JPS6210511B2

JPS6210511B2 -

Info

Publication number: JPS6210511B2
Application number: JP54117030A
Authority: JP
Inventors: Etsumi Nakamura; Takashi Suzuki; Tadashi Yanagida; Minehiko Yamamura
Original assignee: Tanabe Seiyaku Co Ltd
Current assignee: Tanabe Seiyaku Co Ltd
Priority date: 1979-09-11
Filing date: 1979-09-11
Publication date: 1987-03-06
Also published as: ES8106001A1; US4313875A; EP0025233A1; CA1148942A; DE3062540D1; ES494932A0; ATE2901T1; JPS5640686A; EP0025233B1; HU181731B

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は６−〔Ｄ−２−（Ｄ−２−アミノ−３−
Ｎ−メチルカルバモイルプロピオンアミド）−２
−ｐ−ヒドロキシフエニルアセタミド〕ペニシラ
ン酸（以下、N′−メチル−Ｄ−アスパラギニル
アモキシシリンと略称する）またはその塩の新規
精製法に関する。 N′−メチル−Ｄ−アスパラギニルアモキシシ
リンはグラム陽性菌乃至陰性菌のいずれに対して
もすぐれた抗菌活性を示す合成ペニシリンであ
り、その合成法としては例えば後記参考例にも示
される如く、（）６−アミノペニシラン酸とＤ
−２−（Ｄ−２−アミノ−３−Ｎ−メチルカルバ
モイルプロピオンアミド）−２−ｐ−ヒドロキシ
フエニル酢酸とを縮合反応させる方法および
（）アモキシシリンとＤ−２−アミノ−３−Ｎ
−メチルカルバモイルプロピオン酸とを縮合反応
させる方法が知られている（特開昭52−36689
号；同52−83392号および同52−83393号）。しか
しこれらの既知方法でN′−メチル−Ｄ−アスパ
ラギニルアモキシシリンを製造するに際しては副
生物並びに未反応原料等の夾雑物が混入してくる
ため、高純度の目的化合物を得るためにはこれら
夾雑物の分離除去操作乃至精製操作が更に必要と
なる。例えばN′−メチル−Ｄ−アスパラギニル
アモキシシリンを前記合成法によつて製造した場
合、前記（）の方法では原料化合物たるＤ−２
−（Ｄ−２−アミノ−３−Ｎ−メチルカルバモイ
ルプロピオンアミド）−２−ｐ−ヒドロキシフエ
ニル酢酸（以下、夾雑物イと称する）のほか分解
産物乃至副生物たるペニシロン酸（化学構造式は
後記〔Ａ〕の通り）（以下、夾雑物ロと称する）、
該ペニシロン酸とN′−メチル−Ｄ−アスパラギ
ニルアモキシシリンとの酸アミドに相当する二量
体（化学構造式は後記〔Ｂ〕の通り）（以下、夾
雑物ハと称する）、更には構造不明の着色物質
（以下、夾雑物ニと称する）が夾雑物として混入
し、また前記（）の方法で得たN′−メチル−
Ｄ−アスパラギニルアモキシシリンには夾雑物
ロ，ハ，ニ等のほかに原料化合物たるアモキシシ
リン（以下、夾雑物ホと称する）等が夾雑物とし
て混入する。しかもこれらの夾雑物は目的化合物
たるN′−メチル−Ｄ−アスパラギニルアモキシ
シリンと近似の物理化学的性状を示すため単純な
精製手段によつては一般的に分離除去することが
困離である。例えば実験室的規模でならともかく
工業的に実施する場合は前記公報に記載された酢
酸エチル抽出操作および／またはその水溶液の有
機溶媒（テトラヒドロフラン、酢酸エチル等）に
よる洗浄操作によつてもこれら夾雑物を完全に除
去することは難かしい。一方、従来ペニシリン類乃至セフアロスポリン
類化合物の精製に用いられている例えば活性炭、
アルミナ、イオン交換樹脂、イオン交換性多糖
類、ゲルロ過剤等を使用するカラムクロマト法に
よつてもうまく精製することが出来ない。例えば
粗製のN′−メチル−Ｄ−アスパラギニルアモキ
シシリンを活性炭のカラムに導通する場合は、当
該目的化合物の溶出と殆ど同時に夾雑物イまたは
ホが溶出し、引きつづいて夾雑物ロおよびハが溶
出してくるため、高純度のN′−メチル−Ｄ−ア
スパラギニルアモキシシリンを単離することが出
来ない。またアルミナカラムを使用した場合は、
N′−メチル−Ｄ−アスパラギニルアモキシシリ
ンと夾雑物ハおよびニとは分離し得るものの、夾
雑物イ，ロおよびホを分離除去することが出来な
い。更にイオン交換樹脂のうち弱塩基性陰イオン
交換樹脂を使用した場合は、N′−メチル−Ｄ−
アスパラギニルアモキシシリンの大部分が夾雑物
イまたはホと同時に溶出するかあるいは更に夾雑
物ロまたはニと同時に溶出してくる場合もあるた
め、高純度のN′−メチル−Ｄ−アスパラギニル
アモキシシリンを収率よく回収することが出来
ず、また強塩基性イオン交換樹脂を使用した場合
は夾雑物ロ，ハおよびニは分離除去し得るが、夾
雑物イまたはホは分離することが出来ない。イオ
ン交換性多糖類やゲルロ過剤は夾雑物ホ，ロ，ハ
およびニを分離除去することが出来るが、夾雑物
イを分離し得ないと共に、これら吸着剤の使用量
が大量必要（純度80％程度のN′−メチル−Ｄ−
アスパラギニルアモキシシリン１ｇの精製処理に
約400〜600ml必要）となつて実用的にも難点があ
る。しかるに本発明者等は種々研究を重ねた結果、
N′−メチル−Ｄ−アスパラギニルアモキシシリ
ンまたはその塩の精製に際してスチレン−ジビニ
ルベンゼン共重合体からなる非極性多孔質吸着樹
脂（以下、多孔質吸着樹脂と略称する）を使用す
れば、当該化合物の合成に際して混入してくる前
記夾雑物を一挙に分離除去し得ることを見出し本
発明を完成するに到つた。すなわち、本発明によれば、粗製のN′−メチ
ル−Ｄ−アスパラギニルアモキシシリンまたはそ
の塩を含有する水性溶液を多孔質吸着樹脂で吸着
処理し、ついで該樹脂に吸着した上記N′−メチ
ル−Ｄ−アスパラギニルアモキシシリンを水で溶
出するか、あるいは一たん水で展開したのち水と
親水性有機溶媒との混合溶媒で溶出し、該化合物
を含む活性溶出分画を採取することによつて不純
物を含有したN′−メチル−Ｄ−アスパラギニル
アモキシシリンまたはその塩を精製することが出
来る。本発明に係る精製処理を実施するに際しては
N′−メチル−Ｄ−アスパラギニルアモキシシリ
ンは遊離の形であつてもよいが、適当な塩を形成
していてもよい。かかる塩の好ましい例としては
例えばカリウム塩、ナトリウム塩、カルシウム
塩、アルミニウム塩の如き金属塩、トリエチルア
ミン塩の如きトリアルキルアミン塩、プロカイン
塩、ジベンジルアミン塩、Ｎ−ベンジル−β−フ
エネチルアミン塩、１−エフエナミン塩、Ｎ・
N′−ジベンジルエチレンジアミン塩、デヒドロ
アビエチルアミン塩の如き置換アンモニウム塩、
アンモニウム塩等があげられる。本発明において、N′−メチル−Ｄ−アスパラ
ギニルアモキシシリンまたはその塩の精製に使用
する多孔質吸着樹脂としては、スチレンとジビニ
ルベンゼンとからなる多孔性共重合体であつて、
細孔容積が約0.6〜1.1ml／ｇ度のものを用いるの
が好ましい。また比表面積は約200〜800m²／ｇ、
とりわけ約300〜750cm²／ｇのものが好ましい。更
に粒度は平均約20〜300メツシユ、とりわけ約40
〜200メツシユ程度で粒度がそろつているものが
好ましい。上記条件を満たす多孔質吸着樹脂を具
体的に例示すれば、例えば細孔容積0.890ml／
ｇ、比表面積501.3m²／ｇ、粒度40〜50メツシユ
のスチレン−ジビニルベンゼン共重合体（三菱化
成製商品名“ダイヤイオンHP−10”）；細孔容積
1.077ml／ｇ、比表面積718.0m²／ｇ、粒度40〜50
メツシユのスチレン−ジビニルベンゼン共重合体
（三菱化成製商品名“ダイヤイオンHP−20”）；
細孔容積0.990ml／ｇ、比表面積570m²／ｇ、粒度
40〜50メツシユのスチレン−ジビニルベンゼン共
重合体（三菱化成製商品名“ダイヤイオンHP−
30”）；細孔容積0.687ml／ｇ、比表面積704.7
m²／ｇ、粒度40〜50メツシユのスチレン−ジビニ
ルベンゼン共重合体（三菱化成製商品名“ダイヤ
イオンHP−40”）細孔容積0.693ml／ｇ、比表面
積300m²／ｇ、粒度20〜50メツシユのスチレン−
ジビニルベンゼン共重合体（ローム・アンド・ハ
ース社製商品名“アンバーライトXAD−２”）；
細孔容積0.998ml／ｇ、比表面積700m²／ｇ、粒度
20〜50メツシユのスチレン−ジビニルベンゼン共
重合体（ローム・アンド・ハース社製商品名“ア
ンバーライトXAD−４”）等を好適にあげること
が出来る。本発明に係るN′−メチル−Ｄ−アスパラギニ
ルアモキシシリンまたはその塩と各種夾雑物との
分離精製処理は一般的にはカラム法によつて実施
するのが好ましい。使用されるカラムの形状には
特に制限はないが、精製操作中N′−メチル−Ｄ
−アスパラギニルアモキシシリンの分解を防止す
るためカラム全体を冷却し得るような冷却装置が
付してあるものが望ましく、またカラム処理の効
果から考えてカラム直径と高さとの比が約１：３
〜１：50の範囲にあるのが適当である。 N′−メチル−Ｄ−アスパラギニルアモキシシ
リンまたはその塩含有水性溶液の上記多孔質吸着
樹脂による吸着処理は、まずあらかじめ水で膨潤
させた該樹脂をカラムに均一に充填し、これに
N′−メチル−Ｄ−アスパラギニルアモキシシリ
ンまたはその塩含有水性溶液を流下させて行う。
この場合使用される樹脂の好適所要量は、処理液
量および溶質濃度によつても変動するが、例えば
約10％程度のN′−メチル−Ｄ−アスパラギニル
アモキシシリンまたはその塩含有水性溶液を用い
る場合は、その液量に対して約３〜10倍量、とり
わけ４〜５倍量程度用いるのが好ましい。処理す
べき水性溶液中のN′−メチル−Ｄ−アスパラギ
ニルアモキシシリンまたはその塩の濃度は約0.5
〜25W／Ｗ％濃度にあるのが好ましい。また該水
性溶液は、N′−メチル−Ｄ−アスパラギニルア
モキシシリンの合成反応終了液から溶媒を留去
し、得られる残査を適当量の水性溶媒に溶解する
ことにより調製され、更に必要とあれば該水性溶
液を活性炭処理もしくはロ過して不溶物を除去し
たものを用いても良い。上記樹脂からのN′−メチル−Ｄ−アスパラギ
ニルアモキシシリンまたはその塩の溶出操作は上
記カラムに水を導通して溶出するか、あるいはい
つたん水で展開したのち水と親水性有機溶媒との
混合溶媒を導通して溶出するとよい。溶出速度は
一般的にSV約0.5〜５の範囲にあるのが好まし
い。例えば前者の水のみで溶出する場合は、該カ
ラムに水をSV約0.5〜４、好ましくは１〜2.5の速
度で導通して行なうとよい。上記方法によれば、
まず夾雑物イもしくはホおよびロが直ちに溶出
し、それらの溶出終了後につづいてN′−メチル
−Ｄ−アスパラギニルアモキシシリンまたはその
塩のみが選択的に溶出してくるので、この溶出区
分を採取すれば純粋なN′−メチル−Ｄ−アスパ
ラギニルアモキシシリンまたはその塩のみを含有
する水溶液を得ることが出来る。そしてこの
N′−メチル−Ｄ−アスパラギニルアモキシシリ
ンの溶出終了後引きつづき当該操作を行なつても
夾雑物ハおよびニは該樹脂に吸着されたまま溶出
しない。また、カラムを一たん水で展開したのち水と親
水性有機溶媒との混合溶媒で溶出する場合は、該
カラムに水を上記と同一速度で導通して樹脂に吸
着している夾雑物イもしくはホおよびロを溶出除
去したのち、上記混合溶媒をSV約0.5〜５、好ま
しくは約１〜３の速度で導通してN′−メチル−
Ｄ−アスパラギニルアモキシシリンまたはその塩
のみを溶出させるとよい。上記混合溶媒としては
具体的には、例えばメタノール、エタノールの如
き炭素数１〜４個のアルカノール；アセトン、メ
チルエチルケトンの如き炭素数３〜４個のアルカ
ノン；テトラヒドロフラン、ジオキサン、エーテ
ルの如き炭素数２〜４のジアルキルエーテルもし
くは環状アルキルエーテル；ジメチルホルムアミ
ド、ジメチルアセタミドの如き炭素数３〜４個の
脂肪酸Ｎ・N′−ジアルキルアミド；ジメチルス
ルホキシド等から選ばれる親水性有機溶媒と水と
の混合溶媒があげられ、特に水と炭素数１〜３個
のアルカノール（とりわけメタノールもしくはエ
タノール）との混合溶媒であつて、そのアルカノ
ール濃度が約１〜15V／Ｖ％、とりわけ２〜8V／
Ｖ％程度のものを使用すれば、溶出速度の向上
と、N′−メチル−Ｄ−アスパラギニルアモキシ
シリンまたはその塩の純度および収率向上に更に
好結果を得ることが出来る。この場合も水のみの
場合と同様、N′−メチル−Ｄ−アスパラギニル
アモキシシリンの溶出終了後夾雑物ハおよびニは
殆ど溶出しない。上記いずれの場合においても、N′−メチル−
Ｄ−アスパラギニルアモキシシリンまたはその塩
の精製は約２〜15℃、とりわけ４〜６℃付近で行
なうのが好ましい。なお溶出液中のN′−メチル
−Ｄ−アスパラギニルアモキシシリンは272nｍ
における紫外部吸収を測定することによつて容易
に検出出来、これによつて溶出液中の目的化合物
含有区分と夾雑物含有区分とを適宜識別すること
が出来る。いずれにせよ上記本発明方法によれ
ば、目的化合物たるN′−メチル−Ｄ−アスパラ
ギニルアモキシシリンの合成に際し混入する各種
夾雑物を上記多孔性吸着樹脂に対して吸脱着処理
すれば、夾雑物イもしくはホおよびロは目的化合
物に先立つて溶出するが、それらの溶出終了後に
該目的化合物が溶出し、また夾雑物ハおよびニは
該樹脂に吸着されたままで溶出してこないため、
実質的に夾雑物を全く含まないN′−メチル−Ｄ
−アスパラギニルアモキシシリンまたはその塩の
溶出分画を採取することが出来る。かくして得られたN′−メチル−Ｄ−アスパラ
ギニルアモキシシリンまたはその塩含有溶出分画
からの目的化合物の単離は慣用の方法によつて実
施することが出来、例えば該分画を加熱濃縮、凍
結濃縮、逆浸透濃縮したのち凍結乾燥することに
より、N′−メチル−Ｄ−アスパラギニルアモキ
シシリンまたはその塩を高純度結晶として単離す
ることが出来る。本発明方法によれば、粗N′−メチル−Ｄ−ア
スパラギニルアモキシシリンまたはその塩を多孔
質吸着樹脂に対する吸脱着処理することによりそ
の合成に際して混入してきた夾雑物を一挙に分離
除去し得るから、精製処理操作を著しく簡略化す
ることが出来、更に精製操作中N′−メチル−Ｄ
−アスパラギニルアモキシシリンが分解すること
もなく、高純度結晶としてN′−メチル−Ｄ−ア
スパラギニルアモキシシリンまたはその塩を高収
率に回収取得することが出来る。尚、前記各種夾雑物中夾雑物ロは下記〔Ａ〕の
構造式を有するものであり、また前記夾雑物ハは
IR、UV、元素分析値、NMR等の分析結果から判
断して下記〔Ｂ〕の構造式を示す二量体である。構造式〔Ａ〕（ペニシロン酸、夾雑物ロ）構造式〔Ｂ〕（二量体、夾雑物ハ）実験例 (1) 実験方法後記参考例１で得た粗製のN′−メチル−Ｄ
−アスパラギニルアモキシシリン水溶液
（N′−メチル−Ｄ−アスパラギニルアモキシシ
リンの純度：79％）を第１表記載の樹脂または
吸着体を充填したカラムに導入し、ついで同カ
ラムに水を導入してN′−メチル−Ｄ−アスパ
ラギニルアモキシシリンを溶出し、同成分含有
分画を採取する。得られた分画を高速液体クロ
マトグラフイー（条件：後記実施例１と同じ）
に付し、N′−メチル−Ｄ−アスパラギニルア
モキシシリンの純度および回収率並びに夾雑物
混入の存否を検討した。 (2) 実験結果第１表の通りである。すなわち本発明方法に
よる場合、目的とするN′−メチル−Ｄ−アス
パラギニルアモキシシリンは夾雑物イおよびロ
が溶出したのちに溶出し、しかもこの間夾雑物
ハおよびロは樹脂に吸着されたままで溶出し
てこないため、実質的に該目的化合物のみをほ
ぼ定量的に溶出させ回収し得ることが認められ
た。これに反して〜の樹脂または吸着体の
うち、、、、およびを使用する場合
は目的化合物と殆ど同時に夾雑物イが溶出して
くるため該夾雑物を分離除去し得ず、またを
使用する場合は夾雑物イと共に夾雑物ロも溶出
し、の場合は該夾雑物ロに続いて更に夾雑物
ハも溶出してくる。更にでは目的化合物と夾
雑物イ〜ニが殆ど同時に溶出してくるため、こ
れらいずれを使用しても夾雑物を含まない目的
とするN′−メチル−Ｄ−アスパラギニルアモ
キシシリンを回収することは出来なかつた。

【表】但し、表中記号（＋）は、該分画中にその成
分が溶存していることおよび記号（−）はその
成分の溶存が認められないことを表わし、また
表中ローマ数字は下記を表わす。：スチレン−ジビニルベンゼン共重合体（細
孔容積：1.077ml／ｇ、比表面積；718m²／
ｇ、粒度；40〜50メツシユ、三菱化成製商品
名“ダイヤイオンHP−20”）：最強塩基性陰イオン交換樹脂〔トリメチル
インモニウム基（−Ｎ（CH₃）₃）置換ポリ
スチレン、ローム・アンド・ハース社製商品
名“アンバーライトCG−400”〕：弱塩基性陰イオン交換樹脂｛ジビニルベン
ゼン・アクリル酸ジメチルアミノアルキレン
アミド〔CH₂＝CH−CONH（CH₂）nN
（CH₃）₂〕共重合体、三菱化成製商品名“ダイ
ヤイオンWA−10”｝：弱塩基性陰イオン交換樹脂｛ジメチルアミ
ノ基〔（CH₃）₂N−〕置換ポリスチレン、ロー
ム・アンド・ハース社製商品名“アンバーラ
イトIRA−93”｝：弱塩基性陰イオン交換樹脂｛Ｎ−（ポリイ
ミノエチレン）アミノメチル基〔Ｈ
（HNCH₂CH₂）nNHCH₂−〕置換スチレン・
ジビニルベンゼン共重合体（多孔性タイ
プ）、三菱化成製商品名“ダイヤイオンWA
−21”｝：ゲルロ過剤（エピクロルヒドリン架橋デキ
ストランゲル、フアルマシア社製商品名“セ
フアデツクスＧ−10”）：ジエチルアミノエチルセルロース：アルミナ：弱塩基性陰イオン交換樹脂｛第一乃至三級
アミノ基置換ポリスチレン、ローム・アン
ド・ハース社製商品名“アンバーライトIR
−45”｝更に、表中純度および回収率は、次の溶出液
に基づいて算出した。、および：N′−メチル−Ｄ−アスパラギニルアモキシ
シリンの溶出開始からその終了までの溶出液、、、および：N′−メチル−Ｄ−アスパラギニルアモキシ
シリンの溶出開始から夾雑物ハの溶出直前ま
での溶出液：N′−メチル−Ｄ−アスパラギニルアモキシ
シリンの溶出開始から夾雑物ニの溶出直前ま
での溶出液実施例１後記参考例１で得た租製のN′−メチル−Ｄ−
アスパラギニルアモキシシリン含有水溶液170ml
を、あらかじめ水で膨潤したスチレン−ジビニル
ベンゼン共重合体（細孔容積：1.077ml／ｇ、比
表面積：718.0m²／ｇ、粒度：40〜50メツシユ、
三菱化成製商品名“ダイヤイオンHP−20）ゲル
を充填したカラム（5.25φcm×37.0cm、800ml）
に通し、N′−メチル−Ｄ−アスパラギニルアモ
キシシリンを吸着させた。ついで純水をSV＝2.0
（26.7ml／分）の速度で流下し、吸着されている
N′−メチル−Ｄ−アスパラギニルアモキシシリ
ンを展開し溶出した。溶出される物質の検出は溶
出液の紫外部吸収波長272nｍを測定することに
より行ない、溶出液を900ml宛採取した。すなわ
ちフラクシヨンNo.１には夾雑物イが、同No.２には
夾雑物ロ、同No.３〜17にはN′−メチル−Ｄ−ア
スパラギニルアモキシシリンのみがそれぞれ含ま
れ、また夾雑物ハおよびニは樹脂に吸着されたま
まで溶出しなかつた。かくしてフラクシヨンNo.３
〜17を合することにより、夾雑物を含まない
N′−メチル−Ｄ−アスパラギニルアモキシシリ
ン含有水溶液13500mlを得た。本水溶液中には
N′−メチル−Ｄ−アスパラギニルアモキシシリ
ンが1.78mg／ml含まれていた。回収率：94.1％高速液体クロマトグラフイー〔条件(イ)：カラム
150mm×４mmステンレスチール製、充填剤オクタ
デシルトリクロロシラン−5uｍシリカゲル、溶
離剤メタノール・PH5.5リン酸緩衝液（12.5：
87.5）。以下同。〕：N′−メチル−Ｄ−アスパラギニルアモキシシ
リン以外の物質は検出されなかつた。実施例２後記参考例１で得た粗製のN′−メチル−Ｄ−
アスパラギニルアモキシシリン含有水溶液167ml
を、あらかじめ水で膨潤したスチレン−ジビニル
ベンゼン共重合体（細孔容積：1.077ml／ｇ、比
表面積：718.0m²／ｇ、粒度：40〜50メツシユ、
三菱化成製商品名“ダイヤイオンHP−20”）ゲル
を充填したカラム（5.25φcm×37.0cm、800ml）
に通し、N′−メチル−Ｄ−アスパラギニルアモ
キシシリンを吸着させた。ついでこのカラムに純
水1800mlをSV＝2.0の速度で導通して溶出操作を
行い、ひきつづきこのカラムに含水エタノール
（エタノール濃度：8V／Ｖ％）を上記と同一速度
で導通しN′−メチル−Ｄ−アスパラギニルアモ
キシシリンを溶出した。溶出される物質の検出
は、溶出液の紫外部吸収波長272nｍを測定する
ことにより行ない、溶出液は900ml宛採取する。
フラクシヨンNo.１には夾雑物イ、同No.２には夾雑
物ロがそれぞれ含まれ、フラクシヨンNo.３〜６に
はN′−メチル−Ｄ−アスパラギニルアモキシシ
リンのみが含まれていた。また夾雑物ハおよびニ
は樹脂に吸着されたままで溶出しなかつた。かく
してフラクシヨンNo.３〜６を合することにより、
夾雑物を含まないN′−メチル−Ｄ−アスパラギ
ニルアモキシシリン含有水溶液3600mlを得た。本
水溶液中にはN′−メチル−Ｄ−アスパラギニル
アモキシシリンが6.68mg／ml含まれていた。回収
率96.0％。高速液体クロマトグラフイー（条件：実施例１に
同じ）：N′−メチル−Ｄ−アスパラギニルアモキシシ
リン以外の物質は検出されなかつた。実施例３後記参考例１で得た粗製のN′−メチル−Ｄ−
アスパラギニルアモキシシリン含有水溶液167ml
を、あらかじめ水で膨潤したスチレン−ジビニル
ベンゼン共重合体（細孔容積：0.687ml／ｇ、比
表面積704.7m²／ｇ、粒度：40〜50メツシユ、三
菱化成製商品名“ダイヤイオンHP−40”）ゲルを
充填したカラム（5.25φcm×37.0cm、800ml）に
導通し、N′−メチル−Ｄ−アスパラギニルアモ
キシシリンを吸着させた。ついでこのカラムに純
水をSV＝2.0の速度で導通して溶出操作を行い、
引きつづきこのカラムに含水エタノール（エタノ
ール濃度：2V／Ｖ％）を上記と同一速度で導通
してN′−メチル−Ｄ−アスパラギニルアモキシ
シリンを溶出する。溶出される物質の検出は、溶
出液の紫外部吸収波長272nｍを測定することに
より行ない、溶出液1000ml宛採取した。フラクシ
ヨンNo.１には夾雑物イが、同No.２には夾雑物ロが
それぞれ含まれ、同No.３〜８にはN′−メチル−
Ｄ−アスパラギニルアモキシシリンのみが含まれ
ていた。また夾雑物ハおよびニは樹脂に吸着され
たまま溶出しなかつた。かくしてフラクシヨンNo.
３〜８を合することにより、N′−メチル−Ｄ−
アスパラギニルアモキシシリン含有水溶液6000ml
を得た。本水溶液中にはN′−メチル−Ｄ−アス
パラギニルアモキシシリンが4.03mg／ml含まれて
いた。回収率96.5％。高速液体クロマトグラフイー（条件：実施例１と
同じ）：N′−メチル−Ｄ−アスパラギニルアモキシシ
リン以外の物質は検出されなかつた。実施例４後記参考例１で得た粗製のN′−メチル−Ｄ−
アスパラギニルアモキシシリン含有水溶液1667ml
を、あらかじめ水で膨潤したスチレン−ジビニル
ベンゼン共重合体（細孔容積：1.077ml／ｇ、比
表面積：718.0m²／ｇ、粒度：40〜50メツシユ、
三菱化成製“ダイヤイオンHP−20”）ゲルを充填
したカラム（14.0cm×50.0cm、7693ml）に導通
し、N′−メチル−Ｄ−アスパラギニルアモキシ
シリンを吸着させた。このカラムに純水をSV＝
2.0の速度で導通して溶出操作を行い、引きつづ
いて含水エタノール（エタノール濃度：4V／Ｖ
％）を上記と同一速度で導通してN′−メチル−
Ｄ−アスパラギニルアモキシシリンを溶出させ
た。溶出される物質の検出は、検出液の紫外部吸
収波長272nｍを測定することにより行ない、溶
出液7000ml宛採取した。フラクシヨンNo.１には夾
雑物イが、同No.２には夾雑物ロがそれぞれ含ま
れ、同No.３〜11にはN′−メチル−Ｄ−アスパラ
ギニルアモキシシリンのみが含まれていた。また
夾雑物ハおよびニは樹脂に吸着されたままで溶出
されなかつた。フラクシヨンNo.３〜11を合するこ
とにより、N′−メチル−Ｄ−アスパラギニルア
モキシシリン含有水溶液63000mlを得た。本水溶
液中にはN′−メチル−Ｄ−アスパラギニルアモ
キシシリンが3.85mg／ml含まれていた。回収率
97.0％。高速液体クロマトグラフイー（条件：実施例１と
同じ）：N′−メチル−Ｄ−アスパラギニルアモキシシ
リン以外の物質は検出されなかつた。実施例５後記参考例１で得た粗製のN′−メチル−Ｄ−
アスパラギニルアモキシシリン含有水溶液200ml
を、あらかじめ水で膨潤したスチレン−ジビニル
ベンゼン共重合体（細孔容積：0.693ml／ｇ、比
表面積300m²／ｇ、粒度：20〜50メツシユ、ロー
ム・アンド・ハース社製商品名“アンバーライト
XAD−２”）ゲルを充填したカラム（5.25φcm×
37.0cm、800ml）に導通し、N′−メチル−Ｄ−ア
スパラギニルアモキシシリンを吸着させた。この
カラムに純水をSV＝4.0の速度で導通して溶出操
作を行ない、引きつづいてこのカラムに含水エタ
ノール（エタノール濃度：2V／Ｖ％）を上記速
度で導通しN′−メチル−Ｄ−アスパラギニルア
モキシシリンを溶出した。溶出される物質の検出
は、溶出液の紫外部吸収波長272nｍを測定する
ことにより行ない、溶出液1000ml宛採取した。フ
ラクシヨンNo.１には夾雑物イが、また同No.２には
夾雑物ロがそれぞれ含まれ、同No.３〜10には
N′−メチル−Ｄ−アスパラギニルアモキシシリ
ンのみが含まれていた。フラクシヨンNo.３〜10を
含することにより、N′−メチル−Ｄ−アスパラ
ギニルアモキシシリン含有水溶液8000mlを得た。
本水溶液中にはN′−メチル−Ｄ−アスパラギニ
ルアモキシシリンが3.60mg／ml含まれていた。回
収率96.0％。高速液体クロマトグラフイー（条件：実施例１と
同じ）：N′−メチル−Ｄ−アスパラギニルアモキシシ
リン以外の物質は検出されなかつた。実施例６後記参考例２で得た粗製のN′−メチル−Ｄ−
アスパラギニルアモキシシリン含有水溶液170ml
をあらかじめ水で膨潤したスチレン−ジビニルベ
ンゼン共重合体（細孔容積：1.077ml／ｇ、比表
面積：718m²／ｇ、粒度：40〜50メツシユ、三菱
化成製商品名“ダイヤイオンHP−20”）ゲルを充
填したカラム（5.25φcm×37.0cm、800ml）に導
通し、N′−メチル−Ｄ−アスパラギニルアモキ
シシリンを吸着させた。このカラムに純水SV＝
2.0の速度で導通して溶出操作を行ない、引きつ
づいて含水エタノール（エタノール濃度：2V／
Ｖ％）を導通してN′−メチル−Ｄ−アスパラギ
ニルアモキシシリンを溶出した。溶出される物質
の検出は、溶出液の紫外部吸収波長272nｍを測
定することにより行なわれ、溶出液1000ml宛採取
した。フラクシヨンNo.１〜２には夾雑物ロおよび
ホが含まれ、同No.３〜８にはN′−メチル−Ｄ−
アスパラギニルアモキシシリンのみが含まれてい
た。かくしてフラクシヨンNo.３〜８を合すること
により、N′−メチル−Ｄ−アスパラギニルアモ
キシシリン含有水溶液6000mlを得た。本水溶液中
にはN′−メチル−Ｄ−アスパラギニルアモキシ
シリンが4.12mg／ml含まれていた。回収率97.0％高速液体クロマトグラフイー〔条件：実施例１と
同一条件下に測定。条件(ロ)：カラム150mm×４mm
ステンレススチール製、充填剤オクタデシルトリ
クロロシラン−5umシリカゲル、溶離剤メタノー
ル・PH5.5リン酸緩衝液（2.5：97.5）〕：N′−メチル−Ｄ−アスパラギニルアモキシシ
リン以外の物質は検出されなかつた。上記実施例１〜６で得たN′−メチル−Ｄ−ア
スパラギニルアモキシシリン含有水溶液を、それ
ぞれ凍結乾燥することにより、白色粉末として
N′−メチル−Ｄ−アスパラギニルアモキシシリ
ンを得た。 IRν^{Ｎｕｊｏｌ} _ｎａｘ：3280、1760、1660（cm^-1） TLC（シリカゲル、ｎ−ブタノール：酢酸：水
＝４：１：１）、Rf＝0.43 参考例１ (1) Ｄ−２−（Ｄ−２−０−ニトロフエニルスル
フエニルアミノ−３−Ｎ−メチルカルバモイル
−プロピオンアミド）−２−ｐ−ヒドロキシフ
エニル酢酸89.7ｇおよびＮ−メチルモルホリン
20.2ｇをジメチルホルムアミド1000mlに溶解
し、かくはん下に−25〜−20℃でエチルクロロ
カーボネート21.7ｇのテトラヒドロフラン200
ml溶液を加えた。１分後に６−アミノペニシラ
ン酸のトリエチルアミン塩76.4ｇの水400ml溶
液を−10〜８℃で加え、−10〜−５℃で40分
間、−５〜０℃で30分間かくはんした。５％ク
エン酸水を加えて反応液をPH３とし、テトラヒ
ドロフラン1000mlと酢酸エチル500mlで該反応
物を抽出した。この抽出液を水洗し、乾燥後溶
媒を40℃以下で留去し、得られる残査にエーテ
ルを加えることにより、６−〔Ｄ−２−（Ｄ−２
−０−ニトロフエニルスルフエニルアミノ−３
−Ｎ−メチルカルバモイル−プロピオンアミ
ド）−２−ｐ−ヒドロキシフエニルアセタミ
ド〕ペニシラン酸を黄色針状晶として133ｇ得
た。 mp.165〜167℃（分解） IRν^{Ｎｕｊｏｌ} _ｎａｘ：3400、3250、1780、1730、16
40（cm
^-1） (2) 本品64.6ｇおよびチオベンズアミド27.4ｇを
メタノール−テトラヒドロフラン（４：１）
1000mlに加え、室温で40分間反応させた。反応
後、反応液から30℃以下で溶媒を留去して粗製
のN′−メチル−Ｄ−アスパラギニルアモキシ
シリンを得、これを水257.0mlに溶解した。こ
の水溶液に活性炭8.0ｇを加え、かくはんした
のちロ過（活性炭は少量の水で洗浄）すること
により、粗製のN′−メチル−Ｄ−アスパラギ
ニルアモキシシリン含有水溶液257.0mlを得
た。（N′−メチル−Ｄ−アスパラギニルアモキ
シシリンの純度：79％、同濃度：15％）。また
本水溶液の高速液体クロマトグラム（条件：実
施例１と同じ）は第１図の通りである。参考例２ (1) Ｎ−（Ｄ−２−ベンジルオキシカルボニルア
ミノ−３−Ｎ−メチルカルバモイル−プロピオ
ニルオキシ）コハク酸イミド1.51ｇおよび６−
（Ｄ−２−アミノ−２−ｐ−ヒドロキシフエニ
ルアセタミド）ペニシラン酸トリエチルアミン
塩1.86ｇをジメチルホルムアミド10mlに溶解
し、０〜５℃で16時間反応させた。反応液に５
％クエン酸水溶液20mlを加え、テトラヒドロフ
ラン40mlと酢酸エチル20mlの混液で抽出した。
この抽出液を水洗し、乾燥したのち溶媒を40℃
以下で留去すれば、無色カラメルが得られた。
これにエーテルを加えてロ過することにより、
６−〔Ｄ−２−（Ｄ−２−ベンジルオキシカルボ
ニルアミノ−３−Ｎ−メチルカルバモイル−プ
ロピオンアミド）−２−ｐ−ヒドロキシフエニ
ルアセタミド〕ペニシラン酸を無色粉末として
2.35ｇ得た。収率91.1％。 IRν^{Ｎｕｊｏｌ} _ｎａｘ：3280、1770、1720、1640（cm
^-1） TLC（条件：シリカゲル、テトラヒドロフラ
ン−メタノール−酢酸＝50：50：３）Rf＝
0.663 (2) 本品62.7ｇおよび30％パラジウム・炭酸バリ
ウム40.0ｇをメタノール1000mlにけん濁し、水
素気流中常温常圧で１時間しんとうした。反応
液から触媒をロ去し、ロ液から溶媒を40℃以下
で留去したのち得られた残査を水250mlに溶解
した。この水溶液を参考例１と同様に活性炭
（９ｇ）を処理することにより、粗製のN′−メ
チル−Ｄ−アスパラギニルアモキシシリン含有
水溶液250mlを得た（N′−メチル−Ｄ−アスパ
ラギニルアモキシシリンの純度：79％、同濃
度：15％）。また本水溶液の高速液体クロマト
グラム（条件：実施例６に同じ）は第２図〔条
件(イ)〕および第３図〔条件(ロ)〕に示す通りであ
る。

【図面の簡単な説明】

第１図は参考例１で得た粗製のN′−メチル−
Ｄ−アスパラギニルアモキシシリン含有水溶液の
高速液体クロマトグラム、第２図および第３図は
参考例２で得た粗製のN′−メチル−Ｄ−アスパ
ラギニルアモキシシリン含有水溶液の高速液体ク
ロマトグラムである。図中イは夾雑物(イ)、ロは夾
雑物(ロ)、ハは夾雑物(ハ)、ホは夾雑物(ホ)、ヘは
N′−メチル−Ｄ−アスパラギニルアモキシシリ
ンのピークをそれぞれ表わす。

Claims

【特許請求の範囲】１粗製の６−〔Ｄ−２−（Ｄ−２−アミノ−３−
Ｎ−メチルカルバモイルプロピオンアミド）−２
−ｐ−ヒドロキシフエニルアセタミド〕ペニシラ
ン酸またはその塩を含有する水性溶液をスチレン
−ジビニルベンゼン共重合体からなる非極性多孔
質吸着樹脂で吸着処理し、ついで該樹脂に吸着し
た上記ペニシラン酸化合物を水で溶出するか、あ
るいは一たん水で展開したのち水と親水性有機溶
媒との混合溶媒で溶出し、該化合物を含む活性溶
出分画を採取することを特徴とする６−〔Ｄ−２
−（Ｄ−２−アミノ−３−Ｎ−メチルカルバモイ
ルプロピオンアミド）−２−ｐ−ヒドロキシフエ
ニルアセタミド〕ペニシラン酸またはその塩の精
製法。２粗製の６−〔Ｄ−２−（Ｄ−２−アミノ−３−
Ｎ−メチルカルバモイルプロピオンアミド）−２
−ｐ−ヒドロキシフエニルアセタミド〕ペニシラ
ン酸またはその塩をスチレン−ジビニルベンゼン
共重合体からなる非極性多孔質吸着樹脂に対する
吸脱着処理して精製するに際し、該精製操作をカ
ラム法で行なう特許請求の範囲第１項記載の精製
法。３スチレン−ジビニルベンゼン共重合体からな
る非極性多孔質吸着樹脂の細孔容積が約0.6〜1.1
ml／ｇ、比表面積が約200〜800m²／ｇ、粒度が約
20〜300メツシユである特許請求の範囲第１項ま
たは第２項記載の精製法。４スチレン−ジビニルベンゼン共重合体からな
る非極性多孔質吸着樹脂の細孔容積が約1.077
ml／ｇ、比表面積が718.0m²／ｇ、粒度が40〜50
メツシユである特許請求の範囲第３項記載の精製
法。５スチレン−ジビニルベンゼン共重合体からな
る非極性多孔質吸着樹脂の細孔容積が0.687ml／
ｇ、比表面積が704.7m²／ｇ、粒度が40〜50メツ
シユである特許請求の範囲第３項記載の精製法。６スチレン−ジビニルベンゼン共重合体からな
る非極性多孔質吸着樹脂の細孔容積が0.693ml／
ｇ、比表面積が300m²／ｇ、粒度が20〜50メツシ
ユである特許請求の範囲第３項記載の精製法。７親水性有機溶媒と水との混合溶媒が炭素数１
〜４個のアルカノール、炭素数３〜４個のアルカ
ノン、炭素数２〜４個のジアルキルもしくは環状
アルキルエーテル、炭素数２〜３個のモノカルボ
ン酸アミドまたはジメチルスルホキシドと水との
混合溶媒であつて、該有機溶媒の濃度が約１〜15
％である特許請求の範囲第１項、第２項、第３
項、第４項、第５項または第６項記載の精製法。８親水性有機溶媒と水との混合溶媒がアルカノ
ール水溶液である特許請求の範囲第７項記載の精
製法。９アルカノール水溶液が約２〜８％のメタノー
ル水溶液である特許請求の範囲第８項記載の精製
法。１０アルカノール水溶液が約２〜８％のエタノ
ール水溶液である特許請求の範囲第８項記載の精
製法１１６−〔Ｄ−２−（Ｄ−２−アミノ−３−Ｎ−
メチルカルバモイルプロピオンアミド）−２−ｐ
−ヒドロキシフエニルアセタミド〕ペニシラン酸
もしくはその塩の溶出速度がSV＝0.5〜４である
特許請求の範囲第２項、第３項、第４項、第５
項、第６項、第７項、第８項、第９項または第１
０項記載の精製法。