CN109456331B

CN109456331B - 一种取代的吡唑并[1,5-a]嘧啶化合物及其药物组合物及用途

Info

Publication number: CN109456331B
Application number: CN201811550221.0A
Authority: CN
Inventors: 王义汉; 赵九洋
Original assignee: Shenzhen Targetrx Inc
Current assignee: Shenzhen Targetrx Inc
Priority date: 2017-12-22
Filing date: 2018-12-18
Publication date: 2020-06-05
Anticipated expiration: 2038-12-18
Also published as: WO2019120194A1; CN109456331A; US11453672B2; EP3730492A1; EP3730492A4; US20210107906A1; JP7150356B2; JP2021511291A; CN111362949B; CN111362949A

Abstract

本发明提供了一种取代的吡唑并[1,5‑a]嘧啶化合物的药物组合物及其用途，所述的吡唑并[1,5‑a]嘧啶化合物如式(I)所示化合物，或其药学上可接受的盐、前药、水合物或溶剂化合物、多晶型、立体异构体或同位素变体。本发明化合物可用于治疗可用Trk激酶抑制剂治疗的疾病。

Description

一种取代的吡唑并[1,5-a]嘧啶化合物及其药物组合物及用途

技术领域

本发明属于医药技术领域，尤其涉及一种取代的吡唑并[1,5-a]嘧啶化合物及包含该化合物的组合物及其用途。更具体而言，本发明涉及某些氘取代的(S)-N-(5-((R)-2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-1-基)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基)-3-羟基吡咯烷-1-甲酰胺，这些氘取代的化合物显示Trk家族蛋白酪氨酸激酶抑制，且可用于治疗疼痛、炎症、癌症和某些传染病的用途，且这些氘取代的化合物具有更优良的药效学和/或药代动力学性质。

背景技术

Trk是由称为神经营养因子(NT)的一组可溶性生长因子激活的高亲和性受体酪氨酸激酶。Trk受体家族具有3个成员，即TrkA、TrkB和TrkC。神经营养因子中有(1)可激活TrkA的神经生长因子(NGF)，(2)可激活TrkB的脑源性神经营养因子(BDNF)和NT4/5，和(3)可激活TrkC的NT3。Trk在神经元组织中广泛表达且与神经元细胞的维持、信号传导和存活有关。

文献也显示Trk的过度表达、激活、扩增和/或突变与许多癌症有关，该癌症包括成神经细胞瘤、卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、多发性骨髓瘤、星形细胞瘤与成神经管细胞瘤、神经胶质瘤、黑素瘤、甲状腺癌、胰腺癌、大细胞神经内分泌瘤和结肠直肠癌。此外，已证明Trk/神经营养因子途径的抑制剂在治疗疼痛和炎性疾病的多种临床前动物模型中有效。

神经营养因子/Trk途径，特别是BDNF/TrkB途径也已经牵涉神经变性疾病的病因，该疾病包括多发性硬化、帕金森金氏(Parkinson’s disease)和阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease)。调节神经营养因子/Trk途径可用于治疗这些疾病和相关疾病。

据认为TrkA受体对于克氏锥虫(查加斯氏病)在人类宿主中的寄生虫感染中的疾病过程至关重要。因此，TrkA抑制剂可用于治疗查加斯氏病和有关的原生动物感染。

Trk抑制剂也可用于治疗与骨重建调节失衡有关的疾病，例如骨质疏松症、类风湿性关节炎和骨转移。骨转移是癌症的常见的并发症，在晚期乳腺癌或前列腺癌患者中高达70％和在肺癌、结肠癌、胃癌、膀胱癌、子宫癌、直肠癌、甲状腺癌或肾癌患者中为约15至30％。溶骨性转移可造成严重的疼痛、病理性骨折、危及生命的高钙血症、脊髓压迫症和其它神经压迫综合征。出于这些原因，骨转移是花费高的严重的癌症并发症。因此，可诱导增殖性骨细胞凋亡的药剂是非常有优势的。已在骨折的小鼠模型的成骨区域中观察到TrkA受体和TrkC受体的表达。另外，在几乎所有的成骨细胞凋亡的药剂是非常有优势的。已在骨折的小鼠模型的成骨区域中观察到TrkA受体和TrkC受体的表达。另外，在几乎所有的成骨细胞中均观察到NGF的定位。最近，证明在人类hFOB成骨细胞中pan-Trk抑制剂可抑制由与所有3个Trk受体结合的神经营养因子所激活的酪氨酸信号传导。该数据支持使用Trk抑制剂治疗骨重建疾病(例如癌症患者中的骨转移)的理论。

Larotrectinib(LOXO-101)由Loxo Oncology公司研发的，它是一款广谱抗肿瘤药，用于所有表达有Trk的肿瘤患者，而不是针对某个解剖位置的肿瘤。LOXO-101化学名为(S)-N-(5-((R)-2-(2,5-二氟苯基)-吡咯烷-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基)-3-羟基吡咯烷-1-甲酰胺，结构式如下。LOXO-101在2015年3月开始治疗第一名患者；2016年7月13日被FDA授予突破性药物资格，用于Trk融合基因突变阳性的成人及儿童的不可手术切除或转移性实体瘤；2017年2月完成关键入组；2018年11月，FDA批准以商品名Vitrakvi上市。

已知较差的吸收、分布、代谢和/或排泄(ADME)性质是导致许多候选药物临床试验失败的主要原因。当前上市的许多药物也由于较差的ADME性质限制了它们的应用范围。药物的快速代谢会导致许多本来可以高效治疗疾病的药物由于过快的从体内代谢清除掉而难以成药。频繁或高剂量服药虽然有可能解决药物快速清除的问题，但该方法会带来诸如病人依从性差、高剂量服药引起的副作用及治疗成本上升等问题。另外，快速代谢的药物也可能会使患者暴露于不良的毒性或反应性代谢物中。

虽然LOXO-101作为Trk抑制剂能有效治疗多种癌症等病症，但是发现具有治疗癌症等病症且具有很好的口服生物利用度且有成药性的新型化合物还是具有挑战性的工作。因此，本领域仍需开发对适用作治疗剂的Trk激酶介导疾病具有选择性抑制活性或更好地药效学/药代动力学的化合物，本发明提供了这样的化合物。

发明内容

针对以上技术问题，本发明公开了一种新的氘取代的吡唑并[1,5-a]嘧啶类化合物及其组合物和用途，其具有更好地Trk激酶抑制活性、更低的毒副作用、更好地药效学/药代动力学性能，可用于治疗Trk激酶介导的疾病。

对此，本发明采用以下技术方案：

本发明的第一方面，提供了式(I)化合物：

其中，

R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴、X¹、X²、X³、X⁴、X⁵和X⁶各自独立地是自氢或氘；

附加条件是R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴、X¹、X²、X³、X⁴、X⁵和X⁶中至少一个是氘代的或氘。

或其药学上可接受的盐、前药、水合物或溶剂化合物、多晶型、立体异构体或同位素变体。

在具体实施方案中，R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶和R⁷各自独立地选自氢或氘。

在具体实施方案中，R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³和R¹⁴各自独立地选自氢或氘。

在具体实施方案中，X¹、X²、X³、X⁴、X⁵和X⁶各自独立地选自氢或氘。

在具体实施方案中，R¹、R²、R³和R⁴选自氘，X¹、X²、X³、X⁴、X⁵和X⁶选自氢，R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³和R¹⁴各自独立地选自氢或氘。

在具体实施方案中，R⁸和R⁹选自氘，X¹、X²、X³、X⁴、X⁵和X⁶选自氢，R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³和R¹⁴各自独立地选自氢或氘。

在具体实施方案中，R¹⁰和R¹¹选自氘，X¹、X²、X³、X⁴、X⁵和X⁶选自氢，R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹²、R¹³和R¹⁴各自独立地选自氢或氘。

在具体实施方案中，R¹²、R¹³和R¹⁴选自氘，X¹、X²、X³、X⁴、X⁵和X⁶选自氢，R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰和R¹¹各自独立地选自氢或氘。

在另一方面，本发明提供了含有本发明化合物和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。在具体实施方案中，本发明化合物以有效量提供在所述药物组合物中。在具体实施方案中，本发明化合物以治疗有效量提供。在具体实施方案中，本发明化合物以预防有效量提供。

在另一方面，本发明提供了一种如上所述的药物组合物的制备方法，包括以下步骤：将药学上可接受的赋形剂与本发明化合物进行混合，从而形成药物组合物。

在另一方面，本发明还涉及治疗癌症、疼痛、炎症和某些传染病的方法，包括向需要的受试者给药治疗有效剂量的本发明化合物。在具体实施方案包括本发明化合物在制备用于需要的受试者中治疗癌症、疼痛、炎症和某些传染病的药物中的用途。在具体实施方案中，口服、皮下、静脉内或肌肉内给药所述化合物。在具体实施方案中，长期给药所述化合物。

在另一方面，本发明还提供在需要的受试者中治疗Trk激酶介导的癌症的方法，该方法包括向该受试者给药治疗有效量的本发明化合物。在具体实施方案中，所述癌症通过TrkA；TrkB；TrkC；或TrkA和TrkB介导。在具体实施方案中，患者诊断或鉴定为患有Trk-相关的癌症。

由随后的具体实施方式、实施例和权利要求，本发明的其它目的和优点将对于本领域技术人员显而易见。

具体实施方式

定义

本文中，如无特别说明，“氘代”指化合物或基团中的一个或多个氢被氘所取代；氘代可以是一取代、二取代、多取代或全取代。术语“一个或多个氘代的”与“一次或多次氘代”可互换使用。

本文中，如无特别说明，“非氘代的化合物”是指含氘原子比例不高于天然氘同位素含量(0.015％)的化合物。

本发明还包括同位素标记的化合物，等同于原始化合物在此公开。可以列为本发明的化合物同位素的例子包括氢，碳，氮，氧，磷，硫，氟和氯同位素，分别如²H，³H，¹³C，¹⁴C，¹⁵N，¹⁷O，¹⁸O，³¹P，³²P，³⁵S，¹⁸F以及³⁶Cl。本发明中的化合物，或对映体，非对映体，异构体，或药学上可接受的盐或溶剂化物，其中含有上述化合物的同位素或其他同位素原子都在本发明的范围之内。本发明中某些同位素标记化合物，例如³H和¹⁴C的放射性同位素也在其中，在药物和底物的组织分布实验中是有用的。氚，即³H和碳14，即¹⁴C，它们的制备和检测比较容易，是同位素中的首选。同位素标记的化合物可以用一般的方法，通过用易得的同位素标记试剂替换为非同位素的试剂，用示例中的方案可以制备。

本发明化合物可包括一个或多个不对称中心，且因此可以存在多种“立体异构体”形式，例如，对映异构体和/或非对映异构体形式。例如，本发明化合物可为单独的对映异构体、非对映异构体或几何异构体(例如顺式和反式异构体)，或者可为立体异构体的混合物的形式，包括外消旋混合物和富含一种或多种立体异构体的混合物。异构体可通过本领域技术人员已知的方法从混合物中分离，所述方法包括：手性高压液相色谱法(HPLC)以及手性盐的形成和结晶；或者优选的异构体可通过不对称合成来制备。

如本文所用，术语“本发明化合物”指式(I)所示的化合物。该术语还包括及式(I)化合物的药学上可接受的盐、前药、水合物或溶剂化合物、多晶型、立体异构体或同位素变体。

如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指，在可靠的医学判断范围内，适合与人和低等动物的组织接触而没有过度毒性、刺激性、变态反应等等，并且与合理的益处/危险比例相称的那些盐。药学上可接受的盐在本领域是众所周知的。例如，Berge等人在J.Pharmaceutical Sciences(1977)66:1-19中详细描述的药学上可接受的盐。

本发明化合物的药学上可接受的盐包括衍生自合适的无机和有机酸和无机和有机碱的盐。药学上可接受的无毒的酸加成盐的实例是与无机酸形成的盐，例如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸，或与有机酸形成的盐，例如乙酸、草酸、马来酸、酒石酸、枸橼酸、琥珀酸或丙二酸。也包括使用本领域常规方法形成的盐，例如，离子交换方法。其它药学上可接受的盐包括：已二酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、重硫酸盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡萄糖酸盐、甘油磷酸盐、葡糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酯酸盐、过硫酸盐、3-苯丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐，等等。衍生自合适的碱的药学上可接受的盐包括碱金属、碱土金属、铵和N⁺(C_1-4烷基)₄盐。代表性的碱金属或碱土金属盐包括钠、锂、钾、钙、镁盐，等等。如果合适的话，其它的药学上可接受的盐包括与反离子形成的无毒的铵盐、季铵盐和胺阳离子，反离子例如卤离子、氢氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、低级烷基磺酸根和芳基磺酸根。

术语“溶剂合物”指本发明化合物与溶剂分子配位形成特定比例的配合物。“水合物”指本发明化合物与水进行配位形成的配合物。

术语“前药”包括其本身可以是具有生物活性的或非活性的，当用适当的方法服用后，其在人体内进行代谢或化学反应而转变成式(I)的一类化合物，或式(I)的一个化合物所组成的盐或溶液。所述的前药包括(但不限于)以下化合物：氨基酸残基或由一个或多个(如2、3或4个)氨基酸残基组成的多肽链通过酰胺或酯键共价连接在本发明化合物的游离氨基、羟基或羧基上。氨基酸残基包括但不限于20个通常用3个字母符号表示的天然氨基酸，而且还包括4-羟基脯氨酸、羟基赖氨酸、Demosine、isodemosine、3-甲基组氨酸、正缬氨酸、鸟氨酸和氮氨酸砜。也包括其他类型的前药。例如，游离羧基可衍生为酰胺或烷基酯。如Advanced Drug Delivery Reviews 1996,19,115中所述，游离羟基通过使用以下基团来进行衍生化，所述基团包括但不限于半琥珀酸酯、磷酸酯、二甲基氨基乙酸酯和磷酰基氧基甲氧基碳基。羟基和氨基的氨基甲酸酯前药，以及羟基的碳酸酯前药、磺酸酯和硫酸酯，也包括在内。还包括羟基的衍生化如(酰基氧基)甲基和(酰基氧基)乙基醚，其中所述酰基可以是烷基酯，任选被包括但不限于醚、胺和羧酸官能团的基团取代，或者其中所述酰基是如上述的氨基酸酯。该类型的前药描述在以下文献中：J.Med.Chem.1996,39,10.游离按也可以被衍生化为酰胺、磺酰胺或磷酰胺。所有这些其他部分可掺入包括但不限于醚、胺和羧酸官能团的基团。

术语“多晶型”是指化学药物分子的不同排列方式，一般表现为药物原料在固体状态下的存在形式。一种药物可以多种晶型物质状态存在，同一种药物的不同晶型，在体内的溶解和吸收可能不同，从而会对制剂的溶出和释放产生影响。

如本文所用，术语“受试者”包括但不限于：人(即，任何年龄组的男性或女性，例如，儿科受试者(例如，婴儿、儿童、青少年)或成人受试者(例如，年轻的成人、中年的成人或年长的成人))和/或非人的动物，例如，哺乳动物，例如，灵长类(例如，食蟹猴、恒河猴)、牛、猪、马、绵羊、山羊、啮齿动物、猫和/或狗。在一些实施方案中，受试者是人。在另一些实施方案中，受试者是非人动物。

“疾病”、“障碍”和“病症”在本文中可以互换地使用。

除非另作说明，否则，本文使用的术语“治疗”包括受试者患有具体疾病、障碍或病症时所发生的作用，它降低疾病、障碍或病症的严重程度，或延迟或减缓疾病、障碍或病症的发展(“治疗性治疗”)，还包括受试者开始患有具体疾病、障碍或疾病之前发生的作用(“预防性治疗”)。

通常，化合物的“有效量”是指足以引起目标生物反应的数量。正如本领域普通技术人员所理解的那样，本发明化合物的有效量可以根据下列因素而改变：例如，生物学目标、化合物的药物动力学、所治疗的疾病、给药模式以及受试者的年龄健康情况和症状。有效量包括治疗和预防性治疗有效量。

除非另作说明，否则，本文使用的化合物的“治疗有效量”是在治疗疾病、障碍或病症的过程中足以提供治疗有益处的数量，或使与疾病、障碍或病症有关的一或多种症状延迟或最小化。化合物的治疗有效量是指单独使用或与其他疗法联用的治疗剂的数量，它在治疗疾病、障碍或病症的过程中提供治疗益处。术语“治疗有效量”可以包括改善总体治疗、降低或避免疾病或病症的症状或病因、或增强其他治疗剂的治疗效能的数量。

除非另作说明，否则，本文使用的化合物的“预防有效量”是足以预防疾病、障碍或病症的数量，或足以预防与疾病、障碍或病症有关的一或多种症状的数量，或防止疾病、障碍或病症复发的数量。化合物的预防有效量是指单独使用或与其它药剂联用的治疗剂的数量，它在预防疾病、障碍或病症的过程中提供预防益处。术语“预防有效量”可以包括改善总体预防的数量，或增强其它预防药剂的预防效能的数量。

“组合”以及相关术语是指同时或依次给药本发明的治疗剂。例如，本发明化合物可以与另一治疗剂以分开的单位剂型同时或依次给药，或与另一治疗剂一起呈单一单位剂型同时给药。

化合物

本发明提供式(I)的取代的吡唑并[1,5-a]嘧啶化合物，或其药学上可接受的盐、前药、水合物或溶剂化合物、多晶型、立体异构体或同位素变体：

其中，

作为本发明的优选实施方案，式(I)中化合物至少含有一个氘原子，更佳地一个氘原子，更佳地二个氘原子，更佳地三个氘原子，更佳地四个氘原子，更佳地五个氘原子，更佳地六个氘原子，更佳地七个氘原子，更佳地八个氘原子，更佳地九个氘原子。

作为本发明的优选实施方案，氘在氘代位置的氘同位素含量至少是大于天然氘同位素含量0.015％，较佳地大于30％，更佳地大于50％，更佳地大于75％，更佳地大于95％，更佳地大于99％。

具体地说，在本发明中R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴、X¹、X²、X³、X⁴、X⁵和X⁶，各氘代位置中氘同位素含量至少是5％，较佳地大于10％，更佳地大于15％，更佳地大于20％，更佳地大于25％，更佳地大于30％，更佳地大于35％，更佳地大于40％，更佳地大于45％，更佳地大于50％，更佳地大于55％，更佳地大于60％，更佳地大于65％，更佳地大于70％，更佳地大于75％，更佳地大于80％，更佳地大于85％，更佳地大于90％，更佳地大于95％，更佳地大于99％。

在另一具体实施方案中，式(I)中化合物的R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴、X¹、X²、X³、X⁴、X⁵和X⁶，至少其中一个含氘，更佳地两个含氘，更佳地三个含氘，更佳地四个含氘，更佳地五个含氘，更佳地六个含氘，更佳地七个含氘，更佳地八个含氘，更佳地九个含氘，更佳地十个含氘，更佳地十一个含氘，更佳地十二个含氘，更佳地十三个含氘，更佳地十四个含氘，更佳地十五个含氘，更佳地十六个含氘，更佳地十七个含氘，更佳地十八个含氘，更佳地十九个含氘，更佳地二十个含氘。具体而言，式(I)中化合物至少含有一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个、十八个、十九个、二十个氘原子。

在具体实施方案中，“R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³和R¹⁴各自独立地是自氢或氘”包括R¹选自氢或氘，R²选自氢或氘，以此类推，直至R¹⁴选自氢或氘的技术方案；更具体地，包括R¹为氢或R¹为氘，R²为氢或R²为氘，以此类推，直至R¹⁴为氢或R¹⁴为氘的技术方案。

在具体实施方案中，“X¹、X²、X³、X⁴、X⁵和X⁶各自独立地是自氢或氘”包括X¹选自氢或氘，X²选自氢或氘，以此类推，直至X⁶选自氢或氘的技术方案；更具体地，包括X¹选自氢或X¹选自氘，X²选自氢或X²选自氘，以此类推，直至X⁶选自氢或X⁶选自氘的技术方案。

作为本发明的优选实施方案，R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶和R⁷各自独立地选自氢或氘。

在另一优选实施方案中，R¹和R²是氘。

在另一优选实施方案中，R³和R⁴是氘。

在另一优选实施方案中，R¹、R²、R³和R⁴是氘。

在另一优选实施方案中，R⁵和R⁶是氘。

在另一优选实施方案中，R⁷是氘。

作为本发明的优选实施方案，R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³和R¹⁴各自独立地是自氢或氘。

在另一优选实施方案中，R⁸和R⁹是氘。

在另一优选实施方案中，R¹⁰和R¹¹是氘。

在另一优选实施方案中，R¹²、R¹³和R¹⁴是氘。

作为本发明的优选实施方案，X¹、X²、X³、X⁴、X⁵和X⁶各自独立地选自氢或氘。

作为本发明的优选实施方案，R¹、R²、R³和R⁴选自氘，X¹、X²、X³、X⁴、X⁵和X⁶选自氢，R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³和R¹⁴各自独立地选自氢或氘。

在另一优选实施方案中，R¹、R²、R³、R⁴、R⁸和R⁹选自氘，R⁵、R⁶、R⁷、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴、X¹、X²、X³、X⁴、X⁵和X⁶选自氢。

在另一优选实施方案中，R¹、R²、R³、R⁴、R¹⁰和R¹¹选自氘，R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹²、R¹³、R¹⁴、X¹、X²、X³、X⁴、X⁵和X⁶选自氢。

在另一优选实施方案中，R¹、R²、R³、R⁴、R¹²、R¹³和R¹⁴选自氘，R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、X¹、X²、X³、X⁴、X⁵和X⁶选自氢。

在另一优选实施方案中，R¹、R²、R³、R⁴、R⁸、R⁹、R¹²、R¹³和R¹⁴选自氘，R⁵、R⁶、R⁷、R¹⁰、R¹¹、X¹、X²、X³、X⁴、X⁵和X⁶选自氢。

作为本发明的优选实施方案，R⁸和R⁹选自氘，X¹、X²、X³、X⁴、X⁵和X⁶选自氢，R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³和R¹⁴各自独立地选自氢或氘。

在另一优选实施方案中，R⁸、R⁹、R¹⁰和R¹¹选自氘，R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R¹²、R¹³、R¹⁴、X¹、X²、X³、X⁴、X⁵和X⁶选自氢。

在另一优选实施方案中，R⁸、R⁹、R¹²、R¹³和R¹⁴选自氘，R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R¹⁰、R¹¹、X¹、X²、X³、X⁴、X⁵和X⁶选自氢。

在另一优选实施方案中，R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³和R¹⁴选自氘，R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、X¹、X²、X³、X⁴、X⁵和X⁶选自氢。

作为本发明的优选实施方案，R¹⁰和R¹¹选自氘，X¹、X²、X³、X⁴、X⁵和X⁶选自氢，R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹²、R¹³和R¹⁴各自独立地选自氢或氘。

在另一优选实施方案中，R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³和R¹⁴选自氘，R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、X¹、X²、X³、X⁴、X⁵和X⁶选自氢。

作为本发明的优选实施方案，R¹²、R¹³和R¹⁴选自氘，X¹、X²、X³、X⁴、X⁵和X⁶选自氢，R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰和R¹¹各自独立地选自氢或氘。

在另一方面，本发明提供式(II)化合物：

其中，

R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³和R¹⁴各自独立地选自氢或氘；

附加条件是，上述化合物至少含有一个氘原子；

在具体实施方案中，式(II)化合物至少含有一个氘原子。

在具体实施方案中，氘在氘代位置的氘同位素含量至少是大于天然氘同位素含量0.015％，较佳地大于30％，更佳地大于50％，更佳地大于75％，更佳地大于95％，更佳地大于99％。

在一优选实施方案中，本发明涉及式(II)化合物或其药学上可接受的盐，其中，R⁵、R⁶和R⁷是氢，R¹、R²、R³、R⁴、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³和R¹⁴各自独立地选自氢或氘，附加条件是，上述化合物至少含有一个氘原子。

在另一优选实施方案中，本发明涉及式(II)化合物或其药学上可接受的盐，其中，R⁵、R⁶和R⁷是氢，R¹、R²、R³和R⁴是氘，R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³和R¹⁴各自独立地选自氢或氘。在具体实施方案中，R⁸和R⁹是氘；在具体实施方案中，R⁸和R⁹是氢；在具体实施方案中，R¹⁰和R¹¹是氘；在具体实施方案中，R¹⁰和R¹¹是氢；在具体实施方案中，R¹²、R¹³和R¹⁴是氘；在具体实施方案中，R¹²、R¹³和R¹⁴是氢。

在另一优选实施方案中，本发明涉及式(II)化合物或其药学上可接受的盐，其中，R⁵、R⁶和R⁷选自氢，R⁸和R⁹是氘，R¹、R²、R³、R⁴、R¹⁰、R¹¹、R¹²、R¹³和R¹⁴各自独立地选自氢或氘。在具体实施方案中，R¹、R²、R³和R⁴是氘；在具体实施方案中，R¹、R²、R³和R⁴是氢；在具体实施方案中，R¹⁰和R¹¹是氘；在具体实施方案中，R¹⁰和R¹¹是氢；在具体实施方案中，R¹²、R¹³和R¹⁴是氘；在具体实施方案中，R¹²、R¹³和R¹⁴是氢。

在另一优选实施方案中，本发明涉及式(II)化合物或其药学上可接受的盐，其中，R⁵、R⁶和R⁷选自氢，R¹⁰和R¹¹是氘，R¹、R²、R³、R⁴、R⁸、R⁹、R¹²、R¹³和R¹⁴各自独立地选自氢或氘。在具体实施方案中，R¹、R²、R³和R⁴是氘；在具体实施方案中，R¹、R²、R³和R⁴是氢；在具体实施方案中，R⁸和R⁹是氘；在具体实施方案中，R⁸和R⁹是氢；在具体实施方案中，R¹²、R¹³和R¹⁴是氘；在具体实施方案中，R¹²、R¹³和R¹⁴是氢。

在另一优选实施方案中，本发明涉及式(II)化合物或其药学上可接受的盐，其中，R⁵、R⁶和R⁷选自氢，R¹²、R¹³和R¹⁴是氘，R¹、R²、R³、R⁴、R⁸、R⁹、R¹⁰和R¹¹各自独立地选自氢或氘。在具体实施方案中，R¹、R²、R³和R⁴是氘；在具体实施方案中，R¹、R²、R³和R⁴是氢；在具体实施方案中，R⁸和R⁹是氘；在具体实施方案中，R⁸和R⁹是氢；在具体实施方案中，R¹⁰和R¹¹是氘；在具体实施方案中，R¹⁰和R¹¹是氢。

作为本发明的优选实施方案中，所述化合物选自下组化合物或其药学上可接受的盐：

在另一优选实施方案中，所述化合物不包括非氘代化合物。

药物组合物和施用方法

在另一方面，本发明提供了药物组合物，其包含本发明化合物(还称为“活性组分”)和药学上可接受的赋形剂。在一些实施方案中，所述药物组合物包含有效量的活性组分。在一些实施方案中，所述药物组合物包含治疗有效量的活性组分。在一些实施方案中，所述药物组合物包含预防有效量的活性组分。

本发明的药物组合物包含安全有效量范围内的本发明化合物或其药理上可接受的盐及药理上可以接受的赋形剂或载体。其中“安全有效量”指的是：化合物的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。通常，药物组合物含有0.5-2000mg本发明化合物/剂，更佳地，含有1-500mg本发明化合物/剂。较佳地，所述的“一剂”为一个胶囊或药片。

“药学上可接受的赋形剂”是指不会破坏一起调配的化合物的药理学活性的无毒载体、佐剂或媒剂。可以用于本发明组合物中的药学上可接受的载体、佐剂或媒剂包括(但不限于)离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白(如人类血清白蛋白)、缓冲物质(如磷酸盐)、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质(如硫酸鱼精蛋白)、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、硅胶、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、基于纤维素的物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇以及羊毛脂。

本发明的药物组合物可通过将本发明的化合物与适宜的药学上可接受的赋形剂组合而制备，例如可配制成固态、半固态、液态或气态制剂，如片剂、丸剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、膏剂、乳剂、悬浮剂、溶液剂、栓剂、注射剂、吸入剂、凝胶剂、微球及气溶胶等。

给予本发明的化合物或其药物组合物的典型途径包括但不限于口服、直肠、透黏膜、经肠给药，或者局部、经皮、吸入、肠胃外、舌下、阴道内、鼻内、眼内、抚摸内、肌内、皮下、静脉内给药。

本发明的药物组合物可以采用本领域众所周知的方法制造，如常规的混合法、溶解法、制粒法、制糖衣药丸法、磨细法、乳化法、冷冻干燥法等等。

对于口服给药，可以通过将活性化合物与本领域熟知的药学上可接受的赋形剂混合来配置该药物组合物。这些赋形剂能使本发明的化合物被配制成片剂、丸剂、锭剂、糖衣剂、胶囊剂、液体、凝胶剂、浆剂、悬浮剂等，用于对患者的口服给药。

可以通过常规的混合、填充或压片方法来制备固体口服组合物。例如，可通过下述方法获得：将所述的活性化合物与固体赋形剂混合，任选地碾磨所得的混合物，如果需要则加入其它合适的辅剂，然后将该混合物加工成颗粒，得到了片剂或糖衣剂的核心。适合的辅料包括但不限于：粘合剂、稀释剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、甜味剂或矫味剂等。如微晶纤维素、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶溶液、蔗糖和淀粉糊；滑石、淀粉、硬脂酸钙或硬脂酸；乳糖、蔗糖、淀粉、甘露糖醇、山梨糖醇或磷酸二钙；二氧化硅；交联羟甲基纤维素钠、预交化淀粉、淀粉羟乙酸钠、藻酸、玉米淀粉、马铃薯淀粉、甲基纤维素、琼脂、羟甲基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮等。可以根据通常药物实践中公知的方法任选地对糖衣剂的核心进行包衣，尤其使用肠溶包衣。

药物组合物还可适用于肠胃外给药，如合适的单位剂型的无菌溶液剂、混悬剂或冻干产品。能够使用适当的赋形剂，例如填充剂、缓冲剂或表面活性剂。

本发明化合物可以通过任何使用途径和方法给药，例如通过口服或肠胃外(例如，静脉内)给药。本发明化合物的治疗有效量为从约0.0001到20mg/kg体重/天，例如从0.001到10mg/kg体重/天。

本发明化合物的剂量频率由患者个体的需求决定，例如，每天1次或2次，或每天更多次。给药可以是间歇性的，例如，其中在若干天的期间内，患者接受本发明化合物的每日剂量，接着在若干天或更多天的期间，患者不接受式本发明化合物的每日剂量。

本发明化合物的治疗适应症

本发明化合物展现Trk家族蛋白酪氨酸激酶抑制作用，且该化合物可用于治疗疼痛、炎症、癌症和某些传染病。

一些实施方案包括本发明化合物用于治疗可通过抑制TrkA、TrkB、和/或TrkC激酶治疗的病症及疾病(例如TrkA、TrkB和/或TrkC介导的病症，例如本文所述的一种或多种病症，包括Trk相关的癌症)的用途。在一些实施方案中，本发明化合物也可用于治疗疼痛(包括慢性及急性疼痛)。在一些实施方案中，本发明化合物可用于治疗多种类型的疼痛、神经性疼痛、手术疼痛及与癌症、手术及骨折相关的疼痛。另外，本发明化合物可用于治疗炎症、活性或慢性神经变性疾病及某些传染性疾病。

在一些实施方案中，本文提供了治疗诊断患有Trk-相关的癌症的患者的方法，包括向患者给药治疗有效量的本发明化合物。例如，Trk-相关的癌症可选自：非小细胞肺癌、乳头状甲状腺癌、多形性成胶质细胞瘤、急性髓细胞性白血病、结肠直肠癌、大细胞神经内分泌癌、前列腺癌、结肠癌、急性髓细胞性白血病、肉瘤、小儿神经胶质瘤、肝内胆管癌、毛细胞性星形细胞瘤、低级神经胶质瘤、肺腺癌、唾液腺癌、分泌型乳腺癌、纤维肉瘤、肾瘤和乳腺癌。

在一些实施方案中，Trk-相关的癌症选自：TRK-相关的癌症的非限制性实例包括：Spitzoid黑素瘤、Spitz肿瘤(例如，转移性Spitz肿瘤)、非小细胞肺癌(NSCLC)、甲状腺癌(例如，乳头状甲状腺瘤(PTC)、急性髓细胞性白血病(AML)、肉瘤(例如，未分化肉瘤或成人软组织肉瘤)、小儿神经胶质瘤、结肠直肠癌(CRC)、多形性成胶质细胞瘤(GBM)、大细胞神经内分泌癌症(LCNEC)、甲状腺癌、肝内胆管癌(LCC)、毛细胞性星形细胞瘤、低级神经胶质瘤、头颈部鳞状上皮细胞癌、肾瘤、黑素瘤、支气管癌、B-细胞癌症、Bronchus癌症、口腔或咽部癌症、血液组织癌、子宫颈癌、胃癌、肾癌、肝癌、多发性骨髓瘤、卵巢癌、胰腺癌、唾液腺癌、小肠或阑尾癌症、睾丸癌、泌尿膀胱癌、小细胞肺癌、炎性肌纤维母细胞癌、胃肠道间质瘤、非霍奇金淋巴瘤、成神经细胞瘤、小细胞肺癌、鳞状上皮细胞癌、食管-胃癌、皮肤癌、赘瘤(例如，黑色素细胞赘瘤)、Spitz痣、星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、神经胶质瘤、大细胞神经内分泌肿瘤、骨癌和直肠癌。

在一些实施方案中，本发明化合物可用于治疗小儿患者的Trk相关的癌症。例如，本文所提供的化合物可用于治疗婴儿型肉瘤、成神经细胞瘤、先天性中胚层肾瘤、脑低分级神经胶质瘤及脑桥神经胶质瘤。

在一些实施方案中，本发明化合物可与一种或多种通过相同或不同的作用机制起作用的其他治疗剂或疗法组合用于治疗Trk相关的癌症。

在一些实施方案中，所述其它治疗剂选自：靶向受体酪氨酸激酶的治疗剂，包括卡博替尼、克唑替尼、埃罗替尼、吉非替尼、伊马替尼、拉帕替尼、尼洛替尼、帕唑替尼、帕妥珠单抗、瑞戈替尼、舒尼替尼和曲妥单抗。

在一些实施方案中，所述其它治疗剂选自信号转导途径抑制剂，包括，例如，Ras-Raf-MEK-ERK途径抑制剂(例如，索拉非尼，曲美替尼，或威罗非尼)，PI3K-Akt-mTOR-S6K途径抑制剂(例如，依维莫司、雷帕霉素、哌立福辛，或西罗莫司)和凋亡途径的调节剂(例如，奥巴克拉(obataclax))。

在一些实施方案中，所述其它治疗剂选自：细胞毒素化疗剂，包括，例如，三氧化二砷、博来霉素、卡巴他赛、卡培他滨、卡铂、顺铂、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、柔红霉素、多西紫杉醇、多柔比星、依托泊苷、氟尿嘧啶、吉西他滨、伊立替康、洛莫司汀、甲氨碟呤、丝裂霉素C、奥沙利铂、紫杉醇、培美曲塞、替莫唑胺和长春新碱。

在一些实施方案中，所述其它治疗剂选自血管发生-靶向的治疗，包括，例如，阿柏西普和贝伐单抗。

在一些实施方案中，所述其它治疗剂选自免疫靶向的试剂，包括，例如，阿地白介素、易普利单抗、拉姆单抗(Iambrolizumab)、纳武单抗和西普鲁塞-T。

在一些实施方案中，其它治疗剂选自有效抵抗下游Trk路径的药剂，包括，例如靶向NGF的生物药物，例如NGF抗体及panTrk抑制剂。

在一些实施方案中，其它治疗剂或疗法为放射疗法，包括(例如)放射性碘化物疗法、外照射辐射及镭223疗法。

在一些实施方案中，其它治疗剂包括上文所列示疗法或治疗剂中的任一者，这些疗法或治疗剂为其中癌症具有NTRK基因、Trk蛋白或它们的表达或活性或水平的失调的癌症的护理标准。

在一些实施方案中，本文提供了治疗患者癌症(例如，Trk-相关的癌症)的方法，包括向所述患者给药本发明化合物。在一些实施方案中，该至少一种其它治疗或治疗剂选自放射治疗(例如，放射性碘化物治疗、外照射辐射、或镭223治疗)、细胞毒素化疗剂(例如，三氧化二砷、博来霉素、卡巴他赛、卡培他滨、卡铂、顺铂、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、柔红霉素、多西紫杉醇、多柔比星、依托泊苷、氟尿嘧啶、吉西他滨、伊立替康、洛莫司汀、甲氨碟呤、丝裂霉素C、奥沙利铂、紫杉醇、培美曲赛、替莫唑胺、或长春新碱)、酪氨酸激酶靶向的治疗(例如，阿法替尼、卡博替尼、西妥昔单抗、克唑替尼、达拉菲尼、埃罗替尼、吉非替尼、伊马替尼、拉帕替尼、尼洛替尼、帕唑帕尼、帕唑帕尼、帕尼单抗、帕妥珠单抗、瑞戈非尼、舒尼替尼、或曲妥单抗)、凋亡调节剂和信号转导抑制剂(例如依维莫司、哌立福辛、雷帕霉素、索拉菲尼、西罗莫司、曲美替尼、或威罗菲尼)、免疫-靶向的治疗(例如，阿地白介素、干扰素a-2b、易普利单抗、拉姆单抗、纳武单抗、泼尼松、或西普鲁赛-T)和血管发生-靶向的治疗(例如，阿柏西普或贝伐单抗)，其中当与其它治疗或治疗剂组合时，本发明化合物可有效治疗所述癌症。

在一些实施方案中，所述其它治疗剂为不同的Trk抑制剂。其它Trk抑制剂的非限制性实例包括(R)-2-苯基吡咯烷取代的咪唑并哒嗪、AZD6918、GNF-4256、GTX-186、GNF-5837、AZ623、AG-879、altiratinib、CT327、AR-772、AR-523、AR-786、AR-256、AR-618、AZ-23、AZD7451、卡博替尼、CEP-701、CEP-751、PHA-739358、多韦替尼、entrectinib、PLX7486、GW441756、MGCD516、ONO-5390556、PHA-848125AC、瑞戈非尼、索拉非尼、舒尼替尼、TSR-011、VM-902A、K252a、4-氨基吡唑基嘧啶和取代的吡唑并[1,5-a]嘧啶化合物。

这些其它治疗剂可与本文所提供的一或多种化合物一起作为相同或单独剂型的一部分经由相同或不同的给药途径且基于相同或不同的给药时间表根据本领域技术人员已知的标准药物实践来给药。

本发明的化合物与现有技术中已知的非氘代化合物相比，具有一系列优点。本发明的优点包括：第一，采用本发明技术方案的化合物和组合物为疼痛、炎症、癌症和某些传染病，特别是TRK-相关的疾病的治疗提供了更有利的治疗工具。第二，改进了化合物在生物体中的代谢，使化合物具有更好的药代动力学参数特性。在这种情况下，可以改变剂量并形成长效制剂，改善适用性。第三，提高了化合物在动物体内的药物浓度，提高了药物疗效。第四，抑制了某些代谢产物，提高化合物的安全性。

实施例

下面结合具体实施例，作进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则份数和百分比为重量份和重量百分比。

通常，在制备流程中，各反应通常在惰性溶剂中，在室温至回流温度(如0℃～100℃，优选0℃～80℃)下进行。反应时间通常为0.1-60小时，优选地为0.5-24小时。

实施例1(S)-N-(5-((R)-2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-1-基)-吡唑并[1,5-a]嘧啶- 3-基)-3-羟基吡咯烷-2,2,5,5-d₄-1-甲酰胺(化合物L-1)的制备。

采用以下路线进行合成：

步骤1 4-(2,5-二氟苯基)-4-氧代丁基氨基甲酸叔丁酯(化合物1)的合成

取2,5-二氟溴苯(7.95g，41.4mmol)溶于无水THF(50mL)中，-45℃下缓慢滴加31.1mL异丙基氯化镁的无水THF溶液(31.1mL，62.2mmol)，滴毕自然升温至0℃搅拌1h，再于-15℃缓慢滴加N-叔丁氧羰基-2-吡咯烷酮(11.5g，62.1mmol)的无水四氢呋喃(30mL)溶液，滴毕室温搅拌30min。反应液倒入100mL饱和氯化铵溶液中搅拌10min，静置分液，水相用30mL乙酸乙酯萃取三次，合并有机相并用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤浓缩，柱层析得7.87g无色固体即为化合物1，收率：63.6％。LC-MS(APCI):m/z＝300.0(M+1)⁺。

步骤2 5-(2,5-二氟苯基)-3,4-二氢-2H-吡咯三氟乙酸盐(化合物2)的合成

取化合物1(500mg，1.67mmol)溶于二氯甲烷(4.0mL)中，室温下缓慢滴加三氟乙酸(2.0mL)，滴毕室温搅拌1h。浓缩反应液，得466mg棕色油状液体即为化合物2，不需纯化直接投入下一步。

步骤3 2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷(化合物3)的合成

取化合物2(466mg，1.67mmol)溶于无水甲醇(10mL)中，加入Pd/C(50mg)，室温氢化过夜。过滤，滤渣用20mL乙酸乙酯洗涤，滤液浓缩，得305mg无色油状液体即为化合物3，两步收率：99％。LC-MS(APCI):m/z＝184.1(M+1)⁺。

步骤4 5-(2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-1-基)-3-硝基吡唑并[1,5-α]嘧啶(化合物4)的合成

取化合物3(500mg，2.73mmol)和5-氯-3-硝基吡唑并[1,5-a]嘧啶(542mg，2.73mmol)溶于无水乙醇(10mL)中，室温下加入DIPEA(1.76g，13.62mmol)，加热回流30min。浓缩反应液，柱层析(PE/EA，30％～50％)得781mg淡黄色固体粉末即为化合物4，收率：82.9％。LC-MS(APCI):m/z＝346.5(M+1)⁺。

步骤5 5-(2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-1-基)吡唑并[1,5-α]嘧啶-3-胺(化合物5)的合成

取化合物4(300mg，0.87mmol)溶于10mL无水甲醇和3mL水，室温下加入还原铁粉(485mg，8.67mmol)和氯化铵(93mg，1.75mmol)，加热回流2h。过滤，滤渣用20mL乙酸乙酯洗涤，滤液浓缩至约3mL，加入10mL乙酸乙酯和5mL水，分液，水相用5mL乙酸乙酯萃取三次，合并有机相并用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得266mg棕色油状液体即为化合物5，直接用于下一步。

步骤6(S)-1-苄基-3-羟基丁二酰亚胺(化合物6)的合成

取L-苹果酸(10.0g，74.6mmol)和苄胺(9.59g，89.5mmol)分散于250mL二甲苯中，加热回流分水8h。冷却至室温后再降温至0℃，并于0℃下搅拌2h。过滤，滤饼用200mL石油醚洗涤,收集滤饼，柱层析(PE/EA:50％～66％)得9.66g白色固体粉末即为化合物6。¹H-NMR(300MHz,CDCl₃)δ7.50–7.14(m,5H),4.67(t,J＝1.2Hz,2H),4.63(dd,J＝5.8,2.5Hz,1H),3.08(dd,J＝18.2,8.4Hz,1H),2.70(dd,J＝18.2,4.8Hz,1H).

步骤7(S)-1-苄基-3-羟基-2,2,5,5-四氘代吡咯烷(化合物7)的合成

取氘化铝锂(LiAlD₄，2.45g，58.3mmol)分散于70mL无水四氢呋喃，-15℃下缓慢滴加化合物6(3.0g，14.6mmol)的四氢呋喃(70mL)溶液，滴毕室温搅拌过夜。加入少量十水硫酸钠淬灭，过滤反应液，滤渣用100mL乙酸乙酯洗涤，滤液浓缩，所得1.26g无色油状液体即为化合物7，直接用于下一步。

步骤8(S)-3-羟基-2,2,5,5-四氘代吡咯烷(化合物8)的合成

取化合物7(526mg，2.9mmol)溶于10mL氘代甲醇中，50℃下氢化过夜。过滤，滤渣用30mL乙酸乙酯洗涤，浓缩滤液，所得255mg棕色油状液体即为化合物8，直接用于下一步。

步骤9(S)-N-(5-(2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-1-基)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基)-3-羟基吡咯烷-2,2,5,5-d₄-1-甲酰胺(化合物9)的合成

取化合物5(270mg，0.86mmol)溶于25mL二氯甲烷中，室温下一次性加入CDI(N,N'-羰基二咪唑，283mg，1.74mmol)，室温搅拌2h。一次性加入化合物8(160mg，1.75mmol)，室温搅拌30min。加入20mL水，并于室温下搅拌10min。分液，水相用20mL二氯甲烷萃取三次，合并有机相，并用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，柱层析(DCM/MeOH，0％～10％)得355mg淡黄色固体粉末即为化合物9，收率：95.4％。LC-MS(APCI):m/z＝433.3(M+1)⁺。¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ8.23(d,J＝4.3Hz,1H),8.21(s,1H),8.14(d,J＝7.8Hz,1H),7.05(d,J＝25.1Hz,2H),6.90(s,1H),6.74(s,1H),6.05(d,J＝7.7Hz,1H),4.51(m,1H),3.88(d,J＝7.8Hz,1H),3.70(d,J＝7.9Hz,1H),2.46(td,J＝9.5,8.6,4.3Hz,1H),2.11-1.98(m,6H).

步骤10(S)-N-(5-((R)-2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-1-基)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基)-3-羟基吡咯烷-2,2,5,5-d₄-1-甲酰胺(化合物L-1)的制备

采用手性制备色谱柱将消旋体化合物9进行分离得到目标产物L-1。LC-MS(APCI):m/z＝433.3(M+1)⁺。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.23(d,J＝4.3Hz,1H),8.21(s,1H),8.14(d,J＝7.8Hz,1H),7.05(d,J＝25.1Hz,2H),6.90(s,1H),6.74(s,1H),6.05(d,J＝7.7Hz,1H),4.51(m,1H),3.88(d,J＝7.8Hz,1H),3.70(d,J＝7.9Hz,1H),2.46(td,J＝9.5,8.6,4.3Hz,1H),2.11-1.98(m,6H).

实施例2(S)-N-(5-((R)-2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-1-基-2,3,3-d₃)-吡唑并[1, 5-a]嘧啶-3-基)-3-羟基吡咯烷-1-甲酰胺(化合物L-2)的制备。

采用以下路线进行合成：

步骤1 5-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-2,2,3-d₃(化合物10)的合成

取化合物2(500mg，1.79mmol)溶于10mL氘代甲醇，加入Pd/C(50mg)氘气加压室温氢化过夜。过滤，滤渣用20mL乙酸乙酯洗涤，滤液浓缩，得477mg无色油状液体即为化合物10。收率：95.4％。LC-MS(APCI):m/z＝187.1(M+1)⁺。

步骤2 5-(2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-1-基-2,2,3-d₃)-3-硝基吡唑并[1,5-α]嘧啶(化合物11)的合成

取化合物10(500mg，2.7mmol)和5-氯-3-硝基吡唑并[1,5-a]嘧啶(533mg，2.7mmol)溶于10mL无水乙醇，室温下加入DIPEA(1.74g，13.4mmol)，加热回流30min。浓缩反应液，柱层析(PE/EA，30％～50％)得793mg淡黄色固体粉末即为化合物11，收率：84.4％。LC-MS(APCI):m/z＝349.6(M+1)⁺。

步骤3 5-(2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-1-基-2,2,3-d₃)吡唑并[1,5-α]嘧啶-3-胺(化合物12)的合成

取化合物11(300mg，0.86mmol)溶于10mL无水甲醇和3mL水，室温下加入还原铁粉(485mg，8.66mmol)和氯化铵(93mg，1.75mmol)，加热回流2h。过滤，滤渣用20mL乙酸乙酯洗涤，滤液浓缩至约3mL，加入10mL乙酸乙酯和5mL水，分液，水相用5mL乙酸乙酯萃取三次，合并有机相并用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得273mg棕色油状液体即为化合物12，直接用于下一步。

步骤4(S)-N-(5-(2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-1-基-2,3,3-d₃)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基)-3-羟基吡咯烷-1-甲酰胺(化合物13)的合成

取化合物12(273mg，0.86mmol)溶于25mL二氯甲烷，室温下一次性加入CDI(282mg，1.74mmol)，室温搅拌2h。一次性加入(S)-3-吡咯烷醇(159mg，1.83mmol)，室温搅拌30min。加入20mL水，并于室温下搅拌10min。分液，水相用20mL二氯甲烷萃取三次，合并有机相，并用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，柱层析(DCM/MeOH，0％～10％)得320mg淡黄色固体粉末即为化合物13，收率：86.3％。LC-MS(APCI):m/z＝432.2(M+1)⁺。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.23(d,J＝4.3Hz,1H),8.21(s,1H),8.14(d,J＝7.8Hz,1H),7.05(d,J＝25.1Hz,2H),6.90(s,1H),6.74(s,1H),6.05(d,J＝7.7Hz,1H),4.51(m,1H),3.88(d,J＝7.8Hz,1H),3.70(d,J＝7.9Hz,1H),3.65–3.44(m,3H),2.11–1.98(m,5H).

步骤5(S)-N-(5-((R)-2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-1-基-2,3,3-d₃)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基)-3-羟基吡咯烷-1-甲酰胺(化合物L-2)的制备

采用手性制备色谱柱将消旋体化合物13进行分离得到目标产物L-2。LC-MS(APCI):m/z＝432.2(M+1)⁺。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.23(d,J＝4.3Hz,1H),8.21(s,1H),8.14(d,J＝7.8Hz,1H),7.05(d,J＝25.1Hz,2H),6.90(s,1H),6.74(s,1H),6.05(d,J＝7.7Hz,1H),4.51(m,1H),3.88(d,J＝7.8Hz,1H),3.70(d,J＝7.9Hz,1H),3.65–3.44(m,3H),2.11–1.98(m,5H).

实施例3(S)-N-(5-((R)-2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-1-基-2,3,3-d₃)-吡唑并[1, 5-a]嘧啶-3-基)-3-羟基吡咯烷-2,2,5,5-d₄-1-甲酰胺(化合物L-3)的制备。

采用以下路线进行合成：

步骤1(S)-N-(5-(2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-1-基-2,3,3-d₃)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基)-3-羟基吡咯烷-2,2,5,5-d₄-1-甲酰胺(化合物14)的合成

取化合物12(270mg，0.85mmol)溶于25mL二氯甲烷，室温下一次性加入CDI(282mg，1.74mmol)，室温搅拌2h。一次性加入化合物8(159mg，1.74mmol)，室温搅拌30min。加入20mL水，并于室温下搅拌10min。分液，水相用20mL二氯甲烷萃取三次，合并有机相，并用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，柱层析(DCM/MeOH，0％～10％)得339mg淡黄色固体粉末即为化合物14，收率：91.8％。LC-MS(APCI):m/z＝436.3(M+1)⁺。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.23(d,J＝4.3Hz,1H),8.21(s,1H),8.14(d,J＝7.8Hz,1H),7.05(d,J＝25.1Hz,2H),6.90(s,1H),6.74(s,1H),6.05(d,J＝7.7Hz,1H),4.51(m,1H),3.88(d,J＝7.8Hz,1H),3.70(d,J＝7.9Hz,1H),2.11–1.98(m,4H).

步骤2(S)-N-(5-((R)-2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-1-基-2,3,3-d₃)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基)-3-羟基吡咯烷-2,2,5,5-d₄-1-甲酰胺(化合物L-3)的制备

采用手性制备色谱柱将消旋体化合物14进行分离得到目标产物L-3。LC-MS(APCI):m/z＝436.3(M+1)⁺。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.23(d,J＝4.3Hz,1H),8.21(s,1H),8.14(d,J＝7.8Hz,1H),7.05(d,J＝25.1Hz,2H),6.90(s,1H),6.74(s,1H),6.05(d,J＝7.7Hz,1H),4.51(m,1H),3.88(d,J＝7.8Hz,1H),3.70(d,J＝7.9Hz,1H),2.11–1.98(m,4H).

实施例4(S)-N-(5-((R)-2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-1-基-4,4-d₂)吡唑并[1,5-a] 嘧啶-3-基)-3-羟基吡咯烷-1-甲酰胺(化合物L-4)的制备。

采用以下路线进行合成：

步骤1吡咯烷-2,5-二酮-3,3,4,4-d₄(化合物15)的合成

取琥珀酰亚胺(9.0g，90.9mmol)溶于60mL氘代甲醇中，加入碳酸钾(1.44g，10.4mmol)，微波加热120℃搅拌30min。浓缩反应液，所得固体即为化合物15，直接用于下一步。

步骤2吡咯-2-酮-3,3,4,4-d₄(化合物16)的合成

上步所得固体分散于400mL无水四氢呋喃，冰浴下分批加入氢化锂铝(LAH，3.05g，80.3mmol)，加完后于冰浴下搅拌15min。反应液用十水硫酸钠淬灭，过滤，滤渣用200mL乙酸乙酯洗涤，合并滤液并浓缩，柱层析(PE/EA，25％～50％)得1.44g无色油状液体即为化合物16，直接投入下一步反应。

步骤3N-叔丁氧羰基-2-吡咯烷酮-3,3,4,4-d₄(化合物17)的合成

取化合物16(1.44g，16.2mmol)溶于20mL二氯甲烷，室温下加入DIPEA和DMAP，冰水浴下缓慢滴加Boc₂O，加完后室温搅拌过夜。浓缩反应液，柱层析得586mg棕色油状液体即为化合物17，直接投入下一步。

步骤4(4-(2,5-二氟苯基)-4-氧代丁基-2,2,3,3-d₄)氨基甲酸叔丁酯(化合物18)的合成

取2,5-二氟溴苯(500mg，2.6mmol)溶于5mL THF，-45℃下缓慢滴加异丙基氯化镁无水THF溶液(1.56mL，3.12mmol)，滴毕自然升温至0℃搅拌1h，再于-15℃缓慢滴加化合物17(466mg，2.46mmol)的四氢呋喃(5mL)溶液,滴毕室温搅拌30min。反应液倒入10mL饱和氯化铵溶液中搅拌10min，静置分液，水相用10mL乙酸乙酯萃取三次，合并有机相并用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤浓缩，柱层析(PE/EA，0％～10％)得367mg无色固体即为化合物18，收率：46.6％。

步骤5(5-(2,5-二氟苯基)-3,4-二氢-2H-吡咯-3,3,4,4-d₄)三氟乙酸盐(化合物19)的合成

取化合物18(367mg，1.21mmol)溶于4.0mL二氯甲烷，室温下缓慢滴加2.0mL三氟乙酸，滴毕室温搅拌1h。浓缩反应液，得301mg棕色油状液体即为化合物19.

步骤6 2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-4,4-d₂(化合物20)的合成

取化合物19(301mg，1.06mmol)溶于10mL无水甲醇，加入Pd/C(30mg)，室温氢化过夜。过滤，滤渣用20mL乙酸乙酯洗涤，滤液浓缩，得301mg无色油状液体即为化合物20。LC-MS(APCI):m/z＝186.3(M+1)⁺。

步骤7 5-(2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-1-基-4,4-d₂)-3-硝基吡唑并[1,5-α]嘧啶(化合物21)的合成

取化合物20(301mg，1.63mmol)和5-氯-3-硝基吡唑并[1,5-a]嘧啶(300mg，1.51mmol)溶于10mL无水乙醇，室温下加入DIPEA(391mg，3.02mmol)，加热回流30min。浓缩反应液，柱层析(PE/EA，30％～50％)得222mg淡黄色固体粉末即为化合物21。LC-MS(APCI):m/z＝348.3(M+1)⁺。

步骤8 5-(2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-1-基-4,4-d₂)吡唑并[1,5-α]嘧啶-3-胺(化合物22)的合成

取化合物21(222mg，0.64mmol)溶于10mL无水甲醇和3mL水，室温下加入还原铁粉(357mg，6.37mmol)和氯化铵(68mg，1.28mmol)，加热回流2h。过滤，滤渣用20mL乙酸乙酯洗涤，滤液浓缩至约3mL，加入10mL乙酸乙酯和5mL水，分液，水相用5mL乙酸乙酯萃取三次，合并有机相并用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得195mg棕色油状液体即为化合物22，直接用于下一步。

步骤9(S)-N-(5-(2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-1-基-4,4-d₂)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基)-3-羟基吡咯烷-1-甲酰胺(化合物23)的合成

取化合物22(195mg，0.61mmol)溶于25mL二氯甲烷，室温下一次性加入CDI(199mg，1.23mmol)，室温搅拌2h。一次性加入(S)-3-吡咯烷醇(107mg，1.23mmol)，室温搅拌30min。加入20mL水，并于室温下搅拌10min。分液，水相用20mL二氯甲烷萃取三次，合并有机相，并用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，柱层析(DCM/MeOH，0％～10％)得102mg淡黄色固体粉末即为化合物23，收率：38.9％。LC-MS(APCI):m/z＝431.2(M+1)⁺。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.23(d,J＝4.3Hz,1H),8.21(s,1H),8.14(d,J＝7.8Hz,1H),7.05(d,J＝25.1Hz,2H),6.90(s,1H),6.74(s,1H),6.05(d,J＝7.7Hz,1H),4.51(m,1H),3.88(d,J＝7.8Hz,1H),3.70(d,J＝7.9Hz,1H),3.65–3.44(m,4H),2.46(td,J＝9.5,8.6,4.3Hz,1H),2.11–1.98(m,4H).

步骤10(S)-N-(5-((R)-2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-1-基-4,4-d₂)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基)-3-羟基吡咯烷-1-甲酰胺(化合物L-4)的制备

采用手性制备色谱柱将消旋体化合物23进行分离得到目标产物L-4。LC-MS(APCI):m/z＝431.2(M+1)⁺。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.23(d,J＝4.3Hz,1H),8.21(s,1H),8.14(d,J＝7.8Hz,1H),7.05(d,J＝25.1Hz,2H),6.90(s,1H),6.74(s,1H),6.05(d,J＝7.7Hz,1H),4.51(m,1H),3.88(d,J＝7.8Hz,1H),3.70(d,J＝7.9Hz,1H),3.65–3.44(m,4H),2.46(td,J＝9.5,8.6,4.3Hz,1H),2.11–1.98(m,4H).

实施例5(S)-N-(5-((R)-2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-1-基-5,5-d₂)吡唑并[1,5-a] 嘧啶-3-基)-3-羟基吡咯烷-1-甲酰胺(化合物L-5)的制备。

采用以下路线进行合成：

步骤1吡咯烷-2-酮-5,5-d₂(化合物24)的合成

取琥珀酰亚胺(3.0g，30.3mmol)分散于130mL无水四氢呋喃，冰浴下分批加入LiAlD₄(1.02g，24.3mmol)，加完后于冰浴下搅拌15min。反应液用十水硫酸钠淬灭，过滤，滤渣用70mL乙酸乙酯洗涤，合并滤液并浓缩，柱层析(PE/EA，25％～50％)得1.44g无色油状液体即为化合物24，直接投入下一步。

步骤2N-叔丁氧羰基-2-吡咯烷酮-5,5-d₂(化合物25)的合成

取化合物24(1.44g，16.5mmol)溶于20mL二氯甲烷，室温下加入DIPEA(8.55g，66.1mmol)和DMAP(404mg，3.3mmol)，冰水浴下缓慢滴加Boc₂O(7.22g，33.1mmol)，加完后室温搅拌过夜。浓缩反应液，柱层析得586mg棕色油状液体即为化合物25，直接投入下一步。

步骤3(4-(2,5-二氟苯基)-4-氧代丁基-1,1-d₂)氨基甲酸叔丁酯(化合物26)的合成

取2,5-二氟溴苯(500mg，2.6mmol)溶于5mL THF，-45℃下缓慢滴加异丙基氯化镁的无水THF溶液(1.55mL，3.1mmol)，滴毕自然升温至0℃搅拌1h，再于-15℃缓慢滴加化合物25(466mg，2.49mmol)的四氢呋喃(5mL)溶液，滴毕室温搅拌30min。反应液倒入10mL饱和氯化铵溶液中搅拌10min，静置分液，水相用10mL乙酸乙酯萃取三次，合并有机相并用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤浓缩，柱层析(PE/EA，0％～10％)得380mg无色固体即为化合物26。

步骤4(5-(2,5-二氟苯基)-3,4-二氢-2H-吡咯-2,2-d₂)三氟乙酸盐(化合物27)的合成

取化合物26(380mg，1.26mmol)溶于4.0mL二氯甲烷，室温下缓慢滴加2.0mL三氟乙酸，滴毕室温搅拌1h。浓缩反应液，得339mg棕色油状液体即为化合物27。

步骤5 5-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-5,5-d₂(化合物28)的合成

取化合物27(339mg，1.21mmol)溶于10mL无水甲醇，加入Pd/C(30mg)，室温氢化过夜。过滤，滤渣用20mL乙酸乙酯洗涤，滤液浓缩，得313mg无色油状液体即为化合物28。LC-MS(APCI):m/z＝186.1(M+1)⁺。

步骤6 5-(2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-1-基-5,5-d₂)-3-硝基吡唑并[1,5-α]嘧啶(化合物29)的合成

取化合物28(313mg，1.69mmol)和5-氯-3-硝基吡唑并[1,5-a]嘧啶(335mg，1.69mmol)溶于10mL无水乙醇，室温下加入DIPEA(391mg，3.02mmol)，加热回流30min。浓缩反应液，柱层析(PE/EA，30％～50％)得320mg淡黄色固体粉末即为化合物29。LC-MS(APCI):m/z＝348.5(M+1)⁺。

步骤7 5-(2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-1-基-5,5-d₂)吡唑并[1,5-α]嘧啶-3-胺(化合物30)的合成

取化合物29(300mg，0.86mmol)溶于10mL无水甲醇和3mL水，室温下加入还原铁粉(485mg，8.6mmol)和氯化铵(93mg，1.75mmol)，加热回流2h。过滤，滤渣用20mL乙酸乙酯洗涤，滤液浓缩至约3mL，加入10mL乙酸乙酯和5mL水，分液，水相用5mL乙酸乙酯萃取三次，合并有机相并用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得251mg棕色油状液体即为化合物30，直接用于下一步。

步骤8(S)-N-(5-(2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-1-基-5,5-d₂)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基)-3-羟基吡咯烷-1-甲酰胺(化合物31)的合成

取化合物30(150mg，0.47mmol)溶于15mL二氯甲烷，室温下一次性加入CDI(92mg，0.57mmol)，室温搅拌2h。一次性加入(S)-3-吡咯烷醇(62mg，0.71mmol)，室温搅拌30min。加入10mL水，并于室温下搅拌10min。分液，水相用10mL二氯甲烷萃取三次，合并有机相，并用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，柱层析(DCM/MeOH，0％～10％)得87mg淡黄色固体粉末即为化合物31。LC-MS(APCI):m/z＝431.1(M+1)⁺。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.23(d,J＝4.3Hz,1H),8.21(s,1H),8.14(d,J＝7.8Hz,1H),7.05(d,J＝25.1Hz,2H),6.90(s,1H),6.74(s,1H),6.05(d,J＝7.7Hz,1H),4.51(m,1H),3,3.65–3.44(m,4H),2.46(td,J＝9.5,8.6,4.3Hz,1H),2.11–1.98(m,6H).

步骤9(S)-N-(5-((R)-2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-1-基-5,5-d₂)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基)-3-羟基吡咯烷-1-甲酰胺(化合物L-5)的制备

采用手性制备色谱柱将消旋体化合物31进行分离得到目标产物L-5。LC-MS(APCI):m/z＝431.1(M+1)⁺。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.23(d,J＝4.3Hz,1H),8.21(s,1H),8.14(d,J＝7.8Hz,1H),7.05(d,J＝25.1Hz,2H),6.90(s,1H),6.74(s,1H),6.05(d,J＝7.7Hz,1H),4.51(m,1H),3,3.65–3.44(m,4H),2.46(td,J＝9.5,8.6,4.3Hz,1H),2.11–1.98(m,6H).

实施例6(S)-N-(5-((R)-2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-1-基-5,5-d₂)吡唑并[1,5-a] 嘧啶-3-基)-3-羟基吡咯烷-2,2,5,5-d₄-1-甲酰胺(化合物L-6)的制备。

采用以下路线进行合成：

步骤1(S)-N-(5-(2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-1-基-5,5-d₂)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基)-3-羟基吡咯烷-2,2,5,5-d₄-1-甲酰胺(化合物32)的合成

取化合物30(150mg，0.47mmol)溶于25mL二氯甲烷，室温下一次性加入CDI(92mg，0.56mmol)，室温搅拌2h。一次性加入化合物8(62mg，0.68mmol)，室温搅拌30min。加入10mL水，并于室温下搅拌10min。分液，水相用10mL二氯甲烷萃取三次，合并有机相，并用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，柱层析(DCM/MeOH，0％～10％)得79mg淡黄色固体粉末即为化合物32。LC-MS(APCI):m/z＝435.2(M+1)⁺。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.23(d,J＝4.3Hz,1H),8.21(s,1H),8.14(d,J＝7.8Hz,1H),7.05(d,J＝25.1Hz,2H),6.90(s,1H),6.74(s,1H),6.05(d,J＝7.7Hz,1H),4.51(m,1H),2.46(td,J＝9.5,8.6,4.3Hz,1H),2.11–1.98(m,6H).

步骤2(S)-N-(5-((R)-2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-1-基-5,5-d₂)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基)-3-羟基吡咯烷-2,2,5,5-d₄-1-甲酰胺(化合物L-6)的制备

采用手性制备色谱柱将消旋体化合物32进行分离得到目标产物L-6。LC-MS(APCI):m/z＝435.2(M+1)⁺。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.23(d,J＝4.3Hz,1H),8.21(s,1H),8.14(d,J＝7.8Hz,1H),7.05(d,J＝25.1Hz,2H),6.90(s,1H),6.74(s,1H),6.05(d,J＝7.7Hz,1H),4.51(m,1H),2.46(td,J＝9.5,8.6,4.3Hz,1H),2.11–1.98(m,6H).

实施例7(S)-N-(5-((R)-2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-1-基-2,3,3,5,5-d₂)吡唑并 [1,5-a]嘧啶-3-基)-3-羟基吡咯烷-1-甲酰胺(化合物L-7)的制备。

采用以下路线进行合成：

步骤1 2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-2,3,3,5,5-d₅(化合物33)的合成

取化合物27(339mg，1.21mmol)溶于10mL氘代无水甲醇中，加入Pd/C(30mg)，室温氢化过夜。过滤，滤渣用20mL乙酸乙酯洗涤，滤液浓缩，得228mg无色油状液体即为化合物33。LC-MS(APCI):m/z＝189.7(M+1)⁺。

步骤2 5-(2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-1-基-2,3,3,5,5-d₅)-3-硝基吡唑并[1,5-α]嘧啶(化合物34)的合成

取化合物33(228mg，1.21mmol)和5-氯-3-硝基吡唑并[1,5-a]嘧啶(239mg，1.21mmol)溶于10mL无水乙醇，室温下加入DIPEA(866mg，6.7mmol)，加热回流30min。浓缩反应液，柱层析(PE/EA，30％～50％)得232mg淡黄色固体粉末即为化合物34。LC-MS(APCI):m/z＝351.2(M+1)⁺。

步骤3 5-(2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-1-基-2,3,3,5,5-d₅)吡唑并[1,5-α]嘧啶-3-胺(化合物35)的合成

取化合物34(232mg，0.66mmol)溶于10mL无水甲醇和3mL水，室温下加入还原铁粉(363mg，6.48mmol)和氯化铵(70mg，1.32mmol)，加热回流2h。过滤，滤渣用20mL乙酸乙酯洗涤，滤液浓缩至约3mL，加入10mL乙酸乙酯和5mL水，分液，水相用5mL乙酸乙酯萃取三次，合并有机相并用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得208mg棕色油状液体即为化合物35，直接用于下一步。

步骤4(S)-N-(5-((R)-2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-1-基-2,3,3,5,5-d₂)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基)-3-羟基吡咯烷-1-甲酰胺(化合物36)的合成

取化合物35(208mg，0.65mmol)溶于20mL二氯甲烷，室温下一次性加入CDI(210mg，1.29mmol)，室温搅拌2h。一次性加入(S)-3-吡咯烷醇(113mg，1.29mmol)，室温搅拌30min。加入20mL水，并于室温下搅拌10min。分液，水相用20mL二氯甲烷萃取三次，合并有机相，并用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，柱层析(DCM/MeOH，0％～10％)得199mg淡黄色固体粉末即为化合物36。LC-MS(APCI):m/z＝434.1(M+1)⁺。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.23(d,J＝4.3Hz,1H),8.21(s,1H),8.14(d,J＝7.8Hz,1H),7.05(d,J＝25.1Hz,2H),6.90(s,1H),6.74(s,1H),6.05(d,J＝7.7Hz,1H),4.51(m,1H),3.65–3.44(m,4H),2.46(td,J＝9.5,8.6,4.3Hz,1H),2.11–1.98(m,2H).

步骤5(S)-N-(5-((R)-2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-1-基-2,3,3,5,5-d₂)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基)-3-羟基吡咯烷-1-甲酰胺(化合物L-7)的制备

采用手性制备色谱柱将消旋体化合物36进行分离得到目标产物L-7。LC-MS(APCI):m/z＝434.1(M+1)⁺。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.23(d,J＝4.3Hz,1H),8.21(s,1H),8.14(d,J＝7.8Hz,1H),7.05(d,J＝25.1Hz,2H),6.90(s,1H),6.74(s,1H),6.05(d,J＝7.7Hz,1H),4.51(m,1H),3.65–3.44(m,4H),2.46(td,J＝9.5,8.6,4.3Hz,1H),2.11–1.98(m,2H).

生物活性测试。

(1)激酶抑制作用

化合物配制：受试化合物溶于DMSO配成20mM母液。使用前将化合物在DMSO中稀释成0.1mM(100倍终浓度的稀释液)，并做3倍梯度稀释，11个浓度。加药时用缓冲液稀释成4倍终浓度的稀释液。

激酶检测：配制缓冲液后，将酶与预先稀释配制的不同浓度化合物混合，室温放置30分钟，每个浓度双复孔。加入对应底物及ATP，室温反应60分钟(其中设置阴阳性对照)。反应完毕加入抗体检测，室温孵育60分钟后Evnvision检测，采集数据。通过Evnvision酶标仪检测，测定在各浓度的本发明化合物存在下的酶活力，并计算不同浓度的化合物对酶活力的抑制活性，之后根据四参数方程，根据Graphpad 5.0软件对不同浓度化合物下酶活力的抑制活性进行拟合，计算出IC₅₀值。

按照上述方法，测试本发明化合物对TRK A、TRK B、TRK C激酶的抑制活性。实施实例中的激酶抑制作用结果如表1所示.

表1：

实施例化合物	TRK AIC<sub>50</sub>(nM)	TRK B IC<sub>50</sub>(nM)	TRK C IC<sub>50</sub>(nM)
				LOXO-101	0.90	0.54	0.44
L-1	0.82	0.46	0.41
				L-2	0.96	0.46	0.45
L-3	1.13	0.40	0.32
				L-4	0.73	0.33	0.29
L-7	0.86	0.63	0.29

如表1所示，本发明化合物具有显著的蛋白激酶抑制活性，一般具有低于1nM的IC₅₀值。特别是，同没有氘代的化合物LOXO-101比较，本发明化合物对TRKA/B/C表现出强的抑制活性。

(2)代谢稳定性评价

微粒体实验：人肝微粒体：0.5mg/mL，Xenotech；大鼠肝微粒体：0.5mg/mL，Xenotech；辅酶(NADPH/NADH)：1mM，Sigma Life Science；氯化镁：5mM，100mM磷酸盐缓冲剂(pH为7.4)。

储备液的配制：精密称取一定量的实施例化合物的粉末，并用DMSO分别溶解至5mM。

磷酸盐缓冲液(100mM，pH7.4)的配制：取预先配好的150mL的0.5M磷酸二氢钾和700mL的0.5M磷酸氢二钾溶液混合，再用0.5M磷酸氢二钾溶液调节混合液pH值至7.4，使用前用超纯水稀释5倍，加入氯化镁，得到磷酸盐缓冲液(100mM)，其中含100mM磷酸钾，3.3mM氯化镁，pH为7.4。

配制NADPH再生系统溶液(含有6.5mM NADP，16.5mM G-6-P，3U/mL G-6-P D，3.3mM氯化镁)，使用前置于湿冰上。

配制终止液：含有50ng/mL盐酸普萘洛尔和200ng/mL甲苯磺丁脲(内标)的乙腈溶液。取25057.5μL磷酸盐缓冲液(pH7.4)至50mL离心管中，分别加入812.5μL人肝微粒体，混匀，得到蛋白浓度为0.625mg/mL的肝微粒体稀释液。取25057.5μL磷酸盐缓冲液(pH7.4)至50mL离心管中，分别加入812.5μL SD大鼠肝微粒体，混匀，得到蛋白浓度为0.625mg/mL的肝微粒体稀释液。

样品的孵育：用含70％乙腈的水溶液将相应化合物的储备液分别稀释至0.25mM，作为工作液，备用。分别取398μL的人肝微粒体或者大鼠肝微粒体稀释液加入96孔孵育板中(N＝2)，分别加入2μL 0.25mM的的工作液中，混匀。

代谢稳定性的测定：在96孔深孔板的每孔中加入300μL预冷的终止液，并置于冰上，作为终止板。将96孔孵育板和NADPH再生系统置于37℃水浴箱中，100转/分钟震荡，预孵5min。从孵育板每孔取出80μL孵育液加入终止板，混匀，补充20μL NADPH再生系统溶液，作为0min样品。再向孵育板每孔加入80μL的NADPH再生系统溶液，启动反应，开始计时。相应化合物的反应浓度为1μM，蛋白浓度为0.5mg/mL。分别于反应10、30、90min时，各取100μL反应液，加入终止板中，涡旋3min终止反应。将终止板于5000×g，4℃条件下离心10min。取100μL上清液至预先加入100μL蒸馏水的96孔板中，混匀，采用LC-MS/MS进行样品分析。

数据分析：通过LC-MS/MS系统检测相应化合物及内标的峰面积，计算化合物与内标峰面积比值。通过化合物剩余量的百分率的自然对数与时间作图测得斜率，并根据以下公式计算t_1/2和CL_int，其中V/M即等于1/蛋白浓度。

对本发明化合物及其没有氘代的化合物同时测验比较，评价其在人和大鼠肝微粒体的代谢稳定性。代表性实施例化合物的代谢稳定性的指标——半衰期及肝固有清除率——如表2所示。表2中采用未经氘代的化合物LOXO-101作为对照品。在人和大鼠肝微粒体实验中，通过与未经氘代的化合物LOXO-101对照，本发明化合物可以明显改善代谢稳定性。

表2：

(3)大鼠药代动力学实验

6只雄性Sprague-Dawley大鼠，7-8周龄，体重约210g，分成2组，每组3只，经静脉或口服单个剂量的化合物(口服10mg/kg)，比较其药代动力学差异。

大鼠采用标准饲料饲养，给予水。试验前16小时开始禁食。药物用PEG400和二甲亚砜溶解。眼眶采血，采血的时间点为给药后0.083小时，0.25小时、0.5小时、1小时、2小时、4小时、6小时、8小时、12小时和24小时。

大鼠吸入乙醚后短暂麻醉，眼眶采集300μL血样于试管。试管内有30μL 1％肝素盐溶液。使用前，试管于60℃烘干过夜。在最后一个时间点血样采集完成之后，大鼠乙醚麻醉后处死。

血样采集后，立即温和地颠倒试管至少5次，保证混合充分后放置于冰上。血样在4℃ 5000rpm离心5分钟，将血浆与红细胞分离。用移液器吸出100μL血浆到干净的塑料离心管中，标明化合物的名称和时间点。血浆在进行分析前保存在-80℃。用LC-MS/MS测定血浆中本发明化合物的浓度。药代动力学参数基于每只动物在不同时间点的血药浓度进计算。

实验表明，本发明化合物在动物体内具有更好的药代动力学性质，因此具有更好的药效学和治疗效果。

以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。

Claims

1.化合物，其选自下组化合物或其药学上可接受的盐：

2.一种药物组合物，其含有药学上可接受的赋形剂和权利要求1所述的化合物，或其药学上可接受的盐。

3.一种权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐或权利要求2所述的药物组合物在制备治疗选自癌症、疼痛、炎症、神经变性疾病或克氏锥虫感染的相关病症的药物中的用途。

4.一种权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐或权利要求2所述的药物组合物在制备治疗Trk激酶介导的癌症的药物中的用途。

5.根据权利要求4所述的用途，其中所述癌症通过TrkC介导。