WO2007088651A1 - ＴＧＦ－βシグナル阻害剤と抗腫瘍剤の組み合せ使用 - Google Patents

ＴＧＦ－βシグナル阻害剤と抗腫瘍剤の組み合せ使用 Download PDF

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WO2007088651A1
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tgf
receptor
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Kazunori Kataoka
Kohei Miyazono
Mitsunobu Kano
Younsoo Bae
Nobuhiro Nishiyama
Kosei Hirakawa
Masakazu Yashiro
Manabu Node
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The University Of Tokyo
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Definitions

  • the present invention provides a transforming growth factor ⁇ (TGF-S) signal inhibitor that enhances leakage without renewing neovascularization in tumor (or cancer) tissue, and possibly further reduces intratumoral fiber components.
  • TGF-S transforming growth factor ⁇
  • the present invention also relates to the combined use and combination of the inhibitor and the antitumor agent.
  • Drug-encapsulated polymeric micelle compounds that have been developed as drug delivery systems (DDS) to selectively deliver drugs to solid tumors, such as adriamycin or cisbratine for polyethylene glycol and polyaspartic acid or polyethylene glycol and polyglutamic acid
  • Drug-encapsulated polymer micelles encapsulated in polymer micelles composed of a combination have been confirmed to exhibit higher efficacy than certain unmodified drugs themselves against certain types of cancer (for example, Refer to Patent Document 1 or Patent Document 2, respectively, and the documents referred to in the background art are collectively described at the end of this paragraph.) Both are in the clinical trial stage and are expected to be put to practical use.
  • the structure of blood vessels is poor or the cancer has properties such as thick interstitial fiber components.
  • the drugs but also the above-mentioned polymer-encapsulated polymer micelles still have no sufficient therapeutic effect and remain difficult to treat.
  • TGF-signal which is known to be involved in angiogenesis
  • TGF-y5 signal controls the permeability of blood vessels in general. It is also known as a method for this (see Patent Document 3).
  • Patent Document 3 there is still no definitive opinion about whether TGF itself is a pro- or anti-angiogenic factor for angiogenesis, particularly cancer-related angiogenesis (see Non-Patent Document 1).
  • TGF- ⁇ ligand is secreted extracellularly as an inactive latent form.
  • Type II receptor When the mature form is further excised from this latent TGF-5, it becomes active and first binds to the type II receptor (TSRII) on the target cell surface.
  • Type II receptors have a high binding affinity for TGF—.
  • type III receptor also called co-receptor, has ligand binding ability, although it does not have intracellular signal transduction activity.
  • the bound type II receptor recruits the type I receptor (generally ALK 5, optionally ALK 1) to form a complex. This complex then activates the Smad pathway, a group of molecules responsible for intracellular transduction mechanisms.
  • Sm ad 2 3 (S mad 1 5 8 downstream of ALK 1) is phosphorylated, which binds to Smad 4 and translocates into the nucleus, leading to the start of translation of the target molecule in the nucleus. (See Non-Patent Document 1 and Non-Patent Document 2).
  • TG F- ⁇ is known to act on growth inhibition in normal epithelial ⁇ endothelial / hematopoietic cells (see, for example, Non-patent Document 3, Non-patent Document 4, and Non-patent Document 5). That is, TG F- ⁇ has a carcinogenic inhibitory effect in normal tissues or TGF- ⁇ responsive benign tumor tissues. On the other hand, when the cancer has become malignant to some extent, it is often refractory to suppress the growth of TG F- ⁇ , and conversely, the cancer cells themselves produce a large amount of TG F- ⁇ and become a scaffolding tissue (cancer) It is thought to promote the growth and metastasis of tumors.
  • TGF-signal transduction which is a pyroguchi virazole derivative as a drug to be applied to these diseases Inhibitors have been provided (see Patent Document 4).
  • the pyrrolopyrazole derivative alone or in combination with other antitumor agents seems to be beneficial for the treatment of advanced cancer. It has been suggested that However, there is no data showing what kind of cancer was effective at what level, and no specific effect was confirmed.
  • Non-patent document 6 Non-patent document 1
  • Non-patent document 8. suppression of the TGF- ⁇ signal in benign epithelial cancer cells promotes the carcinogenic process
  • TGF- ⁇ has an immunosuppressive effect (see Patent Document 5). For this reason, TGF-production by tumor cells is thought to attenuate immunity to tumors (see Non-Patent Document 9), and thymoma and malignant melanoma models if T cells are made TGF- ⁇ -refractory. It is also known that the tumor disappears in (see Non-Patent Document 10).
  • TGF- ⁇ signal As described above, it is also described that the role of TGF- ⁇ signal is effective from the viewpoint of cancer treatment, or conversely, it may have adverse effects.
  • TGF-3 I-type receptor (TGF-3 ligand adsorption) protein is administered systemically by intraperitoneal injection and lung metastasis decreases.
  • TGF-3 ligand adsorption TGF-3 I-type receptor
  • Non-Patent Documents 1 and 2 In addition, anti-TGF- ⁇ antibody (ligand neutralization) Some of these single use forms have already entered clinical trials in Europe and the United States, and some have reached Phase III (see Non-patent Documents 13 and 14). Similarly, TGF- ⁇ antisense oligonucleotide (TGF-3 gene transcription suppression) is also in clinical trials (see Non-patent Document 15).
  • TGF- ⁇ signal inhibitors have been intensively studied.
  • LY 364947 TGF-type I receptor (at least ALK5) phosphorylation inhibitor by inhibiting ATP competition)
  • A77-01 phosphorylation inhibitor similar to LY364947
  • various low molecular weight TGF-signal inhibitors are under development as antitumor agents (see Non-Patent Document 2 above).
  • Patent Document 1 Japanese Patent No. 251 7760
  • Patent Document 2 WO 2002 26241
  • Patent Document 3 WO 2005/01 39 1 5
  • Patent Document 4 Japanese Patent Publication No. 2004-535404 (or WO 2002)
  • Patent Document 5 Special Table 2006-503899 (or WO 2004/03
  • Non-Patent Document 1 Mitsunobu Kano, Kohei Miyazono TG F— ⁇ S in angiogenesis
  • Non-Patent Document 2 Yingling, JM eta I., Nature R e v. D ru D is c. 3, 1 01 1— 1022 (2004)
  • Non-temple literature 3 S i e g e I, P. M. e t a I.
  • Non-Patent Document 4 Wa k e fi e l d, M. e t a, C u r
  • Non-patent document 5 D u m o n t, N, e t a I., C a n c e r
  • Non-Patent Document 6 T a n g, B. e t a I, J. C I i n. I
  • Non-Patent Document 7 Cui, W. eta I. Ce 86, 531
  • Non-Patent Document 8 0 f t, M., e t a I, N at r u C e
  • Non-Patent Document 9 Shitterio, J.JI., Annu.
  • Non-Patent Document 10 Gore I ik, I. E, Nature
  • Non-patent literature 1 1 Mu r a o k a, R. e, J. C I i n.
  • Non-Patent Document 1 2 George, J. eta, Proc. I. A ca d. S c to US A 96, 1 27 1 9
  • Non-Patent Documents 13 Mead, A. and etal I-, Invest
  • Non-Patent Document 14 MeaIy, N.E.etaI., Druus.Fut.2 8, 320-322 (200 3)
  • Non-Patent Literature 15 B o g d a h n, U e et a I, Am. S o c.
  • Non-Patent Document 16 Sa wy er, J. S. eta I., J. Med.
  • Non-patent document 17 Tojo, M. et a I., Cnc cer S c i
  • antitumor agents that fall into a new category have also been proposed.
  • the present inventors have found that when such leakage enhancement is brought to the new blood vessels, the antitumor agent or contrast agent can be selectively delivered to tumor cells, and the antitumor agent, When a combination of a modified antitumor agent with improved delivery to tumor cells or tumor tissue and a TGF- ⁇ signal inhibitor is modified by modifying the tumor active substance (mo d ⁇ f ⁇ ed) It was confirmed that the therapeutic effect on adenocarcinoma, Skills gastric cancer metastasis, etc. was significantly enhanced. This effect is due to the combined use of anti-VEGF antibody (B evacizumab; trade name A vastin) and general anticancer drugs that have already been approved in the United States (Macken 2 I e, M. J.
  • a pharmaceutical preparation for enhancing the leakage of new blood vessels in a tumor tissue comprising a TGF- / S signal inhibitor as an active ingredient and, in some cases, reducing fibrosis. Is done.
  • a TGF-3 signal inhibitor for preparing a pharmaceutical preparation for leaking new blood vessels in tumor tissue, and furthermore, neoplasia in tumor tissue. Improving the efficacy of an antitumor active substance in an individual comprising administering an effective amount of a TGF- ⁇ signal inhibitor to an individual (mammalian, particularly human) in need of rendering the blood vessel leaky A method is also provided.
  • a TGF-yS signal inhibitor as an active ingredient, and an antitumor active substance as an active ingredient, wherein the antitumor activity has been modified to improve the ability to deliver to tumor cells or tumor tissues A combination for treating a tumor characterized in that it is combined with a substance is provided.
  • Yet another aspect of the invention relates to a tumor comprising a combination of a TGF-signal inhibitor and a contrast agent, preferably a contrast agent modified to improve delivery to tumor cells or tumor tissue.
  • a contrast agent preferably a contrast agent modified to improve delivery to tumor cells or tumor tissue.
  • TG F—iS and TG F— ⁇ signal inhibitors are used in the meaning content generally recognized in the technical field used in Non-Patent Document 1 and the like. Briefly, TG F—signaling inhibitor (or TG F—signaling inhibitor (signal
  • TG F— iS ligand TG F— ⁇ type I receptor (AL K5, 1), TG F- ⁇ type II receptor , TG F—; 8 TG F- by inhibiting one of the type III receptors (betaglycan, endoglin), smad protein (1, 2, 3, 4, 5, 8) or a combination thereof. It can be defined as a substance that inhibits the S signaling pathway.
  • the leakage of new blood vessels in a tumor tissue and, in some cases, the reduction of fibrosis are, for example, dextran injection experiments (in short, using mice, VEG F-A and FG F- Matrigel mixed with 2 was injected subcutaneously into the abdominal wall, TG F_ ⁇ signal inhibitor was administered intraperitoneally, 7 days later, dextran having a molecular weight of 2,000,000 was injected, and the animal was sacrificed and removed.
  • dextran injection experiments in short, using mice, VEG F-A and FG F- Matrigel mixed with 2 was injected subcutaneously into the abdominal wall, TG F_ ⁇ signal inhibitor was administered intraperitoneally, 7 days later, dextran having a molecular weight of 2,000,000 was injected, and the animal was sacrificed and removed.
  • dextran injection experiments in short, using mice, VEG F-A and FG F- Matrigel mixed with 2 was injected subcutaneously into the abdominal wall, TG F_ ⁇ signal inhibitor was administered intraperitoneally,
  • anti-tumor active agents or anti-tumor agents are increased by increasing the leakage of new blood vessels in tumor tissue and possibly reducing the fibrous component in the tumor.
  • the TG F— signal inhibitor that can be used in the present invention is conceptually included in the above definition and meets the purpose of the present invention (for example, increasing the leakage of new blood vessels in tumor tissue, and optionally in tumors) Anything that can reduce the fiber component is included, regardless of the type and origin of the compound.
  • soluble TGF— ⁇ type I receptor soluble TGF- ⁇ 8 type II receptor
  • soluble TG F— ⁇ type III receptor anti-TG F— ⁇ antibody
  • anti-TGF— / 5 High molecular weight substances such as type I receptor antibody, anti-TGF- ⁇ type II receptor antibody and anti-TGF-type III receptor antibody, TGF-antisense oligonucleotide or siRNA.
  • TGF- ⁇ signal inhibitors include, but are not limited to, low molecular weight compounds having exactly GF-I type receptor kinase inhibitor activity, for example, dihydropyrrolopyrazole-based scaffolds. Hold (scaffo I d), imidazole-based scaffold, virazolopyridine-based scaffold, pyrazole-based scaffold, imidazopyridine-based scaffold, triazol-based scaffold And a pyridopyrimidine-based scaffold, a pyropyrazole-based scaffold and an isothiazol-based scaffold.
  • the force hold based on anything can be said to be a compound having anything as a basic skeleton.
  • a typical example of such a low molecular weight compound is a scaffold mainly composed of a structure represented by the following chemical formula.
  • Non-Patent Documents 16 for LY 550410 and LY 580276 which belong to dihydropyrrolopyrazole-based scaffolds, and imidazole-based scaffolds.
  • SB-5051 24 belonging to the group see Byfield, S. D. eta and Pharma co I., 65, 74 4-752 (2004) for Mo.
  • WO 2004/02687 1 can be referred to.
  • the compound (2) and Y 364947 belonging to the pyrazole-based scaffold see Ge II ibert and F. eta, respectively. J. Med. Cem.
  • Non-Patent Document 16 can be referred to.
  • WO 2004Z021 989 can be referred to.
  • Triazo For compounds (4) belonging to scaffolds based on WO 2 0 0 4 0 2 6 3 0 7 can be referred to, and compounds (5) belonging to the pyridopyrimidine-based scaffold can be referred to WO 2 0 0 0/0 1 2 4 9 7 and isothiazole WO 2 0 0 4 1 4 7 5 7 4 can be referred to for a compound (6) belonging to a scaffold based on pyrrole, and Patent Document 4 can be referred to for compounds based on pyrrolopyrazole.
  • modified means “modified antitumor active substance that should improve derinolysis ability to tumor cells or tumor tissues” that can be used in combination with the above TGF-signal inhibitor. It does not mean that the original antitumor active substance or antitumor agent or anticancer agent is simply made into a simple salt or simple prodrug, but a carrier substance, a specific high molecular weight substance, etc. In other words, the original antitumor active substance is in a form that has improved delivery ability to tumor cells or tumor tissue.
  • the form in which the delivery ability is improved is a structure in which the drug is delivered to the target tumor cell or tumor tissue efficiently (for example, resistance to degradation by various enzymes in the living body). Or a structure in which stability in an aqueous solvent is increased, target selectivity is increased using an antibody or the like, or solubility is changed).
  • modified anti-tumor active substances include, but are not limited to, antibodies or drugs (especially degraded by in vivo enzymes when taken up into specific cells such as poly or oligonucleotides).
  • a compound of a high molecular weight carrier suitable for stabilizing an antitumor active substance (including a complex in which the carrier and the active substance are covalently bonded), antitumor Active substance is ribosome or polymer micelle
  • antitumor Active substance is ribosome or polymer micelle
  • a polymer in the form of polymer vesicles and in the form of nanobubbles. All are prepared according to modification techniques known in the art and modifications thereof.
  • Such conjugates include, but are not limited to, cationically charged polymers or polymers or copolymers carrying cationically charged polymer segments and oligos or polynucleotides (including single or double stranded). Or conjugates thereof and conjugates in which an inert polymer such as an antibody or poly (ethylene glycol) and an antitumor active substance are covalently bonded via an in vivo cleavable hydrazone bond or a disulfide bond. Can do.
  • Liposomes in the form of encapsulating tumor active substances are formed using lipids or cationic lipids as carriers, and polymeric micelles in the form of encapsulating tumor active substances are hydrophilic polymer chain segments.
  • a block copolymer comprising a hydrophobic polymer chain segment, and a structure formed using a block copolymer comprising a hydrophilic polymer chain segment and a charged polymer segment as a carrier.
  • Such copolymers include, but are not limited to, hydrophilic polymer chain segments derived from poly (ethylene glycol), hydrophobic polymer chain segment forces, poly (hydrophobic Derived from a polymer selected from the group consisting of poly (amino acid), poly (aspartate) and poly (glutamate), poly (lactide), poly (lacton) and copolymers thereof.
  • Poly (lactide) above Preferably includes poly (lactic acid) and poly (glycolic acid) obtained by ring-opening polymerization of lactides, and poly (lacton) is preferably -lacton, r-lactone, 5-lacton or Including those obtained by ring-opening polymerization of ⁇ -lacton.
  • These copolymers may be modified to be temperature sensitive by incorporating, for example, units derived from isobutyl vinyl into the polymer single chain unit.
  • the antitumor active substance that can be used in the present invention includes any substance having an antitumor activity that can be modified as described above. More specific examples of such anti-tumor active substances include, but are not limited to, oligo or polynucleotides that suppress oncogene expression or function to express cancer suppressor genes and their derivatives ( For example, for appropriate genes (BC L 2, clusterin, PKC, methyl transferase, survivin, STAT3, HS P 27, HRAS, KRAS 2, etc.) Antisense or sense oligonucleotides, short interfering ⁇ si RN A s ) and nc RNA such as mi RN A, abutama, decoy nucleic acid], and antibodies (which can specifically bind to tumor cells or tumor tissues) ), As well as antimetabolites (eg, full-aged lauracil, ⁇ gafur, carmofur, doxyfluzine, cytarabine, cladribine, Gem
  • the antibiotics and plant extracts referred to in the present invention are limited to those having antitumor activity, and also include compounds corresponding to derivatives of compounds obtained from nature. . It is also understood that the radionuclide used for radiation therapy is also included in the above-mentioned antitumor active substances.
  • polymer micelles or conduits that contain such antitumor active substances including those that have been used in clinical trials, poly (ethylene glycol) block-poly (asparagine containing adriamycin Acid) polymer micelle from copolymer (for example, see Patent Document 1), poly (ethylene glycol) block-poly (aspartate ester) polymer micelle containing paclitaxel (for example, see Patent Document 1) Hama guchi, T., eta I., Br. J.
  • poly (ethylene glycol) b I ock encapsulating cisplatin or diaminocyclohexaneplatinum (II) Polymer micelles from poly (glutamic acid) copolymers (see, for example, WO 02/2624 1 A 1 and WO 2005/05664 1 A 1), campcosine or derivatives thereof
  • polymer micelles from poly (ethylene glycol) b I ock poly (aspartate ester) copolymer encapsulating toppocan see, for example, WO 03/099260 A1, WO 2005/0 23230), etc.
  • antibody-drug conjugates examples include, but are not limited to, CD 3 3 antibody and force lyamycin (ca I ⁇ cheamicin), which are antibodies that can specifically bind to tumor cells.
  • Conjugation See gemudsumabuzogamicin: see US 5, 773, 001 B) as a conjugate of a non-active high molecular weight compound (polyethylene glycol (sometimes abbreviated as PEG), albumin, etc.) and a drug.
  • PEG interferon (eg, Wang, YS eta, Ad v. Drug D e Iv. Re v.
  • the present invention it is also possible to provide a system for selectively delivering various contrast agents to a tumor tissue by utilizing the effect of enhancing the leakage of new blood vessels in the tumor tissue exhibited by the above TGF- ⁇ signal inhibitor.
  • the contrast agent used (or various contrast reporter components: eg, Tc, Gd, Mn, etc.) is modified to give high molecular weight substances as described above for antitumor agents (eg, to impart binding properties to contrast agents) And those modified using polyethylene glycol, dendrimers, etc.).
  • Such a contrast agent is not limited in any way as long as it meets the object of the present invention, but is not limited to Marccos, E. eta I., Bioconjugate Ch em.
  • a modified antitumor active substance for treatment of a tumor characterized by combining the above-mentioned TGF- ⁇ signal inhibitor and the above-mentioned antitumor agent or antitumor active substance, in particular, a modified antitumor active substance
  • the combination can be the inhibitor and the antitumor active substance combined in a single formulation or can exist as a separate formulation.
  • a TGF-5 signal inhibitor and an antitumor active substance are administered to an individual (mammal, preferably human), both are administered at the same time or one of them, and then the other drug is administered. Can be administered at appropriate intervals. In the latter case, it is usually preferable to administer the TGF— / S signal inhibitor first.
  • the ratio of these combinations cannot be specified because the optimum value differs depending on the type of TG F-iS signal inhibitor used and the type of the modified antitumor active substance.
  • Animal experiments can be performed and specialists can make decisions based on the results obtained.
  • they can also be administered by the same or different routes of administration. These administration routes can be oral administration, arterial injection, intravenous injection, intratumoral injection, subcutaneous injection, and the like.
  • the dose of the antitumor active substance can be determined with reference to the dose of the original drug.
  • TGF- ⁇ signal inhibitor is particularly useful for individuals, mammals, preferably humans who need to increase leakage without retraction of new blood vessels. It is carried out using the effective dose.
  • the therapeutically effective amount can be a low dose that does not reach the cancer cells themselves, as described above and described in the Examples below. Such doses can also be determined by the specialist based on the results of further animal experiments if necessary, referring to the examples described below.
  • the therapeutically effective amount of an anti-tumor active substance can be determined with reference to the therapeutically effective amount of drugs already in clinical use. Can do. On the other hand, in the case of a clinically unused drug, it can be determined by a specialist after appropriate animal experiments.
  • Tumors that are primarily intended to be treated with a TGF- ⁇ signal inhibitor or combination in accordance with the present invention are chemoresistant due to high interstitial components or poor neovascular histology.
  • the tumor groups include splenic adenocarcinoma, Skills gastric cancer, cholangiocarcinoma, refractory digestive tumors including metastatic liver tumors, malignant fibrous histiocytosis (MFL), refractory soft tissue tumors including fibrosarcoma And some of the central nervous system tumors including medulloblastoma, some of breast cancer (especially those with strong fibrosis), etc. and breast cancer with increased fibrosis.
  • MFL malignant fibrous histiocytosis
  • the use of a TGF-inhibitor that selectively acts only on unstable new blood vessels changes the accumulation of anticancer agents in normal sites where no angiogenesis has occurred. Therefore, it is possible to improve the arrival of an anticancer agent specifically in a tumor or cancer tissue in which angiogenesis is induced. Therefore, when used in combination with TGF-; S inhibitors and anti-tumor active substances, the effects of not only TGF- ⁇ inhibitors but also anti-tumor active substances can be minimized.
  • the above-mentioned combination is in the form of a tumor therapeutic kit that individually includes a pharmaceutical preparation containing a TGF- ⁇ signal inhibitor and a pharmaceutical preparation containing a modified antitumor active substance. Can do.
  • FIG. 1 is a graph showing changes in tumor volume over time, showing the combined effect of a general anticancer agent and a TGF- ⁇ signal inhibitor on splenic adenocarcinoma cells according to Example 1 described later.
  • the vertical axis represents relative tumor volume, and the horizontal axis represents time (days).
  • Fig. 2-1 is a photograph replacing a figure showing fluorescent immunohistochemical staining showing the effect of a GF- ⁇ signal inhibitor in Matrigel plug assembly according to Example 2 described later.
  • (A), (b-1), and (b-2) are the results for the control group, the wrinkle-treated group, and the 1 ⁇ 1 IFc-treated group, respectively, in this order.
  • vascular endothelial cell marker red is SMA (vessel wall cell), blue is cell nucleus staining.
  • C) and (d) show the distribution of tail-injected dextran in the Matrigel plug, green and red are the same as above, and blue is dextran.
  • Fig. 2-2 is a graph that quantitatively shows the effect of the TGF- signal inhibitor in the Matrigel plug assembly shown in Fig. 2-1 according to Example 2 described later.
  • A shows the coverage of vascular endothelial cells with vascular wall cells
  • (b) shows the total area of the vascular endothelium marker-positive part
  • (c) shows the dextran distribution area per microscope field. Error bars indicate standard error.
  • Fig. 3-1 is a photograph replacing a diagram showing the effect of a TGF-S signal inhibitor in the tissue of the BXP C3 cell ectopic transplant model according to 3-1 of Example 3 described later.
  • the left column (a, c, e) is the control condition
  • the right column (b, d, f) is the LY administration condition.
  • (A, b) shows the morphology of blood vessels in the cancer tissue.
  • VE-cadherin vascular endothelial marker
  • red indicates NG 2
  • purple indicates proliferative nucleus staining (Ki 1 67).
  • C, d) shows accumulation of systemically administered dextran in cancer tissue. Green is dextran and blue is nuclear staining.
  • E, f) is a sample with Azan staining that dyes the extracellular fiber component blue.
  • Fig. 3-2 is a graph quantitatively showing the effect of the TGF- ⁇ signal inhibitor in the tissue of the B XPC 3 cell ectopic transplant model according to 3-1 of Example 3 described later.
  • A shows the coverage of vascular endothelial cells with vascular wall cells
  • (b) shows the total area of the vascular endothelium marker-positive part
  • (c) shows the dextran distribution area per microscope field. Error bars indicate standard error.
  • D shows the ratio of fiber components per microscopic field.
  • FIG. 4 is a photograph replacing a diagram showing the effect of a TGF-3 signal inhibitor on blood vessels in a general organ according to 3-2 of Example 3 described later.
  • the left column (a, d, g, m) is the brain
  • the middle column (b, e, h, n) is the liver
  • the right column (c, f, i, I) is the kidney.
  • the upper row (a–f) is blood vessel staining
  • green represents P EC AM–1
  • red represents SMA
  • blue represents cell nucleus staining.
  • (a ⁇ c) is the control group
  • (d ⁇ f) is the LY administration group.
  • the lower row (g–I) shows the distribution of dextran after administration, with green indicating dextran and blue indicating cell nuclei.
  • Fig. 5-1 is a photograph instead of a diagram showing confirmation of the therapeutic range of the TGF- signal inhibitor according to 3-3 of Example 3 described later.
  • Green is phosphorylated Sma d 2 (if positive, it strongly suggests that TG F— ⁇ is signaled)
  • red is P EC AM-1
  • blue is nucleus staining.
  • A-c is a field of weak magnification
  • (a) is the control condition
  • (b) is LY 1 mgZk g
  • (c) is LY 2
  • the condition is 5 mgZkg.
  • D-e is a field of strong expansion focusing on blood vessels.
  • Fig. 5-2 shows the effect of TG F- signal inhibitor on nucleated blood cells according to 3-4 of Example 3 described later.
  • the upper row (a–c) shows the frequency distribution of phosphorylated Sm ad 2 positive cells in peripheral blood nucleated cells by the cell sorter, and the lower row (d–f) shows a photograph showing the smear image of the specimen at that time. is there.
  • Figure 6-1 shows the distribution of high-molecular-weight anticancer drugs in cancer tissues when TGF-; S signal inhibitors are administered in combination in the BXPC 3 subcutaneous tumor model according to 3-5 in Example 3 described later. This is a substitute photo.
  • T indicates a part of the tumor cell, and the rest is the stroma in the tumor tissue.
  • the left column (a–1, 2) is the distribution of doxil, and the right column (b–1, 2) is the distribution of M ic I I e — ADR.
  • the upper (a-1, b-1) is the control group and the lower (a-2, b-2) is the LY combination group.
  • Figure 6-2 shows the high-molecular-weight anticancer drug in the cancer tissue measured by the HP LC method when TG F-signal inhibitor was administered in combination with the BXPC 3 subcutaneous tumor model according to 3-5 in Example 3 described later. Indicates accumulation.
  • (A) is the accumulated amount of doxil, and
  • (b) is the accumulated amount of Mic e I Ie-A D R.
  • FIG. 7 is a graph showing the tumor growth curve over time when ADR, doxil, and Mice II e-ADR are used as a single dose for Bx PC3 according to 3-6 of Example 3 described later.
  • the vertical axis represents relative tumor volume, and the horizontal axis represents time (days).
  • FIG. 8 is a graph showing the tumor growth curve over time when ADR and Mice II e-ADR are used in B x PC3 every 3 days according to 3-7 in Example 3 described later.
  • the vertical axis represents relative tumor volume, and the horizontal axis represents time ( ⁇ ).
  • FIG. 9 is a graph showing the tumor growth curve over time in the case of using MIAP a Ca-2-drug according to 3-8 in Example 3 described later.
  • the vertical axis represents relative tumor volume, and the horizontal axis represents time (days).
  • Fig. 10-1 shows the Mice II e- ADR cancer tissue in the MIAP a C a-2 subcutaneous tumor model in combination with TGF- ⁇ signal inhibitor according to Example 3 3-9 described later. It is the photograph replaced with the figure which shows distribution.
  • the upper (a) is the LY administration group and the lower (b) is the control group.
  • Figure 10-2 shows the high measured by the HP LC method when TG F- ⁇ signal inhibitor was administered in combination in the MI AP a C a-2 subcutaneous tumor model according to 3-9 of Example 3 described later. 2 shows accumulation of molecular anticancer drugs in cancer tissue.
  • Fig. 11 shows the combined use of a TGF- ⁇ signal inhibitor in a liver metastasis model of a spleen cancer obtained in the MIAP a C a-2 orthotopic transplantation model according to 3-10 of Example 3 described later.
  • This is a photograph instead of a figure showing the distribution of Mice II e-ADR in cancer tissue.
  • A is the control group
  • B the chopsticks Y combination group.
  • L indicates normal liver tissue
  • M indicates metastatic focus. It is worth noting that while L has almost no change in accumulation, M has a significant accumulation effect when combined with LY.
  • Fig. 12 shows the total weight of the metastatic lymph nodes obtained in the Oli 1 ⁇ 1-21 ⁇ / 11_1 ⁇ ] orthotopic transplant model according to 3-1 1 of Example 3 described later.
  • Figure 1 3-1 shows TG F—; 5 signal inhibitor (T b RIIF c, (a, b)) or other than LY in BX PC 3 subcutaneous tumor model according to 3-12 of Example 3 described later It is a photograph replacing a figure showing the distribution of a high molecular weight anticancer drug in cancer tissue when a VEG F inhibitor (stake VEG F antibody, (c, d)) is administered in combination.
  • VEG F inhibitor take VEG F antibody, (c, d)
  • Figure 1 3-2 shows TG F—inhibitor (T b RIIF c, (a)) or VEG F inhibition in B x PC 3 subcutaneous tumor model according to 3-13 of Example 3 below. It shows the accumulation of high-molecular-weight anticancer drugs in cancer tissues when the drug (anti-VEG F antibody, (b)) is administered in combination.
  • Figure 1 4-11 is a photograph that replaces the figure showing the distribution of TG F— /? Signal inhibitor and M celle-ADR or simple substance ADR in combination with general organs according to Example 3, 3-14, described later. is there.
  • the upper row represents the LY administration group
  • the lower row represents the control group
  • the left column represents Mic e I I e-ADR
  • the right column represents the single ADR.
  • Fig. 14 1-2 shows the amount of accumulation in general organs when TGF- / 3 signal inhibitor and Miclele-ADR or simple substance ADR are administered in combination according to 3-14 of Example 3 described later. From the left to the liver (a), kidney (b), and spleen (c), the inhibitor 'micelle combined, micelle only, inhibitor' single ADR combined, single ADR only, are arranged. N. S. in the numbers below means that it is not statistically significant.
  • Example 1 Combined effect of a general anticancer agent (unmodified) and TG F— ⁇ signal inhibitor in splenic adenocarcinoma cells
  • Sma d 4 deficient splenic adenocarcinoma cells (BX PC3) 5 x 10 6 were injected subcutaneously into the abdominal wall of 4-week-old male mice. A cancer cell mass that entered the growth phase was used in the experiment.
  • TS-1 oral 5 FU prodrug, Taiho Pharmaceutical
  • LY 2 groups of 1 mgZkg 3 times a week intraperitoneally combined, each with n 3, and the control group, TS— “! Single administration group, and LY + TS—1 combination group.
  • the tumor volume approximate value was continuously observed for 14 days, and the tumor volume approximated by the long side X (short side) 2 of the tumor mass was compared with the volume at the start of administration of each tumor mass as 1. .
  • the group shows tumor reduction compared to the TS-1 alone group. The progress is shown in the graph in Fig. 1. The results are shown in the lower graph of Fig. 1.
  • Example 2 Effect of TG F— ⁇ signal inhibitor on neovascularization by Matrigel plug assembly
  • Matrigel (BD) is mixed with VEG F—A, FG F—2, and heparin, and TG F— ⁇ inhibitor LY 364947 (hereinafter referred to as LY) 500 n M or T ⁇ RII: F c 50 ⁇ G / m I or control is further mixed into the same gel, which is then injected subcutaneously into the abdominal wall of male I CR mice, and the Matrigel plug is removed at the expense of the animal with ⁇ eyes, using immunofluorescence staining. searched.
  • vascular endothelial cells are antibodies against P EC AM-1 (platelet endothelial cell adhesion molecule-U platelet endothelial cell adhesion molecule 1) and vascular wall cells are directed against SMA (smooth muscle actin).
  • P EC AM-1 platelet endothelial cell adhesion molecule-U platelet endothelial cell adhesion molecule 1
  • SMA smooth muscle actin
  • the results are shown in Figure 2-1 and Figure 2-2.
  • the LY administration group and the TbRIIFc administration group basically had the same phenotype.
  • the distribution area of dextran increased approximately 2-fold with LY administration, and the difference was significant (p ⁇ 0.0001).
  • Smad 4 deficient splenic adenocarcinoma cells (BXPC 3) 5 x 10 6 were injected subcutaneously into the abdominal wall of 4-week-old male mice and used as a ectopic transplantation model for splenic adenocarcinoma.
  • a cancer cell mass that entered the growth phase after a week was used for the experiment.
  • LY 364947 (hereinafter referred to as LY) I mgZkg or control was administered intraperitoneally 24 hours before sacrifice of the animals. The tumor mass was removed at the expense of the animal and a histological search was performed.
  • Sma d 4 deficient spleen adenocarcinoma cells (Bx PC3) 5 x 1 0 6 were injected subcutaneously into the abdominal wall of 4-week-old male mice. A cancer cell mass that entered the growth phase was used in the experiment.
  • LY 1 mg / kg, 25 mgkg or a control was administered intraperitoneally as a GF- ⁇ inhibitor.
  • the tumor was excised at the sacrifice of the animal, and immunohistochemical staining of the tumor was performed using an antibody against phosphorylated smad 2 and an antibody against PEC AM 1.
  • Nude mice to be transplanted with cancer were intraperitoneally administered once with LY I mgZkg or control as a TGF-inhibitor.
  • TGF-inhibitor One hour after administration, whole blood was collected, hemolyzed, formalin fixed, and cell membrane perforated with methanol, and then stained with an antibody against phosphorylated Smad2 and then phosphorylated with FACS. The ratio of 2 positive cells was measured.
  • the reaction with only the secondary antibody was used as a control for immunostaining, and the gate (P1 in Fig. 5-2) was set so that the positive cell rate in this group was about 1%.
  • the ratio of phosphorylated Sma d 2 positive cells was measured in the F-inhibitor administration group and the non-administration group. Result:
  • ADR adriamycin
  • M icelle—ADR PEG-adriamycin
  • the ADR encapsulated in the ribosome has autofluorescence, while the ADR bound to PEG does not have autofluorescence due to the shielding effect of PEG, and is taken into the cell's low pH environment and dissociated. Note that only the ADRs that have autofluorescence.
  • Sma d 4-deficient knee adenocarcinoma cells (BX PC3) 5 x 10 6 were injected subcutaneously into the abdominal wall of 4-week-old male mice.
  • BX PC3 4-deficient knee adenocarcinoma cells
  • As an ectopic transplantation model of splenic adenocarcinoma about 2 weeks after transplantation A cancer cell mass that entered the growth phase was used in the experiment.
  • As an anticancer agent doxil 8 mgZkg, M icelie-ADR 8 mg / kg or normal ADR 8 mgZkg or no anticancer agent were used.
  • n 5 for each of the above 8 conditions combining 4 X 2 species. These animals were observed continuously for approximate 14 days tumor volume. Tumor volumes approximated by the long side X (short side) 2 of the tumor mass were compared, with the volume at the start of administration of each tumor mass being 1.
  • the tumor volume approximation was continuously observed for 16 days, and the tumor volume approximated by the long side X (short side) 2 of the tumor mass, Each tumor mass was compared with a volume at the start of administration of 1. The tumor mass was excised at the sacrifice of the animal on the final day, and a histological search was performed.
  • TGFbRII mutant splenic adenocarcinoma cell line MIAPACa-2 (ATCC No. CRL-1420) was used.
  • control group 2. 9 1 ⁇ 0.30, LY monotherapy group 2. 7 5 ⁇ 0.08, ADR monotherapy group 0.88 7 ⁇ 0.19, M ⁇ ce II e— A DR alone group 0. 9 1 ⁇ 0. 1 0, LY + ADR combined group 1. 4 5 ⁇ 0. 1 1, and Y + ⁇ ⁇ celle— ADR combined group 0. 46 ⁇ 0 1 where 4 (where Y + M II ce II e—ADR combination test: P 0. 0003). The progress is shown in the graph of Fig. 9.
  • the treatment was the same as 3-12 except that the TGFbRIII mutant spleen adenocarcinoma cell line MIAPACa2 was used. Only the tumor mass was searched.
  • a TG F b RII mutant spleen adenocarcinoma cell line MIAP a C a-2 was first used to generate a subcutaneous tumor in a nude mouse, which was then transplanted into the spleen of another nude mouse, after 4 weeks Was used. Others were the same as 3-7. Only the tumor mass and surrounding liver tissue were searched.
  • Skills gastric cancer cell line O CUM— 2MLN was injected into the stomach wall of nude mice, and 2 weeks later, it was used as a model for orthotopic transplantation of Skills gastric cancer.
  • Micelle ADR 16 mg / kg as an anticancer agent or no anticancer agent was administered via tail vein three times every 4 days.
  • LY 1 mg / kg or control was administered intraperitoneally three times a week. On day 16, animals were sacrificed and the total weight of the metastatic lymph nodes was measured. result:
  • the total weight of metastatic lymph nodes was also suppressed in the TG inhibitor micelle group (see Fig. 12).
  • TbRI I-Fc (R & D) was used for intraperitoneal administration as a Ding GF—S inhibitor.
  • the dose used was 2.5 mg Zkg, which was reported not to suppress fibrosis in Non-Patent Document 1 2 (Since fibrosis was not significantly suppressed at the LY dose used this time, Set with the amount considered).
  • the anticancer drug used in combination was only Mic e I Ie-ADR 8 mgZkg. Only the tumor mass was searched.
  • mice Ile-ADR (8 mg Zkg) or ADR (8 mgZkg) was administered via tail vein to tumor-bearing nude mice.
  • a novel pharmaceutical use of the inhibitor based on the discovery of a novel action and effect of TGF-signal inhibitor that enhances leakage without renewing neovascularization in tumor tissue, and A system is provided that enhances antitumor activity or enhances the selectivity of the contrast agent to reach the target by using a combination of an inhibitor and an antitumor active substance or contrast agent. Therefore, the present invention can be used in a wide range of related industries including the pharmaceutical industry.

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Abstract

TGF-βシグナル阻害剤と薬物内包高分子ミセル等により改変された抗腫瘍活性物質または造影剤の組み合せ使用が提供される。抗腫瘍活性物質または造影剤の標的への選択的デリバリー能が向上し、標的での抗腫瘍活性が増強される。

Description

明 細 書
T G F— β シグナル阻害剤と抗腫瘍剤の組み合せ使用 技術分野
本発明は、 トランスフォーミング増殖因子 ^ ( T G F - S ) シグナル阻 害剤の腫瘍 （または癌） 組織における新生血管を退縮させずに漏出性を高め、 場合によりさらに、 腫瘍内線維成分を減少するための使用に関し、 また、 該 阻害剤と抗腫瘍剤の組み合せ使用及び組み合せ物に関する。
背景技術
薬物を固形癌に選択的にデリバリーするドラッグデリバリーシステム （D D S ) として開発された薬物内包高分子ミセル化合物、 例えば、 アドリアマ イシンまたはシスブラチンをポリエチレングリコールとポリアスパラギン酸 またはポリエチレングリコールとポリグルタミン酸のブロック共重合体から なる高分子ミセルに内包せしめた薬物内包高分子ミセルは、 一定の種類の癌 に対して対応する未修飾薬物それ自体に比べてより高い効能を示すことが確 認されている （例えば、 それぞれ、 特許文献 1または特許文献 2参照、 以下、 背景技術で言及する文献はこの段落の末尾にまとめて記載する。 ） 。 そして、 両者とも臨床治験段階にあり、 実用化の見通しがついている。 しかしながら、 例えば、 癌間質 （主に、 新生血管とコラーゲン質線維等の線維成分を含む〉 において血管構築が悪いか、 あるいは間質線維成分が厚い等の性質を有する 癌では、 既存の化学療法剤のみならず上記の薬物内包高分子ミセルも未だ十 分な治療効果をもたらさず、 難治療性のままである。
他方、 血管新生等への関与が知られている T G F— シグナルの役割 は、 癌の増殖または転移の抑制に関連して精力的に研究されている。 また、 T G F - y5 シグナルの制御は、 血管一般に対してその透過性を制御するた めの方法としても知られている （特許文献 3参照） 。 しかし、 T G F— それ自体が血管新生、 とりわけ癌に関連する血管新生の促進因子か抑制因子 かについては確定した見解が未だ無い （非特許文献 1参照） 。 具体的には、 T G F— ^ リガンドは、 細胞外に不活性な潜在型として分泌される。 この 潜在型 T G F— 5 から成熟型がさらに切り出されると、 活性を持つように なり、 標的細胞表面の I I型受容体 （T S R I I ) にまず結合する。 I I型 受容体は T G F— への結合親和性が高い。 このとき、 補助受容体とも呼 ばれる I I I型受容体は、 細胞内のシグナル伝達活性がないものの、 リガン ド結合能がある。 結合された I I型受容体は I型受容体 （一般的には A L K 5、 場合により A L K 1 ) をリクルートして複合体を形成する。 この複合体 は次に細胞内の伝達機構を担う分子群である Sm a d経路を活性化する。 す なわち、 まず Sm a d 2 3 ( A L K 1の下流では S m a d 1 5 8 ) 力 リン酸化され、 これが Sma d 4と結合して核内へ移行し、 核内で標的分子 の翻訳開始へつながる （前記非特許文献 1及び非特許文献 2参照） 。
また、 癌に関連する一般的な TG F— シグナルの役割については、
T G F-β は正常の上皮■内皮 ·造血細胞において増殖抑制に働くことが 知られている （例えば、 非特許文献 3、 非特許文献 4、 非特許文献 5参照） 。 すなわち、 正常組織または T G F— ^ 応答性の良性腫瘍組織において T G F-β は発癌抑制効果がある。 一方、 癌がある程度悪性化してくると、 T G F-β による増殖抑制に不応性となることが多く、 逆に癌細胞自体が T G F-β を大量に産生し、 足場となる周囲組織 （癌間質） の発育を促し、 腫瘍の発育と転移を促進すると考えられている。 このような TG F - βの 剰産生に多数の疾患が関連しているとの観点から、 これらの疾患に適用する ための薬剤としてピロ口ビラゾール誘導体である、 T G F - シグナル伝達 阻害剤が提供されている （特許文献 4参照） 。 この文献では、 癌細胞自体が TGF— ^ を大量に産生する等の機序を考慮し、 該ピロロピラゾール誘導 体単独または他の抗腫瘍剤との組み合せが進行癌の治療に有益であると思わ れる、 との示唆がなされている。 しかし、 どのような癌に、 どのようなレべ ルで有効であつたか、等のデータは何ら示されていないし、 それらの具体的 な効能については何ら確認されていない。
また、 良性の上皮癌の癌細胞において TG F— ^ シグナルを抑制する と発癌過程が促進されることが示唆されている （非特許文献 6、 非特許文献 つ、 非特許文献 8. 参照） 。
さらに、 TGF— ^ は免疫抑制効果を持つ （特許文献 5参照） 。 このた め、 腫瘍細胞による TG F— 産生は腫瘍に対する免疫を減弱させると考 えられており （非特許文献 9参照） 、 そして T細胞を TGF— ^不応性に すると胸腺腫と悪性黒色腫モデルで腫瘍が消失することも知られている （非 特許文献 10参照） 。
以上に示すように、 TGF— ^ シグナルの役割は、 癌治療の観点からは 有効であるか、 逆に、 悪影響を及ぼす場合があることも記載されている。
また、 TGF— /3 シグナル伝達経路に関与する各種物質の抗腫瘍活性 について多くの知見も存在する。 例えば、 マウス乳がん細胞株 4 T 1のマウ ス同系肺転移モデルにおいて、 可溶化 TGF— 3 I Ϊ型受容体 （TGF— 3 リガンド吸着〉 タンパク質を腹腔内注射により全身投与すると、 肺転移が減 少したこと （非特許文献 1 1参照） 、 慢性肝炎モデルにおいて上記のタンパ ク質を 5m gZk g腹腔内注射により全身投与すると、 肝線維化が抑制され たが、 2. 5mgZk gでは線維化は抑制されなかったこと （非特許文献 1 2参照） が知られている。 さらに、 抗 TGF— ^ 抗体 （リガンド中和） そ れ自体の単独使用様式ですでにいくつかが欧米で臨床治験に入っており、 フ エーズ （P h a s e) I I Iに至っているものもある （非特許文献 1 3、 非 特許文献 1 4参照） 。 同様に、 TG F— ^ アンチセンスオリゴヌクレオチ ド （TG F— 3遺伝子転写抑制） も臨床治験に入っているものがある （非 特許文献 1 5参照） 。
以上の高分子量化合物に加えて、 低分子量 TG F— ^ シグナル阻害剤も 精力的に研究が為されている。 例えば、 LY 364947 (ATP競合阻害 による TG F— I型受容体 （少なくとも A LK5) リン酸化阻害剤） （非 特許文献 1 6参照） 、 A77— 01 (LY364947と同様なリン酸化阻 害剤） （非特許文献 1 7参照） 、 その他、 各種の低分子量 TG F— シグ ナル阻害剤が抗腫瘍剤として開発中である （上記の非特許文献 2参照） 。
特許文献 1 ：特許第 251 7760号公報
特許文献 2 : WO 2002 26241
特許文献 3 : WO 2005/01 39 1 5
特許文献 4 ：特表 2004 - 535404号公報 （または WO 2002
094833)
特許文献 5 ：特表 2006 - 503899 (または WO 2004/03
4023)
非特許文献 1 ：狩野光伸、 宮園浩平 血管新生における TG F—^ ス
一パーファミリーシグナルの関与 Mo I e c u I a r
Me d i c i n e 2005 ; 42 ; 661 -668, 和文総説
非特許文献 2 ： Y i n g l i n g, J. M. e t a I . , N a t u r e R e v. D r u D i s c. 3, 1 01 1— 1022 (2004)
非寺許文献 3 ： S i e g e I , P. M. e t a I . N a t u r e
Re v. Ca n c e r 3, 807-81 8 (200
3)
非特許文献 4 ： Wa k e f i e l d, に M. e t a に ， C u r
Op i n. G e n. D e v. 1 2, 22— 29 (200 非特許文献 5 ： D u m o n t , N , e t a I . , C a n c e r
I I 3, 531 -536 (2003) 非特許文献 6 ： T a n g , B. e t a I , J. C I i n. I
s t . 1 1 2, 1 1 1 6- 1 1 24 (2003) 非特許文献 7 ： C u i , W. e t a I . C e 86, 531
5 42 (1 996)
非特許文献 8 ： 0 f t , M. , e t a I , N a t u r e C e
B i o に 4, 487-494 (2002)
非特許文献 9 ： し e t t e r i o , J . J I . , A n n u .
R e v I mm u n o I . 7-1 61 (1 9
9 8)
非特許文献 1 0 ： G o r e I i k , I . e , N a t u r e
M e d . 7, 1 1 1 8-1 001 ) 非特許文献 1 1 : Mu r a o k a, R. e , J . C I i n.
I n e s t . 1 09， 1 559 (200 2)
非特許文献 1 2 : G e o r g e, J. e t a に ， P r o c . N a t I . A c a d. S c に US A 96, 1 27 1 9一
1 2フ 2 4 (1 99 9)
非特許文献 1 3 ： M e a d , A. に e t a I - ， I n v e s t
Op h t h a I m o I . V i s . S c に 44, 339
4一 34 0 1 (200 3)
非特許文献 1 4 ： M e a I y, N. E . e t a I . , D r u s . F u t . 2 8 , 320- 322 ( 200 3)
非特許文献 1 5 ： B o g d a h n , U . e t a I . , Am. S o c .
C I i n On c o l . A n n . Me e t . A b s t r a c t 1 51 4 (2 004)
非特許文献 1 6 ： S a w y e r , J . S. e t a I . , J. Me d .
C h e m 46, 39 53-3 956 (2003) 非特許文献 1 7 ： T o j o , M. e t a I . , Ca n c e r S c i
96 ： 7 9 1 -800 (200 5)
発明の開示
以上に述べたとおり、 薬物内包高分子ミセルでは、 標的細胞または組織へ のデリバリ一能が改善することも確認され一定の良好な効能が得られておリ、 また、 従来の知見と全く異なる知見に基づき、 新たなカテゴリーに入る抗腫 瘍剤も提案されている。 し力、し、 一般に毒性が高い抗腫瘍剤を使用するとの 観点に立てば、 さらなる標的選択性ないし到達性の向上と、 より少ない用量 を可能にする医薬製剤の提供が望まれるであろう。 特に、 血管構築が悪いか、 あるいは線維化の強い組織型の癌 （fl萃臓腺癌、 スキルス胃癌、 等） で有意な 効果を示す医薬製剤を提供することが望まれる。 本発明者等は低分子量 T G F-/3 I型受容体の阻害剤し Υ 364947を 癌細胞自体には到達しない低用量で投与した際や、 例えば上記非特許文献 1 2において慢性肝炎モデルでの肝線維化を抑制しなかったと記載されている 低用量の可溶化 T G F— ;8 〗 I型受容体タンパク質を投与した際においても なお、 Sm a d 4欠失変異腫瘍細胞株をヌードマウスに移植する腫瘍異所移 植 （ t u m o r — x e n o g r a f t ) モデルの腫瘍異所移植片の新生血管 の漏出性を、 未処置のものに比し、 有意に高めることを見出した。 またその 一方、 一般臓器の既存の血管には漏出性の変化をもたらさないことも見出し た。
さらに、 本発明者等は、 かような漏出性の増進が新生血管にもたらされる と抗腫瘍剤または造影剤が選択的に腫瘍細胞へデリバリーしやすくなること、 また、 抗腫瘍剤、 特に、 抗腫瘍活性物質を改変して （mo d ί f ί e d) 腫 瘍細胞もしくは腫瘍組織へのデリバリー能を改善させた改変抗腫瘍剤と T G F— β シグナル阻害剤を組み合わせて使用すると、 現に、 滕臓腺癌、 スキ ルス胃癌転移巣、 等に対する治療効果を有意に高めることを確認した。 この 効果は、 米国において既に認可されている抗 V E G F抗体 （B e v a c i z u m a b ；商品名 A v a s t i n ) と一般抗癌剤の併用療法 （M a c K e n 2 I e , M. J . e t a I . , L a n c e t O n c o l 5 : 54 1 — 49 (2004) 及び d e G r a m o n t , A. e t a に , O n c o l o g y. 2005 ; 6 9 S u p p l 3 ： 4 6 - 5 6. 参照） 力《、 いく つかの癌 （特に転移性大腸癌） において臨床的にも著明な効果を示している ものの、 鸱臓腺癌では有意な併用効果については明確になっていないことを 考慮すると、 極めて有望な癌の化学療法が提供できることを意味する。 これ に加えて、 投与する T G F— 3 シグナル阻害剤の用量を渐増させれば、 例 えば上記非特許文献 1 2においても報告されているように、 さらに線維化を 抑制することができ、 新生血管の漏出性の調節にとどまらず、 線維化の抑制 を通じた他の薬物のドラッグデリバリ一能の向上または増進も可能である。
したがって、 本発明によれば、 有効成分として T G F— /S シグナル阻 害剤を含んでなる腫瘍組織における新生血管の漏出性を高め、 場合によって はさらに、 線維化を減少させるための医薬製剤が提供される。
また、 この使用態様の別の態様として、 腫瘍組織における新生血管を漏 出性にするための医薬製剤を調製するための T G F— 3 シグナル阻害剤の 使用が提供され、 さらにまた、 腫瘍組織における新生血管を漏出性にするこ とを必要とする個体 （哺乳動物、 特にヒト） に有効量の T G F— ^ シグナ ル阻害剤を投与することを含んでなる、 個体における抗腫瘍活性物質の効能 を向上させるための方法も提供される。
別の態様の発明として、 有効成分としての T G F— yS シグナル阻害剤 と、 有効成分としての抗腫瘍活性物質であって、 腫瘍細胞もしくは腫瘍組織 へのデリバリー能を改善すべく改変された抗腫瘍活性物質とを組み合わせた ことを特徴とする腫瘍の処置用組み合せ物が提供される。
さらに別の態様の発明として、 T G F— シグナル阻害剤と、 造影剤、 好ましくは、 腫瘍細胞もしくは腫瘍組織へのデリバリー能を改善すべく改変 された造影剤とを組み合わせたことを特徴とする腫瘍の選択的な造影方法及 び造影用組み合せ物が提供される。
発明の詳細な記述
本明細書において、 抗腫瘍活性物質、 抗腫瘍剤または抗癌剤との用語は、 互換可能に使用されており、 化合物の種類、 作用機序、 等を問うことなく、 哺乳動物、 特に、 ヒトの腫瘍、 特に悪性腫瘍に対して何らかの効能を有する 物質を指す。 TG F— iS 及び TG F— ^ シグナル阻害剤は、 上記非特許文 献 1等に使用されている、 当該技術分野で一般に認識されている意味内容で 使用されている。 簡潔には、 TG F— シグナル阻害剤 （signal ing inhibitor) (または TG F— シグナル伝達阻害剤 （signal
transduction) とも言う） は、 TG F— シグナル伝達系路を構成する因 子、 すなわち TG F— iS リガンド、 TG F— ^ I型受容体 （A L K5、 1 ) 、 TG F-β I I型受容体、 TG F— ;8 I I I型受容体 （ベータグリカ ン、 エンドグリン） 、 Sma dタンパク質 （1、 2、 3、 4、 5、 8) のい ずれかまたはその組み合わせを阻害することにより、 TG F- S シグナル 伝達系路を阻害する物質と定義できる。
本発明において、 腫瘍組織における新生血管の漏出性を高め、 また場合に より線維化を減少させるとは、 例えば、 デキストラン注入実験 （簡潔にいえ ば、 マウスを用い、 VEG F— A及び FG F— 2を混ぜたマトリゲルを腹壁 皮下に注入し、 TG F_^ シグナル阻害剤を腹腔内投与して 7日後、 分子 量 2, 000, 000のデキストランを注入してから動物を犠牲にして、 摘 出したマトリゲルプラグ内の新生血管とデキストランの分布の関係を確認す る実験： K a n o、 M. R. e t a に ， J. C e l l S c に ， 1 1 8， 37 59-3768 ( 2005 ) 参照） により確認できる事象である (図 2— 1 , 図 2— 2参照） 。
理論により、 拘束されるものでないが、 腫瘍組織における新生血管の漏出 性が高まり、 そして場合によって腫瘍内の線維成分が減少することにより、 抗腫瘍活性物質または抗腫瘍剤、 特に、 高分子化した抗腫瘍剤， 並びにリポ ソーム及び高分子ミセル等、 特に、 平均直径が数 nmから数百 nmまでサイ ズを有するナノスフエアー等に内包させることにより改変された抗腫瘍剤、 または同様に改変された造影剤の癌細胞へのデリ /くリ一能が向上するものと 理解されている。
本発明で使用できる TG F— シグナル阻害剤には、 上記定義に概念上 包含され、 かつ、 本発明の目的に沿う （例えば、 腫瘍組織における新生血管 の漏出性を高め、 そして場合によって腫瘍内の線維成分を減少することので きる） ものであれば、 化合物の種類及び起源を問うことなくいずれのものも 包含される。
限定されるものでないが、 例えば、 可溶性 TGF— ^ I型受容体、 可溶性 TGF-^8 I I型受容体、 可溶性 TG F— ^ I I I型受容体， 抗 TG F— ^ 抗体、 抗 T G F— /5 I型受容体抗体、 抗 T G F— ^ I I型受容体抗体及び抗 TGF— I I I型受容体抗体等の高分子量物質、 TG F— アンチセン スオリゴヌクレオチドもしくは s i RN Aが挙げられる。
また、 TG F— ^ シグナル阻害剤には、 丁 G F— I型受容体キナーゼ インヒビター活性を有する低分子量化合物が包含され、 限定されるものでな いが、 例えば、 ジヒドロピロロピラゾールをベースとするスカホールド （s c a f f o I d) 、 イミダゾールをベースとするスカホールド、 ビラゾロピ リジンをベースとするスカホールド、 ピラゾールをベースとするスカホール ド、 イミダゾピリジンをベースとするスカホールド、 トリァゾ一ルをベース とするスカホールド、 ピリ ドピリミジンをベースとするスカホールド、 ピロ 口ピラゾールをベースとするスカホールド及びィソチアゾ一ルをベースとす るスカホ一ルドを挙げることができる。 ここに言う、 何々をべ一スとするス 力ホールドとは、 何々を基本骨格として有する化合物とも換言できる。 かよ うな低分子化合物の典型的なものとしては、 例えば、 下記の化学式で表され る構造を主体とするスカホールドを挙げることができる。
Figure imgf000013_0001
LY580276
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Figure imgf000013_0003
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化合物（6)
Figure imgf000015_0002
LY364947 これらのスカホールド及びそれらのアナログに関する情報は、 ジヒドロピ ロロピラゾールをベースとするスカホールドに属する LY 55041 0及び LY 580276については非特許文献 1 6を参照でき、 イミダゾールをべ —スとするスカホールドに属する S B— 5051 24については B y f i e l d、 S . D. e t a に ， Mo に P h a r ma c o I . , 65, 74 4-752 (2004) を参照でき、 ピラゾ口ピリジンをべ一スとするスカ ホールドに属する化合物 （ 1 ) については WO 2004/02687 1 を参 照でき、 ピラゾールをベースとするスカホールドに属する化合物 （2) 及び し Y 364947についは、 それぞれ G e I I i b e r t , F. e t a に ， J . Me d. C e m. 47, 4494-4506 (2004) 及び 非特許文献 1 6を参照でき、 イミダゾピリジンをベースとするスカホールド に属する化合物 （3) については WO 2004Z021 989を参照でき、 トリァゾールをベースとするスカホールドに属する化合物 （4) については WO 2 0 0 4 0 2 6 3 0 7を参照でき、 ピリ ドピリミジンをベースとする スカホールドに属する化合物 （5 ) については WO 2 0 0 0 / 0 1 2 4 9 7 を参照でき、 イソチアゾールをベースとするスカホールドに属する化合物 ( 6 ) については WO 2 0 0 4 1 4 7 5 7 4を参照でき、 また、 ピロロピ ラゾールをベースとするものについては特許文献 4を参照できる。 これらの 文献は引用することにより、 その記載内容の全てが本明細書の内容となる） 。 さらに、 これらの関連物質についは非特許文献 2、 5及 1 7も参照できる。 また、 上記の T G F— シグナル阻害剤と組み合わせて使用することの できる 「腫瘍細胞もしくは腫瘍組織へのデリノくリ一能を改善すベく改変され た抗腫瘍活性物質」 にいう、 改変されたとは原型の抗腫瘍活性物質もしくは 抗腫瘍剤または抗癌剤を、 例えば、 単に単純な塩にしたか、 単純なプロドラ グとしたものを意味するのでなく、 キヤリヤー物質、 特定の高分子量物質、 等を使用して原型の抗腫瘍活性物質の腫瘍細胞もしくは腫瘍組織へのデリバ リ一能が改善された形態にあるものを意味する。 ここで、 デリバリー能が改 善された形態とは、 標的とする腫瘍細胞もしくは腫瘍組織に薬物が総体的に 効率よく送達されるような構造 （例えば、 生体内の各種酵素等による分解に 対する抵抗性が高まっているか、 水性溶媒中で安定性が高まっているか、 ま たは抗体等を使用して標的選択性が高まっているか、 または溶解性が変化し た等の構造） を意味する。 かような改変された抗腫瘍活性物質には、 限定さ れるものでないが、 抗体もしくは薬物 （特に、 ポリもしくはオリゴヌクレオ リ ドのように特定の細胞に取り込まれる際に生体内酵素で分解されるような 薬物） を安定化させるために適当な高分子量キヤリヤーと抗腫瘍活性物質と のコンジユゲー卜の形態 （該キヤリヤーと該活性物質が共有結合によリ結合 した複合体を包含する） 、 抗腫瘍活性物質がリボソームもしくは高分子ミセ ルに内包された形態、 ポリマーべシクルの形態及びナノバブルの形態にある ものが包含される。 いずれも、 当該技術分野で公知の改変技術及びそれらに 準じて調製される。
かようなコンジュゲートとしては、 限定されるものでないが、 カチオン荷 電性ポリマーもしくはカチオン荷電性ポリマーセグメントを担持する重合体 もしくは共重合体とオリゴもしくはポリヌクレオチド （一本鎖もしくは二本 鎖を包含する） またはその誘導体とのコンプレックス及び抗体もしくはポリ (エチレングリコール） 等の不活性重合体と抗腫瘍活性物質との生体内開裂 性ヒドラゾン結合もしくはジスルフィ ド結合を介して共有結合したコンジュ ゲートを挙げることができる。 腫瘍活性物質が内包れた形態にあるリポソ一 ムは、 リピッドまたはカチォニックリピイ ドをキヤリヤーとして形成され、 そして腫瘍活性物質が内包れた形態にある高分子ミセルは、 親水性ポリマー 鎖セグメントと疎水性ポリマー鎖セグメントを含んでなるブロック共重合体、 及び親水性ポリマー鎖セグメン卜と荷電性ポリマーセグメントを含んでなる ブロック共重合体をキヤリヤーとして形成される構造物を挙げることができ る。 このような共重合体のより具体的なものとしては、 限定されるものでな いが、 親水性ポリマー鎖セグメントが、 ポリ （エチレングリコール） に由来 し、 疎水性ポリマー鎖セグメント力、 ポリ （疎水性アミノ酸） 、 ポリ （ァス パラギン酸エステル） 及びポリ （グルタミン酸エステル） 、 ポリ （ラクチ ド） 、 ポリ （ラク トン） 及びこれらの共重合体からなる群より選ばれる重合 体に由来し、 荷電性ポリマーセグメントがポリ （グルタミン酸） 、 ポリ （ァ スパラギン酸） 、 ポリ （リジン） 、 ポリ （ （メタ） アクリル酸 N , N—ジ アルキルアミノアルキル） 及びポリ （エチレンィミン） からなる群より選ば れる重合体に由来するものを挙げることができる。 上記のポリ （ラクチド） には、 好ましくはラクチド類の開環重合により得られるポリ （乳酸） 及びポ リ （グリコール酸） を包含し、 ポリ （ラク トン） は、 好ましくは、 ーラク トン、 rーラクトン、 5—ラク トンまたは ε—ラク トンの開環重合により得 られるものを包含する。 これらの共重合体はポリマ一鎖単位中に、 例えばィ ソブチルビニル等に由来する単位を組み込むことで温度感受性に改変されて いてもよい。
他方、 本発明で使用できる抗腫瘍活性物質には、 上記のような改変の可能 な抗腫瘍活性を有する如何なる物質も包含される。 かような抗腫瘍活性物質 のより具体的なものとしては、 限定されるものでないが、 癌遺伝子の発現を 抑制するかもしくは癌抑制遺伝子を発現するように機能するオリゴもしくは ポリヌクレオチド及びその誘導体 （例えば， 適当な遺伝子 （BC L 2、 クラ スタリン （C l u s t e r i n) 、 PKC 、 メチルトランスフェラーゼ (Me t h y I t r a n s f e r a s e) 、 サーハイ Cン (S u r v i v i n) 、 S TAT3、 HS P 27、 HRAS、 KRAS 2等） のアンチセンス もしくはセンスオリゴヌクレオチド、 ショートインターフェアリング 〈s i RN As) 及び m i RN A等の n c RNA, アブタマ一、 デコイ核酸） 、 及 び抗体 （腫瘍細胞もしくは腫瘍組織に特異的に結合しうるもの） 、 並びに代 謝拮抗薬 （例えば、 フル才ロウラシル、 亍ガフール、 カルモフール、 ドキシ フルジン、 シタラビン、 クラドリビン、 ゲムシタビン、 メ トトレキセ一卜 等） 、 アルキル化薬 （例えば、 シクロホスフアミド、 二ムスチン等〉 、 白金 製剤 （カルボプラスチン、 シスプラスチン、 ネブダプラスチン、 ォキサリブ ラスチン、 ジアミノシクロへキサン白金 （ I I ) 等） 、 抗生物質 （マイ トマ イシン C、 アクラルビシン、 ェピルビシン、 ドキソルビシン （またはァドリ アマイシン） 、 ピラルビシン、 ミ トキサントロン、 ブレオマイシン等） 、 及 び植物抽出物 （例えば、 ビノルビシン、 ビンクリスチン、 ビンデシン、 ビン ブラスチン、 ドセタキセル、 パクリタキセル （またはタキソール） 、 エトポ キシド、 イリノテカン等） を挙げることができる。 なお、 上記から理解でき るように、 本発明にいう抗生物質及び植物抽出物は抗腫瘍活性を有するもの に限定され、 また、 天然から得られた化合物の誘導体に該当する化合物も包 含される。 また、 放射線療法に使用される放射性核種も上記の抗腫瘍活性物 質に包含されるものと理解されている。
かような抗腫瘍活性物質を内包する高分子ミセルまたはコンジユゲー卜の うち、 臨床治験に供されているものを含む興味深いものとしては、 アドリア マイシンを内包したポリ （エチレングリコール） b l o c k—ポリ （ァスパ ラギン酸） 共重合体からの高分子ミセル （例えば、 特許文献 1参照） 、 パク リタキセルを内包したポリ （エチレングリコール） b l o c k—ポリ （ァス パラギン酸エステル） 共重合体からの高分子ミセル （例えば、 H ama g u c h i , T. , e t a I . , B r . J. C a n c e r , 92 : 1 240- 1 246, 2005、 シスプラチンもしくはジアミノシクロへキサン白金 ( I I ) を内包したポリ （エチレングリコール） b I o c k—ポリ （グルタ ミン酸） 共重合体からの高分子ミセル （例えば、 WO 02/2624 1 A 1、 WO 2005/05664 1 A 1参照） 、 カンプ卜亍シンもしくはそ の誘導体、 例えばトポ亍カンを内包したポリ （エチレングリコール〉 b I o c k一ポリ （ァスパラギン酸エステル） 共重合体からの高分子ミセル （例え ぱ、 WO 03/099260 A 1、 WO 2005/0 23230参照） 等 が挙げられる。 本発明で使用できる抗体と薬物のコンジュゲートとしては、 限定されるものでないが、 腫瘍細胞に特異的に結合し得る抗体である C D 3 3抗体と力リキアマイシン （c a I ί c h e a m i c i n ) のコンジュゲ一 ト （ゲムッズマブォゾガミシン： U S 5, 773, 001 B参照） が挙 げられ、 非活性高分子量化合物 （ポリエチレングリコール （PEGと略記す る場合あり） 、 アルブミン等） と薬物のコンジュゲートとしては、 P EG— ィンターフェ口ン （例えば、 Wa n g, Y. S. e t a に ， Ad v. D r u g D e I v . Re v. 54, 547-570, 2002) 及び PEG —抗 TN F Fa bコンジユゲー卜 （Ch a pma n, A. P. e t a に , N a t u r e B i o t e c h n o に 1 7, 780— 783, 1 9 99) 等が挙げられ、 その他 D u n c a n, R. N a t u r e Re v i w s D r u g D i s c o v e r y 2 , 347— 360, 2003に記載 されるコンジュゲートが挙げられる （以上の文献は、 引用することにより、 それらの内容の全てが本明細書の内容となる） 。 また、 オリゴヌクレオチド を高分子ミセルに内包させた例については、 Ka k i z awa, Y. e t a に ， Β ι oma c r omo I e c u I e s 20 O l , 2 , 491—49 7参照できる。
本願発明によれば、 上記の TG F— ^ シグナル阻害剤が奏する腫瘍組織 における新生血管の漏出性を高める作用を利用して、 各種造影剤を腫瘍組織 へ選択的にデリバリーする系も提供できる。 使用する造影剤 （または各種コ ントラストレポーター成分：例えば、 T c、 Gd、 Mn等） は、 上記の抗腫 瘍剤について説明した高分子量物質 （例えば、 造影剤に結合性を付与するよ うに修飾されたポリエチレングリコール、 デンドリマー等） を使用して修飾 されたものが好ましい。 このような造影剤は本発明の目的に沿うものであれ ば如何なるものでもよ 限定されるものでないが、 Ma r c c o s, E. e t a I . , B i o c o n j u g a t e Ch em. 1 998, 9, 1 84 - 1 91 ; T o r c h i I i n V. P. Ad v a n c e d D r u g D e l i v e r y R e v i ew s 54 (2002) 235-252 ; K o b a y a s i H . e t a I . , A d v a n c e d D r u g D e l i v e r y R e v i e w s 57 (2005) 227 1 — 2286及 びそれらに引用されたその他の文献に記載されたものを挙げることができる (これらの文献は引用することにより、 それらの記載内容が本明細書に組み 入れられる） 。
本発明に従う、 上記の TG F— ^ シグナル阻害剤と、 上記の抗腫瘍剤も しくは抗腫瘍活性物質、 特に、 改変された抗腫瘍活性物質とを組み合わせた ことを特徴とする腫瘍の処置用組み合せ物は、 阻害剤と抗腫瘍活性物質が、 単一の製剤中に組合わされて存在するか、 個別の製剤として存在することが できる。 また、 T G F— 5 シグナル阻害剤と抗腫瘍活性物質を個体 （哺乳 動物、 好ましくは、 ヒト） に投与する場合には、 両者を同時に、 またはいず れか一方を投与した後、 もう一方の薬剤を適当な間隔をもって投与すること ができる。 後者の場合、 通常は、 先に、 TG F— / S シグナル阻害剤を投与 するのが好ましい。 これらの組み合せの比率は、 使用する TG F— iS シグ ナル阻害剤と改変された抗腫瘍活性物質の種類により最適値が異なるので特 定できないが、 後述する例を参照に、 通常、 小規模の動物実験を行い、 それ らから得られる結果を参考に専門医が決定することができる。 また、 個別の 製剤で存在するときは、 同じかもしくは相互に異なる投与経路から投与する こともできる。 これらの投与経路としては、 経口投与、 動脈注射、 静脈注射、 腫瘍内注射、 皮下注射、 等であることができる。 抗腫瘍活性物質の用量は、 原型の薬物の用量を参考にして決定することができる。
上記 TG F— ^ シグナル阻害剤を投与は、 特に、 新生血管を退縮させず に漏出性を高めることが必要な個体、 哺乳動物、 好ましくはヒトに、 治療有 効量を用いて実施される。 治療有効量は、 上述し、 また、 後述される実施例 で説明されるように、 癌細胞自体には到達しない低用量であることができる。 かような用量も、 後述する例を参照して、 必要があればさらに動物実験を行 し、、 それらの結果に基づいて専門医が決定することができる。 また、 抗腫瘍 活性物質の治療有効量は、 既に、 臨床上使用されている薬物の場合には、 そ れらの治療有効量を参照に決定できるが、 通常、 既知用量以下の用量を選ぶ ことができる。 他方、 臨床上未使用の薬物の場合には、 適当な動物実験をし た後、 専門医が決定することができる。
本発明に従い、 T G F— ^ シグナル阻害剤または組み合せ物で処置する ことが主として意図されている腫瘍としては、 間質成分が多いか、 または乏 新生血管性の組織型であるために化学療法抵抗性とされる腫瘍群を挙げるこ とができる。 し力、し、 これらの腫瘍以外に使用する場合でも、 好ましい効能 が得られる。 上記腫瘍群としては、 滕臓腺癌、 スキルス胃癌、 胆管細胞癌、 転移性肝腫瘍等を含む難治性消化器腫瘍、 悪性線維性組織球症 （M F L ) 、 線維肉腫を含む難治性軟部組織腫瘍、 髄芽腫を含む中枢神経系腫瘍の一部、 乳癌の一部 （特に、 線維化の強いもの） 、 等及び線維化の亢進した乳癌が挙 げられる。
本発明によれば、 血管に対しては、 不安定な新生血管にのみに選択的に作 用する T G F— 阻害剤の利用により、 血管新生の起こっていない正常部 位への抗癌剤集積を変化させることなく、 血管新生が惹起されている腫瘍も しくは癌組織に特異的に抗癌剤の到達を改善することができる。 そのため、 T G F— ; S 阻害剤、 また、 抗腫瘍活性物質と併用する場合には、 T G F— β 阻害剤だけでなく、 抗腫瘍活性物質による影響 '副作用を最小限にとど めることができる。 本発明では、 上記の組み合せ物は、 TG F— ^ シグナル阻害剤を含有 する医薬製剤と改変された抗腫瘍活性物質を含有する医薬製剤を個別に含む 腫瘍の治療用キッ卜の形態にあることができる。
図面の簡単な説明
図 1は、 後述する例 1による、 塍臓腺癌細胞における一般抗癌剤、 TG F -β シグナル阻害剤の併用効果を表す、 経時的な腫瘍体積変化を示すグラ フである。 縦軸が相対的な腫瘍体積を表し、 横軸が時間 （日） を表す。 図 2— 1は、 後述する例 2による、 マトリゲルプラグアツセィにおける Τ G F— ^シグナル阻害剤の効果を表す、 蛍光免疫組織染色を示す図に代わる 写真である。 （a) 、 (b— 1 ) 及び （b— 2) は、 この順に、 それぞれ、 対照群、 し丫投与群及び丁 1^ 1 I F c投与群の結果であり、 いずれも緑色 が P EC AM— 1 (血管内皮細胞マーカー） 、 赤色が SMA (血管壁細胞マ 一力一） 、 青が細胞核染色を示す。 （c) 及び （d) は尾静注したデキスト ランのマトリゲルプラグでの分布を示しており、 緑 ·赤色は上記と同じもの を、 青色がデキストランを示している。
図 2— 2は、 後述する例 2による、 図 2— 1に示されたマトリゲルプラグ アツセィにおける TG F— シグナル阻害剤の効果を定量的に表すグラフで ある。 （a) は血管壁細胞による血管内皮細胞の被覆率を、 （b) は血管内 皮マーカー陽性部分の総面積を、 （c) は一顕微鏡視野あたりのデキストラ ン分布面積を示す。 エラ一バーは標準誤差を示す。
図 3— 1は、 後述する例 3の 3— 1による、 B X P C3細胞異所移植モデ ルの組織における TG F— Sシグナル阻害剤の効果を示す図に代わる写真で ある。 左列 （a, c, e) はコントロール条件、 右列 （b, d, f ) は LY 投与条件である。 （a, b) は癌組織内の血管の形態を示しており、 緑色が VE-c a d h e r i n (血管内皮マ一カー） 、 赤色が N G 2、 紫色が増殖 核の染色 （K i一 67) を示す。 （c, d) は、 全身投与したデキストラン の癌組織への集積を示す。 緑色がデキストランであり、 青色は細胞核染色で ある。 （e, f )は細胞外線維成分を青色に染める A z a n染色を行った標 本である。
図 3— 2は、 後述する例 3の 3— 1による、 B X P C 3細胞異所移植モデ ルの組織における TG F— ^シグナル阻害剤の効果を定量的に表すグラフで ある。 （a) は血管壁細胞による血管内皮細胞の被覆率を、 （b) は血管内 皮マーカー陽性部分の総面積を、 （c) は一顕微鏡視野あたりのデキストラ ン分布面積を示す。 エラーバーは標準誤差を示す。 （d) は一顕微鏡視野あ たりの線維成分の割合を示す。
図 4は、 後述する例 3の 3— 2による、 一般臓器での血管における TG F— 3シグナル阻害剤の効果を示す図に代わる写真である。 左列 （a, d, g, m) は脳、 中列 （b, e, h, n) は肝臓、 右列 （ c， f ， i , I ) は 腎臓である。 上段 （a— f ) は血管の染色であり、 緑が P EC AM— 1、 赤 が SMA、 青が細胞核染色を表す。 中で （a— c) は対照群、 （d— f ) は LY投与群である。 また、 下段 （g— I ) は投与後のデキス卜ランの分布で あり、 緑がデキストラン、 青が細胞核を表す。
図 5— 1は、 後述する例 3の 3— 3による、 TG F— シグナル阻害剤の 薬効範囲確認を示す図に代わる写真である。 緑がリン酸化 Sma d 2 (陽性 であれば TG F— ^のシグナル伝達がなされていることを強く示唆する） 、 赤が P EC AM— 1、 青が細胞核染色である。 （a— c) は弱拡大の視野で あり、 （ a ) は対照条件、 （b) は LY 1 mgZk g、 （c) は LY 2 5mgZk gの条件である。 （d— e) は血管に注目した強拡大の視野であ る。
図 5— 2は、 後述する例 3の 3— 4による、 TG F— シグナル阻害剤の 有核血球細胞に対する効果を示す。 上段 （a— c) はセルソーターによる、 末梢血有核細胞中のリン酸化 Sm a d 2陽性細胞の度数分布を、 下段 （d— f ) はその際の検体のスメァ像を示す図に代わる写真である。 一番左 （a) が二次抗体のみの （染色のための） 対照で、 ここで P 1 = 1 %となるように ゲートを設定した。 同じゲート設定を用いて、 （b) LY非投与群と （c) L Y投与群の P 1ゲー卜内の割合を求めた。
図 6— 1は、 後述する例 3の 3— 5による、 B X P C 3皮下腫瘍モデルに おいて T G F— ; Sシグナル阻害剤を併用投与した場合の高分子抗癌剤の癌組 織内分布を示す図に代わる写真である。 Tは腫瘍細胞部分を示し、 それ以外 の場所は腫瘍組織内の間質である。 左列 （a— 1、 2) はドキシルの分布で あり、 右列 （b— 1 , 2) は M i c e I I e— ADRの分布である。 上段 (a - 1 , b— 1 ) は対照群で下段 （a— 2, b— 2 ) は L Y併用群である。 図 6— 2は、 後述する例 3の 3— 5による、 B X P C 3皮下腫瘍モデルに おいて TG F— シグナル阻害剤を併用投与した場合の、 H P LC法で測定 した高分子抗癌剤の癌組織内蓄積を示す。 （a) がドキシルの蓄積量であり、 ( b) が M i c e I I e— A D Rの蓄積量である。
図 7は、 後述する例 3の 3— 6による、 Bx PC3に ADR、 ドキシル、 M i c e I I e— ADRを一回投与で使用した場合の経時的な腫瘍増殖曲線 を表すグラフである。 縦軸が相対的な腫瘍体積を表し、 横軸が時間 （日） を 表す。 図 8は、 後述する例 3の 3— 7による、 B x PC3に ADR、 M i c e I I e— ADRを 4曰おき 3回投与で使用した場合の経時的な腫瘍増殖曲線を 表すグラフである。 縦軸が相対的な腫瘍体積を表し、 横軸が時間 （曰） を表 す。
図 9は、 後述する例 3の 3— 8による、 M I AP a Ca— 2—薬剤を使用 した場合の経時的な腫瘍増殖曲線を表すグラフである。 縦軸が相対的な腫瘍 体積を表し、 横軸が時間 （日） を表す。
図 1 0— 1は、 後述する例 3の 3— 9による、 M I A P a C a— 2皮下腫 瘍モデルにおいて TGF— ^シグナル阻害剤を併用投与した場合の M i c e I I e— ADRの癌組織内分布を示す図に代わる写真である。 上段 （a) は LY投与群で下段 （b) は対照群である。
図 1 0— 2は、 後述する例 3の 3— 9による、 M I AP a C a— 2皮下腫 瘍モデルにおいて TG F— ^シグナル阻害剤を併用投与した場合の、 HP L C法で測定した高分子抗癌剤の癌組織内蓄積を示す。
図 1 1は後述する例 3の 3— 1 0による、 M I A P a C a— 2同所移植モ デルで得られた滕臓癌肝転移巣モデルにおける、 TG F— ^シグナル阻害剤 を併用投与した場合の M i c e I I e—ADRの癌組織内分布を示す図に代 わる写真である。 （a) が対照群、 （b) はし Y併用群である。 Lは正常肝 臓組織を示しており、 Mは転移巣を示す。 Lにおいては蓄積の程度がほとん ど変化ないのに対し、 Mでは LY併用にて著明な蓄積効果を認めることが特 筆に価する。
図 1 2は、 後述する例 3の 3— 1 1による、 0〇リ1\1ー21\/11_1\]同所移植 モデルで得られた転移リンパ節の総重量を示す。 図 1 3— 1は、 後述する例 3の 3— 1 2による、 B X PC 3皮下腫瘍モデ ルにおいて L Y以外の TG F— ;5シグナル阻害剤 （T b R I I F c、 （a, b) ) または VEG F阻害剤 （杭 VEG F抗体、 （c, d) ) を併用投与し た場合の高分子抗癌剤の癌組織内分布を示す図に代わる写真である。
図 1 3— 2は、 後述する例 3の 3— 1 3による、 B x PC 3皮下腫瘍モデ ルにおいてし Y以外の TG F— 阻害剤 （T b R I I F c、 （a) ) または VEG F阻害剤 （抗 VEG F抗体、 （b) ) を併用投与した場合の高分子抗 癌剤の癌組織内蓄積を示す。
図 1 4一 1は、 後述する例 3の 3— 1 4による、 TG F— /?シグナル阻害 剤と M ί c e l l e—ADRまたは単体 ADR併用投与における一般臓器で の分布を示す図に代わる写真である。 肝臓 （a) 、 腎臓 （b) 、 脾臓 （c) に対し、 上段が LY投与群、 下段が対照群、 左列が M i c e I I e-ADR 右列が単体 A D Rを表す。
図 1 4一 2は、 後述する例 3の 3— 1 4による、 TG F— /3シグナル阻害 剤と M i c e l l e— ADRまたは単体 ADR併用投与における一般臓器で の蓄積量を示す。 肝臓 （a) 、 腎臓 （b) 、 脾臓 （c) に対し、 おのおの左 より、 阻害剤 ' ミセル併用、 ミセルのみ、 阻害剤 '単体 ADR併用、 単体 A DRのみ、 と排列されている。 下記の数字における N. S. は統計学的に有 意でないことを表す。
発明を実施するための最良の形態
<実施例 >
以下、 具体例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、 本発明をこれら の態様に限定することを意味するものではない。 例 1 ： 滕臓腺癌細胞における一般抗癌剤 （未改変） 、 TG F— ^ シグナ ル阻害剤の併用効果
薬物： シェムシタにン (G emc i t a b i n e )
方法：
Sma d 4欠失塍臓腺癌細胞 （Bx PC3 : ATCC N o. CRL— 1
687) 5 x 1 06個を 4週齢ォスヌードマウスの腹壁皮下に注射し、 膝臓 腺癌の異所移植モデルとして、 移植約 2週間経過し癌細胞塊が増殖期に入つ たものを実験に用いた。 ジェムシタビン （以下、 G emと略記） を 1 25m gZk g週 2回腹腔内投与し、 LY364947 (以下、 LYという） を 1 mgZk g週 3回腹腔内投与の二種を組み合わせ、 各 r> = 2で、 コント口一 ル群、 Gem単独投与群、 LY + G em併用群の 3群とした。 これらの動物 にっき、 2 1 日間腫瘍体積値を継続的に観察した。 腫瘍体積は腫瘍塊の長辺 x (短辺)2で近似し、 各腫瘍塊の投与開始時の値を 1 として比較した。 結果 を図 1の上段のグラフに示す。
H¾：
最終日においてコントロール群 5. 56± 1. 59、 G e m単独投与群 4·
76±0. 46、 LY + G em併用群 3. 25± 1. 1 5と、 併用群は単独 投与群に比べて腫瘍の縮減が見られる。
薬物： T S— 1
雄：
Sma d 4欠失滕臓腺癌細胞 （B X PC3) 5 x 1 06個を 4週齢ォスヌ 一ドマウスの腹壁皮下に注射し、 塍臓腺癌の異所移植モデルとして、 移植約 2週間経過し癌細胞塊が増殖期に入ったものを実験に用いた。 TS— 1 (経 口 5 FUプロッドラッグ、 大鵬薬品） を 5mg k g毎日経口投与、 LY を 1 mgZk g週 3回腹腔内投与の二種を組み合わせ、 各 n = 3で、 コント ロール群、 TS— "!単独投与群、 LY + TS— 1併用群の 3群とした。 これ らの動物につき、 1 4日間腫瘍体積近似値を継続的に観察した。 腫瘍体積は 腫瘍塊の長辺 X (短辺)2で近似したものを、 各腫瘍塊の投与開始時体積を 1 として比較した。
結果：
最終日において、 コントロール群 3. 88±0. 61、 TS— 1単独投与 群 2. 49±0. 23、 LY + TS— 1併用群 1. 93±0. 31 と、 LY + TS- 1併用群は TS— 1単独投与群に比べて腫瘍の縮減が見られる。 経 過は図 1のグラフに示す。 結果を図 1の下段のグラフに示す。
例 2 ：マトリゲルプラグアツセィによる新生血管への TG F— ^シグナル阻 害剤の効果
方法：
マトリゲル （BD社） に VEG F— A、 FG F— 2、 及びへパリンを混合 し、 さらに TG F— ^阻害剤 L Y 364947 (以下、 LYという） 500 n Mまたは T ^ R I I ： F c 50 μ g/m Iまたはコントロールをさらに 同じゲルに混ぜてから、 これらをォス I CRマウスの腹壁に皮下注射し、 Ί 曰目で動物を犠牲にしてマトリゲルプラグを摘出し、 免疫蛍光染色を用いて 検索した。 具体的には、 新生血管形質については、 血管内皮細胞を P EC A M— 1 (platelet endothelial cell adhesionmolecule-U 血小板内皮細胞 接着分子一 1 ) に対する抗体で、 血管壁細胞を SMA ( 平滑筋ァクチン） に対する抗体で認識し、 LY投与群またはコントロール群においては、 全内 皮細胞面積中の壁細胞に被覆されている面積の割合を、 及び、 血管内皮マー カー陽性の面積を定量化した （以上、 n = 20) 。 また犠牲 6時間前に分子 量 2, 000, 000の高分子デキストラン （ I n v i t r o g e n Mo I e c u I a r P r o b e s社） を経尾静脈にて投与し、 阻害剤の有無に よる腫瘍組織内での分布の差異を、 分布面積の定量により検討した （n = 2 結果：
結果を、 図 2— 1及び図 2— 2に示す。 L Y投与群と T b R I I F c投与 群は基本的には同じ表現型となった。 壁細胞の内皮細胞被覆は、 LY投与群 で非投与群と比べ有意に減少した （p = 0. 006) 。 また、 血管内皮の総 面積は、 LY投与群で有意に増加した （p = 0. 0009) 。 デキストラン の分布面積は LY投与により約 2倍に増加し、 その差は有意であった （p< 0. 0001 ) 。
例 3 ：高分子化合物と TG F— /3 シグナル阻害剤の併用
3- 1. Sma d 4欠失 TG F— シグナル不応性塍臓腺癌細胞 （ B x P C3) 一高分子量デキストラン一し Y364947、 新生血管形質変化とデ キストラン分布
方法：
Sm a d 4欠失塍臓腺癌細胞 （B X P C 3) 5 x 1 06個を 4週齢ォスヌ 一ドマウスの腹壁皮下に注射し、 滕臓腺癌の異所移植モデルとして、 移ネ直約 2週間経過し癌細胞塊が増殖期に入ったものを実験に用いた。 TG F— /S 阻害剤としては L Y 364947 (以下、 LYという） I mgZk gまたは コントロールを 1回、 動物を犠牲にする 24時間前に腹腔内投与した。 動物 を犠牲にして腫瘍塊を摘出し、 組織学的検索を行った。 具体的には、 新生血 管形質については、 血管内皮細胞を P E CAM— 1 (platelet endothel ial cel l adhesion molecule-K 血小板内皮細胞接着分子一 1 ) に対する抗体で、 血管壁細胞を NG2 (ニューログリカン 2) に対する抗体で認識し、 全内皮 細胞面積中の壁細胞に被覆されている面積の割合を、 及び、 血管内皮マーカ —陽性の面積を定量化し （以上、 n=4匹 X1 0顕微鏡視野 =40) 、 また、 デキストランの分布についてはその分布面積を定量化した。 また、 同一のモ デルを用意した上で、 犠牲 6時間前に分子量 2, 000, 000の高分子デ ヤス 卜フン ( I n v i t r o g e n Mo l e c u l a r P r o b e s 社） を経尾静脈にて投与し、 阻害剤の有無による腫瘍組織内での分布の差異 を、 分布面積の定量により検討した （n = 3匹 x 4顕微鏡視野 =1 2)。
結果：
壁細胞による内皮細胞の被覆程度は、 コントロールでは 36. 0±2. 2%であったのに対し、 TG F— / S 阻害剤の存在下で 23. 3± 1. 9% であった （ t検定により p = 0. 00002) 。 次に、 内皮細胞マーカー陽 性面積はコントロールで 1. 00±0. 03に対し、 TG F— /S 阻害剤の 存在下で 1. 1 3士0. 06であった （t検定により p = 0. 02) 。 さら に、 高分子デキストランの分布面積は、 コントロールで 1. 00±0. 1 3 に対し、 TG F— /? 阻害剤の存在下で 2. 24±0. 36であった （t検 定により p = 0. 002) 。 （図 3— 1及び図 3— 2参照）
なお、 この L Y投与量が 1 mgZk gの条件においては、 膠原線維を染め 分けるァザン染色において、 L Y投与 ·非投与群で腫瘍組織の線維化には有 意な差が認められなかった （標本上の面積の定量化により P==0. 336) 。 3-2. 一般臓器一高分子量デキストラン一 LY364947、 血管形質変 化とデキストラン分布
方法： 3― 1で用いた動物から脳 ·肝臓 ·腎臓を摘出し、 組織学的検索を行った。 血管については P EC AM— 1に対する抗体で血管内皮細胞を、 SMA (S mo o t h mu s e I e a c t i n s 平滑筋ァクチン） に対する抗体で 血管壁細胞を標識し、 またデキストランの分布を観察した。
結果：
これら一般臓器の既存の血管には TGF—^シグナル阻害に伴う明らかな 形質の変化は見られなかった。 また、 デキストランの分布にも明らかな差は 見られなかった。 （図 4参照）
3-3. リン酸化 Sm a d 2の染色による、 癌組織での L Y 364947投 与後 1時間での T G F— シグナル抑制効果の確認
方法：
Sma d 4欠失隧臓腺癌細胞 （Bx PC3) 5 x 1 06個を 4週齢ォスヌ 一ドマウスの腹壁皮下に注射し、 塍臓腺癌の異所移植モデルとして、 移植約 2週間経過し癌細胞塊が増殖期に入ったものを実験に用いた。 丁 G F— ^ 阻害剤として L Y 1 mg/k g、 25 m g k gまたはコントロールを 1回、 腹腔内投与した。 投与後 1時間で動物を犠牲にして腫瘍を摘出し、 リン酸化 Sma d 2に対する抗体ならびに PEC AM 1に対する抗体を用いて腫瘍の 免疫組織染色を行った。
結果：
弱拡大顕微鏡視野にて、 LY 1 mgノ k g投与した場合には、 コントロー ルと比較して著明な差は認めない （図 5—1 (a) ， (b) 参照） 。 しかし ながら、 この投与量においても、 拡大視野にて腫瘍内血管壁を観察すると、 Sma d 2のリン酸化の解除を認める。 一方、 し Y 25mgZk gを投与し た場合には、 ほぼ全ての癌細胞において Sm a d 2のリン酸化の解除を認め た。 （図 5— 1参照）
3-4. リン酸化 S ma d 2の染色による、 有核血球細胞での L Y 3649 47投与後 1時間での TG F—；8シグナル抑制効果の確認
方法：
被がん移植ヌードマウスに TG F— 阻害剤として LY I mgZk gま たはコントロールを 1回、 腹腔内投与した。 投与後 1時間で全採血を行い、 溶血処理、 ホルマリン固定、 メタノールによる細胞膜穿孔処理を行った後、 リン酸化 S ma d 2に対する抗体にて染色を行ったのち、 F ACSによりリ ン酸化 Sma d 2陽性細胞の比率を測定した。 このとき、 2次抗体のみを反 応させたものを免疫染色法のコントロールとし、 この群で陽性細胞率が約 1 %となるようにゲート （図 5— 2における P 1 ) を設定し、 TG F— 阻 害剤投与群と非投与群でリン酸化 Sma d 2陽性細胞の比率を測定した。 結果：
コントロール群では 35. 7%の細胞がリン酸化 Sma d 2陽性なのに対 し、 L Y投与群では 1 6. 3 %が陽性と S m a d 2リン酸化の抑制を確認し た。 1一 3および 1一 4より、 L Y 1 m gZk gの投与量でも血管壁及び血 球細胞においては TG F— シグナルの抑制が見られることが示唆された (図 5 - 2参照） 。
3 -5. Sma d 4欠失塍臓腺癌細胞 （ B x P C 3 ) —高分子製剤 （ドキシ ルおよびミセルァドリアマイシン） 一組織内分布
方法：
Sma d 4欠失塍臓腺癌細胞 （B X P C 3) 5 x 1 06個を 4週齢ォスヌ 一ドマウスの腹壁皮下に注射し、 滕臓腺癌の異所移植モデルとして、 移植約 2週間経過し癌細胞塊が増殖期に入ったものを実験に用いた。 高分子製剤と して、 アドリアマイシン （以下 ADR) 内包型リボソーム製剤であるドキシ ル 8m gZk gおよび低 p H応答性開裂結合を含む P EG化ァドリアマイシ ン （以下、 M i c e l l e— ADRという） （Ba e、 Y. e t a に , B i o c o n j u g a t e Ch em. 1 6, 1 22- 1 30 (2005) 参照） 8mgZk gを、 動物を犠牲にする 24時間前に経尾静脈投与した。 また、 LY 1 mgZk gまたはコントロールを 1回、 同時に腹腔内投与した。 動物を犠牲にして腫瘍塊を摘出し （ ί ) 凍結標本を作成し、 また （ i ί ) 組 織片中に含まれる ADR総量を H P LC法により定量化した。 （ i ) による 凍結切片では、 A DRの自家蛍光を利用し、 共焦点顕微鏡を用いて A DRの 組織中の分布を観察した。 なおこの際、 リボソームに内包された ADRは自 家蛍光を持つ一方、 P EGを結合した A D Rは P EGの遮蔽効果により自家 蛍光を有さず、 細胞内の低 p H環境に取り込まれて解離した ADRのみ自家 蛍光を有することに留意した。
結果：
( i ) 自家蛍光による組織中 （図 6— 1中 Tは腫瘍細胞塊、 その他の部位 は、 がん間質） の分布を観察すると投与 24時間後のドキシルの分布は主に 血管周囲の間質部分にあることが判明した。 TG F— ;5 阻害剤存在下では 分布がより広範囲にわたった （図 6 - 1参照） 。 （ i ί ) H P LC法により 相対分布量はコントロールで 1. 00±0. 1 5であるのに対し、 TG F— 阻害剤存在下では 2. 1 8±0. 40であった （p = 0. 01 5) (図 6 - 2参照） 。
次に、 M i c e l I e— ADRと LYとの併用条件では （ ί ) 顕著に癌細 胞における A DRの放出が高まり、 腫瘍細胞群内にまんべんなく分布してい ることが確認された。 M i c e I I e— ADR単独投与条件では間質細胞と 腫瘍塊のごく外縁においてのみ A DRが放出されていた。 これは M i c e I I e— ADRが間質に主に分布し、 腫瘍細胞へ到達していないことが原因と 考えられた （図 6— 1参照） 。 （ i i ) HP LC法による ADR総量も、 L Y+M i c e l l e— ADR群で単独投与群に比べ有意に高いことが示され た （P = 0. 004) (図 6 - 2参照） 。
3-6. Sma d 4欠失滕臓腺癌細胞 （B x P C 3) —ドキシル一 M i c e I I e— ADR— TG F— 阻害剤 増殖曲線
方法：
Sma d 4欠失膝臓腺癌細胞 （B X PC3) 5 x 1 06個を 4週齢ォスヌ 一ドマウスの腹壁皮下に注射し、 滕臓腺癌の異所移植モデルとして、 移植約 2 週間経過し癌細胞塊が増殖期に入ったものを実験に用いた。 抗癌剤として、 ドキシル 8mgZk g、 M i c e l i e— ADR 8mg/k gまたは通常 の ADR 8mgZk gまたは抗癌剤なし、 いずれも経尾静脈投与、 1回の み投与を行った。 TG F— ;8 阻害剤としては L Y 364947 (以下 LY、 図中 I n h i b) 1 mg/k gまたはコントロールを抗癌剤投与と同時に 1 回のみ腹腔内投与を行った。 以上 4 X 2種を組み合わせた 8条件に関し、 各 n = 5で実験を行った。 これらの動物につき、 1 4日間腫瘍体積近似値を継 続的に観察した。 腫瘍体積は腫瘍塊の長辺 X (短辺） 2で近似したものを、 各腫瘍塊の投与開始時体積を 1 として比較した。
結果：
最終日において、 コントロール群 4. 77±0. 50、 TG F— ^ 阻害 剤単独群 4. 83±0. 54、 ADR単独群 4. 70±0. 32、 TG F— ^ 阻害剤 · ADR併用群 4. 24±0. 1 2、 ドキシル単独群 3. 96土 0. 43、 TG F— 阻害剤 ' ドキシル併用群 2. 79±0. 28、 高分 子ミセル単独群 4. 1 6±0. 29、 TG F— ^ 阻害剤 '高分子ミセル併 用群 2. 08±0. 20、 であった。 これらのうち、 MANOVA法による 検定で有意に差のある群は、 TG F— ^ 阻害剤■ ドキシル併用群 （コント ロール群に対して p = 0. 01 フ） 、 TG F— ^ 阻害剤 '高分子ミセル併 用群 （コントロール群に対して p = 0. 0003) の二群のみであり、 ドキ シル ·高分子ミセルとも単独投与では有意な効果は見られなかった。 経過を 図 7のグラフに示す。
3—フ. Sma d 4欠失睦臓腺癌細胞 （B x PC3) —高分子ミセル一 LY 増殖曲線
方法：
Sma d 4欠失膝臓腺癌細胞 （B X PC 3〉 5 x 1 06個を 4週齢ォスヌ 一ドマウスの腹壁皮下に注射し、 fl萃臓腺癌の異所移植モデルとして、 移植約 2週間経過し癌細胞塊が増殖期に入ったものを実験に用いた。 抗癌剤として M i c e I I e-ADR 1 6 m g / k gまたは ADR8mgZk gまたは抗 癌剤なし、 についていずれも経尾静脈投与を 4日おき 3回行った。 TG F— ^ 阻害剤としてし Y 364947 (以下、 し Yという） I mgZk gまた はコントロール週 3回腹腔内投与。 以上 3 X 2種を組み合わせた 6条件に関 し、 各 n = 5で実験を行った。 これらの動物につき、 1 6日間腫瘍体積近似 値を継続的に観察した。 腫瘍体積は腫瘍塊の長辺 X (短辺)2で近似したもの を、 各腫瘍塊の投与開始時体積を 1として比較した。 また最終日に動物を犠 牲にして腫瘍塊を摘出し、 組織学的検索を行った。
結果： 最終日において、 コントロール群が 4. 69 ±0. 46、 L Y単独群が 4. 34± 0. 37、 A D R単独群が 3. 49 ±0. 20、 M i c e l i e— A D R単独群が 3. 05±0. 47、 L Y + AD R併用群が 3. 49±0. 3 2、 L Y+M i c e I I e— A D R併用群が 1 . 06 ±0. 1 3であった (ここで、 M ί c e I I e -A D R単独群に対する L Y+M i c e I I e - A D R併用群の差の検定： P = 0. 0005) 。 経過を図 8のグラフに示す。 3 - 8. M I A P a C a— 2—ミセルーし Y、 腫瘍増殖曲線
方法：
T G F b R I I変異滕臓腺癌細胞株 M I A P a C a -2 (A T CC N o. C R L— 1 420) を用いる他は 3—フと同一の処理を行った。
結果：
最終日 （1 6日目） において、 コントロール群 2. 9 1 ±0. 30、 L Y 単独投与群 2. 7 5 ±0. 08、 AD R単独投与群 0. 8 7 ±0. 1 9、 M ί c e I I e— A DR単独投与群 0. 9 1 ±0. 1 0、 L Y + A D R併用群 1. 4 5 ±0. 1 1、 し Y+Μ ί c e l l e— A D R併用群 0. 46±0. 1 4であった （ここで、 し Y + M ί c e I I e— A D R併用群の差の検定： P = 0. 0003) 。 経過を図 9のグラフに示す。
3 - 9. M I A P a C a— 2—ミセルー L丫、 薬物腫瘍内動態
方法：
T G F b R I I変異滕臓腺癌細胞株 M I A P a C a ~ 2を用いる他は 3 一 2と同一の処理を行った。 腫瘍塊のみを検索した。
結果：
A D R自家蛍光の観察により、 L Y+M i c e I I e— A D R併用の場合 に限り、 腫瘍細胞への A D R取り込みが増加することが観察された （図 1 0 - 1参照） 。 このことは、 TGF— シグナル阻害剤の血管新生に対する 影響が、 癌の種類によらず一定であることを強く示唆する。 さらに、 HP L C法による定量の結果、 LY + Μ ί c e I I e— A D R併用群での A D R蓄 積総量が、 他群に比べて有意に （p = 0. 0007) 高いことが示された (図 1 0 - 2参照） 。
3- 1 0. M I AP a C a— 2肝転移巣一ミセルー L丫、 薬物腫瘍内動態 方法：
TG F b R I I変異滕臓腺癌細胞株 M I A P a C a - 2を用いてまずヌ ―ドマウスで皮下腫瘍を生成させ、 これをさらに別のヌードマウスの滕臓に 移植し、 4週間経過したものを用いた。 他は 3— 7と同一の処理を行った。 腫瘍塊および周囲の肝組織のみを検索した。
結果：
A DR自家蛍光の観察により、 し Y+M i c e l l e— ADR併用の場合 に限リ、 転移腫瘍細胞塊への A D R取り込みが増加することが観察された (図 1 1参照） 。
3- . OCUM— 2MLNリンパ節転移巣一ミセルー L Y、 転移抑制効 果
方法：
スキルス胃癌細胞株 O CUM— 2MLNをヌードマウスの胃壁に注入し、 2週間後よリスキルス胃癌同所移植モデルとして用いた。 抗癌剤として M i c e l l e— ADR 1 6mgノ k gまたは抗癌剤なし、 についていずれも経 尾静脈投与を 4日おき 3回行った。 TGF— /S 阻害剤として LY 1 mg/ k gまたはコントロール週 3回腹腔内投与を行った。 1 6日目に動物を犠牲 にし、 転移リンパ節の総重量を測定した。 結果：
TG 阻害剤■ ミセル併用投与群で転移リンパ節総重量がもつとも抑 制された （図 1 2参照） 。
3- 1 2. B x PC3—ミセルー T b R I I— F c、 薬物腫瘍内動態 方法：
上記 3— 1と同一の系において、 丁 G F— S 阻害剤として T b R I I - F c (R&D社） を腹腔内投与で用いた。 用量は、 非特許文献 1 2において 線維化を抑制しないと報告された 2. 5mgZk gを用いた （今回使用して いる L Yの用量では線維化の抑制が有意には認められないため、 同等の量と 考え設定した） 。 併用する抗癌剤は M i c e I I e— ADRの 8mgZk g のみとした。 腫瘍塊のみを検索した。
結果：
A D R自家蛍光の観察によリ、 3— 2の L Y併用で見られたのと同様の効 果を、 自家蛍光観察法、 HP LC法双方において認めた （図 1 3— 1 (a) ， (b) 及び図 1 3— 2 (a) 参照） 。
3- 1 3. B X PC3—ミセルー抗 VEG F抗体、 薬物腫瘍内動態
方法：
3-1と同一の系において、 同じく新生血管に作用するが TG F— シ グナル阻害剤とは作用機構が全く別種であり新生血管を退縮または正常化さ せることで血管新生を阻害する薬剤として抗 V EG F抗体 （R&D社） を 2. 5mgZk g腹腔内投与で用いた。 併用する抗癌剤は M ί c e I I e-AD Rの 8mgZk gのみとした。 腫瘍塊のみを検索した。
結果： ADR自家蛍光の観察により、 TG F— ^ シグナル阻害剤併用の場合と 異なリ、 抗 V E G F抗体を併用した場合は腫瘍細胞への取リ込みは同抗体併 用群もコントロール群もほぼ観察されなかった。 また、 H P LC法にょリ定 量すると、 抗 V EG F抗体併用群とコントロール群も間に有意な差は認めら れなかった。 このことは、 TG F— 8 シグナル阻害による新生血管漏出性 亢進の機構が、 特に高分子抗腫瘍剤に併用する場合に、 既存の血管新生阻害 法である血管退縮または正常化の機構との併用に比べて、 明らかに勝ること を示唆する （図 1 3 - 1 (C) 、 (D) 及び図 1 3— 2 (b) 参照） 。
3- 1 . ミセルー LY、 薬物体内動態
担癌ヌードマウスに対し、 抗癌剤として M i c e I l e— ADRを 8mg Zk gまたは ADRを 8mgZk g、 いずれも経尾静脈投与した。 TG F— β 阻害剤として LYを 1 mgZk gまたはコントロールを腹腔内投与した。 以上の 2X 2種を組み合わせた 4条件に関し、 各 n = 3で実験を行った。 投 与に 4時間後にこれらの動物を犠牲にし、 血液■心臓 ·肝臓■脾臓■腎臓を 摘出して （ i ) 凍結標本を作成し、 また （ ί ί ) 組織片中に含まれる ADR 総量を HP LC法により定量化した。 また、 薬剤を投与した尾静脈周辺を観 察した。
結果：
( i ί ) により、 M i c e I I e— ADR投与の場合、 測定した全ての臓 器において LY投与、 非投与の間に P = 0. 05以下の有意な差は認めなか つた。 （ i ) によっても LY投与 ·非投与の間に臓器内分布の明らかな差は 認められなかった。 従って正常臓器では LY投与による抗癌剤副作用の悪化 はほぼないものと推定された。 また、 LY併用投与による抗癌剤関連静脈炎 の增悪も認められなかった （図 1 4 - 1及び図 1 4一 2参照） 。 産業上の利用の可能性
本願発明によれば、 T G F— シグナル阻害剤の腫瘍組織における新生血 管を退縮させずに漏出性を高めるとの新規な作用効果の発見に基づく、 該阻 害剤の新規な医薬用途、 並びに該阻害剤と抗腫瘍活性物質または造影剤との 組み合せ使用による、 抗腫瘍活性の増強または造影剤の標的到達の選択性を 高めた系が提供される。 したがって、 製薬産業を初めとした関連する広範な 産業において、 本発明は利用できる。

Claims

請求の範囲
1. 有効成分としてトランスフォーミング增殖因子 ^ (TG F-β) シ グナル阻害剤及び製薬学的に許容され得る賦形剤を含んでなる腫瘍組織にお ける新生血管を退縮させずに漏出性を高めるための医薬製剤。
2. TG F— j8 シグナル阻害剤が、 さらに腫瘍内線維成分の減少もさせ る請求項 1記載の医薬製剤。
3. 腫瘍組織における新生血管を退縮させずに漏出性を高め、 場合によつ て腫瘍内線維成分を減少させる、 ことが癌細胞への薬物のデリ くリ一能を増 進させる請求項 1記載の医薬製剤。
4. TG F-β シグナル阻害剤が、 可溶性 T G F— β Ι型受容体、 可溶 性丁 G F— I I型受容体、 可溶性 TG F— /3 I I I型受容体、 抗 TG F— 抗体、 抗 TG F— ^ I型受容体抗体、 抗 TG F— ^ I I型受容体抗体、 抗 TG F— iS I I I型受容体抗体及び TG F— ^ アンチセンスオリゴヌク レオチドもしくは s i RN Aからなる群より選ばれる請求項 1記載の医薬製 剤。
5. TG F-β シグナル阻害剤が、 TG F— I型受容体キナーゼイン ヒビタ一及び TG F— ) 8 I I型受容体キナーゼインヒビターからなる群より 選ばれる請求項 1記載の医薬製剤。
6. TG F-yS I型受容体キナーゼインヒビター及び TG F— 3 I I型受 容体キナーゼインヒビターが、 ジヒドロピロロピラゾールをベースとするス 力ホールド、 イミダゾ一ルをベースとするスカホールド、 ピラゾ口ピリジン をベースとするスカホールド、 ピラゾールをベースとするスカホ一ルド、 ィ ミダゾピリジンをベースとするスカホールド、 卜リアゾ一ルをベースとする スカホールド、 ピリ ドピリミジンをべ一スとするスカホ一ルド、 ピロロビラ ゾ一ルをベースとするスカホールド及びィソチアゾ一ルをベースとするスカ ホールドからなる群より選ばれる低分子量化合物である請求項 5記載の医薬 製剤。
7 . 腫瘍が、 間質成分が多いか、 または乏新生血管性の組織型であるため に化学療法抵抗性とされる腫瘍群から選ばれるか、 または難治性消化器腫瘍、 難治性軟部組織腫瘍及び線維化の進んだ乳癌からなる群よリ選ばれる請求項 1記載の医薬製剤。
8 . 有効成分としての T G F— ^ シグナル阻害剤と、 有効成分としての 抗腫瘍活性物質とを組み合わせたことを特徴とする腫瘍の処置用組み合せ物。
9 . 有効成分としての T G F— ^ シグナル阻害剤と、 有効成分としての 抗腫瘍活性物質とを組み合わせたことを特徴とする腫瘍の処置用組み合せ物 であって、 抗腫瘍活性物質が、 腫瘍細胞もしくは腫瘍組織へのデリバリー能 を改善すベく改変された抗腫瘍活性物質である、 上記組み合せ物。
1 0 . 改変された抗腫瘍活性物質が、 高分子量キヤリヤーと抗腫瘍活性物 質のコンジユゲー卜の形態にあるか、 または抗腫瘍活性物質がリボソームも しくはデンドリマーもしくは高分子ミセルに内包された形態にあることを特 徴とする請求項 9記載の組み合せ物。
1 1 . 改変された抗腫瘍活性物質が、 高分子量キヤリヤーと抗腫瘍活性物 質のコンジユゲー卜であり、 かつ、 カチオン荷電性ポリマーもしくはカチォ ン荷電性ポリマーセグメントを担持する重合体もしくは共重合体とオリゴも しくはポリヌクレオチドそれ自体もしくはその誘導体のコンプレックス、 及 び抗体と抗腫瘍活性物質との生体内開裂性ヒ ドラゾン結合もしくはジスルヒ ド結合を介して結合したコンジユゲー卜からなる群より選ばれる請求項 9記 載の組み合せ物。
1 2. 抗腫瘍性活性物質が、 癌遺伝子の発現を抑制するかもしくは癌抑制 遺伝子を発現するように機能するォリゴもしくはポリヌクレオチド及びその 誘導体、 代謝拮抗薬、 アルキル化薬、 白金製剤、 抗生物質、 植物成分抽出物、 並びに放射性核種もしくは物質からなる群よリ選ばれる請求項 8記載の組み 合せ物。
1 3 . 抗腫瘍性活性物質が、 癌遺伝子の発現を抑制するかもしくは癌抑制 遺伝子を発現するように機能するオリゴもしくはポリヌクレオチド及びその 誘導体、 代謝拮抗薬、 アルキル化薬、 白金製剤、 抗生物質、 植物成分抽出物、 並びに放射性核種もしくは物質からなる群よリ選ばれる請求項 9記載の組み 合せ物。
1 4. リボソームが、 ポリカチォニックリピイドから形成され、 そして高 分子ミセルが、 親水性ポリマー鎖セグメントと疎水性ポリマー鎖セグメン卜 を含んでなるブロック共重合体及び親水性ポリマー鎖セグメン卜と荷電性ポ リマーセグメントを含んでなるブロック共重合体からなる群より選ばれるキ ャリヤーから形成されることを特徴とする請求項 1 0記載の組み合せ物。
1 5 . 親水性ポリマー鎖セグメントが、 ポリ （エチレングリコール） に由 来し、 疎水性ポリマー鎖セグメントが、 ポリ （疎水性アミノ酸） 、 ポリ （ァ スパラギン酸エステル） 及びポリ （グルタミン酸エステル） 、 ポリ （ラクチ ド） 、 ポリ（ラク トン)及びこれらの共重合体からなる群より選ばれる重合体 に由来し、 荷電性ポリマ一セグメントがポリ （グルタミン酸） 、 ポリ （ァス パラギン酸） 、 ポリ （リジン） 、 ポリ （ （メタ） アクリル酸 N， N—ジァ ルキルアミノアルキル） 及びポリ （エチレンィミン） からなる群より選ばれ る重合体に由来する請求項 1 4記載の組み合せ物。
1 6. T G F-β シグナル阻害剤が、 可溶性 TG F— ^ I型受容体、 可 溶性 T G F— I I型受容体、 可溶性 T G F-/3 I I I型受容体、 抗 T G F -β 抗体、 抗 TG F— I型受容体抗体、 抗 TG F— ^ I I型受容体抗体、 抗 — I I I型受容体抗体及び TG F— アンチセンスオリゴヌク レオチドからなる群より選ばれる請求項 8記載の組み合せ物。
1 7. T G F-y5 シグナル阻害剤が、 可溶性 TG F— ;3 I型受容体、 可 溶性 TG F— ^ I I型受容体、 可溶性 TG F— ^ I I I型受容体、 抗 TG F -β 抗体、 抗 TG F— I型受容体抗体、 抗 TG F— ^ I I型受容体抗体、 抗 TG F— yS I I I型受容体抗体及び TG F— j8 アンチセンスオリゴヌク レオチドからなる群より選ばれる請求項 9記載の組み合せ物。
1 8. T G F— /5 シグナル阻害剤が、 TG F— I型受容体キナーゼィ ンヒビター及び TG F— I I型受容体キナーゼインヒビターからなる群よ リ選ばれる請求項 8記載の組み合せ物。
1 9. T G シグナル阻害剤が、 T G F— I型受容体キナーゼィ ンヒビター及び TG F— I I型受容体キナーゼインヒビタ一からなる群よ り選ばれる請求項 9記載の組み合せ物。
20. TG F— ^ I型受容体キナーゼインヒビター及び TG F— I I型 受容体キナーゼインヒビターが、 ジヒドロピロロピラゾールをベースとする スカホールド、 イミダゾールをベースとするスカホールド、 ピラゾ口ピリジ ンをベースとするスカホールド、 ピラゾールをベースとするスカホールド、 イミダゾピリジンをベースとするスカホールド、 卜リアゾールをベースとす るスカホ一ルド、 ピリ ドピリミジンをベースとするスカホールド、 ピロロピ ラゾールをベースとするスカホールド及びィソチアゾールをベースとするス 力ホールドからなる群より選ばれる低分子量化合物である請求項 1 8記載の 組み合せ物。
2 1 . T G F - β 1型受容体キナーゼインヒビター及び T G F - β I I型 受容体キナーゼインヒビターが、 ジヒドロピロロピラゾールをベースとする スカホールド、 イミダゾ一ルをベースとするスカホールド、 ピラゾ口ピリジ ンをベースとするスカホールド、 ピラゾールをベースとするスカホールド、 イミダゾピリジンをベースとするスカホールド、 トリァゾールをベースとす るスカホールド、 ピリ ドピリミジンをベースとするスカホールド、 ピロロピ ラゾールをベースとするスカホールド及びィソチアゾ一ルをベースとするス 力ホールドからなる群より選ばれる低分子量化合物である請求項 1 9記載の 組み合せ物。
2 2 . 処置される腫瘍が、 間質成分が多いか、 または乏新生血管性の組織 型であるために化学療法抵抗性とされる腫瘍群から選ばれる請求項 8記載の 組み合せ物。
2 3 . 処置される腫瘍が、 間質成分が多いか、 または乏新生血管性の組織 型であるために化学療法抵抗性とされる腫瘍群から選ばれる請求項 9記載の 組み合せ物。
2 4 . 処置される腫瘍が、 難治性消化器腫瘍、 難治性軟部組織腫瘍及び線 維化の亢進した乳癌からなる群よリ選ばれる請求項 8記載の組み合せ物。
2 5 . 処置される腫瘍が、 難治性消化器腫瘍、 難治性軟部組織腫瘍及び線 維化の亢進した乳癌からなる群よリ選ばれる請求項 9記載の組み合せ物。
2 6 . 有効成分として T G F— シグナル阻害剤を含有する医薬製剤及 び有効成分として抗腫瘍活性物質を含有する医薬製剤を含んでなる腫瘍の処 置用キッ卜。
27. 有効成分として TG F— ^ シグナル阻害剤を含有する医薬製剤及 び有効成分として抗腫瘍活性物質を含有する医薬製剤を含んでなる腫瘍の処 置用キットであって、 抗腫瘍活性物質が、 腫瘍細胞もしくは腫瘍組織へのデ リバリー能を改善すべく改変されている上記キッ卜。
28. TG F— /S シグナル阻害剤を含有する医薬製剤が静脈注入用剤、 腫瘍内注入用剤及び皮下注入用剤からなる群よリ選ばれ、 抗腫瘍活性物質を 含有する医薬製剤が静脈注入用剤、 腫瘍内注入用剤、 皮下注入用剤， 経口用 剤及び直腸注入用剤からなる群より選ばれる請求項 26記載のキッ ト。
29. TG F-β シグナル阻害剤を含有する医薬製剤が静脈注入用剤、 腫瘍内注入用剤及び皮下注入用剤からなる群より選ばれ、 改変されている抗 腫瘍活性物質を含有する医薬製剤が静脈注入用剤、 腫瘍内注入用剤、 皮下注 入用剤， 経口用剤及び直腸注入用剤からなる群より選ばれる請求項 27記載 のキッ卜。
30. TG F-β シグナル阻害剤が、 可溶性 TG F— ^ I型受容体、 可溶 性 TG F— ^ I I型受容体、 可溶性 TG F— I I I型受容体、 抗 TG F— β 抗体、 抗 TG F— I型受容体抗体、 抗 TG F— I I型受容体抗体、 抗 TG F— S l I I型受容体抗体、 TG F— アンチセンスオリゴヌクレ ォチド、 TG F— yS I型受容体キナーゼインヒビター及び TG F— ^ I I型 受容体キナーゼィンヒビターからなる群よリ選ばれる請求項 26記載のキッ ト。
3 1. TG F-β シグナル阻害剤が、 可溶性 TG F— ^ I型受容体、 可溶 性 TG F— I I型受容体、 可溶性 TG F— ^ I 1 I型受容体、 抗 TG F— β 抗体、 抗 TG F— ^ I型受容体抗体、 抗 TG F— ^ I I型受容体抗体、 抗 TG F— S l I I型受容体抗体、 TG F— ^ アンチセンスオリゴヌクレ ォチド、 T G F— ^ I型受容体キナーゼインヒビター及び T G F— ^ I I型 受容体キナーゼィンヒビターからなる群よリ選ばれる請求項 2 7記載のキッ 卜 Q
3 2 . T G F— /5 I型受容体キナーゼインヒビター及び T G F— ;8 I I型 受容体キナーゼインヒビターが、 ジヒ ドロピロロピラゾールをベースとする スカホールド、 イミダゾールをベースとするスカホールド、 ピラゾ口ピリジ ンをベースとするスカホールド、 ピラゾールをベースとするスカホールド、 ィミダゾピリジンをベースとするスカホールド、 トリアゾールをベースとす るスカホ一ルド、 ピリ ドピリミジンをベースとするスカホールド、 ピロロピ ラゾールをベースとするスカホールド及びィソチアゾ一ルをベースとするス 力ホールドからなる群より選ばれる低分子量化合物である請求項 3 0記載の キット。
3 3 . T G F— S I型受容体キナーゼインヒビター及び T G F— ^ I I型 受容体キナーゼインヒビターが、 ジヒ ドロピロロピラゾールをベースとする スカホールド、 イミダゾールをベースとするスカホールド、 ピラゾ口ピリジ ンをベースとするスカホールド、 ピラゾールをベースとするスカホールド、 イミダゾピリジンをベースとするスカホールド、 トリァゾールをベースとす るスカホールド、 ピリ ドピリミジンをベースとするスカホールド、 ピロロピ ラゾールをベースとするスカホールド及びイソチアゾールをベースとするス 力ホールドからなる群より選ばれる低分子量化合物である請求項 3 1記載の キッ ト。
3 4 . 有効成分としての T G F— 3 シグナル阻害剤と、 有効成分として の造影剤とを組み合わせたことを特徴とする造影用組み合せ物。
35. 造影剤が、 腫瘍細胞もしくは腫瘍組織へのデリバリー能を改善すベ く改変された造影剤である、 請求項 34記載の組み合せ物。
36. 改変された造影剤が、 高分子量キヤリャ一と抗腫瘍活性物質のコン ジユゲー卜の形態にあるか、 または造影剤がリポソームもしくはデンドリマ —もしくは高分子ミセルに内包された形態にあることを特徴とする請求項 3 5記載の組み合せ物。
37. 個体 （s u b j e c t ) の腫瘍組織における新生血管を退縮させず に漏出性を高める方法であって、 該新生血管を退縮させずに漏出性を高める ことが必要な個体に治療有効量のトランスフォーミング増殖因子 β (TG F- 5) シグナル阻害剤を投与することを含んでなる、上記方法。
38. 個体における腫瘍の治療方法であって、 該治療を必要とする個体に TG F-β シグナル阻害剤と、 抗腫瘍活性物質を、同時に、 もしくはそれぞ れ時期を異にして前後に、 投与することを含んでなる、 上記治療方法。
39. 個体における腫瘍の治療方法であって、 該治療を必要とする個体に 丁 G F— シグナル阻害剤と、 抗腫瘍活性物質であって、 腫瘍細胞もしく は腫瘍組織へのデリバリー能を改善すべく改変された抗腫瘍活性物質を、同 時に、 もしくはそれぞれ時期を異にして前後に、 投与することを含んでなる、 上記治療方法。
40. 個体の腫瘍組織の造影方法であって、 該造影を必要とする個体に TG F-β シグナル阻害剤と、 造影剤であって、 腫瘍細胞もしくは腫瘍組 織へのデリバリー能を改善すべく改変された造影剤を、同時に、 もしくはそ れぞれ時期を異にして前後に、 投与することを含んでなる、 上記造影方法。
4 1. 個体 （s U b j e c t ) の腫瘍組織における新生血管を退縮させず に漏出性を高めるための医薬製剤を調製する際のトランスフォーミング増殖 因子 3 (T G F-β ) シグナル阻害剤の使用。
4 2. 個体における腫瘍の治療用の医薬製剤を調製する際の T G F— 3 シグナル阻害剤と、 抗腫瘍活性物質の組み合せ物の使用。
43. 個体における腫瘍の治療用の医薬製剤を調製する際の T G F— ^ シグナル阻害剤と、 抗腫瘍活性物質であって、 腫瘍細胞もしくは腫瘍組織へ のデリバリー能を改善すべく改変された抗腫瘍活性物質の組み合せ物の使用。
44. 個体の腫瘍組織の造影用の造影組成物を調製する際の TG F— シグナル阻害剤と、 造影剤の組み合せ物の使用。
45. 個体の腫瘍組織の造影用の造影組成物を調製する際の T G F— ^ シグナル阻害剤と、 造影剤であって、 腫瘍細胞もしくは腫瘍組織へのデリバ リー能を改善すべく改変された造影剤の組み合せ物の使用。
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Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2012508170A (ja) * 2008-11-07 2012-04-05 イムクローン・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー 抗ｔｇｆベータ受容体ｉｉ抗体
JP2012523819A (ja) * 2009-04-20 2012-10-11 国立大学法人 東京大学 Ｈｔｒａ１変異と家族性虚血性脳小血管病との関連
JP2013500313A (ja) * 2009-07-30 2013-01-07 アンチセンス・ファーマ・ゲーエムベーハー 化学療法薬およびＴＧＦ−β系の阻害剤の組合せ
WO2016024628A1 (ja) * 2014-08-14 2016-02-18 学校法人東京医科大学 樹状細胞の抗癌免疫賦活能の促進方法およびその用途
WO2016210292A1 (en) 2015-06-25 2016-12-29 Children's Medical Center Corporation Methods and compositions relating to hematopoietic stem cell expansion, enrichment, and maintenance
WO2017161001A1 (en) 2016-03-15 2017-09-21 Children's Medical Center Corporation Methods and compositions relating to hematopoietic stem cell expansion

Families Citing this family (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2009225665B9 (en) 2008-03-17 2015-01-15 The Scripps Research Institute Combined chemical and genetic approaches for generation of induced pluripotent stem cells
EP2154167A1 (de) * 2008-07-30 2010-02-17 Bayer MaterialScience AG Elektromechanischer Wandler mit einem Polymerelement auf Polyisocyanat-Basis
CN102317442B (zh) 2008-12-17 2014-08-13 斯克里普斯研究所 干细胞的产生和保持
WO2011047300A1 (en) 2009-10-16 2011-04-21 The Scripps Research Institute Induction of pluripotent cells
AU2011235212B2 (en) 2010-03-31 2014-07-31 The Scripps Research Institute Reprogramming cells
EP2580320B1 (en) 2010-06-14 2018-08-01 The Scripps Research Institute Reprogramming of cells to a new fate
CN103380212B (zh) 2010-12-22 2017-04-05 菲特治疗公司 用于单细胞分选与增强ipsc重新编程的细胞培养平台
AU2014256876B2 (en) 2013-04-26 2020-11-12 Cornell, University Cortical interneurons and other neuronal cells produced by the directed differentiation of pluripotent and multipotent cells
EP3008170A4 (en) 2013-06-11 2016-11-09 Harvard College SC-CELLS AND COMPOSITIONS AND METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF
KR102460549B1 (ko) 2014-03-04 2022-10-28 페이트 세러퓨틱스, 인코포레이티드 개선된 재프로그래밍 방법 및 세포 배양 플랫폼
US10023879B2 (en) 2014-06-04 2018-07-17 Fate Therapeutics, Inc. Minimal volume reprogramming of mononuclear cells
CN107429230B (zh) 2015-01-26 2021-11-12 菲特治疗公司 用于诱导造血细胞分化的方法和组合物
SG11201802957PA (en) 2015-10-16 2018-05-30 Fate Therapeutics Inc Platform for the induction & maintenance of ground state pluripotency
CA3003152A1 (en) 2015-11-04 2017-05-11 Fate Therapeutics, Inc. Methods and compositions for inducing hematopoietic cell differentiation
CN115806940A (zh) 2015-11-04 2023-03-17 菲特治疗公司 多能细胞的基因组工程改造
KR20180103816A (ko) * 2016-02-09 2018-09-19 오토텔릭 엘엘씨 췌장암을 치료하기 위한 조성물과 방법
US9758786B2 (en) 2016-02-09 2017-09-12 Autotelic, Llc Compositions and methods for treating pancreatic cancer
KR20180103817A (ko) * 2016-02-09 2018-09-19 오토텔릭 엘엘씨 암을 치료하기 위한 조성물과 방법
AU2018370029A1 (en) 2017-11-15 2020-07-02 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Islet cell manufacturing compositions and methods of use
AU2019320072A1 (en) 2018-08-10 2021-02-25 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Stem cell derived islet differentiation
JP2022539169A (ja) 2019-06-25 2022-09-07 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド ベータ細胞の分化の向上
WO2023077140A2 (en) 2021-11-01 2023-05-04 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Stem cell derived pancreatic islet differentiation

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE19613691A1 (de) * 1996-04-05 1997-10-09 Boehringer Ingelheim Int Arzneimittel für die Behandlung von Tumorerkrankungen
ATE330619T1 (de) * 2000-09-26 2006-07-15 Toudai Tlo Ltd Polymere mizelle mit darin eingeschlossenem cisplatin und ihre verwendung
US6649588B1 (en) * 2000-10-05 2003-11-18 North Shore - Long Island Jewish Research Institute Inhibition of TGF-β and uses thereof
JP4871732B2 (ja) * 2003-12-19 2012-02-08 アンティセンス ファルマ ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 医薬組成物
US8697031B2 (en) * 2004-06-04 2014-04-15 Case Western Reserve University Dual function polymer micelles

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
FLAVIO CURNIS ET AL.: "Improving chemotherapeutic drug penetration in tumors by vascular targeting and barrier alteration", J. CLIN. INVEST., vol. 110, no. 4, 2002, pages 475 - 482, XP003016187 *
GEORGE J. ET AL.: "In vivo inhibition of rat stellate cell activation by soluble transforming growh factorbeta type II receptor: a potential new therapy for hepatic fibrosis", PROC. NATL. ACAD. SCI. USA, vol. 96, no. 22, 1999, pages 12719 - 12724, XP003016189 *
GOUMANS G.-J. ET AL.: "Balancing the activation state of the endothelium via two distinct TGF-beta type I receptors", EMBO J., vol. 21, no. 7, 2002, pages 1743 - 1753, XP003016185 *
HALDER S.K. ET AL.: "A specific inhibitor of TGF-beta receptor kinase, SB-431542, as a potent antitumor agent for human cancers", NEOPLASIA, vol. 7, no. 5, 2005, pages 509 - 521, XP003016186 *
KHAWLI L.A. ET AL.: "NHS76/PEP2, a fully human vasopermeability-enhancing agent to increase the uptake and efficacy of cancer chemotherapy", CLIN. CANCER RES., vol. 11, no. 8, 2005, pages 3084 - 3093, XP003016188 *
See also references of EP1992360A4 *
TETSUO WATABE ET AL.: "TGF-beta reeptor kinase inhibitor enhances growth and integrity of embryonic stem cell-derived endothelial cells", J. CELL BIOL., vol. 163, no. 6, 2003, pages 1303 - 1311, XP003016184 *

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2012508170A (ja) * 2008-11-07 2012-04-05 イムクローン・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー 抗ｔｇｆベータ受容体ｉｉ抗体
JP2012523819A (ja) * 2009-04-20 2012-10-11 国立大学法人 東京大学 Ｈｔｒａ１変異と家族性虚血性脳小血管病との関連
US9567637B2 (en) 2009-04-20 2017-02-14 The University Of Tokyo Association of HTRA1 mutations and familial ischemic cerebral small-vessel disease
JP2013500313A (ja) * 2009-07-30 2013-01-07 アンチセンス・ファーマ・ゲーエムベーハー 化学療法薬およびＴＧＦ−β系の阻害剤の組合せ
WO2016024628A1 (ja) * 2014-08-14 2016-02-18 学校法人東京医科大学 樹状細胞の抗癌免疫賦活能の促進方法およびその用途
WO2016210292A1 (en) 2015-06-25 2016-12-29 Children's Medical Center Corporation Methods and compositions relating to hematopoietic stem cell expansion, enrichment, and maintenance
WO2017161001A1 (en) 2016-03-15 2017-09-21 Children's Medical Center Corporation Methods and compositions relating to hematopoietic stem cell expansion
EP4049665A1 (en) 2016-03-15 2022-08-31 Children's Medical Center Corporation Methods and compositions relating to hematopoietic stem cell expansion

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