JP7251981B2 - 酵素開裂基を有する細胞毒性活性剤のプロドラッグ - Google Patents

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Description

緒言及び最新技術
本発明は、細胞毒性薬、例えばキネシン紡錘体タンパク質阻害剤が腫瘍関連プロテアーゼによって選択的に開裂することで薬剤を放出する基に結合している新規なプロドラッグ、並びに疾患の治療及び／又は予防のためのこれらのプロドラッグ又は複合体の使用、並びに疾患、特には過剰増殖性及び／又は血管新生性障害、例えばがんの治療及び／又は予防のための医薬の製造におけるこれらプロドラッグの使用に関するものである。そのような治療は、単独療法として、又は他の医薬若しくは別の治療手段と組み合わせて行うことができる。
がん細胞は非常の多くの場合、特定のプロテアーゼを正常細胞より高度に発現する。それが、有効成分放出の結果として、そのようなプロテアーゼによって脱離する基に薬剤が結合している、がん細胞に対する細胞毒性薬の選択性を高める手法につながった。
そのような腫瘍関連プロテアーゼはレグマインである。レグマインは、アスパラギニルエンドペプチダーゼ（Ｓ． Ｉｓｈｉｉ， Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ． １９９４， ２４４， ６０４； Ｊ． Ｍ． Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． １９９７， ２７２， ８０９０）であり、細胞毒性小分子、例えば特にドキソルビシンおよびエトポシド誘導体のプロドラッグの処理に利用されてきた（Ｗ． Ｗｕ ｅｔ ａｌ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ２００６， ６６， ９７０； Ｌ． Ｓｔｅｒｎ ｅｔ ａｌ． Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ． ２００９， ２０， ５００；Ｋ． Ｍ． Ｂａｊｊｕｒｉ ｅｔ ａｌ． ＣｈｅｍＭｅｄＣｈｅｍ ２０１１， ６， ５４）。
Ｓ． Ｉｓｈｉｉ， Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ． １９９４， ２４４， ６０４ Ｊ． Ｍ． Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． １９９７， ２７２， ８０９０ Ｗ． Ｗｕ ｅｔ ａｌ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ２００６， ６６， ９７０ Ｌ． Ｓｔｅｒｎ ｅｔ ａｌ． Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ． ２００９， ２０， ５００ Ｋ． Ｍ． Ｂａｊｊｕｒｉ ｅｔ ａｌ． ＣｈｅｍＭｅｄＣｈｅｍ ２０１１， ６， ５４
ＵＳ２０１５／０３４３０８３Ａ１には、式Ｒ－Ｙ－Ｚ－Ａｓｎ－リンカー－Ｄのレグマイン開裂性ペプチド－有効成分複合体（リンカーはｐ－アミノベンジルカルバモイル又はｐ－アミノベンジルカーボネートを表し、Ｒは各種化学基から選択される残基であり、Ｄは細胞毒性薬であり、Ａｓｎはアミノ酸であるアスパラギンを表し、ＹはＡｌａ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、Ａｒｇ、Ｐｒｏ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ及びＰｈｅから選択されるアミノ酸を表し、ＺはＡｌａ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ及びＰｒｏから選択されるアミノ酸を表し、これらのアミノ酸は常に天然のＬ配置である。）が記載されている。
本発明は、細胞毒性薬の腫瘍選択性の改善の問題に関するものである。この問題を解決するため、本発明は、細胞毒性薬分子のプロドラッグを提供する。この文脈では、有効成分分子は、酵素レグマインによって開裂可能な基に結合しており、有効成分及びレグマイン開裂性基が、共有結合を介して直接、又は自壊性リンカーを介して連結されている。これらのプロドラッグは好ましくは、腫瘍細胞の標的分子に結合した後、腫瘍細胞によって取り込まれ、細胞内で（好ましくはリソソームで）処理されるバインダーを含む。このバインダーは、両方の基（レグマイン開裂性基及びバインダー）が活性代謝物の形成のためには独立に処理しなければならないように、適宜にリンカーを介して有効成分分子に結合していることができるか、又は当該バインダーが、適宜にリンカーを介して酵素レグマインによって開裂可能な基に結合していることができる（レグマイン開裂性基の開裂後に、有効成分がバインダー又はそれの誘導体から離れて存在するように）。好ましい有効成分分子は、キネシン紡錘体タンパク質阻害剤（ＫＳＰ阻害剤）である。腫瘍細胞上の標的分子に結合した後に取り込まれ、細胞内で（好ましくはリソソームで）処理される好ましいバインダーは抗体である。特に好ましいものは、抗体及び有効成分がレグマイン開裂性基を有するリンカーを介して互いに連結されている抗体－有効成分複合体（ＡＤＣ類）である。さらに、好ましいものは、抗体がリンカーを介して抗体のプロドラッグに結合しており、有効成分の作用がレグマイン開裂性基によってマスクされているプロドラッグの抗体との複合体（ＡＰＤＣ類）である。本発明に従って使用されるレグマイン開裂性基は、構造Ｘ－Ｌ－Ａｓｎ又はＸ－Ｌ－Ａｓｐを有しており、ＸはＤ－Ａｌａ、Ｄ－Ｐｒｏ、Ｄ－Ｖａｌ、Ｄ－Ｎｖａ、Ｄ－Ｌｅｕ、Ｄ－Ｉｌｅ、Ｄ－Ｍｅｔ、Ｄ－Ｐｈｅ、Ｄ－Ｔｙｒ、Ｄ－Ｔｒｐ、Ｄ－Ｓｅｒ、Ｄ－Ｔｈｒ、Ｄ－Ｃｙｓ、Ｄ－Ａｓｎ、Ｄ－Ｇｌｎ、Ｄ－Ａｓｐ、Ｄ－Ｇｌｕ、Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－シトルリン又はＤ－Ｈｉｓ又は相当するＮ－アルキル化アミノ酸（Ｃ１－３アルキル化、好ましくはメチル化）を表し、２個以下のさらなるアミノ酸がＸへのＮ結合型で存在していることができる。この文脈において、レグマイン開裂性リンカーにおけるＤ－アミノ酸の導入によって、健常臓器のリソソームにおける安定性上昇が生じる（第Ｃ－１ｃ章に示されている）。好適な参考例との代表的な比較によって示されているように（第Ｃ－１ａ章）、リンカーにＤ－アミノ酸を有する本発明のＡＤＣ類及びＡＰＤＣ類は、高い抗腫瘍作用を有し、それは驚くべきことに、リンカーにおいて全てＬ配置を有するエピマーと比較して、仮にあったとしても劣ることはほとんどない（参考例Ｒ３、４、５及び９）（第Ｃ－１ａ章参照）。
本発明の薬剤Ｄのプロドラッグは、下記一般式Ｉａを有する。
Figure 0007251981000001
式中、
ｍは、０～２であり；
ｎは、０又は１であり；
Ｘは、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２又は－ＣＯＯＨであり、
Ｌａは、自壊性リンカーであり、
Ａ１は、アミノ酸Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリン及びＨｉｓのうちの一つ、又は個々のＮ－アルキルアミノ酸のうちの一つから誘導される基であり、
Ａ２は、アミノ酸Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ｐｒｏ、Ｄ－Ｖａｌ、Ｄ－Ｎｖａ、Ｄ－Ｌｅｕ、Ｄ－Ｉｌｅ、Ｄ－Ｍｅｔ、Ｄ－Ｐｈｅ、Ｄ－Ｔｙｒ、Ｄ－Ｔｒｐ、Ｄ－Ｓｅｒ、Ｄ－Ｔｈｒ、Ｄ－Ｃｙｓ、Ｄ－Ａｓｎ、Ｄ－Ｇｌｎ、Ｄ－Ａｓｐ、Ｄ－Ｇｌｕ、Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－シトルリン又はＤ－Ｈｉｓのうちの一つ、又は個々のＮ－アルキルアミノ酸のうちの一つから誘導される基であり、
Ｒ２は、－Ｈ－又はＣ１－Ｃ３－アルキルであり、
又は
Ｒ２は、Ａ２がＤ－Ｐｒｏから誘導される基である場合、プロリン環のメチレン基への結合であり、
Ｄは、－Ｄ１－（Ｌｂ）ｏ－（ＬＩＧ）ｐであり、
Ｄ１は、細胞毒性薬であり、
ＬＩＧは、腫瘍細胞の標的分子への結合後に、腫瘍細胞によって取り込まれ、細胞内で、好ましくはリソソームで処理されるバインダーであり、
Ｌｂは、リンカーであり、
ｏ及びｐはそれぞれ独立に、０又は１であり、
Ｒは、Ｚ１－（Ｃ＝Ｏ）ｑ－であり、
ｑは、０又は１であり、
Ｚ１は、Ｃ１－１０－アルキル、Ｃ５－１０－アリール又はＣ６－１０－アラルキル、Ｃ５－１０－ヘテロアルキル、Ｃ１－１０－アルキル－Ｏ－Ｃ６－１０－アリール、Ｃ５－１０－ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、Ｃ５－１０－ヘテロアリールアルコキシ、Ｃ１－１０－アルコキシ、Ｃ６－１０－アリールオキシ、Ｃ６－１０－アリール－Ｃ１－１０－アルキルオキシ又はＣ６－１０－アラルコキシ、Ｃ５－１０－ヘテロアルコキシ、Ｃ１－１０－アルキル－Ｏ－Ｃ６－１０－アリールオキシ－又はＣ５－１０－ヘテロシクロアルコキシ基であり、それは、－ＮＨ２、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＮＨ－アルキル、－Ｎ（アルキル）２、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－アルキル、－Ｎ（アルキル）－Ｃ（＝Ｏ）－アルキル、－Ｓ（＝Ｏ）３－Ｈ、－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨ２、－Ｓ（＝Ｏ）２－Ｎ（アルキル）２、－ＣＯＯＨ、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ（アルキル）２又は－ＯＨによってモノ置換又は多置換されていても良く、
又は－Ｈ若しくは－（ＣＨ２）０－１－Ｏｘ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｖ－Ｒ１基であり、
ｘは、０又は１であり、
ｖは、１～２０の数字であり、
Ｒ１は、－Ｈ、－アルキル、－ＣＨ２－ＣＯＯＨ、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＯＯＨ、又は－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ２であり、
または
Ｒは、ＬＩＧ－（Ｌｃ）ｒ－であり、
ＬＩＧは、腫瘍細胞上の標的分子に結合した後に、腫瘍細胞によって取り込まれ、細胞内で、好ましくはリソソームで処理されるバインダーであり、
Ｌｃは、リンカーであり、
ｒは、０又は１である。
この文脈において、アルキルと定義される場合のＲ１は、好ましくはＣ１－１２－アルキルである。
好ましくは、特定のＮ－アルキルアミノ酸のうちの一つから誘導されるＡ１及びＡ２で言及された基は、Ｃ１－Ｃ３－アルキル化アミノ酸、より好ましくはメチル化されたアミノ酸である。
好ましくは、バインダー（ＬＩＧ）は、抗体又は抗原結合性抗体である。その抗体は好ましくは、ヒト、ヒト化若しくはキメラモノクローナル抗体又はそれの抗原結合性断片、特別には抗ＴＷＥＡＫＲ抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗Ｂ７Ｈ３抗体若しくは抗ＨＥＲ２抗体又はそれの抗原結合性断片である。特に好ましいものは、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－７００６、ＴＰＰ－７００７、ＴＰＰ－１０３３６及びＴＰＰ－１０３３７、抗Ｂ７Ｈ３抗体ＴＰＰ－８３８２及びＴＰＰ－８５６７、抗ＥＧＦＲ－抗体セツキシマブ（ＴＰＰ－９８１）及び抗ＨＥＲ２－抗体トラスツズマブ及びＴＰＰ－１０１５、又はこれらの抗原結合性断片である。
非グリコシル化抗体のトランスグルタミナーゼ触媒結合部位特異的官能化の戦略を示す図である。 例えばＮａｔ． Ｃｏｍｍｕｎ．， ２０１３， ４， ２７３５によるヒストンデアセチラーゼ及びカテプシンＬによる薬物放出の連続的酵素段階の例を示す図である。 バインダー－薬物複合体に好ましい抗体の注釈付き配列を示す図である［示されているものは、ＩｇＧの重鎖及び軽鎖、並びにこれらの抗体のＶＨ及びＶＬ領域のタンパク質配列である。配列の下に、重要な領域について注釈を付けてある（ＩｇＧにおけるＶＨ及びＶＬ領域、並びにＣＤＲ領域（Ｈ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、Ｈ－ＣＤＲ３、Ｌ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３））。］ バインダー－薬物複合体に好ましい抗体の配列及び標的タンパク質の配列の配列表である。
最初に、下記で、本発明に従って使用可能なレグマイン開裂性基、並びに自壊性リンカーを介して互いに連結されていても良い細胞毒性薬Ｄについて説明する。その次に、腫瘍細胞の標的分子への結合後に、腫瘍細胞によって取り込まれ、細胞内で（好ましくはリソソームで）処理される、本発明によって好ましいバインダーＬＩＧについて説明する。本発明による化合物の各種要素は、制限なくあらゆる所望の組み合わせで用いることができる。特に、各場合で好ましい又は特に好ましいと記載されている薬物Ｄを、各場合で好ましい又は特に好ましいと記載されているバインダーＬＩＧと組み合わせて、適宜に各場合で好ましい又は特に好ましいと記載されているリンカーと組み合わせて用いることができる。
レグマイン開裂性基
一般式（Ｉａ）の本発明の化合物は、下記式（Ｉａ′）のレグマイン開裂性基を有する。
Figure 0007251981000002
式中、
ｍは、０～２の数字であり、
ｎは、０又は１であり、
Ｘは、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２又は－ＣＯＯＨであり、
Ｌａは、自壊性リンカーであり、
Ａ１は、アミノ酸Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリン及びＨｉｓのうちの一つ、又は個々のＮ－アルキルアミノ酸のうちの一つから誘導される基であり；
Ａ２は、Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ｐｒｏ、Ｄ－Ｖａｌ、Ｄ－Ｎｖａ、Ｄ－Ｌｅｕ、Ｄ－Ｉｌｅ、Ｄ－Ｍｅｔ、Ｄ－Ｐｈｅ、Ｄ－Ｔｙｒ、Ｄ－Ｔｒｐ、Ｄ－Ｓｅｒ、Ｄ－Ｔｈｒ、Ｄ－Ｃｙｓ、Ｄ－Ａｓｎ、Ｄ－Ｇｌｎ、Ｄ－Ａｓｐ、Ｄ－Ｇｌｕ、Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－シトルリン又はＤ－Ｈｉｓのうちの一つアミノ酸、又は個々のＮ－アルキルアミノ酸のうちの一つから誘導される基であり；
Ｒ２は、－Ｈ－又はＣ１－Ｃ３－アルキルであり、
又は
Ｒ２は、Ａ２がＤ－Ｐｒｏから誘導される基である場合、プロリン環のメチレン基への結合であり、
Ｒは、Ｚ１－（Ｃ＝Ｏ）ｑ－であり、
ｑは、０又は１であり、
Ｚ１は、Ｃ１－１０－アルキル、Ｃ５－１０－アリール又はＣ６－１０－アラルキル、Ｃ５－１０－ヘテロアルキル、Ｃ１－１０－アルキル－Ｏ－Ｃ６－１０－アリール、Ｃ５－１０－ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、Ｃ５－１０－ヘテロアリールアルコキシ、Ｃ１－１０－アルコキシ、Ｃ６－１０－アリールオキシ、Ｃ６－１０－アリール－Ｃ１－１０－アルキルオキシ又はＣ６－１０－アラルコキシ、Ｃ５－１０－ヘテロアルコキシ、Ｃ１－１０－アルキル－Ｏ－Ｃ６－１０－アリールオキシ－又はＣ５－１０－ヘテロシクロアルコキシ基であり、それは、－ＮＨ２、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＮＨ－アルキル、－Ｎ（アルキル）２、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－アルキル、－Ｎ（アルキル）－Ｃ（＝Ｏ）－アルキル、－Ｓ（＝Ｏ）３－Ｈ、－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨ２、－Ｓ（＝Ｏ）２－Ｎ（アルキル）２、－ＣＯＯＨ、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ（アルキル）２又は－ＯＨによってモノ置換又は多置換されていても良く、
又は－Ｈ若しくは－（ＣＨ２）０－１－Ｏｘ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｖ－Ｒ１基であり、
ｘは、０又は１であり、
ｖは、１～２０の数字であり、
Ｒ１は、－Ｈ、－アルキル、－ＣＨ２－ＣＯＯＨ、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＯＯＨ、又は－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ２であり、
又は
Ｒは、ＬＩＧ－（Ｌｃ）ｒ－であり、
ＬＩＧは、腫瘍細胞の標的分子への結合後に、腫瘍細胞によって取り込まれ及び細胞内で、好ましくはリソソームで処理されるバインダーであり、
Ｌｃは、リンカーであり、
ｒは、０又は１であり、
＃１は、細胞毒性薬への結合を表す。
この文脈において、アルキルと定義される場合のＲ１は好ましくはＣ１－１２－アルキルであり、ｍは好ましくは１である。
ＲがＺ１－（Ｃ（＝Ｏ））ｑ－である場合、式Ｉａ′のレグマイン開裂性基は、レグマイン開裂性ヘッド基とも称される。
ＲがＬＩＧ－（Ｌｃ）ｒ－である場合、式Ｉａ′のレグマイン開裂性基は、レグマイン開裂性リンカーとも称される。
式Ｉａ′のレグマイン開裂性基がレグマイン開裂性ヘッド基を指す場合、ｑは好ましくは１である。
レグマイン開裂性ヘッド基は、作用に重要である薬物（好ましくはＫＳＰ阻害剤）のアミノ基を生物可逆的に遮断する基を意味するものと理解される。
Ｘは好ましくは－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２である。
Ａ２は好ましくは、アミノ酸Ｄ－Ａｌａ及びＤ－Ｐｒｏのうちの一つから誘導される基である。
好ましいものはさらに、Ｄ－Ａｓｐ、Ｄ－Ａｓｎ、Ｄ－Ｈｉｓ及びＤ－Ｓｅｒから誘導される基である。
Ａ２がアミノ酸Ｄ－Ａｌａ及びＤ－Ｐｒｏのうちの一つから誘導される基である場合、一般式（Ｉａ′）のレグマイン開裂性基は、下記の一般式（Ｉａ″）及び（Ｉａ″′）を有する。
Figure 0007251981000003
一般式（Ｉａ′）におけるＡ２がＤ－プロリンではない場合、Ｒ２は好ましくは－Ｈ又はメチル基、より好ましくは－Ｈである。
式Ｉａ′のレグマイン開裂性基において、アミノ酸残基Ａ１はＬ配置又はＤ配置のいずれかであることができる。Ａ１は好ましくは、Ａｌａ又はＶａｌから誘導される。
好ましいものは、Ｌ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ又はＬ－Ｖａｌである。
特に好ましいものは、Ｌ－Ａｌａである。
レグマイン開裂性保護基において、ｑは好ましくは１である。
Ｚ１は好ましくはＣ１－１０－アルキル、Ｃ６－１０－アラルキル、Ｃ５－１０－ヘテロアリールアルキル、Ｃ６－１０－アラルコキシ、Ｃ６－１０－アリール－Ｃ１－１０－アルキルオキシ又はＣ５－１０－ヘテロアリールアルコキシ基又は－（ＣＨ２）０－１－Ｏｘ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｖ－Ｒ１基であり、ｘ、ｖ及びＲ１は上記で提供の定義を有する。
「アミノ酸のうちの一つから誘導される基」は、化学において通常のように、アミノ酸の側基を指す。すなわち、アラニンの場合の－ＣＨ３などである。
自壊性リンカーＬａ
遊離薬物の効率的放出を確実に行うため、酵素的開裂部位と薬物との間に自壊性リンカー要素（Ｌａ）と呼ばれるものを組み込んでも良い（Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ａｇｅｎｔｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ２００８， ８， ６１８－６３７）。薬物は、各種機序によって放出され得るもので、例えば最初に求核基を酵素的に放出してから、次に電子カスケードを介した脱離によって（Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．， １９９９， ７， １５９７； Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．， ２００２， ４５， ９３７； Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．， ２００２， １０， ７１）、又は相当するリンカー要素の環化によって（Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．， ２００３， １１， ２２７７； Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．， ２００７， １５， ４９７３； Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． Ｌｅｔｔ．， ２００７， １７， ２２４１）、又はそれら二つの組み合わせによって（Ａｎｇｅｗ． Ｃｈｅｍ． Ｉｎｔｅｒ． Ｅｄ．， ２００５， ４４， ４３７８）放出される。そのようなリンカー要素の例を下記の図に示している。
Figure 0007251981000004
本発明によれば、Ｌａとして下記の基のうちの一つが好ましいものである。
Figure 0007251981000005
式中、＃１はカルボニル基への結合を表し、＃２はＤ１のヒドロキシル若しくはアミノ基への結合を表す。
細胞毒性薬
式Ｉａの本発明の化合物において、Ｄは、－Ｄ１－（Ｌｂ）ｏ－（ＬＩＧ）ｐ基であり、
Ｄ１は、細胞毒性薬であり、
ＬＩＧは、腫瘍細胞の標的分子への結合後に、腫瘍細胞によって取り込まれ、細胞内で、好ましくはリソソームで処理されるバインダーを表し、
Ｌｂは、リンカーを表し、
ｏ及びｐは独立に、０又は１である。
使用される細胞毒性薬は、好ましくはマイトマイシン、ドキソルビシン、アミノプテリン、アクチノマイシン、ブレオマイシン、９－アミノカンプトセシン、ｎ８－アセチルスペルミジン、１－（２－クロロエチル）－１，２－ジメタンスルホニルヒドラジド、タリソマイシン、シタラビン、エトポシド、カンプトセシン、タキソール、エスペラミシン、ポドフィロトキシン、アングイジン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、モルホリン－ドキソルビシン、ｎ－（５，５－ジアセトキシペンチル）ドキソルビシン、デュオカルマイシン、オーリスタチン、ピロロベンゾジアゼピン誘導体、インドリノベンゾジアゼピン（ＩＧＮ）誘導体及びモノ－イミン－ＩＧＮ誘導体、カリケアマイシン、ダウノルビシン、カンプトテシンＤＸ８９５１（エキサテカン）又はキネシン紡錘体タンパク質阻害剤（ＫＳＰ阻害剤）であり、その薬物は、一般式（Ｉａ）に従ってそれのヒドロキシル又はアミノ基を介してＬａ（ｎ＝１の場合）又はカルボニル基（ｎ＝０の場合）に結合している。これら薬物の相当する誘導体化は、公知の方法に基づくものであることができる（例えば、デュオカルマイシンに関してはＳｙｎｔｈｅｓｉｓ， １９９９， １５０５、カンプトセシンに関してはＮａｔ． Ｓｔｒｕｃｔ． Ｂｉｏｌ．， ２００２， ９， ３３７， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．， ２０１０， ５３（３）， １０４３、オーリスタチンに関してはＣｈｅｍＭｅｄＣｈｅｍ，． ２０１１， ６（１）， ５４、ドキソルビシンに関してはＭｏｌ． Ｃａｎｃｅｒ． Ｔｈｅｒ．， ２００５， ４， ７５１、及びピロロベンゾジアゼピン誘導体（ＰＢＤ誘導体）に関してはＪ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ， ２００８， ２８３， ９３１８を参照し；さらに、Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ ２０１３， ５６， ７５６４及び緒言におけるさらなる参考文献、Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． ２００１， ４４， １３４１、Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｒｅｐｏｒｔｓ ２０１１， ２６， ６２９も参照する。）
特に好ましいものは、効力に必須である遊離ヒドロキシル若しくはアミノ基を有する細胞毒性薬、特別には、効力に必須である遊離アミノ基を有するものである。そのような基へのレグマイン開裂性基のカップリングは、細胞毒性薬の効力をマスクすることができる。この薬物の群には、例えば、下記式を有するドキソルビシンなどがある。
Figure 0007251981000006
ドキソルビシンの遊離アミノ基へのレグマイン開裂性基の結合によって、それの効力をマスクすることができる。
本発明に従って好ましいさらなる細胞毒性薬は、ＷＯ２０１５／０９６９８２に開示のキネシン紡錘体タンパク質阻害剤である。特別に好ましいものは、下記式ＩＩのキネシン紡錘体タンパク質阻害剤並びにそれの塩、溶媒和物及び溶媒和物の塩である。
Figure 0007251981000007
式中、
Ｘ１はＮであり、
Ｘ２はＮであり、及び
Ｘ３はＣであり；
又は
Ｘ１はＮであり、
Ｘ２はＣであり、及び
Ｘ３はＮであり；
又は
Ｘ１はＣＨ又はＣＦであり、
Ｘ２はＣであり、及び
Ｘ３はＮであり；
又は
Ｘ１はＮＨであり、
Ｘ２はＣであり、及び
Ｘ３はＣであり；
又は
Ｘ１はＣＨであり、
Ｘ２はＮであり、及び
Ｘ３はＣである。
Ｒ１は、－Ｈ、－Ｌ－＃１、－ＭＯＤ又は－（ＣＨ２）０－３Ｚであり、
Ｚは、－Ｈ、－ＮＨＹ３、－ＯＹ３、－ＳＹ３、ハロゲン、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＹ１Ｙ２、又は－Ｃ（＝Ｏ）－ＯＹ３であり、
Ｙ１及びＹ２は独立に、－Ｈ、－ＮＨ２－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０－３－（ＣＨ２）０－３Ｚ′又は－ＣＨ（ＣＨ２Ｗ）Ｚ′であり、
Ｙ３は、－Ｈ又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ′であり、
Ｚ′は、－Ｈ、－ＮＨ２、－Ｓ（＝Ｏ）３Ｈ、－ＣＯＯＨ、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ（ＮＨ２）－ＣＯＯＨ又は－（Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨＹ４）１－３－ＣＯＯＨであり；
Ｗは、－Ｈ又は－ＯＨであり、
Ｙ４は、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖若しくは分岐のＣ１－６アルキル－であるか、－ＮＨ２にによって置換されていても良アリール又はベンジルであり、
Ｒ２は、－Ｌ－＃１、－Ｈ、－ＭＯＤ、－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨＹ４－ＮＨＹ５又は－（ＣＨ２）０－３Ｚであり、
Ｚは、－Ｈ、ハロゲン、－ＯＹ３、－ＳＹ３、－ＮＨＹ３、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＹ１Ｙ２又は－Ｃ（＝Ｏ）－ＯＹ３であり、
Ｙ１及びＹ２は独立に、－Ｈ、－ＮＨ２、又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ′であり、
Ｙ３は、－Ｈ又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ′であり、
Ｚ′は、－Ｈ、－Ｓ（＝Ｏ）３Ｈ、－ＮＨ２又は－ＣＯＯＨであり；
Ｙ４は、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖若しくは分岐のＣ１－６アルキル－であるか、－ＮＨ２によって置換されていても良いアリール又はベンジルであり、
Ｙ５は、－Ｈ又は－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨＹ６－ＮＨ２であり、
Ｙ６は、直鎖若しくは分岐のＣ１－６－アルキルであり；
Ａは、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｓ（＝Ｏ）－、－Ｓ（＝Ｏ）２－、又は－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨ－であり、
Ｒ３は、－Ｌ－＃１、－ＭＯＤ、又は置換されていても良いアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル基であり、それらは１～３個のＯＨ基、１～３個のハロゲン原子、１～３個のモノ－、ジ－若しくはトリハロゲン化アルキル基、１～３個の－Ｏ－アルキル基、１～３個の－ＳＨ基、１～３個の－Ｓ－アルキル基、１～３個の－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－アルキル基、１～３個の－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－アルキル基、１～３個の－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－Ｓ（＝Ｏ）ｎ－アルキル基、１～３個の－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－Ｎ（アルキル）２基、１～３個のＮＨ２基又は１～３個の－（ＣＨ２）０－３Ｚ基によって置換されていても良く、
ｎは、０、１又は２であり、
Ｚは、－Ｈ、ハロゲン、－ＯＹ３、－ＳＹ３、－ＮＨＹ３、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＹ１Ｙ２、又は－Ｃ（＝Ｏ）－ＯＹ３であり、
Ｙ１及びＹ２は独立に、－Ｈ、－ＮＨ２、又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ′であり、
Ｙ３は、－Ｈ、－（ＣＨ２）０－３－ＣＨ－（ＮＨＣ（＝ＯＣＨ３）Ｚ′、－（ＣＨ２）０－３－ＣＨ（ＮＨ２）Ｚ′又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ′であり、
Ｚ′は、－Ｈ、－Ｓ（＝Ｏ）３Ｈ、－ＮＨ２又は－ＣＯＯＨであり、
Ｒ５は、－Ｈ、－ＮＨ２、－ＮＯ２、ハロゲン、－ＣＮ、－ＣＦ３、－ＯＣＦ３、－ＣＨ２Ｆ、－ＣＨ２Ｆ、－ＳＨ又は－（ＣＨ２）０－３Ｚであり、
Ｚは、－Ｈ、－ＯＹ３、－ＳＹ３、ハロゲン、－ＮＨＹ３、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＹ１Ｙ２又は－Ｃ（＝Ｏ）－ＯＹ３であり、
Ｙ１及びＹ２は独立に、－Ｈ、－ＮＨ２、又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ′であり、
Ｙ３は、－Ｈ又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ′であり、
Ｚ′は、－Ｈ、－Ｓ（＝Ｏ）３Ｈ、－ＮＨ２又は－ＣＯＯＨであり、
Ｒ６及びＲ７は独立に、－Ｈ、－ＣＮ、Ｃ１－１０－アルキル、フルオロ－Ｃ１－１０－アルキル、Ｃ２－１０－アルケニル、フルオロ－Ｃ２－１０－アルケニル、Ｃ２－１０－アルキニル、フルオロ－Ｃ２－１０－アルキニル、ヒドロキシル、－ＮＯ２、－ＮＨ２、－ＣＯＯＨ又はハロゲンであり、
Ｒ８は、Ｃ１－１０－アルキル、フルオロ－Ｃ１－１０－アルキル、Ｃ２－１０－アルケニル、フルオロ－Ｃ２－１０－アルケニル、Ｃ２－１０－アルキニル、フルオロ－Ｃ２－１０－アルキニル、Ｃ４－１０－シクロアルキル、フルオロ－Ｃ４－１０－シクロアルキル又は－（ＣＨ２）０－２－（ＨＺ２）であり、
ＨＺ２は、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される２個以下のヘテロ原子を有する４～７員の複素環であり、それは－ＯＨ、－ＣＯＯＨ、－ＮＨ２又は－Ｌ－＃１によって置換されていても良く、
Ｒ９は、－Ｈ、－Ｆ、－ＣＨ３、－ＣＦ３、－ＣＨ２Ｆ又は－ＣＨＦ２であり、
－Ｌ－＃１は、－（Ｌｂ）ｏ－（ＬＩＧ）ｐであり、
ＬＩＧは、腫瘍細胞の標的分子への結合後に、腫瘍細胞によって取り込まれ、細胞内で、好ましくはリソソームで処理されるバインダーであり、
Ｌｂは、リンカーであり、
ｏ及びｐは独立に、０又は１であり、
－ＭＯＤは、－（ＮＲ１０）ｎ－（Ｇ１）ｏ－Ｇ２－Ｇ３であり、
Ｒ１０は、－Ｈ又はＣ１－Ｃ３－アルキルであり、
Ｇ１は、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－又は
Figure 0007251981000008
であり、
ｎは０又は１であり、
ｏは０又は１であり、
Ｇ２は、直鎖若しくは分岐の炭化水素鎖であり、それは１～２０個の炭素原子を有し、基－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓ（＝Ｏ）－、－Ｓ（＝Ｏ）２－、－ＮＲｙ－、－ＮＲｙＣ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲｙ－、－ＮＲｙＮＲｙ－、－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＲｙＮＲｙ－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲｙＮＲｙ－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＣＲｘ＝Ｎ－Ｏの１以上によって１回又は複数回中断されていても良く、前記直鎖若しくは分岐の炭化水素鎖は、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２、－ＣＯＯＨ、－ＯＨ、－ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシド、又はスルホン酸によって置換されていても良く、
Ｇ３は、－Ｈ又は－ＣＯＯＨであり、
Ｒｙは、－Ｈ、フェニル、Ｃ１－Ｃ１０－アルキル、Ｃ２－Ｃ１０－アルケニル、又はＣ２－Ｃ１０－アルキニルであり、それらのそれぞれは－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２、－ＣＯＯＨ、－ＯＨ、－ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシド、又はスルホン酸によって置換されていても良く、
Ｒｘは、－Ｈ、Ｃ１－Ｃ３－アルキル又はフェニルである。
好ましいものは、
Ｒ３は、－Ｌ－＃１、又はＣ１－１０－アルキル、Ｃ６－１０－アリール又はＣ６－１０－アラルキル、Ｃ５－１０－ヘテロアルキル、Ｃ１－１０－アルキル－Ｏ－Ｃ６－１０－アリール又はＣ５－１０－ヘテロシクロアルキル基であり、それらは１～３個のＯＨ基、１～３個のハロゲン原子、１～３個のモノ－、ジ－若しくはトリハロゲン化アルキル基、１～３個の－Ｏ－アルキル基、１～３個の－ＳＨ基、１～３個の－Ｓ－アルキル基、１～３個の－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－アルキル基、１～３個の－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－アルキル基、１～３個の－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－Ｓ（＝Ｏ）ｎ－アルキル基、１～３個の－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－Ｎ（アルキル）２基、１～３個のＮＨ２基又は１～３個の－（ＣＨ２）０－３Ｚ基によって置換されていても良く、
－ＭＯＤは、少なくとも１個の－ＣＯＯＨ基を有する。
好ましいものは、
Ｘ１がＣＨであり、
Ｘ２がＣであり、及び
Ｘ３がＮである化合物である。
式ＩＩの化合物の遊離アミノ基へのレグマイン開裂性基の結合によって、それの効力をマスクすることができる。
本発明に従って使用されるこれらのキネシン紡錘体タンパク質阻害剤は、その効果に必須であるアミノ基を有する。このアミノ基をペプチド誘導体で修飾することで、キネシン紡錘体タンパク質に関する効果が遮断されることで、細胞毒性効果の発達も阻害される。しかしながら、このペプチド残基がレグマインなどの腫瘍関連酵素によって放出することができる場合、腫瘍組織において制御された形で、その効果を再生することができる。
定義
「置換された」という用語は、指定の原子もしくは指定の基上の１以上の水素が、言及されている基からの選択によって置き換わっていることを意味するが、ただし、所定の状況下で、対象の原子の通常の価数を超えるものではない。置換基および／または可変要素の組み合わせが許容される。
「置換されていても良い」という用語は、置換基の数がゼロに等しいかゼロ以外であることができることを意味する。別段の断りがない限り、置換されていても良い基は、いずれか利用可能な炭素もしくは窒素もしくは硫黄原子で水素原子に代えて非水素置換基とすることで収容できるだけの数の適宜の置換基によって置換されていても良い。通常、適宜の置換基（存在する場合）の数は、１、２、３、４または５、特別には１、２または３であることができる。
本明細書で使用される場合、「モノ－または多－」という表現は、例えば本発明の一般式の化合物の置換基の定義において「１、２、３、４または５、好ましくは１、２、３または４、より好ましくは１、２または３、最も好ましくは１または２」を意味する。
本発明による化合物における基が置換されている場合、その基は、別段の断りがない限り、モノ置換または多置換されていることができる。本発明の保護の範囲内において、複数ある全ての基の定義は、互いに独立である。１個、２個もしくは３個の同一もしくは異なる置換基による置換が好ましい。１個の置換基による置換が特に好ましい。
アルキル
アルキルは、１から１０個の炭素原子（Ｃ１－Ｃ１０－アルキル）、通常は１から６（Ｃ１－Ｃ６－アルキル）、好ましくは１から４（Ｃ１－Ｃ４－アルキル）およびより好ましくは１から３個の炭素原子（Ｃ１－Ｃ３－アルキル）を有する直鎖もしくは分岐の飽和１価炭化水素基である。
好ましい例には、メチル－、エチル－、プロピル－、ブチル－、ペンチル－、ヘキシル－、イソプロピル－、イソブチル－、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル－、イソペンチル－、２－メチルブチル－、１－メチルブチル－、１－エチルプロピル－、１，２－ジメチルプロピル－、ネオペンチル－、１，１－ジメチルプロピル－、４－メチルペンチル－、３－メチルペンチル－、２－メチルペンチル－、１－メチルペンチル－、２－エチルブチル－、１－エチルブチル－、３，３－ジメチルブチル－、２，２－ジメチルブチル－、１，１－ジメチルブチル－、２，３－ジメチルブチル－、１，３－ジメチルブチル－、１，２－ジメチルブチル－などがある。
特に好ましいものは、メチル－、エチル－、プロピル－、イソプロピル－またはｔｅｒｔ－ブチル基である。
ヘテロアルキル
ヘテロアルキルは、１から１０個の炭素原子を有する直鎖および／または分岐の炭化水素鎖であって、基－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｓ（＝Ｏ）－、－Ｓ（＝Ｏ）２－、－ＮＲｙ－、－ＮＲｙＣ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲｙ－、－ＮＲｙＮＲｙ－、－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＲｙＮＲｙ－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲｙＮＲｙ－、－ＣＲｘ＝Ｎ－Ｏ－のうちの１以上によって１回または複数回中断されていても良く、側鎖を含む前記炭化水素鎖がある場合、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２、－ＣＯＯＨ、－ＯＨ、－ＮＨ２、－ＮＨ－Ｃ（＝ＮＮＨ２）－、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い炭化水素鎖である。
この文脈で、Ｒｙは各場合で、－Ｈ、フェニル－、Ｃ１－Ｃ１０－アルキル－、Ｃ２－Ｃ１０－アルケニル－またはＣ２－Ｃ１０－アルキニル－であり、それは、次に、各場合で、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２、－ＣＯＯＨ、－ＯＨ、－ＮＨ２、－ＮＨ－Ｃ（＝ＮＮＨ２）－、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。
この文脈で、Ｒｘは－Ｈ、Ｃ１－Ｃ３－アルキル－またはフェニル－である。
アルケニル
アルケニルは、１個もしくは２個の二重結合および２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の炭素原子（Ｃ２－Ｃ１０－アルケニル）、特別には２もしくは３個の炭素原子（Ｃ２－Ｃ３－アルケニル）を有する直鎖もしくは分岐の１価炭化水素鎖であり、明らかなように、アルケニル基が複数の二重結合を含む場合、それらの二重結合は、互いに離れているか、互いに共役していることができる。アルケニル基は、例えば、エテニル（またはビニル）、プロパ－２－エン－１－イル（または「アリル」）、プロパ－１－エン－１－イル、ブタ－３－エニル、ブタ－２－エニル、ブタ－１－エニル、ペンタ－４－エニル、ペンタ－３－エニル、ペンタ－２－エニル、ペンタ－１－エニル、ヘキサ－５－エニル、ヘキサ－４－エニル、ヘキサ－３－エニル、ヘキサ－２－エニル、ヘキサ－１－エニル、プロパ－１－エン－２－イル（または「イソプロペニル」）、２－メチルプロパ－２－エニル、１－メチルプロパ－２－エニル、２－メチルプロパ－１－エニル、１－メチルプロパ－１－エニル、３－メチルブタ－３－エニル、２－メチルブタ－３－エニル、１－メチルブタ－３－エニル、３－メチルブタ－２－エニル、２－メチルブタ－２－エニル、１－メチルブタ－２－エニル、３－メチルブタ－１－エニル、２－メチルブタ－１－エニル、１－メチルブタ－１－エニル、１，１－ジメチルプロパ－２－エニル、１－エチルプロパ－１－エニル、１－プロピルビニル、１－イソプロピルビニル、４－メチルペンタ－４－エニル、３－メチルペンタ－４－エニル、２－メチルペンタ－４－エニル、１－メチルペンタ－４－エニル、４－メチルペンタ－３－エニル、３－メチルペンタ－３－エニル、２－メチルペンタ－３－エニル、１－メチルペンタ－３－エニル、４－メチルペンタ－２－エニル、３－メチルペンタ－２－エニル、２－メチルペンタ－２－エニル、１－メチルペンタ－２－エニル、４－メチルペンタ－１－エニル、３－メチルペンタ－１－エニル、２－メチルペンタ－１－エニル、１－メチルペンタ－１－エニル、３－エチルブタ－３－エニル、２－エチルブタ－３－エニル、１－エチルブタ－３－エニル、３－エチルブタ－２－エニル、２－エチルブタ－２－エニル、１－エチルブタ－２－エニル、３－エチルブタ－１－エニル、２－エチルブタ－１－エニル、１－エチルブタ－１－エニル、２－プロピルプロパ－２－エニル、１－プロピルプロパ－２－エニル、２－イソプロピルプロパ－２－エニル、１－イソプロピルプロパ－２－エニル、２－プロピルプロパ－１－エニル、１－プロピルプロパ－１－エニル、２－イソプロピルプロパ－１－エニル、１－イソプロピルプロパ－１－エニル、３，３－ジメチルプロパ－１－エニル、１－（１，１－ジメチルエチル）エテニル、ブタ－１，３－ジエニル、ペンタ－１，４－ジエニルまたはヘキサ－１－５－ジエニル基である。詳細には、その基はビニルまたはアリルである。
アルキニル
アルキニルは１個の三重結合を有し、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の炭素原子（Ｃ２－Ｃ１０－アルキニル）、特別には２もしくは３個の炭素原子（Ｃ２－Ｃ３－アルキニル）を有する直鎖もしくは分岐の１価炭化水素鎖である。Ｃ２－Ｃ６－アルキニル基は、例えば、エチニル、プロパ－１－イニル、プロパ－２－イニル（またはプロパルギル）、ブタ－１－イニル、ブタ－２－イニル、ブタ－３－イニル、ペンタ－１－イニル、ペンタ－２－イニル、ペンタ－３－イニル、ペンタ－４－イニル、ヘキサ－１－イニル、ヘキサ－２－イニル、ヘキサ－３－イニル、ヘキサ－４－イニル、ヘキサ－５－イニル、１－メチルプロパ－２－イニル、２－メチルブタ－３－イニル、１－メチルブタ－３－イニル、１－メチルブタ－２－イニル、３－メチルブタ－１－イニル、１－エチルプロパ－２－イニル、３－メチルペンタ－４－イニル、２－メチルペンタ－４－イニル、１－メチルペンタ－４－イニル、２－メチルペンタ－３－イニル、１－メチルペンタ－３－イニル、４－メチルペンタ－２－イニル、１－メチルペンタ－２－イニル、４－メチルペンタ－１－イニル、３－メチルペンタ－１－イニル、２－エチルブタ－３－イニル、１－エチルブタ－３－イニル、１－エチルブタ－２－イニル、１－プロピルプロパ－２－イニル、１－イソプロピルプロパ－２－イニル、２，２－ジメチルブタ－３－イニル、１，１－ジメチルブタ－３－イニル、１，１－ジメチルブタ－２－イニル－または３，３－ジメチルブタ－１－イニル基である。詳細には、アルキル基はエチニル、プロパ－１－イニルまたはプロパ－２－イニルである。
シクロアルキル
シクロアルキルは、３～１２個の炭素原子を有する飽和の１価単環式もしくは二環式ヒドロカルビル基（Ｃ３－Ｃ１２－シクロアルキル）である。
この文脈において、単環式ヒドロカルビル基は、通常は３～１０個（Ｃ３－Ｃ１０－シクロアルキル）、好ましくは３～８個（Ｃ３－Ｃ８－シクロアルキル）、より好ましくは３～７個（Ｃ３－Ｃ７－シクロアルキル）の炭素原子を有する１価ヒドロカルビル基である。
単環式ヒドロカルビル基の好ましい例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルおよびシクロオクチルなどがある。
特に好ましいものは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルおよびシクロヘプチルである。
この文脈において、二環式ヒドロカルビル基は、２個の直接隣接する原子を一緒に共有する二つの飽和環系の縮合を意味するものと理解されるべき、通常は３から１２個の炭素原子を有するヒドロカルビル基（Ｃ３－Ｃ１２－シクロアルキル）である。二環式ヒドロカルビル基の好ましい例には、ビシクロ［２．２．０］ヘキシル、ビシクロ［３．３．０］オクチル、ビシクロ［４．４．０］デシル、ビシクロ［５．４．０］ウンデシル、ビシクロ［３．２．０］ヘプチル、ビシクロ［４．２．０］オクチル、ビシクロ［５．２．０］ノニル、ビシクロ［６．２．０］デシル、ビシクロ［４．３．０］ノニル、ビシクロ［５．３．０］デシル、ビシクロ［６．３．０］ウンデシル及びビシクロ［５．４．０］ウンデシルなどがある。
ヘテロシクロアルキル
ヘテロシクロアルキルは、同一であるか異なっていることができる１個、２個、３個もしくは４個のヘテロ原子を有する非芳香族単環式もしくは二環式環系である。そのヘテロ原子は、窒素原子、酸素原子または硫黄原子であることができる。
本発明による単環式環系は、３～８個、好ましくは４～７個、より好ましくは５個もしくは６個の環原子を有することができる。
９
３個の環原子を有するヘテロシクロアルキルの好ましい例には、アジリジニルなどがある。
４個の環原子を有するヘテロシクロアルキルの好ましい例には、アゼチジニル、オキセタニルなどがある。
５個の環原子を有するヘテロシクロアルキルの好ましい例には、ピロリジニル、イミダゾリジニル、ピラゾリジニル、ピロリニル、ジオキソラニルおよびテトラヒドロフラニルなどがある。
６個の環原子を有するヘテロシクロアルキルの好ましい例には、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホニル、ジオキサニル、テトラヒドロピラニルおよびチオモルホニルなどがある。
７個の環原子を有するヘテロシクロアルキルの好ましい例には、アゼパニル、オキセパニル、１，３－ジアゼパニル、１，４－ジアゼパニルなどがある。
８個の環原子を有するヘテロシクロアルキルの好ましい例には、オキソカニル、アゾカニルなどがある。
単環式ヘテロシクロアルキルの中で、好ましいものは、Ｏ、ＮおよびＳの群からの２個以下のヘテロ原子を有する４～７員の飽和複素環基である。
特に好ましいものは、モルホニル、ピペリジニル、ピロリジニルおよびテトラヒドロフラニルである。
同一であっても異なっていても良い１個、２個、３個もしくは４個のヘテロ原子を有する二環式環系は、本発明によれば、６～１２個、好ましくは６～１０個の環原子を有することができ、１個、２個、３個もしくは４個の炭素原子がＯ、ＮおよびＳの群からの同一もしくは異なるヘテロ原子によって置き換わっていることができる。
好ましい例としては、アザビシクロ［３．３．０］オクチル、アザビシクロ［４．３．０］ノニル、ジアザビシクロ［４．３．０］ノニル、オキサザビシクロ［４．３．０］ノニル、チアザビシクロ［４．３．０］ノニルまたはアザビシクロ［４．４．０］デシル、そして定義によるさらなる可能な組み合わせから誘導される基などがある。
特に好ましいものは、パーヒドロシクロペンタ［ｃ］ピロリル、パーヒドロフロ［３，２－ｃ］ピリジニル、パーヒドロピロロ［１，２－ａ］ピラジニル、パーヒドロピロロ［３，４－ｃ］ピロリルおよび３，４－メチレンジオキシフェニルである。
ヘテロシクロアルコキシ
ヘテロシクロアルコキシは、分子の残りの部分に－Ｏ－基を介して結合したヘテロシクロアルキルである。
アルコキシ
アルコキシは、通常１～６個（Ｃ１－Ｃ６－アルコキシ）、好ましくは１～４個（Ｃ１－Ｃ４－アルコキシ）、より好ましくは１～３個（Ｃ１－Ｃ３－アルコキシ）の炭素原子を有する式－Ｏ－アルキルの直鎖若しくは分岐の飽和アルキルエーテル基である。
好ましい例には、メトキシ、エトキシ、ｎ－プロポキシ、イソプロポキシ、ｔｅｒｔ－ブトキシ、ｎ－ペンチルオキシ及びｎ－ヘキシルオキシなどがある。
アリール
アリールは、炭素原子からなる１価単環式もしくは二環式芳香族環系である。例としては、ナフチルおよびフェニルがあり、好ましいものはフェニルまたはフェニル基である。
Ｃ ６ －Ｃ １０ －アラルキル
本発明の文脈におけるＣ６－１０－アラルキルは、Ｃ１－Ｃ４－アルキル基が結合している単環式芳香族アリール、例を挙げるとフェニルである。
例示的Ｃ６－１０－アラルキル基はベンジルである。
ヘテロアリール
ヘテロアリールは、５、６、８、９、１０、１１、１２、１３または１４個の環原子（「５から１４員ヘテロアリール」基）、特別には５、６、９または１０個の環原子を有し、少なくとも１個の環ヘテロ原子および適宜に１個、２個もしくは３個のＮ、ＯおよびＳの群からのさらなる環ヘテロ原子を含み、環炭素原子を介してまたは適宜に（価数が許す場合）環窒素原子を介して結合している１価の単環式、二環式もしくは三環式芳香族環系である。
ヘテロアリール基は、５員ヘテロアリール基、例えば、チエニル、フリル、ピロリル、オキサゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、オキサジアゾリル、トリアゾリル、チアジアゾリルまたはテトラゾリル；または６員ヘテロアリール基、例えば、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニルまたはトリアジニル；または三環式ヘテロアリール基、例えばカルバゾリル、アクリジニルもしくはフェナジニル；または９員ヘテロアリール基、例えばベンゾフラニル、ベンゾチエニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾトリアゾリル、インダゾリル、インドリル、イソインドリル、インドリジニルもしくはプリニル；または１０員ヘテロアリール基、例えばキノリニル、キナゾリニル、イソキノリニル、シンノリニル、フタラジニル、キノキサリニルまたはプテリジニルであることができる。
概して、そして別段の断りがなければ、ヘテロアリール基は、全ての可能な異性体型、例えば互変異体および分子の残りの部分への結合箇所に関しての位置異性体を含む。従って、例示的な非限定的例として、ピリジニルという用語は、ピリジン－２－イル、ピリジン－３－イルおよびピリジン－４－イルを包含し、またはチエニルという用語はチエン－２－イルおよびチエン－３－イルを包含する。
Ｃ ５ －Ｃ １０ －ヘテロアリール
本発明の文脈でのＣ５－１０－ヘテロアリールは、同一であっても異なっていても良い１個、２個、３個もしくは４個のヘテロ原子を有する単環式もしくは二環式芳香族環系である。あり得るヘテロ原子は、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓ（＝Ｏ）および／またはＳ（＝Ｏ）２である。結合価は、いずれの芳香族炭素原子または窒素原子にあっても良い。
本発明による単環式ヘテロアリール基は、５または６個の環原子を有する。好ましいものは、１個もしくは２個のヘテロ原子を有するヘテロアリール基である。特に好ましいのは、この場合、１個もしくは２個の窒素原子である。
５個の環原子を有するヘテロアリール基には、例えば、次の環：チエニル、チアゾリル、フリル、ピロリル、オキサゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、オキサジアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリルおよびチアジアゾリルなどがある。
６個の環原子を有するヘテロアリール基には、例えば、次の環：ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニルおよびトリアジニルなどがある。
本発明による二環式ヘテロアリール基は、９または１０個の環原子を有する。
９個の環原子を有するヘテロアリール基には、例えば、次の環：フタリジル、チオフタリジル、インドリル、イソインドリル、インダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾフリル、ベンゾチエニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、アゾシニル、インドリジニル、プリニル、インドリニルなどがある。
１０個の環原子を有するヘテロアリール基には、例えば、次の環：イソキノリニル、キノリニル、キノリジニル、キナゾリニル、キノキサリニル、シンノリニル、フタラジニル、１，７－および１，８－ナフチリジニル、プテリジニル、クロマニルなどがある。
アリールオキシ
アリールオキシは、式アリール－Ｏ－のアリール基である。
好ましい例には、フェノキシ及びナフチルオキシなどがある。
ヘテロアルコキシ
ヘテロアルコキシは、１から１０個の炭素原子を有する直鎖および／または分岐のヒドロカルビル鎖であって、－Ｏ－を介して分子の残り部分に結合しており、さらに基－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｓ（＝Ｏ）－、－Ｓ（＝Ｏ）２－、－ＮＲｙ－、－ＮＲｙＣ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲｙ－、－ＮＲｙＮＲｙ－、－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＲｙＮＲｙ－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲｙＮＲｙ－、－ＣＲｘ＝Ｎ－Ｏ－の１以上によってさらに１回もしくは複数回中断されていても良く、側鎖が存在する場合にそれを含む炭化水素鎖が－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２、－ＣＯＯＨ、－ＯＨ、－ＮＨ２、－ＮＨ－Ｃ（＝ＮＮＨ２）－、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い炭化水素鎖である。
本文脈において、Ｒｙは各場合で、－Ｈ、フェニル、Ｃ１－Ｃ１０－アルキル、Ｃ２－Ｃ１０－アルケニルまたはＣ２－Ｃ１０－アルキニルであり、それらは次に、各場合で、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２、－ＣＯＯＨ、－ＯＨ、－ＮＨ２、－ＮＨ－Ｃ（＝ＮＮＨ２）－、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。
この文脈において、Ｒｘは、－Ｈ、Ｃ１－Ｃ３－アルキルまたはフェニルである。
本発明の文脈におけるハロゲンまたはハロゲン原子はフッ素（－Ｆ）、塩素（－Ｃｌ）、臭素（－Ｂｒ）またはヨウ素（－Ｉ）である。
好ましいものは、フッ素（－Ｆ）、塩素（－Ｃｌ）及び臭素（－Ｂｒ）である。
本発明によるキネシン紡錘体タンパク質阻害剤プロドラッグは好ましくは、下記の式（ＩＩａ）を有する。
Figure 0007251981000009
式中、
Ｘ１はＮであり、
Ｘ２はＮであり、及び
Ｘ３はＣであり、
又は
Ｘ１はＮであり、
Ｘ２はＣであり、及び
Ｘ３はＮであり、
又は
Ｘ１はＣＨ又はＣＦであり、
Ｘ２はＣであり、及び
Ｘ３はＮであり、
又は
Ｘ１はＮＨであり、
Ｘ２はＣであり、及び
Ｘ３はＣであり、
又は
Ｘ１はＣＨであり、
Ｘ２はＮであり、及び
Ｘ３はＣである。
Ａは、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｓ（＝Ｏ）－、－Ｓ（＝Ｏ）２－、又は－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨ－であり、
Ｒ１は、－Ｈ、－Ｌ－＃１、－ＭＯＤ又は－（ＣＨ２）０－３Ｚであり、
Ｚは、－Ｈ、－ＮＨＹ３、－ＯＹ３、－ＳＹ３、ハロゲン、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＹ１Ｙ２、又は－Ｃ（＝Ｏ）－ＯＹ３であり、
Ｙ１及びＹ２は独立に、－Ｈ、－ＮＨ２－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０－３－（ＣＨ２）０－３Ｚ′又は－ＣＨ（ＣＨ２Ｗ）Ｚ′であり、
Ｙ３は、－Ｈ又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ′であり、
Ｚ′は、－Ｈ、－ＮＨ２、－Ｓ（＝Ｏ）３Ｈ、－ＣＯＯＨ、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ（ＮＨ２）Ｃ（＝Ｏ）－又は－（Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨＹ４）１－３－ＣＯＯＨであり、
Ｗ、－Ｈ又は－ＯＨであり、
Ｙ４は、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖若しくは分岐のＣ１－６アルキルであり、又は－ＮＨ２によって置換されていても良いアリール又はベンジルであり、
Ｒ２は、－Ｈ、－Ｌ－＃１、－ＭＯＤ、－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨＹ４－ＮＨＹ５又は－（ＣＨ２）０－３Ｚであり、
Ｚは、－Ｈ、ハロゲン、－ＯＹ３、－ＳＹ３、－ＮＨＹ３、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＹ１Ｙ２、又は－Ｃ（＝Ｏ）－ＯＹ３であり、
Ｙ１及びＹ２は独立に、－Ｈ、－ＮＨ２、又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ′であり、
Ｙ３は、－Ｈ又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ′であり、
Ｚ′は、－Ｈ、－Ｓ（＝Ｏ）３Ｈ、－ＮＨ２又は－ＣＯＯＨであり、
Ｙ４は、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖若しくは分岐のＣ１－６アルキルであり、又は－ＮＨ２によって置換されていても良いアリール又はベンジルであり、
Ｙ５は、－Ｈ又は－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨＹ６－ＮＨ２であり、
Ｙ６は、直鎖若しくは分岐のＣ１－６－アルキルであり、
Ｒ３は、－ＭＯＤ、－Ｌ－＃１、又は置換されていても良いアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル基であり、それは１～３個のＯＨ基、１～３個のハロゲン原子、１～３個のモノ－、ジ－若しくはトリハロゲン化アルキル基、１～３個の－Ｏ－アルキル基、１～３個の－ＳＨ基、１～３個の－Ｓ－アルキル基、１～３個の－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－アルキル基、１～３個の－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－アルキル基、１～３個の－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－Ｓ（＝Ｏ）ｎ－アルキル基、１～３個の－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－Ｎ（アルキル）２基、１～３個のＮＨ２基又は１～３個の－（ＣＨ２）０－３Ｚ基によって置換されていても良く、
ｎは０、１又は２であり、
Ｚは、－Ｈ、ハロゲン、－ＯＹ３、－ＳＹ３、－ＮＨＹ３、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＹ１Ｙ２又は－Ｃ（＝Ｏ）－ＯＹ３であり、
Ｙ１及びＹ２は独立に、－Ｈ、－ＮＨ２、又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ′であり、
Ｙ３は、－Ｈ、－（ＣＨ２）０－３－ＣＨ（ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ３）Ｚ′、－（ＣＨ２）０－３－ＣＨ（ＮＨ２）Ｚ′又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ′であり、
Ｚ′は、－Ｈ、－Ｓ（＝Ｏ）３Ｈ、－ＮＨ２又は－ＣＯＯＨであり、
Ｒ４は、式Ｉａ′、Ｉａ″及びＩａ″′のレグマイン開裂性基であり、
Ｒ５は、－Ｈ、－ＮＨ２、－ＮＯ２、ハロゲン、－ＣＮ、ＣＦ３、－ＯＣＦ３、－ＣＨ２Ｆ、－ＣＨ２Ｆ、－ＳＨ又は－（ＣＨ２）０－３Ｚであり、
Ｚは、－Ｈ、－ＯＹ３、－ＳＹ３、ハロゲン、－ＮＨＹ３、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＹ１Ｙ２、又は－Ｃ（＝Ｏ）－ＯＹ３であり、
Ｙ１及びＹ２は独立に、－Ｈ、－ＮＨ２、又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ′であり、
Ｙ３は、－Ｈ又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ′であり、
Ｚ′は、－Ｈ、－Ｓ（＝Ｏ）３Ｈ、－ＮＨ２又は－ＣＯＯＨであり、
Ｒ６及びＲ７は独立に、－Ｈ、－ＣＮ、Ｃ１－１０－アルキル、フルオロ－Ｃ１－１０－アルキル、Ｃ２－１０－アルケニル、フルオロ－Ｃ２－１０－アルケニル、Ｃ２－１０－アルキニル、フルオロ－Ｃ２－１０－アルキニル、ヒドロキシル、－ＮＯ２、－ＮＨ２、－ＣＯＯＨ又はハロゲンであり、
Ｒ８は、Ｃ１－１０－アルキル、フルオロ－Ｃ１－１０－アルキル、Ｃ２－１０－アルケニル、フルオロ－Ｃ２－１０－アルケニル、Ｃ２－１０－アルキニル、フルオロ－Ｃ２－１０－アルキニル、Ｃ４－１０－シクロアルキル、フルオロ－Ｃ４－１０－シクロアルキル又は－（ＣＨ２）０－２－（ＨＺ２）であり、
ＨＺ２は、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される２個以下のヘテロ原子を有する４～７員の複素環であり、それは－ＯＨ、－ＣＯＯＨ、－ＮＨ２又は－Ｌ－＃１によって置換されていても良く、
Ｒ９は、－Ｈ、－Ｆ、－ＣＨ３、－ＣＦ３、－ＣＨ２Ｆ又は－ＣＨＦ２であり、
－Ｌ－＃１は、－（Ｌｂ）ｏ－（ＬＩＧ）ｐであり、
ＬＩＧは、腫瘍細胞の標的分子への結合後に、腫瘍細胞によって取り込まれ、細胞内で、好ましくはリソソームで処理されるバインダーであり、
Ｌｂは、リンカーであり、
ｏ及びｐは独立に、０又は１であり、
－ＭＯＤは、－（ＮＲ１０）ｎ－（Ｇ１）ｏ－Ｇ２－Ｇ３であり、
Ｒ１０は、－Ｈ又はＣ１－Ｃ３－アルキルであり、
Ｇ１は、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－又は
Figure 0007251981000010
であり、
ｎは０又は１であり；
ｏは０又は１であり、
Ｇ２は、直鎖若しくは分岐の炭化水素鎖であり、それは１～２０個の炭素原子を有し、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓ（＝Ｏ）－、－Ｓ（＝Ｏ）２－、－ＮＲｙ－、－ＮＲｙＣ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｙ－、－ＮＲｙＮＲｙ－、－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＲｙＮＲｙ－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲｙＮＲｙ－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＣＲｘ＝Ｎ－Ｏによって１回又は複数回中断されていても良く、前記直鎖若しくは分岐の炭化水素鎖は、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２、－ＣＯＯＨ、－ＯＨ、－ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシド、又はスルホン酸によって置換されていても良く、
Ｒｙは、－Ｈ、フェニル、Ｃ１－Ｃ１０－アルキル、Ｃ２－Ｃ１０－アルケニル又はＣ２－Ｃ１０－アルキニルであり、それらはそれぞれ－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２、－ＣＯＯＨ、－ＯＨ、－ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシド、又はスルホン酸によって置換されていても良く、
Ｒｘは、－Ｈ、Ｃ１－Ｃ３－アルキル又はフェニルであり、
Ｇ３は、－Ｈ又は－ＣＯＯＨであり、
－ＭＯＤは、少なくとも１個の－ＣＯＯＨ基を有する。
並びにこれの塩、溶媒和物及び溶媒和物の塩もある。
ここで、好ましいものは、
Ｒ３が、Ｃ１－１０－アルキル、Ｃ６－１０－アリール又はＣ６－１０－アラルキル、Ｃ５－１０－ヘテロアルキル、Ｃ１－１０－アルキル－Ｏ－Ｃ６－１０－アリール又はＣ５－１０－ヘテロシクロアルキル基であり、それが１～３個のＯＨ基、１～３個のハロゲン原子、１～３個のモノ－、ジ－若しくはトリハロゲン化アルキル基、１～３個の－Ｏ－アルキル基、１～３個の－ＳＨ基、１～３個の－Ｓ－アルキル基、１～３個の－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－アルキル基、１～３個の－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－アルキル基、１～３個の－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－Ｓ（＝Ｏ）ｎ－アルキル基、１～３個の－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－Ｎ（アルキル）２基、１～３個のＮＨ２基又は１～３個の－（ＣＨ２）０－３Ｚ基によって置換されていても良く、ｎ及びＺが上記の定義を有する化合物である。
－（Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨＹ４）１－３－ＣＯＯＨ基は、１個の－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨＹ４－ＣＯＯＨ基が存在するか、２個の－（Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨＹ４）基が－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨＹ４－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨＹ４－ＣＯＯＨに従って互いに連結されていることができるか、３個の基が－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨＹ４－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨＹ４－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨＹ４－ＣＯＯＨに従って互いに連結していることができることを意味する。
特に好ましいものは、
Ｘ１がＮであり、
Ｘ２がＮであり、及び
Ｘ３がＣであり、
又は
Ｘ１がＣＨ又はＣＦであり、
Ｘ２がＣであり、及び
Ｘ３がＮであり、
又は
Ｘ１がＮＨであり、
Ｘ２がＣであり、及び
Ｘ３がＣであり、
又は
Ｘ１がＨであり、
Ｘ２がＮであり、及び
Ｘ３がＣである、一般式（ＩＩａ）の化合物である。
特別に好ましいものは、
Ｘ１がＮであり、
Ｘ２がＮであり、及び
Ｘ３がＣであり，
又は
Ｘ１がＣＨであり、
Ｘ２がＣであり、及び
Ｘ３がＮである、一般式（ＩＩａ）の化合物である。
非常に特に好ましいものは、
Ｘ１がＣＨであり、
Ｘ２がＣであり、及び
Ｘ３がＮである、一般式（ＩＩａ）の化合物である。
好ましいものは、Ａが－Ｃ（＝Ｏ）－である一般式（ＩＩａ）の化合物である。
さらに好ましいものは、
Ｒ１が、－Ｌ－＃１、－ＭＯＤ、－Ｈ、－ＣＯＯＨ、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＮＨ２、－（ＣＨ２）１－３ＮＨ２、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＺ″（ＣＨ２）１－３ＮＨ２及び－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＺ″ＣＨ２ＣＯＯＨであり、
Ｚ″が、－Ｈ又は－ＮＨ２である、一般式（ＩＩａ）の化合物である。
一般式（ＩＩａ）において、Ｒ４が－Ｌ－＃１である場合、Ｒ１は好ましくは－ＭＯＤである。
より詳細には、一般式（ＩＩａ）において、Ｒ４は－Ｌ－＃１であり、Ｒ３が－ＭＯＤでなければＲ１は－ＭＯＤである。
一般式（ＩＩａ）において、Ｒ２は好ましくは－Ｈである。
一般式（ＩＩａ）において、Ｒ３は好ましくは－Ｌ－＃１又は－ＭＯＤであるか、Ｃ１－１０－アルキル（－ＯＨ、－Ｏ－アルキル、－ＳＨ、－Ｓ－アルキル、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－アルキル、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－アルキル、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－アルキル、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－アルキル、－Ｓ（＝Ｏ）ｎ－アルキル、－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨ－アルキル、－ＮＨ－アルキル、－Ｎ（アルキル）２、又は－ＮＨ２によって置換されていても良い）である。
ここでアルキルは、好ましくはＣ１－３アルキル－である。
一般式（ＩＩａ）において、Ｒ５は好ましくは－Ｈ又は－Ｆである。
一般式（ＩＩａ）において、Ｒ６及びＲ７は好ましくは独立に、－Ｈ、Ｃ１－１０－アルキル、フルオロ－Ｃ１－１０－アルキル、Ｃ２－１０－アルケニル、フルオロ－Ｃ２－１０－アルケニル、Ｃ２－１０－アルキニル、フルオロ－Ｃ２－１０－アルキニル、ヒドロキシル又はハロゲンである。
一般式（ＩＩａ）において、Ｒ８は、好ましくは分岐のＣ１－５－アルキル基、特別には－Ｃ（ＣＨ３）２－（ＣＨ２）０－２－Ｒｙ基であり、Ｒｙは－Ｈ、－ＯＨ、－Ｃ（＝Ｏ）２Ｈ、又は－ＮＨ２である。
より好ましくは、Ｒ８は、－Ｃ（ＣＨ３）２－（ＣＨ２）－Ｒｙ基であり、Ｒｙは－Ｈである。
一般式（ＩＩａ）において、Ｒ９は好ましくは－Ｈ又は－Ｆである。
一般式（ＩＩａ）において、－ＭＯＤは好ましくは、基ＨＯＯＣ－（ＣＨＸ）ｘ－ＡＭ－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－であり、
式中、
ｘは２～６の数字であり、
Ｘは、－Ｈ、－ＮＨ２又は－ＣＯＯＨであり、
ＡＭは、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－又は－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－である。
一般式（ＩＩａ）において、－ＭＯＤはより好ましくは、基ＨＯＯＣ－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ（ＣＯＯＨ）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、ＨＯＯＣ－ＣＨ（ＮＨ２）－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－及びＨＯＯＣ－ＣＨ（ＮＨ２）－（ＣＨ２）４－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－である。
特別に好ましいものは、
置換基Ｒ１及びＲ３のうちの０個又は１個が－Ｌ－＃１であり、
Ｘ１がＮであり、
Ｘ２がＮであり、及び
Ｘ３がＣであり、
又は
Ｘ１がＣＨ又はＣＦであり、
Ｘ２がＣであり、及び
Ｘ３がＮであり、
又は
Ｘ１がＮＨであり、
Ｘ２がＣであり、及び
Ｘ３がＣであり、
又は
Ｘ１がＣＨであり、
Ｘ２がＮであり、及び
Ｘ３がＣであり、
Ａが－Ｃ（＝Ｏ）－であり、
Ｒ１が、－Ｈ、－ＣＯＯＨ、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＮＨ２、－（ＣＨ２）１－３ＮＨ２、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＺ″（ＣＨ２）１－３ＮＨ２及び－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＺ″ＣＨ２－ＣＯＯＨであり、
Ｚ″が－Ｈ又は－ＮＨ２であり、
Ｒ２が－Ｈであり、
Ｒ３が、ハロゲン、Ｃ１－３－アルキル又はフルオロ－Ｃ１－３－アルキルによってモノ置換又は多置換されていても良いフェニル基であるか、フッ素、－ＯＹ４、－ＳＹ４、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｙ４、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－Ｙ４、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｙ４、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－Ｙ４、－Ｓ（＝Ｏ）ｎ－Ｙ４、－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨ－Ｙ４、－ＮＨ－Ｙ４又は－Ｎ（Ｙ４）２によって置換されていても良いＣ１－１０－アルキル基であり、
ｎが１又は２であり、
Ｙ４が、－Ｈ又はハロゲン、Ｃ１－３－アルキル若しくはフルオロ－Ｃ１－３－アルキルによってモノ置換若しくは多置換されていても良いフェニル基であり、又は－ＯＨ、－ＣＯＯＨ、及び／又は－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｃ１－３－アルキルによって置換されていても良いアルキル－である、一般式（ＩＩａ）の化合物である。
この場合、Ｒ３及びＹ４は好ましくは、フェニル基であり、それは、フッ素によってモノ置換又は多置換されていても良い。
この場合、Ｙ４は好ましくはＣ１－３－アルキルである。
やはり特別に好ましいものは、
Ｒ３が、フェニル基であり、それは、－ＯＨ、－Ｏ－アルキル、－ＳＨ、－Ｓ－アルキル、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－アルキル、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－アルキル、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－アルキル、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－アルキル、－Ｓ（＝Ｏ）ｎ－アルキル、－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨ－アルキル、－ＮＨ－アルキル、－Ｎ（アルキル）２、又は－ＮＨ２によってモノ置換又は多置換されていても良く、
ｎが１又は２であり、
Ｒ５が、－Ｈ又は－Ｆであり、
Ｒ６及びＲ７が独立に、－Ｈ、Ｃ１－１０－アルキル、フルオロ－Ｃ１－１０－アルキル、Ｃ２－１０－アルケニル、フルオロ－Ｃ２－１０－アルケニル、Ｃ２－１０－アルキニル、フルオロ－Ｃ２－１０－アルキニル、ヒドロキシル又はハロゲンであり、
Ｒ８が、分岐のＣ１－５－アルキル基であり、
Ｒ９が、－Ｈ又は－Ｆである、一般式（ＩＩａ）の化合物である。
この場合、Ｃ１－３－アルキルが特に好ましい。
さらに好ましいものは、
Ｒ１が、－Ｈ、－Ｌ－＃１、－ＣＯＯＨ、ＨＯＯＣ－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ（ＣＯＯＨ）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－；ＨＯＯＣ－ＣＨ（ＮＨ２）－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－又はＨＯＯＣ－ＣＨ（ＮＨ２）－（ＣＨ２）４－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－であり、
Ｒ２が－Ｈであり、
Ａが－Ｃ（＝Ｏ）－であり、
Ｒ３が、－（ＣＨ２）ＯＨ、－ＣＨ（ＣＨ３）ＯＨ、－ＣＨ２－Ｓ－ＣＨ２ＣＨ－（ＣＯＯＨ）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ３、－ＣＨ（ＣＨ３）ＯＣＨ３、フェニル基（１～３個のハロゲン原子、１～３個のアミノ基、１～３個のアルキル基又は１～３個のハロアルキル基によって置換されていても良い）、
ＨＯＯＣ－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ（ＣＯＯＨ）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－；
ＨＯＯＣ－ＣＨ（ＮＨ２）－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－；
ＨＯＯＣ－ＣＨ（ＮＨ２）－（ＣＨ２）４－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－又は
－ＣＨ２－Ｓｘ－（ＣＨ２）０－４－ＣＨＹ５－ＣＯＯＨであり、
ｘが０又は１であり、
Ｙ５が－Ｈ又は－ＮＨＹ６であり、
Ｙ６が－Ｈ、－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ３又は－Ｌ－＃１であり、
Ｒ５が－Ｈであり、
Ｒ６及びＲ７が独立に－Ｈ、Ｃ１－３－アルキル又はハロゲンであり、
Ｒ８がＣ１－４－アルキルであり、
Ｒ９が－Ｈである、一般式（ＩＩａ）の化合物である。
ここで、好ましいものは特別には、
Ｒ６及びＲ７が独立に、水素又はフッ素であり、
Ｒ８がｔｅｒｔ－ブチルである化合物である。
さらに好ましいものは、
Ｒ１が、－Ｈ、－ＣＯＯＨ、
ＨＯＯＣ－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ（ＣＯＯＨ）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、
ＨＯＯＣ－ＣＨ（ＮＨ２）－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－又は
ＨＯＯＣ－ＣＨ（ＮＨ２）－（ＣＨ２）４－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－
であり、
Ｒ２が－Ｈであり、
Ａが－Ｃ（＝Ｏ）－であり、
Ｒ３が、－（ＣＨ２）ＯＨ、－ＣＨ（ＣＨ３）ＯＨ、－ＣＨ２－Ｓ－ＣＨ２ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ３、
－ＣＨ（ＣＨ３）ＯＣＨ３、
ＨＯＯＣ－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ（ＣＯＯＨ）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、
ＨＯＯＣ－ＣＨ（ＮＨ２）－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、
ＨＯＯＣ－ＣＨ（ＮＨ２）－（ＣＨ２）４－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、
－ＣＨ２－Ｓｘ－（ＣＨ２）０－４－ＣＨＹ５－ＣＯＯＨ又はフェニル基（１～３個のハロゲン原子、１～３個のアミノ基、１～３個のアルキル基又は１～３個のハロアルキル基によって置換されていても良い）であり、
ｘが０又は１であり、
Ｙ５が－Ｈ又は－ＮＨＹ６であり、
Ｙ６が－Ｈ、－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ３又は－Ｌ－＃１であり、
Ｒ５が－Ｈであり、
Ｒ６及びＲ７が独立に、－Ｈ、Ｃ１－３－アルキル又はハロゲンであり、
Ｒ８がＣ１－４－アルキルであり、
Ｒ９が－Ｈであり、
置換基Ｒ１及びＲ３のうちの一つが－Ｌ－＃１である化合物である。
この場合、好ましいものは、特別には、
Ｒ６及びＲ７が－Ｆであり、
Ｒ８がｔｅｒｔ－ブチルである化合物である。
さらに好ましいものは、下記一般式（ＩＩｂ）の化合物である。
Figure 0007251981000011
式中、
Ｘ１、Ｘ２，Ｘ３、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８及びＲ９は、一般式（ＩＩａ）で提供の定義を有し、
Ａは－Ｃ（＝Ｏ）－であり、
Ｂは単結合、－Ｏ－ＣＨ２－又は－ＣＨ２－Ｏ－であり、
Ｒ２０は－ＮＨ２、－Ｆ、－ＣＦ３、又は－ＣＨ３であり、及び
ｎは０、１又は２である。
この場合、好ましいものは、
Ｘ１がＣＨであり、
Ｘ２がＣであり、及び
Ｘ３がＮである一般式（ＩＩｂ）の化合物である。
やはり好ましいものは、下記一般式（ＩＩｃ）の化合物である。
Figure 0007251981000012
式中、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３Ａ、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８及びＲ９は、一般式（ＩＩａ）で提供の定義を有する。
ここで、好ましいものは、
Ｘ１がＣＨであり、
Ｘ２がＣであり、
Ｘ３がＮであり、
Ａが－Ｃ（＝Ｏ）－であり、及び
Ｒ３が－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＯＣＨ３、－ＣＨ（ＣＨ３）ＯＨ又は－ＣＨ（ＣＨ３）ＯＣＨ３である一般式（ＩＩｃ）の化合物である。
やはり好ましいものは、下記一般式（ＩＩｄ）の化合物である。
Figure 0007251981000013
式中、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ａ、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８及びＲ９は、一般式（ＩＩａ）で提供の定義を有する。
ここで、好ましいものは、
Ｘ１がＣＨであり、
Ｘ２がＣであり、
Ｘ３がＮであり、
Ａが－Ｃ（＝Ｏ）－であり、
Ｒ３が－ＣＨ２－Ｓｘ－（ＣＨ２）０－４－ＣＨＹ５－ＣＯＯＨであり、
ｘが０又は１であり、
Ｙ５が－Ｈ又は－ＮＨＹ６であり、及び
Ｙ６が－Ｈ又は－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３である一般式（ＩＩｄ）の化合物である。
さらに好ましいものは、
・Ｚが－Ｃｌ又は－Ｂｒであり；
・Ｒ１が－（ＣＨ２）０－３Ｚであり、
Ｚが－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＹ１Ｙ２であり、
Ｙ１が－Ｈ、－ＮＨ２、又は－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０－３－（ＣＨ２）０－３Ｚ′であり；
Ｙ２が－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０－３－（ＣＨ２）０－３Ｚ′であり、及び
Ｚ′が－ＣＯＯＨであり；
・Ｙ１が－Ｈであり、
Ｙ２が－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３－ＣＨ２ＣＨ２Ｚ′であり、及び
Ｚ′が－ＣＯＯＨであり；
・Ｙ１が－Ｈであり、
Ｙ２が－ＣＨ２ＣＨ２Ｚ′であり、
Ｚ′が－（Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＣＨＹ４）２－ＣＯＯＨであり、及び
Ｙ４が一般式（ＩＩａ）で提供の定義を有し；
・Ｙ１が－Ｈであり、
Ｙ２が－ＣＨ２ＣＨ２Ｚ′であり、
Ｚ′が－（Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨＣＨＹ４）２－ＣＯＯＨであり、及び
Ｙ４がｉ－プロピル又は－（ＣＨ２）３－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２であり；
・Ｙ１が－Ｈであり、
Ｙ２が－ＣＨ２ＣＨ２Ｚ′であり、
Ｚ′が－（Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨＣＨＹ４）２－ＣＯＯＨであり、及び
Ｙ４が－ＣＨ３又は－（ＣＨ２）３－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２であり；
・Ｙ４が－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖若しくは分岐のＣ１－６アルキルであり；
・Ｙ４がｉ－プロピル又は－ＣＨ３であり；
・Ｙ１が－Ｈであり、
Ｙ２が－ＣＨ２ＣＨ２Ｚ′であり、
Ｚ′が－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨＣＨＹ４－ＣＯＯＨであり、及び
Ｙ４が－ＮＨ２置換されていても良いアリール又はベンジルであり；
・Ｙ４がアミノベンジルであり；
・Ｒ２が－（ＣＨ２）０－３Ｚであり、
Ｚが－ＳＹ３であり、及び
Ｙ３が上記で提供の定義を有し；
・Ｒ４が－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨＹ４－ＮＨＹ５であり、
Ｙ４が上記で提供の定義を有し、及び
Ｙ５が－Ｈであり；
・Ｒ４が－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨＹ４－ＮＨＹ５であり、
Ｙ５が－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨＹ６－ＮＨ２であり、及び
Ｙ４及びＹ６が上記で提供の定義を有し；
・Ｙ４が－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖若しくは分岐のＣ１－６アルキルである、一般式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）及び（ＩＩｄ）の化合物である。
さらに好ましいものは、Ｒ１、Ｒ２又はＲ３が－ＭＯＤである一般式（ＩＩａ）の化合物である。
特に好ましいものは、Ｒ３が－ＭＯＤであり、Ｒ１が－Ｌ－＃１であり、
－ＭＯＤが－（ＮＲ１０）ｎ－（Ｇ１）ｏ－Ｇ２－Ｇ３であり、
Ｒ１０が－Ｈ又はＣ１－Ｃ３－アルキルであり；
Ｇ１が－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－又は
Figure 0007251981000014
であり、
ｎが０又は１であり、
ｏが０又は１であり、
Ｇ２が、直鎖若しくは分岐の炭化水素鎖であり、それは１～２０個の炭素原子を有し、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓ（＝Ｏ）－、－Ｓ（＝Ｏ）２、－ＮＲｙ－、－ＮＲｙＣ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲｙ、－ＮＲｙＮＲｙ－、－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＲｙＮＲｙ－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲｙＮＲｙ－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＣＲｘ＝Ｎ－Ｏ－によって同一に又は異なって１回若しくは複数回中断されていても良く、
前記直鎖若しくは分岐の炭化水素鎖が、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２、－ＣＯＯＨ、－ＯＨ、－ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシド、又はスルホン酸によって置換されていても良く、
Ｒｙが、－Ｈ、フェニル、Ｃ１－Ｃ１０－アルキル、Ｃ２－Ｃ１０－アルケニル又はＣ２－Ｃ１０－アルキニルであり、それらのそれぞれが－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２、－ＣＯＯＨ、－ＯＨ、－ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシド、又はスルホン酸によって置換されていても良く、
Ｒｘが－Ｈ、Ｃ１－Ｃ３－アルキル又はフェニルであり、
Ｇ３が－Ｈ又は－ＣＯＯＨであり、及び
－ＭＯＤ基が好ましくは、少なくとも１個の－ＣＯＯＨ基を有する化合物である。
より好ましくは、基－ＭＯＤは、例えばベタイン基でＣＯＯＨ基を有する。
好ましくは、このＣＯＯＨ基は末端位置にある。
さらにより好ましくは、－ＭＯＤ基は、下記の基である。
－ＣＨ２－Ｓｘ－（ＣＨ２）０－４－ＣＨＹ５－ＣＯＯＨ
式中、
ｘは０又は１であり、
Ｙ５が－Ｈ又は－ＮＨＹ６であり、及び
Ｙ６は－Ｈ又は－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３である。
さらに好ましいものは、
Ｘ１がＮであり、
Ｘ２がＮであり、及び
Ｘ３がＣであり、
又は
Ｘ１がＮであり、
Ｘ２がＣであり、及び
Ｘ３がＮであり、
又は
Ｘ１がＣＨ又はＣＦであり、
Ｘ２がＣであり、及び
Ｘ３がＮであり、
又は
Ｘ１がＮＨであり、
Ｘ２がＣであり、及び
Ｘ３がＣであり、
又は
Ｘ１がＣＨ又はＣＦであり、
Ｘ２がＮであり、及び
Ｘ３がＣであり、
Ｒ１が、－Ｈ、－Ｌ－＃１、－ＭＯＤ又は－（ＣＨ２）０－３Ｚであり、
Ｚが、－Ｈ、－ＮＨＹ３、－ＯＹ３、－ＳＹ３、ハロゲン、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＹ１Ｙ２又は－Ｃ（＝Ｏ）－ＯＹ３であり、
Ｙ１及びＹ２が独立に、－Ｈ、－ＮＨ２、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０－３－（ＣＨ２）０－３Ｚ′又は－ＣＨ（ＣＨ２Ｗ）Ｚ′であり、
Ｙ３が－Ｈ又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ′であり、
Ｚ′が、－Ｈ、－ＮＨ２、－Ｓ（＝Ｏ）３Ｈ、－ＣＯＯＨ、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ（ＮＨ２）－ＣＯＯＨ又は－（Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨＹ４）１－３ＣＯＯＨであり、
Ｗが－Ｈ又は－ＯＨであり、
Ｙ４が、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖若しくは分岐のＣ１－６アルキルであるか、－ＮＨ２によって置換されていても良いアリール又はベンジルであり、
Ｒ２が、－Ｈ、－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨＹ４－ＮＨＹ５又は－（ＣＨ２）０－３Ｚであり、
Ｚが、－Ｈ、ハロゲン、－ＯＹ３、－ＳＹ３、－ＮＨＹ３、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＹ１Ｙ２、又は－Ｃ（＝Ｏ）－ＯＹ３であり、
Ｙ１及びＹ２が独立に、－Ｈ、－ＮＨ２、又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ′であり、
Ｙ３が、－Ｈ又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ′であり、
Ｚ′が、－Ｈ、－Ｓ（＝Ｏ）３Ｈ、－ＮＨ２又は－ＣＯＯＨであり；
Ｙ４が、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖若しくは分岐のＣ１－６アルキルであるか、－ＮＨ２によって置換されていても良いアリール又はベンジルであり、
Ｙ５が、－Ｈ又は－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨＹ６－ＮＨ２であり、
Ｙ６が、直鎖若しくは分岐のＣ１－６－アルキルであり、
Ａが、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｓ（＝Ｏ）－、－Ｓ（＝Ｏ）２－又は－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨ－であり、
Ｒ３が、－Ｌ－＃１、－ＭＯＤ、又はアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル基であり、それらは１～３個のＯＨ基、１～３個のハロゲン原子、１～３個のモノ－、ジ－若しくはトリハロゲン化アルキル基、１～３個の－Ｏ－アルキル基、１～３個の－ＳＨ基、１～３個の－Ｓ－アルキル基、１～３個の－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－アルキル基、１～３個の－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－アルキル基、１～３個の－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－Ｓ（＝Ｏ）ｎ－アルキル基、１～３個の－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－Ｎ（アルキル）２基、１～３個の－ＮＨ（（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１－２０Ｈ）－基、１～３個のＮＨ２基又は１～３個の－（ＣＨ２）０－３Ｚ－基によって置換されていても良く、
Ｚが、－Ｈ、ハロゲン、－ＯＹ３、－ＳＹ３、－ＮＨＹ３、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＹ１Ｙ２又は－Ｃ（＝Ｏ）－ＯＹ３であり、
Ｙ１及びＹ２が独立に、－Ｈ、－ＮＨ２、又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ′であり、
Ｙ３が、－Ｈ、－（ＣＨ２）０－３－ＣＨ（ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３）Ｚ′，－（ＣＨ２）０－３－ＣＨ（ＮＨ２）Ｚ′又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ′であり、
Ｚ′が、－Ｈ、－Ｓ（＝Ｏ）３Ｈ、－ＮＨ２又は－ＣＯＯＨであり、
Ｒ５が、－Ｈ、－ＭＯＤ、－ＮＨ２、－ＮＯ２、ハロゲン、－ＣＮ、－ＣＦ３、－ＯＣＦ３、－ＣＨ２Ｆ、－ＣＨ２Ｆ、－ＳＨ又は－（ＣＨ２）０－３Ｚであり、
Ｚが、－Ｈ、－ＯＹ３、－ＳＹ３、ハロゲン、－ＮＨＹ３、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＹ１Ｙ２、又は－Ｃ（＝Ｏ）－ＯＹ３であり、
Ｙ１及びＹ２が独立に、－Ｈ、－ＮＨ２、又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ′であり、
Ｙ３が－Ｈ又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ′であり、及び
Ｚ′が－Ｈ、－Ｓ（＝Ｏ）３Ｈ、－ＮＨ２又は－Ｃ（＝Ｏ）－ＯＨであり、
Ｒ６及びＲ７が独立に、－Ｈ、－ＣＮ、Ｃ１－１０－アルキル、フルオロ－Ｃ１－１０－アルキル、Ｃ２－１０－アルケニル、フルオロ－Ｃ２－１０－アルケニル、Ｃ２－１０－アルキニル、フルオロ－Ｃ２－１０－アルキニル、ヒドロキシル、－ＮＯ２、－ＮＨ２、－ＣＯＯＨ又はハロゲンであり、
Ｒ８が、Ｃ１－１０－アルキル、フルオロ－Ｃ１－１０－アルキル、Ｃ２－１０－アルケニル、フルオロ－Ｃ２－１０－アルケニル、Ｃ２－１０－アルキニル、フルオロ－Ｃ２－１０－アルキニル、Ｃ４－１０－シクロアルキル又はフルオロ－Ｃ４－１０－シクロアルキルであり、
Ｒ９が、－Ｈ、－Ｆ、－ＣＨ３、－ＣＦ３、－ＣＨ２Ｆ又は－ＣＨＦ２であり、
－ＭＯＤが、－（ＮＲ１０）ｎ－（Ｇ１）ｏ－Ｇ２－Ｇ３基であり、
Ｒ１０が、－Ｈ又はＣ１－Ｃ３－アルキルであり、
Ｇ１が、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－又は
Figure 0007251981000015
であり、
ｎが０又は１であり、
ｏが０又は１であり、
Ｇ２が、直鎖若しくは分岐の炭化水素鎖であり、それは１～２０個の炭素原子を有し、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓ（＝Ｏ）－、－Ｓ（＝Ｏ）２－、－ＮＲｙ－、－ＮＲｙＣ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲｙ－、－ＮＲｙＮＲｙ－、－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＲｙＮＲｙ－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲｙＮＲｙ－によって１回又は複数回中断されていても良く、前記直鎖若しくは分岐の炭化水素鎖は－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２、－ＣＯＯＨ、－ＯＨ、－ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシド、又はスルホン酸によって置換されていても良く、
Ｒｙが、－Ｈ、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＣＲｘ＝Ｎ－Ｏ－であるか、ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２－、－ＣＯＯＨ－、－ＯＨ－、－ＮＨ２－、スルホンアミド－、スルホン－、スルホキシド－又はスルホン酸－置換されていても良いフェニル、Ｃ１－Ｃ１０－アルキル、Ｃ２－Ｃ１０－アルケニル又はＣ２－Ｃ１０－アルキニルであり、
Ｒｘが、－Ｈ、Ｃ１－Ｃ３－アルキル又はフェニルであり，
Ｇ３が、－Ｈ又は－ＣＯＯＨであり、及び
－ＭＯＤ基が好ましくは、少なくとも１個の－ＣＯＯＨ基を有し、
Ｒ１及びＲ３は両方とも－Ｌ－＃１であることはない一般式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）及び（ＩＩｄ）の化合物、
並びにそれの塩、溶媒和物及び溶媒和物の塩である。
ここで、特に好ましいものは、
Ｘ１がＣＨであり、
Ｘ２がＣであり、及び
Ｘ３がＮである、一般式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）及び（ＩＩｄ）の化合物である。
ここで、さらに特に好ましいものは、
Ｒ３が、Ｃ１－１０－アルキル、Ｃ６－１０－アリール、Ｃ６－１０－アラルキル、Ｃ５－１０－ヘテロアルキル、Ｃ１－１０－アルキル－Ｏ－Ｃ６－１０－アリール又はＣ５－１０－ヘテロシクロアルキル基であり、それは１～３個のＯＨ基、１～３個のハロゲン原子、１～３個のモノ－、ジ－若しくはトリハロゲン化アルキル基、１～３個の－Ｏ－アルキル基、１～３個の－ＳＨ基、１～３個の－Ｓ－アルキル基、１～３個の－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－アルキル基、１～３個の－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－アルキル基、１～３個の－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－Ｓ（＝Ｏ）ｎ－アルキル基、１～３個の－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－Ｎ（アルキル）２基、１～３個の－ＮＨ（（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１－２０Ｈ）基、１～３個のＮＨ２基又は１～３個の－（ＣＨ２）０－３Ｚ基によって置換されていても良く、
Ｚが、－Ｈ、ハロゲン、－ＯＹ３、－ＳＹ３、－ＮＨＹ３、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＹ１Ｙ２又は－Ｃ（＝Ｏ）－ＯＹ３であり、
Ｙ１及びＹ２が独立に、－Ｈ、－ＮＨ２、又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ′であり、
Ｙ３が、－Ｈ、－（ＣＨ２）０－３－ＣＨ（ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３）Ｚ′，－（ＣＨ２）０－３－ＣＨ（ＮＨ２）Ｚ′又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ′であり、及び
Ｚ′が、－Ｈ、－Ｓ（＝Ｏ）３Ｈ、－ＮＨ２又は－ＣＯＯＨである、一般式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）及び（ＩＩｄ）の化合物である。
さらに、好ましい一般式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）及び（ＩＩｄ）の化合物は、
Ｘ１がＮであり、
Ｘ２がＮであり、及び
Ｘ３がＣであり、
又は
Ｘ１がＮであり、
Ｘ２がＣであり、及び
Ｘ３がＮであり、
又は
Ｘ１がＣＨ又はＣＦであり、
Ｘ２がＣであり、及び
Ｘ３がＮであり、
又は
Ｘ１がＮＨであり、
Ｘ２がＣであり、及び
Ｘ３がＣであり、
又は
Ｘ１がＣＨ又はＣＦであり、
Ｘ２がＮであり、及び
Ｘ３がＣであり、
Ｒ１が、－Ｈ、－Ｌ－＃１、－ＭＯＤ又は－（ＣＨ２）０－３Ｚであり、
Ｚが、－Ｈ、－ＮＨＹ３、－ＯＹ３、－ＳＹ３、ハロゲン、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＹ１Ｙ２又は－Ｃ（＝Ｏ）－ＯＹ３であり、
Ｙ１及びＹ２が独立に、－Ｈ、－ＮＨ２、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０－３－（ＣＨ２）０－３Ｚ′又は－ＣＨ（ＣＨ２Ｗ）Ｚ′であり、
Ｙ３が、－Ｈ又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ′であり、
Ｚ′が、－Ｈ、－ＮＨ２、－Ｓ（＝Ｏ）３Ｈ、－ＣＯＯＨ、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ（ＮＨ２）－ＣＯＯＨ又は－（Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨＹ４）１－３ＣＯＯＨであり、
Ｗが－Ｈ又は－ＯＨであり、
Ｙ４が、直鎖若しくは分岐の、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２－置換されていても良いＣ１－６アルキル又は－ＮＨ２－置換されていても良いアリール若しくはベンジルであり、
Ｒ２が、－Ｈ、－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨＹ４－ＮＨＹ５又は－（ＣＨ２）０－３Ｚであり、
Ｚが、－Ｈ、ハロゲン、－ＯＹ３、－ＳＹ３、－ＮＨＹ３、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＹ１Ｙ２又は－Ｃ（＝Ｏ）－ＯＹ３であり、
Ｙ１及びＹ２が独立に、－Ｈ、－ＮＨ２、又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ′であり、
Ｙ３が、－Ｈ又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ′であり、
Ｚ′が、－Ｈ、－Ｓ（＝Ｏ）３Ｈ、－ＮＨ２又は－ＣＯＯＨであり、
Ｙ４が、直鎖若しくは分岐の、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２－置換されていても良いＣ１－６アルキル又は－ＮＨ２－置換されていても良いアリール若しくはベンジルであり、
Ｙ５が、－Ｈ又は－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨＹ６－ＮＨ２であり、
Ｙ６が、直鎖若しくは分岐のＣ１－６－アルキルであり、
Ａが、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｓ（＝Ｏ）－、－Ｓ（＝Ｏ）２－又は－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨ－であり、
Ｒ３が、－Ｌ－＃１、－ＭＯＤ又はアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル基（１～３個のＯＨ基、１～３個のハロゲン原子、１～３個のモノ－、ジ－若しくはトリハロゲン化アルキル基、１～３個の－Ｏ－アルキル基、１～３個の－ＳＨ基、１～３個の－Ｓ－アルキル基、１～３個の－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－アルキル基、１～３個の－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－アルキル基、１～３個の－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－Ｓ（＝Ｏ）ｎ－アルキル基、１～３個の－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－Ｎ（アルキル）２基、１～３個の－ＮＨ（（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１－２０Ｈ）－基、１～３個のＮＨ２基又は１～３個の－（ＣＨ２）０－３Ｚ－基によって置換されていても良い）であり、
Ｚが、－Ｈ、ハロゲン、－ＯＹ３、－ＳＹ３、－ＮＨＹ３、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＹ１Ｙ２又は－Ｃ（＝Ｏ）－ＯＹ３であり、
Ｙ１及びＹ２が独立に、－Ｈ、－ＮＨ２、又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ′であり、
Ｙ３が、－Ｈ、－（ＣＨ２）０－３－ＣＨ（ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３）Ｚ′、－（ＣＨ２）０－３－ＣＨ（ＮＨ２）Ｚ′又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ′であり、
Ｚ′が、－Ｈ、－Ｓ（＝Ｏ）３Ｈ、－ＮＨ２又は－ＣＯＯＨであり、
Ｒ５が、－Ｈ、－ＭＯＤ、－ＮＨ２、－ＮＯ２、ハロゲン、－ＣＮ、－ＣＦ３、－ＯＣＦ３、－ＣＨ２Ｆ、－ＣＨ２Ｆ、ＳＨ又は－（ＣＨ２）０－３Ｚであり、
Ｚが、－Ｈ、－ＯＹ３、－ＳＹ３、ハロゲン、－ＮＨＹ３、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＹ１Ｙ２、又は－Ｃ（＝Ｏ）－ＯＹ３であり、
Ｙ１及びＹ２が独立に、－Ｈ、－ＮＨ２、又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ′であり、
Ｙ３が、－Ｈ又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ′であり，
Ｚ′が、－Ｈ、－Ｓ（＝Ｏ）３Ｈ、－ＮＨ２又は－ＣＯＯＨであり、
Ｒ６及びＲ７が独立に、－Ｈ又はハロゲンであり、
Ｒ８が、Ｃ１－１０－アルキル又はフルオロ－Ｃ１－１０－アルキルであり、
Ｒ９が、－Ｈ、－Ｆ、－ＣＨ３、－ＣＦ３、－ＣＨ２Ｆ又は－ＣＨＦ２であり、
－Ｌ－＃１が、－（Ｌｂ）ｏ－（ＬＩＧ）ｐ基であり
ＬＩＧが、腫瘍細胞の標的分子への結合後に、腫瘍細胞によって取り込まれ、細胞内で、好ましくはリソソームで処理されるバインダーであり、
Ｌｂがリンカーであり、
ｏ及びｐがそれぞれ独立に０又は１であり、
－ＭＯＤが、－ＣＨ２－Ｓｘ－（ＣＨ２）０－４－ＣＨＹ５－ＣＯＯＨであり、
ｘが０又は１であり、
Ｙ５が－Ｈ又は－ＮＨＹ６であり、
Ｙ６が－Ｈ又は－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３であり、
Ｒ１及びＲ３が両方とも－Ｌ－＃１であることはないもの、
並びにそれの塩、溶媒和物及び溶媒和物の塩である。
ここで、好ましいものは、
Ｘ１がＣＨであり、
Ｘ２がＣであり、及び
Ｘ３がＮである一般式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）及び（ＩＩｄ）の化合物である。
ここで、さらに好ましいものは、
Ｒ３が、Ｃ１－１０－アルキル、Ｃ６－１０－アリール又はＣ６－１０－アラルキル、Ｃ５－１０－ヘテロアルキル、Ｃ１－１０－アルキル－Ｏ－Ｃ６－１０－アリール又はＣ５－１０－ヘテロシクロアルキル基であり、それらは１～３個のＯＨ基、１～３個のハロゲン原子、１～３個のモノ－、ジ－若しくはトリハロゲン化アルキル基、１～３個の－Ｏ－アルキル基、１～３個の－ＳＨ基、１～３個の－Ｓ－アルキル基、１～３個の－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－アルキル基、１～３個の－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－アルキル基、１～３個の－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－Ｓ（＝Ｏ）ｎ－アルキル基、１～３個の－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－Ｎ（アルキル）２基、１～３個のＮＨ２基又は１～３個の－（ＣＨ２）０－３Ｚ基によって置換されていても良く、
Ｚが、－Ｈ、ハロゲン、－ＯＹ３、－ＳＹ３、－ＮＨＹ３、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＹ１Ｙ２又は－Ｃ（＝Ｏ）－ＯＹ３であり、
Ｙ１及びＹ２が独立に、－Ｈ、－ＮＨ２、又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ′であり、
Ｙ３が、－Ｈ、－（ＣＨ２）０－３－ＣＨ（ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３）Ｚ′、－（ＣＨ２）０－３－ＣＨ（ＮＨ２）Ｚ′又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ′であり、
Ｚ′が、－Ｈ、－Ｓ（＝Ｏ）３Ｈ、－ＮＨ２又は－ＣＯＯＨである、一般式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）及び（ＩＩｄ）の化合物である。
「アルキル」という用語が別の意味で定義されていない場合、アルキルは好ましくはＣ１－Ｃ１０－アルキルである。
「ハロゲン」という用語が別の意味で定義されていない場合、ハロゲンはフッ素（－Ｆ）、塩素（－Ｃｌ）及び臭素（－Ｂｒ）である。
特に好ましいものは、下記一般式（Ｖ）、（ＶＩ）及び（ＶＩＩ）の化合物（Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、一般式（ＩＩａ）で提供の定義を有する。）である。
Figure 0007251981000016
特に好ましいものは、
Ｒ１、Ｒ２及びＲ５が－Ｈであり、Ｒ４が一般式（ＩＩａ）で提供の定義を有する、一般式（Ｖ）、（ＶＩ）及び（ＶＩＩ）の化合物である。
ここで、特別に好ましいものは、一般式（ＶＩ）の化合物である。
腫瘍細胞の標的分子に結合するバインダー
最も広い意味で、「バインダー」という用語は、バインダー－薬物複合体によって対処されるある種の標的細胞群に存在する標的分子に結合する分子を意味すると考えられる。バインダーという用語は、それの最も広い意味で理解されるべきものであり、例えば、レクチン類、ある種の糖鎖に結合する能力を有するタンパク質及びリン脂質結合タンパク質も含む。そのようなバインダーには、例えば、高分子量タンパク質（結合タンパク質）、ポリペプチド累類又はペプチド類（結合ペプチド）、非ペプチド性（例えば、Ｋｅｅｆｅ ＡＤ．， ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ． Ｒｅｖ． Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ． ２０１０；９：５３７－５５０に総覧のあるアプタマー（ＵＳ５，２７０，１６３））、又はビタミン類）及び他の全ての細胞結合性の分子若しくは物質などがある。結合タンパク質は、例えば、抗体及び抗体断片又は抗体模倣体、例えばアフィボディ類、アドネクチン類、アンチカリン類、ＤＡＲＰｉｎ類、アビマー類、ナノボディ類である（Ｇｅｂａｕｅｒ Ｍ． ｅｔ ａｌ．， Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｃｈｅｍ． Ｂｉｏｌ． ２００９；１３：２４５－２５５；Ｎｕｔｔａｌｌ Ｓ．Ｄ． ｅｔ ａｌ．， Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ２００８；８：６０８－６１７による総覧）。結合ペプチドは、例えば、リガンド／受容体ペアのリガンド、例えば、リガンド／受容体ペアＶＥＧＦ／ＫＤＲのＶＥＧＦ、例えばリガンド／受容体ペアトランスフェリン／トランスフェリン受容体又はサイトカイン／サイトカイン受容体のトランスフェリン、例えばリガンド／受容体ペアＴＮＦα／ＴＮＦα受容体のＴＮＦαである。
本発明によるプロドラッグは好ましくは、腫瘍細胞の標的分子に結合することができ、通常は、標的分子への結合後に、腫瘍細胞によって取り込まれ及び細胞内で、好ましくはリソソームで処理されるバインダーを含む。このバインダーを連結することができる一つの方法は、適宜にリンカーを介して酵素レグマインによって開裂可能な基によるものであり、レグマイン開裂性基の開裂後に、有効成分がバインダー又はそれの誘導体から別個に存在するようにするものである。この場合、一般式（Ｉａ）における－Ｄは－Ｄ１を表し、一般式（Ｉａ）における－Ｒは（Ｌｃ）ｒ－ＬＩＧを表す（実施形態Ａ）。さらに、バインダーを、適宜にリンカーを介して薬物分子に連結させて、レグマイン開裂性基の開裂後に、有効成分がバインダー又はそれの誘導体と一緒に存在するようにすることができる。この場合、一般式（Ｉａ）における－Ｄは－Ｄ１－（Ｌｂ）ｏ－ＬＩＧを表し、一般式（Ｉａ）におけるＲ－はＺ１－（Ｃ（＝Ｏ））ｑ－を表す（実施形態Ｂ）。
実施形態Ａの化合物は好ましくは下記の一般式ＩＩＩ′、より好ましくは下記の一般式ＩＩＩ″及びＩＩＩ″′を有する。
Figure 0007251981000017
式中、ｍ、ｎ、ｒ、ＬＩＧ、Ｌａ、Ｌｃ、Ｄ１、Ｘ、Ａ１、Ａ２及びＲ２は、一般式（Ｉａ）で提供の定義を有する。
実施形態Ｂの化合物は好ましくは下記の一般式（ＩＶ′）、より好ましくは下記の一般式（ＩＶ″）及び（ＩＶ″′）を有する。
Figure 0007251981000018
式中、ｍ、ｎ、ｏ、Ｒ、ＬＩＧ、Ｌａ、Ｌｂ、Ｄ１、Ｘ、Ａ１、Ａ２及びＲ２は、一般式（Ｉａ）で提供の定義を有する。
バインダーＬＩＧは通常は、ペプチド、タンパク質（例えば抗体）又はそれらの誘導体である。相当するペプチドは、文献から公知である（総覧が、Ｄ． Ｂｏｅｈｍｅ ａｎｄ Ａ． Ｂｅｃｋ－Ｓｉｃｋｉｎｇｅｒ， Ｊ．Ｐｅｐｔ．Ｓｃｉ． ２０１５－２１．１８６にある。Ｂ． Ｆｏｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ Ｍａｇａｚｉｎｅ， Ｍａｙ ２０１２；Ｖ． Ａｈｒｅｎｓ ｅｔ ａｌ．， Ｆｕｔｕｒｅ Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． ２０１２， ４， １５６７；Ｗ． Ｔａｉ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ． Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ ２０１１， ８， ９０１；Ｒ． Ｓｏｕｄｙ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． ２０１３， ５６， ７５６４及びＲ． Ｓｏｕｄｙ ｅｔ ａｌ．， Ｍ． Ｌａｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． ２００１， ４４， １３４１による緒言でのさらなる参考文献；Ｃ． Ｇｒｕｅｎｄｋｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｒｅｐｏｒｔｓ ２０１１， ２６， ６２９も参照する。）。ペプチド又はそれの誘導体は好ましくは、オクトレオチド、ＧｎＲＨ－ＩＩＩ、［Ｄ－Ｔｙｒ６、β－Ａｌａ１１、Ｐｈｅ１３、Ｎｌｅ１４］ＢＮ（６－１４）、ＮＴ（８－１３）、ｃ（ＲＧＤｆＫ）、ＨＳＤＡＶＦＴＤＮＹＴＲＬＲＫＱＭＡＶＫＫＹＬＮＳＩＬＮ－ＮＨ２（配列番号１６１）、ＮＡＰアミド、［Ｐｈｅ７、Ｐｒｏ３４］ＮＰＹ、ＨＥＲ２標的ペプチド、ＡＴＥＰＲＫＱＹＡＴＰＲＶＦＷＴＤＡＰＧ（配列番号１６２）又はＬＱＷＲＲＤＤＮＶＨＮＦＧＶＷＡＲＹＲＬ（配列番号１６３）［この場合、これらのペプチド配列は、アミノ酸についての標準的な１文字コードで表される。］から選択される。Ｕｍｌａｕｆ ｅｔ ａｌ， Ｂｉｏｃｏｎｊ． Ｃｈｅｍ． ２０１４， Ｏｃｔ． １５；２５（１０）：１８２９－３７に記載のスクリーニング法を用いて、さらなるペプチド配列を確認することが可能である。
実施形態Ａの場合、ペプチドをペプチド結合により、レグマイン開裂性基のＮ末端に直接（例えば、それのＣ末端によって）結合させることができる。リンカーＬｃを介してレグマイン開裂性基のＮ末端にペプチドを結合させることも可能であり、その場合リンカーは好ましくは、ペプチドのＣ若しくはＮ末端に、又はペプチドのリジン若しくはシステイン側鎖に結合している。
実施形態Ｂの場合、ペプチドは、薬物分子に直接結合していることができる。しかしながら、ペプチドがリンカーＬｂを介して薬物分子に結合していることが好ましく、その場合、リンカーは好ましくは、ペプチドのＣ若しくはＮ末端に、又はペプチドのリジン又はシステイン側鎖に結合している。Ｌｂ又はペプチドの結合は概して、薬物分子における水素原子の置換によって行われる。
例えば、一般式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（Ｖ）、（ＶＩ）又は（ＶＩＩ）の化合物の場合、当業界において平均的技術を有する者に公知の方法でＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５又はＲ８における水素原子の置換によって複合体を得ることができる（置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５又はＲ８のうちの一つが－（Ｌｂ）ｏ－ＬＩＧを表す。）
特に好ましいバインダーＬＩＧは、腫瘍細胞の細胞外標的分子に結合する抗体若しくは抗原結合性断片又はそれの誘導体である。より好ましくは、ＬＩＧは、１以上の細胞毒性薬分子が結合している抗体又はそれの断片である。従って、実施形態Ａの場合、本発明による化合物は、下記の一般式（ＩＩＩａ′）又は（ＩＩＩａ″）又は（ＩＩＩａ″′）の抗体－薬物複合体（ＡＤＣ）である。
Figure 0007251981000019
式中、ｍ、ｎ、ｒ、Ｌａ、Ｌｃ、Ｄ１、Ｘ、Ａ１、Ａ２及びＲ２は一般式（Ｉａ）で提供の定義を有し、ＡＢは抗体を表し、ｓは１～２０の数字、好ましくは２～８、より好ましくは３～５、例えば４を表す。この文脈において、Ｄ１は好ましくは、一般式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（Ｖ）、（ＶＩ）又は（ＶＩＩ）の化合物であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ８から選択される１個の置換基が、一般式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（Ｖ）、（ＶＩ）及び（ＶＩＩ）下で、上記で提供の定義を持たず、Ｌａ若しくはカルボニル基への結合を表す。
実施形態Ｂの場合、本発明による化合物は、下記の一般式（ＩＶａ′）又は（ＩＶａ″）又は（ＩＶａ″′）の抗体－プロドラッグ複合体（ＡＰＤＣ）である。
Figure 0007251981000020
Figure 0007251981000021
式中、ｍ、ｎ、ｏ、Ｒ、Ｌａ、Ｌｂ、Ｄ１、Ｘ、Ａ１、Ａ２及びＲ２は一般式（Ｉａ）で提供の定義を有し、ＡＢは抗体を表し、ｓは１～２０の数字、好ましくは２～８、より好ましくは３～５、例えば４を表す。この文脈において、Ｄ１は好ましくは、一般式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（Ｖ）、（ＶＩ）又は（ＶＩＩ）の化合物であり、一つの置換基Ｒ４が一般式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（Ｖ）、（ＶＩ）及び（ＶＩＩ）下で、上記で提供の定義を持たず、Ｌａ若しくはカルボニル基への結合を表す。
抗体（例えば上記の一般式（ＩＩＩａ）及び（ＩＶａ）におけるＡＢ）は、好ましくはヒト、ヒト化若しくはキメラモノクローナル抗体又はそれの抗原結合性断片、特別には抗ＴＷＥＡＫＲ抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗Ｂ７Ｈ３抗体若しくは抗ＨＥＲ２抗体又はこれらの抗原結合性断片である。特に好ましいものは、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－７００６、ＴＰＰ－７００７、ＴＰＰ－１０３３６及びＴＰＰ－１０３３７、抗Ｂ７Ｈ３抗体ＴＰＰ－８３８２及びＴＰＰ－８５６７、抗ＥＧＦＲ－抗体セツキシマブ（ＴＰＰ－９８１）及び抗ＨＥＲ２－抗体トラスツズマブ及びＴＰＰ－１０１５、又はこれらの抗原結合性断片である。
文献には、有機分子の抗体への共有結合（結合）の各種オプションも開示されている。本発明に従って好ましいのは、抗体のシステイン残基の１以上の硫黄原子を介した、及び／又は抗体のリジン残基の１以上のＮＨ基を介した抗体への結合である。しかしながら、抗体の遊離カルボキシル基を介して、又は糖残基を介して有機分子に結合することも可能である。
その抗体は、腫瘍細胞の細胞外標的分子に結合する。最も広い意味での「標的分子」は、標的細胞群に存在し、タンパク質（例えば増殖因子の受容体）若しくは非ペプチド分子（例えば糖又はリン脂質）であることができる分子を意味するものと理解される。それは好ましくは、受容体又は抗原である。
「細胞外」標的分子という用語は、細胞の外部上にある細胞に結合した標的分子、又は細胞の外部上にある標的分子の一部を説明するものであり、すなわち、抗体は無傷の細胞におけるそれの細胞外標的分子に結合することができる。細胞外標的分子は、細胞膜に固定されていることができるか、細胞膜の構成要素であることができる。当業者には、細胞外標的分子を同定する方法は明らかである。タンパク質については、これは、膜貫通ドメイン及び膜におけるタンパク質の配向を求めることで行うことができる。これらのデータは通常、タンパク質データベースに寄託されている（例えば、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ）。
「がん標的分子」という用語は、同じ組織型の非がん細胞上と比較して１以上のがん細胞種上により豊富に存在する標的分子を説明するものである。好ましくは、がん標的分子は、同じ組織型の非がん細胞と比較して１以上のがん細胞種上に選択的に存在し、その場合の選択的には、同じ組織型の非がん細胞と比較してがん細胞上に少なくとも２倍豊富であることを説明するものである（「選択的がん標的分子」）。がん標的分子の使用によって、本発明による複合体を用いるがん細胞の選択的療法が可能となる。
本発明による「バインダー」という用語は、バインダーペプチド、バインダーペプチドの誘導体、バインダータンパク質又はバインダータンパク質の誘導体を意味するものと理解される。バインダーは、結合を介してリンカーに連結される。バインダーは、バインダーのヘテロ原子によって連結されていることができる。連結に用いることができるバインダーの本発明でのヘテロ原子は、
バインダーのスルフヒドリル基を介した硫黄、
バインダーのカルボン酸基又はヒドロキシル基を介した酸素、及び
１級若しくは２級アミン基を介した窒素
である。
詳細には、本発明によれば、「バインダー」という用語は、抗体を意味するものと理解される。
上記で挙げたヘテロ原子は、天然抗体中に存在することができるか、化学的方法若しくは分子生物学の方法によって導入される。本発明によれば、式（Ｉ）の有機遊離基への抗体の結合は、標的分子に関する抗体の結合活性に対してはごくわずかな効果しか持たない。
好ましい実施形態において、前記連結は、標的分子に関するバインダーの結合活性に対する効果を持たない。
本発明によれば、「抗体」という用語は、それの最も広い意味で理解すべきであり、免疫グロブリン分子、例えば無傷もしくは修飾モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体または多特異的抗体（例えば二重特異抗体）を含む。免疫グロブリン分子は好ましくは、代表的にはジスルフィド架橋によって連結される四つのポリペプチド鎖、二つの重鎖（Ｈ鎖）および二つの軽鎖（Ｌ鎖）を有する分子を含む。各重鎖は、重鎖の可変ドメイン（略称ＶＨ）および重鎖の定常ドメインを含む。重鎖の定常ドメインは、例えば、三つのドメインＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３を含むことができる。各軽鎖は、可変ドメイン（略称ＶＬ）および定常ドメインを含む。軽鎖の定常ドメインは、ドメイン（略称ＣＬ）を含む。ＶＨおよびＶＬドメインは、超可変性を有する領域［相補性決定領域（略称ＣＤＲ）とも称される］および低い配列可変性を有する領域（フレームワーク領域、略称ＦＲ）にさらに細分することができる。代表的には、各ＶＨおよびＶＬ領域は、三つのＣＤＲおよび四つ以下のＦＲからなる。例えば、アミノ末端からカルボキシ末端に次の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４である。抗体は、いずれか好適な生物種、例えばウサギ、ラマ、ラクダ、マウスまたはラットから得ることができる。１実施形態において、抗体は、ヒトまたはマウス起源のものである。抗体は、例えばヒト、ヒト化またはキメラであることができる。
「モノクローナル」抗体という用語は、実質的に均一な抗体の群から得られる抗体を指し、すなわち、その群の個々の抗体は、数が少ない可能性がある自然突然変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は、高い特異性を有する単一抗原性結合部位を認識する。モノクローナル抗体という用語は、特定の製造プロセスを指さない。
「無傷」抗体という用語は、軽鎖および重鎖の抗原結合ドメインおよび定常ドメインの両方を含む抗体を指す。定常ドメインは、多くの修飾アミノ酸位置を有する天然ドメインまたはそれの変異体であることができる。
「修飾無傷」抗体という用語は、抗体起源ではないさらなるポリペプチドもしくはタンパク質との共有結合（例えば、ペプチド結合）によってアミノ末端またはカルボキシ末端を介して融合した無傷抗体を指す。さらに、抗体を修飾して、定義の位置で、反応性システインを導入して、担毒体へのカップリングを促進するようにすることができる（Ｊｕｎｕｔｕｌａ ｅｔ ａｌ． Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２００８， ２６（８）９２５－３２参照）。
「ヒト」抗体という用語は、ヒトから得ることができるか、合成ヒト抗体である抗体を指す。「合成」ヒト抗体は、ヒト抗体配列の分析に基づいて合成配列からイン・シリコで部分的または完全に得ることができる抗体である。ヒト抗体は、例えば、ヒト起源の抗体配列のライブラリから単離された核酸によってコードされ得る。そのような抗体の例が、Ｓｏｄｅｒｌｉｎｄ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ． ２０００， １８：８５３－８５６にある。
「ヒト化」または「キメラ」抗体という用語は、配列の非ヒトおよびヒト部分からなる抗体を説明するものである。これらの抗体において、ヒト免疫グロブリン（受容体）の配列の一部が、非ヒト免疫グロブリン（供与体）の配列部分によって置き換わっている。多くの場合で、供与体はマウス免疫グロブリンである。ヒト化抗体の場合、受容体のＣＤＲのアミノ酸が、供与体のアミノ酸によって置き換わっている。場合により、フレームワークのアミノ酸も、供与体の相当するアミノ酸によって置き換わっている。場合により、ヒト化抗体は、抗体の至適化時に導入された、受容体にも供与体にも存在しないアミノ酸を含む。キメラ抗体の場合、供与体免疫グロブリンの可変ドメインが、ヒト抗体の定常領域と融合している。
本明細書で使用される相補性決定領域（ＣＤＲ）という用語は、抗原への結合に必要な可変抗体ドメインのアミノ酸を指す。代表的には、各可変領域は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と称される三つのＣＤＲ領域を有する。各ＣＤＲ領域は、カバットの定義によるアミノ酸および／またはコチアに従って定義される超可変ループのアミノ酸を包含することができる。カバットによる定義は、例えば、可変軽鎖のほぼアミノ酸位置２４～３４（ＣＤＲ１）、５０～５６（ＣＤＲ２）および８９～９７（ＣＤＲ３）、そして可変重鎖の３１～３５（ＣＤＲ１）、５０～６５（ＣＤＲ２）および９５～１０２（ＣＤＲ３）からの領域を含む（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．， Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ， ５ｔｈ Ｅｄ． Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ， ＭＤ．（１９９１））。コチアによる定義は、例えば、可変軽鎖のほぼアミノ酸位置２６～３２（ＣＤＲ１）、５０～５２（ＣＤＲ２）および９１～９６（ＣＤＲ３）そして可変重鎖の２６～３２（ＣＤＲ１）、５３～５５（ＣＤＲ２）および９６～１０１（ＣＤＲ３）の領域を含む（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ； Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９６：９０１－９１７（１９８７））。場合により、ＣＤＲは、カバットおよびコチアに従って定義されるＣＤＲ領域からのアミノ酸を含むことができる。
重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、抗体は異なる群に分けることができる。無傷抗体の主要な５群：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭがあり、これらのうちのいくつかは、さらなる下位群（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２に分けることができる。異なる群に相当する重鎖の定常ドメインは、［アルファ／α］、［デルタ／δ］、［イプシロン／ε］、［ガンマ／γ］および［ミュー（ｍｙ）／μ］と称される。抗体の三次元構造およびサブユニット構造の両方が公知である。
抗体／免疫グロブリンの「機能性断片」または「抗原結合性抗体断片」という用語は、やはり抗体／免疫グロブリンの抗原結合性ドメインを含む抗体／免疫グロブリンの断片（例えば、ＩｇＧの可変ドメイン）と定義される。抗体の「抗原結合性ドメイン」は代表的には、抗体の１以上の超可変領域、例えばＣＤＲ、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３領域を含む。しかしながら、抗体の「フレームワーク」または「骨格」領域は、抗原に対する抗体の結合時に関与し得る。そのフレームワーク領域は、ＣＤＲの骨格を形成する。好ましくは、抗原結合性ドメインは、少なくとも可変軽鎖のアミノ酸４～１０３および可変重鎖のアミノ酸５～１０９、より好ましくは可変軽鎖のアミノ酸３～１０７および可変重鎖の４～１１１、特別に好ましくは完全な可変軽および重鎖、すなわちＶＬのアミノ酸１～１０９およびＶＨの１～１１３（ＷＯ９７／０８３２０による番号付け）を含む。
本発明の「機能性断片」または「抗原結合性抗体断片」は、Ｆａｂ、Ｆａｂ′、Ｆ（ａｂ′）２およびＦｖ断片、二重特異抗体、単一ドメイン抗体（ＤＡｂｓ）、線状抗体、抗体の個々の鎖（単鎖Ｆｖ、略称ｓｃＦｖ）；および多特異的抗体、例えば二重特異抗体および三重特異抗体、例えば抗体断片から形成されるものを包含するが、これらに限定されるものではない（Ｃ． Ａ． Ｋ Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ， ｅｄｉｔｏｒ （１９９５） Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ （Ｂｒｅａｋｔｈｒｏｕｇｈｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）， Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ； Ｒ． Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ＆Ｓ． Ｄｕｅｂｅｌ， ｅｄｉｔｏｒｓ （２００１） Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ）， Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ）。「多特異的」または「多機能性」抗体以外の抗体は、同一の結合部位を有するものである。多特異的抗体は、抗原の異なるエピトープに特異的であることができるか、複数の抗原のエピトープに特異的であることができる（例えば、ＷＯ９３／１７７１５；ＷＯ９２／０８８０２；ＷＯ９１／００３６０；ＷＯ９２／０５７９３；Ｔｕｔｔ， ｅｔ ａｌ．， １９９１， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １４７６０ ６９；米国特許第４，４７４，８９３号；同４，７１４，６８１号；同４，９２５，６４８号；同５，５７３，９２０号；同５，６０１，８１９号；またはＫｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．， １９９２， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １４８：１５４７１５５３参照）。Ｆ（ａｂ′）２またはＦａｂ分子は、Ｃｈ１ドメインとＣＬドメインの間で起こる分子間ジスルフィド相互作用の作用を低減または完全に防止することができるように構築することができる。
「エピトープ」は、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体に特異的に結合する能力を有するタンパク質決定基を指す。エピトープ決定基は通常、アミノ酸もしくは糖側鎖またはそれらの組み合わせなどの分子の化学的に活性な表面基からなり、通常は特異な三次元構造特性を有し、特異な電荷特性も有する。
「機能性断片」または「抗原結合性抗体断片」は、それのアミノ末端またはカルボキシル末端を介して、共有結合（例えばペプチド連結）によって、抗体を起源としない別のポリペプチドまたはタンパク質と融合していることができる。さらに、抗体および抗原結合性断片を、規定の場所で反応性システインを導入することで修飾して、担毒体へのカップリングを促進することができる（Ｊｕｎｕｔｕｌａ ｅｔ ａｌ． Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２００８ Ａｕｇ；２６（８）９２５－３２参照）。
ポリクローナル抗体は、当業者に公知の方法によって作ることができる。モノクローナル抗体は、当業者に公知の方法によって作ることができる（Ｋｏｅｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ, Ｎａｔｕｒｅ, ２５６, ４９５－４９７, １９７５）。ヒトおよびヒト化モノクローナル抗体は、当業者に公知の方法によって作ることができる（Ｏｌｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．, Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ． ９２, ３－１６またはＣａｂｉｌｌｙ ｅｔ ａｌ ＵＳ ４，８１６，５６７またはＢｏｓｓ ｅｔ ａｌ ＵＳ４，８１６，３９７）。
当業者は、例えば、トランスジェニックマウス（Ｎ Ｌｏｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｄ Ｈｕｓｚａｒ， Ｉｎｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １９９５； １３（１）６５－９３）またはファージ提示技術（Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ． １９９１ Ａｕｇ １５；３５２（６３３６）６２４－８）によってヒト抗体およびそれの断片を作る多様な方法を知っている。本発明の抗体は、例えば非常に多数の健常志願者から集めた非常に多数の抗体のアミノ酸配列からなる組換え抗体ライブラリーから得ることができる。抗体は、公知の組換えＤＮＡ技術によって作ることも可能である。抗体の核酸配列は、通常の配列決定によって得ることができるか、公開でアクセス可能なデータベースから入手することができる。
「単離」抗体またはバインダーは、精製されて細胞の他の構成要素が除去されたものである。診断的使用または治療的使用を妨害し得る細胞の汚染構成要素は、例えば、酵素類、ホルモン類、または細胞の他のペプチドもしくは非ペプチド構成要素である。好ましい抗体またはバインダーは、抗体またはバインダーに対して９５重量％強の範囲（例えばローリー法、ＵＶ－Ｖｉｓスペクトル分析またはＳＤＳキャピラリーゲル電気泳動によって測定）まで精製されているものである。さらに、アミノ末端もしくは内部アミノ酸配列の少なくとも１５個のアミノ酸を決定することができる程度まで精製されている抗体、または均一となるまで精製された（均一性は還元条件もしくは非還元条件下のＳＤＳ－ＰＡＧＥによって決定される（検出は、クマシー・ブルー（Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ Ｂｌａｕ）染色または好ましくは銀着色によって決定することができる。）。）抗体である。しかしながら、抗体は通常は、１以上の精製段階によって得られる。
「特異的結合」または「特異的に結合する」という用語は、所定の抗原／標的分子に結合する抗体またはバインダーを指す。抗体またはバインダーの特異的結合は代表的には、少なくとも１０－７Ｍのアフィニティを有する抗体またはバインダーを説明するものであり（Ｋｄ値として；すなわち好ましくは１０ －７ Ｍより小さいＫｄ値を有するもの）、その抗体またはバインダーは所定の抗原／標的分子でも非常に関連の深い抗原／標的分子でもない非特異的抗原／標的分子（例えばウシ血清アルブミンまたはカゼイン）に対してより、所定の抗原／標的分子に対して少なくとも２倍高いアフィニティを有する。その抗体は好ましくは、少なくとも１０－７Ｍ（Ｋｄ値として；すなわち、好ましくは１０－７Ｍより小さいＫｄ値を有するもの）、好ましくは少なくとも１０－８Ｍ、より好ましくは１０－９Ｍから１０－１１Ｍの範囲のアフィニティを有する。Ｋｄ値は、例えば表面プラズモン共鳴分光法によって測定することができる。
本発明の抗体－薬物複合体は同様に、これらの範囲のアフィニティを示す。そのアフィニティは、好ましくは薬物の結合によってほとんど影響を受けない（概して、そのアフィニティは一桁未満低下し、すなわち、例えば、多くとも１０－８Ｍから１０－７Ｍである。）。
本発明に従って使用される抗体は、好ましくは高い選択性についても注目すべきものである。高い選択性が存在するのは、本発明の抗体が、独立の他の抗原、例えばヒト血清アルブミンに対してより少なくとも２倍、好ましくは５倍、またはより好ましくは１０倍良好な標的タンパク質に対するアフィニティを示す場合である（アフィニティは、例えば表面プラズモン共鳴分光法によって測定することができる。）。
さらに、使用される本発明の抗体は、好ましくは交差反応性である。前臨床試験、例えば毒性試験または活性試験（例えば、異種移植マウスでの試験）を容易にし、より良好に解釈できるようにするために、本発明に従って使用される抗体がヒト標的タンパク質に結合するだけでなく、試験に用いられる生物における生物標的タンパク質にも結合する場合が有利である。１実施形態において、本発明に従って使用される抗体は、ヒト標的タンパク質に加えて、少なくとも一つの別の生物種の標的タンパク質に対して交差反応性である。毒性試験および活性試験に関しては、齧歯類、イヌおよび非ヒト霊長類の科の生物を用いることが好ましい。好ましい齧歯類種は、マウスおよびラットである。好ましい非ヒト霊長類は、アカゲザル、チンパンジーおよびカニクイザルである。
１実施形態において、本発明に従って用いられる抗体は、ヒト標的タンパク質に加えて、マウス、ラットおよびカニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）からなる生物種の群から選択される少なくとも一つの別の生物種の標的タンパク質に対して交差反応性である。特別に好ましいものは、ヒト標的タンパク質に加えて、少なくともマウス標的タンパク質に対して交差反応性である本発明に従って用いられる抗体である。好ましいものは、前記別の非ヒト生物種の標的タンパク質に対するアフィニティがヒト標的タンパク質に対するアフィニティと５０倍まで、詳細には１０倍まで異なる交差反応性抗体である。
がん標的分子に対する抗体
バインダー、例えば抗体またはそれの抗原結合性断片が向かう標的分子は、好ましくはがん標的分子である。「がん標的分子」という用語は、同じ組織型の非がん細胞上より１以上のがん細胞種上で豊富に存在する標的分子を説明するものである。好ましくは、がん標的分子は、同じ組織型の非がん細胞と比較して１以上のがん細胞種上に選択的に存在し、「選択的に」とは、同じ組織型の非がん細胞と比較してがん細胞上で少なくとも２倍豊富であることを説明するものである（「選択的がん標的分子」）。がん標的分子を用いることで、本発明による複合体を用いるがん細胞の選択的療法が可能となる。
抗原、例えばがん細胞抗原に対して特異的である抗体は、当業者が熟知している方法（例えば、組み換え発現）、または市販の方法（例えば、Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ， Ｇｅｒｍａｎｙから）によって、当業者が製造することができる。がん療法における公知の市販抗体の例には、Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標）（セツキシマブ、Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ）、Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）（ベバシズマブ、Ｒｏｃｈｅ）およびＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（トラスツズマブ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）である。トラスツズマブは、細胞に基づくアッセイで（Ｋｄ＝５ｎＭ）、ヒト表皮成受容体の細胞外ドメインに高アフィニティで結合するＩｇＧ１κ型の組み換えヒト化モノクローナル抗体である。その抗体は、ＣＨＯ細胞で組み換え的に産生される。
好ましい実施形態において、標的分子は選択的がん標的分子である。
特に好ましい実施形態において、標的分子はタンパク質である。
１実施形態において、標的分子は細胞外標的分子である。好ましい実施形態において、細胞外標的分子はタンパク質である。
がん標的分子は当業者には公知である。これらの例を以下に列記する。
がん標的分子の例は次のものである。
（１）ＥＧＦＲ（ＥＧＦ受容体、ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿００５２１９．２、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１９５６）
（２）メソテリン（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ参照番号Ｑ１３４２１－３）、メソテリンはアミノ酸２９６～５９８によってコードされる。アミノ酸３７～２８６は、巨核球強化因子をコードしている。メソテリンは、ＧＰＩアンカーを介して細胞膜に固定されており、細胞外で局在している。
（３）炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡ９、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ参照番号Ｑ１６７９０）、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：７６８）
（４）Ｃ４．４ａ（ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿０５５２１５．２；同義語ＬＹＰＤ３、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：２７０７６）
（５）ＣＤ５２（ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ_００１７９４．２）
（６）ＨＥＲ２（ＥＲＢＢ２；ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ_００４４３９．２；ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：２０６４）
（７）ＣＤ２０（ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ_０６８７６９．２）
（８）リンパ球活性化抗原ＣＤ３０（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ２８９０８）
（９）リンパ球接着分子ＣＤ２２（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ２０２７３；ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：９３３）
（１０）骨髄（ｍｙｌｏｉｄ）細胞表面抗原ＣＤ３３（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ２０１３８；ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：９４５）
（１１）膜貫通糖タンパク質ＮＭＢ（ＧＰＮＭＢ、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ ＩＤ Ｑ１４９５６、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１０４５７）
（１２）接着分子ＣＤ５６（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ１３５９１）
（１３）表面分子ＣＤ７０（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ３２９７０、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：９７０）
（１４）表面分子ＣＤ７４（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ０４２３３、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：９７２）
（１５）Ｂ－リンパ球抗原ＣＤ１９（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ１５３９１、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：９３０）
（１６）表面タンパク質ムチン－１（ＭＵＣ１、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ１５９４１、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：４５８２）
（１７）表面タンパク質ＣＤ１３８（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ１８８２７）
（１８）インテグリンαＶ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ_００２２０１．１、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：３６８５）
（１９）奇形癌由来増殖因子１タンパク質ＴＤＧＦ１（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ_００３２０３．１、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：６９９７）
（２０）前立腺特異的膜抗原ＰＳＭＡ（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ ＩＤ：Ｑ０４６０９；ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：２３４６）
（２１）チロシンタンパク質キナーゼＥＰＨＡ２（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ ＩＤ：Ｐ２９３１７、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１９６９）
（２２）表面タンパク質ＳＬＣ４４Ａ４（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ_００１１７１５１５．１、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：８０７３６）
（２３）表面タンパク質ＢＭＰＲ１Ｂ（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｏ００２３８）
（２４）輸送タンパク質ＳＬＣ７Ａ５（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ０１６５０）
（２５）表皮前立腺抗原ＳＴＥＡＰ１（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ９ＵＨＥ８、遺伝子ＩＤ：２６８７２）
（２６）卵巣癌抗原ＭＵＣ１６（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ８ＷＸＩ７、遺伝子ＩＤ：９４０２５）
（２７）輸送タンパク質ＳＬＣ３４Ａ２（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｏ９５４３６、遺伝子ＩＤ：１０５６８）
（２８）表面タンパク質ＳＥＭＡ５ｂ（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ９Ｐ２８３）
（２９）表面タンパク質ＬＹＰＤ１（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ８Ｎ２Ｇ４）
（３０）エンドセリン受容体Ｂ型ＥＤＮＲＢ（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｐ２４５３０、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１９１０）
（３１）薬指タンパク質ＲＮＦ４３（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ６８ＤＶ７）
（３２）前立腺癌関連タンパク質ＳＴＥＡＰ２（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ８ＮＦＴ２）
（３３）カチオンチャンネルＴＲＰＭ４（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ８ＴＤ４３）
（３４）補体受容体ＣＤ２１（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｐ２００２３）
（３５）Ｂ細胞抗原受容体複合体関連タンパク質ＣＤ７９ｂ（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｐ４０２５９、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：９７４）
（３６）細胞接着抗原ＣＥＡＣＡＭ６（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｐ４０１９９）
（３７）ジペプチダーゼＤＰＥＰ１（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｐ１６４４４）
（３８）インターロイキン受容体ＩＬ２０Ｒα（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ９ＵＨＦ４、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：３５５９）
（３９）プロテオグリカンＢＣＡＮ（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ９６ＧＷ７）
（４０）エフリン受容体ＥＰＨＢ２（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｐ２９３２３）
（４１）前立腺幹細胞関連タンパク質ＰＳＣＡ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ_００５６６３．２）
（４２）表面タンパク質ＬＨＦＰＬ３（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ８６ＵＰ９）
（４３）受容体タンパク質ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ９６ＲＪ３）
（４４）Ｂ細胞抗原受容体複合体関連タンパク質ＣＤ７９ａ（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｐ１１９１２）
（４５）受容体タンパク質ＣＸＣＲ５（ＣＤ１８５；ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｐ３２３０２；ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ６４３、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ_００１７０７．１）
（４６）イオンチャンネルＰ２Ｘ５（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ９３０８６）
（４７）リンパ球抗原ＣＤ１８０（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ９９４６７）
（４８）受容体タンパク質ＦＣＲＬ１（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ９６ＬＡ６）
（４９）受容体タンパク質ＦＣＲＬ５（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ９６ＲＤ９）
（５０）ＭＨＣクラスＩＩ分子Ｉａ抗原ＨＬＡ－ＤＯＢ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ_００２１１１．１）
（５１）Ｔ細胞タンパク質ＶＴＣＮ１（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ７Ｚ７Ｄ３）
（５２）ＴＷＥＡＫＲ（ＦＮ１４、ＴＮＦＲＳＦ１２Ａ、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ_０５７７２３．１、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：５１３３０）
（５３）リンパ球抗原ＣＤ３７（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｐ１１０４９、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：９５１）
（５４）ＦＧＦ受容体２；ＦＧＦＲ２（ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：２２６３；公式記号：ＦＧＦＲ２）。ＦＧＦＲ２受容体は、各種スプライス変異体（α、β、ＩＩＩｂ、ＩＩＩｃ）で生じる。全てのスプライス変異体が標的分子として働き得る。
（５５）膜貫通糖タンパク質Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６；ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：８０３８１ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ_００１０１９９０７．１、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ５ＺＰＲ３－１）
（５６）Ｂ細胞受容体ＢＡＦＦＲ（ＣＤ２６８；ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１１５６５０）
（５７）受容体タンパク質ＲＯＲ１（ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：４９１９）
（５８）表面受容体ＣＤ１２３（ＩＬ３ＲＡ；ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：３５６３；ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ_００２１７４．１；Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ：Ｐ２６９５１）
（５９）受容体タンパク質シンシチン（ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ３０８１６）
（６０）アスパラギン酸β－ヒドロキシラーゼ（ＡＳＰＨ；ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ４４４）
（６１）細胞表面糖タンパク質ＣＤ４４（ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：９６０）
（６２）ＣＤＨ１５（カドヘリン１５、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１０１３）
（６３）細胞表面糖タンパク質ＣＥＡＣＡＭ５（ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１０４８）
（６４）細胞接着分子Ｌ１様（ＣＨＬ１、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１０７５２）
（６５）受容体チロシンキナーゼｃ－Ｍｅｔ（ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：４２３３）
（６６）ノッチリガンドＤＬＬ３（ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１０６８３）
（６７）エフリンＡ４（ＥＦＮＡ４、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１９４５）
（６８）エクトヌクレオチドピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼ３（ＥＮＰＰ３、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：５１６９）
（６９）凝固因子ＩＩＩ（Ｆ３、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：２１５２）
（７０）ＦＧＦ受容体３（ＦＧＦＲ３、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：２２６１）
（７１）葉酸ヒドロラーゼＦＯＬＨ１（ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：２３４６）
（７２）葉酸受容体１（ＦＯＬＲ１；ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：２３４８）
（７３）グアニル酸シクラーゼ２Ｃ（ＧＵＣＹ２Ｃ、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：２９８４）
（７４）ＫＩＴプロトオンコジーン受容体チロシンキナーゼ（ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：３８１５）
（７５）リソソーム膜タンパク質１（ＬＡＭＰ１、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：３９１６）
（７６）リンパ球抗原６複合体、座Ｅ（ＬＹ６Ｅ、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：４０６１）
（７７）タンパク質ＮＯＴＣＨ３（ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：４８５４）
（７８）タンパク質チロシンキナーゼ７（ＰＴＫ７、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：５７５４）
（７９）ネクチン細胞接着分子４（ＰＶＲＬ４、ＮＥＣＴＩＮ４、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：８１６０７）
（８０）膜貫通タンパク質シンデカン１（ＳＤＣ１、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：６３８２）
（８１）ＳＬＡＭファミリーメンバー７（ＳＬＡＭＦ７、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：５７８２３）
（８２）輸送タンパク質ＳＬＣ３９Ａ６（ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：２５８００）
（８３）ＳＬＩＴ－及びＮＴＲＫ－様ファミリーメンバー６（ＳＬＩＴＲＫ６、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：８４１８９）
（８４）細胞表面受容体ＴＡＣＳＴＤ２（ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：４０７０）
（８５）受容体タンパク質ＴＮＦＲＳＦ８（ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：９４３）
（８６）受容体タンパク質ＴＮＦＳＦ１３Ｂ（ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１０６７３）
（８７）糖タンパク質ＴＰＢＧ（ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：７１６２）
（８８）細胞表面受容体ＴＲＯＰ２（ＴＡＣＳＴＤ２、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：４０７０）
（８９）ガラニン様Ｇタンパク質共役型受容体ＫＩＳＳ１Ｒ（ＧＰＲ５４、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：８４６３４）
（９０）輸送タンパク質ＳＬＡＭＦ６（ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：１１４８３６）。
本発明の好ましい主題において、がん標的分子は、がん標的分子（１）～（９０）、特にはＴＷＥＡＫＲ、Ｂ７Ｈ３、ＥＧＦＲ及びＨＥＲ２からなる群から選択される。
本発明のさらなる特に好ましい主題において、バインダーは、がん標的分子（１）～（９０）、特にはＴＷＥＡＫＲ、Ｂ７Ｈ３、ＥＧＦＲ及びＨＥＲ２からなる群から選択される細胞外がん標的分子に結合する。
本発明のさらなる特に好ましい主題において、バインダーは、がん標的分子（１）～（９０）、特にはＴＷＥＡＫＲ、Ｂ７Ｈ３、ＥＧＦＲ及びＨＥＲ２からなる群から選択される細胞外がん標的分子に特異的に結合する。好ましい実施形態において、バインダーは、標的細胞上のそれの細胞外標的分子への結合後に、その結合によって標的細胞によって取り込まれる。これによって、免疫複合体またはＡＤＣであることができるバインダー－薬物複合体が、標的細胞によって取り込まれることになる。次に、バインダーが、好ましくは細胞内で、好ましくはリソソームで処理される。
１実施形態において、バインダーは、結合タンパク質である。好ましい実施形態において、バインダーは、抗体、抗原結合抗体断片、多特異的抗体または抗体模倣体である。
好ましい抗体模倣体は、アフィボディ類、アドネクチン類、アンチカリン類、ＤＡＲＰｉｎ類、アビメール類、またはナノボディ類である。好ましい多特異的抗体は、二重特異性および三重特異性抗体である。
好ましい実施形態において、バインダーは、抗体または抗原結合抗体断片、より好ましくは単離抗体または単離抗原結合抗体断片である。
好ましい抗原結合抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ′、Ｆ（ａｂ′）２およびＦｖ断片、二重特異性抗体、ＤＡｂｓ、直鎖抗体およびｓｃＦｖである。特に好ましいのは、Ｆａｂ、二重特異性抗体およびｓｃＦｖである。
特に好ましい実施形態において、バインダーは抗体である。特に好ましいのは、モノクローナル抗体またはそれの抗原結合抗体断片である。さらなる特に好ましいものは、ヒト、ヒト化もしくはキメラ抗体またはそれの抗原結合抗体断片である。
がん標的分子に結合する抗体または抗原結合抗体断片は、例えば化学合成または組換え発現などの公知の方法を用いて当業者が作ることができる。がん標的分子についてのバインダーは、商業的に入手できるか、例えば化学合成または組換え発現などの公知の方法を用いて当業者が作ることができる。抗体または抗原結合性抗体断片を作るさらなる方法については、ＷＯ２００７／０７０５３８に記載されている（２２頁「抗体」参照）。当業者であれば、ファージ提示ライブラリー（例えばＭｏｒｐｈｏｓｙｓ ＨｕＣＡＬ Ｇｏｌｄ）などのプロセスを収集および使用して抗体または抗原結合性抗体断片を発見する方法については知っている（ＷＯ２００７／０７０５３８、２４頁以降および７０頁のＡＫ実施例１、７２頁のＡＫ実施例２参照）。Ｂ細胞からのＤＮＡライブラリーを用いるさらなる抗体取得方法が、例えば２６頁（ＷＯ２００７／０７０５３８）に記載されている。ヒト化抗体についてのプロセスは、ＷＯ２００７０７０５３８の３０－３２頁に記載されており、Ｑｕｅｅｎ、ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｓ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８６：１００２９－１００３３， １９８９またはＷＯ９０／０７８６に詳細に記載されている。さらに、タンパク質一般および特に抗体の組換え発現方法は当業者には公知である（例えば、Ｂｅｒｇｅｒ ａｎｄ Ｋｉｍｒｎｅｌ （Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ， Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ， Ｖｏ１． １５２， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ, Ｉｎｃ）：Ｓａｍｂｒｏｏｋ, ｅｔ ａｌ．， （Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， （Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ； Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， Ｎ．Ｙ．； １９８９） Ｖｏｌ． １－３）； Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， （Ｆ． Ｍ． Ａｕｓａｂｅｌ ｅｔ ａｌ． ［Ｅｄｓ．］， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ， Ｇｒｅｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ， Ｉｎｃ． ／ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， Ｉｎｃ．）； Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．， （Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ （１９８８１， Ｐａｕｌ ［Ｅｄ．］）； Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， （Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ （１９９８））； ａｎｄ Ｈａｒｌｏｗ， ｅｔ ａｌ．， （Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ （１９９８）参照）。当業者であれば、タンパク質／抗体の発現に必要な相当するベクター、プロモーターおよびシグナルペプチドは知っている。通常プロセスが、ＷＯ２００７／０７０５３８の４１－４５頁にも記載されている。ＩｇＧ１抗体の取得方法が、例えばＷＯ２００７／０７０５３８の７４頁以降の実施例６に記載されている。抗原への結合後の抗体の取り込みの決定を可能とするプロセスが当業者には公知であり、例えばＷＯ２００７／０７０５３８の８０頁に記載されている。当業者は、異なる標的分子特異性を有する抗体の作製と同様にして炭酸脱水酵素ＩＸ（Ｍｎ）抗体を作るのに用いられているＷＯ２００７／０７０５３８に記載の方法を用いることができる。
細菌発現
当業者は、細菌発現を用いて抗体、それの抗原結合性断片又はそれの変異体を産生可能な方法については承知している。
所望のタンパク質の細菌発現の好適な発現ベクターは、好適な翻訳開始及び翻訳終止シグナル並びに機能性プロモーターとともに機能性リーディングフレーム内に所望のタンパク質をコードするＤＮＡ結合効率を低下配列の挿入によって構築される。そのベクターは、１以上の表現型的に選択可能なマーカー並びにベクターの保持及び所望に応じて宿主内でのそれの増幅を可能とするための複製起点を含む。形質転換のための好適な原核宿主には、大腸菌（Ｅ． ｃｏｌｉ）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）並びにシュードモナス属、ストレプトミセス属及びブドウ球菌属からの各種菌種などがあるが、これらに限定されるものではない。細菌ベクターは、例えば、バクテリオファージ、プラスミド又はファージミドに基づくものであることができる。これらのベクターは、市販のプラスミド由来である選択可能マーカー及び細菌複製起点を含むことができる。代表的には、多くの市販のプラスミドが公知のクローニングベクターｐＢＲ３２２（ＡＴＣＣ３７０１７）の要素を含む。細菌系において、多くの有利な発現ベクターは、発現されるべきタンパク質の所期の使用に基づいて選択することができる。
好適な宿主株の形質転換及び適切な細胞密度までの当該宿主株の増殖後、選択されたプロモーターを好適な手段（例えば、温度変化又は化学的誘発）によって脱再プライミング（ｄｅ－ｒｅｐｒｉｍｅｄ）／誘発し、細胞をさらなる期間にわたって培養する。細胞は代表的には遠心によって回収され、必要に応じて物理的に又は化学的手段で消化され、得られる生抽出液をさらなる精製のために保持する。
従って、本発明のさらなる実施形態は、本発明の新規な抗体をコードする核酸を含む発現ベクターである。
本発明の抗体又はそれの抗原結合性断片には、天然精製産物、化学合成起源である産物、及び原核宿主、例えば大腸菌（Ｅ． ｃｏｌｉ）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）並びにシュードモナス属、ストレプトミセス属及びブドウ球菌属からの各種菌種、好ましくは大腸菌（Ｅ． ｃｏｌｉ）における組み換え技術によって産生される産物などがある。
哺乳動物細胞発現
当業者には、哺乳動物細胞発現を用いて抗体、それの抗原結合性断片又はそれの変異体を産生可能な方法については承知している。
哺乳動物細胞宿主での発現に好ましい調節配列には、哺乳動物細胞での高発現に至るウィルス要素、例えばサイトメガロウィルス（ＣＭＶ）由来のプロモーター及び／又は発現増幅因子（例えば、ＣＭＶプロモーター／エンハンサー）、シミアン・ウイルス４０（ＳＶ４０）（例えば、ＳＶ４０プロモーター／エンハンサー）、アデノウィルスからのもの（例えば、アデノウィルスの主要後期プロモーター（ＡｄＭＬＰ））及びポリオーマからのものなどがある。抗体の発現は、構成的であるか、調節されていることができる（例えば、Ｔｅｔシステムと組み合わせたテトラサイクリンなどの小分子感応物質の付加又は除去によって誘発される）。
ウィルス調節要素及びそれの配列のさらなる説明については、例えば、Ｓｔｉｎｓｋｉによる米国特許第５，１６８，０６２号、Ｂｅｌｌらによる米国特許第４，５１０，２４５号、及びＳｃｈａｆｆｎｅｒらによる米国特許第４，９６８，６１５号を参照する。その組み換え発現ベクターにも同様に、複製起点及び選択可能マーカーなどがあり得る（例えば、米国特許第４，３９９，２１６号、同４，６３４，６６５号及び同５，１７９，０１７号参照）。好適な選択可能マーカーには、Ｇ４１８、ピューロマイシン、ハイグロマイシン、ブラストサイジン、ゼオシン／ブレオマイシン若しくはメトトレキセートなどの物質に対する抵抗性を賦与する遺伝子、又はベクターが細胞に導入されている場合にはグルタミン合成酵素などの宿主細胞の栄養要求性を生じさせる選択可能マーカーなどがある（Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ （Ｎ Ｙ）． １９９２ Ｆｅｂ；１０（２）：１６９－７５）。
例えば、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）遺伝子はメトトレキセートに対する耐性を賦与し、ｎｅｏ遺伝子はＧ４１８に対する耐性を賦与し、アスペルギルス・テレウス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｔｅｒｒｅｕｓ）からのｂｓｄ遺伝子はブラストサイジンに対する耐性を賦与し、ピューロマイシンＮ－アセチルトランスフェラーゼはピューロマイシンに対する耐性を賦与し、Ｓｈ ｂｌｅ遺伝子産物はゼオシンに対する耐性を賦与し、ハイグロマイシンに対する耐性が大腸菌（Ｅ． ｃｏｌｉ）ハイグロマイシン耐性遺伝子（ｈｙｇ又はｈｐｈ）によって賦与される。ＤＨＦＲ又はグルタミン合成酵素などの選択可能マーカーも、ＭＴＸ及びＭＳＸと組み合わせて増幅技術に役立つ。
発現ベクターの宿主細胞へのトランスフェクションを、エレクトロポレーション、ヌクレオフェクション、リン酸カルシウム沈殿、リポフェクション、ポリカチオンに基づくトランスフェクション、例えばポリエチレンイミン（ＰＥＩ）に基づくトランスフェクション及びＤＥＡＥ－デキストラントランスフェクションなどの標準的技術を用いて行うことができる。
抗体、それの抗原結合性断片又はそれの変異体の発現に好適な哺乳動物宿主細胞には、ＣＨＯ－Ｋ１、ＣＨＯ－Ｓ、ＣＨＯ－Ｋ１ＳＶなどのチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞［Ｒ． Ｊ． Ｋａｕｆｍａｎ ａｎｄ Ｐ． Ａ． Ｓｈａｒｐ （１９８２） Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． １５９：６０１－６２１に記載のＤＨＦＲ選択可能マーカーとともに使用されるＵｒｌａｕｂ ａｎｄ Ｃｈａｓｉｎ， （１９８０） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ７７：４２１６－４２２０及びＵｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．， Ｃｅｌｌ． １９８３ Ｊｕｎ；３３（２）：４０５－１２に記載のＤＨＦＲ－ＣＨＯ細胞、並びにＦａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ． ２０１２ Ａｐｒ；１０９（４）：１００７－１５に詳細に記載の他のノックアウト細胞など）、ＮＳ０骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＨＫＢ１１細胞、ＢＨＫ２１細胞、ＣＡＰ細胞、ＥＢ６６細胞、及びＳＰ２細胞などがある。
抗体、それの抗原結合性断片又はそれの変異体の発現は、ＨＥＫ２９３、ＨＥＫ２９３Ｔ、ＨＥＫ２９３－ＥＢＮＡ、ＨＥＫ２９３Ｅ、ＨＥＫ２９３－６Ｅ、ＨＥＫ２９３ Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅ、ＨＫＢ１１、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ、２９３ＥＢＮＡＬＴ７５、ＣＨＯ Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅ、ＣＨＯ－Ｓ、ＣＨＯ－Ｋ１、ＣＨＯ－Ｋ１ＳＶ、ＣＨＯＥＢＮＡＬＴ８５、ＣＨＯＳ－ＸＥ、ＣＨＯ－３Ｅ７又はＣＡＰ－Ｔ細胞などの発現系で、一時的又は半安定的に行うことができる（例えば、Ｄｕｒｏｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． ２００２ Ｊａｎ １５；３０（２）：Ｅ９のように）
一部の実施形態において、発現ベクターは、発現されるタンパク質が、宿主細胞が増殖している細胞培地中に分泌されるような形で構築される。抗体、それの抗原結合性断片又はそれの変異体は、当業者に公知のタンパク質精製法を用いて細胞培地から得ることができる。
精製
抗体、それの抗原結合性断片又はそれらの変異体は、公知の方法を用いて組み換え細胞培養物から取得及び精製することができ、その例には、硫酸アンモニウム又はエタノール沈殿、酸抽出、タンパク質Ａクロマトグラフィー、タンパク質Ｇクロマトグラフィー、アニオン若しくはカチオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）、アフィニティクロマトグラフィー、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー及びレクチンクロマトグラフィーなどがある。高速液体クロマトグラフィー（「ＨＰＬＣ」）も同様に、精製に用いることができる。例えば、Ｃｏｌｌｉｇａｎ， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， ｏｒ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， ＮＹ， Ｎ．Ｙ．， （１９９７－２００１）、例えば第１、４、６、８、９、１０章を参照する。
本発明の抗体若しくはそれの抗原結合性断片、又はそれらの変異体には、天然精製産物、化学合成法からの産物、及び原核若しくは真核宿主における組み換え技術を用いて産生される産物などがある。真核宿主には、例えば、酵母細胞、高度植物細胞、昆虫細胞及び哺乳動物細胞などがある。組み換え発現のために選択される宿主細胞に応じて、発現されるタンパク質は、グリコシル化型又は非グリコシル化型であることができる。
好ましい実施形態において、その抗体は、（１）例えば、ローリー法による、ＵＶ－可視分光法による、又はＳＤＳキャピラリーゲル電気泳動による（例えば、Ｃａｌｉｐｅｒ ＬａｂＣｈｉｐ ＧＸＩＩ、ＧＸ ９０又はＢｉｏｒａｄ Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ装置を用いて）測定で９５重量％強まで、及びより好ましい実施形態において９９重量％強まで、（２）Ｎ－末端又は内部アミノ酸配列の少なくとも１５個の残基の決定に好適な程度まで、又は（３）クマシー・ブルー若しくは好ましくは銀染色を用いて還元条件下若しくは非還元条件下でＳＤＳ－ＰＡＧＥによって測定される均一性まで精製される。
通常、単離抗体は、少なくとも一つのタンパク質精製段階を用いて得られる。
ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ断片又はＦ（ａｂ）２断片である、前記実施形態のいずれかによる抗原結合性断片又は前記実施形態のいずれかによる抗体の抗原結合性断片。
モノクローナル抗体又はそれの抗原結合性断片である、前記実施形態のいずれかによる抗体又は抗原結合性断片。
ヒト、ヒト化若しくはキメラ抗体又は抗原結合性断片である、前記実施形態のいずれかによる抗体又は抗原結合性断片。
抗ＴＷＥＡＫＲ抗体
本発明によれば、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体を用いることが可能である。
「抗ＴＷＥＡＫＲ抗体」又は「ＴＷＥＡＫＲに結合する抗体」という表現は、好ましくは診断及び／又は治療用途に十分なアフィニティを有して、がん標的分子ＴＷＥＡＫＲ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿０５７７２３．１、配列番号１６４）に特異的に結合する抗体に関するものである。特定の実施形態において、その抗体は、解離定数（ＫＤ）≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭでＴＷＥＡＫＲに結合する。
ＴＷＥＡＫＲに結合する抗体の例が、例えばＷＯ２００９／０２０９３３（Ａ２）、ＷＯ２００９／１４０１７７（Ａ２）、ＷＯ２０１４／１９８８１７（Ａ１）及びＷＯ２０１５／１８９１４３（Ａ１）に開示されている。これらの抗体及び抗原結合性断片は、本発明の文脈で用いることができる。
ＩＴＥＭ－４は、Ｎａｋａｙａｍａら（Ｎａｋａｙａｍａ， ｅｔ ａｌ．， ２００３， Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍ， ３０６：８１９－８２５）によって報告された抗ＴＷＥＡＫＲ抗体である。ＣＤＲ移植に基づくこの抗体のヒト化変異体は、Ｚｈｏｕらにより（Ｚｈｏｕ ｅｔ ａｌ．， ２０１３， Ｊ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ． １３３（４）：１０５２－６２）、そしてＷＯ２００９／０２０９３３に記載されている。ＩＴＥＭ－４のヒト化変異体は、ＴＰＰ－７００６、ＴＰＰ－７００７、ＴＰＰ－１０３３４、ＴＰＰ－１０３３５、ＴＰＰ－１０３３６及びＴＰＰ－１０３３７である。これらの抗体及び抗原結合性断片は、本発明の文脈で用いることができる。
本発明の文脈で、好ましいものは、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－２０９０、ＴＰＰ－２６５８、ＴＰＰ－５４４２、ＴＰＰ－８８２５、ＴＰＰ－７００６、ＴＰＰ－７００７、ＴＰＰ－１０３３４、ＴＰＰ－１０３３５、ＴＰＰ－１０３３６及びＴＰＰ－１０３３７である。より好ましいものは、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－７００６、ＴＰＰ－７００７、ＴＰＰ－１０３３４、ＴＰＰ－１０３３５、ＴＰＰ－１０３３６及びＴＰＰ－１０３３７である。特に好ましいものは、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－７００６、ＴＰＰ－７００７、ＴＰＰ－１０３３６及びＴＰＰ－１０３３７である。
抗Ｂ７Ｈ３抗体
本発明によれば、抗Ｂ７Ｈ３抗体を用いることが可能である。
「抗Ｂ７Ｈ３抗体」又は「Ｂ７Ｈ３に結合する抗体」という表現は、好ましくは診断及び／又は治療用途に十分なアフィニティを有して、がん標的分子Ｂ７Ｈ３（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００１０１９９０７．１、配列番号１６５）に特異的に結合する抗体に関するものである。特定の実施形態において、その抗体は、解離定数（ＫＤ）≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭでＢ７Ｈ３に結合する。
Ｂ７Ｈ３に結合する抗体及び抗原結合性断片の例は、当業者には公知であり、例えば、ＷＯ２０１１０９４００、ＥＰ１７７３８８４及びＷＯ２０１４０６１２７７に記載されている。ＥＰ２１２１００８には、抗Ｂ７Ｈ３抗体８Ｈ９及びそれのＣＤＲ配列が記載されている。
これらの抗体及び抗原結合性断片は、本発明の文脈で用いることができる。
抗Ｂ７Ｈ３抗体の好ましい実施形態は、組み換えマウスＢ７Ｈ３（マウスＣＤ２７６；遺伝子ＩＤ：１０２６５７）及びヒトＢ７Ｈ３（ヒトＣＤ２７６；遺伝子ＩＤ：８０３８１）を発現する細胞について抗体ファージディスプレイライブラリをスクリーニングすることで得た。得られた抗体を、ヒトＩｇＧ１フォーマットに変換した。抗Ｂ７Ｈ３抗体ＴＰＰ－８３８２が好ましい例である。
本発明の文脈において、好ましいものは、抗Ｂ７Ｈ３抗体ＴＰＰ－８３８２及びＴＰＰ－８５６７である。
抗ＨＥＲ２抗体：
本発明によれば、抗ＨＥＲ２抗体を用いることが可能である。
「抗ＨＥＲ２抗体」又は「ＨＥＲ２に結合する抗体」という表現は、好ましくは診断及び／又は治療用途に十分なアフィニティを有して、がん標的分子ＨＥＲ２（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００４４３９．２、配列番号１６６）に特異的に結合する抗体に関するものである。特定の実施形態において、その抗体は、解離定数（ＫＤ）≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭでＨＥＲ２に結合する。
がん標的分子ＨＥＲ２に結合する抗体の例は、トラスツズマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）である。トラスツズマブは、特に乳がん治療に用いられるヒト化抗体である。特に好ましい実施形態において、抗ＨＥＲ２抗体はＴＰＰ－１０１５（トラスツズマブ類縁体）である。
ＨＥＲ２に結合する抗体のさらなる例は、トラスツズマブ（ＩＮＮ７６３７、ＣＡＳ番号：ＲＮ：１８０２８８－６９－１）及びペルツズマブ（ＣＡＳ番号：３８０６１０－２７－５）に加えて、ＷＯ２００９／１２３８９４－Ａ２、ＷＯ２００／８１４０６０３－Ａ２、又はＷＯ２０１１／０４４３６８－Ａ２に開示の抗体でもある。抗ＨＥＲ２複合体の１例は、トラスツズマブ－エムタンシン（ＩＮＮ－番号９２９５）である。これらの抗体及び抗原結合性断片は、本発明の文脈で用いることができる。
本発明の文脈において、特に好ましいものは、抗ＨＥＲ２抗体トラスツズマブ及びＴＰＰ－１０１５である。
抗ＥＧＦＲ抗体
本発明によれば、抗ＥＧＦＲ抗体を用いることが可能である。
「抗ＥＧＦＲ抗体」又は「ＥＧＦＲに結合する抗体」という表現は、好ましくは診断及び／又は治療用途に十分なアフィニティを有して、がん標的分子ＥＧＦＲ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００５２１９．２、配列番号１６７）に特異的に結合する抗体に関するものである。特定の実施形態において、その抗体は、解離定数（ＫＤ）≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭでＥＧＦＲに結合する。
ある好ましい実施形態において、抗ＥＧＦＲ抗体は、ＴＰＰ－９８１（セツキシマブ）、パニツムマブ、ニモツズマブからなる群から選択される。特に好ましい実施形態において、抗ＥＧＦＲ抗体はＴＰＰ－９８１（セツキシマブ）である。
ＥＧＦＲ抗体のさらなる実施形態は次の通りである。
・ザルツムマブ／２Ｆ８／ＨｕＭａｘ－ＥＧＦｒ、Ｇｅｎｍａｂ Ａ／Ｓから（ＷＯ０２／１００３４８、ＷＯ２００４／０５６８４７、ＩＮＮ番号８６０５）
・ネシツムマブ／１１Ｆ８、ＩｍＣｌｏｎｅ／ＩＭＣ－１１Ｆ８、ＩｍＣｌｏｎｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．［Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ＆ Ｃｏ］から（ＷＯ２００５／０９０４０７（ＥＰ０１７３５３４８－Ａ１、ＵＳ２００７／０２６４２５３－Ａ１、ＵＳ７，５９８，３５０、ＷＯ２００５／０９０４０７－Ａ１）、ＩＮＮ番号９０８３）
・マツズマブ／抗ＥＧＦＲＭＡｂ、Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ／抗ＥＧＦＲ ＭＡｂ、Ｔａｋｅｄａ／ＥＭＤ７２０００／ＥＭＤ－６２００／ＥＭＤ－７２０００およびＥＭＤ－５５９００／ＭＡｂ４２５／モノクローナル抗体４２５、Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ／Ｔａｋｅｄａから（ＷＯ９２／１５６８３、ＩＮＮ番号８１０３（マツズマブ））
・ＲＧ－７１６０／ＧＡ－２０１／ＧＡ２０１／Ｒ－７１６０／Ｒ７１６０／ＲＧ７１６０／ＲＯ－４８５８６９６／ＲＯ－５０８３９４５／ＲＯ４８５８６９６／ＲＯ５０８３９４５、Ｇｌｙｃａｒｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ＡＧ（Ｒｏｃｈｅ Ｈｏｌｄｉｎｇ ＡＧ）から（ＷＯ２０１０／１１２４１３－Ａ１、ＷＯ２０１０／１１５５５４）
・ＧＴ－ＭＡＢ５．２－ＧＥＸ／ＣｅｔｕＧＥＸ、Ｇｌｙｃｏｔｏｐｅ ＧＭＢＨ（ＷＯ２００８／０２８６８６－Ａ２から（ＥＰ０１９００７５０－Ａ１、ＥＰ０１９１１７６６－Ａ１、ＥＰ０２０７３８４２－Ａ２、ＵＳ２０１０／００２８９４７－Ａ１）
・ＩＳＵ－１０１、Ｉｓｕ Ａｂｘｉｓ Ｉｎｃ（ＩＳＵ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ Ｌｔｄ）／Ｓｃａｎｃｅｌｌから（ＷＯ２００８／００４８３４－Ａ１）
・ＡＢＴ－８０６／ｍＡｂ－８０６／ｃｈ－８０６／抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体８０６、Ｌｕｄｗｉｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ／Ａｂｂｏｔｔ／Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓから（ＷＯ０２／０９２７７１、ＷＯ２００５／０８１８５４およびＷＯ２００９／０２３２６５）
・ＳＹＭ－００４（二つのキメラＩｇＧ１抗体（９９２および１０２４）からなる）、Ｓｙｍｐｈｏｇｅｎ Ａ／Ｓから（ＷＯ２０１０／０２２７３６－Ａ２）
・ＭＲ１－１／ＭＲ１－１ＫＤＥＬ、ＩＶＡＸ Ｃｏｒｐ（Ｔｅｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ Ｌｔｄ）から（Ｄｕｋｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）、（特許：ＷＯ２００１／０６２９３１－Ａ２）
・欠失変異体に対する抗体、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、Ａｍｇｅｎ／Ａｂｇｅｎｉｘから（ＷＯ２００５／０１０１５１、ＵＳ７，６２８，９８６）
・ＳＣ－１００、Ｓｃａｎｃｅｌｌ Ｌｔｄから（ＷＯ０１／０８８１３８－Ａ１）
・ＭＤＸ－４４７／ＥＭＤ８２６３３／ＢＡＢ－４４７／Ｈ４４７／ＭＡｂ、ＥＧＦＲ、Ｍｅｄａｒｅｘ／Ｍｅｒｃｋ ＫｇａＡ、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ（ＵＳ）／Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ（ＤＥ）／Ｔａｋｅｄａ（ＪＰ）から、（ＷＯ９１／０５８７１、ＷＯ９２／１５６８３）
・抗ＥＧＦＲ－Ｍａｂ、Ｘｅｎｃｏｒから（ＷＯ２００５／０５６６０６）
・ＤＸＬ－１２１８／抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体（癌）、ＩｎＮｅｘｕｓ、ＩｎＮｅｘｕｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｃから、Ｐｈａｒｍａｐｒｏｊｅｃｔｓ ＰＨ０４８６３８。
抗炭酸脱水酵素ＩＸ抗体
がん標的分子炭酸脱水酵素ＩＸに結合する抗体の例が、ＷＯ２００７／０７０５３８－Ａ２（例えば、請求項１～１６）に記載されている。
抗ＣＤ１２３抗体
「抗ＣＤ１２３抗体」又は「ＣＤ１２３に結合する抗体」という表現は、好ましくは診断及び／又は治療用途に十分なアフィニティを有して、がん標的分子ＣＤ１２３（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００２１７４．１；Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ：Ｐ２６９５１）に特異的に結合する抗体に関するものである。特定の実施形態において、その抗体は、解離定数（ＫＤ）≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭでＣＤ１２３に結合する。
Ｓｕｎら（Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．， １９９６， Ｂｌｏｏｄ ８７（１）８３－９２）は、ＩＬ－３Ｒα、ＣＤ１２３のＮ末端ドメインに結合するモノクローナル抗体７Ｇ３の形成及び特性について記載している。米国特許第６，１７７，０７８号（Ｌｏｐｅｚ）は、抗ＣＤ１２３抗体７Ｇ３に関するものである。この抗体のキメラ変異体（ＣＳＬ３６０）は、ＷＯ２００９／０７０８４４に記載されており、ヒト化版（ＣＳＬ３６２）がＷＯ２０１２／０２１９３４に記載されている。７Ｇ３抗体の配列がＥＰ２４２６１４８に開示されている。この配列は、ＣＤＲ移植によって得られるヒト化抗体の開始点を構成する。
細胞表面抗原結合後に、特に良好に取り込まれる抗体は、Ｋｕｏら（Ｋｕｏ ｅｔ ａｌ．， ２００９， Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ． ２０（１０）：１９７５－８２）によって開示の抗ＣＤ１２３抗体１２Ｆ１である。抗体１２Ｆ１は、抗体７Ｇ３より高いＣＤ１２３に対するアフィニティで結合し、細胞表面抗原結合後に、７Ｇ３より顕著に早く取り込まれる。１２Ｆ１に基づく二重特異的ｓｃＦｖ免疫融合タンパク質が、ＷＯ２０１３／１７３８２０に開示されている。
マウス７Ｇ３及び１２Ｆ１抗体のヒト化変異体が、生殖系列配列におけるＣＲＤ移植及びその後の至適化に基づいて形成される。
抗ＣＸＣＲ５抗体
「抗ＣＸＣＲ５抗体」又は「ＣＸＣＲ５に結合する抗体」という表現は、好ましくは診断及び／又は治療用途に十分なアフィニティを有して、がん標的分子ＣＸＣＲ５（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００１７０７．１）に特異的に結合する抗体に関するものである。特定の実施形態において、その抗体は、解離定数（ＫＤ）≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭでＣＸＣＲ５に結合する。
ＣＸＣＲ５に結合する抗体及び抗原結合性断片の例は当業者には公知であり、例えばＥＰ２１９５０２３に記載されている。
ラット抗体ＲＦ８Ｂ２（ＡＣＣ２１５３）についてのハイブリドーマ細胞をＤＳＭＺから購入し、その抗体の配列を標準法によって確認した。この配列は、ＣＤＲ移植によって得られるヒト化抗体についての開始点を構成する。
この抗体のヒト化変異体を、生殖系列配列へのＣＤＲ移植に基づいて形成する。
抗Ｃ４．４ａ抗体：
Ｃ４．４ａ抗体及び抗原結合性断片の例が、ＷＯ２０１２／１４３４９９Ａ２に記載されている。その抗体の配列は、ＷＯ２０１２／１４３４９９Ａ２の表１に提供されており、その表において、各行は、列１に列記された抗体の可変軽鎖又は可変重鎖の個々のＣＤＲアミノ酸配列を示す。
抗ＣＤ２０抗体：
がん標的分子ＣＤ２０に結合する抗体の１例は、リツキシマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）である。リツキシマブ（ＣＡＳ番号：１７４７２２－３１－７）は、非ホジキンリンパ腫の治療に用いられるキメラ抗体である。これらの抗体及びそれの抗原結合性断片は、本発明の文脈で用いることができる。
抗ＣＤ５２抗体：
がん標的分子ＣＤ５２に結合する抗体の１例は、アレムツズマブ（Ｇ酵素）である。アレムツズマブ（ＣＡＳ番号：２１６５０３－５７－０）は、慢性リンパ性白血病の治療に用いられるヒト化抗体である。これらの抗体及びそれの抗原結合性断片は、本発明の文脈で用いることができる。
抗メソテリン抗体：
抗メソテリン抗体の例が、例えばＷＯ２００９／０６８２０４に記載されている。ＷＯ２００９／０６８２０４に開示の全ての抗体及び抗原結合性断片を、本明細書で開示の本発明の文脈で用いることができる。より好ましくは、ＷＯ２００９／０６８２０４に開示の抗体はＭＦ－Ｔである。
抗ＣＤ３０抗体
がん標的分子ＣＤ３０に結合し、がん、例えばホジキンリンパ腫の治療に使用可能な抗体の例には、ブレンツキシマブ、イラツムマブ及びＷＯ２００８／０９２１１７、ＷＯ２００８／０３６６８８又はＷＯ２００６／０８９２３２に開示の抗体がある。抗ＣＤ３０複合体の１例は、ブレンツキシマブベドチン（ＩＮＮ番号９１４４）である。これらの抗体及びそれの抗原結合性断片は、本発明の文脈で用いることができる。
抗ＣＤ２２抗体
がん標的分子ＣＤ２２に結合し、がん、例えばリンパ腫の治療に使用可能な抗体の例は、イノツズマブ及びエプラツズマブである。抗ＣＤ２２複合体の例は、イノツズマブオゾガマイシン（ＩＮＮ番号８５７４）又は抗ＣＤ２２－ＭＭＡＥ及び抗ＣＤ２２－ＭＣ－ＭＭＡＥ（ＣＡＳ登録番号：それぞれ１３９５０４－５０－０及び４７４６４５－２７－７）である。これらの抗体及びそれの抗原結合性断片は、本発明の文脈で用いることができる。
抗ＣＤ３３抗体
がん標的分子ＣＤ３３に結合し、がん、例えば白血病の治療に用いることができる抗体の例は、ゲムツズマブ及びリンツズマブ（ＩＮＮ７５８０）である。抗ＣＤ３３複合体の１例は、ゲムツズマブ－オゾガマイシンである。これらの抗体及び抗原結合性断片は、本発明の文脈で用いることができる。
抗ＮＭＢ抗体
がん標的分子ＮＭＢに結合し、がん、例えばメラノーマ又は乳がんの治療に用いることができる抗体の例は、グレンバツムマブ（ＩＮＮ９１９９）である。抗ＮＭＢ複合体の例は、グレンバツムマブベドチン（ＣＡＳ登録番号：４７４６４５－２７－７）である。これらの抗体及びそれの抗原結合性断片は、本発明の文脈で用いることができる。
抗ＣＤ５６抗体
がん標的分子ＣＤ５６に結合し、がん、例えば多発性骨髄腫、小細胞肺癌、ＭＣＣ又は卵巣癌の治療に用いることができる抗体の例は、ロルボツズマブである。抗ＣＤ５７複合体の例は、ロルボツズマブメルタンシン（ＣＡＳ登録番号：１３９５０４－５０－０）である。これらの抗体及び抗原結合性断片は、本発明の文脈で用いることができる。
抗ＣＤ７０抗体
がん標的分子ＣＤ７０に結合し、がん、例えば非ホジキンリンパ腫又は腎細胞がんの治療に用いることができる抗体の例が、ＷＯ２００７／０３８６３７－Ａ２及びＷＯ２００８／０７０５９３－Ａ２に開示されている。抗ＣＤ７０複合体の１例は、ＳＧＮ－７５（ＣＤ７０ＭＭＡＦ）である。これらの抗体及び抗原結合性断片は、本発明の文脈で用いることができる。
抗ＣＤ７４抗体
がん標的分子ＣＤ７４に結合し、がん、例えば多発性骨髄腫の治療に用いることができる抗体の例はミラツズマブである。抗ＣＤ７４複合体の１例はミラツズマブ－ドキソルビシン（ＣＡＳ登録番号：２３２１４－９２－８）である。これらの抗体及び抗原結合性断片は、本発明の文脈で用いることができる。
抗ＣＤ１９抗体
がん標的分子ＣＤ１９に結合し、がん、例えば非ホジキンリンパ腫の治療に用いることができる抗体の例が、ＷＯ２００８／０３１０５６－Ａ２に開示されている。さらなる抗体及び抗ＣＤ１９複合体の例（ＳＡＲ３４１９）が、ＷＯ２００８／０４７２４２－Ａ２に開示されている。これらの抗体及びそれの抗原結合性断片は、本発明の文脈で用いることができる。
抗ムチン抗体
がん標的分子ムチン－１に結合し、がん、例えば非ホジキンリンパ腫の治療に用いることができる抗体の例は、クリバツズマブ及びＷＯ２００３／１０６４９５－Ａ２、ＷＯ２００８／０２８６８６－Ａ２に開示の抗体である。抗ムチン複合体の例が、ＷＯ２００５／００９３６９－Ａ２に開示されている。これらの抗体及びそれの抗原結合性断片は、本発明の文脈で用いることができる。
抗ＣＤ１３８抗体
がん標的分子ＣＤ１３８及びそれの複合体に結合し、がん、例えば多発性骨髄腫の治療に用いることができる抗体の例が、ＷＯ２００９／０８０８２９－Ａ１、ＷＯ２００９／０８０８３０－Ａ１に開示されている。これらの抗体及びそれの抗原結合性断片は、本発明の文脈で用いることができる。
抗インテグリン－αＶ抗体
がん標的分子インテグリンαＶに結合し、がん、例えばメラノーマ、肉腫又は癌腫の治療に用いることができる抗体の例は、インテツムマブ（ＣＡＳ登録番号：７２５７３５－２８－４）、アブシキシマブ（ＣＡＳ登録番号：１４３６５３－５３－６）、エタラジズマブ（ＣＡＳ登録番号：８９２５５３－４２－３）及びＵＳ７，４６５，４４９、ＥＰ７１９８５９－Ａ１、ＷＯ２００２／０１２５０１－Ａ１及びＷＯ２００６／０６２７７９－Ａ２に開示の抗体である。抗インテグリンαＶ複合体の例は、インテツムマブ－ＤＭ４及びＷＯ２００７／０２４５３６－Ａ２に開示の他のＡＤＣ類である。これらの抗体及びそれの抗原結合性断片は、本発明の文脈で用いることができる。
抗ＴＤＧＦ１抗体
がん標的分子ＴＤＧＦ１に結合し、がんの治療に用いることができる抗体の例は、ＷＯ０２／０７７０３３－Ａ１、ＵＳ７，３１８，９２４、ＷＯ２００３／０８３０４１－Ａ２及びＷＯ２００２／０８８１７０－Ａ２に開示の抗体である。抗ＴＤＧＦ１複合体の例が、ＷＯ２００２／０８８１７０－Ａ２に開示されている。これらの抗体及びそれの抗原結合性断片は、本発明の文脈で用いることができる。
抗ＰＳＭＡ抗体
がん標的分子ＰＳＭＡに結合し、がん、例えば前立腺癌の治療に用いることができる抗体の例は、ＷＯ９７／３５６１６－Ａ１、ＷＯ９９／４７５５４－Ａ１、ＷＯ０１／００９１９２－Ａ１及びＷＯ２００３／０３４９０３に開示の抗体である。抗ＰＳＭＡ複合体の例がＷＯ２００９／０２６２７４－Ａ１及びＷＯ２００７／００２２２２に開示されている。これらの抗体及び抗原結合性断片は、本発明の文脈で用いることができる。
抗ＥＰＨＡ２抗体
がん標的分子ＥＰＨＡ２に結合し、複合体の製造、がんの治療に用いることができる抗体の例が、ＷＯ２００４／０９１３７５－Ａ２に開示されている。これらの抗体及び抗原結合性断片は、本発明の文脈で用いることができる。
抗ＳＬＣ４４Ａ４抗体
がん標的分子ＳＬＣ４４Ａ４に結合し、複合体の製造に、そしてがん、例えば膵臓癌又は前立腺癌の治療に使用可能な抗体の例がＷＯ２００９／０３３０９４－Ａ２及びＵＳ２００９／０１７５７９６－Ａ１に開示されている。これらの抗体及びそれの抗原結合性断片は、本発明の文脈で用いることができる。
抗ＨＬＡ－ＤＯＢ抗体
がん標的分子ＨＬＡ－ＤＯＢに結合する抗体の例は、がん、例えば非ホジキンリンパ腫の治療に用いることができる抗体Ｌｙｍ－１（ＣＡＳ登録番号：３０１３４４－９９－０）である。抗ＨＬＡ－ＤＯＢ複合体の例が、例えばＷＯ２００５／０８１７１１－Ａ２に開示されている。これらの抗体及びそれの抗原結合性断片は、本発明の文脈で用いることができる。
抗ＶＴＣＮ１抗体
がん標的分子ＶＴＣＮ１に結合し、複合体の製造に、そしてがん、例えば卵巣癌、膵臓がん、肺がん又は乳がんの治療に用いることができる抗体の例が、ＷＯ２００６／０７４４１８－Ａ２に開示されている。これらの抗体及びそれの抗原結合性断片は、本発明の文脈で用いることができる。
抗ＦＧＦＲ２抗体
抗ＦＧＦＲ２抗体及び抗原結合性断片の例がＷＯ２０１３０７６１８６に記載されている。その抗体の配列がＷＯ２０１３０７６１８６の表９及び表１０に示してある。好ましいものは、Ｍ０４８－Ｄ０１及びＭ０４７－Ｄ０８と称される抗体由来の抗体、抗原結合性断片及び抗体の変異体である。
本発明によるバインダー－薬物複合体に好ましい抗体及び抗原結合性抗体断片
本願において、バインダー－薬物複合体の文脈で、下記の表に示した下記の好ましい抗体：ＴＰＰ－２０９０、ＴＰＰ－２６５８、ＴＰＰ－５４４２、ＴＰＰ－８８２５、ＴＰＰ－７００６、ＴＰＰ－７００７、ＴＰＰ－１０３３４、ＴＰＰ－１０３３５、ＴＰＰ－１０３３６、ＴＰＰ－１０３３７、ＴＰＰ－１０１５、ＴＰＰ－７５１０、ＴＰＰ－７５１１、ＴＰＰ－８３８２及びＴＰＰ－８５６７が挙げられる。
表：抗体のタンパク質配列：
Figure 0007251981000022
Figure 0007251981000023
ＴＰＰ－２０９０、ＴＰＰ－２６５８、ＴＰＰ－５４４２、ＴＰＰ－８８２５、ＴＰＰ－７００６、ＴＰＰ－７００７、ＴＰＰ－１０３３４、ＴＰＰ－１０３３５、ＴＰＰ－１０３３６、ＴＰＰ－１０３３７、ＴＰＰ－１０１５、ＴＰＰ－７５１０、ＴＰＰ－７５１１、ＴＰＰ－８３８２及びＴＰＰ－８５６７は、重鎖（ＶＨ）の可変領域又は軽鎖（ＶＬ）の可変領域における上記の表で指定のＣＤＲ配列（Ｈ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、Ｈ－ＣＤＲ３、Ｌ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３）の１以上を含む抗体である。好ましくは、当該抗体は、重鎖（ＶＨ）の指定の可変領域及び／又は軽鎖（ＶＬ）の可変領域を含む。好ましくは、当該抗体は、重鎖（ＩｇＧ重鎖）の指定の領域及び／又は軽鎖（ＩｇＧ軽鎖）の指定の領域を含む。
ＴＰＰ－９８１は、配列番号２によって示される重鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｈ－ＣＤＲ１）、配列番号３によって示される重鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｈ－ＣＤＲ２）及び配列番号４によって示される重鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖の可変領域（ＶＨ）、並びに配列番号６によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｌ－ＣＤＲ１）、配列番号７によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｌ－ＣＤＲ２）及び配列番号８によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖の可変領域（ＶＬ）を含む抗ＥＧＦＲ抗体である。
ＴＰＰ－１０１５は、配列番号１２によって示される重鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｈ－ＣＤＲ１）、配列番号１３によって示される重鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｈ－ＣＤＲ２）及び配列番号１４によって示される重鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖の可変領域（ＶＨ）、並びに配列番号１６によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｌ－ＣＤＲ１）、配列番号１７によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｌ－ＣＤＲ２）及び配列番号１８によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖の可変領域（ＶＬ）を含む抗ＨＥＲ２抗体である。
ＴＰＰ－２０９０は、配列番号２２によって示される重鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｈ－ＣＤＲ１）、配列番号２３によって示される重鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｈ－ＣＤＲ２）及び配列番号２４によって示される重鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖の可変領域（ＶＨ）、並びに配列番号２６によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｌ－ＣＤＲ１）、配列番号２７によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｌ－ＣＤＲ２）及び配列番号２８によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖の可変領域（ＶＬ）を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体である。
ＴＰＰ－２６５８は、配列番号３２によって示される重鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｈ－ＣＤＲ１）、配列番号３３によって示される重鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｈ－ＣＤＲ２）及び配列番号３４によって示される重鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖の可変領域（ＶＨ）、並びに配列番号３６によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｌ－ＣＤＲ１）、配列番号３７によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｌ－ＣＤＲ２）及び配列番号３８によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖の可変領域（ＶＬ）を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体である。
ＴＰＰ－５４４２は、配列番号４２によって示される重鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｈ－ＣＤＲ１）、配列番号４３によって示される重鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｈ－ＣＤＲ２）及び配列番号４４によって示される重鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖の可変領域（ＶＨ）、並びに配列番号４６によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｌ－ＣＤＲ１）、配列番号４７によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｌ－ＣＤＲ２）及び配列番号４８によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖の可変領域（ＶＬ）を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体である。
ＴＰＰ－７００６は、配列番号５２によって示される重鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｈ－ＣＤＲ１）、配列番号５３によって示される重鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｈ－ＣＤＲ２）及び配列番号５４によって示される重鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖の可変領域（ＶＨ）、並びに配列番号５６によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｌ－ＣＤＲ１）、配列番号５７によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｌ－ＣＤＲ２）及び配列番号５８によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖の可変領域（ＶＬ）を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体である。
ＴＰＰ－７００７は、配列番号６２によって示される重鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｈ－ＣＤＲ１）、配列番号６３によって示される重鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｈ－ＣＤＲ２）及び配列番号６４によって示される重鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖の可変領域（ＶＨ）、並びに配列番号６６によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｌ－ＣＤＲ１）、配列番号６７によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｌ－ＣＤＲ２）及び配列番号６８によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖の可変領域（ＶＬ）を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体である。
ＴＰＰ－７５１０は、配列番号７２によって示される重鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｈ－ＣＤＲ１）、配列番号７３によって示される重鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｈ－ＣＤＲ２）及び配列番号７４によって示される重鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖の可変領域（ＶＨ）、並びに配列番号７６によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｌ－ＣＤＲ１）、配列番号７７によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｌ－ＣＤＲ２）及び配列番号７８によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖の可変領域（ＶＬ）を含む抗ＨＥＲ２抗体である。
ＴＰＰ－７５１１は、配列番号８２によって示される重鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｈ－ＣＤＲ１）、配列番号８３によって示される重鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｈ－ＣＤＲ２）及び配列番号８４によって示される重鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖の可変領域（ＶＨ）、並びに配列番号８６によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｌ－ＣＤＲ１）、配列番号８７によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｌ－ＣＤＲ２）及び配列番号８８によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖の可変領域（ＶＬ）を含む抗ＨＥＲ２抗体である。
ＴＰＰ－８３８２は、配列番号９２によって示される重鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｈ－ＣＤＲ１）、配列番号９３によって示される重鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｈ－ＣＤＲ２）及び配列番号９４によって示される重鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖の可変領域（ＶＨ）、並びに配列番号９６によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｌ－ＣＤＲ１）、配列番号９７によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｌ－ＣＤＲ２）及び配列番号９８によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖の可変領域（ＶＬ）を含む抗Ｂ７Ｈ３抗体である。
ＴＰＰ－８５６７は、配列番号１０２によって示される重鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｈ－ＣＤＲ１）、配列番号１０３によって示される重鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｈ－ＣＤＲ２）及び配列番号１０４によって示される重鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖の可変領域（ＶＨ）、並びに配列番号１０６によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｌ－ＣＤＲ１）、配列番号１０７によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｌ－ＣＤＲ２）及び配列番号１０８によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖の可変領域（ＶＬ）を含む抗Ｂ７Ｈ３抗体である。
ＴＰＰ－８８２５は、配列番号１１２によって示される重鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｈ－ＣＤＲ１）、配列番号１１３によって示される重鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｈ－ＣＤＲ２）及び配列番号１１４によって示される重鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖の可変領域（ＶＨ）、並びに配列番号１１６によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｌ－ＣＤＲ１）、配列番号１１７によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｌ－ＣＤＲ２）及び配列番号１１８によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖の可変領域（ＶＬ）を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体である。
ＴＰＰ－１０３３４は、配列番号１２２によって示される重鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｈ－ＣＤＲ１）、配列番号１２３によって示される重鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｈ－ＣＤＲ２）及び配列番号１２４によって示される重鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖の可変領域（ＶＨ）、並びに配列番号１２６によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｌ－ＣＤＲ１）、配列番号１２７によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｌ－ＣＤＲ２）及び配列番号１２８によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖の可変領域（ＶＬ）を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体である。
ＴＰＰ－１０３３５は、
配列番号１３２によって示される重鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｈ－ＣＤＲ１）、配列番号１３３によって示される重鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｈ－ＣＤＲ２）及び配列番号１３４によって示される重鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖の可変領域（ＶＨ）、並びに配列番号１３６によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｌ－ＣＤＲ１）、配列番号１３７によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｌ－ＣＤＲ２）及び配列番号１３８によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖の可変領域（ＶＬ）を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体である。
ＴＰＰ－１０３３６は、配列番号１４２によって示される重鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｈ－ＣＤＲ１）、配列番号１４３によって示される重鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｈ－ＣＤＲ２）及び配列番号１４４によって示される重鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖の可変領域（ＶＨ）、並びに配列番号１４６によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｌ－ＣＤＲ１）、配列番号１４７によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｌ－ＣＤＲ２）及び配列番号１４８によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖の可変領域（ＶＬ）を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体である。
ＴＰＰ－１０３３７は、配列番号１５２によって示される重鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｈ－ＣＤＲ１）、配列番号１５３によって示される重鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｈ－ＣＤＲ２）及び配列番号１５４によって示される重鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖の可変領域（ＶＨ）、並びに配列番号１５６によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｌ－ＣＤＲ１）、配列番号１５７によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｌ－ＣＤＲ２）及び配列番号１５８によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖の可変領域（ＶＬ）を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体である。
ＴＰＰ－９８１は、好ましくは配列番号１に相当する重鎖（ＶＨ）の可変領域及び配列番号５に相当する軽鎖（ＶＬ）の可変領域を含む抗ＥＧＦＲ抗体である。
ＴＰＰ－１０１５は、好ましくは配列番号１１に相当する重鎖（ＶＨ）の可変領域及び配列番号１５に相当する軽鎖（ＶＬ）の可変領域を含む抗ＨＥＲ２抗体である。
ＴＰＰ－２０９０は、好ましくは配列番号２１に相当する重鎖（ＶＨ）の可変領域及び配列番号２５に相当する軽鎖（ＶＬ）の可変領域を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体である。
ＴＰＰ－２６５８は、好ましくは配列番号３１に相当する重鎖（ＶＨ）の可変領域及び配列番号３５に相当する軽鎖（ＶＬ）の可変領域を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体である。
ＴＰＰ－５４４２は、好ましくは配列番号４１に相当する重鎖（ＶＨ）の可変領域及び配列番号４５に相当する軽鎖（ＶＬ）の可変領域を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体である。
ＴＰＰ－７００６は、好ましくは配列番号５１に相当する重鎖（ＶＨ）の可変領域及び配列番号５５に相当する軽鎖（ＶＬ）の可変領域を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体である。
ＴＰＰ－７００７は、好ましくは配列番号６１に相当する重鎖（ＶＨ）の可変領域及び配列番号６５に相当する軽鎖（ＶＬ）の可変領域を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体である。
ＴＰＰ－７５１０は、好ましくは配列番号７１に相当する重鎖（ＶＨ）の可変領域及び配列番号７５に相当する軽鎖（ＶＬ）の可変領域を含む抗ＨＥＲ２抗体である。
ＴＰＰ－７５１１は、好ましくは配列番号８１に相当する重鎖（ＶＨ）の可変領域及び配列番号８５に相当する軽鎖（ＶＬ）の可変領域を含む抗ＨＥＲ２抗体である。
ＴＰＰ－８３８２は、好ましくは配列番号９１に相当する重鎖（ＶＨ）の可変領域及び配列番号９５に相当する軽鎖（ＶＬ）の可変領域を含む抗Ｂ７Ｈ３抗体である。
ＴＰＰ－８５６７は、好ましくは配列番号１０１に相当する重鎖（ＶＨ）の可変領域及び配列番号１０５に相当する軽鎖（ＶＬ）の可変領域を含む抗Ｂ７Ｈ３抗体である。
ＴＰＰ－８８２５は、好ましくは配列番号１１１に相当する重鎖（ＶＨ）の可変領域及び配列番号１１５に相当する軽鎖（ＶＬ）の可変領域を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体である。
ＴＰＰ－１０３３４は、好ましくは配列番号１２１に相当する重鎖（ＶＨ）の可変領域及び配列番号１２５に相当する軽鎖（ＶＬ）の可変領域を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体である。
ＴＰＰ－１０３３５は、好ましくは配列番号１３１に相当する重鎖（ＶＨ）の可変領域及び配列番号１３５に相当する軽鎖（ＶＬ）の可変領域を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体である。
ＴＰＰ－１０３３６は、好ましくは配列番号１４１に相当する重鎖（ＶＨ）の可変領域及び配列番号１４５に相当する軽鎖（ＶＬ）の可変領域を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体である。
ＴＰＰ－１０３３７は、好ましくは配列番号１５１に相当する重鎖（ＶＨ）の可変領域及び配列番号１５５に相当する軽鎖（ＶＬ）の可変領域を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体である。
ＴＰＰ－９８１は、好ましくは配列番号９に相当する重鎖の領域及び配列番号１０に相当する軽鎖の領域を含む抗ＥＧＦＲ抗体である。
ＴＰＰ－１０１５は、好ましくは配列番号１９に相当する重鎖の領域及び配列番号２０に相当する軽鎖の領域を含む抗ＨＥＲ２抗体である。
ＴＰＰ－２０９０は、好ましくは配列番号２９に相当する重鎖の領域及び配列番号３０に相当する軽鎖の領域を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体である。
ＴＰＰ－２６５８は、好ましくは配列番号３９に相当する重鎖の領域及び配列番号４０に相当する軽鎖の領域を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体である。
ＴＰＰ－５４４２は、好ましくは配列番号４９に相当する重鎖の領域及び配列番号５０に相当する軽鎖の領域を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体である。
ＴＰＰ－７００６は、好ましくは配列番号５９に相当する重鎖の領域及び配列番号６０に相当する軽鎖の領域を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体である。
ＴＰＰ－７００７は、好ましくは配列番号６９に相当する重鎖の領域及び配列番号７０に相当する軽鎖の領域を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体である。
ＴＰＰ－７５１０は、好ましくは配列番号７９に相当する重鎖の領域及び配列番号８０に相当する軽鎖の領域を含む抗ＨＥＲ２抗体である。
ＴＰＰ－７５１１は、好ましくは配列番号８９に相当する重鎖の領域及び配列番号９０に相当する軽鎖の領域を含む抗ＨＥＲ２抗体である。
ＴＰＰ－８３８２は、好ましくは配列番号９９に相当する重鎖の領域及び配列番号１００に相当する軽鎖の領域を含む抗Ｂ７Ｈ３抗体である。
ＴＰＰ－８５６７は、好ましくは配列番号１０９に相当する重鎖の領域及び配列番号１１０に相当する軽鎖の領域を含む抗Ｂ７Ｈ３抗体である。
ＴＰＰ－８８２５は、好ましくは配列番号１１９に相当する重鎖の領域及び配列番号１２０に相当する軽鎖の領域を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体である。
ＴＰＰ－１０３３４は、好ましくは配列番号１２９に相当する重鎖の領域及び配列番号１３０に相当する軽鎖の領域を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体である。
ＴＰＰ－１０３３５は、好ましくは配列番号１３９に相当する重鎖の領域及び配列番号１４０に相当する軽鎖の領域を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体である。
ＴＰＰ－１０３３６は、好ましくは配列番号１４９に相当する重鎖の領域及び配列番号１５０に相当する軽鎖の領域を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体である。
ＴＰＰ－１０３３７は、好ましくは配列番号１５９に相当する重鎖の領域及び配列番号１６０に相当する軽鎖の領域を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体である。
ＬＩＧバインダーのリンカー（Ｌｂ及びＬｃ）
文献に、抗体などのペプチド若しくはタンパク質への有機分子の共有結合的カップリング（結合）のための多様な選択肢が開示されている（例えば、Ｋ． Ｌａｎｇ ａｎｄ Ｊ． Ｗ． Ｃｈｉｎ． Ｃｈｅｍ． Ｒｅｖ． ２０１４， １１４， ４７６４－４８０６， Ｍ． Ｒａｓｈｉｄｉａｎ ｅｔ ａｌ． Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ． ２０１３， ２４， １２７７－１２９４参照）。本発明に従って好ましいものは、遊離チオールとして既に存在しているか、ジスルフィド架橋の還元によって発生する抗体のシステイン残基の１以上の硫黄原子を介した、及び／又は抗体のリジン残基の１以上のＮＨ基を介した、有機基の抗体への結合である。しかしながら、チロシン残基を介して、グルタミン残基を介して、非天然アミノ酸の残基を介して、遊離カルボキシル基を介して、又は抗体の糖残基を介して、ＫＳＰ阻害剤又はプロドラッグを抗体に結合させることも可能である。
本発明によれば、バインダーの特異的結合部位に薬物分子を結合させて、産生物均一性を高めることも可能である。文献には、各種の結合部位特異的結合方法が記載されている（Ａｇａｒｗａｌ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ． Ｃｈｅｍ． ２６， １７６－１９２（２０１５）；Ｃａｌ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｇｅｗ． Ｃｈｅｍ． Ｉｎｔ． Ｅｄ． Ｅｎｇｌ． ５３， １０５８５－１０５８７（２０１４）；Ｂｅｈｒｅｎｓ ｅｔ ａｌ．， ＭＡｂｓ ６， ４６－５３（２０１４）；Ｐａｎｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．， ＭＡｂｓ ６， ３４－４５（２０１４）。これらの方法には、特には、例えばトランスグルタミナーゼ類（ＴＧａｓｅ類）、グリシルトランスフェラーゼ類又はホルミルグリシン発生酵素を用いる酵素複合体化法などもある（Ｓｏｃｈａｊ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ａｄｖａｎｃｅｓ， ３３， ７７５－７８４， （２０１５））。
本発明によれば、キネシン紡錘体タンパク質阻害剤がバインダーのグルタミン側鎖に結合しているキネシン紡錘体タンパク質阻害剤の結合部位特異的バインダー複合体を提供することが可能である。
バインダーが抗体である場合、それは、好ましくは定常領域にアクセプターグルタミを含む。そのようなアクセプターグルタミンは、好適な位置のグルタミンへの突然変異（例えば、重鎖の突然変異Ｎ２９７Ｑ、Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）を介して、又は脱グリコシル又は脱グリコシル化抗体の形成を介して（例えば、ＰＮＧａｓｅＦによる酵素的脱グリコシルを介して、又は重鎖の突然変異Ｎ２９７Ｘを介して、Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング（この場合、ＸはＮ以外のアミノ酸であることができる。））導入することができる。脱グリコシル若しくは脱グリコシル化抗体のその後者の場合、重鎖のグルタミン残基Ｑ２９５（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）はアクセプターグルタミンとなる。特に好ましいものは、Ｎ２９７Ａ又はＮ２９７Ｑ突然変異（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）を含む抗体である。従って、本発明で記載の全ての抗体が同様に、ＰＮＧａｓｅ Ｆによる脱グリコシルによって、又は重鎖のＮ２９７（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）（抗体のＫａｂａｔナンバリングシステム、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．， Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｌｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ， ５ｔｈ Ｅｄ． Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ， ＭＤ．（１９９１）参照）のＮ以外のいずれかの他のアミノ酸への突然変異によって作られるこれら抗体の脱グリコシル化変異体を含む。さらに、本明細書に記載の全ての抗体は、同様に、操作により、トランスグルタミナーゼ触媒反応のために１以上のアクセプターグルタミン残基を含む記載の抗体の変異体を含む。
そのような結合部位特異的結合の一つの方法は、トランスグルタミナーゼによる結合体の結合部位特異的結合に関する文献記載のアプローチである。細菌トランスグルタミナーゼ（ＢＴＧ）（ＥＣ２．３．２．１３）も含むトランスグルタミナーゼ（ＴＧａｓｅ）は、グルタミン類のγ－カルボニルアミド基とリジン類の一級アミン基の間の共有結合の形成を触媒する酵素のファミリーである。そのようなトランスグルタミナーゼはアミン供与体としてリジン以外の基質も受容することから、それらを用いて、好適なアクセプターグルタミン類で抗体を含むタンパク質が修飾されている（Ｊｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ Ｉｎｔ． Ｅｄ． Ｅｎｇｌ ４９， ９９９５－９９９７ （２０１０）； Ｊｏｓｔｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ ２４０， ４７－５４ （２０００）； Ｍｉｎｄｔ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ． １９， ２７１－２７８ （２００８）； Ｄｅｎｎｌｅｒ ｅｔ ａｌ．， ｉｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｊｕａｇｔｅｓ （Ｄｕｃｒｙ， Ｌ．， Ｅｄ．）， ｐｐ ２０５－２１５， Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ． （２０１３））。一方で、遺伝子工学によって抗体に導入されたアクセプターグルタミン残基である人工のグルタミン標識を含む抗体に薬物を結合させるのに、トランスグルタミナーゼが用いられている（Ｓｔｒｏｐ ｅｔ ａｌ．， Ｃｈｅｍ． Ｂｉｏｌ． ２０， １６１－１６７（２０１３））。他方で、抗体の重鎖の定常領域の保存グルタミン残基Ｑ２９５（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）は、脱グリコシル化ＩｇＧ１分子の骨格における細菌トランスグルタミナーゼ（ＥＣ２．３．２．１３）に対する唯一のγ－カルボニルアミド供与体であることから、アクセプターグルタミンであるが、抗体が重鎖の位置Ｎ２９７（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）でグリコシル化されている場合に、ＩｇＧ１の骨格にアクセプターグルタミンは全く存在しないことが報告されている（Ｊｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ Ｉｎｔ． Ｅｄ． Ｅｎｇｌ ４９， ９９９５－９９９７（２０１０））。要約すると、細菌トランスグルタミナーゼを、抗体のアクセプターグルタミン残基でのアミン－薬物基質、例えば薬物－リンカー構築物の結合に用いることができる。そのようなアクセプターグルタミンは、突然変異による抗体の操作によって、又は脱グリコシル化抗体の形成によって導入することができる。そのような脱グリコシル化抗体は、Ｎ－グリコシダーゼＦ（ＰＮＧａｓｅＦ）を用いる脱グリコシルによって、又は重鎖のグリコシル化部位のＮ２９７（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）のＮ以外の他のいずれかのアミノ酸への突然変異によって導入することができる。細菌トランスグルタミナーゼを用いるそのような脱グリコシル化抗体の酵素的結合が、突然変異Ｎ２９７Ｄ、Ｎ２９７Ｑ（Ｊｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ Ｉｎｔ． Ｅｄ． Ｅｎｇｌ ４９， ９９９５－９９９７（２０１０））、又はＮ２９７Ｓ（特許出願ＷＯ２０１３０９２９９８Ａ１及びＷＯ２０１３０９２９８３Ａ２を参照する。）を含む脱グリコシル化抗体変異体について記載されている。トランスグルタミナーゼによるそのような脱グリコシル化抗体の酵素的結合によって、両方の重鎖が位置Ｑ２９５（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）で特異的に官能化されている、２のＤＡＲを有するＡＤＣが提供される。重鎖の突然変異Ｎ２９７Ｑのみが、重鎖当たりもう一つ別の結合部位を提供する。そのような変異体の結合により、両方の重鎖が位置Ｑ２９５及びＱ２９７で特異的に官能化されている、４のＤＡＲを有するＡＤＣが生じる。
重鎖が突然変異Ｑ２９５Ｎ及びＮ２９７Ｑを有する抗体変異体は、位置Ｑ２９７に一つのみのアクセプターグルタミン残基を有する（Ｓｉｍｏｎｅ Ｊｅｇｅｒ， Ｓｉｔｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｕｍｏｕｒ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｕｓｉｎｇ ｔｒａｎｓｇｌｕｔａｍｉｎａｓｅ， Ｔｈｅｓｉｓ ａｔ ＥＴＨ Ｚｕｒｉｃｈ （２００９））。細菌トランスグルタミナーゼを用いる脱グリコシル化抗体の結合部位特異的結合について記載した文献にいくつかの例がある（例えばＤｅｎｎｌｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９， ５６９－５７８ （２０１４）； Ｌｈｏｓｐｉｃｅ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ １２， １８６３－１８７１ （２０１５））。脱グリコシル化抗体のトランスグルタミナーゼ触媒結合部位特異的官能化の戦略が、図１にまとめてある。
結合部位特異的及び結合部位非特異的の両方でのカップリングが、リンカーと称されるものを用いて行われる。リンカーは、イン・ビボで開裂可能なリンカーの群及びイン・ビボで安定なリンカーの群に分類することができる（Ｌ． Ｄｕｃｒｙ ａｎｄ Ｂ． Ｓｔｕｍｐ， Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ． ２１， ５－１３（２０１０）参照）。イン・ビボで開裂可能なリンカーは、イン・ビボで開裂可能な基を有し、そこで、イン・ビボで化学的に開裂可能な基とイン・ビボで酵素的に開裂可能な基の間で区別することが可能である。「イン・ビボで化学的に開裂可能な」及び「イン・ビボで酵素的に開裂可能な」は、リンカー又は基が循環中では安定であり、標的細胞で若しくは標的細胞内でのみ、そこでの化学的若しくは酵素的に異なる環境（比較的低いｐＨ；高いグルタチオン濃度；カテプシン若しくはプラスチンなどのリソソーム酵素、又は例えば、β－グルクロニダーゼ類などのグリオシダーゼ類（ｇｌｙｏｓｉｄａｓｅｓ）の存在）によって開裂することで、低分子量ＫＳＰ阻害剤又はそれの誘導体を放出することを意味する。イン・ビボで化学的に開裂可能な基は、特にはジスルフィド、ヒドラゾン、アセタール及びアミナールであり；酵素的にイン・ビボで開裂可能な基は、特に２－８－オリゴペプチド基、特別にはジペプチド基又はグリコシドである。ペプチド開裂部位は、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ． ２００２， １３， ８５５－８６９及びＢｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ ８ （１９９８） ３３４１－３３４６、さらにはＢｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ． １９９８， ９， ６１８－６２６に開示されている。これらには、例えば、アラニン－アラニン－アスパラギン、バリン－アラニン、バリン－リジン、バリン－シトルリン、アラニン－リジン及びフェニルアラニン－リジン（適宜に、さらなるアミド基を有する）などがある。
遊離薬物の効率的放出を確保するため、酵素的開裂部位と薬物の間に自壊性リンカー要素（ＳＩＧ）と称されるものを組み込んでも良い（Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ａｇｅｎｔｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ２００８， ８， ６１８－６３７）。薬物は、各種機構で、例えば最初に求核基を酵素的に放出し、次に電子カスケードを介して脱離させることで（Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．， １９９９， ７， １５９７； Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．， ２００２， ４５， ９３７；Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．， ２００２， １０， ７１）、又は相当するリンカー要素の環化によって（Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．， ２００３， １１， ２２７７；Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．， ２００７， １５， ４９７３；Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． Ｌｅｔｔ．， ２００７， １７， ２２４１）、又はその二つの組み合わせによって（Ａｎｇｅｗ． Ｃｈｅｍ． Ｉｎｔｅｒ． Ｅｄ．， ２００５， ４４， ４３７８）放出させることができる。そのようなリンカー要素の例を下記の図に示す。
Figure 0007251981000024
例えばヒストンデアセチラーゼ及びカテプシンＬによる薬物放出のための連続酵素段階の例が、Ｎａｔ． Ｃｏｍｍｕｎ．， ２０１３， ４， ２７３５に記載されており、図２に描かれている。
イン・ビボで安定なリンカーは、高い安定性（血漿中２４時間後に５％未満の代謝物）によって区別され、上記のようなイン・ビボで化学的又は酵素的に開裂可能基を持たない。
リンカー－Ｌｂ－又は－Ｌｃ－は好ましくは、
次の基本構造（ｉ）から（ｉｖ）：
（ｉ）－（Ｃ＝Ｏ）ｍ－ＳＧ１－Ｌ１－Ｌ２－
（ｉｉ）－（Ｃ＝Ｏ）ｍ－Ｌ１－ＳＧ－Ｌ１－Ｌ２－
（ｉｉｉ）－（Ｃ＝Ｏ）ｍ－Ｌ１－Ｌ２－
（ｉｖ）－（Ｃ＝Ｏ）ｍ－Ｌ１－ＳＧ－Ｌ２
のうちの一つを有し、
ｍは０又は１であり；ＳＧは、（化学的に又は酵素的に）イン・ビボで開裂可能な基（特に、ジスルフィド、ヒドラゾン、アセタール及びアミナール；又はレグマイン、カテプシン又はプラスミンによって開裂可能な２から８オリゴペプチド基）であり、ＳＧ１はオリゴペプチド基又は好ましくはジペプチド基であり、Ｌ１は、互いに独立に、イン・ビボで安定な有機基を表し、Ｌ２は、バインダーに対するカップリング基又は単結合を表す。ここで、カップリングは好ましくは、抗体のシステイン残基又はリジン残基に対するものである。あるいは、カップリングは、抗体のチロシン残基、グルタミン残基又は非天然アミノ酸に対するものであることができる。非天然アミノ酸は、例えば、アルデヒド又はケト基（例えば、例えばホルミルグリシン）又はアジド若しくはアルキン基（Ｌａｎ ＆ Ｃｈｉｎ， Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｕｎｎａｔｕｒａｌ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄｓ ａｎｄ Ｂｉｏｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ Ｌａｂｅｌｉｎｇ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ， Ｃｈｅｍ． Ｒｅｖ． ２０１４， １１４， ４７６４－４８０６参照）を含むことができる。
本発明に従って特に好ましいものは、基本的リンカー構造（ｉｉｉ）である。代謝により、基本的リンカー構造（ｉｉｉ）を有する本発明による複合体の投与及び抗体のシステイン又はリジン残基へのリンカーのカップリングによって、下記式のシステイン又はリジン誘導体が生じる。
Figure 0007251981000025
式中、Ｌ１は、各場合で、細胞毒性薬、例えば低分子量ＫＳＰ阻害剤、例えば式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（Ｖ）、（ＶＩ）又は（ＶＩＩ）の化合物に結合している。
本発明に従って好ましいものは、特には式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）又は（Ｖ）の化合物における位置Ｒ１への結合の場合の、特にはＬ１基が下記構造のうちの一つを有する場合のリンカー基本構造（ｉｉ）及び（ｉｖ）でもある。
（ａ）－ＮＨ－（ＣＨ２）０－４－（ＣＨＣＨ３）０－４－ＣＨＹ５－Ｃ（＝Ｏ）－Ｙ７［式中、
Ｙ５は、－Ｈ又は－ＮＨＹ６であり、
Ｙ６は、－Ｈ又は－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ３であり、及び
Ｙ７は、単結合又は－ＮＨ－（ＣＨ２）０－４－ＣＨＮＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－であることで、
開裂後に、相当する構造
－ＮＨ－（ＣＨ２）０－４－（ＣＨＣＨ３）０－４－ＣＨＹ５－ＣＯＯＨ又は
－ＮＨ－（ＣＨ２）０－４－（ＣＨＣＨ３）０－４－ＣＨＹ５－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ２）０－４－ＣＨＮＨ２－ＣＯＯＨが得られる。］
（ｂ）－ＣＨ２－Ｓｘ－（ＣＨ２）０－４－ＣＨＹ５－Ｃ（＝Ｏ）－［式中、
ｘは、０又は１であり、
Ｙ５は、－Ｈ又は－ＮＨＹ６であり、及び
Ｙ６は、－Ｈ又は－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ３であることで、
開裂後に、相当する構造
－ＣＨ２－Ｓｘ－（ＣＨ２）０－４－ＣＨＹ５－ＣＯＯＨが得られる。］
リンカーがシステイン側鎖又はシステイン残基に結合している場合、Ｌ２は好ましくは、システインのスルフヒドリル基と反応する基から誘導される。これらには、ハロアセチル類、マレイミド類、アジリジン類、アクリロイル類、アリール化化合物、ビニルスルホン類、ピリジルジスルフィド類、ＴＮＢチオール類及びジスルフィド還元剤などがある。これらの基は一般に、スルフヒドリル結合と求電子的に反応して、スルフィド（例えばチオエーテル）又はジスルフィド架橋を形成する。好ましいものは、安定なスルフィド架橋である。
Ｌ２は好ましくは、下記の構造を有する。
Figure 0007251981000026
式中、
＃１は、抗体の硫黄原子への連結部位であり、
＃２は、Ｌ１基への連結部位であり、
Ｒ２２は－ＣＯＯＨ、－Ｃ（＝Ｏ）－ＯＲ、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨＲ又は－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ）２であり、及び
Ｒは、Ｃ１－３－アルキル、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２又は－ＣＯＯＨである。
この場合、Ｒが－ＣＯＯＨである場合が好ましい。
特に好ましいものは、Ｌ２が下記の式Ａ３及びＡ４を有する本発明の化合物である。
Figure 0007251981000027
式中、
＃１は、抗体の硫黄原子への連結部位であり、
＃２は、薬物分子への連結部位であり、
ｘは、１又は２であり、及び
Ｒ２２は、－ＣＯＯＨ、－Ｃ（＝Ｏ）－ＯＲ、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ２、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨＲ又は－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２であり、及び
ＲはＣ１－３－アルキルである。
この文脈において好ましくは、Ｒ２２は－ＣＯＯＨであり、この文脈において特には、ｘが１である場合、Ｒ２２は－ＣＯＯＨである。
本発明による複合体又は本発明による複合体の混合物において、抗体のシステイン残基への結合が、好ましくは８０％強、より好ましくは９０％強（各場合、抗体へのリンカーの結合の総数に基づいて）の程度まで、より好ましくは式Ａ３又はＡ４の二つの構造のうちの一つとして存在する。ここで、式Ａ３又はＡ４の構造は通常は一緒に存在し、好ましくは抗体への結合の数に基づいて６０：４０から４０：６０の比率で存在する。そして、残りの結合は、下記構造として存在する。
Figure 0007251981000028
式中、
＃１は、抗体の硫黄原子への連結部位であり、
＃２は、薬物分子への連結部位である。
本発明によれば、Ｌ１は好ましくは、下記式によって表される。
Figure 0007251981000029
式中、
＃１は、抗体の硫黄原子への連結部位であり、
＃２は、薬物分子への連結部位であり、
Ｒ１０は、－Ｈ、－ＮＨ２又はＣ１－Ｃ３－アルキルであり、
ｎは０又は１であり、
ｏは０又は１であり、
Ｇ１は、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－又は
Figure 0007251981000030
であり、
Ｇ２は、アリーレン基及び／又は直鎖及び／又は分岐及び／又は環状のアルキレン基からなる１～１００個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐のヒドロカルビル鎖であり、それは、基－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓ（＝Ｏ）－、－Ｓ（＝Ｏ）２、－ＮＲｙ－、－ＮＲｙＣ（＝Ｏ）－、－Ｃ（ＮＨ）ＮＲｙ－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲｙ－、－ＮＲｙＮＲｙ－、－Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲｙＮＲｙ－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲｙＮＲｙ－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＣＲｘ＝Ｎ－Ｏ－及び／又はＮ、Ｏ及びＳ、－Ｓ（＝Ｏ）－若しくは－Ｓ（＝Ｏ）２－から選択される１～４個のヘテロ原子を有する３～１０員の芳香族若しくは非芳香族複素環の１以上によって１回又は複数回中断されていても良く、その直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖は、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２、－ＣＯＯＨ、－ＯＨ、－ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシド、又はスルホン酸によってさらに置換されていても良く、
Ｒｙは、－Ｈ、フェニル、Ｃ１－Ｃ１０－アルキル、Ｃ２－Ｃ１０－アルケニル又はＣ２－Ｃ１０－アルキニルであり、それらはそれぞれ、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２、－ＣＯＯＨ、－ＯＨ、－ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシド、又はスルホン酸によってさらに置換されていても良く、及び
Ｒｘは、－Ｈ、Ｃ１－Ｃ３－アルキル又はフェニルである。
この文脈において、Ｇ１は好ましくは
Figure 0007251981000031
であり、Ｒ１０は好ましくは、Ｇ１が－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－や
Figure 0007251981000032
でない場合は－ＮＨ２ではない。
好ましくは、Ｇ２は、アリーレン基及び／又は直鎖及び／又は分岐及び／又は環状のアルキレン基からなる１～１００個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐のヒドロカルビル鎖であり、それは、基－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓ（＝Ｏ）－、－Ｓ（＝Ｏ）２、－ＮＨ－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＭｅ－、－ＮＨＮＨ－、－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨＮＨ－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨＮＨ－及びＮ、Ｏ及びＳ又は－Ｓ（＝Ｏ）－から選択される４個以下のヘテロ原子を有する５～１０員の芳香族若しくは非芳香族複素環の１以上によって１回又は複数回中断されていても良い。
より好ましくは、Ｇ２は
Figure 0007251981000033
であり、その直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖は、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２によってさらに置換されていても良い。
Ｇ２はさらに好ましくは、アリーレン基及び／又は直鎖及び／又は分岐及び／又は環状のアルキレン基からなる１～１００個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐のヒドロカルビル鎖であり、それは、基－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓ（＝Ｏ）－、－Ｓ（＝Ｏ）２、－ＮＨ－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＭｅ－、－ＮＨＮＨ－－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨＮＨ－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨＮＨ－、－ＣＲｘ＝Ｎ－Ｏ－及び／又はＮ、Ｏ及びＳ、－Ｓ（＝Ｏ）－若しくは－Ｓ（＝Ｏ）２－から選択される１～４個のヘテロ原子を有する３～１０員の芳香族若しくは非芳香族複素環の１以上によって１回又は複数回中断されていても良く、その直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖は、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２、－ＣＯＯＨ、－ＯＨ、－ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシド、又はスルホン酸によってさらに置換されていても良く、及び
Ｒｘは、－Ｈ、Ｃ１－Ｃ３－アルキル又はフェニルである。
この文脈において、Ｇ２は好ましくは
Figure 0007251981000034
である。
好ましくは、Ｇ２は、下記構造の中断基を表す。
Figure 0007251981000035
式中、
Ｒｘは、－Ｈ、Ｃ１－Ｃ３－アルキル又はフェニルであり、
＃１は、ＫＳＰ阻害剤又はプロドラッグへの結合であり、
＃２は、抗体のカップリング基（例えばＬ２）への結合である。
アリーレン基及び／又は直鎖及び／又は分岐及び／又は環状アルキレン基の直鎖若しくは分岐の炭化水素鎖は通常、言及される個々の数の炭素原子を有するα，ω－二価アルキル基を含む。好ましい例には、メチレン、エタン－１，２－ジイル（１，２－エチレン）、プロパン－１，３－ジイル（１，３－プロピレン）、ブタン－１，４－ジイル（１，４－ブチレン）、ペンタン－１，５－ジイル（１，５－ペンチレン）、ヘキサン－１，６－ジイル（１，６－ヘキシレン）、ヘプタン－１，７－ジイル（１，７－ヘキシレン）、オクタン－１，８－ジイル（１，８－オクチレン）、ノナン－１，９－ジイル（１，９－ノニレン）、デカン－１，１０－ジイル（１，１０－デシレン）などがある。
分岐炭化水素鎖は、直鎖炭化水素鎖又は直鎖アルキレン基における１以上の水素原子が、Ｃ１－１０－アルキル基によって置換されていることで、分岐の炭化水素又は側鎖を形成していることを意味する。
炭化水素鎖はさらに、環状アルキレン基（シクロアルカンジイル）、例えば１，４－シクロヘキサンジイル又は１，３－シクロペンタンジイルを含んでいても良い。これらの環状基は不飽和であっても良い。特に、その炭化水素鎖には、芳香族基（アリーレン基）、例えばフェニレンが存在しても良い。そして、環状アルキレン基及びアリーレン基における１以上の水素原子がＣ１－１０－アルキル基によって置換されていることも可能である。このようにして、分岐していても良い炭化水素鎖が形成される。この炭化水素鎖は、合計０から１００個の炭素原子、好ましくは１から５０個、特に好ましくは２から２５個の炭素原子を有する。
分岐の炭化水素又は側鎖は、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２、－ＣＯＯＨ、－ＯＨ、－ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシド、又はスルホン酸によって置換されていても良い。
炭化水素鎖は、基－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓ（＝Ｏ）－、－Ｓ（＝Ｏ）２－、－ＮＨ－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＭｅ－、－ＮＨＮＨ－、－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨＮＨ－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨＮＨ－及び＝Ｎ－、－Ｏ－及び－Ｓ－、－Ｓ（＝Ｏ）－若しくは－Ｓ（＝Ｏ）２－から選択される４個以下のヘテロ原子を有する５～１０員の芳香族若しくは非芳香族複素環の１以上によって１回又は複数回中断されていても良い。
ここで、好ましいものは、基：
Figure 0007251981000036
である。
Ｇ２におけるさらなる中断基は、好ましくは、
Figure 0007251981000037
である。
好ましくは、リンカーＬは、下記式に相当する。
Figure 0007251981000038
式中、
ｍは、０又は１であり、
§は、薬物分子又はプロドラッグへの結合であり、
§§は、バインダーペプチド又はタンパク質への結合であり、及び
Ｌ１及びＬ２は、上記で提供の定義を有する。
より好ましくは、そして上記の定義を参照すると、Ｌ１は、下記の簡略化された式に相当する。
Figure 0007251981000039
式中、
Ｒ１１は、－Ｈ又は－ＮＨ２であり、
Ｂは、－［（ＣＨ２）ｘ－（Ｘ４）ｙ］ｗ－（ＣＨ２）ｚ－基であり、
ｗは、０～２０であり、
ｘは、０～５であり、
ｙは、０又は１であり、
ｚは、０～５であり、及び
Ｘ４は、－Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－，－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－又は
Figure 0007251981000040
である。
好ましくは、リンカーＬは下記式を有する。
Figure 0007251981000041
式中、
＃３は、薬物分子又はプロドラッグへの結合であり、
＃４は、バインダーペプチド又はタンパク質への結合であり、
Ｒ１１は、－Ｈ又は－ＮＨ２であり、
Ｂは、－［（ＣＨ２）ｘ－（Ｘ４）ｙ］ｗ－（ＣＨ２）ｚ－基であり、
ｗは、０～２０であり、
ｘは、０～５であり、
ｙは、０又は１であり、
ｚは、１～５であり、及び
Ｘ４は、－Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－又は
Figure 0007251981000042
である。
上記のリンカーは、リンカーが水素原子の置換によってＲ１に、又は開裂性リンカーＳＧ１と組み合わせてＲ４にカップリングする、即ち、Ｒ１が－Ｌ－＃１であるか、Ｒ４が－ＳＧ１－Ｌ－＃１である（＃１は抗体への結合である。）である式（ＩＩａ）の複合体で特に好ましい。
本発明による複合体において、又は本発明による複合体の混合物において、抗体のシステイン残基への結合が、好ましくは８０％強、より好ましくは９０％強（各場合で、抗体へのリンカーの結合の総数に基づいて）の程度まで存在する。
ここで、特に好ましいものは、下記一般式（Ａ５）及び（Ａ６）の二つの構造である。
Figure 0007251981000043
式中、
＃１は、抗体の硫黄原子への連結部位であり、
＃２は、Ｌ１基への連結部位であり、
Ｒ２２は、－ＣＯＯＨ、－Ｃ（＝Ｏ）－ＯＲ、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ２又は－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨＲであり、及び
Ｒは、Ｃ１－３－アルキルである。
より好ましくは、Ｒ２２は－ＣＯＯＨである。
ここで、一般式Ａ５又はＡ６の構造は通常は一緒に存在し、好ましくは抗体への結合数に基づいて６０：４０～４０：６０の比率である。残りの結合は、下記構造で存在する。
Figure 0007251981000044
式中、
＃１及び＃２は、上記で提供の定義を有する。
システイン側鎖又はシステイン残基に結合したリンカー－Ｌｂ－及び－Ｌｃ－は、下記一般式を有する。
Figure 0007251981000045
式中、
§は、薬物分子又はプロドラッグへの結合であり、
§§は、バインダーペプチド又はタンパク質への結合であり、
ｍは、０、１、２、又は３であり、
ｎは、０、１又は２であり、
ｐは、０～２０であり、
Ｌ３は、下記の基：
Figure 0007251981000046
であり、
ｏは、０又は１であり、
Ｇ３は、アリーレン基及び／又は直鎖及び／又は環状アルキレン基からなる１～１００個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐のヒドロカルビル鎖であり、それは、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓ（＝Ｏ）－、－Ｓ（＝Ｏ）２、－ＮＨ－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＭｅ－、－ＮＨＮＨ－、－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨＮＨ－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨＮＨ－及び＝Ｎ－、－Ｏ－及び－Ｓ－、－Ｓ（＝Ｏ）－若しくは－Ｓ（＝Ｏ）２－から選択される４個以下のヘテロ原子を有する３～１０員の芳香族若しくは非芳香族複素環によって１回又は複数回中断されていても良く、その直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖は、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２、－ＣＯＯＨ、－ＯＨ、－ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシド又はスルホン酸によってさらに置換されていても良く、
§′は、－Ｓ（Ｏ）ｎ基への結合であり、及び
§″は、環中の窒素原子への結合である。
好ましくは、芳香族若しくは非芳香族複素環は５～１０員環である。
好ましくは、Ｇ３は、
Figure 0007251981000047
である。
好ましいものは、下記式の化合物である。
Figure 0007251981000048
式中、
ｍは１であり、
ｐは０であり、
ｎは０であり、
Ｌ３は、下記の基：
Figure 0007251981000049
であり、
ｏは０又は１であり、
Ｇ３は、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ－（ＣＨ２）ｔ－（Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ）ｕ－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｖ－（ＣＨ２）ｗ－であり、
ｓ、ｔ、ｖ及びｗは独立に、０～２０であり、
ｕは０又は１であり、
§′は、－Ｓ（Ｏ）ｎ基への結合であり、及び
§″は、環中の窒素原子への結合である。
上記式§－（Ｃ（＝Ｏ））ｍ－Ｌ１－Ｌ２－§§における好ましい基は、下記の表で列記されたものである（ｒは０～２０、好ましくは０～１５、より好ましくは１～２０、特別に好ましくは２～１０の数字である。）。
Figure 0007251981000050
Figure 0007251981000051
Figure 0007251981000052
Figure 0007251981000053
Figure 0007251981000054
Figure 0007251981000055
Figure 0007251981000056
Figure 0007251981000057
Figure 0007251981000058
Figure 0007251981000059
Figure 0007251981000060
Figure 0007251981000061
Figure 0007251981000062
Figure 0007251981000063
Figure 0007251981000064
Ｌ１のさらなる例を表Ｃに示してあり、表中において、この基はボックスで強調してある。
下記の表Ａ及びＡ′は、リンカー部分Ｌ１の例を提供するものである。これらの表にはさらに、Ｌ１のこれらの例が好ましく組み合わされる基Ｌ２、さらには好ましいカップリング箇所（式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（Ｖ）及び（ＶＩ）の化合物におけるＲ１又はＲ３）及びｍの好ましい値を示してあり、すなわちこれはＬ１の前にカルボニル基があるか否かを問わない（§－（ＣＯ）ｍ－Ｌ１－Ｌ２－§§を参照）。これらのリンカーは好ましくは、システイン残基にカップリングしている。Ｌ２がコハク酸イミドであるかそれから誘導されている場合、このイミドは完全に又は部分的に、上記のような加水分解された開鎖コハク酸アミドの形態であっても良い。Ｌ１に応じて、開鎖コハク酸アミドに対するこの加水分解の程度は、ほぼ明白であるか、全くないこともある。
表Ａ
（Ｓｕｂｓｔ．＝置換基）
Figure 0007251981000065
Figure 0007251981000066
Figure 0007251981000067
Figure 0007251981000068
Figure 0007251981000069
Figure 0007251981000070
＊＊より好ましくは、これらの列で具体的に示されたリンカーＬ１は、下記一般式（Ａ７）及び（Ａ８）から選択されるリンカーＬ２に連結されている。
Figure 0007251981000071
式中、
＃１は、バインダーの硫黄原子への連結部位であり、
＃２は、Ｌ１基への連結部位であり、
Ｒ２２は、好ましくは－ＣＯＯＨである。
本発明による複合体において、又は本発明による複合体の混合物において、バインダーのシステイン残基への結合が、好ましくは８０％強、より好ましくは９０％強（各場合で、バインダーへのリンカーの結合の総数に基づいて）の程度まで、そしてより好ましくは式（Ａ７）及び（Ａ８）の二つの構造のうちの一つに存在する。
この文脈において、式（Ａ７）及び（Ａ８）の構造は通常、好ましくはバインダーへの結合の数に基づいて６０：４０～４０：６０の比率で、一緒に存在する。そして、残りの結合は、下記の構造で存在する。
Figure 0007251981000072
式中、＃１及び＃２は上記で提供の定義を有する。
表Ａ′
（Ｓｕｂｓｔ．＝置換基）
Figure 0007251981000073
Figure 0007251981000074
Figure 0007251981000075
Figure 0007251981000076
Figure 0007251981000077
Figure 0007251981000078
Figure 0007251981000079
Figure 0007251981000080
Figure 0007251981000081
Figure 0007251981000082
Figure 0007251981000083
Figure 0007251981000084
Figure 0007251981000085
Figure 0007251981000086
Figure 0007251981000087
Figure 0007251981000088
Figure 0007251981000089
Figure 0007251981000090
Figure 0007251981000091
Figure 0007251981000092
Figure 0007251981000093
Figure 0007251981000094
Figure 0007251981000095
Figure 0007251981000096
Figure 0007251981000097
Figure 0007251981000098
Figure 0007251981000099
Figure 0007251981000100
Figure 0007251981000101
Figure 0007251981000102
Figure 0007251981000103
＊＊：表Ａについての注＊＊を参照する。
＊＊＊：この構造Ｌ２が存在する場合、下記式の構造Ｌ２が同時に存在し得る。
Figure 0007251981000104
相当するリンカーを有する複合体の例は下記構造を有し、Ｘ１はＣＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し、Ｌ１は上記で提供の定義を有し、Ｌ２及びＬ３はＬ１と同じ定義を有し、ＡＫ１は、システイン残基を介して結合した抗体であり、ｎは１から１０の数字である。
より好ましくは、ＡＫ１は抗体又は抗原結合性抗体である。その抗体は、好ましくはヒト、ヒト化若しくはキメラモノクローナル抗体又はそれの抗原結合性断片、特別には抗ＴＷＥＡＫＲ抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗Ｂ７Ｈ３抗体又は抗ＨＥＲ２抗体又はこれらの抗原結合性断片である。特に好ましいものは、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－７００６、ＴＰＰ－７００７、ＴＰＰ－１０３３６及びＴＰＰ－１０３３７、抗Ｂ７Ｈ３抗体ＴＰＰ－８３８２及びＴＰＰ－８５６７、抗ＥＧＦＲ－抗体セツキシマブ（ＴＰＰ－９８１）及び抗ＨＥＲ２－抗体トラスツズマブ及びＴＰＰ－１０１５、又はこれらの抗原結合性断片である。
Figure 0007251981000105
Figure 0007251981000106
この文脈において、
ＡＫ１は、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗Ｂ７Ｈ３抗体又は抗ＨＥＲ２抗体又はこれらの抗原結合性断片であり、
ｎは、１～２０の数字である。
さらに、リンカーの基本構造（ｉ）、（ｉｉ）及び（ｉｖ）が好ましい。
（ｉ）－（Ｃ＝Ｏ）ｍ－ＳＧ１－Ｌ１－Ｌ２－
（ｉｉ）－（Ｃ＝Ｏ）ｍ－Ｌ１－ＳＧ－Ｌ１－Ｌ２－
（ｉｉｉ）－（Ｃ＝Ｏ）ｍ－Ｌ１－ＳＧ－Ｌ２
上記において、ＳＧ１又はＳＧはカテプシン開裂性基を表し、Ｌ１及びＬ２は表Ａ′で列挙された定義を有する。特に好ましいものは、下記の基である。
－Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－（アラニンのＣ末端アミドでのアミド結合の開裂を生じる）
－ＮＨ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－（リジンのＣ末端アミドでのアミド結合の開裂）
－ＮＨ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－（シトルリンのＣ末端アミドでのアミド結合の開裂）
－ＮＨ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－（リジンのＣ末端アミドでのアミド結合の開裂）
－ＮＨ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－（リジンのＣ末端アミドでのアミド結合の開裂）
－ＮＨ－Ａｌａ－Ｃｉｔ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－（シトルリンのＣ末端アミドでのアミド結合の開裂）。
この文脈において、特に好ましいものは、下記一般式によるＳＧ１又はＳＧである。
Figure 0007251981000107
式中、
Ｘは、－Ｈ又はＣ１－１０－アルキル基（－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２、－ＣＯＯＨ、－ＯＨ、－ＮＨ２、又はスルホン酸によって置換されていても良い）である。
下記の表Ｃは、リンカー部分－ＳＧ１－Ｌ１－又は－Ｌ１－ＳＧ－Ｌ１－（ＳＧ１／ＳＧはカテプシン開裂性基である。）の例を提供する。表Ｃにはさらに、これらの－ＳＧ１－Ｌ１－及び－Ｌ１－ＳＧ－Ｌ１－の例が好ましく組み合わされたＬ２基、更には好ましいカップリング箇所（Ｒ１～Ｒ５）及びｍの好ましい値を示してあり、すなわちこれはＬ１の前にカルボニル基があるか否かを問わない（§－（Ｃ（＝Ｏ））ｍ－Ｌ１－Ｌ２－§§を参照）。これらのリンカーは好ましくは、システイン残基にカップリングしている。Ｌ１基は、ボックス中で強調されている。しかしながら、これらのＬ１基は、上記の式§－（Ｃ（＝Ｏ））ｍ－Ｌ１－Ｌ２－§§について具体的に記載のＬ１基のうちの一つによって置き換わっていても良い。Ｌ２がコハク酸アミド又はそれから誘導される場合、このアミドは、完全に又は部分的に、上記のような加水分解された開鎖コハク酸アミドの形態であっても良い。
表Ｃ
（Ｓｕｂｓｔ．＝置換基）
Figure 0007251981000108
Figure 0007251981000109
Figure 0007251981000110
Figure 0007251981000111
Figure 0007251981000112
Figure 0007251981000113
Figure 0007251981000114
Figure 0007251981000115
Figure 0007251981000116
Figure 0007251981000117
Figure 0007251981000118
リンカーの下記基本構造（ｉ）を有する複合体の例：
Figure 0007251981000119
［式中、ｍ、ＳＧ１、Ｌ１及びＬ２は表Ｃで提供の定義を有する。］は、下記構造のうちの一つを有する。
Figure 0007251981000120
式中、
Ｘ１はＣＨであり、
Ｘ２はＣであり、
Ｘ３はＮであり、
Ｌ４は、Ｌ１について表Ｃで上記で具体的に記載のものと同じ定義を有し、
ＡＫ１は、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗Ｂ７Ｈ３抗体又は抗ＨＥＲ２抗体又はこれらの抗原結合性断片であり、それはシステイン残基を介して結合しており、
ｎは１～２０の数字であり、式ＩＩａによる位置Ｒ４における（すなわち－ＮＨ２基での）水素原子が、本発明に従って使用される式Ｉａのレグマイン開裂性基によって置き換わっている。
より好ましくは、ＡＫ１は抗体又は抗原結合性抗体である。その抗体は好ましくはヒト、ヒト化若しくはキメラモノクローナル抗体又はそれの抗原結合性断片、特別には抗ＴＷＥＡＫＲ抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗Ｂ７Ｈ３抗体又は抗ＨＥＲ２抗体又はそれの抗原結合性断片である。特に好ましいものは、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－７００６、ＴＰＰ－７００７，ＴＰＰ－１０３３６及びＴＰＰ－１０３３７、抗Ｂ７Ｈ３抗体ＴＰＰ－８３８２及びＴＰＰ－８５６７、抗ＥＧＦＲ－抗体セツキシマブ（ＴＰＰ－９８１）及び抗ＨＥＲ２－抗体トラスツズマブ及びＴＰＰ－１０１５、又はこれらの抗原結合性断片である。
トランスグルタミナーゼ触媒結合の場合、文献には、結合部位特異的な形での、有機分子のバインダー、例えば抗体への共有結合（結合）の各種オプションが開示されている（例えばＳｏｃｈａｊ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ａｄｖａｎｃｅｓ， ３３， ７７５－７８４， （２０１５）、Ｐａｎｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．， ＭＡｂｓ ６， ３４－４５（２０１４）を参照する。）。本発明に従って好ましいのは、トランスグルタミナーゼを用いる抗体のアクセプターグルタミン残基を介した抗体へのＫＳＰ阻害剤又はプロドラッグの結合である。そのようなアクセプターグルタミン残基は、抗体に対する操作によって、又は非グリコシル化抗体を生じる突然変異によって形成することができる。抗体中のこれらアクセプターグルタミンの数は、好ましくは２又は４である。好適なリンカーをカップリング（結合）に用いる。好適なリンカー構造は、トランスグルタミナーゼに好適な基質を構成する遊離アミン供与体官能基を有するものである。そのリンカーは、多様な形態で抗体に連結することができる。
好ましくは、トランスグルタミナーゼ触媒結合の場合、リンカーは、既に上記で挙げた基本構造（ｉ）～（ｉｖ）のうちの一つを有する。
（ｉ）－（Ｃ＝Ｏ）ｍ－ＳＧ１－Ｌ１－Ｌ２－
（ｉｉ）－（Ｃ＝Ｏ）ｍ－Ｌ１－ＳＧ－Ｌ１－Ｌ２－
（ｉｉｉ）－（Ｃ＝Ｏ）ｍ－Ｌ１－Ｌ２－
（ｉｖ）－（Ｃ＝Ｏ）ｍ－Ｌ１－ＳＧ－Ｌ２
式中、
Ｌ１、ＳＧ、ＳＧ１及びｍは、上記で提供の定義を有し、
Ｌ２は、しかしながら好ましくは、下記の基のうちの一つ：
Figure 0007251981000121
を表し、
Ｒｙは、－Ｈ、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－アルキル、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－アルキル、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２又は－ＮＨ２であり、
＃１は、Ｌ１への連結点であり、及び
＃２は、バインダーのグルタミン残基への連結点である。
好ましくはこの文脈において、Ｒｙは－Ｈ又は－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ３である。
相当する複合体の例は下記の構造であり、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｒｙ及びＬ１は上記で提供の定義を有し、ＡＫは好ましくは抗体であるバインダーであり、ｎは好ましくは２又は４である。
Figure 0007251981000122
特に好ましいＫＳＰ阻害剤複合体
やはり好ましいものは、下記式（Ｘ）の化合物とのバインダー又はそれの誘導体（好ましくは抗体）からなる複合体並びにそれの塩、溶媒和物及び溶媒和物の塩である。
Figure 0007251981000123
式中、
ＡＫは、バインダー（好ましくは抗体）ＡＫ１、ＡＫ２、ＡＫ３、又はそれの誘導体であり、
ｎは、１～５０、好ましくは１～２０、より好ましくは２～８、特別には２～６の数字であり、
Ｘ１はＮであり、
Ｘ２はＮであり、及び
Ｘ３はＣであり；
又は
Ｘ１はＮであり、
Ｘ２はＣであり、及び
Ｘ３はＮであり；
又は
Ｘ１はＣＨ又はＣＦであり、
Ｘ２はＣであり、及び
Ｘ３はＮであり；
又は
Ｘ１はＮＨであり、
Ｘ２はＣであり、及び
Ｘ３はＣであり；
又は
Ｘ１はＣＨであり、
Ｘ２はＮであり、及び
Ｘ３はＣである。
Ａは、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｓ（＝Ｏ）－、－Ｓ（＝Ｏ）２－又は－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨ－であり、
Ｍは、次の基：
（＊）－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ２）３－Ｃ（＝Ｏ）－（＊＊）、
（＊）－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ２）２－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＨ２）３－Ｃ（＝Ｏ）－（＊＊）、
（＊）－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ２）２－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＨ２）３－Ｃ（＝Ｏ）－（＊＊）、
（＊）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ（ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＯＯＨ）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ（ＣＨ３）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ（ＣＨ３）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＨ２）３－Ｃ（＝Ｏ）－（＊＊）、
（＊）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ（ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ（ＣＨ３）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ（ＣＨ３）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－（＊＊）、
Figure 0007251981000124
Figure 0007251981000125
Figure 0007251981000126
（＊）－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ２）２－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ２－ＮＨ－Ｒ１２、
（＊）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ（ＣＨ３）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ（ＣＨ３）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ２－ＮＨ－Ｒ１２、
（＊）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ（ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ（ＣＨ３）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ（ＣＨ３）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－Ｒ１２、
Figure 0007251981000127
Figure 0007251981000128
Figure 0007251981000129
であり、
Ｒ１２は、下記の基：
（＊）－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ（＊＊）－ＣＨ２－ＣＯＯＨ、（＊）－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ２－ＣＨ（＊＊）－ＣＯＯＨ、又は
Figure 0007251981000130
であり、
Ｒ１は、水素又は下記の基：
Figure 0007251981000131
であり、
Ｘは、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２であり、
Ｒｘ及びＲｙは独立に、－ＣＨ３、－ＣＨ２－ＣＯＯＨ、－（ＣＨ２）２－ＣＯＯＨ、－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２、－ＣＨ２ＯＨ又は－ＣＨ２Ｒ１１であり、
Ｒ１０は、メチル、－（Ｃ（＝Ｏ））ｑ－Ｏ－Ｒ１１、－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＨ２）ｍ－Ｒ１１であり、
ｑは、０又は１であり、
ｍは、０、１又は２であり、
Ｒ１１は、水素、メチル、ベンジル、ピリジル、イミダゾリル又は基－（Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２）ｐ－Ｏ－ＣＨ３であり、
ｐは１～１１であり、
Ｒ２は－Ｈであり、
Ｒ３は、置換されていても良いアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル基であり、それらは１～３個のＯＨ基、１～３個のハロゲン原子、１～３個のモノ－、ジ－若しくはトリハロゲン化アルキル基、１～３個の－Ｏ－アルキル基、１～３個の－ＳＨ基、１～３個の－Ｓ－アルキル基、１～３個の－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－アルキル基、１～３個の－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－アルキル基、１～３個の－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－Ｓ（＝Ｏ）ｎ－アルキル基、１～３個の－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－Ｎ（アルキル）２基、１～３個のＮＨ２基又は１～３個の－（ＣＨ２）０－３Ｚ基によって置換されていても良く、
ｎは、０、１又は２であり、
Ｚは、－Ｈ、ハロゲン、－ＯＹ３、－ＳＹ３、－ＮＨＹ３、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＹ１Ｙ２又は－Ｃ（＝Ｏ）－ＯＹ３であり、
Ｙ１及びＹ２は独立に、－Ｈ、－ＮＨ２、又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ′であり、
Ｙ３は、－Ｈ、－（ＣＨ２）０－３－ＣＨ－（ＮＨＣ（＝ＯＣＨ３）Ｚ′、－（ＣＨ２）０－３－ＣＨ（ＮＨ２）Ｚ′又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ′であり、
Ｚ′は、－Ｈ、－Ｓ（＝Ｏ）３Ｈ、－ＮＨ２又は－ＣＯＯＨであり、
Ｒ５は、－Ｈ、－ＮＨ２、－ＮＯ２、ハロゲン、－ＣＮ、－ＣＦ３、－ＯＣＦ３、－ＣＨ２Ｆ、－ＣＨ２Ｆ、－ＳＨ又は－（ＣＨ２）０－３Ｚであり、
Ｚは、－Ｈ、－ＯＹ３、－ＳＹ３、ハロゲン、－ＮＨＹ３、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＹ１Ｙ２、又は－Ｃ（＝Ｏ）－ＯＹ３であり、
Ｙ１及びＹ２は独立に、－Ｈ、－ＮＨ２、又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ′であり、
Ｙ３は、－Ｈ又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ′であり、
Ｚ′は、－Ｈ、－Ｓ（＝Ｏ）３Ｈ、－ＮＨ２又は－ＣＯＯＨであり、
Ｒ６及びＲ７は独立に、－Ｈ、－ＣＮ、Ｃ１－１０－アルキル、フルオロ－Ｃ１－１０－アルキル、Ｃ２－１０－アルケニル、フルオロ－Ｃ２－１０－アルケニル、Ｃ２－１０－アルキニル、フルオロ－Ｃ２－１０－アルキニル、ヒドロキシル、－ＮＯ２、－ＮＨ２、－ＣＯＯＨ又はハロゲンであり、
Ｒ８は、Ｃ１－１０－アルキル、フルオロ－Ｃ１－１０－アルキル、Ｃ２－１０－アルケニル、フルオロ－Ｃ２－１０－アルケニル、Ｃ２－１０－アルキニル、フルオロ－Ｃ２－１０－アルキニル、Ｃ４－１０－シクロアルキル、フルオロ－Ｃ４－１０－シクロアルキル又は－（ＣＨ２）０－２－（ＨＺ２）であり、
ＨＺ２はＮ、Ｏ及びＳから選択される２個以下のヘテロ原子を有する４～７員の複素環であり、それは－ＯＨ、－ＣＯＯＨ又は－ＮＨ２によって置換されていても良く、
Ｒ９は、－Ｈ、－Ｆ、－ＣＨ３、－ＣＦ３、－ＣＨ２Ｆ又は－ＣＨＦ２であり、
（＊）は、薬物分子又はレグマイン開裂性基への結合であり、
（＊＊）は、バインダーへの結合である
これらの中で興味深いものは、
ＡＫが、バインダー、好ましくは抗体又は抗原結合性断片であり、
ｎが１～５０、好ましくは１～２０、より好ましくは２～８、特別には２～６の数字であり、
Ｘ１がＣＨであり、
Ｘ２がＣであり、及び
Ｘ３がＮであり；
Ａが－Ｃ（＝Ｏ）－であり、
Ｍが、下記の基：
（＊）－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ２）３－Ｃ（＝Ｏ）－（＊＊）、
（＊）－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ２）２－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＨ２）３－Ｃ（＝Ｏ）－（＊＊）、
（＊）－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ２）２－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＨ２）３－Ｃ（＝Ｏ）－（＊＊）、
（＊）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ（ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＯＯＨ）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ（ＣＨ３）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ（ＣＨ３）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＨ２）３－Ｃ（＝Ｏ）－（＊＊）、
（＊）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ（ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ（ＣＨ３）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ（ＣＨ３）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－（＊＊）、
Figure 0007251981000132
Figure 0007251981000133
Figure 0007251981000134
（＊）－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ２）２－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ２－ＮＨ－Ｒ１２、
（＊）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ（ＣＨ３）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ（ＣＨ３）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ２－ＮＨ－Ｒ１２、

（＊）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ（ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ（ＣＨ３）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ（ＣＨ３）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－Ｒ１２、
Figure 0007251981000135
Figure 0007251981000136
であり、
Ｒ１２が、下記の基：
（＊）－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ（＊＊）－ＣＨ２－ＣＯＯＨ、（＊）－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ２－ＣＨ（＊＊）－ＣＯＯＨ又は
Figure 0007251981000137
であり、
Ｒ１が、水素又は下記の基：
Figure 0007251981000138
であり、
Ｘが、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２であり、
Ｒｘ及びＲｙが独立に、－ＣＨ３、－ＣＨ２－ＣＯＯＨ、－（ＣＨ２）２－ＣＯＯＨ、－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２、－ＣＨ２ＯＨ又は－ＣＨ２Ｒ１１であり、
Ｒ１０が、メチル、－（Ｃ（＝Ｏ））ｑ－Ｏ－Ｒ１１、－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＨ２）ｍ－Ｒ１１であり、
ｑが０又は１であり、
ｍが０、１又は２であり、
Ｒ１１が、水素、メチル、ベンジル、ピリジル、イミダゾリル又は下記の基：－（Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２）ｐ－Ｏ－ＣＨ３であり、
ｐが１～１１であり、
Ｒ２が－Ｈであり、
Ｒ３が、－ＣＨ２－ＯＨ基であり、
Ｒ５が－Ｈであり、
Ｒ６及びＲ７が独立にフッ素であり、
Ｒ８がｔ－ブチルであり、
Ｒ９が－Ｈであり、
（＊）が、薬物分子又はレグマイン開裂性基への結合であり、
（＊＊）がバインダーへの結合である式（Ｘ）の複合体
並びにそれの塩、溶媒和物及び溶媒和物の塩である。
やはり興味深いものは、下記式（ＸＩ）及び（ＸＩ′）の化合物とバインダー又はそれの誘導体（好ましくは抗体）からなる複合体並びにそれの塩、溶媒和物及び溶媒和物の塩である。
Figure 0007251981000139
式中、
ＡＫは、バインダー、好ましくは抗体又は抗原結合性断片であり、
ｎは、１～５０、好ましくは１～２０、より好ましくは２～８、特別には２～６の数字であり、
Ｘ１はＮであり、
Ｘ２はＮであり、及び
Ｘ３はＣであり；
又は
Ｘ１はＮであり、
Ｘ２はＣであり、及び
Ｘ３はＮであり；
又は
Ｘ１はＣＨ又はＣＦであり、
Ｘ２はＣであり、及び
Ｘ３はＮであり；
又は
Ｘ１はＮＨであり、
Ｘ２はＣであり、及び
Ｘ３はＣであり；
又は
Ｘ１はＣＨであり、
Ｘ２はＮであり、及び
Ｘ３はＣである。
Ｍは、下記の基：
Figure 0007251981000140
Figure 0007251981000141
及び－（ＣＨ２）３－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ（ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ（ＣＨ３）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ（ＣＨ３）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＨ２）３－Ｒ１２であり、
Ｒ１２は、下記の基：
（＊）－Ｃ（＝Ｏ）－（＊＊）、（＊）－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ（＊＊）－ＣＨ２－ＣＯＯＨ、
（＊）－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ２－ＣＨ（＊＊）－ＣＯＯＨ、
Figure 0007251981000142
であり、
Ｒ１は、下記の基：
Figure 0007251981000143
であり、
Ｘは、－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２であり、
Ｒｘ及びＲｙは－ＣＨ３、プロピルであり、
Ｒ１０は、－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＨ２）－Ｒ１１、－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｐ－ＣＨ３であり、
Ｒ１１は、水素、ピリジルであり、
ｐは８～１２であり、
Ｒ５は－Ｈであり、
Ｒ６及びＲ７は独立にフッ素であり、
Ｒ８はｔ－ブチルであり、
Ｒ９は－Ｈであり、
（＊）は、薬物分子又はレグマイン開裂性基への結合であり。
（＊＊）はバインダーへの結合である。
これらの中で興味深いものは、
ＡＫが、バインダー、好ましくは抗体又は抗原結合性断片であり、
ｎが１～５０、好ましくは１～２０、より好ましくは２～８、特別には２～６の数字であり、
Ｘ１がＣＨであり、
Ｘ２がＣであり、及び
Ｘ３がＮであり；
Ｍが、下記の基：
Figure 0007251981000144
Figure 0007251981000145
－（ＣＨ２）３－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ（ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ（ＣＨ３）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ（ＣＨ３）－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＨ２）３－Ｒ１２
であり、
Ｒ１２が、下記の基：
（＊）－Ｃ（＝Ｏ）－（＊＊）、（＊）－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ（＊＊）－ＣＨ２－ＣＯＯＨ、
（＊）－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ２－ＣＨ（＊＊）－ＣＯＯＨ
Figure 0007251981000146
であり、
Ｒ１が、下記の基：
Figure 0007251981000147
であり、
Ｘが、－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２であり、
Ｒｘ及びＲｙが－ＣＨ３、プロピルであり、
Ｒ１０が、－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＨ２）－Ｒ１１、－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｐ－ＣＨ３であり、
Ｒ１１が、水素、ピリジルであり、
ｐが８～１２であり、
Ｒ５が－Ｈであり、
Ｒ６及びＲ７が独立にフッ素であり、
Ｒ８がｔ－ブチルであり、
Ｒ９が－Ｈであり、
（＊）が薬物分子又はレグマイン開裂性基への結合であり、
（＊＊）がバインダーへの結合である式（ＸＩ）及び（ＸＩ′）の複合体並びにそれの塩、溶媒和物及び溶媒和物の塩である。
本発明によれば、特に好ましいものは、
ＡＫ（ＡＫ１；ＡＫ２；ＡＫ３）がバインダー、好ましくは抗体又は抗原結合性断片であり、
ｎが１～５０、好ましくは１～２０、より好ましくは２～８、特別には２～６の数字である。
ＡＫ１が、好ましくはシステイン残基を介してＫＳＰ阻害剤に結合した抗体であり、
ＡＫ２が、好ましくはリジン残基を介してＫＳＰ阻害剤に結合した抗体であり、
ＡＫ３が、好ましくはグルタミン残基を介してＫＳＰ阻害剤に結合した抗体である、下記のＫＳＰ－阻害剤複合体である。
ここで使用されるバインダー又は抗体は好ましくは、説明において好ましいと記載されているバインダー及び抗体である。
特別に好ましいものは、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－７００６、ＴＰＰ－７００７、ＴＰＰ－１０３３６及びＴＰＰ－１０３３７、抗Ｂ７Ｈ３抗体ＴＰＰ－８３８２及びＴＰＰ－８５６７、抗ＥＧＦＲ－抗体セツキシマブ（ＴＰＰ－９８１）及び抗ＨＥＲ２－抗体トラスツズマブ及びＴＰＰ－１０１５、又はこれらの抗原結合性断片である。
特に好ましい複合体は、以下のものである。
Figure 0007251981000148
Figure 0007251981000149
Figure 0007251981000150
Figure 0007251981000151
Figure 0007251981000152
Figure 0007251981000153
Figure 0007251981000154
Figure 0007251981000155
Figure 0007251981000156
Figure 0007251981000157
Figure 0007251981000158
Figure 0007251981000159
Figure 0007251981000160
Figure 0007251981000161
Figure 0007251981000162
Figure 0007251981000163
Figure 0007251981000164
Figure 0007251981000165
Figure 0007251981000166
Figure 0007251981000167
Figure 0007251981000168
Figure 0007251981000169
Figure 0007251981000170
Figure 0007251981000171
Figure 0007251981000172
ＫＳＰ阻害剤－リンカー中間体又はプロドラッグ－リンカー中間体及び複合体の製造
本発明による複合体は、最初に低分子量ＫＳＰ阻害剤又はそれのプロドラッグにリンカーを提供することによって製造される。次に、このようにして得られた中間体をバインダー（好ましくは抗体）と反応させる。
好ましくは、システイン残基へのカップリングのために、下記化合物のうちの一つを、システイン含有バインダー、例えばこの目的のために部分還元されていても良い抗体と反応させる。
Figure 0007251981000173
Figure 0007251981000174
Figure 0007251981000175
Figure 0007251981000176
Figure 0007251981000177
式中、
Ｘ１はＣＨであり、
Ｘ２はＣであり、
Ｘ３はＮであり、
Ｒは－Ｈ又は－ＣＯＯＨであり、
Ｋは、直鎖若しくは分岐のＣ１－Ｃ６アルコキシ－又は－ＯＨ－置換されていても良いＣ１－Ｃ６アルキルであり、及び
ＳＧ１、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３及びＬ４は上記で提供の定義を有する。
上記式において、さらには下記の反応図式及び構造式において、式ＩＩａによる位置Ｒ４における、すなわち－ＮＨ２基における水素原子は、本発明に従って使用される式Ｉａのレグマイン開裂性基によって置き換わっていても良い。
上記化合物のそれぞれにおいて、そして下記化合物において、ｔｅｒｔ－ブチル基は、シクロヘキシルによって置き換わっていても良い。
当該化合物は、例えば、それのトリフルオロ酢酸塩の形態で用いることができる。バインダーとの反応、例えば抗体との反応については、当該化合物は好ましくは、バインダーに関して２～１２倍モル過剰で用いる。
好ましくは、リジン残基へのカップリングに関しては、下記の化合物のうちの一つを、抗体などのリジン含有バインダーと反応させる。
Figure 0007251981000178
式中、
Ｘ１はＣＨであり、
Ｘ２はＣであり、
Ｘ３はＮであり、及び
Ｌ４はＬ１と同じ定義を有し、Ｌ１は、上記で記載のものと同じ定義を有する。
システイン残基にカップリングする中間体については、その反応は、下記のように描くことができる。
Figure 0007251981000179
他の中間体及び他の抗体を同様に反応させることができる。
リジン残基にカップリングする中間体の場合、その反応は下記のように描くことができる。
Figure 0007251981000180
本発明によれば、これによって、下記の複合体が得られる。
Figure 0007251981000181
この反応（開環）は、ｐＨ７．５～９で、好ましくはｐＨ８で、２５℃～３７℃の温度で、例えば撹拌することで行うことができる。好ましい撹拌時間は８～３０時間である。
上記式において、Ｘ１はＣＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し、ＳＧ１及びＬ１は上記と同じ定義を有し、Ｌ２、Ｌ３及びＬ４はＬ１と同じ定義を有し；Ｒ及びＫは上記と同じ定義を有する。
ＡＫ１は、システイン残基、抗ＥＧＦＲ抗体、抗Ｂ７Ｈ３抗体若しくは抗ＨＥＲ２抗体又はこれらの抗原結合性断片を介してカップリングした抗ＴＷＥＡＫＲ抗体であり、ＡＫ２は、リジン残基、抗ＥＧＦＲ抗体、抗Ｂ７Ｈ３抗体若しくは抗ＨＥＲ２抗体又はこれらの抗原結合性断片を介してカップリングした抗ＴＷＥＡＫＲ抗体である。より好ましくは、ＡＫ１及びＡＫ２は、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－７００６、ＴＰＰ－７００７、ＴＰＰ－１０３３６及びＴＰＰ－１０３３７、抗Ｂ７Ｈ３抗体ＴＰＰ－８３８２及びＴＰＰ－８５６７、抗ＥＧＦＲ－抗体セツキシマブ（ＴＰＰ－９８１）及び抗ＨＥＲ２－抗体トラスツズマブ及びＴＰＰ－１０１５、又はこれらの抗原結合性断片である。
さらなる定義
「ＴＧａｓｅ」又は「ＴＧ」としても互換的に用いられる「トランスグルタミナーゼ」という表現は、ペプチド結合グルタミンのγ－カルボキサミド基とリジンもしくは構造的に関連のある１級アミン、例えばアミノペンチル基、又は例えばペプチド結合リジンのε－アミノ基との間のアシル転位反応を介してタンパク質を連結して、８－（γ－グルタミル）リジンイソペプチド結合を生じさせる能力を有する酵素を意味するものと理解される。ＴＧａｓｅ類には、細菌トランスグルタミナーゼ（ＢＴＧ）、例えばＥＣ参照番号２．３．２．１３を有する酵素（タンパク質－グルタミン－γ－グルタミルトランスフェラーゼ）などがある。
抗体のアミノ酸残基を指す場合の「アクセプターグルタミン」という表現は、好適な条件下でトランスグルタミナーゼによって認識され、この特異的グルタミンとリジン若しくは構造的に関連する１級アミン、例えばアミノペンチル基との間の反応によりトランスグルタミナーゼ触媒作用下にそれと連結することができるグルタミン残基を意味する。アクセプターグルタミンは、表面露出グルタミンであることができる。
本明細書において「アミノ酸修飾」又は「突然変異」は、ポリペプチド配列におけるアミノ酸置換、挿入及び／又は欠失を意味する。本明細書における好ましいアミノ酸修飾は置換である。本明細書における「アミノ酸置換」又は「置換」は、タンパク質配列における所定位置での別のアミノ酸によるアミノ酸の置き換えを意味する。例えば、置換Ｙ５０Ｗは、位置５０でのチロシンがトリプトファンによって置き換わっている親ポリペプチドの変異体を説明するものである。ポリペプチドの「変異体」は、基準ポリペプチド、代表的には天然もしくは「親」ポリペプチドと実質的に同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを説明するものである。ポリペプチド変異体は、天然アミノ酸配列での特定の位置での１以上のアミノ酸交換、欠失及び／又は挿入を有することができる。
「結合部位特異的複合体」という表現は、バインダー、好ましくは抗体、及び残基の複合体、好ましくはリンカー－薬物残基を説明するものであり、そのバインダーは、１以上の所定の位置、好ましくはグルタミン残基で官能化されている。細菌トランスグルタミナーゼ（ＢＴＧ）（ＥＣ２．３．２．１３）などのトランスグルタミナーゼ類（ＴＧａｓｅ）は、グルタミン－タンパク質基質の認識において強い特異性を示し、「結合部位特異的複合体化」を触媒することができる。
「均一複合体」又は「均一ＡＤＣ」という表現は、バインダーの少なくとも６０％、７０％、８０％又は９０％がバインダー当たり同数の複合体化残基を有する結合部位特異的複合体の混合物を説明するものである。抗体の場合、この数は、偶数、好ましくは２又は４であるべきである。
同位体、塩、溶媒和物、同位体変異体
本発明はまた、本発明による化合物の全ての好適な同位体形態を包含する。本発明の化合物の同位体形態は本明細書において、本発明の化合物内の少なくとも一つの原子が同じ原子番号であるが、自然界において通常若しくは支配的にある原子質量とは異なる原子質量を有する別の原子に交換されている化合物を意味するものと理解される。本発明の化合物に組み込むことができる同位体の例には、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素の同位体があり、例えば２Ｈ（重水素）、３Ｈ（三重水素）、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１７Ｏ、１８Ｏ、３２Ｐ、３３Ｐ、３３Ｓ、３４Ｓ、３５Ｓ、３６Ｓ、１８Ｆ、３６Ｃｌ、８２Ｂｒ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２９Ｉ及び１３１Ｉである。本発明による化合物の特定の同位体型、特別には１以上の放射性同位体が組み込まれているものは、例えば、作用機序又は身体中での有効成分分布の試験に有用となり得る。製造及び検出が比較的容易であることから、特には、３Ｈ又は１４Ｃ同位体で標識された化合物がその目的には好適である。さらに、同位体、例えば重水素を組み込むことにより、化合物の代謝安定性が高くなることで特に治療上有益となり得るものであり、例えば身体中での半減期が長くなり、又は必要な活性成分用量が減る。従って、本発明による化合物のそのような修飾も、場合により、本発明の好ましい実施形態を構成し得る。本発明による化合物の同位体型は、当業者に公知の方法によって、例えばさらに下記に記載の方法及び実施例に記載の手順によって、個々の試薬及び／又は出発化合物の相当する同位体修飾を用いることで製造することができる。
本発明の文脈において好ましい塩は、本発明による化合物の生理的に許容される塩である。自体は医薬用途には適さないが、例えば本発明による化合物の単離又は精製には用いることができる塩も包含される。
本発明による化合物の生理的に許容される塩には、鉱酸、カルボン酸及びスルホン酸の酸付加塩、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸及び安息香酸の塩などがある。
本発明による化合物の生理的に許容される塩にはさらに、通常の塩基の塩、例えば好ましくは、アルカリ金属塩（例えばナトリウム及びカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えばカルシウム及びマグネシウム塩）及びアンモニア若しくは１から１６個の炭素原子を有する有機アミン、例えば好ましくはエチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、エチルジイソプロピルアミン、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、ジメチルアミノエタノール、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ－メチルピペリジン、Ｎ－メチルモルホリン、アルギニン、リジン及び１,２－エチレンジアミンから誘導されるアンモニウム塩などがある。
本発明の文脈での溶媒和物は、溶媒分子による配位によって固体又は液体での錯体を形成している本発明による化合物の形態として説明される。水和物は、配位が水によるものである溶媒和物の特定の形態である。本発明の文脈で好ましい溶媒和物は水和物である。
本発明はさらに、本発明による化合物のプロドラッグも包含する。この文脈での「プロドラッグ」という用語は、自体は生理的に活性又は不活性であり得るが、身体に存在中に反応して（例えば、代謝的又は加水分解的に）、本発明による化合物を与える化合物を指す。
特定の実施形態
下記の実施形態が特に好ましい。
実施形態Ａ：
式ＩＶａ′又はＩＶａ″又はＩＶａ″′のＡＰＤＣ［式ＩＶａ′又はＩＶａ″又はＩＶａ″′におけるＤ１は、下記式（ＩＩｅ）の化合物である。］。
Figure 0007251981000182
式中、
Ｘ１はＮであり、
Ｘ２はＮであり、及び
Ｘ３はＣであり、
又は
Ｘ１はＣＨであり、
Ｘ２はＣであり、及び
Ｘ３はＮであり、
又は
Ｘ１はＮＨであり、
Ｘ２はＣであり、及び
Ｘ３はＣであり、
又は
Ｘ１はＣＨであり、
Ｘ２はＮであり、及び
Ｘ３はＣであり、
Ａは－Ｃ（＝Ｏ）－であり、
Ｒ１は、－Ｌ－＃１、－Ｈ、－ＣＯＯＨ、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨＮＨ２、－（ＣＨ２）１－３ＮＨ２、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＺ″（ＣＨ２）１－３ＮＨ２及び－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＺ″ＣＨ２－ＣＯＯＨであり、
Ｚ″は、－Ｈ又は－ＮＨ２であり、
Ｒ２は－Ｈであり、
Ｒ４は、式（Ｉａ）の基であり、
Ｒ３は、－Ｌ－＃１又はＣ１－１０－アルキル基であり、それは－ＯＨ、－Ｏ－アルキル、－ＳＨ、－Ｓ－アルキル、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－アルキル、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－アルキル、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－アルキル、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－アルキル、－Ｓ（＝Ｏ）ｎ－アルキル、－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨ－アルキル、－ＮＨ－アルキル、－Ｎ（アルキル）２、又は－ＮＨ２によって置換されていても良く、
Ｒ５は－Ｈ又は－Ｆであり、
Ｒ６及びＲ７は独立に、－Ｈ、Ｃ１－３－アルキル、フルオロ－Ｃ１－３－アルキル、Ｃ２－４－アルケニル、フルオロ－Ｃ２－４－アルケニル、Ｃ２－４－アルキニル、フルオロ－Ｃ２－４－アルキニル、ヒドロキシル又はハロゲンであり、
Ｒ８は、分岐のＣ１－５－アルキル基又はシクロヘキシル基であり、
Ｒ９は－Ｈ又は－Ｆであり、
－Ｌ－＃１は、リンカー基：
Figure 0007251981000183
であり、
ｍは０又は１であり、
§は、ＫＳＰ阻害剤への結合を表し、
§§は、抗体への結合を表し、
Ｌ２は、下記の基：
Figure 0007251981000184
のうちの一つであり、
＃１は、抗体の硫黄原子への連結部位であり、
＃２は、Ｌ１基への連結部位であり、
Ｌ１は、基：
Figure 0007251981000185
であり、
Ｒ１０は、－Ｈ、－ＮＨ２又はＣ１－３－アルキルであり、
Ｇ１は、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－又は
Figure 0007251981000186
であり、
ｎは０又は１であり、
ｏは０又は１であり、及び
Ｇ２は、アリーレン基及び／又は直鎖及び／又は分岐及び／又は環状のアルキレン基からなる１～１００個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐の炭化水素鎖であり、それは、同一若しくは異なって、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓ（＝Ｏ）－、－Ｓ（＝Ｏ）２、－ＮＨ－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＭｅ－、－ＮＨＮＨ－、－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨＮＨ－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨＮＨ－及び＝Ｎ－、－Ｏ－及び－Ｓ－、又は－Ｓ（＝Ｏ）－から選択される４個以下のヘテロ原子を有する３～１０員の芳香族若しくは非芳香族複素環によって１回又は複数回中断されていても良く、前記直鎖若しくは分岐の炭化水素鎖は、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２、－ＣＯＯＨ、－ＯＨ、－ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシド、又はスルホン酸によって置換されていても良く、
＃１は、ＫＳＰ阻害剤への結合であり、
＃２は、抗体へのＬ２への結合であり、
置換基Ｒ１及びＲ３のうちの一方がリンカー基－Ｌ－＃１、並びにそれの塩、溶媒和物及び溶媒和物の塩であり、式ＩＶａ′又はＩＶａ″又はＩＶａ″′で言及の抗体は、ヒト、ヒト化若しくはキメラモノクローナル抗体又はそれの抗原結合性断片であり、式ＩＶａ′又はＩＶａ″又はＩＶａ″′におけるｎは１～１０の数字である。
好ましくは、この場合の抗体は、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗Ｂ７Ｈ３抗体又は抗ＨＥＲ２抗体又はこれらの抗原結合性断片である。
特に好ましいものは、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－７００６、ＴＰＰ－７００７、ＴＰＰ－１０３３６及びＴＰＰ－１０３３７、抗Ｂ７Ｈ３抗体ＴＰＰ－８３８２及びＴＰＰ－８５６７、抗ＥＧＦＲ－抗体セツキシマブ（ＴＰＰ－９８１）及び抗ＨＥＲ２－抗体トラスツズマブ及びＴＰＰ－１０１５、又はこれらの抗原結合性断片である。
ここで、好ましいものは、Ｒ３がアルキル、好ましくはＣ１－３アルキルと定義される式（ＩＩｅ）の化合物である。
この文脈において、Ｇ２は好ましくは
Figure 0007251981000187
である。
或いは、リンカー－Ｌ－＃１は、リジン側鎖又はリジン残基に結合していても良い。その場合、それは好ましくは、下記式を有する。
Figure 0007251981000188
式中、
§は、ＫＳＰ阻害剤への結合を表し、
§§は、抗体への結合を表し、
ｘは０又は１であり、
ＳＧは開裂性基であり、
Ｌ４は、単結合又は基：
Figure 0007251981000189
であり、
ｙは０又は１であり、
Ｇ４は、アリーレン基及び／又は直鎖及び／又は分岐及び／又は環状のアルキレン基からなる１～１００個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐の炭化水素鎖であり、それは、同一若しくは異なって、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓ（＝Ｏ）－、－Ｓ（＝Ｏ）２、－ＮＨ－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＭｅ－、－ＮＨＮＨ－、－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨＮＨ－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨＮＨ－及び＝Ｎ－、－Ｏ－及び－Ｓ－、－Ｓ（＝Ｏ）－又は－Ｓ（＝Ｏ）２－から選択される４個以下のヘテロ原子を有する５～１０員の芳香族若しくは非芳香族複素環によって１回又は複数回中断されていても良く、前記直鎖若しくは分岐の炭化水素鎖は、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２、－ＣＯＯＨ、－ＯＨ、－ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシド又はスルホン酸によって置換されていても良い。
この文脈において、ＳＧは好ましくは、２～８オリゴペプチド、より好ましくはジペプチドである。
好ましくは、Ｇ４の直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖は、
Figure 0007251981000190
によって中断されていても良い。
実施形態Ｂ：
式ＩＶａ′又はＩＶａ″又はＩＶａ″′のＡＰＤＣ（式ＩＶａ′又はＩＶａ″又はＩＶａ″′におけるＤ１は式（ＩＩｆ）の化合物である。）：
Figure 0007251981000191
［式中、
Ｘ１はＮであり、
Ｘ２はＮであり、及び
Ｘ３はＣであり、
又は
Ｘ１はＣＨであり、
Ｘ２はＣであり、及び
Ｘ３はＮであり、
又は
Ｘ１はＮＨであり、
Ｘ２はＣであり、及び
Ｘ３はＣであり、
又は
Ｘ１はＣＨであり、
Ｘ２はＮであり、及び
Ｘ３はＣであり、
Ａは、－Ｃ（＝Ｏ）－であり、
Ｒ１は、－Ｌ－＃１、－Ｈ、－ＣＯＯＨ、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨＮＨ２、－（ＣＨ２）１－３ＮＨ２、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＺ″（ＣＨ２）１－３ＮＨ２及び－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＺ″ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）－ＯＨであり、
Ｚ″は、－Ｈ又は－ＮＨ２であり、
Ｒ２は－Ｈであり、
Ｒ４は、式（Ｉａ）の基であり
Ｒ３は、－Ｌ－＃１又はＣ１－１０－アルキル基であり、それは－ＯＨ、－Ｏ－アルキル、－ＳＨ、－Ｓ－アルキル、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－アルキル、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－アルキル、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－アルキル、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－アルキル、－Ｓ（＝Ｏ）ｎ－アルキル、－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨ－アルキル、－ＮＨ－アルキル、－Ｎ（アルキル）２及び－ＮＨ２によって置換されていても良く、
Ｒ５は－Ｈ又は－Ｆであり、
Ｒ６及びＲ７は独立に、－Ｈ、Ｃ１－３－アルキル、フルオロ－Ｃ１－３－アルキル、Ｃ２－４－アルケニル、フルオロ－Ｃ２－４－アルケニル、Ｃ２－４－アルキニル、フルオロ－Ｃ２－４－アルキニル、ヒドロキシル又はハロゲンであり、
Ｒ８は、分岐のＣ１－５－アルキル基であり、
Ｒ９は－Ｈ又は－Ｆであり、
－Ｌ－＃１は、下記の基：
Figure 0007251981000192
であり、
ｍは０又は１であり；
§は、ＫＳＰ阻害剤への結合を表し、
§§は、抗体への結合を表し、
Ｌ２は、下記の基：
Figure 0007251981000193
であり、
＃１は、抗体の硫黄原子への連結部位であり、
＃２は、Ｌ１基への連結部位であり、
Ｌ１は、下記の基：
Figure 0007251981000194
であり、
Ｒ１０は、－Ｈ、－ＮＨ２又はＣ１－Ｃ３－アルキルであり、
Ｇ１は、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－又は
Figure 0007251981000195
であり、
ｎは０又は１であり、
ｏは０又は１であり、
Ｇ２は、アリーレン基及び／又は直鎖及び／又は分岐及び／又は環状のアルキレン基からなる１～１００個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐の炭化水素鎖であり、それは、同一若しくは異なって、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓ（＝Ｏ）－、－Ｓ（＝Ｏ）２．－、－ＮＨ－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＭｅ－、－ＮＨＮＨ－、－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨＮＨ－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨＮＨ－及び＝Ｎ－、－Ｏ－及び－Ｓ－、又は－Ｓ（＝Ｏ）－から選択される４個以下のヘテロ原子を有する３～１０員の芳香族若しくは非芳香族複素環によって１回又は複数回中断されていても良く、前記直鎖若しくは分岐の炭化水素鎖は、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２、－ＣＯＯＨ、－ＯＨ、－ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシド、又はスルホン酸によって置換されていても良く、
＃１は、ＫＳＰ阻害剤への結合であり、
＃２は、抗体へのＬ２への結合であり、
置換基Ｒ１及びＲ３のうちの一方がリンカー基－Ｌ－＃１である。］並びにそれの塩、溶媒和物及び溶媒和物の塩（式ＩＶａ′又はＩＶａ″又はＩＶａ″′で言及された抗体はヒト、ヒト化若しくはキメラモノクローナル抗体又はそれの抗原結合性断片であり、式ＩＶａ′又はＩＶａ″又はＩＶａ″′におけるｎは１～１０の数字である。）。
好ましくは、この場合の抗体は、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗Ｂ７Ｈ３抗体又は抗ＨＥＲ２抗体又はこれらの抗原結合性断片である。
特に好ましいものは、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－７００６、ＴＰＰ－７００７、ＴＰＰ－１０３３６及びＴＰＰ－１０３３７、抗Ｂ７Ｈ３抗体ＴＰＰ－８３８２及びＴＰＰ－８５６７、抗ＥＧＦＲ－抗体セツキシマブ（ＴＰＰ－９８１）及び抗ＨＥＲ２－抗体トラスツズマブ及びＴＰＰ－１０１５、又はこれらの抗原結合性断片である。
ここで好ましいものは、Ｒ３がアルキルと、好ましくはＣ１－３アルキルと定義される式（ＩＩｆ）の化合物である。
この文脈において、Ｇ２は好ましくは、
Figure 0007251981000196
である。
或いは、リンカー－Ｌ－＃１は、リジン側鎖又はリジン残基に結合していても良い。その場合、それは好ましくは、下記式を有する。
Figure 0007251981000197
式中、
§は、ＫＳＰ阻害剤への結合を表し、
§§は、抗体への結合を表し、
ｘは０又は１であり、
ＳＧは開裂性基であり、
Ｌ４は、単結合又は基：
Figure 0007251981000198
であり、
ｙは０又は１であり、及び
Ｇ４は、アリーレン基及び／又は直鎖及び／又は分岐及び／又は環状のアルキレン基からなる１～１００個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐の炭化水素鎖であり、それは、同一若しくは異なって、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓ（＝Ｏ）－、－Ｓ（＝Ｏ）２、－ＮＨ－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＭｅ－、－ＮＨＮＨ－、－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨＮＨ－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨＮＨ－及び＝Ｎ－、－Ｏ－及び－Ｓ－、－Ｓ（＝Ｏ）－又は－Ｓ（＝Ｏ）２－から選択される４個以下のヘテロ原子を有する５～１０員の芳香族若しくは非芳香族複素環によって１回又は複数回中断されていても良く、前記直鎖若しくは分岐の炭化水素鎖は、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２、－ＣＯＯＨ、－ＯＨ、－ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシド、又はスルホン酸によって置換されていても良い。
この文脈において、ＳＧは好ましくは２～８オリゴペプチド、より好ましくはジペプチドである。
好ましくは、Ｇ４の直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖は、
Figure 0007251981000199
によって中断されていても良い。
実施形態Ｃ：
式ＩＶａ′又はＩＶａ″又はＩＶａ″′のＡＰＤＣ（式ＩＶａ′又はＩＶａ″又はＩＶａ″′におけるＤ１は、下記式（ＩＩｇ）の化合物である。）：
Figure 0007251981000200
［式中、
Ｘ１はＮであり、
Ｘ２はＮであり、及び
Ｘ３はＣであり、
又は
Ｘ１はＣＨであり、
Ｘ２はＣであり、及び
Ｘ３はＮであり、
又は
Ｘ１はＮＨであり、
Ｘ２はＣであり、及び
Ｘ３はＣであり、
又は
Ｘ１はＣＨであり、
Ｘ２はＮであり、及び
Ｘ３はＣであり、
Ａは－Ｃ（＝Ｏ）－であり、
Ｒ１は－Ｌ－＃１であり、
Ｒ２は－Ｈであり、
Ｒ４は式（Ｉａ）の基であり、
Ｒ３はＣ１－１０－アルキル基（－ＯＨ、－Ｏ－アルキル、－ＳＨ、－Ｓ－アルキル、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－アルキル、－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－アルキル、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－アルキル、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－アルキル、－Ｓ（＝Ｏ）ｎ－アルキル、－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨ－アルキル、－ＮＨ－アルキル、－Ｎ（アルキル）２又は－ＮＨ２によって置換されていても良い。）であるか、－ＭＯＤであり、
－ＭＯＤは、下記の基：
Figure 0007251981000201
であり、
Ｒ１０は、－Ｈ又はＣ１－Ｃ３－アルキルであり；
Ｇ１は、であり－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－又は
Figure 0007251981000202
であり、
ｎは０又は１であり、
ｏは０又は１であり、
Ｇ２は、直鎖及び／又は分岐の炭化水素鎖であり、それは１～２０個の炭素原子を有し、同一若しくは異なって、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＳＯ－、－Ｓ（＝Ｏ）２、－ＮＲｙ－、－ＮＲｙＣ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｙ－、－ＮＲｙＮＲｙ－、－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＲｙＮＲｙ－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲｙＮＲｙ－Ｃ（＝Ｏ）－又は－ＣＲｘ＝Ｎ－Ｏ－によって１回又は複数回中断されていても良く、前記直鎖若しくは分岐の炭化水素鎖は－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２、－ＣＯＯＨ、－ＯＨ、－ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシド、又はスルホン酸によって置換されていても良く、
Ｒｘは、－Ｈ、Ｃ１－Ｃ３－アルキル又はフェニルであり、
Ｒｙは、－Ｈ、フェニル、Ｃ１－Ｃ１０－アルキル、Ｃ２－Ｃ１０－アルケニル又はＣ２－Ｃ１０－アルキニルであり、それらはそれぞれ、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２、－ＣＯＯＨ、－ＯＨ、－ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシド、又はスルホン酸によってさらに置換されていても良く、
Ｒ５は－Ｈ又は－Ｆであり、
Ｒ６及びＲ７は独立に、－Ｈ、Ｃ１－３－アルキル、フルオロ－Ｃ１－３－アルキル、Ｃ２－４－アルケニル、フルオロ－Ｃ２－４－アルケニル、Ｃ２－４－アルキニル、フルオロ－Ｃ２－４－アルキニル、ヒドロキシル又はハロゲンであり、
Ｒ８は分岐のＣ１－５－アルキル基であり、
Ｒ９は－Ｈ又は－Ｆであり、
－Ｌ－＃１はリンカー基：
Figure 0007251981000203
であり、
ｍは０又は１であり、
§は、ＫＳＰ阻害剤への結合を表し、
§§は抗体への結合を表し、
Ｌ２は、下記の基：
Figure 0007251981000204
のうちの一つであり、
＃１は、抗体の硫黄原子への連結部位であり、
＃２は、Ｌ１基への連結部位であり、
Ｌ１は、基：
Figure 0007251981000205
であり、
Ｒ１０は、－Ｈ、－ＮＨ２又はＣ１－３－アルキルであり、
Ｇ１は、であり－ＮＨＣ（＝Ｏ）－又は
Figure 0007251981000206
であり、
ｎは０又は１であり、
ｏは０又は１であり、及び
Ｇ２は、アリーレン基及び／又は直鎖及び／又は分岐及び／又は環状のアルキレン基からなる１～１００個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐の炭化水素鎖であり、それは、同一若しくは異なって、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓ（＝Ｏ）－、－Ｓ（＝Ｏ）２、－ＮＨ－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＭｅ－、－ＮＨＮＨ－、－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨＮＨ－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨＮＨ－及び＝Ｎ－、－Ｏ－及び－Ｓ－、又は－Ｓ（＝Ｏ）－から選択される４個以下のヘテロ原子を有する３～１０員の芳香族若しくは非芳香族複素環によって１回又は複数回中断されていても良く、前記直鎖若しくは分岐の炭化水素鎖は、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２、－ＣＯＯＨ、－ＯＨ、－ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシド、又はスルホン酸によって置換されていても良く、
＃１は、ＫＳＰ阻害剤への結合であり，
＃２は、抗体へのＬ２への結合である。］
並びにそれの塩、溶媒和物及び溶媒和物の塩（式ＩＶａ′又はＩＶａ″又はＩＶａ″′で言及の抗体は、ヒト、ヒト化若しくはキメラモノクローナル抗体又はそれの抗原結合性断片であり、式ＩＶａ′又はＩＶａ″又はＩＶａ″′におけるｎは１～１０の数字である。）。
好ましくは、この場合の抗体は、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗Ｂ７Ｈ３抗体又は抗ＨＥＲ２抗体又はこれらの抗原結合性断片である。
特に好ましいものは、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－７００６、ＴＰＰ－７００７、ＴＰＰ－１０３３６及びＴＰＰ－１０３３７、抗Ｂ７Ｈ３抗体ＴＰＰ－８３８２及びＴＰＰ－８５６７、抗ＥＧＦＲ－抗体セツキシマブ（ＴＰＰ－９８１）及び抗ＨＥＲ２－抗体トラスツズマブ及びＴＰＰ－１０１５、又はこれらの抗原結合性断片である。
ここで、好ましいものは、Ｒ３がアルキルと、好ましくはＣ１－３アルキルと定義される式（ＩＩｇ）の化合物である。
この場合、－ＭＯＤは好ましくは、少なくとも１個のＣＯＯＨ基を有する。
実施形態Ｄ：
式ＩＶａ′又はＩＶａ″又はＩＶａ″′のＡＰＤＣ（式ＩＶａ′又はＩＶａ″又はＩＶａ″′におけるＤ１は、式（ＩＩｈ）の化合物である。）：
Figure 0007251981000207
［式中、
Ｘ１はＮであり、
Ｘ２はＮであり、及び
Ｘ３はＣであり、
又は
Ｘ１はＣＨであり、
Ｘ２はＣであり、及び
Ｘ３はＮであり、
又は
Ｘ１はＮＨであり、
Ｘ２はＣであり、及び
Ｘ３はＣであり、
又は
Ｘ１はＣＨであり、
Ｘ２はＮであり、及び
Ｘ３はＣであり、
Ａは－Ｃ（＝Ｏ）－であり、
Ｒ１は－Ｈ又は－ＣＯＯＨであり、
Ｒ２は－Ｈであり、
Ｒ４は式Ｉａの基であり、
Ｒ３は－Ｌ－＃１であり、
Ｒ５は－Ｈ又は－Ｆであり、
Ｒ６及びＲ７は独立に、－Ｈ、Ｃ１－３－アルキル、フルオロ－Ｃ１－３－アルキル、Ｃ２－４－アルケニル、フルオロ－Ｃ２－４－アルケニル、Ｃ２－４－アルキニル、フルオロ－Ｃ２－４－アルキニル、ヒドロキシル又はハロゲンであり、
Ｒ８は分岐のＣ１－５－アルキル基であり、
Ｒ９は－Ｈ又は－Ｆであり、
－Ｌ－＃１は、リンカー基：
Figure 0007251981000208
であり、
ｍは０又は１であり、
§は、ＫＳＰ阻害剤への結合を表し、
§§は、抗体への結合を表し、
Ｌ２は、下記の基：
Figure 0007251981000209
のうちの一つであり、
＃１は、抗体の硫黄原子への連結部位であり、
＃２は、Ｌ１基への連結部位であり、
Ｌ１は、下記の基：
Figure 0007251981000210
であり、
Ｒ１０は、－Ｈ、－ＮＨ２又はＣ１－３－アルキルであり、
Ｇ１は、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－又は
Figure 0007251981000211
であり、
ｎは０又は１であり、
ｏは０又は１であり、及び
Ｇ２は、アリーレン基及び／又は直鎖及び／又は分岐及び／又は環状のアルキレン基からなる１～１００個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐の炭化水素鎖であり、それは、同一若しくは異なって、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓ（＝Ｏ）－、－Ｓ（＝Ｏ）２、－ＮＨ－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＭｅ－、－ＮＨＮＨ－、－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨＮＨ－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨＮＨ－及び＝Ｎ－、－Ｏ－及び－Ｓ－、又は－Ｓ（＝Ｏ）－から選択される４個以下のヘテロ原子を有する３～１０員の芳香族若しくは非芳香族複素環によって１回又は複数回中断されていても良く、前記直鎖若しくは分岐の炭化水素鎖は、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２、－ＣＯＯＨ、－ＯＨ、－ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシド、又はスルホン酸によって置換されていても良く、
＃１は、ＫＳＰ阻害剤への結合であり、
＃２は、抗体へのＬ２への結合である。］並びにそれの塩、溶媒和物及び溶媒和物の塩（式ＩＶａ′又はＩＶａ″又はＩＶａ″′で言及の抗体はヒト、ヒト化若しくはキメラモノクローナル抗体又はそれの抗原結合性断片であり、式ＩＶａ′又はＩＶａ″又はＩＶａ″′におけるｎは１～１０の数字である。）。
好ましくは、この場合の抗体は、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗Ｂ７Ｈ３抗体又は抗ＨＥＲ２抗体又はこれらの抗原結合性断片である。
特に好ましいものは、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－７００６、ＴＰＰ－７００７、ＴＰＰ－１０３３６及びＴＰＰ－１０３３７、抗Ｂ７Ｈ３抗体ＴＰＰ－８３８２及びＴＰＰ－８５６７、抗ＥＧＦＲ－抗体セツキシマブ（ＴＰＰ－９８１）及び抗ＨＥＲ２－抗体トラスツズマブ及びＴＰＰ－１０１５、又はこれらの抗原結合性断片である。
この文脈において、Ｇ２は好ましくは
Figure 0007251981000212
である。
実施形態Ｅ：
式ＩＶａ′又はＩＶａ″又はＩＶａ″′のＡＰＤＣ（式ＩＶａ′又はＩＶａ″又はＩＶａ″′におけるＤ１は、式（ＩＩｉ）の化合物である。）：
Figure 0007251981000213
［式中、
Ｒ１は－Ｌ－＃１であり、
－Ｌ－＃１は、下記リンカー基：
Figure 0007251981000214
であり、
ｍは０又は１であり、
§は、ＫＳＰ阻害剤への結合を表し、
§§は、抗体への結合を表し、
Ｌ２は、下記の基：
Figure 0007251981000215
であり、
Ｒ２２は、－ＣＯＯＨ、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－Ｃ１－３－アルキル、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｃ１－３－アルキル、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－Ｃ１－３－アルキル又は－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２であり、
＃１は、抗体の硫黄原子への連結部位であり、
＃２はＬ１への結合であり、
Ｌ１は、下記の基：
Figure 0007251981000216
であり、
Ｒ１０は－Ｈであり，
Ｇ１は、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－又は
Figure 0007251981000217
であり、
ｎは０又は１であり、
ｏは０又は１であり、
Ｇ２はＣ１－３－アルキルであり、
＃１はＫＳＰ阻害剤への結合であり、
＃２は、抗体へのＬ２への結合であり、
Ｒ２及びＲ５は－Ｈであり、
Ｒ３は－ＣＨ２ＯＨであり、
Ｒ４は式（Ｉａ）の基である。］並びにそれの塩、溶媒和物及び溶媒和物の塩（式ＩＶａ′又はＩＶａ″又はＩＶａ″′で言及の抗体はヒト、ヒト化若しくはキメラモノクローナル抗体又はそれの抗原結合性断片であり、式ＩＶａ′又はＩＶａ″又はＩＶａ″′におけるｎは１～１０の数字である。）。
好ましいものは、Ｒ２２が－ＣＯＯＨである式（ＩＩｉ）の化合物である。
本発明による複合体において、又は本発明による複合体の混合物において、各場合で抗体へのリンカーの総数に基づく抗体のシステイン残基への結合は、好ましくは８０％強の範囲程度まで、より好ましくは９０％強の程度まで存在する。
特に好ましいものは、この場合、本発明によれば、Ｌ２として下記の基：
Figure 0007251981000218
（Ｒ２２は上記で提供の定義を有する。）を有する複合体である。
概して、両方の種類のＬ２基を有する複合体が、好ましくは抗体への結合の数に基づいて６０：４０～４０：６０の比率で存在する。
次に、残りの結合は、下記構造で存在する。
Figure 0007251981000219
式中、＃１及び＃２は上記で提供の定義を有する。
好ましくは、この場合の抗体は、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗Ｂ７Ｈ３抗体又は抗ＨＥＲ２抗体又はこれらの抗原結合性断片である。
特に好ましいものは、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－７００６、ＴＰＰ－７００７、ＴＰＰ－１０３３６及びＴＰＰ－１０３３７、抗Ｂ７Ｈ３抗体ＴＰＰ－８３８２及びＴＰＰ－８５６７、抗ＥＧＦＲ－抗体セツキシマブ（ＴＰＰ－９８１）及び抗ＨＥＲ２－抗体トラスツズマブ及びＴＰＰ－１０１５、又はこれらの抗原結合性断片である。
治療用途
治療するのに本発明による化合物を用いることができる過増殖性疾患には、特にはがん及び腫瘍疾患の群などがある。本発明の文脈において、これらは、特には次の疾患（ただし、これらに限定されるものではない）：乳癌及び乳房腫瘍（腺管型及び小葉型などの乳癌、イン・サイツも）、気道の腫瘍（小細胞肺癌及び非小細胞癌、気管支癌）、脳腫瘍（例えば、脳幹の腫瘍及び視床下部の腫瘍、星細胞腫、上衣細胞腫、神経膠芽腫、神経膠腫、髄芽腫、髄膜腫並びに神経外胚葉性（ｎｅｕｒｏ－ｅｃｔｏｒｍａｌ）腫瘍及び松果体腫瘍）、消化器の腫瘍（食道、胃、胆嚢、小腸、大腸、直腸及び肛門の癌）、肝臓腫瘍（特に、肝細胞癌、胆管癌及び混合型肝細胞胆管癌）、頭部及び頸部領域の腫瘍（喉頭、下咽頭、鼻咽頭、口咽頭癌、口唇及び口腔癌、口腔メラノーマ）、皮膚腫瘍（基底細胞腫、棘細胞癌、扁平上皮癌、カポジ肉腫、悪性メラノーマ、非メラノーマ皮膚がん、メルケル細胞皮膚がん、肥満細胞腫瘍）、軟組織の腫瘍（特に、軟組織の肉腫、骨肉腫、悪性線維性組織球腫、軟骨肉腫、線維肉腫、血管肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、リンパ肉腫及び横紋筋肉腫）、眼球の腫瘍（特に、眼球内メラノーマ及び網膜芽細胞腫）、内分泌腺及び外分泌腺の腫瘍（例えば甲状腺及び副甲状腺、膵臓及び唾液腺の癌、腺癌）、尿路の腫瘍（膀胱、陰茎、腎臓、腎盂及び尿管の腫瘍）及び生殖器の腫瘍（女性における子宮内膜、子宮頸部、卵巣、膣、外陰部及び子宮の癌、及び男性における前立腺及び睾丸の癌）を意味するものと理解される。これらには、固形型又は循環細胞としての血液、リンパ系及び脊髄の増殖性疾患などもあり、例えば白血病、リンパ腫及び骨髄増殖性疾患、例えば急性骨髄性、急性リンパ芽球性、慢性リンパ性、慢性骨髄性及びヘアリー細胞性の白血病、及びＡＩＤＳ関連リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫、バーキットリンパ腫及び中枢神経系でのリンパ腫である。
ヒトでのこれらの十分に特徴付けられている疾患は、他の哺乳動物でも同等の病因によって生じ得るものであり、本発明の化合物によって同様に治療可能である。
本発明による化合物による上記で言及のがん疾患の治療は、固体腫瘍の治療及びそれの転移型及び循環型の治療の両方を含むものである。
本発明の文脈において、「治療」又は「治療する」という用語は、従来の意味で用いられ、疾患又は健康上の異常と戦い、軽減し、弱化し、又は改善すること、並びに例えばがんの場合でのように、この疾患によって障害される生活条件を改善することを目的として、患者の世話を行い、ケアを行い、看病することを意味する。
従って、本発明はさらに、障害の、特別には上記障害の治療及び／又は予防のための本発明による化合物の使用を提供する。
本発明はさらに、障害の、特別には上記障害の治療及び／又は予防のための医薬品を製造するための本発明の化合物の使用を提供する。
本発明はさらに、障害の、特別には上記障害の治療及び／又は予防方法での本発明の化合物の使用を提供する。
本発明はさらに、有効量の少なくとも１種類の本発明の化合物を用いて、障害、特別には上記障害を治療及び／又は予防する方法を提供する。
本発明の化合物は、単独で、又は必要に応じて、１以上の他の薬理活性物質と組み合わせて用いることができ、ただしその組み合わせは望ましくない及び許容できない副作用を生じるものではない。従って、本発明はさらに、特別には上記障害の治療及び／又は予防のための、少なくとも１種類の本発明の化合物及び１以上のさらなる薬物を含む医薬品を提供する。
例えば、本発明の化合物は、がん疾患治療のための既知の抗過剰増殖性、細胞増殖抑制性又は細胞毒性物質と組み合わせることができる。好適な組み合わせ薬物の例には、下記のものなどがある。
１３１Ｉ－ｃｈＴＮＴ、アバレリックス、アビラテロン、アクラルビシン、アドゥ－トラスツズマブエムタンシン、アファチニブ、アフリベルセプト、アルデスロイキン、アレムツズマブ、アレンドロン酸、アリトレチノイン、アルトレタミン、アミホスチン、アミノグルテチミド、ヘキシル５－アミノレブリネート、アムルビシン、アムサクリン、アナストロゾール、アンセスチム、アネトールジチオレチオン、アネツマブラブタンシン、アンギオテンシンＩＩ、アンチトロンビンＩＩＩ、アプレピタント、アルシツモマブ、アルグラビン、三酸化ヒ素、アスパラギナーゼ、アテゾリズマブ、アキシチニブ、アザシチジン、ベロテカン、ベンダムスチン、ベシレソマブ、ベリノスタット、ベバシズマブ、ベキサロテン、ビカルタミド、ビサントレン、ブレオマイシン、ブリナツモマブ、ボルテゾミブ、ブセレリン、ボスチニブ、ブレンツキシマブ・ベドチン、ブスルファン、カバジタキセル、カボザンチニブ、カルシトニン、カルシウムホリナート、カルシウムレボホリナート、カペシタビン、カプロマブ、カルバマゼピン、カルボプラチン、カルボコン、カルフィルゾミブ、カルモフール、カルムスチン、カツマキソマブ、セレコキシブ、セルモロイキン、セリチニブ、セツキシマブ、クロラムブシル、クロルマジノン、クロルメチン、シドフォビル、シナカルセト、シスプラチン、クラドリビン、クロドロン酸、クロファラビン、コビメチニブ、コパンリシブ（ＢＡＹ８０－６９４６）、クリサンタスパーゼ、クリゾチニブ、シクロホスファミド、シプロテロン、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダラツムマブ、ダブラフェニブ、ダサチニブ、ダウノルビシン、デシタビン、デガレリクス、デニロイキンジフチトクス、デノスマブ、デプレオチド、デスロレリン、デクスラゾキサン、塩化ジブロスピジウム、ジアンヒドロガラクチトール、ジクロフェナク、ジヌツキシマブ、ドセタキセル、ドラセトロン、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、ドキソルビシン＋エストロン、ドロナビノール、エドレコロマブ、酢酸エリプチニウム、エンドスタチン、エノシタビン、エンザルタミド、エピルビシン、エピチオスタノール、エポエチンアルファ、エポエチンベータ、エポエチンゼータ、エプタプラチン、エリブリン、エルロチニブ、エソメプラゾール、エストラムスチン、エトポシド、エチニルエストラジオール、エベロリムス、エキセメスタン、ファドロゾール、フェンタニル、フルオキシメステロン、フロクスウリジン、フルダラビン、フルオロウラシル、フルタミド、フォリン酸、フォルメスタン、ホスアプレピタント、フォテムスチン、フルベストラント、ガドブトロール、ガドテリドール、ガドテル酸メグルミン塩、ガドベルセタミド、ガドキセト酸・２ナトリウム塩（Ｇｄ－ｅＯＢ－ＤＴＰＡ・２ナトリウム塩）、硝酸ガリウム、ガニレリクス、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ゲムツズマブ、グルカルピダーゼ、グルトキシム（ｇｌｕｔｏｘｉｍ）、ゴセレリン、グラニセトロン、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＳＣＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、ヒスタミン二塩酸塩、ヒストレリン、ヒドロキシカルバミド、Ｉ－１２５シード、イバンドロン酸、イブリツモマブ チウキセタン、イブルチニブ、イダルビシン、イホスファミド、イマチニブ、イミキモド、インプロスルファン、インジセトロン、インカドロン酸、インゲノールメブテート、インターフェロンアルファ、インターフェロンベータ、インターフェロンガンマ、イオビトリドール、イオベングアン（１２３Ｉ）、イオメプロール、イピリムマブ、イリノテカン、イトラコナゾール、イキサベピロン、イキサゾミブ、ランレオチド、ランソプラゾール、ランソプラゾール、ラパチニブ、ラソコリン、レナリドマイド、レンバチニブ、レノグラスチム、レンチナン、レトロゾール、リュープロレリン、レバミソール、レボノルゲストレル、レボチロキシンナトリウム、リペグフィルグラスチム、リスリド、ロバプラチン、ロムスチン、ロニダミン、マソプロコール、メドロキシプロゲステロン、メゲストロール、メラルソプロール、メルファラン、メピチオスタン、メルカプトプリン、メスナ、メタドン、メトトレキサート、メトキサレン、アミノレブリン酸メチル、メチルプレドニゾロン、メチルテストステロン、メチロシン、ミファムルチド、ミルテホシン、ミリプラチン、ミトブロニトール、ミトグアゾン、ミトラクトール、マイトマイシン、ミトタン、ミトキサントロン、モガムリズマブ、モルグラモスチム、モピダモール、モルヒネ塩酸塩、モルヒネ硫酸塩、ナビロン、ナビキシモルス、ナファレリン、ナロキソン＋ペンタゾシン、ナルトレキソン、ナルトグラスチム、ネシツムマブ、ネダプラチン、ネララビン、ネリドロン酸、ネツピタント／パロノセトロン、ニボルマブペンテトレオチド（ｎｉｖｏｌｕｍａｂｐｅｎｔｅｔｒｅｏｔｉｄｅ）、ニロチニブ、ニルタミド、ニモラゾール、ニモツズマブ、ニムスチン、ニンテダニブ、ニトラクリン、ニボルマブ、オビヌツズマブ、オクトレオチド、オファツムマブ、オラパリブ、オララツマブ、オマセタキシン－メペサクシネート、オメプラゾール、オンダンセトロン、オルゴテイン、オリロチモド、オシメルチニブ、オキサリプラチン、オキシコドン、オキシメトロン、オゾガマイシン、ｐ５３遺伝子治療、パクリタキセル、パルボシクリブ、パリフェルミン、パラジウム－１０３シード、パロノセトロン、パミドロン酸、パニツムマブ、パノビノスタット、パントプラゾール、パゾパニブ、ペグアスパルガーゼ、ペンブロリズマブ、ｐｅｇ－インターフェロンアルファ－２ｂ、ペンブロリズマブ、ペメトレキセド、ペントスタチン、ペプロマイシン、ペルフルブタン、ペルホスファミド、ペルツズマブ、ピシバニール、ピロカルピン、ピラルビシン、ピクサントロン、プレリキサホル、プリカマイシン、ポリグルサム、リン酸ポリエストラジオール、ポリビニルピロリドン＋ヒアルロン酸ナトリウム、ポリサッカライド－Ｋ、ポマリドミド、ポナチニブ、ポルフィマーナトリウム、プララトレキセート、プレドニムスチン、プレドニゾン、プロカルバジン、プロコダゾール、プロプラノロール、キナゴリド、ラベプラゾール、ラコツモマブ、塩化ラジウム－２２３、ラドチニブ、ラロキシフェン、ラルチトレキセド、ラモセトロン、ラムシルマブ、ラニムスチン、ラスブリカーゼ、ラゾキサン、レファメチニブ、レゴラフェニブ、リセドロン酸、エチドロン酸レニウム－１８６、リツキシマブ、ロラピタント、ロミデプシン、ロムルチド、ロニシクリブ、サマリウム（１５３Ｓｍ）レキシドロナム、サツモマブ、セクレチン、シルツキシマブ、シプロイセル－ｔ、シゾフィラン、ソブゾキサン、グリシジダゾールナトリウム、ソニデジブ、ソラフェニブ、スタノゾロール、ストレプトゾシン、スニチニブ、タラポルフィン、タリモジーン・ラハーパレプベック、タミバロテン、タモキシフェン、タペンタドール、タソネルミン、テセロイキン、テクネチウム（９９ｍＴｃ）ノフェツモマブ（ｎｏｆｅｔｕｍｏｍａｂ）メルペンタン、９９ｍＴｃ－ＨＹＮＩＣ－［Ｔｙｒ３］－オクトレオチド、テガフール、テガフール＋ギメラシル＋オテラシル、テモポルフィン、テモゾロミド、テムシロリムス、テニポシド、テストステロン、テトロホスミン、サリドマイド、チオテパ、チマルファシン、チオグアニン、トシリズマブ、トポテカン、トレミフェン、トシツモマブ、トラベクテジン、トラメチニブ、トラマドール、トラスツズマブ、トレオスルファン、トレチノイン、トリフルリジン＋チピラシル、トラメチニブ、トリロスタン、トリプトレリン、トロホスファミド、トロンボポエチン、ウベニメクス、バルルビシン、バンデタニブ、バプレオチド、ヴァラチニブ、ベムラフェニブ、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビンフルニン、ビノレルビン、ビスモデギブ、ボリノスタット、イットリウム－９０ガラス微小ビーズ、ジノスタチン、ジノスタチンスチマラマー、ゾレドロン酸、ゾルビシン。
さらに、抗体は、ＭＰＳ１阻害剤又は標的：ＯＸ－４０、ＣＤ１３７／４－１ＢＢ、ＤＲ３、ＩＤＯ１／ＩＤＯ２、ＬＡＧ－３及びＣＤ４０に対する抗体の群から選択することができる。
さらに、本発明による化合物は、放射線療法及び／又は外科的介入と組み合わせて用いることもできる。
概して、本発明の化合物と他の細胞増殖抑制的に又は細胞毒性的に活性な薬剤との組み合わせで、次の目的を追求することができる。
・個々の有効成分による治療と比較して、腫瘍増殖の遅延、それの大きさの低減、又はさらにそれの完全な除去における効力の改善；
・単独療法の場合より低い用量で使用される化学療法剤使用の可能性；
・個々の投与と比較して副作用少なく、より耐容性のある治療法の可能性；
・より広いスペクトラムの腫瘍性疾患の治療の可能性；
・療法に対するより高い応答速度の達成；
・現代の標準療法と比較して長い患者の生存時間。
さらに、本発明の化合物は、放射線療法及び／又は外科的介入と組み合わせて用いることもできる。
本発明はさらに、代表的には１以上の不活性で無毒性の医薬として好適な賦形剤とともに少なくとも一つの本発明による化合物を含む医薬、及び上記目的のためのそれの使用を提供する。
本発明による化合物は、全身的及び／又は局所的に作用し得る。これに関して、それは好適な形で、例えば非経口的に、可能な場合に吸入によって、又はインプラント若しくはステントとして投与することができる。
本発明による化合物は、全身的及び／又は局所的に作用し得る。これに関して、それは好適な形で、例えば経口、非経口、肺、鼻、舌下、舌、口腔、直腸、膣、皮膚、経皮、結膜若しくは耳経路によって、又はインプラント若しくはステントとして投与することができる。
本発明による化合物は、これらの投与経路に好適な投与形態で投与することができる。
経口投与に好適な投与形態は、先行技術に従って機能し、本発明の化合物を迅速及び／又は改変された様式で送達し、本発明の化合物を結晶形及び／又は非晶質及び／又は溶解形で含有する投与形態、例えば、錠剤（非コート又はコート錠、例えば、腸溶性コーティング、又は不溶であるか、遅れて溶解し、本発明による化合物の放出を制御するコーティングを有するもの）、口中で迅速に崩壊する錠剤、又は、フィルム／ウェハ、フィルム／凍結乾燥物、カプセル（例えば、硬又は軟ゼラチンカプセル）、糖衣錠、粒剤、ペレット、粉剤、乳濁液、懸濁液、エアロゾル又は液剤である。
非経口投与は、吸収段階（例えば、静脈、動脈、心臓内、髄腔内又は腰椎内で）を回避することができ、又は吸収（例えば、筋肉、皮下、皮内、経皮又は腹腔内で）を含むことができる。非経口投与の好適な投与形態には、液剤、懸濁液、乳濁液、凍結乾燥物又は無菌粉剤の形態での注射及び注入用製剤などがある。
他の投与経路に好適な投与形態は、例えば、吸入用の医薬形態（粉末吸入剤、噴霧器など）、点鼻剤、液剤又は噴霧剤；舌、舌下若しくは口腔投与用の錠剤、フィルム／ウェハ又はカプセル、坐剤、点眼剤、眼軟膏剤、洗眼剤、眼球挿入物、点耳剤、噴霧剤、粉剤、洗浄剤若しくはタンポン、膣カプセル、水系懸濁液（ローション、振盪混合物）、親油性懸濁液、乳濁液、マイクロエマルション、軟膏、クリーム、経皮治療系（例えば貼付剤）、乳液、ペースト、泡剤、粉剤、インプラント又はステントである。
好ましいものは、非経口投与、特別には静脈投与である。
本発明による化合物は、言及した投与形態に変換することができる。これは、自体公知の方法で、薬学的に好適な賦形剤と混和することで行うことができる。これらの賦形剤には、下記のものなどがある。
・充填剤及び担体（例えばセルロース、微結晶セルロース、例えばＡｖｉｃｅｌ（登録商標）、乳糖、マンイトール、デンプン、リン酸カルシウム、例えばＤｉ－ｃａｆｏｓ（登録商標））、
・軟膏基剤（例えばワセリン、パラフィン類、トリグリセリド類、ロウ類、羊毛脂、羊毛脂アルコール類、ラノリン、親水性軟膏、ポリエチレングリコール類）、
・坐剤基剤（例えばポリエチレングリコール類、ココアバター、固い脂肪）、
・溶媒（例えば水、エタノール、イソプロパノール、グリセロール、プロピレングリコール、中鎖トリグリセリド脂肪油、液体ポリエチレングリコール類、パラフィン類）、
・界面活性剤、乳濁液、分散剤又は湿展剤（例えばドデシル硫酸ナトリウム、レシチン、リン脂質、脂肪アルコール、例えばＬａｎｅｔｔｅ（登録商標）、ソルビタン脂肪酸エステル類、例えばＳｐａｎ（登録商標）、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、例えばＴｗｅｅｎ（登録商標）、ポリオキシエチレン脂肪酸グリセリド類、例えばＣｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル類、ポリオキシエチレン脂肪アルコールエーテル類、グリセロール脂肪酸エステル類、ポロキサマー類、例えばＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標））、
・緩衝物質、さらには酸及び塩基（例えばリン酸塩、炭酸塩、クエン酸、酢酸、塩酸、水酸化ナトリウム、炭酸アンモニウム、トロメタモール、トリエタノールアミン），
・等張化剤（例えばグルコース、塩化ナトリウム）、
・吸着剤（例えば微粉砕シリカ類）、
・増粘剤、ゲル形成剤、濃厚剤又は結合剤（例えばポリビニルピロリドン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース－ナトリウム、デンプン、カルボマー類、ポリアクリル酸類、例えばＣａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）、アルギン酸類、ゼラチン類）、
・崩壊剤（例えば加工でんぷん、カルボキシメチルセルロース－ナトリウム、でんぷんグリコール酸ナトリウム、例えばＥｘｐｌｏｔａｂ（登録商標）、架橋ポリビニルピロリドン、クロスカルメロース－ナトリウム、例えばＡｃＤｉＳｏｌ（登録商標））、
・流動調節剤、潤滑剤、流動促進剤及び離型剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、タルク、微粉砕シリカ類、例えばＡｅｒｏｓｉｌ（登録商標））、
・溶解を急速化又は変えたフィルム若しくは拡散膜用のコーティング剤（例えば、糖、シェラック）及びフィルム形成剤（例えば、ポリビニルピロリドン類、例えばＫｏｌｌｉｄｏｎ（登録商標）、ポリビニルアルコール、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、酢酸セルロース、酢酸フタル酸セルロース、ポリアクリレート類、ポリメタクリレート類、例えばＥｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）によって）、
・カプセル材料（例えばゼラチン類、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、
・合成ポリマー（例えばポリ乳酸類、ポリグリコリド類、ポリアクリレート類、ポリメタクリレート類、例えばＥｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）、ポリビニルピロリドン類、例えばＫｏｌｌｉｄｏｎ（登録商標）、ポリビニルアルコール類、ポリ酢酸ビニル、ポリエチレンオキサイド類、ポリエチレングリコール類並びにそれらのコポリマー及びブロックコポリマー）、
・可塑剤（例えばポリエチレングリコール類、プロピレングリコール、グリセロール、トリアセチン、クエン酸トリアセチル、フタル酸ジブチル）、
・浸透促進剤、
・安定剤（例えば、酸化防止剤、例えばアスコルビン酸、パルミチン酸アスコルビル、アスコルビン酸ナトリウム、ブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、没食子酸プロピル）、
・保存剤（例えば、パラベン類、ソルビン酸、チオマーサル、塩化ベンザルコニウム、酢酸クロルヘキシジン、安息香酸ナトリウム）、
・色素（例えば、無機顔料、例えば酸化鉄類、二酸化チタン）、
・芳香剤、甘味剤、香味剤及び／又は臭気矯正剤。
本発明はさらに、代表的には１以上の薬学的に好適な賦形剤とともに少なくとも一つの本発明による化合物を含む医薬組成物、並びに上記目的のためのそれの使用を提供する。
概して、非経口投与の場合、約０．１～２０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０．３～７ｍｇ／ｋｇの量を投与して、効果的な結果を得ることが有利であることが認められている。
そうではあっても、場合により、具体的に体重、投与経路、有効成分に対する個体の応答、製剤の種類、及び投与を行う時刻若しくは間隔に応じて、指定量から逸脱する必要であることもあり得る。従って、場合により、上記最小量より少ない量で管理するのが十分である可能性があるが、他の場合には、言及した上限を超えなければならない。より大きい量の投与の場合、それらを１日かけて、いくつかの個々の用量に分けることが得策である可能性がある。
本発明による化合物は、同位体型の形態も取り得る。従って本発明は、本発明による化合物の１以上の同位体型、特別には重水素含有化合物を包含する。
化合物又は試薬の「同位体型」という用語は、そのような化合物が構築される１以上の同位体の割合が自然ではない化合物と定義される。
「本発明による化合物の同位型」という用語は、そのような化合物が構築される１以上の同位体の割合が自然ではない本発明による化合物と定義される。
「不自然な割合」という表現は、それの自然な頻度より高いそのような同位体の割合を意味するものと理解される。この関連で用いられる同位体の自然頻度は、″Ｉｓｏｔｏｐｉｃ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｅｌｅｍｅｎｔｓ １９９７″， Ｐｕｒｅ Ａｐｐｌ． Ｃｈｅｍ．， ７０（１）， ２１７－２３５， １９９８にある。
そのような同位体の例は、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素の安定な放射性同位体、例えば２Ｈ（重水素）、３Ｈ（三重水素）、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１７Ｏ、１８Ｏ、３２Ｐ、３３Ｐ、３３Ｓ、３４Ｓ、３５Ｓ、３６Ｓ、１８Ｆ、３６Ｃｌ、８２Ｂｒ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１２９Ｉ及び１３１Ｉである。
本明細書で特定された障害の治療及び／又は予防に関して、本発明による化合物の同位体型は好ましくは、重水素を含む（「本発明による重水素含有化合物」）。３Ｈ又は１４Ｃなどの１以上の放射性同位体が組み込まれた本発明による化合物の同位体型は、例えば、医療及び／又は基質組織分布試験で有用である。取り込み及び検出が容易であることから、これらの同位体が特に好ましい。１８Ｆ又は１１Ｃなどの陽電子放出同位体を本発明による化合物に組み込むことが可能である。本発明による化合物のこれらの同位体型は、イン・ビボ撮像用途での使用に好適である。本発明による重水素含有及び１３Ｃ含有化合物を、質量スペクトル分析での前臨床又は臨床試験内で用いることができる。
本発明による化合物の同位体型は、通常、試薬を同位体型の試薬、好ましくは重水素含有試薬に代えることで、本明細書に記載の図式及び／又は実施例に記載の当業者に公知の方法によって製造することができる。所望の重水素化部位に従って、一部の場合で、Ｄ２Ｏからの重水素を、そのような化合物の合成に用いることができる化合物又は試薬に直接組み込むことができる。分子への重水素の組み込みに有用な別の試薬は、重水素ガスである。重水素の組み込みの迅速な経路は、オレフィン系結合及びアセチレン系結合の触媒重水素化である。官能基を含む炭化水素での水素の重水素への直接交換のために、重水素ガス存在下に、金属触媒（すなわち、Ｐｄ、Ｐｔ及びＲｈ）を用いることもできる。各種の重水素化試薬及び合成単位は、例えば、Ｃ／Ｄ／Ｎ Ｉｓｏｔｏｐｅｓ， Ｑｕｅｂｅｃ， Ｃａｎａｄａ；Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｉｓｏｔｏｐｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ．， Ａｎｄｏｖｅｒ， ＭＡ， ＵＳＡ；及びＣｏｍｂｉＰｈｏｓ Ｃａｔａｌｙｓｔｓ， Ｉｎｃ．， Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ， ＮＪ， ＵＳＡのような会社から市販されている。
「重水素含有化合物」という用語は、１以上の水素原子が１以上の重水素原子によって置き換わっており、一般式（Ｉ）の化合物における各重水素化位置での重水素の頻度が約０．０１５％である重水素の天然頻度より高い本発明による化合物と定義される。詳細には、本発明による重水素含有化合物において、一般式（Ｉ）の化合物における全ての重水素化位置での重水素の頻度は、この位置又はこれらの位置で、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％又は８０％より高く、好ましくは９０％、９５％、９６％又は９７％より高く、さらに好ましくは９８％又は９９％より高い。全ての重水素化位置での重水素の頻度は、他の重水素化位置における重水素の頻度から独立であることは明らかであろう。
本発明による化合物への１以上の重水素原子の選択的取り込みによって、分子の物理化学特性（例えば酸性度［Ｃ． Ｌ． Ｐｅｒｒｉｎ、ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．， ２００７， １２９， ４４９０］、塩基性度［Ｃ． Ｌ． Ｐｅｒｒｉｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．， ２００５， １２７， ９６４１］、親油性［Ｂ． Ｔｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｔ． Ｊ． Ｐｈａｒｍ．， １９８４， １９（３）， ２７１］）及び／又は代謝プロファイルを変えることができ、親化合物／代謝物の比率又は形成される代謝物の例における変化を引き起こすことができる。そのような変化は特定の治療上の利点を生じ得ることから、特定の環境下で好ましい可能性がある。代謝及び代謝物の比率が変わる代謝切り換えの速度低下が報告されている（Ａ． Ｅ． Ｍｕｔｌｉｂ ｅｔ ａｌ．， Ｔｏｘｉｃｏｌ． Ａｐｐｌ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．， ２０００， １６９， １０２）。親薬剤及び代謝物への曝露におけるこれらの変化は、本発明による重水素含有化合物の薬力学、耐容性および効力に関して重要な結果を有し得る。場合により、重水素置換によって、望ましくない又は有毒な代謝物の形成が低下又は排除され、所望の代謝物の形成が促進される（例えばＮｅｖｉｒａｐｉｎｅ： Ａ． Ｍ． Ｓｈａｒｍａ ｅｔ ａｌ．， Ｃｈｅｍ． Ｒｅｓ． Ｔｏｘｉｃｏｌ．， ２０１３， ２６， ４１０；Ｅｆａｖｉｒｅｎｚ： Ａ． Ｅ． Ｍｕｔｌｉｂ ｅｔ ａｌ．， Ｔｏｘｉｃｏｌ． Ａｐｐｌ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．， ２０００， １６９， １０２）。他の場合、重水素化の重要な効果は、全身クリアランスの速度を低下させることである。結果的に、化合物の生物学的半減期が大きくなる。可能な臨床的効果には、ピークレベル低下及びトラフレベル上昇を伴って同様の全身曝露を維持スル能力などがあると考えられる。これによって、特定の化合物の薬物動態／薬力学関係に応じて、副作用低下及び効力強化が生じると考えられる。この重水素効果の例は、ＭＬ－３３７（Ｃ． Ｊ． Ｗｅｎｔｈｕｒ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．， ２０１３， ５６， ５２０８）及びオダナカティブ（Ｋ． Ｋａｓｓａｈｕｎ ｅｔ ａｌ．， ＷＯ２０１２／１１２３６３）である。代謝速度低下によって、全身クリアランス速度に変化を生じることなく薬物の曝露を増加させるさらに他の場合が報告されている（例えば、Ｒｏｆｅｃｏｘｉｂ： Ｆ． Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ａｒｚｎｅｉｍ． Ｆｏｒｓｃｈ． Ｄｒｕｇ． Ｒｅｓ．， ２００６， ５６， ２９５；Ｔｅｌａｐｒｅｖｉｒ： Ｆ． Ｍａｌｔａｉｓ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．， ２００９， ５２， ７９９３）。この効果を示す重水素化薬剤は、用量要件低下（例えば、所望の効果を達成するための投与回数低減又は用量軽減）を有し得るか、及び／又は代謝物負荷量低下を生じ得る。
本発明による化合物は、２以上の可能な代謝攻撃部位を有し得る。物理化学特性及び代謝プロファイルに対する上記効果を至適化するため、１以上の重水素－水素交換の一定パターンを有する本発明による重水素含有化合物を選択することができる。詳細には、本発明による重水素含有化合物の重水素原子は、炭素原子に結合し、及び／又は代謝酵素、例えばシトクロムＰ４５０の攻撃部位である本発明による化合物における位置にある。
下記の実施例は、本発明の実行可能性を説明するものであり、本発明はこれら実施例にのみ限定されるものではない。
別段の断りがない限り、下記の試験及び実施例におけるパーセントは重量パーセントであり、部は重量部である。液体／液体溶液における溶媒比、希釈比及び濃度データは、各場合で体積基準である。
合成経路：
作業例の例として、下記の図式に、例示的合成経路を示している。
これらの図式において、式ＩＩａによれば、アミノ基－ＮＨＲ４上のＲ４置換基は、Ｚ１－（Ｃ＝Ｏ）（０－１）－（Ｐ３）（０－２）－Ｐ２－ＮＨ－ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２）－Ｃ（＝Ｏ）－基であることができる。
この文脈において，
Ｐ２は、Ｄ－Ｇｌｙ、Ｄ－Ｐｒｏ、Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ｖａｌ、Ｄ－Ｎｖａ、Ｄ－Ｌｅｕ、Ｄ－Ｉｌｅ、Ｄ－Ｍｅｔ、Ｄ－Ｐｈｅ、Ｄ－Ｔｙｒ、Ｄ－Ｔｒｐ、Ｄ－Ｓｅｒ、Ｄ－Ｔｈｒ、Ｄ－Ｃｙｓ、Ｄ－Ａｓｎ、Ｄ－Ｇｌｎ、Ｄ－Ａｓｐ、Ｄ－Ｇｌｕ、Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－シトルリン及びＤ－Ｈｉｓの群から選択されるＤ－アミノ酸である。
Ｐ３は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリン及びＨｉｓの群から選択されるＬ－又はＤ－アミノ酸である。
Ｚ１は、Ｃ１－１０－アルキル、Ｃ５－１０－アリール又はＣ６－１０－アラルキル、Ｃ５－１０－ヘテロアルキル、Ｃ１－１０－アルキル－Ｏ－Ｃ６－１０－アリール、Ｃ５－１０－ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、Ｃ５－１０－ヘテロアリールアルコキシ、Ｃ１－１０－アルコキシ、Ｃ６－１０－アリールオキシ、Ｃ６－１０－アリール－Ｃ１－１０－アルキルオキシ又はＣ６－１０－アラルコキシ、Ｃ５－１０－ヘテロアルコキシ、Ｃ１－１０－アルキル－Ｏ－Ｃ６－１０－アリールオキシ－又はＣ５－１０－ヘテロシクロアルコキシ基であり（それは、－ＮＨ２、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＮＨ－アルキル、－Ｎ（アルキル）２、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－アルキル、－Ｎ（アルキル）－Ｃ（＝Ｏ）－アルキル、－Ｓ（＝Ｏ）３－Ｈ、－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨ２、－Ｓ（＝Ｏ）２－Ｎ（アルキル）２、－ＣＯＯＨ、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ（アルキル）２又は－ＯＨによってモノ置換又は多置換されていても良い。）、
又は－Ｈ若しくは－（ＣＨ２）０－１－Ｏｘ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｖ－Ｒ１基であり、
ｘは０又は１であり、
ｖは１～２０の数字であり、
Ｒ１は、式（ＩＩ）で提供の定義を有する。
図式１：
Figure 0007251981000220
［ａ）：ＨＡＴＵ、ＤＭＦ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、ＲＴ又はＥＤＣＩ、ＨＯＢＴ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴｂ）Ｈ２、１０％Ｐｄ－Ｃ、ＭｅＯＨ、ＲＴ；ｃ）Ｚ１－ＣＯＯＨ、ＥＤＣＩ、ＨＯＢＴ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ又はＺ１－ＣＯＯＨ、ＨＡＴＵ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ又はＺ１－ＣＯＯＳｕ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ］
さらに、図式２及び３による他の中間体を、レグマイン開裂性ＡＤＣ前駆体に変換することができる。
図式２：
Figure 0007251981000221
［ａ）：ＨＡＴＵ、ＤＭＦ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、ＲＴ又はＥＤＣＩ、ＨＯＢＴ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴｂ）Ｈ２、１０％Ｐｄ－Ｃ、ＭｅＯＨ、ＲＴ；ｃ）１，１′－［（１，５－ジオキソペンタン－１，５－ジイル）ビス（オキシ）］ジピロリジン－２，５－ジオン、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ］
図式３：
Figure 0007251981000222
［ａ）：ＨＡＴＵ、ＤＭＦ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、ＲＴ又はＥＤＣＩ、ＨＯＢＴ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴｂ）Ｈ２、１０％Ｐｄ－Ｃ、ＭｅＯＨ、ＲＴ；ｃ）１，１′－［（１，５－ジオキソペンタン－１，５－ジイル）ビス（オキシ）］ジピロリジン－２，５－ジオン、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ］
図式１～３に示したベンジルオキシカルボニル基に代わるものとして、ペプチド化学で確立された他の保護基を用い、同様に公知である相当する方法によってそれらを取り外すことができる。保護基戦略の選択は、その分子にある他の構造要素との適合性に関して当業者には公知の要件に従って行う。保護基がまだ存在する場合には、分子中のさらなる保護基を最終段階で除去することができる。その合成は、それらの順序に関して並べ変えても良い。
さらに、リンカー構造Ｌ１－Ｌ２の文脈におけるタンパク質反応性基は、特許請求の範囲内で変えることができる。
図式４：図式１に従ってＡＤＰＣに変換することができる中間体シリーズＦのＡＤＣ前駆体分子の合成
Figure 0007251981000223
［ａ）：ＥＤＣＩ、ＨＯＢＴ、ジイソプロピルエチルアミン、ＲＴ；ｂ）エタノール、ピペリジン、メチルアミン、水、ＲＴ；ｃ）ＨＡＴＵ、ジイソプロピルエチルアミン、ＲＴ；ｄ）ＴＦＡ、ＤＣＭ、ＲＴ］
図式５：図式１に従ってＡＤＰＣに変換することができる中間体シリーズＦのＡＤＣ前駆体分子の合成
Figure 0007251981000224
［ａ）：例えばＥＤＣＩ、ＨＯＢＴ、ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ；ｂ）例えばＤＣＭ／ＴＦＡ２０：１、ＲＴ；ｃ）例えばＨＡＴＵ、ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ；ｄ）例えばＴＦＡ、ＤＣＭ、ＲＴ］
図式６：図式１に従ってＡＤＰＣに変換することができる中間体シリーズＦのＡＤＣ前駆体分子の合成
Figure 0007251981000225
［ａ）：例えば２－ブロモ－１－エチルピリジニウムテトラフルオロボレート、ジイソプロピルエチルアミン、ＤＣＭ、ＲＴ；ｂ）例えば２Ｍ ＬｉＯＨ溶液、ＴＨＦ、水、ＲＴ、位置異性体のＨＰＬＣ分離；ｃ）例えばＥＤＣＩ、ＨＯＢＴ、ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ；ｄ）例えばＴＦＡ、ＤＣＭ、ＲＴ］
図式７：図式１に従ってＡＤＰＣに変換することができる中間体シリーズＦのＡＤＣ前駆体分子の合成
Figure 0007251981000226
［ａ）：例えばＨ２、Ｐｄ－Ｃ、ＥｔＯＨ、ＲＴ；ｂ）例えばｐ－ニトロベンジルブロミド、Ｋ２ＣＯ３、ＤＭＦ；ｃ）例えばエタノール、４０％メチルアミン水溶液、５０℃；ｄ）例えば亜ジチオン酸二ナトリウム、ＴＨＦ、水、５０℃；ｅ）例えばＨＡＴＵ、ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ；ｆ）例えばピペリジン、４０％メチルアミン水溶液、エタノール、５０℃；ｇ）例えばジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ；ｈ）例えばピペリジン、ＤＭＦ、ＲＴ；ｉ）ＴＦＡ、ＤＣＭ、ＲＴ］
図式８：図式１に従ってＡＤＰＣに変換することができる中間体シリーズＦのＡＤＣ前駆体分子の合成
Figure 0007251981000227
［ａ）：例えばＥｔ３Ｎ、ＤＭＦ、ＲＴ；ｂ）例えばＨ２、Ｐｄ－Ｃ、ＥｔＯＨ／酢酸エチル／ＴＨＦ（１：１：１）、ＲＴ；ｃ）例えば４－メチルモルホリン、ＤＭＦ、ＲＴ；ｄ）例えばＨＡＴＵ、ＨＯＡｔ、ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ；ｅ）例えばＴＦＡ、ＲＴ］
図式９：図式１に従ってＡＤＰＣに変換することができる中間体シリーズＦのＡＤＣ前駆体分子の合成
Figure 0007251981000228
［ａ）：例えばＮａＢＨ（ＯＡｃ）３、ＨＯＡｃ、ジクロロメタン、ＲＴ；ｂ）例えばクロロアセチルクロライド、ＮＥｔ３、ＤＣＭ、ＲＴ；ｃ）例えばＣｓ２ＣＯ３、ＤＭＦ、５０℃；ｄ）例えば１－（２－アミノエチル）－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオン塩酸塩（１：１）、Ｔ３Ｐ（Ｒ）、ジイソプロピルエチルアミン、ＭｅＣＮ、ＲＴ；ｅ）例えばＴＦＡ、ＲＴ］
図式１０：図式１に従ってＡＤＰＣに変換することができる中間体シリーズＦのＡＤＣ前駆体分子の合成
Figure 0007251981000229
［ａ）：例えばメタンスルホニルクロライド、ＮＥｔ３、ジクロロメタン、０℃；ｂ）例えばＮａＮ３、ＤＭＦ、４０℃；ｃ）例えばＨ２、Ｐｄ－Ｃ、ＥｔＯＨ／酢酸エチル（１：１）、ＲＴ；ｄ）例えばＴＢＡＦ、ＴＨＦ、ＲＴ；ｅ）例えば１－（｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝オキシ）ピロリジン－２，５－ジオン、ＮＥｔ３、ＣａＣＯ３、１，４－ジオキサン、ＲＴ；ｆ）例えばＮ－クロロコハク酸イミド、ＴＥＭＰＯ、テトラ－ｎ－ブチルアンモニウムクロライド、クロロホルム、０．０５Ｎ炭酸カリウム／０．０５Ｎ炭酸水素ナトリウム溶液（１：１）；ｇ）例えばＮａＢＨ（ＯＡｃ）３、ＨＯＡｃ、ジクロロメタン、ＲＴ；ｈ）例えばクロロアセチルクロライド、ＮＥｔ３、ＤＣＭ、ＲＴ；ｉ）例えばＴＢＡＦ、ＴＨＦ、水、ＲＴ；ｊ）例えば４－メチルモルホリン、ＤＭＦ、ＲＴ；ｋ）例えばＴＦＡ、ＲＴ］
図式１１：図式１に従ってＡＤＰＣに変換することができる中間体シリーズＦのＡＤＣ前駆体分子の合成
Figure 0007251981000230
［ａ）：例えばホルムアルデヒド、Ｎａ２ＣＯ３、水、ＲＴ；ｂ）例えばＡｃ２Ｏ、ピリジン、ＴＨＦ、ＲＴ；ｃ）例えばジ－ｔｅｒｔ－ブチルマロネート、ＫＯｔＢｕ、ＴＨＦ、ＲＴ；ｄ）例えばＬｉＢＨ４、ＴＨＦ、ＲＴ；ｅ）例えばＴＢＤＭＳＣｌ、イミダゾール、ＤＣＭ、ＲＴ；ｆ）例えばデス－マーチンペルヨージナン、ＤＣＭ；ｇ）例えば水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム、ＡｃＯＨ、ＤＣＭ、ＲＴ；ｈ）例えばｎＢｕ４ＮＦ、ＴＨＦ、ＲＴ；ｉ）例えばＳＯＣｌ２、ＴＨＦ、ＲＴ；ｊ）例えばＡｃＳＫ、ｎＢｕ４ＮＩ、ＤＭＦ、９０℃；ｋ）例えばＮａＯＨ、ＭｅＯＨ、ＴＨＦ、ＲＴ；ｌ）例えばＴＣＥＰ、ジオキサン、ＲＴ；ｍ）例えばエピマーの分離；ｎ）例えば６Ｎ塩酸、ＴＨＦ、ＲＴ、ｏ）例えばＭａｌ－ｄＰＥＧ（３）－Ｍａｌ、ＰＢＳ緩衝液、ＡＣＮ、ＲＴ］
図式１２：図式１に従ってＡＤＰＣに変換することができる中間体シリーズＦのＡＤＣ前駆体分子の合成
Figure 0007251981000231
［ａ）：例えばＭａｌ－ｄＰＥＧ（３）－Ｍａｌ、ＰＢＳ緩衝液、ＡＣＮ、ＲＴ］
図式１３：図式１に従ってＡＤＰＣに変換することができる中間体シリーズＦのＡＤＣ前駆体分子の合成
Figure 0007251981000232
［ａ）：例えばＢＦ３ＯＥｔ２、ＴＨＦ、０℃；ｂ）：例えば亜硝酸イソアミル、－１０℃、０．５時間；ｃ）：例えばメチル２－クロロ－３－オキソブタノエート、ピリジン、水、－５℃；ｄ）：例えばＮＥｔ３、トルエン、ＲＴ；ｅ）：例えばＥｔ３ＳｉＨ、ＴＦＡ、ＲＴ；ｆ）：例えばＬｉＢＨ４、ＴＨＦ、６０℃；ｇ）：例えばデス－マーチンペルヨージナン、ＤＣＭ、ＲＴ；ｈ）：例えば（Ｒ）－（＋）－メチル－２－プロパンスルフィンアミド、チタン（ＩＶ）イソプロポキシド、ＴＨＦ、ＲＴ；ｉ）：例えばｔｅｒｔ－ＢｕＬｉ、ペンタン、ＴＨＦ、－７８℃；ｊ）：例えばＨＣｌ／ジオキサン、ＴＨＦ、ＭｅＯＨ、ＲＴ；ｋ）：例えば３－（１，３－ジオキソ－１，３－ジヒドロ－２Ｈ－イソインドール－２－イル）プロパナール、ＮａＢ（ＯＡｃ）３Ｈ、ＡｃＯＨ、ＤＣＭ、ＲＴ；ｌ）：例えば２－クロロ－２－オキソ酢酸エチル、ＮＥｔ３、ＤＣＭ、ＲＴ；ｍ）：例えばメチルアミン、水、ＥｔＯＨ、５０℃］
図式１４：ＡＤＣ前駆体分子の前駆体の合成
Figure 0007251981000233
［ａ）：例えばｔｅｒｔ－ブチルＮ－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－５－オキソ－Ｌ－ノルバリネート、ＮａＢ（ＯＡｃ）３Ｈ、ＡｃＯＨ、ＤＣＭ、ＲＴ；ｂ）：例えば２－クロロ－２－オキソ酢酸エチル、ＮＥｔ３、ＤＣＭ、ＲＴ；ｃ）：例えばメチルアミン、水、ＥｔＯＨ、６０℃；ｄ）：例えばＴＨＦ、ＤＣＭ、５０℃；ｅ）：例えばＢｏｃ２Ｏ、ＮＥｔ３、ＤＣＭ、ＲＴ；ｆ）：例えばトリフルオロ酢酸／１－（２－アミノエチル）－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオン（１：１）、ＨＡＴＵ、ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ；ｆ）：例えばＴＦＡ、ＤＣＭ、ＲＴ］
図式１５：中間体の合成
Figure 0007251981000234
［ａ）：例えば水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム、酢酸、ＤＣＭ、ＲＴ；ｂ）例えばアセトキシアセチルクロライド、ＮＥｔ３、ＤＣＭ、ＲＴ；ｃ）例えばＬｉＯＨ、ＴＨＦ／水、ＲＴ；ｄ）例えばＨ２、Ｐｄ－Ｃ、ＥｔＯＨ、ＲＴ；ｅ）例えばＴｅｏｃ－ＯＳｕ、ＮＥｔ３、ジオキサン、ＲＴ；ｆ）例えばＦｍｏｃ－Ｃｌ、ジイソプロピルエチルアミン、ジオキサン／水２：１、ＲＴ］
図式１６：の合成中間体
Figure 0007251981000235
［ａ）：例えば水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム、酢酸、ＤＣＭ、ＲＴ；ｂ）例えばアセトキシアセチルクロライド、ＮＥｔ３、ＤＣＭ、ＲＴ；ｃ）例えばＬｉＯＨ、メタノール、ＲＴ；ｄ）例えばＴＦＡ、ＤＣＭ、ＲＴ；ｅ）例えばＢｏｃ２Ｏ、ジイソプロピルエチルアミン、ＤＣＭ、ＲＴ］
図式１７：中間体の合成
Figure 0007251981000236
［ａ）：例えばベンジルブロミド、Ｃｓ２ＣＯ３、ＤＭＦ、ＲＴ；ｂ）例えばＰｄ（ｄｐｐｆ）２Ｃｌ２、ＤＭＦ、Ｎａ２ＣＯ３、８５℃；ｃ）例えばＬｉＡｌＨ４、ＴＨＦ、０℃；ＭｎＯ２、ＤＣＭ、ＲＴ；ｄ）例えばＴｉ（ｉＯＰｒ）４、ＴＨＦ、ＲＴ；ｅ）例えばｔＢｕＬｉ、ＴＨＦ、－７８℃；ＭｅＯＨ、ＮＨ４Ｃｌ；ｆ）例えばＨＣｌ／１，４－ジオキサン］
図式１８：図式１に従ってＡＤＰＣに変換することができる中間体シリーズＦのＡＤＣ前駆体分子の合成
Figure 0007251981000237
［ａ）：水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム、酢酸、ＤＣＭ、ＲＴ；ｂ）アセトキシアセチルクロライド、ジイソプロピルエチルアミン、ＤＣＭ、ＲＴ；ｃ）ＬｉＯＨ、ＭｅＯＨ、ＲＴ；ｄ）トリフルオロ酢酸／１－（２－アミノエチル）－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオン（１：１）ＨＡＴＵ、ＤＭＦ、ジイソプロピルエチルアミン、ＲＴ；ｅ）塩化亜鉛、トリフルオロエタノール、５０℃、ＥＤＴＡ．］
図式１９：図式１に従ってＡＤＰＣに変換することができる中間体シリーズＦのＡＤＣ前駆体分子の合成
Figure 0007251981000238
［ａ）：ＨＡＴＵ、ＤＭＦ、ジイソプロピルエチルアミン、ＲＴ；ｂ）塩化亜鉛、トリフルオロエタノール、５０℃、ＥＤＴＡ．］
図式２０：図式１に従ってＡＤＰＣに変換することができる中間体シリーズＦのＡＤＣ前駆体分子の合成
Figure 0007251981000239
［ａ）：水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム、酢酸、ＤＣＭ、ＲＴ；ｂ）アセトキシアセチルクロライド、トリエチルアミン、ＤＣＭ、ＲＴ；ｃ）ＬｉＯＨ、ＭｅＯＨ、ＲＴ；ｄ）トリフルオロ酢酸／１－（２－アミノエチル）－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオン（１：１）ＨＡＴＵ、ＤＭＦ、ジイソプロピルエチルアミン、ＲＴ；ｅ）塩化亜鉛、トリフルオロエタノール、５０℃、ＥＤＴＡ．］
図式２１：中間体及びＡＤＣ前駆体の合成の一般的方法
Figure 0007251981000240
［ａ）：ＨＡＴＵ、ＤＭＦ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、ＲＴ又はＥＤＣＩ、ＨＯＢＴ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴｂ）Ｈ２、１０％Ｐｄ－Ｃ、ＭｅＯＨ、ＲＴ；ｃ）Ｚ１－ＣＯＯＨ、ＥＤＣＩ、ＨＯＢＴ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ又はＺ１－ＣＯＯＨ、ＨＡＴＵ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ又はＺ１－ＣＯＯＳｕ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ］
図式２２：レグマイン開裂性リンカーを有するＡＤＣ前駆体分子の合成
Figure 0007251981000241
［ａ）：ＨＡＴＵ、ＤＭＦ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、ＲＴ又はＥＤＣＩ、ＨＯＢＴ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴｂ）Ｈ２、１０％Ｐｄ－Ｃ、ＭｅＯＨ、ＲＴ；ｃ）１，１′－［（１，５－ジオキソペンタン－１，５－ジイル）ビス（オキシ）］ジピロリジン－２，５－ジオン、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ］
図式２３：レグマイン開裂性リンカーを有するＡＤＣ前駆体分子の合成
Figure 0007251981000242
［ａ）：ＨＡＴＵ、ＤＭＦ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、ＲＴ又はＥＤＣＩ、ＨＯＢＴ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴｂ）Ｈ２、１０％Ｐｄ－Ｃ、ＭｅＯＨ、ＲＴ；ｃ）１，１′－［（１，５－ジオキソペンタン－１，５－ジイル）ビス（オキシ）］ジピロリジン－２，５－ジオン、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ］
さらに、図式２１、２２及び２３による他の中間体は、レグマイン開裂性ＡＤＣ及びＡＰＤＣ前駆体に変換することができる。
図式２１～２３に示したベンジルオキシカルボニル基に代わるものとして、ペプチド化学で確立された他の保護基を用い、同様に公知である相当する方法によってそれらを取り外すことができる。保護基戦略の選択は、その分子にある他の構造要素との適合性に関して当業者には公知の要件に従って行う。保護基がまだ存在する場合には、分子中のさらなる保護基を最終段階で除去することができる。その合成は、それらの順序に関して並べ変えても良い。
図式２４：グマイン開裂性ヘッド基を有するシステイン結合したＡＤＣの合成レ
Figure 0007251981000243
［ａ）：ＨＡＴＵ、ＤＭＦ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、ＲＴ；ｂ）２～５当量ＴＣＥＰ、ＰＢＳ ｐＨ７．２、ＲＴで３０分間攪拌；ｃ）アルゴン下にＲＴで９０分間攪拌、次にＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）によってｐＨ８に再緩衝、そしてアルゴン下にＲＴで終夜攪拌、次に超遠心による濃縮、そしてｐＨ７．２のＰＢＳによる所望の濃度の設定）］
図式２５：レグマイン開裂性リンカーを有するリジン結合したＡＤＣの合成
Figure 0007251981000244
［ａ）：ＨＡＴＵ、ＤＭＦ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、ＲＴ；ｂ）Ｈ２、１０％Ｐｄ－Ｃ、メタノール１．５時間、ＲＴ；ｃ）１，１′－［（１，５－ジオキソペンタン－１，５－ジイル）ビス（オキシ）］ジピロリジン－２，５－ジオン、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴで終夜攪拌；ｄ）ＰＢＳ中のＡＫ２、ＤＭＳＯに溶かした５当量の活性エステルの添加、ＲＴでアルゴン下に６０分間攪拌、ＤＭＳＯに溶かした追加の５当量の活性エステルの添加、ＲＴでアルゴン下に６０分間攪拌、次にＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）を用いて平衡としたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）による精製、次に超遠心による濃縮、そしてＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）による所望の濃度の設定）］
図式２６：レグマイン開裂性ヘッド基を有するＡＤＣ前駆体の合成
Figure 0007251981000245
［ａ）：ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３、ＨＯＡｃ、ジクロロメタン、ＲＴ；ｂ）クロロアセチルクロライド、ＮＥｔ３、ＤＣＭ、ＲＴ；ｃ）Ｌ－システイン、ＮａＨＣＯ３、ＤＢＵ、イソプロパノール／水、５０℃；ｄ）ＨＡＴＵ、ＤＭＦ、ジイソプロピルエチルアミン、ＲＴ；ｅ）塩化亜鉛、トリフルオロエタノール、５０℃；ｆ）ｄ）ＨＡＴＵ、ＤＭＦ、ジイソプロピルエチルアミン、ＲＴ］
図式２７：トランスグルタミナーゼカップリングを介したＡＤＣの合成
Figure 0007251981000246
［ａ：５ｍｇ ＡＫ３／ＤＰＢＳ ｐＨ７．４（ｃ約１０ｍｇ／ｍＬ）、６当量の担毒体－リンカー前駆体（例えば中間体Ｑ３１－Ｑ３４）；組み換え細菌トランスグルタミナーゼ溶液１２．５μＬ（１．２５Ｕ）の水溶液（１００Ｕ／ｍＬ）５０μＬ及びＤＰＢＳ ｐＨ７．４ ３７．５μＬを加え、３７℃で２４時間インキュベートする。］
Ａ．実施例
略称及び頭字語：
Ａ４９８：ヒト腫瘍細胞系
ＡＢＣＢ１：ＡＴＰ結合カセットサブファミリーＢメンバー１（Ｐ－ｇｐ及びＭＤＲ１と同義語）
ａｂｓ．：純粋
Ａｃ：アセチル
ＡＣＮ：アセトニトリル
ａｑ．：水系、水溶液
ＡＴＰ：アデノシン三リン酸
ＢＣＲＰ：乳癌耐性タンパク質、排出輸送体
ＢＥＰ：２－ブロモ－１－エチルピリジニウムテトラフルオロボレート
Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル
ｂｒ．：広い（ＮＭＲで）
Ｅｘ．：実施例
ＢｘＰＣ３：ヒト腫瘍細胞系
ｃａ．：約
ＣＩ：化学イオン化（ＭＳで）
Ｄ：二重線（ＮＭＲで）
Ｄ：日
ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィー
ＤＣＩ：直接化学イオン化（ＭＳで）
ＤＣＭ：ジクロロメタン
Ｄｄ：二重線の二重線（ＮＭＲで）
ＤＭＡＰ：４－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノピリジン
ＤＭＥ：１，２－ジメトキシエタン
ＤＭＥＭ：ダルベッコ改変イーグル培地（細胞培養のための標準培養液）
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
Ｄ／Ｐ：色素（蛍光色素）／タンパク質比
ＤＰＢＳ、Ｄ－ＰＢＳ、ＰＢＳ：ダルベッコのリン酸緩衝塩溶液
ＰＢＳ＝ＤＰＢＳ＝Ｄ－ＰＢＳ、ｐＨ７．４、Ｓｉｇｍａから、Ｎｏ Ｄ８５３７
組成：
ＫＣｌ ０．２ｇ
ＫＨ２ＰＯ４（無水物）０．２ｇ
ＮａＣｌ ８．０ｇ
Ｎａ２ＨＰＯ４（無水物）１．１５ｇ
Ｈ２Ｏで１リットルとする
Ｄｔ：三重線の二重線（ＮＭＲで）
ＤＴＴ：ＤＬ－ジチオスレイトール
ＥＤＣ：Ｎ′－（３－ジメチルアミノプロピル）－Ｎ－エチルカルボジイミド塩酸塩
ＥＧＦＲ：上皮増殖因子受容体
ＥＩ：電子衝撃イオン化（ＭＳで）
ＥＬＩＳＡ：酵素結合免疫吸着検定法
ｅｑ．：当量
ＥＳＩ：電気スプレーイオン化（ＭＳで）
ＥＳＩ－ＭｉｃｒｏＴｏｆｑ：ＥＳＩ－ＭｉｃｒｏＴｏｆｑ（Ｔｏｆ＝飛行時間及びｑ＝四重極を用いる質量分析装置の名称）
ＦＣＳ：ウシ胎仔血清
Ｆｍｏｃ：（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル
ｓａｔ．：飽和
ＧＴＰ：グアノシン５′三リン酸
Ｈ：時間
ＨＡＴＵ：Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＥＰＥＳ：４－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－１－エタンスルホン酸
ＨＯＡｃ：酢酸
ＨＯＡｔ：１－ヒドロキシ－７－アザベンゾトリアゾール
ＨＯＢｔ：１－ヒドロキシ－１Ｈ－ベンゾトリアゾール水和物
ＨＯＳｕ：Ｎ－ヒドロキシコハク酸イミド
ＨＰＬＣ：高圧高速液体クロマトグラフィー
ＩＣ５０：半最大阻害濃度
ｉ．ｍ．：筋肉的に、筋肉への投与
ｉ．ｖ．：静脈的に、静脈への投与
ｃｏｎｃ．：濃
ＫＰＬ－４：ヒト腫瘍細胞系
ＫＵ－１９－１９：ヒト腫瘍細胞系
ＬＣ－ＭＳ：液体クロマトグラフィー結合質量分析
ＬＬＣ－ＰＫ１細胞：ルイス肺癌ブタ（ｐｏｒｋ）腎臓細胞系
Ｌ－ＭＤＲ：ヒトＭＤＲ１トランスフェクトＬＬＣ－ＰＫ１細胞
ＬｏＶｏ：ヒト腫瘍細胞系
ｍ：多重線（ＮＭＲで）
ＭＤＲ１：多剤耐性タンパク質１
ＭｅＣＮ：アセトニトリル
ｍｉｎ：分
ＭＳ：質量分析
ＭＴＴ：３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニル－２Ｈ－テトラゾリウムブロマイド
ＮＣＩ－Ｈ２９２：ヒト腫瘍細胞系
－Ｎｍｅ－：窒素原子に結合したメチル基
ＮＣＩ－Ｈ５２０：ヒト腫瘍細胞系
ＮＭＭ：Ｎ－メチルモルホリン
ＮＭＰ：Ｎ－メチル－２－ピロリジノン
ＮＭＲ：核磁気共鳴スペクトル測定
ＮＭＲＩ：Ｎａｖａｌ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＮＭＲＩ）由来のマウス系統
Ｎｕｄｅマウス：実験動物
ＮＳＣＬＣ：非小細胞肺癌
ＰＢＳ：リン酸緩衝塩溶液
Ｐｄ／Ｃ：パラジウム／活性炭
Ｐ－ｐｇ：Ｐ－糖タンパク質、輸送体タンパク質
ＰＮＧａｓｅＦ：糖を開裂させる酵素
ｑｕａｎｔ．：定量的（収率で）
Ｑｕａｒｔ：四重線（ＮＭＲで）
Ｑｕｉｎｔ：五重線（ＮＭＲで）
Ｒｆ：保持指数（ＴＬＣで）
ＲＴ：室温
Ｒｔ：保持時間（ＨＰＬＣで）
ｓ：一重線（ＮＭＲで）
ｓ．ｃ．：皮下的に、皮下への投与
ＳＣＣ－４：ヒト腫瘍細胞系
ＳＣＩＤマウス：重度の複合免疫不全を有する試験マウス
ＳＫ－ＨＥＰ－１：ヒト腫瘍細胞系
ｔ：三重線（ＮＭＲで）
ＴＢＡＦ：フッ化テトラ－ｎ－ブチルアンモニウム
ＴＣＥＰ：トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン
ＴＥＭＰＯ：（２，２，６，６－テトラメチルピペリジン－１－イル）オキシル
Ｔｅｏｃ：トリメチルシリルエトキシカルボニル
ｔｅｒｔ：ターシャリー
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
Ｔ３Ｐ（登録商標）：２，４，６－トリプロピル－１，３，５，２，４，６－トリオキサトリホスフィナン２，４，６－トリオキサイド
Ｕ２５１：ヒト腫瘍細胞系
ＵＶ：紫外線スペクトル測定
ｖ／ｖ：体積比（溶液のもの）
Ｚ：ベンジルオキシカルボニル

アミノ酸略称
Ａｌａ＝アラニン
Ａｒｇ＝アルギニン
Ａｓｎ＝アスパラギン
Ａｓｐ＝アスパラギン酸
Ｃｙｓ＝システイン
Ｇｌｕ＝グルタミン酸
Ｇｌｎ＝グルタミン
Ｇｌｙ＝グリシン
Ｈｉｓ＝ヒスチジン
Ｉｌｅ＝イソロイシン
Ｌｅｕ＝ロイシン
Ｌｙｓ＝リジン
Ｍｅｔ＝メチオニン
Ｎｖａ＝ノルバリン
Ｐｈｅ＝フェニルアラニン
Ｐｒｏ＝プロリン
Ｓｅｒ＝セリン
Ｔｈｒ＝トレオニン
Ｔｒｐ＝トリプトファン
Ｔｙｒ＝チロシン
Ｖａｌ＝バリン。
ＨＰＬＣ及びＬＣ－ＭＳ法：
方法１（ＬＣ－ＭＳ）：
装置：Ｗａｔｅｒｓ ＡＣＱＵＩＴＹ ＳＱＤ ＵＰＬＣシステム；カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＨＳＳ Ｔ３ １．８μ ５０×１ｍｍ；溶離液Ａ：水１リットル＋９９％ギ酸０．２５ｍＬ、溶離液Ｂ：アセトニトリル１リットル＋９９％ギ酸０．２５ｍＬ；勾配：０．０分９０％Ａ→１．２分５％Ａ→２．０分５％Ａオーブン：５０℃；流量：０．４０ｍＬ／分；ＵＶ検出：２０８－４００ｎｍ。
方法２（ＬＣ－ＭＳ）：
ＭＳ装置型：Ｗａｔｅｒｓ Ｓｙｎａｐｔ Ｇ２Ｓ；ＵＰＬＣ装置型：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｉ－ＣＬＡＳＳ；カラム：Ｗａｔｅｒｓ、ＢＥＨ３００、２．１×１５０ｍｍ、Ｃ１８ １．７μｍ；溶離液Ａ：水１リットル＋０．０１％ギ酸；溶離液Ｂ：アセトニトリル１リットル＋０．０１％ギ酸；勾配：０．０分２％Ｂ→１．５分２％Ｂ→８．５分９５％Ｂ→１０．０分９５％Ｂ；オーブン：５０℃；流量：０．５０ｍＬ／分；ＵＶ検出：２２０ｎｍ。
方法３（ＬＣ－ＭＳ）：
ＭＳ装置：Ｗａｔｅｒｓ （Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ）ＱＭ；ＨＰＬＣ装置：Ａｇｉｌｅｎｔ １１００シリーズ；カラム：Ａｇｉｌｅｎｔ ＺＯＲＢＡＸ Ｅｘｔｅｎｄ－Ｃ１８ ３．０×５０ｍｍ ３．５ミクロン；溶離液Ａ：水１リットル＋０．０１ｍｏｌの炭酸アンモニウム、溶離液Ｂ：アセトニトリル１リットル；勾配：０．０分９８％Ａ→０．２分９８％Ａ→３．０分５％Ａ→４．５分５％Ａ；オーブン：４０℃；流量：１．７５ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
方法４（ＬＣ－ＭＳ）：
ＭＳ装置型：Ｗａｔｅｒｓ Ｓｙｎａｐｔ Ｇ２Ｓ；ＵＰＬＣ装置型：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｉ－ＣＬＡＳＳ；カラム：Ｗａｔｅｒｓ、ＨＳＳＴ３、２．１×５０ｍｍ、Ｃ１８ １．８μｍ；溶離液Ａ：水１リットル＋０．０１％ギ酸；溶離液Ｂ：アセトニトリル１リットル＋０．０１％ギ酸；勾配：０．０分１０％Ｂ→０．３分１０％Ｂ→１．７分９５％Ｂ→２．５分９５％Ｂ；オーブン：５０℃；流量：１．２０ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
方法５（ＬＣ－ＭＳ）：
装置：Ｗａｔｅｒｓ ＡＣＱＵＩＴＹ ＳＱＤ ＵＰＬＣシステム；カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＨＳＳ Ｔ３ １．８μ ５０×１ｍｍ；溶離液Ａ：水１リットル＋９９％ギ酸０．２５ｍＬ、溶離液Ｂ：アセトニトリル１リットル＋９９％ギ酸０．２５ｍＬ；勾配：０．０分９５％Ａ→６．０分５％Ａ→７．５分５％Ａオーブン：５０℃；流量：０．３５ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０－４００ｎｍ。
方法６（ＬＣ－ＭＳ）：
装置：Ｗａｔｅｒｓ ＵＰＬＣ Ａｃｑｕｉｔｙ搭載Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ Ｑｕａｔｔｒｏ Ｐｒｅｍｉｅｒ；カラム：Ｔｈｅｒｍｏ Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＧＯＬＤ１．９μ５０×１ｍｍ；溶離液Ａ：水１リットル＋５０％ギ酸０．５ｍＬ、溶離液Ｂ：アセトニトリル１リットル＋５０％ギ酸０．５ｍＬ；勾配：０．０分９７％Ａ→０．５分９７％Ａ→３．２分５％Ａ→４．０分５％Ａオーブン：５０℃；流量：０．３ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
方法７（ＬＣ－ＭＳ）：
装置：Ａｇｉｌｅｎｔ ＭＳ Ｑｕａｄ ６１５０；ＨＰＬＣ：Ａｇｉｌｅｎｔ １２９０；カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＨＳＳ Ｔ３ １．８μ ５０×２．１ｍｍ；溶離液Ａ：水１リットル＋９９％ギ酸０．２５ｍＬ、溶離液Ｂ：アセトニトリル１リットル＋９９％ギ酸０．２５ｍＬ；勾配：０．０分９０％Ａ→０．３分９０％Ａ→１．７分５％Ａ→３．０分５％Ａオーブン：５０℃；流量：１．２０ｍＬ／分；ＵＶ検出：２０５－３０５ｎｍ。
方法８（ＬＣ－ＭＳ）：
ＭＳ装置型：Ｗａｔｅｒｓ Ｓｙｎａｐｔ Ｇ２Ｓ；ＵＰＬＣ装置型：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｉ－ＣＬＡＳＳ；カラム：Ｗａｔｅｒｓ、ＨＳＳＴ３、２．１×５０ｍｍ、Ｃ１８ １．８μｍ；溶離液Ａ：水１リットル＋０．０１％ギ酸；溶離液Ｂ：アセトニトリル１リットル＋０．０１％ギ酸；勾配：０．０分２％Ｂ→２．０分２％Ｂ→１３．０分９０％Ｂ→１５．０分９０％Ｂ；オーブン：５０℃；流量：１．２０ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
方法９：実施例１８１から１９１についてのＬＣ－ＭＳ－Ｐｒｅｐ精製法（方法ＬＩＮＤ－ＬＣ－ＭＳ－Ｐｒｅｐ）
ＭＳ装置：Ｗａｔｅｒｓ、ＨＰＬＣ装置：Ｗａｔｅｒｓ；Ｗａｔｅｒｓ Ｘ－Ｂｒｉｄｇｅ Ｃ１８カラム、１９ｍｍ×５０ｍｍ、５μｍ、溶離液Ａ：水＋０．０５％アンモニア、溶離液Ｂ：アセトニトリル（ＵＬＣ）、勾配；流量：４０ｍＬ／分；ＵＶ検出：ＤＡＤ；２１０－４００ｎｍ。
又は
ＭＳ装置：Ｗａｔｅｒｓ、ＨＰＬＣ装置：Ｗａｔｅｒｓ；Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ Ｃ１８（２）１００Ａカラム、ＡＸＩＡ Ｔｅｃｈ． ５０×２１．２ｍｍ、溶離液Ａ：水＋０．０５％ギ酸、溶離液Ｂ：アセトニトリル（ＵＬＣ）勾配；流量：４０ｍＬ／分；ＵＶ検出：ＤＡＤ；２１０－４００ｎｍ。
方法１０：実施例１８１から１９１についてのＬＣ－ＭＳ分析法（ＬＩＮＤ＿ＳＱＤ＿ＳＢ＿ＡＱ）
装置ＭＳ：Ｗａｔｅｒｓ ＳＱＤ；装置ＨＰＬＣ：Ｗａｔｅｒｓ ＵＰＬＣ；カラム：Ｚｏｒｔｅｘ ＳＢ－Ａｑ（Ａｇｉｌｅｎｔ）、５０ｍｍ×２．１ｍｍ、１．８μｍ；溶離液Ａ：水＋０．０２５％ギ酸、溶離液Ｂ：アセトニトリル（ＵＬＣ）＋０．０２５％ギ酸；勾配：０．０分９８％Ａ－０．９分２５％Ａ－１．０分５％Ａ－１．４分５％Ａ－１．４１分９８％Ａ－１．５分９８％Ａ；オーブン：４０℃；流量：０．６００ｍＬ／分；ＵＶ検出：ＤＡＤ；２１０ｎｍ。
方法１１（ＨＰＬＣ）：
装置：ＨＰ１１００シリーズ
カラム：Ｍｅｒｃｋ Ｃｈｒｏｍｏｌｉｔｈ ＳｐｅｅｄＲＯＤ ＲＰ－１８ｅ、５０－４．６ｍｍ、カタログ番号１．５１４５０．０００１、Ｃｈｒｏｍｏｌｉｔｈ Ｇｕａｒｄカートリッジキットプレカラム、ＲＰ－１８ｅ、５－４．６ｍｍ、カタログ番号１．５１４７０．０００１
勾配：流量５ｍＬ／分
注入容量５μＬ
溶媒Ａ：ＨＣｌＯ４（７０％）／水（４ｍＬ／Ｌ）
溶媒Ｂ：アセトニトリル
開始２０％Ｂ
０．５０分２０％Ｂ
３．００分９０％Ｂ
３．５０分９０％Ｂ
３．５１分２０％Ｂ
４．００分２０％Ｂ
カラム温度：４０℃
波長：２１０ｎｍ。
方法１２：（ＬＣ－ＭＳ）：
ＭＳ装置型：Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＦＴ－ＭＳ；ＵＨＰＬＣ＋装置型Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＵｌｔｉＭａｔｅ ３０００；カラム：Ｗａｔｅｒｓ、ＨＳＳＴ３、２．１×７５ｍｍ、Ｃ１８ １．８μｍ；溶離液Ａ：水１リットル＋０．０１％ギ酸；溶離液Ｂ：アセトニトリル１リットル＋０．０１％ギ酸；勾配：０．０分１０％Ｂ→２．５分９５％Ｂ→３．５分９５％Ｂ；オーブン５０℃；流量０．９０ｍＬ／分；ＵＶ検出２１０ｎｍ／最適積分経路２１０－３００ｎｍ。
方法１３：（ＬＣ－ＭＳ）
ＭＳ装置：Ｗａｔｅｒｓ （Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ） Ｑｕａｔｔｒｏ Ｍｉｃｒｏ；装置Ｗａｔｅｒｓ ＵＰＬＣ Ａｃｑｕｉｔｙ；カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＢＥＨＣ１８ １．７μ ５０×２．１ｍｍ；溶離液Ａ：水１リットル＋０．０１ｍｏｌギ酸アンモニウム、溶離液Ｂ：アセトニトリル１；勾配：０．０分９５％Ａ→０．１分９５％Ａ→２．０分１５％Ａ→２．５分１５％Ａ→２．５１分１０％Ａ→３．０分１０％Ａ；オーブン：４０℃；流量：０．５ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
以下において製造が明瞭に記載されていない全ての反応物又は試薬は、一般に利用可能な提供元から商業的に購入したものである。製造が同様に以下において記載されておらず、商業的に入手できなかったか、通常は使えない供給元から得た他の全ての反応物又は試薬については、それらの製造が記載されている刊行文献を挙げてある。
方法１４：（ＬＣ－ＭＳ）（ＭＣＷ－ＬＴＱ－ＰＯＲＯＳＨＥＬＬ－ＴＦＡ９８－１０分）
ＭＳ装置型：ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＬＴＱ－Ｏｒｂｉｔｒａｐ－ＸＬ；ＨＰＬＣ装置型：Ａｇｉｌｅｎｔ １２００ＳＬ；カラム：Ａｇｉｌｅｎｔ、ＰＯＲＯＳＨＥＬＬ １２０、３×１５０ｍｍ、ＳＢ－Ｃ１８ ２．７μｍ；溶離液Ａ：水＋０．１％トリフルオロ酢酸１リットル；溶離液Ｂ：アセトニトリル＋０．１％トリフルオロ酢酸１リットル；勾配：０．０分２％Ｂ→０．３分２％Ｂ→５．０分９５％Ｂ→１０．０分９５％Ｂ；オーブン：４０℃；流量：０．７５ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
原料化合物及び中間体：
本発明による化合物の製造及び好適な中間体の製造に好適な原料化合物については、ＷＯ２０１５／９６９８２Ａ１で既報である。
ＷＯ２０１５／９６９８２Ａ１による中間体Ｃ１～Ｃ７３、Ｌ１～Ｌ７３、Ｆ１～Ｆ５８及びＦ８２～Ｆ９１、Ｆ１０３～Ｆ１２９、Ｆ１４２～Ｆ１５６、Ｆ１６３～Ｆ１８０、Ｆ１９２～Ｆ１９６、Ｆ２０４～Ｆ２０７、Ｆ２０９～Ｆ２１８、Ｆ２３５、Ｆ２３６、Ｆ２３８、Ｆ２４１～Ｆ２４５、Ｆ２４７、Ｆ２４８及びＦ２５４は、本願の開示の一部を形成している。以降、特定の番号を有する化合物への言及がある場合（例えば中間体Ｃ１、Ｌ１又はＦ１）、それは、ＷＯ２０１５／９６９８２Ａ１によるこれらの番号を有する化合物を意味する。以下、さらなる原料化合物及び中間体について説明する。
中間体Ｃ７４
トリフルオロ酢酸２－（トリメチルシリル）エチル３－アミノ－Ｎ－［（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－２－（｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタノイル］－Ｄ－アラニネート（１：１）
Figure 0007251981000247
中間体Ｃ５８ ７５ｍｇ（０．１１４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ １２．５ｍＬに取り、ＨＡＴＵ ６５ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン７９μＬの存在下に中間体Ｌ７５ ７８ｍｇ（０．１７１ｍｍｏｌ）とカップリングさせた。分取ＨＰＬＣによる精製後に、中間体をエタノール２０ｍＬに取り、１０％パラジウム／活性炭により室温で水素標準圧下に１時間水素化した。触媒を濾去し、溶媒を減圧下に除去し、生成物を分取ＨＰＬＣによって精製した。アセトニトリル／水１：１からの凍結乾燥によって、標題化合物６３ｍｇ（２段階で理論値の６４％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１６分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８４４［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ７５
メチル（２Ｓ）－４－［（アセトキシアセチル）｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝アミノ］－２－（｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタノエート
Figure 0007251981000248
中間体Ｃ５２ ４．３ｇ（１２．２ｍｍｏｌ）をＤＣＭ ５２５ｍＬに溶かし、水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム３．６３ｇ（１７．１２ｍｍｏｌ）及び酢酸８．４ｍＬを加えた。室温で５分間撹拌後、ＤＣＭ １７５ｍＬに溶かしたメチル（２Ｓ）－４－オキソ－２－（｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタノエート（従来法によって（３Ｓ）－３－アミノ－４－メトキシ－４－オキソブタン酸から製造）３．２３ｇ（１１．８５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温でさらに４５分間撹拌した。混合物をＤＣＭで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液１００ｍＬで２回抽出し、次に飽和塩化ナトリウム溶液で抽出した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせ、濃縮し、残留物を高真空乾燥して、中間体４．６ｇ（理論値の６１８４％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．９７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６１４．３２（Ｍ＋Ｈ）＋。
この中間体２００ｍｇ（０．３３ｍｍｏｌ）をＤＣＭ １０ｍＬに溶かし、トリエチルアミン１０５μＬ及びアセトキシアセチルクロライド７７μＬ（０．７１７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で終夜撹拌し、減圧下に濃縮した。残留物を酢酸エチルに取り、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で２回、次に飽和塩化ナトリウム溶液で抽出した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、濃縮した。これによって、標題化合物２１３ｍｇ（７５％）をベージュ泡状物として得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７１４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ７６
Ｎ－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｌ－バリル－Ｎ－｛（１Ｓ）－３－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－カルボキシプロピル｝－Ｌ－アラニンアミド
Figure 0007251981000249
ペプチド化学の従来法に従って（塩化亜鉛によるＴｅｏｃ保護基の除去、ＨＡＴＵの存在下でのＮ－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｌ－バリル－Ｌ－アラニンによるアシル化、及びＴＨＦ／水中での水酸化リチウムによるエステル開裂）、標題化合物を中間体Ｃ７５から製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８１８（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ７７
Ｓ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル）－Ｎ－（４－ｔｅｒｔ－ブトキシ－４－オキソブタノイル）－Ｌ－システイン
Figure 0007251981000250
最初に４－ｔｅｒｔ－ブトキシ－４－オキソブタン酸（８．３９ｍｇ、４８．１μｍｏｌ）を、ＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、１－ヒドロキシ－１Ｈ－ベンゾトリアゾール水和物７．３７ｍｇ（４８．１μｍｏｌ）、（ベンゾトリアゾール－１－イルオキシ）ビスジメチルアミノメチリウムフルオロボレート１５．５ｍｇ（（４８．１μｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン８．６０μＬ（４８．１μｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１０分間撹拌した。最初にＳ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル）－Ｌ－システイントリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｃ７１）４０．０ｍｇ（０．０４８ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン２５．４μＬ（１４１．９μｍｏｌ）を加え、混合物を反応液に加え、反応混合物を室温で４時間撹拌した。反応混合物を、によって直接精製し分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物３５．０ｍｇ（理論値の８３％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝２．７６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８７３［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ７８
１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラペンタデカン－１５－酸
Figure 0007251981000251
最初に２－（トリメチルシリル）エチル［３－（｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝アミノ）プロピル］カーバメート（中間体Ｃ１１の合成を参照）１９７ｍｇ（０．３５４ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン５．０ｍＬに入れ、混合物を加熱して４０℃とした。この温度で、ピリジン２４０μＬ（３．０ｍｍｏｌ）及び４－クロロ－４－オキソブタン酸メチル２２０μＬ（１．８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。ピリジン２４０μＬ（３．０ｍｍｏｌ）及び４－クロロ－４－オキソブタン酸メチル２２０μＬ（１．８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。ピリジン２４０μＬ（３．０ｍｍｏｌ）及び４－クロロ－４－オキソブタン酸メチル２２０μＬ（１．８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、有機相を各場合で、５％ＫＨＳＯ４溶液で３回抽出した。有機相を飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。溶媒を減圧下に留去した。残留物を分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、メチル１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラペンタデカン－１５－オエート７４．１ｍｇ（理論値の３１％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６７０［Ｍ＋Ｈ］＋。
メチル１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラペンタデカン－１５－オエート７８．３ｍｇ（１１７μｍｏｌ）を最初に、ＴＨＦ ４．０ｍＬに入れ、メタノール８００μＬ、水１６０μＬ及びＬｉＯＨ水溶液（１Ｍ）２３０μＬ（２３０μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌し、酢酸で反応停止し、分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物６４．８ｍｇ（理論値の８５％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝２．６１分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝６５４［Ｍ－Ｈ］－。
中間体Ｃ７９
トリフルオロ酢酸／２－（トリメチルシリル）エチル３－アミノ－Ｎ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２，１７－トリオキソ－５－オキサ－１４－チア－７，１１－ジアザ－２－シラヘプタデカン－１７－イル）－Ｄ－アラニネート（１：１）
Figure 0007251981000252
最初に１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－１４－チア－７，１１－ジアザ－２－シラヘプタデカン－１７－オン酸（中間体Ｃ６９）５７．４ｍｇ（８１．８μｍｏｌ）を、ＤＭＦ ５．７ｍＬに入れ、トリフルオロ酢酸２－（トリメチルシリル）エチル３－｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝－Ｄ－アラニネート（１：１）（中間体Ｌ７５）７４．０ｍｇ（１６４μｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン４３μＬ（２５０μｍｏｌ）及びＨＡＴＵ ６２．２ｍｇ（１６４μｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を室温で１時間撹拌し、酢酸で反応停止し、分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２－（トリメチルシリル）エチルＮ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２，１７－トリオキソ－５－オキサ－１４－チア－７，１１－ジアザ－２－シラヘプタデカン－１７－イル）－３－｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝－Ｄ－アラニネート５２．４ｍｇ（理論値の６３％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．６４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２２［Ｍ］＋。
アルゴン下に、最初に酢酸パラジウム（ＩＩ）６．２３ｍｇ（２７．７μｍｏｌ）を、ジクロロメタン３．０ｍＬに入れ、トリエチルアミン１２μＬ（８３μｍｏｌ）及びトリエチルシラン８９μＬ（５５０μｍｏｌ）を加え、混合物を５分間撹拌した。ジクロロメタン３．０ｍＬ中の２－（トリメチルシリル）エチルＮ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２，１７－トリオキソ－５－オキサ－１４－チア－７，１１－ジアザ－２－シラヘプタデカン－１７－イル）－３－｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝－Ｄ－アラニネート５６．７ｍｇ（５５．５μｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。混合物を濃縮してほぼ乾固させ、アセトニトリル／水を加え、混合物を濾過し、分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物３７．４ｍｇ（理論値の６７％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１２）：）：Ｒｔ＝２．１５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８８８［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ８０
Ｓ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル）－Ｎ－［１５－（グリシルアミノ）－４，７，１０，１３－テトラオキサペンタデカン－１－オイル］－Ｌ－システイントリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000253
アルゴン下に、最初に１－（｛Ｎ－［（ベンジルオキシ）カルボニル］グリシル｝アミノ）－３，６，９，１２－テトラオキサペンタデカン－１５－オン酸（中間体Ｌ９０）４３．４ｍｇ（９５．１μｍｏｌ）を、ＤＭＦ ２．５ｍＬに入れ、１－ヒドロキシ－１Ｈ－ベンゾトリアゾール水和物１４．６ｍｇ（９５．１μｍｏｌ）、（ベンゾトリアゾール－１－イルオキシ）ビスジメチルアミノメチリウムフルオロボレート３０．５ｍｇ（９５．１μｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン１６．５μＬ（９５．１μｍｏｌ）を加え、混合物を１０分間撹拌した。Ｓ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル）－Ｌ－システイントリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｃ７１）７９．０ｍｇ（９５．１μｍｏｌ）を、ＤＭＦ ２．５ｍＬに溶かし、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン４９．５μＬ（２８５．３μｍｏｌ）を加え、混合物を反応液に加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌し、分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｓ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル）－Ｎ－［１５－（｛Ｎ－［（ベンジルオキシ）カルボニル］グリシル｝アミノ）－４，７，１０，１３－テトラオキサペンタデカン－１－オイル］－Ｌ－システイン４４．２ｍｇ（理論値の４０％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝２．５７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１５６［Ｍ＋Ｈ］＋。
Ｓ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル）－Ｎ－［１５－（｛Ｎ－［（ベンジルオキシ）カルボニル］グリシル｝アミノ）－４，７，１０，１３－テトラオキサペンタデカン－１－オイル］－Ｌ－システイン６０．２ｍｇ（５２．１μｍｏｌ）をエタノール３．０ｍＬに懸濁させ、パラジウム／活性炭（１０％）６．０ｍｇを加え、混合物を水素で室温及び標準圧で１時間水素化した。２回、パラジウム／活性炭（１０％）６．０ｍｇを加え、混合物を水素で室温及び標準圧で１時間水素化した。触媒を濾去し、反応混合物から減圧下に溶媒を除去し、真空乾燥した。残留物を分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物２９．４ｍｇ（理論値の５０％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝３．７７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２１［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ８１
（Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－１－シクロヘキシルメタンアミン
Figure 0007251981000254
アルゴン下に－７８℃で、シクロヘキシルマグネシウムクロライド／ジエチルエーテル（２Ｍ）１８．７ｍＬ（３７．４５ｍｍｏｌ）をジメチル亜鉛３．１２ｍＬ（６．２４ｍｍｏｌ）のトルエン中溶液（２．０Ｍ）に加え、混合物を－７８℃で３０分間撹拌した。（Ｒ）－Ｎ－｛（Ｅ／Ｚ）－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］メチレン｝－２－メチルプロパン－２－スルフィンアミド５．０ｇ（１２．４８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ中溶液を－７８℃で加え、反応混合物をこの温度で１時間撹拌し、次に室温で４時間撹拌した。－７８℃で、飽和塩化アンモニウム溶液ｍＬを加え、反応混合物を昇温させて室温とした。混合物を酢酸エチルで希釈し、水で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、Ｂｉｏｔａｇｅ Ｉｓｏｌｅｒａ（シリカゲル、酢酸エチル／シクロヘキサン２５：７５）を用いて精製した。これによって、中間体１．５９ｇ（理論値の２６％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝２．７６分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝４８３［Ｍ－Ｈ］－。
アルゴン下に、最初にこの中間体２６４．０ｍｇ（０．５４ｍｍｏｌ）を、１，４－ジオキサン０．５ｍＬに入れ、ＨＣｌ／１，４－ジオキサン溶液（４．０Ｍ）１．３６ｍＬを加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。ジクロロメタンを加え、反応混合物を１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、Ｂｉｏｔａｇｅ Ｉｓｏｌｅｒａ（シリカゲル、メタノール／ジクロロメタン９８：２）を用いて精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物をジクロロメタンに溶解させ、炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１４８ｍｇ（理論値の７２％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１３）：Ｒｔ＝２．０７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３６４［Ｍ－ＮＨ２］＋。
中間体Ｃ８２
２－（トリメチルシリル）エチル（３－｛［（Ｒ）－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］（シクロヘキシル）メチル］アミノ｝プロピル）カーバメート
Figure 0007251981000255
アルゴン下に、水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム３９２．２ｍｇ（１．８５ｍｍｏｌ）及び酢酸９１．２９ｍｇ（１．５２ｍｍｏｌ）を、１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－１－シクロヘキシルメタンアミン（中間体Ｃ８１）５０３．０ｍｇ（１．３２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１．４ｍＬ）中溶液に加え、反応混合物を室温で１０分間撹拌した。２－（トリメチルシリル）エチル（３－オキソプロピル）カーバメート５７４．６（２．３８ｍｍｏｌ）のジクロロメタン中溶液を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。２－（トリメチルシリル）エチル（３－オキソプロピル）カーバメート１４３ｍｇ（０．６６ｍｍｏｌ）を加えた後、混合物をさらに２時間撹拌した。反応混合物をジクロロメタンで希釈し、有機相を、飽和炭酸ナトリウム溶液で及び飽和ＮａＣｌ溶液で各場合で２回洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物 ｇ（理論値の５０％）を得た。これによって、標題化合物４８８ｇ（理論値の６３％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５８２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ８３
２－（トリメチルシリル）エチル（３－｛［（Ｒ）－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］（シクロヘキシル）メチル］（クロロアセチル）アミノ｝プロピル）カーバメート
Figure 0007251981000256
トリエチルアミン２８０．０ｍｇ（２．７７ｍｍｏｌ）及びクロロアセチルクロライド３９７．８ｍｇ（３．５２ｍｍｏｌ）を、４Åモレキュラーシーブスを加えた２－（トリメチルシリル）エチル（３－｛［（Ｒ）－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］（シクロヘキシル）メチル］アミノ｝プロピル）カーバメート（中間体Ｃ８２）４８７．９ｍｇ（０．８４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（８．４０ｍＬ）中溶液に加え、反応混合物を室温で６時間撹拌した。反応混合物をジクロロメタンで希釈し、有機相を飽和炭酸水素ナトリウム溶液及び飽和塩化アンモニウム溶液で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物４７０ｍｇ（理論値の８５％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝２．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６８０（Ｍ＋Ｎａ）＋。
中間体Ｃ８４
Ｓ－｛１１－［（Ｒ）－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］（シクロヘキシル）メチル］－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル｝－Ｌ－システイン
Figure 0007251981000257
Ｌ－システイン３２２．１ｍｇ（２．６６ｍｍｏｌ）を水０．１９ｍＬと炭酸水素ナトリウム３１９．０ｍｇ（３．８０ｍｍｏｌ）に懸濁させた。イソプロパノール１．９０ｍＬに溶かした２－（トリメチルシリル）エチル（３－｛［（Ｒ）－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］（シクロヘキシル）メチル］（クロロアセチル）アミノ｝プロピル）カーバメート（中間体Ｃ８３）２５０．０ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）及び１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン６９３．８ｇ（４．５６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で３．５時間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を飽和炭酸水素ナトリウム溶液で繰り返し洗浄し、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物２７６ｍｇ（理論値の９７％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝２．３４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７４４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ８５
Ｓ－｛１１－［（Ｒ）－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］（シクロヘキシル）メチル］－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル｝－Ｎ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］－Ｌ－システイン
Figure 0007251981000258
Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン３４．８ｍｇ（０．２７ｍｍｏｌ）をＳ－｛１１－［（Ｒ）－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］（シクロヘキシル）メチル］－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル｝－Ｌ－システイン（１：１）（中間体Ｃ８４）１００ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ）及び１－｛６－［（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ］－６－オキソヘキシル｝－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオン４１．５ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４．０ｍＬ）中混合物に加え、反応混合物を室温で３時間撹拌した。後処理せずに、混合物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物８８ｍｇ（理論値の７０％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝２．７１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９３６（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ８６
１１－［（Ｒ）－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］（シクロヘキシル）メチル］－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－１４－チア－７，１１－ジアザ－２－シラヘプタデカン－１７－オン酸
Figure 0007251981000259
炭酸カリウム１６１．６５ｍｇ（１．１７ｍｍｏｌ）を、２－（トリメチルシリル）エチル（３－｛［（Ｒ）－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］（シクロヘキシル）メチル］（クロロアセチル）アミノ｝プロピル）カーバメート（中間体Ｃ８３）２２０．０ｍｇ（０．３３ｍｍｏｌ）及び３－スルファニルプロパン酸３９．０２ｍｇ（０．３７ｍｍｏｌ）のメタノール（７．４５ｍＬ）中混合物及び数滴の水に加えた。反応混合物を５０℃で４時間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を水及び飽和ＮａＣｌ溶液で繰り返し洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、それ以上後処理せずに用いた。これによって、標題化合物２０１ｍｇ（理論値の８３％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝２．７２分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝７２６（Ｍ－Ｈ）－。
中間体Ｃ８７
２－（トリメチルシリル）エチル｛１３－［（Ｒ）－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］（シクロヘキシル）メチル］－１－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２，７，１２－トリオキソ－１０－チア－３，６，１３－トリアザヘキサデカン－１６－イル｝カーバメート
Figure 0007251981000260
ＤＭＦ中のＮ－（２－アミノエチル）－２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセトアミド（中間体Ｌ１）５４．１８ｍｇ（０．２８ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン７１．０１ｍｇ（０．５０ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ １０４．４６ｍｇ（０．２７ｍｍｏｌ）及び１－ヒドロキシ－７－アザベンゾトリアゾール０．２３ｍＬ（０．１４ｍｍｏｌ）０．５Ｍを、１１－［（Ｒ）－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］（シクロヘキシル）メチル］－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－１４－チア－７，１１－ジアザ－２－シラヘプタデカン－１７－オン酸（中間体Ｃ８６）１００ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１．３７ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で５時間撹拌した。それ以上後処理せずに、混合物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物４１ｍｇ（理論値の３３％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝２．６１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９０７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ８８
ｔｅｒｔ－ブチル３－［（｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝アミノ）メチル］ピロリジン－１－カルボキシレート・トリフルオロ酢酸（１：１）
立体異性体の混合物
Figure 0007251981000261
水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム１．７１ｇ（８．０５ｍｍｏｌ）及び酢酸０．４０ｇ（６．６１ｍｍｏｌ）を、（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロパン－１－アミン（中間体Ｃ５２）２．０４ｇ（５．７５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５１ｍＬ）中溶液に加え、反応混合物を室温で５分間撹拌した。３－ホルミルピロリジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル１．３２ｇ（６．６１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２０ｍＬ）中溶液を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、有機相を各場合で、飽和炭酸ナトリウム溶液で２回及び飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１．８６ｇ（理論値の５０％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５３８（Ｍ＋Ｈ－ＣＦ３ＣＯ２Ｈ）＋。
中間体Ｃ８９
ｔｅｒｔ－ブチル３－｛［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］メチル｝ピロリジン－１－カルボキシレート
Figure 0007251981000262
トリエチルアミン１．３６ｇ（１３．４２ｍｍｏｌ）及びクロロアセチルクロライド２．１３ｇ（１８．８７ｍｍｏｌ）を、４Åモレキュラーシーブスを入れたｔｅｒｔ－ブチル３－［（｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝アミノ）メチル］ピロリジン－１－カルボキシレート（中間体Ｃ８８）２．８９ｇ（４．１９ｍｍｏｌ、純度８０％）の（４２ｍＬ）ジクロロメタン中溶液に加えた。反応混合物を室温で５時間撹拌した。混合物をロータリーエバポレータによって濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物の異性体１ ４４９ｍｇ（理論値の１７％）及び異性体２ ４４２ｍｇ（理論値の１７％）を得た。
異性体１ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝２．７４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６１４（Ｍ＋Ｈ）＋。
異性体２ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝２．７８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６１４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ９０
Ｓ－［２－（｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝｛［１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）ピロリジン－３－イル］メチル｝アミノ）－２－オキソエチル］－Ｌ－システイン（異性体１）
Figure 0007251981000263
Ｌ－システイン３５７．３ｍｇ（０．５８ｍｍｏｌ）を、炭酸水素ナトリウム４８８．７ｍｇ（４．０７ｍｍｏｌ）を含む水２．３ｍＬに懸濁させた。イソ－プロパノール２３．０ｍＬに溶かしたｔｅｒｔ－ブチル３－｛［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］メチル｝ピロリジン－１－カルボキシレート（中間体Ｃ８９、異性体１）３５７．０ｍｇ（０．５８ｍｍｏｌ）及び１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン１．０６ｇ（６．９８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を飽和炭酸水素ナトリウム溶液で繰り返し洗浄し、飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物２５５．０ｍｇ（理論値の６２％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６９９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ９１
Ｓ－［２－（｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝｛［１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）ピロリジン－３－イル］メチル｝アミノ）－２－オキソエチル］－Ｌ－システイン（異性体２）
Figure 0007251981000264
Ｌ－システイン４５３．５ｍｇ（３．７４ｍｍｏｌ）を、炭酸水素ナトリウム４４９．２ｍｇ（５．３５ｍｍｏｌ）を含む水２．１ｍＬに懸濁させた。イソプロパノール２１．１ｍＬに溶かしたｔｅｒｔ－ブチル３－｛［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］メチル｝ピロリジン－１－カルボキシレート（中間体Ｃ８９、異性体２）３２８７．４ｍｇ（０．５４ｍｍｏｌ）及び１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン０．９８ｇ（６．４２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を飽和炭酸水素ナトリウム溶液で繰り返し洗浄し、飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物２２１．０ｍｇ（理論値の５９％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６９９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ９２
Ｓ－［２－（｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝｛［１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）ピロリジン－３－イル］メチル｝アミノ）－２－オキソエチル］－Ｎ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］－Ｌ－システイン（異性体１）
Figure 0007251981000265
Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン１８．４９ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）を、Ｓ－［２－（｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝｛［１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）ピロリジン－３－イル］メチル｝アミノ）－２－オキソエチル］－Ｌ－システイン（中間体Ｃ９０）５０ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）及び１－｛６－［（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ］－６－オキソヘキシル｝－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオン２２．０６ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３．３ｍＬ）中混合物に加え、反応混合物を室温で４５分間撹拌した。後処理せずに、混合物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物６５ｍｇ（理論値の１００％、純度７１％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８９２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ９３
Ｓ－［２－（｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝｛［１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）ピロリジン－３－イル］メチル｝アミノ）－２－オキソエチル］－Ｎ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］－Ｌ－システイン（異性体２）
Figure 0007251981000266
Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン１８．４９ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）を、Ｓ－［２－（｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝｛［１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）ピロリジン－３－イル］メチル｝アミノ）－２－オキソエチル］－Ｌ－システイン（中間体Ｃ９１）５０．０ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）及び１－｛６－［（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ］－６－オキソヘキシル｝－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオン２２．０６ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３．０ｍＬ）中混合物に加え、反応混合物を室温で９０分間撹拌した。後処理せずに、混合物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物６３ｍｇ（理論値の９８％、純度７３％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８９２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ９４
Ｓ－［２－（｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝｛［１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）ピロリジン－３－イル］メチル｝アミノ）－２－オキソエチル］－Ｎ－［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］－Ｌ－システイン（異性体１）
Figure 0007251981000267
Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン１８．５ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）を、Ｓ－［２－（｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝｛［－１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）ピロリジン－３－イル］メチル｝アミノ）－２－オキソエチル］－Ｌ－システイン（中間体Ｃ９０）５０．０ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）及び－｛２－［（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ］－２－オキソエチル｝－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオン１８．０ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３．３ｍＬ）中混合物に加え、反応混合物を室温で３０分間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液で繰り返し洗浄し、飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物５７ｍｇ（理論値の８１％、純度８５％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３６（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ９５
３－｛［２－（｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝｛［１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）ピロリジン－３－イル］メチル｝アミノ）－２－オキソエチル］スルファニル｝プロパン酸（異性体１）
Figure 0007251981000268
炭酸カリウム３０２．５ｍｇ（２．１９ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ－ブチル３－｛［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］メチル｝ピロリジン－１－カルボキシレート（中間体Ｃ８９、異性体１）３８４．０ｍｇ（０．６２ｍｍｏｌ）及び３－スルファニルプロパン酸７３．０ｍｇ（０．６９ｍｍｏｌ）のメタノール（１４ｍＬ）及び水数滴中混合物に加えた。反応混合物を５０℃で２．５時間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を水で繰り返し洗浄し、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。残留物を、それ以上後処理せずに用いた。これによって、標題化合物３５８．０ｍｇ（理論値の８４％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６８４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ９６
３－｛［２－（｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝｛［１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）ピロリジン－３－イル］メチル｝アミノ）－２－オキソエチル］スルファニル｝プロパン酸（異性体２）
Figure 0007251981000269
炭酸カリウム２２６．０ｍｇ（１．６４ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ－ブチル３－｛［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］メチル｝ピロリジン－１－カルボキシレート（中間体Ｃ８９、異性体２）２８７．０ｍｇ（０．４５ｍｍｏｌ）及び３－スルファニルプロパン酸５４．６ｍｇ（０．５１ｍｍｏｌ）のメタノール（１４ｍＬ）及び水数滴中混合物に加えた。反応混合物を５０℃で２．５時間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を水で繰り返し洗浄し、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。残留物を、それ以上後処理せずに用いた。これによって、標題化合物３１８．７ｍｇ（理論値の８８％、純度８８％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６８４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ９７
ｔｅｒｔ－ブチル３－［２－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－１４－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－３，８，１３－トリオキソ－５－チア－２，９，１２－トリアザテトラデカ－１－イル］ピロリジン－１－カルボキシレート（異性体２）
Figure 0007251981000270
アルゴン下に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン１４．１７ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ ２７．８０ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）を、３－｛［２－（｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝｛［１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）ピロリジン－３－イル］メチル｝アミノ）－２－オキソエチル］スルファニル｝プロパン酸（中間体Ｃ９６）２５．０ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２．８１ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。Ｎ－（２－アミノエチル）－２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセトアミド－エタン（１：１）トリフルオロ酢酸（中間体Ｌ１）２２．７５ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１．４ｍＬ）中溶液及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン５ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。混合物を水と混合し、ジクロロメタンで抽出した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、それ以上後処理せずに用いた。これによって、標題化合物２６ｍｇ（理論値の８４％）を得た。ＬＣ－ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝４．３９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８６３（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ９８
ｔｅｒｔ－ブチル３－［２－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－１８－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－３，８，１３－トリオキソ－５－チア－２，９，１２－トリアザオクタデカ－１－イル］ピロリジン－１－カルボキシレート（異性体２）
Figure 0007251981000271
アルゴン下に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン１４．１７ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ ２７．８０ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）を、３－｛［２－（｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝｛［１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）ピロリジン－３－イル］メチル｝アミノ）－２－オキソエチル］スルファニル｝プロパン酸（中間体Ｃ９６）２５．０ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２．８１ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。Ｎ－（２－アミノエチル）－６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド－エタン（１：１）トリフルオロ酢酸３７．３０ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１．４ｍＬ）中溶液及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン５ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。水を加え、混合物をジクロロメタンで抽出した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物２２ｍｇ（理論値の６３％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝４．５４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９１９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ９９
ｔｅｒｔ－ブチル３－［２－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２４－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－３，８，１９－トリオキソ－１２，１５－ジオキサ－５－チア－２，９，１８－トリアザテトラコサ－１－イル］ピロリジン－１－カルボキシレート（異性体２）
Figure 0007251981000272
アルゴン下に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン１４．１７ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ ２７．８０ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）を、３－｛［２－（｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝｛［１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）ピロリジン－３－イル］メチル｝アミノ）－２－オキソエチル］スルファニル｝プロパン酸（中間体Ｃ９６）２５．０ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２．８１ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。Ｎ－｛２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］エチル｝－６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド－エタン（１：１）トリフルオロ酢酸（中間体Ｌ８２）３５．０５ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１．４ｍＬ）中溶液及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン５ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。水を加え、混合物をジクロロメタンで抽出した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物２５ｍｇ（理論値の６０％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝４．５２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１００７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ１００
２－（トリメチルシリル）エチル｛（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－［（２－｛［（２Ｒ）－２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）プロパノイル］アミノ｝エチル）アミノ］－１－オキソブタン－２－イル｝カーバメート
Figure 0007251981000273
（２Ｒ）－Ｎ－（２－アミノエチル）－２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）プロパンアミド（１：１）トリフルオロ酢酸２２．２ｍｇ（０．０６８ｍｍｏｌ）を、（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－２－（｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタン酸（中間体Ｃ５８）４５ｍｇ（０．０６８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５．８ｍＬ）中溶液に加えた。室温で３０分間撹拌後、ＨＡＴＵ ３９ｍｇ（０．１０ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン３６ｍｇ（０．２７ｍｍｏｌ）を前記混合物に加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。後処理せずに、混合物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物７ｍｇ（理論値の１２％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ８５１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ１０１
トリフルオロ酢酸／メチル（２Ｓ）－４－［（アセトキシアセチル）｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝アミノ］－２－アミノブタノエート（１：１）
Figure 0007251981000274
中間体Ｃ５２ ４．３ｇ（１２．２ｍｍｏｌ）をＤＣＭ ５２５ｍＬに溶かし、水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム３．６３ｇ（１７．１２ｍｍｏｌ）及び酢酸８．４ｍＬを加えた。室温で５分間撹拌後、ＤＣＭ １７５ｍＬに溶かしたメチル（２Ｓ）－４－オキソ－２－（｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタノエート（従来法によって（３Ｓ）－３－アミノ－４－メトキシ－４－オキソブタン酸から製造）３．２３ｇ（１１．８５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温でさらに４５分間撹拌した。混合物をＤＣＭで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液１００ｍＬで２回抽出し、次に飽和塩化ナトリウム溶液で抽出した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせ、濃縮し、残留物を高真空乾燥して、中間体４．６ｇ（理論値の６１％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．９７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６１４．３２（Ｍ＋Ｈ）＋。
最初に、この中間体２．０６ｇ（３．３６ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ ７６ｍＬに入れ、トリエチルアミン２．１ｍＬの存在下に２－クロロ－２－オキソ酢酸エチル０．８１ｍＬ（７．１７ｍｍｏｌ）によってアシル化した。室温で２０時間撹拌後、追加の２－クロロ－２－オキソ酢酸エチル０．３６ｍＬ及びトリエチルアミン０．９４ｍＬを加え、混合物を室温でさらに１５分間撹拌した。混合物を酢酸エチル５００ｍＬで希釈し、５％クエン酸３００ｍＬで２回、飽和炭酸水素ナトリウム溶液３００ｍＬで２回、飽和塩化ナトリウム溶液１００ｍＬで１回の順で抽出し、次に硫酸マグネシウムで脱水し、濃縮した。高真空乾燥によって、保護中間体２．１７ｇ（理論値の７９％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７１４（Ｍ＋Ｈ）＋。
この中間体３２１ｍｇ（０．３４２ｍｍｏｌ）を、２，２，２－トリフルオロエタノール７ｍＬに溶かした。塩化亜鉛２７９．５ｍｇ（２．０５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で２時間撹拌した。エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－テトラ酢酸５９９ｍｇ（２．０５ｍｍｏｌ）及び０．１％トリフルオロ酢酸溶液２ｍＬを加え、混合物を次に減圧下に濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮及びアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物６０ｍｇ（理論値の２６％）を得て、それはまだ少量の脱アセチル化化合物を含んでいた。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９１分及び０．９５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５２８及び５７０（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ１０２
（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－２－｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタン酸
Figure 0007251981000275
最初に、中間体Ｃ２と同様にして、中間体Ｃ５２について、ベンジル（２Ｓ）－２－｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝－４－オキソブタノエートによって還元的アルキル化した。次に、２級アミノ基を２－クロロ－２－オキソ酢酸エチルでアシル化し、最後に、二つのエステル基を２Ｍ水酸化リチウム／メタノール溶液で加水分解した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６４６（Ｍ－Ｈ）－。
中間体Ｃ１０３
２－（トリメチルシリル）エチルＮ－［２－（｛（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］－Ｎ２－｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝－Ｌ－グルタミネート
Figure 0007251981000276
最初にＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＤＭＦ中で中間体Ｃ１０２ １５１ｍｇ（０．２３ｍｍｏｌ）を中間体Ｌ９８ １２８ｍｇ（０．２３４ｍｍｏｌ）とカップリングさせることで、標題化合物を製造した。次に、室温で標準水素圧下で３０分間１０％パラジウム／活性炭で水素化することでＺ保護基を除去して、標題化合物を得た。
収量：２段階で理論値の３０％。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９２９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ１０４
２－（トリメチルシリル）エチル（３Ｒ，４Ｒ）－３－［（｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝アミノ）メチル］－４－フルオロピロリジン－１－カルボキシレート
Figure 0007251981000277
（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロパン－１－アミン２．２４ｇ（６．３１ｍｍｏｌ）の４Åモレキュラーシーブスの入ったジクロロメタン（５６．０ｍＬ）中溶液に水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム１．８７ｇ（８．８４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１５分間撹拌した。２－（トリメチルシリル）エチル（３Ｒ，４Ｓ）－３－フルオロ－４－ホルミルピロリジン－１－カルボキシレート（ＷＯ２０１４／１５１０３０Ａ１）２．２０ｇ（７．５８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で３．５時間撹拌した。混合物をジクロロメタンで希釈し、有機相を飽和炭酸水素ナトリウム溶液及び水で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物１．３９ｇ（理論値の２４％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６００（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ１０５
２－（トリメチルシリル）エチル（３Ｒ，４Ｒ）－３－｛［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］メチル｝－４－フルオロピロリジン－１－カルボキシレート
Figure 0007251981000278
２－（トリメチルシリル）エチル（３Ｒ，４Ｒ）－３－［（｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝アミノ）メチル］－４－フルオロピロリジン－１－カルボキシレート（中間体Ｃ１０４）６９２．８ｍｇ（０．８８ｍｍｏｌ）の４Åモレキュラーシーブスを入れたジクロロメタン（８．７ｍＬ）中溶液に、トリエチルアミン２９５．０ｍｇ（２．９１ｍｍｏｌ）及びクロロアセチルクロライド４１８．９ｍｇ（３．７１ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で２．５時間撹拌した。反応混合物をジクロロメタンで希釈し、有機相を飽和炭酸水素ナトリウム溶液及び飽和塩化アンモニウム溶液で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。残留物を再度、４Åモレキュラーシーブスを入れたジクロロメタン８．７ｍＬに溶かし、トリエチルアミン２９５．０ｍｇ（２．９１ｍｍｏｌ）及びクロロアセチルクロライド４１８．９ｍｇ（３．７１ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で３時間撹拌した。反応混合物をジクロロメタンで希釈し、有機相を飽和炭酸水素ナトリウム溶液及び飽和塩化アンモニウム溶液で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮し、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物６９１ｍｇ（理論値の７４％、純度６４％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．７８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６７６（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ１０６
３－｛［２－（｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝｛［（３Ｒ，４Ｒ）－４－フルオロ－１－｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝ピロリジン－３－イル］メチル｝アミノ）－２－オキソエチル］スルファニル｝プロパン酸
Figure 0007251981000279
２－（トリメチルシリル）エチル（３Ｒ，４Ｒ）－３－｛［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］メチル｝－４－フルオロピロリジン－１－カルボキシレート（中間体Ｃ１０５）６９１．０ｍｇ（０．６５ｍｍｏｌ）及び３－スルファニルプロパン酸７６．３ｍｇ（０．７２ｍｍｏｌ）のメタノール（１５ｍＬ）及び水数滴中混合物に、炭酸カリウム３１６ｍｇ（２．２９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１．５時間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を水で繰り返し洗浄し、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。残留物を、それ以上後処理せずに用いた。これによって、標題化合物５０２ｍｇ（理論値の６７％、純度６５％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４８分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝７４４（Ｍ－Ｈ）－。
中間体Ｃ１０７
Ｓ－｛［２－（｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝｛［（３Ｒ，４Ｒ）－４－フルオロ－１－｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝ピロリジン－３－イル］メチル｝アミノ）－２－オキソエチル］－Ｌ－システイン
Figure 0007251981000280
Ｌ－システイン２０３．６ｍｇ（１．６８ｍｍｏｌ）を、炭酸水素ナトリウム２０１．７ｍｇ（２．４０ｍｍｏｌ）とともに水０．９５ｍＬに懸濁させた。それに、イソプロパノール９．５ｍＬに溶かした２－（トリメチルシリル）エチル（３Ｒ，４Ｒ）－３－｛［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］メチル｝－４－フルオロピロリジン－１－カルボキシレート（中間体１０５）１７０．０ｍｇ（０．２４ｍｍｏｌ）及び１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン４３８．５ｍｇ（２．４０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。酢酸エチルを混合物に加え、有機相を飽和炭酸水素ナトリウム溶液で繰り返し及び飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物１５２ｍｇ（理論値の８３％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７６２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ１０８
２－（トリメチルシリル）エチルＮ６－（Ｎ－｛（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝－β－アラニル）－Ｎ２－｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝－Ｌ－リジネート
Figure 0007251981000281
中間体Ｃ１０２ １０３ｍｇ（０．１６ｍｍｏｌ）を、ＥＤＣＩ、ＨＯＢＴ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、ＤＭＦ中、２－（トリメチルシリル）エチルＮ６－β－アラニル－Ｎ２－｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝－Ｌ－リジネート１１０ｍｇ（０．１７５ｍｍｏｌ）とカップリングさせることで標題化合物を製造した。次に、Ｚ保護基を、標準水素圧下で１０％パラジウム／活性炭でのジクロロメタン／メタノール１：１中における水素化によって除去して、標題化合物を、収量１１３ｍｇ（２段階で理論値の７５％）で得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９５７（Ｍ＋Ｈ）＋。
ここで使用した中間体は、ペプチド化学の従来法により、ＨＡＴＵ存在下での市販のＮ－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－β－アラニン及び２－（トリメチルシリル）エチルＮ２－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｌ－リジネートのカップリング、Ｚ保護基の水素分解的脱離、１－（｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝オキシ）ピロリジン－２，５－ジオンによるトリメチルシリルエチルオキシカルボニル（Ｔｅｏｃ）保護基の導入、及び最後に７．５％トリフルオロ酢酸のジクロロメタン中溶液中にて４５分間撹拌することによるＢｏｃ保護基の温和な脱離によって製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４６２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ１０９
ジ－ｔｅｒｔ－ブチルＮ－｛（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝－β－アラニル－Ｌ－グルタメート
Figure 0007251981000282
最初に、ペプチド化学の従来の方法により、ＨＡＴＵの存在下での市販のＮ－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－β－アラニン及びジ－ｔｅｒｔ－ブチルＬ－グルタメート塩酸塩（１：１）のカップリング及び次にＺ保護基の水素分解的脱離によって、ジペプチド誘導体ジ－ｔｅｒｔ－ブチルβ－アラニル－Ｌ－グルタメート製造した。次に、ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下でのこの中間体と中間体Ｃ１０２とのカップリングと、次に室温で標準水素圧下での４５分間にわたるメタノール中１０％パラジウム／活性体での水素化によるＺ保護基の脱離によって標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８２６［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ１１０
ジベンジルＮ－｛（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝－β－アラニル－Ｌ－グルタメート
Figure 0007251981000283
ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に酢酸エチルと５％炭酸水素ナトリウム溶液との間での分配によってｐ－トルエンスルホン酸塩から事前に放出されたいたジベンジルＬ－グルタメートを中間体Ｃ６１とカップリングさせ、次にトリフルオロエタノール中にて塩化亜鉛でＴｅｏｃ保護基を脱離させることで、標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８９４［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ１１０（Ｄ）
ジベンジルＮ－｛（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝－β－アラニル－Ｄ－グルタメート
Figure 0007251981000284
ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にジベンジルＤ－グルタメート（酢酸エチルと５％炭酸水素ナトリウム溶液との間の分配によってそれのｐ－トルエンスルホン酸塩から事前に放出させておいたもの）を中間体Ｃ６１とカップリングさせ、次に、Ｔｅｏｃ保護基をトリフルオロエタノール中で塩化亜鉛によって外すことで標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８９４［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ１１１
ジ－ｔｅｒｔ－ブチルＮ－｛（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝－β－アラニル－Ｄ－グルタメート
Figure 0007251981000285
中間体Ｃ１０９と同様にして標題化合物を合成した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８２６［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ１１２
Ｎ－アセチル－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｎ１－｛（２Ｓ）－１－［（２－アミノエチル）アミノ］－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－オキソブタン－２－イル｝－Ｌ－アスパルタミド
Figure 0007251981000286
最初に、（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－２－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ］ブタン酸を、ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にベンジル（２－アミノエチル）カーバメート塩酸塩（１：１）にカップリングさせた。或いは、反応物として中間体Ｃ５８を用いることも可能である。次に、５０℃で５時間にわたり４当量の塩化亜鉛／トリフルオロエタノールとともに攪拌することでＢｏｃ保護基の脱離を行った。得られた中間体を、ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｌ１１１にカップリングさせた。最終段階で、室温で水素標準圧下に１時間にわたりＤＣＭ／メタノール１：１中、１０％パラジウム／活性炭で水素化することで標題化合物を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８５４［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ１１３
トリフルオロ酢酸／ベンジルＮ－｛（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝－３－｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝－Ｄ－アラニネート（１：１）
Figure 0007251981000287
最初に、市販の３－｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝－Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｄ－アラニンから出発して、ＥＤＣ／ＤＭＡＰ存在下でのベンジルアルコールによるエステル化、次にトリフルオロ酢酸によるＢｏｃ保護基の脱離によって、トリフルオロ酢酸／ベンジル－３－｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝－Ｄ－アラニネート（１：１）を製造した。次に、このアミノ酸単位を、ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＤＭＦ中にて中間体Ｃ５８にカップリングさせた。最終段階で、６当量の塩化亜鉛とともにトリフルオロエタノール中にて５０℃で２時間撹拌し、分取ＨＰＬＣによる精製を行うことで、標題化合物を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８２４［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ１１４
トリフルオロ酢酸／ｔｅｒｔ－ブチル４－（｛（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）ブタノエート（１：１）
Figure 0007251981000288
最初に、ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、中間体Ｃ１０２をｔｅｒｔ－ブチル４－アミノブタノエート塩酸塩（１：１）にカップリングさせた。次に、ＤＣＭ／メタノール１：１中室温で水素標準圧下で１時間にわたり１０％パラジウム／活性炭で水素化することで、標題化合物を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６５５［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ１１６
トリフルオロ酢酸／Ｎ１－｛（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－［（２－｛［－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］－１－オキソブタン－２－イル｝－Ｌ－アスパルタミド（１：１）
Figure 0007251981000289
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－Ｎ－（２－｛［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］アミノ｝エチル）ブタンアミド（１：１）（８１．０ｍｇ、１００μｍｏｌ）（中間体Ｆ１０４）及び２，５－ジオキソピロリジン－１－イルＮ２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｌ－アスパラギネート（４３．０ｍｇ、１３１μｍｏｌ）をＤＭＦ ５．０ｍＬに溶かした。反応混合物をＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（６１μＬ、３５０μｍｏｌ）とともに室温でさらに１時間撹拌し、次に分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ １２５×３０；１０μ、流量：７５ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を凍結乾燥した。これによって、化合物ｔｅｒｔ－ブチル［（２Ｓ）－４－アミノ－１－（｛（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－［（２－｛［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］－１－オキソブタン－２－イル｝アミノ）－１，４－ジオキソブタン－２－イル］カーバメート８４ｍｇ（理論値の８８％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９０７［Ｍ＋Ｈ］＋。
ｔｅｒｔ－ブチル［（２Ｓ）－４－アミノ－１－（｛（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－［（２－｛［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］－１－オキソブタン－２－イル｝アミノ）－１，４－ジオキソブタン－２－イル］カーバメート（８３．０ｍｇ、９１．５μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール５．０ｍＬに溶かした。反応混合物に塩化亜鉛（７４．８ｍｇ、５４９μｍｏｌ）を混合し、５０℃で１５分間撹拌した。反応混合物にエチレンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－テトラ酢酸（１６０ｍｇ、５４９μｍｏｌ）を混合し、アセトニトリル／水５．０ｍＬで希釈し、ＴＦＡ（２０μＬ）を加え、混合物をさらに１０分間撹拌した。混合物をシリンジフィルターで濾過し、分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ １２５×３０；１０μ、流量：７５ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、標題化合物５０ｍｇ（理論値の５８％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８０７［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ１１７
トリフルオロ酢酸／ジベンジルＮ－［３－（｛２－［（３－アミノプロピル）｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝アミノ］－２－オキソエチル｝スルファニル）プロパノイル］－β－アラニル－Ｌ－グルタメート（１：１）
Figure 0007251981000290
ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にトリフルオロ酢酸／ジベンジルβ－アラニル－Ｌ－グルタメート（１：１）（中間体Ｌ１２７）を１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－１４－チア－７，１１－ジアザ－２－シラヘプタデカン－１７－酸にカップリングさせ、次に、塩化亜鉛／トリフルオロエタノールによるＴｅｏｃ保護基の脱離を行うことで、標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９３８［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ１１８
９Ｈ－フルオレン－９－イルメチル｛３－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］プロピル｝カーバメート
Figure 0007251981000291
最初に、９Ｈ－フルオレン－９－イルメチル［３－（｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝アミノ）プロピル］カーバメート（２．５０ｇ、３．９４ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１．６ｍＬ、１２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン２００ｍＬに入れ、冷却して０℃とした。この温度で、クロロアセチルクロライド（２．２３ｇ、１９．７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で５時間攪拌し、酢酸エチルで希釈した。有機相を飽和炭酸水素ナトリウム溶液及び飽和塩化アンモニウム溶液で３回洗浄した。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。残留物を、それ以上精製せずに、次の合成段階で用いた。これによって、標題化合物１．７ｇ（理論値の６３％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．５２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７１０（Ｍ＋Ｈ＋）＋。
中間体Ｃ１１９
トリフルオロ酢酸／２－（トリメチルシリル）エチルＳ－｛２－［（３－アミノプロピル）｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝アミノ］－２－オキソエチル｝－Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｌ－システイナート（１：１）
Figure 0007251981000292
最初に９Ｈ－フルオレン－９－イルメチル｛３－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］プロピル｝カーバメート（中間体Ｃ１１８）（２０８ｍｇ、２９４μｍｏｌ）及び２－（トリメチルシリル）エチルＮ－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｌ－システイナート（９９．３ｍｇ、３０９μｍｏｌ）（中間体Ｌ１２８）を、ＤＭＦ ５．０ｍＬに入れ、トリエチルアミン１滴を加え、混合物を室温で終夜攪拌した。反応混合物を水（０．１％ＴＦＡ）１．０ｍＬと混合し、分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空乾燥させた。これによって、２－（トリメチルシリル）エチルＳ－｛２－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（３－｛［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝プロピル）アミノ］－２－オキソエチル｝－Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｌ－システイナート２５２ｍｇ（理論値の８６％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．７６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９９５［Ｍ＋Ｈ］＋。
最初に２－（トリメチルシリル）エチルＳ－｛２－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（３－｛［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝プロピル）アミノ］－２－オキソエチル｝－Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｌ－システイナート（６３．１ｍｇ、６３．４μｍｏｌ）をＤＭＦ ２．０ｍＬに入れ、モルホリン２００μＬを加え、混合物を室温で２時間３０分攪拌した。反応混合物を水（０．１％ＴＦＡ）１．０ｍＬと混合し、分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空乾燥させた。これによって、標題化合物５１ｍｇ（理論値の９１％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７７３［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ１２０
Ｎ－｛［２－（２－メトキシエトキシ）エトキシ］アセチル｝－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｎ１－｛（２Ｓ）－１－［（２－アミノエチル）アミノ］－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－オキソブタン－２－イル｝－Ｌ－アスパルタミド
Figure 0007251981000293
カップリングに中間体Ｌ１２９を用い、中間体Ｃ１１２と同様にして、この中間体を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９７２［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ１２１
ジベンジルＮ－｛（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝－β－アラニル－Ｄ－グルタメート
Figure 0007251981000294
ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にジベンジルＤ－グルタメート（酢酸エチルと５％炭酸水素ナトリウム溶液との間で分配することでそれのｐ－トルエンスルホン酸エンから事前に放出させておいたもの）と中間体Ｃ６１とカップリングさせ、次に、塩化亜鉛／トリフルオロエタノールでＴｅｏｃ保護基を外すことで標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８９４［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ１２２
ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［２－（｛（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］－Ｎ２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｄ－α－グルタミネート
Figure 0007251981000295
ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にジベンジルＤ－グルタメート（酢酸エチルと５％炭酸水素ナトリウム溶液との間で分配することでそれのｐ－トルエンスルホン酸エンから事前に放出させておいたもの）を中間体Ｃ６１とカップリングさせ、次に、塩化亜鉛／トリフルオロエタノールでＴｅｏｃ保護基を外すことで、標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８９４［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ１２３
ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［２－（｛（２Ｓ）－２－（Ｌ－アスパラギニルアミノ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］－Ｎ２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｄ－α－グルタミネート
Figure 0007251981000296
Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＤＭＦ中で４－ニトロフェニルＮ２－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｌ－アスパラギネートを中間体Ｃ１２２にカップリングさせ、次に、標準水素圧下に室温でのＤＣＭ／メタノール１：１中の１０％パラジウム活性炭での水素化によってＺ保護基を外すことで、標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９５５［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ１２４
８－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イル）－３，９－ジオキソ－２－オキサ－１１－チア－４，８－ジアザテトラデカン－１４－酸
Figure 0007251981000297
最初に９Ｈ－フルオレン－９－イルメチル［３－（｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝アミノ）プロピル］カーバメート（３．５０ｇ、５．５２ｍｍｏｌ）（中間体Ｃ６７）及びトリエチルアミン（２．３ｍＬ、１７ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（７００ｍＬ、１１ｍｏｌ）に入れた。クロロアセチルクロライド（３．１２ｇ、２７．６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で５時間攪拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、有機相を最初に１０％クエン酸溶液で洗浄し、次に飽和炭酸水素ナトリウム溶液及び飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄した。有機相を飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。溶媒を減圧下に留去した。
そうして得られた９Ｈ－フルオレン－９－イルメチル｛３－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］プロピル｝カーバメート（３５０ｍｇ、４９３μｍｏｌ）中間体を、３－スルファニルプロパン酸（９３μＬ、９９０μｍｏｌ）とともにＤＭＦ（７．０ｍＬ）に溶解させ、トリエチルアミンを加えた。混合物を室温で５時間攪拌し、水３ｍＬ＋０．１％ＴＦＡを加えることで反応停止した。混合物を減圧下に濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。標題化合物３０７ｍｇ（８０％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７８０［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ１２５
ジ－ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［３－（｛２－［（３－アミノプロピル）｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝アミノ］－２－オキソエチル｝スルファニル）プロパノイル］－Ｄ－アスパルテートトリフルオロ酢酸塩
Figure 0007251981000298
８－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イル）－３，９－ジオキソ－２－オキサ－１１－チア－４，８－ジアザテトラデカン－１４－酸（２００ｍｇ、２５６μｍｏｌ、中間体Ｃ１２４）及びジ－ｔｅｒｔ－ブチル－Ｄ－アスパルテート塩酸塩塩（８６．７ｍｇ、３０８μｍｏｌ）のＤＭＦ（３．０ｍＬ）中混合物に、ＨＡＴＵ（１１７ｍｇ、３０８μｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１３０μＬ、７７０μｍｏｌ）を加え、反応液を室温で１０分間攪拌した。反応混合物を水＋０．１％ＴＦＡで反応停止し、分取ＨＰＬＣによって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空乾燥させた。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．６１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１００７［Ｍ＋Ｈ］＋。
得られた中間体をＤＭＦ（３．０ｍＬ）に溶解させ、モルホリン（２００μＬ、２．３ｍｍｏｌ）と混合した。混合物を室温で５時間攪拌し、水＋０．１％ＴＦＡで反応停止し、分取ＨＰＬＣによって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空乾燥させた。標題化合物１８２ｍｇを得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝３．８４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７８５［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ１２６
ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－｛［（２Ｓ，５Ｒ，８Ｓ）－２－アミノ－８－（２－アミノ－２－オキソエチル）－１４－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－５－メチル－３，６，９，１５，２０－ペンタオキソ－１７－チア－４，７，１０，１４－テトラアザエイコサン－２０－イル］アミノ｝スクシネート
Figure 0007251981000299
Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン及びＨＡＴＵの存在下ＤＭＦ中にてＮ－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｌ－アスパラギン（中間体Ｌ１０８）を中間体Ｃ１２５にカップリングさせ、次に、標準水素圧下に室温で酢酸エチル／エタノール１：１中で１０％パラジウム／活性炭にて水素化することでＺ保護基を外して、標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０４１［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ１２７
トリフルオロ酢酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル－（２Ｒ）－２－｛［（４Ｓ，７Ｒ，１０Ｓ）－１０－（２－アミノ－２－オキソエチル）－１６－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－１－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－４，７－ジメチル－２，５，８，１１，１７，２２－ヘキサオキソ－１９－チア－３，６，９，１２，１６－ペンタアザドコサン－２２－イル］アミノ｝スクシネート塩
Figure 0007251981000300
ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－｛［（２Ｓ，５Ｒ，８Ｓ）－２－アミノ－８－（２－アミノ－２－オキソエチル）－１４－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－５－メチル－３，６，９，１５，２０－ペンタオキソ－１７－チア－４，７，１０，１４－テトラアザエイコサン－２０－イル］アミノ｝スクシネート（１２．０ｍｇ、１１．５μｍｏｌ、中間体Ｃ１２６）及び１－｛２－［（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ］－２－オキソエチル｝－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオン（３．２０ｍｇ、１２．７μｍｏｌ）をＤＭＦ（１．０ｍＬ）に溶かし、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（４．０μＬ、２３μｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１時間攪拌した。次に、水＋０．１％ＴＦＡによって反応停止し、分取ＲＰ－ＨＰＬＣによる混合物の直接精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空乾燥させた。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１７８［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ１２８
Ｎ２－アセチル－Ｎ－［２－（｛（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］－Ｎ６－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｌ－リジンアミド
Figure 0007251981000301
（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－２－｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタン酸（１７．０ｍｇ、２６．２μｍｏｌ、中間体Ｃ１０２）のＤＭＦ（２．８ｍＬ）中溶液に、Ｎ２－アセチル－Ｎ－（２－アミノエチル）－Ｎ６－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｌ－リジンアミド（９．５４ｍｇ、２８．９μｍｏｌ、中間体Ｌ１３５）、ＨＡＴＵ（１８．０ｍｇ、４７．２μｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（９．１μＬ、５２μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間攪拌した。次に、溶媒を減圧下に除去し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９６０［Ｍ＋Ｈ］＋。
それをＤＣＭ／ＥｔＯＨに溶解させ、標準水素圧下に室温で１０％パラジウム／活性炭で水素化することで、Ｚ保護基を外した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８２６［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ１２９
Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｎ１－［３－（｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝｛［（３－｛［（１Ｒ）－１，２－ジカルボキシエチル］アミノ｝－３－オキソプロピル）スルファニル］アセチル｝アミノ）プロピル］－Ｌ－アスパルタミドトリフルオロ酢酸塩
Figure 0007251981000302
中間体Ｃ１２６をトリフルオロエタノール（２．０ｍＬ）に溶解させ、二塩化亜鉛（９．１９ｍｇ、６７．４μｍｏｌ）を加えた。５０℃で１時間攪拌後、塩化亜鉛（９．１９ｍｇ、６７．４μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃でさらに１時間攪拌した。エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－テトラ酢酸（１９．７ｍｇ、６７．４μｍｏｌ）を反応混合物に加え、それを短時間攪拌してから、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ－ＨＰＬＣによって精製を直接行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を凍結乾燥した。これによって、標題化合物７．６ｍｇ（理論値の５２％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝０．８４分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝９２７［Ｍ－Ｈ］－。
中間体Ｌ７４
３－［２－［２－［２－［２－［［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸
Figure 0007251981000303
ｔｅｒｔ－ブチル３－［２－［２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノエート１０７ｍｇ（０．３３５ｍｍｏｌ）及び（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）アセテート９３ｍｇ（０．３６９ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド５ｍＬに溶かし、Ｎ－メチルモルホリン０．０７４ｍＬ（０．６７１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。酢酸０．０４８ｍＬ（０．８３８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を、分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、ｔｅｒｔ－ブチル３－［２－［２－［２－［２－［［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノエート１３３ｍｇ（８６％、純度１００％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４５９（Ｍ＋Ｈ）＋。
ＴＦＡ ０．５ｍＬをｔｅｒｔ－ブチル３－［２－［２－［２－［２－［［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノエート（１３０ｍｇ、０．２８４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、残留物を水に取り、凍結乾燥した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物１０２ｍｇ（９０％、純度１００％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．５２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４０２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ７５
トリフルオロ酢酸／２－（トリメチルシリル）エチル３－｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝－Ｄ－アラニネート（１：１）
Figure 0007251981000304
ペプチド化学の従来によって（ＥＤＣＩ／ＤＭＡＰを用いる２－（トリメチルシリルエタノールによるエステル化及びトリフルオロ酢酸によるＢｏｃ保護基の脱離）、標題化合物を３－｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝－Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｄ－アラニンから製造した。これによって、標題化合物４０５ｍｇ（２段階で理論値の５８％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３３９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ７６
（２Ｓ）－２－ブロモ－４－オキソ－４－［２－（トリメチルシリル）エトキシ］ブタン酸
Figure 0007251981000305
最初に、ペプチド化学の従来法によって（ＥＤＣＩ／ＤＭＡＰを用いる２－（トリメチルシリル）エタノールによるエステル化、Ｚ保護基及びベンジルエステルの水素分解的除去）、好適に保護されたアスパラギン酸誘導体を、（３Ｓ）－４－（ベンジルオキシ）－３－｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝－４－オキソブタン酸から製造した。
このようにして得られた（２Ｓ）－２－アミノ－４－オキソ－４－［２－（トリメチルシリル）エトキシ］ブタン酸４７０ｍｇ（１．８ｍｍｏｌ）を、水１０ｍＬに懸濁させ、１Ｍ塩酸１．８ｍＬ及び濃硫酸０．５ｍＬを加え、次に臭化カリウム８６３ｍｇ（７．２５ｍｍｏｌ）を加えた。１０℃で、３０分の期間をかけて亜硝酸ナトリウム１５０ｍｇ（２．１７５ｍｍｏｌ）の水（１ｍＬ）中溶液を滴下し、混合物を１０から１５℃で２時間撹拌した。混合物を酢酸エチル５０ｍＬで抽出した。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。溶媒の留去及び分取ＨＰＬＣによる生成物の精製によって、標題化合物２６０ｍｇ（理論値の４８％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０３分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝２９５及び２９７（Ｍ－Ｈ）－。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ［ｐｐｍ］＝０．０３（ｓ、９Ｈ）、０．９５（ｔ、２Ｈ）、２．９４及び３．２（２ｄｄ、２Ｈ）、４．１８（ｔ、２Ｈ）、４．５７（ｔ、１Ｈ）。
中間体Ｌ７７
トリフルオロ酢酸／Ｎ－［２－（２－アミノエトキシ）エチル］－２－ブロモアセトアミド（１：１）
Figure 0007251981000306
ｔｅｒｔ－ブチル［２－（２－アミノエトキシ）エチル］カーバメート４１８ｍｇ（２．０５ｍｍｏｌ）を最初に、ブロモ無水酢酸６３８ｍｇ（２．４６ｍｍｏｌ）と反応させ、次にＢｏｃ保護基をトリフルオロ酢酸で除去した。これによって、標題化合物５５１ｍｇ（２段階で理論値の６３％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法）：Ｒｔ＝０．３２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２２７及び２２５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ７８
Ｎ－［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］－β－アラニン
Figure 0007251981000307
ＥＤＣＩ／ＨＯＢｔ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にｔｅｒｔ－ブチルβ－アラニネート塩酸塩（１：１）にカップリングさせ、次にトリフルオロ酢酸で脱保護することで、市販の（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）酢酸から標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．３２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２２７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ７９
Ｎ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］－β－アラニン
Figure 0007251981000308
ｔｅｒｔ－ブチルβ－アラニネート塩酸塩（１：１）６４．８ｍｇ（０．３５７ｍｍｏｌ）及び１－｛６－［（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ］－６－オキソヘキシル｝－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオン１００ｍｇ（０．３２４ｍｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミド４ｍＬに溶かし、Ｎ－メチルモルホリン６５．６ｍｇ（０．６４９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。酢酸０．０４８ｍＬ（０．８３８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を、分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］－β－アラニネート８４．５ｍｇ（７７％、純度１００％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３３９（Ｍ＋Ｈ）＋。
ＴＦＡ １．６２ｍＬを、ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］－β－アラニネート（８２．８ｍｇ、０．２４４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（８ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、残留物を水に取り、凍結乾燥した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物６２．７ｍｇ（８７％、純度９５％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２８３（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ８０
２－（トリメチルシリル）エチル３－［（１５－アミノ－４，７，１０，１３－テトラオキサペンタデカン－１－オイル）アミノ］－Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｄ－アラニネート
Figure 0007251981000309
ペプチド化学の従来法によって（塩からの放出及びＥＤＣＩ／ＤＭＡＰを用いる２－（トリメチルシリル）エタノールによるエステル化、Ｚ保護基の水素分解的除去、ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下の市販の３－オキソ－１－フェニル－２，７，１０，１３，１６－ペンタオキサ－４－アザノナデカン－１９－オン酸へのカップリング、及びさらなるＺ保護基の水素分解的除去）、市販の３－｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝－Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｄ－アラニン／Ｎ－シクロヘキシルシクロヘキサンアミン（１：１）から標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５５２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ８１
トリフルオロ酢酸／ベンジル｛２－［（２－アミノエチル）スルホニル］エチル｝カーバメート（１：１）
Figure 0007251981000310
ＤＭＦ中Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、２，２′－スルホニルジエタンアミン２５０ｍｇ（１．１１ｍｍｏｌ）を１－｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］オキシ｝ピロリジン－２，５－ジオン９２．３ｍｇ（０．３７ｍｍｏｌ）にカップリングさせた。次に、ＨＰＬＣによる精製を行って、標題化合物７０ｍｇ（理論値の４７％）を得た。
Ｃ－ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝０．６４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２５７．１１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ８２
トリフルオロ酢酸／Ｎ－｛２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］エチル｝－６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド（１：１）
Figure 0007251981000311
Ｎ－Ｂｏｃ－２，２′－（エチレンジオキシ）ジエチルアミン８８．６ｍｇ（０．３５７ｍｍｏｌ）及びＮ－スクシニミジル６－マレイミドヘキサノエート１００ｍｇ（０．３２４ｍｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミド４．０ｍＬに溶かし、Ｎ－メチルモルホリン０．０７１ｍＬ（０．６５０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。酢酸０．０４８ｍＬ（０．８３８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を、分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：７５ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、ｔｅｒｔ－ブチル｛２－［２－（２－｛［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］エチル｝カーバメート１２７ｍｇ（理論値の８１％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４４２（Ｍ＋Ｈ）＋。
ＴＦＡ ２．０ｍＬを、ｔｅｒｔ－ブチル｛２－［２－（２－｛［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］エチル｝カーバメート１２３ｍｇ（２２５μｍｏｌ）のジクロロメタン（７．５ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、残留物を水に取り、凍結乾燥した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物１１１ｍｇ（理論値の１００％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．３１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３４２（Ｍ＋Ｈ）＋。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝１．１７（ｍ、２Ｈ）、１．４７（ｍ、４Ｈ）、２．０４（ｍ、２Ｈ）、２．９８（ｍ、２Ｈ）、３．１９（ｍ、２Ｈ）、３．３９（ｍ、４Ｈ）、３，５６（ｍ、６Ｈ）、７．０１（ｓ、２Ｈ）、７．７２（ｂｓ、３Ｈ）、７．８０（ｍ、１Ｈ）。
中間体Ｌ８３
トリフルオロ酢酸／Ｎ－｛２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］エチル｝－２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセトアミド（１：１）
Figure 0007251981000312
ｔｅｒｔ－ブチル｛２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］エチル｝カーバメート２００ｍｇ（０．８０５ｍｍｏｌ）、（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）酢酸１５０ｍｇ（０．９６６ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン５６０μＬ（３．２ｍｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミド１０ｍＬに溶かし、ＨＡＴＵ ４５９ｍｇ（１．２１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３０分間撹拌した。溶媒を減圧下に留去し、残留物をジクロロメタンに溶解させた。有機相を５％クエン酸溶液で２回洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、Ｂｉｏｔａｇｅ Ｉｓｏｌｅｒａ（シリカゲル、カラム２５ｇＳＮＡＰ、ジクロロメタン：メタノール９８：２）を用いて精製した。これによって、ｔｅｒｔ－ブチル｛２－［２－（２－｛［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］エチル｝カーバメート２７６ｍｇ（理論値の８９％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．６７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３８６（Ｍ＋Ｈ）＋。
ＴＦＡ ４ｍＬを、ｔｅｒｔ－ブチル｛２－［２－（２－｛［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］エチル｝カーバメート（２７５ｍｇ、７１４μｍｏｌ）のジクロロメタン（１５ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で３０分間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、残留物を水に取り、凍結乾燥した。これによって、標題化合物２８１ｍｇ（理論値の９９％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．１７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２８６（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ８４
トリフルオロ酢酸／Ｎ－（１４－アミノ－３，６，９，１２－テトラオキサテトラデカ－１－イル）－６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド（１：１）
Figure 0007251981000313
ｔｅｒｔ－ブチル（１４－アミノ－３，６，９，１２－テトラオキサテトラデカ－１－イル）カーバメート２００ｍｇ（０．５９４ｍｍｏｌ）及び１－｛６－［（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ］－６－オキソヘキシル｝－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオン２０２ｍｇ（０．６５４ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド４．０ｍＬに溶かし、Ｎ－メチルモルホリン０．１３０ｍＬ（１．２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。酢酸０．０８５ｍＬ（１．５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を、分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、ｔｅｒｔ－ブチル［２１－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－１６－オキソ－３，６，９，１２－テトラオキサ－１５－アザヘンアイコサ－１－イル］カーバメート２７５ｍｇ（理論値の７３％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５３０（Ｍ＋Ｈ）＋。
ＴＦＡ ７８０μＬ（１０ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ－ブチル［２１－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－１６－オキソ－３，６，９，１２－テトラオキサ－１５－アザヘンアイコサ－１－イル］カーバメート（２６８ｍｇ、５０５μｍｏｌ）のジクロロメタン（５．０ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、残留物を水に取り、凍結乾燥した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物２６６ｍｇ（理論値の９７％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．４６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４３０（Ｍ＋Ｈ）＋。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝１．１７（ｍ、２Ｈ）、１．４７（ｍ、４Ｈ）、２．０３（ｍ、２Ｈ）、２．９９（ｍ、２Ｈ）、３．１８（ｍ、２Ｈ）、３．３８（ｍ、４Ｈ）、３，５２（ｍ、８Ｈ）、３，５８（ｍ、６Ｈ）、７．０１（ｓ、２Ｈ）、７．７３（ｂｓ、３Ｈ）、７．８０（ｍ、１Ｈ）。
中間体Ｌ８５
トリフルオロ酢酸／Ｎ－（１４－アミノ－３，６，９，１２－テトラオキサテトラデカ－１－イル）－２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセトアミド（１：１）
Figure 0007251981000314
ｔｅｒｔ－ブチル（１４－アミノ－３，６，９，１２－テトラオキサテトラデカ－１－イル）カーバメート２００ｍｇ（０．５９４ｍｍｏｌ）、（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）酢酸１１１ｍｇ（０．７１３ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン４１０μＬ（２．４ｍｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミド６ｍＬに溶かし、ＨＡＴＵ ３３９ｍｇ（０．８９２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌し、分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、ｔｅｒｔ－ブチル［１７－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－１６－オキソ－３，６，９，１２－テトラオキサ－１５－アザヘプタデカ－１－イル］カーバメート１３０ｍｇ（理論値の４３％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４７４（Ｍ＋Ｈ）＋。
ＴＦＡ ４１０μＬ（５．３ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ－ブチル［１７－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－１６－オキソ－３，６，９，１２－テトラオキサ－１５－アザヘプタデカ－１－イル］カーバメート（１２６ｍｇ、２６７μｍｏｌ）のジクロロメタン（４．０ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１２４ｍｇ（理論値の９５％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１３）：Ｒｔ＝０．７４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３７４（Ｍ＋Ｈ）＋。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝２．９９（ｍ、２Ｈ）、３．２２（ｍ、２Ｈ）、３．４１（ｍ、２Ｈ）、３，５３（ｍ、８Ｈ）、３，５８（ｍ、６Ｈ）、４．０２（ｓ、２Ｈ）、７．０９（ｓ、２Ｈ）、７．７３（ｂｓ、３Ｈ）、８．２１（ｍ、１Ｈ）。
中間体Ｌ８６
Ｎ－［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］－Ｌ－バリル－Ｌ－アラニン
Figure 0007251981000315
Ｌ－バリル－Ｌ－アラニン１００ｍｇ（０．５３１ｍｍｏｌ）及び１－｛２－［（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ］－２－オキソエチル｝－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオン１３４ｍｇ（０．５３１ｍｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミド３ｍＬに溶かし、トリエチルアミン０．１５０ｍＬ（１．１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で８時間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物７１．５ｍｇ（理論値の４１％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．４２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３２６（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ８７
３－［２－（２－｛［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］プロパン酸
Figure 0007251981000316
ｔｅｒｔ－ブチル３－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］プロパノエート２５０ｍｇ（１．０７ｍｍｏｌ）、２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）酢酸１５１ｍｇ（０．９７４ｍｍｏｌ）、１－ヒドロキシ－１Ｈ－ベンゾトリアゾール水和物２２４ｍｇ（１．４６ｍｍｏｌ）及び１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩２２４ｍｇ（１．１７ｍｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミド５．０ｍＬに溶かした。反応混合物を室温で１時間撹拌した。酢酸エチルを加え、混合物を５％クエン酸溶液で２回、そして飽和炭酸水素ナトリウム溶液で抽出した。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で２回洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×４０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、ｔｅｒｔ－ブチル３－［２－（２－｛［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］プロパノエート２６７ｍｇ（理論値の６４％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３７１（Ｍ＋Ｈ）＋。
ＴＦＡ １．１ｍＬ（１４ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ－ブチル３－［２－（２－｛［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］プロパノエート（２６３ｍｇ、７１０μｍｏｌ）のジクロロメタン（１０ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物２４０ｍｇ（理論値の９４％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝０．５７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３１５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ８８
２，５－ジオキソピロリジン－１－イルＮ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］－Ｌ－バリル－Ｌ－アラニネート
Figure 0007251981000317
Ｌ－バリル－Ｌ－アラニン１５０ｍｇ（０．７９７ｍｍｏｌ）及び１－｛６－［（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ］－６－オキソヘキシル｝－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオン２４６ｍｇ（０．７９７ｍｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミド４．０ｍＬに溶かし、トリエチルアミン０．２２０ｍＬ（１．６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量；５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、Ｎ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］－Ｌ－バリル－Ｌ－アラニン３０２ｍｇ（理論値の９７％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．０２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３８２（Ｍ＋Ｈ）＋。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝０．８２（ｄｄ、６Ｈ）、１．１７（ｍ、２Ｈ）、１．２７（ｄ、３Ｈ）、１．４８（ｍ、４Ｈ）、１．９４（ｍ、１Ｈ）、２．１３（ｍ、２Ｈ）、３．３８（ｔ、２Ｈ）、４．１７（ｍ、２Ｈ）、７．００（ｓ、２Ｈ）、７．７５（ｄ、１Ｈ）、８．１９（ｄ、１Ｈ）。
Ｎ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］－Ｌ－バリル－Ｌ－アラニン１３０ｍｇ（０．５３１ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン６．５ｍＬに溶かし、１－ヒドロキシピロリジン－２，５－ジオン５８．８ｍｇ（０．５１１ｍｍｏｌ）及び１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩７８．４ｍｇ（０．４０９ｍｍｏｌ）を加えた。追加の１－ヒドロキシピロリジン－２，５－ジオン５８．８ｍｇ（０．５１１ｍｍｏｌ）及び１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩７８．４ｍｇ（０．４０９ｍｍｏｌ）を加えた。ジクロロメタンを加え、混合物を水で３回洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１７２ｍｇ（理論値の８７％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．２８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４７９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ８９
１－ベンジル－５－［２－（トリメチルシリル）エチル］－Ｌ－グルタメート塩酸塩（１：１）
Figure 0007251981000318
（４Ｓ）－５－（ベンジルオキシ）－４－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ］－５－オキソペンタン酸１．００ｇ（２．９６ｍｍｏｌ）を最初に、ＴＨＦ １３．０ｍＬに入れ、２－（トリメチルシリル）エタノール５１０μＬ（３．６ｍｍｏｌ）及び４－ジメチルアミノピリジン１０９ｍｇ（８８９μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を冷却して０℃とし、Ｎ－エチル－Ｎ′－３－（ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩６８２ｍｇ（３．５６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を酢酸エチルに溶解させた。有機相を０．１Ｎ ＨＣｌ溶液で２回及び飽和塩化ナトリウム溶液洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、Ｂｉｏｔａｇｅ Ｉｓｏｌｅｒａ（シリカゲル、カラム２５ｇＳＮＡＰ、シクロヘキサン：酢酸エチル８０：２０）を用いて精製した。これによって、化合物１－ベンジル－５－［２－（トリメチルシリル）エチル］－Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｌ－グルタメート６４９ｍｇ（理論値の５０％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝４．６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４３８（Ｍ＋Ｈ）＋。
１－ベンジル－５－［２－（トリメチルシリル）エチル］－Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｌ－グルタメート６４９ｍｇ（１．４８ｍｍｏｌ）を、ジオキサン７．０ｍＬに溶かし、氷浴冷却しながら、４Ｎ ＨＣｌ／ジオキサン１４ｍＬ（５９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、残留物を高真空乾燥し、Ｂｉｏｔａｇｅ Ｉｓｏｌｅｒａ（シリカゲル、カラム２５ｇＳＮＡＰ、ジクロロメタン：メタノール９０：１０）によって精製した。これによって、標題化合物３２０ｍｇ（理論値の５７％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３３８（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ９０
１－（｛Ｎ－［（ベンジルオキシ）カルボニル］グリシル｝アミノ）－３，６，９，１２－テトラオキサペンタデカン－１５－オン酸
Figure 0007251981000319
最初にＮ－［（ベンジルオキシ）カルボニル］グリシン１１８ｍｇ（５６６μｍｏｌ）を、ＤＭＦ ５．０ｍＬに入れ、ｔｅｒｔ－ブチル１－アミノ－３，６，９，１２－テトラオキサペンタデカン－１５－オエート２００ｍｇ（６２２μｍｏｌ）、１－ヒドロキシ－１Ｈ－ベンゾトリアゾール水和物１３０ｍｇ（８４９μｍｏｌ）及び１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩１３０ｍｇ（６７９μｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。酢酸エチルを加え、混合物を５％クエン酸溶液で２回及び飽和炭酸水素ナトリウム溶液で抽出した。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で２回洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、ｔｅｒｔ－ブチル１－（｛Ｎ－［（ベンジルオキシ）カルボニル］グリシル｝アミノ）－３，６，９，１２－テトラオキサペンタデカン－１５－オエート２７４ｍｇ（理論値の９５％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．６９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５１３（Ｍ＋Ｈ）＋。
ＴＦＡ ８２０μＬ（１１ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ－ブチル１－（｛Ｎ－［（ベンジルオキシ）カルボニル］グリシル｝アミノ）－３，６，９，１２－テトラオキサペンタデカン－１５－オエート２７４ｍｇ（５３５μｍｏｌ）のジクロロメタン（５．０ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、残留物を水に取り、凍結乾燥した。これによって、標題化合物２６２ｍｇ（理論値の１００％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．１２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４５７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ９１
トリフルオロ酢酸／２－（トリメチルシリル）エチル１－｛［３－アミノ－Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｄ－アラニル］アミノ｝－３，６，９，１２－テトラオキサペンタデカン－１５－オエート（１：１）
Figure 0007251981000320
ペプチド化学の従来法によって（ＥＤＣＩ／ＤＭＡＰを用いる２－トリメチルシリルエタノールによるエステル化、Ｚ保護基の水素分解的除去、市販のＮ－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－３－｛［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝－Ｄ－アラニンへのカップリング、及びＦｍｏｃ保護基の除去）、市販の３－オキソ－１－フェニル－２，７，１０，１３，１６－ペンタオキサ－４－アザノナデカン－１９－オン酸から標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５５２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ９２
Ｎ－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｌ－アラニル－Ｌ－アラニル－Ｌ－α－アスパラギン
Figure 0007251981000321
ペプチド化学の従来の方法によってＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン存在下でのＬ－アスパラギン酸ｔｅｒｔ－ブチルと市販のＮ－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｌ－アラニル－Ｌ－アラニンのＨＡＴＵカップリング及び次にトリフルオロ酢酸によるカルボキシル基の脱保護により、標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４０９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ９３
Ｎ－アセチル－Ｌ－アラニル－Ｌ－アラニル－Ｌ－アスパラギン
Figure 0007251981000322
ペプチド化学の従来の方法により、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン存在下でのＬ－アスパラギン酸ｔｅｒｔ－ブチルと市販のＮ－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｌ－アラニル－Ｌ－アラニンのＨＡＴＵカップリング、次にＤＣＭ／メタノール中１０％パラジウム／活性炭での水素化によるＺ保護基の脱保護、次にＤＭＦ中ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下での酢酸によるアセチル化、最後にトリフルオロ酢酸によるカルボキシル基の脱保護によって標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．１６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３１７（Ｍ＋Ｈ）＋。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝１．１９（２ｄ、６Ｈ）、１．８２（ｓ、３Ｈ）、２．５（ｍ、２Ｈ）、４．２６（ｍ、２Ｈ）、４．４８（ｑ、１Ｈ）、６．９（ｓ、１Ｈ）、７．３６（ｓ、１Ｈ）、８．０（ｍ、３Ｈ）、１２．５４（ｓ、１Ｈ）。
中間体Ｌ９４
Ｎ－｛４－オキソ－４－［２－（トリメチルシリル）エトキシ］ブタノイル｝－Ｌ－アラニル－Ｌ－アラニル－Ｌ－アスパラギン
Figure 0007251981000323
最初に、ＤＣＭ中ＥＤＣＩ／ＤＭＡＰ存在下での４－（ベンジルオキシ）－４－オキソブタン酸の２－（トリメチルシリル）エタノールとの反応及び次にベンジルエステルの水素化分解的開裂によって、４－オキソ－４－［２－（トリメチルシリル）エトキシ］ブタン酸を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２１７（Ｍ－Ｈ）－。
さらに、カップリングＤＭＦ中ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン存在下にＮ－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｌ－アラニル－Ｌ－アラニンを－Ｌ－アスパラギン酸を４－ニトロベンジル臭化水素酸塩（１：１）とカップリングさせ、次にＤＣＭ中トリフルオロ酢酸によってアミノ基を外すことで、トリフルオロ酢酸／４－ニトロベンジル－Ｌ－アラニル－Ｌ－アラニル－Ｌ－アスパラギネート（１：１）を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．４３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４１０（Ｍ＋Ｈ）＋。
ＤＭＦ中ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にこれら２種類の中間体カップリングさせ、次にＤＣＭ／メタノール１：９中１０％パラジウム／活性炭での水素化によってｐ－ニトロベンジルエステルを開裂させることで、標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４７５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ９５
Ｎ－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｌ－バリル－Ｌ－アラニン
Figure 0007251981000324
ペプチド化学の従来の方法により、Ｎ－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｌ－バリン及びｔｅｒｔ－ブチルＬ－アラニネート塩酸塩（１：１）から出発して、この中間体を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．３４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３２３．１６（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ９６
Ｎ－アセチル－Ｌ－バリル－Ｎ５－カルバモイル－Ｌ－オルニチンアミド
Figure 0007251981000325
ペプチド化学の従来の方法により、２，５－ジオキソピロリジン－１－イル－Ｎ－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｌ－バリネートのＮ５－カルバモイル－Ｌ－オルニチンとのカップリングから始め、次にエタノール中１０％パラジウム／活性炭でのＺ保護基の水素化分解的開裂、最後に得られたジペプチドの１－アセトキシピロリジン－２，５－ジオンとの反応によって、この中間体を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．２５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３１７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ９７
１－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２－オキソ－６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７－オクタオキサ－３－アザトリアコンタン－３０－オン酸
Figure 0007251981000326
最初にｔｅｒｔ－ブチル１－アミノ－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４－オクタオキサヘプタコサン－２７－オエート（１００ｍｇ、２０１μｍｏｌ）をＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）酢酸（４６．８ｍｇ、３０１μｍｏｌ）、１－ヒドロキシ－１Ｈ－ベンゾトリアゾール水和物（７６．９ｍｇ、５０２μｍｏｌ）及び１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩（７７．０ｍｇ、４０２μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌し、酢酸エチルを加えた。有機相を５％クエン酸溶液で２回、そして飽和炭酸水素ナトリウム溶液で、次に飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、ｔｅｒｔ－ブチル－１－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２－オキソ－６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７－オクタオキサ－３－アザトリアコンタン－３０－オエート１９．１ｍｇ（理論値の１３％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６３５［Ｍ＋Ｈ］＋。
ｔｅｒｔ－ブチル１－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２－オキソ－６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７－オクタオキサ－３－アザトリアコンタン－３０－オエート（１９．１ｍｇ、３０．１μｍｏｌ）のＤＣＭ（１．０ｍＬ）中溶液に、ＴＦＡ（６２μＬ、６００μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、残留物を水に取り、凍結乾燥した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、標題化合物１０．８ｍｇ（理論値の４６％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．５５分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝５７７［Ｍ－Ｈ］－。
中間体Ｌ９８
２，２－ジメチルプロパン酸／２－（トリメチルシリル）エチル－Ｎ－（２－アミノエチル）－Ｎ２－｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝－Ｌ－グルタミネート（１：１）
Figure 0007251981000327
最初に、ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、（４Ｓ）－５－ｔｅｒｔ－ブトキシ－４－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ］－５－オキソペンタン酸をベンジル（２－アミノエチル）カーバメートとカップリングさせた。次に、ＤＣＭ中トリフルオロ酢酸により、Ｂｏｃ保護基及びｔｅｒｔ－ブチルエステルを脱離させた。次に、最初に、ＤＭＦ／水中Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に１－（｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝オキシ）ピロリジン－２，５－ジオンと反応させることでアミノ基を再保護し、次にＤＣＭ中ＥＤＣＩ／ＤＭＡＰの存在下に２－（トリメチルシリル）エタノールと反応させることでカルボキシル基を保護した。最後の段階で、エタノール中標準圧下に１０％パラジウム／活性炭で水素化分解することで、末端アミノ基を脱保護した。触媒の濾去、濃縮、分取ＨＰＬＣによる精製及び残留物のアセトニトリル／水からの凍結乾燥後に、標題化合物を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４３４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ９９
トリフルオロ酢酸／２－（トリメチルシリル）エチル－Ｎ－［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］－Ｌ－バリル－Ｌ－アラニル－β－アラニル－Ｌ－リシネート（１：１）
Figure 0007251981000328
最初に、Ｎ２－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｎ６－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｌ－リジンから出発して、ペプチド化学の従来によって２－（トリメチルシリル）エチルＮ６－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｌ－リシネートを製造した。次に、この中間体を、ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、標準的方法によって製造したトリペプチド単位Ｎ－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｌ－バリル－Ｌ－アラニル－β－アラニンとカップリングさせた。次に、メタノール中の水素化分解によって、Ｚ保護基を除去し、得られた中間体を、ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）酢酸にカップリングさせた。最後の段階で、温和な条件下に１０％トリフルオロ酢酸／ＤＭＦ中、室温で１時間撹拌することにより、側鎖アミノ基を脱保護した。濃縮及びアセトニトリル／水からの凍結乾燥後に、標題化合物を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．６４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６２５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１００
３－［５－（２－｛［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］アミノ｝エチル）－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル］プロパン酸
Figure 0007251981000329
メチル３－シアノプロパノエート（４ｇ、３５．４ｍｍｏｌ）のエタノール（１２０ｍＬ）中溶液に、ヒドロキシルアミン塩酸塩３．６９ｇ（５３ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン１５ｍＬ（１１０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。混合物を濃縮し、残留物を酢酸エチルに溶解させ、次に水及びブラインで洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、濃縮した。残留物を、それ以上精製せずに用いた。これによって、メチル（４Ｚ）－４－アミノ－４－（ヒドロキシイミノ）ブタノエート５ｇ（理論値の９７％）を得た。
メチル（４Ｚ）－４－アミノ－４－（ヒドロキシイミノ）ブタノエート（４．８５ｇ、３３．１９ｍｍｏｌ）のジオキサン（１２０．０ｍＬ）中溶液に、Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－β－アラニン６．９１ｇ（３６．５０ｍｍｏｌ）及び１，３－ジシクロヘキシルカルボジイミド８．２２ｇ（３９．８２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌した。混合物を濃縮し、残留物を水に溶解させ、酢酸エチルで抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。これによって、メチル（４Ｅ）－４－｛［Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－β－アラニル］アミノ｝－４－（ヒドロキシイミノ）ブタノエート６．０ｇ（理論値の５７％）を得た。
メチル（４Ｅ）－４－｛［Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－β－アラニル］アミノ｝－４－（ヒドロキシイミノ）ブタノエート（６．０ｇ、１８．９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１００ｍＬ）中溶液を１２０℃で５時間撹拌した。水を加え、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、メチル３－（５－｛２－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ］エチル｝－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル）プロパノエート４ｇ（理論値の７１％）を得た。
メチル（４Ｅ）－４－｛［Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－β－アラニル］アミノ｝－４－（ヒドロキシイミノ）ブタノエート（４．００ｇ、１３．４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（６０ｍＬ）中溶液にＬｉＯＨ（１．６０ｇ、６６．８ｍｍｏｌ）の水（１０ｍＬ）中溶液を加えた。反応混合物を６０℃で終夜撹拌した。水を加え、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。残留物をそれ以上精製せずに用いた。これによって、３－（５－｛２－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ］エチル｝－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル）プロパン酸３．６０ｇ（理論値の８７％）を得た。
３－（５－｛２－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ］エチル｝－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル）プロパン酸（２．０ｇ、７．０１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（３０ｍＬ）中溶液にトリフルオロ酢酸２．０ｍＬ（２６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を水と混和し、ジクロロメタンで抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。残留物をそれ以上精製せずに用いた。これによって、３－［５－（２－アミノエチル）－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル］プロパン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）１．５０ｇ（理論値の７２％）を得た。
３－［５－（２－アミノエチル）－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル］プロパン酸（１．５ｇ、５．０１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２５ｍＬ）中溶液に、１－［２－（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）－２－オキソエチル］－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオン１．３０ｇ（５．５２ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン１．５２ｇ（１５．０４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を水と混和し、ジクロロメタンで抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物７７４ｍｇ（理論値の４７％）を得た。
１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝２．６７（ｔ、２Ｈ）、２．９１（ｔ、２Ｈ）、３．０３（ｔ、２Ｈ）、３．４６（ｑ、２Ｈ）、４．２８（ｓ、２Ｈ）、７．０１（ｓ、２Ｈ）、８．３７（ｔ、１Ｈ）、１２．２８（ｂｓ、１Ｈ）。
中間体Ｌ１０１
ｔｅｒｔ－ブチルＬ－アラニル－Ｌ－アラニル－Ｌ－アスパラギネート
Figure 0007251981000330
ペプチド化学の従来の方法により、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン存在下での市販のＮ－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｌ－アラニル－Ｌ－アラニンのｔｅｒｔ－ブチルＬ－アスパラギネート塩酸塩とのＨＡＴＵカップリングと、次にメタノール中１０％パラジウム／活性炭でのＺ保護基の水素化分解的脱離によって、標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法７）：Ｒｔ＝０．２３分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝３２９（Ｍ－Ｈ）－。
中間体Ｌ１０２
Ｎ－（３８－オキソ－２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５－ドデカオキサオクタトリアコンタン－３８－イル）－Ｌ－アラニル－Ｌ－アラニル－Ｌ－アスパラギン
Figure 0007251981000331
最初に、２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５－ドデカオキサオクタトリアコンタン－３８－酸２１５ｍｇ（３６５μｍｏｌ）及び中間体Ｌ１０１（４０２μｍｏｌ）１３３ｍｇをＤＭＦ １．４ｍＬに入れ、ＨＡＴＵ １４６ｍｇ（３８４μｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン１６０μＬ（９１０μｍｏｌ）を加え、混合物を室温で３時間撹拌した。水（１．５ｍＬ）及びＡＣＮ（０．５ｍＬ）を加えた。反応溶液を分取ＨＰＬＣ（溶離液：ＡＣＮ／水＋０．１％ＴＦＡ、勾配＝１：９→３：２）によって精製し、次に、ＤＣＭ ２ｍＬ中、ＴＦＡ ２ｍＬによるブトキシカルボニル保護基の脱離を行った（室温で３時間撹拌）。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．５６分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝８４４．５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１０３
Ｎ－（ピリジン－４－イルアセチル）－Ｌ－アラニル－Ｌ－アラニル－Ｌ－アスパラギントリフルオロアセテート（１：１）
Figure 0007251981000332
ペプチド化学の従来の方法により、ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に４－ピリジン酢酸の市販のｔｅｒｔ－ブチルＬ－アラニル－Ｌ－アラニネートとのカップリングから始め、次にトリフルオロ酢酸による脱保護、ｔｅｒｔ－ブチルＬ－アスパラギネートへのカップリング、次にトリフルオロ酢酸によるカルボキシル基の脱保護によって、標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．１５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３９４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１０４
Ｎ－イソニコチノイル－Ｌ－アラニル－Ｌ－アラニル－Ｌ－アスパラギントリフルオロアセテート（１：１）
Figure 0007251981000333
中間体Ｌ１０３と同様にして、イソニコチン酸の市販のｔｅｒｔ－ブチルＬ－アラニル－Ｌ－アラニネートとのカップリングから始め、標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．１７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３８０（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１０５
ｔｅｒｔ－ブチルＮ－｛［２－（２－メトキシエトキシ）エトキシ］アセチル｝－Ｌ－アラニル－Ｌ－アラニル－Ｌ－アスパラギネートトリフルオロアセテート（１：１）
Figure 0007251981000334
中間体Ｌ１０３と同様にして［２－（２－メトキシエトキシ）エトキシ］酢酸の市販のｔｅｒｔ－ブチルＬ－アラニル－Ｌ－アラニネートとのカップリングから始めて標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．１７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３８０（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１０６
Ｎ－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｌ－アラニル－Ｌ－アラニル－Ｌ－アスパラギン
Figure 0007251981000335
ペプチド化学の従来の方法により、ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在での市販のＮ－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｌ－アラニル－Ｌ－アラニンの１－ｔｅｒｔ－ブチル４－［２－（トリメチルシリル）エチル］－Ｌ－アスパルテートとのカップリングによって標題化合物を製造した。このアミノ酸単位は、ＥＤＣＩ及びＤＭＡＰの存在下での２－（トリメチルシリル）エタノールによるエステル化、次に５％トリフルオロ酢酸／ＤＣＭによるｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル保護基の温和な除去によって（３Ｓ）－４－ｔｅｒｔ－ブトキシ－３－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ］－４－オキソブタン酸から製造した。次に、完全保護中間体７４５ｍｇ（１．３１７ｍｍｏｌ）をＤＣＭ ４３．５ｍＬに溶かし、トリフルオロ酢酸３．５ｍＬを加え、室温で５時間撹拌することで、そのｔｅｒｔ－ブチルエステルを温和に加水分解した。分取ＨＰＬＣによる精製後に、得られた生成物混合物から標題化合物１６８ｍｇ（理論値の２５％）を単離した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５１０（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１０７
Ｎ－［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｌ－アスパラギン
Figure 0007251981000336
ペプチド化学の従来の方法により、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下でのＮ－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニンのｔｅｒｔ－ブチルＬ－アスパラギネートへのＨＡＴＵカップリング、次に１０％パラジウム／活性炭でのメタノール中の水素化によるＺ保護基の脱保護、次にＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下でのＤＭＦ中の１－｛２－［（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ］－２－オキソエチル｝－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオンによるアシル化、最後にトリフルオロ酢酸によるカルボキシル基の脱保護によって、標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．１８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４１２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１０８
Ｎ－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｌ－アスパラギン
Figure 0007251981000337
ペプチド化学の従来法により、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＮ－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニンをｔｅｒｔ－ブチルＬ－アスパラギネートにＨＡＴＵカップリングさせ、次にトリフルオロ酢酸でカルボキシル基を脱保護することで、実施例Ｌ９２と同様にして、標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４０９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１０９
Ｎ－イソニコチノイル－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｌ－アスパラギン・トリフルオロアセテート（１：１）
Figure 0007251981000338
ペプチド化学の従来法により、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＮ－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニンをｔｅｒｔ－ブチルＬ－アスパラギネートにＨＡＴＵカップリングさせ、次にＺ保護基の水素分解的除去を行い、ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にイソニコチン酸にカップリングさせ、最後にトリフルオロ酢酸でカルボキシル基を脱保護することで、標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１３）：Ｒｔ＝０．５４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３８０（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１１０
Ｎ－（ピリジン－４－イルアセチル）－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｌ－アスパラギントリフルオロアセテート（１：１）
Figure 0007251981000339
ペプチド化学の従来法により、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＮ－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニンをｔｅｒｔ－ブチルＬ－アスパラギネートにＨＡＴＵカップリングさせ、次にＺ保護基の水素分解的除去を行い、ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にピリジン－４－イル酢酸塩酸塩（１：１）にカップリングさせ、最後にトリフルオロ酢酸でカルボキシル基を脱保護することで、標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１３）：Ｒｔ＝０．５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３９４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１１１
Ｎ－アセチル－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｌ－アスパラギン
Figure 0007251981000340
ペプチド化学の従来法により、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＮ－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニンをｔｅｒｔ－ブチルＬ－アスパラギネートにＨＡＴＵカップリングさせ、次にトリフルオロ酢酸でカルボキシル基を脱保護し、次にＺ保護基の水素化分解除去を行い、最後にＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に１－アセトキシピロリジン－２，５－ジオンることで、標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．１７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３１７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１１２
トリフルオロ酢酸Ｎ－（２－アミノエチル）－Ｎ２－｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝グリシンアミド（１：１）
Figure 0007251981000341
ペプチド化学の従来法により、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にグリシンを１－（｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝オキシ）ピロリジン－２，５－ジオンと反応させ、次にＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にベンジル（２－アミノエチル）カーバメート塩酸塩（１：１）にＨＡＴＵカップリングさせ、最後にＺ保護基の水素化分解除去を行うことで、標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．４６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２６２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１１３
（５Ｓ，８Ｒ，１１Ｓ）－５，８－ジメチル－３，６，９－トリオキソ－１１－｛２－オキソ－２－［２－（トリメチルシリル）エトキシ］エチル｝－１－フェニル－２－オキサ－４，７，１０－トリアザドデカン－１２－酸
Figure 0007251981000342
ペプチド化学の従来法により、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＤＭＦ中でＮ－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニンを１－ｔｅｒｔ－ブチル－４－［２－（トリメチルシリル）エチル］－Ｌ－アスパルテートにＨＡＴＵカップリングさせ、次に７．５％トリフルオロ酢酸／ＤＣＭ中で攪拌することによってｔｅｒｔ－ブチルエステルをやさしく除去することで、標題化合物を製造した。分取ＨＰＬＣによって、得られた生成物混合物から標題化合物を単離した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．７７分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝５０８（Ｍ－Ｈ）－。
中間体Ｌ１１４
Ｎ－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニン
Figure 0007251981000343
ペプチド化学の従来法により、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＮ－カルボベンジルオキシ－Ｌ－アラニンをＤ－アラニンｔｅｒｔ－ブチルエステル塩酸塩にＨＡＴＵカップリングさせ、最後にブトキシカルボニル保護基をＴＦＡ及びＤＣＭで除去することで、標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．６１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２９５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１１５
ｔｅｒｔ－ブチルＬ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｌ－アスパラギネート
Figure 0007251981000344
ペプチド化学の従来法により、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にｔｅｒｔ－ブチル－Ｌ－アスパラギネート塩酸塩をＮ－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニン（中間体Ｌ１１４）にＨＡＴＵカップリングさせ、最後にＺ保護基を除去することで、標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝０．９１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３３１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１１６
Ｎ－（３８－オキソ－２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５－ドデカオキサオクタトリアコンタン－３８－イル）－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｌ－アスパラギン
Figure 0007251981000345
最初に２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５－ドデカオキサオクタトリアコンタン－３８－酸５００ｍｇ（８４９μｍｏｌ）及びｔｅｒｔ－ブチルＬ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｌ－アスパラギネート３０９ｍｇ（中間体Ｌ１１５、９３４μｍｏｌ）をＤＭＦ ５．８ｍＬに入れ、ＨＡＴＵ ４２０ｍｇ（１．１０４ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン５１８μＬ（２．９７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を０℃で４０分間攪拌した。水（１ｍＬ）及びＡＣＮ（２ｍＬ）を加えた。反応溶液を、分取ＨＰＬＣ（溶離液：ＡＣＮ／水＋０．１％ＴＦＡ、勾配＝１：９→３：２）を行い、次に、ＤＣＭ ３ｍＬ中、ＴＦＡ ３ｍＬでブトキシカルボニル保護基を除去することで（室温で３時間攪拌）精製した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．５６分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝８４３（Ｍ－Ｈ）－。
中間体Ｌ１１７
ｔｅｒｔ－ブチルＬ－アラニル－Ｄ－アラニネート
Figure 0007251981000346
ペプチド化学の従来法により、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＮ－カルボベンジルオキシ－Ｌ－アラニンをＤ－アラニンｔｅｒｔ－ブチルエステル塩酸塩にＨＡＴＵカップリングさせ、最後にを除去することで、標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法７）：Ｒｔ＝０．２９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２１７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１１８
Ｎ－（３８－オキソ－２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５－ドデカオキサオクタトリアコンタン－３８－イル）－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニン
Figure 0007251981000347
最初に２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５－ドデカオキサオクタトリアコンタン－３８－酸２２３ｍｇ（３７９μｍｏｌ）及びｔｅｒｔ－ブチルＬ－アラニル－Ｄ－アラニネート９０．４ｍｇ（中間体Ｌ１１７、４１７μｍｏｌ）を、ＤＭＦ １．２ｍＬに入れ、ＨＡＴＵ １４４ｍｇ（３７９ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン１９８μＬ（１．１４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を０℃で３０分間攪拌した。水（１ｍＬ）及びＡＣＮ（２ｍＬ）を加えた。反応溶液を分取ＨＰＬＣ（溶離液：ＡＣＮ／水＋０．１％ＴＦＡ、勾配＝１：９→３：２）と、次に、ＤＣＭ １．５ｍＬ中でブトキシカルボニル保護基をＴＦＡ １．５ｍＬで除去することで（室温で９０分間攪拌）精製した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．５９分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝７２９（Ｍ－Ｈ）－。
中間体Ｌ１１９
Ｎ－（ピリジン－４－イルアセチル）－Ｌ－アラニル－Ｄ－プロリル－Ｌ－α－アスパラギン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000348
ペプチド化学の従来法により、最初にＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＮ－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｌ－アラニンをｔｅｒｔ－ブチルＤ－プロリネートにＨＡＴＵカップリングさせ、次にＤＣＭ中トリフルオロ酢酸でカルボキシル基を脱保護することで標題化合物を合成した。次に、ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にｔｅｒｔ－ブチルＬ－アスパラギネートにカップリングさせ、次に室温で標準水素圧下に１０％パラジウム／活性炭でＤＣＭ／メタノール１：１中にてＺ保護基を水素分解除去を行った。最後に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に４－ピリジン酢酸にカップリングさせ、次にＤＣＭ中にてトリフルオロ酢酸でカルボキシル基を脱保護することで、得られた中間体を標題化合物に変換した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．１６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４２０（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１２０
トリフルオロ酢酸／Ｎ－（ピリジン－４－イルアセチル）－Ｄ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｌ－アスパルタミド（１：１）
Figure 0007251981000349
ペプチド化学の従来法により、最初にＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＮ－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｌ－アラニンをｔｅｒｔ－ブチルＤ－アラニネート塩酸塩（１：１）にＨＡＴＵカップリングさせ、次にＤＣＭ中トリフルオロ酢酸でカルボキシル基を脱保護することで標題化合物を合成した。次に、ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にｔｅｒｔ－ブチルＬ－アスパラギネートにカップリングさせ、次に室温で標準水素圧下に１０％パラジウム／活性炭でＤＣＭ／メタノール１：１中にてＺ保護基の水素化分解除去を行った。最後に、得られた中間体を、ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に４－ピリジン酢酸にカップリングさせ、次にＤＣＭ中トリフルオロ酢酸でカルボキシル基を脱保護することで標題化合物に変換した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．１６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３９４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１２６
Ｎ－（ピリジン－４－イルアセチル）－Ｌ－アラニル－Ｄ－ノルバリル－Ｌ－アスパラギントリフルオロ酢酸塩
Figure 0007251981000350
ペプチド化学の従来法により、最初にＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にピリジン－４－イル酢酸塩酸塩をｔｅｒｔ－ブチルＬ－アラニネート塩酸塩（１：１）にＨＡＴＵカップリングさせ、次にＤＣＭ中トリフルオロ酢酸でカルボキシル基を脱保護することで、標題化合物を合成した。次に、ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に４－メチルベンゼンスルホン酸－ベンジル－Ｄ－ノルバリネートにカップリングさせ、次に室温で標準水素圧下にＴＨＦ／水中にて水酸化リチウム１水和物でベンジル保護基を除去した。最後に、得られた中間体を、ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にｔｅｒｔ－ブチルＬ－アスパラギネートにカップリングさせ、次にＤＣＭ中トリフルオロ酢酸でカルボキシル基を脱保護することで標題化合物に変換した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．１８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４２２［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｌ１２７
トリフルオロ酢酸ジベンジル－β－アラニル－Ｌ－グルタメート塩
Figure 0007251981000351
ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に４－メチルベンゼンスルホン酸／ジベンジル－Ｌ－グルタメート（１：１）をＮ－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－β－アラニンにカップリングさせ、次に、トリフルオロ酢酸／ジクロロメタンによってｔ－ブチル保護基を除去することで、標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３９９［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｌ１２８
２－（トリメチルシリル）エチルＮ－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｌ－システイナート
Figure 0007251981000352
Ｎ，Ｎ′－ビス（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｌ－シスチン（７．００ｇ、１５．９ｍｍｏｌ）をアセトニトリル８０ｍＬに溶解させ、冷却して０℃とした。この温度で、ピリジン（２．６ｍＬ、３２ｍｍｏｌ）、２－（トリメチルシリル）エタノール（２．５ｍＬ、１７ｍｍｏｌ）及び１，３－ジシクロヘキシルカルボジイミド（３．６１ｇ、１７．５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を０℃で１時間、次に室温で終夜攪拌した。反応混合物を濾過し、フィスターケーキをアセトニトリルで洗浄した。溶媒を減圧下に留去した。残留物を、Ｂｉｏｔａｇｅ Ｉｓｏｌｅｒａを用いて精製した（シリカゲル、酢酸エチル／シクロヘキサン１：２）。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空乾燥させた。これによって、化合物ビス［２－（トリメチルシリル）エチル］－Ｎ，Ｎ′－ビス（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｌ－シスチネート４．１４ｇ（理論値の４１％）を得た。
最初に、アルゴン下に、ビス［２－（トリメチルシリル）エチル］－Ｎ，Ｎ′－ビス（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｌ－シスチネート（３００ｍｇ、４６８μｍｏｌ）を、水１．０ｍＬ及びＤＭＦ ３．０ｍＬに入れた。反応混合物をＴＣＥＰ（３３５ｍｇ、１．１７ｍｍｏｌ）と混合し、室温でさらに１時間攪拌した。混合物を酢酸エチルで希釈し、水及び飽和塩化ナトリウム溶液で繰り返し洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、濃縮した。残留物を、溶離液としてシクロヘキサン／酢酸エチル９：１を用いるＢｉｏｔａｇｅ／Ｉｓｏｌｅｒａ（ＳＮＡＰ２５ｇ）でのカラムクロマトグラフィーによって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空乾燥させた。これによって、標題化合物１０６ｍｇ（理論値の７０％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２８分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝３２０［Ｍ－Ｈ］－。
中間体Ｌ１２９
Ｎ－｛［２－（２－メトキシエトキシ）エトキシ］アセチル｝－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｌ－アスパラギン
Figure 0007251981000353
ペプチド化学の従来法により、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＮ－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニンをｔｅｒｔ－ブチルＬ－アスパラギネート塩酸塩にＨＡＴＵカップリングさせ、次にメタノール中１０％パラジウム／活性炭でＺ保護基の水素化分解除去を行い、次にさらに［２－（２－メトキシエトキシ）エトキシ］酢酸にＨＡＴＵカップリングさせ、その後にＴＦＡでｔｅｒｔ－ブチルエステルを開裂させることで、標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４９１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１３０
Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｌ－アラニル－Ｄ－アスパラギニル－Ｌ－アスパラギン
Figure 0007251981000354
ペプチド化学の従来法により、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、Ｎ２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｄ－アスパラギンの４－ニトロベンジル－Ｌ－アスパラギネート臭化水素酸塩（１：１）へのＨＡＴＵカップリングを行い、次にＴＦＡでＢｏｃ保護基を開裂させ、次に同様にＨＡＴＵによってｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－Ｌ－アラニンのカップリングを行い、最後に、ジクロロメタン／メタノール１：１中１０％パラジウム／活性炭でｐ－ニトロベンジルエステルの水素化分解除去を行うことで、標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．３８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４１８（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１３１
トリフルオロ酢酸／ｔｅｒｔ－ブチル－Ｎ－（２－アミノエチル）－Ｎ２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｄ－α－グルタミネート（１：１）
Figure 0007251981000355
ペプチド化学の従来法により、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、（２Ｒ）－５－ｔｅｒｔ－ブトキシ－２－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ］－５－オキソペンタン酸をベンジル（２－アミノエチル）カーバメート塩酸塩（１：１）にＨＡＴＵカップリングさせ、次に、エタノール中１０％パラジウム／活性炭でベンジルエステルの水素化分解除去を行うことによって、標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３４６（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１３２
Ｎ２－アセチル－Ｄ－アスパラギン
Figure 0007251981000356
ペプチド化学の従来法により、最初にＤＣＭ中ＥＤＣＩ／ＤＭＡＰを用いてＮ２－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｄ－アスパラギンを（２－トリメチルシリル）エタノールでエステル化し、次にＤＣＭ／メタノール１：１中１０％パラジウム／活性炭でベンジルエステルの水素化分解除去を行い、次にＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に１－アセトキシピロリジン－２，５－ジオンと反応させ、最後に、５０℃でトリフルオロエタノール中１時間にわたり６当量の塩化亜鉛とともに５０℃で攪拌することでＴｅｏｃ保護基を除去することで、標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．１５分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝１７３（Ｍ－Ｈ）－。
中間体Ｌ１３３
Ｎ２－アセチル－Ｎ６－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｌ－リジン
Figure 0007251981000357
Ｎ２－アセチル－Ｌ－リジン（９４７ｍｇ、５．０３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ／水／ＮａＨＣＯ３溶液（１５ｍＬ／６ｍＬ／１２ｍＬ）中溶液に、ＴＨＦ ５ｍＬに溶かしたベンジルカルボノクロリデート（９４４ｍｇ、５．５３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で２時間攪拌し、水及び酢酸エチルで希釈した。ｐＨ４を、希ＨＣｌによって確立した。有機相をＭｇＳＯ４で脱水し、吸引濾過し、濃縮した。残留物及び凍結乾燥した水相を、一緒に分取ＨＰＬＣによって精製した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．６５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３２３［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｌ１３４
Ｎ２－アセチル－Ｎ６－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｌ－リジル－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｌ－アスパラギン
Figure 0007251981000358
ペプチド化学の従来法により、最初にＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＮ２－アセチル－Ｎ６－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｌ－リジン（９７．６ｍｇ、３０３μｍｏｌ）（中間体Ｌ１３３）をｔｅｒｔ－ブチルＬ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｌ－アスパラギネート（中間体Ｌ１１５）（１００ｍｇ、３０３μｍｏｌ）にＨＡＴＵカップリングさせ、次にＤＣＭ中トリフルオロ酢酸でカルボキシル基を脱保護することで標題化合物を合成した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．５８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５７９［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｌ１３５
Ｎ２－アセチル－Ｎ－（２－アミノエチル）－Ｎ６－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｌ－リジンアミド
Figure 0007251981000359
ペプチド化学の従来法により、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に市販のＮ２－アセチル－Ｎ６－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｌ－リジンをベンジル（２－アミノエチル）カーバメート塩酸塩（１：１）とＨＡＴＵカップリングさせ、次に、１０％パラジウム／活性炭でＤＣＭ／メタノール１：１中にて水素化することによってＺ保護基を除去することで、標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．４３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３３１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２３９
Ｓ－｛２－［（３－アミノプロピル）｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝アミノ］－２－オキソエチル｝－Ｎ－［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］－Ｌ－システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000360
最初に、アルゴン下に、（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）酢酸７．５ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ １．５ｍＬに入れ、ＨＯＢｔ ７．５ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）、ＴＢＴＵ １５．５ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン６．２ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。ＤＭＦ １．５ｍＬに溶かしたＳ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル）－Ｌ－システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｃ７１）４０．０ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン１８．７ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物Ｓ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル）－Ｎ－［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］－Ｌ－システイン１１．２ｍｇ（理論値の２５％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８５４（Ｍ＋Ｈ）＋。
Ｓ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル）－Ｎ－［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］－Ｌ－システイン１０．９ｍｇ（１２．８μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛１０．４ｍｇ（７６．６μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で４時間撹拌した。エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－テトラ酢酸２２．４ｍｇ（０．０８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製を行った。減圧下に溶媒留去し、残留物を凍結乾燥した。これによって、標題化合物７．５ｍｇ（理論値の６５％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７１０（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２５５
Ｒ／Ｓ－（Ｎ－［１９－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－１７－オキソ－４，７，１０，１３－テトラオキサ－１６－アザノナデカン－１－オイル］－Ｌ－α－グルタミル－Ｓ－｛２－［（３－アミノプロピル）｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝アミノ］－２－オキソエチル｝）ホモシステイン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000361
最初に（２Ｓ）－５－（ベンジルオキシ）－２－｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝－５－オキソペンタン酸１３．１ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、ＨＯＢｔ ５．４ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）、ＴＢＴＵ １１．４ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン４．６ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン１２．９ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ）に溶かしたＲ／Ｓ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル）ホモシステイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｃ１１）３０．０ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ １ｍＬを加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物４－［２－［［（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル］－［３－（２－トリメチルシリルエトキシカルボニルアミノ）プロピル］アミノ］－２－オキソエチル］スルファニル－２－［［（２Ｓ）－５－ベンジルオキシ－２－（ベンジルオキシカルボニルアミノ）－５－オキソ－ペンタノイル］アミノ］ブタン酸３２ｍｇ（７３％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．５３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０８４（Ｍ＋Ｈ）＋。
４－［２－［［（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル］－［３－（２－トリメチルシリルエトキシカルボニルアミノ）プロピル］アミノ］－２－オキソエチル］スルファニル－２－［［（２Ｓ）－５－ベンジルオキシ－２－（ベンジルオキシカルボニルアミノ）－５－オキソ－ペンタノイル］アミノ］ブタン酸４１．４ｍｇ（０．０３８ｍｍｏｌ）をエタノール１０ｍＬに溶解させ、Ｐｄ／Ｃ ４．２ｍｇを加え、混合物を標準気圧下に水素化した。反応混合物を段ボールフィルターで濾過し、フィルターケーキをエタノールで洗浄した。溶媒を減圧下に加熱せずに留去した。残留物を分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×４０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｒ／Ｓ－（Ｌ－α－グルタミル－Ｓ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル）ホモシステイン／トリフルオロ酢酸（１：１）２１．１ｍｇ（５６％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８６０（Ｍ＋Ｈ）＋。
最初にＲ／Ｓ－（Ｌ－α－グルタミル－Ｓ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル））ホモシステイン／トリフルオロ酢酸（１：１）２０．４ｍｇ（２０．９４μｍｏｌ）を、３－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－Ｎ－｛１５－［（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ］－１５－オキソ－３，６，９，１２－テトラオキサペンタデカ－１－イル｝プロパンアミド１１．８ｍｇ（２３．０４μｍｏｌ）とともにＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、４－メチルモルホリン４．２ｍｇ（４１．８８μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌し、酢酸３．１ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を、分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｒ／Ｓ－（Ｎ－［１９－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－１７－オキソ－４，７，１０，１３－テトラオキサ－１６－アザノナデカン－１－オイル］－Ｌ－α－グルタミル－Ｓ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル））ホモシステイン９．５ｍｇ（３６％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．６６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１２５９（Ｍ＋Ｈ）＋。
Ｒ／Ｓ－（Ｎ－［１９－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－１７－オキソ－４，７，１０，１３－テトラオキサ－１６－アザノナデカン－１－オイル］－Ｌ－α－グルタミル－Ｓ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル））ホモシステイン９．４ｍｇ（７．４７μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール１．５ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛６．１ｍｇ（４４．８１μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－テトラ酢酸１３．１ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物６．９ｍｇ（７５％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１１４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２５６
トリフルオロ酢酸／Ｎ－｛（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブチル｝－Ｎ′－［２－（２－｛［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］アミノ｝エトキシ）エチル］コハク酸アミド（１：１）
Figure 0007251981000362
ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下での中間体Ｃ６５ １０ｍｇ（０．０１４ｍｍｏｌ）及びトリフルオロ酢酸／Ｎ－［２－（２－アミノエトキシ）エチル］－２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセトアミド（１：１）９．６ｍｇ（０．０２７ｍｍｏｌ）のカップリング及び次に中間体Ｆ１１９について記載の方法に従ってのトリフルオロエタノール中での塩化亜鉛による脱保護によって、標題化合物を製造した。分取ＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物８ｍｇ（２段階で理論値の６４％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８２２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２５７
Ｒ－｛２－［（３－アミノプロピル）｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝アミノ］－２－オキソエチル｝－Ｎ－［１８－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－１７－オキソ－４，７，１０，１３－テトラオキサ－１６－アザオクタデカン－１－オイル］－Ｌ－システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000363
Ｒ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル）－Ｌ－システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｃ７１）５０．０ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）及び３－［２－［２－［２－［２－［［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸（中間体Ｌ７４）２９ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ３．０ｍＬに溶かし、ＨＡＴＵ ２７．３ｍｇ（０．０７ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン２３．３ｍｇ（０．１８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｒ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル）－Ｎ－［１８－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－１７－オキソ－４，７，１０，１３－テトラオキサ－１６－アザオクタデカン－１－オイル］－Ｌ－システイン１７．４ｍｇ（２６％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法６）：Ｒｔ＝１．３４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１０１（Ｍ＋Ｈ）＋。
Ｒ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル）－Ｎ－［１８－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－１７－オキソ－４，７，１０，１３－テトラオキサ－１６－アザオクタデカン－１－オイル］－Ｌ－システイン１７ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）をトリフルオロエタノール１．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛６．３ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で終夜撹拌した。エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－テトラ酢酸１３．５ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物７．６ｍｇ（４６％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９５７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２５８
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－Ｎ－［３－｛２－［（ブロモアセチル）アミノ］エチル｝アミノ）－３－オキソプロピル］ブタンアミド（１：１）
Figure 0007251981000364
ＨＡＴＵを用いる中間体Ｃ５８のトリフルオロ酢酸／ベンジル［２－（β－アラニルアミノ）エチル］カーバメート（１：１）へのカップリング、次に水素化分解、次に１－（２－ブロモアセトキシ）ピロリジン－２，５－ジオンとのカップリング及び最後に塩化亜鉛による脱保護によって、標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７４７及び７４９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２５９
Ｎ－｛（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝－３－｛［Ｎ－（ブロモアセチル）グリシル］アミノ｝－Ｄ－アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000365
中間体Ｃ５８ ７５ｍｇ（０．１１４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ １２．５ｍＬに取り、ＨＡＴＵ ６５ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン７９μＬの存在下に中間体Ｌ７５ ７８ｍｇ（０．１７１ｍｍｏｌ）にカップリングさせた。分取ＨＰＬＣによる精製後、中間体をエタノール２０ｍＬに取り、室温で水素標準圧下に１時間にわたり１０％パラジウム／活性炭で水素化した。触媒を濾去し、溶媒を減圧下に除去し、生成物を分取ＨＰＬＣによって精製した。アセトニトリル／水１：１からの凍結乾燥によって、２－（トリメチルシリル）エチル３－アミノ－Ｎ－［（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－２－（｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタノイル］－Ｄ－アラニネート６３ｍｇ（２段階で理論値の６４％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１６分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８４４［Ｍ＋Ｈ］＋。
この中間体４０ｍｇ（０．０４７ｍｍｏｌ）を、上記の方法と同様にして、ＨＡＴＵの存在下にＮ－［（ベンジルオキシ）カルボニル］グリシンとカップリングさせ、再度水素化分解的に脱保護した。
この中間体１０ｍｇ（０．０１２ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン４μＬの存在下に市販の１－（２－ブロモアセトキシ）ピロリジン－２，５－ジオン７．７ｍｇ（０．０３２ｍｍｏｌ）とカップリングさせ、次に中間体Ｆ１１９について記載の方法に従ってトリフルオロエタノール中にて塩化亜鉛によって脱保護することで、標題化合物を製造した。分取ＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物１．３ｍｇを得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７７７及び７７９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２６０
Ｎ６－（Ｎ－｛（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝－β－アラニル）－Ｎ２－｛Ｎ－［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］－Ｌ－バリル－Ｌ－アラニル｝－Ｌ－リジン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000366
中間体Ｆ１５５と同様にして標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２０（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２６１
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－Ｎ－（２－｛２－［（ブロモアセチル）アミノ］エトキシ｝エチル）－ブタンアミド（１：１）
Figure 0007251981000367
ＨＡＴＵの存在下での中間体Ｃ５８ ２０ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ）の中間体Ｌ７７ ２５．８ｍｇ（０．０６１ｍｍｏｌ）とのカップリング及び次に塩化亜鉛による脱保護によって標題化合物を製造した。これによって、標題化合物１１．９ｍｇ（２段階で理論値の４７％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７２２及び７２０（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２６２
Ｓ－｛２－［（３－アミノプロピル）｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝アミノ］－２－オキソエチル｝－Ｎ－｛３－［２－（２－｛［３－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）プロパノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］プロパノイル｝－Ｌ－システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000368
最初にＳ－｛２－［（３－アミノプロピル）｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝アミノ］－２－オキソエチル｝－Ｌ－システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｃ７１）３０ｍｇ（３６μｍｏｌ）と３－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－Ｎ－［２－（２－｛３－［（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ］－３－オキソプロポキシ｝エトキシ）エチル］プロパンアミド１６．９ｍｇ（４０μｍｏｌ）を、ＤＭＦ １．５ｍＬに入れ、４－メチルモルホリン１０．９ｍｇ（１０８μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌し、酢酸７．５８ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を、分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｓ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル）－Ｎ－｛３－［２－（２－｛［３－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）プロパノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］プロパノイル｝－Ｌ－システイン３３．４ｍｇ（理論値の８０％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２７（Ｍ＋Ｈ）＋。
Ｓ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル）－Ｎ－｛３－［２－（２－｛［３－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）プロパノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］プロパノイル｝－Ｌ－システイン３２．８ｍｇ（３２μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール３．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛２６．１ｍｇ（１９２μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で２時間撹拌した。エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－テトラ酢酸５６．０ｍｇ（０．１９２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を凍結乾燥した。これによって、標題化合物２２．９ｍｇ（理論値の７１％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８８３（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２６３
Ｎ－［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］－β－アラニル－Ｓ－｛２－［（３－アミノプロピル）｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝アミノ］－２－オキソエチル｝－Ｌ－システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000369
Ｒ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル）－Ｌ－システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｃ７１）３０．０ｍｇ（０．０３６ｍｍｏｌ）及びＮ－［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］－β－アラニン（中間体Ｌ７８）９．８ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ １．０ｍＬに溶かし、ＨＡＴＵ １６．４ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン１４．０ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｎ－［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］－β－アラニル－Ｓ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル）－Ｌ－システイン４．２ｍｇ（１３％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法６）：Ｒｔ＝１．３１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９２５（Ｍ＋Ｈ）＋。
Ｎ－［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］－β－アラニル－Ｓ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル）－Ｌ－システイン１１．３ｍｇ（０．０１１ｍｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛５．０ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で２時間撹拌した。エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－テトラ酢酸１０．７ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物４．４ｍｇ（４０％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７８１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２６４
Ｎ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］－β－アラニル－Ｓ－｛２－［（３－アミノプロピル）｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝アミノ］－２－オキソエチル｝－Ｌ－システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000370
Ｒ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル）－Ｌ－システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｃ７１）３０．０ｍｇ（０．０３６ｍｍｏｌ）及びＮ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］－β－アラニン（中間体Ｌ７９）１２．２ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ １．０ｍＬに溶かし、ＨＡＴＵ １６．４ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン１４．０ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｎ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］－β－アラニル－Ｓ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル）－Ｌ－システイン８．９ｍｇ（２４％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法６）：Ｒｔ＝１．３８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９８１（Ｍ＋Ｈ）＋。
Ｎ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］－β－アラニル－Ｓ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル）－Ｌ－システイン１５．３ｍｇ（０．０１５ｍｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛６．３ｍｇ（０．０４５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で２時間撹拌した。エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－テトラ酢酸１３．５ｍｇ（０．０４５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物９．１ｍｇ（６２％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２６５
トリフルオロ酢酸／Ｎ－（３－アミノプロピル）－Ｎ－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－６，１７－ジオキソ－１０，１３－ジオキサ－３－チア－７，１６－ジアザドコサン－１－アミド（１：１）
Figure 0007251981000371
最初に１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－１４－チア－７，１１－ジアザ－２－シラヘプタデカン－１７－オン酸（中間体Ｃ６９）３０．０ｍｇ（４２．７μｍｏｌ）及びトリフルオロ酢酸／Ｎ－｛２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］エチル｝－６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド（１：１）（中間体Ｌ８２）２５．３ｍｇ（５５．６μｍｏｌ）を、アセトニトリル１．９ｍＬに入れ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン６０μＬ（３４０μｍｏｌ）及び２，４，６－トリプロピル－１，３，５，２，４，６－トリオキサトリホスフィナン２，４，６－トリオキサイド５０％の酢酸エチル中溶液３３μＬ（５６μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。水（２．０ｍＬ）を加え、精製を、分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２－（トリメチルシリル）エチル［４－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－５，１０，２１－トリオキソ－１４，１７－ジオキサ－７－チア－４，１１，２０－トリアザヘキサコサ－１－イル］カーバメート２６．７ｍｇ（理論値の６０％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２５（Ｍ＋Ｈ）＋。
２－（トリメチルシリル）エチル［４－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－５，１０，２１－トリオキソ－１４，１７－ジオキサ－７－チア－４，１１，２０－トリアザヘキサコサ－１－イル］カーバメート２５．３ｍｇ（２４．７μｍｏｌ）を、トリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛２０．２ｍｇ（１４８μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－テトラ酢酸４３．３ｍｇ（１４８μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物２３．４ｍｇ（理論値の９５％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８８１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２６６
トリフルオロ酢酸／Ｎ－（３－アミノプロピル）－Ｎ－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－１－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２，１３－ジオキソ－６，９－ジオキサ－１６－チア－３，１２－ジアザオクタデカン－１８－アミド（１：１）
Figure 0007251981000372
１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－１４－チア－７，１１－ジアザ－２－シラヘプタデカン－１７－オン酸（中間体Ｃ６９）３０．０ｍｇ（０．０４３ｍｍｏｌ）を最初に、トリフルオロ酢酸／Ｎ－｛２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］エチル｝－２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセトアミド（１：１）（中間体Ｌ８３）２２．２ｍｇ（０．０５６ｍｍｏｌ）とともにアセトニトリル１．９ｍＬに入れた。Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン６０μＬ（０．３４ｍｍｏｌ）を加え、Ｔ３Ｐ（５０％酢酸エチル中溶液）３３μＬ（０．０５６ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を室温で終夜撹拌した。水（２．０ｍＬ）を加えた。反応混合物を、分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２－（トリメチルシリル）エチル［１９－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－１－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２，１３，１８－トリオキソ－６，９－ジオキサ－１６－チア－３，１２，１９－トリアザドコサン－２２－イル］カーバメート２０．５ｍｇ（理論値の４９％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９６９（Ｍ＋Ｈ）＋。
２－（トリメチルシリル）エチル［１９－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－１－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２，１３，１８－トリオキソ－６，９－ジオキサ－１６－チア－３，１２，１９－トリアザドコサン－２２－イル］カーバメート１９．１ｍｇ（１９．７μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛１６．１ｍｇ（１１８μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－テトラ酢酸３４．６ｍｇ（１１８μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１３．９ｍｇ（理論値の７５％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８２５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２６７
Ｓ－｛２－［（３－アミノプロピル）｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝アミノ］－２－オキソエチル｝－Ｎ－［１－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２，１８－ジオキソ－６，９，１２，１５－テトラオキサ－３－アザオクタデカン－１８－イル］－Ｌ－システイニル－β－アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000373
最初に、アルゴン下に、１－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２－オキソ－６，９，１２，１５－テトラオキサ－３－アザオクタデカン－１８－オン酸（中間体Ｌ７４）１３．４ｍｇ（３３．３μｍｏｌ）を、ＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン９．３μＬ（５４．４μｍｏｌ）及びＨＡＴＵ １２．６ｍｇ（３３．３μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン４．７μＬ（２７．７μｍｏｌ）に溶かしたＳ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル）－Ｌ－システイニル－β－アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｆ２１６の合成参照）２５．０ｍｇ（２７．７μｍｏｌ）及びＤＭＦ １．０ｍＬを加えた。反応混合物を室温で９０分間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｓ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル）－Ｎ－［１－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２，１８－ジオキソ－６，９，１２，１５－テトラオキサ－３－アザオクタデカン－１８－イル］－Ｌ－システイニル－β－アラニン６．９０ｍｇ（理論値の１９％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝４．４４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１７２（Ｍ＋Ｈ）＋。
Ｓ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル）－Ｎ－［１－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２，１８－ジオキソ－６，９，１２，１５－テトラオキサ－３－アザオクタデカン－１８－イル］－Ｌ－システイニル－β－アラニン６．７０ｍｇ（５．７１μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール１．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛４．６７ｍｇ（３４．３μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－テトラ酢酸１０ｍｇ（３４．３μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物４．４ｍｇ（理論値の６７％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２８（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２６８
トリフルオロ酢酸／Ｎ－（３－アミノプロピル）－Ｎ－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２８－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－６，２３－ジオキソ－１０，１３，１６，１９－テトラオキサ－３－チア－７，２２－ジアザオクタコサン－１－アミド（１：１）
Figure 0007251981000374
最初に１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－１４－チア－７，１１－ジアザ－２－シラヘプタデカン－１７－オン酸（中間体Ｃ６９）３０．０ｍｇ（０．０４３ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸／Ｎ－（１４－アミノ－３，６，９，１２－テトラオキサテトラデカ－１－イル）－６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド（１：１）（中間体Ｌ８４）３０．２ｍｇ（０．０５６ｍｍｏｌ）とともにアセトニトリル２．０ｍＬに入れた。次に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン６０μＬ（０．３４ｍｍｏｌ）を加え、Ｔ３Ｐ（５０％酢酸エチル中溶液）３３μＬ（０．０５６ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を室温で終夜撹拌した。水（２．０ｍＬ）を加えた。反応混合物を、分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２－（トリメチルシリル）エチル［４－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－３２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－５，１０，２７－トリオキソ－１４，１７，２０，２３－テトラオキサ－７－チア－４，１１，２６－トリアザドトリアコンタ－１－イル］カーバメート２７．９ｍｇ（理論値の５９％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１１４（Ｍ＋Ｈ）＋。
２－（トリメチルシリル）エチル［４－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－３２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－５，１０，２７－トリオキソトリオキソ－１４，１７，２０，２３－テトラオキサ－７－チア－４，１１，２６－トリアザドトリアコンタ－１－イル］カーバメート２５．６ｍｇ（２３．０μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．５ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛１８．８ｍｇ（１３８μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－テトラ酢酸４０．３ｍｇ（１３８μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物２２．２ｍｇ（理論値の８８％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９６９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２６９
４－｛［（８Ｒ，１４Ｒ）－１３－（３－アミノプロピル）－１４－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－１－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－１５，１５－ジメチル－２，７，１２－トリオキソ－１０－チア－３，６，１３－トリアザヘキサデカン－８－イル］アミノ｝－４－オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000375
最初にＳ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル）－Ｎ－（４－ｔｅｒｔ－ブトキシ－４－オキソブタノイル）－Ｌ－システイン（中間体Ｃ７７）１７．０ｍｇ（０．０１９５ｍｍｏｌ）を、Ｎ－（２－アミノエチル）－２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセトアミド（中間体Ｌ１）４．９９ｍｇ（０．０２５３ｍｍｏｌ）とともにアセトニトリル１．０ｍＬに入れた。Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン２７μＬ（０．１６ｍｍｏｌ）を加え、Ｔ３Ｐ（５０％酢酸エチル中溶液）１５μＬ（０．０２５ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を室温で終夜撹拌した。水（２．０ｍＬ）を加えた。反応混合物を、分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物ｔｅｒｔ－ブチル４－｛［（１６Ｒ）－１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２３－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２，２－ジメチル－６，１２，１７，２２－テトラオキソ－５－オキサ－１４－チア－７，１１，１８，２１－テトラアザ－２－シラトリコサン－１６－イル］アミノ｝－４－オキソブタノエート９．５ｍｇ（理論値の４６％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０５２（Ｍ＋Ｈ）＋。
ｔｅｒｔ－ブチル４－｛［（１６Ｒ）－１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２３－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２，２－ジメチル－６，１２，１７，２２－テトラオキソ－５－オキサ－１４－チア－７，１１，１８，２１－テトラアザ－２－シラトリコサン－１６－イル］アミノ｝－４－オキソブタノエート８．３ｍｇ（７．８９μｍｏｌ）を、トリフルオロエタノール１．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛６．４５ｍｇ（４７．３μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で６時間撹拌した。二塩化亜鉛６．４５ｍｇ（４７．３μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で終夜撹拌した。エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－テトラ酢酸２７．７ｍｇ（９４．６μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１．１０ｍｇ（理論値の１４％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８５２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２７０
トリフルオロ酢酸／Ｎ－（３－アミノプロピル）－Ｎ－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－Ｎ′－（２－｛［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］アミノ｝エチル）コハク酸アミド（１：１）
Figure 0007251981000376
最初に、アルゴン下に、１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラペンタデカン－１５－オン酸（中間体Ｃ７８）１５．０ｍｇ（２２．９μｍｏｌ）を、ＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン８．０μＬ（４５．８μｍｏｌ）及びＨＡＴＵ １０．４ｍｇ（２７．４μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン４．０μＬ（２２．９μｍｏｌ）に溶かしたトリフルオロ酢酸／Ｎ－（２－アミノエチル）－２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセトアミド（１：１）（中間体Ｌ１）８．５４ｍｇ（２７．４μｍｏｌ）及びＤＭＦ １．０ｍＬを加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２－（トリメチルシリル）エチル［３－（｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝｛４－［（２－｛［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］－４－オキソブタノイル｝アミノ）プロピル］カーバメート１４．７ｍｇ（理論値の７７％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝１．３３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３５（Ｍ＋Ｈ）＋。
２－（トリメチルシリル）エチル［３－（｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝｛４－［（２－｛［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］－４－オキソブタノイル｝アミノ）プロピル］カーバメート１３．２ｍｇ（１５．８μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛１２．９ｍｇ（９４．８μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－テトラ酢酸２７．７ｍｇ（９４．６μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１０．９ｍｇ（理論値の８３％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６９１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２７１
４－｛［（２０Ｒ，２６Ｒ）－２５－（３－アミノプロピル）－２６－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－１－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２７，２７－ジメチル－２，１９，２４－トリオキソ－６，９，１２，１５－テトラオキサ－２２－チア－３，１８，２５－トリアザオクタコサン－２０－イル］アミノ｝－４－オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000377
最初に、アルゴン下に、Ｓ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル）－Ｎ－（４－ｔｅｒｔ－ブトキシ－４－オキソブタノイル）－Ｌ－システイン（中間体Ｃ７７）１９．４ｍｇ（２２．２μｍｏｌ）を、ＤＭＦ ２．０ｍＬに入れ、トリフルオロ酢酸／Ｎ－（１４－アミノ－３，６，９，１２－テトラオキサテトラデカ－１－イル）－２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセトアミド（１：１）（中間体Ｌ７４）２１．７ｍｇ（４４．４μｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン１２μＬ（６７μｍｏｌ）及びＨＡＴＵ １６．９ｍｇ（４４．４μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物ｔｅｒｔ－ブチル４－｛［（１６Ｒ）－１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－３５－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２，２－ジメチル－６，１２，１７，３４－テトラオキソ－５，２１，２４，２７，３０－ペンタオキサ－１４－チア－７，１１，１８，３３－テトラアザ－２－シラペンタトリアコンタン－１６－イル］アミノ｝－４－オキソブタノエート１８．１ｍｇ（理論値の６６％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝１．７９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１２５０（Ｍ＋Ｎａ）＋。
ｔｅｒｔ－ブチル４－｛［（１６Ｒ）－１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－３５－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２，２－ジメチル－６，１２，１７，３４－テトラオキソ－５，２１，２４，２７，３０－ペンタオキサ－１４－チア－７，１１，１８，３３－テトラアザ－２－シラペンタトリアコンタン－１６－イル］アミノ｝－４－オキソブタノエート１８．１ｍｇ（１４．７μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛１２．０ｍｇ（８８．４μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で４時間撹拌した。エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－テトラ酢酸２５．８ｍｇ（８８．４μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１２．３ｍｇ（理論値の７３％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２８（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２７２
トリフルオロ酢酸／Ｎ－（３－アミノプロピル）－Ｎ－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－Ｎ′－［１７－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－１６－オキソ－３，６，９，１２－テトラオキサ－１５－アザヘプタデカ－１－イル］コハク酸アミド（１：１）
Figure 0007251981000378
最初に、アルゴン下に、１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラペンタデカン－１５－オン酸（中間体Ｃ７８）１５．０ｍｇ（２２．９μｍｏｌ）を、ＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン８．０μＬ（４５．８μｍｏｌ）及びＨＡＴＵ １０．４ｍｇ（２７．４μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン４．０μＬ（２２．９μｍｏｌ）に溶かしたトリフルオロ酢酸／Ｎ－（１４－アミノ－３，６，９，１２－テトラオキサテトラデカ－１－イル）－２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセトアミド（１：１）（中間体Ｌ８５）１３．４ｍｇ（２７．４μｍｏｌ）及びＤＭＦ １．０ｍＬを加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２－（トリメチルシリル）エチル［２３－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－１－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２，１９，２２－トリオキソ－６，９，１２，１５－テトラオキサ－３，１８，２３－トリアザヘキサコサン－２６－イル］カーバメート１５．８ｍｇ（理論値の６８％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０１１（Ｍ＋Ｈ）＋。
２－（トリメチルシリル）エチル［２３－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－１－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２，１９，２２－トリオキソトリオキソ－６，９，１２，１５－テトラオキサ－３，１８，２３－トリアザヘキサコサン－２６－イル］カーバメート１５．１ｍｇ（１４．９μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛１２．２ｍｇ（８９．６μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－テトラ酢酸２６．２ｍｇ（８９．６μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１０．３ｍｇ（理論値の７０％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８６７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２７３
トリフルオロ酢酸／Ｎ－（３－アミノプロピル）－Ｎ－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－１－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２，１９－ジオキソ－６，９，１２，１５－テトラオキサ－２２－チア－３，１８－ジアザテトラコサン－２４－アミド（１：１）
Figure 0007251981000379
最初に、アルゴン下に、１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラヘプタデカン－１７－オン酸（中間体Ｃ６９）２０．０ｍｇ（２８．５μｍｏｌ）をＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン１０．０μＬ（５７．０μｍｏｌ）及びＨＡＴＵ １３．０ｍｇ（３４．２μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン５．０μＬ（２８．５μｍｏｌ）に溶かしたトリフルオロ酢酸／Ｎ－（１４－アミノ－３，６，９，１２－テトラオキサテトラデカ－１－イル）－２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセトアミド（１：１）（中間体Ｌ８５）１６．７ｍｇ（３４．２μｍｏｌ）及びＤＭＦ １．０ｍＬを加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２－（トリメチルシリル）エチル［２５－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－１－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２，１９，２４－トリオキソ－６，９，１２，１５－テトラオキサ－２２－チア－３，１８，２５－トリアザオクタコサン－２８－イル］カーバメート１８．６ｍｇ（理論値の６２％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０５７（Ｍ＋Ｈ）＋。
２－（トリメチルシリル）エチル［２５－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－１－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２，１９，２４－トリオキソ－６，９，１２，１５－テトラオキサ－２２－チア－３，１８，２５－トリアザオクタコサン－２８－イル］カーバメート１７．１ｍｇ（１６．２μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛１３．２ｍｇ（９７．０μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－テトラ酢酸２８．４ｍｇ（９７．０μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物９．８０ｍｇ（理論値の５９％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９１３（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２７４
Ｎ－［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］－Ｌ－バリル－Ｌ－アラニル－Ｓ－｛２－［（３－アミノプロピル）｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝アミノ］－２－オキソエチル｝－Ｌ－システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000380
最初にＳ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル）－Ｌ－システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｃ７１）１３．９ｍｇ（０．０１６７ｍｍｏｌ）を、Ｎ－［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］－Ｌ－バリル－Ｌ－アラニン（中間体Ｌ８６）７．０７ｍｇ（０．０２１７ｍｍｏｌ）とともアセトニトリル２．０ｍＬに入れた。Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン２３μＬ（０．１３ｍｍｏｌ）を加え、Ｔ３Ｐ（５０％酢酸エチル中溶液）１３μＬ（０．０２２ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｎ－［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］－Ｌ－バリル－Ｌ－アラニル－Ｓ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル）－Ｌ－システイン３．７０ｍｇ（理論値の１９％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２４（Ｍ＋Ｈ）＋。
Ｎ－［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］－Ｌ－バリル－Ｌ－アラニル－Ｓ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル）－Ｌ－システイン１０．６ｍｇ（１０．３μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛８．４６ｍｇ（６２．１μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－テトラ酢酸１８．１ｍｇ（６２．１μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物５．６０ｍｇ（理論値の５４％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．６９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８８０（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２７５
Ｎ－［３－（｛２－［（３－アミノプロピル）｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝アミノ］－２－オキソエチル｝スルファニル）プロパノイル］－Ｎ－（２－｛［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］アミノ｝エチル）－Ｌ－α－グルタミン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000381
最初に１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－１４－チア－７，１１－ジアザ－２－シラヘプタデカン－１７－オン酸（中間体Ｃ６９）３９．０ｍｇ（５５．６μｍｏｌ）を、ＤＭＦ ４．０ｍＬに入れ、１－ベンジル－５－［２－（トリメチルシリル）エチル］－Ｌ－グルタメート塩酸塩（１：１）（中間体Ｌ８９）４１．６ｍｇ（１１１μｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン２９μＬ（１７０μｍｏｌ）及びＨＡＴＵ ４２．３ｍｇ（１１１μｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を室温で１時間撹拌し、酢酸で反応停止し、分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物１－ベンジル－５－［２－（トリメチルシリル）エチル］－Ｎ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２，１７－トリオキソ－５－オキサ－１４－チア－７，１１－ジアザ－２－シラヘプタデカン－１７－イル）－Ｌ－グルタメート５３．１ｍｇ（理論値の９３％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．７１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２１［Ｍ＋Ｈ］＋。
最初に、アルゴン下に、酢酸パラジウム（ＩＩ）７．６０ｍｇ（３３．９μｍｏｌ）を、ジクロロメタン３．０ｍＬに入れ、トリエチルアミン１４μＬ（１００μｍｏｌ）及びトリエチルシラン１１０μＬ（６８０μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で５分間撹拌し、ジクロロメタン３．０ｍＬに溶かした１－ベンジル－５－［２－（トリメチルシリル）エチル］－Ｎ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２，１７－トリオキソ－５－オキサ－１４－チア－７，１１－ジアザ－２－シラヘプタデカン－１７－イル）－Ｌ－グルタメート６９．２ｍｇ（６７．７μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を段ボールフィルターで濾過し、フィルターケーキをジクロロメタンで洗浄した。溶媒を減圧下に留去した。残留物を分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物（１９Ｓ）－１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２，１７－トリオキソ－１９－｛３－オキソ－３－［２－（トリメチルシリル）エトキシ］プロピル｝－５－オキサ－１４－チア－７，１１，１８－トリアザ－２－シライコサン－２０－オン酸３８．４ｍｇ（理論値の６１％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．５３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９３１（Ｍ＋Ｈ）＋。
最初に（１９Ｓ）－１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２，１７－トリオキソ－１９－｛３－オキソ－３－［２－（トリメチルシリル）エトキシ］プロピル｝－５－オキサ－１４－チア－７，１１，１８－トリアザ－２－シライコサン－２０－オン酸１０．０ｍｇ（１０．７μｍｏｌ）を、ＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、Ｎ－（２－アミノエチル）－２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセトアミド／２，２，２－トリフルオロエタン－１，１－ジオール（１：１）（中間体Ｌ１）６．７３ｍｇ（２１．５μｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン５．６μＬ（３２μｍｏｌ）及びＨＡＴＵ ８．１７ｍｇ（２１．５μｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を室温で３時間撹拌し、酢酸で反応停止し、分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２－（トリメチルシリル）エチルＮ２－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２，１７－トリオキソ－５－オキサ－１４－チア－７，１１－ジアザ－２－シラヘプタデカン－１７－イル）－Ｎ－（２－｛［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］アミノ｝エチル）－Ｌ－α－グルタミネート６．９０ｍｇ（理論値の５８％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．５７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１１０［Ｍ＋Ｈ］＋。
２－（トリメチルシリル）エチルＮ２－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２，１７－トリオキソ－５－オキサ－１４－チア－７，１１－ジアザ－２－シラヘプタデカン－１７－イル）－Ｎ－（２－｛［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］アミノ｝エチル）－Ｌ－α－グルタミネート６．９０ｍｇ（６．２１μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛５．１ｍｇ（３７．２μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。二塩化亜鉛５．１ｍｇ（３７．２μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。二塩化亜鉛５．１ｍｇ（３７．２μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。二塩化亜鉛１０．１ｍｇ（７４．４μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で終夜及び室温で７２時間撹拌した。エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－テトラ酢酸５４．５ｍｇ（１８６μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物２．４ｍｇ（理論値の３９％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８６６（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２７６
Ｓ－｛２－［（３－アミノプロピル）｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝アミノ］－２－オキソエチル｝－Ｎ－｛３－［２－（２－｛［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］プロパノイル｝－Ｌ－システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000382
最初に、アルゴン下に、３－［２－（２－｛［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］プロパン酸（中間体Ｌ８７）９．０８ｍｇ（２８．９μｍｏｌ）を、ＤＭＦ １．０ｍＬに入れ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン８．３３μＬ（４８．２μｍｏｌ）及びＨＡＴＵ １１．０ｍｇ（２８．９μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌した。Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン４．６７μＬ（２４．１μｍｏｌ）に溶かしたＳ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル）－Ｌ－システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｃ７１）２０．０ｍｇ（２７．７μｍｏｌ）及びＤＭＦ １．０ｍＬを加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物Ｓ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル）－Ｎ－｛３－［２－（２－｛［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］プロパノイル｝－Ｌ－システイン４．７０ｍｇ（理論値の１９％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝２．４７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０１３（Ｍ＋Ｈ）＋。
Ｓ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル）－Ｎ－｛３－［２－（２－｛［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］プロパノイル｝－Ｌ－システイン１３．９ｍｇ（１３．７μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛５．６ｍｇ（４１．２μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。二塩化亜鉛５．６ｍｇ（４１．２μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で３０分間撹拌した。エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－テトラ酢酸２４．１ｍｇ（８２．４μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１０．８ｍｇ（理論値の８０％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．５８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８６９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２７７
Ｎ－［３－（｛２－［（３－アミノプロピル）｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝アミノ］－２－オキソエチル｝スルファニル）プロパノイル］－３－［（ブロモアセチル）アミノ］－Ｄ－アラニン／トリフルオロ酢酸（１１）
Figure 0007251981000383
トリフルオロ酢酸／－２－（トリメチルシリル）エチル３－アミノ－Ｎ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２，１７－トリオキソ－５－オキサ－１４－チア－７，１１－ジアザ－２－シラヘプタデカン－１７－イル）－Ｄ－アラニネート（１：１）（中間体Ｃ８０）８．９０ｍｇ（８．８８μｍｏｌ）及び１－（２－ブロモアセトキシ）ピロリジン－２，５－ジオン２．３１ｍｇ（９．７７μｍｏｌ）をジメチルホルムアミド１ｍＬに溶かし、Ｎ－メチルモルホリン２．９μＬ（２７μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を、分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２－（トリメチルシリル）エチルＮ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２，１７－トリオキソ－５－オキサ－１４－チア－７，１１－ジアザ－２－シラヘプタデカン－１７－イル）－３－［（ブロモアセチル）アミノ］－Ｄ－アラニネート５．８０ｍｇ（理論値の６５％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．５７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１００８（Ｍ＋Ｈ）＋。
２－（トリメチルシリル）エチルＮ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２，１７－トリオキソ－５－オキサ－１４－チア－７，１１－ジアザ－２－シラヘプタデカン－１７－イル）－３－［（ブロモアセチル）アミノ］－Ｄ－アラニネート５．８０ｍｇ（５．７５μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛４．７０ｍｇ（３４．５μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。二塩化亜鉛４．７０ｍｇ（３４．５μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で５時間撹拌した。エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－テトラ酢酸２０．２ｍｇ（６９．０μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１．７０ｍｇ（理論値の３４％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７６４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２７８
Ｎ－［３－（｛２－［（３－アミノプロピル）｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝アミノ］－２－オキソエチル｝スルファニル）プロパノイル］－３－｛［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］アミノ｝－Ｄ－アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000384
トリフルオロ酢酸／２－（トリメチルシリル）エチル３－アミノ－Ｎ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２，１７－トリオキソ－５－オキサ－１４－チア－７，１１－ジアザ－２－シラヘプタデカン－１７－イル）－Ｄ－アラニネート（１：１）（中間体Ｃ８０）１０．０ｍｇ（９．９８μｍｏｌ）及び１－｛２－［（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ］－２－オキソエチル｝－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオン２．７７ｍｇ（１１．０μｍｏｌ）をジメチルホルムアミド１ｍＬに溶かし、Ｎ－メチルモルホリン３．３μＬ（３０μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。酢酸２．０μＬ（３５μｍｏｌ）を反応混合物に加え、それを分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２－（トリメチルシリル）エチルＮ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２，１７－トリオキソ－５－オキサ－１４－チア－７，１１－ジアザ－２－シラヘプタデカン－１７－イル）－３－｛［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］アミノ｝－Ｄ－アラニネート５．５０ｍｇ（理論値の５４％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．５１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２４（Ｍ＋Ｈ）＋。
２－（トリメチルシリル）エチルＮ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２，１７－トリオキソ－５－オキサ－１４－チア－７，１１－ジアザ－２－シラヘプタデカン－１７－イル）－３－｛［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］アミノ｝－Ｄ－アラニネート５．５０ｍｇ（５．３６μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール１．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛４．３９ｍｇ（３２．２μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。二塩化亜鉛４．３９ｍｇ（３２．２μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。二塩化亜鉛４．３９ｍｇ（３２．２μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で４時間撹拌した。エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－テトラ酢酸２８．２ｍｇ（９６．５μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物２．７０ｍｇ（理論値の５６％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７８１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２７９
Ｎ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］－Ｌ－バリル－Ｎ－［３－（｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝［（｛（２Ｒ）－２－カルボキシ－２－［（３－カルボキシプロパノイル）アミノ］エチル｝スルファニル）アセチル］アミノ）プロピル］－Ｌ－アラニンアミド
Figure 0007251981000385
Ｓ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル）－Ｎ－（４－ｔｅｒｔ－ブトキシ－４－オキソブタノイル）－Ｌ－システイン（中間体Ｃ７７）１２．２ｍｇ（１４μｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛１１．４ｍｇ（８３．８μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－テトラ酢酸２４．５ｍｇ（８３．８μｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物４－｛［（１Ｒ）－２－（｛２－［（３－アミノプロピル）｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝アミノ］－２－オキソエチル｝スルファニル）－１－カルボキシエチル］アミノ｝－４－オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）４．６０ｍｇ（理論値の４２％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６７３（Ｍ＋Ｈ）＋。
４－｛［（１Ｒ）－２－（｛２－［（３－アミノプロピル）｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝アミノ］－２－オキソエチル｝スルファニル）－１－カルボキシエチル］アミノ｝－４－オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）１０．０ｍｇ（１２．７μｍｏｌ）及び２，５－ジオキソピロリジン－１－イルＮ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］－Ｌ－バリル－Ｌ－アラニネート（中間体Ｌ８８）７．４１ｍｇ（１２．７μｍｏｌ）をジメチルホルムアミド１．５ｍＬに溶かし、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン４．４μＬ（２５μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。酢酸２．０μＬ（３５μｍｏｌ）を反応混合物に加え、それを分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物５．２０ｍｇ（理論値の３９％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０３６（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２８０
トリフルオロ酢酸／Ｎ－［２－（｛（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］－３－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ベンズアミド（１：１）
Figure 0007251981000386
市販の１－（３－｛［（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ］カルボニル｝フェニル）－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオンへのカップリング及び次に塩化亜鉛による脱保護によって、中間体Ｃ６４から標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７５５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２８１
Ｎ－｛（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝－３－｛［Ｎ－（ブロモアセチル）－β－アラニル］アミノ｝－Ｄ－アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000387
最初に、修飾アミノ酸単位Ｎ－（ブロモアセチル）－β－アラニン及び２－（トリメチルシリル）エチル－３－アミノ－Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｄ－アラニネートをペプチド化学の従来法によって製造した。これらを、ＨＡＴＵ及びモルホリンの存在下に互いにカップリングさせた。次に、１０％トリフルオロ酢酸／ジクロロメタンを用いてｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル保護基を除去して、２－（トリメチルシリル）エチル３－｛［Ｎ－（ブロモアセチル）－β－アラニル］アミノ｝－Ｄ－アラニネート中間体を得た。
最後に、この中間体をＨＡＴＵ及び４－メチルモルホリンの存在下に中間体Ｃ５８にカップリングさせ、次に塩化亜鉛によって脱保護することで、標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７９１及び７９３（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２８２
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－Ｎ－（３－｛［Ｎ－（ブロモアセチル）グリシル］アミノ｝プロピル）ブタンアミド（１：１）
Figure 0007251981000388
最初に、ペプチド化学の従来法によってｔｅｒｔ－ブチルグリシネート及びブロモ無水酢酸から、中間体トリフルオロ酢酸／Ｎ－（３－アミノプロピル）－Ｎ２－（ブロモアセチル）グリシンアミド（１：１）を製造した。
最後に、この中間体をＨＡＴＵ及び４－メチルモルホリンの存在下に中間体Ｃ５８にカップリングさせ、次に塩化亜鉛によって脱保護することで、標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７４７及び７４９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２８３
Ｎ－［（２Ｒ）－２－（｛（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）－２－カルボキシエチル］－Ｎ２－（ブロモアセチル）－Ｌ－α－アスパラギン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000389
最初に、修飾アミノ酸単位（２Ｓ）－２－［（ブロモアセチル）アミノ］－４－オキソ－４－［２－（トリメチルシリル）エトキシ］ブタン酸を、（２Ｓ）－２－アミノ－４－オキソ－４－［２－（トリメチルシリル）エトキシ］ブタン酸及びブロモ無水酢酸、及び市販の３－｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝－Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｄ－アラニン／Ｎ－シクロヘキシルシクロヘキサンアミン（１：１）からのアミノ酸単位２－（トリメチルシリル）エチル－３－アミノ－Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｄ－アラニネートから製造した。その二つの単位をＨＡＴＵ及びモルホリンの存在下に互いにカップリングさせ、次にｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル保護基を、５％トリフルオロ酢酸／ジクロロメタンを用いて除去して、シリルエチルエステル保護基を得て、そうしてトリフルオロ酢酸／２－（トリメチルシリル）エチル－Ｎ－｛（２Ｒ）－２－アミノ－３－オキソ－３－［２－（トリメチルシリル）エトキシ］プロピル｝－Ｎ２－（ブロモアセチル）－Ｌ－α－アスパラギナート（１：１）中間体を得た。
最後に、この中間体をＨＡＴＵ及び４－メチルモルホリンの存在下に中間体Ｃ５８にカップリングさせ、次に塩化亜鉛によって脱保護することで、標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３５及び８３７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２８４
Ｎ－｛（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝－３－｛［１－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２，１８－ジオキソ－６，９，１２，１５－テトラオキサ－３－アザオクタデカン－１８－イル］アミノ｝－Ｄ－アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000390
最初に、ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、中間体Ｌ８０を市販の（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）酢酸にカップリングさせ、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル保護基を、１６％トリフルオロ酢酸／ジクロロメタンを用いて除去して、シリルエチルエステル保護基を得た。
最後に、この中間体をＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｃ５８にカップリングさせ、次に塩化亜鉛によって脱保護することで、標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．４６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９８４．４５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２８５
Ｎ－｛（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝－３－［（１８－ブロモ－１７－オキソ－４，７，１０，１３－テトラオキサ－１６－アザオクタデカン－１－オイル）アミノ］－Ｄ－アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000391
最初に、中間体Ｌ８０を市販のブロモ無水酢酸でアシル化し、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル保護基を、２０％トリフルオロ酢酸／ジクロロメタンを用いて除去して、シリルエチルエステル保護基を得た。
最後に、この中間体をＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｃ５８にカップリングさせ、次に塩化亜鉛によって脱保護することで、標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９６７及び９６９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２８６
１－［（Ｎ－｛（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝－３－｛［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］アミノ｝－Ｄ－アラニル）アミノ］－３，６，９，１２－テトラオキサペンタデカン－１５－オン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000392
最初に、中間体Ｌ９１を、ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）酢酸にカップリングさせ、Ｂｏｃ保護基を、１２．５％ＴＦＡ／ＤＣＭで除去した。得られた中間体を、ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｃ５８にカップリングさせ、塩化亜鉛による脱保護によって標題化合物に変換した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９８４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２８８
Ｎ－｛（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝－３－（｛Ｎ－［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］－Ｌ－セリル｝アミノ）－Ｄ－アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000393
中間体Ｃ７４ ３５ｍｇ（３９μｍｏｌ）を、ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピル（ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙ）エチルアミンの存在下に、ｔｅｒｔ－ブチルＯ－ｔｅｒｔ－ブチル－Ｌ－セリネート及び（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）酢酸から事前に製造しておいたＮ－［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］－Ｌ－セリンとカップリングさせた。塩化亜鉛による脱保護及びＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物１４ｍｇ（理論値の３８％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．４３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８２４．３４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２８９
Ｎ２－｛（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝－Ｎ６－［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］－Ｄ－リジン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000394
最初に、ペプチド化学の従来法によって、Ｎ６－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｎ２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｄ－リジンからトリフルオロ酢酸／２－（トリメチルシリル）エチル－Ｎ６－［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］－Ｄ－リシネート（１：１）を製造した。
次に、この中間体１２．５ｍｇ（２５μｍｏｌ）を、ＨＡＴＵ及び４－メチルモルホリンの存在下に中間体Ｃ５８ １５ｍｇ（２３μｍｏｌ）とカップリングさせた。塩化亜鉛による脱保護及びＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物１４ｍｇ（理論値の５３％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７７９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２９０
Ｎ２－｛（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝－Ｎ６－（ブロモアセチル）－Ｄ－リジン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000395
最初に、ペプチド化学の従来法によって、Ｎ６－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｎ２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｄ－リジンから、トリフルオロ酢酸／２－（トリメチルシリル）エチル－Ｎ６－（ブロモアセチル）－Ｄ－リシネート（１：１）を製造した。
この中間体１２ｍｇ（２５μｍｏｌ）を、ＨＡＴＵ及び４－メチルモルホリンの存在下に中間体Ｃ５８ １５ｍｇ（２３μｍｏｌ）とカップリングさせた。塩化亜鉛による脱保護及びＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物７ｍｇ（理論値の３６％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７６２及び７６４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２９１
Ｎ－［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］－Ｌ－バリル－Ｎ－｛３－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］プロピル｝－Ｌ－アラニンアミド
Figure 0007251981000396
最初に、ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＮ－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｌ－バリル－Ｌ－アラニンにカップリングさせることで、実施例Ｍ９から標題化合物を製造した。次の段階で、室温で水素標準圧下に１０％パラジウム／活性炭で１時間水素化することでＺ保護基を除去し、次にＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）酢酸にカップリングさせることで、脱保護中間体を標題化合物に変換した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７７７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２９３
Ｎ－｛（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝－３－｛［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ベンゾイル］アミノ｝－Ｄ－アラニン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000397
中間体Ｃ７４ ３５ｍｇ（３９μｍｏｌ）をＤＭＦ ４ｍＬに溶かし、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、市販の１－（３－｛［（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ］カルボニル｝フェニル）－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオン１３．５ｍｇ（４３μｍｏｌ）にカップリングさせた。塩化亜鉛による脱保護及びＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物１２ｍｇ（理論値の３４％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝０．９３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７９９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２９４
Ｎ－｛５－［（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ］－５－オキソペンタノイル｝－Ｌ－バリル－Ｎ－｛（１Ｓ）－３－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－カルボキシプロピル｝－Ｌ－アラニンアミド
Figure 0007251981000398
メタノール１２ｍＬに溶かした中間体Ｃ７６ ４１ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を、室温で１時間、水素標準圧下に１０％パラジウム／活性炭１０ｍｇで水素化した。触媒を濾去し、溶媒を減圧下に除去した。これによって、脱保護中間体３２ｍｇ（理論値の９２％）を得た。
この中間体１５ｍｇ（０．０２２ｍｍｏｌ）をＤＭＦに溶かし、１，１′－［（１，５－ジオキソペンタｎ－１，５－ジイル）ビス（オキシ）］ジピロリジン－２，５－ジオン１３ｍｇ（０．０３９ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン７μＬを加えた。室温で１時間撹拌後、反応混合物を濃縮し、残留物をＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物９ｍｇ（理論値の４５％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８９５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２９５
Ｎ－［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］－Ｌ－バリル－Ｎ－｛（１Ｓ）－３－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－カルボキシプロピル｝－Ｌ－アラニンアミド
Figure 0007251981000399
メタノール１２ｍＬに溶かした中間体Ｃ７６ ４１ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を、室温で１時間、水素標準圧下に１０％パラジウム／活性炭１０ｍｇで水素化した。触媒を濾去し、溶媒を減圧下に除去した。これによって、脱保護中間体３２ｍｇ（理論値の９２％）を得た。
この中間体１５ｍｇ（０．０２２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ４ｍＬに溶かし、１－｛２－［（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ］－２－オキソエチル｝－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオン１０ｍｇ（０．０３９ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン７μＬを加えた。室温で２時間撹拌後、反応混合物を濃縮し、残留物をＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物１０ｍｇ（理論値の５６％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８２１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２９６
トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－Ｎ－｛２－［（２－｛［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］アミノ｝エチル）スルホニル］エチル｝ブタンアミド（１：１）
Figure 0007251981000400
ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｃ５８にカップリングさせることで、中間体Ｌ８１から標題化合物を製造した。次の段階で、ＤＣＭ／メタノール１：１中室温で水素標準圧下に３０分間、１０％パラジウム／活性炭での水素化によってＺ保護基を除去した。ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）酢酸にカップリングさせ、最後に塩化亜鉛による脱保護によって、脱保護中間体を標題化合物に変換した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７８５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ２９７
Ｓ－｛２－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（ピロリジン－３－イルメチル）アミノ］－２－オキソエチル｝－Ｎ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］－Ｌ－システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（異性体１）
Figure 0007251981000401
アルゴン下に、塩化亜鉛１５ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）を、Ｓ－［２－（｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝｛［１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）ピロリジン－３－イル］メチル｝アミノ）－２－オキソエチル］－Ｎ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］－Ｌ－システイン（中間体Ｃ９２）３６ｍｇ（０．０３ｍｍｏｌ、純度６８％）の２，２，２－トリフルオロエタノール（０．７４ｍＬ）中溶液に加え、反応混合物を５０℃で７時間撹拌した。次に、ＥＤＴＡ ３２ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１５分間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を水及び飽和ＮａＣｌ溶液で繰り返し洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物６．４ｍｇ（理論値の２５％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７９２（Ｍ＋Ｈ－ＣＦ３ＣＯ２Ｈ）＋。
中間体Ｆ２９８
Ｓ－｛２－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（ピロリジン－３－イルメチル）アミノ］－２－オキソエチル｝－Ｎ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］－Ｌ－システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（異性体２）
Figure 0007251981000402
アルゴン下に、塩化亜鉛１９ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）を、Ｓ－［２－（｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝｛［１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）ピロリジン－３－イル］メチル｝アミノ）－２－オキソエチル］－Ｎ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］－Ｌ－システイン（中間体Ｃ９１）４５ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ、純度７１％）の２，２，２－トリフルオロエタノール（０．９４ｍＬ）中溶液に加え、反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。次に、ＥＤＴＡ ４２ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１５分間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を水及び飽和ＮａＣｌ溶液で繰り返し洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物５．７ｍｇ（理論値の１８％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７９１（Ｍ＋Ｈ－ＣＦ３ＣＯ２Ｈ）＋。
中間体Ｆ２９９
Ｓ－（２－｛（３－アミノプロピル）［（Ｒ）－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］（シクロヘキシル）メチル］アミノ｝－２－オキソエチル）－Ｎ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］－Ｌ－システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000403
Ｓ－｛１１－［（Ｒ）－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］（シクロヘキシル）メチル］－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル｝－Ｎ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］－Ｌ－システイン（中間体Ｃ８４）８８．０ｍｇ（０．０９ｍｍｏｌ）の２，２，２－トリフルオロエタノール（１．８８ｍＬ）中溶液に、塩化亜鉛７６．８ｍｇ（０．５７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。次に、ＥＤＴＡ １６４．６ｍｇ（０．５７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１５分間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を水及び飽和ＮａＣｌ溶液で繰り返し洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物３１ｍｇ（理論値の３５％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．８２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７９２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ３００
（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－Ｎ－（２－｛［（２Ｒ）－２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）プロパノイル］アミノ｝エチル）ブタンアミド
Figure 0007251981000404
アルゴン下に、２－（トリメチルシリル）エチル｛（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－［（２－｛［（２Ｒ）－２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）プロパノイル］アミノ｝エチル）アミノ］－１－オキソブタン－２－イル｝カーバメート（中間体１００）７ｍｇ（０．０８ｍｍｏｌ）の２，２，２－トリフルオロエタノール（０．２ｍＬ）中溶液に、塩化亜鉛１１ｍｇ（０．０８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で８時間撹拌した。次に、ＥＤＴＡ １４ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１５分間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を水及び飽和ＮａＣｌ溶液で繰り返し洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物１．６ｍｇ（理論値の２７％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７０７（Ｍ＋Ｈ－ＣＦ３ＣＯ２Ｈ）＋。
中間体Ｆ３０２
Ｓ－｛２－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（ピロリジン－３－イルメチル）アミノ］－２－オキソエチル｝－Ｎ－［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］－Ｌ－システイントリフルオロアセテート（１：１）（異性体１）
Figure 0007251981000405
アルゴン下に、Ｓ－［２－（｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝｛［（１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）ピロリジン－３－イル］メチル｝アミノ）－２－オキソエチル］－Ｎ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］－Ｌ－システイン（中間体Ｃ９４）５６．９ｍｇ（５８．２ｍｍｏｌ、純度８５％）の２，２，２－トリフルオロエタノール（１．４ｍＬ）中混合物に、塩化亜鉛３１．７ｍｇ（０．２３ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。次に、ＥＤＴＡ ６８．０ｍｇ（０．２３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１５分間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を水及び飽和ＮａＣｌ溶液で繰り返し洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物７ｍｇ（理論値の１３％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７３６（Ｍ＋Ｈ－ＣＦ３ＣＯ２Ｈ）＋。
中間体Ｆ３０５
Ｎ－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－６，１７－ジオキソ－Ｎ－（ピロリジン－３－イルメチル）－１０，１３－ジオキサ－３－チア－７，１６－ジアザドコサン－１－アミド／トリフルオロ酢酸（１：１）（異性体２）
Figure 0007251981000406
ｔｅｒｔ－ブチル３－［２－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２４－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－３，８，１９－トリオキソ－１２，１５－ジオキサ－５－チア－２，９，１８－トリアザテトラコサ－１－イル］ピロリジン－１－カルボキシレート（中間体Ｃ９９）２４．８０ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）の２，２，２－トリフルオロエタノール（０．６５ｍＬ）中溶液に、塩化亜鉛１３．４２ｍｇ（０．１０ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で８時間撹拌した。次に、ＥＤＴＡ ２８．７８ｍｇ（０．１０ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１５分間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を水及び飽和ＮａＣｌ溶液で繰り返し洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、標題化合物１０ｍｇ（理論値の４４％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝３．１１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９０７（Ｍ＋Ｈ－ＣＦ３ＣＯ２Ｈ）＋。
中間体Ｆ３０６
Ｓ－｛２－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（３－｛［Ｎ２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｌ－アスパラギニル］アミノ｝プロピル）アミノ］－２－オキソエチル｝－Ｎ－［１－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２，１８－ジオキソ－６，９，１２，１５－テトラオキサ－３－アザオクタデカン－１８－イル］－Ｌ－システイン
Figure 0007251981000407
中間体Ｆ２５７ ２２ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（０．２２ｍＬ）中溶液に室温で、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン１０．７μＬ（０．０６２ｍｍｏｌ）及びＮ－α－Ｂｏｃ－Ｌ－アスパラギンＮ－ヒドロキシコハク酸イミドエステル１０ｍｇを加えた。混合物を１５分間攪拌した。水（２ｍＬ）及びＡＣＮ（４ｍＬ）を加えた。反応溶液を分取ＨＰＬＣ（溶離液：ＡＣＮ／水＋０．１％ＴＦＡ、勾配＝１：９→３：２）によって精製した。これによって、標題化合物２１ｍｇ（理論値の８７％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１７１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ３０７
Ｓ－［２－（［３－（Ｌ－アスパラギニルアミノ）プロピル］｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝アミノ）－２－オキソエチル］－Ｎ－［１－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２，１８－ジオキソ－６，９，１２，１５－テトラオキサ－３－アザオクタデカン－１８－イル］－Ｌ－システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000408
中間体Ｆ３０６ ２１ｍｇ（０．０１７ｍｍｏｌ）の２，２，２－トリフルオロエタノール（１．５ｍＬ）中溶液に、塩化亜鉛２４．３ｍｇ（０．１７８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を６０℃で６０分間攪拌した。ＥＤＴＡ ５２．１ｍｇ（０．１７８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１５分間攪拌した。水（２ｍＬ）及びＡＣＮ（４ｍＬ）を加えた。反応溶液を濾過し、分取ＨＰＬＣ（溶離液：ＡＣＮ／水＋０．１％ＴＦＡ、勾配＝１：９→３：２）によって精製した。これによって、標題化合物１８ｍｇ（理論値の８５％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０７１（Ｍ＋Ｈ）＋。
ＡＰＤＣ又はＡＤＣ前駆体（中間体シリーズＱ）の一般的合成方法
ＡＰＤＣ前駆体：
Ｆシリーズの上記中間体（Ｆ１～Ｆ３０５）又は保護されていても良い前駆体は、適宜に最終脱保護後であっても、図式１に従ってＡＰＤＣ前駆体Ｑに変換することができる。レグマイン開裂性ヘッド基のＮ末端アミノ基の放出及びそれに続く各種構造の置換基Ｚ１によるＡＰＤＣ前駆体分子の修飾（図式１）後に、ＡＰＤＣの特性のプロファイルの改善も達成可能である。ＡＰＤＣ前駆体分子の抗体への結合のためのタンパク質反応性基は、位置Ｒ１、Ｒ２又はＲ３にあり得る。
例示的方法について、ここで説明する。
中間体Ｆ１～Ｆｘ ０．０３７ｍｍｏｌを、好適な溶媒、例えばＤＭＦ、ＤＭＳＯ、ＤＣＭ、クロロホルム、トルエン、ＴＨＦ、メタノール又はそれの混合物１から２０ｍＬ、好ましくは５から１０ｍＬに取り、０．０３９ｍｍｏｌのＮ末端修飾トリペプチド誘導体、例えば中間体Ｌ９２を加え、０．０４１ｍｍｏｌの標準的カップリング試薬、例えばＨＡＴＵ、ＥＤＣＩ／ＨＯＢＴ、ＢＥＰなど、及び０．１１ｍｍｏｌの標準的塩基、例えばＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、４－メチルモルホリンなども加える。室温で５分間撹拌後、混合物をトリフルオロ酢酸２滴で酸性とし、濃縮する。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製する。適切な分画を減圧下に濃縮し、残留物をアセトニトリル／水から凍結乾燥する。
結合したトリペプチド誘導体の前記Ｎ末端修飾が保護基である場合、それはその後に、公知の方法によって除去することができ、例えば好ましくは水素化分解によるＺ保護基、酸加水分解若しくは塩化亜鉛によるＢｏｃ保護基、塩基加水分解によるＦｍｏｃ保護基、又はフッ化物による若しくは塩化亜鉛を用いるＴｅｏｃ基である。
最後に、そうして放出されたアミノ基を、例えば、活性エステル、酸塩化物、イソシアネートなどのアミン反応性基により、又は標準的カップリング試薬、例えばＨＡＴＵ、ＥＤＣＩ／ＨＯＢＴ、ＢＥＰなど、及び標準的塩基、例えばＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、４－メチルモルホリンなどの存在下でのカルボン酸誘導体へのカップリングによってアシル化又はアルキル化して、特性のプロファイルを改善することができる。分子中にさらなる保護基がなお存在する場合、それは最後の段階で除去することができる。
図式１：
Figure 0007251981000409
［ａ）：ＨＡＴＵ、ＤＭＦ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、ＲＴ又はＥＤＣＩ、ＨＯＢＴ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ；ｂ）Ｈ２、１０％Ｐｄ－Ｃ、ＭｅＯＨ、ＲＴ；ｃ）Ｚ１－ＣＯＯＨ、ＥＤＣＩ、ＨＯＢＴ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ又はＺ１－ＣＯＯＨ、ＨＡＴＵ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ又はＺ１－ＣＯＯＳｕ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ］
ＡＤＣ前駆体：
さらに、タンパク質反応性基をまだ含まない他の中間体を、図式２及び３に従って、レグマイン開裂性ＡＤＣ前駆体に変換することができる。
図式２：
Figure 0007251981000410
［ａ）：ＨＡＴＵ、ＤＭＦ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、ＲＴ又はＥＤＣＩ、ＨＯＢＴ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ；ｂ）Ｈ２、１０％Ｐｄ－Ｃ、ＭｅＯＨ、ＲＴ；ｃ）１，１′－［（１，５－ジオキソペンタン－１，５－ジイル）ビス（オキシ）］ジピロリジン－２，５－ジオン、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ］
図式３：
Figure 0007251981000411
［ａ）：ＨＡＴＵ、ＤＭＦ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、ＲＴ又はＥＤＣＩ、ＨＯＢＴ、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ；ｂ）Ｈ２、１０％Ｐｄ－Ｃ、ＭｅＯＨ、ＲＴ；ｃ）１，１′－［（１，５－ジオキソペンタン－１，５－ジイル）ビス（オキシ）］ジピロリジン－２，５－ジオン、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＦ、ＲＴ］
図式１から３に示したベンジルオキシカルボニル基に代わるものとして、ペプチド化学で確立された他の保護基を用い、同様に公知である相当する方法によってそれらを除去させることが可能である。保護基戦略の選択を、分子に生じる他の構造要素との適合性に関連する当業者に公知の要件に応じて行う。分子中のさらなる保護基がなお存在する場合、それは最終段階で除去することができる。
それらの合成は、順序に関して並べ変えても良い。
さらに、リンカー構造Ｌ１からＬ２の文脈でのタンパク質反応性基は、特許請求の範囲内で変えることができる。
中間体Ｒ１
Ｎ－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｎ１－｛（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－［（２－｛［－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］－１－オキソブタン－２－イル｝－Ｌ－アスパルタミド
Figure 0007251981000412
中間体Ｆ１０４ ７．５ｍｇ（０．００９ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ２ｍＬに溶かし、ＨＡＴＵ ５．３ｍｇ（０．０１４ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン５μＬ及び中間体Ｌ１０８ ５．８ｍｇ（０．０１１ｍｍｏｌ）を加えた後、室温で１５分間攪拌した。次に、混合物を減圧下に濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。標題化合物３．２ｍｇ（理論値の３１％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０８３（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｒ２
Ｎ－イソニコチニル－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｎ１－｛（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコリル）アミノ］－１－［（２－｛［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］－１－オキソブタン－２－イル｝－Ｌ－アスパルタミドトリフルオロアセテート（１：１）
Figure 0007251981000413
中間体Ｒ１と同様にして、中間体Ｆ１０４ １２．７ｍｇ（０．０１６ｍｍｏｌ）を中間体Ｌ１０９ ７．８ｍｇ（０．０１６ｍｍｏｌ）にカップリングさせた。標題化合物４．５ｍｇ（理論値の２４％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．７４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０５４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｒ３
Ｎ－（ピリジン－４－イルアセチル）－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｎ１－｛（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－［（２－｛［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］－１－オキソブタン－２－イル｝－Ｌ－アスパルタミドトリフルオロアセテート（１：１）
Figure 0007251981000414
中間体Ｒ１と同様にして、中間体Ｆ１０４ １００ｍｇ（０．１２４ｍｍｏｌ）を、中間体Ｌ１１０ ７５ｍｇ（０．１５ｍｍｏｌ）にカップリングさせた。分取ＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物５８ｍｇ（理論値の３９％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０６８（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｒ４
Ｎ－アセチル－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｎ１－｛（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－［（２－｛［－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］－１－オキソブタン－２－イル｝－Ｌ－アスパルタミド
Figure 0007251981000415
中間体Ｒ１と同様にして、中間体Ｆ１０４ ２０ｍｇ（０．０２５ｍｍｏｌ）を中間体Ｌ１１１ ３０．６ｍｇ（０．０６２ｍｍｏｌ）にカップリングさせた。標題化合物２．３ｍｇ（理論値の９％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９９１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｒ５
Ｎ－［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｎ１－｛（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－［（３－｛［（１Ｓ）－１，３－ジカルボキシプロピル］アミノ｝－３－オキソプロピル）アミノ］－１－オキソブタン－２－イル｝－Ｌ－アスパルタミド
Figure 0007251981000416
化合物Ｃ１１０から、ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｌ１０８にカップリングさせることで、標題化合物を製造した。次の段階で、標準水素圧下に室温で１時間にわたりメタノール中１０％パラジウム／活性炭で水素化することによって全ての保護基を除去し、次に脱保護中間体を、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に１－｛２－［（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ］－２－オキソエチル｝－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオンとの反応によって標題化合物に変換した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１０７［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｒ６
Ｎ－｛５－［（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ］－５－オキソペンタノイル｝－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｎ１－｛（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－［（３－｛［（１Ｓ）－１，３－ジカルボキシプロピル］アミノ｝－３－オキソプロピル）アミノ］－１－オキソブタン－２－イル｝－Ｌ－アスパルタミド
Figure 0007251981000417
化合物Ｃ１１０から、最初にＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｌ１０８にカップリングさせることで、標題化合物を製造した。次の段階で、標準水素圧下に室温で１．５時間にわたりメタノール中１０％パラジウム／活性炭で水素化することで全ての保護基をによって除去し、ＤＭＦ中Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に１，１′－［（１，５－ジオキソペンタン－１，５－ジイル）ビス（オキシ）］ジピロリジン－２，５－ジオンと反応させることで、脱保護中間体を標題化合物に変換した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１８１［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｒ７
Ｎ－（ピリジン－４－イルアセチル）－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｎ１－［（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－｛［２－（｛５－［（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ］－５－オキソペンタノイル｝アミノ）エチル］アミノ｝－１－オキソブタン－２－イル］－Ｌ－アスパルタミド
Figure 0007251981000418
ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｃ１０２をｔｅｒｔ－ブチル（２－アミノエチル）カーバメートにカップリングさせ、次に室温で標準水素圧下に１時間にわたりＤＣＭ－メタノール１：１中にて１０％パラジウム／活性炭で水素化することでＺ保護基を除去し、次にＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｌ１１０にカップリングさせ、次に、トリフルオロエタノール中にて５０℃で２時間にわたり６当量の塩化亜鉛と攪拌することでＢｏｃ基を除去することによって、標題化合物を製造した。最終段階で、得られた中間体をＤＭＦに取り、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に１，１′－［（１，５－ジオキソペンタン－１，５－ジイル）ビス（オキシ）］ジピロリジン－２，５－ジオンによって標題化合物に変換した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１４２［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｒ８
Ｎ－（ピリジン－４－イルアセチル）－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｎ１－［（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－（｛２－［（Ｎ－｛５－［（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ］－５－オキソペンタノイル｝グリシル）アミノ］エチル｝アミノ）－１－オキソブタン－２－イル］－Ｌ－アスパルタミド
Figure 0007251981000419
中間体Ｃ１０２及び中間体Ｌ１１２から、中間体Ｒ７と同様にして、標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１９９［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｒ９
Ｎ－［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｎ１－｛（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－［（３－｛［（１Ｒ）－１，３－ジカルボキシプロピル］アミノ｝－３－オキソプロピル）アミノ］－１－オキソブタン－２－イル｝－Ｌ－アスパルタミド
Figure 0007251981000420
化合物Ｃ１１１から、最初にＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｌ１０７にカップリングさせ、次に塩化亜鉛によって脱保護することで、標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１０７［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｒ１０
トリフルオロ酢酸／Ｎ－（ピリジン－４－イルアセチル）－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｎ１－［１３－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－１－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２，７，１２－トリオキソ－１０－チア－３，６，１３－トリアザヘキサデカン－１６－イル］－Ｌ－アスパルタミド（１：１）
Figure 0007251981000421
最初に、トリフルオロ酢酸／３－（｛２－［（３－アミノプロピル）｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝アミノ］－２－オキソエチル｝スルファニル）－Ｎ－（２－｛［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］アミノ｝エチル）プロパンアミド（１：１）（中間体Ｆ２４０）１５．０ｍｇ（１７．６μｍｏｌ）を、Ｎ－（ピリジン－４－イルアセチル）－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｌ－アスパラギン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｌ１１０）１１．６ｍｇ（２２．９μｍｏｌ）とともにアセトニトリル２．０ｍＬ中に入れた。次に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン２５μＬ（０．１４ｍｍｏｌ）を加え、Ｔ３Ｐ（酢酸エチル中５０％）１４μＬ（２３μｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を室温で３０分間攪拌した。反応混合物を分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空乾燥させた。これによって、標題化合物５．７０ｍｇ（理論値の２６％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１１２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｒ１１
Ｎ－（ピリジン－４－イルアセチル）－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｎ１－［（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－（｛４－［（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ］－４－オキソブチル｝アミノ）－１－オキソブタン－２－イル］－Ｌ－アスパルタミド
Figure 0007251981000422
最初に、中間体Ｃ１１４ ２０ｍｇ（３１μｍｏｌ）を、Ｎ－（ピリジン－４－イルアセチル）－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｌ－アスパラギン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｌ１１０）１１．６ｍｇ（２２．９μｍｏｌ）とともにＤＭＦ ５．０ｍＬに入れた。次に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン１１μＬ及びＨＡＴＵ ２１ｍｇ（５５μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で６０分間攪拌した。反応混合物を分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空乾燥させた。次に、トリフルオロエタノール中５０℃で２時間にわたり６当量の塩化亜鉛とともに攪拌することで、ｔｅｒｔ－ブチルエステル基を除去した。６当量のＥＤＴＡを加えた後、分取ＨＰＬＣによって精製した。最終段階で、得られた中間体をＤＭＦに取り、１５当量の１－ヒドロキシピロリジン－２，５－ジオンを用い、５当量のＨＡＴＵ及び５当量のＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に６０分間にわたり攪拌することで標題化合物に変換した。後者を分取ＨＰＬＣによって精製した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０７１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｒ１２
Ｎ－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｎ１－｛（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－［（２－｛［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］－１－オキソブタン－２－イル｝－Ｌ－α－アスパラギン
Figure 0007251981000423
化合物Ｆ１０４から、最初にＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＤＭＦ中で中間体Ｌ１１３にカップリングさせ、次に塩化亜鉛によって脱保護することで標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０８４［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｒ１３
Ｎ－アセチル－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｎ１－［（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－（｛２－［（Ｎ－｛５－［（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ］－５－オキソペンタノイル｝－Ｌ－γ－グルタミル）アミノ］エチル｝アミノ）－１－オキソブタン－２－イル］－Ｌ－アスパルタミド
Figure 0007251981000424
最初に、中間体Ｃ１１２を、ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に（４Ｓ）－５－（ベンジルオキシ）－４－｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝－５－オキソペンタン酸にカップリングさせた。次に、室温で水素標準圧下に１時間にわたりＤＣＭ／メタノール１：１中にて１０％パラジウム／活性炭で水素化することで完全な脱保護を行った。最後に、３当量のＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＤＭＦ中にて５当量の１，１′－［（１，５－ジオキソペンタン－１，５－ジイル）ビス（オキシ）］ジピロリジン－２，５－ジオンと反応させることで、標題化合物を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１９４［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｒ１４
Ｎ－アセチル－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｎ１－［（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－｛［（１Ｒ）－１－カルボキシ－２－（｛５－［（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ］－５－オキソペンタノイル｝アミノ）エチル］アミノ｝－１－オキソブタン－２－イル］－Ｌ－アスパルタミド
Figure 0007251981000425
最初に、ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、中間体Ｃ１１３を中間体Ｌ１１１にカップリングさせた。次に、室温で水素標準圧下に１時間にわたりＤＣＭ／メタノール１：１中にて１０％パラジウム／活性炭での水素化によって完全な脱保護を行った。最後に、３．５当量のＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＤＭＦ中にて２．５当量の１，１′－［（１，５－ジオキソペンタン－１，５－ジイル）ビス（オキシ）］ジピロリジン－２，５－ジオンと反応させることで、標題化合物を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１０９［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｒ１５
Ｎ－アセチル－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｎ１－［（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－（｛２－［（Ｎ－｛５－［（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ］－５－オキソペンタノイル｝－Ｄ－α－グルタミル）アミノ］エチル｝アミノ）－１－オキソブタン－２－イル］－Ｌ－アスパルタミド
Figure 0007251981000426
最初に、ＤＭＦ中の中間体Ｃ１１２を、ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に市販の（２Ｒ）－５－（ベンジルオキシ）－２－｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝－５－オキソペンタン酸にカップリングさせた。次に、室温で水素標準圧下に１時間にわたりメタノール中にて１０％パラジウム／活性炭での水素化によって完全な脱保護を行った。最後に、３当量のＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＤＭＦ中に２．５当量の１，１′－［（１，５－ジオキソペンタン－１，５－ジイル）ビス（オキシ）］ジピロリジン－２，５－ジオンと反応させることで標題化合物を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１９４［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｒ１６
Ｎ－（３８－オキソ－２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５－ドデカオキサオクタトリアコンタン－３８－イル）－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｎ１－｛（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－（グリコロイル）アミノ］－１－［（２－｛［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］－１－オキソブタン－２－イル｝－Ｌ－アスパルタミド
Figure 0007251981000427
中間体Ｆ１０４ ２０ｍｇ（０．０２５ｍｍｏｌ）及び中間体Ｌ１１６ ２３ｍｇ（０．０２７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ０．２ｍＬに溶かし、ＨＡＴＵ １１．３ｍｇ（０．０２９ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン１３μＬ（０．０７４ｍｍｏｌ）を加えた後、室温で４５分間攪拌した。水（１ｍＬ）及びＡＣＮ（１ｍＬ）を加えた。反応溶液を分取ＨＰＬＣ（溶離液：ＡＣＮ／水＋０．１％ＴＦＡ、勾配＝３：７→７：３）によって精製した。標題化合物１９ｍｇ（理論値の５０％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝１．１９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１５１９．８０５５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｒ１７
Ｎ－（３８－オキソ－２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５－ドデカオキサオクタトリアコンタン－３８－イル）－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｎ１－［（２０Ｒ）－２５－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２０－カルボキシ－１－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２，１８，２４－トリオキソ－６，９，１２，１５－テトラオキサ－２２－チア－３，１９，２５－トリアザオクタコサン－２８－イル］－Ｌ－アスパルタミド
Figure 0007251981000428
中間体Ｌ１１８ １４．４ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（０．２５ｍＬ）中溶液に、４－エチルモルホリン９μＬ（０．０８ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ ５．７８ｍｇ（０．０１５ｍｍｏｌ）を加え、中間体Ｆ３０７ １８ｍｇ（０．０１５ｍｍｏｌ）を加えた後、混合物を室温で３０分間攪拌した。水（１．５ｍＬ）及びＡＣＮ（１．５ｍＬ）を加えた。反応溶液を分取ＨＰＬＣ（溶離液：ＡＣＮ／水＋０．１％ＴＦＡ、勾配＝３５％→６５％）によって精製した。標題化合物１０ｍｇ（理論値の３６％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１４）：Ｒｔ＝５．４４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８９２．４３２０（Ｍ＋２Ｈ）２＋。
中間体Ｒ１８
Ｎ－（ピリジン－４－イルアセチル）－Ｌ－アラニル－Ｄ－プロリル－Ｎ１－｛（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－［（２－｛［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］－１－オキソブタン－２－イル｝－Ｌ－アスパルタミド
Figure 0007251981000429
中間体Ｒ１と同様にして、中間体Ｆ１０４ １５ｍｇ（０．０１９ｍｍｏｌ）を中間体Ｌ１１９ １２ｍｇ（０．０２２ｍｍｏｌ）にカップリングさせた。分取ＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物４．７ｍｇ（理論値の２３％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０９４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｒ１９
Ｎ－（ピリジン－４－イルアセチル）－Ｄ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｎ１－｛（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－［（２－｛［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］－１－オキソブタン－２－イル｝－Ｌ－アスパルタミド
Figure 0007251981000430
中間体Ｒ１と同様にして、中間体Ｆ１０４ １５ｍｇ（０．０１９ｍｍｏｌ）を中間体Ｌ１２０ １０．４ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）にカップリングさせた。分取ＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物５．７ｍｇ（理論値の２９％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０６８（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｒ２０
Ｎ－｛５－［（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ］－５－オキソペンタノイル｝－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｎ１－［（１６Ｓ）－４－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－１６，１８－ジカルボキシ－５，１０，１４－トリオキソ－７－チア－４，１１，１５－トリアザオクタデカ－１－イル］－Ｌ－アスパルタミド／トリフルオロ酢酸塩
Figure 0007251981000431
化合物Ｃ１１７から、最初にＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｌ１０８にカップリングさせることで標題化合物を製造した。次の段階で、標準水素圧下に室温で終夜にわたりエタノール：酢酸エチル中にて１０％パラジウム／活性炭で水素化することで全ての保護基を除去し、次に、ＤＭＦ中Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に１，１′－［（１，５－ジオキソペンタン－１，５－ジイル）ビス（オキシ）］ジピロリジン－２，５－ジオンと反応させることで、脱保護中間体を標題化合物に変換した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９４分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝１２２３［Ｍ－Ｈ］－。
中間体Ｒ２１
Ｎ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｎ１－［（１６Ｓ）－４－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－１６，１８－ジカルボキシ－５，１０，１４－トリオキソ－７－チア－４，１１，１５－トリアザオクタデカ－１－イル］－Ｌ－アスパルタミド／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000432
化合物Ｃ１１７から、最初にＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｌ１０８にカップリングさせることで、標題化合物を製造した。次の段階で、全ての保護基を、標準水素圧下に室温で終夜にわたりエタノール：酢酸エチル１：１中にて１０％パラジウム／活性炭で水素化することによって除去し、次に、脱保護中間体を、ＤＭＦ中にて１－｛６－［（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ］－６－オキソヘキシル｝－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオンの存在下にＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンと反応させることで標題化合物に変換した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝Ｒｔ＝０．９７分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝１２０５［Ｍ－Ｈ］－。
中間体Ｒ２２
Ｎ－｛［２－（２－メトキシエトキシ）エトキシ］アセチル｝－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｎ１－｛（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－［（２－｛［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］－１－オキソブタン－２－イル｝－Ｌ－アスパルタミド
Figure 0007251981000433
中間体Ｒ１と同様にして、中間体Ｆ１０４ ２０ｍｇ（０．０２５ｍｍｏｌ）を中間体Ｌ１２９ １１．９ｍｇ（０．０２７ｍｍｏｌ）にカップリングさせた。分取ＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物１３．４ｍｇ（理論値の４９％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１０９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｒ２３
Ｎ－｛［２－（２－メトキシエトキシ）エトキシ］アセチル｝－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｎ１－［（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－（｛２－［（Ｎ－｛５－［（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ］－５－オキソペンタノイル｝－Ｄ－α－グルタミル）アミノ］エチル｝アミノ）－１－オキソブタン－２－イル］－Ｌ－アスパルタミド
Figure 0007251981000434
最初に、ＨＡＴＵの存在下に、中間体Ｃ１２０を（２Ｒ）－５－（ベンジルオキシ）－２－｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝－５－オキソペンタン酸にカップリングさせた。次に、ベンジルオキシカルボニル保護基及びベンジルエステルを１０％パラジウム／活性炭での水素化分解によって除去した。ＤＭＦ中Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に１，１′－［（１，５－ジオキソペンタン－１，５－ジイル）ビス（オキシ）］ジピロリジン－２，５－ジオンによって、得られた中間体を標題化合物に変換した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝Ｒｔ＝０．９４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１３１２［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｒ２４
Ｎ－｛５－［（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ］－５－オキソペンタノイル｝－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｎ１－｛（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－［（３－｛［（１Ｒ）－１，３－ジカルボキシプロピル］アミノ｝－３－オキソプロピル）アミノ］－１－オキソブタン－２－イル｝－Ｌ－アスパルタミド
Figure 0007251981000435
化合物Ｃ１２１から、最初にＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｌ１０８にカップリングさせることで標題化合物を製造した。次の段階で、全ての保護基を、標準水素圧下に室温でエタノール中にて１０％パラジウム／活性炭で水素化することで除去し、ＤＭＦ中にてＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に１，１′－［（１，５－ジオキソペンタン－１，５－ジイル）ビス（オキシ）］ジピロリジン－２，５－ジオンと反応させることで脱保護中間体を標題化合物に変換した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝Ｒｔ＝０．９２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１８１［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｒ２５
Ｎ－｛６－［（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ］－６－オキソヘキシル｝－Ｎ－メチル－Ｌ－アラニル－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｎ１－｛（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－［（３－｛［（１Ｒ）－１，３－ジカルボキシプロピル］アミノ｝－３－オキソプロピル）アミノ］－１－オキソブタン－２－イル｝－Ｌ－アスパルタミド
Figure 0007251981000436
最初に、トリフルオロ酢酸／４－ニトロベンジル－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｌ－アスパラギネート（１：１）を、ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＤＭＦ中にてＮ－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニンを４－ニトロベンジルＬ－アスパラギネート臭化水素酸塩（１：１）とカップリングさせ、次にＤＣＭ中にてトリフルオロ酢酸でアミノ基を脱保護することで製造した。
この中間体を、ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＤＭＦ中にてＮ－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｎ－メチル－Ｌ－アラニンにカップリングさせた。次に、１０％パラジウム／活性炭でのＤＣＭ－メタノール１：１中の水素化によってｐ－ニトロベンジルエステルを外した。
、そうして得られた中間体を、ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＤＭＦ中にて中間体Ｃ１２１にカップリングさせた。次に、５０℃で１時間にわたりトリフルオロエタノール中にて４当量の塩化亜鉛とともに攪拌することで、Ｂｏｃ保護基を外した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１２３５（Ｍ＋Ｈ）＋。
この中間体４５ｍｇ（３３μｍｏｌ）を、メタノール２０．５ｍＬ中で、６－オキソヘキサン酸２６ｍｇ（２００μｍｏｌ）（文献法によって事前に製造したもの（Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ． １９９３， ５８， ２１９６））と合わせ、酢酸７．６μＬ及びボラン－ピリジン錯体３０ｍｇ（３２０μｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で４．５時間攪拌し、減圧下に濃縮し、分取ＨＰＬＣによって精製した。中間体３８ｍｇ（理論値の８４％）を得た。
この中間体３８ｍｇ（０．０２８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ １０ｍＬに溶かし、１－ヒドロキシピロリジン－２，５－ジオン５３ｍｇ（０．４２ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン２４．５μＬ及び少量ずつでＨＡＴＵ合計７７ｍｇ（０．２ｍｍｏｌ）を加えた。室温で２時間攪拌後、反応溶液をＴＦＡでｐＨ３～４に調節し、次に濃縮し、分取ＨＰＬＣによって精製した。保護された中間体３９ｍｇ（９６％）を得て、次にそれをエタノール１５ｍＬに取った。１０％パラジウム／活性炭を加えた後、ベンジルエステル基を標準水素圧下での水素化分解によって除去し、触媒を濾去し、残った溶液を濃縮し、残留物をアセトニトリル／水９：１から凍結乾燥した後、標題化合物３４ｍｇ（理論値の９４％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１２６６（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｒ２６
Ｎ－（ピリジン－４－イルアセチル）－Ｌ－アラニル－Ｄ－アスパラギニル－Ｎ１－｛（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－［（２－｛［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］－１－オキソブタン－２－イル｝－Ｌ－アスパルタミド
Figure 0007251981000437
中間体Ｒ１と同様にして、中間体Ｆ１０４ １５ｍｇ（０．０１９ｍｍｏｌ）を中間体Ｌ１３０ １０．３ｍｇ（０．０２２ｍｍｏｌ）にカップリングさせた。次に、トリフルオロエタノール中５０℃で２時間にわたり６当量の塩化亜鉛と攪拌することでＢｏｃ保護基を外した。最終段階で、中間体を４－ピリジン酢酸にカップリングさせた。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１１１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｒ２７
Ｎ－（ピリジン－４－イルアセチル）－Ｌ－アラニル－Ｄ－セリル－Ｎ１－｛（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－［（２－｛［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］－１－オキソブタン－２－イル｝－Ｌ－アスパルタミド
Figure 0007251981000438
最初に、ＨＡＴＵによってピリジン－４－イル酢酸塩酸塩（１：１）及びｔｅｒｔ－ブチルＬ－アラニネート塩酸塩（１：１）単位をカップリングさせ、次にＤＣＭ中にてＴＦＡでｔｅｒｔ－ブチルエステル開裂を行い、ベンジルＤ－セリネート塩酸塩（１：１）へのカップリングを行い、最後に１０％パラジウム／活性炭でのベンジルエステルの水素化分解開裂を行うことで、Ｎ－（ピリジン－４－イルアセチル）－Ｌ－アラニル－Ｄ－セリンを製造した。
次に、この中間体８．４ｍｇ（２５μｍｏｌ）を、ＨＡＴＵ ９．７ｍｇ（２５．５μｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン１８．５μＬの存在下にＤＭＦ中で中間体Ｃ１１６２０ｍｇ（２１．２μｍｏｌ）にカップリングさせることで、標題化合物に変換した。
ＬＣ－ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．７１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０８４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｒ２８
Ｎ－アセチル－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｎ１－［（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－｛［２－（｛Ｎ－［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］－Ｄ－α－グルタミル｝アミノ）エチル］アミノ｝－１－オキソブタン－２－イル］－Ｌ－アスパルタミド
Figure 0007251981000439
中間体Ｒ１５と同様にして標題化合物を製造した。最終段階で、カップリングで、１，１′－［（１，５－ジオキソペンタン－１，５－ジイル）ビス（オキシ）］ジピロリジン－２，５－ジオンに代えて、マレイイミド誘導体１－｛２－［（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ］－２－オキソエチル｝－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオンを用いた。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１２１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｒ２９
Ｎ－（ピリジン－４－イルアセチル）－Ｌ－アラニル－Ｄ－ノルバリル－Ｎ１－［（２０Ｒ）－２５－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２０－カルボキシ－１－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２，１８，２４－トリオキソ－６，９，１２，１５－テトラオキサ－２２－チア－３，１９，２５－トリアザオクタコサン－２８－イル］－Ｌ－アスパルタミド／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000440
化合物Ｃ１１９から、最初にＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｌ１２６にカップリングさせることで、標題化合物を製造した。次の段階で、Ｔｅｏｃ保護基をトリフルオロエタノール中にて塩化亜鉛によって除去し、脱保護中間体を、ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下での１－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２－オキソ－６，９，１２，１５－テトラオキサ－３－アザオクタデカン－１８－酸との反応によって標題化合物に変換した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１４）：Ｒｔ＝５．２８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１３６０［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｒ３０
Ｎ－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｄ－α－アスパラギル－Ｎ１－｛（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－［（２－｛［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］－１－オキソブタン－２－イル｝－Ｌ－アスパルタミド
Figure 0007251981000441
化合物Ｃ１１６から、最初にＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に（２Ｒ）－２－｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝－４－ｔｅｒｔ－ブトキシ－４－オキソブタン酸にカップリングさせることで標題化合物を製造した。次に、トリフルオロエタノール中２時間にわたり５０℃で６当量の塩化亜鉛とともに攪拌することで、ｔｅｒｔ－ブチルエステルを外し、分取ＨＰＬＣによる精製後に、標題化合物を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝Ｒｔ＝１．０６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０５６［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｒ３１
Ｎ－（ピリジン－４－イルアセチル）－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｎ１－［（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－｛［２－（｛Ｎ－［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］－Ｄ－α－グルタミル｝アミノ）エチル］アミノ｝－１－オキソブタン－２－イル］－Ｌ－アスパルタミド
Figure 0007251981000442
標題化合物の合成を、ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｃ１０２を中間体Ｌ１３１にカップリングさせることで開始した。次に、エタノール中１０％パラジウム／活性炭で標準圧下の水素によってＺ基の水素化分解除去を行った。次に、ＤＭＦ中でＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｌ１１０にカップリングさせた。次に、トリフルオロエタノール中５０℃で６時間にわたり６当量の塩化亜鉛と攪拌することで、Ｂｏｃ保護基及びｔｅｒｔ－ブチルエステルを除去した。最終段階で、得られた中間体をＤＭＦ中Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に１－｛２－［（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ］－２－オキソエチル｝－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオンにカップリングさせ、分取ＨＰＬＣによって精製した後に、、標題化合物を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝Ｒｔ＝１．４９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１９７［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｒ３２
Ｎ－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｌ－アラニル－Ｄ－α－アスパラギル－Ｎ１－｛（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－［（２－｛［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］－１－オキソブタン－２－イル｝－Ｌ－アスパルタミド／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000443
Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、２，５－ジオキソピロリジン－１－イルＮ－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｌ－アラニネートを（２Ｒ）－２－アミノ－４－ｔｅｒｔ－ブトキシ－４－オキソブタン酸にＨＡＴＵカップリングすることで、標題化合物の合成を開始した。得られた中間体を、同様にＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下でのＨＡＴＵカップリングによって中間体Ｃ１１６と反応させた。最終段階で、トリフルオロエタノール中にて２時間にわたり、５０℃で６当量の塩化亜鉛とともに攪拌することで、ｔｅｒｔ－ブチルエステルを外した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１２７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｒ３３
Ｎ－アセチル－Ｌ－アラニル－Ｄ－α－アスパラギル－Ｎ１－｛（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－［（２－｛［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］－１－オキソブタン－２－イル｝－Ｌ－アスパルタミド／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000444
Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に２，５－ジオキソピロリジン－１－イルＮ－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｌ－アラニネートを（２Ｒ）－２－アミノ－４－ｔｅｒｔ－ブトキシ－４－オキソブタン酸にＨＡＴＵカップリングさせることで、標題化合物の合成を開始した。次に、エタノール中１０％パラジウム／活性炭で標準圧下の水素によってＺ基の水素化分解除去を行った。次に、ＤＭＦ中Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に１－アセトキシピロリジン－２，５－ジオンとの反応を行った。次に、得られた中間体を、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＨＡＴＵカップリングによって中間体Ｃ１１６と反応させた。最終段階で、トリフルオロエタノール中２時間にわたり５０℃で６当量の塩化亜鉛と反応させることで、ｔｅｒｔ－ブチルエステルを外した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０３５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｒ３４
Ｎ－｛５－［（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ］－５－オキソペンタノイル｝－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｎ１－｛３－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］プロピル｝－Ｌ－アスパルタミド
Figure 0007251981000445
化合物Ｍ９から、最初にＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｌ１０８にカップリングさせることで標題化合物を製造した。次の段階で、ＤＣＭ／メタノール中標準水素圧下に室温で１０％パラジウム／活性炭で水素化を行うことでＺ保護基を除去し、ＤＭＦ中Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に１，１′－［（１，５－ジオキソペンタン－１，５－ジイル）ビス（オキシ）］ジピロリジン－２，５－ジオンと反応させることで、脱保護中間体を標題化合物に変換した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝Ｒｔ＝１．０１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９３７［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｒ３５
Ｎ－アセチル－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｎ１－［（２０Ｒ）－２５－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２０－カルボキシ－１－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２，１８，２４－トリオキソ－６，９，１２，１５－テトラオキサ－２２－チア－３，１９，２５－トリアザオクタコサン－２８－イル］－Ｌ－アスパルタミド
Figure 0007251981000446
化合物Ｃ１１９から、最初にＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｌ１１１にカップリングさせることで標題化合物を製造した。次の段階で、Ｂｏｃ保護基及びトリメチルシリルエチルエステルを、トリフルオロエタノール中塩化亜鉛によって除去し、脱保護中間体を、ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に１－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２－オキソ－６，９，１２，１５－テトラオキサ－３－アザオクタデカン－１８－酸との反応によって標題化合物に変換した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．７８分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝１２５３［Ｍ－Ｈ］－。
中間体Ｒ３６
Ｎ－アセチル－Ｌ－アラニル－Ｄ－α－アスパラギル－Ｎ１－［（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－｛［２－（｛Ｎ－［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］－Ｄ－α－グルタミル｝アミノ）エチル］アミノ｝－１－オキソブタン－２－イル］－Ｌ－アスパルタミド
Figure 0007251981000447
Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、２，５－ジオキソピロリジン－１－イルＮ－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｌ－アラニネートの（２Ｒ）－２－アミノ－４－ｔｅｒｔ－ブトキシ－４－オキソブタン酸へのＨＡＴＵカップリングを行うことで、標題化合物の合成を開始した。次に、エタノール中１０％パラジウム／活性炭で標準圧下の水素を用いて、Ｚ基の水素化分解除去を行った。次に、ＤＭＦ中Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に１－アセトキシピロリジン－２，５－ジオンとの反応を行った。次に、得られた中間体を、ＤＭＦ中Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＨＡＴＵカップリングによって中間体Ｃ１２３と反応させた。次に、トリフルオロエタノール中２時間にわたり６当量の塩化亜鉛とともに５０℃で攪拌することで、ｔｅｒｔ－ブチルエステル及びＢｏｃ保護基を除去した。最終段階で、ＤＭＦ中Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に１－｛２－［（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ］－２－オキソエチル｝－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオンへのカップリングを行うことで、標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１６４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｒ３７
Ｎ－（ピリジン－４－イルアセチル）－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｎ１－［（２０Ｒ）－２５－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２０－カルボキシ－１－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２，１８，２４－トリオキソ－６，９，１２，１５－テトラオキサ－２２－チア－３，１９，２５－トリアザオクタコサン－２８－イル］－Ｌ－アスパルタミド
Figure 0007251981000448
化合物Ｃ１１９から、最初にＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｌ１１０にカップリングさせることで標題化合物を製造した。次の段階で、Ｂｏｃ保護基及びトリメチルシリルエチルエステルをトリフルオロエタノール中塩化亜鉛によって除去し、次にＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に１－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２－オキソ－６，９，１２，１５－テトラオキサ－３－アザオクタデカン－１８－酸と反応させることで脱保護中間体を標題化合物に変換した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１３３２［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｒ３８
Ｎ－アセチル－Ｄ－α－アスパラギル－Ｎ１－｛（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－［（２－｛［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］－１－オキソブタン－２－イル｝－Ｌ－アスパルタミド
Figure 0007251981000449
標題化合物の合成を、ＤＭＦ中Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に１－アセトキシピロリジン－２，５－ジオンを（２Ｒ）－２－アミノ－４－ｔｅｒｔ－ブトキシ－４－オキソブタン酸と反応させることによって開始した。次に、得られた中間体を、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＨＡＴＵカップリングによってＤＭＦ中で中間体Ｃ１１６と反応させた。最終段階で、トリフルオロエタノール中４０分間にわたり５０℃で６当量の塩化亜鉛とともに攪拌することによって、ｔｅｒｔ－ブチルエステルを外した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９６４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｒ３９
Ｎ－アセチル－Ｄ－α－アスパラギル－Ｎ１－［（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－｛［２－（｛Ｎ－［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］－Ｄ－α－グルタミル｝アミノ）エチル］アミノ｝－１－オキソブタン－２－イル］－Ｌ－アスパルタミド
Figure 0007251981000450
標題化合物の合成を、ＤＭＦ中Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に１－アセトキシピロリジン－２，５－ジオンを（２Ｒ）－２－アミノ－４－ｔｅｒｔ－ブトキシ－４－オキソブタン酸と反応させることによって開始した。次に、得られた中間体を、ＤＭＦ中、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＨＡＴＵカップリングによって中間体Ｃ１２３と反応させた。次に、トリフルオロエタノール中８時間にわたり８当量の塩化亜鉛とともに５０℃で攪拌することで、ｔｅｒｔ－ブチルエステル及びＢｏｃ保護基を除去した。最終段階で、ＤＭＦ中Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に１－｛２－［（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ］－２－オキソエチル｝－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオンにカップリングさせることで、標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０９３（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｒ４０
Ｎ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｎ１－｛３－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］プロピル｝－Ｌ－アスパルタミド
Figure 0007251981000451
化合物Ｍ９から、最初にＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｌ１０８にカップリングさせることで標題化合物を製造した。次の段階で、ＤＣＭ／メタノール中、標準水素圧下に室温で１０％パラジウム／活性炭で水素化することによってＺ保護基を除去し、次に、脱保護中間体を、ＤＭＦ中Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に１－｛６－［（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ］－６－オキソヘキシル｝－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオンと反応させることで標題化合物に変換した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝Ｒｔ＝１．０５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９１９［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｒ４１
Ｎ－［６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノイル］－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｎ１－｛３－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］プロピル｝－Ｌ－アスパルタミド
Figure 0007251981000452
化合物Ｃ１２１から、最初にＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｌ１０８にカップリングさせることで標題化合物を製造した。次の段階で、保護基を、エタノール中標準水素圧下に室温で１０％パラジウム／活性炭で水素化によって除去し、次に、ＤＭＦ中Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に１－｛６－［（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ］－６－オキソヘキシル｝－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオンと反応させることで、脱保護中間体を標題化合物に変換した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝Ｒｔ＝０．９６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１６３［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｒ４２
Ｎ－（ブロモアセチル）－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｎ１－｛（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－［（３－｛［（１Ｒ）－１，３－ジカルボキシプロピル］アミノ｝－３－オキソプロピル）アミノ］－１－オキソブタン－２－イル｝－Ｌ－アスパルタミド
Figure 0007251981000453
化合物Ｃ１２１から、最初にＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｌ１０８にカップリングさせることで標題化合物を製造した。次の段階で、全ての保護基を、エタノール中標準水素圧下に室温で１０％パラジウム／活性炭で水素化によって除去し、次に、ＤＭＦ中Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に１－（２－ブロモアセトキシ）ピロリジン－２，５－ジオンと反応させることによって、脱保護中間体を標題化合物に変換した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝Ｒｔ＝０．９３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０９０及び１０９２［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｒ４３
Ｎ－アセチル－Ｄ－アラニル－Ｎ１－｛（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－［（２－｛［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］－アミノ｝エチル）アミノ］－１－オキソブタン－２－イル｝－Ｌ－アスパルタミド
Figure 0007251981000454
中間体Ｒ１と同様にして、中間体Ｆ１０４ ８１ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ）を２，５－ジオキソピロリジン－１－イルＮ２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｌ－アスパラギネート４３ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ）にカップリングさせた。次に、トリフルオロエタノール中２０分間にわたり５０℃で６当量の塩化亜鉛とともに攪拌することで、Ｂｏｃ保護基を外した。最終段階で、ＤＭＦ中、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＨＡＴＵによって、Ｎ－アセチル－Ｄ－アラニンにカップリングさせることで、標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．７７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９２０（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｒ４４
Ｎ－アセチル－Ｄ－アスパラギニル－Ｎ１－｛（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－［（２－｛［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］－アミノ｝エチル）アミノ］－１－オキソブタン－２－イル｝－Ｌ－アスパルタミド
Figure 0007251981000455
化合物Ｃ１１６から、ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｌ１３２にカップリングさせることで、標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝Ｒｔ＝０．９１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９６３［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｒ４５
Ｎ－｛５－［（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ］－５－オキソペンタノイル｝－Ｌ－アラニル－Ｄ－α－アスパラギル－Ｎ１－｛３－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）－アミノ］プロピル｝－Ｌ－アスパルタミド
Figure 0007251981000456
化合物Ｍ９から、当業者に公知のペプチド化学によって、数段階で、標題化合物を製造した。
最初に、ＤＭＦ中、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に化合物Ｍ９を４－ニトロフェニルＮ２－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｌ－アスパラギネートにカップリングさせ；次に、エタノール中、標準水素圧下に室温で１０％パラジウム／活性炭で水素化することでＺ保護基を除去し；次に、ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に（２Ｒ）－２－｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝－４－ｔｅｒｔ－ブトキシ－４－オキソブタン酸にカップリングさせ；次に、標準水素圧下に室温でのＤＣＭ／メタノール１：１中の１０％パラジウム活性炭での水素化によってＺ保護基を除去し；次に、ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＮ－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｌ－アラニンにカップリングさせ、Ｚ保護基の水素化分解除去をさらに行い；次に、トリフルオロエタノール中、３時間にわたり５０℃で６当量の塩化亜鉛と攪拌することで、ｔｅｒｔ－ブチルエステルの開裂を行い；最後に、ＤＭＦ中、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に１，１′－［（１，５－ジオキソペンタン－１，５－ジイル）ビス（オキシ）］ジピロリジン－２，５－ジオンと反応させた。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９８１［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｒ４６
Ｎ－［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］－Ｌ－アラニル－Ｄ－α－アスパラギル－Ｎ１－｛３－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－プロピル｝－Ｌ－アスパルタミド
Figure 0007251981000457
中間体Ｒ４５と同様にして、標題化合物を製造した。しかしながら、最終段階で、カップリングにおいて、１，１′－［（１，５－ジオキソペンタン－１，５－ジイル）ビス（オキシ）］ジピロリジン－２，５－ジオンに代えて、１－｛２－［（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ］－２－オキソエチル｝－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオンを用いた。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝Ｒｔ＝０．９９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９０７［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｒ４７
Ｎ－［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｎ１－［３－（｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝｛［（３－｛［（１Ｒ）－１，２－ジカルボキシエチル］－アミノ｝－３－オキソプロピル）スルファニル］アセチル｝アミノ）プロピル］－Ｌ－アスパルタミドトリフルオロ酢酸塩
Figure 0007251981000458
中間体Ｃ１２７をトリフルオロエタノール（２．０ｍＬ）に溶解させ、二塩化亜鉛（４．１８ｍｇ、３０．６μｍｏｌ）を加えた。５０℃で１時間攪拌後、塩化亜鉛（４．１８ｍｇ、３０．６μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃でさらに１時間攪拌した。二塩化亜鉛（４．１８ｍｇ、３０．６μｍｏｌ）を再度加え、反応混合物を５０℃で１時間攪拌した。エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－テトラ酢酸（８．９５ｍｇ、３０．６μｍｏｌ）を反応混合物に加え、それを１０分間攪拌し、次に水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。精製を、分取ＲＰ－ＨＰＬＣによって直接行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を凍結乾燥した。これによって、標題化合物４．３ｍｇ（理論値の７１％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９５分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝１０６４［Ｍ－Ｈ］－。
中間体Ｒ４８
Ｎ－（ピリジン－４－イルアセチル）－Ｌ－アラニル－Ｄ－ヒスチジル－Ｎ１－｛（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－［（２－｛［（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］－１－オキソブタン－２－イル｝－Ｌ－アスパルタミド
Figure 0007251981000459
ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｃ１０２をｔｅｒｔ－ブチル（２－アミノエチル）カーバメートにカップリングさせ、次にＤＣＭ－メタノール１：１中標準水素圧下に室温で１時間にわたり１０％パラジウム／活性炭で水素化することでＺ保護基を除去し、次にＤＭＦ中、４－ニトロフェニルＮ２－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｌ－アスパラギネートにカップリングさせ、次に、エタノール中、標準水素圧下に室温で１時間にわたり１０％パラジウム／活性炭で水素化することで、Ｚ保護基を除去することによって、標題化合物を製造した。
次に、この中間体を、ＤＭＦ中、ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＮ－［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］－１－｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝－Ｄ－ヒスチジン（ＤＭＦ中、Ｎ－［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］－Ｄ－ヒスチジンを１－（｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝－オキシ）ピロリジン－２，５－ジオンの存在下にＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンと反応させることで、事前に製造したもの）にカップリングさせた。次に、Ｆｍｏｃ保護基を、ＤＭＦ中にてピペリジンで外した。得られた脱保護化合物を、ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、Ｎ－（ピリジン－４－イルアセチル）－Ｌ－アラニン塩酸塩（１：１）（ＨＡＴＵによりピリジン－４－イル酢酸塩酸塩（１：１）をｔｅｒｔ－ブチルＬ－アラニネート塩酸塩（１：１）と反応させ、次にＤＣＭ中にてＴＦＡによってｔｅｒｔ－ブチルエステル加水分解を行うことで事前に製造したもの）にカップリングさせた。
５０℃でトリフルオロエタノール中、１時間にわたり、６当量の塩化亜鉛と攪拌することで、得られた中間体からＢｏｃ基を外した。最終段階で、ＤＭＦ中、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に１－｛２－［（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ］－２－オキソエチル｝－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオンと反応させることで、標題化合物を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１３４［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｒ４９
Ｎ－｛５－［（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ］－５－オキソペンタノイル｝－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｎ１－［３－（｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝｛［（３－｛［（１Ｒ）－１，２－ジカルボキシ－エチル］アミノ｝－３－オキソプロピル）スルファニル］アセチル｝アミノ）プロピル］－Ｌ－アスパルタミドトリフルオロ酢酸塩
Figure 0007251981000460
Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｎ１－［３－（｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝｛［（３－｛［（１Ｒ）－１，２－ジカルボキシエチル］アミノ｝－３－オキソプロピル）スルファニル］アセチル｝アミノ）－プロピル］－Ｌ－アスパルタミドトリフルオロ酢酸塩（７．６０ｍｇ、６．５７μｍｏｌ、中間体Ｃ１２９）及び１，１′－［（１，５－ジオキソペンタン－１，５－ジイル）ビス（オキシ）］ジピロリジン－２，５－ジオン（５．３６ｍｇ、１６．４μｍｏｌ）をＤＭＦ（１．０ｍＬ）に溶かし、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（４．６μＬ、２６μｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で３．５時間攪拌した。次に、水＋０１％ＴＦＡによって反応停止し、混合物を分取ＲＰ－ＨＰＬＣによって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を凍結乾燥した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９７分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝１１３８［Ｍ－Ｈ］－。
中間体Ｒ５０
Ｎ２－アセチル－Ｌ－リジル－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｎ１－｛（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－［（３－｛［（１Ｒ）－１，３－ジカルボキシプロピル］アミノ｝－３－オキソプロピル）アミノ］－１－オキソブタン－２－イル｝－Ｌ－アスパルタミドトリフルオロ酢酸塩
Figure 0007251981000461
当業者に公知のペプチド化学の方法によって、化合物Ｃ１１０Ｄから数段階で標題化合物を製造した。
最初に、ＤＭＦ中、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン及びＨＡＴＵの存在下に、中間体Ｃ１１０Ｄを中間体Ｌ１３４にカップリングさせた。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１４５４［Ｍ＋Ｈ］＋。
次に、ジクロロメタン／メタノール１：１中、水素標準圧下に室温で１０％パラジウム／活性炭で水素化することで、Ｚ保護基を外した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１４０［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｒ５１
トリフルオロ酢酸Ｎ－（ピリジン－４－イルアセチル）－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｎ１－｛（２Ｓ）－１－（｛２－［（Ｎ２－アセチル－Ｌ－リジル）アミノ］エチル｝アミノ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－オキソブタン－２－イル｝－Ｌ－アスパルタミド塩
Figure 0007251981000462
当業者に公知のペプチド化学の方法によって、化合物Ｃ１２８から数段階で標題化合物を製造した。
最初に、ＤＭＦ中、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン及びＨＡＴＵの存在下に、中間体Ｃ１２８を中間体Ｌ１１０にカップリングさせた。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１２０１［Ｍ＋Ｈ］＋。
次に、トリフルオロエタノール中、３０分間にわたり５０℃で６当量の塩化亜鉛とともに攪拌することでｔｅｒｔ－ブチルエステルを開裂させることで、標題化合物を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１０１［Ｍ＋Ｈ］＋。
Ｂ：抗体／薬物複合体（ＡＤＣ）の製造
Ｂ－１．抗体形成の一般的方法
使用した抗体、例えばＴＰＰ－２０９０、ＴＰＰ－２６５８、ＴＰＰ－５４４２、ＴＰＰ－８８２５、ＴＰＰ－７００６、ＴＰＰ－７００７、ＴＰＰ－１０３３４、ＴＰＰ－１０３３５、ＴＰＰ－１０３３６、ＴＰＰ－１０３３７、ＴＰＰ－１０１５、ＴＰＰ－７５１０、ＴＰＰ－７５１１、ＴＰＰ－８３８２及びＴＰＰ－８５６７のタンパク質配列（アミノ酸配列）を、当業者には公知の方法によってタンパク質をコードするＤＮＡ配列に変換し、一過性哺乳動物細胞培養に適した発現ベクターに挿入した（Ｔｏｍ ｅｔ ａｌ．， Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｘｐｒｅｓｓ： Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍｓ， Ｍｉｃｈａｅｌ Ｒ． Ｄｙｓｏｎ ａｎｄ Ｙｖｅｓ Ｄｕｒｏｃｈｅｒ編、Ｓｃｉｏｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｌｔｄ， ２００７の第１２章に記載）。
市販の抗体セツキシマブ（ＴＰＰ－９８１；商標名：エルビタックス）を、本明細書に記載の作業例に用いた。
Ｂ－２．哺乳動物細胞で抗体を発現する一般的方法
Ｔｏｍ ｅｔ ａｌ．， Ｃｈａｐｔｅｒ １２ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｘｐｒｅｓｓ：Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍｓ， ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｍｉｃｈａｅｌ Ｒ． Ｄｙｓｏｎ ａｎｄ Ｙｖｅｓ Ｄｕｒｏｃｈｅｒ， Ｓｃｉｏｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｌｔｄ, ２００７によって記載の方法に従って、抗体、例えば例えばＴＰＰ－２０９０、ＴＰＰ－２６５８、ＴＰＰ－５４４２、ＴＰＰ－８８２５、ＴＰＰ－７００６、ＴＰＰ－７００７、ＴＰＰ－１０３３４、ＴＰＰ－１０３３５、ＴＰＰ－１０３３６、ＴＰＰ－１０３３７、ＴＰＰ－１０１５、ＴＰＰ－７５１０、ＴＰＰ－７５１１、ＴＰＰ－８３８２及びＴＰＰ－８５６７を、一過性哺乳動物細胞培養で製造した。
Ｂ－３．細胞上清からの抗体の一般的精製方法
抗体、例えばＴＰＰ－２０９０、ＴＰＰ－２６５８、ＴＰＰ－５４４２、ＴＰＰ－８８２５、ＴＰＰ－７００６、ＴＰＰ－７００７、ＴＰＰ－１０３３４、ＴＰＰ－１０３３５、ＴＰＰ－１０３３６、ＴＰＰ－１０３３７、ＴＰＰ－１０１５、ＴＰＰ－７５１０、ＴＰＰ－７５１１、ＴＰＰ－８３８２及びＴＰＰ－８５６７を、細胞培養上清から得た。細胞を遠心することで、細胞上清を清澄化した。次に、細胞上清を、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）クロマトグラフィーカラムでのアフィニティクロマトグラフィーによって精製した。このために、カラムをＤＰＢＳ ｐＨ７．４（Ｓｉｇｍａ／Ａｌｄｒｉｃｈ）中で平衡状態とし、細胞上清を加え、カラムを約１０カラム体積のＤＰＢＳ ｐＨ７．４＋５００ｍＭ塩化ナトリウムで洗浄した。抗体を５０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ３．５＋５００ｍＭ塩化ナトリウムで溶離し、次にＤＰＢＳ ｐＨ７．４でのＳｕｐｅｒｄｅｘ ２００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）におけるゲル濾過クロマトグラフィーによってさらに精製した。
市販の抗体を、標準的なクロマトグラフィー法（タンパク質Ａクロマトグラフィー、分取ゲル濾過クロマトグラフィー（ＳＥＣ－サイズ排除クロマトグラフィー））により精製した。
Ｂ－４．システイン側鎖へのカップリングの一般的方法
次の抗体を、当該カップリング反応で用いた。
実施例ａ系：セツキシマブ（抗ＥＧＦＲ ＡＫ）
実施例ｅ系：ＴＰＰ－１０１５（抗Ｈｅｒ２ ＡＫ）
実施例ｈ１系：抗Ｂ７Ｈ３ ＡＫ（ＴＰＰ－８３８２）
実施例ｈ２系：抗Ｂ７Ｈ３ ＡＫ（ＴＰＰ－８５６７）
実施例ｋ系：抗ＴＷＥＡＫＲ ＡＫ（ＴＰＰ－２６５８）
実施例ｌ１系：抗ＴＷＥＡＫＲ ＡＫ（ＴＰＰ－７００７）
実施例ｌ２系：抗ＴＷＥＡＫＲ ＡＫ（ＴＰＰ－７００６）
実施例ｌ３系：抗ＴＷＥＡＫＲ ＡＫ（ＴＰＰ－１０３３６）
実施例ｌ４系：抗ＴＷＥＡＫＲ ＡＫ（ＴＰＰ－１０３３７）
カップリング反応は通常、アルゴン下で行った。
ＰＢＳ緩衝液に溶かした２から５当量のトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（ＴＣＥＰ）を、１ｍｇ／ｍＬ～２０ｍｇ／ｍＬの濃度範囲、好ましくは約１０ｍｇ／ｍＬ～１５ｍｇ／ｍＬの範囲での適切な抗体のＰＢＳ緩衝液中溶液に加え、混合物を室温で３０分～１時間撹拌した。これに関しては、使用した個々の抗体の溶液は、作業例で記載の濃度で用いることができるか、指定の出発濃度の約１／２までＰＢＳ緩衝液で希釈して、好ましい濃度範囲とすることもできる。次に、所期の負荷量に応じて、２～１２当量、好ましくは約５～１０当量のカップリング対象のマレイミド前駆体化合物又はハライド前駆体化合物をＤＭＳＯ中溶液として加えた。この場合、ＤＭＳＯの量は総体積の１０％を超えるものであってはならない。混合物を、マレイミド前駆体の場合には室温で６０～２４０分間、ハライド前駆体の場合には室温で８から２４時間撹拌し、次にＰＢＳ平衡化ＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に負荷し、ＰＢＳ緩衝液で溶離した。通常、別段の断りがない限り、ＰＢＳ緩衝液中の対象抗体５ｍｇを、還元及びその後のカップリングに用いた。そうして、ＰＤ１０カラムでの精製により、各場合で、個々のＡＤＣのＰＢＳ緩衝液（３．５ｍＬ）中溶液を得た。サンプルを超遠心によって濃縮し、適宜にＰＢＳ緩衝液で再希釈した。必要な場合、低分子量成分をより良好に除去するため、ＰＢＳ緩衝液による再希釈後に、超遠心による濃縮を繰り返した。生物試験のため、必要な場合、最終ＡＤＣサンプルの濃度を、適宜に、再希釈によって０．５～１５ｍｇ／ｍＬの範囲に調節した。作業例で記載のＡＤＣ溶液の個々のタンパク質濃度を求めた。さらに、Ｂ－７下に記載の方法を用いて、抗体負荷量（薬物／ｍＡｂ比）を求めた。
リンカーに応じて、実施例で示されているＡＤＣは、多少、抗体に連結した加水分解された開鎖コハク酸アミドの形態で存在していても良い。
特に、リンカー下位構造：
Figure 0007251981000463
を介して抗体のチオール基に連結しているＫＳＰ－Ｉ－ＡＤを、開鎖コハク酸アミドを介して連結したＡＤＣを介して、図式２８に従って、カップリング後の再緩衝化及びｐＨ８での約２０～２４時間の撹拌によって、選択的に製造することもできる。
＃１は抗体への硫黄架橋を表し、＃２は修飾ＫＳＰ阻害剤への結合点を表す。
リンカーが加水分解された開鎖コハク酸アミドを介して抗体に結合しているそのようなＡＤＣは、下記の例示的方法により、選択的に製造することもできる。
小規模カップリング：
ＰＢＳ緩衝液に溶かした２～５当量のトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（ＴＣＥＰ）を、１ｍｇ／ｍＬ～２０ｍｇ／ｍＬの濃度範囲で、好ましくは約５ｍｇ／ｍＬ～１５ｍｇ／ｍＬの範囲で適切な抗体２～５ｍｇのＰＢＳ緩衝液中溶液に加え、混合物を室温で３０分～１時間攪拌した。次に、所期の負荷量に応じて、２～１２当量、好ましくは約５～１０当量のカップリング対象のマレイミド前駆体を、ＤＭＳＯ中溶液として加えた。ここで、ＤＭＳＯの量は、総体積の１０％を超えてはならない。混合物を室温で６０～２４０分間攪拌し、事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液で体積２．５～７．５ｍＬに希釈し、そしてＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を通し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を室温でアルゴン下に終夜攪拌した。次に、その溶液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。
中規模カップリング：
アルゴン下に、２～５当量、好ましくは３当量のＴＣＥＰのＰＢＳ緩衝液中溶液（濃度約０．２～０．８ｍｇ／ｍＬ、好ましくは０．５ｍｇ／ｍＬ）を、ＰＢＳ緩衝液中の対象抗体２０～２００ｍｇ（濃度約５～１５ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間攪拌し、そしてＤＭＳＯに溶かした２～１２、好ましくは５～１０当量のマレイミド前駆体化合物を加えた。室温でさらに１．５時間～２時間攪拌後、混合物を、事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液で希釈した。
この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡化しておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に負荷し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で希釈して濃度１～７ｍｇ／ｍＬとした。この溶液を室温でアルゴン下に終夜撹拌した。必要な場合、その溶液を再緩衝化してｐＨ７．２とした。そのＡＤＣ溶液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈し、適宜に再度濃縮して濃度約１０ｍｇ／ｍＬとした。
作業例での他の加水分解感受性であり得る抗体へのチアニルコハク酸イミド架橋は、次のリンカー下位構造を含み、＃１は抗体へのチオエーテル連結を表し、＃１は修飾ＫＳＰ阻害剤への連結部位を表す。
Figure 0007251981000464
これらのリンカー下位構造は、抗体への連結ユニットを表し、（さらなるリンカー組成物に加えて）腫瘍細胞で生成される代謝物の構造及びプロファイルに対して大きい効果を有する。
示された構造式において、ＡＫ１は次の意味を有する。
実施例ａ系：セツキシマブ（部分還元）－Ｓ§１
実施例ｅ系：ＴＰＰ－１０１５（部分還元）－Ｓ§１
実施例ｈ１系：抗Ｂ７Ｈ３ ＡＫ（ＴＰＰ－８３８２部分還元）－Ｓ§１
実施例ｈ２系：抗Ｂ７Ｈ３ ＡＫ（ＴＰＰ－８５６７部分還元）－Ｓ§１
実施例ｋ系：抗ＴＷＥＡＫＲ ＡＫ（ＴＰＰ－２６５８部分還元）－Ｓ§１
実施例ｌ１系：抗ＴＷＥＡＫＲ ＡＫ（ＴＰＰ－７００７部分還元）－Ｓ§１
実施例ｌ２系：抗ＴＷＥＡＫＲ ＡＫ（ＴＰＰ－７００６部分還元）－Ｓ§１
実施例ｌ３系：抗ＴＷＥＡＫＲ ＡＫ（ＴＰＰ－１０３３６部分還元）－Ｓ§１
実施例ｌ４系：抗ＴＷＥＡＫＲ ＡＫ（ＴＰＰ－１０３３７部分還元）－Ｓ§１。
式中、
§１は、コハク酸イミド基への又はいずれかの異性体の加水分解された開鎖コハク酸アミド又はそれから生じるアルキレン基への連結を表し、
Ｓは、部分還元抗体のシステイン残基の硫黄原子を表す。
Ｂ－５．リジン側鎖へのカップリングの一般的方法
次の抗体を、当該カップリング反応に用いた。
実施例ａ系：セツキシマブ（抗ＥＧＦＲ ＡＫ）
実施例ｅ系：ＴＰＰ－１０１５（抗Ｈｅｒ２ ＡＫ）
実施例ｈ１系：抗Ｂ７Ｈ３ ＡＫ（ＴＰＰ－８３８２）
実施例ｈ２系：抗Ｂ７Ｈ３ ＡＫ（ＴＰＰ－８５６７）
実施例ｋ系：抗ＴＷＥＡＫＲ抗体（ＴＰＰ－２６５８）
実施例ｌ１系：抗ＴＷＥＡＫＲ ＡＫ（ＴＰＰ－７００７）
実施例ｌ２系：抗ＴＷＥＡＫＲ ＡＫ（ＴＰＰ－７００６）
実施例ｌ３系：抗ＴＷＥＡＫＲ ＡＫ（ＴＰＰ－１０３３６）
実施例ｌ４系：抗ＴＷＥＡＫＲ ＡＫ（ＴＰＰ－１０３３７）。
カップリング反応は通常、アルゴン下で行った。
２～８当量のカップリング対象の前駆体化合物を、ＤＭＳＯ中溶液として、所期の負荷量に応じて１ｍｇ／ｍＬ～２０ｍｇ／ｍＬ濃度範囲の、好ましくは約１０ｍｇ／ｍＬの対象抗体のＰＢＳ緩衝液中溶液に加えた。室温で３０分～６時間撹拌後、ＤＭＳＯ中の同量の前駆体化合物を再度加えた。この場合、ＤＭＳＯの量は総体積の１０％を超えてはならない。室温でさらに３０分～６時間撹拌後、混合物をＰＢＳで平衡化したＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に負荷し、ＰＢＳ緩衝液で溶離した。通常、別段の断りがない限り、ＰＢＳ緩衝液中の対象抗体５ｍｇを、カップリングに用いた。従って、ＰＤ１０カラムでの精製によって各場合で、個々のＡＤＣのＰＢＳ緩衝液（３．５ｍＬ）中溶液を得た。サンプルを超遠心によって濃縮し、適宜にＰＢＳ緩衝液で再希釈した。必要であれば、低分子量成分の除去をより良好に行うため、限外濾過による濃縮を、ＰＢＳ緩衝液による再希釈後に繰り返した。生物試験のため、必要な場合、最終ＡＤＣサンプルの濃度を、適宜に、再希釈によって０．５～１５ｍｇ／ｍＬの範囲に調節した。
作業例で記載のＡＤＣ溶液の個々のタンパク質濃度を求めた。さらに、Ｂ－７下に記載の方法を用いて、抗体負荷量（薬物／ｍＡｂ比）を求めた。
示した構造式において、ＡＫ２は次の意味：
実施例ａ系：セツキシマブ－ＮＨ§２
実施例ｅ系：ＴＰＰ－１０１５－ＮＨ§２
実施例ｈ１系：抗Ｂ７Ｈ３ ＡＫ（ＴＰＰ－８３８２）－ＮＨ§２
実施例ｈ２系：抗Ｂ７Ｈ３ ＡＫ（ＴＰＰ－８５６７）－ＮＨ§２
実施例ｋ系：抗ＴＷＥＡＫＲ抗体（ＴＰＰ－２６５８）－ＮＨ§２
実施例ｌ１系：抗ＴＷＥＡＫＲ ＡＫ（ＴＰＰ－７００７）－ＮＨ§２
実施例ｌ２系：抗ＴＷＥＡＫＲ ＡＫ（ＴＰＰ－７００６）－ＮＨ§２
実施例ｌ３系：抗ＴＷＥＡＫＲ ＡＫ（ＴＰＰ－１０３３６）－ＮＨ§２
実施例ｌ４系：抗ＴＷＥＡＫＲ ＡＫ（ＴＰＰ－１０３３７）－ＮＨ§２
を有し、
式中、
§２は、カルボニル基への連結を表し、
ＮＨは、抗体のリジン残留物の側鎖アミノ基を表す。
Ｂ－５ａ．細菌トランスグルタミナーゼによる一般的ＡＤＣ合成方法
実施例ｔ系でのカップリング反応において、下記の抗体を用いた（下記の抗体－ＨＣ－Ｎ２９７Ｚの名称は、両方の重鎖でアミノ酸Ｚに代わってアミノ酸Ｎ２９７（Ｋａｂａｔナンバリング）となっている抗体を意味し、ＴＰＰ－ｘｘｘｘ－ＨＣ－Ｑ２９５Ｎ－ＨＣ－Ｎ２９７Ｑの名称は、アミノ酸Ｎに代えてアミノ酸Ｑ２９５（Ｋａｂａｔナンバリング）となっており、両方の重鎖でアミノ酸Ｑに代えてアミノ酸Ｎ２９７（Ｋａｂａｔナンバリング）となっているＴＰＰ－ＸＸＸＸを有する抗体を意味する。元の抗体の抗体名は、その名称（例えばトラスツズマブ）として、又はＴＰＰ－ＸＸＸＸ（ＴＰＰ名ＸＸＸＸを有する抗体）として報告することができる。）
ＡＫ３ａ：抗ＴＷＥＡＫＲ抗体（ＴＰＰ－２６５８）（ＴＰＰ－２０９０－ＨＣ－Ｎ２９７Ａに相当）
ＡＫ３ｂ：抗ＴＷＥＡＫＲ抗体（ＴＰＰ－５４４２）（ＴＰＰ－２０９０－ＨＣ－Ｎ２９７Ｑに相当）
ＡＫ３ｃ：抗ＴＷＥＡＫＲ抗体（ＴＰＰ－８２２５）（ＴＰＰ－２０９０－ＨＣ－Ｑ２９５Ｎ－ＨＣ－Ｎ２９７Ｑに相当）
ＡＫ３ｄ：抗ＨＥＲ２抗体（ＴＰＰ－７５１０）（ＴＰＰ－１０１５－ＨＣ－Ｎ２９７Ａに相当）
ＡＫ３ｅ：抗ＨＥＲ２抗体（ＴＰＰ－７５１１）（ＴＰＰ－１０１５－ＨＣ－Ｎ２９７Ｑに相当）。
最大ＤＡＲ２を得るための一般的手順：
相当する脱グリコシル（ａｇｌｙｃｏ）抗体変異体（ＨＣ－Ｎ２９７Ａ）５ｍｇのＤＰＢＳ（ｐＨ７．４）中溶液（濃度約５～１５ｍｇ／ｍＬ）に、好適な担毒体リンカー前駆体の溶液（例えば中間体Ｒ５０及びＲ５１；１０ｍＭ ＤＭＳＯ中溶液）２０μＬ（６当量）を加えた。３７℃で５分間インキュベーション後、組み換え細菌トランスグルタミナーゼの水溶液（製品番号Ｔ００１、Ｚｅｄｉｒａ ＧｍｂＨ， Ｄａｒｍｓｔａｄｔ， Ｇｅｒｍａｎｙ）（２５Ｕ／ｍＬ）５０μＬを加え、インキュベーションを３７℃でさらに２４時間続けた。次に、反応混合物をＤＰＢＳ ｐＨ７．４で希釈して総量２．５ｍＬとし、ゲル濾過によってＤＰＢＳ平衡ＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通し、ｐＨ７．４のＤＰＢＳ緩衝液で溶離した。次に、Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａｃｅｌ－３０Ｋ遠心（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）によってＡＤＣ溶液を濃縮し、それをＤＰＢＳで再希釈して体積約２．５ｍＬとした。最後に、ＤＰＢＳ １２．５μＬ中のｂ－トランスグルタミナーゼ遮断剤Ｚｅｄｉｒａ Ｃ１０００．００６２５μｍｏｌを、その溶液に加えた。ＡＤＣ溶液の作業例で言及した個々のタンパク質濃度を求めた。さらに、Ｂ－７下に記載の方法を用いて、抗体負荷量（薬物／ｍＡｂ比）を求めた。
最大ＤＡＲ４を得るための一般的手順：
相当する脱グリコシル（ａｇｌｙｃｏ）抗体変異体（ＨＣ－Ｎ２９７Ｑ）５ｍｇのＤＰＢＳ（ｐＨ７．４）中溶液（濃度約５～１５ｍｇ／ｍＬ）に、好適な担毒体リンカー前駆体の溶液（例えば中間体Ｒ５０及びＲ５１；１０ｍＭ ＤＭＳＯ中溶液）１６～２０当量を加えた。３７℃で５分間インキュベーション後、組み換え細菌トランスグルタミナーゼの水溶液（製品番号Ｔ００１、Ｚｅｄｉｒａ ＧｍｂＨ， Ｄａｒｍｓｔａｄｔ， Ｇｅｒｍａｎｙ）（２５Ｕ／ｍＬ）４００μＬ（１０Ｕ）を加え、インキュベーションを３７℃でさらに２４時間続けた。次に、反応混合物をＤＰＢＳ ｐＨ７．４で希釈して総量２．５ｍＬとし、ゲル濾過によってＤＰＢＳ平衡ＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通し、ｐＨ７．４のＤＰＢＳ緩衝液で溶離した。次に、Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａｃｅｌ－３０Ｋ Ｚｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）によってＡＤＣ溶液を濃縮し、それをＤＰＢＳで再希釈して体積約２．５ｍＬとした。最後に、ＤＰＢＳ ２００μＬ中のｂ－トランスグルタミナーゼ遮断剤Ｚｅｄｉｒａ Ｃ１０００．１μｍｏｌを、その溶液に加えた。ＡＤＣ溶液の作業例で言及した個々のタンパク質濃度を求めた。さらに、Ｂ－７下に記載の方法を用いて、抗体負荷量（薬物／ｍＡｂ比）を求めた。
最大ＤＡＲ２を得るための、より大きい規模でのトランスグルタミナーゼ介在カップリングの一般手順：
特定の抗体の脱グリコシル化変異体（ＨＣ－Ｎ２９７Ａ）３０ｍｇのＤＰＢＳ ｐＨ７．４中溶液（濃度約５から１５ｍｇ／ｍＬ）に、６当量の適切な担毒体リンカー前駆体の溶液（１０ｍＭ ＤＭＳＯ中溶液）を加えた。３７℃で５分間インキュベーション後、組み換え細菌トランスグルタミナーゼの水溶液（製品番号Ｔ００１、Ｚｅｄｉｒａ ＧｍｂＨ， Ｄａｒｍｓｔａｄｔ， Ｇｅｒｍａｎｙ）（２５Ｕ／ｍＬ）２００μＬ（７．５Ｕ）を加え、インキュベーションを３７℃でさらに２４時間続けた。反応混合物を、ＤＰＢＳ ｐＨ７．４のＳｕｐｅｒｄｅｘ２００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）でのゲル濾過クロマトグラフィーによって精製して、小分子及びトランスグルタミナーゼをＡＤＣから分離した。次に、ＡＤＣ溶液をＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａｃｅｌ－３０Ｋ遠心管（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて濃縮して、最終濃度５～２５ｍｇ／ｍＬとした。次に、その溶液を無菌濾過した。
作業例で報告のＡＤＣ溶液の個々の濃度を求めた。チャプターＢ７に記載の方法によって、負荷量を求めた。作業例で示した方法に従って、ＡＤＣバッチの特性を決定した。
最大ＤＡＲ４を得るための、より大きい規模でのトランスグルタミナーゼ介在カップリングの一般手順：
特定の抗体の脱グリコシル化変異体（ＨＣ－Ｎ２９７Ｑ）３０ｍｇのＤＰＢＳ ｐＨ７．４中溶液（濃度約５～１５ｍｇ／ｍＬ）に、１６～２４当量の適切な担毒体リンカー前駆体の溶液（１０ｍＭ ＤＭＳＯ中溶液）を加えた。３７℃で５分間インキュベーション後、組み換え細菌トランスグルタミナーゼの水溶液（製品番号Ｔ００１、Ｚｅｄｉｒａ ＧｍｂＨ， Ｄａｒｍｓｔａｄｔ， Ｇｅｒｍａｎｙ）（２５Ｕ／ｍＬ）２４００μＬ（６０Ｕ）を加え、インキュベーションを３７℃でさらに２４時間続けた。反応混合物を、ＤＰＢＳ ｐＨ７．４のＳｕｐｅｒｄｅｘ２００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）でのゲル濾過クロマトグラフィーによって精製して、小分子及びトランスグルタミナーゼをＡＤＣから分離した。次に、ＡＤＣ溶液をＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａｃｅｌ－３０Ｋ遠心管（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて濃縮して、最終濃度５～２５ｍｇ／ｍＬとした。次に、その溶液を無菌濾過した。
作業例で報告のＡＤＣ溶液の個々の濃度を求めた。チャプターＢ７に記載の方法によって、負荷量を求めた。作業例で示した方法に従って、ＡＤＣバッチの特性を決定した。
実施例ｔ系について示した構造式において、ＡＫ３は各場合で下記の意味：
ＡＫ３ａ：抗ＴＷＥＡＫＲ抗体（ＴＰＰ－２６５８）（ＴＰＰ－２０９０－ＨＣ－Ｎ２９７Ａに相当）－ＣＯ－§２
ＡＫ３ｂ：抗ＴＷＥＡＫＲ抗体（ＴＰＰ－５４４２）（ＴＰＰ－２０９０－ＨＣ－Ｎ２９７Ｑに相当）－ＣＯ－§２
ＡＫ３ｃ：抗ＴＷＥＡＫＲ抗体（ＴＰＰ－８８２５）（ＴＰＰ－２０９０－ＨＣ－Ｑ２９５Ｎ－ＨＣ－Ｎ２９７Ｑ）－ＣＯ－§２
ＡＫ３ｄ：抗ＨＥＲ２抗体（ＴＰＰ－７５１０）（ＴＰＰ－１０１５－ＨＣ－Ｎ２９７Ａに相当）－ＣＯ－§２
ＡＫ３ｅ：抗ＨＥＲ２抗体（ＴＰＰ－７５１１）（ＴＰＰ－１０１５－ＨＣ－Ｎ２９７Ｑに相当）－ＣＯ－§２
を有し、
§２は担毒体リンカー前駆体のアミノ基への連結を示し、
ＣＯは抗体のグルタミン残基の側鎖カルボニル基を表す。
Ｂ－６ａ．閉鎖コハク酸イミド－システイン付加物の一般的製造方法
例示的実施形態において、１０μｍｏｌの上記マレイミド前駆体化合物をＤＭＦ ３から５ｍＬに取り、Ｌ－システイン２．１ｍｇ（２０μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間から２４時間撹拌し、次に減圧下に濃縮し、分取ＨＰＬＣによって精製した。
Ｂ－６ａａ．異性体開鎖コハク酸アミド－システイン付加物の一般的製造方法：
例示的実施形態において、上記マレイミド前駆体化合物６８μｍｏｌを、ＤＭＦ １５ｍＬに取り、Ｎ－｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝－Ｌ－システイン３６ｍｇ（１３６μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で約２０時間撹拌し、次に減圧下に濃縮し、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせ、減圧下に溶媒留去し、次に、残留物をＴＨＦ／水１：１ １５ｍＬに溶かした。２Ｍ水酸化リチウム水溶液１３１μＬを加え、混合物を室温で１時間撹拌した。次に、反応液を１Ｍ塩酸で中和し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、理論値の約５０％の位置異性体保護中間体を無色泡状物として得た。
最後の段階で、０．０２３ｍｍｏｌのこれらの位置異性体加水分解生成物を２，２，２－トリフルオロエタノール３ｍＬに溶かした。塩化亜鉛１２．５ｍｇ（０．０９２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で４時間撹拌した。次に、エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－テトラ酢酸２７ｍｇ（０．０９２ｍｍｏｌ）を加え、溶媒を減圧下に留去した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮及びアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、加水分解開鎖スルファニルコハク酸アミドを位置異性体混合物として得た。
本発明による複合体のさらなる精製及び特性決定
反応後、場合により、反応混合物を、例えば限外濾過によって濃縮し、脱塩し、例えばＳｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５カラムを用いるクロマトグラフィーによって精製した。例えば、ホスフェート緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で、溶離を行った。次に、溶液を無菌濾過し、冷凍した。或いは、複合体を凍結乾燥することができる。
Ｂ－７．抗体、担毒体負荷量及び開鎖システイン付加物の割合の測定
脱グリコシル化及び／又は変性後の分子量測定に加えてタンパク質同定のため、トリプシン消化を行い、それは、変性、還元及び誘導体化後に、トリプシンペプチドを介してタンパク質のアイデンティティーを確認するものである。
作業例に記載の複合体の得られたＰＢＳ緩衝液溶液の担毒体負荷量を、下記のように求めた。
リジン連結ＡＤＣの担毒体負荷量の測定を、個々の複合体種の分子量の質量分析測定によって行った。ここで、抗体複合体を最初に、ＰＮＧａｓｅＦで脱グリコシル化し、サンプルを酸性とし、ＨＰＬＣ分離／脱塩後に、ＥＳＩ－ＭｉｃｒｏＴｏｆＱ（Ｂｒｕｋｅｒ Ｄａｌｔｏｎｉｋ）を用いる質量分析によって分析した。ＴＩＣ（全イオンクロマトグラム）におけるシグナルでの全てのスペクトラムを加え、異なる複合体種の分子量をＭａｘＥｎｔデコンボリューションに基づいて計算した。次に、異なる種のシグナル積分後に、ＤＡＲ（＝薬物／抗体比）を計算した。これに関しては、担毒体カウントによって加重された全ての化学種についての積分結果の総合計を、全ての化学種についての単純加重積分結果の総合計によって割った。
還元及び変性ＡＤＣの逆相クロマトグラフィーによって、システイン連結複合体の担毒体負荷量を求めた。グアニジニウム塩酸塩（ＧｕＨＣｌ）（２８．６ｍｇ）及びＤＬ－ジチオスレイトール（ＤＴＴ）の溶液（５００ｍＭ、３μＬ）をＡＤＣ溶液（１ｍｇ／ｍＬ、５０μＬ）に加えた。混合物を５５℃で１時間インキュベートし、ＨＰＬＣによって分析した。
ＨＰＬＣ分析を、２２０ｎｍで検出を行うＡｇｉｌｅｎｔ １２６０ＨＰＬＣシステムで行った。Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ ＰＬＲＰ－Ｓポリマー逆相カラム（カタログ番号ＰＬ１９１２－３８０２）（２．１×１５０ｍｍ、粒径８μｍ、１０００Å）を、次の勾配：０分、２５％Ｂ；３分、２５％Ｂ；２８分、５０％Ｂで流量１ｍＬ／分で用いた。溶離液Ａは、０．０５％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）／水からなり、溶離液Ｂは０．０５％トリフルオロ酢酸／アセトニトリルからなるものであった。
非複合体化抗体の軽鎖（Ｌ０）及び重鎖（Ｈ０）との保持時間比較によって、検出されたピークの割り当てを行った。専ら複合体化サンプルで検出されたピークを、１個の担毒体（Ｌ１）を有する軽鎖及び１個、２個及び３個の担毒体（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）を有する重鎖に割り当てた。
担毒体を有する抗体の平均負荷量を、ＨＣ負荷量及びＬＣ負荷量の合計の倍としての積分によって求めたピーク面積から計算したが、ＬＣ負荷量は全ＬＣピークの単一加重積分結果の合計で割った全ＬＣピークの担毒体数平均加重積分結果の合計から計算され、ＨＣ負荷量は全ＨＣピークの単一加重積分結果の合計で割った全ＨＣピークの担毒体数平均加重積分結果の合計から計算される。個々の場合で、いくつかのピークの共溶出のために、正確に担毒体負荷を求めることができなかった可能性があった。
軽鎖及び重鎖をＨＰＬＣによって十分に分離できなかった場合、システイン連結複合体の担毒体負荷量の測定は、軽鎖及び重鎖での個々の複合体種の分子量の質量分析測定によって行った。
それに関して、グアニジニウム塩酸塩（ＧｕＨＣｌ）（２８．６ｍｇ）及びＤＬ－ジチオスレイトール（ＤＴＴ）の溶液（５００ｍＭ、３μＬ）をＡＤＣ溶液（１ｍｇ／ｍＬ、５０μＬ）に加えた。混合物を５５℃で１時間インキュベートし、ＥＳＩ－ＭｉｃｒｏＴｏｆＱ（Ｂｒｕｋｅｒ Ｄａｌｔｏｎｉｋ）を用いるオンライン脱塩後に質量分析によって分析した。
ＤＡＲ測定のため、全てのスペクトラムを、ＴＩＣ（全イオンクロマトグラム）におけるシグナルに加え、軽鎖及び重鎖での異なる複合体種の分子量をＭａｘＥｎｔデコンボリューションに基づいて求めた。担毒体を有する抗体の平均負荷量を、ＨＣ負荷量及びＬＣ負荷量の合計の倍としての積分によって求めたピーク面積から求めた。この文脈では、ＬＣ負荷量は、全ＬＣピークについての単純加重積分結果の合計で割った、担毒体カウントによって加重された全ＬＣピークについての積分結果の合計から計算され、ＨＣ負荷量は、全ＨＣピークについての単純加重積分結果の合計で割った、担毒体カウントによって加重された全ＨＣピークについての積分結果の合計から計算される。
開鎖構築物の場合、開鎖システイン付加物の割合を求めるため、全ての単一複合体化軽鎖及び重鎖変異体の閉鎖：開鎖システイン付加物（分子量Δ１８ダルトン）の分子量面積比を求めた。全ての変異体の平均によって、開鎖システイン付加物の割合を得た。
グルタミン連結複合体の担毒体負荷量を、還元及び変性ＡＤＣの逆相クロマトグラフィーによって求めた。グアニジニウム塩酸塩（ＧｕＨＣｌ）（２８．６ｍｇ）及びＤＬ－ジチオトレイトール（ＤＴＴ）の溶液（５００ｍＭ、３μＬ）をＡＤＣ溶液（１ｍｇ／ｍＬ、５０μＬ）に加えた。混合物を５５℃で１時間インキュベートし、ＨＰＬＣによって分析した。
２２０ｎｍで検出を行うＡｇｉｌｅｎｔ１２６０ＨＰＬＣシステムで、ＨＰＬＣ分析を行った。Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ ＰＬＲＰ－Ｓポリマー逆相カラム（カタログ番号ＰＬ１９１２－３８０２）（２．１×１５０ｍｍ、粒径８μｍ、１０００Å）を、流量１ｍＬ／分で、次の勾配：０分、３１％Ｂ；１分、３１％Ｂ；１４分、３８％Ｂ、１６分、９５％Ｂによって用いた。溶離液Ａは０．０５％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水溶液からなり、溶離液Ｂは０．０５％トリフルオロ酢酸／アセトニトリルからなるものであった。
非複合体化抗体の軽鎖（Ｌ０）及び重鎖（Ｈ０）との保持時間比較によって、検出ピークを割り当てた。専ら複合体化サンプルで検出されたピークを、１個及び２個の担毒体を有する重鎖（Ｈ１、Ｈ２）に割り当てた。
担毒体を有する抗体の平均負荷量を、ＨＣ負荷量及びＬＣ負荷量の合計の倍としての積分によって求めたピーク面積から計算したが、ＬＣ負荷量は全ＬＣピークの単一加重積分結果の合計で割った全ＬＣピークの担毒体数平均加重積分結果の合計から計算され、ＨＣ負荷量は全ＨＣピークの単一加重積分結果の合計で割った全ＨＣピークの担毒体数平均加重積分結果の合計から計算される。
或いは、グルタミン連結ＡＤＣの担毒体負荷量を、個々の複合体種の分子量の質量分析測定によって測定した。この場合、サンプルを酸性とし、ＨＰＬＣ分離／脱塩後に、ＥＳＩ－ＭｉｃｒｏＴｏｆＱ （Ｂｒｕｋｅｒ Ｄａｌｔｏｎｉｋ）を用いる質量分析によって分析した。ＴＩＣ（総イオンクロマトグラフィー）でのシグナルにおける全てのスペクトラムを加え、各種複合体種の分子量をＭａｘＥｎｔ逆重畳積分に基づいて計算した。次に、各種複合体種のシグナル積分後に、ＤＡＲ（＝薬物／抗体比）を計算した。これに関しては、担毒体カウントで加重した全ての化学種についての積分結果の合計を、全ての化学種についての単純加重積分の合計によって割った。
Ｂ－８．ＡＤＣ類の抗原結合の検証
バインダーの標的分子への結合能力を、カップリングが起こった後に調べた。当業者であれば、この目的に用いられる各種方法については熟知しており、例えば、複合体のアフィニティは、ＥＬＩＳＡ技術又は表面プラズモン共鳴分析（ＢＩＡｃｏｒｅ（商標名）測定）を用いて調べることができる。複合体濃度は、例えばタンパク質による抗体複合体についての一般的な方法を用いて当業者が測定することができる（Ｄｏｒｏｎｉｎａ ｅｔ ａｌ．； Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２００３；２１：７７８－７８４及びＰｏｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｂｌｏｏｄ ２００７；１１０２：６１６－６２３も参照）。
代謝物の作業例
実施例Ｍ１
Ｓ－［１－（２－｛［２－（｛（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］アミノ｝－２－オキソエチル）－２，５－ジオキソピロリジン－３－イル］－Ｌ－システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000465
中間体Ｆ１０４ １．８ｍｇ（２μｍｏｌ）をＤＭＦ １ｍＬに取り、Ｌ－システイン２．７ｍｇ（２２μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２０時間撹拌し、減圧下に濃縮し、分取ＨＰＬＣによって精製した。標題化合物０．６ｍｇ（理論値の２６％）が無色泡状物として残った。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８０分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８１４［Ｍ＋Ｈ］＋。
実施例Ｍ２
４－［（２－｛［２－（｛（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］アミノ｝－２－オキソエチル）アミノ］－３－｛［（２Ｒ）－２－アミノ－２－カルボキシエチル］スルファニル｝－４－オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
及び
４－［（２－｛［２－（｛（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］アミノ｝－２－オキソエチル）アミノ］－２－｛［（２Ｒ）－２－アミノ－２－カルボキシエチル］スルファニル｝－４－オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000466
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８０分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８１４［Ｍ＋Ｈ］＋。
最初に、Ｌ－システインを、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、ＤＭＦ中の１－（｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝オキシ）ピロリジン－２，５－ジオンでＮ－｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝－Ｌ－システインに変換した。
Ｎ－｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝－Ｌ－システイン４０６ｍｇ（１．５３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ １０ｍＬに溶かし、無水マレイン酸１５７．５ｍｇ（１．６０６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。中間体Ｃ６６ ７．５ｍｇ（０．０１ｍｍｏｌ）をこの溶液１３０μＬに加え、混合物を室温で５分間撹拌した。混合物を減圧下に濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、保護中間体１０ｍｇ（８９％）を得たが、ＨＰＬＣによってもＬＣ－ＭＳによっても位置異性体を分離することはできなかった。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３８分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１２０［Ｍ＋Ｈ］＋。
最後の段階で、この中間体１０ｍｇを２，２，２－トリフルオロエタノール２ｍＬに溶かした。塩化亜鉛１２ｍｇ（０．０８８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を５０℃で３０分間撹拌した。エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－テトラ酢酸２６ｍｇ（０．０８８ｍｍｏｌ）を加え、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮及びアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物８．３ｍｇ（理論値の９９％）を８７：１３の比率での位置異性体混合物として得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．３分及び２．４３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３２（Ｍ＋Ｈ）＋。
１Ｈ－ＮＭＲ主位置異性体：（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）：Ｄ＝８．７（ｍ、１Ｈ）、８．５（ｍ、２Ｈ）、８．１（ｍ、１Ｈ）、７．６（ｍ、１Ｈ）、７．５（ｓ、１Ｈ）７．４－７．１５（ｍ、６Ｈ）、６．９－７．０（ｍ、１Ｈ）、６．８５（ｓ、１Ｈ）、５．６１（ｓ、１Ｈ）、４．９及び５．２（２ｄ、２Ｈ）、４．２６及び４．０６（２ｄ、２Ｈ）、３．５－３．８（ｍ、５Ｈ）、３．０－３．４（ｍ、５Ｈ）、２．７５－３．０（ｍ、３Ｈ）、２．５８及び２．５７（ｄｄ、１Ｈ）、０．７７及び１，５（２ｍ、２Ｈ）、０．８１（ｓ、９Ｈ）。
別法として、位置異性体標題化合物を次のように製造した。
最初に、Ｌ－システインを、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＤＭＦ中の１－（｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝オキシ）ピロリジン－２，５－ジオンでＮ－｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝－Ｌ－システインに変換した。
中間体Ｆ１０４ ５５ｍｇ（０．０６８ｍｍｏｌ）及びＮ－｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝－Ｌ－システイン３６ｍｇ（０．１３６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ １５ｍＬに溶かし、混合物を室温で２０時間撹拌した。混合物を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせ、減圧下に溶媒留去し、残留物をＴＨＦ／水１：１ １５ｍＬに溶かした。２Ｍ水酸化リチウム水溶液１３１μＬを加え、混合物を室温で１時間撹拌した。次に、混合物を１Ｍ塩酸で中和し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、位置異性体保護中間体３７ｍｇ（理論値の５０％）を無色泡状物として得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝３．３３分及び３．３６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９７６（Ｍ＋Ｈ）＋。
最後の段階で、この中間体２５ｍｇ（０．０２３ｍｍｏｌ）を２，２，２－トリフルオロエタノール３ｍＬに溶かした。塩化亜鉛１２．５ｍｇ（０．０９２ｍｍｏｌ）を加え、混合物を５０℃で４時間撹拌した。エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－テトラ酢酸２７ｍｇ（０．０９２ｍｍｏｌ）を加え、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮及びアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物１８．５ｍｇ（理論値の８５％）を２１：７９の比率での位置異性体混合物として得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．３７分及び３．４４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３２（Ｍ＋Ｈ）＋。
標題化合物の個々の位置異性体の標的製造を、以下のようにして行った。
実施例Ｍ３
４－［（２－｛［（２Ｒ）－２－（｛（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）－２－カルボキシエチル］アミノ｝－２－オキソエチル）アミノ］－３－｛［（２Ｒ）－２－アミノ－２－カルボキシエチル］スルファニル｝－４－オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
及び
４－［（２－｛［（２Ｒ）－２－（｛（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）－２－カルボキシエチル］アミノ｝－２－オキソエチル）アミノ］－２－｛［（２Ｒ）－２－アミノ－２－カルボキシエチル］スルファニル｝－４－オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000467
最初に、Ｌ－システインを、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、ＤＭＦ中の１－（｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝オキシ）ピロリジン－２，５－ジオンでＮ－｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝－Ｌ－システインに変換した。
中間体Ｆ１９３ １１ｍｇ（０．０１３ｍｍｏｌ）及びＮ－｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝－Ｌ－システイン８ｍｇ（０．０１６ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ ３ｍＬに溶かし、混合物を室温で２０時間撹拌した。その混合物を濃縮し、残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。
適切な分画を合わせ、減圧下に溶媒留去し、残留物をＴＨＦ／水１：１ ２ｍＬに溶かした。２Ｍ水酸化リチウム水溶液１９μＬを加え、混合物を室温で１時間撹拌した。追加の２Ｍ水酸化リチウム水溶液１９μＬを加え、混合物を室温で終夜撹拌した。混合物を１Ｍ塩酸で中和し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。これによって、位置異性体保護中間体４．１ｍｇ（理論値の３８％）を無色泡状物として得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０３分（広い）；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２０（Ｍ＋Ｈ）＋。
最後の段階で、この中間体４．１ｍｇ（０．００４ｍｍｏｌ）を２，２，２－トリフルオロエタノール３ｍＬに溶かした。塩化亜鉛３ｍｇ（０．０２２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で１時間撹拌した。エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－テトラ酢酸６ｍｇ（０．０２２ｍｍｏｌ）及び０．１％トリフルオロ酢酸水溶液２ｍＬを加え、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮及びアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物５ｍｇ（定量的）を２０：８０の比率での位置異性体混合物として得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７８分（広い）；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８７６（Ｍ＋Ｈ）＋。
ＬＣ－ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．３６分及び２．３９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８７６（Ｍ＋Ｈ）＋。
実施例Ｍ４
Ｓ－（１－｛２－［２－（｛（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エトキシ］エチル｝－２，５－ジオキソピロリジン－３－イル）－Ｌ－システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000468
中間体Ｆ２４８ ３ｍｇ（４μｍｏｌ）をＤＭＦ ２ｍＬに取り、Ｌ－システイン０．９ｍｇ（８μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１８時間撹拌し、減圧下に濃縮した。残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を濃縮して、アセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥後に、標題化合物１．１ｍｇ（理論値の３２％）を白色固体として得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７８分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８０１［Ｍ＋Ｈ］＋。
実施例Ｍ５
（３Ｒ，７Ｓ）－７－アミノ－１７－｛［（２Ｒ）－２－アミノ－２－カルボキシエチル］スルファニル｝－３－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－４－グリコロイル－２，２－ジメチル－８，１６－ジオキソ－１２－オキサ－４，９，１５－トリアザノナデカン－１９－オン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
及び
（３Ｒ，７Ｓ）－７－アミノ－１８－｛［（２Ｒ）－２－アミノ－２－カルボキシエチル］スルファニル｝－３－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－４－グリコロイル－２，２－ジメチル－８，１６－ジオキソ－１２－オキサ－４，９，１５－トリアザノナデカン－１９－オン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000469
中間体Ｆ２４８の保護中間体８ｍｇ（０．０１０ｍｍｏｌ）及びＮ－｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝－Ｌ－システイン５．１ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ３ｍＬに溶かし、混合物を室温で１８時間撹拌し、超音波浴で２時間処理した。混合物を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせ、減圧下に溶媒留去し、残留物をＴＨＦ／水１：１ ２ｍＬに溶かした。２Ｍ水酸化リチウム水溶液１５μＬを加え、混合物を室温で１５分間撹拌した。混合物を１Ｍ塩酸でｐＨ約３に調節し、塩化ナトリウム溶液２０ｍＬで希釈し、酢酸エチル２０ｍＬで２回抽出した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、濃縮し、残留物をアセトニトリル／水から凍結乾燥した。これによって、位置異性体保護中間体８．４ｍｇ（２段階で理論値の７８％）を無色泡状物として得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４４分及び３．４３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１０７（Ｍ＋Ｈ）＋。
最後の段階で、この中間体８ｍｇ（０．００７ｍｍｏｌ）を２，２，２－トリフルオロエタノール５ｍＬに溶かした。塩化亜鉛９．８ｍｇ（０．０７２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で１．５時間撹拌した。エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－テトラ酢酸を加え、溶媒を減圧下に留去した。残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮及びアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物４ｍｇ（理論値の５９％）を３１：６７の比率での位置異性体混合物として得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７９分及び０．８１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８１９（Ｍ＋Ｈ）＋。
実施例Ｍ６
２－｛［（２Ｒ）－２－アミノ－２－カルボキシエチル］スルファニル｝－４－（｛（１４Ｒ）－１３－（３－アミノプロピル）－１４－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－１５，１５－ジメチル－２，７，１２－トリオキソ－１０－チア－３，６，１３－トリアザヘキサデカ－１－イル｝アミノ）－４－オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：２）及び
３－｛［（２Ｒ）－２－アミノ－２－カルボキシエチル］スルファニル｝－４－（｛（１４Ｒ）－１３－（３－アミノプロピル）－１４－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－１５，１５－ジメチル－２，７，１２－トリオキソ－１０－チア－３，６，１３－トリアザヘキサデカ－１－イル｝アミノ）－４－オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：２）
Figure 0007251981000470
中間体Ｆ２１３ １８ｍｇ（０．０２１ｍｍｏｌ）及びＮ－｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝－Ｌ－システイン１１．２ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ２ｍＬに溶かし、混合物を室温で１８時間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮した。残留物（２１．２ｍｇ）をＴＨＦ／水１：１ ３ｍＬに溶解させた。２Ｍ水酸化リチウム水溶液０．０４ｍＬを加え、混合物を室温で３時間撹拌した。２Ｍ水酸化リチウム水溶液０．０２ｍＬを加え、混合物を室温で１時間撹拌した。酢酸７．２ｍｇ（０．１２ｍｍｏｌ）を用いて混合物をｐＨ約７に調節した。反応混合物を、分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水；０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、位置異性体保護中間体１３ｍｇ（２段階で５７％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０２０（Ｍ＋Ｈ）＋。
最後の段階で、この中間体１３ｍｇ（０．０１ｍｍｏｌ）を２，２，２－トリフルオロエタノール２ｍＬに溶かした。塩化亜鉛６．２ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を加え、反応液を５０℃で７時間撹拌した。エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－テトラ酢酸１３．３ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を加え、生成物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮及びアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物１０．３ｍｇ（８１．４％）を位置異性体混合物として得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８７５（Ｍ＋Ｈ）＋。
実施例Ｍ７
Ｓ－（２－｛［２－（｛（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］アミノ｝－２－オキソエチル）－Ｌ－システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000471
中間体Ｆ１１９ ６ｍｇ（８μｍｏｌ）をＤＭＦ ３ｍＬに取り、Ｌ－システイン１．８ｍｇ（１５μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で６時間撹拌し、室温で３日間経過させた。反応を減圧下に濃縮し、生成物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７１７（Ｍ＋Ｈ）＋。
実施例Ｍ８
（３Ｒ）－６－｛（１１Ｓ，１５Ｒ）－１１－アミノ－１５－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－１４－グリコロイル－１６，１６－ジメチル－２，５，１０－トリオキソ－３，６，９，１４－テトラアザヘプタデカ－１－イル｝－５－オキソチオモルホリン－３－カルボン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000472
実施例１３５からの化合物４ｍｇ（０．００４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ／水４ｍＬに溶かし、２Ｍ水酸化リチウム水溶液４８μＬを加えた。混合物を室温で１時間撹拌し、濃縮し、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせ、濃縮し、アセトニトリル／水から凍結乾燥することで、標題化合物２．４ｍｇ（理論値の６０％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８６分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８１４［Ｍ＋Ｈ］＋。
実施例Ｍ９
Ｎ－（３－アミノプロピル）－Ｎ－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２－ヒドロキシアセトアミド
Figure 0007251981000473
最初に（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロパン－１－アミン（中間体Ｃ５２）１５０．０ｍｇ（０．４２ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン２．０ｍＬに入れ、ＨＯＡｃ ２９．２ｍｇ（０．４９ｍｍｏｌ）及び水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム１２５．６ｍｇ（０．５９ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で５分間撹拌した。３－（１，３－ジオキソ－１，３－ジヒドロ－２Ｈ－イソインドール－２－イル）プロパナール９８．９ｍｇ（０．４９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、有機相を飽和炭酸ナトリウム溶液で２回及び飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄した。硫酸マグネシウムで脱水した後、溶媒を減圧下に留去し、残留物をシリカゲル（溶離液：ジクロロメタン／メタノール１００：１）で精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２－［３－（｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝アミノ）プロピル］－１Ｈ－イソインドール－１，３（２Ｈ）－ジオン１８８．６ｍｇ（７４％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．００分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５４１［Ｍ＋Ｈ］＋。
最初に２－［３－（｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝アミノ）プロピル］－１Ｈ－イソインドール－１，３（２Ｈ）－ジオン１７１．２ｍｇ（０．３２ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン５．０ｍＬに入れ、トリエチルアミン７３．６ｍｇ（０．７３ｍｍｏｌ）を加えた。０℃で、アセトキシアセチルクロライド９４．９ｍｇ（０．７０ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、有機相を飽和炭酸水素ナトリウム溶液で２回及び飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄した。硫酸マグネシウムで脱水した後、溶媒を減圧下に留去し、残留物を、Ｂｉｏｔａｇｅ Ｉｓｏｌｅｒａ（シリカゲル、カラム１０ｇＳＮＡＰ、流量１２ｍＬ／分、酢酸エチル／シクロヘキサン１：３）を用いて精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２－（｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝［３－（１，３－ジオキソ－１，３－ジヒドロ－２Ｈ－イソインドール－２－イル）プロピル］アミノ）－２－オキソ酢酸エチル１５９．０ｍｇ（７７％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６４２［Ｍ＋Ｈ］＋。
２－（｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝［３－（１，３－ジオキソ－１，３－ジヒドロ－２Ｈ－イソインドール－２－イル）プロピル］アミノ）－２－オキソ酢酸エチル１４７．２ｍｇ（０．２３ｍｍｏｌ）を最初に、エタノール４．０ｍＬに入れ、メタンアミン（４０％水溶液）３５６．２ｍｇ（４．５９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で終夜撹拌した。溶媒を減圧下に留去し、残留物をトルエンで３回共蒸留した。残留物をシリカゲル（溶離液：ジクロロメタン／メタノール＝１０：１）で精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物６７．４ｍｇ（６３％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４７０［Ｍ＋Ｈ］＋。
実施例Ｍ１０
（２Ｒ，２８Ｒ）－２８－アミノ－２－［（｛２－［（３－アミノプロピル）｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝アミノ］－２－オキソエチル｝スルファニル）メチル］－２５－（カルボキシメチル）－４，２０，２４－トリオキソ－７，１０，１３，１６－テトラオキサ－２６－チア－３，１９，２３－トリアザノナコサン－１，２９－ジオン酸／トリフルオロ酢酸（１：２）及び
（１Ｒ，２８Ｒ，３４Ｒ）－１－アミノ－３３－（３－アミノプロピル）－３４－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－３５，３５－ジメチル－６，１０，２６，３２－テトラオキソ－１４，１７，２０，２３－テトラオキサ－３，３０－ジチア－７，１１，２７，３３－テトラアザヘキサトリアコンタン－１，４，２８－トリカルボン酸／トリフルオロ酢酸（１：２）
Figure 0007251981000474
Ｒ－｛２－［（３－アミノプロピル）｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝アミノ］－２－オキソエチル｝－Ｎ－［１９－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－１７－オキソ－４，７，１０，１３－テトラオキサ－１６－アザノナデカン－１－オイル］－Ｌ－システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｆ２０９）２０ｍｇ（０．０１８ｍｍｏｌ）及びＮ－｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝－Ｌ－システイン９．７８ｍｇ（０．０３６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ２ｍＬに溶かし、混合物を室温で１８時間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮した。残留物（４７．７ｍｇ）をＴＨＦ／水１：１ ３ｍＬに溶解させた。２Ｍ水酸化リチウム水溶液０．０８ｍＬを加え、混合物を室温で１時間撹拌した。酢酸９．２６ｍｇ（０．１５ｍｍｏｌ）を用いて、反応液をｐＨ約７に調節した。反応混合物を、分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水；０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、位置異性体保護中間体１５．３ｍｇ（２段階で２９％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法６）：Ｒｔ＝１２．２６分及び１２．３０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１２５４（Ｍ＋Ｈ）＋。
最後の段階で、この中間体１５．３ｍｇ（０．０１ｍｍｏｌ）を２，２，２－トリフルオロエタノール２ｍＬに溶かした。塩化亜鉛６．１ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で２時間撹拌した。エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－テトラ酢酸１３．１ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を加え、生成物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮及びアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物１１．９ｍｇ（７９．５％）を位置異性体混合物として得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１１０（Ｍ＋Ｈ）＋。
実施例Ｍ１１
Ｓ－｛２－［（３－アミノプロピル）｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝アミノ］－２－オキソエチル｝－Ｌ－システイン／トリフルオロ酢酸（１：２）
Figure 0007251981000475
Ｓ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル）－Ｌ－システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｃ７１）１５．０ｍｇ（０．０１８ｍｍｏｌ）をトリフルオロエタノール１．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛７．４ｍｇ（０．０５４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で終夜撹拌した。エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－テトラ酢酸１５．８ｍｇ（０．０５４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１１．１ｍｇ（７７％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５７３（Ｍ＋Ｈ）＋。
実施例Ｍ１２
４－｛［（１Ｒ）－２－（｛２－［（３－アミノプロピル）｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝アミノ］－２－オキソエチル｝スルファニル）－１－カルボキシエチル］アミノ｝－４－オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000476
Ｓ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル）－Ｎ－（４－ｔｅｒｔ－ブトキシ－４－オキソブタノイル）－Ｌ－システイン（中間体Ｃ７７）１２．２ｍｇ（０．０１４ｍｍｏｌ）をトリフルオロエタノール２．０ｍＬに溶かし、二塩化亜鉛１１．４ｍｇ（０．０８４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－テトラ酢酸２４．５ｍｇ（０．０８４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１０分間撹拌し、水（０．１％ＴＦＡ）を加えた。分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって直接、精製を行った。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物４．６ｍｇ（４２％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６７３（Ｍ＋Ｈ）＋。
実施例Ｍ１３
４－［（２－｛［２－（｛（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］アミノ｝－２－オキソエチル）アミノ］－２－｛［（２Ｒ）－２－アミノ－２－カルボキシエチル］スルファニル｝－４－オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
位置異性体１、エピマー１（２Ｒ）又は（２Ｓ）。
Figure 0007251981000477
ＬＣ－ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．４４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３２［Ｍ＋Ｈ］＋。
最初に、メチルＬ－システイネート塩酸塩（１：１）を、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＤＭＦ中の１－（｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝オキシ）ピロリジン－２，５－ジオンでメチルＮ－｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝－Ｌ－システイネートに変換した。
市販の３－ブロモ－４－メトキシ－４－オキソブタン酸４０８ｍｇ（１．９３ｍｍｏｌ）及びメチルＮ－｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝－Ｌ－システイネート１８０ｍｇ（０．６４４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ８ｍＬに溶かし、１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン１４７ｍｇ（０．９７ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１８時間撹拌後、追加の３－ブロモ－４－メトキシ－４－オキソブタン酸１３６ｍｇ（０．６４ｍｍｏｌ）及び１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン１４７ｍｇ（０．９７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温でさらに１２時間撹拌し、減圧下に濃縮した。残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせ、減圧下に留去して、４－メトキシ－３－｛［（２Ｒ）－３－メトキシ－３－オキソ－２－（｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）プロピル］スルファニル｝－４－オキソブタン酸１５１ｍｇ（理論値の５７％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．７４分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝４０８（Ｍ－Ｈ）－。
この中間体のうち１４５ｍｇを、キラルカラムによる超臨界流体クロマトグラフィーによって個々のジアステレオマー（ＳＦＣ；カラム：ＤＡＩＣＥＬ、ＡＤ－Ｈ ５μ ２５０×２０ｍｍ；流量：８０ｍＬ／分；方法：ＡＤ－２５％ＥＴＯＨ－８０ｍＬ；圧力：１００バール；波長：２１０ｎＭ）に分離し、エピマー１ ６３ｍｇ（４３％）及びエピマー２ ５８ｍｇ（４０％）を得た。
エピマー１を次のように特性決定した。
ＬＣ－ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．９４分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝４０８（Ｍ－Ｈ）－。
１Ｈ－ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）：Ｄ＝７．５７（ｄ、１Ｈ）、４．２４（ｍ、１Ｈ）、４．０５（ｔ、２Ｈ）、３．６７（ｔ、１Ｈ）、３．６５（ｓ、３Ｈ）、３．６２（ｓ、３Ｈ）、３．０５（ｄｄ、１Ｈ）、２．７０－２．８８（ｍ、２Ｈ）、２．５９（ｄｄ、１Ｈ）、０．９３（ｔ、２Ｈ）、０．０２（ｓ、９Ｈ）。
エピマー２を次のように特性決定した。
ＬＣ－ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．９５分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝４０８（Ｍ－Ｈ）－。
１Ｈ－ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）：Ｄ＝７．５８（ｄ、１Ｈ）、４．１６－４．２３（ｍ、１Ｈ）、４．０５（ｔ、２Ｈ）、３．６７（ｄｄ、１Ｈ）、３．６５（ｓ、３Ｈ）、３．６４（ｓ、３Ｈ）、３．０４（ｄｄ、１Ｈ）、２．８８（ｄｄ、１Ｈ）、２．７７（ｄｄ、１Ｈ）、２．６１（ｄｄ、１Ｈ）、０．９２（ｔ、２Ｈ）、０．０２（ｓ、９Ｈ）。
エピマー１ ３２．５ｍｇ（０．０７９ｍｍｏｌ）を、ＨＡＴＵ ３０ｍｇ（０．０７９ｍｍｏｌ）及び４－メチルモルホリン１３．４ｍｇ（０．１３２ｍｍｏｌ）の存在下に中間体Ｃ６６ ５０ｍｇ（０．０６６ｍｍｏｌ）とカップリングさせて、ＨＰＬＣ精製後に、完全に保護された中間体メチル４－｛［（８Ｓ）－８－｛２－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］エチル｝－２，２－ジメチル－６，９，１４－トリオキソ－５－オキサ－７，１０，１３－トリアザ－２－シラペンタデカン－１５－イル］アミノ｝－２－｛［（２Ｒ）－３－メトキシ－３－オキソ－２－（｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）プロピル］スルファニル｝－４－オキソブタノエート４３ｍｇ（理論値の５７％）を得た。
この中間体４０ｍｇ（０．０３５ｍｍｏｌ）を室温で２Ｍ水酸化リチウム溶液０．９ｍＬ／メタノール１１ｍＬとともに２０分間撹拌して、両方のメチルエステル基を開裂させた。ＨＰＬＣによる精製によって、ジカルボン酸誘導体１２ｍｇ（理論値の３１％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝４．７４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１２０［Ｍ＋Ｈ］＋。
最後に、この中間体１０ｍｇ（０．００９ｍｍｏｌ）を、上記で記載の方法に従って塩化亜鉛／トリフルオロエタノールで完全に脱保護した。残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮及びアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物２．６ｍｇ（理論値の３０％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．４４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３２［Ｍ＋Ｈ］＋。
実施例Ｍ１４
４－［（２－｛［２－（｛（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］アミノ｝－２－オキソエチル）アミノ］－２－｛［（２Ｒ）－２－アミノ－２－カルボキシエチル］スルファニル｝－４－オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
位置異性体１、エピマー２（２Ｒ又は２Ｓ）。
Figure 0007251981000478
ＬＣ－ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．４４分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３２［Ｍ＋Ｈ］＋。
実施例Ｍ１３に記載の中間体エピマー２を、実施例Ｍ１３における記載と同様にして反応させた。
エピマー２ ３２．５ｍｇ（０．０７９ｍｍｏｌ）を、ＨＡＴＵ ３０ｍｇ（０．０７９ｍｍｏｌ）及び４－メチルモルホリン１３．４ｍｇ（０．１３２ｍｍｏｌ）の存在下に、中間体Ｃ６６ ５０ｍｇ（０．０６６ｍｍｏｌ）とカップリングさせて、ＨＰＬＣ精製後に、完全に保護された中間体メチル４－｛［（８Ｓ）－８－｛２－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］エチル｝－２，２－ジメチル－６，９，１４－トリオキソ－５－オキサ－７，１０，１３－トリアザ－２－シラペンタデカン－１５－イル］アミノ｝－２－｛［（２Ｒ）－３－メトキシ－３－オキソ－２－（｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）プロピル］スルファニル｝－４－オキソブタノエート４３ｍｇ（理論値の５７％）を得た。
次に、この中間体４０ｍｇ（０．０３５ｍｍｏｌ）を、室温で２Ｍ水酸化リチウム溶液０．９ｍＬ／メタノール１１ｍＬとともに２０分間撹拌して、両方のメチルエステル基を開裂させた。ＨＰＬＣによる精製によって、ジカルボン酸誘導体１１ｍｇ（理論値の２８％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝４．７４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１２０［Ｍ＋Ｈ］＋。
最後に、この中間体１０ｍｇ（０．００９ｍｍｏｌ）を、上記の方法に従って塩化亜鉛／トリフルオロエタノールで完全に脱保護した。残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮及びアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物４．４ｍｇ（理論値の５２％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．４４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３２［Ｍ＋Ｈ］＋。
実施例Ｍ１５
４－［（２－｛［２－（｛（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］アミノ｝－２－オキソエチル）アミノ］－３－｛［（２Ｒ）－２－アミノ－２－カルボキシエチル］スルファニル｝－４－オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
位置異性体２、エピマー１（３Ｒ又は３Ｓ）。
Figure 0007251981000479
ＬＣ－ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．４５分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３２［Ｍ＋Ｈ］＋。
市販の２－ブロモ－４－エトキシ－４－オキソブタン酸７４２．８ｍｇ（３．３ｍｍｏｌ）及びメチルＮ－｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝－Ｌ－システイネート８０２ｍｇ（２．８７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ３２ｍＬに溶かし、１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン６５５．４ｍｇ（４．３１ｍｍｏｌ）を加えた。室温で２０時間撹拌後、混合物を減圧下に濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせ、減圧下に溶媒留去して、４－エトキシ－２－｛［（２Ｒ）－３－メトキシ－３－オキソ－２－（｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）プロピル］スルファニル｝－４－オキソブタン酸５２１ｍｇ（理論値の４３％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝３．１３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４２４（Ｍ＋Ｈ）＋。
この中間体のうち５１０ｍｇを、キラルカラムによる超臨界流体クロマトグラフィーによって個々のジアステレオマーに分離して（ＳＦＣ；カラム：ＤＡＩＣＥＬ、ＡＤ－Ｈ ５μ ２５０×２０ｍｍ；流量：８０ｍＬ／分；方法：ＡＤ－１０％ＥｔＯＨ－８０ｍＬ；圧力：１００バール；波長：２１０ｎｍ）、エピマー１ １００ｍｇ（２０％）及びエピマー２ １４１ｍｇ（２８％）を得た。
エピマー１を次のように特性決定した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９９分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝４２２（Ｍ－Ｈ）－。
１Ｈ－ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）：Ｄ＝７．６０（ｄ、１Ｈ）、４．１８－４．２６（ｍ、１Ｈ）、４．０１－４．０８（ｍ、４Ｈ）、３．６３（ｓ、３Ｈ）、３．５９（ｄｄ、１Ｈ）、３．０４（ｄｄ、１Ｈ）、２．９２（ｄｄ、１Ｈ）、２．８０（ｄｄ、１Ｈ）、２．６３（ｄｄ、１Ｈ）、１．１７（ｔ、３Ｈ）、０．９２（ｔ、２Ｈ）、０．０２（ｓ、９Ｈ）。
エピマー２を次のように特性決定した。
ＬＣ－ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．９５分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝４０８（Ｍ－Ｈ）－。
１Ｈ－ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）：Ｄ＝７．５６（ｄ、１Ｈ）、４．２１－４．２９（ｍ、１Ｈ）、４．０１－４．１（ｍ、４Ｈ）、３．６４（ｓ、３Ｈ）、３．５８（ｄｄ、１Ｈ）、３．０８（ｄｄ、１Ｈ）、２．８５（ｄｄ、１Ｈ）、２．７８（ｄｄ、１Ｈ）、２．６０（ｄｄ、１Ｈ）、１．１７（ｔ、３Ｈ）、０．９３（ｔ、２Ｈ）、０．０２（ｓ、９Ｈ）。
ＨＡＴＵ ３０ｍｇ（０．０７９ｍｍｏｌ）及び４－メチルモルホリン１３．４ｍｇ（０．１３２ｍｍｏｌ）の存在下に、エピマー１ ３３．６ｍｇ（０．０７９ｍｍｏｌ）を中間体Ｃ６６ ５０ｍｇ（０．０６６ｍｍｏｌ）とカップリングさせて、ＨＰＬＣ精製後に、完全に保護された中間体５１ｍｇ（理論値の６３％）を得た。
エチル４－｛［（８Ｓ）－８－｛２－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］エチル｝－２，２－ジメチル－６，９，１４－トリオキソ－５－オキサ－７，１０，１３－トリアザ－２－シラペンタデカン－１５－イル］アミノ｝－３－｛［（２Ｒ）－３－メトキシ－３－オキソ－２－（｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）プロピル］スルファニル｝－４－オキソブタノエート
この中間体４９ｍｇ（０．０４２ｍｍｏｌ）を、室温で２Ｍ水酸化リチウム溶液０．５ｍＬ／ＴＨＦ／水１：１ １２ｍＬとともに３０分間撹拌して、両方のメチルエステル基を開裂させた。酸性とし、ＨＰＬＣによって精製することで、ジカルボン酸誘導体１１ｍｇ（理論値の２４％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝４．６８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１２０［Ｍ＋Ｈ］＋。
最後に、この中間体１１ｍｇ（０．０１ｍｍｏｌ）を、上記の方法に従って塩化亜鉛／トリフルオロエタノールで完全に脱保護した。残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮及びアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物３．７ｍｇ（理論値の３９％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．４５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３２［Ｍ＋Ｈ］＋。
実施例Ｍ１６
４－［（２－｛［２－（｛（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］アミノ｝－２－オキソエチル）アミノ］－３－｛［（２Ｒ）－２－アミノ－２－カルボキシエチル］スルファニル｝－４－オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
位置異性体２、エピマー２（３Ｒ又は３Ｓ）。
Figure 0007251981000480
ＬＣ－ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．４４分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３２［Ｍ＋Ｈ］＋。
実施例Ｍ１５に記載のエピマー２中間体を、実施例Ｍ１５における記載と同様にして変換させた。
ＨＡＴＵ ３０ｍｇ（０．０７９ｍｍｏｌ）及び４－メチルモルホリン１３．４ｍｇ（０．１３２ｍｍｏｌ）の存在下に、エピマー２ ３３．６ｍｇ（０．０７９ｍｍｏｌ）を、中間体Ｃ６６ ５０ｍｇ（０．０６６ｍｍｏｌ）とカップリングさせて、ＨＰＬＣ精製後に、完全に保護された中間体５１ｍｇ（理論値の６３％）を得た。
エチル４－｛［（８Ｓ）－８－｛２－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］エチル｝－２，２－ジメチル－６，９，１４－トリオキソ－５－オキサ－７，１０，１３－トリアザ－２－シラペンタデカン－１５－イル］アミノ｝－３－｛［（２Ｒ）－３－メトキシ－３－オキソ－２－（｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）プロピル］スルファニル｝－４－オキソブタノエート
この中間体４９ｍｇ（０．０４２ｍｍｏｌ）を、室温で２Ｍ水酸化リチウム溶液０．５ｍＬ／ＴＨＦ／水１：１ １２ｍＬとともに３０分間撹拌して、両方のメチルエステル基を開裂させた。酸性とし、ＨＰＬＣによって精製することで、ジカルボン酸誘導体１３．４ｍｇ（理論値の２８％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝４．６６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１２０［Ｍ＋Ｈ］＋。
最後に、この中間体１３．４ｍｇ（０．０１２ｍｍｏｌ）を、上記の方法に従って塩化亜鉛／トリフルオロエタノールで完全に脱保護した。残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮及びアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物７．５ｍｇ（理論値の６６％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．４４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３２［Ｍ＋Ｈ］＋。
実施例Ｍ１７
（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタン酸塩酸塩（１：１）
Figure 0007251981000481
中間体Ｃ５３ １５０ｍｇ（０．２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ １５ｍＬに溶かし、ＤＡＢＣＯ ２．２９ｇ（２０．３９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を超音波浴で３０分間処理した。酢酸１．１７ｍＬを加えることで、混合物をｐＨ３～４とし、それを減圧下に濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製し、適切な分画を室温で減圧下に濃縮した。残留物をアセトニトリル／水１：１に取り、４Ｎ塩酸５ｍＬを加え、混合物を凍結乾燥した。これによって、標題化合物８１ｍｇ（理論値の６８％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．６９分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５１４［Ｍ＋Ｈ］＋。
実施例Ｍ１８
Ｎ－［２－（｛（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］－Ｌ－グルタミン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000482
最初に、トリフルオロ酢酸／ベンジルＮ－（２－アミノエチル）－Ｎ２－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｌ－グルタミネート（１：１）を、当業者にとっては共通の知識である方法によって製造した。次に、ＨＡＴＵの存在下に、この中間体を中間体Ｃ５８にカップリングさせた。次に、最初に、ベンジルオキシカルボニル保護基及びベンジルエステルを水素化開裂によって除去し、次に２－（トリメチルシリル）エトキシカルボニル保護基を、塩化亜鉛を用いて除去した。
ＬＣ－ＭＳ（方法６）：Ｒｔ＝１．９１分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６８５［Ｍ＋Ｈ］＋。
実施例Ｍ１９
Ｎ６－（Ｎ－｛（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝－β－アラニル）－Ｌ－リジン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000483
最初に、ペプチド化学において公知の従来の保護基操作を用いて、トリフルオロ酢酸／２－（トリメチルシリル）エチル－Ｎ２－［（ベンジルオキシ）カルボニル］－Ｌ－リシネート（１：１）を製造した。ＨＡＴＵの存在下に、この中間体を中間体Ｃ６１にカップリングさせた。次に、最初に、２－（トリメチルシリル）エトキシカルボニル保護基及び２－（トリメチルシリル）エチルエステルを、塩化亜鉛を用いて開裂させた。最後に、ベンジルオキシカルボニル保護基の水素化分解的開裂及び分取ＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝１．６５分。
実施例Ｍ２０
（１Ｒ，４Ｒ，２７Ｒ，３３Ｒ）－１－アミノ－３２－（３－アミノプロピル）－３３－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－３４，３４－ジメチル－６，９，２５，３１－テトラオキソ－１３，１６，１９，２２－テトラオキサ－３，２９－ジチア－７，１０，２６，３２－テトラアザペンタトリアコンタン－１，４，２７－トリカルボン酸／トリフルオロ酢酸（１：２）
Figure 0007251981000484
最初に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、メチルＬ－システイネート塩酸塩（１：１）を、ＤＭＦ中の１－（｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝オキシ）ピロリジン－２，５－ジオンでメチルＮ－｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝－Ｌ－システイネートに変換した。
市販の３－ブロモ－４－メトキシ－４－オキソブタン酸４０８ｍｇ（１．９３ｍｍｏｌ）及びメチルＮ－｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝－Ｌ－システイネート１８０ｍｇ（０．６４４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ８ｍＬに溶かし、１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン１４７ｍｇ（０．９７ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１８時間撹拌した後、追加の３－ブロモ－４－メトキシ－４－オキソブタン酸１３６ｍｇ（０．６４ｍｍｏｌ）及び１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン１４７ｍｇ（０．９７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温でさらに１２時間撹拌し、減圧下に濃縮した。残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせ、減圧下に溶媒留去して、４－メトキシ－３－｛［（２Ｒ）－３－メトキシ－３－オキソ－２－（｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）プロピル］スルファニル｝－４－オキソブタン酸１５１ｍｇ（理論値の５７％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．７４分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝４０８（Ｍ－Ｈ）－。
４－メトキシ－３－｛［（２Ｒ）－３－メトキシ－３－オキソ－２－（｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）プロピル］スルファニル｝－４－オキソブタン酸３．６６ｍｇ（８．９３μｍｏｌ）を、ＨＡＴＵ ３．６６ｍｇ（８．９３μｍｏｌ）及び４－メチルモルホリン１．６μＬ（１５μｍｏｌ）の存在下に、Ｓ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル）－Ｎ－［１５－（グリシルアミノ）－４，７，１０，１３－テトラオキサペンタデカン－１－オイル］－Ｌ－システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｃ８０）１３．０ｍｇ（７．４４μｍｏｌ）とカップリングさせて、ＨＰＬＣ精製後に、完全に保護された中間体Ｓ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル）－Ｎ－［１５－（｛Ｎ－［（８Ｒ，１１Ｒ）－８，１１－ビス（メトキシカルボニル）－２，２－ジメチル－６，１３－ジオキソ－５－オキサ－１０－チア－７－アザ－２－シラトリデカン－１３－イル］グリシル｝アミノ）－４，７，１０，１３－テトラオキサペンタデカン－１－オイル］－Ｌ－システイン３．９ｍｇ（理論値の３７％）を得た。
この中間体３．９０ｍｇ（２．７６μｍｏｌ）を、室温で２Ｍ水酸化リチウム溶液３５μＬ／ＴＨＦ／水３：１ １．０ｍＬとともに１５分間撹拌して、両方のメチルエステル基を開裂させた。ＨＰＬＣによる精製によって、ジカルボン酸誘導体３．６０ｍｇ（理論値の９４％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝４．８３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１３８５［Ｍ＋Ｈ］＋。
最後に、この中間体３．６ｍｇ（２．６μｍｏｌ）を、上記の方法に従って塩化亜鉛／トリフルオロエタノールで完全に脱保護した。残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮及びアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物１．９２ｍｇ（理論値の５５％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．７２分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝１０９４［Ｍ－Ｈ］－。
実施例Ｍ２１
（２Ｒ，２４Ｓ，２７Ｒ）－２７－アミノ－２－［（｛２－［（３－アミノプロピル）｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝アミノ］－２－オキソエチル｝スルファニル）メチル］－２４－（カルボキシメチル）－４，２０，２３－トリオキソ－７，１０，１３，１６－テトラオキサ－２５－チア－３，１９，２２－トリアザオクタコサン－１，２８－ジオン酸／トリフルオロ酢酸（１：２）
Figure 0007251981000485
市販の２－ブロモ－４－エトキシ－４－オキソブタン酸７４２．８ｍｇ（３．３ｍｍｏｌ）及びメチルＮ－｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝－Ｌ－システイネート８０２ｍｇ（２．８７ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ ３２ｍＬに溶かし、１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン６５５．４ｍｇ（４．３１ｍｍｏｌ）を加えた。室温で２０時間撹拌後、混合物を減圧下に濃縮し、残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせ、減圧下に溶媒留去して、４－エトキシ－２－｛［（２Ｒ）－３－メトキシ－３－オキソ－２－（｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）プロピル］スルファニル｝－４－オキソブタン酸５２１ｍｇ（理論値の４３％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝３．１３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４２４（Ｍ＋Ｈ）＋。
４－エトキシ－２－｛［（２Ｒ）－３－メトキシ－３－オキソ－２－（｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）プロピル］スルファニル｝－４－オキソブタン酸４．３６ｍｇ（１０．３μｍｏｌ）を、ＨＡＴＵ ３．９２ｍｇ（１０．３μｍｏｌ）及び４－メチルモルホリン１．９μＬ（１７μｍｏｌ）の存在下に、Ｓ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル）－Ｎ－［１５－（グリシルアミノ）－４，７，１０，１３－テトラオキサペンタデカン－１－オイル］－Ｌ－システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｃ８０）１５．０ｍｇ（８．５９μｍｏｌ）とカップリングさせて、ＨＰＬＣ精製後に、完全に保護された中間体Ｓ－（１１－｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－７，１１－ジアザ－２－シラトリデカン－１３－イル）－Ｎ－［１５－（｛Ｎ－［（８Ｒ，１１Ｓ）－１１－（２－エトキシ－２－オキソエチル）－８－（メトキシカルボニル）－２，２－ジメチル－６，１２－ジオキソ－５－オキサ－１０－チア－７－アザ－２－シラドデカン－１２－イル］グリシル｝アミノ）－４，７，１０，１３－テトラオキサペンタデカン－１－オイル］－Ｌ－システイン３．６ｍｇ（理論値の２６％）を得た。
この中間体６．２０ｍｇ（２．８２μｍｏｌ）を、室温で２Ｍ水酸化リチウム溶液３５μＬ／ＴＨＦ／水１：１ １．０ｍＬとともに１５分間撹拌して、両方のエステル基を開裂させた。酸性とし、ＨＰＬＣによって精製して、ジカルボン酸誘導体３．６０ｍｇ（理論値の９２％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝４．７１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１３８５［Ｍ＋Ｈ］＋。
最後に、この中間体３．６０ｍｇ（１．６９μｍｏｌ）を、上記の方法に従って塩化亜鉛／トリフルオロエタノールで完全に脱保護した。残留物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮及びアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物０．８８ｍｇ（理論値の３９％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．７２分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝１０９４［Ｍ－Ｈ］－。
実施例Ｍ２２
（２Ｒ，２７Ｒ）－２７－アミノ－２－［（｛２－［（３－アミノプロピル）｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝アミノ］－２－オキソエチル｝スルファニル）メチル］－２４－（カルボキシメチル）－４，２０，２３－トリオキソ－７，１０，１３，１６－テトラオキサ－２５－チア－３，１９，２２－トリアザオクタコサン－１，２８－ジオン酸／トリフルオロ酢酸（１：２）及び（１Ｒ，２７Ｒ，３３Ｒ）－１－アミノ－３２－（３－アミノプロピル）－３３－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－３４，３４－ジメチル－６，９，２５，３１－テトラオキソ－１３，１６，１９，２２－テトラオキサ－３，２９－ジチア－７，１０，２６，３２－テトラアザペンタトリアコンタン－１，４，２７－トリカルボン酸／トリフルオロ酢酸（１：２）
Figure 0007251981000486
Ｓ－｛２－［（３－アミノプロピル）｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝アミノ］－２－オキソエチル｝－Ｎ－［１－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２，１８－ジオキソ－６，９，１２，１５－テトラオキサ－３－アザオクタデカン－１８－イル］－Ｌ－システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）（中間体Ｆ２５７）１６．５ｍｇ（０．０１５ｍｍｏｌ）及びＮ－｛［２－（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝－Ｌ－システイン８．１８ｍｇ（０．０３１ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ ２ｍＬに溶かし、混合物を室温で１８時間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮した。残留物（２８．９ｍｇ）をＴＨＦ／水１：１ ３ｍＬに溶解させた。２Ｍ水酸化リチウム水溶液０．０４６ｍＬを加え、混合物を室温で３時間撹拌した。次に、酢酸５．２μＬ（０．０９２ｍｍｏｌ）を用い、反応混合物をｐＨ約７に調節した。反応混合物を、分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ １２５×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水；０．１％ＴＦＡ）によって直接精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これにより、位置異性体保護中間体１２．１ｍｇ（２段階で５８％）を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．８２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１２４０（Ｍ＋Ｈ）＋。
最後の段階で、この中間体１２．１ｍｇ（０．００９ｍｍｏｌ）を２，２，２－トリフルオロエタノール２ｍＬに溶かした。塩化亜鉛７．３ｍｇ（０．０５４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で２時間撹拌した。次に、エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－テトラ酢酸１５．７ｍｇ（０．０５４ｍｍｏｌ）を加え、生成物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画の濃縮及びアセトニトリル／水からの残留物の凍結乾燥によって、標題化合物６．４ｍｇ（５９％）を位置異性体混合物として得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０９６（Ｍ＋Ｈ）＋。
実施例Ｍ２３
Ｎ－｛（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝－β－アラニル－Ｌ－グルタミン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000487
最初に、ジ－ｔｅｒｔ－ブチルＬ－グルタメート塩酸塩（１：１）を、ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｃ６１とカップリングさせた。次に、保護された中間体をトリフルオロエタノールに取り、塩化亜鉛存在下に５０℃で終夜撹拌することで、脱保護を完了させた。ＥＤＴＡ添加後に、分取ＨＰＬＣによる精製によって後処理を行った。
ＬＣ－ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．４５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７１４［Ｍ＋Ｈ］＋。
実施例Ｍ２４
Ｎ－｛（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝－β－アラニル－Ｄ－グルタミン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000488
最初に、ジ－ｔｅｒｔ－ブチルＬ－グルタメート塩酸塩（１：１）を、ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｃ６１にカップリングさせた。次に、保護された中間体をトリフルオロエタノールに取り、塩化亜鉛存在下に５０℃で撹拌することで、脱保護を完了させた。ＥＤＴＡ添加後に、分取ＨＰＬＣによる精製によって、後処理を行った。
ＬＣ－ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．４１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７１４［Ｍ＋Ｈ］＋。
実施例Ｍ２５
Ｎ－｛（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝－Ｌ－グルタミン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000489
最初に、ジ－ｔｅｒｔ－ブチルＬ－グルタメート塩酸塩（１：１）を、ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｃ６１とカップリングさせた。次の段階で、水素標準圧下に４５分間にわたり、室温でメタノール中にて１０％パラジウム／活性炭で水素化することで、Ｚ保護基を除去した。次に、部分保護された中間体をトリフルオロエタノールに取り、塩化亜鉛の存在下に５０℃で７時間撹拌することで、脱保護を完了させた。ＥＤＴＡ添加後に、分取ＨＰＬＣによる精製によって、後処理を行った。
ＬＣ－ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．４４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６４３［Ｍ＋Ｈ］＋．
実施例Ｍ２６
４－［（２－｛［２－（｛（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］アミノ｝－２－オキソエチル）アミノ］－２－｛［（２Ｒ）－２－アミノ－２－カルボキシエチル］スルファニル｝－４－オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
位置異性体１、エピマー混合物
Figure 0007251981000490
本実施例は、実施例１３及び実施例１４からの化合物のエピマー混合物について説明するものである。その合成は、実施例１３と同様に行い、超臨界流体クロマトグラフィーによる二つのエピマーの分離は行わず、標題化合物をエピマー混合物として製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．４３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３２［Ｍ＋Ｈ］＋．
実施例Ｍ２７
４－［（２－｛［２－（｛（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］アミノ｝－２－オキソエチル）アミノ］－３－｛［（２Ｒ）－２－アミノ－２－カルボキシエチル］スルファニル｝－４－オキソブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
位置異性体２、エピマー混合物
Figure 0007251981000491
本実施例は、実施例１５及び実施例１６の化合物からのエピマー混合物について説明するものである。その合成は、実施例１５と同様に行い、超臨界流体クロマトグラフィーによる二つのエピマーの分離は行わず、標題化合物をエピマー混合物として製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２．４５分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８３２［Ｍ＋Ｈ］＋。
実施例Ｍ２８
Ｎ６－｛（３Ｒ，７Ｓ）－７－アミノ－３－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－４－グリコロイル－２，２－ジメチル－８，１３，１６，２０－テトラオキソ－４，９，１２，１５－テトラアザエイコサン－２０－イル｝－Ｌ－リジン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000492
中間体Ｃ６６から、ペプチド化学の従来法により、最初にＤＭＦ中Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に１，１′－［（１，５－ジオキソペンタン－１，５－ジイル）ビス（オキシ）］－ジピロリジン－２，５－ジオンにカップリングさせることで２－（トリメチルシリル）エチル［（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－（｛２－［（Ｎ－｛５－［（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ］－５－オキソペンタノイル｝グリシル）アミノ］エチル｝アミノ）－１－オキソブタン－２－イル］カーバメートを得ることで、標題化合物を製造した。次の段階で、同様に、ＤＭＦ中にてＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、ｔｅｒｔ－ブチルＮ２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｌ－リジネート塩酸塩（１：１）へのカップリングを行ってから、最終段階で、トリフルオロエタノール中の６当量の塩化亜鉛によって、５０℃で３時間攪拌することで全ての保護基を除去した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８５５［Ｍ＋Ｈ］＋。
実施例Ｍ２９
Ｎ６－（５－｛［２－（｛（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］アミノ｝－５－オキソペンタノイル）－Ｌ－リジン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 0007251981000493
最初に、ＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－２－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ］ブタン酸をベンジル（２－アミノエチル）カーバメート塩酸塩（１：１）にカップリングさせた。次に、メタノール中にて室温で水素標準圧下に４５分間にわたり１０％パラジウム／活性炭での水素化を行うことで、Ｚ保護基を除去した。次に、実施例Ｍ２８と同様にして、１，１′－［（１，５－ジオキソペンタン－１，５－ジイル）ビス（オキシ）］ジピロリジン－２，５－ジオンへのカップリングを行った。次の段階で、その中間体を、ＤＭＦ中にてＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下にｔｅｒｔ－ブチルＮ２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｌ－リジネート塩酸塩（１：１）にカップリングさせてから、最終段階で、トリフルオロエタノール中の８当量の塩化亜鉛によって、５０℃で５．５時間攪拌することで全ての保護基を除去した。分取ＨＰＬＣによる精製によって、標題化合物を得た。
ＬＣ－ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．２８分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝７９６［Ｍ－Ｈ］＋。
ＡＰＤＣ類及びＡＤＣ類の作業例
マレイミド基を介して抗体のシステイン側鎖にカップリングさせた作業例の構造式に示したＡＰＤＣ及びＡＤＣは、リンカー及びカップリング手順に応じて、主として各場合で示した開環型又は閉環型で存在する。しかしながら、その製造物は、小さい割合で個々の他の形態を含むことができる。カップリング反応はアルゴン下で行った。
実施例１ａ
Figure 0007251981000494
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２８ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間撹拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｒ１ ０．２５ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間撹拌後、混合物を予めｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液で体積２．５ｍＬに希釈し、次に、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。次に、溶出液を室温でアルゴン下に終夜撹拌した。
次に、超遠心による濃縮及びＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）での再希釈を行った。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．８５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．６。
実施例１ｅ
同様にして、中間体Ｒ１を抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．８５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．４
実施例１ｋ
同様にして、中間体Ｒ１を抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－２６５８ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．４２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．９。
実施例２ａ
Figure 0007251981000495
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．４５８ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０．９２ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間攪拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｒ２ ０．２７ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間攪拌後、反応混合物を事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１．９４２ｍＬで希釈した。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に投入し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を室温でアルゴン下に終夜攪拌した。次に、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．９９ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．６。
実施例２ｅ
同様にして、中間体Ｒ２を抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．５。
実施例２ｋ
同様にして、中間体Ｒ２を抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－２６５８ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：２．０５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．４。
実施例３ａ
Figure 0007251981000496
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間攪拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｒ３ ０．２８ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間攪拌後、反応液を事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１．９４２ｍＬで希釈した。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に投入し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を室温でアルゴン下に終夜攪拌した。
この溶液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：２．０７ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．２。
実施例３ｅ
同様にして、中間体Ｒ３を抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．８５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．６。
実施例３ｈ１
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．４６ｍｇのＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）（０．７５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ５．１ｍＬ中の抗Ｂ７Ｈ３抗体ＴＰＰ－８３８２ ８０ｍｇ（ｃ＝１５．７ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間攪拌し、ＤＭＳＯ ５８５μＬに溶かした中間体Ｒ３ ４．４１ｍｇ（０．００３７ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間攪拌後、混合物を事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液で希釈して７．５ｍＬとし、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に少量ずつ通し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を合わせ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で希釈して１２．５ｍＬとし、アルゴン下に室温で終夜攪拌した。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ７．２で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に投入し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ７．２で溶離した。次に、交差流濃縮を行った。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１３．８６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．８。
実施例３ｈ２
同様にして、中間体Ｒ３を抗Ｂ７Ｈ３抗体ＴＰＰ－８５６７ ５０ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：９．６４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．３。
実施例３ｋ
同様にして、中間体Ｒ３を抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－２６５８ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．４７ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．４。
実施例３ｌ１
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．１７２ｍｇのＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）（０．３ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ３．４ｍＬ中の抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－７００７ ３０ｍｇ（ｃ＝８．８ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間攪拌し、次にＤＭＳＯ ３００μＬに溶かした中間体Ｒ３ １．６６ｍｇ（０．００１４ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間攪拌後、混合物を、事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液で希釈して５ｍＬとし、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に少量ずつ通し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を合わせ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で希釈して７．５ｍＬとし、アルゴン下に室温で終夜攪拌した。この溶液をＰＢＳ緩衝液ｐＨ７．２で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に投入し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ７．２で溶離した。次に、溶出液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈し、再濃縮し、再度無菌濾過した。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：８．８６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．４。
実施例３ｌ２
同様にして、中間体Ｒ３を、ＰＢＳ ４．１６ｍＬ中の抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－７００６ ４８．５ｍｇ（ｃ＝１１．６ｍｇ／ｍＬ）にカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１１．４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．５。
実施例３ｌ３
同様にして、中間体Ｒ３を、ＰＢＳ ２．６１ｍＬ中の抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－１０３３６ ３０ｍｇ（ｃ＝１１．５ｍｇ／ｍＬ）にカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：７．７２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．５。
実施例３ｌ４
同様にして、中間体Ｒ３を、ＰＢＳ ２．７８ｍＬ中の抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－１０３３７ ３０ｍｇ（ｃ＝１０．８ｍｇ／ｍＬ）にカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：９．３３ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．７。
実施例４ａ
Figure 0007251981000497
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間攪拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｒ４ ０．２３ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間攪拌後、混合物を、事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１．９ｍＬで希釈して体積２．５ｍＬとし、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を室温でアルゴン下に終夜攪拌した。次に、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：２．２９ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．５。
実施例４ｅ
同様にして、中間体Ｒ４を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．７５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．２。
実施例４ｋ
同様にして、中間体Ｒ４を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－２６５８ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．７３ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．３。
実施例５ａ
Figure 0007251981000498
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．４５８ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０．９２ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間攪拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｒ５ ０．２６ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間攪拌後、反応混合物を事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１．９４２ｍＬで希釈した。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に投入し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜攪拌した。次に、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．９１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．７。
実施例５ｅ
同様にして、中間体Ｒ５を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．４０ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．６。
実施例５ｋ
同様にして、中間体Ｒ５を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－２６５８ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．８５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．０。
実施例６ａ
Figure 0007251981000499
ここでは、ＰＢＳ ４５９μＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０．９２ｍｇ／ｍＬ）を、中間体Ｒ６へのカップリングに用いた。最初に、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした５当量（０．２ｍｇ）の中間体Ｒ６ を加え、室温で１時間攪拌後、同量を再度加え、混合物を室温でさらに１時間攪拌した。次に、反応混合物をＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で希釈して２．５ｍＬとし、Ｓｅｐｈａｄｅｘカラムで精製し、次に超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）で再希釈した。
タンパク質濃度：２．０４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．１。
実施例６ｅ
同様にして、中間体Ｒ６を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．７４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．０。
実施例６ｋ
同様にして、中間体Ｒ６を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－２６５８ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：２．０ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．４。
実施例７ａ
Figure 0007251981000500
ＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）にアルゴン下で、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした５当量（０．１９ｍｇ）の中間体Ｒ７の溶液を加え、室温で１時間攪拌後、同量を再度加え、混合物を室温でさらに１時間攪拌した。次に、反応混合物を、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で希釈して２．５ｍＬとし、Ｓｅｐｈａｄｅｘカラムで精製し、次に超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）で再希釈した。
タンパク質濃度：２．２９ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．９。
実施例７ｅ
同様にして、中間体Ｒ７を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．９５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．５。
実施例７ｋ
同様にして、中間体Ｒ７を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－２６５８ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．６０ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：５．３。
実施例８ａ
Figure 0007251981000501
ＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）にアルゴン下で、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした５当量（０．２ｍｇ）の中間体Ｒ８の溶液を加え、室温で１時間攪拌後、同量を再度加え、混合物を室温でさらに１時間攪拌した。次に、反応液をＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で希釈して２．５ｍＬとし、Ｓｅｐｈａｄｅｘカラムで精製し、次に超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）で再希釈した。
タンパク質濃度：１．５７ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．６。
実施例８ｅ
同様にして、中間体Ｒ８を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．２５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．８。
実施例８ｋ
同様にして、中間体Ｒ８を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－２６５８ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．１５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：７．０。
実施例９ａ
Figure 0007251981000502
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．４５８ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０．９２ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間攪拌し、次にＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｒ９ ０．２６ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間攪拌後、反応混合物を事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１．９ｍＬで希釈した。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に投入し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をアルゴン下に室温で終夜攪拌した。次に、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．９５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．７。
実施例９ｅ
同様にして、中間体Ｒ９を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．８８ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．２。
実施例９ｈ１
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．２３ｍｇのＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）（０．５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ２．５５ｍＬ中の抗Ｂ７Ｈ３抗体ＴＰＰ－８３８２ ３０ｍｇ（ｃ＝１５．６９ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間攪拌し、ＤＭＳＯ ２５０μＬに溶かした中間体Ｒ９ ２．０７ｍｇ（０．００１８７ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間攪拌後、混合物を事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液で希釈して５ｍＬとし、分割し、各部分をＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を合わせ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で希釈して７．５ｍＬとし、アルゴン下に室温で終夜攪拌した。この溶液をＰＢＳ緩衝液ｐＨ７．２で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に投入し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ７．２で溶離した。溶出液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈し、再濃縮し、再度無菌濾過した。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：８．４６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．８。
実施例９ｈ２
同様にして、中間体Ｒ９を、ＰＢＳ ３ｍＬ中の抗Ｂ７Ｈ３抗体ＴＰＰ－８５６７ ３０ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）にカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：８．０８ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．９。
実施例９ｋ
同様にして、中間体Ｒ９を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－２６５８ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．８１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．２。
実施例１０ｋ
Figure 0007251981000503
アルゴン下にＴＣＥＰ ０．０２８ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）、中溶液を、ＰＢＳ ０．２４ｍＬ中の抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－２６５８ ５ｍｇ（ｃ＝２０．９ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物をＰＢＳ緩衝液２．１１ｍＬで希釈し、室温で３０分間攪拌した。次に、ＤＭＳＯ １００μＬに溶かした中間体Ｒ１０ ０．２５ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間攪拌後、混合物をＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に投入し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を室温でアルゴン下に終夜攪拌した。次に、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．０
薬物／ｍＡｂ比：０。
実施例１０ｈ１
実施例９ｈ１と同様にして、中間体Ｒ１０を抗Ｂ７Ｈ３抗体ＴＰＰ－８３８２ ３０ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１０．９５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．４。
実施例１１ａ
Figure 0007251981000504
ＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）にアルゴン下で、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした５当量（０．２ｍｇ）の中間体Ｒ１１の溶液を加え、室温で１時間攪拌後、同量を再度加え、混合物を室温でさらに１時間攪拌した。次に、反応混合物を、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で希釈して２．５ｍＬとし、Ｓｅｐｈａｄｅｘカラムで精製し、次に超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）で再希釈した。
タンパク質濃度：２．２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．０。
実施例１１ｅ
同様にして、中間体Ｒ１１を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．１３ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．４。
実施例１１ｋ
同様にして、中間体Ｒ１１を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－２６５８ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：０．９８ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：６．０。
実施例１２ａ
Figure 0007251981000505
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．４５８ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０．９２ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間攪拌し、次にＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｒ１２ ０．２５ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間攪拌後、反応駅を事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１．９ｍＬで希釈した。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に投入し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を室温でアルゴン下に終夜攪拌した。次に、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：２．０ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．３。
実施例１２ｅ
同様にして、中間体Ｒ１２を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．８８ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．２。
実施例１２ｋ
同様にして、中間体Ｒ１２を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－２６５８ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．９８ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．２。
実施例１３ａ
Figure 0007251981000506
ＰＢＳ ０．５５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝９ｍｇ／ｍＬ）に、アルゴン下で、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした５当量（０．２１ｍｇ）の中間体Ｒ１３の溶液を加え、室温で１時間攪拌後、同量を再度加え、混合物を室温でさらに１時間攪拌した。次に、反応混合物を、希釈してＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で２．５ｍＬとし、Ｓｅｐｈａｄｅｘカラムで精製し、次に超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）で再希釈した。
タンパク質濃度：２．１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．５。
実施例１３ｅ
同様にして、中間体Ｒ１３を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：２．０１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．１。
実施例１３ｋ
同様にして、中間体Ｒ１３を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－２６５８ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：２．０７ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．５。
実施例１４ａ
Figure 0007251981000507
ＰＢＳ ０．５ｍＬ中セツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）にアルゴン下で、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした５当量（０．１９ｍｇ）の中間体Ｒ１４の溶液を加え、室温で１時間攪拌後、同量を再度加え、混合物を室温でさらに１時間攪拌した。次に、反応混合物を、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で希釈して２．５ｍＬとし、Ｓｅｐｈａｄｅｘカラムで精製し、次に超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）で再希釈した。
タンパク質濃度：２．０４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．９。
実施例１４ｅ
同様にして、中間体Ｒ１４を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．７９ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：５．９。
実施例１４ｋ
同様にして、中間体Ｒ１４を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－２６５８ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：２．０７ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：５．４。
実施例１５ａ
Figure 0007251981000508
ＰＢＳ ０．４５８ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０．９ｍｇ／ｍＬ）を、アルゴン下に、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした５当量（０．２ｍｇ）の中間体Ｒ１５の溶液と混合し、室温で１時間攪拌後、同量を再度加え、混合物を室温でさらに１時間攪拌した。次に、反応混合物を、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で希釈して２．５ｍＬとし、Ｓｅｐｈａｄｅｘカラムで精製し、次に超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）で再希釈した。
タンパク質濃度：２．３１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：５．５。
実施例１５ｅ
同様にして、中間体Ｒ１５を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．８９ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：６．８。
実施例１５ｈ１
ＰＢＳ １．９１ｍＬ中のＢ７Ｈ３抗体ＴＰＰ－８３８２ ３０ｍｇ（ｃ＝１５．７ｍｇ／ｍＬ）を、アルゴン下に、ＤＭＳＯ ２００μＬに溶かした５当量（１．２ｍｇ）の中間体Ｒ１５の溶液と混合し、室温で１時間攪拌後、同量を再度加え、混合物を室温でさらに１時間攪拌した。次に、混合物を、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で希釈して２．５ｍＬとし、Ｓｅｐｈａｄｅｘカラムを用いて精製した。溶出液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）で再希釈し、再濃縮し、再度無菌濾過した。
タンパク質濃度：１０．３９ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：５．６。
実施例１５ｋ
同様にして、中間体Ｒ１５を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－２６５８ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．９２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：８．１。
実施例１５ｌ１
同様にして、中間体Ｒ１５を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－７００７ ５ｍｇにカップリングさせた。この場合、Ｒ１５の過剰量を１０当量から５当量に減らした。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．６４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．２。
実施例１６ａ
Figure 0007251981000509
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０７６ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．４５８ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０．９２ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で１５０分間攪拌し、次にＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｒ１６ ０．８１１ｍｇ（０．０００５３３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに１２０分間攪拌後、反応混合物を、事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１．９５ｍＬで希釈した。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に投入し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を室温でアルゴン下に終夜攪拌した。次に、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：２．２０ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：７．３。
実施例１６ｅ
同様にして、中間体Ｒ１６を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：２．２５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：７．３。
実施例１６ｈ１
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．７７ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．４ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ３．１９ｍＬ中のＢ７Ｈ３抗体ＴＰＰ－８３８２ ５０ｍｇ（ｃ＝１５．７ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で１５０分間攪拌した。次に、ＤＭＳＯ ４００μＬに溶かした中間体Ｒ１６ １６当量（８．１ｍｇ）を加え、混合物を室温で２時間攪拌した。次に、混合物をＰＢＳ緩衝液（ｐＨ８）で希釈して５ｍＬとした。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に投入し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をＰＢＳ緩衝液ｐＨ８ ０．５ｍＬで希釈し、アルゴン下に室温で終夜攪拌した。次に、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：９．５６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：７．２。
実施例１６ｈ２
ＰＢＳ ２．７９ｍＬ中のＢ７Ｈ３抗体ＴＰＰ－８５６７ ４０ｍｇ（ｃ＝１４．４ｍｇ／ｍＬ）を、中間体Ｒ１６と同様にしてカップリングさせた。
タンパク質濃度：９．９３ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：７．９。
実施例１６ｋ
同様にして、中間体Ｒ１６を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－２６５８ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：２．３６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：７．４。
実施例１６ｌ２
ＰＢＳ １．５１４ｍＬ中の抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－７００６ ２５ｍｇ（ｃ＝１６．５ｍｇ／ｍＬ）を、１６ｈ１下に記載の方法に従って、中間体Ｒ１６にカップリングさせた。
タンパク質濃度：１１．５４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：８．０。
実施例１７ａ
Figure 0007251981000510
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０８６ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．４５８ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０．９２ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で１５０分間攪拌し、次にＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｒ１７ １．０７ｍｇ（０．０００６０ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに１２０分間攪拌後、反応混合物を、事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１．９５ｍＬで希釈した。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に投入し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を室温でアルゴン下に終夜攪拌した。次に、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：２．２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：５．５。
実施例１７ｅ
同様にして、中間体Ｒ１７を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．７１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．３。
実施例１７ｈ１
同様にして、中間体Ｒ１７を、抗Ｂ７Ｈ３抗体ＴＰＰ－８３８２ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．５２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：５．１。
実施例１７ｋ
同様にして、中間体Ｒ１７を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－２６５８ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．６５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：５．４。
実施例１８ａ
Figure 0007251981000511
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間攪拌し、次にＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｒ１８ ０．２６ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間攪拌後、反応混合物を、事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液で希釈して２．５ｍＬとした。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に投入し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を室温でアルゴン下に終夜攪拌した。
この溶液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．８２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．０。
実施例１８ｅ
同様にして、中間体Ｒ１８を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．７ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．１。
実施例１８ｈ１
同様にして、中間体Ｒ１８を、抗Ｂ７Ｈ３ＴＰＰ－８３８２ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．７１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．５。
実施例１８ｋ
同様にして、中間体Ｒ１８を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－２６５８ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．６９ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．６。
実施例１９ａ
Figure 0007251981000512
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間攪拌し、次にＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｒ１９ ０．２５ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０間攪拌後、反応混合物を事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液で希釈して２．５ｍＬとした。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に投入し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を室温でアルゴン下に終夜攪拌した。
この溶液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．８８ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．８。
実施例１９ｅ
同様にして、中間体Ｒ１９を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．７ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．３。
実施例１９ｋ
同様にして、中間体Ｒ１９を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－２６５８ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：２．３５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．２。
実施例２０ａ
Figure 0007251981000513
ＰＢＳ ０．３ｍＬ中のセツキシマブ３ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）を、アルゴン下に、ＤＭＳＯ ３０μＬに溶かした５当量（０．２６８ｍｇ）の中間体Ｒ２０の溶液と混合し、室温で１時間攪拌後、同量を再度加え、混合物を室温でさらに１時間攪拌した。次に、混合物をＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で希釈して２．５ｍＬとし、Ｓｅｐｈａｄｅｘカラムで精製し、次に超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）で再希釈した。
タンパク質濃度：２．３５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：５．３。
実施例２０ｅ
同様にして、中間体Ｒ２０を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ３ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．９４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：７．１。
実施例２０ｈ１
同様にして、中間体Ｒ２０を、抗Ｂ７Ｈ３抗体ＴＰＰ－８３８２ ３ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：２．１２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：５．９。
実施例２０ｋ
同様にして、中間体Ｒ２０を、抗Ｂ７Ｈ３ＴＰＰ－８３８２ ３ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：２．２１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：６．８。
実施例２１ａ
Figure 0007251981000514
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間攪拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｒ２１ ０．３１ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間攪拌後、混合物をＰＢＳ緩衝液で希釈して体積２．５ｍＬとし、Ｓｅｐｈａｄｅｘカラムで精製し、超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：２．１７ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：５．６。
実施例２１ｅ
同様にして、中間体Ｒ２１を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．９９ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．８。
実施例２１ｈ１
同様にして、中間体Ｒ２１を、抗Ｂ７Ｈ３ＴＰＰ－８３８２ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：２．０８ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．６。
実施例２１ｋ
同様にして、中間体Ｒ２１を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－２６５８ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：２．１３ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．４。
実施例２２ａ
Figure 0007251981000515
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間攪拌し、次にＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｒ２２ ０．２６ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間攪拌後、反応混合物を、事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液で希釈して体積２．５ｍＬとした。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に投入し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を室温でアルゴン下に終夜攪拌した。
この溶液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．９９ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．８。
実施例２２ｅ
同様にして、中間体Ｒ２２を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．９ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．３。
実施例２２ｈ１
実施例９ｈ１と同様にして、中間体Ｒ２２を、ＰＢＳ ３ｍＬ中の抗Ｂ７Ｈ３抗体ＴＰＰ－８３８２ ３０ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：８．７４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．９。
実施例２２ｈ２
同様にして、中間体Ｒ２２を、抗Ｂ７Ｈ３抗体ＴＰＰ－８５６７ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：２．１１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．７。
実施例２２ｋ
同様にして、中間体Ｒ２２を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－２６５８ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．７９ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．３。
実施例２３ａ
Figure 0007251981000516
ＰＢＳ ０．５５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝９．１ｍｇ／ｍＬ）を、アルゴン下に、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした５当量（０．２４ｍｇ）の中間体Ｒ２３の溶液と混合した。室温で１時間攪拌後、同量を再度加え、混合物を室温でさらに１時間攪拌した。次に、反応混合物を、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で希釈して２．５ｍＬとし、Ｓｅｐｈａｄｅｘカラムで精製し、次に超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）で再希釈した。
タンパク質濃度：２．１３ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：６．１。
実施例２３ｅ
同様にして、中間体Ｒ２３を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：２．０２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：７．６。
実施例２３ｈ１
実施例１５ｈ１と同様にして、中間体Ｒ２３を、抗Ｂ７Ｈ３抗体ＴＰＰ－８３８２ ３０ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：９．９７ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：６．４。
実施例２３ｋ
同様にして、中間体Ｒ２３を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－２６５８ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：２．２４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：７．３。
実施例２４ａ
Figure 0007251981000517
ＰＢＳ ０．４５８ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０．９ｍｇ／ｍＬ）を、アルゴン下に、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした５当量（０．２４ｍｇ）の中間体Ｒ２４の溶液と混合した。室温で１時間攪拌後、同量を再度加え、混合物を室温でさらに１時間攪拌した。次に、反応混合物を、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で希釈して２．５ｍＬとし、Ｓｅｐｈａｄｅｘカラムで精製し、次に超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）で再希釈した。
タンパク質濃度：２．２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．７。
実施例２４ｅ
同様にして、中間体Ｒ２４を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．８９ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：５．８。
実施例２４ｋ
同様にして、中間体Ｒ２４を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－２６５８ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：２．２１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：５．７。
実施例２４ｌ１
抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－７００７ ３０ｍｇのＰＢＳ（２．５２ｍＬ）中溶液（ｃ＝１１．９ｍｇ／ｍＬ）に、アルゴン下に、ＤＭＳＯ １００μＬに溶かした中間体Ｒ２４ １．２ｍｇ（０．００１ｍｍｏｌ）を加えた。室温で６０分間攪拌後、同量を再度加え、混合物を室温でさらに１時間攪拌した。次に、混合物をＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で希釈して５ｍＬとし、Ｓｅｐｈａｄｅｘカラムで精製し、次に超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）で再希釈し、再濃縮し、再度無菌濾過した。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１０．５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．３。
実施例２４ｌ３
同様にして、中間体Ｒ２４を、ＰＢＳ ２．６１ｍＬ中の抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－１０３３６ ３０ｍｇ（ｃ＝１１．５ｍｇ／ｍＬ）にカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１０．４６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：５．０。
実施例２４ｌ４
同様にして、中間体Ｒ２４を、ＰＢＳ ２．７８ｍＬ中の抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－１０３３７ ３０ｍｇ（ｃ＝１０．８ｍｇ／ｍＬ）にカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：７．８５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．７。
実施例２５ａ
Figure 0007251981000518
ＰＢＳ ０．５５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝９．１ｍｇ／ｍＬ）を、アルゴン下に、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした５当量（０．２３ｍｇ）の中間体Ｒ２５の溶液と混合し、室温で１時間攪拌後、同量を再度加え、混合物を室温でさらに１時間攪拌した。次に、反応混合物を、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で希釈して２．５ｍＬとし、Ｓｅｐｈａｄｅｘカラムで精製し、次に超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）で再希釈した。
タンパク質濃度：２．０７ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．５。
実施例２５ｅ
同様にして、中間体Ｒ２５を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．４２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：５．５。
実施例２５ｈ１
同様にして、中間体Ｒ２５を、抗Ｂ７Ｈ３抗体ＴＰＰ－８３８２ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．８２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：５．７。
実施例２５ｋ
同様にして、中間体Ｒ２５を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－２６５８ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：２．１６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：５．６。
実施例２６ａ
Figure 0007251981000519
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間攪拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｒ２６ ０．２６ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間攪拌後、反応混合物を事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液で希釈して２．５ｍＬとした。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に投入し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を室温でアルゴン下に終夜攪拌した。
この溶液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．９４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．８。
実施例２６ｅ
同様にして、中間体Ｒ２６を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．８６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．５。
実施例２６ｈ１
同様にして、中間体Ｒ２６を、抗Ｂ７Ｈ３抗体ＴＰＰ－８３８２ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：２．０ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．０。
実施例２６ｋ
同様にして、中間体Ｒ２６を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－２６５８ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．７５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．７。
実施例２７ａ
Figure 0007251981000520
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間攪拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｒ２７ ０．２３ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間攪拌後、反応混合物を、事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液で希釈して体積２．５ｍＬとした。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に投入し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を室温でアルゴン下に終夜攪拌した。
この溶液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．６５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．１。
実施例２７ｅ
同様にして、中間体Ｒ２７を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．６７ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．０。
実施例２７ｈ１
同様にして、中間体Ｒ２７を、抗Ｂ７Ｈ３抗体ＴＰＰ－８３８２ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．８６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．９。
実施例２７ｋ
同様にして、中間体Ｒ２７を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－２６５８ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．８ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．４。
実施例２８ａ
Figure 0007251981000521
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間攪拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｒ２８ ０．２６ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間攪拌後、反応混合物を、事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液で希釈して体積２．５ｍＬとした。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に投入し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を室温でアルゴン下に終夜攪拌した。
この溶液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．６８ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．０。
実施例２８ｅ
同様にして、中間体Ｒ２８を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．５５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．６。
実施例２８ｈ１
同様にして、中間体Ｒ２８を、抗Ｂ７Ｈ３抗体ＴＰＰ－８３８２ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．９５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．４。
実施例２８ｌ１
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．１７ｍｇのＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）（０．２５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ２．５ｍＬ中の抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－７００７ ３０ｍｇ（ｃ＝１２ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間攪拌し、ＤＭＳＯ ２５０μＬに溶かした中間体Ｒ２８ １．５７ｍｇ（０．００１４ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間攪拌後、混合物を事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液で希釈して５ｍＬとし、分割し、各部分をＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を合わせ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で希釈して７．５ｍＬとし、アルゴン下に室温で終夜攪拌した。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ７．２で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に投入し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ７．２で溶離した。溶出液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈し、再濃縮し、再度無菌濾過した。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：８．２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．１。
実施例２９ａ
Figure 0007251981000522
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ（０．０５ｍＬ）中溶液緩衝液を、ＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間攪拌し、次にＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｒ２９ ０．３４ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間攪拌後、反応を、事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液で希釈して２．５ｍＬとした。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に投入し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を室温でアルゴン下に終夜攪拌した。
この溶液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．６６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．６。
実施例２９ｅ
同様にして、中間体Ｒ２９を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．２４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．８。
実施例２９ｈ１
同様にして、中間体Ｒ２９を、抗Ｂ７Ｈ３抗体ＴＰＰ－８３８２ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．５４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．６。
実施例２９ｋ
同様にして、中間体Ｒ２９を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－２６５８ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．６３ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．８。
実施例３０ａ
Figure 0007251981000523
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間攪拌し、次にＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｒ３０ ０．２６ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間攪拌後、反応液を、事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液で希釈して２．５ｍＬとした。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に投入し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を室温でアルゴン下に終夜攪拌した。
この溶液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．７４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．０。
実施例３０ｅ
同様にして、中間体Ｒ３０を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．８２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．３。
実施例３０ｋ
同様にして、中間体Ｒ３０を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－２６５８ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．７ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．０。
実施例３１ａ
Figure 0007251981000524
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間攪拌し、次にＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｒ３１ ０．２６ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間攪拌後、反応混合物を、事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液で希釈して２．５ｍＬとした。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に投入し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を室温でアルゴン下に終夜攪拌した。
この溶液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：２．４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．８。
実施例３１ｅ
同様にして、中間体Ｒ３１を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．７６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．１。
実施例３１ｈ１
実施例９ｈ１と同様にして、中間体Ｒ３１を、ＰＢＳ ２ｍＬ中の抗Ｂ７Ｈ３抗体ＴＰＰ－８３８２ ２０ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：９．４５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．３。
実施例３１ｌ１
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．１７ｍｇのＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）（０．３ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ３．４ｍＬ中の抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－７００７ ３０ｍｇ（ｃ＝８．８ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間攪拌し、次にＤＭＳＯ ２５０μＬに溶かした中間体Ｒ３１ １．６８ｍｇ（０．００１４ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間攪拌後、混合物を事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液で希釈して５ｍＬとし、分割し、各部分を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を再度合わせ、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で希釈して７．５ｍＬとし、アルゴン下に室温で終夜攪拌した。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ７．２で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に投入し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ７．２で溶離した。溶出液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈し、再濃縮し、再度無菌濾過した。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：８．０６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．１。
実施例３２ａ
Figure 0007251981000525
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間攪拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｒ３２ ０．２９ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間攪拌後、反応混合物を、事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液で希釈して体積２．５ｍＬとした。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に投入し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を室温でアルゴン下に終夜攪拌した。
この溶液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．８４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．５。
実施例３２ｅ
同様にして、中間体Ｒ３２を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．８２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．９。
実施例３２ｋ
同様にして、中間体Ｒ３２を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－２６５８ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．８８ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．７。
実施例３３ａ
Figure 0007251981000526
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．５ｍＬのセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間攪拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｒ３３ ０．２７ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間攪拌後、反応混合物を、事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液で希釈して体積２．５ｍＬとした。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に投入し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を室温でアルゴン下に終夜攪拌した。
この溶液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：２．１３ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．６。
実施例３３ｅ
同様にして、中間体Ｒ３３を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．９３ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．５。
実施例３３ｈ１
同様にして、中間体Ｒ３３を、抗Ｂ７Ｈ３抗体ＴＰＰ－８３８２ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．８１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．５。
実施例３３ｌ１
同様にして、中間体Ｒ３３を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－７００７ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．８６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．８。
実施例３４ａ
Figure 0007251981000527
ＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）を、アルゴン下に、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした５当量（０．１５ｍｇ）の中間体Ｒ３４の溶液と混合し、室温で１時間攪拌後、同量を再度加え、混合物を室温でさらに１時間攪拌した。次に、混合物をＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で希釈して２．５ｍＬとし、Ｓｅｐｈａｄｅｘカラムで精製し、次に超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）で再希釈した。
タンパク質濃度：１．８４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．４。
実施例３４ｅ
同様にして、中間体Ｒ３４を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．７５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．３。
実施例３４ｌ１
同様にして、中間体Ｒ３４を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－７００７ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．７６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．３。
実施例３５ａ
Figure 0007251981000528
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間攪拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｒ３５ ０．３２ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間攪拌後、反応混合物を、事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液で希釈して体積２．５ｍＬとした。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に投入し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を室温でアルゴン下に終夜攪拌した。
この溶液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．７２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．３。
実施例３５ｅ
同様にして、中間体Ｒ３５を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．５７ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．４。
実施例３５ｋ
同様にして、中間体Ｒ３５を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－２６５８ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．７３ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．３。
実施例３５ｌ１
実施例３１ｌ１と同様にして、中間体Ｒ３５を、ＰＢＳ ２．５ｍＬ中の抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－７００７ ２５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１１．５５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．５。
実施例３６ａ
Figure 0007251981000529
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間攪拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｒ３６ ０．３ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間攪拌後、反応混合物を、事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液で希釈して体積２．５ｍＬとした。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に投入し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を室温でアルゴン下に終夜攪拌した。
この溶液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．９５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．８。
実施例３６ｅ
同様にして、中間体Ｒ３６を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．４２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．２。
実施例３６ｌ１
同様にして、中間体Ｒ３６を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－７００７ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．９４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．７。
実施例３７ａ
Figure 0007251981000530
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間攪拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｒ３７ ０．３２ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間攪拌後、反応混合物を、事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液で希釈して体積２．５ｍＬとした。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に投入し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を室温でアルゴン下に終夜攪拌した。
この溶液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．７７ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．２。
実施例３７ｅ
同様にして、中間体Ｒ３７を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．４４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．６。
実施例３７ｋ
同様にして、中間体Ｒ３７を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－２６５８ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．５３ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．０。
実施例３７ｌ１
実施例３１ｌ１と同様にして、中間体Ｒ３７を、ＰＢＳ ２．５ｍＬ中の抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－７００７ ２５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１１．４６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．３。
実施例３８ａ
Figure 0007251981000531
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．４ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１２．５ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間攪拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｒ３８ ０．２３ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間攪拌後、反応混合物を、事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液で希釈して体積２．５ｍＬとした。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に投入し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を室温でアルゴン下に終夜攪拌した。
この溶液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：２．０２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．０。
実施例３８ｅ
同様にして、中間体Ｒ３８を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．７７ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．３。
実施例３８ｌ１
同様にして、中間体Ｒ３８を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－７００７ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．０６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．０。
実施例３９ａ
Figure 0007251981000532
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間攪拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｒ３９ ０．３ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間攪拌後、反応混合物を、事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液で希釈して体積２．５ｍＬとした。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に投入し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を室温でアルゴン下に終夜攪拌した。
この溶液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：２．０１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．６。
実施例３９ｅ
同様にして、中間体Ｒ３９を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．８５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．５。
実施例３９ｌ１
同様にして、中間体Ｒ３９を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－７００７ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．８４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．４。
実施例４０ａ
Figure 0007251981000533
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間攪拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｒ４０ ０．３１ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間攪拌後、混合物をＰＢＳ緩衝液で希釈して体積２．５ｍＬとし、Ｓｅｐｈａｄｅｘカラムで精製し、次に超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．８５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．３。
実施例４０ｅ
同様にして、中間体Ｒ４０を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：２．０５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．９。
実施例４０ｌ１
同様にして、中間体Ｒ４０を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－７００７ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．９８ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．９。
実施例４１ａ
Figure 0007251981000534
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間攪拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｒ４１ ０．２７ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間攪拌後、混合物をＰＢＳ緩衝液で希釈して体積２．５ｍＬとし、Ｓｅｐｈａｄｅｘカラムで精製し、次に超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：２．０２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．５。
実施例４１ｅ
同様にして、中間体Ｒ４１を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：２．０８ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．５。
実施例４１ｌ１
同様にして、中間体Ｒ４１を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－７００７ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．９４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．９。
実施例４２ａ
Figure 0007251981000535
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間攪拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｒ４２ ０．２９ｍｇ（０．０００２７ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに４時間攪拌後、混合物をＰＢＳ緩衝液で希釈して体積２．５ｍＬとし、Ｓｅｐｈａｄｅｘカラムで精製し、次に超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．６８ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．６。
実施例４２ｅ
同様にして、中間体Ｒ４２を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：２．０９ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．０。
実施例４２ｌ１
同様にして、中間体Ｒ４２を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－７００７ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．７ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．４。
実施例４３ａ
Figure 0007251981000536
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．４ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１２．５ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間攪拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｒ４３ ０．２２ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間攪拌後、反応混合物を、事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液で希釈して体積２．５ｍＬとした。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に投入し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を室温でアルゴン下に終夜攪拌した。
この溶液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：２．０８ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．５。
実施例４３ｅ
同様にして、中間体Ｒ４３を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．９ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．６。
実施例４３ｌ１
同様にして、中間体Ｒ３８を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－７００７ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．５７ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．１。
実施例４４ｅ
Figure 0007251981000537
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２３ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．４ｍＬ中の抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ４ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間攪拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｒ４４ ０．１８ｍｇ（０．０００１９ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間攪拌後、反応混合物を、事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液で希釈して体積２．５ｍＬとした。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に投入し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を室温でアルゴン下に終夜攪拌した。
この溶液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．５９ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．４。
実施例４４ｌ１
同様にして、中間体Ｒ４５を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－７００７ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．５７ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．９。
実施例４５ａ
Figure 0007251981000538
ＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）を、アルゴン下に、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした５当量（０．１６ｍｇ）の中間体Ｒ４５の溶液と混合した。室温で１時間攪拌後、同量を再度加え、混合物を室温でさらに１時間攪拌した。次に、混合物をＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で希釈して２．５ｍＬとし、Ｓｅｐｈａｄｅｘカラムで精製し、次に超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）で再希釈した。
タンパク質濃度：２．１４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．６。
実施例４５ｅ
同様にして、中間体Ｒ４５を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．８４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．９。
実施例４５ｌ１
同様にして、中間体Ｒ４５を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－７００７ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：２．０１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．３。
実施例４６ａ
Figure 0007251981000539
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間攪拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｒ４６ ０．２１ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間攪拌後、反応混合物を、事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液で希釈して体積２．５ｍＬとした。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に投入し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を室温でアルゴン下に終夜攪拌した。
この溶液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．８３ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．１。
実施例４６ｅ
同様にして、中間体Ｒ４６を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．７１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．９。
実施例４６ｌ１
同様にして、中間体Ｒ４６を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－７００７ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．７８ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．４。
実施例４７ａ
Figure 0007251981000540
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ ０．４５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１１ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間攪拌し、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｒ４７ ０．２７５ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間攪拌後、反応混合物を、事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液で希釈して体積２．５ｍＬとした。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に投入し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を室温でアルゴン下に終夜攪拌した。
この溶液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．７７ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．９。
実施例４７ｅ
同様にして、中間体Ｒ４７を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．４３ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．０。
実施例４７ｌ１
同様にして、中間体Ｒ４７を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－７００７ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．６０ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．１。
実施例４８ａ
Figure 0007251981000541
ＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に、アルゴン下で、ＴＣＥＰ ０．０２９ｍｇのＰＢＳ緩衝液（０．０５ｍＬ）中溶液を加えた。混合物を室温で３０分間攪拌し、次にＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした中間体Ｒ４８ ０．２９ｍｇ（０．０００２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間攪拌後、混合物を事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液で希釈して体積２．５ｍＬとした。この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に投入し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液を室温でアルゴン下に終夜攪拌した。
この溶液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈した。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．７５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．１。
実施例４８ｅ
同様にして、中間体Ｒ４８を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．７２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．７。
実施例４８ｌ１
同様にして、中間体Ｒ４８を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－７００７ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．７１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．４。
実施例４９ａ
Figure 0007251981000542
ＰＢＳ ０．５ｍＬ中のセツキシマブ５ｍｇ（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）い、アルゴン下で、ＤＭＳＯ ５０μＬに溶かした５当量（０．４７ｍｇ）の中間体Ｒ３４の溶液を加え、室温で１時間攪拌後、同量を再度加え、混合物を室温でさらに１時間攪拌した。次に、混合物をＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で希釈して２．５ｍＬとし、Ｓｅｐｈａｄｅｘカラムによって精製し、次に超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）で再希釈して２．５ｍＬとした。
得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：２．３１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：５．６。
実施例４９ｅ
同様にして、中間体Ｒ３４を、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：２．１２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：７．１。
実施例４９ｌ１
同様にして、中間体Ｒ３４を、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－７００７ ５ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：２．２５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：５．８。
実施例５０ｄｔ－２
Figure 0007251981000543
抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－２６５８（ＴＰＰ－２０９０－ＨＣ－Ｎ２９７Ａに相当）５ｍｇのＤＰＶ ｐＨ７．２（５４０μＬ）中溶液に（濃度約１０ｍｇ／ｍＬ）に、１０ｍｍｏｌの中間体Ｒ５０のＤＭＳＯ中溶液２０μＬを加えた。３７℃で５分間インキュベーション後、組み換え細菌トランスグルタミナーゼ水溶液（製品番号Ｔ００１、Ｚｅｄｉｒａ ＧｍｂＨ， Ｄａｒｍｓｔａｄｔ， Ｇｅｒｍａｎｙ）（２５Ｕ／ｍＬ）４０μＬを加え、インキュベーションを３７℃でさらに２４時間続けた。次に、反応混合物をＤＰＢＳ ｐＨ７．２で希釈して体積２．５ｍＬとし、ゲル濾過によってＤＰＢＳで平衡としたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通し、ｐＨ７．４のＤＰＢＳ緩衝液で溶離した。次に、ＡＤＣ溶液をＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａｃｅｌ－３０Ｋ遠心（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）によって濃縮し、それをＤＰＢＳで再希釈した。最後に、ＤＰＢＳ １２．５μＬ中のｂ－トランスグルタミナーゼ遮断剤Ｚｅｄｉｒａ Ｃ１００ ０．００５μｍｏｌを溶液に加えた。得られたＡＤＣ溶液は、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．７１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：１．９。
実施例５０ｄｔ－４
Figure 0007251981000544
抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－５４４２（ＴＰＰ－２０９０－ＨＣ－Ｎ２９７Ｑに相当）５ｍｇのＤＰＶ ｐＨ７．２中溶液に（濃度＝７．４ｍｇ／ｍＬ）に、１０ｍｍｏｌの中間体Ｒ５０のＤＭＳＯ中溶液８０μＬを加えた。３７℃で５分間インキュベーション後、組み換え細菌トランスグルタミナーゼ水溶液（製品番号Ｔ００１、Ｚｅｄｉｒａ ＧｍｂＨ， Ｄａｒｍｓｔａｄｔ， Ｇｅｒｍａｎｙ）（２５Ｕ／ｍＬ）４００μＬを加え、インキュベーションを３７℃で２４時間続けた。次に、反応混合物をＤＰＢＳ ｐＨ７．２で希釈して合計体積２．５ｍＬとし、ゲル濾過によってＤＰＢＳで平衡としたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通し、ｐＨ７．４のＤＰＢＳ緩衝液で溶離した。次に、ＡＤＣ溶液をＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａｃｅｌ－３０Ｋ遠心（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）によって濃縮し、それをＤＰＢＳで再希釈して体積約２．５ｍＬとした。最後に、ＤＰＢＳ ２００μＬ中のｂ－トランスグルタミナーゼ遮断剤Ｚｅｄｉｒａ Ｃ１００ ０．１μｍｏｌを溶液に加えた。得られたＡＤＣ溶液は、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．６９ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．７。
実施例５０ｅｔ－４
Figure 0007251981000545
抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－７５１１（抗ＨＥＲ２抗体－ＨＣ－Ｎ２９７Ｑに相当）５ｍｇのＤＰＶ ｐＨ７．２中溶液に（濃度＝１０ｍｇ／ｍＬ）に、１０ｍｍｏｌの中間体Ｒ５０のＤＭＳＯ中溶液８０μＬを加えた。３７℃で５分間インキュベーション後、組み換え細菌トランスグルタミナーゼ水溶液（製品番号Ｔ００１、Ｚｅｄｉｒａ ＧｍｂＨ， Ｄａｒｍｓｔａｄｔ， Ｇｅｒｍａｎｙ）（２５Ｕ／ｍＬ）４００μＬを加え、インキュベーションを３７℃で２４時間続けた。次に、反応混合物をＤＰＢＳ ｐＨ７．２で希釈して合計体積２．５ｍＬとし、ゲル濾過によってＤＰＢＳで平衡としたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通し、ｐＨ７．４のＤＰＢＳ緩衝液で溶離した。次に、ＡＤＣ溶液をＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａｃｅｌ－３０Ｋ遠心（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）によって濃縮し、それをＤＰＢＳで再希釈して体積約２．５ｍＬとした。最後に、ＤＰＢＳ ２００μＬ中のｂ－トランスグルタミナーゼ遮断剤Ｚｅｄｉｒａ Ｃ１００ ０．１μｍｏｌを溶液に加えた。得られたＡＤＣ溶液は、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．６４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．８。
実施例５１ｄｔ－２
Figure 0007251981000546
抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－２６５８（ＴＰＰ－２０９０－ＨＣ－Ｎ２９７Ａに相当）５ｍｇのＤＰＶ ｐＨ７．２（５３０μＬ）（濃度約１０ｍｇ／ｍＬ）中溶液に、１０ｍｍｏｌの中間体Ｒ５１のＤＭＳＯ中溶液２０μＬを加えた。３７℃で５分間インキュベーション後、組み換え細菌トランスグルタミナーゼ水溶液５０μＬ（製品番号Ｔ００１、Ｚｅｄｉｒａ ＧｍｂＨ， Ｄａｒｍｓｔａｄｔ， Ｇｅｒｍａｎｙ）（２５Ｕ／ｍＬ）を加え、インキュベーションを３７℃でさらに２４時間続けた。次に、反応混合物をＤＰＢＳ ｐＨ７．２で希釈して２．５ｍＬとし、ゲル濾過によってＤＰＢＳで平衡としたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通し、ｐＨ７．４のＤＰＢＳ緩衝液で溶離した。次に、そのＡＤＣ溶液をＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａｃｅｌ－３０Ｋ遠心（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）によって濃縮し、それをＤＰＢＳで再希釈した。最後に、ＤＰＢＳ １２．５μＬ中のｂ－トランスグルタミナーゼ遮断剤Ｚｅｄｉｒａ Ｃ１００ ０．００５μｍｏｌを溶液に加えた。得られたＡＤＣ溶液は、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：２．０８ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：１．９。
実施例５１ｄｔ－４
Figure 0007251981000547
抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－５４４２（ＴＰＰ－２０９０－ＨＣ－Ｎ２９７Ｑに相当）５ｍｇのＤＰＢＳ ｐＨ７．２中溶液（ｃ＝１０ｍｇ／ｍＬ）に、１０ｍｍｏｌの中間体Ｒ５１のＤＭＳＯ中溶液５３μＬを加えた。３７℃で５分間インキュベーション後、組み換え細菌トランスグルタミナーゼ水溶液（製品番号Ｔ００１、Ｚｅｄｉｒａ ＧｍｂＨ， Ｄａｒｍｓｔａｄｔ， Ｇｅｒｍａｎｙ）（２５Ｕ／ｍＬ）４００μＬを加え、インキュベーションを３７℃で２４時間続けた。次に、反応混合物をＤＰＢＳ ｐＨ７．２で希釈して総容量２．５ｍＬとし、ゲル濾過によってＤＰＢＳで平衡としたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通し、ｐＨ７．４のＤＰＢＳ緩衝液で溶離した。次に、そのＡＤＣ溶液をＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａｃｅｌ－３０Ｋ遠心（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）によって濃縮し、それをＤＰＢＳで再希釈して容量約２．５ｍＬとした。最後に、ＤＰＢＳ ２００μＬ中のｂ－トランスグルタミナーゼ遮断剤Ｚｅｄｉｒａ Ｃ１００ ０．０５μｍｏｌを溶液に加えた。得られたＡＤＣ溶液は、次のように特性決定された。
タンパク質濃度：１．５６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．３。
比較例：小分子、ＡＰＤＣ類及びＡＤＣ類
最初に、各種条件下でのレグマイン介在開裂及び安定性を調べるため、レグマイン開裂性プロドラッグＲ３ｒ－ＬＬＬ及びＲ３ｒ－ＬＤＬを製造した。
さらに、代表的基準化合物として、レグマイン開裂性リンカーにおける全てのアミノ酸が天然のＬ配置のものである本発明によるレグマイン開裂性ＡＰＤＣ類及びＡＤＣ類のエピマーを製造した（参考例Ｒ３ａ，ｅ、ｋ；Ｒ４ａ、ｅ、ｋ；Ｒ５ａ、ｅ、ｋ及びＲ９ａ、ｅ、ｋ）。
最後に、腫瘍及び他の組織における活性代謝物の濃度を求めるため（→チャプターＣ５ｂ）、実施例３ｋ（レグマイン開裂性基を有する）との比較のため、基準ＡＤＣ類Ｒ１０ｋ及びＲ１０ｈ１（レグマイン開裂性基を持たない）を製造した。両方のＡＤＣとも同じ活性代謝物を形成することから、それらの臓器分布に対する本発明によるレグマイン開裂性基の効果を調べることができる。
参考例Ｒ３ｒ－ＬＬＬ
Ｎ－（ピリジン－４－イルアセチル）－Ｌ－アラニル－Ｌ－アラニル－Ｎ１－［（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－（メチルアミノ）－１－オキソブタン－２－イル］－Ｌ－アスパルタミド
Figure 0007251981000548
最初に、トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－Ｎ－メチルブタンアミド（１：１）を、ＷＯ２０１５０９６９８２Ａ１に記載の方法に従って製造した。次に、この中間体を用い、ＤＭＦ中にてＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｌ１０３にカップリングさせることで、標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９０２［Ｍ＋Ｈ］＋。
参考例Ｒ３ｒ－ＬＤＬ
Ｎ－（ピリジン－４－イルアセチル）－Ｌ－アラニル－Ｄ－アラニル－Ｎ１－［（２Ｓ）－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－１－（メチルアミノ）－１－オキソブタン－２－イル］－Ｌ－アスパルタミド
Figure 0007251981000549
最初に、トリフルオロ酢酸／（２Ｓ）－２－アミノ－４－［｛（１Ｒ）－１－［１－ベンジル－４－（２，５－ジフルオロフェニル）－１Ｈ－ピロール－２－イル］－２，２－ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］－Ｎ－メチルブタンアミド（１：１）を、ＷＯ２０１５０９６９８２Ａ１に記載の方法に従って製造した。次に、この中間体を用い、ＤＭＦ中にてＨＡＴＵ及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｌ１１０にカップリングさせることで、標題化合物を製造した。
ＬＣ－ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９０２［Ｍ＋Ｈ］＋。
参考例Ｒ３ａ
Figure 0007251981000550
実施例３ａと同様にして、製造を行った。
タンパク質濃度：１．９９ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．６。
同様にして、同様の方法で、参考例Ｒ３ｅを、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５を用いて製造し、参考例Ｒ３ｋを、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－２６５８を用いて製造した。
参考例Ｒ３ｅ
タンパク質濃度：１．７０ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．３。
参考例Ｒ３ｋ
タンパク質濃度：１．７１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．１。
参考例Ｒ４ａ
Figure 0007251981000551
実施例４ａと同様にして、製造を行った。
タンパク質濃度：１．８７ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．２。
同様にして、同様の方法で、参考例Ｒ４ｅを、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５を用いて製造し、参考例Ｒ４ｋを、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－２６５８を用いて製造した。
参考例Ｒ４ｅ
タンパク質濃度：１．７０ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．３。
参考例Ｒ４ｋ
タンパク質濃度：１．７９ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．３。
参考例Ｒ５ａ
Figure 0007251981000552
実施例５ａと同様にして、製造を行った。
タンパク質濃度：２．０２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．５。
同様にして、同様の方法で、参考例Ｒ５ｅを、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５を用いて製造し、参考例Ｒ５ｋを、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－２６５８を用いて製造した。
参考例Ｒ５ｅ
タンパク質濃度：１．７２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．２。
参考例Ｒ５ｋ
タンパク質濃度：１．７９ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．１。
参考例Ｒ９ａ
Figure 0007251981000553
実施例９ａと同様にして、製造を行った。
タンパク質濃度：１．５７ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．４
同様にして、同様の方法で、参考例Ｒ９ｅを、抗ＨＥＲ２抗体ＴＰＰ－１０１５を用いて製造し、参考例Ｒ９ｋを、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－２６５８を用いて製造した。
参考例Ｒ９ｅ
タンパク質濃度：１．７９ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．１。
参考例Ｒ９ｋ
タンパク質濃度：０．６８ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．８。
参考例Ｒ１０ｋ
Figure 0007251981000554
アルゴン下に、ＴＣＥＰ ０．８６ｍｇのＰＢＳ緩衝液（２ｍＬ）中溶液を、ＰＢＳ １０．５ｍＬ中の抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ－２６５８ １５０ｍｇ（ｃ＝１４．２８ｍｇ／ｍＬ）に加えた。混合物を室温で３０分間攪拌し、ＤＭＳＯ １２５０μＬに溶かした中間体Ｆ１０４ ６．６３ｍｇ（０．００８ｍｍｏｌ）を加えた。室温でさらに９０分間攪拌後、反応液を、事前にｐＨ８に調節しておいたＰＢＳ緩衝液１２５０μＬで希釈した。
この溶液を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で平衡としておいたＰＤ１０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に投入し、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で溶離した。溶出液をＰＢＳ緩衝液ｐＨ８で希釈して、合計体積２２．５ｍＬとした。この溶液をアルゴン下に室温で終夜攪拌し、ＰＤ－１０カラムを用いて再緩衝してｐＨ７．２とした。次に、溶出液を超遠心によって濃縮し、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で再希釈し、再度濃縮した。得られたＡＤＣバッチは、下記のように特性決定された。
タンパク質濃度：１４．０６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．４。
参考例Ｒ１０ｈ１
同様にして、中間体Ｆ１０４を、抗Ｂ７Ｈ３抗体ＴＰＰ－８３８２ １００ｍｇにカップリングさせた。得られたＡＤＣバッチは、下記のように特性決定された。
タンパク質濃度：１４．１２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．２。
Ｃ：生物学的効力の評価
本発明による化合物の生理活性を、下記の評価で示すことができる。
Ｃ－１ａ：ＡＤＣの細胞毒性効果の測定
ＡＤＣの細胞毒性効果の分析を、各種細胞系を用いて行った。
ＮＣＩ－Ｈ２９２：ヒト粘液性類表皮肺癌細胞、ＡＴＣＣ－ＣＲＬ－１８４８、標準培地：ＲＰＭＩ１６４０（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ；＃ＦＧ１２１５、安定グルタミン）＋１０％ＦＣＳ（Ｓｉｇｍａ；＃Ｆ２４４２）、ＴＷＥＡＫＲ－陽性；ＥＧＦＲ－陽性。
ＢｘＰＣ３：ヒト膵臓癌細胞、ＡＴＣＣ－ＣＲＬ－１６８７、標準培地：ＲＰＭＩ１６４０（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ；＃ＦＧ１２１５、安定グルタミン）＋１０％ＦＣＳ（Ｓｉｇｍａ；＃Ｆ２４４２）、ＴＷＥＡＫＲ－陽性。
ＬｏＶｏヒト結腸直腸がん細胞、ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ－２２９、ＭＴＴアッセイ用に培養：標準培地：カイン（Ｋａｉｇｈｎ′ｓ）＋Ｌ－グルタミン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ２１１２７）＋１０％熱失活ＦＣＳ（Ｇｉｂｃｏから、Ｎｏ．１０５００－０６４）。ＣＴＧアッセイ用の培養：ＲＰＭＩ１６４０（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ；＃ＦＧ１２１５、安定グルタミン）＋１０％ＦＣＳ（Ｓｉｇｍａ＃Ｆ２４４２）。ＴＷＥＡＫＲ－陽性。
ＫＰＬ４：ヒト乳がん細胞系、Ｂａｙｅｒ Ｐｈａｒｍａ ＡＧ（ＤＳＭＺで２０１２年７月１９日に同一性をチェック及び確認）、標準培地：ＲＰＭＩ１６４０（Ｇｉｂｃｏから；＃２１８７５－０５９、安定化Ｌ－グルタミン）＋１０％熱失活ＦＣＳ（Ｇｉｂｃｏから、Ｎｏ．１０５００－０６４）；ＨＥＲ２－陽性。
ＳＫ－ＨＥＰ－１：ヒト肝臓がん細胞系、ＡＴＣＣ番号ＨＴＢ－５２、標準培地：アール塩＋Ｇｌｕｔａｍａｘ Ｉ含有ＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ４１０９０）＋１０％熱失活ＦＣＳ（Ｇｉｂｃｏから、Ｎｏ．１０５００－０６４）；ＥＧＦＲ－陽性、ＴＷＥＡＫＲ－陽性。
ＫＵ－１９－１９：ヒト膀胱癌細胞、ＤＭＳＺ、標準培地：ＲＰＭＩ １６４０（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ；＃ＦＧ１２１５、安定化グルタミン）＋１０％ＦＣＳ（Ｓｉｇｍａ；＃Ｆ２４４２）、ＴＷＥＡＫＲ－陽性。
ＳＣＣ４：ヒト舌基底癌、標準培地：ＤＭＥＭ／ハムＦ１２；（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ；＃ＦＧ４８１５、安定グルタミン含有）、ＡＴＣＣ－ＣＲＬ－１６２４＋１０％ＦＣＳ（Ｓｉｇｍａ＃Ｆ２４４２）、ＴＷＥＡＫＲ－陽性。
対象の細胞系についてＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）、又はＬｅｉｂｎｉｚ－Ｉｎｓｔｉｔｕｔ ＤＳＭＺ－Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）によって記載された標準的方法によって、細胞を培養した。
ＣＴＧアッセイ
Ｃ－１ａ下に挙げた増殖培地を用い、標準的な方法によって細胞を培養した。試験は、トリプシン（０．０５％）及びＥＤＴＡ（０．０２％）のＰＢＳ中溶液（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ ＡＧ ＃Ｌ２１４３）による細胞の分離、ペレット化、培地での再懸濁、カウンティング及び白色底の９６ウェル培養プレート（Ｃｏｓｔａｒ＃３６１０）への細胞播種（７５μＬ／ウェルで、次の細胞数はウェル当たりである。ＮＣＩ－Ｈ２９２：２５００細胞／ウェル、ＢｘＰＣ３：２５００細胞／ウェル、ＬｏＶｏ３０００細胞／ウェル）によって行い、インキュベータにおいて３７℃及び５％二酸化炭素でインキュベートした。２４時間後、培地２５μＬ中の抗体薬物複合体（４倍濃縮）を、細胞に加えて、その細胞での最終抗体薬物複合体濃度が３×１０－７Ｍから３×１０－１１Ｍを得た（３連）。次に、細胞をインキュベータにおいて３７℃及び５％二酸化炭素でインキュベートした。並行したプレートで、薬物処理開始時（第０日）での細胞活性を、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏｗ（ＣＴＧ）発光細胞生存率アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ＃Ｇ７５７３及び＃Ｇ７５７１）を用いて求めた。このために、基質１００μＬを各細胞バッチに加え、次に、プレートをアルミニウムホイルで覆い、プレート振盪器上１８０ｒｐｍで２分間振盪し、実験台上に８分間置き、照度計（Ｖｉｃｔｏｒ Ｘ２、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を用いて測定した。その基質により、生存細胞におけるＡＴＰ含有量を検出し、その際に、発光シグナルが発生し、その強度は細胞の生存率に正比例する。抗体薬物複合体とともに７２時間インキュベートした後、これらの細胞の生存率も、上記の方法に従って、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏｗ発光細胞生存率アッセイを用いて求めた。その測定データから、ＤＲＣ（用量応答曲線）解析スプレッドシート及び４パラメータ適合を用い、第０日との比較で増殖阻害のＩＣ５０を計算した。ＤＲＣ解析スプレッドシートは、ＩＤＢＳ Ｅ－ＷｏｒｋＢｏｏｋ Ｓｕｉｔｅプラットフォーム（ＩＤＢＳ：ＩＤ Ｂｕｓｉｎｅｓｓ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ Ｌｔｄ．， Ｇｕｉｌｄｆｏｒｄ， ＵＫ）に基づいてＢａｙｅｒ Ｐｈａｒｍａ ＡＧ及びＢａｙｅｒ Ｂｕｓｉｎｅｓｓ Ｓｅｒｖｉｃｅｓが開発したｂｉｏｂｏｏｋスプレッドシートである。
下記の表１ａに、本アッセイからの代表的作業例のＩＣ５０値を挙げてある。
表１ａ
Figure 0007251981000555
Figure 0007251981000556
下記の表１ｂには、本発明によるＡＤＣ類及びＡＰＤＣ類の代表例の、レグマイン開裂性基の全てのアミノ酸がＬ配置である相当するエピマーＡＤＣ類及びＡＰＤＣ類（参考例シリーズＲ）との比較データを挙げてある。有意差は全く見られない。
表１ｂ）
Figure 0007251981000557
報告の活性データは、本実験セクションに記載の作業例に関するものであり、薬物／ｍＡＢ比が示されている。それらの値は、異なる薬物／ｍＡＢ比に関して逸脱している可能性がある。ＩＣ５０値は、いくつかの独立の実験又は個々の値の平均である。抗体薬物複合体の作用は、個々のリンカー及び担毒体を含む個々のアイソタイプ対照に対して選択的であった。
ＭＴＴアッセイ
Ｃ－１ａ下に特定された増殖培地を用いる標準法によって、細胞を培養した。本試験は、ＡｃｃｕｔａｓｅのＰＢＳ中溶液（ＢｉｏｃｈｒｏｍＡＧ＃Ｌ２１４３）による細胞の分離、ペレット化、培地での再懸濁、カウンティング及び白色底の９６ウェル培養プレート（Ｃｏｓｔａｒ＃３６１０から）への細胞播種（ＮＣＩ Ｈ２９２：２５００細胞／ウェル；ＳＫ－ＨＥＰ－１：１０００細胞／ウェル；ＫＰＬ４：１２００細胞／ウェル、総体積１００μＬ中）によって行う。次に、細胞を、インキュベータにおいて３７℃及び５％二酸化炭素でインキュベートした。４８時間後、培地を交換した。次に、濃度１０－５Ｍから１０－１３Ｍでの培地１０μＬ中の抗体薬物複合体をピペットで細胞に加え（三連で）、アッセイ液をインキュベータにおいて３７℃及び５％二酸化炭素でインキュベートした。９６時間後、ＭＴＴアッセイ（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ， Ｖｉｒｇｉｎｉａ， ＵＳＡ、カタログ番号３０－１０１０Ｋ）を用いて細胞増殖を検出した。このために、ＭＴＴ試薬を細胞とともに４時間インキュベートし、次に界面活性剤を加えることで、細胞を終夜溶解させた。生成した色素を、５７０ｎｍで検出した（Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｍ１０００ｐｒｏ， Ｔｅｃａｎ）。測定データを用いて、ＤＲＣ（用量応答曲線）を使用して増殖阻害のＩＣ５０を計算した。試験物質で処理しなかったが、それ以外は同様に処理した細胞の増殖を、１００％数値と定義した。
下記の表１ｃ～ｆに、本アッセイからの代表的作業例のＩＣ５０値を挙げてある。
表１ｃ
Figure 0007251981000558
Figure 0007251981000559
Figure 0007251981000560
下記の表１ｄには、本発明によるＡＤＣ類及びレグマイン開裂性基の全てのアミノ酸がＬ配置である相当するＡＰＤＣ類（参考例シリーズＲ）を含む代表例についての比較データを挙げてある。ＮＣＩ－Ｈ２９２細胞系については、明瞭に変化したＩＣ５０値は測定されなかった。
表１ｄ：
Figure 0007251981000561
表１ｅ：
Figure 0007251981000562
Figure 0007251981000563
Figure 0007251981000564
下記の表１ｆには、本発明によるＡＤＣ類及びレグマイン開裂性基の全てのアミノ酸がＬ配置である相当するＡＰＤＣ類（参考例シリーズＲ）を含む代表例についての比較データを挙げてある。有意に変化したＩＣ５０値は測定されなかった。
表１ｆ：
Figure 0007251981000565
報告の活性データは、本実験セクションに記載の作業例に関するものであり、薬物／ｍＡＢ比を示す。値は、異なる薬物／ｍＡＢ比に関して逸脱がある可能性がある。ＩＣ５０値は、いくつかの独立の実験又は個別の値の平均である。当該抗体薬物複合体の作用は、個々のリンカー及び担毒体を含む個々のアイソタイプ対照に関して選択的であった。
Ｃ－１ｂ：選択された実施例によるキネシンスピンドルタンパク質ＫＳＰ／Ｅｇ５の阻害の測定
ヒトキネシンスピンドルタンパク質ＫＳＰ／Ｅｇ５（ｔｅｂｕ－ｂｉｏ／Ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ Ｉｎｃ, Ｎｏ．０２７ＥＧ０１－ＸＬ）のモータードメインを、１５ｍＭ ＰＩＰＥＳ、ｐＨ６．８（５ｍＭ ＭｇＣｌ２及び１０ｍＭ ＤＴＴ、Ｓｉｇｍａ）中室温で５分間、５０μｇ／ｍＬタキソール（Ｓｉｇｍａ Ｎｏ．Ｔ７１９１－５ＭＧ）で安定化した微小管（ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｉ）（ウシ又はブタ、ｔｅｂｕ－ｂｉｏ／Ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ Ｉｎｃ）とともに濃度１０ｎＭでインキュベートした。調製したばかりの混合物を３８４ＭＴＰ（Ｃｏｒｎｉｎｇから）に小分けした。濃度１．０×１０－６Ｍから１．０×１０－１３Ｍの調べる阻害剤及びＡＴＰ（最終濃度５００μＭ、Ｓｉｇｍａ）を加えた。インキュベーションは室温で２時間であった。マラカイトグリーン（Ｂｉｏｍｏｌ）を用いて形成された無機ホスフェートを検出することで、ＡＴＰａｓｅ活性を検出した。試薬を加えた後、アッセイ液を室温で５０分間インキュベートしてから、波長６２０ｎｍでの吸収を検出した。使用した陽性対照は、モナストロール（Ｓｉｇｍａ、Ｍ８５１５－１ｍｇ）及びイスピネシブ（ＡｄｏｏＱ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ Ａ１０４８６）であった。用量－活性曲線の個々のデータは、８倍測定である。ＩＣ５０値は、二つの独立の実験の平均である。１００％対照は、阻害剤で処理されなかったサンプルであった。
下記の表２に、記載のアッセイからの代表的作業例のＩＣ５０値を列記し、相当する細胞毒性データをまとめている（ＭＴＴアッセイ）。
表２
Figure 0007251981000566
Figure 0007251981000567
報告された活性データは、本実験セクションに記載の作業例に関するものである。
Ｃ－１ｃ：酵素アッセイ及び安定性試験
ａ：カテプシンＢアッセイ
試験対象のあらゆるカテプシンＢ開裂性プロドラッグに関して、ミクロ反応容器（０．５ｍＬ、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆから）で混合物を作った。ここで使用した酵素をヒト肝臓組織から得た。最初にカテプシンＢ（ＳｉｇｍａＣ８５７１２５μｇ）２μｇを入れ、５０ｍＭリン酸Ｎａ緩衝液ｐＨ６．０、２ｍＭ ＤＴＴで合計容量２００μＬとした。次に、試験対象の基質溶液５０μＬをピペットで入れた。混合物を４０℃で３００ｒｐｍの一定の撹拌下にサーモブロック（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから）でインキュベートした。酵素反応を速度論的に制御した。このために、サンプル１０μＬを異なる時点で取った。採取したサンプルを直ちに氷冷メタノール２０μＬと混合して、酵素反応を停止してから、－２０℃で冷凍した。サンプリングに選択した時間点は、１０分後、２時間後、４時間後及び２４時間後とした。次に、サンプルを、ＲＰ－ＨＰＬＣ分析によって分析した（逆相ＨＰＬＣ、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、１２００シリーズ）。放出された担毒体の測定によって、酵素反応の半減期ｔ１／２の測定が可能となった。
ｂ：レグマインアッセイ
組み換えヒト酵素でレグマインアッセイを行った。レグマイン酵素溶液（カタログ番号２１９９－ＣＹ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を、５０ｍＭ酢酸Ｎａ緩衝液／１００ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ４．０で希釈して所望の濃度とし、３７℃で２時間前インキュベートした。次に、ｒｈレグマインを５０ｍＭ ＭＥＳ緩衝液、２５０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ５．０で１ｎｇ／μＬの最終濃度に調節した。試験対象のあらゆるレグマイン開裂性プロドラッグについて、ミクロ反応容器（０．５ｍＬ、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆから）で混合物を作った。そのために、基質溶液を、５０ｍＭ ＭＥＳ緩衝液、２５０ｍＭＮａＣｌ、ｐＨ５．０で所望の濃度（２倍濃度）に調節した。酵素反応の速度論的測定のため、最初にレグマイン溶液２５０μＬを入れ、基質溶液２５０μＬ（最終濃度：単一濃度）を加えることで酵素反応を開始した。異なる時点で、サンプル５０μＬを取った。このサンプルを直ちに氷冷メタノール１００μＬと混合して、酵素反応を停止してから、－２０℃で冷凍した。サンプリングに選択した時間点は、０．５時間後、１時間後、３時間後及び２４時間後とした。次に、ＲＰ－ＨＰＬＣ分析により、そしてＬＣ－ＭＳ分析によってサンプルを分析した。放出された担毒体の測定によって、酵素反応の半減期ｔ１／２の測定が可能となった（図１）。
代表例でのレグマイン介在開裂を示すため、レグマインアッセイで製造した基質は、立体異性体モデル化合物Ａ（＝参考例Ｒ３ｒ－ＬＬＬ）及びＢ（＝参考例Ｒ３ｒ－ＬＤＬ）であり、それらは中心のアラニン単位上でそれぞれＳ配置及びＲ配置を有する。化合物Ａを、上記の条件下で開裂させて、半減期１．１時間の標的化合物とした。化合物Ｂは、２４時間以内で約２０％程度まで開裂させて標的化合物とした。
Figure 0007251981000568
図１：モデル化合物Ａ（参考例Ｒ３ｒ－ＬＬＬ）及びＢ（参考例Ｒ３ｒ－ＬＤＬ）のレグマイン介在開裂
ｃ：ラット血漿における安定性測定のためのアッセイ
化合物Ａ及びＢの安定性を調べるため、各場合で１．５ｍＬエッペンドルフ管中のラット血漿１ｍＬを、エッペンドルフ振盪器上で３７℃に平衡化した。化合物Ａ及び化合物Ｂの濃度が１００μｇ／ｍＬである原液（９アセトニトリル／１ＤＭＳＯ）を調製した。原液の各場合１０μＬずつを平衡化ラット血漿１ｍＬにピペットで入れて、濃度１μｇ／ｍＬとした。
サンプルを、２４時間にわたり４５０ｒｐｍ及び３７℃に維持した。０時間、０．２５時間、０．５時間、１時間、２時間、４時間、６時間及び２４時間の各サンプリング時点で、５０μＬを採取し、メタノール１５０μＬにピペットで入れた。最初に入っていたメタノール中に内部標準が０．０５μｇ／ｍＬの濃度で含まれていた。短時間の渦攪拌後、１０ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．８）３００μＬを加え、１８８１ｇで１０分間遠心した。次に、ＲＰ－ＨＰＬＣ分析及びＬＣ－ＭＳ分析によってサンプルの分析を行った。
このアッセイでは、化合物Ａ（参考例Ｒ３ｒ－ＬＬＬ）及び化合物Ｂ（参考例Ｒ３ｒ－ＬＤＬ）の両方が、２４時間にわたって安定であった。
ｄ：ラット肝臓リソソームでの安定性測定のためのアッセイ
化合物Ａ及びＢのリソソーム安定性を求めるため、リソソーム酵素を、ラット肝臓細胞から単離した。化合物Ａ及びＢをそれぞれ、このリソソーム抽出液に加えて、リソソーム条件下での安定性を調べた。タンパク質分解酵素レグマインは、ラット肝臓リソソームにおいて、あっても非常に少量でのみ発現される（Ｃｈｅｎ， Ｊ－Ｍ． ｅｔ ａｌ １９９７）。リソソーム酵素の酵素活性をモニタリングするため、カテプシン特異的基質を加えた。
最初に、新鮮なラット肝臓を摘出し、秤量し、均質化培地中で氷上に直接乗せた（０．２５Ｍショ糖、１ｍＭ ＥＤＴＡ、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７）。肝臓を粉砕し、培地の変更を行った。ラット肝臓を、Ｐｏｔｔｅｒ（Ｂ． Ｂｒａｕｎ）において７５０ｒｐｍで、４倍量のラット肝臓重量で均質化した。ホモジネートを１０００ｇで１０分間遠心し、上清を濾過した。次の段階で、超遠心機を用いて、「軽ミトコンドリア画分」（ＬＭＦ）を、２６５００ｇで２０分間かけて上清から遠心した。ミトコンドリアは別として、ペレット中にはリソソームも存在する。上清を廃棄し、ペレットを、０．８ｍＬ／ｇの均質化培地で再懸濁させた。
リソソーム画分をＬＭＦの他の細胞構成要素から分離するため、６種類のＯｐｔｉｐｒｅｐ密度勾配を、Ｏｐｔｉｐｒｅｐ緩衝液（１００ｍＭ ＭＯＰＳ、２０ｍＭ ＥＤＴＡ、０．５％ＥｔＯＨ、ｐＨ７．６）中８％、１２％、１６％、１９％、２２．５％及び２７％のショ糖含有量で準備した。ショ糖は、特定のパーセントの２．３Ｍ原液から加えた。単離ＬＭＦ ２．５ｍＬを、ショ糖含有量１９％の密度段階にさらに加えた。次に、密度段階を、１０ｍＬ遠心管中で、あるものを別のものの頂部に乗せて層化し、４８５００ｇで１７時間遠心した。画分１～８が勾配の上側５．６ｍＬ中にあり、廃棄した。画分９及び１０は、その下の１．６ｍＬにあり、その勾配から取り出し、氷上で５分間にわたり、溶解緩衝液（２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０．１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ１００、ｐＨ５）１．６ｍＬで溶解させた。リソソームは、画分９及び１０中に存在している。溶解をモニタリングするため、溶解リソソーム画分のタンパク質含有量を、ＢＣＡアッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ ＢＣＡタンパク質アッセイキット）を用いてモニタリングした。
化合物Ａ及びＢのリソソーム安定性を調べるため、１００μｇ／ｍＬの原液（９アセトニトリル／１ＤＭＳＯ）６μＬを、９０ｍＭクエン酸緩衝液２９０μＬ及びリソソーム抽出液３００μＬに加え、エッペンドルフ振盪器上で３７℃でインキュベートした。０時間、１時間、２時間、６時間、２４時間及び４８時間後に、インキュベーション溶液から各回５０μＬを取り、ＭｅＯＨ １５０μＬにピペットで注入した。内部標準を、０．０５μｇ／ｍＬで初期充填液に含ませた。ＲＰ－ＨＰＬＣ ＬＣＭＳ分析のため、サンプルを１０ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．８）３００μＬで希釈し、分析した。
リソソーム安定性アッセイの条件下では、化合物Ａ（参考例Ｒ３ｒ－ＬＬＬ）は、２４時間以内に約６時間の半減期で約８０％まで開裂したが、化合物Ｂ（参考例Ｒ３ｒ－ＬＤＬ）は、同期間にわたり安定であった。
Ｃ－２：取り込みアッセイ
取り込みは、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を介した抗原発現性癌細胞における細胞毒性ペイロードの特異的かつ効率的提供を可能とする重要なプロセスである。このプロセスは、特異的抗体及びアイソタイプ対照抗体の蛍光標識を介してモニタリングされる。最初に、蛍光色素を抗体のリジンに結合させた。結合は、ｐＨ８．３の２倍モル過剰のＣｙｐＨｅｒ ５ＥモノＮＨＳエステル（バッチ３５７３９２, ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて行った。カップリング後、反応混合物をゲルクロマトグラフィー（Ｚｅｂａ Ｓｐｉｎ Ｄｅｓａｌｔｉｎｇ Ｃｏｌｕｍｎｓ、４０Ｋ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｎｏ．８７７６８；溶離緩衝液：ダルベッコＰＢＳ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｎｏ．Ｄ８５３７）によって精製して、過剰の色素を除去し、ｐＨを調節した。得られたタンパク質溶液を、ＶＩＶＡＳＰＩＮ５００カラム（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ ｓｔｅｄｉｍ ｂｉｏｔｅｃ）を用いて濃縮する。抗体の色素負荷量を、分光光度分析（ＮａｎｏＤｒｏｐ）及び次に計算：（Ｄ：Ｐ＝Ａｄｙｅεｐｒｏｔｅｉｎ：（Ａ２８０－０．１６Ａｄｙｅ）εｄｙｅ）によって求めた。
ここで調べた抗体及びアイソタイプ対照の色素負荷量は、同等の次数のものであった。細胞結合アッセイにおいて、前記カップリングが抗体のアフィニティにおける変化をもたらさないことが確認された。
その標識抗体を、取り込みアッセイに用いた。処置開始前に、細胞（２×１０４／ウェル）を、９６ウェルＭＴＰ（肉厚、黒色、透明底Ｎｏ４３０８７７６、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓから）における培地１００μＬに播いた。３７℃／５％ＣＯ２で１８時間インキュベートした後、培地を代え、標識抗体を各種濃度で加えた（１０、５、２．５、１、０．１μｇ／ｍＬ）。標識されたアイソタイプ対照（陰性対照）について、同じ処理プロトコールを用いた。選択されたインキュベーション時間は、０時間、０．２５時間、０．５時間、１時間、１．５時間、２時間、３時間、６時間及び２４時間であった。ＩｎＣｅｌｌＡｎａｌｙｚｅｒ １０００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅから）を用いて、蛍光測定を行った。次に、パラメータである顆粒カウント／細胞及び総顆粒強度／細胞の測定を介して、動力学的評価を行った。
受容体への結合後、Ｂ７Ｈ３抗体について、それの取り込み能力を調べた。このために、異なる受容体発現レベルを有する細胞を選択した。標的介在特異的取り込みが、本発明の関連で用いた抗体で観察されたが、アイソタイプ対照は取り込みを全く示さなかった。
Ｃ－３：細胞透過性を求めるためのイン・ビトロ試験
Ｃａｃｏ－２細胞を用いるフラックスアッセイでのイン・ビトロ試験によって、基質の細胞透過性を調べることができる［Ｍ． Ｄ． Ｔｒｏｕｔｍａｎ ａｎｄ Ｄ． Ｒ． Ｔｈａｋｋｅｒ, Ｐｈａｒｍ． Ｒｅｓ． ２０ （８）, １２１０－１２２４（２００３）］。これに関して、２４ウェルフィルタープレート上で、細胞１５から１６日間培養した。透過を求めるため、個々の試験物質を、ＨＥＰＥＳ緩衝液溶液で、頂部で（ａｐｉｃａｌｌｙ）（Ａ）又は基底部で（ｂａｓａｌｌｙ）（Ｂ）細胞に付与し、２時間インキュベートした。０時間後及び２時間後に、シス及びトランスコンパートメントからサンプルを取った。それらのサンプルを、逆相カラムを用いるＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ １２００、Ｂｏｅｂｌｉｎｇｅｎ, Ｇｅｒｍａｎｙ）によって分離した。ＨＰＬＣシステムを、Ｔｕｒｂｏ Ｉｏｎ Ｓｐｒａｙ Ｉｎｔｅｒｆａｃｅを介して三連四重極質量分析計ＡＰＩ４０００（ＡＢ ＳＣＩＥＸ Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ ＧＭＢＨ, Ｄａｒｍｓｔａｄｔ, Ｇｅｒｍａｎｙ）に連結した。Ｓｃｈｗａｂらが公開した式を用いて計算されたＰａｐｐ値に基づいて透過性を評価した［Ｄ． Ｓｃｈｗａｂ ｅｔ ａｌ．, Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． ４６, １７１６－１７２５（２００３）］。Ｐａｐｐ（Ｂ－Ａ）／Ｐａｐｐ（Ａ－Ｂ）の比（排出比）が＞２又は＜０．５であった場合に、物質は能動的に輸送されると分類された。
細胞内で放出される担毒体について非常に重要なものは、ＢからＡへの透過性［Ｐａｐｐ（Ｂ－Ａ）］及びＰａｐｐ（Ｂ－Ａ）：Ｐａｐｐ（Ａ－Ｂ）の比（排出比）であり、この浸透率が低いほど、Ｃａｃｏ－２細胞の単層を通る物質の能動輸送及び受動輸送が遅くなる。さらに、排出比が能動輸送を示さない場合、その物質は、細胞内放出後に、細胞内でより長く留まることができる。従って、生化学的標的（この場合、キネシンスピンドルタンパク質、ＫＳＰ／Ｅｇ５）との相互作用に使える時間も長くなる。
下記の表３には、このアッセイからの代表的作業例についての浸透率データを示してある。
表３
Figure 0007251981000569
Figure 0007251981000570
Ｃ－４：Ｐ－糖タンパク質（Ｐ－ｇｐ）についての基質特性を求めるためのイン・ビトロ試験
多くの腫瘍細胞が、薬物のための輸送タンパク質を発現し、これは非常に多くの場合、細胞増殖抑制剤に対する抵抗性の発達を伴う。従って、そのような輸送タンパク質、例えばＰ－糖タンパク質（Ｐ－ｇｐ）又はＢＣＲＰの基質ではない物質は、例えば、改善された活性プロファイルを示し得ると考えられる。
Ｐ－ｇｐ（ＡＢＣＢ１）用の物質の基質特性を、Ｐ－ｇｐを過剰発現するＬＬＣ－ＰＫ１細胞（Ｌ－ＭＤＲ１細胞）を用いるフラックスアッセイによって求めた［Ａ．Ｈ． Ｓｃｈｉｎｋｅｌ ｅｔ ａｌ．, Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ． ９６, １６９８－１７０５ （１９９５）］。このために、ＬＬＣ－ＰＫ１細胞又はＬ－ＭＤＲ１細胞を、３から４日間、９６ウェルフィルタープレートで培養した。透過性を測定するため、個々の試験物質を、単独で又は阻害剤（例えば、イベルメクチン又はベラパミル）の存在下に、ＨＥＰＥＳ緩衝液溶液で、頂部で（ａｐｉｃａｌｌｙ）（Ａ）又は基底部で（ｂａｓａｌｌｙ）（Ｂ）細胞に付与し、２時間インキュベートした。０時間後及び２時間後に、シス及びトランスコンパートメントからサンプルを取った。それらのサンプルを、逆相カラムを用いるＨＰＬＣによって分離した。ＨＰＬＣシステムを、Ｔｕｒｂｏ Ｉｏｎ Ｓｐｒａｙ Ｉｎｔｅｒｆａｃｅを介してＡＰＩ３０００三連四重極質量分析計（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ａｐｐｌｅｒａ, Ｄａｒｍｓｔａｄｔ, Ｇｅｒｍａｎｙ）に連結した。Ｓｃｈｗａｂらが公開した式を用いて計算されたＰａｐｐ値に基づいて透過性を評価した［Ｄ． Ｓｃｈｗａｂ ｅｔ ａｌ．, Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． ４６, １７１６－１７２５（２００３）］。Ｐａｐｐ（Ｂ－Ａ）／Ｐａｐｐ（Ａ－Ｂ）の排出比が＞２であった場合に、物質はＰ－ｇｐ基質であると分類された。
Ｐ－ｇｐ基質特性の評価のためのさらなる基準として、Ｌ－ＭＤＲ１細胞及びＬＬＣ－ＰＫ１細胞における排出比又は阻害剤存在下若しくは非存在下での排出比を比較することができる。これらの値が２より大きい係数だけ異なる場合、対象の物質はＰ－ｇｐ基質である。
Ｃ－５：薬物動態
Ｃ５ａ：イン・ビトロでの取り込み後のＡＤＣ代謝物の確認
方法の説明：
免疫複合体を用いる取り込み試験を行って、細胞内的に形成された代謝物を分析する。このために、ヒト肺腫瘍細胞ＮＣＩ Ｈ２９２（３×１０５／ウェル）を６ウェルプレートに播き、終夜インキュベートする（３７℃、５％ＣＯ２）。その細胞を１０μｇ／ｍＬ（６６ｎＭ）の被験ＡＤＣで処理する。取り込みを、３７℃及び５％ＣＯ２で行った。各種時間点で（０、４、２４、４８、７２時間）、さらなる分析用に細胞サンプルと取る。最初に、上清（約５ｍＬ）を回収し、遠心（２分、室温、１０００ｒｐｍ Ｈｅｒａｅｕｓ Ｖａｒｉｏｆｕｇｅ ３．０Ｒ）後に、－８０℃で保存する。細胞をＰＢＳで洗浄し、Ａｃｃｕｔａｓｅを用いて分離し、細胞数を測定する。さらに洗浄した後、所定数の細胞（２×１０５）を溶解緩衝液（哺乳動物細胞溶解キット（Ｓｉｇｍａ ＭＣＬ１）１００ｍＬで処理し、Ｐｒｏｔｅｉｎ ＬｏＢｉｎｄ管（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆカタログ番号００３０１０８．１１６）中、連続振盪しながら（Ｔｈｅｒｍｏｍｉｘｅｒ、１５分、４℃、６５０ｒｐｍ）インキュベートする。インキュベーション後、溶解物を遠心し（１０分、４℃、１２０００ｇ、ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ ５４１５Ｒ）、上清を回収する。得られた上清を－８０℃で保存する。そして、全てのサンプルを下記のように分析する。
培養上清又は細胞溶解物中の化合物の測定を、メタノール又はアセトニトリルでタンパク質を沈殿させた後に、三連四重極質量分析計（ＭＳ）に連結された高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって行う。
培養上清／細胞溶解物５０μＬの後処理のため、沈殿試薬（メタノール）１５０μＬを加え、混合物を１０秒間振盪する。沈殿試薬は、好適な濃度で（通常は、２０～１００μｇ／Ｌの範囲）内部標準（ＩＳＴＤ）を含んでいる。１８８１ｇで１０分間遠心した後、上清をオートサンプラーバイアルに移し、溶離液に適した緩衝液３００μＬを加え、再度振盪し、１８８１ｇで１０分間遠心する。
最後に、細胞溶解物及び上清サンプルを、ＡＢ ＳＣＩＥＸ Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ ＧｍｂＨからのＨＰＬＣ連結ＡＰＩ６５００三連四重極質量分析計を用いて分析した。
較正のため、ブランク溶解物又はブランク上清を、適切な濃縮液と混合する（０．１～１０００μｇ／Ｌ）。検出限界（ＬＬＯＱ）は、約０．２μｇ／Ｌである。
妥当性を調べるための品質対照は、４及び４０μｇ／Ｌを含む。
Ｃ５ｂ：イン・ビボでのＡＤＣ代謝物の確認
異種移植マウスで１０ｍｇ／ｋｇの本発明による各種複合体を静脈注射した後、これら複合体の投与から２４時間後、抗体及び可能な代謝物の血漿、腫瘍、肝臓及び腎臓濃度を測定することができる。Ｃ－６下に、異種移植モデルに関して、その方法のより具体的な説明がある。ここで扱うものはいずれも、本発明による複合体の代謝物濃縮液である。言及の基質における代謝物の測定によってさらに、腫瘍での負荷量と比較した、血漿、腎臓及び肝臓での代謝物負荷量に関するデータが得られる。
可能な代謝物の定量のための分析
血漿、腫瘍、肝臓及び腎臓中の化合物の分析を、三連四重極質量分析計（ＭＳ）に連結された高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により、通常はメタノールでタンパク質を沈殿させた後に行う。
血漿５０μＬの後処理のため、沈殿試薬（メタノール）１５０μＬを加え、混合物を１０秒間振盪する。沈殿試薬は、好適な濃度で（通常は、２０～１００μｇ／Ｌの範囲）内部標準（ＩＳＴＤ）を含んでいる。１８８１ｇで１０分間遠心した後、上清をオートサンプラーバイアルに移し、溶離液に適した緩衝液３００μＬを加え、再度振盪する。
腫瘍又は臓器材料の後処理においては、特定の材料を３～２０倍量の抽出緩衝液と混合する。抽出緩衝液は、Ｔｉｓｓｕｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｉｅｒｃｅ， Ｒｏｃｋｆｏｒｄ， ＩＬ）５０ｍＬ、Ｃｏｍｐｌｅｔｅ－Ｐｒｏｔｅａｓｅ－Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ－Ｃｏｃｋｔａｉｌ（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ＧｍｂＨ， Ｍａｎｎｈｅｉｍ， Ｇｅｒｍａｎｙ）の２個のペレット及び最終濃度１ｍＭでのフェニルメチルスルホニルフルオリド（Ｓｉｇｍａ， Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ， ＭＯ）を含む。組織の種類（硬：腫瘍；軟：肝臓、腎臓）に従って、Ｐｒｅｓｃｅｌｌｙｓ ２４溶解及び均質化システム（Ｂｅｒｔｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）の溶解及び均質化プログラムを選択する（ｗｗｗ．ｐｒｅｓｃｅｌｌｙｓ．ｃｏｍ）。均質化サンプルを４℃で終夜静置した。ホモジネート（ｈｏｍｏｇｅｎｉｚａｔｅ）５０μＬをオートサンプラーバイアルに移し、ＩＳＴＤを含むメタノール１５０μＬを加え、１０秒間撹拌し、５分間静置する。酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．８）３００μＬを加え、短時間攪拌した後、サンプルを１８８１ｇで１０分間遠心する。
較正のため、血漿サンプルについての血漿及び組織サンプルについての相当するブランク基質を、濃度０．６～１０００μｇ／Ｌで混合する。サンプルの種類又は組織の種類に従って、検出限界（ＬＯＱ）は１～２０μｇ／Ｌである。
最後に、血漿及び基質サンプルを、ＡＢ ＳＣＩＥＸ Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ ＧｍｂＨからのＨＰＬＣ連結ＡＰＩ６５００三連四重極質量分析計を用いて分析する。
妥当性を調べるための品質対照は、４、４０及び４００μｇ／Ｌを含む。
表４：Ｋｕ－１９－１９異種移植マウスでの本発明による複合体投与から２４時間後の、異種移植マウス（ｎ＝３）の腫瘍、血漿、肝臓及び腎臓における代謝物濃度（ＭＷ：平均、ＳＤ：標準偏差）。ＬＬＯＱ腫瘍：３～２０μｇ／Ｌ；ＬＬＯＱ血漿：１μｇ／Ｌ；ＬＬＯＱ肝臓及び腎臓：５μｇ／Ｌ。
表４：
Figure 0007251981000571
実施例３ｋ及び参考例Ｒ１０ｋからのＡＤＣ（レグマイン開裂性基を持つもの及び持たないもの）は、Ｋｕ－１９－１９モデルにおいて同等のイン・ビボ効果を示す（チャプターＣ－６ｂ参照）。実施例３ｈ１からのＡＤＣも同様に、Ａ４９８モデルにおいてイン・ビボ効果を示し（チャプターＣ－６ｃ参照）、それは、少なくとも参考例Ｒ１０ｈ１（レグマイン開裂性基を持つもの及び持たないもの）と同等である。
しかしながら、実施例３ｋからのＡＤＣを投与した後は、比較ＡＤＣ Ｒ１０ｋ付与後と比較して、特に肝臓において、かなり低い活性代謝物濃度が測定される。実施例Ｒ１０ｋからの酵素開裂性基を持たない基準ＡＤＣ（２０９．４μｇ／ｌ）と比較した、実施例３ｋからのＡＤＣ（２６μｇ／Ｌ）投与後の肝臓における活性代謝物Ｍ２６の低い濃度は、ラット肝臓リソソームでのチャプターＣ１ｃに記載のモデル化合物Ｂ（参考例Ｒ３ｒ－ＬＤＬ）の高い安定性に合致するものである。
Ｃ－６：イン・ビボ活性試験
本発明による複合体の活性を、例えば異種移植モデルを用いて調べた。当業者であれば、本発明による化合物の活性を調べることができる先行技術の方法については熟知している（例えば、ＷＯ２００５／０８１７１１；Ｐｏｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．, Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ２００９ Ｍａｒ １５；６９（６）：２３５８－６４参照）。このために、例えば、バインダーの標的分子を発現する腫瘍細胞系を、齧歯類（例えばマウス）に移植した。次に、本発明による複合体、アイソタイプ抗体対照複合体、対照抗体又は等張性生理食塩水を移植動物に投与した。投与は、１回又は複数回行った。数日のインキュベーション時間後、複合体処理動物及び対照群を比較することで、腫瘍の大きさを測定した。複合体処理動物は、相対的に小さい腫瘍サイズを示した。
Ｃ－６ａ．マウスでの増殖阻害／実験腫瘍の退行
抗体薬物複合体に対する抗原を発現するヒト腫瘍細胞を、免疫抑制マウス、例えばＮＭＲｉヌード又はＳＣＩＤマウスの側部に皮下接種する。１００から１０００万個の細胞を細胞培養液から除去し、遠心し、培地又は培地／マトリゲルに再懸濁させる。細胞懸濁液をマウスの皮下に注射する。
数日以内に腫瘍が増殖する。腫瘍サイズ約４０ｍｍ２で腫瘍が確立された後に、処置を開始する。比較的大きい腫瘍に対する効果を調べるため、腫瘍サイズが５０から１００ｍｍ２でのみ処置を開始することも可能である。
ＡＰＤＣ及びＡＤＣによる処置は、マウスの尾静脈に静脈（ｉ．ｖ．）経路で行う。ＡＤＣは５ｍＬ／ｋｇの体積で投与する。
処置プロトコールは、抗体の薬物動態によって決まる。標準として、処置は、第４日ごとに連続３回行う。増殖が遅い腫瘍の場合は、週１回処置を選択しても良い。本発明による複合体を用いると、処置は、標準として２週間若しくは３週間にわたり週１回行う。迅速な評価のために、単回処置を行うプロトコールを用いることができる。しかしながら、治療をさらに続けることも可能であるか、後の時点で、３処置日の第２サイクルを行うことができる。
標準として、処置群当たり動物８匹を用いる。活性物質を投与される群に加えて、同じプロトコールに従って、一つの群を緩衝液のみで対照群として処理する。
実験中、腫瘍面積を、定期的にカリパスを用いて２次元（長さ／幅）で測定する。その腫瘍面積は、長さ×幅として求める。処置群の対照群との平均腫瘍面積の比を、Ｔ／Ｃ面積と記述する。
処置終了後、実験の全ての群を同時に屠殺する場合、腫瘍を摘出し、秤量することができる。処置群の対照群との平均腫瘍重量の比を、Ｔ／Ｃ重量と記述する。
Ｃ－６ｂ．各種異種移植モデルにおける抗ＴＷＥＡＫＲ ＡＰＤＣ類の効力
腫瘍細胞（例えばＫＵ－１９－１９、ＮＣＩ－Ｈ２９２、ＳＣＣ４）を、雌ＮＭＲＩ－ヌード又はＮＯＤ．ＳＣＩＤマウス（Ｊａｎｖｉｅｒ）の脇腹に皮下接種する。腫瘍サイズ約４０ｍｍ２で、抗体－薬物複合体で静脈処理を行う。処理後、適宜に、腫瘍増殖のモニタリングを継続する。
抗ＴＷＥＡＫＲ抗体－プロドラッグ複合体（ＡＰＤＣ類）による処置によって、対象群及びアイソタイプ－薬物複合体と比較して、腫瘍増殖が明瞭及び長期にわたって阻害され、それはレグマイン開裂性基を持たない相当するＡＤＣ（Ｒ１０ｋ）の増殖阻害に匹敵するものである。表５には、処置開始後に計算した、対照群の最終測定日での腫瘍面積について求めたＴ／Ｃ値を示してある。レグマイン開裂性抗ＴＷＥＡＫＲＡＤＣ（例えば実施例２４ｌ１）も、強力且つ特異的抗腫瘍効果を示した。
表５：
Figure 0007251981000572
Figure 0007251981000573
Ｃ－６ｃ．各種異種移植モデルでの抗Ｂ７Ｈ３ ＡＰＤＣ類の効力
腫瘍細胞（例えばＵ２５１－ＭＧ、ＮＣＩ－Ｈ２９２、ＳＣＣ４、ＮＣＩ－Ｈ１７０３）を、雌ＮＭＲＩ－ヌード又はＮＯＤ．ＳＣＩＤマウス（Ｊａｎｖｉｅｒ）の脇腹に皮下接種する。腫瘍サイズ約４０ｍｍ２で、抗体－薬物複合体で静脈処理を行う。処理後、適宜に、腫瘍増殖のモニタリングを継続する。
抗Ｂ７Ｈ３抗体－プロドラッグ複合体（ＡＰＤＣ類）による処置によって、対象群及びアイソタイプ－薬物複合体と比較して、腫瘍増殖が顕著且つ長期にわたって阻害される。表６には、各種異種移植モデルでの、処置開始後に計算した、対照群の最終測定日での腫瘍面積について求めた各種抗Ｂ７Ｈ３ ＡＰＤＣのＴ／Ｃ値及び基準化合物Ｒ１０ｈ１のＴ／Ｃ値を示してある。
表６：
Figure 0007251981000574
Figure 0007251981000575

Claims (41)

  1. 下記一般式Ｉａを有する複合体。
    Figure 0007251981000576
     ［式中、
    ｍは、０～２であり；
    ｎは、０又は１であり；
    Ｘは、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２又は－ＣＯＯＨであり、
    Ｌａは、自壊性リンカーであり、
    Ａ１は、アミノ酸Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリン及びＨｉｓのうちの一つ、又は個々のＮ－アルキルアミノ酸のうちの一つの側鎖であり、
    Ａ２は、アミノ酸Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ｐｒｏ、Ｄ－Ｖａｌ、Ｄ－Ｎｖａ、Ｄ－Ｌｅｕ、Ｄ－Ｉｌｅ、Ｄ－Ｍｅｔ、Ｄ－Ｐｈｅ、Ｄ－Ｔｙｒ、Ｄ－Ｔｒｐ、Ｄ－Ｓｅｒ、Ｄ－Ｔｈｒ、Ｄ－Ｃｙｓ、Ｄ－Ａｓｎ、Ｄ－Ｇｌｎ、Ｄ－Ａｓｐ、Ｄ－Ｇｌｕ、Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－シトルリン又はＤ－Ｈｉｓのうちの一つ、又は個々のＮ－アルキルアミノ酸のうちの一つの側鎖であり、
    Ｒ１ａは、－Ｈ－又はＣ１－Ｃ３－アルキルであり、
    又は
    Ｒ１ａは、Ａ２がＤ－Ｐｒｏの側鎖である場合、プロリン環のメチレン基への結合であり、
    Ｄは、－Ｄ１－（Ｌｂ）ｏ－（ＬＩＧ）ｐであり、
    Ｄ１は、細胞毒性薬であり、
    ＬＩＧは、腫瘍細胞の標的分子への結合後に、腫瘍細胞によって取り込まれ、細胞内で、好ましくはリソソームで処理される抗体又はその抗原結合性抗体断片であり、
    Ｌｂは、リンカーであり、
    ｏ及びｐはそれぞれ独立に、０又は１であり、
    Ｒは、Ｚ１－（Ｃ＝Ｏ）ｑ－であり、
    ｑは、０又は１であり、
    Ｚ１は、Ｃ１－１０－アルキル、Ｃ５－１０－アリール、Ｃ６－１０－アラルキル、Ｃ５－１０－ヘテロアルキル、Ｃ１－１０－アルキル－Ｏ－Ｃ６－１０－アリール、Ｃ５－１０－ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、Ｃ５－１０－ヘテロアリールアルコキシ、Ｃ１－１０－アルコキシ、Ｃ６－１０－アリール－Ｃ１－１０－アルキルオキシ、Ｃ６－１０－アリールオキシ又はＣ６－１０－アラルコキシ、Ｃ５－１０－ヘテロアルコキシ、Ｃ１－１０－アルキル－Ｏ－Ｃ６－１０－アリールオキシ－又はＣ５－１０－ヘテロシクロアルコキシ基であり、それらはそれぞれ、－ＮＨ２、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＮＨ－アルキル、－Ｎ（アルキル）２、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－アルキル、－Ｎ（アルキル）－Ｃ（＝Ｏ）－アルキル、－Ｓ（＝Ｏ）３－Ｈ、－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨ２、－Ｓ（＝Ｏ）２－Ｎ（アルキル）２、－ＣＯＯＨ、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ（アルキル）２又は－ＯＨによってモノ置換又は多置換されていても良く、
    又は－Ｈ若しくは－（ＣＨ２）０－１－Ｏｘ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｖ－Ｒ１ｂ基であり、
    ｘは、０又は１であり、
    ｖは、１～２０の数字であり、
    Ｒ１ｂは、－Ｈ、－アルキル、－ＣＨ２－ＣＯＯＨ、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＯＯＨ、又は－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ２であり、
    または
    Ｒは、ＬＩＧ－（Ｌｃ）ｒ－であり、
    ＬＩＧは、上記定義のとおりであり、
    Ｌｃは、リンカーであり、及び
    ｒは、０又は１であり、
    但し、ｐが０の場合はＲはＬＩＧ－（Ｌｃ）ｒ－であり、ｐが１の場合はＲはＬＩＧ－（Ｌｃ）ｒ－ではない。］
  2. Ａ２がアミノ酸Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ｐｒｏ、Ｄ－Ａｓｐ、Ｄ－Ａｓｎ、Ｄ－Ｈｉｓ及びＤ－Ｓｅｒのうちの一つの側鎖である、請求項１に記載の複合体。
  3. Ｒ１ａが－Ｈ又はメチル基、好ましくは－Ｈである、請求項１又は２に記載の複合体。
  4. ｍが１である、請求項１から３のいずれか一項に記載の複合体。
  5. Ａ１がＬ配置又はＤ配置である、請求項１から４のいずれか一項に記載の複合体。
  6. Ａ１がＡｌａ又はＶａｌの側鎖である、請求項１から５のいずれか一項に記載の複合体。
  7. ｑが１であり、Ｚ１がＣ１－１０－アルキル、酸素原子によって１回若しくは複数回中断されていても良いＣ５－１０－ヘテロアルキル（例えばアルキル化されていても良いオリゴアルキレンオキサイド鎖）、Ｃ６－１０－アラルキル、Ｃ５－１０－ヘテロアリールアルキル、Ｃ６－１０－アラルコキシ又はＣ５－１０－ヘテロアリールアルコキシ基を表す、請求項１から６のいずれか一項に記載の複合体。
  8. Ｌａが下記の基から選択される、請求項１から７のいずれか一項に記載の複合体。
    Figure 0007251981000577
     ［式中、＃１はカルボニル基への結合を表し、＃２はＤ１のヒドロキシル又はアミノ基への結合を表す。］
  9. Ｄ１がマイトマイシン、ドキソルビシン、アミノプテリン、アクチノマイシン、ブレオマイシン、９－アミノカンプトセシン、ｎ８－アセチルスペルミジン、１－（２－クロロエチル）－１，２－ジメタンスルホニルヒドラジド、タリソマイシン、シタラビン、エトポシド、カンプトセシン、タキソール、エスペラミシン、ポドフィロトキシン、アングイジン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、モルホリン－ドキソルビシン、ｎ－（５，５－ジアセトキシペンチル）ドキソルビシン、デュオカルマイシン、オーリスタチン、ピロロベンゾジアゼピン誘導体、カリケアマイシン、ダウノルビシン、カンプトテシンＤＸ８９５１（エキサテカン）又はキネシン紡錘体タンパク質阻害剤（ＫＳＰ阻害剤）から選択される薬物であり、当該薬物がそれのヒドロキシル若しくはアミノ基を介して式ＩａのＬａ（ｎ＝１の場合）又はカルボニル基（ｎ＝０の場合）に結合している、請求項１から８のいずれか一項に記載の複合体。
  10. 前記ＫＳＰ阻害剤が下記式（ＩＩａ）の化合物である、請求項９に記載の複合体又はそれの塩、溶媒和物もしくは溶媒和物の塩。
    Figure 0007251981000578
     ［式中、
    Ｘ１はＮであり、
    Ｘ２はＮであり、及び
    Ｘ３はＣであり、
    又は
    Ｘ１はＮであり、
    Ｘ２はＣであり、及び
    Ｘ３はＮであり、
    又は
    Ｘ１はＣＨ又はＣＦであり、
    Ｘ２はＣであり、及び
    Ｘ３はＮであり、
    又は
    Ｘ１はＮＨであり、
    Ｘ２はＣであり、及び
    Ｘ３はＣであり、
    又は
    Ｘ１はＣＨであり、
    Ｘ２はＮであり、及び
    Ｘ３はＣであり、
    Ａは、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｓ（＝Ｏ）－、－Ｓ（＝Ｏ）２－、又は－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨ－であり、
    Ｒ１は、－Ｈ、－Ｌ－＃１、－ＭＯＤ又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ１－１であり、
    Ｚ１－１は、－Ｈ、－ＮＨＹ１－３、－ＯＹ１－３、－ＳＹ１－３、ハロゲン、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＹ１－１Ｙ１－２、又は－Ｃ（＝Ｏ）－ＯＹ１－３であり、
    Ｙ１－１及びＹ１－２は独立に、－Ｈ、－ＮＨ２、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０－３－（ＣＨ２）０－３Ｚ１－２又は－ＣＨ（ＣＨ２Ｗ）Ｚ１－２であり、
    Ｙ１－３は、－Ｈ又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ１－２であり、
    Ｚ１－２は、－Ｈ、－ＮＨ２、－Ｓ（＝Ｏ）３Ｈ、－ＣＯＯＨ－又は－（Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨＹ１－４）１－３ＣＯＯＨであり、
    Ｗは、－Ｈ又は－ＯＨであり、
    Ｙ１－４は、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖若しくは分岐のＣ１－６アルキルであり、又は－ＮＨ２によって置換されていても良いアリール又はベンジルであり、
    Ｒ２は、－Ｈ、－Ｌ－＃１、－ＭＯＤ、－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨＹ２－４－ＮＨＹ２－５又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ２－１であり、
    Ｚ２－１は、－Ｈ、ハロゲン、－ＯＹ２－３、－ＳＹ２－３、－ＮＨＹ２－３、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＹ２－１Ｙ２－２、又は－Ｃ（＝Ｏ）－ＯＹ２－３であり、
    Ｙ２－１及びＹ２－２は独立に、－Ｈ、－ＮＨ２、又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ２－２であり、
    Ｙ２－３は、－Ｈ又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ２－２であり、
    Ｚ２－２は、－Ｈ、－Ｓ（＝Ｏ）３Ｈ、－ＮＨ２又は－ＣＯＯＨであり、
    Ｙ２－４は、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖若しくは分岐のＣ１－６アルキルであり、又は－ＮＨ２によって置換されていても良いアリール又はベンジルであり、
    Ｙ２－５は、－Ｈ又は－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨＹ２－６－ＮＨ２であり、
    Ｙ２－６は、直鎖若しくは分岐のＣ１－６－アルキルであり、
    Ｒ３は、－ＭＯＤ、－Ｌ－＃１、又は置換されていても良いアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル基であり、それらは１～３個のＯＨ基、１～３個のハロゲン原子、１～３個のモノ－、ジ－若しくはトリハロゲン化アルキル基、１～３個の－Ｏ－アルキル基、１～３個の－ＳＨ基、１～３個の－Ｓ－アルキル基、１～３個の－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－アルキル基、１～３個の－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－アルキル基、１～３個の－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－Ｓ（＝Ｏ）０－２－アルキル基、１～３個の－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－Ｎ（アルキル）２基、１～３個のＮＨ２基又は１～３個の－（ＣＨ２）０－３Ｚ３－１基によって置換されていても良く、
    Ｚ３－１は、－Ｈ、ハロゲン、－ＯＹ３－３、－ＳＹ３－３、－ＮＨＹ３－３、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＹ３－１Ｙ３－２又は－Ｃ（＝Ｏ）－ＯＹ３－３であり、
    Ｙ３－１及びＹ３－２は独立に、－Ｈ、－ＮＨ２、又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ３－２であり、
    Ｙ３－３は、－Ｈ、－（ＣＨ２）０－３－ＣＨ（ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ３）Ｚ３－２、－（ＣＨ２）０－３－ＣＨ（ＮＨ２）Ｚ３－２又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ３－２であり、
    Ｚ３－２は、－Ｈ、－Ｓ（＝Ｏ）３Ｈ、－ＮＨ２又は－Ｃ（＝Ｏ）－ＯＨであり、
    Ｒ４は、下記式Ｉａ′のレグマイン開裂性基であり、
    Figure 0007251981000579
    ［式中、
    Ｒ、Ａ１、ｍ、Ｒ１ａ、Ａ２、Ｘ、Ｌａおよびｎは、請求項１と同じ定義を有し、＃１は式（ＩＩａ）のＫＳＰ阻害剤への結合である。］
    Ｒ５は、－Ｈ、－ＮＨ２、－ＮＯ２、ハロゲン、－ＣＮ、ＣＦ３、－ＯＣＦ３、－ＣＨ２Ｆ、－ＣＨ２Ｆ、－ＳＨ又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ５－１であり、
    Ｚ５－１は、－Ｈ、－ＯＹ５－３、－ＳＹ５－３、ハロゲン、－ＮＨＹ５－３、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＹ５－１Ｙ５－２、又は－Ｃ（＝Ｏ）－ＯＹ５－３であり、
    Ｙ５－１及びＹ５－２は独立に、－Ｈ、－ＮＨ２、又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ５－２であり、
    Ｙ５－３は、－Ｈ又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ５－２であり、
    Ｚ５－２は、－Ｈ、－Ｓ（＝Ｏ）３Ｈ、－ＮＨ２又は－ＣＯＯＨであり、
    Ｒ６及びＲ７は独立に、－Ｈ、－ＣＮ、Ｃ１－１０－アルキル、フルオロ－Ｃ１－１０－アルキル、Ｃ２－１０－アルケニル、フルオロ－Ｃ２－１０－アルケニル、Ｃ２－１０－アルキニル、フルオロ－Ｃ２－１０－アルキニル、ヒドロキシル、－ＮＯ２、－ＮＨ２、－ＣＯＯＨ又はハロゲンであり、
    Ｒ８は、Ｃ１－１０－アルキル、フルオロ－Ｃ１－１０－アルキル、Ｃ２－１０－アルケニル、フルオロ－Ｃ２－１０－アルケニル、Ｃ２－１０－アルキニル、フルオロ－Ｃ２－１０－アルキニル、Ｃ４－１０－シクロアルキル、フルオロ－Ｃ４－１０－シクロアルキル又は－（ＣＨ２）０－２－（Ｚ８）であり、
    Ｚ８は、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される２個以下のヘテロ原子を有する４～７員の複素環であり、それは－ＯＨ、－ＣＯＯＨ、－ＮＨ２又は－Ｌ－＃１によって置換されていても良く、
    Ｒ９は、－Ｈ、－Ｆ、－ＣＨ３、－ＣＦ３、－ＣＨ２Ｆ又は－ＣＨＦ２であり、
    －Ｌ－＃１は、－（Ｌｂ）ｏ－（ＬＩＧ）ｐであり、
    ＬＩＧは、腫瘍細胞の標的分子への結合後に、腫瘍細胞によって取り込まれ、細胞内で、好ましくはリソソームで処理される抗体又はその抗原結合性抗体断片であり、
    Ｌｂは、リンカーであり、
    ｏ及びｐは独立に、０又は１であり、
    －ＭＯＤは、－（ＮＲ１０）０－１－（Ｇ１）０－１－Ｇ２－Ｇ３であり、（但し、－ＭＯＤは、少なくとも１個の－ＣＯＯＨ基を有する。）
    Ｒ１０は、－Ｈ又はＣ１－Ｃ３－アルキルであり、
    Ｇ１は、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－又は
    Figure 0007251981000580
     であるか、又は存在せず、
    Ｇ２は、直鎖若しくは分岐の炭化水素鎖であり、それは１～２０個の炭素原子を有し、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓ（＝Ｏ）－、－Ｓ（＝Ｏ）２－、－ＮＲｙ－、－ＮＲｙＣ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｙ－、－ＮＲｙＮＲｙ－、－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＲｙＮＲｙ－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲｙＮＲｙ－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＣＲｘ＝Ｎ－Ｏ－によって１回又は複数回中断されていても良く、前記直鎖若しくは分岐の炭化水素鎖は、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２、－ＣＯＯＨ、－ＯＨ、－ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシド、又はスルホン酸によって置換されていても良く、
    Ｒｙは、－Ｈ、フェニル、Ｃ１－Ｃ１０－アルキル、Ｃ２－Ｃ１０－アルケニル又はＣ２－Ｃ１０－アルキニルであり、それらはそれぞれ－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２、－ＣＯＯＨ、－ＯＨ、－ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシド、又はスルホン酸によって置換されていても良く、
    Ｒ ｘ は、－Ｈ、Ｃ１－Ｃ３－アルキル又はフェニルであり、
    Ｇ３は、－Ｈ又は－ＣＯＯＨである。］
  11. Ｒ１又はＲ３が－Ｌ－＃１である、請求項１０に記載の複合体。
  12. Ｘ１がＣＨであり、Ｘ２がＣであり、Ｘ３がＮである、請求項１０又は１１に記載の複合体。
  13. Ｒ６及びＲ７が独立に、－Ｈ、Ｃ１－３－アルキル又はハロゲンである、請求項１０～１２のいずれか一項に記載の複合体。
  14. Ｒ６及びＲ７がＦである、請求項１３に記載の複合体。
  15. Ｒ８が、Ｃ１－４－アルキル（好ましくはｔｅｒｔ－ブチル）又はシクロヘキシルである、請求項１０～１４のいずれか一項に記載の複合体。
  16. Ｒ９が－Ｈである、請求項１０～１５のいずれか一項に記載の複合体。
  17. ＲがＬＩＧ－（Ｌｃ）ｒ－であり、
    Ｏ及びｐが０である、請求項１から１６のいずれか一項に記載の複合体。
  18. 下記式ＩＩＩａの複合体。
    Figure 0007251981000581
     ［式中、
    ｍは、０～２であり；
    ｎは、０又は１であり；
    Ｘは、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２又は－ＣＯＯＨであり、
    Ｌａは、自壊性リンカーであり、
    Ｌｃは、リンカーであり、
    Ｄ１は、細胞毒性薬であり、
    ｒは、０又は１であり、
    Ｒ１ａ、Ａ２及びＡ１は、請求項１と同じ定義を有し、
    ＡＢは、抗体又はその抗原結合性抗体断片であり、
    ｓは、１～２０、
    好ましくは２～８、
    より好ましくは２～６である。］
  19. ＲがＺ １ －（Ｃ＝Ｏ）ｑ－であり、
    ｐが１である、請求項１から１６のいずれか一項に記載の複合体。
  20. 下記式ＩＶａ′の複合体。
    Figure 0007251981000582
     ［式中、
    ｍは、０～２であり；
    ｎは、０又は１であり；
    Ｌａは、自壊性リンカーであり、
    Ｌｂは、リンカーであり、
    ｏは、０又は１であり、
    Ｄ１、Ｘ、Ａ１ 及びＡ ２ は、請求項１と同じ定義を有し、
    Ｒ ２ は、－Ｈ－又はＣ １ －Ｃ ３ －アルキルであり、
    又は
    Ｒ ２ は、Ａ ２ がＤ－Ｐｒｏの側鎖である場合、プロリン環のメチレン基への結合であり、
    Ｒは、Ｚ１－（Ｃ＝Ｏ）ｑ－であり、
    Ｚ１及びｑは、請求項１と同じ定義を有し、
    ＡＢは、抗体又はその抗原結合性抗体断片であり、
    ｓは、１～２０であり、
    好ましくは２～８、
    より好ましくは２～６である。］
  21. 前記リンカーＬｂ又はＬｃが、抗体若しくはその抗原結合性抗体断片のシステイン側鎖若しくはシステイン残基に結合しており、下記式を有する、請求項１０に記載の複合体。
    Figure 0007251981000583
     ［式中、
    ｍ２は、０又は１であり；
    §は、Ｌｂから細胞毒性薬Ｄ１又はＬｃから下記式（Ｉａ’）
    Figure 0007251981000584
    ［式中、
    Ｒ、Ａ１、ｍ、Ｒ１ａ、Ａ２、Ｘ、Ｌａおよびｎは、請求項１と同じ定義を有し］
    の構造を有するレグマイン開裂性基への結合であり、
    §§は、抗体又はその抗原結合性抗体断片への結合であり、
    －Ｌ２－は、下記の基：
    Figure 0007251981000585
     であり、
    ＃１は、前記抗体又はその抗原結合性抗体断片のシステイン側鎖又はシステイン残基への連結部位を示し、
    ＃２は、前記Ｌ１基への連結部位を示し、
    Ｌ１は、－（ＮＲ １０ ）０－１－（Ｇ１）０－１－Ｇ１２－であり、
    Ｒ１０は、－Ｈ又はＣ１－Ｃ３－アルキルであり、
    Ｇ１は、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－又は
    Figure 0007251981000586
     であるか、又は存在せず、
    Ｇ１２は、アリーレン基及び／又は直鎖及び／又は分岐及び／又は環状のアルキレン基からなる１～１００個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐の炭化水素鎖であり、それは基－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓ（＝Ｏ）－、－Ｓ（＝Ｏ）２、－ＮＨ－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｎｍｅ－、－ＮＨＮＨ－、－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨＮＨ－、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨＮＨ－、Ｎ、Ｏ及びＳ、－Ｓ（＝Ｏ）－又は－Ｓ（＝Ｏ）２－から選択される４個以下のヘテロ原子を有する５～１０員の芳香族若しくは非芳香族複素環（好ましくは
    Figure 0007251981000587
     ［式中
    Ｘ５は、Ｈ又は－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２、－ＣＯＯＨ、－ＯＨ、－ＮＨ２、ＮＨ－ＣＮＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドもしくはスルホン酸又は、下記の基：
    Figure 0007251981000588
     ［式中、Ｒｘは、－Ｈ、Ｃ１－Ｃ３－アルキル又はフェニルである。］
    の一つで置換されていても良いＣ１－１０－アルキル基である。］
    の１以上によって１回若しくは複数回中断されていても良い。］
  22. Ｌ２が下記式の一方を有する開裂鎖状スクシンイミドである、請求項２１に記載の複合体。
    Figure 0007251981000589
     ［式中、
    ＃１は、抗体又はその抗原結合性抗体断片のシステイン側鎖又はシステイン残基への連結部位であり、
    ＃２は、Ｌ１基への連結部位である。］
  23. Ｌ２が、
    Figure 0007251981000590
     であり、
    ｍ２は、１であり、
    Ｌ１は、－ＮＲ１０－Ｇ１２であり、
    Ｒ１０は、－Ｈであり、
    Ｇ１２は、－［（ＣＨ２）ｘ＊－（Ｘ４）ｙ］ｗ－（ＣＨ２）ｚ－基であり、
    ｗは、０～１５であり；
    ｘ＊は、０～５であり；
    ｙは、０又は１であり；
    ｚは、０～５であり；及び
    Ｘ４は、－Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－，－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－又は
    Figure 0007251981000591
     である、請求項２１に記載の複合体。
  24. 前記リンカー－Ｌｂ－及び／又は－Ｌｃ－が、抗体又はその抗原結合性抗体断片のシステイン側鎖又はシステイン残基に結合しており、下記式を有する、請求項１から２０のいずれか一項に記載の複合体。
    Figure 0007251981000592
     ［式中、
    §は、Ｌｂから細胞毒性薬Ｄ１又はＬｃから下記式（Ｉａ’）
    Figure 0007251981000593
    ［式中、
    Ｒ、Ａ１、ｍ、Ｒ１ａ、Ａ２、Ｘ、Ｌａおよびｎは、請求項１と同じ定義を有し、＃１は式（ＩＩａ）のＫＳＰ阻害剤への結合である。］
    の構造を有するレグマイン開裂性基への結合であり、
    §§は、抗体又は抗原結合性抗体断片への結合であり、
    ｍ３は、０、１、２、又は３であり、
    ｎ２は、０、１又は２であり、
    ｐ２は、０～２０であり、
    Ｌ ３ は、下記の基：
    Figure 0007251981000594
     であり、
    ｏ２は、０又は１であり、
    §′は、－Ｓ（Ｏ） ｎ２ 基への結合であり、及び
    §″は、サクシニミジル環中の窒素原子への結合であり；
    Ｇ３は、１～１００個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐の炭化水素鎖であり、該直鎖若しくは分岐の炭化水素鎖は、アリーレン基及び／又は直鎖及び／又は分岐及び／又は環状のアルキレン基を含み、それは、基－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓ（＝Ｏ）－、Ｓ（＝Ｏ）２－、－ＮＨ－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－及びＮ、Ｏ及びＳ、－Ｎｍｅ－、－ＮＨＮＨ－、－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨＮＨ－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨＮＨ－、－Ｓ（＝Ｏ）－又は－Ｓ（＝Ｏ）２－から選択される４個以下のヘテロ原子を有する５～１０員の芳香族若しくは非芳香族複素環（好ましくは
    Figure 0007251981000595
     ）の１以上によって１回又は複数回中断されていても良く、直鎖若しくは分岐の炭化水素鎖の側鎖が存在する場合、それは、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－ＮＨ２、－ＣＯＯＨ、－ＯＨ、スルホン、スルホキシド又はスルホン酸によって置換されていても良い。］
  25. 前記リンカー－Ｌｂ－又は－Ｌｃ－が、システイン側鎖又はシステイン残基に結合しており、下記式を有する、請求項２４に記載の複合体。
    Figure 0007251981000596
     ［式中、
    §は、Ｌｂから細胞毒性薬Ｄ１又はＬｃから下記式（Ｉａ’）
    Figure 0007251981000597
    ［式中、
    Ｒ、Ａ１、ｍ、Ｒ１ａ、Ａ２、Ｘ、Ｌａおよびｎは、請求項１と同じ定義を有し、＃１は式（ＩＩａ）のＫＳＰ阻害剤への結合である。］
    の構造を有するレグマイン開裂性基への結合であり、
    §§は、抗体又はその抗原結合性抗体断片への結合であり、
    ｍ３は、１であり；
    ｐ２は、０であり；
    ｎ２は、０であり、
    Ｌ ３ は、下記の基：
    Figure 0007251981000598
     であり、
    ｏ２は、０又は１であり、
    Ｇ３は、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ２－（ＣＨ２）ｔ－（Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ）ｕ－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｖ２－（ＣＨ２）ｗ－であり、
    ｓ２、ｔ、ｖ２及びｗは独立に、０～１０であり、
    ｕは、０又は１であり、
    §′は、－Ｓ（Ｏ）ｎ２基への結合であり、及び
    §″は、サクシニミジル環中の窒素原子への結合である。］
  26. Ｒ２又はＲ３が－Ｌ－＃１である、請求項１０に記載の複合体。
  27. 下記式（Ｘ）の構造を有する、請求項９に記載の複合体又はそれの塩、溶媒和物もしくは溶媒和物の塩。
    Figure 0007251981000599
     ［式中、
    ＡＫは、抗体又はその抗原結合性抗体断片であり、
    ｎ２は、１～５０、好ましくは１～２０、より好ましくは２～８、特別には２～６の数字であり、
    Ｘ１はＮであり、
    Ｘ２はＮであり、及び
    Ｘ３はＣであり；
    又は
    Ｘ１はＮであり、
    Ｘ２はＣであり、及び
    Ｘ３はＮであり；
    又は
    Ｘ１はＣＨ又はＣＦであり、
    Ｘ２はＣであり、及び
    Ｘ３はＮであり；
    又は
    Ｘ１はＮＨであり、
    Ｘ２はＣであり、及び
    Ｘ３はＣであり；
    又は
    Ｘ１はＣＨであり、
    Ｘ２はＮであり、及び
    Ｘ３はＣであり；
    Ａは、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｓ（＝Ｏ）－、－Ｓ（＝Ｏ）２－又は－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨ－であり、
    Ｍは、次の基：
    Figure 0007251981000600
    Figure 0007251981000601
     であり、
    Ｒ １２ は、下記の基：
    （＊＊＊）－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ（＊＊）－ＣＨ２－ＣＯＯＨ、（＊＊＊）－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ２－ＣＨ（＊＊）－ＣＯＯＨ又は
    Figure 0007251981000602
     であり、
    Ｒ １ は、水素又は下記の基：
    Figure 0007251981000603
     であり、
    Ｘは、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２であり、
    Ｒｘ及びＲｙは独立に、－ＣＨ３、－ＣＨ２－ＣＯＯＨ、－（ＣＨ２）２－ＣＯＯＨ、－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２、－ＣＨ２ＯＨ又は－ＣＨ２Ｒ１１であり、
    Ｒ １０ は、メチル、－（Ｃ（＝Ｏ））ｑ２－Ｏ－Ｒ１１、又は－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＨ２）ｍ４－Ｒ１１であり、
    ｑ２は、０又は１であり、
    ｍ４は、０、１又は２であり、
    Ｒ１１は、水素、メチル、ベンジル、ピリジル、イミダゾリル又は基－（Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２）ｐ３－Ｏ－ＣＨ３であり、
    ｐ３は、１～１１であり、
    Ｒ ２ は、－Ｈであり、
    Ｒ ３ は、置換されていても良いアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル基であり、それらは１～３個のＯＨ基、１～３個のハロゲン原子、１～３個のモノ－、ジ－若しくはトリハロゲン化アルキル基、１～３個の－Ｏ－アルキル基、１～３個の－ＳＨ基、１～３個の－Ｓ－アルキル基、１～３個の－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－アルキル基、１～３個の－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－アルキル基、１～３個の－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－Ｓ（＝Ｏ）０－２－アルキル基、１～３個の－Ｓ（＝Ｏ）２－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－ＮＨ－アルキル基、１～３個の－Ｎ（アルキル）２基、１～３個のＮＨ２基又は１～３個の－（ＣＨ２）０－３Ｚ３－１基によって置換されていても良く、
    Ｚ３－１は、－Ｈ、ハロゲン、－ＯＹ３－３、－ＳＹ３－３、－ＮＨＹ３－３、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＹ３－１Ｙ３－２又は－Ｃ（＝Ｏ）－ＯＹ３－３であり、
    Ｙ３－１及びＹ３－２は独立に、－Ｈ、－ＮＨ２、又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ３－２であり、
    Ｙ３－３は、－Ｈ、－（ＣＨ２）０－３－ＣＨ－（ＮＨＣ（＝ＯＣＨ３）Ｚ３－２、－（ＣＨ２）０－３－ＣＨ（ＮＨ２）Ｚ３－２又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ３－２であり、
    Ｚ３－２は、－Ｈ、－Ｓ（＝Ｏ）３Ｈ、－ＮＨ２又は－ＣＯＯＨであり、
    Ｒ ５ は、－Ｈ、－ＮＨ２、－ＮＯ２、ハロゲン、－ＣＮ、－ＣＦ３、－ＯＣＦ３、－ＣＨ２Ｆ、－ＣＨ２Ｆ、－ＳＨ又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ５－１であり、
    Ｚ５－１は、－Ｈ、－ＯＹ５－３、－ＳＹ５－３、ハロゲン、－ＮＨＹ５－３、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＹ５－１Ｙ５－２、又は－Ｃ（＝Ｏ）－ＯＹ５－３であり、
    Ｙ５－１及びＹ５－２は独立に、－Ｈ、－ＮＨ２、又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ５－２であり、
    Ｙ５－３は、－Ｈ又は－（ＣＨ２）０－３Ｚ５－２であり、
    Ｚ５－２は、－Ｈ、－Ｓ（＝Ｏ）３Ｈ、－ＮＨ２又は－ＣＯＯＨであり、
    Ｒ ６ 及びＲ ７ は独立に、－Ｈ、－ＣＮ、Ｃ１－１０－アルキル、フルオロ－Ｃ１－１０－アルキル、Ｃ２－１０－アルケニル、フルオロ－Ｃ２－１０－アルケニル、Ｃ２－１０－アルキニル、フルオロ－Ｃ２－１０－アルキニル、ヒドロキシル、－ＮＯ２、－ＮＨ２、－ＣＯＯＨ又はハロゲンであり、
    Ｒ ８ は、Ｃ１－１０－アルキル、フルオロ－Ｃ１－１０－アルキル、Ｃ２－１０－アルケニル、フルオロ－Ｃ２－１０－アルケニル、Ｃ２－１０－アルキニル、フルオロ－Ｃ２－１０－アルキニル、Ｃ４－１０－シクロアルキル、フルオロ－Ｃ４－１０－シクロアルキル又は－（ＣＨ２）０－２－（Ｚ８）であり、
    Ｚ８は、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される２個以下のヘテロ原子を有する４～７員の複素環であり、それは－ＯＨ、－ＣＯＯＨ又は－ＮＨ２によって置換されていても良く、
    Ｒ ９ は、－Ｈ、－Ｆ、－ＣＨ３、－ＣＦ３、－ＣＨ２Ｆ又は－ＣＨＦ２であり、
    （＊）は、薬物分子への結合であり、
    （＊＊）は、抗体又は抗原結合性抗体断片への結合であり、
    （＊＊＊）は、基Ｍへの結合である。］
  28. 下記式（Ｘ）の構造を有する、請求項２７に記載の複合体又はそれの塩、溶媒和物もしくは溶媒和物の塩。
    Figure 0007251981000604
    ［式中、
    ＡＫが、抗体又はその抗原結合性抗体断片であり、
    ｎ２が、１～５０、好ましくは１～２０、より好ましくは２～８、特別には２～６の数字であり、
    Ｘ１がＣＨであり、
    Ｘ２がＣであり、及び
    Ｘ３がＮであり；
    Ａが、－Ｃ（＝Ｏ）－であり、
    Ｍが、下記の基：
    Figure 0007251981000605
    Figure 0007251981000606
    であり、
    Ｒ １２ が、下記の基：
    （＊＊＊）－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ（＊＊）－ＣＨ２－ＣＯＯＨ、（＊＊＊）－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ２－ＣＨ（＊＊）－ＣＯＯＨ又は
    Figure 0007251981000607
     であり、
    Ｒ １ が、水素又は下記の基：
    Figure 0007251981000608
     であり、
    Ｘが、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２であり、
    Ｒｘ及びＲｙが独立に、－ＣＨ３、－ＣＨ２－ＣＯＯＨ、－（ＣＨ２）２－ＣＯＯＨ、－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２、－ＣＨ２ＯＨ又は－ＣＨ２Ｒ１１であり、
    Ｒ １０ が、メチル、－（Ｃ（＝Ｏ））ｑ２－Ｏ－Ｒ１１、－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＨ２）ｍ－Ｒ１１であり、
    ｑ２が、０又は１であり、
    ｍ４が、０、１又は２であり、
    Ｒ１１が、水素、メチル、ベンジル、ピリジル、イミダゾリル又は基－（Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２）ｐ３－Ｏ－ＣＨ３であり、
    ｐ３が、１～１１であり、
    Ｒ ２ が、－Ｈであり、
    Ｒ ３ が、－ＣＨ２－ＯＨ基であり、
    Ｒ ５ が、－Ｈであり、
    Ｒ ６ 及びＲ ７ が独立に、フッ素であり、
    Ｒ ８ が、ｔ－ブチルであり、
    Ｒ ９ が、－Ｈであり、
    （＊）が、薬物分子への結合であり、
    （＊＊）が、抗体又は抗原結合性抗体断片への結合であり、
    （＊＊＊）が、基Ｍへの結合である。］
  29. 下記式（ＸＩ）又は（ＸＩ′）の構造を有する、請求項９に記載の複合体又はそれの塩、溶媒和物もしくは溶媒和物の塩。
    Figure 0007251981000609
     ［式中、
    ＡＫは、抗体又は抗原結合性抗体断片であり、
    ｎ２は、１～５０、好ましくは１～２０、より好ましくは２～８、特別には２～６の数字であり、
    Ｘ１はＮであり、
    Ｘ２はＮであり、及び
    Ｘ３はＣであり；
    又は
    Ｘ１はＮであり、
    Ｘ２はＣであり、及び
    Ｘ３はＮであり；
    又は
    Ｘ１はＣＨ又はＣＦであり、
    Ｘ２はＣであり、及び
    Ｘ３はＮであり；
    又は
    Ｘ１はＮＨであり、
    Ｘ２はＣであり、及び
    Ｘ３はＣであり；
    又は
    Ｘ１はＣＨであり、
    Ｘ２はＮであり、及び
    Ｘ３はＣであり、
    Ｍは、下記の基：
    Figure 0007251981000610
     であり、
    Ｒ １２ は、下記の基：
    （＊＊＊）－Ｃ（＝Ｏ）－（＊＊）、（＊）－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ（＊＊）－ＣＨ２－ＣＯＯＨ、
    （＊＊＊）－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ２－ＣＨ（＊＊）－ＣＯＯＨ、又は
    Figure 0007251981000611
     であり、
    Ｒ １ は、下記の基：
    Figure 0007251981000612
     であり、
    Ｘは、－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２であり、
    Ｒｘ及びＲｙは、－ＣＨ３、プロピルであり、
    Ｒ１０は、－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＨ２）－Ｒ１１、－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｐ３－ＣＨ３であり、
    Ｒ１１は、水素、ピリジルであり、
    ｐ３は、８～１２であり、
    Ｒ ５ は、－Ｈであり、
    Ｒ ６ 及びＲ ７ は独立に、フッ素であり、
    Ｒ ８ は、ｔ－ブチルであり、
    Ｒ ９ は、－Ｈであり、
    （＊）は、薬物分子への結合であり、
    （＊＊）は、抗体又は抗原結合性抗体断片への結合であり、
    （＊＊＊）は、基Ｍへの結合である。］
  30. 下記式（ＸＩ）又は式（ＸＩ’）の構造を有する請求項２９に記載の複合体。
    Figure 0007251981000613
    ［式中、
    Ｘ１がＣＨであり、
    Ｘ２がＣであり、及び
    Ｘ３がＮである。］
  31. 下記の構造を有する、請求項１に記載の複合体。
    ［式中、
    ＡＫは、抗体又は抗原結合性抗体断片（ＡＫ１、ＡＫ２、ＡＫ３）であり、
    ＡＫ１は、好ましくはシステイン残基を介してＫＳＰ阻害剤に結合した抗体であり、
    ＡＫ２は、好ましくはリジン残基を介してＫＳＰ阻害剤に結合した抗体であり、
    ＡＫ３は、好ましくはグルタミン残基を介してＫＳＰ阻害剤に結合した抗体であり、
    ｎは、１～５０、好ましくは１～２０、より好ましくは２～８、特別には２～６の数字である。］
    Figure 0007251981000614
    Figure 0007251981000615
    Figure 0007251981000616
    Figure 0007251981000617
    Figure 0007251981000618
    Figure 0007251981000619
    Figure 0007251981000620
    Figure 0007251981000621
    Figure 0007251981000622
    Figure 0007251981000623
    Figure 0007251981000624
    Figure 0007251981000625
    Figure 0007251981000626
    Figure 0007251981000627
    Figure 0007251981000628
    Figure 0007251981000629
    Figure 0007251981000630
    Figure 0007251981000631
    Figure 0007251981000632
    Figure 0007251981000633
    Figure 0007251981000634
    Figure 0007251981000635
    Figure 0007251981000636
    Figure 0007251981000637
    Figure 0007251981000638
    Figure 0007251981000639
  32. 抗体又はその抗原結合性抗体断片が細胞外がん標的分子に結合する、請求項１から３１のいずれか一項に記載の複合体。
  33. 抗体又はその抗原結合性抗体断片が、標的細胞上のそれの細胞外標的分子に結合した後、その結合を介して標的細胞に取り込まれる、請求項１から３２のいずれか一項に記載の複合体。
  34. 抗体又はその抗原結合性抗体断片が、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗Ｂ７Ｈ３抗体、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体、又はこれらの抗原結合性抗体断片である、請求項１から３３のいずれか一項に記載の複合体。
  35. 抗ＴＷＥＡＫＲ抗体がＴＰＰ－７００６、ＴＰＰ－７００７、ＴＰＰ－１０３３６及びＴＰＰ－１０３３７からなる群から選択され、抗Ｂ７Ｈ３抗体がＴＰＰ－８３８２及びＴＰＰ－８５６７からなる群から選択され、抗ＥＧＦＲ抗体がセツキシマブ（ＴＰＰ－９８１）であり、抗ＨＥＲ２抗体がトラスツズマブ及びＴＰＰ－１０１５からなる群から選択される、請求項３４に記載の複合体。
  36. 抗体又はその抗原結合性抗体断片が、
    （ｉ）配列番号２によって示される重鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｈ－ＣＤＲ１）、配列番号３によって示される重鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｈ－ＣＤＲ２）及び配列番号４によって示される重鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖の可変領域（ＶＨ）、並びに配列番号６によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｌ－ＣＤＲ１）、配列番号７によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｌ－ＣＤＲ２）及び配列番号８によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖の可変領域（ＶＬ）を含む抗ＥＧＦＲ抗体であり、
    （ｉｉ）配列番号１２によって示される重鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｈ－ＣＤＲ１）、配列番号１３によって示される重鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｈ－ＣＤＲ２）及び配列番号１４によって示される重鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖の可変領域（ＶＨ）、並びに配列番号１６によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｌ－ＣＤＲ１）、配列番号１７によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｌ－ＣＤＲ２）及び配列番号１８によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖の可変領域（ＶＬ）を含む抗ＨＥＲ２抗体であり、
    （ｉｉｉ）配列番号２２によって示される重鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｈ－ＣＤＲ１）、配列番号２３によって示される重鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｈ－ＣＤＲ２）及び配列番号２４によって示される重鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖の可変領域（ＶＨ）、並びに配列番号２６によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｌ－ＣＤＲ１）、配列番号２７によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｌ－ＣＤＲ２）及び配列番号２８によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖の可変領域（ＶＬ）を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体であり、
    （ｉｖ）配列番号３２によって示される重鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｈ－ＣＤＲ１）、配列番号３３によって示される重鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｈ－ＣＤＲ２）及び配列番号３４によって示される重鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖の可変領域（ＶＨ）、並びに配列番号３６によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｌ－ＣＤＲ１）、配列番号３７によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｌ－ＣＤＲ２）及び配列番号３８によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖の可変領域（ＶＬ）を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体であり、
    （ｖ）配列番号４２によって示される重鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｈ－ＣＤＲ１）、配列番号４３によって示される重鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｈ－ＣＤＲ２）及び配列番号４４によって示される重鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖の可変領域（ＶＨ）、並びに配列番号４６によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｌ－ＣＤＲ１）、配列番号４７によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｌ－ＣＤＲ２）及び配列番号４８によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖の可変領域（ＶＬ）を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体であり、
    （ｖｉ）配列番号５２によって示される重鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｈ－ＣＤＲ１）、配列番号５３によって示される重鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｈ－ＣＤＲ２）及び配列番号５４によって示される重鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖の可変領域（ＶＨ）、並びに配列番号５６によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｌ－ＣＤＲ１）、配列番号５７によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｌ－ＣＤＲ２）及び配列番号５８によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖の可変領域（ＶＬ）を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体であり、
    （ｖｉｉ）配列番号６２によって示される重鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｈ－ＣＤＲ１）、配列番号６３によって示される重鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｈ－ＣＤＲ２）及び配列番号６４によって示される重鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖の可変領域（ＶＨ）、並びに配列番号６６によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｌ－ＣＤＲ１）、配列番号６７によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｌ－ＣＤＲ２）及び配列番号６８によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖の可変領域（ＶＬ）を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体であり、
    （ｖｉｉｉ）配列番号７２によって示される重鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｈ－ＣＤＲ１）、配列番号７３によって示される重鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｈ－ＣＤＲ２）及び配列番号７４によって示される重鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖の可変領域（ＶＨ）、並びに配列番号７６によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｌ－ＣＤＲ１）、配列番号７７によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｌ－ＣＤＲ２）及び配列番号７８によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖の可変領域（ＶＬ）を含む抗ＨＥＲ２抗体であり、
    （ｉｘ）配列番号８２によって示される重鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｈ－ＣＤＲ１）、配列番号８３によって示される重鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｈ－ＣＤＲ２）及び配列番号８４によって示される重鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖の可変領域（ＶＨ）、並びに配列番号８６によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｌ－ＣＤＲ１）、配列番号８７によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｌ－ＣＤＲ２）及び配列番号８８によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖の可変領域（ＶＬ）を含む抗ＨＥＲ２抗体であり、
    （ｘ）配列番号９２によって示される重鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｈ－ＣＤＲ１）、配列番号９３によって示される重鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｈ－ＣＤＲ２）及び配列番号９４によって示される重鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖の可変領域（ＶＨ）、並びに配列番号９６によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｌ－ＣＤＲ１）、配列番号９７によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｌ－ＣＤＲ２）及び配列番号９８によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖の可変領域（ＶＬ）を含む抗Ｂ７Ｈ３抗体であり、
    （ｘｉ）配列番号１０２によって示される重鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｈ－ＣＤＲ１）、配列番号１０３によって示される重鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｈ－ＣＤＲ２）及び配列番号１０４によって示される重鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖の可変領域（ＶＨ）、並びに配列番号１０６によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｌ－ＣＤＲ１）、配列番号１０７によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｌ－ＣＤＲ２）及び配列番号１０８によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖の可変領域（ＶＬ）を含む抗Ｂ７Ｈ３抗体であり、
    （ｘｉｉ）配列番号１１２によって示される重鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｈ－ＣＤＲ１）、配列番号１１３によって示される重鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｈ－ＣＤＲ２）及び配列番号１１４によって示される重鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖の可変領域（ＶＨ）、並びに配列番号１１６によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｌ－ＣＤＲ１）、配列番号１１７によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｌ－ＣＤＲ２）及び配列番号１１８によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖の可変領域（ＶＬ）を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体であり、
    （ｘｉｉｉ）配列番号１２２によって示される重鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｈ－ＣＤＲ１）、配列番号１２３によって示される重鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｈ－ＣＤＲ２）及び配列番号１２４によって示される重鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖の可変領域（ＶＨ）、並びに配列番号１２６によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｌ－ＣＤＲ１）、配列番号１２７によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｌ－ＣＤＲ２）及び配列番号１２８によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖の可変領域（ＶＬ）を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体であり、
    （ｘｉｖ）配列番号１３２によって示される重鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｈ－ＣＤＲ１）、配列番号１３３によって示される重鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｈ－ＣＤＲ２）及び配列番号１３４によって示される重鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖の可変領域（ＶＨ）、並びに配列番号１３６によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｌ－ＣＤＲ１）、配列番号１３７によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｌ－ＣＤＲ２）及び配列番号１３８によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖の可変領域（ＶＬ）を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体であり、
    （ｘｖ）配列番号１４２によって示される重鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｈ－ＣＤＲ１）、配列番号１４３によって示される重鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｈ－ＣＤＲ２）及び配列番号１４４によって示される重鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖の可変領域（ＶＨ）、並びに配列番号１４６によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｌ－ＣＤＲ１）、配列番号１４７によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｌ－ＣＤＲ２）及び配列番号１４８によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖の可変領域（ＶＬ）を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体であり、
    若しくは
    （ｘｖｉ）配列番号１５２によって示される重鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｈ－ＣＤＲ１）、配列番号１５３によって示される重鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｈ－ＣＤＲ２）及び配列番号１５４によって示される重鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｈ－ＣＤＲ３）を含む重鎖の可変領域（ＶＨ）、並びに配列番号１５６によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ１配列（Ｌ－ＣＤＲ１）、配列番号１５７によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ２配列（Ｌ－ＣＤＲ２）及び配列番号１５８によって示される軽鎖の可変ＣＤＲ３配列（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む軽鎖の可変領域（ＶＬ）を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体であり、
    又は
    これらの抗体の抗原結合性断片である、請求項１から３５のいずれか一項に記載の複合体。
  37. 抗体又はその抗原結合性抗体断片が、
    （ｉ）配列番号１に相当する重鎖（ＶＨ）の可変領域及び配列番号５に相当する軽鎖（ＶＬ）の可変領域を含む抗ＥＧＦＲ抗体であり、
    （ｉｉ）配列番号１１に相当する重鎖（ＶＨ）の可変領域及び配列番号１５に相当する軽鎖（ＶＬ）の可変領域を含む抗ＨＥＲ２抗体であり、
    （ｉｉｉ）配列番号２１に相当する重鎖（ＶＨ）の可変領域及び配列番号２５に相当する軽鎖（ＶＬ）の可変領域を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体であり、
    （ｉｖ）配列番号３１に相当する重鎖（ＶＨ）の可変領域及び配列番号３５に相当する軽鎖（ＶＬ）の可変領域を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体であり、
    （ｖ）配列番号４１に相当する重鎖（ＶＨ）の可変領域及び配列番号４５に相当する軽鎖（ＶＬ）の可変領域を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体であり、
    （ｖｉ）配列番号５１に相当する重鎖（ＶＨ）の可変領域及び配列番号５５に相当する軽鎖（ＶＬ）の可変領域を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体であり、
    （ｖｉｉ）配列番号６１に相当する重鎖（ＶＨ）の可変領域及び配列番号６５に相当する軽鎖（ＶＬ）の可変領域を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体であり、
    （ｖｉｉｉ）配列番号７１に相当する重鎖（ＶＨ）の可変領域及び配列番号７５に相当する軽鎖（ＶＬ）の可変領域を含む抗ＨＥＲ２抗体であり、
    （ｉｘ）配列番号８１に相当する重鎖（ＶＨ）の可変領域及び配列番号８５に相当する軽鎖（ＶＬ）の可変領域を含む抗ＨＥＲ２抗体であり、
    （ｘ）配列番号９１に相当する重鎖（ＶＨ）の可変領域及び配列番号９５に相当する軽鎖（ＶＬ）の可変領域を含む抗Ｂ７Ｈ３抗体であり、
    （ｘｉ）配列番号１０１に相当する重鎖（ＶＨ）の可変領域及び配列番号１０５に相当する軽鎖（ＶＬ）の可変領域を含む抗Ｂ７Ｈ３抗体であり、
    （ｘｉｉ）配列番号１１１に相当する重鎖（ＶＨ）の可変領域及び配列番号１１５に相当する軽鎖（ＶＬ）の可変領域を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体であり、
    （ｘｉｉｉ）配列番号１２１に相当する重鎖（ＶＨ）の可変領域及び配列番号１２５に相当する軽鎖（ＶＬ）の可変領域を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体であり、
    （ｘｉｖ）配列番号１３１に相当する重鎖（ＶＨ）の可変領域及び配列番号１３５に相当する軽鎖（ＶＬ）の可変領域を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体であり、
    （ｘｖ）配列番号１４１に相当する重鎖（ＶＨ）の可変領域及び配列番号１４５に相当する軽鎖（ＶＬ）の可変領域を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体であり、若しくは
    （ｘｖｉ）配列番号１５１に相当する重鎖（ＶＨ）の可変領域及び配列番号１５５に相当する軽鎖（ＶＬ）の可変領域を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体であり、又は
    これらの抗体の抗原結合性断片である、請求項１から３６のいずれか一項に記載の複合体。
  38. 抗体又はその抗原結合性抗体断片が、
    （ｉ）配列番号９に相当する重鎖の領域及び配列番号１０に相当する軽鎖の領域を含む抗ＥＧＦＲ抗体であり、
    （ｉｉ）配列番号１９に相当する重鎖の領域及び配列番号２０に相当する軽鎖の領域を含む抗ＨＥＲ２抗体であり、
    （ｉｉｉ）配列番号２９に相当する重鎖の領域及び配列番号３０に相当する軽鎖の領域を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体であり、
    （ｉｖ）配列番号３９に相当する重鎖の領域及び配列番号４０に相当する軽鎖の領域を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体であり、
    （ｖ）配列番号４９に相当する重鎖の領域及び配列番号５０に相当する軽鎖の領域を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体であり、
    （ｖｉ）配列番号５９に相当する重鎖の領域及び配列番号６０に相当する軽鎖の領域を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体であり、
    （ｖｉｉ）配列番号６９に相当する重鎖の領域及び配列番号７０に相当する軽鎖の領域を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体であり、
    （ｖｉｉｉ）配列番号７９に相当する重鎖の領域及び配列番号８０に相当する軽鎖の領域を含む抗ＨＥＲ２抗体であり、
    （ｉｘ）配列番号８９に相当する重鎖の領域及びに配列番号９０相当する軽鎖の領域を含む抗ＨＥＲ２抗体であり、
    （ｘ）配列番号９９に相当する重鎖の領域及び配列番号１００に相当する軽鎖の領域を含む抗Ｂ７Ｈ３抗体であり、
    （ｘｉ）配列番号１０９に相当する重鎖の領域及び配列番号１１０に相当する軽鎖の領域を含む抗Ｂ７Ｈ３抗体であり、
    （ｘｉｉ）配列番号１１９に相当する重鎖の領域及び配列番号１２０に相当する軽鎖の領域を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体であり、
    （ｘｉｉｉ）配列番号１２９に相当する重鎖の領域及び配列番号１３０に相当する軽鎖の領域を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体であり、
    （ｘｉｖ）配列番号１３９に相当する重鎖の領域及び配列番号１４０に相当する軽鎖の領域を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体であり、
    （ｘｖ）配列番号１４９に相当する重鎖の領域及び配列番号１５０に相当する軽鎖の領域を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体であり、若しくは
    （ｘｖｉ）配列番号１５９に相当する重鎖の領域及び配列番号１６０に相当する軽鎖の領域を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体であり、又は
    これらの抗体の抗原結合性断片である、請求項１から３７のいずれか一項に記載の複合体。
  39. 不活性の無毒で薬学的に好適な賦形剤と組み合わせて請求項１から３８のいずれか一項に記載の複合体を含む医薬組成物。
  40. 疾患の治療及び／又は予防方法で使用するための請求項１から３８のいずれか一項に記載の複合体。
  41. 過剰増殖性障害及び／又は血管新生障害の治療方法で使用するための請求項１から３８及び４０のいずれか一項に記載の複合体。
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