ES2682043T3 - Ibrutinib deuterado - Google Patents

Abstract

Un compuesto de Fórmula I: **(Ver fórmula)** o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: cada Y1, cada Y2, cada Y3, cada Y4 e Y5 es deuterio; y cada Y6, cada Y7, cada Y8, cada Y9, cada Y10 cada Y11, cada Y12 cada Y13 e Y14 se seleccionan independientemente entre hidrógeno y deuterio.

Description

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DESCRIPCION

Ibrutinib deuterado Antecedentes de la invención

Muchos medicamentos actuales presentan propiedades absorción, distribución, metabolismo y/o excreción (ADME) deficientes que impiden su uso más amplio o limitan su uso en ciertas indicaciones. Las propiedades incidentes de las propiedades ADME también son una razón importante para el fracaso de los candidatos a fármacos en los ensayos clínicos. Aunque las tecnologías de formulación y las estrategias de profármacos se pueden emplear en algunos casos para mejorar ciertas propiedades ADME, estos enfoques a menudo fallan al abordar los problemas subyacentes de ADME que existen para muchos fármacos y candidatos a fármacos. Uno de esos problemas es el metabolismo rápido que hace que una cantidad de fármacos, que de otro modo podrían ser muy eficaces para tratar una enfermedad, se eliminen demasiado rápido del cuerpo. Una solución posible para la eliminación rápida del fármaco es la dosificación frecuente o elevada para alcanzar un nivel plasmático del fármaco suficientemente elevado. Sin embargo, esto introduce una serie de posibles problemas de tratamiento tales como cumplimiento deficiente del paciente con el régimen de dosificación, efectos secundarios que se vuelven más agudos con las dosis más elevadas y aumento del coste del tratamiento. Un fármaco de rápida metabolización también puede exponer a los pacientes a metabolitos tóxicos o reactivos no deseados.

Otra limitación de ADME que afecta a muchos medicamentos es la formación de metabolitos tóxicos o biológicamente reactivos. Como resultado, algunos pacientes que reciben el fármaco pueden experimentar toxicidades, o la dosificación segura de tales fármacos puede ser limitada de manera que los pacientes reciban una cantidad subóptima del agente activo. En ciertos casos, la modificación de los intervalos de dosificación o los enfoques de formulación pueden ayudar a reducir los efectos clínicos adversos, pero a menudo la formación de tales metabolitos no deseados es intrínseca al metabolismo del compuesto.

En algunos casos seleccionados, un inhibidor metabólico se administrará conjuntamente con un fármaco que se elimina con demasiada rapidez. Tal es el caso de la clase de fármacos inhibidores de proteasa que se usan para tratar la infección por VIH. La FDA recomienda que estos fármacos se dosifiquen conjuntamente con ritonavir, un inhibidor de la enzima 3A4 del citocromo P450 (CYP3A4), la enzima que es responsable de su metabolismo (véase Kempf, D.J. et al., Antimicrobial agents and chemotherapy, 1997, 41 (3): 654-60). Sin embargo, el ritonavir causa efectos adversos y aumenta la carga de píldoras para pacientes con VIH que ya deben tomar una combinación de diferentes fármacos. De forma análoga, el inhibidor de CYP2D6 quinidina se ha añadido al dextrometorfano con el fin de reducir el metabolismo rápido de CYP2D6 de dextrometorfano en un tratamiento de efecto pseudobulbar. La quinidina, sin embargo, tiene efectos secundarios no deseados que limitan en gran medida su uso en terapia de combinación potencial (véase Wang, L et al., Clinical Pharmacology and Therapeutics, 1994, 56 (6 Pt 1): 659-67; y etiqueta de la FDA para quinidina en
www.accessdata.fda.gov).

En general, la combinación de fármacos con inhibidores del citocromo P450 no es una estrategia satisfactoria para disminuir la eliminación del fármaco. La inhibición de la actividad de una enzima CYP puede afectar al metabolismo y la eliminación de otros fármacos metabolizados por esa misma enzima. La inhibición de CYP puede hacer que otros fármacos se acumulen en el cuerpo a niveles tóxicos.

Una estrategia potencialmente atractiva para mejorar las propiedades metabólicas de un fármaco es la modificación con deuterio. En este enfoque, se intenta ralentizar el metabolismo de un fármaco mediado por CYP o reducir la formación de metabolitos no deseados mediante la sustitución de uno o más átomos de hidrógeno con átomos deuterio. El deuterio es un isótopo de hidrógeno seguro, estable y no radioactivo. En comparación con el hidrógeno, el deuterio forma enlaces más fuertes con carbono. En casos seleccionados, el aumento de la fuerza de enlace impartida por el deuterio puede tener un impacto positivo en las propiedades ADME de un fármaco, creando el potencial para mejorar la eficacia, seguridad y/o tolerabilidad del fármaco. Al mismo tiempo, debido a que el tamaño y la forma del deuterio son esencialmente idénticos a los de hidrógeno, no se esperaría que la sustitución de hidrógeno por deuterio afectara la potencia bioquímica y la selectividad del fármaco en comparación con la entidad química original que solo contiene hidrógeno.

En los últimos 35 años, los efectos de la sustitución del deuterio en la tasa de metabolismo se han informado para un porcentaje muy pequeño de fármacos aprobados (véase, por ejemplo, Blake, MI et al., J Pharm Sci, 1975, 64: 36791; Foster, AB, Adv Drug Res 1985, 14: 1-40 ("Foster"); Kushner, DJ et al., Can J Physiol Pharmacol 1999, 79-88; Fisher, MB et al., Curr Opin Drug Discov Devel, 2006, 9: 101-09 ("Fisher")). Los resultados han sido variables e impredecibles. Para algunos compuestos, la deuteración causó una disminución de la eliminación metabólica in vivo. Para otros, no hubo cambio en el metabolismo. Aún otros demostraron un aumento de la eliminación metabólica. La variabilidad en los efectos deuterio también ha llevado a los expertos a cuestionar o descartar la modificación del deuterio como una estrategia viable de diseño de fármacos para inhibir el metabolismo adverso (véanse Foster en la p. 35 y Fisher en la p. 101).

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Los efectos de la modificación de deuterio en las propiedades metabólicas de un fármaco no son predecibles incluso cuando los átomos deuterio se incorporan en sitios conocidos del metabolismo. Solo al preparar y someter a ensayo realmente un fármaco deuterado se puede determinar si la tasa de metabolismo se diferenciará de la de su homólogo no deuterado y de qué forma. Véase, por ejemplo, Fukuto et al., (J. Med. Chem. 1991, 34, 2871-76). Muchos fármacos tienen múltiples sitios en los que el metabolismo es posible. El sitio o sitios en los que se requiere la sustitución del deuterio y la extensión de la deuteración necesaria para observar un efecto sobre el metabolismo, si lo hubiera, serán diferentes para cada fármaco.

Sumario de la invención

El documento WO 2008/039218 desvela compuestos de pirazol pirimidina que son inhibidores de la tirosina quinasa de Bruton (BTK). Se describen métodos de uso de estos compuestos para tratar enfermedades autoinmunes, enfermedades heteroinmunes, cáncer y afecciones inflamatorias. La presente invención se refiere a nuevos derivados de ibrutinib, un inhibidor de BTK que se encuentra en desarrollo activo para el tratamiento de leucemia linfocítica crónica, linfoma de células del manto y mieloma múltiple. El ibrutinib también puede ser útil para el tratamiento de linfoma no Hodgkin, linfoma de linfocitos B grandes difusos, y enfermedad autoinmune. La presente invención también proporciona composiciones que comprenden un compuesto de la presente invención y las composiciones de ese tipo para uso en métodos para el tratamiento de enfermedades tales como las que se han mencionado anteriormente.

A pesar de las actividades beneficiosas potenciales del ibrutinib, existe una necesidad continua de nuevos compuestos para tratar las enfermedades y afecciones que se han mencionado anteriormente.

Descripción detallada de la invención

Definiciones

El término "tratar" se refiere a disminuir, suprimir, atenuar, disminuir, detener, o estabilizar el desarrollo o progresión de una enfermedad (por ejemplo, una enfermedad o trastorno que se define en el presente documento), Disminuir la gravedad de la enfermedad o mejorar los síntomas asociados con la enfermedad.

"Enfermedad" se refiere a cualquier afección o trastorno que dañe o interfiera con la función normal de una célula, tejido u órgano.

Se reconocerá que se produce alguna variación de abundancia isotópica natural en un compuesto sintetizado dependiendo del origen de los materiales químicos usados en la síntesis. Por lo tanto, una preparación de ibrutinib contendrá de forma inherente pequeñas cantidades de isotopólogos deuterados. La concentración de isótopos de hidrógeno y carbono estables naturalmente abundantes, independientemente de la presente variación, es pequeña e irrelevante en comparación con el grado de sustitución isotópica estable de compuestos de la presente invención. Véase, por ejemplo, Wada, E et al., Seikagaku, 1994, 66: 15; Gannes, LZ et al., Comp Biochem Physiol Mol Integr Physiol, 1998, 119: 725.

En los compuestos de la presente invención, cualquier átomo no designado de forma específica como un isótopo particular pretende representar a cualquier isótopo estable de ese átomo. A menos que se indique de otro modo, cuando una posición se designa de forma específica como "H" o "hidrógeno", se entiende que la posición tiene hidrógeno en su composición isotópica de abundancia natural. También a menos que se indique de otro modo, cuando una posición se designa de forma específica como "D" o "deuterio", se entiende que la posición tiene deuterio en una abundancia que es al menos 3000 veces mayor que la abundancia natural del deuterio, que es de un 0,015 % (es decir, una incorporación de deuterio de al menos un 45 %).

El término "factor de enriquecimiento isotópico" como se usa en el presente documento se refiere a la proporción entre la abundancia isotópica y la abundancia natural de un isótopo especificado.

En otras realizaciones, un compuesto de la presente invención tiene un factor de enriquecimiento isotópico para cada átomo de deuterio designado de al menos 3500 (52,5 % de incorporación de deuterio en cada átomo de deuterio designado), al menos 4000 (60 % de incorporación de deuterio), al menos 4500 (67,5 % de incorporación de deuterio), al menos 5000 (75 % de deuterio), al menos 5500 (82,5 % de incorporación de deuterio), al menos 6000 (90 % de incorporación de deuterio), al menos 6333,3 (95 % de incorporación de deuterio), al menos 6466,7 (97 % de incorporación de deuterio), al menos 6600 (99 % de incorporación de deuterio), o al menos 6633,3 (99,5 % de incorporación de deuterio).

El término "isotopólogo" se refiere a una especie en la que la estructura química se diferencia de un compuesto específico de la presente invención solamente en la composición isotópica del mismo.

El término "compuesto", cuando hace referencia a un compuesto de la presente invención, se refiere a una colección de moléculas que tienen una estructura química idéntica, excepto porque puede haber variación isotópica entre los

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átomos constituyentes de las moléculas. Por lo tanto, para las personas con experiencia en la materia será evidente que un compuesto representado con una estructura química en particular que contiene los átomos de deuterio indicados, también contendrá cantidades menores de isotopólogos que tengan átomos de hidrógeno en una o más de las posiciones de deuterio designadas en esa estructura. La cantidad relativa de los isotopólogos de ese tipo en un compuesto de la presente invención dependerá de una serie de factores que incluyen la pureza isotópica de reactivos deuterados usados para preparar el compuesto y la eficacia de la incorporación de deuterio en las diversas etapas de síntesis usadas para preparar el compuesto. Sin embargo, como se ha expuesto anteriormente, la cantidad relativa de los isotopólogos de ese tipo in toto será inferior a un 55 % del compuesto. En otras realizaciones, la cantidad relativa de los isotopólogos de ese tipo in toto será inferior a un 50 %, inferior a un 47,5 %, inferior a un 40 %, inferior a un 32,5 %, inferior a un 25 %, inferior a un 17,5 %, inferior a un 10 %, inferior a un 5 %, inferior a un 3 %, inferior a un 1 %, o inferior a un 0,5 % del compuesto.

La invención también proporciona sales de los compuestos de la invención.

Una sal de un compuesto de la presente invención se forma entre un ácido y un grupo básico del compuesto, tal como un grupo funcional amino, o una base y un grupo ácido del compuesto, tal como un grupo funcional carboxilo. De acuerdo con otra realización, el compuesto es una sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable.

La expresión "farmacéuticamente aceptable", como se usa en el presente documento, se refiere a un componente, es decir, dentro del alcance del criterio médico sensato, adecuado para su uso en contacto con los tejidos de seres humanos y otros mamíferos sin excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica y similares, y son proporcionales con una relación de beneficio/riesgo razonable. Una "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a cualquier sal no tóxica que, después de su administración a un receptor, es capaz de proporcionar, ya sea directa o indirectamente, un compuesto de la presente invención. Un "contraión farmacéuticamente aceptable" es una parte iónica de una sal que no es tóxica cuando se libera de la sal después de su administración a un receptor.

La sal farmacéuticamente aceptable también puede ser una sal de un compuesto de la presente invención y una base. Las bases a modo de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, hidróxidos de metales alcalinos incluyendo sodio, potasio, y litio; hidróxidos de metales alcalinotérreos tales como calcio y magnesio; hidróxidos de otros metales, tales como aluminio y que cinc; amoniaco, aminas orgánicas tales como mono-, di-, o tri-alquilaminas sin sustituir o sustituidas con hidroxilo, diciclohexilamina; tributil amina; piridina; N-metilamina, N-etilamina; dietilamina; trietilamina; mono-, bis-, o tris-(2-OH-alquilamina (C1-C6)), tales como N,N-dimetil-N-(2-hidroxietil)amina o tri-(2-hidroxietil)amina; N-metil-D-glucamina; morfolina; tiomorfolina; piperidina; pirrolidina; y aminoácidos tales como arginina, lisina, y similares.

Los compuestos de la presente invención (compuestos de Fórmula I), pueden contener un átomo de carbono asimétrico, por ejemplo, como resultado de sustitución de deuterio o de otro tipo. Como tal, los compuestos de la presente invención pueden existir ya sea como enantiómeros individuales, o como mezclas de los dos enantiómeros. Por consiguiente, un compuesto de la presente invención puede existir como cualquiera de una mezcla racémica o una mezcla escalémica, o como los respectivos estereoisómeros individuales que están sustancialmente libres de otro estereoisómero posible. La expresión "sustancialmente libre de otros estereoisómeros" como se usa en el presente documento se refiere a que están presentes menos de un 25 % de otros estereoisómeros, preferentemente menos de un 10 % de otros estereoisómeros, más preferentemente menos de un 5 % de otros estereoisómeros y lo más preferentemente menos de un 2 % de otros estereoisómeros. En la técnica se conocen métodos para obtener o sintetizar un enantiómero individual para un compuesto dado y se pueden aplicar cuando sean viables a compuestos finales o a materiales de partida o compuestos intermedios.

A menos que se indique de otro modo, cuando un compuesto desvelado se denomina o se representa con una estructura sin especificar la estereoquímica y si tiene uno o más centros quirales, se entiende que se representan todos los estereoisómeros posibles del compuesto.

La expresión "compuestos estables", como se usa en el presente documento, se refiere a compuestos que tienen una estabilidad suficiente como para permitir su preparación y que mantienen la integridad del compuesto durante un periodo de tiempo suficiente como para ser útiles para los fines que se detallan en el presente documento (por ejemplo, formulación en productos terapéuticos, compuestos intermedios para su uso en producción de compuestos terapéuticos, compuestos intermedios que se pueden aislar o almacenar, tratamiento de una enfermedad o afección sensible a agentes terapéuticos).

Tanto "D" como "d" se refieren a deuterio. "dx-y" se refiere a sustitución con de x a y número de átomos de deuterio. "Estereoisómero" se refiere tanto a enantiómeros como a diastereómeros. Tanto "terc" como "t-" se refieren a terciario. "US" se refiere a Estados Unidos de América.

Un grupo está "sustituido con" un sustituyente cuando uno o más átomos de hidrógeno del grupo se sustituyen con un número correspondiente de átomos sustituyentes (si el sustituyente es un átomo) o grupos (si el sustituyente es un grupo). Por ejemplo, "sustituido con deuterio" se refiere a la sustitución de uno o más átomos de hidrógeno con un número correspondiente de átomos de deuterio.

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A través de la presente memoria descriptiva, una variable puede hacer referencia a generalmente (por ejemplo, "cada Y") o puede hacer referencia a específicamente (por ejemplo, Y1, Y2, Y3, etc.). A menos que se indique de otro modo, cuando una variable se refiere a generalmente, pretende incluir todas las realizaciones específicas de esa variable en particular.

Compuestos Terapéuticos

La presente invención proporciona un compuesto de Fórmula I:

imagen1

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: cada Y1, cada Y2, cada Y3, cada Y4 e Y5 es deuterio; y

cada Y6, cada Y7, cada Y8, cada Y9, cada Y10, cada Y11, cada Y12 cada Y13 e Y14 se seleccionan

independientemente entre hidrógeno y deuterio.

En una realización del compuesto de Fórmula I, Y12, Y13, e Y14 son cada uno hidrógeno.

En una realización del compuesto de Fórmula I, Y12, Y13, e Y14 son cada uno deuterio.

En una realización, o en un aspecto de cualquiera de las realizaciones o aspectos que se han mencionado anteriormente, cada Y7 es hidrógeno y cada Y8 es hidrógeno. En otra realización o aspecto, cada Y7 es deuterio y cada Y8 es deuterio.

En otra realización más, el compuesto es un compuesto de Fórmula I seleccionado entre uno cualquiera de los compuestos (Cmp) que se presentan en la Tabla 1 (a continuación) excepto los compuestos de referencia 102-106, 108, 110-117, 119, 121-126:

Tabla 1

Cmp N.°

Y1 Y2 Y3 Y4 Y5 Y6 -< -J II -< 00 >- II O >- II o> >- Y12 = Y13 = Y14

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D H H H H H H H H

101

H H H H D H H H H

102

D H H H D H H H H

103

H D H D H H H H H

104

D D H D H H H H H

Cmp N.°

Y1 Y2 Y3 Y4 Y5 Y6 -< -J II -< 00 >- II O >- II o> >- Y12 = Y13 = Y14

105

H D H D D H H H H

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D D H D D H H H H

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D D D D D H H H H

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D D H D H D H H H

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D D D D D D H H H

110

H H H H H D H H H

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D H H H H H H H D

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H H H H D H H H D

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D H H H D H H H D

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H D H D H H H H D

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D D H D H H H H D

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H D H D D H H H D

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D D H D D H H H D

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D D D D D H H H D

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D D H D H D H H D

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D D D D D D H H D

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H H H H H D H H D

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H H H H H H D D H

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H H H H H H D H H

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H H H H H H H D H

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H H H H H H D D D

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D D D D D H D D H

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D D D D D H D D D

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D D D D D D D D D

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que cualquier átomo no designado como deuterio está presente en su abundancia isotópica natural.

5 En otro conjunto de realizaciones, cualquier átomo no designado como deuterio en cualquiera de las realizaciones, aspectos, o ejemplos que se han expuesto anteriormente está presente en su abundancia isotópica natural.

Los expertos habituales en química de síntesis pueden conseguir fácilmente la síntesis de compuestos de Fórmula I por referencia a las Síntesis a modo de Ejemplo y los Ejemplos que se desvelan en el presente documento. Los 10 procedimientos relevantes análogos para los de uso para la preparación de compuestos de Fórmula I y compuestos intermedios de los mismos se desvelan, por ejemplo en el documento de Patente de Estados Unidos n.° 7732454.

Los métodos de ese tipo se pueden realizar usando los reactivos deuterados y opcionalmente, otros reactivos y/o compuestos intermedios que contienen isótopos para sintetizar los compuestos que se definen en el presente

documento, o aplicando protocolos de síntesis convencionales conocidos en la técnica para introducir átomos isotópicos a una estructura química.

Síntesis a modo de Ejemplo

5

El Esquema 1 proporciona un procedimiento a modo de ejemplo para la preparación de los compuestos de Fórmula I.

imagen2

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Como se muestra en el Esquema 1, el compuesto apropiadamente deuterado 2 reacciona con el compuesto apropiadamente deuterado 3 en condiciones de reacción de Mitsunobu de manera análoga a Zhengying, P. et al., Chem. Med. Chem. 2007, 2, 58-61, para proporcionar 4. La desprotección de 4 seguido de acilación con el compuesto apropiadamente deuterado 5 de forma análoga a la de la publicación de patente de Estados Unidos 15 n.° 20080108636 proporciona un compuesto de Fórmula I.

El Esquema 2 proporciona un procedimiento a modo de ejemplo para la preparación de los compuestos de fórmula 2 para su uso en el Esquema 1.

imagen3

Yodosuccimmida

isótopos

de

CON

Pü

PdfPPhj),

Como se muestra en el Esquema 2, 2 se puede preparar partiendo de 6 usando un procedimiento análogo al que se describe en la publicación de patente WO 2012003544. 6 se calienta con el compuesto apropiadamente deuterado 7 5 para proporcionar 8, que se calienta con N-yodosuccinimida para dar 9. La reacción de 9 con 10 proporciona 2. Un ejemplo deuterado de 7, el compuesto 7a (que se muestra en la inserción del Esquema 2) está disponible en el mercado.

El Esquema 3 proporciona un procedimiento a modo de ejemplo para la preparación de los compuestos de fórmula 10 10 para su uso en el Esquema 2.

imagen4

imagen5

Como se muestra en el Esquema 3, el compuesto apropiadamente deuterado 11 se trata con el compuesto apropiadamente deuterado 12 usando un procedimiento análogo al que se describe en la publicación de patente WO 5 2006125208 para dar 17. 17 se trata con BuLi seguido de B(OiPr)3 para dar 10. Un ejemplo deuterado de 11, el

compuesto 11a (que se muestra en la inserción del Esquema 3) está disponible en el mercado. Un ejemplo deuterado de 12, el compuesto 12a (que se muestra en la inserción del Esquema 3) está disponible en el mercado. 11a y/o 12a se pueden usar en el Esquema 3 para proporcionar los compuestos 10a, 10b y 10c.

10 El Esquema 4a proporciona un procedimiento a modo de ejemplo para la preparación del compuesto 3a para su uso en el Esquema 1.

imagen6

Esquema 4a. Preparación de 3a, un ejemplo del compuesto 3 (Esquema 1):

DCl

14a

15a

Acido (1fi)-(-}-1u- Canforsulfónico

ir. EtijN, BocjO

15 Como se muestra en el Esquema 4, 13 se trata con ÜCl/Ü2O para dar 14a, que por tratamiento con BD3 da 15a. La resolución quiral de 15a seguido por la introducción del grupo protector Boc se consigue de manera análoga a la que se describe en la publicación de patente WO 2004072086 para dar 3a.

El Esquema 4b proporciona un procedimiento a modo de ejemplo para la preparación de los compuestos 3b-3h para 20 su uso en el Esquema 1.

imagen7

NBoc

NBoc

NBoc

ejemplos del compuesto 3 en los míe yJ= Y11

(Esquema 1):

NaBY-

COCI

i. BY

15(1)

. Acido (Iffl-(-)-lu-Canforsulfónico D

ii. E|3n,

Acido (lR)-(-)-10-Canforsulfónico

i NaBY5

NH ¡i. Et3N. BflfoO

ii. BY

k,NBoc

k^NBoc

k^NBoc

NBoc

NBoc

Los compuestos 3b-3h, en los que en cada caso las posiciones que corresponden a Y4 e Y2 en la Fórmula I son las mismas, se pueden preparar como se muestra en el Esquema 4b. De acuerdo con la ruta (i), en la que cada Y4 y 5 cada Y2 es deuterio, 18 se convierte to 19 usando un procedimiento análogo al que se describe en Sabot, C. et al., J. Org. Chem. 2007, 72, 5001-5004. 19 se trata con NaBY54 seguido de BY13 para dar 15(i). La resolución quiral de 15(i) seguido por la introducción del grupo protector Boc se consigue de manera análoga a la que se describe en la publicación de patente WO 2004072086 para dar 3(i). De acuerdo con la ruta (ii), en la que cada Y4 y cada Y2 es hidrógeno, 18 se trata con NaBY54 seguido de BY13 para dar 15(ii). La resolución quiral de 15(ii) seguido por la 10 introducción del grupo protector Boc se consigue de manera análoga a la que se describe en la publicación de patente WO 2004072086 para dar 3(ii). La ruta (i) se puede usar para preparar los compuestos 3b-3e, mientras que la ruta (ii) se puede usar para preparar los compuestos 3f-3h (todos se muestran en la inserción del Esquema 4b).

El Esquema 5 proporciona un procedimiento a modo de ejemplo para la preparación del compuesto 5a para su uso 15 en el Esquema 1.

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imagen8

(COCI)2

DMF

/sorocos ae CDN

Como se muestra en el Esquema 5, el compuesto 16 disponible en el mercado se puede tratar con cloruro de oxalilo para proporcionar 5a de manera análoga a la que se describe en la publicación de patente WO 2009005937A1.

Los enfoques y los compuestos específicos que se han mostrado anteriormente no pretenden ser limitantes. Las estructuras químicas en los esquemas en el presente documento representan variables que por la presente se definen de forma proporcional con definiciones de grupos químicos (restos, átomos, etc.) de la posición correspondiente en las fórmulas de compuestos en el presente documento, tanto si se identifican con el mismo nombre de variable (es decir, R1, R2, R3, etc.) como si no lo hacen. La idoneidad de un grupo químico en una estructura de compuesto para su uso en la síntesis de otro compuesto está dentro del conocimiento de alguien con una experiencia habitual en la materia.

Los métodos adicionales para sintetizar compuestos de Fórmula I y sus precursores sintéticos, incluyendo aquellos en los que sus rutas no se muestran de forma explícita en los esquemas en el presente documento, están dentro de los medios de los químicos con una experiencia habitual en la materia. Las transformaciones de química de síntesis y metodologías de grupos protectores (protección y desprotección) útiles para la síntesis de los compuestos aplicables se conocen en la técnica e incluyen, por ejemplo, las que se describen en Larock R, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989); Greene, TW et al., Projective Groups in Organic Synthesis, 3a Ed., John Wiley and Sons (1999); Fieser, L et al., Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1994); y Paquette, L, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1995) y ediciones posteriores de las mismas.

Las combinaciones de sustituyentes y variables previstas por la presente invención son solamente las que dan como resultado la formación de compuestos estables.

Composiciones

La invención también proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I o sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto; y un vehículo farmacéuticamente aceptable. El vehículo o vehículos son "aceptables" en el sentido de ser compatibles con los otros ingredientes de la formulación y, en el caso de un vehículo farmacéuticamente aceptable, no perjudiciales para el receptor del mismo en una cantidad usada en el medicamento.

Los excipientes, adyuvantes y vehículos farmacéuticamente aceptables que se pueden usar en las composiciones farmacéuticas de la presente invención incluyen, pero no se limitan a, agentes de intercambio iónico, alúmina, estearato de aluminio, lecitina, proteínas de suero, tales como albúmina de suero humano, sustancias tampón tales como fosfatos, glicina, ácido sórbico sorbato potásico, mezclas parciales de glicérido de ácidos grasos vegetales saturados, agua, sales o electrolitos, tales como sulfato de protamina, hidrogenofosfato disódico, hidrogenofosfato potásico, cloruro sódico, sales de cinc, sílice coloidal, trisilicato de magnesio, polivinil pirrolidona, sustancias a base de celulosa, polietilenglicol, carboximetilcelulosa sódica, poliacrilatos, ceras, polímeros de bloque de polietileno- polioxipropileno, polietilenglicol y lanolina.

Si fuera necesario, la solubilidad y la biodisponibilidad de los compuestos de la presente invención en composiciones farmacéuticas se pueden aumentar con métodos bien conocidos en la técnica. Un método incluye el uso de excipientes líquidos en la formulación. Véase " Oral Lipid-Based Formulations: Enhancing the Bioavailability of Poorly WaterSoluble Drugs (Drugs and the Pharmaceutical Sciences)", David J. Hauss, ed. Informa Healthcare, 2007; y " Role of Lipid Excipients in Modifying Oral and Parenteral Drug Delivery: Basic Principles and Biological Examples", Kishor M. Wasan, ed. Wiley-Interscience, 2006.

Otro método conocido para aumentar la biodisponibilidad es el uso de una forma amorfa de un compuesto de la presente invención formulado opcionalmente con un poloxámero, tal como LUTROL™ y PLURONIC™ (BASF Corporation), o copolímeros de bloque de óxido de etileno y óxido de propileno. Véase el documento de Patente de Estados Unidos N.° 7.014.866; y las publicaciones de patente de Estados Unidos N.os 20060094744 y 20060079502.

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Las composiciones farmacéuticas de la invención incluyen las que son adecuadas para administración oral, rectal, nasal, tópica (incluyendo bucal y sublingual), vaginal o parenteral (incluyendo subcutánea, intramuscular, intravenosa e intradérmica). En ciertas realizaciones, el compuesto de las fórmulas en el presente documento se administra por vía transdérmica (por ejemplo, usando un parche transdérmico o técnicas iontoforéticas). Otras formulaciones se pueden presentar de forma conveniente en una forma de dosificación unitaria, por ejemplo, comprimidos, cápsulas de liberación sostenida, y en liposomas, y se pueden preparar con cualquier método bien conocido en la técnica farmacéutica. Véase, por ejemplo, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott Williams & Wilkins, Baltimore, MD (20a ed. 2000).

Los métodos preparativos de ese tipo incluyen la etapa de poner en asociación, con la molécula a administrar, ingredientes tales como el vehículo que constituye uno o más ingredientes auxiliares. En general, las composiciones se preparan poniendo en asociación los principios activos de forma uniforme y profunda con vehículos líquidos, liposomas o vehículos sólidos finamente divididos, o ambos, y a continuación, se para necesario, se da forma al producto.

En ciertas realizaciones, el compuesto se administra por vía oral. Las composiciones de la presente invención adecuadas para su administración oral se puede presentar comunidades separadas tales como cápsulas, sobrecitos, o comprimidos cada uno conteniendo una cantidad determinada previamente del principio activo; un polvo o gránulos; una solución o una suspensión en un líquido acuoso o un líquido acuoso; una emulsión líquida de aceite en agua; una emulsión líquida de agua en aceite; empaquetadas en liposomas; o en forma de un bolo, etc. Las cápsulas de gelatina blanda pueden ser útiles para contener tales suspensiones, lo que puede aumentar de forma beneficiosa la tasa de absorción del compuesto.

En el caso de comprimidos para uso oral, los vehículos que se usan comúnmente incluyen lactosa y almidón de maíz. Por lo general también se añaden agentes lubricantes, tales como estearato de magnesio. Para administración oral en una forma de cápsula, los diluyentes útiles incluyen lactosa y almidón de maíz seco. Cuando las suspensiones acuosas se administran por vía oral, el principio activo se combina con agentes de emulsión y de suspensión. Si se desea, se pueden añadir determinados agentes edulcorantes y/o saborizantes y/o colorantes.

Las composiciones adecuadas para administración oral incluyen pastillas para chupar que comprenden los ingredientes en una base de sabor, normalmente sacarosa y goma arábiga o tragacanto; y pastillas que comprenden el principio activo en una base inerte tal como gelatina y glicerina, o sacarosa y goma arábiga.

Las composiciones adecuadas para administración parenteral incluyen y soluciones para inyección estéril acuosas y no acuosas que pueden contener antioxidantes, tampones, agentes bacteriostáticos y solutos que hace que la formulación sea isotónica con la sangre del receptor pretendido; y suspensiones estériles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes de suspensión y agentes espesantes. Las formulaciones se pueden presentar en recipientes de una sola dosis o de múltiples dosis, por ejemplo, ampollas y viales cerrados herméticamente, y se pueden almacenar en una condición secada por congelación (liofilizada) que requiere solamente la adición del vehículo líquido estéril, por ejemplo agua a inyecciones, inmediatamente antes de su uso. Las soluciones tensiones de inyección extemporánea se pueden preparar a partir de polvos, gránulos y comprimidos estériles.

Las soluciones para inyección de ese tipo pueden estar en forma, por ejemplo, de una suspensión acuosa u oleaginosa inyectable estéril. Esta suspensión se puede formular de acuerdo con técnicas conocidas en la técnica usando agentes de dispersión o humectantes adecuados (tal como, por ejemplo, Tween 80) y agentes de suspensión. La preparación inyectable estéril también puede ser una solución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o disolvente parenteralmente aceptable no tóxico, por ejemplo, en forma de una solución en 1,3-butanodiol. Entre los vehículos y disolventes aceptables que se pueden usar se encuentran manitol, agua, solución de Ringer y solución isotónica de cloruro sódico. Además, como un disolvente o medios de suspensión de forma convencional se usan aceites no volátiles, estériles. Para este fin, se puede usar cualquier aceite no volátil blando incluyendo mono- o diglicéridos sintéticos. Los ácidos grasos, tales como ácido oleico y sus derivados glicéridos son útiles en la preparación de agentes inyectables, al igual que lo son los aceites naturales farmacéuticamente aceptables, tales como aceite de oliva o aceite de ricino, especialmente en sus versiones polioxietiladas. Estas soluciones o suspensiones oleosas también pueden contener un diluyente o dispersante alcohólico de cadena larga.

Las composiciones farmacéuticas de la presente invención se pueden administrar en forma de consistorios para administración rectal. Estas composiciones se pueden preparar mezclando un compuesto de la presente invención con un excipiente no irritante adecuado que es sólido a temperatura ambiente pero liquido a la temperatura rectal y por lo tanto se fundirá en el recto para liberar los componentes activos. Los materiales de ese tipo incluyen, pero no se limitan a, manteca de cacao, cera de abejas y polietilenglicoles.

Las composiciones farmacéuticas de la presente invención se pueden administrar mediante aerosol o inhalation nasal. Las composiciones de ese tipo se preparan de acuerdo con técnicas bien conocidas en la técnica de formulación farmacéutica y se pueden preparar como soluciones en solución salina, usando de alcohol bencílico u otros conservantes adecuados, promotores de absorción para aumentar la biodisponibilidad, fluorocarbonos, y/u otros agentes solubilizantes o dispersantes conocidos en la técnica. Véase, por ejemplo: Rabinowitz JD y Zaffaroni

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AC, documento de patente de Estados Unidos N.° 6.803.031, asignado a Alexza Molecular Delivery Corporation.

La administración tópica de las composiciones farmacéuticas de la presente invención es especialmente útil cuando el tratamiento deseado implica zonas u órganos fácilmente accesibles mediante aplicación tópica. Para aplicación tópica por vía tópica a la piel, la composición farmacéutica se debería formular con una pomada adecuada que contenga los componentes activos suspendidos o disueltos en un vehículo. Los vehículos para administración tópica de los compuestos de la presente invención incluyen, pero no se limitan a, aceite mineral, vaselina líquida, Vaselina de color blanco, propilenglicol, compuesto de polioxietileno y polioxipropileno, cera emulsionante, y agua. Como alternativa, la composición farmacéutica se puede formular con una loción o crema adecuada que contiene el compuesto activo suspendido o disuelto en un vehículo. Los vehículos adecuados incluyen, pero no se limitan a, aceite mineral, monoestearato de sorbitán, polisorbato 60, cera de ésteres de cetilo, alcohol cetearílico, 2- octildodecanol, alcohol bencílico, y agua. Las composiciones farmacéuticas de la presente invención también se deben aplicar por vía tópica al tracto intestinal inferior mediante formulación de supositorio rectal o en una formulación de enema adecuado. Los parches tópicamente transdérmicos y la administración iontoforética también están incluidos en la presente invención.

La aplicación de los agentes terapéuticos objeto puede ser local, con el fin de su administración al sitio de interés. Para proporcionar las composiciones objeto al sitio de interés se pueden usar diversas técnicas, tales como inyección, uso de catéteres, trócares, proyectiles, gel plurónico, stents, polímeros de liberación sostenida de fármaco u otro dispositivo que proporcione acceso interno.

Los compuestos de la presente invención se pueden incorporar en composiciones para revestimiento de un dispositivo médico implantable, tal como prótesis, válvulas artificiales, injertos vasculares, stents, o catéteres. Los revestimientos adecuados y la preparación general de dispositivos implantables revestidos se conocen en la técnica y se ejemplifican en los documentos de Patente de Estados Unidos N.os 6.099.562; 5.886.026; y 5.304.121. Por lo general los revestimientos son materiales poliméricos biocompatibles tales como polímero de hidrogel, polimetildisiloxano, policaprolactona, polietilenglicol, ácido poliláctico, acetato de etileno y vinilo, y mezclas de los mismos. Los revestimientos opcionalmente se pueden cubrir adicionalmente con un revestimiento externo adecuado de fluorosilicona, polisacáridos, polietilenglicol, fosfolípidos o combinaciones de los mismos para impartir características de liberación controladas en la composición. Los revestimientos para dispositivos invasivos se van a incluir dentro de la definición de excipiente, adyuvante o vehículo farmacéuticamente aceptable, ya que esos términos se usan en el presente documento.

Un método para el revestimiento de un dispositivo médico implantable puede comprender la etapa de ponen en contacto dicho dispositivo con la composición de revestimiento que se ha descrito anteriormente. Para los expertos en la materia será evidente que el revestimiento del dispositivo se producirá antes de su implante en un mamífero.

Un método para impregnar un dispositivo de liberación de fármaco implantable comprende la etapa de poner en contacto dicho dispositivo de liberación de fármaco con un compuesto o composición de la presente invención. Los dispositivos de liberación de fármaco implantables incluyen, pero no se limitan a, cápsulas o tubos de polímero biodegradable, cápsulas de polímero difusible, no degradable, cápsulas de polímero difusible y obleas de polímero biodegradables.

En el presente documento se desvela un dispositivo médico implantable revestido con un compuesto o una composición que comprende un compuesto de la presente invención, de modo que dicho compuesto es terapéuticamente activo.

En el presente documento también se desvela un dispositivo de liberación de fármaco implantable impregnado con o que contiene un compuesto o una composición que comprende un compuesto de la presente invención, de modo que dicho compuesto se libera a partir de dicho dispositivo y es terapéuticamente activo.

Cuando un órgano o tejido es accesible debido a la eliminación del sujeto, dicho órgano o tejido se puede introducir en un baño en un medio que contiene una composición de la presente invención, una composición de la presente invención se puede pintar sobre el órgano, o una composición de la presente invención se puede aplicar de cualquier otro modo conveniente.

Una composición de la presente invención puede comprender adicionalmente un segundo agente terapéutico. El segundo agente terapéutico se puede seleccionar entre cualquier compuesto o agente terapéutico conocido por tener o por demostrar propiedades ventajosas cuando se administra con un compuesto que tiene el mismo mecanismo de acción que el ibrutinib. El segundo agente se puede seleccionar entre ofatumumab, rituximab, bendamustina, ciclofosfamida, doxorrubicina, prednisona, sulfato de vincristina, fludarabina, y alopurinol.

En otra realización de la presente divulgación, se proporcionan formas de dosificación separadas de un compuesto de la presente invención y uno o más de cualquiera de los segundos agentes terapéuticos que se han descrito anteriormente, en las que el compuesto y el segundo agente terapéutico están asociados entre sí. La expresión "asociados entre sí" como se usa en el presente documento se refiere a que las formas de dosificación separadas se

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empaquetan en conjunto o se unen de otro modo entre sí de modo que sea rápidamente evidente que se pretende que las formas de dosificación separadas se comercialicen y se administren juntas (en menos de 24 horas una de otra, de forma consecutiva o de forma simultánea).

En las composiciones farmacéuticas de la invención, el compuesto de la presente invención está presente en una cantidad eficaz. Como se usa en el presente documento, la expresión "cantidad eficaz" se refiere a una cantidad que, cuando se administra en un régimen de dosificación apropiado, es suficiente para tratar el trastorno diana.

La interrelación de dosificaciones para animales y seres humanos (basadas en miligramos por metro cuadrado de superficie corporal) se describe en Freireich et al., Cancer Chemother. Rep, 1966, 50: 219. El área de superficie corporal se puede determinar aproximadamente a partir de la altura y el peso del sujeto. Véase, por ejemplo, Scientific Tables, Geigy Pharmaceuticals, Ardsley, N.Y., 1970, 537.

En una realización, una cantidad eficaz de un compuesto de la presente invención puede variar de 1 mg/kg a 50 mg/kg, administrada una vez al día, tal como de 2,5 mg a 50 mg/kg, administrada una vez al día, tal como de

2.5 mg a 25 mg/kg, administrada una vez al día, tal como de 5 mg a 25 mg/kg, administrada una vez al día.

En una realización, una cantidad eficaz de un compuesto de la presente invención puede variar de 1 mg/kg a 50 mg/kg, administrada dos veces al día, tal como de 2,5 mg a 50 mg/kg, administrada dos veces al día, tal como de

2.5 mg a 25 mg/kg, administrada dos veces al día, tal como de 5 mg a 25 mg/kg, administrada dos veces al día.

En una realización, una cantidad eficaz de un compuesto de la presente invención puede variar de 50 mg a 5000 mg, tal como de 100 mg a 2500 mg, tal como de 100 mg a 2250 mg, tal como de 150 mg a 2250 mg, tal como de 180 mg a 2250 mg, tal como de 300 mg a 100 mg, tal como de 350 mg a 800 mg, tal como de 400 mg a 600 mg, tal como de 450 mg, que se puede administrar una vez al día.

Las dosis eficaces también variarán, tal como lo reconocen los expertos habituales en la materia, dependiendo de las enfermedades tratadas, la gravedad de la enfermedad, la vía de administración con el sexo, edad y estado de salud general del sujeto, uso de excipiente, la posibilidad de uso simultáneo con otros tratamientos terapéuticos tal como uso de otros agentes y el criterio del médico que trata.

Para composiciones farmacéuticas que comprenden un segundo agente terapéutico, una cantidad eficaz del segundo agente terapéutico está entre aproximadamente un 20 % y un 100 % de la dosificación utilizada normalmente en un régimen de monoterapia usando simplemente ese agente. Preferentemente, una cantidad eficaz está entre aproximadamente un 70 % y un 100 % de la dosis monoterapéutica normal. Las dosificaciones monoterapéuticas normales de estos segundos agentes terapéuticos se conocen bien en la técnica. Véase, por ejemplo, Wells et al., eds., Pharmacotherapy Handbook, 2a Edición, Appleton y Lange, Stamford, Conn. (2000); PDR Pharmacopoeia, Tarascon Pocket Pharmacopoeia 2000, Edición Deluxe, Tarascon Publishing, Loma Linda, Calif. (2000), referencias cada una de las cuales se incorporan en el presente documento por referencia en su totalidad.

Se espera que algunos de los segundos agentes terapéuticos que se han mencionado anteriormente actúen de forma sinérgica con los compuestos de la presente invención. Cuando esto sucede, se permitirá la reducción de la dosificación eficaz del segundo agente terapéutico y/o el compuesto de la presente invención a partir de la necesaria en una monoterapia. Esto tiene la ventaja de minimizar los efectos secundarios tóxicos de cualquiera del segundo agente terapéutico de un compuesto de la presente invención, mejoras sinérgicas en la eficacia, mejora de la facilidad de administración o uso y/o reducción del gasto global de la preparación o formulación de compuesto.

Métodos de Tratamiento

Los compuestos de la invención se pueden usar un método para inhibir BTK en una célula, que comprende poner en contacto la célula con un compuesto de Fórmula I en el presente documento.

Una enfermedad seleccionada entre el grupo que consiste en leucemia, incluyendo leucemia linfocítica crónica; linfoma, incluyendo linfoma de células del manto; mieloma, incluyendo mieloma múltiple; y enfermedad autoinmune, se puede tratar mediante la administración de una composición farmacéutica como se describe en el presente documento. En una realización, la invención proporciona por lo tanto un compuesto o composición de la invención como se ha definido anteriormente para su uso en el tratamiento de una enfermedad seleccionada entre leucemia linfocítica crónica, linfoma de células del manto, y mieloma múltiple. Los compuestos y composiciones que se desvelan en el presente documento también pueden usar para tratar linfoma de linfocitos B grandes difusos, y enfermedad autoinmune.

La identificación de un sujeto con necesidad de un tratamiento de este tipo puede estar en el criterio de un sujeto o un profesional de cuidados de salud y puede ser subjetiva (por ejemplo, opinión) u objetiva (por ejemplo, mensurable con un ensayo o método de diagnóstico). El sujeto puede ser un paciente.

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Cualquiera de los métodos de tratamiento que se han mencionado anteriormente puede comprender la etapa adicional de administración conjunta al sujeto con necesidad del mismo de uno o más segundos agentes terapéuticos. La elección del segundo agente terapéutico se puede realizar a partir de cualquier segundo agente terapéutico conocido por ser útil para administración conjunta con ibrutinib. La elección del segundo agente terapéutico también depende de la enfermedad o afección a tratar en particular. Los ejemplos de segundos agentes terapéuticos que se pueden usar en los métodos desérticos son los que se han presentado anteriormente para su uso en composiciones de combinación que comprenden un compuesto de la presente invención y un segundo agente terapéutico. Los agentes de ese tipo incluyen, pero no se limitan a, ofatumumab, rituximab, bendamustina, ciclofosfamida, doxorrubicina, prednisona, sulfato de vincristina, fludarabina, y alopurinol.

La expresión "administración conjunta" como se usa en el presente documento se refiere a que el segundo agente terapéutico se puede administrar junto con un compuesto de la presente invención como parte de una forma de clasificación individual (tal como una composición de la presente invención que comprende un compuesto de la invención y un segundo agente terapéutico como se ha descrito anteriormente) o como formas de múltiples dosificaciones, separadas. Como alternativa, el agente adicional se puede administrar antes de, de forma consecutiva con, o después de la administración de un compuesto de la presente invención. En un tratamiento de terapia de combinación de ese tipo, tanto los compuestos de la presente invención como el segundo o segundos agentes terapéuticos se administran mediante métodos convencionales. La administración de una composición de la presente invención, que comprende tanto un compuesto de la invención como un segundo agente terapéutico, a un sujeto no descarta la administración separada de ese mismo agente terapéutico, cualquier otro segundo agente terapéutico o cualquier compuesto de la presente invención a dicho sujeto en otro momento durante un curso de tratamiento.

Las cantidades eficaces de estos segundos agentes terapéuticos son bien conocidas por las personas con experiencia en la materia y las directrices para su dosificación se pueden encontrar en documentos de patente y en solicitudes de patentes publicadas que se mencionan en el presente documento, así como en Wells et al., eds., Pharmacotherapy Handbook, 2a Edición, Appleton y Lange, Stamford, Conn. (2000); PDR Pharmacopoeia, Tarascon Pocket Pharmacopoeia 2000, Edición de Deluxe, Tarascon Publishing, Loma Linda, Calif. (2000), y otros textos médicos. Sin embargo, estaría dentro del ámbito del experto en la materia determinar el intervalo de cantidad eficaz óptima del segundo agente terapéutico.

En una realización, en la que un segundo agente terapéutico se administra a un sujeto, la cantidad eficaz del compuesto de la presente invención es menor de lo que podría ser su cantidad eficaz cuando no se administra el segundo agente terapéutico. En otra realización, la cantidad eficaz del segundo agente terapéutico es menor de lo que podría ser su cantidad eficaz cuando no se administra el compuesto de la presente invención. De este modo, los efectos secundarios no deseados asociados con dosis elevadas de cualquier agente se pueden minimizar. Otras ventajas potenciales (incluyendo, pero no limitadas a, mejora de los regímenes de dosificación y/o reducción del coste del fármaco) serán evidentes para las personas con experiencia en la materia.

En el presente documento también se desvela el uso de un compuesto de Fórmula I solo o junto con uno o más de los segundos agentes terapéuticos que se han descrito anteriormente en la fabricación de un medicamento, ya sea como una sola composición o como formas de dosificación separadas, para el tratamiento o la prevención, en un sujeto, de una enfermedad, trastorno o síntoma tal como se ha establecido anteriormente. Otro aspecto de la invención es un compuesto de Fórmula I para su uso en el tratamiento o prevención, en un sujeto, de una enfermedad, trastorno con síntomas del mismo que se describe en el presente documento.

En los Ejemplos que siguen a continuación, cualquier compuesto que no entre dentro del alcance de las reivindicaciones está incluido con fines de referencia.

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Etapa 1. 3-Yodo-1H-p¡razolor3.4-dlp¡r¡m¡d¡n-4-am¡na (31). 1H-P¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4-am¡na, 30 (5.0 g. 37 mmol, 1 equ¡v.) se suspend¡ó en DMF (100 ml) y se añad¡ó W-yodosucc¡n¡m¡da (NIS) (10,7 g, 45 mmol, 1,2 equ¡v.). La reacc¡ón se calentó a 80 °C durante 2 horas. La reacc¡ón se enfr¡ó a temperatura amb¡ente y a cont¡nuac¡ón a 0 °C y se ¡nterrump¡ó med¡ante la ad¡c¡ón gota a gota de agua (200 ml). Los sól¡dos resultantes se recog¡eron por f¡ltrac¡ón, 10 se lavaron con agua y etanol frío, y se secaron en un horno de vacío para produc¡r 31 (8,1 g, rend¡m¡ento de un 84 %) en forma de un sól¡do de color be¡ge.

Etapa 2. Fenox¡fen¡l)-1H-p¡razolo[3.4-dlp¡r¡m¡d¡n-4-am¡na (33). El Compuesto 31 (4,0 g, 15,3 mmol, 1 equ¡v.), ác¡do borón¡co 32 (6,56 g, 30,7 mmol, 2 equ¡v.), y monoh¡drato tr¡bás¡co de fosfato potás¡co (10,56 g, 45,9 mmol, 3 equ¡v.) 15 se d¡solv¡eron en d¡oxano (50 ml) y agua (20 ml). La mezcla se roc¡ó con n¡trógeno durante 20 m¡nutos y se añad¡ó tetraqu¡s(tr¡fen¡lfosf¡na)palad¡o (2,70 g, 2,3 mmol, 0,15 equ¡v.). La mezcla se roc¡ó con n¡trógeno durante un per¡odo ad¡c¡onal de 5 m¡nutos y a cont¡nuac¡ón se calentó a reflujo durante 24 horas. La reacc¡ón se enfr¡ó a temperatura

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ambiente y se agitó durante una noche, proporcionan un precipitado de color beige. La mezcla de reacción se diluyó con agua (50 ml) y los sólidos se recogieron por filtración. El producto en bruto se trituró con metanol (150 ml) para producir 3,9 g de un 85 % de producto puro. La pureza se mejoró adicionalmente mediante la trituración con acetato de etilo (100 ml), proporcionando 33 (3,6 g, rendimiento de un 77 %, 90 % puro) en forma de un sólido de color beige.

Etapa 3. (ffl-3-(4-Amino-3-(4-fenoxifenil)-1H-pirazolo[3,4-d1pirimidin-1-il)piperidin-1-carboxilato de tere-butilo (35). El Compuesto 33 (1,80 g, 5,9 mmol, 1 equiv.), piperidina protegida, 34 (1,43 g, 7,1 mmol, 1,2 equiv.), trifenilfosfina (2,33 g, 8,9 mmol, 1,5 equiv.), y azodicarboxilato de diisopropilo (1,80 g, 8,9 mmol, 1,5 equiv.) se disolvieron en THF (200 ml) y se agitaron a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (200 ml) y se lavó con bicarbonato sódico acuoso saturado (1 x 300 ml) y solución salina saturada (1 x 300 ml). La fase orgánica se secó sobre sulfato sódico, se filtro y se concentró a presión reducida. El material en bruto se adsorbió sobre gel de sílice y se purificó usando un sistema de cromatografía automatizado Analogix eluyendo con un 0-8 % de metanol en diclorometano. Todas las fracciones que contenían producto se combinaron y se volvieron a someter a cromatografía usando las condiciones mencionadas anteriormente para producir 35 (1,1 g, rendimiento de un 38 %) en forma de una espuma de color blanco.

Etapa 4. Clorhidrato de (ffl-3-(4-fenoxifenil-1-(piperidin-3-il-1H-pirazolo[3,4-d1pirimidin-4-amina (36). El Compuesto 35 (700 mg, 1,48 mmol, 1 equiv.) se disolvió en dioxano (8 ml). Una solución de cloruro de hidrógeno en dioxano (4 ml de una solución 4 N en dioxano, 16 mmol, 10,7 equiv.) se añadió y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche. La reacción se diluyó con éter dietílico (20 ml) y los sólidos resultantes se recogieron por filtración bajo una corriente de nitrógeno. El producto se secó adicionalmente en un horno de vacío para producir 36 (550 mg, rendimiento de un 88 %) en forma de un sólido de color blanquecino.

Etapa 5. (ft)-1-(3-(4-Amino-3-(4-fenoxifenil)-1H-pirazolo[3,4-d1pirimidin-1-il)piperidin-1-il)prop-2-en-2,3,3-d3-1-ona

(Compuesto 122).

A) DMF (0,003 ml, 0,03 mmol, 0,02 equiv.) se añadió a ácido acrílico-d4 disponible en el mercado (126 mg, 1,66 mmol, 1 equiv, 99 % de átomos de D) seguido de cloruro de oxalilo (0,16 ml, 1,83 mmol, 1,1 equiv.). La mezcla se agitó durante 30 minutos, momento en el que toda la evolución del gas había cesado. El cloruro de acriloílo-d3 (37) se usó como tal.

B) En un vial de 20 ml, se añadió trietilamina (0,46 ml, 3,18 mmol, 3 equiv.) a una suspensión de 36 (450 mg,

1,06 mmol, 1 equiv.) en diclorometano (10 ml). La reacción se agitó durante 15 minutos, dando como resultado una solución de color transparente. A continuación se añadió cloruro de acriloílo-d3 (37) (0,10 ml, 1,17 mmol, 1,1 equiv, preparado anteriormente) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano (50 ml) y se lavó con ácido cítrico al 5 % (50 ml). La fase orgánica se secó sobre sulfato sódico, se filtró con que se concentró a presión reducida. El material en bruto se purificó usando un sistema de cromatografía automatizado Analogix eluyendo con un 0-8 % de metanol en diclorometano. Todas las fracciones que contenían productos se combinaron y se concentraron para dar una película incolora que se disolvió en benceno/metanol (5 ml) y se liofilizó para producir el Compuesto 122 (170 mg, rendimiento de un 36 %, [M+H] + = 444,3) en forma de un polvo de color blanco.

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10 % Pd/C, H2

NS

DMF. 80 °C

160 &C

30a

HO-'B

K3PO4, 1^3)4

riioxano, agua

33a

n

NBoc

i hoxano

DIAD, PPh3, THE

N ■

Qr

GHjCI

MCI

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Compuesto 110

Esquema 6. Preparación del Compuesto 110

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Etapa 1. 1H-pirazolof3.4-d1pirimidin-4-amina-3.6-d2 (30a). Un reactor de bomba Parr de 2 l se cargó con 30 (5,0 g, 37 mmol, 1.0 equiv.), paladio al 10 % sobre carbono (500 mg. seco). y D2O (1 L. 99,8 % de átomos de D). El reactor

se evacuó y se volvió a cargar con hidrógeno tres veces. Después de la carga final de hidrógeno a 138 kPa la

mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. A continuación el hidrógeno se evacuó y se reemplazó con nitrógeno. El reactor se calentó a 140 °C durante 32 horas. momento en el que la reacción era completa tal como se determina mediante análisis de MS. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y se transfirió a un matraz de fondo redondo de 3 l. Se añadió HCl concentrado (15 ml) y la mezcla se calentó a reflujo. Una vez que todo el producto sólido se había disuelto. la mezcla se filtró en caliente a través de una capa de Celite, lavando con agua. Cuando todavía estaba caliente. el pH del filtrado se ajustó a 8 con hidróxido de amonio concentrado. El

filtrado se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida hasta ~50 % del volumen original. El

sólido de color blanco resultante se recogió por filtración y se secó en un horno de vacío para producir 30a (2.0 g. rendimiento de un 40 %) en forma de un sólido de color blanco. El producto adicional permaneció en el filtrado.

Etapa 2. 3-Yodo-1H-pirazolo[3.4-d1pirimidin-4-amina-6-d1 (31a). El Compuesto 30a (1.0 g. 7.3 mmol. 1 equiv.) se suspendió en DMF (20 ml) y se añadió W-yodosuccinimida (NIS) (1,97 g. 8.7 mmol. 1.2 equiv.). La reacción se calentó a 80 °C durante 2 horas. se añadió una porción adicional de NIS (1.0 g) y la reacción se calentó a 80 °C durante otras 2 horas. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y a continuación a 0 °C y se interrumpió mediante la adición gota a gota de agua (60 ml). Los sólidos resultantes se recogieron por filtración y se lavaron con agua. El producto en bruto se purificó por trituración con etanol frío (100 ml) y se secó en un horno de vacío para producir 3la (1,74 g. rendimiento de un 91 %) en forma de un sólido de color beige.

Etapa 3. 3-(4-Fenoxifenil)-1H-pirazolo[3.4-d1pirimidin-4-amina-6-d1 (33a). El Compuesto 31a (1,74 g. 6.6 mmol. 1 equiv.), ácido borónico 32 (2,85 g. 13,2 mmol. 2 equiv.), y fosfato potásico tribásico (4,60 g. 19,9 mmol. 3 equiv.) se disolvieron en dioxano (20 ml) y agua (8 ml). La mezcla se roció con nitrógeno durante 15 minutos y se añadió tetraquis(trifenilfosfina)paladio (1,15 g. 1.0 mmol. 0,15 equiv.). La mezcla se roció con nitrógeno durante un periodo adicional de 5 minutos y a continuación se calentó a reflujo durante 30 horas.

La reacción se enfrió a temperatura ambiente y se agitó durante una noche. dando un precipitado de color beige. La mezcla de reacción se diluyó con agua (60 ml) y los sólidos se recogieron por filtración. El producto en bruto se trituró con metanol (50 ml). proporcionando 33a (900 mg. rendimiento de un 45 %) en forma de un sólido de color beige.

Etapa 4. (ft)-3-(4-Amino-3-(4-fenoxifenil)-1H-pirazolo[3.4-d1pirimidin-1-il-6-d1)piperidin-1-carboxilato de tere-butilo (35a). El Compuesto 33a (840 mg. 2,75 mmol. 1 equiv.), piperidina protegida 34 (670 mg. 3,30 mmol. 1.2 equiv.), trifenilfosfina (1,10 g. 4,13 mmol. 1.5 equiv.), y azodicarboxilato de diisopropilo (850 mg. 8.9 mmol. 1.5 equiv.) se disolvieron en THF (80 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante una noche. Para forzar la finalización de la reacción. se añadieron porciones adicionales de 34 (670 mg). trifenilfosfina (1,10 g). y azodicarboxilato de diisopropilo (850 mg) y la reacción se agitó durante un periodo adicional de 6 horas. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida. El material en bruto se adsorbió sobre gel de sílice y se purificó usando un sistema de cromatografía automatizado Analogix eluyendo un 0-8 % de metanol en diclorometano. Todas las fracciones que contenían producto se combinaron y se volvieron a someter a cromatografía usando las condiciones mencionadas anteriormente para producir 35a (160 mg. rendimiento de un 12 %) en forma de un sólido de color blanco. Las fracciones menos puras adicionales también se recuperaron y se retuvieron.

Etapa 5. Clorhidrato de (ft)-3-(4-fenoxifenil)-1-(piperidin-3-il)-1H-pirazolo[3.4-d1pirimidin-4-amina-6-d1 (36a). El Compuesto 35a (160 mg. 0,33 mmol. 1 equiv.) se disolvió en dioxano (10 ml). Una solución de cloruro de hidrógeno en dioxano (2 ml de una solución 4 N en dioxano. 8 mmol. 24 equiv.) se añadió y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 65 horas. La reacción se diluyó con éter dietílico (40 ml) y los sólidos resultantes se recogieron por filtración bajo una corriente de nitrógeno. El producto se secó adicionalmente en un horno de vacío para producir 36a (100 mg. rendimiento de un 73 %) en forma de un sólido de color blanquecino.

Etapa 6. (ft)-1-(3-(4-Amino-3-(4-fenoxifenil)-1H-pirazolo[3.4-d1pirimidin-1-il-6-d1)piperidin-1-il)prop-2-en-1-ona

(Compuesto 110).

A) DMF (0,014 ml. 0,18 mmol. 0,02 equiv.) se añadió a ácido acrílico (0,24 ml. 3.5 mmol. 1 equiv.) seguido de cloruro de oxalilo (0,33 ml. 3.8 mmol. 1.1 equiv.). La mezcla se agitó durante 30 minutos. momento en el que toda la evolución de gas había cesado. El cloruro de acriloílo, 37a, se usó como tal.

B) Trietilamina (0,050 ml. 0,36 mmol. 3 equiv.) se añadió a una suspensión de 36a (50 mg. 0,12 mmol. 1 equiv.) en diclorometano (2.5 ml). La reacción se agitó durante 15 minutos. dando como resultado una solución transparente. El cloruro de acriloílo. 37a (0,011 ml. 0,13 mmol. 1.1 equiv. preparado anteriormente) se añadió y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas para producir el Compuesto 110 ([M+H1+ = 442.)

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A) DMF (0,002 ml. 0,03 mmol, 0,02 equ¡v.) se añad¡ó a ác¡do acríl¡co-d4 (0.10 ml. 1,38 mmol, 1 equ¡v, 99 % de átomos de D) d¡spon¡ble en el mercado segu¡do de cloruro de oxal¡lo (0,12 ml, 1,52 mmol, 1,1 equ¡v.). La mezcla se agitó durante 30 m¡nutos, momento en el que toda la evoluc¡ón de gas había cesado. El cloruro de acr¡loílo-d3 resultante, 37, se usó como tal.

10 B) Tr¡et¡lam¡na (0,050 ml, 0,36 mmol, 3 equ¡v.) se añad¡ó a una suspens¡ón de 36a (50 mg, 0,12 mmol, 1 equ¡v.) en d¡clorometano (2,5 ml). La reacc¡ón se ag¡tó durante 15 m¡nutos, dando como resultado una soluc¡ón transparente. Se añad¡ó cloruro de acr¡loílo-d3, 37 (0,011 ml, 0,13 mmol, 1,1 equ¡v, preparado anter¡ormente) y la reacc¡ón se agitó a temperatura amb¡ente durante 2 horas para produc¡r el Compuesto 121 ([M+H]+ = 445.)

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Ejemplo 4. Síntesis del Compuesto Intermedio (S)-3-h¡drox¡-2.2.3.4.4.5.5.6.6-d9-p¡per¡d¡n-1-carbox¡lato de tere-butilo (3a). La síntes¡s del compuesto ¡ntermed¡o 3a se muestra en el Esquema 7 y se descr¡be a cont¡nuac¡ón.

imagen12

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Etapa 1. 2-Oxo-3.3.4.4.5.5-ds-p¡rrol¡d¡na-1-carbox¡lato de tere-but¡lo (41). P¡rrol¡d¡n-2-ona. 40 (5.0 g. 55 mmol. 1 equ¡v. 98 % de átomos de D) d¡spon¡ble en el mercado y 4-d¡met¡lam¡nop¡r¡d¡na (740 mg. 6 mmol. 0.11 equ¡v.) se d¡solv¡eron en aceton¡tr¡lo y se enfr¡aron a 0 °C segu¡do de la ad¡c¡ón de b¡carbonato de d¡-fere-but¡lo (24.0 g. 110 mmol. 2 equ¡v.). La reacc¡ón se dejó calentar a temperatura amb¡ente y se agitó durante una noche. La mezcla 10 de reacc¡ón se vert¡ó en agua (250 ml) y se concentró parc¡almente. La mezcla acuosa se extrajo con acetato de

et¡lo (3 x 200 ml). Las fases orgán¡cas comb¡nadas se lavaron con HCl 1 N (1 x 200 ml). b¡carbonato sód¡co acuoso saturado (1 x 200 ml). y soluc¡ón sal¡na saturada (1 x 200 ml). La fase orgán¡ca se secó sobre sulfato sód¡co. se f¡ltró. y se concentró a pres¡ón reduc¡da. El producto en bruto se pur¡f¡có usando un s¡stema de cromatografía automat¡zado Analog¡x eluyendo con un 20-80 % de acetato de et¡lo en heptanos para produc¡r 41 (10.1 g. 15 rend¡m¡ento de un 96 %) en forma de un líquido de color amar¡llo claro.

Etapa 2. Éster de terc-but¡lo del ác¡do 4-oxo-5-d¡met¡lsulfoxon¡o-pent¡l-1.1.2.2.3.3-d6-carbám¡co (42). Se suspend¡ó yoduro de tr¡met¡l sulfoxon¡o (7.26 g. 33 mmol. 3 equ¡v.) en THF (50 ml). Se añad¡ó fere-butóx¡do potás¡co (5.09 g. 27.5 mmol. 2.5 equ¡v.) y la reacc¡ón se calentó a reflujo durante 2 horas. La suspens¡ón de color blanco se enfr¡ó a 20 temperatura amb¡ente y se añad¡ó 41 (2.1 g. 11.0 mmol. 1 equ¡v.). La reacc¡ón se agitó a temperatura amb¡ente

durante 2 horas y se ¡nterrump¡ó med¡ante la ad¡c¡ón de agua (80 ml). La mezcla de reacc¡ón se extrajo con ¡sopropanol al 10 % en d¡clorometano (4 x 100 ml). Las fases orgán¡cas comb¡nadas se secaron sobre sulfato sód¡co. se f¡ltra se concentraron a pres¡ón reduc¡da. El producto en bruto se d¡solv¡ó en 2:1 de acetato de et¡lo:heptanos (100 ml) y se concentró lentamente hasta aprox¡madamente 10 ml. El prec¡p¡tado de color

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Etapa 3. 3-Oxo-4.4.5,5.6.6-d6-p¡per¡d¡n-1-carbox¡lato de ferc-butilo (43). Se disolvió dicloruro de bis( 1,5- ciclooctadieno)diiridio(I) (47 mg, 0,071 mmol, 0,01 equiv.) en 1,2-dicloroetano y la solución se roció con nitrógeno durante 15 minutos y a continuación se calentó a reflujo. En una separado, se disolvió 42 (2,0 g, 7,1 mmol, 1 equiv.) en 1,2-dicloroetano y la solución se roció con nitrógeno durante 15 minutos. A continuación esta solución se añadió gota a gota mediante una bomba de jeringa durante 12 horas a la solución de catalizador a reflujo. La reacción se calentó a reflujo durante una hora adicional después de finalizar la adición. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El material en bruto se purificó usando un sistema de cromatografía automatizado Analogix eluyendo con un 0-40 % de acetato de etilo en heptanos para producir 43 (1,1 g, rendimiento de un 76 %) en forma de un aceite incoloro, espeso. RMN 1H indicaba una incorporación de aproximadamente un 50 % de protones en la posición 4.

Etapa 4. 3-Oxo-2.2.4.4.5.5.6.6-d8-p¡per¡d¡n-1-carbox¡lato de ferc-butilo (44). El Compuesto 43 (1,1 g, 5,9 mmol, 1 equiv.) se disolvió en cloroformo-d (100 ml, 99,8 % de átomos de D) y se añadió 2,3,4,6,7,8-hexahidro-1H- pirimido[1,2-a]pirimidina (81 mg, 0,59 mmol, 0,1 equiv.). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas, momento en el que la RMN 1H indicaba un 10 % de H restante en las posiciones 2 y 4. El disolvente se evaporó, se añadió cloroformo-d recién preparado, y la reacción se agitó durante un periodo adicional de 16 horas. A continuación el ciclo se repitió una tercera vez, momento en el que la reacción se diluyó con diclorometano (100 ml) y se lavó con HCl 1 N (1 x 100 ml). La fase orgánica se secó sobre sulfato sódico, se filtró, y se concentró a presión reducida para producir 44 (1,1 g, recuperación cuantitativa) en forma de un aceite incoloro, espeso. No era detectable ninguna señal de protón en cualquiera de las posiciones 2 o 4 por RMN 1H.

Etapa 5. 3-H¡drox¡-2.2.3.4.4.5.5.6.6-d9-P¡per¡d¡n-1-carbox¡lato de ferc-butilo (45). El Compuesto 44 (1,1 g, 5,3 mmol, 1 equiv.) se disolvió en metanol-d (40 ml, 99 % de átomos de D) y se enfrió 0 °C. Se añadió borodeuteriuro sódico (245 mg, 5,8 mmol, 1,1 equiv, 99 % de átomos de D). La reacción se agitó a 0 °C durante 2 horas y a continuación a temperatura ambiente durante una noche. La reacción se interrumpió con cloruro de amonio saturado (5 ml) y agua (10 ml). La mezcla se concentró parcialmente y a continuación se extrajo con diclorometano (4 x 50 ml). Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material en bruto se purificó usando un sistema de cromatografía automatizado Analogix eluyendo con un 0-5 % de metanol en diclorometano para producir 45 (0,50 g, rendimiento de un 46 %) en forma de un aceite incoloro, expresó que solidificó después de un periodo de reposo.

Etapa 6. 3-H¡drox¡-2.2.3.4.4.5.5.6.6-d9-P¡per¡d¡na (15a). El Compuesto 45 (0,50 g, 2,4 mmol, 1 equiv.) se disolvió en dioxano (5 ml) y se añadió cloruro de hidrógeno (2 ml de una solución 4 N en dioxano, 8 mmol, 3,3 equiv.). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche. A continuación la reacción en bruto se concentró a presión reducida y se añadió hidróxido sódico acuoso al 24 % (5 ml) al residuo. La solución acuosa se extrajo con isopropanol al 10 % en diclorometano (6 x 50 ml). Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico, se filtra y se concentraron a presión reducida para producir 15a (160 mg, rendimiento de un 62 %) en forma de una película incolora.

Etapa 6. (S)-3-H¡drox¡-2.2.3.4.4.5.5.6.6-d9-P¡per¡d¡n-1-carbox¡lato de ferc-butilo (Compuesto Intermedio 3a).

A) El Compuesto 15a (1 equiv.) y ácido (R)-canforsulfónico (1 equiv.) se calentaron a reflujo en 2-butanona para obtener una solución transparente. Después de la refrigeración a temperatura ambiente se obtiene un precipitado sólido de color blanco que se filtra, se lava con 2-butanona, y se seca para producir la sal de (R)-CSA del enantiómero S de 15a. La pureza óptica se mejora adicionalmente mediante el calentamiento del sólido aislado a reflujo en una segunda porción de 2-butanona, enfriando, filtrando y secando.

B) La sal de (R)-CSA del enantiómero S de 15a (1 equiv.) y trietilamina (1,2 equiv.) se disuelven en diclorometano y se enfría a 0 °C. Se añade de bicarbonato de di-tercbutilo (1,1 equiv.) en una porción y la reacción se agita a temperatura ambiente durante 48 horas. La mezcla de reacción se diluye con diclorometano y se lava con agua. La fase orgánica se seca, se filtra y se concentra. El material en bruto se purifica por cromatografía sobre gel de sílice para producir 3a (enantiómero S). El compuesto intermedio 3a puede ser útil en la preparación de compuestos de Fórmula I en la que cada Y1, cada Y2, cada Y3, cada Y4 e Y5 es deuterio, tal como los Compuestos 107, 109, 118 y 120, de manera análoga a la que se muestra en el presente documento para los compuestos 110, 121 y 122, tal como puede concebir fácilmente un experto en la materia. Por ejemplo, para la preparación del compuesto 107, los compuestos intermedios fundamentales podrían ser los compuestos 3a, 33 y 37a. Para la preparación del compuesto 109, los compuestos intermedios fundamentales podrían ser los compuestos 3a, 33a y 37 a. For la preparación del compuesto 118, los compuestos intermedios fundamentales podrían ser los compuestos 3a, 33 y 37. Y para la preparación del compuesto 120, los compuestos intermedios fundamentales podrían ser los compuestos 3a, 33a y 37.

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Ejemplo 5. Evaluación de la Estabilidad Metabólica

Ensayo Microsómico: Los microsomas de hígado humano (20 mg/ml) se obtienen en Xenotech, LLC (Lenexa, KS). p-nicotinamida adenina dinucleótido fosfato, forma reducida (NADPH), cloruro de magnesio (MgCh), y dimetilsulfóxido (DMSO) se adquieren en Sigma-Aldrich.

Determinación de la Estabilidad Metabólica: se preparan soluciones de reserva 7,5 mM de los compuestos de ensayo en DMSO. Las soluciones de reserva 7,5 mM se diluyen a 12,5-50 pM en acetonitrilo (ACN). Los 20 mg/ml de microsomas de hígado humano se diluyen a 0,625 mg/ml en tampón de fosfato potásico 0,1 M, pH 7,4, que contiene MgCh 3 mM. Los microsomas diluidos se añaden a pocillos de una placa de polipropileno de pocillos profundos de 96 pocillos por triplicado. Una alícuota de 10 pl del compuesto de ensayo 12,5-50 pM se añade a los microsomas y la mezcla se calienta previamente durante 10 minutos. Las reacciones se inician mediante la adición de solución de NADPH calentada previamente. El volumen de reacción final es de 0,5 ml y contiene 0,5 mg/ml de microsomas de hígado humano, compuesto de ensayo 0,25-1,0 pM, y NADPH 2 mM en tampón de fosfato potásico 0,1 M, pH 7,4, y MgCh 3 mM. Las mezclas de reacción se incuban a 37 °C, y las alícuotas de 50 pl se retiran a 0, 5, 10, 20, y 30 minutos y se añaden a placas de 96 pocillos de pocillos poco profundos que contienen 50 pl de ACN enfriado en hielo con patrón interno para parar las reacciones. Las placas se almacenan a 4 °C durante 20 minutos Tras lo cual se añaden 100 pl de agua a los pocillos de la placa antes de centrifugación para sedimentar las proteínas precipitadas. Los sobrenadantes se transfieren a otra placa de 96 pocillos y se analizan para cantidades de precursor que permanece por LC-MS/MS usando un espectrómetro de masas API 4000 de Applied Bio-systems. El mismo procedimiento se sigue para el homólogo no deuterado del compuesto de Fórmula I y el control positivo, 7- etoxicumarina (1 pM). El ensayo se realiza por triplicado.

Análisis de datos: Los t1/2 in vitro para los compuestos de ensayo se calculan a partir de las pendientes de la regresión lineal de la relación del % de precursor restante (ln) con respecto al tiempo de incubación.

in vitro t1/2 = 0,693/k

k = -[pendiente de regresión lineal del % de precursor restante(ln) con respecto al tiempo de incubación]

El análisis de datos se realiza usando el Software Excel de Microsoft.

Claims (9)

1. 5

   10

   15

   20

   25

   REIVINDICACIONES

   1. Un compuesto de Fórmula I:

   imagen1

   o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que:

   cada Y1, cada Y2, cada Y3, cada Y4 e Y5 es deuterio; y

   cada Y6, cada Y7, cada Y8, cada Y9, cada Y10 cada Y11, cada Y12 cada Y13 e

   Y14 se seleccionan independientemente entre hidrógeno y deuterio.
2. 2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que Y12, Y13, e Y14 son cada uno hidrógeno.
3. 3. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que Y12, Y13, e Y14 son cada uno deuterio.
4. 4. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que (a) cada Y7 es hidrógeno y cada Y8 es hidrógeno, o (b) cada Y7 es deuterio y cada Y8 es deuterio.
5. 5. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en la que el compuesto se selecciona entre el grupo de compuestos (Cmp) que se presentan en la tabla que sigue a continuación:

   Cmp N.°

   Y1 Y2 Y3 Y4 Y5 Y6 -< -J II -< 00 >- II O >- II o> >- Y12 = Y13 = Y14

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   D D D D D H H H H

   109

   D D D D D D H H H

   118

   D D D D D H H H D

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   D D D D D D H H D

   127

   D D D D D H D D H

   128

   D D D D D H D D D

   129

   D D D D D D D D H

   130

   D D D D D D D D D

   o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que cualquier átomo no designado como deuterio está presente en su abundancia isotópica natural.
6. 6. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 en el que la incorporación de deuterio en cada átomo de deuterio designado es al menos un 90 %.

   5 7. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 en el que la incorporación de deuterio

   en cada átomo de deuterio designado es al menos un 95 %.
7. 8. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 en el que la incorporación de deuterio en cada átomo de deuterio designado es al menos un 97 %.

   10
8. 9. Una composición farmacéutica que comprende el compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
9. 10. Un compuesto como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1-8, o una composición como se define 15 en la reivindicación 9, para su uso en el tratamiento de una enfermedad seleccionada entre leucemia linfocítica

   crónica, linfoma de células del manto, y mieloma múltiple.