DE69317979T2 - PEG-Interferon-Konjugate - Google Patents

PEG-Interferon-Konjugate

Info

Publication number
DE69317979T2
DE69317979T2 DE69317979T DE69317979T DE69317979T2 DE 69317979 T2 DE69317979 T2 DE 69317979T2 DE 69317979 T DE69317979 T DE 69317979T DE 69317979 T DE69317979 T DE 69317979T DE 69317979 T2 DE69317979 T2 DE 69317979T2
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
interferon
conjugate
peg
daltons
compound
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
DE69317979T
Other languages
English (en)
Other versions
DE69317979D1 (de
Inventor
Robert Karasiewicz
Carlo Nalin
Perry Rosen
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
F Hoffmann La Roche AG
Original Assignee
F Hoffmann La Roche AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by F Hoffmann La Roche AG filed Critical F Hoffmann La Roche AG
Publication of DE69317979D1 publication Critical patent/DE69317979D1/de
Application granted granted Critical
Publication of DE69317979T2 publication Critical patent/DE69317979T2/de
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/555—Interferons [IFN]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/62—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D213/63—One oxygen atom
    • C07D213/64—One oxygen atom attached in position 2 or 6
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C69/00—Esters of carboxylic acids; Esters of carbonic or haloformic acids
    • C07C69/96—Esters of carbonic or haloformic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/555—Interferons [IFN]
    • C07K14/56—IFN-alpha
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Description

  • Verschiedene natürliche und rekominante Proteine sind von medizinischem und pharmazeutischem Nutzen. Wenn sie gereinigt und formuliert sind, können sie parenteral für verschiedene therapeutische Indikationen verabreicht werden. Parenteral verabreichte Proteine können jedoch immunogen sein, können relativ wasserunlöslich sein und können eine kurze pharmakologische Halbwertzeit haben. Daher kann es schwierig sein, therapeutisch nützliche Blutspiegel der Proteine bei Patienten zu erreichen.
  • Diese Probleme können überwunden werden, indem die Proteine an Polymere, wie Polyethylenglykol, konjugiert werden. Davis et al. offenbaren in US-Patent Nr. 4 179 337 die Konjugation von Polyethylenglykol (PEG) an Proteine, z.B. Enzyme und Insulin, um Konjugate zu erhalten, bei denen das Protein weniger immunogen ist, aber einen wesentlichen Anteil der physiologischen Aktivität behält. Nakagawa et al. (US-Patent Nr. 4 791 192) offenbaren, PEG an inselzellenaktivierendes Protein zu konjugieren, um dessen Nebenwirkungen und die Immunogenität zu vermindern. Veronese et al. offenbaren in Applied Biochem. and Biotech. 11: 141-152 (1985) die Aktivierung von Polyethylenglykolen mit Phenylchlorformiaten, um eine Ribonuclease und eine Superoxiddismutase zu modifizieren. Katre et al offenbaren auch in den US-Patenten Nr. 4 766 106 und 4 917 888 die Solubilisierung von Proteinen durch Polymerkonjugation. PEG und andere Polymere werden mit rekombinaten Proteinen konjugiert, um deren Immonogenität zu vermindern und die Halbwertszeit zu erhöhen. Siehe Nitecki et al., US-Patent Nr. 4 902 502, Enzon Inc, Internationale Patentanmeldung Veröffentlichungsnummer. WO 90113540, Nishimura et al, Europaische Patentanmeldung 154 316 and Tomasi, Internationale Anmeldung Veröffentlichungsnummer WO 86/04145.
  • EP 426 488 beschreibt die Kupplung eines PEG/PPG-Polymers an Superoxiddismutase, wobei die entstehende Verbindung die Formel PEG/PPG-O-CO-NH-SOD hat.
  • Frühere Methoden zur Bildung von PEG/Proteinkonjugaten und die Konjugate, die mit diesen Methoden entstehen, weisen mehrere Probleme auf. Zu diesen Problemen gehört, daß bestimmte Methoden zur Bildung dieser mit PEG konjugierten Proteine das Protein so inaktivieren können, daß die entstehenden Konjugate eine geringe biologische Aktivität aufweisen. Außerdem können bestimmte Linker, die zur Bildung dieser PEG-Protein- Konjugate verwendet werden, empfindlich sein für eine hydrolytische Spaltung in vivo. Wenn eine solche Spaltung nach Verabreichung auftritt, verlieren die Konjugate die nützlichen Eigenschaften, die das PEG beiträgt.
  • Eine Ausführungsform der Erfindung sind neue Interferon-PEG- Konjugate mit einzigartigen Linkern, die eine Interferon(IFN)-Aminogruppe mit PEG verbinden. Die vorliegende Erfindung ist auf physiologisch aktive Interferonkonjugate der allgemeinen Formel: interferon
  • gerichtet, worin R ein C&sub1;-C&sub4;-Alkylrest ist, R¹, R², R³ und R&sup4; H oder C&sub1;-C&sub4;-Alkylreste sind,
  • m 1 oder 2 ist,
  • W O oder NH ist,
  • x eine ganze Zahl zwischen 1 und 1000 ist und jeder der Indices y und z eine ganze Zahl von 0 bis 1000 ist und die Summe von x, y und z 3 bis 1000 ist, mit der Maßgabe, daß mindestens einer der Reste R¹, R², R³ und R&sup4; ein C&sub1;-C&sub4;-Alkylrest ist und x, y und z so ausgewählt sind, daß das Molekulargewicht der Polymereinheit in dem Konjugat im Bereich von etwa 1000 Dalton bis etwa 10000 Dalton ist.
  • Es ist selbstverständlich, das die -NH-Gruppe in Formel I von einer zugänglichen Aminogruppe des Interferonmoleküls stammt.
  • Genauer haben die zwei verschiedenen Interferonkonjugate die folgenden Formeln: interferon
  • worin R ein C&sub1;-C&sub4;-Alkylrest ist, R¹, R², R³, R&sup4; H oder C&sub1;-C&sub4;- Alkylreste sind, m 1 oder 2 ist, x, y, z wie in Formel I oben definiert sind, mit der in Formel I oben erwähnten Maßgabe.
    • Kurze Beschreibung der Figuren Figur 1: Zeitverlauf der PEG-Modifizierung mit der Verbindung von Beispiel 7
  • Interferon (5 mg/ml) wurde mit einem 10-fachen, 20-fachen oder 40-fachen überschuß des Reagenzes bezogen auf Protein über die angegebenen Zeiträume mit 25 mM Tricin (pH 10,0) 0,5 M KSCN, 100 mM NaCl inkubiert. Zu verschiedenen Zeitpunkten wurden Aliquots entnommen, mit Glycin abgeschreckt und an einem 15% SDS-PAGE-Gel analysiert. "I" auf der Markierung steht für Interferon.
    • Figur 2: Zeitverlauf der PEG-Modifizierung mit der Verbindung von Beispiel 5
  • Interferon wurde mit einem 3-fachen oder mit einem 10-fachen Überschuß an Reagenz über die angegebenen Zeiträume, wie in Figur 1, inkubiert. Zu den angegebenen Zeitpunkten wurden Aliquots entnommen, mit Glycin abgeschreckt und an einem 15% SDS-PAGE-Gel analysiert. "S" ist die Bezeichnung für Proteinmolekulargewichtstandards, "I" ist die Bezeichnung für Interferon.
    • Figur 3: Vergleich der PEG-Modifizierung mit der Verbindung von Beispiel 1 (linke Seite) und von Beispiel 3 (rechte Seite)
  • Interferon wurde mit einem 3-fachen Überschuß jeden Reagenzes 0,25, 1,5 oder 24 Stunden lang inkubiert. Es wurden Aliquots entnommen, mit Glycin abgeschreckt und an einem 15% SDS-PAGE- Gel analysiert. "S" ist die Bezeichnug für Proteinmolekulargewichtsstandard, "I" ist die Bezeichnung für Interferon.
  • Erfindungsgemäß können die IFN-Konjugate der Formel IA und IB hergestellt werden, indem aktiviertes PEG, bei dem eine endständige Hydroxy- oder Aminogruppe durch einen aktivierten Linker ersetzt wurde, kondensiert wird. Diese Reagenzien können dann mit einer oder mehreren Aminogruppen in dem IFN reagieren. Die Kondensation mit nur einer Aminogruppe unter Bildung eines mono-PEG-ylierten Konjugates ist eine bevorzugte Ausführungsform der Erfindung. Daher betrifft die Erfindung auch neue aktivierte Verbindungen (Reagenzien), die verwendet werden können, um die Interferonkonjugate der vorliegenden Verbindung herzustellen. Diese Verbindungen haben die folgenden allgemeinen Formeln:
  • worin R ein C&sub1;-C&sub4;-Alkylrest ist, R¹, R², R³ und R&sup4; H oder C&sub1;-C&sub4;- Alkylreste sind, mit der Maßgabe, daß mindestens einer der Reste R¹, R², R³ und R&sup4; ein C&sub1;-C&sub4;-Alkylrest ist,
  • R&sup5; H oder ein C&sub1;-C&sub4;-Alkylrest ist, wenn W NH ist oder R&sup5; H ist, wenn W ZO ist, W NH oder O ist,
  • x eine ganze Zahl zwischen 1 und 1000 ist und jeder der Indices y und z eine ganze Zahl von 0 bis 1000 ist und die Summe von x, y und z 3 bis 1000 ist und x, y und z so ausgewählt werden, daß das Molekulargewicht der Polymereinheit im Konjugat im Bereich von etwa 1000 Dalton bis etwa 10000 Dalton liegt, und
  • worin R ein C&sub1;-C&sub4;-Alkylrest ist, R¹, R², R³ und R&sup4; H oder C&sub1;-C&sub4;- Alkylreste sind, x eine ganze Zahl von 1 bis 1000 ist und jeder der Indices y und z eine ganze Zahl von 0 bis 1000 ist, und die Summe von x, y und z 3 bis 1000 ist, wobei mindestens einer der Reste R¹, R², R³ und R&sup4; ein C&sub1;-C&sub4;-Alkylrest ist und wobei x, y und z so ausgewählt sind, daß das Molekulargewicht der Verbindung im Bereich von etwa 1000 Dalton bis etwa 10000 Dalton liegt.
  • Genauer schließt die Formel II Verbindungen der folgenden zwei Arten ein:
  • Für IIA und IIB sind R, R¹, R², R³, R&sup4;, R&sup5; und x, y und z wie oben definiert und es gilt dieselbe Maßgabe wie oben.
  • Erfindungsgemäß wird unter Verwendung der aktivierten PEG- Reagenzien der Formeln IIA, IIB oder III zur Erzeugung der Konjugate, eine Verbindung zwischen den freien Aminogruppen in einem Protein, wie Interferon (IFN), und PEG gebildet, sodaß das entstehende Konjugat mindestens ein Teil der biologischen Aktivität des Proteins behält bei verminderter Immogenität. Außerdem erzeugen die Verbindungsgruppen, die in dem Konjugat der Erfindung gebildet werden, durch die Verwendung irgendeines der aktivierten Polyethylenglykole der Formeln IIA, IIB oder III ein Proteinkonjugat, das nicht leicht einer hydrolytischen Spaltung in vivo unterliegt und nicht die Nachteile, die bei PEG-Proteinkonjugaten des Standes der Technik vorhanden sind, aufweist.
  • Erfindungsgemäß können R, R¹, R², R³, R&sup4;, R&sup5; irgendwelche Niedrigalkylgruppen sein, bevorzugt Methylgruppen. Der Ausdruck Niedrigalkylgruppe bezeichnet Niedrigalkylgruppen, die 1 bis 6 Kohlenstoffatome enthalten, z.B. Methyl-, Ethyl-, n- Propyl-, Isopropylgruppen etc. Im allgemeinen ist die bevorzugte Alkylgruppe eine Niedrigalkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, wobei eine Methylgruppe am meisten bevorzugt ist. R, R¹, R², R³, R&sup4; und R&sup5; können auch Wasserstoff sein, aber R¹, R², R³ und R&sup4; können nicht alle gleichzeitig Wasserstoff sein.
  • Erfindungsgemäß können x, y und z aus irgendeiner Kombination von Zahlen ausgewählt werden, sodaß das entstehende Konjugat mindestens einen Teil der biologischen Aktivität des IFN, das das Konjugat bildet, behält. Es ist offensichtlich, daß die Summe von x, y und z und m umgekehrt proportional zum Anteil der biologischen Aktivität des IFN ist, die in dem Konjugat erthalten bleibt. Der numerische Wert für x, y und z bedeutet die Anzahl von Glykoleinheiten in dem Polyglykol, das das Konjugat bildet. Der Term m bedeutet die Anzahl von freien oder verfügbaren Aminogruppen, die in dem IFN enthalten sind, die mit der aktivierten PEG-Mischung reagieren können. Je höher der Wert für m und für x, y und z ist, desto höher ist das Molekulargewicht des Konjugats. Erfindungsgemäß sind x, y und z irgendwelche Zahlen, sodaß das Molekulargewicht des Konjugats, unter Ausschluß des Gewichts des Proteins, zwischen etwa 300 und etwa 30000 Dalton liegt. Für IFN ist es bevorzugt, daß m eine Zahl von 1 bis 3 ist. Eine besonders bevorzugte Ausführungsform ist ein mono-PEG-yliertes Konjugat, worin m 1 ist, das unter solchen Bedingungen hergestellt wurde, das eine hohe Ausbeute an IFN-Konjugat erhalten wird, das aus IFN aufgebaut ist, bei dem nur eine freie Aminogruppe mit dem PEG-Reagenz der Formel IIA oder IIB oder III reagiert hat. Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform, bei der m 1 ist, sind x, y und z solche Zahlen, daß das Glykol, das das Konjugat bildet, ein durchschnittliches Molekulargewicht von etwa 300 bis etwa 30000 Dalton, bevorzugt etwa 1000 bis etwa 10000 Dalton, insbesondere etwa 1000 bis etwa 5000 Dalton hat. In einer besonders bevorzugten Ausführungsform ist das Molekulargewicht etwa 2000 Dalton.
  • Was die Zahlen x, y und z der Einheiten betrifft, ist x eine ganze Zahl von 1 bis 1000 und jeder der Indices y und x ist eine ganze Zahl von 0 bis 1000 und die Summe von x, y und z ist 3 bis 1000.
  • In einer bevorzugten Ausführungsform der Konjugate der Formeln IA und IB sind x und y 5 bis 500 und z ist 0 bis 4. In einer besonders bevorzugten Ausführungsform ist das verwendete Glykol eine Mischung von Glykolen, worin x 10 bis 100 ist, y 1 bis 10 ist und z 0 ist. Am meisten bevorzugt ist ein Interferonkonjugat der Formel IA, worin m 1 ist, R, R² und R&sup4; CH&sub3; sind, R¹ H ist, x etwa 19 ist, y etwa 2 und z 0 ist. Dieses entspricht einem durchschnittlichen Molekulargewicht der PEG-Einheit von etwa 1000 Dalton.
  • Um irgendwelche Zweifel im Hinblick auf die Anzahl der Einheiten in dem PEG-Molekül zu vermeiden, ist die Charakterisierung des Polyethylenglykolpolymers durch das Molekulargewicht bevorzugt gegenüber einer Angabe der Anzahl der sich wiederholenden Einheiten (SRU) in dem PEG-Polymer durch x, y und z. Es kann schwierig sein, diese Werte festzustellen, aufgrund der potentiellen Inhomogenität der Ausgangs-PEG- Verbindungen, die gewöhnlich durch ihr durchschnittliches Molekulargewicht und nicht durch die Anzahl der sich wiederholenden Einheiten, die sie enthalten, definiert werden. Die Ausgangs-PEG-Verbindungen mit verschiedenen Molekulargewichten können mit im Stand der Technik bekannten Methoden hergestellt werden oder von kommerziellen Lieferanten erhalten werden.
  • Wenn die Werte für x, y und z, die durch Bestimmung der Molekulargewichte erhalten werden, oder vom Lieferanten angegeben werden, keine ganze Zahlen sind (was gewöhnlich der Fall ist) müssen ihre Werte in üblicher Weise auf- oder abgerundet werden, um eine Zuordnung der ganzen Zahlen zu dem Polymermolekül, das wahrscheinlich den Hauptteil der Polymermischung bildet, zu ermöglichen.
  • Wenn das Reagenz gemäß einer der Formeln IIA, IIB oder III mit einem IFN umgesetzt wird, das mehr als eine freie Aminogruppe enthält, kann das Konjugat als Mischung verschiedener Reaktionsprodukte von IFN mit PEG-Reagenzmischungen hergestellt werden. Diese Reaktionsprodukte bilden sich als Ergebnis der Reaktion des PEG-Reagenzes mit einer oder mehreren freien Aminogruppen. Dies wird durch m in den Formeln IA und IB angegeben. Wenn z.B. das IFN drei freie Aminogruppen enthält, kann das aktivierte PEG-Reagenz mit einer der freien Aminogruppen, mit zwei der freien Aminogruppen oder mit allen drei reagieren. In dieser Situation enthält die Mischung konjugierte Reaktionsprodukte, die sich in allen drei Fällen gebildet haben. Da die verschiedenen konjugierten Reaktionsprodukte in dieser Mischung breit differierende Molekulargewichte haben, abhängig von dem Wert für m, d.h. 1, 2 oder 3, können diese Reaktionsprodukte mit üblichen Methoden, wie Chromatographie, getrennt werden. Um zu bestimmen, ob m und x, y und z richtig ausgewählt wurden, können die getrennten konjugierten Reaktionsprodukte auf ihre biologische Aktivität untersucht werden mit den gleichen Mittel, die verwendet werden, um das Stamm-IFN zu screenen, um zu bestimmen, ob das konjugierte Reaktionsprodukt immer noch einen Teil der biologischen Aktivität des zur Bildung des Konjugats verwendeten IFN's behalten hat. Auf diese Weise können die Zahlen m, x, y und z in irgendeiner gewünschten Art und Weise eingestellt werden, um die gewünschte Aktivität zu liefern.
  • Bei der bevorzugten Ausführungsform ist m 1. Wenn m 1 ist, kann dieses Konjugat auch erhalten werden, wenn zwei oder mehr freie Aminogruppen vorhanden sind. Das aktivierte PEG- Reagenz reagiert zuerst mit einer der freien Aminogruppen, die in dem IFN enthalten sind. Indem die Konzentration der Reagenzien, z.B. des IFN, und die Reaktionsbedingungen gemäß Standardmethoden der Aminkondensation eingestellt werden, kann der Grad der Pegylierung der freien Aminogruppen, die in dem Protein enthalten sind, eingestellt werden. Bei Proteinen, die eine oder mehr freie Aminogruppen enthalten, wobei eine der freien Aminogruppe aktiver als die anderen Aminogruppen ist, können die Bedingungen so ausgewählt werden, daß das Protein mit der aktivierten Verbindung umgesetzt wird unter Bildung der Verbindung der Formel IA oder IB, worin m 1 ist. Andere freie Aminogruppen, die innerhalb der Aminosäuren vorhanden sind, die das Protein bilden, können nachfolgend mit dem PEG umgesetzt werden, indem die Kondensationsreaktion länger durchgeführt wird oder indem strengere Bedingungen verwendet werden.
  • In der vorliegenden Beschreibung und den Anspüchen sollen die Ausdrücke Interferon und IFN alle Arten von Interferon (d.h. Moleküle mit einer Interferonaktivität) einschließen, z.B. α-, β-, γ- und ω-Interferon, und alle Unterarten dieser Typen, z.B. α1, α2, α2A, α2B oder α2C und Hybride oder Chimere der verschiedenen Arten und/oder Unterarten. Das Interferon kann jeden Ursprungs sein und kann aus natürlichen Quellen, Gewebekulturen oder durch Gentechnik erhalten werden. Methoden zur Erzeugung und Isolierung von natürlichen oder rekombinanten Interferonen sind im Stand der Technik wohlbekannt und werden z.B. in den Patentanmeldungen mit den Veröffentlichungsnummern EP 43 980, EP 211 148, EP 140 127, DE 3 028 919, USP 4503035 und USP 4414150 beschrieben.
  • Der Vorteil der Verwendung der Reagenzien der Formeln IIA, IIB und III, worin mindestens einer der Reste R¹, R², R³, R&sup4; ein Niedrigalkylrest, insbesondere ein Methylrest ist (alkylsubstituierte Reagenzien) liegt in der unerwartenden Verbesserung der Ausbeute des Konjugats, d.h. des PEG-ylierten Proteins, wenn die alkylsubstituierten Reagenzien verwendet werden im Vergleich zu den entsprechenden unsubstituierten Reagenzien. Alkylsubstituierte Reagenzien liefern mindestens die 2-fache Menge an Konjugaten in der gleichen Reaktionszeit verglichen mit den entsprechenden unsubstituierten Reagenzien bei der Erzeugung solcher Konjugate.
  • Wenn die Konjugate der Formeln IA und IB, die aus den oben beschriebenen substituierten Reagenzien hergestellt wurden, an Patienten für therapeutische Zwecke verabreicht werden, haben sie eine unerwartet verbesserte Halbwertszeit in vivo im Blutstrom des Patienten, verglichen mit einem Konjugat, das aus dem entsprechenden unsubstituierten Reagenzien gebildet wurde. Obwohl die Halbwertszeit in vivo direkt proportional dem Molekulargewichte des Konjugats ist, hat ein Konjugat, das aus einem substituierten Reagenz hergestellt wurde, überraschenderweise eine solche Halbwertszeit, wie ein Konjugat mit höherem Molekulargewicht, das aus einem unsubstituierten Reagenz hergestellt wurde. Eine längere Halbwertszeit für ein therapeutisches Mittel im Blutstrom des Patienten liefert eine verbesserte Effizienz bei der Verabreichung des Mittels an einen Patienten. Z.B. können Konjugate aus alkylsubstituierten Reagenzien weniger häufig und/oder in geringeren Mengen verabreicht werden, als Konjugate, die aus dem entsprechenden unsubstituierten Reagenz hergestellt wurden. Um die Effizienz der Verabreichung von biologisch aktiven Proteinkonjugaten mit Polyethylenglykol zu verbessern, wurden erhöhte Molekulargewichte von Polyethylenglykol zur Bildung dieser Proteinkonjugate verwendet. Jedoch vermindert sich die biologische Wirksamkeit des aktiven konjugierten IFN mit steigendem Molekulargewicht. Durch die Verwendung dieser erfindungsgemäßen Konjugate, die mit substituierten Reagenzien hergestellt werden, wird jedoch die Effizienz der Verabreichung gegenüber der Verwendung des entsprechenden unsubstituierten Konjugats bei einem weniger hohen Anstieg des Molekulargewichts verbessert.
  • Gemäß einer weiteren Ausführungsform bezieht sich die vorliegende Erfindung auch auf Verfahren zur Herstellung der neuen Konjugate.
  • Das Konjugat der Formel IA kann wie folgt hergestellt werden: PEG-Amin Protein
  • worin R, R¹, R², R³, R&sup4; md R&sup5;, m und x, y und z wie oben sind, mit der Maßgabe, daß einer oder mehrere der Reste R¹, R², R³, R&sup4; Niedrigalkylreste sein können.
  • Bei dieser Reaktion wird ein PEG-Amin mit der Verbindung der Formel IV in einem Kohlenwasserstoff oder chlorierten Kohlenwasserstoff als Lösungsmittel vermischt, um die Verbindung der Formel IIA zu erzeugen. Die Verbindung der Formel IIA kann in einem wäßrigen Medium mit einer oder mehreren der freien Aminogruppen des Proteins kondensiert werden, um das Konjugat der Formel IA herzustellen. Diese Reaktion kann unter üblichen Bedingungen zur Kondensation von Ammen in wäßrigem Medium durchgeführt werden. Im allgemeinen wird diese Reaktion in einer wäßrigen Standardpufferlösung mit einem pH zwischen 7 und 10 durchgeführt, um das Konjugat der Formel IA zu erzeugen. Diese Reaktion kann eine Mischung von PEG- Protein-Konjugaten mit verschiedenen Molekulargewichten erzeugen, abhängig von der Anzahl der freien Aminogruppen in dem Protein und der Reaktionszeit. Die PEG-Protein-Konjugate können dann in die einzelnen Komponenten aufgetrennt werden mit üblichen Methoden, wie Hochleistungsflüssigchromatographie (HPLC) oder Gelelektrophorese. Die üblichen Bedingungen zur Auftrennung von Verbindungen nach dem Molekulargewicht mit HPLC oder Gelelektrophorese können verwendet werden. Die Auftrennung dieser Mischung kann nach den Molekulargewichten der gebildeten Produkte, wie hier beschrieben, durchgeführt werden.
  • Ein IFN-Konjugat der Formel IB kann gemäß dem folgenden Reaktionsschema hergestellt werden: PEG-Alkohol NH&sub2;-Interferon Interferon
  • worin R, R¹, R², R³, R&sup4;, R&sup5;, m, x, y, z und die Maßgabe wie vorher definiert sind.
  • Die Verbindung der Formel IV wird hergestellt, indem Phosgen mit 2-Hydroxypyridin (substituiert falls R&sup5; ein NiedrigAlkylrest ist) unter Verwendung irgendeiner üblichen Methode zur Kondensation eines Säurehalogenids mit einem Alkohol kondensiert wird.
  • Die Kondensation eines PEG-Alkohols mit der Verbindung der Formel IV wird bewirkt, indem übliche Bedingungen zur Kondensation eines Alkohols mit einem Carbonat verwendet werden, um die Verbindung der Formel IIB herzustellen. Die Verbindung der Formel IIB wird mit dem Protein über eine oder mehrere freie Aminogruppen an dem Protein kondensiert, um die Verbindung der Formel IB herzustellen. Diese Reaktion wird in der für die Kondensation der Verbindung der Formel IIA beschriebenen Weise durchgeführt, um das Konjugat der Formel IA herzustellen. Abhängig von der Anzahl der freien Aminogruppen, die in den Proteinen enthalten sind, die mit der Verbindung der Formel IIB reagieren, kann das Konjugat der Formel IB als Mischung von Konjugaten mit verschiedenen Molekulargewichten gebildet werden. Diese Konjugatmischung kann in der vorher beschriebenen Weise aufgetrennt werden.
  • Die Verbindung der Formel IB kann auch unter Verwendung des folgenden Reaktionsschemas hergestellt werden: NH&sub2;-Interferon interferon
  • worin R, R¹, R², R³, R&sup4;, R&sup5;, m, x und y wie oben definiert sind.
  • In diesem Reaktionsschema wird ein PEG-Alkohol mit der Verbindung der Formel IV kondensiert, um die Verbindung der Formel III herzustellen. Bei dieser Reaktion wird die Verbindung der Formel IIB als Zwischenprodukt gebildet, die dann mit einem zweiten Mol PEG-Alkohol reagiert, um die Verbindung der Formel III herzustellen. Bei der Durchführung dieser Reaktion ist der PEG-Alkohol in einem Anteil von mindestens 2 mol pro mol der Verbindung der Formel IV vorhanden. Für dieses Verfahren kann jede übliche Methode zur Kondensation eines Alkohols mit einem Carbonat verwendet werden. Die Verbindung der Formel III wird mit Interferon umgesetzt unter Bildung des Konjugats der Formel IB, in der für die Umwandlung der Verbindung der Formel IIA in die Verbindung der Formel IA beschriebenen Weise. Abhangig von der Menge an freien Aminogruppen, die in dem Protein enthalten sind, erzeugt die Kondensation der Verbindung der Formel III mit dem Protein eine Mischung von Konjugaten, die in die einzelnen Komponenten in der vorher zur Auftrennung des Konjugats von Formel IA beschriebenen Weise aufgetrennt werden können.
  • Im Zusammenhang mit der vorliegenden Verbindung wurde gefunden, daß die erfindungsgemäßen Interferonkonjugate den gleichen Nutzen wie das Protein, das zur Bildung des Konjugats verwendet wurde, haben. Daher sind diese Konjugate therapeutisch auf gleiche Weise aktiv, wie das Protein aus dem sie gebildet wurden, und können auf gleiche Weise, wie das Protein selbst, verwendet werden, ohne die unerwünschten Immunreaktionen zu erzeugen, die mit der Verabreichung der Proteine selbst an Patienten verbunden sein können. Daher umfaßt die vorliegende Erfindung auch die pharmazeutischen Zusammensetzungen auf Basis von Verbindungen der Formel I und deren Salzen und Methoden zu ihrer Herstellung.
  • Die pharmazeutischen Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung, die zur Kontrolle oder Verhütung von Krankheiten verwendet werden, umfassen ein Interferonkonjugat der allgemeinen Formel I und ein therapeutisch inertes, nicht toxisches und therapeutisch annehmbares Trägermaterial. Die pharmazeutischen Zusammensetzungen, die verwendet werden sollen, können gemäß guter medizinischer Praxis formuliert und dosiert werden, wobei die zu behandelnde Störung, der Zustand des einzelnen Patienten, der Ort der Abgabe des Proteinkonjugats, die Verabreichungsmethode und andere dem Praktiker bekannte Faktoren in Betracht gezogen werden sollten.
  • Die folgenden Beispiele erläutern beispielhafte Auführungsformen der vorliegenden Erfindung, ohne diese zu beschränken.
  • Jeffamin M-2070, das in diesen Beispielen verwendet wird, ist ein Monomethoxypolyoxyalkylenpropylaminpolymer mit einem durchschnittlichen Molekulargewicht von 2070, das von Propylen- und Ethylenoxid abgeleitet ist, das aus einem Polyethylenglykolgerüst aufgebaut ist und durchschnittlich 30% statistisch eingebaute Propylengruppen enthält.
  • Jeffamin M-1000 ist ein Monomethoxypolyoxyalkylenpropylaminpolymer mit einem durchschnittlichen Molekulargewicht von 1000, das von Propylen- und Ethylenoxid abgeleitet ist, das aus einem Polyethylenglykolgerüst aufgebaut ist, das 14% spezifisch eingebaute Propylenoxidgruppen enthält, wobei x einen Durchschnittswert von 18,6 hat, y einen Durchschnittswert von 1,6 hat und z 0 ist (x, y und z werden hier mit der gleichen Bedeutung verwendet wie oben beschrieben).
  • Alle in den Beispielen beschriebenen Reagenzien können wasserfrei in Braunglasfläschchen bei 4ºC aufbewahrt werden, bis sie benötigt werden. Frische Aliquots werden für jede Modifikation verwendet.
    • Beispiele Referenzbeispiel 1 Herstellung von alpha,alpha-Oxomethylen-bis-[omegamethoxypoly(oxy-1,2-ethandiyl)]SRU 111
  • Aus einer Suspension von 1,5 g MPEG (Methoxypolyethylenglykol) (Molekulargewicht ungefähr 5000) in 80 ml trockenem Toluol wurden 50 ml Lösungsmittel abdestilliert. Die Lösung wurde dann abgekühlt und 30,5 mg Di-2-pyridylcarbonat zugegeben. Die entstehende Mischung wurde dann 24 Stunden lang am Rückfluß erhitzt. Die Lösung wurde dann gekühlt und der entstehende Niederschlag filtriert und mit einem kleinen Volumen Toluol und anschließend Diethylether gewaschen. Der Feststoff wurde dann im Hochvakuum getrocknet, was 0,6 g alpha,alpha-Oxomethylen-bis-(omega-methoxypoly(oxy-1,2- ethandiyl)SRU 111 als weißes Pulver lieferte. PEG- modifiziertes Interferon wurde mit der Methode 1, wie unten beschrieben, hergestellt.
    • Herstellung von PEG-modifiziertem Interferonalpha Methode 1:
  • Rekombinantes Interferon-alpha mit 5 mg Protein pro ml wurde gegen einen Puffer, der 5 mM Natriumacetat, pH 5,0, 120 mM NaCl enthielt, dialysiert. Kaliumthiocyanat wurde zugegeben, um eine Endkonzentration von 0,5 M zu erhalten, und der pH wurde durch Zugabe von ein 10-tel Volumen 1 M Tricinnatriumhydroxid, pH 11,9, eingestellt, um schließlich eine Lösung mit einem pH von 10,0 zu erhalten. PEG-Reagenz wurde zu dem Protein zugegeben in einem molaren Verhältnis von 3:1 als Feststoff oder gelöst in DMSO (das Volumen von DMSO war kleiner als 10% der Gesamtmenge). Die Modifikation wurde bei Raumtemperatur 30 Minuten bis 4 Stunden lang fortschreiten gelassen und anschließend wurde 1 M L-Glycin (pH 6,3) auf eine Endkonzentration von 20 mM zugegeben, um die weitere Modifikation zu stoppen. PEG-modifiziertes Protein wurde ausgefällt durch Zugabe von 3,5 M Ammoniumsulfat, 50 mM Natriumphosphat, pH 7,0, auf eine Endkonzentration von 1,1 M Ammoniumsulfat (1,0 M Ammoniumsulfat für PEG-10000), der Niederschlag durch Zentrifugation gesammelt, gewaschen und wieder in 25 mM Ammoniumacetat, pH 5,0, aufgelöst. Die PEG- modifizierten Proteine wurden durch Chromatographie auf einer hydrophoben Anstauschsäule (z.B. 75 x 7,5 mm), wie BioRad TSK-Phenyl-5-PW oder Toyopearl Phenyl-650 M unter Verwendung eines Gradienten mit abnehmenden Gehalt an Ammoniumsulfat in 50 mM Natriumphosphat, pH 7,0, gereinigt. Als Alternative wurde PEG-IFN durch Gelfiltration auf einer Sephacryl-S-200- Säule (Z.B. 90 cm x 3,2 cm Säule) (Pharmacia), die mit 25 InM Natriumacetat (pH 5,0), 200 mM NaCl equilibriert war, gereinigt. Das PEG-modifizierte Protein wurde mit SDS-PAGE identifiziert. Protein, das von der Säule eluierte, das einem Interferon mit einem (PEG&sub1;-IFN) oder 2 (PEG&sub2;-IFN) gebundenen PEG entsprach, wurde zusammengefaßt, eingeengt und das Protein durch Absorption bei 280 nm oder durch colorimetrischen Test (Pierce) bestimmt. PEG-IFN wurde bei 4ºC in Puffer, der 50 mM Natriumphosphat, pH 7,0, 0,3 M Ammoniumsulfat enthielt, aufbewahrt
    • Methode 2:
  • Interferon-alpha-2a mit einer Konzentration von ungefähr 6 mg/ml wurde gegen 5 mM Natriumacetat, pH 5,0, 0,12 M Natriumchlorid dialysiert. Die Proteinkonzentration wurde bestimmt, indem die Absorption bei 280 nm gemessen wurde unter Verwendung von 1,0 mg&supmin;¹ml als Extinktionskoeffizient. Die Proteinlösung wurde mit dem modifizierenden Reagenz in einem molaren Verhältnis von Protein zu Reagenz von 1:3 vermischt. Die Modifikationsreaktion wurde gestartet, indem der pH auf 10,0 eingestellt wurde unter Verwendung von ein 10-tel Volumen von 0,1 M Na&sub2;B&sub4;O&sub7; NaOH, pH 10,7. Nach 1-stündiger Inkubation bei Raumtemperatur wurde die Reaktion gestoppt durch Zugabe von ein 12-tel Volumen 1 M Glycin, pH 7,5. Nach 3 bis 5 Minuten sank der pH auf 5,0 bis 6,0 durch Zugabe von ein 12- tel Volumen 1 M Natriumacetat, pH 4,0.
  • Die Lösung, die PEG-Interferon, abgesättigtes Reagenz und unmodifiziertes Interferon enthielt, wurde 4-fach mit 40 mM Ammoniumacetat, pH 4,5, verdünnt und auf eine CM-Cellulosesäule (Whatman CM-52, ungefähr 0,5 ml Harz pro mg Protein) gegeben. Nach Waschen der Säule mit 5 Volumina 40 mM Ammoniumacetat, pH 4,5, wurden PEG-Interferon und unmodifiziertes Interferon eluiert unter Verwendung eines linearen Natriumchloridgradienten (0 bis 0,5 M) in 40 mM Ammoniumacetat, pH 4,5. Die Fraktionen, die Protein enthielten, wurden durch ihre Absorption bei 280 nm identifiziert, und Fraktionen, die PEG- Interferon enthielten, wurden mit SDS-PAGE identifiziert.
  • PEG-Interferon wurde weiter durch Größenausschluß-Gelfiltrations-Chromatographie auf einer Säule, die Sephacryl S-200- Harz enthielt (Pharmacia LKB), gereinigt. Die Fraktionen, die von der Säule eluiert wurden, wurden mit SDS-PAGE analysiert und das Peak-Material, das PEG-Interferon enthielt, wurde zusammenge faßt.
    • Referenzbeispiel 2 Herstellung von alpha,alpha-Oxomethylen-bis-[omegamethoxypoly(oxy-1,2-ethandiyl)]SRU 28,3
  • Mit dem in Beispiel 1 beschriebenen Verfahren wurde MPEG (Molekulargewicht 1300) in alpha, alpha-Oxomethylen-bis-[omegamethoxypoly(oxy-1,2-ethandiyl) SRU 28,3 umgewandelt und PEG- modifiziertes Interferon wurde hergestellt unter Verwendung dieses Reagenzes mit der in Beispiel 1 beschriebenen Methode 1.
    • Referenzbeispiel 3 Herstellung von alpha-Methyl-omega-[2-[[(2-pyridinyloxy)carbonyl]oxy]ethoxy]-poly(oxy-1,2-ethandiyl)SRU 111,7
  • Aus einer Lösung mit 1 g MPEG mit einem Molekulargewicht von 5000, die in 30 ml trockenem CH&sub2;Cl&sub2; gelöst war, wurden 10 ml Lösungsmittel abdestilliert. Die Lösung wurde auf Raumtemperatur gekühlt und 132 mg (0,6 mM) Di-2-pyridylcarbonat und 4 mg DMAP wurden zugegeben. Die entstehende Lösung wurde dann 14 Stunden lang gerührt und das Lösungsmittel im Vakuum entfernt. Der Rückstand wurde mit Diethylether verrieben und der entstehende Niederschlag abfiltriert. Das Produkt wurde dann in 7 ml trockenem Glyme gelöst, erwärmt, um die Auflösung zu bewirken, und die entstehende Lösung abkühlen gelassen und bei Raumtemperatur mehrere Stunden lang stehen gelassen. Der entstehende Niederschlag wurde dann abfiltriert und mit 2 x 5 ml trockenem Glyme gewaschen. Der Feststoff wurde dann in einem Vakuumofen und unter Stickstoffströmung getrocknet, was 0,7 g alpha-[(2-Pyridinyloxy)carbonyl]omega-methoxypoly(oxy- 1,2-ethandiyl)SRU 111,7 lieferte.
  • Analyse für: C&sub9;H&sub1;&sub1;NO&sub4; (CH&sub2;CH&sub2;O)111,7.
  • berechnet: C 54,57; H 9,02; N 0,28;
  • gefunden: C 54,51; H 9,19; N 0,28.
  • PEG-modifiziertes Interferon wurde hergestellt unter Verwendung dieses Reagenzes mit der in Beispiel 1 beschriebenen Methode 1.
    • Referenzbeispiel 4 Herstellung von alpha-(2-Pyridinyloxy)carbonyl]- omega-methoxypoly(oxy-1,2-ethandiyl)SRU 225
  • Mit dem in Beispiel 3 beschriebenen Verfahren wurde MPEG mit einem Molekulargewicht von 10000 in alpha-[(2- Pyridinyloxy)carbonyl]omega-methoxypoly(oxy-1,2-ethandiyl)SRU 225 umgewandelt.
  • Analyse für: C&sub9;H&sub1;&sub1;NO&sub4; (CH&sub2;CH&sub2;O)&sub2;&sub2;&sub5;:
  • berechnet: C 54,54; H 9,08; N 0,14;
  • gefunden: C 54,54; H 9,12; N 0,11.
  • PEG-modifiziertes Interferon wurde unter Verwendung des Reagenzes mit der in Beispiel 1 beschriebenen Methode 1 hergestellt.
    • Beispiel 5 Herstellung von alpha-Methyl-omega-[2-[2-[[(2-pyridinyloxy)carbonyl]oxy]propoxy]propoxy]poly(oxy-1,2-ethandiyl)SRU 64,7
  • Aus einer Lösung mit 0,5 g alpha-2-[2-(Hydroxypropoxy)propyl]omega-methoxypoly(oxy-1,2-ethandiyl)SRU 64,7 in 40 ml trockenem CH&sub2;Cl&sub2; wurden 15 ml Lösungsmittel abdestilliert. Zu der Lösung wurden dann 108 mg Di-2-pyridylcarbonat, 4 mg DMAP und mehrere Kügelchen 4 A-Molekularsiebe zugegeben. Die Mischung wurde dann über Nacht gerührt, filtriert und das Lösungsmittel bei vermindertem Druck entfernt. Der Rückstand wurde mit Größenausschluß-Chromatographie gereinigt.
  • Dieses Reagenz entsprach einer Verbindung der Formel
  • worin n etwa 64 ist.
  • Dies entspricht einem Molekulargewicht des Polymers von etwa 3000 Dalton.
  • PEG-modifiziertes Interferon wurde unter Verwendung dieses Reagenzes mit der in Beispiel 1 beschriebenen Methode 1 hergestellt.
    • Beispiel 6 Herstellung von alpha-Methyl-omega-[2-[2-[[(2-pyridinyloxy)- carbonyl]oxy]propoxy]propoxy]poly(oxy-1,2-ethandiyl)SRU 110
  • Mit dem in Beispiel 5 beschriebenen Verfahren wurde alpha-2- [2-(Hydroypropoxy)propyl]omega-methoxypoly(oxy-1,2-ethandiyl)SRU 110 in alpha-Methyl-omega-[2-[2-[[(2-pyridinyloxy)carbonyl]oxy]propoxylpropoxy]poly(oxy-1,2-ethandiyl)SRU 110 umgewandelt.
  • Dieses Reagenz (IIB-2) entspricht dem in Beispiel 5 (IIB-1) beschriebenen, außer das n etwa 110 ist, was etwa 5000 Dalton entspricht.
  • PEG-modifiziertes Interferon wurde unter Verwendung dieses Reagenzes mit der in Beispiel 1 beschriebenen Methode 1 hergestellt.
    • Beispiel 7 Herstellung von Methyloxiran Oxiranpolymer-[2-[[2- Pyridinyloxy)carbonyl]amino]propylmethylether (MO/O =10/32)
  • Aus einer Lösung von 1 g Jeffamin M-2070 (Texaco Chemical Co.) in 40 ml trockenem CH&sub2;Cl&sub2; wurden 15 ml Lösungsmittel abdestilliert. Die Lösung wurde auf 0ºC gekühlt und 215 mg Di- 2-pyridylcarbonat wurden zugegeben. Die entstehende Lösung wurde weitere 4 Stunden lang bei 0ºC gerührt, wonach das Lösungsmittel bei vermindertem Druck entfernt wurde. Der Rückstand wurde dann mit Hilfe von 2 Phenomenex-Größenausschlußsäulen, die aufeinanderfolgend verbunden waren (500 Å und 1000 Å) gereinigt. Das Produkt zeigte zwei Banden im UV bei 232 nm und 310 nm.
  • Dieses Reagenz entsprach einer Verbindung der Formel
  • worin R&sup5; H ist, R² H oder ein Methylrest ist und als durchschnittliche Verteilung n 32 ist, wenn R² H und n 10 ist, wenn R² ein Methylrest ist.
  • PEG-modifiziertes Interferon wurde unter Verwendung dieses Reagenzes mit der in Beispiel 1 beschriebenen Methode 2 hergestellt.
    • Beispiel 8 Herstellung von Methyloxiran Oxiranpolymer-[2-[[(3-Methyl-2- pyridinyloxy)carbonyl]amino]propylmethylether (MO/O = 10/32)
  • Mit dem in Beispiel 7 beschriebenen Verfahren wurde 1 g Jeffamin M-2070 mit bis-(3-Methyl-2-pyridyl)carbonat umgesetzt, was Methyloxiran-Oxiranpolymer-[2-[[(3-Methyl-2- pyridinyloxy)carbonyl]amino]propylmethylether lieferte (MO/O = 10/32).
  • Dieses Reagenz (IIA-2) entspricht dem in Beispiel 7 (IIA-1) beschriebenen, außer das R&sup5; CH&sub3; ist.
  • PEG-modifiziertes Interferon wurde unter Verwendung dieses Reagenzes mit der in Beispiel 1 beschriebenen Methode 1 hergestellt.
    • Beispiel 9 Herstellung von Methyloxiran-Oxiranpolymer-[2-[[(2- Pyridinyloxy)carbonyl]amino]propylmethylether, Block (MO/O = 1,6/18,6)
  • Mit dem in Beispiel 7 beschriebenen Verfahren wurden 0,6 g Jeffamin M-1000 (Texaco Chemical Co.) mit 155,6 mg Di-2- pyridylcarbonat umgesetzt, was Methyloxiran-Oxiranpolymer-[2- [[(2-Pyridinyloxy)carbonyl]amino]propylmethylether als Blockpolymer (MO/O = 1,6/18,6) lieferte.
  • Dies liefert eine Verbindung der Formel
  • Mit der angegebenen durchschnittlichen Verteilung der Einheiten in dem polymeren Produkt.
  • PEG-modifiziertes Interferon wurde unter Verwendung dieses Reagenzes mit der in Beispiel 1 beschriebenen Methode 1 hergestellt.
  • Antivirale Akivität von Interferon: Die antivirale Aktivität von Interferon und PEG-modifiziertem Interferon wurde bestimmt (Rubenstein et al (1981) J. Virol. 37: 755-758; Familletti et al (1981) Methods Enzymol. 78: 387-394). Alle Tests wurden bezogen auf die Kontrolle standardisiert. Der in dem Test verwendete Interferonstandard hatte eine spezifische Aktivität von 2 x 10&sup8; Einheiten pro mg Protein.
  • Die zur Modifikation von Interferon verwendeten Bedingungen basierten auf optimierten Protokollen, wie beschrieben. Die PEG-Modifikation wurde mit SDS-PAGE analysiert bezüglich der Umwandlung von Interferon in Mono-PEG-Interferon bei verschiedenen Inkubationszeiten (chemische Reaktivität) und bezüglich der Verteilung auf verschiedene Arten von PEG- Interferonkonjugaten (Ortsselektivität). Bei der SDS-PAGE wurden PEG-modifizierte Molekularten als langsame wandernde Banden auf dem Gel beobachtet. Sowohl Mono-PEG- als auch Di- PEG-Interferone wurden in ausreichender Ausbeute erzeugt, sodaß diese Molekülarten aus den Reaktionsmischungen durch Chromatographie unter Ausnutzung hydophober Wechselwirkungen gereinigt werden konnten. Gereinigte PEG-Interferone wurden auf ihre antivirale Aktivität getestet und mit unmodifizierten Interferon-a2a-Standards verglichen. Die Molekulargewichte der verwendeten Polymere ebenso wie die antivirale Aktivität einiger pegylierter Derivate sind in Tabelle 1 beschrieben. Tabelle 1 Physikalische Eigenschaften von PEG-Reagenzien und biologischen Aktivitäten der Proteinkonjugate
  • ND = nicht bestimmt.

Claims (19)

1. Interferon-Konjugat der Formel:
worin R C1-C4-Alkyl ist; R¹, R², R³ und R&sup4; H oder C1-C4-Alkyl sind;
m 1 oder 2 ist;
W O oder NH ist;
x eine ganze Zahl zwischen 1 und 1000 ist und jede von y und z eine ganze Zahl von 0 bis 1000 ist und die Summe von x, y und z 3 bis 1000 ist;
mit der Maßgabe, daß mindestens einer von R¹, R², R³ und R&sup4; C1-C4-Alkyl ist und x, y und z so gewählt sind, daß das Molekulargewicht der Polymereinheit in dem Konjugat im Bereich von etwa 1000 Dalton bis etwa 10 000 Dalton ist.
2. Interferon-Konjugat nach Anspruch 1, worin m 1 ist.
3. Interferon-Konjugat nach Anspruch 1, worin R Methyl ist.
4. Interferon-Konjugat nach Anspruch 1, worin x, y und z so gewählt sind, daß das Molekulargewicht der Polymereinheit in dem Konjugat im Bereich von etwa 1000 Dalton bis etwa 5000 Dalton ist.
5. Interferon-Konjugat nach Anspruch 1, worin x, y und z so gewählt sind, daß das Molekulargewicht der Polymereinheit in dem Konjugat im Bereich von etwa 1000-2200 Dalton ist.
6. Interferon-Konjugat nach Anspruch 1, worin x und y 5,0 bis 500,0 sind und z 0,0 bis 4,0 ist.
7. Interferon-Konjugat nach Anspruch 1, worin x 10,0 bis 100,0 ist, y 1,0 bis 10,0 ist und z 0 ist.
8. Interferon-Konjugat nach Anspruch 1, worin das Interferon Interferon-α2A ist.
9. Interferon-Konjugat nach Anspruch 8, worin W NH ist; m 1 ist; R, R² und R³ CH&sub3; sind; R¹ H ist; x 18,6 ist, y 1,6 ist und z 0 ist.
10. Verbindung der Formel:
worin R C1-C4-Alkyl ist, R¹, R², R³, R&sup4; H oder C1-C4-Alkyl sind, vorausgesetzt, daß mindestens einer von R¹, R², R³ und R&sup4; C1-C4-Alkyl ist; R&sup5; H oder C1-C4-Alkyl ist, wenn W NH ist, oder R&sup5; H ist, wenn W O ist;
W NH oder O ist;
x eine ganze Zahl zwischen 1 und 1000 ist und jede von y und z eine ganze Zahl von 0 bis 1000 ist und die Summe von x, y und z 3 bis 1000 ist und x, y und z so gewählt sind, daß das Molekulargewicht der Polymereinheit in dem Konjugat im Bereich von etwa 1000 Dalton bis etwa 10 000 Dalton ist.
11. Verbindung nach Anspruch 10, worin R Methyl ist.
12. Verbindung nach Anspruch 10, worin x 10,0 bis 100,0 ist, y 1,0 bis 10,0 ist und z 0,0 bis 4,0 ist.
13. Verbindung der Formel:
worin R C1-C4-Alkyl ist; R¹, R², R³ und R&sup4; H oder C1-C4-Alkyl sind, x eine ganze Zahl von 1 bis 1000 ist und jede von y und z eine ganze Zahl von 0 bis 1000 ist und die Summe von x, y und z 3 bis 1000 ist, worin mindestens einer von R¹, R², R³ und R&sup4; C1-C4-Alkyl ist und worin x, y und z so gewählt sind, daß das Molekulargewicht der Verbindung im Bereich von etwa 1000 Dalton bis etwa 10 000 Dalton ist.
14. Verbindung nach Anspruch 13, worin R Methyl ist.
15. Interferon-Konjugate nach einem der Ansprüche 1-9 zur Verwendung als therapeutisch wirksame Verbindungen bei der Behandlung oder Prophylaxe von Erkrankungen.
16. Verfahren zur Herstellung eines Interferon-Konjugats, wie in einem der Ansprüche 1-9 beansprucht, wobei das Verfahren die Umsetzung einer in den Ansprüchen 10-14 beanspruchten Verbindung mit Interferon oder einem Salz davon und die Isolierung des Interferon-Konjugats aus der Reaktionsmischung umfaßt.
17. Pharmazeutische Zusammensetzungen, umfassend ein Interferon-Konjugat, wie in einem der Ansprüche 1-9 beansprucht, und einen therapeutisch inerten Träger.
18. Pharmazeutische Zusammensetzungen zur Behandlung oder Prophylaxe immunmodulatorischer Erkrankungen wie neoplastischen Krankheiten oder infektiösen Krankheiten, umfassend ein Interferon-Konjugat, wie in einem der Ansprüche 1-9 beansprucht, und einen therapeutisch inerten Träger.
19. Verwendung von Interferon-Konjugaten nach einem der Ansprüche 1-10 zur Herstellung von Medikamenten zur Verwendung bei der Behandlung oder Prophylaxe von Erkrankungen.
DE69317979T 1992-08-26 1993-08-13 PEG-Interferon-Konjugate Expired - Lifetime DE69317979T2 (de)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US07/935,770 US5382657A (en) 1992-08-26 1992-08-26 Peg-interferon conjugates

Publications (2)

Publication Number Publication Date
DE69317979D1 DE69317979D1 (de) 1998-05-20
DE69317979T2 true DE69317979T2 (de) 1998-08-20

Family

ID=25467637

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE69317979T Expired - Lifetime DE69317979T2 (de) 1992-08-26 1993-08-13 PEG-Interferon-Konjugate

Country Status (37)

Country Link
US (1) US5382657A (de)
EP (1) EP0593868B1 (de)
JP (1) JP2859105B2 (de)
KR (1) KR100295520B1 (de)
CN (3) CN1039015C (de)
AT (1) ATE165102T1 (de)
AU (1) AU668742B2 (de)
BG (1) BG98067A (de)
BR (1) BR9303469A (de)
CA (1) CA2103829C (de)
CZ (1) CZ169393A3 (de)
DE (1) DE69317979T2 (de)
DK (1) DK0593868T3 (de)
EE (1) EE9400151A (de)
ES (1) ES2116376T3 (de)
FI (1) FI109765B (de)
HR (1) HRP931094A2 (de)
HU (1) HUT67013A (de)
IL (1) IL106750A0 (de)
IS (1) IS4067A (de)
LT (1) LT3174B (de)
LV (1) LV10907B (de)
MW (1) MW7693A1 (de)
MX (1) MX9305146A (de)
MY (1) MY131445A (de)
NO (1) NO933028D0 (de)
NZ (2) NZ248452A (de)
OA (1) OA09850A (de)
PH (1) PH30460A (de)
PL (1) PL300194A1 (de)
RO (1) RO112730B1 (de)
SI (1) SI9300423A (de)
SK (1) SK89893A3 (de)
UY (1) UY23635A1 (de)
YU (1) YU56693A (de)
ZA (1) ZA936098B (de)
ZW (1) ZW11193A1 (de)

Families Citing this family (291)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2006596C (en) * 1988-12-22 2000-09-05 Rika Ishikawa Chemically-modified g-csf
ATE289350T1 (de) 1989-04-21 2005-03-15 Amgen Inc Tnf-rezeptor, tnf bindende proteine und dafür kodierende dnas
US7264944B1 (en) 1989-04-21 2007-09-04 Amgen Inc. TNF receptors, TNF binding proteins and DNAs coding for them
IL95031A (en) 1989-07-18 2007-03-08 Amgen Inc Method for the production of a human recombinant tumor necrosis factor inhibitor
US6143866A (en) * 1989-07-18 2000-11-07 Amgen, Inc. Tumor necrosis factor (TNF) inhibitor and method for obtaining the same
US6552170B1 (en) 1990-04-06 2003-04-22 Amgen Inc. PEGylation reagents and compounds formed therewith
US5595732A (en) * 1991-03-25 1997-01-21 Hoffmann-La Roche Inc. Polyethylene-protein conjugates
US5880131A (en) * 1993-10-20 1999-03-09 Enzon, Inc. High molecular weight polymer-based prodrugs
US5919455A (en) 1993-10-27 1999-07-06 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
CA2176229C (en) * 1993-11-10 2003-05-27 Carl W. Gilbert Improved interferon polymer conjugates
US5951974A (en) * 1993-11-10 1999-09-14 Enzon, Inc. Interferon polymer conjugates
IL112583A0 (en) * 1994-02-08 1995-05-26 Amgen Inc Oral delivery of chemically modified proteins
US5730990A (en) * 1994-06-24 1998-03-24 Enzon, Inc. Non-antigenic amine derived polymers and polymer conjugates
US20030053982A1 (en) * 1994-09-26 2003-03-20 Kinstler Olaf B. N-terminally chemically modified protein compositions and methods
DE4435087A1 (de) * 1994-09-30 1996-04-04 Deutsches Krebsforsch Konjugat zur Behandlung von Infektions-, Autoimmun- und Hauterkrankungen
US5824784A (en) * 1994-10-12 1998-10-20 Amgen Inc. N-terminally chemically modified protein compositions and methods
US5738846A (en) * 1994-11-10 1998-04-14 Enzon, Inc. Interferon polymer conjugates and process for preparing the same
JP2758154B2 (ja) * 1995-04-06 1998-05-28 エフ・ホフマン−ラ ロシユ アーゲー インターフェロンを含む液体製剤
DE19514087A1 (de) * 1995-04-13 1996-10-17 Deutsches Krebsforsch Konjugat aus einem Wirkstoff, einem Polyether und ggfs. einem nicht als körperfremd angesehenen, nativen Protein
JP2000507917A (ja) 1995-11-02 2000-06-27 シェーリング コーポレイション 持続的低用量サイトカイン注入治療
US5908621A (en) 1995-11-02 1999-06-01 Schering Corporation Polyethylene glycol modified interferon therapy
TW517067B (en) 1996-05-31 2003-01-11 Hoffmann La Roche Interferon conjugates
TW555765B (en) * 1996-07-09 2003-10-01 Amgen Inc Low molecular weight soluble tumor necrosis factor type-I and type-II proteins
DE69838552T2 (de) 1997-07-14 2008-05-21 Bolder Biotechnology, Inc., Louisville Derivate des wachstumshormons und verwandte proteine
US7495087B2 (en) * 1997-07-14 2009-02-24 Bolder Biotechnology, Inc. Cysteine muteins in the C-D loop of human interleukin-11
US20080076706A1 (en) 1997-07-14 2008-03-27 Bolder Biotechnology, Inc. Derivatives of Growth Hormone and Related Proteins, and Methods of Use Thereof
US6753165B1 (en) * 1999-01-14 2004-06-22 Bolder Biotechnology, Inc. Methods for making proteins containing free cysteine residues
US7270809B2 (en) * 1997-07-14 2007-09-18 Bolder Biotechnology, Inc. Cysteine variants of alpha interferon-2
KR100364938B1 (ko) * 1997-09-18 2002-12-18 에프. 호프만-라 로슈 아게 만성 씨형 간염의 치료를 위한 인테페론-알파와 아만타딘을 함유한 약제
US6180095B1 (en) * 1997-12-17 2001-01-30 Enzon, Inc. Polymeric prodrugs of amino- and hydroxyl-containing bioactive agents
AU1825299A (en) 1997-12-17 1999-07-05 Enzon, Inc. Polymeric prodrugs of amino- and hydroxyl-containing bioactive agents
US5981709A (en) * 1997-12-19 1999-11-09 Enzon, Inc. α-interferon-polymer-conjugates having enhanced biological activity and methods of preparing the same
US5985263A (en) * 1997-12-19 1999-11-16 Enzon, Inc. Substantially pure histidine-linked protein polymer conjugates
FR2774687B1 (fr) * 1998-02-06 2002-03-22 Inst Nat Sante Rech Med Lipopeptides contenant un fragment de l'interferon gamma, et leur utilisation dans des compositions pharmaceutiques
US6180096B1 (en) 1998-03-26 2001-01-30 Schering Corporation Formulations for protection of peg-interferon alpha conjugates
CZ302005B6 (cs) * 1998-03-26 2010-09-01 Schering Corporation Vodný prostredek PEG-interferon alfa konjugátu, jeho lyofilizát a výrobek jej obsahující
WO1999055377A2 (en) 1998-04-28 1999-11-04 Applied Research Systems Ars Holding N.V. Polyol-ifn-beta conjugates
ES2172288T3 (es) 1998-05-15 2002-09-16 Schering Corp Terapia de combinacion que comprende ribavirina e interferon alfa en pacientes que no han sido sometidos a tratamiento antiviral y que tienen infeccion cronica de hepatitis c.
WO1999061055A1 (en) * 1998-05-22 1999-12-02 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Bifunctional molecules and therapies based thereon
ITMI981148A1 (it) * 1998-05-22 1999-11-22 Therapicon Srl Utilizzo di lisozima c modificato per preparare composizioni medicinali per il trattamento di alcune gravi malattie
ID29285A (id) * 1998-06-08 2001-08-16 Hoffmann La Roche PENGGUNAAN PEG-IFN-α DAN RIBAVIRIN UNTUK PENGOBATAN HEPATITIS C KRONIS
US20030143662A1 (en) * 1998-06-16 2003-07-31 Cummings Richard D. Glycosulfopeptide inhibitors of leukocyte rolling and methods of use thereof
JP2002518354A (ja) * 1998-06-16 2002-06-25 ザ ボード オブ リージェンツ オブ ザ ユニヴァーシティー オブ オクラホマ 糖硫酸ペプチド、その合成方法および使用方法
US7223845B2 (en) 1998-06-16 2007-05-29 The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma Synthetic glycosulfopeptides and methods of synthesis thereof
SG2008070138A (en) 1998-10-16 2017-08-30 Biogen Ma Inc Polymer conjugates of interferon beta- 1a and their uses
EA005005B1 (ru) * 1998-10-16 2004-10-28 Байоджен, Инк. ГИБРИДНЫЙ ПОЛИПЕПТИД β1α-ИНТЕРФЕРОНА ЧЕЛОВЕКА, ЕГО МУТАНТНЫЕ ФОРМЫ И ПРОИЗВОДНЫЕ И СОДЕРЖАЩАЯ ИХ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ
US6660843B1 (en) * 1998-10-23 2003-12-09 Amgen Inc. Modified peptides as therapeutic agents
US8288126B2 (en) 1999-01-14 2012-10-16 Bolder Biotechnology, Inc. Methods for making proteins containing free cysteine residues
EP1144613B2 (de) 1999-01-14 2020-05-06 Bolder Biotechnology, Inc. Verfahren zur herstellung von proteinen mit freien cysteinresten
KR100689212B1 (ko) * 1999-01-29 2007-03-09 암겐 인코포레이티드 Ｇｃｓｆ 결합체
PT1043026E (pt) 1999-04-08 2005-09-30 Schering Corp Terapeutica do melanoma
US6605273B2 (en) 1999-04-08 2003-08-12 Schering Corporation Renal cell carcinoma treatment
US6362162B1 (en) 1999-04-08 2002-03-26 Schering Corporation CML Therapy
US6923966B2 (en) 1999-04-08 2005-08-02 Schering Corporation Melanoma therapy
JO2291B1 (en) 1999-07-02 2005-09-12 اف . هوفمان لاروش ايه جي Erythropoietin derivatives
EP2241623A3 (de) 1999-07-07 2010-12-01 ZymoGenetics, Inc. Monoklonaler Antikörper gegen menschlichen Cytokinrezeptor
AU4934299A (en) * 1999-07-15 2001-02-05 Kuhnil Pharm. Co., Ltd. Novel water soluble-cyclosporine conjugated compounds
US7431921B2 (en) * 1999-08-27 2008-10-07 Maxygen Aps Interferon beta-like molecules
US6531122B1 (en) * 1999-08-27 2003-03-11 Maxygen Aps Interferon-β variants and conjugates
US7144574B2 (en) * 1999-08-27 2006-12-05 Maxygen Aps Interferon β variants and conjugates
US6969524B1 (en) 1999-10-12 2005-11-29 Santen Pharamceutical Co., Ltd. Interferon complex and medicinal use thereof
BR0015506A (pt) 1999-11-12 2002-07-23 Maxygen Holdings Ltd Conjugados de interferon gama, métodos para sua preparação, composições farmacêuticas que compreendem ás moléculas e seu uso no tratamento de doenças
YU32402A (sh) 1999-11-12 2005-03-15 Maxygen Holdings Ltd. Konjugati gama interferona
AU2044001A (en) 1999-11-19 2001-05-30 Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Targeted bifunctional molecules and therapies based thereon
US6887842B1 (en) 1999-11-19 2005-05-03 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Modulating a pharmacokinetic property of a drug by administering a bifunctional molecule containing the drug
US7220552B1 (en) 1999-11-19 2007-05-22 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Bifunctional molecules and their use in the disruption of protein-protein interactions
AU2253301A (en) 1999-12-03 2001-06-12 Zymogenetics Inc. Human cytokine receptor
CZ20022727A3 (cs) 2000-01-10 2002-11-13 Maxygen Holdings Ltd Polypeptidový konjugát, způsob jeho výroby a farmaceutický prostředek
EP1908477A3 (de) * 2000-01-24 2008-06-11 Schering Corporation Kombination aus Temozolomid und pegyliertem Interferon-alpha zur Krebsbehandlung
WO2001052882A1 (en) * 2000-01-24 2001-07-26 Schering Corporation Combination of temozolomide and pegylated interferon-alpha for treating cancer
EP1982732A3 (de) 2000-02-11 2011-06-08 Bayer HealthCare LLC Faktor VII- oder VIIA-ähnliche Konjugate
KR100353392B1 (ko) * 2000-03-13 2002-09-18 선바이오(주) 높은 생체 활성도를 갖는 생체 활성 단백질과 ｐｅｇ의결합체 제조방법
US6756037B2 (en) 2000-03-31 2004-06-29 Enzon, Inc. Polymer conjugates of biologically active agents and extension moieties for facilitating conjugation of biologically active agents to polymeric terminal groups
US6777387B2 (en) 2000-03-31 2004-08-17 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Terminally-branched polymeric linkers containing extension moieties and polymeric conjugates containing the same
ES2320101T3 (es) * 2000-10-16 2009-05-19 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Eritropoyetina conjugada con mono-peg.
US20020169290A1 (en) * 2000-11-02 2002-11-14 Claus Bornaes New multimeric interferon beta polypeptides
ATE432986T1 (de) 2000-11-07 2009-06-15 Zymogenetics Inc Menschlicher rezeptor für tumor necrosis factor
JP2004532289A (ja) * 2001-02-20 2004-10-21 エンゾン ファーマシューティカルズ，インコーポレーテッド 末端分枝高分子リンカーおよびそれを含む高分子複合体
WO2002066516A2 (en) 2001-02-20 2002-08-29 Zymogenetics, Inc. Antibodies that bind both bcma and taci
PL367154A1 (en) 2001-02-27 2005-02-21 Maxygen Aps New interferon beta-like molecules
JP2004532624A (ja) 2001-03-02 2004-10-28 ザイモジェネティクス，インコーポレイティド マウスサイトカイン受容体
US6958388B2 (en) 2001-04-06 2005-10-25 Maxygen, Aps Interferon gamma polypeptide variants
US7038015B2 (en) * 2001-04-06 2006-05-02 Maxygen Holdings, Ltd. Interferon gamma polypeptide variants
WO2002083166A1 (en) * 2001-04-10 2002-10-24 Santen Pharmaceutical Co., Ltd. Interferon-polymer complexes and medicinal use thereof
ATE446771T1 (de) 2001-05-24 2009-11-15 Zymogenetics Inc Taci-immunoglobulin-fusionsproteine
WO2003000278A1 (en) * 2001-06-22 2003-01-03 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Ointments
MD2053C2 (ro) * 2001-07-10 2003-07-31 Национальный Научно-Практический Центр Превентивной Медицины Министерства Здравоохранения Республики Молдова Remediu cu acţiune interferonogenă
ATE376020T1 (de) 2001-08-22 2007-11-15 Bioartificial Gel Technologies Inc Verfahren zu herstellung von aktivierten polyethylenglykolen
JP2005517648A (ja) * 2001-12-07 2005-06-16 インターミューン インコーポレイテッド 肝炎ウイルス感染症を治療するための組成物および方法
KR100888371B1 (ko) 2002-01-17 2009-03-13 동아제약주식회사 가지 달린 고분자 유도체와 인터페론 결합체를 포함하는 항바이러스제
PT3025726T (pt) * 2002-01-18 2020-01-09 Biogen Ma Inc Compostos do polímero polialquileno e utilizações dos mesmos
US8003089B2 (en) * 2002-03-13 2011-08-23 Beijing Jiankai Technology Co., Ltd. Y shape branched hydrophilic polymer derivatives, their preparation methods, conjugates of the derivatives and drug molecules, and pharmaceutical compositions comprising the conjugates
IL164214A0 (en) * 2002-04-11 2005-12-18 Zymogenetics Inc Use of interleukin-24 to treat ovarian cancer
JP4409962B2 (ja) 2002-04-19 2010-02-03 ザイモジェネティクス，インコーポレイティド サイトカイン受容体
BR0311978A (pt) 2002-06-21 2005-03-22 Novo Nordisk Healthcare Ag Preparação, método para preparar a mesma, formulação farmacêutica, métodos para tratar de uma sìndrome responsiva ao fator vii, para prevenir hemorragias indesejáveis, para prevenir coagulação sanguìnea indesejável e para prevenir as reações mediadas pelo fator tecidual, e, uso de uma preparação
US7524931B2 (en) * 2002-07-03 2009-04-28 Maxygen Holdings Ltd. Full-length interferon gamma polypeptide variants
MXPA05000796A (es) * 2002-07-24 2005-04-19 Hoffmann La Roche Aditivos de acidos polialquilenglicolicos.
JP2006510589A (ja) * 2002-09-05 2006-03-30 ザ ジェネラル ホスピタル コーポレーション アシアロインターフェロンおよび肝臓癌の治療
JP2006508918A (ja) * 2002-09-05 2006-03-16 ザ ジェネラル ホスピタル コーポレーション 修飾されたアシアロインターフェロンおよびその使用
AU2003285286A1 (en) * 2002-09-27 2004-04-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Conjugates of insulin-like growth factor binding protein-4 and poly (ethylene glycol)
US20040175359A1 (en) * 2002-11-12 2004-09-09 Desjarlais John Rudolph Novel proteins with antiviral, antineoplastic, and/or immunomodulatory activity
US7314613B2 (en) * 2002-11-18 2008-01-01 Maxygen, Inc. Interferon-alpha polypeptides and conjugates
KR101162908B1 (ko) * 2002-12-26 2012-07-06 마운틴 뷰 파마슈티컬즈, 인크. 수용체-결합 활성이 보존된, 사이토카인, 케모카인,성장인자, 폴리펩티드 호르몬 및 이들의 길항제의 중합체접합체
US9125880B2 (en) * 2002-12-26 2015-09-08 Mountain View Pharmaceuticals, Inc. Polymer conjugates of interferon-beta with enhanced biological potency
CA2509248A1 (en) * 2002-12-31 2004-07-22 Nektar Therapeutics Al, Corporation Polymeric reagents comprising a ketone or a related functional group
WO2004074345A2 (en) * 2003-02-19 2004-09-02 Pharmacia Corporation Carbonate esters of polyethylene glycol activated by means of oxalate esters
WO2004076474A2 (en) * 2003-02-26 2004-09-10 Intermune, Inc. Polyethylene glycol modified interferon compositions and methods of use thereof
WO2004078127A2 (en) * 2003-02-28 2004-09-16 Intermune, Inc. Continuous delivery methods for treating hepatitis virus infection
CA2458085A1 (en) 2003-03-21 2004-09-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Transcriptional activity assay
CN101039957A (zh) 2003-05-16 2007-09-19 因特缪恩公司 合成的趋化因子受体配体及其使用方法
CN1910200A (zh) 2003-08-07 2007-02-07 津莫吉尼蒂克斯公司 Il－28和il－29的均一化制剂
GB0320638D0 (en) 2003-09-03 2003-10-01 Novartis Ag Organic compounds
EP1673387B1 (de) 2003-10-10 2010-09-15 Novo Nordisk A/S Il-21-derivate
RS54573B1 (sr) 2003-10-14 2016-06-30 F. Hoffmann-La Roche Ltd Makrociklične karboksilne kiseline i acilsulfonamidi kao inhibitori replikacije hcv
ES2428358T3 (es) 2003-10-17 2013-11-07 Novo Nordisk A/S Terapia de combinación
US20050089952A1 (en) * 2003-10-22 2005-04-28 Akzo Nobel N.V. Apparatuses and processes for increasing protein PEGylation reaction yields
WO2005040758A2 (en) * 2003-10-24 2005-05-06 Intermune, Inc. Use of pirfenidone in therapeutic regimens
WO2005062949A2 (en) * 2003-12-23 2005-07-14 Intermune, Inc. Method for treating hepatitis virus infection
GB0500020D0 (en) 2005-01-04 2005-02-09 Novartis Ag Organic compounds
SG135176A1 (en) * 2004-02-02 2007-09-28 Ambrx Inc Modified human four helical bundle polypeptides and their uses
US7351787B2 (en) * 2004-03-05 2008-04-01 Bioartificial Gel Technologies, Inc. Process for the preparation of activated polyethylene glycols
RU2311930C2 (ru) * 2004-04-30 2007-12-10 Закрытое акционерное общество "ВЕРОФАРМ" Пэгилированный интерферон для борьбы с вирусной инфекцией
JP2008507298A (ja) 2004-05-19 2008-03-13 マキシジェン， インコーポレイテッド インターフェロンαポリペプチドおよび結合体
US20060018875A1 (en) * 2004-06-14 2006-01-26 Blatt Lawrence M Interferon compositions and methods of use thereof
CN102603895B (zh) * 2004-06-18 2016-09-28 Ambrx公司 新颖抗原结合多肽和其用途
WO2006091231A2 (en) * 2004-07-21 2006-08-31 Ambrx, Inc. Biosynthetic polypeptides utilizing non-naturally encoded amino acids
BRPI0513865A (pt) 2004-07-29 2008-05-20 Zymogenetics Inc métodos para tratar cáncer, para inibir a progressão de cáncer, para retardar o começo de cáncer, para reduzir a severidade de cáncer, e para inibir pelo menos uma das condições ou sintomas de cáncer, do linfoma não-hodgkin, do mieloma múltiplo, e de tumores da cabeça e o pescoço
MX2007001663A (es) 2004-08-12 2007-04-10 Schering Corp Formulacion de interferon pegilado estable.
EP1799713B1 (de) 2004-09-23 2014-11-05 VasGene Therapeutics, Inc. Polypeptidverbindungen zur hemmung von angiogenese und tumorwachstum
MX2007007581A (es) * 2004-12-22 2007-07-24 Ambrx Inc Composiciones de amino acil-arnt sintetasa y sus usos.
US7816320B2 (en) 2004-12-22 2010-10-19 Ambrx, Inc. Formulations of human growth hormone comprising a non-naturally encoded amino acid at position 35
WO2006073846A2 (en) * 2004-12-22 2006-07-13 Ambrx, Inc. Methods for expression and purification of recombinant human growth hormone
CN103690936A (zh) 2004-12-22 2014-04-02 Ambrx公司 经修饰的人类生长激素
JP2008532931A (ja) 2005-02-08 2008-08-21 ザイモジェネティクス， インコーポレイテッド 抗ｉｌ−２０、抗ｉｌ−２２および抗ｉｌ−２２ｒａ抗体ならびに結合パートナー、ならびに炎症における使用法
JP2008544746A (ja) 2005-05-12 2008-12-11 ザイモジェネティクス， インコーポレイテッド 免疫応答を調節するための組成物および方法
WO2007044083A2 (en) * 2005-05-18 2007-04-19 Maxygen, Inc. Evolved interferon-alpha polypeptides
CN101247821B (zh) * 2005-06-03 2013-01-23 Ambrx公司 经改良人类干扰素分子和其用途
MX2007015819A (es) * 2005-06-13 2008-02-22 Nastech Pharm Co Suministro de derivados peptidicos a traves de la mucosa.
EP1893632B1 (de) 2005-06-17 2015-08-12 Novo Nordisk Health Care AG Selektive reduktion und derivatisierung manipulierter faktor vii proteine mit mindestens einem nichtnativen zystein
AR054778A1 (es) 2005-06-17 2007-07-18 Novartis Ag Uso de sangliferina en hcv
CN101257925A (zh) * 2005-06-20 2008-09-03 派普根公司 人干扰素α类似物和干扰素τ的低毒长循环的嵌合体
US7695710B2 (en) 2005-06-20 2010-04-13 Pepgen Corporation Antitumor and antiviral combination therapies using low-toxicity, long-circulating human interferon-alpha analogs
WO2007000769A2 (en) * 2005-06-29 2007-01-04 Yeda Research And Development Co. Ltd. At The Weizmann Institute Of Science RECOMBINANT INTERFERON α2 (IFNα2) MUTANTS
GEP20105124B (en) 2005-07-25 2010-11-25 Array Biopharma Inc Novel macrocyclic inhibitors of hepatitis c virus replication
JP4829969B2 (ja) * 2005-08-18 2011-12-07 アンブルックス，インコーポレイテッド ｔＲＮＡ組成物、およびその使用
PT1931697E (pt) 2005-09-28 2010-12-06 Zymogenetics Inc Antagonistas de il-17a e il-17f e processos para a sua utilização
CN101415705B (zh) 2005-10-11 2011-10-26 因特蒙公司 抑制丙型肝炎病毒复制的化合物和方法
EP1937294A4 (de) * 2005-10-21 2009-11-04 Synageva Biopharma Corp Glykolierte und glykosylierte therapeutische proteine von geflügel
US20080171696A1 (en) * 2005-10-21 2008-07-17 Avigenics, Inc. Pharmacodynamically enhanced therapeutic proteins
HRP20110404T1 (hr) * 2005-11-08 2011-08-31 Ambrx Ubrzivači za modifikaciju ne-prirodnih aminokiselina i polipeptida ne-prirodnih aminokiselina
KR20080079643A (ko) * 2005-11-16 2008-09-01 암브룩스, 인코포레이티드 비-천연 아미노산을 포함하는 방법 및 조성물
AU2006326404B2 (en) * 2005-12-14 2011-11-03 Ambrx, Inc. Compositions containing, methods involving, and uses of non-natural amino acids and polypeptides
CA2636914C (en) 2006-01-12 2016-08-09 Kuniaki Yoshioka Oral composition containing interferon-.alpha.
CN100475270C (zh) 2006-01-20 2009-04-08 清华大学 一种治疗肿瘤的药物及其应用
CN101002945B (zh) 2006-01-20 2012-09-05 清华大学 一种用于肿瘤治疗的新型复合物
BRPI0710878A2 (pt) 2006-04-11 2015-03-31 Novartis Ag Compostos orgânicos e seus usos
AU2007248680C1 (en) * 2006-05-02 2014-01-23 Allozyne, Inc. Non-natural amino acid substituted polypeptides
US20080096819A1 (en) * 2006-05-02 2008-04-24 Allozyne, Inc. Amino acid substituted molecules
RU2008145084A (ru) 2006-05-24 2010-06-27 Ново Нордиск Хелс Кеа Аг (Ch) Аналоги фактора ix, имеющие пролонгированное время полужизни in vivo
EP2030628B1 (de) 2006-06-01 2012-08-15 Yun Cheng Peptid zur prophylaxe oder therapie von leberschäden sowie ein derivat davon und seine verwendung
CN1911447B (zh) * 2006-06-30 2010-05-12 复旦大学 转铁蛋白-聚乙二醇-药物分子复合物及其制备药物的用途
EP1886685A1 (de) 2006-08-11 2008-02-13 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methoden, Verwendungen und Zusammensetzungen zur Modulation der Replikation von HCV durch Aktivierung oder Hemmung des Farnesoid X Rezeptors
US20080131398A1 (en) * 2006-08-21 2008-06-05 United Therapeutics Corporation Combination therapy for treatment of viral infections
EP2064333B1 (de) * 2006-09-08 2014-02-26 Ambrx, Inc. Unterdrücker-trna-transkription für wirbeltierzellen
CA2663083A1 (en) * 2006-09-08 2008-03-13 Ambrx, Inc. Modified human plasma polypeptide or fc scaffolds and their uses
CN101541955B (zh) * 2006-09-08 2016-09-28 Ambrx公司 用于脊椎动物细胞的杂合抑制tRNA
AU2007325838B2 (en) 2006-11-22 2013-09-19 Bristol-Myers Squibb Company Targeted therapeutics based on engineered proteins for tyrosine kinases receptors, including IGF-IR
CN101219219B (zh) * 2007-01-10 2013-02-13 北京普罗吉生物科技发展有限公司 包含血管抑素或其片段的复合物、其制备方法及应用
ATE516814T1 (de) 2007-02-02 2011-08-15 Bristol Myers Squibb Co 10fn3 domain zur behandlung von krankheiten begleitet von unerwünschter angiogenese
BRPI0809583B1 (pt) 2007-03-30 2022-02-22 Ambrx, Inc Polipeptídeo fgf-21 modificado, composição compreendendo o mesmo, método para produzir o referido polipetídeo fgf-21 e célula compreendendo um polinucleotídeo
MX2009011870A (es) * 2007-05-02 2009-11-12 Ambrx Inc Polipeptidos de interferon beta modificados y usos de los mismos.
CA2707840A1 (en) 2007-08-20 2009-02-26 Allozyne, Inc. Amino acid substituted molecules
WO2009030066A1 (en) * 2007-09-04 2009-03-12 Biosteed Gene Expression Tech. Co., Ltd. Polyethylene glycol modified interferon alpha 2b and preparation method and applicatioins thereof
PL2196475T3 (pl) 2007-09-04 2012-10-31 Biosteed Gene Expression Tech Co Ltd Interferon alfa 2a zmodyfikowany rozgałęzioną cząsteczką glikolu polietylenowego, sposób jego syntezy i zastosowanie
ES2908934T3 (es) 2007-10-04 2022-05-04 Zymogenetics Inc ZB7H6 miembro de la familia B7 y composiciones y métodos relacionados
US8216571B2 (en) 2007-10-22 2012-07-10 Schering Corporation Fully human anti-VEGF antibodies and methods of using
ES2632504T3 (es) 2007-11-20 2017-09-13 Ambrx, Inc. Polipéptidos de insulina modificados y sus usos
PL2796466T3 (pl) 2007-12-07 2018-04-30 Zymogenetics, Inc. Humanizowane cząsteczki przeciwciała swoiste dla il-31
NZ620606A (en) 2008-02-08 2015-08-28 Ambrx Inc Modified leptin polypeptides and their uses
BRPI0822530B1 (pt) 2008-04-03 2022-03-22 Biosteed Gene Expression Tech. Co., Ltd Método de preparação de um hormônio de crescimento humano glicolado por polietileno (modificado por peg), hormônio do crescimento humano modificado por peg de menor peso molecular aparente e seu uso, preparação de hormônio do crescimento humano modificado por peg de menor peso molecular aparente e seu método de preparação e composição
AR071874A1 (es) 2008-05-22 2010-07-21 Bristol Myers Squibb Co Proteinas de dominio de armazon basadas en fibronectina multivalentes
US8658766B2 (en) 2008-06-27 2014-02-25 Zymogenetics, Inc. Soluble hybrid Fcγ receptors and related methods
PE20110426A1 (es) 2008-07-23 2011-07-01 Ambrx Inc Polipeptidos g-csf bovinos modificados
PT2337846T (pt) 2008-09-26 2018-04-05 Ambrx Inc Vacinas e microrganismos dependentes da replicação de aminoácidos não naturais
CN102232085A (zh) 2008-09-26 2011-11-02 Ambrx公司 修饰的动物促红细胞生成素多肽和其用途
EP2341924A4 (de) 2008-10-02 2013-01-23 David Gladstone Inst Verfahren zur behandlung von hepatitis-c-virusinfektionen
EP2408449A4 (de) 2009-03-18 2012-08-08 Univ Leland Stanford Junior Verfahren und zusammensetzungen zur behandlung von flaviviridae-virusinfektionen
US8512690B2 (en) 2009-04-10 2013-08-20 Novartis Ag Derivatised proline containing peptide compounds as protease inhibitors
US20110182850A1 (en) 2009-04-10 2011-07-28 Trixi Brandl Organic compounds and their uses
EP2896404B1 (de) 2009-06-04 2017-08-02 Novartis AG Verfahren zur Identifizierung von Stellen für IgG-Konjugation
US20110027229A1 (en) 2009-07-31 2011-02-03 Medtronic, Inc. Continuous subcutaneous administration of interferon-alpha to hepatitis c infected patients
EA201200650A1 (ru) 2009-10-30 2012-12-28 Бёрингер Ингельхайм Интернациональ Гмбх Курсы комбинированного лечения вируса гепатита с, включающие bi201335, интерферон-альфа и рибавирин
JP2013515080A (ja) 2009-12-21 2013-05-02 アンブルックス，インコーポレイテッド 修飾されているウシのソマトトロピンポリペプチドおよびそれらの使用
WO2011087810A1 (en) 2009-12-21 2011-07-21 Ambrx, Inc. Modified porcine somatotropin polypeptides and their uses
EP2569331A1 (de) 2010-05-10 2013-03-20 Perseid Therapeutics LLC Polypeptid-inhibitoren von vla4
US8765737B1 (en) 2010-05-11 2014-07-01 Demerx, Inc. Methods and compositions for preparing and purifying noribogaine
US8362007B1 (en) 2010-05-11 2013-01-29 Demerx, Inc. Substituted noribogaine
US9394294B2 (en) 2010-05-11 2016-07-19 Demerx, Inc. Methods and compositions for preparing and purifying noribogaine
EP3091028A1 (de) 2010-05-26 2016-11-09 Bristol-Myers Squibb Company Auf fibronectin basierende gerüstproteine mit erhöhter stabilität
CN102711871A (zh) 2010-06-16 2012-10-03 麦德托尼克公司 用于稳定药物递送装置中的药物的阻尼系统
US9586954B2 (en) 2010-06-22 2017-03-07 Demerx, Inc. N-substituted noribogaine prodrugs
US8741891B1 (en) 2010-06-22 2014-06-03 Demerx, Inc. N-substituted noribogaine prodrugs
US8802832B2 (en) 2010-06-22 2014-08-12 Demerx, Inc. Compositions comprising noribogaine and an excipient to facilitate transport across the blood brain barrier
US8637648B1 (en) 2010-06-22 2014-01-28 Demerx, Inc. Compositions comprising noribogaine and an excipient to facilitate transport across the blood brain barrier
EP2585065A1 (de) 2010-06-24 2013-05-01 Panmed Ltd. Behandlung von hepatitis c-virus-bedingten mit hydroxychloroquin oder einer kombination aus hydroxychloroquin und einem anti-virus-mittel
US9358237B2 (en) 2010-07-23 2016-06-07 Demerx, Inc. Noribogaine compositions
US9567386B2 (en) 2010-08-17 2017-02-14 Ambrx, Inc. Therapeutic uses of modified relaxin polypeptides
AU2011291943B2 (en) 2010-08-17 2015-01-22 Ambrx, Inc. Modified relaxin polypeptides and their uses
TWI480288B (zh) 2010-09-23 2015-04-11 Lilly Co Eli 牛顆粒細胞群落刺激因子及其變體之調配物
WO2012045704A1 (en) 2010-10-05 2012-04-12 Novartis Ag New treatments of hepatitis c virus infection
AU2011311880B2 (en) 2010-10-08 2014-07-24 Novartis Ag Vitamin E formulations of sulfamide NS3 inhibitors
CN105381450A (zh) 2010-11-30 2016-03-09 诺华有限公司 丙型肝炎病毒感染的新疗法
EP2481740B1 (de) 2011-01-26 2015-11-04 DemeRx, Inc. Verfahren und Zusammensetzungen zur Herstellung von Noribogain aus Voacangin
WO2012107589A1 (en) 2011-02-11 2012-08-16 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment and prevention of hcv infections
WO2012130996A1 (en) 2011-03-31 2012-10-04 Novartis Ag Alisporivir to treat hepatitis c virus infection
JP2014509630A (ja) 2011-04-01 2014-04-21 ノバルティス アーゲー Ｂ型肝炎ウイルス単独の感染症またはデルタ肝炎ウイルスとの複合感染症および付随する肝疾患の治療
WO2012140082A1 (en) 2011-04-13 2012-10-18 Novartis Ag Treatment of hepatitis c virus infection with alisporivir
US20140187488A1 (en) 2011-05-17 2014-07-03 Bristol-Myers Squibb Company Methods for maintaining pegylation of polypeptides
EP2709648A4 (de) 2011-05-19 2015-04-08 Geysen Hendrik M Verbindungen zur bindung an den erythropoietinrezeptor
MX2014000031A (es) 2011-07-01 2014-07-09 Bayer Ip Gmbh Polipeptidos de fusion de relaxina y usos de los mismos.
US20140314713A1 (en) 2011-07-20 2014-10-23 Universite Paris Diderot - Paris Vii Methods for determining treatment response in patients infected with hcv genotype 4
JP2014525939A (ja) * 2011-08-25 2014-10-02 ナノジェン・ファーマシューティカル・バイオテクノロジー ペグインターフェロンλ１複合体
US9617274B1 (en) 2011-08-26 2017-04-11 Demerx, Inc. Synthetic noribogaine
BR112014007247A2 (pt) 2011-09-27 2017-03-28 Novartis Ag alisporivir para o tratamento de infecção por vírus da hepatite c
CN104053670A (zh) 2011-10-31 2014-09-17 百时美施贵宝公司 具有降低的免疫原性的纤连蛋白结合域
MY171759A (en) 2011-12-06 2019-10-28 Univ Leland Stanford Junior Methods and compositions for treating viral diseases
EP2788003A4 (de) 2011-12-09 2015-05-27 Demerx Inc Phosphatester von noribogain
US9150584B2 (en) 2012-01-25 2015-10-06 Demerx, Inc. Indole and benzofuran fused isoquinuclidene derivatives and processes for preparing them
WO2013112673A1 (en) 2012-01-25 2013-08-01 Demerx, Inc. Synthetic voacangine
US8454947B1 (en) 2012-03-01 2013-06-04 Nanogen Pharmaceutical Biotechnology PEG-interferon lambda 1 conjugates
JP2015509980A (ja) 2012-03-14 2015-04-02 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング Ｈｃｖ−ｈｉｖ同時感染患者集団のｈｃｖ感染症を治療するための併用療法
JP2015512900A (ja) 2012-03-28 2015-04-30 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 特別な患者の遺伝子亜型分集団のｈｃｖ感染症を治療するための併用療法
HK1206610A1 (en) 2012-03-30 2016-01-15 Sorrento Therapeutics, Inc. Fully human antibodies that bind to vegfr2
WO2013177187A2 (en) 2012-05-22 2013-11-28 Massachusetts Institute Of Technology Synergistic tumor treatment with extended-pk il-2 and therapeutic agents
WO2013174988A1 (en) 2012-05-24 2013-11-28 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for predicting and monitoring treatment response in hcv- and hcv/hiv-infected subjects
JP2015519375A (ja) 2012-05-31 2015-07-09 ソレント・セラピューティクス・インコーポレイテッドＳｏｒｒｅｎｔｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， Ｉｎｃ． Ｐｄ−ｌ１に結合する抗原結合蛋白質
US9738724B2 (en) 2012-06-08 2017-08-22 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
CN105050618B (zh) 2012-06-21 2018-11-16 索伦托治疗有限公司 与c-Met结合的抗原结合蛋白
CA2877814A1 (en) 2012-06-22 2013-12-27 Dingqiu HUANG Antigen binding proteins that bind ccr2
DK2863955T3 (en) 2012-06-26 2017-01-23 Sutro Biopharma Inc MODIFIED FC PROTEINS, INCLUDING LOCATION-SPECIFIC NON-NATURAL AMINO ACID RESIDUES, CONJUGATES THEREOF, METHODS OF PRODUCING ITS AND PROCEDURES FOR USE THEREOF
BR112015004022B1 (pt) 2012-08-31 2023-04-25 Sutro Biopharma, Inc Aminoácidos modificados compreendendo um grupo azido
US20140205566A1 (en) 2012-11-30 2014-07-24 Novartis Ag Cyclic nucleuoside derivatives and uses thereof
US8940728B2 (en) 2012-12-20 2015-01-27 Demerx, Inc. Substituted noribogaine
WO2014098877A1 (en) 2012-12-20 2014-06-26 Demerx, Inc. Substituted noribogaine
US9045481B2 (en) 2012-12-20 2015-06-02 Demerx, Inc. Substituted noribogaine
US20150361159A1 (en) 2013-02-01 2015-12-17 Bristol-Myers Squibb Company Fibronectin based scaffold proteins
CA2913977C (en) 2013-05-31 2022-11-29 Sorrento Therapeutics, Inc. Antigen binding proteins that bind pd-1
ES2658039T3 (es) 2013-07-10 2018-03-08 Sutro Biopharma, Inc. Anticuerpos que comprenden múltiples residuos de aminoácidos no naturales sitio-específicos, métodos para su preparación y métodos de uso
US9840493B2 (en) 2013-10-11 2017-12-12 Sutro Biopharma, Inc. Modified amino acids comprising tetrazine functional groups, methods of preparation, and methods of their use
SI3137078T1 (sl) 2014-05-01 2019-08-30 Eiger Biopharmaceuticals, Inc. Zdravljenje okužbe s hepatitis delta virusom
US10076512B2 (en) 2014-05-01 2018-09-18 Eiger Biopharmaceuticals, Inc. Treatment of hepatitis delta virus infection
US11311519B2 (en) 2014-05-01 2022-04-26 Eiger Biopharmaceuticals, Inc. Treatment of hepatitis delta virus infection
US9388239B2 (en) 2014-05-01 2016-07-12 Consejo Nacional De Investigation Cientifica Anti-human VEGF antibodies with unusually strong binding affinity to human VEGF-A and cross reactivity to human VEGF-B
WO2015195673A2 (en) 2014-06-18 2015-12-23 Demerx, Inc. Halogenated indole and benzofuran derivatives of isoquinuclidene and processes for preparing them
EP3180018B1 (de) 2014-08-12 2019-07-24 Massachusetts Institute Of Technology Synergistische tumorbehandlung mit il-2 und integrin-bindendem fc-fusionsprotein
US20170224777A1 (en) 2014-08-12 2017-08-10 Massachusetts Institute Of Technology Synergistic tumor treatment with il-2, a therapeutic antibody, and a cancer vaccine
CA2958673A1 (en) 2014-08-22 2016-02-25 Sorrento Therapeutics, Inc. Antigen binding proteins that bind cxcr3
US9987241B2 (en) 2014-09-25 2018-06-05 The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma Enzyme conjugate and prodrug cancer therapy
SG11201702824UA (en) 2014-10-24 2017-05-30 Bristol Myers Squibb Co Modified fgf-21 polypeptides and uses thereof
SI3215193T1 (sl) * 2014-11-06 2024-02-29 Pharmaessentia Corporation Dozirna shema za pegiliran interferon
WO2016148179A1 (ja) * 2015-03-17 2016-09-22 国立大学法人信州大学 Ｉｆｎを用いた非接着培養による樹状細胞の調製方法
KR102514971B1 (ko) 2015-04-21 2023-03-27 아이거 바이오파마슈티컬스 인코포레이티드 로나파르닙 및 리토나버를 포함하는 약제 조성물
CN108135979A (zh) 2015-11-03 2018-06-08 豪夫迈·罗氏有限公司 Hbv衣壳组装抑制剂和干扰素的组合疗法
CN108367001A (zh) 2015-11-04 2018-08-03 艾格尔峰生物制药有限公司 治疗丁型肝炎病毒感染
CN109715821B (zh) 2016-01-29 2022-09-06 索伦托药业有限公司 与pd-l1结合的抗原结合蛋白
WO2018087345A1 (en) 2016-11-14 2018-05-17 F. Hoffmann-La Roche Ag COMBINATION THERAPY OF AN HBsAg INHIBITOR, A NUCLEOS(T)IDE ANALOGUE AND AN INTERFERON
US10350266B2 (en) 2017-01-10 2019-07-16 Nodus Therapeutics, Inc. Method of treating cancer with a multiple integrin binding Fc fusion protein
EP3568150A4 (de) 2017-01-10 2020-12-02 Xcella Biosciences, Inc. Kombinationstumorbehandlung mit integrin-bindendem fc-fusionsprotein und immunmodulator
ES3009748T3 (en) 2017-01-18 2025-03-31 Inst Nat Sante Rech Med Pharmaceutical compositions for the treatment patients suffering from myeloproliferative disorders
KR102670432B1 (ko) 2017-02-08 2024-05-28 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 약동학적 인핸서를 포함하는 변형된 렐락신 폴리펩티드 및 그의 용도
US11926664B2 (en) 2017-07-25 2024-03-12 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for modulating monocytopoiesis
US11446365B2 (en) 2017-08-09 2022-09-20 The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma Antimalarial enzyme conjugates, kits containing same, and methods of producing and using same
WO2019036605A2 (en) 2017-08-17 2019-02-21 Massachusetts Institute Of Technology MULTIPLE SPECIFICITY BINDING AGENTS OF CXC CHEMOKINES AND USES THEREOF
SG11202102427XA (en) 2018-09-11 2021-04-29 Ambrx Inc Interleukin-2 polypeptide conjugates and their uses
US20200102370A1 (en) 2018-09-28 2020-04-02 Massachusetts Institute Of Technology Collagen-localized immunomodulatory molecules and methods thereof
AU2019361206A1 (en) 2018-10-19 2021-06-03 Ambrx, Inc. Interleukin-10 polypeptide conjugates, dimers thereof, and their uses
WO2020154032A1 (en) 2019-01-23 2020-07-30 Massachusetts Institute Of Technology Combination immunotherapy dosing regimen for immune checkpoint blockade
CN119455004A (zh) 2019-02-12 2025-02-18 Ambrx公司 包含抗体-tlr激动剂缀合物的组合物、方法和用途
US20220241376A1 (en) 2019-07-18 2022-08-04 Enyo Pharma Method for decreasing adverse-effects of interferon
WO2021178612A1 (en) 2020-03-05 2021-09-10 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy for treating hepatitis b virus infection
CA3174114A1 (en) 2020-03-11 2021-09-16 Ambrx, Inc. Interleukin-2 polypeptide conjugates and methods of use thereof
WO2021228983A1 (en) 2020-05-13 2021-11-18 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) A pharmaceutical composition comprising an arsenic compound, an inductor of type-1 ifn and a protein kinase inhibitor for treating cancer
ES2929379T3 (es) 2020-05-20 2022-11-28 Inst Nat Sante Rech Med Métodos para el tratamiento de infecciones por coronavirus
US20210403908A1 (en) 2020-06-22 2021-12-30 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treatment of hepatitis d virus infection
WO2022040596A1 (en) 2020-08-20 2022-02-24 Ambrx, Inc. Antibody-tlr agonist conjugates, methods and uses thereof
WO2022043496A2 (en) 2020-08-28 2022-03-03 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Use of mait cells as biomarkers and biotargets in covid-19
WO2022079205A1 (en) 2020-10-15 2022-04-21 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Use of ifn-alpha polypeptides for the treatment of coronavirus infections
WO2022159414A1 (en) 2021-01-22 2022-07-28 University Of Rochester Erythropoietin for gastroinfestinal dysfunction
KR20240004342A (ko) 2021-04-03 2024-01-11 암브룩스, 인코포레이티드 항-her2 항체-약물 접합체 및 이의 용도
CN120676956A (zh) 2023-02-09 2025-09-19 谢彦晖 聚乙二醇修饰的白介素2、糖皮质激素和透明质酸用于治疗特应性皮炎
WO2025006676A2 (en) 2023-06-27 2025-01-02 Firecyte Therapeutics, Inc. Insulin-like growth factor binding protein like 1 (igfbpl1) compositions and methods of use thereof

Family Cites Families (53)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2651657A (en) * 1949-05-21 1953-09-08 Standard Oil Dev Co Synthetic lubricating oil
SE337223B (de) * 1967-05-23 1971-08-02 Pharmacia Ab
US3619371A (en) * 1967-07-03 1971-11-09 Nat Res Dev Production of a polymeric matrix having a biologically active substance bound thereto
SE343210B (de) * 1967-12-20 1972-03-06 Pharmacia Ab
DK132327A (de) * 1968-07-16
US3632828A (en) * 1968-12-16 1972-01-04 Dow Chemical Co Polyethylene glycol monomethyl ether carbonates
BE758425A (fr) * 1969-12-02 1971-04-16 Baxter Laboratories Inc Streptokinase liee chimiquement a une matrice en carbohydrate (
DE2247163A1 (de) * 1972-09-26 1974-03-28 Merck Patent Gmbh Traegermatrix zur fixierung biologisch wirksamer stoffe und verfahren zu ihrer herstellung
US4179337A (en) * 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
US4002531A (en) * 1976-01-22 1977-01-11 Pierce Chemical Company Modifying enzymes with polyethylene glycol and product produced thereby
US4100271A (en) * 1976-02-26 1978-07-11 Cooper Laboratories, Inc. Clear, water-miscible, liquid pharmaceutical vehicles and compositions which gel at body temperature for drug delivery to mucous membranes
GB1578348A (en) * 1976-08-17 1980-11-05 Pharmacia Ab Products and a method for the therapeutic suppression of reaginic antibodies responsible for common allergic
US4094744A (en) * 1976-11-18 1978-06-13 W. R. Grace & Co. Water-dispersible protein/polyurethane reaction product
DE2862449D1 (en) * 1977-08-22 1984-11-22 Nat Res Dev Macromolecular covalent conjugates, methods for preparing and pharmaceutical compositions containing them
JPS55110105A (en) * 1979-02-19 1980-08-25 Japan Atom Energy Res Inst Preparation of polymer composition containing physiologically active material
JPS6023084B2 (ja) * 1979-07-11 1985-06-05 味の素株式会社 代用血液
US4640835A (en) * 1981-10-30 1987-02-03 Nippon Chemiphar Company, Ltd. Plasminogen activator derivatives
US4609546A (en) * 1982-06-24 1986-09-02 Japan Chemical Research Co., Ltd. Long-acting composition
WO1985003934A1 (fr) * 1984-03-06 1985-09-12 Takeda Chemical Industries, Ltd. Proteine modifiee chimiquement et son procede de preparation
US4486344A (en) * 1983-03-28 1984-12-04 Miles Laboratories, Inc. Urea-linked immunogens, antibodies, and preparative method
JPS6098988A (ja) * 1983-11-01 1985-06-01 Chemo Sero Therapeut Res Inst Ｌｐｆ−ｈａの精製法
JPS60127952A (ja) 1983-12-14 1985-07-08 Fanuc Ltd 領域加工方法
US4496689A (en) * 1983-12-27 1985-01-29 Miles Laboratories, Inc. Covalently attached complex of alpha-1-proteinase inhibitor with a water soluble polymer
DE3572982D1 (en) * 1984-03-06 1989-10-19 Takeda Chemical Industries Ltd Chemically modified lymphokine and production thereof
GB8430252D0 (en) * 1984-11-30 1985-01-09 Beecham Group Plc Compounds
US4732863A (en) * 1984-12-31 1988-03-22 University Of New Mexico PEG-modified antibody with reduced affinity for cell surface Fc receptors
DE3676670D1 (de) * 1985-06-26 1991-02-07 Cetus Corp Solubilisierung von proteinen fuer pharmazeutische zusammensetzungen mittels polymerkonjugierung.
US4917888A (en) * 1985-06-26 1990-04-17 Cetus Corporation Solubilization of immunotoxins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation
US4766106A (en) * 1985-06-26 1988-08-23 Cetus Corporation Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation
US4847079A (en) * 1985-07-29 1989-07-11 Schering Corporation Biologically stable interferon compositions comprising thimerosal
US5100664A (en) * 1985-09-20 1992-03-31 Cetus Corporation Human IL-2 as a vaccine adjuvant
US4818769A (en) * 1985-09-20 1989-04-04 Cetus Corporation Method of controlling stress-related disease in livestock by administration of human IL-2
US5102872A (en) * 1985-09-20 1992-04-07 Cetus Corporation Controlled-release formulations of interleukin-2
US4791192A (en) * 1986-06-26 1988-12-13 Takeda Chemical Industries, Ltd. Chemically modified protein with polyethyleneglycol
US4810638A (en) * 1986-07-24 1989-03-07 Miles Inc. Enzyme-labeled antibody reagent with polyalkyleneglycol linking group
US4894226A (en) * 1986-11-14 1990-01-16 Cetus Corporation Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polyproline conjugation
US4851220A (en) * 1986-11-26 1989-07-25 Schering Corporation Stable oleaginous gel
US4871538A (en) * 1987-07-13 1989-10-03 Schering Corporation Insoluble copper-alpha interferon complex
AU611932B2 (en) * 1987-08-21 1991-06-27 Wellcome Foundation Limited, The Novel complex
US4847325A (en) * 1988-01-20 1989-07-11 Cetus Corporation Conjugation of polymer to colony stimulating factor-1
US5199360A (en) 1988-09-27 1993-04-06 Sirkka Koistinen Table constructions
GB8824591D0 (en) * 1988-10-20 1988-11-23 Royal Free Hosp School Med Fractionation process
AU4660789A (en) * 1988-11-23 1990-06-12 Genentech Inc. Polypeptide derivatives
US4902502A (en) * 1989-01-23 1990-02-20 Cetus Corporation Preparation of a polymer/interleukin-2 conjugate
US5122614A (en) * 1989-04-19 1992-06-16 Enzon, Inc. Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides
WO1990013540A1 (en) * 1989-04-19 1990-11-15 Enzon, Inc. Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides
EP0400472B1 (de) * 1989-05-27 1996-04-03 Sumitomo Pharmaceuticals Company, Limited Verfahren für die Herstellung von Polyethylenglykolderivate und modifizierte Proteine.
JP2978187B2 (ja) * 1989-11-02 1999-11-15 日本ケミカルリサーチ株式会社 修飾スーパーオキサイドディスムターゼの製造法
US5234903A (en) * 1989-11-22 1993-08-10 Enzon, Inc. Chemically modified hemoglobin as an effective, stable non-immunogenic red blood cell substitute
JP3187044B2 (ja) * 1989-12-01 2001-07-11 ビーエーエスエフ アクチェンゲゼルシャフト ヒルジン突然変異蛋白質及びヒルジンポリアルキレングリコール複合体
JPH04202293A (ja) * 1990-11-29 1992-07-23 Tonen Corp 作動油
US5595732A (en) * 1991-03-25 1997-01-21 Hoffmann-La Roche Inc. Polyethylene-protein conjugates
US5281698A (en) * 1991-07-23 1994-01-25 Cetus Oncology Corporation Preparation of an activated polymer ester for protein conjugation

Also Published As

Publication number Publication date
ZW11193A1 (en) 1994-03-23
AU668742B2 (en) 1996-05-16
NO933028D0 (no) 1993-08-25
LT3174B (en) 1995-02-27
AU4478093A (en) 1994-03-03
DK0593868T3 (da) 1999-02-08
KR940003969A (ko) 1994-03-14
NZ248452A (en) 1995-12-21
UY23635A1 (es) 1994-03-01
DE69317979D1 (de) 1998-05-20
CN1088936A (zh) 1994-07-06
FI933740L (fi) 1994-02-27
CN1211578A (zh) 1999-03-24
CN1173500A (zh) 1998-02-18
EE9400151A (et) 1996-02-15
BG98067A (en) 1994-12-02
MX9305146A (es) 1994-03-31
ATE165102T1 (de) 1998-05-15
SI9300423A (en) 1994-03-31
CN1039015C (zh) 1998-07-08
FI109765B (fi) 2002-10-15
ES2116376T3 (es) 1998-07-16
SK89893A3 (en) 1994-04-06
NZ264872A (en) 1996-01-26
CZ169393A3 (en) 1994-04-13
KR100295520B1 (ko) 2001-09-17
HRP931094A2 (en) 1997-06-30
EP0593868B1 (de) 1998-04-15
CN1155618C (zh) 2004-06-30
IL106750A0 (en) 1993-12-08
OA09850A (fr) 1994-08-15
IS4067A (is) 1994-02-27
JP2859105B2 (ja) 1999-02-17
JPH06192300A (ja) 1994-07-12
RO112730B1 (ro) 1997-12-30
EP0593868A1 (de) 1994-04-27
YU56693A (sh) 1997-01-08
MW7693A1 (en) 1994-06-08
LV10907A (lv) 1995-12-20
CN1183112C (zh) 2005-01-05
MY131445A (en) 2007-08-30
BR9303469A (pt) 1994-03-22
HUT67013A (en) 1995-01-30
HU9302366D0 (en) 1993-11-29
ZA936098B (en) 1994-03-01
LTIP888A (lt) 1994-08-25
PL300194A1 (en) 1994-04-05
PH30460A (en) 1997-05-28
US5382657A (en) 1995-01-17
LV10907B (en) 1996-04-20
FI933740A0 (fi) 1993-08-25
CA2103829A1 (en) 1994-02-27
CA2103829C (en) 2003-04-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE69317979T2 (de) PEG-Interferon-Konjugate
DE69720320T2 (de) Interferon-Konjugate
DE69920002T2 (de) Konjugate aus polyole und beta-interferon
DE69228269T2 (de) Polyäthylenglycolprotein Konjugate
DE60315145T2 (de) Hydrophiles polymerderivat mit y-verzweigung und herstellungsverfahren dafür; obige verbindung enthaltender medizinischer verbundwerkstoff
DE60224415T2 (de) Pegyliertes und diglykosyliertes erythropoietin
DE69514342T2 (de) Modifizierte polypeptide mit erhoehter biologischer aktivitaet
DE69228627T2 (de) Langkettiger Carbonsäureimidester
DE69637382T2 (de) Interferon polymer-konjugate und verfahren zu ihrer herstellung
DE60036053T2 (de) Erythropoietinkonjugate
DE60011087T2 (de) Konjugate zwischen erythropoietin und polyethylenglycol
DE602004009314T2 (de) Polysialinsäurederivate
DE3876997T2 (de) Konjugate von superoxiddismutase.
HK1005225B (en) Interferon conjugates
MXPA00010223A (en) Polyol-ifn-beta conjugates
MXPA97004012A (en) Conjugados de interfe

Legal Events

Date Code Title Description
8364 No opposition during term of opposition