JP7332139B2 - 置換されたアニオン性化合物 - Google Patents

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    • C08B37/0021—Dextran, i.e. (alpha-1,4)-D-glucan; Derivatives thereof, e.g. Sephadex, i.e. crosslinked dextran

Description

本発明は、置換されたアニオン性化合物に関する。
１９８０年代初頭の遺伝子工学によるインスリンの製造以来、糖尿病患者は、それらの治療のためのヒトインスリンから恩恵を受けてきた。この製造物は、非ヒトインスリン、特にブタインスリンの使用に関連した免疫学的危険性が解消されるため、その治療を大きく改善してきた。しかしながら、皮下注射されたヒトインスリンは、その後６０分間しか血糖値低下作用を有しておらず、このことは、ヒトインスイリンを用いて治療される糖尿病患者が、食事の３０分前に注射しなければならないことを意味する。
糖尿病患者の健康及び快適さを改善するために解決されるべき問題の１つは、健康人の生理的反応に近い反応が可能であれば、ヒトインスリンよりもより迅速な血糖低下反応を与えるインスリン製剤を用いて、それらを提供することである。健康な個人の内因性インスリンの分泌は、血糖値上昇によって直ちに開始される。この対象は、インスリンの注射と食事の開始との間の遅れを最小にすることである。
今や、そのような製剤の提供は、患者が最良の可能な医療を受けるのに使用できると受け入れられている。
遺伝子工学は、速効型インスリンアナログの開発に伴う反応の提供を可能にした。これらのインスリンは、皮下注射後に血液中へより迅速に吸収されるように、１種又は２種のアミノ酸で変性されている。これらインスリンである、リスプロ（ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ）（登録商標），リリー（Ｌｉｌｌｙ））社、アスパルト（ノボログ（Ｎｏｖｏｌｏｇ）（登録商標），ノボ（Ｎｏｖｏ）社）及びグルリシン（アピドラ（Ａｐｉｄｒａ）（登録商標），サノフィアベンチス（Ｓａｎｏｆｉ Ａｖｅｎｔｉｓ）社）は、ヒトインスリンよりもより迅速な血糖低下反応を有する、安定なインスリン溶液である。その結果、これら速効型インスリンアナログを用いて治療された患者は、食事のたった１５分前にインスリン注射を受けることが可能である。
速効型インスリンアナログの原理は、１００ＩＵ／ｍＬの濃度にてヘキサマーを形成して、市販品中のインスリンの安定性を確実にする一方で、同時に、速効型を得るために、皮下注射後にこれらヘキサマーのモノマーへの非常に急速な解離を促進することである。
市販品形態に配合されたヒトインスリンは、モノマー及びダイマー形態において活性であるが、使用濃度（１００ＩＵ／ｍＬ）にて、亜鉛及びフェノール又はｍ－クレゾールのような他の賦形剤の存在中においては、当該ヒトインスリンは、会合してヘキサマーを形成するため、食事の開始（血糖値上昇）により生ずる生理的反応と動態的に近似する血糖低下反応が得られない。ヒトインスリンは、モノマー形態においては凝集して、そしてその後に繊維状化する非常に高い傾向にあり、それによってその活性を失うため、４℃にて２年間まで安定であるヘキサマー形態に製造される。さらには、この凝集形態においては、ヒトインスリンは、患者に対して免疫学的危険性を与えてしまう。
ヘキサマーのダイマーへの解離及びダイマーのモノマーへの解離は、速効型インスリンアナログと比較した場合、ほぼ２０分も作用が遅い（非特許文献１）。
さらには、インスリンアナログの血液中への通過動態及びそれらの血糖低下動態は最適ではなく、そして、健康人に分泌される内因性インスリンの動態に近づけるようにさらに短い作用時間を有する製剤が真に必要とされている。
バイオデル社（Ｂｉｏｄｅｌ）は、特許文献１に記載されるとおり、ＥＤＴＡ及びクエン酸を含有するヒトインスリン製剤によって、かかる問題に対する解決法を提案した。亜鉛原子と錯体形成するＥＤＴＡの性能、及び、クエン酸とインスリン表面に存在するカチオン部分との相互作用が、インスリンのヘキサマー形態を不安定化し、そしてこのことが作用時間を短くする。
しかしながら、そのような製剤はとりわけ、薬事法規の安定性要件に合致し得る唯一つの安定形態である、インスリンのヘキサマー形態を解離するという不具合を有している。
本出願人の名義のＰＣＴ特許文献２が、カルボキシル基を有する置換された多糖類の添加によって上記の種々の問題を解決し得る、ヒトインスリン又はインスリンアナログ製剤を記載していることもまた既知である。
しかしながら、そのような製剤の慢性的な且つ集中的な使用又は同様に小児の使用に必要とされる要件によって、当業者は、それらの離脱を促進するように分子量及びサイズを可能な限り小さくした賦形剤を使用することを模索している。
賦形剤として特許文献２及び特許文献３に記載される多糖類は、統計的に長さが種々であり、且つタンパク質活性成分との相互作用が可能な部位が非常に豊富である鎖から成る化合物である。この豊富さが、相互作用に関して特異性の欠如を誘発してしまい、そしてより小さく且つより良好に定義された分子が、これに関してより特異的となる。
米国特許出願第２００８３９３６５号 国際公開第２０１０／１２２３８５号 米国特許出願公開第２０１２／０９４９０２Ａ１号
Ｂｒａｎｇｅ Ｊ．他，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗ，３５，１９９９，３０７－３３５
さらには、良好に定義された主骨格を有する分子は、一般的に質量分析における広範で高い背景ノイズを有するシグナルを与えるポリマーと比較して、薬物動態学的又はＡＤＭＥ（吸収、分布、代謝、排泄）実験中の生物学的媒体を、一般的によりたやすく追跡し得る（例えば、ＭＳ／ＭＳ）。
対照的に、良好に定義され且つより短い分子が、タンパク質活性要素との相互作用が可能な部位が欠乏していることは、排除されない。とりわけ、それら分子の小さなサイズのため、実験の部の比較例において示されるとおり、ポリマー効果を損失しているために、それらは多糖類型のポリマーと同様の特性を有していない（とりわけ、等電点でのインスリン分解試験及びアルブミンのようなモデルタンパク質との相互作用試験を参照のこと）。
これらの残念な結果にもかかわらず、出願人は、ポリアニオン化合物との併用における置換されたアニオン性化合物を使用することにより、インスリン速度を速め得る製剤を開発するのに成功した。
さらには、多糖類の使用の場合と同様に、インスリンのヘキサマーの性質は影響されず、そしてそのため、さらに、本発明に従う置換されたアニオン性化合物の存在中での円偏光二色性による、ヒトインスリンとインスリンアナログとの会合の様態の実施例により確認されるとおり、製剤の安定性が影響されない。
本発明は、対応する市販のインスリン製品と比較した場合に、投与後に、ヒトインスリン又はそのアナログの血液への通過を促進し、そしてより迅速に血糖値を低下させ得る、ヒトインスリン又はインスリンアナログ製剤を特に製造することを可能とするので、上記概略した種々の問題を解決することを可能とする。
本発明は、ヘキサマー形態にあるインスリン、少なくとも１種の置換されたアニオン性化合物及び非ポリマー状ポリアニオン性化合物を含有する水溶液組成物から成る。
用語"置換されたアニオン性化合物"とは、同一の又は異なったグリコシド結合を介して結合した、１乃至８の離散数ｕ（１≦ｕ≦８）の同一又は異なった糖単位から形成された糖主骨格から成る化合物であって、前記糖単位が、環状形態にあるか又は開環還元形態にあるヘキソースから成る群より選択され、前記化合物が部分的に置換されたカルボキシル官能基を有し、未置換のカルボキシル官能基は塩化可能である、化合物を意味する。
一態様において、インスリンは、ヘキサマー形態にある。
一態様において、インスリンは、ヒトインスリンである。
用語"ヒトインスリン"とは、ペプチド配列が、対立遺伝子変異及びホモログを包含するヒトインスリンの配列である、合成により又は組換えにより得られたインスリンを意味する。
一態様において、インスリンは、欧州薬局方及び米国薬局方に記載されているような、組換え体ヒトインスリンである。
一態様において、インスリンは、インスリンアナログである。
用語"インスリンアナログ"とは、ヒトインスリンの主配列と比較して少なくとも１つの変性基を有する、組換え体インスリンを意味する。
一態様において、インスリンアナログは、インスリンリスプロ（ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ）（登録商標））、インスリンアスパルト（ノボログ（Ｎｏｖｏｌｏｇ）（登録商標）、ノボラピッド（Ｎｏｖｏｒａｐｉｄ）（登録商標））及びインスリングルリジン（アピドラ（Ａｐｉｄｒａ）（登録商標））から成る群より選択される。
一態様において、インスリンアナログは、インスリンリスプロ（ヒューマログ（登録商標））である。
一態様において、インスリンアナログは、インスリンアスパルト（ノボログ（登録商標）、ノボラピッド（登録商標））である。
一態様において、インスリンアナログは、インスリングルリジン（アピドラ（登録商標））である。
一態様において、置換されたアニオン性化合物は、同一の又は異なったグリコシド結合を介して結合した、１乃至８の離散数ｕ（１≦ｕ≦８）の同一又は異なった糖単位から形成された主骨格から成る、単離形態にあるか又は混合物としての置換されたアニオン性化合物より選択され、
前記糖単位は、環状形態にあるか又は開環還元形態にある、ヘキソースから成る群より選択され、前記糖単位は、
ａ）一般式Ｉ：

－［Ｒ１］ａ－［ＡＡ］ｍ 式Ｉ

で表される少なくとも１種の置換基であって前記置換基は、
少なくとも２つの置換基が存在する場合には、同一又は異なっており、
基－［ＡＡ］は、アミノ酸残基を表し、
基－Ｒ１－は単結合であり、その場合にはａ＝０であり、且つアミノ酸残基－［ＡＡ］は官能基Ｇを介して前記主骨格に直接に結合しているか、又は
２乃至１５個の炭素原子をベースとした鎖であり、その場合にはａ＝１であり、置換されていてもよく、及び／又は、Ｏ、Ｎ及びＳより選択される少なくとも１種のヘテロ原子及び前記アミノ酸との反応前に少なくとも１種の酸官能基を有していてもよく、前記鎖は、前記アミノ酸残基－［ＡＡ］と共にアミド官能基を形成し、及び、前記主骨格が有するヒドロキシル官能基と前記基－Ｒ１－の前駆体が有する官能基又は置換基との間の反応から生じる官能基Ｆによって前記主骨格に結合しており、
Ｆは、エーテル官能基、エステル官能基及びカルバメート官能基より選択され、
Ｇは、カルバメート官能基であり、
ｍは、１又は２であり、
前記糖単位の置換度ｊは、－［Ｒ１］ａ－［ＡＡ］ｍについて、厳密に、０よりも大きく且つ６以下、即ち０＜ｊ≦６である、置換基により置換されており、及び
ｂ）１つ以上の置換基－Ｒ'１であって、
前記置換基は、置換されていてもよく、及び／又はＯ、Ｎ及びＳより選択される少なくとも１つ以上のヘテロ原子及びアルカリ金属カチオン塩の形態にある少なくとも１つの酸官能基を有していてもよい、２乃至１５個の炭素原子をベースとした鎖であり、前記鎖は、前記主骨格が有するヒドロキシル官能基と前記置換基－Ｒ'１の前駆体が有する官能基又は置換基との間の反応から生じた官能基Ｆ'を介して前記主骨格に結合しており、
Ｆ'は、エーテル官能基、エステル官能基又はカルバメート官能基であり、
前記糖単位の置換度ｉは、－Ｒ'１について、０乃至６－ｊ、即ち０≦ｉ≦６－ｊであり、及び
Ｆ及びＦ'は、同一であるか又は異なっており、
Ｆ及びＧは、同一であるか又は異なっており、
ｉ＋ｊ≦６であり、
－Ｒ'１は、－Ｒ１－と同一であるか又は異なっており、
置換基－Ｒ'１が有する遊離の塩化可能な酸官能基は、アルカリ金属カチオン塩の形態にあり、
同一又は異なっていてもよい前記グリコシド結合は、α又はβ配置にある、（１，１）、（１，２）、（１，３）、（１，４）又は（１，６）型のグリコシド結合から成る群より選択される、置換基により置換されていてもよいことを特徴とする。
一態様において、単離形態にあるか又は混合物としての置換されたアニオン性化合物は、同一の又は異なったグリコシド結合を介して結合した、１乃至８の離散数ｕ（１≦ｕ≦８）の同一又は異なった糖単位から形成された糖主骨格から成る、置換されたアニオン性化合物より選択され、
前記糖単位は、環状形態にあるか又は開環還元形態にある、ヘキソースから成る群より選択され、前記糖単位は、
ａ）一般式Ｉ：

－［Ｒ１］ａ－［ＡＡ］ｍ 式Ｉ

で表される少なくとも１種の置換基によりランダムに置換されており、前記置換基は、
少なくとも２つの置換基が存在する場合には、同一又は異なっており、
基－［ＡＡ］－は、アミノ酸残基を表し、前記アミノ酸は、フェニルアラニン、α－メチルフェニルアラニン、３，４－ジヒドロキシフェニルアラニン、チロシン、α－メチルチロシン、Ｏ－メチルチロシン、α－フェニルグリシン、４－ヒドロキシフェニルグリシン及び３，５－ジヒドロキシフェニルグリシン並びにそれらのアルカリ金属カチオン塩から成る群より選択され、前記誘導体は、Ｌ絶対配置又はＤ絶対配置であり、－［ＡＡ］は、リンカーアーム－Ｒ１－を介して分子の主骨格に結合しているか、又は、官能基Ｇを介して前記主骨格に直接に結合しており、
基－Ｒ１－は、単結合であり、その場合にはａ＝０であり、又は
２乃至１５個の炭素原子をベースとした鎖であり、その場合にはａ＝１であり、置換されていても、及び／又は、前記アミノ酸との反応前に、Ｏ、Ｎ及びＳより選択される少なくとも１種のヘテロ原子及び少なくとも１種の酸官能基を有していてもよく、前記鎖は、前記アミノ酸残基－［ＡＡ］と共にアミド官能基を形成し、及び、前記主骨格が有するヒドロキシル官能基とＲ１の前駆体が有する官能基又は置換基との間の反応から生じる官能基Ｆを介して前記糖主骨格に結合しており、
Ｆは、エーテル官能基、エステル官能基及びカルバメート官能基より選択され、
Ｇは、カルバメート官能基であり、
ｍは、１又は２であり、
置換度ｊは、－［Ｒ１］ａ－［ＡＡ］ｍについて、厳密に、０よりも大きく且つ６以下、即ち０＜ｊ≦６である、置換基により置換されており、及び
１つ以上の置換基－Ｒ'１であって、
前記置換基は、置換されていてもよく、及び／又は少なくとも１つ以上のヘテロ原子（Ｏ、Ｎ及びＳより選択される）及びアルカリ金属カチオン塩の形態にある少なくとも１つの酸官能基を有していてもよい、２乃至１５個の炭素原子をベースとした鎖であり、前記鎖は、前記主骨格が有するヒドロキシル官能基と－Ｒ'１の前駆体が有する官能基との間の反応から生じた官能基Ｆ'を介して前記主骨格に結合しており、
Ｆ'は、エーテル官能基、エステル官能基又はカルバメート官能基であり、
前記置換度ｉは、－Ｒ'１について、０乃至６－ｊ、即ち０≦ｉ≦６－ｊであり、及び
－Ｒ'１は、－Ｒ１－と同一であるか又は異なっており、
Ｆ及びＦ'は、同一であるか又は異なっており、
Ｆ'及びＧは、同一であるか又は異なっており、
遊離の塩化可能な酸官能基は、アルカリ金属カチオン塩の形態にある、置換基により無作為に置換されていてもよく、
ｂ）同一又は異なっていてもよい前記グリコシド結合は、α又はβ配置にある、（１，１）、（１，２）、（１，３）、（１，４）又は（１，６）型のグリコシド結合から成る群より選択され、
ｃ）ｉ＋ｊ≦６であることを特徴とする。
一態様において、ｍは、１である。
一態様において、同一又は異なっていてもよい－Ｒ１及び－Ｒ'１は、２乃至８個の炭素原子をベースとした鎖である。
一態様において、同一又は異なっていてもよい－Ｒ１及び－Ｒ'１は、２乃至４個の炭素原子をベースとした鎖である。
ｉ及びｊは統計的な置換度であり、及び糖単位当りの置換基の平均数を表す。各々の糖単位は、異なった反応性の幾つかのヒドロキシル官能基を有しているために、置換されたアニオン性化合物における置換基の分布は、ある糖単位と、同じポリアニオン性化合物との間の他のものとは異なり得る。
一態様において、０．３≦ｉである。
一態様において、０．４≦ｉである。
一態様において、ｉ≦３である。
一態様において、ｉ≦２．５である。
一態様において、０．３≦ｊである。
一態様において、０．４≦ｊである。
一態様において、ｊ≦２である。
一態様において、ｊ≦１．８である。
一態様において、ｉ及びｊは、０＜ｉ＋ｊ≦６である。
一態様において、０＜ｉ＋ｊ≦５である。
一態様において、０＜ｉ＋ｊ≦４である。
一態様において、０＜ｉ＋ｊ≦３である。
一態様において、０＜ｉ＋ｊ≦２．５である。
一態様において、０＜ｉ＋ｊ≦２である。
一態様において、０．５≦ｉ＋ｊ≦３である。
一態様において、０．５≦ｉ＋ｊ≦２．５である。
一態様において、０．５≦ｉ＋ｊ≦２である。
一態様において、０．６≦ｉ＋ｊ≦３．５である。
一態様において、０．８≦ｉ＋ｊ≦２．５である。
一態様において、０．７≦ｉ＋ｊ≦２．５である。
一態様において、０．７≦ｉ＋ｊ≦２である。
一態様において、１＜ｉ＋ｊ≦２．５である。
一態様において、１＜ｉ＋ｊ≦２である。
一態様において、－Ｒ１及び－Ｒ'１は、エーテル結合を介して主骨格に結合している。
一態様において、－Ｒ１－が炭素原子をベースとした鎖である場合、エーテル結合を介して主骨格に直接に結合している。
一態様において、－Ｒ１－が炭素原子をベースとした鎖である場合、Ｏ、Ｎ及びＳから成る群より選択されるヘテロ原子を有していてもよい。
一態様において、－Ｒ１－は、アミノ酸残基ＡＡと共にアミド結合を形成し、且つエーテル官能基Ｆを介して主骨格に直接に結合している。
一態様において、－Ｒ１－は、アミノ酸残基ＡＡと共にアミド結合を形成し、且つカルバメート官能基Ｆを介して主骨格に直接に結合している。
一態様において、－Ｒ１－は、アミノ酸残基ＡＡと共にアミド結合を形成し、且つエステル官能基Ｆを介して主骨格に直接に結合している。
一態様において、－Ｒ１－及び－Ｒ'１は、式ＩＩ及びＩＩＩ
Figure 0007332139000001
 （式中、
о及びｐは、同一又は異なっていてもよく、１以上１２以下であり、及び
－Ｒ３、－Ｒ'３、－Ｒ４及び－Ｒ'４は、同一又は異なっていてもよく、水素原子、飽和の又は不飽和の、直鎖状の、枝分れ状の又は環状の、炭素原子数１乃至６のアルキル基、ベンジル基、炭素原子数７乃至１０のアルキルアリール基から成る群より選択され、並びに、Ｏ、Ｎ及びＳから成る群より選択されるヘテロ原子、又は、カルボン酸、アミン、アルコール及びチオール官能基から成る群より選択される官能基を有していてもよい。）
で表される基より選択される。
一態様において、－ＡＡ－への結合前の－Ｒ１－は、－ＣＨ２－ＣＯＯＨである。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、基－Ｒ'１が－ＣＨ２－ＣＯＯＨであることを特徴とする。
一態様において、－ＡＡ－への所望の結合前の－Ｒ１－は、クエン酸より誘導される。
一態様において、－ＡＡ－への所望の結合前の－Ｒ１－は、リンゴ酸より誘導される。
一態様において、－Ｒ'１は、クエン酸より誘導される。
一態様において、－Ｒ'１は、リンゴ酸より誘導される。
一態様において、－ＡＡ－への所望の結合前の－Ｒ１－は、下記基
Figure 0007332139000002
 （式中、＊は、Ｆに対する結合部位を表す。）
又は、それらの、Ｎａ＋及びＫ＋から成る群より選択されるアルカリ金属カチオンとの塩より、選択される。
一態様において、－Ｒ'１は、下記基
Figure 0007332139000003
 （式中、＊は、Ｆ'に対する結合部位を表す。）
又は、それらの、Ｎａ＋及びＫ＋から成る群より選択されるアルカリ金属カチオンとの塩より、選択される。
一態様において、基－［ＡＡ］－は、Ｌ、Ｄ又はラセミの絶対配置にある、フェニルアラニンの、及びそれらのアルカリ金属カチオン塩の、残基である。
一態様において、基－［ＡＡ］－は、Ｌ、Ｄ又はラセミの絶対配置にある、α－メチルフェニルアラニンの、及びそのアルカリ金属カチオン塩の、残基である。
一態様において、基－［ＡＡ］は、Ｌ、Ｄ又はラセミの絶対配置にある、３，４－ジヒドロキシフェニルアラニンの、及びそのアルカリ金属カチオン塩の、残基である。
一態様において、基－［ＡＡ］は、Ｌ、Ｄ又はラセミの絶対配置にある、チロシンの、及びそのアルカリ金属カチオン塩の、残基である。
一態様において、基－［ＡＡ］は、Ｌ、Ｄ又はラセミの絶対配置にある、α－メチルチロシンの、及びそのアルカリ金属カチオン塩の、残基である。
一態様において、基－［ＡＡ］は、Ｌ、Ｄ又はラセミの絶対配置にある、Ｏ－メチルチロシンの、及びそのアルカリ金属カチオン塩の、残基である。
一態様において、基－［ＡＡ］は、Ｌ、Ｄ又はラセミの絶対配置にある、α－フェニルグリシンの、及びそのアルカリ金属カチオン塩の、残基である。
一態様において、基－［ＡＡ］は、Ｌ、Ｄ又はラセミの絶対配置にある、４－ヒドロキシフェニルグリシンの、及びそのアルカリ金属カチオン塩の、残基である。
一態様において、基－［ＡＡ］は、Ｌ、Ｄ又はラセミの絶対配置にある、３，５－ジヒドロキシフェニルグリシンの、及びそのアルカリ金属カチオン塩の、残基である。
一態様において、基－［ＡＡ］は、ラセミ体混合物の形態にあるアミノ酸残基である。
一態様において、基－［ＡＡ］は、Ｄ絶対配置にある単離された異性体の形態にあるアミノ酸残基である。
一態様において、基－［ＡＡ］は、Ｌ絶対配置にある単離された異性体の形態にあるアミノ酸残基である。
一態様において、ｕは、１乃至５である。
一態様において、ｕは、３乃至５である。
一態様において、ｕ＝８である。
一態様において、ｕ＝７である。
一態様において、ｕ＝６である。
一態様において、ｕ＝５である。
一態様において、ｕ＝４である。
一態様において、ｕ＝３である。
一態様において、ｕ＝２である。
一態様において、ｕ＝１である。
一態様において、ヘキソースは、マンノース、グルコース、フルクトース、ソルボース、タガトース、プシコース、ガラクトース、アロース、アルトロース、タロース、イドース、グロース、フコース、フクロース、ラムノース、マンニトール、ソルビトール及びガラクチトール（ズルシトール）から成る群より選択される。
一態様において、グリコシド結合は、（１，４）又は（１，６）型である。
一態様において、置換されたアニオン性化合物は、（１，１）型のグリコシド結合を介して結合したヘキソースより選択される、ｕ＝２の離散数の同一の又は異なった糖単位から形成された糖主骨格から成るアニオン性化合物より選択される。
一態様において、置換されたアニオン性化合物は、（１，１）型のグリコシド結合を介して結合したヘキソースより選択される、ｕ＝２の離散数の異なった糖単位から形成された糖主骨格から成るアニオン性化合物より選択され、前記糖主骨格は、トレハロース及びスクロースから成る群より選択される。
一態様において、置換されたアニオン性化合物は、（１，２）型のグリコシド結合を介して結合したヘキソースより選択される、ｕ＝２の離散数の同一の又は異なった糖単位から形成された糖主骨格から成るアニオン性化合物より選択される。
一態様において、置換されたアニオン性化合物は、（１，２）型のグリコシド結合を介して結合したヘキソースより選択される、ｕ＝２の離散数の同一の又は異なった糖単位から形成された糖主骨格から成るアニオン性化合物より選択され、前記糖主骨格は、コージビオースである。
一態様において、置換されたアニオン性化合物は、（１，３）型のグリコシド結合を介して結合したヘキソースより選択される、ｕ＝２の離散数の同一の又は異なった糖単位から形成された糖主骨格から成るアニオン性化合物より選択される。
一態様において、置換されたアニオン性化合物は、（１，３）型のグリコシド結合を介して結合したヘキソースより選択される、ｕ＝２の離散数の同一の又は異なった糖単位から形成された糖主骨格から成るアニオン性化合物より選択され、前記糖主骨格は、ニゲリオース（ｎｉｇｅｒｉｏｓｅ）及びラミナリビオースから成る群より選択される。
一態様において、置換されたアニオン性化合物は、（１，４）型のグリコシド結合を介して結合したヘキソースより選択される、ｕ＝２の離散数の同一の又は異なった糖単位から形成された糖主骨格から成るアニオン性化合物より選択される。
一態様において、置換されたアニオン性化合物は、（１，４）型のグリコシド結合を介して結合したヘキソースより選択される、ｕ＝２の離散数の同一の又は異なった糖単位から形成された糖主骨格から成るアニオン性化合物より選択され、前記糖主骨格は、マルトース、ラクトース及びセロビオースから成る群より選択される。
一態様において、置換されたアニオン性化合物は、（１，６）型のグリコシド結合を介して結合したヘキソースより選択される、ｕ＝２の離散数の同一の又は異なった糖単位から形成された糖主骨格から成るアニオン性化合物より選択される。
一態様において、置換されたアニオン性化合物は、（１，６）型のグリコシド結合を介して結合したヘキソースより選択される、ｕ＝２の離散数の同一の又は異なった糖単位から形成された糖主骨格から成るアニオン性化合物より選択され、前記糖主骨格は、イソマルトース、メリビオース及びゲンチオビオースから成る群より選択される。
一態様において、置換されたアニオン性化合物は、（１，６）型のグリコシド結合を介して結合したヘキソースより選択される、ｕ＝２の離散数の同一の又は異なった糖単位から形成された糖主骨格から成るアニオン性化合物より選択され、前記糖主骨格は、イソマルトースである。
一態様において、置換されたアニオン性化合物は、１つが環状形態にあり且つその他が開環還元形態にある、ｕ＝２の離散数の糖単位から形成された糖主骨格から成るアニオン性化合物より選択される。
一態様において、置換されたアニオン性化合物は、１つが環状形態にあり且つその他が開環還元形態にある、ｕ＝２の離散数の糖単位から形成された糖主骨格から成るアニオン性化合物より選択され、前記糖主骨格は、マルチトール及びイソマルチトールから成るより選択される。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、糖主骨格が、３≦ｕ≦８の離散数の同一の又は異なった糖単位から形成されていることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、３≦ｕ≦８の離散数の糖単位から形成された糖主骨格が構成されている、同一の又は異なった糖単位の少なくとも１種が、同一の又は異なったグリコシド結合を介して結合したヘキソース単位から成る群より選択されることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、３≦ｕ≦８の離散数の糖単位から形成された糖主骨格が構成されている、同一の又は異なった糖単位が、ヘキソースより選択され、且つ少なくとも１種の（１，２）型のグリコシド結合を介して結合していることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、３≦ｕ≦８の離散数の糖単位から形成された糖主骨格が構成されている、同一の又は異なった糖単位が、ヘキソースより選択され、且つ少なくとも１種の（１，３）型のグリコシド結合を介して結合していることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、３≦ｕ≦８の離散数の糖単位から形成された糖主骨格が構成されている、同一の又は異なった糖単位が、ヘキソースより選択され、且つ少なくとも１種の（１，４）型のグリコシド結合を介して結合していることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、３≦ｕ≦８の離散数の糖単位から形成された糖主骨格が構成されている、同一の又は異なった糖単位が、ヘキソースより選択され、且つ少なくとも１種の（１，６）型のグリコシド結合を介して結合していることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、糖主骨格が、ｕ＝３の離散数の同一の又は異なった糖単位から形成されていることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、環状形態にあるヘキソースから成る群より選択される少なくとも１種の糖単位、及び開環形態にあるヘキソースから成る群より選択される少なくとも１種の糖単位を有することを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、３つの糖単位が同一であることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、３つの糖単位のうち２つが同一であることを特徴とする。
一態様において、本発明に従うアニオン性化合物は、同一の糖単位が、その２つが環状形態にあり且つ１つが開環還元形態にあるヘキソースより選択され、及び（１，４）型のグリコシド結合を介して結合していることを特徴とする。
一態様において、本発明に従うアニオン性化合物は、同一の糖単位が、その２つが環状形態にあり且つ１つが開環還元形態にあるヘキソースより選択され、及び（１，６）型のグリコシド結合を介して結合していることを特徴とする。
一態様において、本発明に従うアニオン性化合物は、同一の又は異なった糖単位がヘキソースより選択されることを、及び、中心のヘキソースが（１，２）型のグリコシド結合を介して且つ（１，４）型のグリコシド結合を介して結合していることを特徴とする。
一態様において、本発明に従うアニオン性化合物は、同一の又は異なった糖単位がヘキソースより選択されることを、及び、中心のヘキソースが（１，３）型のグリコシド結合を介して且つ（１，４）型のグリコシド結合を介して結合していることを特徴とする。
一態様において、本発明に従うアニオン性化合物は、同一の又は異なった糖単位がヘキソースより選択されることを、及び、中心のヘキソースが（１，２）型のグリコシド結合を介して且つ（１，６）型のグリコシド結合を介して結合していることを特徴とする。
一態様において、本発明に従うアニオン性化合物は、同一の又は異なった糖単位がヘキソースより選択されることを、及び、中心のヘキソースが（１，２）型のグリコシド結合を介して且つ（１，３）型のグリコシド結合を介して結合していることを特徴とする。
一態様において、本発明に従うアニオン性化合物は、同一の又は異なった糖単位がヘキソースより選択されることを、及び、中心のヘキソースが（１，４）型のグリコシド結合を介して且つ（１，６）型のグリコシド結合を介して結合していることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、糖主骨格がエルロース（ｅｒｌｏｓｅ）であることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、３つの同一の又は異なった糖単位が、マンノース及びグルコースから成る群より選択されるヘキソース単位であることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、糖主骨格がマルトトリオースであることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、糖主骨格がイソマルトトリオースであることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、糖主骨格が、ｕ＝４の離散数の同一の又は異なった糖単位から形成されていることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、４つの糖単位が同一であることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、４つの糖単位のうち３つが同一であることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、前記４つの糖単位が、マンノース及びグルコースから成る群より選択されることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、糖主骨格がマルトテトラオースであることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、前記同一の又は異なった糖単位がヘキソースより選択されることを、及び、末端のヘキソースが（１，２）型のグリコシド結合を介して結合していることを、及びその他が（１，６）型のグリコシド結合を介して一緒に結合していることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、前記同一の又は異なった糖単位がヘキソースより選択され、且つ（１，６）型のグリコシド結合を介して結合していることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、糖主骨格が、ｕ＝５の離散数の同一の又は異なった糖単位から形成されていることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、５つの糖単位が同一であることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、前記５つの糖単位が、マンノース及びグルコースから成る群より選択されることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、同一の又は異なった糖単位がヘキソースより選択され、且つ（１，４）型のグリコシド結合を介して結合していることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、糖主骨格がマルトペンタオースであることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、糖主骨格が、ｕ＝６の離散数の同一の又は異なった糖単位から形成されていることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、６つの糖単位が同一であることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、同一の又は異なった糖単位がヘキソースより選択され、且つ（１，４）型のグリコシド結合を介して結合していることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、６つの同一の又は異なった糖単位が、マンノース及びグルコースから成る群より選択されるヘキソース単位であることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、糖主骨格がマルトヘキサオースであることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、糖主骨格が、ｕ＝７の離散数の同一の又は異なった糖単位から形成されていることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、７つの糖単位が同一であることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、同一の又は異なった糖単位がヘキソースより選択され、且つ（１，４）型のグリコシド結合を介して結合していることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、前記７つの糖単位が、マンノース及びグルコースから成る群より選択されるヘキソース単位であることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、糖主骨格がマルトヘプタオースであることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、糖主骨格が、ｕ＝８の離散数の同一の又は異なった糖単位から形成されていることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、８つの糖単位が同一であることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、同一の又は異なった糖単位がヘキソースより選択され、且つ（１，４）型のグリコシド結合を介して結合していることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、前記８つの糖単位が、マンノース及びグルコースから成る群より選択されるヘキソース単位であることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、糖主骨格がマルトオクタオースであることを特徴とする。
本発明において、離散数の糖単位を有する置換されたアニオン性化合物は、天然化合物である。
本発明において、離散数の糖単位を有する置換されたアニオン性化合物は、合成化合物である。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、多糖類の酵素分解、それに続く精製によって得られることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、多糖類の化学分解、それに続く精製によって得られることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、低分子量の前駆体の共有結合によって、化学的に得られることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、糖主骨格がソホロースであることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、糖主骨格がスクロースであることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、糖主骨格がラクツロースであることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、糖主骨格がマルツロースであることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、糖主骨格がロイクロース（ｌｅｕｃｒｏｓｅ）であることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、糖主骨格がルチノースであることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、糖主骨格がイソマルツロースであることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、糖主骨格がフコシルラクトースであることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、糖主骨格がゲンチアノースであることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、糖主骨格がラフィノースであることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、糖主骨格がメレジトースであることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、糖主骨格がパノースであることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、糖主骨格がケストースであることを特徴とする。
一態様において、本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、糖主骨格がスタキオースであることを特徴とする。
一態様において、ポリアニオン性化合物は、亜鉛に対する親和性が亜鉛に対するインスリンの親和性よりも低く、且つ、解離定数ＫｄＣａ＝［ＮＰＰ化合物］ｒ［Ｃａ２＋］ｓ／［（ＮＰＰ化合物）ｒ－（Ｃａ２＋）ｓ］が１０－１．５以下である、非ポリマー状ポリアニオン（ＮＰＰ）化合物である。
種々のポリアニオン性化合物のカルシウムイオンに対する解離定数（Ｋｄ）は、カルシウムイオンに特異的な電極（メトラー－トレド（Ｍｅｔｔｌｅｒ－Ｔｏｌｅｄｏ））及び参照電極を用いた外部校正により、測定される。全ての測定は、ｐＨ７の１５０ｍＭ ＮａＣｌ中で行われる。遊離のカルシウムイオンの濃度のみが測定され；ポリアニオン性化合物に結合しているカルシウムイオンはいずれの電極電位をも誘発しない。
一態様において、ポリアニオン性化合物は、ポリカルボン酸、及びそのＮａ＋、Ｋ＋、Ｃａ２＋又はＭｇ２＋塩から成る群より選択される。
一態様において、ポリカルボン酸は、クエン酸及び酒石酸、並びにそれらのＮａ＋、Ｋ＋、Ｃａ２＋又はＭｇ２＋塩から成る群より選択される。
一態様において、ポリアニオン性化合物は、ポリリン酸、及びそのＮａ＋、Ｋ＋、Ｃａ２＋又はＭｇ２＋塩から成る群より選択される。
一態様において、ポリリン酸は、トリホスフェート、及びそのＮａ＋、Ｋ＋、Ｃａ２＋又はＭｇ２＋塩である。
一態様において、ポリアニオン性化合物は、クエン酸、及びそのＮａ＋、Ｋ＋、Ｃａ２＋又はＭｇ２＋塩である。
一態様において、ポリアニオン性化合物は、酒石酸、及びそのＮａ＋、Ｋ＋、Ｃａ２＋又はＭｇ２＋塩である。
一態様において、ポリアニオン性化合物は、三リン酸、及びそのＮａ＋、Ｋ＋、Ｃａ２＋又はＭｇ２＋塩である。
一態様において、ポリアニオン性化合物は、トレハロース、マルトース、ラクトース、スクロース、セロビオース、イソマルトース、マルチトール及びイソマルチトールから成る群より選択される二糖類化合物から得られる、離散数の糖単位から形成された糖主骨格から成る化合物である。
一態様において、離散数の糖単位から形成された糖主骨格から成るポリアニオン性化合物は、マルトトリオース、マルトテトラオース、マルトペンタオース、マルトヘキサオース、マルトヘプタオース、マルトオクタオース及びイソマルトトリオースから成る群より選択される、離散数の糖単位から形成された主骨格から成る化合物から得られる。
一態様において、離散数の糖単位から形成された糖主骨格から成るポリアニオン性化合物は、カルボキシメチルマルトトリオース、カルボキシメチルマルトテトラオース、カルボキシメチルマルトペンタオース、カルボキシメチルマルトヘキサオース、カルボキシメチルマルトヘプタオース、カルボキシメチルマルトオクタオース及びカルボキシメチルイソマルトトリオースから成る群より選択される。
一態様において、比（ポリアニオン性化合物が有する酸官能基の分子数／アニオン性化合物の分子数）は、３以上である。
一態様において、比（ポリアニオン性化合物が有する酸官能基の分子数／アニオン性化合物の分子数）は、４以上である。
一態様において、比（糖主骨格から成るポリアニオン性化合物が有する酸官能基の分子数／アニオン性化合物の分子数）は、５以上である。
一態様において、比（糖主骨格から成るポリアニオン性化合物が有する酸官能基の分子数／アニオン性化合物の分子数）は、８以上である。
一態様において、置換されたアニオン性化合物／インスリンのモル比は、０．６乃至７５である。
一態様において、前記モル比は、０．７乃至５０である。
一態様において、前記モル比は、１．４乃至３５である。
一態様において、前記モル比は、１．９乃至３０である。
一態様において、前記モル比は、２．３乃至３０である。
一態様において、置換されたアニオン性化合物／インスリンのモル比は、８である。
一態様において、置換されたアニオン性化合物／インスリンのモル比は、１２である。
一態様において、置換されたアニオン性化合物／インスリンのモル比は、１６である。
一態様において、置換されたアニオン性化合物／インスリンの質量比は、０．５乃至１０である。
一態様において、前記質量比は、０．６乃至７である。
一態様において、前記質量比は、１．２乃至５である。
一態様において、前記質量比は、１．６乃至４である。
一態様において、前記質量比は、２乃至４である。
一態様において、置換されたアニオン性化合物／インスリンの質量比は、２である。
一態様において、置換されたアニオン性化合物／インスリンの質量比は、３である。
一態様において、置換されたアニオン性化合物／インスリンの質量比は、４である。
一態様において、置換されたアニオン性化合物／インスリンの質量比は、６である。
一態様において、置換されたアニオン性化合物の濃度は、１．８乃至３６ｍｇ／ｍＬである。
一態様において、置換されたアニオン性化合物の濃度は、１．８乃至３６．５ｍｇ／ｍＬである。
一態様において、置換されたアニオン性化合物の濃度は、２．１乃至２５ｍｇ／ｍＬである。
一態様において、置換されたアニオン性化合物の濃度は、４．２乃至１８ｍｇ／ｍＬである。
一態様において、置換されたアニオン性化合物の濃度は、５．６乃至１５ｍｇ／ｍＬである。
一態様において、置換されたアニオン性化合物の濃度は、７乃至１５ｍｇ／ｍＬである。
一態様において、置換されたアニオン性化合物の濃度は、７．３ｍｇ／ｍＬである。
一態様において、置換されたアニオン性化合物の濃度は、１０．５ｍｇ／ｍＬである。
一態様において、置換されたアニオン性化合物の濃度は、１４．６ｍｇ／ｍＬである。
一態様において、置換されたアニオン性化合物の濃度は、２１．９ｍｇ／ｍＬである。
一態様において、ポリアニオン性化合物の濃度は、２乃至１５０ｍＭである。
一態様において、ポリアニオン性化合物の濃度は、２乃至１００ｍＭである。
一態様において、ポリアニオン性化合物の濃度は、２乃至７５ｍＭである。
一態様において、ポリアニオン性化合物の濃度は、２乃至５０ｍＭである。
一態様において、ポリアニオン性化合物の濃度は、２乃至３０ｍＭである。
一態様において、ポリアニオン性化合物の濃度は、２乃至２０ｍＭである。
一態様において、ポリアニオン性化合物の濃度は、２乃至１０ｍＭである。
一態様において、ポリアニオン性化合物の濃度は、５乃至１５０ｍＭである。
一態様において、ポリアニオン性化合物の濃度は、５乃至１００ｍＭである。
一態様において、ポリアニオン性化合物の濃度は、５乃至７５ｍＭである。
一態様において、ポリアニオン性化合物の濃度は、５乃至５０ｍＭである。
一態様において、ポリアニオン性化合物の濃度は、５乃至３０ｍＭである。
一態様において、ポリアニオン性化合物の濃度は、５乃至２０ｍＭである。
一態様において、ポリアニオン性化合物の濃度は、５乃至１０ｍＭである。
一態様において、ポリアニオン性化合物の濃度は、０．５乃至３０ｍｇ／ｍＬである。
一態様において、ポリアニオン性化合物の濃度は、０．５乃至２５ｍｇ／ｍＬである。
一態様において、ポリアニオン性化合物の濃度は、０．５乃至１０ｍｇ／ｍＬである。
一態様において、ポリアニオン性化合物の濃度は、０．５乃至８ｍｇ／ｍＬである。
一態様において、ポリアニオン性化合物の濃度は、１乃至３０ｍｇ／ｍＬである。
一態様において、ポリアニオン性化合物の濃度は、１．５乃至２５ｍｇ／ｍＬである。
一態様において、ポリアニオン性化合物の濃度は、２乃至２５ｍｇ／ｍＬである。
一態様において、ポリアニオン性化合物の濃度は、２乃至１０ｍｇ／ｍＬである。
一態様において、ポリアニオン性化合物の濃度は、２乃至８ｍｇ／ｍＬである。
一態様において、置換されたアニオン性化合物は、ナトリウムフェニルアラニネートにより変性されたナトリウムマルトトリオースメチルカルボキシレート（ｕ＝３、ｉ＝０．６５、ｊ＝１．０）である。
一態様において、置換されたアニオン性化合物は、ナトリウムフェニルアラニネートにより変性されたナトリウムマルトトリオースメチルカルボキシレート（ｕ＝３、ｉ＝１．０５、ｊ＝０．６５）である。
一態様において、置換されたアニオン性化合物は、ナトリウムフェニルアラニネートにより変性されたナトリウムマルトトリオースメチルカルボキシレート（ｕ＝３、ｉ＝０．４６、ｊ＝１．２）である。
一態様において、置換されたアニオン性化合物は、ナトリウムフェニルアラニネートにより変性されたナトリウムマルトトリオースメチルカルボキシレート（ｕ＝３、ｉ＝０．３５、ｊ＝０．６５）である。
一態様において、ポリアニオン性化合物は、ナトリウムマルトトリオースメチルカルボキシレートである。
一態様において、ポリアニオン性化合物は、クエン酸ナトリウムである。
一態様において、ポリアニオン性化合物は、ナトリウム塩の若しくはカリウム塩の形態にある酸形態又は塩基形態にある三リン酸である。
一態様において、ポリアニオン性化合物は、ナトリウム塩の若しくはカリウム塩の形態にある酸形態又は塩基形態にある酒石酸塩である。
本発明はまた、本発明に従う組成物を含有するインスリン医薬製剤であって、前記インスリンがヘキサマー形態にある、製剤にも関する。
一態様において、本発明は、インスリン濃度が２４０乃至３０００μＭ（４０乃至５００ＩＵ／ｍＬ）であることを特徴とする、医薬製剤に関する。
一態様において、本発明は、インスリン濃度が６００乃至３０００μＭ（１００乃至５００ＩＵ／ｍＬ）であることを特徴とする、医薬製剤に関する。
一態様において、本発明は、インスリン濃度が６００乃至２４００μＭ（１００乃至４００ＩＵ／ｍＬ）であることを特徴とする、医薬製剤に関する。
一態様において、本発明は、インスリン濃度が６００乃至１８００μＭ（１００乃至３００ＩＵ／ｍＬ）であることを特徴とする、医薬製剤に関する。
一態様において、本発明は、インスリン濃度が６００乃至１２００μＭ（１００乃至２００ＩＵ／ｍＬ）であることを特徴とする、医薬製剤に関する。
一態様において、本発明は、インスリン濃度が６００μＭ（１００ＩＵ／ｍＬ）であることを特徴とする、医薬製剤に関する。
一態様において、本発明は、インスリン濃度が１２００μＭ（２００ＩＵ／ｍＬ）であることを特徴とする、医薬製剤に関する。
一態様において、本発明は、インスリン濃度が１８００μＭ（３００ＩＵ／ｍＬ）であることを特徴とする、医薬製剤に関する。
一態様において、本発明は、インスリン濃度が２４００μＭ（４００ＩＵ／ｍＬ）であることを特徴とする、医薬製剤に関する。
一態様において、本発明は、インスリン濃度が３０００μＭ（５００ＩＵ／ｍＬ）であることを特徴とする、医薬製剤に関する。
本発明は、少なくとも１種の置換されたアニオン性化合物であって、前記化合物は、同一の又は異なったグリコシド結合を介して結合した、１乃至８の離散数ｕ（１≦ｕ≦８）の同一又は異なった糖単位から形成された糖主骨格から成り、前記糖単位は、環状形態にあるか又は開環還元形態にあるヘキソースから成る群より選択され、前記化合物は、部分的に置換されたカルボキシル官能基を有し、未置換のカルボキシル官能基がヒトインスリン医薬製剤を調製できるように塩化されている、前記置換されたアニオン性化合物と、ポリアニオン性化合物との併用であって、置換されたアニオン性化合物及び任意のアニオン性化合物が存在しない製剤と比較した場合に、投与後に血液中へのインスリンの通過を促進し、そしてより迅速に血糖値を低下させることを可能にする、併用に関する。
一態様において、本発明は、少なくとも１種の置換されたアニオン性化合物であって、前記化合物は、部分的に置換されたカルボキシル官能基を有し、未置換のカルボキシル官能基がヒトインスリン医薬製剤を調製できるように塩化されている、前記置換されたアニオン性化合物と、ポリアニオン性化合物との併用であって、置換されたアニオン性化合物及び任意のアニオン性化合物が存在しない製剤と比較した場合に、投与後に血液中へのインスリンの通過を促進し、そしてより迅速に血糖値を低下させることを可能にする、併用に関する。
一態様において、本発明は、少なくとも１種の置換されたアニオン性化合物であって、前記化合物は、部分的に置換されたカルボキシル官能基を有し、未置換のカルボキシル官能基がインスリンアナログ製剤を調製できるように塩化されている、前記置換されたアニオン性化合物と、ポリアニオン性化合物との併用であって、置換されたアニオン性化合物及び任意のアニオン性化合物が存在しない製剤と比較した場合に、投与後に血液中へのインスリンの通過を促進し、そしてより迅速に血糖値を低下させることを可能にする、併用に関する。
一態様において、インスリンは、ヒトインスリンである。
用語"ヒトインスリン"とは、対立遺伝子変異及びホモログを包含する、ペプチド配列がヒトインスリンの配列である、合成により又は組換えにより得られたインスリンを意味する。
一態様において、インスリンは、欧州薬局方及び米国薬局方に記載されているような、組換え体ヒトインスリンである。
一態様において、インスリンは、インスリンアナログである。
用語"インスリンアナログ"とは、ヒトインスリンの主配列と比較して少なくとも１つの変性基を有する、組換え体インスリンを意味する。
一態様において、インスリンアナログは、インスリンリスプロ（ヒューマログ（登録商標））、インスリンアスパルト（ノボログ（登録商標）、ノボラピッド（登録商標））及びインスリングルリジン（アピドラ（登録商標））から成る群より選択される。
一態様において、インスリンアナログは、インスリンリスプロ（ヒューマログ（登録商標））である。
一態様において、インスリンアナログは、インスリンアスパルト（ノボログ（登録商標）、ノボラピッド（登録商標））である。
一態様において、インスリンアナログは、インスリングルリジン（アピドラ（登録商標））である。
一態様において、本使用は、置換されたアニオン性化合物が、同一の又は異なったグリコシド結合を介して結合した、１乃至８の離散数ｕ（１≦ｕ≦８）の同一又は異なった糖単位から形成された主骨格から成る、単離形態にあるか又は混合物としての置換されたアニオン性化合物より選択され、
前記糖単位は、環状形態にあるか又は開環還元形態にある、ヘキソースから成る群より選択され、前記糖単位は、
ａ）一般式Ｉ：

－［Ｒ１］ａ－［ＡＡ］ｍ 式Ｉ

で表される少なくとも１種の置換基であって前記置換基は、
少なくとも２つの置換基が存在する場合には、同一又は異なっており、
基－［ＡＡ］は、アミノ酸残基を表し、
基－Ｒ１－は単結合であり、その場合にはａ＝０であり、且つアミノ酸残基－［ＡＡ］は官能基Ｇを介して前記主骨格に直接に結合しているか、又は
２乃至１５個の炭素原子をベースとした鎖であり、その場合にはａ＝１であり、置換されていても、及び／又は、前記アミノ酸との反応前に、Ｏ、Ｎ及びＳより選択される少なくとも１種のヘテロ原子及び少なくとも１種の酸官能基を有していてもよく、前記鎖は、前記アミノ酸残基－［ＡＡ］と共にアミド官能基を形成し、及び、前記主骨格が有するヒドロキシル官能基と前記基－Ｒ１－の前駆体が有する官能基又は置換基との間の反応から生じる官能基Ｆによって前記主骨格に結合しており、
Ｆは、エーテル官能基、エステル官能基及びカルバメート官能基より選択され、
Ｇは、カルバメート官能基であり、
ｍは、１又は２であり、
前記糖単位の置換度ｊは、－［Ｒ１］ａ－［ＡＡ］ｍについて、厳密に、０よりも大きく且つ６以下、即ち０＜ｊ≦６である、置換基により置換されており、及び
ｂ）１つ以上の置換基－Ｒ'１であって、
前記置換基は、置換されていても、及び／又はＯ、Ｎ及びＳより選択される少なくとも１つ以上のヘテロ原子及びアルカリ金属カチオン塩の形態にある少なくとも１つの酸官能基を有していてもよい、２乃至１５個の炭素原子をベースとした鎖であり、前記鎖は、前記主骨格が有するヒドロキシル官能基と前記置換基－Ｒ'１の前駆体が有する官能基又は置換基との間の反応から生じた官能基Ｆ'を介して前記主骨格に結合しており、
Ｆ'は、エーテル官能基、エステル官能基又はカルバメート官能基であり、
前記糖単位の置換度ｉは、－Ｒ'１について、０乃至６－ｊ、即ち０≦ｉ≦６－ｊであり、及び
Ｆ及びＦ'は、同一であるか又は異なっており、
Ｆ及びＧは、同一であるか又は異なっており、
ｉ＋ｊ≦６であり、
－Ｒ'１は、－Ｒ１－と同一であるか又は異なっており、
置換基－Ｒ'１が有する遊離の塩化可能な酸官能基は、アルカリ金属カチオン塩の形態にあり、
同一又は異なっていてもよい前記グリコシド結合は、α又はβ配置にある、（１，１）、（１，２）、（１，３）、（１，４）又は（１，６）型のグリコシド結合から成る群より選択される、置換基により置換されていてもよいことを特徴とする。
一態様において、本使用は、単離形態にあるか又は混合物としての置換されたアニオン性化合物は、同一の又は異なったグリコシド結合を介して結合した、１乃至８の離散数ｕ（１≦ｕ≦８）の同一又は異なった糖単位から形成された糖主骨格から成る、置換されたアニオン性化合物より選択され、
前記糖単位は、環状形態にあるか又は開環還元形態にある、ヘキソースから成る群より選択され、前記糖単位は、
ａ）一般式Ｉ：

－［Ｒ１］ａ－［ＡＡ］ｍ 式Ｉ

で表される少なくとも１種の置換基によりランダムに置換されており、前記置換基は、
少なくとも２つの置換基が存在する場合には、同一又は異なっており、
基－［ＡＡ］－は、アミノ酸残基を表し、前記アミノ酸は、フェニルアラニン、α－メチルフェニルアラニン、３，４－ジヒドロキシフェニルアラニン、チロシン、α－メチルチロシン、Ｏ－メチルチロシン、α－フェニルグリシン、４－ヒドロキシフェニルグリシン及び３，５－ジヒドロキシフェニルグリシン並びにそれらのアルカリ金属カチオン塩から成る群より選択され、前記誘導体は、Ｌ絶対配置又はＤ絶対配置であり、－［ＡＡ］は、リンカーアーム－Ｒ１－を介して分子の主骨格に結合しているか、又は、官能基Ｇを介して前記主骨格に直接に結合しており、
基－Ｒ１－は、単結合であり、その場合にはａ＝０であり、又は
２乃至１５個の炭素原子をベースとした鎖であり、その場合にはａ＝１であり、置換されていてもよく、及び／又は、前記アミノ酸との反応前に、Ｏ、Ｎ及びＳより選択される少なくとも１種のヘテロ原子及び少なくとも１種の酸官能基を有していてもよく、前記鎖は、前記アミノ酸残基－［ＡＡ］と共にアミド官能基を形成し、及び、前記主骨格が有するヒドロキシル官能基とＲ１の前駆体が有する官能基又は置換基との間の反応から生じる官能基Ｆを介して前記糖主骨格に結合しており、
Ｆは、エーテル官能基、エステル官能基及びカルバメート官能基より選択され、
Ｇは、カルバメート官能基であり、
ｍは、１又は２であり、
置換度ｊは、－［Ｒ１］ａ－［ＡＡ］ｍについて、厳密に、０よりも大きく且つ６以下、即ち０＜ｊ≦６である、置換基により置換されており、及び
１つ以上の置換基－Ｒ'１であって、
前記置換基は、置換されていても、及び／又は少なくとも１つ以上のヘテロ原子（Ｏ、Ｎ及びＳより選択される）及びアルカリ金属カチオン塩の形態にある少なくとも１つの酸官能基を有していてもよい、２乃至１５個の炭素原子をベースとした鎖であり、前記鎖は、前記主骨格が有するヒドロキシル官能基と－Ｒ'１の前駆体が有する官能基との間の反応から生じた官能基Ｆ'を介して前記主骨格に結合しており、
Ｆ'は、エーテル官能基、エステル官能基又はカルバメート官能基であり、
前記置換度ｉは、－Ｒ'１について、０乃至６－ｊ、即ち０≦ｉ≦６－ｊであり、及び
－Ｒ'１は、－Ｒ１－と同一であるか又は異なっており、
Ｆ及びＦ'は、同一であるか又は異なっており、
Ｆ'及びＧは、同一であるか又は異なっており、
遊離の塩化可能な酸官能基は、アルカリ金属カチオン塩の形態にある、置換基により無作為に置換されていてもよく、
ｂ）同一又は異なっていてもよい前記グリコシド結合は、α又はβ配置にある、（１，１）、（１，２）、（１，３）、（１，４）又は（１，６）型のグリコシド結合から成る群より選択され、
ｃ）ｉ＋ｊ≦６であることを特徴とする。
一態様において、ｍは、１である。
一態様において、同一又は異なっていてもよい－Ｒ１及び－Ｒ'１は、２乃至８個の炭素原子をベースとした鎖である。
一態様において、同一又は異なっていてもよい－Ｒ１及び－Ｒ'１は、１乃至４個の炭素原子をベースとした鎖である。
一態様において、同一又は異なっていてもよい－Ｒ１及び－Ｒ'１は、１又は２個の炭素原子をベースとした鎖である。
インスリンの作用の遅延がインスリン濃度に依存することは、当業者に既知である。１００ＩＵ／ｍＬの製剤についての作用評価の遅延のみが立証されている。
６００μＭ（１００ＩＵ／ｍＬ）の濃度の市販の"正規の"ヒトインスリン製剤は、ヒトにおいて、５０乃至９０分の作用遅延、及び３６０乃至４２０分の作用限度を有する。血液中の最大のインスリン濃度に達するまでの時間は、ヒトにおいて９０乃至１８０分である。
６００μＭ（１００ＩＵ／ｍＬ）の濃度の市販の速効型インスリンアナログ製剤は、ヒトにおいて、３０乃至６０分間の作用遅延、及び２４０乃至３００分の作用限度を有する。血液中の最大のインスリン濃度に達するまでの時間は、ヒトにおいて５０乃至９０分である。
本発明はまた、２４０乃至３０００μＭ（４０乃至５００ＩＵ／ｍＬ）のインスリン濃度を有するヒトインスリン製剤の調製方法であって、置換されたアニオン性化合物及びポリアニオン性化合物が存在していない同様のインスリン濃度の参照製剤よりも、ヒトにおける作用遅延がより小さい製剤の調製方法であって、（１）少なくとも１種の置換されたアニオン性化合物であって、前記化合物は部分的に置換されたカルボキシル官能基を有し、未置換のカルボキシル官能基は塩化可能である、化合物を、前記製剤に添加する段階、及び（２）少なくとも１種のポリアニオン性化合物を前記製剤に添加する段階、から成ることを特徴とする、前記方法にも関する。
一態様において、インスリンは、ヘキサマー形態にある。
本発明はまた、６００乃至１２００μＭ（１００乃至２００ＩＵ／ｍＬ）のインスリン濃度を有するヒトインスリン製剤の調製方法であって、置換されたアニオン性化合物及びポリアニオン性化合物が存在していない同様のインスリン濃度の参照製剤よりも、ヒトにおける作用遅延がより小さい製剤の調製方法であって、（１）少なくとも１種の置換されたアニオン性化合物であって、前記化合物は部分的に置換されたカルボキシル官能基を有し、未置換のカルボキシル官能基は塩化可能である、化合物を、前記製剤に添加する段階、及び（２）少なくとも１種のポリアニオン性化合物を前記製剤に添加する段階、から成ることを特徴とする、前記方法にも関する。
一態様において、前記インスリンは、ヘキサマー形態にある。
本発明はまた、ヒトにおける作用遅延が６０分未満である、６００μＭ（１００ＩＵ／ｍＬ）のインスリン濃度を有するヒトインスリン製剤の調製方法であって、（１）少なくとも１種の置換されたアニオン性化合物であって、前記化合物は部分的に置換されたカルボキシル官能基を有し、未置換のカルボキシル官能基は塩化可能である、化合物を、前記製剤に添加する段階、及び（２）少なくとも１種のポリアニオン性化合物を前記製剤に添加する段階、から成ることを特徴とする、前記方法にも関する。
一態様において、前記インスリンは、ヘキサマー形態にある。
本発明はまた、１２００μＭ（２００ＩＵ／ｍＬ）のインスリン濃度を有するヒトインスリン製剤の調製方法であって、同様の濃度（２００ＩＵ／ｍＬ）の且つ置換されたアニオン性化合物及びポリアニオン性化合物が存在していないヒトインスリン製剤よりも、ヒトにおける作用遅延が少なくとも１０％小さい製剤の調製方法であって、（１）少なくとも１種の置換されたアニオン性化合物であって、前記化合物は部分的に置換されたカルボキシル官能基を有し、未置換のカルボキシル官能基は塩化可能である、化合物を、前記製剤に添加する段階、及び（２）少なくとも１種のポリアニオン性化合物を前記製剤に添加する段階、から成ることを特徴とする、前記方法にも関する。
一態様において、前記インスリンは、ヘキサマー形態にある。
本発明はまた、１８００μＭ（３００ＩＵ／ｍＬ）のインスリン濃度を有するヒトインスリン製剤の調製方法であって、同様の濃度（３００ＩＵ／ｍＬ）の且つ置換されたアニオン性化合物及びポリアニオン性化合物が存在していないヒトインスリン製剤よりも、ヒトにおける作用遅延が少なくとも１０％小さい製剤の調製方法であって、（１）少なくとも１種の置換されたアニオン性化合物であって、前記化合物は部分的に置換されたカルボキシル官能基を有し、未置換のカルボキシル官能基は塩化可能である、化合物を、前記製剤に添加する段階、及び（２）少なくとも１種のポリアニオン性化合物を前記製剤に添加する段階、から成ることを特徴とする、前記方法にも関する。
一態様において、前記インスリンは、ヘキサマー形態にある。
本発明はまた、２４００μＭ（４００ＩＵ／ｍＬ）のインスリン濃度を有するヒトインスリン製剤の調製方法であって、同様の濃度（４００ＩＵ／ｍＬ）の且つ置換されたアニオン性化合物及びポリアニオン性化合物が存在していないヒトインスリン製剤よりも、ヒトにおける作用遅延が少なくとも１０％小さい製剤の調製方法であって、（１）少なくとも１種の置換されたアニオン性化合物であって、前記化合物は部分的に置換されたカルボキシル官能基を有し、未置換のカルボキシル官能基は塩化可能である、化合物を、前記製剤に添加する段階、及び（２）少なくとも１種のポリアニオン性化合物を前記製剤に添加する段階、から成ることを特徴とする、前記方法にも関する。
一態様において、前記インスリンは、ヘキサマー形態にある。
本発明はまた、３０００μＭ（５００ＩＵ／ｍＬ）のインスリン濃度を有するヒトインスリン製剤の調製方法であって、同様の濃度（５００ＩＵ／ｍＬ）の且つ置換されたアニオン性化合物及びポリアニオン性化合物が存在していないヒトインスリン製剤よりも、ヒトにおける作用遅延が少なくとも１０％小さい製剤の調製方法であって、（１）少なくとも１種の置換されたアニオン性化合物であって、前記化合物は部分的に置換されたカルボキシル官能基を有し、未置換のカルボキシル官能基は塩化可能である、化合物を、前記製剤に添加する段階、及び（２）少なくとも１種のポリアニオン性化合物を前記製剤に添加する段階、から成ることを特徴とする、前記方法にも関する。
一態様において、前記インスリンは、ヘキサマー形態にある。
本発明はまた、（１）少なくとも１種の置換されたアニオン性化合物であって、前記化合物は部分的に置換されたカルボキシル官能基を有し、未置換のカルボキシル官能基は塩化可能である、化合物を、前記製剤に添加する段階、及び（２）少なくとも１種のポリアニオン性化合物を前記製剤に添加する段階、から成ることを特徴とする、速効型ヒトインスリン製剤の調製方法を構成する。
一態様において、前記インスリンは、ヘキサマー形態にある。
本発明はまた、ヒトにおける作用遅延が６０分未満の、好ましくは４５分未満の、及びより好ましくは３０分未満の、６００μＭ（１００ＩＵ／ｍＬ）のインスリン濃度を有するヒトインスリン製剤の調製方法であって、（１）少なくとも１種の置換されたアニオン性化合物であって、前記化合物は部分的に置換されたカルボキシル官能基を有し、未置換のカルボキシル官能基は塩化可能である、化合物を、前記製剤に添加する段階、及び（２）少なくとも１種のポリアニオン性化合物を前記製剤に添加する段階、から成ることを特徴とする、前記方法にも関する。
一態様において、前記インスリンは、ヘキサマー形態にある。
本発明はまた、２４０乃至３０００μＭ（４０乃至５００ＩＵ／ｍＬ）のインスリン濃度を有するインスリンアナログ製剤の調製方法であって、置換されたアニオン性化合物及びポリアニオン性化合物が存在していない同様のインスリン濃度の参照製剤よりも、ヒトにおける作用遅延が小さい製剤の調製方法であって、（１）少なくとも１種の置換されたアニオン性化合物であって、前記化合物は部分的に置換されたカルボキシル官能基を有し、未置換のカルボキシル官能基は塩化可能である、化合物を、前記製剤に添加する段階、及び（２）少なくとも１種のポリアニオン性化合物を前記製剤に添加する段階、から成ることを特徴とする、前記方法にも関する。
一態様において、前記インスリンは、ヘキサマー形態にある。
本発明はまた、６００乃至１２００μＭ（１００乃至２００ＩＵ／ｍＬ）のインスリン濃度を有するインスリンアナログ製剤の調製方法であって、置換されたアニオン性化合物及びポリアニオン性化合物が存在していない同様のインスリンアナログ濃度の参照製剤よりも、ヒトにおける作用遅延が小さい製剤の調製方法であって、（１）少なくとも１種の置換されたアニオン性化合物であって、前記化合物は部分的に置換されたカルボキシル官能基を有し、未置換のカルボキシル官能基は塩化可能である、化合物を、前記製剤に添加する段階、及び（２）少なくとも１種のポリアニオン性化合物を前記製剤に添加する段階、から成ることを特徴とする、前記方法にも関する。
一態様において、前記インスリンは、ヘキサマー形態にある。
本発明はまた、ヒトにおける作用遅延が３０分未満である、６００μｍｏｌ／Ｌ（１００ＩＵ／ｍＬ）のインスリン濃度を有するインスリンアナログ製剤の調製方法であって、（１）少なくとも１種の置換されたアニオン性化合物であって、前記化合物は部分的に置換されたカルボキシル官能基を有し、未置換のカルボキシル官能基は塩化可能である、化合物を、前記製剤に添加する段階、及び（２）少なくとも１種のポリアニオン性化合物を前記製剤に添加する段階、から成ることを特徴とする、前記方法にも関する。
一態様において、前記インスリンは、ヘキサマー形態にある。
本発明はまた、ヒトにおける作用遅延が、置換されたアニオン性化合物及びポリアニオン性化合物が存在していないインスリンアナログ製剤よりも少なくとも１０％小さい、１２００μＭ（２００ＩＵ／ｍＬ）のインスリン濃度を有するインスリンアナログ製剤の調製方法であって、（１）少なくとも１種の置換されたアニオン性化合物であって、前記化合物は部分的に置換されたカルボキシル官能基を有し、未置換のカルボキシル官能基は塩化可能である、化合物を、前記製剤に添加する段階、及び（２）少なくとも１種のポリアニオン性化合物を前記製剤に添加する段階、から成ることを特徴とする、前記方法にも関する。
一態様において、前記インスリンは、ヘキサマー形態にある。
本発明はまた、ヒトにおける作用遅延が、置換されたアニオン性化合物及びポリアニオン性化合物が存在していないインスリンアナログ製剤よりも少なくとも１０％小さい、１８００μＭ（３００ＩＵ／ｍＬ）のインスリン濃度を有するインスリンアナログ製剤の調製方法であって、（１）少なくとも１種の置換されたアニオン性化合物であって、前記化合物は部分的に置換されたカルボキシル官能基を有し、未置換のカルボキシル官能基は塩化可能である、化合物を、前記製剤に添加する段階、及び（２）少なくとも１種のポリアニオン性化合物を前記製剤に添加する段階、から成ることを特徴とする、前記方法にも関する。
一態様において、前記インスリンは、ヘキサマー形態にある。
本発明はまた、ヒトにおける作用遅延が、置換されたアニオン性化合物及びポリアニオン性化合物が存在していないインスリンアナログ製剤よりも少なくとも１０％小さい、２４００μＭ（４００ＩＵ／ｍＬ）のインスリン濃度を有するインスリンアナログ製剤の調製方法であって、（１）少なくとも１種の置換されたアニオン性化合物であって、前記化合物は部分的に置換されたカルボキシル官能基を有し、未置換のカルボキシル官能基は塩化可能である、化合物を、前記製剤に添加する段階、及び（２）少なくとも１種のポリアニオン性化合物を前記製剤に添加する段階、から成ることを特徴とする、前記方法にも関する。
一態様において、前記インスリンは、ヘキサマー形態にある。
本発明はまた、ヒトにおける作用遅延が、置換されたアニオン性化合物及びポリアニオン性化合物が存在していないインスリンアナログ製剤よりも少なくとも１０％小さい、３０００μＭ（５００ＩＵ／ｍＬ）のインスリン濃度を有するインスリンアナログ製剤の調製方法であって、（１）少なくとも１種の置換されたアニオン性化合物であって、前記化合物は部分的に置換されたカルボキシル官能基を有し、未置換のカルボキシル官能基は塩化可能である、化合物を、前記製剤に添加する段階、及び（２）少なくとも１種のポリアニオン性化合物を前記製剤に添加する段階、から成ることを特徴とする、前記方法にも関する。
一態様において、前記インスリンは、ヘキサマー形態にある。
本発明は、超速効型インスリンアナログ製剤の調製であって、少なくとも１種の置換されたアニオン性化合物であって、前記化合物は部分的に置換されたカルボキシル官能基を有し、未置換のカルボキシル官能基は塩化可能である、化合物を、前記製剤に添加する段階から成ることを特徴とする、前記調製に存する。
一態様において、本調製は、少なくとも１種のポリアニオン性化合物を前記製剤に添加することを含む。
一態様において、前記インスリンは、ヘキサマー形態にある。
一態様において、前記インスリンアナログは、 インスリンリスプロ（ヒューマログ（登録商標））、インスリンアスパルト（ノボログ（登録商標）、ノボラピッド（登録商標））及びインスリングルリジン（アピドラ（登録商標））から成る群より選択される。
一態様において、前記インスリンアナログは、インスリンリスプロ（ヒューマログ（登録商標））である。
一態様において、前記インスリンアナログは、インスリンアスパルト（ノボログ（登録商標）、ノボラピッド（登録商標））である。
一態様において、前記インスリンアナログは、インスリングルリジン（アピドラ（登録商標））である。
一態様において、前記インスリンは、欧州薬局方及び米国薬局方に記載されているような、組換え体ヒトインスリンである。
一態様において、前記インスリンは、インスリンリスプロ（ヒューマログ（登録商標））、インスリンアスパルト（ノボログ（登録商標）、ノボラピッド（登録商標））及びインスリングルリジン（アピドラ（登録商標））から成る群より選択されるインスリンアナログである。
本組成物は、混合物としての、ヒトインスリンの又はインスリンアナログの水溶液及び置換されたアニオン性化合物の水溶液を、ポリアニオン性化合物と簡単に混合することにより、さらに調製され得る。
一態様において、本組成物は、ヒトインスリンの又はインスリンアナログの水溶液、置換されたアニオン性化合物の水溶液、及び溶液又は凍結乾燥物形態にあるポリアニオン性化合物を簡単に混合することにより、調製され得る。
一態様において、本組成物は、ヒトインスリンの又はインスリンアナログの水溶液、凍結乾燥物形態にある置換されたアニオン性化合物、及び溶液又は凍結乾燥物形態にあるポリアニオン性化合物を簡単に混合することにより、調製され得る。
好ましくは、本組成物は、注射可能な溶液の形態にある。
一態様において、ヒトインスリン又はインスリンアナログの濃度は、２４０乃至３０００μＭ（４０乃至５００ＩＵ／ｍＬ）である。
一態様において、ヒトインスリン又はインスリンアナログの濃度は、６００乃至３０００μＭ（１００乃至５００ＩＵ／ｍＬ）である。
一態様において、ヒトインスリン又はインスリンアナログの濃度は、６００乃至２４００μＭ（１００乃至４００ＩＵ／ｍＬ）である。
一態様において、ヒトインスリン又はインスリンアナログの濃度は、６００乃至１８００μＭ（１００乃至３００ＩＵ／ｍＬ）である。
一態様において、ヒトインスリン又はインスリンアナログの濃度は、６００乃至１２００μＭ（１００乃至２００ＩＵ／ｍＬ）である。
一態様において、ヒトインスリン又はインスリンアナログの濃度は、６００μＭ（１００ＩＵ／ｍＬ）である。
一態様において、ヒトインスリン又はインスリンアナログの濃度は、１２００μＭ（２００ＩＵ／ｍＬ）である。
一態様において、６００μＭ（１００ＩＵ／ｍＬ）のヒトインスリン又はインスリンアナログの濃度は、特に小児に適用する為に、簡単な希釈により低下され得る。
一態様において、ヒトインスリン又はインスリンアナログの濃度は、１８００μＭ（３００ＩＵ／ｍＬ）である。
一態様において、ヒトインスリン又はインスリンアナログの濃度は、２４００μＭ（４００ＩＵ／ｍＬ）である。
一態様において、ヒトインスリン又はインスリンアナログの濃度は、３０００μＭ（５００ＩＵ／ｍＬ）である。
本発明はまた、乾燥することにより、及び／又は凍結乾燥することにより得られることを特徴とする、本発明に従う医薬製剤にも関する。
一態様において、本発明に従う組成物はまた、０乃至５００μＭの濃度の亜鉛塩の添加を含む。
一態様において、本発明に従う組成物はまた、０乃至３００μＭの濃度の亜鉛塩の添加を含む。
一態様において、本発明に従う組成物はまた、０乃至２００μＭの濃度の亜鉛塩の添加を含む。
一態様において、本発明に従う組成物は、０乃至１００ｍＭ、好ましくは０乃至５０ｍＭ又は１５乃至５０ｍＭの濃度の緩衝液を含有する。
一態様において、前記緩衝液は、トリスである。
一態様において、本発明に従う組成物は、保存剤もまた含有する。
一態様において、前記保存剤は、単独又は混合物としての、ｍ－クレゾール及びフェノールから成る群より選択される。
一態様において、前記保存剤の濃度は、１０乃至５０ｍＭである。
一態様において、前記保存剤の濃度は、１０乃至４０ｍＭである。
本発明に従う組成物はまた、等張化剤、例えば、グリセロール、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、マンニトール及びグリシンのような添加剤を含有し得る。
本発明に従う組成物はまた、薬局方に従う添加剤、例えば界面活性剤、例えばポリソルベートを含有し得る。
本発明に従う組成物はまた、実施濃度で使用されるインスリンと適合性がある、薬局方に従ういかなる賦形剤も含有し得る。
局所的放出及び全身的放出の場合、想定される投与の様式は、静脈内、皮下、皮内又は筋肉内である。
経皮、口腔、経鼻、膣内、眼球、口腔又は肺投与の経路がまた想定される。
本発明はまた、インプラント可能な又は移送可能なインスリンポンプを意図した、１００ＩＵ／ｍＬの濃度にあるヒトインスリン又はインスリンアナログ溶液の製剤のための、本発明に従う組成物の使用にも関する。
本発明はまた、インプラント可能な又は移送可能なインスリンポンプを意図した、２００ＩＵ／ｍＬの濃度にあるヒトインスリン又はインスリンアナログ溶液の製剤のための、本発明に従う組成物の使用にも関する。
本発明はまた、置換されたアニオン性化合物であって、同一の又は異なったグリコシド結合を介して結合した、１乃至８の離散数ｕ（１≦ｕ≦８）の同一又は異なった糖単位から形成された糖主骨格から成る、単離形態にあるか又は混合物としての置換されたアニオン性化合物より選択され、
前記糖単位は、環状形態にあるか又は開環還元形態にある、ヘキソースから成る群より選択され、前記糖単位は、
ａ）一般式Ｉ：

－［Ｒ１］ａ－［ＡＡ］ｍ 式Ｉ

で表される少なくとも１種の置換基であって前記置換基は、
少なくとも２つの置換基が存在する場合には、同一又は異なっており、
基－［ＡＡ］－は、アミノ酸残基を表し、
基－Ｒ１－は単結合であり、その場合にはａ＝０であり、且つアミノ酸残基－［ＡＡ］－は官能基Ｇを介して前記主骨格に直接に結合しているか、又は
２乃至１５個の炭素原子をベースとした鎖であり、その場合にはａ＝１であり、置換されていても、及び／又は、前記アミノ酸との反応前に、Ｏ、Ｎ及びＳより選択される少なくとも１種のヘテロ原子及び少なくとも１種の酸官能基を有していてもよく、前記鎖は、前記アミノ酸残基－［ＡＡ］と共にアミド官能基を形成し、及び、前記主骨格が有するヒドロキシル官能基と前記基－Ｒ１－の前駆体が有する官能基又は置換基との間の反応から生じる官能基Ｆによって前記主骨格に結合しており、
Ｆは、エーテル官能基、エステル官能基及びカルバメート官能基より選択され、
Ｇは、カルバメート官能基であり、
ｍは、１又は２であり、
前記糖単位の置換度ｊは、－［Ｒ１］ａ－［ＡＡ］ｍについて、厳密に、０よりも大きく且つ６以下、即ち０＜ｊ≦６である、置換基により置換されており、及び
ｂ）１つ以上の置換基－Ｒ'１であって、
前記置換基は、置換されていてもよく、及び／又はＯ、Ｎ及びＳより選択される少なくとも１つ以上のヘテロ原子及びアルカリ金属カチオン塩の形態にある少なくとも１つの酸官能基を有していてもよい、２乃至１５個の炭素原子をベースとした鎖であり、前記鎖は、前記主骨格が有するヒドロキシル官能基と前記置換基－Ｒ'１の前駆体が有する官能基又は置換基との間の反応から生じた官能基Ｆ'を介して前記主骨格に結合しており、
Ｆ'は、エーテル官能基、エステル官能基又はカルバメート官能基であり、
前記糖単位の置換度ｉは、－Ｒ'１について、０乃至６－ｊ、即ち０≦ｉ≦６－ｊであり、及び
Ｆ及びＦ'は、同一であるか又は異なっており、
Ｆ及びＧは、同一であるか又は異なっており、
ｉ＋ｊ≦６であり、
－Ｒ'１は、－Ｒ１－と同一であるか又は異なっており、
置換基－Ｒ'１が有する遊離の塩化可能な酸官能基は、アルカリ金属カチオン塩の形態にあり、
同一又は異なっていてもよい前記グリコシド結合は、α又はβ配置にある、（１，１）、（１，２）、（１，３）、（１，４）又は（１，６）型のグリコシド結合から成る群より選択される、置換基により置換されていてもよい、前記置換されたアニオン性化合物にも関する。
上記式中、種々の変数は上記数値を有する。
本発明に従う置換されたアニオン性化合物は、糖主骨格への置換基のランダムクラフトにより得られ得る。
一態様において、式Ｉ又はＩＩで表される置換基により置換されているアニオン性化合物より選択される、置換されたアニオン性化合物は、主骨格が天然に有するアルコール基又はカルボン酸基の保護／脱保護の段階を包含するプロセスを介して、糖単位
の正確な位置に置換基をグラフトすることによって、得られ得ることを特徴とする。当該ストラテジーによって、主骨格への置換基の選択的なグラフト、とりわけ位置選択的なグラフトが可能となる。保護基は、ＰＧＭ Ｗｕｔｓ他が記載したテキストである、Ｇｒｅｅｎ'ｓ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ２００７に記載されたものを包含するが、これらに限定されない。
糖主骨格は、高分子量多糖類の分解により得られ得る。分解経路は、化学分解及び／又は酵素分解を包含するが、これらに限定されない。
糖骨格はまた、酵素的な又は化学的なカップリングストラテジーを用いて、単糖類分子又はオリゴ糖分子の間のグリコシド結合の形成により得られ得る。カップリングストラテジーは、刊行物 Ｓｍｏｏｔｈ Ｊ．Ｔ．他，Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２００９，６２，１６２－２５０に、及び刊行物 Ｌｎｄｈｏｒｓｔ Ｔ．Ｋ．，Ｅｓｓｅｎｔｉａｌｓ ｏｆ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２００７，１５７－２０８に記載されるものを包含する。カップリング反応は、溶液中で又は固体支持体上で行われ得る。カップリング前の糖分子は、所望の置換基を有していても、及び／又は、互いに無作為に又は位置選択的にカップリングされた官能化されたものであってもよい。
以下、実施例によれば、本発明に従う化合物は、下記プロセス：
・糖主骨格への置換基のランダムグラフト；
・置換基を有する単糖類分子又はオリゴ糖類分子の間の、１つ以上のグリコシル化段階；
・置換基を有する１つ以上の単糖類又はオリゴ糖類と、１つ以上の単糖類分子又はオリゴ糖類分子との間の、１つ以上のグリコシル化段階；
・糖主骨格が天然に有するアルコール又は酸へ保護基を導入する１つ以上の段階、それに続く置換基をグラフトさせる１つ以上の反応、最終的に、保護基を除去する段階；
・糖主骨格が天然に有するアルコール又は酸への保護基を有する１つ以上の単糖類分子又はオリゴ糖類分子間の、１つ以上のグリコシル化段階、得られた糖主骨格に置換基をグラフトさせる１つ以上の段階、その後の、保護基を除去する段階；
・糖主骨格が天然に有するアルコール又は酸への保護基を有する１つ以上の単糖類分子又はオリゴ糖類分子と、１つ以上の単糖類又はオリゴ糖類分子との間の、１つ以上のグリコシル化段階、置換基をグラフトさせる１つ以上の段階、及びその後の、保護基を除去する段階；
の１つに従い、得られ得る。
単離されたか又は混合物としての本発明に従う化合物は、特に上記プロセスによって得られた後に、種々の方法において、分離され及び／又は精製され得る。
特に"調製可能な"とは、
・特にシリカ上のフラッシュクロマトグラフィー、及び
・ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）型、特に、ＲＰ－ＨＰＬＣ（逆相ＨＰＬＣ）
のようなクロマトグラフィー法により作られ得ることに言及する。
選択的な沈澱法がまた用いられ得る。
本発明はまた、下記実施例によって示される。
図１は、実施例Ｂ２及びＢ８に記載の製剤を用いて得られた薬力学結果を示したグラフである。 図２は、実施例Ｂ２及びＢ８に記載の製剤を用いて得られた薬物動態結果を示したグラフである。 図３は、実施例Ｂ２及びＢ１０に記載の製剤を用いて得られた薬力学結果を示したグラフである。 図４は、実施例Ｂ２及びＢ１０に記載の製剤を用いて得られた薬物動態結果を示したグラフである。 図５は、実施例Ｂ２及びＢ７に記載の製剤を用いて得られた薬力学結果を示したグラフである。 図６は、実施例Ｂ２及びＢ７に記載の製剤を用いて得られた薬物動態結果を示したグラフである。 図７は、実施例Ｂ１及びＢ３に記載の製剤を用いて得られた薬力学結果を示したグラフである。 図８は、実施例Ｂ１及びＢ３に記載の製剤を用いて得られた薬物動態結果を示したグラフである。 図９は、実施例Ｂ１及びＢ３９に記載の製剤を用いて得られた薬力学結果を示したグラフである。 図１０は、実施例Ｂ１及びＢ３９に記載の製剤を用いて得られた薬物動態結果を示したグラフである。 ２５１ｎｍでのＣＤシグナルを示すグラフである。 ２７５ｎｍでのＣＤシグナルを示すグラフである。 図１３は、実施例Ｂ２及びＢ１１に記載の製剤を用いて得られた薬力学結果を示したグラフである。 図１４は、実施例Ｂ２及びＢ１１に記載の製剤を用いて得られた薬物動態結果を示したグラフである 図１５は、実施例Ｂ１及びＢ３８に記載の製剤を用いて得られた薬力学結果を示したグラフである。 図１６は、実施例Ｂ１及びＢ３８に記載の製剤を用いて得られた薬物動態結果を示したグラフである。 図１７は、実施例Ｂ１及びＢ５３に記載の製剤を用いて得られた薬力学結果を示したグラフである。 図１８は、実施例Ｂ１及びＢ５３に記載の製剤を用いて得られた薬物動態結果を示したグラフである。 図１９は、化合物１乃至１１の存在中のリスプロインスリンの会合状態を示す、２５１ｎｍでのＣＤシグナルを示すグラフである。 図２０は、化合物１乃至１１の存在中のリスプロインスリンの会合状態を示す、２７５ｎｍでのＣＤシグナルを示すグラフである。
実施例
本発明に従う置換されたアニオン性化合物の構造を、表１に示す。多糖類比較例の構造を、表２に与える。
ＡＡ 置換されたアニオン性化合物
Figure 0007332139000004
Figure 0007332139000005
Figure 0007332139000006
表１

ＡＢ 多糖類比較例
Figure 0007332139000007
Figure 0007332139000008
 表２
ＡＡ１．化合物１：ナトリウムＬ－フェニルアラニネートにより官能化されたナトリウムマルトトリオースメチルカルボキシレート
水素化ホウ素ナトリウムの０．６ｇ（１６ｍｍｏｌ）を、６５℃にて水に溶解したマルトトリオース（カルボシンス（ＣａｒｂｏＳｙｎｔｈ）社）の８ｇ（ヒドロキシル官能基の１４３ｍｍｏｌ）中に添加した。３０分間撹拌した後、クロロ酢酸ナトリウムの２８ｇ（２３８ｍｍｏｌ）を添加した。その後、当該溶液に、１０Ｎ ＮａＯＨの２４ｍＬ（２４ｍｍｏｌ）を滴下添加し、そしてその後、当該混合物を、６５℃にて９０分間加熱した。その後、当該反応媒体にクロロ酢酸ナトリウムの１６．６ｇ（１４３ｍｍｏｌ）を添加し、同様に１０Ｎ ＮａＯＨの１４ｍＬ（１４ｍｍｏｌ）を滴下添加した。１時間加熱した後、当該混合物を水で希釈し、酢酸で中和し、そしてその後、水に対する１ｋＤａ ＰＥＳメンブランでの限外濾過によって、精製した。乾燥抽出物によって最終溶液の化合物濃度を決定し、そしてその後、５０／５０（ｖ／ｖ）水／アセトン混合物中で酸／塩基アッセイを行って、メチルカルボキシレートによる置換度を決定した。
乾燥抽出物に従うと：［化合物］＝３２．９ｍｇ／ｇであった。
酸／塩基アッセイに従うと、メチルカルボキシレートによる置換度は、糖単位当り１．６５であった。
プロライト（Ｐｕｒｏｌｉｔｅ）（アニオン性）樹脂でナトリウムマルトトリオースメチルカルボキシレート溶液を酸性化して、マルトトリオースメチルカルボン酸を得、その後、１８時間凍結乾燥した。
マルトトリオースメチルカルボン酸の１０ｇ（６３ｍｍｏｌのメチルカルボン酸官能基）をＤＭＦ中に可溶化し、そしてその後、０℃に冷却した。ＤＭＦ中のエチルフェニルアラニネート塩酸塩（８．７ｇ；３８ｍｍｏｌ）の混合物を調製した。トリエチルアミンの３．８ｇ（３８ｍｍｏｌ）を当該混合物に添加した。その後、ＮＭＭ（６．３ｇ；６３ｍｍｏｌ）とＥｔＯＣＯＣｌ（６．８ｇ，６３ｍｍｏｌ）との溶液を０℃にて当該混合物に添加した。その後、エチルフェニルアラニネート溶液を添加し、そして当該混合物を１０℃にて撹拌した。イミダゾール水溶液を添加し、そしてその後、当該混合物を３０℃に加熱した。当該媒体を水で希釈し、そしてその後、得られた溶液を、０．１Ｎ ＮａＯＨ、ＮａＣｌ及び水に対する１ｋＤａ ＰＥＳメンブランでの限外濾過によって精製した。乾燥抽出物によって最終溶液の分子濃度を決定した。溶液の試料を凍結乾燥し、そしてＤ２Ｏ中で１Ｈ ＮＭＲによって解析して、ナトリウムＬ－フェニルアラニネートで官能化されたメチルカルボキシレートによる置換度を決定した。
乾燥抽出物に従うと：［化合物１］＝２９．４ｍｇ／ｇであった。
酸／塩基アッセイに従うと、メチルカルボキシレートによる置換度は、糖単位当り０．６５であった。
１Ｈ ＮＭＲに従うと：ナトリウムＬ－フェニルアラニネートで官能化されたメチルカルボキシレートによる置換度は、糖単位当り１．０であった。
ＡＡ２．化合物２：ナトリウムＬ－フェニルアラニネートにより官能化されたナトリウムマルトトリオースメチルカルボキシレート
化合物１の調製に用いたのと同様のプロセスを用いて、ナトリウムＬ－フェニルアラニネートにより官能化されたナトリウムマルトトリオースカルボキシレートを得た。
酸／塩基アッセイに従うと、ナトリウムメチルカルボキシレートによる置換度は、糖単位当り１．０であった。
乾燥抽出物に従うと：［化合物２］＝２０．２ｍｇ／ｇであった。
１Ｈ ＮＭＲに従うと：ナトリウムＬ－フェニルアラニネートで官能化されたメチルカルボキシレートによる置換度は、糖単位当り０．６５であった。
ＡＡ３．化合物３：ナトリウムＬ－フェニルアラニネートにより官能化されたナトリウムマルトトリオースメチルカルボキシレート
化合物１の調製に用いたのと同様のプロセスを用いて、ナトリウムＬ－フェニルアラニネートにより官能化されたナトリウムマルトトリオースカルボキシレートを得た。
酸／塩基アッセイに従うと、ナトリウムメチルカルボキシレートによる置換度は、糖単位当り０．４６であった。
乾燥抽出物に従うと：［化合物３］＝７．２ｍｇ／ｇであった。
１Ｈ ＮＭＲに従うと：ナトリウムＬ－フェニルアラニネートで官能化されたメチルカルボキシレートによる置換度は、糖単位当り１．２であった。
ＡＡ４．化合物４：ナトリウムＬ－フェニルアラニネートにより官能化されたナトリウムマルトトリオースメチルカルボキシレート
化合物１の調製に用いたのと同様のプロセスを用いて、ナトリウムＬ－フェニルアラニネートにより官能化されたナトリウムマルトトリオースカルボキシレートを得た。
酸／塩基アッセイに従うと、ナトリウムメチルカルボキシレートによる置換度は、糖単位当り０．３５であった。
乾燥抽出物に従うと：［化合物４］＝３．１ｍｇ／ｇであった。
１Ｈ ＮＭＲに従うと：ナトリウムＬ－フェニルアラニネートで官能化されたメチルカルボキシレートによる置換度は、糖単位当り０．６５であった。
ＡＡ５．化合物５：ナトリウムＬ－フェニルアラニネートにより官能化されたナトリウムマルトトリオースメチルカルボキシレート
化合物１の調製に用いたのと同様のプロセスを用いて、ナトリウムＬ－フェニルアラニネートにより官能化されたナトリウムマルトトリオースメチルカルボキシレートを得た。
乾燥抽出物に従うと：［化合物５］＝１０．９ｍｇ／ｇであった。
１Ｈ ＮＭＲに従うと：ナトリウムＬ－フェニルアラニネートで官能化されたメチルカルボキシレートによる置換度は、糖単位当り０．４０であった。
ナトリウムメチルカルボキシレートによる置換度は、糖単位当り１．２５であった。
ＡＡ６．化合物６：ナトリウムＬ－フェニルアラニネートにより官能化されたナトリウムマルトトリオースメチルカルボキシレート
水素化ホウ素ナトリウムの０．６ｇ（１６ｍｍｏｌ）を、６５℃にて水に溶解したマルトトリオース（カルボシンス社）の８ｇ（１４３ｍｍｏｌのヒドロキシル官能基）中に添加した。３０分間撹拌した後、クロロ酢酸ナトリウムの２８ｇ（２３７ｍｍｏｌ）を添加した。その後、当該溶液に、１０Ｎ ＮａＯＨの２４ｍＬ（２４０ｍｍｏｌ）を滴下添加した。６５℃にて９０分間加熱した後、当該混合物を水で希釈し、酢酸で中和し、そしてその後、水に対する１ｋＤａ ＰＥＳメンブランでの限外濾過によって、精製した。乾燥抽出物によって最終溶液の化合物濃度を決定し、そしてその後、５０／５０（ｖ／ｖ）水／アセトン混合物中で酸／塩基アッセイを行って、ナトリウムメチルカルボキシレートによる置換度を決定した。
乾燥抽出物に従うと：［化合物］＝１４．５ｍｇ／ｇであった。
酸／塩基アッセイに従うと、ナトリウムメチルカルボキシレートによる置換度は、糖単位当り１．４５であった。
プロライト（アニオン性）樹脂でナトリウムマルトトリオースメチルカルボキシレート溶液を酸性化して、マルトトリオースメチルカルボン酸を得、その後、１８時間で凍結乾燥した。
化合物１の調製に用いたのと同様のプロセスを用いて、ナトリウムＬ－フェニルアラニネートにより官能化されたナトリウムマルトトリオースメチルカルボキシレートを得た。
乾燥抽出物に従うと：［化合物６］＝１０．８ｍｇ／ｇであった。
１Ｈ ＮＭＲに従うと：ナトリウムＬ－フェニルアラニネートで官能化されたメチルカルボキシレートによる置換度は、糖単位当り０．６５であった。
ナトリウムメチルカルボキシレートによる置換度は、糖単位当り０．８であった。
ＡＡ７．化合物７：ナトリウムＬ－フェニルアラニネートにより官能化されたナトリウムマルトトリオースメチルカルボキシレート
化合物１の調製で記載されているのと同様のプロセスを用いて、１．７６のナトリウムメチルカルボキシレートによる置換度を特徴とするナトリウムマルトトリオースメチルカルボキシレートの８ｇを合成しそして凍結乾燥した。
当該凍結乾燥物の８ｇ（５８ｍｍｏｌのヒドロキシル官能基）及びクロロ酢酸ナトリウムの１５ｇ（１２９ｍｍｏｌ）を、６５℃の水に溶解した。当該溶液に、１０Ｎ ＮａＯＨの１３ｍＬ（１３０ｍｍｏｌ）を滴下添加し、そしてその後、当該混合物を、６５℃にて９０分間加熱した。その後、当該反応媒体にクロロ酢酸ナトリウムの９ｇ（７８ｍｍｏｌ）を添加し、同様に１０Ｎ ＮａＯＨの８ｍＬ（８０ｍｍｏｌ）を滴下添加した。１時間加熱した後、当該混合物を水で希釈し、酢酸で中和し、そしてその後、水に対する１ｋＤａ ＰＥＳメンブランでの限外濾過によって、精製した。乾燥抽出物によって最終溶液の化合物濃度を決定し、そしてその後、５０／５０（ｖ／ｖ）水／アセトン混合物中での酸／塩基アッセイを行って、ナチリウムメチルカルボキシレートによる置換度を決定した。
乾燥抽出物に従うと：［化合物］＝１１．７ｍｇ／ｇであった。
酸／塩基アッセイに従うと、ナトリウムメチルカルボキシレートによる置換度は、糖単位当り３．３０であった。
プロライト（アニオン性）樹脂でナトリウムマルトトリオースメチルカルボキシレート溶液を酸性化して、マルトトリオースメチルカルボン酸を得、その後、１８時間で凍結乾燥した。
化合物１の調製に用いたのと同様のプロセスを用いて、ナトリウムＬ－フェニルアラニネートにより官能化されたナトリウムマルトトリオースメチルカルボキシレートを得た。
乾燥抽出物に従うと：［化合物７］＝１４．９ｍｇ／ｇであった。
１Ｈ ＮＭＲに従うと：ナトリウムＬ－フェニルアラニネートで官能化されたメチルカルボキシレートによる置換度は、糖単位当り０．６５であった。
ナトリウムメチルカルボキシレートによる置換度は、糖単位当り２．６５であった。
ＡＡ８．化合物８：ナトリウムＬ－フェニルアラニネートにより官能化されたナトリウムマルトペンタオースメチルカルボキシレート
マルトペンタオース（カルボシンス社）を用いて行った他は、化合物１の調製について記載したのと同様のプロセスを用いて、糖単位当り１．７５のメチルカルボン酸による置換度を有するマルトペンタオースメチルカルボン酸の１０ｇを得、そしてその後、凍結乾燥した。
化合物１の調製に用いたのと同様のプロセスを用いて、ナトリウムＬ－フェニルアラニネートにより官能化されたナトリウムマルトペンタオースメチルカルボキシレートを得た。
乾燥抽出物に従うと：［化合物８］＝７．１ｍｇ／ｇであった。
１Ｈ ＮＭＲに従うと：ナトリウムＬ－フェニルアラニネートで官能化されたメチルカルボキシレートによる置換度は、糖単位当り０．７５であった。
ナトリウムメチルカルボキシレートによる置換度は、糖単位当り１．０であった。
ＡＡ９．化合物９：ナトリウムＬ－フェニルアラニネートにより官能化されたナトリウムマルトオクタオースメチルカルボキシレート
マルトオクタオース（カルボシンス社）を用いて行った他は、化合物１の調製について記載したのと同様のプロセスを用いて、糖単位当り１．６５のメチルカルボン酸による置換度を有するマルトオクタオースメチルカルボン酸の１０ｇを得、そしてその後、凍結乾燥した。
化合物１の調製に用いたのと同様のプロセスを用いて、ナトリウムＬ－フェニルアラニネートにより官能化されたナトリウムマルトオクタオースメチルカルボキシレートを得た。
乾燥抽出物に従うと：［化合物９］＝２６．３ｍｇ／ｇであった。
１Ｈ ＮＭＲに従うと：ナトリウムＬ－フェニルアラニネートで官能化されたメチルカルボキシレートによる置換度は、糖単位当り０．６５であった。
ナトリウムメチルカルボキシレートによる置換度は、糖単位当り１．０であった。
ＡＡ１０．化合物１０：ナトリウムＬ－チロシネートにより官能化されたナトリウムマルトトリオースメチルカルボキシレート
メチルＬ－チロシネート塩酸塩（バケム（Ｂａｃｈｅｍ）社）を用いて行った他は、化合物１の調製について記載したのと同様のプロセスを用いて、糖単位当り１．６４のナトリウムメチルカルボキシレートによる置換度を特徴とするナトリウムマルトトリオースメチルカルボキシレートを、ナトリウムＬ－チロシネートにより官能化した。
乾燥抽出物に従うと：［化合物１０］＝９．１ｍｇ／ｇであった。
１Ｈ ＮＭＲに従うと：ナトリウムＬ－チロシネートで官能化されたメチルカルボキシレートによる置換度は、糖単位当り０．８１であった。
ナトリウムメチルカルボキシレートによる置換度は、糖単位当り０．８３であった。
ＡＡ１１．化合物１１：ナトリウムα－フェニルグリシネートにより官能化されたナトリウムマルトトリオースメチルカルボキシレート
化合物１の調製について記載したのと同様のプロセスを用いて、糖単位当り１．６４のメチルカルボン酸による置換度を有するマルトトリオースメチルカルボン酸の１０ｇを得、そしてその後、凍結乾燥した。
マルトトリオースメチルカルボン酸の８ｇ（５０ｍｍｏｌのメチルカルボン酸官能基）をＤＭＦ中に溶解し、そしてその後、０℃に冷却した。ナトリウムα－フェニルグリシネート（バケム社，５ｇ；３３ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（３３ｍｍｏｌ）の混合物を、水中に調製した。その後、ＮＭＭ溶液（４．９ｇ；４９ｍｍｏｌ）及びＥｔＯＣＯＣｌ溶液（５．３ｇ，４９ｍｍｏｌ）を、０℃にてマルトトリオースメチルカルボン酸溶液に添加した。その後、ナトリウムα－フェニルグリシネート及びトリエチルアミンの溶液を添加し、そして当該混合物を３０℃にて撹拌した。９０分後にイミダゾール水溶液（３４０ｇ／Ｌ）を添加した。当該媒体を水で希釈し、そしてその後、得られた溶液を、ｐＨ１０．４の１５０ｍＭ ＮａＨＣＯ３／Ｎａ２ＣＯ３緩衝液、０．９％ＮａＣｌ及び水に対する１ｋＤａ ＰＥＳメンブランでの限外濾過によって精製した。乾燥抽出物によって最終溶液の分子濃度を決定した。溶液の試料を凍結乾燥し、そしてＤ２Ｏ中での１Ｈ ＮＭＲによって解析して、ナトリウムα－フェニルグリシネートで官能化されたメチルカルボキシレートによる置換度を決定した。
乾燥抽出物に従うと：［化合物１１］＝９．１ｍｇ／ｇであった。
１Ｈ ＮＭＲに従うと：ナトリウムα－フェニルグリシネートで官能化されたメチルカルボキシレートによる置換度は、糖単位当り０．５２であった。
ナトリウムメチルカルボキシレートによる置換度は、糖単位当り１．１２であった。
ＡＢ 多糖類比較例
ＡＢ１．多糖類１：ナトリウムＬ－フェニルアラニネートにより官能化されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレート
多糖類１は、仏国特許第２９１４３０５号の番号で公開されている、特許出願仏国特許第０７／０２３１６号に記載されるプロセスに従い、１０ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量を有するデキストラン（ＤＰ＝３９，ファルマコスモス社）から得られた、ナトリウムＬ－フェニルアラニネートにより官能化されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートである。酸／塩基アッセイに従うと、ナトリウムメチルカルボキシレートによる置換度は、糖単位当り０．６であった。
１Ｈ ＮＭＲに従うと：ナトリウムＬ－フェニルアラニネートで官能化されたメチルカルボキシレートによる置換度は、糖単位当り０．４６であった。
当該多糖類は、仏国特許出願第０９／０１４７８号の多糖類１に相当する。
ＡＢ２．多糖類２：ナトリウムＬ－フェニルアラニネートにより官能化されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレート
多糖類２は、仏国特許第２９１４３０５号の番号で公開されている、特許出願仏国特許第０７／０２３１６号に記載されるプロセスに従い、５ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量を有するデキストラン（ＤＰ＝１９，ファルマコスモス社）から得られた、ナトリウムＬ－フェニルアラニネートにより官能化されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートである。酸／塩基アッセイに従うと、ナトリウムメチルカルボキシレートによる置換度は、糖単位当り１．０１であった。
１Ｈ ＮＭＲに従うと：ナトリウムＬ－フェニルアラニネートで官能化されたメチルカルボキシレートによる置換度は、糖単位当り０．６４であった。
ＡＢ３．多糖類３：ナトリウムＬ－フェニルアラニネートにより官能化されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレート
多糖類３は、仏国特許第２９１４３０５号の番号で公開されている、特許出願仏国特許第０７／０２３１６号に記載されるプロセスに従い、５ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量を有するデキストラン（ＤＰ＝１９，ファルマコスモス社）から得られた、ナトリウムＬ－フェニルアラニネートにより官能化されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートである。酸／塩基アッセイに従うと、ナトリウムメチルカルボキシレートによる置換度は、糖単位当り０．６５であった。
１Ｈ ＮＭＲに従うと：ナトリウムＬ－フェニルアラニネートで官能化されたメチルカルボキシレートによる置換度は、糖単位当り０．４５であった。
ＡＢ４．多糖類４：ナトリウムＬ－フェニルアラニネートにより官能化されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレート
多糖類４は、仏国特許第２９１４３０５号の番号で公開されている、特許出願仏国特許第０７／０２３１６号に記載されるプロセスに従い、１０ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量を有するデキストラン（ＤＰ＝３９，ファルマコスモス社）から得られた、ナトリウムＬ－フェニルアラニネートにより官能化されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートである。酸／塩基アッセイに従うと、ナトリウムメチルカルボキシレートによる置換度は、糖単位当り１．０１であった。
１Ｈ ＮＭＲに従うと：ナトリウムＬ－フェニルアラニネートで官能化されたメチルカルボキシレートによる置換度は、糖単位当り０．６４であった。
ＡＢ５．多糖類５：ナトリウムＬ－フェニルアラニネートにより官能化されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレート
多糖類５は、仏国特許第２９１４３０５号の番号で公開されている、特許出願仏国特許第０７／０２３１６号に記載されるプロセスに従い、５ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量を有するデキストラン（ＤＰ＝１９，ファルマコスモス社）から得られた、ナトリウムＬ－フェニルアラニネートにより官能化されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートである。酸／塩基アッセイに従うと、ナトリウムメチルカルボキシレートによる置換度は、糖単位当り０．４５であった。
１Ｈ ＮＭＲに従うと：ナトリウムＬ－フェニルアラニネートで官能化されたメチルカルボキシレートによる置換度は、糖単位当り０．６５であった。
ＡＣ ポリアニオン性化合物
ポリアニオン性化合物１：ナトリウムマルトトリオースメチルカルボキシレート
水素化ホウ素ナトリウムの０．６ｇ（１６ｍｍｏｌ）を、６５℃にて水中に溶解したマルトトリオース（カルボシンス社）の８ｇ（１４３ｍｍｏｌのヒドロキシル官能基）に添加した。３０分間撹拌した後、クロロ酢酸ナトリウムの２８ｇ（２３８ｍｍｏｌ）を添加した。その後、当該溶液に、１０Ｎ ＮａＯＨの２４ｍＬ（２４０ｍｍｏｌ）を滴下添加し、そしてその後、６５℃にて９０分間加熱した。その後、当該反応媒体にクロロ酢酸ナトリウムの１６．６ｇ（１４３ｍｍｏｌ）を添加し、同様に１０Ｎ ＮａＯＨの１４ｍＬ（１４０ｍｍｏｌ）を滴下添加した。１時間加熱した後、当該混合物を水で希釈し、酢酸で中和し、そしてその後、水に対する１ｋＤａ ＰＥＳメンブランでの限外濾過によって、精製した。乾燥抽出物によって最終溶液の化合物濃度を決定し、そしてその後、５０／５０（ｖ／ｖ）水／アセトン混合物中での酸／塩基アッセイを行って、ナトリウムメチルカルボキシレートによる置換度を決定した。
乾燥抽出物に従うと：［ポリアニオン性化合物１］＝３２．９ｍｇ／ｇであった。
酸／塩基アッセイに従うと、ナトリウムメチルカルボキシレートによる置換度は、糖単位当り１．６５であった。
Ｂ 溶液の調製
Ｂ１．１００ＩＵ／ｍＬの、速効型インスリンアナログであるノボログ（登録商標）の溶液
当該溶液は、ノボログ（登録商標）の名称の下でノボ ノルディスク（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ）社から販売されている、市販のアスパルトインスリン溶液である。当該製品は、速効型アスパルトインスリンアナログである。
Ｂ２．１００ＩＵ／ｍＬの、速効型インスリンアナログであるヒューマログ（登録商標）の溶液
当該溶液は、ヒューマログ（登録商標）の名称の下でエリ リリー（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）社から販売されている、市販のリスプロインスリン溶液である。当該製品は、速効型インスリンアナログである。
Ｂ３．１００ＩＵ／ｍＬの、中間型ヒトインスリンであるアクトラピッド（Ａｃｔｒａｐｉｄ）（登録商標）の溶液
当該溶液は、アクトラピッド（登録商標）の名称の下でノボ ノルディスク社から販売されている、市販のヒトインスリン溶液である。当該製品は、中間型ヒトインスリンである。
Ｂ４．１００ＩＵ／ｍＬの、中間型ヒトインスリンであるヒュームリン（Ｈｕｍｕｌｉｎ）（登録商標）Ｒの溶液
当該溶液は、ヒュームリン（登録商標）Ｒの名称の下でエリ リリー社から販売されている、市販のヒトインスリン溶液である。当該製品は、中間型ヒトインスリンである。
Ｂ５．賦形剤溶液の調製
非ポリマー状ポリアニオン性化合物は、カルシウムイオンについて、及びインスリンのヘキサマー形態を不安定化しない性能について、それらの解離定数を測定することによって、選択される。
カルシウムイオンについての解離定数に関しては、下記のとおり決定される。
ＣａＣｌ２の２．５ｍＭ、ＮａＣｌの１５０ｍＭ及び濃度を増加させたポリアニオン性化合物（０乃至２０ｍＭ）を含有する溶液を調製した。これら製剤全ての電位を測定し、そして製剤中の遊離のカルシウムイオンの濃度を決定した。スカッチャード法（Ｓｃａｔｃｈａｒｄ ｍｅｔｈｏｄ）による直線化後、解離定数を確定した。これらのデータによって、Ｃａに対する種々のポリアニオン性化合物のカルボン酸塩及びリン酸塩の親和性を比較することが可能となった。
インスリンのヘキサマー形態を不安定化しないそれらの性能に関し、円偏光二色性によって、インスリン単独（アニオン性化合物又はポリアニオン性化合物が存在しない）と比較した特性を測定した（実験の部Ｄの実験プロトコルを参照のこと）。
１．１８８Ｍのクエン酸ナトリウム溶液の調製
目盛付きフラスコ中の水２５ｍＬ中にクエン酸ナトリウムの９．０８１１ｇ（３０．９ｍｍｏｌ）を溶解することによって、クエン酸ナトリウム溶液を得た。１Ｍ ＨＣｌの１ｍＬを添加することによって、ｐＨを正確に７．４に調節した。当該溶液を、０．２２μｍのフィルタに通して濾過した。
１３０ｍＭのｍ－クレゾール溶液の調製
１Ｌの目盛付きフラスコ中での水９８６．４ｍＬ中にｍ－クレゾールの１４．１１４ｇ（１３０ｍｍｏｌ）を溶解することによって、ｍ－クレゾール溶液を得た。
ｍ－クレゾール及びグリセロール（９６．６ｍＭのｍ－クレゾール及び５６６ｍＭのグリセロール）の溶液の調製
１３０ｍＭのｍ－クレゾール溶液の７３．３ｇをグリセロールの５．２６ｇに添加し、そして水２２．２５ｇの添加によって希釈した。得られたｍ－クレゾール及びグリセロール溶液を３０分間均質化し、そしてその後、０．２２μｍのメンブランに通して濾過した。
３２．７ｍＭのトゥイーン２０（Ｔｗｅｅｎ２０）溶液の調製
目盛付きフラスコ中の水５０ｍＬ中にトゥイーン２０の２．００７９ｇ（１．６３６ｍｍｏｌ）を溶解することによって、トゥイーン２０溶液を得た。当該溶液を０．２２μｍのメンブランに通して濾過した。
Ｂ６．５００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン溶液の調製
水１５ｇをヒトインスリンの５６３．６ｍｇに添加し、そしてその後、０．１Ｎ ＨＣｌの５．９８ｇを添加することによって、ｐＨを酸性ｐＨに低下させた。酸性ｐＨにてインスリンの全てが溶解した後、当該溶液を、０．１Ｎ ＮａＯＨの８．３ｍＬを添加することにより、ｐＨ７．２に中和した。その後、水０．７６ｇを添加することにより、濃度を５００ＩＵ／ｍＬに調節した。最終的に、当該溶液を０．２２μｍのメンブランに通して濾過した。
Ｂ７．化合物１の存在下での１００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン溶液の調製
［化合物１］／［リスプロインスリン］質量比２．０を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量及び下記の配合で、種々の試薬を添加した。
凍結乾燥した化合物１ ７３０ｍｇ
１００ＩＵ／ｍＬのヒューマログ（商標登録）市販溶液 １００ｍＬ
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。
０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ８．化合物１及びクエン酸塩の存在下での１００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン溶液の調製
［化合物１］／［リスプロインスリン］質量比２．０及び９．３ｍＭのクエン酸塩濃度を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量及び下記の配合で、種々の試薬を添加した。
凍結乾燥した化合物１ ７３０ｍｇ
１００ＩＵ／ｍＬのヒューマログ（登録商標）市販溶液 １００ｍＬ
１．１８８Ｍのクエン酸ナトリウム溶液 ７８３μＬ
クエン酸塩については、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。
０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ９．化合物１及びポリアニオン性化合物１の存在下での１００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン溶液の調製
［化合物１］／［ポリアニオン性化合物１］／［リスプロインスリン］質量比２．０／２．０／１を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量及び下記の配合で、種々の試薬を添加した。
凍結乾燥した化合物１ ７３０ｍｇ
凍結乾燥したポリアニオン性化合物１ ７３０ｍｇ
１００ＩＵ／ｍＬのヒューマログ（登録商標）市販溶液 １００ｍＬ
ポリアニオン性化合物１は、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。
０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ１０．化合物１及びポリアニオン性化合物１の存在下での１００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン溶液の調製
［化合物１］／［ポリアニオン性化合物１］／［リスプロインスリン］質量比２．０／５．５／１を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量及び下記の配合で、種々の試薬を添加した。
凍結乾燥した化合物１ ７３０ｍｇ
凍結乾燥したポリアニオン性化合物１ ２０００ｍｇ
１００ＩＵ／ｍＬのヒューマログ（登録商標）市販溶液 １００ｍＬ
ポリアニオン性化合物１は、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。
０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ１１．化合物２及びクエン酸塩の存在下での１００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン溶液の調製
［化合物２］／［リスプロインスリン］質量比２．０及び９．３ｍＭのクエン酸塩濃度を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量及び下記の配合で、種々の試薬を添加した。
凍結乾燥した化合物２ ７３０ｍｇ
１００ＩＵ／ｍＬのヒューマログ（登録商標）市販溶液 １００ｍＬ
１．１８８Ｍのクエン酸ナトリウム溶液 ７８３μＬ
クエン酸塩については、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。
０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ１２．化合物２及びポリアニオン性化合物１の存在下での１００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン溶液の調製
［化合物２］／［ポリアニオン性化合物１］／［リスプロインスリン］質量比２．０／２．０／１を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量及び下記の配合で、種々の試薬を添加した。
凍結乾燥した化合物２ ７３０ｍｇ
凍結乾燥したポリアニオン性化合物１ ７３０ｍｇ
１００ＩＵ／ｍＬのヒューマログ（登録商標）市販溶液 １００ｍＬ
ポリアニオン性化合物１は、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。
０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ１３．化合物２及びポリアニオン性化合物１の存在下での１００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン溶液の調製
［化合物２］／［ポリアニオン性化合物１］／［リスプロインスリン］質量比２．０／５．５／１を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量及び下記の配合で、種々の試薬を添加した。
凍結乾燥した化合物２ ７３０ｍｇ
凍結乾燥したポリアニオン性化合物１ ２０００ｍｇ
１００ＩＵ／ｍＬのヒューマログ（登録商標）市販溶液 １００ｍＬ
ポリアニオン性化合物１は、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。
０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ１４．化合物１の存在下での１００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン溶液の調製
［化合物１］／［リスプロインスリン］質量比４を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を添加した。
凍結乾燥形態にある化合物１ １４６０ｍｇ
１００ＩＵ／ｍＬのヒューマログ（登録商標）市販溶液 １００ｍＬ
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ１５．化合物２の存在下での１００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン溶液の調製
［化合物２］／［リスプロインスリン］質量比４を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を添加した。
凍結乾燥形態にある化合物２ １４６０ｍｇ
１００ＩＵ／ｍＬのヒューマログ（登録商標）市販溶液 １００ｍＬ
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ１６．化合物１及び酒石酸ナトリウムの存在下での１００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリンアナログ溶液の調製
［化合物１］／［リスプロインスリン］質量比２．０及び８０ｍＭの酒石酸ナトリウム濃度を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を添加した。
凍結乾燥形態にある化合物１ ７３０ｍｇ
１００ＩＵ／ｍＬのヒューマログ（登録商標）市販溶液 １００ｍＬ
酒石酸ナトリウム １．５５２ｇ
酒石酸塩については、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。
０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ１７．化合物１及びポリアニオン性化合物１の存在下での１００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン溶液の調製
［化合物１］／［ポリアニオン性化合物１］／［リスプロインスリン］質量比２／４／１を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を添加した。
凍結乾燥形態にある化合物１ ７３０ｍｇ
凍結乾燥形態にあるポリアニオン性化合物１ １４６０ｍｇ
１００ＩＵ／ｍＬのヒューマログ（登録商標）市販溶液 １００ｍＬ
ポリアニオン性化合物１は、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ１８．化合物１及び三リン酸ナトリウムの存在下での１００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン溶液の調製
１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を添加した。
凍結乾燥形態にある化合物１ ７３０ｍｇ
三リン酸ナトリウム １８４ｍｇ
１００ＩＵ／ｍＬのヒューマログ（登録商標）市販溶液 １００ｍＬ
三リン酸塩については、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ１９．化合物２及び酒石酸ナトリウムの存在下での１００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリンアナログ溶液の調製
［化合物２］／［リスプロインスリン］質量比２．０及び８０ｍＭの酒石酸ナトリウム濃度を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を添加した。
凍結乾燥形態にある化合物２ ７３０ｍｇ
１００ＩＵ／ｍＬのヒューマログ（登録商標）市販溶液 １００ｍＬ
酒石酸ナトリウム １．５５２ｇ
酒石酸塩については、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ２０．化合物２及びポリアニオン性化合物１の存在下での１００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン溶液の調製
［化合物２］／［ポリアニオン性化合物１］／［リスプロインスリン］質量比２／４／１を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を添加した。
凍結乾燥形態にある化合物２ ７３０ｍｇ
凍結乾燥形態にあるポリアニオン性化合物１ １４６０ｍｇ
１００ＩＵ／ｍＬのヒューマログ（登録商標）市販溶液 １００ｍＬ
ポリアニオン性化合物１は、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ２１．化合物２及び三リン酸ナトリウムの存在下での１００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン溶液の調製
１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を添加した。
凍結乾燥形態にある化合物２ ７３０ｍｇ
三リン酸ナトリウム １８４ｍｇ
１００ＩＵ／ｍＬのヒューマログ（登録商標）市販溶液 １００ｍＬ
三リン酸塩については、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ２２．２００ＩＵ／ｍＬのインスリンアナログ（リスプロインスリン）溶液の調製
リスプロインスリンの市販製剤（ヒューマログ（登録商標））を、３ｋＤａカットオフ値を有するアミコンウルトラ－１５（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ－１５）遠心分離管を用いて濃縮した。最初にアミコン管を１２ｍＬの脱イオン水を用いて洗浄した。市販製剤の１２ｍＬを、２０℃にて４０００ｇにて、３５分間、遠心分離した。濃縮液の容量を測定し、そして濃度を推定した。全ての濃縮液を集め、そして全体の濃度を推定した（＞２００ＩＵ／ｍＬ）。
当該濃縮したリスプロインスリン溶液の濃度を、市販のリスプロインスリン製剤（ヒューマログ（登録商標））を添加することによって、２００ＩＵ／ｍＬに調節した。濃縮したリスプロインスリン製剤は、１００ＩＵ／ｍＬの市販製剤と同様の賦形剤（ｍ－クレゾール、グリセロール、リン酸塩）の濃度を有していた。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ２３．化合物１及びクエン酸塩の存在下での２００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン溶液の調製
［化合物１］／［リスプロインスリン］質量比２を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
２００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン １００ｍＬ
化合物１の凍結乾燥物 １４６０ｍｇ
１．１８８Ｍのクエン酸ナトリウム溶液 １５６６μＬ
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ２４．化合物１及びポリアニオン性化合物１の存在下での２００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン溶液の調製
［化合物１］／［ポリアニオン性化合物１］／［リスプロインスリン］質量比２／２／１を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
２００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン １００ｍＬ
化合物１の凍結乾燥物 １４６０ｍｇ
ポリアニオン性化合物１の凍結乾燥物 １４６０ｍｇ
ポリアニオン性化合物１は、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ２５．化合物１及びポリアニオン性化合物１の存在下での２００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン溶液の調製
［化合物１］／［ポリアニオン性化合物１］／［リスプロインスリン］質量比２／４／１を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
２００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン １００ｍＬ
化合物１の凍結乾燥物 １４６０ｍｇ
ポリアニオン性化合物１の凍結乾燥物 ２９２０ｍｇ
ポリアニオン性化合物１は、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ２６．化合物２及びポリアニオン性化合物１の存在下での２００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン溶液の調製
［化合物２］／［ポリアニオン性化合物１］／［リスプロインスリン］質量比２／４／１を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
２００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン １００ｍＬ
化合物２の凍結乾燥物 １４６０ｍｇ
ポリアニオン性化合物１の凍結乾燥物 ２９２０ｍｇ
ポリアニオン性化合物１は、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ２７．化合物１及び酒石酸塩の存在下での１００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン溶液の調製
［化合物１］／［ヒトインスリン］質量比２及び酒石酸塩の８０ｍＭを有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
５００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン ２０ｍＬ
化合物１の３６．０１ｍｇ／ｍＬ溶液 ２０．２７ｍＬ
９６．６ｍＭのｍ－クレゾール／５６６ｍＭのグリセロール溶液 ３０ｍＬ
水 ２８．９５ｍＬ
酒石酸ナトリウム １．５５２ｇ
酒石酸塩については、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨは７．４±０．４であった。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして＋４℃にて保管した。
Ｂ２８．化合物１及び三リン酸塩の存在下での１００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン溶液の調製
１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
５００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン ２０ｍＬ
化合物１の３６．０１ｍｇ／ｍＬ溶液 ２０．２７ｍＬ
９６．６ｍＭのｍ－クレゾール／５６６ｍＭのグリセロール溶液 ３０ｍＬ
水 ２８．９５ｍＬ
三リン酸ナトリウム １８４ｍｇ
三リン酸塩については、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨは７．４±０．４であった。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして＋４℃にて保管した。
Ｂ２９．化合物２及び酒石酸塩の存在下での１００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン溶液の調製
［化合物２］／［ヒトインスリン］質量比２及び酒石酸塩の８０ｍＭを有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
５００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン ２０ｍＬ
化合物２の３６．０１ｍｇ／ｍＬ溶液 ２０．２７ｍＬ
９６．６ｍＭのｍ－クレゾール／５６６ｍＭのグリセロール溶液 ３０ｍＬ
水 ２８．９５ｍＬ
酒石酸ナトリウム １．５５２ｇ
酒石酸塩については、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨは７．４±０．４であった。
０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして＋４℃にて保管した。
Ｂ３０．化合物２及び三リン酸の存在下での１００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン溶液の調製
１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
５００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン ２０ｍＬ
化合物２の３６．０１ｍｇ／ｍＬ溶液 ２０．２７ｍＬ
９６．６ｍＭのｍ－クレゾール／５６６ｍＭのグリセロール溶液 ３０ｍＬ
水 ２８．９５ｍＬ
三リン酸ナトリウム １８４ｍｇ
三リン酸塩については、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨは７．４±０．４であった。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして＋４℃にて保管した。
Ｂ３１．２００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン溶液の調製
ヒトインスリンの市販製剤（ヒュームリン（登録商標）Ｒ）を、３ｋＤａカットオフ値を有するアミコンウルトラ－１５遠心分離管を用いて濃縮した。最初にアミコン管を１２ｍＬの脱イオン水を用いて洗浄した。市販製剤の１２ｍＬを、２０℃にて４０００ｇにて、３５分間、遠心分離した。濃縮液の容量を測定し、そして濃度を推定した。全ての濃縮液を集め、そして全体の濃度を推定した（＞２００ＩＵ／ｍＬ）。
当該濃縮したヒトインスリン溶液の濃度を、市販のヒトインスリン製剤（ヒュームリン（登録商標）Ｒ）を添加することによって、２００ＩＵ／ｍＬに調節した。濃縮したヒトインスリン製剤は、１００ＩＵ／ｍＬの市販製剤と同様の賦形剤（ｍ－クレゾール、グリセロール）の濃度を有していた。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ３２．化合物１及びクエン酸塩の存在下での２００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン溶液の調製
［化合物１］／［ヒトインスリン］質量比２を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
２００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン １００ｍＬ
化合物１の凍結乾燥物 １４６０ｍｇ
１．１８８Ｍクエン酸ナトリウム溶液 １５６６μＬ
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ３３．化合物１及びポリアニオン性化合物１の存在下での２００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン溶液の調製
［化合物１］／［ポリアニオン性化合物１］／［ヒトインスリン］質量比２／２／１を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
２００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン １００ｍＬ
化合物１の凍結乾燥物 １４６０ｍｇ
ポリアニオン性化合物１の凍結乾燥物 １５６６ｍｇ
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ３４．化合物１及びポリアニオン性化合物１の存在下での２００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン溶液の調製
［化合物１］／［ポリアニオン性化合物１］／［ヒトインスリン］質量比２／４／１を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
２００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン １００ｍＬ
化合物１の凍結乾燥物 １４６０ｍｇ
ポリアニオン性化合物１の凍結乾燥物 ２９２０ｍｇ
ポリアニオン性化合物１は、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ３５．化合物２及びクエン酸塩の存在下での２００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン溶液の調製
［化合物２］／［ヒトインスリン］質量比２を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
２００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン １００ｍＬ
化合物２の凍結乾燥物 １４６０ｍｇ
１．１８８Ｍクエン酸ナトリウム溶液 １５６６μＬ
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ３６．化合物２及びポリアニオン性化合物１の存在下での２００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン溶液の調製
［化合物２］／［ポリアニオン性化合物１］／［ヒトインスリン］質量比２／２／１を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
２００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン １００ｍＬ
化合物２の凍結乾燥物 １４６０ｍｇ
ポリアニオン性化合物１の凍結乾燥物 １４６０ｍｇ
ポリアニオン性化合物１は、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ３７．化合物２及びポリアニオン性化合物１の存在下での２００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン溶液の調製
［化合物２］／［ポリアニオン性化合物１］／［ヒトインスリン］質量比２／４／１を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
２００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン １００ｍＬ
化合物２の凍結乾燥物 １４６０ｍｇ
ポリアニオン性化合物１の凍結乾燥物 ２９２０ｍｇ
ポリアニオン性化合物１は、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ３８．化合物２及びクエン酸塩の存在下での１００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン溶液の調製
［化合物２］／［ヒトインスリン］質量比２及び９．３ｍＭのクエン酸塩を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
５００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン ２０ｍＬ
化合物２の３６．０１ｍｇ／ｍＬ溶液 ２０．２７ｍＬ
９６．６ｍＭのｍ－クレゾール／５６６ｍＭのグリセロール溶液 ３０ｍＬ
水 ２８．９５ｍＬ
１．１８８Ｍのクエン酸ナトリウム溶液 ７８３μＬ
クエン酸塩については、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨは７．４±０．４であった。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ３９．化合物１及びクエン酸塩の存在下での１００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン溶液の調製
［化合物１］／［ヒトインスリン］質量比２及び９．３ｍＭのクエン酸塩を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
５００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン ２０ｍＬ
化合物１の３６．０１ｍｇ／ｍＬ溶液 ２７ｍＬ
９６．６ｍＭのｍ－クレゾール／５６６ｍＭのグリセロール溶液 ３０ｍＬ
水 ２８．９５ｍＬ
１．１８８Ｍのクエン酸ナトリウム溶液 ７８３μＬ
クエン酸塩については、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨは７．４±０．４であった。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ４０．化合物１及びクエン酸塩の存在下での１００ＩＵ／ｍＬのアスパルトインスリン溶液の調製
［化合物１］／［アスパルトインスリン］質量比２．０及び９．３ｍＭのクエン酸塩を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
凍結乾燥した化合物１ ７３０ｍｇ
１００ＩＵ／ｍＬの市販のノボログ（登録商標）溶液 １００ｍＬ
１．１８８Ｍのクエン酸ナトリウム溶液 ７８３μＬ
クエン酸塩については、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。
０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ４１．速効型インスリンアナログであるアピドラ（登録商標）の１００ＩＵ／ｍＬ溶液
当該溶液は、アピドラ（登録商標）の名称の下でサノフィアベンチス社から販売されている、市販のグルリジンインスリン溶液である。
Ｂ４２．化合物１及びクエン酸塩の存在下での１００ＩＵ／ｍＬのグルリジンインスリン溶液の調製
［化合物１］／［グルリジンインスリン］質量比２．０及び９．３ｍＭのクエン酸塩濃度を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量及び下記の配合で、種々の試薬を添加した。
凍結乾燥した化合物１ ７３０ｍｇ
１００ＩＵ／ｍＬの市販のアピドラ（登録商標）溶液 １００ｍＬ
１．１８８Ｍのクエン酸ナトリウム溶液 ７８３μＬ
クエン酸塩については、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。
０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ４３．化合物２及びクエン酸塩の存在下での１００ＩＵ／ｍＬのアスパルトインスリン溶液の調製
［化合物２］／［アスパルトインスリン］質量比２．０及び９．３ｍＭのクエン酸塩濃度を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量及び下記の配合で、種々の試薬を添加した。
凍結乾燥した化合物２ ７３０ｍｇ
１００ＩＵ／ｍＬの市販のノボログ（登録商標）溶液 １００ｍＬ
１．１８８Ｍのクエン酸ナトリウム溶液 ７８３μＬ
クエン酸塩については、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。
０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ４４．化合物２及びクエン酸塩の存在下での１００ＩＵ／ｍＬのグルリジンインスリン溶液の調製
［化合物２］／［グルリジンインスリン］質量比２．０及び９．３ｍＭのクエン酸塩濃度を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量及び下記の配合で、種々の試薬を添加した。
凍結乾燥した化合物２ ７３０ｍｇ
１００ＩＵ／ｍＬの市販のアピドラ（登録商標）溶液 １００ｍＬ
１．１８８Ｍのクエン酸ナトリウム溶液 ７８３μＬ
クエン酸塩については、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。
０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ４５．化合物５及びクエン酸塩の存在下での１００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン溶液の調製
［化合物５］／［リスプロインスリン］質量比２．０及び９．３ｍＭのクエン酸塩濃度を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量及び下記の配合で、種々の試薬を添加した。
凍結乾燥した化合物５ ７３０ｍｇ
１００ＩＵ／ｍＬの市販のヒューマログ（登録商標）溶液 １００ｍＬ
１．１８８Ｍのクエン酸ナトリウム溶液 ７８３μＬ
クエン酸塩については、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。
０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ４６．化合物６及びクエン酸塩の存在下での１００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン溶液の調製
［化合物６］／［リスプロインスリン］質量比２．０及び９．３ｍＭのクエン酸塩濃度を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量及び下記の配合で、種々の試薬を添加した。
凍結乾燥した化合物６ ７３０ｍｇ
１００ＩＵ／ｍＬの市販のヒューマログ（登録商標）溶液 １００ｍＬ
１．１８８Ｍのクエン酸ナトリウム溶液 ７８３μＬ
クエン酸塩については、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。
０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ４７．化合物７及びクエン酸塩の存在下での１００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン溶液の調製
［化合物７］／［リスプロインスリン］質量比２．０及び９．３ｍＭのクエン酸塩濃度を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量及び下記の配合で、種々の試薬を添加した。
凍結乾燥した化合物７ ７３０ｍｇ
１００ＩＵ／ｍＬの市販のヒューマログ（登録商標）溶液 １００ｍＬ
１．１８８Ｍのクエン酸ナトリウム溶液 ７８３μＬ
クエン酸塩については、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。
０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ４８．化合物８及びクエン酸塩の存在下での１００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン溶液の調製
［化合物８］／［リスプロインスリン］質量比２．０及び９．３ｍＭのクエン酸塩濃度を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量及び下記の配合で、種々の試薬を添加した。
凍結乾燥した化合物８ ７３０ｍｇ
１００ＩＵ／ｍＬの市販のヒューマログ（登録商標）溶液 １００ｍＬ
１．１８８Ｍのクエン酸ナトリウム溶液 ７８３μＬ
クエン酸塩については、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。
０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ４９．化合物９及びクエン酸塩の存在下での１００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン溶液の調製
［化合物９］／［リスプロインスリン］質量比２．０及び９．３ｍＭのクエン酸塩濃度を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量及び下記の配合で、種々の試薬を添加した。
凍結乾燥した化合物９ ７３０ｍｇ
１００ＩＵ／ｍＬの市販のヒューマログ（登録商標）溶液 １００ｍＬ
１．１８８Ｍのクエン酸ナトリウム溶液 ７８３μＬ
クエン酸塩については、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。
Ｂ５０．化合物５及びクエン酸塩の存在下での１００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン溶液の調製
［化合物５］／［ヒトインスリン］質量比２．０及び９．３ｍＭのクエン酸塩濃度を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量及び下記の配合で、種々の試薬を添加した。
凍結乾燥した化合物５ ７３０ｍｇ
１００ＩＵ／ｍＬの市販のヒュームリン（登録商標）Ｒ溶液 １００ｍＬ
１．１８８Ｍのクエン酸ナトリウム溶液 ７８３μＬ
クエン酸塩については、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。
０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ５１．化合物６及びクエン酸塩の存在下での１００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン溶液の調製
［化合物６］／［ヒトインスリン］質量比２．０及び９．３ｍＭのクエン酸塩濃度を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量及び下記の配合で、種々の試薬を添加した。
凍結乾燥した化合物６ ７３０ｍｇ
１００ＩＵ／ｍＬの市販のヒュームリン（登録商標）Ｒ溶液 １００ｍＬ
１．１８８Ｍのクエン酸ナトリウム溶液 ７８３μＬ
クエン酸塩については、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。
０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ５２．化合物７及びクエン酸塩の存在下での１００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン溶液の調製
［化合物７］／［ヒトインスリン］質量比２．０及び９．３ｍＭのクエン酸塩濃度を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量及び下記の配合で、種々の試薬を添加した。
凍結乾燥した化合物７ ７３０ｍｇ
１００ＩＵ／ｍＬの市販のヒュームリン（登録商標）Ｒ溶液 １００ｍＬ
１．１８８Ｍのクエン酸ナトリウム溶液 ７８３μＬ
クエン酸塩については、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。
０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ５３．化合物８及びクエン酸塩の存在下での１００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン溶液の調製
［化合物８］／［ヒトインスリン］質量比２．０及び９．３ｍＭのクエン酸塩濃度を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量及び下記の配合で、種々の試薬を添加した。
凍結乾燥した化合物８ ７３０ｍｇ
１００ＩＵ／ｍＬの市販のヒュームリン（登録商標）Ｒ溶液 １００ｍＬ
１．１８８Ｍのクエン酸ナトリウム溶液 ７８３μＬ
クエン酸塩については、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。
０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ５４．化合物９及びクエン酸塩の存在下での１００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン溶液の調製
［化合物９］／［ヒトインスリン］質量比２．０及び９．３ｍＭのクエン酸塩濃度を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量及び下記の配合で、種々の試薬を添加した。
凍結乾燥した化合物９ ７３０ｍｇ
１００ＩＵ／ｍＬの市販のヒュームリン（登録商標）Ｒ溶液 １００ｍＬ
１．１８８Ｍのクエン酸ナトリウム溶液 ７８３μＬ
クエン酸塩については、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。
０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ５５．化合物２の存在下での１００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン溶液の調製
［化合物２］／［ヒトインスリン］質量比２．０を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量及び下記の配合で、種々の試薬を添加した。
凍結乾燥した化合物２ ７３０ｍｇ
１００ＩＵ／ｍＬの市販のヒュームリン（登録商標）Ｒ溶液 １００ｍＬ
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。
０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ５６．化合物７の存在下での１００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン溶液の調製
［化合物７］／［ヒトインスリン］質量比２．０を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量及び下記の配合で、種々の試薬を添加した。
凍結乾燥した化合物７ ７３０ｍｇ
１００ＩＵ／ｍＬの市販のヒュームリン（登録商標）Ｒ溶液 １００ｍＬ
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。
０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ５７．化合物１０及びクエン酸塩の存在下での１００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン溶液の調製
［化合物１０］／［リスプロインスリン］質量比２．０及び９．３ｍＭのクエン酸塩濃度を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量及び下記の配合で、種々の試薬を添加した。
凍結乾燥した化合物１０ ７３０ｍｇ
１００ＩＵ／ｍＬの市販のヒューマログ（登録商標）Ｒ溶液 １００ｍＬ
１．１８８Ｍのクエン酸ナトリウム溶液 ７８３μＬ
クエン酸塩については、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。
０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ５８．化合物１１及びクエン酸塩の存在下での１００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン溶液の調製
［化合物１１］／［リスプロインスリン］質量比２．０及び９．３ｍＭのクエン酸塩濃度を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量及び下記の配合で、種々の試薬を添加した。
凍結乾燥した化合物１１ ７３０ｍｇ
１００ＩＵ／ｍＬの市販のヒューマログ（登録商標）Ｒ溶液 １００ｍＬ
１．１８８Ｍのクエン酸ナトリウム溶液 ７８３μＬ
クエン酸塩については、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。
Ｂ５９．化合物１０及びクエン酸塩の存在下での１００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン溶液の調製
［化合物１０］／［ヒトインスリン］質量比２．０及び９．３ｍＭのクエン酸塩濃度を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量及び下記の配合で、種々の試薬を添加した。
凍結乾燥した化合物１０ ７３０ｍｇ
１００ＩＵ／ｍＬの市販のヒュームリン（登録商標）Ｒ溶液 １００ｍＬ
１．１８８Ｍのクエン酸ナトリウム溶液 ７８３μＬ
クエン酸塩については、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。
０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ６０．化合物１１及びクエン酸塩の存在下での１００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン溶液の調製
［化合物１１］／［ヒトインスリン］質量比２．０及び９．３ｍＭのクエン酸塩濃度を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量及び下記の配合で、種々の試薬を添加した。
凍結乾燥した化合物１１ ７３０ｍｇ
１００ＩＵ／ｍＬの市販のヒュームリン（登録商標）Ｒ溶液 １００ｍＬ
１．１８８Ｍのクエン酸ナトリウム溶液 ７８３μＬ
クエン酸塩については、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。
０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ６１．２００ＩＵ／ｍＬのアスパルトインスリン溶液の調製
アスパルトインスリンの市販製剤（ノボログ（登録商標））を、３ｋＤａカットオフ値を有するアミコンウルトラ－１５遠心分離管を用いて濃縮した。最初にアミコン管を１２ｍＬの脱イオン水を用いて洗浄した。市販製剤の１２ｍＬを、２０℃にて４０００ｇにて、３５分間、遠心分離した。濃縮液の容量を測定し、そして濃度を推定した。全ての濃縮液を集め、そして全体の濃度を推定した（＞２００ＩＵ／ｍＬ）。
当該濃縮したアスパルトインスリン溶液の濃度を、市販のアスパルトインスリン製剤（ノボログ（登録商標））を添加することによって、２００ＩＵ／ｍＬに調節した。濃縮したアスパルトインスリン製剤は、１００ＩＵ／ｍＬの市販製剤と同様の賦形剤（ｍ－クレゾール、グリセロール）の濃度を有していた。
遠心分離時間及び市販製剤についての最終希釈度を改変することにより、同様の手法で、３００、４００又は５００ＩＵ／ｍＬのアスパルトインスリン製剤を調製することが可能である。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ６２．２００ＩＵ／ｍＬのグルリジンインスリン溶液の調製
グルリジンインスリンの市販製剤（アピドラ（登録商標））を、３ｋＤａカットオフ値を有するアミコンウルトラ－１５遠心分離管を用いて濃縮した。最初にアミコン管を１２ｍＬの脱イオン水を用いて洗浄した。市販製剤の１２ｍＬを、２０℃にて４０００ｇにて、３５分間、遠心分離した。濃縮液の容量を測定し、そして濃度を推定した。全ての濃縮液を集め、そして全体の濃度を推定した（＞２００ＩＵ／ｍＬ）。
当該濃縮したグルリジンインスリン溶液の濃度を、市販のグルリジンインスリン製剤（アピドラ（登録商標））を添加することによって、２００ＩＵ／ｍＬに調節した。濃縮したアスパルトインスリン製剤は、１００ＩＵ／ｍＬの市販製剤と同様の賦形剤（ｍ－クレゾール、ＮａＣｌ、ＴＲＩＳ）の濃度を有していた。
遠心分離時間及び市販製剤についての最終希釈度を改変することにより、同様の手法で、３００、４００又は５００ＩＵ／ｍＬのグルリジンインスリン製剤を調製することが可能である。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ６３．１４．６ｍｇ／ｍＬの化合物１及び１８．６ｍＭのクエン酸塩の存在下での２００ＩＵ／ｍＬのアスパルトインスリン溶液の調製
［化合物１］／［アスパルトインスリン］質量比２．０を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量及び下記の配合で、種々の試薬を添加した。
化合物１の凍結乾燥物 １４６０ｍｇ
２００ＩＵ／ｍＬのアスパルトインスリン １００ｍＬ
１．１８８Ｍのクエン酸ナトリウム溶液 １５６６μＬ
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ６４．３００、４００及び５００ＩＵ／ｍＬの、ヒトインスリン、リスプロインスリン、アスパルトインスリン又はグルリジンインスリン溶液の調製
２００ＩＵ／ｍＬのグルリジンインスリン溶液の調製に関する実施例Ｂ６２のプロトコルに基づき、３００ＩＵ／ｍＬ、４００ＩＵ／ｍＬ及び５００ＩＵ／ｍＬの（及びまた、中間濃度の）、ヒトインスリン、リスプロインスリン、アスパルトインスリン又はグルリジンインスリンの濃縮製剤を調製した。市販のインスリン製剤を、３ｋＤａカットオフ値を有するアミコンウルトラ－１５遠心分離管を用いて濃縮した。最初にアミコン管を１２ｍＬの脱イオン水を用いて洗浄した。市販製剤の１２ｍＬを、２０℃にて４０００ｇにて、遠心分離した。遠心分離時間を改変することにより、製剤中のインスリンの最終濃度を調節することを可能とした。濃縮液の容量を測定し、そして濃度を推定した。全ての濃縮液を集め、そして全体の濃度を推定した（＞３００、４００又は５００ＩＵ／ｍＬ）。
当該濃縮したインスリン溶液の濃度を、インスリン製剤（ヒュームリン（登録商標）Ｒ、ノボログ（登録商標）又はアピドラ（登録商標））を添加することによって、所望の濃度（例えば、３００ＩＵ／ｍＬ、４００ＩＵ／ｍＬ又は５００ＩＵ／ｍＬ）に調節した。濃縮したインスリン製剤は、１００ＩＵ／ｍＬの市販製剤と同様の賦形剤濃度を有していた。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ６５．化合物１及びクエン酸塩の存在下での２００ＩＵ／ｍＬのグルリジンインスリン溶液の調製
［化合物１］／［グルリジンインスリン］質量比２を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量及び下記の配合で、種々の試薬を混合した。
化合物１の凍結乾燥物 １４６０ｍｇ
２００ＩＵ／ｍＬのグルリジンインスリン １００ｍＬ
１．１８８Ｍのクエン酸ナトリウム溶液 １５６６μＬ
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ６６．化合物１及びクエン酸塩の存在下での３００ＩＵ／ｍＬのアスパルトインスリン溶液の調製
［化合物１］／［アスパルトインスリン］質量比２．０を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
３００ＩＵ／ｍＬのアスパルトインスリン １００ｍＬ
化合物１の凍結乾燥物 ２１９０ｍｇ
クエン酸ナトリウム ７２０ｍｇ
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ６７．化合物１及びクエン酸塩の存在下での３００ＩＵ／ｍＬのグルリジンインスリン溶液の調製
［化合物１］／［グルリジンインスリン］質量比２．０を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
３００ＩＵ／ｍＬのグルリジンインスリン １００ｍＬ
化合物１の凍結乾燥物 ２１９０ｍｇ
クエン酸ナトリウム ７２０ｍｇ
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ６８．化合物１及びクエン酸塩の存在下での４００ＩＵ／ｍＬのアスパルトインスリン溶液の調製
［化合物１］／［アスパルトインスリン］質量比２を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
４００ＩＵ／ｍＬのアスパルトインスリン １００ｍＬ
化合物１の凍結乾燥物 ２９２０ｍｇ
クエン酸ナトリウム ９６０ｍｇ
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ６９．化合物１及びクエン酸塩の存在下での４００ＩＵ／ｍＬのグルリジンインスリン溶液の調製
［化合物１］／［グルリジンインスリン］質量比２．０を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
４００ＩＵ／ｍＬのグルリジンインスリン １００ｍＬ
化合物１の凍結乾燥物 ２９２０ｍｇ
クエン酸ナトリウム ９６０ｍｇ
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ７０．化合物１及びクエン酸塩の存在下での５００ＩＵ／ｍＬのアスパルトインスリン溶液の調製
［化合物１］／［アスパルトインスリン］質量比２．０を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
５００ＩＵ／ｍＬのアスパルトインスリン １００ｍＬ
化合物１の凍結乾燥物 ３６５０ｍｇ
クエン酸ナトリウム １２００ｍｇ
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ７１．化合物１及びクエン酸塩の存在下での５００ＩＵ／ｍＬのグルリジンインスリン溶液の調製
［化合物１］／［グルリジンインスリン］質量比２．０を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
５００ＩＵ／ｍＬのグルリジンインスリン １００ｍＬ
化合物１の凍結乾燥物 ３６５０ｍｇ
クエン酸ナトリウム １２００ｍｇ
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ７２．化合物１及びクエン酸塩の存在下での３００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン溶液の調製
［化合物１］／［ヒトインスリン］質量比２．０を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
３００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン １００ｍＬ
化合物１の凍結乾燥物 ２１９０ｍｇ
クエン酸ナトリウム ７２０ｍｇ
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ７３．化合物１及びクエン酸塩の存在下での３００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン溶液の調製
［化合物１］／［リスプロインスリン］質量比２．０を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
３００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン １００ｍＬ
化合物１の凍結乾燥物 ２１９０ｍｇ
クエン酸ナトリウム ７２０ｍｇ
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ７４．化合物１及びクエン酸塩の存在下での４００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン溶液の調製
［化合物１］／［ヒトインスリン］質量比２．０を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
４００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン １００ｍＬ
化合物１の凍結乾燥物 ２９２０ｍｇ
クエン酸ナトリウム ９６０ｍｇ
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ７５．化合物１及びクエン酸塩の存在下での４００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン溶液の調製
［化合物１］／［リスプロインスリン］質量比２．０を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
４００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン １００ｍＬ
化合物１の凍結乾燥物 ２９２０ｍｇ
クエン酸ナトリウム ９６０ｍｇ
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ７６．化合物１及びクエン酸塩の存在下での５００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン溶液の調製
［化合物１］／［ヒトインスリン］質量比２．０を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
５００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン １００ｍＬ
化合物１の凍結乾燥物 ３６５０ｍｇ
クエン酸ナトリウム １２００ｍｇ
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ７７．化合物１及びクエン酸塩の存在下での５００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン溶液の調製
［化合物１］／［リスプロインスリン］質量比２．０を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
５００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン １００ｍＬ
化合物１の凍結乾燥物 ３６５０ｍｇ
クエン酸ナトリウム １２００ｍｇ
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ７８．化合物２及びクエン酸塩の存在下での２００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン溶液の調製
［化合物２］／［リスプロインスリン］質量比２．０を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
２００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン １００ｍＬ
化合物２の凍結乾燥物 １４６０ｍｇ
１．１８８Ｍのクエン酸ナトリウム溶液 １５６６μＬ
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ７９．化合物２及びクエン酸塩の存在下での２００ＩＵ／ｍＬのアスパルトインスリン溶液の調製
［化合物２］／［アスパルトインスリン］質量比２．０を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
２００ＩＵ／ｍＬのアスパルトインスリン １００ｍＬ
化合物２の凍結乾燥物 １４６０ｍｇ
１．１８８Ｍのクエン酸ナトリウム溶液 １５６６μＬ
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ８０．化合物２及びクエン酸塩の存在下での２００ＩＵ／ｍＬのグルリジンインスリン溶液の調製
［化合物２］／［グルリジンインスリン］質量比２．０を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
２００ＩＵ／ｍＬのグルリジンインスリン １００ｍＬ
化合物２の凍結乾燥物 １４６０ｍｇ
１．１８８Ｍのクエン酸ナトリウム溶液 １５６６μＬ
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ８１．化合物２及びクエン酸塩の存在下での３００ＩＵ／ｍＬのアスパルトインスリン溶液の調製
［化合物２］／［アスパルトインスリン］質量比２．０を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
３００ＩＵ／ｍＬのアスパルトインスリン １００ｍＬ
化合物２の凍結乾燥物 ２１９０ｍｇ
クエン酸ナトリウム ７２０ｍｇ
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ８２．化合物２及びクエン酸塩の存在下での３００ＩＵ／ｍＬのグルリジンインスリン溶液の調製
［化合物２］／［グルリジンインスリン］質量比２．０を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
３００ＩＵ／ｍＬのグルリジンインスリン １００ｍＬ
化合物２の凍結乾燥物 ２１９０ｍｇ
クエン酸ナトリウム ７２０ｍｇ
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ８３．化合物２及びクエン酸塩の存在下での４００ＩＵ／ｍＬのアスパルトインスリン溶液の調製
［化合物２］／［アスパルトインスリン］質量比２．０を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
４００ＩＵ／ｍＬのアスパルトインスリン １００ｍＬ
化合物２の凍結乾燥物 ２９２０ｍｇ
クエン酸ナトリウム ９６０ｍｇ
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ８４．化合物２及びクエン酸塩の存在下での４００ＩＵ／ｍＬのグルリジンインスリン溶液の調製
［化合物２］／［グルリジンインスリン］質量比２．０を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
４００ＩＵ／ｍＬのグルリジンインスリン １００ｍＬ
化合物２の凍結乾燥物 ２９２０ｍｇ
クエン酸ナトリウム ９６０ｍｇ
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ８５．化合物２及びクエン酸塩の存在下での５００ＩＵ／ｍＬのアスパルトインスリン溶液の調製
［化合物２］／［アスパルトインスリン］質量比２．０を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
５００ＩＵ／ｍＬのアスパルトインスリン １００ｍＬ
化合物２の凍結乾燥物 ３６５０ｍｇ
クエン酸ナトリウム １２００ｍｇ
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ８６．化合物２及びクエン酸塩の存在下での５００ＩＵ／ｍＬのグルリジンインスリン溶液の調製
［化合物２］／［グルリジンインスリン］質量比２．０を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
５００ＩＵ／ｍＬのグルリジンインスリン １００ｍＬ
化合物２の凍結乾燥物 ３６５０ｍｇ
クエン酸ナトリウム １２００ｍｇ
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ８７．化合物２及びクエン酸塩の存在下での３００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン溶液の調製
［化合物２］／［ヒトインスリン］質量比２を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
３００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン １００ｍＬ
化合物２の凍結乾燥物 ２１９０ｍｇ
クエン酸ナトリウム ７２０ｍｇ
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ８８．化合物２及びクエン酸塩の存在中の３００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン溶液の調製下で
［化合物２］／［リスプロインスリン］質量比２．０を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
３００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン １００ｍＬ
化合物２の凍結乾燥物 ２１９０ｍｇ
クエン酸ナトリウム ７２０ｍｇ
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ８９．化合物２及びクエン酸塩の存在下での４００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン溶液の調製
［化合物２］／［ヒトインスリン］質量比２．０を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
４００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン １００ｍＬ
化合物２の凍結乾燥物 ２９２０ｍｇ
クエン酸ナトリウム ９６０ｍｇ
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ９０．化合物２及びクエン酸塩の存在下で中の４００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン溶液の調製
［化合物２］／［リスプロインスリン］質量比２．０を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
４００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン １００ｍＬ
化合物２の凍結乾燥物 ２９２０ｍｇ
クエン酸ナトリウム ９６０ｍｇ
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ９１．化合物２及びクエン酸塩の存在下での５００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン溶液の調製
［化合物２］／［ヒトインスリン］質量比２．０を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
５００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン １００ｍＬ
化合物２の凍結乾燥物 ３６５０ｍｇ
クエン酸ナトリウム １２００ｍｇ
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ９２．化合物２及びクエン酸塩の存在下での５００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン溶液の調製
［化合物２］／［リスプロインスリン］質量比２．０を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量で、種々の試薬を混合した。
５００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン １００ｍＬ
化合物２の凍結乾燥物 ３６５０ｍｇ
クエン酸ナトリウム １２００ｍｇ
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ９３．化合物３及びクエン酸塩の存在下での１００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン溶液の調製
［化合物３］／［リスプロインスリン］質量比２．０及び９．３ｍＭのクエン酸塩濃度を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量及び下記の配合で、種々の試薬を添加した。
凍結乾燥した化合物３ ７３０ｍｇ
５００ＩＵ／ｍＬの市販のヒューマログ（登録商標）溶液 １００ｍＬ
１．１８８Ｍのクエン酸ナトリウム溶液 ７８３μＬ
クエン酸塩については、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。
０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ９４．化合物４及びクエン酸塩の存在下での１００ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン溶液の調製
［化合物４］／［リスプロインスリン］質量比２．０及び９．３ｍＭのクエン酸塩濃度を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量及び下記の配合で、種々の試薬を添加した。
凍結乾燥した化合物４ ７３０ｍｇ
１００ＩＵ／ｍＬの市販のヒューマログ（登録商標）溶液 １００ｍＬ
１．１８８Ｍのクエン酸ナトリウム溶液 ７８３μＬ
クエン酸塩については、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。
０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ９５．化合物３及びクエン酸塩の存在下での１００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン溶液の調製
［化合物３］／［ヒトインスリン］質量比２．０及び９．３ｍＭのクエン酸塩濃度を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量及び下記の配合で、種々の試薬を添加した。
凍結乾燥した化合物３ ７３０ｍｇ
１００ＩＵ／ｍＬの市販のヒュームリン（登録商標）Ｒ溶液 １００ｍＬ
１．１８８Ｍのクエン酸ナトリウム溶液 ７８３μＬ
クエン酸塩については、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。
０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｂ９６．化合物４及びクエン酸塩の存在下での１００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン溶液の調製
［化合物４］／［ヒトインスリン］質量比２．０及び９．３ｍＭのクエン酸塩濃度を有する１００ｍＬの最終容量の製剤のために、下記に特定した量及び下記の配合で、種々の試薬を添加した。
凍結乾燥した化合物４ ７３０ｍｇ
１００ＩＵ／ｍＬの市販のヒュームリン（登録商標）溶液 １００ｍＬ
１．１８８Ｍのクエン酸ナトリウム溶液 ７８３μＬ
クエン酸塩については、注射用製剤に適合性のある、ナトリウム塩、カリウム塩又はその他の塩の形態にある酸形態又は塩基形態で使用され得る。
最終的なｐＨを７．４±０．４に調節した。
０．２２μｍメンブランに通して清澄な溶液を濾過し、そして４℃にて保管した。
Ｃ 薬力学及び薬物動態
Ｃ１：インスリン溶液の薬力学を測定するためのプロトコル
事前に頸静脈内にカテーテル挿入した、およそ５０ｋｇの体重の１２頭の国産ブタを、２．５時間絶食させ、その後に実験を開始した。インスリン注射に先立って、３つの血液試料を採取して、グルコース及びインスリンの基礎濃度を決定した。
３１Ｇのニードル付きのノボペン（Ｎｏｖｏｐｅｎ）インスリンペンを用いて、前記動物の耳下の頸に、リスプロインスリンについて０．０９ＩＵ／ｋｇの投与量での、及びヒトインスリン及びアスパルトインスリンついて０．１２５ＩＵ／ｋｇの投与量でのインスリンを、皮下注射した。
その後、血液試料を、４分毎に２０分間、そしてその後、１０分毎に３時間まで、採取した。各々の試料を採取した後、カテーテルを、希釈ヘパリン溶液を用いて洗浄した。
一滴の血液をとり、血糖計を用いて血糖値を決定した。
その後、薬力学曲線をプロットし、そして各々のブタについて血液中の最小グルコース濃度に達するのに要した時間を決定し、そしてグルコースＴｍｉｎとして記録した。その後、グルコースＴｍｉｎ値の平均値を算出した。
残った血液を乾燥したチューブに集め、そして遠心分離して血清を単離した。各々のブタについて、サンドイッチ式ＥＬＩＳＡ免疫酵素法を用いて血清試料中のインスリン濃度を測定した。
その後、薬物動態曲線をプロットした。各々のブタについて血清中の最大インスリン濃度に達するのに要した時間を、インスリンＴｍａｘとして決定し、そして記録した。その後、インスリンＴｍａｘ値の平均値を算出した。
Ｃ２：実施例Ｂ２及びＢ８のインスリン溶液についての、薬力学及び薬物動態結果
Figure 0007332139000009
 実施例Ｂ２及びＢ８に記載の製剤を用いて得られた薬力学結果を、図１に示す。本発明に従うと、これら曲線の解析は、賦形剤として化合物１及び９．３ｍＭのクエン酸塩を含有する実施例Ｂ８の製剤（実施例Ｂ８に相当する、四角形を用いてプロットした曲線，グルコースＴｍｉｎ＝３０±１１分）によって、実施例Ｂ２の市販のヒューマログ（登録商標）製剤（実施例Ｂ２に相当する、三角形を用いてプロットした曲線，グルコースＴｍｉｎ＝４４±１４分）を用いて得られたよりも、より迅速な作用を得られたことを、示した。
実施例Ｂ２及びＢ８に記載の製剤を用いて得られた薬物動態結果を、図２に示す。本発明に従うと、これら曲線の解析は、賦形剤として化合物１及び９．３ｍＭのクエン酸塩を含有する実施例Ｂ８の製剤（実施例Ｂ８に相当する、四角形を用いてプロットした曲線，インスリンＴｍａｘ＝１１±６分）が、実施例Ｂ２の市販のヒューマログ（登録商標）製剤（実施例Ｂ２に相当する、三角形を用いてプロットした曲線，インスリンＴｍａｘ＝１８±８分）よりも、リスプロインスリンのより迅速な吸収を誘発し得たことを、示した。
Ｃ３：実施例Ｂ２及びＢ１０のインスリン溶液についての、薬力学及び薬物動態結果
Figure 0007332139000010
 実施例Ｂ２及びＢ１０に記載の製剤を用いて得られた薬力学結果を、図３に示す。本発明に従うと、これら曲線の解析は、賦形剤として化合物１及び２０ｍｇ／ｍＬのポリアニンオン化合物１を含有する実施例Ｂ１０の製剤（実施例Ｂ１０に相当する、四角形を用いてプロットした曲線，グルコースＴｍｉｎ＝３３±１３分）によって、実施例Ｂ２の市販のヒューマログ（登録商標）製剤（実施例Ｂ２に相当する、三角形を用いてプロットした曲線，グルコースＴｍｉｎ＝４４±１４分）よりも、より迅速な作用を得られたことを、示した。
実施例Ｂ２及びＢ１０に記載の製剤を用いて得られた薬物動態結果を、図４に示す。本発明に従うと、これら曲線の解析は、賦形剤として化合物１及び２０ｍｇ／ｍＬのポリアニンオン化合物１を含有する実施例Ｂ１０の製剤（実施例Ｂ１０に相当する、四角形を用いてプロットした曲線，インスリンＴｍａｘ＝１５±９分）が、実施例Ｂ２の市販のヒューマログ（登録商標）製剤（実施例Ｂ２に相当する、三角形を用いてプロットした曲線，インスリンＴｍａｘ＝１８±８分）よりも、リスプロインスリンのより迅速な吸収を誘発し得たことを、示した。
Ｃ４：実施例Ｂ２及びＢ７のインスリン溶液についての、薬力学及び薬物動態結果
Figure 0007332139000011
 実施例Ｂ２及びＢ７に記載の製剤を用いて得られた薬力学結果を、図５に示す。本発明に従うと、これら曲線の解析は、賦形剤として化合物１を含有する実施例Ｂ７の製剤（実施例Ｂ７に相当する、四角形を用いてプロットした曲線，グルコースＴｍｉｎ＝４１±１６分）は、実施例Ｂ２の市販のヒューマログ（登録商標）製剤（実施例Ｂ２に相当する、三角形を用いてプロットした曲線，グルコースＴｍｉｎ＝５０±１４分）を用いて得られたよりも、より迅速な作用の発現を誘発したことを、示した。
実施例Ｂ２及びＢ７に記載の製剤を用いて得られた薬物動態結果を、図６に示す。これら曲線の解析は、賦形剤として化合物１を含有する製剤（実施例Ｂ２に相当する、四角形を用いてプロットした曲線，インスリンＴｍａｘ＝２１±１０分）が、実施例Ｂ２の市販のヒューマログ製剤（登録商標）（実施例Ｂ２に相当する、三角形を用いてプロットした曲線（インスリンＴｍａｘ＝２０±９分））を用いたよりも、リスプロインスリンのより迅速な吸収を誘発しなかったことを、示した。それ故、化合物１単独では、リスプロインスリンの薬物動態の有意な促進を引き起こすのに不十分であった。
Ｃ５：実施例Ｂ１及びＢ３のインスリン溶液についての、薬力学及び薬物動態結果
Figure 0007332139000012
 実施例Ｂ１及びＢ３に記載の製剤を用いて得られた薬力学結果を、図７に示す。これら曲線の解析は、実施例Ｂ３の製剤（実施例Ｂ３に相当する、四角形を用いてプロットした曲線，グルコースＴｍｉｎ＝６１±３１分）は、実施例Ｂ１の市販のアスパルトインスリン製剤（実施例Ｂ１に相当する、三角形を用いてプロットした曲線，グルコースＴｍｉｎ＝４４±１３分）よりも、より遅い作用を実際に有していたことを、示した。
実施例Ｂ１及びＢ３に記載の製剤を用いて得られた薬物動態結果を、図８に示す。これら曲線の解析は、実施例Ｂ３のヒトインスリン単独の製剤（実施例Ｂ３に相当する、四角形を用いてプロットした曲線，インスリンＴｍａｘ＝３６±３３分）が、実施例Ｂ１の市販のアスパルトインスリン製剤（ノボログ（登録商標））（実施例Ｂ１に相当する、三角形を用いてプロットした曲線，インスリンＴｍａｘ＝２８±１３分）よりも、より遅い吸収を実際に誘発したことを、示した。
これらの結果は、ヒトインスリンと比較して、速効型インスリンアナログについての、血糖値低下の促進及びインスリンの吸収の促進について、文献の結果に従っていた。
Ｃ６：実施例Ｂ１及びＢ３９のインスリン溶液についての、薬力学及び薬物動態結果
Figure 0007332139000013
 実施例Ｂ１及びＢ３９に記載の製剤を用いて得られた薬力学結果を、図９に示す。これら曲線の解析は、賦形剤として化合物１及び９．３ｍＭのクエン酸塩を含有する実施例Ｂ３９のヒトインスリンをベースとした製剤（実施例Ｂ３９に相当する、四角形を用いてプロットした曲線，グルコースＴｍｉｎ＝４６±９分）によって、実施例Ｂ１の市販のアスパルトインスリン製剤（ノボログ（登録商標））（実施例Ｂ１に相当する、三角形を用いてプロットした曲線，グルコースＴｍｉｎ＝５３±２４分）を用いて得られたのと同様の作用を得られたことを、示した。
実施例Ｂ１及びＢ３９に記載の製剤を用いて得られた薬物動態結果を、図１０示す。これら曲線の解析は、賦形剤として化合物１及び９．３ｍＭのクエン酸塩を含有する実施例Ｂ３９の製剤（実施例Ｂ３９に相当する、四角形を用いてプロットした曲線，インスリンＴｍａｘ＝２０±７分）が、実施例Ｂ１の市販のアスパルトインスリン製剤（ノボログ（登録商標））（実施例Ｂ１に相当する、三角形を用いてプロットした曲線，インスリンＴｍａｘ＝２２±１０分）を用いて得られたのと同様のインスリン吸収を誘発したことを、示した。
実施例Ｃ５とＣ６との間の、アスパルトインスリン（ノボログ（登録商標））についての時間パラメータが同様であるため、実施例Ｂ３９の製剤が、市販のヒトインスリン製剤（実施例Ｂ３）と比較して、血糖値の低下及びヒトインスリンの吸収の促進を誘発したという外挿が推定され得る。
Ｃ７：実施例Ｂ２及びＢ１１のインスリン溶液についての、薬力学及び薬物動態結果
Figure 0007332139000014
 実施例Ｂ２及びＢ１１に記載の製剤を用いて得られた薬力学結果を、図１３に示す。本発明に従うと、これら曲線の解析は、賦形剤として化合物２及び９．３ｍＭのクエン酸塩を含有する実施例Ｂ１１の製剤（実施例Ｂ１１に相当する、四角形を用いてプロットした曲線，グルコースＴｍｉｎ＝３２±１０分）によって、実施例Ｂ２の市販のヒューマログ（登録商標）製剤（実施例Ｂ２に相当する、三角形を用いてプロットした曲線，グルコースＴｍｉｎ＝４１±２１分）を用いて得られたよりもより迅速な作用が得られたことを、示した。
実施例Ｂ２及びＢ１１に記載の製剤を用いて得られた薬物動態結果を、図１４に示す。本発明に従うと、これら曲線の解析は、賦形剤として化合物２及び９．３ｍＭのクエン酸塩を含有する実施例Ｂ１１の製剤（実施例Ｂ１１に相当する、四角形を用いてプロットした曲線，インスリンＴｍａｘ＝１３±５分）が、実施例Ｂ２の市販のヒューマログ（登録商標）製剤（実施例Ｂ２に相当する、三角形を用いてプロットした曲線，インスリンＴｍａｘ＝２２±１３分）よりも、リスプロインスリンのより迅速な吸収を誘発したことを、示した。
Ｃ８：実施例Ｂ１及びＢ３８のインスリン溶液についての、薬力学及び薬物動態結果
Figure 0007332139000015
 実施例Ｂ１及びＢ３８に記載の製剤を用いて得られた薬力学結果を、図１５に示す。これら曲線の解析は、賦形剤として化合物２及び９．３ｍＭのクエン酸塩を含有する実施例Ｂ３８のヒトインスリンをベースとした製剤（実施例Ｂ１０２に相当する、四角形を用いてプロットした曲線，グルコースＴｍｉｎ＝４７±３０分）によって、実施例Ｂ１の市販のアスパルトインスリン製剤（ノボログ（登録商標））（実施例Ｂ１に相当する、三角形を用いてプロットした曲線，グルコースＴｍｉｎ＝４７±１５分）を用いて得られたのと同様の作用が得られたことを、示した。
実施例Ｂ１及びＢ３８に記載の製剤を用いて得られた薬物動態結果を、図１６に示す。これら曲線の解析は、賦形剤として化合物２及び９．３ｍＭのクエン酸塩を含有する実施例Ｂ３８の製剤（実施例Ｂ３８に相当する、四角形を用いてプロットした曲線，インスリンＴｍａｘ＝２２±２１分）が、実施例Ｂ１の市販のアスパルトインスリン製剤（ノボログ（登録商標））（実施例Ｂ１に相当する、三角形を用いてプロットした曲線，インスリンＴｍａｘ＝１９±１２分）を用いて得られたのと同様のヒトインスリン吸収を誘発したことを、示した。
実施例Ｃ５とＣ８との間の、アスパルトインスリン（ノボログ（登録商標））についての時間パラメータが同様であるため、実施例Ｂ３８の製剤が、市販のヒトインスリン製剤（実施例Ｂ３）と比較して、血糖値の低下及びヒトインスリンの吸収の促進を誘発したという外挿が推定され得る。
Ｃ９：実施例Ｂ１及びＢ５３のインスリン溶液についての、薬力学及び薬物動態結果
Figure 0007332139000016
 実施例Ｂ１及びＢ５３に記載の製剤を用いて得られた薬力学結果を、図１７に示す。これら曲線の解析は、賦形剤として化合物８及び９．３ｍＭのクエン酸塩を含有する実施例Ｂ５３のヒトインスリンをベースとした製剤（実施例Ｂ５３に相当する、四角形を用いてプロットした曲線，グルコースＴｍｉｎ＝６３±３６分）によって、実施例Ｂ１の市販のアスパルトインスリン製剤（ノボログ（登録商標））（実施例Ｂ１に相当する、三角形を用いてプロットした曲線，グルコースＴｍｉｎ＝５３±１９分）を用いて得られたのと実質的に同様の迅速な作用が得られたことを、示した。
実施例Ｂ１及びＢ５３に記載の製剤を用いて得られた薬物動態結果を、図１８に示す。これら曲線の解析は、賦形剤として化合物８及び９．３ｍＭのクエン酸塩を含有する実施例Ｂ５３の製剤（実施例Ｂ５３に相当する、四角形を用いてプロットした曲線，インスリンＴｍａｘ＝１９±１２分）が、実施例Ｂ１の市販のアスパルトインスリン製剤（ノボログ（登録商標））（実施例Ｂ１に相当する、三角形を用いてプロットした曲線，インスリンＴｍａｘ＝１９±６分）を用いて得られたのと同様のヒトインスリン吸収を誘発したことを、示した。
実施例Ｃ５とＣ９との間の、アスパルトインスリン（ノボログ（登録商標））についての時間パラメータが同様であるため、実施例Ｂ５３の製剤が、市販のヒトインスリン製剤（実施例Ｂ３）と比較して、血糖値の低下及びヒトインスリンの吸収の促進を誘発したという外挿が推定され得る。
Ｄ 円偏光二色性
Ｄ１：、円偏光二色性により評価した、化合物１の存在下でのリスプロインスリンの会合状態
円偏光二色性によって、インスリンの二次構造及び四次構造を観察することができた。インスリンモノマーは、ダイマーとして、及びヘキサマーとして、形成されている。ヘキサマーは、インスリンの物理学的に又は化学的に最も安定した形態である。２つのヘキサマー形態は、Ｒ６形態及びＴ６形態が存在する。リスプロインスリンは、Ｒ６ヘキサマー形態（最も安定な形態である）の特徴である、２５１ｎｍでの強いＣＤシグナルを有している。２５１ｎｍでのＣＤシグナルの損失は、ヘキサマーの不安定化に関連する（そしてそのため、ダイマーへのヘキサマーの転換の第一の兆候である）。
ＥＤＴＡ及びＥＤＴＡ／クエン酸塩混合物は、リスプロインスリンのＲ６形態を完全に破壊した（図１１）。従って、ＥＤＴＡは、ヘキサマーに顕著な影響を及ぼした。
対照的に、クエン酸塩単独、化合物１単独、及びまた、化合物１／クエン酸塩混合物及び化合物１／ポリアニオン性化合物１混合物は、２５１ｎｍでのＣＤシグナルに対して、実質的に何らの影響も有していなかった。それ故これら化合物は、ヘキサマーのＲ６構造に対して何らの影響も有しておらず、及びヘキサマー構造に対して僅かの影響しか有していなかった。
Ｄ２：円偏光二色性により評価した、化合物１の存在中のヒトインスリンの会合状態
円偏光二色性によって、インスリンの二次構造及び四次構造を観察することができた。インスリンモノマーは、ダイマーとして、及びヘキサマーとして、形成されている。ヘキサマーは、インスリンの物理学的に又は化学的に最も安定した形態である。２７５ｎｍでのＣＤシグナルが、インスリンのヘキサマー形態の特徴である（およそ－３００°ではヘキサマーについてのシグナルであり、－２００°乃至－２５０°ではダイマーについてのシグナルであり、そして－２００°以下ではモノマーについてのシグナルである）。それ故、２７５ｎｍでのＣＤシグナルの損失は、ダイマー又はモノマーへのヘキサマーの不安定化の特性である。
ＥＤＴＡ及びＥＤＴＡ／クエン酸塩混合物は、ヒトインスリンのヘキサマー構造に対して非常に顕著な影響を有していた（ダイマーへのヘキサマーの全体的な解離，図１２）。対照的に、クエン酸塩単独、化合物１単独、ポリアニオン性化合物１単独、並びにまた、化合物１／クエン酸塩混合物及び化合物１／ポリアニオン性化合物１混合物は、ヒトインスリンのヘキサマー構造に対して影響を及ぼさなかった。ＥＤＴＡと異なり、化合物１及びクエン酸塩又はポリアニオン性化合物１を含有するヒトインスリン製剤は、ヒトインスリンヘキサマーのいかなる解離も示さなかった。
Ｄ３：円偏光二色性により評価した、化合物１乃至１１の存在下でのリスプロインスリンの会合状態
円偏光二色性によって、インスリンの二次構造及び四次構造を観察することができた。インスリンモノマーは、ダイマーとして、及びヘキサマーとして、形成されている。ヘキサマーは、インスリンの物理学的に又は化学的に最も安定した形態である。２つのヘキサマー形態は、Ｒ６形態及びＴ６形態が存在する。リスプロインスリンは、Ｒ６ヘキサマー形態（最も安定な形態である）の特徴である、２５１ｎｍでの強いＣＤシグナルを有している。２５１ｎｍでのＣＤシグナルの損失は、ヘキサマーの不安定化に関連する（そしてそのため、ダイマーへのヘキサマーの転換の第一の兆候である）。得られた結果を、図１９に示す。当該図は、ｘ軸については、
Ａ：リスプロインスリン（１００ＩＵ／ｍＬ）
Ｂ：リスプロインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物２
Ｃ：リスプロインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物２＋９．３ｍＭのクエン酸塩
Ｄ：リスプロインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物１
Ｅ：リスプロインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物１＋９．３ｍＭのクエン酸塩
Ｆ：リスプロインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物３
Ｇ：リスプロインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物３＋９．３ｍＭのクエン酸塩
Ｈ：リスプロインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物４
Ｉ：リスプロインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物４＋９．３ｍＭのクエン酸塩
Ｊ：リスプロインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物５
Ｋ：リスプロインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物５＋９．３ｍＭのクエン酸塩
Ｌ：リスプロインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物６
Ｍ：リスプロインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物６＋９．３ｍＭのクエン酸塩
Ｎ：リスプロインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物７
Ｏ：リスプロインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物７＋９．３ｍＭのクエン酸塩
Ｐ：リスプロインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物８
Ｑ：リスプロインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物８＋９．３ｍＭのクエン酸塩
Ｒ：リスプロインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物９
Ｓ：リスプロインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物９＋９．３ｍＭのクエン酸塩
Ｔ：リスプロインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物１０
Ｕ：リスプロインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物１０＋９．３ｍＭのクエン酸塩
Ｖ：リスプロインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物１１
Ｗ：リスプロインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物１１＋９．３ｍＭのクエン酸塩
を記載しており、そしてｙ軸については、２５１ｎｍでの円偏光二色性シグナル（ｄｅｇ・ｃｍ２・ｄｍｏｌ－１）を記載している。
化合物１乃至１１単独、及びまた、化合物１乃至１１とクエン酸塩との混合物は、リスプロインスリンについての２５１ｎｍでのＣＤシグナルにおいて影響を有していなかった。それ故、化合物１乃至１１は、ヘキサマーのＲ６構造に対して何らの影響も有しておらず、及びヘキサマー構造に対して僅かの影響しか有していなかった。
Ｄ４：円偏光二色性により評価した、化合物１乃至１１の存在中のリスプロインスリンの会合状態
円偏光二色性によって、インスリンの二次構造及び四次構造を観察することができた。インスリンモノマーは、ダイマーとして、及びヘキサマーとして、形成されている。ヘキサマーは、インスリンの物理学的に及び化学的に最も安定した形態である。２７５ｎｍでのＣＤシグナルが、インスリンのヘキサマー形態の特徴である（およそ－３００°ではヘキサマーについてのシグナルであり、－２００°乃至－２５０°ではダイマーについてのシグナルであり、そして－２００°以下ではモノマーについてのシグナルである）。それ故、２７５ｎｍでのＣＤシグナルの損失は、ヘキサマーのダイマー又はモノマーへの不安定化の特性である。得られた結果を、図２０に示す。当該図は、ｘ軸については、
Ａ：ヒトインスリン（１００ＩＵ／ｍＬ）
Ｂ：ヒトインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物２
Ｃ：ヒトインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物２＋９．３ｍＭのクエン酸塩
Ｄ：ヒトインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物１
Ｅ：ヒトインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物１＋９．３ｍＭのクエン酸塩
Ｆ：ヒトインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物３
Ｇ：ヒトインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物３＋９．３ｍＭのクエン酸塩
Ｈ：ヒトインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物４
Ｉ：ヒトインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物４＋９．３ｍＭのクエン酸塩
Ｊ：ヒトインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物５
Ｋ：ヒトインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物５＋９．３ｍＭのクエン酸塩
Ｌ：ヒトインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物６
Ｍ：ヒトインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物６＋９．３ｍＭのクエン酸塩
Ｎ：ヒトインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物７
Ｏ：ヒトインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物７＋９．３ｍＭのクエン酸塩
Ｐ：ヒトインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物８
Ｑ：ヒトインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物８＋９．３ｍＭのクエン酸塩
Ｒ：ヒトインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物９
Ｓ：ヒトインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物９＋９．３ｍＭのクエン酸塩
Ｔ：ヒトインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物１０
Ｕ：ヒトインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物１０＋９．３ｍＭのクエン酸塩
Ｖ：ヒトインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物１１
Ｗ：ヒトインスリン＋７．３ｍｇ／ｍＬの化合物１１＋９．３ｍＭのクエン酸塩
を記載しており、そしてｙ軸については、２７５ｎｍでの円偏光二色性シグナル（ｄｅｇ・ｃｍ２・ｄｍｏｌ－１）を記載している。
化合物１乃至１１単独、及びまた、化合物１乃至１１とクエン酸塩との混合物は、ヒトインスリンについての２７５ｎｍでのＣＤシグナルにおいて影響を有していなかった。それ故、化合物１乃至１１は、ヒトインスリンのヘキサマー構造に対して何らの影響も有していなかった。
Ｅ 等電点におけるヒトインスリン及びインスリンナアナログの溶解
Ｅ１．等電点におけるヒトインスリンの溶解
ヒトインスリンは、５．３にて等電点を有する。このｐＨ５．３において、ヒトインスリンは、沈澱する。ヒトインスリンと種々の化合物との複合体の形成を証明する試験を、等電点にて行った。相互作用が存在すれば、等電点にてインスリンを溶解させることが可能である。
２００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン溶液を調製した。異なった濃度（８、３０又は１００ｍｇ／ｍＬ）の化合物の水溶液を調製した。ヒトインスリン溶液と化合物溶液との等容量（５０／５０）混合物を調製して、１００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリン及び所望の濃度の化合物（４、１５又は５０ｍｇ／ｍＬ）を含有する溶液とした。２００ｍＭ酢酸を添加することにより、当該種々の溶液のｐＨを、ｐＨ５．３に調節した。
当該溶液の外観を記録した。溶液が混濁している場合には、当該試験濃度の化合物は、ヒトインスリンを溶解することが出来ていない。当該溶液が半透明である場合には、当該試験濃度にてヒトインスリンを溶解することが出来ている。この方法において、等電点でヒトインスリンを溶解するのに要する化合物の濃度が決定され得た。当該濃度が低いほど、ヒトインスリンに対する化合物の親和性がより大きい。
得られた結果を表３に示す。当該結果は、化合物及び多糖類が、ヒトインスリンの溶解に関して、同様の特性を有していないことを示した。
Figure 0007332139000017
Ｅ２．等電点でのリスプロインスリンの溶解
リスプロインスリンは、５．３にて等電点を有する。このｐＨ５．３において、リスプロインスリンは、沈澱する。リスプロインスリンと種々の化合物との複合体の形成を証明する試験を、等電点にて行った。相互作用が存在すれば、等電点にてリスプロインスリンを溶解させることが可能である。
リスプロインスリンの市販の製剤（ヒューマログ（登録商標））を、１ｍＭ ＰＯ４緩衝液（ｐＨ７）に対して透析した。透析後、リスプロインスリン濃度はおよそ９０ＩＵ／ｍＬとなった。凍結乾燥した化合物を計量し、そしてリスプロインスリン溶液中に溶解して、９０ＩＵ／ｍＬのリスプロインスリン及び所望の濃度（４、１５又は５０ｍｇ／ｍＬ）の当該化合物を含有する製剤とした。これら溶液のｐＨを、２００ｍＭ酢酸を添加することによって、ｐＨ５．３に調節した。
当該溶液の外観を記録した。溶液が混濁している場合には、当該試験濃度の化合物は、リスプロインスリンを溶解することが出来ていない。当該溶液が半透明である場合には、当該試験濃度にてリスプロインスリンを溶解することが出来ている。この方法において、等電点でリスプロインスリンを溶解するのに要する化合物の濃度が決定され得た。当該濃度が低いほど、リスプロインスリンに対する化合物の親和性がより大きい。
得られた結果を表４に示す。当該結果は、化合物及び多糖類が、リスプロインスリンの溶解に関して、同様の特性を有していないことを示した。
Figure 0007332139000018
Ｆ アルブミンとの相互作用
Ｆ１：種々の多糖類又は化合物と、アルブミンのようなモデルタンパク質との間の相互作用を決定するために、セントリコン試験（Ｃｅｎｔｒｉｃｏｎ ｔｅｓｔ）（５０ｋＤａのカットオフ閾値を有するメンブラン）を行った。７．３ｍｇ／ｍＬの多糖類の又は化合物の溶液を、２０ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）のＰＢＳ溶液中で３倍に希釈した（当該混合物中の濃度：多糖類の又は化合物の２．４３ｍｇ／ｍＬ、アルブミンの１３．３ｍｇ／ｍＬ及び塩の１００ｍＭ）。
当該混合物をセントリコンで遠心分離して、メンブランに通しておよそ半分の容量とした。アルブミンがセントリコンメンブラン上に定量的に残った。分析された多糖類及び化合物は、その大部分がメンブランを単独で通過した（最大分子量を有する多糖類については、当該多糖類のおよそ２０％が残った）。
遠心分離後、多糖類又は化合物を、濾液中でＵＶによりアッセイした。アルブミンに結合した多糖類又は化合物の百分率を、下記式によって算出した。
（１－［アルブミン存在中の濾液中の多糖類又は化合物］／［アルブミンなしの濾液中の多糖類又は化合物］）×１００
得られた結果を表５に示す。当該試験において、分子量５乃至１５ｋＤａの多糖類は、アルブミンに対して強く保持されたことが非常に明らかに観察された。対照的に、当該試験において、より低分子量の本発明の化合物は、アルブミンに対してより少なく保持された。
Figure 0007332139000019

Claims (1)

  1. 次式で表される置換されたアニオン性化合物であって、
    Figure 0007332139000020
     式中、Ｒは、Ｈ、Ｒ'１又はＲ１－［ＡＡ］であり、
    －Ｒ'１は、
    Figure 0007332139000021
     を表し、
    －Ｒ１－［ＡＡ］は、
    Figure 0007332139000022
     を表し、
    ヘキソースの置換度ｊは、－Ｒ１－［ＡＡ］について、０．３乃至１．８であり、かつ、
    ヘキソースの置換度ｉは、－Ｒ'１について、０．３乃至３である、
    置換されたアニオン性化合物。


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