JP2006523237A5 - - Google Patents

Description

ＰＩ−３キナーゼインヒビタープロドラッグ

発明の背景
１．発明の分野
本発明は、ＰＩ−キナーゼインヒビターのプロドラッグおよびこれらのインヒビターを用いる方法に関する。

２．関連技術の説明
ＰＩ−３キナーゼは、Ｄ３位のホスファチジルイノシトールをリン酸化して重要な二次メッセンジャーであるホスファチジルイノシトール３’−リン酸を生成する、大きいファミリーの脂質キナーゼである。ＰＩ−３キナーゼファミリーのメンバーは、配列相同性および酵素触媒によって形成される生成物に基づいて３つのクラスに分類される。クラスＩのＰＩ−３キナーゼは２つのサブユニットからなる：１１０ｋｄの触媒性サブユニットおよび８５ｋｄの調節性サブユニット。クラスＩのＰＩ−３キナーゼは、サイトカイン、インテグリン、増殖因子および免疫レセプターの下流の重要なシグナル伝達事象に関与しており、これによって、この経路の制御が重要な治療効果をもたらし得ることが示唆される。

クラスIのＰＩ−３キナーゼの阻害がアポトーシスを誘導し、インビボにおいて腫瘍誘
導性血管形成をブロックし、そして特定の腫瘍の放射線感受性を増大する。ＬＹ２９４００２（２−（４−モルホリニル）−８−フェニル−４Ｈ−１−ベンソピラン−４−オン）（化合物１）は、クラスＩ ＰＩ−３キナーゼの周知の特異的なインヒビターであり、そして抗癌特性を有することが実証されている。

しかし、ＬＹ２９４００２の抗癌適用は、それが水溶性を欠くこと、および薬物動態が良くないことによって厳しく制限されている。さらに、ＬＹ２９４００２は、組織特異的な特性を有さず、そして動物で急速に代謝されることが実証されている。これらの要因のせいで、ＬＹ２９４００２は頻繁な間隔で投与する必要があり、従って正常な細胞でのＰＩ−３キナーゼを阻害する能力も有し、それによって望ましくない副作用をもたらす。

改善された薬物動態および薬力学的特性を有するクラスＩのＰＩ−３キナーゼインヒビターが依然として必要である。本発明は、これらの必要性をみたし、他の関連の利点を提供する。

発明の要旨
本発明は、四級窒素の１つの結合が加水分解され、この結合の加水分解後に、式：

の化合物が得られる、四級窒素を含むプロ化合物に関しており、
ここで、
Ｒ_１およびＲ_２は独立してＨ、必要に応じて置換された脂肪族、必要に応じて置換されたアリール、ヒドロキシル、ハロゲン、アルコキシ、複素環式、シアノ、アミノであるか、または一緒になって、必要に応じて置換された脂環式もしくは必要に応じて置換されたアリールを形成し；
Ｒ_３はＨ、必要に応じて置換された脂肪族および必要に応じて置換されたアリールであり；そして
Ｒ_４およびＲ_５は独立して、Ｈ、必要に応じて置換された脂肪族、必要に応じて置換されたアリール、複素環式、アリールオキシ、カルボキシであるか、または一緒になって、必要に応じて置換された複素環式もしくは必要に応じて置換されたヘテロアリールを形成する。

このプロ化合物は、式：

の化合物であってもよく、
環Ａはベンゾであり；
Ｚ_１、およびＺ_２は独立してＳまたはＯであり；
Ｒ_１およびＲ_２は独立してＨ、必要に応じて置換された脂肪族、必要に応じて置換されたアリール、ヒドロキシル、ハロゲン、アルコキシ、複素環式、シアノ、アミノであるか、または一緒になって、必要に応じて置換された脂環式もしくは必要に応じて置換されたアリールを形成し；
Ｒ_３はＨ、必要に応じて置換された脂肪族および必要に応じて置換されたアリールであり；そして
Ｒ_４およびＲ_５は独立して、Ｈ、必要に応じて置換された脂肪族、必要に応じて置換されたアリール、複素環式、アリールオキシ、カルボキシであるか、または一緒になって、必要に応じて置換された複素環式もしくは必要に応じて置換されたヘテロアリールを形成し；
Ｒ_６は、Ｈ、必要に応じて置換された脂肪族、必要に応じて置換されたアリール、アルコキシ、カルボキシ、アミノ、複素環式、アリールオキシ、およびそこで必要に応じて置換された標的化因子であり；そして
Ｌがリンカー基である。
この標的化因子は、ビタミン、ペプチド、タンパク質、リポソーム、骨親和性剤または軟骨親和性剤であってもよい。

本発明はまた、式：

の中間化合物に関し、
ここで、
Ｘは、ハロ基、好ましくはＣｌまたはＩであり；
Ｙは、−ＣＨ_２−、−ＣＨ（ＣＨ_３）−、−ＣＨ（Ｐｈ）−、−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＯＯＨ）−またはＣＨ（ＣＨ（ＣＨ３）２）−であり；
Ｚ_１およびＺ_２は独立してＳまたはＯであり；そして
ｎ＝０〜１である。

本発明はまた、ＰＩ−３キナーゼ活性に関連する状態、炎症性疾患、加齢性黄斑変性症、変異ＰＴＥＮに伴う状態、高血圧、膵炎、潰瘍、癌の処置；白血球機能破壊；アポトーシス誘導；腫瘍細胞の化学感受性の増強；腫瘍細胞の放射線感受性の増強；腫瘍誘導性血管形成の阻害；癌以外の疾患に関連する血管形成プロセスの阻害；ステントの能力の改善；患者の細胞全体におけるホスファチジルイノシトール３キナーゼの阻害のためのプロ化合物の使用に関し、これには本発明のプロ化合物を含む組成物の有効量をその必要な患者に投与する工程を包含する。このプロ化合物は、緩徐なＩ．Ｖ．注入によって患者に投与され得る。

本発明は、前駆細胞と、本発明のプロ化合物を含む組成物の有効量とを接触させる工程を包含する、前駆細胞の分化を抑制するための方法にも関する。

本発明はまた、本発明のプロ化合物の精製に関し、これには少なくとも０．１（ｖ／ｖ）％の酸を含む溶液にプロ化合物を添加する工程を包含する。このプロ化合物を含む溶液を、好ましくはＨＰＬＣによってクロマトグラフにかけて、プロ化合物を単離する。

発明の詳細な説明
本発明の化合物、生成物および組成物、ならびに方法が開示され記載される以前には、本明細書において用いられる専門用語は、特定の実施形態を記載する目的のためだけであって、限定を意図するものではないということが理解されるべきである。本明細書および添付の特許請求の範囲において用いられる場合、単数形「１つの（ａ）、（ａｎ）」および「この、その（ｔｈｅ）」とは、文脈が明白に他を示さない限り複数の言及を包含することに注意のこと。

本出願を通じて、刊行物が言及される場合、これらの刊行物の開示はその全体が本出願に参考として援用され、本発明が属する当該分野の状況をさらに詳細に記載する。

１．定義
本明細書において用いる場合、「分枝した（ｂｒａｎｃｈｅｄ）」という用語は、１〜２４個の骨格原子を含む基であって、この基の骨格鎖が、主な鎖から１つ以上の従属する分枝を含む基をいう。本明細書における好ましい分枝した基は１〜１２個の骨格原子を含む。分枝した基の例としては、限定はしないが、イソブチル、ｔ−ブチル、イソプロピル、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ_２ＣＨ_３、−ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_２ＣＨ_３）ＣＨ_２ＣＨ_３、−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＨ_３、−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（ＣＨ_３）_３などが挙げられる。

本明細書において用いる場合、「分枝していない（ｕｎｂｒａｎｃｈｅｄ）」という用語は、１〜２４個の骨格原子を含む基であって、この基の骨格鎖が、直接の線状に伸びる基をいう。本明細書における好ましい分枝していない基は、１〜１２個の骨格原子を含む。

本明細書において用いる場合、「環状（ｃｙｃｌｉｃ）」または「シクロ（ｃｙｃｌｏ）」という用語は、単独で、または組み合わせて、１つ以上の閉じた環を有する基であって、不飽和であっても飽和であっても、３〜１２個の骨格原子、好ましくは３〜７個の骨格原子の環を有する基をいう。

本明細書において用いる場合、「低級（ｌｏｗｅｒ）」という用語は、１〜６個の骨格原子を有する基をいう。

本明細書において用いる場合、「飽和された（ｓａｔｕｒａｔｅｄ）」という用語は、その骨格原子の全ての利用可能な原子価結合が、他の原子に結合されている基をいう。飽和された基の代表的な例としては、限定はしないが、ブチル、シクロヘキシル、ピペリジンなどが挙げられる。

本明細書において用いる場合、「不飽和の（ｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ）」という用語は、２つの隣接する骨格原子の少なくとも１つの利用可能な原子価結合が、他の原子に結合されていない基をいう。不飽和基の代表的な例としては、限定はしないが、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２、フェニル、ピロールなどが挙げられる。

本明細書において用いる場合、「脂肪族（ａｌｉｐｈａｔｉｃ）」という用語は、分枝していない、分枝した、または環状の基を指し、これは置換されてもされなくてもよく、そして飽和されても飽和されなくてもよいが、ただし芳香族ではない。脂肪族という用語はさらに、脂肪族基を包含し、これは、炭化水素骨格の１つ以上の原子を置き換える、酸素、窒素、イオウまたはリン原子を含む。

本明細書において用いる場合、「芳香族（ａｒｏｍａｔｉｃ）」という用語は、置換されても置換されなくてもよいが、４ｎ＋２の非局在化π（パイ）電子を有する、不飽和環状炭化水素基を指す。芳香族という用語はさらに、炭化水素骨格の１つ以上の炭素を置換する窒素原子を含む、芳香族基を包含する。芳香族基の例としては、限定はしないが、フェニル、ナフチル、チエニル、フラニル、ピリジニル、（イソ）オキサゾイルなどが挙げられる。

本明細書において用いる場合、「置換された（ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ）」という用語は、炭素または適切なヘテロ原子を取り外して、さらなる基で置換した、１つ以上の水素または他の原子を有する基をいう。本明細書において、好ましい置換基は、１〜５個、最も好ましくは１〜３個の置換基で置換される。２つの置換基を有する原子は、「ジ（ｄｉ）」で示されるが、３つ以上の置換基を有する原子は、「ポリ（ｐｏｌｙ）」と示される。このような置換基の代表的な例としては、限定はしないが、脂肪族基、芳香族基、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アルコキシ、ハロ、アリールオキシ、カルボニル、アクリル、シアノ、アミノ、ニトロ、リン酸含有基、イオウ含有基、ヒドロキシル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アルコキシカルボニルオキシ、アリールオキシカルボニルオキシ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ジアリールアミノカルボニル、アルキルチオカルボニル、アシルアミノ、アミジノ、イミノ、アルキルチオ、アリールチオ、チオカルボキシレート、アルキルスルフィニル、トリフルオロメチル、アジド、ヘテロシクリル、アルキルアリール、ヘテロアリール、セミカルバジド、チオセミカルバジド、マレイミド、オキシミノ、イミダート、シクロアルキル、シクロアルキルカルボニル、ジアルキルアミノ、アリールシクロアルキル、アリールカルボニル、アリールアルキルカルボニル、アリールシクロアルキルカルボニル、アリールホスフィニル、アリールアルキルホスフィニル、アリールシクロアルキルホスフィニル、アリールホスホニル、アリールアルキルホスホニル、アリールシクロアルキルホスホニル、アリールスルホニル、アリールシクロアルキルスルホニル、アクリルシクロアルキルスルホニル、それらの組み合わせ、およびそれらの置換が挙げられる。

本明細書において用いる場合、「置換されていない、非置換（ｕｎｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ）」という用語は、そこに結合された、またはそれに代わって置換されたいかなるさらなる基も有さない基をいう。

単独でまたは組み合わせて本明細書において用いる場合、「アルキル」という用語は、分枝した、または分枝していない、飽和脂肪族基をいう。アルキル基の代表的な例としては、限定はしないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、オクチル、デシル、テトラデシル、ヘキサデシル、エイコシル、テトラコシルなどが挙げられる。

単独でまたは組み合わせて、本明細書において用いる場合、「アルケニル（ａｌｋｅｎｙｌ）」という用語は、鎖にそった任意の適切なポイントで生じ得る、少なくとも１つの炭素間二重結合を含む、分枝した、または未分枝の不飽和の脂肪族基を指す。アルケニル基の代表的な例としては、限定はしないが、エテニル、Ｅ−およびＺ−ペンテニル、デセニルなどが挙げられる。

単独でまたは組み合わせて本明細書において用いる場合、「アルキニル（ａｌｋｙｎｙｌ）」という用語は、鎖にそった任意の適切なポイントで生じ得る、少なくとも１つの炭素間三重結合を含む、分枝した、または未分枝の、不飽和の脂肪族基を指す。アルキニル基の代表的な例としては、限定はしないが、エチニル、プロピニル、プロパルジル、ブチニル、ヘキシニル、デシニルなどが挙げられる。

単独でまたは組み合わせて本明細書において用いる場合、「アリール（ａｒｙｌ）」という用語は、他の芳香族または非芳香族の環状基に必要に応じて縮合され得る、置換した、または置換されていない芳香族基を指す。アリール基の代表的な例としては、限定はしないが、フェニル、ベンジル、ナフチル、ベンジリジン、キシリル、スチレン、スチリル、フェネチル、フェニレン、ベンゼントリイルなどが挙げられる。

単独でまたは組み合わせて本明細書において用いる場合、「アルコキシ（ａｌｋｏｘｙ）」という用語は、単独の末端エーテル結合を通じて結合されたアルキル、アルケニルまたはアルキニル基をいう。アルコキシ基の例としては、限定はしないが、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソ−プロポキシ、ｎ−ブトキシ、２−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ｎ−ペントキシ、２−ペントキシ、３−ペントキシ、イソペントキシ、ネオペントキシ、ｎ−ヘキソキシ、２−ヘキソキシ、３−ヘキソキシ、３−メチルペントキシ、フルオロメトキシ、ジフルオロメトキシ、トリフルオロメトキシ、クロロメトキシ、ジクロロメトキシおよびトリクロロメトキシが挙げられる。

単独でまたは組み合わせて本明細書において用いる場合、「アリールオキシ（ａｒｙｌｏｘｙ）」という用語は、単独の末端エーテル結合を通じて結合されたアリール基をいう。

単独でまたは組み合わせて本明細書において用いる場合、「ハロゲン（ｈａｌｏｇｅｎ）」、「ハライド（ｈａｌｉｄｅ）」または「ハロ（ｈａｌｏ）」という用語は、フッ素「Ｆ」、塩素「Ｃｌ」、臭素「Ｂｒ」、ヨウ素「Ｉ」およびアスタチン「Ａｔ」を指す。ハロ基の代表的な例としては、限定はしないが、クロロアセトアミド、ブロモアセトアミド、ヨードアセトアミドなどが挙げられる。

組み合わせて本明細書において用いる場合、「ヘテロ（ｈｅｔｅｒｏ）」という用語は、炭素または水素以外の任意の元素の１つ以上の原子を含む基をいう。ヘテロ基の代表的な例としては、限定はしないが、窒素、酸素、イオウおよびリンを含むヘテロ原子を含む基が挙げられる。

本明細書において用いる場合、「複素環（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅ）」という用語は、ヘテロ原子を含む環状基をいう。複素環の代表的な例としては、限定はしないが、ピリジン、ピペラジン、ピリミジン、ピリダジン、ピペラジン、ピロール、ピロリジノン、ピロリジン、モルホリン、チオモルホリン、インドール、イソインドール、イミダゾール、トリアゾール、テトラゾール、フラン、ベンゾフラン、ジベンゾフラン、チオフェン、チアゾール、ベンゾチアゾール、ベンゾキサゾール、ベンゾチオフェン、キノリン、イソキノリン、アザピン、ナフトピラン、フラノベンゾピラノンなどが挙げられる。

単独でまたは組み合わせて、本明細書において用いる場合、「カルボニル（ｃａｒｂｏｎｙｌ）」または「カルボキシ（ｃａｒｂｏｘｙ）」という用語は、炭素−酸素間二重結合を含む基をいう。カルボニルを含む基の代表的な例としては、限定はしないが、アルデヒド（すなわち、ホルミル）、ケトン（すなわち、アシル）、カルボン酸（すなわち、カルボキシル）、アミド（すなわち、アミド）、イミド（ｉｍｉｄｅ）（すなわち、イミド（ｉｍｉｄｏ））、エステル、無水物などが挙げられる。

単独でまたは組み合わせて本明細書において用いる場合、「アクリル（ａｃｒｙｌ）」という用語は、Ｑが脂肪族基または芳香族基である、ＣＨ_２＝Ｃ（Ｑ）Ｃ（Ｏ）Ｏ−によって示される基をいう。

単独でまたは組み合わせて本明細書において用いる場合、「シアノ（ｃｙａｎｏ）」、「シアン酸塩（ｃｙａｎａｔｅ）」または「シアン化物（ｃｙａｎｉｄｅ）」という用語は、炭素−窒素間二重結合をいう。シアノ基の代表的な例としては限定はしないが、イソシアン酸塩、イソチオシアン酸塩などが挙げられる。

単独でまたは組み合わせて本明細書において用いる場合、「アミノ（ａｍｉｎｏ）」という用語は、骨格の窒素原子を含む基をいう。アミノ基の代表的な例としては、限定はしないがアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、ジアリールアミノ、アルキルアリールアミノ、アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、カルバモイル、ウレイドなどが挙げられる。

本明細書において用いる場合、「リン酸塩含有基（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｇｒｏｕｐ）」という用語は、酸化状態で少なくとも１つのリン原子を含む基をいう。代表的な例としては、限定はしないが、ホスホン酸、ホスフィン酸、リン酸エステル、ホスフィニデン、ホスフィノ、ホスフィニル、ホスフィニリデン、リン酸、ホスホノ、ホスホラニル、ホスホラニリデン、ホスホロソなどが挙げられる。

本明細書において用いる場合、「イオウ含有基（ｓｕｌｆｕｒ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ
ｇｒｏｕｐ）」という用語は、イオウ原子を含む基をいう。代表的な例としては限定はしないが、スルフヒドリル、スルフェノ、スルフィノ、スルフェニル、スルホ、スルホニル、チオ、チオキソなどが挙げられる。

本明細書において用いる場合、「必要に応じた（ｏｐｔｉｏｎａｌ）」または「必要に応じて（ｏｐｔｉｏｎａｌｌｙ）」という用語は、引き続いて記載される事象または状況が生じても生じなくてもよいことを意味し、そしてこの説明は、この事象または状況が生じる場合、および起こらない場合を包含する。例えば、「必要に応じて置換されたアルキル（ｏｐｔｉｏｎａｌｌｙ ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ ａｌｋｙｌ）」という句は、アルキル基が置換されてもされなくてもよいことを意味し、そしてこの説明は置換されていないアルキルおよび置換のあるアルキルの両方を包含する。

本明細書において提供されるような化合物、生成物または組成物に関して用いる場合、「有効量（ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｍｏｕｎｔ）」という用語は、所望の結果を得るために十分な化合物、生成物または組成物の量を意味する。必要な正確な量は、用いられる特定の化合物、生成物または組成物、投与の様式などに依存して変化する。従って、正確な「有効量」を特定することは常に可能ではない。しかし、適切な有効量は、慣用的な実験のみを用いて、本開示から知識を得た当業者によって決定できる。

本明細書において用いる場合、「適切な（ｓｕｉｔａｂｌｅ）」という用語は、言及した目的について本明細書において提供されたような化合物、生成物または組成物と適合性である基をいう。言及した目的についての適切性は、慣用的な条件だけを用いて当業者によって決定できる。

本明細書において用いる場合、「加水分解性（ｈｙｄｒｏｌｙｚａｂｌｅ）」という用語は、この基が加水分解できるか、または加水分解しやすい（すなわち、この分子または基の２つ以上の新しい分子または基への分離）。ことをいう。

２．化合物
本発明は、四級アミンの１つの結合の切断の際に、式：

の化合物が生じる化合物を提供するが
ここで、
環Ａがベンゾであり；
Ｚ_１、およびＺ_２は独立してＳまたはＯであり；
Ｒ_１およびＲ_２は独立してＨ、必要に応じて置換された脂肪族、必要に応じて置換されたアリール、ヒドロキシル、ハロゲン、アルコキシ、複素環式、シアノ、アミノであるか、または一緒になって、必要に応じて置換された脂環式もしくは必要に応じて置換されたアリールを形成し；
Ｒ_３はＨ、必要に応じて置換された脂肪族および必要に応じて置換されたアリールであり；そして
Ｒ_４およびＲ_５は独立して、Ｈ、必要に応じて置換された脂肪族、必要に応じて置換されたアリール、複素環式、アリールオキシ、カルボキシであるか、または一緒になって、必要に応じて置換された複素環式もしくは必要に応じて置換されたヘテロアリールを形成する。
好ましくは、四級アミンの１つの結合の切断は、ＬＹ２９４００２（化合物１）を生じる。

本発明はまた、式：

の化合物を提供し、
ここで、
環Ａがベンゾであり；
Ｚ_１、およびＺ_２は独立してＳまたはＯであり；
Ｒ_１およびＲ_２は独立してＨ、必要に応じて置換された脂肪族、必要に応じて置換されたアリール、ヒドロキシル、ハロゲン、アルコキシ、複素環式、シアノ、アミノであるか、または一緒になって、必要に応じて置換された脂環式もしくは必要に応じて置換されたアリールを形成し；
Ｒ_３はＨ、必要に応じて置換された脂肪族および必要に応じて置換されたアリールであり；そして
Ｒ_４およびＲ_５は独立して、Ｈ、必要に応じて置換された脂肪族、必要に応じて置換されたアリール、複素環式、アリールオキシ、カルボキシであるか、または一緒になって、必要に応じて置換された複素環式もしくは必要に応じて置換されたヘテロアリールを形成し；そして
Ｒ_６は、Ｈ、必要に応じて置換された脂肪族、必要に応じて置換されたアリール、アルコキシ、カルボキシ、アミノ、複素環式、アリールオキシ、およびそこで必要に応じて置換された標的化因子であり；そして
Ｌがリンカー基である。

好ましい実施形態では、本発明の化合物２〜３は、Ｒ_１−環Ａ−Ｒ_２が以下：

からなる群より選択される化合物である。

好ましい実施形態では、本発明の化合物２〜３は、Ｒ_４−Ｎ−Ｒ_５が以下：

からなる群より選択される化合物である。

別の実施形態では本発明の化合物２〜３は、Ｒ_６が以下：

からなる群より選択される化合物である。

ａ．リンカー
別の実施形態では、本発明の化合物３は、リンカー基が加水分解可能である化合物である。プロドラッグのリンカー基は、酵素切断によって、または好ましくは、生存している動物での水性条件を含むがこれに限定されない生理学的条件下での加水分解によって切断されて、化合物２が生じ得る。生理学的条件下でのリンカー基の加水分解の速度は好ましくは、約１分の半減期から約４８時間の半減期である。

ｂ．加水分解
本明細書において用いる場合、「加水分解可能、加水分解性（ｈｙｄｒｏｌｙｚａｂｌｅ）」という用語は、約１分の半減期から約４８時間の半減期という速度で、加水分解（すなわち、水分子の正味の挿入に起因する、その分子または基の２つ以上の新規な分子または基への分離）され得るかまたは加水分解し易いことをいう。

リンカー基とは、化合物２を生じるように加水分解または酵素的に切断されてもよい任意の基であり得る。好ましい実施形態では、リンカー基は、以下の式：

であり、ここでＺ_３およびＺ_４は独立してＳまたはＯであり；そして
Ｒ_７が−ＣＨ_２−、−ＣＨ（ＣＨ_３）−、−ＣＨ（Ｐｈ）−、−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＯＯＨ）−またはＣＨ（ＣＨ（ＣＨ３）２）−である。

化合物２を得るためのプロドラッグのリンカー基の加水分解の代表的な例は、（スキーム１）に示され、ここでＺ_３およびＺ_４は独立して各々Ｏである。Ｒ_６エステルの加水分解または酵素切断は、Ｒ_７アルデヒドの遊離で崩壊するヘミアミナル（ｈｅｍｉａｍｉｎａｌ）を生じ、これによって遊離の三級アミンを含む化合物２が生じる。Ｒ_６およびＲ_７の両方とも、遊離の三級アミンに戻る種々の率が得られるように選択され得る。例えば、Ｒ_６もしくはＲ_７での置換の増大、またはその組み合わせが加水分解に向かう安定性を増大し得る。さらに、Ｒ_６部分の電子求引性基は安定性を低下させる。本明細書に開示されるＲ_６またはＲ_７の変化に加えて、四級アミンの安定性を変化し得るさらなる要因は、その内容が参考として本明細書に援用される、Ｎ．Ｂｏｄｏｒ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９８０，ｖｏｌ ２３ ＃５、ｐｐ４６９〜４８０「Ｓｏｆｔ Ｄｒｕｇｓ．１．Ｌａｂｉｌｅ Ｑｕａｔｅｒｎａｒｙ Ａｍｍｏｎｉｕｍ Ｓａｌｔｓ ａｓ Ｓｏｆｔ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｓ」；およびＧ．Ｂｒｏｕｉｌｌｅｔｔｅ ｅｔ ａｌ．；Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９９６，ｖｏｌ ８５ ＃６，ｐｐ６２０−６２３にみることができる。

スキーム１

ｃ．標的化因子
別の実施形態では、本発明の化合物は、Ｒ_６がさらにそれに共有結合した１つ以上の標的化因子（Ｔ）を含む化合物である。標的化因子によって本発明のプロドラッグは特定のタイプの細胞、組織、器官または細胞外構造に選択的に送達されることが可能になる。上記で考察されるとおり、化合物１（ＬＹ２９４００２）での処理は、バイオアベイラビリティー、急速な代謝および副作用という点で劣る。なぜなら、この化合物は組織特異的ではないからである。従って、副作用が生じ得る場合、薬物の位置を処置の領域の位置に対して限定すること、または薬物が組織に達することを少なくとも妨げること、そして任意の特定の時間で有効であるが過剰ではない量の薬物が用いられることを確実にすることが極めて所望される。標的化剤の使用によって、本発明のプロドラッグは、身体全体を通じて均一に分布するのではなく、処置の部位で濃縮されること、または早期に代謝されるかもしくはさらに急速に排出されることが可能になる。処置の部位に一旦送達されれば、リンカーを、酵素的に切断してもよいし、または上記のように加水分解して、化合物２を得てもよい。さらに、標的化因子の使用によって、処置の部位で薬物の有効濃度を達成するために投与することが必要な投薬量が制限され得る。標的化因子の使用はまた、処置の部位で薬物の有効濃度を得るために、さらに頻繁な投薬またはさらに別の投与方法を可能にする。

標的化因子は、共有結合を介して、本発明の化合物に優先的に結合するが、この共有結合は、リンカー上の（それぞれ）求電子性または求核性の基と共有結合的に反応される、この標的化因子の求核性または求電子性基を含むがこれに限定されない方法によって形成され得る。

本発明の１実施形態では、本発明の化合物２〜３は、Ｒ_６〜Ｔが以下：

からなる群より選択される化合物である。

本発明のプロドラッグと反応し得る標的化因子としては、限定はしないが、炭水化物、ビタミン、ペプチド、タンパク質、ヌクレオシド、ヌクレオチド、核酸、リポソーム、脂質、骨親和性剤および軟骨親和性剤が挙げられる。標的化因子はまた、所望の組織におけるレセプターによって結合されて、レセプター媒介プロセスによって細胞に必要に応じて輸送される分子であってもよい。このような標的化因子の代表的な例としては、脳のグリア細胞に存在する末梢ベンゾジアゼピンレセプター（ＰＢＲ）に結合するジアゼピンが挙げられるがこれらに限定されない。このようなジアゼピンの代表的な例は、その内容が参考として本明細書に援用される、Ｇ．Ｔｒａｐａｎｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．２００３．ｖｏｌ １４，ｐｐ８３０−８３９「Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ Ｂｅｎｚｏｄｉａｚｅｐｉｎｅ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｌｉｇａｎｄ−Ｍｅｌｐｈａｌａｎ Ｃｏｊｕｇａｔｅｓ ｆｏｒ Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｔｏ Ｂｒａｉｎ Ｔｕｍｏｒｓ」に考察される。

標的化因子として用いられ得る代表的なビタミンとしては、限定はしないが、フォレート、ビタミンＢ_１２、またはビタミンＣが挙げられる。「フォレート（ｆｏｌａｔｅ）」という用語は、葉酸受容体と結合する能力を有する葉酸誘導体を包含する。標的化因子として用いられ得るフォレートの代表的な例としては、限定はしないが、葉酸、フォリン酸、プテロポリグルタミン酸、および葉酸受容体結合プテリジン、例えば、テトラヒドロプテリン、ジヒドロフォレート、テトラヒドロフォレートおよびそれらのデアザアナログおよびジアザアナログが挙げられる。他の適切なフォレートは、フォレートアナログであり、これには限定はしないが、アミノプテリン、アメトプテリン（メトトレキセート）、Ｎ_１０−メチルフォレート、２−デアミノ−ヒドロキシフォレート、デアザアナログ、例えば、１−デアザメトプテリン、または３−デアザメトプテリンおよび３’５’−ジクロロ４−アミノ−４−デオキシ−Ｎ_１０−メチルプテロイル−グルタミン酸（ジクロロメトトレキセート）が挙げられる。本発明の化合物に対して共有結合するために適切なフォレートに分子を結合させる方法は、その内容が参考として本明細書に援用される、米国特許第６，５７６，２３９号、同第５，８２０，８４７号、同第５，６８８，４８８号、同第５，１０８，９２１号、同第５，６３５，３８２号および同第５，４１６，０１６号に開示される。本発明の化合物に対して共有結合するために適切なビタミンＣに分子を結合させる方法は、その内容が参考として本明細書に援用されるＳ．Ｍａｎｆｒｄｉｎｉ Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｖｏｌ ４５、ｐｐ５５９〜５６２，２００２に開示される。

標的化因子として用いられ得る代表的なペプチドおよびペプチド模倣物としては、限定はしないが、ＲＧＤｓ、ｃ（ＲＧＤｆＫ）、ビトロネクチン、フィブロネクチン、ソマトスタチン−レセプターアゴニストおよびソマトスタチンレセプターアンタゴニストからなる群より選択されるＲＧＤ含有ペプチドが挙げられる。ａｖｂ３インテグリンレセプターに結合して、アンタゴニストとして作用する分子は、その内容が本明細書において参考として援用される米国特許第６，５５２，０７９号、同第６，４２６，３５３Ｂ、ＷＯ２００２／４０５０５Ａ２および米国特許公開２００２／００５５４９９、同第２００２／００６１８８５、同第２００２／００６５２９１、同第２００２／００７２５００、Ｕ．Ｓ．２００２／００７２５１８；Ｗ．Ａｒａｐ ｅｔ ａｌ．、Ｓｃｉｅｎｃｅ、ｖｏｌ ２７９、ｎｕｍｂｅｒ １６、１９９８、ｐｐ３７７〜３８０；ＲＪ Ｋｏｋ ｅｔ ａｌ．、Ｂｉｏｊｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．２００２，ｖｏｌ １３、ｐｐ１２８〜１３５；ＤＡ Ｓｉｐｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ．、Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｖｏｌ
４、ｎｕｍｂｅｒ ５、１９９８、ｐｐ６２３〜６２６；ＰＭ Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２００３、ｖｏｌ ６３、ｐｐ５８３８〜５８４３；ならびにＪＤ Ｈｏｏｄ ｅｔ ａｌ．、Ｓｃｉｅｎｃｅ ｖｏｌ ２９６、ｐｐ２４０４〜２４０７に記載されるように標的化因子として用いられ得る。標的化因子として用いられ得る代表的なタンパク質としては、限定はしないが、抗体またはそのフラグメント、例えば、腫瘍特異的モノクローナル抗体またはそのフラグメントが挙げられる。標的化因子として用いられ得る代表的な骨親和性因子としては、限定はしないが、ホスホン酸塩、ホスホン酸、アミノメチルホスホン酸、リン酸塩、ポリリン酸塩およびハイドロキシアパタイト結合ポリペプチドが挙げられる。他のペプチドとしては、クロロトキシン（ＳＵ６，４２９，１８７Ｂ１）および組織因子（Ｇ．Ｍ．Ｌａｎｚａ ｅｔ ａｌ．、「Ｔａｒｇｅｔｅｄ Ａｎｔｉｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｔｏ Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｓｍｏｏｔｈ Ｍｕｓｃｌｅ Ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ａ
Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ
Ｃｏｎｔｒａｓｔ Ａｇｅｎｔ」；Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２００２、ｖｏｌｕｍｅ
１０６、ｐｐ２８４２〜２８４７）が挙げられる。

他の適切な標的化因子としては、抗体が挙げられる。抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤもしくはＩｇＥのクラスの抗体、またはそのフラグメントもしくは誘導体であってもよく、これには、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｄおよび単鎖抗体、二重特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）、二重特異性抗体（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ）、二機能性抗体、およびその誘導体が挙げられる。抗体は、所望のエピトープまたはそれに由来する配列に対して十分な結合特異性を示す、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、アフィニティー精製抗体またはそれらの混合物であってもよい。この抗体はまた、キメラ抗体であってもよい。この抗体は、腫瘍、組織適合性および他の細胞表面抗原、細菌、真菌、ウイルス、酵素、毒素、薬物および他の生理学的に活性な分子と関連するものを含む、種々の抗原性決定基に関するものであり得る。抗体が特異的に反応し得る腫瘍と会合する抗原としては、限定はしないが、このような抗原が挙げられ、そして限定はしないが、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ムチン、例えばＴＡＧ−７２、ヒト乳脂肪小球抗原、前立腺血清抗原（ＰＳＡ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＰＳ（ホスファチジルセリン）、ならびにＩＬ−２、ＥＧＦ、ＶＥＧＦおよびトランスフェリンレセプターを含むがこれに限定されないレセプターが挙げられる。腫瘍に会合する他の代表的な抗原としては、限定はしないが、それらの内容が参考として本明細書に援用される、ＺａｌｃｂｅｒｇおよびＭｃＫｅｎｚｉｅ，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ ３；ｐｐ８７６〜８２（１９８５）、ＷＯ０１／６８７０９Ａ１、および米国特許公開ＵＳ２００４／０００９１２２Ａ１に記載される腫瘍関連抗原が挙げられる。

他の適切な標的化因子としては、グルコース、ガラクトース、マンノース、マンノース６−リン酸、ホルモン（例えば、インスリン、成長ホルモンなど）、増殖因子またはサイトカイン（例えば、ＴＧＦβ、ＥＧＦ、インスリン様成長因子、など）、ＹＥＥ（ＧａｌＮＡｃＡＨ）．ｓｕｂ．３または誘導体、コバラミン、α−２マクログロブリン、アシアロ糖タンパク質、アルブミン、テキサフィリン、メタロテキサフィリン、抗体、抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ）、単鎖抗体可変領域（ｓｃＦｖ）、トランスフェリン、任意のビタミンおよび任意の補酵素が挙げられる。

標的化因子はまた、骨にプロドラッグを送達する因子であってもよい。骨標的化因子としては、限定はしないが、ＥＤＴＭＰ ＤＯＴＭＰおよびＡＢＥＤＴＭＰが挙げられ、これは、その内容が本明細書に参考として援用される、米国特許第４，９３７，３３３号、同第４，８８２，１４２号、同第５，０６４，６３３号およびＷＯ−９４／００１４３に開示される。ＤＯＴＭＰおよびＥＤＴＭＰは、図３に示されるカップリング化学、および図４に示されるアルキル化化学を含むがこれに限定されない任意の方法によってリンカー部分に結合され得、ここではＲ基が、リンカー部分の（それぞれ）求核性基または求電子性基と反応する、適切な求電子性基または求核性基を有してもよい。カップリング化学のさらなる詳細は、その内容が参考として本明細書に援用される、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ
１９９９，５５，ｐｐ１２９９７〜１３０１０に提供される。アルキル化化学のさらなる詳細は、その内容が参考として本明細書に援用される、Ｐｒｏｃ．ＳＰＩＥ−Ｉｎｔ．Ｓｏｃ．Ｏｐｔ．Ｅｎｇ．１９９９，３６００（Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｉｍａｇｎ．Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ Ｄｙｅｓ＆Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｌ，ｐｐ９９〜１０６；米国特許第５，１７７，０５４号；Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９４，３７，４９８〜５１１；Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ，１９８９，３０＃５１ｐｐ７１４１〜７１４４；および米国特許第５，９５５，４５３号に提供される。

標的化因子は、本発明の化合物の徐放性リザーバ部位として骨に対してプロドラッグを送達するように用いられ得る。標的化因子は、四級アミンに結合する酸切断性リンカーを介して本発明の化合物に結合する骨親和性（骨向性（ｏｓｔｅｏｔｒｏｐｉｃ））部分であってもよい。酸切断可能リンカーの例としては、限定はしないが、オルト酸−アミド結合が挙げられる。酸性の条件下では、タンパク質−ＡＣＬ−３アミド結合は容易に切断されて、その内容が参考として援用されるＷＯ−９４／００１４３に記載されるように、アミド官能性の天然のアミノ基を遊離する。酸性媒介性機構に関与する骨破壊性の骨再吸収の間、骨に対してプロドラッグを拘束する結合が切断されて、本発明の化合物が遊離され得る。

骨に対してプロドラッグを送達するために用いられる標的化因子は、ノッチレセプターと結合する分子であってもよい。ノッチシグナル伝達は、種々の造血系列の発達および分化に重要な役割を果たす。Ｊｕｎｄｔ ｅｔ ａｌ．、Ｂｌｏｏｄ、１０２（１１）：９２８ａ（２００３）に考察されるように、リガンド誘導性ノッチシグナル伝達は、多発性骨髄腫細胞の新規な増殖因子であり、そしてインビボにおいて多発性骨髄腫のリンパ種発生にこれらの相互作用が寄与することが示唆される。

骨標的化因子は、骨の主な構成要素である、ヒドロキシアパタイト中のカルシウムイオンに高い親和性を有し得る。本発明の化合物は、骨以外の体の領域におけるカルシウム沈着、例えば、動脈、心臓、腎臓または膀胱のカルシウム沈着に標的化され得る。しかし、骨標的化因子は理想的には骨組織に選択的に結合する。本発明の骨標的化因子は、被験体の骨組織に結合され、好ましくは骨以外の組織よりも高い親和性で骨に結合し、そして特定の時間にわたって結合を残し、これによって骨環境に対してこの組成物を送達する。言い換えれば、骨標的化因子は好ましくは、骨以外の組織に対してこの骨標的化因子が結合するよりも少なくとも２倍大きい（例えば、少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、または少なくとも２５倍大きい親和性）親和性で骨組織に結合する。骨標的化因子は骨組織に可逆的に結合するが、このことはこの骨標的化因子が最終的には骨から遊離されて、身体から排出されることを意味する。

骨標的化因子は、四級プロドラッグを加水分解することが可能になるのに十分な時間、骨組織に対する結合を維持し得、それによって標的細胞（例えば、骨髄細胞）に対して活性薬物を送達する。骨標的化因子は、約１日（例えば、約２日、約３日、または約７日）〜約１年（例えば、約３３０日、約３６５日、または約４００日）間にわたって骨に対する結合を維持し得、その後、骨標的化因子が身体から排出される。骨標的化因子は、約７日（例えば、約７日、約１４日または約２１日）〜約６ヶ月（例えば、約９０日、約１２０日、または約１５０日）間にわたって骨に対する結合を維持してもよい。例えば、骨標的化プロドラッグは、３０日間骨に対して結合を維持し得、その間この薬物が放出される。約４５日後、骨標的化因子は骨から遊離されて、最終的に排泄される。従って、本発明における使用のための骨標的化因子は、骨組織に対する結合動態に基づいて選択され得る。候補の骨標的化因子は、例えばマルチウェル形式で、骨組織（例えば、ハイドロキシアパタイト）に対する親和性を決定することによって、インビトロでスクリーニングできる。候補の骨標的化因子はまた、身体からの候補の骨標的化因子の排泄の速度およびタイミングを評価することによってインビボでスクリーニングされ得る。これに関して、骨標的化因子は好ましくは、腎臓を介して身体から排出される。

骨標的化因子は望ましくは、リン酸塩、ホスホン酸塩、ビスホスホン酸塩、ヒドロキシビスホスホン酸塩、アミノメチレンホスホン酸、および酸性ペプチドからなる群より選択される。本発明の骨標的化因子は、これらの群のうち１つ、２つ以上またはその混合物を担持してもよい。例えば、骨標的化因子は、ホスホン酸塩であってもよく、このことは、この骨標的化因子は、ホスホン酸塩であってもよく、このことはこの骨標的化因子が１つのホスホン酸塩、２つのホスホン酸塩、または３つ以上のホスホン酸塩を含んでもよいことを意味する。本発明における使用のための適切な骨標的化因子の１つは、疼痛緩和のために骨転移に選択的な放射線用量を送達するための放射性の^１５３Ｓｍ複合体として、ＥＤＴＭＰ（その化学構造は、図１に示され、現在ＦＤＡが承認している、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（メチレンホスホン酸）（Ｑｕａｄｒａｍｅｔ（商標）））である。ＥＤＴＭＰは、４つのホスホン酸基を含むリン酸塩であり、従って、四リン酸塩である。^１５３Ｓｍ−ＥＤＴＭＰのような化合物は、腫瘍が存在する骨、対正常な骨に選択的に、１０：１より大きい比で局在する。なぜなら好ましくはカルシウムの代謝回転は転移性領域において極めて高いからである。報告によれば、^１５３Ｓｍ−ＥＤＴＭＰは、造骨細胞の骨転移において骨格によって急速に取り込まれて血漿から排出される。骨格において蓄積しない化合物の一部は、急速に排出され、排泄は投与後６時間内でほぼ完全である（Ｊｉｍｏｎｅｔ ｅｔ ａｌ．、Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｓ，３６，２７４５（１９９３））。疼痛緩和は、隣接する転移性の腫瘍細胞にある程度の効果を有する、造骨細胞の骨転移に対して結合した同位体に由来する放射線に起因していると考えられる。別の臨床上有用な骨標的化システムは、多発性骨髄腫の処置のために骨髄に対して高用量の放射線量を選択的に送達するように設計された放射性の^１６６Ｈｏ複合体として、ＤＯＴＭＰ（その化学構造は、図１に示され、現在第ＩＩＩ相臨床試験中の（ＳＴＲ、骨格標的化放射線（ｓｋｅｌｅｔａｌ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｒａｄｉａｔｉｏｎ）と名付けられた）である。放射性の^１６６Ｈｏ−ＤＯＴＭＰ複合体は、骨格系に局在して、悪性の骨髄腫細胞を有する近接する骨髄を照射することに注目すべきである。^１５３Ｓｍ−ＥＤＴＭＰ系と同様に、骨に局在しないホスホン酸塩は、尿によって身体の外に排出される。一般には、骨格の取り込みは、注射された用量の約２０〜約５０％であり、そして腫瘍浸潤を有する骨の領域への局在は、Ｂａｙｏｕｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．３６，７３０（１９９５）の図７に図示される。

好ましくは、骨標的化因子は、ポリホスホン酸である。ポリホスホン酸は、骨組織に対して生物学的に活性な分子を首尾よく標的することが実証されている。例えば、成長因子（骨形成を刺激する）に対する、ＡＢＤＴＭＰ（その化学構造は、図１に示される）のようなポリアミノホスホン酸の結合（イソチオシアネート化学による）によって、ラットの骨に対する増殖因子の標的化が首尾よく生じる（例えば、国際特許出願ＷＯ９４／００１４５を参照のこと）。同様に、骨標的化因子は、タンパク質に結合している。例えば、ヒト血清アルブミンに対して結合するビスホスホン酸塩は、インビトロ（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．１６，２５８（２０００））およびインビボ（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．，１６，１１１６（２０００））において骨にタンパク質を首尾よく送達した。骨親和性因子の有用性は、骨へのタンパク質の送達を上回り、そして例えば、低分子の治療用分子を含む。骨親和性ビスホスホン酸塩およびアルキル化剤、例えば、ＢＡＤ（その化学構造は図１に示す、を含む結合体が生成されている（例えば、Ｗｉｎｇｅｎ ｅｔ
ａｌ．，Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．，１１１，２０９（１９８６）を参照のこと）。この分子では、アルキル化剤は、その標的（ＤＮＡ）との相互作用において特異的ではなく、従って、ビスホスホン酸塩（すなわち、骨親和性剤）とアルキル化部分との間で切断の必要はない。ビスホスホン酸−アルキル化剤は、ＢＡＤを用いるラット骨肉腫モデルにおいて有効性を実証した。ＭＴＸ−ＢＰと命名され、図１に示される、ビスホスホン酸塩に共有結合されている葉酸代謝拮抗、抗腫瘍性剤であるメトトレキセートを用いて、別の一連の研究を行なった（例えば、Ｓｔｕｒｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２７．８２５（１９９２）；Ｓｔｕｒｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２８，８９９（１９９３）；およびＨｏｓａｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．３７，１０５（１９９６）を参照のこと）。Ｔｃ−９９ｍ標識したＭＴＸ−ＢＰを用いて、約１５％の注射用量が約４時間後に骨格に局在し、このときこの用量の約６１％が排出されていることが確認された（Ｈｏｓａｉｎ、前出）。ＭＴＸ−ＢＰはさらに、移植された骨肉腫の動物モデルにおいてメトトレキセート単独と比較して５倍大きい抗癌効果を実証した（Ｓｔｕｒｔｚ １９９２、前出）。化学構造が図１に記載されている、付加されたビスホスホン酸塩とのカルボキシフルオレセイン基の結合体ＣＦ−ＢＰを用いて、同様の研究が記載されている（Ｆｕｊｉｓａｋｉ
ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ，４，１１７（１９９４））。この分子では、ＣＦ基は、薬物動態および生体分布を定量するための蛍光性マーカーであり、インビボで加水分解しやすいエステル結合を通じて骨標的化因子に結合される。ラットでの静脈内注射の研究によって、ＣＦ−ＢＰが骨に局在し、そしてエステル結合の一般的加水分解を介して、生成されたＣＦの徐放性機構として機能することが示された（Ｆｕｊｉｓａｋｉ、前出）。

別の実施形態では、骨親和性因子は、（Ａｓｐ）_６および（Ｇｌｕ）_６のようなペプチドであってもよい。骨および象牙質で富んでいることが見出されている糖タンパク質オステオネクチンの酸に富むペプチド配列は、ヒドロキシアパタイトに強い親和性を有する（Ｆｕｊｉｓａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ
Ａｃｔａ，５３，１２９２（１９９６））。従って、酸性アミノ酸を含むペプチドリガンドは、骨標的化因子の理想的な候補物である。実際、（Ｇｌｕ）_１０は、ビオチンに結合された場合、標識されたストレプトアビジンを首尾よく補強した（Ｃｈｕ ａｎｄ Ｏｒｇｅｌ、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ，８，１０３（１９９７）および国際特許出願ＷＯ９８／３５７０３にさらに記載される）。さらに、（Ａｓｐ）_６に結合したフルオレセインイソチオシアネートの生物学的半減期は、大腿骨では１４日であり（Ｋａｓｕｇａｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｏｎｅ ａｎｄ Ｍｉｎｅｒａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１５（５），９３６（２０００））、これは、本発明の骨標的化因子にとって受容可能な半減期である。同様に、エストラジオール−（Ａｓｐ）_６結合体の骨への送達は、卵巣切除された動物で実証されており、ここでは骨粗鬆的なタイプの骨の損失の阻害を伴う（Ｋａｓｕｇａｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｏｎｅ ａｎｄ Ｍｉｎｅｒａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｓｕｐｐｌ １），１４，Ｓ５３４（１９９９））。骨に対する（Ａｓｐ）_６結合は、破骨細胞によって媒介される骨吸収プロセスの間に代謝されると考えられる。従って、酸性のペプチドリガンドによって、骨に対する化合物の補充の手段が得られるだけでなく、骨細胞および周囲の組織に対して化合物を緩徐に放出する機構も得られる。

骨標的化因子の他の例としては、限定はしないが、アミノおよびヒドロキシル−アルキルホスホン酸およびジホスホン酸；アレンドロン酸、パミドロン酸、４−アミノブチルホスホン酸、１−ヒドロキシエタン−１，１−ジホスホン酸およびアミノメチレンビスホスホン酸を含む、ヒドロキシルビスホスホン酸；フィチン酸のようなホスホン酸；ならびにアミノメチレンホスホン酸、例えば、Ｎ，Ｎ−ビス（メチルホスホノ）−４−アミノ安息香酸およびニトリロトリ（メチルホスホン酸）；が挙げられる。このような骨標的化因子の非限定的な例は、図２に示される。

好ましくは、骨標的化因子は、アミノメチレンホスホン酸である。「アミノメチレンホスホン酸（ａｍｉｎｏｍｅｔｈｙｌｅｎｅｐｈｏｓｐｈｏｎｉｃ ａｃｉｄ）」とは、−ＮＣＨ_２ＰＯ_３Ｈ部分を含む化合物であって、アミノ基に１、２または３つのメチレンホスホン酸基が結合されており、そして他の化学部分でさらに置換されてもよい化合物を意味する。アミノメチレンホスホン酸は、１つ以上のホスホン酸基および１つ以上のアミノ基を含んでもよい。これらのアミノメチレンホスホン酸の例としては、限定はしないが、図２に示される化合物Ｆ〜Ｎが挙げられる。

これらの骨標的化因子および他の骨標的化因子は、ヘテロ原子の１つを通じて、またはさらなる結合ポイントを導入する化学的修飾によって結合されてもよいと考えられる。例えば、ＥＤＴＭＰを、図３に例示されるように、リン酸素のうちの１つによってリンカーに結合してホスホン酸結合を作製してもよい（例えば、Ｖｉｅｒａ ｄｅ Ａｌｍｅｄｉａら．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，５５，１２９９７〜１３０１０（１９９９）を参照のこと）。リン酸素はまた、図４に示されるようにアルキル化され得、ここでは例えば、活性化されたＰＥＧに対する結合のための二次結合ポイントを得るために、Ｒ基が、例えば、側鎖のアミノ基を有してもよい。本発明において利用できる他のタイプのアルキル化としては、限定はしないが、Ｃｈａｖｅｚ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｉｍａｇｉｎｇ：Ｒｅｐｏｒｔｅｒｓ，Ｄｙｅｓ，＆ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ，Ｃｏｎｔａｇ ＆ Ｓｅｖｉｃｋ−Ｍｕｒａｃｉａ編、Ｐｒｏｃ．ＳＰＩＥ，第３６００，９９〜１０６（１９９９年，Ｊｕｌｙ）にさらに記載されているとおり、また、例えば、米国特許第５，１７７，０６４号、米国特許第５，９５５，４５３号、ｄｅ Ｌｏｍｂａｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３７，４９８〜５１１（１９９４）およびＩｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ，３０（５１），７１４１〜７１４４（１９８９）にさらに記載される他のホスホン酸について示されるように、ＤＯＴＭＰに関与するのと同様の例が挙げられる。あるいは、化学的修飾のために、ＥＤＴＭＰを、例えば、修飾して、アニリン基の導入によってＡＢＤＴＭＰを生成してもよい（例えば、国際特許出願ＷＯ９４／００１４５の図１にさらに記載されるように）。次いでアニリンアミンを利用して、例えばアミド結合を形成する。ＤＯＭＴＰは図５に概要をまとめたように、同様に修飾されてもよい。

「ホスホン酸塩、リン酸塩およびアミノメチレンホスホン酸塩（ｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ、ｐｈｏｓｐｈａｔｅ、ａｎｄ ａｍｉｎｏｍｅｔｈｙｌｅｎｅｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ）」という用語は、それぞれ、ホスホン酸、リン酸およびアミノメチレンホスホン酸、ならびにその任意の塩、加水分解性エステル、およびリン酸ベースの酸のプロドラッグを包含することを意味する。血中での７．４という生物学的ｐＨで、または骨の周囲でのそれより酸性のｐＨでは、骨標的化因子のリン酸塩またはホスホン酸塩の特定の一部が脱プロトン化されて、対イオンで置換され得る。さらに、カルシウムのプロトンの交換は、本発明におけるヒドロキシアパタイトに対する骨標的化因子の結合の内在する事象である。しかし、骨標的化因子を含む組成物の調製および投与は、その中でリン酸の完全なプロトン化は要しても要さなくてもよい。従って、ホスホン酸、リン酸およびアミノメチレンホスホン酸は、ホスホン酸塩、リン酸塩およびアミノメチレンホスホン酸塩と交換可能に記載され利用される。特に好ましくはないが、リン酸ベースの酸の生物学的に加水分解可能なエステルは、骨標的化プロドラッグのインビボ使用においても利用できる。同様に、組成物の酸性度をマスクするために、例えば処方および投与の間、リン酸ベースの酸のプロドラッグをインビボで利用してもよい。

標的化因子はまた、特定の組織の特性に基づいて標的する因子であってもよい。このような標的化因子の代表的な例としては、限定はしないが、その内容が参考として本明細書に援用される、Ｈ．Ｍａｅｄａ ｅｔ ａｌ．「Ｔｕｍｏｒ ｖａｓｃｕｌａｒ ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｔｈｅ ＥＰＲ ｅｆｆｅｃｔ ｉｎ ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ」；Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，２０００ ｖｏｌ ６３、ｐｐ２７１−２８４に記載されているように、ＥＰＲ効果（浸透性および保持の増強）に起因して腫瘍組織に選択的に局在するポリマーが挙げられる。他の代表的なポリマーは、Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド（ＨＰＭＡ）および（ポリ）Ｌ−グルタミン酸である。

標的化因子はまた、ＲＧＤ部分を含んでもよい。Ｃｕｒｎｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，６４（２）：５６５〜５７１（２００４）に考察されるように、ＲＧＤ部分は、α_ｖβ_３インテグリンを含む細胞接着レセプターとの相互作用と相互作用することによって脈管構造に対してＲＧＤ融合タンパク質を標的する。

３．合成
ａ．主な環系
本発明の化合物は、出発生成物としてＬＹ２９４００２（化合物１）を用いて合成され得る。ＬＹ２９４００２（化合物１）は、商業的に入手されても、または実施例１に記載のように、もしくはその内容が参考として本明細書に援用される米国特許第５，７０３，０７５号に記載のように合成してもよい。当業者はまた、出発生成物として化合物２を用いて本発明の化合物を合成し得る。

ｂ．主な環系の誘導体の調製
化合物２および３の主な環系は、ＬＹ２９４００２（化合物１）の主な環系の誘導体であってもよい。化合物３の主要環系の誘導体は、ＬＹ２９４００２（化合物１）の主な環誘導体の調製のために、その内容が本明細書において参考として援用される、米国特許第５，７０３，０７５号に開示されるように、調製され得る。化合物３の主要環系の誘導体はまた、置換２−ヒドロキシ−アセトフェノンを含むがこれに限定されない市販の化合物を用いることによって調製され得る。

ｃ．モルホリン環の誘導体の調製
化合物３のアミン誘導体は、室温から強制条件（過剰な求核試薬および１１０℃への加熱）への範囲におよぶ条件下での実施例１のチオアルキル基の置換によって調製できる。任意の一級または二級の窒素含有求核試薬は、モルホリン環構造（異なるモルホリンアナログを含む）に別のアミン置換基を与えるように反応し得る。化合物３のこのようなアミン誘導体の合成の代表的な例は、本明細書の実施例に記載される。

ｄ．エステルの調製
上記のとおり、エステルは、本発明の四級化された化合物を形成するために使用され得る。本発明の四級化化合物は好ましくは、ハロエステルを用いて形成される。１つの好ましい実施形態では、本発明の四級化化合物は、クロロメチルエステルを用いて形成される。本発明の化合物の調製において有用な多数のクロロメチルエステルは市販の供給源から入手可能である。さらに、クロロメチルエステルは、その内容が本明細書において援用される、ＷＯ０２／４２２６５、ＷＯ９４／２３７２４および米国特許第４，４４４，６８６号、同第４，２６４，７６５号および同第４，３４２，７６８号に記載されるように合成され得る。

ｅ．四級化
本発明のプロドラッグは、例えば、実施例４および実施例６に記載のように、ハロメチルエステルでの化合物１または化合物２の三級アミンの四級化によって調製され得る。四級化されたアミン化合物は一般には、温和な条件では可逆性ではない。しかし、本発明の四級化合物は上記で考察されたように容易に加水分解される。化合物１または化合物２の三級アミンを四級化するために用いられ得るハロメチルエステルは市販されており、または以下の実施例に記載されるように調製されてもよい。

ｆ．リンカー
本発明のプロドラッグはまた、少なくとも２つの官能基を含むリンカーで化合物１または化合物２の三級アミンを四級化することによって調製されてもよい。このリンカーは三級アミンを四級化可能であり、または標的分子に共有結合可能であるか、または標的分子に容易に結合され得る、任意の天然または合成のリンカーであってもよい。

リンカーは好ましくは、酸素もしくはイオウのような原子、−ＮＨ−、−ＣＨ_２−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−のような単位、または原子の鎖からなった。リンカーの分子量は代表的には、約１４〜２００の範囲、好ましくは、１４〜９６の長さから約６原子までの範囲である。リンカーの代表的な例としては、限定はしないが、必要に応じて置換されており、鎖のうち１または２つの飽和炭素が必要に応じて−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）−、−ＣＯＮＨ−、−ＣＯＮＨＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣＯ_２−、−Ｏ−、−ＮＨＣＯＮＨ−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＮＨ−、−ＮＨＣＯ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ_２−、−ＮＨ−、−ＳＯ_２ＮＨ−、または−ＮＨＳＯ_２−で置換されている、飽和または不飽和の脂肪族基が挙げられる。

リンカーの第一の官能基を用いて、上記で考察される三級アミンを四級化する。好ましい第一の官能基は、限定はしないがクロロメチルエステルおよびヨードメチルエステルを含むハロメチルエステルである。リンカーの第二の官能基は、標的化因子に共有結合され得る。

第二の官能基は、求電子基または求核性基であってもよい。標的基に共有結合するために好ましい第二の官能基はイソチオシアネート、ハロアセトアミドマレイミド、イミドエステル、チオフタルイミド、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミルエステル、ピリジルジスルフィド、フェニルアジド、カルボキシル（およびその酸塩化物）、アミノ、アシルヒドロジド、セミカルバジド、チオセミカルバジド、ジアゾニウム、ヒドラジン、アジド、アミノアルキル尿素、アミノアルキルチオ尿素、ハロトリアジン、およびメタ（ジヒドロキシボリル）フェニルチオ尿素である。標的化因子に対して本発明のプロドラッグを共有結合するために適切であり得る他の適切な反応性部分としては、ジスルフィド、ニトレン、スルホンアミド、カルボジイミド、塩化スルホニル、ベンズイミデート、−ＣＯＣＨ_３および−ＳＯ_３Ｈが挙げられる。

適切な第二の官能基は、それとの共有結合が形成される標的化因子の官能基に依存し、そして結果として所定のタイプの結合を形成する生物学的活性の損失に対するその感受性による。標的化因子がタンパク質である場合、第二の官能基は、ポリペプチド骨格を構成するアミノ酸の側鎖基と反応し得る。このような側鎖基としては、アスパラギン酸およびグルタミン酸残基のカルボキシル基、リジン残基のアミノ基、チロシンおよびヒスチジンの芳香族基、およびシステイン残基のスルフヒドリル基が挙げられる。

ポリペプチド骨格のような標的化因子によって提示されるカルボキシル側鎖基は、可溶性のカルボジイミド反応によってアミン第二官能基と反応され得る。標的化因子によって提示されるアミン側鎖基は、イソチオシアネート、イソシアネートまたはハロトリアジン第二官能基と反応されて、本発明のプロドラッグに対する結合を発揮し得る。あるいは、標的化因子上のアミノ側鎖基は、ジアルデヒドおよびイミドエステルのような二機能性の因子によって、アミン反応性基を有する本発明のプロドラッグ化合物に連結され得る。標的化因子によって提示される芳香族基は、ジアゾニウム誘導体を介して本発明のプロドラッグに結合され得る。標的化因子の分子上のスルフヒドリル基は、マレイミドと、またはハロアルキル標的化因子反応性基、例えばヨードアセトアミドと反応し得る。このような反応に適切な遊離のスルフヒドリル基は、タンパク質である免疫グロブリンのジスルフィド結合から生成されてもよく、または化学的誘導体によって導入されてもよい。免疫グロブリンの重鎖領域内で生成された遊離のスルフヒドリル基に対する結合は、免疫グロブリンの抗原結合部位を妨害しないが、抗体が補体を活性化できなくし得る。

標的因子がグリコシル化タンパク質である場合、ポリペプチド骨格を介して本発明の化合物に対する結合を形成する代わりは、ＭｃＫｅａｒｎ ｅｔ ａｌ．，ＥＰＯ ８８，６９５のような方法に従って糖タンパク質の炭水化物側鎖との共有結合を形成することである。従って、抗体の炭水化物側鎖は、選択的に酸化されてアルデヒドを生成してもよく、これが次にアミン反応性基と反応してＳｃｈｉｆｆ塩基を形成するか、またはヒドラジン、セミカルバジドもしくはチオカルバジド反応性基と反応して、対応するヒドラゾン、セミカルバゾンもしくはチオセミカルバゾン結合を得ることができる。またこれらの同じ方法を使用して、本発明のプロドラッグを、炭水化物および多糖類のような非タンパク質性の標的化因子に結合してもよい。

事前の酸化の必要性なしに炭水化物および多糖類に結合するのに有用な別の標的化因子反応性部分は、ジヒドロキシボリル基であり、例えば、これはメタ（ジヒドロキシボリル）フェニルチオ尿素誘導体に存在する。この基は、１，２−シス−ジオールを含む標的化因子と反応して、５−員環の環状ホウ酸塩エステルを形成し、従ってこの基を含む炭水化物、多糖類および糖タンパク質と使用される。Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１１，３６２３〜２８（１９７２）に開示されるように、リボースは１，２−シス−ジオール基を２’，３’位置で含むので、ジヒドロキシボリル誘導体はまた、本発明のプロドラッグをリボヌクレオシド、リボヌクレオチドおよびリボ核酸に連結するためにも用いられ得る。デオキシリボヌクレオチドおよびＤＮＡ標的化因子は、３’ヒドロキシル基が存在しない場合、この方式で本発明のプロドラッグには連結され得ない。しかし、後者の標的化因子は、Ｅｎｇｅｌｈａｒｄｔ ｅｔ ａｌ．，ＥＰＯ９７，３７３に開示されるように、デオキシリボヌクレオチドのアリルアミン誘導体を最初に形成することによって、プロドラッグのイソチオシアネート誘導体に結合し得る。

本発明のプロドラッグと結合される標的化因子がインタクトな細胞である場合、ポリペプチド反応性部分または炭水化物反応性部分のいずれが使用されてもよい。ＨｗａｎｇおよびＷａｓｅ，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，５１２，５４〜７１（１９７８）は、インジウム−１１１を用いて赤血球および血小板を標識する、Ｓｕｎｄｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１７，１３０４（１９７４）の二機能性ＥＤＴＡキレーターのジアゾニウム誘導体の使用を開示する。ジヒドロキシボリル基は、種々の細菌、ウイルスおよび微生物と反応する。Ｚｉｔｔｌｅ，Ａｄｖａｎ．Ｅｎｚｙｍ．，１２ ４９３（１９５１）およびＢｕｒｎｅｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．，９６，１５７〜６２（１９８０）を参照のこと。

化合物１または化合物２の三級アミンを共有結合的に四級化するために用いられ得る好ましいリンカーは、式：

（化合物４）
のリンカーであり、
ここで、
Ｘはハロ基であり；
Ｙは−ＣＨ_２−、−ＣＨ（ＣＨ_３）−、−ＣＨ（Ｐｈ）−、−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＯＯＨ）−またはＣＨ（ＣＨ（ＣＨ３）２）−であり
Ｚ_１およびＺ_２は独立してＳまたはＯであり；そして
ｎ＝０〜４である。

１実施形態では、本発明の化合物４は、それらの化合物であり、ここで、
ＸはＣｌまたはＩであり；
Ｙは−ＣＨ_２−、−ＣＨ（ＣＨ_３）−、−ＣＨ（Ｐｈ）−、−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＯＯＨ）−またはＣＨ（ＣＨ（ＣＨ３）２）−であり；
Ｚ_１およびＺ_２は独立してＯであり；そして
ｎ＝０である。

別の実施形態では、本発明の化合物４は、それらの化合物であり、ここで、
ＸはＣｌまたはＩであり；
Ｙは−ＣＨ_２−、−ＣＨ（ＣＨ_３）−、−ＣＨ（Ｐｈ）−、−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＯＯＨ）−またはＣＨ（ＣＨ（ＣＨ３）２）−であり；
Ｚ_１およびＺ_２は独立してＯであり；そして
ｎ＝１である。

化合物４は、最終の四級窒素の切断率に変動を与える、アルキルおよびアリールカルボン酸骨格の両方とのリンカーを提供する。化合物４のリンカーは、実施例５に記載されるような市販の出発製品を用いて調製され得る。

ｇ．精製
本発明の化合物は、標準的な精製方法を用いて単離され得る。本発明の化合物の加水分解性の結合は、この化合物の精製の間に加水分解しやすくてもよい。

本発明はまた、本発明の化合物を精製する方法に関しており、この方法は、化合物を可溶化するために少なくとも０．１％の酸（ｖ／ｖ）を含む溶液にこの化合物を添加する工程を包含する。次いでこの化合物を、クロマトグラフィー、好ましくはＨＰＬＣを行うことによって精製する。

ｈ．試験
本発明のプロドラッグは、時間の関数として、切断条件に曝露されたプロドラッグのＨＰＬＣ分析を行なうことによって、加水分解性結合の加水分解の速度および加水分解の生成物を決定するように試験され得る。本発明の化合物の生物学的活性は、実施例１７に記載されるようにマクロファージ細胞株Ｊ７７４細胞において食作用をブロックする工程を含むがこれに限定されない方法によって測定され得る。本発明の化合物の生物学的活性はまた、その内容が参考として援用される、米国特許第５，４８０，９０６号；Ｋ．Ｆｕｃｈｉｋａｍｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｍｏｌ Ｓｃｒｅｅｎ，２００２ Ｏｃｔ．ｐｐ４４１〜４５０；ＶＩ Ｓｉｌｖｅｒｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｓｃｒｅｅｎ，２００２，Ｄｅｃ．７（６），５０７〜５１４；ＢＥ Ｄｒｅｅｓ Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｈｉｇｈｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ２００３，ｖｏｌ ６、３２１〜３３０に記載されるように、ＰＩ−３キナーゼ酵素アッセイによって測定され得る。

ｉ．塩
本発明の化合物は、種々の薬学的に受容可能な塩型で有用である。「薬学的に受容可能な塩（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ ｓａｌｔ）」という用語は、薬剤師によって理解される塩型、すなわち、実質的に毒性でなく、所望の薬物動態学的特性、嗜好性、吸収、分布、代謝または排出を提供する塩型をいう。選択にも重要であり、天然にはさらに重要な他の要因は、原料の費用、結晶化の容易さ、収率、安定性、吸湿性および得られたバルク薬物の流動性である。好都合には、薬学的組成物は、活性成分またはその薬学的に受容可能な塩から、薬学的に受容可能なキャリアと組み合わせて調製されてもよい。

本発明の方法および組成物における使用に適切である、本発明の化合物の薬学的に受容可能な塩としては、限定はしないが、種々の有機酸および無機酸、例えば、塩化水素、スルホン酸ヒドロキシメタン、臭化水素、メタンスルホン酸、硫酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、マレイン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、フルファミン酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、パモン酸、スルファニル酸、２−アセトキシ安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イセチオン酸と形成される塩が挙げられ、そして種々の他の薬学的に受容可能な塩、例えば、硝酸塩、リン酸塩、ホウ酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、コハク酸塩、安息香酸塩、アスコルビン酸塩、サリチル酸塩などが挙げられる。四級アンモニウムイオンのような陽イオンは、陰イオン性部分についての薬学的に受容可能な対イオンと考えられる。

本発明の化合物の好ましい塩としては、塩酸塩、メタンスルホン酸塩およびトリフルオロ酢酸塩が挙げられるが、メタンスルホン酸塩がより好ましい。さらに、本発明の化合物の薬学的に受容可能な塩は、ナトリウム、カリウムおよびリチウムのようなアルカリ金属；アルカリ土類金属、例えば、カルシウムおよびマグネシウム；有機塩基、例えば、ジシクロヘキシルアミン、トリブチルアミンおよびピリジン；ならびにアルギニン、リジンなどのようなアミノ酸と形成されてもよい。

本発明の薬学的に受容可能な塩は、従来の化学的方法によって合成され得る。一般には、塩は、適切な溶媒または溶媒の組み合わせ中での、遊離の塩基または酸と、化学量論的な量または過剰な、所望の塩を形成する無機もしくは有機の酸もしくは塩との反応によって調製される。

一般には、本発明の化合物の塩の対イオンは、この合成された化合物に対して用いた反応物によって決定される。反応物に依存して、塩の対イオンの混合物が存在し得る。例えば、反応を促進するためにＮａＩが添加される場合、対イオンはＣｌおよびＩの対の陰イオンの混合物であってもよい。さらに分取ＨＰＬＣでは、酢酸が溶出物に存在する場合、酢酸塩によって交換されるもとの対イオンを生じ得る。塩の対イオンは、異なる対イオンに交換されてもよい。対イオンは好ましくは、薬学的に受容可能な対イオンと交換されて、上記の塩を形成する。対イオンを交換するための手順は、その内容が参考として本明細書に援用される、ＷＯ ２００２／０４２２６５、ＷＯ２００２／０４２２７６およびＳ．Ｄ．Ｃｌａｓ，「Ｑｕａｔｅｒｎｉｚｅｄ Ｃｏｌｅｓｔｉｐｏｌ，ａｎ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｂｉｌｅ ｓａｌｔ ａｄｓｏｒｂｅｎｔ：Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ｓｔｕｄｉｅｓ」Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，８０（２）：１２８〜１３１（１９９１）に記載される。明快な理由によって、対イオンは、本明細書の化学構造に明確に示されず、そしてこの化合物の特徴づけは、同定された四級陽イオンに基づく。

４．組成物
本明細書はまた、本発明の１つ以上の化合物を含む組成物も包含する。本発明の組成物はさらに、１つ以上の薬学的に受容可能なさらなる成分（単数または複数）、例えば、ミョウバン、安定化剤、抗菌剤、緩衝液、着色剤、香料、アジュバントなどを含んでもよい。

ａ．処方物
本発明の組成物は、従来の方式で処方される錠剤またはトローチ剤の形態であってもよい。例えば、経口投与のための錠剤およびカプセルは、従来の賦形剤を含んでもよく、これには、限定はしないが結合剤、充填剤、潤滑剤、崩壊剤および湿潤剤が挙げられる。結合剤としては、限定はしないが、シロップ、アカシア、ゼラチン、ソルビトール、トラガカント、デンプンの粘液およびポリビニルピロリドンが挙げられる。充填剤としては、限定はしないが、ラクトース、糖、微結晶性セルロース、トウモロコシデンプン、リン酸カルシウムおよびソルビトールが挙げられる。潤滑剤としては、限定はしないが、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、滑石、ポリエチレングリコールおよびシリカが挙げられる。崩壊剤としては限定はしないが、ジャガイモデンプンおよびデンプングリコール酸ナトリウムが挙げられる。湿潤剤としては、限定はしないが、ラウリル硫酸ナトリウムが挙げられる。錠剤は、当該分野で周知の方法に従ってコーティングされ得る。

本発明の組成物はまた、水性または油性の懸濁液、溶液、エマルジョン、シロップおよびエリキシルを含むがこれに限定されない液体処方物であってもよい。この組成物はまた、使用前の水または他の適切なビヒクルとの構成のために乾燥生成物として処方され得る。このような液体調製物は、懸濁剤、乳化剤、非水性のビヒクルおよび防腐剤を含むがこれらに限定されない添加物を含んでもよい。懸濁剤としては、限定はしないが、ソルビトールシロップ、メチルセルロース、グルコース／糖シロップ、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲルおよび硬化食用油脂が挙げられる。乳化剤としては、限定はしないが、レシチン、ソルビタンモノオレエート、およびアカシアが挙げられる。非水性のビヒクルとしては、限定はしないが、食用油脂、アーモンドオイル、分留ココナッツオイル、油状エステル、プロピレングリコールおよびエチルアルコールが挙げられる。防腐剤としては限定はしないが、メチルまたはプロピルｐ−ヒドロキシ安息香酸塩およびソルビン酸が挙げられる。

本発明の組成物はまた、座剤として処方され得るが、これは座剤基剤を含んでもよく、この基剤としては、カカオバターまたはグリセリドが挙げられるがこれらに限定されない。本発明の組成物はまた、吸引のために処方され得、これは乾燥粉末として投与され得る溶液、懸濁液もしくはエマルジョンを含むがこれに限定されない形態、または噴霧剤、例えば、ジクロロジフルオロメタンもしくはトリクロロフルオロメタンを用いるエアロゾルの形態であってもよい。本発明の組成物はまた、クリーム、軟膏、ローション、ペースト、薬用絆創膏、パッチまたはメンブレンを含むがこれに限定されない、水性または非水性のビヒクルを含む、処方された経皮処方物であってもよい。

本発明の組成物はまた、注射または連続注入による投与を含むがこれに限定されない、非経口投与のために処方されてもよい。注射の処方物は、油状または水性のビヒクル中の懸濁液、溶液またはエマルジョンの形態であってもよく、そして懸濁剤、安定化剤および分散剤が挙げられるがこれらに限定されない処方剤を含んでもよい。この組成物はまた、滅菌の、発熱物質のない水を含むがこれに限定されない安定なビヒクルでの再構成のために粉末形態で提供され得る。

本発明の組成物はまた、移植によってまたは筋肉内注射によって投与され得るデポ調製物として処方されてもよい。この組成物は、適切なポリマーまたは疎水性物質（例えば、受容可能なオイル中のエマルジョンとして）、イオン交換樹脂とともに、または溶解度の劣る誘導体として（例えば、溶解度の劣る塩として）処方され得る。

本発明の組成物はまた、リポソーム調製物として処方され得る。リポソーム調製物は、リポソームを含んでもよく、これが目的の細胞または角質層に浸透して、細胞膜と融合し、このリポソームの内容物の細胞への送達が得られる。例えば、Ｙａｒｏｓｈの米国特許第５，０７７，２１１号、Ｒｅｄｚｉｎｉａｋらの米国特許第４，６２１，０２３号、またはＲｅｄｚｉｎｉａｋらの米国特許第４，５０８，７０３号に記載されるようなリポソームを用いてもよい。本発明の組成物は、皮膚状態を標的することを意図しており、ＵＶまたは酸化障害を生じる因子に対する哺乳動物の皮膚の曝露の前、間または後に投与され得る。他の適切な処方物はニオゾームを使用してもよい。ニオゾームはリポソームと同様の脂質小胞であり、その膜は主に非イオン性の脂質から構成され、その形態のいくつかは角質層を横切って化合物を輸送するために有効である。

５．処置
本発明はまた、ＰＩ−３キナーゼ活性に関連する条件に罹患している患者を処置する方法を包含する。ＰＩ−３キナーゼ活性は、異常、過剰または構成的に活性であってもよい。本発明はまた、炎症性疾患を処置するための方法を包含するが、この方法は、本発明の化合物の治療上有効な量をその必要な患者に投与する工程を包含する。不適切なＰＩ−３キナーゼシグナル伝達活性に寄与し得る、このような疾患および有害な健康上の影響は、当該分野において、例えば、その内容が参考として援用される、Ｕ．Ｓ．２００２／０１５０９５４Ａ１；ＵＳ５，５０４，１０３；ＵＳ６，５１８，２７７Ｂ１；Ｕ．Ｓ．６，４０３，５８８；Ｕ．Ｓ．６，４８２，６２３；Ｕ．Ｓ．６，５１８，２７７；Ｕ．Ｓ．６，６６７，３００；Ｕ．Ｓ．２００３０２１６３８９；Ｕ．Ｓ．２００３０１９５２１１；Ｕ．Ｓ．２００２００３７２７６およびＵ．Ｓ．５，７０３，０７５で開示されている。

本発明はまた、ｐ５３媒介性のプログラムされた細胞死を増強するための方法を包含するが、この方法は、本発明の化合物の治療上有効な量をその必要な患者に投与する工程を包含する。

本発明はまた、腫瘍細胞の化学感受性を増強するための方法を包含するが、この方法は、本発明の化合物の治療上有効な量をその必要な患者に投与する工程を包含する。

本発明はまた、腫瘍細胞の放射線感受性を増強するための方法を包含するが、この方法は、本発明の化合物の治療上有効な量をその必要な患者に投与する工程を包含する。

本発明はまた、腫瘍誘導性血管形成を阻害するための方法を包含するが、この方法は、本発明の化合物の治療上有効な量をその必要な患者に投与する工程を包含する。

本発明はまた、癌以外の疾患に関連する血管形成プロセスを阻害するための方法を包含するが、この方法は、本発明の化合物の治療上有効な量をその必要な患者に投与する工程を包含する。

本発明はまた、癌の処置のための方法を包含するが、この方法は、本発明の化合物の治療上有効な量をその必要な患者に投与する工程を包含する。

この化合物は、化学療法および放射線療法のような他の抗癌処置と同時にまたは周期的に投与されてもよい。本明細書において用いる場合、「同時（ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ）」または「同時に（ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ）」という用語は、他の抗癌処置および本発明の化合物が、お互いの４８時間、好ましくは２４時間、さらに好ましくは１２時間、それよりさらに好ましくは６時間、そして最も好ましくは３時間以下内に投与されたことを意味する。本明細書において用いる場合、「周期的に（ｍｅｔｒｏｎｏｍｉｃａｌｌｙ）」という用語は、化学療法から種々の時点での、そして反復投与および／または化学療法レジメンに対して特定の頻度でのこの化合物の投与を意味する。

化学療法処置は、細胞毒性剤もしくは細胞増殖抑制剤、またはそれらの組み合わせの投与を包含し得る。細胞毒性因子は：（１）細胞がＤＮＡを複製する能力を妨害すること、および（２）癌細胞における細胞死および／またはアポトーシスを誘導することによって癌細胞が増殖することを妨げる。細胞増殖抑制剤は、細胞増殖を時には低い連続レベルに調節する、細胞シグナル伝達のプロセスを調節、妨害または阻害することを介して作用する。

細胞毒性因子として用いられ得る化合物のクラスは、以下を含む：アルキル化剤（限定はしないが、ナイトロジェンマスタード、エチレンイミン誘導体、スルフォン酸アルキル、ニトロソ尿素およびトリアゼンを含む）；ウラシルマスタード、クロルメチン、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））、イホスファミド、メルファラン、クロランブシル、ピポブロマン、トリエチレン−メラミン、トリエチレンチオホスホラミン、ブスルファン、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾシン、デカルバジンおよびテモゾラミド；代謝拮抗物質（限定はしないが、葉酸拮抗薬、ピリミジンアナログ、プリンアナログおよびアデノシンデアミナーゼインヒビターを含む）：メトトレキセート、５−フルオロウラシル、フロクスウリジン、シタラビン、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、リン酸フルダラビン、ペントスタチンおよびゲムシタビン；天然産物およびそれらの誘導体（例えば、ビンカアルカロイド、抗腫瘍抗生物質、酵素、リンホカインおよびエピポドフィロトキシン）；ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ａｒａ−ｃ、パクリタキセル（パクリタキセルはＴａｘｏｌ（登録商標）として市販されている）、ミトラマイシン、デオキシコ−ホルマイシン、マイトマイシン−ｃ、ｌ−アスパラギナーゼ、インターフェロン（好ましくはＩＦＮ−α）、エトポシド、およびテニポシド。

他の増殖性の細胞毒性因子は、ナベルベン、ＣＰＴ−１１、アナストラゾール、レトラゾール、カペシタビン、レロキサフィン、シクロホスファミド、イホスファミドおよびドロロキサフィンである。

微小管に影響する因子は、細胞の有糸分裂を妨害し、そしてその細胞毒性活性については当該分野で周知である。本発明において有用な微小管影響因子としては、限定はしないがアロコルヒチン（ＮＳＣ４０６０４２）、ハリコンドリンＢ（ＮＳＣ６０９３９５）、コルヒチン（ＮＳＣ７５７）、コルヒチン誘導体（例えば、ＮＳＣ３３４１０）、ドラスタチン１０（ＮＳＣ３７６１２８）、マイタンシン（ＮＳＣ１５３８５８）、リゾキシン（ＮＳＣ３３２５９８）、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標）、ＮＳＣ１２５９７３）、タキソール（登録商標）誘導体（例えば、誘導体（例えば、ＮＳＣ６０８８３２）、チオコルヒチンＮＳＣ３６１７９２）、トリチルシステイン（ＮＳＣ８３２６５）、硫酸ビンブラスチン（ＮＳＣ４９８４２）、硫酸ビンクリスチン（ＮＳＣ６７５７４）、エポチロンＡ、エポチロンＢおよびを含むがこれに限定されない天然および合成のエポチロン、ならびにジスコデルモライド（Ｓｅｒｖｉｃｅ，（１９９６）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２７４：２００９）エストラムスチン、ノコダゾール、ＭＡＰ４などが挙げられる。このような因子の例はまた、Ｂｕｌｉｎｓｋｉ（１９９７）Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｓｃｉ．１１０：３０５５ ３０６４；Ｐａｎｄａ（１９９７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９４：１０５６０〜１０５６４；Ｍｕｈｌｒａｄｔ（１９９７）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５７：３３４４〜３３４６；Ｎｉｃｏｌａｏｕ（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ ３８７：２６８〜２７２；Ｖａｓｑｕｅｚ（１９９７）Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｃｅｌｌ．８：９７３〜９８５；およびＰａｎｄａ（１９９６）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２９８０７〜２９８１２にも記載される。

また適切なのは、細胞毒性因子、例えば、エピドフィロトキシン；抗悪性腫瘍酵素；トポイソメラーゼインヒビター；プロカルバジン；ミトキサントロン；白金配位錯体、例えば、シス−プラチンおよびカルボプラチン；生物学的応答修飾因子；増殖インヒビター；抗ホルモン治療剤；ロイコボリン；テガフール；および造血成長因子である。

用いられ得る細胞増殖抑制剤としては、限定はしないが、ホルモンおよびステロイド（合成アナログを含む）：１７α−エチニルエストラジオール、ジエチルスチルベストロール、テストステロン、プレドニゾン、フルオキシメステロン、ドロモスタノロンプロピオネート、テストラクトン、メゲストロラセテート、メチルプレドニゾロン、メチル−テストステロン、プレドニゾロン、トリアムシノロン、ハロトリアニセン（ｈｌｏｒｏｔｒｉａｎｉｓｅｎｅ）、ヒドロキシプロゲステロン、アミノグルテチミド、エストラムスチン、メドロキシプロゲステロンアセテート、リュープロリド、フルタミド、トレミフェン、ゾラデックスが挙げられる。

他の細胞増殖抑制剤は、血管新生阻害剤、例えば、マトリックスメタロプロテイナーゼインヒビターであり、そして他のＶＥＧＦインヒビター、例えば、抗ＶＥＧＦ抗体および低分子、例えばＺＤ６４７４およびＳＵ６６６８も含まれる。Ｇｅｎｅｔｅｃｈの抗Ｈｅｒ２抗体も利用できる。適切なＥＧＦＲインヒビターはＥＫＢ−５６９（不可逆性インヒビター）である。また、ＥＧＦＲに免疫特異性のＩｍｃｌｏｎｅ抗体Ｃ２２５およびｓｒｃインヒビターも含まれる。

細胞増殖抑制剤として用いるためにも適切なのはＣａｓｏｄｅｘ（登録商標）（ｂｉｃａｌｕｔａｍｉｄｅ，Ａｓｔｒａ Ｚｅｎｅｃａ）であり、これはアンドロゲン依存性の癌腫を非増殖性にさせる。細胞増殖抑制剤のさらに別の例は、抗エストロゲンであるＴａｍｏｘｉｆｅｎ（登録商標）であり、これはエストロゲン依存性乳癌の増殖または成長を阻害する。細胞増殖シグナルの伝達のインヒビターは、細胞増殖抑制剤である。代表的な例としては、上皮細胞成長因子インヒビター、Ｈｅｒ−２インヒビター、ＭＥＫ−１キナーゼインヒビター、ＭＡＰＫキナーゼインヒビター、ＰＩ３インヒビター、ＳｒｃキナーゼインヒビターおよびＰＤＧＦインヒビターが挙げられる。

種々の癌を本発明に従って処置することが可能であり、この癌としては、限定はしないが以下：膀胱（加速性および転移性の膀胱癌を含む）、乳房、結腸（結腸直腸癌を含む）、腎臓、肝臓、肺（小細胞および非小細胞肺癌および肺の腺癌を含む）、卵巣、前立腺、精巣、尿生殖路、リンパ系、直腸、喉頭、膵臓（膵外分泌癌腫を含む）、食道、胃、膀胱、頸部、甲状腺、および皮膚（扁平上皮癌を含む）の癌；白血病、急性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ヘアリー細胞リンパ腫、組織球性リンパ腫およびバーキットリンパ腫を含むリンパ系の造血性腫瘍；急性および慢性の骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、骨髄性白血病および前骨髄球性白血病を含む骨髄系列の造血性腫瘍；星細胞腫、神経芽細胞腫、神経膠腫およびシュワン細胞腫を含む中枢および末梢神経系の腫瘍；線維肉腫、横紋筋肉腫および骨肉種を含む間葉起源の腫瘍；ならびに黒色腫、色素性乾皮症、角化棘細胞腫、精上皮腫、甲状腺濾胞性癌および奇形癌を含む他の腫瘍；を含む癌腫が挙げられる。

最も好ましくは、本発明は、膀胱の加速性または転移性の癌、膵臓癌、前立腺癌、非小細胞肺癌、結腸直腸癌および乳癌を処置するために用いられる。

本発明はまた、膵臓を処置するための方法を包含するが、この方法は、本発明の化合物の治療上有効な量をその必要な患者に投与する工程を包含する。Ｇｕｋｏｖｓｋｙ ｅｔ
ａｌ．，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ、１２６（２）：５５４〜６６（２００４）に考察されるように、ＰＩ−３キナーゼの阻害は、膵炎を妨げ得る。

本発明はまた、潰瘍を処置するための方法を包含するが、この方法は、本発明の化合物の治療上有効な量をその必要な患者に投与する工程を包含する。本発明はまた、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、例えば、胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）を処置するための方法を包含するが、この方法は、本発明の化合物の治療上有効な量をその必要な患者に投与する工程を包含する。Ｂａｃｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｄｉｇｅｓｔｉｖｅ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｗｅｅｋ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ ａｎｄ Ｉｔｉｎｅｒａｒｙ Ｐｌａｎｎｅｒ、Ｖｏｌ．２００３，Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｎｏ．Ｍ９２１（２００３）およびＲｏｋｕｔａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｄｉｇｅｓｔｉｖｅ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｗｅｅｋ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ ａｎｄ Ｉｔｉｎｅｒａｒｙ Ｐｌａｎｎｅｒ，Ｖｏ．２００３，Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｎｏ．３５４（２００３）に考察されるように、ＰＩ−３キナーゼは、胃の細胞へのＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｏｒ Ｐｙｌｏｒｉの結合に関与する。さらに、Ｏｓａｋｉ
ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、１３０（１）：８〜１４（２００４）は、ＰＩ−３キナーゼインヒビター、例えばＬＹ２９４００２が、胃癌の抗腫瘍剤として有用であり得ることを示す。

本発明はまた、心血管ステントのようなステントを有する患者に対して本発明の化合物の治療上有効な量を投与する工程を包含する、ステントの能力を改善する方法を包含する。Ｚｈｏｕら、Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２３（１１）：２０１５〜２０２０（２００３）に考察されるように、ＰＩ−３キナーゼの阻害は、血管のステント位置に伴う「伸展（ｓｔｒｅｔｃｈ）」障害を妨げ得る。ステントまたはそのポリマーマトリックス中の本発明の化合物は、ステントコーティングマトリックスにおける可溶性を改善し得、水／血清の溶解度を改善し得、またはステント位置に隣接する細胞への灌流を改善し得る。

本発明はまた、加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）を処置するための方法を包含するが、この方法は、本発明の治療上有効な量の化合物をその必要な患者に投与する工程を包含する。Ｒｅｔｉｎａ，Ｆｅｂｕｒａｒｙ １８，２００４に考察されるように、ＶＥＧＦの阻害は、ＡＭＤに関連する血管の過剰増殖を阻害する。本発明の化合物は、血管形成を阻害することによってＡＭＤを処置し得る。

本発明はまた、高血圧を処置するための方法を包含するが、この方法は、本発明の治療上有効な量の化合物をその必要な患者に投与する工程を包含する。Ｎｏｔｔｈｃｏｔｔ ａｎｄ Ｗａｔｔｓ，Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，４３（１）：１２５〜１３０（２００４）に考察されるように、ＰＩ−３キナーゼの阻害は、高血圧に関連するＭｇ^２＋の低い細胞外濃度を妨げ得る。

本発明はまた、前駆細胞、例えば、骨髄前駆細胞の分化を抑制するための方法を包含するが、この方法は、本発明の化合物の有効量を前駆細胞に投与する工程を包含する。ＬｅｗｉｓらＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ、３２（１）：３６〜４４（２００４）に考察されるように、ＰＩ−３キナーゼ経路の阻害は、骨髄前駆細胞を抑制する。

本発明はまた、肝臓癌を処置するための方法を包含するが、この方法は、本発明の治療上有効な量の化合物をその必要な患者に投与する工程を包含する。Ｌｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ ３８（４）Ｓｕｐｐｌ １：４０１Ａ（２００３）に考察されるように、ＬＹ２９４００２は、ヒト肝臓組織の指標であるＡｋｔ（セリン／トレオニンプロテインキナーゼＢ）のリン酸化を阻害する。

本発明はまた、変異ＰＴＥＮに関連する状態を処置するための方法を包含するが、この方法は、本発明の治療上有効な量の化合物をその必要な患者に投与する工程を包含する。ＰＴＥＮは、コーデン病を有する患者で同定されている染色体１０ｑ２３に位置する癌抑制遺伝子である。Ｖｅｇａら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，１２１（６）：１３５６〜１３５９（２００３）に考察されるように、変異ＰＴＥＮは、プロトオンコジーンＡｋｔの活性化を阻害する能力が低くなっている。ＰＩ−３キナーゼのインヒビターは、Ａｋｔのリン酸化を阻害し得、それによって変異ＰＴＥＮの影響を軽減する。

ａ．投与
本発明の組成物は、限定はしないが経口、非経口、舌下、経皮、直腸、経粘膜、局所、吸引、口腔内投与、またはそれらの組み合わせを含む任意の方法で投与されてもよい。非経口投与としては、限定はしないが、静脈内、動脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、クモ膜下腔内および関節内が挙げられる。本発明の組成物はまた、この組成物の緩徐な放出および緩徐な制御されたｉ．ｖ．注入を可能にするインプラントの形態で投与されてもよい。

ｂ．投薬量
治療での使用に必要な化合物の治療上有効な量は、処置される条件の性質、活性が所望される時間の長さ、ならびに患者の年齢および条件によって変化し、そして担当医によって最終的に決定される。しかし、一般には、成人の処置に使用される用量は代表的には、１日あたり０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約２００ｍｇ／ｋｇの範囲である。この用量は、１日あたり約１μｇ／ｋｇ〜約１００μｇ／ｋｇであってもよい。所望の用量は、単回用量で、または適切な間隔で投与される複数の用量として、例えば、１日あたり２、３、４またはそれ以上の低用量として都合よく投与されてもよい。複数回の用量もしばしば所望されるか、または必要である。

多数の要因によって、本発明の化合物は広範な用量で投与されることになり得る。他の治療剤と組み合わせて用いる場合、本発明の化合物の投薬量は、比較的低い投薬量で与えられてもよい。さらに、標的化因子の使用によって必要な投薬量を比較的低くすることができる。本発明の特定の化合物は、限定はしないが、低い毒性、高いクリアランス、三級アミンの切断率の低さを含む要因に起因して比較的高用量で投与されてもよい。結果として、本発明の化合物の投薬量は、約１ｎｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇの範囲であってもよい。本発明の化合物の投薬量は、限定はしないが約１μｇ／ｋｇ、２５μｇ／ｋｇ、５０μｇ／ｋｇ、７５μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ、１２５μｇ／ｋｇ、１５０μｇ／ｋｇ、１７５μｇ／ｋｇ、２００μｇ／ｋｇ、２２５μｇ／ｋｇ、２５０μｇ／ｋｇ、２７５μｇ／ｋｇ、３００μｇ／ｋｇ、３２５μｇ／ｋｇ、３５０μｇ／ｋｇ、３７５μｇ／ｋｇ、４００μｇ／ｋｇ、４２５μｇ／ｋｇ、４５０μｇ／ｋｇ、４７５μｇ／ｋｇ、５００μｇ／ｋｇ、５２５μｇ／ｋｇ、５５０μｌ／ｋｇ、５７５μｇ／ｋｇ、６００μｇ／ｋｇ、６２５μｇ／ｋｇ、６５０μｇ／ｋｇ、６７５μｇ／ｋｇ、７００μｇ／ｋｇ、７２５μｇ／ｋｇ、７５０μｇ／ｋｇ、７７５μｇ／ｋｇ、８００μｇ／ｋｇ、８２５μｇ／ｋｇ、８５０μｇ／ｋｇ、８７５μｇ／ｋｇ、９００μｇ／ｋｇ、９２５μｇ／ｋｇ、９５０μｇ／ｋｇ、９７５μｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、６０ｍｇ／ｋｇ、７０ｍｇ／ｋｇ、８０ｍｇ／ｋｇ、９０ｍｇ／ｋｇまたは１００ｍｇ／ｋｇを含む任意の投薬量であってもよい。

本発明は、以下の非限定的な実施例によって例示される多数の局面を有する。

実施例１
ＬＹ２９４００２の調製
Ｌｙ２９４００２の１０ｇのサンプルは、その内容が参考として援用される、Ｖｌａｈｏｓ ｅｔ ａｌ．、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９（７）：５２４１（１９９４）に記載される手順に基づくスキーム２に従って調製した。アミンによる１２のようなチオクロムのチオメチル基の置換は、前に記載されており（その内容が参考として援用される、Ｂａｎｔｉｃｋら、Ｊ．Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｈｅｍ，１８：６７９（１９８１））、チオールアニオンのアルキル化を伴う二硫化炭素での１１のようなメチルフェニルケトンの環化を有する（Ｖｌａｈｏｓ ｅｔ ａｌ．ａｎｄ Ｂａｎｔｉｃｋ ｅｔ ａｌ．）。カルボン酸（１０）からの１工程反応のメチルケトン（例えば、１１）の調製は、その内容が参考として本明細書に援用される、Ｒｕｂｏｔｔｏｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，４８：１５５０（１９８３）に記載された手順を用いて行なった。

スキーム２

実施例２
ＬＹ２９４００２の四級アナログの調製
スキーム３の手順後、ＬＹ２９４００２の三級アミンを、強制条件下でヨードメタンまたは塩化ベンジルを用いて四級化して、化合物Ａ０５２−１０および化合物１３Ｂを得た。実施例５６は、メチル四級プロドラッグＡ０５２−１０の合成を記載する。実施例５７は、フタルイミド四級プロドラッグＡ０５２−０８の合成を記載する。実施例５８は、パラカルボキシルベンジル四級Ａ０４４−７８の合成を記載する。［０１９９］［０２１５］は、パラ−ｓｃｎ−ベンジル四級プロドラッグＡ０４４−８０の合成を記載する。

スキーム３

実施例３
クロロメチルエステルの調製
クロロメチル中間体を、Ｔｓｕｊｉｈａｒａ，Ｓｙｎｔｈ Ｃｏｍｍｕｎ，２４，７６７，１９９４に記載の手順に従って調製した。要するに、適切なカルボン酸を、ジクロロメタン／水の５０／５０混合物中に希釈した。この混合物を氷水槽中で冷却して、炭酸水素ナトリウム（４当量）およびｎ−テトラブチル硫酸水素アンモニウム（０．０５当量）を添加した。５分間の撹拌後、クロロメチルクロロサルフェート（１．１当量）を添加した。この溶液を一晩激しく撹拌した。この混合物をさらなるジクロロメタンとともに分液漏斗に移して、飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄した。有機物を硫酸ナトリウム乾燥させて、溶媒を除去して生成物を得た。この物質をＬＣ−ＭＳによって、そしてある場合には１Ｈ ＮＭＲ分光法によって特徴付けた。この一般的な手順によって、以下の代表的なクロロメチルエステルを対応するカルボン酸から調製した：
表１

＊ＵＶ検出を用いるＨＰＬＣ−ＭＳ保持時間；
＊＊ＵＶ検出を用いる出発カルボン酸のＨＰＬＣ−ＭＳ保持時間；
ＵＤ＝ＵＶ吸収がないこと、およびＭＳによるイオン化がないことに起因して検出されない。

実施例４
四級プロドラッグへのＬＹ２９４００２の変換
ＬＹ２９４００２（化合物１）をアセトニトリルに溶解し、次いで実施例３由来の各々のクロロメチルエステル（１〜１．５当量）を、ヨウ化ナトリウムの１〜２当量とともに添加した。室温ではこの反応はクロロメチルエステルでごくゆっくり進行して、塩化ナトリウムの沈殿とともにごく少量の四級化されたアミン生成物が得られた。６５℃では、この反応は通常４時間で完了した。この反応が完全に濾過された場合（ＬＣ−ＭＳによる分析で判定した）；濃縮し、ついで逆相ＨＰＬＣで精製した。この画分を収集して、凍結乾燥し、ふわふわした粉末として所望の生成物を得た。この方式で調製および精製した実施例は、下の表に示す（対イオンは示していないが、その塩化物、ヨウ化物、酢酸塩またはそれらの混合物を含む）。

表２

実施例５
ハロメチルエステルリンカー
実施例３および実施例４の結果に基づいて、ハロメチルエステルリンカーを調製した（スキーム４およびチャート）。実施例３に記載されるように、化合物Ｂは、化合物Ａ（市販される）から調製した。この化合物は、アセトンまたは２−ブタノンへの溶解、次いで２〜５当量のヨードナトリウムに溶解することによるＦｉｎｋｌｅｓｔｅｉｎ反応により、さらに反応性のヨードメチルエステル（化合物Ｃ）に変換され、ここでは塩化ナトリウムが沈殿して、ヨードメチルエステル（化合物Ｃ）が溶液中で生成された。化合物Ｃは、溶媒の剥ぎ取りおよび水不混和性の溶媒、例えば塩化メチレンへの溶解、および残りのヨードナトリウムを除去するための水での抽出によって単離された。

化合物Ｅは化合物Ｄ（市販されている）から調製し、化合物ＦおよびＧは、それぞれ、化合物ＢおよびＣの生成物と同様の方式で調製した。

スキーム４

実施例６
ハロメチルリンカーでのＬＹ２９４４０２の四級化
ハロメチルエステルは、実施例５のものを含むが、これを、実施例４の方法論と同様の条件を用いてＬＹ２９４００２を四級化するために用いた。遊離の官能基とのリンカーを含む代表的なプロドラッグとしては以下が挙げられる：

化合物１１０５は、アセトニトリル中に化合物Ｃとともに化合物１１０１を混合することによって調製され、ここではこの両方が可溶性であり、そして生成物化合物１１０５は、３日間にわたって沈殿し、少量のアセトニトリルで洗浄されて実質的に純粋な化合物１１０５が得られた（ＬＣＭＳによって確認された）。

実施例７
化合物１１１１を用いるプロドラッグの調製
化合物１１１１は、スキーム５に示す方法によって生成した。化合物１１１０は、１〜３時間にわたってニートなトリフルオロ酢酸で処理し、ＴＦＡをアルゴンで吹き飛ばして減圧下で乾燥し、化合物１１１３からなるガラス状の固体を得た。次いで、化合物１１１３を１〜３ｍｌの塩化チオニルに溶解して、６５℃で３〜８時間加熱した。塩化チオニルをアルゴンで吹き飛ばし、ついで減圧下で乾燥して、ガラス状の黄色固体として良好な収率で化合物１１１１を得た。化合物１１１１は、例えば、メタノールへの単なる溶解によって、種々の窒素含有およびヒドロキシル含有求核試薬との代表的な酸塩化物として反応されて、相当するメチルエステル化合物１１１２を得ることができる。

スキーム５

化合物１１１１のサンプルを、アセトニトリルに溶解して、別々のバイアルに含まれる少なくとも５当量の種々のアルコールで処理した。１時間後、サンプルをＨＰＬＣ−ＭＳによって分析したところ、表３に示されて特徴付けられるとおり、９０％より多い化合物１１１１の対応するエステルへの良好な変換が示された。

表３

^＊ ＵＶ ２１４ｎｍ
実施例８
化合物１１１１を用いるタンパク質結合プロドラッグの調製
修飾されるアミノ基またはヒドロキシル基に対して２〜１０倍過剰な化合物１１１１を用いて大量の水溶液（ｐＨ７〜９）（炭酸塩緩衝液に対してリン酸塩緩衝液）中でタンパク質を結合体化する。酸塩化物の化合物１１１１は、混合した有機の水溶液（５０／５０の水／アセトニトリルまたは５０／５０の水／ＴＨＦなど）に導入してもよいし、または１〜２４時間、室温で２相の反応系で塩化メチレン中に撹拌してもよい。タンパク質結合体は、透析または限外濾過によって精製して、直接用いることができる。

５０ｍＭの炭酸水素ナトリウム緩衝液に含まれる５ｍｇ／ｍｌのトランスフェリンタンパク質（Ｓｉｇｍａ）の５００μｌのアリコートを、実施例１２に従ってＤＭＳＯ中に調製した、１００倍の３０ｍＭ Ａ０２４−７９（１００モル当量）と混合した。室温での１時間および２０分の反応の後、５０倍のサンプルを取り出して、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−１０（７００モル重量のカットオフ）カラムを通過させて、低分子からタンパク質を分離した。次いで、精製された結合されたタンパク質溶出物のアリコートをアセトニトリルで抽出したところ、ＬＣ−ＭＳでは化合物１は検出されなかった。精製された結合体化されたタンパク質溶出物を室温で３９時間静置させて、その時点でタンパク質混合物をアセトニトリルで再度溶出したところ、この時点で化合物１の最大理論量の１５％が検出された。これらの結果によって、プロドラッグの１５モルというモル比がトランスフェリンの１モルあたりに結合されたことが示される。これらの結果によって、代表的なタンパク質に対する求電子性リンカー保有プロドラッグの結合が実証され、そして経時的に、ＰＩ３キナーゼインヒビター（化合物１）のかなりの量が水性の条件下でタンパク質から遊離されたことが実証された。

実施例９
化合物１１１１を用いる樹脂結合プロドラッグの調製
全て天然のアミノ酸を用いる標準的なＦＭＯＣ／ＨＯＢＴカップリングペプチド化学を用いて、ｗａｎｇ樹脂上でペプチドａｒｇ−ｇｌｙ−ａｓｐ−ｓｅｒ（ＲＧＤＳ）を調製した。樹脂結合したペプチドを１〜２４時間ＤＭＦ中で化合物１１１１と反応させて、濾過して、樹脂をＤＭＦで、次いで、塩化メチレンで洗浄し、次いでトリフルオロ酢酸で処理して、樹脂から結合体化合物１１２６を切断した（スキーム６）。実施例５５は、化合物１１１１の大規模化調製を記載する。

スキーム６

実施例１０
化合物１１１１を用いるフォレート標的化因子でのプロドラッグの調製
化合物１１１１は、求電子性基を有し、この基が軽度に塩基性の有機または水性の条件（すなわち、２０ｍＭ〜５００ｍＭの炭酸水素ナトリウム）下で求核性アミノ基と反応して非可逆性のチオ尿素結合を形成し得る。適切な求核性アミノ基は、標的化生体高分子フォレートに存在する。フォレート分子ＡおよびＣを、塩基トリメチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミンの存在下でほぼ等しい割合で混合することによってＤＭＦ中のアミノ基を介して化合物１１１１に結合して、化合物ＢおよびＤを得た（スキーム７）。

スキーム７

実施例１１
化合物１１１１を用いる抗体標的化因子でのプロドラッグの調製
化合物１１１１は、ｐＨ７〜９の水溶液中でモノクローナル抗体に結合体化し、次いで限外濾過、または低分子からタンパク質結合体を分離する他の標準的な方法によって分離する。行なわれた結合体化は実施例８に従って調製され得る。

実施例１２
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルを用いるプロドラッグの調製
化合物１１１１よりも反応性の低いエステルは、化合物１１１３のＮ−ヒドロキシスクシンイミド活性エステルを生成することによって調製した（スキーム８）。化合物１１１３（Ａ０２４−６７）の１００ｍｇのサンプルを、５３ｍｇのＮ−ヒドロキシスクシンイミド（２当量）とともに１ｍｌの乾燥ＴＨＦに溶解した。塩化メチレン（２当量）に含まれる１Ｍジクロヘキシカルボジイミドの４５のアリコートを撹拌しながら一挙に添加した。３分内に重い白色沈殿が形成され、このことはカップリング反応が生じたことを示した。反応物を２３時間撹拌させた後、この反応混合物を濾過して、濾液から溶媒を除去して、１７２ｍｇの粗活性エステル生成物を、化合物Ａ０２４−７９と命名された濃い黄色の油状物として得たが、これは２．３３４分という保持時間を示し、Ｍ＋＝５３５という予想質量がこのピークについて見出された。

スキーム８

化合物１１１１について上記したのと同じ化学を用いて、実施例８に記載されたように標的タンパク質に対して結合体化するためにＡ０２４−７９を用い、そしてポリマーに対して結合体化するために用いたのは実施例７４に記載する。

実施例１３
化合物１１０５を用いるプロドラッグの調製
化合物１１０５は、求電子性基を有し、この基は、軽度に塩基性の有機または水性の条件（すなわち、２０ｍＭ〜５００ｍＭの炭酸水素ナトリウム）下で求核性アミノ基と反応して非可逆性のチオ尿素結合を形成し得る。適切な求核性アミノ基は、ビタミン誘導体のようなアミン基を保有するペプチド、タンパク質および低分子のような生体高分子に存在する（スキーム７のＡおよびＣ）。このような生成物の代表的な例としては、化合物ＢおよびＤが挙げられる。

スキーム９

実施例１４
モルホリン環の誘導体の調製
スキーム１のチオメチル化合物は、実施例１に記載のように調製した。この化合物を、適切な溶媒中において触媒量の酢酸の有無のもとで、そして過剰な求核性のアミン化合物とともに、ほとんどのチオメチル化合物が消費されるまで加熱した。この混合物を分取逆相ＬＣ−ＭＳに供して、所望のモルホリンアナログを単離した。この方式で調製した化合物は、それらの調製条件とともに表４に示し、特徴および単離は表５に示す。化合物のＮＭＲデータは表６に示す。

表４

表５

表６

実施例１５
ＨＰＬＣ分析
ＨＰＬＣ分析を島津ＬＣＭＳ−２０１０で行い、流速は３ｍｌ／分を、そして出発Ｂ濃度は５％を使用した。Ｂ溶媒は５．０分で９５％濃度まで直線的に増大させて、６．０分まで９５％で保持し、次いで６．５分で５％に直線的に減少させ、これを７．５分で流し終わるまで保持する。他に注記しない限り、これが本実施例で用いた方法である。方法Ｂは、極性の化合物のための緩い勾配の方法であって、これには３ｍｌ／分の流速および０％の出発Ｂ濃度を使用して、これを最初の１分間保持する。溶媒Ｂは３．０分で１０％の濃度まで直線的に増大させ、次いで５．０分で９５％まで直線的に減少させて、ここで６．０分まで保持し、次いで６．５分で５％まで直線的に減少させて、これを７．５分で流し終わるまで保持する。質量検出に加えて、ＬＣ検出は、３つのチャネルからなった；２５４ｎｍのＵＶ吸収、２１４ｎｍのＵＶ吸収、そして蒸発光散乱（Ａｌｌｔｅｃｈ ＥＬＳＤ ２０００）。蒸発光散乱検出器は、１分あたり１．５リットルの窒素流を用いて５０℃で行なった。ＣＤＬ（化学脱溶媒ライン）および島津ＬＣＭＳ−２０１０のブロック温度は両方とも３００℃であって、窒素ネブライザーガス流は４．５Ｌ／分であった。正および負の質量スペクトルが５０〜２０００ｍ／ｚで検出された。カラムはＹＭＣ ＣｏｍｂｉＳｃｒｅｅｎ ＯＤＳ−ＡＱ，Ｓ−５μ粒子サイズ、５０ｍｍ長、内径４．６ｍｍであった。移動相Ａは、０．１％（ｖ／ｖ）ＨＯＡｃを添加したＨＰＬＣ等級のＢ＆Ｊの水を用いて作製し、移動相Ｂは０．１％（ｖ／ｖ）ＨＯＡｃを添加したＨＰＬＣ等級のＢ＆Ｊのアセトニトリルを用いて作製した。このシステムによって、参照標準として用いた標準の市販の物質（４−ヒドロキシフェニル酢酸；Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃａｔａｌｏｇ Ｈ５０００−４；融点１４９〜１５１℃）について１．５０〜１．６０分（ｔ_Ｒ＝１．５０〜１．６０）という保持時間が得られる。

実施例１６
分取ＨＰＬＣ
勾配分取ＨＰＬＣを、ＳＩＬ−１０Ａ自動サンプリング装置に接続した２つのＬＣ−８Ａポンプを備える島津システムで行い、逆相カラム（ＹＭＣ，カタログＣＣＡＱＳＯＳＯ５２ＯＷＴ；ＯＤＳ−ＡＱ ＣｏｍｂｉＰｒｅｐ，２０ｍｍ×５０ｍｍ）で溶出し、次いでＭＲＡ可変容積分配器を通過させた；次いでより小さいストリームを、ＬＣ−１０ＡＤＶＰ補給ポンプ（ＭｅＯＨ）を用いて３ｍｌ／分まで作製し、溶出液を可変２チャンネル波長ＵＶ検出器を通過させ、次いで蒸発光散乱検出器（１分あたり１．５リットルの窒素流を用いて５０Ｃで実施）と島津２０１０質量検出器とにほぼ６：１に分けた；次いで、ＭＲＡ分配器からの大きいストリームを、質量、ＵＶ吸収またはＥＬＳピークサイズによって誘発される分画収集器として機能するＧｉｌｓｏｎ ２１５液体処理装置に流した。

種々の勾配を、さらに水性の溶媒Ａから出発して流して、種々の濃度のＢまで傾斜させた。移動相Ａは０．１％（ｖ／ｖ）ＨＯＡｃを添加したＨＰＬＣ等級のＢ＆Ｊの水を用いて作製し、移動相Ｂは０．１％（ｖ／ｖ）ＨＯＡｃを添加したＨＰＬＣ等級のＢ＆Ｊのアセトニトリルを用いて作製した。

実施例１７
加水分解されたプロドラッグの生物活性
ＬＹ２９４００２（化合物１）の生物活性は、クラスＩ ＰＩ−３キナーゼ依存性経路である、Ｊ７７４マクロファージ中の食作用を評価することによって決定した。要するに、Ｊ７７４細胞を、１０％ＦＣＳを添加したＤＭＥＭ中で１時間、適切なＤＭＳＯコントロールとともに、１０、１および０．１μＭの濃度のＬＹ２９４００２で処理して、次いで感作されたｓＲＢＣ（ヒツジ赤血球）を、１００：１の標的対エフェクター比で３７℃で３０分間添加した。細胞を低張性ショックに曝して赤血球を取り除き、細胞溶出液中のヘモグロビン濃度の測定によって食作用を決定した。図１に示されるように、ＬＹ２９４００２は、全ての濃度で用量依存性の様式で食作用を有意にブロックした。これらの結果によって、Ｊ７７４細胞系は、本発明の化合物がＰＩ−３キナーゼ活性を阻害する能力を迅速にかつ容易にアッセイするために用いられ得ることが示される。ＰＩ−３キナーゼ活性をアッセイするこの方法を用いて、標的されたプロドラッグ化合物１１２６を、種々のプレインキュベーション時間を用いて５μＭの濃度で試験して、プロドラッグを活性薬物（化合物１）にインサイチュで変換させた。コントロールのサンプル（化合物１１２６のプレインキュベーションなしの時間ゼロ）は、１４０という食作用係数（ＰＧＩ；ＰＩ−３キナーゼの阻害がない結果として生じる食作用の程度の指標）を示したが、化合物１１２６は水性でｐＨ＝７であり、２、５および１０時間のインキュベーション時間で、それぞれＰＧＩは８８、７８および３７を示した。本実施例によって、最初のプロドラッグ１１２６は、ＰＩ−３キナーゼ阻害活性をほとんどまたは全く有さず、そして有意なＰＩ−３キナーゼ阻害を示す生物活性薬物に経時的に変換されることが実証される。別の実験では、２０μＭ濃度の化合物１１２６は曝露限界の設定（試験溶液に対する２０分の曝露、次いで試験溶液の除去）で、溶媒ブランクについて１６３、化合物１について１９０、そしてＲＧＤＳ（化合物１１２６の標的部分であるテトラペプチド）についての１７０に対して、５０というＰＧＩを有した。本実施例は、曝露時間限界の設定での標的されたＰＩ−３キナーゼインヒビターの利点を示した。この効果はさらに、実験を繰り返すことによって評価したが、ここでは、化合物１１２６の１０μＭ、３μＭ、１μＭおよび０μＭという漸減する用量を用いて、化合物の除去後２０分のインキュベーション時間、続いて食作用の２時間のインキュベーションによって、それぞれ３３、１４３、２０６および２１３というＰＧＩが得られた。本実施例によって化合物１１２６は用量曝露限界の設定で、用量依存性の様式でＰＩ−３キナーゼを阻害したことが実証される。

実施例１８
骨標的化基Ａ０３０−８４の調製
５００ｍｇの４−［（Ｎ−ＢＯＣ）アミノエチル］アニリン（Ａｌｄｒｉｃｈ）を含む１０ｍｌのジオキサンの溶液をパラホルムアルデヒド（４００ｍｏｌ％、２７０ｍｇ）および亜リン酸トリメチル（４００ｍｏｌ％、１．１２ｇ）で処理した。この混合物を９５℃で一晩加熱した。次いでさらにパラホルムアルデヒド（２７０ｍｇ）および亜リン酸トリメチル（１．１２ｇ）を添加して、これを再度９５℃で一晩加熱した。この溶液を冷却して、クロロホルム（２０ｍＬ）にとり、飽和塩化ナトリウム（２０ｍＬ）および水（２０ｍＬ）で洗浄した。有機物を硫酸ナトリウムで乾燥して、溶媒および過剰の亜リン酸トリメチルを８０℃のロータリーエバポレーションによって除去して、１．７２３ｇの透明な油状物を得た。ロット番号Ａ０３０−７４と命名された表題の化合物の存在を、エレクトロスプレーＨＰＬＣ−ＭＳによって確認したところ、これはｔ_Ｒ＝２．９分の保持時間、そして所望の質量［Ｍ＝Ｃ_１８Ｈ_３２Ｎ_２Ｏ_８Ｐ_２］について実測した、４６７ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋および４８９ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋を示した。

１０ｍＬのジクロロメタン中で上記のように調製した８７０ｍｇのＡ０３０−７４の溶液をブロモトリメチルシラン（６９０モル％、１．９７ｇ）で処理した。この溶液を一晩撹拌した。メタノール（１０ｍＬ）を添加して、溶液を１５分撹拌し、次いで濃縮して１．１２ｇのオレンジ色の油状物を得た。表題の化合物の存在をエレクトロスプレーＬＣ−ＭＳによって確認した。この勾配を用いる保持時間は、ｔ_Ｒ＝０．８５分であることが見出され、そして所望の生成物［Ｍ＝Ｃ_９Ｈ_１６Ｎ_２Ｏ_６Ｐ_２］についての質量スペクトルは、ネガティブモードで操作する予想ｍ／ｚ ３０９［Ｍ−Ｈ］⁻で見出した。この生成物には参照番号Ａ０３０−８４を与えた。

実施例１９
化合物Ａ０１４−５２の合成

１．０ｇの４−カルボキシフェニルイソチオシアナートにジクロロメタン（１５ｍＬ）および蒸留水（１５ｍＬ）を添加した。フラスコを氷水槽中で冷却して、炭酸水素ナトリウム（４．０当量）およびｎ−硫酸水素テトラブチルアンモニウム（０．０５当量）を添加した。１０分後、クロロメチルクロロサルフェート（１．２当量）を添加した。この溶液を一晩激しく撹拌して、ジクロロメタン（１０ｍＬ）で補助して分液漏斗に移した。この相を分離して有機物を飽和塩化ナトリウム（２０ｍＬ）で洗浄した。有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を除去して、１．１０ｇの黄褐色の固体を得た。表題の化合物の存在は、生成物（４．２分）対、出発のカルボン酸（３．２分）の保持時間のシフトによって示された。この化合物をプロトンＮＭＲ分光法によって確認した：^１Ｈ（ＣＤＣｌ_３）δ：８．０８（ｄ，２Ｈ，Ｊ８．８Ｈｚ），７．３０（ｄ，２Ｈ，Ｊ８．８Ｈｚ），５．９５（ｓ，２Ｈ）。

実施例２０
化合物Ａ０１４−４８の合成

２５０ｍｇのクロロメチルエステル（Ａ０１４−５２に記載の手順を介して調製）を含む２ｍＬのアセトンの溶液を、ヨウ化ナトリウム（１．２当量）で処理して、この溶液を一晩撹拌した。この溶液を濾過して、溶媒を除去し、その残留物をジクロロメタン（１０ｍＬ）にとった。この溶液を１０％（ｗ／ｖ）の亜硫酸ナトリウム（１０ｍＬ）、５％（ｗ／ｖ）炭酸水素ナトリウム（１０ｍＬ）および水（１０ｍＬ）で洗浄した。この有機物を硫酸ナトリウムで乾燥して、溶媒を除去して１３７ｍｇの薄緑色の固体を得た。表題の化合物の存在は、ヨードメチルエステル生成物（４．４分）対出発クロロメチルエステル（４．２分）の保持時間のシフトで示された。この化合物はまたプロトンＮＭＲ分光法によって確認した：^１Ｈ（ＣＤＣｌ_３）δ：８．０４（ｄ，２Ｈ，Ｊ８．８Ｈｚ），７．２９（ｄ，２Ｈ，Ｊ８．１Ｈｚ），６．１５（ｓ，２Ｈ）。

実施例２１
化合物Ａ０１４−７６の合成

３８７ｍｇのクロロメチルエステル（Ａ０１４−５２に記載の手順を介して調製）を含む６ｍＬの２−ブタノンの溶液を、ヨウ化ナトリウム（１．２当量）で処理して、この溶液を１０時間加熱した。この溶液を濾過して、溶媒を除去し、その残留物をジクロロメタン（１０ｍＬ）にとった。この溶液を１０％（ｗ／ｖ）の亜硫酸ナトリウム（１０ｍＬ）、５％（ｗ／ｖ）炭酸水素ナトリウム（１０ｍＬ）および水（５ｍＬ）で洗浄した。この有機物を硫酸ナトリウムで乾燥して、溶媒を除去して３１０ｍｇの黄褐色色の固体を得た。表題の化合物の存在は、ヨードメチルエステル生成物（４．４分）対出発クロロメチルエステル（４．２分）の保持時間のシフトで示された。

実施例２２
化合物Ａ０１８−２４の合成

６４ｍｇの２−ｐ−ニトロベンジル−１，４，７，１０−テトラアザサイクロドデカン（Ｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｃｓ）を含む５００μＬのジオキサンの溶液を、パラホルムアルデヒド（５０ｍｇ）および亜リン酸トリメチル（２０７ｍｇ）で処理した。この混合物を８５℃で加熱して、次いで溶媒を７５℃のロータリーエバポレーションによって除去した。クロロホルム（１０ｍＬ）を添加して、溶液を飽和塩化ナトリウム（２×１０ｍＬ）および水（２×１０ｍＬ）で洗浄した。この有機物を硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を除去して褐色の油状物を得た。これをＬＣを介して精製して、所望の物質を得た。表題の化合物の存在をエレクトロスプレーＬＣ−ＭＳ Ａによって確認した；ｔ_Ｒ＝１．８分。ＭＳ［Ｍ＝Ｃ_２７Ｈ_５３Ｎ_５Ｏ_１４Ｐ_４］ｍ／ｚ７９６（ＭＨ^＋），８１８（ＭＮａ^＋）。

実施例２３
化合物Ａ０２２−３２の合成

３３ｍｇのホスホン酸大環状化合物（Ａ０１８−２４で調製）を含む７００μｌのジクロロメタンの溶液をブロモトリメチルシラン（７２ｍｇ）で処理した。この混合物を一晩撹拌し、次いでさらなるブロモトリメチルシラン（３６ｍｇ）を添加して、これをさらに３日撹拌した。メタノール（５００ｍＬ）を添加して溶液を１時間撹拌し、次いで揮発性物質を除去して、褐色の油状物を得た。メタノールの添加で褐色の固体を沈殿させ、これを濾過して乾燥させた。これを、ＬＣを介して精製して、２．７ｍｇの所望の物質を得た。表題の化合物の存在をエレクトロスプレーＬＣ−ＭＳ Ａによって確認した；ｔ_Ｒ＝１．５分。ＭＳ［Ｍ＝Ｃ_１９Ｈ_３７Ｎ_５Ｏ_１４Ｐ_４］ｍ／ｚ ６８２（Ｍ−Ｈ⁻），３４０（Ｍ−２Ｈ）／２）^２−］。

ニトロ基は標準的な還元方法を用いて、例えば、純粋な水素の雰囲気下でのメタノール中の炭素触媒上で５％パラジウムとともに撹拌することによって還元する。次いでこの混合物を濾過して（触媒に対する空気の曝露を妨げるように注意する）、溶媒をエバポレートしてアミンを得る。

実施例２４
化合物Ａ０２２−５６の合成

リン酸（１．２６ｇ）、６Ｍ塩酸（１９．５ｍＬ）およびｐ−キシレンジアミン（１．０ｇ）の混合物を１００℃に加熱した。これに３７％（ｗｔ／ｗｔ）のホルムアルデヒド水溶液（１．１５ｍＬ）を添加して、この混合物を１００℃で一晩撹拌した。この混合物を濾過して、８０℃でのロータリーエバポレーションによって水を除去して、２．１１ｇの白色固体を得た。表題の化合物の存在を、方法Ｂを用いてエレクトロスプレーＬＣ−ＭＳによって確認した；ｔ_Ｒ＝１．８分。ＭＳ［Ｍ＝Ｃ_１０Ｈ_１８Ｎ_２Ｏ_６Ｐ_２］ｍ／ｚ ３２５（ＭＨ^＋）。

実施例２５
化合物Ａ０１８−１２の合成

９２８ｍｇ Ｎ−ＢＯＣ−１，４−ジアミノブタンを含む１０ｍＬのジオキサンの溶液を、パラホルムアルデヒド（５９２ｍｇ）および亜リン酸トリメチル（２．４４ｇ）で処理した。この混合物を１０８℃で一晩撹拌して、７５℃のロータリーエバポレーションによって溶媒を除去した。クロロホルム（１０ｍＬ）を添加してこの溶液を飽和塩化ナトリウム（２×１０ｍＬ）および水（２×１０ｍＬ）で洗浄した。この有機物を硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を除去して１．５５ｇの油状物を得た。表題の化合物の存在をエレクトロスプレーＬＣ−ＭＳによって確認した；ｔ_Ｒ＝２．４分。ＭＳ［Ｍ＝Ｃ_１５Ｈ_３４Ｎ_２Ｏ_８Ｐ_２］ｍ／ｚ ４５５（ＭＮａ^＋）。

実施例２６
化合物Ａ０２６−９２の合成

７８３ｍｇのホスホン酸塩（Ａ０１８−２４で調製）を含む１８ｍＬのジクロロメタンの溶液をブロモトリメチルシラン（２．２ｇ）で処理した。この溶液を一晩撹拌し、メタノール（１０ｍＬ）を添加してその混合物を２時間撹拌した。揮発性物質を除去して、１．２２ｇの黄色油状物を得た。表題の化合物の存在を、方法Ｂを用いてエレクトロスプレーＬＣ−ＭＳによって確認した；ｔ_Ｒ＝０．４分。ＭＳ［Ｍ＝Ｃ_６Ｈ_１８Ｎ_２Ｏ_６Ｐ_２］ｍ／ｚ ２７５（Ｍ−Ｈ⁻）。

実施例２７
化合物Ａ０３０−７４の合成

５００ｍｇ ４−［（Ｎ−ＢＯＣ）アミノエチル］アニリンを含む１０ｍＬのジオキサンの溶液をパラホルムアルデヒド（２７０ｍｇ）および亜リン酸トリメチル（１．１２ｇ）で処理した。この混合物を９５℃に一晩加熱した。次いでさらなるパラホルムアルデヒド（２７０ｍｇ）および亜リン酸トリメチル（１．１２ｇ）を添加して、これを再度、一晩９５℃で加熱した。この溶液を冷却して、クロロホルム（２０ｍＬ）にとり、飽和塩化ナトリウム（２０ｍＬ）および水（２０ｍＬ）で洗浄した。有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させて、溶媒および過剰の亜リン酸トリメチルを８０℃のロータリーエバポレーションによって除去して、１．７２ｇの透明な油状物を得た。表題の化合物の存在を、エレクトロスプレーＬＣ−ＭＳによって確認した；ｔ_Ｒ＝２．９分。ＭＳ［Ｍ＝Ｃ_１８Ｈ_３２Ｎ_２Ｏ_８Ｐ_２］ｍ／ｚ ４６７（ＭＨ^＋）；４８９（ＭＮａ^＋）。

実施例２８
化合物Ａ０３０−８４の合成

８７０ｍｇのＡ０３０−７４を含む１０ｍＬのジクロロメタンの溶液をブロモトリメチルシラン（１．９７ｇ）で処理した。この溶液を一晩撹拌した。メタノール（１０ｍＬ）を添加してその溶液を１５分撹拌し、次いで濃縮して１．１２ｇのオレンジ色の油状物を得た。表題の化合物の存在を、方法Ｂを用いてエレクトロスプレーＬＣ−ＭＳによって確認した；ｔ_Ｒ＝０．８５分。ＭＳ［Ｍ＝Ｃ_９Ｈ_１６Ｎ_２Ｏ_６Ｐ_２］ｍ／ｚの実測３０９［Ｍ−Ｈ］⁻。

実施例２９
化合物Ａ０３５−６６の合成

２．０ｇ部の４−アミノメチル安息香酸（Ａｌｄｒｉｃｈ）を、０．６４ｇの固体ＮａＯＨを含む２０ｍＬの水に溶解した。３．１８ｇ部のＢｏｃ無水物（Ａｌｄｒｉｃｈ）を添加して、その混合物を一晩撹拌させた。この混合物に１５ｍＬの２Ｎ ＨＣｌを注意深く添加することによってｐＨ＝２に調節した。得られた白色固体を濾過して、乾燥させ、２．９９９７ｇの生成物を得た。この生成物をＬＣＭＳ（保持時間２．９０１分、所望のＭ−Ｈ質量イオン２５０ｍ／ｚで観察）によって特徴付けた。

実施例３０
化合物Ａ０３５−６の合成

１．５部のＡ３５−６６を１７ｍＬの乾燥ＴＨＦ中に、０．６９ｇのＮ−ヒドロキシスクシンイミド（Ａｌｄｒｉｃｈ）とともに溶解し、次いで１Ｍジシクロヘキシカルボジイミド（Ａｌｄｒｉｃｈ）を含む６ｍＬのジクロロメタンとともに撹拌して一度に処理した。２日後、白色沈殿（ジシクロヘキシル尿素）を濾過して除き、次いで濾液を減圧下でロータリーエバポレートして、２．８１４６ｇの白色固体を得て、ＬＣＭＳによって特徴付けた（保持時間３．２９９分、そして３４９ｍ／ｚで所望のＭ＋Ｈを観察）。

実施例３１
化合物Ａ０３５−１４の合成

Ａ０３５−６の５００ｍｇ部を、５ｍＬの乾燥ＴＨＦに溶解して、１．００２ｍＬ（１０当量）のエチレンジアミン（ＥＤＡ）で処理して２時間撹拌させた。次いでこの溶液を形成された固体からデカントした。次いで溶媒および過剰のＥＤＡを、減圧下でロータリーエバポレーションによってデカントされた溶液から除去し、０．８７２８ｇの白色固体を得た；この生成物をＬＣＭＳによって特徴付けた（保持時間１．６０８分、そして２９４ｍ／ｚで所望のＭ＋Ｈを観察）。

実施例３２
化合物Ａ０３２−２４の合成

８７２ｍｇのアミン（Ａ０３５−１４で調製）を含む１０ｍＬのジオキサンの溶液をパラホルムアルデヒド（５３５ｍｇ）および亜リン酸トリメチル（２．２１ｇ）で処理した。この混合物を１００℃で一晩加熱し、次いで溶媒を８０℃のロータリーエバポレーションによって除去して、褐色の固体を得た。クロロホルム（２５ｍＬ）を添加してその溶液を水（１５ｍＬ）で洗浄した。この有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させて、溶媒を除去して２４１ｍｇの黄色半固体を得た。これを、ＬＣを介して精製して、５８．８ｍｇの所望の物質を得た。表題の化合物の存在を、エレクトロスプレーＬＣ−ＭＳによって確認した；ｔ_Ｒ＝２．６分。ＭＳ［Ｍ＝Ｃ_２１Ｈ_３７Ｎ_２３Ｏ_９Ｐ_２］ｍ／ｚ ５３８（ＭＨ^＋），５６０（ＭＮａ^＋）。

実施例３３
化合物Ａ０３２−４０の合成

５４．６ｍｇのホスホン酸塩（Ａ０３２−２４で調製）を含む１ｍＬのジクロロメタンの溶液をブロモトリメチルシラン（１５６ｍｇ）で処理した。この混合物を一晩撹拌させた。エタノール（０．５ｍＬ）および水（３滴）を添加して、これを１時間撹拌し、次いで揮発性物質を除去して、その物質を減圧下で乾燥させた。これを水（１ｍＬ）にとって、凍結乾燥させ、５９ｍｇの黄褐色固体を得た。表題の化合物の存在を、方法Ｂを用いてエレクトロスプレーＬＣ−ＭＳによって確認した；ｔ_Ｒ＝０．４分。ＭＳ［Ｍ＝Ｃ_１２Ｈ_２１Ｎ_３Ｏ_７Ｐ_２］ｍ／ｚ ３８０（Ｍ−Ｈ⁻），３８２（ＭＨ^＋），４０４（ＭＮａ^＋）。

実施例３４
化合物Ａ０２６−６０の合成

Ｋａｎｔｏｃｉ，Ｄ．，Ｋｅｎｉｋｅ，Ｊ．Ｋ．，Ｗｅｃｈｔｅｒ，Ｗ．Ｊ．Ｓｙｎ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１９９６，２６（１０），２０３７の手順を介してＡ０２６−６０を調製した：Ｎ−ベンジル−Ｎ−メチルアミン（２０．０ｇ）、亜リン酸ジエチル（７０．７ｇ）およびオルトギ酸トリエチル（２９．３ｇ）の混合物をアルゴン還流下（１５０℃）で５時間撹拌した。エタノールを７０℃のロータリーエバポレートを介して除去して、その混合物を再度、一晩還流して加熱した。この溶液を６００ｍＬクロロホルムで希釈して、１Ｍの水酸化ナトリウム（３×１００ｍＬ）および飽和塩化ナトリウム（３×１５０ｍＬ）で洗浄した。この有機物を硫酸ナトリウムで乾燥して、溶媒を除去し、７４．０ｇの淡黄色油状物を得た。この物質の１０．０ｇを、溶出液として１４：４：１の酢酸エチル：ヘキサン：メタノールを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供した。これによって、６．０８ｇの透明な油状物を得た。表題の化合物の存在を、エレクトロスプレーＬＣ−ＭＳによって確認した；ｔ_Ｒ＝３．４分。ＭＳ［Ｍ＝Ｃ_１７Ｈ_３１ＮＯ_６Ｐ_２］ｍ／ｚ ４０８（ＭＨ^＋），４３０（ＭＮａ^＋），４７１（ＭＮａ−ＣＨ_３ＣＮ^＋）。

実施例３５
化合物Ａ０３０−５４の合成

Ｋａｎｔｏｃｉ，Ｄ．，Ｋｅｎｉｋｅ，Ｊ．Ｋ．，Ｗｅｃｈｔｅｒ，Ｗ．Ｊ．Ｓｙｎ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１９９６，２６（１０），２０３７の手順を介してＡ０３０−５４（ＣＡＳ＃８０４７５−００−９として公知の化合物）を調製した：４．５２ｇのホスホン酸化ベンジルアミン（Ａ０２６−６０で調製）を含むメタノール（４５ｍＬ）の溶液を１０％パラジウムとともに炭素（２００ｍｇ）上で処理して、水素雰囲気に一晩供した。パラジウム／炭素を濾過して、２．９８ｇの淡黄色の油状物を得た。表題の化合物の存在を、方法Ａを用いてエレクトロスプレーＬＣ−ＭＳによって確認した；ｔ_Ｒ＝１．９分。ＭＳ［Ｍ＝Ｃ_１０Ｈ_２５ＮＯ_６Ｐ_２］ｍ／ｚ ３１８（ＭＨ^＋）。

実施例３６
化合物Ａ０３９−１６の合成

Ａ０３９−１６：５００ｍｇのサンプルの４−クロロメチル安息香酸（Ａｌｄｒｉｃｈ）を、８ｍＬのＴＨＦに溶解し、５当量のエチレンジアミン（Ａｌｄｒｉｃｈ）（９８３μＬ）とともに一度に処理した。２４時間後、溶媒を高真空下で除去して、白色固体（９３％）をＬＣＭＳによって特徴付けた（保持時間０．４分、そして１９５ｍ／ｚで所望のＭ＋Ｈを観察）。

実施例３７
化合物Ａ０３８−２４の合成

ジオキサン（１０ｍＬ）中の６７９ｍｇのアミノ酸（Ａ０３９−１６で調製）、３７％（ｗｔ／ｗｔ）ホルムアルデヒド水溶液（１．０４ｍＬ）、亜リン酸（１．１５ｇ）および濃（１２．１Ｍ）塩酸（２．３ｍＬ）の混合物を１００℃で一晩撹拌した。この溶媒を７５℃でロータリーエバポレートを介して除去して、混合物を遠心分離して固体を廃棄した。この液体にさらにホルムアルデヒド溶液（１．０４ｍＬ）、亜リン酸（１．１５ｇ）、濃塩酸（２ｍＬ）およびジオキサン（１０ｍＬ）を添加して、これを再度１００℃で一晩撹拌させた。この溶媒を７５℃のロータリーエバポレーションによって除去して、濃い油状物を得た。これをＬＣを介して精製して、２７６ｍｇの黄褐色の固体を得た。表題の化合物の存在を方法Ａを用いてエレクトロスプレーＬＣＭＳによって確認した；ｔ_Ｒ＝０．６分。ＭＳ［Ｍ＝Ｃ_１３Ｈ_２３Ｎ_２Ｏ_１１Ｐ_３］ｍ／ｚ ４７５（ＭＨ⁻），４７７（ＭＨ^＋）。

実施例３８
化合物Ａ０３８−５０の合成

６．０ｇのＦｍｏｃ−Ｌｙｓ−ＯＨ（Ａｄｖａｎｃｅｄ ＣｈｅｍＴｅｃｈ）を含むメタノール（２５ｍＬ）および水（２５ｍＬ）の混合物を３７％（ｗｔ／ｗｔ）ホルムアルデヒド水溶液（６．０６ｍＬ）および亜リン酸ジメチル（８．９６ｇ）で処理した。この混合物を８０℃で２時間撹拌して、冷却し、ジクロロメタン（１×１００ｍＬ、２×５０ｍＬ）で抽出した。この有機物を飽和塩化ナトリウム（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで３０分間乾燥し、溶媒を除去して、１０．１７ｇの薄緑色の油状物を得た。表題の化合物の存在を、方法Ａを用いてエレクトロスプレーＬＣ−ＭＳによって確認した；ｔ_Ｒ＝３．３分。ＭＳ［Ｍ＝Ｃ_２７Ｈ_３８Ｎ_２Ｏ_１０Ｐ_２］ｍ／ｚ ６１３（ＭＨ^＋），６３６（ＭＮａ^＋）。

実施例３９
化合物Ａ０３８−６６の合成

２３．９ｍｇのホスホン酸化Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ−ＯＨ（Ａ０３８−５０で調製）を含むジクロロメタン（１ｍＬ）の溶液を、ブロモトリメチルシラン（６０ｍｇ）で処理した。この混合物を一晩撹拌した。表題の化合物の存在を、方法Ａを用いてエレクトロスプレーＬＣ−ＭＳによって確認した；ｔ_Ｒ＝３．４分。ＭＳ［Ｍ＝Ｃ_２３Ｈ_３０Ｎ_２Ｏ_１０Ｐ_２］ｍ／ｚ ５５５（Ｍ−Ｈ⁻）。

実施例４０
化合物Ａ０３８−７６の合成

１１２．９ｍｇのホスホン酸化Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ−ＯＨ（Ａ０３８−５０で調製）を含む６Ｍ塩酸（３ｍＬ）の溶液を、８０℃で２日間撹拌した。水（９ｍＬ）を添加してさらに２日後、この混合物を遠心分離して液体をデカントした。この固体を減圧下で乾燥させて、８６．８ｍｇの灰色の固体を得た。表題の化合物の存在を、方法Ａを用いてエレクトロスプレーＬＣ−ＭＳによって確認した；ｔ_Ｒ＝３．１分。ＭＳ［Ｍ＝Ｃ_２３Ｈ_３０Ｎ_２Ｏ_１０Ｐ_２］ｍ／ｚ ５５５（Ｍ−Ｈ⁻）。

実施例４１
化合物Ａ０３８−９０の合成

５００ｍｇのＦｍｏｃ−Ｌｙｓ−ＯＨ（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｃｈｅｍ Ｔｅｃｈ）を含むジオキサン（５ｍＬ）の溶液を、３７％（ｗｔ／ｗｔ）ホルムアルデヒド水溶液（３０３μＬ）、亜リン酸（３３３ｍｇ）および濃（１２．１Ｍ）塩酸（６７４μＬ）で処理した。この混合物を９０℃で一晩撹拌して、この溶媒を７５℃のロータリーエバポレーションによって除去した。表題の化合物の存在を、方法Ｂを用いてエレクトロスプレーＬＣ−ＭＳによって確認した；ｔ_Ｒ＝５．４分。ＭＳ［Ｍ＝Ｃ_２３Ｈ_３０Ｎ_２Ｏ_１０Ｐ_２］ｍ／ｚ ５５５（Ｍ−Ｈ⁻）。

実施例４２
化合物Ａ０４２−１８の合成

１．２９ｇのＢｏｃ−保護アミノ酸（上記ロットＡ０３５−６６と同じく調製）を含む１５ｍＬのテトラヒドロフランの溶液をＮ−ヒドロキシスクシンイミド（６２３ｍｇ）および１．０Ｍ １，３−ジクロロヘキシルカルボジイミドを含むジクロロメタン（５．４ｍＬ）で処理した。この混合物を一晩撹拌して、白色沈殿を濾過して、上清を濃縮し、１．８９ｇの白色固体を得た。表題の化合物の存在は、３．３分のＵＶ信号の存在によって示された。

実施例４３
化合物Ａ０４２−２６の合成

２．１ｇのｔｒｉｓ−（２−アミノエチル）アミンを含む２０ｍＬのテトラヒドロフランの溶液に、１．０ｇの活性化エステル（Ａ０４２−１８によって調製）を含む２０ｍＬのテトラヒドロフランの溶液を４０分間にわたって滴下して加えた。この混合物を一晩撹拌して、沈殿物を得て、これを濾過してロータリーエバポレーションによって濃縮し、２．１０ｇの黄色油状物を得た。表題の化合物の存在を、方法Ａを用いてエレクトロスプレーＬＣ−ＭＳによって確認した；ｔ_Ｒ＝１．４分。ＭＳ［Ｍ＝Ｃ_１９Ｈ_３３Ｎ_５Ｏ_３］ｍ／ｚ ３８０（Ｍ−Ｈ^＋）、４０２（ＭＮａ^＋）。

実施例４４
化合物Ａ０４２−３２の合成

２．０８ｇのアミン（Ａ０４２−２６で調製）を含むジオキセン（２０ｍＬ）の溶液を、パラホルムアルデヒド（１．５０ｇ）および亜リン酸ジメチル（６．８５ｇ）で処理した。この混合物を９０℃で一晩撹拌して、その溶媒を７０℃のロータリーエバポレーションによって除去した。ジメチルメタン（５０ｍＬ）を添加して、これを飽和塩化ナトリウム（２５ｍＬ）および水（２５ｍＬ）で洗浄した。この有機物を硫酸ナトリウムで乾燥して、溶媒を除去した。この残滓をＬＣで精製して、１２３．８ｍｇの黄色油状物を得た。表題の化合物の存在を、方法Ｄを用いてエレクトロスプレーＬＣ−ＭＳによって確認した；ｔ_Ｒ＝２．２分。ＭＳ［Ｍ＝Ｃ_３１Ｈ_６１Ｎ_５Ｏ_１５Ｐ_４］ｍ／ｚ ８６８（ＭＨ^＋）。

実施例４５
化合物Ａ０４２−７０の合成

１１１．１ｍｇのホスホン酸化ジアミン（Ａ０４２−３２を介して調製）を含む１ｍＬのジクロロメタンの溶液を、１９４ｍｇのブロモトリメチルシランで処理した。５時間後、メタノール（１ｍＬ）を添加した。この混合物を１時間撹拌して、溶媒を除去して１１３．９ｍｇの黄褐色の固体を得た。表題の化合物の存在は、方法Ｂを用いてエレクトロスプレーＬＣ−ＭＳによって確認した；ｔ_Ｒ＝１．０分。ＭＳ［Ｍ＝Ｃ_１８Ｈ_３７Ｎ_５Ｏ_１３Ｐ_４］ｍ／ｚ ３２８（Ｍ＋２Ｈ／２）^２＋）］、６５６（ＭＨ^＋）。この化合物をまたプロトンＮＭＲ分光法によって分析した：^１Ｈ（ＣＤＣｌ_３）δ：７．７７（ｄ，２Ｈ，Ｊ８．１Ｈｚ），７．４３（ｄ，２Ｈ，Ｊ８．２Ｈｚ），４．１〜３．３（ｍ，３３Ｈ）。

実施例４６
化合物Ａ０２６−９４の合成

７５０ｍｇのホスホン酸塩（Ａ０３０−５４を介して調製）を含む２４ｍＬのジクロロメタンの溶液を、ブロモトリメチルシラン（２．８９ｇ）で処理した。この溶液を一晩撹拌した。メタノール（１０ｍＬ）を添加して、その溶液を２時間撹拌し、その溶媒を除去して、黄色の油状物を得て、これを凍結乾燥し、３６４ｍｇの白色固体を得た。表題の化合物の存在は、方法Ｂを用いてエレクトロスプレーＬＣ−ＭＳによって確認した；ｔ_Ｒ＝０．６分。ＭＳ［Ｍ＝Ｃ_２Ｈ_９ＮＯ_６Ｐ_２］ｍ／ｚ ２０４（Ｍ−Ｈ）⁻）。

実施例４７
化合物Ａ０２６−９６の合成

Ａ０４２−９６（ｔｅｒｔ−亜リン酸ブチル）：４．１０ｇの亜リン酸を含む１００ｍＬのテトラヒドロフランの溶液を２−メチル−２−プロパノール（７．４１ｇ）で処理した。１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミドを含むジクロロメタン（１００．０ｍＬ）の１．０Ｍ溶液を添加して、白色固体の形成を生じた。この混合物を一晩撹拌して、固体を濾過し、溶媒を除去して６．８２ｇの黄色固体を得た。表題の化合物の存在は、ＧＣ−ＭＳによって確認した。以下のフラグメントを見出した：５７［（ＣＨ_３）_３Ｃ^＋］、８３［ＨＰ（ＯＨ）_３ ^＋］、１２３［（ＨＯ）_２ＰＣ（ＣＨ_３）_２ ^＋］。

実施例４８
化合物Ａ０４２−９８の合成

エタノールアミン（８５８ｍｇ）、パラホルムアルデヒド（１．０５ｇ）、ｔｅｒｔ−亜リン酸ブチル（Ａ０４２−９６，６．８２ｇを介して調製）を含むベンゼン（１００ｍＬ）の混合物を一晩９０℃で加熱して、濃い油状物の上に液体を生じた。この液体をデカントして、ロータリーエバポレーションを介して濃縮し、油状物を得て、これを１０％メタノールを含有するジクロロメタンを溶出液として用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供した。透明な油状物（４３６ｍｇ）を得た。表題の化合物の存在は、方法Ａを用いてエレクトロスプレーＬＣ−ＭＳによって確認した；ｔ_Ｒ＝３．６分。ＭＳ［Ｍ＝Ｃ_２０Ｈ_４５ＮＯ_７Ｐ_２］ｍ／ｚ ４９６（ＭＮａ^＋）。

実施例４９
化合物Ａ０２９−３４の合成

４−イソチオシアナートフェニル酢酸を調製するために、１．３ｍｌ（１３．５ｍｍｏｌ、２当量）のチオホスゲンを、２０ｍｌの乾燥ＴＨＦに懸濁した１．０ｇの４−アミノフェニル酢酸（６．６１ｍｍｏｌ）［Ａｌｄｒｉｃｈ］および３．７３ｇの無水炭酸カリウム（４当量）に加えた。この懸濁物を室温で１５分間撹拌して、続いて８５℃のシリコーン油槽中で４時間加熱した。この溶液を冷却して、濾過シリンジ中で１インチのセライト層を通した。この溶液を丸底フラスコ中で収集して、溶媒を減圧下で除去した。

このサンプルを真空デシケーター中に２時間保管し、次いでアセトン−水混合物に溶解し、凍結して凍結乾燥し、１．６５ｇの黒っぽい固体を得た。この化合物は、ＬＣＭＳクロマトグラムの保持時間の３．３２分へのシフトによって同定した。

実施例５０
化合物Ａ０４０−２２の合成

４−イソチオシアナートフェニル酢酸クロロメチルエステルを調製するために、０．５３０ｇの４−イソシアナートフェニル酢酸（２．７ｍｍｏｌ）をガラスバイアル中で５．０ｍｌの塩化メチレンに溶解して、これに、５．０ｍｌの水に溶解した０．０４４ｇのテトラ−ｎ−ブチル硫酸水素アンモニウム（相間移動触媒−０．０５当量）および０．８６６ｇの炭酸水素ナトリウム（４当量）を添加した。この溶液を氷浴中で１０分間撹拌した。この冷たい混合物に０．５２０ｇのクロロメチルクロロサルフェート（ＡＣＲＯＳ Ｃｈｅｍｉｃａｌ−１．２当量）を添加して、室温まで徐々に温度上昇させながら４時間撹拌した。この有機層を分液漏斗で分離して、１０ｍｌの飽和ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。この溶媒を減圧下で除去して、０．７０３ｇの粗油状物を得た。この生成物は、ＬＣＭＳで新しいピークの形成によって同定され、この保持時間は４．２６８分であり、出発材料に相当するピークの消失があった。

実施例５１
化合物Ａ０４０−２６の合成

化合物１１０１の４−イソチオシアナートフェニル酢酸四級塩誘導体を調製するために、化合物１１０１（０．３００ｇ、１．０ｍｍｏｌ）および０．５８２ｇのヨウ化ナトリウム（４当量）を、１ドラムのバイアル中で４．０ｍｌ乾燥アセトニトリルに溶解した。この４−イソチオシアナートフェニル酢酸クロロメチルエステル（化合物Ａ０４０−２２）を含む２．０ｍｌの乾燥アセトニトリルを撹拌しながら添加した。この混合物をシリコーン油浴上で、６５℃で５時間加熱して、ＬＣＭＳによって反応の進行をモニタリングした。化合物１１０１出発材料のほとんどを消費した場合、この反応混合物を、３．０１９分、ｍ^＋＝５１３の分取ＬＣＭＳ保持時間を用いて精製した。９４％純粋な生成物の１９４．１ｍｇの収量を得て、ＬＣＭＳによって同定した。次いで化合物Ａ０４０−２６を、化合物１１０５を利用する実施例に記載された方法によって記載されるように求核試薬保有標的化因子と反応させて、有用な標的プロドラッグを調製する。

実施例５２
化合物Ａ０４４−５２の合成

Ｎ−ベンジル−Ｎ−メチルカルボニルクロロメチルエステルを調製するために、０．３００ｍｇ（３２４μＬ，ｄ＝０．９４２）ベンジルメチルアミンおよび６４０μＬジイソプロピルエチルアミン（１．５当量）を２．０ｍｌの乾燥塩化メチレンに溶解して、氷浴中で冷却した。この溶液が冷却された場合、３３０μＬのクロロメチルクロロホルメート（１．５当量）を含む２．０ｍｌの乾燥塩化メチレンを添加して、２時間撹拌し、この溶液を徐々に室温に戻させた。黄色溶液を分液漏斗に入れて、２×１０ｍｌ １Ｎ ＨＣｌ、１×１０ｍｌ水および２×１０ｍｌ １Ｎ 重炭酸ナトリウムを用いて洗浄した。この有機層を硫酸ナトリウムで乾燥して、減圧下で濃縮した。カルバミン酸クロロメチルを、０．９５ｇの黄色油状物として得て、ＬＣＭＳにおいてｕｖ活性成分として３．５２０分の保持時間で同定した。

化合物１１０１のＮ−ベンジル，Ｎ−メチルカルバモイルメチル四級塩を調製するために、０．５ｇの化合物１１０１および０．５ｇのヨウ化ナトリウム（２０当量）を、ガラスバイアル中で５．０ｍｌ乾燥アセトニトリルに溶解した。このＮ−ベンジル、Ｎ−メチルカルバモイルクロロメチルエステルを溶液に追加し、次いで一晩６５℃の油浴に入れた。この生成物を、ＬＣＭＳによって同定して、分取ＬＣＭＳによって精製し、保持時間２．７３１分、Ｍ＋＝４８５、そして９０％の純度で、Ａ０４４−５２と命名された１６９．５ｍｇ（理論収率２１．５％）の固体を得た。

実施例５３
化合物Ａ０４４−６２の合成

化合物１１５７のＮ−ベンジル，Ｎ−メチルカルバモイルメチル四級塩を調製するために、２２ｍｇの化合物１１５７、２０ｍｇのヨウ化ナトリウム（２．０当量）および３０．７ｍｇのＮ−ベンジル−Ｎ−メチルカルボンモイルクロロメチルメステル（２．０当量）を、ガラスバイアル中で５００μＬの乾燥アセトニトリルに混合し、一晩６５℃の油浴中で加熱した。この生成物を、ＬＣＭＳによって同定して、分取ＬＣＭＳによって精製した。保持時間２．８１０分、Ｍ＋＝４８３および９８％純度で５．４ｍｇの化合物（理論収率１５．５％）を得た。

実施例５４
化合物Ａ０４４−２８の合成

化合物１１０１のベンジルホルモイル−１−エチル四級塩を調製するために、２００μＬ １−クロロエチルクロロホルメートを、ガラスバイアル中で１００μＬのベンジルアルコールを含む２．０ｍｌの乾燥塩化メチレンに添加して、氷浴中で０℃でインキュベートした。冷却された溶液に２００μＬのピリジンを添加して、２分内に白色沈殿を形成させた。撹拌を室温で一晩継続した。この混合物に１０ｍｌの塩化メチレンを添加し、次いで１×１０ｍｌ ０．５Ｍ ＨＣｌ、１×１０ｍｌ水および１×１０ｍｌ ０．５Ｎ重炭酸ナトリウム溶液を用いて洗浄した。この有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させて、減圧下で溶媒を除去した。ベンジル−１−ギ酸クロロメチルを、３．９３３分の保持時間のｕｖ活性成分として同定した。

１．０ｍｌの乾燥アセトニトリルに溶解した１００ｍｇの化合物１１０１および１００ｍｇのＮａＩ（２０当量）に１０７ｍｇ（１．５当量）のベンジル−１−ギ酸クロロメチルを添加した。この混合物を６５℃で一晩加熱した。ＬＣＭＳで出発物質の存在が示されたため、さらなる１０７ｍｇ（１．５当量）のベンジル−１−ギ酸クロロエーテルを添加して、さらに２４時間加熱を続けた。ＬＣＭＳによって、緩慢勾配クロマトグラフィーで出発物質から分離され得る生成物を同定した。所望の化合物を分取ＬＣＭＳを用いて単離して、保持時間４．６９０分、Ｍ＋＝４８８、９８．６％純度で１３．７ｍｇ（８．７％理論収率）の化合物を得た。

実施例５５
化合物１１２６の合成
クロロメチル−ｔ−ブチルスクシネートを調製するために、モノｔ−ブチルスクシネート（Ａｌｄｒｉｃｈ）、２．０ｇを８．０ｍｌの塩化メチレンに溶解したものを、４．０ｇの炭酸カリウムと０．２４ｇのテトラｎ−ブチル硫酸水素アンモニウムを８．０ｍｌの水に含むガラスバイアルに添加して、氷浴で撹拌した。１５分後、１．３ｍＬのクロロメチルクロロサルフェート（Ａｃｒｏｓ）を塩化メチレン層に添加して、反応混合物をゆっくり室温になる温度で撹拌した。有機層を分離して１×１０ｍｌの水および１×１０ｍｌの飽和ブライン溶液で洗浄した。この溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥して、溶媒を減圧下で除去した。３ｇの淡黄色油状物を得て、ロット番号Ａ０４７−７１とした。

上記のＡ０４７−７１の３ｇを３６ｍＬのアセトニトリルに溶解して、１．８ｇの化合物１１０１および１．８ｇのＮａＩで処理し、撹拌しながら１６時間ヒーター上に置いた。反応混合物（沈殿を含む）を水と塩化メチレンとの間で分画して、塩化メチレン層を分離して、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥しエバポレートして、暗い油状物を得た。この油状物を５ｍＬのアセトニトリルに溶解して、２日間冷蔵庫に保管した。次いで、形成した黄色沈殿を濾過して３ｍＬのアセトニトリルで洗浄し乾燥して、ロット番号Ａ０４６−６７Ａとして、２．８４３５ｇの９５％を超える純度の、保持時間２．７１９分、４９４ｍ／ｚの［Ｍ＋］という生成物を得た。この生成物の全てを１０ｍＬの塩化チオニルに溶解して、６５℃に４時間加熱した。過剰の塩化チオニルを減圧下で除去して、黄色油状物を高真空下で乾燥して１．９９０６ｇの酸塩化物（化合物１１１１）を黄色のバリバリした固体として得た。この固体を引き続く反応に直接用いた。

化合物１１０１酸塩化物およびｄｅ−ＦＭＯＣｅｄ ＲＧＤＳペプチドをカップリングするために、化合物１１１１の１．２６ｇの酸塩化物および５．６ｇ ｄｅ−ＦＭＯＣ除去ＲＧＤＳペプチド（両方とも五酸化リン上で、真空デシケーターで乾燥させた）をアルゴンガス下で５０ｍｌの丸底フラスコ中に混合した。この固体に２７０μＬの乾燥ピリジン含有２８ｍｌ塩化メチレンを添加して、この混合物を振盪して酸塩化物を溶解した。この混合物をオービタルシェイカーに１時間おいた。この溶液をガラス質プラスチックシリンジで排液して、２×１０ｍｌの塩化メチレンで洗浄して、溶媒を排液した。この樹脂に５００μＬのアニソール、続いて２０ｍｌの５０／５０ ＴＦＡ／塩化メチレン溶液を添加した。この樹脂を時折撹拌しながら、ＴＦＡ溶液中に３時間静置させた。ＴＦＡ溶液を樹脂から排液した。この樹脂をＴＦＡ溶液と組み合わせた１０ｍｌの塩化メチレンで洗浄した。ＴＦＡ溶液を４つのバイアルに入れて、これをアルゴンガスで風乾した。各々のバイアルを複数回のエーテル洗浄で処理し、再度アルゴンガスで風乾した。この生成物をＬＣＭＳによって同定し、そして分取逆相ＬＣＭＳを用いて１７回の実施で精製した。この組み合わせた実施によって、１６３．７ｍｇの９６％純度の生成物（ロット番号ａ０３６−３３と指定）を保持時間１．７６８分、Ｍ＋＝８５３そして４２７ｍ／ｚで［Ｍ＋Ｈ］／２で得た。この化合物についてのＬＣ−ＭＳクロマトグラムおよび質量スペクトルは、図７および図８に示す。図７では、ｘ軸が分単位の時間であり、そして上のクロマトグラムのｙ軸は２５４ｎｍでのＵＶ検出器のミリ吸光度単位であり、そして下のクロマトグラムのｙ軸は、蒸発光散乱検出器によって検出されるミリボルトである。図８では、ｘ軸は質量対電荷比（ｍ／ｚ）であり、ｙ軸は質量イオンカウントの強度である。

スキーム１０

実施例５６
化合物Ａ０５２−１０の合成

化合物１１０１のフタルイミドメチル四級塩を調製するために、１００ｍｇの化合物１１０１および１００ｍｇのヨウ化ナトリウム（２．０当量）の混合物を３．０ｍｌの乾燥アセトニトリルに溶解した。この混合物に１２８ｍｇのクロロメチルフタルイミド（Ａｌｄｒｉｃｈ）を添加して、このバイアルを５５℃の油浴中で４日間加熱した。この生成物を、保持時間３．９８４分、Ｍ＋＝４６７で新しいピークとしてＬＣＭＳによって同定した。

実施例５７
化合物Ａ０５２−０８の合成

化合物１１０１のフタルイミドメチル四級塩を調製するために、１００ｍｇの化合物１１０１および１００ｍｇのヨウ化ナトリウム（２．０当量）の混合物を３．０ｍｌの乾燥アセトニトリルに溶解した。この混合物に１２８ｍｇのクロロメチルフタルイミドを添加して、このバイアルを５５℃の油浴中で４日間加熱した。この生成物を、ＬＣＭＳによって、Ｒｆ＝３．９８４、Ｍ＋＝４６７で新しいピークとして同定した。

実施例５８
化合物Ａ０４４−７８の合成

化合物１１０１の４−カルボキシベンジル四級塩を調製するために、３００ｍｇの化合物１１０１、４００ｍｇのヨウ化ナトリウムおよび５００ｍｇのクロロメチル安息香酸を、ガラスバイアル中で混合して、４．０ｍｌの乾燥アセトニトリル中で懸濁した。この反応物を、６５℃で油浴において加熱して、ＬＣＭＳによって２週間モニターした。この溶液をガラス質プラスチックシリンジで濾過してさらなる２ミクロンのフィルターと適合させた。この所望の化合物を分取ＬＣＭＣを用いて単離したが、これは３．７１７分の保持時間、Ｍ＋＝４４２であった。９６％純度の２７．７ｍｇの収量を得た。化合物Ａ０４４−７８のカルボン酸基を、ａ）ＮＨＳ活性エステルを調製するための実施例３１の方法によって記載されるようなＮ−ヒドロキシスクシンイミドとの反応、またはｂ）実施例５６の方法によって記載されるような酸塩化物への変換によって反応性の基に変換する。次いで、これらの反応性基のいずれかを、前の実施例に記載した方法を用いて標的化因子の求核アミンまたはアルコール基と反応させて標的化プロドラッグ結合体を得る。

実施例５９
化合物Ａ０４４−８０の合成

化合物１１０１の４−イソシアナトベンジル四級塩を調製するため、３００ｍｇの化合物１１０１、４５０ｍｇのヨウ化ナトリウム（３．０当量）および４９０ｍｇ（３．０当量）の４−クロロメチルベンゼンイソシアナートの混合物を４．０ｍｌの乾燥アセトニトリルに溶解して、油浴中で６５℃で２日間加熱した。ＬＣＭＳによって、この反応は、出発材料（化合物１１０１）がないために終了したことが示された。この生成物は、４．５７７分の保持時間、Ｍ＋＝４３９で新しいピークとして同定された。化合物Ａ０４４−８０は、種々の標的化因子の求核性基と反応して、化合物１１０５およびＡ０４０−２６を利用する実施例の方法によって、標的化因子に対するカルバミン酸塩または尿素結合を生じる。

実施例６０
化合物Ａ０４４−４の合成

化合物１１０１のピボロイルメチル四級塩を調製するために、１００ｍｇの塩化ピボロイル（２．０当量）を、１００ｍｇの化合物１１０１および１００ｍｇのヨウ化ナトリウム（２．０当量）を含む２．０ｍｌの乾燥アセトニトリルの混合物に滴下して加えた。この混合物を６５℃の油浴で２時間加熱した。この固体は２ミクロンフィルターを装着したガラス質のプラスチックシリンジを用いて濾過した。この化合物を同定して、分取ＬＣＭＳを用いて単離した。保持時間２．７３５分、Ｍ＋＝４２２の黄色固体を得たが、これは９３．７％の純度で１０２．３ｍｇの収率であった。

実施例６１
化合物Ａ０４０−７０の合成

化合物１１０１のアセトキシメチル四級塩を調製するために、１．０ｇの化合物１１０１を、ガラスバイアル中で１０ｍｌ乾燥アセトニトリルに溶解して、１．０ｇの酢酸ブロモメチル（２．０当量）を添加して、室温で一晩撹拌させた。ＬＣＭＳによって、出発物質の存在が示され、そして反応物を６５℃で、油浴中で８時間加熱した。母液を固体からデカントして、固体を少量の冷たいアセトニトリルで洗浄した。この固体を真空デシケーターで一晩乾燥させた。この生成物を、９７％の純度である、２．２０４分の保持時間、Ｍ＋＝３８０の２６４ｍｇの白色固体として同定した。この化合物は、極めて高い水溶性を有することが見出された；リン酸緩衝化生理食塩水中のこの化合物の３２．５ミリモル溶液を、１．８６５ｍＬのリン酸緩衝化生理食塩水中で２７ｍｇを溶解することによって調製して約４というｐＨを得た。この溶液の５０μＬのアリコート（これはプロドラッグとして化合物１１０１の１．６２５μモルを含む）を、ヌードマウスの尾静脈に注射したが、有害な観察可能な影響はなく、このプロドラッグ形態の毒性のないことが示されたが、化合物１１０１の１．０４μモルの注射では３匹のマウス中３匹で即時的な死亡が生じた。さらに、化合物Ａ０４０−７０のこの３２．５ｍＭの溶液の２５０μＬを、経口胃管によってヌードマウスに投与した。５、１５および３０分後、４０μＬのマウス血液を得て、ＬＣ−ＭＳによって分析し（アセトニトリルを用いる抽出後）、プロドラッグＡ０４０−７０および化合物１の組み合わせた血液レベルが、それぞれの時点で１．８、４．９７および４．８０マイクロモルであることが実証された。この結果によって、インビボにおけるプロドラッグから活性薬物の経口のバイオアベイラビリティーが実証される。少量の水にこの化合物Ａ０４０−７０を溶解すること、およびＡｌｄｒｉｃｈから入手可能なＤｏｗｅｘ２２（塩化物型）のような陰イオン交換樹脂層を通過させること、そして次に水および凍結乾燥の混合性溶離剤を用いて洗浄して臭化物イオンが塩化物イオンで交換された固体を得ることによって塩化物を得る。

実施例６２
非イオン性水溶性のためのポリオキシエチレン保有プロドラッグの調製

化合物１の７８ｍｇ部分を７６ｍｇのＮａＩとともに２ｍＬのアセトニトリルに溶解して、１４４ｍｇのクロロメチルエステルＡ０２９−６２で一度に処理して、６５℃で５時間撹拌した。この反応物を、逆相ＬＣ−ＭＳによって精製して、２．３０分の保持時間で７２ｍｇ（５１％収率）の黄色固体Ａ０２７−８５を得たが、これはＣ_３０Ｈ_３８ＮＯ_９によって期待されるとおりＭ＋＝５５６を示す質量スペクトルを有することによって特徴づけられた。わずかなサンプルをｐＨ＝７．４のリン酸緩衝液、続いてＬＣ−ＭＳに経時的に導入して、ここでこのプロドラッグのかなりの部分が、約３時間という変換の推定半減期で、化合物１に戻された。

実施例６３
化合物１の骨標的化プロドラッグの調製
７５ｍモル Ａ０４２−７０（１．５μモル）の２０μＬ部分を含む水を、５００ｍモルのリン酸緩衝液を含むバイアル（０．５単位で増す３．０〜８．０にわたる１１の種々のｐＨの１１のバイアル）に添加した。次いで、各々のバイアルを混合した後、６０μモル化合物１１１１を含むアセトニトリルの５０μＬ（３．０μモル＝骨標的化因子のアミノ基に対して２当量）で処理して、振盪することによって混合した。１時間後、各々のバイアルの３μＬのアリコートをＨＰＬＣに注入して、ＵＶピーク領域を出発物質、ならびに化合物１１０１の加水分解の所望の生成物および副産物について決定した。６、６．５、７、７．５および８というｐＨのサンプルのみが、所望の骨標的化プロドラッグＡ０４６−８９Ｐ（保持時間２．５０分；［Ｍ＋］１０７５ｍ／ｚ Ｃ４２Ｈ５９Ｎ６Ｏ１９Ｐ４について実測）［Ｍ＋２］／２＝５３８ ｍ／ｚも実測）の有意な量を有することが見出された。本実施例によって、これらの条件下の骨標的化プロドラッグの合成のための最適ｐＨはｐＨ＝７．０であり、４つのホスホン酸基を有する化合物１の所望の骨標的化プロドラッグの約４２％という理論収率が得られることが実証される。２４時間後、ｐＨ＝７．０の時間を示す同じ溶液の分析によって、標的化プロドラッグが化合物１に完全に戻されたことが示され、これによって生理学的に関連する条件下での可逆性が実証される。

実施例６４
非小細胞肺癌に対する化合物１１２６のインビボ有用性
約３０グラムの体重の４〜６週齢の雄性ヌードマウスに、０日目に５百万の腫瘍細胞（ヒト非小細胞肺癌細胞：Ｈ１２９９）を右脇腹に皮下に接種した。腫瘍細胞を増殖させた１４日後、動物を各５匹の３群に分けた。１群にはビヒクルコントロールのみを与えた。１群にはプロドラッグ（すなわち、化合物１）の活性成分の２５ｍｇ／ｋｇ／日用量レベルに対応して、２４．４ミリモル溶液の化合物１１２６を含むリン酸緩衝化生理食塩水の５０μＬの容積の１日２回尾静脈（ｉ．ｖ）注射を与えた。最終群には、プロドラッグ（化合物１）の活性成分の５ｍｇ／ｋｇ／日の投薬レベルに対応して、４．９ミリモル溶液の化合物１１２６を含むリン酸緩衝化生理食塩水の５０μＬの容積の１日２回尾静脈（ｉ．ｖ）注射を与えた。ノギスを用いて３日ごとに腫瘍を測定して、腫瘍容積を決定して、２７日で動物を屠殺したときに動物の重量を記録した。その結果を表７に示すが、これによって処置のわずか３日後に最初のデータポイントで（１７日目）、そしてこの研究の終わりまで続く、両方の用量レベルについてのコントロールに対する強力な腫瘍容積の低下が示される：
表７

＊ビヒクルのみのコントロール動物に対して比較
１日２回の用量は、２週間の投与期間にわたって十分耐容された。上記の有効性の結果ではまた、コントロール群とこの処置群との間で動物の体重の統計学的に有意な相違を伴わず、これによって、全体の毒性の一般的な測定として、標的されたプロドラッグが所望のとおり毒性を欠失していたことが示される。

実施例６５
脳の癌に対する化合物１１２６のインビボ有効性
ヒト脳癌細胞株（Ｕ８７ＭＧ）を用い、初回の腫瘍容積測定を１０日目に行なうように７日目に処置を開始すること以外は上記の実施例に記載のとおり動物実験を行なった。この癌細胞株に対する化合物１１２６の結果を、表８に示しており、そして有効性および望まれるような毒性の欠失が示された：
表８

＊ビヒクルのみのコントロール動物に対して比較
実施例６６
α ｖ標的化ＰＩ ３キナーゼインヒビターは、Ｍａｔｒｉｇｅｌ上でＥＤＣ−ＣＢＦ１内皮細胞の管腔形成を抑制した
管腔形成は、インビボである程度の血管形成の形成を示す。本実施例では、どの程度ＰＩ ３キナーゼインヒビター（標的化ＰＩ３キナーゼインヒビタープロドラッグを含む）が管腔形成を阻害できるかを決定した。Ｍａｔｒｉｇｅｌを１２ウェルプレートウェルにプレートして、３７℃で２時間固めた。次いで１×１０^５ ＥＤＣ−ＣＢＦ１内皮細胞をＰＢＳ、ＲＡＤｆＶ（環状陰性コントロールペプチド）、ＲＧＤｆＶ（環状陽性コントロールペプチド）、ＲＡＤＳ（直線状陰性コントロールペプチド）、化合物１または化合物１１２６の存在下でＭａｔｒｉｇｅｌ層の上に２０°Ｍ濃度で一晩置いた。次いで顕微鏡を用いて写真を撮った。十分形成された管腔はＰＢＳコントロールウェル中で可視化することができる（図の上左側のパネル）。これらはＰＢＳコントロールに比較してＲＧＤｆＶ、ＲＡＤｆＶまたはＲＧＤＳ含有ウェルでそれほど異なることはなかった。管腔形成は、化合物１１０１および化合物１１２６を含有するウェルでは有意に少なかった。

実施例６７
標的化ＰＩ３キナーゼインヒビターは、ＨＢＥＣにおいてｐ５３転写活性を誘導した
本実験で、ｐ５３ルシフェラーゼ活性の誘導に対するＰＩ ３キナーゼインヒビター（化合物１および化合物１の標的化プロドラッグバージョン；化合物１１２６）の効果を試験した。このトランスフェクション手順は、ｐ５３転写をモニターするために文献に記載された手順と同様であった。化合物１（６時間曝露）は、コントロールよりも２倍高いルシフェラーゼ活性を誘導し、そして化合物１の標的化バージョン（化合物１１２６）はｐ５３ルシフェラーゼ活性を誘導する能力がさらに優れていた（ほぼ３倍）。ｐ５３機能のこの誘導は、ｐ５３インヒビターであるピフィスリン（ｐｉｆｉｔｈｒｉｎ）αの２０μＭ濃度によって抑止されることが実証された。触媒活性Ａｋｔの同時トランスフェクションはまた、これらの化合物によって誘導されたｐ５３機能を阻害した。この結果によって、ＰＩ３キナーゼインヒビターによって誘導されたｐ５３転写が、全シグナル伝達カスケードにおいてＡｋｔの下流であり、標的化プロドラッグ化合物１１２６が未標的薬物である化合物１に対してｐ５３の誘導を増強したことが示される。

実施例６８
化合物１１２６の精製
反応混合物Ａ０４４−８４（２．３３ｇ）を、別々の０．３３ｇのサンプルに秤量して、１容積部のアセトニトリル、１容積部の水、および１容積％の酢酸を含む８００μｌの溶液中に分取クロマトグラフィーの直前に溶解した。この溶液の４００μｌを各々の分取クロマトグラフィー実施について注入した。ポンプＡ溶離剤は０．１％酢酸を添加したＢ＆Ｊ水（３６５−４）であって、ポンプＢ溶離剤は、０．１％酢酸を添加したＢ＆Ｊアセトニトリル（０１５−４）であった。最初に、溶離剤は１０％Ｂであって、次いで４分の期間にわたって直線的に３４％Ｂに増大し、次いで４．２５分で直線的に９５％Ｂまで増大し、５．２５分まで保持し、次いで５．５０分で１０％Ｂの開始濃度に直線的に低下して戻った。総ポンプ流量は２０ｍＬ／分であった。自動サンプリング装置が次回のためにサンプリングしている間にシステムの再平衡を達成した。この勾配を用いて、正の質量スペクトルピークを８５３（ｍ／ｚ＝１）および４２７（ｍ／ｚ＝２）を有する生成物が３．３７分で溶出した。ＥＬＳＤで検出されたシグナルが１０ｍｖを超えた場合、分取クロマトグラフィー実施の間に画分を収集した。生成物を含む画分は、２倍過剰の水（容積で）を用いて溶出して、収集の直後にドライアイス−アセトン浴を用いて凍結乾燥容器中で凍結させた。２４〜４８時間にわたる凍結乾燥後、９５％の純度を有する白色のフワフワした固体として化合物１１２６の全部で１８０ｍｇを得た。本実施例によって、注意深いｐＨ制御で不安定なプロドラッグ１１２６は、水性ベースの逆相分離方法を用いて高い純度で単離できることが実証される。

実施例６９
ＳＣＮ反応性プロドラッグの調製

実施例２０の方法によって調製したＡ０１４−４８の１８４ｍｇ部を、１５４ｍｇの化合物１とともに１２ｍＬのアセトニトリルに溶解して、室温で撹拌した。１６時間後、ＬＣ−ＭＳによって、所望の四級アンモニウム化合物への約６５％の変換が示されたので、さらに４５ｍｇのヨード化合物を添加して、さらに２２時間後に反応は８０％終了したので、さらに４０ｍｇのヨード化合物を添加して、さらに２４時間撹拌させた。次いでこの固体を遠心分離して、アセトニトリルで洗浄して、２．８９分の保持時間で特徴付けられる、２８２．６ｍｇ（４５％収率）の所望の生成物が高純度で得られ、これは、化合物ＣＯＭＰＯＵＮＤ１１０５としてＣ２８Ｈ２３Ｎ２Ｏ５Ｓについて４９９という所望のＭ＋を示した。

メタノールに入れた際、化合物１１０５はメタノールときれいに反応して、保持時間２．７８分であってＣ２９Ｈ２７Ｎ２Ｏ６Ｓについて５３１という予想されるＭ＋で化合物Ａ０１３−９４が得られた。これによってアルコールとのイソチオシアネートプロドラッグの反応がリンカーに対するカルバミン酸塩結合を生じることが示される。

このイソチオシアネート中間プロドラッグはまた、塩化メチレン（必要に応じてトリメチルアミンの存在）中で二級アミンを含む種々のアミンと反応してＡ０１７−５５（Ｃ３５Ｈ３８Ｎ３Ｏ７Ｓについて６４４ｍ／ｚという所望のＭ＋を示す、保持時間２．８４分）；Ａ０１７−５７（Ｃ３３Ｈ３４Ｎ３Ｏ７Ｓについて６１６ｍ／ｚという所望のＭ＋を示す、保持時間２．４６分）およびＡ０２７−１５（Ｃ３８Ｈ４８Ｎ３Ｏ１１Ｐ２Ｓについて８１６ｍ／ｚという所望のＭ＋を示す、保持時間２．８２分）のような尿素生成物が生じる。これらの実施例によって、所望の連結されたプロドラッグを生じるための求核試薬の多様な基を有するイソチオシアネートプロドラッグの良好な収率での反応が実証される。Ａ０１７−５５化合物はさらに、トリフルオロ酢酸と反応して、驚くべき事にｔ−ブチル基の切断の経過の間に環状化合物Ａ０１７−５９が得られた（Ｃ３１Ｈ２８Ｎ３Ｏ６Ｓについて５７０ｍ／ｚという所望のＭ＋を示す保持時間２．４７分）。本実施例によって、さらなる化学がプロドラッグ化合物のリンカー基上で行なわれ得るということが実証された。ホスホン酸塩緩衝液中でｐＨ＝７．４で、ＬＣ−ＭＳによって追跡したところ、この化合物のかなりの量が１７時間にわたって化合物１に戻った。

実施例７０
化合物１対標的化プロドラッグの急性毒性
静脈内に投与された化合物１は３匹のヌードマウスにおいて５分内の投与で１６ｍｇ／ｋｇという用量レベルで１００％の死亡率を有することが確認された。実施例５６の方法によって調製された化合物１１２６は、３匹のヌードマウスに３７％より高い用量レベル（２２ｍｇ／ｋｇ）で静脈内注射された場合、観察の１時間後でさえ０％の死亡率を示した。本実施例は、このプロドラッグの処方物の能力の改善および化合物１のプロドラッグの毒性の減少を示す。

実施例７１
化合物１のアナログ

実施例５６の化合物１１２６について記載されたような中間体Ａ０４６−６７ＳＭの調製の間、副産物が観察された。この物質をＬＣ−ＭＳによって精製して、単独の化合物Ａ０３７−９４を得たが、この化合物は提案された構造のプロトンＮＭＲと一致し、３．００分という保持時間を与え、そして質量スペクトルは３３８ｍ／ｚ（極めて低値）という予想される［Ｍ＋Ｈ］＋および３７９ｍ／ｚのそれより大きな［Ｍ＋Ｈ＋４１（ＡＣＮ）］を示した。本実施例によって、さらなるプロドラッグ修飾に適切な化合物１の新規なアナログの単離が示される。

実施例７２
マウスにおいて化合物１を送達するためのプロドラッグの使用
マウスに１００万個の非小細胞肺癌細胞（Ｈ１２９９）を皮下注射して、腫瘍塊が約１０〜１５ｍｍ×７〜９ｍｍの直径になるまで約７日間増殖させた。動物に標的化プロドラッグ化合物１１２６を、ｉ．ｖ．（５０μＬ）またはｉ．ｐ．（５０μＬ）のいずれかで、３２．６ミリモル溶液の化合物１１２６を含むリン酸緩衝化生理食塩水とともに注射した。６０分後、マウスを屠殺して、腫瘍を取り出した。腫瘍の３つの小片を取り出して切り刻んだ。プロドラッグの全てを化合物１に変換させるために２４時間経過した後、腫瘍サンプルをアセトニトリルで抽出した。ＬＣ−ＭＳによる定量によって、抽出可能な化合物１の濃度（遊離の化合物１および化合物１１２６由来の合計として）は、Ｉ．Ｐ．注射のための腫瘍片中で１５７±７ナノモル、そしてＩ．Ｖ．注射のための腫瘍片中で２７１±１７ナノモルであったことが示された。本実施例によって、標的化プロドラッグを用いる腫瘍組織への化合物１の送達が実証される。

実施例７３
化合物１を形成するためのプロドラッグの可逆性
プロドラッグ化合物を、水またはＤＭＳＯに（水に自由には溶解しない場合）溶解し、次いで、５０ｍＭリン酸緩衝液ｐＨ＝７．４またはｐＨ＝４．８中に少なくとも１０倍に希釈して、室温で静置させた。この化合物の最終濃度は水性環境中で５０〜５００μモルに及んだ。アリコートを経時的に採取して、ＬＣ−ＭＳによって分析し、プロドラッグの消失の確認および薬物（化合物１）の出現の確認の両方を行なった。化合物１１２６は、ｐＨ＝７．５で約１時間の半減期、そしてｐＨ＝４．８で約６４時間の半減期を有することが見出された。化合物１１１０は、ｐＨ＝７．４で約１０時間、そしてｐＨ＝４．８で１２０時間を超える半減期を有することが見出された。化合物Ａ０４０−７０は、ｐＨ＝７．４で約１０時間の半減期を有することが見出された。これらの実験によって、化学的にプロドラッグが薬物（化合物１）に変換し、このプロドラッグの消失は極めてｐＨ依存性であり、この変換は生理学的なｐＨで極めて急速に生じ、そして酸性のｐＨで実質的に遅いことが実証される。

実施例７４
腫瘍に局在する結合体の合成
求電子性の基を保有する化合物（例えば、化合物Ａ０３６−４８Ｂ、１１０５、１１０７、１１１１、Ａ０２４−７９および１１１３）は、アルコール、アミノおよびチオール基のような求核性基を保有するポリマーと反応し得る。２０００〜１００，０００の分子量を有するＮ−（２−ヒドロキシプロピル）メチルアクリルアミド（ＨＰＭＡ）は、トリエチルアミンまたはジイソプロピルエチレンアミンの存在下で塩化メチレンまたはテトラヒドロフランのような非プロトン性有機溶媒中で過剰の化合物１１１１と反応され、次いでサイズ排除クロマトグラフィー、超遠心分離、またはメタノールもしくはエーテルのような別の溶媒中での沈殿によって分離される。このように沈殿または分離されたポリマーは実質的に１１１１を含まず、そして腫瘍の近位で経時的に活性な化合物１を遊離して、抗腫瘍効果および血管新生阻害効果を生じる、腫瘍に局在する結合体として用いられる。同様にポリグルタミン酸は、カルボジイミドカップリングを用いる、カルボン酸と過剰なジアミンとの反応によってポリ求核性保有基に変換され得、続いてサイズ排除クロマトグラフィーまたは逆相ＨＰＬＣ精製によってポリグルタミン酸のポリ求核性バージョンが得られる。次いで、これらのポリマーは、トリエチルアミンまたはジイソプロピルエチレンアミンの存在下で塩化メチレンまたはテトラヒドロフランのような非プロトン性有機溶媒中で過剰部分の化合物１１１１または１１０５またはＡ０３６−４８ＢまたはＡ０２４−７９と直接的に反応され得、次いでサイズ排除クロマトグラフィー、超遠心分離、またはメタノールもしくはエーテルのような別の溶媒中での沈殿によって分離され得る。このように沈殿または分離されたポリ結合体化ポリマーは実質的に低分子量の残留プロドラッグを含まず、そして腫瘍の近位で経時的に活性な化合物１を遊離して、抗腫瘍効果および血管新生阻害効果を生じる、腫瘍に局在する結合体として用いられる。

図１は、ＥＤＴＭＰ、ＤＯＴＭＰ、ＡＢＤＴＭＰ、ＢＡＤ、ＭＴＸ−ＢＰおよびＣＦ−ＢＰの化学構造を示す。 図２は、潜在的な骨標的化因子の化学構造を示す。 図３は、骨標的化因子のホスホン酸塩を修飾するための化学反応を示す。 図４は、骨標的化因子のホスホン酸塩を修飾するためのアルキル化反応を示す。 図５は、ＥＤＴＭＰおよびＤＯＴＭＰを化学的に修飾するための概念を示す。 図６は、Ｊ７７４細胞におけるＬＹ２９４００２による食作用の阻害を示す。カラムは、食作用性係数、または食細胞応答の陽性な細胞の割合を示す。食作用性係数は、１００Ｊ７７４細胞１個あたりに見出されるｓＲＢＣ（ヒツジ赤血球）の数であり、そして食作用性細胞の％は、少なくとも１つのｓＲＢＣを食菌したＪ７７４細胞の％である。誤差指示線は、平均の標準偏差に相当する。 図７は、化合物１１２６（Ａ０３６−３３）のＵＶおよびＥＬＳクロマトグラムを示す。 図８は、化合物１１２６（Ａ０３６−３３）の正の質量スペクトルを示す。 図９は、Ａｖβ３標的化ＰＩ ３キナーゼインヒビターが、Ｍａｔｒｉｇｅｌ上でのＥＤＣ−ＣＢＦ１内皮細胞の管腔の形成を抑止することを示す。

Claims (3)

1. 式：
   の化合物またはその塩。
2. 請求項１に記載の化合物を含む活性治療薬としての組成物。
3. 医薬の製造のための請求項１に記載の化合物の使用であって、該医薬が、
   （ａ）ＰＩ−３キナーゼ活性に関連する状態に罹患している患者を処置するための医薬；
   （ｂ）炎症性疾患を処置するための医薬であって、該医薬が、必要に応じて、１種以上のさらなる治療剤を含み、必要に応じて、該１種以上のさらなる治療剤が、アルキル化剤、代謝拮抗物質、アスパラギナーゼ、ビンクリスチン、ビンブラスチン、アントラサイクリン、微小管破壊剤、タキソール、ハーセプチン、ゲムシタビン、およびエトポシドからなる群より選択され得る、医薬；
   （ｃ）患者においてアポトーシスを誘導するための医薬；
   （ｄ）患者における腫瘍細胞の化学感受性を増強させるための医薬；
   （ｅ）患者における腫瘍細胞の放射線感受性を増強させるための医薬；
   （ｆ）患者における腫瘍誘導性血管形成を阻害するための医薬；
   （ｇ）患者において癌以外の疾患に関連する血管形成プロセスを阻害するための医薬；
   （ｈ）患者において膵炎を処置するための医薬；
   （ｉ）患者において潰瘍を処置するための医薬；
   （ｊ）患者において胃癌を処置するための医薬；
   （ｋ）患者において肝臓癌を処置するための医薬；
   （ｌ）患者においてステントの能力を改善するための医薬；
   （ｍ）患者における加齢性黄斑変性症を処置するための医薬；
   （ｎ）患者における変異ＰＴＥＮに伴う状態を処置するための医薬；
   （ｏ）患者における高血圧を処置するための医薬；
   （ｐ）患者における白血球機能を破壊するための医薬；
   （ｑ）患者における前駆細胞の分化を抑制するための医薬；
   （ｒ）哺乳動物の細胞全体においてホスファチジルイノシトール３キナーゼを阻害するための医薬；
   （ｓ）肺癌を処置するための医薬；または
   （ｔ）脳癌を処置するための医薬
   である、使用。