KR20150119976A - 암 치료를 위한 신규한 항-ｃｄ38 항체 - Google Patents

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안나 스칼렛스카야
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대니얼 타바레스
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Abstract

본원에서는 CD38에 특이적으로 결합하고, 세포자멸사, 항체 의존성 세포-매개 세포독성 (ADCC) 및/또는 보체 의존성 세포독성 (CDC)에 의해 CD38+ 세포를 사멸시킬 수 있는 항체, 인간화 항체, 재표면화 항체, 항체 단편, 유도된 항체, 및 이들과 세포독성제의 접합체를 제공한다. 상기 항체 및 이의 단편은 CD38 단백질을 발현하는 종양, 예컨대 다발성 골수종, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 급성 골수성 백혈병 또는 급성 림프구성 백혈병의 치료, 또는 자가면역 및 염증성 질환, 예컨대 전신성 루푸스, 류머티스성 관절염, 다발성 경화증, 홍반증 및 천식의 치료에 사용될 수 있다. 상기 유도된 항체는 상승된 수준의 CD38을 발현하는 종양의 진단 및 영상화에 사용될 수 있다. 또한 제공되는 것은 세포 결합제 및 세포독성제를 포함하는 세포독성 접합체, 상기 접합체를 포함하는 치료적 조성물, 세포 성장의 억제 및 질환의 치료에 상기 접합체를 사용하는 방법, 및 세포독성 접합체를 포함하는 키트이다. 특히, 세포 결합제는 CD38 단백질을 인식하여 결합하는 모노클로날 항체 및 이의 에피토프-결합 단편이다.

Description

암 치료를 위한 신규한 항-ＣＤ38 항체{NOVEL ANTI-CD38 ANTIBODIES FOR THE TREATMENT OF CANCER}
CD38은 긴 C-말단 세포외 도메인 및 짧은 N-말단 세포질 도메인을 갖는 45 kD의 제II형 막관통 당단백질이다. CD38 단백질은 NAD+의 시클릭 ADP-리보스 (cADPR)로의 전환에 촉매작용을 할 수 있고, 또한 cADPR을 ADP-리보스로 가수분해시킬 수 있는 2기능성 세포외 효소이다. 개체 발생 동안, CD38은 CD34+ 수임된 줄기 세포, 및 림프 세포, 적혈구 및 골수 세포의 계통-수임된 전구체 상에서 나타난다. CD38 발현은 주로 림프 계통에서 T 및 B 세포 발생의 상이한 단계에서 발현 수준이 변화되며 지속된다.
CD38은 비-호지킨 림프종 (NHL), 버킷 림프종 (BL), 다발성 골수종 (MM), B 세포 만성 림프구성 백혈병 (B-CLL), B 및 T 세포 급성 림프구성 백혈병 (ALL), T 세포 림프종 (TCL), 급성 골수성 백혈병 (AML), 모발상 세포 백혈병 (HCL), 호지킨 림프종 (HL) 및 만성 골수성 백혈병 (CML)을 포함하는 다수의 조혈성 악성종양 및 다양한 조혈성 악성종양으로부터 유래된 세포주에서 상향조절된다. 다른 한편으로, 조혈 시스템의 가장 원시적인 다능성 줄기 세포는 CD38-이다. 조혈성 악성종양에서의 CD38 발현 및 그것의 질환 진행과의 상관관계는 CD38을 항체 요법에 대한 매력적인 표적으로 만들었다.
CD38은 Ca2 + 동원 (M. Morra et al., 1998, FASEB J., 12: 581-592; M. T. Zilber et al., 2000, Proc Natl Acad Sci USA, 97: 2840-2845) 및 림프 및 골수 세포 또는 세포주에서의 포스포리파제 C-γ, ZAP-70, syk 및 c-cbl을 포함하는 다수의 신호전달 분자의 티로신 인산화를 통한 신호 전달 (A. Funaro et al., 1993, Eur J Immunol, 23: 2407-2411; M. Morra et al., 1998, FASEB J., 12: 581-592; A. Funaro et al., 1990, J Immunol, 145: 2390-2396; M. Zubiaur et al., 1997, J Immunol, 159: 193-205; S. Deaglio et al., 2003, Blood 102: 2146-2155; E. Todisco et al., 2000, Blood, 95: 535-542; M. Konopleva et al., 1998, J Immunol, 161: 4702-4708; M. T. Zilber et al., 2000, Proc Natl Acad Sci USA, 97: 2840-2845; A. Kitanaka et al., 1997, J Immunol, 159: 184-192; A. Kitanaka et al., 1999, J Immunol, 162: 1952-1958; R. Mallone et al., 2001, Int Immunol, 13: 397-409)에 관여하는 것으로 보고되어 있다. 이들 관찰을 기초로, CD38은 림프 및 골수 세포의 정상적인 발생 동안 그들의 성숙 및 활성화에 중요한 신호전달 분자인 것으로 제안되었다.
신호 전달 및 조혈작용에서의 CD38의 정확한 역할은, 특히 이들 신호 전달 연구의 대부분이 비-생리학적 리간드인 CD38 및 항-CD38 모노클로날 항체를 전위적으로 과발현하는 세포주를 사용해왔기 때문에 아직 명확하지 않다. CD38 단백질은 Ca2+ 동원을 유도할 수 있는 분자인 cADPR을 생성하는 효소 활성을 갖기 때문에 (H. C. Lee et al., 1989, J Biol Chem, 264: 1608-1615; H. C. Lee and R. Aarhus, 1991, Cell Regul, 2: 203-209), 모노클로날 항체에 의한 CD38 라이게이션이 cADPR의 생성을 증가시킴으로써 림프구에서의 Ca2 + 동원 및 신호 전달을 유발하는 것으로 제안되어 왔다 (H. C. Lee et al., 1997, Adv Exp Med Biol, 419: 411-419). 이러한 가설과는 반대로, CD38 단백질의 말단부 절단 및 점-돌연변이 분석은 그의 세포질 꼬리 또는 그의 효소 활성 중 어느 것도 항-CD38 항체에 의해 매개되는 신호전달에 필수적이지 않음을 나타내었다 (A. Kitanaka et al., 1999, J Immunol, 162: 1952-1958; F. E. Lund et al., 1999, J Immunol, 162: 2693-2702; S. Hoshino et al., 1997, J Immunol, 158, 741-747).
CD38의 기능에 대한 최상의 증거는 선천적인 면역성에서의 결함, 및 수지상 세포 이동에서의 결함에 기인한 감소된 T-세포 의존성 체액 반응을 갖는 CD38-/- 녹아웃 마우스로부터 얻어진다 (S. Partida-Sanchez et al., 2004, Immunity, 20: 279-291; S. Partida-Sanchez et al., 2001, Nat Med, 7: 1209-1216). 그럼에도 불구하고, 하기와 같이 조혈작용 동안의 CD38 발현 패턴이 인간과 마우스 사이에서 크게 상이하기 때문에, 마우스에서의 CD38 기능이 인간에서와 동일한지는 명확하지 않다: a) 인간에서의 미성숙 전구체 줄기 세포와 달리, 마우스에서의 유사한 전구체 줄기 세포는 높은 수준의 CD38을 발현하고 (T. D. Randall et al., 1996, Blood, 87: 4057-4067; R. N. Dagher et al., 1998, Biol Blood Marrow Transplant, 4: 69-74), b) 인간 B 세포 발생 동안에는 배 중심 B 세포 및 형질 세포에서 높은 수준의 CD38 발현이 발견되는 반면 (F. M. Uckun, 1990, Blood, 76: 1908-1923; M. Kumagai et al., 1995, J Exp Med, 181: 1101-1110), 마우스에서는 상응하는 세포에서의 CD38 발현 수준이 낮다 (A. M. Oliver et al., 1997, J Immunol, 158: 1108-1115; A. Ridderstad and D. M. Tarlinton 1998, J Immunol, 160: 4688-4695).
다양한 종양 세포 및 세포주에 대해 상이한 증식 성질을 갖는 몇몇의 항-인간 CD38 항체가 문헌에 기재되어 있다. 예를 들어, 마우스 Fab 및 인간 IgG1 Fc를 갖는 키메라 OKT10 항체는 MM 환자 또는 정상 개체로부터의 말초 혈액 단핵 효과기 세포의 존재 하에서 림프종 세포에 대해 매우 효율적으로 항체 의존성 세포-매개 세포독성 (ADCC)을 매개한다 (F. K. Stevenson et al. 1991, Blood, 77: 1071-1079). 항-CD38 항체 AT13/5의 CDR-이식된 인간화 버전은 CD38-양성 세포주에 대해 강력한 ADCC 활성을 갖는 것으로 나타났다 (US 09/797,941 A1). 인간 모노클로날 항-CD38 항체는 ADCC 및/또는 보체 의존성 세포독성 (CDC)에 의한 CD38-양성 세포주의 시험관내 사멸을 매개하고, MM 세포주 RPMI-8226을 갖는 SCID 마우스에서 종양 성장을 지연시키는 것으로 나타났다 (WO2005/103083 A2). 다른 한편으로, 몇몇의 항-CD38 항체 IB4, SUN-4B7 및 OKT10 (IB6, AT1 또는 AT2는 아님)은 정상 개체로부터의 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)의 증식을 유도하였다 (C. M. Ausiello et al. 2000, Tissue Antigens, 56: 539-547).
종래 기술의 항체 중 일부는 CD38+ B 세포에서 세포자멸사를 유발시킬 수 있는 것으로 나타났다. 그러나, 그들은 기질 세포 또는 기질-유래 시토킨의 존재 하에서만 그렇게 할 수 있다. 작동성 항-CD38 항체 (IB4)는 인간 배 중심 (GC) B 세포의 세포자멸사를 방지하고 (S. Zupo et al. 1994, Eur J Immunol, 24: 1218-1222), KG-1 및 HL-60 AML 세포의 증식을 유도하는 것 (M. Konopleva et al. 1998, J Immunol, 161: 4702-4708)으로 보고되었지만, 저캣(Jurkat) T 림프모구성 세포에서는 세포자멸사를 유도한다 (M. Morra et al. 1998, FASEB J, 12: 581-592). 또 다른 항-CD38 항체 T16은 ALL 환자로부터의 미성숙 림프 세포 및 백혈병 림프모구 세포 (M. Kumagai et al. 1995, J Exp Med, 181: 1101-1110) 및 AML 환자로부터의 백혈병 골수모구 세포 (E. Todisco et al. 2000, Blood, 95: 535-542)의 세포자멸사를 유도하기는 하였지만, T16은 기질 세포 또는 기질-유래 시토킨 (IL-7, IL-3, 줄기 세포 인자)의 존재 하에서만 세포자멸사를 유도하였다.
다른 한편으로, 일부 종래 기술 항체는 가교결합 후에는 세포자멸사를 유도하지만, 단독 인큐베이션 시에는 어떠한 세포자멸사 활성도 전혀 없었다 (WO 2006/099875).
CD38은 다양한 조혈성 악성종양에 대한 항체 요법에서의 매력적인 표적이기 때문에, 본 출원인은 CD38-양성의 악성 조혈 세포에 대한 세포자멸사, ADCC 및 CDC 유도의 3가지 세포독성 활성에서의 높은 효능에 대해 다수의 항-인간 CD38 항체를 생성하여 스크리닝하였다. 본 발명은 세포자멸사, ADCC 및 CDC 유도의 3가지 상이한 세포독성 메커니즘에 의해 CD38+ 세포를 사멸시킬 수 있는 신규한 항-CD38 항체를 기재한다. 놀랍게도, 본 발명은 기질 세포 또는 기질-유래 시토킨의 존재 없이도 CD38+ 세포의 세포자멸사를 직접 유도할 수 있는 최초의 항-CD38 항체를 개시한다.
발명의 개요
본 발명의 목적은 CD38에 특이적으로 결합하고, 세포자멸사에 의해 CD38+ 세포를 사멸시킬 수 있는 항체를 제공하는 것이다. 일부 종래 기술 항체는 가교결합 시에만 세포자멸사를 유발시킬 수 있고, 그렇지 않으면 어떠한 세포자멸사 활성도 없는 반면, 본 발명의 항체는 단독으로 인큐베이션 시에도 CD38+ 세포의 세포자멸사적 세포사를 유도할 수 있다. 본 발명의 한 양상에서, 본 발명의 항체는 ADCC 또는 CDC에 의해 CD38+ B 세포를 사멸시킬 수 있다. 보다 또 다른 양상에서, 본 발명의 항체는 전술한 메커니즘, 즉 세포자멸사, ADCC 및 CDC 중 2가지 이상에 의해 CD38+ 세포를 사멸시킬 수 있다. 놀랍게도, 본 발명의 항체는 세포자멸사, ADCC 및 CDC의 3가지 상이한 메커니즘 모두에 의해 CD38+ B 세포를 사멸시키는 것으로 증명된 최초의 항-CD38 항체이다. 본 발명의 추가적인 실시양태에서, 상기 항체는 기질 세포 또는 기질-유래 시토킨의 부재 하에서도 세포자멸사에 의해 CD38+ B 세포를 사멸시킬 수 있다.
본 발명의 항체는 특히 림프종 세포, 백혈병 세포 및 다발성 골수종 세포를 포함하는 악성 CD38+ B 세포를 사멸시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, CD38+ B 세포는 NHL, BL, MM, B-CLL, ALL, TCL, AML, HCL, HL 또는 CML 세포이다.
본 발명의 한 양상에서, 본 발명의 항체는 기질 세포 또는 기질-유래 시토킨의 부재 하에서 세포자멸사에 의해 적어도 24％의 다우디(Daudi) 림프종 세포 및/또는 적어도 7％의 라모스(Ramos) 림프종 세포 및/또는 11％의 MOLP-8 다발성 골수종 세포 및/또는 36％의 SU-DHL-8 림프종 세포 및/또는 62％의 DND-41 백혈병 세포 및/또는 27％의 NU-DUL-1 림프종 세포 및/또는 9％의 JVM-13 백혈병 세포 및/또는 4％의 HC-1 백혈병 세포를 사멸시킬 수 있다.
본 발명의 항체는 폴리클로날 또는 모노클로날일 수 있다. 바람직한 것은 모노클로날 항-CD38 항체이다. 더욱 바람직한 실시양태에서는, 경쇄 및 중쇄 가변 영역 모두의 아미노산 서열, 경쇄 및 중쇄 가변 영역에 대한 유전자의 cDNA 서열, CDR (상보성 결정 영역)의 확인, 표면 아미노산의 확인, 및 재조합 형태에서의 발현을 위한 수단과 관련하여 본원에서 충분히 특성화된, 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 및 38SB39로부터 선택된 뮤린(murine) 항체가 제공된다.
본 발명은 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 및 38SB39로부터 선택된 뮤린 항-CD38 모노클로날 항체의 키메라 버전을 포함한다. 또한 포함되는 것은 항체 또는 이의 에피토프-결합 단편의 가변 영역 프레임워크의 표면-노출 잔기가 경쇄 및 중쇄 모두에서 공지된 인간 항체 표면과 더욱 밀접하게 유사하도록 대체된, 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 및 38SB39 항체의 재표면화 또는 인간화 버전이다. 본 발명의 인간화 항체 및 이의 에피토프-결합 단편은 이들이 투여되는 인간 대상체에서 뮤린 버전보다 덜 면역원성 (또는 완전히 비-면역원성)이라는 점에서 개선된 성질을 갖는다. 따라서, 본 발명의 상이한 버전의 인간화 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 및 38SB39 항체 및 이의 에피토프-결합 단편은 인간에게 면역원성이지 않으면서 CD38을 특이적으로 인식한다.
본 발명의 인간화 버전의 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 및 38SB39 항체는 각 항체의 경쇄 및 중쇄 가변 영역 모두의 아미노산 서열, 경쇄 및 중쇄 가변 영역에 대한 유전자의 DNA 서열, 상보성 결정 영역 (CDR)의 확인, 가변 영역 프레임워크 표면 아미노산 잔기의 확인, 및 재조합 형태에서의 발현을 위한 수단의 개시와 관련하여 본원에서 충분히 특성화된다.
본 발명에서 (1) CD38을 인식하여 결합하는 세포 결합제, 및 (2) 세포독성제를 포함하는 세포독성 접합체들 간의 접합체의 용도가 또한 구현된다. 상기 세포독성 접합체에서, 세포 결합제는 CD38에 대한 친화력이 높고, 세포독성제는 CD38을 발현하는 세포에 대한 세포독성의 정도가 높아서, 본 발명의 세포독성 접합체는 효과적인 사멸제를 형성한다.
바람직한 실시양태에서, 세포 결합제는 항-CD38 항체 (예를 들어, 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 및 38SB39) 또는 이의 에피토프-결합 단편, 더욱 바람직하게는 인간화 항-CD38 항체 (예를 들어, 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 및 38SB39) 또는 이의 에피토프-결합 단편이고, 여기서 세포독성제는 직접적으로 또는 절단가능하거나 절단가능하지 않은 링커를 통해 항체 또는 이의 에피토프-결합 단편에 공유결합으로 부착된다. 더욱 바람직한 실시양태에서, 세포 결합제는 인간화 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 및 38SB39 항체 또는 이의 에피토프-결합 단편이고, 세포독성제는 탁솔, 메이탄시노이드, 토메이마이신 유도체, 렙토마이신 유도체, CC-1065 또는 CC-1065 유사체이다.
더욱 바람직하게는, 세포 결합제는 인간화 항-CD38 항체 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 및 38SB39이고, 세포독성제는 메이탄신 화합물, 예컨대 DM1 또는 DM4이다.
본 발명은 CD38에 결합하는 능력이 유지된 항-CD38 항체의 단편의 용도를 또한 포함한다. 본 발명의 또 다른 양상에서는, 항-CD38 항체의 기능성 등가물의 용도가 구현된다.
본 발명은 CD38을 발현하는 세포의 성장을 억제하는 방법을 또한 포함한다. CD38을 발현하는 세포의 성장을 억제하는 방법은 생체내에서 발생하여 세포의 사멸을 초래하지만, 바람직한 실시양태에서는 시험관내 및 생체외 적용 또한 포함된다.
본 발명은 항-CD38 항체 또는 항-CD38 항체-세포독성제 접합체, 및 제약상 허용가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 치료용 조성물을 또한 제공한다. 일부 실시양태에서, 상기 치료용 조성물은 제2의 치료제를 포함한다. 이러한 제2의 치료제는 상피 성장 인자 (EGF), 섬유모세포 성장 인자 (FGF), 간세포 성장 인자 (HGF), 조직 인자 (TF), 단백질 C, 단백질 S, 혈소판-유래 성장 인자 (PDGF), 헤레귤린, 대식세포 자극 단백질 (MSP) 또는 혈관 내피 성장 인자 (VEGF)의 길항제, 또는 HER2 수용체, HER3 수용체, c-MET 및 기타 수용체 티로신 키나제를 비롯한, 상피 성장 인자 (EGF), 섬유모세포 성장 인자 (FGF), 간세포 성장 인자 (HGF), 조직 인자 (TF), 단백질 C, 단백질 S, 혈소판-유래 성장 인자 (PDGF), 헤레귤린, 대식세포 자극 단백질 (MSP) 또는 혈관 내피 성장 인자 (VEGF)에 대한 수용체의 길항제를 포함하는 군으로부터 선택될 수 있다. 이러한 제2의 치료제는 또한 CD3, CD14, CD19, CD20, CD22, CD25, CD28, CD30, CD33, CD36, CD40, CD44, CD52, CD55, CD59, CD56, CD70, CD79, CD80, CD103, CD134, CD137, CD138 및 CD152를 포함하는 분화 집단 (cluster of differentiation; CD) 항원을 표적으로 하는 항체로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다. 이러한 제2의 치료제는 또한 화학요법제 또는 면역조절제의 군으로부터 선택될 수 있다.
본 발명은 상기 치료용 조성물을 사용하여 암 또는 염증성 질환, 예컨대 자가면역 질환에 걸린 대상체을 치료하는 방법을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 암은 NHL, BL, MM, B-CLL, ALL, TCL, AML, HCL, HL 및 CML로 이루어진 군으로부터 선택된다. 또 다른 실시양태에서, 자가면역 질환은 전신 홍반성 루푸스, 다발성 경화증, 류머티스성 관절염, 크론병(Crohn's disease), 궤양성 대장염, 위염, 하시모토 갑상선염(Hashimoto's thyroiditis), 강직성 척추염, C형 간염-관련 한랭글로불린혈증성 혈관염, 만성 국소 뇌염, 수포성 유사천포창, 혈우병 A, 막증식성 사구체신염, 쇼그렌 증후군(Sjogren's syndrome), 성인 및 소아 피부근염, 성인 다발성 근염, 만성 두드러기, 원발성 담즙성 간경변, 특발성 혈소판 감소성 자반증, 시신경 척수염, 그레이브스 갑상선 이상성 질환(Graves' dysthyroid disease), 수포성 유사천포창, 막증식성 사구체신염, 처그-스트라우스 증후군(Churg-Strauss syndrome) 및 천식으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 바람직한 실시양태에서, 세포독성 접합체는 항-CD38 항체 및 세포독성제를 포함한다. 더욱 바람직한 실시양태에서, 세포독성 접합체는 인간화 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 및 38SB39 항체-DM1 접합체, 인간화 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 및 38SB39 항체-DM4 또는 인간화 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 및 38SB39 항체-탁산 접합체를 포함하고, 접합체는 제약상 허용가능한 담체 또는 부형제와 함께 투여된다.
본 발명의 또 다른 양상에서, 항-CD38 항체는 생물학적 샘플 내의 CD38 단백질을 검출하는 데 사용된다. 바람직한 실시양태에서, 상기 항체는 종양 조직 내의 CD38 수준을 측정하는 데 사용된다.
본 발명은 항-CD38 항체 또는 항-CD38 항체-세포독성제 접합체 및 사용 설명서를 포함하는 키트를 또한 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 항-CD38 항체는 인간화 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 및 38SB39 항체이고, 세포독성제는 메이탄신 화합물, 예컨대 DM1 또는 DM4, 토메이마이신 유도체, 렙토마이신 유도체 또는 탁산이고, 설명서는 접합체를 암에 걸린 대상체의 치료에서 사용하기 위한 것이다. 키트는 제약상 허용가능한 제형의 제조에 필요한 성분, 예컨대 접합체가 동결건조 상태 또는 농축 형태인 경우의 희석제, 및 제형의 투여에 필요한 성분을 또한 포함할 수 있다.
달리 언급하지 않는 한, 본원에서 인용된 모든 참조문헌 및 특허는 참조로 포함된다.
본원은 CD38에 특이적으로 결합하고, 세포자멸사, 항체 의존성 세포-매개 세포독성 (ADCC) 및/또는 보체 의존성 세포독성 (CDC)에 의해 CD38+ 세포를 사멸시킬 수 있는 항체, 인간화 항체, 재표면화 항체, 항체 단편, 유도된 항체, 및 이들과 세포독성제의 접합체를 제공한다.
도 1a는 인간 CD38을 발현하는 300-19 세포 및 CD38-양성 라모스 림프종 세포에 대한 정제된 뮤린 항-CD38 항체 38SB13, 38SB18, 38SB19의 특이적 결합의 FACS 분석을 나타낸다.
도 1b는 인간 CD38을 발현하는 300-19 세포 및 CD38-양성 라모스 림프종 세포에 대한 정제된 뮤린 항-CD38 항체 38SB30, 38SB31, 38SB39, 및 대조군 항-CD38 항체 AT13/5의 특이적 결합의 FACS 분석을 나타낸다.
도 2는 라모스 세포에 의해 수립된 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 및 38SB39의 결합 적정 곡선을 나타낸다.
도 3은 38SB13, 38SB19 또는 AT13/5 (10 nM)와의 24시간 인큐베이션 후 세포자멸사를 겪은 라모스 세포의 FACS 도트 플롯 (FL4-H; TO-PRO-3 염색; y-축 및 FL1-H; 아넥신(Annexin) V-FITC 염색; x-축)을 나타낸다.
도 4a는 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31, 38SB39, 38SB7, 38SB23, IB4, AT13/5, OKT10 또는 SUN-4B7과의 24시간 인큐베이션 후 세포자멸사를 겪은 라모스 세포의 평균 백분율을 나타낸다. 중복 샘플로부터의 아넥신 V-양성 세포의 평균 백분율 (y-축은 TO-PRO-3 양성 및 음성 세포 둘 다를 포함함)을 플로팅하였다.
도 4b는 도 4a에서와 동일한 항체 세트와의 24시간 인큐베이션 후 세포자멸사를 겪은 다우디 세포의 평균 백분율을 나타낸다.
도 4c는 도 4a에서와 동일한 항체 세트와의 24시간 인큐베이션 후 세포자멸사를 겪은 Molp-8 세포의 평균 백분율을 나타낸다.
도 5a는 hu38SB19-LC를 발현시키는 데 사용된 인간 발현 벡터의 다이어그램을 나타낸다.
도 5b는 hu38SB19-HC를 발현시키는 데 사용된 인간 발현 벡터의 다이어그램을 나타낸다.
도 5c는 hu38SB19LC 및 hu38SB19HC 둘 다를 발현시키는 데 사용된 인간 발현 벡터의 다이어그램을 나타낸다.
도 6a는 항체 ch38SB13, ch38SB18 및 ch38SB19에 의해 매개된 라모스 세포에 대한 ADCC 활성을 나타낸다.
도 6b는 항체 ch38SB30, ch38SB31 및 ch38SB39에 의해 매개된 라모스 세포에 대한 ADCC 활성을 나타낸다.
도 7a는 항체 ch38SB18, ch38SB19, ch38SB31, 및 비-결합 키메라 인간 IgG1 대조군 항체에 의해 매개된 LP-1 다발성 골수종 세포에 대한 ADCC 활성을 나타낸다.
도 7b는 항체 ch38SB19 및 뮤린 38SB19에 의해 매개된 다우디 세포에 대한 ADCC 활성을 나타낸다.
도 8a는 ch38SB19 항체 및 비-결합 키메라 인간 IgG1 대조군 항체에 의해 매개된 NALM-6 B-ALL 세포에 대한 ADCC 활성을 나타낸다.
도 8b는 ch38SB19 항체 및 비-결합 키메라 인간 IgG1 대조군 항체에 의해 매개된 MOLT-4 T-ALL 세포에 대한 ADCC 활성을 나타낸다.
도 9a는 항체 ch38SB13, ch38SB18, ch38SB19, ch38SB30 및 ch38SB39에 의해 매개된 Raji-IMG 세포에 대한 CDC 활성을 나타낸다.
도 9b는 항체 ch38SB19 및 ch38SB31에 의해 매개된 Raji-IMG 세포에 대한 CDC 활성을 나타낸다.
도 10은 항체 ch38SB18, ch38SB19, ch38SB31, 및 비-결합 키메라 인간 IgG1 대조군 항체에 의해 매개된 LP-1 다발성 골수종 세포에 대한 CDC 활성을 나타낸다.
도 11a는 항체 ch38SB13, cch38SB19 및 ch38SB39에 의해 매개된 다우디 세포에 대한 CDC 활성을 나타낸다.
도 11b는 항체 ch38SB18 및 ch38SB30에 의해 매개된 다우디 세포에 대한 CDC 활성을 나타낸다.
도 11c는 항체 ch38SB19 및 ch38SB31에 의해 매개된 다우디 세포에 대한 CDC 활성을 나타낸다.
도 12a는 라모스 세포에의 결합에 대한 ch38SB19, hu38SB19 v1.00 및 hu38SB19 v1.20의 결합 적정 곡선을 나타낸다.
도 12b는 라모스 세포에 대한 비오틴화 뮤린 38SB19 항체의 결합과 경쟁하는 ch38SB19, hu38SB19 v1.00 및 hu38SB19 v1.00의 능력을 비교하는 결합 곡선을 나타낸다.
도 13은 ch38SB19, hu38SB19 v1.00 또는 hu38SB19 v1.20 항체와의 24시간 인큐베이션 후 세포자멸사를 겪은 다우디 세포의 평균 백분율을 나타낸다.
도 14는 항체 ch38SB19, hu38SB19 v1.00, hu38SB19 v1.20, 및 비-결합 키메라 인간 IgG1 대조군 항체에 의해 매개된 LP-1 다발성 골수종 세포에 대한 ADCC 활성을 나타낸다.
도 15a는 항체 ch38SB19, hu38SB19 v1.00 및 hu38SB19 v1.20에 의해 매개된 Raji-IMG 림프종 세포에 대한 CDC 활성을 나타낸다.
도 15b는 항체 ch38SB19, hu38SB19 v1.00 및 hu38SB19 v1.20에 의해 매개된 LP-1 다발성 골수종 세포에 대한 CDC 활성을 나타낸다.
도 15c는 항체 ch38SB19, hu38SB19 v1.00 및 hu38SB19 v1.20에 의해 매개된 DND-41 T-세포 급성 림프모구성 백혈병 세포에 대한 CDC 활성을 나타낸다.
도 16은 SU-DHL-8 비만성 거대 B 세포 림프종 세포, NU-DUL-1 B-세포 림프종 세포, DND-41 T-세포 급성 림프모구성 백혈병 세포, JVM-13 B-세포 만성 림프구성 백혈병 세포 및 HC-1 모발상 세포 백혈병 세포에 대한, hu38SB19 v1.00 항체와의 24시간 인큐베이션 후의 아넥신 V 양성 세포의 평균 백분율을 나타낸다.
도 17은 수립된 미세전이 인간 라모스 종양을 갖는 SCID 마우스의 생존율을 나타낸다. 마우스는 지시된 바와 같이 뮤린 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 또는 38SB39 항체, 또는 PBS로 처리하였다.
도 18은 수립된 미세전이 인간 다우디 종양을 갖는 SCID 마우스의 생존율을 나타낸다. 마우스는 지시된 바와 같이 hu38SB19 또는 mu38SB19 항체, 또는 PBS로 처리하였다.
도 19는 NCI-H929 다발성 골수종 이종이식 종양을 갖는 SCID 마우스의 평균 종양 부피를 나타낸다. 마우스는 지시된 바와 같이 hu38SB19, 비-결합 대조군 IgG1 항체 또는 PBS로 처리하였다.
도 20은 MOLP-8 다발성 골수종 이종이식 종양을 갖는 SCID 마우스의 평균 종양 부피를 나타낸다. 마우스는 지시된 바와 같이 hu38SB19, mu38SB19, 비-결합 대조군 IgG1 항체 또는 PBS로 처리하였다.
본원에서는 CD38에 특이적으로 결합할 수 있는 신규한 항체가 제공된다. 구체적으로, 본 발명자들은 세포 표면 상에서 CD38에 특이적으로 결합하여 세포자멸사에 의해 CD38+ 세포를 사멸시키는 신규한 항체를 발견하였다. 본 발명의 한 양상에서, 항-CD38 항체는 또한 항체 의존성 세포독성 (ADCC)에 의해 CD38+ 세포를 사멸시킬 수 있다. 또 다른 양상에서, 본 발명의 항-CD38 항체는 보체 의존성 세포독성 (CDC)에 의해 CD38+ 세포를 사멸시킬 수 있다. 보다 또 다른 양상에서, 본 발명의 항-CD38 항체는 전술한 메커니즘인 세포자멸사, ADCC 및 CDC 중 2가지 이상에 의해 CD38+ 세포를 사멸시킬 수 있다. 구체적으로는, 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 항-CD38 항체는 세포자멸사, ADCC 및 CDC에 의해 CD38+ 세포를 사멸시킬 수 있다. 따라서, 본 발명은 3가지 상이한 메커니즘에 의해 CD38+ 세포를 사멸시킬 수 있는 최초의 항-CD38 항체를 제공한다.
CD38에 결합할 수 있고 CD38+ 세포에서 세포자멸사적 세포사를 유발시킬 수 있는 항체는 이미 기재되어 있지만 (M. Kumagai et al., 1995, J Exp Med, 181: 1101-1110; E. Todisco et al. 2000, Blood, 95: 535-542), 본 발명의 항체는 기질 세포 또는 기질-유래 시토킨의 부재 하에서 세포자멸사 활성이 증명된 최초의 것이다. 본원에서 사용된 용어 "기질"은 결합 조직, 혈관 및 염증 세포를 포함하는 종양의 비-악성 지지 조직을 지칭한다. 기질 세포는 성장 인자, 및 암 세포의 거동에 영향을 줄 수 있는 기타 물질, 예컨대 시토킨을 생산한다. 본원에서 사용된 용어 "시토킨"은 면역성, 염증 및 조혈작용을 매개하고 조절하는 소형 분비 단백질 (예를 들어, IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, 및 IL-6, IFNg, IL-3, IL-7 및 GM-CSF)을 지칭한다. 본원에서, 종래 기술의 항체는 기질 세포 또는 기질-유래 시토킨의 부재 하에 세포자멸사적 세포사를 유발시킬 수 없는 것으로 나타나 있다. 반면에, 본 발명의 항-CD38 항체는 동일한 조건 하에서 강력한 세포자멸사 활성을 나타낸다.
또 다른 양상에서, 본 발명의 항체는 3×10-9 M 이하의 KD로 CD38 단백질에 결합할 수 있다.
본원에서 사용된 용어 "CD38"은, 예를 들어 진뱅크(Genbank) 수탁 번호 NP_001766에서와 같은 아미노산 서열을 포함하는 제II형 막관통 단백질을 지칭한다. "CD38+ 세포"는 CD38 단백질을 발현하는 세포이다. 바람직하게는, CD38+ 세포는 포유동물 세포이다.
본 발명의 한 실시양태에서, CD38+ 세포는 악성 세포이다. 또 다른 실시양태에서, CD38+ 세포는 B 세포이다. 바람직한 실시양태에서, CD38+ 세포는 조혈성 악성종양으로부터 유래된 종양 세포이다. 더욱 바람직한 실시양태에서, CD38+ 세포는 림프종 세포, 백혈병 세포 또는 다발성 골수종 세포이다. 추가의 바람직한 실시양태에서, CD38+ 세포는 NHL, BL, MM, B-CLL, ALL, TCL, AML, HCL, HL 또는 CML 세포이다.
따라서, 한 실시양태에서, 본 발명은 기질 세포 또는 기질-유래 시토킨의 부재 하에 적어도 24％의 다우디 림프종 세포를 사멸시킬 수 있는 항-CD38 항체를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항-CD38 항체는 기질 세포 또는 기질-유래 시토킨의 부재 하에 적어도 7％의 라모스 림프종 세포를 사멸시킬 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항-CD38 항체는 기질 세포 또는 기질-유래 시토킨의 부재 하에 적어도 11％의 MOLP-8 다발성 골수종 세포를 사멸시킬 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항-CD38 항체는 기질 세포 또는 기질-유래 시토킨의 부재 하에 적어도 36％의 SU-DHL-8 림프종 세포를 사멸시킬 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항-CD38 항체는 기질 세포 또는 기질-유래 시토킨의 부재 하에 적어도 27％의 NU-DUL-1 림프종 세포를 사멸시킬 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항-CD38 항체는 기질 세포 또는 기질-유래 시토킨의 부재 하에 적어도 62％의 DND-41 백혈병 세포를 사멸시킬 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항-CD38 항체는 기질 세포 또는 기질-유래 시토킨의 부재 하에 적어도 9％의 JVM-13 백혈병 세포를 사멸시킬 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항-CD38 항체는 기질 세포 또는 기질-유래 시토킨의 부재 하에 적어도 4％의 HC-1 백혈병 세포를 사멸시킬 수 있다.
항체
용어 "항체"는 본원에서 가장 넓은 의미로 사용되고, 구체적으로 임의의 이소타입, 예컨대 IgG, IgM, IgA, IgD 및 IgE의 모노클로날 항체 (전장 모노클로날 항체 포함), 폴리클로날 항체, 다중특이적 항체, 키메라 항체 및 항체 단편을 포함한다. 특정 항원과 반응성인 항체는 재조합 방법, 예컨대 파지 또는 유사 벡터 내의 재조합 항체의 라이브러리의 선별에 의해, 또는 항원 또는 항원-코딩 핵산으로 동물을 면역화시킴으로써 생산할 수 있다.
전형적인 IgG 항체는 디술피드 결합에 의해 연결된 2개의 동일한 중쇄 및 2개의 동일한 경쇄로 구성된다. 각각의 중쇄 및 경쇄는 불변 영역 및 가변 영역을 함유한다. 각각의 가변 영역은 "상보성 결정 영역" ("CDR") 또는 "초가변 영역"으로 칭해지는 3개의 절편을 함유하고, 이들은 항원의 에피토프에 결합하는 것을 주로 담당한다. 이들은 일반적으로 N-말단으로부터 순차적으로 번호가 매겨진 CDR1, CDR2 및 CDR3으로 지칭된다. 가변 영역의 더욱 고도로 보존된 부분은 "프레임워크 영역"으로 칭해진다.
본원에서 사용된 "VH" 또는 "VH"는 Fv, scFv, dsFv, Fab, Fab' 또는 F(ab')2 단편의 중쇄를 포함하는, 항체의 면역글로불린 중쇄의 가변 영역을 지칭한다. "VL" 또는 "VL"에 대한 언급은 Fv, scFv, dsFv, Fab, Fab' 또는 F(ab')2 단편의 경쇄를 포함하는, 항체의 면역글로불린 경쇄의 가변 영역을 지칭한다.
"폴리클로날 항체"는 하나 이상의 또 다른 동일하지 않은 항체들 사이에서 또는 이러한 항체의 존재 하에 생산된 항체이다. 일반적으로, 폴리클로날 항체는 동일하지 않은 항체들을 생산하는 여러 또 다른 B-림프구들의 존재 하에 B-림프구로부터 생산된다. 일반적으로, 폴리클로날 항체는 면역화된 동물로부터 직접적으로 수득된다.
본원에서 사용된 "모노클로날 항체"는 실질적으로 균질한 항체들의 집단으로부터 수득된 항체이고, 즉 이러한 집단을 형성하는 항체들은 미량으로 존재할 수 있는 가능한 천연 발생 돌연변이를 제외하고는 본질적으로 동일하다. 이러한 항체들은 단일 에피토프에 대한 것이고, 따라서 고도로 특이적이다.
"에피토프"는 항체가 결합하는 항원 상의 부위이다. 항원이 중합체, 예컨대 단백질 또는 다당류인 경우, 에피토프는 인접한 잔기들에 의해, 또는 항원성 중합체의 폴딩에 의해 가까이 근접하게 되는 인접하지 않은 잔기들에 의해 형성될 수 있다. 단백질에서, 인접한 아미노산들에 의해 형성된 에피토프는 변성 용매에의 노출 시에 전형적으로 유지되는 반면, 인접하지 않은 아미노산들에 의해 형성된 에피토프는 전형적으로 상기 노출 하에 손실된다.
본원에서 사용된 용어 "KD"는 특정 항체/항원 상호작용의 해리 상수를 지칭한다.
본 발명은 경쇄 및 중쇄 모두의 아미노산 서열, CDR의 확인, 표면 아미노산의 확인, 및 재조합 형태에서의 발현을 위한 수단과 관련하여 충분히 특성화된, 신규한 뮤린 항-CD38 항체인 본원의 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 및 38SB39로부터 진행된다. 항체 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 및 38SB39 경쇄 및 중쇄, 및 인간화 버전의 일차 아미노산 및 DNA 서열이 본원에서 개시된다.
38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 및 38SB39 뮤린 항-CD38 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주는 2006년 6월 21일자로 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션 (미국 20110-2209 버지니아주 마나싸스 유니버시티 불러바드 10801)에 각각 수탁 번호 PTA-7667, PTA-7669, PTA-7670, PTA-7666, PTA-7668 및 PTA-7671 하에 기탁되었다.
본 발명의 범주는 이러한 서열들을 포함하는 항체 및 단편에 한정되지 않는다. 그보다는, CD38에 특이적으로 결합하고, 세포자멸사, ADCC 및/또는 CDC에 의해 CD38+ 세포를 사멸시킬 수 있는 모든 항체 및 단편이 본 발명의 범주 내에 속한다. 따라서, 상기 항체 및 항체 단편은 스캐폴드, CDR, 경쇄 및 중쇄의 아미노산 서열이 항체 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 및 38SB39 또는 인간화 유도체와 상이할 수 있지만, 여전히 본 발명의 범주 내에 속한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 서열 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 및 36으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 CDR을 하나 이상 포함하는 항체 또는 이의 에피토프-결합 단편을 제공한다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 항체는 하나 이상의 중쇄 및 하나 이상의 경쇄를 포함하고, 여기서 상기 중쇄는 서열 1, 2, 3, 7, 8, 9, 13, 14, 15, 19, 20, 21, 25, 26, 27, 31, 32 및 33으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 3개의 순차적인 CDR을 포함하고, 상기 경쇄는 서열 4, 5, 6, 10, 11, 12, 16, 17, 18, 22, 23, 24, 28, 29, 30, 34, 35 및 36으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 3개의 순차적인 CDR을 포함한다.
더욱 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 항체는 서열 1, 2, 3, 4, 5 및 6의 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 3개의 CDR을 포함한다. 추가적인 더욱 바람직한 실시양태에서, 하나 이상의 중쇄 및 하나 이상의 경쇄를 포함하는 38SB13항체가 제공되고, 여기서 상기 중쇄는 서열 1, 2 및 3으로 이루어진 아미노산 서열을 갖는 3개의 순차적인 CDR을 포함하고, 상기 경쇄는 서열 4, 5 및 6으로 이루어진 아미노산 서열을 갖는 3개의 순차적인 CDR을 포함한다.
또 다른 더욱 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 항체는 서열 7, 8, 9, 10, 11 및 12의 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 3개의 CDR을 포함한다. 추가적인 더욱 바람직한 실시양태에서, 하나 이상의 중쇄 및 하나 이상의 경쇄를 포함하는 38SB18 항체가 제공되고, 여기서 상기 중쇄는 서열 7, 8 및 9로 이루어진 아미노산 서열을 갖는 3개의 순차적인 CDR을 포함하고, 상기 경쇄는 서열 10, 11 및 12로 이루어진 아미노산 서열을 갖는 3개의 순차적인 CDR을 포함한다.
또 다른 더욱 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 항체는 서열 13, 14, 15, 16, 17 및 18의 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 3개의 CDR을 포함한다. 추가적인 더욱 바람직한 실시양태에서, 하나 이상의 중쇄 및 하나 이상의 경쇄를 포함하는 38SB19 항체가 제공되고, 여기서 상기 중쇄는 서열 13, 14 및 15로 이루어진 아미노산 서열을 갖는 3개의 순차적인 CDR을 포함하고, 상기 경쇄는 서열 16, 17 및 18로 이루어진 아미노산 서열을 갖는 3개의 순차적인 CDR을 포함한다.
또 다른 더욱 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 항체는 서열 19, 20, 21, 22, 23, 24의 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 3개의 CDR을 포함한다. 추가적인 더욱 바람직한 실시양태에서, 하나 이상의 중쇄 및 하나 이상의 경쇄를 포함하는 38SB30 항체가 제공되고, 여기서 상기 중쇄는 서열 19, 20 및 21로 이루어진 아미노산 서열을 갖는 3개의 순차적인 CDR을 포함하고, 상기 경쇄는 서열 22, 23 및 24로 이루어진 아미노산 서열을 갖는 3개의 순차적인 CDR을 포함한다.
또 다른 더욱 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 항체는 서열 25, 26, 27, 28, 29 및 30의 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 3개의 CDR을 포함한다. 추가적인 더욱 바람직한 실시양태에서, 하나 이상의 중쇄 및 하나 이상의 경쇄를 포함하는 38SB31 항체가 제공되고, 여기서 상기 중쇄는 서열 25, 26 및 27로 이루어진 아미노산 서열을 갖는 3개의 순차적인 CDR을 포함하고, 상기 경쇄는 서열 28, 29 및 30으로 이루어진 아미노산 서열을 갖는 3개의 순차적인 CDR을 포함한다.
또 다른 더욱 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 항체는 서열 31, 32, 33, 34, 35 및 36의 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 3개의 CDR을 포함한다. 추가적인 더욱 바람직한 실시양태에서, 하나 이상의 중쇄 및 하나 이상의 경쇄를 포함하는 38SB39 항체가 제공되고, 여기서 상기 중쇄는 서열 31, 32 및 33으로 이루어진 아미노산 서열을 갖는 3개의 순차적인 CDR을 포함하고, 상기 경쇄는 서열 34, 35 및 36으로 이루어진 아미노산 서열을 갖는 3개의 순차적인 CDR을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항-CD38 항체는 서열 38, 40, 42, 44, 46 및 48로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함한다. 더욱 바람직한 실시양태에서, 서열 38로 이루어진 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는 38SB13 항체가 제공된다. 더욱 바람직한 실시양태에서, 서열 40으로 이루어진 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는 38SB18 항체가 제공된다. 더욱 바람직한 실시양태에서, 서열 42로 이루어진 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는 38SB19 항체가 제공된다. 더욱 바람직한 실시양태에서, 서열 44로 이루어진 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는 38SB30 항체가 제공된다. 더욱 바람직한 실시양태에서, 서열 46으로 이루어진 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는 38SB31 항체가 제공된다. 더욱 바람직한 실시양태에서, 서열 48로 이루어진 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는 38SB39 항체가 제공된다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항체는 서열 50, 52, 54, 56, 58 및 60으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함한다. 더욱 바람직한 실시양태에서, 서열 50으로 이루어진 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함하는 38SB13 항체가 제공된다. 더욱 바람직한 실시양태에서, 서열 52로 이루어진 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함하는 38SB18 항체가 제공된다. 더욱 바람직한 실시양태에서, 서열 54로 이루어진 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함하는 38SB19 항체가 제공된다. 더욱 바람직한 실시양태에서, 서열 56으로 이루어진 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함하는 38SB30 항체가 제공된다. 더욱 바람직한 실시양태에서, 서열 58로 이루어진 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함하는 38SB31 항체가 제공된다. 더욱 바람직한 실시양태에서, 서열 60으로 이루어진 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함하는 38SB39 항체가 제공된다.
키메라 및 인간화 38 SB13 , 38 SB18 , 38 SB19 , 38 SB30 , 38 SB31 및 38 SB39 항체
본원에서 사용된 "키메라 항체"는 가변 영역이, 상이한 종의 불변 영역 또는 다른 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 불변 영역에 연결되도록 불변 영역 또는 이의 일부분이 변경, 대체 또는 교환된 항체이다. "키메라 항체"는 또한 불변 영역이, 상이한 종의 가변 영역 또는 다른 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 가변 영역에 연결되도록 가변 영역 또는 이의 일부분이 변경, 대체 또는 교환된 항체를 지칭한다. 키메라 항체의 제조 방법은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 전문이 본원에 참조로 포함되는 문헌 [Morrison, 1985, Science, 229: 1202]; [Oi et al., 1986, BioTechniques, 4: 214]; [Gillies et al., 1989, J. Immunol. Methods, 125: 191-202]; 미국 특허 번호 5,807,715; 4,816,567; 및 4,816,397을 참고한다.
본 발명의 한 실시양태에서, 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 및 38SB39의 키메라 버전이 제공된다. 구체적으로, 상기 키메라 버전은 하나 이상의 인간 불변 영역을 함유한다. 더욱 바람직한 실시양태에서, 상기 인간 불변 영역은 인간 IgG1/Kappa 불변 영역이다.
본원에서 사용된 용어 "인간화 항체"는 비-인간 면역글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 항체를 지칭한다. 인간화의 목적은 항체의 완전한 항원 결합 친화력 및 특이성은 유지하면서 인간 내로 도입하기 위한 이종 항체, 예컨대 뮤린 항체의 면역원성을 감소시키는 것이다. 여러 기술, 예컨대 재표면화 및 CDR 이식을 사용하여 인간화 항체, 또는 다른 포유동물에 의해 거부되지 않도록 개조된 항체를 생산할 수 있다. 본원에서 사용된 재표면화 기술은 분자 모델링, 통계학적 분석 및 돌연변이유발의 조합을 사용하여, 표적 숙주의 공지된 항체의 표면을 닮도록 항체 가변 영역의 비-CDR 표면을 변경시킨다. CDR 이식 기술은, 예를 들어 마우스 항체의 상보성 결정 영역을 인간 프레임워크 도메인 내로 치환하는 것을 포함한다 (예를 들어, W0 92/22653 참조). 바람직하게는 인간화 키메라 항체에는 상응하는 인간 항체 영역으로부터 실질적으로 또는 배타적으로 유래된 불변 영역 및 상보성 결정 영역 (CDR) 이외의 가변 영역, 및 인간 이외의 포유동물로부터 실질적으로 또는 배타적으로 유래된 CDR이 존재한다.
항체의 재표면화를 위한 전략 및 방법, 및 상이한 숙주 내에서 항체의 면역원성을 감소시키기 위한 기타 방법이, 전문이 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 번호 5,639,641에 개시되어 있다. 간략하게, 바람직한 방법에서는, (1) 항체 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 풀(pool)의 위치 정렬을 생성시켜, 모든 가변 영역에 대한 정렬 위치가 적어도 약 98％ 동일한 중쇄 및 경쇄 가변 영역 프레임워크 표면 노출 위치의 세트를 제공하고; (2) 중쇄 및 경쇄 가변 영역 프레임워크 표면 노출 아미노산 잔기의 세트를 설치류 항체 (또는 이의 단편)에 대해 규정하고; (3) 설치류의 표면 노출 아미노산 잔기의 세트와 가장 근접하게 동일한 중쇄 및 경쇄 가변 영역 프레임워크 표면 노출 아미노산 잔기의 세트를 확인하고; (4) 설치류 항체의 상보성 결정 영역의 임의의 잔기의 임의의 원자의 5 Å 이내에 있는 아미노산 잔기를 제외하고, 단계 (2)에서 규정된 중쇄 및 경쇄 가변 영역 프레임워크 표면 노출 아미노산 잔기의 세트를 단계 (3)에서 확인된 중쇄 및 경쇄 가변 영역 프레임워크 표면 노출 아미노산 잔기의 세트로 치환하고; (5) 결합 특이성이 있는 인간화된 설치류 항체를 생산한다.
CDR-이식 (EP 0 239 400; WO 91/09967; 미국 특허 번호 5,530,101; 및 5,585,089), 베니어링(veneering) 또는 재표면화 (EP 0 592 106; EP 0 519 596; 문헌 [Padlan E. A., 1991, Molecular Immunology 28(4/5): 489-498]; [Studnicka G. M. et al., 1994, Protein Engineering, 7(6): 805-814]; [Roguska M.A. et al., 1994, PNAS, 91: 969-973]) 및 사슬 셔플링(shuffling) (미국 특허 번호 5,565,332)이 포함되는 다양한 기타 기술을 사용하여 항체를 인간화시킬 수 있다. 파지 디스플레이 방법이 포함되는 당업계에 공지된 다양한 방법에 의해 인간 항체를 제조할 수 있다. 또한, 미국 특허 번호 4,444,887, 4,716,111, 5,545,806 및 5,814,318; 및 국제 특허 출원 공개 번호 WO 98/46645, WO 98/50433, WO 98/24893, WO 98/16654, WO 96/34096, WO 96/33735 및 WO 91/10741을 참고한다 (상기 참조문헌들은 전문이 참조로 포함됨).
본 발명은 CD38을 인식하고 세포자멸사, ADCC 및/또는 CDC에 의해 CD38+ 세포를 사멸시키는 인간화 항체 또는 이의 단편을 제공한다. 추가적인 실시양태에서, 인간화 항체 또는 이의 에피토프-결합 단편은 3가지 모두의 메커니즘에 의해서 상기 CD38+ 세포를 사멸시키는 능력이 있다. 보다 또 다른 추가적인 실시양태에서, 본 발명의 인간화 항체 또는 이의 에피토프-결합 단편은 기질 세포 또는 기질-유래 시토킨의 부재 하에서도 세포자멸사에 의해 상기 CD38+ 세포를 사멸시킬 수 있다.
이러한 인간화 항체의 바람직한 실시양태는 인간화 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 또는 38SB39 항체, 또는 이의 에피토프-결합 단편이다.
더욱 바람직한 실시양태에서, 항체 또는 이의 단편의 표면-노출 잔기가 공지된 인간 항체 표면을 더욱 밀접하게 닮도록 경쇄 및 중쇄 모두에서 대체된, 재표면화 또는 인간화 버전의 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 및 38SB39 항체가 제공된다. 본 발명의 인간화 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 및 38SB39 항체 또는 이의 에피토프-결합 단편에는 개선된 성질이 있다. 예를 들어, 인간화 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 및 38SB39 항체 또는 이의 에피토프-결합 단편은 CD38 단백질을 특이적으로 인식한다. 더욱 바람직하게는, 인간화 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 및 38SB39 항체 또는 이의 에피토프-결합 단편은 세포자멸사, ADCC 및/또는 CDC에 의해 CD38+ 세포를 사멸시키는 추가적인 능력이 있다.
인간화 버전의 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 및 38SB39 항체는 또한 이들 각각의 경쇄 및 중쇄 가변 영역 모두의 아미노산 서열, 경쇄 및 중쇄 가변 영역에 대한 유전자의 DNA 서열, CDR의 확인, 표면 아미노산의 확인, 및 재조합 형태에서의 발현을 위한 수단의 개시와 관련하여 본원에서 충분히 특성화된다. 그러나, 본 발명의 범주는 이러한 서열들을 포함하는 항체 및 단편에 한정되지 않는다. 그보다는, CD38에 특이적으로 결합하고, 세포자멸사, ADCC 및/또는 CDC에 의해 CD38+ 세포를 사멸시킬 수 있는 모든 항체 및 단편이 본 발명의 범주 내에 속한다. 바람직하게는, 이러한 항체는 3가지 모두의 메커니즘에 의해서 CD38+ 세포를 사멸시킬 수 있다. 따라서, 본 발명의 항체 및 에피토프-결합 항체 단편은 스캐폴드, CDR 및/또는 경쇄 및 중쇄의 아미노산 서열이 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 및 38SB39 항체 또는 이의 인간화 유도체와 상이할 수 있지만, 여전히 본 발명의 범주 내에 속한다.
38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 및 38SB39 항체의 CDR이 모델링에 의해 확인되고, 이들의 분자 구조가 예측되었다. 또다시, CDR이 에피토프 인식에 중요하기는 하지만, 이것이 본 발명의 항체 및 단편에 필수적인 것은 아니다. 따라서, 예를 들어 본 발명의 항체의 친화력 성숙에 의해 생산된 개선된 성질이 있는 항체 및 단편이 제공된다.
38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 및 38SB39 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 서열, 및 이들의 CDR의 서열은 기존에 공지되지 않았고, 본 출원에서 기재된다. 이러한 정보를 사용하여, 인간화 버전의 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 및 38SB39 항체를 생산할 수 있다. 이러한 인간화 항-CD38 항체 또는 이들의 유도체는 또한 본 발명의 세포 결합제로서 사용될 수 있다.
따라서, 한 실시양태에서, 본 발명은 서열 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 및 36으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 CDR을 하나 이상 포함하는 인간화 항체 또는 이의 에피토프-결합 단편을 제공한다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 인간화 항체는 하나 이상의 중쇄 및 하나 이상의 경쇄를 포함하고, 여기서 상기 중쇄는 서열 1, 2, 3, 7, 8, 9, 13, 14, 15, 19, 20, 21, 25, 26, 27, 31, 32 및 33으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 3개의 순차적인 CDR을 포함하고, 상기 경쇄는 서열 4, 5, 6, 10, 11, 12, 16, 17, 18, 22, 23, 24, 28, 29, 30, 34, 35 및 36으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 3개의 순차적인 CDR을 포함한다. 추가적인 바람직한 실시양태에서, 하나 이상의 중쇄 및 하나 이상의 경쇄를 포함하는 인간화 버전의 38SB13이 제공되고, 여기서 상기 중쇄는 서열 1, 2 및 3으로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 3개의 순차적인 상보성 결정 영역을 포함하고, 상기 경쇄는 서열 4, 5 및 6으로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 3개의 순차적인 상보성 결정 영역을 포함한다. 또 다른 추가적인 바람직한 실시양태에서, 하나 이상의 중쇄 및 하나 이상의 경쇄를 포함하는 인간화 버전의 38SB18이 제공되고, 여기서 상기 중쇄는 서열 7, 8 및 9로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 3개의 순차적인 상보성 결정 영역을 포함하고, 상기 경쇄는 서열 10, 11 및 12로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 3개의 순차적인 상보성 결정 영역을 포함한다. 또 다른 추가적인 바람직한 실시양태에서, 하나 이상의 중쇄 및 하나 이상의 경쇄를 포함하는 인간화 버전의 38SB19가 제공되고, 여기서 상기 중쇄는 서열 13, 14 및 15로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 3개의 순차적인 상보성 결정 영역을 포함하고, 상기 경쇄는 서열 16, 17 및 18로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 3개의 순차적인 상보성 결정 영역을 포함한다. 또 다른 추가적인 바람직한 실시양태에서, 하나 이상의 중쇄 및 하나 이상의 경쇄를 포함하는 인간화 버전의 38SB30이 제공되고, 여기서 상기 중쇄는 서열 19, 20 및 21로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 3개의 순차적인 상보성 결정 영역을 포함하고, 상기 경쇄는 서열 22, 23 및 24로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 3개의 순차적인 상보성 결정 영역을 포함한다. 또 다른 추가적인 바람직한 실시양태에서, 하나 이상의 중쇄 및 하나 이상의 경쇄를 포함하는 인간화 버전의 38SB31이 제공되고, 여기서 상기 중쇄는 서열 25, 26 및 27로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 3개의 순차적인 상보성 결정 영역을 포함하고, 상기 경쇄는 서열 28, 29 및 30으로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 3개의 순차적인 상보성 결정 영역을 포함한다. 또 다른 추가적인 바람직한 실시양태에서, 하나 이상의 중쇄 및 하나 이상의 경쇄를 포함하는 인간화 버전의 38SB39가 제공되고, 여기서 상기 중쇄는 서열 31, 32 및 33으로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 3개의 순차적인 상보성 결정 영역을 포함하고, 상기 경쇄는 서열 34, 35 및 36으로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 3개의 순차적인 상보성 결정 영역을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 서열 66 및 72의 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함하는 인간화 항체 또는 이의 단편을 제공한다. 바람직한 실시양태에서, 서열 66으로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함하는 인간화 38SB19 항체가 제공된다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 서열 72로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함하는 인간화 38SB31 항체가 제공된다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 서열 62, 64, 68 및 70의 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는 인간화 항체 또는 이의 단편을 제공한다. 바람직한 실시양태에서, 서열 62 및 64의 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는 인간화 38SB19 항체가 제공된다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 서열 68 및 70의 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는 인간화 38SB31 항체가 제공된다.
본 발명의 인간화 38SB19 항체 및 이의 에피토프-결합 단편은 원래의 뮤린 잔기로부터 인간 항체 28E4의 상응하는 프레임워크 표면 잔기로 교환된 뮤린 표면 프레임워크 잔기를 나타내는, 표 1A 및 1B에서 회색 잔기로 규정된 하나 이상의 위치에서의 경쇄 및/또는 중쇄 아미노산 잔기 치환을 또한 포함할 수 있다. 표 1B 내의 별표(*) 잔기는 인간화 38SB19 중쇄 변이체 (서열 65)에서의 뮤린 복귀 돌연변이에 상응한다. 복귀 돌연변이에 대한 잔기는 CDR에 인접하고, 미국 특허 번호 5,639,641에 기술된 바와 같이, 또는 기존의 인간화 시도에서 항원 결합 친화력에서의 감소가 초래된 잔기의 선별과 유사하게 선택되었다 (Roguska et al., 1996, 미국 특허 출원 공보 2003/0235582 및 2005/0118183).
유사하게, 본 발명의 인간화 38SB13, 38SB18, 38SB30, 38SB31 및 38SB39 항체 및 이의 에피토프-결합 단편 또한 경쇄 및/또는 중쇄 아미노산 잔기에서의 치환을 포함할 수 있다.
폴리뉴클레오티드, 벡터 및 숙주 세포
본 발명의 항-CD38 항체를 코딩하는 핵산이 제공된다. 한 실시양태에서, 핵산 분자는 항-CD38 면역글로불린의 중쇄 및/또는 경쇄를 코딩한다. 바람직한 실시양태에서, 한 핵산은 항-CD38 면역글로불린의 중쇄를 코딩하고, 또 다른 핵산 분자는 항-CD38 면역글로불린의 경쇄를 코딩한다.
본 발명의 또 다른 양상에서, 서열 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70 및 72의 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 제공된다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 서열 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69 및 71로 이루어진 군으로부터 선택된다. 본 발명은 상기 폴리뉴클레오티드 자체에 한정되지 않고, 상기 폴리뉴클레오티드와 적어도 80％의 동일성을 나타내는 모든 폴리뉴클레오티드를 또한 포함한다.
본 발명은 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 제공한다. 한 실시양태에서, 상기 벡터는 항-CD38 면역글로불린의 중쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 함유한다. 또 다른 실시양태에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 항-CD38 면역글로불린의 경쇄를 코딩한다. 본 발명은 융합 단백질, 변형 항체, 항체 단편, 및 이들의 프로브를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 분자를 포함하는 벡터를 또한 제공한다.
본 발명의 항-CD38 항체의 중쇄 및/또는 경쇄를 발현시키기 위해, 상기 중쇄 및/또는 경쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 유전자들이 전사 및 번역 서열에 작동가능하게 연결되도록 발현 벡터 내로 삽입한다. 발현 벡터에는 플라스미드, YAC, 코스미드, 레트로바이러스, EBV-유래 에피솜, 및 상기 중쇄 및/또는 경쇄의 발현을 확실하게 하는 데 편리한 것으로 당업자에게 공지된 모든 기타 벡터가 포함된다. 당업자는 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오티드들이 상이한 벡터 내로 또는 동일한 벡터에 클로닝될 수 있다는 것을 인지할 것이다. 바람직한 실시양태에서, 상기 폴리뉴클레오티드들은 동일한 벡터에 클로닝된다.
본 발명의 폴리뉴클레오티드, 및 이러한 분자를 포함하는 벡터를 적절한 포유동물 숙주 세포의 형질전환에 사용할 수 있다. 형질전환은 폴리뉴클레오티드를 세포 숙주 내로 도입하기 위한 임의의 공지된 방법에 의해 이루어질 수 있다. 이러한 방법은 당업자에게 주지되어 있고, 덱스트란-매개 형질전환, 인산칼슘 침전, 폴리브렌-매개 형질감염, 원형질체 융합, 전기천공, 리포솜 내로의 폴리뉴클레오티드의 캡슐화, 유전자총(biolistic) 주사, 및 핵 내로의 DNA의 직접적인 미세주사를 포함한다.
항체 단편
본 발명의 항체는 상기 논의된 전장 항체, 뿐만 아니라 이의 에피토프-결합 단편을 모두 포함한다. 본원에서 사용된 "항체 단편"은 일반적으로 "에피토프-결합 단편"으로 명명되는, 전장 항체가 인식하는 에피토프에 결합하는 능력이 유지된 항체의 임의의 부분을 포함한다. 항체 단편의 예로는 Fab, Fab' 및 F(ab')2, Fd, 단일쇄 Fv (scFv), 단일쇄 항체, 디술피드-연결 Fv (dsFv), 및 VL 또는 VH 영역을 포함하는 단편이 포함되지만, 이에 한정되지 않는다. 단일쇄 항체가 포함되는 에피토프-결합 단편은 가변 영역(들)을 단독으로 또는 힌지(hinge) 영역, CH1, CH2 및 CH3 도메인 전체 또는 이들의 일부분과 조합하여 포함할 수 있다.
이러한 단편은 Fab 단편 또는 F(ab')2 단편 중 하나 또는 양쪽 모두를 함유할 수 있다. 바람직하게는, 항체 단편은 전체 항체의 6개의 CDR 모두를 함유하지만, 이러한 영역을 모두보다 적게 함유하는, 예를 들어 3개, 4개 또는 5개의 CDR을 함유하는 단편 또한 기능성이다. 또한, 단편은 면역글로불린 클래스 IgG, IgM, IgA, IgD 또는 IgE, 및 이의 서브클래스 중 임의의 하나의 구성원일 수 있거나, 이러한 구성원들이 조합될 수 있다.
Fab 및 F(ab')2 단편은 효소, 예컨대 파파인 (Fab 단편) 또는 펩신 (F(ab')2 단편)을 사용하여, 단백질분해성 절단에 의해 생산할 수 있다.
"단일쇄 FV" ("scFv") 단편은 항체 경쇄 가변 영역 (VL)의 하나 이상의 단편에 연결된 항체 중쇄 가변 영역 (VH)의 하나 이상의 단편을 함유하는 에피토프-결합 단편이다. 링커는 단일쇄 항체 단편이 유래된 전체 항체의 표적 분자 결합-특이성이 유지되도록 VL 및 VH 영역이 연결될 때 이들의 정확한 3차원 폴딩이 발생하는 것을 확실하게 하도록 선택되는 짧은 가용성 펩티드일 수 있다. VL 또는 VH 서열의 카르복실 말단이 링커에 의해 상보적인 VL 또는 VH 서열의 아미노산 말단에 공유결합으로 연결될 수 있다.
본 발명의 단일쇄 항체 단편은 본 명세서에 기술된 전체 항체의 가변 영역들 또는 상보성 결정 영역들 (CDR들) 중 하나 이상을 갖는 아미노산 서열을 함유하지만, 이러한 항체의 불변 영역은 일부 또는 전체가 없다. 이러한 불변 도메인은 항원 결합에 필수적이지는 않지만, 전체 항체의 구조의 주요한 부분을 구성한다. 따라서, 단일쇄 항체 단편은 불변 도메인의 일부분 또는 전체를 함유하는 항체의 사용과 관련된 문제점들의 일부를 극복할 수 있다. 예를 들어, 단일쇄 항체 단편은 생물학적 분자와 중쇄 불변 영역 간의 원치 않는 상호작용, 또는 기타 불필요한 생물학적 활성이 없는 경향이 있다. 추가적으로, 단일쇄 항체 단편은 전체 항체보다 상당히 작고, 따라서 전체 항체보다 모세혈관 투과성이 더 양호하여, 단일쇄 항체 단편이 표적 항원-결합 부위에 더욱 효율적으로 국소화되어 이에 결합하도록 한다. 또한, 항체 단편은 원핵생물 세포에서 비교적 대규모로 생산될 수 있어서, 그의 생산을 용이하게 한다. 또한, 단일쇄 항체 단편의 비교적 작은 크기는 전체 항체보다 이들이 수용자에서 면역 응답을 아마도 덜 일으키도록 한다.
단일쇄 항체 단편은 분자 클로닝, 항체 파지 디스플레이 라이브러리 또는 당업자에게 주지된 유사한 기술에 의해 생성될 수 있다. 이들 단백질은, 예를 들어 진핵생물 세포 또는 박테리아를 포함하는 원핵생물 세포에서 생산될 수 있다. 본 발명의 에피토프-결합 단편은 또한 당업계에 공지된 다양한 파지 디스플레이 방법을 사용하여 생성될 수 있다. 파지 디스플레이 방법에서는, 기능성 항체 도메인이 이를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 보유하는 파지 입자의 표면 상에 디스플레이된다. 특히, 이러한 파지는 레퍼토리 또는 조합형 항체 라이브러리 (예를 들어, 인간 또는 뮤린)로부터 발현된 에피토프-결합 도메인을 디스플레이하는 데 이용될 수 있다. 당해 항원에 결합하는 에피토프-결합 도메인을 발현하는 파지를 항원을 사용하여, 예를 들어 고체 표면 또는 비드에 결합 또는 포획된 표지된 항원을 사용하여 선별 또는 확인할 수 있다. 전형적으로, 이러한 방법에서 사용된 파지는 파지 유전자 III 또는 유전자 VIII 단백질에 재조합적으로 융합된 Fab, Fv 또는 디술피드-안정화 Fv 항체 도메인과 함께 파지로부터 발현된 fd 및 M13 결합 도메인을 포함하는 필라멘트형 파지이다.
본 발명의 에피토프-결합 단편을 만드는 데 사용될 수 있는 파지 디스플레이 방법의 예로는 전문이 본원에 참조로 포함되는 문헌 [Brinkman et al., 1995, J. Immunol. Methods, 182: 41-50]; [Ames et al., 1995, J. Immunol. Methods, 184: 177-186]; [Kettleborough et al., 1994, Eur. J. Immunol., 24: 952-958]; [Persic et al., 1997, Gene, 187: 9-18]; [Burton et al., 1994, Advances in Immunology, 57: 191-280]; WO/1992/001047; WO 90/02809; WO 91/10737; WO 92/01047; WO 92/18619; WO 93/11236; WO 95/15982; WO 95/20401; 및 미국 특허 번호 5,698,426; 5,223,409; 5,403,484; 5,580,717; 5,427,908; 5,750,753; 5,821,047; 5,571,698; 5,427,908; 5,516,637; 5,780,225; 5,658,727; 5,733,743 및 5,969,108에 개시된 것들이 포함된다.
파지 선별 후, 단편을 코딩하는 파지의 영역을 단리하고, 예를 들어 하기에 상세하게 기술된 바와 같이 재조합 DNA 기술을 사용하여, 포유동물 세포, 곤충 세포, 식물 세포, 효모 및 박테리아가 포함되는 선택된 숙주에서의 발현을 통해 에피토프-결합 단편을 생성시키는 데 사용할 수 있다. 예를 들어, 당업계에 공지된 방법, 예컨대 전문이 본원에 참조로 포함되는 WO 92/22324; 문헌 [Mullinax et al., 1992, BioTechniques, 12(6): 864-869]; [Sawai et al., 1995, AJRI, 34: 26-34]; 및 [Better et al., 1988, Science, 240: 1041-1043]에 개시된 것들을 사용하여 Fab, Fab' 및 F(ab')2 단편을 재조합적으로 생산하기 위한 기술을 쓸 수 있다. 단일쇄 Fv 및 항체를 생산하는 데 사용될 수 있는 기술의 예로는 미국 특허 번호 4,946,778 및 5,258,498; 문헌 [Huston et al., 1991, Methods in Enzymology, 203: 46-88]; [Shu et al., 1993, PNAS, 90: 7995-7999]; [Skerra et al., 1988, Science, 240: 1038-1040]에 기술된 것들이 포함된다.
기능성 등가물
항-CD38 항체 및 인간화 항-CD38 수용체 항체의 기능성 등가물이 본 발명의 범주 내에 또한 포함된다. 용어 "기능성 등가물"에는 상동성 서열의 항체, 키메라 항체, 인공 항체 및 변형 항체가 예를 들어 포함되고, 여기서 각각의 기능성 등가물은 CD38 단백질에 결합하는 그의 능력에 의해 규정된다. 당업자는 "항체 단편"으로 불리는 분자들의 군과 "기능성 등가물"로 불리는 분자들의 군에 중복이 있다는 것을 이해할 것이다. 기능성 등가물의 생산 방법은 당업자에게 공지되어 있고, 예를 들어 각각의 전문이 본원에 참조로 포함되는 WO 93/21319, EP 239,400; WO 89/09622; EP 338,745; 및 EP 332,424에 개시되어 있다.
상동성 서열의 항체는 본 발명의 항-CD38 항체 및 인간화 항-CD38 항체의 아미노산 서열과 서열 상동성이 있는 아미노산 서열의 항체이다. 바람직하게는, 상동성은 본 발명의 항-CD38 항체 및 인간화 항-CD38 항체의 가변 영역의 아미노산 서열과의 상동성이다. 본원에서 아미노산 서열에 적용된 "서열 상동성"은, 예를 들어 문헌 [Pearson and Lipman, 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 85: 2444-2448]에 따른 FASTA 검색 방법에 의해 측정 시, 또 다른 아미노산 서열에 대한 서열 상동성이 적어도 약 90％, 91％, 92％, 93％ 또는 94％이고, 더욱 바람직하게는 적어도 약 95％, 96％, 97％, 98％ 또는 99％인 서열로 정의된다.
인공 항체는 scFv 단편, 디아바디(diabody), 트리아바디(triabody), 테트라바디(tetrabody) 및 mru를 포함하고 (문헌 [Winter, G. and Milstein, C., 1991, Nature, 349: 293-299]; [Hudson, P.J., 1999, Current Opinion in Immunology, 11: 548-557]의 리뷰 참조), 이들 각각은 항원-결합 능력을 갖는다. 단일쇄 Fv 단편 (scFv)에서, 항체의 VH 및 VL 도메인은 가요성 펩티드에 의해 연결된다. 전형적으로, 이러한 링커 펩티드는 아미노산 잔기 약 15개의 길이이다. 링커가 너무 작으면, 예를 들어 아미노산 5개이면, 2가 scFv 이량체인 디아바디가 형성된다. 링커가 아미노산 잔기 3개 미만으로 축소되면, 트리아바디 및 테트라바디로 칭해지는 삼량체성 및 사량체성 구조가 형성된다. 항체의 최소 결합 단위는 CDR, 전형적으로 중쇄의 CDR2이고, 이는 충분한 특이적 인식 및 결합이 있어 개별적으로 사용될 수 있다. 이러한 단편은 분자 인식 단위 또는 mru로 칭해진다. 이러한 여러 mru들이 짧은 링커 펩티드에 의해 함께 연결되어, 단일 mru보다 결합성이 더 높은 인공 결합 단백질을 형성할 수 있다.
본 출원의 기능성 등가물은 변형 항체, 예를 들어 임의의 유형의 분자가 항체에 공유결합으로 부착되어 변형된 항체를 또한 포함한다. 예를 들어, 변형 항체에는 예를 들어 글리코실화, 아세틸화, 페길화, 인산화, 아미드화, 공지된 보호/차단기에 의한 유도체화, 단백질분해성 절단, 세포성 리간드 또는 기타 단백질에 대한 연결 등에 의해 변형된 항체가 포함된다. 공유결합 부착은 항체가 항-이디오타입 응답을 생성시키는 것을 방지하지 않는다. 이러한 변형은 특이적 화학 절단, 아세틸화, 포르밀화, 투니카마이신의 대사 합성 등이 포함되지만 이에 한정되지 않는 공지된 기술에 의해 수행될 수 있다. 추가적으로, 변형 항체는 하나 이상의 전통적이지 않은 아미노산을 함유할 수 있다.
기능성 등가물은 상이한 프레임워크 내에서 상이한 사슬 상의 상이한 CDR을 상호교환시킴으로써 생산될 수 있다. 따라서, 예를 들어 상이한 클래스의 항체가 주어진 세트의 CDR에 대해 상이한 중쇄의 치환에 의해 가능하고, 이에 의해, 예를 들어 IgG1-4, IgM, IgA1-2, IgD, IgE 항체 타입 및 이소타입이 생산될 수 있다. 유사하게, 주어진 세트의 CDR을 전적으로 합성인 프레임워크 내에 매립함으로써 본 발명의 범주 내의 인공 항체가 생산될 수 있다.
당업계에 공지된 광범위한 방법을 사용하여, 특정 세트의 CDR의 측면에 있는 가변 및/또는 불변 영역 서열 내에서의 돌연변이, 결실 및/또는 삽입에 의해 기능성 등가물이 쉽게 생산될 수 있다. 본 발명의 항체 단편 및 기능성 등가물은 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 또는 38SB39 항체와 비교했을 때 CD38에 대한 결합이 검출가능한 정도인 분자를 포함한다. 검출가능한 정도의 결합은 CD38에 대한 뮤린 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 또는 38SB39 항체의 결합 능력의 적어도 10-100％의 범위 내의 모든 값, 바람직하게는 적어도 50％, 60％ 또는 70％, 더욱 바람직하게는 적어도 75％, 80％, 85％, 90％, 95％ 또는 99％를 포함한다.
개선된 항체
CDR은 에피토프 인식 및 항체 결합에 일차적으로 중요하다. 그러나, 항체가 그의 동족 에피토프를 인식하여 그것에 결합하는 능력을 방해하지 않으면서 CDR을 포함하는 잔기에 변화가 이루어질 수 있다. 예를 들어, 에피토프 인식에 영향을 미치지 않지만, 에피토프에 대한 항체의 결합 친화력을 증가시키는 변화가 이루어질 수 있다.
따라서, 뮤린 및 인간화 항체 모두의 개선된 버전이 본 발명의 범주 내에 또한 포함되고, 이들 또한 CD38을 특이적으로 인식하여 이에 결합하며, 바람직하게는 증가된 친화력을 갖는다.
1차 항체 서열의 지식을 기초로 항체 서열 내의 다양한 위치에 하나 이상의 아미노산 변화를 도입하는 것의, 결합 및 발현 수준과 같은 항체의 성질에 대한 효과가 여러 연구에서 조사되었다 (Yang, W. P. et al., 1995, J. Mol. Biol., 254: 392-403; Rader, C. et al., 1998, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95: 8910-8915; Vaughan, T. J. et al., 1998, Nature Biotechnology, 16: 535-539).
이러한 연구에서, 올리고뉴클레오티드-매개 부위-지정 돌연변이유발, 카세트 돌연변이유발, 에러-유발 PCR, DNA 셔플링과 같은 방법, 또는 대장균의 돌연변이 유발 유전자-균주를 사용하여, CDR1, CDR2, CDR3 또는 프레임워크 영역에서 중쇄 및 경쇄 유전자의 서열을 변화시킴으로써 1차 항체의 등가물이 생성되었다 (Vaughan, T. J. et al., 1998, Nature Biotechnology, 16: 535-539; Adey, N. B. et al., 1996, Chapter 16, pp. 277-291, in "Phage Display of Peptides and Proteins", Eds. Kay, B. K. et al., Academic Press). 1차 항체의 서열을 변화시키는 이러한 방법들로 2차 항체의 개선된 친화력이 초래되었다 (Gram, H. et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89: 3576-3580; Boder, E. T. et al., 2000, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 97: 10701-10705; Davies, J. and Riechmann, L., 1996, Immunotechnolgy, 2: 169-179; Thompson, J. et al., 1996, J. Mol. Biol., 256: 77-88; Short, M. K. et al., 2002, J. Biol. Chem., 277: 16365-16370; Furukawa, K. et al., 2001, J. Biol. Chem., 276: 27622-27628).
항체의 하나 이상의 아미노산 잔기를 변화시키는 유사한 지시된 전략에 의해, 본 발명에 기술된 항체 서열을 사용하여, CD38에 대한 개선된 친화력을 포함하여 개선된 기능을 갖는 항-CD38 항체를 개발할 수 있다.
바람직한 아미노산 치환은 (1) 단백질분해에 대한 감수성을 감소시키고, (2) 산화에 대한 감수성을 감소시키고, (3) 단백질 복합체를 형성하기 위한 결합 친화력을 변경시키고, (4) 이러한 유사체의 다른 물리화학적 또는 기능적 성질을 부여하거나 변성시키는 것이다. 유사체는 천연-발생 펩티드 서열 이외의 서열의 다양한 뮤테인(mutein)을 포함할 수 있다. 예를 들어, 단일 또는 다중 아미노산 치환 (바람직하게는 보존성 아미노산 치환)이 천연-발생 서열에서 이루어질 수 있다 (바람직하게는, 분자간 접촉을 형성하는 도메인(들) 외부의 폴리펩티드의 부분에서). 보존성 아미노산 치환은 어버이 서열의 구조적 특성을 실질적으로 변화시키지 않아야 한다 (예를 들어, 대체 아미노산이 어버이 서열에서 발생하는 나선을 파괴하거나 어버이 서열을 특성화하는 다른 유형의 2차 구조를 붕괴시키는 경향이 없어야 한다). 당업계에 인지된 폴리펩티드 2차 및 3차 구조의 예가 각각 본원에 참조로 포함되는 문헌 [Proteins, Structures and Molecular Principles (Creighton, Ed., W. H. Freeman and Company, New York (1984))]; [Introduction to Protein Structure (C. Branden and J. Tooze, eds., Garland Publishing, New York, N. Y. (1991))]; 및 [Thornton et al., 1991, Nature, 354: 105]에 기술되어 있다.
개선된 항체에는 또한 동물 면역화, 하이브리도마 형성 및 특정 특성이 있는 항체의 선별의 표준 기술에 의해 제조된, 개선된 특성이 있는 항체가 포함된다.
본 발명에 따른 개선된 항체에는 특히, 향상된 기능적 성질을 갖는 항체가 포함된다. 특별히 관심 있는 것은 ADCC와 같은 세포적 세포독성 효과기 기능을 매개하는 능력이 향상된 항체이다. 이러한 항체는 항체의 불변 프레임워크 내에 단일 또는 다중 치환을 만들어 그의 Fc 수용체와의 상호작용을 변경시킴으로써 얻어질 수 있다. 이러한 돌연변이체를 디자인하는 방법은, 예를 들어 문헌 [Lazar et al. (2006, Proc. Natl. Acad. Scl. U.S.A. 103(11): 4005-4010)] 및 [Okazaki et al. (2004, J. Mol. Biol. 336(5): 1239-49)]에서 찾아볼 수 있다. WO 03/074679, WO 2004/029207, WO 2004/099249, WO2006/047350, WO 2006/019447, WO 2006/105338, WO 2007/041635 또한 참고한다. 개선된 항체의 생산을 위해서 특이적으로 설계된 세포주를 사용하는 것 또한 가능하다. 구체적으로, 이들 세포주는 글리코실화 경로의 조절을 변경시킴으로써, 불충분하게 푸코실화되거나 심지어 완전히 탈푸코실화된 항체를 생산한다. 이러한 세포주 및 이들을 설계하는 방법은, 예를 들어 문헌 [Shinkawa et al. (2003, J. Biol. Chem. 278(5): 3466-3473)], [Ferrara et al. (2006, J. Biol. Chem. 281(8): 5032-5036; 2006, Biotechnol. Bioeng. 93(5): 851-61)], EP 1331266, EP 1498490, EP 1498491, EP 1676910, EP 1792987 및 WO 99/54342에 개시되어 있다.
본 발명은 세포독성 접합체를 또한 포함한다. 이러한 세포독성 접합체는 2개의 주요 성분인 세포 결합제 및 세포독성제를 포함한다.
본원에서 사용된 용어 "세포 결합제"는 세포 표면 상의 CD38 단백질을 특이적으로 인식하여 이에 결합하는 작용제를 지칭한다. 한 실시양태에서, 세포 결합제는 접합체가 비-특이적 결합으로부터 초래되는 부작용이 거의 없으면서 표적화된 방식으로 작용하도록 CD38을 특이적으로 인식한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 세포 결합제는 또한 접합체의 세포독성 약물 부분이 세포 상에서 작용하도록 하는 데, 및/또는 접합체가 세포에 의해 내입될 충분한 시간을 허용하는 데 충분한 기간 동안 접합체가 표적 세포와 접촉하도록, CD38 단백질을 특이적으로 인식한다.
바람직한 실시양태에서, 세포독성 접합체는 세포 결합제로서 항-CD38 항체, 더욱 바람직하게는 뮤린 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 또는 38SB39 항-CD38 모노클로날 항체를 포함한다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 세포 결합제는 상기 항-CD38 항체의 키메라 버전이다. 더욱 바람직한 실시양태에서, 세포독성 접합체는 인간화 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 및 38SB39 항체 또는 이의 에피토프-결합 단편을 포함한다. 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 및 38SB39 항체는 CD38을 특이적으로 인식할 수 있고, 세포독성제를 표적화된 방식으로 비정상적인 세포 또는 조직, 예컨대 암 세포로 지시한다.
본 발명의 세포독성 접합체의 두 번째 성분은 세포독성제이다. 본원에서 사용된 용어 "세포독성제"는 세포의 기능 또는 성장을 감소시키거나 차단하고/하거나 세포의 파괴를 야기하는 물질을 지칭한다.
바람직한 실시양태에서, 세포독성제는 소형 약물, 전구약물, 탁소이드, 메이탄시노이드, 예컨대 DM1 또는 DM4, 토메이마이신 유도체, 렙토마이신 유도체, CC-1065 또는 CC-1065 유사체이다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 세포 결합제는 직접적으로 또는 절단가능하거나 절단가능하지 않은 링커를 통해 세포독성제에 공유결합으로 부착된다.
세포 결합제, 세포독성제 및 링커가 하기에서 더욱 상세하게 논의된다.
세포 결합제
치료제로서의 본 발명의 화합물의 유효성은 적합한 세포 결합제의 신중한 선별에 좌우된다. 세포 결합제는 현재 공지된 또는 공지될 임의의 종류일 수 있고, 펩티드 및 비-펩티드를 포함한다. 세포 결합제는 특이적 또는 비-특이적 방식으로 세포에 결합할 수 있는 임의의 화합물일 수 있다. 일반적으로, 이들은 항체 (특히 모노클로날 항체), 림포카인, 호르몬, 성장 인자, 비타민, 영양소-전달 물질 (예컨대 트랜스페린), 또는 임의의 기타 세포 결합 분자 또는 물질일 수 있다.
사용될 수 있는 세포 결합제의 더욱 구체적인 예로는 하기의 것들이 포함된다:
a) 폴리클로날 항체;
b) 모노클로날 항체;
c) 항체 단편, 예컨대 Fab, Fab' 및 F(ab')2, Fv (Parham, 1983, J. Immunol., 131: 2895-2902; Spring et al., 1974, J. Immunol., 113: 470-478; Nisonoff et al., 1960, Arch. Biochem. Biophys., 89: 230-244).
구체적으로는, 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 및 38SB39로부터 선택된 항-CD38 모노클로날 항체가 본 발명에 따른 세포 결합제로서 사용될 수 있다. 유사하게, 상기 세포 결합제는 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 및 38SB39 모노클로날 항체 중 하나의 키메라 버전일 수 있다. 바람직하게는 인간화 항-CD38 항체가 본 발명의 세포 결합제로서 사용된다. 더욱 바람직하게는, 인간화 항-CD38 항체는 인간화 또는 재표면화 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 및 38SB39 항체로부터 선택된다.
세포독성제
또 다른 실시양태에서, 인간화 항체 또는 이의 에피토프-결합 단편이 약물, 예컨대 메이탄시노이드에 접합되어, 약물을 CD38 단백질에 표적화시킴으로써 항원-발현 세포에 대한 특이적 세포독성이 있는 전구약물을 형성할 수 있다. 이러한 항체 및 고도로 독성인 소형 약물 (예를 들어, 메이탄시노이드, 탁산, 토메이마이신 유도체, 렙토마이신 유도체 및 CC-1065 유사체)을 포함하는 세포독성 접합체를 종양, 예컨대 림프종, 백혈병 및 다발성 골수종의 치료를 위한 치료제로서 사용할 수 있다.
본 발명의 세포독성 접합체에서 사용되는 세포독성제는 세포사를 초래하거나, 세포사를 유도하거나, 또는 일부 방식에서는 세포 생육력을 감소시키는 임의의 화합물일 수 있다. 바람직한 세포독성제에는, 예를 들어 하기 정의된, 메이탄시노이드 및 메이탄시노이드 유사체, 탁소이드, 토메이마이신 유도체, 렙토마이신 유도체, CC-1065 및 CC-1065 유사체, 돌라스틴 및 돌라스틴 유도체가 포함된다. 이러한 세포독성제들이 본원에 개시된 바와 같은 항체, 항체 단편, 기능성 등가물, 개선된 항체 및 이들의 유사체에 접합된다.
세포독성 접합체는 시험관내 방법으로 제조될 수 있다. 약물 또는 전구약물을 항체에 연결시키기 위해 연결기가 사용된다. 적절한 연결기는 당업계에 주지되어 있고, 디술피드 기, 티오에테르 기, 산-불안정 기, 광-불안정기, 펩티다제-불안정 기 및 에스테라제-불안정 기를 포함한다. 바람직한 연결기는 디술피드 기 및 티오에테르 기이다. 예를 들어, 디술피드 교환 반응을 사용하여 또는 항체와 약물 또는 전구약물 간에 티오에테르 결합을 형성시킴으로써 접합체가 구축될 수 있다.
메이탄시노이드
세포독성 접합체를 형성하기 위해 본 발명에서 사용될 수 있는 세포독성제 중에는 메이탄시노이드 및 메이탄시노이드 유사체가 있다. 적절한 메이탄시노이드의 예로는 메이탄시놀 및 메이탄시놀 유사체가 포함된다. 메이탄시노이드는 미세관 형성을 억제하고 포유동물 세포에 고도로 독성인 약물이다.
적절한 메이탄시놀 유사체의 예로는 변형된 방향족 고리가 있는 것들 및 기타 위치에 변형이 있는 것들이 포함된다. 이러한 적절한 메이탄시노이드가 미국 특허 번호 4,424,219; 4,256,746; 4,294,757; 4,307,016; 4,313,946; 4,315,929; 4,331,598; 4,361,650; 4,362,663; 4,364,866; 4,450,254; 4,322,348; 4,371,533; 6,333,410; 5,475,092; 5,585,499; 및 5,846,545에 개시되어 있다.
변형된 방향족 고리가 있는 적절한 메이탄시놀 유사체의 구체적인 예로는 하기의 것들이 포함된다:
(1) C-19-데클로로 (미국 특허 번호 4,256,746) (안사마이토신 P2의 LAH 환원에 의해 제조됨);
(2) C-20-히드록시 (또는 C-20-데메틸) +/-C-19-데클로로 (미국 특허 번호 4,361,650 및 4,307,016) (스트렙토마이세스(Streptomyces) 또는 악티노마이세스(Actinomyces)를 사용한 탈메틸화 또는 LAH를 사용한 탈염소화에 의해 제조됨); 및
(3) C-20-데메톡시, C-20-아실옥시 (-OCOR), +/-데클로로 (미국 특허 번호 4,294,757) (아실 클로라이드를 사용한 아실화에 의해 제조됨).
기타 위치에 변형이 있는 적절한 메이탄시놀 유사체의 구체적인 예로는 하기의 것들이 포함된다:
(1) C-9-SH (미국 특허 번호 4,424,219) (메이탄시놀과 H2S 또는 P2S5의 반응의 의해 제조됨);
(2) C-14-알콕시메틸 (데메톡시/CH2OR) (미국 특허 번호 4,331,598);
(3) C-14-히드록시메틸 또는 아실옥시메틸 (CH2OH 또는 CH2OAc) (미국 특허 번호 4,450,254) (노카르디아(Nocardia)로부터 제조됨);
(4) C-15-히드록시/아실옥시 (미국 특허 번호 4,364,866) (스트렙토마이세스에 의한 메이탄시놀의 전환에 의해 제조됨);
(5) C-15-메톡시 (미국 특허 번호 4,313,946 및 4,315,929) (트레위아 누디플로라(Trewia nudiflora)로부터 단리됨);
(6) C-18-N-데메틸 (미국 특허 번호 4,362,663 및 4,322,348) (스트렙토마이세스에 의한 메이탄시놀의 탈메틸화에 의해 제조됨); 및
(7) 4,5-데옥시 (미국 특허 번호 4,371,533) (메이탄시놀의 삼염화티타늄/LAH 환원에 의해 제조됨).
바람직한 실시양태에서, 본 발명의 세포독성 접합체는 티올-함유 메이탄시노이드 (DM1) (기존에 N2'-데아세틸-N2'-(3-메르캅토-1-옥소프로필)-메이탄신으로 명명됨)를 세포독성제로서 사용한다. DM1은 하기 화학식 I로 표시된다:
[화학식 I]
Figure pat00001
또 다른 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 세포독성 접합체는 티올-함유 메이탄시노이드 N2'-데아세틸-N-2'(4-메틸-4-메르캅토-1-옥소펜틸)-메이탄신을 세포독성제로서 사용한다. DM4는 하기 화학식 II로 표시된다:
[화학식 II]
Figure pat00002
본 발명의 추가적인 실시양태에서, 황 원자를 지니는 탄소 원자 상에 모노- 또는 디-알킬 치환을 지니는 티올- 및 디술피드-함유 메이탄시노이드가 포함되는 기타 메이탄신이 사용될 수 있다. 여기에는 힌더드(hindered) 술프히드릴 기를 지니는 아실 기가 있는 아실화 아미노산 측쇄가 C-3, C-14 히드록시메틸, C-15 히드록시 또는 C-20 데스메틸에 있는 메이탄시노이드가 포함되고, 여기서 티올 관능기를 지니는 아실 기의 탄소 원자에는 CH3, C2H5, 탄소수 1 내지 10의 선형 또는 분지형 알킬 또는 알케닐, 탄소수 3 내지 10의 시클릭 알킬 또는 알케닐, 페닐, 치환된 페닐 또는 헤테로시클릭 방향족 또는 헤테로시클로알킬 라디칼인 치환기가 1개 또는 2개 있으며, 또한 치환기 중 하나는 H일 수 있고, 아실 기는 카르보닐 관능기와 황 원자 사이에 길이가 탄소수 3 이상인 선형 사슬을 갖는다.
이러한 추가적인 메이탄신에는 하기 화학식 III으로 표시되는 화합물이 포함된다:
[화학식 III]
Figure pat00003
식 중,
Y'은 (CR7R8)l(CR9=CR10)p(C≡C)qAr(CR5R6)mDu(CR11=CR12)r(C≡C)sBt(CR3R4)nCR1R2SZ를 나타내고, 여기서
R1 및 R2는 각각 독립적으로 CH3, C2H5, 탄소수 1 내지 10의 선형 알킬 또는 알케닐, 탄소수 3 내지 10의 분지형 또는 고리형 알킬 또는 알케닐, 페닐, 치환된 페닐 또는 헤테로시클릭 방향족 또는 헤테로시클로알킬 라디칼이고, 추가적으로 R2는 H일 수 있고,
A, B, D는 탄소수 3 내지 10의 시클로알킬 또는 시클로알케닐, 단순형 또는 치환형 아릴 또는 헤테로시클릭 방향족 또는 헤테로시클로알킬 라디칼이고,
R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R11 및 R12는 각각 독립적으로 H, CH3, C2H5, 탄소수 1 내지 10의 선형 알킬 또는 알케닐, 탄소수 3 내지 10의 분지형 또는 고리형 알킬 또는 알케닐, 페닐, 치환된 페닐 또는 헤테로시클릭 방향족 또는 헤테로시클로알킬 라디칼이고,
l, m, n, o, p, q, r, s 및 t는 각각 독립적으로 0 또는 1 내지 5의 정수이고, 단 l, m, n, o, p, q, r, s 및 t 중 둘 이상은 어떤 경우에도 0이 아니고,
Z는 H, SR 또는 -COR이고, 여기서 R은 탄소수 1 내지 10의 선형 알킬 또는 알케닐, 탄소수 3 내지 10의 분지형 또는 고리형 알킬 또는 알케닐, 또는 단순형 또는 치환형 아릴 또는 헤테로시클릭 방향족 또는 헤테로시클로알킬 라디칼이다.
화학식 III의 바람직한 실시양태에는 하기와 같은 화학식 III의 화합물이 포함된다:
R1이 H이고, R2가 메틸이고, Z가 H인 화합물,
R1 및 R2가 메틸이고, Z가 H인 화합물,
R1이 H이고, R2가 메틸이고, Z가 -SCH3인 화합물,
R1 및 R2가 메틸이고, Z가 -SCH3인 화합물.
이러한 추가적인 메이탄신에는 또한 하기 화학식 IV-L, IV-D, 또는 IV-D,L로 표시되는 화합물이 포함된다:
<화학식 IV-L>
Figure pat00004
<화학식 IV-D>
Figure pat00005
<화학식 IV-D,L>
Figure pat00006
식 중,
Y는 (CR7R8)l(CR5R6)m(CR3R4)nCR1R2SZ를 나타내고, 여기서
R1 및 R2는 각각 독립적으로 CH3, C2H5, 탄소수 1 내지 10의 선형 알킬 또는 알케닐, 탄소수 3 내지 10의 분지형 또는 고리형 알킬 또는 알케닐, 페닐, 치환된 페닐, 또는 헤테로시클릭 방향족 또는 헤테로시클로알킬 라디칼이고, 추가적으로 R2는 H일 수 있고,
R3, R4, R5, R6, R7 및 R8은 각각 독립적으로 H, CH3, C2H5, 탄소수 1 내지 10의 선형 알킬 또는 알케닐, 탄소수 3 내지 10의 분지형 또는 고리형 알킬 또는 알케닐, 페닐, 치환된 페닐 또는 헤테로시클릭 방향족 또는 헤테로시클로알킬 라디칼이고,
l, m 및 n은 각각 독립적으로 1 내지 5의 정수이고, 추가적으로 n은 0일 수 있고,
Z는 H, SR 또는 -COR이고, 여기서 R은 탄소수 1 내지 10의 선형 또는 분지형 알킬 또는 알케닐, 탄소수 3 내지 10의 고리형 알킬 또는 알케닐, 또는 단순형 또는 치환형 아릴 또는 헤테로시클릭 방향족 또는 헤테로시클로알킬 라디칼이고,
May는 C-3, C-14 히드록시메틸, C-15 히드록시 또는 C-20 데스메틸에서 측쇄를 지니는 메이탄시노이드를 나타낸다.
화학식 IV-L, IV-D 및 IV-D,L의 바람직한 실시양태에는 하기와 같은 화학식 IV-L, IV-D 및 IV-D,L의 화합물이 포함된다:
R1이 H이고, R2가 메틸이고, R5, R6, R7 및 R8이 각각 H이고, l 및 m이 각각 1이고, n이 0이고, Z가 H인 화합물,
R1 및 R2가 메틸이고, R5, R6, R7 및 R8이 각각 H이고, l 및 m이 1이고, n이 0이고, Z가 H인 화합물,
R1이 H이고, R2가 메틸이고, R5, R6, R7 및 R8이 각각 H이고, l 및 m이 각각 1이고, n이 0이고, Z가 -SCH3인 화합물,
R1 및 R2가 메틸이고, R5, R6, R7 및 R8이 각각 H이고, l 및 m이 1이고, n이 0이고, Z가 -SCH3인 화합물.
바람직하게는, 세포독성제는 화학식 IV-L로 표시된다.
이러한 추가적인 메이탄신에는 또한 하기 화학식 V로 표시되는 화합물이 포함된다:
[화학식 V]
Figure pat00007
식 중,
Y는 (CR7R8)l(CR5R6)m(CR3R4)nCR1R2SZ를 나타내고, 여기서
R1 및 R2는 각각 독립적으로 CH3, C2H5, 탄소수 1 내지 10의 선형 알킬 또는 알케닐, 탄소수 3 내지 10의 분지형 또는 고리형 알킬 또는 알케닐, 페닐, 치환된 페닐 또는 헤테로시클릭 방향족 또는 헤테로시클로알킬 라디칼이고, 추가적으로 R2는 H일 수 있고,
R3, R4, R5, R6, R7 및 R8은 각각 독립적으로 H, CH3, C2H5, 탄소수 1 내지 10의 선형 알킬 또는 알케닐, 탄소수 3 내지 10의 분지형 또는 고리형 알킬 또는 알케닐, 페닐, 치환된 페닐 또는 헤테로시클릭 방향족 또는 헤테로시클로알킬 라디칼이고,
l, m 및 n은 각각 독립적으로 1 내지 5의 정수이고, 추가적으로 n은 0일 수 있고,
Z는 H, SR 또는 -COR이고, 여기서 R은 탄소수 1 내지 10의 선형 알킬 또는 알케닐, 탄소수 3 내지 10의 분지형 또는 고리형 알킬 또는 알케닐, 또는 단순형 또는 치환형 아릴 또는 헤테로시클릭 방향족 또는 헤테로시클로알킬 라디칼이다.
화학식 V의 바람직한 실시양태에는 하기와 같은 화학식 V의 화합물이 포함된다:
R1이 H이고, R2가 메틸이고, R5, R6, R7 및 R8이 각각 H이고, l 및 m이 각각 1이고, n이 0이고, Z가 H인 화합물,
R1 및 R2가 메틸이고, R5, R6, R7 및 R8이 각각 H이고, l 및 m이 1이고, n이 0이고, Z가 H인 화합물,
R1이 H이고, R2가 메틸이고, R5, R6, R7 및 R8이 각각 H이고, l 및 m이 각각 1이고, n이 0이고, Z가 -SCH3인 화합물,
R1 및 R2가 메틸이고, R5, R6, R7 및 R8이 각각 H이고, l 및 m이 1이고, n이 0이고, Z가 -SCH3인 화합물.
이러한 추가적인 메이탄신에는 하기 화학식 VI-L, VI-D 또는 VI-D,L로 표시되는 화합물이 추가로 포함된다:
<화학식 VI-L>
Figure pat00008
<화학식 Vl-D>
Figure pat00009
<화학식 VI-D,L>
Figure pat00010
식 중,
Y2는 (CR7R8)l(CR5R6)m(CR3R4)nCR1R2SZ2를 나타내고, 여기서
R1 및 R2는 각각 독립적으로 CH3, C2H5, 탄소수 1 내지 10의 선형 알킬 또는 알케닐, 탄소수 3 내지 10의 분지형 또는 고리형 알킬 또는 알케닐, 페닐, 치환된 페닐 또는 헤테로시클릭 방향족 또는 헤테로시클로알킬 라디칼이고, 추가적으로 R2는 H일 수 있고,
R3, R4, R5, R6, R7 및 R8은 각각 독립적으로 H, CH3, C2H5, 탄소수 1 내지 10의 선형 알킬 또는 알케닐, 탄소수 3 내지 10의 분지형 또는 고리형 알킬 또는 알케닐, 페닐, 치환된 페닐 또는 헤테로시클릭 방향족 또는 헤테로시클로알킬 라디칼이고,
l, m 및 n은 각각 독립적으로 1 내지 5의 정수이고, 추가적으로 n은 0일 수 있고,
Z2는 SR 또는 COR이고, 여기서 R은 탄소수 1 내지 10의 선형 알킬 또는 알케닐, 탄소수 3 내지 10의 분지형 또는 고리형 알킬 또는 알케닐, 또는 단순형 또는 치환형 아릴 또는 헤테로시클릭 방향족 또는 헤테로시클로알킬 라디칼이고,
May는 메이탄시노이드이다.
이러한 추가적인 메이탄신에는 또한 하기 화학식 VII로 표시되는 화합물이 포함된다:
[화학식 VII]
Figure pat00011
식 중,
Y2'은 (CR7R8)l(CR9=CR10)p(C≡C)qAr(CR5R6)mDu(CR11=CR12)r(C≡C)sBt(CR3R4)nCR1R2SZ2를 나타내고, 여기서
R1 및 R2는 각각 독립적으로 CH3, C2H5, 탄소수 1 내지 10의 선형 또는 분지형 알킬 또는 알케닐, 탄소수 3 내지 10의 고리형 알킬 또는 알케닐, 페닐, 치환된 페닐 또는 헤테로시클릭 방향족 또는 헤테로시클로알킬 라디칼이고, 추가적으로 R2는 H일 수 있고,
A, B 및 D는 각각 독립적으로 탄소수 3 내지 10의 시클로알킬 또는 시클로알케닐, 단순형 또는 치환형 아릴 또는 헤테로시클릭 방향족 또는 헤테로시클로알킬 라디칼이고,
R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R11 및 R12는 각각 독립적으로 H, CH3, C2H5, 탄소수 1 내지 10의 선형 알킬 또는 알케닐, 탄소수 3 내지 10의 분지형 또는 고리형 알킬 또는 알케닐, 페닐, 치환된 페닐 또는 헤테로시클릭 방향족 또는 헤테로시클로알킬 라디칼이고,
l, m, n, o, p, q, r, s 및 t는 각각 독립적으로 0 또는 1 내지 5의 정수이고, 단 l, m, n, o, p, q, r, s 및 t 중 둘 이상은 어떤 경우에도 0이 아니고,
Z2는 SR 또는 -COR이고, 여기서 R은 탄소수 1 내지 10의 선형 알킬 또는 알케닐, 탄소수 3 내지 10의 분지형 또는 고리형 알킬 또는 알케닐, 또는 단순형 또는 치환형 아릴 또는 헤테로시클릭 방향족 또는 헤테로시클로알킬 라디칼이다.
화학식 VII의 바람직한 실시양태에는 R1이 H이고, R2가 메틸인 화학식 VII의 화합물이 포함된다.
상기 업급된 메이탄시노이드들이 항-CD38 항체 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 또는 38SB39, 또는 이의 상동체 또는 단편에 접합될 수 있고, 여기서 항체는 메이탄시노이드의 C-3, C-14 히드록시메틸, C-15 히드록시 또는 C-20 데스메틸에서 발견되는 아실화 아미노산 측쇄의 아실 기 상에 존재하는 티올 또는 디술피드 관능기를 사용하여 메이탄시노이드에 연결되고, 아실화 아미노산 측쇄의 아실 기에서 이의 티올 또는 디술피드 관능기는 CH3, C2H5, 탄소수 1 내지 10의 선형 알킬 또는 알케닐, 탄소수 3 내지 10의 분지형 또는 고리형 알킬 또는 알케닐, 페닐, 치환된 페닐 또는 헤테로시클릭 방향족 또는 헤테로시클로알킬 라디칼인 치환기가 1개 또는 2개 있는 탄소 원자에 위치하며, 추가적으로 치환기 중 하나는 H일 수 있고, 아실 기는 카르보닐 관능기와 황 원자 사이에 길이가 탄소수 3 이상인 선형 사슬을 갖는다.
바람직한 본 발명의 접합체는 하기 화학식 VIII의 메이탄시노이드에 접합된 항-CD38 항체 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 또는 38SB39, 또는 이의 상동체 또는 단편을 포함하는 것이다:
[화학식 VIII]
Figure pat00012
식 중,
Y1'은 (CR7R8)l(CR9=CR10)p(C≡C)qAr(CR5R6)mDu(CR11=CR12)r(C≡C)sBt(CR3R4)nCR1R2S-를 나타내고, 여기서
A, B 및 D는 각각 독립적으로 탄소수 3 내지 10의 시클로알킬 또는 시클로알케닐, 단순형 또는 치환형 아릴 또는 헤테로시클릭 방향족 또는 헤테로시클로알킬 라디칼이고,
R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R11 및 R12는 각각 독립적으로 H, CH3, C2H5, 탄소수 1 내지 10의 선형 알킬 또는 알케닐, 탄소수 3 내지 10의 분지형 또는 고리형 알킬 또는 알케닐, 페닐, 치환된 페닐 또는 헤테로시클릭 방향족 또는 헤테로시클로알킬 라디칼이고,
l, m, n, o, p, q, r, s 및 t는 각각 독립적으로 0 또는 1 내지 5의 정수이고, 단 l, m, n, o, p, q, r, s 및 t 중 둘 이상은 어떤 경우에도 0이 아니다.
바람직하게는, R1은 H이고 R2는 메틸이거나, R1 및 R2가 메틸이다.
더욱 더 바람직한 본 발명의 접합체는 하기 화학식 IX-L, IX-D 또는 IX-D,L의 메이탄시노이드에 접합된 항-CD38 항체 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 또는 38SB39, 또는 이의 상동체 또는 단편을 포함하는 것이다:
<화학식 IX-L>
Figure pat00013
<화학식 IX-D>
Figure pat00014
<화학식 IX-D,L>
Figure pat00015
식 중,
Y1은 (CR7R8)l(CR5R6)m(CR3R4)nCR1R2S-를 나타내고, 여기서
R1 및 R2는 각각 독립적으로 CH3, C2H5, 탄소수 1 내지 10의 선형 알킬 또는 알케닐, 탄소수 3 내지 10의 분지형 또는 고리형 알킬 또는 알케닐, 페닐, 치환된 페닐, 헤테로시클릭 방향족 또는 헤테로시클로알킬 라디칼이고, 추가적으로 R2는 H일 수 있고,
R3, R4, R5, R6, R7 및 R8은 각각 독립적으로 H, CH3, C2H5, 탄소수 1 내지 10의 선형 알킬 또는 알케닐, 탄소수 3 내지 10의 분지형 또는 고리형 알킬 또는 알케닐, 페닐, 치환된 페닐 또는 헤테로시클릭 방향족 또는 헤테로시클로알킬 라디칼이고,
l, m 및 n은 각각 독립적으로 1 내지 5의 정수이고, 추가적으로 n은 0일 수 있고,
May는 C-3, C-14 히드록시메틸, C-15 히드록시 또는 C-20 데스메틸에서 측쇄를 지니는 메이탄시놀을 나타낸다.
화학식 IX-L, IX-D 또는 IX-D,L의 바람직한 실시양태에는 하기와 같은 화학식 IX-L, IX-D 또는 IX-D,L의 화합물이 포함된다:
R1이 H이고 R2가 메틸이거나, R1 및 R2가 메틸인 화합물,
R1이 H이고, R2가 메틸이고, R5, R6, R7 및 R8이 각각 H이고, l 및 m이 각각 1이고, n이 0인 화합물,
R1 및 R2가 메틸이고, R5, R6, R7 및 R8이 각각 H이고, l 및 m이 1이고, n이 0인 화합물.
바람직하게는, 세포독성제는 화학식 IX-L로 표시된다.
추가적으로 바람직한 본 발명의 접합체는 하기 화학식 X의 메이탄시노이드에 접합된 항-CD38 항체 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 또는 38SB39, 또는 이의 상동체 또는 단편을 포함하는 것이다:
[화학식 X]
Figure pat00016
식 중, 치환기들은 상기 화학식 IX에 대해 정의된 바와 같다.
R1이 H이고, R2가 메틸이고, R5, R6, R7 및 R8이 각각 H이고, l 및 m이 각각 1이고, n이 0인 임의의 상기 기술된 화합물이 특히 바람직하다.
R1 및 R2가 메틸이고, R5, R6, R7 및 R8이 각각 H이고, l 및 m이 1이고, n이 0인 임의의 상기 기술된 화합물이 추가적으로 특히 바람직하다.
또한, L-아미노아실 입체이성질체가 바람직하다.
계류 중인 미국 특허 출원 번호 10/849,136 (2004년 5월 20일 출원)에 교시된 각각의 메이탄시노이드가 또한 본 발명의 세포독성 접합체에서 사용될 수 있다. 미국 특허 출원 번호 10/849,136의 전체 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
디술피드 -함유 연결 기
메이탄시노이드를 세포 결합제, 예컨대 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 또는 38SB39 항체에 연결시키기 위해, 메이탄시노이드는 연결 모이어티(moiety)를 포함한다. 연결 모이어티는 완전히 활성인 메이탄시노이드가 특정 부위에서 방출되도록 하는 화학 결합을 함유한다. 적절한 화학 결합은 당업계에 주지되어 있고, 디술피드 결합, 산-불안정 결합, 광-불안정 결합, 펩티다제-불안정 결합 및 에스테라제-불안정 결합을 포함한다. 디술피드 결합이 바람직하다.
연결 모이어티는 반응성 화학기를 또한 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 반응성 화학기는 디술피드 결합 연결 모이어티를 통해 메이탄시노이드에 공유결합으로 결합될 수 있다.
특히 바람직한 반응성 화학기는 N-숙신이미딜 에스테르 및 N-술포숙신이미딜 에스테르이다.
반응성 화학기를 함유하는 연결 모이어티를 포함하는 특히 바람직한 메이탄시노이드는 연결 모이어티가 디술피드 결합을 함유하고 반응성 화학기가 N-숙신이미딜 또는 N-술포숙신이미딜 에스테르를 포함하는 메이탄시놀 및 이의 유사체의 C-3 에스테르이다.
메이탄시노이드 상의 다수의 위치가 연결 모이어티를 화학적으로 연결시키는 위치로 작용할 수 있다. 예를 들어, 히드록실 기가 있는 C-3 위치, 히드록시메틸로 변형된 C-14 위치, 히드록시로 변형된 C-15 위치 및 히드록시 기가 있는 C-20 위치가 모두 유용할 것으로 예상된다. 그러나, C-3 위치가 바람직하고, 메이탄시놀의 C-3 위치가 특히 바람직하다.
연결 모이어티를 갖는 메이탄시놀의 에스테르의 합성을 디술피드 결합-함유 연결 모이어티의 관점에서 기술하지만, 당업자는 기타 화학 결합 (상기 기술된 바와 같음)이 있는 연결 모이어티가 다른 메이탄시노이드와 같이 본 발명에서 또한 사용될 수 있다는 것을 이해할 것이다. 기타 화학 결합의 구체적인 예로는 산-불안정 결합, 광-불안정 결합, 펩티다제-불안정 결합 및 에스테라제-불안정 결합이 포함된다. 본원에 포함된 미국 특허 번호 5,208,020의 개시내용은 이러한 결합을 지니는 메이탄시노이드의 생성을 교시한다.
반응성 기를 지니는 디술피드 모이어티가 있는 메이탄시노이드 및 메이탄시노이드 유도체의 합성이 미국 특허 번호 6,441,163 및 6,333,410, 및 미국 출원 번호 10/161,651 (각각 본원에 참조로 포함됨)에 기술되어 있다.
반응성 기-함유 메이탄시노이드, 예컨대 DM1을 항체, 예컨대 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 또는 38SB39 항체와 반응시켜, 세포독성 접합체를 생성한다. 이러한 접합체를 HPLC 또는 겔-여과에 의해 정제할 수 있다.
이러한 항체-메이탄시노이드 접합체를 생성하기 위한 여러 우수한 계획들이 미국 특허 번호 6,333,410, 및 미국 출원 번호 09/867,598, 10/161,651 및 10/024,290 (각각 전문이 본원에 포함됨)에서 제공된다.
일반적으로, 수성 완충제 중 항체의 용액을 반응성 기를 지니는 디술피드 모이어티를 갖는 몰 과량의 메이탄시노이드와 함께 인큐베이션할 수 있다. 과량의 아민 (예컨대 에탄올아민, 타우린 등)의 첨가에 의해 반응 혼합물을 켄칭시킬 수 있다. 그 후, 메이탄시노이드-항체 접합체를 겔-여과에 의해 정제할 수 있다.
252 nm에서의 흡광도와 280 nm에서의 흡광도의 비율을 분광광도법으로 측정함으로써 항체 분자 당 결합된 메이탄시노이드 분자의 개수를 구할 수 있다. 평균 1-10개의 메이탄시노이드 분자/항체 분자가 바람직하다.
항체와 메이탄시노이드 약물의 접합체를 시험관내에서 다양한 원치않는 세포주의 증식을 억제하는 능력에 대해 평가할 수 있다. 예를 들어, 인간 림프종 세포주 다우디, 인간 림프종 세포주 라모스, 인간 다발성 골수종 세포주 MOLP-8, 및 인간 T 세포 급성 림프구성 백혈병 세포주 MOLT-4와 같은 세포주가 이러한 화합물들의 세포독성을 평가하는 데 용이하게 사용될 수 있다. 평가될 세포를 화합물에 24시간 동안 노출시키고, 세포의 생존 분율을 공지된 방법에 의해 직접적인 분석법으로 측정할 수 있다. 그 후, IC50 값을 분석 결과로부터 계산할 수 있다.
PEG -함유 연결 기
메이탄시노이드는 또한 미국 출원 번호 10/024,290에 기재된 바와 같이 PEG 연결기를 사용하여 세포 결합제에 연결시킬 수 있다. 이러한 PEG 연결기는 물 및 비-수성 용매 모두에 가용성이고, 하나 이상의 세포독성제를 세포 결합제에 연결시키는 데 사용될 수 있다. 예시적인 PEG 연결 기에는 한쪽 말단의 관능성 술프히드릴 또는 디술피드 기 및 다른쪽 말단의 활성 에스테르를 통해 링커의 양쪽 말단에서 세포독성제 및 세포 결합제에 결합하는 헤테로-2관능성 PEG 링커가 포함된다.
PEG 연결 기를 사용하는 세포독성 접합체의 합성의 일반적인 예로서, 구체적인 상세사항을 위해 미국 출원 번호 10/024,290가 또다시 참조된다. 합성은 반응성 PEG 모이어티를 지니는 하나 이상의 세포독성제와 세포결합제의 반응으로 시작되고, 각각의 반응성 PEG 모이어티의 말단 활성 에스테르가 세포 결합제의 아미노산 잔기로 치환되어, PEG 연결 기를 통해 세포 결합제에 공유결합으로 결합된 하나 이상의 세포독성제를 포함하는 세포독성 접합체가 산출된다.
탁산
본 발명에 따른 세포독성 접합체에서 사용되는 세포독성제는 또한 탁산 또는 이의 유도체일 수 있다.
탁산은 천연 세포독성 제품인 파클리탁셀 (탁솔), 및 반-합성 유도체인 도세탁셀 (탁소텔)을 포함하는 화합물 군이고, 두 화합물은 암의 치료에서 널리 사용된다. 탁산은 튜불린의 탈중합을 억제하여 세포사를 초래하는 유사분열 방추사 억제제이다. 도세탁셀 및 파클리탁셀은 암의 치료에서 유용한 작용제이지만, 정상 세포에 대한 비-특이적 독성으로 인해 항-종양 활성이 제한된다. 또한, 파클리탁셀 및 도세탁셀과 같은 화합물 자체는 세포 결합제의 접합체에서 사용되기에 충분히 강력하지 않다.
세포독성 접합체의 제조에서 사용하기 위한 바람직한 탁산은 하기 화학식 XI의 탁산이다:
[화학식 XI]
Figure pat00017
본 발명의 세포독성 접합체에서 사용될 수 있는 탁산의 합성 방법은, 탁산을 항체와 같은 세포 결합제에 접합시키는 방법과 함께, 미국 특허 번호 5,416,064, 5,475,092, 6,340,701, 6,372,738 및 6,436,931, 및 미국 출원 번호 10/024,290, 10/144,042, 10/207,814, 10/210,112 및 10/369,563에 상세하게 기술되어 있다.
토메이마이신 유도체
본 발명에 따른 세포독성제는 또한 토메이마이신 유도체일 수 있다. 토메이마이신 유도체는 DNA의 마이너 그루브 내의 구아닌의 N2에 공유결합으로 결합함으로써 생물학적 성질을 발휘하는 공지된 부류의 화합물인 피롤로[1,4]벤조디아제핀 (PBD)이다. PBD에는 다수의 마이너 그루브 결합제, 예컨대 안트라마이신, 네오트라마이신 및 DC-81이 포함된다.
고도의 세포독성을 보유하고 세포 결합제에 효과적으로 연결될 수 있는 신규한 토메이마이신 유도체가, 그 내용이 본원에 참조로 포함되는 국제 출원 번호 PCT/IB2007/000142에 기술되어 있다. 세포 결합제-토메이마이신 유도체 복합체는 토메이마이신 유도체의 충분한 양의 세포독성 작용이 오직 원치 않는 세포에 대해서만 표적화된 방식으로 적용되도록 하여, 표적화되지 않은 건강한 세포에 대한 손상으로 인한 부작용을 방지하도록 한다.
본 발명에 따른 세포독성제는 연결 기를 통해 세포 결합제, 예컨대 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 또는 38SB39 항체에 연결된 하나 이상의 토메이마이신 유도체를 포함한다. 연결 기는 통상적인 방법을 통해 토메이마이신 유도체에 공유결합으로 결합된 화학적 모이어티의 일부분이다. 바람직한 실시양태에서, 화학적 모이어티는 디술피드 결합을 통해 토메이마이신 유도체에 공유결합으로 결합될 수 있다.
본 발명에서 유용한 토메이마이신 유도체는 하기에 제시된 화학식 XII의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 수화물, 또는 수화염, 또는 이러한 화합물의 다형성 결정질 구조물, 또는 이의 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체이다:
[화학식 XII]
Figure pat00018
식 중,
Figure pat00019
는 임의적 단일 결합을 나타내고;
Figure pat00020
은 단일 결합 또는 이중 결합을 나타내고;
단,
Figure pat00021
가 단일 결합을 나타내는 경우, 동일하거나 상이한 U 및 U'은 독립적으로 H를 나타내고, 동일하거나 상이한 W 및 W'은 OH, 에테르, 예컨대 -OR, 에스테르 (예를 들어 아세테이트), 예컨대 -OCOR, 카르보네이트, 예컨대 -OCOOR, 카르바메이트, 예컨대 -OCONRR', 시클릭 카르바메이트 (N10 및 C11이 고리의 일부분을 형성함), 요소, 예컨대 -NRCONRR', 티오카르바메이트, 예컨대 -OCSNHR, 시클릭 티오카르바메이트 (N10 및 C11이 고리의 일부분을 형성함), -SH, 술피드, 예컨대 -SR, 술폭시드, 예컨대 -SOR, 술폰, 예컨대 -SOOR, 술포네이트, 예컨대 -SO3-, 술폰아미드, 예컨대 -NRSOOR, 아민, 예컨대 -NRR', 임의로 시클릭 아민 (N10 및 C11이 고리의 일부분을 형성함), 히드록실아민 유도체, 예컨대 -NROR', 아미드, 예컨대 -NRCOR, 아지도, 예컨대 -N3, 시아노, 할로, 트리알킬 또는 트리아릴포스포늄, 아미노산-유래 기로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고; 바람직하게는 W 및 W'은 동일하거나 상이하고, OH, Ome, Oet, NHCONH2, SMe이고;
Figure pat00022
가 이중 결합을 나타내는 경우, U 및 U'은 존재하지 않고, W 및 W'은 H를 나타낸다.
ㆍ R1, R2, R1', R2'은 동일하거나 상이하고, 할라이드 또는 하나 이상의 Hal, CN, NRR', CF3, OR, 아릴, Het, S(O)qR로 임의 치환된 알킬로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 R1 및 R2 및 R1' 및 R2'은 각각 =B 및 =B' 기를 함유하는 이중 결합을 함께 형성한다.
바람직하게는, R1 및 R2 및 R1' 및 R2'은 각각 =B 및 =B' 기를 함유하는 이중 결합을 함께 형성한다.
ㆍ B 및 B'은 동일하거나 상이하고, 하나 이상의 Hal, CN, NRR', CF3, OR, 아릴, Het, S(O)qR로 임의 치환된 알케닐로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 B 및 B'은 산소 원자를 나타낸다.
바람직하게는, B = B'이다.
더욱 바람직하게는, B = B' = =CH2 또는 =CH-CH3이다.
ㆍ X, X'은 동일하거나 상이하고, 하나 이상의 -O-, -NR-, -(C=O)-, -S(O)q-로부터 독립적으로 선택된다.
바람직하게는, X = X'이다.
더욱 바람직하게는, X = X' = O이다.
ㆍ A, A'은 동일하거나 상이하고, 산소, 질소 또는 황 원자를 임의로 함유하는 알킬 또는 알케닐 (각각 하나 이상의 Hal, CN, NRR', CF3, OR, S(O)qR, 아릴, Het, 알킬, 알케닐로 임의 치환됨)로부터 독립적으로 선택된다.
바람직하게는, A = A'이다.
더욱 바람직하게는, A = A' = 치환되지 않은 선형 알킬이다.
ㆍ Y, Y'은 동일하거나 상이하고, H, OR로부터 독립적으로 선택된다.
바람직하게는, Y = Y'이다.
더욱 바람직하게는, Y = Y' = O알킬, 더욱 바람직하게는 O메틸이다.
ㆍ T는 -NR-, -O-, -S(O)q-, 또는 4 내지 10-원의 아릴, 시클로알킬, 헤테로시클릭 또는 헤테로아릴 (각각 하나 이상의 Hal, CN, NRR', CF3, R, OR, S(O)qR 및/또는 링커(들)로 임의 치환됨), 또는 하나 이상의 Hal, CN, NRR', CF3, OR, S(O)qR 및/또는 링커(들)로 임의 치환된 분지형 알킬, 또는 하나 이상의 Hal, CN, NRR', CF3, OR, S(O)qR 및/또는 링커(들)로 치환된 선형 알킬이다.
바람직하게는, T는 하나 이상의 링커(들)로 임의 치환된, 4 내지 10-원 아릴 또는 헤테로아릴, 더욱 바람직하게는 페닐 또는 피리딜이다.
상기 링커는 연결 기를 포함한다. 적절한 연결 기는 당업계에 주지되어 있고, 티올, 술피드, 디술피드 기, 티오에테르 기, 산-불안정 기, 광-불안정 기, 펩티다제-불안정 기 및 에스테라제-불안정 기를 포함한다. 디술피드 기 및 티오에테르 기가 바람직하다.
연결 기가 티올-, 술피드 (또는 소위 티오에테르 -S-) 또는 디술피드 (-S-S-)-함유 기인 경우, 티올, 술피드 또는 디술피드 기를 지니는 측쇄는 선형 또는 분지형, 방향족 또는 헤테로시클릭일 수 있다. 당업자는 적절한 측쇄를 용이하게 확인할 수 있다.
바람직하게는, 상기 링커는 하기 화학식의 링커이다:
Figure pat00023
식 중,
G는 단일 또는 이중 결합, -O-, -S- 또는 -NR-이고;
D는 단일 결합 또는 -E-, -E-NR-, -E-NR-F-, -E-O-, -E-O-F-, -E-NR-CO-, -E-NR-CO-F-, -E-CO-, -CO-E-, -E-CO-F, -E-S-, -E-S-F-, -E-NR-C-S-, -E-NR-CS-F-이고;
여기서 E 및 F는 동일하거나 상이하고, 선형 또는 분지형 -(OCH2CH2)i알킬(OCH2CH2)j-, -알킬(OCH2CH2)i-알킬-, -(OCH2CH2)i-, -(OCH2CH2)i시클로알킬(OCH2CH2)j-, -(OCH2CH2)i헤테로시클릭(OCH2CH2)j-, -(OCH2CH2)i아릴(OCH2CH2)j-, -(OCH2CH2)i헤테로아릴(OCH2CH2)j-, -알킬-(OCH2CH2)i알킬(OCH2CH2)j-, -알킬-(OCH2CH2)i-, -알킬-(OCH2CH2)i시클로알킬(OCH2CH2)j-, -알킬(OCH2CH2)i헤테로시클릭(OCH2CH2)j-, -알킬-(OCH2CH2)i아릴(OCH2CH2)j-, -알킬(OCH2CH2)i헤테로아릴(OCH2CH2)j-, -시클로알킬-알킬-, -알킬-시클로알킬-, -헤테로시클릭-알킬-, -알킬-헤테로시클릭-, -알킬-아릴-, -아릴-알킬-, -알킬-헤테로아릴-, -헤테로아릴-알킬-로부터 독립적으로 선택되고;
여기서 i 및 j는 동일하거나 상이하고, 정수이며, 0, 1 내지 2000으로부터 독립적으로 선택되고;
Z는 선형 또는 분지형 -알킬-이고;
p는 0 또는 1이고;
Z'은 H, 티올 보호기, 예컨대 COR, R20 또는 SR20 (여기서, R20은 H, 메틸, 알킬, 임의 치환된 시클로알킬, 아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로시클릭을 나타냄)을 나타내고, 단 Z'이 H인 경우, 상기 화합물은 PBD 모이어티 중 하나의 이민 결합 -NH= 상에 티올 기 -SH가 부가되어 초래된 분자내 고리화에 의해 형성된 상응하는 화합물과 평형 상태이다.
ㆍ 동일하거나 상이한 n, n'은 0 또는 1이다.
ㆍ q는 0, 1 또는 2이다.
ㆍ R, R'은 동일하거나 상이하고, H, 알킬, 아릴 (각각 Hal, CN, NRR', CF3, R, OR, S(O)qR, 아릴, Het로 임의 치환됨)로부터 독립적으로 선택된다.
기하이성질체 및 입체이성질체를 갖는 화학식 XII의 화합물 또한 본 발명의 일부이다.
화학식 XII의 토메이마이신 유도체의 N-10, C-11 이중 결합은 물, 알콜, 티올, 1차 또는 2차 아민, 요소 및 기타 친핵체의 존재 하에 가역적인 방식으로 상응하는 이민 부가물로 용이하게 전환가능한 것으로 공지되어 있다. 이러한 공정은 가역적이고, 진공 또는 고온에서 비-양성자성 용매 내에서 탈수제의 존재 하에 상응하는 토메이마이신 유도체를 쉽게 재생성할 수 있다 (Z. Tozuka, 1983, J. Antibiotics, 36: 276).
따라서, 하기 화학식 XIII의 토메이마이신 유도체의 가역적 유도체가 본 발명에서 또한 사용될 수 있다:
[화학식 XIII]
Figure pat00024
식 중, A, X, Y, n, T, A', X', Y', n', R1, R2, R1', R2'은 화학식 XII에서 정의된 바와 같고, W, W'은 동일하거나 상이하고, OH, 에테르, 예컨대 -OR, 에스테르 (예를 들어 아세테이트), 예컨대 -OCOR, -COOR, 카르보네이트, 예컨대 -OCOOR, 카르바메이트, 예컨대 -OCONRR', 시클릭 카르바메이트 (N10 및 C11이 고리의 일부분을 형성함), 요소, 예컨대 -NRCONRR', 티오카르바메이트, 예컨대 -OCSNHR, 시클릭 티오카르바메이트 (N10 및 C11이 고리의 일부분을 형성함), -SH, 술피드, 예컨대 -SR, 술폭시드, 예컨대 -SOR, 술폰, 예컨대 -SOOR, 술포네이트, 예컨대 -SO3-, 술폰아미드, 예컨대 -NRSOOR, 아민, 예컨대 -NRR', 임의로 시클릭 아민 (N10 및 C11이 고리의 일부분을 형성함), 히드록실아민 유도체, 예컨대 -NROR', 아미드, 예컨대 -NRCOR, -NRCONRR', 아지도, 예컨대 -N3, 시아노, 할로, 트리알킬 또는 트리아릴포스포늄, 아미노산-유래 기로 이루어진 군으로부터 선택되고; 바람직하게는 W 및 W'은 동일하거나 상이하고, OH, Ome, Oet, NHCONH2, SMe이다.
따라서 화학식 XIII의 화합물은 용매가 물인 경우 물을 포함하는 용매화물로 간주될 수 있고; 이러한 용매화물이 특히 유용할 수 있다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명의 토메이마이신 유도체는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
8,8'-[1,3-벤젠디일비스(메틸렌옥시)]-비스[(S)-2-에트-(E)-일리덴-7-메톡시-1,2,3,11a-테트라히드로-5H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-5-온]
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비스-{2-[(S)-2-메틸렌-7-메톡시-5-옥소-1,3,,11a-테트라히드로-5H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-8-일옥실-에틸}-카르밤산 tert-부틸 에스테르
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8,8'-[(1-(2-[메틸-(2-메틸-2-메틸디술파닐-프로필)-아미노]-에톡시)-벤젠-3,5-디메틸)-디옥시]-비스[(S)-2-에트-(E)-일리덴-7-디메톡시-1,2,3,11a-테트라히드로-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-5-온]
8,8'-[(4-(3-[메틸-(4-메틸-4-메틸디술파닐-펜타노일)-아미노]-프로필-피리딘-2,6-디메틸)-디옥시]-비스[(S)-2-에트-(E)-일리덴-7-디메톡시-1,2,3,11a-테트라히드로-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-5-온]
8,8'-[(4-(3-[메틸-(2-메틸-2-메틸디술파닐-프로필)-아미노]-프로필)-피리딘-2,6-디메틸)-디옥시]-비스[(S)-2-에트-(E)-일리덴-7-디메톡시-1,2,3,11a-테트라히드로-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-5-온]
8,8'-[(1-(4-메틸-4-메틸디술파닐)-펜탄아미도)-벤젠-3,5-디메틸)-디옥시]-비스[(S)-2-에트-(E)-일리덴-7-디메톡시-1,2,3,11a-테트라히드로-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-5-온]
뿐만 아니라 상응하는 메르캅토 유도체, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 수화물, 또는 수화염, 또는 이러한 화합물의 다형성 결정질 구조물, 또는 이의 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체.
바람직한 화합물은 하기 화학식의 화합물이다:
Figure pat00025
또는
Figure pat00026
.
식 중, X, X', A, A', Y, Y', T, n, n'은 상기 정의된 바와 같다.
화학식 XII의 화합물은 당업자에게 주지된 다수의 방식으로 제조할 수 있다. 예를 들어, 하기 기술된 방법의 적용 또는 개조, 또는 당업자가 이해하는 바와 같은 이에 대한 변동에 의해 화합물을 합성할 수 있다. 적합한 변형 및 치환이 당업자에게 용이하게 명백하고 주지되어 있거나, 또는 과학 문헌으로부터 용이하게 얻어질 수 있다. 특히, 이러한 방법을 문헌 [R.C. Larock, Comprehensive Organic Transformations, Wiley-VCH Publishers, 1999]에서 발견할 수 있다.
본 발명에서 사용될 수 있는 토메이마이신 유도체의 합성 방법이 국제 출원 번호 PCT/IB2007/000142에 기술되어 있다. 본 발명의 화합물은 다양한 합성 경로에 의해 제조할 수 있다. 시약 및 출발 재료는 시판중이거나, 또는 당업자가 주지된 기술에 의해 용이하게 합성할 수 있다 (예를 들어, WO 00/12508, WO 00/12507, WO 2005/040170, WO 2005/085260, FR1516743, 문헌 [M. Mori et al., 1986, Tetrahedron, 42: 3793-3806] 참조).
본 발명의 접합체 분자는 임의의 기술을 사용하여 형성할 수 있다. 산-불안정 링커를 통해, 또는 광-불안정 링커에 의해 본 발명의 토메이마이신 유도체를 항체 또는 기타 세포 결합제에 연결할 수 있다. 유도체를 적절한 서열이 있는 펩티드와 축합하고, 이어서 세포 결합제에 연결하여 펩티다제-불안정 링커를 생성할 수 있다. 숙신화시켜 세포 결합제에 연결할 수 있는 1차 히드록실 기를 함유하도록 접합체를 제조함으로써, 세포내 에스테라제에 의해 절단되어 유리 유도체를 방출할 수 있는 접합체를 생성할 수 있다. 바람직하게는, 유리 또는 보호 티올 기를 함유하도록 유도체를 합성한 후, 하나 이상의 디술피드 또는 티올-함유 유도체를 디술피드 결합 또는 티오에테르 연결을 통해 세포 결합제에 각각 공유결합으로 연결한다.
수많은 접합 방법이 USP 5,416,064 및 USP 5,475,092에 교시되어 있다. 유리 아미노 기가 산출되도록 토메이마이신 유도체를 변형시킨 후, 항체 또는 기타 세포 결합제에 산-불안정 링커 또는 광-불안정 링커를 통해 연결할 수 있다. 유리 아미노 또는 카르복실 기가 있는 토메이마이신 유도체를 펩티드와 축합하고, 이어서 세포 결합제에 연결하여 펩티다제-불안정 링커가 생성할 수 있다. 링커 상에 유리 히드록실 기가 있는 토메이마이신 유도체를 숙신화시켜 세포 결합제에 연결함으로써, 세포내 에스테라제에 의해 절단되어 유리 약물을 방출할 수 있는 접합체를 생성할 수 있다. 가장 바람직하게는, 유리 또는 보호 티올 기를 생성하도록 토메이마이신 유도체를 처리한 후, 디술피드- 또는 티올 함유 토메이마이신 이량체를 디술피드 결합을 통해 세포 결합제에 연결한다.
바람직하게는, 모노클로날 항체- 또는 세포 결합제-토메이마이신 유도체 접합체는 상기 논의된 바와 같이 디술피드 결합을 통해 연결되고, 토메이마이신 유도체를 전달할 수 있는 것이다. 이러한 세포 결합 접합체는 공지된 방법에 의해, 예컨대 모노클로날 항체를 숙신이미딜 피리딜-디티오프로피오네이트 (SPDP)에 의해 변형시킴으로써 제조된다 (Carlsson et al., 1978, Biochem. J., 173: 723-737). 그 후, 생성된 티오피리딜 기를 티올-함유 토메이마이신 유도체로의 처리에 의해 치환시켜, 디술피드-연결 접합체를 생성한다. 별법으로, 아릴디티오-토메이마이신 유도체의 경우, 항체 분자 내로 앞서 도입된 술프히드릴 기에 의한 토메이마이신 유도체의 아릴-티올의 직접적인 치환에 의해 세포 결합 접합체를 형성한다. 디술피드 브릿지를 통해 연결된 1 내지 10개의 토메이마이신 유도체 약물을 함유하는 접합체가 양쪽 방법에 의해 용이하게 제조된다.
더욱 구체적으로는, 2 mM EDTA를 함유하는 0.05 M 인산칼륨 완충제 (pH 7.5) 중 2.5 ㎎/㎖ 농도의 디티오-니트로피리딜 변형 항체의 용액을 티올-함유 토메이마이신 유도체 (1.3 몰 당량/디티오피리딜 기)로 처리한다. 변형 항체로부터의 티오-니트로피리딘의 방출을 325 nm에서 분광광도법으로 모니터링하고, 약 16시간 내에 완료한다. 항체-토메이마이신 유도체 접합체를 정제하고, 미반응 약물 및 기타 저분자량 물질을 세파덱스(Sephadex) G-25 또는 세파크릴(Sephacryl) S300 컬럼을 통한 겔 여과에 의해 제거한다. 230 nm에서의 흡광도와 275 nm에서의 흡광도의 비율을 측정함으로써 항체 분자당 결합된 토메이마이신 유도체 모이어티의 개수를 구할 수 있다. 평균 1-10개의 토메이마이신 유도체 분자/항체 분자가 이러한 방법에 의해 디술피드 결합을 통해 연결될 수 있다.
항원-발현 세포에 대한 결합 친화력에 대한 접합의 효과를 기존에 문헌 [Liu et al., 1996, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 93: 8618-8623]에 기술된 방법을 사용하여 측정할 수 있다. 세포주에 대한 토메이마이신 유도체 및 이의 항체 접합체의 세포독성은 문헌 [Goldmacher et al., 1985, J. Immunol., 135: 3648-3651]에 기술된 바와 같이 세포 증식 곡선의 역-외삽에 의해 측정할 수 있다. 부착성 세포주에 대한 이러한 화합물의 세포독성은 문헌 [Goldmacher et al., 1986, J. Cell Biol., 102: 1312-1319]에 기술된 바와 같이 클론원성 분석법에 의해 측정할 수 있다.
렙토마이신 유도체
본 발명에 따른 세포독성제는 또한 렙토마이신 유도체일 수 있다. 본 발명에 따르면, "렙토마이신 유도체"는 문헌 [Kalesse et al., 2002, Synthesis 8: 981-1003]에 정의된 바와 같은 렙토마이신 군의 구성원을 지칭하고, 렙토마이신, 예컨대 렙토마이신 A 및 렙토마이신 B, 칼리스타틴, 랏자돈, 예컨대 랏자돈 A 및 랏자돈 B, 앙귀노마이신, 예컨대 앙귀노마이신 A, B, C, D, 카수사마이신, 렙톨스타틴, 렙토푸라닌, 예컨대 렙토푸라닌 A, B, C, D를 포함한다. 렙토마이신 A 및 B의 유도체가 바람직하다.
더욱 구체적으로, 본 발명의 유도체는 하기 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 수화물, 또는 수화염, 또는 이러한 화합물의 다형성 결정질 구조물, 또는 이의 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체이다:
<화학식 I>
Figure pat00027
식 중,
Ra 및 Ra'은 H 또는 -Alk이고; 바람직하게는, Ra는 -Alk, 바람직하게는 메틸이고, Ra'은 H이고;
R17은 OR, CN, NRR', 퍼플루오로알킬로 임의 치환된 알킬이고; 바람직하게는, R17은 알킬, 더욱 바람직하게는 메틸 또는 에틸이고;
R9는 OR, CN, NRR', 퍼플루오로알킬로 임의 치환된 알킬이고; 바람직하게는, R9는 알킬, 더욱 바람직하게는 메틸이고;
X는 -O-또는 -NR-이고; 바람직하게는, X는 -NR-이고;
Y는 -U-, -NR-U-, -O-U-, -NR-CO-U-, -U-NR-CO-, -U-CO-, -CO-U-이고;
바람직하게는, X가 -O-인 경우, Y는 -U-, -NR-U-, -U-NR-CO-이고;
여기서 U는 선형 또는 분지형 -Alk-, -Alk(OCH2CH2)m-, -(OCH2CH2)m-Alk-, -Alk(OCH2CH2)m-Alk-, -(OCH2CH2)m-, -시클로알킬-, -헤테로시클릭-, -시클로알킬-Alk-, -Alk-시클로알킬-, -헤테로시클릭-Alk-, -Alk-헤테로시클릭-으로부터 선택되고;
여기서 m은 1 내지 2000으로부터 선택된 정수이고;
바람직하게는, U는 선형 또는 분지형 -Alk-이고;
Z는 -Alk-이고;
n은 0 또는 1이고; 바람직하게는 n은 0이고;
T는 H, 티올 보호기, 예컨대 Ac, R1 또는 SR1 (여기서, R1은 H, 메틸, Alk, 시클로알킬, 임의 치환된 아릴 또는 헤테로시클릭을 나타냄)을 나타내거나, 또는 하기 화학식을 나타내고;
Figure pat00028
(식 중, Ra, Ra', R17, R9, X, Y, Z, n은 상기 정의된 바와 같음)
바람직하게는, T는 H 또는 SR1 (여기서, R1은 Alk, 더욱 바람직하게는 메틸을 나타냄)이고;
동일하거나 상이한 R, R'은 H 또는 알킬이고;
Alk는 선형 또는 분지형 알킬을 나타내고; 바람직하게는, Alk는 (-(CH2 -q(CH3)q)p- (여기서, p는 1 내지 10의 정수를 나타내고, q는 0 내지 2의 정수를 나타냄)를 나타내고; 바람직하게는, Alk는 -(CH2)- 또는 -C(CH3)2-를 나타낸다.
바람직한 화합물은 하기로부터 선택될 수 있다:
(2E,10E,12E,16Z,18E)-(R)-6-히드록시-3,5,7,9,11,15,17-헵타메틸-19-((2S,3S)-3-메틸-6-옥소-3,6-디히드로-2H-피란-2-일)-8-옥소-노나데카-2,10,12,16,18-펜타엔산의 (2-메틸술파닐-에틸)-아미드
비스-[(2E,10E,12E,16Z,18E)-(R)-6-히드록시-3,5,7,9,11,15,17-헵타메틸-19-((2S,3S)-3-메틸-6-옥소-3,6-디히드로-2H-피란-2-일)-8-옥소-노나데카-2,10,12,16,18-펜타엔산의 (2-메르캅토에틸)-아미드]
(2E,10E,12E,16Z,18E)-(R)-6-히드록시-3,5,7,9,11,15,17-헵타메틸-19-((2S,3S)-3-메틸-6-옥소-3,6-디히드로-2H-피란-2-일)-8-옥소-노나데카-2,10,12,16,18-펜타엔산의 (2-메르캅토-에틸)-아미드
(2E,10E,12E,16Z,18E)-(R)-6-히드록시-3,5,7,9,11,15,17-헵타메틸-19-((2S,3S)-3-메틸-6-옥소-3,6-디히드로-2H-피란-2-일)-8-옥소-노나데카-2,10,12,16,18-펜타엔산의 (2-메틸디술파닐-에틸)-아미드
(2E,10E,12E,16Z,18E)-(R)-6-히드록시-3,5,7,9,11,15,17-헵타메틸-19-((2S,3S)-3-메틸-6-옥소-3,6-디히드로-2H-피란-2-일)-8-옥소-노나데카-2,10,12,16,18-펜타엔산의 (2-메틸-2-메틸디술파닐-프로필)-아미드
(2E,10E,12E,16Z,18E)-(R)-6-히드록시-3,5,7,9,11,15,17-헵타메틸-19-((2S,3S)-3-메틸-6-옥소-3,6-디히드로-2H-피란-2-일)-8-옥소-노나데카-2,10,12,16,18-펜타엔산의 (2-메르캅토-2-메틸-프로필)-아미드
또는 이의 제약상 허용가능한 염, 수화물, 또는 수화염, 또는 이러한 화합물의 다형성 결정질 구조물, 또는 이의 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체.
유도체를 세포결합제에 연결시키기 위해, 유도체는 디술피드 결합, 술피드 (또는 본원에서 티오에테르로 칭해짐) 결합, 산-불안정 기, 광-불안정 기, 펩티다제-불안정 기 또는 에스테라제-불안정 기와 같은 연결을 통해 유도체가 세포 결합제에 연결되도록 하는 모이어티 (연결 기)를 포함하여야 한다. 렙토마이신 유도체를, 예를 들어 디술피드 결합, 티오에테르 결합, 산-불안정 기, 광-불안정 기, 펩티다제-불안정 기 또는 에스테라제-불안정 기를 통해 세포 결합제에 연결시키는 데 필요한 모이어티를 함유하도록 유도체를 제조한다. 수성 용액에서의 용해도를 추가로 향상시키기 위해, 연결 기는 폴리에틸렌 글리콜 스페이서를 함유할 수 있다. 바람직하게는, 표적화된 세포의 환원성 환경은 술피드 또는 디술피드의 절단 및 이와 관련하여 세포독성이 증가된 유도체의 방출을 초래하기 때문에 술피드 또는 디술피드 연결이 사용된다.
본 발명의 화합물은 다양한 합성 경로에 의해 제조할 수 있다. 시약 및 출발 재료는 시판중이거나, 또는 당업자가 주지된 기술에 의해 용이하게 합성할 수 있다. 본 발명의 세포독성 접합체에서 사용될 수 있는 렙토마이신 유도체의 합성 방법은, 상기 렙토마이신 유도체를 항체와 같은 세포 결합제에 접합시키는 방법과 함께, 그 내용이 본원에 참조로 포함되는 유럽 특허 출원 번호 06290948.6에 상세하게 기술되어 있다.
CC -1065 유사체
본 발명에 따른 세포독성 접합체에서 사용되는 세포독성제는 또한 CC-1065 또는 이의 유도체일 수 있다.
CC-1065는 스트렙토마이세스 젤렌시스(Streptomyces zelensis)의 배양 브로스(broth)로부터 단리된 강력한 항-종양 항생제이다. CC-1065는 통상적으로 사용되는 항암 약물, 예컨대 독소루비신, 메토트렉세이트 및 빈크리스틴보다 시험관내에서 약 1000배 더 강력하다 (B.K. Bhuyan et al., 1982, Cancer Res., 42, 3532-3537). CC-1065 및 이의 유사체는 미국 특허 번호 6,372,738, 6,340,701, 5,846,545 및 5,585,499에 개시되어 있다.
CC-1065의 세포독성 효능은 이의 알킬화 활성 및 이의 DNA-결합 또는 DNA-삽입(intercalating) 활성과 상관되었다. 이러한 2가지 활성은 분자의 별도의 부분에 존재한다. 따라서, 알킬화 활성은 시클로프로파피롤로인돌 (CPI) 서브유닛 내에 함유되고, DNA-결합 활성은 2개의 피롤로인돌 서브유닛 내에 존재한다.
CC-1065는 세포독성제로서의 특정한 매력적인 특색이 있지만, 치료적 사용에는 한계가 있다. 마우스에 CC-1065를 투여하면 지연형 간독성을 야기하여, 12.5 ㎍/㎏의 정맥내 단일 투여 후 50일째에 사망에 이르렀다 (V. L. Reynolds et al., 1986, J. Antibiotics, XXIX: 319-334). 이는 지연형 독성을 야기하지 않는 유사체를 개발하려는 노력을 자극하였고, CC-1065를 모델로 하는 더욱 단순한 유사체의 합성이 기재되었다 (M.A. Warpehoski et al., 1988, J. Med. Chem., 31: 590-603).
또 다른 일련의 유사체에서는, CPI 모이어티가 시클로프로파벤즈인돌 (CBI) 모이어티로 대체되었다 (D. L. Boger et al., 1990, J. Org. Chem., 55: 5823-5833; D. L. Boger et al., 1991, BioOrg. Med. Chem. Lett., 1: 115-120). 이러한 화합물은 마우스에서 지연형 독성을 야기하지 않으면서 어버이 약물의 높은 시험관내 효능을 유지한다. CC-1065와 마찬가지로, 이러한 화합물은 공유결합 방식으로 DNA의 마이너 그루브에 결합하여 세포사를 야기하는 알킬화제이다. 그러나, 가장 유망한 유사체인 아도젤레신(Adozelesin) 및 카르젤레신(Carzelesin)의 임상 평가는 실망스러운 결과에 이르렀다 (B. F. Foster ef al., 1996, Investigational New Drugs, 13: 321-326; I. Wolff et al., 1996, Clin. Cancer Res., 2: 1717-1723). 이러한 약물은 높은 전신 독성으로 인해 불량한 치료 효과를 나타낸다.
CC-1065 유사체의 치료 효능은 종양 부위로의 표적화된 전달을 통해 생체내 분포를 변화시킴으로써 크게 향상될 수 있고, 결과적으로 표적화되지 않은 조직에서의 더 낮은 독성, 따라서 더 낮은 전신 독성이 초래된다. 이러한 목표를 달성하기 위해, CC-1065의 유사체 및 유도체와 종양 세포를 특이적으로 표적화하는 세포결합제의 접합체가 기술되었다 (미국 특허 5,475,092; 5,585,499; 5,846,545). 전형적으로 이러한 접합체들은 시험관내에서 높은 표적-특이적 세포독성을 나타내고, 마우스에서의 인간 종양 이종이식 모델에서 뛰어난 항-종양 활성을 나타낸다 (R. V. J. Chari et al., 1995, Cancer Res., 55: 4079-4084).
최근, 수성 매질에서의 용해도가 향상된 CC-1065 유사체의 전구약물이 기술되었다 (유럽 특허 출원 번호 06290379.4). 이러한 전구약물에서는, 약물이 산성 수용액에서의 보관 시에 안정적이도록 하고, 보호되지 않은 유사체와 비교하여 약물에 증가된 수용성을 부여하는 관능기로 분자의 알킬화 부분의 페놀성 기가 보호된다. 보호기는 생체내에서 생리학적 pH에서 쉽게 절단되어, 상응하는 활성 약물을 제공한다. EP 06290379.4에 기술된 전구약물에서, 페놀성 치환기는 생리학적 pH에서 전하를 띠는 페닐 카르바메이트를 함유한 술폰산으로서 보호되고, 따라서 수용성이 향상된다. 수용성을 추가로 향상시키기 위해, 임의적 폴리에틸렌 글리콜 스페이서가 인돌릴 서브유닛과 절단가능한 연결, 예컨대 디술피드 기 사이의 링커 내로 도입될 수 있다. 이러한 스페이서의 도입은 약물의 효능을 변경시키지 않는다.
본 발명의 세포독성 접합체에서 사용될 수 있는 CC-1065 유사체의 합성 방법은, 유사체를 항체와 같은 세포 결합제에 접합시키는 방법과 함께, EP 06290379.4 (그 내용이 본원에 참조로 포함됨) 및 미국 특허 번호 5,475,092, 5,846,545, 5,585,499, 6,534,660 및 6,586,618 및 미국 출원 번호 10/116,053 및 10/265,452에 상세하게 기술되어 있다.
기타 약물
메토트렉세이트, 다우노루비신, 독소루비신, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 멜팔란, 미토마이신 C, 클로람부실, 칼리키아마이신, 튜불리신 및 튜불리신 유사체, 듀오카르마이신 및 듀오카르마이신 유사체, 돌라스타틴 및 돌라스타틴 유사체와 같은 약물이 본 발명의 접합체의 제조에 또한 적절하다. 약물 분자는 또한 혈청 알부민과 같은 중개 담체 분자를 통해 항체 분자에 연결될 수 있다. 미국 일련 번호 09/740991에 예를 들어 기술된 바와 같은 독사루비신 및 다우노루비신 화합물 또한 유용한 세포독성제일 수 있다.
치료용 조성물
본 발명은 또한 치료적 유효량의 본 발명의 화합물 및 제약상 허용가능한 담체를 포함하는, 과증식성 장애 또는 염증성 질환 또는 자가면역 질환의 치료를 위한 치료용 조성물에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 상기 제약 조성물은 하기를 포함하는 (그러나 이에 한정되지 않는) 암의 치료를 위한 것이다: 방광, 유방, 결장, 신장, 간, 폐, 난소, 췌장, 위, 자궁경부, 갑상선 및 피부의 암종을 비롯한 암종 (편평세포 암종 포함); 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병, B-세포 림프종, T-세포 림프종, 버킷 림프종을 비롯한 림프 계통의 조혈성 종양; 급성 및 만성 골수성 백혈병 및 전골수구성 백혈병을 비롯한 골수 계통의 조혈성 종양; 섬유육종 및 횡문근육종을 비롯한 중간엽 기원의 종양; 흑색종, 정상피종, 기형암종, 신경모세포종 및 신경교종을 비롯한 기타 종양; 성상세포종, 신경모세포종, 신경교종 및 신경초종을 비롯한 중추 및 말초 신경계의 종양; 섬유육종, 횡문근육종 및 골육종을 비롯한 중간엽 기원의 종양; 및 흑색종, 색소성 건피증, 각화극세포종, 정상피종, 갑상선 여포암 및 기형암종을 비롯한 기타 종양, 및 CD38이 현저하게 발현된, 아직 결정되지 않은 기타 암. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 제약 조성물은 CD38이 발현된 암, 예컨대 비-호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 모발상 세포 백혈병, 다발성 골수종, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 급성 골수성 백혈병 또는 급성 림프구성 백혈병, 및 CD38이 현저하게 발현된, 아직 결정되지 않은 기타 암의 치료에 사용된다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 제약 조성물은 자가면역 질환, 예컨대 전신 홍반성 루푸스, 류머티스성 관절염, 다발성 경화증, 크론병, 궤양성 대장염, 위염, 하시모토 갑상선염, 강직성 척추염, C형 간염-관련 한랭글로불린혈증성 혈관염, 만성 국소 뇌염, 수포성 유사천포창, 혈우병 A, 막증식성 사구체신염, 쇼그렌 증후군, 성인 및 소아 피부근염, 성인 다발성 근염, 만성 두드러기, 원발성 담즙성 간경변, 특발성 혈소판 감소성 자반증, 시신경 척수염, 그레이브스 갑상선 이상성 질환, 수포성 유사천포창, 막증식성 사구체신염, 처그-스트라우스 증후군 및 천식의 치료에 사용될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 상기 제약 조성물은 예를 들어 이식편 거부, 예컨대 신장 이식 거부, 간 이식 거부, 폐 이식 거부, 심장 이식 거부 및 골수 이식 거부; 이식편 대 숙주 질환; 바이러스 감염, 예컨대 mV 감염, HIV 감염, AIDS 등; 및 기생충 감염, 예컨대 편모충증, 아메바증, 주혈흡충증, 및 당업자에 의해 결정되는 바와 같은 기타 감염과 같은 기타 장애에 관한 것이다.
본 발명은 하기를 포함하는 제약 조성물을 제공한다:
a) 유효량의 본 발명의 항체, 항체 단편 또는 항체 접합체, 및
b) 불활성이거나 생리적으로 활성일 수 있는, 제약상 허용가능한 담체.
본원에서 사용된 "제약상 허용가능한 담체"에는 생리적으로 혼화성인 임의의 모든 용매, 분산 매질, 코팅제, 항-박테리아 및 항-진균 작용제 등이 포함된다. 적절한 담체, 희석제 및/또는 부형제의 예로는 물, 염수, 포스페이트 완충 염수, 덱스트로스, 글리세롤, 에탄올 등 중 하나 이상, 뿐만 아니라 이들의 조합물이 포함된다. 다수의 사례에서, 등장성 작용제, 예컨대 당, 폴리알콜 또는 염화나트륨이 조성물 내에 포함되는 것이 바람직할 것이다. 특히, 적절한 담체의 관련 예로는 (1) 약 1 ㎎/㎖ 내지 25 ㎎/㎖의 인간 혈청 알부민을 함유하거나 함유하지 않는 둘베코(Dulbecco) 포스페이트 완충 염수 (pH가 약 7.4), (2) 0.9％ 염수 (0.9％ w/v 염화나트륨 (NaCl)), 및 (3) 5％ (w/v) 덱스트로스가 포함되고; 이는 항산화제, 예컨대 트립타민, 및 안정화제, 예컨대 트윈(Tween) 20을 또한 함유할 수 있다.
본원의 조성물은 치료될 특정 장애에 필요하다면 추가적인 치료제를 또한 함유할 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 항체, 항체 단편 또는 항체 접합체, 및 보충적인 활성 화합물은 서로 불리하게 영향을 미치지 않는 상보적인 활성을 가질 것이다. 바람직한 실시양태에서, 추가적인 치료제는 상피 성장 인자 (EGF), 섬유모세포 성장 인자 (FGF), 간세포 성장 인자 (HGF), 조직 인자 (TF), 단백질 C, 단백질 S, 혈소판-유래 성장 인자 (PDGF), 헤레귤린, 대식세포 자극 단백질 (MSP) 또는 혈관 내피 성장 인자 (VEGF)의 길항제, 또는 HER2 수용체, HER3 수용체, c-MET 및 기타 수용체 티로신 키나제를 비롯한, 상피 성장 인자 (EGF), 섬유모세포 성장 인자 (FGF), 간세포 성장 인자 (HGF), 조직 인자 (TF), 단백질 C, 단백질 S, 혈소판-유래 성장 인자 (PDGF), 헤레귤린, 대식세포 자극 단백질 (MSP) 또는 혈관 내피 성장 인자 (VEGF)에 대한 수용체의 길항제이다. 바람직한 실시양태에서, 추가적인 치료제는 CD3, CD14, CD19, CD20, CD22, CD25, CD28, CD30, CD33, CD36, CD40, CD44, CD52, CD55, CD59, CD56, CD70, CD79, CD80, CD103, CD134, CD137, CD138 및 CD152를 포함하는 분화 집단 (CD) 항원을 표적으로 하는 작용제이다. 바람직한 실시양태에서, 추가적인 치료제는 화학요법제 또는 면역조절제이다.
본 발명의 조성물은 형태가 다양할 수 있다. 여기에는, 예를 들어 액체, 반고체 및 고체 투여 형태가 포함되지만, 바람직한 형태는 의도된 투여 방식 및 치료 용도에 좌우된다. 전형적으로 바람직한 조성물은 주사용 또는 주입용 용액의 형태이다. 바람직한 투여 방식은 비경구 투여 (예를 들어 정맥내, 근육내, 복강내, 피하)이다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 볼루스로서 또는 장기간에 걸친 연속적인 주입에 의해 정맥내로 투여된다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 이는 근육내, 피하, 관절내, 윤활막내, 종양내, 종양주위, 병변내 또는 병변주위 경로에 의해 주사되어, 국소적, 뿐만 아니라 전신성 치료 효과를 발휘한다.
비경구 투여를 위한 무균성 조성물은 필요한 양의 본 발명의 항체, 항체 단편 또는 항체 접합체를 적합한 용매에 혼입시킨 후, 미세여과에 의해 무균화시킴으로써 제조될 수 있다. 용매 또는 비히클로서, 물, 염수, 포스페이트 완충 염수, 덱스트로스, 글리세롤, 에탄올 등, 뿐만 아니라 이들의 조합물이 사용될 수 있다. 다수의 사례에서, 등장성 작용제, 예컨대 당, 폴리알콜 또는 염화나트륨이 조성물 내에 포함되는 것이 바람직할 것이다. 이러한 조성물들은 또한 보조제, 특히 습윤화제, 등장화제, 유화제, 분산제 및 안정화제를 함유할 수 있다. 비경구 투여를 위한 무균성 조성물은 또한 사용 시점에 무균수 또는 임의의 다른 주사용 무균성 매질에 용해시킬 수 있는 무균성 고체 조성물의 형태로 제조될 수 있다.
본 발명의 항체, 항체 단편 또는 항체 접합체는 또한 경구 투여될 수 있다. 경구 투여를 위한 고체 조성물로서, 정제, 환제, 산제 (젤라틴 캡슐, 새세이(sachet)) 또는 입제가 사용될 수 있다. 이러한 조성물에서는, 본 발명에 따른 활성 성분을 아르곤 기류 하에 하나 이상의 불활성 희석제, 예컨대 전분, 셀룰로스, 수크로스, 락토스 또는 실리카와 혼합한다. 이러한 조성물은 또한 희석제 이외의 물질, 예를 들어 하나 이상의 윤활제, 예컨대 스테아르산마그네슘 또는 탈크, 착색제, 코팅제 (당의정) 또는 글레이즈(glaze)를 포함할 수 있다.
경구 투여를 위한 액체 조성물로서, 불활성 희석제, 예컨대 물, 에탄올, 글리세롤, 식물성 오일 또는 파라핀 오일을 함유하는 제약상 허용가능한 액제, 현탁액제, 에멀션, 시럽 및 엘릭서를 사용할 수 있다. 이러한 조성물은 희석제 이외의 물질, 예를 들어 습윤화제, 감미제, 증점제, 풍미제 또는 안정화제를 포함할 수 있다.
투여량은 원하는 효과, 치료 기간 및 사용된 투여 경로에 좌우되는데; 이는 일반적으로 성인에 대해 경구용으로 5 ㎎ 내지 1000 ㎎/일이고, 단위 투여량은 활성 물질 1 ㎎ 내지 250 ㎎의 범위이다. 일반적으로, 의사는 연령, 체중 및 치료될 대상체에 특이적인 임의의 기타 요인에 따라 적합한 투여량을 결정할 것이다.
치료용 사용 방법
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 CD38+ 세포를 사멸시키는 것을 필요로 하는 환자에게 상기 CD38에 결합하여 세포자멸사, ADCC 및/또는 CDC에 의해 상기 CD38+ 세포를 사멸시킬 수 있는 항체를 투여함으로써 CD38+ 세포를 사멸시키는 방법을 제공한다. 임의 유형의 본 발명의 항체, 항체 단편 또는 세포독성 접합체가 치료용으로 사용될 수 있다. 따라서 본 발명은 의약으로서의 항-CD38 모노클로날 항체, 이의 단편 또는 이의 세포독성 접합체의 용도를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명의 항체, 항체 단편 또는 세포독성 접합체는 포유동물에서의 과증식성 장애 또는 염증성 질환 또는 자가면역 질환의 치료에 사용된다. 더욱 바람직한 실시양태에서, 상기 개시되고, 본 발명의 항체, 항체 단편 또는 세포독성 접합체를 함유하는 제약 조성물 중 하나가 포유동물에서의 과증식성 장애의 치료에 사용된다. 한 실시양태에서, 상기 장애는 암이다. 특히, 암은 전이성 암이다.
따라서, 본 발명의 제약 조성물은 하기를 포함하는 (그러나 이에 한정되지 않는) 다양한 암의 치료 또는 예방에 유용하다: 방광, 유방, 결장, 신장, 간, 폐, 난소, 췌장, 위, 자궁경부, 갑상선 및 피부의 암종을 비롯한 암종 (편평세포 암종 포함); 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병, B-세포 림프종, T-세포 림프종, 버킷 림프종을 비롯한 림프 계통의 조혈성 종양; 급성 및 만성 골수성 백혈병 및 전골수구성 백혈병을 비롯한 골수 계통의 조혈성 종양; 섬유육종 및 횡문근육종을 비롯한 중간엽 기원의 종양; 흑색종, 정상피종, 기형암종, 신경모세포종 및 신경교종을 비롯한 기타 종양; 성상세포종, 신경모세포종, 신경교종 및 신경초종을 비롯한 중추 및 말초 신경계의 종양; 섬유육종, 횡문근육종 및 골육종을 비롯한 중간엽 기원의 종양; 및 흑색종, 색소성 건피증, 각화극세포종, 정상피종, 갑상선 여포암 및 기형암종을 비롯한 기타 종양, 및 CD38이 발현된, 아직 결정되지 않은 기타 암. 바람직하게는, 장애는 CD38이 발현된 NHL, BL, MM, B-CLL, ALL, TCL, AML, HCL, HL 또는 CML, 및 CD38이 현저하게 발현된, 아직 결정되지 않은 기타 암이다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 제약 조성물은 자가면역 질환, 예컨대 전신 홍반성 루푸스, 류머티스성 관절염, 다발성 경화증, 크론병, 궤양성 대장염, 위염, 하시모토 갑상선염, 강직성 척추염, C형 간염-관련 한랭글로불린혈증성 혈관염, 만성 국소 뇌염, 수포성 유사천포창, 혈우병 A, 막증식성 사구체신염, 쇼그렌 증후군, 성인 및 소아 피부근염, 성인 다발성 근염, 만성 두드러기, 원발성 담즙성 간경변, 특발성 혈소판 감소성 자반증, 시신경 척수염, 그레이브스 갑상선 이상성 질환, 수포성 유사천포창, 막증식성 사구체신염, 처그-스트라우스 증후군 및 천식의 치료에 사용될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 상기 제약 조성물은 예를 들어 이식편 거부, 예컨대 신장 이식 거부, 간 이식 거부, 폐 이식 거부, 심장 이식 거부 및 골수 이식 거부; 이식편 대 숙주 질환; 바이러스 감염, 예컨대 mV 감염, HIV 감염, AIDS 등; 및 기생충 감염, 예컨대 편모충증, 아메바증, 주혈흡충증, 및 당업자에 의해 결정되는 바와 같은 기타 감염과 같은 기타 장애에 관한 것이다.
유사하게, 본 발명은 유효량의 본 발명의 항체, 항체 단편 또는 항체 접합체, 또는 항체, 항체 단편 또는 세포독성 접합체를 포함하는 치료제를, 단독으로 또는 또 다른 세포독성제 또는 치료제와 조합하여, 표적 세포, 또는 표적 세포를 함유하는 조직과 접촉시키는 것을 포함하는, 선별된 세포 집단의 성장을 억제하는 방법을 제공한다. 바람직한 실시양태에서, 추가적인 치료제는 상피 성장 인자 (EGF), 섬유모세포 성장 인자 (FGF), 간세포 성장 인자 (HGF), 조직 인자 (TF), 단백질 C, 단백질 S, 혈소판-유래 성장 인자 (PDGF), 헤레귤린, 대식세포 자극 단백질 (MSP) 또는 혈관 내피 성장 인자 (VEGF)의 길항제, 또는 HER2 수용체, HER3 수용체, c-MET 및 기타 수용체 티로신 키나제를 비롯한, 상피 성장 인자 (EGF), 섬유모세포 성장 인자 (FGF), 간세포 성장 인자 (HGF), 조직 인자 (TF), 단백질 C, 단백질 S, 혈소판-유래 성장 인자 (PDGF), 헤레귤린, 대식세포 자극 단백질 (MSP) 또는 혈관 내피 성장 인자 (VEGF)에 대한 수용체의 길항제이다. 바람직한 실시양태에서, 추가적인 치료제는 CD3, CD14, CD19, CD20, CD22, CD25, CD28, CD30, CD33, CD36, CD40, CD44, CD52, CD55, CD59, CD56, CD70, CD79, CD80, CD103, CD134, CD137, CD138 및 CD152를 포함하는 분화 집단 (CD) 항원을 표적으로 하는 작용제이다. 바람직한 실시양태에서, 추가적인 치료제는 화학요법제 또는 면역조절제이다.
선별된 세포 집단의 성장을 억제하는 방법은 시험관내에서, 생체내에서 또는 생체외에서 실행될 수 있다. 본원에서 사용된 "성장 억제"는 단기간이든지 또는 장기간이든지 세포의 성장을 느리게 하는 것, 세포 생육력을 감소시키는 것, 세포사를 야기하는 것, 세포를 용해시키는 것 및 세포사를 유도하는 것을 의미한다.
시험관내 용도의 예로는 질환 세포 또는 악성 세포를 사멸시키기 위한 동일한 환자 내로의 이식 전의 자가 골수의 처리; 적격성 T 세포를 사멸시키고 이식편-대-숙주 질환 (GVHD)을 예방하기 위한 이식 전의 골수의 처리; 표적 항원을 발현하지 않는 목적 변이체를 제외한 모든 세포를 사멸시키기 위한 또는 원치 않는 항원을 발현하는 변이체를 사멸시키기 위한 세포 배양물의 처리가 포함된다.
비-임상성 시험관내 용도의 조건은 당업자에 의해 쉽게 결정된다.
임상성 생체외 용도의 예는 암 치료 또는 자가면역 질환의 치료에서 자가 이식 전에 골수로부터 종양 세포 또는 림프 세포를 제거하는 것, 또는 이식편-대-숙주 질환 (GVHD)을 예방하기 위해 이식 전에 자가 또는 동종 골수 또는 조직으로부터 T 세포 또는 기타 림프 세포를 제거하는 것이다. 하기와 같이 처리가 수행될 수 있다. 환자 또는 기타 개체로부터 골수를 수확한 후, 본 발명의 세포독성제가 첨가된 혈청을 함유하는 배지에서 인큐베이션한다. 농도는 약 37℃에서 약 30분 내지 약 48시간 동안, 약 10 μM 내지 1 pM 범위이다. 농도 및 인큐베이션 시간의 정확한 조건, 즉 용량은 당업자에 의해 쉽게 결정된다. 인큐베이션 후, 골수 세포를 혈청을 함유하는 배지로 세정하고, 공지된 방법에 따라 정맥내 주입에 의해 환자에게 복귀시킨다. 골수의 수확 시점과 처리된 세포의 재주입 사이에 환자에게 다른 치료, 예컨대 제거성 화학요법 또는 전신 방사선조사의 과정이 제공되는 경우, 처리된 골수 세포는 표준 의학 장비를 사용하여 액체 질소 중에 동결시켜 보관한다.
임상성 생체내 용도를 위해, 본 발명의 항체, 에피토프-결합 항체 단편 또는 세포독성 접합체는 무균성 및 내독소 수준에 대해 테스트된 용액으로서 공급될 것이다. 세포독성 접합체 투여의 적절한 프로토콜의 예는 하기와 같다. 접합체를 정맥내 볼루스로서 4주 동안 매주 주 1회 제공한다. 볼루스 투여량은 5 내지 10 ㎖의 인간 혈청 알부민이 첨가될 수 있는 50 내지 100 ㎖의 생리식염수로 제공된다. 투여량은 정맥내 투여 당 10 ㎍ 내지 100 ㎎ (하루에 100 ng 내지 1 ㎎/㎏ 범위)일 것이다. 더욱 바람직하게는, 투여량은 50 ㎍ 내지 30 ㎎ 범위일 것이다. 가장 바람직하게는, 투여량은 1 ㎎ 내지 20 ㎎ 범위일 것이다. 4주 치료 후, 환자에게 주 단위 치료를 지속할 수 있다. 투여 경로, 부형제, 희석제, 투여량, 시간 등과 관련된 구체적인 임상 프로토콜은 임상 상황이 허가함에 따라 당업자에 의해 결정될 수 있다.
진단
본 발명의 항체 또는 항체 단편은 또한 시험관내에서 또는 생체내에서 생물학적 샘플 내의 CD38을 검출하는 데 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 본 발명의 항-CD38 항체는 조직 또는 조직으로부터 유래된 세포 내의 CD38의 수준을 결정하는 데 사용된다. 바람직한 실시양태에서, 조직은 질환 조직이다. 방법의 바람직한 실시양태에서, 조직은 종양 또는 이의 생검 절편이다. 방법의 바람직한 실시양태에서, 조직 또는 이의 생검 절편을 먼저 환자로부터 절제한 후, 조직 또는 생검 절편 내의 CD38의 수준을 본 발명의 항체 또는 항체 단편에 의해 면역분석법에서 결정할 수 있다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, CD38의 수준은 동결되거나 고정될 수 있는 조직 또는 이의 생검 절편의 샘플 상에서 결정할 수 있다. 동일한 방법을 사용하여 CD38 단백질의 또 다른 성질, 예컨대 이의 세포 표면 수준, 또는 이의 세포성 국소화를 결정할 수 있다.
상기 기술된 방법을 사용하여 암에 걸린 것으로 밝혀졌거나 암에 걸린 것으로 추측되는 대상체에서 암을 진단할 수 있고, 이때 상기 환자에서 측정된 CD38의 수준이 정상 기준 대상체 또는 표준물의 수준과 비교된다. 그 후, 상기 방법을 사용하여 종양이 CD38을 발현하는지 여부를 결정할 수 있고, 이는 종양이 본 발명의 항체, 항체 단편 또는 항체 접합체로의 치료에 양호하게 응답할 것임을 시사할 수 있다. 바람직하게는, 종양은 CD38이 발현된 NHL, BL, MM, B-CLL, ALL, TCL, AML, HCL, HL 또는 CML, 및 CD38이 현저하게 발현된, 아직 결정되지 않은 기타 암이다.
본 발명은 연구 또는 진단 용도에서의 사용을 위해 추가로 표지된 모노클로날 항체, 인간화 항체 및 이의 에피토프-결합 단편을 추가로 제공한다. 바람직한 실시양태에서, 표지는 방사성표지, 형광단, 발색단, 영상화제 또는 금속 이온이다.
상기 표지된 항체 또는 이의 에피토프-결합 단편을 암 또는 염증성 질환 또는 자가면역 질환에 걸린 것으로 추측되는 대상체에게 투여하고, 대상체의 신체 내에서의 표지의 분포를 측정 또는 모니터링하는 진단 방법이 또한 제공된다.
키트
본 발명은 또한, 예를 들어, 기술된 세포독성 접합체 및 특정 세포 유형의 사멸을 위한 세포독성 접합체의 사용에 대한 설명서를 포함하는 키트를 포함한다. 설명서는 세포독성 접합체를 시험관내에서, 생체내에서 또는 생체외에서 사용하기 위한 지침을 포함할 수 있다.
전형적으로, 키트에는 세포독성 접합체를 함유하는 구획이 있을 것이다. 세포독성 접합체는 동결건조된 형태, 액체 형태, 또는 키트 내에 포함되도록 개조될 수 있는 기타 형태일 수 있다. 키트는 또한 키트 내의 설명서 상에 기술된 방법을 실행하는 데 필요한 추가적인 요소, 예컨대 동결건조 분말을 재구성시키기 위한 멸균 용액, 환자에게 투여하기 전에 세포독성 접합체와 조합시키기 위한 추가적인 작용제, 및 접합체를 환자에게 투여하는 것을 보조하는 도구를 함유할 수 있다.
[실시예]
본 발명을 이제 하기 실시예를 참조하여 기술하지만, 이는 단지 설명을 위한 것이지, 본 발명을 한정하고자 하는 것은 아니다.
실시예 1
마우스 CD38 항체
높은 수준의 인간 CD38을 안정적으로 발현하는 BALB/c 마우스로부터 유래된 전구체 B 세포주인 300-19 세포 (M. G. Reth et al. 1985, Nature, 317: 353-355)를 BALB/c VAF 마우스의 면역화에 사용하였다. 마우스를 이뮤노젠, 인크.(ImmunoGen, Inc.)에서 사용되는 표준 면역화 프로토콜에 의해 2-3주마다 마우스 당 약 5×106개의 CD38-발현 300-19 세포로 피하 면역화시켰다. 면역화된 마우스를 하이브리도마 생성을 위해 희생시키기 3일 전에 또 다른 용량의 항원으로 부스팅시켰다. 표준 동물 프로토콜에 따라 마우스로부터 비장을 수집하고, 2개의 냉동시킨 무균성 현미경용 슬라이드 사이에서 분쇄하여, RPMI-1640 배지 내의 단일 세포 현탁액을 수득하였다. 비장 세포를 펠렛화하고, 세정하고, 폴리에틸렌 글리콜-1500 (로슈(Roche) 783 641)을 사용하여 뮤린 골수종 P3X63Ag8.653 세포 (J. F. Kearney et al. 1979, J Immunol, 123: 1548-1550)와 융합시켰다. 융합된 세포를 하이포잔틴-아미노프테린-티미딘 (HAT) (시그마(Sigma) H-0262)을 함유하는 RPMI-1640 선별 배지에 재현탁시키고, 37℃ (5％ CO2)에서 96-웰 편평 바닥 플레이트 (코닝-코스타(Corning-Costar) 3596, 웰 당 200 ㎕의 세포 현탁액)에서 성장에 대해 선별하였다. 5일의 인큐베이션 후, 100 ㎕의 배양 상청액을 각각의 웰로부터 제거하고, 하이포잔틴-티미딘 (HT) 보충물 (시그마 H-0137)을 함유하는 100 ㎕의 RPMI-1640 배지로 교체하였다. 하이브리도마 클론이 항체 스크리닝을 위해 준비될 때까지 37℃ (5％ CO2)에서 인큐베이션을 지속하였다. 문헌 [J. Langone and H. Vunakis (Eds., Methods in Enzymology, Vol. 121, "Immunochemical Techniques, Part I"; Academic Press, Florida)] 및 [E. Harlow and D. Lane ("Antibodies: A Laboratory Manual"; 1988; Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York)]에 기재된 것을 비롯하여 다른 면역화 및 하이브리도마 생산 기술도 사용할 수 있다.
벡턴 디킨슨(Becton Dickinson) FACSCalibur 또는 FACSArray 기계를 사용하는 형광 활성화 세포 분류 (FACS)에 의해, CD38-발현 300-19 세포에는 결합하지만 어버이 300-19 세포에는 결합하지 않는 마우스 모노클로날 항체의 분비에 대해서 하이브리도마로부터의 배양 상청액을 스크리닝하였다 (FITC 또는 PE-접합 항-마우스 IgG 항혈청을 사용함). 양성으로 검증된 하이브리도마 클론을 서브클로닝하고, 각각의 분비된 항-CD38 항체의 이소타입을 시판되는 이소타입-결정 시약 (로슈 1493027)을 사용하여 확인하였다. CD38 결합에 대해 양성인 총 29개의 항체를 표준 프로토콜을 사용하여 단백질 A 또는 G 크로마토그래피에 의해 정제한 다음 추가로 특성화하였다.
실시예 2
항- CD38 항체의 결합 특성화
항-CD38 항체 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 및 38SB39의 CD38-발현 300-19 세포에 대한 결합 및 어버이 300-19 세포에 대한 결합의 부재를 증명하는 FACS 막대그래프를 도 1에 나타냈다. 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 또는 38SB39 항체 (10 nM)를 2％ 정상 염소 혈청으로 보충한 100 ㎕ 빙냉 RPMI-1640 배지 내에서 CD38-발현 300-19 세포 또는 어버이 300-19 세포 (샘플 당 1-2×105개 세포)와 함께 3시간 동안 인큐베이션하였다. 그 후, 세포를 펠렛화하고, 세정하고, FITC-접합 염소 항-마우스 IgG 항체 (잭슨 래버러토리(Jackson Laboratory), 100 ㎕, 2％ 정상 염소 혈청으로 보충한 저온 RPMI-1640 배지 중 6 ㎍/㎖)와 함께 1시간 동안 얼음 상에서 인큐베이션하였다. 세포를 다시 펠렛화하고, 세정하고, 1％ 포름알데히드를 함유하는 200 ㎕ PBS에 재현탁시키고, 셀퀘스트(CellQuest) 소프트웨어 (BD 바이오사이언시즈(Biosciences))와 FACSCalibur 유동 세포측정기를 사용하여 분석하였다.
38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 또는 38SB39와 함께 인큐베이션한 CD38-발현 300-19 세포의 FACS 막대그래프는, 대응하는 음성 대조군 (오직 FITC-접합 염소 항-마우스 IgG-항체와 함께 인큐베이션한 세포)의 것과 비교해서 강한 형광 시프트를 나타내었다 (도 1). 또한, 어버이 300-19 세포를 이들 항체 중 임의의 것과 함께 인큐베이션한 경우에는 유의적인 형광 시프트가 검출되지 않았다. 양성 대조군 항-CD38 항체인 AT13/5 (세로텍(Serotec), MCA1019)를 사용한 경우에도 유사한 결과가 얻어졌다.
강한 형광 시프트는 또한 라모스 (ATCC CRL 1596) 림프종 세포를 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 또는 38SB39와 함께 인큐베이션한 경우에도 관찰되었다 (도 1). S자형 용량 반응 곡선에 대한 비-선형 회귀 방법 (GraphPad Prizm, version 4, software, San Diego, CA)을 사용하여, 도 2에 나타낸 FACS 분석 곡선으로부터 라모스 세포에의 결합에 대한 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 및 38SB39의 겉보기 해리 상수 (KD)의 값을 추정하였다. 값은 다음과 같았다: 각각 0.10 nM, 0.10 nM, 0.12 nM, 0.16 nM, 0.11 nM 및 3.03 nM.
실시예 3
38 SB13 , 38 SB18 , 38 SB19 , 38 SB30 , 38 SB31 및 38 SB39 항체에 의한 라모스 및 다우디 림프종 세포의 세포자멸사 유도
항-CD38 항체 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 및 38SB39는 라모스 및 다우디 (ATCC CCL-213) 림프종 세포주 및 MOLP-8 다발성 골수종 세포주 (DSMZ ACC 569)의 세포자멸사를 유도하였다. 세포자멸사의 정도는 아넥신 V의 FITC 접합체 (바이오소스(Biosource) PHN1018) 및 TO-PRO-3 (인비트로젠(Invitrogen) T3605)로 염색한 후 FACS 분석에 의해 측정하였다. 아넥신 V는 무손상 세포의 세포막 이중층의 외부에서 포스포티딜세린에 결합하지만 내부에서는 그렇지 않다. 건강한 정상 세포에서 포스포티딜세린은 세포막 이중층의 내부 상에서 발현되며, 원형질막의 내엽에서 외엽으로의 포스포티딜세린 전이는 검출가능한 최초의 세포자멸사 신호 중 하나이다. 따라서, 아넥신 V의 결합은 세포자멸사의 유도에 대한 신호이다. TO-PRO-3는 세포자멸사의 후기 단계에서 나타나는 바와 같이, 원형질막 완전성이 붕괴되었을 경우에만 막을 관통할 수 있는 단량체성 시아닌 핵산 염색약이다.
기하급수적으로 성장하는 세포를 10％ 우태 혈청 (FBS), 2 mM L-글루타민 및 50 ㎍/㎖ 젠타마이신으로 보충한 RMPI-1640 배지 (이하, 완전 RMPI-1640 배지로 지칭함) 내에서 24-웰 플레이트에 약 2×105개 세포/㎖로 플레이팅하였다. 달리 언급하지 않는 한, 세포는 일반적으로 완전 RMPI-1640 배지 내에서 성장한다. 세포를 5％ CO2를 함유하는 습한 대기 중에서 항-CD38 항체 (10 nM)와 함께 24시간 동안 37℃에서 인큐베이션하였다. 그 후, 세포를 펠렛화하고, 500 ㎕ PBS로 2회 세정하고, 5 ㎕의 아넥신 V-FITC를 함유하는 100 ㎕ 결합 완충제 (아넥신 V-FITC 키트 내에 제공됨)에 재현탁시키고, 15분 동안 얼음 상에서 인큐베이션하였다. 그 후, 400 ㎕의 결합 완충제 및 TO-PRO-3 (최종 농도가 1 μM에 이를 때까지)를 믹스에 첨가하고, FITC 및 TO-PRO-3의 세포-결합 형광을 FACS에 의해 즉시 측정하였다. 각 샘플에 대해 4천 건의 결과를 수집하였다. 셀퀘스트 소프트웨어를 사용하여 TO-PRO-3의 형광 (FL4-H; y-축) 및 아넥신 V-FITC의 형광 (FL1-H; x-축)에 대한 도트 플롯을 생성하였다.
결과를 도 3 및 4에 나타내었다. 도 3은 다양한 항-CD38 항체와 24시간 인큐베이션 후의 다우디 세포에 대한 이러한 도트 플롯의 예를 제공한다. 중복 샘플로부터의 아넥신 V-양성 세포 (TO-PRO-3 양성 및 음성 세포 둘 다를 포함함)의 평균 백분율을 이들 플롯으로부터 구하여 도 4에 나타내었다. 예상치 못하게도, 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 및 38SB39는 강력한 세포자멸사 활성을 나타내었다. 이들 항체 중 임의의 것에 노출된 다우디 세포의 30％ 초과가 아넥신 V-양성인 것에 비해, 미처리된 세포는 단지 약 6％만이 아넥신 V-양성이었다 (도 3 및 4a). 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 및 38SB39는 10 nM의 동일한 농도에서 시험된 종래 기술의 뮤린 CD38 항체 (AT13/5, OKT10, IB4 및 SUN-4B7, 미처리 대조군 값을 제한 후의 아넥신 V-양성이 10％ 미만) 및 실험실에서 생산한 다른 2개의 항-CD38 항체 (38SB7 및 38SB23, 미처리 대조군보다 높지 않음, 즉 약 6％ 아넥신 V-양성)보다 적어도 2.4배 더 강력한 세포자멸사 활성 (미처리 대조군 값을 제한 후 24％)을 나타내었다 (도 4a). AT13/5는 세로텍 (MCA1019)으로부터 구입하였고, OKT10은 하이브리도마 (ATCC CRL-8022)로부터 제조하여 정제하였다. IB4 및 SUN-4B7은 이탈리아 튜린 대학의 에프. 말라바시(F. Malavasi) 교수로부터 기증받은 것이었다. 유사하게, 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 및 38SB39 항-CD38 항체는 또 다른 림프종 세포주인 라모스 상에서 종래 기술의 뮤린 CD38 항체인 AT13/5, OKT10, IB4 및 SUN-4B7, 또는 다른 2개의 새로운 항-CD38 항체인 38SB7 및 38SB23 (미처리 대조군 값을 제한 후의 아넥신 V-양성이 2％ 미만)보다 적어도 3.5배 더 강력한 전(pro)-세포자멸사 활성 (미처리 대조군 값을 제한 후의 아넥신 V-양성이 7％ 초과)을 나타내었다 (도 4b). 끝으로, 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 및 38SB39 항-CD38 항체는 다발성 골수종 세포주 MOLP-8 상에서 강력한 전-세포자멸사 활성을 나타내었다 (도 4c). 이들 항체로 처리한 MOLP-8 세포의 대략 50％가 아넥신 V-양성인 것에 비해, 미처리된 세포는 약 39％가 아넥신 V-양성이었다. 반면에, 종래 기술의 뮤린 CD38 항체인 AT13/5, OKT10, IB4 및 SUN-4B7, 또는 다른 2개의 새로운 항-CD38 항체인 38SB7 및 38SB23 중 임의의 것으로의 처리는 세포자멸사된 세포의 비율 증가를 일으키지 않았다.
실시예 4
항- CD38 항체인 38 SB19 항체의 경쇄 및 중쇄의 클로닝 및 서열분석
38 SB19 항체를 생산하는 하이브리도마 세포로부터의 RNA 제조
퀴아젠(Qiagen)의 RNeasy 미니프렙 키트를 사용하여, 38SB19 항체를 생산하는 5×106개의 하이브리도마 세포로부터 전체 RNA의 제조물을 수득하였다. 간략하게는, 5×106개의 세포를 펠렛화하고, 350 ㎕ RLT 완충제 (1％ β-메르캅토에탄올 함유)에 재현탁시켰다. 21.5 게이지 바늘 및 주사기에 대략 10-20회 또는 더 이상 점성이 아닐 때까지 통과시킴으로써 현탁액을 균질화시켰다. 에탄올 (350 ㎕의 70％ 수성 에탄올)을 균질화물에 첨가하고, 이를 잘 혼합하였다. 용액을 스핀 컬럼으로 옮기고, 2-㎖ 수집관 내에 넣고, 8000× g 초과에서 15초 동안 스피닝하였다. 컬럼을 500 ㎕ RPE 완충제로 2회 세정한 후, 새로운 관으로 옮기고, RNase가 없는 30 ㎕의 물 및 1분 스핀으로 용출시켰다. 용출액 (30 ㎕)을 다시 컬럼에 넣고, 2차 1분 스핀으로 용출시켰다. 30 ㎕ 용출액의 분취량을 물로 희석하여, RNA 정량을 위해 260 nm에서 UV 흡광도를 측정하는 데 사용하였다.
역전사효소 ( RT ) 반응에 의한 cDNA 제조
인비트로젠의 SuperscriptII 키트를 사용하여, 전체 RNA로부터 가변 영역 38SB19 항체 cDNA를 생성시켰다. Qianeasy 미니프렙으로부터의 5 ㎍까지의 전체 RNA를 사용하여, 키트 프로토콜을 충실하게 따랐다. 간략하게는, RNA, 1 ㎕ 무작위 프라이머 및 1 ㎕ dNTP 믹스를 RNase가 없는 무균성 증류수로 12 ㎕가 되게 하고, 65℃에서 5분 동안 인큐베이션하였다. 그 후, 믹스를 얼음 상에 적어도 1분 동안 놓았다. 이어서, 4 ㎕의 5× 반응 완충제, 2 ㎕의 0.1 M DTT 및 1 ㎕의 RNaseOUT을 첨가하고, 믹스를 25℃에서 2분 동안 엠제이 리서치(MJ Research)의 써멀사이클러(thermalcycler)에서 인큐베이션하였다. 1 ㎕의 Superscriptll 효소가 첨가될 수 있도록 써멀사이클러를 중단시킨 후, 추가로 10분 동안 25℃에서 재가동시키고 나서, 50분 동안 55℃로 시프트시켰다. 70℃로 15분 동안 가열함으로써 반응을 열-불활성화시키고, 1 ㎕ RNase H를 첨가하고 37℃에서 20분 동안 인큐베이션함으로써 RNA를 제거하였다.
축퇴성 PCR 반응
하이브리도마 세포로부터 유래된 cDNA에 대한 축퇴성 PCR 반응의 1차 라운드를 위한 절차는 문헌 [Wang et al. (2000)] 및 [Co et al.(1992)]에 기술된 방법을 기초로 하였다. 이러한 라운드를 위한 프라이머 (표 2)는 pBluescriptII 플라스미드 내로의 클로닝을 용이하게 하기 위한 제한 부위를 함유한다.
PCR 반응 성분 (표 3)을 얇은 벽의 PCR 튜브 내 얼음 상에서 혼합한 후, 예비가열했다가 94℃에서 중단시킨 엠제이 리서치의 써멀사이클러로 옮겼다. 하기와 같이 문헌 [Wang et al., 2000]으로부터의 프로그램을 사용하여 반응을 수행하였다:
명칭: Wang45
94℃ 3:00분
94℃ 0:15초
45℃ 1:00분
72℃ 2:00분
두 번째로 돌아감 29회
72℃ 6:00분
4℃ 계속
종결.
그 후, PCR 반응 혼합물을 1％ 저융점 아가로스 겔 상에서 러닝시키고, 300 내지 400 bp 밴드를 절제하고, 자이모(Zymo) DNA 미니 컬럼을 사용하여 정제하고, 서열분석을 위해 에어전코트 바이오사이언시즈(Agencourt biosciences)로 보냈다. 각각의 5' 및 3' PCR 프라이머를 서열분석 프라이머로 사용하여, 양쪽 방향으로부터 38SB19 가변 영역 cDNA를 생성시켰다.
5' 말단 서열의 클로닝
38SB19 가변 영역 경쇄 및 중쇄 cDNA 서열을 클로닝하기 위해 사용된 축퇴성 프라이머가 5' 말단 서열을 변경시키기 때문에, 완전한 서열을 해독하기 위해 추가적인 서열분석 노력이 필요하였다. 상기 기술된 방법으로부터의 예비 cDNA 서열을 사용하여 38SB19 서열이 유래된 뮤린 생식계열 서열에 대해 NCBI IgBlast 사이트 (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/)를 검색하였다. 새로운 PCR 반응으로 PCR 프라이머에 의해 변경되지 않은 완전한 가변 영역 cDNA를 산출할 수 있도록 뮤린 항체의 리더 서열에 어닐링시키기 위해 PCR 프라이머를 디자인하였다 (표 3). PCR 반응, 밴드 정제 및 서열분석을 상기 기술된 바와 같이 수행하였다.
서열 확인을 위한 펩티드 분석
가변 영역에 대한 cDNA 서열 정보를 생식계열 불변 영역 서열과 조합하여 전장 항체 cDNA 서열을 얻었다. 그 후, 중쇄 및 경쇄의 분자량을 계산하여, 뮤린 38SB19 항체의 LC/MS 분석에 의해 얻어진 분자량과 비교하였다.
표 4는 38SB19 LC 및 HC에 대한 cDNA 서열로부터 계산된 질량을 LC/MS에 의해 측정된 값과 함께 제공한다. 분자량 측정치는 38SB19 경쇄 및 중쇄 모두에 대해 cDNA 서열과 일치하였다.
실시예 5
hu38SB19 항체의 재조합 발현
hu38SB19에 대한 가변 영역 서열을 코돈-최적화하고 블루 헤런 바이오테크놀러지(Blue Heron Biotechnology)에 의해 분석하였다. 단일 사슬 및 탠덤 이중 사슬 포유동물 발현 플라스미드 둘 다에서 각각의 불변 서열과 인-프레임으로 클로닝하기 위해 서열을 제한 효소 부위의 측면에 위치시켰다. 경쇄 가변 영역을 ps38SB19LCZv1.0 및 ps38SB19v1.00 플라스미드 둘 다의 EcoRI 및 BsiWI 부위로 클로닝하였다 (도 5a 및 5c). 중쇄 가변 영역을 ps38SB19HCNv1.0 및 ps38SB19v1.00 플라스미드 둘 다의 HindIII 및 Apa1 부위로 클로닝하였다 (도 5b 및 5c). 이들 플라스미드를 사용하여 포유동물 세포 내에서 일시적이거나 안정적인 형질감염으로 hu38SB19를 발현시킬 수 있다. 유사한 발현 벡터 구조체를 사용하여 다른 키메라 및 인간화 항체를 생산하였다.
HEK-293T 세포에서 hu38SB19를 발현시키기 위한 일시적 형질감염을 BD 사이언시즈로부터의 CaPO4 시약을 사용하여 수행하였다. 발현 수율을 향상시키기 위해서, 공급된 프로토콜을 약간 변형시켰다. 간략하게는, 형질감염 24시간 전에 2×106개의 HEK-293T 세포를 폴리에틸렌이민 (PEI)으로 코팅된 10 ㎝ 조직 배양 플레이트 상에 놓았다. 세포를 PBS로 세정하고, 배지를 1％ 울트라 로우(Ultra Low) IgG FBS (하이클론(Hyclone))를 함유하는 10 ㎖ DMEM (인비트로젠)으로 교체함으로써 형질감염을 시작하였다. 용액 A (10 ㎍ DNA, 86.8 ㎕ Ca2 + 용액, 및 500 ㎕까지의 H2O)를 용액 B에 와동시키면서 적가하였다. 혼합물을 실온에서 1분 동안 인큐베이션하고, 1 ㎖의 혼합물을 각 10 ㎝ 플레이트에 적가하였다. 대략 16시간의 형질감염 후, 배지를 1％ 울트라 로우 IgG FBS를 함유하는 10 ㎖의 신선한 DMEM으로 교체하였다. 대략 24시간 후, 2 mM 나트륨 부티레이트를 각 10 ㎝ 플레이트에 첨가하였다. 4일 후 형질감염물을 수확하였다.
1/10 부피의 1 M 트리스/HCl 완충제 (pH 8.0)를 첨가함으로써 단백질 A 친화성 크로마토그래피를 위한 상청액을 제조하였다. pH-조정된 상청액을 0.22 ㎛ 필터 멤브레인을 통해 여과하고, 결합 완충제 (PBS, pH 7.3)로 평형을 맞춘 단백질 A 세파로스(Sepharose) 컬럼 (하이트랩(HiTrap) 단백질 A HP, 1 ㎖, 아머샴 바이오사이언시즈(Amersham Biosciences))에 로딩하였다. 샘플을 로딩하는 동안 DNA와 같은 세포성 물질로부터의 오염을 감소시키기 위해 Q-세파로스 프리컬럼 (10 ㎖)을 단백질 A 컬럼의 상류에 연결시켰다. 샘플 로딩 후 프리컬럼을 제거하고, 세정 및 용출을 위해 단백질 A 컬럼 배치를 역전시켰다. 280 nm에서의 흡광도 없음으로 안정한 기준선이 얻어질 때까지 결합 완충제로 컬럼을 세정하였다. 0.5 ㎖/분의 유속을 사용하여 0.15 M NaCl (pH 2.8)을 함유하는 0.1 M 아세트산 완충제로 항체를 용출시켰다. 대략 0.25 ㎖의 분획을 수집하고, 1/10 부피의 1 M 트리스/HCl (pH 8.0)을 첨가함으로써 중화시켰다. 피크 분획(들)을 밤새 PBS에 대하여 2회 투석하고, 정제된 항체를 OD28O에서의 흡광도에 의해 정량하였다. 인간화 및 키메라 항체는 또한 단백질 G 컬럼을 약간 상이한 절차로 사용하여 정제할 수도 있다.
기술된 모든 키메라 및 인간화 항-CD38 항체를 상기 기술된 것과 유사한 절차로 발현시키고 정제하였다.
실시예 6
키메라 항- CD38 항체의 항체 의존성 세포-매개 세포독성 ( ADCC ) 활성
일부 항-CD38 항체는 인간 IgG1 불변 영역을 갖는 키메라 또는 인간화 항체로서 ADCC 및/또는 CDC 활성을 갖는 것으로 이미 나타나 있기 때문에 (J. H. Ellis et al. 1995, J Immunol, 155: 925-937; F. K. Stevenson et al. 1991, Blood, 77: 1071-1079; WO 2005/103083), 뮤린 가변 영역 및 인간 IgG1/IgKappa 불변 영역으로 이루어진 키메라 버전의 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 및 38SB39를 제조하여 ADCC 및/또는 CDC 활성에 대해 시험하였다.
라모스 세포를 표적 세포로서 사용하고 인간 자연 살해 (NK) 세포를 효과기 세포로서 사용하여 ch38SB13, ch38SB18, ch38SB19, ch38SB30, ch38SB31 및 ch38SB39를 먼저 ADCC에 대해 시험하였다. 락테이트 데히드로게나제 (LDH) 방출 분석법을 사용하여 세포 용해를 측정하였다 (R. L. Shields et al., 2001, J Biol Chem, 276: 6591-6604).
NK 단리 키트 II (밀텐이 바이오텍(Miltenyi Biotech))에 대한 변형 프로토콜을 사용하여 NK 세포를 먼저 인간 혈액 (정상 기증자로부터의 것; 매사추세츠주 브라이튼 소재의 리서치 블러드 컴포넌츠, 인크.(Research Blood Components, Inc.)로부터 구입)으로부터 단리하였다. 혈액을 행크 평형 염액(Hank's Balanced Salt Solution (HBSS))으로 2-3배 희석하였다. 25 ㎖의 희석된 혈액을 50 ㎖ 코니칼 튜브 내에서 25 ㎖의 피콜 파크(Ficoll Paque) 위에 조심스럽게 적층하고, 400 g로 45분 동안 19℃에서 원심분리하였다. 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)를 경계면으로부터 수집하여 새로운 코니칼 50 ㎖ 튜브로 옮기고, HBSS로 1회 세정하였다. PBMC를 2 ㎖의 NK-단리 완충제에 재현탁시킨 후, 500 ㎕의 비오틴-항체 칵테일 (NK-단리 키트로부터의 것, 130-091-152, 밀텐이 바이오텍)을 세포 현탁액에 첨가하였다. 비오틴-항체 칵테일은 NK 세포를 제외한 림프구에 결합하는 비오틴화된 항체를 함유한다. 혼합물을 4℃에서 10분 동안 인큐베이션한 후, 1.5 ㎖의 NK-단리 완충제 (PBS, 0.1％ BSA, 1 mM EDTA) 및 1 ㎖의 항-비오틴 마이크로 비드를 첨가하였다. 세포-항체 혼합물을 추가 15분 동안 4℃에서 인큐베이션하였다. 이어서, 세포를 50 ㎖의 NK-단리 완충제로 1회 세정하고, 3 ㎖의 NK-단리 완충제에 재현탁시켰다. 그 후, MACS LS 컬럼 (MACS 분리기 상의 것, 밀텐이 바이오텍)을 3 ㎖의 NK-단리 완충제로 예비-세정하였다. 그 후, 세포 현탁액을 LS 컬럼에 공급하였다. 용출액 (미표지된 세포를 갖는 분획)을 새로운 50-㎖ 코니칼 튜브 내로 수집하였다. 컬럼을 3 ㎖의 NK-단리 완충제로 3회 세정하였다. 전체 용출액을 동일한 튜브 내로 수집하고, 50 ㎖의 NK-단리 완충제로 1회 세정하였다. NK 세포를 5％ 우태 혈청, 50 ㎍/㎖ 젠타마이신으로 보충한 30 ㎖의 RPMI-1640 내에 넣었다.
0.1％ BSA, 20 mM HEPES (pH 7.4) 및 50 ㎍/㎖ 젠타마이신으로 보충한 RPMI-1640 배지 (이하, RHBP 배지로 지칭함) 중의 다양한 농도의 ch38SB13, ch38SB18, ch38SB19, ch38SB30, ch38SB31 및 ch38SB39 항체를 둥근 바닥 96-웰 플레이트 내로 분취하였다 (50 ㎍/웰). 표적 라모스 세포를 RHBP 배지에 106개 세포/㎖로 재현탁시키고, 항체 희석물을 함유하는 각 웰에 첨가하였다 (100 ㎕/웰). 표적 세포 및 항체 희석물을 함유하는 플레이트를 30분 동안 37℃에서 인큐베이션하였다. 그 후, NK 세포 (50 ㎕/웰)를 표적 세포를 함유하는 웰에 전형적으로는 1개 표적 세포 대 3-6개 NK 세포의 비율로 첨가하였다. RHBP 배지 (50 ㎕/웰)를 NK 세포를 함유하는 대조군 웰에 첨가하였다. 또한, 20 ㎕의 트리톤(Triton) X-100 용액 (RPMI-1640 배지, 10％ 트리톤 X-100)을 항체 없이 오직 표적 세포만을 함유하는 3개의 웰에 첨가하여, 최대로 가능한 LDH 방출을 측정하였다. 혼합물을 37℃에서 4시간 동안 인큐베이션한 후, 10분 동안 1200 rpm으로 원심분리하고, 100 ㎕의 상청액을 새로운 편평 바닥 96-웰 플레이트로 조심스럽게 옮겼다. 세포독성 검출 키트 (로슈 1 644 793)로부터의 LDH 반응 혼합물 (100 ㎕/웰)을 각 웰에 첨가하고, 실온에서 5-30분 동안 인큐베이션하였다. 샘플의 광학 밀도를 490 nm에서 측정하였다 (OD490). 100％ 용해를 트리톤 X-100 처리 샘플의 OD490 값으로 하고 0％ 용해를 표적 세포만을 함유하는 미처리 대조군 샘플의 OD490 값으로 하여 각 샘플의 용해율 ％를 구하였다. NK 세포만을 함유하는 샘플은 무시해도 좋은 OD490 판독값을 나타내었다.
라모스 표적 세포 및 NK 효과기 세포로 시험한 경우, 키메라 항-CD38 항체는 매우 강력한 ADCC 활성을 나타내었다 (도 6). S자형 용량 반응 곡선을 사용한 비-선형 회귀 방법에 의해 EC50 값을 추정하여 하기와 같이 밝혀내었다: ch38SB13에 대해 0.0013 ㎍/㎖, ch38SB18에 대해 0.0013 ㎍/㎖, ch38SB19에 대해 0.0018 ㎍/㎖, ch38SB30에 대해 0.0022 ㎍/㎖, ch38SB31에 대해 0.0012 ㎍/㎖, ch38SB39에 대해 0.1132 ㎍/㎖. 키메라 항-CD38 항체는 또한 LP-1 (DSMZ ACC 41) 다발성 골수종 세포에 대한 강력한 ADCC 활성도 나타내었다 (EC50 값: ch38SB18에 대해 0.00056 ㎍/㎖; ch38SB19에 대해 0.00034 ㎍/㎖; ch38SB31에 대해 0.00024 ㎍/㎖) (도 7a). ch38SB19는 또한 다우디 림프종 세포 (도 7b), NALM-6 B-ALL 세포 (DSMZ ACC 128) (도 8a) 및 MOLT-4 T-ALL 세포 (ATTC CRL-1582) (도 8b)를 ADCC에 의해 효율적으로 사멸시킴으로써, 현저하게 강력한 세포자멸사 활성을 갖는 항-CD38 항체가 다양한 조혈성 악성종양으로부터 유래된 다양한 종양 세포에 대한 강력한 ADCC 활성도 가짐을 시사하였다. 또한, 동일한 실험에서 비-결합 IgG1 대조군 항체 (리툭시맙, 바이오젠아이덱(BiogenIdec)) (도 7a, 8a 및 8b) 또는 mu38SB19 (도 7b)는 유의적인 ADCC 활성을 갖지 않았다.
실시예 7
키메라 항- CD38 항체의 CDC 활성
ch38SB13, ch38SB18, ch38SB19, ch38SB30, ch38SB31 및 ch38SB39의 CDC 활성을 문헌 [H. Gazzano-Santoro et al. 1997, J. Immunol Methods, 202: 163-171]으로부터 변형시킨 방법에 기초하여 측정하였다. 인간 보체는 제조업자에 의해 지시된 바와 같이 무균성 정제수로 재구성시킨 후 실험 직전에 RHBP 배지로 5배 희석시키는 동결건조된 인간 보체 혈청 (시그마-알드리치(Sigma-Aldrich) S1764)이었다. RHBP 배지에 106개 세포/㎖로 현탁시킨 표적 세포를 편평 바닥 96-웰 조직 배양 플레이트의 웰에 분취하였다 (50 ㎕/웰). 그 후, RHBP 배지 중 50 ㎕의 다양한 농도 (10 nM 내지 0.001 nM)의 항-CD38 항체를 첨가한 후 (샘플 당 1종의 항체), 50 ㎕/웰의 보체 용액을 첨가하였다. 그 후, 플레이트를 5％ CO2를 함유하는 습한 대기 중에서 2시간 동안 37℃에서 인큐베이션한 후, RHBP (최종 10％)에 희석시킨 50 ㎕의 40％ 알라마 블루(Alamar Blue) 시약 (바이오소스 DAL1100)을 각 웰에 첨가하여 세포의 생육력을 측정하였다. 알라마 블루는 생육가능한 세포의 감소하는 능력을 모니터링하였다. 플레이트를 5-18시간 동안 37℃에서 인큐베이션한 후, 540/590 nm에서 형광 (상대적 형광도, RFU)을 측정하였다. 먼저 각 샘플에 대한 RFU 값으로부터 배경 RFU 값 (임의의 세포 없이 배지만 함유하는 웰)을 제함으로써 배경 형광에 대한 실험적 값을 보정한 후, 보정된 RFU 값을 미처리 세포 샘플의 보정된 RFU 값으로 나눔으로써 각 샘플에 대한 세포 생육력 ％를 구하였다.
키메라 항-CD38 항체 샘플의 CDC 활성을, 5％의 최종 희석률로 인간 보체를 사용하여 Raji-IMG 세포로 시험한 경우, 키메라 항-CD38 항체는 매우 강력한 CDC 활성을 나타내었다 (도 9). Raji-IMG는 Raji 세포 (ATCC CCL-86)로부터 유래된 세포이며, 보다 낮은 수준의 막 보체 억제제 CD55 및 CD59를 발현한다. 도 8에 나타낸 S자형 용량 반응 곡선으로부터의 비-선형 회귀에 의해 EC50 값을 추정하였고, 이는 하기와 같았다: ch38SB13에 대해 0.005 ㎍/㎖, ch38SB18에 대해 0.0101 ㎍/㎖, ch38SB19에 대해 0.028 ㎍/㎖, ch38SB30에 대해 0.020 ㎍/㎖, ch38SB31에 대해 0.010 ㎍/㎖, 그리고 ch38SB39에 대해 0.400 ㎍/㎖. 키메라 항-CD38 항체는 또한 LP-1 다발성 골수종 세포에 대해 강력한 CDC 활성을 나타내는 반면 (EC50 값: ch38SB18에 대해 0.032 ㎍/㎖; ch38SB19에 대해 0.030 ㎍/㎖; ch38SB31에 대해 0.043 ㎍/㎖), 비-결합 키메라 대조군 IgG1 (리툭시맙, 바이오젠아이덱)은 어떠한 CDC 활성도 갖지 않았다 (도 10). 키메라 CD38 항체를 다우디 림프종 세포 상에서 시험한 경우, 상이한 항-CD38 항체들은 그들의 CDC 활성이 상이했다 (도 11). 다우디 세포의 생육률은 보체의 존재 하에 1.25 ㎍/㎖의 ch38SB19와의 인큐베이션 후에는 15％ 미만인 반면, 보체의 존재 하에 ch38SB18 또는 ch38SB39 (1.25 ㎍/㎖ 이상의 농도)와의 인큐베이션 후에는 이들 세포의 생육률에 단지 최소한의 감소만이 존재하였다 (생육률은 각각 85％ 및 91％). 또한, 다우디 세포를 보체의 존재 하에 1.25 ㎍/㎖ 이상 농도의 ch38SB13, ch38SB30 및 ch38SB31과 인큐베이션한 경우, 단지 약간의 생육률 감소만이 관찰되었다 (생육률은 각각 65％, 45％ 및 53％).
실시예 8
인간화 항- CD38 항체의 결합 친화력, 및 세포자멸사 , ADCC 및 CDC 활성
2가지 버전의 인간화 38SB19 (hu38SB19 v1.00 및 v1.20) 및 키메라 38SB19는 라모스 세포로 시험한 경우에 각각 0.23 nM, 0.25 nM 및 0.18 nM의 KD 값으로 유사한 결합 친화력을 나타내었다 (도 12a). 키메라 및 인간화 38SB19 항체의 결합 친화력을 또한 경쟁 결합 분석법에서 비교하였는데, 여기서는 비오틴화 뮤린 38SB19 항체의 결합과 경쟁하는 그들의 친화력을 측정하였다. 비오틴-표지된 뮤린 38SB19 항체 (3×10-10 M)를 다양한 농도의 ch38SB19, hu38SB19 v1.00 또는 hu38SB19 v1.20과 혼합하였다. 항체 혼합물을 라모스 세포와 함께 인큐베이션하고, 세포에 결합된 비오틴화 뮤린 38SB19의 양을 FACS 분석에 의해 FITC-접합 스트렙타비딘으로 측정하였다. hu38SB19 v1.00, hu38SB19 v1.20 및 ch38SB19는 비오틴화 뮤린 38SB19의 결합과 충분히 동등하게 경쟁하였고 (도 12b), 이는 다시 결합 친화력이 인간화에 의해 영향을 받지 않았음을 가리킨다. ch38SB19, hu38SB19 v1.00 및 hu38SB19 v1.20 (10-8 내지 10-11 M)을 다우디 세포의 세포자멸사를 유도하는 그들의 능력에 대해 비교한 경우, 그들은 유사한 세포자멸사 활성을 나타내었다 (도 13). 게다가, hu38SB19 v1.00 및 v1.20은 또한 LP-1 세포에서 ch38SB19와 유사한 ADCC (도 14) 및 Raji-IMG 및 LP-1 세포에서 ch38SB19와 유사한 CDC 효능 (도 15)을 나타내었다. hu38SB19 v1.00은 또한 T-세포 급성 림프모구성 백혈병 세포주 DND-41 (DSMZ 525)에서 ch38SB19와 유사한 CDC 활성을 나타내었다 (도 15). hu38SB19 v1.00을 다양한 세트의 세포주에서 세포자멸사를 유도하는 그의 능력에 대해 추가로 시험하였다 (도 16). hu38SB19 v1.00 (10-8 M)으로의 처리는 B 세포 림프종 세포주 SU-DHL-8 (DSMZ ACC 573)에서 (미처리 대조군에서의 7％로부터 hu38SB19-처리 세포에서의 97％로) 및 NU-DUL-1 (DSMZ ACC 579)에서 (미처리 대조군에서의 10％로부터 hu38SB19-처리 세포에서의 37％로) 및 T-ALL 세포주 DND-41에서 (미처리 대조군에서의 7％로부터 hu38SB19-처리 세포에서의 69％로) 아넥신 V-양성 세포의 극적인 증가를 일으켰다. 또한, hu38SB19 v1.00 (10-8 M)으로의 처리는 B-세포 림프구성 백혈병 세포주 JVM-13 (DSMZ ACC 19)에서 (미처리 대조군에서의 8％로부터 hu38SB19-처리 세포에서의 17％로) 및 모발상 세포 백혈병 세포주 HC-1 (DSMZ ACC 301)에서 (미처리 대조군에서의 6％로부터 hu38SB19-처리 세포에서의 10％로) 아넥신 V-양성 세포의 비율을 증가시켰다.
유사하게, 2가지 버전의 인간화 38SB31 (hu38SB31 v1.1 및 v1.2) 및 키메라 38SB31은 라모스 세포로 시험한 경우에 각각 0.13 nM, 0.11 nM 및 0.12 nM의 KD 값으로 유사한 결합 친화력을 나타내었다. 키메라 및 인간화 38SB31 항체의 결합 친화력을 또한 상기 기술한 바와 같이 경쟁 결합 분석법에서 비교하였고, 충분히 동등하게 수행되었다. hu38SB31 v1.1을 몇몇 세포주에서 세포자멸사를 유도하는 그의 능력에 대해 추가로 시험하였다. 인간화 항체는 라모스, 다우디, Molp-8 및 SU-DHL-8 세포에 대해서 ch38SB31과 유사한 세포자멸사 활성을 나타내었다. 게다가, hu38SB31 v1.1은 또한 이들 세포주에서 ch38SB31와 유사한 ADCC 및 CDC 활성을 나타내었다.
실시예 9
38 SB13 , 38 SB18 , 38 SB19 , 38 SB30 , 38 SB31 및 38 SB39 의 생체내 효능
38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 및 38SB39의 생체내 항-종양 활성을 라모스 림프종 세포에 의해 수립된 면역결핍 마우스 (암컷 CB.17 SCID)에서의 생존 인간 이종이식 종양 모델에서 조사하였다. 암컷 CB.17 SCID 마우스에 외측 미정맥을 통해서 0.1 ㎖ 무혈청 배지 중 2×106개 라모스 세포를 접종하였다. 종양 세포 접종 7일 후, 마우스를 체중에 기초하여 7군으로 무작위로 나누었다. 6마리의 마우스로 이루어진 38SB31-처리군 및 8마리의 마우스로 이루어진 38SB39-처리 군을 제외하고, 군 당 10마리의 마우스가 존재하였다. 세포 접종 7일 후에 시작하여 3주 연속으로, 주마다 2회씩 40 ㎎/㎏ 용량의 항체를 마우스에 정맥내 투여하였다. 한쪽 또는 양쪽 뒷다리가 마비되거나, 체중 감소가 처리 전 값으로부터 20％를 초과하거나, 동물이 음식 및 물에 도달하지 못할 정도로 병든 경우에는 마우스를 희생시켰다. 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 또는 38SB39로의 처리는 마우스의 생존율을 PBS-처리 마우스에 비해 유의적으로 연장시켰다 (도 17). PBS-처리 마우스의 평균 생존일은 22일이었고, 항체-처리군은 28 내지 33일의 범위였다.
mu38SB19 및 hu38SB19의 생체내 항-종양 활성을 면역결핍 마우스에서의 추가 인간 이종이식 종양 모델에서 추가로 조사하였다. 다우디 림프종 생존 모델에 대해서는, SCID 마우스에 외측 미정맥을 통해서 0.1 ㎖ 무혈청 배지 중 5×106개 다우디 세포를 접종하였다. 상기 기술한 바와 같이 연구를 수행하였다. mu38SB19 또는 hu38SB19로의 처리는 마우스의 생존율을 PBS-처리 마우스에 비해 유의적으로 연장시켰다 (도 18). PBS-처리 마우스의 평균 생존일은 22일인 반면, 항체-처리 마우스의 평균 생존일은 47일이었다.
NCI-H929 다발성 골수종 종양 모델에 대해서는, SCID 마우스에 107개 세포를 피하 접종하였다. 종양이 6일째에 감지할 수 있게 되었을 때, 동물을 체중에 따라 10개의 군으로 무작위로 나누고 항체 처리를 시작하였다. hu38SB19 항체 또는 비-결합 키메라 IgG1 대조군 항체 (리툭시맙, 바이오젠아이덱)를 3주 연속으로, 주마다 2회씩 40 ㎎/㎏ 용량으로 마우스에 정맥내 투여하였다. 종양 부피를 모니터링하고, 종양이 2000 ㎣ 크기에 도달하거나 괴사된 경우 동물을 희생시켰다. PBS-처리군은 89일째에 1000 ㎣의 평균 종양 부피에 도달하였고, 키메라 IgG1 대조군 항체군은 84일째에 도달하였다 (도 19). hu38SB19로의 처리는 10마리 동물 모두에서 종양 성장을 완전하게 방지하였다. 반면에, PBS-처리군에서는 2마리, 키메라 IgG1 대조군 항체에서는 3마리의 동물에서만 종양 퇴화가 나타났다.
MOLP-8 다발성 골수종 종양 모델에 대해서는, SCID 마우스에 107개 세포를 피하 접종하였다. 종양이 4일째에 감지할 수 있게 되었을 때, 동물을 체중에 따라 10개의 군으로 무작위로 나누고 항체 처리를 시작하였다. hu38SB19 및 mu38SB19 항체 또는 키메라 IgG1 대조군 항체를 3주 연속으로, 주마다 2회씩 40 ㎎/㎏ 용량으로 마우스에 정맥내 투여하였다. 종양 부피를 모니터링하고, 종양이 2000 ㎣ 크기에 도달하거나 괴사된 경우 동물을 희생시켰다. PBS-처리군은 22일째에 500 ㎣의 평균 종양 부피에 도달하였고, 키메라 IgG1 대조군 항체군은 23일째에 도달하였다 (도 20). 이들 군에서 퇴화된 종양은 없었다. 반면에, hu38SB19 또는 mu38SB19로의 처리는 각각 10마리 중 8마리 또는 10마리 중 6마리에서 종양 퇴화를 유발하였다.
[표 1A]
Figure pat00029
[표 1B]
Figure pat00030
[표 2]
Figure pat00031
[표 3]
Figure pat00032
[표 4]
Figure pat00033
[표 5]
Figure pat00034
아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션 PTA-7666 20060621 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션 PTA-7667 20060621 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션 PTA-7668 20060621 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션 PTA-7669 20060621 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션 PTA-7670 20060621 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션 PTA-7671 20060621
SEQUENCE LISTING <110> SANOFI-AVENTIS <120> NOVEL ANTI-CD38 ANTIBODIES FOR THE TREATMENT OF CANCER <130> FR2006-043 <160> 80 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 1 Ser Tyr Gly Met Asn 1 5 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 2 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 3 <211> 5 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 3 Arg Gly Phe Ala Tyr 1 5 <210> 4 <211> 15 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 4 Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Ile Tyr Gly Asn Gly Phe Met Asn 1 5 10 15 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 5 Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 6 Gln Gln Ile Asn Glu Asp Pro Phe Thr 1 5 <210> 7 <211> 5 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 7 Asn Ser Gly Met Asn 1 5 <210> 8 <211> 17 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 8 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 9 <211> 5 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 9 Arg Gly Phe Val Tyr 1 5 <210> 10 <211> 15 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 10 Arg Ala Ser Glu Ser Val Ala Ile Tyr Gly Asn Ser Phe Leu Lys 1 5 10 15 <210> 11 <211> 7 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 11 Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser 1 5 <210> 12 <211> 9 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 12 Gln Gln Ile Asn Glu Asp Pro Tyr Thr 1 5 <210> 13 <211> 5 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 13 Asp Tyr Trp Met Gln 1 5 <210> 14 <211> 17 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 14 Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 15 <211> 11 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 15 Gly Asp Tyr Tyr Gly Ser Asn Ser Leu Asp Tyr 1 5 10 <210> 16 <211> 11 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 16 Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Val Val Ala 1 5 10 <210> 17 <211> 7 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 17 Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ile 1 5 <210> 18 <211> 9 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 18 Gln Gln His Tyr Ser Pro Pro Tyr Thr 1 5 <210> 19 <211> 5 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 19 Gly Ser Trp Met Asn 1 5 <210> 20 <211> 17 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 20 Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Ile Ile Tyr Asn Gly Asn Phe Arg 1 5 10 15 Asp <210> 21 <211> 10 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 21 Trp Gly Thr Phe Thr Pro Ser Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 22 <211> 11 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 22 Lys Ala Ser Gln Asp Val Val Thr Ala Val Ala 1 5 10 <210> 23 <211> 7 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 23 Ser Ala Ser His Arg Tyr Thr 1 5 <210> 24 <211> 9 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 24 Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Thr Thr 1 5 <210> 25 <211> 5 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 25 Ser Tyr Thr Leu Ser 1 5 <210> 26 <211> 17 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 26 Thr Ile Ser Ile Gly Gly Arg Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Glu 1 5 10 15 Gly <210> 27 <211> 8 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 27 Asp Phe Asn Gly Tyr Ser Asp Phe 1 5 <210> 28 <211> 11 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 28 Lys Ala Ser Gln Val Val Gly Ser Ala Val Ala 1 5 10 <210> 29 <211> 7 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 29 Trp Ala Ser Thr Arg His Thr 1 5 <210> 30 <211> 9 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 30 Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Tyr Thr 1 5 <210> 31 <211> 5 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 31 Asn Phe Gly Met His 1 5 <210> 32 <211> 17 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 32 Tyr Ile Arg Ser Gly Ser Gly Thr Ile Tyr Tyr Ser Asp Thr Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 33 <211> 11 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 33 Ser Tyr Tyr Asp Phe Gly Ala Trp Phe Ala Tyr 1 5 10 <210> 34 <211> 11 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 34 Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala 1 5 10 <210> 35 <211> 7 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 35 Ser Ala Ser Ser Arg Tyr Ser 1 5 <210> 36 <211> 9 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 36 Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu Thr 1 5 <210> 37 <211> 336 <212> DNA <213> Mus sp. <220> <221> CDS <222> (1)..(336) <400> 37 aac att gtg ctg acc caa tct cca gct tct ttg gct gtg tct ctt ggg 48 Asn Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 cag agg gcc acc ata tcc tgc aga gcc agt gaa agt gtt gag att tat 96 Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Ile Tyr 20 25 30 ggc aat ggt ttt atg aac tgg ttc cag cag aaa cca gga cag cca ccc 144 Gly Asn Gly Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 aaa ctc ctc atc tat cgt gca tcc aac cta gaa tct ggg atc cct gcc 192 Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala 50 55 60 agg ttc agt ggc agt ggg tct agg aca gag ttc acc ctc acc att gat 240 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Asp 65 70 75 80 cct gtg gag gct gat gat gtt gca acc tat tac tgt caa caa att aat 288 Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ile Asn 85 90 95 gag gat cca ttc acg ttc ggc tcg ggg aca aag ttg gaa ata aaa cgg 336 Glu Asp Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 110 <210> 38 <211> 112 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 38 Asn Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Ile Tyr 20 25 30 Gly Asn Gly Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Asp 65 70 75 80 Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ile Asn 85 90 95 Glu Asp Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 110 <210> 39 <211> 336 <212> DNA <213> Mus sp. <220> <221> CDS <222> (1)..(336) <400> 39 gac att gta ctg acc caa tct cca gct tct ttg gct gtg tct cta ggg 48 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 cag agg gcc acc ata tcc tgc aga gcc agt gag agt gtt gct att tat 96 Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Ala Ile Tyr 20 25 30 ggc aat agt ttt ctg aaa tgg ttc cag cag aaa ccg gga cag cca ccc 144 Gly Asn Ser Phe Leu Lys Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 aaa ctc ctc atc tat cgt gca tcc aac cta gaa tct ggg atc cct gcc 192 Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala 50 55 60 agg ttc agt ggc agt ggg tct ggg aca gac ttc acc ctc acc att aat 240 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn 65 70 75 80 cct gtg gag gct gat gat gtt gca acc tat tac tgt cag caa att aat 288 Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ile Asn 85 90 95 gag gat ccg tac acg ttc gga ggg ggg acc aag ctg gaa ata aaa cgg 336 Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 110 <210> 40 <211> 112 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 40 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Ala Ile Tyr 20 25 30 Gly Asn Ser Phe Leu Lys Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn 65 70 75 80 Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ile Asn 85 90 95 Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 110 <210> 41 <211> 324 <212> DNA <213> Mus sp. <220> <221> CDS <222> (1)..(324) <400> 41 gac att gtg atg gcc cag tct cac aaa ttc atg tcc aca tca gtt gga 48 Asp Ile Val Met Ala Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 gac agg gtc agc atc acc tgc aag gcc agt cag gat gtg agt act gtt 96 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Val 20 25 30 gtg gcc tgg tat caa cag aaa cca gga caa tct cct aaa cga ctg att 144 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Arg Leu Ile 35 40 45 tac tcg gca tcc tat cgg tat att gga gtc cct gat cgc ttc act ggc 192 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ile Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 agt gga tct ggg acg gat ttc act ttc acc atc agc agt gtg cag gct 240 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 gaa gac ctg gca gtt tat tac tgt cag caa cat tat agt cct ccg tac 288 Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Pro Pro Tyr 85 90 95 acg ttc gga ggg ggg acc aag ctg gaa ata aaa cgg 324 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 42 <211> 108 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 42 Asp Ile Val Met Ala Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Val 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Arg Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ile Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Pro Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 43 <211> 324 <212> DNA <213> Mus sp. <220> <221> CDS <222> (1)..(324) <400> 43 gac att gtg atg acc cag tct cac aaa ttc ttg tcc aca tca gtt gga 48 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Leu Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 gac agg gtc agt atc acc tgc aag gcc agt cag gat gtg gtt act gct 96 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Val Thr Ala 20 25 30 gtt gcc tgg ttt caa cag aaa cca gga caa tct cca aaa cta ctg att 144 Val Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 tat tcg gca tcc cac cgg tac act gga gtc cct gat cgc ttc act ggc 192 Tyr Ser Ala Ser His Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 agt gga tct ggg aca gat ttc act ttc acc atc atc agt gtg cag gct 240 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ile Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 gaa gac ctg gca gtt tat tac tgt caa caa cat tat act act ccc acg 288 Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Thr 85 90 95 acg ttc ggt gga ggc acc aag ctg gac ttc aga cgg 324 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Asp Phe Arg Arg 100 105 <210> 44 <211> 108 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 44 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Leu Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Val Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser His Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ile Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Thr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Asp Phe Arg Arg 100 105 <210> 45 <211> 324 <212> DNA <213> Mus sp. <220> <221> CDS <222> (1)..(324) <400> 45 gac act gtg atg acc cag tct cac aaa ttc ata tcc aca tca gtt gga 48 Asp Thr Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Ile Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 gac agg gtc agc atc acc tgc aag gcc agt cag gtt gtg ggt agt gct 96 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Val Val Gly Ser Ala 20 25 30 gta gcc tgg tat caa cag aaa cca ggg caa tct cct aaa cta ctg att 144 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 tac tgg gca tcc acc cgg cac act gga gtc cct gat cgc ttc aca ggc 192 Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 agt gga tct ggg aca gat ttc act ctc acc att agc aat gtg cag tct 240 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser 65 70 75 80 gaa gac ttg gca gat tat ttc tgt cag caa tat aac agc tat ccg tac 288 Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Tyr 85 90 95 acg ttc gga ggg ggg acc aag ctg gaa ata aaa cgg 324 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 46 <211> 108 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 46 Asp Thr Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Ile Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Val Val Gly Ser Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 47 <211> 324 <212> DNA <213> Mus sp. <220> <221> CDS <222> (1)..(324) <400> 47 gac att gtg atg acc cag tct caa aaa ttc atg tcc aca tca gta gga 48 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 gac agg gtc agc gtc acc tgc aag gcc agt cag aat gtg ggt act aat 96 Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn 20 25 30 gtt gcc tgg tat caa cac aaa cca gga caa tcc cct aaa ata atg att 144 Val Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ile Met Ile 35 40 45 tat tcg gcg tcc tcc cgg tac agt gga gtc cct gat cgc ttc aca ggc 192 Tyr Ser Ala Ser Ser Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 agt gga tct ggg aca ctt ttc act ctc acc atc aac aat gtg cag tct 240 Ser Gly Ser Gly Thr Leu Phe Thr Leu Thr Ile Asn Asn Val Gln Ser 65 70 75 80 gaa gac ttg gca gag tat ttc tgt cag caa tat aac agc tat cct ctc 288 Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 acg ttc ggc tcg ggg aca aag ttg gaa ata aaa cgg 324 Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 48 <211> 108 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 48 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ile Met Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Ser Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Leu Phe Thr Leu Thr Ile Asn Asn Val Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 49 <211> 342 <212> DNA <213> Mus sp. <220> <221> CDS <222> (1)..(342) <400> 49 cag atc cag ttg gtg cag tct gga cct gag ctg aag aag cct gga gag 48 Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 aca gtc aag atc tcc tgc aag gct tct ggg tat acc ctc aca agc tac 96 Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Ser Tyr 20 25 30 gga atg aac tgg gtg aag cag gct cca gga aag ggt tta aag tgg atg 144 Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met 35 40 45 ggc tgg ata aac acc tac act gga gaa cca aca tat gct gat gac ttt 192 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 aag gga cgt ttt gcc ttc tct ttg gaa acc tct gcc agc act gcc ttt 240 Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Phe 65 70 75 80 ttg cag atc aac aac ctc aaa aat gag gac acg gct aca tat ttc tgt 288 Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys 85 90 95 gta aga cgc ggg ttt gct tac tgg ggc caa ggg act ctg gtc act gtc 336 Val Arg Arg Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 100 105 110 tct gca 342 Ser Ala <210> 50 <211> 114 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 50 Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Ser Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Phe 65 70 75 80 Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys 85 90 95 Val Arg Arg Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 100 105 110 Ser Ala <210> 51 <211> 342 <212> DNA <213> Mus sp. <220> <221> CDS <222> (1)..(342) <400> 51 cag atc cag ttg gtg cag tct gga cct gag ctg aag aag cct gga gag 48 Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 aca gtc aag atc tcc tgc aag gct tct ggg tat acc ttc aca aac tct 96 Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Ser 20 25 30 gga atg aac tgg gtg aag cag gct cca gga aag ggt tta aag tgg atg 144 Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met 35 40 45 ggc tgg ata aac acc tac act gga gag ccg aca tat gct gat gac ttc 192 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 aag gga cgg ttt gcc ttc tct ttg gaa acc tct gcc agc tct gcc tat 240 Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Ser Ala Tyr 65 70 75 80 ttg cag atc agt aac ctc aaa aat gag gac acg gct aca tat ttc tgt 288 Leu Gln Ile Ser Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys 85 90 95 gca aga agg ggt ttt gtt tac tgg ggc caa ggg act ctg gta act gtc 336 Ala Arg Arg Gly Phe Val Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 100 105 110 tct gca 342 Ser Ala <210> 52 <211> 114 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 52 Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Ser 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Ser Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Ile Ser Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Gly Phe Val Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 100 105 110 Ser Ala <210> 53 <211> 360 <212> DNA <213> Mus sp. <220> <221> CDS <222> (1)..(360) <400> 53 cag gtt cag ctc cag cag tct ggg gct gag ctg gca aga cct ggg act 48 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Thr 1 5 10 15 tca gtg aag ttg tcc tgt aag gct tct ggc tac acc ttt act gac tac 96 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 tgg atg cag tgg gta aaa cag agg cct gga cag ggt ctg gag tgg att 144 Trp Met Gln Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 ggg act att tat cct gga gat ggt gat act ggg tac gct cag aag ttc 192 Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 aag ggc aag gcc aca ttg act gcg gat aaa tcc tcc aaa aca gtc tac 240 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Lys Thr Val Tyr 65 70 75 80 atg cac ctc agc agt ttg gct tct gag gac tct gcg gtc tat tac tgt 288 Met His Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 gca aga ggg gat tac tac ggt agt aat tct ttg gac tat tgg ggt caa 336 Ala Arg Gly Asp Tyr Tyr Gly Ser Asn Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 gga acc tca gtc acc gtc tcc tca 360 Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 54 <211> 120 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 54 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Thr 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Trp Met Gln Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Lys Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met His Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Asp Tyr Tyr Gly Ser Asn Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 55 <211> 357 <212> DNA <213> Mus sp. <220> <221> CDS <222> (1)..(357) <400> 55 cag gtc cag tta cag caa tct gga cct gaa ctg gtg agg cct ggg gcc 48 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 tca gtg aag att tcc tgc aaa act tct ggc tac gca ttc agt ggc tcc 96 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Gly Ser 20 25 30 tgg atg aac tgg gtg aag cag agg cct gga cag ggt cta gag tgg att 144 Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 gga cgg att tat ccg gga gat gga gat atc att tac aat ggg aat ttc 192 Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Ile Ile Tyr Asn Gly Asn Phe 50 55 60 agg gac aag gtc aca ctg tct gca gac aaa tcc tcc aac aca gcc tac 240 Arg Asp Lys Val Thr Leu Ser Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 atg cag ctc agc agc ctg acc tct gtg gac tct gcg gtc tat ttt tgt 288 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Val Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 tcg aga tgg ggg aca ttt acg ccg agt ttt gac tat tgg ggc caa ggc 336 Ser Arg Trp Gly Thr Phe Thr Pro Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 acc act ctc aca gtc tcc tca 357 Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 <210> 56 <211> 119 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 56 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Gly Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Ile Ile Tyr Asn Gly Asn Phe 50 55 60 Arg Asp Lys Val Thr Leu Ser Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Val Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ser Arg Trp Gly Thr Phe Thr Pro Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 <210> 57 <211> 351 <212> DNA <213> Mus sp. <220> <221> CDS <222> (1)..(351) <400> 57 gac gtg aag ctg gtg gag tct ggg gga ggc tta gtg aag cct gga ggg 48 Asp Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 tcc ctg aaa ctc tcc tgt gaa gcc tct gga ttc act ttc agt agc tat 96 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 acc ctg tct tgg gtt cgc cag act ccg gag acg agg ctg gag tgg gtc 144 Thr Leu Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Thr Arg Leu Glu Trp Val 35 40 45 gca acc att agt att ggt ggt cgc tac acc tat tat cca gac agt gtg 192 Ala Thr Ile Ser Ile Gly Gly Arg Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 gag ggc cga ttc acc atc tcc aga gac aat gcc aag aac acc ctg tac 240 Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 ctg caa atg aac agt ctg aag tct gag gac aca gcc atg tat tac tgt 288 Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 aca aga gat ttt aat ggt tac tct gac ttc tgg ggc caa ggc acc act 336 Thr Arg Asp Phe Asn Gly Tyr Ser Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 ctc aca gtc tcc tca 351 Leu Thr Val Ser Ser 115 <210> 58 <211> 117 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 58 Asp Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Thr Leu Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Thr Arg Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Ile Gly Gly Arg Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Asp Phe Asn Gly Tyr Ser Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Leu Thr Val Ser Ser 115 <210> 59 <211> 360 <212> DNA <213> Mus sp. <220> <221> CDS <222> (1)..(360) <400> 59 aat gta cag ctg gta gag tct ggg gga ggc tta gtg cag cct gga ggg 48 Asn Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 tcc cgg aaa ctc tcc tgt gca gcc tct gga ttc act ttc agt aac ttt 96 Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe 20 25 30 gga atg cac tgg gtt cgt cag gct cca gag aag ggt ctg gag tgg gtc 144 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 gca tac att cgt agt ggc agt ggt acc atc tac tat tca gac aca gtg 192 Ala Tyr Ile Arg Ser Gly Ser Gly Thr Ile Tyr Tyr Ser Asp Thr Val 50 55 60 aag ggc cga ttc acc atc tcc aga gac aat ccc aag aac acc ctg ttc 240 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Pro Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 ctg caa atg acc agt cta agg tct gag gac acg gcc atg tat tac tgt 288 Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 gca aga tcc tac tat gat ttc ggg gcc tgg ttt gct tac tgg ggc caa 336 Ala Arg Ser Tyr Tyr Asp Phe Gly Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 ggg act ctg gtc act gtc tct gca 360 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 115 120 <210> 60 <211> 120 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 60 Asn Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Arg Ser Gly Ser Gly Thr Ile Tyr Tyr Ser Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Pro Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Tyr Tyr Asp Phe Gly Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 115 120 <210> 61 <211> 324 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(324) <400> 61 gat atc gta atg acc cag tcc cac ctg agt atg agt acc tcc ctg gga 48 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Leu Ser Met Ser Thr Ser Leu Gly 1 5 10 15 gat cct gtg tca atc act tgc aag gcc tca cag gat gtg agc acc gtc 96 Asp Pro Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Val 20 25 30 gtt gct tgg tat cag cag aag ccc ggg caa tca ccc aga cgt ctc atc 144 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg Arg Leu Ile 35 40 45 tac tca gca tca tac cgt tac atc ggg gtg cct gac cga ttt act ggc 192 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ile Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 tct ggc gct ggc aca gat ttc acc ttt aca att agt tcc gtc cag gcc 240 Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 gaa gac ctg gcc gtg tac tac tgc cag cag cac tac agt ccc cca tac 288 Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Pro Pro Tyr 85 90 95 act ttc ggg gga ggg act aag ctc gaa atc aaa cgt 324 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 62 <211> 108 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 62 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Leu Ser Met Ser Thr Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Pro Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Val 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg Arg Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ile Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Pro Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 63 <211> 324 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(324) <400> 63 gac att gtt atg gct caa agc cat ctg tct atg agc aca tct ctg gga 48 Asp Ile Val Met Ala Gln Ser His Leu Ser Met Ser Thr Ser Leu Gly 1 5 10 15 gat cct gtg tcc atc act tgc aaa gcc agt caa gac gtg tct aca gtt 96 Asp Pro Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Val 20 25 30 gtt gca tgg tat caa cag aag cca ggc cag tca ccc aga cgg ctc att 144 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg Arg Leu Ile 35 40 45 tac tca gct tct tac cga tac atc ggg gtc cct gac aga ttt aca ggt 192 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ile Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 agt ggg gcc ggt act gac ttc act ttt act atc tca tcc gta caa gcc 240 Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 gaa gac ctg gca gta tat tac tgc cag caa cat tat tcc cca ccc tac 288 Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Pro Pro Tyr 85 90 95 aca ttc ggc ggg ggt act aag ctg gaa att aaa cgt 324 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 64 <211> 108 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 64 Asp Ile Val Met Ala Gln Ser His Leu Ser Met Ser Thr Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Pro Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Val 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg Arg Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ile Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Pro Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 65 <211> 360 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(360) <400> 65 cag gta cag ctc gtt cag tcc ggc gcc gag gta gct aag cct ggt act 48 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Ala Lys Pro Gly Thr 1 5 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tcc tgt gag gcc tcc ggc ttc acc ttc tcc tcc tac 96 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 acc ctg tcc tgg gtg agg cag acc cct ggc aag ggc ctg gag tgg gtg 144 Thr Leu Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 gcc acc atc tcc atc ggc ggc agg tac acc tac tac cct gac tcc gtg 192 Ala Thr Ile Ser Ile Gly Gly Arg Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 aag ggc cgg ttc acc atc tcc cgg gac aac gcc aag aac acc ctg tac 240 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 ctg cag atg aac tcc ctg aag tcc gag gac acc gcc atg tac tac tgt 288 Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 acc cgg gac ttc aac ggc tac tcc gac ttc tgg ggc cag ggc acc aca 336 Thr Arg Asp Phe Asn Gly Tyr Ser Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 ctg acc gtg tcc tcc 351 Leu Thr Val Ser Ser 115 <210> 72 <211> 117 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 72 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Thr Leu Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Ile Gly Gly Arg Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Asp Phe Asn Gly Tyr Ser Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Leu Thr Val Ser Ser 115 <210> 73 <211> 36 <212> DNA <213> Mus sp. <400> 73 ggaggatcca tagacagatg ggggtgtcgt tttggc 36 <210> 74 <211> 32 <212> DNA <213> Mus sp. <400> 74 ggaggatccc ttgaccaggc atcctagagt ca 32 <210> 75 <211> 32 <212> DNA <213> Mus sp. <220> <221> misc_feature <222> (1)..(32) <223> mixed bases are defined as follows: H=A+T+C, S=G+C, Y=C+T, K= G+T, M=A+C, R=A+G, W=A+T, V = A+C+G, N = A+C+G+T <400> 75 cttccggaat tcsargtnma gctgsagsag tc 32 <210> 76 <211> 35 <212> DNA <213> Mus sp. <220> <221> misc_feature <222> (1)..(35) <223> mixed bases are defined as follows: H=A+T+C, S=G+C, Y=C+T, K= G+T, M=A+C, R=A+G, W=A+T, V = A+C+G, N = A+C+G+T <400> 76 cttccggaat tcsargtnma gctgsagsag tcwgg 35 <210> 77 <211> 31 <212> DNA <213> Mus sp. <220> <221> misc_feature <222> (1)..(31) <223> mixed bases are defined as follows: H=A+T+C, S=G+C, Y=C+T, K= G+T, M=A+C, R=A+G, W=A+T, V = A+C+G, N = A+C+G+T <400> 77 ggagctcgay attgtgmtsa cmcarwctmc a 31 <210> 78 <211> 46 <212> DNA <213> Mus sp. <400> 78 tatagagctc aagcttggat ggtgggaaga tggatacagt tggtgc 46 <210> 79 <211> 21 <212> DNA <213> Mus sp. <400> 79 atggagtcac agattcaggt c 21 <210> 80 <211> 32 <212> DNA <213> Mus sp. <400> 80 ttttgaattc cagtaacttc aggtgtccac tc 32

Claims (1)

  1. 세포자멸사, 항체 의존성 세포-매개 세포독성 (ADCC) 및 보체 의존성 세포독성 (CDC)에 의해 CD38+ 세포를 사멸시킬 수 있는 것을 특징으로 하는, CD38에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 에피토프-결합 단편을 사용하는 치료 방법.
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Families Citing this family (317)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SI2511297T1 (sl) 2004-02-06 2015-07-31 Morphosys Ag Proti -CD38 humana protitelesa in njihova uporaba
US9200061B2 (en) * 2004-02-06 2015-12-01 Morpho Sys AG Generation and profiling of fully human HuCAL gold®-derived therapeutic antibodies specific for human CD3i
WO2006122355A1 (en) * 2005-05-16 2006-11-23 Qrsciences Pty Ltd A system and method for improving the analysis of chemical substances using nqr
CA2621982C (en) 2005-09-07 2017-11-28 Jennerex Biotherapeutics Ulc Systemic treatment of metastatic and/or systemically-disseminated cancers using gm-csf-expressing poxviruses
EP1945671A2 (en) 2005-10-12 2008-07-23 MorphoSys AG Generation and profiling of fully human hucal gold-derived therapeutic antibodies specific for human cd38
EP1914242A1 (en) * 2006-10-19 2008-04-23 Sanofi-Aventis Novel anti-CD38 antibodies for the treatment of cancer
US7259237B1 (en) 2006-12-29 2007-08-21 Miller Kent D Pan-antiviral peptides
ES2435779T3 (es) 2007-07-19 2013-12-23 Sanofi Agentes citotóxicos que comprenden nuevos derivados de tomaimicina y su uso terapéutico
PA8849001A1 (es) * 2008-11-21 2010-06-28 Lilly Co Eli Anticuerpos de c-met
EP2191843A1 (en) * 2008-11-28 2010-06-02 Sanofi-Aventis Antitumor combinations containing antibodies recognizing specifically CD38 and cyclophosphamide
EP2191842A1 (en) * 2008-11-28 2010-06-02 Sanofi-Aventis Antitumor combinations containing antibodies recognizing specifically CD38 and cytarabine
EP2191841A1 (en) 2008-11-28 2010-06-02 Sanofi-Aventis Antitumor combinations containing antibodies recognizing specifically CD38 and vincristine
EP2191840A1 (en) 2008-11-28 2010-06-02 Sanofi-Aventis Antitumor combinations containing antibodies recognizing specifically CD38 and melphalan
FR2947269B1 (fr) 2009-06-29 2013-01-18 Sanofi Aventis Nouveaux composes anticancereux
FR2949469A1 (fr) 2009-08-25 2011-03-04 Sanofi Aventis Derives anticancereux, leur preparation et leur application en therapeutique
WO2011032180A1 (en) 2009-09-14 2011-03-17 Jennerex, Inc. Oncolytic vaccinia virus combination cancer therapy
UY32913A (es) 2009-10-02 2011-04-29 Sanofi Aventis Nuevos maitansinoides y el uso de dichos maitansinoides para preparar conjugados con un anticuero
MA33892B1 (fr) 2009-12-22 2013-01-02 Roche Glycart Ag Anticorps anti-her3, et leurs utilisations
HUE027713T2 (en) * 2009-12-23 2016-10-28 Hoffmann La Roche Anti-BV8 antibodies and their use
US9220743B2 (en) * 2010-01-22 2015-12-29 Nuovo Biologics, Llc Pan-antiviral peptides for protein kinase inhibition
US9242013B2 (en) 2010-04-15 2016-01-26 Seattle Genetics Inc. Targeted pyrrolobenzodiazapine conjugates
EP2558475A1 (en) 2010-04-15 2013-02-20 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepines used to treat proliferative diseases
JP6093696B2 (ja) 2010-06-09 2017-03-08 ゲンマブ エー／エス ヒトｃｄ３８に対する抗体
FR2963007B1 (fr) 2010-07-26 2013-04-05 Sanofi Aventis Derives anticancereux, leur preparation et leur application therapeutique
ES2617446T3 (es) 2010-09-27 2017-06-19 Morphosys Ag Anticuerpo anti-cd38 y lenalidomida o bortezomib para el tratamiento del mieloma múltiple y nhl
UA112170C2 (uk) 2010-12-10 2016-08-10 Санофі Протипухлинна комбінація, що містить антитіло, яке специфічно розпізнає cd38, і бортезоміб
JOP20210044A1 (ar) 2010-12-30 2017-06-16 Takeda Pharmaceuticals Co الأجسام المضادة لـ cd38
AU2012204467B2 (en) * 2011-01-04 2016-08-18 Sillajen, Inc. Generation of antibodies to tumor antigens and generation of tumor specific complement dependent cytotoxicity by administration of oncolytic vaccinia virus
KR102272828B1 (ko) 2011-03-29 2021-07-05 이뮤노젠 아이엔씨 일-단계 방법에 의한 메이탄시노이드 항체 접합체의 제조
MY171008A (en) 2011-03-29 2019-09-23 Immunogen Inc Preparation of maytansinoid antibody conjugates by a one-step process
RU2610336C2 (ru) 2011-04-21 2017-02-09 Сиэтл Дженетикс, Инк. Новые конъюгаты связывающее соединение - активное соединение (adc) и их применение
EP3508500A1 (en) * 2011-04-29 2019-07-10 Apexigen, Inc. Anti-cd40 antibodies and methods of use
US9427477B2 (en) 2011-05-09 2016-08-30 Mayo Foundation For Medical Education And Research Cancer treatments
EP2710042A2 (en) 2011-05-16 2014-03-26 Fabion Pharmaceuticals, Inc. Multi-specific fab fusion proteins and methods of use
KR101860174B1 (ko) 2011-09-20 2018-05-21 메디뮨 리미티드 표적 접합체 내의 내포를 위한 비대칭 이량체 pbd 화합물로서 피롤로벤조디아제핀
US9526798B2 (en) 2011-10-14 2016-12-27 Seattle Genetics, Inc. Pyrrolobenzodiazepines and targeted conjugates
CN110183470A (zh) 2011-10-14 2019-08-30 麦迪穆有限责任公司 吡咯并苯并二氮杂卓
US9399073B2 (en) 2011-10-14 2016-07-26 Seattle Genetics, Inc. Pyrrolobenzodiazepines
BR112014009055B1 (pt) 2011-10-14 2021-12-14 Seattle Genetics, Inc. Compostos pirrolobenzodiazepinas, conjugados alvos, ligante de fármaco e uso dos ditos conjugados para tratar uma doença proliferativa
SG11201401518TA (en) 2011-10-28 2014-05-29 Teva Pharmaceuticals Australia Pty Ltd Polypeptide constructs and uses thereof
WO2013075740A1 (en) * 2011-11-23 2013-05-30 Sanofi Antibody purification method
EP2812702B1 (en) * 2012-02-10 2019-04-17 Seattle Genetics, Inc. Diagnosis and management of CD30-expressing cancers
AR090549A1 (es) 2012-03-30 2014-11-19 Genentech Inc Anticuerpos anti-lgr5 e inmunoconjugados
AU2013256596A1 (en) 2012-05-01 2014-10-09 Genentech, Inc. Anti-PMEL17 antibodies and immunoconjugates
SG11201500087VA (en) 2012-07-09 2015-02-27 Genentech Inc Immunoconjugates comprising anti-cd22 antibodies
JP2015523380A (ja) 2012-07-09 2015-08-13 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｃｄ７９ｂ抗体を含む免疫複合体
BR112015002193A2 (pt) 2012-08-02 2017-07-04 Genentech Inc anticorpos anti-etbr e imunoconjugados
PT2900232T (pt) 2012-09-25 2018-02-09 Morphosys Ag Combinações e suas utilizações
WO2014055415A1 (en) 2012-10-01 2014-04-10 Mayo Foundation For Medical Education And Research Cancer treatments
AU2013326881B2 (en) 2012-10-04 2018-08-02 Immunogen, Inc. Use of a PVDF membrane to purify cell-binding agent cytotoxic agent conjugates
EP2906250B1 (en) 2012-10-12 2018-05-30 ADC Therapeutics SA Pyrrolobenzodiazepine-anti-psma antibody conjugates
PL2906253T3 (pl) 2012-10-12 2019-02-28 Adc Therapeutics Sa Koniugaty pirolobenzodiazepina-przeciwciało anty-psma
MX364329B (es) 2012-10-12 2019-04-23 Medimmune Ltd Conjugados del anticuerpo pirrolobenzodiazepina.
CA2885315C (en) 2012-10-12 2020-06-23 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
ES2660029T3 (es) 2012-10-12 2018-03-20 Medimmune Limited Conjugados de anticuerpo-pirrolobenzodiazepinas
KR101819404B1 (ko) 2012-10-12 2018-02-28 메디뮨 리미티드 피롤로벤조디아제핀 및 그의 컨주게이트
CN105102068B (zh) 2012-10-12 2018-06-01 Adc疗法责任有限公司 吡咯并苯并二氮杂卓-抗体结合物
WO2014057072A1 (en) 2012-10-12 2014-04-17 Spirogen Sàrl Synthesis and intermediates of pyrrolobenzodiazepine derivatives for conjugation
AU2013328628B2 (en) 2012-10-12 2016-12-15 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepine-anti-CD22 antibody conjugates
WO2014068114A1 (en) 2012-11-05 2014-05-08 Morphosys Ag Radiolabelled antibody and uses thereof
TWI609887B (zh) 2012-11-05 2018-01-01 皮爾法伯製藥公司 新穎的抗原結合蛋白及其作爲治療癌症之定址產物的用途
UA118255C2 (uk) * 2012-12-07 2018-12-26 Санофі Композиція, яка містить антитіло до cd38 і леналідомід
US10342869B2 (en) 2012-12-07 2019-07-09 The Regents Of The University Of California Compositions comprising anti-CD38 antibodies and lenalidomide
IL241407B (en) * 2013-03-13 2022-06-01 Univ California Preparations containing antibodies against cd-38 and carfilzomib
KR102066318B1 (ko) 2013-03-13 2020-01-14 메디뮨 리미티드 피롤로벤조디아제핀 및 그의 컨쥬게이트
BR112015023070B1 (pt) 2013-03-13 2022-06-07 Genentech, Inc. Conjugados e compostos de pirrolobenzodiazepinas, composição farmacêutica que compreende os mesmo, bem como seus usos para o tratamento de uma doença proliferativa
US9562099B2 (en) 2013-03-14 2017-02-07 Genentech, Inc. Anti-B7-H4 antibodies and immunoconjugates
JP6436965B2 (ja) 2013-03-14 2018-12-12 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｂ７−ｈ４抗体及びイムノコンジュゲート
PT2992013T (pt) 2013-04-29 2020-03-05 Teva Pharmaceuticals Australia Pty Ltd Anticorpos anti-cd38 e fusões a interferão alfa-2b atenuado
US11117975B2 (en) 2013-04-29 2021-09-14 Teva Pharmaceuticals Australia Pty Ltd Anti-CD38 antibodies and fusions to attenuated interferon alpha-2B
HUE038741T2 (hu) * 2013-05-06 2018-11-28 Sanofi Sa Folyamatos többlépéses eljárás antitestek tisztítására
BR112016002829A2 (pt) 2013-08-12 2017-09-19 Genentech Inc Composto e processo para preparar o composto de conjugado anticorpo-¿droga, composição farmacêutica, método de tratamento do câncer, kit para o tratamento do câncer, intermediário ligante¿-droga, porção e composto de porção droga de dímero cbi
CN105518027A (zh) 2013-09-17 2016-04-20 豪夫迈·罗氏有限公司 使用抗lgr5抗体的方法
US10010624B2 (en) 2013-10-11 2018-07-03 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
US9950078B2 (en) 2013-10-11 2018-04-24 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
GB201317982D0 (en) 2013-10-11 2013-11-27 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
GB201317981D0 (en) 2013-10-11 2013-11-27 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
WO2015052535A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
CN103513040B (zh) * 2013-10-16 2015-03-11 常晓天 蛋白cd38在制备类风湿性关节炎诊断标记物中的应用
JP2016536314A (ja) * 2013-10-31 2016-11-24 サノフイ ヒトのがんを治療するための特異的抗ｃｄ３８抗体
SG11201603244VA (en) 2013-11-04 2016-05-30 Glenmark Pharmaceuticals Sa Production of t cell retargeting hetero-dimeric immunoglobulins
PE20160712A1 (es) 2013-12-13 2016-07-26 Genentech Inc Anticuerpos e inmunoconjugados anti-cd33
KR20160092024A (ko) 2013-12-16 2016-08-03 제넨테크, 인크. 1-(클로로메틸)-2,3-디히드로-1H-벤조[e]인돌 이량체 항체-약물 접합체 화합물, 및 사용 및 치료 방법
CA2934617A1 (en) 2013-12-23 2015-07-02 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Antibody drug conjugates (adcs) with kinesin spindle protein (ksp)
JP2017506640A (ja) * 2014-02-14 2017-03-09 セントローズ， エルエルシー 細胞外標的化薬物共役体
JP6673838B2 (ja) 2014-02-14 2020-04-01 セレクティスＣｅｌｌｅｃｔｉｓ 免疫細胞と病的細胞の両方に存在する抗原を標的とするように操作された、免疫療法のための細胞
US9603927B2 (en) 2014-02-28 2017-03-28 Janssen Biotech, Inc. Combination therapies with anti-CD38 antibodies
US9732154B2 (en) 2014-02-28 2017-08-15 Janssen Biotech, Inc. Anti-CD38 antibodies for treatment of acute lymphoblastic leukemia
BR112016022385A2 (pt) * 2014-03-28 2018-06-19 Xencor, Inc anticorpos específicos que se ligam a cd38 e cd3
UA119352C2 (uk) * 2014-05-01 2019-06-10 Тева Фармасьютикалз Острейліа Пті Лтд Комбінація леналідоміду або помалідоміду і конструкції анти-cd38 антитіло-атенуйований інтерферон альфа-2b та спосіб лікування суб'єкта, який має cd38-експресуючу пухлину
CN106414499A (zh) 2014-05-22 2017-02-15 基因泰克公司 抗gpc3抗体和免疫偶联物
WO2015195555A1 (en) 2014-06-16 2015-12-23 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Blocking cd38 using anti-cd38 antibody conjugated to protein g to protect nk cells
US10213513B2 (en) 2014-06-16 2019-02-26 Mayo Foundation For Medical Education And Research Treating myelomas
EP3154581B1 (en) 2014-06-16 2019-02-20 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Blocking cd38 using anti-cd38 f(ab')2 to protect nk cells
US9212225B1 (en) * 2014-07-01 2015-12-15 Amphivena Therapeutics, Inc. Bispecific CD33 and CD3 binding proteins
KR20170032406A (ko) 2014-07-15 2017-03-22 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 입양 세포 치료를 위한 조작된 세포
US10617757B2 (en) 2014-08-08 2020-04-14 The Regents Of The University Of California Methods for treating multiple myeloma
CA2959141A1 (en) 2014-08-28 2016-03-03 Bioatla, Llc Conditionally active chimeric antigen receptors for modified t-cells
WO2016040294A2 (en) * 2014-09-09 2016-03-17 Janssen Biotech, Inc. Combination therapies with anti-cd38 antibodies
PT3191135T (pt) 2014-09-12 2020-11-12 Genentech Inc Anticorpos anti-her2 e imunoconjugados
GB201416112D0 (en) 2014-09-12 2014-10-29 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
AR101846A1 (es) 2014-09-12 2017-01-18 Genentech Inc Anticuerpos anti-cll-1 e inmunoconjugados
EP3191518B1 (en) 2014-09-12 2020-01-15 Genentech, Inc. Anti-b7-h4 antibodies and immunoconjugates
KR20170052600A (ko) 2014-09-12 2017-05-12 제넨테크, 인크. 시스테인 가공된 항체 및 콘주게이트
CN113929782B (zh) * 2014-09-16 2024-06-21 依奈特制药公司 对淋巴细胞中抑制途径的中和
JP6730261B2 (ja) 2014-09-17 2020-07-29 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｈｅｒ２抗体を含む免疫複合体
US9446148B2 (en) 2014-10-06 2016-09-20 Mayo Foundation For Medical Education And Research Carrier-antibody compositions and methods of making and using the same
CA2965414C (en) 2014-10-29 2024-01-09 Teva Pharmaceuticals Australia Pty Ltd Interferon .alpha.2.beta. variants
US11773166B2 (en) 2014-11-04 2023-10-03 Ichnos Sciences SA CD3/CD38 T cell retargeting hetero-dimeric immunoglobulins and methods of their production
MA40894A (fr) * 2014-11-04 2017-09-12 Glenmark Pharmaceuticals Sa Immunoglobulines hétéro-dimères reciblant des lymphocytes t cd3/cd38 et leurs procédés de production
SG11201703599VA (en) 2014-11-19 2017-06-29 Immunogen Inc Process for preparing cell-binding agent-cytotoxic agent conjugates
CN107148285B (zh) 2014-11-25 2022-01-04 Adc治疗股份有限公司 吡咯并苯并二氮杂䓬-抗体缀合物
CN110894240B (zh) 2014-11-26 2022-04-15 森科股份有限公司 结合cd3和肿瘤抗原的异二聚体抗体
US10259887B2 (en) 2014-11-26 2019-04-16 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and tumor antigens
NZ732753A (en) * 2014-12-04 2024-08-30 Janssen Biotech Inc Anti-cd38 antibodies for treatment of acute myeloid leukemia
GB201506389D0 (en) * 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
GB201506402D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
GB201506411D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Bergenbio As Humanized anti-axl antibodies
MY189692A (en) 2015-05-07 2022-02-26 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Anti-ox40 antibodies and methods of use thereof
HUE054271T2 (hu) 2015-05-13 2021-08-30 Morphosys Ag Mielóma Multiplex (MM) kezelése
KR102602754B1 (ko) 2015-05-20 2023-11-14 얀센 바이오테크 인코포레이티드 경쇄 아밀로이드증 및 다른 cd38-양성 혈액학적 악성종양을 치료하기 위한 항-cd38 항체
US9644032B2 (en) 2015-05-29 2017-05-09 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies against OX40 and uses thereof
AU2016271124C1 (en) 2015-05-30 2020-05-14 Molecular Templates, Inc. De-immunized, Shiga toxin a subunit scaffolds and cell-targeting molecules comprising the same
ES2890783T3 (es) 2015-06-22 2022-01-24 Janssen Biotech Inc Terapias de combinación para enfermedades malignas hematológicas con anticuerpos anti-CD38 e inhibidores de survivina
JP6971858B2 (ja) 2015-06-22 2021-11-24 バイエル ファーマ アクチエンゲゼルシャフト 酵素開裂性基を有する抗体薬物複合体（ａｄｃ）および抗体プロドラッグ複合体（ａｐｄｃ）
FI3313441T3 (fi) 2015-06-24 2024-03-28 Janssen Biotech Inc Kiinteiden kasvainten immunomodulaatio ja hoito spesifisesti cd38:aa sitovilla vasta-aineilla
US20170044265A1 (en) 2015-06-24 2017-02-16 Janssen Biotech, Inc. Immune Modulation and Treatment of Solid Tumors with Antibodies that Specifically Bind CD38
MA42895A (fr) 2015-07-15 2018-05-23 Juno Therapeutics Inc Cellules modifiées pour thérapie cellulaire adoptive
TW201707725A (zh) 2015-08-18 2017-03-01 美國馬友醫藥教育研究基金會 載體－抗體組合物及其製造及使用方法
CA2998611A1 (en) * 2015-09-14 2017-03-23 Leukemia Therapeutics, LLC Identification of novel diagnostics and therapeutics by modulating rhoh
TW201713360A (en) 2015-10-06 2017-04-16 Mayo Foundation Methods of treating cancer using compositions of antibodies and carrier proteins
WO2017060322A2 (en) 2015-10-10 2017-04-13 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Ptefb-inhibitor-adc
MA43354A (fr) 2015-10-16 2018-08-22 Genentech Inc Conjugués médicamenteux à pont disulfure encombré
US10781261B2 (en) 2015-11-03 2020-09-22 Janssen Biotech, Inc. Subcutaneous formulations of anti-CD38 antibodies and their uses
CN108472369A (zh) 2015-11-03 2018-08-31 詹森生物科技公司 抗cd38抗体的皮下制剂及其用途
CN105837688B (zh) * 2015-11-20 2019-02-26 北京大学深圳研究生院 单域抗体及其编码基因，免疫毒素及其编码基因、制备方法、表达载体、应用，及宿主细胞
IL299072A (en) 2015-12-02 2023-02-01 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Antibodies and methods for using them
WO2017120501A1 (en) 2016-01-07 2017-07-13 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods of treating cancer with interferon
CN113817060B (zh) * 2016-01-09 2024-03-08 嘉立医疗科技(广州)有限公司 用于癌症治疗的钙粘蛋白-17特异性抗体和细胞毒性细胞
GB201601431D0 (en) 2016-01-26 2016-03-09 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines
EP3411077A1 (en) 2016-02-05 2018-12-12 ImmunoGen, Inc. Efficient process for preparing cell-binding agent-cytotoxic agent conjugates
GB201602359D0 (en) 2016-02-10 2016-03-23 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
GB201602356D0 (en) 2016-02-10 2016-03-23 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
AU2017217881B2 (en) 2016-02-12 2022-11-17 Mayo Foundation For Medical Education And Research Hematologic cancer treatments
CA3016098A1 (en) 2016-03-04 2017-09-08 Morphosys Ag Clinical assessment of m-protein response in multiple myeloma
US10870701B2 (en) 2016-03-15 2020-12-22 Generon (Shanghai) Corporation Ltd. Multispecific fab fusion proteins and use thereof
WO2017165440A1 (en) 2016-03-21 2017-09-28 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods for reducing toxicity of a chemotherapeutic drug
US11878061B2 (en) 2016-03-21 2024-01-23 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods for improving the therapeutic index for a chemotherapeutic drug
MX2018011627A (es) 2016-03-24 2019-01-10 Bayer Pharma AG Profarmacos de farmacos citotoxicos que tienen grupos enzimaticamente escindibles.
US10618969B2 (en) 2016-04-06 2020-04-14 Mayo Foundation For Medical Education And Research Carrier-binding agent compositions and methods of making and using the same
KR20200087875A (ko) 2016-04-15 2020-07-21 바이오아트라, 엘엘씨 항 Axl항체 및 이의 면역접합체와 이것들의 용도
GB201607478D0 (en) 2016-04-29 2016-06-15 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
WO2017196847A1 (en) 2016-05-10 2017-11-16 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Variable new antigen receptor (vnar) antibodies and antibody conjugates targeting tumor and viral antigens
US11254742B2 (en) 2016-05-13 2022-02-22 Bioatla, Inc. Anti-Ror2 antibodies, antibody fragments, their immunoconjugates and uses thereof
CN109313200B (zh) 2016-05-27 2022-10-04 豪夫迈·罗氏有限公司 用于表征位点特异性抗体-药物缀合物的生物分析性方法
WO2017214182A1 (en) 2016-06-07 2017-12-14 The United States Of America. As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Fully human antibody targeting pdi for cancer immunotherapy
CN109310781B (zh) 2016-06-15 2024-06-18 拜耳制药股份公司 具有ksp抑制剂和抗-cd123-抗体的特异性抗体-药物-缀合物(adc)
US20190233533A1 (en) * 2016-06-28 2019-08-01 Umc Utrecht Holding B.V. Treatment Of IgE-Mediated Diseases With Antibodies That Specifically Bind CD38
EP3475304B1 (en) 2016-06-28 2022-03-23 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind somatostatin receptor 2
EP3484923A1 (en) * 2016-07-15 2019-05-22 Takeda Pharmaceutical Company Limited Methods and materials for assessing response to plasmablast- and plasma cell-depleting therapies
CN117717604A (zh) 2016-07-19 2024-03-19 梯瓦制药澳大利亚股份有限公司 抗cd47联合治疗
EP3487506A1 (en) 2016-07-20 2019-05-29 Hybrigenics SA Combinations of inecalcitol with an anti-cd38 agent and their uses for treating cancer
CA3031559A1 (en) 2016-08-02 2018-02-08 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Monoclonal antibodies targeting glypican-2 (gpc2) and use thereof
WO2018031662A1 (en) 2016-08-11 2018-02-15 Genentech, Inc. Pyrrolobenzodiazepine prodrugs and antibody conjugates thereof
JP2019526579A (ja) 2016-09-01 2019-09-19 マヨ ファウンデーション フォー メディカル エデュケーション アンド リサーチＭａｙｏ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ Ｆｏｒ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｔ細胞癌を標的とする為の方法及び組成物
EP3506942B1 (en) 2016-09-01 2022-11-16 Mayo Foundation for Medical Education and Research Carrier-pd-l1 binding agent compositions for treating cancers
CN109890422A (zh) 2016-09-06 2019-06-14 梅约医学教育与研究基金会 紫杉醇-白蛋白-结合剂组合物及使用和制备该组合物的方法
EP3510048A1 (en) 2016-09-06 2019-07-17 Mayo Foundation for Medical Education and Research Methods of treating pd-l1 expressing cancer
WO2018048815A1 (en) 2016-09-06 2018-03-15 Nantibodyfc, Llc Methods of treating triple-negative breast cancer using compositions of antibodies and carrier proteins
GB201617466D0 (en) 2016-10-14 2016-11-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine conjugates
TWI788307B (zh) * 2016-10-31 2023-01-01 美商艾歐凡斯生物治療公司 用於擴增腫瘤浸潤性淋巴細胞之工程化人造抗原呈現細胞
WO2018089628A1 (en) 2016-11-09 2018-05-17 Agenus Inc. Anti-ox40 antibodies, anti-gitr antibodies, and methods of use thereof
CA3036983A1 (en) 2016-11-21 2018-05-24 Cureab Gmbh Anti-gp73 antibodies and immunoconjugates
US11236171B2 (en) 2016-12-21 2022-02-01 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Human monoclonal antibodies specific for FLT3 and uses thereof
CA3047491A1 (en) 2016-12-21 2018-06-28 Bayer Aktiengesellschaft Prodrugs of cytotoxic active agents having enzymatically cleavable groups
JP7066714B2 (ja) 2016-12-21 2022-05-13 バイエル・ファルマ・アクティエンゲゼルシャフト 酵素的に切断可能な基を有する抗体薬物コンジュゲート（ａｄｃ）
EP3558387B1 (de) 2016-12-21 2021-10-20 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Spezifische antikörper-wirkstoff-konjugate (adcs) mit ksp-inhibitoren
CN109963570A (zh) 2017-01-21 2019-07-02 宁波知明生物科技有限公司 芍药苷-6’-o-苯磺酸酯在治疗干燥综合征的应用
GB201702031D0 (en) 2017-02-08 2017-03-22 Medlmmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
PL3544636T3 (pl) 2017-02-08 2021-12-06 Adc Therapeutics Sa Koniugaty pirolobenzodiazepina-przeciwciało
RS63502B1 (sr) 2017-04-18 2022-09-30 Medimmune Ltd Konjugati pirolobenzodiazepina
CA3057748A1 (en) 2017-04-20 2018-10-25 Adc Therapeutics Sa Combination therapy with an anti-axl antibody-drug conjugate
WO2018213064A1 (en) 2017-05-19 2018-11-22 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Human monoclonal antibody targeting tnfer2 for cancer immunotherapy
US11318211B2 (en) 2017-06-14 2022-05-03 Adc Therapeutics Sa Dosage regimes for the administration of an anti-CD19 ADC
WO2018234370A1 (en) 2017-06-20 2018-12-27 Institut Curie DEFECTIVE IMMUNE CELLS AGAINST SUV39H1
US11191845B2 (en) 2017-06-20 2021-12-07 Sorrento Therapeutics, Inc. CD38 antibody drug conjugate
CA3066953A1 (en) 2017-06-30 2019-01-03 Lentigen Technology, Inc. Human monoclonal antibodies specific for cd33 and methods of their use
WO2019005208A1 (en) 2017-06-30 2019-01-03 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services ANTIBODIES TO HUMAN MESOTHELIN AND USES IN ANTICANCER THERAPY
EP3434692A1 (en) * 2017-07-24 2019-01-30 Encefa Compounds which specifically binds to cd38 for use in the treatment of neurodegenerative diseases
BR112020002636A2 (pt) * 2017-08-10 2020-07-28 Grifols Diagnostic Solutions Inc. composições, métodos e/ou kits que compreendem um domínio extracelular recombinante de cd38 humano
AU2018316521A1 (en) * 2017-08-16 2020-02-13 Black Belt Therapeutics Limited CD38 modulating antibody
SG11202000484TA (en) * 2017-08-16 2020-02-27 Black Belt Therapeutics Ltd Cd38 antibody
WO2019035938A1 (en) 2017-08-16 2019-02-21 Elstar Therapeutics, Inc. MULTISPECIFIC MOLECULES BINDING TO BCMA AND USES THEREOF
NZ761175A (en) 2017-08-18 2024-07-26 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine conjugates
WO2019055689A1 (en) 2017-09-13 2019-03-21 Teneobio, Inc. HEAVY CHAIN ANTIBODIES BINDING TO EXOENZYMES
JP2020533380A (ja) * 2017-09-14 2020-11-19 グラクソスミスクライン、インテレクチュアル、プロパティー、ディベロップメント、リミテッドＧｌａｘｏｓｍｉｔｈｋｌｉｎｅ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｌｉｍｉｔｅｄ 癌の組合せ治療
KR20200061376A (ko) 2017-09-29 2020-06-02 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 항체-피롤로벤조디아제핀 유도체 콘쥬게이트
WO2019070726A1 (en) * 2017-10-02 2019-04-11 Visterra, Inc. CD73 BINDING ANTIBODY MOLECULES AND USES THEREOF
MX2020004129A (es) * 2017-10-10 2020-08-20 Sanofi Sa Anticuerpos anti-cd38 y metodos de uso.
MA50514A (fr) 2017-10-31 2020-09-09 Janssen Biotech Inc Méthodes de traitement du myélome multiple à haut risque
WO2019089848A1 (en) 2017-11-01 2019-05-09 Juno Therapeutics, Inc. Methods associated with tumor burden for assessing response to a cell therapy
CN111542596A (zh) 2017-11-01 2020-08-14 朱诺治疗学股份有限公司 产生工程化细胞的治疗性组合物的方法
US12031975B2 (en) 2017-11-01 2024-07-09 Juno Therapeutics, Inc. Methods of assessing or monitoring a response to a cell therapy
MX2020004239A (es) 2017-11-01 2020-09-09 Juno Therapeutics Inc Proceso para producir una composicion de celulas t.
TW201932482A (zh) 2017-11-01 2019-08-16 美商奇諾治療有限公司 對b細胞成熟抗原具特異性之嵌合抗原受體及編碼聚核苷酸
WO2019089969A2 (en) 2017-11-01 2019-05-09 Juno Therapeutics, Inc. Antibodies and chimeric antigen receptors specific for b-cell maturation antigen
EP3706785A4 (en) * 2017-11-10 2021-08-04 Actinium Pharmaceuticals, Inc. COMBINATION THERAPY FOR TREATMENT OF A HEMATOLOGICAL DISEASE
MX2020005907A (es) 2017-12-08 2020-10-19 Juno Therapeutics Inc Formulacion de medio libre de suero para cultivar celulas y metodos de uso de la misma.
JP2021505168A (ja) 2017-12-08 2021-02-18 ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド 操作されたｔ細胞の組成物を製造するための方法
SG11202005217VA (en) 2017-12-08 2020-07-29 Juno Therapeutics Inc Phenotypic markers for cell therapy and related methods
WO2019149743A1 (en) 2018-01-30 2019-08-08 Cellectis Combination comprising allogeneic immune cells deficient for an antigen present on both t-cells and pathological cells and therapeutic antibody against said antigen
CN110144008B (zh) 2018-02-12 2021-03-19 杭州尚健生物技术有限公司 Cd38蛋白抗体及其应用
GB201803342D0 (en) 2018-03-01 2018-04-18 Medimmune Ltd Methods
EP3762031A4 (en) * 2018-03-08 2021-12-22 Phanes Therapeutics, Inc. ANTI-CLAUDINE ANTIBODIES 18.2 AND THEIR USES
GB201806022D0 (en) 2018-04-12 2018-05-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
US12048745B2 (en) 2018-05-01 2024-07-30 Augusta University Research Institute, Inc. Methods for detecting and reversing immune therapy resistance
BR112020023187A2 (pt) 2018-05-16 2021-04-20 Janssen Biotech, Inc. métodos para tratamento de cânceres e de aumento da eficácia de agentes terapêuticos de redirecionamento de células t
CN108752475B (zh) * 2018-06-14 2021-07-30 北京智仁美博生物科技有限公司 抗人cd38抗体及其用途
TW202019962A (zh) 2018-07-10 2020-06-01 法商賽諾菲公司 標靶CD38及TGF-β的組合療法
US11939377B2 (en) 2018-07-12 2024-03-26 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Affinity matured CD22-specific monoclonal antibody and uses thereof
US20240254252A1 (en) 2018-07-13 2024-08-01 Genmab A/S Trogocytosis-mediated therapy using cd38 antibodies
TW202019518A (zh) 2018-07-13 2020-06-01 丹麥商珍美寶股份有限公司 Ｃｄ３８抗體之變體及其用途
EP3833684A1 (en) 2018-08-08 2021-06-16 The United States of America, as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services High affinity monoclonal antibodies targeting glypican-2 and uses thereof
SG11202101130VA (en) 2018-08-09 2021-03-30 Juno Therapeutics Inc Methods for assessing integrated nucleic acids
AU2019338999A1 (en) * 2018-09-11 2021-03-18 Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. Anti-CD38 antibody, antigen-binding fragment thereof, and pharmaceutical use
CN109265551B (zh) * 2018-09-25 2020-09-15 华东师范大学 Cd38抗体、嵌合抗原受体和药物
CN109293773B (zh) * 2018-09-25 2020-09-04 上海邦耀生物科技有限公司 靶向cd38蛋白的抗体、嵌合抗原受体和药物
EP3867275A2 (en) 2018-10-17 2021-08-25 Janssen Biotech, Inc. Method of providing subcutaneous administration of anti-cd38 antibodies
US20210388106A1 (en) 2018-10-26 2021-12-16 Teneobio, Inc. Heavy chain antibodies binding to cd38
SG11202103873VA (en) 2018-11-01 2021-05-28 Juno Therapeutics Inc Chimeric antigen receptors specific for g protein-coupled receptor class c group 5 member d (gprc5d)
AU2019372331A1 (en) 2018-11-01 2021-05-27 Juno Therapeutics, Inc. Methods for treatment using chimeric antigen receptors specific for B-cell maturation antigen
MA54248A (fr) 2018-11-13 2021-09-22 Janssen Biotech Inc Régulation de métaux traces pendant la production d'anticorps anti-cd38
WO2020120730A1 (en) * 2018-12-14 2020-06-18 Morphosys Ag Antibody formulations
CN113490510A (zh) 2019-01-08 2021-10-08 美国政府(由卫生和人类服务部的部长所代表) 用于治疗实体瘤的靶向间皮素的跨物种单结构域抗体
AU2020212534A1 (en) 2019-01-22 2021-07-22 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services High affinity monoclonal antibodies targeting glypican-1 and methods of use
CN113474362B (zh) * 2019-01-28 2023-04-18 普众发现医药科技(上海)有限公司 对cd44特异性的抗体
MA54860A (fr) 2019-01-28 2022-05-04 Sanofi Sa Méthodes de traitement du myélome multiple
CA3130695A1 (en) 2019-02-27 2020-09-03 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-cd20 or anti-cd38 antibodies
KR20220002891A (ko) 2019-03-15 2022-01-07 모르포시스 아게 자가항체-매개 자가면역 질병의 치료를 위한 항-cd38 항체 및 이의 약제학적 조성물
TW202104269A (zh) * 2019-04-23 2021-02-01 法商賽諾菲公司 抗ｃｄ３８抗體和調配物
SG11202111360YA (en) 2019-05-01 2021-11-29 Juno Therapeutics Inc Cells expressing a recombinant receptor from a modified tgfbr2 locus, related polynucleotides and methods
BR112021021200A2 (pt) 2019-05-01 2021-12-21 Juno Therapeutics Inc Células expressando um receptor quimérico de um locus cd247 modificado, polinucleotídeos relacionados e métodos
BR112021022503A2 (pt) 2019-05-14 2021-12-28 Sanofi Sa Métodos de administração de anticorpo anti-cd38 para tratar mieloma múltiplo
US11655302B2 (en) 2019-06-10 2023-05-23 Sanofi Anti-CD38 antibodies and formulations
WO2020261219A1 (en) 2019-06-27 2020-12-30 Crispr Therapeutics Ag Use of chimeric antigen receptor t cells and nk cell inhibitors for treating cancer
MX2021015433A (es) 2019-07-02 2022-06-08 Hutchinson Fred Cancer Res Vectores ad35 recombinantes y mejoras de la terapia génica relacionadas.
AU2020318781A1 (en) 2019-07-23 2022-02-10 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Immune cells defective for SUV39H1
CA3155246A1 (en) * 2019-10-21 2021-04-29 Sandro MATOSEVIC Engineered natural killer cells and methods for using the same in immunotherapy and autophagy inhibition techniques
JP2022552875A (ja) 2019-10-22 2022-12-20 ザ ユナイテッド ステイツ オブ アメリカ， アズ リプレゼンテッド バイ ザ セクレタリー， デパートメント オブ ヘルス アンド ヒューマン サービシーズ 多様な固形腫瘍を処置するためのｂ７ｈ３（ｃｄ２７６）を標的とする高親和性ナノボディ
WO2021092171A1 (en) 2019-11-06 2021-05-14 Genentech, Inc. Diagnostic and therapeutic methods for treatment of hematologic cancers
GB201916150D0 (en) 2019-11-06 2019-12-18 Univ Of Ireland Galway Treatment of multiple myeloma
CN112876563B (zh) * 2019-11-29 2022-08-16 康诺亚生物医药科技（成都）有限公司 药物组合物及其制备方法和应用
US20210188996A1 (en) 2019-12-05 2021-06-24 Sanofi-Aventis U.S. Llc Formulations of anti-cd38 antibodies for subcutaneous administration
EP4069740A1 (en) * 2019-12-06 2022-10-12 Sanofi-Aventis U.S. LLC Use of isatuximab for the treatment of relapsed and/or refractory multiple myeloma
CA3161573A1 (en) 2019-12-12 2021-06-17 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Antibody-drug conjugates specific for cd276 and uses thereof
JP2023507120A (ja) 2019-12-18 2023-02-21 テネオフォー， インコーポレイテッド Ｃｄ３８に結合する重鎖抗体
WO2021144457A1 (en) 2020-01-16 2021-07-22 Genmab A/S Formulations of cd38 antibodies and uses thereof
WO2021207689A2 (en) 2020-04-10 2021-10-14 Juno Therapeutics, Inc. Methods and uses related to cell therapy engineered with a chimeric antigen receptor targeting b-cell maturation antigen
KR20230005268A (ko) * 2020-04-24 2023-01-09 밀레니엄 파머슈티컬스 인코퍼레이티드 항-cd19 항체 및 이의 용도
CN115803824A (zh) 2020-05-13 2023-03-14 朱诺治疗学股份有限公司 鉴定与临床反应相关的特征的方法及其用途
CN116234558A (zh) 2020-06-26 2023-06-06 朱诺治疗学有限公司 条件性地表达重组受体的工程化t细胞、相关多核苷酸和方法
WO2021260657A1 (en) 2020-06-26 2021-12-30 Crispr Therapeutics Ag Allogeneic cell therapy of b cell malignancies using genetically engineered t cells targeting cd19
CN111808193B (zh) * 2020-06-30 2022-04-05 源道隆（苏州）医学科技有限公司 可结合人cd38的纳米抗体及其应用
KR20230074713A (ko) 2020-07-30 2023-05-31 엥스띠뛰 퀴리 Socs1에 결함이 있는 면역 세포
CN114075285B (zh) * 2020-08-20 2023-05-30 瑞阳(苏州)生物科技有限公司 抗人cd38人源化单克隆抗体及其应用
EP4211244A1 (en) 2020-09-14 2023-07-19 Vor Biopharma, Inc. Compositions and methods for cd38 modification
US20230391852A1 (en) 2020-10-26 2023-12-07 The U.S.A., As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Single domain antibodies targeting sars coronavirus spike protein and uses thereof
CN112300281B (zh) * 2020-10-29 2021-06-11 杭州爱唯生命科技有限公司 含有nk细胞的药物组合物及其治疗癌症的用途
US20220135696A1 (en) 2020-11-03 2022-05-05 Sanofi-Aventis U.S. Llc Use of isatuximab for the treatment of multiple myeloma
WO2022098787A1 (en) 2020-11-04 2022-05-12 Juno Therapeutics, Inc. Cells expressing a chimeric receptor from a modified invariant cd3 immunoglobulin superfamily chain locus and related polynucleotides and methods
EP4251282A1 (en) 2020-11-27 2023-10-04 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM) Methods for diagnosis and monitoring of toxic epidermal necrolysis
WO2022117572A2 (en) 2020-12-02 2022-06-09 Oncurious Nv An ltbr agonist in combination therapy against cancer
US20220202859A1 (en) 2020-12-23 2022-06-30 Crispr Therapeutics Ag Cancer treatment using cd38 inhibitor and/or lenalidomide and t-cells expressing a chimeric antigen receptor
WO2022152823A1 (en) 2021-01-14 2022-07-21 Morphosys Ag Anti-cd38 antibodies and their uses
AU2022218137A1 (en) 2021-02-03 2023-08-24 Mozart Therapeutics, Inc. Binding agents and methods of using the same
US20220275090A1 (en) 2021-02-22 2022-09-01 Janssen Biotech, Inc. Combination Therapies with Anti-CD38 Antibodies and PARP or Adenosine Receptor Inhibitors
TW202302642A (zh) 2021-03-01 2023-01-16 德商莫菲西斯公司 用於治療抗體介導移植物排斥用途之抗ｃｄ３８抗體
JP2024509853A (ja) 2021-03-03 2024-03-05 ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド Ｔ細胞療法およびｄｇｋ阻害剤の組合せ
WO2022232612A1 (en) 2021-04-29 2022-11-03 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Lassa virus-specific nanobodies and methods of their use
WO2022234009A2 (en) 2021-05-06 2022-11-10 Juno Therapeutics Gmbh Methods for stimulating and transducing t cells
US20240269282A1 (en) 2021-05-10 2024-08-15 Institut Curie Methods for the Treatment of Cancer, Inflammatory Diseases and Autoimmune Diseases
TW202309077A (zh) 2021-05-12 2023-03-01 瑞士商Ｃｒｉｓｐｒ治療公司 用於治療實性瘤的靶向ｃｄ７０的基因工程化免疫細胞
WO2022238962A1 (en) 2021-05-12 2022-11-17 Crispr Therapeutics Ag Genetically engineered immune cells targeting cd70 for use in treating hematopoietic malignancies
CN113244175B (zh) * 2021-05-22 2022-11-04 苏州大学 一种免疫囊泡美登素偶联物及其制备方法与应用
WO2022248602A1 (en) 2021-05-25 2022-12-01 Institut Curie Myeloid cells overexpressing bcl2
CN117500831A (zh) 2021-06-09 2024-02-02 美国政府(由卫生和人类服务部的部长所代表) 用于治疗实体瘤的靶向pd-l1的跨物种单结构域抗体
CN113278075B (zh) * 2021-06-18 2021-12-14 芜湖森爱驰生物科技有限公司 一种炎症检测试剂盒
WO2022271987A1 (en) 2021-06-23 2022-12-29 TeneoFour, Inc. Anti-cd38 antibodies and epitopes of same
TW202321303A (zh) 2021-07-19 2023-06-01 德商莫菲西斯公司 抗pla2r自體抗體媒介膜性腎病變之治療
MX2024001211A (es) 2021-07-28 2024-02-12 Genentech Inc Proteinas de fusion fc heterodimericas il15/il15r alfa para el tratamiento de tipos de cancer de sangre.
TW202321308A (zh) 2021-09-30 2023-06-01 美商建南德克公司 使用抗ｔｉｇｉｔ抗體、抗ｃｄ３８抗體及ｐｄ—１軸結合拮抗劑治療血液癌症的方法
CN113896802A (zh) * 2021-10-09 2022-01-07 宜明昂科生物医药技术（上海）有限公司 靶向cd47和cd38的重组融合蛋白及其制备和用途
WO2023076876A1 (en) 2021-10-26 2023-05-04 Mozart Therapeutics, Inc. Modulation of immune responses to viral vectors
WO2023081705A1 (en) 2021-11-03 2023-05-11 Janssen Biotech, Inc. Methods of treating cancers and enhancing efficacy of bcmaxcd3 bispecific antibodies
CA3237175A1 (en) 2021-11-03 2023-05-11 Janssen Biotech, Inc. Corticosteriod reduction in treatment with anti-cd38 antibodies
CN113912727B (zh) * 2021-11-16 2023-05-02 福州迈新生物技术开发有限公司 抗cd38蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用
WO2023126458A1 (en) 2021-12-28 2023-07-06 Mnemo Therapeutics Immune cells with inactivated suv39h1 and modified tcr
CN114457017B (zh) * 2022-01-19 2023-10-17 四川大学华西第二医院 一种小鼠成纤维细胞肿瘤细胞株HXLyAF-KBM及其应用
WO2023147515A1 (en) 2022-01-28 2023-08-03 Juno Therapeutics, Inc. Methods of manufacturing cellular compositions
WO2023144303A1 (en) 2022-01-31 2023-08-03 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Cd38 as a biomarker and biotarget in t-cell lymphomas
WO2023159182A1 (en) 2022-02-18 2023-08-24 Rakuten Medical, Inc. Anti-programmed death-ligand 1 (pd-l1) antibody molecules, encoding polynucleotides, and methods of use
AU2023231217A1 (en) 2022-03-07 2024-10-17 Marielle CHIRON BLONDEL Use of isatuximab in combination with other agents for the treatment of multiple myeloma
WO2023187024A1 (en) 2022-03-31 2023-10-05 Institut Curie Modified rela protein for inducing interferon expression and engineered immune cells with improved interferon expression
WO2023215737A1 (en) 2022-05-03 2023-11-09 Genentech, Inc. Anti-ly6e antibodies, immunoconjugates, and uses thereof
WO2023213969A1 (en) 2022-05-05 2023-11-09 Juno Therapeutics Gmbh Viral-binding protein and related reagents, articles, and methods of use
WO2023220655A1 (en) 2022-05-11 2023-11-16 Celgene Corporation Methods to overcome drug resistance by re-sensitizing cancer cells to treatment with a prior therapy via treatment with a t cell therapy
WO2023230548A1 (en) 2022-05-25 2023-11-30 Celgene Corporation Method for predicting response to a t cell therapy
WO2023230581A1 (en) 2022-05-25 2023-11-30 Celgene Corporation Methods of manufacturing t cell therapies
WO2023240135A2 (en) 2022-06-07 2023-12-14 Actinium Pharmaceuticals, Inc. Bifunctional chelators and conjugates
WO2024040151A1 (en) 2022-08-18 2024-02-22 Pfizer Inc. Sirp alpha fusion protein and anti-cd38 antibody combination therapies
WO2024054944A1 (en) 2022-09-08 2024-03-14 Juno Therapeutics, Inc. Combination of a t cell therapy and continuous or intermittent dgk inhibitor dosing
TW202423970A (zh) 2022-10-10 2024-06-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 Ｇｐｒｃ５ｄ ｔｃｂ及ｃｄ３８抗體之組合療法
WO2024094660A1 (en) 2022-10-31 2024-05-10 Genmab A/S Cd38 antibodies and uses thereof
WO2024095173A1 (en) 2022-11-02 2024-05-10 Janssen Biotech, Inc. Methods of treating cancers
WO2024100604A1 (en) 2022-11-09 2024-05-16 Juno Therapeutics Gmbh Methods for manufacturing engineered immune cells
WO2024124132A1 (en) 2022-12-09 2024-06-13 Juno Therapeutics, Inc. Machine learning methods for predicting cell phenotype using holographic imaging
WO2024161021A1 (en) 2023-02-03 2024-08-08 Juno Therapeutics Gmbh Methods for non-viral manufacturing of engineered immune cells

Family Cites Families (128)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2429001A (en) 1946-12-28 1947-10-14 Axel H Stone Artificial hand
US2429004A (en) 1947-02-20 1947-10-14 Wachsman Michael Fabric contacting circuit closer for knitting machines
FR1516743A (fr) 1966-04-01 1968-02-05 Rhone Poulenc Sa Nouvel antibiotique et son procédé de préparation par culture de streptomyces croceus
US4307016A (en) 1978-03-24 1981-12-22 Takeda Chemical Industries, Ltd. Demethyl maytansinoids
US4256746A (en) 1978-11-14 1981-03-17 Takeda Chemical Industries Dechloromaytansinoids, their pharmaceutical compositions and method of use
JPS55102583A (en) 1979-01-31 1980-08-05 Takeda Chem Ind Ltd 20-acyloxy-20-demethylmaytansinoid compound
JPS55162791A (en) 1979-06-05 1980-12-18 Takeda Chem Ind Ltd Antibiotic c-15003pnd and its preparation
JPS5645483A (en) 1979-09-19 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd C-15003phm and its preparation
EP0028683A1 (en) 1979-09-21 1981-05-20 Takeda Chemical Industries, Ltd. Antibiotic C-15003 PHO and production thereof
JPS5645485A (en) 1979-09-21 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd Production of c-15003pnd
US4444887A (en) 1979-12-10 1984-04-24 Sloan-Kettering Institute Process for making human antibody producing B-lymphocytes
WO1982001188A1 (en) 1980-10-08 1982-04-15 Takeda Chemical Industries Ltd 4,5-deoxymaytansinoide compounds and process for preparing same
US4450254A (en) 1980-11-03 1984-05-22 Standard Oil Company Impact improvement of high nitrile resins
US4315929A (en) 1981-01-27 1982-02-16 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Method of controlling the European corn borer with trewiasine
US4313946A (en) 1981-01-27 1982-02-02 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Chemotherapeutically active maytansinoids from Trewia nudiflora
JPS57192389A (en) 1981-05-20 1982-11-26 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid
US4716111A (en) 1982-08-11 1987-12-29 Trustees Of Boston University Process for producing human antibodies
GB8308235D0 (en) 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5807715A (en) 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
US5258498A (en) 1987-05-21 1993-11-02 Creative Biomolecules, Inc. Polypeptide linkers for production of biosynthetic proteins
IL89489A0 (en) 1988-03-09 1989-09-10 Hybritech Inc Chimeric antibodies directed against human carcinoembryonic antigen
AU631545B2 (en) 1988-04-15 1992-12-03 Protein Design Labs, Inc. Il-2 receptor-specific chimeric antibodies
ES2070172T3 (es) 1988-04-16 1995-06-01 Celltech Ltd Procedimiento para producir proteinas mediante adn recombinante.
AU4308689A (en) 1988-09-02 1990-04-02 Protein Engineering Corporation Generation and selection of recombinant varied binding proteins
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
US5780225A (en) 1990-01-12 1998-07-14 Stratagene Method for generating libaries of antibody genes comprising amplification of diverse antibody DNAs and methods for using these libraries for the production of diverse antigen combining molecules
WO1991010737A1 (en) 1990-01-11 1991-07-25 Molecular Affinities Corporation Production of antibodies using gene libraries
JP3068180B2 (ja) 1990-01-12 2000-07-24 アブジェニックス インコーポレイテッド 異種抗体の生成
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5698426A (en) 1990-09-28 1997-12-16 Ixsys, Incorporated Surface expression libraries of heteromeric receptors
DK0564531T3 (da) 1990-12-03 1998-09-28 Genentech Inc Berigelsesfremgangsmåde for variantproteiner med ændrede bindingsegenskaber
ES2315612T3 (es) 1991-04-10 2009-04-01 The Scripps Research Institute Genotecas de receptores heterodimericos usando fagemidos.
DE69233482T2 (de) 1991-05-17 2006-01-12 Merck & Co., Inc. Verfahren zur Verminderung der Immunogenität der variablen Antikörperdomänen
WO1992022653A1 (en) 1991-06-14 1992-12-23 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
WO1992022324A1 (en) 1991-06-14 1992-12-23 Xoma Corporation Microbially-produced antibody fragments and their conjugates
ES2136092T3 (es) 1991-09-23 1999-11-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados.
PT1024191E (pt) 1991-12-02 2008-12-22 Medical Res Council Produção de auto-anticorpos a partir de reportórios de segmentos de anticorpo e exibidos em fagos
US5733743A (en) 1992-03-24 1998-03-31 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
EP0563475B1 (en) 1992-03-25 2000-05-31 Immunogen Inc Cell binding agent conjugates of derivatives of CC-1065
AU4025193A (en) 1992-04-08 1993-11-18 Cetus Oncology Corporation Humanized C-erbB-2 specific antibodies
JPH06511156A (ja) * 1992-07-16 1994-12-15 イコス　コーポレイション 炎症性疾患状態に関連する症状の緩和
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
JPH09506262A (ja) 1993-12-08 1997-06-24 ジェンザイム・コーポレイション 特異的抗体の製造方法
ES2247204T3 (es) 1994-01-31 2006-03-01 Trustees Of Boston University Bancos de anticuerpos policlonales.
US5516637A (en) 1994-06-10 1996-05-14 Dade International Inc. Method involving display of protein binding pairs on the surface of bacterial pili and bacteriophage
GB9424449D0 (en) * 1994-12-02 1995-01-18 Wellcome Found Antibodies
DE69637481T2 (de) 1995-04-27 2009-04-09 Amgen Fremont Inc. Aus immunisierten Xenomäusen stammende menschliche Antikörper gegen IL-8
AU2466895A (en) 1995-04-28 1996-11-18 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
JP2978435B2 (ja) 1996-01-24 1999-11-15 チッソ株式会社 アクリロキシプロピルシランの製造方法
US5916771A (en) 1996-10-11 1999-06-29 Abgenix, Inc. Production of a multimeric protein by cell fusion method
KR20080059467A (ko) 1996-12-03 2008-06-27 아브게닉스, 인크. 복수의 ｖｈ 및 ｖｋ 부위를 함유하는 사람 면역글로불린유전자좌를 갖는 형질전환된 포유류 및 이로부터 생성된항체
WO1998046645A2 (en) 1997-04-14 1998-10-22 Micromet Gesellschaft Für Biomedizinische Forschung Mbh Method for the production of antihuman antigen receptors and uses thereof
US6235883B1 (en) 1997-05-05 2001-05-22 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
DK2180007T4 (da) 1998-04-20 2017-11-27 Roche Glycart Ag Glycosyleringsteknik for antistoffer til forbedring af antistofafhængig cellecytotoxicitet
GB9818731D0 (en) 1998-08-27 1998-10-21 Univ Portsmouth Compounds
AU757510C (en) 1998-08-27 2003-09-11 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines
US7223397B1 (en) 1999-01-07 2007-05-29 Research Development Foundation Potentiation of anti-CD38-Immunotoxin cytotoxicity
ATE349438T1 (de) 1999-11-24 2007-01-15 Immunogen Inc Cytotoxische wirkstoffe enthaltend taxane und deren therapeutische anwendung
DE60031793T2 (de) 1999-12-29 2007-08-23 Immunogen Inc., Cambridge Doxorubicin- und daunorubicin-enthaltende, zytotoxische mittel und deren therapeutische anwendung
JP2003534022A (ja) * 2000-05-26 2003-11-18 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション Ｒａｎｋリガンド介在障害の治療に有用な抗−ｒａｎｋリガンドモノクローナル抗体
GB0013810D0 (en) * 2000-06-06 2000-07-26 Celltech Chiroscience Ltd Biological products
US6333410B1 (en) 2000-08-18 2001-12-25 Immunogen, Inc. Process for the preparation and purification of thiol-containing maytansinoids
EA013224B1 (ru) 2000-10-06 2010-04-30 Киова Хакко Кирин Ко., Лтд. Клетки, продуцирующие композиции антител
US6441163B1 (en) 2001-05-31 2002-08-27 Immunogen, Inc. Methods for preparation of cytotoxic conjugates of maytansinoids and cell binding agents
US6716821B2 (en) 2001-12-21 2004-04-06 Immunogen Inc. Cytotoxic agents bearing a reactive polyethylene glycol moiety, cytotoxic conjugates comprising polyethylene glycol linking groups, and methods of making and using the same
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
US20040110226A1 (en) 2002-03-01 2004-06-10 Xencor Antibody optimization
US6534660B1 (en) 2002-04-05 2003-03-18 Immunogen, Inc. CC-1065 analog synthesis
US6756397B2 (en) 2002-04-05 2004-06-29 Immunogen, Inc. Prodrugs of CC-1065 analogs
EP1498490A4 (en) 2002-04-09 2006-11-29 Kyowa Hakko Kogyo Kk PROCESS FOR PREPARING ANTIBODY COMPOSITION
EP1498491A4 (en) 2002-04-09 2006-12-13 Kyowa Hakko Kogyo Kk METHOD FOR INCREASING THE ACTIVITY OF AN ANTIBODY COMPOSITION FOR BINDING TO THE FC GAMMA RECEPTOR IIIA
US6596757B1 (en) 2002-05-14 2003-07-22 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising polyethylene glycol-containing taxanes and their therapeutic use
US7538195B2 (en) 2002-06-14 2009-05-26 Immunogen Inc. Anti-IGF-I receptor antibody
EP3502133A1 (en) 2002-09-27 2019-06-26 Xencor, Inc. Optimized fc variants and methods for their generation
US7541440B2 (en) * 2002-09-30 2009-06-02 Immunomedics, Inc. Chimeric, human and humanized anti-granulocyte antibodies and methods of use
AU2003295411A1 (en) * 2002-11-07 2004-06-03 Celltech R & D Human monoclonal antibodies to heparanase
CA2504818C (en) 2002-11-07 2013-04-23 Immunogen, Inc. Anti-cd33 antibodies and method for treatment of acute myeloid leukemia using the same
US7276497B2 (en) * 2003-05-20 2007-10-02 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising new maytansinoids
WO2005014649A2 (en) * 2003-08-08 2005-02-17 Pharmacia Corporation Method for the preparation of molecules having antibody activity
US20050208627A1 (en) * 2003-09-18 2005-09-22 Bowdish Katherine S Elicitation of antibodies to self peptides in mice by immunization with dendritic cells
AU2004280066A1 (en) 2003-10-09 2005-04-21 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Genomically modified cell
ATE516288T1 (de) 2003-10-22 2011-07-15 Us Gov Health & Human Serv Pyrrolobenzodiazepinderivate, zusammensetzungen, die diese enthalten, und damit in zusammenhang stehende verfahren
WO2005056766A2 (en) * 2003-12-04 2005-06-23 Medimmune, Inc. TARGETED DRUG DELIVERY USING EphA2 OR Eph4 BINDING MOIETIES
ES2541489T3 (es) * 2004-02-06 2015-07-21 Morphosys Ag Anticuerpos humanos anti-CD38 y usos para ellos
EP1723152B1 (en) 2004-03-09 2015-02-11 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepines
EP2360186B1 (en) * 2004-04-13 2017-08-30 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-P-selectin antibodies
WO2005103081A2 (en) * 2004-04-20 2005-11-03 Genmab A/S Human monoclonal antibodies against cd20
AR049390A1 (es) * 2004-06-09 2006-07-26 Wyeth Corp Anticuerpos contra la interleuquina-13 humana y usos de los mismos
JP2008504029A (ja) * 2004-06-21 2008-02-14 ワシントン・ユニバーシティ 西ナイルウイルスに対する抗体ならびにその治療的および予防的使用
EP2471813B1 (en) 2004-07-15 2014-12-31 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
US7732131B2 (en) * 2004-08-03 2010-06-08 Innate Pharma S.A. Therapeutic and diagnostic methods and compositions targeting 4Ig-B7-H3 and its counterpart NK cell receptor
US20060223147A1 (en) 2004-08-05 2006-10-05 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd., Process for producing glycoprotein composition
WO2006047350A2 (en) 2004-10-21 2006-05-04 Xencor, Inc. IgG IMMUNOGLOBULIN VARIANTS WITH OPTIMIZED EFFECTOR FUNCTION
WO2006066171A1 (en) * 2004-12-15 2006-06-22 Neuralab Limited Amyloid βετα antibodies for use in improving cognition
AU2006214121B9 (en) * 2005-02-15 2013-02-14 Duke University Anti-CD19 antibodies and uses in oncology
CN107033243B (zh) * 2005-03-23 2020-12-15 根马布股份公司 用于治疗多发性骨髓瘤的cd38抗体
AU2006230413B8 (en) 2005-03-31 2011-01-20 Xencor, Inc Fc variants with optimized properties
US20090123950A1 (en) * 2005-05-24 2009-05-14 Morphosys Ag Generation And Profiling Of Fully Human Hucal Gold®-Derived Therapeutic Antibodies Specific For Human CD38
DE102005030112A1 (de) 2005-06-28 2007-01-18 Patent-Treuhand-Gesellschaft für elektrische Glühlampen mbH Lötzusatzwerkstoff
CA2624189A1 (en) 2005-10-03 2007-04-12 Xencor, Inc. Fc variants with optimized fc receptor binding properties
ATE527262T1 (de) 2006-01-25 2011-10-15 Sanofi Sa Neue tomaymycin derivate enhaltende zytotoxische mittel
EP1864682A1 (en) 2006-06-09 2007-12-12 Sanofi-Aventis Leptomycin derivatives
EP1914242A1 (en) * 2006-10-19 2008-04-23 Sanofi-Aventis Novel anti-CD38 antibodies for the treatment of cancer
NZ590330A (en) 2008-07-21 2012-08-31 Immunomedics Inc Structural variants of anti-cd20 antibodies for improved therapeutic characteristics
ES2617446T3 (es) * 2010-09-27 2017-06-19 Morphosys Ag Anticuerpo anti-cd38 y lenalidomida o bortezomib para el tratamiento del mieloma múltiple y nhl
JOP20210044A1 (ar) * 2010-12-30 2017-06-16 Takeda Pharmaceuticals Co الأجسام المضادة لـ cd38
SG11201401518TA (en) * 2011-10-28 2014-05-29 Teva Pharmaceuticals Australia Pty Ltd Polypeptide constructs and uses thereof
WO2013125861A1 (ko) 2012-02-20 2013-08-29 주식회사 노리코리아 지식 유닛에 기초하여 교육 서비스를 제공하기 위한 방법, 시스템 및 컴퓨터 판독 가능한 기록 매체
US10342869B2 (en) * 2012-12-07 2019-07-09 The Regents Of The University Of California Compositions comprising anti-CD38 antibodies and lenalidomide
WO2016040294A2 (en) * 2014-09-09 2016-03-17 Janssen Biotech, Inc. Combination therapies with anti-cd38 antibodies
NZ732753A (en) * 2014-12-04 2024-08-30 Janssen Biotech Inc Anti-cd38 antibodies for treatment of acute myeloid leukemia
WO2016111677A1 (en) * 2015-01-06 2016-07-14 Hewlett-Packard Development Company, L.P. Adapter to concatenate connectors
KR102602754B1 (ko) * 2015-05-20 2023-11-14 얀센 바이오테크 인코포레이티드 경쇄 아밀로이드증 및 다른 cd38-양성 혈액학적 악성종양을 치료하기 위한 항-cd38 항체
ES2890783T3 (es) * 2015-06-22 2022-01-24 Janssen Biotech Inc Terapias de combinación para enfermedades malignas hematológicas con anticuerpos anti-CD38 e inhibidores de survivina
US20170044265A1 (en) * 2015-06-24 2017-02-16 Janssen Biotech, Inc. Immune Modulation and Treatment of Solid Tumors with Antibodies that Specifically Bind CD38
CN108472369A (zh) * 2015-11-03 2018-08-31 詹森生物科技公司 抗cd38抗体的皮下制剂及其用途
US10781261B2 (en) * 2015-11-03 2020-09-22 Janssen Biotech, Inc. Subcutaneous formulations of anti-CD38 antibodies and their uses
MX2020004129A (es) * 2017-10-10 2020-08-20 Sanofi Sa Anticuerpos anti-cd38 y metodos de uso.
US11605302B2 (en) 2020-11-10 2023-03-14 Rockwell Collins, Inc. Time-critical obstacle avoidance path planning in uncertain environments

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