JPH09510717A - ジュウテリウム化による薬物の効能の増強 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 薬物（例えば、ジヒドロピリジン）および特に１または２以上の水素原子がジュウテリウム化されているニフェジピンの効能を増強しかつその作用期間を増加する方法、ここでジュウテリウム化ニフェジピンは、ニフェジピンそれ自体よりも非常に低い濃度において使用したとき、予期せざるほどに改良された低血圧特性を有する。また、新規な薬物の同一性および生物学的同等性を決定する方法を開示し、この方法において新規な薬物の分子およびアイソトープの構造をガスクロマトグラフィー−アイソトープ比質量分析により決定し、そして既知のヒト薬物の分子およびアイソトープの構造と比較する。

Description

【発明の詳細な説明】 ジュウテリウム化による薬物の効能の増強 関係する出願に対する関係 これは我々の１９９４年３月２５日提出の米国特許出願第０８／２１７，８９ ７号（これは引用することによって本明細書の一部とされる）の一部継続出願で ある。 発明の背景 本発明は、既知の薬物の分子構造のアイソトープの形態を変化させることによ って、既知の製剤または薬物の効能を増強する方法、およびそのように製造され た増強された薬物に関する。さらに詳しくは、本発明は、水素原子の１または２ 以上をジュウテリウム原子にジュウテリウム化することによって、１または２以 上の水素原子を含有する既知の薬物の分子構造を修飾することに関する。生ずる 薬物は有意に変更されており、そして既知の薬物より大きく改良された活性を有 する。さらに詳しくは、本発明は、ジヒドロピリジン（例えば、ニフェジピン） をジュウテリウム化（ジュウテレート化）する方法に関し、これによりジュウテ リウム化されたニフェジピンは増加された低血圧作用およびニフェジピンよりも より低い濃度において哺乳動物に対する増加した作用期間を有する。 製剤を合成するとき、炭素、水素、酸素、窒素などを含む種々の置換基を有す る炭素の主鎖が組立てられる。製剤は、例えば、セレンディピティおよび分子の 修飾を包含する多数の方法により設計および合成されてきている。これらおよび 他の方法によって時間経過とともに極めて多数の薬物が生み出されている。この ような修飾により個々の会社は市場において競争的に優位な立場を保持すること ができるので、生産業の時間および資源の有意な部分はある種の薬理学的分類、 例えば、抗高血圧薬の範囲内で新規な薬剤の探索に費やされる。このような新規 な薬剤はプロトタイプの化合物と異なる活性を有することがしばしばあり、こう してそれらの開発にコストが費やされる。 発明の要約 現在市販されている事実上すべての薬物は多数の水素原子を含み、それらの各 々は１の分子質量を有することは知られている。薬物上の水素原子の１または２ 以上をそれらの分子質量が２になるように修飾するとき、薬物の活性は有意に変 更されそしてなお大きく改良されることが発見された。したがって、例えば、ジ ヒドロピリジン、例えば、ニフェジピンのアイソトープの修飾は、ニフェジピン それ自体に比較して、哺乳動物において低血圧（血圧の降下）作用を予期せざる ことには変化させ、そしてこのような作用はヒトにおいても達成される。 ニフェジピンはアンギナおよび高血圧の治療において使用される重要な薬物と して世界的に市販されている。その構造は下記の通りである： メチル基の１または２以上の水素をジュウテリウムで置換するか、またはメチ ル基の１または２以上のをＣＤ₃で置換することによって、ニフェジピンを修飾 することにより、ニフェジピンの治療的性質を変更させることができ、そして有 意に改良することさえできる。例えば、環上の２および６位における２つのメチ ル基を２つのジュウテリウム化基（ＣＤ₃）で置換する、すなわち、６つの水素 原子を６つのジュウテリウム原子で置換することによって、ニフェジピンを修飾 することにより、ジュウテリウム化ニフェジピンの構造は下記のようになる： 上記分子の双方はニフェジピンであり、そして後者は前者のアイソトープの形 態である。 図面の簡単な説明 本発明は図面を参照することによってさらに理解されるであろう。 第１図は、ニフェジピンそれ自体と比較した治療したラットへの種々の濃度の ジュウテリウム化ニフェジピンの低血圧作用を示す。 第２図および第３図は、Ｔ型カルシウムチャンネルへの対照ニフェジピン（ニ フェジピンＢ）およびジュウテリウム化ニフェジピン（ニフェジピンＤ）の使用 依存性阻害を示す。 第４図は、パルス周波数の関数としてのカルシウムの流れへの対照ニフェジピ ンおよびジュウテリウム化ニフェジピンの作用を示す。 第５図は、使用依存性への対照ニフェジピンおよびジュウテリウム化ニフェジ ピンの作用を示す。 第６（ａ）図および第６（ｂ）図は、平均動脈圧への対照ニフェジピンおよび ジュウテリウム化ニフェジピンの作用を示す。 第７（ａ）図および第７（ｂ）図は、非対称Ｓ状モデルを使用して適合させた 対照ニフェジピン（第７（ａ）図）およびジュウテリウム化ニフェジピン（第７ （ｂ）図）の濃度−作用の関係を示す。 第８（ａ）図および第８（ｂ）図は、ロジスティック投与量応答モデルを使用 して適合させた対照ニフェジピン（第８（ａ）図）およびジュウテリウム化ニフ ェジピン（第８（ｂ）図）の濃度−作用の関係を示す。 第９（ａ）図および第９（ｂ）図は、対照およびジュウテリウム化（被験）ニ カルジピンの投与量−応答作用を示す。 第１０図は、作用期間が対照ニカルジピンに比較してジュウテリウム化ニカル ジピンについて大きいことを示す。 第１１図は、ベラパミルそれ自体と比較して治療ラットについての種々の濃度 のジュウテリウム化ベラパミルの低血圧作用を示す。 第１２図は、作用期間が対照ベラパミルに比較してジュウテリウム化ベラパミ ルについて大きいことを示す。 第１３図は、７つのニフェジピン調製物の３次元の「フィンガープリント」を 示す。 第１４図は、９つのニフェジピン調製物の２次元の「フィンガープリント」を 示す。 第１５図は、ソタロール粗製錠剤の２次元（酸素／炭素）の「フィンガープリ ント」を示す。 第１６図は、３人の異なる人からの３本の異なる毛の試料の「フィンガープリ ント」を示す。 第１７図は、３つのアルコール飲料の２次元の炭素−酸素の「フィンガープリ ント」を示す。 発明の詳細な説明 ニフェジピン（および他のジヒドロピリジン、例えば、ニカルジピン、ニモジ ピン、ニルジピン、ニソルジピン、ニトレンジピン、フェロジピン、イフラジピ ンまたはアムロジピン）のこのような修飾は、ニフェジピンをジュウテリウム化 管の中でジュウテロクロロホルムと酸化ジュウテリウムとの混合物中に溶解し、 次いで少量のトリフルオロ酢酸無水物およびジュウテロアセトンをそれに添加し 、 混合することによって達成することができる。次いで、好ましくは管を液体窒素 の中に浸漬することによって、溶液を管内で凍結させ、次いで管を密閉する。次 いで密閉した管を約５０℃〜約６５℃の範囲、好ましくは約５５℃〜約６０℃の 範囲の温度に加熱し、そしてニフェジピン上の２および６位のメチル基をＣＤ₃ にジュウテリウム化するために十分な時間の間その温度に維持する。約１５０〜 約１８０時間はこの反応を完結するために有効であり、約１６０〜１７０時間は 好ましい。 ジュウテリウム化ニフェジピンを下記の方法で合成した。 実施例Ｉ ８０ｍｇの粉末の形態のニフェジピンを特別のジュウテリウム化管の中に入れ 、その中において２ｍｌのジュウテロクロロホルムと０．５ｍｌの酸化ジュウテ リウムとの混合物中に溶解し、次いで０．２ｍｌのトリフルオロ酢酸無水物およ び２ｍｌのジュウテロアセトンを添加し、混合した。この溶液を液体窒素中で凍 結し、管を窒素雰囲気下に火炎密閉した。次いで管を５７℃に１６８時間加熱し 、次いでそれを冷却し、開いた。管の内容物を丸底フラスコに移し、溶媒を回転 蒸発器で真空除去した。すべての操作は減少した光強度下に実施した。慣用の¹ Ｈ核磁気共鳴吸収（ＮＭＲ）を使用して、ジュウテリウム置換は上記に示したＣ −２およびＣ−６メチル基の９５％であると計算された。 次いで、血圧へのジュウテリウム化ニフェジピンの作用を下記のようにして決 定した： 実施例ＩＩ 自発的に高血圧症のラット（ＳＨＲ）をペントバルビタール（６５ｍｇ／ｋｇ 、腹腔内）で麻酔し、そして頸動脈および頸静脈にカニューレを挿入した。頸動 脈カニューレを介して血圧を連続的に監視した。ジメチルスルホキシド（ＤＭＳ Ｏ）の中に溶解したジュウテリウム化および非ジュウテリウム化の双方のニフェ ジピ ン試料を生理食塩水中で希釈して、ＤＭＳＯの最終注射濃度が０．０２５容量％ より低いようにした。次いで適当な希釈物のアリコートをＳＨＲに静脈内注射し 、注射後血圧の作用を少なくとも２時間監視した。使用した投与量は、対照群お よび被験群において、０．００００１、０．００００２、０．００００２５、お よび０．００００５ミリモル／ラットであった。すべてのラットは互いに２５ｇ 以内の体重であった。 結果を第１図に示す。３つのより低い濃度において、ジュウテリウム化ニフェ ジピンの低血圧作用は正規のニフェジピンのそれより大きかった（ｐ＝０．０８ 、ウィルコクソン・ランク−総計検定による）。ラットの５０％の有効投与量（ ＥＤ₅₀）を上記投与量からの結果に基づいて計算し、そして結果は下記の通りで あった：（１）ｌｏｇＥＤ₅₀ジュウテリウム化ニフェジピン：−４．４８（−４ ．５３〜−４．４３、９５％の信頼区間）；および（２）１ｏｇＥＤ₅₀正規のニ フェジピン：−４．３６（−４．４０〜−４．３１、９５％の信頼区間）。信頼 区間はオーバーラップしないので、２つのニフェジピン生成物の効能において統 計学的差が存在し、ジュウテリウム化ニフェジピンは予期せざることには最大の 効能を有する。 カルシウムチャンネルのブロック活性へのジュウテリウム化ニフェジピンの作 用を研究し、そして研究は下記のようにしてパッチクランプ法の全細胞バージョ ンを使用して実施した： 実施例ＩＩＩ ＮＩＥ−１１５細胞（神経芽細胞腫細胞系）を使用し、そしてこれらの細胞を 慣用の組織培養技術を使用して培養した。研究のために、細胞はトリプシン処理 および再プレート後６〜８時間において使用した。この状態において、発現され た優勢を占めるカルシウムチャンネルはＴ型チャンネルであり、これを現在の研 究において使用した。 パッチクランピングは下記の外部および内部の溶液を使用して実施した：外部 の溶液（ｍＭ）：ＢａＣｌ₂ ２０、Ｔｒｉｓ １０５、ＫＣｌ ５、ＣｓＣｌ ５、ＨＥＰＥＳ ２０、グルコース ２０およびテトロドキシン ０．０００ ５。内部の溶液（ｍＭ）：ＣｓＣｌ １３０、ＡＴＰ−Ｎａ₂ ２、ＨＥＰＥＳ ２０、グルコース ５、ＭＧＣｌ₂ ５、ｃＡＭＰ ０．２５、およびＥＧＴ Ａ １０。すべての溶液のモル浸透圧濃度を３１０〜３２０ｍＯｓｍに調節し、 そして必要に応じてＨＣｌ、ＮａＯＨ、ＣｓＯＨまたはＢａ（ＯＨ）₂を使用し てｐＨを７．４に調節した。細胞を含有するペトリ皿を倒立位相差顕微鏡のステ イジに取り付けた。薄壁のホウケイ酸塩ガラスから製作し、内部の溶液を含有す るピペットをマイクロマニュプレーターにより選択した細胞表面に進行させた。 ２０〜３０ギガオームの範囲の抵抗で膜パッチの形成を吸引により促進した。１ ０ｍＶの増分の試験パルスを２００ミリ秒間加え、パルスの間の少なくとも５秒 でチャンネルを回復させた。基底チャンネル活性をピークの内方流れに基づいて 測定した。ニフェジピン溶液を適当な濃度に添加した後、３分を経過させて薬物 が平衡濃度に到達するようにした。この時間後、電流−電圧の関係を再試験し、 そして結果を得られた対照電流の百分率として表した（すなわち、１００％はチ ャンネルブロック活性の不存在を示す）。 １×１０^-6および１×１０^-5の濃度における予備的結果は、ジュウテリウム化 ニフェジピンおよび非ジュウテリウム化ニフェジピンについてのチャンネルコン ダクタンスの間の統計学的差を示さなかった（７０％対７７％、および、それぞ れ、３５％および４３％、ｐ−有意でない）。しかしながら、これらの研究の間 において、２つのニフェジピン化合物のチャンネル活性化依存性の間に差が事実 存在することが認められた。通常のように、普通のニフェジピンはチャンネルの 活性化の状態に依存するブロッキング活性を示した（通常ブロッキングは、チャ ンネルがいっそう「活性」であるとき、促進される）。この作用はジュウテリウ ム化ニフェジピンについて見られなかった；むしろ、それはチャンネルの状態を 無視して連続的な最大の作用を示すように思われた。これが示唆するように、カ ルシウムチャンネルへのジュウテリウム化ニフェジピンの結合は、効能に差が存 在しないことがあってさえ、増強される。臨床的には、これはジュウテリウム化 ニフェジピンがレセプターのより長い半減期を有することができることおよび／ またはそれが血圧の範囲を横切って一定の作用を有することができることを意味 する（正常血圧が高いほど、カルシウムチャンネルのブロッカーの低血圧作用は 大きくなる）。ジュウテリウム化ニフェジピンは高い血圧を有するヒトにおいて 同様な方法で作用することが期待される。 既知の製剤化合物における１または２以上の水素原子のジュウテリウム化はこ のような化合物の活性を増強または変更するであろうことが認められたが、この ような化合物の活性は、化合物中の他の原子の１または２以上を異なるアイソト ープで置換することによって、変更することができると信じられる。原子質量が 異なる多くの種類の他の原子、例えば、炭素、窒素、酸素、錫などが存在するこ とが知られている。これらの異なる種の原子をアイソトープと呼ばれ、そして核 中の中性子の数のみが異なる。 実施例ＩＶ カルシウムチャンネルの阻害の使用依存性−カルシウムチャンネルの反復活性 化は、ピークの内方流れを漸進的に減少させる。流れのこのような減少は、チャ ンネルの刺激の頻度が大きくなるほど、いっそう顕著に起こる。「使用依存性」 のアンタゴニストの存在下に、反復刺激による流れの減少は増強される。使用依 存性は、引き続くチャンネルの活性化の間にアンタゴニストが小さい増分で累積 的に結合ことを意味する。カルシウムチャンネルの場合において２または３回の チャンネル活性化後、阻害の定常状態に到達する。使用依存性の根元的な意味は 、所定のアンタゴニスト（薬物）が活性チャンネルにいっそう強く結合すること で ある。より大きい使用依存性のチャンネル阻害を示す薬物は、活性カルシウムチ ャンネルについてより大きい親和性を有すると推定される。 実施例の下記の組において、カルシウムチャンネルを示した間隔において電流 の反復パルスで脱分極した。このような研究はパッチクランプの全細胞バージョ ンを使用して実施した。薬物の非存在下のパルスの間の間隔の関数として内方流 れの減少を対照として取った。次いで、対照（すなわち、非ジュウテリウム化） およびジュウテリウム化ニフェジピンを、細胞に５μＭの濃度で適用した。次い で、刺激の頻度の関数としての内方流れの減少（すなわち、使用依存性）を２つ のニフェジピン調製物の間で比較した。 第２図は、ＮＩＥ−１１５細胞におけるＴ型カルシウムチャンネルへの対照ニ フェジピン（ニフェジピンＢ）およびジュウテリウム化ニフェジピン（ニフェジ ピンＤ）の使用依存性阻害を示す。この図面は、内方電流の流れおよびニフェジ ピンによるその阻害を表す。刺激の頻度が増加するにつれて、反復刺激のときの 内方電流は減少する（使用依存性）。ニフェジピンは内方電流を減少するように 思われるが、刺激の頻度の増加において、ジュウテリウム化ニフェジピンは対照 ニフェジピンよりも有効である（パネルＣ）。これらの差を第３図〜第５図にさ らに示す。 第３図は、反復１秒のパルス（脱分極）についての内方カルシウム流れへの２ つのニフェジピンの阻害作用を表す。このパルスの頻度において、ジュウテリウ ム化ニフェジピンは対照流れよりもカルシウム流れのブロッキングにおいていっ そう有効である（ｐ＜０．０５、反復測定による、ＡＮＯＶＡ）。ニフェジピン の濃度は双方の場合において５μＭであった。 第４図は、パルス頻度の関数としてカルシウム流れ阻害への２つのニフェジピ ンの作用を示す。１および０．３秒の間隔において、ジュウテリウム化ニフェジ ピンはカルシウムチャンネルのブロッキングにおいて対照ニフェジピンよりも有 効であった。 第５図は、使用依存性への２つのニフェジピンの作用を示す。すべての頻度に おいて、ジュウテリウム化ニフェジピンはより大きい使用依存性カルシウムチャ ンネル阻害を示した。 上記データに基づいて、ジュウテリウム化ニフェジピンはカルシウムチャンネ ルのより大きい使用依存性阻害を有するように思われる。これが意味するように 、ジュウテリウム化ニフェジピンは、刺激の頻度が増加するにつれて、カルシウ ムチャンネルのブロッキングにおいて正規のニフェジピンよりも有効である。チ ャンネルの活性化は病理学的状態、例えば、高血圧症またはアンギナにおいてよ り大きいので、ジュウテリウム化ニフェジピンは正規のニフェジピンよりもこれ らの疾患においていっそう有効である／効力のあることが期待されるであろう。 しかしながら、チャンネル活性が大きいない非病理学的状態において、ジュウテ リウム化ニフェジピンの活性は正規のニフェジピンのそれに近づくであろう。こ のような特性は、薬物（例えば、ジュウテリウム化ニフェジピン）の相対的効能 が症状の苛酷性とともに直接変化するであろうことを意味するので、極めて感動 的である。したがって、例えば、特定の血圧の目標を達成するために血圧をどれ だけ多く減少すべきかを薬物は「知っている」ように思われる。現在、症状（例 えば、高血圧症、アンギナ）の苛酷性が増加するにつれて、このような症状を治 療するために必要なニフェジピンの投与量も増加する。このようなことはジュウ テリウム化ニフェジピンについての場合に当てはまらないであろう。 実施例Ｖ 正常血圧のＳＤラットにおける血圧へのジュウテリウム化ニフェジピンおよび 対照ニフェジピンの作用。対照ニフェジピンおよびジュウテリウム化ニフェジピ ンを最小体積のエタノールの中に溶解し、エタノールの最終濃度が０．０４％よ り低くなるまで希釈した。次いで、示した濃度において１ｍｌの投与量の２つの ニフェジピンを、体重３００〜３５０ｇのペントバルビタール麻酔したＳＤラッ トに注射した。平均動脈圧の最大変化、ならびに低血圧応答の期間を動脈内カテ ーテルにより直接測定した。１つのみの薬物投与量を各ラットに与え、最小６０ 分を経過させて血圧を基線に戻した。結果を後述する図面中に示す。各時間にお いて、作用期間は対照ニフェジピンに比較してジュウテリウム化ニフェジピンに ついてより大きかった。しかしながら、応答期間は血圧の減少の大きさに依存す ることがあるので、等しい効力の投与量の２つの処方物を比較した。この比較に おいて、２×１０^-3モルの濃度の対照ニフェジピンおよび１×１０^-3モルの濃度 のジュウテリウム化ニフェジピンを比較した（相対的効能−４５．８／−４０． ３ｍｍＨｇ、対照／ジュウテリウム化、ｐ＝ＮＳ）。これらの投与量において、 同等の血圧作用にかかわらず、対照ニフェジピンの作用期間は４６．５分であり 、そしてジュウテリウム化ニフェジピンの作用期間は６２．２分であった（ｐ＝ ０．０２）。したがって、ジュウテリウム化ニフェジピンの作用期間は、血圧低 下の有効性に対して独立に、対照ニフェジピンのそれより大きい（すなわち、効 能および作用期間の双方は異なる）。 第６図は、平均動脈圧への対照ニフェジピンおよびジュウテリウム化ニフェジ ピンの作用を示す：第６（ａ）図はプロットした実際の値を示し、第６（ｂ）図 はロジスティック投与量応答回帰によりデータに適合させた曲線を示す。合計６ 匹のラットを各投与量において試験した。見ることができるように、すべての投 与量において、ジュウテリウム化ニフェジピンは対照ニフェジピンよりも効能が あった（ｐ＜０．０５、反復測定による、ＡＮＯＶＡ）。ＭＡＰ＝平均動脈圧。 第７図は、非対称Ｓ状モデルを使用して適合させた対照ニフェジピン（第７（ ａ）図）およびジュウテリウム化ニフェジピン（第７（ｂ）図）についての濃度 −作用の関係を示す。適合させた値＋９５％の信頼区間が示されている。これら の２つのグラフから、信頼区間の間のオーバーラップの欠如に基づいて、２つ のニフェジピンについての濃度−作用の関係は異なることが明らかである。いっ そう正確であるために、曲線の適合は下記の方程式を使用して実施した：ｙ＝ａ ＋ｂ（１−（１＋ｅｘｐ（（ｘ＋ｄｌｎ（２^1/o−１）−ｃ）／ｄ））^{- 0}／₀₀。 これに基づいて、パラメーターａ、ｂおよびｃのすべてはｐ＜０．０５において 統計学的に異なった。 第８図は、ロジスティック投与量応答モデルを使用して適合させた対照ニフェ ジピン（第８（ａ）図）およびジュウテリウム化ニフェジピン（第８（ｂ）図） についての濃度−作用の関係を示す。適合させた値＋９５％の信頼区間が示され ている。これらの２つのグラフから、信頼区間の間のオーバーラップの欠如に基 づいて、２つのニフェジピンについての濃度−作用の関係は異なることが明らか である。いっそう正確であるために、曲線の適合は下記の方程式を使用して実施 した：ｙ＝ａ＋ｂ／（１＋（ｘ／ｃ）^d）。これに基づいて、パラメーターａお よびｂのすべてはｐ＜０．０５において統計学的に異なった。 実施例ＶＩ 正常血圧のＳＤラットにおける血圧へのジュウテリウム化ニカルジピンおよび 対照ニカルジピンの作用。対照ニカルジピンおよびジュウテリウム化ニカルジピ ン（ジュウテリウム化ニフェジピンの製造に類似するにおいて、後述するように 、製造した）を最小体積のエタノールの中に溶解し、エタノールの最終濃度が０ ．０４％より低くなるまで希釈した。次いで示した投与量の２つのニカルジピン を、体重３００〜３５０ｇのペントバルビタール麻酔したＳＤラットに注射した 。平均動脈圧の最大変化、ならびに低血圧応答の期間を動脈内カテーテルにより 直接測定した。１つのみの薬物投与量を各ラットに与え、最小６０分を経過させ て血圧を基線に戻した。 効能の第９（ａ）図および第９（ｂ）図は、対照およびジュウテリウム化（被 験）ニカルジピンの投与量−応答作用を示す。曲線の信頼区間は区域においてオ ーバーラップするが、ＥＤ₁₆、ＥＤ₅₀、およびＥＤ₅₄の統計学的比較は下記の差 を示した。 上記表から、信頼区間はＥＤ₁₆およびＥＤ₅₄の双方について排除的であること を見ることができる。これは投与量応答関係の特質が異なることを示す。これは 対照ニカルジピンについて４１６そしてジュウテリウム化ニカルジピンについて ４６の異なる傾斜の関数により確証される（Ｌｉｔｃｈｆｉｅｌｄ−Ｗｉｌｃｏ ｘｏｎ法により計算して）。したがって、２つの処方物の効能は異なる。 独立変数として投与量および処方物、および依存性変数として平均動脈圧の減 少を使用する２方法の分析は、下記のＡＮＯＶＡ表を明らかにした： ｐ＜０．０５レベルにおいて薬物の差について差は存在しない（しかしながら 、０．１レベルにおいて差は存在する）が、差の欠如は曲線が異ならないＥＤ₅₀ 付近に集まった多数の投与量のためであると思われる。しかしながら、顕著な薬 物×投与量の相互作用が存在し、これは投与量−応答曲線の特質における差を意 味する。 作用期間−ほとんどの時間において、作用期間は対照ニカルジピンに比較して ジュウテリウム化ニカルジピンについて大きかった（第１０図）。しかしながら 、応答期間は血圧の減少の大きさに依存することがあるので、等しい効能の投与 量の２つの処方物を比較した。この比較において、１×１０^-9モルの投与量の対 照ニカルジピンおよび３×１０^-9モルの濃度のジュウテリウム化ニカルジピンを 比較した（相対的効能−１３．８／−１３．８ｍｍＨｇ、対照／ジュウテリウム 化、ｐ＝ＮＳ）。これらの投与量において、同等の血圧作用にかかわらず、対照 ニカルジピンの作用期間は５．４＋３．８（ＳＤ）分であり、そしてジュウテリ ウム化ニカルジピンの作用期間は１５．０＋６．４（ＳＤ）分であった（ｐ＝０ ．４９、Ｍａｎｎ−Ｗｔｉｂｎｅｙ Ｕ−検定による）。したがって、ジュウテ リウム化ニカルジピンの作用期間は、血圧低下の有効性に対して独立に、対照ニ カルジピンのそれより大きい。 独立変数として投与量および処方物、および依存性変数として作用期間を使用 する２方法による作用期間の比較は、下記のＡＮＯＶＡ表を明らかにした： これらの結果は、２つの薬物の作用期間の有意差を示し、ならびに投与量−作 用期間の関係の特質の差を意味する。 上記データに基づいて、ジュウテリウム化ニカルジピンは、血圧低下投与量− 応答作用の特質ならびに作用期間の双方において、対照ニカルジピンと異なる。 実施例ＶＩＩ ジュウテリウム化ニカルジピンの製造。ニカルジピン（および他のジヒドロピ リジン）のこのような修飾は、ニカルジピンをジュウテリウム化管の中でジュウ テロクロロホルムと酸化ジュウテリウムとの混合物中に溶解し、次いで少量のト リフルオロ酢酸無水物およびジュウテロアセトンをそれに添加し、混合すること によって達成することができる。次いで、好ましくは管を液体窒素の中に浸漬す ることによって、溶液を管内で凍結させ、次いで管を密閉する。次いで密閉した 管を約５０℃〜約６５℃の範囲、好ましくは約５５℃〜約６０℃の範囲の温度に 加熱し、そしてニカルジピン上の２および６位のメチル基をＣＤ₃にジュウテリ ウム化するために十分な時間の間その温度に維持する。約１５０〜約１８０時間 はこの反応を完結するために有効であり、約１６０〜１７０時間は好ましい。 ジュウテリウム化ニカルジピンを下記の方法で合成した：８０ｍｇの粉末の形 態のニカルジピンを特別のジュウテリウム化管の中に入れ、その中において２ｍ ｌのジュウテロクロロホルムと０．５ｍｌの酸化ジュウテリウムとの混合物中に 溶解し、次いで０．２ｍｌのトリフルオロ酢酸無水物および２ｍｌのジュウテロ アセトンを添加し、混合した。この溶液を液体窒素中で凍結し、管を窒素雰囲気 下に火炎密閉した。次いで管を５７℃に１６８時間加熱し、次いでそれを冷却し 、開いた。管の内容物を丸底フラスコに移し、溶媒を回転蒸発器で真空除去した 。すべての操作は減少した光強度下に実施した。慣用の¹Ｈ核磁気共鳴吸収（Ｎ ＭＲ）を使用して、ジュウテリウム置換は上記に示したＣ−２およびＣ−６メチ ル基の９５％であると計算された。 ジヒドロピリジン環の位置２および６に結合したメチル基中の水素のジュウテ リウムによる置換の深遠な作用が与えられ、そしてすべてのジヒドロピリジンの カルシウムチャンネルのブロッカーがこれらの位置に少なくとも１つのメチル基 を有するという事実が与えられる（事実、５メチルを有するアミロジピンを除外 して、すべてのジヒドロピリジンは２つのメチルを有し、２メチルのＣＨ₂０Ｃ Ｈ₂ＣＨ₂ＮＨ₂による置換は興味あることにはこのジヒドロピリジンの作用期間 を著しく増加する）と、任意の他のジヒドロピリジンにおけるこれらのメチル基 のジュウテリウム化はニフェジピンにおけるのと同一の作用を有することが期待 されるであろう。 実施例ＶＩＩＩ 正常血圧のＳＤラットにおける血圧へのジュウテリウム化ベラパミルおよび対 照ベラパミルの作用。 ベラパミルのジュウテリウム化−ベラパミル塩酸塩をジュウテリウム化水（ｖ ／ｖ）およびジュウテリウム化メタノール中の２５％のジュウテリウム化硫酸の 溶液に添加した。この溶液を９０℃において１４０時間撹拌した。ｐＨを１２． ０に調節し、この混合物を酢酸エチルで抽出した。一緒にした酢酸エチルの抽出 液を水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、蒸発させると、粘性油状物が得ら れた。この油状物をエーテル中に溶解し、エーテル性塩化水素を添加して塩酸塩 を沈澱させた。この塩を濾過により集め、酢酸エチルから結晶化させると、ジュ ウテリウム化ベラパミルが白色固体状物として得られた。 対照ベラパミルおよびジュウテリウム化ベラパミル（ベラパミル（フェニルア ルキルアミン）の芳香族位置がジュウテリウム化された）を最小体積のエタノー ルの中に溶解し、エタノールの最終濃度が０．０４％より低くなるまで希釈した 。次いで示した投与量の２つのベラパミルを、体重３００〜３５０ｇのペントバ ルビタール麻酔したＳＤラットに注射した。平均動脈圧の最大変化、ならびに低 血 圧応答の期間を動脈内カテーテルにより直接測定した。１つのみの薬物投与量を 各ラットに与え、最小６０分を経過させて血圧を基線に戻した。結果を下記に示 す。 各投与量において、ジュウテリウム化ベラパミルの作用（効能）は対照ベラパ ミルのそれより低かった（第１１図参照）。投与量応答に関して、最大応答とし てほぼ−９０ｍｍＨｇを使用して、対照ベラパミルについてのＥＤ₅₀は２．８９ ×１０^-4ｍＭであり、そしてジュウテリウム化ベラパミルについてのＥＤ₅₀は２ ．１６×１０^-3ｍＭであった。この差は、全体の投与量応答曲線における差の間 で、Ｌｉｔｃｈｆｉｅｌｄ−Ｗｉｌｃｏｘｏｎ分析により異なった。事実、この 技術により決定した効能比は０．１３３ジュウテリウム化／対照であった（９５ ％の信頼区間、０．０７／０．２５、ｐ＜０．００1）。したがって、ジュウテ リウム化ベラパミルは対照ベラパミルより効能が低かった。 しかしながら、作用期間に関して、Ｌｉｔｃｈｆｉｅｌｄ−Ｗｉｌｃｏｘｏｎ 分析により、ジュウテリウム化ベラパミルはより長い作用期間を有した（第１２ 図参照）。さらに、投与量−期間の曲線も有意に異なり、ジュウテリウム化／対 照について４．９５の効能比を与えた（９５％の信頼区間、２．３／１０．７、 ｐ＜０．０１）。等しい効能の投与量（対照について０．３×１０^-4ｍＭ、ジュ ウテリウム化について０．３×１０^-3ｍＭ；血圧の減少、それぞれ、−５２．８ および−５７．０ｍｍＨｇ）において他の方法を比較するために、ジュウテリウ ム化ベラパミル／対照ベラパミルについての作用期間は１２．５／６分であった （ｐ＜０．０１）。 これらの結果が示唆するように、効能および作用期間はジュウテリウム化によ り変更された。ジヒドロピリジンを使用するときのように、作用期間はジュウテ リウム化により延長されたが、効能は、ジヒドロピリジンと異なり、減少した。 しかしながら、ジュウテリウム化の部位に依存して、効能は潜在的に増加するこ とができるであろう。 したがって、上記にかんがみて、（１）作用期間はジュウテリウム化により延 長される（試験したすべての薬物について）；（２）効能はジュウテリウム化に より影響を受ける；それはジヒドロピリジンについて増加し、そしてベラパミル （フェニルアルキルアミン）について減少する；そして（３）使用依存性はジヒ ドロピリジンについて変更される（それはベラパミルについて試験しなかった） 。 アイソトープを使用する薬物の作用期間の延長。序論： 製剤の製造業者は、長い活性期間を有する薬物を開発するとき、数百万ドルを 費やす。より長い作用期間をもつ薬物についての探索は、例えば、下記のものを 包含するいくつかの理由で生ずる：有益な治療効果の延長；新規な薬物投与処方 物について発行された新しい特許による薬物市場のシェアーの保護；および患者 のコンプライアンスの増加（１日当たり３または４回の処方物の代わりに１日当 たり１回の処方物を取ることを容易とする）。 ３つの試験した薬物の各（すなわち、ニフェジピン、ニカルジピン、およびベ ラパミル）は高血圧症（高い血圧）の治療において現在使用されている。心臓血 管の疾患は北アメリカにおける死の主要な原因であり、そして高血圧症は有意な 危険因子であるので、これらの投薬必要とする患者は１日当たり２４時間高血圧 のこれらの作用から患者を保護する薬物濃度を循環の中に有することが重要であ る。ある製造業者は２、３または４回／日の投与をしばしば提供するが、いくつ かの製造業者は投薬処方物を変更することによってより長い作用期間（より長い 半減期）を有する薬物を製造している。これらの投薬処方物の変更は、例えば、 薬物の放出を遅延する賦形剤を含めること、処方物のコーティング、より新しい 処方物（例えば、浸透圧ポンプ）、およびコーティングされた顆粒を包含する。 投薬処方物のこれらの修飾の多くは、開発および製造に極めて費用がかかる。 本明細書において開示するジュウテリウム化薬物を使用するとき、我々は異な るクラスの薬物（例えば、１〜４ジヒドロピリジンおよびフェニルアルキルアミ ン）を修飾できることを示し、そして我々の修飾は、薬物に無関係に、含まれる 原理が同一であるので、すべての薬物に適用されると信じられる。理論により拘 束されないで、薬物をジュウテリウム化することによって、我々は２つの効果を 生成したように思われる：：分子の脂質親和特質を増加した、そして−Ｈを−Ｄ （ジュウテリウム原子）で置換することによって、Ｃ−Ｈ結合をいっそう熱力学 的に安定性とした。前者の点は薬物をいっそう「より深い」組織の貯蔵所（例え ば、脂肪の）の中に分布させることができ、そしてより長い期間の間体の中に長 居させることができる。しかしながら、後者の点はいっそう注意して考察すべき 点である。水素をジュウテリウムで置換することによって、生ずる炭素（Ｃ）ジ ュウテリウム（Ｄ）結合はより強くなる。それゆえ、水素（Ｈ）の質量を１原子 質量単位増加し、Ｄをつくることによって、Ｃ−Ｄ結合は多分より強くなる。こ れはＨの非放射性の安定なアイソトープとしてＤをを使用して実施される。興味 あることには、Ｃ−Ｄ結合はＣ−Ｈ結合より熱力学的にいっそう安定であるので 、それは代謝的（または破壊的）プロセスにより容易には切り放されない。それ ゆえ、薬物の排除の半減期は延長され、そして薬物の治療効果は増加する。また 、我々は薬物の効能が変化することがあることを観察したが、薬物作用の延長は 最も顕著である。 したがって、本質的には、これまで研究した３つの分子においてＨをＤで単に 置換することによって、我々は作用期間を増加することによって新規な「改良さ れた解放性の」薬物をつくった。さらに、この方法の明確な利点は、改良された 解放性の処方物の中に現在含められている、いくつかの潜在的に毒性の賦形剤の 添加の必要性を取り除くことである。 実施例ＩＸ 化合物の「フィンガープリンティング」。製剤化合物の置換基は通常炭素、水 素、窒素、酸素などの元素であり、そしてこれらの元素は２以上のアイソトープ の形態で存在できるので、特に薬物が製造される各地区において合成材料の地方 の化学供給業者が通常使用されるので、これらのアイソトープの正確な形態は各 化学物質がつくられる方法および地理学的場所により決定される。ここで、所定 の製剤はその中に存在するアイソトープの非常に明確なパターンをもつ分子とし て発生させることができる。１つの製造業者による既知の分子と市場において見 出される同様な製剤との比較は、第２の薬物が同一製造業者によるか、または他 の製造業者により製造されたかどうかを確立することができる。各分子はアイソ トープの非常に明確なパターン（「フィンガープリント」）を有するので、これ は可能である。ガスクロマトグラフィー−アイソトープ比質量分析（ＧＣ−ＩＲ ＭＳ）を使用して、製剤調製物の中に存在する物質を確認することができる。 一般的薬物製品は市場における承認される前にある種の特定の試験に合格しな くてはならないが、患者が消費するこのような一般的薬物製品はその薬物の革新 者が製造した薬物のそれと同一の品質をもたないことがあることが決定された。 品質の差は不純物に関係づけるか、または薬物分子の化学構成の差に関係づける ことができ、このような差は標準的試験手法を使用して検出されないが、薬物分 子の分子構造を決定するＧＣ−ＩＲＭＳ（後述する）の使用により検出される。 以上から容易に明らかなように、同一量の薬物を含有する製剤調製物は生物学 的に同等でないことがある。この不同等性は、完全に、特定の製剤の中に含まれ る元素のすべてのアイソトープ混合物のためでであることがある。一般的薬物と その薬物の革新者の権利下に製造された既知の製造業者の薬物との間のこのよう なアイソトープの差は、１つの処方物が他の処方物と置換される場合、投与にわ たってまたは投与下に間違いを生ずることがある。これは、例えば、以前によく 抑制されたアンギナまたは高血圧症が１つの処方物を他の処方物と交換したとき 抑制されないことがあることを意味し、なぜ薬物が期待するようにもはや性能を 発揮しないかと医師を困惑させることがある。逆に、以前に薬物の悪い作用を経 験しなかった患者は新規な処方物から副作用を発生し始めることがある。さらに 、臨床的作用の期間は２つの異なる処方物の間で異なることがある。本発明の態 様によれば、市場に出現し、市場に出されかつ１つの製造業者により製造された 既知の薬物の同等物として販売されている新規な薬物は、既知の薬物との生物学 的同等性について容易に分析することができる。 ＩＲＭＳの方法の基礎 アイソトープ比質量分析（ＩＲＭＳ）は、小さい試料（低いナノグラム量）を 測定できる高度に精確な分析法である。例えば、¹³Ｃ／¹²Ｃ比はモノ炭素分子； ＣＯ₂ガスについて決定される。したがって、有機炭素を酸化第一銅（ＣｕＯ、 オンライン燃焼炉または元素分析装置）の存在下の燃焼によりＣＯ₂に変換し、 極低温的またはクロマトグラフィー的に精製しなくてはならない。次いで、ＣＯ₂ ガスを連続流のＩＲＭＳ（また、ＧＦ−ＩＲＭＳと呼ばれる）により分光光度 計に直接向けることができる。 ＣＯ₂分子を発生するための炭素（¹²Ｃおよび¹³Ｃ）および酸素（¹⁶Ｏ、¹⁷Ｏ 、¹⁸Ｏ）のアイソトープの統計学的組み合わせは、分子量が、それぞれ、４４、 ４５、および４６である種々のアイソトポマーの形成を生ずる。したがって、炭 素のアイソトープ比を測定するために、３つのイオンビームを発生させ、ＣＯ₂ の種々のアイソトポマーの質量に相当するものをＩＲＭＳにおいて記録する。 高い正確さおよび高い精度を得るために、絶対的に既知のアイソトープ組成の 参照ガスを使用し、そして二重の入口系によりガス−スイッチ弁を介してイオン 化源の中に試料のガスと参照ガスの双方を別々に入れる。種々のイオンビームの 測定により、試料の¹³Ｃの濃縮を計算することができる。この計算値にδ¹³Ｃ（⁰ ／₀₀）表示法を与える。¹³Ｃの発生量を下記式に従いδ¹³Ｃ（⁰／₀₀）として表 す：δ¹³Ｃ（⁰／₀₀）＝（［（¹³Ｃ／¹²Ｃ）試料／（¹³Ｃ／¹²Ｃ）ＰＤＢ］−１ ）×１０００ このδ¹³Ｃ（⁰／₀₀）値は、標準からの炭素のアイソトープ比の１００部当たり 部の変動を測定する。炭素について、ＰＤＢを内部標準として選択した。ＰＤＢ はピー・ディー・ベレムニテラ（Ｐｅｅ Ｄｅｅ Ｂｅｌｅｍｎｉｔｅｌｌａ（ サウスカロライナ州におけるピー・ディーの地質学的層からの化石）である。こ の化石の炭酸カルシウムからの¹³Ｃ／¹²Ｃ比は０．０１１２３７である。ＰＤＢ に比較して、天然の化合物の大部分はマイナスのデルタ値を表示する。上記方程 式において、¹³Ｃ／¹²Ｃはアイソトポマーを指示する。 ¹⁵Ｎについての種々のイオンビームの測定にδ¹⁵Ｃ（⁰／₀₀）表示法を与える 。 ¹⁵Ｎの発生量を下記式に従いδ¹⁵Ｎ（⁰／₀₀）として表す：δ¹⁵Ｎ（⁰／₀₀）＝ ［（¹⁵Ｎ／¹⁴Ｎ）試料）−（¹⁵Ｎ／¹⁴標準）／（¹⁵Ｎ／¹⁴Ｎ）標準］×１０００ このδ¹⁵Ｎ（⁰／₀₀）値は、標準からの窒素のアイソトープ比の１００部当たり 部の変動を測定する。窒素について、空気を内部標準として選択した。 ¹⁸Ｏについての種々のイオンビームの測定にδ¹⁸Ｃ（⁰／₀₀）表示法を与える 。¹⁸Ｏの発生量を下記式に従いδ¹⁸Ｏ（⁰／₀₀）として表す：δ¹⁸Ｏ（⁰／₀₀）＝ ［（¹⁸Ｏ／¹⁶Ｏ）試料）−（¹⁸Ｏ／¹⁶Ｏ標準）／（¹⁸Ｏ／¹⁶Ｏ）標準］×１００ ０ このδ¹⁸Ｏ（⁰／₀₀）値は、標準から誘導された酸素である酸素のイソトープ比 の１００部当たり部の変動を測定する。酸素について、ＣＯ₂を内部標準として 選択した。 ＩＲＭＳの計器の設定 アイソトープ比質量分析器は、二重の入口モードおよび非ガス試料の導入のた めの元素分析装置を装備したフィンニガン（Ｆｉｎｎｉｇａｎ）ＭＡＴ２５２（ Ｂｒｅｍｅｎ、ドイツ国）であった。各試料がポリアルコキシ１０〜２０μｇを 含有するように試料を秤量し、錫カプセルに移した。閉じた錫カプセルを自動化 導入システム（元素分析装置ＮＡ１５００ＮＣ型、Ｆｉｓｏｎｓ、英国）の中に 収容した。試料を１０８０℃において酸素および酸化触媒（ＣｒＯ＋ＣｕＯ）で 燃焼させた。精製したＣＯ₂を連続流ＩＲＭＳにより分析した。ＣＯ₂標準は¹³Ｃ オズテッチ（Ｏｚｔｅｃｈ）ＣＯ₂（ｄＣ（ＰＤＢ）＝−３６．４９ ⁰／₀₀；ｄ Ｏ（ＰＤＢ）＝−２５．５６ ⁰／₀₀；ｄＯ（ＳＭＯＷ）＝＋１５．０６ ⁰／₀₀） （Ｏｚｔｅｃｈ Ｔｒａｄｉｎｇ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、米国テキサス州ダ ラス、から入手した）であった。他の標準の実験はアトロピン（Ｃ、７０．５６ ％、 Ｈ；８．０１％；Ｎ、４．８４％；Ｏ、１６．５９％）およびフェナントレン（ Ｃ、９３．５５６％、Ｈ；５．６１５％；Ｎ、０．１８０％；Ｓ、０．４５６％ ）であった。精製した窒素を連続流ＩＲＭＳにより分析した。Ｎ標準は¹⁵Ｎオズ テッチ窒素（ｄＮ（ＡＩＲ）＝−１．８９ ⁰／₀₀（Ｏｚｔｅｃｈ Ｔｒａｄｉｎ ｇ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、米国テキサス州ダラス、から入手した）であった 。 計器の設定は下記の通りであった：高電圧（ＨＶ）、１０ｋＶ；カソード、５ ．７４Ａ；放射、１．４７３ｍＡ；トラップ放射、０．９３７ｍＡ；電子のエネ ルギー、７５．０−Ｖ；トラップ、５０．１Ｖ。 フィンガープリンティングのための アイソトープ比質量分析の適用： ニフェジピン、シプロフロキサシン、ケトプロフェン、ゾピクロンを包含する 多数の製剤を、製造源の決定のためにアイソトープ比質量分析器（ＩＲＭＳ）を 使用して研究した。この「フィンガープリント」を生成する方法は、例えば、Ｃ Ｏ₂ガスから決定される¹³Ｃ／¹²Ｃ比に基づく；また、酸素および窒素のアイソ トープ比を「フィンガープリンティング」に使用することができる。製剤中の有 機炭素を酸化第一銅の存在下に燃焼によりＣＯ₂に変換し、極低温的またはクロ マトグラフィー的に精製する。生ずるＣＯ₂をＩＲＭＳの移送ラインを介して連 続流により分光光度計に直接移送する。 ＣＯ₂のアイソトープの測定のための高度の精度を維持するために、絶対的に 既知のアイソトープ組成の参照ガスを、試料ガス（製剤から）および参照ガスの 双方を別々に導入することができる二重の入口系を通してＩＲＭＳに入れる。こ の分析は、下記のように表される¹³Ｃ／¹²Ｃ比（δ ⁰／₀₀）を発生させる： （δ ⁰／₀₀）＝（（Ｒ試料−Ｒ標準）／Ｒ標準）×１０００ このδ ⁰／₀₀（デルタ／ミル）値は、標準からの炭素のアイソトープ比の１００ 部当たり部の変動を測定する。製剤のフィンガープリンティングにおいて使用す るのはこの値である。 生材料（活性成分）ならびに仕上げられた生成物（例えば、錠剤）を分析した 。処理した製剤についての結果は下記の通りである： 生材料および仕上げられた生成物についてのＩＲＭＳの結果 フィンガープリンティング ＩＲＭＳを使用して種々の製造源からの製剤を「フィンガープリント」するこ とができることを、上記情報は確証する。このような情報は、生材料（活性成分 ）または仕上げられた生成物であるかどうかにかかかわらず、製剤源を突き止め るために使用することができる。 第１３図は、７つのニフェジピン調製物の３次元の「フィンガープリント」を 示す。これらの調製物のすべては互いに有意に異なる。この型の３次元の「フィ ンガープリント」は、典型的には薬物または任意の他の物質の最も感受性の「フ ィンガープリント」を提供するために実施されるものである。 第１４図は、９つのニフェジピン調製物の２次元の「フィンガープリント」を 示す。誤差の線は９５％の信頼区間である；したがって、これらの調製物のすべ ては互いに有意に異なる。３次元の「フィンガープリンティング」はいっそう精 確な「フィンガープリント」を与えるが、実際には２次元の「フィンガープリン ティング」は通常物質を区別するために十分である。 第１５図は、ソラトール粗製錠剤の２次元（酸素／炭素）の「フィンガープリ ント」を示す。錠剤の大部分は２次元の技術により互いに区別することができる が、炭素−酸素の２次元の「フィンガープリンティング」は炭素−窒素の「フィ ンガープリンティング」より精度が低い。 第１６図は、３人の異なる人からの３本の異なる毛の試料の「フィンガープリ ント」を示す。第１の患者（ｐｔ．１）の場合において、第２試料を１週後に獲 得し、第１と比較した。この比較は第１試料と統計学的に同一の値を与え、こう してこの技術が再現性があり、そして毛の試料の同定に使用することができる。 第１７図は、３つのアルコール飲料の２次元の炭素−酸素の「フィンガープリ ント」を示す。アルコール飲料の中の２つは同一ブランドのものであるが、「フ ィンガープリンティング」は由来の国に従いそれらを区別することができる。 上記のそれ以上の変動および変形は当業者にとって明らかであり、そしてこの ような変動および改変は添付した請求の範囲に包含される。

【手続補正書】特許法第１８４条の７第１項 【提出日】１９９６年１月４日 【補正内容】 請求の範囲 １． 水素原子の少なくとも１つがジュウテリウム原子で置換されいるジヒド ロピリジンである化合物。 ２． 前記ジヒドロピリジンが下記式を有するジュウテリウム化ニフェジピン である、請求項１に記載の化合物。 （式中、水素原子の少なくとも１つはジュウテリウム原子である）。 ３． 前記ジュウテリウム化ニフェジピンのメチル基の少なくとも１つがＣＤ₃ である、請求項２に記載の化合物。 ４． メチル基がジヒドロピリジン環の位置２および６に結合しており、そし てそれらの少なくとも１つがＣＤ₃で置換されている、請求項１に記載の化合物 。 ５． 前記ジュウテリウム化ジヒドロピリジンが下記式を有するジュウテリウ ム化ニフェジピンである、請求項４に記載の化合物。 ６． 前記ジヒドロピリジンがニフェジピン、ニカルジピン、ニモジピン、ニ ルジピン、ニソルジピン、ニトレンジピン、フェロジピン、イフラジピンまたは アムロジピンである、請求項１に記載の化合物。 ７． ジヒドロピリジンをジュウテロクロロホルムと酸化ジュウテリウムとの 混合物中に溶解して溶液を形成し、 トリフルオロ酢酸無水物およびジュウテロアセトンを前記溶液に添加し、 前記溶液を容器内で凍結および密閉し、 前記ジヒドロピリジン上の２および６位の水素原子のすべてをジュウテリウム 化するために十分な温度にかつ時間の間前記溶液を加熱し、そして ジュウテリウム化ジヒドロピリジンを回収する、 ことを含んでなる、Ｈ原子の少なくとも１つがジュウテリウム原子で置換された ジュウテリウム化ジヒドロピリジンを製造する方法。 ８． 前記ジュウテリウム化ジヒドロピリジンがジュウテリウム化ニフェジピ ンであり、そして前記方法が、 ニフェジピンをジュウテロクロロホルムと酸化ジュウテリウムとの混合物中に 溶解して溶液を形成し、 トリフルオロ酢酸無水物およびジュウテロアセトンを前記溶液に添加し、 前記溶液を容器内で凍結および密閉し、 前記ニフェジピン上の２および６位におけるメチル基上の水素原子のすべてを ジュウテリウム化するために十分な温度にかつ時間の間前記溶液を加熱し、そし て 前記ジュウテリウム化ニフェジピンを回収する、 ことを含んでなる、請求項７に記載の方法。 ９． ８０ｍｇのニフェジピンを約２ｍｌのジュウテロクロロホルムと約０． ５ｍｌの酸化ジュウテリウムとの混合物中に溶解して溶液を形成し、 ０．２ｍｌのトリフルオロ酢酸無水物および２ｍｌのジュウテロアセトンを前 記溶液に添加し、そして混合し、 前記溶液を容器内で凍結および密閉し、 前記溶液を約５０〜約６５℃の温度に約１５０〜１８０時間の間加熱し、 前記加熱された溶液を冷却し、そして前記ジュウテリウム化ニフェジピンを回 収する、 ことを含んでなる、請求項８に記載の方法。 １０． 前記温度が約５５〜約６０℃である、請求項９に記載の方法。 １１． 前記時間が約１６０〜１７０時間である、請求項９に記載の方法。 １２． 前記温度が約５７℃であり、そして前記時間が１６８時間である、請 求項９に記載の方法。 １３． Ｈ原子の少なくとも１つがジュウテリウム原子で置換されているジュ ウテリウム化ニフェジピンの治療的に有効量を高血圧に悩まされる動物に投与す ることを含んでなる、前記動物の高血圧を治療する方法。 １４． メチル基がジヒドロピリジン環の位置２および６に結合しており、そ してそれらの少なくとも１つがＣＤ₃で置換されている、請求項１３に記載の方 法。 １５． 製剤化合物が既知の製剤化合物と同一および／または生物学的に同等 であるかどうかを検出する方法であって、下記ステップ： （ａ）前記既知の製剤化合物の分子およびアイソトープの構造をガスクロマト グラフィー−アイソトープ比質量分析により決定し、 （ｂ）前記検出に付す前記製剤化合物の分子およびアイソトープの構造をガス クロマトグラフィー−アイソトープ比質量分析により決定し、 （ｃ）前記２つの決定の結果を比較して、前記既知の製剤化合物の分子構造に わたって前記製剤化合物の分子構造のアイソトープの変動を検出する、 を含んでなる前記方法。 １６． 抗高血圧薬物としての、Ｈ原子の少なくとも１つがジュウテリウム原 子で置換されているジュウテリウム化ニフェジピンの使用。 １７． メチル基がジヒドロピリジン環の位置２および６に結合しており、そ してそれらの少なくとも１つがＣＤ₃で置換されている、請求項１６に記載の使 用。 １８． 抗高血圧薬物を製造するのための、Ｈ原子の少なくとも１つがジュウ テリウム原子で置換されているジュウテリウム化ニフェジピンの使用。 １９． メチル基がジヒドロピリジン環の位置２および６に結合しており、そ してそれらの少なくとも１つがＣＤ₃で置換されている、請求項１８に記載の使 用。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ Ｃ０７Ｄ 487/04 １４０ 9547−4Ｈ Ｃ０７Ｃ 233/33 Ｃ０７Ｃ 233/33 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)， ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，Ｃ Ｈ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ， ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，Ｍ Ｗ，ＭＸ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＺ， ＶＮ (72)発明者 カーイュ，ジル カナダ国ケベック、ウートルモン、アブニ ュ、ケルブ、３

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １． 水素原子の少なくとも１つがジュウテリウム原子で置換されいるか、ま たは少なくとも１つの炭素、窒素または酸素が異なるアイソトープで置換されて いる化合物。 ２． 前記化合物がジヒドロピリジンである、請求項１に記載の化合物。 ３． 前記ジヒドロピリジンが下記式を有するジュウテリウム化ニフェジピン である、請求項２に記載の化合物。 （式中、水素原子の少なくとも１つはジュウテリウム原子である）。 ４． 前記ジュウテリウム化ニフェジピンのメチル基の少なくとも１つがＣＤ₃ である、請求項３に記載の化合物。 ５． ジヒドロピリジン環の位置２および６に結合したメチル基の少なくとも １つがＣＤ₃で置換されている、請求項２に記載の化合物。 ６． 前記ジュウテリウム化ジヒドロピリジンが下記式を有するジュウテリウ ム化ニフェジピンである、請求項５に記載の化合物。 ７． 前記ジヒドロピリジンがニフェジピン、ニカルジピン、ニモジピン、ニ ルジピン、ニソルジピン、ニトレンジピン、フェロジピン、イフラジピンまたは アムロジピンである、請求項２に記載の化合物。 ８． ジヒドロピリジンをジュウテロクロロホルムと酸化ジュウテリウムとの 混合物中に溶解して溶液を形成し、 トリフルオロ酢酸無水物およびジュウテロアセトンを前記溶液に添加し、 前記溶液を容器内で凍結および密閉し、 前記ジヒドロピリジン上の２および６位の水素原子のすべてをジュウテリウム 化するために十分な温度にかつ時間の間前記溶液を加熱し、そして 前記ジュウテリウム化ジヒドロピリジンを回収する、 ことを含んでなる、請求項２に記載のジュウテリウム化ジヒドロピリジンを製造 する方法。 ９． 前記ジュウテリウム化ジヒドロピリジンがジュウテリウム化ニフェジピ ンであり、そして前記方法が、 ニフェジピンをジュウテロクロロホルムと酸化ジュウテリウムとの混合物中に 溶解して溶液を形成し、 トリフルオロ酢酸無水物およびジュウテロアセトンを前記溶液に添加し、 前記溶液を容器内で凍結および密閉し、 前記ニフェジピン上の２および６位における水素原子のすべてをジュウテリウ ム化するために十分な温度にかつ時間の間前記溶液を加熱し、そして 前記ジュウテリウム化ニフェジピンを回収する、 ことを含んでなる、請求項８に記載の方法。 １０． ８０ｍｇのニフェジピンを約２ｍｌのジュウテロクロロホルムと約０ ．５ｍｌの酸化ジュウテリウムとの混合物中に溶解して溶液を形成し、 ０．２ｍｌのトリフルオロ酢酸無水物および２ｍｌのジュウテロアセトンを前 記溶液に添加し、そして混合し、 前記溶液を容器内で凍結および密閉し、 前記溶液を約５０〜約６５℃の温度に約１５０〜１８０時間の間加熱し、 前記加熱された溶液を冷却し、そして前記ジュウテリウム化ニフェジピンを回 収する、 ことを含んでなる、請求項９に記載の方法。 １１． 前記温度が約５５〜約６０℃である、請求項１０に記載の方法。 １２． 前記時間が約１６０〜１７０時間である、請求項１０に記載の方法。 １３． 前記温度が約５７℃であり、そして前記時間が１６８時間である、請 求項１０に記載の方法。 １４． 請求項２または６に記載の式のジュウテリウム化ニフェジピンの治療 的に有効量を高血圧に悩まされる動物に投与することを含んでなる、前記動物の 高血圧を治療する方法。 １５． 製剤化合物が既知の製剤化合物と同一および／または生物学的に同等 であるかどうかを検出する方法であって、下記ステップ： （ａ）前記既知の製剤化合物の分子およびアイソトープの構造をガスクロマト グラフィー−アイソトープ比質量分析により決定し、 （ｂ）前記検出に付す前記製剤化合物の分子およびアイソトープの構造をガス クロマトグラフィー−アイソトープ比質量分析により決定し、 （ｃ）前記２つ の決定の結果を比較して、前記既知の製剤化合物の分子構造にわたって前記製剤 化合物の分子構造のアイソトープの変動を検出する、 を含んでなる前記方法。 １６． 抗高血圧薬物としての、請求項２または５に記載の式のジュウテリウ ム化ニフェジピンの使用。 １７． 抗高血圧薬物を製造するのための、請求項２または５に記載の式のジ ュウテリウム化ニフェジピンの使用。