CN1910200A - Il－28和il－29的均一化制剂 - Google Patents

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Abstract

通过突变编码成熟蛋白质的多核苷酸序列中一个或多个半胱氨酸残基，来生产IL－28A，IL－28B和IL－29的均一化制剂。半胱氨酸突变体蛋白质显示要么与其关联受体相结合，要么展示有生物活性。所显示的一类生物活性是抗病毒活性。

Description

IL-28和IL-29的均一化制剂
发明背景
细胞因子在调节血细胞生成和免疫应答中起着重要的作用，并能够影响淋巴细胞的发育。人II类细胞因子家族包括干扰素-α(IFN-α)亚型、干扰素-β(IFN-β)、干扰素-γ(IFN-γ)、IL-10、IL-19(美国专利5,985,614)、MDA-7(Jiang等，Oncogene 11，2477-2486，(1995))、IL-20(Jiang等，Oncogene 11，2477-2486，(1995))、IL-22(Xie等，J.Biol.Chem.275，31335-31339，(2000))、和AK-155(Knappe等，J.Virol.74，3881-3887，(2000))。大多数细胞因子通过与I类或II类细胞因子受体来结合和传导信号。人II类细胞因子受体家族的成员包括干扰素-αR1(IFN-αR1)、干扰素-γ-R2(IFN-γ-R2)、干扰素-γR1(IFN-γR1)、干扰素-γR2(IFN-γR2)、IL-10R(Liu等，J.Immunol.152，1821-1829，(1994))、CRF2-4(Lutfalla等Genomics16，366-373，(1993))、IL-20Rβ(Blumberg等，Cell 104，9-19，(2001))(也称为zcytor7(美国专利5,945,511)和CRF2-8(Kotenko等，Oncogene19，2557-2565，(2000))、IL-20Rβ(Blumberg等，同上，(2001))(也称为DIRS1(PCT WO99/46379))、IL-22RA1(IL-22受体α1，提交给HUGO要求批准)(也称为IL-22R(Xie等，J.Biol.Chem.275，31335-31339，(2000))、zcytorll(美国专利5,965,704)和CRF2-9(Kotenko等，Oncogene，19，2557-2565，(2000))以及组织因子。
II类细胞因子受体通常是杂二聚体，其由两个不同的受体链(即α和β受体亚基(Stahl等，Cell，74，587-590，(1993)))组成。一般地，α亚基是主要的细胞因子结合蛋白，而β亚基是形成高亲和结合位点和进行信号转导所必需的。IL-20受体是一个例外，其中两个亚基都是IL-20结合所必需的(Blumberg等，同上，(2001))。
II类细胞因子受体可以通过该受体的细胞外部分中大约200个氨基酸(D200)的保守细胞因子结合域来鉴定。该细胞因子结合域由两个各约为100个氨基酸的III型纤连蛋白(FnIII)结构域组成(Bazan J.F.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87，6934-6938，(1990)；Thoreau等，FEBS Lett.282，16-31，(1991))。每个FnIII结构域都包含保守的Cys、Pro和Trp残基，所述残基决定了与免疫球蛋白恒定区相似的7个β链的特征性折叠方式(Uze等，J.Interferon Cytokine Res.15，3-26，(1995))。II类细胞因子受体家族的保守结构元件使得可能基于一级氨基酸序列同源性来鉴定该家族的新成员。
白细胞介素是介导免疫应答(包括炎症)的细胞因子家族。T细胞是免疫应答的核心，其产生许多细胞因子和针对抗原的获得性免疫。由T细胞产生的细胞因子被分成1型和2型(Kelso，A.Immun.Cell Biol.76：300-317，1998)。1型细胞因子包括IL-2、干扰素-γ(IFN-γ)、LT-α，其参与炎症应答、病毒免疫力、细胞内寄生物免疫和同种异体移植物排斥。2型细胞因子包括IL-4、IL-5、IL-6、IL-10和IL-13，其参与体液应答、蠕虫免疫和过敏反应。1型和2型所共有的细胞因子包括IL-3、GM-CSF和TNF-α。有一些证据暗示产生1型和2型的T细胞群偏好迁移进不同类型的发炎组织中。
从治疗的角度出发，干扰素尤其令人感兴趣(关于干扰素的综述参见DeMaeyer和De Maeyer-Guignard的《The Cytokine Handbook》(第三版)中的″Interferons″，第491-516页，Thompson(编)(Academic Press Ltd.1998)，并参见Walsh，Biopharmaceuticals：Biochemistry and Biotechnology，第158-188页(John Wiley & Sons 1998))。干扰素显示出多种生物活性，并可用于治疗某些自身免疫疾病(尤其是癌症)和增强免疫应答来抗感染物，包括病毒、细菌、真菌和原生生物。至今，已经鉴定出了6种形式的干扰素，它们被分为两大类。所谓“I型”IFN包括IFN-α、IFN-β、IFN-ω、IFN-δ和干扰素-τ。目前，IFN-γ和IFN-α的一个亚型是仅有的II型IFN。
I型IFN被认为来源于相同的祖先基因，它们保留了充分相似的结构从而通过相同的细胞表面受体起作用。人IFN-α/β受体的α链包含细胞外的N-末端结构域，其具有II类细胞因子受体的特征。IFN-γ与I型IFN或II型IFN-α亚型不具有显著的同源性，但其与I型IFN有许多相同的生物活性。
临床医生利用干扰素的多种活性从而通过利用该蛋白质来治疗大量疾病。例如，一种形式的IFN-α已经在50多个国家被批准用于治疗医学疾病，如毛细胞性白血病、肾细胞癌、基底细胞癌、恶性黑素瘤、AIDS相关性卡波西肉瘤、多发性骨髓瘤、慢性髓细胞性白血病、非何杰金氏淋巴瘤、喉乳头状瘤病、蕈样肉芽肿病、尖锐湿疣、慢性乙型肝炎、丙型肝炎、慢性丁型肝炎、慢性非甲、非乙/丙型肝炎。美国食品药品管理局批准了使用IFN-β来治疗多发性硬化，一种神经系统慢性疾病。IFN-γ被用于治疗慢性肉芽肿病，其中干扰素增强患者免疫应答从而消灭感染的细菌、真菌和原生生物病原体。临床研究表明，IFN-γ可用于治疗AIDS、利什曼病和瘤型麻风。
IL-28A、IL-28B和IL-29包含最近发现的新蛋白质家族，所述蛋白质家族与I型干扰素有序列同源性，并与IL-10有基因组同源性。该新家族在共同所有的PCT申请WO 02/086087和Sheppard等，Nature Immunol.4：63-68，2003(全文都纳入本文参考)中有详细的描述。从功能上说，IL-28和IL-29类似于I型干扰素，均能诱导细胞中的抗病毒状态，但不像I型干扰素的是，它们不显示出抗某些B细胞系的抗增殖活性。
已知IL-28和IL-29具有奇数个半胱氨酸(PCT申请WO 02/086087和Sheppard等，同上)。重组IL-28和IL-29的表达会导致形成蛋白质的非均一混合物，所述蛋白质包含多种构型的分子内二硫键。分离这些形式是困难和费力的。所以，通过表达以及重新折叠和纯化这些制剂的方法，希望能提供在表达时具有单一分子内二硫键模式的IL-28和IL-29分子，以及重折叠和纯化这些制剂以保持均一性的方法。因此，本发明提供生产IL-28和IL-29的均一化制剂的组合物和方法。
发明详述
定义
在以下叙述中，将广泛使用大量术语。以下定义将有助于理解本发明。
除非有其他说明，“一个”、“一种”、“这个”、“这种”、和“至少一个”、“至少一种”可以交换使用，它们指一个(种)或大于一个(种)。
本文中的术语“亲和标签”用于指这样的多肽片段，其能和第二多肽结合以便于该第二多肽的纯化或检测或者为第二多肽和底物的结合提供位点。原则上，可以获得其抗体或其它特异性结合剂的任何肽或蛋白质均可以用作亲和标签。亲和标签包括多聚组氨酸序列段、蛋白A(Nilsson等，EMBO J.4：1075，1985；Nilsson等，Methods Enzymol.198：3，1991)、谷胱甘肽S转移酶(Smith和Johnson等，Gene 67：31，1988)、Glu-Glu亲和标签(Grussenmeyer等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82：7952-4，1985)、P物质、FlagTM肽(Hopp等，Biotechnology 6；1204-10，1988)、链霉亲和素结合肽、或者其它抗原性表位或结合域。通常可参见Ford等，Protein Expression and Purification 2：95-107，1991。编码亲和标签的DNA可从供应商(如Pharmacia Biotech，Piscataway，NJ)处获得。
本文中的术语“等位变体”用于指占据相同染色体座位的两个或多个不同基因形式中的任一个。等位变异可以通过突变而自然产生，可以在群体内导致表型多态性。基因突变可以是沉默的(编码的多肽中没有变化)或可以编码具有改变的氨基酸序列的多肽。术语等位变体在本文中也用于指由基因的等位变体编码的蛋白质。
本文中的术语“氨基末端”和“羧基末端”用于指多肽内的位置。在上下文允许的情况下，参照多肽的特定序列或部分，这些术语用于指邻近或相对的位置。例如，在多肽中位于参考序列羧基末端的某个序列指，该序列位于该参考序列的羧基端近侧的位置，但不一定位于完整多肽的羧基端。
术语“互补物/反互补物对”是指不相同的部分，这些部分在适当的条件下将形成非共价方式连接的稳定对。例如，生物素和亲和素(或链霉亲和素)是互补物/反互补物对的原型成员。互补物/反互补物对的其它实例包括受体/配体对、抗体/抗原(或半抗原或表位)对、有义/反义多核苷酸对，等等。当期望使互补物/反互补物对随后解离时，优选该互补物/反互补物对具有＜109M-1的结合亲和力。
术语“简并核苷酸序列”是指这样的核苷酸序列，其包括一个或多个简并密码子(与编码多肽的参考多核苷酸分子相比)。简并密码子含有不同的核苷酸三联体，但编码相同的氨基酸残基(即，GAU和GAC三联体均编码Asp)。
术语“表达载体”用于指线性或环状的DNA分子，其包含编码感兴趣的多肽的片段，其中所述片段与提供其转录的额外片段可操作地连接。这些额外片段包括启动子和终止子序列，并还可以包括一个或多个复制起点、一个或多个选择标记、增强子、多腺苷酸化信号等。表达载体一般来源于质粒或病毒DNA，或可以含有这两者的元件。
当应用于多核苷酸时，术语“分离的”是指该多核苷酸已经离开其天然遗传环境并因而不含有其它无关或不需要的编码序列，而且它以适于在遗传工程化蛋白质制备系统中使用的形式存在。该分离的分子是从其天然环境中被分离出来的那些分子，包括cDNA和基因组克隆。本发明的分离的DNA分子不含有原来与之相连接的其它基因，但可以包括天然的5′和3′非翻译区，如启动子和终止子。相连区域的鉴定对于本领域普通技术人员而言是显然的(例如参见，Dynan和Tijan，Nature 316：774-78，1985)。
″分离的”多肽或蛋白质是这样的多肽或蛋白质，其被发现处在不同于其天然环境的条件下，例如离开了血液和动物组织。在优选形式中，该分离的多肽基本上不含有其它多肽，尤其是动物来源的其它多肽。优选提供高度纯化形式的多肽，即纯度大于95％、更优选纯度大于99％。在上下文中使用时，术语“分离的”不排除以可选的物理形式存在相同多肽，如二聚体或可选的糖基化或衍生化形式。
术语“水平”当指免疫细胞，如NK细胞、T细胞、尤其是细胞毒性T细胞、B细胞等时，增加的水平是增加的细胞数或增强的细胞功能活性。
术语“水平”当指病毒感染时，是指病毒感染水平的变化，其包括但不仅限于，CTL或NK细胞(如上所述)水平的变化、病毒负荷的减少、抗病毒抗体滴度的增加、丙氨酸氨基转移酶的血清学水平的降低、或者由靶组织或器官的组织学检验所确定的改善。对于本领域普通技术人员而言，很容易就能确定这些水平的变化是否是显著差异或变化。
术语“可操作地连接的”当指DNA片段时，表示这些区段按一定方式排列以使它们可以协同地为其预期的目的发挥作用，例如转录起始于启动子并通过编码片段进行到终止子。
术语“定向进化同源物”(ortholog)是指从一个物种获得的多肽或蛋白质，其是来自于不同物种的多肽或蛋白质的功能对应物。定向进化同源物之间的序列差异是物种形成的结果。
″平行进化同源物”(paralog)是由生物体产生的不同的但结构上相关的蛋白质。平行进化同源物被认为起源于基因重复。例如，α珠蛋白、β珠蛋白和肌红蛋白彼此是平行进化同源物。
″多核苷酸”是指从5′向3′末端阅读的脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸碱基的单链或双链聚合物。多核苷酸包括RNA和DNA，可以从天然来源分离、体外合成或通过组合天然和合成的分子来制备。多核苷酸的大小表示为碱基对(缩写“bp″)、核苷酸(″nt ″)或千碱基(″kb″)。在上下文允许的情况下，后两个术语可以描述单链或双链的多核苷酸。当该术语应用于双链分子时，其用于指整个长度，并且应理解为相当于术语“碱基对”。本领域技术人员明了，双链多核苷酸的两条链可以在长度上稍有差异，而且它们的末端可以因酶促裂解而交错；因此在双链多核苷酸分子中可能并非所有的核苷酸都是配对的。
″多肽”是指通过肽键连接的氨基酸残基的聚合物，可以是天然产生的或合成产生的。少于约10个氨基酸残基的多肽通常被称作“肽”。
本文中的术语“启动子”用于表示其所在领域认可的含义，指含有提供RNA聚合酶结合和转录起始的DNA序列的基因部分。启动子序列通常但并不总是存在于基因的5′非编码区。
″蛋白质”是指包含一条多条多肽链的大分子。蛋白质还可以包含非肽成分，如糖基。糖和其它非肽取代基可以由产生蛋白质的细胞添加至蛋白质上，并且它们将随细胞类型的不同而不同。蛋白质在本文中以其氨基酸主链结构来定义；诸如糖基等取代基一般不作详细说明，虽然如此，但仍可以存在。
术语“受体”是指细胞相关蛋白质，其与生物活性分子(即配体)结合并介导配体对细胞的作用。膜结合受体的特征在于包含细胞外配体结合域和通常参与信号转导的细胞内效应物域的多个肽结构。配体与受体的结合导致受体构象改变，引起效应物域和细胞内的其它分子间发生相互作用。该相互作用接着导致细胞代谢的改变。与受体-配体相互作用有关的代谢事件包括基因转录、磷酸化、去磷酸化、环AMP产生的增加、细胞钙动员、膜脂动员、细胞粘着、肌醇脂质的水解和磷脂的水解。一般来说，受体可以是膜结合的、细胞质的或细胞核的；单体(如促甲状腺激素受体、β肾上腺素能受体)或多聚体(如PDGF受体、生长激素受体、IL-3受体、GM-CSF受体、G-CSF受体、红细胞生成素受体和IL-6受体)。
术语“分泌信号序列”是指编码多肽(″分泌肽”)的DNA序列，所述多肽作为更大多肽的一个成分，引导该更大的多肽通过合成其的细胞的分泌途径。该更大多肽通常在通过分泌途径的运输过程中被切割而除去了分泌肽。
本文中的术语“剪接变体”用于指由基因转录产生的RNA的多种可选择形式。剪接变异通过利用存在于转录的RNA分子中的、或较少见地分别转录的RNA分子间的可选的剪接位点而自然产生，其可以导致由相同的基因而转录产生几种mRNA。剪接变体可以编码具有改变的氨基酸序列的多肽。本文中的术语剪接变体也用于指由基因转录产生的mRNA的剪接变体所编码的蛋白质。
应当理解，通过粗略的分析方法(如凝胶电泳)测定的聚合物的分子量和长度是近似值。当该值以“约”X或“大约”X表示时，所述X的值将理解为精确到±10％。
″zcyto20″、″zcyto21″、″zcyto22″分别是以前对人IL-28A、人IL-29和人IL-28B的命名。IL-28A的核苷酸和氨基酸序列分别如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示。IL-29的核苷酸和氨基酸序列分别如SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示。IL-28B的核苷酸和氨基酸序列分别如SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示。这些序列在共同转让到ZymoGenetics，Inc.的PCT申请WO02/086087中有全面的描述，将其全文纳入本文参考。
″zcyto24″和″zcyto25″是以前对鼠IL-28的名称，分别如SEQ ID NO：7、8、9、10所示。所述多核苷酸和多肽在共同转让到ZymoGenetics，Inc.的PCT申请WO02/086087中有全面的描述，将其全文纳入本参考。
″zcytor19″是以前对IL-28受体α亚基的名称，如SEQ ID NO：11所示。所述多核苷酸和多肽在Schering，Inc.为权益人的PCT申请WO 02/20569和转让到ZymoGenetics，Inc.的PCT申请WO02/44209中有描述，将其全文纳入本文参考。″IL-28受体″指IL-28α亚基和CRF2-4亚基形成的杂二聚受体。
本发明提供了包括DNA和RNA分子的多核苷酸分子，其编码IL-28和IL-29的半胱氨酸突变体，其造成表达出重组的IL-28或IL-29制剂，所述制剂是均一化制剂。为了本发明的目的，IL-28和IL-29的均一化制剂是，其中在纯化的多肽中包含至少98％的单一分子内二硫键模式的制剂。在其他具体实施方式中，纯化多肽的制剂中所述单一的二硫化物构型是99％均一的。一般来说，如本文所述，这些半胱氨酸突变体将保持野生型IL-28或IL-29的一些生物活性。例如，本发明的分子能以一定特异性结合IL-28受体。一般地，当KD落在100nM至100pM的范围内时，配体与其同源受体的结合是特异的。100mM至10nM的KD范围内的特异结合为低亲和性结合。2.5pM至100pM的KD范围内的特异结合为高亲和性结合。在另一个例子中，当所述分子能具有同野生型IL-28或IL-29相关的抗病毒活性的一些水平时，则存在IL-28或IL-29半胱氨酸突变体的生物活性。本文中详细描述了如何测定抗病毒活性的水平。
当提及IL-28时，该术语指IL-28A和IL-28B二者。以前IL-28A被命名为zcyto20(SEQ ID NO：1和2)，IL-29被命名为zcyto21(SEQ ID NO：3和4)，而IL-28B被命名为zcyto22(SEQ ID NO：5和6)。(参见PCT申请WO02/086087和Sheppard等，同上)。IL28的鼠定向进化同源物以前被命名为zcyto24(SEQ ID NO：7和8)、zcyto25(SEQ ID NO：9和10)。
野生型IL-28A基因编码200个氨基酸的多肽，如SEQ ID NO：2所示。可预计IL-28A的信号序列包含SEQ ID NO：2的氨基酸残基-25(Met)至氨基酸残基-1(Ala)。IL-28A的成熟肽起始于SEQ ID NO：2的氨基酸残基1(Val)。IL-28A的螺旋如下所预计：螺旋A由氨基酸残基31(Ala)至45(Leu)所定义；螺旋B由氨基酸残基58(Thr)至65(Gln)所定义；螺旋C由氨基酸残基69(Arg)至86(Ala)所定义；螺旋D由氨基酸残基95(Val)至114(Ala)所定义；螺旋E由氨基酸残基126(Thr)至142(Lys)所定义；而螺旋F由氨基酸残基148(Cys)至169(Ala)所定义；如SEQ ID NO：2所示。
野生型IL-29基因编码200个氨基酸的多肽，如SEQ ID NO：4所示。可预计IL-29的信号序列包含SEQ ID NO：4，SEQ ID NO：119或SEQ ID NO：121的氨基酸残基-19(Met)至氨基酸残基-1(Ala)。IL-29的成熟肽起始于SEQ IDNO：4的氨基酸残基1(Gly)。IL-29在PCT申请WO 02/02627中有描述。IL-29的螺旋预测如下：螺旋A由氨基酸残基30(Ser)至44(Leu)所定义；螺旋B由氨基酸残基57(Asn)至65(Val)所定义；螺旋C由氨基酸残基70(Val)至85(Ala)所定义；螺旋D由氨基酸残基92(Glu)至111(Gln)所定义；螺旋E由氨基酸残基118(Thr)至139(Lys)所定义；而螺旋F由氨基酸残基144(Gly)至170(Leu)所定义；如SEQ ID NO：4所示。
野生型IL-28B基因编码200个氨基酸的多肽，如SEQ ID NO：6所示。预计IL-28B的信号序列包含SEQ ID NO：6的氨基酸残基-21(Met)至氨基酸残基-1(Ala)。IL-28B的成熟肽起始于SEQ ID NO：6的氨基酸残基1(Val)。IL-28B的螺旋预计如下：螺旋A由氨基酸残基31(Ala)至45(Leu)所定义；螺旋B由氨基酸残基58(Thr)至65(Gln)所定义；螺旋C由氨基酸残基69(Arg)至86(Ala)所定义；螺旋D由氨基酸残基95(Gly)至114(Ala)所定义；螺旋E由氨基酸残基126(Thr)至142(Lys)所定义；而螺旋F由氨基酸残基148(Cys)至169(Ala)所定义；如SEQ ID NO：6所示。
本发明提供了如SEQ ID NO：1、2、3、4、5和6所示的IL-28和IL-29野生型序列中的突变，其造成表达单一形式的IL-28或IL-29分子。因为形式的异质性被认为是多种分子内二硫键形成模式的结果，本发明的特定实施方式包括野生型IL-28和IL-29序列中的半胱氨酸残基突变。当IL-28和IL-29在E.coli中表达时，则存在N-末端或氨基末端的甲硫氨酸。例如，SEQ ID NO：12-17显示了N-末端Met存在时IL-28A、IL-29和IL-28B的核苷酸和氨基酸残基编号。表1显示了野生型IL-28A、IL-28B和IL-29的分子内二硫键连接的半胱氨酸对的可能组合。
                                  表1
  IL-28A SEQID NO：2   C16-C115   C48-C148   C50-C148   C167-C174   C16-C48   C16-C50   C48-C115   C50-C115   C115-C148
  Met IL-28ASEQ ID NO：13   C17-C116   C49-C149   C51-C1498   C168-C175   C17-C49   C17-C51   C49-C116   C51-C116   C116-C149
  IL-29 SEQ IDNO：4   C15-C112   C49-C145   C112-C171
  Met IL-29SEQ ID NO：15   C16-C113   C50-C146   C113-C172
  IL-28B SEQID NO：6   C16-C115   C48-C148   C50-C148   C167-C174   C16-C48   C16-C50   C48-C115   C50-C115   C115-C148
  Met IL-28BSEQ ID NO：17   C17-C116   C49-C149   C51-C149   C168-C175   C17-C49   C17-C51   C49-C116   C51-C116   C116-C149
本发明的多核苷酸和多肽分子在野生型IL-28A、IL-29或IL-28B分子中存在的一个或多个半胱氨酸处具有突变，但仍旧保持本文所述的一些生物活性。表2列举了示例的半胱氨酸突变体，尤其是半胱氨酸(C)向丝氨酸(S)的点突变。
              表2
  IL-28A C48S   SEQ ID NO：19
  Met IL-28A C49S   SEQ ID NO：21
  IL-28A C50S   SEQ ID NO：23
  Met IL-28A C51S   SEQ ID NO：25
  IL-29 C171S   SEQ ID NO：27
  Met IL-29 C172S   SEQ ID NO：29
所有的家族成员都显示出了能结合相同的II类细胞因子受体(IL-28R)。IL-28α-亚基以前被称为zcytor19受体。不受理论所限，这些分子似乎均经由相同途径通过IL-28R受体传递信号。IL-28受体在共同转让的PCT专利申请WO02/44209中有描述，其全文纳入本文参考；在以下文献中也有描述：Sheppard等，同上；Kotenko等.，Nature Immunol.4：69-77，2003；和PCTWO/03/040345。IL-28R是II类细胞因子受体的成员，其特征在于，在它们的细胞外结构域中存在一个或多个细胞因子受体模块(CRM)。其他II类细胞因子受体包括zcytor11(共有的美国专利第5,965,704号)、CRF2-4(Genbank登录号Z17227)、IL-10R(Genbank登录号U00672和NM_001558)、DIRS1、zcytor7(共有的美国专利第5,945,511号)以及组织因子。IL-28受体，与除了干扰素-α/β受体α链之外的所有已知的II类受体一样，在其细胞外结构域中仅仅具有单一的II类CRM。
四螺旋束的细胞因子还通过其组成螺旋的长度分组。“长螺旋”形式的细胞因子一般由24-30个残基的螺旋组成，包括IL-6、睫状神经营养因子(CNTF)、白血病抑制因子(LIF)和人生长激素(hGH)。“短螺旋”形式的细胞因子一般由18-21个残基的螺旋组成，包括IL-2、IL-4和GM-CSF。使用CNTF和IL-6进行的研究证实，可以将CNTF螺旋替换为IL-6中的等同螺旋，从而使该嵌合体具有CTNF结合性质。因此，似乎四螺旋细胞因子的功能域是基于结构同源性而确定的，而与序列的同一性无关，并且这些功能域能够在嵌合体中保持功能的完整性(Kallen等，J.Biol.Chem.274：11859-11867，1999)。因此，半胱氨酸突变体IL-28和IL-29多肽可用于制备嵌合的融合分子，尤其是与其它干扰素融合，从而确定和调节受体的结合特异性。尤其令人感兴趣的是将来自干扰素和细胞因子(如IFN-α、IL-10、人生长激素)的螺旋和环结构域组合而形成的融合蛋白。
本发明提供多核苷酸分子，包括DNA和RNA分子，其编码诸如半胱氨酸突变体IL-28或IL-29多肽。例如，本发明提供编码本文所公开的IL-28A C48S、MetIL-28A C49S、IL-28A C50S、Met IL-28A C51S、IL-29 C171S和Met IL-29 C172S多肽的简并核苷酸序列。本领域普通技术人员能容易的认识到，考虑到遗传密码子的简并性，在这些多核苷酸分子中可能有相当大的序列变化。SEQ ID NO：30、31、32、33、34和35是简并的DNA序列，其涵盖了分别编码IL-28A C48S、Met IL-28A C49S、IL-28A C50S、Met IL-28A C51S、IL-29 C171S和Met IL-29C172S的所有DNA。本领域普通技术人员能认识到，通过将U代替T，SEQ ID NO：30、31、32、33、34和35的简并序列也能提供所有编码SEQ ID NO：30、31、32、33、34和35的所有RNA序列，因此其也纳入本发明范围。
本发明IL-28A多肽也包括成熟多肽的第二个半胱氨酸(C2)处的突变。例如，从SEQ ID NO：2的多肽的N-末端或氨基-末端算起，C2是在第48位氨基酸的半胱氨酸，或如果在E coli(参见如，SEQ ID NO：13)表达，则在第49位(额外的N-末端Met)。例如，该第二个半胱氨酸(其中有7个，像IL-28B一样)或IL-28A的C2可以被突变成丝氨酸、丙氨酸、苏氨酸、缬氨酸或天冬酰胺。例如，本发明的IL-28A C2突变分子包括如SEQ ID NO：20和22所示的多核苷酸分子，包括DNA和RNA分子，其分别编码如SEQ ID NO：21和23所示的IL-28A C2突变多肽。SEQ ID NO：36和37是本发明另外的IL-28A C2多肽。
除了IL-28A C2突变体，本发明也包括IL-28A多肽，其包含成熟多肽的第三个半胱氨酸位置(C3)上的突变。例如，从SEQ ID NO：2所示多肽的N-末端或氨基-末端算起的C3是在第50位的半胱氨酸，或如果是在E coli中表达的(参见如，SEQ ID NO：13)，则在第51位(额外的N-末端Met)。例如，本发明的IL-28A C3突变分子包括如SEQ ID NO：24和26所示的多核苷酸分子，包括DNA和RNA分子，其分别编码如SEQ ID NO：25和27所示的IL-28A C3突变多肽。SEQ ID NO：38和39是本发明另外的IL-28A C3多肽。
本发明的IL-28A多肽包括诸如，SEQ ID NO：2、13、19、21、23和25，其分别由如SEQ ID NO：1、12、18、20、22和24所示的IL-28A多核苷酸分子编码。本发明的另一些IL-28A多肽包括诸如，SEQ ID NO：36、37、38和39。
本发明IL-28B多肽也包括在该成熟多肽的第二个半胱氨酸(C2)上的突变。例如，从SEQ ID NO：6所示多肽的N-末端或氨基-末端算起的C2是在第48位氨基酸处的半胱氨酸，或如果是在E coli(参见如，SEQ ID NO：17)中表达的，则在第49位(加了N-末端的Met)。例如，该第二个半胱氨酸(其中有7个，像IL-28A一样)或IL-28B的C2可以被突变成丝氨酸、丙氨酸、苏氨酸、缬氨酸或天冬酰胺。例如，本发明的IL-28B C2突变分子包括如SEQ ID NO：122和124所示的多核苷酸分子，包括DNA和RNA分子，其分别编码如SEQ ID NO：123和125所示的IL-28B C2突变多肽。本发明其他的IL-28B C2突变分子包括如SEQ ID NO：130和132所示的多核苷酸分子，包括DNA和RNA分子，其分别编码如SEQ ID NO：131和133所示的IL-28B C2突变多肽(PCT申请WO03/066002(Kotenko等)。
除了IL-28B C2突变体之外，本发明也包括包含在成熟多肽的第三个半胱氨酸位置(C3)上的突变的IL-28B多肽。例如，从SEQ ID NO：6所示多肽的N-末端或氨基-末端算起的C3是在第50位的半胱氨酸，或如果是在E coli(参见如，SEQ ID NO：17)中表达的，则在第51位(加了N-末端的Met)。例如，本发明的IL-28B C3突变分子包括如SEQ ID NO：126和128所示的多核苷酸分子，包括DNA和RNA分子，其分别编码如SEQ ID NO：127和129所示的IL-28BC3突变多肽。本发明其他的IL-28B C3突变分子包括如SEQ ID NO：134和136所示的多核苷酸分子，包括DNA和RNA分子，其分别编码如SEQ ID NO：135和137所示的IL-28B C3突变多肽(PCT申请WO 03/066002(Kotenko等)。
本发明的IL-28B多肽包括诸如SEQ ID NO：6、17、123、125、127、129、131、133、135和137，其分别由如SEQ ID NO：5、16、122、124、126、128、130、132、134和136所示的IL-28B多核苷酸分子编码。
本发明的IL-29多肽也包括在该成熟多肽的第五个半胱氨酸(C5)上的突变。例如，从SEQ ID NO：4所示多肽的N-末端或氨基-末端算起，C5是在第171位上的半胱氨酸，或如果是在E coli中表达的(参见如，SEQ ID NO：15)，则在第172位(加了N-末端的Met)。例如，该第五个半胱氨酸或IL-29的C5可以被突变成丝氨酸、丙氨酸、苏氨酸、缬氨酸或天冬酰胺。这些IL-29 C5突变多肽具有C1(SEQ ID NO：4的Cys15)/C3(SEQ ID NO：4的Cys112)和C2(SEQ ID NO：4的Cys49)/C4(SEQ ID NO：4的Cys145)的二硫键模式。本发明其他的IL-29 C5突变分子包括如SEQ ID NO：26、28、82、84、138、140、142、144、146、148、150、152、154、156、158和160所示的多核苷酸分子，包括DNA和RNA分子，其分别编码如SEQ ID NO：27、29、83、85、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159和161所示的IL-29C5突变多肽。本发明其他的IL-29 C5突变分子包括如SEQ ID NO：86、88、94和96所示的多核苷酸分子，包括DNA和RNA分子，其分别编码如SEQ ID NO：87、89、95和97所示的IL-29 C5突变多肽(PCT申请WO 03/066002(Kotenko等))。另外，本发明的IL-29 C5突变分子包括如SEQ ID NO：102、104、110和112所示的多核苷酸分子，包括DNA和RNA分子，其分别编码如SEQ ID NO：103、105、111和113所示的IL-29 C5突变多肽(PCT申请WO 02/092762(Baum等))。
除了IL-29 C5突变体，本发明也包括在成熟多肽的第一个半胱氨酸位置(C1)处包含突变的IL-29多肽。例如，从SEQ ID NO：4所示多肽的N-末端或氨基-末端算起，C1是在第15位上的半胱氨酸，或如果是在E coli(参见如，SEQ IDNO：15)中表达的，则在第16位(加了N-末端的Met)。这些IL-29C1突变多肽将具有预计的C2(SEQ ID NO：4的Cys49)/C4(SEQ ID NO：4的Cys145)和C3(SEQ ID NO：4的Cys112)/C5(SEQ ID NO：4的Cys171)二硫键模式。本发明其他的IL-29 C1突变分子包括如SEQ ID NO：74、76、78和80所示的多核苷酸分子，包括DNA和RNA分子，其分别编码如SEQ ID NO：75、77、79和81所示的IL-29 C1突变多肽。本发明其他的IL-29 C1突变分子包括如SEQ IDNO：90、92、98和100所示的多核苷酸分子，包括DNA和RNA分子，其分别编码如SEQ ID NO：91、93、99和101所示的IL-29 C1突变多肽(PCT申请WO03/066002(Kotenko等))。另外，本发明的IL-29 C1突变分子包括如SEQ ID NO：106、108、114和116所示的多核苷酸分子，包括DNA和RNA分子，其分别编码如SEQ ID NO：107、109、115和117所示的IL-29 C1突变多肽(PCT申请WO02/092762(Baum等))。
本发明的IL-29多肽包括诸如SEQ ID NO：4、15、27、29、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159和161，其由如SEQ ID NO：3、14、26、28、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、138、140、142、144、146、148、150、152、154、156、158和160所示的IL-29多核苷酸分子编码，可以进一步包括如SEQ ID NO：119所示的信号序列或如SEQ ID NO：121所示的信号序列。另外，本发明还包括如SEQ ID NO：40和41所示的IL-29多肽。编码SEQ ID NO：119的信号序列多肽的多核苷酸分子如SEQ ID NO：118所示。编码SEQ ID NO：120的信号序列多肽的多核苷酸分子如SEQ ID NO：121所示。
在一个方面中，本发明提供分离的多肽，其包含与选自以下组的氨基酸残基序列具有至少90％或95％序列同一性的序列，所述组由SEQ ID NO：2、4、6、8、10、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、和161组成。所述多肽可任选包含如SEQ ID NO：2、4、6、8、10、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、和161所示的氨基酸序列中至少15个、至少30个、至少45个或至少60个连续的氨基酸。在另一个具体实施方式中，该分离的多肽是选自以下组的氨基酸残基，所述组由SEQ ID NO：2、4、6、8、10、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、和161组成。相比于选自以下组的氨基酸序列(所述组由SEQ ID NO：2、4、6、8、10、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、和161组成)，多肽可具有保守的氨基改变。
在另一个方面中，本发明提供包含多肽和聚烷基醚部分的融合蛋白，所述多肽包含选自以下组的氨基酸残基序列，所述组由SEQ ID NO：2、4、6、8、10、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、和161组成。所述聚烷基醚部分可选地是聚乙二醇，如20kD mPEG丙醛或30kD mPEG丙醛。聚乙二醇可以是分支的或直链的。聚乙二醇可以共价连接于所述多肽的N末端或C末端。
在另一个方面，本发明提供融合蛋白，其包含由肽键连接的第一多肽和第二多肽，其中第一多肽包含选自以下组的氨基酸残基序列，所述组由SEQ ID NO：2、4、6、8、10、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、和161组成；和第二多肽。第二多肽可选地是抗体片段。该抗体片段可选地是F(ab′)、F(ab)、Fab′、Fab、Fv、scFv和/或最小识别单位。第二多肽可选地是人白蛋白。第二多肽可选地是选自亲和标签、毒素、放射性核苷酸、酶和荧光团的多肽。
表3给出了SEQ ID NO：30、31、32、33、34和35中使用的单字母代码，以指明简并的核苷酸位置。“解析″是由代码字母表示的核苷酸。“互补物”是指互补核苷酸的代码。例如，代码Y表示C或T，其互补物R表示A或G，其中A与T互补，而G与C互补。
                  表3
  核苷酸   解析   互补物   解析
  ACGTRYMKSWHBV   ACGTA|GC|TA|CG|TC|GA|TA|C|TC|G|TA|C|G   TGCAYRKMSWDVB   TGCAC|TA|GG|TA|CC|GA|TA|G|TA|C|GC|G|T
  DN   A|G|TA|C|G|T   HN   A|C|TA|C|G|T
表4中给出了SEQ ID NO：30、31、32、33、34和35中使用的简并密码子，涵盖了给定氨基酸的所有可能密码子。
                            表4
  氨基酸   单字母代码   密码子   简并密码子
  CysSerThrProAlaGlyAsnAspGluGlnHisArgLysMetIleLeuValPheTyrTrpTerAsn|AspGlu|GlnAny   CSTPAGNDEQHRKMILVFYW.BZX   TGC TGTAGC AGT TCA TCC TCG TCTACA ACC ACG ACTCCA CCC CCG CCTGCA GCC GCG GCTGGA GGC GGG GGTAAC AATGAC GATGAA GAGCAA CAGCAC CATAGA AGG CGA CGC CGG CGTAAA AAGATGATA ATC ATTCTA CTC CTG CTT TTA TTGGTA GTC GTG GTTTTC TTTTAC TATTGGTAA TAG TGA   TGYWSNACNCCNGCNGGNAAYGAYGARCARCAYMGNAARATGATHYTNGTNTTYTAYTGGTRRRAYSARNNN
本领域技术人员将明白，为确定代表编码每个氨基酸的所有可能密码子的简并密码子，会引入某些不确定性。例如，丝氨酸的简并密码子(WSN)可以在某些情况下编码精氨酸(AGR)，而精氨酸的简并密码子(MGN)可以在某些情况下编码丝氨酸(AGY)。类似的关系也存在于编码苯丙氨酸和亮氨酸的密码子间。因此，简并序列所涵盖的某些多核苷酸可以编码变体氨基酸序列，但本领域技术人员通过参考氨基酸序列就可以容易地识别出这些变体序列。氨基酸序列如SEQ IDNO：19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、和161。变体序列的功能可以容易地按照本文所述的方式来测试。
本领域技术人员也将明白，不同物种会表现出“偏好密码子使用”。一般可参见Grantham等，Nuc.Acids Res.8：1893-912，1980；Haas等，Curr.Biol.6：315-24，1996；Wain-Hobson等，Gene 13：355-64，1981；Grosjean和Fiers，Gene 18：199-209，1982；Holm，Nuc.Acids Res.14：3075-87，1986；Ikemura，J.Mol.Biol.158：573-97，1982。本文中使用的术语“偏好密码子使用”或“偏好密码子”是本领域的一个术语，指某个物种的细胞中最频繁使用的蛋白质翻译密码子，因此在编码每种氨基酸的可能密码子中会偏好一种或几种代表性的密码子(见表4)。例如，苏氨酸(Thr)可以由ACA、ACC、ACG或ACT编码，但在哺乳动物细胞中ACC是最常用的密码子；在其它物种中，例如在昆虫细胞、酵母、病毒或细菌中，可能偏好不同的Thr密码子。通过本领域已知的多种方法，可以将特定物种的偏好密码子引入本发明多核苷酸中。将偏好密码子序列引入重组DNA中可以通过诸如使特定细胞类型或物种中的蛋白质翻译更为有效来增加蛋白质的产生。因此，SEQ ID NO：30、31、32、33、34和35中公开的简并密码子序列可以作为模板，来优化多核苷酸在本领域常用的和本文公开的各种细胞类型和物种中的表达。可以按本文所述测试和优化含有偏好密码子的序列在不同物种中的表达，并测试这些序列的功能。
在另一个方面中，本发明提供选自以下组的分离的多核苷酸，所述组由SEQID NO：1、3、5、7、9、12、14、16、18、20、22、24、26、28、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154、156、158和160组成。
在另一个方面中，本发明提供分离的多核苷酸，其能在杂交条件下与选自以下组的序列或其互补序列杂交，所述组由SEQ ID NO：1、3、5、7、9、12、14、16、18、20、22、24、26、28、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154、156、158和160组成，所述杂交条件为在约42℃至约70℃，用50％甲酰胺、5×SSC(1×SSC：0.15M氯化钠和15mM柠檬酸纳)、50mM磷酸钠(pH 7.6)、5×Denhardt′s液(100×Denhardt′s液；2％(w/v)菲科尔400、2％(w/v)聚乙烯吡咯烷酮、和2％(w/v)牛血清白蛋白、10％硫酸葡聚糖、和20mg/ml变性剪切鲑精DNA，其中该分离的多核苷酸编码具有抗病毒活性的多肽。可选地，所编码的多肽具有针对乙型肝炎和/或丙型肝炎的抗病毒活性。可选地，该分离的多核苷酸可编码选自以下组的序列的至少一部分，所述组由SEQ ID NO：2、4、6、8、10、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、和161组成。所述分离的多核苷酸可编码SEQ ID NO：2、4、6、8、10、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、或161所代表的多肽。
在另一个方面中，本发明提供编码多肽的分离的多核苷酸，其中所编码的多肽选自以下组，所述组由SEQ ID NO：2、4、6、8、10、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、和161组成。
在另一个方面中，本发明提供编码多肽的分离的多核苷酸，其中所编码的多肽与选自以下组的序列具有至少90％或95％的序列同一性，所述组由SEQ IDNO：2、4、6、8、10、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、和161组成，其中所编码的多肽具有抗病毒活性。可选地，所编码的多肽具有针对乙型肝炎和/或丙型肝炎的抗病毒活性。
正如前面提及的，本发明的分离多核苷酸包括DNA和RNA。制备DNA和RNA的方法是本领域所熟知的。一般来说，从产生大量半胱氨酸突变体IL-28或IL-29 RNA的组织或细胞中分离出RNA。这样的组织和细胞可以通过Northern印迹(Thomas，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：5201，1980)，或通过筛选来自不同细胞类型的条件培养基针对靶细胞或组织的活性进行鉴定。一旦鉴定出产生该活性或RNA的细胞或组织后，就可以使用异硫氰酸胍抽提，之后由CsCl梯度离心分离，由此制备总RNA(Chirgwin等，Biochemistry 18：52-94，1979)。使用Aviv和Leder的方法(Proc.Natl.Acad.Sci.USA 69：1408-12，1972)从总RNA中制备poly(A)+RNA。可以使用已知方法从poly(A)+RNA中制备互补DNA(cDNA)。在另一可供选择的方案中，可以分离基因组DNA。然后通过诸如杂交或PCR来鉴定并分离编码半胱氨酸突变体IL-28或IL-29多肽的多核苷酸。
可以通过常规克隆方法获得编码半胱氨酸突变体IL-28或IL-29的全长克隆。优选互补DNA(cDNA)克隆，但对于一些应用(例如在转基因动物中表达)，可能优选使用基因组克隆，或对cDNA克隆进行修饰使之包括至少一个基因组内含子。制备cDNA和基因组克隆的方法是公知的并处于本领域普通技术人员的水平内，它们包括使用本文公开的序列或其部分来作为探针筛选文库或作为引物来扩增文库。表达文库可以使用针对IL-28受体片段的抗体或其它特异性结合物来探测。
本领域普通技术人员明白，在分别诸如SEQ ID NO：1、3和5中所公开的序列，代表了人IL-28和IL-29条带的单个等位基因的突变，并且预计会有等位基因变异和剪接改变。例如，如WO 02/086087所述，并且鉴定出了这样的IL-29变体，其中如SEQ ID NO：4所示的氨基酸残基169(Asn)是Arg残基。这些等位基因变体纳入本发明的范围。可以根据标准流程，用探针筛选来自不同个体的cDNA或基因组文库，从而克隆到该序列的等位基因变体。如SEQ ID NO：1、3和5所示DNA序列等位基因变体，包括含有沉默突变的那些序列，以及除了半胱氨酸突变之外突变会导致氨基酸序列变化的那些序列，均纳入本发明的范围，作为SEQ ID NO：2、4和6的等位基因变体的蛋白质也一样。保留了半胱氨酸突变IL-28或IL-29性质的由可变剪接的mRNA所产生的cDNA也纳入本发明的范围，由该cDNA和mRNA所编码的多肽也一样。根据本领域已知的标准流程，用探针筛选来自不同个体或组织的cDNA或基因组文库，可以克隆到这些序列的等位基因变体和剪接变体，编码半胱氨酸或半胱氨酸残基的多核苷酸突变可如本文所述而引入。
在本发明的具体实施方式中，编码分离的变体或半胱氨酸突变体IL-28-和IL-29的核酸分子可在严谨条件下与具有以下核苷酸序列的核酸分子杂交，所述核苷酸序列为SEQ ID NO：18、20、22、24、26、28、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154、156、158和160，或与具有下述序列的互补核苷酸序列的核酸分子杂交，所述核苷酸序列为SEQ ID NO：18、20、22、24、26、28、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154、156、158和160。一般而言，严谨条件被选择成比在规定的离子强度和pH下特定序列的热熔解温度(Tm)低约5℃。Tm是(在规定的离子强度和pH下)50％靶序列与完全匹配的探针发生杂交的温度。
如果核苷酸序列具有一定程度的互补性，则诸如DNA-DNA、RNA-RNA和DNA-RNA的核酸分子对能够杂交。杂交体可以容许在双螺旋中有错配的碱基对，但杂交体的稳定性会受到错配程度的影响。每1-1.5％的碱基对错配，错配杂交体的Tm就降低1℃。改变杂交条件的严谨性就可以控制存在于杂交体中的错配程度。当杂交温度升高而杂交缓冲液的离子强度降低时，严谨程度增加。
将这些条件适用于具体的多核苷酸杂交体是属于本领域技术人员的能力范围内的。特定靶序列的Tm是(在确定的条件下)50％靶序列与完全匹配的探针序列发生杂交的温度。影响Tm的那些条件包括，多核苷酸探针的大小和碱基对含量、杂交液的离子强度和杂交液中去稳定剂的存在情况。用于计算Tm的许多方程式是本领域中已知的，它们对于DNA、RNA和DNA-RNA杂交体及不同长度的多核苷酸探针序列是特异的(参见如，Sambrook等，Molecular Cloning：ALaboratory Manual，第2版(Cold Spring Harbor Press 1989)；Ausubel等(编)，Current Protocols in Molecular Biology(John Wiley and Sons，Inc.1987)；Berger和Kimmel(编)，Guide to Molecular Cloning Techniques，(AcademicPress，Inc.1987)；和Wetmur，Crit.Rev.Biochem.Mol.Biol.26：227(1990))。诸如OLIGO 6.0(LSR；Long Lake，MN)和Primer Premier 4.0(Premier BiosoftInternational；Palo Alto，CA)的序列分析软件以及英特网上的站点，均是公众可得到的工具，可根据用户所确定的标准而用来分析给定序列并计算Tm。这些程序也可以在确定的条件下分析给定的序列并确定适宜的探针序列。典型地，较长的多核苷酸序列(＞50个碱基对)的杂交在低于所算出的Tm约20-25℃的温度下进行。对于较小的探针(＜50个碱基对)，杂交通常在Tm或低于所算出的Tm5-10℃的温度下进行。这使得DNA-DNA和DNA-RNA杂交体能以最大速率杂交。
杂交后，可以在严谨条件或在高度严谨条件下洗涤核酸分子以除去未杂交的核酸分子。典型的严谨洗涤条件包括在含0.1％十二烷基硫酸钠(SDS)的0.5×-2×SSC溶液中于55-65℃进行洗涤。也就是说，编码变体或半胱氨酸突变体IL-28或IL-29多肽的核酸分子在严谨洗涤条件下与分别具有SEQ ID NO：18、20、22、24、26、28、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154、156、158和160的核苷酸序列(或其互补序列)的核酸分子杂交，其中所述洗涤严谨性相当于含0.1％ SDS的0.5×-2×SSC在55-65℃下，包括含0.1％ SDS的0.5×SSC在55℃下，或含0.1％ SDS的2×SSC在65℃下。本领域技术人员可以容易地设计出等同的条件，如通过用SSPE代替洗涤液中的SSC。
典型的高度严谨洗涤条件包括在含0.1％十二烷基硫酸钠(SDS)的0.1×-0.2×SSC溶液中于50-65℃洗涤。也就是说，编码半胱氨酸突变体IL-28或IL-29多肽变体的核酸分子可以在高度严谨洗涤条件下与具有SEQ ID NO：18、20、22、24、26、28、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154、156、158和160的核苷酸序列(或其互补序列)的核酸分子杂交，其中所述洗涤严谨性相当于含0.1％ SDS的0.1×-0.2×SSC在50-65℃下，包括含0.1％ SDS的0.1×SSC在50℃下，或含0.1％ SDS的0.2×SSC在65℃下。
本发明还提供分离的IL-28或IL-29多肽，其与例如下述的本发明多肽具有实质相似的序列同一性：SEQ ID NO：2、4、6、8、10、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159或161。本文中所用的术语“实质相似的序列同一性”指包含与如下所示的序列或它们的定向进化同源物有至少80％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或大于99％的序列同一性的多肽：SEQ ID NO：2、4、6、8、10、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159或161。本发明还包括包含与本发明的多肽或其片段有至少80％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或大于99％序列同一性的氨基酸序列的多肽。本发明进一步包括编码这些多肽的多核苷酸分子。本发明的IL-28和IL-29多肽优选是重组多肽。在另一方面，本发明的IL-28和IL-29多肽具有至少15、至少30、至少45、或至少60个连续的氨基酸。例如，本发明的IL-28或IL-29多肽涉及具有来自以下序列的至少15、至少30、至少45、或至少60个连续氨基酸的多肽：SEQ ID NO：2、4、6、8、10、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159或161。确定同一性百分数的方法下文有描述。
本发明还关注变体核酸分子，其可利用两种标准来确定：确定所编码的多肽分别与以下氨基酸序列之间的相似性：SEQ ID NO：19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159或161，和/或如上所述的杂交测定法。这些变体包括这样的核酸分子：(1)其在严谨洗涤条件下分别与具有以下核苷酸序列(或其互补序列)的核酸分子杂交：SEQ ID NO：18、20、22、24、26、28、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154、156、158和160，其中洗涤严谨性相当于含0.1％ SDS的0.5×-2×SSC在55-65℃；或(2)其编码分别与以下氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或大于99％序列同一性的多肽：SEQ ID NO：19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159或161。或者，变体可以表征为这样的核酸分子：(1)其在严谨洗涤条件下分别与具有以下核苷酸序列(或其互补序列)的核酸分子杂交：SEQ ID NO：18、20、22、24、26、28、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154、156、158或160，其中洗涤严谨性相当于含0.1％SDS的0.1×-0.2×SSC在50-65℃；以及(2)其编码分别与以下氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或大于99％序列同一性的多肽：SEQ ID NO：19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159或161。
序列同一性百分数由常规方法来确定。参见如，Altschul等，Bull.Math.Bio.48：603(1986)，和Henikoff和Henikoff，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89；10915(1992)。简而言之，利用缺口开始罚分为10、缺口延伸罚分为1和如表4所述的Henikoff和Henikoff(同上)的“BLOSUM62″评分矩阵(用标准的单字母代码表示氨基酸)，将两个氨基酸序列比对以优化该比对评分。
Figure A20048002917000291
                              表5
   A  R  N  D  C  Q  E  G  H  I  L  K  M  F  P  S  T  W  Y  V
A  4
R -1  5
N -2  0  6
D -2 -2  1  6
C  0 -3 -3 -3  9
Q -1  1  0  0 -3  5
E -1  0  0  2 -4  2  5
G  0 -2  0 -1 -3 -2 -2  6
H -2  0  1 -1 -3  0  0 -2  8
I -1 -3 -3 -3 -1 -3 -3 -4 -3  4
L -1 -2 -3 -4 -1 -2 -3 -4 -3  2  4
K -1  2  0 -1 -3  1  1 -2 -1 -3 -2  5
M -1 -1 -2 -3 -1  0 -2 -3 -2  1  2 -1  5
F -2 -3 -3 -3 -2 -3 -3 -3 -1  0  0 -3  0  6
P -1 -2 -2 -1 -3 -1 -1 -2 -2 -3 -3 -1 -2 -4  7
S  1 -1  1  0 -1  0  0  0 -1 -2 -2  0 -1 -2 -1  4
T  0 -1  0 -1 -1 -1 -1 -2 -2 -1 -1 -1 -1 -2 -1  1  5
W -3 -3 -4 -4 -2 -2 -3 -2 -2 -3 -2 -3 -1  1 -4 -3 -2 11
Y -2 -2 -2 -3 -2 -1 -2 -3  2 -1 -1 -2 -1  3 -3 -2 -2  2  7
V  0 -3 -3 -3 -1 -2 -2 -3 -3  3  1 -2  1 -1 -2 -2  0 -3 -1  4
本领域技术人员明白，有许多成熟的算法可用于比对两个氨基酸序列。Pearson和Lipman的“FASTA″相似性检索算法是一个合适的蛋白质比对方法，可用来检测本文公开的氨基酸序列和推测的变体IL-28或IL-29的氨基酸序列之间的同一性水平。FASTA算法在Pearson和Lipman，Proc.Natl.Acad.Sci.USA85：2444(1988)以及Pearson，Meth.Enzymol.183：63(1990)中有描述。
简而言之，FASTA首先通过确定查询序列(如SEQ ID NO：2)和测试序列共有的区域来表征序列相似性，所述区域在不考虑保守氨基酸替代、插入或缺失的情况下具有最高密度的同一性(如果ktup变量为1)或同一性对(如果ktup＝2)的区域。然后使用氨基酸替代矩阵比较所有配对氨基酸的相似性，将具有最高密度一致性的10个区域重新评分，并“修剪”区域的末端以便仅包括对此最高分有贡献的那些残基。如果有评分大于“截断值”(由预先确定的公式基于序列长度和ktup值来计算的)的几个区域，则检验这些经修剪的最初区域以确定这些区域是否可以连接起来形成具有缺口的大致比对。最后，使用可允许氨基酸插入和缺失的修正型Needleman-Wunsch-Sellers算法(Needleman和Wunsch，J.Mol.Biol.48：444(1970)；Sellers，SIAM J.Appl.Math.26：787(1974))对这两个氨基酸序列的最高得分区域进行比对。FASTA分析的优选参数是：ktup＝1、缺口开始罚分＝10、缺口延伸罚分＝1和替代矩阵＝BLOSUM62。如Pearson，Meth.Enzymol.183；63(1990)的附录2所解释的，这些参数可以通过修改评分矩阵文件(″SMATRIX″)而导入FASTA程序中。
使用上述的比例，FASTA还可以用于确定核酸分子的序列同一性。对于核苷酸序列的比较，ktup值可以在1至6的范围内，优选3至6，最优选3，而其它参数设置为默认值。
变体IL-28或IL-29半胱氨酸突变体多肽或具有实质相似的序列同一性的多肽表征为具有一个或多个氨基酸替代、缺失或插入。这些改变优选是微小性质的改变，即保守氨基酸替代(见表6)，以及其它不显著影响多肽折叠或活性的替代；小的缺失，通常是一个至约30个氨基酸的缺失；氨基或羧基末端延伸，例如氨基末端的甲硫氨酸残基，不超过约20-25个残基的小接头肽，或亲和标签。因此，本发明包括约146至207个氨基酸残基的多肽，其包含与以下序列中的相应区域具有至少80％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或大于99％序列同一性的序列：SEQ ID NO：19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159或161。包含亲和标签的多肽可以在所述IL-28和IL-29多肽与亲和标签之间进一步包含蛋白水解切割位点。优选的这类位点包括凝血酶裂解位点和因子Xa裂解位点。
       表6
  保守氨基酸替代
  碱性：   精氨酸赖氨酸组氨酸
  酸性：   谷氨酸天冬氨酸
  极性：   谷氨酰胺天冬酰胺
  疏水性：   亮氨酸异亮氨酸缬氨酸
  芳香族：   苯丙氨酸色氨酸酪氨酸
  小氨基酸：   甘氨酸丙氨酸丝氨酸苏氨酸甲硫氨酸
可以确定包含对于维持结构完整性比较关键的区域或结构域的氨基酸残基。在这些区域中，人们可以确定出能或多或少地耐受改变并且保持分子的整个三级结构的特定残基。分析序列结构的方法包括但不限于，具有高度氨基酸或核苷酸同一性的多个序列的比对、二级结构倾向(propensity)、二元图(binarypatterns)、互补堆积(complementary packing)和隐蔽的极性相互作用(Barton，Current Opin.Struct.Biol.5：372-376，1995；和Cordes等，CurrentOpin.Struct.Biol.6：3-10，1996)。一般来说，当设计对分子的修饰或鉴定特定片段时，在确定结构的同时将评价修饰分子的活性。
在半胱氨酸突变体IL-28或IL-29多肽中进行氨基酸序列的改变，以便最小程度地破坏对于生物学活性所必需的高级结构。例如，当半胱氨酸突变体IL-28或IL-29多肽包含一个或多个螺旋时，所进行的氨基酸残基的改变应不破坏螺旋的几何形状和该分子的其它成分，其中所述成分的构象改变将减弱一些关键的功能，例如分子与其结合对象的结合性质。氨基酸序列改变的效果可以通过诸如以上公开的计算机模拟进行预测，或通过晶体结构分析进行测定(参见如，Lapthorn等，Nat.Struct.Biol.2：266-268，1995)。本领域公知的其它技术可对变体蛋白和标准分子(如天然蛋白)的折叠进行比较。例如，可以比较变体和标准分子中的半胱氨酸模式。质谱和利用还原与烷基化的化学修饰，为测定与二硫键相关的或不相关的半胱氨酸残基提供了方法(Bean等，Anal.Biochem.201：216-266，1992；Gray，Protein Sci.2：1732-1748，1993；和Patterson等，Anal.Chem.66：3727-3732，1994)。一般认为，如果修饰的分子与标准分子具有不相同的半胱氨酸模式，则折叠将受到影响。另一个公知并被接受的用于测量折叠的方法是园二色性(CD)。测量和比较修饰分子和标准分子产生的CD谱是常规的(Johnson，Proteins 7；205-214，1990)。晶体学是另一个分析折叠和结构的公知方法。核磁共振(NNR)、消化肽作图和表位作图也是分析折叠及蛋白质和多肽之间的结构相似性的已知方法(Schaanan等，Science 257：961-964，1992)。
可以产生如以下序列所示的半胱氨酸突变体IL-28或IL-29蛋白序列的Hopp/Woods亲水性图谱(Hpp等，Proc.Natl.Acad.Sci.78：3824-3828，1981；Hopp，J.Immun.Meth.88：1-18，1986和Triquier等，Protein Engineering 11：153-169，1998)：SEQ ID NO：19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159或161。该图谱基于的是滑行的六残基窗体。忽略隐蔽的G、S和T残基及暴露的H、Y和W残基。本领域技术人员将明白，在设计半胱氨酸突变体IL-28或IL-29多肽氨基酸序列中的修饰时，将要考虑亲水性或疏水性，以便不破坏整体结构和生物学图谱。尤其令人感兴趣的残基替代位置是选自由Val、Leu和Ile组成之组或选自由Met、Gly、Ser、Ala、Tyr和Trp组成之组中的疏水性残基。
由INF-α与IL-28A、IL-28B和IL-29家族成员(如表1和2所示)之间的序列相似性分析也可以推断出必需氨基酸。使用如前所述的“FASTA″分析方法，在蛋白质家族中鉴定出高相似性区域，并利用这些区域分析氨基酸序列以寻求保守区域。基于结构鉴定变体多核苷酸的备选方法是确定编码潜在变体IL-28或IL-29基因的核酸分子是否可以和如上文所述的核酸分子杂交。
鉴定本发明多肽中必需氨基酸的其它方法是本领域已知的方法，例如定点诱变或丙氨酸扫描诱变(Cunningham和Wells，Science 244：1081(1989)，Bass等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88：4498(1991)，Coombs和Corey，“定点诱变和蛋白质工程”，《Proteins：Analysis and Design》，Angeletti(编)，第259-311页(Academic Press，Inc.1998))。在后一技术中，在分子内的每个残基位置引入单个丙氨酸突变，并按以下所述来测试所获半胱氨酸突变分子的生物学或生物化学活性，以确定对于该分子的活性关键的氨基酸残基。也可参见Hilton等，J.Biol.Chem.271：4699(1996)。
本发明还包括半胱氨酸突变体IL-28或IL-29多肽的功能性片段和编码这些功能性片段的核酸分子。本文中所定义的“功能性”半胱氨酸突变体IL-28或IL-29或其片段可以由，其增殖或分化活性、诱导或抑制特化细胞功能的能力，或特异结合抗IL-28或IL-29抗体或者IL-28受体(可溶的或固定化的)的能力来表征。在本文中公开了半胱氨酸突变体IL-28或IL-29多肽的特别指明的活性及如何对它们检测。如前文所述，IL-28和IL-29多肽的特征在于6螺旋束。因此，本发明还提供融合蛋白，其包括：(a)含上述一个或多个螺旋的多肽分子；和(b)含一个或多个所述螺旋的功能性片段。融合蛋白的其他多肽部分可以由另一螺旋束细胞因子或干扰素(如INF-α)来提供，或由促进融合蛋白分泌的非天然的和/或无关的分泌信号肽来提供。
本发明的半胱氨酸突变体IL-28或IL-29多肽，包括全长多肽、生物学活性片段和融合多肽，均可以根据常规技术使用其中导入了编码该多肽的表达载体的细胞来制备。本文中所用的“其中导入了表达载体的细胞”包括直接进行操作而引入了外源DNA分子的细胞和其含有该引入的DNA的后代。适宜的宿主细胞是可以用外源DNA转化或转染且可以在培养基中生长的那些细胞类型，包括细菌、真菌细胞和培养的高等真核细胞。操作克隆的DNA分子和将外源DNA引入多种宿主细胞的技术公开于Sambrook等，Molecular Cloning：A LaboratoryManual，第2版，Cold SpringHarbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，NY，1989；和Ausubel等，编，Current Protocols in Molecular Biology，JohnWiley and Sons，Inc.NY，1987。
在另一方面，本发明提供表达载体，其包含以下可操作相连的元件：转录启动子；编码如本文所述的多肽的DNA片段；和转录终止子。
本发明还提供包含分离和纯化的DNA分子的表达载体，其包括以下可操作相连的元件：转录启动子：编码与选自以下组的多肽具有至少90％或95％序列同一性的多肽的DNA片段：SEQ ID NO：19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159和161；和转录终止子。所述DNA分子可进一步包含与DNA片段可操作相连的分泌信号序列。所编码的多肽可进一步包含如本文所述的亲和标签。本发明还提供包含上述表达载体的培养细胞。所编码的多肽可选地包含如下所示的氨基酸序列中的至少15、至少30、至少45或至少60个连续的氨基酸：SEQ ID NO：19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159和161。所编码的多肽可选地具有抗病毒活性，如抗乙型肝炎和丙型肝炎活性。
在另一方面，本发明提供包含如上文所述的表达载体的培养细胞。
在另一方面，本发明提供制备蛋白质的方法，其包括：在表达DNA片段的条件下，培养如上文所述的细胞；并回收由该DNA片段编码的蛋白质。
一般来说，在表达载体中，编码半胱氨酸突变体IL-28或IL-29多肽的DNA序列与对于其表达所必需的其它遗传元件(一般包括转录启动子和终止子)可操作地连接。载体通常还含有一个或多个选择标记和一个或多个复制起点，但本领域技术人员将明白，在某些系统中可以在不同载体上提供选择标记，而且外源DNA的复制可以通过整合在宿主细胞基因组中来实现。启动子、终止子、选择标记、载体和其它元件的选择是属于本领域普通技术人员水平内的常规设计。这些元件中的许多在文献中已有描述，并可通过供应商来获取。
为了将半胱氨酸突变体IL-28或IL-29多肽导入宿主细胞的分泌途径，可以在表达载体中提供分泌信号序列(又称作前导序列，前原序列或前序列)。该分泌信号序列可以是半胱氨酸突变体IL-28或IL-29的分泌信号序列(如SEQ IDNO：119或SEQ ID NO：121)，或可以是来源于其他分泌蛋白(例如t-PA；见美国专利No.5,641,655)的或从头合成的。将分泌信号序列与半胱氨酸突变体IL-28或IL-29DNA序列可操作地连接，即将这两个序列以正确的阅读框连接和定位，以引导新合成的多肽进入宿主细胞的分泌途径。分泌信号序列通常位于编码感兴趣的多肽的DNA序列的5′，但某些信号序列可以位于感兴趣的DNA序列的其它地方(见例如Welch等，美国专利No.5,037,743；Holland等，美国专利No.5,143,830)。
各种合适的重组宿主细胞包括但不限于，革兰氏阴性的原核宿主生物。合适的E.coli菌株包括W3110、K12衍生株MM294、TG-1、JM-107、BL21和UT5600。其它合适的菌株包括：BL21(DE3)、BL21(DE3)pLysS、BL21(DE3)pLysE、DH1、DH4I、DH5、DH5I、DH5IF′、DH5IMCR、DH10B、DH10B/p3、DH11S、C600、HB101、JM101、JM105、JM109、JM110、K38、RR1、Y1088、Y1089、CSH18、ER1451、ER1647、E.coli K12、E.coli K12RV308、E.coliK12C600、E.coliHB101、E.coli K12C600R.sub.k-M.sub.k-、E.coliK12 RR1(参见如，Brown(编)，Molecular Biology Labfax(Academic Press1991))。其他革兰氏阴性的原核宿主可包括沙雷氏菌属、假单胞菌属、柄杆菌属。原核宿主可包括革兰氏阳性生物，如芽孢杆菌属，例如，枯草芽孢杆菌(B.subtilis)和苏云金芽孢杆菌(B.thuringienesis)和B.thuringienesis var.israelensis，以及链霉菌属，例如，浅青紫链霉菌(S.lividans)、产二素链霉菌(S.ambofaciens)、弗氏链霉菌(S.fradiae)和灰褐链霉菌(S.griseofuscus)。合适的枯草芽孢杆菌菌株包括BR151、YB886、MI119、MI120和B170(参见如，Hardy，DNA Cloning：A Practical Approach的″BacillusCloning Methods″，Glover(编.)(IRL Press 1985))。在原核宿主中增殖载体的标准技术对于本领域普通技术人员来说是已知的(如参见，Ausubel等(编)，Short Protocols in Molecular Biology，第3版(John Wiley & Sons1995)；Wu等，Methods in GeneBiotechnology(CRC Press，Inc.1997))。在一个具体实施方式中，本发明的方法利用在W3110菌株中表达的半胱氨酸突变体IL-28或IL-29，该菌株保藏于美国典型培养物保藏中心(ATCC)，保藏号为ATCC#27325。
需要利用本发明的表达系统大规模生产半胱氨酸突变体IL-28或IL-29时，可使用分批发酵。通常，分批发酵包括，在合适的培养基中摇瓶培养表达半胱氨酸突变体IL-28或IL-29的E.coli株，使之生长到600nm处的光密度(OD)介于5至20间，由此制备第一阶段种子瓶。合适的培养基包含氮源，如硫酸铵、磷酸铵、氯化铵、酵母提取物、水解动物蛋白、水解植物蛋白或水解酪蛋白。磷酸盐可以来自磷酸钾、磷酸铵、磷酸或磷酸钠。其他成分是氯化镁或硫酸镁、硫酸亚铁或氯化亚铁和其他痕量元素。可以向生长培养基中添加糖类，例如果糖、葡萄糖、半乳糖、乳糖和甘油，以提高生长。或者，利用分批补料培养来实现高产量生产半胱氨酸突变体IL-28或IL-29蛋白。在与针对用于接种分批发酵的第一阶段容器所述的条件相似的条件下，培养生产半胱氨酸突变体IL-28或IL-29的E.coli株。
发酵后，离心收获细胞，将其重新悬浮于匀浆缓冲液中进行匀浆，例如，在APV-Gaulin匀浆器(Invensys APV，Tonawanda，纽约)，或其它类型的细胞破裂设备，如颗粒碾磨机或超声仪内进行。或者，从发酵罐中直接取出细胞并在APV-Gaulin匀浆器内匀浆。用含还原剂(如β巯基乙醇(10-100mM)或二硫苏糖醇(5-50mM))的盐酸胍(5-8M)或尿素(7-8M)溶解经洗过的包涵体制品。溶液可在Tris、磷酸、HEPES或其它合适的缓冲液中制备。也可用含月桂基硫酸钠(0.1-2％)的尿素(2-4M)溶解包涵体。在从转化的E.coli宿主菌株中回收纯化的半胱氨酸突变体IL-28或IL-29的过程中(所述宿主菌株中半胱氨酸突变体IL-2g或IL-29以可折射光线的包涵体形式积累)，破碎细胞，离心收获包涵体。然后溶解包涵体，并在含还原剂的6M盐酸胍中变性。然后，在受控的复性步骤中氧化被还原的半胱氨酸突变体IL-28或IL-29。使重新折叠的半胱氨酸突变体IL-28或IL-29通过滤器净化，去除不溶的蛋白质。然后，使溶液通过滤器净化，去除不溶的蛋白质。重新折叠并浓缩半胱氨酸突变体IL-28或IL-29蛋白后，将重新折叠的半胱氨酸突变体IL-28或IL-29蛋白在阳离子交换柱上用稀缓冲液捕获出来，并用疏水相互作用色谱来纯化。
培养的哺乳动物细胞是本发明中的合适宿主。将外源DNA引入哺乳动物宿主细胞中的方法包括磷酸钙介导的转染(Wigler等，Cell 14：725，1978；Corsaro和Pearson，Somatic Cell Genetics 7：603，1981；Graham和Van der Eb，Virology 52：456，1973)、电穿孔(Neumann等，EMBO J.1：841-845，1982)、DEAE-葡聚糖介导的转染(Ausubel等，同上)和脂质体介导的转染(Hawley-Nelson等，Focus 15：73，1993；Ciccarone等，Focus 15：80，1993)以及病毒载体(Miller和Rosman，BioTechniques 7：980-90，1989；Wang和Finer，Nature Med.2：714-6，1996)。在培养的哺乳动物细胞中生产重组多肽的方法已公开在诸如Levinson等，美国专利No.4,713,339；Hagen等，美国专利No.4,784,950；Palmiter等，美国专利No.4,579,821；和Ringold，美国专利No.4,656,134中。适宜的培养的哺乳动物细胞包括COS-1(ATCC No.CRL1650)、COS-7(ATCC No.CRL 1651)、BHK(ATCC No.CRL 1632)、BHK 570(ATCC No.CRL10314)、293(ATCC No.CRL 1573；Graham等，J.Gen.Virol.36：59-72，1977)和中国仓鼠卵巢细胞系(例如CHO-K1，ATCC No.CCL 61)。其它适宜的细胞系是本领域已知的，并可以通过公共保藏单位(如美国典型培养物保藏中心，Manassas，VA)来获得。一般来说，优选强转录启动子，如来自SV-40或巨细胞病毒的启动子。参见如，美国专利No.4,956,288。其它适宜的启动子包括来自金属硫蛋白基因的启动子(美国专利No.4,579,821和4,601,978)和腺病毒主要晚期启动子。
一般使用药物筛选来选择其中插入了外源DNA的培养哺乳动物细胞。这些细胞通常被称作“转染子”。已在选择剂存在的条件下培养并能够将目的基因传递给其后代的细胞被称作“稳定转染子”。优选的选择标记是编码抗生素新霉素抗性的基因。在存在新霉素类药物(如G-418)等时进行选择。还可以使用选择系统以增加目的基因的表达水平，该过程被称作“扩增”。扩增可按照如下方式实施：在有低水平选择剂存在时培养转染子，然后增加选择剂的量，以选择产生高水平的所引入基因之产物的细胞。优选的可扩增选择标记是二氢叶酸还原酶，该酶赋予对氨甲蝶呤的抗性。也可以使用其它药物抗性基因(例如潮霉素抗性、多重抗药性、嘌呤霉素乙酰转移酶)。引入改变表型的其他备选标记，如绿色荧光蛋白，或细胞表面蛋白(如CD4、CD8、Class I MHC)、胎盘碱性磷酸酶，可通过诸如FACS分选方法或磁珠分离技术用于从未转染的细胞中分选出转染的细胞。
还可以使用其它高等真核细胞作为宿主，包括植物细胞、昆虫细胞和鸟类细胞。将发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)用作在植物细胞中表达基因的载体可参见综述Sinkar等，J.Biosci.(Bangalore)11：47-58，1987。转化昆虫细胞并在其中生产外来多肽可参见Guarino等，美国专利No.5,162,222和WIPO公开文件WO 94/06463。昆虫细胞可用重组杆状病毒来感染，所述病毒通常来源于苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcNPV)。参见King，L.A.和Possee，R.D.，The Baculovirus Expression System：A Laboratory Guide，伦敦，Chapman& Hall；O′Reilly，D.R.等，Baculovirus Expression Vectors：A LaboratoryManual，纽约，Oxford University Press.，1994；以及，Richardson，C.D.，编，Baculovirus Expression Protocols.Methods in MolecularBiology，Totowa，NJ Humana Press，1995。制备重组杆状病毒的第二种方法使用基于转座子的系统，其由Luckow等所描述(Luckow，V.A.，等，J.Virol.67：4566-4579，1993)。该系统以Bac-to-Bac试剂盒的形式出售(Life Technologies，Rockville，MD)。该系统利用转移载体，即含有Tn7转座子的pFastBaclTM(LifeTechnologies)，以便将编码半胱氨酸突变体IL-28或IL-29多肽的DNA移入杆状病毒基因组中，该杆状病毒基因组作为所谓“杆粒”的大质粒被维持在大肠杆菌中。pFastBaclTM转移载体使用了AcNPV多角体蛋白启动子驱动感兴趣的基因表达，在此情形下是半胱氨酸突变体IL-28或IL-29。然而，可以在很大程度上修饰pFastBaclTM。可以去除多角体蛋白启动子，并替换为杆状病毒碱性蛋白启动子(也称为Pcor、p6.9或MP启动子)，其在杆状病毒感染的较早期表达，并已显示出表达分泌蛋白的优点。参见，Hill-Perkins，M.S，和Possee，R.D.，J.Gen.Virol.71：971-976，1990；Bonning，B.C.等，J.Gen.Virol.75：1551-1556，1994；和Chazenbalk，G.D.和Rapoport，B.，J.Biol.Chem.270：1543-1549，1995。在这些转移载体构建体中，可使用短或长型的碱性蛋白启动子。此外，可以构建转移载体，其将天然IL-28或IL-29分泌信号序列替换为源自昆虫蛋白的分泌信号序列。例如，来自蜕化类固醇葡萄糖基转移酶(EGT)、蜜蜂蜂毒素(Invitrogen，Carlsbad，CA)或杆状病毒gp67(PharMingen，San Diego，CA)的分泌信号序列可用在构建体中以替换天然IL-28或IL-29分泌信号序列。另外，转移载体可包括符合阅读框的融合，其在表达的半胱氨酸突变体IL-28或IL-29多肽的C-或N-末端具有编码表位标签、例如Glu-Glu表位标签的DNA(Grussenmeyer，T.等，Proc.Natl.Acad.Sci.82：7952-4，1985)。使用本领域已知技术，将含有半胱氨酸突变体IL-28或IL-29的转移载体转化至E.Coli中，并筛选含有被打断的lacZ基因(指示重组杆状病毒)的杆粒。用常规技术分离含重组杆状病毒基因组的杆粒DNA，将其用于转染草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞，如Sf9细胞。随后产生表达半胱氨酸突变体IL-28或IL-29的重组病毒。通过本领域常用方法制备重组病毒原种。
重组病毒可用于感染宿主细胞，通常是来源于秋粘虫(草地贪夜蛾)的细胞系。一般可参见Glick和Pasternak，Molecular Biotechnology：Principlesand Applications of Recombinant DNA，ASM Press，Washington，D.C.，1994。其他合适的细胞系是源自Trichoplusia ni(美国专利No.5,300,435)的HighFiveOTM细胞系(Invitrogen)。
在本发明中还可以使用真菌细胞，包括酵母细胞。在此方面特别感兴趣的酵母种包括酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)和Pichia methanolica。用外源DNA转化酿酒酵母细胞并从其中制备重组多肽的方法公开在诸如Kawassaki，美国专利No.4,599,311；Kawasaki等，美国专利No.4,931,373；Brake，美国专利No.4,870,008；Welch等，美国专利No.5,037,743；和Murray等，美国专利No.4,845,075中。通过由选择标记所确定的表型，通常是药物抗性或在缺少特定养分(例如亮氨酸)时的生长能力，选择转化的细胞。用于酿酒酵母的优选载体系统是Kawasaki等(美国专利No.4,931,373)公开的POT1载体系统，该系统允许通过在含有葡萄糖的培养基中的生长来选择转化的细胞。用于酵母的适宜启动子和终止子包括来自糖酵解酶基因(参见如Kawasaki，美国专利No.4,599,311；Kingsman等，美国专利No.4,615,974；和Bitter，美国专利No.4,977,092)和醇脱氢酶的那些。也可参见美国专利No.4,990,446；5,063,154；5,139,936和4,661,454。用于其它酵母、包括多形汉逊氏酵母(Hansenula polymorpha)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)、脆壁克鲁维酵母(Kluyveromyces fragilis)、玉蜀黍黑粉菌(Ustilago mydis)、巴斯德毕赤酵母、Pichia methanolica、季也蒙氏毕赤酵母(Pichiaguillermondii)和麦芽糖假丝酵母(Candida maltosa)的转化系统也是本领域已知的。参见如Gleeson等，J.Gen.Microbiol.132：3459-3465，1986；Cregg，美国专利No.4,882,279。可根据McKnight等，美国专利No.4,935,349的方法使用曲霉属细胞。转化Acremonium chrysogenum的方法公开在Sumino等，美国专利No.No.5,162,228中。转化脉孢菌的方法公开在Lambowitz，美国专利No.4,486,533中。将Pichia methanolica用作宿主以制备重组蛋白的方法公开在美国专利No.5,955,349、5,888,768和6,001,597、美国专利No.5,965,389、美国专利No.5,736,383和美国专利No.5,854,039中。
优选将本发明多肽和蛋白质纯化到≥80％纯度，更优选≥90％纯度，甚至更优选≥95％纯度，尤其优选药物纯的状态，即相对于污染的大分子、尤其是其它蛋白质和核酸而言纯度是大于99.9％，而且不含感染源和热源。优选地，纯化的多肽或蛋白质基本上不含有其它多肽或蛋白质，尤其是动物来源的那些。
通过常规蛋白质纯化方法，通常通过层析技术的组合，来纯化表达的重组半胱氨酸突变体IL-28或IL-29蛋白质(包括嵌合多肽和多聚蛋白)。一般可参见亲和层析：原理和方法(Affinity Chroma tography：Principles & Methods)，Pharmacia LKB Biotechnology，Uppsala，瑞典，1988；和Scopes，蛋白质纯化：原理和实践(Protein Purification：Principles and Practice)，Springer-Verlag，纽约，1994。包含多聚组氨酸亲和标签(通常约6个组氨酸残基)的蛋白质可以通过在镍螯合树脂上亲和层析来纯化。参见如Houchuli等，Bio/Technol.6；1321-1325，1988。包含glu-glu标签的蛋白质可以根据常规方法通过免疫亲和层析来纯化。参见如Grussenmeyer等，同上。可根据本领域已知的方法在直链淀粉柱上纯化麦芽糖结合蛋白融合体。
半胱氨酸突变体IL-28或IL-29多肽还可以根据本领域已知的方法通过化学合成制备，包括完全固相合成、部分固相合成方法、片段缩合或经典的溶液合成。参见如Merrifield，J.Am.Chem.Soc.85：2149，1963；Stewart等，SolidPhase Peptide Synthesis(第2版)，Pierce Chemical Co.，Rockford，IL，1984；Bayer和Rapp，Chem.Pept.Prot.3：3，1986；和Atherton等，Solid PhasePeptide Synthesis：A Practical Approach，IRL Press，Oxford，1989。体外合成对于制备较小的多肽是尤其有好处的。
使用本领域已知方法，可以将半胱氨酸突变体IL-28或IL-29蛋白制备成单体或多聚体；糖基化或未糖基化的；PEG化或未PEG化的；融合蛋白形式；并可以包括或可以不包括起始甲硫氨酸残基。用于治疗的半胱氨酸突变体IL-28或IL-29缀合物可以包含药学上可接受的水溶性聚合物部分。干扰素与水溶性聚合物的缀合已显示出能延长干扰素的循环半衰期，并能降低多肽的免疫原性(参见如，Nieforth et al.，Clin.Pharmacol.Ther.59：636(1996)，和Monkarsh等，Anal.Biochem.247：434(1997))。
合适的水溶性聚合物包括聚乙二醇(PEG)、单甲氧基-PEG、单-(C1-C10)烷氧基-PEG、芳氧基-PEG、聚-(N-乙烯吡咯烷酮)PEG、三甲氧基PEG、单甲氧基-PEG丙醛、PEG丙醛、二-琥珀酰亚胺碳酸PEG、丙二醇均聚物、聚环氧丙烷/环氧乙烷共聚物、聚氧乙烯化多羟基化合物(如，甘油)、单甲氧基-PEG丁醛、PEG丁醛、单甲氧基-PEG乙醛、PEG乙醛、甲氧基PEG-琥珀酰亚胺基丙酸酯、甲氧基PEG-琥珀酰亚胺基丁酸酯、聚乙烯醇、葡聚糖、纤维素或其他基于糖类的聚合物。合适的PEG可具有约600至约60,000的分子量，包括如5,000道尔顿，12,000道尔顿，20,000道尔顿，30,000道尔顿，和40,000道尔顿，其可以是直链的或分支的。半胱氨酸突变体IL-28或IL-29缀合物还可包括这类水溶性聚合物的混合物。
半胱氨酸突变体IL-28或IL-29缀合物的一个例子包含半胱氨酸突变体IL-28或IL-29部分和连在该半胱氨酸突变体IL-28或IL-29部分的N末端的聚环氧烷部分。PEG是一种合适的聚环氧烷。例如，半胱氨酸突变体IL-28或IL-29可用PEG修饰，该过程被称为“PEG化”。半胱氨酸突变体IL-28或IL-29的PEG化可通过现有技术中已知的PEG化反应中任何一种来进行(如参见，EP 0154 316，Delgado等，Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems9：249(1992)，Duncan和Spreafico，Clin.Pharmacokinet.27：290(1994)，和Francis等，Int J Hematol 68：1(1998))。例如，PEG化可用反应性聚乙二醇分子由酰化反应或由烷基化反应来进行。在备选的方法中，半胱氨酸突变体IL-28或IL-29缀合物通过缩合活化的PEG来形成，其中PEG的末端羟基或氨基被活化的接头分子所替代(如参见，Karasiewicz等，美国专利5,382,657)。
由酰化进行的PEG化通常需要将半胱氨酸突变体IL-28或IL-29多肽与PEG的活性酯衍生物反应。活化的PEG酯的一个例子是与N-羟基琥珀酰亚胺酯化的PEG。本文中所用的术语″酰化″包括在半胱氨酸突变体IL-28或IL-29和水溶性聚合物间的以下类型的连接：酰胺、氨基甲酸酯、氨甲酸乙酯(urethane)等。由酰化制备PEG化的半胱氨酸突变体IL-28或IL-29的方法通常将包含步骤：(a)用PEG(如PEG醛衍生物的反应性酯)与半胱氨酸突变体IL-28或IL-29多肽在可以使一个或多个PEG基团连接到半胱氨酸突变体IL-28或IL-29上的条件下，和(b)获得反应产物。通常，最优的酰化反应反应条件将根据已知的参数和所期望的结果来确定。例如，PEG：半胱氨酸突变体IL-28或IL-29的比率越大，聚PEG化的半胱氨酸突变体IL-28或IL-29产物的百分数越大。
由烷基化进行的PEG化通常涉及在还原剂存在的条件下，将半胱氨酸突变体IL-28或IL-29与PEG衍生物的末端醛(如丙醛、丁醛、乙醛)等反应。PEG基团优选通过-CH2-NH2基团与所述多肽连接。
通过还原性烷基化衍生作用来产生单PEG化产物的方法利用了可用于衍生化的不同类型伯氨基团的有差异的反应性。典型地，反应在使其能利用蛋白质的赖氨酸残基的ε氨基和N-末端残基的α氨基之间的pKa差异的pH下进行。通过该选择性衍生作用，可控制含诸如醛等反应性基团的水溶性聚合物与蛋白质的连接。与聚合物的缀合主要发生在蛋白质的N-末端上，而不显著修饰其他反应性基团，如赖氨酸侧链氨基。
通过还原性烷基化生产实质均一化的单聚合物半胱氨酸突变体IL-28或IL-29缀合物分子群体的方法可包含以下步骤：(a)在还原性烷基化条件下，在适合选择性修饰在半胱氨酸突变体IL-28或IL-29氨基末端的α氨基的pH下，将半胱氨酸突变体IL-28或IL-29多肽与反应性PEG反应，并(b)获得反应产物。用于还原性烷基化的还原剂在水溶液中应该是稳定的，并优选仅仅能还原在还原性烷基化初始过程中形成的Schiff碱。优选的还原剂包括硼氢化钠、氰基硼氢钠、二甲胺硼烷、三甲胺硼烷和吡啶硼烷。
为了获得单聚合物半胱氨酸突变体IL-28或IL-29缀合物的基本单一群体，还原性烷基化反应条件是能使水溶性聚合物部分选择性地连接于半胱氨酸突变体IL-28或IL-29N-末端的那些条件。这类反应条件通常利用了赖氨酸氨基和N-末端上的α氨基之间的pKa差异。pH还影响聚合物与所用的蛋白质的比率。一般来说，如果pH较低，则相对于蛋白质应用较过量的聚合物比较理想，因为N-末端的α-基团反应性越低，就需要越多聚合物以获得最佳条件。如果pH较高，则聚合物：半胱氨酸突变体IL-28或IL-29无需如此大，因为有较多反应性基团可供利用。通常pH在3-9或3-6的范围内。要考虑的其他因素是水溶性聚合物的分子量。一般来说，聚合物的分子量越大，连接在蛋白质上的聚合物分子数越少。对于PEG化反应而言，典型的分子量为约2kDa至约100kDa，约5kDa至约50kDa，约12kDa至约40kDa，或约20kDa至约30kDa。水溶性聚合物与半胱氨酸突变体IL-28或IL-29的摩尔比率通常在1∶1至100∶1的范围内。典型地，对于多PEG化而言，水溶性聚合物比半胱氨酸突变体IL-28或IL-29的摩尔比率为1∶1至20∶1，而对于单PEG化为1∶1至5∶1。
产生含干扰素和水溶性聚合物部分的缀合物的一般方法在现有技术中是已知的。如参见，Karasiewicz等，美国专利5,382,657，Greenwald等，美国专利5,738,846，Nieforth等，Clin.Pharmacol.Ther.59：636(1996)，Monkarsh等，Anal.Biochem.247：434(1997)。可利用标准纯化方法，如透析、超滤、离子交换色谱、亲和色谱、大小排阻色谱等，将PEG化物从未缀合的半胱氨酸突变体IL-28或IL-29多肽中分离出来。
本发明的半胱氨酸突变体IL-28或IL-29分子能特异结合IL-28受体和/或用作抗病毒剂。利用已成熟的方法可测试半胱氨酸突变体IL-28或IL-29多肽与IL-28受体的结合。可根据厂商的指导，利用碘珠(iodobead)(Pierce，Rockford，IL)将半胱氨酸突变体IL-28或IL-29碘化，然后如下所述使用125I-IL-28或125I-IL-29。
在第一个方法中，在存在或缺少可能的结合竞争物(包括未标记的半胱氨酸突变体IL-28、半胱氨酸突变体IL-29、IL-28或IL-29)的情况下，将50ng125I-IL-28或125I-IL-29与1000ng IL-28受体的人IgG融合蛋白合并。也可进行同样的结合反应，其中换用其他细胞因子受体人IgG融合物作为对照来测试特异性。于4℃孵育后，将蛋白质-G(Zymed，SanFransisco，CA)加入到反应中，以捕捉受体-IgG融合物和任何结合在它们上的蛋白质，将反应物于4℃孵育又一个小时。然后收集蛋白质-G琼脂糖，用PBS洗三次，结合的125I-IL-28或125I-IL-29用γ射线计数仪(Packard Instruments，Downers Grove，IL)测量。
在第二个方法中，可以检测分子抑制125I-IL-28或125I-IL-29与结合在板上的受体之间的结合的能力。可以通过将100μl的1g/ml受体溶液在板上孵育过夜，将IL-28受体片段(代表细胞外配体结合结构域)吸附在96孔板的孔上。在第二种形式中，可以将受体-人IgG融合物结合在96孔板的孔上，所述板已经包被有针对融合蛋白的人IgG部分的抗体。在用受体包被板后，洗板，用SUPERBLOCK(Pierce，Rockford，IL)封闭，再洗板。将含固定浓度的125I-IL-28或125I-IL-29溶液(其中含或不含升高浓度的潜在结合竞争物，所述竞争物包括半胱氨酸突变体IL-28、半胱氨酸突变体IL-29、IL-2g和IL-29)和100μl的溶液加入到板上合适的孔中。于4℃孵育一个小时后，洗板，用计数仪(Topcount，Packard Instruments，Downers grove，IL)测量所结合的125I-IL-28或125I-IL-29的量。可以根据在这些结合测试中使用的受体分子以及用作抑制剂的分子来确定125I-IL-28或125I-IL-29的结合特异性。
除了PEG化，也可以将人白蛋白通过遗传工程方式偶联到本发明的多肽上以延长其半衰期。人白蛋白是最普通的天然产生的人循环系统中的血蛋白，能在体内维持循环超过20天。研究表明，通过遗传工程方式融合到人白蛋白上的治疗蛋白具有较长的半衰期。IL28或IL29白蛋白融合蛋白，像PEG化蛋白一样，相对于目前可供利用的疗法，可以为患者提供长效治疗方案，具有更便利的给药日程，相似或更高的功效和安全性(美国专利6,165,470；Syed等，Blood，89(9)：3243-3253(1997)；Yeh等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，89：1904-1908(1992)；和Zeisel等，Horm.Res.，37：5-13(1992))。
像前述的PEG化和人白蛋白一样，人IgG分子的Fc部分也可以与本发明的多肽相融合。由于Fc部分，所得的融合蛋白可具有增加的循环半衰期(美国专利5,750,375，美国专利5843,725，美国专利6,291,646；Barouch等，Journal of Immunology，61：1875-1882(1998)；Barouch等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，97(8)：4192-4197(4月11，2000)；和Kim等，Transplant Proc.，30(8)：4031-4036(1998年12月))。
检测和诊断病毒感染的方法对于本领域普通技术人员来说是公知的。用于测定响应于本发明分子的给药而产生的病毒减少的确切方法将由病毒种类和感染是否是体内或体外的而定。如果是体内感染，测定和检测感染和感染水平的改变可以根据感染的个体、病毒感染类型等而变化。例如，该方法包括但不限于，测定CD4细胞计数的改变、血清学测试、通过常规和实时定量聚合酶链式反应测试来测定病毒DNA和病毒RNA、病毒诱导的抗体水平、免疫荧光和酶联免疫吸附测定、细胞病理效应和组织学方法。
抗病毒效应可以是直接的或间接的。直接抗病毒效应的例子是，例如，其中半胱氨酸突变体IL-28或IL-29多肽竞争病毒受体或共同受体以阻断病毒感染。半胱氨酸突变体IL-28或IL-29可经肠胃外途径给药以防止病毒感染或降低进行中的病毒复制和重感染(Gayowski，T.等，Transplantation 64：422-426，1997)。间接抗病毒效应的例子是，例如其中半胱氨酸突变体IL-28或IL-29可结合CD4或其他白细胞受体并通过调节免疫应答效果来显示抗病毒效应。
尤其感兴趣的是将半胱氨酸突变体IL-28或IL-29用于抗病毒治疗病毒性白血病(HTLV)、AIDS(HIV)或由诸如轮状病毒、杯状病毒(如，诺沃克因子)和某些致病性腺病毒株所引起的胃肠病毒感染、乙型和丙型肝炎。
半胱氨酸突变体IL-28或IL-29所应用的其它病毒感染类型包括但不限于：由DNA病毒造成的感染(如，疱疹病毒，如单纯疱疹病毒、Epstein-Barr病毒、巨细胞病毒；痘病毒，如天花(痘疮)病毒；肝DNA病毒(如，乙型肝炎病毒)；乳头瘤病毒；腺病毒)；RNA病毒(如，HIVI、II；HTLV I、II；脊髓灰质炎病毒；甲型肝炎病毒；冠状病毒，如重症急性呼吸综合症(SARS)；正粘病毒(如，流感病毒)；副粘病毒(如，麻疹病毒)；狂犬病病毒；丙型肝炎病毒)、黄病毒、流感病毒；杯状病毒；狂犬病病毒、牛疫病毒、沙粒病毒等。另外，半胱氨酸突变体IL-28或IL-29所应用的病毒相关疾病类型的例子包括但不限于：获得性免疫缺陷；重症急性呼吸综合症(SARS)；肝炎；肠胃炎；出血性疾病；肠炎；心脏炎；脑炎；麻痹症；支气管炎；上和下呼吸道疾病；呼吸性多发性乳头瘤病；关节炎；弥散性疾病、脑膜炎、单核细胞增多症。另外，半胱氨酸突变体IL-28或IL-29可用于多种应用中进行抗病毒免疫治疗，并可和其他细胞因子、其他蛋白质或小分子抗病毒剂等结合使用。
临床上，HCV的诊断测试包括对抗体的血清学试验和对病毒颗粒的分子测试。可用酶免疫测试(Vrielink等，Transfusion 37：845-849，1997)，但其需要利用额外的测试诸如免疫印迹测试(Pawlotsky等，Hepatologv 27：1700-1702，1998)来确证。定性和定量试验一般使用聚合酶链式反应技术，而且其优选用于评估病毒血症和治疗反应(Poynard等，Lancet 352：1426-1432，1998；McHutchinson等，N.Engl.J.Med.339：1485-1492，1998)。有一些商品化的测试可供利用，如定量RT-PCR(Amplicor HCV MonitorTM，Roche MolecularSystems，Branchburg，NJ)和分支的DNA(脱氧核糖核酸)信号扩增试验(QuantiplexTM HCV RNA试验[bDNA]，Chiron Corp.，Emeryville，CA)。针对HCV感染的非特异性实验室测试可测量丙氨酸氨基转移酶水平(ALT)，其并不昂贵并容易使用(National Institutes of Health Consensus DevelopmentConference Panel，Hepatology 26(增刊1)：2S-10S，1997)。肝活组织检查的组织学评估一般被认为是确定HCV进程的最准确方法(Yano等，Hepatology23：1334-1340，1996.)对于HCV的临床测试的综述，可参见Lauer等，N.Engl.J.Med.345：41-52，2001。
有几个体内模型可用于测试HBV和HCV，它们对本领域普通技术人员来说是已知的。对于HCV，例如，HCV复制子模型是一个基于细胞的系统，用以研究药物抑制HCV复制的效果(Blight等，Science，290(5498)：1972-1974(Dec.8，2000)；和Lobmann等，Science，285(5424)：110-113(7月2日，1999))。如Korba等，Antiviral Res.，19(1)：55-70(1992)和Korba等，AntiviralRes.，15(3)：217-228(1991)中所述，本领域普通技术人员公知并可接受的体外HBV模型可用于确定测试分子的抗HBV活性。
例如，半胱氨酸突变体IL-28或IL-29对感染HBV的哺乳动物的影响可利用美洲旱獭模型来评估。简而言之，被美洲旱獭肝炎病毒(WHV)长期感染的美洲旱獭产生了与长期感染HBV的人中的疾病所相似的肝炎和肝细胞瘤。该模型已被用于临床前评估抗病毒活性。已建立了长期感染WHV的株系，利用该模型，用血清接种新生动物来提供动物，以用于研究某些化合物的效果。(此类综述可参见，Tannant等，ILAR J.42(2)：89-102，2001)。黑猩猩也可用于评估半胱氨酸突变体IL-28或IL-29对HBV感染的哺乳动物的影响。利用黑猩猩，已表征了HBV，这些研究证实黑猩猩的疾病与人的疾病很相似(Barker等，J.Infect.Dis.132：451-458，1975和Tabor等，J.Infect.Dis.147：531-534，1983.)黑猩猩模型已被用于评估疫苗(Prince等，In：Vaccines97，ColdSpring Harbor Laboratory Press，1997.)利用感染猿免疫缺陷病毒的非人灵长类可常规测试针对HIV的疗法(此类综述可参见，Hirsch等，Adv.Pharmcol.49：437-477，2000 and Nathanson等，AIDS 13(增刊A)：S113-S120，1999.)关于非人灵长类在HIV、肝炎、疟疾、呼吸道合胞病毒和其他疾病中的应用的综述，参见，Sibal等，ILAR J.42(2)：74-84，2001。最近开发的转基因小鼠模型(Guidotti等，Journal of Virology 69：6158-6169，1995)能支持感染性HBV的高水平复制，其已被用作HBV感染的化学治疗模型。将转基因小鼠用抗病毒药物治疗，并在治疗后测量转基因鼠肝和血清中的HBV DNA和RNA水平。也可测量治疗后在转基因鼠血清中的HBV蛋白水平。该模型已被用于评估拉米夫啶(lamivudine)和IFN-alpha在降低HBV病毒滴度方面的效果(Morrey等，Antiviral Therapy 3：59-68，1998)。
另外，本发明的半胱氨酸突变体IL-28或IL-29多肽和蛋白质可以通过其活性进行表征，所述活性即调节应答细胞类型的增殖、分化、迁移、粘着、基因表达或代谢。半胱氨酸突变体IL-28或IL-29多肽和蛋白质的生物学活性可以利用设计成检测细胞增殖、分化、迁移或粘着；或者基因表达或细胞代谢的改变(如，产生其它生长因子或其它大分子)的体外或体内试验来检测。许多适宜的试验是本领域已知的，本文中公开了代表性的试验。对于筛选，例如对于确定氨基酸替代、缺失或插入的效果，利用培养细胞的试验是最方便的。
半胱氨酸突变体IL-28或IL-29蛋白的活性可以使用培养的细胞在体外测量，或通过将本发明的分子施用于适当的动物模型而在体内测量。测量细胞增殖或分化的试验是本领域所熟知的。例如，测量增殖的试验包括诸如下述的实验：对中性红染料的化学敏感性(Cavanaugh等，Investigational New Drugs 8：347-354，1990)、掺入放射性标记的核苷酸(公开在诸如Rains和Ross，MethodsEnzymol.109：749-773，1985；Wahl等，Mol.Cell Biol.8：5016-5025，1988；和Cook等，Analytical Biochem.179：1-7，1989)、在增殖细胞的DNA中掺入5-溴-2′-脱氧尿苷(BrdU)(Porstmann等，J.Immunol.Methods 82：169-179，1985)和使用四唑_盐(Mosmann，J.Immunol.Methods 65：55-63，1983；Alley等，Cancer Res.48：589-601，1988；Marshall等，Growth Reg.5：69-84，1995；和Scudiero等，Cancer Res.48：4872-4833，1988)。可以使用能被诱导而分化出更成熟表型的适宜前体细胞来测试分化。测量分化的试验包括诸如，测量与组织的阶段特异性表达有关的细胞表面标记、酶活性、功能活性或形态学改变(Watt，FASEB，5：281-284，1991；Francis，Differentiation 57：63-75，1994；Raes，Adv.Anim.Cell Biol.Technol.Bioprocesses，161-171，1989；所有文献均并入本文作为参考)。
利用设计成测定IL-28和IL-29诱导的一种或多种其他生长因子或其他大分子的生产的试验，也可检测半胱氨酸突变体IL-28或IL-29多肽活性。含IL-28和IL-29的蛋白家族的某些成员已显示出能增加体内的循环单核细胞数。单核细胞活化对于先天和适应性免疫都是至关重要的。例如，已显示单核细胞的活化可通过几种机制刺激抗原呈递。抗原呈递可促进T细胞(细胞毒性和辅助T细胞)的活化和增殖。树突状细胞的成熟和活化也促进T细胞的活化以及先天和适应性免疫。活化的单核细胞和巨噬细胞的增加也显示出能增加细胞溶解活性。所以，半胱氨酸突变体IL-28或IL-29将可用作为抗感染剂，增强先天、细胞介导和体液免疫应答。已观察到CD14+单核细胞中ICAM染色的增加，提示IL-28和IL-29在单核细胞活化中起作用。虽然数据显示家族成员能促进针对病毒的抗病毒应答，但可能细菌和寄生虫也受到影响。
进行单核细胞活化试验以(1)寻找半胱氨酸突变体IL-28或IL-29蛋白能否进一步刺激单核细胞活化，和(2)检测半胱氨酸突变体IL-28或IL-29蛋白调节粘附诱导的或内毒素诱导的单核细胞活化的能力(Fuhlbrigge等，J.Immunol.138：3799-3802，1987)。响应于活化而产生的IL-1α和TNFα水平通过ELISA测试(Biosource，Inc.Camarillo，CA)。单核细胞/巨噬细胞由于有CD 14(LPS受体)而对内毒素非常敏感，具有适度内毒素样活性水平的蛋白质会活化这些细胞。
增加水平的单核细胞提示半胱氨酸突变体IL-28或IL-29可对骨髓内的骨髓始祖细胞起直接作用。对于恢复免疫力，如在化疗后恢复免疫力，提高骨髓始祖细胞向单核细胞的分化是重要的。因此，向接受化疗的患者给药半胱氨酸突变体IL-28或IL-29能促进他们的康复以及对抗通常与化疗方法相关的感染的能力。因此，扩大单核细胞或单核细胞始祖细胞数的方法通过用本发明的分子培养骨髓或外周血细胞来进行，从而提高单核细胞或单核细胞始祖细胞数，以便体外或离体实现这种效果。本发明还提供向需要提高单核细胞或单核细胞始祖细胞的哺乳动物体内给药本发明的分子。增多的单核细胞或单核细胞始祖细胞可用临床医生、内科医生和其他本领域普通技术人员所熟知的方法来测量。单核细胞属于造血细胞的骨髓系，因此对该谱系内的其它细胞的影响并不罕见。例如，当因子能促进骨髓或淋巴系中一类细胞的分化或增殖时，这将能影响有共同始祖或干细胞的其他细胞的产生。
半胱氨酸突变体IL-28或IL-29蛋白的造血活性可在各种培养的造血细胞上测试。优选的试验包括初级骨髓集落测试和限于晚期细胞系的集落测试，它们在现有技术中是已知的(如，Holly等，WIPO申请WO 95/21920)。将置于合适半固体培养基(如，含15％胎牛血清、10％牛血清白蛋白和0.6％ PSN抗生素混合物的50％甲基纤维素)上的髓细胞在存在测试多肽的情况下孵育，然后用显微镜检测集落形成。已知的造血因子用作对照。可如上文所述测定半胱氨酸突变体IL-28或IL-29多肽对造血细胞系的促有丝分裂活性。
基本按Kahler等(Arteriosclerosis，Thrombosis and VascularBiology17：932-939，1997)所述测试细胞迁移。如果蛋白质诱导细胞从低蛋白质浓度区域迁移到高蛋白质浓度区域，则该蛋白质被认为是有趋化性的。典型的测试是利用改良的Boyden腔来进行的，其中用聚苯乙烯膜分隔2个腔(Transwell；Corning Costar Corp.)。将稀释在含1％ BSA的培养基中的测试样品加入含Transwell的24孔板上的较低腔中。然后，将细胞放在预先用0.2％明胶处理过的Transwell插入物上。37℃孵育4小时后测量细胞迁移。除去Transwell膜顶部的非迁移细胞，并固定附着在膜下表面上的细胞，用0.1％结晶紫染色。然后用10％乙酸提取染色的细胞，并于600nm测量吸光度。然后从标准标定曲线计算迁移。还可以使用Grant等(″血管发生是上皮-间充质相互作用的一个成分”，Goldberg和Rosen，Epithelial-Mesenchymal Interaction inCancer，Birkh_user Verlag，1995，235-248；Baatout，Anticancer Research17：451-456，1997)的matrigel方法测量细胞迁移。
细胞粘着活性基本上按照LaFleur等(J.Biol.Chem.272：32798-32803，1997)公开的方法测定。简而言之，用测试蛋白质包被微量滴定板，用BSA封闭非特异位点，并以大约104-105个细胞/孔的密度接种细胞(如平滑肌细胞、白细胞或内皮细胞)。在37℃孵育这些孔(通常为约60分钟)，然后通过温和洗涤除去未贴壁的细胞。通过常规方法(如，用结晶紫染色、裂解细胞并测定裂解物的光密度)对贴壁细胞数定量。对照孔用已知的粘着蛋白(如纤连蛋白或玻连蛋白)包被。
半胱氨酸突变体IL-28或IL-29多核苷酸在动物中的表达为进一步研究体内过量生产或蛋白质活性的抑制的生物学效应提供了模型。可以使用病毒载体或裸DNA将IL-28或IL-29的编码多核苷酸和反义多核苷酸导入测试动物，如小鼠中，或可以制备转基因动物。
测试本发明蛋白质的一个体内方法利用了病毒递送系统。用于此目的的病毒实例包括腺病毒、疱疹病毒、逆转录病毒、痘苗病毒和腺相关病毒(AAV)。腺病毒是一种双链DNA病毒，其是目前研究得最好的用于递送异源核酸的基因转移载体。综述可参见Becker等，Meth.Cell Biol.43：161-89，1994；和Douglas和Curiel，Science & Medicine 4：44-53，1997。腺病毒系统有几个优点。腺病毒可以(i)容纳相对大的插入DNA；(ii)生长至高滴度；(iii)感染广谱的哺乳动物细胞类型；和(iv)可与许多不同的启动子一起使用，包括遍在的、组织特异性的和可调节的启动子。由于腺病毒在血流中是稳定的，故它们可以通过静脉内注射给药。也可参见，Wu等，J.Biol.Chem.263：14621-14624，1988；Wu等，J.Biol.Chem.267：963-967，1992；以及Johnston和Tang，Meth.Cell Biol.43：353-365，1994。
还可以制备被加工成可表达半胱氨酸突变体IL-28或IL-29基因的转基因小鼠(Lowell等，Nature 366：740-742，1993)，所述鼠经工和表现出完全缺失半胱氨酸突变体IL-28或IL-29基因功能的小鼠，后者被称作“敲除小鼠(knockoutmice)″(Snouwaert等，Science 257：1083，1992)。可以利用这些小鼠在体内系统中研究半胱氨酸突变体IL-28或IL-29基因及其编码的蛋白质。转基因表达的优选启动子包括来自金属硫蛋白和白蛋白基因的启动子。
大多数细胞因子以及由活化淋巴细胞产生的其它蛋白质对于整个身体的细胞分化、活化、募集和细胞稳态有重要的生物学作用。半胱氨酸突变体IL-28或IL-29及其活性的抑制剂预期具有多种治疗用途。这些治疗用途包括对需要免疫调节的疾病(包括自身免疫病如类风湿性关节炎、多发性硬化、重症肌无力、全身性红斑狼疮和糖尿病)进行治疗。IL-28或IL-29在炎症调节中是重要的，因此可以用于治疗类风湿性关节炎、哮喘和败血症。IL-28或IL-29可在介导肿瘤发生中起作用，因此半胱氨酸突变体IL-28或IL-29拮抗剂可用于治疗癌症。IL-28或IL-29可以用于调节免疫系统，因此半胱氨酸突变体IL-28或IL-29拮抗剂可用于降低移植排斥、预防移植物抗宿主疾病、增强对感染性疾病的免疫力、治疗无免疫应答的患者(如，HIV+患者)、或增强疫苗。
本发明蛋白质家族的成员显示出具有类似于干扰素-α的抗病毒效果。在美国，干扰素已被批准用于治疗自身免疫病、尖锐湿疣、慢性丙型肝炎、膀胱癌、子宫颈癌、喉乳头状瘤病、阿利贝尔氏真菌病、慢性乙型肝炎、感染了人免疫缺陷病毒的患者中的Kaposi肉瘤、恶性黑素瘤、毛细胞性白血病和多发性硬化症。另外，半胱氨酸突变体IL-28或IL-29可用于治疗动脉硬化症，如通过抑制细胞增殖来治疗动脉硬化。因此，本发明涉及具有IL-28和IL-29活性的半胱氨酸突变体IL-28或IL-29蛋白、多肽和肽在治疗这些病症以及治疗视网膜病中的应用。本发明也涉及具有IL-28和IL-29活性的半胱氨酸突变体IL-28或IL-29蛋白、多肽和肽在治疗淋巴增殖疾病中的应用，所述淋巴增殖疾病包括B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、非-Hodkin氏淋巴瘤、多发性骨髓瘤、急性髓细胞性白血症、慢性髓细胞性白血症。
干扰素还显示出可诱导培养细胞中抗原的表达(如参见，Auth等，Hepatology 18：546(1993)，Guadagni等，Int.J.Biol.Markers 9：53(1994)，Girolomoni等，Eur.J.Immunol.25：2163(1995)，和Maciejewski等，Blood85：3183(1995)。该活性增强了在体外鉴定新肿瘤相关抗原的能力。另外，干扰素能增加人肿瘤抗原表达水平，这显示干扰素可作佐剂用于免疫疗法，或利用抗肿瘤抗原的抗体，增强免疫闪烁扫描法中(Guadagni等，CancerImmunol.Immunother.26：222(1988)；Guadagni等，Int.J.Biol.Markers9：53(1994))。因此，本发明包括利用抗肿瘤抗原的抗体，将具有IL-28和IL-29活性的半胱氨酸突变体IL-28或IL-29蛋白、多肽和肽用作免疫治疗佐剂或用于增强免疫闪烁成像术。
可以体内测量半胱氨酸突变体IL-28或IL-29的活性和对肿瘤发展及转移的影响。已开发出几个同基因小鼠模型，它们可用于研究多肽、化合物或其它治疗方法对肿瘤进展的影响。在这些模型中，将传代培养的肿瘤细胞植入与肿瘤供体相同品系的鼠中。细胞将在受体小鼠中发育成具有相似特征的肿瘤，而且在某些模型中会发生转移。其中，我们研究中合适的肿瘤模型包括Lewis肺癌(ATCC No.CRL-1642)和B16黑素瘤(ATCC No.CRL-6323)。这两个均是常用的肿瘤系，与C57BL6小鼠同基因，易于在体外培养和操作。由这些细胞系中任一者的植入所引起的肿瘤能够在C57BL6鼠中向肺转移。Lewis肺癌模型近来已被用于在小鼠中，以鉴定血管生成抑制剂(O′Reilly MS等，Cell 79：315-328，1994)。通过每日注射重组蛋白、激动剂或拮抗剂或一次性注射重组腺病毒，用试验剂来处理C57BL6/J小鼠。此处理后3天，将105至106个细胞植入背部皮肤下。或者，可以在移植前用重组腺病毒(如表达半胱氨酸突变体IL-28或IL-29的重组腺病毒)感染细胞本身，以便在肿瘤位置或在细胞内合成该蛋白质，而不是在全身合成。该小鼠通常在5日内长出可见的肿瘤。使该肿瘤生长长达3个星期，在此期间它们在对照处理组中可以达到1500-1800mm3大小。在整个实验过程中，仔细监测肿瘤的尺寸和体重。处死时，与肺和肝一起取出肿瘤并称重。肺重量显示出与转移肿瘤负荷十分相关。作为另一种测量方法，可对肺表面的转移瘤计数。使用本领域已知的和本文中描述的方法，处理切下的肿瘤、肺和肝，以便进行组织病理学检查、免疫组织化学分析和原位杂交。由此可以评估表达的目的多肽(如半胱氨酸突变体IL-28和IL-29)对肿瘤募集血管系统和进行转移的能力的影响。此外，除了使用腺病毒外，还可以用半胱氨酸突变体IL-28和IL-29瞬时转染植入的细胞。应用稳定的半胱氨酸突变体IL-28或IL-29转染子以及应用诱导型启动子体内激活半胱氨酸突变体IL-28或IL-29表达是本领域已知的，而且可以将它们用于该系统中以评价对转移的诱导。另外，可以直接将纯化的半胱氨酸突变体IL-28或IL-29条件培养基注射入该小鼠模型中，并由此用于该系统中。一般可参考，O′Reilly MS等，Cell 79：315-328，1994；和Rusciano D等，肝转移的鼠模型，Invasion Metastasis 14：349-361，1995。
半胱氨酸突变体IL-28或IL-29还可用于治疗心肌炎，这是一种当心脏卷入炎症过程时发生的疾病。淋巴细胞渗透和肌纤维崩溃被认为是在病毒、细菌、真菌或寄生虫的感染后造成的(如参见，Brodison等，J.Infection 37：99(1998))。可静脉内或皮下注射半胱氨酸突变体IL-28或IL-29来治疗与心肌炎相关的感染。也可静脉内给药半胱氨酸突变体IL-28或IL-29，作为免疫调节细胞因子来治疗自体免疫心肌炎。利用A/J小鼠中的心肌炎自体免疫模型可外推出干扰素剂量(Donermeyer，等，J.Exp.Med.182：1291(1995))。
近来报道集中于I型干扰素在预防病毒诱导的糖尿病中的作用，其在病毒感染早期通过在胰腺β细胞中诱导出强抗病毒状态起作用(Flodstroem等，Nature Immunology3，373-382(2002))。这阻止了由于病毒诱导的细胞死亡和伴随其的自体免疫引起的β细胞的流失。半胱氨酸突变体IL-28或IL-29还诱导表达IL-28受体的细胞中的抗病毒状态。IL-28受体在胰腺组织中高表达，因此IL-28和IL-29可在预防由于β细胞死亡引起的病毒诱导的糖尿病起作用。另外，I型干扰素在预防病毒诱导的糖尿病中的作用可扩展到其它病毒诱导的自体免疫病上，因此IL-28和IL-29也可在预防其它疾病中起作用，如肌肉硬化症、狼疮和在表达IL-28受体的组织中的病毒诱导的自体免疫病。
半胱氨酸突变体IL-28或IL-29多肽可单独或与其他血管形成或血管生成剂(包括VEGF)联合给药。当半胱氨酸突变体IL-28或IL-29和其他试剂联合使用时，可以适应被治疗的特定状况来同时或连续给药这两种化合物。
半胱氨酸突变体IL-28或IL-29可用于治疗肿瘤发生，因此可以用于治疗癌症。IL-28可以抑制B细胞肿瘤系，提示了用半胱氨酸突变体IL-28或IL-29治疗患者可能有治疗好处，从而诱导B细胞肿瘤细胞进入增殖较不活跃的状态。该配体可以和其它已应用的药剂(包括常规化疗药剂以及免疫调节剂，如干扰素α)联合给药。α/β干扰素已显示出能有效地治疗某些白血病和动物疾病模型，而且对于B细胞肿瘤来源的细胞系，干扰素α和半胱氨酸突变体IL-28或IL-29的生长抑制作用可能是加成性的。
在另一个方面，本发明提供药物配方，其包含选自由下述组成之组中的分离的多肽：SEQ ID NO：2、4、6、8、10、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、和161组成；和药学上可接受的载体。
对于药物应用，可以根据常规方法对半胱氨酸突变体IL-28或IL-29蛋白进行配制以便局部或胃肠外，尤其是静脉内或皮下递送。一般地，药物制剂包括半胱氨酸突变体IL-28或IL-29多肽和药学上可接受的载体，如盐水、缓冲盐水、5％葡萄糖水溶液等。制剂可以进一步包括一种或多种赋形剂、防腐剂、增溶剂、缓冲剂、防止蛋白质丢失在瓶表面上的白蛋白等。配制方法是本领域熟知的，并公开在诸如Remington：The Science and Practice of Pharmacy，Gennaro编，Mack Publishing Co.，Easton，PA，第19版，1995中。半胱氨酸突变体IL-28或IL-29优选以大约10至100μg/ml总体积的浓度使用，但也可以使用1ng/ml至1000μg/ml范围内的浓度。对于局部使用，例如为了促进伤口愈合，可以按0.1-10μg/cm2伤口面积使用该蛋白质，确切的剂量由临床医师根据已接受的标准，考虑待治疗疾病的性质和严重性、患者的特性等来确定。剂量的确定在本领域普通技术人员的水平范围内。可以在治疗期间每日或间歇地给药。可以在一至几个小时的典型时间期限内通过快速注射或输注进行静脉内给药。还可以使用缓释配方。一般地，半胱氨酸突变体IL-28或IL-29的治疗有效量是指，足以使所治疗的疾病产生临床显著的改变的量，如病毒负荷或免疫功能方面的临床显著改变、发病率的显著降低或组织学评分的显著增加。
例如，药物配方可以试剂盒形式提供，其中包含含有本发明IL-28或IL29多肽的容器。治疗性多肽可以单或多剂注射液或者注射前重新配制的无菌粉的形式来提供。可选地，该试剂盒可包括干粉分散剂、液体气雾发生剂或喷雾剂，用于治疗性多肽的给药。该试剂盒可进一步包含关于药物组合物适应症和用法的书面信息。另外，该信息可包括这样的陈述，即该IL-28或IL29多肽配方不适于已知对IL-28或IL29多肽过敏的患者。
在另一个方面，本发明提供制备针对多肽的抗体的方法，其包括：用选自由下述组成之组中的多肽接种动物：SEQ ID NO：19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、和161，其中所述多肽在动物中引起免疫应答以产生抗体；并从动物中分离抗体。在另一个方面，本发明提供由上文所述的方法制备的抗体(如中和抗体)，其中该抗体结合选自由下述组成之组中的多肽：SEQ ID NO：19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、和161。在一个具体实施方式中，上文所述的抗体特异性结合选自由下述组成之组中的多肽：SEQ ID NO：19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、和161。在另一个方面，本发明提供其特异结合如本文所述多肽的抗体或抗体片段。在一个具体实施方式中，所述抗体选自多克隆抗体，鼠单克隆抗体，源自鼠单克隆抗体的人源化抗体，抗体片段和人单克隆抗体。在一个具体实施方式中，抗体片段如本文所述，其中所述抗体片段选自F(ab′)、F(ab)、Fab′、Fab、Fv、scFv、和最小识别单位。
在另一个方面，本发明提供抗独特型抗体，其特异结合如本文所述的抗体。
本文所用的术语“抗体”包括多克隆抗体、单克隆抗体、其抗原结合片段(如F(ab′)2和Fab片段)、单链抗体等，包括遗传工程化抗体。非人抗体可以通过在人框架和恒定区上植入非人CDR、或通过掺入完整的非人可变结构域(可选地通过替换暴露的残基来用人样表面“遮蔽”它们，其结果是产生“镶饰”抗体)来进行人源化。在一些情况下，人源化抗体可以在人可变区构架中保留非人残基以增加适当的结合特征。通过使抗体人源化，可以提高生物学半衰期，并减少在施用于人后出现不良免疫应答的可能性。本领域技术人员可以用特定和不同的恒定域(即不同的Ig亚型)来产生人源化抗体，以促进或抑制与特定抗体恒定域有关的各种免疫功能。如果抗体与半胱氨酸突变体IL-28或IL-29多肽或蛋白质的结合亲和力比抗体与对照(非半胱氨酸突变体IL-28和IL-29)多肽或蛋白质的结合亲和力高至少10倍，则该抗体被定义为是能特异结合的。本领域普通技术人员可以容易地测定单克隆抗体的亲和力(参见如，Scatchard，Ann.NYAcad.Sci.51：660-672，1949)。
制备多克隆和单克隆抗体的方法是本领域熟知的(见例如Hurrell，J.G.R.编，Monoclonal Hybridoma Antibodies：Techniques and Applications，CRCPress，Inc.，Boca Raton，FL，1982，纳入本文作为参考)。多肽免疫原可以是全长分子或其部分。如果多肽部分是“半抗原样的”，则该部分可以有利地与大分子载体(如匙孔_血蓝蛋白(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)或破伤风类毒素)结合或连接而用于免疫。
本领域技术人员已知的多种试验均可以用于检测特异性结合半胱氨酸突变体IL-28或IL-29多肽的抗体。示例性的试验详述于以下文献中：UsingAntibodies：A Laboratory Manual，Harlow和Lane(编)，Cold Spring HarborLaboratory Press，1999。此类试验的代表性例子包括：并行免疫电泳(concurrent immunoelectrophoresis)、放射免疫分析、放射免疫沉淀、酶联免疫吸附试验(ELISA)、点印迹分析、Western印迹分析、抑制或竞争试验和三明治试验。
对于某些应用，包括体外和体内诊断应用，使用标记的抗体是有利的。适宜的直接标签或标记包括放射性核素、酶、底物、辅因子、抑制剂、荧光标记、化学发光标记、磁性颗粒等；间接标签或标记可以类似使用生物素-亲和素或其它互补物/反互补物对作为中间体。本发明的抗体还可以直接或间接地缀合药物、毒素、放射性核素等，而且这些缀合物可以用于体内诊断或治疗应用(如，抑制细胞增殖)。一般可参见Ramakrishnan等，Cancer Res.56：1324-1330，1996。
本发明进一步通过以下非限制性的实施例来说明。
                         实施例
                         实施例1
                    哺乳动物表达质粒
含zcyto20和zcyto21的表达质粒通过同源重组来构建。利用PCR扩增生成zcyto20和zcyto21 cDNA片段。PCR引物如下：
zcyto20/pZMP21：zc40923和zc43152，分别为SEQ ID NO：42和43；zcyto21/pZMP21：zc40922和zc43153，分别为SEQ ID NO：2和73。
将PCR反应混合物在1％琼脂糖凝胶上分离，用QIAquickTM凝胶提取试剂盒(Qiagen，Valencia，CA)从凝胶中提取相当于插入物大小的条带。
利用经Bg1II切割的质粒pZMP21进行与PCR插入片段的重组。质粒pZMP21为哺乳动物表达载体，其中包含表达盒，该表达盒具有MPSV启动子和用于插入编码序列的多个限制性位点；E.coli复制起始点；哺乳动物选择标记表达单元，其含SV40启动子、增强子和复制起始点、DHFR基因和SV40终止子；和在S.cerevisiae中选择和复制所需的URA3和CEN-ARS序列。该质粒是利用来自pRS316(保藏于美国典型培养物保藏中心，10801 University Boulevard，Manassas，VA 20110-2209，登录号77145)的酵母遗传元件、来自脊髓灰质炎病毒的内部核糖体进入位点(IRES)元件和在跨膜结构域C-末端截短的CD8细胞外结构域，由pZP9(保藏于美国典型培养物保藏中心，10801 UniversityBoulevard，Manassas，VA 20110-2209，登录号98668)构建而得。
将100微升感受态酿酒酵母(S.cerevisiae)细胞独立地与以上10μl插入片段DNA和100μl切过的pZMP21载体混合，将混合物移入0.2cm电穿孔杯。利用设置为0.75kV(5kV/cm)、∞Ω和25μF的电源(BioRad Laboratories，Hercules，CA)，电脉冲处理酵母/DNA混合物。向杯中加入600μl 1.2M山梨醇，将酵母以100μl和300μl等分铺板到两个URA-D平皿上，于30℃孵育。约72小时后，将单个平皿上的Ura+酵母转化子重悬于1ml H2O中，轻轻旋转以沉积酵母细胞。将细胞沉淀重悬于0.5ml裂解缓冲液(2％ Triton X-100，1％SDS，100mM NaCl，10mM Tris，pH 8.0，1mM EDTA)中。将500微升裂解混合物加入含250μl经酸洗过的玻璃珠和300μl苯酚-氯仿的Eppendorf管中，剧烈震荡3分钟，在Eppendorf离心机中以最高速离心5分钟。将300μl水相层移入新试管中，用600μl乙醇(EtOH)和30μl 3M乙酸钠沉淀DNA，然后以最高速离心30分钟。将DNA沉淀重悬于30μl TE中。
用5μl酵母DNA制品和50μl细胞进行电感受态E.coli宿主细胞(MC1061)的转化。以2.0kV、400Ω和25μF电击细胞。电穿孔后，加入1ml SOC(2％ BactoTM胰蛋白胨(Difco，Detroit，MI)、0.5％酵母提取物(Difco)、10mM NaCl、2.5mM KCl、10mM MgCl2，10mM MgSO4、20mM葡萄糖)，然后将细胞以50μl和200μl等分铺板到两个LB AMP平皿(LB肉汤(Lennox)、1.8％ BactoTM琼脂(Difco)、100mg/L氨苄青霉素)上。
对每个构建体取3个克隆的插入片段进行序列分析，针对每个构建体选出含正确序列的一个克隆。根据厂商说明书，利用商品化的试剂盒(QIAGEN质粒大量试剂盒，Qiagen，Valencia，CA)大规模分离质粒DNA。正确的构建体被命名为zcyto20/pZMP21和zcyto21/pZMP21。
                            实施例2
                 在CHO细胞中表达哺乳动物构建体
用200单位Pvu I于37℃消化200μg zcyto20/pZMP21和zcyto21/pZMP21构建体3个小时，然后用IPA沉淀，并沉淀于1.5mL微离心管中。从沉淀上倒出上清液，用1mL 70％乙醇洗沉淀，于室温孵育5分钟。以14,000RPM在微型离心机中将试管离心10分钟，从沉淀上吸掉上清液。然后在无菌环境中将沉淀重悬于750μl PF-CHO培养基中，于60℃孵育30分钟。离心CHO细胞并用DNA-介质溶液重悬。将DNA/细胞混合物置于0.4cm开口的杯中，用以下参数电穿孔：950μF、高电容和300V。然后取杯中的内容物并用PF-CHO稀释至25mL，置于125mL摇瓶中。将瓶置于37℃6％CO2并以120RPM摇动的摇动培养箱中。
                       实施例3
              zcyto20-CHO蛋白质的纯化和分析
A.zcyto20-CHO蛋白质的纯化
从DXB11-CHO细胞系库中生产重组zcyto20(IL-28A)蛋白。收获培养物并用0.2μm滤器无菌过滤培养基。
依次使用Poros HS 50柱(Applied Biosystems，Framingham，MA)、Monolithic WCX柱(Isco，Inc.，Lincoln，NE)、ToyoPearl Butyl 650S柱(TosoH，Montgomeryville，PA)和Superdex 75柱(Amersham Biosciences，Piscataway，NJ)来完成zcyto20-CHO蛋白质的纯化。将DXB111-CHO的培养基调到pH 6.0，然后加入到Poros HS 50柱上。用50mM MES(2-吗啉代乙烷磺酸)、100mM NaCl、pH 6洗柱，将结合的蛋白质以10倍柱体积(CV)线性梯度洗脱至60％的50mM MES、2M NaCl、pH 6。收集洗脱级分，经SDS-PAGE和考马斯亮蓝染色来确认zcyto20蛋白的存在。合并该含zcyto20蛋白的级分，用双蒸水稀群至导电率为约20mS，将其上样到Monolithic WCX柱上。用93％的50mM MES、100mM NaCl、pH 6和7％ 50mM MES，2M NaCl，pH6洗柱，将结合的蛋白质用7％至50％的50mM MES、2M NaCl、pH 6以25CV线性梯度洗脱。收集洗脱级分，经SDS-PAGE和考马斯亮蓝染色来确认zcyto20蛋白的存在。合并该含zcyto20蛋白的级分，调节至1M硫酸铵，并将其加样到ToyoPearl丁基650S柱上。用递减的硫酸铵梯度洗脱Zcyto20，合并含纯zcyto20蛋白的级分并浓缩，用以注射进Superdex 75柱。将来自凝胶过滤柱的含zcyto20蛋白的级分合并，浓缩，通过0.2μm滤器过滤，冷冻于-80℃。最终纯化的蛋白质的浓度用BCA测试(Pierce Chemical Co.，Rockford，IL)和HPLC-氨基酸分析来确定。
B.zcyto20-CHO蛋白质的SDS-PAGE和Western印迹分析
通过SDS-PAGE(Nupage 4-12％ Bis-Tris，Invitrogen，Carlsbad，CA)和Western印迹，利用兔抗zcyto21-CEE-BV IgG作为与zcyto20-CHO蛋白质交叉反应的初级抗体，由此来分析重组的zcyto20蛋白。凝胶用Invitrogen的XcellII小槽(Carlsbad，CA)来电泳，并根据说明书提供的指导，用Invitrogen的Xcell II印迹模块将其转移至0.2μm硝酸纤维素膜膜(Bio-Rad Laboratories，Hercules，CA)上。在含25mM Tris碱、200mM甘氨酸20％甲醇的缓冲液中，以500mA进行转移50分钟。用含10％脱脂奶粉的1×PBS封闭膜10分钟，然后用在含2.5％脱脂奶粉的1×PBS中的初级抗体探测。室温下标记印迹1小时，同时振荡。为了标记第二抗体，用PBS洗印迹3次，每次10分钟，然后用山羊抗兔IgG-HRP(Pierce Chemical Co.，Rockford，IL)探测1小时。用1×PBS洗印迹3次，每次10分钟，用SuperSignal_ULTRA试剂(Pierce Chemical Co.，Rockford，IL)的1∶1混合物显色，用Lumi成像仪捕获信号(EoehringerMannheim GmbH，德国)。
C.蛋白质纯化和分析概要
来自CHO培养基的纯化zcyto20蛋白在非还原条件下的4-12％ Bis-Tris凝胶上主要以约20kDa的二联体和少量约38kDa的三联二聚体形式迁移。它们在还原条件下都缩成20kDa的单条带。MS肽作图显示为2种在二硫键连接和O连接的糖基化位点方面的异构体的混合物。
                          实施例4
               zcyto21-CHO蛋白质的纯化和分析
A zcyto21-CHO蛋白质的纯化
从稳定的DXB11-CHO细胞系生产重组zcyto21蛋白。收获培养物，并用0.2μm滤器无菌过滤培养基。开始用阳离子和阴离子交换色谱，然后用疏水相互作用色谱和大小排阻色谱，从条件培养基中纯化蛋白质。将DXB111-CHO培养基调到pH 6.0，然后加入到Poros 50HS柱(Applied Biosystems，Framingham，MA)上。用1×PBS、pH 6洗柱，将结合的蛋白质用5×PBS、pH8.4洗脱。收集洗脱级分，经SDS-PAGE和考马斯亮蓝染色来确认zcyto21蛋白的存在。然后将该级分稀释至导电率为13mS，并将pH调到8.4，使其流过Poros 50HQ柱(AppliedBiosystems，Framingham，MA)。然后含zcyto21蛋白的流过液用硫酸铵调节为约127mS，并将其加样到ToyoPearl Phenyl 650S柱(TosoH，Montgomeryville，PA)上。用递减的硫酸铵梯度洗脱Zcyto21蛋白，合并该含纯zcyto21蛋白的级分并浓缩，用以注射进Superdex 75柱(Amersham Biosciences，Piscataway，NJ)。最终纯化的蛋白质的浓度用BCA测试(Pierce Chemical Co.，Rockford，IL)和HPLC-氨基酸分析来确定。
B.zcyto21-CHO蛋白质的SDS-PAGE和Western印迹分析
通过SDS-PAGE(Nupage 4-12％ Bis-Tris，Invitrogen，Carlsbad，CA)和Western印迹，利用兔抗zcyto21-CEE-BV IgG作为初级抗体，由此来分析重组的zcyto21蛋白。凝胶用Invitrogen的Xcell II小槽(Carlsbad，CA)来电泳，并根据说明书提供的指导，用Invitrogen的Xcell II印迹模块将其转移至0.2μm硝酸纤维素膜(Bio-Rad Laboratories，Hercules，CA)上。在含25mM Tris碱、200mM甘氨酸和20％甲醇的缓冲液中，以500mA进行转移50分钟。用含10％脱脂奶粉的1×PBS封闭所转移的印迹10分钟，然后用在含2.5％脱脂奶粉的1×PBS中的初级抗体探测。室温下标记印迹1小时，同进振摇。为了标记第二抗体，用PBS洗印迹3次，每次10分钟，然后用山羊抗兔IgG-HRP(Pierce Chemical Co.，Rockford，IL)探测1小时。用1×PBS洗印迹3次，每次10分钟，用SuperSignal_ULTRA试剂(Pierce Chemical Co.，Rockford，IL)的1∶1混合物显色，用Lumi成像仪(Boehringer Mannheim GmbH，德国)捕获信号。
C.蛋白质纯化和分析概要
来自CHO培养基的纯化zcyto21蛋白在还原和非还原条件下在4-12％Bis-Tris凝胶上都以2个或多个约28kDa的条带形式迁移。MS肽作图显示为2种在二硫键连接和一个N-连接的糖基化和几个O-连接的糖基化位点方面的异构体的混合物。
                         实施例5
                     鉴定IL-29的形式
使用在约pH 6.3的磷酸缓冲液中的测序级胰蛋白酶(Roche Applied Science，Indianapolis，IN)将来自纯化IL-29合并物的峰级分于37℃消化过夜，以限制二硫键重排。通过与四极飞行时间混合质谱仪(Micromass，Milford MA)联用的反相HPLC(Agilent，Palo Alto，CA)，来分析每个消化产物。收集图谱，将质量与电荷比转化为质量，并与由胰蛋白酶消化IL29所得的所有理论上的肽与二硫键连接的肽组合相比较。对还原之前和之后的图谱进行了比较，并且对IL-29中二硫键连接的肽分配合适质量，由此确定二硫键。来自#20级分的材料显示二硫键模式为C15-C112和C49-C145，而观察到C171为S-谷胱甘肽半胱氨酸(都称为SEQ ID NO：4)。来自#51级分的材料显示二硫键模式为C49-C145和C112-C171，而观察到C15为S-谷胱甘肽半胱氨酸(称为SEQ ID NO：4)。
                        实施例6
                    E.coli表达质粒
构建表达载体，pTAP237
通过同源重组将PCR产生的接头插入到pTAP186的Sma1位点中而产生质粒pTAP237。质粒pTAP186源于质粒pRS316(酿酒酵母穿梭载体)和pMAL-c2(来源于pKK223-3的E.coli表达质粒，其含有启动子和rrnB终止子)。质粒pTAP186含卡那霉素抗性基因，其中SmaI位点已被破坏，而且在酵母ARS-CEN6和URA3序列侧翼有NotI和SfiI位点，有助于通过NotI消化将它们从质粒上去除。PCR产生的接头将pTAP186中的表达偶联序列替换成合成RBS II序列。其由各100pmol的寡核苷酸zc29，740和zc29，741(各如SEQ ID NO：44和45所示)和各约5pmol的寡核苷酸zc29，736和zc29，738(各如SEQ ID NOs：46和47所示)制备出来。这些寡核苷酸通过PCR组合起来，所述PCR为在94℃ 30秒，50℃ 30秒和72℃ 30秒进行10个循环，接着4℃浸泡。产生的PCR产物通过加入两倍体积的100％乙醇沉淀而浓缩。将沉淀重悬于10μl水中，用于重组进用SmaI消化的接受载体pTAP186中，以产生含合成RBS II序列的构建体。将约1μg PCR产生的接头和100ng用SmaI消化的pTAP186混合在一起，转化进感受态酵母细胞(S.cerevisiae)中。然后将酵母铺在URA+平板上，置于室温约72小时。然后，将单个平板上的Ura+转化子重悬于1ml H2O中，轻轻离心以沉淀酵母细胞。将细胞沉淀重悬于0.5mL裂解缓冲液中。回收DNA并转化进E.coli MC1061中。通过如上所述的菌落PCR，利用各约20pmol的寡核苷酸zc29，740和zc29，741(如SEQ ID NO：44和45所示)筛选克隆。对在琼脂糖凝胶上显示正确大小条带的克隆进行序列分析。正确的质粒被命名为pTAP237。
                         实施例7
              IL-29半胱氨酸突变体的密码子优化
A.密码子优化生成IL-29野生型表达构建体
天然人IL-29基因序列并不在E.coli株W3110中很好表达。检查IL-29编码序列中所用的密码子后发现，其包含过多在E.coli中最不常用的密码子，其CAI值等于0.206。CAI为同义密码子偏好的统计学计量标准，可用于预测蛋白质产生的水平(Sharp等，Nucleic Acids Res.15(3)：1281-95，1987)。编码高表达蛋白质的基因倾向于具有高CAI值(＞0.6)，而由低CAI值(≤0.2)的基因编码的蛋白质一般表达效率低。这提示了IL-29在E.coli中低产的原因。另外，在信使后半段堆积有罕见的密码子，会较大可能性地导致翻译中断、翻译过早终止和氨基酸错误掺入(Kane JF.Curr.Opin.Biotechnol.6(5)：494-500，1995)。
已经显示，当提高宿主中某些罕见tRNA的水平时，可急剧提高含罕见密码子的基因的蛋白质表达水平(Zdanovsky等，Applied EnviromentalMicrob.66：3166-3173，2000；You等，.Biotechniques 27：950-954，1999)。pRARE质粒带有编码针对在大肠杆菌中很少使用的几个密码子的tRNA的基因(argU、argW、leuW、proL、ileX和glyT)。这些基因由它们天然的启动子控制(Novy，同上)。在E.coli中与pRARE共表达能增强IL-29的产量，产量约为200mg/L。这些数据提示，使用更合适的密码子来重新再合成编码IL-29的基因能提供表达大量IL-29的改良的载体。
从16个重叠的寡核苷酸构建密码子优化的IL-29编码序列：zc44，566(SEQID NO：48)、zc44，565(SEQ ID NO：49)、zc44，564(SEQ ID NO：50)，、c44，563(SEQ ID NO：51)、zc44，562(SEQ ID NO：52)、zc44，561(SEQ IDNO：53)、zc44，560(SEQ ID NO：54)、zc244，559(SEQ ID NO：55)、zc44，558(SEQ ID NO：56)、zc44，557(SEQ ID NO：57)。PCR扩增后，这些重叠的寡核苷酸的引物延伸产生了具有优化成在E.coli中表达的密码子的全长IL-29基因。通过酵母同源重组，将PCR最终产物插入表达载体pTAP237中。从酵母中提取表达建体并转化入感受态E.coli MC1061中。通过菌落PCR来鉴定抗卡那霉素的克隆。通过测序鉴定阳性克隆，并随后转化入生产宿主株W3110。带有优化的IL-29序列的表达载体被命名为pSDH184。所得的基因在E.coli很好地表达。新构建体的表达水平提高至约250mg/L。
B.密码子优化的zcyto21 C172S半胱氨酸突变体表达构建体的产生
用于生成zcyto21 C172S半胱氨酸体变体的策略基于的是QuikChangeSite-Directed Mutagenesis试剂盒(Stratagene)。根据厂商建议，设计引物来导入C172S突变。引物被命名为ZG44，340(SEQ ID NO：58)和ZG44，341(SEQID NO：59)。按照Quik Change Mutagenesis说明书，进行PCR以产生zcyto21C172S半胱氨酸突变体。设立5个相同的50μl反应。将2.5μl pSDH175(缺少酵母载体主链序列)DNA用作每个反应的模板。利用以下量的试剂配置PCR混合物：30μl 10×PCR缓冲液、125ng(27.42μl)ZG44，340、125ng(9.18μl)ZG44，341、6μl dNTP、6μl Pfu Turbo聚合酶(Stratagene，La Jolla，CA)和206.4μl水。每个反应中加入47.5μl混合物等分试样。PCR条件如下：以95℃ 30秒进行1个循环，然后以95℃ 30秒、55℃ 1分钟和68℃ 7分钟进行16个循环，然后以68℃ 7分钟进行1个循环，最后保存于4℃。所有5个PCR反应都合并入一个试管。如每个厂商说明书所述，将5μl DpnI限制性酶加入到PCR反应中，在37℃孵育2小时。加入10％ 3M乙酸钠和2体积100％乙醇来沉淀DNA。在-20℃进行沉淀20分钟。以14,000rpm离心DNA 5分钟，并真空离心蒸发浓缩干燥沉淀。将DNA沉淀重悬于20μl水中。将PCR产生的DNA转化入E.coli株DH10B中。混合5μl DNA和40μl ElectroMAX DH10B细胞(Invitrogen)。然后在0.1cm杯(Bio-Rad)中利用Bio-Rad Gene Pulser IITM(其参数为1.75kV、100Ω和25μF)，对细胞和DNA混合物进行电穿孔。然后，使电穿孔的细胞于37℃培养1小时。将混合物铺于LB+25μg/ml卡那霉素平板上于37℃孵育过夜。对10个克隆筛选zcyto21 C172S插入片段的存在情况。利用QIAprepTM旋转小量试剂盒(Qiagen，Valencia，CA)从所有10个克隆中分离DNA，并用XbaI和PstI限制性酶进行切割来分析插入片段的存在情况。9个克隆中含有插入片段，对其测序以确保导入了zcyto21 C172S突变。经测序验证克隆，随后将其标记为pSDH188。
                          实施例8
                    E.coli IL-29表达构建体
用PCR分离含野生型序列的IL-29 DNA片段。引物zc41，212(SEQ ID NO：60)含有41个碱基对(bp)的载体侧翼序列和对应于IL-29氨基末端的24bp，引物zc41，041(SEQ ID NO：61)含有相应于含zcyto21插入片段的载体3’末端的38bp，在反应中使用这两个引物。PCR条件如下：以94℃ 30秒、50℃ 30秒和72℃ 1分钟进行25个循环，然后于4℃浸泡。在含1×TBE缓冲液的1％琼脂糖凝胶上电泳少量(2-4μL)PCR样品，用以分析，观察到所预计的约500bp片段的条带。余下的100μL体积反应物用200μl无水乙醇沉淀。将沉淀重悬于10μL水中，用于将其重组进经Sma1切割的受体载体pTAP238中，以产生如上所述的编码zcyto21的构建体。带有正确序列的克隆被命名为pTAP377。用Notl/Ncol(10μL DNA，5μL缓冲液3 New England BioLabs、2μL Notl、2μLNcol、31μL水，于37℃进行1小时)消化克隆pTAP377，并用T4 DNA连接酶缓冲液(7μL前述消化物、2μL 5×缓冲液、1μL T4 DNA连接酶)重新连接。该步骤去除了酵母序列、CEN-ARS，从而精简了载体。用Pvu2和Pst1按诊断性地消化pTAP337 DNA，以确认不存在酵母序列。将pTAP377 DNA转化入E.coli株W3110/pRARE，该宿主菌株带有额外的罕见E.coli tRNA基因拷贝。
                         实施例9
                 E.coli IL-28A表达构建体
用PCR分离含zcyto20野生型序列(如SEQ ID NO：1所示)的DNA片段。引物zc43，431(SEQ ID NO：62)含有41个碱基对(bp)的载体侧翼序列和对应于zcyto20氨基末端的24bp，引物zc43，437(SEQ ID NO：63)含有相应于含zcyto20插入片段的载体3’末端的38bp，在反应中使用这两个引物。PCR条件如下：以94℃ 30秒、50℃ 30秒和72℃ 1分钟进行25个循环，然后保存于4℃。在含1×TBE缓冲液的1％琼脂糖凝胶上电泳少量(2-4μL)PCR样品，用以分析，观察到所预计的约500bp片段的条带。余下的100μL体积反应物用200μl无水乙醇沉淀。将沉淀重悬于10μL水中，用于将其重组进经Sma1切割的受体载体pTAP238中，以产生如上所述的编码zcyto20的构建体。带有正确序列的克隆被命名为pYEL7。用Notl/Ncol(10μL DNA，5μL缓冲液3 NewEngland BioLabs、2μL Notl、2μL Ncol、31μL水，于37℃进行1小时)消化它，并用T4 DNA连接酶缓冲液(7μL前述消化物、2μL 5×缓冲液、1μLT4 DNA连接酶)重新连接。该步骤去除了酵母序列、CEN-ARS，从而精简了载体。用Pvu2和Pst1诊断性地消化该重新连接的pYEL7 DNA，以确认不存在酵母序列。将pYEL7 DNA转化入E.coli株W3110/pRARE。
                            实施例10
            zcyto21 C172S半胱氨酸突变体表达构建体
用于产生zcyto21 C172S半胱氨酸突变体(SEQ ID NO：28)的策略基于的是QuikChange_定点诱变试剂盒(Stratagene La Jolla，CA)。根据厂商建议，设计引物来导入C172S突变。这些引物被命名为ZG44，327和ZG44，328(分别是SEQ ID NO：64和65)。按照QuikChange诱变说明书进行PCR，以产生zcyto21C172S半胱氨酸突变体。设立5个完全相同的50μl反应。将2.5μl pTAR377(缺少酵母载体主链序列)DNA用作每个反应的模板。利用以下量的试剂配置PCR混合物：30μl 10×PCR缓冲液、125ng(27.42μl)ZG44，327(SEQ ID NO：64)、125ng(9.18μl)ZG44，328(SEQ ID NO：65)、6μl dNTP、6μl PfuTurbo聚合酶(Stratagene)和206.4μl水。向每个反应中加入47.5μl混合物。PCR条件如下：以95℃ 30秒进行1个循环，然后以95℃ 30秒、55℃ 1分钟和68℃ 7分钟进行16个循环，然后以68℃ 7分钟进行1个循环，最后保存于4℃。所有5个PCR反应都合并入一个试管。如厂商说明书所述，将5μl Dpnl限制性酶加入到PCR反应中，在37℃孵育2小时。加入10％ 3M乙酸钠和2体积100％乙醇(Aaper Alcohol，Shelbyville，KY)来沉淀DNA。在-20℃进行沉淀20分钟。以14,000rpm离心DNA 5分钟，并对沉淀进行真空离心蒸发干燥。将DNA沉淀重悬于20μl水中。将PCR产生的DNA转化入E.coli株DH10B中。混合5μl DNA和40μl ElectroMAX DH10B细胞(Invitrogen，Caslsbad，CA)。然后在0.1cm杯(Bio-Rad，Hercules，CA)中利用Bio-Rad Gene Pulser IITM，参数设置为1.75kV、100Ω和25μF，对细胞和DNA混合物进行电穿孔。然后，将电穿孔的细胞于37℃培养1小时。将混合物置于LB+25μg/ml卡那霉素平皿上于37℃孵育过夜。对10个克隆筛选IL-29插入片段的存在情况。利用QIApreTM旋转小量试剂盒(Qiagen)从所有10个克隆中分离DNA，并用XbaI(Roche)和PstI(New England Biolabs)限制性酶切来分析插入片段的存在。9个克隆含有插入片段，对其测序以确保导入了zcyto21 C172S突变。测序验证克隆(分离物#6)，随后将其标记为pSDH171。可将相似的策略用于产生zcyto21 C15S突变体。
                            实施例11
              zcyto20 C49S半胱氨酸突变体表达构建体
用重叠PCR来生成zcyto20 C49S半胱氨酸突变体编码序列(SEQ ID NO：20)。将pYEL7(SEQ ID NO：67)用作模板，并利用寡核苷酸引物zc43，431(SEQID NO：62)和zc45，399(SEQ ID NO：66)，通过PCR扩增来产生野生型IL-28A序列(SEQ ID NO：1)的前面187个碱基。将pYEL7(SEQ ID NO：67)用作模板，并利用寡核苷酸引物zc45，398(SEQ ID NO：68)和zc43，437(SEQ ID NO：63)，通过PCR扩增来产生105至531位碱基的第二个DNA片段。引物zc45，399(SEQID NO：66)和zc45，398(SEQ ID NO：68)含有特异修饰序列，其将半胱氨酸49改变成丝氨酸。合并这两个PCR产物，并用寡核苷酸引物zc43，431(SEQID NO：62)和zc43，437(SEQ ID NO：63)来进行PCR重叠扩增。通过酵母同源重组(Raymond等Biotechniques.Jan.26(1)：134-8，140-1，1999)，将最终的PCR产物插入表达载体pTAP238中。从酵母中提取表达构建体并转化入感受态E.coli DH10B中。通过菌落PCR来筛选抗卡那霉素的克隆。通过测序确证阳性克隆，随后将其转化入生产宿主株W3110/pRARE。带有zcyto20 C49S半胱氨酸突变体编码序列的表达载体被命名为pCHAN9。
                       实施例12
           zcyto20 C51S半胱氨酸突变体表达构建体
用重叠PCR来生成zcyto20 C51S半胱氨酸突变体编码序列(SEQ ID NO：24)。将pYEL7(SEQ ID NO：67)用作模板，并利用寡核苷酸引物zc43，431(SEQID NO：62)和zc45，397(SEQ ID NO：63)，通过PCR扩增来产生野生型IL-28A序列的前面193个碱基。将pYEL7(SEQ ID NO：67)用作模板，并利用寡核苷酸引物zc45，396(SEQ ID NO：70)和zc43，437(SEQ ID NO：63)，通过PCR扩增来产生111至531位碱基的第二个DNA片段。引物zc45，397(SEQ ID NO：69)和zc45，396(SEQ ID NO：70)含有特异修饰序列，其将半胱氨酸51改变成丝氨酸。合并这两个PCR产物，并用寡核苷酸引物zc43，431(SEQ ID NO：62)和zc43，437(SEQ ID NO：63)来进行PCR重叠扩增。通过酵母同源重组(Raymond等，同上)，将最终的PCR产物插入我们的内部表达载体pTAP238中。从酵母中提取表达构建体，并转化入感受态E.coli DH10B中。通过菌落PCR来筛选抗卡那霉素的克隆。通过测序确证阳性克隆，随后转化入生产宿主株W3110/pRARE。带有zcyto20 C50S半胱氨酸突变体编码序列的表达载体被命名为pCHAN10。
                          实施例13
    在E.coli中表达IL-28A、IL-29和Cys至Ser的半胱氨酸突变体
在分开的实验中，将转化有如实施例6-9所述的表达载体之一的E.coli接种于100mL Superbroth II培养基(Becton Dickinson，San Diego，CA)中，于37℃培养过夜，所述培养基含有0.01％防沫剂289(Sigma Aldrich，St.Louis，MO)、30μg/ml卡那霉素，35μg/ml氯霉素。将5mL接种物加入到装有500mL相同培养基的2L培养瓶中，于37℃以250rpm振摇，直到培养物的OD600达到4。然后加入IPTG，使终浓度为1mM，再继续振摇2.5小时。于4℃以4,000xg离心细胞10分钟。将细胞沉淀冻存于-80℃，直到下次使用。
                      实施例14
                IL-28的重折叠和纯化
A.包涵体的制备
如上所述，人野生型IL-29在E.coli株W3110中以包涵体形式表达。将分批补料发酵获得的细胞沉淀重悬于50mM Tris、pH 7.3中。使悬浮液以8000psi通过APV-Gaulin匀浆仪(Invensys APV，Tonawanda，纽约)3次。以15,000g离心30分钟回收不溶材料。用50mM Tris、1％(v/v)Triton X100(pH 7.3)和4M尿素持续洗涤沉淀。然后将包涵体在室温分散在50mM Tris、6M盐酸胍、5mM DTT中1小时然后以15,000g将材料离心1小时。由该步骤获得的上清液包含还原型可溶性IL-29。
B.重折叠
在室温，同时搅拌下，将溶解的IL-29缓慢稀释于50mM Tris(pH 8)、0.75M精氨酸、0.05％ PEG3350、2mM MgCl2、2mM CaCl2、0.4mM KCl、10mM NaCl、4mM还原型谷胱甘肽、0.8mM氧化型谷胱甘肽中。重折叠缓冲液中的IL-29终浓度为0.1mg/ml。使重折叠混合物置于室温过夜。然后用浓缩的乙酸将悬浮液的pH调节为5。然后通过0.2μm滤器来过滤悬浮液。对重折叠混合物的RP-HPLC分析显示有2个突出峰。
C.纯化
将重折叠混合物用pH 5的50mM NaOAc在线稀释(1∶2)，并将其加样到Pharmacia SP Sepharose Fast Flow阳离子交换柱(North Peapack，NJ)上。用3倍体积50mM NaOAc、400mM NaCl(pH 5)洗柱。用50mM NaOAc、1.4M NaCl(pH 5)洗脱结合的IL-29。将固体(NH4)2SO4加到阳离子交换步骤的洗脱物合并液中，使(NH4)2SO4的终浓度为0.5M。然后将材料上样到ToyoPearl苯基650SHIC柱(Tosoh Biosep，Montgomery，PA)上。用3倍体积50mM NaOAc、1M(NH4)2SO4(pH 5)洗柱。用10体积的从50mM NaOAc、1M(NH4)2SO4(pH 5)至50mM NaOAc(pH 5)的线性梯度来洗脱结合的zcyto21。收集洗脱物的级分。在该步骤中观察到2个突出峰。对洗脱物级分进行RP-HPLC分析。最终将缓冲液交换成PBS(pH 7.3)之后，得到了对应于2种二硫键异构体的2种产物。
                     实施例15
           IL-29半胱氨酸突变体的重折叠和纯化
如实施例3所述，纯化IL-29产生了2种二硫键异构体。用HIC FPLC步骤分离这2种形式。这一分离没有在基线拆分开。不得不使用严格的“峰修剪(PeakShaving)”来获得实质纯的异构体(＞95％)。使该步骤的产量和整个过程的适用范围受到损害。对于C15-C112形式和C112-C171形式，最终产量分别为8％和9％。在CHO和杆状病毒(BV)系统中产生的野生型IL-29也显示出相似的现象。已经确定，C15-C112形式的异构体在二硫键模式方面与I型INF的同源。也证实了，在ISRE测试中，C15-C112形式的生物活性比C112-C171形式的高30倍(参见下文)。
zcyto21 Cys172Ser突变蛋白的重折叠和纯化
zcyto21 C172S多肽(SEQ ID NO：29)的包涵体制备、重折叠和纯化基本与IL-29野生型(SEQ ID NO：4)的相同。对突变蛋白的重折叠混合物的RP-HPLC分析显示仅仅有1个突出峰，该峰对应于野生型IL-29的C15-C112形式。随后的HIC色谱显示仅仅有1个峰。所以无需使用严格的“峰修剪”了。整个过程的最终产量接近50％。在实施例16所示的ISRE测试中，zcyto21 Cys172Ser多肽(SEQ ID NO：29)显示与野生型IL-29的C15-C112形式有等同的生物活性。
                       实施例16
    抗病毒活性：在Hela和L929细胞中的致细胞病变效应
利用瞬时转染的人胚肾(HEK)细胞的条件培养基来进行抗病毒活性的初始功能测试。该条件培养基的制备如下所述。利用标准操作，将人或鼠IL-28A、IL-28B或IL-29的全长cDNA克隆进pzp7Z载体中。将人或鼠IL-28A、IL-28B或IL-29构建体转染进293HEK细胞。简而言之，对每个构建体，在转染前约18h，将700,000个细胞/孔(6孔板)置于2毫升DMEM+10％胎牛血清中。针对每个孔，将1.5微克人或鼠IL-28A、IL-28B或IL-29DNA和0.5微克pIRES2-EGFP DNA(Clontech)加入到总量为100微升的含6微升Fugene 6试剂(RocheBiochemicals)的DMEM中。2微克pIRES2-EGFP DNA本身用作阴性对照。30分钟后，将这些转染混合物加入到预先铺板的293细胞中。24小时后去除细胞培养基，并加入DMEM+0.1％牛血清白蛋白。48小时后收集条件培养基，通过0.45微米滤器过滤，将其用于抗病毒和报道测试。
利用人子宫颈癌细胞(HeLa)和鼠成纤维细胞(L929)来进行抗病毒测试。在第一天，稀释含人或鼠IL-28A、IL-28B或IL-29的条件培养基并置于96孔平底微量滴定板中的50,000个细胞中。于37℃孵育24小时后，去除培养基并换入含感染复数为0.1的脑心肌炎病毒的培养基。再在37℃孵育细胞24小时。然后采用4-分数量表对培养孔中致细胞病变效应的存在情况进行视觉评分，然后将其转化为如表7所示的％CPE。将包括仅GFP以及纯化的人干扰素-a-2a或鼠干扰素-α转染的细胞的条件培养基作为对照。
        表7：致细胞病变效应的确定
  名称   观察致细胞病变效应(CPE)
  -   无CPE
  +/-   可能有CPE(约1％的单层表面)
  +   限于一个斑的CPE(约5％的表面)
  +1   CPE限于三个斑，影响不超过25％的单层
  1   25％CPE
  1-2   37％CPE
  2   50％CPE
  2-3   62％CPE
  3   75％CPE
  3-4   87％CPE
  4   100％CPE
表8显示含人或鼠IL-28A、IL-28B或IL-29的条件培养基能在HeLa细胞中以依赖剂量的方式抑制病毒感染(％CPE)，而对照GFP条件培养基不能显著阻止致细胞病变效应的出现。如表9所示，含人或鼠IL-28A、IL-28B或IL-29的条件培养基不能在L929细胞中抑制病毒感染。在两个实验中，纯化的干扰素都显示出了阳性的抗病毒活性。
表8：利用条件培养基(CM)测得的人或鼠IL-28A、IL-28B或IL-29在HeLa细胞中的致细胞病变效应百分数
  相对CM浓度  GFP对照   zcyto20IL-28A(CM)   zcyto21IL-29(CM)  zcyto22IL-28B(CM)  zcyto24鼠IL-28(CM)  zcyto25鼠IL-28(CM)   hIFN-α-2a   hIFN-α-2a浓度
  未加  87   87   87  87  87  87   87   0ng/ml
  .008X  87   10   56  0  0  10   15   .0001ng/ml
  .0156X  87   2.5   31  0  0  5   8.3   .001ng/ml
  .0325X  87   5   10  0  0  5   1.7   .01ng/ml
  .0625X  87   2.5   10  0  0  0   0   .1ng/ml
  .125X  87   0   5  0  0  0   0   1ng/ml
  .25X  87   0   0  0  0  0   0   10ng/ml
  .5X  87   0   0  0  0  0   0   100ng/ml
表9：利用条件培养基(CM)测得的人或鼠IL-28A、IL-28B或IL-29在L929细胞中的致细胞病变效应百分数
  相对CM浓度  GFP对照  zcyto20(CM)  zcyto21(CM)  zcyto22(CM)  zcyto24(CM)  zcyto25(CM)  hIFN-α   hIFN-α浓度
  未加  87  87  87  87  87  87  87   0ng/ml
  .008X  87  87  87  87  87  87  87   .0001ng/ml
  .0156X  87  87  87  87  87  87  87   .001ng/ml
  .0325X  87  87  87  87  87  87  87   .01ng/ml
  .0625X  87  87  87  87  87  87  58   .1ng/ml
  .125X  87  87  87  87  87  87  6.7   1ng/ml
  .25X  87  87  87  87  87  87  0   10ng/ml
  .5X  87  87  87  87  87  87  0   100ng/ml
                     实施例17
           通过干扰素-应答途径的信号传导
I型干扰素与它们的特异受体的相互作用能诱导大量与它们的抗病毒/抗增殖活性有关的基因。这些包括2′-5′寡聚腺苷酸合成酶(2-5OAS)、双链RNA依赖性Pkr激酶(Pkr)、磷脂变位酶(scramblase)和细胞内粘附分子-1(ICAM-1)。还能诱导功能未知的基因，如56kDa干扰素刺激基因产物(ISG-56k)。为了确定这些基因中的一些或全部是否在用IL-28A处理细胞时被诱导，将人Daudi B淋巴细胞用Sf9细胞的条件培养基处理72小时，所述Sf9细胞感染了表达IL-28A的杆状病毒。用来自感染了野生型杆状病毒的Sf9细胞的条件培养基作阴性对照。处理后，收集细胞并裂解，以分离总RNA。使用针对如上文所述的人干扰素刺激基因的特异寡核苷酸引物，用逆转录酶将1微克总RNA转化成cDNA，将其用作聚合酶链式反应的模板。针对人甘油-3-磷酸脱氢酶(G3PDH)的寡核苷酸引物用作非干扰素刺激基因对照。结果显示，在用IL-28A处理细胞后，能明显诱导ISG-56k、Pkr、2-5OAS和磷脂变位酶(scramblase)。对于ICAM-1或非干扰素刺激基因对照(G3PDH)，则未见有诱导。
                        实施例18
                   信号转导报告试验
使用信号转导报告试验来确定人和鼠IL-28和IL-29与IL-28受体的功能性相互作用。在存在或缺少含II类细胞因子受体(包括人DIRS1、IFNαR1、IFNαR2和IL-28受体)cDNA的pZP7表达载体的情况下，用含干扰素刺激的应答元件(ISRE)驱动荧光素酶报告基因转录的报告质粒转染人胚肾(HEK)细胞。用II类配体(包括IL-28A(SEQ ID NO：2)、IL-29(SEQ ID NO：4)、IL-28B(SEQID NO：6)、zcyto10、huIL10和huIFNa-2a)刺激转染细胞后的荧光素酶活性反映了配体与细胞表面上的转染和天然的细胞因子受体之间的相互作用。结果和方法如下所述。
细胞转染
如下转染293HEK细胞：转染前约18h将700,000个293细胞/孔(6孔板)置于2毫升DMEM+10％胎牛血清中。以每个孔计，将1微克pISRE-荧光素酶DNA(Stratagene)、1微克细胞因子受体DNA和1微克pIRES2-EGFP DNA(Clontech)加入到含9微升Fugene 6试剂(Roche Biochemicals)的总计100微升DMEM中。在不包括细胞因子报告DNA时，使用2微克pIRES2-EGFP DNA。30分钟后，将此转染混合物加入到预先铺好的293细胞中。24小时后，利用胰蛋白酶-EDTA从平板上去除转染的细胞，并以约25,000个细胞/孔将其重新铺到96孔微量滴定板中。配体刺激前约18h，将培养基换成DMEM+0.5％FBS。
信号转导报告试验
信号转导报告试验如下进行：在DMEM+0.5％ FBS中以37℃孵育18h后，用以下II类配体的稀释液(溶于DMEM+0.5％ FBS)刺激转染的细胞；IL-28A、IL-29、IL-28B、zcyto10、huIL10和huIFNa-2a。37℃孵育4小时后，裂解细胞，加入荧光素酶底物后，在照度计上测定相应光单位(RLU)。所得结果以试验样品的RLU相对于单用培养基的对照的诱导倍数(试验样品的RLU/单用培养基的RLU＝诱导倍数)。表10显示，IL-28A、IL-29和IL-28B在经ISRE荧光素酶转染的293细胞中诱导ISRE信号传递，荧光素酶活性超过单用培养基的15至17倍诱导量。利用内源CRF2-4(SEQ ID NO：71)向转染混合物中添加IL-28受体α亚基DNA(SEQ ID NO：11)，造成由IL-28A、IL-29和IL-28B引起的ISRE信号传递有6至8倍的进一步诱导，达到104至125倍的诱导总量。其他被转染的II类细胞因子受体DNA均没有造成ISRE信号传递增加。这些结果显示IL-28A、IL-29和IL-28B同IL-28细胞因子受体功能性地相互作用。表10显示huIFNa-2a能在被ISRE-荧光素酶转染的293细胞中诱导ISRE信号传递，导致荧光素酶活性相对于单用培养基有205倍诱导量。可是，向转染中添加IL-28受体DNA会导致ISRE信号传递降低11倍(相对于单用ISRE-荧光素酶DNA)，这提示了IL-28受体的过量表达含负面影响干扰素信号传递，与IL-28受体的过量表达对IL-28A、IL-29和IL-28B信号传递的积极影响相反。
                            表10
I1类细胞因子刺激后被转染的293细胞中干扰素激活应答元件(ISRE)的信号传递(诱导倍数)
  配体   ISRE-Luc.   ISRE-Luc./IL-28R
  IL-28A(125ng/ml)   15   125
  IL-29(125ng/ml)   17   108
  IL-28B(125ng/ml)   17   104
  HuIFNa-2a(100ng/ml)   205   18
  Zcyto10(125ng/ml)   1.3   1
  HuIL10(100ng/ml)   1   0.5
                       实施例19
          用IL-29半胱氨酸突变体进行的信号转导试验
细胞转染
为了产生稳定地过量表达人IL-28受体的293HEK细胞，如下转染293细胞：转染前约6h将300,000个293细胞/孔(6孔板)在2毫升DMEM+10％胎牛血清中铺板。以每个孔计，将2微克含人IL-28受体α亚基的cDNA(SEQID NO：11)的pZP7表达载体加入到总量为100微升的含6微升Fugene 6试剂(RocheBiochemicals)的DMEM中。30分钟后，将这转染混合物加入到预先铺好的293细胞中。48小时后，将转染的细胞置于2微克/毫升嘌呤霉素的选择之下。挑出嘌呤霉素抗性细胞作为细胞群。
如下转染过表达人IL-28受体的293HEK细胞：转染前约18h将700,000个293细胞/孔(6孔板)在2毫升DMEM+10％胎牛血清中铺板。以每个孔计，将1微克含有驱动荧光素霉报告基因转录之干扰素-激活应答元件(ISRE)的KZ157加入到总量为100微升的含3微升Fugene 6试剂(Roche Biochemicals)的DMEM中。30分钟后，将这转染混合物加入到预先铺好的293细胞中。48小时后，利用胰蛋白酶-EDTA从平板上取下转染的细胞并将其重新铺于500微克/ml G418(Geneticin，Life Technologies)中。挑出嘌呤霉素和G418抗性细胞作为细胞群。
信号转导报告试验
如下进行信号转导报告试验：用胰蛋白酶-EDTA处理过表达人IL-28受体的含KZ157的293HEK细胞，将其以25,000个细胞/孔重新铺于96孔微量滴定板中。配体刺激前约18h，将培养基换成DMEM+0.5％FBS。
在DMEM+0.5％ FBS中以37℃孵育18h后，用不同形式的含有不同半胱氨酸结合模式的E.coli来源zcyto21稀释液(溶于DMEM+0.5％ FBS)刺激转染的细胞。以37℃孵育4小时后，裂解细胞，加入荧光素酶底物后，在照度计上测定相应光单位(RLU)。所得结果显示成试验样品的RLU相对于单用培养基的对照的诱导倍数(试验样品的RLU/单用培养基的RLU＝诱导倍数)。
表11显示，来源于E.coli的野生型IL-29的C1-C3形式(C16-C113)比野生型C3-C5形式(113-C172)或野生型C1-C3形式与C3-C5形式(C16-C113，C113-C172)的混合物能更好地诱导ISRE信号传递，所述形式均参考SEQ ID NO：15。
表12显示，来源于E.coli的野生型IL-29的C1-C3(C16-C113)和来源于E.coli的半胱氨酸突变体(C172S)IL-29(SEQ ID NO：29)的C1-C3(C16-C113；SEQ ID NO：15)能够同等地诱导过表达人IL-28受体的293HEK细胞中的ISRE信号传递。
                    表11
由不同形式的E.Coli来源IL-29造成的ISRE信号传递(诱导倍数)
  细胞因子浓度(ng/ml)  C1-C3形式(C16-C113)   C3-C5形式(C113-C172)   C1-C3和C3-C5的混合物
  100  36   29   34
  10  38   25   35
  1  32   12   24
  0.1  10   2   5
  0.01  3   1   1
  0.001  1   1   1
                         表12
由不同形式的大肠杆菌来源IL-29造成的ISRE信号传递(诱导倍数)
  细胞因子浓度(ng/ml)  野生型C1-C3   半胱氨酸突变体C172S C1-C3
  1000  9.9   8.9
  100  9.3   8.7
  10  9.3   8.1
  1  7.8   7
  0.1  4.6   3.3
  0.01  1.9   1.5
  0.001  1.3   0.9
                      实施例20
       由聚I：C和病毒感染诱导的IL-28A、IL-29、IL-28B
将新分离的人外周血单核细胞在有聚肌苷酸-聚胞苷酸(聚I：C；100μg/ml)(SIGMA；St.Louis，MO)、MOI为0.1的脑心肌炎病毒(EMCV)存在下或单独用培养基的条件下培养。孵育15h后，从细胞中分离总RNA并用无RNase的DNase处理。将100ng总RNA用作模板，利用Superscript一步RT-PCR和PlatinumTaq试剂盒以及基因特异性引物，根据厂商(Invitrogen)建议，进行一步RT-PCR。
在未处理的细胞中观察到人IL-28A、IL-28B和IL-29、IFN-α和IFN-βRNA的含量低，甚至检测不到。相反，聚I：C处理和病毒感染均提高了IL-28A、IL-29、IL-28B RNA的量，用I型干扰素也观察到相同现象。这些实验显示，IL-28A、IL-29、IL-28B，像I型干扰素一样，能通过双链RNA或病毒感染来诱导。
                   实施例21
      在HepG2细胞中相对于IFNα的IL-28、IL-29信号传递活性
A.细胞转染
转染HepG2细胞如下：在转染前约18h，将700,000个HepG2细胞/孔(6孔板)铺在2毫升DMEM+10％胎牛血清中铺板。以每个孔计，将1微克pISRE-荧光素酶DNA(Stratagene)和1微克pIRES2-EGFP DNA(Clontech)加入到总量为100微升的含6微升Fugene 6试剂(Roche Biochemicals)的DMEM中。30分钟后，将这转染混合物加入到预先铺好的HepG2细胞中。24小时后，利用胰蛋白酶-EDTA从平板上取下转染的细胞并以约25,000个细胞/孔将其重新铺于96孔微量滴定板中。配体刺激前约18h，将培养基换成DMEM+0.5％FBS。
B.信号转导报告试验
信号转导报告试验如下进行：在DMEM+0.5％ FBS中以37℃孵育18h后，用100ng/ml IL-28A、IL-29、IL-28B、zcyto24、zcyto25和huIFN-α2a配体刺激转染的细胞。以37℃孵育4小时后，裂解细胞，加入荧光素酶底物后，在照度计上测定相应光单位(RLU)。所得结果以试验样品的RLU相对于单用培养基的对照的诱导倍数(试验样品的RLU/单用培养基的RLU＝诱导倍数)表示。表13显示，IL-28A、IL-29、IL-28B、zcyto24和zcyto25在经ISRE荧光素酶转染的人HepG2肝细胞中会诱导ISRE信号传递。
表13：HepG2细胞中的细胞因子依赖性ISRE信号传递的诱导倍数
  细胞因子   诱导倍数
  IL-28A   5.6
  IL-29   4
  IL-28B   5.8
  Zcyto24   4.7
  Zcyto25   3
  HuIFN-a2a   5.8
                        实施例22
          在HepG2细胞中相对于IFNα的IL-29抗病毒活性
针对EMCV(美国典型培养物保藏中心#VR-129B，Manassas，VA)和人细胞调整抗病毒试验(Familletti，P.，等，Methods Enzym.78：387-394，1981)。将细胞和细胞因子一起铺板，并在以感染复数为0.1至1的EMCV刺激前孵育24小时。感染后24小时，用染料摄取生物试验分析细胞的生活力(Berg，K.，等，Apmis 98：156-162，1990)。对靶细胞进行MTT并在37℃孵育2小时。加入溶解溶液，于37℃孵育过夜，并测定570nm处的光密度。OD570与抗病毒活性成正比例。
结果显示了当用HepG2细胞测试IL-29和IFN时的抗病毒活性：在EMCV感染和染料摄取试验前，将IL-29、IFN-β和IFNα-2a以可变的浓度加入到HepG2细胞中。将来自一式三份的孔中OD570的平均值和标准偏差作图。OD570与抗病毒活性呈正比例。对于IL-29，EC50为0.60ng/ml；对于IFNα2a，EC50为0.57ng/ml；对于IFN-β，EC50为0.46ng/ml。
                       实施例23
         在肝和淋巴细胞亚群中IL-28RA mRNA的表达
为了进一步检测IL-28RA的mRNA分布，利用SDS 7900HT系统(AppliedBiosystems，CA)进行半定量RT-PCR。每个样品利用100ng总RNA和基因特异性引物来进行一步RT-PCR。利用Bjab RNA为每种引物集产生标准曲线，所有样品值均相对HPRT标准化。标准化的结果概括在表14-17中。也显示了IFNAR2和CRF2-4的标准化的值。
表14：B和T细胞表达显著水平的IL-28RA mRNA。在树突状细胞和大多数单核细胞中可见到低水平。
                             表14
  细胞/组织   IL-28RA   IFNAR2   CRF2-4
  未刺激的树突状细胞   .04   5.9   9.8
  树突状细胞+IFNg   .07   3.6   4.3
  树突状细胞   .16   7.85   3.9
  用LPS/IFNg刺激的CD14+   .13   12   27
  静息的CD14+单核细胞   .12   11   15.4
  未活化的Hu CD14+   4.2   TBD   TBD
  Hu CD14+1ug/ml LPS活化   2.3   TBD   TBD
  H.发炎的扁桃腺   3   12.4   9.5
  H.B细胞+PMA/Iono 4 & 24小时   3.6   1.3   1.4
  静息的Hu CD19+   6.2   TBD   TBD
  Hu CD19+4小时PMA/Iono   10.6   TBD   TBD
  Hu CD19+24小时活化PMA/Iono   3.7   TBD   TBD
  IgD+B细胞   6.47   13.15   6.42
  IgM+B细胞   9.06   15.4   2.18
  IgD-B细胞   5.66   2.86   6.76
  NK细胞+PMA/Iono   0   6.7   2.9
  未活化的Hu CD3+   2.1   TBD   TBD
  静息的CD4+   .9   8.5   29.1
  CD4+未刺激18小时   1.6   8.4   13.2
  CD4+ +聚I/C   2.2   4.5   5.1
  CD4+ +PMA/Iono   .3   1.8   .9
  CD3阴性 静息的   1.6   7.3   46
  CD3阴性 未刺激18小时   2.4   13.2   16.8
  CD3阴性+聚I/C 18小时   5.7   7   30.2
  CD3阴性+LPS 18小时   3.1   11.9   28.2
  CD8+未刺激18小时   1.8   4.9   13.1
  用PMA/Ion刺激CD8+18小时   .3   .6   1.1
如表14所示，正常肝组织和来源于肝的细胞系显示出了实质性水平的IL-28RA和CRF2-4mRNA。
                         表15
  细胞/组织   IL-28RA   IFNAR2   CRF2-4
  HepG2   1.6   3.56   2.1
  HepG2 UGAR 5/10/02   1.1   1.2   2.7
  HepG2，CGAT HKES081501C   4.3   2.1   6
  HuH7 5/10/02   1.63   16   2
  HuH7肝细胞瘤-CGAT   4.2   7.2   3.1
  肝，正常-CGAT #HXYZ020801K   11.7   3.2   8.4
  肝，NAT-正常邻接组织   4.5   4.9   7.7
  肝，NAT-正常邻接组织   2.2   6.3   10.4
  Hep SMVC肝静脉   0   1.4   6.5
  Hep SMCA肝动脉   0   2.1   7.5
  Hep.Fibro   0   2.9   6.2
  Hep.Ca.   3.8   2.9   5.8
  腺瘤肝   8.3   4.2   10.5
  SK-Hep-1腺瘤肝   .1   1.3   2.5
  AsPC-1 Hu.胰腺瘤   .7   .8   1.3
  Hu.Hep.星形细胞   .025   4.4   9.7
如表15所示，原代气管上皮细胞包含丰富水平的IL-28RA和CRF2-4。
                        表16
  细胞/组织  IL-28RA   IFNAR2   CRF2-4
  U87MG-胶质瘤  0   .66   .99
  NHBE未刺激的  1.9   1.7   8.8
  NHBE+TNFα  2.2   5.7   4.6
  NHBE+聚I/C  1.8   nd   nd
  小气道上皮细胞  3.9   3.3   27.8
  NHLF-正常人肺成纤维细胞  0   nd   nd
如表16所示，IL-28RA存在于正常和患病的肝样品中，并且在来源于丙型肝炎和乙型肝炎感染样品的组织中表达增加。
                            表17
 细胞/组织   IL-28RA   CRF2-4   IFNAR2
 凝血坏死的肝   8.87   15.12   1.72
 自体免疫型肝炎的肝   6.46   8.90   3.07
 新生儿肝炎   6.29   12.46   6.16
 晚期肝病   4.79   17.05   10.58
 急性肝衰竭   1.90   14.20   7.69
 急性肝衰竭   2.52   11.25   8.84
 硬化，初级胆汁型   4.64   12.03   3.62
 硬化，酒精型(Laennec)   4.17   8.30   4.14
 硬化，隐原性   4.84   7.13   5.06
 丙型肝炎+，带有硬化   3.64   7.99   6.62
 丙型肝炎+   6.32   11.29   7.43
 Hep A的继发性急性肝炎   8.94   21.63   8.48
 丙型肝炎+   7.69   15.88   8.05
 乙型肝炎+   1.61   12.79   6.93
 正常肝   8.76   5.42   3.78
 正常肝   1.46   4.13   4.83
 肝NAT   3.61   5.43   6.42
 肝NAT   1.97   10.37   6.31
 Hu胎肝   1.07   4.87   3.98
 肝细胞癌   3.58   3.80   3.22
 肝腺癌   8.30   10.48   4.17
 Hep SMVC肝静脉   0.00   6.46   1.45
 Hep SMCA肝动脉   0.00   7.55   2.10
 Hep.成纤维细胞   0.00   6.20   2.94
 HuH7肝细胞瘤   4.20   3.05   7.24
 HepG2肝细胞癌   3.40   5.98   2.11
 SK-Hep-1肝腺癌   0.03   2.53   1.30
 HepG2未刺激的   2.06   2.98   2.28
 HepG2+zcyto21   2.28   3.01   2.53
 HepG2+IFNα   2.61   3.05   3.00
 正常女性的肝-退化的   1.38   6.45   4.57
 正常肝-退化的   1.93   4.99   6.25
 正常肝-退化的   2.41   2.32   2.75
 病肝-退化的   2.33   3.00   6.04
 来自Clonetics的原代肝细胞   9.13   7.97   13.30
如表18-22所示，IL-28RA可在正常B细胞、B淋巴瘤细胞系、T细胞、T淋巴瘤细胞系(Jurkat)、正常和转化的淋巴细胞(B细胞和T细胞)和正常的人单核细胞中检测到。
                                      表18
  HPRT平均值   IL-28RA平均值   IL-28RA标准化值   IFNAR2   IFNAR2标准化值   CRF2-4   CRF2-4标准化值
  CD14+ 24小时 未刺激#A38   13.1   68.9   5.2   92.3   7.0   199.8   15.2
  CD14+ 24小时 刺激#A38   6.9   7.6   1.1   219.5   31.8   276.6   40.1
  CD14+ 24小时 未刺激#A112   17.5   40.6   2.3   163.8   9.4   239.7   13.7
  CD14+ 24小时 刺激#A112   11.8   6.4   0.5   264.6   22.4   266.9   22.6
  CD14+ 静息#X   32.0   164.2   5.1   1279.7   39.9   699.9   21.8
  CD14++LPS#X   21.4   40.8   1.9   338.2   15.8   518.0   24.2
  CD14+ 24小时 未刺激#A39   26.3   86.8   3.3   297.4   11.3   480.6   18.3
  CD14+ 24小时 刺激#A39   16.6   12.5   0.8   210.0   12.7   406.4   24.5
  HL60静息   161.2   0.2   0.0   214.2   1.3   264.0   1.6
  HL60+PMA   23.6   2.8   0.1   372.5   15.8   397.5   16.8
  U937静息   246.7   0.0   0.0   449.4   1.8   362.5   1.5
  U937+PMA   222.7   0.0   0.0   379.2   1.7   475.9   2.1
  Jurkat静息   241.7   103.0   0.4   327.7   1.4   36.1   0.1
  Jurkat活化的   130.7   143.2   1.1
  Colo205   88.8   43.5   0.5
  HT-29   26.5   30.5   1.2
                        表19
  HPRT SD   IL-28RA SD
单核细胞24小时 未刺激#A38   0.6   2.4
单核细胞24小时刺激#A38   0.7   0.2
单核细胞24小时 未刺激#A112   2.0   0.7
单核细胞24小时 刺激#A112   0.3   0.1
单核细胞静息#X   5.7   2.2
单核细胞+LPS #X   0.5   1.0
单核细胞24小时 未刺激#A39   0.7   0.8
单核细胞24小时 刺激#A39   0.1   0.7
HL60静息   19.7   0.1
HL60+PMA   0.7   0.4
U937静息   7.4   0.0
U937+PMA   7.1   0.0
Jurkat静息   3.7   1.1
Jurkat活化的 2.4 1.8
Colo205   1.9   0.7
HT-29   2.3   1.7
                                        表20
  平均Hprt   平均IFNAR2  平均IL-28RA  平均CRF
  CD3+/CD4+ 0   10.1   85.9  9.0  294.6
  CD4/CD3+未刺激18小时   12.9   108.7  20.3  170.4
  CD4+/CD3+ +聚I/C 18小时   24.1   108.5  52.1  121.8
  CD4+/CD3+ +PMA/Iono 18小时   47.8   83.7  16.5  40.8
  CD3 neg 0   15.4   111.7  24.8  706.1
  CD3 neg未刺激18小时   15.7   206.6  37.5  263.0
  CD3 neg+聚I/C 18小时   9.6   67.0  54.7  289.5
  CD3 neg+LPS 18小时   14.5   173.2  44.6  409.3
  CD8+未刺激18小时   6.1   29.7  11.1  79.9
  CD8+ +PMA/Iono 18小时   78.4   47.6  26.1  85.5
  12.8.1-NHBE未刺激   47.4   81.1  76.5  415.6
  12.8.2-NHBE+TNF-alpha   42.3   238.8  127.7  193.9
  SAEC   15.3   49.9  63.6  426.0
                                          表21
  IL-28RA标准化值   CRF标准化值   IFNAR2标准化值   IL-28RASD   CRF SD   IFNAR2 SD
  CD3+/CD4+ 0   0.9   29.1   8.5   0.1   1.6   0.4
  CD4/CD3+未刺激18小时   1.6   13.2   8.4   0.2   1.6   1.4
  CD4+/CD3+ +聚I/C 18小时   2.2   5.1   4.5   0.1   0.3   0.5
  CD4+/CD3+ +PMA/Iono 18小时   0.3   0.9   1.8   0.0   0.1   0.3
  CD3 neg 0   1.6   46.0   7.3   0.2   4.7   1.3
  CD3 neg未刺激18小时   2.4   16.8   13.2   0.4   2.7   2.3
  CD3 neg+聚I/C 18小时   5.7   30.2   7.0   0.3   1.7   0.8
  CD3 neg+LPS 18小时   3.1   28.2   11.9   0.4   5.4   2.9
  CD8+未刺激 18小时   1.8   13.1   4.9   0.1   1.1   0.3
  CD8+ +PMA/Iono 18小时   0.3   1.1   0.6   0.0   0.1   0.0
  12.8.1-NHBE未刺激   1.6   8.8   1.7   0.1   0.4   0.1
  12.8.2-NHBE+TNFF-alpha   3.0   4.6   5.7   0.1   0.1   0.1
  SAEC   4.1   27.8   3.3   0.2   1.1   0.3
                                表22
  SD Hprt   SDIFNAR2   SDIL-28RA   SD CRF
  CD3+/CD4+ 0   0.3   3.5   0.6   12.8
  CD4/CD3+未刺激 18小时   1.4   13.7   1.1   8.5
  CD4+/CD3+ +聚I/C 18小时   1.3   9.8   1.6   3.4
  CD4+/CD3+ +PMA/Iono 18小时   4.0   10.3   0.7   3.7
  CD3 neg 0   1.4   16.6   1.6   28.6
  CD3 neg未刺激18小时   2.4   16.2   2.7   12.6
  CD3 neg+聚I/C 18小时   0.5   7.0   1.0   8.3
  CD3 neg+LPS 18小时   1.0   39.8   5.6   73.6
  CD8+未刺激18小时   0.2   1.6   0.5   6.1
  CD8+ +PMA/Iono 18小时   1.3   1.7   0.2   8.1
  12.8.1-NHBE未刺激   2.4   5.6   2.7   2.8
  12.8.2-NHBE+TNF-alpha   0.5   3.4   3.5   3.4
  SAEC   0.5   4.8   1.8   9.9
                           实施例24
                小鼠IL-28不影响Daudi细胞增殖
将人Daudi细胞以50,000个细胞/毫升重悬于RPMI+10％ FBS，并按96孔板上的每孔计，将5000个细胞铺板。将IL-29-CEE(缀合了glu标签的IL-29)、IFN-γ或IFN-α2a以2倍系列稀释度加到每个孔中。IL-29-CEE所使用的浓度范围为1000ng/ml至0.5ng/ml。IFN-γ所使用的浓度范围为125ng/ml至0.06ng/ml。IFN-α2a所使用的浓度范围为62ng/ml至0.03ng/ml。将细胞于37℃孵育72h。72h后，以20微升/孔加入Alamar蓝(Accumed，Chicago，IL)。进一步于37℃、5％ CO中孵育平板24小时。利用SoftMaxTM Pro程序，于波长544(激发)和590(发射)处，在FmaxTM平板读数计(Molecular Devices，Sunnyvale，CA)上读出平板读数。Alamar蓝基于细胞代谢活性而给出荧光读数，因此是相比于阴性对照而言的细胞增殖的直接度量。结果显示，与IFN-α2a相反，IL-29-CEE对Daudi细胞的增殖不具有显著的作用。
                        实施例25
         小鼠IL-28对小鼠B细胞没有抗增殖作用
利用MACS磁珠去除CD43+细胞，以此从2个Balb/C(7个月大)脾中分离小鼠B细胞。用LPS、抗IgM或抗CD40单克隆抗体体外培养纯化的B细胞。将小鼠IL-28或小鼠IFNα加入到培养物中，在第48小时加入3H-胸苷，在培养72小时后，测量3H-胸苷的掺入情况。
10ng/ml的IFNα抑制被LPS或抗IgM刺激的小鼠B细胞的3H-胸苷掺入。可是，在包括1000ng/ml的任何测试浓度下，小鼠IL-28不抑制3H-胸苷掺入。相反，mIFNα和小鼠IL-28二者均可增加被抗CD40 MAb刺激的小鼠B细胞的3H-胸苷掺入。
这些数据证实，不像IFNα，小鼠IL-28即使在高浓度也不显示出抗增殖活性。另外，zcyto24在抗CD40 Mab存在的情况下会增强增殖。结果表明，小鼠IL-28不同于IFNα，因为即使在高浓度，小鼠IL-28不对小鼠B细胞也不显示出抗增殖活性。另外，小鼠IL-28在抗CD40单克隆抗体存在的情况下可增强增殖。
                      实施例26
                    骨髓扩增试验
在αMEM、10％ FBS、50μM β-巯基乙醇、2ng/ml FLT3L中，于37℃下，使新鲜的人骨髓单核细胞(Poietic Technologies，Gaithersburg，Md.)粘附在塑料上2小时。然后将非粘附细胞以25,000至45,000细胞/孔(96孔组织培养板)在αMEM、10％ FBS、50μM β-巯基乙醇、2ng/ml FLT3L中，在存在或缺少1000ng/ml IL-29-CEE、100ng/ml IL-29-CEE、10ng/ml IL-29-CEE、100ng/mlIFN-α2a、10ng/ml IFN-α2a或1ng/ml IFN-α2a的情况下铺板。将这些细胞和各种细胞因子一起孵育以测试来自骨髓的造血细胞的扩增或分化(20ng/ml IL-2、2ng/ml IL-3、20ng/ml IL-4、20ng/ml IL-5、20ng/mlIL-7、20ng/ml IL-10、20ng/ml IL-12、20ng/ml IL-15、10ng/ml IL-21或不加细胞因子)。8至12天后，以20微升/孔加入Alamar蓝(Accumed，Chicago，IL)。进一步于37℃、5％ CO中孵育平板24小时。利用SoftMaxTM Pro程序，于波长544(激发)和590(发射)处，在FmaxTM平板读数计(Molecular Devices，Sunnyvale，CA)上读出平板读数。Alamar蓝基于细胞代谢活性而给出荧光读数，因此是相比于阴性对照的细胞增殖的直接度量。
IFN-α2a在所有测试的条件下均造成骨髓扩增的显著抑制。相反，在存在IL-3、IL-4、IL-5、IL-7、，IL-10、IL-12、IL-21或不加细胞因子的情况下，IL-29对骨髓细胞扩增没有显著作用。在存在IL-2或IL-15的情况下，骨髓细胞扩增受到少量抑制。
                    实施例27
       用可溶受体(zcytoR19/CRF2-4)抑制IL-28和IL-29信号传递
 A.信号转导报告试验
使用信号转导报告试验来显示zcytor19-Fc4均二聚可溶性受体和zcytor19-Fc/CRF2-4-Fc杂二聚可溶性受体对zcyto20、zcyto21和zcyto24信号递送的抑制剂性质。对过表达zcytor19受体的人胚肾(HEK)细胞用含干扰素激活应答元件(ISRE)的报告质粒转染，所述元件驱动荧光素酶报告基因的转录。用配体(包括zcyto20(SEQ ID NO：2)、zcyto21(SEQ ID NO：4)、zcyto24(SEQID NO：8))刺激转染细胞后的荧光素酶活性反映了配体与可溶受体的相互作用。
B.细胞转染
如下转染过表达zcytor19的293HEK细胞如下：在转染前约18h，将700,000个293细胞/孔(6孔板)于2毫升DMEM+10％胎牛血清中铺板。以每个孔计，将1微克pISRE-荧光素酶DNA(Stratagene)和1微克pIRES2-EGFP DNA(Clontech)加入到总量为100微升的含6微升Fugene 6试剂(RocheBiochemicals)的DMEM中。30分钟后，将这转染混合物加入到预先铺好的293细胞中。24小时后，利用胰蛋白酶-EDTA从平板上取下转染的细胞，并以约25,000个细胞/孔将其重新铺于96孔微量滴定板中。配体刺激前约18h，将培养基换成DMEM+0.5％FBS。
C.信号转导报告试验
如下进行信号转导报告试验：在DMEM+0.5％ FBS中于37℃孵育18h后，用10ng/ml zcyto20、zcyto21或zcyto24和10微克/ml以下可溶性受体刺激转染细胞；人zcytor19-Fc均二聚体、人zcytor19-Fc/人CRF2-4-Fc杂二聚体、人CRF2-4-Fc均二聚体、鼠zcytor19-Ig均二聚体。以37℃孵育4小时后，裂解细胞，加入荧光素酶底物后，在照度计上测定相对光单位(RLU)。所得结果显示为在存在可溶性受体情况下的配体诱导的信号传递相对于在仅存在PBS情况下的信号传递的抑制百分数。表23显示，人zcytor19-Fc/人CRF2-4杂二聚可溶性受体能以对照的16-45％之间的水平抑制zcyto20、zcyto21和zcyto24诱导的信号传递。人zcytor19-Fc均二聚可溶性受体也能抑制zcyto21诱导的信号传递的45％。用huCRF2-4-Fc或muzcytor19-Ig均二聚可溶性受体则未见有显著作用。
表23：可性溶受体对配体诱导的干扰素刺激应答元件(ISRE)信号传递的抑制百分数
  配体   Huzcytor19-Fc/huCRF2-4-Fc   Huzcytor19-Fc   HuCRF2-4-Fc   Muzcytor19-Ig
  Zcyto20   16％   92％   80％   91％
  Zcyto21   16％   45％   79％   103％
  Zcyto24   47％   90％   82％   89％
                        实施例28
         IL-28和IL-29抑制新鲜人PBMC中的HIV复制
人免疫缺陷病毒(HIV)是致病性逆转录病毒，其感染免疫系统的细胞。CD4 T细胞和单核细胞是主要被感染的细胞类型。为了测试IL-28和IL-29体外抑制HIV复制的能力，在存在IL-28、IL-29和MetIL-29C172S-PEG的情况下用HIV病毒感染正常供体的PBMC。
从由筛选的供体获得的全血中分离新鲜人外周血单核细胞(PBMC)，所述供体对HIV和HBV呈血清阴性。外周血细胞经低速离心沉淀/洗涤2-3遍，重悬于PBS中以去除污染的血小板。将洗过的血细胞用Dulbecco磷酸缓冲盐水(D-PBS)以1∶1的比例稀释，并在包含14mL淋巴细胞分离培养基((LSM；Mediatech Inc.Herndon，VA的cellgroTM)；密度为1.078+/-0.002g/ml)的50mL离心管中分层，以600xG离心30分钟。将PBMC条带小心地从所得界面吸出，接着通过低速离心用PBS洗2次。最后一次洗涤后，通过锥虫蓝排斥法计数细胞，并以1×107个细胞/mL重悬于RPMI 1640中，所述RPMI 1640中添加了15％胎牛血清(FBS)、2mM L-谷氨酰胺、4μg/mL PHA-P。将细胞于37℃孵育48-72小时。孵育后，离心PBMC并重悬于RPMI 1640中，所述RPMI 1640中添加了15％ FBS、2mM L-谷氨酰胺、100U/mL青霉素、100μg/rnL链霉素、10μg/mL庆大霉素和20U/mL重组人IL-2。将PBMC以1-2×106个细胞/mL的浓度维持在培养基上，每周更换培养基两次，直到用于试验方案时为止。因为附着于组织培养瓶上，因此单核细胞从培养物中去除了。
对于标准PBMC试验，合并来自于至少2个正常供体的PHA-P刺激细胞，用新制培养基稀释至终浓度达到1×106个细胞/mL，并以50μL/孔将其铺于96孔圆底微量板的内部孔中(5×104个细胞/孔)。在微量滴定管中制备2X浓度的测试稀释液，每种浓度取100μL以标准方式置于合适的孔中。将IL-28、IL-29和MetIL-29C172S-PEG以0-10μg/ml的浓度加入，它们通常是1/2对数稀释液。将50μL预先确定的病毒原液稀释液置于每个测试孔中(最终MOI为0.1)。仅加有细胞和病毒的孔用作病毒对照。利用MTS试验系统，完全一样地制备另外不带病毒的板用于药物细胞毒性研究。感染后，使PBMC培养物维持7天，在此期间收集无细胞的上清液样品并测试逆转录酶活性和p24抗原水平。
IL-28、IL-29和MetIL-29C172S-PEG引起的逆转录酶活性或p24抗原水平的降低将会是抗病毒活性的指标。结果会证明，IL-28和IL-29对治疗HIV和AIDS可能有治疗价值。
                           实施例29
           IL-28和IL-29抑制狨猴肝细胞中的GBV-B复制
HCV是RNA病毒的黄病毒科的成员。HCV在离体或体外培养物中不能很好地复制，因此没有令人满意的系统来体外测试分子的抗HCV活性。GB病毒B(GBV-B)是用于开发抗HCV抗病毒剂的吸引人的代用模型，这是因为其与HCV具有相对高水平的序列同一性，而且是嗜肝病毒。迄今为止，该病毒只能在某些非人灵长类动物原代肝细胞中生长。这可通过体外分离肝细胞并用GBV-B感染它们，或从感染GBV-B的狨猴中分离肝细胞并直接用抗病毒化合物进行处理来实现。
利用TaqMan RT-PCR测试IL-28、IL-29和MetIL-29C172S-PEG对GBV-B细胞外RNA生产的影响，并利用CellTiter96_试剂(Promega，Madison，WI)测试它们对细胞毒性的影响，试验中使用6个半对数稀释度的IL-28、IL-29或MetIL-29C172S-PEG多肽，一式三份进行。未处理的培养物用作细胞和病毒对照。RIBAVIRIN_(最高测试浓度为200μg/ml)和IFN-α(最高测试浓度为5000IU/ml)用作阳性对照化合物。分离原代肝细胞培养物，将其铺于胶原包被的平板上。第二天，用测试样品(IL-28、IL-29、MetIL-29C172S-PEG、IFNα或RIBAVIRIN_)处理培养物24小时，然后将其暴露于GBV-B病毒粒子或在使用体内感染的肝细胞时用测试样品直接处理。第二天加入测试样品和培养基，并在3天后替换。3至4天后(加入测试样品后的第6-7天)，收集上清液，用CellTiter96_对细胞数定量。从上清液提取病毒RNA，将含有RT-PCR靶的体外转录RNA用作标准品，在定量TaqMan RT-PCR试验中三次重复定量。计算重复样品的平均值。通过将一式三份的样品相对于未处理的病毒和细胞对照的平均RNA和细胞数目值作图来评估病毒产生的抑制。导致50％抑制GBV-B RNA产生的药物抑制浓度(IC50)和导致相对于对照值破坏50％细胞数量的毒性浓度(TC50)由从数据产生的图外推而计算得到。
IL-28和29对GBV-B RNA产生的抑制作用指示了IL-28和IL-29对该丙型肝炎样病毒针对肝细胞(丙型肝炎感染的主要器官)的作用的抗病毒性质，阳性结果提示了IL-28或IL-29可用于治疗人的HCV感染。
                         实施例30
    IL-28、IL-29和MetIL-29C172S-PEG抑制WT10细胞中的HBV复制
慢性乙型肝炎(HBV)是人类最普遍和严重的病毒感染之一，属于病毒的肝DNA病毒科。为了测试IL-28和IL-29抗HBV的抗病毒活性，利用人肝细胞系HepG2的变体，在体外感染系统中，测试IL-28、IL-29和MetIL-29C172S-PEG抗HBV的活性。IL-28、IL-29和MetIL-29C172S-PEG在该系统抑制病毒复制，提示其在治疗人HBV中有治疗价值。
WT10细胞是人肝细胞系HepG2 2.2.15的衍生物。WT10细胞稳定转染有HBV基因组，在该细胞系中能稳定表达HBV转录物(Fu和Cheng，AntimicrobialAgents Chemother.44(12)：3402-3407，2000)。在WT10试验中，待测药物和3TC对照各以5种浓度分别试验，这些浓度是以半对数连续稀释的。最终用TaqMan PCR测定细胞外HBV DNA(IC50)并利用CellTiter96试剂测定细胞数(TC50)。该试验与Korba等，Antiviral Res.15(3)：217-228，1991和Korba等，Antiviral Res.19(1)：55-70，1992所述的相似。简而言之，将WT10细胞铺于96-孔微量滴定板中。16-24小时后，洗涤HepG2-2.2. 15细胞的高密度单层细胞并用完全培养基替换该培养基，所述完全培养基含各种浓度的测试样品，一式三份进行。3TC用作阳性对照，而向细胞单独加入培养基用作阴性对照(病毒对照，VC)。3天后，用含合适稀释度的测试样品的培养基来代替该培养基。初始加入测试化合物6天后，收集细胞培养物上清液，用链霉蛋白酶和DNAse处理，并用于实时定量TaqMan PCR试验。通过监测因与扩增的HBV DNA发生杂交的猝死荧光探针分子的核酸外切降解引起的荧光信号增加，实时监测PCR扩增的HBV DNA。对于每个PCR扩增，利用纯化HBV DNA的稀释物同时产生标准曲线。从HBV DNA水平的降低(IC50)计算出抗病毒活性。然后进行染料摄取试验来测定细胞生存能力，将其用于计算毒性(TC50)。治疗指数(TI)以TC50/IC50计算。
IL-28、IL-29和MetIL-29C172S-PEG抑制WT10细胞中的HepB病毒复制，其IC50＜0.032ug/ml。这证实了IL-28和IL-29对肝细胞系中生长的HBV的抗病毒活性，提供了其对于治疗人患者中HBV的治疗价值的证据。
                        实施例31
    IL-28、IL-29和MetIL-29C172S-PEG抑制牛肾细胞中的BVDV复制
HCV是RNA病毒黄病毒科的成员。属于该科的其它病毒有牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和黄热病毒(YFV)。HCV在离体或体外培养物中不能很好地复制，因此没有系统可用来体外测试抗HCV活性。BVDV和YFV试验用于作为针对HCV的替代病毒来测试针对黄病毒科病毒的抗病毒活性。
通过致细胞病变效应(CPE)抑制试验评估1L-28、IL-29和MetIL-29C172S-PEG的抗病毒作用。用细胞致病性BVDV病毒感染后，利用Madin-Darby牛肾细胞(MDBK)来进行试验，测试细胞死亡，以及加入IL-28、IL-29和MetIL-29C172S-PEG对细胞死亡的抑制。MDBK细胞在Dulbecco改良基本培养基(DMEM)中增殖，所述培养基含酚红和10％马血清、1％谷氨酰胺和1％青霉素-链霉素。在不添加酚红并添加2％ FBS、1％谷氨酰胺和1％青霉素-链霉素的DMEM中进行CPE抑制试验。试验前的那天，细胞用胰蛋白酶水解(1％胰蛋白酶-EDTA)，洗涤，计数并以104个细胞/孔将其铺于96孔平底BioCoat_平板(Fisher Scientific，Pittsburgh，PA)中，体积为100μl/孔。第二天，去除培养基，将预先滴定的病毒等分液加入到细胞中。病毒用量是使其在最大CPE进展时(对于BVDV是第7天)产生完全细胞死亡(＞80％)的最大稀释度。根据厂商规程，使用Vmax平板读数计(Molecular Devices，Sunnyvale，CA)，利用CellTiter96_试剂(Promega)确定细胞活力。测试样品以6种浓度分别测试，所述浓度用试验培养基以半对数连续稀释。IFNα和RIBAVIRIN_用作阳性对照。在病毒感染时加入测试样品。相对于对照来确定每种浓度的CPE减少百分数和细胞生存力百分数的平均背景和样品颜色校正数据，并相对于TC50计算IC50。
IL-28、IL-29和MetIL-29C172S-PEG抑制在MDBK牛肾细胞中由BVDV诱导的细胞死亡。IL-28以0.02μg/ml的IC50抑制细胞死亡，IL-29以0.19μg/ml的IC50抑制细胞死亡，而MetIL-29C172S-PEG以0.45μg/ml的IC50抑制细胞死亡。这证实了，IL-28和IL-29具有抗黄病毒科病毒的抗病毒活性。
                       实施例32
               由IL-28和IL-29诱导干扰素刺激基因
A.人外周血单核细胞
新分离的人外周血单核细胞在存在IL-29(20ng/mL)、IFNα2a(2ng/ml)(PBL Biomedical Labs，Piscataway，NJ)或单独用培养基的条件下培养。将细胞孵育6、24、48或72小时后，分离总RNA并用无RNase的DNase处理。将100ng总RNA用作模板，利用Taqman一步RT-PCR Master Mix_试剂以及基因特异引物，根据厂商(Applied Biosystems，Branchburg，NJ)建议，进行一步半定量RT-PCR_。将结果针对HPRT标准化，并以每个时间点相对于单独使用培养基的对照的诱导倍数表示。表24显示，在所有测试的时间点，IL-29诱导人外周血单核细胞中干扰素刺激的基因。
                          表24
  MxA诱导倍数  Pkr诱导倍数  OAS诱导倍数
  6小时IL-29   3.1  2.1  2.5
  6小时IFNα2a   17.2  9.6  16.2
  24小时IL-29   19.2  5.0  8.8
  24小时IFNα2a   57.2  9.4  22.3
  48小时IL-29   7.9  3.5  3.3
  48小时IFNα2a   18.1  5.0  17.3
  72小时IL-29   9.4  3.7  9.6
  72小时IFNα2a   29.9  6.4  47.3
B.活化的人T细胞
利用Pan T-cell Isolation_试剂盒，根据厂商说明书(Miltenyi，Auburn，CA)，从新收获的人外周血单核细胞中通过负选择来分离人T细胞。然后，活化T细胞并用结合于平板上的抗CD3、可溶性抗CD28(0.5ug/ml)(Pharmingen，SanDiego，CA)和白细胞介素2(IL-2；100U/ml)(R & D Systems，Minneapolis，MN)扩增5天，洗涤，然后用IL-2进一步扩增5天。活化并扩增后，用IL-28A(20ng/ml)、IL-29(20ng/ml)或单独用培养基刺激细胞3、6或18小时。分离总RNA并用无RNase的DNase处理。如上一个实施例所述，进行一步半定量RT-PCR_。将结果针对HPRT标准化，并以每个时间点相对于单独使用培养基的对照的诱导倍数表示。表25显示，在所有测试的时间点，IL-28和IL-29诱导活化的人T细胞中干扰素刺激的基因表达。
                            表25
  MxA诱导倍数  Pkr诱导倍数  OAS诱导倍数
 供体#1 3小时IL-28   5.2  2.8  4.8
 供体#1 3小时IL-29   5.0  3.5  6.0
 供体#1 6小时IL-28   5.5  2.2  3.0
 供体#1 6小时IL-29   6.4  2.2  3.7
 供体#1 18小时IL-28   4.6  4.8  4.0
 供体#1 18小时IL-29   5.0  3.8  4.1
 供体#2 3小时IL-28   5.7  2.2  3.5
 供体#2 3小时IL-29   6.2  2.8  4.7
 供体#2 6小时IL-28   7.3  1.9  4.4
 供体#2 6小时IL-29   8.7  2.6  4.9
 供体#2 18小时IL-28   4.7  2.3  3.6
 供体#2 18小时IL-29   4.9  2.1  3.8
C.原代人肝细胞
将来自2个单独的供体(Cambrex，Baltimore，MI)和CellzDirect，Tucson，AZ)的新鲜分离的人肝细胞用IL-28A(50ng/ml)、IL-29(50ng/ml)、IFNα2a(50ng/ml)或单独用培养基刺激24小时。刺激后，分离总RNA并用无RNase的DNase处理。如前述实施例所述进行一步半定量RT-PCR。将结果针对HPRT标准化，并以每个时间点相对于单独使用培养基的对照的诱导倍数表示。表26显示，24小时刺激后，IL-28和IL-29诱导原代人肝细胞中干扰素刺激的基因表达。
                           表26
  MxA诱导倍数  Pkr诱导倍数  OAS诱导倍数
  供体#1 IL28   31.4  6.4  30.4
  供体#1 IL29   31.8  5.2  27.8
  供体#1 IFN-α2a   63.4  8.2  66.7
  供体#2 IL28   41.7  4.2  24.3
  供体#2 IL29   44.8  5.2  25.2
  供体#2 IFN-α2a   53.2  4.8  38.3
D.HepG2和HuH7：人肝细胞瘤细胞系
用IL-28A(10ng/ml)、IL-29(10ng/ml)、IFNα2a(10ng/ml)、IFNB(1ng/ml)(PBL Biomedical，Piscataway，NJ)，或单独用培养基刺激HepG2和HuH7细胞(ATCC NOS.8065，Manassas，VA)24或48小时。在另一分开的培养物中，如上所述，用20ng/ml MetIL-29C172S-PEG或MetIL-29-PEG刺激HepG2细胞。分离总RNA并用无RNase的DNase处理。如前所述，使用100ng总RNA作为一步半定量RT-PCR的模板。将结果针对HPRT标准化，并以每个时间点相对于单独使用培养基的对照的诱导倍数表示。表27显示，24和48小时后，IL-28和IL-29诱导HepG2和HuH7肝细胞瘤细胞系中表达干扰素刺激的基因。
                          表27
  MxA诱导倍数 Pkr诱导倍数    OAS诱导倍数
  HepG2 24小时IL28   12.4 0.7    3.3
  HepG2 24小时IL29   36.6 2.2    6.4
  HepG2 24小时IFNα2a   12.2 1.9    3.2
  HepG2 24小时IFNβ   93.6 3.9    19.0
  HepG2 48小时IL28   2.7 0.9    1.1
  HepG2 48小时IL29   27.2 2.1    5.3
  HepG2 48小时IFNα2a   2.5 0.9    1.2
  HepG2 48小时IFNβ   15.9 1.8    3.3
  HuH7 24小时IL28   132.5 5.4    52.6
  HuH7 24小时IL29   220.2 7.0    116.6
  HuH7 24小时IFNα2a   157.0 5.7    67.0
  HuH7 24小时IFNβ   279.8 5.6    151.8
  HuH7 48小时IL28   25.6 3.4    10.3
  HuH7 48小时IL29   143.5 7.4    60.3
  HuH7 48小时IFNα2a   91.3 5.8    32.3
  HuH7 48小时IFNβ   65.0 4.2    35.7
                          表28
 MxA诱导倍数 OAS诱导倍数  Pkr诱导倍数
  Met IL-29C172S-PEG  36.7 6.9  2.2
  Met IL-29-PEG  46.1 8.9  2.8
显示的数据是针对在培养24小时后20ng/ml MetIL-29-PEG和MetIL-29C172S-PEG型IL-29的结果。
将显示的数据针对HPRT标准化，并以相对于未刺激细胞的诱导倍数表示。
                        实施例33
            IL-28和IL-29在HCV复制子系统中的抗病毒活性
抗病毒药物抑制HCV复制的能力可以在体外用HCV复制子系统来测试。该复制子系统由Huh7人肝细胞瘤细胞系组成，所述细胞系已用亚基因组RNA复制子转染，该复制子能指导HCV基因组RNA的组成型复制(Blight，K.J.等Science 290：1972-1974，2000)。用10IU/ml的IFNα处理复制子克隆能相对于未处理的对照细胞系减少HCV RNA量的85％。IL-28A和IL-29在72小时内能减少由复制子克隆产生的HCV RNA的量，这显示通过IL-28A/IL-29处理Huh7细胞所带来的抗病毒状态对于抑制HCV复制子复制是有效的，因此很可能对抑制HCV复制有效。
IL-28A和IL-29抑制HCV复制的能力通过Bayer支链DNA试剂盒确定，其在以下条件下进行：
1.以递增至1.0μg/ml浓度(6)*的IL28单独使用
2.以递增至1.0μg/ml浓度(6)*的IL29单独使用
3.以递增至1.0μg/ml浓度(6)*的PEGIL29单独使用
4.以0.3、1.0和3.0IU/ml的IFNα2A单独使用
5.利巴韦林单独使用。
阳性对照是IFNα，而阴性对照是病毒唑。
72小时后，用Alomar蓝染色细胞以评估存活能力。
*条件1-3的浓度为：
1.0μg/ml、0.32μg/ml、0.10μg/ml、0.032μg/ml、0.010μg/ml、0.0032μg/ml。
复制子克隆(BB7)每天用以上所列剂量处理1X，连续进行3天。72小时后测量总HCV RNA。
                         实施例34
          IL-28和IL-29具有抗致病性病毒的抗病毒活性
用两种方法在体外试验IL-28和IL-29抗以下一组致病性病毒的抗病毒活性，所述组中包括腺病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、鼻病毒、克萨奇病毒、流感病毒、痘苗病毒、西尼罗河病毒、登革热病毒、委内端拉马脑炎病毒、皮钦德病毒(pichinde virus)和脊髓灰质炎病毒。这两种方法是通过细胞的可视(显微)检查和中性红(NR)染料摄入细胞的量的增加来确定的病毒诱导的致细胞病变效应(CPE)的抑制。在CPE抑制方法中，在含有宿主细胞的96孔平底微平板上评估7种浓度的测试药物(log10稀释度，如1000，100，10，1，0.1，0.01，0.001ng/ml)抗每种病毒的效果。24小时前向病毒加入化合物，所述病毒使用浓度约为每孔5至100个细胞培养物感染剂量，依病毒而定，这相当于根据每细胞的感染复数(MOI)等于0.01至0.0001个感染颗粒的病毒。于37℃孵育足以引起适当的病毒致细胞病变效应发展的指定时间后，读出测试结果。在NR吸收试验中，向用于获得视觉评分的同一套平板中加入染料(培养基中浓度为0.34％)。2h后，利用微板自动读数计来确定细胞吸收并接着被洗脱的染料颜色强度。抗病毒活性表示为50％有效(病毒抑制)浓度(EC50)，其由将化合物浓度对抑制百分数在半对数图纸上作图来确定。在一些情形下，EC50/IC50数据可由合适的回归分析软件来确定。一般来说，NR试验确定的EC50值比由CPE方法得到的高2至4倍。
                                   表29：视觉试验
  病毒   细胞系   药物   视觉评分的EC50   视觉评分的IC50   视觉评分的SI(IC50/EC50)
  腺病毒   A549   IL-28A   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml   0
  腺病毒   A549   IL-29   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml   0
  腺病毒   A549   MetIL-29C172S-PEG   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml   0
  副流感病毒   MA-104   IL-28A   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml   0
  副流感病毒   MA-104   IL-29   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml   0
  副流感病毒   MA-104   MetIL-29C172S-PEG   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml   0
  呼吸道合胞病毒   MA-104   IL-28A   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml   0
  呼吸道合胞病毒   MA-104   IL-29   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml   0
  呼吸道合胞病毒   MA-104   MetIL-29C172S-PEG   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml   0
  鼻病毒2   KB   IL-28A   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml   0
  鼻病毒2   KB   IL-29   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml   0
  鼻病毒2   KB   MetIL-29C172S-PEG   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml   0
  鼻病毒9   HeLa   IL-28A   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml   0
  鼻病毒9   HeLa   IL-29   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml   0
  鼻病毒9   HeLa   MetIL-29C172S-PEG   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml   0
  克萨奇B4病毒   KB   IL-28A   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml   0
  克萨奇B4病毒   KB   IL-29   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml   0
  克萨奇B4病毒   KB   MetIL-29C172S-PEG   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml   0
  流感病毒(A型[H3N2])   Maden-Darby犬肾   IL-28A   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml   0
  流感病毒(A型[H3N2])   Maden-Darby犬肾   IL-29   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml   0
  流感病毒(A型[H3N2])   Maden-Darby犬肾   MetIL-29C172S-PEG   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml   0
  流感病毒(A型[H3N2])   Vero   IL-28A   0.1μg/ml   ＞10μg/ml   ＞100
  流感病毒(A型[H3N2])   Vero   IL-29   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml   0
  流感病毒(A型[H3N2])   Vero   MetIL-29C172S-PEG   0.045μg/ml   ＞10μg/ml   ＞222
  痘苗病毒   Vero   IL-28A   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml   0
  痘苗病毒   Vero   IL-29   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml   0
  痘苗病毒   Vero   MetIL-29C172S-PEG   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml   0
  西尼罗河病毒   Vero   IL-28A   0.00001μg/ml   ＞10μg/ml   ＞1,000,000
  西尼罗河病毒   Vero   IL-29   0.000032μg/ml   ＞10μg/ml   ＞300,000
  西尼罗河病毒   Vero   MetIL-29C172S-PEG   0.001μg/ml   ＞10μg/ml   ＞10,000
  登革热病毒   Vero   IL-28A   0.01μg/ml   ＞10μg/ml   ＞1000
  登革热病毒   Vero   IL-29   0.032μg/ml   ＞10μg/ml   ＞312
  登革热病毒   Vero   MetIL-29C172S-PEG   0.0075μg/ml   ＞10μg/ml   ＞1330
  委内瑞拉马脑炎病毒   Vero   IL-28A   0.01μg/ml   ＞10μg/ml ＞1000
  委内瑞拉马脑炎病毒   Vero   IL-29   0.012μg/ml   ＞10μg/ml ＞833
  委内瑞拉马脑炎病毒   Vero   MetIL-29C172S-PEG   0.0065μg/ml   ＞10μg/ml ＞1538
  皮钦德病毒   BSC-1   IL-28A   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml 0
  皮钦德病毒   BSC-1   IL-29   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml 0
  皮钦德病毒   BSC-1   MetIL-29C172S-PEG   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml 0
  脊髓灰质炎病毒   Vero   IL-28A   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml 0
  脊髓灰质炎病毒   Vero   IL-29   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml 0
  脊髓灰质炎病毒   Vero   MetIL-29C172S-PEG   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml 0
                            表30：中性红试验
  病毒   细胞系   药物   EC50 NR   IC50 NR   SI NR(IC50/EC50)
  腺病毒   A549   IL-28A   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml   0
  腺病毒   A549   IL-29   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml   0
  腺病毒   A549   MetIL-29C172S-PEG   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml   0
  副流感病毒   MA-104   IL-28A   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml   0
  副流感病毒   MA-104   IL-29   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml   0
  副流感病毒   MA-104   MetIL-29C172S-PEG   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml   0
  呼吸道合胞病毒   MA-104   IL-28A   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml 0
  呼吸道合胞病毒   MA-104   IL-29   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml 0
  呼吸道合胞病毒   MA-104   MetIL-29C172S-PEG   5.47μg/ml   ＞10μg/ml ＞2
  鼻病毒2   KB   IL-28A   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml 0
  鼻病毒2   KB   IL-29   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml 0
  鼻病毒2   KB   MetIL-29C172S-PEG   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml 0
  鼻病毒9   HeLa   IL-28A   1.726μg/ml   ＞10μg/ml ＞6
  鼻病毒9   HeLa   IL-29   0.982μg/ml   ＞10μg/ml ＞10
  鼻病毒9   HeLa   MetIL-29C172S-PEG   2.051μg/ml   ＞10μg/ml ＞5
  克萨奇B4病毒   KB   IL-28A   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml 0
  克萨奇B4病毒  KB   IL-29   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml  0
  克萨奇B4病毒  KB   MetIL-29C172S-PEG   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml  0
  流感病毒(A型[H3N2])  Maden-Darby犬肾   IL-28A   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml  0
  流感病毒(A型[H3N2])  Maden-Darby犬肾   IL-29   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml  0
  流感病毒(A型[H3N2])  Maden-Darby犬肾   MetIL-29C172S-PEG   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml  0
  流感病毒(A型[H3N2])  Vero   IL-28A   0.25μg/ml   ＞10μg/ml  ＞40
  流感病毒(A型[H3N2])  Vero   IL-29   2μg/ml   ＞10μg/ml  ＞5
  流感病毒(A型[H3N2])  Vero   MetIL-29C172S-PEG   1.4μg/ml   ＞10μg/ml  ＞7
  痘苗病毒  Vero   IL-28A   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml  0
  痘苗病毒  Vero   IL-29   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml  0
  痘苗病毒  Vero   MetIL-29C172S-PEG   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml  0
  西尼罗河病毒  Vero   IL-28A   0.0001μg/ml   ＞10μg/ml  ＞100,000
  西尼罗河病毒  Vero   IL-29   0.00025μg/ml   ＞10μg/ml  ＞40,000
  西尼罗河病毒  Vero   MetIL-29C172S-PEG   0.00037μg/ml   ＞10μg/ml  ＞27,000
  登革热病毒  Vero   IL-28A   0.1μg/ml   ＞10μg/ml  ＞100
  登革热病毒  Vero   IL-29   0.05μg/ml   ＞10μg/ml  ＞200
  登革热病毒  Vero   MetIL-29C172S-PEG   0.06μg/ml   ＞10μg/ml  ＞166
  委内瑞拉马脑炎病毒  Vero   IL-28A   0.035μg/ml   ＞10μg/ml  ＞286
  委内瑞拉马脑炎病毒  Vero   IL-29   0.05μg/ml   ＞10μg/ml  ＞200
  委内瑞拉马脑炎病毒  Vero   MetIL-29C172S-PEG   0.02μg/ml   ＞10μg/ml  ＞500
  皮钦德病毒  BSC-1   IL-28A   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml  0
  皮钦德病毒  BSC-1   IL-29   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml  0
  皮钦德病毒  BSC-1   MetIL-29C172S-PEG   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml  0
  脊髓灰质炎病毒  Vero   IL-28A   ＞1.672μg/ml   ＞10μg/ml  ＞6
  脊髓灰质炎病毒  Vero   IL-29   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml  0
  脊髓灰质炎病毒  Vero   MetIL-29C172S-PEG   ＞10μg/ml   ＞10μg/ml  0
                           实施例35
IL-28、IL-29、metIL-29-PEG和metIL-29C172S-PEG在鼠肝细胞系AML-12中刺激ISG诱导
干扰素刺激基因(ISG)是由I型干扰素(IFN)和由IL-28和IL-29家族分子所诱导的基因，这提示IFN和IL-28与IL-29诱导相似的途径，造成了抗病毒活性。人I型IFNs(IFNα1-4和IFNβ)对鼠细胞有很少或没有活性，这被认为是由于缺少物种交叉反应性所造成的。为了测试人IL-28和IL-29是否对鼠细胞有效果，通过对鼠肝源细胞系AML-12进行实时PCR来评估人IL-28和IL-29造成的ISG诱导。
将AML-12细胞铺在含完全DMEM培养基的6孔板中，浓度为2×106个细胞/孔。细胞铺板后24小时，将人IL-28和IL-29加入到培养物中，达到浓度为20ng/ml。作为对照，细胞用鼠IFN(阳性对照)刺激或不刺激(阴性)。加入CHO源的人IL-28A(SEQ ID NO：2)或IL-29(SEQ ID NO：4)后第8、24、48和72小时时收获细胞。利用RNAEasy-kit_(Qiagen，Valencia，CA)从细胞沉淀中分离RNA。用DNase(Millipore，Billerica，MA)处理RNA以除去RNA中任何污染的DNA。用Perkin-Elmer RT混合物生成cDNA。用鼠OAS、Pkr和Mx1的特异引物和探针，通过实时PCR来评估ISG基因诱导。为了获得定量数据，HPRT实时PCR与ISG PCR联用。用得自IFN刺激的鼠PBL的已知量RNA得到标准曲线。所有数据显示为相对于内部HPRT表达的表达量。
人IL-28A和IL-29在鼠肝细胞系AML-12中刺激ISG诱导，这证实了与I型IFN不同，IL-28/29家族的蛋白质显示出交叉物种反应性。
              表31
  刺激   OAS   PkR   Mx1
  无   0.001   0.001   0.001
  人IL-28   0.04   0.02   0.06
  人IL-29   0.04   0.02   0.07
  鼠IL-28   0.04   0.02   0.08
  鼠IFNα   0.02   0.02   0.01
所有所示数据都表示为相对于HPRT基因表达的倍数
ng  of OAS mRNA＝相对于内部持家基因(HPRT)的OAS mRNA量的标准化值ng of HPRT mRNA
例如，48小时时间点的数据如下所示。
                      表32
AML12的
 Mx1诱导倍数  OAS诱导倍数  Pkr诱导倍数
  MetIL-29-PEG  728  614  8
  MetIL-29C172S-PEG  761  657  8
用20ng/ml metIL-29-PEG或metIL-29C172S-PEG刺激细胞24小时。
所示的数据针对HPRT标准化，并显示为相对于未刺激细胞的诱导倍数。
                     实施例36
       在表达人IL-29的转基因鼠的脾中高效诱导ISG
产生转基因(Tg)鼠，其在Eu-lck启动子控制下表达人IL-29。为了研究人IL-29是否在鼠体内具有生物活性，通过在Eu-lck IL-29转基因鼠脾中进行实时PCR来分析ISG的表达。
利用在Eu-lck启动子控制下表达人IL-29基因的构建体，产生转基因鼠(C3H/C57BL/6)。该启动子在T细胞和B细胞中是有活性的。在约10周前处死转基因鼠和它们的非转基因同窝鼠(n＝2/组)。分离鼠的脾。利用RNAEasy-kit_(Qiagen)从细胞沉淀中分离RNA。用Dnase处理RNA以除法RNA中的任何污染DNA。用Perkin-Elmer RT_混合物生成cDNA。用鼠OAS、Pkr和Mx1的特异引物和探针(5’FAM，3’NFQ)，通过实时PCR来评估ISG基因诱导。为了获得定量数据，将HPRT实时PCR与ISG PCR联用。另外，用IFN刺激的鼠PBL的已知量得到标准曲线。所有数据以相对于内部HPRT表达的表达量显示。
分离自IL-29Tg鼠的脾显示出相对于它们的非Tg同窝鼠对照，高度诱导ISG OAS、Pkr和Mx1，这提示人IL-29在鼠体内有生物活性。
            表33
  鼠   OAS   PkR   Mx1
  非Tg   4.5   4.5   3.5
  IL-29Tg   12   8   21
所示的所有数据都是相对于HPRT基因表达的表达倍数。所示的是2只鼠中的平均表达量。
                       实施例37
    人IL-28和IL-29蛋白在鼠的肝、脾和血中诱导ISG基因表达
为了确定人IL-28和IL-29是否在体内诱导干扰素刺激基因，将CHO源的IL-28A和IL-29蛋白注射进鼠。另外，如上所述，利用MetIL-29C172S-PEG和MetIL-29-PEG，也在体内试验中测试来自于E.coli的IL-29。在不同时间点并以不同剂量，在鼠的血、脾和肝中测定ISG基因诱导。
用一系列剂量(10μg-250μg)的CHO源人IL-28A和IL-29或MetIL-29C172S-PEG和MetIL-29C16-C113-PEG腹膜内或静脉内注射C57BL/6鼠，在不同时间点(1hr-48hr)处死鼠。从鼠中分离脾和肝，并分离RNA。还从血细胞中分离RNA。将细胞沉淀并用RNAEasy_试剂盒(Qiagen)从沉淀中分离RNA。用DNase(Amicon)处理RNA以除去RNA中的任何污染DNA。用Perkin-Elmer RT混合物(Perkin-Elmer)生成cDNA。用鼠OAS、Pkr和Mx1的特异引物和探针，通过实时PCR来评估ISG基因诱导。为了获得定量数据，将HPRT实时PCR与ISG PCR联用。另外，用IFN刺激的鼠PBL的已知量得到标准曲线。所有数据以相对于内部HPRT表达的表达量显示。
人IL-29以依赖于剂量的方式在鼠的肝、脾和血中诱导ISG基因表达(OAS、Pkr、Mx1)。ISG的表达在注射后1-6小时之间达到峰值，并显示出在长达48小时内有高出对照鼠的持续表达。在该实验中，人IL-28A不诱导ISG基因表达。
                          表34
  注射   OAS-1hr   OAS-6hr   OAS-24hr   OAS-48hr
  非肝   1.6   1.6   1.6   1.6
  IL-29肝   2.5   4   2.5   2.8
  非脾   1.8   1.8   1.8   1.8
  IL-29脾   4   6   3.2   3.2
  非血   5   5   5   5
  IL-29血   12   18   11   10
所示结果都是相对于HPRT基因表达的表达倍数。以单剂量静脉注射250μg的IL-29诱导肝OAS的样品数据组如下所示。所示的是5只不同动物/组的平均表达量。
        表35
  注射  OAS(24hr)
  无  1.8
  IL-29 10μg  3.7
  IL-29 50μg  4.2
  IL-29 250μg  6
                             表36
MetIL-29-PEG                     MetIL-29C 172S-PEG                  天然的
  3hr   6hr   12hr   24hr   3hr   6hr   12hr   24hr   24hr
  PKR   18.24   13.93   4.99   3.77   5.29   5.65   3.79   3.55   3.70
  OAS   91.29   65.93   54.04   20.81   13.42   13.02   10.54   8.72   6.60
  Mx1   537.51   124.99   33.58   35.82   27.89   29.34   16.61   0.00   10.98
对鼠通过静脉注射100μg蛋白质。所示数据是相对于鼠肝中HPRT表达量的表达倍数。从鼠血和脾中得到相似的数据。
                                 实施例38
                 IL-28和IL-29诱导鼠中的ISG蛋白
为了分析人IL-28和IL-29对ISG蛋白(0AS)诱导的作用，对来自于用IL-28和IL-29处理的鼠的血清和血浆测试OAS活性。
用PBS或一系列浓度(10μg-250μg)的人IL-28或IL-29静脉注射C57BL/6鼠。在不同时间点从鼠中分离血清和血浆，并用来自Eiken Chemicals(Tokyo，日本)的OAS放射免疫测试(RIA)试剂盒测定OAS活性。
IL-28和IL-29在鼠的血清和血浆中诱导了OAS活性，这显示这些蛋白有体内生物活性。
                        表37
  注射   OAS-1hr   OAS-6hr   OAS-24hr   OAS-48hr
  无   80   80   80   80
  IL-29   80   80   180   200
OAS活性是以pmol/dL血浆的形式来显示的，其针对人IL-29的一种浓度(250μg)。
                          实施例39
             IL-28和IL-29抑制鼠中的腺病毒病理情况
为了测试IL-28和IL-29抗感染肝的病毒的抗病毒活性，在鼠中针对表达内部绿色荧光蛋白(GFP)基因的感染性腺病毒载体测试测试样品。静脉内注射时，这些病毒主要以肝为靶位进行基因表达。腺病毒是复制缺陷性的，但由于炎症细胞渗透而造成肝损伤，其可由测定像AST和ALT这类的肝酶的血清水平或直接检查肝病理状况来检测。
向C57B1/6鼠每天一次腹腔内注射50μg鼠IL-28(如SEQ ID NO：8所示的zcyto24)或metIL-29C172S-PEG，进行3天。用PBS注射对照动物。第3次给药后1小时，对鼠单次大剂量尾静脉内注射腺病毒载体AdGFP(1×109噬斑形成单位(pfu))。这之后，隔天向鼠额外给药PBS、鼠IL-28或metIL-29C172S-PEG，额外进行4次给药(总共7次)。最后一次给药PBS、鼠IL-28或metIL-29C172S-PEG后一小时，最后对鼠放血并处死。分析血清和肝组织。分析血清的AST和ALT肝酶。分离肝并用于分析GFP表达和组织学情况。对于组织学情况，用福尔马林固定肝标本，然后包埋在石蜡中，接着H & E染色。用光学显微镜检查经过盲处理的肝切片。记录变化，并以设计成测量肝病理和炎症情况的尺度进行评分。
如肝荧光所测量的，鼠IL-28和IL-29抑制腺病毒感染和基因表达。经PBS处理的鼠(n＝8)的平均相对肝荧光为52.4(任意单位)。相反，经IL-28处理的鼠(n＝8)的相对肝荧光为34.5，而经IL-29处理的鼠(n＝8)的相对肝荧光为38.9。如血清ALT和AST水平以及组织学所测量的，腺病毒感染和基因表达的减弱导致肝病理情况减轻。经PBS处理的鼠(n＝8)的平均血清AST为234U/L(单位/升)，而血清ALT为250U/L。相反，经IL-28处理的鼠(n＝8)的平均血清AST为193U/L，血清ALT为216U/L，而经IL-29处理的鼠(n＝8)的平均血清AST为162U/，血清ALT为184U/L。另外，肝组织学情况显示，给予了鼠IL-28或IL-29的鼠比PBS处理组有更低的肝和炎症得分。在肝细胞中，IL-29组的肝也比PBS处理组有更少的窦状细胞增殖、更少的有丝分裂象和更少的改变(如形成空泡，、存在多核、肝细胞变大)。这些数据证实，鼠IL-28和IL-29具有抗肝营养性病毒的抗病毒活性。
                          实施例40
                          LCMV模型
具有淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)感染的鼠是极好的急性和慢性感染的模型。这些模型被用于评估细胞因子对抗病毒免疫应答的作用以及IL-28和IL-29对病毒荷载量和抗病毒免疫应答的作用。使用2种模型：LCMVArmstrong(急性)感染和LCMV克隆13(慢性)感染。(参见，如，Wherry等，J.Virol.77：4911-4927，2003；Blattman等，Nature Med.9(5)：540-547，2003；Hoffman等，J.Immunol.170：1339-1353，2003。)响应于病毒有3个CD8 T细胞发展阶段：1)膨胀，2)收缩，和3)记忆(急性模型)。对于急性和慢性模型，在每个阶段注射IL-28或1L-29。在慢性模型中，在感染后60天注射IL-28或IL-29，用以评估IL-28或IL-29对持久病毒荷载量的影响。对于急性和慢性模型，注射IL-28或IL-29，并检查在血、脾和肝中的病毒荷载量。其他检测参数包括：流式四聚体染色来计数LCMV特异性CD8+T细胞；用它们的关联LCMV抗原刺激时四聚物+细胞产生细胞因子的能力；和LCMV特异性CD8+T细胞响应于它们的关联LCMV抗原的增殖能力。通过流式细胞术对LCMV特异性T细胞进行表型分类，用以评估细胞活化和分化状态。而且检查LCMV特异性CTL裂解含它们的关联LCMV抗原的靶细胞的能力。还评估LCMV特异性CD4+T细胞的数目和功能。
测定用IL-28或IL-29处理后病毒荷载量的减少情况。任何器官、尤其是肝中病毒荷载量的50％下降将是显著的。对于经IL-28或IL-29处理的鼠，增殖、制造细胞因子或显示出成熟表型的四聚体阳性T细胞相对于未处理的鼠增加20％也被认为是显著的。
IL-28或IL-29注射导致病毒荷载量的减少是由于更有效控制病毒感染而造成的，尤其是在慢性模型中，其中未处理时病毒滴度在长期一段时间中保持升高水平。相对于未处理鼠而言病毒滴度降低2倍被认为是显著的。
                      实施例41
               急性病毒感染的流感模型
A.测试抗病毒活性的预实验
为了测定IL-28或IL-29对流感病毒造成的急性感染的抗病毒活性，用被流感感染的c57B 1/6鼠进行体外研究，其使用了以下方案：
动物：6周大的雌性BALB/c鼠(Charles River)，148只鼠，每组30只。
分组：(1)绝对对照(未感染的)，平行进行，以测定抗体滴度和组织病理学状况(每组2只动物)
(2)载体(腹膜内注射)盐水
(3)金刚烷胺(阳性对照)，5天间10mg/天(per os)，感染前2小时开始
(4)IL-28或IL-29处理的(5μg，腹膜内注射，感染后2小时开始)
(5)IL-28或IL-29(25μg，腹膜内注射，感染后2小时开始)
(6)IL-28或IL-29(125μg，腹膜内注射，感染后2小时开始)
第0天-除了绝对对照，所有动物用流感病毒感染
对于病毒荷载量(LD50下为10)
对于免疫学测验(LD30)
第0-9天-每天注射IL-28或IL-29(腹膜内注射)
记录体重和一般表现(3次/周)
第3天-每天组处死8只动物
右肺的病毒荷载量(TCID50)
左肺的组织病理学状况
血液样品的抗体滴定第10天-处死所有活着的动物，收集血液样品用于抗体滴定，分离肺淋巴细胞(3次4级)用于进行直接CTL试验(在所有5组中)，并对以下标记进行定量免疫表型确定：CD3/CD4、CD3/CD8、CD3/CD8/CD11b、CD8/CD44/CD62L、CD3/DX5、GR-1/F480和CD19。
第2号研究
利用8周大的雌性C57B1/6鼠(Charles River)进行IL-28或IL-29在感染了鼠适应用病毒的C57B1/6鼠中的功效研究。
组1：载体(腹膜内注射)
组2：阳性对照：抗流感中和抗体(山羊抗流感A/USSR(H1N1)(ChemiconInternational，Temecula，CA)；40μg/鼠，在感染(10μl鼻内)后2h和4h
组3：IL-28或IL-29(5μg，腹膜内注射)
组4：IL-28或IL-29(25μg，腹膜内注射)
组5：IL-28或IL-29(125μg，腹膜内注射)
进行后续生命观察和免疫学试验：
第0天-所有动物用流感病毒感染(实验2中确定的剂量)
第0-9天-每天注射IL-28或IL-29(腹膜内注射)
每隔一天记录体重和一般表现
第10天-处死所有活着的动物并进行病毒实验以确定肺中的病毒荷载量
分离肺淋巴细胞(利用EL-4作为靶位并使用不同的E∶T比率(基于实验1和2的最佳结果进行肺中的直接CTL测定)。
四聚体染色：含流感病毒A核蛋白(NP)表位的结合MHC I型四聚体的CD8+T细胞数用MHC I型和病毒肽FLU-NP366-374/Db(ASNENMETM)(LMCV肽/Db)来评估。
定量免疫分型如下：CD8、四聚体、细胞内IFNγ、NK1.1、CD8、四聚体、CD62L、CD44、CD3(+或-)、NK1.1(+)、细胞内IFNγ、CD4、CD8、NK1.1、DX5、CD3(+或-)、NK1.1、DX5、四聚体，单色样品用于细胞计调节。
存活/重刺激研究
第30天：用不同剂量的IL-28或IL-29或者用阳性抗流感病毒抗体对照处理9天来研究鼠的存活状况。测量体重和个体血清样品中抗体(总抗体，IgG1，IgG2a，IgG2b)的产生。
重刺激研究：
第0天：2组都用A/PR病毒(1LD30)感染。
不处理组6。
组7用125μg IL-28或IL-29处理9天。
第30天：存活研究
测量体重和个体血清样品中抗体(总抗体，IgG1，IgG2a，IgG2b)的产生。
第60天：重刺激研究
每组中存活个体分成2个小组
组6A和7A用A/PR病毒(1 LD30)重刺激。
组6B和7B用A/PR病毒(1 LD30)重刺激。
跟踪检视2组并确定处死的日期。测量体重和个体血清样品中抗体(总抗体，IgG1，IgG2a，IgG2b)的产生。
                           实施例42
   IL-28和IL-29在体内具有抗乙型肝炎病毒(HBV)的抗病毒活性
转基因鼠模型(Guidotti等，J.Virology 69：6158-6169，1995)可高水平复制感染性HBV，已将其用作HBV感染的化疗模型。用抗病毒药物处理转基因鼠，处理后测量转基因鼠肝和血清中的HBV DNA和RNA水平。处理后，也可测量转基因鼠血清中的HBV蛋白水平。该模型被用于评估拉米夫啶和IFN-α降低HBV病毒滴度的效果。
每隔一天向HBV TG鼠(雄性)腹膜内注射2.5、25或250微克IL-28或IL-29，进行14天(共8剂)。在处理日(第0天)和第7天对鼠放血收集血清。给予最后一剂IL-29后1小时，对鼠最后放血并处死。分析血清和肝的肝HBV DNA、肝HBV RNA、血清HBV DNA、肝HBc，、血清Hbe和血清HBs。
应答IL-28或IL-29的肝HBV DNA、肝HBV RNA、血清HBV DNA、肝HBc，、血清Hbe或血清HBs的减少反映了这些化合物抗HBV的抗病毒活性。
                         实施例43
   IL-28和IL-29抑制人疱疹病毒-8(HHV-8)在BCBL-1细胞中的复制
在体外感染系统中，利用B淋巴样细胞系BCBL-1来测定IL-28和IL-29针对HHV-8的抗病毒活性。
在HHV-8试验中，在各以半对数稀释的五个浓度下对测试化合物和ganciclovir对照进行测定。最终用TaqMan PCR扩增胞外HHV-8 DNA(IC50)，并用CellTiter96_试剂(TC50；Promega，Madison，WI)测定细胞数。简而言之，将BCBL-1细胞铺于96-孔微量滴定板中。16-24小时后洗细胞并用含各种浓度的测试化合物的完全培养基来替换培养基，一式三份。Ganciclovir是阳性对照，而单独培养基作为阴性对照(病毒对照，VC)。3天后用含合适稀释度的测试化合物的新鲜培养基替换培养基。初次给药测试化合物后6天，收集细胞培养物上清液，用蛋白酶和DNAse处理，然后用于进行实时定量TaqMan PCR试验。通过监测荧光信号的增加来实时检测PCR扩增的HHV-8 DNA，所述荧光信号是由外切核酸酶降解与扩增的HHV-8 DNA杂交的淬灭荧光探针分子而造成的。对于每次PCR扩增，用纯化的HHV-8 DNA稀释液同时产生标准曲线。由HHV-8 DNA水平的降低(IC50)来计算抗病毒活性。然后利用新的染料摄入试验测量细胞生存能力，其用于计算毒性(TC50)。治疗指数(TI)以TC50/IC50计算。
IL-28和IL-29抑制BCBL-1细胞中的HHV-8病毒复制。IL-28A具有1μg/ml的IC50和＞10μg/ml的TC50(TI＞10)。IL-29具有6.5μg/ml的IC50和＞10μg/ml的TC50(TI＞1.85)。MetIL-29C172S-PEG具有0.14μg/ml的IC50和＞10μg/ml的TC50(TI＞100)。
                     实施例44
    IL-28和IL-29抗Epstein Barr病毒(EBV)的抗病毒活性
在体外感染系统中，利用B淋巴样细胞系P3HR-1来测定IL-28和IL-29抗EBV的抗病毒活性。在EBV试验中，在各以半对数系列稀释的五个浓度下对测试化合物和对照进行测试。最终用TaqMan PCR扩增胞外EBV DNA(IC50)，并用CellTiter96_试剂(TC50；Promega)测量细胞数。简而言之，将P3HR-1细胞铺于96-孔微量滴定板中。16-24小时后洗细胞并用含各种浓度的测试化合物的完全培养基来替换培养基，一式三份。除了阳性对照之外，向细胞单加培养基作为阴性对照(病毒对照，VC)。3天后，用含合适稀释度的测试化合物的新制培养基替换培养基。初次给药测试化合物后6天，收集细胞培养物上清液，用蛋白酶和DNAse处理，然后用于进行实时定量TaqMan PCR试验。通过监测荧光信号的增加来实时检测PCR扩增的EBV DNA，所述荧光信号是由外切核酸酶降解与扩增的EBV DNA杂交的淬灭荧光探针分子而产生的。对于每次PCR扩增，用纯化的EBV DNA稀释液同时产生标准曲线。由EBV DNA水平的降低(IC50)来计算抗病毒活性。然后利用新的染料摄入试验测量细胞生存能力，其用于计算毒性(TC50)。治疗指数(TI)以TC50/IC50计算。
                        实施例45
    IL-28和IL-29抗单纯疱疹病毒-2(HSV-2)的抗病毒活性
在体外感染系统中，在Vero细胞中测定IL-28和IL-29的抗HSV-2的抗病毒活性。在抑制致细胞病变效应试验(CPE)中评估IL-28和IL-29的抗病毒作用。试验包括通过细胞致病性HSV-2病毒杀死Vero细胞以及通过IL-28和IL-29抑制细胞死亡。Vero细胞在Dulbecco改良基本培养基(DMEM)中繁殖，所述培养基含酚红和10％马血清、1％谷氨酰胺和1％青霉素-链霉素，而在不含酚红并含2％ FBS、1％谷氨酰胺和1％青霉素-链霉素的DMEM中进行CPE抑制试验。在试验前那天，细胞用胰蛋白酶水解(1％胰蛋白酶-EDTA)，洗涤，计数并以104个细胞/孔铺于96孔平底BioCoat_平板(Fisher Scientific，Pittsburgh，PA)，体积为100μl/孔。第二天早晨，去除培养基并向细胞加入预先滴定的病毒等分试样。所用的病毒量是将在最大CPE发展时产生完全细胞死亡(＞80％)的最大稀释度。根据厂商说明书，使用Vmax平板读数计(Molecular Devices，Sunnyvale，CA)，利用CellTiter96_试剂(Promega)确定细胞存活力。分别以在试验培养基中接半对数稀释的六种浓度测试化合物。无环鸟苷用作阳性对照。在病毒感染时加入化合物。相对于对照测定每种浓度下的平均背景和药物颜色校正数据，以确定CPE降低百分比和细胞存活力百分比，并相对于TC50计算IC50。
IL-28A、IL-29和MetIL-29C172S-PEG在该试验中不抑制细胞死亡(＞10ug/ml的IC50)。在该试验中也没有IFN的抗病毒活性。
本文所引用的所有专利、专利申请、公开文献和可获得的电子资料(如，GenBank氨基酸和核苷酸序列提交文件)的全文都纳入本文参考。前文的具体描述和实施例仅仅是为了清楚理解而给出的。从中不应理解成有不必要的限制。本发明不限于具体所示和所述的确切内容，因为对本领域技术人员显而易见的变化将包括在由权利要求书所限定的发明内。
                           序列表
<110>ZymoGenetics，Inc
<120>IL-28和IL-29的均一化制剂
<130>03-10PC
<150>US 60/493,194
<151>2003-08-07
<150>US 60/551,841
<151>2004-03-10
<150>US 60/559,142
<151>2004-04-02
<160>161
<170>FastSEQ for Windows Version 4.0
<210>1
<211>734
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<221>sig_peptide
<222>(53)...(127)
<221>mat_peptide
<222>(128)...(655)
<221>CDS
<222>(53)...(655)
<400>1
tgggtgacag cctcagagtg tttcttctgc tgacaaagac cagagatcag ga atg aaa 58
                                                          Met Lys
                                                          -25
cta gac atg act ggg gac tgc acg cca gtg ctg gtg ctg atg gcc gca   106
Leu Asp Met Thr Gly Asp Cys Thr Pro Val Leu Val Leu Met Ala Ala
            -20                 -15                 -10
gtg ctg acc gtg act gga gca gtt cct gtc gcc agg ctc cac ggg gct   154
Val Leu Thr Val Thr Gly Ala Val Pro Val Ala Arg Leu His Gly Ala
        -5                  1               5
ctc ccg gat gca agg ggc tgc cac ata gcc cag ttc aag tcc ctg tct   202
Leu Pro Asp Ala Arg Gly Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser
 10                  15                  20                  25
cca cag gag ctg cag gcc ttt aag agg gcc aaa gat gcc tta gaa gag   250
Pro Gln Glu Leu Gln Ala Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu
                 30                  35                  40
tcg ctt ctg ctg aag gac tgc agg tgc cac tcc cgc ctc ttc ccc agg   298
Ser Leu Leu Leu Lys Asp Cys Arg Cys His Ser Arg Leu Phe Pro Arg
             45                  50                  55
acc tgg gac ctg agg cag ctg cag gtg agg gag cgc ccc atg gct ttg   346
Thr Trp Asp Leu Arg Gln Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Met Ala Leu
         60                  65                  70
gag gct gag ctg gcc ctg acg ctg aag gtt ctg gag gcc acc gct gac    394
Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp
     75                  80                  85
act gac cca gcc ctg gtg gac gtc ttg gac cag ccc ctt cac acc ctg    442
Thr Asp Pro Ala Leu Val Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu
 90                  95                 100                 105
cac cat atc ctc tcc cag ttc cgg gcc tgt atc cag cct cag ccc acg    490
His His Ile Leu Ser Gln Phe Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr
                110                 115                 120
gca ggg ccc agg acc cgg ggc cgc ctc cac cat tgg ctg tac cgg ctc    538
Ala Gly Pro Arg Thr Arg Gly Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu
            125                 130                 135
cag gag gcc cca aaa aag gag tcc cct ggc tgc ctc gag gcc tct gtc    586
Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val
        140                 145                 150
acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg cga gac ctg aat tgt gtt gcc    634
Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala
    155                 160                 165
agt ggg gac ctg tgt gtc tga ccctcccacc agtcatgcaa cctgagattt       685
Ser Gly Asp Leu Cys Val  *
170                 175
tatttataaa ttagccactt gtcttaattt attgccaccc agtcgctat              734
<210>2
<211>200
<212>PRT
<213>人
<220>
<221>信号
<222>(1)...(25)
<400>2
Met Lys Leu Asp Met Thr Gly Asp Cys Thr Pro Val Leu Val Leu Met
-25                 -20                 -15                 -10
Ala Ala Val Leu Thr Val Thr Gly Ala Val Pro Val Ala Arg Leu His
                -5                   1               5
Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser
        10                  15                  20
Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu
    25                  30                  35
Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp Cys Arg Cys His Ser Arg Leu Phe
40                  45                  50                  55
Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Met
                60                  65                  70
Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr
            75                  80                  85
Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Val Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His
        90                  95                  100
Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Phe Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln
    105                 110                 115
Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg Gly Arg Leu His His Trp Leu Tyr
120                 125                 130                 135
Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala
                140                 145                 150
Ser Val Thr Phe Asn Lau Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys
            155                 160                 165
Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
        170                 175
<210>3
<211>856
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>sig_peptide
<222>(98)...(154)
<221>mat_peptide
<222>(155)...(700)
<221>CDS
<222>(98)...(700)
<400>3
aattaccttt tcactttaca cacatcatct tggattgccc attttgcgtg gctaaaaagc  60
agagccatgc cgctggggaa gcagttgcga tttagcc atg gct gca gct tgg acc   115
                                         Met Ala Ala Ala Trp Thr
                                                         -15
gtg gtg ctg gtg act ttg gtg cta ggc ttg gcc gtg gca ggc cct gtc    163
Val Val Leu Val Thr Leu Val Leu Gly Leu Ala Val Ala Gly Pro Val
            -10                  -5                 1
ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc tgc cac att ggc agg    211
Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His Ile Gly Arg
     5                   10                  15
ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc aag aag gcc agg    259
Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys Lys Ala Arg
20                  25                  30                  35
gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg agt tgc agc tct    307
Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser Cys Ser Ser
                 40                  45                  50
cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc cag gtg agg gag    355
Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln Val Arg Glu
             55                  60                  65
cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg ctg aag gtc ctg    403
Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys Val Leu
         70                  75                  80
gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta gac cag ccc ctt    451
Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu
     85                  90                  95
cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc tgt atc cag cct    499
His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys Ile Gln Pro
100                 105                 110                 115
cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc cac cac tgg ctg    547
Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His His Trp Leu
                120                 125                 130
cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct ggc tgc ctg gag    595
His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly Cys Leu Glu
            135                 140                 145
gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg cga gac ctc aaa    643
Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu Lys
        150                 155                 160
tat gtg gcc gat ggg aac ctg tgt ctg aga acg tca acc cac cct gag    691
Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Cys Leu Arg Thr Ser Thr His Pro Glu
    165                 170                 175
tcc acc tga caccccacac cttatttatg cgctgagccc tactccttcc            740
Ser Thr  *
180
ttaatttatt tcctctcacc ctttatttat gaagctgcag ccctgactga gacatagggc  800
tgagtttatt gttttacttt tatacattat gcacaaataa acaacaagga attgga      856
<210>4
<211>200
<212>PRT
<213>人
<220>
<221>信号
<222>(1)...(19)
<400>4
 Met Ala Ala Ala Trp Thr Val Val Leu Val Thr Leu Val Leu Gly Leu
                 -15                 -10                 -5
Ala Val Ala Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys
             1               5                  10
Gly Cys His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala
    15                  20                  25
Ser Phe Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys
30                  35                  40                  45
Asn Trp Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg
                50                  55                  60
Leu Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala
            65                  70                  75
Leu Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp
        80                  85                  90
Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu
    95                  100                 105
Gln Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly
110                 115                 120                 125
Arg Leu His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu
                130                 135                 140
Ser Ala Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu
            145                 150                 155
Leu Thr Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Cys Leu Arg
        160                 165                 170
Thr Ser Thr His Pro Glu Ser Thr
    175                 180
<210>5
<211>734
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>sig_peptide
<222>(53)...(127)
<221>mat_peptide
<222>(128)...(655)
<221>CDS
<222>(53)...(655)
<400>5
tgggtgacag cctcagagtg tttcttctgc tgacaaagac cagagatcag ga atg aaa  58
                                                          Met Lys
                                                          -25
cta gac atg acc ggg gac tgc atg cca gtg ctg gtg ctg atg gcc gca    106
Leu Asp Met Thr Gly Asp Cys Met Pro Val Leu Val Leu Met Ala Ala
            -20                 -15                 -10
gtg ctg acc gtg act gga gca gtt cct gtc gcc agg ctc cgc ggg gct    154
Val Leu Thr Val Thr Gly Ala Val Pro Val Ala Arg Leu Arg Gly Ala
         -5                 1               5
ctc ccg gat gca agg ggc tgc cac ata gcc cag ttc aag tcc ctg tct    202
Leu Pro Asp Ala Arg Gly Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser
10                  15                  20                  25
cca cag gag ctg cag gcc ttt aag agg gcc aaa gat gcc tta gaa gag    250
Pro Gln Glu Leu Gln Ala Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu
                 30                  35                  40
tcg ctt ctg ctg aag gac tgc aag tgc cgc tcc cgc ctc ttc ccc agg    298
Ser Leu Leu Leu Lys Asp Cys Lys Cys Arg Ser Arg Leu Phe Pro Arg
             45                  50                  55
acc tgg gac ctg agg cag ctg cag gtg agg gag cgc ccc gtg gct ttg    346
Thr Trp Asp Leu Arg Gln Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu
         60                  65                  70
gag gct gag ctg gcc ctg acg ctg aag gtt ctg gag gcc acc gct gac    394
Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp
     75                  80                  85
act gac cca gcc ctg ggg gat gtc ttg gac cag ccc ctt cac acc ctg    442
Thr Asp Pro Ala Leu Gly Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu
 90                  95                 100                 105
cac cat atc ctc tcc cag ctc cgg gcc tgt atc cag cct cag ccc acg    490
His His Ile Leu Ser Gln Leu Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr
                110                 115                 120
gca ggg ccc agg acc cgg ggc cgc ctc cac cat tgg ctg cac cgg ctc    538
Ala Gly Pro Arg Thr Arg Gly Arg Leu His His Trp Leu His Arg Leu
            125                 130                 135
cag gag gcc cca aaa aag gag tcc cct ggc tgc ctc gag gcc tct gtc    586
Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val
        140                 145                 150
acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg cga gac ctg aat tgt gtt gcc    634
Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala
    155                  60                 165
agc ggg gac ctg tgt gtc tga cccttccgcc agtcatgcaa cctgagattt       685
Ser Gly Asp Leu Cys Val  *
170                 175
tatttataaa ttagccactt ggcttaattt attgccaccc agtcgctat              734
<210>6
<211>200
<212>PRT
<213>人
<220>
<221>信号
<222>(1)...(25)
<400>6
Met Lys Leu Asp Met Thr Gly Asp Cys Met Pro Val Leu Val Leu Met
-25                 -20                 -15                 -10
Ala Ala Val Leu Thr Val Thr Gly Ala Val Pro Val Ala Arg Leu Arg
                -5                   1               5
Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser
        10                  15                  20
Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu
    25                  30                  35
Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp Cys Lys Cys Arg Ser Arg Leu Phe
40                  45                  50                  55
Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val
                60                  65                  70
Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr
            75                  80                  85
Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Gly Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His
        90                  95                  100
Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln
    105                 110                 115
Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg Gly Arg Leu His His Trp Leu His
120                 125                 130                 135
Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala
                140                 145                 150
Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys
            155                 160                 165
Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
        170                 175
<210>7
<211>633
<212>DNA
<213>Mus musculus
<220>
<221>sig_peptide
<222>(22)...(105)
<221>mat_peptide
<222>(106)...(630)
<221>CDS
<222>(22)...(630)
<400>7
tcacagaccc cggagagcaa c atg aag cca gaa aca gct ggg ggc cac atg    51
                        Met Lys Pro Glu Thr Ala Gly Gly His Met
                                    -25                 -20
ctc ctc ctg ctg ttg cct ctg ctg ctg gcc gca gtg ctg aca aga acc    99
Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Leu Ala Ala Val Leu Thr Arg Thr
            -15                 -10                  -5
caa gct gac cct gtc ccc agg gcc acc agg ctc cca gtg gaa gca aag    147
Gln Ala Asp Pro Val Pro Arg Ala Thr Arg Leu Pro Val Glu Ala Lys
        1               5                   10
gat tgc cac att gct cag ttc aag tct ctg tcc cca aaa gag ctg cag    195
Asp Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Lys Glu Leu Gln
 15                  20                  25                  30
gcc ttc aaa aag gcc aag gat gcc atc gag aag agg ctg ctt gag aag    243
Ala Pne Lys Lys Ala Lys Asp Ala Ile Glu Lys Arg Leu Leu Glu Lys
                 35                  40                  45
gac ctg agg tgc agt tcc cac ctc ttc ccc agg gcc tgg gac ctg aag    291
Asp Leu Arg Cys Ser Ser His Leu Phe Pro Arg Ala Trp Asp Leu Lys
             50                  55                  60
cag ctg cag gtc caa gag cgc ccc aag gcc ttg cag gct gag gtg gcc    339
Gln Leu Gln Val Gln Glu Arg Pro Lys Ala Leu Gln Ala Glu Val Ala
         65                  70                  75
ctg acc ctg aag gtc tgg gag aac atg act gac tca gcc ctg gcc acc    387
Leu Thr Leu Lys Val Trp Glu Asn Met Thr Asp Ser Ala Leu Ala Thr
     80                  85                  90
atc ctg ggc cag cct ctt cat aca ctg agc cac att cac tcc cag ctg    435
Ile Leu Gly Gln Pro Leu His Thr Leu Ser His Ile His Ser Gln Leu
 95                 100                 105                 110
cag acc tgt aca cag ctt cag gcc aca gca gag ccc agg tcc ccg agc    483
Gln Thr Cys Thr Gln Leu Gln Ala Thr Ala Glu Pro Arg Ser Pro Ser
                115                 120                 125
cgc cgc ctc tcc cgc tgg ctg cac agg ctc cag gag gcc cag agc aag    531
Arg Arg Leu Ser Arg Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Gln Ser Lys
            130                 135                 140
gag acc cct ggc tgc ctg gag gcc tct gtc acc tcc aac ctg ttt cgc    579
Glu Thr Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Ser Asn Leu Phe Arg
        145                 150                  55
ctg ctc acc cgg gac ctc aag tgt gtg gcc aat gga gac cag tgt gtc    627
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Lys Cys Val Ala Asn Gly Asp Gln Cys Val
    160                 165                 170
tga cct                                                            633
 *
<210>8
<211>202
<212>PRT
<213>Mus musculus
<220>
<221>信号
<222>(1)...(28)
<400>8
Met Lys Pro Glu Thr Ala Gly Gly His Met Leu Leu Leu Leu Leu Pro
            -25                 -20                 -15
Leu Leu Leu Ala Ala Val Leu Thr Arg Thr Gln Ala Asp Pro Val Pro
        -10                 -5                   1
Arg Ala Thr Arg Leu Pro Val Glu Ala Lys Asp Cys His Ile Ala Gln
 5                  10                  15                  20
Phe Lys Ser Leu Ser Pro Lys Glu Leu Gln Ala Phe Lys Lys Ala Lys
                25                  30                  35
Asp Ala Ile Glu Lys Arg Leu Leu Glu Lys Asp Leu Arg Cys Ser Ser
            40                  45                  50
His Leu Phe Pro Arg Ala Trp Asp Leu Lys Gln Leu Gln Val Gln Glu
        55                  60                  65
Arg Pro Lys Ala Leu Gln Ala Glu Val Ala Leu Thr Leu Lys Val Trp
    70                  75                  80
Glu Asn Met Thr Asp Ser Ala Leu Ala Thr Ile Leu Gly Gln Pro Leu
85                  90                  95                  100
His Thr Leu Ser His Ile His Ser Gln Leu Gln Thr Cys Thr Gln Leu
                105                 110                 115
Gln Ala Thr Ala Glu Pro Arg Ser Pro Ser Arg Arg Leu Ser Arg Trp
            120                 125                 130
Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Gln Ser Lys Glu Thr Pro Gly Cys Leu
        135                 140                 145
Glu Ala Ser Val Thr Ser Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu
    150                 155                 160
Lys Cys Val Ala Asn Gly Asp Gln Cys Val
165                 170
<210>9
<211>632
<212>DNA
<213>Mus musculus
<220>
<221>sig_peptide
<222>(22)...(105)
<221>mat_peptide
<222>(106)...(630)
<221>CDS
<222>(22)...(630)
<400>9
tcacagaccc cggagagcaa c atg aag cca gaa aca gct ggg ggc cac atg    51
                        Met Lys Pro Glu Thr Ala Gly Gly His Met
                                    -25                 -20
ctc ctc ctg ctg ttg cct ctg ctg ctg gcc gca gtg ctg aca aga acc    99
Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Leu Ala Ala Val Leu Thr Arg Thr
            -15                 -10                  -5
caa gct gac cct gtc ccc agg gcc acc agg ctc cca gtg gaa gca aag    147
Gln Ala Asp Pro Val Pro Arg Ala Thr Arg Leu Pro Val Glu Ala Lys
        1               5                   10
gat tgc cac att gct cag ttc aag tct ctg tcc cca aaa gag ctg cag    195
Asp Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Lys Glu Leu Gln
 15                  20                  25                  30
gcc ttc aaa aag gcc aag ggt gcc atc gag aag agg ctg ctt gag aag    243
Ala Phe Lys Lys Ala Lys Gly Ala Ile Glu Lys Arg Leu Leu Glu Lys
                 35                  40                  45
gac atg agg tgc agt tcc cac ctc atc tcc agg gcc tgg gac ctg aag    291
Asp Met Arg Cys Ser Ser His Leu Ile Ser Arg Ala Trp Asp Leu Lys
             50                  55                  60
cag ctg cag gtc caa gag cgc ccc aag gcc ttg cag gct gag gtg gcc    339
Gln Leu Gln Val Gln Glu Arg Pro Lys Ala Leu Gln Ala Glu Val Ala
         65                  70                  75
ctg acc ctg aag gtc tgg gag aac ata aat gac tca gcc ctg acc acc    387
Leu Thr Leu Lys Val Trp Glu Asn Ile Asn Asp Ser Ala Leu Thr Thr
     80                  85                  90
atc ctg ggc cag cct ctt cat aca ctg agc cac att cac tcc cag ctg    435
Ile Leu Gly Gln Pro Leu His Thr Leu Ser His Ile His Ser Gln Leu
 95                 100                 105                 110
cag acc tgt aca cag ctt cag gcc aca gca gag ccc aag ccc ccg agt    483
Gln Thr Cys Thr Gln Leu Gln Ala Thr Ala Glu Pro Lys Pro Pro Ser
                115                 120                 125
cgc cgc ctc tcc cgc tgg ctg cac agg ctc cag gag gcc cag agc aag    531
Arg Arg Leu Ser Arg Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Gln Ser Lys
            130                 135                 140
gag act cct ggc tgc ctg gag gac tct gtc acc tcc aac ctg ttt caa    579
Glu Thr Pro Gly Cys Leu Glu Asp Ser Val Thr Ser Asn Leu Phe Gln
        145                 150                 155
ctg ctc ctc cgg gac ctc aag tgt gtg gcc agt gga gac cag tgt gtc    627
Leu Leu Leu Arg Asp Leu Lys Cys Val Ala Ser Gly Asp Gln Cys Val
    160                 165                 170
tga cc                                                             632
 *
<210>10
<211>202
<212>PRT
<213>信号
<220>
<221>SIGNAL
<222>(1)...(28)
<400>10
Met Lys Pro Glu Thr Ala Gly Gly His Met Leu Leu Leu Leu Leu Pro
            -25                 -20                 -15
Leu Leu Leu Ala Ala Val Leu Thr Arg Thr Gln Ala Asp Pro Val Pro
        -10                 -5                   1
Arg Ala Thr Arg Leu Pro Val Glu Ala Lys Asp Cys His Ile Ala Gln
 5                  10                  15                  20
Phe Lys Ser Leu Ser Pro Lys Glu Leu Gln Ala Phe Lys Lys Ala Lys
                25                  30                  35
Gly Ala Ile Glu Lys Arg Leu Leu Glu Lys Asp Met Arg Cys Ser Ser
            40                  45                  50
His Leu Ile Ser Arg Ala Trp Asp Leu Lys Gln Leu Gln Val Gln Glu
        55                  60                  65
Arg Pro Lys Ala Leu Gln Ala Glu Val Ala Leu Thr Leu Lys Val Trp
    70                  75                  80
Glu Asn Ile Asn Asp Ser Ala Leu Thr Thr Ile Leu Gly Gln Pro Leu
85                  90                  95                  100
His Thr Leu Ser His Ile His Ser Gln Leu Gln Thr Cys Thr Gln Leu
                105                 110                 115
Gln Ala Thr Ala Glu Pro Lys Pro Pro Ser Arg Arg Leu Ser Arg Trp
            120                 125                 130
Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Gln Ser Lys Glu Thr Pro Gly Cys Leu
        135                 140                 145
Glu Asp Ser Val Thr Ser Asn Leu Phe Gln Leu Leu Leu Arg Asp Leu
    150                 155                 160
Lys Cys Val Ala Ser Gly Asp Gln Cys Val
165                 170
<210>11
<211>520
<212>PRT
<213>人
<400>11
Met Ala Gly Pro Glu Arg Trp Gly Pro Leu Leu Leu Cys Leu Leu Gln
 1               5                  10                  15
Ala Ala Pro Gly Arg Pro Arg Leu Ala Pro Pro Gln Asn Val Thr Leu
            20                  25                  30
Leu Ser Gln Asn Phe Ser Val Tyr Leu Thr Trp Leu Pro Gly Leu Gly
        35                  40                  45
Asn Pro Gln Asp Val Thr Tyr Phe Val Ala Tyr Gln Ser Ser Pro Thr
    50                  55                  60
Arg Arg Arg Trp Arg Glu Val Glu Glu Cys Ala Gly Thr Lys Glu Leu
65                  70                  75                  80
Leu Cys Ser Met Met Cys Leu Lys Lys Gln Asp Leu Tyr Asn Lys Phe
                85                  90                  95
Lys Gly Arg Val Arg Thr Val Ser Pro Ser Ser Lys Ser Pro Trp Val
            100                 105                 110
Glu Ser Glu Tyr Leu Asp Tyr Leu Phe Glu Val Glu Pro Ala Pro Pro
        115                 120                 125
Val Leu Val Leu Thr Gln Thr Glu Glu Ile Leu Ser Ala Asn Ala Thr
    130                 135                 140
Tyr Gln Leu Pro Pro Cys Met Pro Pro Leu Asp Leu Lys Tyr Glu Val
145                 150                 155                 160
Ala Phe Trp Lys Glu Gly Ala Gly Asn Lys Thr Leu Phe Pro Val Thr
                165                 170                 175
Pro His Gly Gln Pro Val Gln Ile Thr Leu Gln Pro Ala Ala Ser Glu
            180                 185                 190
His His Cys Leu Ser Ala Arg Thr Ile Tyr Thr Phe Ser Val Pro Lys
        195                 200                 205
Tyr Ser Lys Phe Ser Lys Pro Thr Cys Phe Leu Leu Glu Val Pro Glu
    210                 215                 220
Ala Asn Trp Ala Phe Leu Val Leu Pro Ser Leu Leu Ile Leu Leu Leu
225                 230                 235                 240
Val Ile Ala Ala Gly Gly Val Ile Trp Lys Thr Leu Met Gly Asn Pro
                245                 250                 255
Trp Phe Gln Arg Ala Lys Met Pro Arg Ala Leu Asp Phe Ser Gly His
            260                 265                 270
Thr His Pro Val Ala Thr Phe Gln Pro Ser Arg Pro Glu Ser Val Asn
        275                 280                 285
Asp Leu Phe Leu Cys Pro Gln Lys Glu Leu Thr Arg Gly Val Arg Pro
    290                 295                 300
Thr Pro Arg Val Arg Ala Pro Ala Thr Gln Gln Thr Arg Trp Lys Lys
305                 310                 315                 320
Asp Leu Ala Glu Asp Glu Glu Glu Glu Asp Glu Glu Asp Thr Glu Asp
                325                 330                 335
Gly Val Ser Phe Gln Pro Tyr Ile Glu Pro Pro Ser Phe Leu Gly Gln
            340                 345                 350
Glu His Gln Ala Pro Gly His Ser Glu Ala Gly Gly Val Asp Ser Gly
        355                 360                 365
Arg Pro Arg Ala Pro Leu Val Pro Ser Glu Gly Ser Ser Ala Trp Asp
    370                 375                 380
Ser Ser Asp Arg Ser Trp Ala Ser Thr Val Asp Ser Ser Trp Asp Arg
385                 390                 395                 400
Ala Gly Ser Ser Gly Tyr Leu Ala Glu Lys Gly Pro Gly Gln Gly Pro
                405                 410                 415
Gly Gly Asp Gly His Gln Glu Ser Leu Pro Pro Pro Glu Phe Ser Lys
            420                 425                 430
Asp Ser Gly Phe Leu Glu Glu Leu Pro Glu Asp Asn Leu Ser Ser Trp
        435                 440                 445
Ala Thr Trp Gly Thr Leu Pro Pro Glu Pro Asn Leu Val Pro Gly Gly
    450                 455                 460
Pro Pro Val Ser Leu Gln Thr Leu Thr Phe Cys Trp Glu Ser Ser Pro
465                 470                 475                 480
Glu Glu Glu Glu Glu Ala Arg Glu Ser Glu Ile Glu Asp Ser Asp Ala
                485                 490                 495
Gly Ser Trp Gly Ala Glu Ser Thr Gln Arg Thr Glu Asp Arg Gly Arg
            500                 505                 510
Thr Leu Gly His Tyr Met Ala Arg
        515                 520
<210>12
<211>531
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>SEQ ID NO：1的成熟蛋白，添加了3’Met
<221>CDS
<222>(1)...(531)
<400>12
atg gtt cct gtc gcc agg ctc cac ggg gct ctc ccg gat gca agg ggc    48
Met Val Pro Val Ala Arg Leu His Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly
 1               5                   10                  15
tgc cac ata gcc cag ttc aag tcc ctg tct cca cag gag ctg cag gcc    96
Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala
             20                  25                  30
ttt aag agg gcc aaa gat gcc tta gaa gag tcg ctt ctg ctg aag gac    144
Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp
         35                  40                  45
tgc agg tgc cac tcc cgc ctc ttc ccc agg acc tgg gac ctg agg cag    192
Cys Arg Cys His Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln
     50                  55                  60
ctg cag gtg agg gag cgc ccc atg gct ttg gag gct gag ctg gcc ctg    240
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Met Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
 65                  70                  75                  80
acg ctg aag gtt ctg gag gcc acc gct gac act gac cca gcc ctg gtg    288
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Val
                 85                  90                  95
gac gtc ttg gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cat atc ctc tcc cag    336
Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln
            100                 105                 110
ttc cgg gcc tgt atc cag cct cag ccc acg gca ggg ccc agg acc cgg    384
Phe Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg
        115                 120                 125
ggc cgc ctc cac cat tgg ctg tac cgg ctc cag gag gcc cca aaa aag    432
Gly Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys
    130                 135                 140
gag tcc cct ggc tgc ctc gag gcc tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc    480
Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg
145                 150                 155                 160
ctc ctc acg cga gac ctg aat tgt gtt gcc agt ggg gac ctg tgt gtc    528
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                  75
tga                                                                531
 *
<210>13
<211>176
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>SEQ ID NO：1的成熟蛋白，添加了3’Met
<400>13
Met Val Pro Val Ala Arg Leu His Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly
 1               5                  10                  15
Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala
            20                  25                  30
Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp
        35                  40                  45
Cys Arg Cys His Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln
    50                  55                  60
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Met Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
65                  70                  75                  80
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Val
                85                  90                  95
Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln
            100                 105                 110
Phe Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg
        115                 120                 125
Gly Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys
    130                 135                 140
Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg
145                 150                 155                 160
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
<210>14
<211>621
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>SEQ ID NO：3的成熟蛋白，添加了3’Met
<221>CDS
<222>(1)...(549)
<400>14
atg ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc tgc    48
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys
 1               5                   10                  15
cac att ggc agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc    96
His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
             20                  25                  30
aag aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg    144
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
         35                  40                  45
agt tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc    192
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
     50                  55                  60
cag gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg    240
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
 65                  70                  75                  80
ctg aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta    288
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Agp Val Leu
                 85                  90                  95
gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc    336
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
tgt atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc    384
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
cac cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct    432
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
ggc tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg    480
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
cga gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg aac ctg tgt ctg aga acg tca    528
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Cys Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
acc cac cct gag tcc acc tga caccccacac cttatttatg cgctgagccc       579
Thr His Pro Glu Ser Thr  *
            180
tactccttcc ttaatttatt tcctctcacc ctttatttat  ga                    621
<210>15
<211>182
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>SEQ ID NO：3的成熟蛋白，添加了3’Met
<400>15
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys
 1               5                  10                  15
His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
            20                  25                  30
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
        35                  40                  45
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
65                  70                  75                  80
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                85                  90                  95
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Cys Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
Thr His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>16
<211>531
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>SEQ ID NO：5的成熟蛋白，添加了3’Met
<221>CDS
<222>(1)...(531)
<400>16
atg gtt cct gtc gcc agg ctc cgc ggg gct ctc ccg gat gca agg ggc    48
Met Val Pro Val Ala Arg Leu Arg Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly
 1               5                   10                  15
tgc cac ata gcc cag ttc aag tcc ctg tct cca cag gag ctg cag gcc    96
Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala
             20                  25                  30
ttt aag agg gcc aaa gat gcc tta gaa gag tcg ctt ctg ctg aag gac    144
Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp
         35                  40                  45
tgc aag tgc cgc tcc cgc ctc ttc ccc agg acc tgg gac ctg agg cag    192
Cys Lys Cys Arg Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln
     50                  55                  60
ctg cag gtg agg gag cgc ccc gtg gct ttg gag gct gag ctg gcc ctg    240
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
 65                  70                  75                  80
acg ctg aag gtt ctg gag gcc acc gct gac act gac cca gcc ctg ggg    288
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Gly
                 85                  90                  95
gat gtc ttg gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cat atc ctc tcc cag    336
Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln
            100                 105                 110
ctc cgg gcc tgt atc cag cct cag ccc acg gca ggg ccc agg acc cgg    384
Leu Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg
        115                 120                 125
ggc cgc ctc cac cat tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc cca aaa aag    432
Gly Arg Leu His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys
    130                 135                 140
gag tcc cct ggc tgc ctc gag gcc tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc    480
Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg
145                 150                 155                 160
ctc ctc acg cga gac ctg aat tgt gtt gcc agc ggg gac ctg tgt gtc    528
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
tga                                                                531
 *
<210>17
<211>176
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>SEQ ID NO：5的成熟蛋白，添加了3’Met
<400>17
Met Val Pro Val Ala Arg Leu Arg Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly
 1               5                  10                  15
Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala
            20                  25                  30
Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp
        35                  40                  45
Cys Lys Cys Arg Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln
    50                  55                  60
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
65                  70                  75                  80
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Gly
                85                  90                  95
Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln
            100                 105                 110
Leu Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg
        115                 120                 125
Gly Arg Leu His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys
    130                 135                 140
Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg
145                 150                 155                  60
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
<210>18
<211>528
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-28A突变体C48S
<221>CDS
<222>(1)...(528)
<400>18
gtt cct gtc gcc agg ctc cac ggg gct ctc ccg gat gca agg ggc tgc    48
Val Pro Val Ala Arg Leu His Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly Cys
 1               5                  10                  15
cac ata gcc cag ttc aag tcc ctg tct cca cag gag ctg cag gcc ttt    96
His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala Phe
             20                  25                  30
aag agg gcc aaa gat gcc tta gaa gag tcg ctt ctg ctg aag gac tcc    144
Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp Ser
         35                  40                  45
agg tgc cac tcc cgc ctc ttc ccc agg acc tgg gac ctg agg cag ctg    192
Arg Cys His Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln Leu
     50                  55                  60
cag gtg agg gag cgc ccc atg gct ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg    240
Gln Val Arg Glu Arg Pro Met Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
 65                  70                  75                  80
ctg aag gtt ctg gag gcc acc gct gac act gac cca gcc ctg gtg gac    288
Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Val Asp
                 85                  90                  95
gtc ttg gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cat atc ctc tcc cag ttc    336
Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Phe
            100                 105                 110
cgg gcc tgt atc cag cct cag ccc acg gca ggg ccc agg acc cgg ggc    384
Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg Gly
        115                 120                 125
cgc ctc cac cat tgg ctg tac cgg ctc cag gag gcc cca aaa aag gag    432
Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu
    130                 135                 140
tcc cct ggc tgc ctc gag gcc tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc    480
Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu
145                 150                 155                 160
ctc acg cga gac ctg aat tgt gtt gcc agt ggg gac ctg tgt gtc tga    528
Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val  *
                165                 170                 175
<210>19
<211>175
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-28A突变体C48S
<400>19
Val Pro Val Ala Arg Leu His Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly Cys
 1               5                  10                  15
His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala Phe
            20                  25                  30
Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp Ser
        35                  40                  45
Arg Cys His Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Met Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
65                  70                  75                  80
Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Val Asp
                85                  90                  95
Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Phe
            100                 105                 110
Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg Gly
        115                 120                 125
Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu
    130                 135                 140
Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu
145                 150                 155                 160
Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
<210>20
<211>531
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>met IL-28A突变体C49S
<221>CDS
<222>(1)...(531)
<400>20
atg gtt cct gtc gcc agg ctc cac ggg gct ctc ccg gat gca agg ggc    48
Met Val Pro Val Ala Arg Leu His Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly
 1               5                   10                  15
tgc cac ata gcc cag ttc aag tcc ctg tct cca cag gag ctg cag gcc    96
Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala
             20                  25                  30
ttt aag agg gcc aaa gat gcc tta gaa gag tcg ctt ctg ctg aag gac    144
Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp
         35                  40                  45
tcc agg tgc cac tcc cgc ctc ttc ccc agg acc tgg gac ctg agg cag    192
Ser Arg Cys His Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln
     50                  55                  60
ctg cag gtg agg gag cgc ccc atg gct ttg gag gct gag ctg gcc ctg    240
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Met Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
 65                  70                  75                  80
acg ctg aag gtt ctg gag gcc acc gct gac act gac cca gcc ctg gtg    288
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Val
                 85                  90                  95
gac gtc ttg gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cat atc ctc tcc cag    336
Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln
            100                 105                 110
ttc cgg gcc tgt atc cag cct cag ccc acg gca ggg ccc agg acc cgg    384
Phe Arg Ala CysI le Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg
        115                 120                 125
ggc cgc ctc cac cat tgg ctg tac cgg ctc cag gag gcc cca aaa aag    432
Gly Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys
    130                 135                 140
gag tcc cct ggc tgc ctc gag gcc tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc    480
Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg
145                 150                 155                 160
ctc ctc acg cga gac ctg aat tgt gtt gcc agt ggg gac ctg tgt gtc    528
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
tga                                                                531
 *
<210>21
<211>176
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>met IL-28A突变体C49S
<400>21
Met Val Pro Val Ala Arg Leu His Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly
 1               5                  10                  15
Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala
            20                  25                  30
Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp
        35                  40                  45
Ser Arg Cys His Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln
    50                  55                  60
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Met Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
65                  70                  75                  80
Thr Leu Lvs Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Val
                85                  90                  95
Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln
            100                 105                 110
Phe Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg
        115                 120                 125
Gly Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys
    130                 135                 140
Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg
145                 150                 155                 160
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
<210>22
<211>528
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-28A突变体C50S
<221>CDS
<222>(1)...(528)
<400>22
gtt cct gtc gcc agg ctc cac ggg gct ctc ccg gat gca agg ggc tgc    48
Val Pro Val Ala Arg Leu His Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly Cys
 1               5                   10                  15
cac ata gcc cag ttc aag tcc ctg tct cca cag gag ctg cag gcc ttt    96
His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala Phe
             20                  25                  30
aag agg gcc aaa gat gcc tta gaa gag tcg ctt ctg ctg aag gac tgc    144
Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp Cys
         35                  40                  45
agg tcc cac tcc cgc ctc ttc ccc agg acc tgg gac ctg agg cag ctg    192
Arg Ser His Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln Leu
     50                  55                  60
cag gtg agg gag cgc ccc atg gct ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg    240
Gln Val Arg Glu Arg Pro Met Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
 65                  70                  75                  80
ctg aag gtt ctg gag gcc acc gct gac act gac cca gcc ctg gtg gac    288
Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Val Asp
                 85                  90                  95
gtc ttg gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cat atc ctc tcc cag ttc    336
Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Phe
            100                 105                 110
cgg gcc tgt atc cag cct cag ccc acg gca ggg ccc agg acc cgg ggc    384
Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg Gly
        115                 120                 125
cgc ctc cac cat tgg ctg tac cgg ctc cag gag gcc cca aaa aag gag    432
Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu
    130                 135                 140
tcc cct ggc tgc ctc gag gcc tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc    480
Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu
145                 150                 155                 160
ctc acg cga gac ctg aat tgt gtt gcc agt ggg gac ctg tgt gtc tga    528
Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val  *
                165                 170                 175
<210>23
<211>175
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-28A突变体C50S
<400>23
Val Pro Val Ala Arg Leu His Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly Cys
 1               5                  10                  15
His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala Phe
            20                  25                  30
Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp Cys
        35                  40                  45
Arg Ser His Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Met Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
65                  70                  75                  80
Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Val Asp
                85                  90                  95
Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Phe
            100                 105                 110
Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg Gly
        115                 120                 125
Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu
    130                 135                 140
Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu
145                 150                 155                 160
Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
<210>24
<211>531
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>met IL-28A突变体C51S
<221>CDS
<222>(1)...(531)
<400>24
atg gtt cct gtc gcc agg ctc cac ggg gct ctc ccg gat gca agg ggc    48
Met Val Pro Val Ala Arg Leu His Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly
 1               5                   10                  15
tgc cac ata gcc cag ttc aag tcc ctg tct cca cag gag ctg cag gcc    96
Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala
             20                  25                  30
ttt aag agg gcc aaa gat gcc tta gaa gag tcg ctt ctg ctg aag gac    144
Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp
         35                  40                  45
tgc agg tcc cac tcc cgc ctc ttc ccc agg acc tgg gac ctg agg cag    192
Cys Arg Ser His Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln
     50                  55                  60
ctg cag gtg agg gag cgc ccc atg gct ttg gag gct gag ctg gcc ctg    240
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Met Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
 65                  70                  75                  80
acg ctg aag gtt ctg gag gcc acc gct gac act gac cca gcc ctg gtg    288
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Val
                 85                  90                  95
gac gtc ttg gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cat atc ctc tcc cag    336
Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln
            100                 105                  110
ttc cgg gcc tgt atc cag cct cag ccc acg gca ggg ccc agg acc cgg    384
Phe Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg
        115                 120                 125
ggc cgc ctc cac cat tgg ctg tac cgg ctc cag gag gcc cca aaa aag    432
Gly Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys
    130                 135                 140
gag tcc cct ggc tgc ctc gag gcc tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc    480
Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg
145                 150                 155                 160
ctc ctc acg cga gac ctg aat tgt gtt gcc agt ggg gac ctg tgt gtc    528
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
tga                                                                531
 *
<210>25
<211>176
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>met IL-28A突变体C51S
<400>25
Met Val Pro Val Ala Arg Leu His Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly
 1               5                  10                  15
Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala
            20                  25                  30
Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp
        35                  40                  45
Cys Arg Ser His Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln
    50                  55                  60
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Met Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
65                  70                  75                  80
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Val
                85                  90                  95
Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln
            100                 105                 110
Phe Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg
        115                 120                 125
Gly Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys
    130                 135                 140
Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg
145                 150                 155                 160
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
<210>26
<211>546
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-29突变体C171S
<221>CDS
<222>(1)...(546)
<400>26
ggt ccg gtt ccg acc tct aaa cca acc acc act ggt aaa ggt tgc cac    48
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His
 1               5                   10                  15
atc ggt cgt ttc aaa tct ctg tct ccg cag gaa ctg gct tct ttc aaa    96
Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
             20                  25                  30
aaa gct cgt gac gct ctg gaa gaa tct ctg aaa ctg aaa aac tgg tct    144
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
         35                  40                  45
tgc tct tct ccg gtt ttc ccg ggt aac tgg gat ctg cgt ctg ctg cag    192
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
     50                  55                  60
gtt cgt gaa cgt ccg gtt gct ctg gaa gct gaa ctg gct ctg acc ctg    240
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
 65                  70                  75                  80
aaa gtt ctg gaa gct gct gca ggt cct gct ctg gaa gat gtt ctg gat    288
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                 85                  90                  95
cag ccg ctg cac act ctg cac cac atc ctg tct cag ctg cag gct tgc    336
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
att caa ccg caa ccg acc gct ggt ccg cgt ccg cgt ggt cgt ctg cac    384
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
cac tgg ctg cat cgt ctg cag gaa gct ccg aaa aaa gaa tct gct ggt    432
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
tgc ctg gaa gct tct gtt acc ttc aac ctg ttc cgt ctg ctg acc cgt    480
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
gat ctg aaa tac gtt gct gat ggt aac ctg tct ctg cgt acc tct acc    528
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Ser Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
cat ccg gaa tct acc taa                                            546
His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>27
<211>181
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-29突变体C171S
<400>27
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His
 1               5                  10                  15
Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
            20                  25                  30
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
        35                  40                  45
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
    50                  55                  60
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
65                  70                  75                  80
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                85                  90                  95
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Ser Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>28
<211>549
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>met IL-29突变体C172S
<221>CDS
<222>(1)...(549)
<400>28
atg ggt ccg gtt ccg acc tct aaa cca acc acc act ggt aaa ggt tgc    48
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys
 1               5                   10                  15
cac atc ggt cgt ttc aaa tct ctg tct ccg cag gaa ctg gct tct ttc    96
His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
             20                  25                  30
aaa aaa gct cgt gac gct ctg gaa gaa tct ctg aaa ctg aaa aac tgg    144
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
         35                  40                  45
tct tgc tct tct ccg gtt ttc ccg ggt aac tgg gat ctg cgt ctg ctg    192
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
     50                  55                  60
cag gtt cgt gaa cgt ccg gtt gct ctg gaa gct gaa ctg gct ctg acc    240
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
 65                  70                  75                  80
ctg aaa gtt ctg gaa gct gct gca ggt cct gct ctg gaa gat gtt ctg    288
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                 85                  90                  95
gat cag ccg ctg cac act ctg cac cac atc ctg tct cag ctg cag gct    336
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
tgc att caa ccg caa ccg acc gct ggt ccg cgt ccg cgt ggt cgt ctg    384
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
cac cac tgg ctg cat cgt ctg cag gaa gct ccg aaa aaa gaa tct gct    432
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                  40
ggt tgc ctg gaa gct tct gtt acc ttc aac ctg ttc cgt ctg ctg acc    480
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
cgt gat ctg aaa tac gtt gct gat ggt aac ctg tct ctg cgt acc tct    528
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Ser Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
acc cat ccg gaa tct acc taa                                        549
Thr His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>29
<211>182
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>met IL-29突变体C172S
<400>29
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys
 1               5                  10                  15
His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
            20                  25                  30
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
        35                  40                  45
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
65                  70                  75                  80
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                85                  90                  95
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Ser Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
Thr His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>30
<211>525
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>SEQ ID NO：18的简并序列
<221>misc_feature
<222>(1)...(525)
<223>n＝A，T，C或G
<400>30
gtnccngtng cnmgnytnca yggngcnytn ccngaygcnm gnggntgyca yathgcncar 60
ttyaarwsny tnwsnccnca rgarytncar gcnttyaarm gngcnaarga ygcnytngar 120
garwsnytny tnytnaarga ywsnmgntgy caywsnmgny tnttyccnmg nacntgggay  180
ytnmgncary tncargtnmg ngarmgnccn atggcnytng argcngaryt ngcnytnacn  240
ytnaargtny tngsrgcnac ngcngayacn gayccngcny tngtngaygt nytngaycar  300
ccnytncaya cnytncayca yathytnwsn carttymgng cntgyathca rccncarccn  360
acngcnggnc cnmgnacnmg nggnmgnytn caycaytggy tntaymgnyt ncargargcn  420
ccnaaraarg arwsnccngg ntgyytngsr gcnwsngtna cnttyaayyt nttymgnytn  480
ytnacnmgng ayytnaaytg ygtngcnwsn ggngayytnt gygtn                  525
<210>31
<211>525
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>SEQ ID NO：20的简并序列
<221>misc_feature
<222>(1)...(525)
<223>n＝A，T，C或G
<400>31
gtnccngtng cnmgnytnca yggngcnytn ccngaygcnm gnggntgyca yathgcncar 60
ttyaarwsny tnwsnccnca rgarytncar gcnttyaarm gngcnaarga ygcnytngar 120
garwsnytny tnytnaarga ywsnmgntgy caywsnmgny tnttyccnmg nacntgggay 180
ytnmgncary tncargtnmg ngarmgnccn atggcnytng argcngaryt ngcnytnacn 240
ytnaargtny tngargcnac ngcngayacn gayccngcny tngtngaygt nytngaycar 300
ccnytncaya cnytncayca yathytnwsn carttymgng cntgyathca rccncarccn 360
acngcnggnc cnmgnacnmg nggnmgnytn caycaytggy tntaymgnyt ncargargcn 420
ccnaaraarg arwsnccngg ntgyytngar gcnwsngtna cnttyaayyt nttymgnytn 480
ytnacnmgng ayytnaaytg ygtngcnwsn ggngayytnt gygtn                 525
<210>32
<211>525
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>SEQ ID NO：22的简并序列
<221>misc_feature
<222>(1)...(525)
<223>n＝A，T，C或G
<400>32
gtnccngtng cnmgnytnca yggngcnytn ccngaygcnm gnggntgyca yathgcncar 60
ttyaarwsny tnwsnccnca rgarytncar gcnttyaarm gngcnaarga ygcnytngar 120
garwsnytny tnytnaarga ywsnmgntgy caywsnmgny tnttyccnmg nacntgggay 180
ytnmgncary tncargtnmg ngarmgnccn atggcnytng argcngaryt ngcnytnacn 240
ytnaargtny tngargcnac ngcngayacn gayccngcny tngtngaygt nytngaycar 300
ccnytncaya cnytncayca yathytnwsn carttymgng cntgyathca rccncarccn 360
acngcnggnc cnmgnacnmg nggnmgnytn caycaytggy tntaymgnyt ncargargcn 420
ccnaaraarg arwsnccngg ntgyytngar gcnwsngtna cnttyaayyt nttymgnytn 480
ytnacnmgng ayytnaaytg ygtngcnwsn ggngayytnt gygtn                 525
<210>33
<211>525
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>SEQ ID N0：24的简并序列
<221>misc_feature
<222>(1)...(525)
<223>n＝A，T，C或G
<400>33
gtnccngtng cnmgnytnca yggngcnytn ccngaygcnm gnggntgyca yathgcncar  60
ttyaarwsny tnwsnccnca rgarytncar gcnttyaarm gngcnaarga ygcnytngar  120
garwsnytny tnytnaarga ywsnmgntgy caywsnmgny tnttyccnmg nacntgggay  180
ytnmgncary tncargtnmg ngarmgnccn atggcnytng argcngaryt ngcnytnacn  240
ytnaargtny tngargcnac ngcngayacn gayccngcny tngtngaygt nytngaycar  300
ccnytncaya cnytncayca yathytnwsn carttymgng cntgyathca rccncarccn  360
acngcnggnc cnmgnacnmg nggnmgnytn caycaytggy tntaymgnyt ncargargcn  420
ccnaaraarg arwsnccngg ntgyytngar gcnwsngtna cnttyaayyt nttymgnytn  480
ytnacnmgng ayytnaaytg ygtngcnwsn ggngayytnt gygtn                  525
<210>34
<211>525
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>SEQ ID NO：26的简并序列
<221>misc_feature
<222>(1)...(525)
<223>n＝A，T，C或G
<400>34
gtnccngtng cnmgnytnca yggngcnytn ccngaygcnm gnggntgyca yathgcncar 60
ttyaarwsny tnwsnccnca rgarytncar gcnttyaarm gngcnaarga ygcnytngar 120
garwsnytny tnytnaarga ywsnmgntgy caywsnmgny tnttyccnmg nacntgggay 180
ytnmgncary tncargtnmg ngarmgnccn atggcnytng argcngaryt ngcnytnacn 240
ytnaargtny tngargcnac ngcngayacn gayccngcny tngtngaygt nytngaycar 300
ccnytncaya cnytncayca yathytnwsn carttymgng cntgyathca rccncarccn 360
acngcnggnc cnmgnacnmg nggnmgnytn caycaytggy tntaymgnyt ncargargcn 420
ccnaaraarg arwsnccngg ntgyytngar gcnwsngtna cnttyaayyt nttymgnytn 480
ytnacnmgng ayytnaaytg ygtngcnwsn ggngayytnt gygtn                 525
<210>35
<211>525
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>SEQ ID NO：28的简并序列
<221>misc_feature
<222>(1)...(525)
<223>n＝A，T，C或G
<400>35
gtnccngtng cnmgnytnca yggngcnytn ccngaygcnm gnggntgyca yathgcncar 60
ttyaarwsny tnwsnccnca rgarytncar gcnttyaarm gngcnaarga ygcnytngar 120
garwsnytny tnytnaarga ywsnmgntgy caywsnmgny tnttyccnmg nacntgggay 180
ytnmgncary tncargtnmg ngarmgnccn atggcnytng argcngaryt ngcnytnacn 240
ytnaargtny tngargcnac ngcngayacn gayccngcny tngtngaygt nytngaycar 300
ccnytncaya cnytncayca yathytnwsn carttymgng cntgyathca rccncarccn 360
acngcnggnc cnmgnacnmg nggnmgnytn caycaytggy tntaymgnyt ncargargcn 420
ccnaaraarg arwsnccngg ntgyytngar gcnwsngtna cnttyaayyt nttymgnytn 480
ytnacnmgng ayytnaaytg ygtngcnwsn ggngayytnt gygtn                 525
<210>36
<211>175
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-28A突变体C48X
<221>变体
<222>(48)...(48)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val或Asn
<400>36
Val Pro Val Ala Arg Leu His Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly Cys
 1               5                  10                  15
His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala Phe
            20                  25                  30
Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp Xaa
        35                  40                  45
Arg Cys His Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Met Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
65                  70                  75                  80
Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Val Asp
                85                  90                  95
Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Phe
            100                 105                 110
Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg Gly
        115                 120                 125
Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu
    130                 135                 140
Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu
145                 150                 155                 160
Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
<210>37
<211>176
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>met IL-28A突变体C49X
<221>变体
<222>(49)...(49)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val或Asn
<400>37
Met Val Pro Val Ala Arg Leu His Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly
 1               5                  10                  15
Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala
            20                  25                  30
Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp
        35                  40                  45
Xaa Arg Cys His Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln
    50                  55                  60
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Met Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
65                  70                  75                  80
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Val
                85                  90                  95
Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln
            100                 105                 110
Phe Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg
        115                 120                 125
Gly Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys
    130                 135                 140
Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg
145                 150                 155                 160
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
<210>38
<211>175
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-28A突变体C50X
<221>变体
<222>(50)...(50)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val或Asn
<400>38
Val Pro Val Ala Arg Leu His Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly Cys
 1               5                  10                  15
His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala Phe
            20                  25                  30
Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp Cys
        35                  40                  45
Arg Xaa His Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Met Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
65                  70                  75                  80
Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Val Asp
                85                  90                  95
Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Phe
            100                 105                 110
Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg Gly
        115                 120                 125
Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu
    130                 135                 140
Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu
145                 150                 155                 160
Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
<210>39
<211>176
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>met IL-28A突变体C51X
<221>变体
<222>(51)...(51)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val或Asn
<400>39
Met Val Pro Val Ala Arg Leu His Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly
 1               5                  10                  15
Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala
            20                  25                  30
Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp
        35                  40                  45
Cys Arg Xaa His Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln
    50                  55                  60
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Met Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
65                  70                  75                  80
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Val
                85                  90                  95
Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln
            100                 105                 110
Phe Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg
        115                 120                 125
Gly Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys
    130                 135                 140
Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg
145                 150                 155                 160
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
<210>40
<211>181
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-29突变体C171X
<221>VARIANT
<222>(171)...(171)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val或Asn
<400>40
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His
 1               5                  10                  15
Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
            20                  25                  30
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
        35                  40                  45
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
    50                  55                  60
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
65                  70                  75                  80
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                85                  90                  95
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>41
<211>182
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>met IL-29突变体C172X
<221>变体
<222>(172)...(172)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val或Asn
<400>41
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys
 1               5                  10                  15
His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
            20                  25                  30
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
        35                  40                  45
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
65                  70                  75                  80
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                85                  90                  95
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
Thr His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>42
<211>49
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC40923
<400>42
tccagggaat tcatataggc cggccaccatgaaactagac atgactggg              49
<210>43
<211>74
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC43152
<400>43
ggggtgggta caaccccaga gctgttttaa ggcgcgcctc tagactattt ttagacacac 60
aggtccccac tggc                                                   74
<210>44
<211>50
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC29740
<400>44
 ttgacaatta atcatcggct cgtataatgt gtggaattgt gagcggataa           50
<210>45
<211>42
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC29741
<400>45
tctgatttaa tctgtatcag gctgaaaatc ttatctcatc  cg                   42
<210>46
<211>62
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC29736
<400>46
gtggaattgt gagcggataa caatttcaca cagaattcattaaagaggag aaattaactc 60
cc                                                               62
<210>47
<211>63
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC29738
<400>47
gctgaaaatc ttatctcatc cgccaaaaca cccgggagtt aatttctcct ctttaatgaa 60
ttc                                                               63
<210>48
<211>78
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC44566
<400>48
tcttccagag cgtcacgagc ttttttgaaa gaagccagtt cctgcggaga cagagatttg 60
aaacgaccga tgtggcaa                                               78
<210>49
<211>84
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC44565
<400>49
tcgtgacgct ctggaagaat ctctgaaact gaaaaactgg tcttgctctt ctccggtttt 60
cccgggtaac tgggatctgc gtct                                        84
<210>50
<211>71
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC44564
<400>50
aacagaagct tccaggcaac cagcagattc ttttttcgga gcttcctgca gacgatgcag 60
ccagtggtgc a                                                      71
<210>51
<211>73
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC44563
<400>51
aactggctct gaccctgaaa gttctggaag ctgctgcagg tcctgctctg gaagatgttc 60
tggatcagcc gct                                                    73
<210>52
<211>74
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC44562
<400>52
tcagggtcag agccagttca gcttccagag caaccggacg ttcacgaacc tgcagcagac 60
gcagatccca gtta                                                   74
<210>53
<211>76
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC44561
<400>53
tcagctgcag gcttgcattc aaccgcaacc gaccgctggt ccgcgtccgc gtggtcgtct 60
gcaccactgg ctgcat                                                 76
<210>54
<211>60
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC44560
<400>54
atgcaagcct gcagctgaga caggatgtgg tgcagagtgt gcagcggctg atccagaaca 60
<210>55
<211>62
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC44559
<400>55
atgggtccgg ttccgacctc taaaccaacc accactggta aaggttgcca catcggtcgt 60
tt                                                                62
<210>56
<211>65
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC44558
<400>56
ttaggtagat tccggatggg tagaggtacg caggcacagg ttaccatcag caacgtattt 60
cagat                                                             65
<210>57
<211>69
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC44557
<400>57
tgcctggaag cttctgttac cttcaacctg ttccgtctgc tgacccgtga tctgaaatac 60
gttgctgat                                                         69
<210>58
<211>41
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC44340
<400>58
cgttgctgat ggtaacctgt ctctgcgtac ctctacccat c                     41
<210>59
<211>41
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC44341
<400>59
gatgggtaga ggtacgcaga gacaggttac catcagcaac g                     41
<210>60
<211>68
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC41212
<400>60
ctagaaataa ttttgtttaa ctttaagaag gagatatata tatgggccct gtccccactt 60
ccaagccc                                                          68
<210>61
<211>67
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC41041
<400>61
tctgtatcag gctgaaaatc ttatctcatc cgccaaaaca ttaggtggac tcagggtggg 60
ttgacgt                                                           67
<210>62
<211>65
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC43431
<400>62
ctagaaataa ttttgtttaa ctttaagaag gagatatata tatggttcct gtcgccaggc 60
tccac                                                              65
<210>63
<211>67
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC43437
<400>63
taatctgtat caggctgaaa atcttatctc atccgccaaa acatcagaca cacaggtccc 60
cactggc                                                           67
<210>64
<211>39
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC44327
<400>64
gtggccgatg ggaacctgtc cctgagaacg tcaacccac                        39
<210>65
<211>39
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC44328
<400>65
gtgggttgac gttctcaggg acaggttccc atcggccac                        39
<210>66
<211>83
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC45399
<400>66
tcaggtccca ggtcctgggg aagaggcggg agtggcacct ggagtccttc agcagaagcg 60
actcttctaa ggcatctttg gcc                                         83
<210>67
<211>531
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>起始于pYEL7b的成熟zcyto20
<221>CDS
<222>(1)...(531)
<400>67
atg gtt cct gtc gcc agg ctc cac ggg gct ctc ccg gat gca agg ggc    48
Met Val Pro Val Ala Arg Leu His Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly
 1               5                   10                  15
tgc cac ata gcc cag ttc aag tcc ctg tct cca cag gag ctg cag gcc    96
Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala
             20                  25                  30
ttt aag agg gcc aaa gat gcc tta gaa gag tcg ctt ctg ctg aag gac    144
Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp
         35                  40                  45
tgc agg tgc cac tcc cgc ctc ttc ccc agg acc tgg gac ctg agg cag    192
Cys Arg Cys His Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln
     50                  55                  60
ctg cag gtg agg gag cgc ccc atg gct ttg gag gct gag ctg gcc ctg    240
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Met Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
 65                  70                  75                  80
acg ctg aag gtt ctg gag gcc acc gct gac act gac cca gcc ctg gtg    288
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Val
                 85                  90                  95
gac gtc ttg gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cat atc ctc tcc cag    336
Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln
            100                 105                 110
ttc cgg gcc tgt atc cag cct cag ccc acg gca ggg ccc agg acc cgg    384
Phe Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg
        115                 120                 125
ggc cgc ctc cac cat tgg ctg tac cgg ctc cag gag gcc cca aaa aag    432
Gly Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys
    130                 135                 140
gag tcc cct ggc tgc ctc gag gcc tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc    480
Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg
145                 150                 155                 160
ctc ctc acg cga gac ctg aat tgt gtt gcc agt ggg gac ctg tgt gtc    528
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
tga                                                                531
 *
<210>68
<211>83
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC45398
<400>68
ggccaaagat gccttagaag agtcgcttct gctgaaggac tccaggtgcc actcccgcct 60
cttccccagg acctgggacc tga                                         83
<210>69
<211>83
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC45397
<400>69
gctgcctcag gtcccaggtc ctggggaaga ggcgggagtg ggacctgcag tccttcagca 60
gaagcgactc ttctaaggca tct                                         83
<210>70
<211>83
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC45396
<400>70
agatgcctta gaagagtcgc ttctgctgaa ggactgcaggtcccactccc gcctcttccc 60
caggacctgg gacctgaggc agc                                        83
<210>71
<211>1013
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(14)...(991)
<400>71
ccagcgtccg tcc atg gcg tgg agc ctt ggg agc tgg ctg ggt ggc tgc     49
               Met Ala Trp Ser Leu Gly Ser Trp Leu Gly Gly Cys
                1               5                   10
ctg ctg gtg tca gca ttg gga atg gta cca cct ccc gaa aat gtc aga    97
Leu Leu Val Ser Ala Leu Gly Met Val Pro Pro Pro Glu Asn Val Arg
         15                  20                  25
atg aat tct gtt aat ttc aag aac att cta cag tgg gag tca cct gct    145
Met Asn Ser Val Asn Phe Lys Asn Ile Leu Gln Trp Glu Ser Pro Ala
     30                  35                  40
ttt gcc aaa ggg aac ctg act ttc aca gct cag tac cta agt tat agg    193
Phe Ala Lys Gly Asn Leu Thr Phe Thr Ala Gln Tyr Leu Ser Tyr Arg
45                  50                  55                  60
ata ttc caa gat aaa tgc atg aat act acc ttg acg gaa tgt gat ttc    241
Ile Phe Gln Asp Lys Cys Met Asn Thr Thr Leu Thr Glu Cys Asp Phe
                 65                  70                  75
tca agt ctt tcc aag tat ggt gac cac acc ttg aga gtc agg gct gaa    289
Ser Ser Leu Ser Lys Tyr Gly Asp His Thr Leu Arg Val Arg Ala Glu
             80                  85                  90
ttt gca gat gag cat tca gac tgg gta aac atc acc ttc tgt cct gtg    337
Phe Ala Asp Glu His Ser Asp Trp Val Asn Ile Thr Phe Cys Pro Val
         95                 100                 105
gat gac acc att att gga ccc cct gga atg caa gta gaa gta ctt gct    385
Asp Asp Thr Ile Ile Gly Pro Pro Gly Met Gln Val Glu Val Leu Ala
    110                 115                 120
gat tct tta cat atg cgt ttc tta gcc cct aaa att gag aat gaa tac    433
Asp Ser Leu His Met Arg Phe Leu Ala Pro Lys Ile Glu Asn Glu Tyr
125                 130                 135                 140
gaa act tgg act atg aag aat gtg tat aac tca tgg act tat aat gtg    481
Glu Thr Trp Thr Met Lys Asn Val Tyr Asn Ser Trp Thr Tyr Asn Val
                145                 150                 155
caa tac tgg aaa aac ggt act gat gaa aag ttt caa att act ccc cag    529
Gln Tyr Trp Lys Asn Gly Thr Asp Glu Lys Phe Gln Ile Thr Pro Gln
            160                 165                 170
tat gac ttt gag gtc ctc aga aac ctg gag cca tgg aca act tat tgt    577
Tyr Asp Phe Glu Val Leu Arg Asn Leu Glu Pro Trp Thr Thr Tyr Cys
        175                 180                 185
gtt caa gtt cga ggg ttt ctt cct gat cgg aac aaa gct ggg gaa tgg    625
Val Gln Val Arg Gly Phe Leu Pro Asp Arg Asn Lys Ala Gly Glu Trp
    190                 195                 200
agt gag cct gtc tgt gag caa aca acc cat gac gaa acg gtc ccc tcc    673
Ser Glu Pro Val Cys Glu Gln Thr Thr His Asp Glu Thr Val Pro Ser
205                 210                 215                 220
tgg atg gtg gcc gtc atc ctc atg gcc tcg gtc ttc atg gtc tgc ctg    721
Trp Met Val Ala Val Ile Leu Met Ala Ser Val Phe Met Val Cys Leu
                225                 230                 235
gca ctc ctc ggc tgc ttc tcc ttg ctg tgg tgc gtt tac aag aag aca    769
Ala Leu Leu Gly Cys Phe Ser Leu Leu Trp Cys Val Tyr Lys Lys Thr
            240                 245                 250
aag tac gcc ttc tcc cct agg aat tct ctt cca cag cac ctg aaa gag    817
Lys Tyr Ala Phe Ser Pro Arg Asn Ser Leu Pro Gln His Leu Lys Glu
        255                 260                 265
ttt ttg ggc cat cct cat cat aac aca ctt ctg ttt ttc tcc ttt cca    865
Phe Leu Gly His Pro His His Asn Thr Leu Leu Phe Phe Ser Phe Pro
    270                 275                 280
ttg tcg gat gag aat gat gtt ttt gac aag cta agt gtc att gca gaa    913
Leu Ser Asp Glu Asn Asp Val Phe Asp Lys Leu Ser Val Ile Ala Glu
285                 290                 295                 300
gac tct gag agc ggc aag cag aat cct ggt gac agc tgc agc ctc ggg    961
Asp Ser Glu Ser Gly Lys Gln Asn Pro Gly Asp Ser Cys Ser Leu Gly
                305                 310                 315
acc ccg cct ggg cag ggg ccc caa agc tag gctctgagaa ggaaacacac      1011
Thr Pro Pro Gly Gln Gly Pro Gln Ser  *
            320                 325
tc                                                                 1013
<210>72
<211>49
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC40922
<400>72
tccagggaat tcatataggc cggccaccat ggctgcagct tggaccgtg             49
<210>73
<211>71
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC43153
<400>73
ggggtgggta caaccccaga gctgttttaa ggcgcgcctc tagactattt ttaggtggac 60
tcagggtggg t                                                      71
<210>74
<211>546
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL29突变体C15X，Asn169
<221>CDS
<222>(1)...(546)
<221>变化
<222>(44)...(45)
<223>n＝A，G，T，或C
<400>74
ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc dnn cac    48
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Xaa His
 1               5                   10                  15
att ggc agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc aag    96
Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
             20                  25                  30
aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg agt    144
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
         35                  40                  45
tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc cag    192
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
     50                  55                  60
gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg ctg    240
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
 65                  70                  75                  80
aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta gac    288
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                 85                  90                  95
cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc tgt    336
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc cac    384
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct ggc    432
His Trp Lau His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg cga    480
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg aay ctg tgt ctg aga acg tca acc    528
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Cys Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
cac cct gag tcc acc tga                                            546
His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>75
<211>181
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>变体
<222>(15)...(15)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<223>IL29突变体C15X，Asn169
<400>75
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Xaa His
 1               5                  10                  15
Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
            20                  25                  30
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
        35                  40                  45
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
    50                  55                  60
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
65                  70                  75                  80
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                85                  90                  95
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Cys Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>76
<211>549
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL29突变体C16X，Asn170
<221>CDS
<222>(1)...(549)
<221>变化
<222>(47)...(48)
<223>n＝A，T，G，或C
<400>76
atg ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc dnn    48
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Xaa
 1               5                   10                  15
cac att ggc agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc    96
His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
             20                  25                  30
aag aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg    144
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
         35                  40                  45
agt tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc    192
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
     50                  55                  60
cag gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg    240
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
 65                  70                  75                  80
ctg aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta    288
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                 85                  90                  95
gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc    336
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
tgt atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc    384
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
cac cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct    432
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
ggc tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg    480
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
cga gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg aay ctg tgt ctg aga acg tca    528
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Cys Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
acc cac cct gag tcc acc tga                                        549
Thr His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>77
<211>182
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>变体
<222>(16)...(16)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<223>Met IL29突变体C16X，Asn170
<400>77
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Xaa
 1               5                  10                  15
His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
            20                  25                  30
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
        35                  40                  45
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
65                  70                  75                  80
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                85                  90                  95
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                  40
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Cys Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
Thr His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>78
<211>546
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL29突变体C15X，Asp169
<221>CDS
<222>(1)...(546)
<221>变化
<222>(44)...(45)
<223>n＝A，T，G，或C
<400>78
ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc dnn cac    48
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Xaa His
 1               5                   10                  15
att ggc agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc aag    96
Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
             20                  25                  30
aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg agt    144
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
         35                  40                  45
tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc cag    192
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
     50                  55                  60
gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg ctg    240
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
 65                  70                  75                  80
aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta gac    288
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                 85                  90                  95
cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc tgt    336
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc cac    384
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct ggc    432
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg cga    480
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg gay ctg tgt ctg aga acg tca acc    528
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Cys Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
cac cct gag tcc acc tga                                            546
His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>79
<211>181
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL29突变体C15X，Asp169
<221>变体
<222>(15)...(15)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>79
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Xaa His
 1               5                  10                  15
Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
            20                  25                  30
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
        35                  40                  45
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
    50                  55                  60
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
65                  70                  75                  80
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                85                  90                  95
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Cys Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>80
<211>549
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL29突变体C16X，Asp170
<221>CDS
<222>(1)...(549)
<221>变化
<222>(47)...(48)
<223>n＝A，T，G，或C
<400>80
atg ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc dnn    48
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Xaa
 1               5                   10                  15
cac att ggc agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc    96
His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
             20                  25                  30
aag aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg    144
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
         35                  40                  45
agt tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc    192
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
     50                  55                  60
cag gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg    240
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
 65                  70                  75                  80
ctg aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta    288
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                 85                  90                  95
gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc    336
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
tgt atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc    384
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
cac cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct    432
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
ggc tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg    480
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
cga gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg gay ctg tgt ctg aga acg tca    528
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Cys Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
acc cac cct gag tcc acc tga                                        549
Thr His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>81
<211>182
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL29突变体C16X，Asp170
<221>变体
<222>(16)...(16)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>81
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Xaa
 1               5                  10                  15
His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
            20                  25                  30
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
        35                  40                  45
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
65                  70                  75                  80
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                85                  90                  95
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Cys Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
Thr His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>82
<211>546
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL29突变体Asp169，C171X
<221>CDS
<222>(1)...(546)
<221>变化
<222>(512)...(513)
<223>n＝A，T，G，或C
<400>82
ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc tgc cac    48
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His
 1               5                   10                  15
att ggc agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc aag    96
Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
             20                  25                  30
aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg agt    144
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
         35                  40                  45
tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc cag    192
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
     50                  55                  60
gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg ctg    240
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
 65                  70                  75                  80
aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta gac    288
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                 85                  90                  95
cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc tgt    336
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc cac    384
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct ggc    432
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                  140
tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg cga    480
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg gay ctg dnn ctg aga acg tca acc    528
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
cac cct gag tcc acc tga                                            546
His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>83
<211>181
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL29突变体Asp169，C171X
<221>变体
<222>(171)...(171)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>83
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His
 1               5                  10                  15
Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
            20                  25                  30
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
        35                  40                  45
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
    50                  55                  60
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
65                  70                  75                  80
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
            85                  90                  95
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>84
<211>549
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL29突变体Asp170，C172X
<221>CDS
<222>(1)...(549)
<221>变化
<222>(515)...(516)
<223>n＝A，T，G，或C
<400>84
atg ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc tgc    48
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys
 1               5                   10                  15
cac att ggc agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc    96
His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
             20                  25                  30
aag aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg    144
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
         35                  40                  45
agt tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc    192
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
     50                  55                  60
cag gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg    240
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
 65                  70                  75                  80
ctg aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta    288
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                 85                  90                  95
gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc    336
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
tgt atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc    384
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
cac cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct    432
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
ggc tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg    480
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
cga gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg gay ctg dnn ctg aga acg tca    528
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Xaa Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
acc cac cct gag tcc acc tga                                        549
Thr His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>85
<211>182
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL29突变体Asp170，C172X
<221>变体
<222>(172)...(172)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>85
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys
 1               5                  10                  15
His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
            20                  25                  30
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
        35                  40                  45
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
65                  70                  75                  80
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                85                  90                  95
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Xaa Leu Arg Thr Ser
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Thr His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>86
<211>546
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL29突变体T10P，Asn169，C171X
<221>CDS
<222>(1)...(546)
<221>变化
<222>(512)...(513)
<223>n＝A，T，G，或C
<400>86
ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc ccn act ggg aag ggc tgc cac    48
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Pro Thr Gly Lys Gly Cys His
 1               5                   10                  15
att ggc agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc aag    96
Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
             20                  25                  30
aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg agt    144
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
         35                  40                  45
tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc cag    192
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
     50                  55                  60
gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg ctg    240
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
 65                  70                  75                  80
aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta gac    288
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                 85                  90                  95
cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc tgt    336
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc cac    384
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct ggc    432
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg cga    480
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg aac ctg dnn ctg aga acg tca acc    528
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
cac cct gag tcc acc tga                                            546
His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>87
<211>181
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL29突变体T10P，Asn169，C171X
<221>变体
<222>(171)...(171)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>87
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Pro Thr Gly Lys Gly Cys His
 1               5                  10                  15
Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
            20                  25                  30
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
        35                  40                  45
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
    50                  55                  60
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
65                  70                  75                  80
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                85                  90                  95
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>88
<211>549
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL29突变体T11P，Asn170，C172X
<221>CDS
<222>(1)...(549)
<221>变化
<222>(515)...(516)
<223>n＝A，T，G，或C
<400>88
atg ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc ccn act ggg aag ggc tgc    48
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Pro Thr Gly Lys Gly Cys
 1               5                   10                  15
cac att ggc agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc    96
His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
             20                  25                  30
aag aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg    144
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
         35                  40                  45
agt tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc    192
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
     50                  55                  60
cag gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg    240
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
 65                  70                  75                  80
ctg aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta    288
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                 85                  90                  95
gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc    336
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
tgt atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc    384
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
cac cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct    432
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
ggc tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg    480
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
cga gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg aac ctg dnn ctg aga acg tca    528
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
acc cac cct gag tcc acc tga                                        549
Thr His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>89
<211>182
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL29突变体T11P，Asn170，C172X
<221>变体
<222>(172)...(172)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>89
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Pro Thr Gly Lys Gly Cys
 1               5                  10                  15
His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
            20                  25                  30
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
        35                  40                  45
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
65                  70                  75                  80
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                85                  90                  95
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
Thr His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>90
<211>546
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL29突变体T10P，C15X，Asn169
<221>CDS
<222>(1)...(546)
<221>变化
<222>30，44，45
<223>n＝A，T，G，或C
<400>90
ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc ccn act ggg aag ggc dnn cac    48
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Pro Thr Gly Lys Gly Xaa His
 1               5                   10                  15
att ggc agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc aag    96
Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
             20                  25                  30
aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg agt    144
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
         35                  40                  45
tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc cag    192
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
     50                  55                  60
gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg ctg    240
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
 65                  70                  75                  80
aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta gac    288
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                 85                  90                  95
cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc tgt    336
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc cac    384
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct ggc    432
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg cga    480
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg aay ctg tgt ctg aga acg tca acc    528
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Cys Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
cac cct gag tcc acc tga                                            546
His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>91
<211>181
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL29突变体T10P，C15X，Asn169
<221>变体
<222>(15)...(15)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>91
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Pro Thr Gly Lys Gly Xaa His
 1               5                  10                  15
Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
            20                  25                  30
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
        35                  40                  45
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
    50                  55                  60
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
65                  70                  75                  80
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                85                  90                  95
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Cys Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>92
<211>549
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL29突变体T11P，C16X，Asn170
<221>CDS
<222>(1)...(549)
<221>变化
<222>33，47，48
<223>n＝A，T，G，或C
<400>92
atg ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc cch act ggg aag ggc dnn    48
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Pro Thr Gly Lys Gly Xaa
 1               5                   10                  15
cac att ggc agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc    96
His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
             20                  25                  30
aag aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg    144
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
         35                  40                  45
agt tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc    192
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
     50                  55                  60
cag gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg    240
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
 65                  70                  75                  80
ctg aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta    288
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                 85                  90                  95
gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc    336
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
tgt atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc    384
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
cac cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct    432
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
ggc tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg    480
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
cga gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg aay ctg tgt ctg aga acg tca    528
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Cys Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
acc cac cct gag tcc acc tga                                        549
Thr His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>93
<211>182
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL29突变体T11P，C16X，Asn170
<221>变体
<222>(16)...(16)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>93
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Pro Thr Gly Lys Gly Xaa
 1               5                  10                  15
His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
            20                  25                  30
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
        35                  40                  45
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
65                  70                  75                  80
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                85                  90                  95
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Cys Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
Thr His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>94
<211>546
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL29突变体T10P，Asp169，C171X
<221>CDS
<222>(1)...(546)
<221>变化
<222>30，512，513
<223>n＝A，T，G，或C
<400>94
ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc ccn act ggg aag ggc tgc cac    48
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Pro Thr Gly Lys Gly Cys His
 1               5                   10                  15
att ggc agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc aag    96
Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
             20                  25                  30
aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg agt    144
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
         35                  40                  45
tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc cag    192
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
     50                  55                  60
gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg ctg    240
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
 65                  70                  75                  80
aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta gac    288
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                 85                  90                  95
cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc tgt    336
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc cac    384
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct ggc    432
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg cga    480
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg gay ctg dnn ctg aga acg tca acc    528
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
cac cct gag tcc acc tga                                            546
His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>95
<211>181
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL29突变体T10P，Asp169，C171X
<221>变体
<222>(171)...(171)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>95
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Pro Thr Gly Lys Gly Cys His
 1               5                  10                  15
Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
            20                  25                  30
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
        35                  40                  45
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
    50                  55                  60
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
65                  70                  75                  80
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                85                  90                  95
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>96
<211>549
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL29突变体T11P，Asp170，C172X
<221>CDS
<222>(1)...(549)
<221>变化
<222>33，515，516
<223>n＝A，T，G，或C
<400>96
atg ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc ccn act ggg aag ggc tgc    48
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Pro Thr Gly Lys Gly Cys
 1               5                   10                  15
cac att ggc agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc    96
His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
             20                  25                  30
aag aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg    144
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
         35                  40                  45
agt tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc    192
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
     50                  55                  60
cag gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg    240
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
 65                  70                  75                  80
ctg aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta    288
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                 85                  90                  95
gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc    336
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
tgt atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc    384
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
cac cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct    432
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
ggc tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg    480
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
cga gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg gay ctg dnn ctg aga acg tca    528
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Xaa Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
acc cac cct gag tcc acc tga                                        549
Thr His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>97
<211>182
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL29突变体T11P，Asp170，C172X
<221>变体
<222>(172)...(172)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>97
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Pro Thr Gly Lys Gly Cys
 1               5                  10                  15
His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
            20                  25                  30
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
        35                  40                  45
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
65                  70                  75                  80
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                 85                  90                  95
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Xaa Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
Thr His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>98
<211>546
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL29突变体T10P，C15X，Asp169
<221>CDS
<222>(1)...(546)
<221>变化
<222>30，44，45
<223>n＝A，T，G，或C
<400>98
ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc ccn act ggg aag ggc dnn cac    48
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Pro Thr Gly Lys Gly Xaa His
 1               5                   10                  15
att ggc agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc aag    96
Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
             20                  25                  30
aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg agt    144
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
         35                  40                  45
tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc cag    192
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
     50                  55                  60
gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg ctg    240
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
 65                  70                  75                  80
aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta gac    288
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                 85                  90                  95
cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc tgt    336
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc cac    384
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct ggc    432
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg cga    480
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg gay ctg tgt ctg aga acg tca acc    528
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Cys Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
cac cct gag tcc acc tga                                            546
His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>99
<211>181
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL29突变体T10P，C15X，Asp169
<221>变体
<222>(15)...(15)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>99
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Pro Thr Gly Lys Gly Xaa His
 1               5                  10                  15
Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
            20                  25                  30
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
        35                  40                  45
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
    50                  55                  60
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
65                  70                  75                  80
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                85                  90                  95
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Cys Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>100
<211>549
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL29突变体T11P，C16X，Asp170
<221>CDS
<222>(1)...(549)
<221>变化
<222>33，47，48
<223>n＝A，T，G，或C
<400>100
atg ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc ccn act ggg aag ggc dnn    48
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Pro Thr Gly Lys Gly Xaa
 1               5                   10                  15
cac att ggc agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc    96
His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
             20                  25                  30
aag aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg    144
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
         35                  40                  45
agt tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc    192
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
     50                  55                  60
cag gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg    240
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
 65                  70                  75                  80
ctg aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta    288
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                 85                  90                  95
gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc    336
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
tgt atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc    384
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
cac cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct    432
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
ggc tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg    480
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
cga gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg gay ctg tgt ctg aga acg tca    528
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Cys Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
acc cac cct gag tcc acc tga                                        549
Thr His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>101
<211>182
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL29突变体T11P，C16X，Asp170
<221>变体
<222>(16)...(16)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>101
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Pro Thr Gly Lys Gly Xaa
 1               5                  10                  15
His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
            20                  25                  30
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
        35                  40                  45
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
65                  70                  75                  80
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                85                  90                  95
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Cys Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
Thr His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>102
<211>546
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL29突变体G18D，Asn169，C171X
<221>CDS
<222>(1)...(546)
<221>变化
<222>(512)...(513)
<223>n＝A，T，G，或C
<400>102
ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc tgc cac    48
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His
 1               5                   10                  15
att gay agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc aag    96
Ile Asp Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
             20                  25                  30
aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg agt    144
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
         35                  40                  45
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Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
     50                  55                  60
gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg ctg    240
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
 65                  70                  75                  80
aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta gac    288
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                 85                  90                  95
cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc tgt    336
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc cac    384
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct ggc    432
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg cga    480
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg aac ctg dnn ctg aga acg tca acc    528
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
cac cct gag tcc acc tga                                            546
His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>103
<211>181
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL29突变体G18D，Asn169，C171X
<221>变体
<222>(171)...(171)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>103
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His
 1               5                  10                  15
Ile Asp Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
            20                  25                  30
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
        35                  40                  45
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
    50                  55                  60
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
65                  70                  75                  80
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                85                  90                  95
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>104
<211>549
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL29突变体G19D，Asn170，C172X
<221>CDS
<222>(1)...(549)
<221>变化
<222>(515)...(516)
<223>n＝A，T，G，或C
<400>104
atg ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc tgc    48
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys
 1               5                   10                  15
cac att gay agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc    96
His Ile Asp Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
             20                  25                  30
aag aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg    144
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
         35                  40                  45
agt tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc    192
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
     50                  55                  60
cag gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg    240
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
 65                  70                  75                  80
ctg aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta    288
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                 85                  90                  95
gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc    336
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
tgt atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc    384
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
cac cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct    432
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
ggc tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg    480
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
cga gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg aac ctg dnn ctg aga acg tca    528
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
acc cac cct gag tcc acc tga                                        549
Thr His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>105
<211>182
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL29突变体G19D，Asn170，C172X
<221>变体
<222>(172)...(172)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>105
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys
 1               5                  10                  15
His Ile Asp Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
            20                  25                  30
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
        35                  40                  45
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
65                  70                  75                  80
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                85                  90                  95
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
Thr His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>106
<211>546
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL29突变体C15X，G18D，Asn169
<221>CDS
<222>(1)...(546)
<221>变化
<222>(44)...(45)
<223>n＝A，T，G，或C
<400>106
ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc dnn cac    48
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Xaa His
 1               5                   10                  15
att gay agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc aag    96
Ile Asp Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
             20                  25                  30
aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg agt    144
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
         35                  40                  45
tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc cag    192
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
     50                  55                  60
gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg ctg    240
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
 65                  70                  75                  80
aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta gac    288
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                 85                  90                  95
cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc tgt    336
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc cac    384
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct ggc    432
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg cga    480
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg aay ctg tgt ctg aga acg tca acc    528
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Cys Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
cac cct gag tcc acc tga                                            546
His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>107
<211>181
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL29突变体C15X，G18D，Asn169
<221>变体
<222>(15)...(15)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>107
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Xaa His
 1               5                  10                  15
Ile Asp Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
            20                  25                  30
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
        35                  40                  45
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
    50                  55                  60
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
65                  70                  75                  80
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                85                  90                  95
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
         115                120                 125
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Cys Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>108
<211>549
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL29突变体C16X，G19D，Asn170
<221>CDS
<222>(1)...(549)
<221>变化
<222>(47)...(48)
<223>n＝A，T，G，或C
<400>108
atg ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc dnn    48
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Xaa
 1               5                   10                  15
cac att gay agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc    96
His Ile Asp Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
             20                  25                  30
aag aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg    144
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
         35                  40                  45
agt tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc    192
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
     50                  55                  60
cag gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg    240
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
 65                  70                  75                  80
ctg aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cea gcc ctg gag gac gtc cta    288
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                 85                  90                  95
gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc    336
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
tgt atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc    384
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
cac cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct    432
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
ggc tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg    480
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
cga gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg aay ctg tgt ctg aga acg tca    528
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Cys Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
acc cac cct gag tcc acc tga                                        549
Thr His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>109
<211>182
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL29突变体C16X，G19D，Asn170
<221>变体
<222>(16)...(16)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>109
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Xaa
 1               5                  10                  15
His Ile Asp Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
            20                  25                  30
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
        35                  40                  45
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
65                  70                  75                  80
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                85                  90                  95
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Cys Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
Thr His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>110
<211>546
<212>DNA
<213>q人工序列
<220>
<223>IL29突变体G18D，Asp169，C171X
<221>CDS
<222>(1)...(546)
<221>变化
<222>(512)...(513)
<223>n＝A，T，G，或C
<400>110
ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc tgc cac    48
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His
 1               5                   10                  15
att gay agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc aag    96
Ile Asp Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
             20                  25                  30
aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg agt    144
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
         35                  40                  45
tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc cag    192
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
     50                  55                  60
gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg ctg    240
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
65                  70                  75                  80
aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta gac    288
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                85                  90                  95
cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc tgt    336
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc cac    384
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct ggc    432
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg cga    480
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg gay ctg dnn ctg aga acg tca acc    528
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
cac cct gag tcc acc tga                                            546
His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>111
<211>181
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL29突变体G18D，Asp169，C171X
<221>变体
<222>(171)...(171)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>111
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His
 1               5                  10                  15
Ile Asp Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
            20                  25                  30
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
        35                  40                  45
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
    50                  55                  60
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
65                  70                  75                  80
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                85                  90                  95
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>112
<211>549
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL29突变体G19D，Asp170，C172X
<221>CDS
<222>(1)...(549)
<221>变化
<222>(515)...(516)
<223>n＝A，T，G，或C
<400>112
atg ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc tgc    48
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys
 1               5                  10                  15
cac att gay agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc    96
His Ile Asp Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
             20                  25                  30
aag aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg    144
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
         35                  40                  45
agt tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc    192
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
     50                  55                  60
cag gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg    240
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
65                  70                  75                  80
ctg aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta    288
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                 85                  90                  95
gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc    336
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
tgt atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc    384
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
cac cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct    432
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
ggc tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg    480
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
cga gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg gay ctg dnn ctg aga acg tca    528
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Xaa Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
acc cac cct gag tcc acc tga                                        549
Thr His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>113
<211>182
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL29突变体G19D，Asp170，C172X
<221>变体
<222>(172)...(172)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>113
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys
 1               5                  10                  15
His Ile Asp Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
            20                  25                  30
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
        35                  40                  45
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
65                  70                  75                  80
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                85                  90                  95
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Xaa Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
Thr His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>114
<211>546
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL29突变体C15X，G18D，Asp169
<221>CDS
<222>(1)...(546)
<221>变化
<222>(44)...(45)
<223>n＝A，T，G，或C
<400>114
ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc dnn cac    48
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Xaa His
 1               5                   10                  15
att gay agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc aag    96
Ile Asp Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
             20                  25                  30
aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg agt    144
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
         35                  40                  45
tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc cag    192
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
     50                  55                  60
gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg ctg    240
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
 65                  70                  75                  80
aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta gac    288
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                 85                  90                  95
cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc tgt    336
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc cac    384
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct ggc    432
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg cga    480
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg gay ctg tgt ctg aga acg tca acc    528
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Cys Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
cac cct gag tcc acc tga                                            546
His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>115
<211>181
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL29突变体C15X，G18D，Asp169
<221>变体
<222>(15)...(15)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>115
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Xaa His
 1               5                  10                  15
Ile Asp Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
            20                  25                  30
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
        35                  40                  45
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
    50                  55                  60
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
65                  70                  75                  80
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                85                  90                  95
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Cys Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>116
<211>549
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL29突变体C16X，G19D，Asp170
<221>CDS
<222>(1)...(549)
<221>变化
<222>(47)...(48)
<223>n＝A，T，G，或C
<400>116
atg ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc dnn    48
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Xaa
 1               5                   10                  15
cac att gay agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc    96
His Ile Asp Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
             20                  25                  30
aag aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg    144
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
         35                  40                  45
agt tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc    192
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
     50                  55                  60
cag gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg    240
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
65                  70                  75                  80
ctg aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta    288
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                 85                  90                  95
gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc    336
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
tgt atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc    384
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
cac cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct    432
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
ggc tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg    480
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
cga gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg gay ctg tgt ctg aga acg tca    528
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Cys Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
acc cac cct gag tcc acc tga                                        549
Thr His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>117
<211>182
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL29突变体C16X，G19D，Asp170
<221>变体
<222>(16)...(16)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>117
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Xaa
 1               5                  10                  15
His Ile Asp Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
            20                  25                  30
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
        35                  40                  45
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
65                  70                  75                  80
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                85                  90                  95
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Cys Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
Thr His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>118
<211>57
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>信号序列
<221>CDS
<222>(1)...(57)
<400>118
atg gct gca gct tgg acc gtg gtg ctg gtg act ttg gtg cta ggc ttg    48
Met Ala Ala Ala Trp Thr Val Val Leu Val Thr Leu Val Leu Gly Leu
 1               5                   10                  15
gcc gtg gca                                                        57
Ala Val Ala
<210>119
<211>19
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>信号序列
<400>119
Met Ala Ala Ala Trp Thr Val Val Leu Val Thr Leu Val Leu Gly Leu
 1               5                  10                  15
Ala Val Ala
<210>120
<211>66
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>信号序列
<221>CDS
<222>(1)...(66)
<400>120
atg gtg ccc acc aca ttg gct tgg acc gtg gtg ctg gtg act ttg gtg    48
Met Val Pro Thr Thr Leu Ala Trp Thr Val Val Leu Val Thr Leu Val
 1               5                   10                  15
cta ggc ttg gcc gtg gca                                            66
Leu Gly Leu Ala Val Ala
             20
<210>121
<211>22
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>信号序列
<400>121
Met Val Pro Thr Thr Leu Ala Trp Thr Val Val Leu Val Thr Leu Val
 1               5                  10                  15
Leu Gly Leu Ala Val Ala
            20
<210>122
<211>528
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-28B C48S
<221>CDS
<222>(1)...(528)
<221>变化
<222>(143)...(144)
<223>n＝A，T，G，或C
<400>122
gtt cct gtc gcc agg ctc cgc ggg gct ctc ccg gat gca agg ggc tgc    48
Val Pro Val Ala Arg Leu Arg Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly Cys
 1               5                   10                  15
cac ata gcc cag ttc aag tcc ctg tct cca cag gag ctg cag gcc ttt    96
His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala Phe
             20                  25                  30
aag agg gcc aaa gat gcc tta gaa gag tcg ctt ctg ctg aag gac dnn    144
Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp Xaa
         35                  40                  45
aag tgc cgc tcc cgc ctc ttc ccc agg acc tgg gac ctg agg cag ctg    192
Lys Cys Arg Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln Leu
     50                  55                  60
cag gtg agg gag cgc ccc gtg gct ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg    240
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
 65                  70                  75                  80
ctg aag gtt ctg gag gcc acc gct gac act gac cca gcc ctg ggg gat    288
Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Gly Asp
                 85                  90                  95
gtc ttg gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cat atc ctc tcc cag ctc    336
Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu
            100                 105                 110
cgg gcc tgt atc cag cct cag ccc acg gca ggg ccc agg acc cgg ggc    384
Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg Gly
        115                 120                 125
cgc ctc cac cat tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc cca aaa aag gag    432
Arg Leu His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu
    130                 135                 140
tcc cct ggc tgc ctc gag gcc tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc    480
Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu
145                 150                  55                 160
ctc acg cga gac ctg aat tgt gtt gcc agc ggg gac ctg tgt gtc tga    528
Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val  *
                165                 170                 175
<210>123
<211>175
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>变体
<222>(48)...(48)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<223>IL-28B C48S
<400>123
Val Pro Val Ala Arg Leu Arg Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly Cys
 1               5                  10                  15
His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala Phe
            20                  25                  30
Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp Xaa
        35                  40                  45
Lys Cys Arg Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
65                  70                  75                  80
Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Gly Asp
                85                  90                  95
Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu
            100                 105                 110
Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg Gly
        115                 120                 125
Arg Leu His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu
    130                 135                 140
Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu
145                 150                 155                 160
Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
<210>124
<211>531
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL-28B C49S
<221>CDS
<222>(1)...(531)
<221>变化
<222>(146)...(147)
<223>n＝A，T，G，或C
<400>124
atg gtt cct gtc gcc agg ctc cgc ggg gct ctc ccg gat gca agg ggc    48
Met Val Pro Val Ala Arg Leu Arg Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly
 1               5                   10                  15
tgc cac ata gcc cag ttc aag tcc ctg tct cca cag gag ctg cag gcc    96
Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala
             20                  25                  30
ttt aag agg gcc aaa gat gcc tta gaa gag tcg ctt ctg ctg aag gac    144
Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp
         35                  40                  45
dnn aag tgc cgc tcc cgc ctc ttc ccc agg acc tgg gac ctg agg cag    192
Xaa Lys Cys Arg Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln
     50                  55                  60
ctg cag gtg agg gag cgc ccc gtg gct ttg gag gct gag ctg gcc ctg    240
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
 65                  70                  75                  80
acg ctg aag gtt ctg gag gcc acc gct gac act gac cca gcc ctg ggg    288
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Gly
                 85                  90                  95
gat gtc ttg gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cat atc ctc tcc cag    336
Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln
            100                 105                 110
ctc cgg gcc tgt atc cag cct cag ccc acg gca ggg ccc agg acc cgg    384
Leu Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg
        115                 120                 125
ggc cgc ctc cac cat tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc cca aaa aag    432
Gly Arg Leu His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys
    130                 135                 140
gag tcc cct ggc tgc ctc gag gcc tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc    480
Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg
145                 150                 155                 160
ctc ctc acg cga gac ctg aat tgt gtt gcc agc ggg gac ctg tgt gtc    528
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
tga                                                                531
 *
<210>125
<211>176
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>变体
<222>(49)...(49)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<223>Met IL-28B C49S
<400>125
Met Val Pro Val Ala Arg Leu Arg Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly
 1               5                  10                  15
Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala
            20                  25                  30
Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp
        35                  40                  45
Xaa Lys Cys Arg Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln
    50                  55                  60
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
65                  70                  75                  80
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Gly
                85                  90                  95
Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln
            100                 105                 110
Leu Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg
        115                  20                 125
Gly Arg Leu His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys
    130                 135                 140
Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg
145                 150                 155                 160
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
<210>126
<211>528
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-28B C50S
<221>CDS
<222>(1)...(528)
<221>变化
<222>(149)...(150)
<223>n＝A，T，G，或C
<400>126
gtt cct gtc gcc agg ctc cgc ggg gct ctc ccg gat gca agg ggc tgc    48
Val Pro Val Ala Arg Leu Arg Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly Cys
 1               5                   10                  15
cac ata gcc cag ttc aag tcc ctg tct cca cag gag ctg cag gcc ttt    96
His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala Phe
             20                  25                  30
aag agg gcc aaa gat gcc tta gaa gag tcg ctt ctg ctg aag gac tgc    144
Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp Cys
         35                  40                  45
aag dnn cgc tcc cgc ctc ttc ccc agg acc tgg gac ctg agg cag ctg    192
Lys Xaa Arg Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln Leu
     50                  55                  60
cag gtg agg gag cgc ccc gtg gct ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg    240
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
 65                  70                  75                  80
ctg aag gtt ctg gag gcc acc gct gac act gac cea gcc ctg ggg gat    288
Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Gly Asp
                 85                  90                  95
gtc ttg gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cat atc ctc tcc cag ctc    336
Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu
            100                 105                 110
cgg gcc tgt atc cag cct cag ccc acg gca ggg ccc agg acc cgg ggc    384
Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg Gly
        115                 120                 125
cgc ctc cac cat tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc cca aaa aag gag    432
Arg Leu His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu
    130                 135                 140
tcc cct ggc tgc ctc gag gcc tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc    480
Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu
145                 150                 155                 160
ctc acg cga gac ctg aat tgt gtt gcc agc ggg gac ctg tgt gtc tga    528
Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val  *
                165                 170                 175
<210>127
<211>175
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>变体
<222>(50)...(50)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<223>IL-28B C50S
<400>127
Val Pro Val Ala Arg Leu Arg Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly Cys
 1               5                  10                  15
His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala Phe
            20                  25                  30
Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp Cys
        35                  40                  45
Lys Xaa Arg Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
65                  70                  75                  80
Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Gly Asp
                85                  90                  95
Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu
            100                 105                 110
Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg Gly
        115                 120                 125
Arg Leu His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu
    130                 135                 140
Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu
145                 150                 155                 160
Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
<210>128
<211>531
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL-28B C51S
<221>CDS
<222>(1)...(531)
<221>变化
<222>(152)...(153)
<223>n＝A，T，G，或C
<400>128
atg gtt cct gtc gcc agg ctc cgc ggg gct ctc ccg gat gca agg ggc    48
Met Val Pro Val Ala Arg Leu Arg Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly
 1               5                   10                  15
tgc cac ata gcc cag ttc aag tcc ctg tct cca cag gag ctg cag gcc    96
Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala
             20                  25                  30
ttt aag agg gcc aaa gat gcc tta gaa gag tcg ctt ctg ctg aag gac    144
Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp
         35                  40                  45
tgc aag dnn cgc tcc cgc ctc ttc ccc agg acc tgg gac ctg agg cag    192
Cys Lys Xaa Arg Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln
     50                  55                  60
ctg cag gtg agg gag cgc ccc gtg gct ttg gag gct gag ctg gcc ctg    240
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
 65                  70                  75                  80
acg ctg aag gtt ctg gag gcc acc gct gac act gac cca gcc ctg ggg    288
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Gly
                 85                  90                  95
gat gtc ttg gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cat atc ctc tcc cag    336
Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln
            100                 105                 110
ctc cgg gcc tgt atc cag cct cag ccc acg gca ggg ccc agg acc cgg    384
Leu Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg
        115                 120                 125
ggc cgc ctc cac cat tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc cca aaa aag    432
Gly Arg Leu His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys
    130                 135                 140
gag tcc cct ggc tgc ctc gag gcc tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc    480
Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg
145                 150                 155                 160
ctc ctc acg cga gac ctg aat tgt gtt gcc agc ggg gac ctg tgt gtc    528
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
tga                                                                531
 *
<210>129
<211>176
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>变体
<222>(51)...(51)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<223>Met IL-28B C51S
<400>129
Met Val Pro Val Ala Arg Leu Arg Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly
 1               5                  10                  15
Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala
            20                  25                  30
Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp
        35                  40                  45
Cys Lys Xaa Arg Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln
    50                  55                  60
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
65                  70                  75                  80
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Gly
                85                  90                  95
Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln
            100                 105                 110
Leu Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg
        115                 120                 125
Gly Arg Leu His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys
    130                 135                 140
Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg
145                 150                 155                 160
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
<210>130
<211>528
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-28B C48S T87S H135Y
<221>CDS
<222>(1)...(528)
<221>变化
<222>143，144，261
<223>n＝A，T，G，或C
<400>130
gtt cct gtc gcc agg ctc cgc ggg gct ctc ccg gat gca agg ggc tgc    48
Val Pro Val Ala Arg Leu Arg Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly Cys
 1               5                   10                  15
cac ata gcc cag ttc aag tcc ctg tct cca cag gag ctg cag gcc ttt    96
His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala Phe
             20                  25                  30
aag agg gcc aaa gat gcc tta gaa gag tcg ctt ctg ctg aag gac dnn    144
Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp Xaa
         35                  40                  45
aag tgc cgc tcc cgc ctc ttc ccc agg acc tgg gac ctg agg cag ctg    192
Lys Cys Arg Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln Leu
     50                  55                  60
cag gtg agg gag cgc ccc gtg gct ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg    240
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
 65                  70                  75                  80
ctg aag gtt ctg gag gcc wsn gct gac act gac cca gcc ctg ggg gat    288
Leu Lys Val Leu Glu Ala Xaa Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Gly Asp
                 85                  90                  95
gtc ttg gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cat atc ctc tcc cag ctc    336
Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu
            100                 105                 110
cgg gcc tgt atc cag cct cag ccc acg gca ggg ccc agg acc cgg ggc    384
Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg Gly
        115                 120                 125
cgc ctc cac cat tgg ctg tay cgg ctc cag gag gcc cca aaa aag gag    432
Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu
    130                 135                 140
tcc cct ggc tgc ctc gag gcc tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc    480
Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu
145                 150                 155                 160
ctc acg cga gac ctg aat tgt gtt gcc agc ggg gac ctg tgt gtc tga    528
Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val  *
                165                 170                 175
<210>131
<211>175
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>变体
<222>(48)...(48)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<221>变体
<222>(87)...(87)
<223>Xaa＝Ser
<223>IL-28B C48S T87S H135Y
<400>131
Val Pro Val Ala Arg Leu Arg Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly Cys
 1               5                  10                  15
His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala Phe
            20                  25                  30
Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp Xaa
        35                  40                  45
Lys Cys Arg Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
65                  70                  75                  80
Leu Lys Val Leu Glu Ala Xaa Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Gly Asp
                 85                  90                  95
Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu
            100                 105                 110
Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg Gly
        115                 120                 125
Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu
    130                 135                 140
Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu
145                 150                 155                 160
Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
<210>132
<211>531
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL-28B C49S T88S H136Y
<221>CDS
<222>(1)...(531)
<221>变化
<222>146，147，264
<223>n＝A，T，G，或C
<400>132
atg gtt cct gtc gcc agg ctc cgc ggg gct ctc ccg gat gca agg ggc    48
Met Val Pro Val Ala Arg Leu Arg Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly
 1               5                   10                  15
tge cac ata gcc cag ttc aag tcc ctg tct cca cag gag ctg cag gcc    96
Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala
             20                  25                  30
ttt aag agg gcc aaa gat gcc tta gaa gag tcg ctt ctg ctg aag gac    144
Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp
         35                  40                  45
dnn aag tgc cgc tcc cgc ctc ttc ccc agg acc tgg gac ctg agg cag    192
Xaa Lys Cys Arg Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln
     50                  55                  60
ctg cag gtg agg gag cgc ccc gtg gct ttg gag gct gag ctg gcc ctg    240
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
 65                  70                  75                  80
acg ctg aag gtt ctg gag gcc wsn gct gac act gac cca gcc ctg ggg    288
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Xaa Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Gly
                 85                  90                  95
gat gtc ttg gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cat atc ctc tcc cag    336
Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln
            100                 105                 110
ctc cgg gcc tgt atc cag cct cag ccc acg gca ggg ccc agg acc cgg    384
Leu Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg
        115                 120                 125
ggc cgc ctc cac cat tgg ctg tay cgg ctc cag gag gcc cca aaa aag    432
Gly Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys
    130                 135                 140
gag tcc cct ggc tgc ctc gag gcc tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc    480
Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg
145                 150                 155                 160
ctc ctc acg cga gac ctg aat tgt gtt gcc agc ggg gac ctg tgt gtc    528
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
tga                                                                531
 *
<210>133
<211>176
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>变体
<222>(49)...(49)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<221>变体
<222>(88)...(88)
<223>Xaa＝Ser
<223>Met IL-28B C49S T88S H136Y
<400>133
Met Val Pro Val Ala Arg Leu Arg Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly
 1               5                  10                  15
Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala
            20                  25                  30
Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp
        35                  40                  45
Xaa Lys Cys Arg Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln
    50                  55                  60
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
65                  70                  75                  80
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Xaa Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Gly
                85                  90                  95
Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln
            100                 105                 110
Leu Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg
        115                 120                 125
Gly Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys
    130                 135                 140
Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg
145                 150                 155                 160
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
<210>134
<211>528
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-28B C50S T87S H135Y
<221>CDS
<222>(1)...(528)
<221>变化
<222>149，150，261
<223>n＝A，T，G，或C
<400>134
gtt cct gtc gcc agg ctc cgc ggg gct ctc ccg gat gca agg ggc tgc    48
Val Pro Val Ala Arg Leu Arg Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly Cys
 1               5                   10                  15
cac ata gcc cag ttc aag tcc ctg tct cca cag gag ctg cag gcc ttt    96
His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala Phe
             20                  25                  30
aag agg gcc aaa gat gcc tta gaa gag tcg ctt ctg ctg aag gac tgc    144
Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp Cys
         35                  40                  45
aag dnn cgc tcc cgc ctc ttc ccc agg acc tgg gac ctg agg cag ctg    192
Lys Xaa Arg Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln Leu
     50                  55                  60
cag gtg agg gag cgc ccc gtg gct ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg    240
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
 65                  70                  75                  80
ctg aag gtt ctg gag gcc wsn gct gac act gac cca gcc ctg ggg gat    288
Leu Lys Val Leu Glu Ala Xaa Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Gly Asp
                 85                  90                  95
gtc ttg gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cat atc ctc tcc cag ctc    336
Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu
            100                 105                 110
cgg gcc tgt atc cag cct cag ccc acg gca ggg ccc agg acc cgg ggc    384
Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg Gly
        115                 120                 125
 cgc ctc cac cat tgg ctg tay cgg ctc cag gag gcc cca aaa aag gag   432
 Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu
     130                 135                 140
tcc cct ggc tgc ctc gag gcc tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc    480
Ser Pro Gly cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu
145                 150                 155                 160
ctc acg cga gac ctg aat tgt gtt gcc agc ggg gac ctg tgt gtc tga    528
Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val  *
                165                 170                 175
<210>135
<211>175
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>变体
<222>(50)...(50)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<221>变体
<222>(87)...(87)
<223>Xaa＝Ser
<223>IL-28B C50S T87S H135Y
<400>135
Val Pro Val Ala Arg Leu Arg Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly Cys
 1               5                  10                  15
His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala Phe
            20                  25                  30
Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp Cys
        35                  40                  45
Lys Xaa Arg Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
65                  70                  75                  80
Leu Lys Val Leu Glu Ala Xaa Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Gly Asp
                85                  90                  95
Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu
            100                 105                 110
Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg Gly
        115                 120                 125
Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu
    130                 135                 140
Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu
145                 150                 155                 160
Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
<210>136
<211>531
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL-28B C51S T88S H136Y
<221>CDS
<222>(1)...(531)
<221>变化
<222>152，153，264
<223>n＝A，T，G，或C
<400>136
atg gtt cct gtc gcc agg ctc cgc ggg gct ctc ccg gat gca agg ggc    48
Met Val Pro Val Ala Arg Leu Arg Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly
 1               5                   10                  15
tgc cac ata gcc cag ttc aag tcc ctg tct cca cag gag ctg cag gcc    96
Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala
             20                  25                  30
ttt aag agg gcc aaa gat gcc tta gaa gag tcg ctt ctg ctg aag gac    144
Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp
         35                  40                  45
tgc aag dnn cgc tcc cgc ctc ttc ccc agg acc tgg gac ctg agg cag    192
Cys Lys Xaa Arg Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln
     50                  55                  60
ctg cag gtg agg gag cgc ccc gtg gct ttg gag gct gag ctg gcc ctg    240
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
 65                  70                  75                  80
acg ctg aag gtt ctg gag gcc wsn gct gac act gac cca gcc ctg ggg    288
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Xaa Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Gly
                 85                  90                  95
gat gtc ttg gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cat atc ctc tcc cag    336
Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln
            100                 105                 110
ctc cgg gcc tgt atc cag cct cag ccc acg gca ggg ccc agg acc cgg    384
Leu Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg
        115                 120                 125
ggc cgc ctc cac cat tgg ctg tay cgg ctc cag gag gcc cca aaa aag    432
Gly Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys
    130                 135                 140
gag tcc cct ggc tgc ctc gag gcc tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc    480
Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg
145                 150                 155                 160
ctc ctc acg cga gac ctg aat tgt gtt gcc agc ggg gac ctg tgt gtc    528
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
tga                                                                531
 *
<210>137
<211>176
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>变体
<222>(51)...(51)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<221>变体
<222>(88)...(88)
<223>Xaa＝Ser
<223>Met IL-28B C51S T88S H136Y
<400>137
Met Val Pro Val Ala Arg Leu Arg Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly
 1               5                  10                  15
Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala
            20                  25                  30
Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp
        35                  40                  45
Cys Lys Xaa Arg Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln
    50                  55                  60
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
65                  70                  75                  80
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Xaa Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Gly
                85                  90                  95
Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln
            100                 105                 110
Leu Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg
        115                 120                 125
Gly Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys
    130                 135                 140
Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg
145                 150                 155                 160
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
<210>138
<211>543
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-29 C170X，在N-末端甲硫氨酸和甘氨酸之后截短
<221>变化
<222>(509)...(510)
<223>n＝A，T，G，或C
<221>CDS
<222>(1)...(543)
<400>138
cct gtc ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc tgc cac att    48
Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His Ile
 1               5                   10                  15
ggc agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc aag aag    96
Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys Lys
             20                  25                  30
gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg agt tgc    144
Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser Cys
         35                  40                  45
agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc cag gtg    192
Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln Val
     50                  55                  60
agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg ctg aag    240
Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys
 65                  70                  75                  80
gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta gac cag    288
Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp Gln
                 85                  90                  95
ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc tgt atc    336
Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys Ile
            100                 105                 110
cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc cac cac    384
Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His His
        115                 120                 125
tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct ggc tgc    432
Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly Cys
    130                 135                 140
ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg cga gac    480
Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp
145                 150                 155                 160
ctc aaa tat gtg gcc gat ggg aac ctg dnn ctg aga acg tca acc cac    528
Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr His
                165                 170                 175
cct gag tcc acc tga                                                543
Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>139
<211>180
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>变体
<222>(170)...(170)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<223>IL-29 C170X，在N-末端甲硫氨酸和甘氨酸之后截短
<400>139
Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His Ile
 1               5                  10                  15
Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys Lys
            20                  25                  30
Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser Cys
        35                  40                  45
Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln Val
    50                  55                  60
Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys
65                  70                  75                  80
Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp Gln
                85                  90                  95
Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys Ile
            100                 105                 110
Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His His
        115                 120                 125
Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly Cys
    130                 135                 140
Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp
145                 150                 155                 160
Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr His
                165                 170                 175
Pro Glu Ser Thr
            180
<210>140
<211>540
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-29 C169X，在N-末端甲硫氨酸、甘氨酸和脯氨酸之后截短
<221>变化
<222>(506)...(507)
<223>n＝A，T，G，或C
<221>CDS
<222>(1)...(540)
<400>140
gtc ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc tgc cac att ggc    48
Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His Ile Gly
 1               5                   10                  15
agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc aag aag gcc    96
Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys Lys Ala
             20                  25                  30
agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg agt tgc agc    144
Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser Cys Ser
         35                  40                  45
tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc cag gtg agg    192
Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln Val Arg
     50                  55                  60
gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg ctg aag gtc    240
Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys Val
 65                  70                  75                  80
ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta gac cag ccc    288
Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp Gln Pro
                 85                  90                  95
ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc tgt atc cag    336
Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys Ile Gln
            100                 105                 110
cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc cac cac tgg    384
Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His His Trp
        115                 120                 125
ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct ggc tgc ctg    432
Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly Cys Leu
    130                 135                 140
gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg cga gac ctc    480
Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu
145                 150                 155                 160
aaa tat gtg gcc gat ggg aac ctg dnn ctg aga acg tca acc cac cct    528
Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr His Pro
                165                 170                 175
gag tcc acc tga                                                    540
Glu Ser Thr  *
<210>141
<211>179
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>变体
<222>(169)...(169)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<223>L-29 C169X，在N-末端甲硫氨酸、甘氨酸和脯氨酸之后截短
<400>141
Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His Ile Gly
 1               5                  10                  15
Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys Lys Ala
            20                  25                  30
Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser Cys Ser
        35                  40                  45
Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln Val Arg
    50                  55                  60
Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys Val
65                  70                  75                  80
Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp Gln Pro
                85                  90                  95
Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys Ile Gln
            100                 105                 110
Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His His Trp
        115                 120                 125
Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly Cys Leu
    130                 135                 140
Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu
145                 150                 155                 160
Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr His Pro
                165                 170                 175
Glu Ser Thr
<210>142
<211>537
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-29 C168X，在N-末端甲硫氨酸、甘氨酸、脯氨酸和缬氨酸之后截短
<221>变化
<222>(503)...(504)
<223>n＝A，T，G，或C
<221>CDS
<222>(1)...(537)
<400>142
ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc tgc cac att ggc agg    48
Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His Ile Gly Arg
 1               5                   10                  15
ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc aag aag gcc agg    96
Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys Lys Ala Arg
             20                  25                  30
gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg agt tgc agc tct    144
Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser Cys Ser Ser
         35                  40                  45
cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc cag gtg agg gag    192
Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln Val Arg Glu
     50                  55                  60
cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg ctg aag gtc ctg    240
Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys Val Leu
 65                  70                  75                  80
gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta gac cag ccc ctt    288
Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu
                 85                  90                  95
cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc tgt atc cag cct    336
His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys Ile Gln Pro
            100                 105                 110
cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc cac cac tgg ctg    384
Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His His Trp Leu
        115                 120                 125
cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct ggc tgc ctg gag    432
His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly Cys Leu Glu
    130                 135                 140
gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg cga gac ctc aaa    480
Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu Lys
145                 150                 155                 160
tat gtg gcc gat ggg aac ctg dnn ctg aga acg tca acc cac cct gag    528
Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr His Pro Glu
                165                 170                 175
tcc acc tga                                                        537
Ser Thr  *
<210>143
<211>178
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-29 C168X，在N-末端甲硫氨酸、甘氨酸、脯氨酸和缬氨酸之后截短
<221>变体
<222>(168)...(168)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>143
Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His Ile Gly Arg
1                5                  10                  15
Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys Lys Ala Arg
            20                  25                  30
Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser Cys Ser Ser
        35                  40                  45
Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln Val Arg Glu
    50                  55                  60
Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys Val Leu
65                  70                  75                  80
Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu
                85                  90                  95
His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys Ile Gln Pro
            100                 105                 110
Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His His Trp Leu
        115                 120                 125
His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly Cys Leu Glu
    130                 135                 140
Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu Lys
145                 150                 155                 160
Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr His Pro Glu
                165                 170                 175
Ser Thr
<210>144
<211>534
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-29 C167X，在N-末端甲硫氨酸、甘氨酸、脯氨酸、缬氨酸和脯氨酸之后截短
<221>变化
<222>(500)...(501)
<223>n＝A，T，G，或C
<221>CDS
<222>(1)...(534)
<400>144
act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc tgc cac att ggc agg ttc    48
Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His Ile Gly Arg Phe
 1               5                   10                  15
aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc aag aag gcc agg gac    96
Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys Lys Ala Arg Asp
             20                  25                  30
gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg agt tgc agc tct cct    144
Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser Cys Ser Ser Pro
         35                  40                  45
gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc cag gtg agg gag cgc    192
Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln Val Arg Glu Arg
     50                  55                  60
cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg ctg aag gtc ctg gag    240
Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys Val Leu Glu
 65                  70                  75                  80
gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta gac cag ccc ctt cac    288
Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His
                 85                  90                  95
acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc tgt atc cag cct cag    336
Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys Ile Gln Pro Gln
            100                 105                 110
ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc cac cac tgg ctg cac    384
Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His His Trp Leu His
        115                 120                 125
cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct ggc tgc ctg gag gca    432
Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly Cys Leu Glu Ala
    130                 135                 140
tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg cga gac ctc aaa tat    480
Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu Lys Tyr
145                 150                 155                 160
gtg gcc gat ggg aac ctg dnn ctg aga acg tca acc cac cct gag tcc    528
Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr His Pro Glu Ser
               165                 170                 175
acc tga                                                            534
Thr  *
<210>145
<211>177
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-29 C167X，在N-末端甲硫氨酸、甘氨酸、脯氨酸、缬氨酸和脯氨酸之后截短
<221>变体
<222>(167)...(167)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>145
Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His Ile Gly Arg Phe
 1               5                  10                  15
Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys Lys Ala Arg Asp
            20                  25                  30
Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser Cys Ser Ser Pro
        35                  40                  45
Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln Val Arg Glu Arg
    50                  55                  60
Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys Val Leu Glu
65                  70                  75                  80
Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His
                85                  90                  95
Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys Ile Gln Pro Gln
            100                 105                 110
Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His His Trp Leu His
        115                 120                 125
Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly Cys Leu Glu Ala
    130                 135                 140
Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu Lys Tyr
145                 150                 155                 160
Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr His Pro Glu Ser
                165                 170                 175
Thr
<210>146
<211>531
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-29 C166X，在N-末端甲硫氨酸、甘氨酸、脯氨酸、缬氨酸、脯氨酸和苏氨酸之后截短
<221>变化
<222>(497)...(498)
<223>n＝A，T，G，或C
<221>CDS
<222>(1)...(531)
<400>146
tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc tgc cac att ggc agg ttc aaa    48
Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His Ile Gly Arg Phe Lys
 1               5                   10                  15
tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc aag aag gcc agg gac gcc    96
Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys Lys Ala Arg Asp Ala
             20                  25                  30
ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg agt tgc agc tct cct gtc    144
Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser Cys Ser Ser Pro Val
         35                  40                  45
ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc cag gtg agg gag cgc cct    192
Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro
     50                  55                  60
gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg ctg aag gtc ctg gag gcc    240
Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala
 65                  70                  75                  80
gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta gac cag ccc ctt cac acc    288
Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr
                 85                  90                  95
ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc tgt atc cag cct cag ccc    336
Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro
            100                 105                 110
aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc cac cac tgg ctg cac cgg    384
Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His His Trp Leu His Arg
        115                 120                 125
ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct ggc tgc ctg gag gca tct    432
Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly Cys Leu Glu Ala Ser
    130                 135                 140
gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg cga gac ctc aaa tat gtg    480
Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu Lys Tyr Val
145                 150                 155                 160
gcc gat ggg aac ctg dnn ctg aga acg tca acc cac cct gag tcc acc    528
Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr His Pro Glu Ser Thr
                165                 170                 175
tga                                                                531
 *
<210>147
<211>176
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-29 C166X，在N-末端甲硫氨酸、甘氨酸、脯氨酸、缬氨酸、脯氨酸和苏氨酸之后截短
<221>变体
<222>(166)...(166)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>147
Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His Ile Gly Arg Phe Lys
 1               5                  10                  15
Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys Lys Ala Arg Asp Ala
            20                  25                  30
Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser Cys Ser Ser Pro Val
        35                  40                  45
Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro
    50                  55                  60
Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala
65                  70                  75                  80
Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr
                85                  90                  95
Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro
            100                 105                 110
Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His His Trp Leu His Arg
        115                 120                 125
Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly Cys Leu Glu Ala Ser
    130                 135                 140
Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu Lys Tyr Val
145                 150                 155                 160
Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr His Pro Glu Ser Thr
                165                 170                 175
<210>148
<211>528
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-29 C165X，在N-末端甲硫氨酸、甘氨酸、脯氨酸、缬氨酸、脯氨酸、苏氨酸和丝氨酸之后截短
<221>变化
<222>(494)...(495)
<223>n＝A，T，G，或C
<221>CDS
<222>(1)...(528)
<400>148
aag ccc acc aca act ggg aag ggc tgc cac att ggc agg ttc aaa tct    48
Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His Ile Gly Arg Phe Lys Ser
 1               5                   10                  15
ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc aag aag gcc agg gac gcc ttg    96
Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu
             20                  25                  30
gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg agt tgc agc tct cct gtc ttc    144
Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe
         35                  40                  45
ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc cag gtg agg gag cgc cct gtg    192
Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val
     50                  55                  60
gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg ctg aag gtc ctg gag gcc gct    240
Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala
 65                  70                  75                  80
gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta gac cag ccc ctt cac acc ctg    288
Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu
                 85                  90                  95
cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc tgt atc cag cct cag ccc aca    336
His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr
            100                 105                 110
gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc cac cac tgg ctg cac cgg ctc    384
Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His His Trp Leu His Arg Leu
        115                 120                 125
cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct ggc tgc ctg gag gca tct gtc    432
Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val
     130                 135                 140
acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg cga gac ctc aaa tat gtg gcc    480
Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala
145                 150                 155                  60
gat ggg aac ctg dnn ctg aga acg tca acc cac cct gag tcc acc tga    528
Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr His Pro Glu Ser Thr  *
                165                 170                 175
<210>149
<211>175
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-29 C165X，在N-末端甲硫氨酸、甘氨酸、脯氨酸、缬氨酸、脯氨酸、苏氨酸和丝氨酸之后截短
<221>变体
<222>(165)...(165)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>149
Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His Ile Gly Arg Phe Lys Ser
 1               5                  10                  15
Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu
            20                  25                  30
Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe
        35                  40                  45
Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val
    50                  55                  60
Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala
65                  70                  75                  80
Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu
                85                  90                  95
His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr
            100                 105                 110
Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His His Trp Leu His Arg Leu
        115                 120                 125
Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val
    130                 135                 140
Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala
145                 150                 155                 160
Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr His Pro Glu Ser Thr
                165                 170                 175
<210>150
<211>552
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>在N-末端甲硫氨酸之后插入Leu的IL-29，C173X
<221>变化
<222>(518)...(519)
<223>n＝A，T，G，或C
<221>CDS
<222>(1)...(552)
<400>150
atg ytn ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc    48
Met Leu Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly
 1               5                   10                  15
tgc cac att ggc agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc    96
Cys His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser
             20                  25                  30
ttc aag aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac    144
Phe Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn
         35                  40                  45
tgg agt tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt    192
Trp Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu
     50                  55                  60
ctc cag gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg    240
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
 65                  70                  75                  80
acg ctg aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc    288
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val
                 85                  90                  95
cta gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag    336
Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln
            100                 105                 110
gcc tgt atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc    384
Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg
        115                 120                 125
ctc cac cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc    432
Leu His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser
    130                 135                 140
gct ggc tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc    480
Ala Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu
145                 150                 155                 160
acg cga gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg aac ctg dnn ctg aga acg    528
Thr Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr
                165                 170                 175
tca acc cac cct gag tcc acc tga                                    552
Ser Thr His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>151
<211>183
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>在N-末端甲硫氨酸之后插入Leu的IL-29，C173X
<221>变体
<222>(173)...(173)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>151
Met Leu Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly
 1               5                  10                  15
Cys His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser
            20                  25                  30
Phe Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn
        35                  40                  45
Trp Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu
    50                  55                  60
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
65                  70                  75                  80
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val
                85                  90                  95
Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln
            100                 105                 110
Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg
        115                 120                 125
Leu His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser
    130                 135                 140
Ala Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu
145                 150                 155                 160
Thr Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr
                165                 170                 175
Ser Thr His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>152
<211>549
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-29 G2L C172X
<221>变化
<222>(515)...(516)
<223>n＝A，T，G，或C
<221>CDS
<222>(1)...(549)
<400>152
atg ytn cct gtc ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc tgc    48
Met Leu Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys
 1               5                   10                  15
cac att ggc agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc    96
His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
             20                  25                  30
aag aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg    144
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
         35                  40                  45
agt tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc    192
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
     50                  55                  60
cag gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg    240
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
 65                  70                  75                  80
ctg aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta    288
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                 85                  90                  95
gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc    336
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
tgt atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc    384
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
cac cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct    432
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
ggc tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg    480
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
cga gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg aac ctg dnn ctg aga acg tca    528
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
acc cac cct gag tcc acc tga                                        549
Thr His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>153
<211>182
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-29 G2L C172X
<221>变体
<222>(172)...(172)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>153
Met Leu Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys
 1               5                  10                  15
His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
            20                  25                  30
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
        35                  40                  45
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
65                  70                  75                  80
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                85                  90                  95
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
Thr His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>154
<211>552
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>在N-末端甲硫氨酸之后插入Ile的IL-29，C173X
<221>变化
<222>(518)...(519)
<223>n＝A，T，G，或C
<221>CDS
<222>(1)...(552)
<400>154
atg ath ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc    48
Met Ile Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly
 1               5                   10                  15
tgc cac att ggc agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc    96
Cys His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser
             20                  25                  30
ttc aag aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac    144
Phe Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn
         35                  40                  45
tgg agt tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt    192
Trp Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu
     50                  55                  60
ctc cag gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg    240
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
 65                  70                  75                  80
acg ctg aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc    288
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val
                 85                  90                  95
cta gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag    336
Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln
            100                 105                 110
gcc tgt atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc    384
Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg
        115                 120                 125
ctc cac cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc    432
Leu His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser
    130                 135                 140
gct ggc tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc    480
Ala Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu
145                 150                 155                 160
acg cga gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg aac ctg dnn ctg aga acg    528
Thr Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr
                165                 170                 175
tca acc cac cct gag tcc acc tga                                    552
Ser Thr His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>155
<211>183
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>在N-末端甲硫氨酸之后插入ILe的IL-29，C173X
<221>变体
<222>(173)...(173)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>155
Met Ile Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly
 1               5                  10                  15
Cys His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser
            20                  25                  30
Phe Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn
        35                  40                  45
Trp Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu
    50                  55                  60
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
65                  70                  75                  80
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val
                85                  90                  95
Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln
            100                 105                 110
Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg
        115                 120                 125
Leu His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser
    130                 135                 140
Ala Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu
145                 150                 155                 160
Thr Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr
               165                 170                 175
Ser Thr His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>156
<211>549
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-29 G2I C172X
<221>变化
<222>(515)...(516)
<223>n＝A，T，G，或C
<221>CDS
<222>(1)...(549)
<400>156
atg ath cct gtc ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc tgc    48
Met Ile Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys
 1               5                   10                  15
cac att ggc agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc    96
His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
             20                  25                  30
aag aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg    144
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
         35                  40                  45
agt tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc    192
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
     50                  55                  60
cag gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg    240
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
 65                  70                  75                  80
ctg aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta    288
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                 85                  90                  95
gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc    336
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
tgt atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc    384
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
cac cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct    432
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
ggc tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg    480
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
cga gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg aac ctg dnn ctg aga acg tca    528
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
acc cac cct gag tcc acc tga                                        549
Thr His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>157
<211>182
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-29 G2I C172X
<221>变体
<222>(172)...(172)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>157
Met Ile Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys
 1               5                  10                  15
His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
            20                  25                  30
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
        35                  40                  45
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
65                  70                  75                  80
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                85                  90                  95
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
Thr His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>158
<211>531
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>在N-末端甲硫氨酸之后缺失了第2-7位氨基酸残基的IL-29，C166X
<221>变化
<222>(497)...(498)
<223>n＝A，T，G，或C
<221>CDS
<222>(1)...(531)
<400>158
atg aag ccc acc aca act ggg aag ggc tgc cac att ggc agg ttc aaa    48
Met Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His Ile Gly Arg Phe Lys
 1               5                   10                  15
tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc aag aag gcc agg gac gcc    96
Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys Lys Ala Arg Asp Ala
             20                  25                  30
ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg agt tgc agc tct cct gtc    144
Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser Cys Ser Ser Pro Val
         35                  40                  45
ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc cag gtg agg gag cgc cct    192
Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro
     50                  55                  60
gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg ctg aag gtc ctg gag gcc    240
Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala
 65                  70                  75                  80
gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta gac cag ccc ctt cac acc    288
Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr
                 85                  90                  95
ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc tgt atc cag cct cag ccc    336
Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro
            100                 105                 110
aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc cac cac tgg ctg cac cgg    384
Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His His Trp Leu His Arg
        115                 120                 125
ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct ggc tgc ctg gag gca tct    432
Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly Cys Leu Glu Ala Ser
    130                 135                 140
gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg cga gac ctc aaa tat gtg    480
Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu Lys Tyr Val
145                 150                 155                 160
gcc gat ggg aac ctg dnn ctg aga acg tca acc cac cct gag tcc acc    528
Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr His Pro Glu Ser Thr
                165                 170                 175
tga                                                                531
 *
<210>159
<211>176
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>N-末端甲硫氨酸之后缺失了第2-7位氨基酸残基的IL-29，C166X
<221>变体
<222>(166)...(166)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>159
Met Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His Ile Gly Arg Phe Lys
 1               5                  10                  15
Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys Lys Ala Arg Asp Ala
            20                  25                  30
Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser Cys Ser Ser Pro Val
        35                  40                  45
Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro
    50                  55                  60
Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu LVs Val Leu Glu Ala
65                  70                  75                  80
Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr
                85                  90                  95
Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro
            100                 105                 110
Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His His Trp Leu His Arg
        115                 120                 125
Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly Cys Leu Glu Ala Ser
    130                 135                 140
Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu Lys Tyr Val
145                 150                 155                 160
Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr His Pro Glu Ser Thr
                165                 170                 175
<210>160
<211>558
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>在N-末端甲硫氨酸之后插入了Glu，Ala和Glu的IL-29，C175X
<221>变化
<222>(524)...(525)
<223>n＝A，T，G，或C
<221>CDS
<222>(1)...(558)
<400>160
atg gar gcn gar ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg    48
Met Glu Ala Glu Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly
 1               5                   10                  15
aag ggc tgc cac att ggc agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta    96
Lys Gly Cys His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu
             20                  25                  30
gcg agc ttc aag aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg    144
Ala Ser Phe Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu
         35                  40                  45
aaa aac tgg agt tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg    192
Lys Asn Trp Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu
     50                  55                  60
agg ctt ctc cag gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg    240
Arg Leu Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu
 65                  70                  75                  80
gcc ctg acg ctg aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag    288
Ala Leu Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu
                 85                  90                  95
gac gtc cta gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag    336
Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln
            100                 105                 110
ctc cag gcc tgt atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg    384
Leu Gln Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg
        115                 120                 125
ggc cgc ctc cac cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag    432
Gly Arg Leu His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys
    130                 135                 140
gag tcc gct ggc tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc    480
Glu Ser Ala Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg
145                 150                 155                 160
ctc ctc acg cga gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg aac ctg dnn ctg    528
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu
                165                 170                 175
aga acg tca acc cac cct gag tcc acc tga                            558
Arg Thr Ser Thr His Pro Glu Ser Thr  *
            180                 185
<210>161
<211>185
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>在N-末端甲硫氨酸之后插入了Glu，Ala和Glu的IL-29，C175X
<221>变体
<222>(175)...(175)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>161
Met Glu Ala Glu Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly
 1               5                  10                  15
Lys Gly Cys His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu
            20                  25                  30
Ala Ser Phe Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu
        35                  40                  45
Lys Asn Trp Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu
    50                  55                  60
Arg Leu Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu
65                  70                  75                  80
Ala Leu Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu
                85                  90                  95
Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln
            100                 105                 110
Leu Gln Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg
        115                 120                 125
Gly Arg Leu His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys
    130                 135                 140
Glu Ser Ala Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg
145                 150                 155                 160
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu
                165                 170                 175
Arg Thr Ser Thr His Pro Glu Ser Thr
            180                 185

Claims (34)

1.一种分离的多肽，其包含与选自以下组的序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，所述组由SEQ ID NO：19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159和161组成；其中所述多肽具有抗病毒活性。
2.权利要求1的多肽，其中所述多肽包含与选自以下组的序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列，所述组由SEQ ID NO：19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、和161组成。
3.权利要求1的多肽，其中所述多肽具有抗肝炎活性。
4.权利要求1的多肽，其中所述多肽具有抗乙型肝炎活性。
5.权利要求1的多肽，其中所述多肽具有抗丙型肝炎活性。
6.权利要求1的多肽，其中所述多肽进一步包含共价连接于该多肽N末端的聚乙二醇部分。
7.权利要求6的多肽，其中所述聚乙二醇部分是mPEG丙醛。
8.权利要求7的多肽，其中所述mPEG丙醛的分子量为约20kD或30kD。
9.权利要求7的多肽，其中所述mPEG丙醛是直链的。
10.一种分离的多肽，其包含选自以下组的氨基酸序列，所述组由SEQ IDNO：19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、和161组成。
11.编码多肽的分离的多核苷酸，其中所编码的多肽包含与选自以下组的序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，所述组由SEQ ID NO：19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、和161组成；其中该多肽具有抗病毒活性。
12.权利要求11的分离的多核苷酸，其中所编码的多肽包含与选自以下组的序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列，所述组由SEQ ID NO：19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、和161组成。
13.权利要求11的分离的多核苷酸，其中所编码的多肽具有抗乙型肝炎活性。
14.权利要求11的分离的多核苷酸，其中所编码的多肽具有抗丙型肝炎活性。
15.一种分离的多核苷酸，其能在杂交条件下与选自以下组的核苷酸序列或其互补序列杂交，所述组由SEQ ID NO：18、20、22、24、26、28、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154、156、158、和160组成，所述杂交条件为在约42℃至约70℃，在50％甲酰胺、5xSSC(1xSSC：0.15M氯化钠和15mM柠檬酸钠)、50mM磷酸钠(pH7.6)、5x Denhardt′s液、和2％(w/v)牛血清白蛋白、10％硫酸葡聚糖、和20mg/ml变性的剪切鲑精DNA中，其中该多核苷酸编码具有抗病毒活性的多肽。
16.权利要求15的分离的多核苷酸，其中所编码的多肽具有抗乙型肝炎活性。
17.权利要求15的分离的多核苷酸，其中所编码的多肽具有抗丙型肝炎活性。
18.一种分离的多核苷酸，其中包含选自以下组的核苷酸序列，所述组由SEQ ID NO：18、20、22、24、26、28、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154、156、158和160组成。
19.表达载体，其包含下列可操作相连的元件：
转录启动子；
编码权利要求1的多肽的DNA区段；
和转录终止子。
20.培养的细胞，其中已经导入了权利要求19的表达载体，其中所述细胞表达由该DNA区段编码的多肽。
21.生产多肽的方法，其包括：
培养其中已导入了权利要求19的表达载体的细胞，其中该细胞表达由所述DNA区段编码的多肽；并且
回收表达的多肽。
22.特异结合权利要求1的多肽的抗体或抗体片段。
23.权利要求22的抗体，其中该抗体选自多克隆抗体，鼠单克隆抗体，源自鼠单克隆抗体的人源化抗体，抗体片段，中和性抗体，和人单克隆抗体。
24.权利要求22的抗体片段，其中该抗体片段选自F(ab′)、F(ab)、Fab′、Fab、Fv、scFv和最小识别单位。
25.抗独特型抗体，其包含特异结合权利要求22的抗体的抗独特型抗体。
26.融合蛋白，其包含含有选自以下组的氨基酸残基序列的多肽和聚烷氧化物部分，所述组由SEQ ID NO：2、4、6、8、10、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159和161组成。
27.权利要求26的融合蛋白，其中聚烷氧化物部分是聚乙二醇。
28.权利要求27的融合蛋白，其中聚乙二醇连接于所述多肽的N末端或C末端。
29.权利要求27的融合蛋白，其中聚乙二醇是mPEG丙醛。
30.权利要求27的融合蛋白，其中聚乙二醇是分支的或直链的。
31.权利要求27的融合蛋白，其中聚乙二醇的分子量为约20kD或30kD。
32.编码包含由共价键连接的第一部分和第二部分的融合蛋白的分离多核苷酸，其中第一部分包含选自以下组的多肽，所述组由SEQ ID NO：19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159和161组成；而且其中第二部分包含聚乙二醇。
33.一种制剂，其中包含：
选自以下组的分离的多肽，所述组由SEQ ID NO：19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159和161组成；和
药学上可接受的载体。
34.包含权利要求33的制剂的试剂盒。
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