CN116514927A - 一种替考拉宁的纯化方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及医药领域，特别涉及一种替考拉宁纯化方法。所述纯化方法包括如下步骤：S1、将替考拉宁粗粉以水稀释后加入乙醇，获得上柱液；S2、以水、乙醇和可溶性盐分别配制预洗液和洗脱液；S3、将所述上柱液上色谱柱，所述色谱柱以UniHybird C18单分散硅胶色谱填料装柱，以所述预洗液预洗后，以所述洗脱液洗脱，洗脱至滤液中替考拉宁含量低于300，收集滤液，获得有效收集液；S4、将所述有效收集液进行赶醇脱盐，浓缩后进行结晶。本发明所提供的纯化方法可降低未知杂质的含量，有效提高替考拉宁产品的纯度和质量。
Description
技术领域
本发明涉及医药领域，特别涉及一种替考拉宁的纯化方法。
背景技术
现有的替考拉宁主要的提纯方法有萃取法、吸附法、离子交换法和色谱层析法等。在这些方法中，最常用的是树脂吸附法，在现有技术中替考拉宁分离纯化中采用PS30-300微球为树脂吸附，将发酵液碱化后过滤，用树脂吸附后，用有机物的水溶液作为解析剂进行解析，解析液进行活性炭脱色、过滤，加入溶剂沉淀得到替考拉宁粗品，最后用树脂进行精制。在上述的方法中，所用的树脂多为大孔吸附树脂，其控制替考拉宁组分和去除杂质的能力有限。在工业生产中发现，未知杂质经常性不合格，即现有技术对未知杂质含量控制的稳定性差，然而其含量不合格直接导致替考拉宁产品中总杂也不合格，因此亟需一种可有效降低未知杂质含量的替考拉宁纯化方法。
发明内容
为了克服上述现有技术的缺陷，本发明所要解决的技术问题是：提供一种可有效降低替考拉宁中未知杂质含量的纯化方法。
为了解决上述技术问题，本发明提供一种替考拉宁的纯化方法，包括如下步骤：
S1、将替考拉宁粗粉以水稀释后加入乙醇，获得上柱液；
S2、以水、乙醇和可溶性盐分别配制预洗液和洗脱液；
S3、将所述上柱液上色谱柱，所述色谱柱以UniHybird C18单分散硅胶色谱填料装柱，以所述预洗液预洗后，以所述洗脱液洗脱，洗脱至滤液中替考拉宁含量低于300，收集滤液，获得有效收集液；
S4、将所述有效收集液进行赶醇脱盐，浓缩后进行结晶。
本发明的有益效果在于：本发明所提供的替考拉宁纯化方法可实现未知单杂以及总杂比原工艺更低，提高替考拉宁产品的纯度和质量，满足产品质量要求，同时提高单步收率。
具体实施方式
为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式予以说明。
在本文中，所述乙醇度为一般定义，即乙醇的体积浓度。
一种替考拉宁的纯化方法，包括如下步骤：
S1、将替考拉宁粗粉以水稀释后加入乙醇，获得上柱液；
S2、以水、乙醇和可溶性盐分别配制预洗液和洗脱液；
S3、将所述上柱液上色谱柱，所述色谱柱以UniHybird C18单分散硅胶色谱填料装柱，以所述预洗液预洗后，以所述洗脱液洗脱，洗脱至滤液中替考拉宁含量低于300，收集滤液，获得有效收集液；
S4、将所述有效收集液进行赶醇脱盐，浓缩后进行结晶。
在一种可选的实施方式中，所述上柱液中含有体积浓度为20％的乙醇。
在一种实施方式中，所述稀释为将所述替考拉宁粗粉稀释至0.5～3万单位。
在一种实施方式中，所述可溶性盐为硫酸钠。
在一种优选的实施方式中，所述预洗液包括乙醇度为15％的乙醇和质量浓度为1％的硫酸钠的水溶液。
在一种优选的实施方式中，所述洗脱液包括乙醇度为30％的乙醇和质量浓度为1％的硫酸钠的水溶液。
在一种实施方式中，所述洗脱液的洗脱量为5BV。
在一种实施方式中，所述滤液的总杂小于1.5％，即当所述滤液的总杂小于1.5％时开始收集滤液，以获得有效收集液。
在一种实施方式中，所述浓缩为将所述滤液浓缩至替考拉宁含量为7万单位。
在一种实施方式中，所述结晶以丙酮结晶替考拉宁。优选地，以8BV量的丙酮结晶所述替考拉宁。
具体的，所述替考拉宁的纯化方法包括如下步骤：
S1、将替考拉宁粗粉溶于一定量纯化水中，稀释至0.5～3万单位后加入一定量的乙醇，得到上柱液；
S2、配制预洗液和洗脱液；
其中，所述预洗液预洗液包括乙醇度为15％的乙醇和质量浓度为1％的硫酸钠的水溶液；
所述洗脱液包括乙醇度为30％的乙醇和质量浓度为1％的硫酸钠的水溶液；
S3、将所述上柱液上色谱柱，所述色谱柱以UniHybird C18单分散硅胶色谱填料装柱，并先以所述预洗液预洗，然后以所述洗脱液洗脱至替考拉宁含量低于300mg/L，总杂小于1.5％后开始收集滤液，获得有效收集液；
S4、将所述有效收集液进行赶醇，去除醇和盐，至乙醇度为0且电导率小于100，收集赶醇液，将所述赶醇液浓缩至一定单位后加入一定量的丙酮进行结晶，过滤后获得替考拉宁。
实施例1
一种替考拉宁的纯化方法，包括如下步骤：
S1、取替考拉宁粗粉(1万单位)30g用纯化水溶解至3L，待其完全溶解后加入600mL无水乙醇(浓度≥99.5％)，获得上柱液；
S2、用0.75L无水乙醇和50g硫酸钠加入纯化水中配制5L的预洗液；
用3L的无水乙醇和100g硫酸钠加入纯化水中配制10L的洗脱液；
S3、制备含有1000mL UniHybird C18单分散硅胶色谱填料的色谱柱，以所述上柱液进行上柱，流速2.0BV/h，用所述预洗液预洗5BV，流速2.0BV，再用所述洗脱液进行洗脱，流速2.0BV/h，收集替考拉宁纯度大于98.5％，总杂小于1.5％，获得有效收集液；以500mL(0.5BV)一瓶进行收集，得到有效收集液7.5L，含2581单位，其中含替考拉宁19.36g，收率为64.53％，(上柱、预洗、洗脱过程全程温度控制为25℃)；
S4、将所述有效收集液以用300分子量的纳滤膜进行纳滤至滤出液乙醇度为0，电导率小于100，得赶醇液2.25L，含8320单位，含替考拉宁18.72g，然后浓缩汁7万单位(267mL)，控制料液温度25℃，pH＝7.0，然后加入2.136L(8BV)丙酮搅拌2h进行析晶，过滤后用丙酮顶洗，烘干后获得替考拉宁产品。
检测例
将实施例1和原工艺中上柱液和替考拉宁产品分别以高效液相色谱进行杂质分析，结果如表1所示。
其中，所述原工艺包括如下步骤：
S1、取替考拉宁粗粉(1万单位)30g用纯化水溶解至3L，待其完全溶解后加入600mL无水乙醇(≥99.5％)，获得上柱液；
S2、用1L无水乙醇加入纯化水中配制5L的预洗液；
用6L的无水乙醇加入纯化水中配制10L的洗脱液；
S3、制备含有1000mL HZ806填料的色谱柱，以所述上柱液进行上柱，流速1.0BV，用所述预洗液预洗2BV，流速1.0BV，再用所述洗脱液进行洗脱，流速1.0BV，收集替考拉宁纯度大于98.5％，总杂小于1.5％，获得有效收集液(全程上柱、预洗、洗脱过程温度控制为25℃)；
S4、将所述有效收集液以用300分子量的纳滤膜进行纳滤至滤出液乙醇度为0，控制料液温度25℃，pH＝7.0，用2.136L(8BV)丙酮搅拌2h进行析晶，过滤后用丙酮顶洗，烘干后获得替考拉宁产品。
表1
从表1可以看出，本发明所提供的替考拉宁纯化方法相较于原工艺，未知单杂和总杂质比原工艺明显小很多，替考拉宁的纯度和收率得到提高。
综上所述，本发明选择用UniHybird C18单分散硅胶色谱柱对替考拉宁粗品进行层析纯化，并对实验条件进行优化，使其提纯效率高，能够满足生产的要求，提高杂质和色素的去除率，来获得更高质量的替考拉宁产品，使其符合市场要求。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等同变换，或直接或间接运用在相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。
Claims (9)
1.一种替考拉宁的纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、将替考拉宁粗粉以水稀释后加入乙醇，获得上柱液；
S2、以水、乙醇和可溶性盐分别配制预洗液和洗脱液；
S3、将所述上柱液上色谱柱，所述色谱柱以UniHybird C18单分散硅胶色谱填料装柱，以所述预洗液预洗后，以所述洗脱液洗脱，洗脱至滤液中替考拉宁含量低于300，收集滤液，获得有效收集液；
S4、将所述有效收集液进行赶醇脱盐，浓缩后进行结晶。
2.根据权利要求1所述纯化方法，其特征在于，所述稀释为将所述替考拉宁粗粉稀释至0.5～3万单位。
3.根据权利要求1所述纯化方法，其特征在于，所述可溶性盐为硫酸钠。
4.根据权利要求3所述纯化方法，其特征在于，所述预洗液包括乙醇度为15％的乙醇和质量浓度为1％的硫酸钠的水溶液。
5.根据权利要求3所述纯化方法，其特征在于，所述洗脱液包括乙醇度为30％的乙醇和质量浓度为1％的硫酸钠的水溶液。
6.根据权利要求1所述纯化方法，其特征在于，所述洗脱液的洗脱量为5BV。
7.根据权利要求1所述纯化方法，其特征在于，所述滤液的总杂小于1.5％。
8.根据权利要求1所述纯化方法，其特征在于，所述浓缩为将所述滤液浓缩至替考拉宁含量为7万单位。
9.根据权利要求1所述纯化方法，其特征在于，所述结晶以丙酮结晶替考拉宁。
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