JP2018104473A - 人工多能性幹細胞を作製するための化学的手法と遺伝的手法の組み合わせ法 - Google Patents
人工多能性幹細胞を作製するための化学的手法と遺伝的手法の組み合わせ法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2018104473A JP2018104473A JP2018072807A JP2018072807A JP2018104473A JP 2018104473 A JP2018104473 A JP 2018104473A JP 2018072807 A JP2018072807 A JP 2018072807A JP 2018072807 A JP2018072807 A JP 2018072807A JP 2018104473 A JP2018104473 A JP 2018104473A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- cell
- polypeptide
- inhibitor
- pluripotent
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 210000004263 induced pluripotent stem cell Anatomy 0.000 title description 28
- 239000000126 substance Substances 0.000 title description 13
- 238000013459 approach Methods 0.000 title description 9
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 title description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 421
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 416
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 412
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 240
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 217
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims abstract description 196
- 239000002829 mitogen activated protein kinase inhibitor Substances 0.000 claims abstract description 66
- 102000001267 GSK3 Human genes 0.000 claims abstract description 57
- 108060006662 GSK3 Proteins 0.000 claims abstract description 57
- NFVJNJQRWPQVOA-UHFFFAOYSA-N n-[2-chloro-5-(trifluoromethyl)phenyl]-2-[3-(4-ethyl-5-ethylsulfanyl-1,2,4-triazol-3-yl)piperidin-1-yl]acetamide Chemical compound CCN1C(SCC)=NN=C1C1CN(CC(=O)NC=2C(=CC=C(C=2)C(F)(F)F)Cl)CCC1 NFVJNJQRWPQVOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 57
- 108091005735 TGF-beta receptors Proteins 0.000 claims abstract description 53
- 102000016715 Transforming Growth Factor beta Receptors Human genes 0.000 claims abstract description 53
- 229940124647 MEK inhibitor Drugs 0.000 claims abstract description 50
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims abstract description 42
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 42
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims abstract description 42
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 746
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 claims description 99
- 210000001778 pluripotent stem cell Anatomy 0.000 claims description 74
- 108700021430 Kruppel-Like Factor 4 Proteins 0.000 claims description 71
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 70
- 101100247004 Rattus norvegicus Qsox1 gene Proteins 0.000 claims description 65
- 210000005155 neural progenitor cell Anatomy 0.000 claims description 48
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 claims description 44
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 claims description 22
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 claims description 16
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 16
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 claims description 13
- 210000003780 hair follicle Anatomy 0.000 claims description 10
- FHYUGAJXYORMHI-UHFFFAOYSA-N SB 431542 Chemical group C1=CC(C(=O)N)=CC=C1C1=NC(C=2C=C3OCOC3=CC=2)=C(C=2N=CC=CC=2)N1 FHYUGAJXYORMHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- HIJMSZGHKQPPJS-UHFFFAOYSA-N 3-(6-methylpyridin-2-yl)-n-phenyl-4-quinolin-4-ylpyrazole-1-carbothioamide Chemical compound CC1=CC=CC(C=2C(=CN(N=2)C(=S)NC=2C=CC=CC=2)C=2C3=CC=CC=C3N=CC=2)=N1 HIJMSZGHKQPPJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 6
- AQGNHMOJWBZFQQ-UHFFFAOYSA-N CT 99021 Chemical compound CC1=CNC(C=2C(=NC(NCCNC=3N=CC(=CC=3)C#N)=NC=2)C=2C(=CC(Cl)=CC=2)Cl)=N1 AQGNHMOJWBZFQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 claims description 3
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 abstract description 55
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 abstract description 33
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 abstract description 25
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 147
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 142
- 101100239628 Danio rerio myca gene Proteins 0.000 description 120
- 101150039798 MYC gene Proteins 0.000 description 106
- 101100459258 Xenopus laevis myc-a gene Proteins 0.000 description 106
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 103
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 99
- 102100035423 POU domain, class 5, transcription factor 1 Human genes 0.000 description 91
- 101710126211 POU domain, class 5, transcription factor 1 Proteins 0.000 description 91
- 230000008672 reprogramming Effects 0.000 description 91
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 83
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 83
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 78
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 67
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 60
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 55
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 53
- 108020005497 Nuclear hormone receptor Proteins 0.000 description 50
- 102000006255 nuclear receptors Human genes 0.000 description 50
- 108020004017 nuclear receptors Proteins 0.000 description 50
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 48
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 48
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 47
- 108060004795 Methyltransferase Proteins 0.000 description 44
- 102000016397 Methyltransferase Human genes 0.000 description 44
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 44
- 239000003276 histone deacetylase inhibitor Substances 0.000 description 44
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 41
- 108091006146 Channels Proteins 0.000 description 39
- 239000012824 ERK inhibitor Substances 0.000 description 39
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 37
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 36
- 229940121372 histone deacetylase inhibitor Drugs 0.000 description 36
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 36
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 35
- 101710135898 Myc proto-oncogene protein Proteins 0.000 description 31
- 102100038895 Myc proto-oncogene protein Human genes 0.000 description 31
- 101710150448 Transcriptional regulator Myc Proteins 0.000 description 31
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 31
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 31
- OSXFATOLZGZLSK-UHFFFAOYSA-N 6,7-dimethoxy-2-(4-methyl-1,4-diazepan-1-yl)-N-[1-(phenylmethyl)-4-piperidinyl]-4-quinazolinamine Chemical compound C=12C=C(OC)C(OC)=CC2=NC(N2CCN(C)CCC2)=NC=1NC(CC1)CCN1CC1=CC=CC=C1 OSXFATOLZGZLSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- -1 Reprogramming Klf Proteins 0.000 description 27
- 230000017858 demethylation Effects 0.000 description 26
- 238000010520 demethylation reaction Methods 0.000 description 26
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 25
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 25
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 24
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 24
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 24
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 24
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 24
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 23
- 230000008569 process Effects 0.000 description 23
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 22
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 21
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 21
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 20
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 19
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 19
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 17
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 15
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 14
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 13
- 230000001973 epigenetic effect Effects 0.000 description 13
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 12
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 12
- 108010033040 Histones Proteins 0.000 description 12
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 12
- 230000006870 function Effects 0.000 description 12
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 12
- 238000011160 research Methods 0.000 description 12
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 12
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 11
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 11
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 10
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 10
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 10
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 10
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 10
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 9
- 102000038624 GSKs Human genes 0.000 description 9
- 108091007911 GSKs Proteins 0.000 description 9
- 102100025751 Mothers against decapentaplegic homolog 2 Human genes 0.000 description 9
- 101710143123 Mothers against decapentaplegic homolog 2 Proteins 0.000 description 9
- 102100025748 Mothers against decapentaplegic homolog 3 Human genes 0.000 description 9
- 101710143111 Mothers against decapentaplegic homolog 3 Proteins 0.000 description 9
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 9
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 9
- 150000003839 salts Chemical group 0.000 description 9
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 9
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 9
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 9
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 8
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 8
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 8
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 8
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 8
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 8
- 230000032459 dedifferentiation Effects 0.000 description 8
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 8
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 8
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 8
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 8
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 7
- 102000011787 Histone Methyltransferases Human genes 0.000 description 7
- 108010036115 Histone Methyltransferases Proteins 0.000 description 7
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 7
- 239000002585 base Substances 0.000 description 7
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 7
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 7
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 7
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 7
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 7
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 7
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 7
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 7
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 7
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 7
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 7
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 7
- OHCQJHSOBUTRHG-KGGHGJDLSA-N FORSKOLIN Chemical compound O=C([C@@]12O)C[C@](C)(C=C)O[C@]1(C)[C@@H](OC(=O)C)[C@@H](O)[C@@H]1[C@]2(C)[C@@H](O)CCC1(C)C OHCQJHSOBUTRHG-KGGHGJDLSA-N 0.000 description 6
- 208000013875 Heart injury Diseases 0.000 description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 6
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 6
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 6
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 6
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 238000011161 development Methods 0.000 description 6
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 6
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 6
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 6
- NIJJYAXOARWZEE-UHFFFAOYSA-N di-n-propyl-acetic acid Natural products CCCC(C(O)=O)CCC NIJJYAXOARWZEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 6
- 210000001654 germ layer Anatomy 0.000 description 6
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 6
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 6
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 6
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 6
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 6
- RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N puromycin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C[C@H](N)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N2C3=NC=NC(=C3N=C2)N(C)C)O[C@@H]1CO RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 6
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 6
- MSRILKIQRXUYCT-UHFFFAOYSA-M valproate semisodium Chemical compound [Na+].CCCC(C(O)=O)CCC.CCCC(C([O-])=O)CCC MSRILKIQRXUYCT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 229960000604 valproic acid Drugs 0.000 description 6
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 6
- NMUSYJAQQFHJEW-KVTDHHQDSA-N 5-azacytidine Chemical compound O=C1N=C(N)N=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 NMUSYJAQQFHJEW-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 5
- 102000005606 Activins Human genes 0.000 description 5
- 108010059616 Activins Proteins 0.000 description 5
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 5
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 description 5
- 102000004016 L-Type Calcium Channels Human genes 0.000 description 5
- 108090000420 L-Type Calcium Channels Proteins 0.000 description 5
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 5
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 5
- MEFKEPWMEQBLKI-AIRLBKTGSA-N S-adenosyl-L-methioninate Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](C[S+](CC[C@H](N)C([O-])=O)C)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 MEFKEPWMEQBLKI-AIRLBKTGSA-N 0.000 description 5
- 239000000488 activin Substances 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 229960002756 azacitidine Drugs 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 210000002459 blastocyst Anatomy 0.000 description 5
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 5
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 5
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 5
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 5
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 5
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 5
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 5
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 5
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 5
- 241000894007 species Species 0.000 description 5
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 5
- CDKIEBFIMCSCBB-UHFFFAOYSA-N 1-(6,7-dimethoxy-3,4-dihydro-1h-isoquinolin-2-yl)-3-(1-methyl-2-phenylpyrrolo[2,3-b]pyridin-3-yl)prop-2-en-1-one;hydrochloride Chemical compound Cl.C1C=2C=C(OC)C(OC)=CC=2CCN1C(=O)C=CC(C1=CC=CN=C1N1C)=C1C1=CC=CC=C1 CDKIEBFIMCSCBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- BTUOOXPZOVNPMF-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(1,3-benzodioxol-5-yl)-2-tert-butyl-1h-imidazol-5-yl]-6-methylpyridine;hydrochloride Chemical compound Cl.CC1=CC=CC(C2=C(N=C(N2)C(C)(C)C)C=2C=C3OCOC3=CC=2)=N1 BTUOOXPZOVNPMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 4
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 4
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 4
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 description 4
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 4
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 4
- 102000019058 Glycogen Synthase Kinase 3 beta Human genes 0.000 description 4
- 108010051975 Glycogen Synthase Kinase 3 beta Proteins 0.000 description 4
- 108010085895 Laminin Proteins 0.000 description 4
- 102000007547 Laminin Human genes 0.000 description 4
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 4
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 4
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000043136 MAP kinase family Human genes 0.000 description 4
- 108091054455 MAP kinase family Proteins 0.000 description 4
- 102100024193 Mitogen-activated protein kinase 1 Human genes 0.000 description 4
- YXOLAZRVSSWPPT-UHFFFAOYSA-N Morin Chemical compound OC1=CC(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2O1 YXOLAZRVSSWPPT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102100030590 Mothers against decapentaplegic homolog 6 Human genes 0.000 description 4
- 101710143114 Mothers against decapentaplegic homolog 6 Proteins 0.000 description 4
- 102100030608 Mothers against decapentaplegic homolog 7 Human genes 0.000 description 4
- 108010067902 Peptide Library Proteins 0.000 description 4
- 101700026522 SMAD7 Proteins 0.000 description 4
- 230000010632 Transcription Factor Activity Effects 0.000 description 4
- RTKIYFITIVXBLE-UHFFFAOYSA-N Trichostatin A Natural products ONC(=O)C=CC(C)=CC(C)C(=O)C1=CC=C(N(C)C)C=C1 RTKIYFITIVXBLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 4
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 4
- 229940049706 benzodiazepine Drugs 0.000 description 4
- 150000001557 benzodiazepines Chemical class 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 239000000801 calcium channel stimulating agent Substances 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 230000007348 cell dedifferentiation Effects 0.000 description 4
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 4
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 210000003981 ectoderm Anatomy 0.000 description 4
- 210000001900 endoderm Anatomy 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 238000013537 high throughput screening Methods 0.000 description 4
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 4
- 210000003716 mesoderm Anatomy 0.000 description 4
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 4
- UXOUKMQIEVGVLY-UHFFFAOYSA-N morin Natural products OC1=CC(O)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UXOUKMQIEVGVLY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FMURUEPQXKJIPS-UHFFFAOYSA-N n-(1-benzylpiperidin-4-yl)-6,7-dimethoxy-2-(4-methyl-1,4-diazepan-1-yl)quinazolin-4-amine;trihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.Cl.C=12C=C(OC)C(OC)=CC2=NC(N2CCN(C)CCC2)=NC=1NC(CC1)CCN1CC1=CC=CC=C1 FMURUEPQXKJIPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 4
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000029279 positive regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 4
- RTKIYFITIVXBLE-QEQCGCAPSA-N trichostatin A Chemical compound ONC(=O)/C=C/C(/C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1=CC=C(N(C)C)C=C1 RTKIYFITIVXBLE-QEQCGCAPSA-N 0.000 description 4
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 4
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LBPKYPYHDKKRFS-UHFFFAOYSA-N 1,5-naphthyridine, 2-[3-(6-methyl-2-pyridinyl)-1h-pyrazol-4-yl]- Chemical compound CC1=CC=CC(C2=C(C=NN2)C=2N=C3C=CC=NC3=CC=2)=N1 LBPKYPYHDKKRFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 17β-estradiol Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 0.000 description 3
- GFMMXOIFOQCCGU-UHFFFAOYSA-N 2-(2-chloro-4-iodoanilino)-N-(cyclopropylmethoxy)-3,4-difluorobenzamide Chemical compound C=1C=C(I)C=C(Cl)C=1NC1=C(F)C(F)=CC=C1C(=O)NOCC1CC1 GFMMXOIFOQCCGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XAUDJQYHKZQPEU-KVQBGUIXSA-N 5-aza-2'-deoxycytidine Chemical compound O=C1N=C(N)N=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 XAUDJQYHKZQPEU-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 3
- HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N Ala-Gln Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- MLDQJTXFUGDVEO-UHFFFAOYSA-N BAY-43-9006 Chemical compound C1=NC(C(=O)NC)=CC(OC=2C=CC(NC(=O)NC=3C=C(C(Cl)=CC=3)C(F)(F)F)=CC=2)=C1 MLDQJTXFUGDVEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 3
- SUZLHDUTVMZSEV-UHFFFAOYSA-N Deoxycoleonol Natural products C12C(=O)CC(C)(C=C)OC2(C)C(OC(=O)C)C(O)C2C1(C)C(O)CCC2(C)C SUZLHDUTVMZSEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100024785 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 3
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 3
- 102000003964 Histone deacetylase Human genes 0.000 description 3
- 108090000353 Histone deacetylase Proteins 0.000 description 3
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 3
- 238000010240 RT-PCR analysis Methods 0.000 description 3
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- JDSJDASOXWCHPN-UHFFFAOYSA-N TDZD-8 Chemical compound O=C1N(C)SC(=O)N1CC1=CC=CC=C1 JDSJDASOXWCHPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960001570 ademetionine Drugs 0.000 description 3
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 3
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 3
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 3
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 3
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 3
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- OHCQJHSOBUTRHG-UHFFFAOYSA-N colforsin Natural products OC12C(=O)CC(C)(C=C)OC1(C)C(OC(=O)C)C(O)C1C2(C)C(O)CCC1(C)C OHCQJHSOBUTRHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 210000002242 embryoid body Anatomy 0.000 description 3
- 210000002304 esc Anatomy 0.000 description 3
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 3
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 3
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 3
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 3
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 3
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 3
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 230000006799 invasive growth in response to glucose limitation Effects 0.000 description 3
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 3
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 3
- 210000003098 myoblast Anatomy 0.000 description 3
- YAEMHJKFIIIULI-UHFFFAOYSA-N n-(4-methoxybenzyl)-n'-(5-nitro-1,3-thiazol-2-yl)urea Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1CNC(=O)NC1=NC=C([N+]([O-])=O)S1 YAEMHJKFIIIULI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 3
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 3
- 210000002997 osteoclast Anatomy 0.000 description 3
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 3
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 3
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 229950010131 puromycin Drugs 0.000 description 3
- 239000000018 receptor agonist Substances 0.000 description 3
- 229940044601 receptor agonist Drugs 0.000 description 3
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 3
- CYOHGALHFOKKQC-UHFFFAOYSA-N selumetinib Chemical compound OCCONC(=O)C=1C=C2N(C)C=NC2=C(F)C=1NC1=CC=C(Br)C=C1Cl CYOHGALHFOKKQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 3
- MFBOGIVSZKQAPD-UHFFFAOYSA-M sodium butyrate Chemical compound [Na+].CCCC([O-])=O MFBOGIVSZKQAPD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 239000012453 solvate Substances 0.000 description 3
- 229960003787 sorafenib Drugs 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical group N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- RWEVIPRMPFNTLO-UHFFFAOYSA-N 2-(2-fluoro-4-iodoanilino)-N-(2-hydroxyethoxy)-1,5-dimethyl-6-oxo-3-pyridinecarboxamide Chemical compound CN1C(=O)C(C)=CC(C(=O)NOCCO)=C1NC1=CC=C(I)C=C1F RWEVIPRMPFNTLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZRHRPGSSSVYBRG-UHFFFAOYSA-N 2-[(3-iodophenyl)methylthio]-5-pyridin-4-yl-1,3,4-oxadiazole Chemical compound IC1=CC=CC(CSC=2OC(=NN=2)C=2C=CN=CC=2)=C1 ZRHRPGSSSVYBRG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KYVDGDMQERQKOY-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-1-(4,5-dibromo-2-thiophenyl)ethanone Chemical compound ClCC(=O)C1=CC(Br)=C(Br)S1 KYVDGDMQERQKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BDCBRQYHYNUWAM-UHFFFAOYSA-N 2-phenyl-4-(5-pyridin-2-yl-1h-pyrazol-4-yl)pyridine Chemical compound C1=NNC(C=2N=CC=CC=2)=C1C(C=1)=CC=NC=1C1=CC=CC=C1 BDCBRQYHYNUWAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004105 2-pyridyl group Chemical group N1=C([*])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WUUGFSXJNOTRMR-IOSLPCCCSA-N 5'-S-methyl-5'-thioadenosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CSC)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 WUUGFSXJNOTRMR-IOSLPCCCSA-N 0.000 description 2
- NMUSYJAQQFHJEW-UHFFFAOYSA-N 5-Azacytidine Natural products O=C1N=C(N)N=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 NMUSYJAQQFHJEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 2
- IGAZHQIYONOHQN-UHFFFAOYSA-N Alexa Fluor 555 Chemical compound C=12C=CC(=N)C(S(O)(=O)=O)=C2OC2=C(S(O)(=O)=O)C(N)=CC=C2C=1C1=CC=C(C(O)=O)C=C1C(O)=O IGAZHQIYONOHQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KXDAEFPNCMNJSK-UHFFFAOYSA-N Benzamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CC=C1 KXDAEFPNCMNJSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060000903 Beta-catenin Proteins 0.000 description 2
- 102000015735 Beta-catenin Human genes 0.000 description 2
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- QCMYYKRYFNMIEC-UHFFFAOYSA-N COP(O)=O Chemical class COP(O)=O QCMYYKRYFNMIEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940122642 Calcium channel agonist Drugs 0.000 description 2
- 206010068051 Chimerism Diseases 0.000 description 2
- 230000007067 DNA methylation Effects 0.000 description 2
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 2
- 241000255581 Drosophila <fruit fly, genus> Species 0.000 description 2
- 102100038132 Endogenous retrovirus group K member 6 Pro protein Human genes 0.000 description 2
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- MDMWHKZANMNXTF-UHFFFAOYSA-N FPL 64176 Chemical compound COC(=O)C1=C(C)NC(C)=C1C(=O)C1=CC=CC=C1CC1=CC=CC=C1 MDMWHKZANMNXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 2
- WMBWREPUVVBILR-UHFFFAOYSA-N GCG Natural products C=1C(O)=C(O)C(O)=CC=1C1OC2=CC(O)=CC(O)=C2CC1OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 WMBWREPUVVBILR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000687905 Homo sapiens Transcription factor SOX-2 Proteins 0.000 description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010061216 Infarction Diseases 0.000 description 2
- 208000002260 Keloid Diseases 0.000 description 2
- 239000002147 L01XE04 - Sunitinib Substances 0.000 description 2
- 239000005511 L01XE05 - Sorafenib Substances 0.000 description 2
- 239000003798 L01XE11 - Pazopanib Substances 0.000 description 2
- 239000002118 L01XE12 - Vandetanib Substances 0.000 description 2
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100025725 Mothers against decapentaplegic homolog 4 Human genes 0.000 description 2
- 101710143112 Mothers against decapentaplegic homolog 4 Proteins 0.000 description 2
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 2
- 101100310657 Mus musculus Sox1 gene Proteins 0.000 description 2
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 101710150336 Protein Rex Proteins 0.000 description 2
- 101710149951 Protein Tat Proteins 0.000 description 2
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 2
- 101710183548 Pyridoxal 5'-phosphate synthase subunit PdxS Proteins 0.000 description 2
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 2
- YASAKCUCGLMORW-UHFFFAOYSA-N Rosiglitazone Chemical compound C=1C=CC=NC=1N(C)CCOC(C=C1)=CC=C1CC1SC(=O)NC1=O YASAKCUCGLMORW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZJUKTBDSGOFHSH-WFMPWKQPSA-N S-Adenosylhomocysteine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CSCC[C@H](N)C(O)=O)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 ZJUKTBDSGOFHSH-WFMPWKQPSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 2
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 2
- 206010043276 Teratoma Diseases 0.000 description 2
- 102100024270 Transcription factor SOX-2 Human genes 0.000 description 2
- 229930189037 Trapoxin Natural products 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 102000004987 Troponin T Human genes 0.000 description 2
- 108090001108 Troponin T Proteins 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 101150063416 add gene Proteins 0.000 description 2
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 238000002266 amputation Methods 0.000 description 2
- 238000003491 array Methods 0.000 description 2
- 229960003005 axitinib Drugs 0.000 description 2
- RITAVMQDGBJQJZ-FMIVXFBMSA-N axitinib Chemical compound CNC(=O)C1=CC=CC=C1SC1=CC=C(C(\C=C\C=2N=CC=CC=2)=NN2)C2=C1 RITAVMQDGBJQJZ-FMIVXFBMSA-N 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- ACWZRVQXLIRSDF-UHFFFAOYSA-N binimetinib Chemical compound OCCONC(=O)C=1C=C2N(C)C=NC2=C(F)C=1NC1=CC=C(Br)C=C1F ACWZRVQXLIRSDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 238000001369 bisulfite sequencing Methods 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 2
- 238000010805 cDNA synthesis kit Methods 0.000 description 2
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 2
- 239000012830 cancer therapeutic Substances 0.000 description 2
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 108010027178 cyclic hydroxamic acid-containing peptide 1 Proteins 0.000 description 2
- 238000004163 cytometry Methods 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 239000006274 endogenous ligand Substances 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 230000007705 epithelial mesenchymal transition Effects 0.000 description 2
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 229960005309 estradiol Drugs 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 2
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 2
- 238000003365 immunocytochemistry Methods 0.000 description 2
- 230000007574 infarction Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 2
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 2
- 210000001117 keloid Anatomy 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 150000002611 lead compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- ZFLWDHHVRRZMEI-UHFFFAOYSA-N methyl 2,6-dimethyl-5-nitro-4-[2-(trifluoromethyl)phenyl]-1,4-dihydropyridine-3-carboxylate Chemical compound COC(=O)C1=C(C)NC(C)=C([N+]([O-])=O)C1C1=CC=CC=C1C(F)(F)F ZFLWDHHVRRZMEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 2
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 2
- 235000007708 morin Nutrition 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 201000008383 nephritis Diseases 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 2
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 229960000639 pazopanib Drugs 0.000 description 2
- CUIHSIWYWATEQL-UHFFFAOYSA-N pazopanib Chemical compound C1=CC2=C(C)N(C)N=C2C=C1N(C)C(N=1)=CC=NC=1NC1=CC=C(C)C(S(N)(=O)=O)=C1 CUIHSIWYWATEQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 2
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 2
- HYAFETHFCAUJAY-UHFFFAOYSA-N pioglitazone Chemical compound N1=CC(CC)=CC=C1CCOC(C=C1)=CC=C1CC1C(=O)NC(=O)S1 HYAFETHFCAUJAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- XSCHRSMBECNVNS-UHFFFAOYSA-N quinoxaline Chemical compound N1=CC=NC2=CC=CC=C21 XSCHRSMBECNVNS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007420 reactivation Effects 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 2
- 108010091666 romidepsin Proteins 0.000 description 2
- 229960003452 romidepsin Drugs 0.000 description 2
- OHRURASPPZQGQM-GCCNXGTGSA-N romidepsin Chemical compound O1C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)C(=C/C)/NC(=O)[C@H]2CSSCC\C=C\[C@@H]1CC(=O)N[C@H](C(C)C)C(=O)N2 OHRURASPPZQGQM-GCCNXGTGSA-N 0.000 description 2
- OHRURASPPZQGQM-UHFFFAOYSA-N romidepsin Natural products O1C(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(=CC)NC(=O)C2CSSCCC=CC1CC(=O)NC(C(C)C)C(=O)N2 OHRURASPPZQGQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 2
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 229960001796 sunitinib Drugs 0.000 description 2
- WINHZLLDWRZWRT-ATVHPVEESA-N sunitinib Chemical compound CCN(CC)CCNC(=O)C1=C(C)NC(\C=C/2C3=CC(F)=CC=C3NC\2=O)=C1C WINHZLLDWRZWRT-ATVHPVEESA-N 0.000 description 2
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 210000003014 totipotent stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 2
- 238000011222 transcriptome analysis Methods 0.000 description 2
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- 108010060597 trapoxin A Proteins 0.000 description 2
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 2
- 229960000241 vandetanib Drugs 0.000 description 2
- UHTHHESEBZOYNR-UHFFFAOYSA-N vandetanib Chemical compound COC1=CC(C(/N=CN2)=N/C=3C(=CC(Br)=CC=3)F)=C2C=C1OCC1CCN(C)CC1 UHTHHESEBZOYNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229950000578 vatalanib Drugs 0.000 description 2
- YCOYDOIWSSHVCK-UHFFFAOYSA-N vatalanib Chemical compound C1=CC(Cl)=CC=C1NC(C1=CC=CC=C11)=NN=C1CC1=CC=NC=C1 YCOYDOIWSSHVCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000237 vorinostat Drugs 0.000 description 2
- WAEXFXRVDQXREF-UHFFFAOYSA-N vorinostat Chemical compound ONC(=O)CCCCCCC(=O)NC1=CC=CC=C1 WAEXFXRVDQXREF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WMBWREPUVVBILR-WIYYLYMNSA-N (-)-Epigallocatechin-3-o-gallate Chemical compound O([C@@H]1CC2=C(O)C=C(C=C2O[C@@H]1C=1C=C(O)C(O)=C(O)C=1)O)C(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 WMBWREPUVVBILR-WIYYLYMNSA-N 0.000 description 1
- LAQPKDLYOBZWBT-NYLDSJSYSA-N (2s,4s,5r,6r)-5-acetamido-2-{[(2s,3r,4s,5s,6r)-2-{[(2r,3r,4r,5r)-5-acetamido-1,2-dihydroxy-6-oxo-4-{[(2s,3s,4r,5s,6s)-3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxy}hexan-3-yl]oxy}-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy}-4-hydroxy-6-[(1r,2r)-1,2,3-trihydrox Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@H]([C@@H](NC(C)=O)C=O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@]2(O[C@H]([C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)C2)[C@H](O)[C@H](O)CO)C(O)=O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 LAQPKDLYOBZWBT-NYLDSJSYSA-N 0.000 description 1
- QXSIYYQGSPCIHN-UHFFFAOYSA-N 1,1-dimethyl-2-[4-(5-nitrofuran-2-yl)-1,3-thiazol-2-yl]hydrazine Chemical compound S1C(NN(C)C)=NC(C=2OC(=CC=2)[N+]([O-])=O)=C1 QXSIYYQGSPCIHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NTSBZVCEIVPKBJ-UHFFFAOYSA-N 1-azakenpaullone Chemical compound C1C(=O)NC2=CC=CN=C2C2=C1C1=CC(Br)=CC=C1N2 NTSBZVCEIVPKBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011714 129 mouse Methods 0.000 description 1
- HIRPMCAAOWFCHY-UHFFFAOYSA-N 166020-57-1 Chemical compound CN1C(=O)C(C(NC2=CC=CC=C22)=O)CC12C1=CC=CC=C1 HIRPMCAAOWFCHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VGONTNSXDCQUGY-RRKCRQDMSA-N 2'-deoxyinosine Chemical group C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(N=CNC2=O)=C2N=C1 VGONTNSXDCQUGY-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- RUJZRLFQRAMGNM-UHFFFAOYSA-N 2,4-dibenzyl-3-sulfanylidene-1,2,4-thiadiazolidin-5-one Chemical compound S=C1N(CC=2C=CC=CC=2)C(=O)SN1CC1=CC=CC=C1 RUJZRLFQRAMGNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FRKNLNPIFZHIIZ-UHFFFAOYSA-N 2-aminosulfanylprop-2-enenitrile Chemical compound NSC(=C)C#N FRKNLNPIFZHIIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VPVLEBIVXZSOMQ-UHFFFAOYSA-N 3-[[6-(3-aminophenyl)-7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl]oxy]phenol Chemical compound NC1=CC=CC(C=2NC3=NC=NC(OC=4C=C(O)C=CC=4)=C3C=2)=C1 VPVLEBIVXZSOMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QOXOZONBQWIKDA-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxypropyl Chemical group [CH2]CCO QOXOZONBQWIKDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003349 3-pyridyl group Chemical group N1=C([H])C([*])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- QCQCHGYLTSGIGX-GHXANHINSA-N 4-[[(3ar,5ar,5br,7ar,9s,11ar,11br,13as)-5a,5b,8,8,11a-pentamethyl-3a-[(5-methylpyridine-3-carbonyl)amino]-2-oxo-1-propan-2-yl-4,5,6,7,7a,9,10,11,11b,12,13,13a-dodecahydro-3h-cyclopenta[a]chrysen-9-yl]oxy]-2,2-dimethyl-4-oxobutanoic acid Chemical compound N([C@@]12CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@H]5C(C)(C)[C@@H](OC(=O)CC(C)(C)C(O)=O)CC[C@]5(C)[C@H]4CC[C@@H]3C1=C(C(C2)=O)C(C)C)C(=O)C1=CN=CC(C)=C1 QCQCHGYLTSGIGX-GHXANHINSA-N 0.000 description 1
- GEBBCNXOYOVGQS-BNHYGAARSA-N 4-amino-1-[(2r,3r,4s,5s)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxyamino)oxolan-2-yl]pyrimidin-2-one Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](NO)O1 GEBBCNXOYOVGQS-BNHYGAARSA-N 0.000 description 1
- JFUAWXPBHXKZGA-IBGZPJMESA-N 4-fluoro-2-[(4r)-5,5,5-trifluoro-4-hydroxy-2-methyl-4-(1h-pyrrolo[2,3-c]pyridin-2-ylmethyl)pentan-2-yl]phenol Chemical compound C([C@@](O)(CC=1NC2=CN=CC=C2C=1)C(F)(F)F)C(C)(C)C1=CC(F)=CC=C1O JFUAWXPBHXKZGA-IBGZPJMESA-N 0.000 description 1
- UVGNZJPJZDDRNU-UHFFFAOYSA-N 4-methoxy-N-[(5-nitro-1,3-thiazol-2-yl)carbamoyl]benzamide Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C(=O)NC(=O)NC1=NC=C([N+]([O-])=O)S1 UVGNZJPJZDDRNU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VSBNVARERCGCEF-UHFFFAOYSA-N 5,11-dimethyl-6h-pyrido[4,3-b]carbazole;hydrochloride Chemical compound Cl.N1=CC=C2C(C)=C(NC=3C4=CC=CC=3)C4=C(C)C2=C1 VSBNVARERCGCEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NKOHRVBBQISBSB-UHFFFAOYSA-N 5-[(4-hydroxyphenyl)methyl]-1,3-thiazolidine-2,4-dione Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1CC1C(=O)NC(=O)S1 NKOHRVBBQISBSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 5-bromo-4-chloro-3-indolyl beta-D-galactoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CNC2=CC=C(Br)C(Cl)=C12 OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 0.000 description 1
- DVKQVRZMKBDMDH-UUOKFMHZSA-N 8-Br-cAMP Chemical compound C([C@H]1O2)OP(O)(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H]2N1C(N=CN=C2N)=C2N=C1Br DVKQVRZMKBDMDH-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 1
- 239000013607 AAV vector Substances 0.000 description 1
- 102100034134 Activin receptor type-1B Human genes 0.000 description 1
- 102100034135 Activin receptor type-1C Human genes 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 108700031308 Antennapedia Homeodomain Proteins 0.000 description 1
- 238000012935 Averaging Methods 0.000 description 1
- 102100024505 Bone morphogenetic protein 4 Human genes 0.000 description 1
- WDPFQABQVGJEBZ-MAKOZQESSA-N Bothermon Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1.O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 WDPFQABQVGJEBZ-MAKOZQESSA-N 0.000 description 1
- 241000208199 Buxus sempervirens Species 0.000 description 1
- MDZCSIDIPDZWKL-UHFFFAOYSA-N CHIR-98014 Chemical compound C1=C([N+]([O-])=O)C(N)=NC(NCCNC=2N=C(C(=CN=2)N2C=NC=C2)C=2C(=CC(Cl)=CC=2)Cl)=C1 MDZCSIDIPDZWKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000000905 Cadherin Human genes 0.000 description 1
- 108050007957 Cadherin Proteins 0.000 description 1
- 101100342337 Caenorhabditis elegans klf-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100257372 Caenorhabditis elegans sox-3 gene Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 102100025064 Cellular tumor antigen p53 Human genes 0.000 description 1
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 1
- 208000006545 Chronic Obstructive Pulmonary Disease Diseases 0.000 description 1
- KPSRODZRAIWAKH-JTQLQIEISA-N Ciprofibrate Natural products C1=CC(OC(C)(C)C(O)=O)=CC=C1[C@H]1C(Cl)(Cl)C1 KPSRODZRAIWAKH-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- 102000005636 Cyclic AMP Response Element-Binding Protein Human genes 0.000 description 1
- 108010045171 Cyclic AMP Response Element-Binding Protein Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- XUIIKFGFIJCVMT-GFCCVEGCSA-N D-thyroxine Chemical compound IC1=CC(C[C@@H](N)C(O)=O)=CC(I)=C1OC1=CC(I)=C(O)C(I)=C1 XUIIKFGFIJCVMT-GFCCVEGCSA-N 0.000 description 1
- LUKZREJJLWEWQM-UHFFFAOYSA-N DMNT Natural products CC(C)=CCCC(C)=CC=C LUKZREJJLWEWQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 238000007399 DNA isolation Methods 0.000 description 1
- 229940126190 DNA methyltransferase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 108010002156 Depsipeptides Proteins 0.000 description 1
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 102100037124 Developmental pluripotency-associated 5 protein Human genes 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 206010056340 Diabetic ulcer Diseases 0.000 description 1
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012594 Earle’s Balanced Salt Solution Substances 0.000 description 1
- 206010014561 Emphysema Diseases 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241001198387 Escherichia coli BL21(DE3) Species 0.000 description 1
- 229940124602 FDA-approved drug Drugs 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- HEMJJKBWTPKOJG-UHFFFAOYSA-N Gemfibrozil Chemical compound CC1=CC=C(C)C(OCCCC(C)(C)C(O)=O)=C1 HEMJJKBWTPKOJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003676 Glucocorticoid Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108090000079 Glucocorticoid Receptors Proteins 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- 108010053070 Glutathione Disulfide Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 1
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 1
- 206010019728 Hepatitis alcoholic Diseases 0.000 description 1
- 108010027412 Histocompatibility Antigens Class II Proteins 0.000 description 1
- 102000018713 Histocompatibility Antigens Class II Human genes 0.000 description 1
- 102100033636 Histone H3.2 Human genes 0.000 description 1
- 102000006947 Histones Human genes 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000799189 Homo sapiens Activin receptor type-1B Proteins 0.000 description 1
- 101000799193 Homo sapiens Activin receptor type-1C Proteins 0.000 description 1
- 101000762379 Homo sapiens Bone morphogenetic protein 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000721661 Homo sapiens Cellular tumor antigen p53 Proteins 0.000 description 1
- 101000881848 Homo sapiens Developmental pluripotency-associated 5 protein Proteins 0.000 description 1
- 101001139134 Homo sapiens Krueppel-like factor 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000615488 Homo sapiens Methyl-CpG-binding domain protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000984042 Homo sapiens Protein lin-28 homolog A Proteins 0.000 description 1
- 101000635804 Homo sapiens Tissue factor Proteins 0.000 description 1
- 101000777245 Homo sapiens Undifferentiated embryonic cell transcription factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000713340 Human immunodeficiency virus 2 Species 0.000 description 1
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 1
- 208000029523 Interstitial Lung disease Diseases 0.000 description 1
- SHGAZHPCJJPHSC-NUEINMDLSA-N Isotretinoin Chemical compound OC(=O)C=C(C)/C=C/C=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C SHGAZHPCJJPHSC-NUEINMDLSA-N 0.000 description 1
- 102100020677 Krueppel-like factor 4 Human genes 0.000 description 1
- 108010017123 Kruppel-Like Transcription Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000004434 Kruppel-Like Transcription Factors Human genes 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 239000005517 L01XE01 - Imatinib Substances 0.000 description 1
- 208000034693 Laceration Diseases 0.000 description 1
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006137 Luria-Bertani broth Substances 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 1
- 102100021299 Methyl-CpG-binding domain protein 2 Human genes 0.000 description 1
- VKEQBMCRQDSRET-UHFFFAOYSA-N Methylone Chemical compound CNC(C)C(=O)C1=CC=C2OCOC2=C1 VKEQBMCRQDSRET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 description 1
- 101100355655 Mus musculus Eras gene Proteins 0.000 description 1
- 101100446513 Mus musculus Fgf4 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100137157 Mus musculus Pou5f1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100310650 Mus musculus Sox18 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100257376 Mus musculus Sox3 gene Proteins 0.000 description 1
- 108091057508 Myc family Proteins 0.000 description 1
- 101710150912 Myc protein Proteins 0.000 description 1
- 108700026495 N-Myc Proto-Oncogene Proteins 0.000 description 1
- UIAYVIIHMORPSJ-UHFFFAOYSA-N N-cyclohexyl-N-methyl-4-[(2-oxo-1H-quinolin-6-yl)oxy]butanamide Chemical compound C=1C=C2NC(=O)C=CC2=CC=1OCCCC(=O)N(C)C1CCCCC1 UIAYVIIHMORPSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100030124 N-myc proto-oncogene protein Human genes 0.000 description 1
- 241001028048 Nicola Species 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102000043276 Oncogene Human genes 0.000 description 1
- 229940126033 PPAR agonist Drugs 0.000 description 1
- 102000052651 Pancreatic hormone Human genes 0.000 description 1
- 101800001268 Pancreatic hormone Proteins 0.000 description 1
- 206010033645 Pancreatitis Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 108010043958 Peptoids Proteins 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 208000004210 Pressure Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 102100025460 Protein lin-28 homolog A Human genes 0.000 description 1
- 239000013614 RNA sample Substances 0.000 description 1
- 101100127230 Rattus norvegicus Khdc3 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241001068295 Replication defective viruses Species 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- 239000012327 Ruthenium complex Substances 0.000 description 1
- 238000011579 SCID mouse model Methods 0.000 description 1
- 101150086694 SLC22A3 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100439027 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) cdc2 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000012506 Sephacryl® Substances 0.000 description 1
- 102000007365 Sialoglycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010032838 Sialoglycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 241000713311 Simian immunodeficiency virus Species 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- 101150001847 Sox15 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- NAVMQTYZDKMPEU-UHFFFAOYSA-N Targretin Chemical compound CC1=CC(C(CCC2(C)C)(C)C)=C2C=C1C(=C)C1=CC=C(C(O)=O)C=C1 NAVMQTYZDKMPEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710192266 Tegument protein VP22 Proteins 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N Thiophosphoric acid Chemical class OP(O)(S)=O RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700009124 Transcription Initiation Site Proteins 0.000 description 1
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 1
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 102000004903 Troponin Human genes 0.000 description 1
- 108090001027 Troponin Proteins 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 102100031278 Undifferentiated embryonic cell transcription factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 208000000558 Varicose Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 1
- 108010087302 Viral Structural Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000013814 Wnt Human genes 0.000 description 1
- 108050003627 Wnt Proteins 0.000 description 1
- 230000004156 Wnt signaling pathway Effects 0.000 description 1
- 102000052549 Wnt-3 Human genes 0.000 description 1
- 108700020985 Wnt-3 Proteins 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 101710185494 Zinc finger protein Proteins 0.000 description 1
- 102100023597 Zinc finger protein 816 Human genes 0.000 description 1
- HUDSYNWJCPDHLL-CJLVFECKSA-N [(E)-[2-(6-bromo-2-hydroxy-1H-indol-3-yl)indol-3-ylidene]amino] acetate Chemical compound CC(=O)O\N=C1\C(=Nc2ccccc12)c1c(O)[nH]c2cc(Br)ccc12 HUDSYNWJCPDHLL-CJLVFECKSA-N 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004504 adult stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000001270 agonistic effect Effects 0.000 description 1
- 208000002353 alcoholic hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 150000001447 alkali salts Chemical class 0.000 description 1
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N all-trans-retinoic acid Chemical compound OC(=O)\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N 0.000 description 1
- 238000011316 allogeneic transplantation Methods 0.000 description 1
- 230000001668 ameliorated effect Effects 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000003098 androgen Substances 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 229940124599 anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 1
- 150000001484 arginines Chemical class 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 description 1
- 238000010009 beating Methods 0.000 description 1
- 230000003796 beauty Effects 0.000 description 1
- NCNRHFGMJRPRSK-MDZDMXLPSA-N belinostat Chemical compound ONC(=O)\C=C\C1=CC=CC(S(=O)(=O)NC=2C=CC=CC=2)=C1 NCNRHFGMJRPRSK-MDZDMXLPSA-N 0.000 description 1
- 229960003094 belinostat Drugs 0.000 description 1
- 229960002938 bexarotene Drugs 0.000 description 1
- 229960000516 bezafibrate Drugs 0.000 description 1
- IIBYAHWJQTYFKB-UHFFFAOYSA-N bezafibrate Chemical compound C1=CC(OC(C)(C)C(O)=O)=CC=C1CCNC(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 IIBYAHWJQTYFKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 206010006451 bronchitis Diseases 0.000 description 1
- CJGYSWNGNKCJSB-YVLZZHOMSA-N bucladesine Chemical compound C([C@H]1O2)OP(O)(=O)O[C@H]1[C@@H](OC(=O)CCC)[C@@H]2N1C(N=CN=C2NC(=O)CCC)=C2N=C1 CJGYSWNGNKCJSB-YVLZZHOMSA-N 0.000 description 1
- 229960005263 bucladesine Drugs 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 231100000315 carcinogenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 230000010307 cell transformation Effects 0.000 description 1
- 230000004700 cellular uptake Effects 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 206010008118 cerebral infarction Diseases 0.000 description 1
- 208000026106 cerebrovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 150000005829 chemical entities Chemical class 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- YZFWTZACSRHJQD-UHFFFAOYSA-N ciglitazone Chemical compound C=1C=C(CC2C(NC(=O)S2)=O)C=CC=1OCC1(C)CCCCC1 YZFWTZACSRHJQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950009226 ciglitazone Drugs 0.000 description 1
- 229950002934 cilostamide Drugs 0.000 description 1
- 229960002174 ciprofibrate Drugs 0.000 description 1
- KPSRODZRAIWAKH-UHFFFAOYSA-N ciprofibrate Chemical compound C1=CC(OC(C)(C)C(O)=O)=CC=C1C1C(Cl)(Cl)C1 KPSRODZRAIWAKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 1
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 1
- 229960002842 clobetasol Drugs 0.000 description 1
- CBGUOGMQLZIXBE-XGQKBEPLSA-N clobetasol propionate Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@H](C)[C@@](C(=O)CCl)(OC(=O)CC)[C@@]1(C)C[C@@H]2O CBGUOGMQLZIXBE-XGQKBEPLSA-N 0.000 description 1
- 229960001214 clofibrate Drugs 0.000 description 1
- KNHUKKLJHYUCFP-UHFFFAOYSA-N clofibrate Chemical compound CCOC(=O)C(C)(C)OC1=CC=C(Cl)C=C1 KNHUKKLJHYUCFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000003081 coactivator Effects 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000009295 crossflow filtration Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000013479 data entry Methods 0.000 description 1
- 229960003603 decitabine Drugs 0.000 description 1
- 238000002716 delivery method Methods 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000009025 developmental regulation Effects 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-O diethylammonium Chemical compound CC[NH2+]CC HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 1
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003968 dna methyltransferase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 1
- 238000007876 drug discovery Methods 0.000 description 1
- 210000001705 ectoderm cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 210000004039 endoderm cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 108700004025 env Genes Proteins 0.000 description 1
- 208000002854 epidermolysis bullosa simplex superficialis Diseases 0.000 description 1
- 230000007608 epigenetic mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000004049 epigenetic modification Effects 0.000 description 1
- 230000006565 epigenetic process Effects 0.000 description 1
- 229930182833 estradiol Natural products 0.000 description 1
- 238000011124 ex vivo culture Methods 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000003889 eye drop Substances 0.000 description 1
- 229940012356 eye drops Drugs 0.000 description 1
- 229960002297 fenofibrate Drugs 0.000 description 1
- YMTINGFKWWXKFG-UHFFFAOYSA-N fenofibrate Chemical compound C1=CC(OC(C)(C)C(=O)OC(C)C)=CC=C1C(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 YMTINGFKWWXKFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- 229940125753 fibrate Drugs 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 108700004026 gag Genes Proteins 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 229960003627 gemfibrozil Drugs 0.000 description 1
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 1
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 1
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 1
- 238000012268 genome sequencing Methods 0.000 description 1
- 229940080856 gleevec Drugs 0.000 description 1
- 229940124750 glucocorticoid receptor agonist Drugs 0.000 description 1
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- YPZRWBKMTBYPTK-BJDJZHNGSA-N glutathione disulfide Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CSSC[C@@H](C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)CC[C@H](N)C(O)=O YPZRWBKMTBYPTK-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 210000002149 gonad Anatomy 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000009067 heart development Effects 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 230000006195 histone acetylation Effects 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 150000001469 hydantoins Chemical class 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- YLMAHDNUQAMNNX-UHFFFAOYSA-N imatinib methanesulfonate Chemical compound CS(O)(=O)=O.C1CN(C)CCN1CC1=CC=C(C(=O)NC=2C=C(NC=3N=C(C=CN=3)C=3C=NC=CC=3)C(C)=CC=2)C=C1 YLMAHDNUQAMNNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 238000005462 in vivo assay Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 230000003914 insulin secretion Effects 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000006525 intracellular process Effects 0.000 description 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 1
- 229960005280 isotretinoin Drugs 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- QQUXFYAWXPMDOE-UHFFFAOYSA-N kenpaullone Chemical compound C1C(=O)NC2=CC=CC=C2C2=C1C1=CC(Br)=CC=C1N2 QQUXFYAWXPMDOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940043355 kinase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N lactose group Chemical group OC1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O2)CO)[C@H](O1)CO GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 101150111214 lin-28 gene Proteins 0.000 description 1
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910003002 lithium salt Inorganic materials 0.000 description 1
- 159000000002 lithium salts Chemical class 0.000 description 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000005976 liver dysfunction Effects 0.000 description 1
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 210000004779 membrane envelope Anatomy 0.000 description 1
- 210000001704 mesoblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 229950005555 metelimumab Drugs 0.000 description 1
- 229940098779 methanesulfonic acid Drugs 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 1
- 238000010208 microarray analysis Methods 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 229960003574 milrinone Drugs 0.000 description 1
- PZRHRDRVRGEVNW-UHFFFAOYSA-N milrinone Chemical compound N1C(=O)C(C#N)=CC(C=2C=CN=CC=2)=C1C PZRHRDRVRGEVNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- 125000004573 morpholin-4-yl group Chemical group N1(CCOCC1)* 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- RDSACQWTXKSHJT-NSHDSACASA-N n-[3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-iodoanilino)-6-methoxyphenyl]-1-[(2s)-2,3-dihydroxypropyl]cyclopropane-1-sulfonamide Chemical compound C1CC1(C[C@H](O)CO)S(=O)(=O)NC=1C(OC)=CC(F)=C(F)C=1NC1=CC=C(I)C=C1F RDSACQWTXKSHJT-NSHDSACASA-N 0.000 description 1
- NBZFRTJWEIHFPF-UHFFFAOYSA-N n-[3-[7-[(2,5-dimethylpyrazol-3-yl)amino]-1-methyl-2-oxo-4h-pyrimido[4,5-d]pyrimidin-3-yl]-4-methylphenyl]-3-(trifluoromethyl)benzamide Chemical compound N1=C2N(C)C(=O)N(C=3C(=CC=C(NC(=O)C=4C=C(C=CC=4)C(F)(F)F)C=3)C)CC2=CN=C1NC1=CC(C)=NN1C NBZFRTJWEIHFPF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 230000009826 neoplastic cell growth Effects 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 239000012457 nonaqueous media Substances 0.000 description 1
- 231100001223 noncarcinogenic Toxicity 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 230000000414 obstructive effect Effects 0.000 description 1
- 210000004248 oligodendroglia Anatomy 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000002246 oncogenic effect Effects 0.000 description 1
- 108091008820 oncogenic transcription factors Proteins 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- YPZRWBKMTBYPTK-UHFFFAOYSA-N oxidized gamma-L-glutamyl-L-cysteinylglycine Natural products OC(=O)C(N)CCC(=O)NC(C(=O)NCC(O)=O)CSSCC(C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)CCC(N)C(O)=O YPZRWBKMTBYPTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940094443 oxytocics prostaglandins Drugs 0.000 description 1
- 239000004025 pancreas hormone Substances 0.000 description 1
- 229940032957 pancreatic hormone Drugs 0.000 description 1
- FWZRWHZDXBDTFK-ZHACJKMWSA-N panobinostat Chemical compound CC1=NC2=CC=C[CH]C2=C1CCNCC1=CC=C(\C=C\C(=O)NO)C=C1 FWZRWHZDXBDTFK-ZHACJKMWSA-N 0.000 description 1
- 229960005184 panobinostat Drugs 0.000 description 1
- 108010043655 penetratin Proteins 0.000 description 1
- MCYTYTUNNNZWOK-LCLOTLQISA-N penetratin Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(N)=O)C1=CC=CC=C1 MCYTYTUNNNZWOK-LCLOTLQISA-N 0.000 description 1
- 239000000816 peptidomimetic Substances 0.000 description 1
- 239000002307 peroxisome proliferator activated receptor agonist Substances 0.000 description 1
- 230000009038 pharmacological inhibition Effects 0.000 description 1
- 238000009520 phase I clinical trial Methods 0.000 description 1
- 238000009521 phase II clinical trial Methods 0.000 description 1
- 150000008298 phosphoramidates Chemical class 0.000 description 1
- 239000003757 phosphotransferase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000037081 physical activity Effects 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229960005095 pioglitazone Drugs 0.000 description 1
- 210000005059 placental tissue Anatomy 0.000 description 1
- 108010049948 plitidepsin Proteins 0.000 description 1
- UUSZLLQJYRSZIS-LXNNNBEUSA-N plitidepsin Chemical compound CN([C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]1C(=O)N[C@@H]([C@H](CC(=O)O[C@H](C(=O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N2CCC[C@H]2C(=O)N(C)[C@@H](CC=2C=CC(OC)=CC=2)C(=O)O[C@@H]1C)C(C)C)O)[C@@H](C)CC)C(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)C(C)=O UUSZLLQJYRSZIS-LXNNNBEUSA-N 0.000 description 1
- 229950008499 plitidepsin Drugs 0.000 description 1
- 108700004029 pol Genes Proteins 0.000 description 1
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 description 1
- 229920000724 poly(L-arginine) polymer Polymers 0.000 description 1
- 108010011110 polyarginine Proteins 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 159000000001 potassium salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000007781 pre-processing Methods 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 1
- 230000004952 protein activity Effects 0.000 description 1
- 125000004076 pyridyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229940083082 pyrimidine derivative acting on arteriolar smooth muscle Drugs 0.000 description 1
- 150000003230 pyrimidines Chemical class 0.000 description 1
- 150000003235 pyrrolidines Chemical class 0.000 description 1
- 239000013608 rAAV vector Substances 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 239000002464 receptor antagonist Substances 0.000 description 1
- 229940044551 receptor antagonist Drugs 0.000 description 1
- 230000010837 receptor-mediated endocytosis Effects 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000029865 regulation of blood pressure Effects 0.000 description 1
- 230000008085 renal dysfunction Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000001718 repressive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 230000002207 retinal effect Effects 0.000 description 1
- 229930002330 retinoic acid Natural products 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 1
- HJORMJIFDVBMOB-UHFFFAOYSA-N rolipram Chemical compound COC1=CC=C(C2CC(=O)NC2)C=C1OC1CCCC1 HJORMJIFDVBMOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950005741 rolipram Drugs 0.000 description 1
- 229960004586 rosiglitazone Drugs 0.000 description 1
- 210000001908 sarcoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 description 1
- 238000007423 screening assay Methods 0.000 description 1
- 229950003647 semaxanib Drugs 0.000 description 1
- 238000011896 sensitive detection Methods 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 210000002460 smooth muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000016160 smooth muscle contraction Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- VPZRWNZGLKXFOE-UHFFFAOYSA-M sodium phenylbutyrate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)CCCC1=CC=CC=C1 VPZRWNZGLKXFOE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960002232 sodium phenylbutyrate Drugs 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000010473 stable expression Effects 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 150000003460 sulfonic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 150000003505 terpenes Chemical class 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 229940034208 thyroxine Drugs 0.000 description 1
- XUIIKFGFIJCVMT-UHFFFAOYSA-N thyroxine-binding globulin Natural products IC1=CC(CC([NH3+])C([O-])=O)=CC(I)=C1OC1=CC(I)=C(O)C(I)=C1 XUIIKFGFIJCVMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004066 trametinib Drugs 0.000 description 1
- LIRYPHYGHXZJBZ-UHFFFAOYSA-N trametinib Chemical compound CC(=O)NC1=CC=CC(N2C(N(C3CC3)C(=O)C3=C(NC=4C(=CC(I)=CC=4)F)N(C)C(=O)C(C)=C32)=O)=C1 LIRYPHYGHXZJBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003306 transcription coregulator activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040010337 transcription coregulator activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 108091006106 transcriptional activators Proteins 0.000 description 1
- 238000000844 transformation Methods 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 230000032895 transmembrane transport Effects 0.000 description 1
- GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N trimethylamine Chemical compound CN(C)C GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DRDCQJADRSJFFD-UHFFFAOYSA-N tris-hydroxymethyl-methyl-ammonium Chemical class OC[N+](C)(CO)CO DRDCQJADRSJFFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001641 troglitazone Drugs 0.000 description 1
- GXPHKUHSUJUWKP-NTKDMRAZSA-N troglitazone Natural products C([C@@]1(OC=2C(C)=C(C(=C(C)C=2CC1)O)C)C)OC(C=C1)=CC=C1C[C@H]1SC(=O)NC1=O GXPHKUHSUJUWKP-NTKDMRAZSA-N 0.000 description 1
- GXPHKUHSUJUWKP-UHFFFAOYSA-N troglitazone Chemical compound C1CC=2C(C)=C(O)C(C)=C(C)C=2OC1(C)COC(C=C1)=CC=C1CC1SC(=O)NC1=O GXPHKUHSUJUWKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 208000019553 vascular disease Diseases 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 210000004340 zona pellucida Anatomy 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0696—Artificially induced pluripotent stem cells, e.g. iPS
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/06—Antiasthmatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/08—Bronchodilators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0618—Cells of the nervous system
- C12N5/0623—Stem cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0625—Epidermal cells, skin cells; Cells of the oral mucosa
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0656—Adult fibroblasts
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/05—Inorganic components
- C12N2500/10—Metals; Metal chelators
- C12N2500/12—Light metals, i.e. alkali, alkaline earth, Be, Al, Mg
- C12N2500/14—Calcium; Ca chelators; Calcitonin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/01—Modulators of cAMP or cGMP, e.g. non-hydrolysable analogs, phosphodiesterase inhibitors, cholera toxin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/065—Modulators of histone acetylation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/10—Growth factors
- C12N2501/15—Transforming growth factor beta (TGF-β)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/60—Transcription factors
- C12N2501/602—Sox-2
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/60—Transcription factors
- C12N2501/603—Oct-3/4
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/60—Transcription factors
- C12N2501/604—Klf-4
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/60—Transcription factors
- C12N2501/605—Nanog
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/60—Transcription factors
- C12N2501/608—Lin28
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/70—Enzymes
- C12N2501/72—Transferases (EC 2.)
- C12N2501/727—Kinases (EC 2.7.)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2506/00—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells
- C12N2506/08—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells from cells of the nervous system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2506/00—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells
- C12N2506/09—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells from epidermal cells, from skin cells, from oral mucosa cells
- C12N2506/094—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells from epidermal cells, from skin cells, from oral mucosa cells from keratinocytes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2506/00—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells
- C12N2506/13—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells from connective tissue cells, from mesenchymal cells
- C12N2506/1307—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells from connective tissue cells, from mesenchymal cells from adult fibroblasts
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2506/00—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells
- C12N2506/28—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells from vascular endothelial cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Obesity (AREA)
- Psychiatry (AREA)
Abstract
Description
本願は、2008年3月17日に出願された米国特許仮出願第61/069,956号および2008年10月31日に出願された同第61/197,986号に係る優先権の恩典を主張する。これらはそれぞれ参照により組み入れられる。
幹細胞は、全能性細胞または多能性細胞と分類されることが多い。全能性幹細胞は、あらゆるものに分化する能力を有し、すなわち、体内の異なる全てのタイプの細胞を生じさせる。全能性幹細胞の一例は受精卵細胞である。多能性幹細胞は、3つの主要な生殖細胞層に由来する体内の全ての細胞タイプ、または胚そのものを生じることができる。
本発明は、哺乳動物細胞から多能性幹細胞へのリプログラミングまたは脱分化を誘導する作用物質をスクリーニングする方法を提供する。一部の態様において、前記方法は、
(a)トランスフェクトされた細胞を作製するために、Octポリペプチド、Klfポリペプチド、Mycポリペプチド、およびSoxポリペプチドのうちの全てではないが少なくとも1つを非多能性細胞に導入する工程;
(b)トランスフェクトされた細胞と、異なる作用物質のライブラリーとを接触させる工程;
(c)接触させた該細胞を多能性幹細胞の特徴についてスクリーニングする工程;ならびに
(d)幹細胞の特徴の発生と、ライブラリー由来の特定の作用物質とを相関付け、それによって、多能性幹細胞への細胞の脱分化を刺激する作用物質を特定する工程
を含む。
(a)非多能性細胞の増殖が阻害されかつ多能性幹細胞の増殖が促進されるように、細胞とMAPK/ERKキナーゼ(MEK)インヒビターとを接触させる工程;および
(b)接触させた該細胞を多能性幹細胞の特徴についてスクリーニングする工程
を含む。
工程(a)の前に、前記細胞と作用物質ライブラリーとを接触させる工程;および
工程(b)の後に、工程(b)の結果に基づいて、多能性幹細胞を誘導する作用物質を選択する工程
を含む。
(a)Octポリペプチド、Klfポリペプチド、Mycポリペプチド、およびSoxポリペプチドのうちの1つまたは複数を、非多能性細胞に導入する工程;
(b)該細胞とH3K9メチル化を阻害するかまたはH3K9脱メチルを促進する作用物質とを接触させ、それによって、人工多能性幹細胞を作製する工程
を含む。
i.非多能性細胞と、Klfポリペプチド、Octポリペプチド、Mycポリペプチド、およびSoxポリペプチドより選択される1つまたは複数の外因性ポリペプチドとの接触、
ii.その後に続く、該外因性ポリペプチドの非存在下での細胞の培養
のサイクルを少なくとも2回(例えば、2回、3回、4回、5回、またはそれ以上)含む。
(c)多能性幹細胞の特徴を示す細胞を選択する工程
をさらに含む。
第1の発現カセットに機能的に連結されたプロモーターを含む、第1のベクターであって、該第1の発現カセットがKlf4をコードするポリヌクレオチドを含む、第1のベクター;
第2の発現カセットに機能的に連結されたプロモーターを含む、第2のベクターであって、該第2の発現カセットがSox2をコードするポリヌクレオチドを含む、第2のベクター;および
第3の発現カセットに機能的に連結されたプロモーターを含む、第3のベクターであって、該第3の発現カセットがc-Mycをコードするポリヌクレオチドを含む、第3のベクター
を導入することを含む。
(a)Klfポリペプチド、Octポリペプチド、Mycポリペプチド、およびSoxポリペプチドの発現のための1つまたは複数の発現カセットを、非多能性細胞に導入する工程;
(b)該細胞と、H3K9メチル化を阻害するかまたはH3K9脱メチルを促進する作用物質とを接触させ、それによって、人工多能性幹細胞を作製する工程
を含む。
(a)該細胞と、
H3K9メチル化を阻害するかまたはH3K9脱メチルを促進する1つの作用物質(BIXを含むが、これに限定されない);
L型Caチャンネルアゴニスト(BayKを含むが、これに限定されない);
cAMP経路のアクチベーター(フォルスコリンを含むが、これに限定されない);
DNAメチルトランスフェラーゼ(DNMT)インヒビター(RG108または5-アザ-Cを含むが、これに限定されない);
核受容体リガンド(デキサメタゾンを含むが、これに限定されない);
GSK3インヒビター(CHIR99021を含むが、これに限定されない);
MEKインヒビター;
TGFβ受容体/ALK5インヒビター(SB431542、A-83-01、または2-(3-(6-メチルピリジン-2-イル)-1H-ピラゾール-4-イル)-1,5-ナフチリジンを含むが、これに限定されない);
HDACインヒビター(TSA、VPA、酪酸ナトリウム、SAHAなどを含むが、これに限定されない);および
Erkインヒビター
のうちの少なくとも1つ(例えば、1つ、2つ、3つ、4つ、またはそれ以上)と
を接触させ、それによって、人工多能性幹細胞を作製する工程を含む。
(a)前記細胞と、
i.H3K9メチル化を阻害するかまたはH3K9脱メチルを促進する1つの作用物質とを、ならびに
ii.L型Caチャンネルアゴニスト(BayKを含むが、これに限定されない);
cAMP経路のアクチベーター(フォルスコリンを含むが、これに限定されない);
DNAメチルトランスフェラーゼ(DNMT)インヒビター(RG108または5-アザ-Cを含むが、これに限定されない);
核受容体リガンド(デキサメタゾンを含むが、これに限定されない);
GSK3インヒビター(CHIR99021を含むが、これに限定されない);
MEKインヒビター;
TGFβ受容体/ALK5インヒビター(SB431542、A-83-01、または2-(3-(6-メチルピリジン-2-イル)-1H-ピラゾール-4-イル)-1,5-ナフチリジンを含むが、これに限定されない);
HDACインヒビター(TSA、VPA、酪酸ナトリウム、SAHAなどを含むが、これに限定されない);および
Erkインヒビター
からなる群より選択される1つの作用物質とを
接触させる工程を含む。
(b)Klfポリペプチド、Octポリペプチド、Mycポリペプチド、および/またはSoxポリペプチドの発現のための1つまたは複数の発現カセットを、非多能性細胞に導入する工程をさらに含む。
哺乳動物細胞と、
H3K9メチル化を阻害するかまたはH3K9脱メチルを促進する1つの作用物質;
L型Caチャンネルアゴニスト;
cAMP経路のアクチベーター;
DNAメチルトランスフェラーゼ(DNMT)インヒビター;
核受容体リガンド;
GSK3インヒビター;
MEKインヒビター;
TGFβ受容体/ALK5インヒビター,
HDACインヒビター;および
Erkインヒビター
のうちの少なくとも1つ(例えば、1つ、2つ、3つ、4つ、またはそれ以上)と
の混合物を提供する。
i.H3K9メチル化を阻害するかまたはH3K9脱メチルを促進する1つの作用物質と、
ii.L型Caチャンネルアゴニスト;
cAMP経路のアクチベーター;
DNAメチルトランスフェラーゼ(DNMT)インヒビター;
核受容体リガンド;
GSK3インヒビター;
MEKインヒビター;
TGFβ受容体/ALK5インヒビター;
HDACインヒビター;および
Erkインヒビター
からなる群より選択される1つの作用物質と
を含む。
H3K9メチル化を阻害する1つの作用物質と、
L型Caチャンネルアゴニスト;
cAMP経路のアクチベーター;
DNAメチルトランスフェラーゼ(DNMT)インヒビター;
核受容体リガンド;
GSK3インヒビター;
MEKインヒビター;
TGFβ受容体/ALK5インヒビター;
HDACインヒビター;および
Erkインヒビター
からなる群より選択される1つの作用物質と
を含む、組成物を提供する。
i.H3K9メチル化を阻害するかまたはH3K9脱メチルを促進する1つの作用物質と、
ii.L型Caチャンネルアゴニスト;
cAMP経路のアクチベーター;
DNAメチルトランスフェラーゼ(DNMT)インヒビター;
核受容体リガンド;
GSK3インヒビター;
MEKインヒビター;
TGFβ受容体/ALK5インヒビター;
HDACインヒビター;および
Erkインヒビター
からなる群より選択される1つの作用物質と
を含む、キットを提供する。
(a)Octポリペプチド、Klfポリペプチド、Mycポリペプチド、およびSoxポリペプチドのうちの1つまたは複数を該非多能性細胞に導入する工程;
(b)該細胞と、H3K9メチル化を阻害するかまたはH3K9脱メチルを促進する作用物質とを接触させ、それによって、人工多能性幹細胞を作製する工程
を含む、方法。
2. 工程(a)が、前記非多能性細胞と、Klfポリペプチド、Octポリペプチド、Mycポリペプチド、およびSoxポリペプチドより選択される1つまたは複数の外因性ポリペプチドとを接触させることを含む、請求項1記載の方法。
3. 工程(a)が、
i. 前記非多能性細胞と、Klfポリペプチド、Octポリペプチド、Mycポリペプチド、およびSoxポリペプチドより選択される1つまたは複数の外因性ポリペプチドとの接触、
ii.その後に続く、該外因性ポリペプチドの非存在下での細胞の培養
のサイクルを少なくとも2回含む、請求項2記載の方法。
4. 工程(a)が、Klfポリペプチド、Octポリペプチド、Mycポリペプチド、およびSoxポリペプチドの発現のための1つまたは複数の発現カセットを前記非多能性細胞に導入することを含む、請求項1記載の方法。
5. Octポリペプチドの発現のための発現カセットおよびSoxポリペプチドの発現のための発現カセットが前記非多能性細胞に導入される、請求項1記載の方法。
6. 導入する工程が、KLFポリペプチドおよびOctポリペプチドの発現のための1つまたは複数の発現カセットを前記非多能性細胞に導入することを含み、Mycポリペプチドおよび/またはSoxポリペプチドのための発現カセットが該細胞に導入されない、請求項1記載の方法。
7. KlfポリペプチドがKlf4であり、かつOctポリペプチドがOct4である、請求項1〜6のいずれか一項記載の方法。
8. 前記非多能性細胞が体細胞である、請求項1〜7のいずれか一項記載の方法。
9. 前記非多能性細胞が線維芽細胞である、請求項1〜7のいずれか一項記載の方法。
10. Mycポリペプチドの発現のための発現カセットもKlfポリペプチドの発現のための発現カセットも前記非多能性細胞に導入されない、請求項1〜7のいずれか一項記載の方法。
11. 導入する工程がインビボで行われる、請求項1〜10のいずれか一項記載の方法。
12. 導入する工程がインビトロで行われる、請求項1〜10のいずれか一項記載の方法。
13. (c)多能性幹細胞の特徴を示す細胞を選択する工程をさらに含む、請求項1〜12のいずれか一項記載の方法。
14. 前記非多能性細胞を動物から得、かつ前記人工多能性幹細胞を望ましい細胞タイプに分化させる、請求項1〜13のいずれか一項記載の方法。
15. 前記望ましい細胞タイプが動物に導入される、請求項14記載の方法。
16. 前記動物がヒトである、請求項15記載の方法。
17. 前記動物が非ヒト動物である、請求項15記載の方法。
18. 選択された前記細胞がOct4の発現のための外因性発現カセットを含まない、請求項13記載の方法。
19. 前記作用物質がH3K9メチル化を阻害する、請求項1〜8のいずれか一項記載の方法。
20. H3K9メチル化を阻害する前記作用物質がBIX01294である、請求項19記載の方法。
21. 前記細胞がヒト細胞である、請求項1〜20いずれか一項記載の方法。
22. 前記細胞が、マウス細胞、イヌ細胞、ウシ細胞、ブタ細胞、ラット細胞、および非ヒト霊長類細胞である、請求項1〜20のいずれか一項記載の方法。
23. 前記非多能性細胞が前駆細胞である、請求項1〜22のいずれか一項記載の方法。
24. 前記前駆細胞が、神経前駆細胞、皮膚前駆細胞、または毛包前駆細胞である、請求項23記載の方法。
25. 導入する工程が、
第1の発現カセットに機能的に連結されたプロモーターを含む、第1のベクターであって、該第1の発現カセットがKlf4をコードするポリヌクレオチドを含む、第1のベクター;
第2の発現カセットに機能的に連結されたプロモーターを含む、第2のベクターであって、該第2の発現カセットがSox2をコードするポリヌクレオチドを含む、第2のベクター;および
第3の発現カセットに機能的に連結されたプロモーターを含む、第3のベクターであって、該第3の発現カセットがc-Mycをコードするポリヌクレオチドを含む、第3のベクター
を導入することを含む、請求項1または4〜24のいずれか一項記載の方法。
26. ベクターが、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、非ウイルスプラスミドベクター、またはエピソーム発現ベクターである、請求項1または4〜25のいずれか一項記載の方法。
27. 哺乳動物細胞から多能性幹細胞へのリプログラミングまたは脱分化を誘導する作用物質をスクリーニングする方法であって、
(a)トランスフェクトされた細胞を作製するために、Octポリペプチド、Klfポリペプチド、Mycポリペプチド、およびSoxポリペプチドのうちの全てではないが少なくとも1つを非多能性細胞に導入する工程;
(b)該トランスフェクトされた細胞と、異なる作用物質のライブラリーとを接触させる工程;
(c)接触させた該細胞を多能性幹細胞の特徴についてスクリーニングする工程;ならびに
(d)幹細胞の特徴の発生と、ライブラリー由来の特定の作用物質とを相関付け、それによって、多能性幹細胞への細胞の脱分化を刺激する作用物質を特定する工程
を含む、方法。
28. 工程(a)が、Octポリペプチド、Klfポリペプチド、Mycポリペプチド、およびSoxポリペプチドのうちの全てではないが少なくとも1つの発現のための1つまたは複数の発現カセットを、前記非多能性細胞に導入することを含む、請求項27記載の方法。
29. 工程(a)が、外因性Octポリペプチド、外因性Klfポリペプチド、外因性Mycポリペプチド、および外因性Soxポリペプチドのうちの全てではないが少なくとも1つを、前記非多能性細胞に導入することを含む、請求項27記載の方法。
30. 特定の作用物質が50〜1500ダルトンである、請求項27〜29記載の方法。
31. 工程(a)が、2つの発現カセットを前記細胞に導入することを含み、それぞれの発現カセットが、異なるタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含み、該タンパク質が、Octポリペプチド、Klfポリペプチド、Mycポリペプチド、およびSoxポリペプチドからなる群より選択され、かつ該群の残りのメンバーが該細胞に導入されない、請求項27記載の方法。
32. 工程(a)が、3つの発現カセットを前記細胞に導入することを含み、それぞれの発現カセットが、異なるタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含み、該タンパク質が、Octポリペプチド、Klfポリペプチド、Mycポリペプチド、およびSoxポリペプチドからなる群より選択され、かつ該群の残りのメンバーが該細胞に導入されない、請求項27記載の方法。
33. 前記細胞がヒト細胞である、請求項27〜32のいずれか一項記載の方法。
34. 前記細胞が非ヒト哺乳動物細胞である、請求項27〜33のいずれか一項記載の方法。
35. 前記非多能性細胞が前駆細胞である、請求項27〜34のいずれか一項記載の方法。
36. 前記前駆細胞が、神経前駆細胞、皮膚前駆細胞、または毛包前駆細胞である、請求項35記載の方法。
37. OctポリペプチドがOct4であり、KlfポリペプチドがKlf4であり、Mycポリペプチドがc-Mycであり、かつSoxポリペプチドがSox2である、請求項27〜36のいずれか一項記載の方法。
38. 多能性幹細胞の特徴を有する哺乳動物細胞をスクリーニングする方法であって、
(a)非多能性細胞の増殖が阻害されかつ多能性幹細胞の増殖が促進されるように、細胞とMAPK/ERKキナーゼ(MEK)インヒビターとを接触させる工程;および
(b)接触させた該細胞を多能性幹細胞の特徴についてスクリーニングする工程
を含む、方法。
39. 工程(a)の前に、前記細胞と作用物質ライブラリーとを接触させる工程;および
工程(b)の後に、工程(b)の結果に基づいて、多能性幹細胞を誘導する作用物質を選択する工程
を含む、請求項38記載の方法。
40. 前記細胞がヒト細胞である、請求項38〜39のいずれか一項記載の方法。
41. 前記細胞が、マウス細胞、イヌ細胞、ウシ細胞、ブタ細胞、ラット細胞、および非ヒト霊長類細胞である、請求項38〜39のいずれか一項記載の方法。
42. MEKインヒビターがPD0325901である、請求項38〜41のいずれか一項記載の方法。
43. 哺乳動物細胞と、H3K9メチル化を阻害するかまたはH3K9脱メチルを促進する作用物質との混合物であって、
該細胞が、
Octポリペプチド、Klfポリペプチド、Soxポリペプチド、およびMycポリペプチドのうちの少なくとも1つまたは複数を発現する;ならびに/または
外因性Octポリペプチド、外因性Klfポリペプチド、外因性Soxポリペプチド、および外因性Mycポリペプチドのうちの少なくとも1つまたは複数と接触している、
混合物。
44. 前記細胞が、第1の組換え発現カセット、第2の組換え発現カセット、および第3の組換え発現カセットを含み、
該第1の発現カセットが、Klfポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに機能的に連結されたプロモーターを含み、
該第2の発現カセットが、Soxポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに機能的に連結されたプロモーターを含み、かつ
該第3の発現カセットが、Mycポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに機能的に連結されたプロモーターを含む、
請求項43記載の混合物。
45. 前記作用物質がH3K9メチル化を阻害する、請求項43〜44のいずれか一項記載の混合物。
46. H3K9メチル化を阻害する前記作用物質がBIX01294である、請求項45記載の方法。
47. 前記細胞が、1つまたは複数のレトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、非ウイルスプラスミドベクター、またはエピソーム発現ベクターを含み、
該1つまたは複数のレトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、非ウイルスプラスミドベクター、またはエピソーム発現ベクターが、第1の発現カセット、第2の発現カセット、および第3の発現カセットを含む、
請求項43〜46のいずれか一項記載の混合物。
48. 前記混合物が、第1、第2、および第3のレトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、非ウイルスプラスミドベクター、またはエピソーム発現ベクターを含み、
該第1のレトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、非ウイルスプラスミドベクター、またはエピソーム発現ベクターが、前記第1の発現カセットを含み、
該第2のレトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、非ウイルスプラスミドベクター、またはエピソーム発現ベクターが、前記第2の発現カセットを含み、
該第3のレトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、非ウイルスプラスミドベクター、またはエピソーム発現ベクターが、前記第3の発現カセットを含む、
請求項47記載の混合物。
49. 前記細胞がヒト細胞である、請求項43〜48のいずれか一項記載の混合物。
50. 前記細胞が、マウス細胞、イヌ細胞、ウシ細胞、ブタ細胞、ラット細胞、および非ヒト霊長類細胞である、請求項43〜48のいずれか一項記載の混合物。
51. 前記細胞が前駆細胞を含む、請求項43〜50のいずれか一項記載の混合物。
52. 前記前駆細胞が神経前駆細胞、皮膚前駆細胞、または毛包前駆細胞である、請求項51記載の混合物。
53. KlfポリペプチドがKlf4であり、Mycポリペプチドがc-Mycであり、かつSoxポリペプチドがSox2である、請求項43〜52のいずれか一項記載の混合物。
54. Octポリペプチド、Klfポリペプチド、Mycポリペプチド、およびSoxポリペプチドからなる群より選択されるタンパク質の少なくとも1つを内因的に発現する、哺乳動物細胞であって、
該細胞が、該群の少なくとも1つのタンパク質を内因的に発現せず、
内因的に発現されない該タンパク質が、該細胞に存在する異種組換え発現カセットによってコードされるRNAから発現され、
該細胞が、Octポリペプチド、Klfポリペプチド、Mycポリペプチド、およびSoxポリペプチドをそれぞれ内因的または異種的に発現し、かつ
異種発現カセットからの該タンパク質の発現により、該細胞の非多能性細胞から多能性幹細胞へのリプログラミングまたは脱分化が生じる、
哺乳動物細胞。
55. OctポリペプチドがOct4であり、KlfポリペプチドがKlf4であり、Mycポリペプチドがc-Mycであり、かつSoxポリペプチドがSox2である、請求項54記載の細胞。
56. SoxポリペプチドおよびMycポリペプチドを内因的に発現し、かつOctポリペプチドおよびKlfポリペプチドを異種的に発現する、請求項54〜55のいずれか一項記載の細胞。
57. OctポリペプチドがOct4であり、KlfポリペプチドがKlf4であり、Mycポリペプチドがc-Mycであり、かつSoxポリペプチドがSox2である、請求項56記載の細胞。
58. 細胞においてOct4発現を誘導する方法であって、
該細胞と、H3K9メチル化を阻害するかまたはH3K9脱メチルを促進する作用物質とを接触させ、それによって、該細胞におけるOct4発現を誘導する工程
を含む、方法。
59. 接触させる工程の直前に、前記細胞がOct4を発現しない、請求項58記載の方法。
60. 接触させた前記細胞が多能性細胞でない、請求項58〜59のいずれか一項記載の方法。
61. 接触させる工程の後に、前記細胞が多能性になるように誘導される、請求項58〜59のいずれか一項記載の方法。
62. 非多能性細胞を多能性細胞に誘導する方法であって、
該非多能性細胞と多能性を誘導する1つもしくは複数の作用物質とを接触させる、かつ/または多能性を誘導するタンパク質を発現するように発現カセットを該細胞に導入する工程であって、該細胞が、フィーダー細胞上で培養されず、かつ固体培養表面に接着される工程
を含む、方法。
63. 前記細胞が、マトリゲル、細胞外マトリックス(ECM)またはECM類似体、ラミニン、フィブロネクチン、およびコラーゲンからなる群より選択される分子テザーにより固体培養表面に接着される、請求項62記載の方法。
64. 接触させる工程が、請求項1または請求項1の従属項に記載の工程を含む、請求項62記載の方法。
65. 人工多能性幹細胞を哺乳動物非多能性細胞から作製する方法であって、
(a)該細胞と、
H3K9メチル化を阻害するかまたはH3K9脱メチルを促進する1つの作用物質;
L型Caチャンネルアゴニスト;
cAMP経路のアクチベーター;
DNAメチルトランスフェラーゼ(DNMT)インヒビター;
核受容体リガンド;
GSK3インヒビター;
MEKインヒビター;
TGFβ受容体/ALK5インヒビター;
HDACインヒビター;および
erkインヒビター
のうちの少なくとも2つと
を接触させ、それによって、人工多能性幹細胞を作製する工程
を含む、方法。
66. 接触させる工程が、
(a)前記細胞と、
i.H3K9メチル化を阻害するかまたはH3K9脱メチルを促進する1つの作用物質;ならびに
ii.L型Caチャンネルアゴニスト;
cAMP経路のアクチベーター;
DNAメチルトランスフェラーゼ(DNMT)インヒビター;
核受容体リガンド;
GSK3インヒビター;
MEKインヒビター;
TGFβ受容体/ALK5インヒビター;
HDACインヒビター;および
erkインヒビター
からなる群より選択される1つの作用物質
のうちの少なくとも2つと
を接触させることを含む、請求項65記載の方法。
67. (b)Klfポリペプチド、Octポリペプチド、Mycポリペプチド、および/またはSoxポリペプチドの発現のための1つまたは複数の発現カセットを、前記非多能性細胞に導入する工程
をさらに含む、請求項65または66記載の方法。
68. Klf4およびOct4が前記細胞に導入される、請求項65〜67のいずれか一項記載の方法。
69. 哺乳動物細胞と、
H3K9メチル化を阻害するかまたはH3K9脱メチルを促進する1つの作用物質;
L型Caチャンネルアゴニスト;
cAMP経路のアクチベーター;
DNAメチルトランスフェラーゼ(DNMT)インヒビター;
核受容体リガンド;
GSK3インヒビター;
MEKインヒビター;
TGFβ受容体/ALK5インヒビター;
HDACインヒビター;および
erkインヒビター
のうちの少なくとも2つと
の混合物。
70. 混合物が、
i. H3K9メチル化を阻害するかまたはH3K9脱メチルを促進する1つの作用物質と、
ii. L型Caチャンネルアゴニスト;
cAMP経路のアクチベーター;
DNAメチルトランスフェラーゼ(DNMT)インヒビター;
核受容体リガンド;
GSK3インヒビター;
MEKインヒビター;
TGFβ受容体/ALK5インヒビター;
HDACインヒビター;および
erkインヒビター
からなる群より選択される1つの作用物質と
を含む、請求項69記載の混合物。
71. 前記細胞が、Octポリペプチド発現のための異種発現カセットおよびSoxポリペプチド発現のための異種発現カセットを含む、請求項69〜70のいずれか一項記載の混合物。
72. 前記細胞が非多能性細胞である、請求項69〜71のいずれか一項記載の混合物。
73. 前記細胞が線維芽細胞である、請求項69〜72のいずれか一項記載の混合物。
74. Mycポリペプチドの発現のための発現カセットもKlfポリペプチドの発現のための発現カセットも非多能性細胞に導入されない、請求項69〜73のいずれか一項記載の混合物。
75. H3K9メチル化を阻害する1つの作用物質;
L型Caチャンネルアゴニスト;
cAMP経路のアクチベーター;
DNAメチルトランスフェラーゼ(DNMT)インヒビター;
核受容体リガンド;
GSK3インヒビター;
MEKインヒビター;
TGFβ受容体/ALK5インヒビター;
HDACインヒビター;および
erkインヒビター
のうちの少なくとも2つ
を含む、組成物。
76. i. H3K9メチル化を阻害する1つの作用物質と、
ii.L型Caチャンネルアゴニスト;
cAMP経路のアクチベーター;
DNAメチルトランスフェラーゼ(DNMT)インヒビター;
核受容体リガンド;
GSK3インヒビター;
MEKインヒビター;
TGFβ受容体/ALK5インヒビター;
HDACインヒビター;および
erkインヒビター
からなる群より選択される1つの作用物質と
を含む、請求項75記載の組成物。
77. H3K9メチル化を阻害する1つの作用物質;
L型Caチャンネルアゴニスト;
cAMP経路のアクチベーター;
DNAメチルトランスフェラーゼ(DNMT)インヒビター;
核受容体リガンド;
GSK3インヒビター;
MEKインヒビター;
TGFβ受容体/ALK5インヒビター;
HDACインヒビター;および
erkインヒビター
のうちの少なくとも2つを含む、キット。
78. i.H3K9メチル化を阻害する1つの作用物質と、
ii.L型Caチャンネルアゴニスト;
cAMP経路のアクチベーター;
DNAメチルトランスフェラーゼ(DNMT)インヒビター;
核受容体リガンド;
GSK3インヒビター;
MEKインヒビター;
TGFβ受容体/ALK5インヒビター;
HDACインヒビター;および
erkインヒビター
からなる群より選択される1つの作用物質と
を含む、請求項77記載のキット。
79. 哺乳動物細胞をさらに含む、請求項77または78記載のキット。
[本発明1001]
人工多能性幹細胞を哺乳動物非多能性細胞から作製する方法であって、
(a)該細胞と、
H3K9メチル化を阻害するかまたはH3K9脱メチルを促進する1つの作用物質;
L型Caチャンネルアゴニスト;
cAMP経路のアクチベーター;
DNAメチルトランスフェラーゼ(DNMT)インヒビター;
核受容体リガンド;
GSK3インヒビター;
MEKインヒビター;
TGFβ受容体/ALK5インヒビター;
HDACインヒビター;および
erkインヒビター
のうちの少なくとも1つと
を接触させ、それによって、人工多能性幹細胞を作製する工程
を含む、方法。
[本発明1002]
接触させる工程が、
(a)前記細胞と、
i.H3K9メチル化を阻害するかまたはH3K9脱メチルを促進する1つの作用物質;ならびに
ii.L型Caチャンネルアゴニスト;
cAMP経路のアクチベーター;
DNAメチルトランスフェラーゼ(DNMT)インヒビター;
核受容体リガンド;
GSK3インヒビター;
MEKインヒビター;
TGFβ受容体/ALK5インヒビター;
HDACインヒビター;および
erkインヒビター
からなる群より選択される1つの作用物質
のうちの少なくとも2つと
を接触させることを含む、本発明1001の方法。
[本発明1003]
(b)Klfポリペプチド、Octポリペプチド、Mycポリペプチド、および/またはSoxポリペプチドの発現のための1つまたは複数の発現カセットを、前記非多能性細胞に導入する工程
をさらに含む、本発明1001または1002の方法。
[本発明1004]
Klf4およびOct4が前記細胞に導入される、本発明1003の方法。
[本発明1005]
人工多能性幹細胞を哺乳動物非多能性細胞から作製する方法であって、
(a)Octポリペプチド、Klfポリペプチド、Mycポリペプチド、およびSoxポリペプチドのうちの1つもしくは複数を該非多能性細胞に導入するか、または該非多能性細胞におけるOctポリペプチド、Klfポリペプチド、Mycポリペプチド、およびSoxポリペプチドのうちの1つもしくは複数の発現を改変する工程;
(b)該細胞とH3K9メチル化を阻害するかまたはH3K9脱メチルを促進する作用物質とを接触させ、それによって、人工多能性幹細胞を作製する工程
を含む、方法。
[本発明1006]
工程(a)が、前記非多能性細胞と、Klfポリペプチド、Octポリペプチド、Mycポリペプチド、およびSoxポリペプチドより選択される1つまたは複数の外因性ポリペプチドとを接触させることを含む、本発明1005の方法。
[本発明1007]
工程(a)が、
i.前記非多能性細胞と、Klfポリペプチド、Octポリペプチド、Mycポリペプチド、およびSoxポリペプチドより選択される1つまたは複数の外因性ポリペプチドとの接触、
ii.その後に続く、該外因性ポリペプチドの非存在下での該細胞の培養
のサイクルを少なくとも2回含む、本発明1006の方法。
[本発明1008]
工程(a)が、Klfポリペプチド、Octポリペプチド、Mycポリペプチド、およびSoxポリペプチドの発現のための1つまたは複数の発現カセットを、前記非多能性細胞に導入することを含む、本発明1005の方法。
[本発明1009]
Octポリペプチドの発現のための発現カセットおよびSoxポリペプチドの発現のための発現カセットが前記非多能性細胞に導入される、本発明1005の方法。
[本発明1010]
導入する工程が、KLFポリペプチドおよびOctポリペプチドの発現のための1つまたは複数の発現カセットを前記非多能性細胞に導入することを含み、Mycポリペプチドおよび/またはSoxポリペプチドのための発現カセットが該細胞に導入されない、本発明1005の方法。
[本発明1011]
KlfポリペプチドがKlf4であり、かつOctポリペプチドがOct4である、本発明1005の方法。
[本発明1012]
前記非多能性細胞が体細胞である、本発明1005の方法。
[本発明1013]
前記非多能性細胞が線維芽細胞である、本発明1005の方法。
[本発明1014]
Mycポリペプチドの発現のための発現カセットもKlfポリペプチドの発現のための発現カセットも前記非多能性細胞に導入されない、本発明1005の方法。
[本発明1015]
導入する工程がインビボで行われる、本発明1005の方法。
[本発明1016]
導入する工程がインビトロで行われる、本発明1005の方法。
[本発明1017]
(c)多能性幹細胞の特徴を示す細胞を選択する工程
をさらに含む、本発明1005の方法。
[本発明1018]
前記非多能性細胞を動物から得、かつ前記人工多能性幹細胞を望ましい細胞タイプに分化させる、本発明1005の方法。
[本発明1019]
前記望ましい細胞タイプが動物に導入される、本発明1018の方法。
[本発明1020]
前記動物がヒトである、本発明1019の方法。
[本発明1021]
前記動物が非ヒト動物である、本発明1019の方法。
[本発明1022]
選択された前記細胞が、Oct4の発現のための外因性発現カセットを含まない、本発明1017の方法。
[本発明1023]
前記作用物質がH3K9メチル化を阻害する、本発明1005の方法。
[本発明1024]
H3K9メチル化を阻害する前記作用物質がBIX01294である、本発明1023の方法。
[本発明1025]
前記細胞がヒト細胞である、本発明1005の方法。
[本発明1026]
前記細胞が、マウス細胞、イヌ細胞、ウシ細胞、ブタ細胞、ラット細胞、および非ヒト霊長類細胞である、本発明1005の方法。
[本発明1027]
前記非多能性細胞が前駆細胞である、本発明1005の方法。
[本発明1028]
前記前駆細胞が、神経前駆細胞、皮膚前駆細胞、または毛包前駆細胞である、本発明1027の方法。
[本発明1029]
導入する工程が、
第1の発現カセットに機能的に連結されたプロモーターを含む、第1のベクターであって、該第1の発現カセットがKlf4をコードするポリヌクレオチドを含む、第1のベクター;
第2の発現カセットに機能的に連結されたプロモーターを含む、第2のベクターであって、該第2の発現カセットがSox2をコードするポリヌクレオチドを含む、第2のベクター;および
第3の発現カセットに機能的に連結されたプロモーターを含む、第3のベクターであって、該第3の発現カセットがc-Mycをコードするポリヌクレオチドを含む、第3のベクター
を導入することを含む、本発明1005の方法。
[本発明1030]
ベクターが、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、非ウイルスプラスミドベクター、またはエピソーム発現ベクターである、本発明1005の方法。
[本発明1031]
哺乳動物細胞から多能性幹細胞へのリプログラミングまたは脱分化を誘導する作用物質をスクリーニングする方法であって、
(a)トランスフェクトされた細胞を作製するために、Octポリペプチド、Klfポリペプチド、Mycポリペプチド、およびSoxポリペプチドのうちの全てではないが少なくとも1つを非多能性細胞に導入する工程;
(b)該トランスフェクトされた細胞と、異なる作用物質のライブラリーとを接触させる工程;
(c)接触させた該細胞を多能性幹細胞の特徴についてスクリーニングする工程;および
(d)幹細胞の特徴の発生と、ライブラリー由来の特定の作用物質とを相関付け、それによって、多能性幹細胞への細胞の脱分化を刺激する作用物質を特定する工程
を含む、方法。
[本発明1032]
工程(a)が、Octポリペプチド、Klfポリペプチド、Mycポリペプチド、およびSoxポリペプチドのうちの全てではないが少なくとも1つの発現のための1つまたは複数の発現カセットを、前記非多能性細胞に導入することを含む、本発明1031の方法。
[本発明1033]
工程(a)が、外因性Octポリペプチド、外因性Klfポリペプチド、外因性Mycポリペプチド、および外因性Soxポリペプチドのうちの全てではないが少なくとも1つを、前記非多能性細胞に導入することを含む、本発明1031の方法。
[本発明1034]
前記特定の作用物質が50〜1500ダルトンである、本発明1031の方法。
[本発明1035]
工程(a)が、2つの発現カセットを前記細胞に導入することを含み、それぞれの発現カセットが、異なるタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含み、該タンパク質が、Octポリペプチド、Klfポリペプチド、Mycポリペプチド、およびSoxポリペプチドからなる群より選択され、かつ該群の残りのメンバーが該細胞に導入されない、本発明1031の方法。
[本発明1036]
工程(a)が、3つの発現カセットを前記細胞に導入することを含み、それぞれの発現カセットが、異なるタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含み、該タンパク質が、Octポリペプチド、Klfポリペプチド、Mycポリペプチド、およびSoxポリペプチドからなる群より選択され、かつ該群の残りのメンバーが該細胞に導入されない、本発明1031の方法。
[本発明1037]
前記細胞がヒト細胞である、本発明1031の方法。
[本発明1038]
前記細胞が非ヒト哺乳動物細胞である、本発明1031の方法。
[本発明1039]
前記非多能性細胞が前駆細胞である、本発明1031の方法。
[本発明1040]
前駆細胞が、神経前駆細胞、皮膚前駆細胞、または毛包前駆細胞である、本発明1040の方法。
[本発明1041]
OctポリペプチドがOct4であり、KlfポリペプチドがKlf4であり、Mycポリペプチドがc-Mycであり、かつSoxポリペプチドがSox2である、本発明1031の方法。
[本発明1042]
多能性幹細胞の特徴を有する哺乳動物細胞をスクリーニングする方法であって、
(a)非多能性細胞の増殖が阻害されかつ多能性幹細胞の増殖が促進されるように、細胞とMAPK/ERKキナーゼ(MEK)インヒビターとを接触させる工程;および
(b)接触させた該細胞を多能性幹細胞の特徴についてスクリーニングする工程
を含む、方法。
[本発明1043]
工程(a)の前に、前記細胞と作用物質ライブラリーとを接触させる工程;および
工程(b)の後に、工程(b)の結果に基づいて、多能性幹細胞を誘導する作用物質を選択する工程
を含む、本発明1042の方法。
[本発明1044]
前記細胞がヒト細胞である、本発明1042の方法。
[本発明1045]
前記細胞が、マウス、イヌ、ウシ、ブタ、ラット、および非ヒト霊長類細胞である、本発明1042の方法。
[本発明1046]
MEKインヒビターがPD0325901である、本発明1042の方法。
[本発明1047]
哺乳動物細胞と、H3K9メチル化を阻害するかまたはH3K9脱メチルを促進する作用物質との混合物であって、
該細胞が、
Octポリペプチド、Klfポリペプチド、Soxポリペプチド、およびMycポリペプチドのうちの少なくとも1つまたは複数を発現する;ならびに/または
外因性Octポリペプチド、外因性Klfポリペプチド、外因性Soxポリペプチド、および外因性Mycポリペプチドのうちの少なくとも1つまたは複数と接触している、
混合物。
[本発明1048]
前記細胞が、第1の組換え発現カセット、第2の組換え発現カセット、および第3の組換え発現カセットを含み、
該第1の発現カセットが、Klfポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに機能的に連結されたプロモーターを含み、
該第2の発現カセットが、Soxポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに機能的に連結されたプロモーターを含み、
該第3の発現カセットが、Mycポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに機能的に連結されたプロモーターを含む、
本発明1047の混合物。
[本発明1049]
前記作用物質がH3K9メチル化を阻害する、本発明1047の混合物。
[本発明1050]
H3K9メチル化を阻害する前記作用物質がBIX01294である、本発明1049の方法。
[本発明1051]
前記細胞が、1つまたは複数のレトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、非ウイルスプラスミドベクター、またはエピソーム発現ベクターを含み、
該1つまたは複数のレトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、非ウイルスプラスミドベクター、またはエピソーム発現ベクターが、第1の発現カセット、第2の発現カセット、および第3の発現カセットを含む、
本発明1047の混合物。
[本発明1052]
前記混合物が、第1、第2、および第3のレトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、非ウイルスプラスミドベクター、またはエピソーム発現ベクターを含み、
該第1のレトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、非ウイルスプラスミドベクター、またはエピソーム発現ベクターが、第1の発現カセットを含み、
該第2のレトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、非ウイルスプラスミドベクター、またはエピソーム発現ベクターが、第2の発現カセットを含み、かつ
該第3のレトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、非ウイルスプラスミドベクター、またはエピソーム発現ベクターが、第3の発現カセットを含む、
本発明1051の混合物。
[本発明1053]
前記細胞がヒト細胞である、本発明1047の混合物。
[本発明1054]
前記細胞が、マウス細胞、イヌ細胞、ウシ細胞、ブタ細胞、ラット細胞、および非ヒト霊長類細胞である、本発明1047の混合物。
[本発明1055]
前記細胞が前駆細胞を含む、本発明1047の混合物。
[本発明1056]
前記前駆細胞が、神経前駆細胞、皮膚前駆細胞、または毛包前駆細胞である、本発明1055の混合物。
[本発明1057]
KlfポリペプチドがKlf4であり、Mycポリペプチドがc-Mycであり、かつSoxポリペプチドがSox2である、本発明1047の混合物。
[本発明1058]
Octポリペプチド、Klfポリペプチド、Mycポリペプチド、およびSoxポリペプチドからなる群より選択されるタンパク質の少なくとも1つを内因的に発現する、哺乳動物細胞であって、
該細胞が、該群の少なくとも1つのタンパク質を内因的に発現せず、
内因的に発現されない該タンパク質が、該細胞に存在する異種組換え発現カセットによってコードされるRNAから発現され、
該細胞が、Octポリペプチド、Klfポリペプチド、Mycポリペプチド、およびSoxポリペプチドをそれぞれ内因的または異種的に発現し、かつ
異種発現カセットからの該タンパク質の発現により、該細胞の非多能性細胞から多能性幹細胞へのリプログラミングまたは脱分化が生じる、
哺乳動物細胞。
[本発明1059]
Oct ポリペプチドがOct 4であり、Klf ポリペプチドがKlf 4であり、Myc ポリペプチドがc-Mycであり、かつSox ポリペプチドがSox2である、本発明1058記載の細胞。
[本発明1060]
Sox ポリペプチドおよびMyc ポリペプチドを内因的に発現し、かつOct ポリペプチドおよびKlf ポリペプチドを異種的に発現する、本発明1058記載の細胞。
[本発明1061]
Oct ポリペプチドがOct 4であり、Klf ポリペプチドがKlf 4であり、Myc ポリペプチドがc-Mycであり、かつSox ポリペプチドがSox2である、本発明1060記載の細胞。
[本発明1062]
細胞においてOct4 発現を誘導する方法であって、
該細胞と、H3K9メチル化を阻害するかまたはH3K9脱メチルを促進する作用物質とを接触させ、それによって、該細胞におけるOct4 発現を誘導する工程
を含む、方法。
[本発明1063]
接触させる工程の直前に、前記細胞がOct4を発現しない、本発明1062記載の方法。
[本発明1064]
接触させた前記細胞が多能性細胞でない、本発明1062記載の方法。
[本発明1065]
接触させる工程の後に、前記細胞が多能性になるように誘導される、本発明1064記載の方法。
[本発明1066]
非多能性細胞を多能性細胞に誘導する方法であって、
該非多能性細胞と多能性を誘導する1つもしくは複数の作用物質とを接触させる、かつ/または多能性を誘導するタンパク質を発現するように発現カセットを該細胞に導入する工程であって、該細胞が、フィーダー細胞上で培養されず、かつ固体培養表面に接着される工程
を含む、方法。
[本発明1067]
前記細胞が、マトリゲル、細胞外マトリックス(ECM)またはECM類似体、ラミニン、フィブロネクチン、およびコラーゲンからなる群より選択される分子テザーにより固体培養表面に接着される、本発明1066の方法。
[本発明1068]
接触させる工程が、本発明1005または本発明1005の従属項のいずれかの工程を含む、本発明1066の方法。
[本発明1069]
哺乳動物細胞と、
H3K9メチル化を阻害するかまたはH3K9脱メチルを促進する1つの作用物質;
L型Caチャンネルアゴニスト;
cAMP経路のアクチベーター;
DNAメチルトランスフェラーゼ(DNMT)インヒビター;
核受容体リガンド;
GSK3インヒビター;
MEKインヒビター;
TGFβ受容体/ALK5インヒビター;
HDACインヒビター;および
erkインヒビター
のうちの少なくとも2つと
の、混合物。
[本発明1070]
i.H3K9メチル化を阻害するかまたはH3K9脱メチルを促進する1つの作用物質と、
ii.L型Caチャンネルアゴニスト;
cAMP経路のアクチベーター;
DNAメチルトランスフェラーゼ(DNMT)インヒビター;
核受容体リガンド;
GSK3インヒビター;
MEKインヒビター;
TGFβ受容体/ALK5インヒビター;
HDACインヒビター;および
erkインヒビター
からなる群より選択される1つの作用物質と
を含む、本発明1069の混合物。
[本発明1071]
前記細胞が、Octポリペプチド発現のための異種発現カセットおよびSoxポリペプチド発現のための異種発現カセットを含む、本発明1069の混合物。
[本発明1072]
前記細胞が非多能性細胞である、本発明1069の混合物。
[本発明1073]
前記細胞が線維芽細胞である、本発明1069の混合物。
[本発明1074]
Mycポリペプチドの発現のための発現カセットもKlfポリペプチドの発現のための発現カセットも非多能性細胞に導入されない、本発明1071の混合物。
[本発明1075]
H3K9メチル化を阻害する1つの作用物質;
L型Caチャンネルアゴニスト;
cAMP経路のアクチベーター;
DNAメチルトランスフェラーゼ(DNMT)インヒビター;
核受容体リガンド;
GSK3インヒビター;
MEKインヒビター;
TGFβ受容体/ALK5インヒビター;
HDACインヒビター;および
erkインヒビター
のうちの少なくとも2つ
を含む、組成物。
[本発明1076]
i.H3K9メチル化を阻害する1つの作用物質と、
ii.L型Caチャンネルアゴニスト;
cAMP経路のアクチベーター;
DNAメチルトランスフェラーゼ(DNMT)インヒビター;
核受容体リガンド;
GSK3インヒビター;
MEKインヒビター;
TGFβ受容体/ALK5インヒビター;
HDACインヒビター;および
erkインヒビター
からなる群より選択される1つの作用物質と
を含む、本発明1075の組成物。
[本発明1077]
H3K9メチル化を阻害する1つの作用物質;
L型Caチャンネルアゴニスト;
cAMP経路のアクチベーター;
DNAメチルトランスフェラーゼ(DNMT)インヒビター;
核受容体リガンド;
GSK3インヒビター;
MEKインヒビター;
TGFβ受容体/ALK5インヒビター;
HDACインヒビター;および
erkインヒビター
のうちの少なくとも2つを含む、キット。
[本発明1078]
i.H3K9メチル化を阻害する1つの作用物質と、
ii.L型Caチャンネルアゴニスト;
cAMP経路のアクチベーター;
DNAメチルトランスフェラーゼ(DNMT)インヒビター;
核受容体リガンド;
GSK3インヒビター;
MEKインヒビター;
TGFβ受容体/ALK5インヒビター;
HDACインヒビター;および
erkインヒビター
からなる群より選択される1つの作用物質と
を含む、本発明1077のキット。
[本発明1079]
哺乳動物細胞をさらに含む、本発明1077のキット。
「Octポリペプチド」は、オクタマー転写因子ファミリーの天然メンバー、または最も近縁の天然ファミリーメンバーと比較して類似の転写因子活性(少なくとも50%、80%、もしくは90%以内の活性)を維持しているその変種、または少なくとも天然ファミリーメンバーのDNA結合ドメインを含み、任意で、転写活性化ドメインを含むポリペプチドのいずれかを指す。例示的なOctポリペプチドには、例えば、POUドメインを含有するOct3/4(本明細書にでは「Oct4」と呼ぶ)が含まれる。Ryan, A.K.およびRosenfeld, M. G. Genes Dev. 11, 1207-1225(1997)を参照されたい。一部の態様において、変種は、天然のOctポリペプチドファミリーメンバー、例えば、前記で列挙したものと比較して、配列全体にわたって少なくとも90%のアミノ酸配列同一性を有する。
I.序論
本発明は、低分子を用いると、人工多能性幹細胞(iPS)の誘導に関与する転写因子の効果を模倣できるという驚くべき発見に一部基づいている。例えば、本明細書において詳述したように、Oct4は、ヒストン3リジン9(H3K9)のメチル化を低下させる低分子で「代替する」ことができる。従って、例えば、G9a(H3K9のヒストンメチルトランスフェラーゼ)を特異的に阻害する低分子であるBIX01294を、Klf4、c-Myc、およびSox2が発現している哺乳動物細胞と接触させると、多能性幹細胞が誘導される。
A.異種発現/内因性発現
本発明の一部の態様において、Octポリペプチド、Klfポリペプチド、Mycポリペプチド、およびSoxポリペプチドからなる群に由来する少なくとも1つ(任意で、2つまたは3つ)のタンパク質を内因的に発現する非多能性細胞が特定される。次いで、この群に由来する残りの(非内因的に発現される)タンパク質を細胞において異種的に発現させ、任意で、MEKインヒビター、H3K9メチル化を阻害する作用物質、L型Caチャンネルアゴニスト;cAMP経路のアクチベーター;DNAメチルトランスフェラーゼ(DNMT)インヒビター;核受容体リガンド;GSK3インヒビター;MEKインヒビター;TGFβ受容体/ALK5インヒビター;HDACインヒビター;および/またはErkインヒビターのうちの1つまたは複数の存在下で、多能性細胞へのリプログラミングおよび/または脱分化についてスクリーニングすることができる。
本明細書において詳述するように、本発明の多くの態様は、1つまたは複数のポリペプチドを細胞に導入し、それによって、細胞において多能性を誘導することを伴う。前記で議論したように、細胞へのポリペプチドの導入は、1つまたは複数の発現カセットを含むポリヌクレオチドの細胞への導入および発現の誘導、それによる発現カセットからの転写および翻訳によるポリペプチドの細胞への導入を含んでもよい。または、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの導入を伴わない多くの異なる方法によって、外因性ポリペプチド(すなわち、細胞外から供給される、および/または細胞によって産生されないタンパク質)を細胞に導入することができる。
本発明の一部の態様において、細胞は、Octポリペプチド、Klfポリペプチド、Mycポリペプチド、およびSoxポリペプチドより選択される少なくとも1つのタンパク質(例えば、これらの少なくとも1つ、2つ、または3つ)を(内因的にまたは異種的に)発現し、残っている非発現タンパク質の1つまたは複数、すなわち、細胞において発現されない、Octポリペプチド、Klfポリペプチド、Mycポリペプチド、またはSoxポリペプチドのいずれかの発現の非存在下で、細胞を多能性幹細胞に誘導するのに十分な少なくとも1つの作用物質と接触させる。
本明細書で使用する、「非多能性細胞」とは、多能性細胞でない哺乳動物細胞を指す。このような細胞の例には、分化細胞ならびに前駆細胞が含まれる。分化細胞の例には、骨髄、皮膚、骨格筋、脂肪組織、および末梢血により選択される組織に由来する細胞が含まれるが、これに限定されない。例示的な細胞タイプには、線維芽細胞、肝細胞、筋芽細胞、ニューロン、骨芽細胞、破骨細胞、およびT細胞が含まれるが、これに限定されない。
本発明は、組換え遺伝学の分野における日常的な技法に頼っている。本発明における一般的な使用方法を開示する基本的な教科書には、Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual (3rd ed. 2001); Kriegler, Gene Transfer and Expression: A Laboratory Manual (1990);およびCurrent Protocols in Molecular Biology (Ausubel et al., eds.,1994))が含まれる。
ある特定の態様において、プラスミドベクターは、宿主細胞を形質転換するために使用することが意図される。一般的に、これらの宿主に関して、宿主細胞と適合する種に由来するレプリコンおよび制御配列を含有するプラスミドベクターが用いられる。ベクターは、複製部位、ならびに形質転換細胞において表現型選択が可能なマーキング配列を有してもよい。
ある特定のウイルスが、受容体を介したエンドサイトーシスによって細胞に感染または侵入し、宿主細胞ゲノムに組み込み、ウイルス遺伝子を安定してかつ効率的に発現することができれば、外来核酸を細胞(例えば、哺乳動物細胞)に導入するための魅力的な候補となる。本発明の核酸を送達するのに使用することができるウイルスベクターの非限定的な例を下記で説明する。
核酸を送達する特定の方法はアデノウイルス発現ベクターの使用を伴う。アデノウイルスベクターのゲノムDNAへの組み込み能力は低いことが知られているが、この特徴は、これらのベクターにより得られる高い遺伝子導入効率によって相殺される。「アデノウイルス発現ベクター」とは、(a)構築物のパッケージングを支持するのに十分な、および(b)ベクターにクローニングされた組織特異的構築物または細胞特異的構築物を最終的に発現するのに十分なアデノウイルス配列を含有する構築物を含むことを意味する。約36kbの直線二本鎖DNAウイルスであるアデノウイルスの遺伝子組成の知識があるので、アデノウイルスDNAの大きな断片を7kbまでの外来配列で置換することができる(Grunhaus et al., Seminar in Virology, 200(2):535-546, 1992))。
核酸は、アデノウイルスを介したトランスフェクションを用いて細胞に導入することができる。アデノウイルスが対となったシステムを用いる細胞システムにおいて、高いトランスフェクション効率が報告されている(Kelleher and Vos, Biotechniques, 17(6): 1110-7, 1994; Cotten et al., Proc Natl Acad Sci USA, 89(13):6094-6098, 1992; Curiel, Nat Immun, 13(2-3):141-64, 1994.)。アデノ随伴ウイルス(AAV)は、組込み頻度が高く、非分裂細胞に感染することができ、従って、哺乳動物細胞、例えば、組織培養されている哺乳動物細胞への遺伝子送達(Muzyczka, Curr Top Microbiol Immunol, 158:97-129, 1992)、またはインビボでの遺伝子送達に有用であるので魅力的なベクターシステムである。rAAVベクターの作製および使用に関する詳細は米国特許第5,139,941号および同第4,797,368号に記載されており、それぞれ参照により本明細書に組み入れられる。
レトロウイルスは、遺伝子を宿主ゲノムに組み込む能力、多量の外来遺伝物質を導入する能力、広範囲の種および細胞タイプに感染する能力、特殊な細胞株においてパッケージングされる能力があるので遺伝子送達ベクターとして有望である(Miller et al., Am. J. Clin. Oncol, 15(3):216-221, 1992)。
送達しようとする核酸は、特異的結合リガンドを発現するように操作された感染性ウイルスの中に収容されてもよい。従って、ウイルス粒子は、標的細胞のコグネイト受容体に特異的に結合し、内容物を細胞に送達する。レトロウイルスベクターを特異的に標的化するように設計された新規の手法は、ウイルスエンベロープへのラクトース残基の化学的付加によるレトロウイルスの化学修飾に基づいて開発された。この改変があると、シアロ糖タンパク質受容体を介した肝細胞の特異的感染が可能になる。
本発明と共に使用するための細胞、組織、または生物を形質転換するのに適した核酸送達法は、本明細書に記載のように、または当業者に公知のように、核酸(例えば、DNA)を細胞、組織、または生物に導入することができる実質的に全ての方法を含むと考えられる。このような方法には、例えば、エクスビボトランスフェクション(Wilson et al., Science, 244:1344-1346, 1989, Nabel and Baltimore, Nature 326:711-713, 1987)、任意で、Fugene6(Roche)またはLipofecyamine (Invitrogen)を用いたエクスビボトランスフェクション;マイクロインジェクション(参照により本明細書に組み入れられる、Harland and Weintraub, J. Cell Biol., 101: 1094-1099, 1985;米国特許第5,789,215号)を含む、注射(米国特許第5,994,624号、同第5,981,274号、同第5,945,100号、同第5,780,448号、同第5,736,524号、同第5,702,932号、同第5,656,610号、同第5,589,466号、および同第5,580,859号、それぞれ参照により本明細書に組み入れられる);エレクトロポレーション(参照により本明細書に組み入れられる、米国特許第5,384,253号;Tur-Kaspa et al., Mol. Cell Biol., 6:716-718, 1986; Potter et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA, 81.7161-7165, 1984);リン酸カルシウム沈殿(Graham and Van Der Eb, Virology, 52:456-467, 1973; Chen and Okayama, Mol. Cell Biol., 7(8):2745-2752, 1987; Rippe et al., Mol. Cell Biol, 10:689-695, 1990);DEAE-デキストラン後のポリエチレングリコールの使用(Gopal, Mol. Cell Biol, 5:1188-1190, 1985);ダイレクトソニックローディング(Fechheimer et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA, 84:8463-8467, 1987);リポソームを介したトランスフェクション(Nicolau and Sene, Biochim. Biophys. Acta, 721:185-190, 1982; Fraley et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA, 76:3348-3352, 1979; Nicolau et al., Methods Enzymol., 149:157-176, 1987; Wong et al., Gene, 10:87-94, 1980; Kaneda et al., Science, 243:375-378, 1989; Kato et al., J Biol Chem., 266:3361-3364, 1991)、および受容体を介したトランスフェクション(Wu and Wu, Biochemistry, 27:887-892, 1988; Wu and Wu, J. Biol. Chem., 262:4429-4432, 1987;それぞれ参照により本明細書に組み入れられる)、ならびにこのような方法の任意の組み合わせによるDNAの直接送達が含まれるが、これに限定されない。
多能性になるように誘導しようとする細胞は、当技術分野において公知の任意の方法に従って培養することができる。大まかなガイドラインは、例えば、Maherali, et al., Cell Stem Cell 3:595-605 (2008)に見られる。
本発明は、予防的使用または治療的使用を含むが、これに限定されない、幹細胞技術のさらなる研究および開発を可能にする。例えば、一部の態様において、本発明の細胞(多能性細胞または望ましい細胞運命に沿って分化するように誘導された細胞のいずれか)は、器官、組織、または細胞タイプの再生を必要とする個体を含むが、これに限定されない、本発明の細胞を必要とする個体に導入される。一部の態様において、細胞は、最初に、生検において個体から得られ、本明細書に記載のように多能性になるように誘導され、任意で、(例えば、特定の望ましい前駆細胞に)分化するように誘導され、次いで、移植によって個体に戻される。一部の態様において、細胞は、個体に導入される前に遺伝子組換えされる。
本発明は、4種類のiPS転写因子(すなわち、Octポリペプチド、Klfポリペプチド、Mycポリペプチド、およびSoxポリペプチド)の1つを「代替する」ことができる作用物質、または細胞を多能性細胞にリプロラミングするのにMycが必要でない細胞では、Octポリペプチド、Klfポリペプチド、もしくはSoxポリペプチドを代替することができる作用物質(Nakagawa, M. et al. Nature Biotechnol. 26, 101-106 (2007); Wernig, M., Meissner, A., Cassady, J. P.およびJaenisch, R. Cell Stem Cell 2, 10-12(2008))、あるいは多能性への融合効率を改善する作用物質をスクリーニングする方法を提供する。
本明細書において議論されるように、本発明は、H3K9メチル化を阻害する作用物質;L型Caチャンネルアゴニスト;cAMP経路のアクチベーター;DNAメチルトランスフェラーゼ(DNMT)インヒビター;核受容体リガンド;GSK3インヒビター;MEKインヒビター;TGFβ受容体/ALK5インヒビター;HDACインヒビター;またはErkインヒビターからなる群より選択される1つまたは複数の化合物との混合物中の非多能性細胞を提供する。一部の態様において、化合物は、多能性を誘導するのに十分な濃度で、または多能性への誘導効率を改善するのに十分な濃度で混合されている。例えば、一部の態様において、化合物は、少なくとも0.1nM、例えば、少なくとも1nM、10nM、100nM、1000nM、10000nM、または100000nM、例えば、0.1nM〜100000nM、例えば、1nM〜10000nM、例えば、10nM〜10000nMの濃度である。一部の態様において、混合物は、合成容器(例えば、試験管、ペトリ皿など)の中にある。従って、一部の態様において、細胞は、単離された細胞であり(動物の一部でない)。一部の態様において、細胞は、動物(ヒトまたは非ヒト)から単離され、容器に入れられ、本明細書に記載のように1つまたは複数の化合物と接触させられる。その後に、細胞を培養してもよく、任意で、同じ動物または異なる動物に戻すことができ、任意で、特定の細胞タイプまたは系列になるように細胞を刺激した後に、同じ動物または異なる動物に戻すことができる。
本発明はまた、例えば、細胞における多能性の誘導または多能性の誘導効率の改善において使用するためのキットを提供する。このようなキットは、H3K9メチル化を阻害する作用物質;L型Caチャンネルアゴニスト;cAMP経路のアクチベーター;DNAメチルトランスフェラーゼ(DNMT)インヒビター;核受容体リガンド;GSK3インヒビター;MEKインヒビター;TGFβ受容体/ALK5インヒビター;HDACインヒビター;またはErkインヒビターからなる群より選択される1つまたは複数の化合物を含んでもよい。一部の態様において、キットは、H3K9メチル化を阻害する作用物質(BIX-01294を含むが、これに限定されない)、およびL型Caチャンネルアゴニスト;cAMP経路のアクチベーター;DNAメチルトランスフェラーゼ(DNMT)インヒビター;核受容体リガンド;GSK3インヒビター;MEKインヒビター;TGFβ受容体/ALK5インヒビター;HDACインヒビター;またはErkインヒビターのうちの少なくとも1つより選択される第2の化合物(H3K9メチル化を阻害する作用物質とは別個の、またはH3K9メチル化を阻害する作用物質と混合される)を含む。
発癌性転写因子(例えば、cMycおよびOct4(Hochedlinger, K. et al., Cell 121, 465-477(2005))のウイルス導入に代替することができ、およびリプログラミング効率を増強できる条件を特定することに向けて、本発明者らは2つの手法の組み合わせを活用しようと努力した。1つは、ある特定の接触可能な成体前駆細胞が多能性を誘導するために必要とされる遺伝子のいくつかをある特定のレベルで内因性に発現している可能性があり、ならびに/または、これらの遺伝子の座位が、そのような前駆細胞がより効率的におよび/もしくはより少ない遺伝子操作でリプログラミングされ得るように、より少なくサイレンシングされている可能性があるという概念に基づいて、画定された前駆細胞のタイプを調査することであり;他方の手法は、特異的な転写因子のウイルス組み込みに代替することができ、および/またはリプログラミング過程を促進できる可能性がある低分子をスクリーニングすることであった。
神経前駆細胞培養
神経前駆細胞は、Contiらにより報告された手順に従い、mESCまたはマウス胎児脳由来であった(Conti, L. et al., PLoS Biol. 3, e283 (2005))。簡潔には、mESCを0.1%ゼラチンでコーティングしたディッシュ上に1×104細胞/cm2で神経誘導培地(50% DMEM/F12基本培地、50% Neurobasal培地、0.5× N2、0.5× B27、1× Glutamax、50 ug/ml BSA)においてプレーティングし、7〜8日間分化させた。次に、形成された神経ロゼットをトリプシン処理して単細胞にし、神経球を形成するようにUltra-Low Attachment dish(Corning)中に神経前駆細胞拡大培地(DMEM/F12、1× N2、10 ng/ml bFGF、10 ng/ml EGF、50ug/ml BSA)において再プレーティングした。懸濁液において3日後に神経球をゼラチンでコーティングしたディッシュに再接着させて、それらをさらに単細胞で継代し、単層で、ゼラチンでコーティングしたディッシュ上で神経前駆細胞拡大培地において5〜6継代を超える間増殖させる前に、4〜6日間さらに分化させた。
Oct4、Klf4、Sox2、およびc-MycのマウスcDNAをpMSCVレトロウイルスベクター中にクローニングし、塩基配列決定により検証した。pMXベースのレトロウイルスベクターはAddgeneより入手した。ウイルス生産および導入は、2〜3に記載されているように行った。
mESC由来または初代OG2マウス神経前駆細胞をMatrigel(1:50, BD Biosciences)でコーティングした6ウェルプレート中に3.5×104細胞/ウェルで神経前駆細胞拡大培地においてプレーティングした。1日後、これらの細胞にレトロウイルスを一晩導入し、培地を、BIX01294(0.5〜1μM)を含むかまたは含まないmESC増殖培地[DMEM、5% FBS、10% KSR、1×non-essential amino acids(Gibco)、2mM L-グルタミン(Gibco)、0.1 mM β-メルカプトエタノール(Gibco)、および103単位/ml LIF(Chemicon)]に交換した。GFP陽性iPS細胞コロニーは9〜14日後に出現し、選び出してMEFフィーダー細胞上でmESC増殖培地を用いて拡大した。
ALP染色はAlkaline Phosphatase Detection Kit(Chemicon)により指示されているように行った。細胞を4%パラホルムアルデヒド中で固定し、PBSで3回洗浄し、次に、0.3% TritonX-100(Sigma)および10%正常ロバ血清(Jackson ImmunoResearch)を含むPBS中で30分間室温でインキュベーションした。その後、細胞を以下の1次抗体と一晩4℃でインキュベーションした:マウス抗Oct4抗体、マウス抗SSEA1抗体(1:200、Santa Cruz)、ウサギ抗Sox2抗体(1:200、Chemicon)、ウサギ抗Nanog抗体(AbCam)、ウサギ抗Pdx1(1:200、C. Wright博士より)、マウス抗βIII-チューブリン抗体(1:500、Covance)、マウス抗心筋トロポニンT(1:200、DSHB)、ウサギ抗アルブミン抗体(DAKO)。洗浄後、細胞をさらに2次抗体:Alexa Fluro555ロバ抗マウスIgGまたはAlexa Fluro555ロバ抗ウサギIgG(1:500、Invitrogen)と30分間、RTでインキュベーションした。核をDAPI(Sigma)染色により検出した。画像をNikon TE2000-Uにより捕捉した。
凝集体キメラを得るために、iPS細胞を露出されたコンパクション後の8細胞期胚と凝集させた。2.5 dpcで雌から流し出した8細胞胚(B6C3F1)をミネラルオイルの下でKSOM培地(10% FCS)の微小滴において培養した。短時間のトリプシン処理後のiPS細胞の塊(10〜20細胞)を選択し、透明帯除去8細胞胚を含む微小滴中に移した。iPS細胞と凝集した8細胞胚を一晩、37℃、5% CO2で培養した。8細胞期から発生した凝集した胚盤胞を2.5 dpcの偽妊娠レシピエントの1つの子宮角中に移植した。
体細胞は、4種類の転写因子の組み合わせ、Oct4/Sox2/Klf4/c-MycまたはOct4/Sox2/Nanog/LIN28を用いて、多能性幹細胞(iPSC)に誘導することができる。このことは、種々の治療用途および研究用途のために患者特異的な細胞を得ることを可能にするプラットホームを提供する。しかしながら、効率およびウイルスのゲノム組み込みに付随する欠点のために、本手法が治療的に関連するにはいくつかの問題が残っている。上記で説明したように、Oct4/Klf4を導入した神経前駆細胞(NPC)をiPSCにリプログラミングすることができる。しかしながら、NPCは内因性にSox2を発現し、ことによると外因性のSox2が無い状態においてリプログラミングを促進する。本研究において、本発明者らは、リプログラミングに不可欠な因子を内因性に発現していないOct4/Klf4を導入したマウス胚繊維芽細胞のリプログラミングを可能にする低分子の組み合わせ、BIX-01294およびBayK8644を特定した。本研究は、表現型スクリーニングにより特定された低分子が、Sox2のような重要な因子のウイルス導入を補償することができ、およびリプログラミング効率を改善できることを証明する。
表現型スクリーニングは、2種類のTFのみを導入した際にMEFのリプログラミングを可能にする低分子の発見をもたらす。
129マウスのE13〜14胚由来の改変されていないMEFを最初のスクリーニングに使用した。MEFをMatrigel上に6ウェルプレートのウェルあたり3.5×104細胞でプレーティングし、OK(Oct4およびKlf4を発現するレトロウイルスベクター)単独を導入した。14〜21日内に、特徴的な胚性幹細胞(ESC)コロニー形態を有しかつ多能性マーカーであるアルカリホスファターゼ(ALP)が陽性であるコロニーの出現について、処理した細胞を評価した。そのようなOKを導入した細胞は、ALP発現が弱陽性である小さな緻密でないコロニーを少しのみ生成した。これらのコロニーはウイルス導入後21日以内に最初に出現し、拡大するのが難しかった。そのため、そのようなアッセイシステムは、望ましいリプログラミング誘導活性を有する低分子の特定のためにきれいなバックグラウンドを提供した。このシステムを用いて、およそ2000個の公知低分子のライブラリー由来の化合物(下記の実験手順参照)をスクリーニングし、処理後14〜21日以内にALPが強陽性であるESCコロニーの出現を誘導した際にヒットとして特定した。このイメージに基づく方法は、同種のレポーターに基づくアッセイ法と比較するとリプログラミングのより正確な評価を提供した。BIXは、高いALP発現を有する1〜2個より多い緻密なESC様コロニーの再現性のある誘導に最も強い効果を有すると見受けられた。本発明者らは、MEFをOKウイルス導入後にBIXで処理した際に、強いALP発現を有する緻密なコロニーをおよそ14〜21日以内に容易に検出できることを観察した。これらの細胞はまた、Nanog、Oct4、およびSSEA-1発現について陽性であった。3種類の不可欠なリプログラミング遺伝子のいずれをも内因性に発現していないより一般的な細胞タイプを用いて得られた本結果は、BIXが強いリプログラミング誘導活性を有し、G9a HMTaseがリプログラミングを促進することができる(Shi, Y. et al., Cell Stem Cell, 2:525-528 (2008))という本発明者らの以前の観察をさらに確証する。しかしながら、OKを導入し、かつBIXで処理したMEFにおけるリプログラミング効率は、MEFの4因子で誘導されるリプログラミングまたはOK/BIX NPCリプログラミングと比較すると依然として低く、約2コロニー/3.5×104細胞であった(Shi, Y. et al., Cell Stem Cell, 2:525-528 (2008))。そのため、本発明者らは、同様の手順であるが、OKウイルス導入後にBIXを基本培地に添加した手順を用いて2回目のスクリーニングを実施した。これは、さらにリプログラミング効率を改善できる新たな低分子を特定するためのより許容的なプラットホームを提供した。より重要なことに、この2回目のスクリーニングは、より特異的な様式において、例えば、ヒストンまたはDNA修飾酵素よりもむしろシグナル伝達経路に作用することによってリプログラミングに影響を与える低分子の発見を促進することができた。この2回目のスクリーニングにおいて、本発明者らは再びおよそ2000個の公知低分子のライブラリー(実験手順参照)を検定し、スクリーニングの基準に基づいてリプログラミングを改善するようにBIXと相乗的な様式において作用することができる2個の化合物を確認した。1つの例はDNAメチルトランスフェラーゼ(DMNT)インヒビターであるRG108であり(Brueckner, B. et al., Cancer Res, 65:6305-6311 (2005))、BIXの存在下でOKを導入したMEFのリプログラミングを増強した(図3)。しかしながら、BIXと同様にRG108は一般的なエピジェネティックレベルで細胞に影響を与えることが公知であり、別のDNAメチルトランスフェラーゼインヒビターである5-アザシチジンがリプログラミングを増強することが既に示されている(Mikkelsen, T. S. et al., Nature, 454:49-55 (2008))。従って、RG108は本研究のためにはさらに追求しなかった。その代わりに、本発明者らは、2回目のスクリーニングにおいて特定されたもう1つの低分子であるL-カルシウムチャンネルアゴニストのBayKに、表現型および機能的特徴決定を集中させた。公知のDNA/ヒストン修飾因子の他にスクリーニングにおいて最も強い効果を示した本低分子をさらに研究した。なぜなら、BIXの非存在下においてはOKを導入したMEFに対して観察可能なリプログラミング活性を有さず、およびエピジェネティックレベルで細胞に直接影響を与えずにむしろ細胞シグナル伝達レベルで影響を与えることが公知であるためである。従って、BayKはリプログラミング過程においてより特異的な役割を果たす可能性がある。129MEFに空のレトロウイルス(陰性対照)を導入した際には;コロニーは観察されなかった。129MEFに低分子無しでOKを導入した際には;弱いALP発現を有する少しの小さな平坦なコロニーしか存在しなかった。129MEFにOKを導入し、およびBIX/BayKで処理した14〜21日後にはESC様iPSCコロニーが観察され;これらのESC様コロニーは強いALP発現を示した。OKを導入したMEFをBayKとの組み合わせでBIXで処理した際には、BIX単独で処理したOKを導入したMEF(〜2コロニー)と比較して、mESCの形態に酷似しているALP+コロニーの数において有意な増加を観察することができた(〜7コロニー)。これらの初代iPSCコロニーのさらなる特徴決定により、免疫蛍光法によって測定すると、Oct4、Sox2、Nanog、およびSSEA1などの典型的な多能性マーカーが陽性であることが示された。
OK導入およびBIX/BayK処理がMEFがiPSCになるように誘導できることをさらに確認し、および特徴決定するために、本発明者らはOct4-GFPレポーターを含むOG2+/-/ROSA26+/-(OG2)トランスジェニックマウス由来の初代MEFを使用した(Do, J.T. and Scholer, H.R., Stem Cells, 22:941-949 (2004))。これらの細胞は一度リプログラミングされると、次にキメラおよび生殖系列適格性を便利に評価するのに使用することができる。129 MEFと同様に、OKを導入したOG2 MEFはBayK/BIXの組み合わせで処理した際にiPSCを作製することができた(OK2B iPSC)(図3)。GFP+ iPSCコロニーはウイルス導入および化合物処理後14〜21日に最初に検出することができた。OG2 MEFにOKを導入していかなる化合物でも処理しなかった際には、3.5×104細胞あたり平均0.5±0.7コロニーの少しの小さなコロニーのみが出現した。これらのコロニーは継代することが難しく、そのためそれ以上は研究しなかった。OKを導入したOG2 MEFのBIX単独での処理は、3.5×104細胞あたり2.5±0.7コロニーと、OK単独と比較して容易にかつ再現的にリプログラミングを可能にした。OKを導入したOG2 MEFをBIX(2μM)およびBayK(2μM)の組み合わせで処理した際にはリプログラミング効率においてさらに有意な改善があり、本発明者らは3.5×104細胞あたり7.7±1.5コロニーを観察した(図3)。OKを導入したOG2 MEFのBIXの非存在下におけるBayK単独での処理は、上記のOKを導入したMEF対照のリプログラミング効率を増加させなかった(データは示していない)。
OK2B iPSCは懸濁液において胚様体(EB)を効率的に形成することができ、胚様体は3つの一次胚葉の派生物である内胚葉細胞(アルブミンおよびPdx1)、中胚葉細胞/心筋細胞(CT3)および外胚葉細胞/ニューロン(βIII-チューブリン、Tuj1)に分化することができた。加えて、OK2B iPSCは、8細胞胚との凝集に続いて胚盤胞の内部細胞塊中に効率的に組み込まれ、凝集した胚を偽妊娠マウスに移植した後にインビボで生殖系列貢献を伴うキメリズムをもたらすことができた。さらに、これらの胚盤胞から得られた1匹の成体雄の子孫を雌のCD1野生型マウスと交配させるとLacZ+子孫の産生をもたらし、そのうち3匹はこれらのiPSCが生殖系列伝達に貢献できたことをさらに確証するOct4-GFP+生殖腺を示した。これらのインビトロおよびインビボの特徴決定により、2種類の遺伝子OKのみのレトロウイルス導入、およびBIX/BayK処理との組み合わせが、表現型および機能的に古典的なmESCと同様であるiPSCにMEFをリプログラミングするのに十分であることが確認された。
本明細書において示されている研究は、ある特定のTFのウイルス導入に機能的に代替し、およびMEFのような一般的な細胞のタイプからiPSCを作製する際にリプログラミング効率を改善するための合理的に設計された表現型スクリーニングから低分子が特定され得るという、原理証明の実証を提供する。標的/過程のより正確および時間的な制御を提供する、iPSCの作製のためのそのような化学的手法は、有害な検出しがたい挿入性のゲノム変化も導入する可能性がある癌遺伝子での遺伝子操作に優って有利であると考えられる。同様の戦略が、完全に化学的に画定された条件において系列が制限された細胞の多能性または多分化能状態へのリプログラミングを最終的に可能にし得る追加的な低分子を見出すために使用されている。BIXは当初はG9a HMTaseの特異的インヒビターとして特定され、特徴決定された(Kubicek, S. et a., Mol Cell, 25:473-481 (2007))。G9a標的遺伝子でH3K9me2レベルを減少させることが示されている(Feldman, N. et al., Nat Cell Biol, 8:188-194 (2006))。興味深いことに、G9aにより媒介されるヒストンH3K9メチル化およびヘテロクロマチン化は、Oct4およびRex1などの胚性遺伝子のエピジェネティックサイレンシングのための高度に特異的な機構に相当する(Feldman, N. et al., Nat Cell Biol, 8:188-194 (2006))。さらに、G9aのノックダウンは成体神経細胞の融合に基づくリプログラミングを補助できることも証明された(Ma, D.K. et al., Stem Cells, 26:2131-2141 (2008))。そのため、BIXがOKまたはKlf4/Sox2/c-Mycのいずれかを導入したNPCからのiPSCの作製を促進でき(Shi, Y. et al., Cell Stem Cell, 2:525-528 (2008))、Sox2またはOct4の内因性発現を補償できると示唆することを本発明者らが以前に観察したのは適切である。しかしながら、NPCは既に有意なレベルのSox2を発現しており、これらの細胞を上述した条件においてリプログラミングにより感受性にさせた可能性がある。本研究は、リプログラミングに必要であると考えられるTFのいずれをも発現していないMEFのリプログラミングを可能にできる低分子を特定することを目標にした。本発明者らがNPCおよびMEF両方のスクリーニングにおいてBIXを特定したのは思いがけないことであり、本分子が体細胞からのiPSCの作製を可能にし、および改善する役割を有することをさらに確認する。BIXの特徴決定された作用機構を考慮すると、本発明者らの研究は、薬理学的阻害を介した機能喪失が、不可欠なiPSCリプログラミング遺伝子の機能獲得を補償するのに十分である分子標的を潜在的に特定した。それはさらに、特異的なエピジェネティック過程であるG9a媒介H3K9me2の阻害をiPSC作製に機構的に結びつける。BIXは、多能性遺伝子のサイレンシングされた状態から活動的な転写状態へのエピジェネティックバランスの移行を促進するように機能する可能性がある。明らかに、RG108などの異なる標的および作用機構を有する他のクロマチン修飾低分子とのBIXの組み合わせを、よりよいリプログラミングのために活用することができた。他方で、特異的なL型カルシウムチャンネルアゴニストとして特徴決定された活性を有するBayK(Schramm, M. et al., Nature, 303:535-537 (1983))がリプログラミング効率を改善するという本発明者らの観察は興味深い。L型カルシウムチャンネルは血圧調節、平滑筋収縮、インシュリン分泌、心臓発生などのような様々な組織における細胞内過程を媒介することが公知である(Tosti, E., Reprod Biol Endocrinol, 4:26(2006))。さらに、BayKを含む様々なアゴニストによるL型カルシウムチャンネルの活性化は、CREB活性化、筋小胞体Ca2+の放出、およびcAMP活性における変化によって細胞内シグナルを誘導することが示されている。より重要なことに、いくつかの報告は、mES細胞の増殖の制御においてカルシウムが役割を果たす可能性があることを示唆している(Heo, J.S. et al., Am J Physiol Cell Physiol, 290:C123-133 (2006))。しかしながら、本発明者らの手においては、2μM BayK単独または1μM BIXとの組み合わせでのmES細胞の処理は、増殖における変化をもたらさない(図5)。さらに、2μM BayK単独または1μM BIXとの組み合わせでのOG2 MEFの処理は、SOX2発現を誘導しない(図6)。言うまでもなく、BayKがリプログラミング過程に影響を与える正確な機構を吟味するにはより多くの仕事が行われる必要がある。しかしながら、以前にはリプログラミングに関連付けられていなかったシグナル経路において活性を有する低分子が有意にその効率を増強できることを見出すのは興味深い。これまでのところ、それは、クロマチン修飾因子に直接作用することなくリプログラミングへの影響を示す、Wnt3タンパク質(Marson, A. et al., Cell Stem Cell, 3:132-135 (2008))とは別のタイプの最初の低分子である。なぜなら、最新では、リプログラミングに影響を与えることが見出された他の低分子のほとんどが細胞のエピジェネティック状態を直接修飾すると見受けられるからである:すなわち、BIX(Shi, Y. et al., Cell Stem Cell, 2:525-528 (2008))、バルプロ酸(Huangfu, D. et al., Nat Biotechnol, 26:795-797 (2008))、および5'アザシチジン(Mikkelsen, T.S. et al., Nature, 454:49-55 (2008))。重要なことに、BayKはインビボでのリプログラミングおよび/または再生に治療的に関連する分子にとって最終的に望ましいと考えられるいくつかの重要な特徴を有するように見受けられる。それだけでは作用/リプログラミングしないが、その効果を発揮するためにBIXの存在を必要とする事実は、おそらく損傷により引き起こされてリプログラミングの形式を既に経験している細胞がその効果により感受性である可能性があることを示唆する。このことは、直接のエピジェネティック修飾因子がそうであるように、全身性に健常細胞に影響を与えることなくより特異的な様式において標的細胞を最終的にリプログラミングすることを許容し得る。
MEFの由来
129S2/SvPasCrlfまたはROSA26+/-/OG2+/-MEFは、WiCell Research Instituteのウェブサイト:「Introduction to human embryonic stem cell culture methods.」に報告されている手順に従って得られた。動物実験は、Max Planck Institute for Biomolecular Research, GermanyのAnimal Protection Guidelinesに従って行った。
マウスOct4、Klf4、c-Myc、およびSox2についてのpMXベースのレトロウイルスベクターはAddgene(Cambridge, MA)より入手した。ウイルス産生および導入過程は記載されているように行った(Takahashi, K. et al., Cell, 131:861-872 (2007))。化合物BIX-01294の合成および完全な特徴決定は、以前に記載された通りであり(Kubicek, S. et al., Mol Cell, 25:473-481 (2007))、Bayk8644はEMD/Calbiochem Biochemical (San Diego, CA)から購入した。
1次および2次スクリーニングのために、公知化合物のコレクションを使用した。本コレクションは、FDAにより認可された薬物、特徴決定された酵素の公知のインヒビターおよびアクチベーターを含む、市販されているおよそ2000個の公知生理活性分子から構成されていた(Sigma-Aldrich (St. Louis, MO)由来のLOPACコレクション、BIOMOL (Plymouth Meeting, PA)由来のKnown Bioactive Library、およびEMD Calbiochem (San Diego, CA)由来の非重複公知化合物を含む)。
ALP染色は、Alkaline Phosphatase Detection Kit(Millipore)を用いて製造業者の指示に従って行った。免疫蛍光アッセイ法のために、細胞を4%パラホルムアルデヒド中で15分、室温(RT)で固定し、PBSで洗浄した。次に、ブロッキング緩衝液(BB)[PBS(Invitrogen)において0.3% Triton X-100(Sigma-Aldrich)、10%正常ロバ血清(Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc)]中で30分、RTでインキュベーションした。次に、1次抗体と一晩4℃でBB中でインキュベーションした。その後、細胞をPBSで洗浄し、2次抗体とBB中で45〜60分間RTでインキュベーションした。1次抗体は以下であった;マウス抗Oct4(1:200)(Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA)、マウス抗SSEA1(1:200)(Santa Cruz Biotechnology Inc.)、ウサギ抗Nanog(1:500)(Abcam Inc., Cambridge, MA)、マウス抗Sox2(1:200)(Millipore)、ウサギ抗Pdx1(1:200)(C.Wright博士からの親切な贈り物)、マウス抗βIII-チューブリン(Tuj1)(1:500)(Covance Research Products Inc., Denver, PA)、マウス抗心筋トロポニンT(CT3)(1:200)(Developmental Studies Hybridoma Bank at the University of Iowa, Iowa City, IA)、ウサギ抗アルブミン(DAKO)。2次抗体はAlexa Fluor555ロバ抗マウスまたはウサギIgG(1:500)(Invitrogen)であった。核をDAPI(Sigma-Aldrich)染色により検出した。画像を測光CoolSnap HQ2 カメラを有するNikon Eclipse TE2000-U/X-cite 120 EXFO顕微鏡を用いて捕捉した。
RNeasy Plus Mini KitをQIAshredderと組み合わせて用いて、iPSCおよび対照細胞株からRNAを抽出した。iScript(商標)cDNA Synthesis Kit(BioRad, Hercules, CA)を用いてRNAをcDNAに変換した。特異的遺伝子の増幅は、以前に発表されたプライマー(Takahashi, K. et al., Cell, 131:861-872 (2007);Takahashi, K. and Yamanaka, S., Cell, 126:663-676 (2006))およびPlatinum PCR SuperMix(Invitrogen)を用いてMastercycler ep gradient PCR machine(Eppendorf)上で行った。
Non Organic DNA Isolation Kit(Millipore)を用いてR1、OG2 MEF、およびOK iPSC(10継代)細胞からDNAを単離した。次に、バイサルファイト塩基配列決定のためにDNAをEZ DNA Methylation-Gold Kit(商標)(Zymo Research Corp., Orange, CA)で処理した。次に、処理したDNAを関心対象の配列を増幅するために用いた。プロモーター断片増幅のために使用したプライマーは以前に発表された通りであった(Blelloch, R. et al., Stem Cells, 24:2007-2013 (2006))。結果として生じた断片をTOPO TA cloning Kit for sequencing(Invitrogen)を用いてクローン化し、塩基配列決定を行った。
凝集体キメラを得るために、iPCを露出されたコンパクション後の8細胞期胚と凝集させた。8細胞胚(B6C3F1)を2.5 dpcで雌から流し出して、ミネラルオイルの下でKSOM培地(10% FCS)の微小滴において培養した。短時間のトリプシン処理後のiPSCの塊(10〜20細胞)を選択し、透明帯除去8細胞胚を含む微小滴中に移した。iPSCと凝集した8細胞胚を一晩、37℃、5%CO2で培養した。8細胞期から発生した凝集した胚盤胞を2.5 dpcの偽妊娠レシピエントの1つの子宮角中に移植した。1匹の成体雄キメラを雌のCD1野生型マウスと交配させた。X-gal染色により、キメラマウスおよび野生型マウスのこの自然交配から得られた6個のF1胚が生殖系列伝達により作製されたことが示された。
棒グラフおよび統計解析は、Excelにおける標準的なt検定を用いて行った。
OK2B iPSCを完全なmES細胞培地においてゼラチン(Millipore, Temecula, CA)上で2日間増殖させた[Knockout DMEM、10% ESに適したFBS、10% Knockout serum replacement、1% Glutamax、1% Non-essential amino acids、ペニシリン/ストレプトマイシン、0.1 mMβ-メルカプトエタノール、1% EmbryoMax ESC Qualified Nucleosides(Millipore)、および103 U/ml LIF(Millipore)](言及している以外、すべての製品はInvitrogen, Carlsbad, CA由来である)。次に、RNAeasy Mini Kit(Qiagen, Valencia, CA)を用いて2通りのウェルからのRNAを単離した。MessageAmp II-Biotin Enhanced Kit(Ambion, Austin, TX)を用いて、全RNA試料を増幅し、かつ標識した。次に、増幅して標識した試料をMouse Genome 430 2.0 Arrays(Affymetrix)にハイブリダイズさせ、GenePattern(ワールドワイドウェブ:broad.mit.edu/cancer/software/)を使用した階層的クラスタリング(ピアソン、対数変換(log-transformed)、列中心(row-centered)値)を用いて解析を行った。
mES R1細胞をゼラチンでコーティングした6ウェルプレート上に2×105細胞/ウェルの密度で完全なmES細胞培地においてプレーティングした。細胞接着と同時、およそ12時間で、DMSO、1μM BIX、2μM BayK、および両方の組み合わせのいずれかで、細胞を3連で処理した。15、24、および48時間で、細胞をトリプシンを用いて剥離させ、血球計算板を用いて計数した。トリパンブルー(Sigma-Aldrich, St.Louis, MO)を死細胞除去のために使用した。
OG2+/-/ROSA26+/- MEFを6ウェルプレート上にウェルあたり3.4×104細胞の密度でプレーティングした。次の日に、DMSO、1μM BIX、2μM BayK、および両方の組み合わせで、細胞を3連で6日間処理した。培地を3日目に新しくした。次に、RNAeasy Mini Kit(Quiagen)を用いて各ウェルからのRNAを単離した。RNAの逆転写をiScript(商標)cDNA Synthesis Kit(BioRad, Hercules, CA)を用いて行った。内因性Sox2の増幅は以前に発表されたプライマー(Takahashi, K., Okita, K., Nakagawa, M., and Yamanaka, S. (2007). Induction of pluripotent stem cells from fibroblast cultures. Nat Protoc 2, 3081-3089;Takahashi, K., and Yamanaka, S. (2006). Induction of pluripotent stem cells from mouse embryonic and adult fibroblast cultures by defined factors. Cell 126, 663-676)をPlatinum PCR SuperMix(Invitrogen)と共に用いて、Mastercycler(登録商標)ep gradient PCR machine(Eppendorf)において行った。
本実施例は、哺乳動物細胞の転写因子タンパク質とのインキュベーションが多能性を誘導するのに十分であることを証明する。
大腸菌(E.coli)において高レベルのタンパク質発現を得るために、4種類すべてのヒトTF遺伝子のコドン領域を最初に最適化し(G A Gutman and G W Hatfield (1989). PNAS. vol. 86.pp:3699-3703)、DNAオリゴベース/PCR遺伝子構築技術(Danilo R Casimiro, Peter E WrightおよびH Jane Dyson. (1997). Structure. Vol.5. pp: 1407- 1412.)を用いて全長を合成した。ポリアルギニンタグ:
を設計において各タンパク質のC末端に付加した(Gump JM, Dowdy SF. (2007) Trends Mol Med. 2007 Oct;13(10):443-8)。最終的なDNA断片にNdeIおよびXhoI部位を隣接させ、タンパク質発現のためにpET41発現ベクターのNdeI-XhoI部位に挿入した。各プラスミドをDNA配列で検証し、次に組み換えタンパク質生産のために自己誘導培地を用いて一晩、BL21出発のコンピテントセルを形質転換した(Studier FW, (2005) Protein Expr Purif. 41(1). Pp: 207-234.)。
大腸菌(Escherichia coli)BL21(DE3)細胞をpET-Oct4-PTD(「PTD」はタンパク質導入ドメインを指す)、pET-Soc2-PTD、pET-Klf4-PTD、およびpET-c-Myc-PTDで別々に形質転換し、自己誘導法を用いてタンパク質発現を行った(Studier F.W., Protein Expression and Purification, 41 (2005) 207-234.)。記載されているように、封入体を可溶化してタンパク質をリフォールディングした(LaFevre BM, Wu S.およびLin X. Molecular Cancer Therapeutics 7, 1420-1429, June 1, 2008. doi: 10.1158/1535-7163;Medynski D., Tuan M., Liu, W., Wu, S.およびLin, X. Protein Expression and Purification Vol. 52, 395-402, April 2007;Hou W., Medynski D., Wu, S., Lin, X.およびLi, LY. Clinical Cancer Research Vol. 11, 5595-5602, August 1, 2005)。
Claims (18)
- 細胞療法のための治療的組成物を作製する方法であって、
(a)
(i) Octポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、Klfポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、およびSoxポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む1つまたは複数の発現カセット;または
(ii) 外因性Octポリペプチド、外因性Soxポリペプチド、および外因性Klfポリペプチド
を体細胞、前駆細胞、または哺乳動物非多能性幹細胞に導入する工程;
(b) 該体細胞、前駆細胞、または哺乳動物非多能性幹細胞と、GSK3インヒビター、MEKインヒビター、およびTGFβ受容体/ALK5インヒビターを接触させる工程;ならびに
(c) 工程(a)および(b)から得られた該細胞を望む細胞タイプに分化させる工程
を含み、
該治療的組成物が、工程(c) から得られた該細胞を含む、
方法。 - OctポリペプチドがOct4である、請求項1記載の方法。
- KlfポリペプチドがKlf4である、請求項1記載の方法。
- SoxポリペプチドがSox2である、請求項1記載の方法。
- 体細胞、前駆細胞、または哺乳動物非多能性幹細胞が、ヒト細胞である、請求項1記載の方法。
- 体細胞が線維芽細胞を含む、請求項1記載の方法。
- 前駆細胞を含む、請求項1記載の方法。
- 前駆細胞が神経前駆細胞、皮膚前駆細胞、または毛包前駆細胞である、請求項7記載の方法。
- TGFβ受容体/ALK5インヒビターがSB431542およびA-83-01からなる群から選択され、
GSK3インヒビターがCHIR99021を含み、MEKインヒビターがPD0325901を含む、請求項1記載の方法。 - 細胞療法のための治療的組成物の製造のための混合物の使用であって、
該混合物が、
(a) 体細胞、前駆細胞、または非多能性幹細胞、ならびに
(b) GSK3インヒビター、MEKインヒビター、およびTGFβ受容体/ALK5インヒビター
を含み、
該体細胞、前駆細胞、または非多能性幹細胞が、
(i) Octポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、Klfポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、およびSoxポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む1つまたは複数の発現カセット;または
(ii) 外因性Octポリペプチド、外因性Soxポリペプチド、および外因性Klfポリペプチド
を含む、
使用。 - OctポリペプチドがOct4である、請求項10記載の使用。
- KlfポリペプチドがKlf4である、請求項10記載の使用。
- SoxポリペプチドがSox2である、請求項10記載の使用。
- 体細胞、前駆細胞、または非多能性幹細胞が、ヒト細胞である、請求項10記載の使用。
- 体細胞が線維芽細胞を含む、請求項10記載の使用。
- 前駆細胞を含む、請求項10記載の使用。
- 前駆細胞が神経前駆細胞、皮膚前駆細胞、または毛包前駆細胞である、請求項16記載の使用。
- TGFβ受容体/ALK5インヒビターがSB431542およびA-83-01からなる群から選択され、
GSK3インヒビターがCHIR99021を含み、MEKインヒビターがPD0325901を含む、請求項10記載の使用。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2021099098A JP7286710B2 (ja) | 2008-03-17 | 2021-06-15 | 人工多能性幹細胞を作製するための化学的手法と遺伝的手法の組み合わせ法 |
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US6995608P | 2008-03-17 | 2008-03-17 | |
US61/069,956 | 2008-03-17 | ||
US19798608P | 2008-10-31 | 2008-10-31 | |
US61/197,986 | 2008-10-31 | ||
JP2016151681A JP6321733B2 (ja) | 2008-03-17 | 2016-08-02 | 人工多能性幹細胞を作製するための化学的手法と遺伝的手法の組み合わせ法 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016151681A Division JP6321733B2 (ja) | 2008-03-17 | 2016-08-02 | 人工多能性幹細胞を作製するための化学的手法と遺伝的手法の組み合わせ法 |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2021099098A Division JP7286710B2 (ja) | 2008-03-17 | 2021-06-15 | 人工多能性幹細胞を作製するための化学的手法と遺伝的手法の組み合わせ法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2018104473A true JP2018104473A (ja) | 2018-07-05 |
JP6899792B2 JP6899792B2 (ja) | 2021-07-07 |
Family
ID=41091504
Family Applications (6)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2011500906A Active JP5951254B2 (ja) | 2008-03-17 | 2009-03-17 | 人工多能性幹細胞を作製するための化学的手法と遺伝的手法の組み合わせ法 |
JP2015013821A Pending JP2015119714A (ja) | 2008-03-17 | 2015-01-28 | 人工多能性幹細胞を作製するための化学的手法と遺伝的手法の組み合わせ法 |
JP2016151681A Active JP6321733B2 (ja) | 2008-03-17 | 2016-08-02 | 人工多能性幹細胞を作製するための化学的手法と遺伝的手法の組み合わせ法 |
JP2018072807A Active JP6899792B2 (ja) | 2008-03-17 | 2018-04-05 | 人工多能性幹細胞を作製するための化学的手法と遺伝的手法の組み合わせ法 |
JP2021099098A Active JP7286710B2 (ja) | 2008-03-17 | 2021-06-15 | 人工多能性幹細胞を作製するための化学的手法と遺伝的手法の組み合わせ法 |
JP2023085020A Pending JP2023101613A (ja) | 2008-03-17 | 2023-05-24 | 人工多能性幹細胞を作製するための化学的手法と遺伝的手法の組み合わせ法 |
Family Applications Before (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2011500906A Active JP5951254B2 (ja) | 2008-03-17 | 2009-03-17 | 人工多能性幹細胞を作製するための化学的手法と遺伝的手法の組み合わせ法 |
JP2015013821A Pending JP2015119714A (ja) | 2008-03-17 | 2015-01-28 | 人工多能性幹細胞を作製するための化学的手法と遺伝的手法の組み合わせ法 |
JP2016151681A Active JP6321733B2 (ja) | 2008-03-17 | 2016-08-02 | 人工多能性幹細胞を作製するための化学的手法と遺伝的手法の組み合わせ法 |
Family Applications After (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2021099098A Active JP7286710B2 (ja) | 2008-03-17 | 2021-06-15 | 人工多能性幹細胞を作製するための化学的手法と遺伝的手法の組み合わせ法 |
JP2023085020A Pending JP2023101613A (ja) | 2008-03-17 | 2023-05-24 | 人工多能性幹細胞を作製するための化学的手法と遺伝的手法の組み合わせ法 |
Country Status (16)
Country | Link |
---|---|
US (8) | US9534205B2 (ja) |
EP (3) | EP2279243B1 (ja) |
JP (6) | JP5951254B2 (ja) |
KR (1) | KR101679082B1 (ja) |
CN (2) | CN104694570B (ja) |
AU (1) | AU2009225665B9 (ja) |
BR (1) | BRPI0908708A2 (ja) |
CA (1) | CA2718904C (ja) |
ES (1) | ES2690554T3 (ja) |
HK (2) | HK1151559A1 (ja) |
IL (1) | IL208144B (ja) |
MX (1) | MX2010010165A (ja) |
RU (1) | RU2010139426A (ja) |
SG (4) | SG188904A1 (ja) |
WO (1) | WO2009117439A2 (ja) |
ZA (1) | ZA201006683B (ja) |
Families Citing this family (177)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20110171185A1 (en) * | 1999-06-30 | 2011-07-14 | Klimanskaya Irina V | Genetically intact induced pluripotent cells or transdifferentiated cells and methods for the production thereof |
WO2007019398A1 (en) | 2005-08-03 | 2007-02-15 | Advanced Cell Technology, Inc. | Improved methods of reprogramming animal somatic cells |
US7682828B2 (en) | 2003-11-26 | 2010-03-23 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Methods for reprogramming somatic cells |
CN101330830B (zh) | 2005-10-18 | 2016-01-20 | 国家犹太健康中心 | 条件无限增殖化长期干细胞和制备和使用所述细胞的方法 |
US8129187B2 (en) | 2005-12-13 | 2012-03-06 | Kyoto University | Somatic cell reprogramming by retroviral vectors encoding Oct3/4. Klf4, c-Myc and Sox2 |
EP2208786B1 (en) * | 2005-12-13 | 2018-08-01 | Kyoto University | Nuclear reprogramming factor |
US8278104B2 (en) | 2005-12-13 | 2012-10-02 | Kyoto University | Induced pluripotent stem cells produced with Oct3/4, Klf4 and Sox2 |
US20090227032A1 (en) * | 2005-12-13 | 2009-09-10 | Kyoto University | Nuclear reprogramming factor and induced pluripotent stem cells |
WO2008124133A1 (en) | 2007-04-07 | 2008-10-16 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Reprogramming of somatic cells |
US9213999B2 (en) * | 2007-06-15 | 2015-12-15 | Kyoto University | Providing iPSCs to a customer |
JP2008307007A (ja) * | 2007-06-15 | 2008-12-25 | Bayer Schering Pharma Ag | 出生後のヒト組織由来未分化幹細胞から誘導したヒト多能性幹細胞 |
US20140342984A1 (en) * | 2007-10-19 | 2014-11-20 | Robert G. Matheny | Compositions for Regenerating Defective or Absent Myocardium |
CA2718904C (en) | 2008-03-17 | 2017-01-03 | The Scripps Research Institute | Combined chemical and genetic approaches for generation of induced pluripotent stem cells |
EP2274424A4 (en) * | 2008-04-07 | 2012-02-01 | Nupotential Inc | REPROGRAMMING A CELL BY INDUCING A PLURIPOTENT GENE USING AN HDAC MODULATOR |
CA2695522C (en) * | 2008-05-02 | 2019-01-15 | Kyoto University | Method of nuclear reprogramming |
US8986702B2 (en) | 2008-05-16 | 2015-03-24 | Taiga Biotechnologies, Inc. | Antibodies and processes for preparing the same |
EP2300611B1 (en) | 2008-06-13 | 2017-08-09 | Whitehead Institute for Biomedical Research | Programming and reprogramming of cells |
US9169462B2 (en) | 2008-07-21 | 2015-10-27 | Taiga Biotechnologies, Inc. | Methods for preparing mature erythrocytes from conditionally immortalized hematopoietic stem cells |
US8298825B1 (en) | 2008-08-25 | 2012-10-30 | The General Hospital Corporation | TGF-beta receptor inhibitors to enhance direct reprogramming |
EP2318435B1 (en) | 2008-08-28 | 2015-12-23 | Taiga Biotechnologies, Inc. | Modulators of myc, methods of using the same, and methods of identifying agents that modulate myc |
US9045737B2 (en) * | 2008-12-13 | 2015-06-02 | Dnamicroarray, Inc. | Artificial three-dimensional microenvironment niche culture |
CN104130976A (zh) | 2008-12-17 | 2014-11-05 | 斯克里普斯研究所 | 干细胞的产生和保持 |
US20110258713A1 (en) * | 2008-12-23 | 2011-10-20 | Vivoscript, Inc. | Compositions and methods for re-programming cells without genetic modification |
WO2010115052A2 (en) * | 2009-04-03 | 2010-10-07 | The Mclean Hospital Corporation | Induced pluripotent stem cells |
US9109245B2 (en) | 2009-04-22 | 2015-08-18 | Viacyte, Inc. | Cell compositions derived from dedifferentiated reprogrammed cells |
US9005975B2 (en) | 2009-05-29 | 2015-04-14 | Kyoto University | Method for selecting clone of induced pluripotent stem cells |
US8709805B2 (en) * | 2009-08-07 | 2014-04-29 | Kyoto University | Canine iPS cells and method of producing same |
CA3091210C (en) * | 2009-10-16 | 2023-04-04 | The Scripps Research Institute | Induction of pluripotent cells |
AU2014250681B2 (en) * | 2009-10-16 | 2016-12-15 | The Scripps Research Institute | Induction of pluripotent cells |
AU2010312291A1 (en) * | 2009-10-29 | 2012-06-21 | Mcmaster University | Generating induced pluripotent stem cells and progenitor cells from fibroblasts |
MX353245B (es) * | 2009-10-31 | 2018-01-08 | New World Laboratories Inc Star | Metodos para reprogramar células y sus usos. |
JP5898086B2 (ja) * | 2009-11-04 | 2016-04-06 | セルラー ダイナミクス インターナショナル, インコーポレイテッド | 化学物質を用いるエピソームリプログラミング |
WO2011082038A2 (en) * | 2009-12-31 | 2011-07-07 | Fate Therapeutics, Inc. | Improved reprogramming compositions |
US20130059385A1 (en) * | 2010-03-02 | 2013-03-07 | The Scripps Research Institute | Methods of generating pluripotent stem cells |
EP2366432A1 (en) * | 2010-03-16 | 2011-09-21 | Helmholtz Zentrum München Deutsches Forschungszentrum für Gesundheit und Umwelt (GmbH) | Inhibitors of glycogen synthase kinase 3 for use in therapeutic methods and screening method relating thereto |
CN105176930B (zh) * | 2010-03-31 | 2021-05-04 | 斯克里普斯研究所 | 重编程细胞 |
CN102260646B (zh) * | 2010-05-26 | 2015-09-16 | 北京瑞普晨创科技有限公司 | 一种制备诱导多潜能干细胞的方法,试剂盒及用途 |
WO2011159726A2 (en) | 2010-06-14 | 2011-12-22 | The Scripps Research Institute | Reprogramming of cells to a new fate |
JP6039551B2 (ja) | 2010-06-18 | 2016-12-07 | セルラー ダイナミクス インターナショナル, インコーポレイテッド | 透析された血清を有する心筋細胞培地 |
WO2012007725A2 (en) * | 2010-07-16 | 2012-01-19 | Plasticell Ltd | Method of reprogramming a cell |
JP2013536689A (ja) | 2010-09-01 | 2013-09-26 | ホワイトヘッド・インスティテュート・フォー・バイオメディカル・リサーチ | Emtを調節するための組成物および方法ならびにその使用 |
WO2012031288A1 (en) * | 2010-09-03 | 2012-03-08 | United States Of America As Represented By The Department Of Veterans Affairs | Efficient generation of neurally-induced mesenchymal stem cells and applications thereof |
US9447408B2 (en) | 2010-09-14 | 2016-09-20 | Kyoto University | Method of efficiently establishing induced pluripotent stem cells |
EP2618829B1 (en) * | 2010-09-22 | 2019-05-01 | The Regents of the University of Colorado, a body corporate | Smad7 for use in the treatment of oral mucositis or psoriasis |
JP6002675B2 (ja) * | 2010-12-17 | 2016-10-05 | ビオラミナ アーベー | 細胞培養培地 |
WO2012087965A2 (en) * | 2010-12-22 | 2012-06-28 | Fate Therapauetics, Inc. | Cell culture platform for single cell sorting and enhanced reprogramming of ipscs |
CA2823154A1 (en) * | 2010-12-27 | 2012-07-05 | Lsip, Llc | Ips cells and method for generating same |
WO2012098260A1 (en) * | 2011-01-21 | 2012-07-26 | Axiogenesis Ag | A non-viral system for the generation of induced pluripotent stem (ips) cells |
ES2957478T3 (es) | 2011-05-02 | 2024-01-19 | Univ Wayne State | Una tecnología de células madre pluripotentes inducidas por proteínas y usos de las mismas |
WO2012166973A1 (en) | 2011-06-01 | 2012-12-06 | Sanford-Burnham Medical Research Institute | Methods for promoting cell reprogramming |
WO2013010045A1 (en) | 2011-07-12 | 2013-01-17 | Biotime Inc. | Novel methods and formulations for orthopedic cell therapy |
CN103857797A (zh) * | 2011-07-19 | 2014-06-11 | 帷幄生物技术公司 | 用于修复软骨损伤的非遗传修饰性重编程细胞的组合物和方法 |
CN103703130A (zh) | 2011-07-25 | 2014-04-02 | 国立大学法人京都大学 | 筛选诱导的多能干细胞的方法 |
WO2013058403A1 (ja) | 2011-10-21 | 2013-04-25 | 国立大学法人京都大学 | 層流による多能性維持単一分散細胞培養法 |
JP5999658B2 (ja) | 2011-11-25 | 2016-09-28 | 国立大学法人京都大学 | 多能性幹細胞の培養方法 |
RU2691027C2 (ru) | 2011-12-05 | 2019-06-07 | Фэктор Байосайенс Инк. | Способы и препараты для трансфекции клеток |
US8497124B2 (en) | 2011-12-05 | 2013-07-30 | Factor Bioscience Inc. | Methods and products for reprogramming cells to a less differentiated state |
WO2013131000A1 (en) * | 2012-03-01 | 2013-09-06 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Emt-inducing transcription factors cooperate with sox9 |
WO2013138623A1 (en) * | 2012-03-14 | 2013-09-19 | Children's Medical Center Corporation | High-throughput image-based chemical screening in zebrafish blastomere cell culture |
EP2877189B1 (en) | 2012-07-20 | 2021-01-06 | Taiga Biotechnologies, Inc. | Enhanced reconstitution and autoreconstitution of the hematopoietic compartment |
US10357517B1 (en) * | 2012-10-01 | 2019-07-23 | University Of South Florida | Methods of treating epilepsy using neural stem cells that express nanog, SSEA-4, OCT-4, MIR-34B, MIR-34C and MIR-592 |
KR102596302B1 (ko) | 2012-11-01 | 2023-11-01 | 팩터 바이오사이언스 인크. | 세포에서 단백질을 발현시키는 방법들과 생성물들 |
WO2014071323A2 (en) * | 2012-11-02 | 2014-05-08 | Duke University | Inhibition of histone methyltransferase for cardiac reprogramming |
WO2014110177A2 (en) * | 2013-01-09 | 2014-07-17 | International Stem Cell Corporation | Small molecules that promote skin regeneration |
JP6495658B2 (ja) | 2013-02-08 | 2019-04-03 | 国立大学法人京都大学 | 巨核球及び血小板の製造方法 |
EP2966163B1 (en) | 2013-03-06 | 2018-01-17 | Kyoto University | Culture system for pluripotent stem cells and method for subculturing pluripotent stem cells |
SG11201507045TA (en) | 2013-03-08 | 2015-10-29 | Univ Colorado Regents | Ptd-smad7 therapeutics |
US9365825B2 (en) * | 2013-03-11 | 2016-06-14 | Taiga Biotechnologies, Inc. | Expansion of adult stem cells in vitro |
US10272115B2 (en) | 2013-03-11 | 2019-04-30 | Taiga Biotechnologies, Inc. | Production and use of red blood cells |
US8859286B2 (en) | 2013-03-14 | 2014-10-14 | Viacyte, Inc. | In vitro differentiation of pluripotent stem cells to pancreatic endoderm cells (PEC) and endocrine cells |
SI2970890T1 (sl) | 2013-03-14 | 2020-10-30 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Sestavki in postopki za razmnoževanje in kultiviranje epitelijskih matičnih celic |
SG11201507829SA (en) | 2013-03-21 | 2015-12-30 | Univ Kyoto | Pluripotent stem cell for neuronal differentiation induction |
KR102164270B1 (ko) | 2013-03-25 | 2020-10-12 | 고에키 자이단 호징 고베 이료 산교 도시 스이신 기코 | 세포의 선별 방법 |
KR20140121317A (ko) * | 2013-04-06 | 2014-10-15 | 서울대학교산학협력단 | 비신경 세포로부터 유도 신경 줄기 세포의 생산 방법 및 이에 의하여 생산되는 유도 신경 줄기 세포 |
JP6461787B2 (ja) | 2013-04-12 | 2019-01-30 | 国立大学法人京都大学 | 肺胞上皮前駆細胞の誘導方法 |
WO2014185358A1 (ja) | 2013-05-14 | 2014-11-20 | 国立大学法人京都大学 | 効率的な心筋細胞の誘導方法 |
EP3006559B1 (en) | 2013-05-31 | 2019-11-06 | iHeart Japan Corporation | Layered cell sheet incorporating hydrogel |
TWI629360B (zh) | 2013-06-11 | 2018-07-11 | 國立大學法人京都大學 | 腎前驅細胞的製造方法及含有腎前驅細胞之醫藥 |
CN104278008B (zh) * | 2013-07-12 | 2020-08-21 | 北京宏冠再生医学科技有限公司 | 一种通过小分子化合物处理来制备多潜能干细胞的方法、试剂盒和用途 |
KR101655383B1 (ko) | 2013-07-27 | 2016-09-08 | 고려대학교 산학협력단 | 소분자 화합물을 포함하는 만능성 줄기세포의 염색체 안정성 유지용 조성물 |
WO2015020113A1 (ja) | 2013-08-07 | 2015-02-12 | 国立大学法人京都大学 | 膵ホルモン産生細胞の製造法 |
SG11201601720RA (en) | 2013-09-05 | 2016-04-28 | Univ Kyoto | New method for inducing dopamine-producing neural precursor cells |
CN104419683A (zh) * | 2013-09-10 | 2015-03-18 | 中国科学院生物物理研究所 | 制备范可尼贫血症患者自体诱导多能干细胞的方法及其应用 |
EP3060649A4 (en) * | 2013-10-23 | 2017-07-12 | The J. David Gladstone Institutes, A Testamentary Trust Established under The Will of J. David Gladstone | Reprogramming cardiomyocytes with one transcription factor |
US10076574B2 (en) | 2013-10-25 | 2018-09-18 | Wayne State University | Methods, systems and compositions relating to cell conversion via protein-induced in-vivo cell reprogramming |
KR102219743B1 (ko) | 2013-11-01 | 2021-02-23 | 고쿠리츠 다이가쿠 호진 교토 다이가쿠 | 신규 연골 세포 유도 방법 |
US9512406B2 (en) | 2013-12-20 | 2016-12-06 | The J. David Gladstone Institute, a testamentary trust established under the Will of J. David Gladstone | Generating hepatocytes |
ES2787198T3 (es) | 2014-01-31 | 2020-10-15 | Factor Bioscience Inc | ARN sintético para su uso en el tratamiento de la epidermólisis ampollosa distrófica |
CN104894060B (zh) * | 2014-03-03 | 2018-11-06 | 中国科学院上海生命科学研究院 | 诱导体细胞转分化为神经干细胞的方法及其应用 |
PT3114214T (pt) | 2014-03-04 | 2024-01-03 | Fate Therapeutics Inc | Métodos de reprogramação melhorados e plataformas de cultura celular |
EP3929302A1 (en) | 2014-07-14 | 2021-12-29 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Method for identifying epitope on protein |
WO2016008982A1 (en) * | 2014-07-16 | 2016-01-21 | Fundación Pública Andaluza Progreso Y Salud | Methods for generating induced pluripotent stem cells |
CN106687582A (zh) | 2014-08-04 | 2017-05-17 | 堪萨斯大学 | 哺乳动物多能干细胞、其产生方法及其用途 |
RU2565548C1 (ru) * | 2014-08-05 | 2015-10-20 | Дмитрий Андреевич Журавлёв | Способ получения плюрипотентных стволовых клеток |
US10851344B2 (en) | 2014-08-07 | 2020-12-01 | The J. David Gladstone Institutes, A Testamentary Trust Established Under The Will Of J. David Gladstone | Reversible stencils for fabricating micro-tissues |
EP3189134A1 (en) * | 2014-09-03 | 2017-07-12 | The Brigham and Women's Hospital, Inc. | Compositions, systems, and methods for generating inner ear hair cells for treatment of hearing loss |
US10711249B2 (en) | 2014-12-26 | 2020-07-14 | Kyoto University | Method for inducing hepatocytes |
WO2016117139A1 (ja) | 2015-01-20 | 2016-07-28 | タカラバイオ株式会社 | 神経系細胞の製造方法 |
JP2018504122A (ja) | 2015-01-26 | 2018-02-15 | フェイト セラピューティクス,インコーポレイテッド | 免疫調節特性が増加した細胞ならびにその使用および製造のための方法 |
WO2016120493A1 (en) * | 2015-01-30 | 2016-08-04 | Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) | Reprogramming method for producing induced pluripotent stem cells (ipsc) |
WO2016131052A1 (en) | 2015-02-13 | 2016-08-18 | Factor Bioscience Inc. | Nucleic acid products and methods of administration thereof |
WO2016131137A1 (en) | 2015-02-17 | 2016-08-25 | University Health Network | Methods for making and using sinoatrial node-like pacemaker cardiomyocytes and ventricular-like cardiomyocytes |
EP3081638A1 (en) | 2015-04-16 | 2016-10-19 | Kyoto University | Method for producing pseudo-islets |
JP2018520688A (ja) | 2015-07-21 | 2018-08-02 | ザ チルドレンズ メディカル センター コーポレーション | Pd−l1発現造血幹細胞およびその使用 |
WO2017033863A1 (ja) * | 2015-08-21 | 2017-03-02 | 京都府公立大学法人 | 骨芽細胞及びその調製方法 |
US11441126B2 (en) | 2015-10-16 | 2022-09-13 | Fate Therapeutics, Inc. | Platform for the induction and maintenance of ground state pluripotency |
CN109072183B (zh) * | 2015-10-21 | 2023-01-20 | 京都府公立大学法人 | 细胞的制备方法 |
US11021687B2 (en) | 2016-01-08 | 2021-06-01 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Production of differentiated enteroendocrine cells and insulin producing cells |
DK3401392T3 (da) * | 2016-01-08 | 2022-03-07 | Evia Life Sciences Inc | Method for producing hepatic stem/precursor cells from mature hepatic cells using low-molecular-weight compound. |
US11413309B2 (en) | 2016-01-20 | 2022-08-16 | Fate Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for immune cell modulation in adoptive immunotherapies |
CA3010236A1 (en) * | 2016-01-20 | 2017-07-27 | Fate Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for immune cell modulation in adoptive immunotherapies |
US10201540B2 (en) | 2016-03-02 | 2019-02-12 | Frequency Therapeutics, Inc. | Solubilized compositions for controlled proliferation of stem cells / generating inner ear hair cells using GSK3 inhibitors: I |
US10213511B2 (en) | 2016-03-02 | 2019-02-26 | Frequency Therapeutics, Inc. | Thermoreversible compositions for administration of therapeutic agents |
US11260130B2 (en) | 2016-03-02 | 2022-03-01 | Frequency Therapeutics, Inc. | Solubilized compositions for controlled proliferation of stem cells / generating inner ear hair cells using a GSK3 inhibitor: IV |
JP6948072B2 (ja) | 2016-04-15 | 2021-10-13 | 国立大学法人京都大学 | Cd8陽性t細胞を誘導する方法 |
KR102312123B1 (ko) | 2016-04-22 | 2021-10-13 | 고쿠리츠 다이가쿠 호진 교토 다이가쿠 | 도파민 생산 신경전구세포의 제조방법 |
CN105943526B (zh) * | 2016-05-18 | 2018-08-14 | 上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心 | Pd0325901在维持动脉导管开放中的应用 |
WO2017206837A1 (zh) * | 2016-06-03 | 2017-12-07 | 中国人民解放军军事医学科学院野战输血研究所 | 将消化道来源上皮细胞重编程为内胚层干/祖细胞的小分子化合物组合、重编程方法及应用 |
US20190322643A1 (en) * | 2016-06-29 | 2019-10-24 | Georgia State University Research Foundation, Inc. | Histone deacetylase and histone methyltransferase inhibitors and methods of making and use of the same |
CA3033788A1 (en) | 2016-08-17 | 2018-02-22 | Factor Bioscience Inc. | Nucleic acid products and methods of administration thereof |
US20190302100A1 (en) * | 2016-10-28 | 2019-10-03 | National Cancer Center | Method for preparing liver progenitor cells |
CA3045017A1 (en) | 2016-12-02 | 2018-06-07 | Taiga Biotechnologies, Inc. | Nanoparticle formulations |
US11932870B2 (en) | 2016-12-05 | 2024-03-19 | Fate Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for immune cell modulation in adoptive immunotherapies |
TWI814716B (zh) | 2016-12-27 | 2023-09-11 | 日商住友化學股份有限公司 | 人工多能性幹細胞的評估方法及選拔方法,以及人工多能性幹細胞的製造方法 |
CN106754655B (zh) * | 2016-12-29 | 2020-06-19 | 赛业(苏州)生物科技有限公司 | 一种动物胚胎培养基 |
SG10201910821XA (en) | 2016-12-30 | 2020-01-30 | Frequency Therapeutics Inc | 1h-pyrrole-2,5-dione compounds and methods of using them to induce self-renewal of stem/progenitor supporting cells |
EP3572502B1 (en) | 2017-01-20 | 2023-01-11 | Kyoto University | Method for producing cd8alpha +beta + cytotoxic t cells |
JP7162537B2 (ja) | 2017-01-26 | 2022-10-28 | 国立大学法人大阪大学 | 幹細胞の中胚葉系細胞への分化誘導用培地および中胚葉系細胞の製造方法 |
WO2018168829A1 (ja) | 2017-03-14 | 2018-09-20 | 国立大学法人京都大学 | 多能性幹細胞からヘルパーt細胞を製造する方法 |
BR112019024637A2 (pt) | 2017-05-25 | 2020-06-16 | Kyoto University | Método para produzir células progenitoras renais, célula progenitora renal, organoide renal, composição farmacêutica, e, agente terapêutico para uma doença renal. |
CN111164209A (zh) | 2017-06-19 | 2020-05-15 | 公益财团法人神户医疗产业都市推进机构 | 多能干细胞的分化能力的预测方法和用于该预测方法的试剂 |
US10149898B2 (en) | 2017-08-03 | 2018-12-11 | Taiga Biotechnologies, Inc. | Methods and compositions for the treatment of melanoma |
US20190062711A1 (en) * | 2017-08-25 | 2019-02-28 | So Young Life Sciences Corporation | Use Of Phosphorylated TBeta4 And Other Factors To Generate Human Induced Pluripotent Stem Cells |
WO2019060708A1 (en) | 2017-09-22 | 2019-03-28 | The Children's Medical Center Corporation | TREATMENT OF TYPE 1 DIABETES AND AUTOIMMUNE DISEASES OR DISORDERS |
US20210363496A1 (en) | 2017-10-17 | 2021-11-25 | Kyoto University | Method for obtaining artificial neuromuscular junction from pluripotent stem cells |
KR101810008B1 (ko) | 2017-10-23 | 2018-01-18 | 차의과학대학교 산학협력단 | 역분화-증진제를 이용한 인간-유래의 체세포로부터 역분화 만능 줄기세포의 제조방법 |
KR101810014B1 (ko) | 2017-10-23 | 2018-01-18 | 차의과학대학교 산학협력단 | 히스톤 데아세틸라제 저해제 및 골 형성 단백질 경로 차단제를 이용한 인간-유래의 체세포로부터 역분화 만능 줄기세포의 제조방법 |
KR101998633B1 (ko) * | 2017-10-31 | 2019-07-11 | 가톨릭관동대학교산학협력단 | 엘립티신의 줄기세포의 연골세포로의 분화 유도 용도 |
CN108624562B (zh) * | 2018-05-18 | 2021-11-02 | 首都医科大学附属北京朝阳医院 | 一种制备肿瘤干细胞的方法及其专用试剂盒 |
KR102158783B1 (ko) * | 2018-06-18 | 2020-09-22 | 한국생명공학연구원 | 세포 리프로그래밍 조성물 및 이를 이용한 유도만능줄기세포의 제조방법 |
EP3822342A4 (en) | 2018-07-13 | 2022-08-03 | Kyoto University | PROCESS FOR PRODUCTION OF GAMMA DELTA T LYMPHOCYTES |
US20210299331A1 (en) | 2018-07-19 | 2021-09-30 | Kyoto University | Pluripotent stem cell-derived plate-shaped cartilage and method for producing the same |
EP3828262A4 (en) | 2018-07-23 | 2022-03-30 | Kyoto University | NOVEL RENAL PROGENITOR CELL MARKER AND METHOD OF RENAL PROGENITOR CELL CONCENTRATION USING THE SAME |
AU2019321641A1 (en) | 2018-08-17 | 2021-04-15 | Frequency Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for generating hair cells by upregulating Jag-1 |
WO2020037326A1 (en) | 2018-08-17 | 2020-02-20 | Frequency Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for generating hair cells by downregulating foxo |
CN113195710A (zh) | 2018-12-06 | 2021-07-30 | 麒麟控股株式会社 | T细胞或nk细胞的制造方法、t细胞或nk细胞的培养用培养基、t细胞或nk细胞的培养方法、维持未分化t细胞的未分化状态的方法和t细胞或nk细胞的增殖促进剂 |
US20220056413A1 (en) | 2018-12-21 | 2022-02-24 | Kyoto University | Lubricin-localized cartilage-like tissue, method for producing same and composition comprising same for treating articular cartilage damage |
WO2020138371A1 (ja) | 2018-12-26 | 2020-07-02 | キリンホールディングス株式会社 | 改変tcr及びその製造方法 |
CA3140384A1 (en) | 2019-05-15 | 2020-11-19 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for purifying neural crest cells or corneal epithelial cells |
CA3141455A1 (en) | 2019-05-20 | 2020-11-26 | Ajinomoto Co., Inc. | Expansion culture method for cartilage or bone precursor cells |
WO2021015228A1 (ja) * | 2019-07-25 | 2021-01-28 | 富士フイルム株式会社 | 特定の分化細胞の製造方法 |
US10501404B1 (en) | 2019-07-30 | 2019-12-10 | Factor Bioscience Inc. | Cationic lipids and transfection methods |
CN112301052A (zh) * | 2019-08-01 | 2021-02-02 | 浙江霍德生物工程有限公司 | 一种通过体细胞重编程制备诱导多功能干细胞的方法 |
US20230030814A1 (en) | 2019-12-12 | 2023-02-02 | National University Corporation Chiba University | Freeze-Dried Preparations Comprising Megakaryocytes and Platelets |
KR102087084B1 (ko) * | 2020-02-03 | 2020-03-10 | 주식회사 이에이치엘바이오 | 항노화인자를 발현하는 지방유래 줄기세포의 대량 배양방법 |
JP2023514324A (ja) | 2020-02-19 | 2023-04-05 | ナミ セラピューティクス, インコーポレイテッド | がんの処置において有用なTFGβアンタゴニストプロドラッグを含有する製剤化および/または共製剤化リポソーム組成物ならびにその方法 |
CN115427555A (zh) | 2020-02-28 | 2022-12-02 | 武田药品工业株式会社 | 由多能干细胞产生自然杀伤细胞的方法 |
US20230257705A1 (en) | 2020-06-17 | 2023-08-17 | Kyoto University | Chimeric antigen receptor-expressing immunocompetent cells |
JP7429294B2 (ja) | 2020-07-13 | 2024-02-07 | 国立大学法人京都大学 | 骨格筋前駆細胞及びその精製方法、筋原性疾患を治療するための組成物、並びに骨格筋前駆細胞を含む細胞群の製造方法 |
EP4180514A1 (en) | 2020-07-20 | 2023-05-17 | Aichi Medical University | Composition for undifferentiated maintenance culture of pluripotent cells, medium for undifferentiated maintenance culture of pluripotent cells, maintenance culture method in undifferentiated state of pluripotent cells, and method for producing pluripotent cells |
JPWO2022039279A1 (ja) | 2020-08-18 | 2022-02-24 | ||
JPWO2022196714A1 (ja) | 2021-03-17 | 2022-09-22 | ||
AU2022266430A1 (en) | 2021-04-30 | 2023-12-14 | Riken | Cord-like aggregates of retinal pigment epithelial cells, device and production method for producing same, and therapeutic agent comprising said cord-like aggregates |
JPWO2022255489A1 (ja) | 2021-06-04 | 2022-12-08 | ||
WO2022259721A1 (ja) | 2021-06-10 | 2022-12-15 | 味の素株式会社 | 間葉系幹細胞の製造方法 |
AR126145A1 (es) | 2021-06-15 | 2023-09-13 | Takeda Pharmaceuticals Co | Método para producir linfocitos citolíticos naturales a partir de células madre pluripotentes |
WO2023283631A2 (en) * | 2021-07-08 | 2023-01-12 | The Broad Institute, Inc. | Methods for differentiating and screening stem cells |
WO2023286832A1 (ja) | 2021-07-15 | 2023-01-19 | アステラス製薬株式会社 | 血管内皮増殖因子(vegf)高発現ペリサイト様細胞の製造方法 |
EP4372080A1 (en) | 2021-07-15 | 2024-05-22 | Astellas Pharma Inc. | Pericyte-like cell expressing vascular endothelial growth factor (vegf) at high level |
EP4386083A1 (en) | 2021-08-11 | 2024-06-19 | Kyoto University | Method for producing renal interstitial progenitor cells, erythropoietin-producing cells, and method for producing renin-producing cells |
WO2023074648A1 (ja) * | 2021-10-25 | 2023-05-04 | 富士フイルム株式会社 | 腸内分泌細胞を製造する方法、多能性幹細胞由来の腸内分泌細胞、培地又は培地キット、およびそれらの利用 |
WO2023085356A1 (ja) | 2021-11-11 | 2023-05-19 | 株式会社ヘリオス | 遺伝子改変多能性幹細胞、それ由来の免疫担当細胞、それらの製造方法及びそれらの用途 |
CN116694551A (zh) * | 2022-02-24 | 2023-09-05 | 清华大学 | 诱导性成熟肝脏细胞及其制备的方法 |
CN114702591B (zh) * | 2022-05-17 | 2022-09-23 | 诺赛联合(北京)生物医学科技有限公司 | 成体细胞衍生的类器官制备技术 |
WO2024078118A1 (en) * | 2022-10-12 | 2024-04-18 | Peking University | Chemical reprogramming and pluripotent stem cells |
KR20240066520A (ko) | 2022-11-04 | 2024-05-16 | 건국대학교 글로컬산학협력단 | 분화된 세포의 유도만능줄기세포로의 리프로그래밍 효율 증진 방법 |
JP7461691B1 (ja) | 2023-06-23 | 2024-04-04 | 株式会社アンプリー | 炭酸ガスパック用キット |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2007056163A2 (en) * | 2005-11-03 | 2007-05-18 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Aminopyrimidines useful as kinase inhibitors |
WO2007069666A1 (ja) * | 2005-12-13 | 2007-06-21 | Kyoto University | 核初期化因子 |
WO2007113505A2 (en) * | 2006-03-30 | 2007-10-11 | The University Court Of The University Of Edinburgh | Culture medium containing kinase inhibitors. and uses thereof |
WO2008015418A2 (en) * | 2006-08-01 | 2008-02-07 | The University Court Of The University Of Edinburgh | Pluripotent cells from rat and other species |
Family Cites Families (101)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR901228A (fr) | 1943-01-16 | 1945-07-20 | Deutsche Edelstahlwerke Ag | Système d'aimant à entrefer annulaire |
US5506337A (en) | 1985-03-15 | 1996-04-09 | Antivirals Inc. | Morpholino-subunit combinatorial library and method |
US4797368A (en) | 1985-03-15 | 1989-01-10 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Adeno-associated virus as eukaryotic expression vector |
US5139941A (en) | 1985-10-31 | 1992-08-18 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | AAV transduction vectors |
US5010175A (en) | 1988-05-02 | 1991-04-23 | The Regents Of The University Of California | General method for producing and selecting peptides with specific properties |
US5703055A (en) | 1989-03-21 | 1997-12-30 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery |
IE66205B1 (en) | 1990-06-14 | 1995-12-13 | Paul A Bartlett | Polypeptide analogs |
US5650489A (en) | 1990-07-02 | 1997-07-22 | The Arizona Board Of Regents | Random bio-oligomer library, a method of synthesis thereof, and a method of use thereof |
US5384253A (en) | 1990-12-28 | 1995-01-24 | Dekalb Genetics Corporation | Genetic transformation of maize cells by electroporation of cells pretreated with pectin degrading enzymes |
WO1993004169A1 (en) | 1991-08-20 | 1993-03-04 | Genpharm International, Inc. | Gene targeting in animal cells using isogenic dna constructs |
US5573905A (en) | 1992-03-30 | 1996-11-12 | The Scripps Research Institute | Encoded combinatorial chemical libraries |
US5702932A (en) | 1992-07-20 | 1997-12-30 | University Of Florida | Microinjection methods to transform arthropods with exogenous DNA |
US5288514A (en) | 1992-09-14 | 1994-02-22 | The Regents Of The University Of California | Solid phase and combinatorial synthesis of benzodiazepine compounds on a solid support |
EP0710283A4 (en) | 1993-07-22 | 1997-07-02 | Merck & Co Inc | THE EXPRESSION OF HUMAN INTERLEUKIN-1-g (b) IN A TRANSGENIC ANIMAL |
US5519134A (en) | 1994-01-11 | 1996-05-21 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Pyrrolidine-containing monomers and oligomers |
US5593853A (en) | 1994-02-09 | 1997-01-14 | Martek Corporation | Generation and screening of synthetic drug libraries |
US5539083A (en) | 1994-02-23 | 1996-07-23 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Peptide nucleic acid combinatorial libraries and improved methods of synthesis |
US5656610A (en) | 1994-06-21 | 1997-08-12 | University Of Southern California | Producing a protein in a mammal by injection of a DNA-sequence into the tongue |
US5525735A (en) | 1994-06-22 | 1996-06-11 | Affymax Technologies Nv | Methods for synthesizing diverse collections of pyrrolidine compounds |
US5549974A (en) | 1994-06-23 | 1996-08-27 | Affymax Technologies Nv | Methods for the solid phase synthesis of thiazolidinones, metathiazanones, and derivatives thereof |
US5736524A (en) | 1994-11-14 | 1998-04-07 | Merck & Co.,. Inc. | Polynucleotide tuberculosis vaccine |
US5843780A (en) | 1995-01-20 | 1998-12-01 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Primate embryonic stem cells |
US5569588A (en) | 1995-08-09 | 1996-10-29 | The Regents Of The University Of California | Methods for drug screening |
US6013516A (en) | 1995-10-06 | 2000-01-11 | The Salk Institute For Biological Studies | Vector and method of use for nucleic acid delivery to non-dividing cells |
US5780448A (en) | 1995-11-07 | 1998-07-14 | Ottawa Civic Hospital Loeb Research | DNA-based vaccination of fish |
GB9807935D0 (en) | 1998-04-14 | 1998-06-10 | Univ Edinburgh | Lineage specific cells and progenitor cells |
US5945100A (en) | 1996-07-31 | 1999-08-31 | Fbp Corporation | Tumor delivery vehicles |
US5981274A (en) | 1996-09-18 | 1999-11-09 | Tyrrell; D. Lorne J. | Recombinant hepatitis virus vectors |
CA2288639A1 (en) | 1997-05-07 | 1998-11-12 | Pharma Mar, S.A. | Aplidine as an l-type calcium channel enhancer |
ATE394484T1 (de) | 1997-06-13 | 2008-05-15 | Ludwig Inst Cancer Res | Smad 6 und dessen anwendungen |
US5994624A (en) | 1997-10-20 | 1999-11-30 | Cotton Incorporated | In planta method for the production of transgenic plants |
US5994136A (en) | 1997-12-12 | 1999-11-30 | Cell Genesys, Inc. | Method and means for producing high titer, safe, recombinant lentivirus vectors |
US20060263382A1 (en) | 1998-06-20 | 2006-11-23 | Richard Hotchkiss | Membrane-permeant peptide complexes for treatment of sepsis |
JP2002521025A (ja) | 1998-07-24 | 2002-07-16 | ザ カーネギー インスチチューション オブ ワシントン | 増殖因子のTGF−βファミリーのメンバーを使用する、生殖系列幹細胞の維持および増殖のための方法。 |
GB9819912D0 (en) * | 1998-09-11 | 1998-11-04 | Univ Edinburgh | Propagation and/or derivation of embryonic stem cells |
WO2000040235A2 (en) | 1999-01-07 | 2000-07-13 | Warner-Lambert Company | Treatment of asthma with mek inhibitors |
US6703420B1 (en) | 1999-03-19 | 2004-03-09 | Bristol-Myers Squibb Pharma Company | Amino-thio-acrylonitriles as MEK inhibitors |
US6730293B1 (en) | 1999-08-24 | 2004-05-04 | Cellgate, Inc. | Compositions and methods for treating inflammatory diseases of the skin |
US20020142457A1 (en) | 1999-12-28 | 2002-10-03 | Akihiro Umezawa | Cell having the potentiality of differentiation into cardiomyocytes |
EP1438390A4 (en) * | 2001-09-21 | 2005-05-25 | Univ Rochester | ZIRCADIANE CONTROL OF SELF-RENEWAL AND DIFFERENTIATION OF TRIBUTE / PRECURSOR CELLS AND TIME-CONTROLLED GENE EXPRESSION |
PT1456380E (pt) | 2001-11-02 | 2012-07-23 | Giuliani Int Ltd | Inibidores smad7 para o tratamento de doenças do snc |
DE60301953T2 (de) * | 2002-03-05 | 2006-07-27 | Artemis Pharmaceuticals Gmbh | Durch inzucht erzeugte von embryonalen stammzellen abgeleitete mäuse |
GB0210539D0 (en) | 2002-05-08 | 2002-06-19 | Univ Edinburgh | Control of es cell self renewal and lineage specification, and medium therefor |
MXPA05003431A (es) | 2002-11-15 | 2005-07-05 | Warner Lambert Co | Quimioterapia de combinacion. |
US7265138B2 (en) | 2003-02-10 | 2007-09-04 | Amgen Inc. | Vanilloid receptor ligands and their use in treatments |
AU2003901099A0 (en) | 2003-03-11 | 2003-03-27 | Es Cell International Pte Ltd. | Methods of inducing differentiation of stem cells |
US20070010008A1 (en) | 2005-06-29 | 2007-01-11 | Tissuetech, Inc. | Ex vivo expansion of primary animal cells |
US20060222657A1 (en) | 2003-06-20 | 2006-10-05 | Dowdy Steven F | Polypeptide transduction and fusogenic peptides |
US7727762B2 (en) | 2003-10-03 | 2010-06-01 | Keiichi Fukuda | Method of inducing the differentiation of stem cells into myocardial cells |
GB2407048B (en) | 2003-10-15 | 2007-07-11 | Biotrace Internat Plc | Laboratory apparatus |
KR20070030164A (ko) | 2003-10-16 | 2007-03-15 | 더 유니버시티 코트, 더 유니버시티 오브 에딘버러 | Es 세포 자가 재생 및 계통 지정의 조절, 및 이를 위한배지 |
AU2004291559B2 (en) | 2003-11-19 | 2008-10-16 | Australian Stem Cell Centre Limited | Methods for producing blood products from pluripotent cells in cell culture |
US20070269412A1 (en) | 2003-12-02 | 2007-11-22 | Celavie Biosciences, Llc | Pluripotent cells |
CA2576872C (en) | 2004-08-13 | 2013-11-12 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Compositions and methods for self-renewal and differentiation in human embryonic stem cells |
WO2006026473A2 (en) | 2004-08-25 | 2006-03-09 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | METHODS AND COMPOSITIONS UTILIZING MYC AND GSK3ß TO MANIPULATE THE PLURIPOTENCY OF EMBRYONIC STEM CELLS |
WO2006088867A2 (en) | 2005-02-15 | 2006-08-24 | Medistem Laboratories, Incorporated | Method for expansion of stem cells |
AU2006275479B2 (en) | 2005-08-01 | 2012-11-29 | Nupotential, Inc. | Production of reprogrammed cells with restored potential |
CA2621161A1 (en) | 2005-09-08 | 2007-03-15 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Sec Retary Of The Department Of Health And Human Services | Methods for promoting stem cell proliferation and survival |
US8217042B2 (en) * | 2005-11-11 | 2012-07-10 | Zentaris Gmbh | Pyridopyrazines and their use as modulators of kinases |
AU2006313518A1 (en) * | 2005-11-11 | 2007-05-18 | The University Court Of University Of Edinburgh | Reprogramming and genetic modification of cells |
US20090227032A1 (en) | 2005-12-13 | 2009-09-10 | Kyoto University | Nuclear reprogramming factor and induced pluripotent stem cells |
JP5024049B2 (ja) | 2005-12-16 | 2012-09-12 | 株式会社明電舎 | 真空コンデンサ |
GB0601538D0 (en) * | 2006-01-26 | 2006-03-08 | Univ Birmingham | Epigenetic analysis |
WO2007088651A1 (ja) | 2006-02-01 | 2007-08-09 | The University Of Tokyo | TGF-βシグナル阻害剤と抗腫瘍剤の組み合せ使用 |
US7541186B2 (en) | 2006-02-22 | 2009-06-02 | University Of Washington | Method of generating human retinal progenitors from embryonic stem cells |
US8741643B2 (en) | 2006-04-28 | 2014-06-03 | Lifescan, Inc. | Differentiation of pluripotent stem cells to definitive endoderm lineage |
US20070259423A1 (en) | 2006-05-02 | 2007-11-08 | Jon Odorico | Method of differentiating stem cells into cells of the endoderm and pancreatic lineage |
GB2437737B (en) | 2006-05-04 | 2008-07-09 | Access Products Ltd | Scaffolding |
KR20090042779A (ko) | 2006-06-30 | 2009-04-30 | 쉐링 코포레이션 | P53 활성을 증가시키는 치환된 피페리딘 및 이의 사용 |
PT2044056E (pt) | 2006-07-14 | 2012-12-05 | Novartis Ag | Derivados de pirimidina como inibidores de alk-5 |
US20080020014A1 (en) | 2006-07-19 | 2008-01-24 | Paul Consigny | Implantable devices containing nuclear receptor ligands for the treatment of vascular and related disorders |
GB0622395D0 (en) | 2006-11-09 | 2006-12-20 | Univ Cambridge Tech | Methods relating to pluripotent cells |
WO2008089351A1 (en) | 2007-01-17 | 2008-07-24 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Improved culture of stem cells |
US20100172883A1 (en) | 2007-01-19 | 2010-07-08 | Bruneau Benoit Gaetan | Methods of generating cardiomyocytes |
CN103627671A (zh) | 2007-01-30 | 2014-03-12 | 佐治亚大学研究基金会 | 产生中内胚层细胞及多能游走细胞的方法与细胞群及用途 |
EP2132225A4 (en) | 2007-02-27 | 2010-06-09 | Procell Therapeutics Inc | COMBINED USE OF NANOG AND OCT4 PERMEABLE TO CELLS TO INCREASE SELF-RENEWAL AND DELETE DIFFERENTIATION OF STEM CELLS |
EP2131840B1 (en) | 2007-03-07 | 2018-10-17 | MEI Pharma, Inc. | Combination of benzimidazole anti-cancer agent and a second anti-cancer agent |
WO2008126932A2 (en) | 2007-04-09 | 2008-10-23 | Riken | Epigenetical regulation of brain plasticity |
EP2554661B2 (en) * | 2007-04-18 | 2018-02-21 | Hadasit Medical Research Services & Development Limited | Stem cell-derived retinal pigment epithelial cells |
US8648069B2 (en) | 2007-06-08 | 2014-02-11 | Abbvie Inc. | 5-substituted indazoles as kinase inhibitors |
JP2008307007A (ja) | 2007-06-15 | 2008-12-25 | Bayer Schering Pharma Ag | 出生後のヒト組織由来未分化幹細胞から誘導したヒト多能性幹細胞 |
DK2173863T3 (en) | 2007-06-29 | 2019-01-21 | Fujifilm Cellular Dynamics Inc | Automated method and apparatus for embryonic stem cell culture |
US20120282229A1 (en) | 2007-08-01 | 2012-11-08 | Christian Kannemeier | Non-viral delivery of transcription factors that reprogram human somatic cells into a stem cell-like state |
EP3078738B1 (en) * | 2007-08-31 | 2020-05-20 | Whitehead Institute for Biomedical Research | Wnt pathway stimulation in reprogramming somatic cells |
KR101564044B1 (ko) * | 2007-10-31 | 2015-10-28 | 고쿠리츠 다이가쿠 호진 교토 다이가쿠 | 핵초기화 방법 |
JP4604076B2 (ja) | 2007-11-07 | 2010-12-22 | 国立大学法人静岡大学 | 燃料電池用電解質膜 |
WO2009073523A2 (en) | 2007-11-29 | 2009-06-11 | Children's Hospital Of Orange County | De-differentiation of human cells |
EP2227241A1 (en) | 2007-11-30 | 2010-09-15 | Cytomatrix PTY LTD | Methods of inducing pluripotency involving sox2 protein |
US20110190730A1 (en) | 2007-11-30 | 2011-08-04 | Cytomatrix Pty Ltd | Methods of inducing pluripotency involving oct4 protein |
WO2009082184A2 (en) | 2007-12-26 | 2009-07-02 | Posdata Co., Ltd. | Method for determining spurious and wireless communication system applying that method |
CA2718904C (en) | 2008-03-17 | 2017-01-03 | The Scripps Research Institute | Combined chemical and genetic approaches for generation of induced pluripotent stem cells |
US8298825B1 (en) | 2008-08-25 | 2012-10-30 | The General Hospital Corporation | TGF-beta receptor inhibitors to enhance direct reprogramming |
CN104130976A (zh) | 2008-12-17 | 2014-11-05 | 斯克里普斯研究所 | 干细胞的产生和保持 |
WO2010102267A2 (en) | 2009-03-06 | 2010-09-10 | Ipierian, Inc. | Tgf-beta pathway inhibitors for enhancement of cellular reprogramming of human cells |
US9005975B2 (en) | 2009-05-29 | 2015-04-14 | Kyoto University | Method for selecting clone of induced pluripotent stem cells |
KR101774206B1 (ko) | 2009-08-07 | 2017-09-04 | 고쿠리츠 다이가쿠 호진 교토 다이가쿠 | 유도된 다능성 줄기 세포의 효율적인 확립 방법 |
CA3091210C (en) | 2009-10-16 | 2023-04-04 | The Scripps Research Institute | Induction of pluripotent cells |
CA2791901C (en) | 2010-03-05 | 2018-01-02 | Texas Heart Institute | Ets2 and mesp1 generate cardiac progenitors from fibroblasts |
CN105176930B (zh) | 2010-03-31 | 2021-05-04 | 斯克里普斯研究所 | 重编程细胞 |
TWI552751B (zh) | 2011-06-20 | 2016-10-11 | H 朗德貝克公司 | 投予4-((1r,3s)-6-氯-3-苯基-二氫茚-1-基)-1,2,2-三甲基-哌及其鹽用於治療精神分裂症的方法 |
US9166832B1 (en) | 2013-10-04 | 2015-10-20 | Altera Corporation | Methods and apparatus for decision feedback equalization adaptation |
-
2009
- 2009-03-17 CA CA2718904A patent/CA2718904C/en active Active
- 2009-03-17 BR BRPI0908708A patent/BRPI0908708A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2009-03-17 CN CN201510084514.4A patent/CN104694570B/zh active Active
- 2009-03-17 EP EP09721278.1A patent/EP2279243B1/en active Active
- 2009-03-17 WO PCT/US2009/037429 patent/WO2009117439A2/en active Application Filing
- 2009-03-17 SG SG2013019211A patent/SG188904A1/en unknown
- 2009-03-17 SG SG10202103401QA patent/SG10202103401QA/en unknown
- 2009-03-17 SG SG10201808863UA patent/SG10201808863UA/en unknown
- 2009-03-17 RU RU2010139426/10A patent/RU2010139426A/ru not_active Application Discontinuation
- 2009-03-17 AU AU2009225665A patent/AU2009225665B9/en active Active
- 2009-03-17 KR KR1020107023172A patent/KR101679082B1/ko active IP Right Grant
- 2009-03-17 US US12/933,391 patent/US9534205B2/en active Active
- 2009-03-17 JP JP2011500906A patent/JP5951254B2/ja active Active
- 2009-03-17 EP EP15177122.7A patent/EP2955222B1/en active Active
- 2009-03-17 SG SG10201607710UA patent/SG10201607710UA/en unknown
- 2009-03-17 ES ES15177122.7T patent/ES2690554T3/es active Active
- 2009-03-17 CN CN200980117686.XA patent/CN102027105B/zh active Active
- 2009-03-17 MX MX2010010165A patent/MX2010010165A/es not_active Application Discontinuation
- 2009-03-17 EP EP18185585.9A patent/EP3409762A1/en active Pending
-
2010
- 2010-03-12 US US12/723,063 patent/US9068170B2/en active Active
- 2010-04-02 US US12/753,386 patent/US9394524B2/en active Active
- 2010-09-14 IL IL208144A patent/IL208144B/en active IP Right Grant
- 2010-09-17 ZA ZA2010/06683A patent/ZA201006683B/en unknown
-
2011
- 2011-06-08 HK HK11105755.1A patent/HK1151559A1/zh unknown
-
2013
- 2013-03-14 US US13/831,289 patent/US9540615B2/en active Active
-
2015
- 2015-01-28 JP JP2015013821A patent/JP2015119714A/ja active Pending
- 2015-10-16 HK HK15110187.5A patent/HK1209457A1/xx unknown
-
2016
- 2016-06-10 US US15/179,657 patent/US9771563B2/en active Active
- 2016-08-02 JP JP2016151681A patent/JP6321733B2/ja active Active
- 2016-11-30 US US15/365,823 patent/US9926533B2/en active Active
-
2017
- 2017-08-23 US US15/684,851 patent/US20180002671A1/en not_active Abandoned
-
2018
- 2018-02-08 US US15/892,312 patent/US20180171303A1/en active Pending
- 2018-04-05 JP JP2018072807A patent/JP6899792B2/ja active Active
-
2021
- 2021-06-15 JP JP2021099098A patent/JP7286710B2/ja active Active
-
2023
- 2023-05-24 JP JP2023085020A patent/JP2023101613A/ja active Pending
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2007056163A2 (en) * | 2005-11-03 | 2007-05-18 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Aminopyrimidines useful as kinase inhibitors |
WO2007069666A1 (ja) * | 2005-12-13 | 2007-06-21 | Kyoto University | 核初期化因子 |
WO2007113505A2 (en) * | 2006-03-30 | 2007-10-11 | The University Court Of The University Of Edinburgh | Culture medium containing kinase inhibitors. and uses thereof |
WO2008015418A2 (en) * | 2006-08-01 | 2008-02-07 | The University Court Of The University Of Edinburgh | Pluripotent cells from rat and other species |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
CELL STEM CELL (JAN, 2008) VOL.2, P.10-12, JPN7020001628, ISSN: 0004287553 * |
NATURE BIOTECHNOLOGY (JAN, 2008) VOL.26, NO.1, P101-106, JPN7020001629, ISSN: 0004287554 * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7286710B2 (ja) | 人工多能性幹細胞を作製するための化学的手法と遺伝的手法の組み合わせ法 | |
AU2019264680B2 (en) | Combined chemical and genetic approaches for generation of induced pluripotent stem cells |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180502 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20180502 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180622 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20190603 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20190829 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20191203 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20191204 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20200617 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200831 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20210119 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20210201 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210421 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20210517 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20210615 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6899792 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |