ES2293638T3

ES2293638T3 - Mejora de la eficacia de farmacos por deuteracion.

Info

Publication number: ES2293638T3
Application number: ES95912109T
Authority: ES
Inventors: Robert R. Foster; Richard Lewanczuk; Gilles Caille
Original assignee: Isotechnika Inc
Current assignee: Isotechnika Inc
Priority date: 1994-03-25
Filing date: 1995-03-27
Publication date: 2008-03-16
Anticipated expiration: 2015-03-27
Also published as: ATE372966T1; AU1944195A; DE69535592D1; JPH09510717A; EP0751926B1; BR9507200A; KR20040068613A; MX9604309A; CA2186371A1; JP3696884B2; CN1087725C; WO1995026325A3; WO1995026325A2; CN1148843A; AU707748B2; US5846514A; DE69535592T2; EP0751926A1; KR100477070B1

Abstract

UN METODO PARA AUMENTAR LA EFICACIA E INCREMENTAR LA DURACION DE LA ACCION DE LOS MEDICAMENTOS (POR EJEMPLO, DIHIDROPIRIDINAS) Y PARTICULARMENTE DE NIFEDIPINA EN DONDE UNO O MAS ATOMOS DE HIDROGENO SON DEUTERADOS Y EN DONDE LA NIFEDIPINA DEUTERADA TIENE PROPIEDADES HIPOTENSIVAS INESPERADAMENTE MEJORADAS CUANDO ES USADA EN CONCENTRACIONES MUCHO MENORES QUE LA NIFEDIPINA PER SE.SE DESCRIBE TAMBIEN UN METODO PARA DETERMINAR LA IDENTIDAD Y BIOEQUIVALENCIA DE UN NUEVO MEDICAMENTO EN DONDE LA ESTRUCTURA MOLECULAR Y LA DEL ISOTOPO DE UN NUEVO MEDICAMENTO ES DETERMINADA POR EL INDICE DE ESPECTROMETRIA DE MASA CON RESPECTO A LOS ISOTOPOS DE CROMATOGRAFIA GASEOSA Y COMPARADA CON LA ESTRUCTURA MOLECULAR Y LA ESTRUCTURA DEL ISOTOPO DE UN MEDICAMENTO HUMANO CONOCIDO.

Description

Mejora de la eficacia de fármacos por deuteración.

Referencia a una solicitud relacionada

Esta es una continuación en parte de la solicitud de los autores pendiente de trámite de la patente US nº de serie 08/217.897 presentada el 25 de marzo de 1994 que está basada e incorporada en la presente memoria como referencia y se incorpora a la misma en su totalidad.

Antecedentes de la invención

La presente invención se refiere a un procedimiento para aumentar la eficacia de productos farmacéuticos o fármacos conocidos, y a los fármacos mejorados producidos de este modo, cambiando la forma isotópica de la estructura molecular del fármaco conocido. Más específicamente, la presente invención se refiere a la modificación de la estructura molecular de fármacos conocidos que contienen uno o más átomos de hidrógeno mediante la deuterización de uno o más de los átomos de hidrógeno en átomos de deuterio. El fármaco resultante está significativamente alterado y presenta actividad mejorada en gran medida sobre el fármaco conocido. Aún más específicamente la presente invención se refiere a un procedimiento de deuteración de una dihidropiridina (p. ej., nifedipina) con lo que la nifedipina deuterada presenta un aumento del efecto hipotensor y un aumento de la duración de la acción en mamíferos a concentraciones más bajas que la nifedipina.

Cuando se sintetizan productos farmacéuticos, se monta un eje central de carbono con varios sustituyentes que incluye carbono, hidrógeno, oxígeno, nitrógeno, etc. Los productos farmacéuticos han sido diseñados y sintetizados por numerosos modos incluyendo, por ejemplo, el descubrimiento casual y la modificación molecular. Estos y otros procedimientos han generado un gran número de fármacos a lo largo del tiempo. Como tales modificaciones han permitido a compañías particulares mantener un presupuesto competitivo en el mercado, una parte significativa del tiempo y de los recursos en la industria se consume investigando nuevos agentes en determinadas clasificaciones farmacológicas, p. ej., antihipertensores. Dichos nuevos agentes con frecuencia presentan diferentes actividades de los compuestos prototipo, justificando de este modo el dinero gastado para su desarrollo.

Eur. J. Med. Chem. vol. 28, nº 3, 1993, 259-263 da a conocer determinados análogos deuterados de verapamilo y nifedipina y se refiere a su síntesis, así como a su actividad biológica cuando se aplican como agentes antihipertensores en forma de una preparación farmacéutica a ratas espontáneamente hipertensas.

Chem. Abstr. 1977-1981, Chem. Subst. Ind. en la columna 1 en la página 46167CS, Chem. Abstr. 1982-1986, Chem. Substr. Ind. en la columna 1 en la página 58923CS, y Chem. Abstr. 1987-1991, Chem. Subst. Ind. en la página 79669CS en la columna 3 se refieren en conjunto a un número de derivados de dihidropiridina en el que por lo menos uno de los átomos de hidrógeno se sustituye por un átomo de deuterio.

Anal. Chim. Acta, vol. 247, nº 2, 1991, 871-875, FR-A-2 673 291 y WO-A-89/094486 da a conocer un procedimiento de comparación de dos muestras de un compuesto químico, p. ej., un compuesto farmacéutico, sometiendo dichas muestras a cromatografía de gases-espectrometría de masas por relación de isótopo para determinar cualquier variación de isótopos en su estructura molecular si las dos muestras tienen o no el mismo o diferente origen.

Biochem. Pharmacology vol. 18 nº 23 páginas 4213 - 16 (1989), da a conocer una nifedipina deuterada.

Sumario de la invención

Es conocido que prácticamente todos los fármacos comercializados actualmente incluyen numerosos átomos de hidrógeno, cada uno de los cuales tiene una masa molecular de uno. Se ha descubierto actualmente que cuando uno o más de los átomos de hidrógeno en un fármaco se modifican de modo que su masa molecular se convierte en dos, la actividad del fármaco se altera de manera significativa e incluso mejora en gran medida. Por lo tanto, por ejemplo, la modificación isotópica de una dihidropiridina, p. ej., tal como nifedipina, ha producido un cambio inesperado en el efecto hipotensor (disminución de la presión sanguínea) en mamíferos en comparación con nifedipina por sí misma, y dichos efectos deberían también conseguirse en seres humanos.

Nifedipina está comercializada en todo el mundo como un importante fármaco utilizado en el tratamiento de la angina de pecho y la hipertensión. Su estructura es la siguiente:

1

Al modificar la nifedipina sustituyendo uno o más hidrógenos de los grupos metilo con deuterio o sustituyendo uno o más de los grupos metilo con CD_{3}, las propiedades terapéuticas de nifedipina pueden alterarse y pueden incluso mejorarse de manera significativa. Por ejemplo, al modificar la nifedipina sustituyendo los dos grupos metilo en las posiciones 2 y 6 en el anillo con dos grupos deuterados (CD_{3}), es decir, sustituyendo 6 átomos de hidrógeno con seis átomos de deuterio, la estructura de la nifedipina deuterada es la siguiente:

2

Ambas moléculas anteriores son nifedipina y la última estructura es una forma isotópica de la anterior.

En particular, la presente invención se refiere a compuestos de dihidropiridina seleccionados de entre el grupo constituido por nicardipina deuterada en la que uno o más átomos de hidrógeno de uno o ambos grupos metilo en las posiciones 2 y 6 se sustituyen por un átomo de deuterio y a los compuestos que tienen la fórmula

3

en la que:

X=H,

R^{1} = CH_{3}, en el que cada átomo de H puede estar sustituido por un átomo de D, y

R^{2} = CH_{3}, en el que por lo menos 5 de cada 6 átomos H en total pueden estar sustituidos por un átomo D, y

en la que por lo menos uno de entre R^{1} y R^{2} conjuntamente contiene un átomo D.

Las formas de realización preferidas de la presente invención están descritas en las reivindicaciones 2 a 30 adjuntas que están incorporadas en la presente memoria como referencia.

Breve descripción de los dibujos

La presente invención se entenderá mejor con relación a los dibujos, en los que:

La Figura 1 presenta el efecto hipotensor de varias concentraciones de las nifedipinas deuteradas en ratas tratadas en comparación con nifedipina sola;

las Figuras 2 y 3 presentan la utilización dependiente de la inhibición de la nifedipina de referencia (Nifedipina B) y la nifedipina deuterada (Nifedipina D) sobre los canales del calcio de tipo T;

la Figura 4 presenta el efecto de la nifedipina de referencia y de la nifedipina deuterada sobre la inhibición existente del calcio en función de la frecuencia del pulso;

la Figura 5 presenta el efecto de la nifedipina de referencia y de la nifedipina deuterada en la dependencia de su utilización;

las Figuras 6(a) y (b) presentan el efecto de la nifedipina deuterada de referencia en la presión arterial media;

las Figuras 7(a) y (b) presentan las relaciones concentración-efecto para la nifedipina de referencia (Figuras 7(a)) y deuterada (Figura 7(b)) ajustadas utilizando un modelo sigmoideo asimétrico;

las Figuras 8(a) y (b) presentan las relaciones concentración-efecto para la nifedipina de referencia (Figuras 8(a)) y deuterada (Figura 8(b)) ajustadas utilizando un modelo logístico de respuesta a la dosis;

las Figuras 9a y 9b presentan el efecto de la respuesta a la dosis para las nicardipinas de referencia y deuterada (prueba);

la Figura 10 demuestra que la duración del efecto fue mayor para la nicardipina deuterada en comparación con la nicardipina de referencia;

la Figura 11 presenta el efecto hipotensor de varias concentraciones de verapamilo deuterado en ratas tratadas en comparación con verapamilo solo;

la Figura 12 demuestra que la duración del efecto fue mayor para el verapamilo deuterado en comparación con el verapamilo de referencia.

Descripción detallada de la invención

Dicha modificación de nifedipina (y de otras dihidropiridinas tales como, por ejemplo, nicardipina, nimodipina, niludipina, nisoldipina, nitrendipina, felodipina, ifradipina y amlodipina) puede conseguirse disolviendo la nifedipina en un tubo de deuteración en una mezcla de deuterocloroformo y óxido de deuterio, y añadiendo a continuación una cantidad menor de anhídrido trifluoroacético y deuteroacetona a esto y mezclándola con ésta. La solución se congela a continuación en el tubo, preferentemente sumergiendo el tubo en nitrógeno líquido y a continuación sellando el tubo. El tubo sellado se calienta a continuación a una temperatura dentro del intervalo comprendido entre aproximadamente 50º a aproximadamente 65ºC, y preferentemente dentro del intervalo entre aproximadamente 55º y aproximadamente 60ºC y mantenido a esta temperatura durante un periodo de tiempo suficiente para deuterar el grupo metilo en las posiciones 2 y 6 en la nifedipina a CD_{3}. Un periodo desde aproximadamente 150 a aproximadamente 180 horas es eficaz para completar la reacción, siendo preferido un tiempo de aproximadamente 160 a 170 horas.

La nifedipina deuterada se sintetizó de la siguiente manera:

Ejemplo I

Se colocaron 80 mg de nifedipina en forma de polvo en un tubo de deuteración especial y se disolvieron en el mismo en una mezcla de 2 ml de deuterocloroformo y 0,5 ml de óxido de deuterio tras lo cual se añadieron 0,2 ml de anhídrido trifluoroacético y 2 ml de deuteroacetona y se mezclaron con los mismos. Se congeló la solución en nitrógeno líquido y se selló el tubo a la llama bajo nitrógeno. Se calentó a continuación el tubo a 57ºC durante 168 horas tras las cuales se enfrió y se abrió. El contenido del tubo se transfirió a un matraz de fondo redondo y se eliminó el disolvente al vacío en un evaporador rotativo. Todas las operaciones se realizaron bajo intensidad luminosa reducida. Utilizando resonancia magnética nuclear (RMN) de ^{1}H convencional se calculó que la sustitución de deuterio era del 95% de los grupos metilo C-2 y C-6 presentados anteriormente.

El efecto de la nifedipina deuterada sobre la presión sanguínea en ratas se determinó a continuación de la forma siguiente:

Ejemplo II

Se anestesiaron ratas espontáneamente hipertensas (SHR) con pentobarbital (65 mg/kg, por vía intraperitoneal) y se canuló una arteria carótida y la vena yugular. La presión sanguínea se controló continuamente por la cánula de la arteria carótida. Se diluyeron en solución salina muestras de nifedipina, tanto deutadas como no deuteradas, disueltas en sulfóxido de dimetilo (DMSO) de modo que la concentración final inyectada de DMSO era inferior al 0,025% en volumen. Se inyectaron por vía intravenosa a continuación alícuotas de las diluciones apropiadas en las SHR y se controlaron los efectos sobre la presión sanguínea durante por lo menos dos horas después de la inyección.

Las dosis utilizadas fueron 0,00001, 0,00002, 0,000025 y 0,00005 milimoles por rata en el grupo de referencia y en el grupo de ensayo. Todas las ratas estaban comprendidas dentro de 25 gramos de peso corporal de unas a otras.

En la Figura 1 se presentan los resultados. En las tres concentraciones menores el efecto hipotensor de la nifedipina deuterada fue superior que el de la nifedipina normal (p=0,08 por la prueba de la suma-ordinal de Wilcoxon). Las dosis eficaces del 50% de las ratas (ED_{50}) se calcularon basándose en los resultados de las dosis anteriores y los resultados fueron: (1) Log ED_{50} de nifedipina deuterada: -4,48 (-4,53 a -4,43, 95% de intervalo de confianza); y (2) Log ED_{50} de nifedipina normal: -4,36 (-4,40 a -4,31, 95% de intervalo de confianza). Dado que los intervalos de confianza no se solapan, existe una diferencia estadística en la potencia de los dos productos de nifedipina, presentando la nifedipina deuterada de forma inesperada la mayor potencia.

Se estudió el efecto de la nifedipina deuterada sobre la actividad de bloqueo del canal del calcio y los estudios se realizaron utilizando la versión de la célula completa del método de sujeción del parche, de la manera siguiente:

Ejemplo III

Se utilizaron células NIE-115 (estirpe celular de neuroblastoma) y se cultivaron estas células utilizando técnicas de cultivo tisular convencionales. Para el estudio, se emplearon seis a ocho horas después de la tripsinización y recolocación en placas. En este estado el canal de calcio predominante expresado fue el canal de tipo T, que se utilizó para los estudios actuales.

La sujeción del parche se realizó utilizando las siguientes soluciones externa e interna: Solución externa (en mM). BaCl_{2} 20, Tris 105, KCl 5, CsCl 5, HEPES 20, glucosa 20 y tetrodotoxina 0,0005. Soluciones internas (en mM): CsCl 130, ATP-Na_{2} 2, HEPES 20, glucosa 5, MgCl_{2} 5, AMPc 0,25 y EGTA 10. La osmolaridad de todas las soluciones se ajustó a 310-320 mOsm y el pH se ajustó a 7,4 utilizando HCl, NaOH, CsOH o Ba(OH)_{2} según se requiera. La placa de Petri que contiene las células se montó en la etapa de un microscopio invertido de contraste de fases. Las pipetas fabricadas de vidrio de borosilicato de pared fina, y que contienen la solución interna, se avanzaron a la superficie celular seleccionada utilizando un micromanipulador. La aspiración facilitó la formación de un parche de membrana con resistencia comprendida en el intervalo entre 20 y 30 gigaohmios. Se aplicaron pulsaciones de prueba a incrementos de 10 mV durante 200 ms dejando por lo menos 5 s para la recuperación del canal entre las pulsaciones. La actividad básica del canal se midió basándose en las corrientes hacia dentro del pico. Después de la adición de las soluciones de nifedipina a la concentración apropiada, se dejaron 3 minutos para que el fármaco alcance las concentraciones de equilibrio. Después de este tiempo las relaciones corriente-voltaje se volvieron a medir y los resultados se expresan como porcentaje de la corriente de referencia obtenida (es decir, 100% indica ninguna actividad de bloqueo del canal).

Los resultados preliminares a las concentraciones de 1 \times 10^{-6} y 1 \times 10^{-5} no presentaban ninguna diferencia estadística entre la conductancia del canal para la nifedipina deuterada y no deuterada (70% frente a 77%, y 35% y 43%, respectivamente, p no es significativa). Durante estos estudios, sin embargo, se observó que existía una diferencia entre la dependencia de activación del canal de los dos compuestos de nifedipina. Como es habitual, la nifedipina normal presentaba actividad de bloqueo que depende del estado de activación de los canales (normalmente el bloqueo se facilita cuando los canales son más "activos"). Este efecto no se observó para la nifedipina deuterada; más bien, parecía presentar efecto máximo continuo a diferencia del estado del canal. Esto sugiere que la unión de la nifedipina deuterada al canal del calcio aumenta incluso cuando no exista diferencia en la potencia. Clínicamente, esto significa que la nifedipina deuterada puede tener una vida media más prolongada del receptor y/o que puede tener un efecto constante a través de los intervalos de presión sanguínea (normalmente cuanto mayor es la presión sanguínea, mayor es el efecto hipotensor de los bloqueantes del canal de calcio). Es de esperar que la nifedipina deuterada actúe de manera similar en los seres humanos que tienen la presión sanguínea elevada.

Aunque se ha observado que deuterando uno o más átomos de hidrógeno en compuestos farmacéuticos conocidos aumentará o alterará la actividad de dichos compuestos, se cree que la actividad de dichos compuestos puede también alterarse sustituyendo un isómero diferente por uno o más de los demás átomos en el compuesto. Se conoce que existen varios tipos de otros átomos, tales como carbono, nitrógeno, oxígeno, estaño, etc., los cuales se diferencian en su masa atómica. Estas especies diferentes de átomos se denominan isótopos y se diferencian solamente en el número de neutrones en el núcleo.

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Ejemplo IV

La dependencia por utilización de la activación repetitiva de los canales del calcio con inhibición del canal del calcio reduce progresivamente la corriente hacia el interior del pico. Dicha disminución en la corriente se produce de manera más notable a medida que es mayor la frecuencia de estimulación de los canales. En presencia de un antagonista "dependiente de la utilización", la disminución en la corriente con la estimulación repetitiva aumenta. La dependencia de la utilización implica que el antagonista se une de manera acumulativa en pequeños incrementos durante las activaciones del canal ulteriores. Después de 2 ó 3 activaciones del canal en el caso de los canales del calcio, se alcanza un estado estacionario de inhibición. La implicación subyacente de la dependencia de la utilización consiste en que un antagonista (fármaco) dado se une más fuertemente al canal activo. Un fármaco que presenta mayor inhibición del canal dependiendo de la utilización se supone que tiene una afinidad mayor para el canal activo del calcio.

En la siguiente serie de ejemplos, los canales del calcio se despolarizaron con pulsaciones repetitivas de la corriente a los intervalos indicados. Dichos estudios se realizaron utilizando la versión de la célula completa de la sujeción del parche. La reducción de la corriente hacia el interior como función del intervalo entre pulsaciones en ausencia de cualquier fármaco se consideró como referencia. La nifedipina de referencia (es decir, no deuterada) y deuterada se aplicaron a continuación a las células a una concentración de 5 micromolar. La disminución de la corriente hacia el interior en función de la frecuencia de estimulación (es decir, la dependencia de la utilización) se comparó a continuación entre las dos preparaciones de nifedipina.

La Figura 2 presenta la inhibición dependiente de la utilización de la nifedipina de referencia (Nifedipina B) y de la nifedipina deuterada (Nifedipina D) sobre los canales del calcio de tipo T en células N1E 115. Esta figura representa la circulación de la corriente hacia dentro y su inhibición por las nifedipinas. A medida que aumenta la frecuencia de estimulación, disminuye la corriente hacia dentro en la estimulación repetitiva (dependencia de la utilización). Se observa que la nifedipina disminuye la corriente hacia dentro, pero a la frecuencia de estimulación aumentada la nifedipina deuterada es más eficaz que la nifedipina de referencia (panel C). Estas diferencias se presentan con más detalle en las Figuras 3 a 5.

La Figura 3 representa el efecto inhibidor de las dos nifedipinas sobre la corriente de calcio hacia dentro para pulsaciones repetitivas de 1 segundo (despolarizaciones). A esta frecuencia de pulsación la nifedipina deuterada es más eficaz en el bloqueo de la corriente de calcio que la corriente de referencia (p < 0,05 mediante mediciones ANOVA repetidas). Las concentraciones de nifedipina fueron 5 micromolar en ambos casos.

La Figura 4 presenta el efecto de las dos nifedipinas sobre la inhibición de la corriente de calcio en función de la frecuencia de pulsación. A intervalos de 1 y 0,3 segundos la nifedipina deuterada fue más eficaz que la nifedipina de referencia para bloquear los canales del calcio.

La Figura 5 presenta el efecto de las dos nifedipinas sobre la dependencia de la utilización. A todas las frecuencias la nifedipina deuterada presentó mayor inhibición del canal del calcio dependiente de la utilización. Dicha inhibición fue aún más notable a medida que aumentaba la frecuencia de estimulación.

Basándose en los datos anteriores, se observa que la nifedipina deuterada presenta mayor inhibición dependiente de la utilización de los canales del calcio. Esto significa que la nifedipina deuterada es más eficaz que la nifedipina normal en el bloqueo de los canales del calcio a medida que aumenta la frecuencia de estimulación. Debido a que la activación del canal es mayor en estados patológicos tales como hipertensión o angina de pecho, la nifedipina deuterada es de esperar que sea más eficaz/potente en estos trastornos que la nifedipina normal. En condiciones no patológicas en las que la activación del canal no es tan grande, sin embargo, la actividad de la nifedipina deuterada se aproximaría a la de la nifedipina normal. Tal característica es sumamente llamativa ya que significa que la potencia relativa del fármaco (p. ej., nifedipina deuterada) variaría directamente con la gravedad de la enfermedad. Así, por ejemplo, el fármaco aparentemente "conoce" cuánto reducir la presión sanguínea a fin de conseguir un determinado objetivo de presión sanguínea. Actualmente, a medida que la gravedad de una enfermedad (p. ej., hipertensión, angina de pecho) aumenta, la dosis de nifedipina necesaria para tratar dicha enfermedad también aumenta. Lo dicho puede no ser válido para la nifedipina deuterada.

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Ejemplo V

Efecto de las nifedipinas deuteradas y de referencia sobre la presión sanguínea en ratas Sprague-Dawley normotensas. Se disolvieron nifedipinas de referencia y deuteradas en volúmenes mínimos de etanol y se diluyeron hasta que la concentración final de etanol era inferior a 0,04%. Dosis de un mililitro de las dos nifedipinas a las concentraciones indicadas se inyectaron a continuación en ratas Sprague-Dawley anestesiadas con pentobarbital que pesaban entre 300 y 350 gramos. El cambio máximo en la presión arterial media, así como la duración de la respuesta hipotensora se midieron directamente mediante un catéter intraarterial. Solamente se administró una dosis de fármaco a cada rata y se dejó un mínimo de 60 minutos para que la presión sanguínea volviese a la de referencia. Los resultados se presentan en las figuras expuestas más adelante. En cada periodo de tiempo la duración del efecto fue mayor para la nifedipina deuterada en comparación con la nifedipina de referencia. Sin embargo, debido a que la duración de la respuesta puede depender de la magnitud de la disminución de la presión sanguínea, se compararon dosis equipotentes de las dos formulaciones. En esta comparación, se compararon la nifedipina de referencia a una concentración de 2 \times 10^{-3} molar y de nifedipina deuterada a una concentración de 1 \times 10^{-3} molar (potencias relativas - 45,8 frente a -40,3 mm Hg deuterada, p=NS). A estas dosis, a pesar de un efecto de la presión sanguínea equivalente, la duración de la acción de la nifedipina de referencia fue de 46,5 min. y la duración de la acción de la nifedipina deuterada fue de 62,2 min. (p=0,02). Por lo tanto, la duración de la acción de la nifedipina deuterada es mayor que la de la nifedipina de referencia independiente de la eficacia de la reducción de la presión sanguínea (es decir, tanto la potencia como la duración de la acción difieren).

La Figura 6 presenta el efecto de la nifedipina de referencia y deuterada sobre la presión arterial media: la Figura
6(a) presenta los valores existentes representados, la Figura 6(b) presenta las curvas ajustadas a los datos por regresión logística de respuesta a la dosis. Se ensayaron un total de seis ratas a cada dosis. Como puede observarse, a todas las dosis la nifedipina deuterada fue más potente que la nifedipina de referencia (p > 0,05 por mediciones ANOVA repetidas). MAP = presión arterial media.

La Figura 7 presenta las relaciones concentración-efecto para la nifedipina de referencia (Figura 7(a)) y deuterada (Figura 7(b)) ajustadas utilizando un modelo sigmoideo asimétrico. Se presentan los valores ajustados más intervalos de confianza del 95%. En estos dos gráficos, basados en la falta de solapamiento entre los intervalos de confianza, es evidente que las relaciones concentración-efecto para las dos nifedipinas difieren. Para ser más preciso, el ajuste de la curva se realizó utilizando la ecuación: y=a+b(1-(1+exp((x-dln(2^{1/e}-1)-c)/d))^{-e}). En esta base todos los parámetros a, b y e se diferenciaron estadísticamente en p < 0,05.

La Figura 8 presenta las relaciones concentración-efecto para la nifedipina de referencia (Figura 8(a)) y deuterada (Figura 8(b)) ajustadas utilizando un modelo logístico de respuesta a la dosis. Se presentan los valores ajustados más intervalos de confianza del 95%. En estos dos gráficos, basados en la falta de solapamiento entre los intervalos de confianza, es evidente que las relaciones concentración-efecto para las dos nifedipinas difieren. Para ser más preciso, el ajuste de la curva se realizó utilizando la ecuación: y=a+b/(1+(x/c)^{d}). En esta base todos los parámetros a y b se diferenciaron estadísticamente en p < 0,05.

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Ejemplo VI

Efecto de las nicardipinas de referencia deuteradas sobre la presión sanguínea en ratas Sprague-Dawley normotensas. Se disolvieron nicardipinas de referencia y deuteradas (preparadas como se describe a continuación, de manera análoga a la preparación de la nifedipina deuterada) en volúmenes mínimos de etanol y se diluyeron hasta que la concentración de etanol fue inferior a 0,04%. Dosis de las dos nicardipinas indicadas se inyectaron a continuación en ratas Sprague-Dawley anestesiadas con pentobarbital que pesaban entre 300 y 350 gramos. El cambio máximo en la presión arterial media, así como la duración de la respuesta hipotensora, se midieron directamente mediante un catéter intraarterial. Solamente se administró una dosis de fármaco a cada rata y se dejó un mínimo de 60 minutos para que la presión sanguínea volviese a la de referencia.

Las Figuras de potencia 9a y 9b demuestran que el efecto de respuesta a la dosis para las nicardipinas (prueba) de referencia y deuteradas. Aunque los intervalos de confianza de las curvas se solapan en áreas, la comparación estadística de ED_{16}, ED_{50} y ED_{84} presentaban las diferencias siguientes:

4

A partir de la tabla anterior, puede apreciarse que los intervalos de confianza son exclusivos tanto para ED_{16} como para ED_{84}. Esto indica que la naturaleza de las relaciones de respuesta a la dosis difiere. Esto se confirma diferenciando las funciones de la pendiente de 416 para la nicardipina de referencia y de 46 para la nicardipina deuterada (calculadas por el método de Litchfield-Wilcoxon). Por lo tanto, las potencias de las dos formulaciones difieren.

El análisis de dos vías de la varianza que utiliza la dosis y la formulación como variables independientes y la reducción en la presión arterial media como variable dependiente pusieron de manifiesto la siguiente tabla de ANOVA:

100

Aunque no existe diferencia a una concentración de p<0,05 para las diferencias del fármaco (sin embargo, existe una diferencia a la concentración de 0,1), la falta de diferencia se debe probablemente a las muchas dosis agrupadas alrededor de ED_{50} donde las curvas no se diferencian. Existe una notable interacción de fármaco \times dosis, sin embargo, que no implica una diferencia en la naturaleza de las curvas de respuesta a la dosis.

Duración de la acción - En la mayoría de los periodos de tiempo la duración del efecto fue mayor para la nicardipina deuterada en comparación con la nicardipina de referencia (Figura 10). Debido a que la duración de la respuesta puede depender de la magnitud de la disminución de la presión sanguínea, sin embargo, se compararon dosis equipotentes de las dos formulaciones. En esta comparación, se compararon la nicardipina de referencia a una dosis de 1 \times 10^{-9} moles y la nicardipina deuterada a una concentración de 3 \times 10^{-9} moles (potencias relativas -13,8 frente a -13,8 mm Hg de referencia frente a deuterada, p = NS). A estas dosis, a pesar de un efecto de la presión sanguínea equivalente, la duración de la acción de la nicardipina de referencia fue de 5,4 + 3,8 (SD) min. y la duración de la nicardipina deuterada fue de 15,0 + 6,4 (SD) min. (p=0,49 por la prueba de la U de Mann-Whitney). De este modo, la duración de la acción de la nicardipina deuterada es mayor que la de la nicardipina de referencia independiente de la presión sanguínea que reduce la eficacia.

La comparación del duración de la acción por ANOVA de dos vías utilizando la dosis y la formulación como variables independientes y la duración de la acción como variable dependiente puso de manifiesto la siguiente tabla de ANOVA:

101

Estos resultados presentan diferencias significativas en la duración de la acción de los dos fármacos así como implican una diferencia en la naturaleza de la duración de la dosis de la relación de la acción.

Basándose en los datos anteriores, la nicardipina deuterada se diferencia de la nicardipina de referencia tanto en la naturaleza del efecto de respuesta a la dosis que reduce la presión sanguínea como en la duración de la acción.

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Ejemplo VII

Preparación de la nicardipina deuterada. Dicha modificación de nicardipina (y de otras dihidropiridinas) puede conseguirse disolviendo la nicardipina en un tubo de deuteración en una mezcla de deuterocloroformo y óxido de deuterio, y a continuación añadiendo una cantidad menor de anhídrido trifluoroacético y deuteroacetona a ésta y mezclándolas. La solución se congela dentro del tubo. Preferentemente sumergiendo el tubo en nitrógeno líquido y a continuación sellando el tubo. El tubo sellado se calienta a continuación a una temperatura comprendida en el intervalo entre 50º y aproximadamente 65ºC y preferentemente en el intervalo entre 55º y aproximadamente 60ºC y se mantiene a esta temperatura durante un periodo de tiempo suficiente para deuterar el grupo metilo en las posiciones 2 y 6 de la nicardipina a CD_{3}. En el periodo entre aproximadamente 150 y aproximadamente 180 horas es eficaz para completar la reacción. Siendo preferible un periodo de aproximadamente 160 a 170 horas.

La nicardipina deuterada se sintetizó de la manera siguiente: Se colocaron 80 mg de nicardipina en forma de polvo en un tubo de deuteración especial y se disolvieron en el mismo en una mezcla de 2 ml de deuterocloroformo y 0,5 ml de óxido de deuterio tras lo cual se añadieron 0,2 ml de anhídrido trifluoroacético y 2 ml de deuteroacetona y se mezclaron con los mismos. Se congeló la solución en nitrógeno líquido y se selló el tubo a la llama bajo nitrógeno. Se calentó a continuación el tubo a 57ºC durante 168 horas tras las cuales se enfrió y se abrió. El contenido del tubo se transfirió a un matraz de fondo redondo y se eliminó el disolvente al vacío en un evaporador rotativo. Todas las operaciones se realizaron bajo intensidad de luz reducida. Utilizando resonancia magnética nuclear (RMN) de ^{1}H convencional se calculó que la sustitución de deuterio era del 95% de los grupos metilo C-2 y C-6 presentados anteriormente.

Dados los profundos efectos de la sustitución del deuterio por hidrógeno en los grupos metilos unidos a las posiciones 2 y 6 del anillo de dihidropiridina, y dado el hecho de que todos los bloqueantes del canal de calcio de dihidropiridina tienen por lo menos un grupo metilo en estas posiciones (de hecho todas las dihidropiridinas tienen 2 metilos excepto amlodipina que solamente tiene un metilo en 6, sustitución del metilo en 2 por CH_{2}OCH_{2}CH_{2}NH_{2} que aumenta drásticamente de forma interesante la duración de la acción de esta dihidropiridina), la deuteración de estos grupos en cualquier otra dihidropiridina sería de esperar que tuviera el mismo efecto que en la
nifedipina.

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Ejemplo comparativo

Efecto de los verapamilos deuterado y de referencia sobre la presión sanguínea en ratas Sprague-Dawley normotensas.

Deuteración de verapamilo - Se añadió hidrocloruro de verapamilo a una solución de ácido sulfúrico deuterada al 25% en agua deuterada (v/v) y metanol deuterado. Se agitó la solución durante 140 horas a 90ºC. Se ajustó el pH a 12,0 y se extrajo la mezcla con acetato de etilo. Los extractos combinados de acetato de etilo se lavaron con agua, se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron para dar un aceite viscoso. Este aceite se disolvió en éter y se añadió hidrocloruro etéreo para precipitar la sal hidrocloruro. Se recogió la sal por filtración y se cristalizó en acetato de etilo para obtener verapamilo deuterado como un sólido blanco.

Los verapamilos de referencia y deuterados (en las que las posiciones aromáticas del verapamilo (una fenilalquilamina) estaban deuteradas) se disolvieron en volúmenes mínimos de etanol y se diluyeron hasta que la concentración final de etanol fue inferior a 0,04%. Las dosis de los dos verapamilos indicadas se inyectaron a continuación en ratas Sprague-Dawley anestesiadas con pentobarbital que pesaban entre 300 y 350 gramos. El cambio máximo en la presión arterial media, así como la duración de la respuesta hipotensora se midieron directamente mediante un catéter intraarterial. Se administró solamente una dosis de fármaco a cada rata y se dejó un mínimo de 60 minutos para que la presión sanguínea volviese a la de referencia. Los resultados se presentan a continuación.

A cada dosis, el efecto (potencia) del verapamilo deuterado fue inferior al del verapamilo de referencia (véase la figura 11). Desde el punto de vista de la respuesta a la dosis, utilizando aproximadamente -90 mm Hg como respuesta máxima, la ED_{50} para el verapamilo de referencia fue 2,89 \times 10^{-4} mM y 2,16 \times 10^{-3} mM para el verapamilo deuterado. Esta diferencia, entre las diferencias en las curvas de respuesta a la dosis completa eran diferentes por el análisis de Lichfield-Wilcoxon. De hecho, la relación de potencia determinada mediante esta técnica fue de 0,133 deuterada frente a referencia (intervalos de confianza del 95% 0,07 a 0,25, p < 0,001). Por lo tanto, el verapamilo deuterado era menos potente que el verapamilo de referencia.

Desde el punto de vista de la duración de la acción, sin embargo, por el análisis de Litchfield-Wilcoxon, el verapamilo deuterado tenía una duración mayor de la acción (véase la figura 12). Además, las curvas de duración de la dosis fueron también significativamente diferentes, dando una relación de potencia de 4,95 para el deuterado frente al de referencia (intervalo de confianza 95% de 2,3 a 10,7, p<0,01). Para comparar de otra manera, a dosis equipotentes (0,3 \times 10^{-4} mM para referencia, 0,3 \times 10^{-3} mM para la deuterada; reducción de BP -52,8 y -57,0 mm Hg respectivamente), la duración de la acción para el verapamilo deuterado frente al de referencia fue de 12,5 frente a 6 minutos
(p < 0,01).

Estos resultados sugieren que la potencia y la duración de la acción fueron alterados por deuteración. Como en las dihidropiridinas, la duración de la acción se prolongó por deuteración, pero disminuyó la potencia, excepto las dihidropiridinas. Dependiendo del punto de deuteración, sin embargo, la potencia pudo aumentarse potencial-
mente.

Por lo tanto, a la vista de lo anterior, (1) la duración de la acción se prolonga por deuteración (para todos los fármacos probados); (2) la potencia está afectada por la deuteración: aumenta para las dihidropiridinas y disminuye para el verapamilo (una fenilalquilamina); y (3) la dependencia por utilización se altera para las dihidropiridinas (no se ha probado para el verapamilo).

Prolongación de la duración de la acción de fármacos utilizando isótopos. Introducción:

Los fabricantes farmacéuticos con frecuencia venden varios millones de fármacos en desarrollo que tienen duraciones de actividad prolongadas. La búsqueda de los fármacos con duraciones más prolongadas de acción aumenta por varias razones incluyendo, por ejemplo: la prolongación del efecto terapéutico beneficioso; la protección del intercambio comercial de fármacos por nuevas patentes publicadas para la nueva formulación de dosificación farmacéutica; y aumentando la observancia del paciente (haciéndole más fácil tomar una formulación una vez al día en lugar de tres o cuatro veces una formulación al día).

Cada uno de los tres fármacos probados (es decir, nifedipina, nicardipina y verapamilo) se está utilizando actualmente en el tratamiento de la hipertensión (presión sanguínea alta). Como enfermedad cardiovascular es una causa principal de muerte en Norteamérica, y la hipertensión es un factor de riesgo significativo, es importante que los pacientes que requieren estas medicaciones tengan concentraciones de fármaco en su circulación que les proteja de estos efectos de alta presión sanguínea 24 horas al día. Aunque algunos fabricantes ofrecen dos, tres o cuatro veces una dosificación al día, varios son los fármacos de preparación que presentan una duración mayor de la acción (vidas medias más prolongadas) alterando la formulación de la dosificación. Estas alteraciones de la formulación de la dosis comprenden, por ejemplo, la inclusión de excipientes que ralentizan la liberación del fármaco, el recubrimiento de las formulaciones, formulaciones más recientes (p. ej., bombas osmóticas) y gránulos recubiertos. Muchas de estas modificaciones de la formulación de la dosis son sumamente costosas de desarrollar y
preparar.

Utilizando los fármacos deuterados dados a conocer en la presente memoria, los inventores han demostrado que pueden modificar los fármacos de diferentes clases (p. ej., 1,4-dihidropiridinas y fenilalquilaminas) y creen que la modificación de los inventores aplica todos los fármacos, ya que el principio implicado es el mismo, independientemente del fármaco. Sin estar ligados por la teoría, mediante fármacos de deuteración, los inventores han producido probablemente dos efectos: aumentaron el número lipofílico de la molécula e hicieron el enlace C-H termodinámicamente más estable sustituyendo el D (átomo de deuterio) por H. El punto anterior puede permitir al fármaco distribuirse en depósitos de tejido "más profundos" (tales como adiposos) y pueden permanecer mucho tiempo en el cuerpo durante un periodo más prolongado de tiempo. Este último punto, sin embargo, es el punto que debería observarse más minuciosamente. Sustituyendo el hidrógeno por un átomo de deuterio, el enlace carbono (C) deuterio (D) resultante se vuelve más fuerte. Por consiguiente, al aumentar la masa de hidrógeno (H) una unidad atómica de masa y creando un D, los enlaces C-D se vuelven probablemente más fuertes. Esto se realiza utilizando D como isótopo del hidrógeno estable no radioactivo del H. Es interesante, que el enlace C-D es termodinámicamente más estable que el enlace C-H, se separa con menos facilidad por procesos metabólicos (o destructivos). Por consiguiente, se prolonga la vida media de eliminación del fármaco y aumentan los efectos terapéuticos del fármaco. Aunque los autores han observado también que pueden existir cambios en la potencia del fármaco, la prolongación del efecto del fármaco es la más
llamativa.

En esencia, por consiguiente, sustituyendo simplemente un D por H en las tres moléculas más investigadas hasta ahora, los inventores han creado un nuevo fármaco "de liberación modificada" aumentando la duración de la actividad. Además, una ventaja distinta de este método es que este método obvia la necesidad de añadir varios excipientes potencialmente tóxicos que se incluyen actualmente en las formulaciones de liberación modificada, fabricados por los innovadores de este fármaco. Las diferencias en la calidad pueden relacionarse con impurezas o con las diferencias en la preparación química de la molécula de fármaco, cuyas diferencias no se detectan utilizando procedimientos de experimentación habituales pero se detectan mediante la utilización de GC-IRMS (descrita a continuación) para determinar la estructura molecular de la molécula de fármaco.

De lo expuesto anteriormente, resulta muy evidente que las preparaciones farmacéuticas que contienen cantidades idénticas de un fármaco pueden no ser bioequivalentes. Esta inequivalencia puede deberse completamente a la mezcla isotópica de todos los elementos que están incluidos en un producto farmacéutico concreto. Dichas diferencias isotópicas entre un fármaco genérico y uno de un fabricante conocido preparado bajo los derechos del innovador de este fármaco podría producir una sobredosificación o infradosificación accidental si una formulación se sustituye por otra. Esto puede significar, por ejemplo, que la angina o la hipertensión bien controladas previamente pueden no controlarse en el momento de intercambiar una formulación por otra, dejando a un médico desconcertado porque el fármaco no se comporta ya como era de esperar. Por el contrario, los pacientes que no experimentaron anteriormente ninguno de los efectos del fármaco desfavorables pueden comenzar a desarrollar efectos secundarios a partir de la nueva formulación. Además, la duración del efecto clínico puede diferir entre dos formulaciones diferentes. Según una forma de realización de la presente invención, un nuevo fármaco que aparece en el mercado y se comercializa como un equivalente de un fármaco conocido que ha estado en el mercado y es preparado por un fabricante puede analizarse fácilmente la bioequivalencia con el fármaco conocido.

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Bases del procedimiento de IRMS

La espectrometía de masas por relación de isótopos (IRMS) es un procedimiento muy preciso de análisis que es capaz de medir pequeñas muestras (cantidades pequeñas de nanogramo). Por ejemplo, se determinan las relaciones ^{13}C/^{12}C en una molécula de monocarbono; CO_{2} gas. Por consiguiente, el carbono orgánico ha de convertirse en CO_{2} gas por combustión sobre óxido cuproso (CuO, estufa de combustión en línea o analizador elemental) y por criogenia o cromatografía purificada. El CO_{2} gas puede a continuación dirigirse inmediatamente al espectrómetro por medio de un IRMS en flujo continuo (denominado también CF-IRMS).

La combinación estadística de los isótopos de carbono (^{12}C y ^{13}C) y oxígeno (^{16}O, ^{17}O, ^{18}O) para generar las moléculas de CO_{2} da lugar a la formación de varios isotopómeros cuyos pesos moleculares son 44, 45 y 46, respectivamente. Por consiguiente, para medir las relaciones de isótopo de carbono, se generan tres rayos iónicos y se registran en el IRMS, correspondiente a las masas de varios isotopómeros de CO_{2}.

Con objeto de obtener una gran precisión y gran exactitud, se utilizan gases de referencia de composición isotópica absolutamente conocida y un sistema de entrada doble permite una admisión alternativa tanto de las muestras como del gas de referencia en la fuente de ionización mediante una válvula de cierre de gas. La medición de varios rayos iónicos permite el cálculo del enriquecimiento en ^{13}C de la muestra. El valor de este cálculo se da como una anotación \delta^{13}C (\textperthousand). La abundancia de ^{13}C se expresa como \delta^{13}C (\textperthousand) según la siguiente ecuación:

\delta^{13}C \ (\textperthousand)=([muestra \ (^{13}C/^{12}C)/(^{13}C/^{12}C)PDB]-1) \ \times 1000

Este valor de \delta^{13}C (\textperthousand) mide las variaciones en partes por mil de la relación del isótopo de carbono del patrón. Para el carbono se seleccionó PDB como referencia internacional. PDB es Pee Dee Belemnitella (un fósil de la formación geológica Pee Dee en Carolina del Sur). La relación ^{13}C/^{12}C del carbonato de calcio de este fósil es 0,011237. En comparación con PDB, la mayoría de los compuestos naturales presentan un valor delta negativo. En la ecuación anterior, ^{13}C/^{12}C se refiere a los isotopómeros.

La medición de varios rayos iónicos para ^{15}N proporciona una anotación \delta^{15}N (\textperthousand). La abundancia de ^{15}N se expresa como \delta^{15}N (\textperthousand) según la siguiente ecuación:

\delta^{15}N \ (\textperthousand)= [(muestra \ ^{15}N/^{14}N)-(patrón \ ^{15}N/^{14}N)/patrón \ (^{15}N/^{14}N)] \ \times 1000

El valor de \delta^{15}N (\textperthousand) mide las variaciones en partes por mil de la relación del isótopo de nitrógeno del patrón. Para el nitrógeno se seleccionó el aire como referencia internacional.

\delta^{18}O \ (\textperthousand)= [(muestra \ ^{18}O/^{16}O)-(patrón \ ^{18}O/^{16}O)/patrón \ (^{18}O/^{16}O)] \ \times 1000

El valor de \delta^{18} O (\textperthousand) mide las variaciones en partes por mil de la relación del isótopo de oxígeno que es, oxígeno del CO_{2} procedente del patrón. Para el oxígeno se seleccionó CO_{2} como referencia internacional.

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Instrumental y ajustes de IRMS

El espectrofotómetro de masas por relación de isótopos fue un Finnigan MAT 252 (Bremen, Alemania), equipado con un modo de entrada doble y un analizador elemental para la introducción de muestras no gaseosas. Las muestras se pesaron de modo que cada una contenía aproximadamente 10 a 20 \mug y se transfirieron a cápsulas de estaño. La cápsula de estaño cerrada se alojó en el sistema de introducción automático (analizador elemental modelo NA1500 NC, Fisons, UK). Las muestras se sometieron a combustión a 1.080ºC con oxígeno y catalizadores de oxidación (CrO + CuO). El CO_{2} purificado se analizó por el IRMS en flujo continuo. El patrón de CO_{2} fue CO_{2} ^{13}C de Oztech (dC(PDB)=-36,49 \textperthousand; dO(PDB)=-25,56 \textperthousand; dO(SMOW)=+15,06 \textperthousand) adquirido en Oztech Trading Corporation, Dallas, TX, EUA. Otros patrones introducidos fueron atropina (C, 70,56%, H 8,01%; N, 4,84%; O, 16,59%) y fenantreno (C, 93,556%; H, 5,615%, N, 0,180%; S, 0,456%). Se analizó el nitrógeno purificado por IRMS en flujo continuo. El nitrógeno patrón fue nitrógeno ^{15}N de Oztech (dN(AIR)=-1,89 \textperthousand; adquirido en Oztech Trading Corporation, Dallas, TX, EUA.

Los ajustes instrumentales fueron: alto voltaje (HV), 10 kV; cátodo, 5,74 A; emisión, 1,473 mA; emisión de captura, 0,937 mA; energía del electrón, 75,0 -V; captura, 50,1 V.

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Aplicación de la espectrometría de masas por relación de isótopo para impresión de huellas

Numerosos productos farmacéuticos, incluyendo nifedipina, ciprofloxacina, quetoprofeno, zopiclona y acetobutolol han sido investigados utilizando un espectrómetro de masas por relación de isótopo (IRMS) para la determinación de la procedencia de la preparación. Este procedimiento para producir una "huella" se basa, por ejemplo, en las relaciones de ^{13}C/^{12}C que se determinan a partir del CO_{2} gaseoso; las relaciones isotópicas del oxígeno y nitrógeno pueden también utilizarse para la "huella". El carbón orgánico en el producto farmacéutico se convierte en CO_{2} por combustión sobre óxido cuproso y se purifica por criogenia o cromatografía. El CO_{2} resultante se transfiere directamente al espectrofotómetro por flujo continuo mediante una línea de transferencia al IRMS.

Con objeto de mantener el elevado grado de precisión para la medición de los isótopos de CO_{2}, un gas de referencia de composición isotópica absolutamente conocida se introduce a la IRMS mediante un sistema de entrada doble que permite la entrada alternativa tanto de una muestra de gas (procedente del producto farmacéutico) como de un gas de referencia. El análisis genera una relación ^{13}C/^{12}C (\delta \textperthousand) que se expresa de la manera siguiente:

\delta \ \textperthousand = ((R_{muestra} - R_{patrón})/R_{patrón}) \ \times 1000

Este valor de \delta \textperthousand (delta por mil) mide las variaciones en partes por mil de la relación del isótopo de carbono procedente del patrón. Este es el valor que se utiliza en la identificación de los productos farmacéuticos.

Se analizaron las materias primas (ingredientes activos) así como los productos acabados (p. ej., comprimidos). Los resultados para los productos farmacéuticos que han sido procesados son los siguientes:

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(Tabla pasa a página siguiente)

Resultados de I.R.M.S. para la impresión de huellas de materias primas y productos acabados

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5

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(Continuación)

6

La información anterior confirma que IRMS puede utilizarse para "identificar" productos farmacéuticos de varias procedencias de preparación. Dicha información puede utilizarse para la procedencia de productos farmacéuticos, ya sea como materias primas (ingredientes activos) o como producto acabado.

La Figura 13 presenta una "huella" tridimensional de siete preparaciones de nifedipina. Todas estas preparaciones son significativamente diferentes unas de otras. Este tipo de "huella" tridimensional es lo que se realizaría típicamente para proporcionar la "huella" más sensible de un fármaco o de cualquier otra sustancia.

La Figura 14 presenta una "huella" bidimensional de nueve preparaciones de nifedipina. Las líneas de error son intervalos de confianza del 95%; por lo tanto, todas las preparaciones son significativamente diferentes unas de otras. Aunque la "huella" tridimensional proporciona una "huella" más precisa, en la práctica es normalmente suficiente la "huella" bidimensional para diferenciar los materiales.

La Figura 15 presenta una "huella" bidimensional (oxígeno frente a carbono) de comprimidos en bruto de solatol. La mayoría de los comprimidos puede diferenciarse unos de otros mediante la técnica bidimensional aunque la "huella" bidimensional de carbono-oxígeno es menos precisa que la "huella" de carbono-nitrógeno.

La Figura 16 presenta "huellas" de tres muestras de cabello diferentes de tres personas diferentes. En el caso del primer paciente (punto 1), se obtuvo una segunda muestra una semana después y se comparó con la primera. Esta comparación dio un valor estadísticamente idéntico a la primera muestra, demostrando de este modo que esta técnica es reproducible y puede utilizarse para identificar muestras de cabello.

Las variaciones y modificaciones adicionales de lo expuesto anteriormente resultan evidentes para los expertos en la materia y dichas variaciones y modificaciones se pretende que estén comprendidas en las reivindicaciones que se adjuntan a la presente memoria.

Claims

1. Compuesto de dihidropiridina seleccionado de entre el grupo constituido por nicardipina deuterada en el que uno o más átomos de hidrógeno de uno o ambos de los grupos metilo en las posiciones 2 y 6 se sustituyen con un átomo de deuterio y los compuestos que presentan la fórmula

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en la que:

X=H,

R^{1} = CH_{3}, en el que cada átomo de H puede estar sustituido por un átomo D, y

R^{2} = CH_{3}, en el que por lo menos 5 de cada 6 átomos H en total pueden sustituirse por un átomo D, y

2. Dihidropiridina según la reivindicación 1, en la que por lo menos uno de los grupos metilo en la posición 2,6 es CD_{3}.

3. Dihidropiridina según la reivindicación 1, en la que X=H, R^{1} = CD_{3} y R^{2} = CH_{3} de fórmula

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4. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, para su utilización como medicamento.

5. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, para su utilización en el tratamiento de la hipertensión.

6. Composición farmacéutica para su utilización como medicamento que comprende uno o más compuestos según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 como ingrediente activo y un soporte farmacéuticamente aceptable.

7. Utilización de uno o más compuestos según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 o de la composición según la reivindicación 6 para la preparación de un medicamento que presenta una actividad hipertensora.

8. Procedimiento para la preparación del compuesto según la reivindicación 1, comprendiendo dicho procedimiento:

: disolver una dihidropiridina en una mezcla de deuterocloroformo y óxido de deuterio para formar una disolución,

: añadir anhídrido trifluoroacético y deuteroacetona a dicha disolución,

: congelar y pesar dicha disolución en un recipiente,

: batir dicha disolución a una temperatura y durante un periodo de tiempo suficiente para deuterar todos los átomos de hidrógeno en los grupos metilo en las posiciones 2 y 6 en dicha dihidropiridina, y

: recuperar dicha dihidropiridina deuterada.

9. Procedimiento según la reivindicación 8, comprendiendo dicho procedimiento:

: disolver 80 mg de nifedipina o nicardipina en una mezcla de aproximadamente 2 ml de deuterocloroformo y aproximadamente 0,5 ml de óxido de deuterio para formar una disolución,

: añadir aproximadamente 0,5 ml de anhídrido trifluoroacético y aproximadamente 2 ml de deuteroacetona a dicha disolución y mezclar con éstos,

: congelar y pesar dicha disolución en un recipiente,

: calentar dicha disolución a una temperatura de aproximadamente 50ºC a aproximadamente 65ºC durante un periodo de aproximadamente 150 a 180 horas,

: enfriar dicha disolución calentada y recuperar dicha nifedipina o nicardipina deuteradas.

10. Procedimiento según la reivindicación 9, en el que dicha temperatura es de aproximadamente 55ºC a aproximadamente 60ºC.

11. Procedimiento según la reivindicación 9, en el que dicho periodo de tiempo es de aproximadamente 160 a 170 horas.

12. Procedimiento como se define en la reivindicación 9, en el que dicha temperatura es de aproximadamente 57ºC y dicho periodo de tiempo es de aproximadamente 168 horas.

13. Compuesto de bloqueo del canal de calcio constituido por el compuesto según la reivindicación 1 que tiene una duración prolongada de actuación en comparación con un análogo no deuterado del compuesto según la reivindicación 1.

14. Compuesto según la reivindicación 13, caracterizado porque todos los átomos de hidrógeno de los grupos metilo en las posiciones 2 y 6 se sustituyen por átomos de deuterio.

15. Compuesto según la reivindicación 13 ó 14, para su utilización como medicamento con una duración de actuación prolongada.

16. Compuesto según la reivindicación 13 ó 14, para su utilización en el tratamiento de la hipertensión y que presenta una duración de actuación prolongada.

17. Composición farmacéutica para su utilización como un medicamento que presenta una duración de actuación prolongada que comprende uno o más compuestos según las reivindicaciones 13 ó 14 como ingrediente activo y un soporte farmacéuticamente aceptable.

18. Utilización de uno o más compuestos según las reivindicaciones 13 ó 14 o de la composición según la reivindicación 17 para la preparación de un medicamento con actividad antihipertensora con duración de actuación prolongada.

19. Utilización de un compuesto según la reivindicación 13, en la que uno o más átomos de hidrógeno de uno o ambos de los grupos metilo en las posiciones 2 y 6 se sustituyen con un átomo de deuterio para la preparación de un medicamento para proporcionar un bloqueo del canal de calcio de duración prolongada.

20. Utilización de un compuesto según la reivindicación 14, para la preparación de un medicamento destinado a proporcionar un bloqueo del canal de calcio de duración prolongada.

21. Compuesto de bloqueo del canal de calcio constituido por el compuesto 1,4-dihidropiridina según la reivindicación 1 que presenta un aumento de la dependencia de utilización en comparación con un análogo no deuterado del compuesto según la reivindicación 1.

22. Compuesto de dihidropiridina según la reivindicación 21, caracterizado porque todos los átomos de hidrógeno de los grupos metilo en las posiciones 2 y 6 se sustituyen con átomos de deuterio.

23. Compuesto según la reivindicación 21 ó 22, para su utilización como medicamento que presenta una dependencia de utilización aumentada.

24. Compuesto según la reivindicación 21 ó 22, para su utilización en el tratamiento de la hipertensión y que presenta una dependencia de utilización aumentada.

25. Composición farmacéutica para su utilización como un medicamento que presenta una dependencia de utilización aumentada que comprende uno o más compuestos según las reivindicaciones 21 ó 22 como ingrediente activo y un soporte farmacéuticamente aceptable.

26. Utilización de uno o más compuestos según las reivindicaciones 21 ó 22 o de la composición según la reivindicación 25 para la preparación de un medicamento que presenta actividad antihipertensora con dependencia de utilización aumentada.

27. Utilización de un compuesto según la reivindicación 21, en la que uno o más átomos de hidrógeno de uno o ambos grupos metilo en las posiciones 2 y 6 se sustituyen con un átomo de deuterio para la preparación de un medicamento destinado a proporcionar un bloqueo del canal de calcio con dependencia de utilización aumentada.

28. Utilización según la reivindicación 27, en la que todos los átomos de hidrógeno de los grupos metilo en las posiciones 2 y 6 en el compuesto de 1,4-dihidropiridina no deuterado se sustituyen con átomos de deuterio.

29. Utilización según la reivindicación 21, en la que uno o más átomos de hidrógeno de uno o ambos de los grupos metilo en las posiciones 2 y 6 se sustituyen por un átomo de deuterio para la preparación de un medicamento que proporciona un bloqueo del canal de calcio con una relación de respuesta a la dosis modificada comparada con un análogo no deuterado del compuesto según la reivindicación 21.

30. Utilización de un compuesto de dihidropiridina según la reivindicación 22, para la preparación de un medicamento destinado a proporcionar un bloqueo del canal de calcio.