EA025215B1 - Новые антитела к cd38 для лечения рака - Google Patents

Новые антитела к cd38 для лечения рака Download PDF

Info

Publication number
EA025215B1
EA025215B1 EA200970393A EA200970393A EA025215B1 EA 025215 B1 EA025215 B1 EA 025215B1 EA 200970393 A EA200970393 A EA 200970393A EA 200970393 A EA200970393 A EA 200970393A EA 025215 B1 EA025215 B1 EA 025215B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
antibody
bis
cell
amino acid
cells
Prior art date
Application number
EA200970393A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200970393A1 (ru
Inventor
Питер Ю. Парк
Лаура М. Бартл
Анна Скалетская
Виктор С. Голмахер
Даниэль Таварес
Джутта Декерт
Венсан Миколь
Вероник Блан
Original Assignee
Санофи-Авентис
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=37831721&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA025215(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Санофи-Авентис filed Critical Санофи-Авентис
Publication of EA200970393A1 publication Critical patent/EA200970393A1/ru
Publication of EA025215B1 publication Critical patent/EA025215B1/ru

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57426—Specifically defined cancers leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68033—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a maytansine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68035—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a pyrrolobenzodiazepine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6867—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from a cell of a blood cancer
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/04—Antipruritics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • C07K16/461—Igs containing Ig-regions, -domains or -residues form different species
    • C07K16/462—Igs containing a variable region (Fv) from one specie and a constant region (Fc) from another
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/914—Hydrolases (3)
    • G01N2333/924—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)

Abstract

Антитела, гуманизированные антитела, антитела с реструктурированной поверхностью, фрагменты антител, дериватизированные антитела и их конъюгаты с цитотоксическими агентами, которые специфически связываются с CD38, способны вызывать цитолиз клеток CD38путем апоптоза, антителообусловленной клеточно-зависимой цитотоксичности и комплементзависимой цитотоксичности (CDC). Указанные антитела и их фрагменты можно применять при лечении опухолей, которые экспрессируют белок CD38, таких как множественная миелома, хронический лимфолейкоз, хронический миелолейкоз, острый миелолейкоз или острый лимфолейкоз, или при лечении аутоиммунных и воспалительных заболеваний, таких как системная красная волчанка, ревматоидный артрит, рассеянный склероз, эритематоз и астма. Предоставляются также цитотоксические конъюгаты, включающие связывающийся с клеткой агент и цитотоксический агент, терапевтические композиции, включающие конъюгат, способы применения конъюгатов при ингибировании роста клеток и лечении заболеваний. В частности, связывающийся с клеткой агент представляет собой моноклональное антитело и его связывающий эпитоп фрагмент, который распознает и связывает белок CD38.

Description

СГО38 представляет собой трансмембранный гликопротеин II типа, имеющий молекулярную массу 45 кД, с длинным С-концевым внеклеточным доменом и коротким Ν-концевым цитоплазматическим доменом. Белок СГО38 представляет собой бифункциональный эктофермент, который может катализировать превращение ΝΛΌ+ (никотинамид-аденин-динуклеотида) в циклическую АДФ-рибозу (сАЭРК), а также гидролизировать сАЭРК в АДФ-рибозу. В течение онтогенеза СГО38 появляется на коммитированных С.ГО34' стволовых клетках и коммитированных линией дифференцировки предшественниках лимфоидных, эритроидных и миелоидных клетках. Экспрессия СЭ38 сохраняется главным образом в лимфоидной линии дифференцировки при варьирующихся уровнях экспрессии на различных стадиях развития Т- и В-клеток.
СГО38 подвергается стимулирующей регуляции при многих гематопоэтических злокачественных заболеваниях и в линиях клеток, полученных при различных гематопоэтических злокачественных заболеваниях, включая неходжкинскую лимфому (ЫНБ), лимфому Беркитта (ВБ), множественную миелому (ММ), В-хронический лимфолейкоз (В-СЬЬ), В- и Т-острый лимфолейкоз (В-АББ), Т-клеточную лимфому (ТСЬ), острый миелолейкоз (ЛМЬ), волосато-клеточный лейкоз (НСЬ), лимфому Ходжкина (НЬ), хронический миелолейкоз (СМЬ). С другой стороны, наиболее примитивными плюрипотентными стволовыми клетками гематопоэтической системы являются С.ГО38-. Экспрессия С.ГО38 при гематопоэтических злокачественных заболеваниях и ее корреляция с прогрессированием заболевания делает С.ГО38 привлекательной мишенью для терапии антителом.
Сообщалось, что СГО38 участвует в мобилизации Са2+ (М. Могга с) а1., 1998, РА8ЕВ, I.. 12: 581-592; М.Т. 2ПЪег е1 а1., 2000, Ргос. Ν·ιΐ1. Асаб. 8с1. И8А, 97: 2840-2845) и в передаче сигналов посредством фосфорилирования тирозина многочисленных передающих сигналы молекул, включая фосфорилазу С-γ, ΖΑΡ-70, 8ук и сЪ1, в лимфоидных и миелоидных клетках или линиях клеток (А. Рииаго е1 а1., 1993, Еиг. I. 1ттипо1., 23: 2407-2411; М. Могга е1 а1., 1998, ЕА8Е8 I., 12: 581-592; А. Рииаго е1 а1., 1990, I. 1ттипо1., 145: 2390-2396; М. ΖиЪ^аи^ е1 а1., 1997, I. 1ттипо1., 159: 193-205; 8. ЭеадНо е1 а1., 2003, В1ооб, 102: 21462155; Е. Тоб15со е1 а1., 2000, В1ооб, 95: 535-542; М. Копор1еуа е1 а1., 1998, I. 1ттипо1., 161: 4702-4708; М.Т. Ζί^Γ е1 а1., 2000, Ргос. ЫаО. Асаб. 8сг И8А, 97: 2840-2845; А. Кйапака е1 а1., 1997, I. 1ттипо1., 159: 184-192; А. КИапака е1 а1., 1999, I. 1ттипо1., 162: 1952-1958; К. Ма11опе е1 а1., 2001, 1п1. 1ттипо1., 13: 397409). На основании этих наблюдений предполагалось, что С.ГО38 представляет собой важную передающую сигналы молекулу при созревании и активации лимфоидных и миелоидных клеток в течение их нормального развития.
Точная роль С.ГО38 в передаче сигналов и гематопоэзе еще неясна, в частности, поскольку в большинстве из этих исследований передачи сигналов использовались линии клеток, эктопически избыточно экспрессирующие СГО38 и моноклональные антитела к СЭ38, которые являются не физиологическими лигандами. Поскольку белок СГО38 обладает ферментативной активностью, которая продуцирует сАЭРК, молекулу, которая вызывает мобилизацию Са2+ (Н.С. Бее е1 а1., 1989, I. Вю1. СЬет., 264: 1608-1615; Н.С. Бее апб К. АагЬик, 1991, Се11 Кеди1, 2: 203-209), предполагалось, что лигирование СГО38 моноклональными антителами запускает мобилизацию Са2+ и передачу сигналов в лимфоцитах увеличением продукции сАЭРК (Н.С. Бее е1 а1., 1997, Абу. Ехр. Меб. Вю1., 419: 411-419). В отличие от этой гипотезы анализ усечения и точечной мутации белка С.ГО38 показал, что для передачи сигналов, опосредованной антителами к СЭ38, нет необходимости ни в его цитоплазматической хвостовой части, ни в его ферментативной активности (А. Кйапака е1 а1., 1999, I. 1ттипо1., 162: 1952-1958; Р.Е. Бипб е1 а1., 1999, I. 1ттипо1., 162: 2693-2702; 8. НсМиио е1 а1., 1997, I. 1ттипо1., 158, 741-747).
Наилучшее доказательство функции СГО38 получено на мышах после нокаута СЭ38-/-, имеющих врожденный дефект иммунитета и сниженную зависимую от Т-клеток гуморальную реакцию, вследствие дефекта миграции дендритных клеток (8. Раг0ба-8апсНе/ е1 а1., 2004, 1ттиш1у, 20: 279-291; 8. Раг0ба-8апс11е/ е1 а1., 2001, Ыа1. Меб., 7: 1209-1216). Тем не менее, неясно, идентична ли функция С.ГО38 у мышей функции С.ГО38 у людей, поскольку тип экспрессии СГО38 во время гематопоэза значительно различается между человеком и мышью: а) в отличие от незрелых стволовых клетокпредшественников у людей, аналогичные стволовые клетки-предшественники у мышей экспрессируют более высокий уровень СЭ38 (ТГО. Капба11 е1 а1., 1996, В1ооб, 87: 4057-4067; Κ.Ν. ЭадЬег е1 а1., 1998, Вю1. В1ооб Магго\у Тгап5р1аШ, 4: 69-74); Ъ) хотя во время развития человеческих В-клеток высокие уровни экспрессии С.ГО38 обнаруживаются в В-клетках и плазматических клетках терминального центра (Р.М. Искип, 1990, В1ооб, 76: 1908-1923; М. Китада1 е1 а1., 1995, I. Ехр. Меб., 181: 1101-1110), у мыши уровни экспрессии СГО38 в соответствующих клетках низкие (А.М. Ойуег е1 а1., 1997, I. 1ттипо1., 158: 1108-1115; А. ЮббегкШб апб Э.М. Таг1т1оп, 1998, I. 1ттипо1., 160: 4688-4695).
В литературе были описаны несколько антител против человеческого С.ГО38 с различными пролиферативными свойствами на различных опухолевых клетках и линиях клеток. Например, химерное антитело ОКТ10 с мышиным РаЪ и человеческим 1§С1 Рс очень эффективно опосредует антителозависимую клеточно-опосредованную цитотоксичность (АЭСС) против клеток лимфомы в присутствии мононуклеарных эффекторных клеток периферической крови или от пациентов с ММ, или от здоровых индивидуумов (Р.К. 81еуеп8оп е1 а1. 1991, В1ооб, 77: 1071-1079). Было показано, что привитый
- 1 025215
СИК-гуманизированный вариант антитела к СИ38 АТ13/5 обладает высокой активностью ЛЭСС против СП38-положительных линий клеток (И8 09/797941 А1). Было показано, что человеческие моноклональные антитела к СЭ38 опосредуют цитолиз ίη νίίτο СЭ38-положительных линий клеток под воздействием АЭСС и/или комплементзависимой цитотоксичности (СЭС) и задерживают рост опухоли у мышей 8СГО, несущих лини клеток ММ КРМ1-8226 (\УО 2005/103083 А2). С другой стороны, несколько антител к СИ38, ΙΒ4, 8υΝ-4Β7 и ОКТ10, но не ΙΒ6, АТ1 или АТ2 вызывали пролиферацию мононуклеарных клеток периферической крови (РВМС) от здоровых индивидуумов (С.М. Аик1е11о с1 а1., 2000, Т1ккие Апйдепк, 56: 539-547).
Было показано, что некоторые из антител предшествующего уровня техники способны запускать апоптоз в Β-клетках СИ38+. Однако они могут делать это в присутствии стромальных клеток или цитокинов, полученных из стромы. Сообщалось, что агонистическое антитело к СЭ38 (ΙΒ4) предотвращает апоптоз Β-клеток человеческого терминального центра (ОС) (8. Ζυρο е1 а1., 1994, Еиг. ί. 1ттипо1., 24: 1218-1222) и вызывает пролиферацию клеток КО-1 и НЬ-60 АМЬ (М. Копор1е\'а е1 а1., 1998, ί. 1ттипо1., 161: 4702-4708), но вызывает апоптоз в лимфобластических клетках Кика! Т (М. Могга е1 а1., 1998, ΡА8ЕΒ ί.. 12: 581-592). Другое антитело к СЭ38 Т16 вызывало апоптоз незрелых лимфоидных клеток и лейкозных лимфобластных клеток от пациента с АЬЬ (М. Китада1 е1 а1., 1995, ί. Ехр. Меб., 181: 11011110) и лейкозных лимфобластных клеток от пациента с АМЬ (Е. ТоФксо е1 а1., 2000, Β^ά, 95: 535-542), но Т16 вызывало апоптоз только в присутствии стромальных клеток или полученных из стромы цитокинов (1Ь-7, 1Ь-3, фактор стволовых клеток).
С другой стороны, некоторые антитела предшествующего уровня техники вызывают апоптоз после поперечной сшивки, но полностью лишены какой-либо апоптозной активности при инкубации отдельно (№О 2006/099875).
Ввиду того что СЭ38 представляет собой привлекательную мишень для антитело-терапии по поводу различных гематопоэтических злокачественных заболеваний, заявители генерировали и провели скрининг большого количества антител против человеческого СЭ38 для выявления высокой эффективности при следующих трех видах цитотоксической активности против СО38-положитсльных злокачественных гематопоэтических клеток: индукция апоптоза, АЭСС и СЭС. В настоящем изобретении описаны новые антитела к СИ38, способные вызвать цитолиз клеток СИ38+ тремя различными цитотоксическими механизмами: индукция апоптоза, АЭСС и СЭС. Следует отметить, что в настоящем изобретении описываются первые антитела к СИ38, которые способны непосредственно вызвать апоптоз клеток СИ38+ даже в отсутствие стромальных клеток или цитокинов, полученных из стромы.
Краткое описание сущности изобретения
Целью изобретения является предоставление антител, специфически связывающих С'П38 и способных вызвать цитолиз клеток СЭ38' посредством апоптоза. В то время как некоторые антитела предшествующего уровня техники способны запустить апоптоз только при поперечной сшивке, но иначе лишены какой-либо апоптозной активности, антитела по изобретению способны вызвать апоптозную гибель клеток ί'Ό38' даже при отдельной инкубации. В одном аспекте изобретения антитела по изобретению способны вызывать цитолиз Β-клеток ί'Ό38' посредством АЭСС или СЭС. В еще одном аспекте антитела по изобретению способны вызывать цитолиз клеток С'П38' по меньшей мере двумя из указанных выше механизмов, т.е. посредством апоптоза, АЭСС и СЭС. Следует отметить, что антитела по изобретению представляют собой первые антитела к СЭ38, которые, как было продемонстрировано, вызывают цитолиз Β-клеток ί'Ό38' всеми тремя различными механизмами: посредством апоптоза, АЭСС и СЭС. В еще одном варианте осуществления изобретения указанные антитела способны вызывать цитолиз Β-клеток С'П38' посредством апоптоза даже в отсутствие стромальных клеток или цитокинов, полученных из стромы.
Антитела по изобретению способны, в частности, вызвать цитолиз злокачественных Β-клеток СЭ38', включая клетки лимфомы, клетки лейкоза и клетки множественной миеломы. В некоторых вариантах осуществления Β-клетка СЭ38' представляет собой клетку ΝΗΕ, ΒΕ, ММ, Β-СЬЬ, АЬЬ, ТСЬ, АМЬ, НСЬ, НЬ или СМЬ.
В одном аспекте изобретения антитела по изобретению способны вызвать лизис по меньшей мере 24% клеток лимфомы Оаибк и/или по меньшей мере 7% клеток лимфомы Каток, и/или 11% клеток множественной миеломы МОЬР-8, и/или 36% клеток лимфомы 8и-ОНЬ-8, и/или 62% клеток лейкоза ΌΝΏ-41, и/или 27% клеток лимфомы Νυ-ΌυΕ-1, и/или 9% клеток лейкоза 1ΥΝ-13, и/или 4% клеток лейкоза НС-1 посредством апоптоза в отсутствие стромальных клеток или цитокинов, полученных из стромы.
Антитела по изобретению могут быть поликлональными или моноклональными. Предпочтительными являются моноклональные антитела к ί'Ό38. В более предпочтительном варианте осуществления предоставляются мышиные антитела, выбранные из 388Β13, 388Β18, 388Β19, 388Β30, 388Β31 и 388Β39, которые полностью характеризуются в настоящем описании в отношении аминокислотных последовательностей их вариабельных областей и легкой, и тяжелой цепей, последовательности кДНК генов вариабельных областей легкой и тяжелой цепей, идентификации их СОК (областей, определяющих комплементарность), идентификации их поверхностных аминокислот и средств для их экспрессии в реком- 2 025215 бинантной форме.
Настоящее изобретение включает химерные варианты мышиного моноклонального антитела к СБ38, выбранного из 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 и 388В39. Также включены имеющие модифицированную поверхность или гуманизированные варианты антител 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 и 388В39, где открытые на поверхности остатки каркаса вариабельной области антител или их связывающие эпитоп фрагменты замещены и в легкой, и в тяжелой цепях для более близкого напоминания известных поверхностей человеческого антитела. Гуманизированные антитела и их связывающие эпитоп фрагменты по настоящему изобретению имеют улучшенные свойства в том, что они являются менее иммуногенными (или полностью не имммуногенными), чем мышиные варианты у людей, которым они вводятся. Таким образом, различные варианты гуманизированных антител 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 и 388В39 и их связывающих эпитоп фрагментов по настоящему изобретению специфически распознают СБ38. в то же время не являясь иммуногенными для человека.
Гуманизированные варианты антител 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 и 388В39 по настоящему изобретению полностью характеризуются в настоящем описании в отношении их соответствующих аминокислотных последовательностей вариабельных областей и легкой, и тяжелой цепей, последовательностей ДНК генов вариабельных областей легкой и тяжелой цепей, идентификации определяющих комплементарность областей (СБК), идентификации поверхностных аминокислотных остатков каркаса их вариабельной области, и описания средств их экспрессии в рекомбинантной форме.
Изобретение также предусматривает применение конъюгатов между цитотоксическими конъюгатами, включающими (1) связывающий клетку агент, который распознает и связывает СБ38, и (2) цитотоксический агент. В цитотоксических конъюгатах клетка, связывающая агент, имеет высокое сродство к СБ38, а цитотоксический агент имеет высокую степень цитотоксичности для клеток, экспрессирующих СБ38, таких как цитотоксические конъюгаты по настоящему изобретению, которые образуют эффективные цитолитические агенты.
В предпочтительном варианте осуществления связывающий клетку агент представляет антитело к СБ38 (например, 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 и 388В39) или его связывающий эпитоп фрагмент, предпочтительнее гуманизированное антитело к СБ38 (например, 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 и 388В39) или его связывающий эпитоп фрагмент, где цитотоксический агент ковалентно присоединен, непосредственно или через расщепляемый или нерасщепляемый линкер, к антителу или к его связывающему эпитоп фрагменту. В более предпочтительных вариантах осуществления связывающийся с клеткой агент представляет собой гуманизированные антитела (388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 и 388В39) или их связывающий эпитоп фрагмент. А цитотоксический агент представляет собой таксол, мейтансиноид, производное томеймицина, производное лептомицина, СС-1065 или аналог СС-1065.
Предпочтительнее связывающийся с клеткой агент представляет собой гуманизированное антитело к СБ38 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 и 388В39, а цитотоксический агент представляет собой соединение мейтансина, такое как ΌΜ1 или ΌΜ4.
Настоящее изобретение также охватывает применение фрагментов антител к СБ38, которые сохраняют способность связывать СБ38. В другом аспекте изобретения предусматривается применение функциональных эквивалентов антител к СБ38.
Настоящее изобретение также включает способ ингибирования роста клетки, экспрессирующей СБ38. В предпочтительных вариантах осуществления способ ингибирования роста клетки, экспрессирующей СБ38, происходит ίη νίνο и приводит к гибели клетки, хотя также включены применения ίη νίίτο и ех νίνο.
Настоящее изобретение также включает терапевтическую композицию, включающую антитело к СБ38 или конъюгат антитела к СБ38-цитотоксического агента, и фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент. В некоторых вариантах осуществления терапевтическая композиция включает второй терапевтический агент. Второй терапевтический агент можно выбрать из группы, включающей антагонисты эпидермального ростового фактора (ЕОР), фактора роста фибробластов (РОЕ), фактора роста гепатоцитов (НОР), тканевого фактора (ТЕ), белка С, белка 8, фактора роста, полученного из тромбоцитов (РБОР), герегулина, белка, стимулирующего макрофаги (Μ8Ρ), или фактора роста сосудистого эндотелия УЕОР), или антагонист рецептора эпидермального ростового фактора (ЕОР), фактора роста фибробластов (РОЕ), фактора роста гепатоцитов (НОР), тканевого фактора (ТР), белка С, белка 8, фактора роста, полученного из тромбоцитов (РБОР), герегулина, белка, стимулирующего макрофаги (Μ8Ρ), или фактора роста сосудистого эндотелия (УЕОР), включая рецептор НЕК2, рецептор НЕК.3, с-ΜΕΤ и тирозинкиназ других рецепторов. Второй терапевтический агент можно также выбрать из группы, включающей антитела, нацеленные на кластеры антигенов дифференциации (СБ), включая СБ3, СБ14, СБ19, СБ20, СБ22, СБ25, СБ28, СБ30, СБ33, СБ36, СБ40, СБ44, СБ52, СБ55, СБ59, СБ56, СБ70, СБ79, СБ80, СБ103, СБ134, СБ137, СБ138 и СБ152. Этот второй терапевтический агент можно также выбрать из группы химиотерапевтических или иммуномодуляторных агентов.
Настоящее изобретение, кроме того, включает способ лечения субъекта, имеющего рак или воспалительное заболевание, включая аутоиммунное заболевание, с использованием терапевтической компо- 3 025215 зиции. В некоторых вариантах осуществления рак выбран из группы, состоящей из ИНЬ, ВЬ, ММ, В-СЬЬ, ЛЬЬ, ТСЬ, ЛМЬ, НСЬ, НЬ и СМЬ. В другом варианте осуществления аутоиммунное заболевание выбрано из группы, состоящей из системной красной волчанки, рассеянного склероза, ревматоидного артрита, болезни Крона, язвенного колита, гастрита, тироидита Хашимото, анкилозирующего спондилита, криоглобулинемического васкулита, связанного с гепатитом С, хронического очагового энцефалита, буллезной псевдопузырчатки, гемофилии А, мембранопролиферативного гломерулонефрита, синдрома Шегрена, дерматомиозита взрослых и ювенильного дерматомиозита, хронической сыпи, первичного билиарного цирроза, идиопатической тромбоцитопенической пурпуры, нейромиелита зрительного нерва, дистироидного заболевания Грэйвса, буллезной псевдопузырчатки, мембранопролиферативного гломерулонефрита, синдрома Чурга-Штрауса и астмы. В предпочтительных вариантах осуществления цитотоксический конъюгат включает антитело к СЭ38 и цитотоксический агент. В более предпочтительных вариантах осуществления цитотоксический конъюгат включает конъюгат гуманизированного антитела 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 и 388В39 с ИМ1, гуманизированного антитела 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 и 388В39 с ИМ4 или гуманизированного антитела 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 и 388В39 с таксаном и конъюгат вводится наряду с фармацевтически приемлемым носителем или эксципиентами.
В другом аспекте изобретения антитела к СЭ38 используются для выявления белка СИ38 в биологическом образце. В предпочтительном варианте осуществления указанные антитела используются для определения уровней СИ38 в опухолевой ткани.
Настоящее изобретение также включает набор, включающий антитело к С.О38 или конъюгат антитела к СН38-цитотоксического агента и иструкции по применению. В предпочтительных вариантах осуществления антитела к С.О38 представляют собой гуманизированные антитела 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 и 388В39, цитотоксический агент представляет собой соединение мейтансина, такое как ИМ1 или ЭМ4. производное томеймицина, производное лептомицина или токсан, и инструкции относятся к применению конъюгатов при лечении субъекта, имеющего рак. Набор может также включать компоненты, необходимые для получения фармацевтически приемлемого состава, такие как разбавитель, если конъюгат находится в лиофилизированном состоянии или в концентрированной форме, и для введения состава.
При отсутствии других указаний все приведенные в настоящем описании ссылки и патенты включены в него в качестве ссылки.
Краткое описание чертежей
На фиг. 1А показан анализ РАС8 (лазерным анализатором клеток по интенсивности флуоресценции) специфического связывания очищенных мышиных антитела к СЭ38, 388В13, 388В18, 388В19, клеток от 38 до 300-19, экспрессирующих человеческий СЭ38, и СН38-положительных клеток лимфомы Каток.
На фиг. 1В показан анализ РАС8 специфического связывания очищенных мышиных антител к СИ38, 388В30, 388В31, 388В39, и контрольного антитела к СИ38 АТ13/5 к клеткам 300-19, экспрессирующим человеческий СЭ38, и СИ38-положительных клеток лимфомы Каток.
На фиг. 2 показаны кривые титрования связывания 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 и 388В39, адаптированных клетками Каток.
На фиг. 3 показаны точечные графики РАС8 (РЬ4-Н; окрашивание ТО-РКО-3; ось у и РЬ1-Н; окрашивание аннексина Р1ТС (флуоресцеином-изотиоцианатом) клеток Каток, подвергаемых апоптозу, после инкубации с 388В18, 388В19 или АТ13/5 (10 нМ) в течение 24 ч.
На фиг. 4А показаны средние процентные доли клеток Каток, подвергаемых апоптозу, после инкубации с 388В13, 383В18, 383В19, 383В30, 383В31 и 383В39, 383В7, 383В23, 1В4, АТ13/5, ОКТ10 или 8иЫ-4В7. На график нанесены средние процентные доли аннексии У-положительные клетки (ось у; включает и ТО-РКО-положительные, и ТО-РКО-отрицательные клетки) из образцов в двух повторениях.
На фиг. 4В показаны средние процентные доли клеток ОаиЙ1, подвергаемых апоптозу, после инкубации в течение 24 ч с тем же набором антител, как на фиг. 4А.
На фиг. 4С показаны средние процентные доли клеток Мо1р-8, подвергаемых апоптозу, после инкубации в течение 24 ч с тем же набором антител, как на фиг. 4А.
На фиг. 5А показана схема человеческого вектора экспрессии, используемого для экспрессии Ьи388В19-ЬС.
На фиг. 5В показана схема человеческого вектора экспрессии, используемого для экспрессии Ьи383В19-НС.
На фиг. 5С показана схема человеческого вектора экспрессии, используемого для экспрессии и Ьи388В19ЬС, и Ьи383В19НС.
На фиг. 6А показаны величины активности АОСС, опосредованной антителами сН388В13, еЬ388В18 и еЬ388В19, в отношении клеток Каток.
На фиг. 6В показаны величины активности АОСС, опосредованной антителами сН388В30, еЬ388В31 и еЬ388В39, в отношении клеток Каток.
- 4 025215
На фиг. 7А показаны величины активности АЭСС. опосредованной антителами СЙ388В18. СЙ388В19. СЙ388В31 и не связывающим химерным человеческим 1дО1 контрольным антителом в отношении клеток множественной миеломы ЬР-1.
На фиг. 7В сравниваются величины активности АЭСС. опосредованной антителами СЙ388В19 и мышиным 388В19 в отношении клеток ЭанШ.
На фиг. 8А показаны величины активности АЭСС. опосредованной антителом СЙ388В19 и не связывающим химерный человеческий 1дО1 контрольным антителом в отношении клеток ЫЛЬМ-б В-ЛЬЬ.
На фиг. 8В показаны величины активности АЭСС. опосредованной антителом СЙ388В19 и не связывающим химерный человеческий 1дО1 контрольным антителом в отношении клеток МОЬТ-б Т-АЬЬ.
На фиг. 9А показаны величины активности СНС. опосредованной антителами СЙ388В13. СЙ388В318, СЙ388В319. СЙ388В30 и СЙ388В39 в отношении клеток Кяр-ГМО.
На фиг. 9В показаны величины активности СЭС. опосредованной антителами СЙ388В319 и СЙ388В31 в отношении клеток Кар-1МО.
На фиг. 10 показаны величины активности СЭС. опосредованной антителами сН388В18. сН388В19. СЙ388В31 и не связывающим химерным человеческим 1дО1 контрольным антителом в отношении клеток множественной миеломы ЬР-1.
На фиг. 11А показаны величины активности СНС. опосредованной антителами сН388В13. СЙ388В19 и сН388В39. в отношении клеток Оаийк
На фиг. 11В показаны величины активности СНС. опосредованной антителами СЙ388В18 и СЙ388В30. в отношении клеток ЭанШ.
На фиг. 11С показаны величины активности СНС. опосредованной антителами СЙ388В19 и сН388В31. в отношении клеток Оаийк
На фиг. 12А показаны кривые титрования связывания сН388В19. 1ш388В19 ν1.00 и 1ш388В19 ν1.20 для связывания с клетками Кашоз.
На фиг. 12В показаны кривые связывания. которые сравнивают сН388В19. 1ш388В19 ν1.00 и 1ш388В19 ν1.00 по их способности конкурировать со связыванием биотинилированного мышиного антитела за связывание 388В19 с клетками Кашоз.
На фиг. 13 показаны средние процентные доли клеток Оаийк подвергающихся апоптозу после 24 ч инкубации с антителом СЙ388В19. Ьц38§В19 ν1.00 или Ьц38§В19 ν1.20.
На фиг. 14 показаны величины активности АЭСС. опосредованной антителами сН388В19. 1ш388В19 ν1.00. 1ш388В19 ν1.20 и не связывающим химерным человеческим 1дО1 контрольным антителом в отношении клеток множественной миеломы ЬР-1.
На фиг. 15А показаны величины активности СНС. опосредованной антителами сН388В19. 1ш388В19 ν1.00 и 1ш388В19 ν1.20. в отношении клеток лимфомы Кар-1МО.
На фиг. 15В показаны величины активности СНС. опосредованной антителами сН388В19.1ш388В19 ν1.00 и 1ш388В19 ν1.20. в отношении клеток множественной миеломы ЬР-1.
На фиг. 15С показаны величины активности СНС. опосредованной антителами сН388В19.1ш388В19 ν1.00 и 1ш388В19 ν1.20. в отношении клеток Т-клеточного острого лимфобластического лейкоза ΌΝΏ-41.
На фиг. 1б показаны средние процентные доли аннексии У-положительных клеток после 24 ч инкубации с антителом 1ш388В19 ν1.0 0 к клеткам диффузной крупной В-клеточной лимфомы 8и-ОНЬ-8. к клеткам В-клеточной лимфомы Νυ-θυΕ-1. к клеткам Т-клеточного острого лимфобластического лейкоза ΌΝΏ-41. к клеткам хронического В-клеточного лимфолейкоза 1УМ-13 и к клеткам волосатоклеточного лейкоза НС-1.
На фиг. 17 показан процент выживания мышей δί',ΊΏ. несущих привившиеся диссеминированные человеческие опухоли Кашоз. Как указано. мышей лечили мышиным антителом 388В13. 388В18. 388В19. 388В30. 388В31 или 388В39 или РВ§ (солевой раствор с фосфатным буфером).
На фиг. 18 показан процент выживания мышей §СГО. несущих привившиеся диссеминированные человеческие опухоли ЭанШ. Как указано. мышей лечили мышиным антителом 1ш388В19 или шц38§В19 или РВ§.
На фиг. 19 показан средний объем опухоли мышей §СГО. несущих ксенотрансплантаты опухолей множественной миеломы N0-4929. Как указано. мышей лечили антителом 1ш388В19. не связывающим контрольным 1дО1 антителом или РВ§.
На фиг. 20 показан средний объем опухоли мышей §СГО. несущих ксенотрансплантаты опухолей множественной миеломы МОЬР-8. Как указано. мышей лечили антителом 1ш388В19. шц38§В19. не связывающим контрольным 1дО1 антителом или РВ§.
- 5 025215
Детальное описание изобретения
В настоящем изобретении описаны новые антитела, способные специфически связывать СИ38. В частности, заявители обнаружили новые антитела, которые специфически связывают СИ38 на клеточной поверхности и вызывают цитолиз клетки СИ38+ посредством апоптоза. В одном аспекте изобретения антитела к СИ38 также способны вызывать цитолиз клетки СИ38+ посредством антителозависимой цитотоксичности (ЛИСС). В другом аспекте изобретения антитела к СИ38 по изобретению также способны вызывать цитолиз клетки СИ38+ посредством комплементзависимой цитотоксичности (СИС). В еще одном аспекте изобретения антитела к СИ38 по изобретению также способны вызывать цитолиз клетки СИ38+ по меньшей мере двумя указанными выше механизмами, посредством апоптоза, ЛИСС и СИС. В частности, в предпочтительном варианте осуществления антитела к СИ38 по изобретению способны вызывать цитолиз клетки СИ38+, посредством апоптоза, ЛИСС и СИС. Таким образом, изобретение относится к первому антителу к СИ38, способному вызывать цитолиз клетки СИ38', тремя различными механизмами.
Ранее были описаны антитела, способные связывать СИ38 и запускать апоптозный цитолиз клеток СИ38+ (М. Кигаада1 е( а1., 1995, 1. Ехр. Меб., 181: 1101-11110; Е. ТоГОсо е( а1., 2000, В1ооб, 95: 535-542), но антитела по изобретению являются первыми, у которых продемонстрирована апоптозная активность в отсутствие клеток стромы или полученных из стромы цитокинов. Используемый в настоящем описании термин строма относится к незлокачественной опорной ткани опухоли, которая включает соединительную ткань, кровеносные сосуды и воспалительные клетки. Стромальные клетки продуцируют ростовые факторы и другие вещества, включая цитокины, которые могут влиять на поведение раковых клеток. Используемый в настоящем описании термин цитокин относится к мелким секретируемым белкам (например, 1Ь-1, 1Ь-2, 1Ь-4, 1Ь-5 и 1Ь-бб ΙΡΝ§, 1Е-3-1Ь-7 и СМ-С8Р), которые опосредуют и регулируют иммунитет, воспаление и гематопоэз. В настоящем описании показано, что антитела предшествующего уровня техники неспособны запускать апоптозный цитолиз в отсутствие клеток стромы или полученных из стромы цитокинов. Напротив, антитела к СИ38а по изобретению проявляют в таких же условиях высокую апоптозную активность.
В другом аспекте, антитела по изобретению способны связываться с белком СИ38 с кс 3х10-9 или ниже.
Используемый в настоящем описании термин СИ38 относится к трансмембранному белку II типа, включающему, например, аминокислотную последовательность, как последовательность в СепЬапк (генном банке) под номером доступа ΝΡ 0017бб. Клетка СИ38 представляет собой клетку, экспрессирующую белок СИ38. Предпочтительно клетка СИ38+ представляет собой клетку млекопитающего.
В одном варианте осуществления клетка СИ38+ представляет собой злокачественную клетку. В предпочтительном варианте осуществления клетка СИ38+ представляет собой опухолевую клетку, полученную при гематопоэтическом злокачественном заболевании. В более предпочтительном варианте осуществления клетка СИ38+ представляет собой клетку лимфомы, клетку лейкоза или клетку множественной миеломы. В еще одном предпочтительном варианте осуществления клетка СИ38+ представляет собой клетку ΗΝΕ, ВЬ, ММ, Β-СЬЬ, ЛЬЕ, ТСЬ, ЛМЬ, ИСЬ, НЬ или СМЬ.
Таким образом, в одном варианте осуществления изобретение относится к антителам к СИ38, способным к цитолизу, по меньшей мере 24% клеток лимфомы ИаиЛ, в отсутствие клеток стромы или цитокинов, полученных из стромы. В другом варианте осуществления антитела к СИ38 по изобретению способны к цитолизу, по меньшей мере 7% клеток лимфомы Каток, в отсутствие клеток стромы или цитокинов, полученных из стромы. В другом варианте осуществления антитела к СИ38 по изобретению способны к цитолизу, по меньшей мере 11% клеток множественной миеломы МОЬР-8, в отсутствие клеток стромы или цитокинов, полученных из стромы. В другом варианте осуществления антитела к СИ38 по изобретению способны к цитолизу, по меньшей мере 3б% клеток лимфомы §и-ИНЕ-8, в отсутствие клеток стромы или цитокинов, полученных из стромы. В другом варианте осуществления антитела к СИ38 по изобретению способны к цитолизу, по меньшей мере 27% клеток лимфомы Νυ-ИНЬ-Ь в отсутствие клеток стромы или цитокинов, полученных из стромы. В другом варианте осуществления антитела к СИ38 по изобретению способны к цитолизу, по меньшей мере б2% клеток лейкоза ΌΝΏ-41, в отсутствие клеток стромы или цитокинов, полученных из стромы. В другом варианте осуществления антитела к СИ38 по изобретению способны к цитолизу, по меньшей мере 9% клеток лейкоза ЬУМ-13, в отсутствие клеток стромы или цитокинов, полученных из стромы. В другом варианте осуществления антитела к СИ38 по изобретению способны к цитолизу, по меньшей мере 4% клеток лейкоза НС-1, в отсутствие клеток стромы или цитокинов, полученных из стромы.
Антитела.
Термин антитело используется в настоящем описании в самом широком смысле и, в частности, охватывает моноклональные антитела (включая моноклональные антитела полной длины) любого изотипа, такие как 1§С, 1дМ, Ι§Ά, 1§И и 1дЕ, поликлональные антитела, мультиспецифические антитела, химерные антитела и фрагменты антител. Антитело, взаимодействующее со специфическим антигеном, можно генерировать рекомбинатными способами, такими как выбор библиотек рекомбинатных антител в фаге, или аналогичных векторах. Или иммунизацией животного антигеном или кодирующей антиген нуклеиновой кислотой.
Типичное 1§О антитело состоит из двух идентичных тяжелых цепей и двух идентичных легких цепей, которые соединены дисульфидными мостиками. Каждая тяжелая и легкая цепь содержит константную область и вариабельную область. Каждая вариабельная область содержит три сегмента, называемых определяющие комплементарность области (СОК) или гипервариабельные области, которые в первую очередь ответственны за связывание с эпитопом антигена. Они обычно именуются СОК1, СОК2 и СОК3, последовательно пронумерованные от Ν-конца. Более высоко консервированные части вариабельных областей называются каркасными областями.
Используемый в настоящем описании термин Ун или УН относится к вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина антитела, включая тяжелую цепь Ρν, зсРу, άδΡν, РаЬ, РаЬ' или фрагмента Р(аЬ')2. Ссылка на Уъ или УЪ относится к вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина антитела, включая легкую цепь Ρν, δсΡν, άδΡν, РаЬ, РаЬ' или фрагмента Р(аЬ')2.
Поликлональное антитело представляет собой антитело, которое было получено среди или в присутствии одного или более других, не идентичных антител. В целом, поликлональные антитела получают из В-лимфоцитов в присутствии нескольких других В-лимфоцитов, продуцирующих неидентичные антитела. Обычно поликлональные антитела получают непосредственно у иммунизированного животного.
Используемый в настоящем описании термин моноклональное антитело представляет собой антитело, полученное из популяции по существу однородных антител, т.е. антитела, образующие эту популяцию, по существу идентичны, за исключением возможных естественно встречающихся мутаций, которые могут присутствовать в небольших количествах. Эти антитела направлены против одного эпитопа и поэтому являются высокоспецифичными.
Эпитоп представляет собой участок антигена, с которым связывается антитело. Если антиген представляет собой полимер, такой как белок или полисахарид, то эпитоп может быть образован смежными остатками или несмежными остатками, тесно сближенными укладкой антигенного полимера. В белках эпитопы, образованные смежными аминокислотами, обычно удерживаются при воздействии денатурирующих растворителей, тогда как эпитопы, образованные не смежными аминокислотами, обычно теряются при указанном воздействии.
Используемый в настоящем описании термин Кс относится к константе диссоциации определенного взаимодействия антитела/антигена.
Настоящее изобретение происходит из новых мышиных антител к СО38, в настоящем изобретении 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 и 388В39, которые полностью характеризуются в отношении аминокислотных последовательностей и легких, и тяжелых цепей, идентификации СОК, идентификации поверхностных аминокислот и средств их экспрессии в рекомбинантной форме. В настоящем изобретении описаны первичные аминокислотные и ДНК последовательности легкой и тяжелой цепей антител 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 и 388В39 и гуманизированных вариантов.
Клеточные линии гибридомы, продуцирующие мышиные антитела к СО38 антител 388В13. 388В18. 388В19, 388В30, 388В31 и 388В39, были депонированы в Американской коллекции типовых культур (10801 υηίνβτδίίγ В1б, Μаηаδδаδ, УА, 201 10-2209, υδΑ), 21 июня 2006 г, под депозитными номерами соответственно РТА-7667, РТА-7669, РТА-7670, РТА-7666, РТА-7668 и РТА-7671.
Объем настоящего изобретения не ограничивается антителами и фрагментами, включающими эти последовательности. Вместо этого, антитела и фрагменты, которые специфически связывают СО38 и способны лизировать клетки СО38+ посредством апоптоза, АОСС и/или СОС, охватываются объемом настоящего изобретения. Таким образом, антитела и фрагменты антител могут отличаться от антитела 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 и 388В39 или гуманизированных производных в аминокислотных последовательностях их каркаса, СОК, легкой цепи и тяжелой цепей, и все же охватываются объемом настоящего изобретения.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к антителам или их связывающему эпитопом фрагменту, включающему один или более СОК, имеющих аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из δΕΟ ГО ΝΟ: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 и 36. В предпочтительном варианте осуществления антитела по изобретению включают по меньшей мере одну тяжелую цепь и по меньшей мере одну легкую цепь, и указанная тяжелая цепь включает три последовательных СОК, имеющих аминокислотные последовательности, выбранные из группы, состоящей из δΕΟ ГО ΝΟ: 1, 2, 3, 7, 8, 9, 13, 14, 15, 19, 20, 21, 25, 26, 27, 31, 32 и 33, и указанная легкая цепь включает три последовательных СОК, имеющих аминокислотные последовательности, выбранные из группы, состоящей из δΕΟ ГО ΝΟ: 4, 5, 6, 10, 11, 12, 16, 17, 18, 22, 23, 24, 28, 29, 30, 34, 35 и 36.
В более предпочтительном варианте осуществления антитела по изобретению включают три СОК, имеющих аминокислотные последовательности, выбранные из группы δΕΟ ГО ΝΟ: 1, 2, 3, 4, 5 и 6. В еще одном более предпочтительном варианте осуществления предоставляется антитело 38δВ13, которое включает по меньшей мере одну тяжелую цепь и по меньшей мере одну легкую цепь, и указанная тяжелая цепь включает три последовательных СОК, имеющих аминокислотные последовательности, выбранные из группы δΕΟ ГО ΝΟ: 1, 2 и 3, а указанная легкая цепь включает три последовательных СОК, име- 7 025215 ющих аминокислотные последовательности, выбранные из группы 8ЕО ГО N0: 4, 5 и 6.
В более предпочтительном варианте осуществления антитела по изобретению включают три СЭР. имеющих аминокислотные последовательности, выбранные из группы 8Е0 ГО N0: 7, 8, 9, 10, 11 и 12. В еще одном более предпочтительном варианте осуществления предоставляется антитело 388В18, которое включает по меньшей мере одну тяжелую цепь и по меньшей мере одну легкую цепь, и указанная тяжелая цепь включает три последовательных СОК, имеющих аминокислотные последовательности, выбранные из группы 8Е0 ГО N0: 7, 8 и 9, а указанная легкая цепь включает три последовательных СОК, имеющих аминокислотные последовательности, выбранные из группы 8Е0 ГО N0: 10, 11 и 12.
В другом более предпочтительном варианте осуществления антитела по изобретению включают три СОК, имеющих аминокислотные последовательности, выбранные из группы 8Е0 ГО N0: 13, 14, 15, 16, 17 и 18. В еще одном более предпочтительном варианте осуществления предоставляется антитело 388В19, которое включает по меньшей мере одну тяжелую цепь и по меньшей мере одну легкую цепь, и указанная тяжелая цепь включает три последовательных СОК, имеющих аминокислотные последовательности, выбранные из группы 8Е0 ГО N0: 13, 14 и 15, а указанная легкая цепь включает три последовательных СОК, имеющих аминокислотные последовательности, выбранные из группы 8Е0 ГО N0: 16, 17 и 18.
В другом более предпочтительном варианте осуществления антитела по изобретению включают три СОК, имеющих аминокислотные последовательности, выбранные из группы 8Е0 ГО N0: 19, 20, 21, 22, 23, 24. В еще одном более предпочтительном варианте осуществления предоставляется антитело 388В30, которое включает по меньшей мере одну тяжелую цепь и по меньшей мере одну легкую цепь, и указанная тяжелая цепь включает три последовательных СОК, имеющих аминокислотные последовательности, выбранные из группы 8Е0 ГО N0: 19, 20 и 21, а указанная легкая цепь включает три последовательных СОК, имеющих аминокислотные последовательности, выбранные из группы 8Е0 ГО N0: 22, 23 и 24.
В другом более предпочтительном варианте осуществления антитела по изобретению включают три СОК, имеющих аминокислотные последовательности, выбранные из группы 8Е0 ГО N0: 25, 26, 27, 28, 29 и 30. В еще одном более предпочтительном варианте осуществления предоставляется антитело 388В31, которое включает по меньшей мере одну тяжелую цепь и по меньшей мере одну легкую цепь, и указанная тяжелая цепь включает три последовательных СОК, имеющих аминокислотные последовательности, выбранные из группы 8Е0 ГО N0: 25, 26 и 27, а указанная легкая цепь включает три последовательных СОК, имеющих аминокислотные последовательности, выбранные из группы 8Е0 ^N0: 28, 29 и 30.
В другом более предпочтительном варианте осуществления антитела по изобретению включают три СОК, имеющих аминокислотные последовательности, выбранные из группы 8Е0 ГО N0: 31, 32, 33, 34, 35 и 36. В еще одном более предпочтительном варианте осуществления предоставляется антитело 388В19, которое включает по меньшей мере одну тяжелую цепь и по меньшей мере одну легкую цепь, и указанная тяжелая цепь включает три последовательных СОК, имеющих аминокислотные последовательности, выбранные из группы 8Е0 ГО N0: 31, 32 и 33, а указанная легкая цепь включает три последовательных СОК, имеющих аминокислотные последовательности, выбранные из группы 8Е0 ГО N0: 34, 35 и 36.
В другом варианте осуществления антитела к СЭ38 по изобретению включают Уь, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0: Уъ для 38, 40, 42, 44, 46 и 48. В более предпочтительном варианте осуществления предоставляется антитело 388В13, включающее Уь, имеющую аминокислотную последовательность, состоящую из 8Е0 ГО N0: 38. В более предпочтительном варианте осуществления предоставляется антитело 388В18, включающее Уь, имеющую аминокислотную последовательность, состоящую из 8Е0 ГО N0: 40. В более предпочтительном варианте осуществления предоставляется антитело 388В19, включающее Уь, имеющую аминокислотную последовательность, состоящую из 8Е0 ГО N0: 42. В более предпочтительном варианте осуществления предоставляется антитело 388В30, включающее Уь, имеющую аминокислотную последовательность, состоящую из 8Е0 ГО N0: 44. В более предпочтительном варианте осуществления предоставляется антитело 388В31, включающее Уь, имеющую аминокислотную последовательность, состоящую из 8Е0 ГО N0: 46. В более предпочтительном варианте осуществления предоставляется антитело 388В39, включающее Уь, имеющую аминокислотную последовательность, состоящую из 8Е0 ГО N0: 48.
В другом варианте осуществления антитела по изобретению включают Ун, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0: 50, 52, 54, 56, 58 и 60. В более предпочтительном варианте осуществления предоставляется антитело 388В13, включающее Ун, имеющую аминокислотную последовательность, состоящую из 8Е0 ГО N0: 50. В более предпочтительном варианте осуществления предоставляется антитело 388В18, включающее Ун, имеющую аминокислотную последовательность, состоящую из 8Е0 ГО N0: 52. В более предпочтительном варианте осуществления предоставляется антитело 388В19, включающее Ун, имеющую аминокислотную последовательность, состоящую из 8Е0 ГО N0: 54. В более предпочтительном варианте осуществления предоставляется антитело 388В30, включающее Ун, имеющую аминокислотную последовательность, состоящую
- 8 025215 из δΕΟ ΙΌ N0: 56. В более предпочтительном варианте осуществления предоставляется антитело 38δΒ31, включающее Ун, имеющую аминокислотную последовательность, состоящую из δΕΟ ΙΌ N0: 58. В более предпочтительном варианте осуществления предоставляется антитело 38δΒ39, включающее Ун, имеющую аминокислотную последовательность, состоящую из δΕΟ ΙΌ N0: 60.
Химерные и гуманизированные антитела 38δΒ13, 38δΒ18, 38δΒ19, 38δΒ30, 38δΒ31 и 38δΒ39.
Используемый в настоящем описании термин химерное антитело обозначает антитело, в котором константная область или ее часть соединена с константной областью другого вида, или относящееся к другом классу или подклассу антител. Химерное антитело также относится к антителу, в котором вариабельная область или ее часть изменена, замещена или обменена с тем, чтобы константная область была связана с вариабельной областью другого вида, или относится к другому классу или подклассу антител. Способы получения химерных антител известны в данной области. См., например, Моткой, 1985, δοίοηοβ, 229: 1202; 0ί е! а1., 1986, Β^оΤесЬη^^ие8, 4: 214; СППек е! а1., 1989, I. 1ттипо1. Ме1коЙ8, 125: 191202; патенты США № 5807715, 4816567 и 4816397, которые полностью включены в настоящее описание в качестве ссылки.
В одном варианте осуществления изобретения, предоставляются химерные варианты 38δΒ13, 38δΒ18, 38δΒ19, 38δΒ30, 38δΒ31 и 38δΒ39. В частности, указанные химерные варианты содержат по меньшей мере одну человеческую константную область. В более предпочтительном варианте осуществления эта человеческая константная область представляет собой константную область человеческого 1дС1/Каппа.
Используемый в настоящем описании термин гуманизированное антитело относится к химерному антителу, которое содержит минимальную последовательность, полученную из не человеческого иммуноглобулина. Целью гуманизации является снижение иммуногенности ксеногенного антитела, такого как мышиное антитело, для введения в человеческое, в то же время сохраняя полное сродство связывания антигена и специфичности антитела. Гуманизированные антитела или антитела, адаптированные против отторжения другими млекопитающими, можно получить, используя несколько технологий, таких как реструктурирование поверхности и трансплантация СЭР. В используемой в настоящем изобретении технологии реструктурирования поверхности применяется комбинация молекулярного моделирования, статистического анализа и мутагенеза для изменения не являющихся СЭР поверхностей вариабельных областей антитела, чтобы сделать их похожими на поверхности известных антител хозяина-мишени. Технология трансплантации СЭР включает замещение определяющих комплементарность областей, например, мышиного антитела, в человеческий каркасный домен, например, см. \У0 92/22653. Гуманизированные химерные антитела предпочтительно имеют константные области и вариабельные области, отличные от определяющих комплементарность областей (СИР), полученных по существу или исключительно из соответствующих областей человеческого антитела, и СИР, полученных по существу или исключительно у млекопитающего, отличного от человека.
Стратегии и способы реструктурирования поверхности антител и другие способы снижения иммуногенности антител в ином организме-хозяине раскрыты в патенте США № 5639641, который полностью включен в настоящее описание в качестве ссылки. Вкратце, в предпочтительном способе (1) генерируется совмещение положений пула вариабельных областей тяжелой и легкой цепей антитела для получения набора открытых на поверхности положений каркаса вариабельной области тяжелой и легкой цепи, где положения совмещения для всех вариабельных областей идентичны по меньшей мере примерно на 98%; (2) определяется набор открытых на поверхности аминокислотных остатков каркаса вариабельной области тяжелой и легкой цепей для антитела грызунов (или его фрагмента); (3) идентифицируется набор открытых на поверхности аминокислотных остатков каркаса вариабельной области тяжелой и легкой цепи, который наиболее близко идентичен набору открытых на поверхности аминокислотных остатков у грызунов; (4) набор открытых на поверхности аминокислотных остатков каркаса вариабельной области тяжелой и легкой цепи, определенный на стадии (2), замещается набором открытых на поверхности аминокислотных остатков каркаса вариабельной области тяжелой и легкой цепи, идентифицированным на стадии (3), за исключением тех аминокислотных остатков, которые находятся в пределах 5 А от любого атома любого остатка определяющих комлементарность областей антитела грызунов; и (5) получают гуманизированное антитело грызуна, имеющее специфичность связывания.
Антитела могут быть гуманизированы с использованием различных других методик, включая трансплантацию СИР (ΕΡ 0239400; \У0 91/09967; патенты США № 5530101 и 5585089), покрытие тонким слоем или реструктурирование поверхности (ΕΡ 0592106; ΕΡ 0519596; Раб1ап Ε.Α., 1991, Мо1еси1аг 1ттипо1оду 28(4/5): 489-498; δΐΒάηκΕπ С.М. е! а1., 1994, Рго!ет Εηβίη^ηηβ, 7(6): 805-814; Родикка М.А. е! а1., 1994, ΡΝΑδ, 91: 969-973) и перетасовку цепи (патент США № 5565332). Человеческие антитела можно получить разнообразными способами, известными в данной области, включая способы представления фага. См. также патенты США № 4444887, 4716111, 5545806 и 5814318 и описание международных патентных заявок под номерами \У0 98/46645, \У0 98/50433, \У0 98/24893, \У0 98/16654, \У0 96/34096, \У0 96/33735 и \У0 91/10741 (указанные ссылки полностью включены в качестве ссылки).
Настоящее изобретение относится к гуманизированным антителам или их фрагментам, которые распознают СБ38 и вызывают цитолиз клеток СБ38+ посредством апоптоза, АЭСС и/или СЭС. В еще
- 9 025215 одном варианте осуществления гуманизированные антитела или их связывающие эпитоп фрагменты способны вызывать цитолиз клеток СО38+ всеми тремя механизмами. В еще одном варианте осуществления гуманизированные антитела или их связывающие эпитоп фрагменты способны вызывать цитолиз клеток СО38' посредством апоптоза даже в отсутствие клеток стромы или цитокинов, полученных из стромы.
Предпочтительным вариантом осуществления такого гуманизированного антитела является гуманизированное антитело 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 или 388В39 или его связывающий эпитоп фрагмент.
В более предпочтительных вариантах осуществления предоставляются измененные в отношении структуры поверхности или гуманизированные варианты антител 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 или 388В39, где открытые на поверхности остатки антитела или его фрагменты замещены и в легкой, и в тяжелой цепях с целью более точного напоминания поверхностей известных человеческих антител. Гуманизированные антитела 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 или 388В39 или их связывающие эпитоп фрагменты по настоящему изобретению имеют улучшенные свойства. Например, гуманизированные антитела 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 или 388В39 или их связывающие эпитоп фрагменты специфически распознают белок С.П38. Предпочтительнее гуманизированные антитела 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 или 388В39 или их связывающие эпитоп фрагменты имеют дополнительную способность вызывать цитолиз клеток С.П38' посредством апоптоза, ЛЭСС и/или СЭС.
Гуманизированные варианты антител 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 или 388В39 также полностью характеризуются в отношении их соответствующих аминокислотных последовательностей вариабельных областей и легкой, и тяжелой цепи, последовательности ДНК генов для вариабельных областей и легкой, и тяжелой цепи, идентификации СОК, идентификации их поверхностных аминокислот и описания средств для их экспрессии в рекомбинантной форме. Однако объем настоящего изобретения не ограничивается антителами и фрагментами, включающими эти последовательности. Напротив, все антитела и фрагменты, которые специфически связывают С.П38 и способны вызывать цитолиз клеток С.О38' посредством апоптоза, ЛЭСС и/или СЭС. охватываются объемом настоящего изобретения. Предпочтительно такие антитела способны вызывать цитолиз клеток С.О38' всеми тремя механизмами. Таким образом, антитела и связывающие эпитоп фрагменты по настоящему изобретению могут отличаться от антител 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 или 388В39 или их гуманизированных производных аминокислотными последовательностями их каркаса, СОК и/или легкой цепи и тяжелой цепей и все же охватываются объемом настоящего изобретения.
СОК антител 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 или 388В39 идентифицируются моделированием, и их молекулярные структуры прогнозировались. И в данном случае, хотя СОК важны для распознавания эпитопа, они не существенны для антител и фрагментов по изобретению. Соответственно, предоставляются антитела и фрагменты, которые имеют улучшенные свойства, полученные, например, формированием сродства антитела по настоящему изобретению.
Последовательности вариабельных областей тяжелой цепи и легкой цепи антител 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 или 388В39 и последовательности их СОК не были ранее известны и представлены в настоящем описании. Такие сведения можно использовать для получения гуманизированных вариантов антител 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 или 388В39. Эти гуманизированные антитела к СОК38 или их производные можно также использовать в качестве связывающего клетки агента по настоящему изобретению.
Таким образом, в одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к гуманизированным антителам или их связывающему эпитоп фрагменту, включающему одну или более СОК, имеющих аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8ЕО ГО N0: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 и 36. В предпочтительном варианте осуществления гуманизированные антитела по изобретению включают по меньшей мере одну тяжелую цепь и по меньшей мере одну легкую цепь, и указанная тяжелая цепь включает три последовательных СОК, имеющих аминокислотные последовательности, выбранные из группы, состоящей из 5>Е0 ГО N0: 1, 2, 3, 7, 8, 9, 13, 14, 15, 19, 20, 21, 25, 26, 27, 31, 32 и 33, и указанная легкая цепь включает три последовательных СОК, имеющих аминокислотные последовательности, выбранные из группы, состоящей из 5>Е0 ГО N0: 4, 5, 6, 10, 11, 12, 16, 17, 18, 22, 23, 24, 28, 29, 30, 34, 35 и 36. В еще одном предпочтительном варианте осуществления предоставляется гуманизированный вариант 388В13, которое включает по меньшей мере одну тяжелую цепь и по меньшей мере одну легкую цепь, где указанная тяжелая цепь включает три последовательные определяющие комплементарность области, имеющие аминокислотные последовательности, представленные 8Е0 ГО N0: 1, 2 и 3, и где указанная легкая цепь включает три последовательные определяющие комплементарность области, имеющие аминокислотные последовательности, представленные 8Е0 ГО N0: 4, 5 и 6. В еще одном предпочтительном варианте осуществления предоставляется гуманизированный вариант 388В18, которое включает по меньшей мере одну тяжелую цепь и по меньшей мере одну легкую цепь, где указанная тяжелая цепь включает три последовательные определяющие комплементарность области, имеющие аминокислотные последовательности, представленные 8Е0 ГО N0: 7, 8 и 9, и где указанная легкая цепь включает три последова- 10 025215 тельные определяющие комплементарность области, имеющие аминокислотные последовательности, представленные БЕЦ ГО N0: 10, 11 и 12. В еще одном предпочтительном варианте осуществления предоставляется гуманизированный вариант 38БВ19, которое включает по меньшей мере одну тяжелую цепь и по меньшей мере одну легкую цепь, где указанная тяжелая цепь включает три последовательные определяющие комплементарность области, имеющие аминокислотные последовательности, представленные БЕЦ ГО N0: 13, 14 и 15, и где указанная легкая цепь включает три последовательные определяющие комплементарность области, имеющие аминокислотные последовательности, представленные БЕО ГО N0: 16, 17 и 18. В еще одном предпочтительном варианте осуществления предоставляется гуманизированный вариант 38БВ30, которое включает по меньшей мере одну тяжелую цепь и по меньшей мере одну легкую цепь, где указанная тяжелая цепь включает три последовательные определяющие комплементарность области, имеющие аминокислотные последовательности, представленные БЕЦ ГО N0: 19, 20 и 21, и где указанная легкая цепь включает три последовательные определяющие комплементарность области, имеющие аминокислотные последовательности, представленные БЕЦ ГО N0: 22, 23 и 24. В еще одном предпочтительном варианте осуществления предоставляется гуманизированный вариант 38БВ31, которое включает по меньшей мере одну тяжелую цепь и по меньшей мере одну легкую цепь, где указанная тяжелая цепь включает три последовательные определяющие комплементарность области, имеющие аминокислотные последовательности, представленные БЕЦ ГО N0: 25, 26 и 27, и где указанная легкая цепь включает три последовательные определяющие комплементарность области, имеющие аминокислотные последовательности, представленные БЕЦ ГО N0: 28, 29 и 30. В еще одном предпочтительном варианте осуществления предоставляется гуманизированный вариант 38БВ39, которое включает по меньшей мере одну тяжелую цепь и по меньшей мере одну легкую цепь, где указанная тяжелая цепь включает три последовательные определяющие комплементарность области, имеющие аминокислотные последовательности, представленные БЕЦ ГО N0: 31, 32 и 33, и где указанная легкая цепь включает три последовательные определяющие комплементарность области, имеющие аминокислотные последовательности, представленные БЕЦ ГО N0: 34, 35 и 36.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к гуманизированным антителам или их фрагментам, которые включают νΗ, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы БЕЦ ГО N0: 66 и 72. В предпочтительном варианте осуществления предоставляется гуманизированное антитело 38БВ19, которое включает νΗ, имеющую аминокислотную последовательность, представленную БЕЦ ГО N0: 66. В другом предпочтительном варианте осуществления предоставляется гуманизированное антитело 38БВ31, которое включает νΗ, имеющую аминокислотную последовательность, представленную БЕЦ ГО N0: 72.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к гуманизированным антителам или их фрагментам, которые включают имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы БЕЦ ГО N0: 62, 64, 68 и 70. В предпочтительном варианте осуществления предоставляется гуманизированное антитело 38БВ19, которое включает имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы БЕЦ ГО N0: 62 и 64. В другом предпочтительном варианте осуществления предоставляется гуманизированное антитело 38БВ31, которое включает У^ имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы БЕЦ ГО N0: 68 и 70.
Гуманизированные антитела 38БВ19 и их связывающие эпитоп фрагменты по настоящему изобретению могут также включать замещения в аминокислотных остатках легкой и/или тяжелой цепи в одном или более положениях, определенных серыми остатками в табл. 1А и 1В, которые представляют мышиные поверхностные каркасные остатки, которые были заменены из первоначального мышиного остатка на соответствующие каркасные поверхностные остатки в человеческом антителе, 28Е4. Остатки, обозначенные звездочкой (*) в табл. 1В, соответствуют мышиным обратным мутациям в варианте тяжелой цепи гуманизированного 38БВ19 (БЕЦ ГО N0: 65). Остатки для обратных мутаций находятся проксимальнее СОТ и были выбраны, как описано в патенте США № 5639641, или по аналогии выбору остатков, которые при предшествующих усилиях гуманизации привели к уменьшению сродства связывания антигена (Кодикка е1 а1., 1996, заявки на патенты США 2003/0235582 и 2005/0118183).
Аналогичным образом, гуманизированные антитела 38БВ13, 38БВ18, 38БВ19, 38БВ30, 38БВ31 или 38БВ39 и их связывающие эпитоп фрагменты по настоящему изобретению могут также включать замещение аминокислотных остатков легкой и/или тяжелой цепи.
Полинуклеотиды, векторы и клетки-хозяева.
Предоставляются нуклеиновые кислоты, кодирующие антитела к С.П38а по изобретению. В одном варианте осуществления молекула нуклеиновой кислоты кодирует тяжелую и/или легкую цепь анти0038 иммуноглобулина. В предпочтительном варианте осуществления одна нуклеиновая кислота кодирует тяжелую цепь анти-СЭ38 иммуноглобулина, а другая нуклеиновая кислота кодирует легкую цепь анти-СЭ38 иммуноглобулина.
В другом аспекте изобретения предоставляются полинуклеотиды, кодирующие полипептиды, имеющие аминокислотную последовательность, выбранную из группы БЕЦ ГО N0: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 38, 40, 42, 44,
- 11 025215
46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70 и 72. В предпочтительном варианте осуществления полипептид по изобретению выбран из группы, состоящей из §ЕО ГО N0: 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69 и 71. Изобретение не ограничивается самими указанными полинуклеотидами, но также включает все полинуклеотиды, проявляющие по меньшей мере 80% идентичность с указанными полинуклеотидами.
Изобретение относится к векторам, включающим полинуклеотиды по изобретению. В одном варианте осуществления вектор содержит полинуклеотид, кодирующий тяжелую цепь анти-СО38 иммуноглобулина. В другом варианте осуществления указанный полинуклеотид кодирует легкую цепь антиСЭ38 иммуноглобулина. Изобретение также относится к векторам, включающим молекулы полинуклеотида, кодирующие гибридные белки, модифицированные антитела, фрагменты антител и их зонды.
Для экспрессии тяжелой и/или легкой цепи антител к СЭ38 по изобретению полинуклеотиды, кодирующие указанные тяжелую и/или легкую цепи, вставляются в векторы экспрессии с тем, чтобы гены были функционально связаны с транскрипционными и трансляционными последовательностями. Векторы экспрессии включают плазмиды, УЛС (дрожжевые искусственные хромосомы), космиды, ретровирус, эписомы, полученные из ЕВУ (вируса Эпштейна-Барра), и все другие векторы, которые, как известно специалистам в данной области, подходят для обеспечения экспрессии указанных тяжелой и/или легкой цепей. Специалисту в данной области будет понятно, что полинуклеотиды, кодирующие тяжелую и легкую цепи, можно клонировать в различные векторы или в один и тот же вектор. В предпочтительном варианте осуществления указанные полинуклеотиды клонируются в один и тот же вектор.
Полинуклеотиды по изобретению и векторы, включающие эти молекулы, можно использовать для трансформации подходящей клетки-хозяина млекопитающего. Трансформация может осуществляться любым известным способом введения полинуклеотидов в клетку-хозяина. Такие способы хорошо известны специалисту в данной области и включают трансформацию, опосредованную декстраном, осаждение фосфатом кальция, трансфекцию, опосредованную полибреном, слияние протопластов, электропорообразование, инкапсулирование полинуклеотида в липосомы, биолистическую инъекцию и прямую микроинъекцию ДНК в ядра.
Фрагменты антител.
Антитела по настоящему изобретению включают и обсужденные выше антитела полной длины, а также их связывающие эпитоп фрагменты. Используемые в настоящем изобретении фрагменты антител включают любую часть антитела, которая сохраняет способность связывать эпитоп, распознаваемым антителом полной длины, в целом именуемыми связывающими эпитоп фрагментами. Примеры фрагментов антител включают без ограничения РаЬ, РаЬ' и Р(аЬ')2, Рб, одноцепочечные Ρν5 (зсРу), одноцепочечные антитела, связанные дисульфидом Ρν5 (6δΡν), и фрагменты, включающие или область Уь, или Ун. Связывающие эпитоп фрагменты, включающие одноцепочечные антитела, могут включать вариабельную область (области) отдельно или в комбинации со всеми или частью из следующих: шарнирной области, доменов СН1, СН2 и СН3.
Такие фрагменты могут содержать один или оба фрагмента РаЬ или фрагмент Р(аЬ')2. Предпочтительно фрагменты антитела содержат все шесть СЭК цельного антитела, хотя также функциональными являются фрагменты, содержащие меньше, чем все такие области, например 3, 4 или 5 СЭК. Кроме того, фрагменты могут представлять собой или могут комбинировать члены любого из следующих классов иммуноглобулина: 1§О, 1дМ, 1дА, Ι§Ό или 1дЕ и их подклассов.
Фрагменты РаЬ и Р(аЬ')2 можно получить протеолитическим расщеплением с использованием ферментов, таких как папин (фрагменты РаЬ) или пепсин (фрагменты Р(аЬ')2).
Фрагменты одноцепочечные РУ (зсРу) представляют собой связывающие эпитоп фрагменты, которые содержат по меньшей мере один фрагмент вариабельной области тяжелой цепи антитела (Ун), связанные по меньшей мере с одним фрагментом вариабельной области тяжелой цепи антитела (Уь). Линкер может представлять собой короткий гибкий пептид, выбранный для обеспечения того, что должная трехмерная укладка областей Уъ и Ун происходит после того, как она связывается так, чтобы сохранить специфичность связывания молекулы-мишени со всем антителом, из которого получен одноцепочечный фрагмент антитела. Карбоксильный конец последовательности Уъ или Ун может быть ковалентно связан линкером с аминокислотным концом комплементарной последовательности Уъ или Ун.
Одноцепочечные фрагменты антител по настоящему изобретению содержат аминокислотные последовательности, имеющие по меньшей мере одну из вариабельной или определяющей комплементарность областей (СГОК) цельных антител, описанных в настоящем описании, но лишенные некоторых или всех константных доменов этих антител. Эти константные домены не являются необходимыми для связывания с антигеном, но составляют основную часть структуры цельных антител. Поэтому одноцепочечные фрагменты антител могут преодолеть некоторые из проблем, связанных с использованием антител, содержащих часть или весь константный домен. Например, одноцепочечные фрагменты антител имеют тенденцию не иметь нежелательных взаимодействий между биологическими молекулами и константной областью тяжелой цепи или другой нежелательной биологической активности. Кроме того, одноцепочечные фрагменты антител значительно меньше, чем цельные антитела, и поэтому могут иметь большую проницаемость в капилляры, чем цельные антитела, позволяя одноцепочечным фрагментам антител бо- 12 025215 лее эффективно локализоваться и связываться с целевыми участками связывания антигенов. Также, фрагменты антитела могут быть получены в относительно большом масштабе в прокариотических клетках, таким образом, облегчая их получение. Кроме того, относительно небольшой размер одноцепочечных фрагментов антител делает менее вероятной возможность вызова иммунного ответа у реципиента, чем цельными антителами.
Одноцепочечные фрагменты антител могут быть генерированы молекулярным клонированием, библиотекой представления фага антитела или аналогичными методиками, хорошо известными специалисту в данной области. Эти белки можно получить, например, в эукариотических клетках или прокариотических клетках, включая бактерии. Связывающие эпитоп фрагменты по настоящему изобретению могут также генерироваться с использованием различных способов представления фага, известных в данной области. В способах представления фага, функциональные домены антител представляются на поверхности частиц фага, которые несут полинуклеотидные последовательности, кодирующие их. В частности, такой фаг можно использовать для представления связывающих эпитоп доменов, экспрессирующихся из репертуара или библиотеки комбинаторных антител (например, человеческих или мышиного). Фаг, экспрессирующий связывающий эпитоп домен, который связывает представляющий интерес антиген, может быть выбран или идентифицирован антигеном, например, с использованием меченого антигена, связанного или захваченного на твердую поверхность или гранулу. Фаг, используемый в этих способах, представляет собой обычно нитчатый фаг, включающий домены связывания й и М13, экспрессируемые из фага РаЬ, Ρν или стабилизированные дисульфидом Ρν домены антитела, рекомбинантно слитые или геном III фага, или с белком гена VIII.
Примеры способов представления фага, которые можно использовать для получения связывающих эпитоп фрагментов по настоящему изобретению, включают способы, описанные в документах Вппктап е! а1., 1995, 1. Iттиηο1. Ме!йойк, 182: 41-50; Атек е! а1., 1995, 1. Iттиηο1. Ме!Ьойк, 184: 177-186; КеЮеЬогоидЬ е! а1., 1994, Еиг. 1. Iттиηо1., 24: 952-958; Регас е! а1., 1997, Сепе, 187: 9-18; Вийоп е! а1., 1994, Айуапсек ίη Iттиηо1о§у, 57: 191-280; νθ 1992/001047; νθ 90/02809; νθ 91/10737; νθ 92/01047; νθ 92/18619; νθ 93/11236; νθ 95/15982; νθ 95/20401 и патенты США № 5698426; 5223409; 5403484; 5580717; 5427908; 5750753; 5821047; 5571698; 5427908; 5516637; 5780225; 5658727; 5733743 и 5969108, каждый из которых полностью включен в настоящее описание в качестве ссылки.
После выбора фага можно выделить области фага, кодирующие фрагменты, и использовать их для генерирования связывающих эпитоп фрагментов посредством экспрессии у выбранного хозяина, включая клетки млекопитающих, клетки насекомых, клетки растений, дрожжи и бактерии, с использованием технологии рекомбинантной ДНК, например, как в деталях описано ниже.
Например, методики для рекомбинантного получения фрагментов РаЬ, РаЬ' и Р(аЬ')2 можно также использовать с применением способов, известных в данной области, таких как способы, описанные в νθ 92/22324; МиШпах е! а1., 1992, ВюТесЬшдиек, 12(6): 864-869; ЗамШ е! а1., 1995, АЖ, 34: 26-34 и Ве!!ег е! а1., 1988, Зшепсе, 240:1041-1043; указанные ссылки полностью включены в настоящее описание в качестве ссылки. Пример методик, которые можно применять для получения одноцепочечных Ρνκ и антител, включает те, которые описаны в патентах США № 4946778 и 5258498; Ник!оп е! а1., 1991, Ме!йойк ш Еп/утокду, 203: 46-88; 8Ьи е! а1., 1993, ΡΝΑ8, 90: 7995-7999; 8кегга е! а1., 1988, Зшепсе, 240:1038-1040.
Функциональные эквиваленты.
В объем изобретения также включены функциональные эквиваленты антитела к СЭ38 и гуманизированного антитела против рецептора ΟΌ38. Термин функциональные эквиваленты включает антитела с гомологичными последовательностями, химерные антитела, искусственные антитела и модифицированные антитела, например, где каждый функциональный эквивалент определяется способностью связываться с белком СО38. Специалисту в данной области будет понятно, что имеется перекрытие в группе молекул, называемых фрагментами антител, и в группе, называемой функциональные эквиваленты. Способы получения функциональных эквивалентов известны специалисту в данной области и описаны, например, в документах νθ 93/21319, ЕР 239400; νθ 89/09622, ЕР 338745 и ЕР 332424, которые полностью включены в качестве ссылки.
Антитела с гомологичными последовательностями представляют собой те антитела с аминокислотными последовательностями, которые имеют гомологию последовательности с аминокислотной последовательностью антитела к СЭ38 по настоящему изобретению. Предпочтительно гомология имеется с аминокислотной последовательностью вариабельных областей антитела к СЭ38а и гуманизированного антитела к СЭ38 по настоящему изобретению. Гомология последовательности применительно к аминокислотной последовательности в настоящем описании определяется как последовательность с гомологией последовательности по меньшей мере примерно 90, 91, 92, 93 или 94%, а предпочтительнее с гомологией последовательности по меньшей мере примерно 95, 96, 97, 98 или 99% с другой аминокислотной последовательностью, по данным определения, например, способом исследования РА8ТА (флуоресцентным иммуносорбентным тестом), в соответствии с документом Реагкоп апй Ь1ргаап, 1988, Ргос. №!1. Асай. 8ш. И8А, 85: 2444-2448.
- 13 025215
Искусственные антитела включают фрагменты 8сРу, диатела, триатела, тетратела и шти (см. обзоры №шХет, О. апй Μίΐδΐβίη, С., 1991, ИаХите, 349: 293-299; Нийвоп, Р.Р, 1999, СштепХ Θρίηίοη ίη 1штипо1оду, 11: 548-557), каждое из которых обладает способностью связывания с антигеном. В одноцепочечном фрагменте Ρν (8сРу) домены УН и Уъ антитела соединены гибким пептидом. Обычно этот линкерный пептид имеет длину примерно 15 аминокислотных остатков. Если линкер гораздо меньше, например состоит из 5 аминокислот, то образуются диатела, которые представляют собой бивалентные димеры 8сΡν. Если линкер редуцирован менее чем до трех аминокислотных остатков, то образуются тримерные и тетрамерные структуры, которые называются триателами и тетрателами. Самой маленькой единицей связывания антитела является СЭР. обычно СЭР2 тяжелой цепи, которая имеет достаточное специфическое распознавание и связывание, так что она может использоваться отдельно. Такой фрагмент называется молекулярной единицей распознавания или шти. Несколько таких шти могут быть соединены вместе короткими линкерными пептидами, поэтому образуя искусственный связывающий белок с более высокой авидностью, чем одиночная тги.
Функциональные эквиваленты по настоящему изобретению также включают модифицированные антитела, например антитела, модифицированные ковалентным присоединением любого типа молекулы в антителу. Например, модифицированные антитела включают антитела, которые были модифицированы, например, гликозилированием, ацетилированием, пэгилированием, фосфорилированием, амидированием, дериватизацией известными защитными/блокирующими группами, протеолитическим расщеплением, связью с клеточным лигандом или другим белком и т.д. Ковалентное присоединение не препятствует генерированию антителом антиидиотипической реакции. Эти модификации можно проводить известными методиками, включая без ограничения специфическое химическое расщепление, ацетилирование, формилирование, метаболический синтез туникамицина и т.д. Кроме того, модифицированные антитела могут содержать одну или более не классических аминокислот.
Функциональные эквиваленты можно получить взаимообменом различных СИР на различных цепях внутри различных каркасов. Так, например, различные классы антитела возможны для данного набора СИР замещением различных тяжелых цепей, посредством чего можно получить, например, типы и изотипы антител 1дО1-4, 1дМ, 1§А1-2, Ι§Ό, 1дЕ. Аналогичным образом, искусственные антитела в пределах объема изобретения можно получить путем помещения определенного набора СИР внутрь полностью синтетического каркаса.
Функциональные эквиваленты можно легко получить мутацией, делецией и/или вставкой внутрь последовательностей вариабельной и/или константной области, которые фланкируют определенный набор СИР с использованием широкого разнообразия способов, известных в данной области. Фрагменты антител и функциональные эквиваленты по настоящему изобретению охватывают те молекулы, которые имеют выявляемую степень связывания с СИ38, по сравнению с антителом 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 или 388В39. Выявляемая степень связывания включает все величины в диапазоне по меньшей мере 10-100%, предпочтительно по меньшей мере 50, 60 или 70%, предпочтительнее по меньшей мере 75, 80, 85, 90, 95 или 99% способности связывания мышиного антитела 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 или 388В39 с СО38.
Усовершенствованные антитела.
СИР имеют первостепенное значение для распознавания эпитопа и связывания с антителом. Однако изменения могут осуществляться в остатках, которые включают СИР, без препятствования способности антитела распознавать и связывать его родственный эпитоп. Например, можно осуществить изменения, которые не воздействуют на распознавание эпитопа, но все же увеличивают сродство связывания антитела с эпитопом.
Таким образом, в объем настоящего изобретения также включены усовершенствованные варианты и мышиных, и гуманизированных антител, которые также специфически распознают и связывают СИ38, предпочтительно с повышенным сродством.
В нескольких исследованиях проведен анализ воздействий введения одного или более изменений аминокислот в различных положениях в последовательности антитела, на основании знания последовательности первичного антитела, на его свойствах, таких как связывание и уровень экспрессии (Уапд, №.Р. еХ а1., 1995, 1. Мо1. Вю1., 254: 392-403; Райег, С. еХ а1., 1998, Ргос. ЫаЙ. Асай. 8с1. И8А, 95: 8910-8915; УаидЬап, Т.1. еХ а1., 1998, ЫаХите ВюХесЬпо1оду, 16: 535-539).
В этих исследованиях эквиваленты первичного антитела генерировались изменением последовательностей генов тяжелой и легкой цепей в СИР1, СИР2, СИР3 или каркасных областях, используя такие способы, как олигонуклеотид-опосредованный, сайт-направленный мутагенез, кассетный мутагенез, подверженная ошибкам ПЦР (полимеразно-цепная реакция), перетасовка ДНК или штаммы-мутаты Е.соН (УаидЬап, Т.1. еХ а1., 1998, ЫаХите ВюХесЬпо1оду, 16: 535-539; Айеу, Ы.В. еХ а1., 1996, СЬарХет 16, р. 277-291, ш РЬаде ΟίφΡιν оГ РерНйев апй РтоХешв, ЕЙ8. Кау, В.К. еХ а1., Асайетю Рте88). Эти способы изменения последовательности первичного антитела привели к улучшенному сродству вторичных антител (Огат, Н. еХ а1., 1992, Ргос. ЫаХ1. Асай. δα. И8А, 89: 3576-3580; Войег, Е.Т. еХ а1., 2000, Ргос. ЫаХ1. Асай. δα. И8А, 97: 10701-10705; □а'^аев, 1. апй ЮесЬтапп, Ц 1996, 1ттипоХесЬпо1оду, 2: 169-179; ТЬотрвоп, 1. еХ а1., 1996, 1. Мо1. Вю1., 256: 77-88; δ^ή, М.К. еХ а1., 2002, 1. Вю1. Сйет., 277: 16365-16370;
- 14 025215
Ритика^а, К. е1 а1., 2001, I. Бю1. СЬет., 276: 27622-27628).
Путем аналогичной направленной стратегии изменения одного или более аминокислотных остатков антитела, последовательности антител, описанные в настоящем изобретении, можно использовать для получения антител к СБ38 с улучшенными функциями, включая улучшенное сродство к СБ38.
Предпочтительные аминокислотные замещения представляют собой те, которые:
(1) снижают восприимчивость к протеолизу, (2) снижают восприимчивость к окислению, (3) изменяют сродство связывания для образования белковых комплексов и (4) придают или модифицируют другие физико-химические или функциональные свойства таких аналогов.
Аналоги могут включать различные мутеины последовательности, отличной от естественно встречающейся пептидной последовательности. Например, одиночные или множественные аминокислотные замещения (предпочтительно консервативные аминокислотные замещения) можно внести в естественно встречающуюся последовательность (предпочтительно в часть полипептида, кнаружи от домена (доменов), образующих межмолекулярные контакты. Консервативное аминокислотное замещение не должно, по существу, изменять структурные характеристики родительской последовательности (например, замещающая аминокислота не должна иметь тенденцию к разрушению спирали, которая возникает в родительской последовательности, или к разрушению других типов вторичной структуры, которая характеризует родительскую последовательность). Примеры признанных в данной области полипептидных вторичных и третичных структур описаны в документах РгоЮиту 81гис1иге5 апй ΜοΕαιΙαΓ РгикарЖ (Сте1дЬίοη, Ей., \.Н. Ргеетап апй котрану, №\ν ΥοιΊ< (1984)); 1п1гойис1гоп ίο Рго1ет 81гис1иге (С. Вгапйеп апй I. Τοο/е, ей§., Оаг1апй РиЪЬкЫпд, №\ν ΥοιΈ Ν.Υ. (1991)) и ТЬюгпГОп еί а1., 1991, ЫаЮге, 354: 105, каждый из которых включен в настоящее описание в качестве ссылки.
Усовершенствованные антитела также включают те антитела, которые имеют улучшенные характеристики, которые получены стандартными методиками иммунизации животных, образования гибридомы и отбора антител со специфическими характеристиками.
Усовершенствованные антитела в соответствии с изобретением включают, в частности, антитела с усиленными функциональными свойствами. Особый интерес представляют те антитела, которые имеют повышенную способность опосредования клеточных цитотоксических эффекторных функций, таких как ЛБСС. Такие антитела можно получить осуществлением одиночных или множественных замещений в константном каркасе антитела, таким образом, изменяя взаимодействие с Рс рецепторами. Способы конструирования таких мутантов можно найти, например, в документах Ьа/аг еί а1. (2006, Ргос. №·ι11. Асай, 8ст И.8.А. 103(11): 4005-4010) и Ока/аО е1 а1. (2004, I. Μο1. ВЫ. 336(5): 1239-49). См. также \\'О 03/074679, \\'О 2004/029207, \\'О 2004/099249, \\'О 2006/047350, \\'О 2006/019447, \\'О 2006/105338, \О 2007/041635. Можно также использовать линии клеток, специфически сконструированные для получения усовершенствованных антител. В частности, эти линии изменили регуляцию пути гликозилирования, приводя к получению антител, которые слабо фукозилированы или даже полностью дефукозилированы. Такие линии клеток и способы конструирования описаны, например, в документах 81ипка\уа еί а1. (2003, I. ВЫ. СЬет. 278(5): 3466-3473), Ретгата е1 а1. (2006, I. ВЫ. СЬет. 281(8): 5032-5036; 2006, В^есЬток Вюепд. 93(5): 851-61), ЕР 1331266, ЕР 1498490, ЕР 1498491, ЕР 1676910, ЕР 1792987 и \О 99/54342.
Настоящее изобретение также включает цитотоксические конъюгаты. Эти цитотоксические конъюгаты включают два первичных компонента, связывающий клетку агент и цитотоксический агент.
Используемый в настоящем описании термин связывающийся с клеткой агент относится к агенту, который специфически распознает и связывается с белками СБ38 на клеточной поверхности. В одном варианте осуществления связывающийся с клеткой агент специфически распознает СБ38, так что он обеспечивает конъюгатам возможность действовать нацеленным образом при небольшом количестве побочных эффектов, возникающих в результате неспецифического связывания.
В другом варианте осуществления связывающийся с клеткой агент по настоящему изобретению также специфически распознает белок СБ38, так, чтобы конъюгаты были в контакте с клеткой-мишенью в течение достаточного периода времени для того, чтобы та часть конъюгата, которая представляет собой цитотоксическое лекарственное средство, имела возможность подействовать на клетку, и/или чтобы дать конъюгатам достаточно времени, чтобы они могли быть интернализованы клеткой.
В предпочтительном варианте осуществления цитотоксические конъюгаты включают антитело к СБ38 в качестве связывающегося с клеткой агента, предпочтительнее, мышиное моноклональное антитело 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 или 388В39. В другом предпочтительном варианте осуществления связывающийся с клеткой агент представляет собой химерный вариант указанного антитела к СБ38. В более предпочтительном варианте осуществления цитотоксический конъюгат включает гуманизированное антитело 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 и 388В39 или его связывающий эпитоп фрагмент. Антитело 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 и 388В39 способно специфически распознавать СБ38 и прицельным образом направляет цитотоксический агент к патологической клетке или ткани, такой как раковая клетка.
- 15 025215
Второй компонент цитотоксических конъюгатов по настоящему изобретению представляет собой цитотоксический агент. Используемый в настоящем описании термин цитотоксический агент относится к веществу, которое снижает или блокирует функцию или рост клеток, и/или вызывает разрушение клеток.
В предпочтительных вариантах осуществления цитотоксический агент представляет собой лекарственный препарат, пролекарство, таксоид, мейтансиноид, такой как ИМ1 или ИМ4, производное томеймицина, производное лептомицина, СС-1065 или аналог СС-1065. В предпочтительных вариантах осуществления связывающиеся с клеткой агенты по настоящему изобретению ковалентно присоединены, непосредственно или посредством расщепляемого или не расщепляемого линкера, к цитотоксическому агенту.
Связывающиеся с клеткой агенты, цитотоксические агенты и линкеры детальнее обсуждаются ниже.
Связывающиеся с клеткой агенты.
Эффективность соединений по настоящему изобретению в качестве терапевтических агентов зависит от тщательного выбора соответствующего связывающегося с клеткой агента. Связывающиеся с клеткой агенты могут быть любого вида, известного в настоящее время, или которые становятся известными, и включают пептиды и не пептиды. Связывающийся с клеткой агент может представлять собой любое соединение, которое может связываться с клеткой, или специфическим или неспецифическим образом. В целом, они могут представлять собой антитела (особенно, моноклональные антитела), лимфокины, гормоны, ростовые факторы, витамины, молекулы транспорта питательных веществ (таких как трансферрин) или любую другую связывающуюся с клеткой молекулу или вещество.
Более специфические примеры агентов, связывающихся с клеткой, которые можно использовать, включают:
a) поликлональные антитела;
b) моноклональные антитела;
c) фрагменты антител, такие как РаЬ, РаЬ' и Р(аЬ')2, Ρν (РагЬат, 1983, 1. 1ттипо1., 131: 2895-2902; 8ргш§ е! а1., 1974, 1. 1ттипо1., 113: 470-478; №копо£Г е! а1., 1960, АгсЬ. Β^οсЬет. Βώρ^δ., 89: 230-244).
В частности, моноклональное антитело к СИ38, выбранное из 388Β13, 388Β18, 388Β19, 388Β30, 388Β31 и 388Β39, можно использовать в качестве связывающегося с клеткой агента, в соответствии с настоящим изобретением. Аналогичным образом, указанный агент, связывающийся с клеткой, может представлять собой химерный вариант одного из моноклональных антител 388Β13, 388Β18, 388Β19, 388Β30, 388Β31 и 388Β39. Предпочтительно гуманизированное антитело к СИ38 используется в качестве связывающегося с клеткой агента по настоящему изобретению. Предпочтительнее, гуманизированное антитело к СИ38 выбрано из гуманизированных или подвергнутых реструктурированию поверхности антител 388Β13, 388Β18, 388Β19, 388Β30, 388Β31 и 388Β39.
Цитотоксические агенты.
В другом варианте осуществления гуманизированное антитело или его связывающий эпитоп фрагмент может быть сопряженно связан с лекарственным средством, таким как мейтансиноид, для образования пролекраства, обладающего специфической цитотоксичностью в отношении экспрессирующих антиген клеток путем нацеливания препарата на белок СИ38. Цитотоксические конъюгаты, включающие такие антитела, и мелкий, высокотоксичный препарат (например, мейтансиноиды, таксаны, производные томеймицина, производные лептомицина и аналоги СС-1065), можно использовать в качестве терапевтического средства для лечения опухолей, таких как лимфома, лейкоз и множественная миелома.
Цитотоксический агент, используемый в цитотоксическом конъюгате по настоящему изобретению, может представлять собой любое соединение, которое приводит к цитолизу, или вызывает цитолиз, или каким-то образом уменьшает жизнеспособность клеток. Предпочтительные цитотокисческие агенты включают, например, мейтансиноиды и аналоги мейтансиноидов, таксоиды, производные томеймицина, производные тептомицина, СС-1065 и аналоги СС-1065, доластатин и аналоги доластатина, определенные ниже. Эти цитотоксические агенты сопряженно связаны с антителами, фрагментами антител, функциональными эквивалентами, усовершенствованными антителами и их аналогами, как описано в настоящем описании.
Цитотоксические конъюгаты можно получить способами ш νίΙΐΌ. Для соединения пролекарства с антителом используется соединительная группа. Подходящие соединительные группы хорошо известны в данной области и включают дисульфидные группы, группы, лабильные к пептидазе, и группы, лабильные к эстеразе. Предпочтительные соединительные группы представляют собой дисульфидные группы и тиоэфирные группы. Например, конъюгаты могут конструироваться с использованием реакции обмена дисульфидов или образованием тиоэфирной связи между антителом и лекарственным препаратом или пролекарством.
Мейтансиноиды.
Среди цитотоксических агентов, которые можно использовать в настоящем изобретении для образования цитотоксического конъюгата, находятся мейтансиноиды и аналоги мейтансиноидов.
- 16 025215
Примеры подходящих мейтансиноидов включают мейтансинол и аналоги мейтансинола. Мейтансиноиды представляют собой лекарственные препараты, которые ингибируют образование микротрубочек и которые являются высокотоксичными для клеток млекопитающих.
Примеры подходящих аналогов мейтансинола включают те, которые имеют модифицированное ароматическое кольцо, и те, которые имеют модификации в других положениях. Такие подходящие мейтансиноиды описаны в патентах США № 4424219; 4256746; 4294757; 4307016; 4313946; 4315929; 4331598; 4361650; 4362663; 4364866; 4450254; 4322348; 4371533; 6333410;5475092;5585499 и 5846545.
Конкретные примеры подходящих аналогов мейтансинола, имеющих модифицированное ароматическое кольцо, включают:
(1) С-19-дехлор (патент США № 4256746) (получаемый восстановлением ЬАН ансамитоцина Р2);
(2) С-20-гидрокси (или С-20-диметил) +/-С-19-дехлор (патенты США № 4361650 и 4307016) (получаемые деметилированием с использованием δΙΐΌρΙοιη\Όθδ или Αсί^ηοтусеδ или дехлорирования с использованием ЬАН);
(3) С-20-деметокси, С-20-ацилокси (-Οί.ΌΡ), +/-дехлор (патент США № 4294757) (получаемый ацилированием с использованием ацилхлоридов).
Конкретные примеры подходящих аналогов мейтансинола, имеющих модификации других положений, включают:
(1) С-9-δΗ (патент США № 4424219) (получаемый взаимодействием мейтансинола с Η2δ или Р^5);
(2) С-14-алкоксиметил (деметокси/СН^Н) (патент США № 4331598);
(3) С-14-гидроксиметил или ацилоксиметил (СН^Н или СН^Ас) (патент США № 4450254) (получаемые из ШсагШа);
(4) С-15-гидрокси/ацилокси (патент США № 4364866) (получаемый превращением мейтансинола δΙίΌρΙοπΛΌΟδ);
(5) С-15-метокси (патенты США № 4313946 и 4315929) (выделенный из Тгемта пиШйота);
(6) С-18-Ы-деметил (патенты США № 4362663 и 4322348) (полученный деметилированием мейтансинола δΙίΌρΙοιί'ΛΌΟδ);
(7) 4,5-деокси (патент США № 4371533) (полученный восстановлением мейтансинола трихлоридом титана/ЬАН).
В предпочтительном варианте осуществления цитотоксические конъюгаты по настоящему изобретению используют содержащий тиол мейтансиноид (ΌΜ1), формально именуемый №'-деацетил-Ы2'-(3меркапто-1-оксопропил)мейтансином в качестве цитотоксического агента. ΌΜ1 представлен следующей структурной формулой (I):
В другом предпочтительном варианте осуществления цитотоксические конъюгаты по настоящему изобретению используют тиолсодержащий мейтансиноид, №'-деацетил-Н2'-(4-метил-4-меркапто-1оксопентил)мейтансин,в качестве цитотоксического агента. ΌΜ4 представлен следующей структурной формулой (II):
В других вариантах осуществления изобретения можно использовать другие мейтансины, включая содержащие тиол и дисульфид мейтансиноиды, несущие моно- или диалкильное замещение на атоме углерода, несущем атом серы. Они включают мейтансиноид, имеющий на С-3, С-14 гидроксиметиле, С-15 гидрокси или С-20 десметиле ацилированную аминокислотную боковую цепь с ацильной группой, несущей блокированную сульфгидрильную группу, где атом углерода ацильной группы, несущей тиольную функциональную группу, имеет один или два заместителя, причем указанные заместители представляют СН3, С2Н5, линейный или разветвленный алкил или алкенил, имеющий от 1 до 10 атомов углерода, циклический алкил или алкенил, имеющий от 3 до 10 атомов углерода, фенил, замещенный фенил или
- 17 025215 гетероциклический ароматический или гетероциклоалкильный радикал, и, кроме того, где один из заместителей может представлять собой Η, и где ацильная группа имеет длину линейной цепи по меньшей мере 3 атома углерода между карбонильной функциональной группой и атомом серы.
Такие дополнительные мейтансины включают соединения, представленные формулой (III)
где Υ' представляет (СК7К8)1(СК9=СК10)р(С=С)чАг(СК5Кб)тИи(СК11=СК12)г(С=С)8В1(СК3К4)пСК1К282, где:
каждый из Κι и К2 независимо представляет СН3, С2Н5, линейный алкил или алкенил, имеющий от 1 до 10 атомов углерода, разветвленный или циклический алкил или алкенил, имеющий от 3 до 10 атомов углерода, фенил, замещенный фенил или гетероциклический ароматический или гетероциклоалкильный радикал, и при добавлении К2 может представлять собой Н;
А, В, И обозначают циклоалкил или циклоалкенил, имеющий от 3 до 10 атомов углерода, простой или замещенный арилом или гетероциклическим ароматическим или гетероциклоалкильным радикалом;
каждый из К3, К4, К5, Кб, К7, К8, К9, Кп и К12 представляет независимо Н, СН3, С2Н5, линейный алкил или алкенил, имеющий от 1 до 10 атомов углерода, разветвленный или циклический алкил или алкенил, имеющий от 3 до 10 атомов углерода, фенил, замещенный фенил или гетероциклический ароматический или гетероциклоалкильный радикал;
каждый из 1, т, п, о, р, с|, г, к и ΐ независимо равен 0 или целому числу от 1 до 5 при условии, что по меньшей мере два из 1, т, п, о, р, с|, г, к и ΐ не равны нулю одновременно; и
Ζ представляет Н, §К или -СОК, где К представляет линейный алкил или алкенил, имеющий от 1 до 10 атомов углерода, разветвленный или циклический алкил или алкенил, имеющий от 3 до 10 атомов углерода, или простой или замещенный арил или гетероциклический ароматический или гетероциклоалкильный радикал.
Предпочтительные варианты осуществления соединений формулы (III) включают соединения формулы (III), где:
К1 представляет Н, К2 представляет метил и Ζ представляет Н;
К1 и К2 представляют метил и Ζ представляет Н;
ГО представляет Н, К2 представляет метил и Ζ представляет -§СН3;
ГО и К2 представляют метил и Ζ представляет -§СН3.
Такие дополнительные мейтансины также включают соединения, представленные формулой (ГУ-Ь), (ГУ-ϋ) или (ГУ-И,Ь):
где Υ представляет (СГОГОЖСГОГОЫСГОГОЦСГОГО^, каждый из К! и К2 независимо представляет СН3, С2Н5, линейный алкил или алкенил, имеющий от 1 до 10 атомов углерода, разветвленный или циклический алкил или алкенил, имеющий от 3 до 10 атомов углерода, фенил, замещенный фенил или гетероциклический ароматический или гетероциклоалкильный радикал, и при добавлении К2 может представлять собой Н;
каждый из К3, ГО, К5, Кб, К7 и К8 представляет независимо Н, СН3, С2Н5, линейный алкил или алкенил, имеющий от 1 до 10 атомов углерода, разветвленный или циклический алкил или алкенил, имеющий от 3 до 10 атомов углерода, фенил, замещенный фенил или гетероциклический ароматический или гетероциклоалкильный радикал;
каждый из 1, т и п независимо равен целому числу от 1 до 5 и при прибавлении п может быть равно
0;
Ζ представляет Н, §К или -СОК, где К представляет линейный или разветвленный алкил или алкенил, имеющий от 1 до 10 атомов углерода, циклический алкил или алкенил, имеющий от 3 до 10 атомов
- 18 025215 углерода, или простой или замещенный арил или гетероциклический ароматический или гетероциклоалкильный радикал; и
Мау представляет мейтансиноид, который несет боковую цепь на С-3, С-14 гидроксиметиле, С-15 гидроки или С-20 десметиле.
Предпочтительные варианты осуществления формул (ГУ-Ь), (ΐν-Ό) и (ГУ-Э,Ь) включают соединения формул (ΐν-Ь), (ΐν-Ό) и (ГУ-Э,Ь), где:
К! представляет Н, К2 представляет метил, каждый из К5, Кб, К7 и К8 представляет независимо Н и каждый т равен 1, η равен 0 и Ζ представляет Н;
Κι и К2 представляют метил, каждый из К5, Кб, К7, К8 представляют Н, 1 и т равны 1, η равен 0 и Ζ представляет Н;
К! представляет Н, К2 представляет метил, каждый из К5, К6, К7, К8 представляют Н, каждый 1 и т равен 1, η равен 0 и Ζ представляет -БСН3;
К! и К2 представляют метил, каждый из К5, К6, К7, К8 представляют Н, 1 и т равны 1, η равен 0 и Ζ представляет -БСН3.
Предпочтительно цитотоксический агент представлен формулой (ГУ-Ь).
Такие дополнительные мейтансины также включают соединения, представленные формулой (V)
где Υ представляет (СΚ7Κ8)1(СΚ5Κб)т(СΚ3Κ4)ηСΚ1Κ2δΖ, каждый из К! и К2 независимо представляет СН3, С2Н5, линейный алкил или алкенил, имеющий от 1 до 10 атомов углерода, разветвленный или циклический алкил или алкенил, имеющий от 3 до 10 атомов углерода, фенил, замещенный фенил или гетероциклический ароматический или гетероциклоалкильный радикал, и при добавлении К2 может представлять собой Н;
каждый из К3, Кд, К5, К6, К7 и К8 представляет независимо Η, СН3, С2Н5, линейный алкил или алкенил, имеющий от 1 до 10 атомов углерода, разветвленный или циклический алкил или алкенил, имеющий от 3 до 10 атомов углерода, фенил, замещенный фенил или гетероциклический ароматический или гетероциклоалкильный радикал;
каждый из 1, т и η независимо равен целому числу от 1 до 5 и при прибавлении η может быть равно
0;
Ζ представляет Н, БК или -С0К, где К представляет линейный алкил или алкенил, имеющий от 1 до 10 атомов углерода, разветвленный или циклический алкил или алкенил, имеющий от 3 до 10 атомов углерода, или простой или замещенный арил или гетероциклический ароматический или гетероциклоалкильный радикал.
Предпочтительные варианты осуществления формулы (ν) включают соединения формулы (ν), где:
К! представляет Н, К2 представляет метил, каждый из К5, К6, К7 и К8 представляет Н; каждый из 1 и т равен 1; η равен 0; и Ζ представляет Н;
К1 и К2 представляют метил, каждый из К5, К6, К7 и К8 представляют Н, 1 и т равны 1; η равен 0 и Ζ представляет Н;
К! представляет Н, К2 представляет метил, каждый из К5, К6, К7 и К8 представляют Н, каждый 1 и т равен 1, η равен 0 и Ζ представляет -БСН3;
К1 и К2 представляют метил, каждый из К5, К6, К7 и К8 представляют Н, 1 и т равны 1, η равен 0 и Ζ представляет -БСН3.
Такие дополнительные мейтансины, кроме того, включают соединения, представленные формулой (УГ-Ь), (νΐ-Ό) или (УГ-ЦЬ):
где Υ2 представляет (СΚ7Κ8)1(СΚ5Κб)т(СΚ3Κ4)ηСΚ1Κ2БΖ2, каждый из К! и К2 независимо представляет СН3, С2Н5, линейный алкил или алкенил, имеющий от 1 до 10 атомов углерода, разветвленный или циклический алкил или алкенил, имеющий от 3 до 10 атомов углерода, фенил, замещенный фенил или гетероциклический ароматический или гетероциклоалкильный радикал, и при добавлении К2 может представлять собой Н;
каждый из К3, Кд, К5, К6, К7 и К8 представляет независимо Н, СН3, С2Н5, линейный или циклический
- 19 025215 алкил или алкенил, имеющий от 1 до 10 атомов углерода, разветвленный или циклический алкил или алкенил, имеющий от 3 до 10 атомов углерода, фенил, замещенный фенил или гетероциклический ароматический или гетероциклоалкильный радикал;
каждый из 1, т и η независимо равен целому числу от 1 до 5 и при прибавлении η может быть равен
0;
Ζ2 представляет 8К или -СОК, где К представляет линейный алкил или алкенил, имеющий от 1 до 10 атомов углерода, разветвленный или циклический алкил или алкенил, имеющий от 3 до 10 атомов углерода, или простой или замещенный арил или гетероциклический ароматический или гетероциклоалкильный радикал; и
Мау представляет мейтансиноид.
Такие дополнительные мейтансиноиды также включают соединения, представленные формулой (VII)
(СК7К8)1(СК9=СК1,)р(С С)Л.( СН,К..)...1У(СН СН).(СеС)А(СК3К4)пСК^2, каждый из К и К2 независимо представляет СН3, С2Н5, линейный или разветвленный алкил или алкенил, имеющий от 1 до 10 атомов углерода, циклический алкил или алкенил, имеющий от 3 до 10 атомов углерода, фенил, замещенный фенил или гетероциклический ароматический или гетероциклоалкильный радикал, и при добавлении К2 может представлять собой Н;
каждый А, В, Ό независимо обозначает циклоалкил или циклоалкенил, имеющий от 3 до 10 атомов углерода, простой или замещенный арилом или гетероциклическим ароматическим или гетероциклоалкильным радикалом;
каждый из К3, К4, К5, К6, К7, К8, К9, Кп и К12 представляет независимо Н, СН3, С2Н5, линейный алкил или алкенил, имеющий от 1 до 10 атомов углерода, разветвленный или циклический алкил или алкенил, имеющий от 3 до 10 атомов углерода, фенил, замещенный фенил или гетероциклический ароматический или гетероциклоалкильный радикал;
каждый из 1, т, η, о, р, с|, г, к и ΐ независимо равен 0 или целому числу от 1 до 5 при условии, что по меньшей мере два из 1, т, η, о, р, с|, г, к и ΐ не равны нулю одновременно;
Ζ2 представляет 8К или -СОК, где К представляет линейный алкил или алкенил, имеющий от 1 до 10 атомов углерода, разветвленный или циклический алкил или алкенил, имеющий от 3 до 10 атомов углерода, или простой или замещенный арил или гетероциклический ароматический или гетероциклоалкильный радикал.
Предпочтительные варианты осуществления соединений формулы (VII) включают соединения формулы (VII), где К! представляет Н и К2 представляет метил.
Указанные выше мейтансиноиды могут быть сопряженно связаны с антителом к СО38 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 или 388В3 9 или его гомологом или фрагментом, где антитело связано с мейтансиноидом с использованием тиольной или дисульфидной функциональной группы, которая присутствует на ацильной группе боковой цепи ацилированной аминокислоты, обнаруживаемой на С-3, С-14 гидроксиметиле, С-15 гидрокси или С-20 десметиле мейтансиноида, и где ацильная группа боковой цепи ацилированной аминокислоты имеет свою тиольную или дисульфидную функциональную группу, локализующуюся на атому углерода, который имеет один или два заместителя, причем указанные заместители представляют собой СН3, С2Н5, линейный алкил или алкенил, имеющий от 1 до 10 атомов углерода, фенил, замещенный фенил или гетероциклический ароматический или гетероциклоалкильный радикал, и при добавлении одного из заместителей может представлять собой Н, и где ацильная группа имеет длину линейной цепи по меньшей мере три атома углерода между карбонильной функциональной группой и атомом серы.
- 20 025215
Предпочтительный конъюгат по настоящему изобретению представляет собой тот, который содержит антитело к СО38 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 или 388В39, или его гомолог или фрагмент, сопряженно связанный с мейтансиноидом формулы (VIII)
где У? представляет (СК К8)-(СК.СК·).(С С).Л.(СК,К..)тО.(СК СК-;).(С С)..В.(СК;К4)пСК-К;5-.
каждый А, В, Ό независимо обозначает циклоалкил или циклоалкенил, имеющий от 3 до 10 атомов углерода, простой или замещенный арилом или гетероциклическим ароматическим или гетероциклоалкильным радикалом;
каждый из К3, К4, К5, К6, К7, К8, К9, Кп и К12 представляет независимо Н, СН3, С2Н5, линейный алкил или алкенил, имеющий от 1 до 10 атомов углерода, разветвленный или циклический алкил или алкенил, имеющий от 3 до 10 атомов углерода, фенил, замещенный фенил или гетероциклический ароматический или гетероциклоалкильный радикал; и каждый из 1, т, п, о, р, с|. г, 5 и ΐ независимо равен 0 или целому числу от 1 до 5 при условии, что по меньшей мере два из 1, т, п, о, р, с|, г, 5 и ΐ не равны нулю одновременно.
Предпочтительно Κι представляет Н, а К2 представляет метил или Κι и К2 представляют метил.
Еще более предпочтительный конъюгат по настоящему изобретению представляет собой тот, который содержит антитело к СО38 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 или 388В39, или его гомолог или фрагмент, сопряженно связанный с мейтансиноидом формулы (ΙΧ-Ь), (ΙΧ-Ό) или (1Х-Э,Ь):
где Υ1 представляет (СК7К8)1СК5К6)т(СК3К4)пСК1К2§-, каждый из К! и К2 независимо представляет СН3, С2Н5, линейный алкил или алкенил, имеющий от 1 до 10 атомов углерода, разветвленный или циклический алкил или алкенил, имеющий от 3 до 10 атомов углерода, фенил, замещенный фенил, гетероциклический ароматический или гетероциклоалкильный радикал, и при добавлении К2 может представлять собой Н;
каждый из К3, К4, К5, К6, К7 и К8 представляет независимо Н, СН3, С2Н5, линейный алкил или алкенил, имеющий от 1 до 10 атомов углерода, разветвленный или циклический алкил или алкенил, имеющий от 3 до 10 атомов углерода, фенил, замещенный фенил или гетероциклический ароматический или гетероциклоалкильный радикал;
каждый из 1, т и п независимо равен целому числу от 1 до 5 и при добавлении п может быть равен нулю;
Мау представляет мейтансинол, который несет боковую цепь на С-3, С-14 гидроксиметиле, С-15 гидрокси или С-20 десметиле.
Предпочтительные варианты осуществления соединений формул (ΙΧ-Ь), (ΙΧ-Ό) и (1Х-Э,Ь) включают соединения формул (ΙΧ-Ь), (ΙΧ-Э) и (ГХ-Э,Ь), где:
К! представляет Н, К2 представляет метил или каждый из К! и К2 представляет метил;
К1 представляет Н, К2 представляет метил, каждый из К5, Кб, К7 и К8 представляют Н; каждый из 1 и т равен 1; п равен 0;
К1 и К2 представляют метил;
каждый из К5, К6, К7 и К8 представляют Н;
каждый из 1 и т равен 1;
п равен 0.
Предпочтительно цитотоксический агент представлен формулой (ΙΧ-Ь).
Еще один предпочтительный конъюгат по настоящему изобретению представляет собой тот, который содержит антитело к СО38 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 или 388В39 или его гомологом или фрагментом, сопряженно связанный с мейтансиноидом формулы (Χ)
- 21 025215
где заместители представляют собой, как определено выше для формулы (IX).
Особенно предпочтительными являются любые из описанных выше соединений, где Р1 представляет Н, Р2 представляет метил, каждый из Р5, Рб, Р7 и Р8 представляют Н; каждый из 1 и т равен 1 и η равен 0.
Кроме того, особенно предпочтительными являются любые из описанных выше соединений, где Р1 и Р2 представляют метил, каждый из Р5, Р6, Р7 и Р8 представляют Н; 1 и т равны 1; и η равен 0.
Кроме того, предпочтительным является Ь-аминоацильный стереоизомер.
Каждый из мейтансиноидов, о котором идет речь в одновременно поданной заявке на патент США № 10/849136, поданной 20 мая 2004 г., можно также использовать в цитотоксическом конъюгат по настоящему изобретению. Полное описание заявки на патент США № 10/849136 включено в настоящее описание путем ссылки.
Содержащие дисульфид соединительные труппы.
Для соединения мейтансиноида со связывающимся с клеткой агентом таким как антитело 38δΒ13, 38δΒ18, 38δΒ19, 38δΒ30, 38δΒ31 или 38δΒ39, мейтансиноид содержит связывающую часть. Связывающая часть содержит химическую связь, которая обеспечивает возможность высвобождения полностью активных мейтансиноидов в определенном участке. Подходящие химические связи хорошо известны в данной области и включают дисульфидные связи, кислотно-лабильные связи, фотолабильные связи, пептидазолабильные связи и эстеразолабильные связи. Предпочтительными являются дисульфидные связи.
Связывающая часть также содержит реактивную химическую группу. В предпочтительном варианте осуществления реактивная химическая группа может быть ковалентно связана с мейтансиноидом через связывающую часть в виде дисульфидной связи.
Особенно предпочтительные реактивные химические группы представляют сложные эфиры Ν-сукцинимидила и сложные эфиры Ν-сульфосукцинимидила.
Особенно предпочтительные мейтансиноиды, содержащие связывающую часть, которая содержит реактивную химическую группу, представляют сложные С-3 эфиры мейтансинола и его аналоги, где связывающая часть содержит дисульфидную связь, а химическая реактивная группа содержит сложный эфир Ν-сукцинимидила или Ν-сульфосукцинимидила.
Многие положения на мейтансиноидах могут служить в качестве положения для химической связи связывающей части. Например, ожидается, что можно использовать положение С-3, имеющее гидроксильную группу, положение С-14, модифицированное гидроксиметилом, положение С-15, модифицированное гидрокси, и положение С-20, имеющее гидрокси группу. Однако положение С-3 является предпочтительным, и особенно предпочтительно С-3 положение мейтансинола.
Хотя синтез сложных эфиров мейтансинола, имеющих связывающую часть, описано с точки зрения связывающих частей, содержащих дисульфидную связь, специалисту в данной области будет понятно, что в настоящем изобретении также могут использоваться связывающие части с другими химическими связями (как описано выше), как и другие мейтансиноиды. Определенные примеры других химических связей включают кислотно-лабильные связи, фотолабильные связи, пептидазолабильные связи и эстеразолабильные связи. В описании патента США № 5208020, включенном в настоящее описание, речь идет о получении мейтансиноидов, несущих такие связи.
Синтез мейтансиноидов и производных мейтансиноидов, имеющих дисульфидную связь, которая несет реактивную группу, описан в патентах США № 6441163 и 6333410 и в заявке на патент США № 10/161651, каждый из которых включен в настоящее описание путем ссылки.
Мейтансиноиды, содержащие реактивную группу, такую как БМ1, вступают во взаимодействие с антителом, таким как антитело 38δΒ13, 38δΒ18, 38δΒ19, 38δΒ30, 38δΒ31 или 38δΒ39, для получения цитотоксических конъюгатов. Эти конъюгаты могут быть очищены ВЭЖХ или гель-фильтрацией.
Несколько превосходных схем получения таких конъюгатов антитела-мейтансиноида представлены в патенте США № 6333410 и в заявках на патенты США № 09/867598, 10/161651 и 10/024290, каждый из которых полностью включен в настоящее описание путем ссылки.
В целом, раствор антитела в водном буфере может инкубироваться с молярным избытком мейтансиноидов, имеющих дисульфидную связь, которая несет реактивную группу. Реакционную смесь можно погасить добавлением избытка амина (такого как этаноламин, таурин и т.д.). Затем конъюгат антитела- 22 025215 мейтансиноида может очищаться гель-фильтрацией.
Количество молекул мейтансиноида, связанных на молекулу антитела, можно определить спектрометрическим измерением соотношения спектральной поглощательной способности при 252 и 280 нм. Предпочтительно в среднем 1-10 молекул мейтансиноида/молекулу антитела.
Конъюгаты антител с мейтансиноидными лекарственными средствами можно оценить для определения их способности подавлять пролиферацию различных линий нежелательных клеток ΐπ νΐΐΓΟ. Например, линии клеток, такие как линия человеческих клеток лимфомы ВаиЛ, линия человеческих клеток лимфомы Кашоз, линия клеток человеческой множественной миеломы М0РЬ-8 и линия клеток человеческого острого Т-клеточного лимфолейкоза М0ЬТ-4, можно легко использовать для оценки цитотоксичности этих соединений. Подлежащие оценке клетки могут быть подвергнуты воздействию соединений в течение 24 ч, и выжившие фракции клеток могут быть измерены в прямых анализах известными методами. Затем по результатам анализов можно рассчитать величины 1С50.
Соединительные группы, содержащие РЕС.
Мейтансиноиды могут быть также связаны с агентами, связывающимися с клетками, с использованием соединительных групп РЕС, как описано в заявке на патент США № 10/024290. Эти соединительные группы РЕС растворимы и в воде, и в неводных растворителях, и могут использоваться для соединения одного или более цитотоксических агентов с агентом, связывающимся с клеткой. Иллюстративные соединительные группы РЕС включают гетеробифункциональные линкеры РЕС, которые связываются с цитотоксическими агентами и с агентами, связывающимися с клетками, на противоположных концах линкеров через функциональную сульфгидрильную или дисульфидную группу на одном конце и активный сложный эфир на другом конце.
В качестве общего примера синтеза цитотоксического конъюгата с использованием соединительной группы РЕС, определенные детали можно найти со ссылкой на заявку на патент США № 10/024290. Синтез начинается со взаимодействия одного или более цитотоксических агентов, несущих реактивную часть РЕС, со связывающимся с клеткой агентом, что приводит к замещению концевого реактивного сложного эфира каждой реактивной части РЕС аминокислотным остатком связывающегося с клеткой агента, для выхода цитотоксического конъюгата, содержащего один или более цитотоксических агентов, ковалентно связанных со связывающимся с клеткой агентом через соединительную группу РЕС.
Таксаны.
Цитотоксический агент, используемый в цитотоксических конъюгатах в соответствии с настоящим изобретением, может также представлять собой таксан или его производное.
Таксаны представляют собой семейство соединений, которое включает паклитаксел (таксол), цитотоксический натуральный продукт, и доцетаксел (таксотере), полусинтетическое производное, два соединения, которые широко используются при лечении рака. Таксаны представляют собой яды митотического веретена, которые ингибируют деполимеризацию тубулина, приводящую к гибели клетки. Хотя доцетаксел и паклитаксел являются полезными средствами при лечении рака, их противоопухолевая активность ограничена, ввиду их неспецифической токсичности в отношении нормальных клеток. Кроме того, соединения, подобные паклитакселу и доцетакселу, являются недостаточно активными для применения в конъюгатах агентов, связывающихся с клетками.
Предпочтительный таксан для использования при получении цитотоксического конъюгата, представляет собой таксан формулы (XI)
Способы синтеза таксанов, которые можно использовать в цитотоксических конъюгатах по настоящему изобретению, наряду со способами сопряженного связывания таксанов с агентами, связывающимися с клетками, такими как антитела, описаны в деталях в патентах США № 5416064, 5475092, 6340701, 6372738 и 6436931 и в заявках на патенты США № 10/024290, 10/144042, 10/207814, 10/210112 и 10/369563.
Производные томеймицина.
Цитотоксический агент в соответствии с настоящим изобретением может также представлять собой производное томеймицина. Производные томеймицина представляют собой пиррол[1,4]бензодиазепины (РВЭ), известный класс соединений, оказывающих свои биологические эффекты ковалентным связыванием с N2 гуанина в малой бороздке ДНК. РВВ включают ряд связывающих агентов малой бороздки, такие как антрамицин, неотрамицин и ВС-81.
Новые производные томеймицина, которые сохраняют высокую цитотоксичность и могут эффективно связываться со связывающимися с клетками агентами, описаны в международной заявке
- 23 025215 № РСТ/В2007/000142, содержание которой включено в настоящее описание путем ссылки. Комплексы агента, связывающегося с клеткой, - производного томеймицина обеспечивают возможность полной меры цитотоксического действия производных томеймицина для целевого применения только против нежелательных клеток, поэтому избегая побочных эффектов вследствие повреждения не целевых здоровых клеток.
Цитотоксический агент в соответствии с настоящим изобретением содержит одно или более производных томеймицина, связанных с агентом, связывающимся с клеткой, таким как антитело 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 или 388В39, через связывающую группу. Связывающая группа является частью химической группы, которая ковалентно связана с производным томеймицина посредством обычных способов. В предпочтительном варианте осуществления химическая часть может быть ковалентно связана с производным томеймицина через дисульфидную связь.
Производные томеймицина, которые можно использовать в настоящем изобретении, имеют формулу (XII), показанную ниже:
где--представляет необязательную одиночную связь;
-представляет или одиночную связь или двойную связь;
при условии что, когда-представляет одиночную связь, и и и', одинаковые или различные, независимо представляют Н, ν и ν', одинаковые или различные, независимо выбраны из группы, состоящей из ОН, простого эфира, такого как -ОК, сложного эфира (например, ацетат), такого как -ОСОК, карбоната, такого как -ОСООК, карбамата, такого как -Οί'.ΌΝΚΚ', циклического карбамата, так что N10 и С11 являются частью цикла, мочевины, такой как -NΚСΟNΚΚ', тиокарбамата, такого как -ΟСδNНΚ, циклического тиокарбамата, так что N10 и С11 являются частью цикла, -8Н, сульфида, такого как -8К, сульфоксида, такого как -8ОК, сульфона, такого как -8ООК, сульфоната, такого как -8О3, сульфонамида, такого как -NΚδΟΟΚ, амина, такого как -ΝΚΚ', необязательного циклического амина, так что N10 и С11 являются частью цикла, гидроксиламинового производного, такого как -ЫКОК', амида, такого как -NΚСΟΚ, азидо, такого как -Ν3, циано, галоида, триалкила или триарилфосфония, происходящей из аминокислоты группы; предпочтительно ν и ν' являются одинаковыми или различными и представляют собой ОН, Оте, Ое!, ΝΗΟΌΝΗ-, 8Ме;
и когда-представляет двойную связь, и и и' отсутствуют и ν и V представляют Н;
Κι, К2, Κι', К2' являются одинаковыми или различными и независимо выбраны из галида или алкила, необязательно замещенных одним или более из На1, ΟΝ, ΝΚΚ', СР3, ОК, арила, Не!, 8(О)ЧК, или Κι и К2 и Κι' и К2' образуют вместе двойную связь, соответственно содержащую группу =В и В'.
Предпочтительно К1 и К2 и К1' и К2' образуют вместе двойную связь, соответственно содержащую группу =В и В'.
В и В' являются одинаковыми или различными и независимо выбраны из алкенила, необязательно замещенного одним или более из На1, СИ, ΝΗΕ', СР3, ОК, арила, Не!, 8(О)ЧК, или В и В' представляет атом кислорода.
Предпочтительно В=В'.
Предпочтительно В=В'= =СН2 или =СН-СН3,
X, X' являются одинаковыми или различными и независимо выбраны из одной или более из групп -О-, -ΝΕ-, -(С=О)-, 8(О)Ч-.
Предпочтительно Х=Х'.
Предпочтительнее, Х=Х'=О.
А, А' являются одинаковыми или различными и независимо выбраны из алкила или алкенила, необязательно содержащего атом кислорода, азота или серы, причем каждый необязательно замещен одной или более из групп На1, СИ, ЖК', СР3, ОК, 8(О)ЧК, арила, Не!, алкила, алкенила.
Предпочтительно А=А'.
Предпочтительнее А=А'= линейный незамещенный алкил.
Υ, Υ' являются одинаковыми или различными и независимо выбраны из Н, ОК;
Предпочтительно Υ=Υ'.
Предпочтительнее Υ=Υ'=О-алкил, предпочтительнее, О-метил.
Т представляет -ΝΒ-, -О-, -8(О)Ч или 4-10-членный арил, циклоалкил, гетероциклический или гетероарил, причем каждый необязательно замещен одним или более На1, СН Ν^Β', СР3, К, ОК, 8(О)ЧК, и/или линкером (линкерами), или разветвленный алкил, необязательно замещенный одним или более На1, СН NΚΚ', СР3, ОК, 8(О)ЧК и/или линкером (линкерами), или линейный алкил, замещенный одним или более На1, СИ, NΚΚ', СР3, ОК, 8(О)ЧК и/или линкером (линкерами).
- 24 025215
Предпочтительно Т представляет 4-10-членный арил или гетероарил, предпочтительнее фенил или пиридил, необязательно замещенный одним или более линкером (линкерами).
Указанный линкер включает соединительную группу. Подходящие соединительные группы хорошо известны в данной области и включают тиольные, сульфидные, дисульфидные группы и эстеразолабильные группы. Предпочтительными являются дисульфидные группы и тиоэфирные группы.
Когда соединительная группа представляет собой группу, содержащую тиол, сульфид (или так называемый тиоэфир -8-) или дисульфид (-8-8-), боковая цепь, несущая тиольную, сульфидную или дисульфидную группу, может быть линейной или разветвленной, ароматической или гетероциклической. Средний специалист в данной области может легко идентифицировать подходящие боковые цепи.
Предпочтительно линкер имеет формулу
-СГО-^)р-8^' где С представляет одиночную или двойную связь, -О-, -8- или -ΝΚ-;
Ό представляет одиночную связь или -Е-, -Е-ΝΚ-, -Е-ΝΚ-Ρ-, -Е-О-, -Е-О-Р-, -Е-ЫК-СО-, -Е-ЫК-СО-Р-, -Е-СО-, -СО-Е-, -Е-СО-Р, -Е-8-, -Е-8-Р-, -Е-НК-С-8-, -Β-ΝΚ-ϋδ-Ρ-;
где Е и Р являются одинаковыми или различными и независимо выбраны из линейного или разветвленного (ОСН^Н^-алкил^ОСН^Н^-, -алкил-(ОСН2СН2)1-алкил-, (ОСН2СН2)1-; -(ОСН2СН2)1циклоалкил^ОСН^Н^-, (ОСН^Н^-гетероциклил^ОСН^Н^-, (ОСН^Н^-арил^ОСН^Н^-,
-(ОСН^Н^-гетероарил^ОСН^Н^-, -алкил^ОСН^Н^-алкил^ОСН^Н^-, -алкил-(ОСН2СН2)1-, -алкил^ОСН^Н^-циклоалкил^С^СН^-, алкил^ОСН^Н^-гетероциклил^СН^Н^-, -алкил(ОСН2СН2)гарил(ОСН2СНД-, алкил-(ОСН2СН2)1-гетероарил (ОСНзСНз),-, -циклоалкилалкил-, алкилциклоалкил-, -гетероциклилалкил-, -алкилгетероциклил-, -алкиларил-, арилалкил-, -алкилгетероарил-, -гетероарилалкил-;
где ί и р идентичные или различные, представляют целые числа и независимо выбраны из 0, 1-2000;
Ζ представляет линейный или разветвленный -алкил-;
Р=0 или 1;
Ζ' представляет Н, защитную группу тиола, такую как СОК, К20 и 8К20, где К20 представляет Н, метил, алкил, необязательно замещенный циклоалкил, арил, гетероарил или гетероциклил, при условии что, когда Ζ' представляет Н, указанное соединение находится в равновесии с соответствующим соединением, образованным внутримолекулярной циклизацией, возникающей в результате добавления тиольной группы -8Н на иминовую связь -ΝΉ= одной из частей РВЭ;
п, п', равные или различные, составляют 0 или 1.
Р=0, 1 или 2.
К, К' равны или различны и независимо выбраны из Н, алкила, арила, причем каждый необязательно замещен На1, ΌΝ, ΝΚΚ', СР3, К, ОК, 8(О)ЧК, арилом, Не!;
или их фармацевтически приемлемые соли, гидраты или гидрированные соли, или полиморфные кристаллические структуры этих соединений или их оптические изомеры, рацематы, диастереомеры или энантиомеры.
Соединения общей формулы (XII), имеющие геометрические и стереоизомеры, также являются частью изобретения.
Известно, что двойная связь Ν-10, С-11 производного томеймицина формулы (XII) легко превращается обратимым образом в соответствующие иминовые аддукты в присутствии воды, спирта, тиола, первичного или вторичного амина, мочевины и других нуклеофилов. Этот процесс обратим и может легко регенерировать соответствующие производные томеймицина в присутствии дегидратирующего агента, в непротонном органическом растворителе, в вакууме или при высокой температуре (Ζ. То/ика, 1983, ί. АпйЫойск, 36: 276).
Таким образом, в настоящем изобретении можно также использовать обратимые производные томеймицина общей формулы (XIII)
где А, X, Υ, п, А', X', Υ', п', К!, К2, К!', К2' определяются, как в формуле (XII), и ^' являются одинаковыми или различными и выбраны из группы, состоящей из ОН, простого эфира, такого как -ОК, сложного эфира (например, ацетата), такого как -ОСОК, -СООК, карбоната, такого как -ОСООК, карбамата, такого как -ОСОМКК', циклического карбамата, с тем, чтобы Ν10 и С11 были частью цикла, мочевины, такой как -НКСОХИК', тиокарбамата, такого как -ОС8МНК, циклического тиокарбамата, такого с тем, чтобы Ν10 и С11 были частью цикла, -8Н, сульфида, такого как -8К, сульфоксида, такого как -8ОК, сульфона, такого как -8ООК, сульфоната, такого как -8О3, сульфонамида, такого как -ХК8ООК, амина, такого как -ΝΡΚ', необязательно циклического амина с тем, чтобы Ν10 и С11 были частью цикла, производного гидроксиламина, такого как -ИРОВ', амида, такого как -ХКСОК, -^^ΝΕΕ', азидо, такого как -Ν3, циано, галоида, триалкила или триарилфосфония, группы, полученной из аминокислоты. Предпоч- 25 025215 тительно и являются одинаковыми или различными и представляют 0Н, 0те, 0е1, ХНС0МН2, 8Ме.
Таким образом, соединения формулы (XIII) можно рассматривать как сольваты, включающие воду, когда растворитель представляет собой воду; эти сольваты могут быть особенно полезными.
В предпочтительном варианте осуществления производные по изобретению выбраны из группы, состоящей из:
8,8'-[1,3-бензолдиилбис(метиленокси)]-бис[(3)-2-эт-(Е)илиден-7-метокси-1,2,3,11а-тетрагидро-5Н-пиррол[2,Ιο] [1,4]бензодиазепин-5-она]
8,8'-[5-метокси-1,3-бензолдиилбис(метиленокси)]-бис[(Ξ)-2эт-(Е)-илиден-7-метокси-1,2,3,11а-тетрагидро-5Н-пиррол[2,1с][1,4]Сензодиазепин-5-она]
8,8'-[1,5-пентандиилбис(окси)]-бис[(3)-2-эт-(Е)-илиден-7 метокси-1,2,3,11а-тетрагидро-5Н-пиррол[2, Ιο] [ 1, 4 ] бензодиазепин-5-она]
8,8'-[1,4-бутандиилбис(окси))-бис[(3)-2-эт-(Е)-илиден-7метокси-1,2,3,11а-тетрагидро-5Н-пиррол[2,1с][1,4]бензодиазепин-5-она]
8,8'-[3-метил-1,5-пентандиилбис(окси))-бис[(3)-2-эт-(Е)илиден-7-метокси-1,2,3,11а-тетрагидро-5Н-пиррол[2,1с][1,4]бензодиазепин-5-она]
8,8'-[2,6-пиридиндиилбис(окси)]-бис[(3)-2-эт-(Е)-илиден-7метокси-1,2,3,11а-тетрагидро-5Н-пиррол[2,1с][1,4]бензодиазепин-5-она]
8,8'-[4-(3-трет-бутоксикарбониламинопропилокси)-2,6пиридиндиилбис-(метиленокси)]-бис[(3)-2-эт-(Е)-илиден-7метокси-1,2,3,11а-тетрагидро-5Н-пиррол[2,Ιο] [1,4]бензодиазепин-5-она]
8,8'-[5 -{3 -аминопропилокси)-1,3бензолдиилбис(метиленокси)]-бис[(3)-2-эт-(Е)-илиден-7-метокси1,2,3,11а-тетрагидро-5Н-пиррол[2,1-с][1,4]бензодиаэепин-5-она]
8,8'- [5-(Ν-метил-З-трет-бутоксикарбониламинопропил)-1,3бензолдиилбис(метиленокси)]-бис[(3)-2-эт-(Е)-илиден-7-метокси1,2,3,11а- тетрагидро-5Н-пиррол[2,1-с] [1,4]бензодиазепин-5-она]
8,8'-{5- [3 -(4-метил-4-метилдисульфанилпентаноиламино)пропилокси]-1,3-бензолдиилбис(метиленокси]]бис[(3)-2-эт-(Е)-илиден-7-метокси-1,2,3,11а-тетрагидро-5Нпиррол[2,1-с][1,4]бензодиазепин-5-она]
8,8’-[5-ацетилтиометил-1,3-бензолдиилбис(метиленокси)]бис[(3)- 2-метилен-7-метокси-1,2,3,11а-тетрагидро-5Н-пиррол[2,Ιο] [1,4]бензодиазепин-5-она]
Сложный трет-бутиловый эфир бис-{2-[ (3)-2-метилен-7метокси-5-оксо-1,3,11а-тетрагидро-5Н-пиррол[2,1с][1,4]бензодиазепин-8-илокси]этил}карбаминовой кислоты
8,8'-[3 -(2-ацетилтиоэтил)-1,5-пентандиилбис(окси}]бис[(3)-2-метилен-7-метокси-1,2,3,11а-тетрагидро-5Н-пиррол[2,1- 26 025215
с][1,4]бензодиазепин-5-она]
8,8'- [5-(Ν-4-меркапто-4,4 -диметилбутаноил)амино-1,3 бензолдиилбис(метиленокси)]-бис[7-метокси-2-метилен-1,2,3,11атетрагидро-5Н-пиррол[2,1-с][1,4]бензодиазепин-5-она]
8,8'-[5-(Ы-4-метилдитио-4,4-диметилбутаноил)амино-1,3 бензолдиилбис(метиленокси)]-бис[7-метокси-2-метилен-1,2,3,11атетрагидро-5Н-пиррол[2,1-с][1,4]бензодиазепин-5-она]
8,8'-[5-(Ы-метил-Ν-(2-меркапто-2,2-диметилэтил)амино-1,3 бензолдиил(метиленокси)]-бис[7-метокси-2-метилен-1,2,3,11атетрагидро-5Н-пиррол[2,1-с][1,4]бензодиазепин-5-она]
8,8'-[5-(Ν-метил-Ν-(2-метилдитио-2,2-диметилэтил)амино1,3-бензолдиил(метиленокси)]-бис[7-метокси-2-метилен-1,2,3,11а тетрагидро-5Н-пиррол[2,1-с][1,4]бензодиазепин-5-она]
8,8'-[(4-(2-(4-меркапто-4-метил)пентанамидоэтокси)пиридин 2,6-диметил)диокси]-бис[ (5)-2-эт-(Е)-илиден-7-диметокси1,2,3,11а-тетрагидропиррол[2,1-с][1,4]бензодиазепин-5-она]
8,8’-[(1-(2-(4-метил-4 метилдисульфанил)пентанамидоэтокси)бензол-3,5-диметил)диокси]бис[(Ξ)-2-эт-(Е)-илиден-7-диметокси-1,2,3,11атетрагидропиррол[2,1-с][1,4]бензодиазепин-5-она]
8,8'-[(4-(3-(4-метил-4метилдисульфанил)пентанамидопропокси)пиридин-2,6диметил)диокси]-бис[(5)-2-эт-(Е)-илиден-7-диметокси-1,2,3,11атетрагидропиррол[2,1-с][1,4]бензодиазепин-5-она]
8,8'-[{4-(4-(4-метил-4 метилдисульфанил)пентанамидобутокси)пиридин-2,6 диметил)диокси]-бис[(5)-2-эт-(Е)-илиден-7-диметокси-1,2,3,11атетрагидропиррол[2,1-с][1,4]бензодиазепин-5-она]
8,8'-[(4-(3-[4-(4-метил-4 метилдисульфанилпентаноил)пиперазин-1-ил]пропил)пиридин-2,6диметил)диокси]-бис[(5)-2-эт-(Е)-илиден-7-диметокси-1,2,3,11атетрагидропиррол[2,1-с][1,4]бензодиазепин-5-она]
8,8'-.[[1-(3-[4- (4-метил-4метилдисульфанилпентаноил)пиперазин-1-ил]пропил)бензол-3,5диметил)диокси]-бис[(5)-2-эт-(Е)-илиден-7-диметокси-1,2,3,11атетрагидропиррол[2,1-с][1,4]бензодиазепин-5-она]
- 27 025215
8,8’-[(4-(2-{2-[2- (4-метил-4метилдисульфанилпентаноиламино)этокси]этокси}этокси)пиридин 2,6-диметил)диокси]-бис[(3)-2-эт-(Е)-илиден-7-диметокси1,2,3,11а-тетрагидропиррол[2,1-с][1,4]бензодиазепин-5-она]
8,8'-[(1-(2-{2-[2-(2-{2-[2- (4-метил-4метилдисульфанилпентаноиламино)этокси]этокси}этокси)этокси]этокси}этокси)бензол-3,5-диметил)диокси]-бис[(3)-2-эт-(Е)илиден-7-диметокси-1,2,3,11а-тетрагидропиррол[2, Ιο] [ 1,4]бензодиазепин-5-она]
8,8'- [{1- (2 -{2-[2-(4-метил-4 метилдисульфанилпентаноиламино)этокси]этокси}этокси)бензол-3,5 диметил)диокси]-бис[(3)-2-эт-(Е)-илиден-7-диметокси-1,2,3,11атетрагидропиррол[2,1-с][1,4]бензодиазепин-5-она]
8,8'-[{4-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(4-метил-4метилдисульфанилпентаноиламино)этокси]этокси)этокси)этокси]этокси]этокси)пиридин-2,6-диметил)диокси]-бис[(3)-2-эт-<Е)илиден-7-диметокси~1,2,3,11а-тетрагидропиррол[2, Ια] [1,4]бензодиазепин-5-она]
8,8'-[(1-(2-[метил-(2-метил-2метилдисульфанилпропил)амино]этокси)бензол-3,5-диметил)диокси] бис [ (3)-2-эт-(Е)-илиден-7-диметокси-1,2,3,11атетрагидропиррол[2,1-с][1,4]бензодиазепин-5-она]
8,8'-[(4-(3 - [метил- (4-метил-4 метилдисульфанилпентаноил)амино]пропил)пиридин-2,6диметил)диокси]-бис[(3)-2-эт-(Е)-идиден-7-диметокси-1,2,3,11атетрагидропиррол[2,1-с][1,4]бензодиазепин-5-она]
8,8'-[(4-(3 - [метил- (2-метил-2 метилдисульфанилпропил)амино]пропил)пиридин-2,6диметил)диокси]-бис[(3)-2-эт-(Е)-илиден-7-диметокси-1,2,3,11атетрагидропиррол[2,1-с][1,4]бензодиазепин-5-она]
8,8'-[(1-(4-метил-4-метилдисульфанил)пентанамидо)бензол3,5-диметил)диокси]-бис[(3)-2-эт-(Е)-илиден-7-диметокси1,2,3,11а-тетрагидропиррол[2,1-с][1,4]бензодиазепин-5-она], а также соответствующих меркапто производных или их фармацевтически приемлемых солей, гидратов или гидрированных солей, или полиморфных кристаллических структур этих соединений или их оптических изомеров, рацематов, диастереомеров или энантиомеров.
Предпочтительные соединения представляют собой соединения формулы:
где X, X', А, А', Υ, Υ', Т, η, η' представляют собой, как определено выше.
Соединения формулы (XII) можно получить рядом способов, хорошо известных специалистам в данной области. Соединения можно синтезировать, например, применением или адаптацией способов, описанных ниже, или их вариантов, как понятно специалисту в данной области. Соответствующие модификации и замещения легко понятны и хорошо известны или специалисты в данной области могут быть легко получены из научной литературы. В частности, такие способы можно обнаружить в документе К.С. Ьагоск, СотргсНсгюкс ΟΓ^ηκ ТгащкогтаХющ, \УПеу-УСН РнЬГОНсге, 1999.
- 28 025215
Способы синтеза производных томеймицина, которые можно использовать в изобретении, описаны в международной заявке № РСТЛВ2007/000142. Соединения по настоящему изобретению можно получить разнообразными синтетическими путями. Реагенты и исходные материалы имеются в продаже или легко синтезируются хорошо известными методиками средним специалистом в данной области (см., например, \\'О 00/12508, \\'О 00/12507, \\'О 2005/040170, \\'О 2005/0852б0, РК 151б743, М. Моп е! а1., 198б, ТеГгакебгоп, 42: 3793-380б).
Молекулы конъюгата по изобретению могут быть образованы с использованием любых методик. Производные томеймицина по изобретению могут быть соединены с антителом или другим связанным с антителом с клеткой агентом через кислотно-лабильный линкер или фотолабильным линкером. Производные могут быть конденсированы пептидом, имеющим подходящую последовательность, и в последующем соединены со связывающимся с клеткой агентом для получения пептидазо-лабильного линкера. Могут быть получены конъюгаты, содержащие первичную гидроксильную группу, которые могут быть сукцинилированы и соединены со связывающимся с клеткой агентом для получения конъюгата, который может быть расщеплен внутриклеточными эстеразами для освобождения свободного производного. Предпочтительно синтезируются производные, содержащие свободную или защищенную тиольную группу, и затем одно или более из каждого дисульфидного или содержащего тиол производного ковалентно соединены со связывающимся с клеткой агентом через дисульфидную связь или тиоэфирную связь.
О многочисленных способах сопряженного связывания речь идет в патентах США № 541б0б4 и 5475092. Производные томеймицина могут быть модифицированы для получения свободной аминогруппы и затем соединены с антителом или другим связывающимся с клеткой агентом через кислотнолабильный линкер или фотолабильный линкер. Производные томеймицина со свободной амино или карбоксильной группой могут быть конденсированы пептидом и в последующем соединены со связывающимся с клеткой агентом для получения пептидазо-лабильного линкера. Производные томеймицина со свободной гидроксильной группой на линкере могут быть сукцинилированы и соединены со связывающимся с клеткой агентом для получения конъюгата, который может быть расщеплен внутриклеточными эстеразами, для освобождения свободного препарата. Наиболее предпочтительно производные томеймицина обрабатываются для создания свободной или защищенной тиольной группы, а затем содержащие дисульфид или тиол димеры томеймицина соединяются со связывающимся с клеткой агентом через дисульфидные связи.
Предпочтительно конъюгаты моноклонального антитела- или связывающегося с клеткой агентапроизводного томеймицина представляют собой те, которые соединены через дисульфидную связь, как обсуждено выше, которые способны доставить производные томеймицина. Такие связывающиеся с клетками конъюгаты получают известными способами, например модификацией моноклональных антител сукцинимидилпиридилдитиопропионатом (8ΡΌΡ) (Сапккоп е! а1., 1978, ВюсЬет. 1., 173: 723-737). Полученная тиопиридильная группа затем вытесняется обработкой содержащими тиол производными томеймицина для получения связанных с клетками конъюгатов. Альтернативно, в случае арилдитиопроизводных томеймицина, образование связывающегося с клеткой конъюгата осуществляется прямым вытеснением арилтиола производного томеймицина сульфгидрильными группами, ранее введенными в молекулы антител. Конъюгаты, содержащие от 1 до 10 лекарств - производных томеймицина, связанных через дисульфидный мостик, легко получить любым способом.
Конкретнее, раствор антитела, модифицированного дитионитропиридилом в концентрации 2,5 мг/мл в 0,05 М буфере фосфата калия, при рН 7,5, содержащий 2 мМ ЕИТА, обрабатывается содержащим тиол производным томеймицина (1,3 мол.экв./дитиопиридильную группу). Высвобождение тионитропиридина из модифицированного антитела контролируется спектрофотометрически при 325 нм и завершается примерно через 1б ч. Конъюгат антитела-производного томеймицина очищается и освобождается от не вступившего во взаимодействие препарата через колонку §ерЬабех 0-25 или §ерЬасгу1 §300. Количество связанных частей производного томеймицина на молекулу антитела можно определить измерением отношения спектральной поглощательной способности при 230 и 274 нм. В среднем, от 1 до 10 молекул производного томеймицина/молекулу антитела могут быть соединены через дисульфидные мостики этим способом.
Воздействие сопряженного связывания на сродство связывания в отношении экспрессирующих антиген клеток можно определить с использованием способов, ранее описанных в документе Ыи е! а1., 199б, Ргос. №И. Асаб. §С1. и.§.А., 93: 8б18-8б23. Цитотоксичность производных томеймицина и их конъюгатов с антителами для линий клеток можно измерить обратной экстраполяцией кривых клеточной пролиферации, как описано в документе 0о1бтасЬег е! а1., 1985, 1. Iттиηο1., 135: 3б48-3б51. Цитотоксичность этих соединений в отношении прикрепленных к субстрату линий клеток можно определить клоногенными анализами, как описано в документе 0о1бтасЬег е! а1., 198б, 1. Се11. Вю1., 102: 1312-1319.
Производные лептомицина.
Цитотоксический агент в соответствии с настоящим изобретением может также представлять собой производное лептомицина. В соответствии с настоящим изобретением, производные лептомицина относятся к членам семейства лептомицина, как определено в документе Ка1екке е! а1. (2002, §уп1кек!к 8:
- 29 025215
981-1003). и включают лептомицины. такие как лептомицин А и лептомицин В. каллистатины. ратжадоны. такие как ратжадон А и ратжадон В. ангвиномицины. такие как ангвиномицин А. В. С. Ό. касусамицины. лептолстатин. лептофуранины. такие как лептофуранин А. В. С. Ό. Предпочтительны производные лептомицина А и В.
Конкретнее. производные по изобретению имеют формулу (I)
где К, и Ка' представляют Н или -алкил; предпочтительно Ка представляет -алкил. предпочтительно метил. а К.,' представляет Н;
К17 представляет алкил. необязательно замещенный ОК. ΟΝ. ΝΚΚ'. перфторалкил; предпочтительно К17 представляет алкил. предпочтительнее метил или этил;
К9 представляет алкил. необязательно замещенный ОК. ϋΝ. ΝΚΚ'. перфторалкил; предпочтительно К9 представляет алкил. предпочтительнее метил;
X представляет -О- или -ΝΚ-; предпочтительно X представляет -ΝΚ-;
Υ представляет -И-. -ΝΚ-υ-. -О-И-. -ΝΚ-СО-и-. -υ-ΝΚ-СО-. -И-СО-. -СО-И-;
предпочтительно когда X представляет -О-. Υ представляет -И-. -ΝΚ-υ-. -υ-ΝΚ-СО-;
где υ выбран из линейного или разветвленного -алкил-. алкил-(ОСН2СН2)т-. -(ОСН2СН2)т-алкил-.
-алкил-(ОСН2СН2)т-алкил-. (ОСН2СН2)т-. -циклоалкил-. -гетероциклил-. циклоалкилалкил-. алкилциклоалкил. -гетероциклилалкил-. -алкилгетероциклил-;
где т представляет целое число. выбранное из 1-2000;
предпочтительно υ представляет линейный или разветвленный -алкил-. Ζ представляет -алкил-; п=0 или 1. предпочтительно п=0;
Т представляет Н. защитную группу тиола. такую как Ас. К! или §КЬ где К! представляет Н. метил. алкил. циклоалкил. необязательно замещенный арил или гетероциклил. или Т представляет
где к.. Ка'. К17. К9. X. Υ. Ζ. п представляют. как определено выше;
предпочтительно Т представляет Н или §КЬ где К! представляет алкил. предпочтительнее метил;
К и К' являются идентичными или различными и представляют Н или алкил;
алкил представляет линейный или разветвленный алкил; предпочтительно алкил представляет (-(СН2-ч(СН3)ч)р-. где р представляет целое число от 1 до 10 и ц представляет целое число от 0 до 2; предпочтительно алкил представляет -(СН2)-ои-С(СН3)2-.
или их фармацевтически приемлемые соли. гидраты или гидрированные соли. или полиморфные кристаллические структуры этих соединений или их оптические изомеры. рацематы. диастереомеры или энантиомеры.
Предпочтительные соединения можно выбрать из:
(2-метилсульфанилэтил)амида (2Е.10Е.12Е.1бΖ.18Е)-(Κ)-б-гидрокси-3.5.7.9.11.15.17-гептаметил-19((2§.3§)-3-метил-б-оксо-3.б-дигидро-2Н-пиран-2-ил)-8-оксононадека-2.10.12.1б.18-пентаеноевой кислоты;
бис-[(2-меркаптоэтил)амида (2Е.10Е.12Е.1бΖ.18Е)-(Κ)-б-гидрокси-3.5.7.9.11.15.17-гептаметил-19((2§.3§)-3-метил-б-оксо-3.б-дигидро-2Н-пиран-2-ил)-8-оксононадека-2.10.12. 1б.18-пентаеноевой кислоты];
(2-меркаптоэтил)амида (2Е.10Е.12Е.1бΖ.18Е)-(Κ)-б-гидрокси-3.5.7.9.11.15.17-гептаметил-19((2§.3§)-3метил-б-оксо-3.б-дигидро-2Н-пиран-2-ил)-8-оксононадека-2.10.12.1б.18-пентаеноевой кислоты;
(2-метилдисульфанилэтил)амида (2Е.10Е.12Е. 1бΖ.18Е)-(Κ)-б-гидрокси-3.5.7.9.11.15.17-гептаметил19-((2§.3§)-3-метил-б-оксо-3.б-дигидро-2Н-пиран-2-ил)-8-оксононадека-2.10.12.1б.18-пентаеноевой кислоты;
(2-метил-2-метилдисульфанилпропил)амида (2Ε.10Ε.12Ε.1бΖ.18Ε)-(Κ)-б-гидрокси-3.5.7.9.11.15.17гептаметил-19-((2§.3§)-3метил-б-оксо-3.б-дигидро-2Н-пиран-2-ил)-8-оксононадека-2.10.12.1б.18пентаеноевой кислоты;
(2-меркапто-2-метилпропил)амида (2Е.10Е.12Е.1бΖ.18Е)-(Κ)-б-гидрокси-3.5.7.9.11.15.17гептаметил-19-((2§.3§)-3-метил-б-оксо-3.б-дигидро-2Н-пиран-2-ил)-8-оксононадека-2.10.12.1б.18пентаеноевой кислоты или их фармацевтически приемлемых солей. гидратов или гидратированных солей. или полиморф- 30 025215 ных кристаллических структур этих соединений или их оптических изомеров, рацематов, диастереомеров или энантиомеров.
Для соединения производного со связывающимся с клеткой агентом производное должно включать часть (соединительную группу), которая обеспечивает возможность соединения производных со связывающимся с клеткой агентом через такую химическую связь, как дисульфидная связь, сульфидная (или называемая в настоящем описании тиоэфирной) связь, кислотно-лабильная группа, фотолабильная группа, пептидазолабильная группа или эстеразолабильная группа. Производные получают так, чтобы они содержали часть, необходимую для соединения производного лептомицина со связывающимся с клеткой агентом, например, через дисульфидную связь, тиоэфирную связь, кислотно-лабильную группу, фотолабильную группу, пептидазолабильную группу или эстеразолабильную группу. Для дополнительного увеличения растворимости в водных растворах соединительная группа может содержать спейсер из полиэтиленгликоля. Предпочтительно используется сульфидная или дисульфидная связь, потому что восстанавливающая среда клетки-мишени приводит к расщеплению сульфида или дисульфида и высвобождению производных с ассоциированным увеличением цитотоксичности.
Соединения по настоящему изобретению можно получить различными способами синтеза. Реагенты и исходные материалы имеются в продаже или легко синтезируются хорошо известными методиками средним специалистом в данной области. Способы синтеза производных лептомицина, которые можно использовать в цитотоксических конъюгатах по настоящему изобретению, наряду со способами сопряженного связывания указанных производных лептомицина со связывающимися с клетками агентами, такими как антитела, детально описаны в Европейской патентной заявке № 06290948.6, содержание которой включено в настоящее описание в качестве ссылки.
Аналоги СС-1065.
Цитотоксический агент, используемый в цитотоксических конъюгатах в соответствии с настоящим изобретением, может также представлять собой СС-1065 или его производное.
СС-1065 представляет собой сильнодействующий противоопухолевой антибиотик, выделенный из бульона культуры 81гер1отусек /е1епк1к. СС-1065 примерно в 1000 раз активнее ш νίΙΐΌ, чем обычно применяемые противораковые препараты, такие как доксорубицин, метотрексат и винкристин (Β.Κ. БЬиуап е! а1., 1982, Сапсег Кек., 42, 3532-3537). СС-1065 и его аналоги описаны в патентах США № 6372738, 6340701, 5846545 и 5585499.
Цитотоксическая активность СС-1065 коррелировалась с алкилирующей активностью и с его активностью связывания с ДНК или интеркалирующей ДНК активностью. Эти два вида активности базируются на отдельных частях молекулы. Так, алкилирующая активность заключается в циклопропапирролиндольной (СР1) субъединице, а активность связывания с ДНК базируется в двух пирролоиндольных субъединицах.
Хотя СС-1065 имеет определенные привлекательные признаки в качестве цитотоксического агента, он имеет ограничения при терапевтическом применении. Введение СС-1065 мышам вызывало отсроченную гепатотоксичность, приводящую к смертности на 50-й день после однократного внутривенного введения дозы 12,5 мкг/кг (У.Ь. Кеупо1бк е! а1., 1986, 1. АпЬЬюЬск, XXIX: 319-334). Это стимулировало усилия по разработке аналогов, которые не вызывают отсроченной токсичности, и был описан синтез более простых смоделированных на СС-1065 аналогов (М.А. \Уагре1юкк1 е! а1., 1988, 1. Меб. СЬет., 31: 590603).
В другой серии аналогов часть СР1 была замещена циклопропанбензиндольной (ί','ΒΙ) частью (И.Ь. Βοде^ е! а1., 1990, 1. Огд. СЬет., 55: 5823-5833; И.Ь. Βοде^ е! а1., 1991, Β^οО^д. Меб. СЬет. Ьей., 1: 115-120). Эти соединения сохраняют высокую активность ш \Ьго родительского препарата, не вызывая отсроченную токсичность у мышей. Подобно СС-1065, эти соединения представляют собой алкилирующие агенты, которые связываются с малой бороздкой ДНК ковалентным образом для вызова цитолиза. Однако клиническая оценка наиболее перспективных аналогов, адозелезина и карзелезина, привели к разочаровывающим результатам (Β.Ρ. РокГег е! а1., 1пуекб§аРопа1 №ν Игадк, 13: 321-326; I. \Уо1ГГ е! а1., 1996, СЬп. Сапсег Кек., 2: 1717-1723). Эти препараты проявляют слабую терапевтическую активность ввиду их высокой системной токсичности.
Терапевтическуюя эффективность аналогов СС-1065 можно значительно улучшить изменением распределением ш νί\Ό посредством целевой доставки в участок опухоли, что приводит к меньшей токсичности для не целевых тканей и, таким образом, к более низкой системной токсичности. Для достижения этой цели были описаны конъюгаты аналогов и производных СС-1065 со связывающимися с клетками агентами, которые специфически нацелены на опухолевые клетки (патенты США № 5475092; 55854 99; 5846545). Эти конъюгаты обычно проявляют высокую специфичную для мишени цитотоксичность ш νίίΐΌ и исключительную противоопухолевую активность на моделях ксенотрансплантатов человеческих опухолей у мышей (К.У.1 СЬап е! а1., 1995, Сапсег Кек., 55: 4079-4084).
Недавно были описаны пролекарства аналогов СС-1065 с повышенной растворимостью в водной среде (европейская патентная заявка № 06290379.4). В этих пролекарствах фенольная группа алкилирующей части молекулы защищена функциональной группой, которая делает препарат устойчивым при хранении в кислотном водном растворе и придает лекарственному препарату увеличенную раствори- 31 025215 мость в воде, по сравнению с незащищенным аналогом. Защитная группа легко расщепляется ίη νίνο при физиологическом рН для получения соответствующего активного лекарственного средства. В пролекарствах, описанных в ЕР 06290379.4, фенольный заместитель защищен в виде сульфоновой кислоты, содержащей фенилкарбамат, который обладает зарядом при физиологическом рН, и, таким образом, имеет повышенную растворимость в воде. Для дополнительного повышения растворимости в воде необязательная полиэтиленгликолевая прокладка может быть введена в линкер между индолильной субъединицей и расщепляемой связью, такой как дисульфидная группа. Введение этой прокладки не изменяет силы действия лекарственного средства.
Способы синтеза аналогов СС-1065, которые можно использовать в цитотоксических конъюгатах по настоящему изобретению, наряду со способами сопряженного связывания аналогов со связывающимися с клетками агентами, такими как антитела, детально описаны в документе ЕР 06290379.4 (содержание которого включено в настоящее описание в качестве ссылки) и в патентах США № 5475092, 5846545, 5585499, 6534660 и 6586618 и в заявках на патенты США № 10/116053 и 10/265452.
Другие лекарственные средства.
Для получения конъюгатов по настоящему изобретению также подходят такие лекарственные средства, как метотрексат, даунорубицин, доксорубицин, винкристин, винбластин, мелфалан, митомицин С, хлорамбуцил, калихеамицин, тубулисин и аналоги тубулисина, дуокармицин и аналоги дуокармицина, доластатин и аналоги доластатина. Молекулы лекарственного средства могут также быть соединены с молекулами антитела посредством промежуточной молекулы носителя, такой как сывороточный альбумин. Доксарубицин и соединения доксарубицина, как описано, например, в заявке на патент США под серийным № 09/740991, также могут представлять собой используемые цитотоксические агенты.
Терапевтическая композиция.
Изобретение также относится к терапевтической композиции для лечения гиперпролиферативного расстройства или аутоиммунного заболевания у млекопитающего, которая включает терапевтически эффективное количество соединения по изобретению и фармацевтически приемлемый носитель. В одном варианте осуществления указанная фармацевтическая композиция предназначена для лечения рака, включая (без ограничения) следующие: карциному, включая карциному мочевого пузыря, молочной железы, ободочной кишки, почки, печени, легкого, яичника, поджелудочной железы, желудка, шейки матки, щитовидной железы и кожи; включая плоскоклеточную карциному; гематопоэтические опухоли лимфоидной линии дифференцировки, включая лейкоз, острый лимфолейкоз, острый лимфобластический лейкоз, В-клеточную лимфому, Τ-клеточную лимфому, лимфому Беркитта; гематопоэтические опухоли миелоидной линии дифференцировки, включая острые и хронические миелолейкозы и промиелоцитарный лейкоз; опухоли мезенхимального происхождения, включая фибросаркому и рабдомиосаркому; другие опухоли, включая меланому, семиному, тетратокарциному, нейробластому и глиому; опухоли центральной и периферической нервной системы, включая астроцитому, нейробластому, глиому и шванномы; опухоли мезенхимального происхождения, включая фибросаркому, рабдомиосаркому, и остеосаркому; и другие опухоли, включая меланому, пигментную ксеродермию, кератоактантому, семиному, фолликулярный рак щитовидной железы и тератокарциному щитовидной железы и другие виды рака, которые еще предстоит определить, при которых преимущественно экспрессирован СИ38.
В предпочтительном варианте осуществления фармацевтические композиции по изобретению применяются для лечения рака, такого как неходжкинская лимфома, лимфома Ходжкина, волосатоклеточный лейкоз, множественную миелому, хронический лимфолейкоз, хронический миелолейкоз, острый миелолейкоз, или острый лимфолейкоз, при которых экспрессирован СИ38, и другие формы рака, которые еще предстоит определить, при которых преимущественно экспрессирован СИ38. В другом варианте осуществления фармацевтическую композицию по изобретению можно применять для лечения аутоиммунных заболеваний, таких как системная красная волчанка, ревматоидный артрит, рассеянный склероз, болезнь Крона, язвенный колит, гастрит, тироидит Хашимото, анкилозирующий спондилит, криоглобулинемический васкулит, связанный с гепатитом С, хронический очаговый энцефалит, псевдопузырчатка, гемофилия А, мембранопролиферативный гломерулонефрит, синдром Шегрена, дерматомиозит взрослых и ювенильный дерматомиозит. Полимиозит взрослых, хроническая сыпь, первичный билиарный цирроз, идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура, нейромиелит зрительного нерва, дистиреодиная болезнь Грэйвса, псевдопузырчатка, мембранопролиферативный гломерулонефрит, синдром Чарга-Штрауса и астма. В другом варианте осуществления указанная фармацевтическая композиция относится к другим расстройствам, таким как, например, отторжение трансплантата, такое как отторжение трансплантата почки, отторжение трансплантата печени, отторжение трансплантата легкого, отторжение трансплантата сердца и отторжение трансплантата костного мозга; болезнь трансплантат против хозяина; вирусные инфекции, такие как инфекция вирусом кори, ВИЧ инфекция, СПИД и т.д.; и паразитарные инфекции, такие как лямблиоз, амебиаз, шистозомоз и др., как определяется средним специалистом в данной области.
- 32 025215
Настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, включающим:
a) эффективное количество антитела, фрагмента антитела или конъюгата антитела по настоящему изобретению;
b) фармацевтически приемлемый носитель, который может быть инертным или физиологически активным.
Используемый в настоящем описании термин фармацевтически приемлемый носитель включает любые и все растворители, дисперсионные среды, покрытия, антибактериальные и противогрибковые средства и им подобные, которые являются физиологически совместимыми. Примеры подходящих носителей, разбавителей и/или эксципиентов включают один или более из воды, солевого раствора, солевого раствора, забуференного фосфатом, декстрозы, глицерина, этанола и им подобных, а также их комбинацию. Во многих случаях будет предпочтительно включить в композицию изотонические агенты, такие как сахара, полиспирты или хлорид натрия. В частности, релевантные примеры подходящего носителя включают (1) солевой раствор с фосфатным буфером Ои1Ьессо, рН-7,4, содержащий или не содержащий примерно от 1 до 25 мг/мл человеческого сывороточного альбумина; (2) 0,9% солевой раствор (0,9% мас./об. хлорида натрия (ИаС1)) и (3) 5% (мас./об.) декстрозы и могут также включать антиоксидант, такой как триптамин, и стабилизирующий агент, такой как Т\уеен 20.
Композиции по настоящему изобретению могут также содержать еще одно терапевтическое средство, необходимое по поводу подвергаемого лечению конкретного расстройства.
Предпочтительно антитело, фрагмент антитела или конъюгат антитела по настоящему изобретению и дополнительное активное соединение будут обладать комплементарными видами активности, которые не оказывают неблагоприятного воздействия друг на друга. В предпочтительном варианте осуществления еще одно терапевтическое средство представляет собой антагонист эпидермального фактора роста (БОР), фактора роста фибробластов (РСР), фактора роста гепатоцитов (НОР), тканевого фактора (ТР), белка С, белка 8, фактора роста, полученного из тромбоцитов (РООР), герегулина, белка, стимулирующего макрофаги (М8Р), или фактора роста сосудистого эндотелия (УЕОР), или антагонист рецептора эпидермального ростового фактора (ЕОР), фактора роста фибробластов (РОР), фактора роста гепатоцитов (НОР), тканевого фактора (ТР), белка С, белка 8, фактора роста, полученного из тромбоцитов (РООР), герегулина, белка, стимулирующего макрофаги (М8Р), или фактора роста сосудистого эндотелия (УЕОР), включая рецептор НЕК2, рецептор НЕК3, с-МЕТ, и тирозин-киназ других рецепторов. В предпочтительном варианте осуществления еще одно терапевтическое средство представляет собой агент, нацеливающий на кластеры антигенов дифференциации (СО), включая СО3, СО14, СО19, СО20, СО22, СО25, СО28, СО30, СО33, СО36, СО40, СО44, СО52, СО55, СО59, СО56, СО70, СО79, СО80, СО103, СО134, СО137, СО138 и СО152. В предпочтительном варианте осуществления еще одно терапевтическое средство представляет собой химиотерапевтический или иммуномодуляторный агент.
Композиции по изобретению могут быть представлены в разнообразных формах. Они включают, например, жидкую, полужидкую и твердую лекарственные формы, но предпочтительная форма зависит от предполагаемого способа введения и терапевтического применения. Обычные предпочтительные композиции представлены в форме инъецируемых или вливаемых растворов. Предпочтительным способом введения является парентеральный (например, внутривенный, внутримышечный, внутрибрюшинный, подкожный). В предпочтительном варианте осуществления композиции по изобретению вводятся внутривенно в виде болюса или непрерывным вливанием в течение некоторого периода времени. В другом предпочтительном варианте осуществления они инъецируются внутримышечным, подкожным, внутрисуставным, внутрисиновиальным путем, введением внутрь опухоли, вокруг опухоли, в очаг поражения или вокруг участка поражения, для оказания местного, а также системного терапевтических эффектов.
Стерильные композиции для парентерального введения могут быть получены включением антитела, фрагмента антитела или конъюгата антитела по настоящему изобретению в требуемом количестве в соответствующем растворителе, с последующей стерилизацией микрофильтрацией. В качестве растворителя или носителя может использоваться вода, солевой раствор, солевой раствор с фосфатным буфером, декстроза, глицерин, этанол и им подобные, а также их комбинация. Во многих случаях, будет предпочтительно включение в композицию изотонических агентов, таких как сахара, полиспирты или хлорид натрия. Эти композиции могут также содержать адъюванты, в частности, смачивающие, изотонизирующие, эмульгирующие, диспергирующие и стабилизирующие агенты. Стерильные композиции для парентерального введения могут также быть получены в форме стерильных твердых композиций, которые могут быть растворены во время применения в стерильной воде или любой другой инъецируемой стерильной среде.
Антитело, фрагмент антитела или конъюгат антитела по настоящему изобретению можно также вводить перорально. В качестве твердых композиций для перорального введения, можно использовать таблетки, пилюли, порошки (в желатиновых капсулах, саше) или гранулы. В этих композициях активный ингредиент в соответствии с изобретением смешивается с одним или более инертными разбавителями, такими как крахмал, целлюлоза, сахароза, лактоза или диоксид кремния, в потоке аргона. Эти композиции могут также включать вещества, отличные от разбавителей, например, одно или более смазывающих
- 33 025215 веществ, таких как стеарат магния или тальк, краситель, покрытие (покрытая сахаром таблетка) или глянцеватель.
В качестве жидких композиций для перорального введения можно использовать фармацевтически приемлемые растворы, суспензии, эмульсии, сиропы и эликсиры, содержащие инертные разбавители, такие как воду, этанол, глицерин, растительные масла или парафиновое масло. Эти композиции могут включать вещества, отличные от разбавителей, например, смачивающие, подслащивающие, загущающие, ароматизирующие или стабилизирующие продукты.
Дозы зависят от желаемого эффекта, длительности лечения и используемого пути введения; они в целом составляют от 5 до 1000 мг/доза перорально для взрослого при стандартных дозах в диапазоне от 1 до 250 мг активного вещества. В целом, врач определит целесообразную дозировку, в зависимости от возраста, массы и любых других факторов, специфичных для подлежащего лечению субъекта.
Терапевтические способы применения.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу цитолиза клетки СБ38+ введением нуждающемуся в нем пациенту антитела, которое связывается в указанным СБ38 и способно вызвать цитолиз указанной клетки СБ38+ посредством апоптоза, АЭСС и/или СЭС. Для лечения можно применять любой тип антител, фрагментов антител или конъюгатов антител по изобретению. Таким образом, изобретение включает применение моноклональных антител к СБ38, их фрагментов или их цитотоксических конъюгатов в качестве лекарственных средств.
В предпочтительном варианте осуществления антитела, фрагменты антител или цитотоксические конъюгаты по изобретению применяются для лечения гиперпролиферативного расстройства или воспалительного заболевания или аутоиммунного заболевания у млекопитающего. В более предпочтительном варианте осуществления одна из описанных выше фармацевтических композиций, которая содержит антитело, фрагмент антитела или цитотоксический конъюгат по изобретению, применяется для лечения гиперпролиферативного расстройства у млекопитающего. В одном варианте осуществления расстройство представляет собой рак. В частности, рак представляет собой метастатический рак.
Соответственно, фармацевтические композиции по изобретению можно применять при лечении или профилактике разнообразных форм рака, включая (без ограничения) следующие: карциному, включая карциному мочевого пузыря, молочной железы, ободочной кишки, почки, печени, легкого, яичника, поджелудочной железы, желудка, шейки матки, щитовидной железы и кожи; включая плоскоклеточную карциному; гематопоэтические опухоли лимфоидной линии дифференцировки, включая лейкоз, острый лимфолейкоз, острый лимфобластический лейкоз, Β-клеточную лимфому, Т-клеточную лимфому, лимфому Беркитта; гематопоэтические опухоли миелоидной линии дифференцировки, включая острые и хронические миелолейкозы и промиелоцитарный лейкоз; опухоли мезенхимального происхождения, включая фибросаркому и рабдомиосаркому; другие опухоли, включая меланому, семиному, тератокарциному, нейробластому и глиому; опухоли центральной и периферической нервной системы, включая астроцитому, нейробластому, глиому и шванномы; опухоли мезенхимального происхождения, включая фибросаркому, рабдомиосаркому, и остеосаркому; и другие опухоли, включая меланому, пигментную ксеродермию, кератоактантому, семиному, фолликулярный рак щитовидной железы и тератокарциному щитовидной железы и другие виды рака, которые еще предстоит определить, при которых преимущественно экспрессирован СБ38. Предпочтительно нарушение представляет собой ΝΗΕ, ΒΕ, ММ, Β-СЬЬ, АЬЬ, ТСЬ, АМЬ, НСЬ, НЬ или СМЬ, в которых СБ38 экспрессируется, и другие раковые заболевания, которые еще предстоит определить, в которых СБ38 экспрессируется преимущественною.
В другом варианте осуществления фармацевтическую композицию по изобретению можно применять для лечения аутоиммунных заболеваний, таких как системная красная волчанка, ревматоидный артрит, рассеянный склероз, болезнь Крона, язвенный колит, гастрит, тироидит Хашимото, анкилозирующий спондилит, криоглобулинемический васкулит, связанный с гепатитом С, хронический очаговый энцефалит, псевдопузырчатка, гемофилия А, мембранопролиферативный гломерулонефрит, синдром Шегрена, дерматомиозит взрослых и ювенильный дерматомиозит, полимиозит взрослых, хроническая сыпь, первичный билиарный цирроз, идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура, нейромиелит зрительного нерва, дистиреодиная болезнь Грэйвса, псевдопузырчатка, мембранопролиферативный гломерулонефрит, синдром Чарга-Штрауса и астма.
В другом варианте осуществления указанная фармацевтическая композиция относится к другим расстройствам, таким как, например, отторжение трансплантата, такое как отторжение трансплантата почки, отторжение трансплантата печени, отторжение трансплантата легкого, отторжение трансплантата сердца и отторжение трансплантата костного мозга; болезнь трансплантат против хозяина; вирусные инфекции, такие как инфекция вирусом кори, ВИЧ инфекция, СПИД и т.д.; и паразитарные инфекции, такие как лямблиоз, амебиаз, шистозомоз и др., как определяется средним специалистом в данной области.
Аналогичным образом, настоящее изобретение относится к способу ингибирования роста выбранных популяций клеток, включающему контакт клеток-мишеней или ткани, содержащей клетки-мишени, с эффективным количеством антитела, фрагмента антитела или конъюгатом антитела по настоящему изобретению или антитела, фрагмента антитела или терапевтического средства, включающего цитоток- 34 025215 сический конъюгат, или отдельно, или в комбинации с другими цитотоксическими или терапевтическими средствами. В предпочтительном варианте осуществления еще одно терапевтическое средство представляет собой антагонист эпидермального фактора роста (ЕОР), фактора роста фибробластов (РОР), фактора роста гепатоцитов (НОР), тканевого фактора (ТР), белка С, белка 8, фактора роста, полученного из тромбоцитов (РООР), герегулина, белка, стимулирующего макрофаги (М8Р), или фактора роста сосудистого эндотелия (УЕОР), или антагонист рецептора эпидермального ростового фактора (ЕОР), фактора роста фибробластов (РОР), фактора роста гепатоцитов (НОР), тканевого фактора (ТР), белка С, белка 8, фактора роста, полученного из тромбоцитов (РООР), герегулина, белка, стимулирующего макрофаги (М8Р), или фактора роста сосудистого эндотелия (УЕОР), включая рецептор НЕК2, рецептор НЕК3, сМЕТ, и тирозин-киназ других рецепторов. В предпочтительном варианте осуществления еще одно терапевтическое средство представляет собой агент, нацеливающий на кластеры антигенов дифференциации (Οϋ), включая СО3, СП14, СП19, СП20, СП22, СП25, СП28, СП30, СП33, СП36, СП40, СП44, СП52, СО55, СО59, СО56, СП70, СП79, СП80, СП103, СП134, СП137, СП138 и СП152. В предпочтительном варианте осуществления еще одно терапевтическое средство представляет собой химиотерапевтический или иммуномодуляторный агент.
Способ ингибирования роста выбранных клеточных популяций можно реализовать ш νίίτο, ш νίνο или ех νίνο. Используемый в настоящем описании термин ингибирование роста означает замедление роста клетки, уменьшение жизнеспособности клеток, вызов гибели клетки, лизис клетки и индукцию гибели клетки в течение или короткого, или длительного периода времени.
Примеры видов применения ш νίίτο включают способы обработки аутологичного костного мозга перед его трансплантацией тому же пациенту для уничтожения патологических или злокачественных клеток; способы обработки аутологичного костного мозга перед его трансплантацией для уничтожения компетентных Т-клеток и предотвращения болезни трансплантата против хозяина (ОУНЭ); способы обработки клеточных культур для уничтожения всех клеток, за исключением желательных вариантов, которые не экспрессируют антиген-мишень; или для уничтожения вариантов, которые экспрессируют нежелательный антиген.
Условия не клинического применения ш νίίτο легко определяются средним специалистом в данной области.
Примерами клинического применения ех νίνο являются применение для удаления опухолевых клеток или лимфоидных клеток из костного мозга перед аутологичной трансплантацией при лечении рака или при лечении аутоиммунного заболевания, или для удаления Т-клеток и других лимфоидных клеток из аутологичного или аллогенного костного мозга или ткани перед трансплантацией для предотвращения болезни трансплантата против хозяина (ОУНЭ). Обработку можно проводить следующим образом. Костный мозг получают у пациента или другого индивидуума и затем инкубируют в среде, содержащей сыворотку, в которую добавляют цитотоксический агент по изобретению. Концентрации находятся в диапазоне примерно от 10 мкМ до 1 пкМ, в течение примерно от 30 мин до примерно 48 ч примерно при 37°С. Точные условия концентрации и времени инкубации, т.е. доза, легко определяются средним специалистом в данной области. После инкубации, клетки костного мозга промывают средой, содержащей сыворотку, и возвращают пациенту внутривенным вливанием в соответствии с известными способами. В условиях, когда пациент получает другой вид лечения, такой как курс абляционной химиотерапии или облучение всего тела между временем взятия костного мозга и повторным вливанием обработанных клеток, обработанные клетки костного мозга хранятся замороженными в жидком азоте, с использованием стандартного медицинского оборудования.
Для клинического применения ш νίνο, антитело, связывающийся с эпитопом фрагмент антитела или цитотоксический конъюгат по изобретению будут поставляться в виде растворов, которые проверены на стерильность и содержание эндотоксинов. Примеры подходящих протоколов введения цитотоксического конъюгата следующие. Конъюгаты вводятся 1 раз/неделю в течение 4 недель в виде внутривенного болюса каждую неделю. Болюсные дозы вводятся в 50-100 мл физиологического солевого раствора, к которому может добавляться от 5 до 10 мл человеческого сывороточного альбумина. Дозировки составят от 10 мкг до 100 мг на введение, внутривенно (в диапазоне от 100 нг до 1 мг/кг в день). Предпочтительнее дозировки будут находиться в диапазоне от 50 мкг до 30 мг. Наиболее предпочтительно дозировки будут находиться в диапазоне от 1 до 20 мг. После четырех недель лечения, пациент может продолжать получать лечение на еженедельной основе. Конкретные клинические протоколы в отношении пути введения, эксципиентов, разбавителей, дозировок, частоты введения и т.д. может определить средний специалист в данной области в зависимости от клинической ситуации.
Диагностика.
Антитела или фрагменты антитела по изобретению можно также применять для выявления СГО38 в биологическом образце ш νίίτο или ш νίνο. В одном варианте осуществления антитела к СГО38 по изобретению используются для определения уровня СГО38 в ткани или В-клетках, полученных из ткани. В предпочтительном варианте осуществления ткань представляет собой патологическую ткань. В предпочтительном варианте осуществления способа, ткань представляет собой опухоль или ее биопсию. В предпочтительном варианте осуществления способа, ткань или ее биопсия сначала вырезаются из тела паци- 35 025215 ента, и затем уровни СЭ38 в ткани или биопсии можно определить при иммуноанализе антителами или фрагментами антител по изобретению. В другом предпочтительном варианте осуществления способа, уровень СЭ38 определяется в образце ткани или его биопсии, которые могут быть заморожены или фиксированы. Тот же способ можно использовать для определения других свойств белка ί'.Ό38, такие как его уровни на клеточной поверхности или его клеточная локализация.
Описанный выше способ можно использовать для диагностики рака у субъекта, у которого известно или подозревается наличие рака, и уровень ί'.Ό38, измеренный у указанного пациента, сравнивается с таковым у здорового субъекта, служащего эталоном, или со стандартным уровнем. Указанный способ можно затем использовать для определения того, экспрессирует ли опухоль ί'.Ό38, что может свидетельствовать о том, что опухоль будет реагировать на лечение антителами, фрагментами антитела или конъюгатами антитела по настоящему изобретению. Предпочтительно опухоль представляет собой МИЕ, ВБ, ММ, В-СББ, АББ, ТСЬ, АМЬ, нСЬ, нЬ или СМЬ, при которых экспрессируется СЭ38, и другие еще подлежащие определению формы рака, при которых преимущественно экспрессируется СЭ38.
Настоящее изобретение, кроме того, относится к моноклональным антителам, гуманизированным антителам и их связывающимся с эпитопом фрагментам, которые, кроме того, являются мечеными, для применения в исследованиях или диагностических видах применения. В предпочтительных вариантах осуществления метка представляет собой радиоактивную метку, фторофор, хромофор, визуализирующий агент или ион металла.
Предоставляется также способ диагностики, при котором указанные меченые антитела или их связывающиеся с эпитопом фрагменты вводятся субъекту с подозрением на наличие рака или воспалительного заболевания или аутоиммунного заболевания, и измеряется или контролируется распределение метки внутри тела субъекта.
Набор.
Настоящее изобретение также включает наборы, например, включающие описанный цитотоксический конъюгат и инструкции по применению цитотоксического конъюгата для уничтожения определенного типа клеток. Инструкции могут включать рекомендации по применению цитотоксических конъюгатов ίη νίίΓΟ, ίη νίνο или ех νίνο.
Обычно, набор будет иметь отсек, содержащий цитотоксический конъюгат. Цитотоксический конъюгат может быть представлен в лиофилизированной форме или другой форме, подлежащей включению в набор. Набор может также содержать дополнительные элементы, необходимые для реализации способа, описанного в инструкциях в наборе, такие как стерилизованный раствор для растворения лиофилизированного порошка, дополнительные агенты для объединения с цитотоксическим конъюгатом перед введением пациенту и инструменты, которые помогают вводить конъюгат пациенту.
Примеры
Теперь изобретение описывается путем ссылки на следующие примеры, которые являются лишь иллюстративными и не предназначены для ограничения настоящего изобретения.
Пример 1.
Мышиные СЭ38-антитела.
Клетки 300-19, представляющие собой линию предшественников В-клеток, полученную у мышей Ва1Ь/е (М.С. КеШ е1 а1., 1985, УаШге, 317: 353-355), устойчиво экспрессирующие высокий уровень человеческого СЭ38, использовали для иммунизации мышей Ва1Ь/с УАЕ. Мышей подкожно иммунизировали примерно 5х106 клеток 300-19, экспрессирующих СЭ38 на мышь 1 раз/2-3 недели стандартными протоколами иммунизации, используемыми в 1ттипСеп, 1пс. Иммунизированных мышей повторно иммунизировали другой дозой антигена за 3 дня до умерщвления для генерирования гибридомы. Селезенку у мыши брали в соответствии со стандартными экспериментальными протоколами и растирали между двумя стерильными, матированными покровными стеклами для микроскопических исследований, для получения суспензии одиночных клеток в среде КРМ1-1640. Клетки селезенки осаждали центрифугированием, промывали и получали гибриды с клетками мышиной миеломы Р3Х63Ад8.653 (Э.Р. Кеагпеу е1 а1., 1979, I. 1ттипо1., 123: 1548-1550) использованием полиэтиленгликоля-1500 (Коске 783 641). Гибридные клетки ресуспендировали в селекционной среде КРМ1-1640, содержащей гипоксантин-аминоптеринтимидин (нАТ) (§1§та н-0262) и отбирали по росту в 96-луночных плоскодонных культуральных планшетах (Сотйщ-СоЧаг 3596, 200 мкл клеточной суспензии на лунку) при 37°С (5% СО2). Через 5 дней инкубации 100 мкл надосадочной жидкости культуры удаляли из каждой лунки и замещали 100 мкл среды КРМ1-1640, содержащей добавку гипоксантина-тимидина (НТ) (§1§та н-0137). Инкубацию при 37°С (5% СО2) продолжали до тех пор, пока клоны гидридомы не были готовы для скрининга антител. Можно также использовать другие методики иммунизации и получения гибридомы, включая те, которые описаны в документах I. Ьандопе апб н. У1пак15 (Еб§., МеИобк ίη Еп/утокду, Уо1. 121, 1ттнпосйет1са1 ТесНпищех, Рай I; Асабетк Рге§5, Е1опба) и Е. наг1о\у апб Ό. Еапе (АпИЬобкк: А ЕаЬогакгу Мапиа1; 1988; Со1Б 8ргтд нагЬог ЕаЬогакгу Рге§5, №\у Уогк).
Активированной флуоресценцией сортировкой клеток (ЕАС8) с использованием прибора Вес1оп Оккйъоп ЕАС8СайЬнг или ЕАС8Аггау проводили скрининг культуральных супернатантов из гибридомы (с Е1ТС (флуоресцеин-изоцианатом) или сопряженно связанной с РЕ (полиэтиленом) антимышиной 1дС
- 36 025215 антисыворотки) для выявления секреции мышиных моноклональных антител, которые связываются с экспрессирующими СБ38 клетками 300-19, но не с родительскими клетками 300-19. Клоны гибридомы, которые давали положительный результат теста, субклонировали и изотип каждого секретируемого антитела к СБ38 идентифицировали с использованием имеющихся в продаже изотипирующих реагентов (ΡοΟι; 1493027). Хроматографией белка А или О с использованием стандартного протокола всего было очищено 29 антител, положительных в отношении связывания СБ38, после чего они характеризовались дополнительно.
Пример 2.
Характеристика связывания антител к СБ38.
На фиг. 1 показаны гистограммы РАС8, демонстрирующие связывание антител к СБ38 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 и 388В39 с экспрессирующими СБ38 клетками 300-19 и отсутствие связывания родительских клеток 300-19. Антитело 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 или 388В39 (10 нМ) инкубировали в течение 3 ч или с экспрессирующими СБ38 клетками 300-19 или с родительскими клетками 300-19 (1-2х 105 клеток на образец) в 100 мкл ледяной среды КΡΜI-1640 с добавкой 2% нормальной козьей сыворотки. Затем клетки осаждали центрифугированием, промывали и инкубировали в течение 1 ч на льду с сопряженно связанным с Р1ТС козьим антимышиным 1§О-антителом Пескам! ^аЪο^аίο^у, 100 мкл, 6 мкг/мл в холодной среде КΡΜI-1640 с добавкой 2% нормальной козьей сыворотки). Клетки снова осаждали центрифугированием, промывали, ресуспендировали в 200 мкл РВ8, содержащего 1% формальдегид, и анализировали, используя проточный цитометр РАС8СаНЪиг с программным обеспечением Се11 Онеа (ВБ ВюкПепсек).
Гистограммы РАС8 экспрессирующих СБ38 клеток 300-19, инкубированных с 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 или 388В39, показали сильный сдвиг флуоресценции, по сравнению с таковой соответствующего отрицательного контроля (клеток, инкубированных с сопряженно связанным с Р1ТС козьим антимышиным 1§О-антителом) (фиг. 1). Значимый сдвиг флуоресценции также не был выявлен, когда родительские клетки 300-19 инкубировали с любым из этих антител. Аналогичные результаты были получены, когда использовали положительное контрольное антитело к СБ38, АТ13/5 (8е^οίес, ΜСА1019).
Сильный сдвиг флуоресценции также наблюдался, когда клетки лимфомы Катο8 (АТСС СКЬ 1596) инкубировали с 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 или 388В39 (фиг. 1). Величины видимых констант диссоциации (КБ) 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 и 388В39 для связывания с клетками Катο8 оценивали по кривым анализа РАС8, показанными на фиг. 2, с использованием способа нелинейной регрессии для сигмоидальной кривой зависимости реакции от дозы (программное обеспечение ОгарЬРай Рп/т, версия 4, 8ап СА). Получены следующие величины: соответственно 0,10, 0,10,
0,12, 0,16, 0,11 и 3,03 нМ.
Пример 3.
Индукция апоптоза клеток лимфомы Катο8 и Баий1 антителами 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 и 388В39.
Антитела к СБ38, 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 и 388В39 вызывали апоптоз линий клеток лимфомы Катο8 и Баий1 (АТСС ССЬ-213) и линии клеток множественной миеломы ΜО^Ρ-8 (Ω8ΜΖ АСС 569). Степень апоптоза измеряли анализом РАС8 после окрашивания конъюгатами Р1ТСаннексин V ^οκοω^ РНМ018) и ТО-РКО-3 ОпуПгодеп Т3605). Аннексии V связывает фосфатидилсерин снаружи, а не изнутри бислоя клеточной мембраны интактной клетки. В здоровых, нормальных клетках фосфатидилсерин экспрессирован на внутренней поверхности бислоя мембраны, и переход фосфатидилсерина из внутреннего к наружному листку плазматической мембраны является одним из самых ранних выявляемых сигналов апоптоза. Таким образом, связывание аннексина V является сигналом индукции апоптоза. ТО-РКО-3 представляет собой краситель мономерной цианиновой нуклеиновой кислоты, который может проникать через плазматическую мембрану только когда повреждена целостность мембраны, как это происходит на более поздних стадиях апоптоза.
Экспоненциально растущие клетки высевали в концентрации примерно 2х105 клеток/мл в 24-луночные планшеты в среде КΡΜI-1640 с добавкой 10% фетальной телячьей сыворотки (РВ8), 2 мМ Ь-глутамина и 50 мкг/мл гентамицина (обозначенной ниже как полная среда КΡΜI-1640). Если нет иных указаний, клетки в целом выращивали в полной среде КΡΜI-1640. Клетки инкубировали с антителами к СБ38 (10 нМ) в течение 24 ч при 37°С в увлажненной атмосфере, содержащей 5% СО2. Затем клетки осаждали центрифугированием, промывали дважды 500 мкл РВ8, ресуспендировали в 100 мкл связывающего буфера (предоставленного в наборе аннексии У-Р1ТС), содержащего 5 мкл аннексии У-Р1ТС, и инкубировали в течение 15 мин на льду. Затем к смеси добавляли 400 мкл связывающего буфера и ТО-РКО-3 (до конечной концентрации 1 мкМ) и сразу с использованием РАС8 измеряли связанную с клетками флуоресценцию Р1ТС и ТО-РКО-3. Точечные графики флуоресценции ТО-РКО-3 (РЬ4-Н; ось у) и флуоресценции аннексии У-Р1ТС (РЬ1-Н; ось х) строили, используя программное обеспечение СеПОнеа.
- 37 025215
Результаты показаны на фиг. 3 и 4. На фиг. 3 приведен пример такого точечного графика для клеток Όππάί после 24-часовой инкубации с различными антителами к СЭ38. По этим графикам определяли средние процентные доли аннексии ν-положительных клеток (включает и ТО-РКО-3-положительные, и отрицательные клетки) по образцам в двух повторениях, и они показаны на фиг. 4. Неожиданно, 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 и 388В39 проявили высокую апоптозную активность. Более чем 30% клеток Оаийг подвергнутых воздействию любого из антител, были аннексии ν-положительными, по сравнению лишь примерно с 6% необработанных клеток (фиг. 3 и 4А). 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 и 388В39 проявили по меньшей мере в 2,4 раза большую апоптозную активность (24% после вычитания контрольной величины без обработки), чем мышиные СЭ38-антитела предшествующего уровня техники, тестированные при такой же концентрации 10 нМ (АТ13/5, ОКТ10, Ш4, и δυN-4В7, менее чем 10% аннексии ν-положительными после вычитания контрольной величины без обработки) и два других антитела к СО38, генерированных в лаборатории заявителей, (388В7 и 388В23, не выше, чем не обработанный контроль, т.е. примерно 6% аннексии ν-положительных) (фиг. 4А). АТ13/5 закупали у 8его!ес (МСА1019), и ОКТ10 получали и очищали из гибридомы (АТСС СКЬ-8022). Ш4 и δυΝ-467 были даром проф. Р. Ма1ауак1 из Туринского университета, Италия. Аналогичным образом, антитела к СИ38 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 и 388В39 проявили по меньшей мере в 3,5 раза более высокую проапоптозную активность на другой линии клеток лимфомы, Каток (7% или более аннексии ν-положительных после вычитания контрольной величины без обработки), чем любые мышиные СЭ38антитела предшествующего уровня техники, АТ13/5, ОКТ10, ГВ4 и δυN-4В7, или два других новых антитела к СЭ38, 388В7 и 388В23 (менее чем 2% аннексии ν-положительных после вычитания контрольной величины без обработки) (фиг. 4В). Наконец, антитела к СЭ38 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 и 388В39 проявили высокую проапоптозную активность на линии клеток множественной миеломы МОЬР-8 (фиг. 4С). Приблизительно 50% клеток МОЬР-8, обработанных этими антителами, были аннексии ν-положительными, по сравнению примерно с 39% необработанных клеток. Напротив, обработка любыми из мышиных СО38-антител предшествующего уровня техники, АТ13/5, ОКТ10, ГВ4, и δυN-4В7, или двумя другими новыми антителами к СЭ38, 388В7 и 388В23, не привела к увеличению доли апоптозных клеток.
Пример 4.
Клонирование и секвенирование легкой и тяжелой цепей антител к СЭ38.
Антитело 388В19.
Получение РНК из клеток гидридомы, которые продуцируют антитело 388В19.
Препараты общей РНК получали из 5х106 клеток гибридомы, которые продуцируют антитело 388В19, с использованием мини препаративного набора Ц1адеп'к Кпеаку. Вкратце, 5х106 клеток осаждали центрифугированием и ресуспендировали в 350 мкл буфера КЬТ (содержащего 1% β-меркаптоэтанола). Суспензию гомогенизировали пропусканием ее через иглу калибра 21,5 и шприц примерно 10-20 раз или до тех пор, пока он больше не был вязким. К гомогенату добавляли этанол (350 мкл 70% водного этанола), который хорошо смешивался. Раствор переносили в центрифужную колонку, помещали в 2-мл сборную пробирку и центрифугировали при >8000хд в течение 15 с. Колонку дважды промывали 500 мкл буфера КРЕ, затем переносили в свежую пробирку и элюировали 30 мкл воды, лишенной РНКазы, и 1-минутным центрифугированием. Элюат (30 мкл) помещали назад на колонку для второго элюирования 1-минутным центрифугированием. Аликвотное количество 30 мкл элюата разбавляли водой и использовали для измерения поглощения УФ-излучения при 250 нм для количественного определения РНК.
Получение кДНК реакцией обратной транскриптазы (КТ).
кДНК вариабельной области антитела 388В19 генерировали из общей РНК с использованием набора Зирегкспр! II от компании [пуйгсщеп. Строго соблюдали протоколы набора, используя до 5 мкг общей РНК из мини-препаратов Ц1апеаку. Вкратце, РНК, случайные праймеры по 1 мкл, и 1 мкл смеси ЙЭТР (динуклеотид-5'-трифосфата) переносили в 12 мкл стерильной дистиллированной воды, лишенной РНКазы, и инкубировали при 65°С в течение 5 мин. Затем смесь помещали на лед по меньшей мере на 1 мин. Затем добавляли 4 мкл 5х реакционного буфера, 2 мкл 0,1 М ОТТ (дитиотрейтола) и 1 мкл КЫакеОИТ и смесь инкубировали при 25°С в течение 2 мин в термоциклическое устройство М1 Кекеагсй. Паузы работы термоциклического устройства устанавливали так, чтобы можно было добавить 1 мкл фермента ЗирегкспрШ, и затем он снова запускался еще на 10 мин при 25°С перед переключением на 55°С на 50 мин. Реакция термически инактивировалась нагреванием до 70°С на 15 мин, и РНК удаляли добавлением 1 мкл РНКазы Н и инкубацией при 37°С в течение 20 мин.
Вырожденные реакции ПЦР.
Процедура первого раунда вырожденной реакции ПЦР на ДНК, полученной из клеток гибридомы, была основана на способах, описанных в документах \Уапд е! а1. (2000) и Со е! а1. (1992). Праймеры для этого раунда (табл. 2) содержат сайт рестрикции для облегчения клонирования в плазмиды рВ1иекпрШ.
Компоненты реакции ПЦР (табл. 3) смешивали на льду в тонкостенных пробирках для ПЦР и затем переносили в термоциклическое устройство М1 Кекеагсй, предварительно нагретое и установленное на паузу при 94°С. Реакции выполняли, используя программу, полученную из документа \Уапд е! а1., 2000,
- 38 025215 следующим образом:
Название: ^аид45
94°С 3:00 мин
94°С 0:15 с
45°С 1:00 мин
72°С 2:00 мин
Переход к 2 29 раз
72°С 6:00 мин
4°С остальное время конец
Затем смеси реакции ПЦР помещали на 1% агарозный гель с низкой точкой плавления, иссекали полосы от 300 до 400 пар оснований, очищали с использованием мини колонок Ζутο ДНК и отсылали в АденсопП ЬювСеисев для секвенирования. Соответствующие 5'- и 3'-праймеры ПЦР использовали в качестве праймеров секвенирования для генерирования кДНК вариабельной области 38БВ19 из обоих направлений.
Клонирование 5'-концевой последовательности.
Поскольку вырожденные праймеры, использованные для клонирования последовательностей кДНК вариабельных областей легкой цепи и тяжелой цепей 38БВ19, изменяют 5'-концевую последовательность, потребовались дополнительные усилия по секвенированию для расшифровки полных последовательностей. Предварительные последовательности кДНК, полученные описанными выше способами, использовали для поиска на сайте интернета N061 ГдВ1а8! (1иιρ://\γ\γ\γ.ηсЬ^.η1т.η^11.дον/^дЫа5ι/) последовательностей зародышевой линии, из которых получена последовательность 38БВ19. Праймеры ПЦР были сконструированы (табл. 3) для гибридизации с лидерной последовательностью мышиного антитела с тем, чтобы новая реакция ПЦР могла дать полную кДНК вариабельной области, не измененную праймерами ПЦР. Реакции ПЦР, очистки полос и секвенирование выполняли, как описано выше.
Пептидный анализ для подтверждения последовательности.
Сведения о последовательности кДНК по вариабельной области объединяли с последовательностью константной области зародышевой линии для получения последовательностей кДНК антитела полной длины. Затем рассчитывали молекулярные массы тяжелой цепи и легкой цепи и сравнивали с молекулярными массами, полученными анализами ЬС/МБ (жидкостной хроматографией/масс-спектрометрией) мышиного антитела 38БВ19.
В табл. 4 представлена рассчитанная масса по последовательностям кДНК для легкой цепи и тяжелой цепи 38БВ19 вместе с величинами, измеренными ЬС/МБ. Измерения молекулярной массы согласуются с последовательностями кДНК и для легкой, и для тяжелой цепей 38БВ19.
Пример 5.
Рекомбинантная экспрессия антител 38БВ19.
Последовательности вариабельной области для йи38БВ19 оптимизировали в отношении выбора кодонов и синтезировали с использованием биотехнологии В1ие Негой Вю1ес1то1оду. Последовательности фланкированы сайтами ферментов рестрикции для клонирования в рамке с соответствующими константными последовательностями в плазмидах для экспрессии, осуществляемой в клетках млекопитающих, и с одиночной цепью, и с тандемной двойной цепью. Вариабельная область легкой цепи клонируется в сайты ЕсоК1 и ВвЛУГ и в плазмиде ρδ38БВ19^СΖν1.0, и в плазмиде р838БВ19ν1.00 (фиг. 5А и 5С). Вариабельная область тяжелой цепи клонируется в сайты Ηίηάΐΐΐ и Ара1 и в плазмиде ρδ38БВ19^СΖν1.0, и в плазмиде р838БВ19ν1.00 (фиг. 5В и 5С). Эти плазмиды можно использовать для экспрессии 1и38БВ19 или при транзиторных, или стабильных трансфекциях в клетках млекопитающих. Аналогичные конструкты векторов экспрессии использовались для получения других химерных и гуманизированных антител.
Транзиторные трансфекции для экспрессии 1и38БВ19 в клетках НЕК-293Т выполняли с использованием реагентов СаР04 от компании ВЭ ВювСеисев. Поставляемые протоколы были слегка модифицированы для увеличения выхода экспрессии. Вкратце, 2х106 клеток НЕК-293Т высевали на 10 см чашки для культуры ткани, покрытые полиэтиленимином (РЕГ) за 24 ч до трансфекции. Трансфекция начиналась промыванием клеток РВБ и замещением среды 10 мл среды ЭМЕМ (Г^йгодеи) с 1% РВБ со сверх низким содержанием ГдС (ИусЬте). Раствор А (10 мкг ДНК, 86,8 мкл раствора Са2' и до 500 мкл Η20) добавляли по каплям к раствору В при перемешивании вихревой мешалкой. Смесь инкубировали при комнатной температуре в течение 1 мин и 1 мл смеси добавляли по каплям в каждую 10 см чашку. Приблизительно через 16 ч после трансфекции, среду замещали 10 мл свежей ЭМЕМ с 1% РВБ со сверх низким содержанием ГдС. Приблизительно через 24 ч в каждую 10 см чашку добавляли 2 мМ бутирата натрия. Трансфекцию получали через 4 дня.
Супернатант получали для аффинной хроматографии белка А добавлением 1/10 объема 1 М буфера Τήδ/ΗΟ, ρΗ 8,0. Супернатант с доведенным ρΗ фильтровали через мембрану фильтра 0,22 мкм и загружали на колонку белка А-Сефарозы (ШТгар Ргйеш А ОТ, 1 мл, Атегзйат В^οδс^еηсеδ), уравновешенную связывающим буфером (РВБ, ρΗ 7,3). Преколонку Ц-Берйагозе (10 мл) подсоединяли выше по потоку от
- 39 025215 колонки белка А во время загрузки образца для снижения загрязнения клеточным материалом, таким как ДНК. После загрузки образца преколонку удаляли и ориентацию колонки белка А изменяли на обратную для промывания и элюирования. Колонку промывали связывающим буфером до тех пор, пока не был получен устойчивый исходный уровень с отсутствием спектральной поглощательной способности при 280 нм. Антитело элюировали 0,1 М буфером уксусной кислоты, содержащим 0,15 М №С1, рН 2,8, с использованием скорости потока 0,5 мл/мин. Собирали фракции приблизительно по 0,25 мл и нейтрализовали добавлением 1/10 объема 1 М Тпк/НСТ рН 8,0. Пиковую фракцию (фракции) диализировали в течение ночи дважды против РВ8, и очищенное антитело количественно анализировали спектральной поглощательной способностью при ОО280 (оптической плотности при 200 нм). Гуманизированные и химерные антитела можно также очистить, используя колонку белка С, несколько другими процедурами.
Все описанные химерные и гуманизированные антитела к С.ГО38 были экспрессированы и очищены в процедурах, аналогичных описанным выше.
Пример 6.
Активность антитело-обусловленной клеточно-зависимой цитотоксичности (АЭСС) химерных антител к СО38.
Поскольку, как было ранее показано, некоторые антитела к С.ГО38 обладают активностью ЛЭСС и/или СЭС как химерные или гуманизированные антитела с константными областями человеческого Т§С1 (ГН. Е1118 е! а1., 1995, I. Iттиηо1., 155: 925-937; Р.К. 8!еуепкоп е! а1., 1991, В1ооб, 77: 1071-1079; \УО 2005/103083), то были получены и тестированы на наличие активности АОСС и/или СЭС химерные варианты 388В13, 388В18, 388В19, 388В30, 388В31 и 388В39, состоящие из мышиных вариабельных областей и человеческой константной области ^СМдк.
СЬ388В13, сЬ388В18, сЬ388В19, сЬ388В30, сЬ388В31 и сЬ388В39 сначала тестировали на наличие АОСС активности, используя клетки Каток в качестве клеток-мишеней, и человеческие натуральные клетки-киллеры (ЯК) в качестве эффекторных клеток. Анализ высвобождения лактат-дегидрогеназы (БОН) использовали для измерения лизиса клеток (К.Б. 8Ше1бк е! а1., 2001, I. Вю1. СЬет., 276: 65916604).
Сначала клетки ΝΙ< изолировали из крови человека (от здорового донора; закупленные у КекеагсЬ В1ооб Сотропеп!к, Шс., ВпдШоп, МА), используя модифицированный протокол для набора для выделения клеток ΝΙ< с помощью ΝΟ Ьок-Шоп КЬ II (МЪ!епу1 Вю!есЬ). Кровь разбавляли в 2-3 раза сбалансированным солевым раствором Хенкса (НВ88). 25 мл разбавленной крови осторожно наслаивали поверх 25 мл Р1со11 Радие в 50 мл конической пробирке и центрифугировали при 400д в течение 45 мин при 19°С. Мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) собирали с поверхности раздела, переносили в новую коническую 50 мл пробирку и однократно промывали НВ88. РВМС ресуспендировали в 2 мл буфера для выделения ΝΙ< и затем к клеточной суспензии добавляли 500 мкл смеси биотинаантитела (из набора для выделения клеток ΝΧ, 130-091-152, МЬ!епу1 Вю!есЬ). Смесь биотина-антитела содержит биотинилированные антитела, которые связываются с лимфоцитами, за исключением клеток ΝΧ. Смесь инкубировали при 4°С в течение 10 мин и затем добавляли 1,5 мл буфера для выделения ΝΧ (РВ8, 0,1% В8А, 1 мМ ЕЭТА) и 1 мл антибиотиновых микрошариков. Смесь клеток и антител инкубировали в течение еще 15 мин при 4°С. Затем клетки однократно промывали 50 мл буфера для выделения НК и ресуспендировали в 3 мл буфера для выделения НК. Затем, колонку МАС8 Б8 (на сепараторе МАС8, МЬ!епу1 Вю!есЬ) предварительно промывали 3 мл буфера для выделения ΝΧ. Затем клеточную суспензию наносили на колонку Б8. Оттекающую жидкость (фракцию с немечеными клетками) собирали в новую 50-мл коническую пробирку. Колонку промывали 3 раза 3 мл буфера для выделения ХК. Всю вытекающую жидкость собирали в ту же пробирку и однократно промывали 50 мл буфера для выделения ΝΗ. Клетки ΝΟ высевали в 30 мл среды КРМЫ640 с добавкой 5% фетальной телячьей сыворотки и 50 мкг/мл гентамицина.
Различные концентрации антител сЬ388В13, сЬ388В18, сЬ388В19, сЬ388В30, сЬ388В31 и сЬ388В39 в среде КРМЫ640 с добавкой 0,1% В8А, 20 мМ НЕРЕ8, рН 7,4 и 50 мкг/мл гентамицина (ниже обозначенной как среда КНВР) в аликвотных количествах (50 мкл/лунку) помещали в 96-луночный планшет с круглым дном. Клетки-мишени Каток ресуспендировали в концентрации 106 клеток/мл в среде КНВР и добавляли в каждую лунку (100 мкл/лунку), содержащую разведения антитела. Планшет, содержащий клетки-мишени и разведения антитела, инкубировали в течение 30 мин при 37°С. Затем клетки ΝΗ (50 мкл/лунку) добавляли в лунки, содержащие клетки-мишени, в соотношении 1 клетка-мишень к 3-6 клеткам ΝΗ. Среду КНВР (50 мкл/лунку) добавляли в контрольные лунки с клетками ΝΗ. Также в 3 лунки, содержащие только клетки-мишени без антитела, добавляли 20 мкл раствора ТгЪоп X-100 (ΚРМI-1640, 10% ТгЪоп X-100) для определения максимального возможного высвобождения БОН. Смеси инкубировали при 37°С в течение 4 ч, затем центрифугировали в течение 10 мин при 1200 об/мин и 100 мкл надосадочной жидкости осторожно переносили в новый плоскодонный 96-луночный планшет. Реакционную смесь БОН (100 мкл/лунку) из набора для выявления цитотоксичности (КосЬе 1 644 793) добавляли в каждую лунку и инкубировали при комнатной температуре в течение 5-30 мин. Оптическую плотность образцов измеряли при 490 нм (ОО.490). Специфический лизис каждого образца в процентах определяли, приписывая 100% лизис величине ОО490 образцов, обработанных ТгЪоп X-100, и лизис 0% - 40 025215 величине ОО490 необработанного контрольного образца, содержащего только клетки-мишени. Образцы, содержащие только клетки ΝΚ, дали показания ОО490, которыми можно было пренебречь.
При тестировании с клетками-мишенями Каток и эффекторными ΝΚ клетками химерные антитела к С'О38 проявили очень высокие показатели активности АОСС (фиг. 6). Величины ЕС50 оценивали нелинейным регрессионным способом с сигмовидными кривыми зависимости реакции от дозы и обнаружили, что они были следующими: 0,0013 мкл/мл для сН388В13, 0,0013 мкл/мл для сН388В18, 0,0018 мкл/мл для сН388В19, 0,0022 мкл/мл для сН388В30, 0,0012 мкл/мл для сН388В31, 0,1132 мкл/мл для сН388В39. Химерные антитела КСО38 также проявили высокую активность АОСС на клетках множественной миеломы ЬР-1 (^8МΖ АСС 41) (величины ЕС50: 0,00056 мкл/мл для сН388В18, 0,00034 мкл/мл для сН388В19, 0,00024 мкл/мл для сН388В31) (фиг. 7А). СН388В19 также эффективно уничтожало клетки лимфомы ОаиЛ (фиг. 7В), клетки ИАЬМ-6 В-АЬЬ (^8МΖ АСС 128) (фиг. 8А) и клетки МОЬТ-4 Т-АЬЬ (АТТС СКЬ-1582) (фиг. 8В) путем АОСС, что указывало на то, что антитела к СО38 с необычно высокой апоптозной активностью также обладают и высокой АОСС-активностью против различных опухолевых клеток, полученных из различных гематопоэтических злокачественных поражений. Не связывающееся с КО1 контрольное антитело (ритуксимаб, ВюдеШбес) (фиг. 7А, 8А и 8В) или ти388В19 (фиг. 7В) в таком же эксперименте не имели значимой активности АОСС.
Пример 7.
Активность СОС химерных антител к СО38.
Величины активности СОС сН388В13, сН388В18, сН388В19, сН388В30, сН388В31 и сН388В39 измеряли на основании способа, модифицированного из документа (Н. Оах/аио^цтого е1 а1., 1997, 1. Iттиηо1. МеГйобк, 202: 163-171). Человеческий комплемент представлял собой лиофилизированную сыворотку человеческого комплемента (Ыдта-АИпсН 81764), которую восстанавливали растворением в стерильной очищенной воде, как указано изготовителем, и затем разводили в пять раз средой КНВР непосредственно перед экспериментом. Клетки-мишени, суспендированные в концентрации 106 клеток/мл в среде КНВР, в аликвотных количествах добавляли в лунки плоскодонного 96-луночного планшета для культуры ткани (50 мкл/мл). Затем добавляли 50 мкл различных концентраций (от 10 до 0,001 нМ) антител к СО38 в среде КНВР (одно антитело на образец), за чем следовало добавление 50 мкл/мл раствора комплемента. Затем планшет инкубировали в течение 2 ч при 37°С в увлажненной атмосфере, содержащей 5% СО2, после чего в каждую лунку добавляли 50 мкл 40% реагента А1атаг В1ие (Вюкоигсе 0АЫ100), разведенного в КНВР (конечное разведение 10%), для измерения жизнеспособности клеток. А1атаг В1ие контролирует восстанавливающую способность жизнеспособных клеток. Планшет инкубировали в течение 5-18 ч при 37°С перед измерением флуоресценции (в относительных единицах флуоресценции, КРИ) при 540/590 нм. Процентную долю удельной жизнеспособности клеток для каждого образца определяли сначала коррекцией экспериментальных величин для фоновой флуоресценции вычитанием величины фоновой КРИ (лунки только со средой, без клеток) из величин КРИ для каждого образца и затем делением корригированных величин КРИ на корригированную величину КРИ необработанных образцов клеток.
Когда величины активности СОС образцов химерного антитела к СО38 тестировали клетками КаД-ГМО с использованием человеческого комплемента при конечном разведения 5%, химерные антитела к СО38 проявили очень высокую активность (фиг. 8). Клетки КаД-ГМО представляют собой клетки, полученные из клеток Кац (АТСС ССЬ-86), и они экспрессируют более низкие уровни мембранных ингибиторов комплемента СО55 и СО59. Величины ЕС50 оценивали нелинейной регрессией по сигмоидальной кривой зависимости реакции от дозы, показанной на фиг. 8, и они были следующими: 0,005 мкл/мл для сН388В13, 0,0101 мкл/мл для сН388В18, 0,028 мкл/мл для сН388В19, 0,020 мкл/мл для сН388В30, 0,010 мкл/мл для сН388В31 и 0,400 мкл/мл для сН388В39. Химерные антитела к СО38 также проявили высокую активность СОС в отношении клеток множественной миеломы ЬР-1 (величина ЕС50: 0,032 мкл/мл для сН388В18, 0,030 мкл/мл для сН388В19, 0,043 мкл/мл для СН388В31), тогда как не связывающийся химерный контрольный !дО1 (ритуксимаб, ВюдеШбес) не обладал никакой активностью СОС (фиг. 10). Когда химерные антитела к СО38 тестировали на клетках лимфомы Оаибц то различные антитела к СО38 отличались по их величинам активности СОС (фиг. 11). Хотя удельная жизнеспособность клеток Оаиб1 составляла менее чем 15% после их инкубации с 1,25 мкг/мл сН388В19 в присутствии комплемента, наблюдалось лишь пограничное снижение удельной жизнеспособности этих клеток после их инкубации с сН388В18 или сН388В39 (1,25 мкг/мл или более высокая концентрация) в присутствии комплемента (удельная жизнеспособность составила соответственно 85 и 91%). Лишь небольшое снижение удельной жизнеспособности также наблюдалось, когда клетки Оаиб1 инкубировали с 1,25 мкг/мл или более высокой концентрацией сН388В13, сН388В30 и сН388В31 в присутствии комплемента (удельная жизнеспособность составила соответственно 65, 45 и 53%).
Пример 8.
Сродство связывания и величины апоптозной, АОСС и СОС активности гуманизированных антител к СО38.
Два варианта гуманизированного 388В19 (Ни388В13 ν1.00 и ν1.20) и химерного 388В19 проявили аналогичные сродства связывания при тестировании с клетками Каток с величинами Кс соответственно
- 41 025215
0,23, 0,25 и 0,18 нМ (фиг. 12А). Величины сродства связывания химерных и гуманизированных антител 38§В19 также сравнивали в анализе конкурентного связывания, где измеряется их способность конкурировать со связыванием биотинилированного мышиного антитела 38§В19. Меченое биотином антитело 38§В19 (3х10-10 М) смешивали с различными концентрациями с138§В19, 1и38§В19 ν1.00 или 1и38§В19 ν1.20. Смесь антител инкубировали с клетками Каток и количество биотинилированного мышиного 38§В19, связанного с клетками, измеряли с использованием ПТС, конъюгированного со стрептавидином, посредством анализа РАС§. 1ш38§В19 ν1.00, 1ш38§В19 ν1.20 и с138§В19 одинаково хорошо конкурировали со связыванием биотинилированного мышиного 38§В19 (фиг. 12В), снова указывая на то, что гуманизация не воздействовала на сродство связывания. Когда с138§В19, 1ш38§В19 ν1.00 и 1ш38§В19 ν1.20 (от 10-8 до 10-11 М) сравнивали по их способности вызывать апоптоз клеток Иаибц они проявили одинаковую апоптозную активность (фиг. 13). Кроме того, 1ш38§В19 ν1.00 и ν1.20 также проявили такую же АИСС, как 1ш38§В19 на клетках ЬР-1 (фиг. 14), и такую же активность СИС, как 1ш38§В19, на клетках КаД-ГМО и ЬР-1 (фиг. 15). Ни38§В19 ν1.00 также проявил такую же активность СИС, как с138§В19, на клетках Т-клеточного острого лимфобластического лейкоза ИХИВ-41 (^§МΖ 525) (фиг. 15). Ни38§В19 ν1.00, кроме того, тестировали на их способность вызывать апоптоз на разнообразном наборе линий клеток (фиг. 1б). Обработка 1ш38§В19 ν1.00 (10-8 М) привела к резкому увеличению аннексии У-положительных клеток в линиях клеток В-клеточной лимфомы §и-ИНЬ-8 (И§М2 АСС 573) (с 7% в необработанном контроле до 97% В-клетках, обработанных 1ш38§В19) и Νυ-ΠυΕ-1 ^§МΖ АСС 579) (с 10% в необработанном контроле до 37% В-клетках, обработанных 1ш38§В19), и линиях клеток Т-АЬЬ ИХИ-41 (с 7% в необработанном контроле до б9% В-клетках, обработанных 1ш38§В19). Кроме того, обработка 1ш38§В19 ν1.00 (10-8 М) увеличила долю аннексии У-положительных клеток в линии клеток В-клеточного лимфолейкоза 1УМ-13 (^§МΖ АСС 19) (с 8% в необработанном контроле до 17% В-клетках, обработанных 1ш38§В19) и в линии клеток волосато-клеточного лейкоза НС-1 (И§М2 АСС 301) (с б% в необработанном контроле до 10% В-клетках, обработанных 1ш38§В19).
Аналогичным образом, два варианта гуманизированного 38§В31 (1ш38§В31 ν1.1 и ν1.2) и химерное 38§В31 проявили одинаковое сродство связывания при тестировании с клетками Каток с величинами Кс соответственно 0,13, 0,11 и 0,12 нМ. Сродство связывания химерных и гуманизированных антител 38§В31 также сравнивали в анализе конкурентного связывания, как описано выше, и они работали одинаково хорошо. Ни38§В31 ν1.1, кроме того, тестировали для выявления его способности вызывать апоптоз в нескольких линиях клеток. Гуманизированное антитело проявило такую же апоптозную активность, как с138§В31, в отношении клеток Каток, Иаибц Мор-8 и §и-ИНЬ-8. Кроме того, 1и38§В31 ν1.1 также проявило на этих линях клеток такую же активность ЛИСС и СИС, как с138§В31.
Пример 9.
Эффективность 38§В13, 38§В18, 38§В19, 38§В30, 38§В31 и 38§В39 ш иуо.
Противоопухолевую активность 38§В13, 38§В18, 38§В19, 38§В30, 38§В31 и 38§В39 ш νί\Ό исследовали на модели выживания ксенотрансплантата опухоли человека у мышей с иммунодефицитом (самки СВ.17 §СГО), после инокуляции клеток лимфомы Каток. Самок мышей СВ.17 §СГО инокулировали введением 2х10б клеток Каток в 0,1 мл бессывороточной среды через латеральную хвостовую вену. Через 7 дней после инокуляции опухолевых клеток мышей методом рандомизации включали в 7 групп на основании массы тела. Каждая группа включала 10 мышей, за исключением группы, получавшей лечение 38§В31, которая включала б мышей, и группы, получавшей лечение 38§В39, которая включала 8 мышей. Антитела вводили мышам внутривенно в дозе 40 мг/кг, 2 раза/неделю, в 3 последовательные недели, начиная через 7 дней после инокуляции клеток. Мышей умерщвляли, если наступал паралич одной или обеих задних лап, потеря массы тела была более чем 20% от величины до лечения или животное было слишком больным, чтобы добраться до пищи и воды. Лечение 38§В13, 38§В18, 38§В19, 38§В30, 38§В31 или 38§В39 значительно удлиняло выживание мышей, по сравнению с выживанием мышей, получавших РВ§ (фиг. 17). Среднее выживание мышей, получавших РВ§, составило 22 дня, а выживание групп, получавших лечение антителами, находилось в диапазоне от 28 до 33 дней.
Противоопухолевую активность ш νί\Ό ти38§В19 и 1ш38§В19, кроме того, исследовали на дополнительных моделях ксенотрансплантата опухоли человека у иммунодефицитных мышей. Для модели выживания при лимфоме Иаибц мышей §СГО инокулировали 5х10б клеток Иаиб1 в 0,1 мл бессывороточной среды через латеральную хвостовую вену. Исследование проводили, как описано выше. Лечение любым из ти38§В19 или 1ш38§В19 значительно удлиняло выживание мышей, по сравнению с выживанием мышей, получавших РВ§ (фиг. 18). Среднее выживание мышей, получавших РВ§, составило 22 дня, а выживание групп, получавших лечение антителами, составило 47 дней.
Для опухолевой модели множественной миеломы NСI-Η929 мышей §СГО инокулировали подкожно 107 клетками. Когда опухоли пальпировались на б-й день, животных методом рандомизации включали в группы по 10 в соответствии с массой тела и начинали лечение антителом. Антитело 1ш38§В19 или не связывающееся химерное Ц01 контрольное антитело (ритуксимаб, Вюдеп1бес) вводили мышам внутривенно в дозе 40 мг/кг, 2 раза/неделю в 3 последовательные недели. Объем опухоли контролировали и животных умерщвляли, если опухоль достигала в размере 2000 мм3 или в ней развивался некроз. У груп- 42 025215 пы, получавшей лечение ΡΒδ, средний объем опухоли достиг 1000 мм3 на 89-й день, в группе контрольного химерного 1дО1 контрольного антитела - на 84-й день (фиг. 19). Лечение 1ιιι38δΒ19 полностью предотвращало рост опухоли у всех 10 животных. Напротив, только у двух животных в группе, леченой ΡΒδ, и трех животных, получавших химерное 1дО1 контрольное антитело, проявилось обратное развитие опухоли.
Для опухолевой модели множественной миеломы М0^Ρ-8, мышей δί'ΊΩ инокулировали подкожно 107 клетками. Когда опухоли пальпировались на 4-й день, животных методом рандомизации включали в группы по 10, в соответствии с массой тела, и начинали лечение антителом. Антитела 1ιιι38δΒ19 и ти38δΒ19 или химерное 1дО1 контрольное антитело вводили мышам внутривенно в дозе 40 мг/кг, 2 раза/неделю в 3 последовательные недели. Объем опухоли контролировали и животных умерщвляли, если опухоль достигала в размере 2000 мм3 или в ней развивался некроз. У группы, получавшей лечение ΡΒδ, средний объем опухоли достиг 500 мм3 на 22-й день, в группе контрольного химерного 1дО1 контрольного антитела - на 23-й день (фиг. 20). Ни в одной из этих групп не было обратного развития опухоли. Напротив, лечение 1ιιι38δΒ19 или ти38δΒ19 привело к обратному развитию соответственно у 8 из 10 или у 6 из 10 животных.
Таблицы
Таблица 1А
Поверхностные остатки каркасной области легкой цепи ти38δΒ19 и соответствующие остатки в том же положении по Кабату в антителе 1.69 человека. Остатки, которые отличаются и поэтому измененные в антителе 1ιιι38δΒ19 представлены в заштрихованных ячейках таблицы. Обозначенные звездочками (*) остатки подвергнуты обратной мутации в остаток ти38δΒ19 в одном или более вариантах 1υ38δΒ19.
Поверхностные остатки каркасной области легкой цепи ти383В19 и соответствующие остатки в антителе 1.69 человека
Положение по Кабату ти385В19 1.69
1 О О
3 V V
5* т А
9 ь К
10 3. Г
15 ь V
18 Р к
40 Р Р
41 с с
42 0 0
45 к к
57 а <3
60 Ώ О
67 А 5
80 А А
81 Е Е
107 К К
108 К к
- 43 025215
Таблица 1В
Поверхностные остатки каркасной области тяжелой цепи гаи38§В19 и соответствующие остатки в том же положении по Кабату в антителе 1.б9 человека. Остатки. которые отличаются и поэтому изменены в антителе 1ш388В19. представлены в заштрихованных ячейках таблицы.
Таблица 2
Праймеры. используемые для вырожденной реакции ПЦР. основаны на праймерах. указанных в документах. описанных в документах \Уапд с1 а1. (2000). за исключением НшйКЬ. которая основана на документе Со с1 а1.. (1992). Смешанные основания определяются следующим образом: Н=А+Т+С. 8=д+С. Υ^+Τ К=О+Т. М=А+С. К А+д. V АЛ. У=А+С+О.
Праймер
Последовательность
Вага1дС1 (8Е<2 ΙΌ N0. 73) ОСАОСАТССАТАОАСАСАТОССССЗТСТСЗТТТТССС
1д<32АЪат 1 аСАОаДТСССТТСАССАСЗНСАТССТАСАЗТСА (5Е0 Ιϋ N0. 74)
ЕсоМН1 (£ЕС ΙΟ ΝΟ. 75) СТТССССААТТСЗАКСТЫМАССТСЗАСЗАСТС
ЕсоМН2 (5Ε0 ΙΌ N0. 76) СТТССОаЛАТТСЗАКСТЫМАССТСЗАСелатСМОС
Зас1МК (8Ε0 Ιϋ ΝΟ. 77) ОСАССТССАУАТТОТеМТЗАСКСАР.йСТМС’А
ΗίηύΚΕ (3Ε0 ΙΟ ΝΟ. 78) ТАТАЕАЕСТСААЕСТТОЕАТЕЕТЕЕОААЕАТОСАТАСАЕТТ еотбс
- 44 025215
Смеси реакции ПЦР в случаях легкой и тяжелой цепей для клонирования последовательностей кДНК вариабельных областей 388Β19
Таблица 3
Реакционная смесь легкой цепи Реакционная смесь тяжелой цепи
5 мкл 10 χ буфер реакции ПЦР 5 мкл 10 х буфер реакции ПЦР
(КосНе) (ЕосЬе)
Смесь 4 мкл 10 мМ ЦИТР (по Смесь 4 мкл 10 мМ άΝΤΡ (по
2,5 мМ каждого) 2,5 мМ каждого)
2 мкл матрицы (реакция 2 мкл матрицы (реакция
обратной транскриптазы) обратной транскриптазы)
5 мкл 10 мкМ левого праймера 2,5 мкл 10 мкМ левого
Зас1МК праймера ЕсоМН!
5 мкл 10 мкМ правого праймера Ηίηάκι, 2,5 мкл 10 мкМ левого праймера ЕСОМН2 5 мкл 10 мкМ правого праймера Вага1дС1
5 мкл ΌΜΞΟ 5 мкл ВМБО
0,5 мкл Тая полимеразы 0,5 мкл Тая полимеразы
(КосЬе) (КосЬе)
23,5 мкл стерильной 23,5 мкл стерильной
дистиллированной Н2О дистиллированной Н2О
Всего 50 мкл Всего 50 мкл
Таблица 4
Праймеры конца 5' мышиной лидерной последовательности, используемые для второго раунда реакций ПЦР 388Β19. Праймеры конца 3' идентичны праймерам, используемым в реакциях первого раунда, поскольку они примируют к соответствующим последовательностям константной области.
Праймер Последовательность
Легкая цепь Лидер легкой цепи 383В19 (ЗЕО Ιϋ ΝΟ. 79) АТОСАСТСАСАСАТТСАаСТС
Тяжелая цепь Лидер тяжелой цепи 38ΞΒ19 (ЗЕО ТИ ΝΟ. 80) ТТТТСААТТССАОТААСТТСАСОТОТССАСТС
Таблица 5
Рассчитанная и измеренная ЬС/М8 величины молекулярной массы легкой и тяжелой цепей антитела 388Β19
Легкая цепь Тяжелая цепь
КДНК ЬС/МБ Разница кДНК ЬС/МБ Разница
МЦ385В19 23735 23736 1 48805 48826 21
- 45 025215
Список последовательностей <110> 5АК0Р1-АУЕНТ15 <120> НОВЫЕ АНТИТЕЛА К СР38 ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РАКА <130 РК2006-043 <160> 80 <170> РаРепПп νθοίοη 3.3 <210> 1 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> Миз зр.
<400> 1
Бег Туг/61у МеГ Азп
5 <210> 2 <211> П <212> БЕЛОК <213> Миг Зр, <400> 2
С1у <210> 3 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> Миз зр.
<400> 3
Агд С1у РКе А1а Туг 1 5 <210> 4 <211> 15 <212> БЕЛОК <213> Миз зр.
<400> 4
Агд А1а Бег 61и Бег Ча1 С1и Не Туг С1у Азп С1у Ь’пе МеГ Азп 15 10 15 <210> 5 <211> 1 <212> БЕЛОК <213> Миз зр.
- 46 025215 <400> 5
Агд А1а Зег Азп Ъеи СЪи Зег
1 5
<210> б
<211> Э
<212> БЕЛОК
<213> Мид зр.
<400> 6
С1п С1п Пе Азп СЪи Азр Рго РНе ТНг
1 5
<210> 7
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Миг зр.
<400> 7
АзпгЗег}'С1у МеЬ Азп
1 5
<210> 8
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> МиЗ зр.
<400> 8
Тгр Г1е Азп ТНг Туг ТНг СЪу СЪи Рго ТНг Туе АЪг Азр Азр РНе Ъуз
1 5 10 15
СЪу
<210> 9
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Миг зр.
<4 00> 9
Агд СЪу РНе Уа1 Туг
1 5
<210> 10
<211> 15
<212> БЕЛОК
<213> Ми5 5р.
<400> 10
Агд А1а Зег СЪи Зег УаЪ А1а Не Туг СЪу Азп Зег РНе Ъеи Ъуз
1 5 10 15
- 47 025215
<210> 16 <211> 11 <212> БЕЛОК
- 48 025215 <213> Миз зр.
<400> 16
Ьуз А1а Зег С1п Азр Уа1 Зег ТЬг Уа1 Уа1 А1а 1 5 10 <210> 17 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Миз зр.
<400> 17
Зег А1а Зег Туг Агд Туг Не
5 <210> 18 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Миз зр.
<400> 18
С1п С1п Н1з Туг Зег Рго Рго Туг ТЬг 1 5 <210> 19 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> Миз зр.
<400> 19
С1у Зег Тгр Мер Азп
5 <210> 20 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Миз зр.
<400> 20
Агд Не Туг Рго Б1у Азр С1у Азр 11е 11е Туг Азп С1у Азп РЬе Агд 15 Ю 15
Азр <210> 21 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> Миз зр.
<400> 21
Тгр О1у ТЬг РНе ТЬг Рго Зег РЬе Аяр Туг
- 49 025215
<210> 27 <211> 8
- 50 025215
<212> <213> БЕЛОК Миз зр.
<400> 27
Азр РЬе Аэп С1у Туг Зег Азр РЬе
1 5
<210> <211> <212> <213> 28 11 БЕЛОК Миз зр.
<400> 28
Ьуз А1а Зег С1п Уа1 Уа1 01у Зег А1а Уа1 А1а
1 5 10
<210> <211> <212> <213> 29 7 БЕЛОК Миг зр.
<400> 29
Тгр А1а Зег ТЬг Агд Шз ТЬг
1 5
<210> <211> <212> <213> 30 9 БЕЛОК Миг гр.
<400> 30
С1п С1п Туг Азп Зег Туг рго Туг ТЬг 1 5
<210> <211> <212> <213> 31 5 БЕЛОК Миз зр.
<400> 31
Азп РЬе С1у МеЬ Η1ξ
1 5
<210> <211> <212> <213> 32 17 БЕЛОК Ми 5 зр.
<400> 32
Туг Не Агд Зег С1у Зег С1у ТЬг 11е Туг Туг Зег Азр ТЬг Уа1 Ьуз 15 10 15
- 51 025215
<220>
<221> СОЗ <222> (1).,(336) <400> 37
аас Азп 1 аее Не дед Уа1 сед Ьеи асе ТЬг 5 саа <31п ссе Зег сса Рго дсе А1а есе Зег 10 еед Ьеи дсе А1а дед Ча1 есе Зег сее Ьеи 13 ддд С1у 48
сад адд дсс асе аеа есс еде ада дсс аде даа аде ди дад аее гае 96
- 52 025215
СЬп Агд АЬа ТЬг 20 11е Зег Суз Агд АЬа 25 Зег СЬи Зег УаЬ СЬи 30 Пе Туг
ддс аа! ддс ссс асд аас Сдд ССс сад сад ааа сса дда сад сса ССС 144
01 у Абп СЬу РЬе МеС Азп Тгр РЬе СЬп СЬп Ьуз Рго СЬу СЬп Рго Рго
35 40 45
а а а сЬс сСс агс СаС сдС дса Ссс аас сСа даа Ссс ддд аСс ссС дсс 192
Ьуз Ьеи Ьеи Не Туг Агд АЬа Зег Азп Ьеи СЬи Зег СЬу Не Рго АЬа
50 55 60
адд Пс ад! ддс адС ддд СсС адд аса дад ССс асе сСс асе аСС да! 240
Агд РЬе Зег СЬу Зег СЬу Зег Агд ТЬг СЬи РЬе ТЬг Ьеи ТЬг Не Азр
65 70 75 30
СС! дСд дад дсС даС дас ди дса асе СаС сас СдС саа саа аСС аа! 288
Рго УаЬ СЬи АЬа Азр Азр УаЬ АЬа ТЬг Туг Туг Суз СЬп СЬп Не Азп
55 90 95
дад даГ сса ЬЬе асд ССс ддс Сед ддд аса аад ССд даа аса ааа сдд 336
01 и Азр Рго РЬе ТЬг РЬе СХу Зег СЬу ТЬг Ьуз Ьеи СЬи Не Ьуз Агд
100 105 НО
<210> 38
<211> 112
<212> : БЕЛОК
<213> 1 Миз зр.
<400> за
Азп Не УаЬ Ьеи ТЬг СЬп Зег Рго А1а Зег Ьеи АЬа УаЬ Зег Ьеи СЬу
1 5 10 15
СЬп Агд АЬа ТЬг Не Зег Суз Агд А1а Зег СЬи Зег УаЬ СЬи Пе Туг
20 25 30
СЬу Аэп СЬу РЬе МеС Азп Тгр РЬе СЬп СЬп Ьуз Рго СЬу СЬп Рго Рго
35 40 45
Ьуз Ьеи Ьеи Не Туг Агд АЬа Зег Азп Ьеи С1и Зег СЬу Не Рго А1а
50 55 60
Агд РЬе Зег СЬу Зег СЬу Зег Агд ТЬг СЬи РЬе ТЬг Ьеи ТЬг Не Азр
65 70 75 30
Рго УаЬ С1и АЬа Азр Азр УаЬ АЬа ТЬг Туг Туг Суз СЬп СЬп Не Азп
35 90 95
СЬи Азр Рго РЬе ТЬг РЬе СЬу Зег СЬу ТЬг Ьуз Ьеи СЬи Пе Ьуз Агд
100 105 но
<210> 39 <211> 336 <212> ДНК <213> Миз зр
- 53 025215 <220>
<221> СОЗ <222> (1)..(336) <400> 39
дао Азр 1 аст Не дТа Уа1 сТд Ъеи асе ТЬг 5 саа О1п ТсТ Зег сса Рго дсТ А1а ТсТ Зег 10 ТТд Ъеи дсТ А1а дТд Уа1 ТсТ Зег ста Ъеи 15 ддд С1у 48
сад адд дсс асе аТа ТСС Тдс ада дсс адТ дад адТ ды дсТ аТТ ТаТ 96
О1п Агд А1а ТНг 11е Зег Суз Агд А1а Зег С1и Зег Уа1 А1а 11е Туг
20 25 30
ддс аат адТ ттт сТд ааа Тдд ТТс сад сад ааа ссд дда сад сса ссс 144
С1у Азп Зег РЬе Ъеи Ъуз Тгр РНе С1п С1п Ъуз Рго С1у С1п Рго Рго
35 40 45
ааа сТс сТс аТс таг сдТ дса Тсс аас ста даа ТсТ ддд аТс ссТ дсс 192
Ъуз Ъеи Ъеи 11е Туг Агд А1а Зег Азп Ъеи С1и Зег С1 у Х1е Рго А1а
50 55 60
адд ТТс адТ ддс адТ ддд ТсТ ддд аса дас ТТС асе стс асе атт ааТ 240
Агд РНе Зег 61у Зег <31у Зег О1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ъеи ТЬг 11е Азп
65 70 75 80
ССТ дгд дад дсГ дат дат дтт дса асе ТаТ Тас ТдТ сад саа аТТ аат 288
Рго Уа1 С1и А1а Азр Азр Уа! А1а ТЬг Туг Туг Суз С1п ст 11е Азп
85 90 95
дад дат ссд Рас асд ТТС дда ддд ддд асе аад сТд даа аТа ааа едд 336
С1и Азр Рго Туг ТЬг РЬе С1у С1у С1у ТЬг Ъуз Ъеи С1и 11е Ъуз Агд
100 105 110 <210> 40 <211> 112 <212> БЕЛОК <213> Миз зр
<400> * 40
Азр 1 11е Уа1 Ъеи ТЫ 5 С1п Зег Рго А1а Зег 10 Ъеи А1а Уа1 Зег Ъеи 15 С1у
О1п Агд А1а ТЬг Не Зег Суз Агд А1а Зег О1и Зег Уа1 А1а 11е Туг
20 25 30
С1у Азп Зег РЬе Ъеи Ъуз Тгр РЬе С1п С1п Ъуз Рго €1у С1п Рго Рго
35 40 45
Ъуз Ъеи Ъеи Не Туг Агд А1а Зег Азп Ъеи С1и Зег С1у 11е Рго А1а
50 55 60
Агд РЬе 5ег С1у 5ег С1у Зег С1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ъеи ТЬг Не А5П
65 70 75 80
Рго Уа1 С1и А1а Азр Азр Уа1 А1а ТЬг Туг Туг Суз СШ С1п 11е АЗП
85 90 95
- 54 025215
С1и Азр Рго Туг 100 ТЫ РЬе С1у 01у С1у 105 ТЬг Ьуз Ьеи С1и Не НО Ьуз Агд
<210> 41
<211> 324
<212> . цнк
<213> : Миз 5р.
<220>
<221> ' СОЗ
<222> (1) . .(324)
<400> 41
дас аСС дед асд дсс сад Сес сас ааа ССС аСд ССС аса сса дСС дда
Азр Не Уа1 МеС А1а С1п Зег Н1з Ьуз РЬе МеС Зег ТЬг Зег Уа1 СЬу
1 5 10 15
дас адд дСс аде асе асе Сдс аад дсе аде сад дас дед аде аеС дСС
Азр Агд Зег 11е ТЬг Суз Ьуз А1а Зег С1п Азр Уа1 5ег ТЬг Уа1
20 25 30
дСд дсс едд СаС саа сад ааа сса дда саа СсС ссС ааа сда сСд аСЬ
Уа1 А1а Тгр Туг С1и С1п Ьуз Рго С1у С1п Зег Рго Ьуз Агд Ьеи Не
35 40 45
Сас Сед дса Ссс СаС едд СаС аСС дда дСс ссС даС сдс ССс асе ддс
Туг Зег А1а Зег Туг Агд Туг 11е С1у 7а1 Рго Азр Агд РЬе ТЬг С1у
50 55 60
адС дда СсС ддд асд дас ссс асе ссс асе асе аде аде дед сад дсс
Зег С1у Зег С1у ТЬг Азр РЬе ТЬг РЬе ТЬг Не Зег Зег Уа1 С1п А1а
65 70 75 80
даа дас сед дса дСС СаС Сас СдС сад саа саС СаС адС СсС сед Сас
С1и Аэр Ьеи А1а Уа! Туг Туг Суз С1п С1п Н1з Туг Зег Рго Рго Туг
85 90 95
асд ССс дда ддд ддд асе аад сСд даа аса ааа сдд
ТЬг РЬе С1у О1у С1у ТЬг Ьуз Ьеи О1и Не Ьуз Агд
100 105
<210> 42
<211> 108
<212> : БЕЛОК
<213> 1 Миз зр.
<400> 42
Азр Не Уа1 МеС А1а С1п Зег Нхз Ьуз РЬе МеС Зег ТЬг Зег Уа1 С1у
1 5 10 15
Азр Агд Уа1 Зег Пе ТЬг Суз Ьуз АЬа Зег С1п Азр Уа1 Зег ТЫ 7а1
20 25 30
7а1 А1а Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у С1п Зег Рго Ьуз Агд Ьеи 11е
35 40 45
Туг Зег 50 АЬа Зег Туг Агд Туг 55 Не СЬу УаЬ Рго Азр 60 Агд РНе ТЬг О1у
Зег С1у Зег С1у ТНг Азр РНе ТЬг РЬе ТЬг Не Зег Зег 7а1 СЬп АЬа
65 70 75 30
С1и Азр Ьеи А1а Уа1 Туг Туг Су£ СЬп СЬп ΗΪ5 Туг Зег Рго Рго Туг
85 90 95
ТЬг РНе СЬу С1у С1у ТЬг Ьуз Ьеи СЬи Пе Ьуз Агд
100 105 <210> 43 <211> 324 <212> ДНК
<213> Миз зр.
<220>
<221> СРЗ
<222> (1) ., .(324)
<400> 43
дас асе дЬд аСд асе сад СсС сас ааа ССС ССд есс аса Сса дСС дда 48
Азр Не УаЬ МеС ТЬг СЬп Зег ΗΪ5 Ьуз РЬе Ьеи Зег ТЬг Зег УаЬ СЬу
1 5 10 15
дас адд дсс аде аСс асе Сдс аад дсс аде сад дас дСд дсс асе дсС 96
Азр Агд УаЬ Зег Не ТЬг Суэ Ьуз АЬа Зег СЬп Азр УаЬ УаЬ ТЬг АЬа
20 25 30
дес дсс Сдд ссс саа сад ааа сса дда саа СсС сса ааа сСа сСд асе 144
УаЬ АЬа Тгр РЬе СЬп СЬп Ьуз Рго СЬу СЬп Зег Рго Ьуз Ьеи Ьеи Ые
35 40 45
Ьае Сед дса ССС сас едд Сас асС дда дсс ССС дас сдс ССс асС ддс 192
Туг Зег А1а Зег Нд 5 Агд Туг ТЬг СЬу УаЬ Рго Азр Агд РЬе ТЬг СЬу
50 55 60
адС дда СсС ддд аса дас ССс асС ССс асе аСс асе адС дСд сад дсС 240
Зег СЬу Зег СЬу ТЬг Азр РЬе ТЬг РЬе ТЬг Не Пе Зег УаЬ СЬп АЬа
65 70 75 80
даа дас сСд дса дСЬ ГаС Сас сдс саа саа сас СаС асе асС ССС асд 288
СЬи Агр Ьеи АЬа УаЬ Туг Туг Суз СЬп СЬп НЬз Туг ТЬг ТЬг Рго ТЬг
85 90 95
асд ССс ддн дда ддс асе аад сСд дас ССС ада едд 324
ТЬг РЬе О1у СЬу СЬу ТЬг Ьуа Ьеи Аэр РЬе Агд Агд
100 105
<210> 44
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Ми5 5р
<400> 44
- 56 025215
Азр 1 Пе Уа1 МеС ТЬг 5 О1п Зег Ηίδ Ьуз РЬе Ьеи Зег ТЬг 10 Зег Уа1 15 31у
Азр Агд 7а1 Зег 11е ТЬг Суз Ьуз Αΐά Зег 31п Азр Уа1 Уа1 ТЬг А1а
20 25 30
Уа1 А1а Тгр РЬе С1п С1л Ьуз Рго 01 у 61п Зег Рго Ьуз Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
Туг Зег А1а Зег ΗΪ5 Агд Туг ТЬг С1у \7а1 Рго Азр Агд РЬе ТЬг С1у
50 55 60
Зег О1у Зег 31у ТЫ Азр РНе ТЬг РЬе ТЬг Не Не Зег νβΐ С1п А1а
65 70 75 ео
С1и Азр Ьеи А1а Уа1 Туг Туг Суз 01 η С1п ΗΪ5 Туг ТЬг ТЬг Рго ТЬг
85 90 95
ТЬг РЬе О1у 31у С1у ТЬг Ьуз Ьеи Азр РЬе Агд Агд
100 105 <210> 45 <211> 324 <212> ДНК
<213> 1 У1из : 5Р-
<220> <221> ι 0Ό3
<222> (1} . -(324)
<400> 45
дас асе дЬд аЬд асе сад ЫГ сас ааа Не аЬа £сс аса Гса дп дда 48
Азр ТЬг Уа1 МеЬ ТЬг С1п Зег ΗΪΞ Ьуз РЬе 11с Зег ТЬг 5ег Уа1 СЬу
1 5 10 15
дас адд ди аде аСс асе Ьдс аад дсс адр сад дН д£д ддб адЬ дсЬ 96
Азр Агд \Ла 1 Зег Не ТЬг Суз Ьуз А1а Зег С1п УаЬ Уа1 С1у Зег АЬа
20 25 30
дра дсс ьдд 5аЬ саа сад ааа сса ддд саа ЬсГ ссЬ ааа сГа егд аН 144
Уа1 А1а Тгр Туг С1л 51п Ьуз Рго СЬу С1п Зег Рго Ьуз Ьеи Ьеи 11е
35 4 0 45
Ьас Ъдд дса ГсС асе едд сас асЬ дда дГс ссЬ даЬ сдс Нс аса ддс 192
Туг Тгр А1а Зег ТЬг Агд Нгз ТЬг СЬу УаЬ Рго Азр Агд РЬе ТЬг СЬу
50 55 60
адг дда ГсГ ддд аса да! Нс ас1 Не асе аИ аде ааб дгд сад ГсЬ 240
Зег С1у Зег СЬу ТЬг Азр РЬе ТЫ Ьеи ТЬг Не Зег АЗП УаЬ СЬп Зег
65 70 75 80
даа дас Ид дса даГ ЬаГ Не бдь сад саа пь аас аде Ш ссд Гас 288
С1и Азр Ьеи А1а Азр Туг РЬе Су5 С1л СЬп Туг Азп Зег Туг Рго Туг
85 90 95
асд Нс дда ддд ддд асе аад с!д даа аЬа ааа едд 324
- 57 025215
ТЬг РНе С1у С1у 100 21у ТНг Ьуз Ьеи С1и 105 11е Ьуз Агд
<210> 46
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Низ зр.
<4ϋ0> 4 6
Азр ТЬг МеГ ТНг С1п Зег ΗΪ!5 Ьуз РНе 11е Зег ТНг Зег \Га1 С1у
1 5 10 15
Азр Агд Уа1 Зег Не ТЬг Су5 Ьуз А1а Зег С1п Уа1 7а1 СЬу Зег А1а
20 25 30
Уа1 А1а Тгр Туг С1п С1п Ьу5 Рго С1у С1п Зег Рго Ьуз Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
Туг Тгр А1а Зег ТНг Агд ΗΪ3 ТНг С1у ν&1 Рго Азр Агд РНе ТНг С1у
50 55 60
Зег С1у Зег С1у ТНг Агр РНе ТНг Ьеи ТНг 11е Зег Азп Уа1 С1п Зег
65 70 75 80
ΰΐυ Азр Ьеи А1а Азр Туг РНе Суз С1п СЬп Туг Азп Зег Туг Рго Туг
85 90 95
ТНг РНе С1у С1у С1у ТНг Ьуз Ьеи С1и Т1е Ьуз Агд
100 105 <210> 47 <211> 324 <212> ДНК <213> Миз зр <220>
<221> ' СБЗ
<222> ш.. .(324)
<400> 47
дас аГГ дгд аГд асе сад ГсГ саа ааа ГГс агд Гсс аса Гса дГа дда 48
Азр 11е УаЬ НеЬ ТНг СЬп Зег С1п Ьу5 РНе МеГ Зег ТЬг Зег Уа1 СЬу
1 5 10 15
дас адд дГс аде дгс асе где аад дсс адг сад ааГ дгд ддб асГ ааГ 96
Азр Агд Уа1 Зег Уа1 ТНг Суз Ьуз АЬа Зег С1п Азп Уа1 С1у ТНг Азп
20 25 30
дгг дсс Гдд гаг саа сас ааа сса дда саа гсс ССГ ааа аГа агд аГГ 144
УаЬ А1а Тгр Туг СЬп Нгз Ьуз Рго СЬу С1п Зег Рго Ьуз Пе МеО Пе
35 40 45
ГаЬ гсд дед гсс гсс едд Гас адГ дда дГс ссГ даг сдс ггс аса ддс 192
Туг Зег А1а Зег Зег Агд Туг Зег СЬу Уа1 Рго Аар Агд РНе ТКг СЬу
- 58 025215
50 55 60
адь дда НсП ддд аса СНН ННс асН сНс асе аНс аас ааП дОд сад 6СГ
Зег СЬу Зег С1у ТНг Ьеи РЬе ТЬг Ьеи ТНг 11е А5П Азп УаЬ СЬп Зег
65 70 75 80
даа дас Н7д дса дад Наб ННс 5д1: сад саа НаН аас аде НаН ссП сНс
С1и Азр Ьеи А1а С1и Туг РЬе Суз СЬп СЬп Туг Азп Зег Туг Рго Ьеи
85 90 95
асд ί 1 с ддс бед ддд аса аад ППд даа аНа ааа едд
ТНг РНе С1у Зег С1у ТНг Ьуз Ьеи СЬи Не Ьуз Агд
100 105 <210> 48 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Миз зр
<400> 48 СЬу
А5р 1 Не Уа1 МеЬ ТНг 5 СЬп Зег С1п Ьуз РНе 10 МеН Зег ТЬг Зег УаЬ 15
Азр Агд УаЬ Зег УаЬ ТНг Суз Ьуз АЬа Зег СЬп Азп Уа1 СЬу ТНг Азп
20 25 30
Уа! А1а Тгр Туг С1п ΗΪ5 Ьуз Рго СЬу С1п Зег Рго Ьуг Не МеН 11е
35 40 45
Туг Зег АЬа Зег Зег Агд Туг Зег С1у Уа1 Рго Азр Агд РНе ТНг СЬу
50 55 60
Зег 01 у Зег С1у ТНг Ьеи РНе ТНг Ьеи ТНг Не Азп Азп УаЬ СЬп Зег
65 70 75 80
СЬи Азр Ьеи А1а СЬи Туг РЬе Суз С1п С1п Туг Азп Зег Туг Рго Ьеи
85 90 95
ТНг РЬе С1у Зег СЬу ТНг Ьуз Ьеи С1и 11е Ьуз Агд
100 105 <210> 49 <211> 342 <212> ДНК <213> Миз зр
<220> <221> СОЗ <222> (1) . . .(342)
<400> 49 сад аНс сад ННд дНд сад НсН дда СсН дад сНд аад аад ССН дда дад
С1п 11е СЬп Ьеи Уа1 СЬп Бег СЬу Рго СЬи Ьеи Ьуз Ьуз Рго С1у С1и
1 5 10 15
- 59 025215
аса ТНг дСс Уа1 аад Ъу5 аСс Не 20 есс Зег Сдс Суз аад Ьуз дсГ А1а ссс Зег 25 ддд С1у СаС Туг асе ТНг сСс Ъеи аса ТНг 30 аде Зег Сас Туг 96
дда аСд аас Сдд дед аад сад дог сса дда аад ддС сса аад едд аСд 144
С1у МеС Агп Тгр Уа1 Ьуз С1п А1а Рго 01у Ъуг С1у Ъеи Ъу5 Тгр МеС
35 40 45
ддс Сдд аса аас асе Сас асС дда даа сса аса СаС дсС дас дас ССС 192
С1у Тгр Не Азп ТНг Туг ТЬг С1у С1и Рго ТНг Туг А1а Азр Азр РНе
50 55 60
аад дда сдС ссс дсс ССс СсС ГГд даа асе СсС дсс аде асС дсс ССС 240
Ъуз С1 у Агд РНе А1а РНе Зег Ьеи Й1и ТНг Зег А1а Зег ТНг А1а РНе
65 70 75 80
осд сад асе аас аас ССС ааа аа1: дад дас асд дсС аса СаС ССС СдС 2Й8
Ъеи С1п Пе Азп Азп Ъеи Ъуз Азп О1и Азр ТНг А1а ТНг Туг РНе Суз
85 90 95
дСа ада сдс ддд ССС дсС Сас гдд ддс саа ддд асС сСд дсс асС дСс 336
νβΐ Агд Агд С1у РНе А1а Туг Тгр С1у С1п С1у ТНг Ъеи Уа1 ТНг Уа1
100 105 110
СсС дса 342
Зег А1а
<210> 50
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Миз зр.
<4 00 > 50
О1п 11е С1п Ъеи Уа1 01п Зег 01у Рго С1и Ъеи Ъуз Ъуз Рго С1у С1и
1 5 10 15
ТНг Уа1 Ъуз Не Зег Суз Ъуз А1а Зег С1у Туг ТНг Ъеи ТНг Зег Туг
20 25 30
С1у МеС Азп Тгр ν$ι Ьуз ОШ А1а Рго С1у Ъуз С1у Ъеи Ъуз Тгр МеС
35 4 0 45
С1у Тгр 11е Азп ТНг Туг ТНг С1у С1и Рго ТНг Туг А1а Азр Азр РНе
50 55 60
Ъуг С1у Агд РНе А1а РНе Зег Ъеи С1и ТНг Зег А1а Зег ТНг А1а РНе
65 70 75 80
Ъеи С1п Не Азп Азп Ьеи Ъуз Азп С1и Азр ТНг А1а ТНг Туг РНе Су 5
85 90 95
Уа1 Агд Агд С1у РНе АЬа Туг Тгр С1у С1п С1у ТНг Ъеи Уа1 ТНг Уа1
100 105 110
- 60 025215
Зег А1а <210> 51 <211> 342 <212> ДНК <213> Миз зр.
<220>
<221> СПЗ <222> (1)..{342) <400> 51
сад С1п 1 аОс Не сад С1п ООд Ьеи дОд Уа! 5 сад С1п Осо Зег дда С1у СС0 Рго
аса дОс аад аОс Осе Оде аад дсО. ОСО
ТЬг Уа! Ьуз Пе Зег Суз Ьуз А! а Зег
20 25
дда аод аас Одд дОд аад сад дсо сса
С1у МеО АЗП Тгр Уа1 Ьуз С1п А1а Рго
35 40
ддс одд аОа аас асе Оас асО дда дад
О1у Тгр Не Азп ТЬг Туг ТЬг С1у С1и
50 55
аад дда едд ООО дсс 00с ОсО ООд даа
Ьуз С1у Агд РЬе А!а РЬе Зег Ьеи С1и
65 70
ЬОд сад аОс адь аас СОС ааа аао дад
Ьеи С1п Не Зег Азп Ьеи Ьуз Азп 51и
85
дса ада адд ддг ООО доо Оас Одд ддс
А1а Агд Агд С1у РЬе Уа! Туг Тгр С1у
100 105
ОсО дса
Зег А1а
дад сОд аад аад ссО дда дад 46
С1и Ъеи ьуз Ьуз Рго С1у С1и 10 15 ддд ОаО асе 00с аса аас ОсО 96
С1у Туг ТЬг РЬе ТЬг Аэп Зег дда аад ддО 00а аад Одд асд 144
С1у Ьуэ С1у Ьеи Оуз Тгр МеО сед аса ОаО дсо дао дас 00с 192
Рго ТЬг Туг А1а Азр Азр РЬе асе Ось дсс аде Осо дсс ОаО 240
ТЬг Зег А1а Зег Зег А1а Туг
80
дас Азр 90 асд ТЬг дсО А1а аса ТЬг ОаО Туг 00с РЬе 95 ОдО Суз 288
саа ддд асО сОд доа асо дос 336
О1п С1у ТЬг Ьеи Уа1 но ТЬг Уа1
342
<210> 52
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Миэ зр.
<400> 52
С1п 11е С!ь Ьеи Уа! <31п Зег С!у Рго
1 5
С1и Ьеи Ьуз Ьуз Рго 31у С1и 10 15
ТЬг Уа! Ьуз 11е Зег Суз Ьуз А1а Зег
20 25
С1у Туг ТЬг РЬе ТЬг Азп Зег 30
- 61 025215
С1у Мее Азп Тгр 35 Уа1 Ьуз С1п А1а 40 Рго С1у Ьуз 61 у Ьеи 45 Ьуз Тгр м©е
С1у Тгр Пе Азп ТЬг Туг ТЬг С1у С1и Рго ТЬг Туг А1а Азр Азр РЬе
50 55 60
Ьуз С1у Агд РЬе А1а РЬе Зег Ьеи С1и ТЬг Зег А1а Зег Зег А1а Туг
65 70 75 80
Ьеи О1п Пе Зег А5П Ьеи Ьуз Азп С1и Азр ТЬг А1а ТЬг Туг РЬе Суз
85 90 95
А1а Агд Агд 02 у РЬе 7а1 Туг Тгр С1у С1п С1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1
100 105 но
Зег А1а
<210> <211> <212> , <213> ! 53 360 цнк Миз : Зр.
<220> <221> СОЗ
<222> ¢1). .(360)
<400> 53
Сад дее сад сее сад сад есе ддд дсе дад сед дса ада ссе ддд асе 48
С1п Уа1 О1п Ьеи 01п С1п Зег 61у А1а О1и Ьеи А1а Агд Рго С1у ТЬг
1 5 10 15
еса дед аад Ид есс еде аад дсе есе ддс еас асе еее асе дас еас 95
Зег Уа1 Ьуз Ьеи. Зег Суз Ьуз А1 а Зег С1у Туг ТЫ РЬе ТЬг Азр Туг
20 25 30
едд аед сад едд деа ааа сад адд ссе дда сад дде сед дад едд аее 144
Тгр Мее 01п Тгр Уа1 Ьуз О1п Агд Рго 01 у С1п С1у Ьеи С1и Тгр 11е
35 4 0 45
ддд асе аее еае ссе дда дае дде дае асе ддд еас дсе сад аад еес 192
С1у ТЬг Пе Туг Рго С1у Азр С1у Αερ ТЬг С1у Туг А1а О1п Ьуз РЬе
50 55 60
аад ддс аад дсс аса еед асе дед дае ааа есс есс ааа аса дес еас 240
Ьуз О1у Ьуз А1а ТЬг Ьеи ТЬг А1а Азр Ьуз Зег Зег Ьуз ТЬг Уа1 Туг
65 70 75 80
аед сас с5с аде аде еед дсе есе дад дас есе дед дес еае еас еде 288
Мее ΗΪ3 Ьеи Зег Зег Ьеи А1а Зег С1и Азр Зег А1а Уа1 туг Туг Суз
85 90 95
дса ада ддд дае еас еас дде аде аас есе еед дас еае едд дде саа 336
А1а Агд 31 у Азр Туг Туг С1у Зег Аэп Зег Ьеи Азр Туг Тгр С1у С1п
100 105 ПО
дда асе еса дес асе дес есс еса 360
- 62 025215
СЬу ТЬг Зег 115 УаЬ ТЪг Уа1 Зег Зег 120
<2Ю> 54
<211> 120
<212> БЕЛОК
<213> Миз зр»
<400> 54
СЬп УаЬ С1п Ьеи СЬп С1п Зег СЬу АЬа СЬи Ьеи А1а Агд Рго СЬу ТЪг
1 5 10 15
Бег УаЬ Ьуз Ьеи Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг ТНг РЪе ТЪг Азр Туг
20 25 30
Тгр МеГ СЬп Тгр УаЬ Ьуз СЬп Агд Рго СЬу СЬп 01у Ьеи СЬи Тгр Не
35 40 45
СЬу ТЪг Не Туг Рго СЬу Азр СЬу Азр ТЪг СЬу Туг А1а СЬп Ьуз РЪе
50 55 60
Ьуз СЬу Ьуз АЬа ТЪг Ьеи ТЪг АЬа Азр Ьуз Зег Зег Ьуз ТЪг УаЬ Туг
65 70 75 ео
Мег ΗΪ5 Ьеи Зег Зег Ьеи АЬа Зег СЬи Азр Зег АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа Агд СЬу Азр Туг Туг СЬу Зег Азп Зег Ьеи Азр Туг Тгр СЬу СЬп
100 105 110
СЬу ТЪг Зег УаЬ ТЪг УаЬ Зег Зег
115 220 <210> 55 <211> 357 <212> ДНК <213> Миз зр <220>
<221> 1 СО5
<222> {1) ,. .(357)
<400> 55
сад дГс сад гиа сад саа ГеГ дда ссГ даа СГд дпд адд ССЁ ддд дсс
СЬп Уа1 СЬп Ьеи СЬп СЬп Зег С1у Рго СЬи Ьеи Уа1 Агд Рго С1у АЬа
1 5 10 15
Гса дьд аад аГГ Гсс где ааа асг ГСГ ддс Гас дса ГГС адЁ ддс Гсс
Зег УаЬ Ьуз Не Зег Суз Ьуз ТЪг Зег СЬу Туг А1а РЪе Зег С1у Бег
20 25 30
Ъдд аГд аас Ьдд дрд аад сад адд ССГ дда сад ддб сГа дад Ьдд аГГ
Тгр Мег Азп Тгр УаЬ Ьуз СЬп Агд Рго СЬу СЬп С1у Ьеи 61и Тгр Не
- б3 025215
35 40 45
дда сдд ап Ъа1 ссд дда даЬ дда даЬ аЪс аи Ьас ааГ ддд ааЬ Нс 192
СЬу Агд Не Туг Рго СЬу А5р СЬу Азр ЬЬе Не Туг Аэп СЬу А5П РЬе
50 55 60
адд дас аад дСс аса Ыд дса дас ааа ;сс ЬСС аас аса дсс Гас 240
Агд Азр Ьуз Уа1 ТЬг Ьеи Зег АЬа Азр Ьуз Зег бег Азл ТЫ АЬа Туг
65 70 75 80
агд сад сГс аде аде съд асе ГсЬ дед дас ГсГ дед дне СаС ЫН 288
МеГ С1п Ьеи Зег 5ег Ьеи ТЫ Зег УаЬ Азр Зег АЬа УаЬ Туг РЬе Суз
85 90 95
гсд ада Гдд ддд аса ш асд ссд адГ Ы дас 5аЬ Ьдд ддс саа ддс 336
Зег Агд Тгр 31 у ТЬг РЬе ТЬг Рго Зег РЬе Азр Туг Тгр СЬу СЬп СЬу
100 105 НО
асе асО сЬс аса дйс Ьсс Оса 357
ТНг ТЬг Ьеи ТЬг УаЬ Зег Зег
115
<210> 56
<211> 119
<212> 1 БЕЛОК
<213> 1 Миз зр.
<400> 56
С1л УаЬ СЬп Ьеи С1п С1л Зег СЬу Рго СЬи Ьеи УаЬ Агд Рго СЬу АЬа
1 5 10 15
Зег УаЬ Ьуз Пе Зег Суз Ъуз ТЬг Зег СЬу Туг АЬа РЬе Зег СЬу Зег
20 25 30
Тгр МеС Азп Тгр Ш Ьуз 01п Агд Рго СЬу СЬп СЬу Ьеи СЬи Тгр Ые
35 40 45
СЬу Агд 11е Туг Рго СЬу А5р СЬу Азр Не ЬЬе Туг Азп СЬу Азп РНе
50 55 60
Агд А$р Ьуз УаЬ ТЬг Ьеи Зег АЬа Азр Ъуз Зег Зег Азп ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
МеГ СЬп Ьеи Зег 5ег Ьеи ТЬг Зег УаЬ Азр Зег АЬа УаЬ Туг РНе Суз
85 90 95
Зег Агд Тгр С1у ТЬг РЬе ТЬг Рго Зег РЬе Азр Туг Тгр СЬу СЬп СЬу
100 105 но
ТЪг ТНг Ъеи ТНг УаЬ Зег Зег 115 <210> 57 <211> 351
- 64 025215 <212> ДНК <213> Μιΐ5 зр.
<220>
<221> СОЗ <222> (1) .. (351) <400> 57 дас дбд аад сбд дед дад бсб ддд дда ддс бба дбд аад ссб дда ддд Аэр Уа1 Ьуз Ьеи Ϋβΐ <31и Зег С1у С1у 31у Ьеи Уа1 Ьуэ Рго С1у С1у 15 10 15
бсс сбд ааа сбс (.сс иди даа дсс бсб дда ббс асб ббс адЬ аде баб 96
Зег Ьеи Ьуз Ьеи Йс-г Суз С1и А1а Зег 31у РНе ТНг РНе Зег Зег Туг
20 25 30
асе сбд беи гдд 9ϊί еде сад асб сед дад асд адд сбд дад бдд дбе 144
ТНг Ьеи Зег Тгр Уа1 Агд 01п ТНг Рго С1и ТНг Агд Ьеи С1и Тгр νβΐ
35 40 45
дса асе абб адб абб ддб ддб сдс бас асе баб ЬаЬ сса дас адб дбд 192
А1а ТНг Не Зег Не С1у С1у Агд Туг ТНг Туг Туг Рго Азр Зег νβΐ
50 55 60
дад ддс еда ббс асе абс бсс ада дас ааб дсс аад аас асе сбд бас 240
С1и С1у Аид РНе ТНг Не Зег Агд Азр АЗП А1а Ьуз Азп ТЬг Ьеи Туг
65 70 75 ео
сбд саа абд аас адб сбд аад бсб дад дас аса дсс абд баб бас бдб 288
Ьеи С1п Меб Азп Зег Ьеи Ьуз Зег С1и Азр ТНг А1а Меб Туг Туг Су5
85 90 95
аса ада даб бб б ааб ддб бас бсб дас ббс бдд ддс саа ддс асе асб ззе
ТНг Агд Азр РНе АЗП С1у Туг Зег Азр РНе Тгр С1у С1п С1у ТЬг ТНг
100 105 НО
351 сбс аса дбе бсс бса Ьеи ТНг Уа1 Зег Зег 115
<210 > 58
<211> 117
<212> БЕЛОК
<213> Миз зр.
<400> 58
Азр Уа1 Ьуз Ье
Зег Ьеи Ьуз Ьеи Зег Суз Ии А1а Зег С1у РНе ТНг РНе Зег Зег Туг 20 25 30
ТНг Ьеи Зег Тгр ν&1 Агд О1п ТНг Рго О1и ТНг Агд Ьеи С1и Тгр Уа1 35 40 45
А1а ТНг Не Зег Не С1у Э1у Агд Туг ТЬг Туг Туг Рго Азр Зег Уа1 50 55 50
- 65 025215
61и С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп АХа Ьуз Азп ТЬг Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи 61п МеЬ Азп Зег Ьеи Ьуз Зег С1и Азр ТЬг А1а меь Туг Туг Суз
85 90 95
ТЬг Агд Азр РЬе Азп 61 у Туг Зег Азр РЬе Тгр С1у С1п С1у ТЬг ТЬг
100 105 110
Ьеи ТЬг 7а1 Зег Бег
115 <210> 59 <211> 360 <212> ДНК <213> Миз зр
<220> <221> ( <222> ооз (1) .. . г360>
<400> 1 59
ааЪ дса сад сЬд дЬа дад ЬсЬ ддд ддэ ддс ССа дьд сад ССГ дда ддд
Азп Уа1 31п Ьеи Уа1 б!и Зег С1у С1у 61у Ьеи Уа1 О1п Рго 61у С1у
1 5 10 15
ьсс сдд ааа сСс Тсс ГдГ дса дсс ГсГ дда 11с асе 11.'.': адг аас ссг
Зег Агд Ьуз Ьеи Бег Суз А1а А1а Зег 61 у РЬе ТЬг РЬе Зег Азп РЬе
20 25 30
дда аЬд сас 5дд дЬЬ сдГ сад дсь сса дад аад дд! сТд дад тдд дЬс
С1у МеЬ ΗΪΞ Тгр Уа1 Агд С1п А1а РГО 61и Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр νβΐ
35 40 45
дса 1ас а С Ъ сде адГ ддс ад£ ддЬ асе аЬс Сас ОаС Ьса дас аса д!д
АЬа Туг Не Агд Бег С1у Зег С1у ТЬг 11е Туг Туг Бег Азр ТЬг Уа1
50 55 60
аад ддс еда ГСс асе а£с Ьсс ада дас ааС ссс аад аас асе сЬд СЬС
Ьуз 61у Агд РЬе ТЬг Пе Зег Агд Азр Азп Рго Ьуз Азп ТЬг Ьеи РЬе
65 70 75 эо
сьд саа аЬд асе адЬ сЬа адд СсЬ дад дас асд дсс асд ЬаЬ Ьас тдь
Ьеи 61п МеЬ ТЬг Бег Ьеи Агд Бег С1и Азр ТЬг А1а МеЬ Туг Туг Суз
85 90 95
дса ада Ссс £ас ЬаЬ даГ гес ддд дсс Ьдд дсЬ Ьас Ьдд ддс саа
А1а Агд Зег Туг Туг Азр РЬе С1у А1а Тгр РЬе А1а Туг Тгр 61у С1п
100 105 110
ддд асе сЬд дСс асг дьс Ось дса 360
С1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег А1а
115 120 <210> 60 <211> 120 <212> БЕЛОК
- 66 025215 <213> Миз зр <400 60
Азп УаЬ 1 СЬп Ьеи УаЬ 5 СЬи Зег СЬу СЬу СЬу 10 Ьеи УаЬ СЬп Рго СЬу 15 СЬу
Зег Агд Ьуз Ьеи Зег Суз АЬа АЬа Зег СЬу РЬе ТЬг РЬе Зег Азп РЬе
20 25 30
СЬу МеН ΗΪ5 Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬи Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр УаЬ
35 40 45
АЬа Туг Не Агд Зег СЬу Зег СЬу ТЬг I Ье Туг Туг Зег Азр ТЬг УаЬ
50 55 60
Ьуз 31 у Агд РЬе ТЬг Не Зег Агд Азр Азп Рго Ьуг Азп ТЬг Ьеи РЬе
65 20 75 ео
Ь^и СЬп МеН ТЬг Зег Ьеи Агд Зег СЬи Азр ТЬг АЬа МеН Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа Агд Зег Туг Туг Агр РЬе СЬу АЬа Тгр РЬе АЬа Туг Тгр СЬу СЬп
100 105 но
СЬу ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег АЬа
115 120
<2Ю> 61
<211> 324
<212> , ДНК
<213> Нотпо заргепз
<220> <221> ' СОЗ
<222> (1) - , . (324)
<4 00> 61
дан аНс дна аНд асе сад нсс сас сНд адН аНд адН асе Нсс енд дда 48
Азр Не УаЬ МеН ТЬг С1п Зег Ηϊ 3 Ьеи Зег Мен Зег ТЬг Зег Ьеи СЬу
1 5 10 15
даН ссН дЪд Нса аНс асН Ндс аад дсс Нса сад дан днд аде асе дНс 96
Азр Рго Уа1 Зег Пе ТЬг Суз Ьуз АЬа Зег СЬп Азр УаЬ Зег ТЬг УаЬ
20 25 30
днн дсН ъдд Наг сад сад аад ссс ддд саа Нса ссс ада сдН снс аНс 144
Уа1 АЬа Тгр Туг СЬп С1п Ьуз Рго СЬу СЬп Зег Рго Агд Агд Ьеи 11е
35 40 45
Нас Пса дса Нса Нас сдН Нас аНс ддд дНд ссН дас еда ИПН ас Ь ддс 192
Туг Зег АЬа Зег Туг Агд Туг Не СЬу УаЬ РГО АЗр Агд РЬе ТЬГ СЬу
50 55 60
ПсП ддс дсГ ддс аса дан ННс асе ннн аса аНН адН Нсс дне сад дсс 240
- 67 025215
Зег СЬу АЬа СЬу ТЪг Азр РНе ТЪг РЬе ТЫ Не Зег Зег УаЬ Е1п А1а
65 70 75 80
даа дас сгд дсс дгд Гас Нас Где сад сад сас Гас адГ есс сса Гас
СЬи Азр Ьеи АЬа УаЬ Туг Туг Суз СЬп СЬп НЬз Туг Зег Рго Рго Туг
85 90 95
асГ ГГс ддд дда ддд асг аад сгс даа агс ааа сдГ
ТЪг РЪе СЬу СЬу СЬу ТЬг Ьуз Ьеи СЬи Не Ьуз Агд
100 105
<210> 62
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Ното зарЬепз
<400> 62
Азр Не УаЬ Мег ТЫ СЬп Зег ΗΪ5 Ьеи Зег МеГ Зег ТЬг Зег Ьеи С1у
1 5 10 15
Азр Рго УаЬ Зег 11е ТЬг Суз Ьуз АЬа Зег СЬп Азр УаЬ Зег ТНг \7а1
20 25 30
УаЬ АЬа Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Рго СЬу СЬп Зег Рго Агд Агд Ьеи Не
35 40 45
Туг Зег АЬа Зег Туг Агд Туг Не СЬу УаЬ Рго Азр Агд РЬе ТНг 61у
50 55 60
Зег СЬу АЬа СЬу ТЬг Азр РНе ТЪг РЪе ТЪг Не Зег Зег УаЬ С1п А1а
65 70 75 80
СЬи Азр Ьеи АЬа УаЬ Туг Туг Суз СЬп СЬп НЬз Туг Зег Рго Рго Туг
85 90 95
ТЪг РЪе СЬу СЬу СЬу ТЪг Ьуз Ьеи СЬи 11е Ьуз Агд
100 105
<210> 63
<211> 324
<2Ь2> , ИНК
<21 Э> Ното зар: _епз
<220>
<221> <222> СОЗ (11 . •(3211
<400 63
дас аГГ дгг аГд дсЬ саа аде саг егд гсГ аГд аде аса ГсГ СГд дда
Азр Не УаЬ МеГ АЬа СЬп Зег ΗΪ 5 Ьеи Зег Мег Зег ТЪг Зег Ьеи С1у
1 5 10 15
даГ ссГ дгд Гсс аГс асГ Где ааа дсс адГ саа дас дГд ГсГ аса 9ΐΐ
- б8 025215
А5р Рго Уа1 Зег 20 Пе ТЬг Суз Ьуз А1а 25 Зег ст Азр Уа1 Зег 30 ТЬг νπ
дбб дса бдд РаР саа сад аад сса ддс сад бса ССС ада едд сбс абб
Уа1 А1а Тгр Туг С1п С1п Ьуэ Рго С1у С1п Зег Рго Агд Агд Ьеи Пе
35 40 45
бас бса дсб РсЬ бас еда бас абс ддд дбе ссб дас ада ббб аса ддб
Туг Зег А1а Зег Туг Агд Туг Пе С1у Уа1 Рго Азр Агд РЬе ТЬг С1у
50 55 60
адб ддд дсс ддр асб дас ббс асб ббб асб абс бса бсс дба саа дсс
Зег С1у А1а <31 у ТЬг Аар РЬе ТЬг РЬе ТЬг Не Зег Зег νβΐ С1п А1а
65 70 75 80
даа дас сбд дса дба баб бас бде сад саа саб баб бес сса ссс бас
С1и Азр Ьеи А1а 7а1 Туг Туг Суз ст ст Нгз Туг Зег Рго Рго Туг
85 90 95
аса ббс ддс ддд ддь асб аад сбд даа абб ааа едб
ТЬг РЬе С1у Е1у С1у ТЬг ЬуЗ Ьеи 61и 11е Ьуз Агд
100 105
<210> 64
<211 > 108
<212> ’ БЕЛОК
<213> Пото заргепз
<4 00> 64
Азр Не ν&ι Меб А1а от Зег нт Ьеи Зег Меб Зег ТЬг Зег Ьеи С1у
1 5 10 15
Азр Его Уа1 Зег 11е ТЬг Суз Ьуз А1а Зег С1п Азр Уа1 Зег ТЬг Уа1
20 25 30
Уа1 А1а Тгр Туг С1п ст Ьуз Рго С1у С1п Зег Рго Агд Агд Ьеи Не
35 40 45
Туг Зег А1а Зег Туг Агд Туг Не СХу Уа! Рго Азр Агд РЬе ТЬг С1у
50 55 60
Зег С1у А1а С1у ТЬг Азр РЬе ТЬг РЬе ТЬг Не Зег Зег Уа1 ст А1а
65 70 75 80
С1и Агр Ьеи А1а νβΐ Туг Туг Суз С1п ст Ηΐ3 Туг Зег Рго Рго Туг
85 90 95
ТНг РЬе О1у С1у С1у ТЬг Ьуз Ьеи С1и Не Ьуз Агд
100 105
<210> 65
<211> 360
<212> ДНК
<213> Ното заррепг
- 69 025215
<22 0> <221> < <222> :эз
!1) - . ,(360)
<400> 1 65
сад дГа сад с!с дЬЬ сад Ссс ддс дсс дад д!а дс! аад сс! дд! ас! 48
СЬп УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬп Зег СЬу АЬа СЬи УаЬ АЬа Ьуз Рго СЬу ТЬг
1 5 10 15
Гсс д!а ааа Пд Гсс !д! аад дс! Гсс ддд Гас аса !!! аса дас Гас 96
Зег УаЬ Ьуз Ьеи Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг ТЬг РЬе ТЬг Азр Туг
20 25 30
агд сад !дд д!а ааа сад сдд сса дд! сад ддс с!д дад 1дд а!! 144
Тгр Ме! СЬп Тгр УаЬ Ьуз СЬп Агд Рго СЬу СЬп СЬу Ьеи СЬи Тгр 11е
35 40 45
дда аса аГа Га! ссс ддс дас ддс дас аса ддс ГаГ дсс сад аад !!! 192
СЬу ТЬг ЬЬе Туг Рго СЬу Азр СЬу Азр ТЬг СЬу Туг АЬа СЬп Ьу5 РЬе
50 55 60
саа ддс аад дса асе с!! ас! дег да! ааа !с! ГСС аад ас! д!с Гас 240
СЬп С1у Ьуз АЬа ТЬг Ьеи ТЬг АЬа Азр Ьуз Зег Зег Ьуз ТЬг УаЬ Туг
65 70 75 80
агд МеГ са! НЬз с!д Ьеи !С! Зег Гсс Зег 85 !!д Ьеи дса АЬа !с! Зег дад СЬи даЬ Азр 90 аде Зег дс! АЬа д!с УаЬ !а! Туг гас Туг 95 Гд! Суз 288
дс! адд ддд дас !ас ГаГ ддд Гса ааГ Ссс егд да! гас !дд ддс сад 336
АЬа Агд СЬу Азр Туг Туг СЬу Зег Азп Зег Ьеи Азр Туг Тгр СЬу СЬп
100 105 но
ддс асе ад! дГс асе д!д аде аде 360
С1у ТЬг Зег УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115 120 <210> 65 <211> 120 <212> БЕЛОК
<213> : Нотс 5арЬепз
<400> 66
СЬп Уа1 СЬп Ьеи УаЬ СЬп 5ес СЬу АЬа СЬи УаЬ АЬа Ьу5 Рго СЬу ТЬг
1 5 10 15
Зег УаЬ Ьу5 Ьеи Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг ТЬг РЬе ТЬг Азр Туг
20 25 30
Тгр Ме! СЬп Тгр УаЬ Ьуз С1п Агд Рго СЬу СЬп СЬу Ьеи СЬи Тгр Ые
35 40 45
СЬу ТЬг Не Туг Рго СЬу Азр СЬу Азр ТЬг СЬу Туг АЬа СЬп Ьуз РЬе
50 55 60
СЬп СЬу Ьуз АЬа ТЬг Ьеи ТЬг АЬа Аэр Ьуз Зег Зег Ьуз ТЬг УаЬ Туг
- 70 025215
65 70 75 80
МеН НЬз Ьеи Зег Зег Ьеи АЬа Зег СЬи Азр Зег АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа Агд СЬу Аар Туг Туг СЬу Зег Азп Зег Ьеи Азр Туг Тгр СЬу С1п
100 105 110
СЬу ТЬг Зег УаЬ ТЬг Уа1 Зег Зег
115 120
<210> 67
<211> 324
<212> ДНК
<213> Кото зарЬепз
<220>
<221> СЭЗ <222> (1)..(324) <400> 67
дас Азр 1 асе ТЬг дНд УаЬ аНд Мен асе ТЬг 5 сад С1п Нсс Зег ссс Рго бсс Зег асе ТЬг 10 аНс Не Нсс Зег асе ТЬг НсН Зег дНд УаЬ 15 ддс СЬу
дас едд дНд Нсс аНс асе ндн аад дсс Нсс сад д+д д^д ддс НСС дсс
Азр Агд УаЬ Зег Не ТЬг Суз Ьуз А1а Зег С1п УаЬ УаЬ СЬу Зег АЬа
20 25 30
дНд дсс ндд НаН сад сад аад ССН ддс сад Нсс ссН аад сНд сНд аНс
Уа1 АЬа Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз РГО С1у СЬп Зег Рго Ьуз Ьеи Ьеи Т1е
35 40 45
Нас Ндд дсс Нсс асе едд сан асе ддс дНд ссН дас едд ННс асе ддс
Туг Тгр АЬа Зег ТЬг Агд НЬз ТЬг С1у УаЬ Рго Азр Агд РЬе ТЬг С1у
50 55 60
Нсс ддс аде ддс асе дас ННс асе сбд асе аНс Нсс аас дед сад Нсс
Зег СЬу Зег С1у ТЬг Азр РНе ТНг Ьеи ТНг Ые Зег Азп Уа1 СЬп Зег
65 70 75 80
дас дас сНд дсс дас Нас ННС Ндс сад сад Нас аас Нсс бас ССН Нас
Азр Азр Ьеи АЬа Азр Туг РЬе Суз С1п СЬп Туг Азп Зег Туг Рго Туг
35 90 95
асе ппп ддс ддс дда аса аад сНд дад аНс аад сдН
ТЬг РЬе СЬу СЬу СЬу ТЬг Ьуз Ьеи С1и ТЬе Ьуз Агд
100 105
144
192
240
288
324
<210 68
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Ното эарбепз
<400> 68
Азр ТЬг УаЬ Меб ТНг С1п Зег Рго Зег ТНг Г1е Зег ТЬг Зег УаЬ СЬу
1 5 10 15
- 71 025215
Азр Агд УаЬ Зег Не ТЫ Суз Ьуз АЬа Зег СЬп УаЬ УаЬ СЬу 5ег АЬа 20 25 30
УаЬ АЬа Тгр Туг СЬп СЬп Ъуз Рго СЬу СЬп Зег Рго Ьуз Ьеи Ьеи Не 35 40 45
Туг Тгр АЬа Зег ТКг Агд НЬз ТЬг СЬу УаЬ Рго Азр Агд РНе ТНг СЬу 50 55 60
Зег СЬу Зег СЬу ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг Ые Зег Азп УаЬ СЬп Зег 65 70 75 80
Азр Азр Ьеи АЬа Азр Туг РЬе Суз СЬп СЬп Туг Азп 5ег Туг Рго Туг 85 90 95
ТЬг РНе СЬу СЬу СЬу ТЬг Ьуз Ьеи СЬи Ые Ьуз Агд 100 105 <210> 69 <211> 324 <212> ДНК <213> Ното зарЬепз
<220> <221> ( <222> оэз (1) .. .(324)
<400> 69
дас асе дЬд аГд асе сад Гсс ссс Ьсс Гсс аГс Гсс асе Гсс аГс ддс 48
Азр ТЬг УаЬ МеГ ТЬг С1п Зег Рго Зег Зег Пе Зег ТНг Зег Не ЗЬу
1 5 10 15
дас едд дьд ГСС аГс асе гди аад дсс Гсс сад дГд дгд ддс ГСС дсс 96
Азр Агд УаЬ Зег Не ТЬг Суз Ьуз А1а Зег С1п Уа1 Уа1 О1у Зег АЬа
20 25 30
дГд дсс ьдд ГйГ сад сад аад ссГ ддс сад Гсс ссГ аад сГд сГд асе 144
Уа1 А1а Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго <31у 61п Зег Рго Ьуз Ьеи Ьеи Ые
35 40 45
Гас гдд дсс Гсс асе едд саг асе ддс д^д ССГ дсс едд ГГс асе ддс 192
Туг Тгр А1а Зег ТЬг Агд Н1з ТЬг С1у Уа1 Рго А1а Агд РЬе ТНг СЬу
50 55 60
Гсс ддс аде ддс асе дас ГГс асе сГд асе агс гсс аас дгд сад Нос 240
Зег С1у Зег С1у ТЬг Азр РНе ТЬг Ьеи ТНг 11е Зег А5П Уа1 С1п Зег
65 70 75 80
дад дас егд дсс дас гас ГГс Где сад сад Гас аас Гсс Гас ссГ Нас 288
С1и Азр Ьеи АЬа Азр Туг РНе Суз С1п СЬп Туг Азп Зег Туг Рго Туг
Θ5 90 05
асе ггг ддс ддс дда аса аад сГд дад агс аад сдГ 324
ТЬг РЬе С1у С1у 31у ТЬг Туз Ьеи СЬи Не Ьуз Агд
100 105
- 72 025215 <210> 70 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Ното зарЬепз <400> 70
Азр 1 ТЬг УаЬ МеЁ ТЬг 5 СЬп Зег Рго Зег Зег 10 Ые Зег ТЬг Зег 11е 15 СЬу
Азр Агд УаЬ Зег 11е ТЬг Суз Ьуз А1а Зег СЬп Уа1 УаЬ СЬу Зег АЬа
20 25 30
Уа1 АЬа Тгр Туг С1п СЬп Ьуг Рго СЬу С1п Зег Рго Ьуз Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
Туг Тгр АЬа Зег ТЬг Агд НЬз ТЬг СЬу Уа1 Рго А1а Агд РЬе ТЬг СЬу
50 55 60
Зег СЬу Зег С1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг Ые Зег Азп УаЬ СЬп Зег
65 70 75 80
СЬи Азр Ъеи А1а Азр Туг РЬе Суз СЬп СЬп Туг Азп Зег Туг Рго Туг
85 90 95
ТЬг РЬе СЬу С1у СЬу ТЬг Ьуз Ьеи С1и Ые Ьуз Агд
100 105
<2Ь0> 71
<211> 351
<212> , цнк
<213> ' Ното 5ар1епз
<220>
<221> ' СОЗ
<222> (ίί · .(351)
<400> 71
дад дьд сад сЁд дбд дад ЁСЁ ддс ддс дда сЬд дГд аад ССЁ ддс ддс 48
СЬи Уа1 С1п Ьеи УаЬ СЬи Зег СЬу СЬу СЬу Ьеи νθι Ьуг Рго СЬу СЬу
1 5 10 15
ёсс сОд адд СЁд тсс ЬдЬ дад дсс ёсс ддс ЁЁС асе ЁЁС ЁСС ЁСС Ёас 96
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз С1и А1а Зег СЬу РЬе ТНг РЬе Зег Зег Туг
20 25 30
асе с£д ёсс Ёдд дьд адд сад асе ссё ддс аад ддс сЬд дад Ёдд д^д 144
ТЬг Ьеи Зег Тгр УаЬ Агд СЬп ТЫ Рго СЬу Ьуз С1у Ьеи СЬи Тгр УаЬ
35 40 45
дсс асе асе ёсс аЬс ддс ддс адд Ьас асе Ьае Ьас ССЁ дас ЁСС дрд 192
АЬа ТЬг ТЬе Зег 11е С1у СЬу Агд Туг ТЬг Туг Туг Рго Азр Зег УаЬ
50 55 60
- 73 025215
аад Ьуз 65 ддс С1у едд Агд ССс РЬе асе ТЬг абс Пе 70 Ссс Зег едд Агд дас Аэр аас Азп дсс АХа 75 аад Ъуз аас Азп асе ТЬг сСд Ьеи Сас Туг 80
сСд сад аСд аас Ссс сед аад Ссс дад дас асе дсс асд Сас Сас СдС
Ьеи С1п Мес Азп Бег Ьеи Ьуз Зег СЬи Азр ТНг АЬа МеС Туг Туг Суз
85 90 95
асе едд дас ССс аас ддс Сас Ссс дас ССс ьдд ддс сад ддс асе аса
ТЬг Агд Азр РЬе Азп СЬу Туг Зег А5р РНе Тгр С1у СЬп СЬу ТЬг ТЬг
100 105 НО
сСд асе дСд ССС Ссс
Ъеи ТЬг УаЬ 5ег Зег
115 <210> 72
<211> 117 <212> БЕЛОК СЬи 5ег СЬу С1у С1у 10 Ъеи УаЬ Ьуз Рго О1у 15 С31у
<213> Ното зарЬепэ Ьеи Уа1 5
<400> С1и Уа1 1 72 ст
Зег Ъеи Агд Ьеи Зег Суз СЬи АЬа Зег С1у РНе ТЬг РНе Зег Зег Туг
20 25 30
ТЬг Ъеи Зег Тгр Уа1 Агд СЬп ТНг Рго С1у Ъуз СЬу Ъеи СЬи Тгр Уа1
35 40 45
АЬа ТНг Не Зег 11е СЬу 61 у Агд Туг ТНг Туг Туг Рго Аэр Зег Уа1
50 55 60
Ъу5 СЬу Агд РНе ТНг Не Зег Агд Азр Азп АЬа Ьуз Азп ТНг Ъеи Туг
65 70 75 80
Ъеи СЬп МеС Азп Зег Ъеи Ъуз Зег <31и Азр ТНг АЬа МеС Туг Туг Суз
85 90 95
ТНг Агд Азр РЬе Азп СЬу Туг Зег Азр РЬе Тгр СЬу СЬп СЬу ТНг ТНг
100 105 110
Ьеи ТНг Зег Зег
115 <210> 73 <211> 36 <212> ДНК <213> Миз зр.
<400> 73 ддаддаЬсса ЬадасадаНд ддддсдссдь ЬРсддс 36
- 74 025215
<210> 74
<211> 32
<212> днк
<213> Миз зр.
<400> 74
ддадданссс НСдассаддс аНссСададС са 32
<210> 75
<211> 32
<212> ДНК
<213> Миз зр
<220>
<221> т13с_£еаПиге <222> (1) . .{32) <223> смешанные основания определяются следующим образом: Н=А+Т+С, 5-С+С, ¥=С+Т, КС + Т, М-А+С, В—А+С, ОТ—А+Т, V = А+С+С, N = А+С+С+Т <400> 75 сННссддааН НсзагдНпта дсНдзадзад Нс 32 <210> 76 <211> 35 <212> ДНК <213> Миз зр.
<220>
<221>
<222>
<223>
У=С+Т, гп1зс_£еаНиге (1) ♦.{35>
смешанные основания определяются следующим образом: К=
О+Т, И'А+С, Р.-А+С, И=А+Т, V “ А+С+С, N = А+С+С+Т
Н=А+Т+С, 5=С+С, <400> 76 сННссддааН нсзагдНпта дсНдзадзад Нсмдд <210> 77 <211> 31 <212> ДНК <213> Миг зр.
<220>
<221> Ш15С_£еаНиге <222> (1)..(31) <223> смешанные основания определяются следующим образом: Н=А+Т+С, 5=С+С, Ύ-С+Т, К=
С+Т, М=А+С, В—А+С, И-А+Т, V - А+С+С, N = А+С+С+Т <400> 77 ддадсНсдау аННдНдтНза стсагмсПтс а 31
<210> 78
<211> 46
<212> ДНК
- 75 025215

Claims (26)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Антитело или его связывающийся с эпитопом фрагмент, которые специфически связывают С.Н38. отличающиеся тем, что указанные антитело или его связывающийся с эпитопом фрагмент включают по меньшей мере одну тяжелую цепь и по меньшей мере одну легкую цепь, где указанная тяжелая цепь включает три последовательные определяющие комплементарность области, имеющие аминокислотные последовательности, представленные БЕЦ ГО N0: 1, 2 и 3, и указанная легкая цепь включает три последовательные определяющие комплементарность области, имеющие аминокислотные последовательности, представленные БЕЦ ГО N0: 4, 5 и 6; или указанная тяжелая цепь включает три последовательные определяющие комплементарность области, имеющие аминокислотные последовательности, представленные БЕЦ ГО N0: 7, 8 и 9, и указанная легкая цепь включает три последовательные определяющие комплементарность области, имеющие аминокислотные последовательности, представленные БЕЦ ГО N0: 10, 11 и 12; или указанная тяжелая цепь включает три последовательные определяющие комплементарность области, имеющие аминокислотные последовательности, представленные БЕЦ ГО N0: 13, 14 и 15, и указанная легкая цепь включает три последовательные определяющие комплементарность области, имеющие аминокислотные последовательности, представленные БЕЦ ГО N0: 16, 17 и 18; или указанная тяжелая цепь включает три последовательные определяющие комплементарность области, имеющие аминокислотные последовательности, представленные БЕЦ ГО N0: 19, 20 и 21, и указанная легкая цепь включает три последовательные определяющие комплементарность области, имеющие аминокислотные последовательности, представленные БЕЦ ГО N0: 22, 23 и 24; или указанная тяжелая цепь включает три последовательные определяющие комплементарность области, имеющие аминокислотные последовательности, представленные БЕЦ ГО N0: 25, 26 и 27, и указанная легкая цепь включает три последовательные определяющие комплементарность области, имеющие аминокислотные последовательности, представленные БЕЦ ГО N0: 28, 29 и 30; или указанная тяжелая цепь включает три последовательные определяющие комплементарность области, имеющие аминокислотные последовательности, представленные БЕЦ ГО N0: 31, 32 и 33, и указанная легкая цепь включает три последовательные определяющие комплементарность области, имеющие аминокислотные последовательности, представленные БЕЦ ГО N0: 34, 35 и 36.
  2. 2. Антитело или его связывающийся с эпитопом фрагмент по п.1, отличающиеся тем, что указанные антитело или его связывающийся с эпитопом фрагмент способны вызвать цитолиз клеток С.Н38' посредством апоптоза в отсутствие клеток стромы или полученных из стромы цитокинов.
  3. 3. Антитело или его связывающийся с эпитопом фрагмент по любому из пп.1, 2, отличающиеся тем, что указанная клетка С.Н38' представляет собой клетку лимфомы, лейкозную клетку или клетку множе- 76 025215 ственной миеломы.
  4. 4. Антитело или его связывающийся с эпитопом фрагмент по п.3, отличающиеся тем, что указанная клетка СЭ38' представляет собой клетку неходжкинской лимфомы (ЫнЬ), клетку лимфомы Беркитта (ВЬ), клетку множественной миеломы (ММ), клетку хронического В-лимфолейкоза (В-СЬЬ), клетку острого В- и Т-лимфолейкоза (АЬЬ), клетку Т-клеточной лимфомы (ТСЬ), клетку острого миелолейкоза (АМЬ), клетку волосато-клеточного лейкоза (нСЬ), клетку лимфомы Ходжкина (нЬ) или клетку хронического миелолейкоза (СМЬ).
  5. 5. Антитело или его связывающийся с эпитопом фрагмент по п.1, отличающиеся тем, что указанные антитело или его связывающийся с эпитопом фрагмент способны вызвать цитолиз по меньшей мере 24% клеток лимфомы Ο;ηι6ί посредством апоптоза в отсутствие клеток стромы или цитокинов, полученных из стромы; и/или указанные антитело или его связывающийся с эпитопом фрагмент способны вызвать цитолиз более чем 7% клеток лимфомы Каток посредством апоптоза в отсутствие клеток стромы или цитокинов, полученных из стромы; и/или указанные антитело или его связывающийся с эпитопом фрагмент способны вызвать цитолиз более чем 11% клеток множественной миеломы М0ЬР-8 посредством апоптоза в отсутствие клеток стромы или цитокинов, полученных из стромы; и/или указанные антитело или его связывающийся с эпитопом фрагмент способны вызвать цитолиз более чем 36% клеток лимфомы §и-ЭнЬ-8 посредством апоптоза в отсутствие клеток стромы или цитокинов, полученных из стромы; и/или указанные антитело или его связывающийся с эпитопом фрагмент способны вызвать цитолиз более чем 62% клеток лейкоза 0^0-41 посредством апоптоза в отсутствие клеток стромы или цитокинов, полученных из стромы; и/или указанные антитело или его связывающийся с эпитопом фрагмент способны вызвать цитолиз более чем 27% клеток лимфомы Ки-ЭиЬ-1 посредством апоптоза в отсутствие клеток стромы или цитокинов, полученных из стромы; и/или указанные антитело или его связывающийся с эпитопом фрагмент способны вызвать цитолиз более чем 9% клеток лейкоза 1УМ-13 посредством апоптоза в отсутствие клеток стромы или цитокинов, полученных из стромы; и/или указанные антитело или его связывающийся с эпитопом фрагмент способны вызвать цитолиз более чем 4% клеток лейкоза нС-1 посредством апоптоза в отсутствие стромальных клеток или цитокинов, полученных из стромы.
  6. 6. Антитело или его связывающийся с эпитопом фрагмент по любому из предыдущих пунктов, отличающиеся тем, что указанные антитело или его связывающийся с эпитопом фрагмент связываются с СО38 с кс 3х 10-9 М или ниже.
  7. 7. Антитело или его связывающийся с эпитопом фрагмент по п.1, отличающиеся тем, что указанные антитело или его связывающийся с эпитопом фрагмент включают вариабельную область легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0: 38, 40, 42, 44, 46 и 48.
  8. 8. Антитело или его связывающийся с эпитопом фрагмент по п.1, отличающиеся тем, что указанные антитело или его связывающийся с эпитопом фрагмент включают вариабельную область тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0: 50, 52, 54, 56, 58, 60.
  9. 9. Антитело или его связывающийся с эпитопом фрагмент по п.1, отличающиеся тем, что указанные антитело или его связывающийся с эпитопом фрагмент продуцируются линией клеток гибридомы, выбранной из группы, включающей линии клеток гибридомы, депонированные в Американской коллекции типовых культур (АТСС) под депозитными номерами РТА-7667, РТА-7669, РТА-7670, РТА-7666, РТА-7668 и РТА-7671.
  10. 10. Антитело или его связывающийся с эпитопом фрагмент по п.1, отличающиеся тем, что указанные антитело или его связывающийся с эпитопом фрагмент включают по меньшей мере одну константную область антитела человека.
  11. 11. Антитело или его связывающийся с эпитопом фрагмент по п.1, отличающиеся тем, что указанные антитело или его связывающийся с эпитопом фрагмент представляют собой гуманизированное или подвергнутое реструктурированию поверхности антитело.
  12. 12. Гуманизированное или подвергнутое реструктурированию поверхности антитело или его связывающийся с эпитопом фрагмент, которые специфически связывают СЭ38, отличающиеся тем, что указанные антитело или его связывающийся с эпитопом фрагмент включают по меньшей мере одну тяжелую цепь и по меньшей мере одну легкую цепь, где указанная тяжелая цепь включает три последовательные определяющие комплементарность области, имеющие аминокислотные последовательности, представленные 8Е0 ГО N0: 1, 2 и 3, и указанная легкая цепь включает три последовательные определяющие комплементарность области, имеющие аминокислотные последовательности, представленные 8Е0 ГО N0: 4, 5 и 6; или
    - 77 025215 указанная тяжелая цепь включает три последовательные определяющие комплементарность области, имеющие аминокислотные последовательности, представленные δΕΟ ГО ΝΟ: 7, 8 и 9, и указанная легкая цепь включает три последовательные определяющие комплементарность области, имеющие аминокислотные последовательности, представленные δΕΟ ГО ΝΟ: 10, 11 и 12; или указанная тяжелая цепь включает три последовательные определяющие комплементарность области, имеющие аминокислотные последовательности, представленные δΕΟ ГО ΝΟ: 13, 81 и 15, и указанная легкая цепь включает три последовательные определяющие комплементарность области, имеющие аминокислотные последовательности, представленные δΕΟ ГО ΝΟ: 16, 17 и 18; или указанная тяжелая цепь включает три последовательные определяющие комплементарность области, имеющие аминокислотные последовательности, представленные δΕΟ ГО ΝΟ: 19, 20 и 21, и указанная легкая цепь включает три последовательные определяющие комплементарность области, имеющие аминокислотные последовательности, представленные δΕΟ ГО ΝΟ: 22, 23 и 24; или указанная тяжелая цепь включает три последовательные определяющие комплементарность области, имеющие аминокислотные последовательности, представленные δΕΟ ГО ΝΟ: 25, 26 и 27, и указанная легкая цепь включает три последовательные определяющие комплементарность области, имеющие аминокислотные последовательности, представленные δΕΟ ГО ΝΟ: 28, 29 и 30; или указанная тяжелая цепь включает три последовательные определяющие комплементарность области, имеющие аминокислотные последовательности, представленные δΕΟ ГО ΝΟ: 31, 32 и 33, и указанная легкая цепь включает три последовательные определяющие комплементарность области, имеющие аминокислотные последовательности, представленные δΕΟ ГО ΝΟ: 34, 35 и 36.
  13. 13. Антитело по п.12, где указанное антитело включает:
    (ί) легкую цепь, содержащую вариабельную область, представленную аминокислотной последовательностью δΕΟ ГО ΝΟ: 62; и (ΐΐ) тяжелую цепь, содержащую вариабельную область, представленную аминокислотной последовательностью δΕΟ ГО ΝΟ: 66, или его связывающийся с эпитопом фрагмент.
  14. 14. Антитело или его фрагмент по п.12, отличающиеся тем, что указанные антитело или его фрагмент включают вариабельную область тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы δΕΟ ГО ΝΟ: 66 и 72.
  15. 15. Антитело или его фрагмент по п.12, отличающиеся тем, что указанные антитело или его фрагмент включают вариабельную область легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы δΕΟ ГО ΝΟ: 62, 64, 68 и 70.
  16. 16. Фрагмент по п.1, отличающийся тем, что указанный фрагмент представляет собой РаЬ, РаЬ', Р(аЬ')2 или Ρν.
  17. 17. Конъюгат, включающий антитело или его связывающийся с эпитопом фрагмент по любому из пп.1-16, соединенные с цитотоксическим агентом.
  18. 18. Конъюгат по п.17, отличающийся тем, что указанный цитотоксический агент выбран из группы, состоящей из мейтансиноида, производного томеймицина, производного лептомицина, таксоида, СС-1065 и аналога СС-1065.
  19. 19. Конъюгат по п.18, отличающийся тем, что указанный цитотоксический агент представляет собой мейтансин ΌΜ1 формулы или указанный цитотоксический агент представляет собой мейтансин ΌΜ4 формулы или указанный цитотоксический агент представляет собой производное томеймицина, выбранное
    - 78 025215 из группы, состоящей из
    8,8'-[1,3-бензолдиил-бис-(метиленокси)]-бис-[(8)-2-эт-(Е)-илиден-7-метокси-1,2,3,11а-тетрагидро5Н-пиррол[2,1 -с] [ 1,4]бензодиазепин-5-она];
    8,8'-[5-метокси-1,3-бензолдиил-бис-(метиленокси)]-бис-[(8)-2-эт-(Е)-илиден-7-метокси-1,2,3,11атетрагидро-5Н-пиррол[2,1-с][1,4]бензодиазепин-5-она];
    8,8'-[1,5-пентандиил-бис-(окси)]-бис-[(8)-2-эт-(Е)-илиден-7-метокси-1,2,3,11а-тетрагидро-5Нпиррол[2,1 -с] [ 1,4]бензодиазепин-5-она];
    8,8'-[1,4-бутандиил-бис-(окси)]-бис-[(8)-2-эт-(Е)-илиден-7-метокси-1,2,3,11а-тетрагидро-5Нпиррол[2,1 -с] [ 1,4]бензодиазепин-5-она];
    8,8'-[3-метил-1,5-пентандиил-бис-(окси)]-бис-[(8)-2-эт-(Е)-илиден-7-метокси-1,2,3,11а-тетрагидро5Н-пиррол[2,1 -с] [ 1,4]бензодиазепин-5-она];
    8,8'-[2,6-пиридиндиил-бис-(окси)]-бис-[(8)-2-эт-(Е)-илиден-7-метокси-1,2,3,11а-тетрагидро-5Нпиррол[2,1 -с] [ 1,4]бензодиазепин-5-она];
    8,8'-[4-(3-трет-бутоксикарбониламинопропилокси)-2,6-пиридиндиил-бис-(метиленокси)]-бис-[(8)-2эт-(Е)-илиден-7-метокси-1,2,3,11а-тетрагидро-5Н-пиррол[2,1-с][1,4]бензодиазепин-5-она];
    8,8'-[5-(3-аминопропилокси)-1,3-бензолдиил-бис-(метиленокси)]-бис-[(8)-2-эт-(Е)-илиден-7метокси-1,2,3,11а-тетрагидро-5Н-пиррол[2,1-с][1,4]бензодиазепин-5-она];
    8,8'-[5-^-метил-3трет-бутоксикарбониламинопропил)-1,3-бензолдиил-бис-(метиленокси)]-бис-[(8)2-эт-(Е)-илиден-7-метокси-1,2,3,11а-тетрагидро-5Н-пиррол[2,1 -с] [ 1,4]бензодиазепин-5-она];
    8,8'-{5-[3 -(4-метил-4-метилдисульфанил-пентаноиламино)пропилокси] - 1,3-бензолдиил-бис(метиленокси)]-бис-[(8)-2-эт-(Е)-илиден-7-метокси-1,2,3,11а-тетрагидро-5Н-пиррол[2,1с][1,4] бензодиазепин-5 -она];
    8,8'-[5-ацетилтиометил-1,3-бензолдиил-бис-(метиленокси)]-бис-[(8)-2-метилен-7-метокси-1,2,3,11атетрагидро-5Н-пиррол[2,1-с][1,4]бензодиазепин-5-она];
    сложного трет-бутилового эфира бис-{2-[(8)-2-метилен-7-метокси-5-оксо-1,3,11а-тетрагидро-5Нпиррол[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-илокси]этил}карбаминовой кислоты;
    8,8'-[3-(2-ацетилтиоэтил)-1,5-пентандиил-бис-(окси)]-бис-[(8)-2-метилен-7-метокси-1,2,3,11атетрагидро-5Н-пиррол[2,1-с][1,4]бензодиазепин-5-она];
    8,8'-[5-^-4-меркапто-4,4-диметилбутаноил)амино-1,3-бензолдиил-бис-(метиленокси)]-бис-[7метокси-2-метилен-1,2,3,11а-тетрагидро-5Н-пиррол[2,1-с][1,4]бензодиазепин-5-она];
    8,8'-[5-^-4-метилдитио-4,4-диметилбутаноил)амино-1,3-бензолдиил-бис-(метиленокси)]-бис-[7метокси-2-метилен-1,2,3,11а-тетрагидро-5Н-пиррол[2,1-с][1,4]бензодиазепин-5-она];
    8,8'-[5-^-метил-Ж(2-меркапто-2,2-диметилэтил))амино-1,3-бензолдиил(метиленокси)]-бис-[7метокси-2-метилен-1,2,3,11а-тетрагидро-5Н-пиррол[2,1-с][1,4]бензодиазепин-5-она];
    8,8'-[5-^-метил-Ж(2-метилдитио-2,2-диметилэтил))амино-1,3-бензолдиил(метиленокси)]-бис-[7метокси-2-метилен-1,2,3,11а-тетрагидро-5Н-пиррол[2,1 -с] [ 1,4]бензодиазепин-5 -она];
    8,8'-[(4-(2-(4-меркапто-4-метил)пентанамидоэтокси)пиридин-2,6-диметил)диокси]-бис-[(8)-2-эт-(Е)илиден-7-диметокси-1,2,3,11 а-тетрагидропиррол[2,1-с][1,4] бензодиазепин-5 -она];
    8,8'-[(1-(2-(4-метил-4-метилдисульфанил)пентанамидоэтокси)бензол-3,5-диметил)диокси]-бис-[(8)2-эт-(Е)-илиден-7-диметокси-1,2,3,11а-тетрагидропиррол[2,1-с][1,4]бензодиазепин-5-она];
    8,8'-[(4-(3-(4-метил-4-метилдисульфанил)пентанамидопропокси)пиридин-2,6-диметил)диокси]-бис[(8)-2-эт-(Е)-илиден-7 -диметокси-1,2,3,11а-тетрагидропиррол[2,1-с][1,4]бензодиазепин-5-она];
    8,8'-[(4-(4-(4-метил-4-метилдисульфанил)пентанамидобутокси)пиридин-2,6-диметил)диокси]-бис[(8)-2-эт-(Е)-илиден-7 -диметокси-1,2,3,11а-тетрагидропиррол[2,1-с][1,4]бензодиазепин-5-она];
    8,8'-[(4-(3-[4-(4-метил-4-метилдисульфанилпентаноил)пиперазин-1-ил]пропил)пиридин-2,6диметил)диокси] -бис-[(8)-2-эт-(Е)-илиден-7-диметокси-1,2,3,11а-тетрагидропиррол[2,1 с][1,4] бензодиазепин-5 -она];
    8,8'-[(1-(3-[4-(4-метил-4-метилдисульфанилпентаноил)пиперазин-1-ил]пропил)бензол-3,5диметил)диокси] -бис-[(8)-2-эт-(Е)-илиден-7-диметокси-1,2,3,11а-тетрагидропиррол[2,1 с][1,4] бензодиазепин-5 -она];
    8,8'-[(4-(2-{2-[2-(4-метил-4-метилдисульфанилпентаноиламино)этокси]этокси}этокси)пиридин-2,6диметил)диокси] -бис-[(8)-2-эт-(Е)-илиден-7-диметокси-1,2,3,11а-тетрагидропиррол[2,1 с][1,4] бензодиазепин-5 -она];
    8,8'-[(1-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(4-метил-4метилдисульфанилпентаноиламино)этокси]этокси}этокси)этокси]-этокси}этокси)бензол-3,5диметил)диокси] -бис-[(8)-2-эт-(Е)-илиден-7-диметокси-1,2,3,11а-тетрагидропиррол[2,1 с][1,4] бензодиазепин-5 -она];
    8,8'-[(1-(2-{2-[2-(4-метил-4-метилдисульфанилпентаноиламино)этокси]этокси}этокси)бензол-3,5диметил)диокси] -бис-[(8)-2-эт-(Е)-илиден-7-диметокси-1,2,3,11а-тетрагидропиррол[2,1 с][1,4] бензодиазепин-5 -она];
    8,8'-[(4-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(4-метил-4-метилдисульфанилпентаноиламино)этокси]этокси}этокси)этокси]этокси}этокси)пиридин-2,6-диметил)диокси]-бис-[(8)-2-эт-(Е)-илиден-7-диметокси- 79 025215
    1,2,3,11а-тетрагидропиррол[2,1 -с] [ 1,4]бензодиазепин-5-она];
    8,8'-[(1-(2-[метил(2-метил-2-метилдисульфанилпропил)амино]этокси)бензол-3,5-диметил)диокси]бис-[(8)-2-эт-(Е)-илиден-7-диметокси-1,2,3,11а-тетрагидропиррол[2,1-с][1,4]бензодиазепин-5-она];
    8,8'-[(4-(3-[метил(4-метил-4-метилдисульфанилпентаноил)амино]пропил)пиридин-2,6диметил)диокси] -бис-[(8)-2-эт-(Е)-илиден-7-диметокси-1,2,3,11а-тетрагидропиррол[2,1 с][1,4] бензодиазепин-5 -она];
    8,8'-[(4-(3-[метил(2-метил-2-метилдисульфанилпропил)амино]пропил)пиридин-2,6диметил)диокси] -бис-[(8)-2-эт-(Е)-илиден-7-диметокси-1,2,3,11а-тетрагидропиррол[2,1 с][1,4] бензодиазепин-5 -она];
    8,8'-[(1-(4-метил-4-метилдисульфанил)пентанамидо)бензол-3,5-диметил)диокси]-бис-[(8)-2-эт-(Е)илиден-7-диметокси-1,2,3,11 а-тетрагидропиррол[2,1-с][1,4] бензодиазепин-5 -она]; или указанный цитотоксический агент представляет собой производное лептомицина, выбранное из группы, состоящей из (2-метилсульфанилэтил)амида (2Е,10Е,12Е,16Ζ,18Е)-(К)-6-гидрокси-3,5,7,9,11,15,17-гептаметил-19((28,38)-3-метил-6-оксо-3,6-дигидро-2Н-пиран-2-ил)-8-оксо-нонадека-2,10,12,16,18-пентаноевой кислоты;
    бис-[(2-меркаптоэтил)амида (2Е,10Е,12Е,16Ζ,18Е)-(К)-6-гидрокси-3,5,7,9,11,15,17-гептаметил-19((28,3 8)-3-метил-6-оксо-3,6-дигидро-2Н-пиран-2-ил)-8-оксо-нонадека-2,10,12,16,18-пентаноевой кислоты];
    (2-меркаптоэтил)амида (2Е,10Е,12Е,16Ζ,18Е)-(К)-6-гидрокси-3,5,7,9,11,15,17-гептаметил-19((28,38)-3метил-6-оксо-3,6-дигидро-2Н-пиран-2-ил)-8-оксо-нонадека-2,10,12,16,18-пентаноевой кислоты;
    (2-метилдисульфанилэтил)амида (2Е,10Е,12Е,16Ζ,18Е)-(К)-6-гидрокси-3,5,7,9,11,15,17-гептаметил19-((28,38)-3метил-6-оксо-3,6-дигидро-2Н-пиран-2-ил)-8-оксо-нонадека-2,10,12,16,18-пентаноевой кислоты;
    (2-метил-2-метилдисульфанилпропил)амида (2Е,10Е,12Е,16Ζ,18Е)-(К)-6-гидрокси-3,5,7,9,11, 15, 17гептаметил-19-((28,38)-3метил-6-оксо-3,6-дигидро-2Н-пиран-2-ил)-8-оксо-нонадека-2,10,12,16,18пентаноевой кислоты;
    (2-меркапто-2-метил)амида (2Е,10Е,12Е,16Ζ,18Е)-(К)-6-гидрокси-3,5,7,9,11,15,17-гептаметил-19((28,38)-3метил-6-оксо-3,6-дигидро-2Н-пиран-2-ил)-8-оксо-нонадека-2,10,12,16,18-пентаноевой кислоты.
  20. 20. Фармацевтическая композиция для лечения злокачественной опухоли или аутоиммунных заболеваний, содержащая антитело или его связывающийся с эпитопом фрагмент по любому из пп.1-16 или конъюгат по любому из пп.17-19, и фармацевтически приемлемый носитель или эксципиенты.
  21. 21. Фармацевтическая композиция по п.20, отличающаяся тем, что указанное дополнительное терапевтическое средство представляет собой антагонист эпидермального фактора роста (ЕОР), фактора роста фибробластов (РОР), фактора роста гепатоцитов (НОР), тканевого фактора (ТР), белка С, белка 8, фактора роста, полученного из тромбоцитов (РЭСР), герегулина, белка, стимулирующего макрофаги (М8Р), или фактора роста сосудистого эндотелия (УЕОР), или антагонист рецептора эпидермального ростового фактора (ЕОР), фактора роста фибробластов (РОР), фактора роста гепатоцитов (НОР), тканевого фактора (ТР), белка С, белка 8, фактора роста, полученного из тромбоцитов (РЭСР), герегулина, белка, стимулирующего макрофаги (М8Р), или фактора роста сосудистого эндотелия (УЕОР), включая рецептор НЕК2, рецептор НЕК3, с-МЕТ, и тирозин-киназ других рецепторов; или указанное дополнительное терапевтическое средство представляет собой антитело, направленное против антигена дифференцировки, выбранного из группы, включающей СО3, СП14, СП19, СП20, СП22, СП25, СП28, СП30, СП33, СП36, СЭ40, СЭ44, СО52, СП55, СП59, СП56, С1Р0, СП79, СП80, СП103, СП134, СП137, СП138 и СП152.
  22. 22. Применение антитела или его связывающегося с эпитопом фрагмента по любому из пп.1-16 для получения лекарственного средства для лечения злокачественной опухоли или аутоиммунного заболевания.
  23. 23. Применение конъюгата по любому из пп.17-19 для получения лекарственного средства для лечения злокачественной опухоли или аутоиммунного заболевания.
  24. 24. Применение по п.23, отличающееся тем, что указанная злокачественная опухоль выбрана из группы, состоящей из карциномы, включая карциному мочевого пузыря, молочной железы, ободочной кишки, почки, печени, легкого, яичника, поджелудочной железы, желудка, шейки матки, щитовидной железы и кожи; включая плоскоклеточную карциному; опухоли мезенхимального происхождения, включая фибросаркому и рабдомиосаркому; другие опухоли, включая меланому, семиному, тератокарциному, нейробластому и глиому; опухоли центральной и периферической нервной системы, включая астроцитому, нейробластому, глиому и шванномы; опухоли мезенхимального происхождения, включая фибросаркому, рабдомиосаркому и остеосаркому; и другие опухоли, включая меланому, пигментную ксеродермию, кератоакантому, семиному, фолликулярный рак щитовидной железы и тератокарциному щитовидной железы; или указанная злокачественная опухоль выбрана из группы, состоящей из гематопоэтических опухолей лимфоидной линии дифференцировки, включая лейкоз, неходжкинскую лимфому, острый лимфолейкоз, острый лимфобластический лейкоз, Β-клеточную лимфому, Т-клеточную лимфому, лимфому Беркитта, лимфому Ходжкина, волосато-клеточный лейкоз, множественную миелому, хронический лимфолейкоз; гематопоэтических опухолей миелоидной линии дифференцировки, включая острые и хронические мие- 80 025215 лолейкозы; и промиелоцитарного лейкоза; или указанное аутоиммунное или воспалительное заболевание выбрано из группы, состоящей из системной красной волчанки, ревматоидного артрита, рассеянного склероза, болезни Крона, язвенного колита, гастрита, тироидита Хашимото, анкилозирующего спондилита, криоглобулинемического васкулита, связанного с гепатитом С, хронического очагового энцефалита, псевдопузырчатки, гемофилии А, мембранопролиферативного гломерулонефрита, синдрома Шегрена, дерматомиозита взрослых и ювенильного дерматомиозита, полимиозита взрослых, хронической сыпи, первичного билиарного цирроза, идиопатической тромбоцитопенической пурпуры, нейромиелита зрительного нерва, дистиреодиной болезни Грэйвса, псевдопузырчатки, мембранопролиферативного гломерулонефрита, синдрома ЧаргаШтрауса и астмы.
  25. 25. Применение по п.23, отличающееся тем, что указанная злокачественная опухоль выбрана из группы, состоящей из гематопоэтических опухолей лимфоидной линии дифференцировки, гематопоэтических опухолей миелоидной линии дифференцировки и промиелоцитарного лейкоза.
  26. 26. Применение по п.24 или 25, отличающееся тем, что указанная гематопоэтическая опухоль лимфоидной линии дифференцировки представляет собой множественную миелому.
EA200970393A 2006-10-19 2007-10-16 Новые антитела к cd38 для лечения рака EA025215B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP06291628A EP1914242A1 (en) 2006-10-19 2006-10-19 Novel anti-CD38 antibodies for the treatment of cancer
PCT/IB2007/004172 WO2008047242A2 (en) 2006-10-19 2007-10-16 Novel anti-cd38 antibodies for the treatment of cancer

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200970393A1 EA200970393A1 (ru) 2009-12-30
EA025215B1 true EA025215B1 (ru) 2016-12-30

Family

ID=37831721

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200970393A EA025215B1 (ru) 2006-10-19 2007-10-16 Новые антитела к cd38 для лечения рака

Country Status (43)

Country Link
US (5) US8153765B2 (ru)
EP (4) EP1914242A1 (ru)
JP (2) JP5607364B2 (ru)
KR (5) KR20090078330A (ru)
CN (1) CN101616933B (ru)
AR (1) AR063488A1 (ru)
AU (1) AU2007311511C1 (ru)
BR (1) BRPI0718130B1 (ru)
CA (2) CA2663209C (ru)
CL (3) CL2007002995A1 (ru)
CO (1) CO6190555A2 (ru)
CR (1) CR10679A (ru)
CY (2) CY1122302T1 (ru)
DK (1) DK2076540T3 (ru)
DO (1) DOP2017000177A (ru)
EA (1) EA025215B1 (ru)
ES (1) ES2726754T3 (ru)
GT (1) GT200900079A (ru)
HK (1) HK1139956A1 (ru)
HR (1) HRP20190742T1 (ru)
HU (2) HUE043351T2 (ru)
IL (1) IL197217B (ru)
LT (2) LT2076540T (ru)
MA (1) MA30895B1 (ru)
ME (1) MEP10609A (ru)
MX (1) MX2009004050A (ru)
MY (1) MY159374A (ru)
NL (1) NL301077I2 (ru)
NO (3) NO20211026A1 (ru)
NZ (1) NZ575188A (ru)
PE (1) PE20081171A1 (ru)
PL (1) PL2076540T3 (ru)
PT (1) PT2076540T (ru)
RS (1) RS58716B1 (ru)
SG (4) SG10202012950TA (ru)
SI (1) SI2076540T1 (ru)
SV (1) SV2009003203A (ru)
TN (1) TN2009000058A1 (ru)
TW (4) TWI538917B (ru)
UA (1) UA114879C2 (ru)
UY (1) UY30655A1 (ru)
WO (1) WO2008047242A2 (ru)
ZA (1) ZA200901395B (ru)

Families Citing this family (312)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MXPA06008700A (es) 2004-02-06 2007-01-19 Morphosys Ag Anticuerpos anti-cd38 humanos y usos para los mismos.
US9200061B2 (en) * 2004-02-06 2015-12-01 Morpho Sys AG Generation and profiling of fully human HuCAL gold®-derived therapeutic antibodies specific for human CD3i
US7999541B2 (en) * 2005-05-16 2011-08-16 Rapiscan Security Products, Inc. System and method for improving the analysis of polymorphic chemical substance forms and concentrations using NQR
WO2007030668A2 (en) 2005-09-07 2007-03-15 Jennerex Biotherapeutics Ulc Systemic treatment of metastatic and/or systemically-disseminated cancers using gm-csf-expressing poxviruses
EP1945671A2 (en) 2005-10-12 2008-07-23 MorphoSys AG Generation and profiling of fully human hucal gold-derived therapeutic antibodies specific for human cd38
EP1914242A1 (en) * 2006-10-19 2008-04-23 Sanofi-Aventis Novel anti-CD38 antibodies for the treatment of cancer
US7259237B1 (en) 2006-12-29 2007-08-21 Miller Kent D Pan-antiviral peptides
ES2435779T3 (es) 2007-07-19 2013-12-23 Sanofi Agentes citotóxicos que comprenden nuevos derivados de tomaimicina y su uso terapéutico
PA8849001A1 (es) * 2008-11-21 2010-06-28 Lilly Co Eli Anticuerpos de c-met
EP2191842A1 (en) * 2008-11-28 2010-06-02 Sanofi-Aventis Antitumor combinations containing antibodies recognizing specifically CD38 and cytarabine
EP2191843A1 (en) * 2008-11-28 2010-06-02 Sanofi-Aventis Antitumor combinations containing antibodies recognizing specifically CD38 and cyclophosphamide
EP2191840A1 (en) * 2008-11-28 2010-06-02 Sanofi-Aventis Antitumor combinations containing antibodies recognizing specifically CD38 and melphalan
EP2191841A1 (en) * 2008-11-28 2010-06-02 Sanofi-Aventis Antitumor combinations containing antibodies recognizing specifically CD38 and vincristine
FR2947269B1 (fr) 2009-06-29 2013-01-18 Sanofi Aventis Nouveaux composes anticancereux
FR2949469A1 (fr) 2009-08-25 2011-03-04 Sanofi Aventis Derives anticancereux, leur preparation et leur application en therapeutique
CA2774144C (en) 2009-09-14 2018-02-13 Jennerex, Inc. Oncolytic vaccinia virus combination cancer therapy
UY32913A (es) 2009-10-02 2011-04-29 Sanofi Aventis Nuevos maitansinoides y el uso de dichos maitansinoides para preparar conjugados con un anticuero
MY161909A (en) 2009-12-22 2017-05-15 Roche Glycart Ag Anti-her3 antibodies and uses thereof
PL2516465T3 (pl) * 2009-12-23 2016-11-30 Przeciwciała anty-bv8 i ich zastosowania
US9220743B2 (en) * 2010-01-22 2015-12-29 Nuovo Biologics, Llc Pan-antiviral peptides for protein kinase inhibition
EA024118B1 (ru) 2010-04-15 2016-08-31 Сиэтл Дженетикс, Инк. Конъюгаты пирролбензодиазепина направленного действия
AU2011239525B2 (en) 2010-04-15 2015-04-09 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines used to treat proliferative diseases
EP2580243B1 (en) * 2010-06-09 2019-10-16 Genmab A/S Antibodies against human cd38
FR2963007B1 (fr) 2010-07-26 2013-04-05 Sanofi Aventis Derives anticancereux, leur preparation et leur application therapeutique
RU2595839C2 (ru) 2010-09-27 2016-08-27 МорфоСис АГ Антитело к cd38 и леналидомид или бортезомиб для лечения множественной миеломы и nhl
UA112170C2 (uk) * 2010-12-10 2016-08-10 Санофі Протипухлинна комбінація, що містить антитіло, яке специфічно розпізнає cd38, і бортезоміб
JOP20210044A1 (ar) * 2010-12-30 2017-06-16 Takeda Pharmaceuticals Co الأجسام المضادة لـ cd38
BR112013017096A2 (pt) * 2011-01-04 2020-09-01 Jennerex Inc. composição e métodos de indução de resposta citotóxica dependente de complemento mediado por anticorpo específico de tumor em animal tendo tumor, de geração de anticorpos in vivo, de inibição do crescimento ou morte de célula de câncer, para tratar indivíduo com câncer, para adaptar de terapia de câncer para indivíduo com câncer e para identificar antígeno específico de tumor
US8795673B2 (en) 2011-03-29 2014-08-05 Immunogen, Inc. Preparation of maytansinoid antibody conjugates by a one-step process
WO2012135517A2 (en) 2011-03-29 2012-10-04 Immunogen, Inc. Preparation of maytansinoid antibody conjugates by a one-step process
US20140127240A1 (en) 2011-04-21 2014-05-08 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Novel Binder-Drug Conjugates (ADCs) and Use of Same
CN113461819B (zh) * 2011-04-29 2024-01-02 埃派斯进有限公司 抗-cd40抗体及其使用方法
US9427477B2 (en) 2011-05-09 2016-08-30 Mayo Foundation For Medical Education And Research Cancer treatments
CN107936121B (zh) 2011-05-16 2022-01-14 埃泰美德(香港)有限公司 多特异性fab融合蛋白及其使用方法
AU2012311505B2 (en) 2011-09-20 2016-09-29 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines as unsymmetrical dimeric PBD compounds for inclusion in targeted conjugates
EP2751111B1 (en) 2011-10-14 2017-04-26 MedImmune Limited Asymmetrical bis-(5H-Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-one) derivatives for the treatment of proliferative or autoimmune diseases
EP3309162A1 (en) 2011-10-14 2018-04-18 Seattle Genetics, Inc. Targeted conjugates of pyrrolobenzodiazepines
EA027386B1 (ru) 2011-10-14 2017-07-31 Медимьюн Лимитед Пирролобензодиазепины
CA2850373C (en) 2011-10-14 2019-07-16 Seattle Genetics, Inc. Pyrrolobenzodiazepines and targeted conjugates
BR112014009925B1 (pt) 2011-10-28 2022-09-20 Teva Pharmaceuticals Australia Pty Ltd Construtores de polipeptídeos e seus usos
WO2013075740A1 (en) * 2011-11-23 2013-05-30 Sanofi Antibody purification method
EP2812702B1 (en) * 2012-02-10 2019-04-17 Seattle Genetics, Inc. Diagnosis and management of CD30-expressing cancers
AR090549A1 (es) 2012-03-30 2014-11-19 Genentech Inc Anticuerpos anti-lgr5 e inmunoconjugados
EP2844300B1 (en) 2012-05-01 2018-10-17 Genentech, Inc. Anti-pmel17 antibodies and immunoconjugates
CA2873889A1 (en) 2012-07-09 2014-01-16 Genentech, Inc. Anti-cd22 antibodies and immunoconjugates
MX2015000359A (es) 2012-07-09 2015-04-14 Genentech Inc Anticuerpos e inmunoconjugados anti-cd79b.
CA2879665A1 (en) 2012-08-02 2014-02-06 Genentech, Inc. Anti-etbr antibodies and immunoconjugates
RU2650618C2 (ru) 2012-09-25 2018-04-16 МорфоСис АГ Комбинации и их применение
EP2903610B1 (en) 2012-10-01 2021-11-03 Mayo Foundation For Medical Education And Research Cancer treatments
CN105209592A (zh) 2012-10-04 2015-12-30 伊缪诺金公司 使用pvdf膜纯化细胞结合剂细胞毒性剂缀合物
NZ707486A (en) 2012-10-12 2018-09-28 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepine - anti-psma antibody conjugates
HUE035694T2 (en) 2012-10-12 2018-05-28 Adc Therapeutics Sa Pirrolobenzodiazepine anti-CD22 antibody conjugates
ES2703151T3 (es) 2012-10-12 2019-03-07 Adc Therapeutics Sa Conjugados de anticuerpos de pirrolobenzodiazepinas
TR201902494T4 (tr) 2012-10-12 2019-03-21 Medimmune Ltd Pirrolobenzodiazepinler ve onların konjugatları.
ES2660029T3 (es) 2012-10-12 2018-03-20 Medimmune Limited Conjugados de anticuerpo-pirrolobenzodiazepinas
EP2906250B1 (en) 2012-10-12 2018-05-30 ADC Therapeutics SA Pyrrolobenzodiazepine-anti-psma antibody conjugates
CA2885305C (en) 2012-10-12 2019-11-12 Spirogen Sarl Synthesis and intermediates of pyrrolobenzodiazepine derivatives for conjugation
SI2906296T1 (en) 2012-10-12 2018-06-29 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
PT2839860T (pt) 2012-10-12 2019-07-29 Medimmune Ltd Pirrolobenzodiazepinas e conjugados das mesmas
EP2914630B1 (en) 2012-11-05 2021-03-03 Pierre Fabre Medicament Novel antigen binding proteins and their use as addressing product for the treatment of cancer
EP2914302B1 (en) 2012-11-05 2017-01-04 MorphoSys AG Radiolabelled antibody and uses thereof
UA118255C2 (uk) * 2012-12-07 2018-12-26 Санофі Композиція, яка містить антитіло до cd38 і леналідомід
US10342869B2 (en) 2012-12-07 2019-07-09 The Regents Of The University Of California Compositions comprising anti-CD38 antibodies and lenalidomide
CN105142674B (zh) 2013-03-13 2018-11-13 麦迪穆有限责任公司 吡咯并苯并二氮杂卓和其结合物
NZ710745A (en) 2013-03-13 2019-03-29 Genentech Inc Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
KR20210043006A (ko) 2013-03-13 2021-04-20 사노피 항-cd38 항체 및 카르필조밉을 포함하는 조성물
EP2970474B1 (en) 2013-03-14 2017-12-20 Genentech, Inc. Anti-b7-h4 antibodies and immunoconjugates
US9562099B2 (en) 2013-03-14 2017-02-07 Genentech, Inc. Anti-B7-H4 antibodies and immunoconjugates
PL3677591T3 (pl) * 2013-04-29 2023-06-26 Teva Pharmaceuticals Australia Pty Ltd Przeciwciała anty-cd38 i fuzje z interferonem alfa-2b o osłabionej aktywności
US11117975B2 (en) 2013-04-29 2021-09-14 Teva Pharmaceuticals Australia Pty Ltd Anti-CD38 antibodies and fusions to attenuated interferon alpha-2B
JP6463734B2 (ja) * 2013-05-06 2019-02-06 サノフイＳａｎｏｆｉ 抗体を精製するための連続的多工程法
AU2014307080B2 (en) 2013-08-12 2018-06-07 Genentech, Inc. 1-(chloromethyl)-2,3-dihydro-1H-benzo(E)indole dimer antibody-drug conjugate compounds, and methods of use and treatment
CA2922889A1 (en) 2013-09-17 2015-03-26 Genentech, Inc. Methods of using anti-lgr5 antibodies
EP3054985B1 (en) 2013-10-11 2018-12-26 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
GB201317981D0 (en) 2013-10-11 2013-11-27 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
GB201317982D0 (en) 2013-10-11 2013-11-27 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
EP3054983B1 (en) 2013-10-11 2019-03-20 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
WO2015052535A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
CN103513040B (zh) * 2013-10-16 2015-03-11 常晓天 蛋白cd38在制备类风湿性关节炎诊断标记物中的应用
SG10201803288RA (en) * 2013-10-31 2018-05-30 Sanofi Sa Specific anti-cd38 antibodies for treating human cancers
US9493563B2 (en) 2013-11-04 2016-11-15 Glenmark Pharmaceuticals S.A. Production of T cell retargeting hetero-dimeric immunoglobulins
KR20160098328A (ko) 2013-12-13 2016-08-18 제넨테크, 인크. 항-cd33 항체 및 면역접합체
CA2929565A1 (en) 2013-12-16 2015-06-25 Genentech, Inc. 1-(chloromethyl)-2,3-dihydro-1h-benzo[e]indole dimer antibody-drug conjugate compounds, and methods of use and treatment
PT3086814T (pt) 2013-12-23 2020-09-04 Bayer Pharma AG Conjugados de fármaco de anticorpo (adcs) com inibidores de ksp
WO2015123687A1 (en) * 2014-02-14 2015-08-20 Centrose, Llc Extracellular targeted drug conjugates
HUE041497T2 (hu) 2014-02-14 2019-05-28 Cellectis Immunsejteken és patológiás sejteken egyaránt jelen lévõ antigént célzó génmódosított sejtek immunterápia célra
US9732154B2 (en) 2014-02-28 2017-08-15 Janssen Biotech, Inc. Anti-CD38 antibodies for treatment of acute lymphoblastic leukemia
US9603927B2 (en) 2014-02-28 2017-03-28 Janssen Biotech, Inc. Combination therapies with anti-CD38 antibodies
SG10202008629XA (en) * 2014-03-28 2020-10-29 Xencor Inc Bispecific antibodies that bind to cd38 and cd3
UA119352C2 (uk) 2014-05-01 2019-06-10 Тева Фармасьютикалз Острейліа Пті Лтд Комбінація леналідоміду або помалідоміду і конструкції анти-cd38 антитіло-атенуйований інтерферон альфа-2b та спосіб лікування суб'єкта, який має cd38-експресуючу пухлину
MX2016015162A (es) 2014-05-22 2017-03-03 Genentech Inc Anticuerpos anti - gpc3 e inmunoconjugados.
US10106620B2 (en) 2014-06-16 2018-10-23 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Blocking CD38 using anti-CD38 F(ab′)2 to protect NK cells
CN113134095A (zh) 2014-06-16 2021-07-20 梅约医学教育与研究基金会 治疗骨髓瘤
WO2015195555A1 (en) 2014-06-16 2015-12-23 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Blocking cd38 using anti-cd38 antibody conjugated to protein g to protect nk cells
US9212225B1 (en) * 2014-07-01 2015-12-15 Amphivena Therapeutics, Inc. Bispecific CD33 and CD3 binding proteins
MA40253A (fr) 2014-07-15 2017-05-24 Juno Therapeutics Inc Cellules modifiées pour thérapie cellulaire adoptive
WO2016022589A2 (en) * 2014-08-08 2016-02-11 The Regents Of The University Of California Methods for treating multiple myeloma
EP3186284B1 (en) 2014-08-28 2022-04-06 BioAtla, Inc. Conditionally active chimeric antigen receptors for modified t-cells
EP3191187B1 (en) * 2014-09-09 2021-07-28 Janssen Biotech, Inc. Combination therapies with anti-cd38 antibodies
GB201416112D0 (en) 2014-09-12 2014-10-29 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
TW201625689A (zh) 2014-09-12 2016-07-16 建南德克公司 抗－ｂ７－ｈ４抗體及免疫結合物
SG10201809668TA (en) 2014-09-12 2018-11-29 Genentech Inc Anti-her2 antibodies and immunoconjugates
US10077318B2 (en) 2014-09-12 2018-09-18 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
EP3191520B1 (en) 2014-09-12 2020-01-01 Genentech, Inc. Anti-cll-1 antibodies and immunoconjugates
RU2734771C2 (ru) * 2014-09-16 2020-10-23 Иннейт Фарма Нейтрализация ингибиторных путей в лимфоцитах
CN107124870A (zh) * 2014-09-17 2017-09-01 基因泰克公司 包含抗her2抗体和吡咯并苯并二氮杂*的免疫缀合物
US9446148B2 (en) 2014-10-06 2016-09-20 Mayo Foundation For Medical Education And Research Carrier-antibody compositions and methods of making and using the same
CA2965414C (en) 2014-10-29 2024-01-09 Teva Pharmaceuticals Australia Pty Ltd Interferon .alpha.2.beta. variants
US11773166B2 (en) 2014-11-04 2023-10-03 Ichnos Sciences SA CD3/CD38 T cell retargeting hetero-dimeric immunoglobulins and methods of their production
MA40894A (fr) * 2014-11-04 2017-09-12 Glenmark Pharmaceuticals Sa Immunoglobulines hétéro-dimères reciblant des lymphocytes t cd3/cd38 et leurs procédés de production
SG11201703599VA (en) 2014-11-19 2017-06-29 Immunogen Inc Process for preparing cell-binding agent-cytotoxic agent conjugates
AU2015352545B2 (en) 2014-11-25 2020-10-15 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
IL252480B2 (en) 2014-11-26 2023-12-01 Xencor Inc Heterodimeric antibodies that bind CD3 and tumor antigens
US10259887B2 (en) 2014-11-26 2019-04-16 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and tumor antigens
KR102597989B1 (ko) * 2014-12-04 2023-11-02 얀센 바이오테크 인코포레이티드 급성 골수성 백혈병을 치료하기 위한 항-cd38 항체
GB201506389D0 (en) * 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
GB201506402D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
GB201506411D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Bergenbio As Humanized anti-axl antibodies
MA42043A (fr) 2015-05-07 2018-03-14 Agenus Inc Anticorps anti-ox40 et procédés d'utilisation de ceux-ci
MX2017014396A (es) 2015-05-13 2018-03-23 Morphosys Ag Tratamiento de mieloma multiple.
MX2017014810A (es) 2015-05-20 2018-05-11 Janssen Biotech Inc Anticuerpos anti-cd38 para el tratamiento de amiloidosis de cadena ligera y otras enfermedades malignas hematológicas positivas para cd38.
PE20180926A1 (es) 2015-05-29 2018-06-08 Bristol Myers Squibb Co Anticuerpos contra el miembro 4 de la superfamilia del receptor del factor de necrosis tumoral (ox40) y sus usos
PT3303373T (pt) 2015-05-30 2020-07-14 Molecular Templates Inc Estruturas de subunidade a de toxina shiga desimunizadas e moléculas de direcionamento celular compreendendo as mesmas
SG10201908685QA (en) 2015-06-22 2019-10-30 Bayer Pharma AG Antibody drug conjugates (adcs) and antibody prodrug conjugates (apdcs) with enzymatically cleavable groups
IL256242B1 (en) 2015-06-22 2024-05-01 Janssen Biotech Inc Combination therapies for HEME malignancies with anti-CD38 antibodies and sorbibin inhibitors
US20160376373A1 (en) 2015-06-24 2016-12-29 Janssen Biotech, Inc. Immune Modulation and Treatment of Solid Tumors with Antibodies that Specifically Bind CD38
US20170044265A1 (en) 2015-06-24 2017-02-16 Janssen Biotech, Inc. Immune Modulation and Treatment of Solid Tumors with Antibodies that Specifically Bind CD38
MA42895A (fr) 2015-07-15 2018-05-23 Juno Therapeutics Inc Cellules modifiées pour thérapie cellulaire adoptive
TW201707725A (zh) 2015-08-18 2017-03-01 美國馬友醫藥教育研究基金會 載體－抗體組合物及其製造及使用方法
CA2998611A1 (en) * 2015-09-14 2017-03-23 Leukemia Therapeutics, LLC Identification of novel diagnostics and therapeutics by modulating rhoh
TW201713360A (en) 2015-10-06 2017-04-16 Mayo Foundation Methods of treating cancer using compositions of antibodies and carrier proteins
WO2017060322A2 (en) 2015-10-10 2017-04-13 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Ptefb-inhibitor-adc
MA43354A (fr) 2015-10-16 2018-08-22 Genentech Inc Conjugués médicamenteux à pont disulfure encombré
US10781261B2 (en) 2015-11-03 2020-09-22 Janssen Biotech, Inc. Subcutaneous formulations of anti-CD38 antibodies and their uses
ES2912729T3 (es) 2015-11-03 2022-05-27 Janssen Biotech Inc Formulaciones subcutáneas de anticuerpos anti-CD38 y sus usos
CN105837688B (zh) * 2015-11-20 2019-02-26 北京大学深圳研究生院 单域抗体及其编码基因，免疫毒素及其编码基因、制备方法、表达载体、应用，及宿主细胞
CN116063542A (zh) 2015-12-02 2023-05-05 阿吉纳斯公司 抗体和其使用方法
US11571469B2 (en) 2016-01-07 2023-02-07 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods of treating cancer with interferon wherein the cancer cells are HLA negative or have reduced HLA expression
JP6974348B2 (ja) * 2016-01-09 2021-12-01 アーベル リミテッドArbele Limited がん処置のためのカドヘリン−１７特異的抗体及び細胞傷害性細胞
GB201601431D0 (en) 2016-01-26 2016-03-09 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines
SG11201806478PA (en) 2016-02-05 2018-08-30 Immunogen Inc Efficient process for preparing cell-binding agent-cytotoxic agent conjugates
GB201602356D0 (en) 2016-02-10 2016-03-23 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
GB201602359D0 (en) 2016-02-10 2016-03-23 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
EP3413874A4 (en) 2016-02-12 2020-01-22 Mayo Foundation for Medical Education and Research HEMATOLOGICAL CANCER TREATMENTS
CA3016098A1 (en) 2016-03-04 2017-09-08 Morphosys Ag Clinical assessment of m-protein response in multiple myeloma
WO2017157305A1 (en) 2016-03-15 2017-09-21 Generon (Shanghai) Corporation Ltd. Multispecific fab fusion proteins and use thereof
AU2017238118A1 (en) 2016-03-21 2018-10-11 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods for improving the therapeutic index for a chemotherapeutic drug
US11305020B2 (en) 2016-03-21 2022-04-19 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods for reducing toxicity of a chemotherapeutic drug
JP7251981B2 (ja) 2016-03-24 2023-04-04 バイエル ファーマ アクチエンゲゼルシャフト 酵素開裂基を有する細胞毒性活性剤のプロドラッグ
US10618969B2 (en) 2016-04-06 2020-04-14 Mayo Foundation For Medical Education And Research Carrier-binding agent compositions and methods of making and using the same
KR20230162730A (ko) 2016-04-15 2023-11-28 바이오아트라, 인코퍼레이티드 항 Axl항체 및 이의 면역접합체와 이것들의 용도
GB201607478D0 (en) 2016-04-29 2016-06-15 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
WO2017196847A1 (en) 2016-05-10 2017-11-16 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Variable new antigen receptor (vnar) antibodies and antibody conjugates targeting tumor and viral antigens
US11254742B2 (en) 2016-05-13 2022-02-22 Bioatla, Inc. Anti-Ror2 antibodies, antibody fragments, their immunoconjugates and uses thereof
US20170370906A1 (en) 2016-05-27 2017-12-28 Genentech, Inc. Bioanalytical analysis of site-specific antibody drug conjugates
WO2017214182A1 (en) 2016-06-07 2017-12-14 The United States Of America. As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Fully human antibody targeting pdi for cancer immunotherapy
EP3919518A1 (en) 2016-06-15 2021-12-08 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Specific antibody-drug-conjugates (adcs) with ksp inhibitors and anti-cd123-antibodies
WO2018002181A1 (en) 2016-06-28 2018-01-04 Umc Utrecht Holding B.V. TREATMENT OF IgE-MEDIATED DISEASES WITH ANTIBODIES THAT SPECIFICALLY BIND CD38
EP3484923A1 (en) 2016-07-15 2019-05-22 Takeda Pharmaceutical Company Limited Methods and materials for assessing response to plasmablast- and plasma cell-depleting therapies
WO2018014067A1 (en) 2016-07-19 2018-01-25 Teva Pharmaceuticals Australia Pty Ltd Anti-cd47 combination therapy
JP2019521171A (ja) * 2016-07-20 2019-07-25 ヒブリジェニクス・エスアー 抗ｃｄ３８薬剤とのイネカルシトールの組み合わせ、及び癌を治療するためのその使用
US11066479B2 (en) 2016-08-02 2021-07-20 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Monoclonal antibodies targeting glypican-2 (GPC2) and use thereof
EP3496763A1 (en) 2016-08-11 2019-06-19 Genentech, Inc. Pyrrolobenzodiazepine prodrugs and antibody conjugates thereof
MX2019002473A (es) 2016-09-01 2019-09-18 Mayo Found Medical Education & Res Métodos y composiciones para el direccionamiento de cánceres de células t.
KR102462041B1 (ko) 2016-09-01 2022-11-02 메이오 파운데이션 포 메디칼 에쥬케이션 앤드 리써치 암 치료용 담체－ｐｄ－ｌ１ 결합제 조성물
WO2018048816A1 (en) 2016-09-06 2018-03-15 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods of treating pd-l1 expressing cancer
EP3509643A1 (en) 2016-09-06 2019-07-17 Mayo Foundation for Medical Education and Research Paclitaxel-albumin-binding agent compositions and methods for using and making the same
US11590098B2 (en) 2016-09-06 2023-02-28 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods of treating triple-negative breast cancer using compositions of antibodies and carrier proteins
GB201617466D0 (en) 2016-10-14 2016-11-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine conjugates
TWI788307B (zh) * 2016-10-31 2023-01-01 美商艾歐凡斯生物治療公司 用於擴增腫瘤浸潤性淋巴細胞之工程化人造抗原呈現細胞
CA3041340A1 (en) 2016-11-09 2018-05-17 Agenus Inc. Anti-ox40 antibodies, anti-gitr antibodies, and methods of use thereof
EP3468991A1 (en) 2016-11-21 2019-04-17 cureab GmbH Anti-gp73 antibodies and immunoconjugates
CA3045902A1 (en) 2016-12-21 2018-06-28 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Human monoclonal antibodies specific for flt3 and uses thereof
WO2018114798A1 (de) 2016-12-21 2018-06-28 Bayer Aktiengesellschaft Prodrugs von cytotoxischen wirkstoffen mit enzymatisch spaltbaren gruppen
EP3558388A1 (de) 2016-12-21 2019-10-30 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Binder-wirkstoff-konjugate (adcs) mit enzymatisch spaltbaren gruppen
JP7030811B2 (ja) 2016-12-21 2022-03-07 バイエル・ファルマ・アクティエンゲゼルシャフト Ｋｓｐ阻害剤を有する特異的抗体－薬物コンジュゲート（ａｄｃ）
JP6827113B2 (ja) 2017-01-21 2021-02-10 広州白雲山漢方現代薬業有限公司Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ Ｈａｎｆａｎｇ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｌｔｄ． シェーグレン症候群の治療におけるペオニフロリン−６’−ｏ−ベンゼンスルホン酸の使用
RS61795B1 (sr) 2017-02-08 2021-06-30 Adc Therapeutics Sa Konjugati pirolobenzodiazepin antitela
GB201702031D0 (en) 2017-02-08 2017-03-22 Medlmmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
WO2018192944A1 (en) 2017-04-18 2018-10-25 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine conjugates
EP3612234B1 (en) 2017-04-20 2024-03-13 ADC Therapeutics SA Combination therapy with an anti-axl antibody-drug conjugate
US11389480B2 (en) 2017-05-19 2022-07-19 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Human monoclonal antibody targeting TNFR2 for cancer immunotherapy
MX2019015042A (es) 2017-06-14 2020-08-06 Adc Therapeutics Sa Regimen de dosificacion.
CA3067311A1 (en) * 2017-06-20 2018-12-27 Sorrento Therapeutics, Inc. Cd38 antibody drug conjugate
MX2019015841A (es) 2017-06-20 2020-08-03 Inst Curie Celulas inmunes defectuosas para suv39h1.
WO2019005208A1 (en) 2017-06-30 2019-01-03 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services ANTIBODIES TO HUMAN MESOTHELIN AND USES IN ANTICANCER THERAPY
WO2019006280A1 (en) 2017-06-30 2019-01-03 Lentigen Technology, Inc. HUMAN MONOCLONAL ANTIBODIES SPECIFIC TO CD33 AND METHODS OF USE
EP3434692A1 (en) * 2017-07-24 2019-01-30 Encefa Compounds which specifically binds to cd38 for use in the treatment of neurodegenerative diseases
KR20240015159A (ko) * 2017-08-10 2024-02-02 그리폴스 다이어그노스틱 솔루션즈 인크. 재조합 인간 cd38-세포외 도메인을 포함하는 조성물, 방법 및/또는 키트
EP3668543A1 (en) * 2017-08-16 2020-06-24 Black Belt Therapeutics Limited Cd38 antibody
SG11202000321PA (en) * 2017-08-16 2020-02-27 Black Belt Therapeutics Ltd Cd38 modulating antibody
WO2019035938A1 (en) 2017-08-16 2019-02-21 Elstar Therapeutics, Inc. MULTISPECIFIC MOLECULES BINDING TO BCMA AND USES THEREOF
AU2018316532B2 (en) 2017-08-18 2022-11-24 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine conjugates
EP3681908A1 (en) 2017-09-13 2020-07-22 Teneobio, Inc. Heavy chain antibodies binding to ectoenzymes
CA3075717A1 (en) * 2017-09-14 2019-03-21 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Combination treatment for cancer
TWI820044B (zh) 2017-09-29 2023-11-01 日商第一三共股份有限公司 抗體－吡咯并苯二氮呯衍生物複合體
US11945868B2 (en) 2017-10-02 2024-04-02 Visterra, Inc. Antibody molecules to CD138 and uses thereof
EP4249068A3 (en) * 2017-10-10 2023-11-22 Sanofi Anti-cd38 antibodies and combinations with anti-cd3 and anti-cd28 antibodies
AU2018359527A1 (en) 2017-10-31 2020-05-07 Janssen Biotech, Inc. Methods of treating high risk multiple myeloma
CN111542596A (zh) 2017-11-01 2020-08-14 朱诺治疗学股份有限公司 产生工程化细胞的治疗性组合物的方法
BR112020008323A2 (pt) 2017-11-01 2020-11-03 Juno Therapeutics Inc anticorpos e receptores de antígenos quiméricos específicos para antígeno de maturação de células b
CA3082010A1 (en) 2017-11-01 2019-05-09 Juno Therapeutics, Inc. Chimeric antigen receptors specific for b-cell maturation antigen (bcma)
US11564946B2 (en) 2017-11-01 2023-01-31 Juno Therapeutics, Inc. Methods associated with tumor burden for assessing response to a cell therapy
US20210254000A1 (en) 2017-11-01 2021-08-19 Juno Therapeutics, Inc. Process for producing a t cell composition
WO2019089858A2 (en) 2017-11-01 2019-05-09 Juno Therapeutics, Inc. Methods of assessing or monitoring a response to a cell therapy
WO2019094931A1 (en) * 2017-11-10 2019-05-16 Actinium Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy for treatment of a hematological disease
CN112203680A (zh) 2017-12-08 2021-01-08 朱诺治疗学股份有限公司 用于细胞疗法的表型标记和相关方法
BR112020011215A2 (pt) 2017-12-08 2020-11-17 Juno Therapeutics Inc processo para a produção de uma composição de células t modificadas
AU2018379091A1 (en) 2017-12-08 2020-06-25 Juno Therapeutics, Inc. Serum-free media formulation for culturing cells and methods of use thereof
US20230158070A1 (en) 2018-01-30 2023-05-25 Cellectis Combination comprising allogeneic immune cells deficient for an antigen present on both t-cells and pathological cells and therapeutic antibody against said antigen
CN110144008B (zh) * 2018-02-12 2021-03-19 杭州尚健生物技术有限公司 Cd38蛋白抗体及其应用
GB201803342D0 (en) 2018-03-01 2018-04-18 Medimmune Ltd Methods
WO2019173420A1 (en) * 2018-03-08 2019-09-12 Phanes Therapeutics, Inc. Anti-claudin 18.2 antibodies and uses thereof
GB201806022D0 (en) 2018-04-12 2018-05-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
MX2020012270A (es) 2018-05-16 2021-04-28 Janssen Biotech Inc Métodos para tratar cánceres y potenciar la eficacia de agentes terapéuticos para el redireccionamiento de células t.
CN108752475B (zh) * 2018-06-14 2021-07-30 北京智仁美博生物科技有限公司 抗人cd38抗体及其用途
JP2021530461A (ja) 2018-07-10 2021-11-11 サノフイSanofi Ｃｄ３８およびｔｇｆ−ベータを標的とする、がんに対する組合せ療法
JP7459043B2 (ja) 2018-07-12 2024-04-01 ザ ユナイテッド ステイツ オブ アメリカ， アズ リプレゼンテッド バイ ザ セクレタリー， デパートメント オブ ヘルス アンド ヒューマン サービシーズ 親和性成熟ｃｄ２２特異的モノクローナル抗体およびその使用
JP2021526845A (ja) 2018-07-13 2021-10-11 ゲンマブ エー／エス Ｃｄ３８抗体を使用したトロゴサイトーシスを介した治療
PE20211858A1 (es) 2018-07-13 2021-09-21 Genmab As Variantes de anticuerpos anti-cd38 y sus usos
US12012463B2 (en) 2018-08-08 2024-06-18 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services High affinity monoclonal antibodies targeting glypican-2 and uses thereof
MX2021001519A (es) 2018-08-09 2021-05-27 Juno Therapeutics Inc Metodos para valorar acidos nucleicos integrados.
KR20210057752A (ko) 2018-09-11 2021-05-21 지앙수 헨그루이 메디슨 컴퍼니 리미티드 항-cd38 항체, 이의 항원 결합 단편, 및 제약 용도
CN109293773B (zh) * 2018-09-25 2020-09-04 上海邦耀生物科技有限公司 靶向cd38蛋白的抗体、嵌合抗原受体和药物
CN109265551B (zh) * 2018-09-25 2020-09-15 华东师范大学 Cd38抗体、嵌合抗原受体和药物
JP2022512722A (ja) 2018-10-17 2022-02-07 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 抗ｃｄ３８抗体の皮下投与を提供する方法
AU2019367218A1 (en) 2018-10-26 2021-06-03 TeneoFour, Inc. Heavy chain antibodies binding to CD38
AU2019374103A1 (en) 2018-11-01 2021-05-20 Juno Therapeutics, Inc. Chimeric antigen receptors specific for G Protein-Coupled Receptor Class C Group 5 Member D (GPRC5D)
CN113646335A (zh) 2018-11-01 2021-11-12 朱诺治疗学股份有限公司 使用对b细胞成熟抗原具有特异性的嵌合抗原受体的治疗的方法
CN113015805A (zh) 2018-11-13 2021-06-22 詹森生物科技公司 抗cd38抗体产生期间的痕量金属的控制
BR112021011399A2 (pt) 2018-12-14 2021-09-14 Morphosys Ag Formulação farmacêutica liofilizada, método para preparar uma formulação líquida de um anticorpo anti-cd38, formulação farmacêutica reconstituída e uso de uma formulação farmacêutica
US20220064324A1 (en) 2019-01-08 2022-03-03 The U.S.A., As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Cross species single domain antibodies targeting mesothelin for treating solid tumors
CN113784987A (zh) 2019-01-22 2021-12-10 美国政府(由卫生和人类服务部的部长所代表) 靶向磷脂酰肌醇蛋白聚糖-1的高亲和力单克隆抗体和使用方法
WO2020160020A1 (en) 2019-01-28 2020-08-06 Sanofi Methods of treating multiple myeloma
EP3917952A4 (en) * 2019-01-28 2022-11-02 Multitude Inc. CD44-SPECIFIC ANTIBODIES
EP3931220A1 (en) 2019-02-27 2022-01-05 F. Hoffmann-La Roche AG Dosing for treatment with anti-tigit and anti-cd20 or anti-cd38 antibodies
EP3938394A1 (en) 2019-03-15 2022-01-19 MorphoSys AG Anti-cd38 antibodies and pharmaceutical compositions thereof for the treatment of autoantibody-mediated autoimmune disease
CN114269375A (zh) * 2019-04-23 2022-04-01 赛诺菲 抗cd38抗体和配制品
AU2020265741A1 (en) 2019-05-01 2021-11-25 Editas Medicine, Inc. Cells expressing a recombinant receptor from a modified TGFBR2 Locus, related polynucleotides and methods
WO2020223571A1 (en) 2019-05-01 2020-11-05 Juno Therapeutics, Inc. Cells expressing a chimeric receptor from a modified cd247 locus, related polynucleotides and methods
EP3969004A1 (en) 2019-05-14 2022-03-23 Sanofi Methods of administering anti-cd38 antibody to treat multiple myeloma
US11655302B2 (en) 2019-06-10 2023-05-23 Sanofi Anti-CD38 antibodies and formulations
CA3144871A1 (en) 2019-06-27 2020-12-30 Crispr Therapeutics Ag Use of chimeric antigen receptor t cells and nk cell inhibitors for treating cancer
AU2020298572A1 (en) 2019-07-02 2021-11-18 Fred Hutchinson Cancer Center Recombinant Ad35 vectors and related gene therapy improvements
KR20220042161A (ko) 2019-07-23 2022-04-04 엥스띠뛰 퀴리 Suv39h1에 결함이 있는 면역 세포
US20220362299A1 (en) * 2019-10-21 2022-11-17 Purdue Research Foundation Engineered natural killer cells and methods for using the same in immunotherapy and autophagy inhibiton techniques
EP4031250A1 (en) 2019-10-22 2022-07-27 The United States of America, as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services High affinity nanobodies targeting b7h3 (cd276) for treating multiple solid tumors
CN115066613A (zh) 2019-11-06 2022-09-16 基因泰克公司 用于治疗血液癌症的诊断和治疗方法
GB201916150D0 (en) 2019-11-06 2019-12-18 Univ Of Ireland Galway Treatment of multiple myeloma
CN112876563B (zh) * 2019-11-29 2022-08-16 康诺亚生物医药科技（成都）有限公司 药物组合物及其制备方法和应用
CA3160502A1 (en) 2019-12-05 2021-06-10 Thomas Ballet Formulations of anti-cd38 antibodies for subcutaneous administration
JP2023505219A (ja) 2019-12-06 2023-02-08 サノフィ－アベンティス・ユー・エス・エルエルシー 再発性および／または不応性の多発性骨髄腫の処置のためのイサツキシマブの使用
US20230032465A1 (en) 2019-12-12 2023-02-02 The U.S.A., As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Antibody-drug conjugates specific for cd276 and uses thereof
MX2022007613A (es) 2019-12-18 2022-07-19 Teneofour Inc Union de anticuerpos de cadena pesada a cd38.
IL294453A (en) 2020-01-16 2022-09-01 Genmab As Formulations of cd38 antibodies and uses thereof
KR20230009386A (ko) 2020-04-10 2023-01-17 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 Ｂ-세포 성숙 항원을 표적화하는 키메라 항원 수용체로 조작된 세포 요법 관련 방법 및 용도
EP4150640A1 (en) 2020-05-13 2023-03-22 Juno Therapeutics, Inc. Methods of identifying features associated with clinical response and uses thereof
KR20230042283A (ko) 2020-06-26 2023-03-28 주노 테라퓨틱스 게엠베하 재조합 수용체를 조건부로 발현하는 조작된 ｔ 세포, 관련된 폴리뉴클레오티드 및 방법
US20220023344A1 (en) 2020-06-26 2022-01-27 Crispr Therapeutics Ag Allogeneic cell therapy of acute lymphoblastic leukemia using genetically engineered t cells targeting cd19
CN111808193B (zh) * 2020-06-30 2022-04-05 源道隆（苏州）医学科技有限公司 可结合人cd38的纳米抗体及其应用
US20230303974A1 (en) 2020-07-30 2023-09-28 Institut Curie Immune Cells Defective for SOCS1
CN114075285B (zh) * 2020-08-20 2023-05-30 瑞阳(苏州)生物科技有限公司 抗人cd38人源化单克隆抗体及其应用
WO2022056489A1 (en) 2020-09-14 2022-03-17 Vor Biopharma, Inc. Compositions and methods for cd38 modification
WO2022093745A1 (en) 2020-10-26 2022-05-05 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Single domain antibodies targeting sars coronavirus spike protein and uses thereof
CN112300281B (zh) * 2020-10-29 2021-06-11 杭州爱唯生命科技有限公司 含有nk细胞的药物组合物及其治疗癌症的用途
EP4240416A1 (en) 2020-11-03 2023-09-13 Sanofi-Aventis U.S. LLC Use of isatuximab for the treatment of multiple myeloma
WO2022098787A1 (en) 2020-11-04 2022-05-12 Juno Therapeutics, Inc. Cells expressing a chimeric receptor from a modified invariant cd3 immunoglobulin superfamily chain locus and related polynucleotides and methods
EP4251282A1 (en) 2020-11-27 2023-10-04 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM) Methods for diagnosis and monitoring of toxic epidermal necrolysis
US20240018248A1 (en) 2020-12-02 2024-01-18 Vib Vzw An ltbr agonist in combination therapy against cancer
WO2022137186A1 (en) 2020-12-23 2022-06-30 Crispr Therapeutics Ag Cancer treatment using cd38 inhibitor and/or lenalidomide and t-cells expressing a chimeric antigen receptor
KR20230142834A (ko) 2021-01-14 2023-10-11 모르포시스 아게 항-cd38 항체 및 이의 용도
MX2023009100A (es) 2021-02-03 2023-09-25 Mozart Therapeutics Inc Agentes aglutinantes y métodos para usar los mismos.
US20220275090A1 (en) 2021-02-22 2022-09-01 Janssen Biotech, Inc. Combination Therapies with Anti-CD38 Antibodies and PARP or Adenosine Receptor Inhibitors
TW202302642A (zh) 2021-03-01 2023-01-16 德商莫菲西斯公司 用於治療抗體介導移植物排斥用途之抗ｃｄ３８抗體
JP2024509853A (ja) 2021-03-03 2024-03-05 ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド Ｔ細胞療法およびｄｇｋ阻害剤の組合せ
WO2022232612A1 (en) 2021-04-29 2022-11-03 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Lassa virus-specific nanobodies and methods of their use
WO2022234009A2 (en) 2021-05-06 2022-11-10 Juno Therapeutics Gmbh Methods for stimulating and transducing t cells
WO2022238386A1 (en) 2021-05-10 2022-11-17 Institut Curie Methods for the treatment of cancer, inflammatory diseases and autoimmune diseases
AR125851A1 (es) 2021-05-12 2023-08-16 Crispr Therapeutics Ag Células inmunes modificadas genéticamente que se focalizan en cd70 para su uso en el tratamiento de neoplasias malignas hematopoyéticas
TW202309077A (zh) 2021-05-12 2023-03-01 瑞士商Ｃｒｉｓｐｒ治療公司 用於治療實性瘤的靶向ｃｄ７０的基因工程化免疫細胞
CN113244175B (zh) * 2021-05-22 2022-11-04 苏州大学 一种免疫囊泡美登素偶联物及其制备方法与应用
EP4346912A1 (en) 2021-05-25 2024-04-10 Institut Curie Myeloid cells overexpressing bcl2
CN117500831A (zh) 2021-06-09 2024-02-02 美国政府(由卫生和人类服务部的部长所代表) 用于治疗实体瘤的靶向pd-l1的跨物种单结构域抗体
CN113278075B (zh) * 2021-06-18 2021-12-14 芜湖森爱驰生物科技有限公司 一种炎症检测试剂盒
WO2022271987A1 (en) 2021-06-23 2022-12-29 TeneoFour, Inc. Anti-cd38 antibodies and epitopes of same
TW202321303A (zh) 2021-07-19 2023-06-01 德商莫菲西斯公司 抗pla2r自體抗體媒介膜性腎病變之治療
IL310372A (en) 2021-07-28 2024-03-01 Genentech Inc IL15/IL15R alpha heterodimeric FC-fused proteins for the treatment of blood cancer
TW202321308A (zh) 2021-09-30 2023-06-01 美商建南德克公司 使用抗ｔｉｇｉｔ抗體、抗ｃｄ３８抗體及ｐｄ—１軸結合拮抗劑治療血液癌症的方法
CN113896802A (zh) * 2021-10-09 2022-01-07 宜明昂科生物医药技术（上海）有限公司 靶向cd47和cd38的重组融合蛋白及其制备和用途
WO2023076876A1 (en) 2021-10-26 2023-05-04 Mozart Therapeutics, Inc. Modulation of immune responses to viral vectors
AU2022380155A1 (en) 2021-11-03 2024-06-20 Janssen Biotech, Inc. Corticosteriod reduction in treatment with anti-cd38 antibodies
CN113912727B (zh) * 2021-11-16 2023-05-02 福州迈新生物技术开发有限公司 抗cd38蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用
WO2023126458A1 (en) 2021-12-28 2023-07-06 Mnemo Therapeutics Immune cells with inactivated suv39h1 and modified tcr
CN114457017B (zh) * 2022-01-19 2023-10-17 四川大学华西第二医院 一种小鼠成纤维细胞肿瘤细胞株HXLyAF-KBM及其应用
WO2023147515A1 (en) 2022-01-28 2023-08-03 Juno Therapeutics, Inc. Methods of manufacturing cellular compositions
WO2023144303A1 (en) 2022-01-31 2023-08-03 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Cd38 as a biomarker and biotarget in t-cell lymphomas
WO2023159182A1 (en) 2022-02-18 2023-08-24 Rakuten Medical, Inc. Anti-programmed death-ligand 1 (pd-l1) antibody molecules, encoding polynucleotides, and methods of use
WO2023172917A1 (en) 2022-03-07 2023-09-14 Sanofi-Aventis U.S. Llc Use of isatuximab in combination with other agents for the treatment of multiple myeloma
WO2023187024A1 (en) 2022-03-31 2023-10-05 Institut Curie Modified rela protein for inducing interferon expression and engineered immune cells with improved interferon expression
TW202406934A (zh) 2022-05-03 2024-02-16 美商建南德克公司 抗Ｌｙ６Ｅ抗體、免疫結合物及其用途
WO2023213969A1 (en) 2022-05-05 2023-11-09 Juno Therapeutics Gmbh Viral-binding protein and related reagents, articles, and methods of use
WO2023220655A1 (en) 2022-05-11 2023-11-16 Celgene Corporation Methods to overcome drug resistance by re-sensitizing cancer cells to treatment with a prior therapy via treatment with a t cell therapy
WO2023230548A1 (en) 2022-05-25 2023-11-30 Celgene Corporation Method for predicting response to a t cell therapy
WO2023230581A1 (en) 2022-05-25 2023-11-30 Celgene Corporation Methods of manufacturing t cell therapies
WO2023240135A2 (en) 2022-06-07 2023-12-14 Actinium Pharmaceuticals, Inc. Bifunctional chelators and conjugates
WO2024040151A1 (en) 2022-08-18 2024-02-22 Pfizer Inc. Sirp alpha fusion protein and anti-cd38 antibody combination therapies
WO2024054944A1 (en) 2022-09-08 2024-03-14 Juno Therapeutics, Inc. Combination of a t cell therapy and continuous or intermittent dgk inhibitor dosing
WO2024079010A1 (en) 2022-10-10 2024-04-18 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy of a gprc5d tcb and cd38 antibodies
WO2024094660A1 (en) 2022-10-31 2024-05-10 Genmab A/S Cd38 antibodies and uses thereof
WO2024095173A1 (en) 2022-11-02 2024-05-10 Janssen Biotech, Inc. Methods of treating cancers
WO2024100604A1 (en) 2022-11-09 2024-05-16 Juno Therapeutics Gmbh Methods for manufacturing engineered immune cells
WO2024124132A1 (en) 2022-12-09 2024-06-13 Juno Therapeutics, Inc. Machine learning methods for predicting cell phenotype using holographic imaging

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1996016990A1 (en) * 1994-12-02 1996-06-06 The Wellcome Foundation Limited Humanized antibodies to cd38
WO2005103083A2 (en) * 2004-02-06 2005-11-03 Morphosys Ag Anti-cd38 human antibodies and uses therefor
WO2006099875A1 (en) * 2005-03-23 2006-09-28 Genmab A/S Antibodies against cd38 for treatment of multiple myeloma

Family Cites Families (125)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2429001A (en) 1946-12-28 1947-10-14 Axel H Stone Artificial hand
US2429004A (en) 1947-02-20 1947-10-14 Wachsman Michael Fabric contacting circuit closer for knitting machines
FR1516743A (fr) 1966-04-01 1968-02-05 Rhone Poulenc Sa Nouvel antibiotique et son procédé de préparation par culture de streptomyces croceus
US4307016A (en) 1978-03-24 1981-12-22 Takeda Chemical Industries, Ltd. Demethyl maytansinoids
US4256746A (en) 1978-11-14 1981-03-17 Takeda Chemical Industries Dechloromaytansinoids, their pharmaceutical compositions and method of use
JPS55102583A (en) 1979-01-31 1980-08-05 Takeda Chem Ind Ltd 20-acyloxy-20-demethylmaytansinoid compound
JPS55162791A (en) 1979-06-05 1980-12-18 Takeda Chem Ind Ltd Antibiotic c-15003pnd and its preparation
JPS5645483A (en) 1979-09-19 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd C-15003phm and its preparation
JPS5645485A (en) 1979-09-21 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd Production of c-15003pnd
EP0028683A1 (en) 1979-09-21 1981-05-20 Takeda Chemical Industries, Ltd. Antibiotic C-15003 PHO and production thereof
US4444887A (en) 1979-12-10 1984-04-24 Sloan-Kettering Institute Process for making human antibody producing B-lymphocytes
WO1982001188A1 (en) 1980-10-08 1982-04-15 Takeda Chemical Industries Ltd 4,5-deoxymaytansinoide compounds and process for preparing same
US4450254A (en) 1980-11-03 1984-05-22 Standard Oil Company Impact improvement of high nitrile resins
US4315929A (en) 1981-01-27 1982-02-16 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Method of controlling the European corn borer with trewiasine
US4313946A (en) 1981-01-27 1982-02-02 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Chemotherapeutically active maytansinoids from Trewia nudiflora
JPS57192389A (en) 1981-05-20 1982-11-26 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid
US4716111A (en) 1982-08-11 1987-12-29 Trustees Of Boston University Process for producing human antibodies
GB8308235D0 (en) 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5807715A (en) 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
US5258498A (en) 1987-05-21 1993-11-02 Creative Biomolecules, Inc. Polypeptide linkers for production of biosynthetic proteins
IL89489A0 (en) 1988-03-09 1989-09-10 Hybritech Inc Chimeric antibodies directed against human carcinoembryonic antigen
EP0362371A4 (en) 1988-04-15 1990-10-24 Protein Design Labs, Inc. Il-2 receptor-specific chimeric antibodies
WO1989009825A1 (en) 1988-04-16 1989-10-19 Celltech Limited Method for producing recombinant dna proteins
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
ATE151110T1 (de) 1988-09-02 1997-04-15 Protein Eng Corp Herstellung und auswahl von rekombinantproteinen mit verschiedenen bindestellen
US5750373A (en) 1990-12-03 1998-05-12 Genentech, Inc. Enrichment method for variant proteins having altered binding properties, M13 phagemids, and growth hormone variants
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
WO1991010737A1 (en) 1990-01-11 1991-07-25 Molecular Affinities Corporation Production of antibodies using gene libraries
US5780225A (en) 1990-01-12 1998-07-14 Stratagene Method for generating libaries of antibody genes comprising amplification of diverse antibody DNAs and methods for using these libraries for the production of diverse antigen combining molecules
AU633698B2 (en) 1990-01-12 1993-02-04 Amgen Fremont Inc. Generation of xenogeneic antibodies
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5698426A (en) 1990-09-28 1997-12-16 Ixsys, Incorporated Surface expression libraries of heteromeric receptors
JP3672306B2 (ja) 1991-04-10 2005-07-20 ザ スクリップス リサーチ インスティテュート ファージミドを使用するヘテロ二量体受容体ライブラリー
EP0519596B1 (en) 1991-05-17 2005-02-23 Merck & Co. Inc. A method for reducing the immunogenicity of antibody variable domains
EP0590067A1 (en) 1991-06-14 1994-04-06 Xoma Corporation Microbially-produced antibody fragments and their conjugates
EP1400536A1 (en) 1991-06-14 2004-03-24 Genentech Inc. Method for making humanized antibodies
US5565332A (en) 1991-09-23 1996-10-15 Medical Research Council Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
ATE275198T1 (de) 1991-12-02 2004-09-15 Medical Res Council Herstellung von antikörpern auf phagenoberflächen ausgehend von antikörpersegmentbibliotheken.
US5733743A (en) 1992-03-24 1998-03-31 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
CA2076465C (en) 1992-03-25 2002-11-26 Ravi V. J. Chari Cell binding agent conjugates of analogues and derivatives of cc-1065
WO1993021319A1 (en) 1992-04-08 1993-10-28 Cetus Oncology Corporation HUMANIZED C-erbB-2 SPECIFIC ANTIBODIES
CA2119128C (en) * 1992-07-16 2000-05-30 Lynn M. Rose Alleviation of symptoms associated with inflammatory disease states
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
WO1995015982A2 (en) 1993-12-08 1995-06-15 Genzyme Corporation Process for generating specific antibodies
WO1995020401A1 (en) 1994-01-31 1995-08-03 Trustees Of Boston University Polyclonal antibody libraries
US5516637A (en) 1994-06-10 1996-05-14 Dade International Inc. Method involving display of protein binding pairs on the surface of bacterial pili and bacteriophage
EP1978033A3 (en) 1995-04-27 2008-12-24 Amgen Fremont Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
CA2219486A1 (en) 1995-04-28 1996-10-31 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
JP2978435B2 (ja) 1996-01-24 1999-11-15 チッソ株式会社 アクリロキシプロピルシランの製造方法
US5916771A (en) 1996-10-11 1999-06-29 Abgenix, Inc. Production of a multimeric protein by cell fusion method
CA2616914C (en) 1996-12-03 2012-05-29 Abgenix, Inc. Egfr-binding antibody
CZ294425B6 (cs) 1997-04-14 2005-01-12 Micromet Ag Způsob výroby anti-humánního antigenového receptoru, anti-humánní antigenový receptor, řetězec VH a VL, souprava pro selekci anti-humánních antigenových receptorů a farmaceutická kompozice, obsahující uvedený receptor
US6235883B1 (en) 1997-05-05 2001-05-22 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
PT1071700E (pt) 1998-04-20 2010-04-23 Glycart Biotechnology Ag Modificação por glicosilação de anticorpos para melhorar a citotoxicidade celular dependente de anticorpos
GB9818731D0 (en) 1998-08-27 1998-10-21 Univ Portsmouth Compounds
WO2000012508A2 (en) 1998-08-27 2000-03-09 Spirogen Limited Pyrrolbenzodiazepines
US7223397B1 (en) 1999-01-07 2007-05-29 Research Development Foundation Potentiation of anti-CD38-Immunotoxin cytotoxicity
DE60032633T2 (de) 1999-11-24 2007-10-04 Immunogen Inc., Cambridge Zytotoxische mittel, die taxane enthalten und ihre therapeutische anwendung
AU767394C (en) 1999-12-29 2005-04-21 Immunogen, Inc. Cytotoxic agents comprising modified doxorubicins and daunorubicins and their therapeutic use
EP1283721A4 (en) * 2000-05-26 2004-07-07 Smithkline Beecham Corp ANTI-RANK-LIGAND-BINDING MONOCLONAL ANTIBODIES USEFUL FOR TREATING DISEASES CAUSED BY THE RANK-LIGANDS
GB0013810D0 (en) * 2000-06-06 2000-07-26 Celltech Chiroscience Ltd Biological products
US6333410B1 (en) 2000-08-18 2001-12-25 Immunogen, Inc. Process for the preparation and purification of thiol-containing maytansinoids
CN102311986B (zh) 2000-10-06 2015-08-19 协和发酵麒麟株式会社 产生抗体组合物的细胞
US6441163B1 (en) 2001-05-31 2002-08-27 Immunogen, Inc. Methods for preparation of cytotoxic conjugates of maytansinoids and cell binding agents
US6716821B2 (en) 2001-12-21 2004-04-06 Immunogen Inc. Cytotoxic agents bearing a reactive polyethylene glycol moiety, cytotoxic conjugates comprising polyethylene glycol linking groups, and methods of making and using the same
AU2003217912A1 (en) 2002-03-01 2003-09-16 Xencor Antibody optimization
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
US6756397B2 (en) 2002-04-05 2004-06-29 Immunogen, Inc. Prodrugs of CC-1065 analogs
US6534660B1 (en) 2002-04-05 2003-03-18 Immunogen, Inc. CC-1065 analog synthesis
AU2003236018A1 (en) 2002-04-09 2003-10-20 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. METHOD OF ENHANCING ACTIVITY OF ANTIBODY COMPOSITION OF BINDING TO FcGamma RECEPTOR IIIa
WO2003085118A1 (fr) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Procede de production de composition anticorps
US6596757B1 (en) 2002-05-14 2003-07-22 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising polyethylene glycol-containing taxanes and their therapeutic use
US7538195B2 (en) 2002-06-14 2009-05-26 Immunogen Inc. Anti-IGF-I receptor antibody
DK2345671T3 (en) 2002-09-27 2016-02-15 Xencor Inc Optimized Fc variants and methods for their formation
US7541440B2 (en) * 2002-09-30 2009-06-02 Immunomedics, Inc. Chimeric, human and humanized anti-granulocyte antibodies and methods of use
EA010570B1 (ru) 2002-11-07 2008-10-30 Иммьюноджен, Инк. Антитело к cd33 и способы его применения
WO2004043989A2 (en) * 2002-11-07 2004-05-27 Medarex, Inc. Human monoclonal antibodies to heparanase
US7276497B2 (en) 2003-05-20 2007-10-02 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising new maytansinoids
WO2005014649A2 (en) * 2003-08-08 2005-02-17 Pharmacia Corporation Method for the preparation of molecules having antibody activity
US20050208627A1 (en) * 2003-09-18 2005-09-22 Bowdish Katherine S Elicitation of antibodies to self peptides in mice by immunization with dendritic cells
JPWO2005035741A1 (ja) 2003-10-09 2006-12-21 協和醗酵工業株式会社 ゲノムが改変された細胞
EP1675857B1 (en) 2003-10-22 2011-07-13 THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA, as represented by THE SECRETARY, DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES Pyrrolobenzodiazepine derivatives, compositions comprising the same and methods related thereto
WO2005056766A2 (en) * 2003-12-04 2005-06-23 Medimmune, Inc. TARGETED DRUG DELIVERY USING EphA2 OR Eph4 BINDING MOIETIES
JP5166861B2 (ja) 2004-03-09 2013-03-21 スピロゲン リミティッド ピロロベンゾジアゼピン
PL1737891T3 (pl) * 2004-04-13 2013-08-30 Hoffmann La Roche Przeciwciała przeciw selektynie p
WO2005103081A2 (en) * 2004-04-20 2005-11-03 Genmab A/S Human monoclonal antibodies against cd20
AR049390A1 (es) * 2004-06-09 2006-07-26 Wyeth Corp Anticuerpos contra la interleuquina-13 humana y usos de los mismos
AU2005254110B2 (en) * 2004-06-21 2010-12-09 Washington University Antibodies against west nile virus and therapeutic and prophylactic uses thereof
EP1919950A1 (en) 2004-07-15 2008-05-14 Xencor, Inc. Optimized fc variants
CA2575607C (en) * 2004-08-03 2017-07-11 Innate Pharma Therapeutic and diagnostic methods and compositions targeting 4ig-b7-h3 and its counterpart nk cell receptor
US20060223147A1 (en) 2004-08-05 2006-10-05 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd., Process for producing glycoprotein composition
WO2006047350A2 (en) 2004-10-21 2006-05-04 Xencor, Inc. IgG IMMUNOGLOBULIN VARIANTS WITH OPTIMIZED EFFECTOR FUNCTION
TW200635608A (en) * 2004-12-15 2006-10-16 Neuralab Ltd Aβ antibodies for use in improving cognition
CN105535967B (zh) * 2005-02-15 2022-05-03 杜克大学 抗cd19抗体及其在肿瘤学中的应用
CA2602663A1 (en) 2005-03-31 2006-10-05 Xencor, Inc. Fc variants with optimized properties
EP2799451A1 (en) * 2005-05-24 2014-11-05 MorphoSys AG Generation and profiling of fully human HuCAL GOLD®-derived therapeutic antibodies specific for human CD38
DE102005030112A1 (de) 2005-06-28 2007-01-18 Patent-Treuhand-Gesellschaft für elektrische Glühlampen mbH Lötzusatzwerkstoff
WO2007041635A2 (en) 2005-10-03 2007-04-12 Xencor, Inc. Fc variants with optimized fc receptor binding properties
EP1813614B1 (en) 2006-01-25 2011-10-05 Sanofi Cytotoxic agents comprising new tomaymycin derivatives
EP1864682A1 (en) 2006-06-09 2007-12-12 Sanofi-Aventis Leptomycin derivatives
EP1914242A1 (en) * 2006-10-19 2008-04-23 Sanofi-Aventis Novel anti-CD38 antibodies for the treatment of cancer
BRPI0917204A2 (pt) * 2008-07-21 2015-12-01 Immunomedics Inc variantes estruturais de anticorpos para melhores características terapêuticas
RU2595839C2 (ru) * 2010-09-27 2016-08-27 МорфоСис АГ Антитело к cd38 и леналидомид или бортезомиб для лечения множественной миеломы и nhl
JOP20210044A1 (ar) * 2010-12-30 2017-06-16 Takeda Pharmaceuticals Co الأجسام المضادة لـ cd38
BR112014009925B1 (pt) * 2011-10-28 2022-09-20 Teva Pharmaceuticals Australia Pty Ltd Construtores de polipeptídeos e seus usos
WO2013125861A1 (ko) 2012-02-20 2013-08-29 주식회사 노리코리아 지식 유닛에 기초하여 교육 서비스를 제공하기 위한 방법, 시스템 및 컴퓨터 판독 가능한 기록 매체
US10342869B2 (en) * 2012-12-07 2019-07-09 The Regents Of The University Of California Compositions comprising anti-CD38 antibodies and lenalidomide
EP3191187B1 (en) * 2014-09-09 2021-07-28 Janssen Biotech, Inc. Combination therapies with anti-cd38 antibodies
KR102597989B1 (ko) * 2014-12-04 2023-11-02 얀센 바이오테크 인코포레이티드 급성 골수성 백혈병을 치료하기 위한 항-cd38 항체
EP3243138A4 (en) * 2015-01-06 2018-07-25 Hewlett-Packard Development Company, L.P. Adapter to concatenate connectors
MX2017014810A (es) * 2015-05-20 2018-05-11 Janssen Biotech Inc Anticuerpos anti-cd38 para el tratamiento de amiloidosis de cadena ligera y otras enfermedades malignas hematológicas positivas para cd38.
IL256242B1 (en) * 2015-06-22 2024-05-01 Janssen Biotech Inc Combination therapies for HEME malignancies with anti-CD38 antibodies and sorbibin inhibitors
US20170044265A1 (en) * 2015-06-24 2017-02-16 Janssen Biotech, Inc. Immune Modulation and Treatment of Solid Tumors with Antibodies that Specifically Bind CD38
US10781261B2 (en) * 2015-11-03 2020-09-22 Janssen Biotech, Inc. Subcutaneous formulations of anti-CD38 antibodies and their uses
ES2912729T3 (es) * 2015-11-03 2022-05-27 Janssen Biotech Inc Formulaciones subcutáneas de anticuerpos anti-CD38 y sus usos
EP4249068A3 (en) * 2017-10-10 2023-11-22 Sanofi Anti-cd38 antibodies and combinations with anti-cd3 and anti-cd28 antibodies
US11605302B2 (en) 2020-11-10 2023-03-14 Rockwell Collins, Inc. Time-critical obstacle avoidance path planning in uncertain environments

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1996016990A1 (en) * 1994-12-02 1996-06-06 The Wellcome Foundation Limited Humanized antibodies to cd38
WO2005103083A2 (en) * 2004-02-06 2005-11-03 Morphosys Ag Anti-cd38 human antibodies and uses therefor
WO2006099875A1 (en) * 2005-03-23 2006-09-28 Genmab A/S Antibodies against cd38 for treatment of multiple myeloma

Non-Patent Citations (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DATABASE EMBL 1 January 1900 (1900-01-01), BASI G, ET AL: "HUMANISED 3D6 IMMUNOGLOBULIN VERSION 1 VH POLYNUCLEOTIDE SEQ ID:36", XP002442066, Database accession no. ADR88440 *
DATABASE EMBL 1 January 1900 (1900-01-01), BEAVERS L S, BUMOL T F, GADSKI R A: "CHIMERIC MAB 9.2.27 LIGHT CHAIN VARIABLE REGION DNA SEQUENCE", XP002442057, Database accession no. AAQ10379 *
DATABASE EMBL 1 January 1900 (1900-01-01), BHASKAR V ET AL: "tmeff2#18 heavy chain variable region encoding dna seq id no:9", XP002442058, Database accession no. ADC27440 *
DATABASE EMBL 1 January 1900 (1900-01-01), CHUA M M, GOODGAL S H, KARUSH F: "MUS MUSCULUS IGM ANTI-DNS HYBRIDOMA VDJ4 REGION OF J558 FAMILY MRNA", XP002442062, Database accession no. M15226 *
DATABASE EMBL 1 January 1900 (1900-01-01), CLARKE S H, ET AL: "MOUSE IG REARRANGED KAPPA-CHAIN V-REGION MRNA FROM PLASMACYTOMA PC3741, PARTIAL CDS", XP002442060, Database accession no. M21522 *
DATABASE EMBL 1 January 1900 (1900-01-01), HARVEY B R, ET AL: "SEQUENCE 20 FROM PATENT US 6916474", XP002442063, Database accession no. AR696413 *
DATABASE EMBL 1 January 1900 (1900-01-01), INOUE T, TSUDA T: "Anti-human IgE monoclonal antibody", XP002442061, Database accession no. E40596 *
DATABASE EMBL 1 January 1900 (1900-01-01), LUSTGARTEN D L, ET AL: "MUS MUSCULUS IG REARRANGED KAPPA-CHAIN GENE V19-J1 REGION", XP002442059, Database accession no. L16832 *
DATABASE EMBL 1 January 1900 (1900-01-01), MA J, WANG J: "MURINE DNA SEQUENCE SEQ ID NO:18", XP002442064, Database accession no. ADO57830 *
DATABASE EMBL 1 January 1900 (1900-01-01), XU H, ET AL: "MUS MUSCULUS CONE GT4-1-M1 MONOCLONAL ANTI-ALPHA-1,3-GALACTOSYLTRANSFERASE IGM HEAVY CHAIN MRNA, PARTIAL CDS", XP002442065, Database accession no. AY090904 *
ELLIS JONATHAN H ET AL: "Engineered anti-CD38 monoclonal antibodies for immunotherapy of multiple myeloma.", THE JOURNAL OF IMMUNOLOGY, THE AMERICAN ASSOCIATION OF IMMUNOLOGISTS, US, vol. 155, no. 2, 1 January 1995 (1995-01-01), US, pages 925 - 937, XP002146232, ISSN: 0022-1767 *
ERICKSON HANS K; PARK PETER U; WIDDISON WAYNE C; KOVTUN YELENA V; GARRETT LISA M; HOFFMAN KAREN; LUTZ ROBERT J; GOLDMACHER VICTOR : "ANTIBODY- MAYTANSINOID CONJUGATES ARE ACTIVATED IN TARGETED CANCER CELLS BY LYSOSOMAL DEGRADATION AND LINKER-DEPENDENT INTRACELLULAR PROCESSING", CANCER RESEARCH, AMERICAN ASSOCIATION FOR CANCER RESEARCH, US, vol. 66, no. 8, 15 April 2006 (2006-04-15), US, pages 4426 - 4433, XP008074767, ISSN: 0008-5472, DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-05-4489 *
GOLDMACHER VICTOR S ET AL: "Anti-CD-38-blocked ricin: An immunotoxin for the treatment of multiple myeloma", BLOOD, AMERICAN SOCIETY OF HEMATOLOGY, US, vol. 84, no. 9, 1 January 1994 (1994-01-01), US, pages 3017 - 3025, XP002424989, ISSN: 0006-4971 *
KONOPLEVA M ET AL: "Stromal cells prevent apoptosis of AML cells by up-regulation of anti-apoptotic proteins", LEUKEMIA., MACMILLAN PRESS LTD., US, vol. 16, no. 9, 1 September 2002 (2002-09-01), US, pages 1713 - 1724, XP002424990, ISSN: 0887-6924, DOI: 10.1038/sj.leu.2402608 *
OJIMA I, ET AL: "Tumor-specific novel taxoid-monoclonal antibody conjugates.", JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY, AMERICAN CHEMICAL SOCIETY, US, vol. 45, no. 26, 19 December 2002 (2002-12-19), US, pages 5620 - 5623, XP002331656, ISSN: 0022-2623, DOI: 10.1021/jm025540g *
STEVENSON F. K., ET AL.: "PRELIMINARY STUDIES FOR AN IMMUNOTHERAPEUTIC APPROACH TO THE TREATMENT OF HUMAN MYELOMA USING CHIMERIC ANTI-CD38 ANTIBODY.", BLOOD, AMERICAN SOCIETY OF HEMATOLOGY, US, vol. 77., no. 05., 1 March 1991 (1991-03-01), US, pages 1071 - 1079., XP000930093, ISSN: 0006-4971 *
WANG P, ET AL.: "MONOTHERAPY WITH ABX-EGF, A FULLY HUMAN ANTI-EGF RECEPTOR MONOCLONAL ANTIBODY, FOR THE TREATMENT OF RENAL CELL CARCINOMAS IN AN ATHYMIC MOUSE MODEL", AMERICAN ASSOCIATION FOR CANCER RESEARCH. PROCEEDINGS OF THE ANNUAL MEETING, AMERICAN ASSOCIATION FOR CANCER RESEARCH, US, vol. 43, 1 March 2002 (2002-03-01), US, pages 912, XP008056434, ISSN: 0197-016X *

Also Published As

Publication number Publication date
ES2726754T3 (es) 2019-10-09
PE20081171A1 (es) 2008-09-26
US20170343550A1 (en) 2017-11-30
WO2008047242A8 (en) 2009-08-06
KR20170129960A (ko) 2017-11-27
SI2076540T1 (sl) 2019-06-28
CL2017001580A1 (es) 2018-03-02
TWI609884B (zh) 2018-01-01
KR101800328B1 (ko) 2017-11-22
KR20150023010A (ko) 2015-03-04
HUE043351T2 (hu) 2019-08-28
TW201630938A (zh) 2016-09-01
EP2076540B1 (en) 2019-02-27
AU2007311511B9 (en) 2020-11-12
AU2007311511C1 (en) 2021-11-04
CR10679A (es) 2009-06-24
TWI609885B (zh) 2018-01-01
US20120156218A1 (en) 2012-06-21
SG10202012950TA (en) 2021-02-25
DK2076540T3 (da) 2019-05-13
TN2009000058A1 (en) 2010-08-19
NL301077I2 (nl) 2021-02-03
MY159374A (en) 2016-12-30
US20110262454A1 (en) 2011-10-27
SG10201501733QA (en) 2015-04-29
AU2007311511A1 (en) 2008-04-24
RS58716B1 (sr) 2019-06-28
HRP20190742T1 (hr) 2019-06-14
TW201734053A (zh) 2017-10-01
BRPI0718130B1 (pt) 2022-05-03
CY2020039I1 (el) 2021-03-12
US8153765B2 (en) 2012-04-10
CN101616933B (zh) 2015-06-10
BRPI0718130A2 (pt) 2013-11-05
GT200900079A (es) 2010-07-09
LT2076540T (lt) 2019-06-10
LTPA2020536I1 (lt) 2020-12-28
PT2076540T (pt) 2019-06-06
UY30655A1 (es) 2008-05-31
WO2008047242A3 (en) 2008-06-26
ME00614B (me) 2011-12-20
JP2014221761A (ja) 2014-11-27
US20200408765A1 (en) 2020-12-31
SG174777A1 (en) 2011-10-28
CA2663209A1 (en) 2008-04-24
NO345911B1 (no) 2021-10-11
DOP2017000177A (es) 2017-09-15
KR101852317B1 (ko) 2018-04-25
EP3498735A1 (en) 2019-06-19
HK1139956A1 (en) 2010-09-30
KR20150119976A (ko) 2015-10-26
HUS2000048I1 (hu) 2020-12-28
JP6121366B2 (ja) 2017-04-26
EP3909980A1 (en) 2021-11-17
KR101534452B1 (ko) 2015-07-06
IL197217B (en) 2019-12-31
NL301077I1 (ru) 2020-12-02
IL197217A0 (en) 2011-08-01
CA2989609A1 (en) 2008-04-24
WO2008047242A9 (en) 2009-02-05
CY2020039I2 (el) 2021-05-05
AR063488A1 (es) 2009-01-28
CY1122302T1 (el) 2021-01-27
JP5607364B2 (ja) 2014-10-15
CO6190555A2 (es) 2010-08-19
MEP10609A (en) 2011-12-20
TW200823236A (en) 2008-06-01
CN101616933A (zh) 2009-12-30
KR20140105035A (ko) 2014-08-29
NO2021044I1 (no) 2021-10-13
TWI538917B (zh) 2016-06-21
JP2010506582A (ja) 2010-03-04
CL2007002995A1 (es) 2008-05-16
CA2663209C (en) 2018-02-13
MX2009004050A (es) 2009-04-28
UA114879C2 (uk) 2017-08-28
WO2008047242A2 (en) 2008-04-24
EA200970393A1 (ru) 2009-12-30
CL2012002012A1 (es) 2012-11-05
NZ575188A (en) 2012-07-27
NO20091712L (no) 2009-05-13
SV2009003203A (es) 2009-10-27
ZA200901395B (en) 2010-06-30
AU2007311511B2 (en) 2013-08-22
TW201518322A (zh) 2015-05-16
MA30895B1 (fr) 2009-11-02
SG173345A1 (en) 2011-08-29
EP1914242A1 (en) 2008-04-23
PL2076540T3 (pl) 2019-08-30
US20090304710A1 (en) 2009-12-10
EP2076540A2 (en) 2009-07-08
NO20211026A1 (no) 2009-05-13
KR20090078330A (ko) 2009-07-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA025215B1 (ru) Новые антитела к cd38 для лечения рака
EA020324B1 (ru) АНТИТЕЛА К РЕЦЕПТОРУ ЭФРИНА EphA2 И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ
AU2020264364B2 (en) Novel anti-cd38 antibodies for the treatment of cancer
TW202210518A (zh) 結合人cd38的抗體、其製備方法和用途

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KG MD TJ TM

ND4A Extension of term of a eurasian patent