CN101031316A - Il－28和il－29治疗癌症和自身免疫性疾病的用途 - Google Patents

Il－28和il－29治疗癌症和自身免疫性疾病的用途 Download PDF

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CN101031316A CN 200580030590 CN200580030590A CN101031316A CN 101031316 A CN101031316 A CN 101031316A CN 200580030590 CN200580030590 CN 200580030590 CN 200580030590 A CN200580030590 A CN 200580030590A CN 101031316 A CN101031316 A CN 101031316A
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K·M·克鲁施尔
P·V·斯瓦库玛
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陈仲良
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Abstract

使用IL－28和IL－29分子治疗患有癌症和自身免疫性疾病的患者的方法。IL－28和IL－29分子包括具有和人IL－28或IL－29多肽序列的同源性的多肽和融合至具有IL－28和IL－29功能性活性的多肽的蛋白。该分子可用作单一疗法或和其他已知的癌症和/或自身免疫疗法一起使用。

Description

IL-28和IL-29治疗癌症和自身免疫性疾病的用途
发明背景
细胞因子通常刺激造血谱系细胞的增殖或分化，或参与身体的免疫和炎症反应。影响血细胞生成的细胞因子的示例是刺激红细胞的发育的促红细胞生成素(EPO)、刺激巨核细胞谱系的细胞的发育的血小板生成素(TPO)、和刺激嗜中性粒细胞的发育的粒细胞集落刺激因子(G-CSF)。这些细胞因子用于在遭受贫血症、血小板减少症和中性粒细胞减少症或接受癌症化学疗法的患者中恢复正常的血细胞水平。
白细胞介素是介导免疫应答的细胞因子的家族。免疫应答的中心是T细胞，该细胞产生许多细胞因子和针对抗原的适应性免疫。已将由T细胞产生的细胞因子分类为1类和2类(Kelso，A. Immun.Cell Biol. 76：300-317，1998)。1类细胞因子包括IL-2、IFN-γ、LT-α，其参与炎症反应、病毒免疫、细胞内寄生物免疫和同种异体移植物排斥。2类细胞因子包括IL-4、IL-5、IL-6、IL-10和IL-13，参与体液反应、蠕虫免疫和过敏反应。1类和2类之间共有的细胞因子包括IL-3、GM-CSF和TNF-α。一些证据表明产生1类和2类的T细胞群体优选地迁移入不同类型的发炎组织。
免疫系统是人体抵抗由病原体即细菌、病毒、真菌等引起的疾病，以及抵抗由身体的自身细胞和组织的异常生长(即癌症肿瘤)导致的疾病的主要防御系统。正常情况下，免疫系统能够区分身体的正常细胞或“自身”和外来病原体或异常细胞或“非自身”。免疫系统避免和自身身体反应的过程称为耐受。有时，免疫系统丧失识别“自身”为正常的能力，随后产生抗组织或细胞的反应，导致耐受的丧失，产生自身免疫状态。由自身免疫性引起的病理学通常具有严重的临床后果，其是世界上特别是发达国家中的其中一个主要健康问题。
自身免疫性疾病的一个示例是多发性硬化症(MS)，其是中枢神经系统(CNS)的进行性疾病。在MS患者中，患者自身的免疫系统破坏髓鞘质，其是围绕和使大脑及脊髓中的神经纤维绝缘的保护层。髓鞘的破坏导致神经传递的破坏和形成瘢痕破坏神经纤维。最终的结果是在受影响的患者中表现许多症状，包括麻刺感或麻木感、言语不清、视觉损伤、眩晕等。在疾病的过程中，四肢无力，导致行动问题，在最严重的情况下，导致四肢瘫痪。基于临床诊断，目前存在四种类型的MS分类，其基于大脑或脊髓受影响的部分、严重度、发作频率等。
MS目前的治疗法包括皮质类固醇药物(以减轻急性发作的症状)以及其他药物如IFN-β和Novantrone。Novantrone已被批准用于晚期MS患者，特别是还未进行其他治疗法的患者。Novantrone对大多数细胞具有细胞毒性，从而如所预期的，具有许多副作用并在最大治疗效果所需要的剂量上是有毒的。IFN-β也是有毒的，要限制该药在
MS患者中的剂量。此外，已显示这些药物的连续使用使患者对进一步使用同一药物不敏感，因此限制了使用这些药物作为长期治疗剂的能力。
从治疗的观点来看，特别吸引人的是干扰素(由De Maeyer和DeMaeyer-Guignard，“Interferons，”in The Cytokine Handbook，第3版，Thompson(ed.)，pages 491-516(Academic Press Ltd.1998)，和由Walsh，Biopharmaceuticals：Biochemistry andBiotechnology，pages 158-188(John Wiley&Sons 1998)提供关于干扰素的综述)。干扰素表现了各种生物学活性，并用于治疗某些自身免疫性疾病、特定的癌症和增强抗传染因子(包括病毒、细菌、真菌和原生动物)的免疫应答。目前，已鉴定了6种形式的干扰素，其已被分为两大类。所谓的“I类”IFN包括IFN-α、IFN-β、IFN-ω、IFN-δ和干扰素-τ。目前，IFN-γ和IFN-α的一个亚类是仅有的II类IFN。
I类IFN，被认为来源于相同的祖先基因，已保留足够的相似结构以通过相同的细胞表面受体发挥作用。人IFN-α/β受体的α链包含具有II类细胞因子受体的特征的细胞外N端结构域。IFN-γ和I类IFN或II类IFN-α亚类不共有显著的同源性，但和I类IFN共有许多生物学活性。
临床医生通过使用干扰素治疗广泛的病症来利用该蛋白的多种活性。例如，IFN-α的一种形式已在超过50个国家中被批准用于治疗病症例如毛细胞性白血病、肾细胞癌、基细胞癌、恶性黑色素瘤、AIDS相关的卡波西氏肉瘤、多发性骨髓瘤、慢性髓细胞性白血病、非何杰金淋巴瘤、喉乳头状瘤病、蕈样真菌病、尖锐湿疣、慢性乙型肝炎、丙型肝炎、慢性丁型肝炎和慢性非甲型、非乙型/丙型肝炎。美国食品与药品管理局已批准了使用IFN-β治疗多发性硬化症(神经系统的慢性疾病)。使用IFN-γ治疗慢性肉芽肿病，其中干扰素增强患者破坏传染性细菌、真菌和原生生物病原体的免疫应答。临床研究也表明IFN-γ可用于治疗AIDS、利什曼病和瘤型麻风。
IL-28A、IL-28B和IL-29构成近年来发现的新的蛋白家族，所述蛋白具有和I类干扰素的序列同源性以及和IL-10的基因组同源性。在共同拥有的PCT申请WO 02/086087和Sheppard等人， Nature Immunol. 4：63-68，2003(两者都在此引用作为参考)中全面描述了该新家族。在功能上，IL-28和IL-29在其诱导细胞中的抗病毒状态的能力上和I类INF相似，但与I类IFN不同，其不表现抗某些B细胞系的抗增殖活性。
可激活即通过抗原或其他刺激物激活成熟T细胞，以产生，例如，细胞因子、生物化学信号转导分子或进一步影响T细胞群体命运的受体。
B细胞可通过其细胞表面上的受体(包括B细胞受体)和进行辅助细胞的功能(例如产生细胞因子)的其他辅助分子来激活。B细胞的激活可导致这样的抗体产生，该抗体结合肿瘤细胞上的免疫原性细胞表面蛋白和启动补体介导的细胞裂解、建立NK细胞或巨噬细胞至肿瘤的桥梁以进行抗体依赖性细胞介导的细胞毒反应(ADCC)、通过阻止存活或诱导细胞凋亡信号干扰肿瘤细胞生长或通过APC促进肿瘤抗原的吸收和呈递来增强免疫原性。因此，体内增强B细胞应答具有提高抗肿瘤活性的潜能(Blattman等人， Science， 305：200-205(July 9，2004))。
因此，可提高天然宿主抗肿瘤诱导或进展的防御能力的试剂可增加患者的好转率和增加患者的存活率，而无以前的方法的细胞毒性副作用。
本发明提供了通过施用可用作单一疗法或和化学疗法、放射疗法、小分子或其他生物制剂一起使用的IL-28A、IL-28B或IL-29组合物来治疗实体瘤、淋巴瘤和自身免疫病症的这些方法。根据此处的教导，这些用途和其他用途对于本领域技术人员来说应当是很显然的。
附图概述
图1显示在第5和第12天用小鼠IL-28质粒注射的小鼠在体内抑制RENCA肿瘤的生长。
图2显示用小鼠IL-28质粒、小鼠IFN-α质粒和N末端缀合至20kD甲氧基-聚乙二醇丙醛的人IL-29C172S多肽注射的小鼠在体内抑制RENCA肿瘤生长。在第5天和12天注射质粒。从第5天至第21天每隔一天提供蛋白。
图3显示用1μg、5μg和25μg N末端缀合至20kD甲氧基-聚乙二醇丙醛的人IL-29C172S多肽和N末端缀合至20kD甲氧基-聚乙二醇丙醛的人IL-29C172S d2-7多肽注射的小鼠在体内抑制RENCA肿瘤的生长。从第5至23天每隔一天提供所有蛋白。
图4显示当肿瘤体积达到100mm3时，每隔一天用载体(■)、5μg通过N末端缀合至20kD甲氧基-聚乙二醇丙醛的人IL-29C172S d2-7多肽()、和25μg通过N末端缀合至20kD甲氧基-聚乙二醇丙醛(◆)的人IL-29C172S d2-7多肽注射20天的小鼠，当肿瘤达到100mm3时，每天用5μg通过N末端缀合至20kD甲氧基-聚乙二醇丙醛的人IL-29C172S d2-7多肽注射20天的小鼠(●)，和从肿瘤注射的第5天开始，每隔一天预防性地施用5μg通过N末端缀合至20kD甲氧基-聚乙二醇丙醛的人IL-29C172S d2-7多肽，进行20天的小鼠(▲)。
图5A显示从第0天开始，然后每隔一天经腹膜内注射25μg通过N末端缀合至20kD甲氧基-聚乙二醇丙醛的人IL-29C172S d2-7多肽10次的小鼠在E.G7胸腺瘤模型中延长了小鼠的存活期。
图5B显示从第0天开始，然后每隔一天用25μg通过末端连接至20k甲氧基-聚乙二醇丙醛的人IL-29C172S d2-7多肽或载体经腹膜内注射10次的小鼠在E.G7胸腺瘤模型中抑制肿瘤生长。
本发明的描述
在下列的描述中，广泛地使用了许多术语。提供下列的定义以帮助理解本发明。
除非另外指出，“a”、“an”、“the”和“至少一”可交换使用并且表示一或超过一。
此处使用的术语“亲和标记物”是指可附着至第二多肽以提供第二多肽的纯化或检测或提供用于第二多肽附着至基质的位点的多肽片段。原则上，可获得其抗体或其他特异性结合试剂的任何肽或蛋白可用作亲和标记物。亲和标记物包括多组氨酸片段、A蛋白(Nilsson等人，EMBO J. 4：1075，1985；Nilsson等人， Methods Enzymol. 198：3，1991)、谷胱甘肽S转移酶(Smith和Johnson， Gene  67：31，1988)、Glu-Glu亲和标记物(Grussenmeyer等人， Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82：7952-4，1985)、P物质、FlagTM肽(Hopp等人， Biotechnology 6：1204-10，1988)、链霉抗生物素蛋白结合肽或其他抗原性表位或结合结构域。一般参见，Ford等人， Protein Expression and Purification  2：95-107，1991。可从商业提供商商购获得编码亲和标记物的DNA(例如，Pharmacia Biotech，Piscataway，NJ)。
此处所用的术语“等位变体”是指占据相同染色体基因座的基因的两种或更多种可选择的形式中的任一种形式。等位变异天然地通过突变产生，其可导致群体中的表型多态现象。基因突变可以是沉默的(被编码的多肽中无变化)或可编码具有变异的氨基酸序列的多肽。术语等位变体此处也用于表示由基因的等位变体编码的蛋白。
术语“氨基末端”和“羧基末端”此处用于表示多肽内的位点。当上下文允许时，这些术语用于，参照多肽的特定序列或部分，表示临近或相对位置。例如，位于多肽内的参照序列的羧基末端的某些序列靠近参照序列的羧基末端，但不必位于完整的多肽的羧基末端。
术语“癌症”或“癌细胞”此处用于表示在瘤中发现的组织或细胞，所述瘤具有将其和正常组织或组织细胞区分开的特征。在这些特征中，包括但不限于：退行性变化的程度、形状上的不规则、细胞轮廓的不清楚、核的大小、细胞核或细胞质结构的变化、其他表型变化、表示癌性或癌前状态的细胞蛋白的存在、增加的有丝分裂数目和转移的能力。关于“癌症”的术语包括癌、肉瘤、肿瘤、上皮瘤、白血病、息肉和硬癌(scirrus)、转化、赘生物等。
术语“互补物/反互补物对”表示在合适的条件下形成非共价缔合的、稳定的配对的非相同部分。例如，生物素和抗生物素蛋白(或链霉抗生物素)是互补物/反互补物对的原型成员。其他示例性互补物/反互补物对包括受体/配体对、抗体/抗原(或半抗原或表位)对、有义/反义多核苷酸对等。当想要互补物/反互补物对的随后的解离时，优选地互补物/反互补物对具有＜109M-1的结合亲和力。
术语“多核苷酸分子的互补物”是指具有互补碱基序列和相反方向(当和参照序列相比时)的多核苷酸分子。
术语“简并核苷酸序列”是指包括一个或更多个简并密码子(当和编码多肽的参照多核苷酸相比时)的核苷酸序列。简并密码子包含不同的核苷酸三联体，但编码相同的氨基酸残基(即，GAU和GAC三联体都编码Asp)。
术语“表达载体”用于表示这样的线性或环状的DNA分子，即其包含有效地连接至提供其转录的另外的片段的编码目的多肽的片段。这些另外的片段包括启动子和终止子序列，也可包括一个或多个复制起始位点、一个或多个选择标记物、增强子、聚腺苷酸信号等。表达载体通常来源于质粒或病毒DNA，或可同时包含两者的元件。
术语“分离的”，当用于多核苷酸时，是指已将多核苷酸从其天然遗传环境分开，从而不含有外来的或不想要的编码序列，并以适合在基因工程蛋白生产系统中使用的形式存在。这些分离的分子是从其天然环境中分离的分子，其包括cDNA和基因组克隆。本发明的分离的DNA分子不含通常和其结合的其他基因，但可包含天然发生的5′和3′非翻译区例如启动子和终止子。结合的区域的鉴定对于本领域技术人员来说是很明了的(参见例如，Dynan和Tijan， Nature  316：774-78，1985)。
“分离的”多肽或蛋白是在其非天然环境(例如在血液和动物组织之外)的条件下发现的多肽或蛋白。在优选的形式中，分离的多肽基本上不含其他多肽，特别是动物来源的其他多肽。优选地以高度纯化的形式即大于95％的纯度，更优选地大于99％的纯度提供多肽。当在本说明书中使用时，术语“分离的”不排除相同的多肽以可选择的物理形式，例如二聚体或可选择地糖基化或经衍生的形式存在。
术语“水平”，当指免疫细胞，例如NK细胞、T细胞，特别是细胞毒性T细胞、B细胞等时，增加的水平是指增加的细胞数目或增强的细胞功能活性。
术语“赘生性”，当指细胞时，表示进行新的和非正常增殖的细胞，特别是其中增殖不受控制和进展，导致赘生物的组织中的细胞。赘生性细胞可以是恶性的，即侵袭性的和转移性的，或良性的。
术语“有效地连接的”，当指DNA片段时，表示以这样的方式排列片段以使其发挥想要的功能，例如，在启动子中起始转录并通过编码区段进行直至终止子。
“多核苷酸”是从5′至3′末端阅读的脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸碱基的单链或双链聚合物。多核苷酸包括RNA和DNA，其可从天然来源分离，体外合成、或通过天然和合成的分子的组合制备。多核苷酸的大小以碱基对(缩写为“bp”)、核苷酸(“nt”)或千碱基(“kb”)表示。在上下文允许的地方，后两个术语可描述单链或双链的多核苷酸。当术语用于双链分子时，其用于表示总的长度并且可理解为和术语“碱基对”的意思相同。本领域技术人员认识到，双链多核苷酸的两条链可在长度上稍微不同，认识到由于酶促切割的结果，其末端可有缺口；因此双链多核苷酸内的核苷酸可以不配对。
“多肽”是通过肽键连接的氨基酸残基的聚合物，无论是天然或合成的聚合物。少于大约10个氨基酸残基的多肽一般称为“肽”。
就其本领域内公认的意义，此处所用的术语“启动子”是指这样的基因的部分，该部分包含提供RNA聚合酶的结合和转录的起始的DNA序列。启动子序列一般，但不总是，发现于基因的5′非编码区。
“蛋白”是包含一种或多种多肽链的大分子。蛋白也可包含非肽组分，例如糖基。糖和其他非肽取代物可通过产生蛋白的细胞被加入至蛋白，其可随细胞类型的变化而变化。此处根据其氨基酸主链结构定义蛋白；取代物例如糖基一般不指明，但其可以存在。
术语“受体”是指结合生物活性分子(即，配体)并介导该配体对细胞的作用的细胞结合蛋白。膜结合受体的特征在于包含细胞外配体结合结构域和通常参与信号转导的细胞内效应结构域的多个肽结构。配体对受体的结合导致受体的构象变化，这引起效应结构域和细胞中的其他分子之间的相互作用。该相互作用导致细胞代谢中的改变。和受体-配体相互作用关联的代谢事件包括基因转录、磷酸化、去磷酸化、环AMP产量的增加、细胞钙的动员、膜脂质的动员、细胞粘附、肌醇脂质的水解和磷脂的水解。一般地，受体可以是膜结合受体、胞质受体或细胞核受体；单体(例如，促甲状腺激素受体、β-肾上腺素能受体)或多聚体(例如，PDGF受体、生长激素受体、IL-3受体、GM-CSF受体、G-CSF受体、促红细胞生成素受体和IL-6受体)。
术语“分泌信号序列”是指编码这样的多肽(“分泌肽”)的DNA序列，该肽作为更大的多肽的组分，指导该更大的多肽通过其中合成其的细胞中的分泌途径。所述更大的多肽通常在通过分泌途径的运输过程中被切割以除去分泌肽。
可将通过不精确的分析方法(例如，凝胶电泳)确定的聚合物的分子量和长度理解为近似值。当这些值表示为“大约”X或“大致”X时，所述的X值理解为精确值±10％。
“zcyto20”、“zcyto21”、“zcyto22”分别是以前对人IL-28A、人IL-29和人IL-28B的名称，此处可互换使用。IL-28A的核苷酸和氨基酸序列分别示于SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2。IL-29的核苷酸和氨基酸序列分别示于SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4。IL-28B的核苷酸和氨基酸序列分别示于SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6。在属于ZymoGenetics，Inc.的PCT申请WO 02/086087(此处引用作为参考)中全面地描述了这些序列。
“zcyto24”和“zcyto25”是小鼠IL-28的以前的名称，其分别示于SEQ ID NO：7、8、9、10。在属于ZymoGenetics，Inc.的PCT申请WO 02/086087(此处引用作为参考)中全面地描述了所述多核苷酸和多肽。
“zcytor19”是IL-28受体α-亚基的以前的名称，其示于SEQ IDNO：11中。在Schering，Inc.的PCT申请WO 02/20569和属于ZymoGenetics，Inc的WO 02/44209(此处引用作为参考)中全面地描述了所述多核苷酸和多肽。“IL-28受体”表示形成异二聚体受体的IL-28α亚基和CRF2-4亚基。
所有参考资料以其全文在此引用作为参考。
A.IL-28、IL-29和其受体
当指IL-28时，术语表示IL-28A和IL-28B。以前IL-28A被称为zcyto20(SEQ ID NO：1和2)，所述术语此处可互换使用，IL-29被称为zcyto21(SEQ ID NO：3和4)，此处所述术语可互换使用，IL-28B被称为zcyto22(SEQ ID NO：5和6)，此处该术语可互换使用(参见，PCT申请WO 02/086087和Sheppard等人， 同上)。IL-28的小鼠直向同源物(ortholog)以前被称为zcyto24(SEQ ID NO：7和8)、zcyto25(SEQ ID NO：9和10)。
野生型IL-28A基因编码SEQ ID NO：2中所示的200个氨基酸的多肽。可预测IL-28A的信号序列为包含SEQ ID NO：2的氨基酸残基-25(Met)至残基-1(Ala)的序列。IL-28A的成熟肽始于氨基酸残基1(Val)。如下预测IL-28A螺旋：由氨基酸残基24(Leu)至40(Glu)界定螺旋A；由氨基酸残基58(Thr)至65(Gln)界定螺旋B；由氨基酸残基69(Arg)至85(Ala)界定螺旋C；由氨基酸残基95(Val)至114(Ala)界定螺旋D；由氨基酸残基126(Thr)至142(Lys)界定螺旋E；和由氨基酸残基148(Cys)至169(Ala)界定螺旋E；如SEQ ID NO：2中所示的。
野生型IL-29基因编码SEQ ID NO：4中所示的200个氨基酸的多肽。预测IL-29的信号序列为包含SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：119或SEQ IDNO：121的氨基酸残基-19(Met)至氨基酸残基-1(Ala)的序列。IL-29的成熟肽始于氨基酸残基1(Gly)。已在PCT申请WO 02/02627中描述了IL-29。如下预测IL-29螺旋：由氨基酸残基30(Ser)至44(Leu)界定螺旋A；由氨基酸残基57(Asn)至65(Val)界定螺旋B；由氨基酸残基70(Val)至85(Ala)界定螺旋C；由氨基酸残基92(Glu)至114(Gln)界定螺旋D；由氨基酸残基118(Thr)至139(Lys)界定螺旋E；和由氨基酸残基144(Gly)至170(Leu)界定螺旋F；如SEQ ID NO：4中所示的。
野生型IL-28B基因编码SEQ ID NO：6中所示的200个氨基酸的多肽。可预测IL-28B的信号序列为包含SEQ ID NO：6的氨基酸残基-21(Met)至氨基酸残基-1(Ala)的序列。IL-28B的成熟肽始于氨基酸残基1(Val)。如下预测IL-28B螺旋：由氨基酸残基8(Leu)至41(Glu)界定螺旋A；由氨基酸序列58(Trp)至65(Gln)界定螺旋B；由氨基酸残基69(Arg)至86(Ala)界定螺旋C；由氨基酸序列95(Gly)至114(Ala)界定螺旋D；由氨基酸序列126(Thr)至142(Lys)界定螺旋E；和由氨基酸残基148(Cys)至169(Ala)界定螺旋F；如SEQ ID NO：6中所示的。
本发明在SEQ ID NO：1、2、3、4、5和6所示的IL-28和IL-29野生型序列中提供了突变，所述突变导致单一形式的IL-28或IL-29分子的表达。因为形式的不均一性据认为是多种分子内二硫键模式的结果，本发明的特定实施方案包括对野生型IL-28和IL-29序列内的半胱氨酸残基的突变。当在大肠杆菌(E.coli)中表达IL-28和IL-29时，存在N末端甲硫氨酸。例如，SEQ ID NO：12-17显示了当N末端Met存在时的IL-28A、IL-29和IL-28B的核苷酸和氨基酸残基的编号。表1显示了野生型IL-28A、IL-28B和IL-29的形成分子内二硫键的半胱氨酸对的可能组合。
                                                                     表1
  IL-28ASEQ ID NO：2   C16-C115   C48-C148   C50-C148   C167-C174   C16-C48   C16-C50   C48-C115   C50-C115   C115-C148
  Met IL-28ASEQ ID NO：13   C17-C116   C49-C149   C51-C1498   C168-C175   C17-C49   C17-C51   C49-C116   C51-C116   C116-C149
  IL-29SEQ ID NO：4   C15-C112   C49-C145   C112-C171
  Met IL-29SEQ ID NO：15   C16-C113   C50-C146   C113-C172
  IL-28BSEQ ID NO：6   C16-C115   C48-C148   C50-C148   C167-C174   C16-C48   C16-C50   C48-C115   C50-C115   C115-C148
  Met IL-28BSEQ ID NO：17   C17-C116   C49-C149   C51-C1498   C168-C175   C17-C49   C17-C51   C49-C116   C51-C116   C116-C149
本发明的多核苷酸和多肽分子可在存在于野生型IL-28A、IL-29或IL-28B分子的一个或多个半胱氨酸上具有突变，但仍保持一些此处描述的生物学活性。表2举例说明了示例性半胱氨酸突变体，特别是半胱氨酸(C)至丝氨酸(S)的点突变。
                表2
  IL-28A C48S   SEQ ID NO：19
  Met IL-28A C49S   SEQ ID NO：21
  IL-28A C50S   SEQ ID NO：23
  Met IL-28A C51S   SEQ ID NO：25
  IL-29C171S   SEQ ID NO：27
  Met IL-29C172S   SEQ ID NO：29
已显示家族的所有成员都结合相同的II类细胞因子受体IL-28R。IL-28α亚基以前称为zcytor19受体。尽管不想被理论束缚，但这些分子似乎通过相同的途径借助于IL-28R受体传导信号。在共同拥有的PCT专利申请WO 02/44209(此处引用作为参考)、Sheppard等人， 同 上、Kotenko等人， Nature Immunol.  4：69-77，2003和PCTWO/03/040345中描述了IL-28受体。IL-28R是II类细胞因子受体的成员，其特征在于在其细胞外结构域中存在一个或多个半胱氨酸受体组件(CRM)。其他II类细胞因子受体包括zcytor11(共同拥有的美国专利号5,965,704)、CRF2-4(Genbank检索号Z17227)、IL-10R(Genbank检索号U00672和NM_001558)、DIRS1、zcytor7(共同拥有的美国专利号5,945,511)和组织因子。IL-28受体，和所有已知的II类受体(除了干扰素α/β受体α链以外)一样，在其细胞外结构域中只具有单个II类CRM。
也根据其组件螺旋的长度将四螺旋束细胞因子(Four-helicalbundle cytokines)分类。“长螺旋”形式细胞因子一般由24-30个残基之间的螺旋构成，包括IL-6、睫状神经营养因子(CNTF)、白血病抑制因子(LIF)和人生长激素(hGH)。“短螺旋”形式细胞因子一般由18-21个残基之间的螺旋构成，包括IL-2、IL-4和GM-CSF。使用CNTF和IL-6的研究证明可将CNTF螺旋和IL-6中的等同的螺旋交换，从而为嵌合体提供结合CTNF的特性。因此，四螺旋细胞因子的功能结构域似乎可基于结构同源性而不论序列同一性来确定，并且其可在嵌合体中保持功能完整性(Kallen等人， J.Biol.Chem. 274：11859-11867，1999)。因此，IL-28和IL-29多肽可用于和特别是其他干扰素一起制备嵌合融合分子，从而确定和调控受体结合性特异性。其中特别吸引人的是组合来自干扰素和细胞因子例如INF-α、IL-10、和人生长激素的螺旋和环状结构域的融合蛋白。
本发明提供了多核苷酸分子，包括编码IL-28或IL-29多肽的DNA和RNA分子。例如，本发明提供了编码此处描述的IL-28A C48S、MetIL-28A C49S、IL-28A C50S、Met IL-28A C51S、IL-29C171S和Met IL-29C172S多肽的简并核苷酸序列。本领域技术人员容易地认识到，考虑到遗传密码子的简并性，在这些多核苷酸分子中可能存在相当多的序列变异。SEQ ID NO：30、31、32、33、34和35是分别包含编码IL-28A C48S、Met IL-28A C49S、IL-28A C50S、Met IL-28A C51S、IL-29C171S和Met IL-29C172S的所有DNA的简并DNA序列。本领域技术人员将认识到，通过用U替代T，SEQ ID NO：30、31、32、33、34和35的简并序列也提供了编码SEQ ID NO：30、31、32，33，34和35的所有RNA序列，从而本发明也涉及所述RNA序列。
zcyto20或IL-28A基因编码如SEQ ID NO：2中所示的205个氨基酸的多肽。IL-28A的信号序列包含SEQ ID NO：2的氨基酸残基-25(Met)至氨基酸残基-1(Ala)，或SEQ ID NO：2的氨基酸残基-21(Met)至氨基酸残基-1(Ala)。IL-28A的成熟肽始于SEQ ID NO：2的氨基酸残基1(Val)。如下预测Zcyto20螺旋：由氨基酸残基52(Ala)至66(Leu)界定螺旋A；由氨基酸残基78(Arg)至87(Val)界定螺旋B；由氨基酸残基91(Pro)至108(Thr)界定螺旋C；由氨基酸残基116(Val)至138(Ser)界定螺旋D；由氨基酸残基151(Thr)至172(Lys)界定螺旋E；和由氨基酸残基177(Gly)至197(Cys)界定螺旋F；如SEQ ID NO：2中所示的。基于多重比对的Zcyto20的进一步分析预测，氨基酸残基37和136、69和197、以及71和178(如SEQ ID NO：2中所示)上半胱氨酸可形成分子内二硫键。编码此处描述的Zcyto20多肽区域、结构域、基元、残基和序列的对应的多核苷酸示于SEQ ID NO：1中。当编码成熟多肽的多核苷酸序列在原核系统例如大肠杆菌中表达时，可以不需要分泌信号序列，N末端Met存在，导致多肽例如SEQ ID NO：13中所示的多肽的表达。
本发明的IL-28A多肽也包括成熟多肽的第2半胱氨C2上的突变。例如，来自SEQ ID NO：2的多肽的N端的C2是氨基酸位点48或，如果在大肠杆菌中表达，位点49(加上N末端Met)上的半胱氨酸(参见，例如，SEQ ID NO：13)。该第2半胱氨酸(其中有7个，如IL-28B)或IL-28A的C2可突变成不形成二硫键的任何氨基酸，例如突变成丝氨酸、丙氨酸、苏氨酸、缬氨酸或天冬酰胺。本发明的IL-28A C2突变体分子，例如SEQ ID NO：18和20中所示的多核苷酸分子，包括分别编码SEQ IDNO：19和21中所示的IL-28A C2突变多肽的DNA和RNA分子。本发明的另外的IL-28A C2突变体分子包括SEQ ID NO：36和37所示的多肽。
除了IL-28A C2突变体，本发明也包括在成熟的多肽的第3半胱氨酸位点C3上包含突变的IL-28A多肽。例如，来自SEQ ID NO：2的多肽的N端的C3是位点50或，如果在大肠杆菌中表达，位点51(加上N末端Met)上的半胱氨酸(参见，例如，SEQ ID NO：13)。本发明的IL-28A C3突变分子包括，例如，SEQ ID NO：22和24中显示的多核苷酸分子，包括分别编码SEQ ID NO：23和25中所示的IL-28A C3突变多肽的DNA和RNA分子。本发明的其他IL-28A C3突变分子包括SEQ ID NO：38和39中所示的多肽。
本发明的IL-28A多肽包括，例如分别由SEQ ID NO：1、12、18、20、22和24所示的IL-28A多核苷酸分子编码的SEQ ID NO：2、13、19、21、23、25。此外，本发明也提供了SEQ ID NO：36、37、38和39中所示的IL-28A多肽。
Zcyto22或IL-28B基因编码SEQ ID NO：6中所示的205个氨基酸的多肽。IL-28B的信号序列包含SEQ ID NO：6的氨基酸残基-25(Met)至氨基酸残基0(Ala)，或可选择地SEQ ID NO：6的氨基酸残基-21(Met)至氨基酸残基0(Ala)。IL-28B的成熟肽始于SEQ ID NO：6的氨基酸残基1(Val)。如下预测IL-28B的螺旋：由氨基酸残基8(Leu)至41(Glu)界定螺旋A；由氨基酸残基58(Trp)至65(Gln)界定螺旋B；由氨基酸残基69(Arg)至86(Ala)界定螺旋C；由氨基酸残基95(Gly)至114(Ala)界定螺旋D；由氨基酸残基126(Thr)至142(Lys)界定螺旋E；和由氨基酸残基148(Cys)至169(Ala)界定螺旋F；如SEQ ID NO：6中所示的。当在原核生物系统例如大肠杆菌中表达编码成熟多肽的多核苷酸序列时，可以不需要分泌信号序列，但存在N末端Met，导致多肽例如SEQ ID NO：17中所示的多肽的表达。
本发明的IL-28B多肽也包含成熟多肽的第2半胱氨酸C2上的突变。例如，来自SEQ ID NO：6的多肽的N端的C2是氨基酸位点48或，如果在大肠杆菌中表达，位点49(加上N末端Met)上的半胱氨酸(参见，例如，SEQ ID NO：17)。该第2半胱氨酸(其中有7个半胱氨酸，如IL-28A)或IL-28B的C2可突变成不形成二硫键的任一氨基酸，例如，突变成丝氨酸、丙氨酸、苏氨酸、缬氨酸或天冬酰胺。本发明的IL-28B C2突变分子包括，例如，SEQ ID NO：122和124中所示的多核苷酸，包括分别编码SEQ ID NO：123和125中所示的IL-28B C2突变多肽的DNA和RNA分子。本发明的其他IL-28B C2突变分子包括SEQ ID NO：130和132中所示的多核苷酸分子，所述多核苷酸分子包括分别编码SEQ ID NO：131和133中所示的IL-28B C2突变多肽的DNA和RNA分子(PCT申请WO 03/066002(Kotenko等人))。
除了IL-28B C2突变体外，本发明也包括在成熟多肽的第3半胱氨酸位点C3上包含突变的IL-28B多肽。例如，来自SEQ ID NO：6的多肽的N端的C3是位点50或，如果在大肠杆菌中表达，位点51(加上N末端Met)上的半胱氨酸(参见，例如，SEQ ID NO：17)。本发明的IL-28B C3突变分子包括，例如，SEQ ID NO：126和128中所示的多核苷酸分子，其包括分别编码SEQ ID NO：127和129中所示的IL-28B C3突变多肽的DNA和RNA分子(PCT公开号WO 03/066002(Kotenko等人))。本发明的其他IL-28B C3突变分子包括如SEQ ID NO：134和136中所示的多核苷酸分子，其包括分别编码SEQ ID NO：135和137中所示的IL-28B C3突变多肽的DNA和RNA分子(PCT公开号WO 03/066002(Kotenko等人))。
本发明的IL-28B多肽包括，例如，分别由SEQ ID NO：5、16、122、124、126、128、130、132、134和136中所示的IL-28B多核苷酸分子编码的SEQ ID NO：6、17、123、125、127、129、131、133、135和137。
本发明的Zcyto21或IL-29多肽也包括成熟的多肽的第5半胱氨酸C5上的突变。例如，来自SEQ ID NO：4的多肽的N端C5是位点171或，如果在大肠杆菌中表达时，位点172(加上N末端Met)上的半胱氨酸(参见，例如，SEQ ID NO：15)。该IL-29的第5半胱氨酸或C5可突变成不形成二硫键的任何氨基酸，例如突变成丝氨酸、丙氨酸、苏氨酸、缬氨酸或天冬酰胺。这些IL-29C5突变多肽具有C1(SEQ ID NO：4的Cys15)/C3(SEQ ID NO：4的Cys112)和C2(SEQ ID NO：4的Cys49)/C4(SEQID NO：4的Cys145)的二硫键模式。本发明的其他IL-29C5突变分子包括SEQ ID NO：26、28、82、84、138、140、142、144、146、148、150、152、154、156、158和160中所示的多核苷酸分子，包括分别编码SEQ IDNO：27、29、83、85、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159和161中所示的IL-29C5突变多肽的DNA和RNA分子。本发明的其他IL-29C5突变分子包括SEQ ID NO：86、88、94和96中所示的多核苷酸分子，其包括分别编码SEQ ID NO：87、89、95和97中所示的IL-29C5突变多肽的DNA和RNA(PCT公开号WO 03/066002(Kotenko等人))。此外，本发明的IL-29C5突变分子包括SEQ ID NO：102、104、110和112中所示的多核苷酸分子，其包括分别编码SEQ ID NO：103、105、111和113中所示的IL-29C5突变多肽的DNA和RNA分子(PCT公开号WO02/092762(Baum等人))。
除了IL-29C5突变体外，本发明也包括在成熟多肽的第1半胱氨酸位点C1上包含突变的IL-29多肽。例如，来自SEQ ID NO：4的多肽的N末端C1是位点15或，当在大肠杆菌中表达时，位点16(加上N末端Met)上的半胱氨酸(参见，例如，SEQ ID NO：15)。因此这些IL-29C1突变多肽具有C2(SEQ ID NO：4的Cys49)/C4(SEQ ID NO：4的Cys145)和C3(SEQ ID NO：4的Cys112)/C5(SEQ ID NO：4的Cys171)的预测的二硫键模式。本发明的其他IL-29C1突变分子包括SEQ ID NO：74、76、78和80中所示的多核苷酸分子，其包括分别编码SEQ ID NO：75、77、79和81中所示的IL-29C1突变多肽的DNA和RNA分子。本发明的其他IL-29C1突变分子包括SEQ ID NO：90、92、98和100中所示的多核苷酸分子，包括分别编码SEQ ID NO：91、93、99和101中所示的IL-29C1突变多肽的DNA和RNA分子(PCT公开号WO 03/066002(Kotenko等人))。此外，本发明的IL-29C1突变分子包括SEQ ID NO：106、108、114和116中所示的多核苷酸分子，其包括分别编码SEQ ID NO：107、109、115和117中所示的IL-29C1突变多肽的DNA和RNA分子(PCT公开号WO 02/092762(Baum等人))。
本发明的IL-29多肽包括，例如，由SEQ ID NO：3、14、26、28、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、138、140、142、144、146、148、150、152、154、156、158和160中所示的IL-29多核苷酸分子编码的SEQ ID NO：4、15、27、29、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159和161，其还可包括SEQ ID NO：119中所示的信号序列或SEQ ID NO：121中所示的信号序列。其他的IL-29多肽包括SEQ IDNO：40和41。编码SEQ ID NO：119的信号序列多肽的多核苷酸分子示于SEQ ID NO：118。编码SEQ ID NO：120的信号序列多肽的多核苷酸分子示于SEQ ID NO：121。
表3列出了SEQ ID NO：30、31、32、33、34和35中所用的单字母密码子以表示简并核苷酸位点。“方案”是由密码子字母表示的核苷酸。“互补”表示互补核苷酸的密码子。例如，密码子Y表示C或T，其互补R表示A或G，A和T互补，G和C互补。
                        表3
  核苷酸   方案   互补   方案
  ACGTRYMKSWHBVDN   ACGTA|GC|TA|CG|TC|GA|TA|C|TC|G|TA|C|GA|G|TA|C|G|T   TGCAYRKMSWDVBHN   TGCAC|TA|GG|TA|CC|GA|TA|G|TA|C|GC|G|TA|C|TA|C|G|T
用于SEQ ID NO：30、31、32、33、34和35的简并密码子，包括给定的氨基酸的所有可能的密码子，示于表4。
                           表4
  氨基酸   单字母密码子   密码子   简并密码子
  CysSerThrProAlaGlyAsnAspGluGlnHisArgLysMetIleLeuValPheTyrTrpTerAsn|AspGlu|Gln任何   CSTPAGNDEQHRKMILVFYW.BZX   TGC TGTAGC AGT TCA TCC TCG TCTACA ACC ACG ACTCCA CCC CCG CCTGCA GCC GCG GCTGGA GGC GGG GGTAAC AATGAC GATGAA GAGCAA CAGCAC CATAGA AGG CGA CGC CGG CGTAAA AAGATGATA ATC ATTCTA CTC CTG CTT TTA TTGGTA GTC GTG GTTTTC TTTTAC TATTGGTAA TAG TGA   TGYWSNACNCCNGCNGGNAAYGAYGARCARCAYMGNAARATGATHYTNGTNTTYTAYTGGTRRRAYSARNNN
本领域技术人员认识到，在确定代表编码各氨基酸的所有可能的密码子的简并密码子的过程中引入一些不确定性。例如，丝氨酸的简并密码子(WSN)可，在一些情况下，编码精氨酸(AGR)，精氨酸的简并密码子(MGN)可，在一些情况下，编码丝氨酸(AGY)。类似的关系存在于编码苯丙氨酸和亮氨酸的密码子之间。因此，由简并序列构成的一些多核苷酸可编码变异的氨基酸序列，但本领域技术人员可容易地参照SEQ ID NO：19、21、23、25、27和29的氨基酸序列鉴定这些变异序列。可就此处描述的功能容易地检验变异序列。
本领域技术人员也认识到，不同的物种可表现“偏爱密码子利用”。一般地，参见，Grantham，等人， Nuc.Acids Res. 8：1893-912，1980；Haas，等人 Curr.Biol. 6：315-24，1996；Wain-Hobson，等人， Gene  13：355-64，1981；Grosjean和Fiers， Gene  18：199-209，1982；Holm， Nuc.Acids Res. 14：3075-87，1986；Ikemura， J.Mol. Biol. 158：573-97，1982。如此处所用的，术语“偏爱密码子利用”或“偏爱密码子”是表示这样的蛋白翻译密码子的本领域的术语，所述密码子在某些物种的细胞中最频繁使用，从而倾向于编码各氨基酸的可能的密码子(参见表4)中的一个或少数几个代表。例如，氨基酸苏氨酸(Thr)可由ACA、ACC、ACG或ACT编码，但在哺乳动物细胞中ACC是最常使用的密码子；在其他物种中，例如昆虫细胞、酵母、病毒或细菌中，不同的Thr密码子可以是优选的。可通过各种本领域已知的方法将特定物种的偏爱密码子导入本发明的多核苷酸。将偏爱密码子序列导入重组DNA可，例如，通过在特定的细胞类型或物种内使蛋白翻译更有效来增加蛋白的生产。因此，SEQ ID NO：30、31、32、33、34和35中公开的简并密码子序列用作这样的模板，该模板用于在本领域中通常使用的和此处公开的各种细胞类型和物种中最优化多核苷酸的表达。可检测和最优化包含偏爱密码子的序列以在各种物种中表达，和就此处公开的功能对所述序列进行检验。
如前面所提到的，本发明的分离的多核苷酸包括DNA和RNA。用于制备DNA和RNA的方法在本领域内是熟知的。一般地，从产生大量IL-28或IL-29RNA的组织或细胞中分离RNA。通过Northern印迹法(Thomas，Proc.Natl.Acad.Sci.USA  77：5201，1980)、或通过就对靶细胞或组织的活性筛选来自各种细胞类型的条件化的培养基来鉴定这些组织和细胞。在鉴定产生所述活性或RNA的细胞或组织后，可使用异硫氰酸胍提取，然后通过在CsCl梯度中离心进行分离来制备总RNA(Chirgwin等人， Biochemistry  18：52-94，1979)。通过使用Aviv和Leder( Proc.Natl.Acad.Sci.USA  69：1408-12，1972)的方法来从总RNA制备Poly(A)+RNA。使用已知的方法从poly(A)+RNA制备互补DNA(cDNA)。在可选择的方法中，可分离基因组DNA。然后通过例如，杂交或PCR鉴定和分离编码IL-28或IL-29多肽的多核苷酸。
可通过常规的克隆方法获得编码IL-28或IL-29的全长克隆。互补DNA(cDNA)克隆是优选的，尽管对于一些应用(例如，在转基因动物中表达)，使用基因组克隆，或修饰cDNA克隆以使其包含至少一个基因组内含子可以是优选的。用于制备cDNA和基因组克隆的方法是熟知的并且在本领域技术人员的水平之内，其包括使用此处公开的序列或其部分探测或引发(priming)文库。可用抗IL-28受体片段的抗体，或其他特异性结合伴侣探测表达文库。
本领域技术人员将认识到，在例如SEQ ID NO：1、3和5中公开的序列分别代表人IL-28和IL-29条带的单个等位基因的突变，认识到预期会发生等位变异和可变剪接。例如，已鉴定了IL-29的变体，在所述变体中，SEQ ID NO：4中所示的氨基酸残基169(Asn)中是Arg，如WO02/086087中所描述的。本发明包括了这些等位基因。可根据标准的方法通过探测来自不同个体的cDNA或基因组文库来克隆该序列的等位变体。SEQ ID NO：1、3和5中所示的DNA序列的等位变体，包括包含沉默突变的变体和其中突变导致氨基酸序列改变的变体(除了半胱氨酸突变外)，在本发明的范围之内，作为SEQ ID NO：2、4和6的等位变体的蛋白也是在本发明的范围之内。产生自可变剪接的mRNA的、保持IL-28或IL-29多肽的特性的cDNA也包括在本发明的范围之内，由这些cDNA和mRNA编码的多肽也在本发明的范围之内。可根据本领域已知的标准方法通过探测来自不同个体或组织的cDNA或基因组文库来克隆这些序列的等位变体和剪接变体，可如此处所述，引入对编码半胱氨酸或半胱氨酸残基的多核苷酸的突变。
在本发明的实施方案内，分离的编码IL-28和IL-29的核酸分子可在严紧条件下和这样的核酸分子杂交，所述这样的核酸分子具有SEQID NO：1、3、5、12、14、16、18、20、22、24、26、28、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154、156、158、160的核苷酸序列或具有和SEQ ID NO：1、3、5、12、14、16、18、20、22、24、26、28、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154、156、158、160互补的核苷酸序列。一般地，选择严紧条件以使其比确定的离子强度和pH下的特定的序列的热解链温度(Tm)低大约5℃。Tm是这样的温度(在确定的离子强度和pH下)，在该温度下，50％的靶序列和完全匹配的探针杂交。
如果核苷酸序列具有一定程度的互补性，则成对的核酸分子，例如DNA-DNA、RNA-RNA和DNA-RNA可杂交。杂交可耐受双螺旋中错配的碱基对，但杂交的稳定受到错配程度的影响。错配杂交体的Tm因每1-1.5％的碱基对错配而降低1℃。改变杂交条件的严紧度使得可以控制杂交体中存在的错配的程度。严紧度的程度随杂交温度增加和杂交缓冲液的离子强度降低而增加。
改变这些条件使之适合用于特定的多核苷酸杂交体正好在本领域技术人员的能力之内。特定靶序列的Tm是这样的温度(在确定的条件下)，在该温度下，50％的靶序列和完全匹配的探针序列杂交。影响Tm的条件包括，多核苷酸探针的大小和碱基对含量、杂交溶液的离子强度和杂交溶液中去稳定剂的存在。许多计算Tm的公式在本领域中是已知的，对于DNA、RNA和DNA-RNA杂交体以及不同长度的多核苷酸探针序列是明确的(参见，例如，Sambrook等人 Molecular Cloning：A Laboratory Manual，第2版(Cold Spring Harbor Press 1989)；Ausubel等人，(eds.)， Current Protocols in Molecular Biology(John Wiley and Sons，Inc.1987)；Berger和Kimmel(eds.)，Guide to Molecular Cloning Techniques，(Academic Press，Inc.1987)；和Wetmur， Crit.Rev.Biochem.Mol.Biol. 26：227(1990))。序列分析软件例如OLIGO 6.0(LSR；Long Lake，MN)和Primer Premier4.0(Premier Biosoft International；Palo Alto，CA)，以及因特网上的地址是可获得的用于基于用户定义的标准分析给定的序列和计算Tm的工具。这些程序也可在确定的条件下分析给定的序列和鉴定合适的探针序列。一般地，在低于计算的Tm大约20-25℃的温度下进行更长核苷酸序列(＞50碱基对的)的杂交。对于更短的探针，＜50碱基对，通常在Tm或低于计算的Tm大约5-10℃的温度下进行杂交。这允许DNA-DNA和DNA-RNA杂交物的最大杂交比例。
杂交后，可在严紧条件或在高度严紧条件下洗涤核酸分子以除去未杂交的核酸分子。常用的严紧洗涤条件包括在55-65℃下、在含有0.1％十二烷基硫酸钠(SDS)的0.5x-2x SSC中进行洗涤。即，编码变体、半胱氨酸突变体、或IL-28或IL-29多肽的核酸分子在这样的严紧洗涤条件下和分别具有SEQ ID NO：1、3、5、12、14、16、18、20、22、24、26、28、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154、156、158或160的核苷酸序列(或其互补序列)的核酸分子杂交，在所述严紧洗涤条件中，洗涤严紧度等同于55-65℃下的含有0.1％SDS的0.5x-2x SSC，包括，55℃下含有0.1％SDS的0.5xSSC或65℃下含有0.1％SDS的2x SSC。本领域技术人员可通过例如在洗涤溶液中用SSPE替代SSC容易地设计等同的条件。
一般的高度严紧的洗涤条件包括在50-65℃下在含有0.1％十二烷基硫酸钠(SDS)的0.1x-0.2x SSC溶液中进行洗涤。换句话说，编码IL-28或IL-29多肽的变体的核酸分子在这样的高度严紧洗涤条件下和具有SEQ ID NO：1、3、5、12、14、16、18、20、22、24、26、28、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154、156、158或160的核苷酸序列(或其互补序列)的核酸分子杂交，在所述高度严紧洗涤条件中，洗涤严紧度等同于50-65℃下的含有0.1％SDS的0.1x-0.2x SSC，包括，50℃下含有0.1％SDS的0.1x SSC或65℃下含有0.1％SDS的0.2x SSC。
本发明也提供了这样的IL-28或IL-29多肽，所述多肽分别和本发明的多肽例如SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159或161具有基本相似的序列同一性。术语“基本相似的序列同一性”此处用于表示分别与SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159或161中所示的序列具有至少80％、至少90％、至少95％、或大于95％、96％、97％、98％、99％或99.5％的序列同一性的多肽，或其直向同源物。本发明也包括这样的多肽，所述多肽包含和本发明的多肽或其片段具有至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.5％或大于99.5％的序列同一性的氨基酸序列。本发明还包括编码这些多肽的核酸分子。本发明的IL-28和IL-29多肽优选地是重组多肽。在另一方面，本发明的IL-28和IL-29多肽具有至少15、至少30个、至少45或至少60个连续的氨基酸。例如，本发明的IL-29多肽涉及这样的多肽，该多肽具有来自SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159或161的至少15、至少30、至少45或至少60个连续的氨基酸。下面描述用于确定百分比同一性的方法。
本发明也涉及可使用这样的两个判据鉴定的变异核酸分子，所述判据是：分别具有SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159或161的氨基酸序列和被编码的多肽之间的相似性的确定，和/或如上所述的杂交测定。这些变体包括这样的核酸分子，该分子(1)在这样的严紧洗涤条件下和分别具有SEQ ID NO：1、3、5、12、14、16、18、20、22、24、26、28、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154、156、158或160的核苷酸序列(或其互补序列)的核酸分子杂交，在所述严紧条件中，洗涤严紧度等同于55-65℃下的含有0.1％SDS的0.5x-2x SSC；或(2)编码和SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159或161的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％或大于95％、96％、97％、98％、99％或99.5％的序列同一性的多肽。可选择地，变体可表征为这样的核酸分子，即其：(1)在高度严紧的洗涤条件下和具有SEQ ID NO：1、3、5、12、14、16、18、20、22、24、26、28、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154、156、158或160的核苷酸序列(或其互补序列)的核酸分子杂交，在所述高度严紧洗涤条件中，洗涤严紧度等同于50-65℃下的含有0.1％SDS的0.1x-0.2x SSC，和(2)编码和SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159或161的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％或大于95％、96％、97％、98％、99％或99.5％的序列同一性的多肽。
本发明还提供了编码这样的多肽的多核苷酸，该多肽治疗、预防此处描述的癌症、抑制其进展、延迟其发生、和/或减少其严重度或抑制其中的至少一种病症或症状，其中被编码的多肽是选自SEQ IDNO：36-41的序列。
由常规方法确定百分比序列同一性。参见，例如，Altschul等人， Bull.Math.Bio.  48：603(1986)，以及Henikoff和Henikoff，Proc.Natl.Acad.Sci.USA  89：10915(1992)。简而言之，通过使用10的缺口开放罚分、1的缺口延伸罚分和表5中所示的Henikoff和Henikoff(同上)“BLOSUM62”打分矩阵(由标准的单字母代码表示氨基酸)排列两个氨基酸序列以最优化比对分值。
Figure A20058003059000351
                                      表5
   A  R  N  D  C  Q  E  G  H  I  L  K  M  F  P  S  T  W  Y  V
A  4
R -1  5
N -2  0  6
D -2 -2  1  6
C  0 -3 -3 -3  9
Q -1  1  0  0 -3  5
E -1  0  0  2 -4  2  5
G  0 -2  0 -1 -3 -2 -2  6
H -2  0  1 -1 -3  0  0 -2  8
I -1 -3 -3 -3 -1 -3 -3 -4 -3  4
L -1 -2 -3 -4 -1 -2 -3 -4 -3  2  4
K -1  2  0 -1 -3  1  1 -2 -1 -3 -2  5
M -1 -1 -2 -3 -1  0 -2 -3 -2  1  2 -1  5
F -2 -3 -3 -3 -2 -3 -3 -3 -1  0  0 -3  0  6
P -1 -2 -2 -1 -3 -1 -1 -2 -2 -3 -3 -1 -2 -4  7
S  1 -1  1  0 -1  0  0  0 -1 -2 -2  0 -1 -2 -1  4
T  0 -1  0 -1 -1 -1 -1 -2 -2 -1 -1 -1 -1 -2 -1  1  5
W -3 -3 -4 -4 -2 -2 -3 -2 -2 -3 -2 -3 -1  1 -4 -3 -2  1  1
Y -2 -2 -2 -3 -2 -1 -2 -3  2 -1 -1 -2 -1  3 -3 -2 -2  2  7
V  0 -3 -3 -3 -1 -2 -2 -3 -3  3  1 -2  1 -1 -2 -2  0 -3 -1  4
本领域技术人员认识到，存在许多可获得的比对两个氨基酸序列的已建立的算法。Pearson和Lipman的“FASTA”相似性搜寻算法适合这样的蛋白比对方法，该方法用于检查此处公开的氨基酸序列和假定的变异的IL-28或IL-29的氨基酸序列共有的同一性水平。由Pearson和Lipman， Proc.Nat’l Acad.Sci.USA  85：2444(1988)，和Pearson，Meth.Enzymol. 183：63(1990)描述FASTA算法。
简而言之，FASTA首先通过鉴定由被查询序列(例如，SEQ ID NO：2)和测试序列共有的区域来表征序列相似性，在不考虑保守性氨基酸替代、插入或缺失的情况下，所述区域具有最高的同一性密度(如果ktup变量是1)或成对同一性密度(如果ktup＝2)。然后通过使用氨基酸取代矩阵比较所有成对氨基酸的相似性来对具有最高同一性密度的10个区域重新评分，所述区域的末端被“修剪”成只包含对最高评分有贡献的残基。如果存在几个具有高于“截止”值的评分(通过预先确定的公式基于序列的长度和ktup值计算的)的区域，那么检查经修剪的起始区域以确定是否可连接所述区域以形成具有缺口的近似比对。最后，使用Needleman-Wunsch-Sellers算法(Needleman和Wunsch， J.Mol. Biol.  48：444(1970)；Sellers， SIAM J.Appl.Math.  26：787(1974))的修改方法排列两个氨基酸序列的最高评分区域，所述算法允许氨基酸插入和缺失。FASTA分析的优选的参数是：ktup＝1、缺口开放罚分＝10、缺口延伸罚分＝1和取代矩阵＝BLOSUM62。如Pearson， Meth.Enzymol.183：63(1990)的附录2中所解释的，可通过修改评分矩阵文件(“SMATRIX”)将这些参数引入FASTA程序。
也可通过使用上面公开的比率，使用FASTA确定核酸分子的序列同一性。对于核酸序列比较，ktup值可在1至6，优选地3至6之间的范围内变动，最优选地为3，其他参数设置为缺省值。
具有基本上相似的序列同一性的变异的IL-28和IL-29多肽的特征在于具有一个或多个氨基酸替代、缺失或加入。这些改变优选地是微不足道的(minor nature)，即不显著地影响多肽的折叠或活性的保守性氨基酸替代(参见表6)和其它替代；小缺失，通常为1至大约30个氨基酸；和氨基或羧基末端延伸，例如氨基末端甲硫氨酸残基、长达大约20-25个残基的小连接体肽或亲和标记物。本发明因此包括包含这样的序列的多肽，该序列和SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159或161的对应区域具有至少80％、优选地至少90％、和更优选地至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.5％或大于99.5％的同一性。包含亲和标记物的多肽还可包含IL-28和IL-29多肽与亲和标记物之间的蛋白水解断裂位点。优选的这样的位点包括凝血酶断裂位点和因子Xa断裂位点。
                         表6
                    保守性氨基酸替代
碱性氨基酸：      精氨酸
                  赖氨酸
                  组氨酸
酸性氨基酸：      谷氨酸
                  天冬氨酸
极性氨基酸：      谷氨酰胺
                  天冬酰胺
疏水性氨基酸：    亮氨酸
                  异亮氨酸
                  缬氨酸
芳香族氨基酸：    苯丙氨酸
                  色氨酸
                  酪氨酸
小氨基酸：        甘氨酸
                  丙氨酸
                  丝氨酸
                  苏氨酸
                  甲硫氨酸
可确定构成这样的区域或结构域的氨基酸残基，所述区域或结构域对于保持结构完整性是至关重要的。在这些区域内，可确定或多或少容忍改变和维持分子的总体三级结构的特定残基。用于分析序列结构的方法包括，但不限于多个具有高度氨基酸或核苷酸同一性的序列的比对、二级结构的倾向、二元模式(binary patterns)、互补堆积(complementary packing)和埋藏的极性相互作用(Barton， Current Opin.Struct.Biol.  5：372-376，1995和Corde等人， Current Opin. Struct.Biol.  6：3-10，1996)。一般地，当设计对分子的修饰或鉴定特异性片段时，确定结构的同时要评估经修饰的分子的活性。
这样改变IL-28或IL-29多肽中的氨基酸序列以使生物学活性所需的高级结构的破坏最小。例如，在IL-28或IL-29多肽包含一个或多个螺旋的位置，这样改变氨基酸残基以使不破坏分子的螺旋几何结构和其他组成，其中构象上的变化减弱了一些至关重要的功能，例如，该分子对其结合伴侣的结合作用。可通过，例如，上面公开的计算机建模预测或通过晶体结构的分析确定氨基酸序列改变的效应(参见，例如，Lapthorn等人， Nat.Struct.Biol.  2：266-268，1995)。本领域内熟知的其他技术将变异蛋白的折叠和标准分子(例如，天然蛋白)的折叠进行比较。例如，可进行变异分子和标准分子中的半胱氨酸模式的比较。质谱技术和使用还原和烷化的化学修饰技术提供了用于确定和二硫键关联的或不参与这些连接的半胱氨酸残基的方法(Bean等人， Anal.Biochem.  201：216-226，1992；Gray， Protein Sci. 2：1732-1748，1993；和Patterson等人， Anal.Chem.  66：3727-3732，1994)。一般认为，如果经修饰的分子不具有和标准分子相同的半胱氨酸模式时，折叠将受到影响。用于测量折叠的另一个熟知的和可接受的方法是圆二色法(circular dichrosism)(CD)。测量和比较经修饰的分子和标准分子产生的CD光谱是常规方法(Johnson， Proteins 7：205-214，1990)。晶体学是另一个熟知的用于分析折叠和结构的方法。核磁共振(NMR)、降解肽谱法(digestive peptide mapping)和表位作图也是已知的用于分析蛋白和多肽之间的折叠和结构相似性的方法(Schaanan等人， Science  257：961-964，1992)。
可产生SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159或161中所示的IL-28或IL-29多肽序列的Hopp/Woods亲水分布图(Hopp等人， Proc.Natl.Acad. Sci.78：3824-3828，1981；Hopp， J.Immun.Meth.  88：1-18，1986和Triquier等人， Protein Engineering  11：153-169，1998)。该分布图基于滑动6残基窗口。忽略埋藏的G、S和T残基以及暴露的H、Y和W残基。本领域技术人员认识到，当设计IL-28或IL-29多肽的氨基酸序列中的修饰时，要考虑亲水性或疏水性，以使不破坏总体结构和生物学特征谱。其中特别吸引人的取代是选自Val、Leu和Ile或选自Met、Gly、Ser、Ala、Tyr和Trp的疏水性残基。
可从IFN-α和IL-28A、IL-28B和IL-29的家族的成员(如表1和2中所示的)之间的序列相似性的分析推断出必需氨基酸。通过使用方法例如前面描述的“FASTA”分析法，在蛋白的家族内鉴定高度相似的区域并将其用于分析氨基酸序列的保守区域。基于结构鉴定变异多核苷酸的可选择的方法是确定编码潜在的变异的IL-28或IL-29的基因的核酸分子是否可和上述核酸分子杂交。
鉴定本发明中的多肽中的必需氨基酸的其他方法是本领域内已知的方法，例如定点诱变法或丙氨酸扫描诱变法(Cunningham和Wells，Science  244：1081(1989)，Bass等人， Proc. Natl Acad.Sci.USA 88：4498(1991)，Coombs和Corey，“Site-Directed Mutagenesisand Protein Engineering，”in  Proteins：Analysis and Design，Angeletti(ed.)，pages 259-311(Academic Press，Inc.1998))。在后一种技术中，在分子的每一个残基上引入单个丙氨酸突变，并就下面公开的生物学或生物化学活性检测所得的分子以鉴定对于该分子的活性是至关重要的氨基酸残基。也参见，Hilton等人， J.Biol. Chem. 271：4699(1996)。
本发明也包括IL-28或IL-29多肽的功能性片段和编码这些功能性片段的核酸分子。此处定义的“功能性”IL-28或IL-29或其片段的特征在于其增殖或分化活性，在于其诱导或抑制特化的细胞功能的能力或在于其特异性结合抗IL-28或IL-29抗体或IL-28受体(可溶性的或固定的)的能力。此处公开了IL-28或IL-29多肽的特化的活性和如何检测其。如本说明书中前面所描述的，IL-28和IL-29多肽的特征在于6螺旋束。因此，本发明还提供了这样的融合蛋白，该融合蛋白包含：(a)包含此处描述的一个或多个螺旋的多肽分子；和(b)包含这些螺旋中的一个或多个螺旋的功能性片段。可通过另一个螺旋束细胞因子或干扰素例如IFN-α，或通过非天然的和/或非相关的帮助融合蛋白分泌的分泌信号肽提供融合蛋白的其他多肽部分。
本发明的IL-28或IL-29多肽，包括全长多肽、半胱氨酸突变多肽、生物学活性片段和融合多肽，可根据常规技术，使用已导入编码该多肽的表达载体的细胞来产生。如此处所用的，“已导入表达载体的细胞”包括已通过外源DNA分子的导入直接被操作的细胞和其包含导入的DNA的后代。合适的宿主细胞是可用外源DNA转化或转染并在培养中生长的细胞类型，包括细菌、真菌细胞和培养的高等真核细胞。由Sambrook等人， Molecular Cloning：A Laboratory Manual，第2版，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，NY，1989，和Ausubel等人，eds.， Current Protocols in Molecular Biology，John Wiley and Sons，Inc.，NY，1987公开了用于操作经克隆的DNA分子和将外源DNA导入各种宿主细胞的技术。
一般地，编码本发明的IL-28或IL-29多肽的DNA序列有效地连接至其表达所需的其他基因元件，通常包括表达载体内的转录启动子和终止子。载体通常也包含一种或更多种选择标记物和一个或多个复制起始位点，尽管本领域技术人员认识到，在某些系统内，可在分开的载体上提供选择标记物，和可通过融合入宿主细胞基因组提供外源DNA的复制。启动子、终止子、选择标记物、载体和其他元件的选择是基本上在本领域技术人员的水平之内的常规设计。许多这样的元件描述于文献中并可通过商业提供商商购获得。
为指导IL-28或IL-29多肽进入宿主细胞的分泌途径，在表达载体中提供分泌信号序列(也称作前导序列、前原序列(prepro sequence)或前序列(pre sequence))。分泌信号序列可以是，例如，半胱氨酸突变体IL-28或IL-29的分泌信号序列，例如，SEQ ID NO：119或SEQ IDNO：121，或可来源于另一种分泌蛋白(例如，t-PA；参见，美国专利号5,641,655)或可从新合成。分泌信号序列有效地连接至IL-28或IL-29DNA序列，即，将两个序列连接在正确的阅读框架内和定位以指导新合成的多肽进入宿主细胞的分泌途径。分泌信号序列通常位于编码目的多肽的DNA序列的5′，尽管某些信号序列可位于目的DNA序列的其他位置(参见，例如，Welch等人，美国专利号5,037,743；Holland等人，美国专利号5,143,830)。
广泛的合适的重组宿主细胞包括，但不限于，革兰氏阴性原核宿主生物。大肠杆菌的合适株系包括W3110、从K12衍生的株系MM294、TG-1、JM-107、BL21和UT5600。其他合适的株系包括：BL21(DE3)、BL21(DE3)pLysS、BL21(DE3)pLysE、DH1、DH4I、DH5、DH5I、DH5IF′、DH5IMCR、DH10B、DH10B/p3、DH11S、C600、HB101、JM101、JM105、JM109、JM110、K38、RR1、Y1088、Y1089、CSH18、ER1451、ER1647、大肠杆菌K12、大肠杆菌K12 RV308、大肠杆菌K12 C600、大肠杆菌HB101、大肠杆菌K12 C600 R.sub.k-M.sub.k-、大肠杆菌K12 RR1(参见，例如，Brown(ed.)， Molecular Biology Labfax(Academic Press1991))。其他革兰氏阴性原核宿主可包括粘质沙雷氏菌(Serratia)、假单胞菌(Pseudomonas)、柄杆菌(Caulobacter)。原核宿主可包含革兰氏阳性生物例如芽孢杆菌属(Bacillus)，例如枯草芽孢杆菌(B.subtilis)和苏云金芽孢杆菌(B.thuringienesis)和苏云金芽孢杆菌以色列变种(B.thuringienesis var.israelensis)，和链霉菌属(Streptomyces)，例如，变铅青链霉菌(S.lividans)、产二素链霉菌(S.ambofaciens)、弗氏链霉菌(S.fradiae)、和灰褐类群链霉菌(S.griseofuscus)。枯草芽胞杆菌(Bacillussubtilus)的合适株系包括BR151、YB886、MI119、MI120和B170(参见，例如，Hardy，“Bacillus Cloning Methods，”in  DNA Cloning： A Practical Approach，Glover(ed.)(IRL Press 1985))。用于在原核宿主中繁殖载体的标准技术对于本领域技术人员来说是熟知的(参见，例如，Ausubel等人(eds.)， Short Protocols in Molecular Biology，第3版(John Wiley&Sons 1995)；Wu等人， Methods in Gene Biotechnology(CRC Press，Inc.1997))。在一个实施方案中，本发明的方法使用在W3110株系中表达的IL-28或IL-29，所述株系已以ATCC#27325保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC)。
当需要使用本发明的表达系统大规模生产IL-28或IL-29时，可使用分批发酵。一般地，分批发酵包括第一阶段，制备种子瓶，通过将表达IL-28或IL-29的大肠杆菌株系在振荡摇瓶培养中培养在合适的培养基中，以使其培养至600nm处为5和20之间的光密度(OD)来进行制备。合适的培养基包含来自源例如硫酸铵、磷酸铵、氯化铵、酵母提取物、经水解的动物蛋白、水解的植物蛋白或水解的酪蛋白的氮。从磷酸钾、磷酸铵、磷酸或磷酸钠提供磷酸。其他组分可以是氯化镁或硫酸镁、硫酸铁或氯化铁以及其他微量元素。生长培养基可补充以糖类，例如，果糖、葡萄糖、半乳糖、乳糖和甘油，以促进生长。可选择地，使用补料分批培养来产生高产量的IL-28或IL-29蛋白。在这样的条件下培养产生IL-28或IL-29的大肠杆菌株系，该条件类似于所描述的用于接种分批发酵的第一阶段容器的条件。
发酵后，通过离心、重悬浮于匀浆缓冲液中来收获细胞并对细胞进行匀浆，例如，在APV-Gaulin匀浆机(Invensys APV，Tonawanda，NewYork)或其他类型的细胞破裂设备，例如砂磨机或超声破碎器中进行匀浆。可选择地，直接从发酵罐取出细胞并在APV-Gaulin匀浆器中进行匀浆。可使用含有还原剂例如β巯基乙醇(10-100mM)或二硫苏糖醇(5-50mM)的盐酸胍(5-8M)或尿素(7-8M)溶解经洗涤的内含体制备物。可在Tris、磷酸盐、HEPES或其他合适的缓冲液中制备溶液。内含体也可用含有硫酸月桂酯钠(0.1-2％)的尿素(2-4M)溶解。在从经转化的大肠杆菌宿主株系(其中IL-28或IL-29作为可折射的内含体积累)中回收纯化的IL-28或IL-29的方法中，破裂细胞，通过离心回收内含体。然后溶解内含体并将其在6M含有还原剂的盐酸胍中进行变性。然后在受控制的复性步骤中氧化经还原的IL-28或IL-29。可将重折叠的IL-28或IL-29通过过滤器以净化和除去不溶性蛋白。然后将溶液通过过滤器以净化和除去不溶性蛋白。在IL-28或IL-29蛋白重折叠和浓缩后，在阳离子交换柱上的稀释缓冲液中捕获重折叠的IL-28或IL-29蛋白并使用疏水作用层析法进行纯化。
培养的哺乳动物细胞是本发明内的合适的宿主。用于将外源DNA导入哺乳动物宿主细胞的方法包括磷酸钙介导的转染(Wigler等人，Cell  14：725，1978；Corsaro和Pearson， Somatic Cell Genetics 7：603，1981：Graham和Van der Eb， Virology  52：456，1973)、电穿孔法(Neumann等人， EMBO J.  1：841-5，1982)、DEAE-葡聚糖介导的转染(Ausubel等人， ibid.)和脂质体介导的转染(Hawley-Nelson等人，Focus 15：73，1993；Ciccarone等人， Focus  15：80，1993，和病毒载体(Miller和Rosman， BioTechniques  7：980-90，1989；Wang和Finer， Nature Med.  2：714-6，1996)。由例如Levinson等人，美国专利号4,713,339；Hagen等人，美国专利号4,784,950；Palmiter等人，美国专利号4,579,821；和Ringold，美国专利号4,656,134公开了重组多肽在培养的哺乳动物细胞中的生产。合适的培养的哺乳动物细胞包括COS-1(ATCC No.CRL 1650)、COS-7(ATCC No.CRL 1651)、BHK(ATCC No.CRL 1632)、BHK 570(ATCC No.CRL 10314)、293(ATCCNo.CRL 1573；Graham等人， J.Gen.Virol. 36：59-72，1977)和中国仓鼠卵巢(例如，CHO-K1；ATCC No.CCL 61)细胞系。其他合适的细胞系在本领域是已知的并可从公共保藏库例如美国典型培养物保藏中心，Manassas，VA获得。一般地，强转录启动子是优选的，例如来自SV-40或细胞巨化病毒的启动子。参见，例如，美国专利号4,956,288。其他合适的启动子包括来自金属硫蛋白基因的启动子(美国专利号4,579,821和4,601,978)和腺病毒主要晚期启动子。
药物选择通常用于选择其中已插入外源DNA的培养的哺乳动物细胞。这些细胞一般称作“转染子”。已在选择剂存在的情况下培养的并且能够将目的基因传递至其后代的细胞称作“稳定的转染子”。优选的选择标记物是编码对抗生素新霉素的抗性的基因。在新霉素类型的药物例如G-418等存在的情况下进行选择。也可将选择系统用于增加目的基因的表达水平，称作“扩增”的方法。通过在低水平的选择剂存在的情况下培养转染子来进行扩增，然后增加选择剂的量以选择产生高水平的被导入的基因的产物的细胞。优选的可扩增的选择标记物是二氢叶酸还原酶，该酶提供对氨甲蝶呤的抗性。也可使用其他药物抗性基因(例如，潮霉素抗性、多药耐药、嘌呤霉素乙酰转移酶)。引入改变的表型的可选择的标记物，例如绿色荧光蛋白，或细胞表面蛋白例如CD4、CD8、I类MHC、胎盘碱性磷酸酶可用于通过这些方法如FACS分选或磁珠分离技术，将经转染的细胞从未转染的细胞中分选出来。
也可将其他高等真核细胞用作宿主，包括植物细胞、昆虫细胞和鸟类细胞。由发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)作为用于在植物细胞中表达基因的载体的用途已由Sinkar等人， J.Biosci.(Bangalore)  11：47-58，1987进行了综述。由Guarino等人，美国专利号5,162,222和WIPO公开号WO 94/06463公开了昆虫细胞的转化和外源多肽在其中的产生。可用重组杆状病毒转染昆虫细胞，所述杆状病毒一般衍生自苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcNPV)。参见，King，L.A.和Possee，R.D.， The Baculovirus Expression System：A Laboratory Guide，London，Chapman&Hall；O′Reilly，D.R.等人，Baculovirus Expression Vectors：A Laboratory Manual，NewYork，Oxford University Press.，1994；和，Richardson，C.D.，Ed.， Baculovirus Expression Protocols.Methods in Molecular Biology，Totowa，NJ，Humana Press，1995。产生重组杆状病毒的第二种方法使用由Luckow(Luckow，V.A，等人， J Virol  67：4566-79，1993)描述的基于转座子的系统。该系统以Bac-to-Bac试剂盒(LifeTechnologies，Rockville，MD)的形式出售。该系统使用包含Tn7转座子的转移载体pFastBaclTM(Life Technologies)，将编码IL-28或IL-29多肽的DNA转移至杆状病毒基因组(其以被称为“杆粒”的大质粒的形式保持在大肠杆菌中)。pFastBaclTM转移载体使用AcNPV多角体蛋白启动子驱动目的基因(在该情况下是IL-28或IL-29)的表达。然而，可较大程度地修饰pFastBaclTM。可除去多角体蛋白启动子并用杆状病毒碱性蛋白启动子(也称作Pcor、p6.9或MP启动子)替代，所述杆状病毒碱性蛋白启动子在杆状病毒感染的早期表达，并且已显示对表达分泌蛋白是有利的。参见，Hill-Perkins，M.S.和Possee，R.D.， J. Gen.Virol.  71：971-6，1990；Bonning，B.C.等人， J.Gen.Virol. 75：1551-6，1994；和，Chazenbalk，G.D.，和Rapoport，B.， J. Biol.Chem.  270：1543-9，1995。在这些转移载体构建体中，可使用碱性蛋白启动子的短的或长的形式。此外，可构建用来源于昆虫蛋白的分泌信号序列取代天然的IL-28或IL-29分泌信号序列的转移载体。例如，可在构建体中使用来自脱皮素葡糖基转移酶(EcdysteroidGlucosyltransferase)(EGT)、蜜蜂蜂毒素(Melittin)(Invitrogen，Carlsbad，CA)、或杆状病毒gp67(PharMingen，San Diego，CA)的分泌信号序列取代天然的IL-28或IL-29分泌信号序列。另外，转移载体可包含编码在表达的IL-28或IL-29多肽的C或N末端的表位标记物，例如，Glu-Glu表位标记物(Grussenmeyer，T.等人， Proc.Natl. Acad.Sci.  82：7952-4，1985)的DNA的符合读框的融合物。使用本领域已知的技术，将包含IL-28或IL-29的转移载体转化入大肠杆菌，并就包含标示重组杆状病毒的中断的lacZ基因的杆粒对其进行筛选。使用常规技术分离包含重组杆状病毒基因组的杆粒DNA，将该DNA用于转染草地贪夜蛾细胞，例如Sf9细胞。随后产生表达IL-28或IL-29的重组病毒。通过本领域内通常使用的方法制备重组病毒贮存物。
使用重组病毒感染宿主细胞，通常为来源于秋季粘虫，草地贪夜蛾的细胞系。一般参见，Glick和Pasternak， Molecular Biotechnology： Principles and Applications of Recombinant DNA，ASM Press，Washington，D.C.，1994。另一种合适的细胞系是来源于粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)的High FiveOTM细胞系(Invitrogen)(美国专利号5,300,435)。
真菌细胞，包括酵母细胞，也可用于本发明内。该方面中的特别吸引人的酵母品种包括酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、巴斯德毕赤氏酵母(Pichia pastoris)和甲醇毕赤酵母(Pichiamethanolica)。由例如，Kawasaki，美国专利号4,599,311；Kawasaki等人，美国专利号4,931,373；Brake，美国专利号4,870,008；Welch等人，美国专利号5,037,743；和Murray等人，美国专利号4,845,075公开了用于使用外源DNA转化酿酒酵母细胞和从其产生重组多肽的方法。通过由选择标记物确定的表型(一般为抗药性或在缺少特定的营养物(例如，亮氨酸)的情况下生长的能力)选择经转化的细胞。用于酿酒酵母的优选的载体系统是由Kawasaki等人(美国专利号4,931,373)公开的POT1载体系统，该系统允许通过在含有葡萄糖的培养基上生长来选择经转化的细胞。用于酵母的合适的启动子和终止子包括来自糖酵解酶基因的启动子和终止子(参见，例如，Kawasaki，美国专利号4,599,311；Kingsman等人，美国专利号4,615,974；和Bitter，美国专利号4,977,092)和醇脱氢酶基因。也参见美国专利号4,990,446、5,063,154、5,139,936和4,661,454。用于其他酵母的转化系统在本领域是已知的，包括多形汉逊氏酵母(Hansenulapolymorpha)、粟酒裂殖糖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、乳克鲁维氏酵母(Kluyveromyces lactis)、脆壁克鲁氏维酵母(Kluyveromyces fragilis)、玉蜀黍黑粉菌(Ustilago maydis)、巴斯德毕赤氏酵母、毕赤巴斯德毕赤氏酵母、季也蒙氏毕赤氏酵母(Pichia guillermondii)和麦芽糖假丝酵母(Candida maltosa)。参见，例如，Gleeson等人， J.Gen.Microbiol. 132：3459-65，1986和Cregg，美国专利号4,882,279。可根据McKnight等人，美国专利号4,935,349的方法使用曲霉属(Aspergillus)细胞。由Sumino等人，美国专利号5,162,228公开了用于转化产黄头孢(Acremoniumchrysogenum)的方法。由Lambowitz，美国专利号4,486,533公开了转化脉孢菌属(Neurospora)的方法。在美国专利号5,955,349、5,888,768和6,001,597、美国专利号5,965,389、美国专利号5,736,383和美国专利号5,854,039中公开了毕赤巴斯德毕赤氏酵母作为产生重组蛋白的宿主的用途。
优选地纯化本发明的多肽和蛋白至≥80％的纯度，更优选地≥90％的纯度，更优选地≥95％的纯度，特别优选的是相对于污染性大分子特别是其他蛋白和核酸，高于99.9％的纯度的药物纯状态，并且无感染性和致热性因子。优选地，纯化的多肽或蛋白基本上不含其他多肽或蛋白，特别是动物来源的多肽或蛋白。
通过常规蛋白纯化方法，通常通过层析技术的组合来纯化表达的重组IL-28或IL-29蛋白(包括嵌合多肽和多聚体蛋白)。一般参见，Affinity Chromatography：Principles&Methods，Pharmacia LKBBiotechnology，Uppsala，Sweden，1988；和Scopes， Protein Purification：Principles and Practice，Springer-Verlag，NewYork，1994。通过在镍螯合型树脂进行亲和层析来纯化包含多组氨酸标记物(通常大约为6个组氨酸残基)的蛋白。参见，例如，Houchuli等人， Bio/Technol. 6：1321-1325，1988。可根据常规方法通过免疫亲和层析来纯化包含glu-glu标记物的蛋白。参见，例如，Grussenmeyer等人，同上。根据本领域已知的方法在直链淀粉柱上纯化麦芽糖结合性蛋白融合物。
也可根据本领域已知的方法通过化学合成制备IL-28或IL-29多肽，所述方法包括完全固相合成法、部分固相法、片段缩合或经典的液相合成法。参见，例如，Merrifield， J.Am.Chem.Soc. 85：2149，1963；Stewart等人， Solid Phase Peptide Synthesis(第2版)，Pierce Chemical Co.，Rockford，IL，1984；Bayer和Rapp，Chem.Pept.Prot. 3：3，1986；和Atherton等人， Solid Phase Peptide Synthesis：A Practical Approach，IRL Press，Oxford，1989。体外合成对于更小的多肽的制备是特别有利的。
通过使用本领域已知的方法，可以单体或多聚体、糖基化或非糖基化、PEG化或非PEG化、融合蛋白的形式制备IL-28或IL-29蛋白；所述蛋白可以包含或可以不包含起始的甲硫氨酸氨基酸残基。用于治疗的IL-28或IL-29缀合物可包含药物可接受的水溶性聚合物部分。已显示干扰素和水溶性聚合物的缀合物增加干扰素的循环半衰期，和减少多肽的免疫原性(参见，例如，Nieforth等人， Clin.Pharmacol.Ther. 59：636(1996)，和Monkarsh等人， Anal.Biochem. 247：434(1997))。
合适的水溶性聚合物包括聚乙二醇(PEG)、单甲氧基-PEG、单-(C1-C10)烷氧基-PEG、芳氧基-PEG，聚-(N-乙烯基吡咯烷酮)PEG、2，2，2-三氟乙磺酰基单甲氧基PEG、单甲氧基-PEG丙醛、PEG丙醛、二-琥珀酰亚氨基碳酸PEG、丙二醇同聚物、聚环氧丙烷/环氧乙烷共聚物、聚氧乙基化多元醇(例如，丙三醇)、单甲氧基-PEG丁醛、PEG丁醛、单甲氧基-PEG乙醛、PEG乙醛、甲氧基PEG-琥珀酰亚氨丙酯、甲氧基PEG-琥珀酰亚氨丁酯、聚乙烯醇、葡聚糖、纤维素或其他基于糖的聚合物。合适的PEG可具有从大约600至大约60,000的分子量，例如，5,000道尔顿、12,000道尔顿、20,000道尔顿、30,000道尔顿和40,000道尔顿，其可以是线性的或分支的。IL-28或IL-29缀合物也可包含这些水溶性聚合物的混合。
IL-28或IL-29缀合物的一个示例包含IL-28或IL-29部分和附着至IL-28或IL-29部分的N末端的聚烷基氧化物部分。PEG是一个合适的聚烷基氧化物。作为举例说明，可用PEG修饰IL-28或IL-29，该方法称为“PEG化”。可通过本领域已知的PEG化反应的任一反应进行IL-28或IL-29的PEG化(参见，例如，EP 0 154 316，Delgado等人， Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems  9：249(1992)，Duncan和Spreafico， Clin.Pharmacokinet. 27：290(1994)，和Francis等人， Int J Hematol  68：1(1998))。例如，可通过酰化反应或通过和反应性聚乙二醇分子的烷化反应来进行PEG化。在可选择的方法中，通过缩合活化的PEG来形成IL-28或IL-29缀合物，其中PEG的末端羟基或氨基已被活化的连接体取代(参见，例如，Karasiewicz等人，美国专利号5,382,657)。
通过酰化作用进行的PEG化通常需要使PEG的活化酯衍生物和IL-28或IL-29多肽反应。活化的PEG酯的示例是酯化成N羟基琥珀酰亚胺酯的PEG。如此处所用的，术语“酰化作用”包括下列类型的IL-28或IL-29和水溶性聚合物之间的连接类型：酰胺、氨基甲酸酯、氨基甲酸乙酯等。用于通过酰化作用制备PEG化的IL-28或IL-29的方法通常包括步骤：(a)在一个或多个PEG基团附着至IL-28或IL-29的条件下，使IL-28或IL-29多肽和PEG反应(例如PEG的醛衍生物的反应性酯)，和(b)获得反应物。一般地，基于已知的参数和想要的结果确定酰化反应的最佳反应条件。例如，PEG：IL-28或IL-29的比率越大，多PGE化的IL-28或IL-29产物的百分比越大。
通过烷化作用进行的PEG化通常包括在还原剂存在的情况下使PEG的衍生物的末端醛，例如丙醛、丁醛、乙醛等和IL-28或IL-29反应。PEG基团优选地通过-CH2-NH2基团附着至多肽。
通过还原性烷化作用产生单PEG化产物的衍生化作用利用不同类型的伯氨基团(其是可获得的用于衍生化作用的基团)的差别反应性。一般地，在允许利用赖氨酸残基的ε氨基和蛋白的N末端残基的α氨基之间的pKa差异的pH下进行所述反应。通过这样的选择性衍生化作用，可控制包含反应性基团例如醛的水溶性聚合物与蛋白的附着。和聚合物的缀合主要发生在蛋白的N末端而无其他反应性基团例如赖氨酸侧链氨基的显著修饰。
产生基本上均一的单聚合物IL-28或IL-29缀合分子的群体的还原性烷化反应可包括步骤：(a)在还原性烷化反应条件下，在适合允许IL-28或IL-29的氨基末端上的α氨基的选择性修饰的pH下，使IL-28或IL-29多肽和反应性PEG反应，和(b)获得反应产物。用于还原性烷化反应的还原剂在水溶液中应当是稳定的并且优选地能够只还原在还原性烷化反应的最初过程中形成的希夫碱。优选的还原剂包括硼氢化钠、氰基硼氢化钠、二甲胺硼烷、三甲胺硼烷和吡啶硼烷。
为了产生单聚合物IL-28或IL-29缀合物的基本上均一的群体，还原性烷化反应条件是允许水溶性聚合物部分选择性附着至IL-28或IL-29的N末端的反应条件。这样的反应条件通常提供了赖氨酸氨基和N末端上的α氨基之间的pKa差异。pH也影响了所使用的聚合物对蛋白的比例。一般地，如果pH越低，想要更高的聚合物对蛋白的比例，因为N末端α基团的反应性越低，则需要更多的聚合物获得最佳条件。如果pH越高，则不需要如此大的聚合物：IL-28或IL-29的比例，因为可获得更多的反应性基团。一般地，pH落在3-9、或3-6的范围之内。另一个要考虑的因素是水溶性聚合物的分子量。一般地，聚合物的分子量越高，可附着至蛋白的聚合物分子的数目越少。为了进行PEG化反应，一般的分子量是大约2kDa至大约100kDa、大约5kDa至大约50kDa、大约12kDa至大约40kDa、或大约20kDa至大约30kDa。水溶性聚合物对IL-28或IL-29的摩尔比例一般在1∶1至100∶1的范围之内。一般地，对于多PEG化，水溶性聚合物对IL-28或IL-29的摩尔比是1∶1至20∶1，对于单PEG化则为1∶1至5∶1。
用于产生包含干扰素和水溶性聚合物的缀合物的一般方法在本领域内是已知的。参见，例如，Karasiewicz等人，美国专利号5,382,657，Greenwald等人，美国专利号5,738,846，Nieforth等人，Clin.Pharmacol.Ther. 59：636(1996)，Monkarsh等人， Anal. Biochem. 247：434(1997)。可通过使用标准的纯化方法，例如透析、超滤、离子交换层析、亲和层析、大小排阻层析等从未缀合的IL-28或IL-29多肽中分离PEG化的种类。
本发明的IL-28或IL-29分子能够特异性地结合IL-28受体和/或充当抗肿瘤剂(antumor agent)。可使用已建立的方法测定IL-28或Il-29多肽对IL-28受体的结合。可根据厂商说明书用碘珠(Pierce，Rockford，IL)碘化IL-28或IL-29，然后如下所述使用125I-IL-28或125I-IL-29。
在第一方法中，在可能的结合竞争剂(包括未标记的IL-28或IL-29)存在或不存在的情况下，将50纳克125I-IL-28或125I-IL-29和1000ng IL-28受体人IgG融合蛋白组合。也进行相同的结合反应，用作为特异性对照的其他细胞因子受体人IgG融合蛋白替换。在4℃下温育后，向反应物中加入G蛋白(Zymed，SanFransisco，CA)以捕获受体-IgG融合蛋白和与其结合的任何蛋白，在4℃下再温育反应物1小时。然后收集G蛋白琼脂糖，用PBS洗涤3次，通过γ计数器(PackardInstruments，Downers Grove，IL)测量125I-IL-28或125I-IL-29的结合。
在第二方法中，可测定分子抑制125I-IL-28或125I-IL-29对板结合受体的结合的能力。可通过在板中温育100μl 1g/mL的受体溶液过夜，将代表细胞外配体结合性结构域的IL-28受体的片段吸附至96孔板的小孔。在第二形式中，可将受体-人IgG融合蛋白结合至已用抗融合蛋白的人IgG部分的抗体包被的96孔板的小孔。在用受体包被板后，洗涤板，用SUPERBLOCK(Pierce，Rockford，IL)进行封闭，再洗涤。溶液包含固定浓度的125I-IL-28或125I-IL-29，该溶液具有或不具有浓度不断增加的潜在结合竞争剂，包括IL-28、IL-29、IL-28和IL-29，向板中恰当的小孔中加入100μl该溶液。在4℃下温育1小时后，洗涤板并通过计数(Topcount，Packard Instruments，Downers grove，IL)确定125I-IL-28或125I-IL-29的结合的量。可通过这些结合测定法中使用的受体分子和通过用作抑制剂的分子确定125I-IL-28或125I-IL-29的结合特异性。
除了PEG化外，可通过遗传学方法将人白蛋白偶联至本发明的多肽以延长其半衰期。人白蛋白是最普遍的天然发生的人循环系统中的血液蛋白，其在身体的循环系统中持续超过20天。研究已显示经基因工程融合至人白蛋白的治疗性蛋白具有更长的半衰期。IL28或IL29白蛋白融合蛋白，如PEG化一样，可为患者提供这样的长效疗法选择，和目前可获得的治疗法相比，该长效疗法选择提供更方便的给药方案，具有类似的或提高的功效和安全性(美国专利号6,165,470；Syed等人，Blood， 89(9)：3243-3253(1997)；Yeh等人， Proc.Natl.Acad.Sci. USA， 89：1904-1908(1992)；和Zeisel等人， Horm.Res.， 37：5-13(1992))。
如前述的PEG化和人白蛋白一样，可将人IgG的Fc部分融合至本发明的多肽。所得的融合蛋白，由于Fc部分的原因，可具有增加的循环半衰期(美国专利号5,750,375，美国专利号5843,725，美国专利号6,291,646；Barouch等人， Journal of Immunology，61：1875-1882(1998)；Barouch等人， Proc.Natl.Acad.Sci.USA，97(8)：4192-4197(April 11，2000)；和Kim等人， Transplant Proc.，30(8)：4031-4036(Dec.1998))。
如此处所用的，术语“抗体”包括多克隆抗体、单克隆抗体、其抗原结合片段例如F(ab′)2和Fab片段、单链抗体等，包括经基因工程改造的抗体。可通过将非人CDR移植至人构架区和恒定区或通过整合整个非人可变结构域(任选通过暴露的残基的取代用人样表面掩盖其，其中所得的抗体是“镶边”抗体)来人源化非人抗体。在一些情况下，人源化的抗体可在人的可变区构架结构域内保留非人残基以增强合适的结合特征。通过人源化抗体，可增加生物学半衰期，减少给人施用后有害免疫应答的潜能。本领域技术人员可生产具有特异性和不同恒定结构域(即，不同的Ig亚类)的人源化抗体以促进或抑制和特定抗体恒定结构域关联的各种免疫功能。如果抗体以大于对对照(非IL-28和IL-29)多肽或蛋白的结合亲和力至少10倍的结合亲和力结合IL-28或IL-29多肽或蛋白，那么抗体被确定为特异性结合。可容易地通过本领域内的常规方法中的一种方法确定单克隆抗体的亲和力(参见，例如，Scatchard， Ann.NY Acad.Sci. 51：660-672，1949)。
用于制备多克隆和单克隆抗体的方法在本领域内是熟知的(参见例如，Hurrell，J.G.R.，Ed.， Monoclonal Hybridoma Antibodies： Techniques and Applications，CRC Press，Inc.，Boca Raton，FL，1982，其在此引用作为参考)。多肽免疫原可以是全长分子或其部分。如果多肽部分是“半抗原样的”，可有利地将该部分结合至或连接至大分子载体(例如钥孔血蓝蛋白(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)或破伤风类毒素)以用于免疫接种。
可使用本领域技术人员已知的各种测定法检测特异性结合IL-28或IL-29多肽的抗体。 Using Antibodies：A Laboratory Manual，Harlow and Lane(Eds.)，Cold Spring Harbor Laboratory Press，1999中详尽地描述了示例性测定法。这些测定法的代表性示例包括：并行免疫电泳(concurrent immunoelectrophoresis)、放射免疫测定法、放射免疫沉淀法、酶联免疫吸附测定法(ELISA)、点印迹测定法、Western印迹测定法、抑制或竞争测定法和夹心分析法。
对于某些用途，包括体外和体内诊断用途，有利地使用经标记的抗体。合适的直接标记物或标记包括放射性核素、酶、底物、辅助因子、抑制剂、荧光标记物、化学发光标记物、磁性颗粒等；间接标记物或标记可使用生物素-抗生物素蛋白或其他互补物/反互补物对作为中间物。也可将本发明的抗体直接或间接地缀合至药物、毒素、放射性核素等，这些缀合物用于体内诊断或治疗用途(例如，细胞增殖的抑制)。一般参见，Ramakrishnan等人， Cancer Res. 56：1324-1330，1996。
给患者施用药物制剂可以是局部、吸入、静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、皮下、胸膜内、鞘内施用、通过局部导管的输注进行的施用或通过直接的病灶内注射进行的施用。当通过注射施用治疗性蛋白时，可通过连续输注或通过单次或多次推注进行施用。一般地，药物制剂包含药物可接受的媒介物例如盐水、缓冲盐水、5％葡萄糖水溶液等和IL-28或IL-29多肽。制剂还可包含一种或多种赋形剂、防腐剂、助溶剂、缓冲剂、白蛋白以预防蛋白在瓶表面上的损失等。配制的方法在本领域内是熟知的并公开于，例如，Remington：The Science andPractice of Pharmacy，Gennaro，ed.，Mack Publishing Co.，Easton，PA，第19版，1995。优选地以大约10至100μg/ml总体积的浓度使用IL-28或IL-29多肽，尽管可使用1ng/ml至1000μg/ml范围内的浓度。对于局部应用，例如促进伤口愈合，可在0.1-10μg/cm2伤口面积的范围内使用蛋白，确切的剂量由临床医师根据可接受的标准，考虑被治疗的病症的性质和严重度、患者的特征等来确定。剂量的确定在本领域技术人员的水平之内。每日给药或在一段治疗时期内间歇地给药。可通过推注或一般1至数小时的一段时间内的输注进行静脉内给药。也可使用持续释放制剂。一般地，IL-28或IL-29的治疗有效量是这样的量，该量足以在被治疗的病症中产生临床上显著的改变，例如在造血或免疫功能上的临床上显著的改变、死亡率上的显著减少或显著增加的组织学评分。
作为举例说明，可以包含装有本发明的IL-28或IL29多肽的容器的试剂盒的方式提供药物制剂。可以用于单剂量或多剂量的注射液的形式、或以这样的无菌粉末的形式提供治疗性多肽，所述无菌粉末可在注射前进行重构。可选择地，这样的试剂盒包括用于施用治疗性多肽的干粉扩散器、液体气雾发生器、或喷雾器。这样的试剂盒还可包含关于药物组合物的适应症和应用的书面信息。此外，这些信息可包括这样的声明，即在已知对IL-28或IL29多肽具有超敏反应的患者中禁忌使用IL-28或IL29多肽制剂。
            B.IL-28和IL-29对治疗癌症的用途
已显示本发明IL-28和IL-29多肽具有和干扰素α相似的抗病毒效应(参见WO 04/037995)。在美国已批准使用干扰素治疗自身免疫疾病、尖锐湿疣、慢性丙型肝炎、膀胱癌、宫颈癌、喉乳头状瘤病、蕈样真菌病、慢性乙型肝炎、感染了人免疫缺陷病毒的患者中的卡波西肉瘤、恶性黑色素瘤、毛细胞性白血病和多发性硬化症。此外，IL-28和IL-29多肽可用于通过抑制细胞增殖来治疗动脉硬化的形式，例如动脉粥样硬化。因此，本发明涉及IL-28或IL-29多肽、具有IL-28和IL-29活性的其融合蛋白和片段治疗这些病症以及治疗视网膜病的用途。本发明提供了IL-28和IL-29蛋白、具有IL-28和IL-29的活性的多肽和肽的用途，即用于治疗、预防淋巴增生性疾病、抑制其进展、延迟其发生、和/或减轻和淋巴增生性疾病关联的病症或症状中的至少一种病症或症状，所述淋巴增生性疾病包括例如，B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、非何杰金氏淋巴瘤、多发性骨髓瘤、急性髓细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病。此外，本发明还提供了IL-28和IL-29蛋白、具有IL-28和IL-29的活性的多肽和肽的这样的用途，即治疗、预防下列癌症、抑制其进展、延迟其发生、和/或减少其严重度或抑制和其相关的病症或症状中的至少一种的用途，所述癌症选自肾细胞癌、宫颈癌(例如，鳞状类型和腺癌)、头与颈的肿瘤(例如，咽下癌(Hypopharyngeal Cancer)、喉癌、唇和口腔癌、不明原发性颈部鳞状转移癌(Metastatic Squamous Neck Cancer withOccult Primary)、鼻咽癌、口咽癌、鼻窦和鼻腔癌、甲状旁腺癌和唾液腺癌)、黑色素瘤(例如，恶性黑色素瘤例如浅表扩展性黑色素瘤、结节性黑色素瘤和恶性雀斑样黑色素瘤)、甲状腺癌(例如，乳头状癌、滤泡癌、髓癌和退行发育性癌)、恶性胶质瘤(例如，多形性恶性胶质瘤和退行发育性星形细胞瘤(anaplastic astrocytoma))、乳腺癌(例如，导管癌)、结肠癌、肺癌(例如，小细胞肺癌、非小细胞肺癌例如鳞状细胞癌、腺癌和大细胞癌、和间皮瘤)、胰腺癌、前列腺癌、胃癌、卵巢癌、睾丸癌、卡波西肉瘤、和骨癌(例如，骨肉瘤、尤因肉瘤、软骨肉瘤、梭形细胞肉瘤和脊索瘤)。
也已显示干扰素诱导培养细胞表达抗原(参见，例如，Auth等人，Hepatology  18：546(1993)，Guadagni等人， Int.J.Biol.Markers 9：53(1994)，Girolomoni等人， Eur.J.Immunol. 25：2163(1995)，和Maciejewski等人， Blood  85：3183(1995)。该活性增强了体外鉴定新的肿瘤相关抗原的能力。此外，干扰素提高人肿瘤抗原的表达水平的能力表明干扰素可用于佐剂(该佐剂用于免疫治疗)或可增强使用抗肿瘤抗原抗体的免疫闪烁成像(Guadagni等人， Cancer Immunol. Immunother. 26：222(1988)；Guadagni等人， Int.J.Biol.Markers 9：53(1994))。因此，本发明包括IL-28或IL-29蛋白、具有IL-28和IL-29的活性的多肽和肽的用途，即作为免疫治疗法的佐剂或提高使用抗肿瘤抗原抗体的免疫闪烁成像的用途。
可在体内测量IL-28或IL-29多肽对肿瘤进展和转移的活性和功效。已发展了几个同系基因型小鼠模型来研究多肽、化合物或其他治疗法对肿瘤进展的影响。在这些模型中，将在培养中传代的肿瘤细胞作为肿瘤供体移植入相同品系的小鼠。所述细胞在受体小鼠中发展成具有相似特征的肿瘤，在其中一些模型中也发生转移。除其他以外，用于我们的研究的合适的肿瘤模型包括路易士肺癌(ATCC编号CRL-1642)和B16黑色素瘤(ATCC编号CRL-6323)。这些都是常用的肿瘤系，是容易进行体外培养和操作的C57BL6小鼠的同系基因型。由这些细胞系的任一细胞系的移植产生的肿瘤能够在C57BL6小鼠中转移至肺。最近已将路易士肺癌模型用于小鼠以鉴定血管发生的抑制剂(O′Reilly MS，等人 Cell  79：315-328，1994)。通过重组蛋白、激动剂或拮抗剂的每日注射或重组腺病毒的一次性注射，用实验试剂处理C57BL6/J小鼠。在该处理3天后，在背部皮肤下移植105至106个细胞。可选择地，可在移植之前用重组腺病毒例如表达IL-28和IL-29的重组腺病毒感染细胞自身，以使所述蛋白在肿瘤位点或细胞内合成而非全身性地合成。小鼠通常在5天内发展出可见的肿瘤。使肿瘤生长长达3周的时期，在该时期，在对照处理组中其可达到1500-1800mm3大小。在整个实验过程中仔细地监控肿瘤大小和体重。在处死时，将肿瘤连同肺和肝脏一起取出并称重。已显示肺的重量很好地和转移的肿瘤负荷相关。作为另外的测量，对肺表面转移灶进行计数。使用本领域已知的和此处描述的方法，制备切除的肿瘤、肺和肝脏以进行组织病理学检查、免疫组织化学和原位杂交。从而可评估所述的表达的多肽，例如半胱氨酸突变的IL-28和IL-29对肿瘤招募脉管系统和进行转移的能力的影响。此外，除了使用腺病毒外，可用IL-28和IL-29瞬时转染移植的细胞。使用稳定的IL-28或IL-29转染子和使用可诱导的启动子在体内激活IL-28或IL-29的表达在本领域内是已知的并且可用于该系统以评估转移的诱导。此外，可将纯化的经IL-28或IL-29条件化的培养基直接注射入该小鼠模型中，从而可用于该系统中。关于一般的参考资料，参见，O′Reilly MS，等人 Cell  79：315-328，1994；和Rusciano D，等人Murine Models of Liver Metastasis. Invasion Metastasis  14：349-361，1995。
本发明提供了治疗癌症的方法，其包括给需要其的患者施用治疗有效量的多肽，该多肽选自SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161，其中所述癌症选自B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、非何杰金氏淋巴瘤、多发性骨髓瘤、急性髓细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、肾细胞癌、宫颈癌、黑色素瘤、甲状腺癌、恶性胶质瘤、乳腺癌、结肠癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌、卵巢癌、睾丸癌、卡波西肉瘤、和骨癌。多肽任选地还可包括聚乙二醇部分，该聚乙二醇部分可共价地连接至多肽(例如，通过氨基末端的氨基连接)。聚乙二醇可以是线性的或分支的。聚乙二醇可具有大约20kD、30kD或40kD的分子量。聚乙二醇可以是单甲氧基-PEG丙醛。施用多肽的患者可以是哺乳动物，例如人。
本发明也提供了治疗癌症的方法，该方法包括给需要其的患者施用治疗有效量的多肽，该多肽和选自SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的序列具有至少90％或95％的序列同一性，其中所述癌症选自B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、非何杰金氏淋巴瘤、多发性骨髓瘤、急性髓细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、肾细胞癌、宫颈癌、黑色素瘤、甲状腺癌、恶性胶质瘤、乳腺癌、结肠癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌、卵巢癌、睾丸癌、卡波西肉瘤、和骨癌。所述多肽可具有SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的至少15、至少30、至少45或至少60个连续氨基酸。多肽任选地还可包含聚乙二醇部分，该部分可共价地连接至该多肽(例如，通过氨基末端的氨基连接)。聚乙二醇可以是线性的或分支的。聚乙二醇可具有大约20kD、30kD或40kD的分子量。聚乙二醇可以是单甲氧基-PG丙醛。施用多肽的患者可以是哺乳动物，例如人。
本发明也提供了治疗癌症的方法，该方法包括给需要其的患者施用治疗有效量的制剂，该制剂包含：和选自SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的序列具有至少90％或95％的序列同一性的多肽、和药物可接受的媒介物；其中所述癌症选自肾细胞癌、宫颈癌(例如，鳞状类型和腺癌)、头颈部肿瘤(例如，咽下癌、喉癌、唇和口腔癌、不明原发性颈部鳞状转移癌、鼻咽癌、口咽癌、鼻窦和鼻腔癌、甲状旁腺癌和唾液腺癌)、黑色素瘤(例如，恶性黑色素瘤例如浅表扩展性黑色素瘤、结节性黑色素瘤和恶性雀斑样黑色素瘤)、甲状腺癌(例如，乳头状癌、滤泡癌、髓癌和退行发育性癌)、恶性胶质瘤(例如，多形性恶性胶质瘤和退行发育性星形细胞瘤)、乳腺癌(例如，导管癌)、结肠癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌、卵巢癌、睾丸癌、卡波西肉瘤、和骨癌(例如，骨肉瘤、尤因肉瘤、软骨肉瘤、梭形细胞肉瘤和脊索瘤)。所述多肽可具有SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的至少15、至少30、至少45或至少60个连续氨基酸。多肽任选地还可包含聚乙二醇部分，该部分可共价地连接至该多肽(例如，通过氨基末端的氨基连接)。聚乙二醇可以是线性的或分支的。聚乙二醇可具有大约20kD、30kD或40kD的分子量。聚乙二醇可以是单甲氧基-PEG丙醛。施用多肽的患者可以是哺乳动物，例如人。第二多肽可以是干扰素分子，例如干扰素α、干扰素β或干扰素γ，另一种治疗剂，例如IL-2和/或IL-21，或其组合。
本发明也提供了治疗癌症的方法，该方法包括给需要其的患者施用治疗有效量的制剂，该制剂包含：和选自SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的序列具有至少90％或95％的序列同一性的多肽、第二多肽、药物可接受媒介物；其中所述癌症选自肾细胞癌、宫颈癌(例如，鳞状类型和腺癌)、头颈部肿瘤(例如，咽下癌、喉癌、唇和口腔癌、不明原发性颈部鳞状转移癌、鼻咽癌、口咽癌、鼻窦和鼻腔癌、甲状旁腺癌和唾液腺癌)、黑色素瘤(例如，恶性黑色素瘤例如浅表扩展性黑色素瘤、结节性黑色素瘤和恶性雀斑样黑色素瘤)、甲状腺癌(例如，乳头状癌、滤泡癌、髓癌和退行发育性癌)、恶性胶质瘤(例如，多形性恶性胶质瘤和退行发育性星形细胞瘤)、乳腺癌(例如，导管癌)、结肠癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌、卵巢癌、睾丸癌、卡波西肉瘤、和骨癌(例如，骨肉瘤、尤因肉瘤、软骨肉瘤、梭形细胞肉瘤和脊索瘤)。所述多肽可具有SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的至少15、至少30、至少45或至少60个连续氨基酸。所述多肽还任选地包含聚乙二醇部分，该部分可共价地连接至多肽(例如，通过氨基末端的氨基连接)。聚乙二醇可以是线性的或分支的。聚乙二醇可具有大约20kD、30kD或40kD的分子量。聚乙二醇可以是单甲氧基-PEG丙醛。施用多肽的患者可以是哺乳动物，例如人。第二多肽可以是干扰素分子，例如干扰素α、干扰素β、或干扰素γ，另一种治疗剂，例如IL-2和/或IL-21，或其组合。
本发明也提供了抑制癌症的进展的方法，该方法包括给需要其的患者施用治疗有效量的多肽，该多肽和选自SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的序列具有至少90％或95％的序列同一性，其中所述癌症选自B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、非何杰金氏淋巴瘤、多发性骨髓瘤、急性髓细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、肾细胞癌、宫颈癌、黑色素瘤、甲状腺癌、恶性胶质瘤、乳腺癌、结肠癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌、卵巢癌、睾丸癌、卡波西肉瘤和骨癌。所述多肽可具有SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的至少15、至少30、至少45或至少60个连续氨基酸。多肽任选地还可包含聚乙二醇部分，该部分可共价地连接至多肽(例如，通过氨基末端的氨基连接)。聚乙二醇可以是线性的或分支的。聚乙二醇可具有大约20kD、30kD或40kD的分子量。聚乙二醇可以是单甲氧基-PEG丙醛。施用多肽的患者可以是哺乳动物，例如人。
本发明也提供了抑制癌症进展的方法，该方法包括给需要其的患者施用治疗有效量的制剂，该制剂包含：和选自SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的序列具有至少90％或95％的序列同一性的多肽、第二多肽、药物可接受媒介物；其中所述癌症选自肾细胞癌、宫颈癌(例如，鳞状类型和腺癌)、头颈部肿瘤(例如，咽下癌、喉癌、唇和口腔癌、不明原发性颈部鳞状转移癌、鼻咽癌、口咽癌、鼻窦和鼻腔癌、甲状旁腺癌和唾液腺癌)、黑色素瘤(例如，恶性黑色素瘤例如浅表扩展性黑色素瘤、结节性黑色素瘤和恶性雀斑样黑色素瘤)、甲状腺癌(例如，乳头状癌、滤泡癌、髓癌和退行发育性癌)、恶性胶质瘤(例如，多形性恶性胶质瘤和退行发育性星形细胞瘤)、乳腺癌(例如，导管癌)、结肠癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌、卵巢癌、睾丸癌、卡波西肉瘤、和骨癌(例如，骨肉瘤、尤因肉瘤、软骨肉瘤、梭形细胞肉瘤和脊索瘤)。所述多肽可具有SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的至少15、至少30、至少45或至少60个连续氨基酸。所述多肽任选地还包含聚乙二醇部分，该部分可共价地连接至多肽(例如，通过氨基末端的氨基连接)。聚乙二醇可以是线性的或分支的。聚乙二醇可具有大约20kD、30kD或40kD的分子量。聚乙二醇可以是单甲氧基-PEG丙醛。施用多肽的患者可以是哺乳动物，例如人。第二多肽可以是干扰素分子，例如干扰素α、干扰素β、或干扰素γ，另一种治疗剂，例如IL-2和/或IL-21，或其组合。
本发明也提供了延迟癌症的发生的方法，该方法包括给需要其的患者施用治疗有效量的多肽，该多肽和选自SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的序列具有至少90％或95％的序列同一性，其中所述癌症选自B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、非何杰金氏淋巴瘤、多发性骨髓瘤、急性髓细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、肾细胞癌、宫颈癌、黑色素瘤、甲状腺癌、恶性胶质瘤、乳腺癌、结肠癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌、卵巢癌、睾丸癌、卡波西肉瘤和骨癌。所述多肽可具有SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的至少15、至少30、至少45或至少60个连续氨基酸。多肽任选地还可包含聚乙二醇部分，该部分可共价地连接至多肽(例如，通过氨基末端的氨基连接)。聚乙二醇可以是线性的或分支的。聚乙二醇可具有大约20kD、30kD或40kD的分子量。聚乙二醇可以是单甲氧基-PEG丙醛。施用多肽的患者可以是哺乳动物，例如人。
本发明也提供了延迟癌症的发生的方法，该方法包括给需要其的患者施用治疗有效量的制剂，该制剂包含：和选自SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的序列具有至少90％或95％的序列同一性的多肽、第二多肽、药物可接受媒介物；其中所述癌症选自肾细胞癌、宫颈癌(例如，鳞状类型和腺癌)、头颈部肿瘤(例如，咽下癌、喉癌、唇和口腔癌、不明原发性颈部鳞状转移癌、鼻咽癌、口咽癌、鼻窦和鼻腔癌、甲状旁腺癌和唾液腺癌)、黑色素瘤(例如，恶性黑色素瘤例如浅表扩展性黑色素瘤、结节性黑色素瘤和恶性雀斑样黑色素瘤)、甲状腺癌(例如，乳头状癌、滤泡癌、髓癌和退行发育性癌)、恶性胶质瘤(例如，多形性恶性胶质瘤和退行发育性星形细胞瘤)、乳腺癌(例如，导管癌)、结肠癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌、卵巢癌、睾丸癌、卡波西肉瘤、和骨癌(例如，骨肉瘤、尤因肉瘤、软骨肉瘤、梭形细胞肉瘤和脊索瘤)。所述多肽可具有SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的至少15、至少30、至少45或至少60个连续氨基酸。所述多肽任选地还可包括聚乙二醇部分，该部分可共价地连接至该多肽(例如，通过氨基末端的氨基连接)。聚乙二醇可以是线性的或分支的。聚乙二醇可具有大约20kD、30kD或40kD的分子量。聚乙二醇可以是单甲氧基-PEG丙醛。施用多肽的患者可以是哺乳动物，例如人。第二多肽可以是干扰素分子，例如干扰素α、干扰素β、或干扰素γ，另一种治疗剂，例如IL-2和/或IL-21，或其组合。
本发明也提供了减少癌症的严重度的方法，该方法包括给需要其的患者施用治疗有效量的多肽，该多肽和选自SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的序列具有至少90％或95％的序列同一性，其中所述癌症选自B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、非何杰金氏淋巴瘤、多发性骨髓瘤、急性髓细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、肾细胞癌、宫颈癌、黑色素瘤、甲状腺癌、恶性胶质瘤、乳腺癌、结肠癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌、卵巢癌、睾丸癌、卡波西肉瘤、和骨癌。所述多肽可具有SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的至少15、至少30、至少45或至少60个连续氨基酸。多肽还可任选地包含聚乙二醇部分，该部分可共价地连接至该多肽(例如，通过氨基末端的氨基连接)。聚乙二醇可以是线性的或分支的。聚乙二醇可具有大约20kD、30kD或40kD的分子量。聚乙二醇可以是单甲氧基-PEG丙醛。施用多肽的患者可以是哺乳动物，例如人。
本发明也提供了减少癌症的严重度的方法，该方法包括给需要其的患者施用治疗有效量的制剂，该制剂包含：和选自SEQ I D NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的序列具有至少90％或95％的序列同一性的多肽、第二多肽、药物可接受媒介物；其中所述癌症选自肾细胞癌、宫颈癌(例如，鳞状类型和腺癌)、头颈部肿瘤(例如，咽下癌、喉癌、唇和口腔癌、不明原发性颈部鳞状转移癌、鼻咽癌、口咽癌、鼻窦和鼻腔癌、甲状旁腺癌和唾液腺癌)、黑色素瘤(例如，恶性黑色素瘤例如浅表扩展性黑色素瘤、结节性黑色素瘤和恶性雀斑样黑色素瘤)、甲状腺癌(例如，乳头状癌、滤泡癌、髓癌和退行发育性癌)、恶性胶质瘤(例如，多形性恶性胶质瘤和退行发育性星形细胞瘤)、乳腺癌(例如，导管癌)、结肠癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌、卵巢癌、睾丸癌、卡波西肉瘤、和骨癌(例如，骨肉瘤、尤因肉瘤、软骨肉瘤、梭形细胞肉瘤和脊索瘤)。所述多肽可具有SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的至少15、至少30、至少45或至少60个连续氨基酸。所述多肽任选地还可包含聚乙二醇部分，该部分可共价地连接至多肽(例如，通过氨基末端的氨基连接)。聚乙二醇可以是线性的或分支的。聚乙二醇可具有大约20kD、30kD或40kD的分子量。聚乙二醇可以是单甲氧基-PEG丙醛。施用多肽的患者可以是哺乳动物，例如人。第二多肽可以是干扰素分子，例如干扰素α、干扰素β、或干扰素γ，另一种治疗剂，例如IL-2和/或IL-21，或其组合。
本发明也提供了抑制癌症的至少一种病症或症状的方法，该方法包括给需要其的患者施用治疗有效量的多肽，该多肽和选自SEQ IDNO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的序列具有至少90％或95％的序列同一性，其中所述癌症选自B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、非何杰金氏淋巴瘤、多发性骨髓瘤、急性髓细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、肾细胞癌、宫颈癌、黑色素瘤、甲状腺癌、恶性胶质瘤、乳腺癌、结肠癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌、卵巢癌、睾丸癌、卡波西肉瘤、和骨癌。所述多肽可具有SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的至少15、至少30、至少45或至少60个连续氨基酸。多肽任选地还可包含聚乙二醇部分，该部分可共价地连接至该多肽(例如，通过氨基末端的氨基连接)。聚乙二醇可以是线性的或分支的。聚乙二醇可具有大约20kD、30kD或40kD的分子量。聚乙二醇可以是单甲氧基-PEG丙醛。施用多肽的患者可以是哺乳动物，例如人。
本发明也提供了抑制癌症的其中至少一种病症或症状的方法，该方法包括给需要其的患者施用治疗有效量的制剂，该制剂包含：和选自SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的序列具有至少90％或95％的序列同一性的多肽、第二多肽、药物可接受媒介物；其中所述癌症选自肾细胞癌、宫颈癌(例如，鳞状类型和腺癌)、头颈部肿瘤(例如，咽下癌、喉癌、唇和口腔癌、不明原发性颈部鳞状转移癌、鼻咽癌、口咽癌、鼻窦和鼻腔癌、甲状旁腺癌和唾液腺癌)、黑色素瘤(例如，恶性黑色素瘤例如浅表扩展性黑色素瘤、结节性黑色素瘤和恶性雀斑样黑色素瘤)、甲状腺癌(例如，乳头状癌、滤泡癌、髓癌和退行发育性癌)、恶性胶质瘤(例如，多形性恶性胶质瘤和退行发育性星形细胞瘤)、乳腺癌(例如，导管癌)、结肠癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌、卵巢癌、睾丸癌、卡波西肉瘤、和骨癌(例如，骨肉瘤、尤因肉瘤、软骨肉瘤、梭形细胞肉瘤和脊索瘤)。所述多肽可具有SEQ IDNO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的至少15、至少30、至少45或至少60个连续氨基酸。所述多肽任选地还可包含聚乙二醇部分，该部分可共价地连接至多肽(例如，通过氨基末端的氨基连接)。聚乙二醇可以是线性的或分支的。聚乙二醇可具有大约20kD、30kD或40kD的分子量。聚乙二醇可以是单甲氧基-PEG丙醛。施用多肽的患者可以是哺乳动物，例如人。第二多肽可以是干扰素分子，例如干扰素α、干扰素β、或干扰素γ，另一种治疗剂，例如IL-2和/或IL-21，或其组合。
本发明也提供了抑制非何杰金氏淋巴瘤的至少一种病症或症状的方法，该方法包括给需要其的患者施用治疗有效量的多肽，该多肽和选自SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的序列具有至少90％或95％的序列同一性，其中所述病症或症状中的至少一种选自颈部、腋窝或腹股沟中的淋巴结无痛肿胀、盗汗、不明原因发烧(unexplainedfever)、体重减轻和过度疲劳。所述多肽可具有SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的至少15、至少30、至少45或至少60个连续氨基酸。多肽任选地还可包含聚乙二醇部分，该部分可共价地连接至多肽(例如，通过氨基末端的氨基连接)。聚乙二醇可以是线性的或分支的。聚乙二醇可具有大约20kD、30kD或40kD的分子量。聚乙二醇可以是单甲氧基-PEG丙醛。施用多肽的患者可以是哺乳动物，例如人。
本发明也提供了抑制非何杰金氏淋巴瘤的至少一种病症或症状的方法，该方法包括给需要其的患者施用治疗有效量的制剂，该制剂包含：和选自SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的序列具有至少90％或95％的序列同一性的多肽、第二多肽、和药物可接受媒介物；其中所述病症或症状中的至少一种选自颈部、腋窝或腹股沟中的淋巴结无痛肿胀、盗汗、不明原因发烧、体重减轻和过度疲劳。所述多肽可具有SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的至少15、至少30、至少45或至少60个连续氨基酸。所述多肽任选地还可包含聚乙二醇部分，该部分可共价地连接至多肽(例如，通过氨基末端的氨基连接)。聚乙二醇可以是线性的或分支的。聚乙二醇可具有大约20kD、30kD或40kD的分子量。聚乙二醇可以是单甲氧基-PEG丙醛。施用多肽的患者可以是哺乳动物，例如人。第二多肽可以是干扰素分子，例如干扰素α、干扰素β、或干扰素γ，另一种治疗剂，例如IL-2和/或IL-21，或其组合。
本发明也提供了抑制多发性骨髓瘤的至少一种病症或症状的方法，该方法包括给需要其的患者施用治疗有效量的多肽，该多肽和选自SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的序列具有至少95％的序列同一性，其中所述病症或症状中的至少一种选自背部疼痛、体重减轻、贫血、肾损伤、反复的呼吸道感染和高血钙症。所述多肽可具有SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的至少15、至少30、至少45或至少60个连续氨基酸。多肽任选地还可包含聚乙二醇部分，该部分可共价地连接至该多肽(例如，通过氨基末端的氨基连接)。聚乙二醇可以是线性的或分支的。聚乙二醇可具有大约20kD、30kD或40kD的分子量。聚乙二醇可以是单甲氧基-PEG丙醛。施用多肽的患者可以是哺乳动物，例如人。
本发明也提供了抑制多发性骨髓瘤的至少一种病症或症状的方法，该方法包括给需要其的患者施用治疗有效量的制剂，该制剂包含：和选自SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的序列具有至少90％或95％的序列同一性的多肽、第二多肽、和药物可接受媒介物；其中所述病症或症状中的至少一种选自背部疼痛、体重减轻、贫血、肾损伤、反复的呼吸道感染和高血钙症。所述多肽可具有SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的至少15、至少30、至少45或至少60个连续氨基酸。所述多肽任选地还可包含聚乙二醇部分，该部分可共价地连接至多肽(例如，通过氨基末端的氨基连接)。聚乙二醇可以是线性的或分支的。聚乙二醇可具有大约20kD、30kD或40kD的分子量。聚乙二醇可以是单甲氧基-PEG丙醛。施用多肽的患者可以是哺乳动物，例如人。第二多肽可以是干扰素分子，例如干扰素α、干扰素β、或干扰素γ，另一种治疗剂，例如IL-2和/或IL-21，或其组合。
本发明也提供了抑制头与颈的肿瘤的至少一种病症或症状的方法，该方法包括给需要其的患者施用治疗有效量的多肽，该多肽和选自SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的序列具有至少90％或95％的序列同一性，其中所述病症或症状中的至少一种选自在数周内不能愈合的头部或颈部的溃疡或疮区域、吞咽困难、呼吸或说话困难、口中麻木的感觉、鼻出血、持续耳痛、听觉困难以及口或颈的肿胀或肿块。所述多肽可具有SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的至少15、至少30、至少45或至少60个连续氨基酸。多肽任选地还可包含聚乙二醇部分，该部分可共价地连接至多肽(例如，通过氨基末端的氨基连接)。聚乙二醇可以是线性的或分支的。聚乙二醇可具有大约20kD、30kD或40kD的分子量。聚乙二醇可以是单甲氧基-PEG丙醛。施用多肽的患者可以是哺乳动物，例如人。
本发明也提供了抑制头与颈的肿瘤的至少一种病症或症状的方法，该方法包括给需要其的患者施用治疗有效量的制剂，该制剂包含：和选自SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的序列具有至少90％或95％的序列同一性的多肽、第二多肽、和药物可接受媒介物；其中所述病症或症状中的至少一种选自在数周内不能愈合的头部或颈部的溃疡或疮区域、吞咽困难、呼吸或说话困难、口中麻木的感觉、鼻出血、持续耳痛、听觉困难以及口或颈的肿胀或肿块。所述多肽可具有SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的至少15、至少30、至少45或至少60个连续氨基酸。所述多肽任选地还可包含聚乙二醇部分，该部分可共价地连接至多肽(例如，通过氨基末端的氨基连接)。聚乙二醇可以是线性的或分支的。聚乙二醇可具有大约20kD、30kD或40kD的分子量。聚乙二醇可以是单甲氧基-PEG丙醛。施用多肽的患者可以是哺乳动物，例如人。第二多肽可以是干扰素分子，例如干扰素α、干扰素β、或干扰素γ，另一种治疗剂，例如IL-2和/或IL-21，或其组合。
存在4种主要类型的在皮肤中发生的恶性黑色素瘤。这些黑色素瘤称为皮肤黑色素瘤。
浅表扩展性黑色素瘤是黑色素瘤的最常见类型。大约10个中有7个(70％)是该类型。其主要在中年人中发生。妇女中最常见的位置是在腿上，而在男人中更常见地发生于躯干，特别是背部。其倾向于最初在整个皮肤表面上扩展：这称为放射生长期。如果在该时期除去黑色素瘤，则存在非常高的治愈机会。如果未除去黑色素瘤，其将开始向下生长至皮肤的更深层。此时存在其在血流或淋巴系统中扩散至身体的其他部分的可能性。结节性黑色素瘤最常发生在胸部或背部。其最常见地发现于中年人中。如果不将其去除，其倾向于非常快速地向皮肤更深层生长。该类型的黑色素瘤通常隆起高于皮肤表面的其他部分，感觉象肿块。其可以是非常深的棕黑色或黑色。恶性雀斑样黑色素瘤最常见地发现于脸部，特别是老年人中。其生长缓慢，可花费数年的时间进行发展。肢端黑色素瘤通常发现于手掌、脚的足底或脚趾甲周围。皮肤黑色素瘤的其他非常罕见的类型包括无黑色素性恶性黑色素瘤(其中黑色素瘤丧失其色素并表现为白色区域)和结缔组织增生性黑色素瘤(其包含纤维状瘢痕组织)。恶性黑色素瘤可始于除皮肤以外的身体部分，但这非常罕见。可受影响的身体的部分是眼睛、口、指甲下(称为甲床黑瘤)、外阴或阴道组织、或内部(cancerbacup国际互联网网站)。
大部分黑色素瘤始于正常皮肤表观上的改变。其可看起来象异常的新痣。不到三分之一的在已存在的痣上发展。可能很难区分痣和黑色素瘤之间的差异，但可使用下列核查项目来帮助区别。其被称为ABCD目录。不对称性-普通的痣在形状上通常是对称的。黑色素瘤可能是不规则的或不对称的。边缘-痣通常具有明确确定的规则边缘。黑色素瘤更可能具有带有锯齿边缘的不规则边缘。颜色-痣通常是均一的棕色。黑色素瘤倾向于具有超过一种颜色。其可以是不同的、混杂有黑色、红色、粉红色、白色或淡蓝色色调的棕色色度。直径-痣一般不超过铅笔的钝头(大约6mm截面)。黑色素瘤直径通常超过7mm。正常的痣可从皮肤隆起和/或可具有毛发。搔痒、结硬皮或出血也可在黑色素瘤中发生-这些是较不一般的征兆，但不应当被忽视(cancerbacup国际互联网网站)。可在这样的鼠类黑色素瘤模型中评估IL-28或IL-29多肽、片段或融合蛋白对肿瘤应答的效应，所述模型类似于Hermans等人， Cancer Res.2003 Dec 1； 63(23)：8408-13；Ramont等人， Exp Cell Res.2003 Nov 15； 291(1)：1-10；Safwat等人， J Exp Ther Oncol.2003 Jul-Aug； 3(4)：161-8；和Fidler，I.J.，Nat New Biol.1973 Apr 4； 242(118)：148-9中描述的模型。
慢性髓细胞样白血病(CML)是主要影响成年人的罕见癌症类型。其是粒细胞(白细胞主要类型中的一种)的癌症。在CML中产生太多的粒细胞，当其未成熟时其被释放入血液中，因而不能正常行使功能。未成熟白细胞称为胚细胞(blasts)。其他类型的血细胞的产生也被破坏。一般地，白细胞以有序和受控的方式修复和再生其自身，但在慢性髓细胞样白血病中，该过程不受控制，细胞不正常地持续地分裂和成熟。该疾病发展通常非常缓慢，这是其被称为‘慢性’髓细胞样白血病(cancerbacup国际互联网网站)的原因。
因为CML缓慢地发展(进展)，因此难以在其早期阶段检测其。有时只有当因为另一种原因检测血液时才发现其。CML的症状通常不明晰并且是非特异性的，其由骨髓中增加的非正常的白细胞数目和减少的正常血细胞的数目引起：腹部左侧的发胀或触痛肿块的感觉。这是因为，在CML中，脾脏可变大。脾脏是正好位于腹部左侧的肋骨下方的器官。其过滤血液和除去损坏的红细胞。脾脏肿胀也导致对胃的压力，这可导致消化不良和食欲不振，由于缺少红细胞(贫血症)的原因，一些人感觉疲劳和显得脸色苍白，由于血液中较低的血小板数目，一些人可注意到其更容易出血或擦伤。擦伤也比正常人更容易，可看到特殊的擦伤。这由通常在腿上或在口中看到的小血样斑构成，其被称为瘀点。妇女可发现其周期变得非常严重。然而，这些症状和征候非常罕见，一些人可注意到全身化的搔痒。慢性髓细胞样白血病可在任何年龄发生，但其更常见地影响中年和老年人。儿童中该病是罕见的(cancerbacup国际互联网网站)。可在这样的鼠类慢性髓细胞样白血病模型中评估IL-28或IL-29多肽、片段或融合蛋白对肿瘤应答的影响，所述模型类似于Ren，R.， Oncogene.2002 Dec9； 21(56)：8629-42；Wertheim等人， Oncogene.2002 Dec9； 21(56)：8612-28；和Wolff等人， Blood.2001 Nov1； 98(9)：2808-16中描述的模型。
非何杰金氏淋巴瘤是淋巴系统的癌症类型。存在两种主要类型的淋巴瘤。一种称为何杰金氏疾病(以第一个描述其的Dr Hodgkin的名字命名)。另一种称为非何杰金氏淋巴瘤。存在大约20种不同类型的非何杰金氏淋巴瘤。在大多数何杰金氏疾病的病例中，在活组织检查中发现称为里德-斯特恩伯格细胞的特殊细胞。该细胞通常不在其他淋巴瘤中发现，因此其被称为非何杰金氏淋巴瘤。这似乎可能没有非常大的差异，但其是重要的，因为对何杰金氏和非何杰金氏淋巴瘤的疗法可以是非常不同的(cancerbacup国际互联网网站)。
通常，非何杰金氏淋巴瘤的第一征候是颈、腋窝或腹股沟中的淋巴结的无痛肿胀。其他症状可包括下列症状中的任一种：盗汗或不明原因的高温(发烧)；食欲不振、不明原因的体重减轻和过度疲劳；儿童可发生咳嗽或气喘。其也可有腹痛或你可注意到你孩子的腹部中的肿块，持续的遍及全身的皮肤搔痒(cancerbacup国际互联网网站)。可在这样的何杰金氏淋巴瘤模型中评估IL-28或IL-29多肽、片段或融合蛋白对肿瘤应答的影响，所述模型类似于Ansell等人， Leukemia.2004 Mar； 18(3)：616-23；De Jonge等人， J Immunol.1998 Aug1； 161(3)：1454-61；和Slavin等人， Nature.1978 Apr13； 272(5654)：624-6中描述的模型。
肾细胞癌，是涉及肾小管细胞中的癌性改变的肾癌形式，是成人中最常见的肾癌类型。细胞变成癌的原因不清楚。吸烟史大大地增加了发展肾细胞癌的可能性。一些人也可具有增加的发展肾细胞癌的内在可能性，肾癌家族史增加该可能性。患有脑视网膜血管瘤病(影响脑部毛细血管的遗传病)的人通常也发展肾细胞癌。要求透析治疗的肾病也增加了发展肾细胞癌的可能性。第一症状通常是尿血。有时两个肾都涉及。该癌症很容易转移或扩散至，最常见地，肺和其他器官，大约1/3的患者在诊断时具有转移灶(Medline Plus MedicalEncyclopedia国际互联网网站)。可在这样的鼠类肾细胞癌模型中评估IL-28或IL-29多肽、片段或融合蛋白对肿瘤应答的影响，所述模型类似于Sayers等人， Cancer Res.1990 Sep 1； 50(17)：5414-20；Salup等人， Immunol.1987 Jan 15； 138(2)：641-7；和Luan等人，Transplantation.2002 May 27； 73(10)：1565-72中描述的模型。
子宫颈是向阴道开放的子宫的颈部。子宫颈癌，也称作宫颈癌，从子宫颈表面上的非正常细胞发展而来。子宫颈癌是影响妇女的最常见癌症中的一种。在子宫颈癌发生之前，通常在子宫颈表面的细胞中发生发育异常、癌前病变。这些异常细胞可进展至侵袭性癌症。在癌症出现后，其可进展通过4个阶段。根据癌症扩散的程度确定所述阶段。癌症扩散越多，治疗的范围可能越广泛。存在两种主要类型的子宫颈癌：(1)鳞状类型(表皮样癌)：这是最常见的类型，占子宫颈癌的大约80％至85％。该癌症可由性传播疾病引起。一个这样的性病是引起尖锐湿疣的人乳头状瘤病毒。癌性肿瘤在子宫颈上生长并生长入子宫颈内。该癌症通常始于子宫颈表面，其可过巴氏涂片(Pap smear)在早期阶段进行诊断。(2)腺癌：该类型的子宫颈癌发展自子宫颈沟中的颈腺中的组织。早期子宫颈癌通常不产生症状。该癌症通常通过巴氏涂片和骨盆检查来检测。这是只要你变得性活跃时你就应当开始进行巴氏涂片和骨盆检查的原因。从未有过性活跃的健康年轻妇女应当在18岁前进行其第一次一年一次的骨盆检查。子宫颈癌的晚期阶段导致异常的阴道出血或在意外时间例如月经期之间、性交之后或绝经之后的白带夹血丝。异常阴道分泌物可以是混浊的或带血的或可包含具有异味的粘液。癌症的晚期可导致疼痛(University of MichiganHealth System国际互联网网站)。可在这样的鼠类子宫颈癌模型中评估IL-28或IL-29多肽、片段或融合蛋白对肿瘤应答的影响，所述模型类似于Ahn等人， Hum Gene Ther.2003 Oct 10；14(15)：1389-99；Hussain等人， Oncology.1992； 49(3)：237-40；和Sengupta等人，Oncology.1991； 48(3)：258-61中描述的模型。
头与颈的大多数癌是称为癌瘤的类型(特别是鳞状细胞癌)。头与颈的癌始于形成口、鼻、咽喉或耳的内层(lining)或覆盖舌表面层的细胞。然而，头与颈的癌症可从其他类型的细胞发展而来。淋巴瘤可从淋巴系统的细胞发展而来。肉瘤发展自构成肌肉、软骨或血管的支持性细胞。黑色素瘤始自为眼睛和皮肤提供颜色的称为黑素细胞的细胞。头与颈的癌症的症状依赖于其发生的部位-例如，舌癌可导致一些说话的含糊不清。最常见症状是在数周内不能愈合的头或颈部的溃疡或疮区域；吞咽困难、或咀嚼或吞咽时疼痛；呼吸或说话困难，例如持续有噪音的呼吸、言语不清或声音嘶哑；口中麻木的感觉；持续的鼻塞、或鼻出血；持续耳痛，耳鸣或听觉困难；口或颈部的肿胀或肿块；脸或上颌的疼痛；在吸烟或咀嚼烟草的人中，癌前病变可在口的衬里或舌上发生。这些可表现为持久的白斑(粘膜白斑病)或红斑(粘膜红斑病)。其通常是无痛的但有时溃疡或可出血(Cancerbacup国际互联网网站)。可在这样的鼠类的头与颈的肿瘤模型中评估IL-28或IL-29多肽、片段或融合蛋白对肿瘤应答的影响，所述模型类似于Kuriakose等人， Head Neck.2000 Jan； 22(1)：57-63；Cao等人，Clin Cancer Res.1999 Jul； 5(7)：1925-34；Hier等人，Laryngoscope.1995 Oct； 105(10)：1077-80；Braakhuis等人，Cancer Res.1991 Jan 1； 51(1)：211-4；Baker，S.R.， Laryngoscope.1985 Jan； 95(1)：43-56；和Dong等人， Cancer Gene Ther.2003Feb； 10(2)：96-104中描述的模型。
乳头状和滤泡甲状腺癌占所有甲状腺癌的80至90％。两种类型都始于甲状腺的滤泡细胞。大部分乳头状和滤泡甲状腺癌倾向于缓慢生长。如果早期检测到其，大部分可被成功地治愈。甲状腺髓样癌(Medullary thyroid cancer)占甲状腺癌病例的5至10％。其产生于C细胞，而不是滤泡细胞。如果在甲状腺髓样癌扩散至身体的其他部分之前发现和治疗其，很容易控制其。甲状腺退行发育性癌(Anaplastic thyroid cancer)是最不常见的甲状腺癌类型(只占病例的百分之1至2)。其产生于滤泡细胞。癌细胞高度异常和难以识别。该类型的癌症通常难以控制，因为癌细胞倾向于非常快速地生长和扩散。早期甲状腺癌通常不产生症状。但随着癌症生长，症状可包括：亚当氏喉结附近的颈的前方的肿块、或小节；声音嘶哑或难以以正常声音说话；肿胀的淋巴结，特别是在颈部；难以吞咽或呼吸；或喉或颈部疼痛(National Cancer Institute的国际互联网网站)。可在这样的鼠类或大鼠甲状腺肿瘤模型中评估IL-28或IL-29多肽、片段或融合蛋白对肿瘤应答的影响，所述模型类似于Quidville等人，Endocrinology.2004 May； 145(5)：2561-71(小鼠模型)；Cranston等人， Cancer Res.2003 Aug 15； 63(16)：4777-80(小鼠模型)；Zhang等人， Clin Endocrinol(Oxf).2000 Jun； 52(6)：687-94(大鼠模型)；和Zhang等人， Endocrinology.1999 May； 140(5)：2152-8(大鼠模型)中描述的模型。
始于大脑组织的肿瘤称为大脑的原发性肿瘤。根据其开始的细胞类型或大脑的部分命名原发性大脑肿瘤。最常见的原发性大脑肿瘤是神经胶质瘤。其始于神经胶质细胞。存在许多类型的神经胶质瘤。(1)星形细胞瘤-肿瘤产生于称为星形细胞的星状胶质细胞。在成人中，星形细胞瘤最常见地产生于大脑。在儿童中，其在脑干、大脑和小脑中发生。III期星形细胞瘤有时称作退行发育性星形细胞瘤。IV期星形细胞瘤通常称为多形性恶性胶质瘤。(2)脑干神经胶质瘤-肿瘤在脑的最低部分发生。在幼儿和中年成人中，最常诊断出脑干神经胶质瘤。(3)室管膜瘤-肿瘤产生自排列在脑室或脊髓的中央管中的细胞。其最常见地发现于儿童和年轻成人。(4)少突神经胶质瘤-该罕见肿瘤产生于产生覆盖和保护神经的脂肪物质的细胞。这些肿瘤通常在大脑中发生。其生长缓慢，通常不扩散入周围的脑组织。其最常见地在中年成人中。脑肿瘤的症状依赖于肿瘤的大小、类型和位置。当肿瘤压迫神经或破坏脑的某些区域时可引起症状。当脑肿胀或液体在颅内积累时也可产生其。这些症状是最常见的脑肿瘤症状：头痛(通常在早晨更严重)；恶心或呕吐；说话、视觉或听觉上的改变；平衡或行走问题；情绪、个性或集中精力的能力的变化；记忆问题；肌肉痉挛或颤搐(癫痫发作或惊厥)；以及手臂或腿的麻木或麻刺感(National CancerInstitute的国际互联网网站)。可在这样的神经胶质瘤动物模型中评估IL-28或IL-29多肽、片段或融合蛋白对肿瘤应答的影响，所述模型类似于Schueneman等人， Cancer Res.2003 Jul15； 63(14)：4009-16；Martinet等人， Eur J Surg Oncol.2003May； 29(4)：351-7；Bello等人， Clin Cancer Res.2002Nov； 8(11)：3539-48；Ishikawa等人， Cancer Sci.2004Jan； 95(1)：98-103；Degen等人， J Neurosurg.2003Nov； 99(5)：893-8；Engelhard等人， Neurosurgery.2001Mar； 48(3)：616-24；Watanabe等人， Neurol Res.2002Jul； 24(5)：485-90；和Lumniczky等人， Cancer Gene Ther.2002Jan； 9(1)：44-52中描述的模型。
多发性骨髓瘤是种癌症类型。其影响某些称为浆细胞的白细胞。当癌症涉及浆细胞时，身体保持产生越来越多的这些细胞。不必要的浆细胞—所有非正常的和所有完全相同的-被称为骨髓瘤细胞。骨髓瘤细胞倾向于集中在骨髓中和骨的硬的外侧部分。有时其只集中一个骨中并形成单个团块，或肿瘤(称为浆细胞瘤)。然而，在多数情况下，骨髓瘤细胞集中在许多骨中，通常形成许多肿瘤并导致其他问题。当该情况发生时，疾病称为多发性骨髓瘤。
骨髓瘤细胞倾向于集中在骨髓中和骨的硬的外侧部分。有时其只集中一个骨中并形成单个团块，或肿瘤(称为浆细胞瘤)。然而，在大多数情况下，骨髓瘤细胞集中在许多骨中，通常形成许多肿瘤并导致其他问题。当该情况发生时，疾病称为多发性骨髓瘤。因为具有多发性骨髓瘤的人具有不正常的大量的相同的浆细胞，因此其也具有太多的一种类型的抗体。这些骨髓瘤细胞和抗体可导致许多严重的医学问题：(1)随着骨髓瘤细胞在数量上的增加，其破坏和弱化骨，导致疼痛和有时断裂。骨疼痛可使患者行动困难；(2)当骨被破坏时，钙被释放入血中。这可导致高血钙症-血液中存在太多的钙。高血钙症可导致食欲不振、恶心、渴感、疲劳、肌无力、不安和意识错乱；(3)骨髓瘤细胞阻止骨髓形成正常的浆细胞和对于免疫系统非常重要的其他白细胞。患者可能不能够抵抗感染和疾病；(4)癌细胞也可阻止新的红细胞的生长，导致贫血症。患有贫血症的患者可经常感觉疲劳或虚弱；和(5)多发性骨髓瘤患者在其肾上可具有严重的问题。过量的抗体蛋白和钙可阻止肾正常地过滤和净化血液。多发性骨髓瘤的症状依赖于疾病的进展。在疾病的最早期，可以无症状。当症状确实发生时，患者通常具有骨痛，通常在背部和肋骨。患者也可具有断骨、虚弱、疲劳、体重减轻或反复的感染。当疾病进展时，症状可包括恶心、呕吐、便秘、排尿问题、腿部无力或麻木(National Cancer Institute的国际互联网网站)。可在这样的多发性骨髓瘤鼠类模型中评估IL-28或IL-29多肽、片段或融合蛋白对肿瘤应答的影响，所述模型类似于Oyajobi等人， Blood.2003 Jul 1； 102(1)：311-9；Croucher等人，J Bone Miner Res.2003 Mar； 18(3)：482-92；Asosingh等人， Hematol J.2000； 1(5)：351-6；和Miyakawa等人， Biochem Biophys Res Commun.2004 Jan 9； 313(2)：258-62中描述的模型。
可在人小细胞/非小细胞肺癌异种移植物模型中评估IL-28或IL-29多肽、片段或融合蛋白对肿瘤应答的影响。简而言之，将人肿瘤移植入免疫缺陷型小鼠，并用IL-28或IL-29多肽、片段或融合蛋白单独地或和其他这样的试剂一起治疗这些小鼠，所述其他试剂可用于，通过评估肿瘤的生长，证明治疗的功效(Nemati等人， Clin Cancer Res.2000 May； 6(5)：2075-86；和Hu等人， Clin Cancer Res.2004Nov 15； 10(22)：7662-70)。
编程性细胞死亡的强效诱导剂Apo2L/TNF关联性编程性细胞死亡性诱导配体(TRAIL)作为潜在的肿瘤特异性癌症治疗剂已产生了令人振奋的前景，因为相对于正常细胞，其在经转化的细胞中选择性地诱导编程性细胞死亡。干扰素(IFN)是TRAIL表达的重要调节剂，因此该配体似乎在抗病毒感染和恶性转化的监视中发挥重要作用。Fiorucci等人， Curr Pharm Des.2005； 11(7)：933-44。IL-28和IL-29也似乎是TRAIL的重要调节剂(参见实施例41，其中TRAIL受IL-29上调)。
C.IL-28和IL-29治疗自身免疫性疾病的用途
本发明也提供了治疗、预防自身免疫性疾病、抑制其进展、延迟其发生、和/或减少和其相关的至少一种病症或症状的方法，该方法包括给需要其的患者施用治疗有效量的多肽，该多肽选自SEQ ID NOs：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161，其中所述自身免疫疾病选自多发性硬化、关节炎、类风湿性关节炎、炎性肠病、全身性红斑狼疮和牛皮癣。多肽任选地还可包含聚乙二醇部分，该部分可共价地连接至多肽(例如，通过氨基末端的氨基连接)。聚乙二醇可以是线性的或分支的。聚乙二醇可具有大约20kD、30kD或40kD的分子量。聚乙二醇可以是单甲氧基-PEG丙醛。施用多肽的患者可以是哺乳动物，例如人。
1.类风湿性关节炎
类风湿性关节炎是其中身体的免疫应答靶向抗身体的自身蛋白，特别是胶原蛋白的自身免疫性疾病，所述胶原蛋白是多个组织特别是关节的基础。所造成的抗胶原蛋白的免疫应答导致关节的破坏。一段时间后，患者可丧失运动其手指和脚趾的能力和可遭受关节和膝盖中的急性疼痛。来自关节炎患者的血清具有增加量的TNFα(肿瘤坏死因子)和抗胶原抗体，两者不仅都是慢性疾病的指示剂而且都对该疾病的病理学有贡献(Smolen和Stein+er G， Nat.Rev.Drug Discov.，2：473-488，2003；Firestein， Nature  423：356-361，2003.)。此外，该疾病由CD4+T细胞启动和介导。DC呈递作为CD4+T细胞的抗原的胶原蛋白。胶原蛋白诱导的关节炎(CIA)模型是在广泛的程度上反映人中看到的疾病的类风湿性关节炎的小鼠模型(Moore， Methods Mol. Biol. 225：175-179，2003：Waksman， Scand.J.Immunol.， 56：12-34，2002)。用2剂在CFA中乳化的胶原蛋白在尾的基部免疫小鼠。这导致在一段时间内增加的爪肿胀和可以目测对其评分和使用测径器进行测量。给成组的经胶原蛋白免疫的小鼠施用IL-28A、IL-28B或IL-29，估计对疾病评分的影响。IL-28A、IL-28B和IL-29对爪的评分和厚度的抑制表明其对正在进行的自身免疫应答的抑制作用。
2.炎性肠病
由有缺陷的免疫调节导致的肠内炎症(称为炎性肠病(IBD))被表征为两个广泛的疾病定义，克罗恩疾病(CD)和溃疡性结肠炎(UC)。一般地，CD被认为是由于Th1应答的调节中的功能障碍造成的，而据信UC是由于Th2应答的调节中的功能障碍引起的。已显示多个细胞因子、趋化因子和基质金属蛋白酶在来自IBD患者的炎性损伤中被上调。这些因子包括IL-1、IL-12、IL-18、IL-15、TNF-α、IFN-γ、MIP1α、MIP1β和MIP2。目前REMICADE(Centocor，Malvern，PA)是，当治疗CD患者时，已成功地被用于靶向疾病自身的唯一药物，其他治疗法通常提高患者的生活质量。和IBD关联的自身免疫应答的IL-28A、IL-28B和IL-29抑制在IBD模型例如小鼠DSS、TNBS、CD4+CD45Rbhi、mdrla-/-和移植物抗宿主病(GVHD)肠炎症模型中得到了证明。(Stadnicki A和Colman RW，Arch Immunol Ther Exp 51：149-155，2003；Pizarro TT等人，Trends in Mol Med 9：218-222，2003)。人IBD的一个试验模型是给啮齿类动物口服施用葡聚糖硫酸钠(DSS)。DSS诱导急性和慢性溃疡性结肠炎，该肠炎具有和人中的组织学检查所见有些相似的特征。由DSS诱导的结肠炎涉及消化道细菌、巨噬细胞和中性粒细胞，对T细胞和B细胞作用较小(Mahler等人， Am.J.Physiol.274：G544-G551，1998；Egger等人， Digestion  62：240-248，2000)。TNBS诱导的结肠炎被认为是Th1介导的疾病，从而和人中的UC相比，其更和CD相似。将三硝基苯磺酸(TNBS)以不同剂量(依赖于品系)经直肠内途径输注入小鼠以诱导抗原特异性(TNBS)T细胞应答，该应答包括Th1样细胞因子IL-12、IL-18和IFNγ的分泌。结肠炎涉及抗原特异性T细胞、巨噬细胞和中性粒细胞至炎症位点的募集反应(Neurath等人，Int.Rev.Immunol.， 19：51-62，2000；Dohi T等人， J.Exp.Med.189：1169-1179，1999)。结肠炎的另一个相对新的模型是至SCID小鼠内的CD4+CD45RBhi转移模型。基于CD45Rb的表达，可将CD4+T细胞广泛地分为2类。CD4+CD45RBhi细胞被认为是初始(nive)T细胞，而CD4+CD45Rblo细胞被认为是调节性T细胞。完全CD4+T细胞至同系SCID小鼠的转移不诱导结肠炎症状。然而，如果只将CD4+CD45RBhi T细胞注射入SCID小鼠，小鼠将在3-6周的时期内发展出结肠炎。CD4+CD45Rblo调节性T细胞和初始T细胞一起的共转移抑制了结肠炎，表明调节性T细胞在调节免疫应答中起着重要作用(Leach等人， Am.J.Pathol.，148：1503-1515，1996；Powrie等人， J.Exp.Med.， 179：589-600，1999)。该模型将证明，IL-28A、IL-28B和IL-29，通过其在小鼠中产生耐受性DC的能力上调T调节性功能，抑制结肠炎。和骨髓移植关联的结肠炎的临床相关性模型是GVHD诱导的结肠炎。移植物抗宿主病(GVHD)在效应细胞的无免疫活性、组织相容性受者中发展，该受者增殖并攻击宿主细胞。接受同种异体骨髓移植的患者或重度再生障碍性贫血患者可能患有GVHD。在小鼠和人中，腹泻是该综合症的最常见和严重的症状。在人中，都已观察到结肠和小肠疾病。GVHD诱导的结肠炎的小鼠模型显示在人中看到的相似的组织学疾病。因而这些小鼠模型可用于确定抑制结肠炎的药物对GVHD的功效(Eigenbrodt等人， Am. J.Pathol.， 137：1065-1076，1990；Thiele等人， J.Clin.Invest.，84：1947-1956，1989)。
3.全身性红斑狼疮
全身性红斑狼疮(SLE)是与免疫复合物关联的疾病，其特征在于针对普遍存在的自身抗原(抗dsDNA)的长期的IgG抗体产生。SLE的作用是全身性的，而不是局限在特定器官。多个染色体基因座已和疾病关联并且可对疾病的不同方面起作用，例如抗dsDNA抗体和肾小球肾炎。已显示CD4+T细胞在SLE的小鼠模型中起重要作用(Horwitz， Lupus 10：319-320，2001；Yellin和Thienel， Curr.Rheumatol.Rep.，2：24-37，2000)。CD8+T细胞的作用没有得到明确的确定，但有证据表明“抑制剂”CD8+T细胞的功能在狼疮患者中被损害(Filaci等人， J. Immunol.， 166：6452-6457，2001；Sakane等人， J.Immunol.，137：3809-3813，1986)。
就IL-28A、IL-28B和IL-29的活性测定来自人SLE患者和小鼠模型的血清。在和IL-28A、IL-28B或IL-29一起培养后，体外评估来自人SLE患者的PBL中的CD8+T细胞抑制剂的活性。通过其抑制抗CD3诱导的自体PBMC增殖的能力来评估来自SLE患者的CD8+T细胞的抑制剂活性。抑制功能和培养物中IFNγ和IL-6的分泌相关。来自经IL-28A、IL-28B或IL-29处理的患者的培养物中的增加的IFNγ和IL-6可显示更高的抑制剂活性(Filaci等人， J.Immunol. 166：6452-6457，2001)。
4.牛皮癣
牛皮癣，是和增生性表皮角质形成细胞和浸润性单核细胞，包括CD4+记忆T细胞、中性粒细胞和巨噬细胞关联的慢性炎性皮肤病(Christophers， Int.Arch.Allergy Immunol.， 110：199，1996)。目前认为环境抗原在引起和促成疾病的病理学中发挥重大的作用。然而，对自身抗原的耐受性的丧失被认为介导了牛皮癣的病理学。树突细胞和CD4+T细胞据认为在介导导致病理学的免疫应答的抗原呈递和识别中起着重要作用。最近发展了基于CD4+CD45RB转移模型的牛皮癣模型(Davenport等人， Interna t.Immunopharmacol.， 2：653-672(2002))。给用诱导牛皮癣的细胞注射的小鼠施用IL-28A、IL-28B或IL-29并评估对临床评分(皮肤疾病)的效果，显示了IL-28A、IL-28B和IL-29的有益效果。
IL-28A、IL-28B或IL-29可和已在自身免疫性和/或癌症中使用的其他试剂一起使用，所述其他试剂包括例如干扰素α(IFN-α，例如，PEGASYS、PEG-INTRON、INFERGEN、Albuferon-AlphaTM)、干扰素β(INF-β，例如，AVONEX、BETASERON、REBIF)、干扰素γ(IFNγ，例如，ACTIMMUNE)、NOVANTRONE、ENBREL、REMICADE、LEUKINE、APO2L/TNF-关联性编程性细胞凋亡诱导性配体(TRAIL)、IL-21和IL-2。通过各种方法确定IL-28A、IL-28B和IL-29的最佳剂量水平和给药方案，所述方法包括IL-28A、IL-28B和IL-29的药物动力学和药效动力学的研究；动物模型中有效剂量的确定，和IL-28A、IL-28B和IL-29的毒性评估。然后可用在灵长类动物和临床试验中进行的直接的药物动力学测量预测患者中的理论剂量，该剂量获得具有足够的强度和持续时间以在患者中获得生物学反应的血浆IL-28A、IL-28B和IL-29水平。
通过下列非限定性实施例进一步举例说明本发明。
                         实施例
                         实施例1
                    哺乳动物表达质粒
通过同源重组构建包含zcyto20和zcyto21的表达质粒。使用PCR扩增法产生zcyto20和zcyto21 cDNA的片段。用于PCR的引物如下：
zcyto20/pZMP21：zc40923和zc43152分别为SEQ ID NOS：42和43；zcyto21/pZMP21：zc40922和zc43153分别为SEQ ID NOS：72和73。
将PCR反应混合物在1％的琼脂糖凝胶上跑胶，使用QIAquickTM GelExtraction试剂盒(Qiagen，Valencia，CA)凝胶提取对应于插入物大小的条带。
将用BglII切割的质粒pZMP21用于和PCR插入片段重组。质粒pZMP21是包含表达盒的哺乳动物表达载体，该表达盒具有MPSV启动子、和用于编码性序列插入的多个限制位点；大肠杆菌复制起始位点；包含SV40启动子、增强子、复制起始位点、DHFR基因和SV40终止子的哺乳动物选择标记物表达单位；和在酿酒酵母中选择和复制所需的URA3和CEN-ARS序列。其由pZP9(以保藏号98668保藏于美国典型培养物保藏中心，10801 University Boulevard，Manassas，VA 20110-2209)和获自pRS316(以保藏号77145保藏于美国典型培养物保藏中心，10801University Boulevard，Manassas，VA 20110-2209)的酵母遗传成分、来自脊髓灰质炎病毒的内部核糖体进入位点(IRES)元件、以及在跨膜结构域的C末端截断的CD8的细胞外结构域构建而来。
独立地将100微升的感受态酵母(酿酒酵母)细胞和10μl插入物DNA以及100ng上述经切割的pZMP21载体混合，将混合物转移至0.2cm电穿孔小杯。使用0.75kV(5kV/cm)、∞欧姆和25μF的设置的电源(BioRad Laboratories，Hercules，CA)对酵母/DNA混合物进行电脉冲。向小杯中加入600μl 1.2M的山梨醇，以100μl和300μl等分将酵母涂板在2个URA-D板上并在30℃下温育。大约72小时后，将来自单块板的Ura+酵母转化子重悬浮于1ml H2O中，短暂离心以沉淀酵母细胞。将细胞沉淀重悬浮于0.5ml裂解缓冲液(2％Triton X-100、1％SDS、100mM NaCl、10mM Tris、pH 8.0、1mM EDTA)中。向装有250μl经酸洗涤的玻璃珠和300μl酚氯仿的Eppendorf管中加入500微升裂解混合物，涡旋3分钟，以最大速度在Eppendorf离心机中离心5分钟。将300微升水相转移至新管，使用600μl乙醇(EtOH)和30μl 3M醋酸钠来沉淀DNA，然后在最大速度下离心30分钟。将DNA沉淀重悬浮于30μl TE中。
使用5μl酵母DNA制剂和50μl细胞进行电感受态大肠杆菌宿主细胞(MC1061)的转化。在2.0kV、25μF和400欧姆下电脉冲所述细胞。电穿孔后，加入1ml SOC(2％BactoTM Tryptone(Difco，Detroit，MI)、0.5％酵母提取物(Difco)、10mM NaCl、2.5mM KCl、10mM MgCl2、10mMMgSO4、20mM葡萄糖)，然后以50μl和200μl的等分将细胞涂板在2块LBAMP板(LB液体培养基(Lennox)、1.8％BactoTM Agar(Difco)、100mg/L氨苄青霉素)中。
将各构建体的3个克隆的插入物接受序列分析，选择各构建体的包含正确序列的一个克隆。按照厂商说明书，使用商购获得的试剂盒(QIAGEN Plasmid Mega试剂盒，Qiagen，Valencia，CA)分离更大规模的质粒DNA。将正确的构建体命名为zcyto20/pZMP21和zcyto21/pZMP21。
                      实施例2
            哺乳动物构建体在CHO细胞中的表达
用200单位的Pvu I在37℃下降解200μg zcyto20/pZMP21和zcyto21/pZMP21构建体3小时，然后用IPA进行沉淀，在1.5mL微量离心管中离心沉淀。将上清液轻轻倒离沉淀，用1mL 70％的乙醇洗涤沉淀并在室温下温育5分钟。在14,000RPM下在微量离心机中离心10分钟，然后将上清液吸离沉淀。然后将沉淀在无菌环境中重悬浮于750μlPF-CHO培养基，让其在60℃下温育30分钟。离心沉淀CHO，然后使用DNA-介质溶液进行重悬浮。将DNA/细胞混合物置于0.4cm间隙小杯中，使用下列参数进行电穿孔：950μF、高电容和300V。然后取出小杯中的内容物并用PF-CHO培养基稀释至25mL，置于125mL振荡培养瓶中。将培养瓶在37℃、6％CO2下置于振荡器上的培养箱中并在120RPM下振荡。
                     实施例3
            zcyto20-CHO蛋白的纯化和分析
A.Zcyto20-CHO蛋白的纯化
从DXB11-CHO细胞系的汇合物中产生重组zcyto20(IL-28A)蛋白。收获培养物，使用0.2μm滤膜对培养基进行无菌过滤。
通过连续地使用Poros HS 50柱(Applied Biosystems，Framingham，MA)、Monolithic WCX柱(Isco，Inc.，Lincoln，NE)、ToyoPearl Butyl 650S柱(TosoH，Montgomeryville，PA)和Superdex75柱(Amersham Biosciences，Piscataway，NJ)获得zcyto20-CHO蛋白的纯化。在装载至Poros 50HS柱之前，将来自DXB111-CHO的培养基调节至pH 6.0。用50mM MES(2-吗啉乙磺酸)、100mM NaCl、pH 6洗涤柱子，用10倍柱体积(CV)的线性梯度的至60％的50mM MES，2M NaCl，pH 6洗脱结合蛋白。收集洗脱级分，通过SDS-PAGE和考马斯亮蓝染色确定zcyto20蛋白的存在。混合包含zcyto20蛋白的该级分，用双蒸水稀释至大约20mS的导电率，将其加载至Monolithic WCX柱。用93％50mMMES、100mM NaCl、pH 6和7％的50mM MES、2M NaCl、pH 6洗涤柱子。用25-CV的从7％至50％的线性梯度的50mM MES、2M NaCl、pH 6洗脱结合蛋白。收集洗脱的集分，通过SDS-PAGE和考马斯亮蓝染色确定zcyto20蛋白的存在。混合包含zcyto20蛋白的级分，调节至1M硫酸铵并加载至ToyoPearl Butyl 650S柱。用递减的硫酸铵梯度洗脱Zcyto20，然后混合和浓缩包含纯zcyto20的级分以注射入Superdex 75柱子。混合来自凝胶过滤柱的包含zcyto20蛋白的级分，对其进行浓缩，通过0.2μm滤膜进行过滤，在-80℃下冷冻。通过BCA测定法(Pierce Chemical Co.，Rockford，IL)和HPLC-氨基酸分析确定最终纯化的蛋白的浓度。
B.zcyto20-CHO蛋白的SDS-PAGE和Western印迹分析
使用兔抗-zcyto21-CEE-BV IgG作为和zcyto20-CHO蛋白交叉反应的一抗，通过SDS-PAGE(Nupage 4-12％Bis-Tris，Invitrogen，Carlsbad，CA)和Western印迹法分析重组zcyto20蛋白。按照仪器手册中提供的说明书，使用Invitrogen’s Xcell II mini-cell(Carlsbad，CA)对凝胶进行电泳，使用Invitrogen’s Xcell II blot module将其转移至0.2μm硝酸纤维素膜(Bio-Rad Laboratories，Hercules，CA)。在含有25mM Tris碱、200mM甘氨酸和20％甲醇的缓冲液中，在500mA下进行转移50分钟。用10％的1x PBS中的脱脂奶粉封闭膜10分钟，然后用含有2.5％脱脂奶粉的1x PBS中的一抗进行探测。在室温下标记印迹1小时，同时进行振荡。对于二抗标记，用PBS洗涤印迹3次，每次10分钟，然后用山羊抗兔IgG-HRP(Pierce Chemical Co.，Rockford，IL)探测1小时。用1x PBS洗涤印迹3次，每次10分钟，使用1∶1SuperSignalULTRA试剂混合物(Pierce Chemical Co.，Rockford，IL)显影，使用Lumi-Imager(Boehringer Mannheim GmbH，Germany)捕获信号。
C.蛋白纯化和分析的概述
在非还原条件下，在4-12％Bis-Tris的凝胶上，来自CHO培养基的纯化的zcyto20蛋白主要以双联体的形式迁移至大约20kDa，少量以三联二聚体的形式迁移至大约38kDa。在还原性条件下其都分解聚集在单条20kDa的条带上。MS肽作图显示关于二硫键的两个异构体的混合物和O连糖基化位点的存在。
                         实施例4
                zcyto21-CHO蛋白的纯化和分析
A.Zcyto21-CHO蛋白的纯化
重组zcyto21产生自稳定的DXB11-CHO细胞系。收获培养物，使用0.2μm的滤膜对培养基进行无菌过滤。通过从阳离子和阴离子交换层析开始，然后进行疏水相互作用层析和大小排阻层析来从条件化的培养基纯化蛋白。在装载至Poros 50HS柱(Applied Biosystems，Framingham，MA)之前，将DXB111-CHO培养基调节至pH 6.0。用1x PBS、pH 6洗涤柱子，用5x PBS、pH 8.4洗脱结合蛋白。收集洗脱级分，通过SDS-PAGE和考马斯亮蓝染色确定zcyto21蛋白的存在。然后将该级分稀释至13mS的导电率，将其pH调节至8.4和使之流过Poros 50HQ柱(Applied Biosystems，Framingham，MA)。然后用硫酸铵将包含zcyto21蛋白的流通液调节至大约127mS，并将其装载至ToyopearlPhenyl 650S柱(TosoH，Montgomeryville，PA)上。用递减的硫酸铵梯度洗脱Zcyto21蛋白，混合包含纯zcyto21的级分并进行浓缩以注射入Superdex 75柱子(Amersham Biosciences，Piscataway，NJ)。通过BCA测定法(Pierce Chemical Co.，Rockford，IL)和HPLC-氨基酸测定法确定最终纯化的蛋白的浓度。
B.zcyto21-CHO蛋白的SDS-PAGE和Western印迹分析法
通过SDS-PAGE(Nupage 4-12％Bis-Tris，Invitrogen，Carlsbad，CA)和通过Western印迹法(使用兔抗zcyto21-CEE-BV IgG作为一抗)分析重组zcyto21蛋白。按照仪器手册中提供的说明书，使用Invitrogen’s Xcell II mini-cell(Carlsbad，CA)对凝胶进行电泳，使用Invitrogen’s Xcell II blot module将其转移至0.2μm硝酸纤维素膜(Bio-Rad Laboratories，Hercules，CA)。在含有25mMTris碱、200mM甘氨酸和20％甲醇的缓冲液中在500mA下进行转移50分钟。用10％的1x PBS中的脱脂奶粉封闭转移的印迹10分钟，然后用含有2.5％脱脂奶粉的1x PBS中的一抗进行探测。在室温下标记印迹1小时，同时进行振荡。对于二抗标记，用PBS洗涤印迹3次，每次10分钟，然后用山羊抗兔IgG-HRP(Pierce Chemical Co.，Rockford，IL)探测1小时。用1x PBS洗涤印迹3次，每次10分钟，使用1∶1SuperSignalULTRA试剂的混合物(Pierce Chemical Co.，Rockford，IL)显影，使用Lumi-Imager(Boehringer Mannheim GmbH，Germany)捕获信号。
C.蛋白纯化和分析的概述
在还原和非还原条件下，在4-12％Bis-Tris凝胶上，来自CHO培养基的纯化的zcyto21蛋白迁移为两条或更多条大约28kDa的条带。MS肽作图显示关于二硫键的两个异构体的混合物以及一个N连糖基化和数个O连糖基化位点的存在。
                       实施例5
                    IL-29的形式的鉴定
在37℃下，用大约pH 6.3的磷酸缓冲液中的序列测定级胰蛋白酶(Roche Applied Science，Indianapolis，IN)降解来自IL-29的纯化混合物的峰级分，以限制二硫键重排。通过串连至四矩时间-飞行杂交质谱仪(Micromass，Milford MA)的反相HPLC(Agilent，Palo Alto，CA)分析各降解物。收集谱，将其从荷质比转变成质量，将其和由IL-29的胰蛋白酶降解产生的所有理论上的肽和二硫键连接的肽的组合比较。通过将还原前和还原后的谱和IL-29中二硫键连接的肽的适当的质量的分配比较来确定二硫键。来自级分#20的材料显示二硫键模式C15-C112和C49-C145，C171经观察为S谷胱甘肽基半胱氨酸(所有都参照SEQ ID NO：4)。来自级分#51的材料显示二硫键模式C49-C145和C112-C171，C15经观察为S谷胱甘肽基半胱氨酸(参照SEQ ID NO：4)。
                         实施例6
                      大肠杆菌表达质粒
表达载体pTAP237的构建
通过同源重组将PCR产生的连接体插入pTAP186的SmaI位点来产生质粒pTAP237。质粒pTAP186衍生自质粒pRS316(酿酒酵母穿梭载体)和pMAL-c2(衍生自pKK223-3并且包含tac启动子和rrnB终止子的大肠杆菌表达质粒)。质粒pTAP186包含卡那霉素抗性基因，在该质粒中，已破坏Sma I位点，使NotI和SfiI位点侧翼连接酵母ARS-CEN6和URA3序列，这有助于通过使用NotI降解将其从质粒切除。PCR产生的连接体用合成的RBS II序列取代pTAP186中的表达连接体序列(expressioncoupler sequence)。其由各100皮摩尔的分别示于SEQ ID NOS：44和45的寡核苷酸zc29,740和zc29,741，和大约各5皮摩尔的分别示于SEQ ID NOS：46和47的寡核苷酸zc29,736和zc29,738制备而来。通过PCR(10个循环：94℃进行30秒，50℃下进行30秒，和72℃下进行30秒，然后在4℃浸泡)组合这些寡合苷酸。通过2倍体积的100％的乙醇沉淀浓缩所得的PCR产物。将沉淀重悬浮于10μL水中以用于重组入用SmaI降解的受体载体pTAP186，从而产生包含合成的RBS II序列的构建体。将大约1μg的PCR产生的连接体和用SmaI降解的100ng pTAP186混合在一起并转移入感受态酵母细胞(酿酒酵母)。然后将酵母涂板在-URA D板上，在室温下放置大约72小时。然后将来自单块板上的Ura+转化子重悬浮于1mL H2O中，短暂离心以沉淀酵母细胞。将细胞沉淀重悬浮于0.5mL裂解缓冲液中。回收DNA并将其转化入大肠杆菌MC1061。使用各20皮摩尔的分别示于SEQ ID NOS：44和45的寡核苷酸zc29,740和zc29,741，通过上面公开的菌落PCR筛选克隆。将在琼脂糖凝胶上展示正确大小的条带的克隆接受序列分析。将正确的质粒命名为pTAP237。
                          实施例7
            IL-29半胱氨酸突变体的密码子最优化
A.IL-29野生型表达构建体的密码子最优化的产生
天然人IL-29基因序列不能很好地在大肠杆菌株系W3110中表达。用于IL-29编码序列的密码子的检查表明，其包含过量的在大肠杆菌中使用频率最低的密码子，CAI值等于0.206。CAI是同义密码子偏爱的统计测量值，其可用于预测蛋白产生水平(Sharp等人， Nucleic Acids Res. 15(3)：1281-95，1987)。编码高度表达的蛋白的基因倾向于具有高CAI值(＞0.6)，而由具有低CAI值(≤0.2)的基因编码的蛋白通常不能有效地表达。这表明了IL-29在大肠杆菌中较低产生的原因。此外，稀有密码子在信使的第二半中的成簇存在导致了更高的翻译停止、翻译的早期终止和氨基酸的错误掺入的可能性(Kane JF. Curr.Opin. Biotechnol. 6(5)：494-500，1995)。
已显示其基因包含稀有密码子的蛋白的表达水平，当某些稀有tRNA的水平在宿主内增加时，可得到显著地提高(Zdanovsky等人，Applied Enviromental Microb. 66：3166-3173，2000；You等人，.Biotechniques  27：950-954，1999)。pRARE质粒携带编码在大肠杆菌中极少使用的几个密码子的tRNA的基因(argU，argW，leuW，proL，ileX和glyT)。所述基因在其天然的启动子的控制之下(Novy，同上)。和pRARE的共表达增加了IL-29在大肠杆菌中的产量，产量大约为200mg/L。这些数据表明用更恰当的密码子利用重新再合成编码IL-29的基因提供了改进的用于表达大量IL-29的载体。
从16个交叠的寡核苷酸构建经密码子最优化的IL-29编码序列，所述寡核苷酸是：zc44,566(SEQ ID NO：48)、zc44,565(SEQ IDNO：49)、zc44,564(SEQ ID NO：50)、zc44,563(SEQ ID NO：51)、zc44,562(SEQ ID NO：52)、zc44,561(SEQ ID NO：53)、zc44,560(SEQID NO：54)、zc244,559(SEQ ID NO：55)、zc44,558(SEQ ID NO：56)、zc44,557(SEQ ID NO：57)。进行这些交叠的寡核苷酸的引物延伸，然后进行PCR扩增，产生了具有在大肠杆菌中表达的最优化的密码子的全长IL-29基因。通过酵母同源重组将最终的PCR产物插入表达载体pTAP237。从酵母中提取表达构建体并将其转化入感受态大肠杆菌MC1061。通过菌落PCR鉴定对卡那霉素抗性的克隆。通过测序确认阳性克隆，随后将其转化入生产性宿主株系W3110。具有最优化的IL-29序列的表达载体命名为pSDH184。所得的基因在大肠杆菌中的表达水平非常高，新构建体表达水平增加至大约250mg/L。
B.密码子最优化的zcyto21 C172S半胱氨酸突变表达构建体的产生
用于产生zcyto21 C172S半胱氨酸突变体的策略基于QuikChangeSite-Directed Mutagenesis试剂盒(Stratagene)。根据厂商建议，设计引物以导入C172S突变。这些引物称为ZG44,340(SEQ ID NO：58)和ZG44,341(SEQ ID NO：59)。按照QuikChange Mutagenesis说明书进行PCR以产生zcyto21 C172S半胱氨酸突变体。建立5个相同的50μl反应。将2.5μl pSDH175(缺少酵母载体主链序列)DNA用作每个反应的模板。使用下列量的反应物建立PCR混合物：30μl 10x PCR缓冲液、125ng(27.42μl)ZG44,340、125ng(9.18μl)ZG44,341、6μl dNTP、6μl Pfu Turbo聚合酶(Stratagene，La Jolla，CA)和206.4μl水。以47.5μl的混合物等分至各反应中。PCR条件如下：1个循环：95℃下进行30秒，然后16个循环：95℃进行30秒，55℃下进行1分钟，68℃下进行7分钟，然后1个循环：68℃下进行7分钟，和最后在4℃下保持。将所有5个PCR反应物装入一个管中。按照厂商的说明书，向PCR反应物中加入5μl DpnI限制性内切酶并在37℃下温育2小时。通过加入10％3M醋酸钠和2倍体积的100％乙醇沉淀DNA。在-20℃下保持沉淀20分钟。在14,000rpm下离心DNA 5分钟，通过真空干燥机干燥沉淀。将DNA沉淀重悬浮于20μl水中。将从PCR产生的DNA转化入大肠杆菌株系DH10B。将5μl DNA和40μl ElectroMAX DH10B细胞(Invitrogen)混合。然后使用设置至1.75kV、100Ω和25μF的Bio-Rad Gene Pulser IITM，在0.1cm小杯(Bio-Rad)中对细胞和DAN混合物进行电穿孔。然后将经电穿孔的细胞在37℃下过度生长1小时。将混合物涂板在LB+25μg/ml卡那霉素板上并在37℃下温育过夜。就zcyto21 C172S插入物的存在筛选10个克隆。使用QIAprepTM Spin Miniprep试剂盒(Qiagen，Valencia，CA)从10个克隆中分离DNA并通过用XbaI和PstI限制性内切酶进行切割来分析插入物的存在。9个克隆包含插入物，进行测序以确保zcyto21 C172S突变已被导入。通过测序确定克隆，随后将其标记为pSDH188。
                        实施例8
                大肠杆菌IL-29表达构建体
使用PCR分离包含野生型序列的IL-29的DNA片段。在反应中使用包含载体侧翼连接序列的41个碱基对(bp)和对应于IL-29的氨基端的24bp的引物zc41,212(SEQ ID NO：60)，和包含对应于包含zcyto21插入物的载体的3’末端的38bp的引物zc41,041(SEQ ID NO：61)。PCR条件如下：25个循环：94℃下进行30秒，50℃下进行30秒，和72℃下进行1分钟；然后在4℃下浸泡。将PCR样品的少量样品(2-4μL)在使用1X TBE缓冲液的1％琼脂糖凝胶上跑胶以进行分析，观察到预期的大约500bp的片段的条带。用200μL无水乙醇沉淀剩下的100μL体积的反应物。将沉淀重悬浮于10μL水中以用于重组入用SmaI切割的受体载体pTAP238中，从而产生上面公开的编码zcyto21的构建体。将具有正确序列的克隆命名为pTAP 377。用Not1/Nco1(10μl DNA、5μl缓冲液3NewEngland BioLabs、2μL Not 1、2μL Nco1、31μL水，在37℃下进行1小时)降解克隆pTAP377，用T4DNA连接酶缓冲液(7μL前面的降解物、2μL的5X缓冲液、1μL的T4DNA连接酶)重新连接。该步骤除去酵母序列CEN-ARS，使载体线性化。用Pvu2和Pst1诊断性地降解pTAP337DNA以确认酵母序列的不存在。将P/taP377 DNA转化入大肠杆菌株系W3110/pRARE，其是具有额外拷贝的稀有大肠杆菌tRNA基因的宿主株系。
                      实施例9
                 大肠杆菌IL-28A表达构建体
使用PCR分离包含zcyto20的野生型序列(如SEQ ID NO：1中所示的)的DNA片段。引物zc43,431(SEQ ID NO：62)包含载体侧翼连接序列的41bp和对应于zcyto20的氨基端的24bp，引物zc43,437(SEQ IDNO：63)包含对应于包含zcyto20插入物的载体的3’末端的38bp。PCR条件如下：25个循环：94℃下进行30秒，50℃下进行30秒，和72℃下进行1分钟；然后在4℃下浸泡。将PCR样品的少量样品(2-4μL)在使用1X TBE缓冲液的1％琼脂糖凝胶上跑胶以进行分析，观察到预期的大约500bp的片段的条带。用200μL无水乙醇沉淀剩下的100μL体积的反应物。将沉淀重悬浮于10μL水中以用于重组入用SmaI切割的受体载体pTAP238中，从而产生上面公开的编码zcyto20的构建体。将具有正确序列的克隆命名为pYEL7。用Not1/Nco1(10μl DNA、5μl缓冲液3NewEngland BioLabs、2μL Not 1、2μL Nco1、31μL水，在37℃下进行1小时)降解其，用T4DNA连接酶缓冲液(7μL前面的降解物、2μL的5X缓冲液、1μL的T4DNA连接酶)重新连接。该步骤除去酵母序列CEN-ARS，使载体线性化。用Pvu2和Pst1诊断性地降解pYEL7DNA以确认酵母序列的不存在。将PYEL7DNA转化入大肠杆菌株系W3110/pRARE。
                     实施例10
           zcvto21 C172S半胱氨酸突变体表达构建体
用于产生zcyto21 C172S半胱氨酸突变体(SEQ ID NO：28)的策略基于QuikChangeSite-Directed Mutagenesis试剂盒(Stratagene，La Jolla，CA)。按照厂商说明书设计引物以导入C172S突变。这些引物被称为ZG44,327和ZG44,328(分别为SEQ ID NOS：64和65)。按照QuikChange Mutagenesis说明书进行PCR以产生zcyto21 C172S半胱氨酸突变体。建立5个相同的50μl反应体系。每个反应将2.5μl pTAP377(缺失酵母载体主链序列)DNA用作模板。使用下列量的反应物建立PCR混合物：30μl 10x PCR缓冲液、125ng(27.42μl)ZG44,327(SEQID NO：64)、125ng(9.18μl)ZG44,328(SEQ ID NO：65)、6μl dNTP、6μl Pfu Turbo聚合酶(Strategene)和206.4μl水。将47.5μl的混合物等分入各反应。PCR条件如下：1个循环：95℃下进行30秒，然后16个循环：95℃进行30秒，55℃下进行1分钟，68℃下进行7分钟，然后1个循环：68℃下进行7分钟，和最后在4℃下保持。将所有5个PCR反应物装入一个管中。按照厂商的说明书，向PCR反应物中加入5μlDpnI限制性内切酶并在37℃下温育2小时。通过加入10％3M醋酸钠和2倍体积的100％乙醇(Aaper Alcohol，Shelbyville，KY)沉淀DNA。在-20℃下保持沉淀20分钟。在14,000rpm下离心DNA 5分钟，通过真空干燥机干燥沉淀。将DNA沉淀重悬浮于20μl水中。将从PCR产生的DNA转化入大肠杆菌株系DH10B。将5μl DNA和40μl ElectroMAX DH10B细胞(Invitrogen，Carlsbad，CA)混合。然后使用设置至1.75kV、100Ω和25μF的Bio-Rad Gene Pulse IITM，在0.1cm小杯(Bio-Rad，Hercules，CA)中对细胞和DNA混合物进行电穿孔。然后将经电穿孔的细胞在37℃下过度培养1小时。将混合物涂板在LB+25μg/ml卡那霉素板上并在37℃下温育过夜。就IL-29插入物的存在筛选10个克隆。使用QIAprepTM Spin Miniprep试剂盒(Qiagen)从10个克隆中分离DNA并通过用XbaI(Roche)和PstI(New England Biolabs)限制性内切酶进行切割来分析插入物的存在。9个克隆包含插入物，进行测序以确保zcyto21 C172S突变已被导入。通过测序确定克隆(isolet #6)，随后将其标记为pSDH171。可进行类似的策略产生zcyto21 C15S突变体。
                         实施例11
         zcyto20 C49S半胱氨酸突变体表达构建体
通过重叠PCR产生编码zcyto20 C49S半胱氨酸突变体的序列(SEQID NO：20)。使用pYEL7(SEQ ID NO：67)作为模板以及寡核苷酸引物zc43,431(SEQ ID NO：62)和zc45,399(SEQ ID NO：66)，通过PCR扩增产生野生型IL-28A序列(SEQ ID NO：1)的前187个碱基。使用pYEL7(SEQ ID NO：67)作为模板以及寡核苷酸引物zc45,398(SEQ ID NO：68)和zc43,437(SEQ ID NO：63)，通过PCR扩增产生从碱基105至531的第二DNA片段。引物zc45,399(SEQ ID NO：66)和zc45,398(SEQ ID NO：68)包含经特异性修饰的将半胱氨酸49改变成丝氨酸的序列。混合这两种PCR产物，并使用寡核苷酸引物zc43,431(SEQ ID NO：62)和zc43,437(SEQ ID NO：63)进行PCR重叠扩增。通过酵母同源重组(Raymond等人Biotechniques. Jan.26(1)：134-8，140-1，1999)将最终的PCR产物插入表达载体pTAP238。从酵母提取所述表达构建体并将其转化入感受态大肠杆菌DH10B。通过菌落PCR筛选卡那霉素抗性克隆。通过测序确认阳性克隆，随后将其转化入生产性宿主株系W3110/pRARE。具有编码zcyto20 C49S半胱氨酸突变体的序列的表达构建体命名为pCHAN9。
                         实施例12
         zcyto20 C51S半胱氨酸突变体表达构建体
通过重叠PCR产生编码zcyto20 C51S半胱氨酸突变体的序列(SEQID NO：24)。使用pYEL7(SEQ ID NO：67)作为模板以及寡核苷酸引物zc43,431(SEQ ID NO：62)和zc45,397(SEQ ID NO：63)，通过PCR扩增产生野生型IL-28A序列的前193个碱基。使用pYEL7(SEQ ID NO：67)作为模板以及寡核苷酸引物zc45,396(SEQ ID NO：70)和zc43,437(SEQ ID NO：63)，通过PCR扩增产生从碱基111至531的第二DNA片段。引物zc45,397(SEQ ID NO：69)和zc45,396(SEQ ID NO：70)包含经特异性修饰的将半胱氨酸51改变成丝氨酸的序列。混合这两种PCR产物，并使用寡核苷酸引物zc43,431(SEQ ID NO：62)和zc43,437(SEQID NO：63)进行PCR重叠扩增。通过酵母同源重组(Raymond等人 同上)将最终的PCR产物插入我们的内部(in-house)表达载体pTAP238。从酵母提取所述表达构建体并将其转化入感受态大肠杆菌DH10B。通过菌落PCR筛选卡那霉素抗性克隆。通过测序确认阳性克隆，随后将其转化入生产性宿主株系W3110/pRARE。具有编码zcyto20 C50S半胱氨酸突变体的序列的表达构建体命名为pCHAN10。
                        实施例13
Il-28A、IL-29和Cys至Ser的半胱氨酸突变体在大肠杆菌中的表
                           达
在分开的实验中，将用实施例6-9中描述的各表达载体转化的大肠杆菌接种入100mL含有0.01％Antifoam 289(Sigma Aldrich，St.Louis，MO)、30μg/ml卡那霉素、35μg/ml氯霉素的Superbroth II培养基(Becton Dickinson，San Diego，CA)并在37℃下培养过夜。向2L培养瓶中的500mL相同培养基中加入5mL接种物，在250rpm、37℃下振荡所述培养瓶直至培养物获得值为4的OD600。然后以1mM终浓度加入IPTG，再继续振荡2.5小时。在4℃下，4,000xg下离心细胞10分钟。将细胞沉淀物在-80℃下冷冻直至以后使用。
                       实施例14
                   IL-28的重折叠和纯化
A.内含体的制备
人野生型IL-29在大肠杆菌株系W3110中以如上所述的内含体形式表达。将来自补料分批发酵的细胞沉淀重悬浮于50mM Tris、pH 7.3中。将悬浮物在8000psi下通过APV-Gaulin匀浆器(Invensys APV，Tonawanda，New York)3次。在15,000g下离心回收不溶性物质，进行30分钟。连续地用50mM Tris、1％(v/v)Triton X100、pH 7.3和4M尿素洗涤沉淀。然后在室温下将内含体分散在50mM Tris、6M盐酸胍、5mM DTT中，进行1小时。然后在15,000g下离心材料1小时。来自该步骤的上清液包含还原的可溶性IL-29。
B.重折叠
在室温下，缓慢地将溶解的IL-29稀释入50mM Tris、pH 8、0.75M精氨酸、0.05％PEG3350、2mM MgCl2、2mM CaCl2、0.4mM KCl、10mM NaCl、4mM还原的谷胱甘肽、0.8mM氧化的谷胱甘肽，同时进行搅拌。重折叠缓冲液中的最终的IL-29的浓度是0.1mg/ml。将重折叠的混合物在室温下放置过夜。然后使用浓醋酸将悬浮液的pH调整至5。然后将悬浮液通过0.2μm滤膜进行过滤。重折叠混合物的RP-HPLC分析显示两个主峰。
C.纯化
在pH 5下用50mM NaOAc系列(in-line)稀释(1∶2)重折叠混合物，并将其加载至Pharmacia SP Sepharose Fast Flow阳离子交换柱(North Peapack，NJ)上。用3倍柱体积的50mM NaOAc、400mM NaCl、pH 5洗涤柱子。用50mM NaOAc、1.4M NaCl、pH 5洗脱结合的IL-29。向阳离子交换步骤的洗脱混合物中加入固体(NH4)2SO4以使(NH4)2SO4的终浓度为0.5M。然后将该物质加载至ToyoPearl Phenyl 650S HIC柱子(Tosoh Biosep，Montgomery，PA)上。然后用3倍柱体积的50mMNaOAc、1M(NH4)2SO4、pH 5洗涤柱子。用10倍柱体积的从50mM NaOAc、1M(NH4)2SO4、pH 5至50mM NaOAc、pH 5的线性梯度洗脱结合的zcyto21。收集洗脱物的级分。在该步骤中观察到2个主峰。进行洗脱级分的RP-HPLC分析。在最终的缓冲液交换为PBS、pH 7.3后，产生对应于2个二硫键异构体的2种产物。
                       实施例15
          IL-29半胱氨酸突变体的重折叠和纯化
如实施例3中所述，IL-29的纯化产生2种二硫键异构体。使用HICFPLC步骤分离这2种形式。该分离不能在基线上实现。必须使用几个“调峰(Peak Shaving)”获得基本上纯的异构体(＞95％)。该步骤的产率因整个过程的延长而受到损失。C15-C112形式和C112-C171形式的终产率分别为8％和9％。CHO和杆状病毒(BV)系统中产生的野生型IL-29也显示相似的现象。已确定异构体的C15-C112形式在二硫键模式上和I类INF的一致。在ISRE测定法(参见下面)中，C15-C112形式也展现比C112-C171形式高30倍的生物学活性。
zcyto21 Cys172Ser突变蛋白的重折叠和纯化
zcyto21 C172S多肽(SEQ ID NO：29)的内含体制备、重折叠和纯化基本上和IL-29野生型(SEQ ID NO：4)的相同。突变蛋白的重折叠混合物的RP-HPLC分析只显示对应于野生型IL-29的C15-C112形式的一个主峰。随后的HIC层析只显示单个峰。因此不必使用严格的“调峰”。整个方法的最终产率接近50％。在实施例16所示的ISRE测定中，zcyto21 Cys172Ser多肽(SEQ ID NO：29)显示和野生型IL-29的C15-C112形式的生物学活性相同的生物学活性。
                      实施例16
        肝脏和淋巴细胞亚群中的IL-28RA mRNA的表达
为了进一步检查IL-28RA的mRNA的分布，使用SDS 7900HT系统(Applied Biosystems，CA)进行半定量RT-PCR。使用各样品的100ng总RNA和基因特异性引物进行一步RT-PCR法。使用Bjab RNA产生各引物组的标准曲线，将所有样品值针对HPRT进行规范化。也显示IFNAR2和CRF2-4的规范值。
表7：B和T细胞表达显著水平的IL-28RA mRNA。在树突细胞和大多数单核细胞中观察到低水平。
表7
  细胞/组织   IL-28RA   IFNAR2   CRF2-4
  树突细胞，未刺激   .04   5.9   9.8
  树突细胞+IFNg   .07   3.6   4.3
  树突细胞   .16   7.85   3.9
  CD14+，用LPS/IFNg刺激   .13   12   27
  CD14+单核细胞，静息   .12   11   15.4
  Hu CD14+Unact.   4.2   TBD   TBD
  Hu CD14+1ug/ml LPS act.   2.3   TBD   TBD
  H.发炎的扁桃体   3   12.4   9.5
  H.B-细胞+PMA/Iono 4&24小时   3.6   1.3   1.4
  Hu CD19+，静息   6.2   TBD   TBD
  Hu CD19+4小时.PMA/Iono   10.6   TBD   TBD
  Hu CD19+24小时Act.PMA/Iono   3.7   TBD   TBD
  IgD+B-细胞   6.47   13.15   6.42
  IgM+B-细胞   9.06   15.4   2.18
  IgD-B-细胞   5.66   2.86   6.76
  NK细胞+PMA/Iono   0   6.7   2.9
  Hu CD3+，未激活的   2.1   TBD   TBD
  CD4+，静息   .9   8.5   29.1
  CD4+，未刺激18小时   1.6   8.4   13.2
  CD4++Poly I/C   2.2   4.5   5.1
  CD4++PMA/Iono   .3   1.8   .9
  CD3neg，静息   1.6   7.3   46
  CD3neg，未刺激18小时   2.4   13.2   16.8
  CD3neg+Poly I/C 18小时   5.7   7   30.2
  CD3neg+LPS 18小时   3.1   11.9   28.2
  CD8+，未刺激18小时   1.8   4.9   13.1
  CD8+，用PMA/Ion刺激18小时   .3   .6   1.1
如表8中所示，正常肝组织和来源于肝的细胞系展示了丰富的IL-28RA和CRF2-4mRNA水平。
                                  表8
  细胞/组织   IL-28RA   IFNAR2   CRF2-4
  HepG2   1.6   3.56   2.1
  HepG2 UGAR 5/10/02   1.1   1.2   2.7
  HepG2，CGAT HKES081501C   4.3   2.1   6
  HuH7 5/10/02   1.63   16   2
  HuH7肝细胞瘤-CGAT   4.2   7.2   3.1
  肝脏，正常的-CGAT#HXYZ020801K   11.7   3.2   8.4
  肝脏，NAT-正常的相邻组织   4.5   4.9   7.7
  肝脏，NAT-正常的相邻组织   2.2   6.3   10.4
  Hep SMVC hep静脉   0   1.4   6.5
  Hep SMCA hep.动脉   0   2.1   7.5
  Hep.Fibro   0   2.9   6.2
  Hep.Ca.   3.8   2.9   5.8
  腺癌肝脏   8.3   4.2   10.5
  SK-Hep-1腺癌.肝脏   .1   1.3   2.5
  AsPC-1 Hu.胰腺癌   .7   .8   1.3
  Hu.Hep.星形细胞   .025   4.4   9.7
如表9中所示，原代气道上皮细胞包含丰富的IL-28RA和CRF2-4水平。
                             表9
  细胞/组织   IL-28RA   IFNAR2   CRF2-4
  U87MG-神经胶质瘤   0   .66   .99
  NHBE，未刺激   1.9   1.7   8.8
  NHBE+TNF-α   2.2   5.7   4.6
  NHBE+poly I/C   1.8   nd   nd
  小气道上皮细胞   3.9   3.3   27.8
  NHLF-正常人肺成纤维细胞   0   nd   nd
如表10中所示，IL-28RA存在于正常和患病的肝样品中，在来自感染了丙型肝炎和乙型肝炎的样品的组织中具有增加的表达。
                                        表10
  细胞/组织   IL-28RA   CRF2-4   IFNAR2
  具有凝固性坏死的肝脏   8.87   15.12   1.72
  具有自身免疫性肝炎的肝脏   6.46   8.90   3.07
  新生儿肝炎   6.29   12.46   6.16
  末期肝脏疾病   4.79   17.05   10.58
  暴发性肝衰竭   1.90   14.20   7.69
  暴发性肝衰竭   2.52   11.25   8.84
  原发性胆汁肝硬化   4.64   12.03   3.62
  酒精性肝硬化(Laennec′s)   4.17   8.30   4.14
  不明原因之肝硬化(Cirrhosis，Cryptogenic)   4.84   7.13   5.06
  肝炎C+，具有肝硬化   3.64   7.99   6.62
  肝炎C+   6.32   11.29   7.43
  继发于HepA的暴发型肝炎   8.94   21.63   8.48
  肝炎C+   7.69   15.88   8.05
  肝炎B+   1.61   12.79   6.93
  正常肝脏   8.76   5.42   3.78
  正常肝脏   1.46   4.13   4.83
  肝NAT   3.61   5.43   6.42
  肝NAT   1.97   10.37   6.31
  Hu胎儿肝脏   1.07   4.87   3.98
  肝细胞癌   3.58   3.80   3.22
  肝脏腺癌   8.30   10.48   4.17
  hep.SMVC，hep.静脉   0.00   6.46   1.45
  Hep SMCA hep.动脉   0.00   7.55   2.10
  Hep.成纤维细胞   0.00   6.20   2.94
  HuH7肝细胞瘤   4.20   3.05   7.24
  HepG2肝细胞癌   3.40   5.98   2.11
  SK-Hep-1腺癌.肝脏   0.03   2.53   1.30
  HepG2，未刺激   2.06   2.98   2.28
  HepG2+zcyto21   2.28   3.01   2.53
  HepG2+IFNα   2.61   3.05   3.00
  正常女性肝脏-退化的   1.38   6.45   4.57
  正常肝脏-退化的   1.93   4.99   6.25
  正常肝脏-退化的   2.41   2.32   2.75
  患病肝脏-退化的   2.33   3.00   6.04
  来自Clonetics的原代肝细胞   9.13   7.97   13.30
如表11-15所示，可在正常B细胞、B淋巴瘤细胞系、T细胞、T淋巴瘤细胞系(Jurkat)、正常和经转化的淋巴细胞(B细胞和T细胞)以及正常人单核细胞中检测到IL-28RA。
                                                         表11
  HPRT平均值   IL-28RA平均值   IL-28RA规范值 IFNAR2   IFNR2规范值 CRF2-4   CRF2-4规范值
  CD14+24hr非条件刺激#A38   13.1   68.9   5.2   92.3   7.0   199.8   15.2
  CD14+24hr刺激#A38   6.9   7.6   1.1   219.5   31.8   276.6   40.1
  CD14+24hr非条件刺激#A112   17.5   40.6   2.3   163.8   9.4   239.7   13.7
  CD14+24hr刺激#A112   11.8   6.4   0.5   264.6   22.4   266.9   22.6
  CD14+rest#X   32.0   164.2   5.1   1279.7   39.9   699.9   21.8
  CD14++LPS#X   21.4   40.8   1.9   338.2   15.8   518.0   24.2
  CD14+24hr非条件刺激#A39   26.3   86.8   3.3   297.4   11.3   480.6   18.3
  CD14+24hr刺激#A39   16.6   12.5   0.8   210.0   12.7   406.4   24.5
  HL60静息   161.2   0.2   0.0   214.2   1.3   264.0   1.6
  HL60+PMA   23.6   2.8   0.1   372.5   15.8   397.5   16.8
  U937静息   246.7   0.0   0.0   449.4   1.8   362.5   1.5
  U937+PMA   222.7   0.0   0.0   379.2   1.7   475.9   2.1
  Jurkat静息   241.7   103.0   0.4   327.7   1.4   36.1   0.1
  Jurkat激活的   130.7   143.2   1.1
  Colo205   88.8   43.5   0.5
  HT-29   26.5   30.5   1.2
                       表12
  HPRT SD   IL-28RA SD
  Mono 24小时非条件刺激#A38   0.6   2.4
  Mono 24小时刺激#A38   0.7   0.2
  Mono 24小时非条件刺激#A112   2.0   0.7
  Mono 24小时刺激#A112   0.3   0.1
  Mono rest#X   5.7   2.2
  Mono+LPS#X   0.5   1.0
  Mono 24小时非条件刺激#A39   0.7   0.8
  Mono 24小时刺激#A39   0.1   0.7
  HL60静息   19.7   0.1
  HL60+PMA   0.7   0.4
  U937静息   7.4   0.0
  U937+PMA   7.1   0.0
  Jurkat静息   3.7   1.1
  Jurkat被激活的   2.4   1.8
  Colo205   1.9   0.7
  HT-29   2.3   1.7
                                        表13
平均Hprt   平均IFNAR2   平均IL-28RA 平均CRF
  CD3+/CD4+0   10.1   85.9   9.0   294.6
  CD4/CD3+非条件刺激18小时   12.9   108.7   20.3   170.4
  CD4+/CD3++Poly I/C 18小时   24.1   108.5   52.1   121.8
  CD4+/CD3++PMA/Iono 18小时   47.8   83.7   16.5   40.8
  CD3neg 0   15.4   111.7   24.8   706.1
  CD3neg非条件刺激18小时   15.7   206.6   37.5   263.0
  CD3neg+Poly I/C 18小时   9.6   67.0   54.7   289.5
  CD3neg+LPS 18hrs   14.5   173.2   44.6   409.3
  CD8+Unstim.18hrs   6.1   29.7   11.1   79.9
  CD8++PMA/Iono 18小时   78.4   47.6   26.1   85.5
  12.8.1-NHBE非条件刺激   47.4   81.1   76.5   415.6
  12.8.2-NHBE+TNF-α   42.3   238.8   127.7   193.9
  SAEC   15.3   49.9   63.6   426.0
                                          表14
  IL-28RA规范值   CRF规范值   IFNAR2规范值   IL-28RASD   CRFSD   IFNAR2SD
  CD3+/CD4+0   0.9   29.1   8.5   0.1   1.6   0.4
  CD4/CD3+非条件刺激18小时   1.6   13.2   8.4   0.2   1.6   1.4
  CD4+/CD3++Poly I/C 18小时   2.2   5.1   4.5   0.1   0.3   0.5
  CD4+/CD3++PMA/Iono 18小时   0.3   0.9   1.8   0.0   0.1   0.3
  CD3neg 0   1.6   46.0   7.3   0.2   4.7   1.3
  CD3neg非条件刺激18小时   2.4   16.8   13.2   0.4   2.7   2.3
  CD3neg+Poly I/C 18小时   5.7   30.2   7.0   0.3   1.7   0.8
  CD3neg+LPS 18小时   3.1   28.2   11.9   0.4   5.4   2.9
  CD8+非条件刺激18小时   1.8   13.1   4.9   0.1   1.1   0.3
  CD8++PMA/Iono 18小时   0.3   1.1   0.6   0.0   0.1   0.0
  12.8.1-NHBE非条件刺激   1.6   8.8   1.7   0.1   0.4   0.1
  12.8.2-NHBE+TNF-α   3.0   4.6   5.7   0.1   0.1   0.1
  SAEC   4.1   27.8   3.3   0.2   1.1   0.3
                                        表15
SD Hprt SD IFNAR2   SDIL-28RA SD CRF
  CD3+/CD4+0   0.3   3.5   0.6   12.8
  CD4/CD3+非条件刺激18小时   1.4   13.7   1.1   8.5
  CD4+/CD3++Poly I/C 18小时   1.3   9.8   1.6   3.4
  CD4+/CD3++PMA/Iono 18小时   4.0   10.3   0.7   3.7
  CD3neg 0   1.4   16.6   1.6   28.6
  CD3neg非条件刺激18小时   2.4   16.2   2.7   12.6
  CD3neg+Poly I/C 18小时   0.5   7.0   1.0   8.3
  CD3neg+LPS 18小时   1.0   39.8   5.6   73.6
  CD8+非条件刺激.18小时   0.2   1.6   0.5   6.1
  CD8++PMA/Iono 18小时   1.3   1.7   0.2   8.1
  12.8.1-NHBE非条件刺激   2.4   5.6   2.7   2.8
  12.8.2-NHBE+TNF-α   0.5   3.4   3.5   3.4
  SAEC   0.5   4.8   1.8   9.9
实施例17
         小鼠IL-28对小鼠B细胞不具有抗增殖效应
通过使用MACS磁珠除去CD43+细胞来从2个Balb/C脾脏(7个月大小)分离小鼠B细胞。将纯化的B细胞和LPS、抗-IgM或抗-CD40单克隆抗体一起进行体外培养。将小鼠IL-28或小鼠IFNα加入培养物中，在第48小时加入3H-胸苷，在培养72小时后测量3H-胸苷的整合。
在10ng/ml时，IFNα抑制用LPS或抗IgM刺激的小鼠B细胞整合3H-胸苷。然而，小鼠IL-28在任何受试浓度上包括1000ng/ml都不抑制3H-胸苷的整合。相反地，IFNα和小鼠IL-28都增加用抗CD40MAb刺激的小鼠B细胞整合3H胸苷。
这些数据表明，和IFNa不同，小鼠IL-28即使在高浓度下也没有显示抗增殖的活性。此外，zcyto24在抗CD40MAb存在的情况下促进增殖。该结果说明小鼠IL-28和IFNα的不同在于小鼠IL-28对小鼠B细胞不表现抗增殖活性，即使在高浓度下亦如此。此外，小鼠IL-28在抗CD40单克隆抗体存在的情况下促进增殖。
                     实施例18
                    骨髓扩增测定
在37℃下，将新鲜人骨髓单核细胞(Poietic Technologies，Gaithersburg，Md.)附着至αMEM、10％FBS、50微摩尔β-巯基乙醇、2ng/ml FLT3L中的塑料，进行2小时。然后在1000ng/ml IL-29-CEE、100ng/ml IL-29-CEE、10ng/ml IL-29-CEE、100ng/ml IFN-α2a、10ng/mlIFN-α2a或1ng/ml IFN-α2a存在或不存的情况下，将未吸附的细胞以25,000至45,000细胞/小孔(96孔组织培养板)涂板在αMEM、10％FBS、50微摩尔β-巯基乙醇、2ng/ml FLT3L中。将这些细胞和各种细胞因子一起温育以检测来自骨髓的造血细胞的扩增或分化(20ng/ml IL-2、2ng/ml IL-3、20ng/ml IL-4、20ng/ml IL-5、20ng/ml IL-7、20ng/mlIL-10、20ng/ml IL-12、20ng/ml IL-15、10ng/ml IL-21或不加入细胞因子)。在8至12天后，以20微升/孔加入Alamar Blue(Accumed，Chicago，Ill.)。将板在37℃、5％CO下再温育24小时。使用SoftMaxTMPro程序，在波长544(激发)和590(发射)下在FmaxTM板读出器(Molecular Devices Sunnyvale，Calif.)上读板。Alamar Blue提供了基于细胞的代谢活性的荧光读出值，从而是相对于负对照的细胞增殖的直接测量。
IFN-α2a在所有受试条件下都对骨髓扩增产生了显著的抑制。相反地，IL-29在IL-3、IL-4、IL-5、IL-7、IL-10、IL-12、IL-21存在或不加入细胞因子的情况下对骨髓细胞的扩增不具显著效果。在IL-2或IL-15存在的情况下观察到骨髓细胞扩增的少量抑制。
                       实施例19
使用可溶性受体(zcytoR19/CRF2-4)进行的IL-28和IL-29信号转
                       导的抑制
A.信号转导报告分子测定法
可使用信号转导报告分子测定法显示zcytor19-Fc4同型二聚体和zcytor19-Fc/CRF2-4-Fc异二聚体可溶性受体对zcyto20、zcyto21和zcyto24信号转导的抑制剂特性。用包含驱动荧光素酶报告基因转录的干扰素刺激的应答元件(ISRE)的报告质粒转染过量表达zcytor19受体的人胚胎肾(HEK)细胞。在用配体(包括zcyto20(SEQ ID NO：2)、zcyto21(SEQ ID NO：15)、zcyto24(SEQ ID NO：8))刺激转染的细胞后，荧光素酶的活性反映了配体和可溶性受体的相互作用。
B.细胞转染
如下转染过量表达zcytor19的293HEK细胞：在转染前大约18小时以700,000个293细胞/孔(6孔板)涂板在2毫升DMEM+10％胎牛血清中。每孔，向总共100微升的DMEM中的6微升Fugene 6试剂(RocheBiochemicals)中加入1微克pISRE-荧光素酶DNA(Stratagene)和1微克pIRES2-EGFP DNA(Clontech)。30分钟后，向预涂板的293细胞中加入该转染混合物。24小时后，使用胰蛋白酶-EDTA从板中取出经转染的细胞并以大约25,000个细胞/孔重新涂板于96孔微量滴定板中。在配体刺激之前大约18小时，将培养基更换为DMEM+0.5％FBS。
C.信号转导报告分子测定法
如下进行信号转导报告分子测定法：在37℃下在DMEM+0.5％FBS中温育18小时后，用10ng/ml zcyto20、zcyto21或zcyto24和10微克/ml的下列可溶性受体刺激经转染的细胞；所述可溶性受体是人zcytor19-Fc同型二聚体、人zcytor19-Fc/人CRF2-4-Fc异二聚体、人CRF2-4-Fc同型二聚体、鼠类zcytor19-Ig同型二聚体。在37℃下温育4小时后，裂解细胞，在加入荧光素酶底物后在光度计上测量相对光单位(RLU)。所得的结果表示为在可溶性受体存在的情况下配体诱导的信号转导相对于在只有PBS存在的情况下的信号转导的百分比抑制。表16显示，人zcytor19-Fc/人CRF2-4异二聚体可溶性受体能够抑制zcyto20、zcyto21和zcyto24诱导的信号转导，抑制程度达到对照的16和45％之间。人zcytor19-Fc同型二聚体可溶性受体也能够抑制zcyto21诱导的信号转导达45％。对于huCRF2-4-Fc或muzcytor19-Ig同型二聚体可溶性受体，没有观察到显著的效果。
表16：由可溶性受体产生的对配体诱导的干扰素刺激的应答元件(ISRE)的信号转导的百分比抑制
  配体   Huzcytor19-Fc/huCRF2-4-Fc   Huzcytor19-Fc   HuCRF2-4-Fc   Muzcytor19-Ig
  Zcyto20   16％   92％   80％   91％
  Zcyto21   16％   45％   79％   103％
  Zcyto24   47％   90％   82％   89％
                         实施例20
    通过IL-28和IL-29进行的干扰素刺激的基因的诱导
A.人外周血单核细胞
在IL-29(20ng/ml)、IFNα2a(2ng/ml)(PBL Biomedical Labs，Piscataway，NJ)或单独的培养基存在的情况下培养新分离的人外周血单核细胞。将细胞温育6、24、48或72小时，然后分离总RNA并用不含RNA酶的DNA酶进行处理。将100ng总RNA用作One-StepSemi-Quantitative RT-PCR的模板，该RT-PCR使用Taqman One-StepRT-PCR Master Mix试剂和由厂商建议的基因特异性引物。(AppliedBiosystems，Branchburg，NJ)。将结果对HPRT进行规范，表示为各时间点的相对于单独的培养基对照的诱导倍数。表17显示IL-29在所有受试时间点上在人外周血单核细胞中诱导干扰素刺激的基因表达。
                           表17
  MxA诱导倍数  Pkr诱导倍数  OAS诱导倍数
  6小时IL29   3.1   2.1   2.5
  6小时IFNα2a   17.2   9.6   16.2
  24小时IL29   19.2   5.0   8.8
  24小时IFNα2a   57.2   9.4   22.3
  48小时IL29   7.9   3.5   3.3
  48hr IFNα2a   18.1   5.0   17.3
  72小时IL29   9.4   3.7   9.6
  72小时IFNα2a   29.9   6.4   47.3
B.被激活的人T细胞
按照厂商说明书，使用Pan T-cell Isolation试剂盒(Miltenyi，Auburn，CA)通过负选择从新收获的外周血单核细胞中分离人T细胞。然后用板结合的抗CD3、可溶性抗CD28(0.5ug/ml)，(Pharmingen，SanDiego，CA)和白细胞介素2(IL-2；100U/ml)(R&D Systems，Minneapolis，MN)激活和扩增T细胞，洗涤细胞，然后使用IL-2再扩增5天。在激活和扩增后，用IL-28A(20ng/ml)、IL-29(20ng/ml)或只用培养基刺激细胞3、6或18小时。分离总RNA并用不含RNA酶的DNA酶进行处理。如上面的实施例中所述进行One-Step Semi-QuantitativeRT-PCR。将结果对HPRT进行规范，表示为各时间点上相对于单独的培养基对照的诱导倍数。表18显示IL-28和IL-29在所有受试时间点上在被激活的人T细胞中诱导干扰素刺激的基因表达。
                             表18
  MxA诱导倍数  Pkr诱导倍数  OAS诱导倍数
  Donor#1 3小时IL28   5.2  2.8  4.8
  Donor#1 3小时IL29   5.0  3.5  6.0
  Donor#1 6小时IL28   5.5  2.2  3.0
  Donor#1 6小时IL29   6.4  2.2  3.7
  Donor#1 18小时IL28   4.6  4.8  4.0
  Donor#1 18小时IL29   5.0  3.8  4.1
  Donor#2 3小时IL28   5.7  2.2  3.5
  Donor#2 3小时IL29   6.2  2.8  4.7
  Donor#2 6小时IL28   7.3  1.9  4.4
  Donor#2 6小时IL29   8.7  2.6  4.9
  Donor#2 18小时IL28   4.7  2.3  3.6
  Donor#2 18小时IL29   4.9  2.1  3.8
C.原代人肝细胞
用IL-28A(50ng/ml)、IL-29(50ng/ml)、IFNα2a(50ng/ml)或单独的培养基刺激来自两个分别的供体(Cambrex，Baltimore，MD andCellzDirect，Tucson，AZ)的新分离的人肝细胞24小时。刺激后，分离总RNA并用不含RNA酶的DNA酶进行处理。如前面的实施例中所述进行一步半定量RT-PCR。将结果对HPRT进行规范，并表示为各时间点上相对于单独的培养基对照的诱导倍数。表19显示IL-28和IL-29在24小时的刺激后在原代人肝细胞中诱导干扰素刺激的基因表达
                             表19
  MxA诱导倍数  Pkr诱导倍数  OAS诱导倍数
  Donor#1 IL28   31.4  6.4  30.4
  Donor#1 IL29   31.8  5.2  27.8
  Donor#1 IFN-α2a   63.4  8.2  66.7
  Donor#2 IL28   41.7  4.2  24.3
  Donor#2 IL29   44.8  5.2  25.2
  Donor#2 IFN-α2a   53.2  4.8  38.3
D.HepG2和HuH7：人肝脏肝癌细胞系
用IL-28A(10ng/ml)、IL-29(10ng/ml)、IFNα2a(10ng/ml)、IFNB(1ng/ml)(PBL Biomedical，Piscataway，NJ)或单独的培养基刺激HepG2和HuH7细胞(ATCC NOS.8065，Manassas，VA)24或48小时。在分开的培养中，如上所述用20ng/ml的MetIL-29C172S-PEG或MetIL-29-PEG刺激HepG2细胞。分离总RNA并用不含RNA酶的DNA酶进行处理。将100ng总RNA用作前述的一步半定量RT-PCR的模板。将结果对HPRT进行规范，表示为各时间点上相对单独的培养基对照的诱导倍数。表20显示IL-28和IL-29在24和28小时后在HepG2和HuH7肝脏肝癌细胞系中诱导ISG表达。
                             Table 20
  MxA诱导倍数  Pkr诱导倍数   OAS诱导倍数
  HepG2 24小时IL28   12.4  0.7   3.3
  HepG2 24小时IL29   36.6  2.2   6.4
  HepG2 24小时IFNα2a   12.2  1.9   3.2
  HepG2 24小时IFNβ   93.6  3.9   19.0
  HepG2 48hr IL28   2.7  0.9   1.1
  HepG2 48hr IL29   27.2  2.1   5.3
  HepG2 48小时IFNα2a   2.5  0.9   1.2
  HepG2 48hr IFNβ   15.9  1.8   3.3
  HuH7 24小时IL28   132.5  5.4   52.6
  HuH7 24小时IL29   220.2  7.0   116.6
  HuH7 24小时IFNα2a   157.0  5.7   67.0
  HuH7 24小时IFNβ   279.8  5.6   151.8
  HuH7 48hr IL28   25.6  3.4   10.3
  HuH7 48hr IL29   143.5  7.4   60.3
  HuH7 48小时IFNα2a   91.3  5.8   32.3
  HuH7 48hr IFNβ   65.0  4.2   35.7
                           表21
  MxA诱导倍数   OAS诱导倍数  Pkr诱导倍数
  MetIL-29-PEG   36.7   6.9  2.2
  MetIL-29C172S-PEG   46.1   8.9  2.8
显示的数据是培养24小时后IL-29的20ng/ml metIL-29-PEG和metIL-29C172S-PEG形式的数据。
将显示的数据对HPRT进行规范并表示为相对于未刺激的细胞的诱导倍数。
                       实施例21
IL-28、IL-29、metIL-29-PEG和metIL-29C172S-PEG在小鼠肝细胞系
                  AML-12中刺激ISG的诱导
干扰素刺激的基因(ISG)是由I型干扰素(IFN)和IL-28以及L-29家族分子诱导的基因，这表明IFN和IL-28以及IL-29诱导导致抗病毒活性的相似途径。人I型IFN(IFNα1-4和IFNβ)对小鼠细胞具有极低或没有活性，这被认为是由于缺乏种交叉反应性导致的。为验证人IL-28和IL-29对小鼠细胞是否具有作用，通过对来源于小鼠肝脏的细胞系AML-12进行实时PCR来评估由人IL-28和IL-29引起的ISG诱导。
将AML-12细胞以2×106细胞/孔的浓度涂板在完全DMEM培养基中的6孔板中。在涂板细胞24小时后，以20ng/ml的浓度向培养物中加入人IL-28和IL-29。作为对照，用小鼠IFNα(正对照)刺激细胞或不刺激细胞(负对照)。在加入来源于CHO的人IL-28A(SEQ ID NO：2)或IL-29(SEQID NO：15)后8、24、48和72小时，收获细胞。使用RNAEasy-kit(Qiagen，Valencia，CA)从细胞沉淀分离RNA。用DNA酶(Millipore，Billerica，MA)处理RNA以清除RNA中的任何污染性DNA。使用Perkin-Elmer RT mix产生cDNA。使用对于OAS、Pkr和Mx1是特异性的引物和探针通过实时PCR评估ISG基因诱导。为获得定量数据，使用ISGPCR重复HPRT实时PCR。使用已知量的来自IFN刺激的小鼠PBL的RNA获得标准曲线。所有数据表示为相对于内部HPRT表达的表达。
人IL-28A和IL-29刺激小鼠肝细胞系AML-12中的ISG诱导，从而证明，和I型IFN不同，IL-28/29家族蛋白显示种交叉反应性。
                          表22
  刺激   OAS   PkR   Mx1
  无   O.001   0.001   0.001
  人IL-28   0.04   0.02   0.06
  人IL-29   0.04   0.02   0.07
  小鼠IL-28   0.04   0.02   0.08
  小鼠IFNα   0.02   0.02   0.01
显示的所有数据表示为相对于HPRT基因表达的倍数，
Figure A20058003059001131
量相对于内部管家基因HPRT的规范化的值
作为示例，显示了48小时时间点上的数据。
                                   表23
AML12′s
  Mx1诱导倍数   OAS诱导倍数   Pkr诱导倍数
  MetIL-29-PEG   728   614   8
  MetIL-29C172S-PEG   761   657   8
用20ng/ml metIL-29-PEG或metIL-29C172S-PEG刺激细胞24小时。
将显示的数据对HPRT进行规范，表示为相对于未受刺激的细胞的诱导倍数。
                        实施例22
     ISG在表达人IL-29的转基因小鼠的脾脏中被有效地诱导
产生在Eu-lck启动子的控制之下表达人IL-29的转基因(Tg)小鼠。为研究人IL-29在小鼠中是否具有体内活性，通过在Eu-lck IL-29转基因小鼠的脾中进行实时PCR来分析ISG的表达。
使用在Eu-lck启动子控制之下表达人IL-29基因的构建体产生转基因小鼠(C3H/C57BL/6)。该启动子在T细胞和B细胞中是有活性的。在10周大小时，杀死转基因小鼠和其非转基因同窝出生仔(n＝2/组)。分离小鼠脾脏。使用RNAEasy-kit(Qiagen)从细胞沉淀中分离RNA。用DNA酶处理RNA以清除RNA中的任何污染性DNA。使用Perkin-Elmer RTmix产生cDNA。使用对于小鼠OAS、Pkr和Mx1是特异性的引物和探针(5’FAM，3’NFQ)通过实时PCR来评估ISG基因的诱导。为获得定量数据，用ISG PCR重复HPRT实时PCR。此外，使用已知量的IFN刺激的小鼠PBL获得标准曲线。所有数据表示为相对于内部HPRT表达的表达。
和其非Tg同窝对照相比，分离自IL-29Tg小鼠的脾显示ISG OAS、Pkr和Mx1的高诱导，表明人IL-29在小鼠中具有体内生物学活性。
                    表24
  小鼠   OAS   PkR   Mx1
  非-Tg   4.5   4.5   3.5
  IL-29Tg   12   8   21
显示的所有数据是相对于HPRT基因表达的表达倍数。显示两只小鼠中的平均表达。
                      实施例23
人IL-28和IL-29蛋白在小鼠的肝脏、脾脏和血液中诱导ISG基因
                       表达
为确定人IL-28和IL-29在体内是否诱导干扰素刺激的基因，将来源于CHO的人IL-28A和IL-29蛋白注射入小鼠。此外，也使用MetIL-29C172S-PEG和MetIL-29-PEG在上述的体内测定法中检测来源于大肠杆菌的IL-29。在不同时间点上和不同的剂量上，测量小鼠的血液、脾脏和肝脏中的ISG基因的诱导。
用多种剂量(10μg-250μg)的来源于CHO的人IL-28A和IL-29或MetIL-29C172S-PEG和MetIL-29C16-C113-PEG腹膜内或静脉内注射C57BL/6小鼠。在不同的时间点(1小时-48小时)杀死小鼠。从小鼠中分离脾脏和肝脏，并分离RNA。从血液细胞分离RNA。沉淀细胞并使用RNAEasy-试剂盒(Qiagen)分离RNA。用DNA酶(Amicon)处理RNA以除去RNA中的任何污染性DNA。使用Perkin-Elmer RT mix(Perkin-Elmer)产生cDNA。使用对于小鼠OAS、Pkr和Mx1是特异性的引物和探针通过实时PCR来测量ISG基因的诱导。为获得定量数据，用ISG PCR重复HPRT实时PCR。使用已知量的IFN刺激的小鼠PBL计算标准曲线。所有数据表示为相对于内部HPRT表达的表达。
人IL-29以剂量依赖性的方式在小鼠的肝脏、脾脏和血液中诱导ISG基因表达(OAS，Pkr，Mx1)。注射后1-6小时之间ISG的表达达到高峰并且显示长达48小时的高于对照小鼠的持续表达。在该实验中，人IL-28A不诱导ISG基因表达。
                                   表25
  注射   OAS-1小时   OAS-6小时   OAS-24小时   OAS-48小时
  无-肝脏   1.6   1.6   1.6   1.6
  IL-29肝脏   2.5   4   2.5   2.8
  无-脾脏   1.8   1.8   1.8   1.8
  IL-29-脾脏   4   6   3.2   3.2
  无-血液   5   5   5   5
  IL-29血液   12   18   11   10
所显示的结果是相对于HPRT基因的表达的表达倍数。显示了在单次静脉内注射250μg时所示的肝脏中IL-29诱导的OAS的样品数据。所示数据是来自5个不同动物/组的平均表达。
表26
  注射  OAS(24小时)
  无  1.8
  IL-29 10μg  3.7
  IL-29 50μg  4.2
  IL-29 250μg  6
                                                                表27
MetIL-29-PEG                        MetIL-29C172S-PEG                                                          未实验的
  3小时   6小时   12小时   24小时   3小时   6小时   12小时   24小时   24小时
 PKR   18.24   13.93   4.99   3.77   5.29   5.65   3.79   3.55   3.70
 OAS   91.29   65.93   54.04   20.81   13.42   13.02   10.54   8.72   6.60
 Mx1   537.51   124.99   33.58   35.82   27.89   29.34   16.61   0.00   10.98
用100μg蛋白静脉内注射小鼠。显示的数据是相对于来自小鼠的肝脏的HPRT表达的表达倍数。从小鼠的血液和脾脏获得相似的数据。
                       实施例24
            IL-28和IL-29在小鼠中诱导ISG蛋白
为分析人IL-28和IL-29对ISG蛋白(OAS)的诱导的效应，就OAS的活性检测来自经IL-28和IL-29处理的小鼠的血清和血浆。
用PBS或不同浓度(10μg-250μg)的人IL-28或I L-29静脉内注射C57BL/6小鼠。在不同的时间点从小鼠分离血清和血浆，使用来自EikenChemicals(Tokyo，Japan)的OAS放射免疫测定(RIA)试剂盒测量OAS的活性。
IL-28和IL-29在小鼠的血清和血浆中诱导OAS活性，表明这些蛋白在体内具有生物学活性。
                                     表28
  注射   OAS-1小时   OAS-6小时   OAS-24小时   OAS-48小时
  无   80   80   80   80
  IL-29   80   80   180   200
对于单一浓度(250μg)的人IL-29，以pmol/dL血浆显示OAS活性。
                       实施例25
               信号转导报告分子测定法
可使用信号转导报告分子测定法确定人和小鼠IL-28和IL-29与IL-28受体的功能性相互作用。在包含II类细胞因子受体(包括人DIRS1、IFNαR1、IFNαR2和IL-28受体)的cDNA的pZP7表达载体存在或不存在的情况下，用包含驱动荧光素酶报告基因转录的干扰素刺激的应答元件(ISRE)的报告质粒转染人胚胎肾(HEK)细胞。在用II类配体(包括IL-28A(SEQ ID NO：2)、IL-29(SEQ ID NO：4)、IL-28B(SEQID NO：6)、zcyto10、huI L10和huIFNa-2a)刺激转染的细胞后，荧光素酶的活性反映了配体和细胞表面上的经转染的和天然的细胞因子受体之间的相互作用。下面描述结果和方法。
细胞转染
如下转染293HEK细胞：在转染前大约18小时以700,000个293细胞/孔(6孔板)涂板在2微升DMEM+10％胎牛血清中。每孔，向总共100微升的DMEM中的9微升Fugene 6试剂(Roche Biochemicals)中加入1微克pISRE-荧光素酶DNA(Stratagene)、1微克细胞因子受体DNA和1微克pIRES2-EGFP DNA(Clontech，)。当没有包含细胞因子受体DNA时，使用2微克pIRES2-EGFP DNA。30分钟后，向预涂板的293细胞加入该转染混合物。24小时后，使用胰蛋白酶-EDTA从板中取出经转染的细胞并以大约25,000个细胞/孔重新涂板于96孔微量滴定板中。在配体刺激之前大约18小时，将培养基更换为DMEM+0.5％FBS。
信号转导报告分子测定法
如下进行信号转导报告分子测定法：在37℃下在DMEM+0.5％FBS中温育18小时后，用下列II类配体的稀释物(在DMEM+0.5％FBS中)刺激经转染的细胞；所述配体是IL-28A、IL-29、IL-28B、zcyto10、huIL10和huIFNa-2a。在37℃下温育4小时后，裂解细胞，在加入荧光素酶底物后在光度计上测量相对光单位(RLU)。所得的结果表示为，相对于单独的培养基对照，实验样品的RLU的诱导倍数(实验样品的RLU/单独的培养基的RLU＝诱导倍数)。表29显示，IL-28A、IL-29和IL-28B在用ISRE-荧光素酶转染的293细胞中诱导ISRE信号转导，相对于单独的培养基，在荧光素酶的活性上产生15至17倍的诱导。使用内源CRF2-4(SEQ ID NO：71)，向转染混合物中加入IL-28受体α亚基DNA(SEQ IDNO：11)，导致6至8倍的由IL-28A、IL-29和IL-28B诱导的ISRE信号转导的进一步诱导，产生104至125倍总诱导。其他转染的II类细胞因子受体DNA中没有一种导致增加的ISRE信号转导。这些结果表明IL-28A、IL-29和IL-28B功能性地和IL-28细胞因子受体相互作用。表29也显示huIFNa-2a可在经ISRE-荧光素酶转染的293细胞中诱导ISRE信号转导，和单独的培养基相比，产生205倍的荧光素酶活性的诱导。然而，向转染物中加入IL-28受体DNA导致ISRE-信号转导减少11倍(和单独的ISRE-荧光素酶DNA相比)，表明IL-28受体的过量表达，和IL-28受体的过量表达对IL-28A、IL-29和IL-28B信号转导的正效应相反，对干扰素信号转导产生负效应。
                          表29
  II类细胞因子刺激后经转染的293细胞的干扰素刺激的应答元件
               (ISRE)的信号转导(诱导倍数)
  配体   ISRE-Luc.   ISRE-Luc./IL-28R
  IL-28A(125ng/ml)   15   125
  IL-29(125ng/ml)   17   108
  IL-28B(125ng/ml)   17   104
  HuIFNa-2a(100ng/ml)   205   18
  Zcyto10(125ng/ml)   1.3   1
  HuIL10(100ng/ml)   1   0.5
                        实施例26
         关于IL-29半胱氨酸突变体的信号转导测定法
细胞转染
为产生稳定地过量表达人IL-28受体的293HEK细胞，如下转染293细胞：在转染前大约6小时以300,000个293细胞/孔(6孔板)涂板在2毫升DMEM+10％胎牛血清中。每孔，向总共100微升的DMEM中的6微升Fugene6试剂(Roche Biochemicals)中加入2微克包含人IL-28受体α亚基(SEQ ID NO：11)的cDNA的pZP7表达载体。30分钟后，向预涂板的293细胞加入该转染混合物。48小时后，将经转染的细胞置于2微克/毫升嘌呤霉素下进行选择。以细胞群体的方式保持嘌呤霉素抗性细胞。
如下转染过量表达人IL-28受体的293HEK细胞：在转染前大约18小时以700,000个293细胞/孔(6孔板)涂板在2毫升DMEM+10％胎牛血清中。每孔，向总共100微升的DMEM中的3微升Fugene 6试剂(RocheBiochemicals)中加入1微克包含驱动荧光素酶报告基因转录的干扰素刺激的应答元件(ISRE)的KZ157。30分钟后，向预涂板的293HEK细胞加入该转染混合物。48小时后，通过使用胰蛋白酶-EDTA，从板中取出经转染的细胞并以500微克/ml G418(Geneticin，Life Technologies)涂板。以细胞群体的方式保持嘌呤霉素和G418抗性细胞。
信号转导报告分子测定法
如下进行信号转导报告分子测定法：用胰蛋白酶-EDTA处理过量表达人IL-28受体和包含KZ157的293HEK细胞，将其以大约25,000细胞/孔涂板在96孔微量培养板中。配体刺激前大约18个小时，将培养基更换为DMEM+0.5％FBS。
在37℃下在DMEM+0.5％FBS中温育18小时后，用不同形式的来源于大肠杆菌的包含不同半胱氨酸结合模式的zcyto21的稀释物(在DMEM+0.5％FBS中)刺激经转染的细胞。在37℃下温育4小时后，裂解细胞，在加入荧光素酶底物后在光度计上测量相对光单位(RLU)。所得的结果表示为相对于单独的培养基对照的实验样品的RLU的诱导倍数(实验样品的RLU/单独的培养基的RLU＝诱导倍数)。
表30显示，来源于野生型大肠杆菌的IL-29的C1-C3形式(C16-C113)能比野生型C3-C5形式(C113-C172)或野生型C1-C3形式和C3-C5形式的混合物(C16-C113，C113-C172)更好地诱导ISRE信号转导，所有形式都参照SEQ ID NO：15。
表31显示来源于野生型大肠杆菌的IL-29的C1-C3(C16-C113)和来源于半胱氨酸突变(C172S)体大肠杆菌的IL-29(SEQ ID NO：29)的C1-C3(C16-C113；SEQ ID NO：15)能够同样地在过量表达人IL-28受体的293HEK细胞中诱导ISRE信号转导。
                       表30
由不同形式的来源于大肠杆菌的IL-29诱导的ISRE信号转导(诱
                      导倍数)
  细胞因子浓度(ng/ml)   C1-C3形式(C16-C113)   C3-C5形式(C113-C172)   C1-C3和C3-C5的混合物
  100   36   29   34
  10   38   25   35
  1   32   12   24
  0.1   10   2   5
  0.01   3   1   1
  0.001   1   1   1
                       表31
由不同形式的来源于大肠杆菌的IL-29诱导的ISRE信号转导(诱
                      导倍数)
  细胞因子浓度(ng/ml)   野生型C1-C3   半胱氨酸突变体C172SC1-C3
  1000   9.9   8.9
  100   9.3   8.7
  10   9.3   8.1
  1   7.8   7
  0.1   4.6   3.3
  0.01   1.9   1.5
  0.001   1.3   0.9
                    实施例27
      人IL-29对B细胞的效应和IL-29毒性皂草素融合物
检测人IL-29对下列人B细胞系的效应：人布凯特氏淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma)细胞系Raji(ATCC No.CCL-86)、Ramos(ATCCNo.CRL-1596)；人EBV B细胞淋巴瘤细胞系RPMI 1788(ATCC No.CRL-156)；人骨髓瘤/浆细胞瘤细胞系IM-9(ATCC No.CRL159)；和经人EBV转化的B细胞系DAKIKI(ATCC No.TIB-206)，和HS Sultan细胞(ATCC No.CRL-1484)。在用IL-29处理大约2-5天后，细胞中表面标记物表达上的变化显示这些细胞可对IL-29作出反应。用IL-29处理的人B细胞系，当重新涂板在细胞培养皿中时远比未处理的细胞生长慢。这些细胞也具有增加的FAS配体的表达，如通过流式细胞仪所估计的一样(实施例27D和实施例27E)，和适当增加的对激活性FAS抗体的敏感度(实施例27A)。这些结果表明IL-29可通过诱导B细胞赘生物的一些类型分化成较少增殖和/或更具FAS配体敏感状态来控制其。此外，IL-28受体在几种B和T细胞系的表面表达(实施例16)。因此，可将IL-29和人IL-29-皂草素免疫毒素缀合物(实施例27B，下面)、或其他IL-29-毒素融合物治疗性地用于B细胞白血病和淋巴瘤。
A.人IL-29对B细胞系的效应
以大约50,000细胞/ml+/-50μg/ml纯化的人IL-29接种IM-9细胞。在3天的生长后，收获细胞，洗涤细胞，计数，然后以大约2500细胞/ml将其重涂板于96孔板中具有0、0.033、0.1或0.33μg/ml抗FAS抗体(R&D Systems，Minneapolis)的小孔中。2天后，进行Alamar blue荧光测定法(参见美国专利号6,307,024)以估计细胞的增殖。
在抗FAS抗体不存在的情况下，相对于未经处理的细胞，经IL-29处理的IM-9细胞的生长受到抑制。在0.33μg/ml抗FAS抗体存在的情况下，经IL-29处理的细胞受到更进一步的抑制。
B.人IL-29-皂草素免疫毒素对B细胞系的效应
实施例28中描述了人IL-29-皂草素免疫毒素缀合物(IL-29-sap)的构建和纯化。人IL-29-sap在抑制细胞生长上远比单独的皂草素更有效。当在3或4天的处理后，将经处理的细胞重涂板时，经人IL-29-sap处理的细胞生长非常差。
以大约2500细胞/孔将IM-9、Ramos和K562(ATCC No.CCL-243)细胞接种在96孔板中，该板具有0至250ng/ml的人zalpha11L-sap缀合物或0-250ng/ml仅作为对照的皂草素(Stirpe等人， Biotechnology 10：405-412，1992)。将板温育4天，然后进行Alamar Blue增殖测定法(美国专利号6,307,024)。在人IL-29-sap缀合物的最高浓度下，细胞的生长被抑制。就IL-28受体的表达而言，细胞系低表达/阴性者不受IL-29-sap的影响，从而显示缀合物的效应的特异性。
在0和50ng/ml的人zalpha11L-sap缀合物下，以50,000细胞/ml将IM-9细胞接种入6孔板中。3天后收获细胞，对细胞计数，然后以2倍的系列稀释度将细胞以每孔100至0.8个细胞重涂板，每个细胞稀释度12个孔，不加入人IL-29-皂草素免疫毒素。6天后，根据Alamar blue增殖测定法的结果对每一细胞稀释度下具有生长的小孔的数目进行评分。
当通过Alamar blue测定法估计细胞数目时，存活的经处理的IM-9细胞的生长显著受损，即使通过重涂板除去IL-29-sap免疫毒素后亦如此。
人IL-28受体的受限的组织分布，和IL-29-sap对表达受体的细胞系的作用的特异性表明该缀合物可在体内被耐受。
C.人IL-29-皂草素免疫毒素对B细胞系存活力的影响
以大约40,000细胞/ml将HS Sultan细胞(ATCC No.CRL-1484)接种在12孔板中，在不加入细胞因子或加入40ng/ml纯化的人IL-29或25ng/ml人IL-29-sap缀合物(实施例28，下面)或20ng/ml IFN-α(RDI)或IL-29和IFN-α的情况下培养5天。IL-29和IFN-α抑制细胞的生长，表明人IL-29和IFN-α的生长抑制作用可以是累加的。
上面的结果支持IL-29或人IL-29-sap在恶性肿瘤或表达IL-28受体特别是B细胞来源的受体的其他疾病的治疗中的可能用途。因其在HSSultan细胞的抑制中的累加效应，特别地建议使用IL-29和IFN-α的组合。淋巴样恶性肿瘤和疾病的一些其他类型也可表达IL-28受体，由于被激活的T细胞也表达该受体mRNA，因此这些疾病中的一些也可对IL-29-毒性融合物疗法的IL-29起反应。
D.人IL-29的刺激增加人B细胞系中FAS(CD95)的表达
人B细胞系HS Sultan(ATCC No.CRL-1484)、IM-9(ATCC No.CRL159)、RPMI 8226(ATCC No.CCL-155)、RAMOS(ATCC No.CRL-1596)、DAKIKI(ATCC No.TIB-206)和RPMI 1788(ATCC No.CRL-156)都用或不用纯化的10至50ng/ml人IL-29处理2至8天。按照厂商的实验方案，然后用抗CD95PE缀合的抗体(PharMingen，San Diego，CA)对细胞进行染色，在FACScalibur(Becton Dickinson，San Jose，CA)上进行分析。在所有细胞系中，在用人IL-29处理后，抗CD95(FAS或APO-1)染色增强。
E.人IL-29的刺激增加原代小鼠脾B细胞中FAS(CD95)的表达
通过从8至12周大小的C57/BL6小鼠中切取脾脏来获得原代小鼠脾细胞。通过用水处理制备物5秒来裂解红细胞，然后将其通过70微米的筛子。洗涤剩下的脾细胞并涂板在RPMI(JRH Bioscience)和10％HIA-FBS(Hyclone，Logan，UT)中。如上所述，将IL-2(R&DSystems)和或不和人IL-29一起使用。然后将其在37℃下、5％CO2中温育5天。按照厂商的方案，收获脾细胞并用抗CD95PE缀合的抗体(PharMingen)和抗CD19FITC缀合的抗体(PharMingen)进行染色。在FACScalibur(Becton Dickinson)上通过流式细胞仪对细胞进行分析。
                     实施例28
            IL-29毒性融合物的构建和纯化
将10mg人IL-29缀合至植物毒素皂草素(Stirpe等人，Biotechnology  10，：405-412，1992)。所得的1.3mg蛋白缀合物由每个人IL-29分子1.1个皂草素分子构成，20nM磷酸钠、300nM氯化钠、pH 7.2中以1.14mg/ml的浓度配制。
                      实施例29
                  体内IL-29毒性融合物
A.检测小鼠中的IL-29-皂草素缀合物
以两种不同的剂量：0.5和0.05mg/kg给C57BL6小鼠(雌性，12周大小，购自Taconic)施用IL-29-皂草素缀合物(实施例27)。静泳内注射由0.1％BSA(ICN，Costa Mesa，CA)组成的媒介物。一周的时间内进行3次注射(第0、2和7天)。在第0(注射前)和第2天以及第8天(注射后)从小鼠采集血液样品。将血液收集入肝素化的管(BectinDickenson，Franklin Lakes，NJ)内，使用自动血液学分析仪(AbbotCell-Dyn model No.CD-3500CS，Abbot Park，IL)确定细胞数量。在第8天血液收集后，对小鼠施用无痛致死术和进行尸体剖检。收集脾脏、胸腺、肝脏、肾脏和骨髓以用于组织病理学。称取脾脏和胸腺的重量，将额外的血液样品收集在血清分离器管中。在标准的化学方案中检测血清。也收集样品以用于此处描述的流式细胞仪分析。
B.体内检测IL-29毒性皂草素融合物对来源于B细胞的肿瘤的效应
使用此处描述的小鼠肿瘤异种移植物模型在体内检测人IL-29和人IL-29毒性皂草素融合物(实施例28)对人肿瘤细胞的效应。最初使用基于体外实验，例如实施例27中描述的实验选择的细胞系检测异种移植物模型。这些细胞系包括，但不限于：人Burkitt淋巴瘤细胞系Raji(ATCC No.CCL-86)、和Ramos(ATCC No.CRL-1596)；人细胞系RPMI 1788(ATCC No.CRL-156)；人骨髓瘤/浆细胞瘤细胞系IM-9(ATCC No.CRL159)；人细胞系DAKIKI(ATCC No.TIB-206)，和HS Sultan细胞(ATCC No.CRL-1484)。也可在该类型的模型中使用直接来自人肿瘤的细胞。通过该方法，就对使用IL-29或IL-29毒性皂草素融合物的疗法敏感的患者的筛查可用于选择zalpha11在抗癌治疗中的用途的最佳指征。
在选择合适的上述异种移植物体内模型后，在体内估计IL-29诱导的天然杀伤细胞的活性和/或IL-29对来源于B细胞的肿瘤的效应。就其产生细胞毒性效应细胞(例如，NK细胞)的能力使用此处描述的小鼠肿瘤异种移植物模型来检测人IL-29，所述效应细胞具有抗来源于B细胞的肿瘤的活性。此外，可估计人IL-29对肿瘤的直接效应。如上所述选择要进行的异种移植模型。发展使用IL-29刺激的人细胞的方案并检测消除肿瘤细胞和提高用细胞系或原代肿瘤接种的小鼠的存活率的功效。
                       实施例30
         IL-29在体内对来源于B细胞的肿瘤的效应
A.使用微型渗透泵(mini-osmotic pumps)进行的IL-29的输注
通过使用微型渗透泵恒量输注IL-29的施用导致和泵中装有的IL-29的浓度成比例的稳定状态的血清浓度。在无菌条件下将0.22ml2mg/ml或0.2mg/ml浓度的磷酸缓冲盐溶液(pH 6.0)中的人IL-29装入Alzet微型渗透泵(2004型；Alza corporation Palo Alto，CA)。通过背部皮肤的1cm的切口将泵皮下移植入小鼠，用无菌伤口缝合线缝合皮肤。这些泵经设计用于在28天内以每小时0.25μl的速度递送其内容物。该施用方法导致用肿瘤细胞注射的小鼠中的存活率的显著增加(下面)。
B.IL-29对来源于B细胞的肿瘤的体内效应
使用此处描述的小鼠肿瘤异种移植物模型检测人IL-29的体内效应。待检测的异种移植物模型是人成淋巴细胞样细胞系IM-9(ATCC No.CRL159)。将C.B-17SCID小鼠(雌性C.B-17/IcrHsd-scid；Harlan，Indianapolis，Indiana)分成4组。在第0天，从培养物收获IM-9细胞(ATCC No.CRL159)，并通过尾部静脉将其静脉内注射入所有小鼠(每只鼠大约1,000,000个细胞)。在第1天，将装有受试检品或对照品的微型渗透泵皮下移植入小鼠。用浓度不断增加的IL-29处理1-3组中(每组n＝9)中的小鼠：组1包含2.0mg/mL人IL-29并且每天递送12μg；组2包含0.20mg/mL人IL-29并且每天递送1.2μg；组3包含0.02mg/mL人IL-29并且每天递送0.12μg。组4(n＝9)中的小鼠是对照，用媒介物(PBS pH 6.0)进行处理。
和经媒介物处理的小鼠相比，用12μg/天或1.2μg/天IL-29输注的小鼠具有增加的存活率(对于12μg/天或1.2μg/天对媒介物，分别为p＜.0001或p＜.005，使用存活率函数的log排序检验)。这些结果显示IL-29在体内显著地减少B细胞肿瘤细胞的效应，明显地导致增加的存活率。
                        实施例31
IL-29在B16-F10黑色素瘤和EG.7胸腺瘤模型中的体内抗肿瘤
                           效应
A.鼠类IL-29在体内对B16-F10黑色素瘤转移灶生长的效应
将小鼠(雌性，C57B16，9周大小；Charles River Labs，Kingston，NY)分成3组。在第0天，从培养物收获B16-F10黑色素瘤细胞(ATCC No.CRL-6475)，通过尾部静脉将其静脉内注射入所有小鼠(每只小鼠大约100,000个细胞)。然后通过腹膜内注射0.1ml指定溶液用检品或关联媒介物来处理小鼠。用媒介物(PBS pH 6.0)处理第1组(n＝24)中的小鼠，在第0、2、4、6和8天注射该媒介物。用zcyto24或zcyto25处理第2组(n＝24)中的小鼠，在第0、2、4、6和8天注射75μg的该zcyto24或zcyto25。用zcyto24或zcyto25处理第3组(n＝12)中的小鼠，从第0天至第9天每天以75μg的剂量注射该zcyto24或zcyto25。在第18天杀死所有小鼠，收集肺以进行肿瘤的定量。计数各肺叶的所有表面上的直径大于0.5mm的肿瘤生长的病灶。在用zcyto24或zcyto25处理的两组小鼠中，和用媒介物处理的小鼠相比，肺上出现的肿瘤病灶的平均数目都显著减少。更频繁(即每天)处理的小鼠具有比隔日处理的小鼠更少的肿瘤病灶。
这些结果表明，使用zcyto24或zcyto25的处理减缓了B16黑色素瘤肿瘤的生长或增强了免疫系统破坏肿瘤细胞的能力。对肿瘤细胞的处理效应可能通过具有IL-29的受体的免疫系统的细胞介导。
B.鼠类IL-29对EG.7胸腺瘤生长的体内效应
将小鼠(雌性，C57B16，9周大小；Charles River Labs，Kingston，NY)分成3组。在第0天，从培养物中收获EG.7细胞(ATCCNo.CRL-2113)，将1,000,000个细胞腹膜内注射入所有小鼠。通过腹膜内注射0.1mL的指定溶液用检品或关联性媒介物处理小鼠。用媒介物(PBS pH 6.0)处理第1组(n＝6)中的小鼠，在第0、2、4和6天注射该媒介物。用zcyto24或zcyto25处理第2组(n＝6)中的小鼠，在第0、2、4和6天以10μg的剂量注射所述物质。用cyto24或zcyto25处理第3组(n＝6)中的小鼠，在第0、2、4和6天以75μg的剂量注射所述物质。在用zcyto24或zcyto25处理的两组小鼠中，和用媒介物处理的小鼠相比，存活时间显著增加。这些结果表明用zcyto24或zcyto25的处理减缓了EG.7肿瘤的生长或增强了免疫系统破坏肿瘤细胞的能力。
                       实施例32
              流式细胞仪分析IL-28受体的表达
确定IL-28受体在来源于非何杰金氏淋巴瘤(NHL)样品的瘤形成性B细胞上的表达。使用多种MAb鉴定瘤形成性B细胞和鉴定共定位的IL-28受体。将通过抗IL-28受体MAb或通过生物素-IL-29的免疫荧光染色记录为平均峰值荧光。基于相对于和对照Mab匹配的同种型的平均峰值荧光的偏移确定定性评分。
使用抗IL-28受体MAb或生物素-IL-29通过免疫荧光染色检测瘤形成性B细胞上的IL-28受体。染色信号的强度和IL-28受体的水平关联。这些数据表明IL-28受体代表了非何杰金氏淋巴瘤的治疗靶。
                       实施例33
             IL-29对B细胞淋巴瘤的体内效应
通过在生长培养基中传代在体外维持人B淋巴瘤细胞系。充分地在PBS中洗涤细胞以除去培养组分。
通过尾部静脉以100微升的体积用(通常地)一百万人淋巴瘤细胞注射SCID小鼠。在先导研究中凭经验确定注射细胞的最佳数目以使肿瘤符合想要的动力学。第2天通过皮下移植ALZET渗透微型泵(ALZET，Cupertino，CA)或通过每天腹膜内注射IL-29或媒介物开始进行IL-29处理。就存活率和严重病态监测小鼠。杀死其原始体重减轻超过20％的小鼠和表现出充分不健全例如后肢肢体麻痹的小鼠。依赖于使用的淋巴瘤细胞，未处理的小鼠通常在3至6周内死亡。对于分泌IgG或IgM的B细胞淋巴瘤，也可通过每周的血液取样和通过ELISA测量血清中人免疫球蛋白水平来监控疾病的进展。
IL-29的剂量响应/IM-9模型
用1×106IM-9细胞注射小鼠，第2天移植28天的渗透微型泵。用下列被递送的IL-29的浓度装载泵：0、0.12、1.2或12微克/天，每剂量组8只小鼠。IL-29在保护小鼠免受肿瘤细胞系侵害上表现出明显的剂量依赖性效应。IL-29的效应是剂量依赖性的。实验末期存活的小鼠没有疾病的症状，在其血清中没有可检测的人IgG。
这些数据表明IL-29在SCID小鼠淋巴瘤模型中的功效和体内抑制淋巴瘤细胞系生长的能力相关。
                      实施例34
         IL-29在小鼠同系基因型卵巢癌模型中的效应
使用Zhang等人， Am.J.of Pathol.  161：2295-2309，2002中描述的小鼠同系基因型模型就卵巢癌中的功效对IL-29的效应进行检测。简而言之，使用逆转录病毒转染和荧光激活的细胞分选，产生稳定地过量表达鼠类VEGF164同种型和增强的绿色荧光蛋白(GFP)的C57BL6鼠类ID8卵巢癌细胞系。将包含VEGF164和GFP cDNA的逆转录病毒构建体转染入BOSC23细胞。通过FACS细胞分选术分析细胞，鉴定GFP高阳性细胞。
将ID8 VEGF164/GFP转染的细胞培养至亚汇合状态并在磷酸缓冲盐(PBS)和冷MATRIGEL(BD Biosciences，Bedford，MA)中制备单细胞悬浮物。以5×106个细胞或未转染的对照细胞在侧腹皮下注射6至8周大小的雌性C57BL6小鼠。可选择地，以7×106个细胞或对照细胞腹膜内注射小鼠。在接种后8周，动物存活或被处死，并就肿瘤的生长对其进行评估。在肿瘤移植后3-14天，或当建立肿瘤移植物移入和生长速率时，开始用重组zcyto24或zcyto25处理小鼠。每天施用0.5-5mg/kg的处理水平，进行5-14天，如果没有看到中和抗体形成的迹象，可继续施用。
                      实施例35
           IL-29在小鼠RENCA模型中的效应
基本上如Wigginton等人， J.Nat.Cancer Instit.  88：38-43，1996中描述的，使用已用RENCA细胞(自然发生的小鼠肾细胞癌)注射的BALB/c小鼠评估IL-29在肾细胞癌模型中的效应。
简而言之，用RENCA细胞注射8至10周大小的BALB/c小鼠，将R1X105个细胞注射入小鼠的肾囊。在肿瘤细胞移植12天后，对小鼠进行肾切除术以除去原发性肿瘤。在施用IL-29之前，使小鼠从手术中恢复。在肿瘤移植后3-14天，或当建立肿瘤移植物移入和生长速率时，开始用重组zcyto24或zcyto25处理小鼠。每天施用0.5-5mg/kg的处理水平，进行5-14天，如果没有看到中和抗体形成的迹象，可继续施用。可选择地，可通过皮下(5×10e5个细胞)或静脉内(1×10e5个细胞)注射导入RENCA细胞。
就和未处理小鼠比较的肿瘤应答对细胞进行评估。使用卡普兰-迈耶(Kaplan-Meier)法比较存活率以及评估肿瘤体积。
                      实施例36
            IL-29在小鼠结肠直肠肿瘤模型中的效应
如Yao等人， Cancer Res.  63：586-592，2003中描述的检测IL-29在结肠直肠小鼠模型中的效应。在该模型中，将MC-26小鼠结肠肿瘤细胞移植入BALB/c小鼠的脾包膜下(subcapsul)。14天后，给经处理的小鼠施用IL-29。在肿瘤移植后3-14天，或当建立肿瘤移植物移入和生长速率时，开始用重组zcyto24或zcyto25处理小鼠。每天施用0.5-5mg/kg的处理水平，进行5-14天，如果没有看到中和抗体形成的迹象，可继续施用。
使用此处描述的标准技术评估IL-29延长存活时间或提高肿瘤应答的功效。
                      实施例37
             IL-29在小鼠胰腺癌模型中的效应
使用由Mukherjee等人， J.Immunol.  165：3451-3460，2000发展的方案评估IL-29在小鼠胰腺癌模型中的功效。简而言之，将MUC1转基因(MUC1.Tg)小鼠和表达癌基因的自发地发生胰腺肿瘤的小鼠(ET小鼠)交配，产生称为MET.MUC1.Tg的小鼠。ET小鼠表达在大鼠弹性蛋白酶启动子控制之下的SV40大T Ag的前127个氨基酸。50％的动物在大约21周大小时发展了威胁生命的胰腺肿瘤。通过流式细胞仪就MUC1的存在常规地检测细胞。所有小鼠都是C57BL/6背景。从第3周至24周每隔3周杀死和表征动物。就疾病-健康的体征，包括昏睡、腹部膨胀、不能饮食或饮水、明显的体重减轻、灰白粪和驼背姿态仔细观察小鼠。
解剖整个胰腺，除去脂肪和淋巴节，称重，并在吸水纸上展开以进行照相。计数小瘤，将胰腺在乙酰胺甲氧基苯(methacarn)中固定，通过常规方法加工以用于显微镜观察，即以5μm厚度逐层切片(每个小鼠胰腺大约10个切片)，用苏木精和伊红染色，通过光学显微镜检查。在肿瘤进展期间的各个时间点上从MET小鼠获得肿瘤，将其在乙酰胺甲氧基苯(60％甲醇、30％氯仿、10％冰醋酸)中固定，包埋在石蜡中，切片以用于免疫组织化学分析。所用的MUC1抗体是CT1，即识别MUC1、HMFG-2、BC2和SM-3的小鼠和人胞质尾区的兔多克隆Ab，其在MUC1的TR结构域中具有表位。
在不另外加入细胞因子的情况下，在体外肽刺激6天后，使用标准的51Cr释放法确定CTL活性。通过经过尼龙过滤网，然后裂解RBC来收获来自个体MET小鼠的脾细胞。
通过两色免疫荧光法就淋巴细胞亚群：CD3、CD4、CD8、Fas、FasL、CD11c以及I类和II类MHC的变化分析来自MET小鼠的脾脏的单个细胞。按照厂商说明书(染色前，在37℃下温育4μl/1.2×107个细胞/6ml 3小时)，在用MUC1肽(10μg/ml，进行6天)刺激和用布雷菲德菌素A(brefeldin-A)(也称作Golgi-Stop；PharMingen)处理细胞后，确定细胞内细胞因子水平。使用PharMingen透化试剂盒透化细胞并如由PharMingen所描述的就细胞内IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-5对细胞进行染色。所有荧光标记的Ab购自PharMingen。使用CellQuest程序(BectonDickinson，Mountain View，CA)在Becton Dickinson FACscan上进行流式细胞仪分析。
在肿瘤移植后3-14天，或当建立肿瘤移植物移入和生长速率时，开始用重组zcyto24或zcyto25处理小鼠。每天施用0.5-5mg/kg的处理水平，进行5-14天，如果没有看到中和抗体形成的迹象，可继续施用。
                       实施例38
             IL-29在鼠类乳腺癌模型中的效应
使用Colombo等人， Cancer Research  62：941-946，2002中描述的同系基因型模型确定IL-29在鼠类乳腺癌模型中对乳腺癌的功效。简而言之，TS/A细胞是BALB/C小鼠的自发性乳腺癌。将所述细胞培养大约1周以选择克隆。培养选择的TS/A细胞，通过将2×102TS/A细胞皮下注射入小鼠的侧腹部来攻击CD-1 nu/nu BR小鼠(Charles RiverLaboratories)。
在肿瘤移植后3-14天，或当建立肿瘤移植物移入和生长速率时，开始用重组zcyto24或zcyto25处理小鼠。每天施用0.5-5mg/kg的处理水平，进行5-14天，如果没有看到中和抗体形成的迹象，可继续施用。在杀死动物后切下肿瘤，并就体积和使用组织化学和免疫组织化学对其进行分析。
                       实施例39
            IL-29在鼠类前列腺癌模型中的效应
使用和Kwon等人， PNAS  96：15074-15079，1999中描述的模型相似的模型，在鼠类前列腺癌模型中估计IL-29对肿瘤应答的效应。在该模型中，存在来源于小鼠前列腺转基因腺癌(TRAMP)的前列腺癌细胞系TRAMP-C2(其被移植入C57BL/6小鼠)的转移性生长。转移性复发(Metastatic relapse)是常见的，主要发生在紧密靠近原发性肿瘤的经流淋巴节中。
简而言之，所用的C2细胞系是来源于TRAMP小鼠的早期传代系，所述小鼠自发地发展可归因于受前列腺限制的SV40抗原表达的自身肿瘤。培养所述细胞并将其以2.5-5×106细胞/0.1ml培养基经皮下注射入C57BL/6小鼠。在肿瘤移植后3-14天，或当建立肿瘤移植物移入和生长速率时，开始用重组zcyto24或zcyto25处理小鼠。每天施用0.5-5mg/kg的处理水平，进行5-14天，如果没有看到中和抗体形成的迹象，可继续施用。在杀死动物后切下肿瘤，并就体积和使用组织化学和免疫组织化学对其进行分析。
                     实施例40
IL-28和IL-29在鼠类实验性变应性脑脊髓炎(EAE)模型中的效应
实验性变应性脑脊髓炎(EAE)是人多发性硬化症(MS)的小鼠模型( Gold等人， Mol.Med.Today，6：88-91，2000；Anderton等人，Immunol.Rev.， 169：123-137，1999)。存在多种在小鼠中诱导疾病的方法。一个这样的方法是用髓鞘质蛋白髓鞘质少突胶质细胞糖蛋白(MOG)的肽免疫小鼠。该蛋白存在于髓鞘的外侧并充当髓鞘质的保护层。在第0天用在RIBI佐剂中乳化的MOG肽(MOG35-55)皮下免疫小鼠。然后在第2天用百日咳毒素(PT)静脉内注射小鼠。小鼠开始显示始于软弱的尾部、摇摆不稳的运动的麻痹症状，然后后肢和前肢瘫痪，根据测量疾病的时期、程度和严重性的几种不同的参数对其进行评分。疾病发生的延迟表明药物在小鼠中改变疾病过程。发病率的减少表明药物对生病的小鼠的数目起作用。临床评分的减少表明药物对疾病的严重度有作用。给成组的小鼠提供PBS或小鼠IL28(SEQ ID NO：8)或人IL29C172S(SEQ ID NO：29)-PEG。经IL-28/29处理的小鼠中的症状的发生、发病率的评分和疾病严重度的评分表明IL-28/29对该模型中的这些参数的作用。在第0天用100ug RIBI佐剂中的MOG35-55皮下免疫小鼠(n＝13/组)。所有小鼠在第2天静脉内接受200ng百日咳毒素。在第1-18天隔日(EOD)用PBS、25ug人IL29C172S或用PBS、BSA或小鼠IL28腹膜内处理成组的小鼠。如上面所详细说明的，从第0天至第30天每天就临床症状和体重减轻对小鼠评分。经IL29C172S(SEQ ID NO：29)-PEG或小鼠IL28(SEQ ID NO：8)处理的小鼠，和PBS处理的动物相比，显示了疾病发病的延迟。
                               表32
  处理组D0-18(EOD)  发病的平均天数(MDO)   P值(对PBS组)Mantel-Cox检测
  PBS   21.1±4.7   -
  25ug人IL29C172S-PEG   28.8±4.5   0.0006
                         表33
  处理组1-21天EOD  发病的平均天数(MDO)   P值(对PBS组)Mantel-Cox检测
  PBS   8.6±1.6   -
  130ug BSA   8.6±1.3   NS
  130ug mIL28   12.2±3.3   P＝0.0009(PBS)P＝0.001(BSA)
                           表34
  处理组1-11天EOD  发病的平均天数(MDO)   P值(对PBS组)Mantel-Cox检测
  PBS   9.5±2.5   -
  50ug mIL28   12.4±3.8   P＝0.0354
  200ug mIL28   13.5±3.2   P＝0.0007
IL-29在多发性硬化症的小鼠模型中延迟疾病的发生
A.概述
为检验人IL-29是否对多发性硬化症具有任何效应，检测IL-29抑制实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)(MS的小鼠模型)的能力。使用在C57BL/6小鼠中良好表征的髓鞘质少突胶质细胞糖蛋白(MOG)的35-55肽免疫模型。进行实验以确定IL-29可在EAE中延迟和/或抑制疾病评分。IL-29在EAE模型中延迟疾病的发生，表明IL-29的使用在MS中是有益的。
B.研究设计
实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)是MS的小鼠模型。在一个这样的模型中，用在RIBI佐剂中乳化的100μg MOG肽(MOG35-55)免疫C57BL/6小鼠。向RIBI的瓶中加入2毫升0.5mg/ml的PBS中的MOG35-55制剂，剧烈地涡旋以乳化溶液。修剃小鼠的背部，将100μg MOG/RIBI皮下注射入小鼠的背部。在免疫前2天和免疫后每天称取小鼠的重量。然后在第2天用200μl百日咳毒素(PT)静脉内注射小鼠，终浓度为200ng/小鼠。每天就临床评分监测小鼠。从第0-18天隔日用200μlPBS、或200μl体积的25ug IL-29C172S(SEQ ID NO：29)-PEG腹膜内注射成组的小鼠。评估小鼠的体重、临床评分和发病率并作图以进行分析。
C.结果和结论
从第0-18天IL-29的隔日施用在该模型中延迟了疾病的发生。该延迟和经PBS处理的小鼠相比是显著的(p＝0.0006，Mantel-Cox检测)。
IL-28在多发性硬化症的小鼠模型中延迟疾病的发生
A.概述
为检验鼠IL-28是否对多发性硬化症具有任何效应，检测IL-28抑制实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)(MS的小鼠模型)的能力。使用在C57BL/6小鼠中良好表征的髓鞘质少突胶质细胞糖蛋白(MOG)的35-55肽免疫模型。进行实验以确定IL-28可在EAE中延迟和/或抑制疾病评分。IL-28在EAE模型中延迟疾病的发生，表明IL-28的使用在MS治疗中是有益的。
B.研究设计
实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)是MS的小鼠模型。在一个这样的模型中，用在RIBI佐剂中乳化的100μg MOG肽(MOG35-55)免疫C57BL/6小鼠。向RIBI的瓶中加入2毫升0.5mg/ml的PBS中的MOG35-55制剂，剧烈地涡旋以乳化溶液。修剃小鼠的背部，将100μg MOG/RIBI皮下注射入小鼠的背部。在免疫前2天和免疫后每天称取小鼠的重量。然后在第2天用200μl百日咳毒素(PT)静脉内注射小鼠，终浓度为200ng/小鼠。每天就临床评分监测小鼠。在一个实验中，从第1-11天隔日用200μl PBS、200μl体积的50ug mIL28或200ug mIL-28(SEQID NO：8)腹膜内注射成组的小鼠。在第二个实验中，从第1-21天隔日用200μl PBS、200μl体积的130ug BSA或130ug mIL-28(SEQ IDNO：8)腹膜内注射成组的小鼠。评估小鼠的体重、临床评分和发病率并作图以进行分析。
C.结果和结论
IL-28的隔日施用在该模型中以剂量依赖性的方式延迟了疾病的发病。该延迟和经PBS或BSA处理的小鼠相比是显著的。
                      实施例41
肝瘤细胞系HepG2中的IL-29和IFNα2a的微阵列比较
A.引言
在病毒感染后，诱导I类干扰素(IFN)成为身体对病毒的免疫应答的部分。这些蛋白通过诱导干扰素刺激的基因(ISG)来抑制病毒的复制，所述基因直接地抑制病毒复制、增加NK细胞的裂解能力(Biron，C.A.1998.Role of early cytokines，including alpha and betainterferons(IFN-alpha/beta)，in innate and adaptive immuneresponses to viral infections.Semin Immunol 10：383-90)和通过增加I类MHC的表达调节适应性免疫应答以提高抗原呈递(Fellous，M.，Nir，U.，Wallach，D.，Merlin，G.，Rubinstein，M.，和Revel，M.1982.Interferon-dependent induction of mRNA for the majorhistocompatibility antigens in human fibroblasts andlymphoblastoid cells.Proc Natl Acad Sci USA 79：3082-6)、提高T细胞生存(Marrack，P.，Kappler，J.，and Mitchell，T.1999.Type I interferons keep activated T cells alive.J Exp Med189：521-30)和刺激树突细胞成熟(Buelens，C.，Bartholome，E.J.，Amraoui，Z.，Boutriaux，M.，Salmon，I.，Thielemans，K.，Willems，F.，and Goldman，M.2002.Interleukin-3 and interferon betacooperate to induce differentiation of monocytes into dendriticcells with potent helper T-cell stimulatory properties.Blood99：993-8)。因为对病毒生命周期的该根本性影响，所以已证明IFNα2a是治疗丙型肝炎的有价值的治疗剂。
除了I型干扰素外，病毒感染诱导IL-28和IL-29(IFNλ1-3)的产生，这两者是最近发现的新的II类细胞因子的家族，其和IFNα和IL-10的关系不紧密。和1型IFN一样，IL28/29具有抗许多病毒的抗病毒活性(Sheppard，P.等人，2003.IL-28，IL-29 and theirclass II cytokine receptor IL-28R.Nat Immunol 4：63-8；Kotenko，S.V.等人，2003.IFN-lambdas mediate antiviral protectionthrough a distinct class II cytokine receptor complex.NatImmunol 4：69-77；和Robek，M.D.等人，2005.Lambda interferoninhibits hepatitis B and C virus replication.J Virol79：3851-4)。我们和其他人在前面已显示IL-29在原代人肝细胞和人肝癌细胞系例如HuH7和HepG2中诱导ISG Mx1、PRKR和OAS。因此IL28/29可象IFNα2a一样调节生物学活性和具有抗人患者中的慢性病毒性肝炎的治疗价值。然而，IL-29和IFNα利用不同的受体，这使得这两种细胞因子可能潜在地调节其他细胞因子特异性基因亚组和生物学过程。因此在全局规模上比较这两种细胞因子的基因调控特征谱是非常有意义的。因此，在分离总DNA和使用DNA微阵列分析法分析基因调控之前用IL-29和IFNα2a处理HepG2细胞，进行不同的时间。
B.研究设计
为鉴定在肝细胞中受IL-29和IFNα2a调控的基因，在肝癌细胞系HepG2上进行微阵列实验。对于这些实验用作为负对照的培养基、50μg/ml人IL-29(SEQ ID NO：4)或5μg/ml人IFNα2a处理HepG2细胞的三份重复培养物，进行1、6或24小时。刺激后，按照厂商说明书，使用购自QIAGEN的RNeasy Mini试剂盒提取总RNA，使用RNA6000 Nano Assay(Agilent)在Agilent 2100 Bioanalyzer中确定RNA的质量和数量。简而言之，使用购自Affymetrix的GeneChipOne-Cycle Target Labeling and Control Reagents合成生物素标记的cRNA。按照厂商说明书，将各样品的片段化的cRNA和AffymetrixHuman Genome Focus Array杂交和染色。然后在Affymetrix GeneChipScanner 3000上扫描阵列，使用Affymetrix GeneChipOperatingSoftware(GCOS)数据挖掘软件产生原始数据。然后将原始数据输入GeneSpring 7.0微阵列分析软件(Silicon Genetics)以进行数据分析目的。将低于0.01的值转化为0.01的值。使用所有存在的并具有50或更大的原始值将所有阵列的每一阵列的强度规范为第50的百分位。对中位数规范基于每个基因的值，所述中位数通过所有阵列上具有50或更大的原始值的值计算而来。使用未滤过的数据产生散布图。受IL-29调控的基因被鉴定为具有小于或等于0.05的单因子变异数分析(ANOVA)p-值，600(3倍于背景)或更大的经IL-29处理的样品中的原始强度，以及和在对应时间点上经培养基处理的样品相比具有2倍或更大的倍数变化的基因。在6小时时间点上观察到基因的最大诱导。
C.结果和结论
分析微阵列结果后发现，在HepG2细胞中都由IL-29和IFNα2a产生的基因调控似乎是短暂的，在6小时处达到峰值，然后逐渐下降。在将来自经IL-29处理的样品的数据和来自经IFNα2a处理的样品的数据比较之后，发现所有基因被这两种细胞因子类似地调控，表明IL-29和IFNα2a在肝细胞中调控相同的基因亚组。然而，在HepG2细胞中受IFNα2a诱导的程度比由IL-29引起的程度强。经鉴定为受IL-29上调(如根据列于研究设计部分的标准所确定的)的所有基因的目录在下面列于表35中。发现这些基因专门由已知的干扰素刺激的基因(ISG)组成，所述干扰素刺激的基因编码参与抗病毒反应(OAS基因、MX基因和PRKR、ADAR)、增殖的调控(IFITM1、IFITM3、CEB1)、编程性细胞凋亡(TNFSF10)和信号转导(NMI，STAT1，IRF9)的蛋白。这些数据表明IL-29在表达IL-28受体的细胞例如肝细胞中介导和由I类干扰素调控的生物学功能相同的生物学功能。
表35
  基因名称  描述   Unigene ID   IFN倍数改变  IL-29倍数改变
  IFIT1  具有三十四肽重复单位1的干扰素诱导的蛋白   Hs.20315   384.1  198.1
  IFI27  干扰素α诱导型蛋白27   Hs.532634   221.5  91.96
  OAS2  2’-5’寡腺苷酸合成酶2   Hs.414332   92.73  40.91
  MX1  粘病毒(流感病毒)抗性1   Hs.517307   81.47  42.44
  G1P3  干扰素α诱导型蛋白(克隆IFI-6-16)   Hs.523847   38.48  32.87
  CEB1  周期蛋白E结合性蛋白1   Hs.26663   34.09  4.526
  IFIT3  干扰素诱导的具有三十四肽重复单位3的蛋白   Hs.47338   33.06  12.58
  OAS1  2’，5’-寡腺苷酸合成酶1   Hs.524760   26.78  13.1
  OASL  2’-5’寡腺苷酸合成酶样   Hs.118633   25.87  8.516
  OAS3  2’-5’寡腺苷酸合成酶3   Hs.528634   23.15  10.83
  MDA5  黑色素瘤分化关联蛋白-5   Hs.163173   22.7  7.423
  G1P2  干扰素α诱导型蛋白(克隆IFI-15K)   Hs.458485   22.49  13.6
  DDX58  DEAD(Asp-Glu-Ala-Asp)盒多肽58   Hs.190622   21.63  8.265
  APOL6  载脂蛋白L，6   Hs.257352   18.16  7.865
  HSXIAPAF1  XIAP关联因子-1   Hs.441975   15.2  7.96
  HMI  N-myc(和STAT)interactor   Hs.54483   13.85  3.855
  PLSCR1  磷脂scramblase 1   Hs.130759   11.64  6.899
  UBE2L6  缀合遍在蛋白的酶E2L 6   Hs.425777   11.21  4.463
  SP110  SP110核体蛋白   Hs.145150   10.94  4.551
  USP18  遍在蛋白特异性蛋白酶18   Hs.38260   10.83  4.357
  ISGF3G  干扰素调节因子9   Hs.1706   10.44  7.496
  STAT1  转录因子1的信号转导物和激活物，91kDa   Hs.470943   9.701  5.565
  SP100  核抗原Sp100   Hs.369056   9.328  3.567
  PSMB9  蛋白酶体(前体，macropain)亚基，β型，9   Hs.381081   9.227  3.128
  TNFSF10  肿瘤坏死因子超家族，成员10(TRAIL)   Hs.478275   8.819  3.003
  MX2  粘病毒(流感病毒)抗性2   Hs.926   7.847  3.368
  IFIT5  干扰素诱导的具有三十四肽重复单位5的蛋白   Hs.252839   7.208  4.143
  ISG20  干扰素刺激的基因20kDa   Hs.459265   7.188  2.489
  PRKR  干扰素诱导型双链RNA依赖性蛋白激酶   Hs.131431   7.025  4.924
  IFITM1  干扰素诱导的跨膜蛋白1(9-27)   Hs.458414   6.288  3.144
  LY6E  淋巴细胞抗原6复合物，基因座E(Sca-2)   Hs.521903   4.047  2.282
  BST2  骨髓基质细胞抗原2   Hs.118110   3.737  2.127
  IFITM3  干扰素诱导的跨膜蛋白3(1-8U)   Hs.374650   3.057  2.25
                         实施例42
    小鼠IL28质粒在小鼠中抑制肾细胞癌RENCA肿瘤的生长
A.概述
为确定IL28/IL29对小鼠中的肿瘤生长是否具有作用，在第0天用RENCA肿瘤细胞皮下注射成组的小鼠。然后在第5和12天，通过流体动力递送(hydrodynamic delivery)(HDD)用50ug对照载体质粒或mIL28质粒(SEQ ID NO：7)注射小鼠。每周3次监测肿瘤体积，进行5周。通过ELISA测量血清中小鼠IL28蛋白的水平。用mIL28质粒注射的小鼠，和注射对照质粒的小鼠相比，显示显著更小的肿瘤，表明小鼠IL28具有抗肿瘤活性。
B.研究设计
在第0天用0.1×106RENCA细胞在右胁腹上皮下注射10周大小的雌性BALB/c小鼠(Charles River Laboratories)。在第5天和12天，使用流体动压法(在5-8秒内通过尾静脉注射重悬浮于1.6ml生理盐水中的质粒)用50ug空的pZP-7质粒或pZP-7/mIL28静脉内注射成组小鼠(n＝10/组)。在质粒注射后24小时(第6和13天)将小鼠放血以通过ELISA确定血清mIL28的水平。使用测径器测量，每周3次监测肿瘤生长，进行5周。使用公式*(B)2*L(mm3)计算肿瘤体积。
C.结果和结论
mIL28质粒的注射导致质粒递送后24小时，蛋白质的表达在50-200ng/ml之间。mIL-28质粒的注射在RENCA模型中抑制肿瘤生长。经对照质粒和IL28质粒注射的小鼠之间的肿瘤体积上的差异在统计学上是显著的(在第36天，和对照相比，p＝0.0125)(图1)。这些数据表明IL28具有抗肿瘤活性并可能对癌症具有治疗效果。
                        实施例43
小鼠IL28质粒和人IL29C172S-PEG蛋白在小鼠中抑制RENCA肿瘤
                       的生长
A.概述
为确定IL28/IL29在小鼠中是否影响肿瘤的生长，在第0天用RENCA肿瘤皮下注射成组的小鼠。然后在第5和12天通过流体动力递送(HDD)用50ug对照载体质粒、mIL28质粒(SEQ ID NO：7)或mIFNα质粒注射小鼠。从第5至21天，独立的组的肿瘤载荷小鼠隔日(EOD)接受通过腹膜内注射的25ug人IL29C172S(SEQ ID NO：29)-PEG(20kD通过N末端缀合的甲氧基-聚乙二醇丙醛)蛋白。每周3次监测肿瘤体积，进行4周。通过ELISA测量血清中小鼠IL28和IFNα蛋白的水平。用mIL28或mIFNα质粒注射的小鼠，和经对照质粒注射的小鼠相比，显示显著更小的肿瘤，表明小鼠IL28具有抗肿瘤活性。此外，用IL29C172S-PEG蛋白注射的小鼠，和对照相比，也显示减少的肿瘤体积。这些数据表明IL28和IL29都具有抗肿瘤活性。
B.研究设计
在第0天用0.1×106RENCA细胞在右胁腹上皮下注射10周大小的雌性BALB/c小鼠(Charles River Laboratories)。在第5和12天，使用流体动压法(在5-8秒内通过尾静脉注射重悬浮于1.6ml生理盐水中的质粒)用50ug空的pZP-7质粒或pZP-7/mIL28或pORF/mIFNα静脉内注射成组小鼠(n＝10/组)。从第5至21天隔日用25ug人IL29C172S-PEG腹膜内注射分开的组的小鼠(n＝10)。以200ul的总体积提供腹膜内注射。在质粒注射后24小时(第6和13天)将小鼠放血以通过ELISA确定血清mIL28和mIFNα的水平。使用测径器测量，每周3次监测肿瘤生长，进行4周。使用公式*(B)2*L(mm3)计算肿瘤体积。
C.结果和结论
mIL-28或mIFNα质粒的施用在该RENCA模型中都显著抑制肿瘤的生长(和第28天的对照组相比，对于所有3组，p＜0.001)(图2)。人IL-29C172S-PEG蛋白注射，和对照相比，也显著地抑制肿瘤生长。这些数据表明mIL28和人IL29具有抗肿瘤活性并且可能对癌症具有治疗效果。
                     实施例44
低剂量的人IL29蛋白的2种不同形式在RENCA模型中显示抗肿
                      瘤活性
A.概述
为确定是否可在比上述更低的剂量上获得IL29的抗肿瘤活性，在第0天用RENCA细胞皮下注射成组的小鼠。从第5至23天，独立的组的肿瘤载荷小鼠隔日(EOD)接受通过腹膜内注射的1ug，、5ug、25ug人IL29C172S(SEQ ID NO：29)-PEG(20kD的通过N末端缀合的甲氧基-聚乙二醇丙醛)或人IL29C172S d2-7(SEQ ID NO：159)-PEG(20kD的通过N末端缀合的甲氧基-聚乙二醇丙醛)蛋白。每周3次监测肿瘤体积，进行4周。用1、5或25ugIL29C172S-PEG蛋白注射的小鼠，和对照相比，显示减少的肿瘤体积。此外，用1、5或25ug的人IL29C172S d2-7-PEG蛋白注射的小鼠，和对照相比，也显示显著减小的肿瘤生长。这些数据表明低剂量的人IL29蛋白的2种不同形式在小鼠中具有抗肿瘤活性。
B.研究设计
在第0天用0.1×106RENCA细胞在右胁腹皮下注射10周大小的雌性BALB/c小鼠(Charles River Laboratories)。从第5至23天隔日用1ug、5ug或25ug人IL29C172S-PEG或人IL29C172S d2-7-PEG腹膜内注射成组的小鼠(n＝10/组)。以200ul的总体积提供腹膜内注射。使用测径器测量，每周3次监测肿瘤生长，进行4周。使用公式*(B)2*L(mm3)计算肿瘤体积。
C.结果和结论
1ug、5ug或25ug人IL29C172S-PEG蛋白的施用显著抑制肿瘤的生长。此外，和经媒介物处理的小鼠相比，1ug、5ug或25ug IL29C172Sd2-7-PEG蛋白的注射抑制肿瘤生长(图3)。这些数据提供了人IL-29蛋白具有抗肿瘤活性并且可能对各种肿瘤具有治疗效果的证据。
                      实施例45
使用PEG化的人IL29的治疗性处理在RENCA模型中显示有效的抗
                      肿瘤活性
A.概述
为确定使用IL29的治疗性处理是否可诱导抗肿瘤活性，在第0天用RENCA肿瘤皮下注射成组的小鼠。当肿瘤体积达到100mm3时，小鼠隔日(EOD)接受媒介物、5ug或25ug人IL29C172S d2-7(SEQ IDNO：159)-PEG(20kD通过N末端缀合的甲氧基-聚乙二醇丙醛)蛋白(共进行10次注射)或每日(ED)接受5ug人IL29C172S d2-7(SEQ IDNO：159)-PEG(20kD通过N末端缀合的甲氧基-聚乙二醇丙醛)蛋白(共进行20次注射)。作为对照，从肿瘤注射的第5天开始共20天(第5-23天)用5ug人IL29C172S d2-7-PEG隔日预防性地处理一组小鼠。各个体小鼠只在其肿瘤体积达到100mm3后接受注射。蛋白的所有注射都通过腹膜内施用。每周3次监测肿瘤的体积，进行4周。用5ug或25ug隔日或5ug每日注射的小鼠，和对照相比，都显示显著较少的肿瘤生长。和前面的结果一致，提供使用5ug IL29预防性处理的小鼠，和对照相比，也显示减少的肿瘤生长。这些数据表明使用人IL29蛋白的治疗性处理在小鼠中具有抗肿瘤活性。
B.研究设计
在第0天用0.1×106RENCA细胞在右胁腹上皮下注射10周大小的雌性BALB/c小鼠(Charles River Laboratories)。从肿瘤体积为大约100mm3时开始，用媒介物、5ug或25ug人IL29C172Sd2-7-PEG隔日腹膜内注射成组的小鼠(n＝10/组)，进行20天，或每天用5ug人IL29C172Sd2-7-PEG注射，进行20天。从实验(预防性处理)的第5天开始，分开的组的小鼠隔日接受5ug人IL29C172S d2-7-PEG，进行20天。以200ul的总体积提供腹膜内注射。使用测径器测量，每周3次监测肿瘤的生长，进行4周。使用公式*(B)2*L(mm3)计算肿瘤体积。
C.结果和结论
用5ug或25ug隔日或5ug每日注射的小鼠，和对照相比，显示显著更小的肿瘤生长。和前面的结果一致，使用5ug IL29的预防性处理的小鼠，和对照相比，也显示减少的肿瘤生长(图4)。这些数据提供了人IL29蛋白具有抗肿瘤活性和对于各种肿瘤具有治疗性效果的证据。
                       实施例46
使用PEG化人IL29的预防性处理在E.G7胸腺瘤模型中抑制肿瘤
                        的生长
A.概述
为确定IL29是否可在其他肿瘤中诱导抗肿瘤活性，在第0天用E.G7肿瘤皮下注射成组的小鼠。成组的小鼠隔日接受媒介物或25ug人IL29C172S d2-7(SEQ ID NO：159)-PEG(20kD通过N末端缀合的甲氧基-聚乙二醇丙醛)蛋白，共10次注射(第0-18天)。蛋白的所有注射都通过腹膜内施用。每周3次监测肿瘤体积，进行4周。用25ug隔日注射的小鼠，和对照相比，显示显著减少的肿瘤生长。这些数据表明使用人IL-29蛋白的处理在小鼠中具有抗肿瘤活性。
B.研究设计
在第0天用0.4×106E.G7细胞在右胁腹上皮下注射10周大小的雌性C57BL/6小鼠(Charles River Laboratories)。用媒介物或25ug人IL29C172Sd2-7-PEG隔日腹膜内注射成组的小鼠(n＝10/组)，进行20天。以200ul的总体积提供腹膜内注射。使用测径器测量，每周3次监测肿瘤生长，进行4周。使用公式*(B)2*L(mm3)计算肿瘤体积。
C.结果和结论
用25ug隔日注射的小鼠，和对照相比，显示显著更少的肿瘤生长并且和对照动物相比也延长小鼠的存活期(图5A和5B)。这些数据提供了人IL29蛋白具有抗肿瘤活性和对于各种肿瘤具有潜在的治疗性效果的证据。
此处引述的所有专利、专利申请和出版物以及可电子获得的材料(例如，GenBank氨基酸和核苷酸序列的提交内容)的全部公开内容在此引用作为参考。前面详述的说明和实施例仅用于使理解更清晰。不应从其理解出不必要的限制，本发明不限于显示的和描述的确切细节，因为对于本领域技术人员是显然的改变包含在由权利要求所界定的本发明中。
                                   序列表
<110>ZymoGenetics，Inc.
<120>IL-28和IL-29治疗癌症和自身免疫性疾病的用途
<l30>04-08PC
<160>161
<170>FastSEQ for Windows Version 4.0
<210>1
<211>734
<212>DNA
<213>智人
<220>
<221>sig_peptide
<222>(53)...(127)
<221>mat_peptide
<222>(128)...(655)
<221>CDS
<222>(53)...(655)
<400>1
tgggtgacag cctcagagtg tttcttctgc tgacaaagac cagagatcag ga atg aaa  58
                                                          Met Lys
                                                          -25
cta gac atg act ggg gac tgc acg cca gtg ctg gtg ctg atg gcc gca    106
Leu Asp Met Thr Gly Asp Cys Thr Pro Val Leu Val Leu Met Ala Ala
            -20                 -15                 -10
gtg ctg acc gtg act gga gca gtt cct gtc gcc agg ctc cac ggg gct    154
Val Leu Thr Val Thr Gly Ala Val Pro Val Ala Arg Leu His Gly Ala
         -5                 1               5
ctc ccg gat gca agg ggc tgc cac ata gcc cag ttc aag tcc ctg tct    202
Leu Pro Asp Ala Arg Gly Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser
10                   15                  20                  25
cca cag gag ctg cag gcc ttt aag agg gcc aaa gat gcc tta gaa gag    250
Pro Gln Glu Leu Gln Ala Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu
                 30                  35                  40
tcg ctt ctg ctg aag gac tgc agg tgc cac tcc cgc ctc ttc ccc agg    298
Ser Leu Leu Leu Lys Asp Cys Arg Cys His Ser Arg Leu Phe Pro Arg
             45                  50                  55
acc tgg gac ctg agg cag ctg cag gtg agg gag cgc ccc atg gct ttg    346
Thr Trp Asp Leu Arg Gln Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Met Ala Leu
         60                  65                  70
gag gct gag ctg gcc ctg acg ctg aag gtt ctg gag gcc acc gct gac    394
Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp
     75                  80                  85
act gac cca gcc ctg gtg gac gtc ttg gac cag ccc ctt cac acc ctg    442
Thr Asp Pro Ala Leu Val Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu
 90                  95                 100                 105
cac cat atc ctc tcc cag ttc cgg gcc tgt atc cag cct cag ccc acg    490
His His Ile Leu Ser Gln Phe Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr
                110                 115                 120
gca ggg ccc agg acc cgg ggc cgc ctc cac cat tgg ctg tac cgg ctc    538
Ala Gly Pro Arg Thr Arg Gly Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu
            125                 130                 135
cag gag gcc cca aaa aag gag tcc cct ggc tgc ctc gag gcc tct gtc    586
Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val
        140                 145                 150
acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg cga gac ctg aat tgt gtt gcc    634
Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala
    155                 160                 165
agt ggg gac ctg tgt gtc tga ccctcccacc agtcatgcaa cctgagattt       685
Ser Gly Asp Leu Cys Val  *
170                 175
tatttataaa ttagccactt gtcttaattt attgccaccc agtcgctat              734
<210>2
<211>200
<212>PRT
<213>智人
<220>
<221>SIGNAL
<222>(1)...(25)
<400>2
Met Lys Leu Asp Met Thr Gly Asp Cys Thr Pro Val Leu Val Leu Met
-25                 -20                 -15                 -10
Ala Ala Val Leu Thr Val Thr Gly Ala Val Pro Val Ala Arg Leu His
                -5                   1               5
Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser
        10                  15                  20
Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu
    25                  30                  35
Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp Cys Arg Cys His Ser Arg Leu Phe
40                  45                  50                  55
Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Met
                60                  65                  70
Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr
            75                  80                  85
Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Val Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His
        90                  95                  100
Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Phe Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln
    105                 110                 115
Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg Gly Arg Leu His His Trp Leu Tyr
120                 125                 130                 135
Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala
                140                 145                 150
Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys
            155                 160                 165
Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
        170                 175
<210>3
<211>856
<212>DNA
<213>智人
<220>
<221>sig_peptide
<222>(98)...(154)
<221>mat_peptide
<222>(155)...(700)
<221>CDS
<222>(98)...(700)
<400>3
aattaccttt tcactttaca cacatcatct tggattgccc attttgcgtg gctaaaaagc  60
agagccatgc cgctggggaa gcagttgcga tttagcc atg gct gca gct tgg acc   115
                                         Met Ala Ala Ala Trp Thr
                                                         -15
gtg gtg ctg gtg act ttg gtg cta ggc ttg gcc gtg gca ggc cct gtc    163
Val Val Leu Val Thr Leu Val Leu Gly Leu Ala Val Ala Gly Pro Val
            -10                  -5                 1
ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc tgc cac att ggc agg    211
Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His Ile Gly Arg
     5                   10                  15
ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc aag aag gcc agg    259
Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys Lys Ala Arg
 20                  25                  30                  35
gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg agt tgc agc tct    307
Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser Cys Ser Ser
                 40                  45                  50
cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc cag gtg agg gag    355
Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln Val Arg Glu
             55                  60                  65
cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg ctg aag gtc ctg    403
Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys Val Leu
         70                  75                  80
gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta gac cag ccc ctt    451
Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu
     85                  90                  95
cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc tgt atc cag cct    499
His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys Ile Gln Pro
100                 105                 110                 115
cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc cac cac tgg ctg    547
Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His His Trp Leu
                120                 125                 130
cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct ggc tgc ctg gag    595
His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly Cys Leu Glu
            135                 140                 145
gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg cga gac ctc aaa    643
Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu Lys
        150                 155                 160
tat gtg gcc gat ggg aac ctg tgt ctg aga acg tca acc cac cct gag    691
Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Cys Leu Arg Thr Ser Thr His Pro Glu
    165                 170                 175
tcc acc tga caccccacac cttatttatg cgctgagccc tactccttcc            740
Ser Thr  *
180
ttaatttatt tcctctcacc ctttatttat gaagctgcag ccctgactga gacatagggc  800
tgagtttatt gttttacttt tatacattat gcacaaataa acaacaagga attgga      856
<210>4
<211>200
<212>PRT
<213>智人
<220>
<221>SIGNAL
<222>(1)...(19)
<400>4
Met Ala Ala Ala Trp Thr Val Val Leu Val Thr Leu Val Leu Gly Leu
                -15                 -10                 -5
Ala Val Ala Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys
             1               5                  10
Gly Cys His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala
    15                  20                  25
Ser Phe Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys
30                  35                  40                  45
Asn Trp Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg
                50                  55                  60
Leu Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala
            65                  70                  75
Leu Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp
        80                  85                  90
Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu
    95                  100                 105
Gln Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly
110                 115                 120                 125
Arg Leu His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu
                130                 135                 140
Ser Ala Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu
            145                 150                 155
Leu Thr Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Cys Leu Arg
        160                 165                 170
Thr Ser Thr His Pro Glu Ser Thr
    175                 180
<210>5
<211>734
<212>DNA
<213>智人
<220>
<221>sig_peptide
<222>(53)...(127)
<221>mat_peptide
<222>(128)...(655)
<221>CDS
<222>(53)...(655)
<400>5
tgggtgacag cctcagagtg tttcttctgc tgacaaagac cagagatcag ga atg aaa  58
                                                          Met Lys
                                                          -25
cta gac atg acc ggg gac tgc atg cca gtg ctg gtg ctg atg gcc gca    106
Leu Asp Met Thr Gly Asp Cys Met Pro Val Leu Val Leu Met Ala Ala
            -20                 -15                 -10
gtg ctg acc gtg act gga gca gtt cct gtc gcc agg ctc cgc ggg gct    154
Val Leu Thr Val Thr Gly Ala Val Pro Val Ala Arg Leu Arg Gly Ala
         -5                 1               5
ctc ccg gat gca agg ggc tgc cac ata gcc cag ttc aag tcc ctg tct    202
Leu Pro Asp Ala Arg Gly Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser
 10                  15                  20                  25
cca cag gag ctg cag gcc ttt aag agg gcc aaa gat gcc tta gaa gag    250
Pro Gln Glu Leu Gln Ala Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu
                 30                  35                  40
tcg ctt ctg ctg aag gac tgc aag tgc cgc tcc cgc ctc ttc ccc agg    298
Ser Leu Leu Leu Lys Asp Cys Lys Cys Arg Ser Arg Leu Phe Pro Arg
             45                  50                  55
acc tgg gac ctg agg cag ctg cag gtg agg gag cgc ccc gtg gct ttg    346
Thr Trp Asp Leu Arg Gln Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu
         60                  65                  70
gag gct gag ctg gcc ctg acg ctg aag gtt ctg gag gcc acc gct gac    394
Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp
     75                  80                  85
act gac cca gcc ctg ggg gat gtc ttg gac cag ccc ctt cac acc ctg    442
Thr Asp Pro Ala Leu Gly Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu
 90                  95                 100                 105
cac cat atc ctc tcc cag ctc cgg gcc tgt atc cag cct cag ccc acg    490
His His Ile Leu Ser Gln Leu Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr
                110                 115                 120
gca ggg ccc agg acc cgg ggc cgc ctc cac cat tgg ctg cac cgg ctc    538
Ala Gly Pro Arg Thr Arg Gly Arg Leu His His Trp Leu His Arg Leu
            125                 130                 135
cag gag gcc cca aaa aag gag tcc cct ggc tgc ctc gag gcc tct gtc    586
Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val
        140                 145                 150
acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg cga gac ctg aat tgt gtt gcc    634
Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala
    155                 160                 165
agc ggg gac ctg tgt gtc tga cccttccgcc agtcatgcaa cctgagattt       685
Ser Gly Asp Leu Cys Val  *
170                 175
tatttataaa ttagccactt ggcttaattt attgccaccc agtcgctat              734
<210>6
<211>200
<212>PRT
<213>智人
<220>
<221>SIGNAL
<222>(1)...(25)
<400>6
Met Lys Leu Asp Met Thr Gly Asp Cys Met Pro Val Leu Val Leu Met
-25                 -20                 -15                 -10
Ala Ala Val Leu Thr Val Thr Gly Ala Val Pro Val Ala Arg Leu Arg
                -5                   1               5
Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser
        10                  15                  20
Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu
    25                  30                  35
Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp Cys Lys Cys Arg Ser Arg Leu Phe
40                  45                  50                  55
Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val
                60                  65                  70
Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr
            75                  80                  85
Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Gly Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His
        90                  95                  100
Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln
    105                 110                 115
Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg Gly Arg Leu His His Trp Leu His
120                 125                 130                 135
Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala
                140                 145                 150
Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys
            155                 160                 165
Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
        170                 175
<210>7
<211>633
<212>DNA
<213>Mus musculus
<220>
<221>sig_peptide
<222>(22)...(105)
<221>mat_peptide
<222>(106)...(630)
<221>CDS
<222>(22)...(630)
<400>7
tcacagaccc cggagagcaa c atg aag cca gaa aca gct ggg ggc cac atg    51
                        Met Lys Pro Glu Thr Ala Gly Gly His Met
                                    -25                 -20
ctc ctc ctg ctg ttg cct ctg ctg ctg gcc gca gtg ctg aca aga acc    99
Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Leu Ala Ala Val Leu Thr Arg Thr
            -15                 -10                  -5
caa gct gac cct gtc ccc agg gcc acc agg ctc cca gtg gaa gca aag    147
Gln Ala Asp Pro Val Pro Arg Ala Thr Arg Leu Pro Val Glu Ala Lys
        1                   5               10
gat tgc cac att gct cag ttc aag tct ctg tcc cca aaa gag ctg cag    195
Asp Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Lys Glu Leu Gln
 15                  20                  25                  30
gcc ttc aaa aag gcc aag gat gcc atc gag aag agg ctg ctt gag aag    243
Ala Phe Lys Lys Ala Lys Asp Ala Ile Glu Lys Arg Leu Leu Glu Lys
                 35                  40                  45
gac ctg agg tgc agt tcc cac ctc ttc ccc agg gcc tgg gac ctg aag    291
Asp Leu Arg Cys Ser Ser His Leu Phe Pro Arg Ala Trp Asp Leu Lys
             50                  55                  60
cag ctg cag gtc caa gag cgc ccc aag gcc ttg cag gct gag gtg gcc    339
Gln Leu Gln Val Gln Glu Arg Pro Lys Ala Leu Gln Ala Glu Val Ala
         65                  70                  75
ctg acc ctg aag gtc tgg gag aac atg act gac tca gcc ctg gcc acc    387
Leu Thr Leu Lys Val Trp Glu Asn Met Thr Asp Ser Ala Leu Ala Thr
     80                  85                  90
atc ctg ggc cag cct ctt cat aca ctg agc cac att cac tcc cag ctg    435
Ile Leu Gly Gln Pro Leu His Thr Leu Ser His Ile His Ser Gln Leu
 95                 100                 105                 110
cag acc tgt aca cag ctt cag gcc aca gca gag ccc agg tcc ccg agc    483
Gln Thr Cys Thr Gln Leu Gln Ala Thr Ala Glu Pro Arg Ser Pro Ser
                115                 120                 125
cgc cgc ctc tcc cgc tgg ctg cac agg ctc cag gag gcc cag agc aag    531
Arg Arg Leu Ser Arg Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Gln Ser Lys
            130                 135                 140
gag acc cct ggc tgc ctg gag gcc tct gtc acc tcc aac ctg ttt cgc    579
Glu Thr Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Ser Asn Leu Phe Arg
        145                 150                 155
ctg ctc acc cgg gac ctc aag tgt gtg gcc aat gga gac cag tgt gtc    627
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Lys Cys Val Ala Asn Gly Asp Gln Cys Val
    160                 165                 170
tga cct                                                            633
 *
<210>8
<211>202
<212>PRT
<213>Mus musculus
<220>
<221>SIGNAL
<222>(1)...(28)
<400>8
Met Lys Pro Glu Thr Ala Gly Gly His Met Leu Leu Leu Leu Leu Pro
            -25                 -20                 -15
Leu Leu Leu Ala Ala Val Leu Thr Arg Thr Gln Ala Asp Pro Val Pro
        -10                 -5                   1
Arg Ala Thr Arg Leu Pro Val Glu Ala Lys Asp Cys His Ile Ala Gln
 5                  10                  15                  20
Phe Lys Ser Leu Ser Pro Lys Glu Leu Gln Ala Phe Lys Lys Ala Lys
                25                  30                  35
Asp Ala Ile Glu Lys Arg Leu Leu Glu Lys Asp Leu Arg Cys Ser Ser
            40                  45                  50
His Leu Phe Pro Arg Ala Trp Asp Leu Lys Gln Leu Gln Val Gln Glu
        55                  60                  65
Arg Pro Lys Ala Leu Gln Ala Glu Val Ala Leu Thr Leu Lys Val Trp
    70                  75                  80
Glu Asn Met Thr Asp Ser Ala Leu Ala Thr Ile Leu Gly Gln Pro Leu
85                  90                  95                  100
His Thr Leu Ser His Ile His Ser Gln Leu Gln Thr Cys Thr Gln Leu
                105                 110                 115
Gln Ala Thr Ala Glu Pro Arg Ser Pro Ser Arg Arg Leu Ser Arg Trp
            120                 125                 130
Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Gln Ser Lys Glu Thr Pro Gly Cys Leu
        135                 140                 145
Glu Ala Ser Val Thr Ser Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu
    150                 155                 160
Lys Cys Val Ala Asn Gly Asp Gln Cys Val
165                 170
<210>9
<211>632
<212>DNA
<213>Mus musculus
<220>
<221>sig_peptide
<222>(22)...(105)
<221>mat_peptide
<222>(106)...(630)
<221>CDS
<222>(22)...(630)
<400>9
tcacagaccc cggagagcaa c atg aag cca gaa aca gct ggg ggc cac atg    51
                        Met Lys Pro Glu Thr Ala Gly Gly His Met
                                    -25                 -20
ctc ctc ctg ctg ttg cct ctg ctg ctg gcc gca gtg ctg aca aga acc    99
Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Leu Ala Ala Val Leu Thr Arg Thr
            -15                 -10                 -5
caa gct gac cct gtc ccc agg gcc acc agg ctc cca gtg gaa gca aag    147
Gln Ala Asp Pro Val Pro Arg Ala Thr Arg Leu Pro Val Glu Ala Lys
        1               5                   10
gat tgc cac att gct cag ttc aag tct ctg tcc cca aaa gag ctg cag    195
Asp Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Lys Glu Leu Gln
 15                  20                  25                  30
gcc ttc aaa aag gcc aag ggt gcc atc gag aag agg ctg ctt gag aag    243
Ala Phe Lys Lys Ala Lys Gly Ala Ile Glu Lys Arg Leu Leu Glu Lys
                 35                  40                  45
gac atg agg tgc agt tcc cac ctc atc tcc agg gcc tgg gac ctg aag    291
Asp Met Arg Cys Ser Ser His Leu Ile Ser Arg Ala Trp Asp Leu Lys
             50                  55                  60
cag ctg cag gtc caa gag cgc ccc aag gcc ttg cag gct gag gtg gcc    339
Gln Leu Gln Val Gln Glu Arg Pro Lys Ala Leu Gln Ala Glu Val Ala
         65                  70                  75
ctg acc ctg aag gtc tgg gag aac ata aat gac tca gcc ctg acc acc    387
Leu Thr Leu Lys Val Trp Glu Asn Ile Asn Asp Ser Ala Leu Thr Thr
     80                  85                  90
atc ctg ggc cag cct ctt cat aca ctg agc cac att cac tcc cag ctg    435
Ile Leu Gly Gln Pro Leu His Thr Leu Ser His Ile His Ser Gln Leu
 95                 100                 105                 110
cag acc tgt aca cag ctt cag gcc aca gca gag ccc aag ccc ccg agt    483
Gln Thr Cys Thr Gln Leu Gln Ala Thr Ala Glu Pro Lys Pro Pro Ser
                115                 120                 125
cgc cgc ctc tcc cgc tgg ctg cac agg ctc cag gag gcc cag agc aag    531
Arg Arg Leu Ser Arg Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Gln Ser Lys
            130                 135                 140
gag act cct ggc tgc ctg gag gac tct gtc acc tcc aac ctg ttt caa    579
Glu Thr Pro Gly Cys Leu Glu Asp Ser Val Thr Ser Asn Leu Phe Gln
        145                 150                 155
ctg ctc ctc cgg gac ctc aag tgt gtg gcc agt gga gac cag tgt gtc    627
Leu Leu Leu Arg Asp Leu Lys Cys Val Ala Ser Gly Asp Gln Cys Val
    160                 165                 170
tga cc                                                           632
 *
<210>10
<211>202
<212>PRT
<213>Mus musculus
<220>
<221>SIGNAL
<222>(1)...(28)
<400>10
Met Lys Pro Glu Thr Ala Gly Gly His Met Leu Leu Leu Leu Leu Pro
            -25                 -20                 -15
Leu Leu Leu Ala Ala Val Leu Thr Arg Thr Gln Ala Asp Pro Val Pro
        -10                 -5                   1
Arg Ala Thr Arg Leu Pro Val Glu Ala Lys Asp Cys His Ile Ala Gln
 5                  10                  15                  20
Phe Lys Ser Leu Ser Pro Lys Glu Leu Gln Ala Phe Lys Lys Ala Lys
                25                  30                  35
Gly Ala Ile Glu Lys Arg Leu Leu Glu Lys Asp Met Arg Cys Ser Ser
            40                  45                  50
His Leu Ile Ser Arg Ala Trp Asp Leu Lys Gln Leu Gln Val Gln Glu
        55                  60                  65
Arg Pro Lys Ala Leu Gln Ala Glu Val Ala Leu Thr Leu Lys Val Trp
    70                  75                  80
Glu Asn Ile Asn Asp Ser Ala Leu Thr Thr Ile Leu Gly Gln Pro Leu
85                  90                  95                  100
His Thr Leu Ser His Ile His Ser Gln Leu Gln Thr Cys Thr Gln Leu
                105                 110                 115
Gln Ala Thr Ala Glu Pro Lys Pro Pro Ser Arg Arg Leu Ser Arg Trp
            120                 125                 130
Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Gln Ser Lys Glu Thr Pro Gly Cys Leu
        135                 140                 145
Glu Asp Ser Val Thr Ser Asn Leu Phe Gln Leu Leu Leu Arg Asp Leu
    150                 155                 160
Lys Cys Val Ala Ser Gly Asp Gln Cys Val
165                 170
<210>11
<211>520
<212>PRT
<213>智人
<400>11
Met Ala Gly Pro Glu Arg Trp Gly Pro Leu Leu Leu Cys Leu Leu Gln
 1               5                  10                  15
Ala Ala Pro Gly Arg Pro Arg Leu Ala Pro Pro Gln Asn Val Thr Leu
            20                  25                  30
Leu Ser Gln Asn Phe Ser Val Tyr Leu Thr Trp Leu Pro Gly Leu Gly
        35                  40                  45
Asn Pro Gln Asp Val Thr Tyr Phe Val Ala Tyr Gln Ser Ser Pro Thr
    50                  55                  60
Arg Arg Arg Trp Arg Glu Val Glu Glu Cys Ala Gly Thr Lys Glu Leu
65                  70                  75                  80
Leu Cys Ser Met Met Cys Leu Lys Lys Gln Asp Leu Tyr Asn Lys Phe
                85                  90                  95
Lys Gly Arg Val Arg Thr Val Ser Pro Ser Ser Lys Ser Pro Trp Val
            100                 105                 110
Glu Ser Glu Tyr Leu Asp Tyr Leu Phe Glu Val Glu Pro Ala Pro Pro
        115                 120                 125
Val Leu Val Leu Thr Gln Thr Glu Glu Ile Leu Ser Ala Asn Ala Thr
    130                 135                 140
Tyr Gln Leu Pro Pro Cys Met Pro Pro Leu Asp Leu Lys Tyr Glu Val
145                 150                 155                 160
Ala Phe Trp Lys Glu Gly Ala Gly Asn Lys Thr Leu Phe Pro Val Thr
                165                 170                 175
Pro His Gly Gln Pro Val Gln Ile Thr Leu Gln Pro Ala Ala Ser Glu
            180                 185                 190
His His Cys Leu Ser Ala Arg Thr Ile Tyr Thr Phe Ser Val Pro Lys
        195                 200                 205
Tyr Ser Lys Phe Ser Lys Pro Thr Cys Phe Leu Leu Glu Val Pro Glu
    210                 215                 220
Ala Asn Trp Ala Phe Leu Val Leu Pro Ser Leu Leu Ile Leu Leu Leu
225                 230                 235                 240
Val Ile Ala Ala Gly Gly Val Ile Trp Lys Thr Leu Met Gly Asn Pro
                245                 250                 255
Trp Phe Gln Arg Ala Lys Met Pro Arg Ala Leu Asp Phe Ser Gly His
            260                 265                 270
Thr His Pro Val Ala Thr Phe Gln Pro Ser Arg Pro Glu Ser Val Asn
        275                 280                 285
Asp Leu Phe Leu Cys Pro Gln Lys Glu Leu Thr Arg Gly Val Arg Pro
    290                 295                 300
Thr Pro Arg Val Arg Ala Pro Ala Thr Gln Gln Thr Arg Trp Lys Lys
305                 310                 315                 320
Asp Leu Ala Glu Asp Glu Glu Glu Glu Asp Glu Glu Asp Thr Glu Asp
                325                 330                 335
Gly Val Ser Phe Gln Pro Tyr Ile Glu Pro Pro Ser Phe Leu Gly Gln
            340                 345                 350
Glu His Gln Ala Pro Gly His Ser Glu Ala Gly Gly Val Asp Ser Gly
        355                 360                 365
Arg Pro Arg Ala Pro Leu Val Pro Ser Glu Gly Ser Ser Ala Trp Asp
    370                 375                 380
Ser Ser Asp Arg Ser Trp Ala Ser Thr Val Asp Ser Ser Trp Asp Arg
385                 390                 395                 400
Ala Gly Ser Ser Gly Tyr Leu Ala Glu Lys Gly Pro Gly Gln Gly Pro
                405                 410                 415
Gly Gly Asp Gly His Gln Glu Ser Leu Pro Pro Pro Glu Phe Ser Lys
            420                 425                 430
Asp Ser Gly Phe Leu Glu Glu Leu Pro Glu Asp Asn Leu Ser Ser Trp
        435                 440                 445
Ala Thr Trp Gly Thr Leu Pro Pro Glu Pro Asn Leu Val Pro Gly Gly
    450                 455                 460
Pro Pro Val Ser Leu Gln Thr Leu Thr Phe Cys Trp Glu Ser Ser Pro
465                 470                 475                 480
Glu Glu Glu Glu Glu Ala Arg Glu Ser Glu Ile Glu Asp Ser Asp Ala
                485                 490                 495
Gly Ser Trp Gly Ala Glu Ser Thr Gln Arg Thr Glu Asp Arg Gly Arg
            500                 505                 510
Thr Leu Gly His Tyr Met Ala Arg
        515                 520
<210>12
<211>531
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>SEQ ID NO：1的成熟蛋白，添加了3’Met
<221>CDS
<222>(1)...(531)
<400>12
atg gtt cct gtc gcc agg ctc cac ggg gct ctc ccg gat gca agg ggc    48
Met Val Pro Val Ala Arg Leu His Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly
 1               5                   10                  15
tgc cac ata gcc cag ttc aag tcc ctg tct cca cag gag ctg cag gcc    96
Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala
             20                  25                  30
ttt aag agg gcc aaa gat gcc tta gaa gag tcg ctt ctg ctg aag gac    144
Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp
         35                  40                  45
tgc agg tgc cac tcc cgc ctc ttc ccc agg acc tgg gac ctg agg cag    192
Cys Arg Cys His Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln
     50                  55                  60
ctg cag gtg agg gag cgc ccc atg gct ttg gag gct gag ctg gcc ctg    240
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Met Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
 65                  70                  75                  80
acg ctg aag gtt ctg gag gcc acc gct gac act gac cca gcc ctg gtg    288
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Val
                 85                  90                  95
gac gtc ttg gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cat atc ctc tcc cag    336
Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln
            100                 105                 110
ttc cgg gcc tgt atc cag cct cag ccc acg gca ggg ccc agg acc cgg    384
Phe Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg
        115                 120                 125
ggc cgc ctc cac cat tgg ctg tac cgg ctc cag gag gcc cca aaa aag    432
Gly Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys
    130                 135                 140
gag tcc cct ggc tgc ctc gag gcc tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc    480
Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg
145                 150                 155                 160
ctc ctc acg cga gac ctg aat tgt gtt gcc agt ggg gac ctg tgt gtc    528
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
tga                                                                531
  *
<210>13
<211>176
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>SEQ ID NO：1的成熟蛋白，添加了3’Met
<400>13
Met Val Pro Val Ala Arg Leu His Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly
 1               5                  10                  15
Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala
            20                  25                  30
Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp
        35                  40                  45
Cys Arg Cys His Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln
    50                  55                  60
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Met Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
65                  70                  75                  80
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Val
                85                  90                  95
Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln
            100                 105                 110
Phe Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg
        115                 120                 125
Gly Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys
    130                 135                 140
Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg
145                 150                 155                 160
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
<210>14
<211>621
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>SEQ ID NO：3的成熟蛋白，添加了3’Met
<221>CDS
<222>(1)...(549)
<400>14
atg ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc tgc    48
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys
 1               5                   10                  15
cac att ggc agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc    96
His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
             20                  25                  30
aag aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg    144
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
         35                  40                  45
agt tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc    192
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
     50                  55                  60
cag gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg    240
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
 65                  70                  75                  80
ctg aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta    288
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                 85                  90                  95
gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc    336
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
tgt atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc    384
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
cac cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct    432
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
ggc tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg    480
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
cga gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg aac ctg tgt ctg aga acg tca    528
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Cys Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
acc cac cct gag tcc acc tga caccccacac cttatttatg cgctgagccc       579
Thr His Pro Glu Ser Thr  *
            180
tactccttcc ttaatttatt tcctctcacc ctttatttat ga                     621
<210>15
<211>182
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>SEQ ID NO：3的成熟蛋白，添加了3’Met
<400>15
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys
 1               5                  10                  15
His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
            20                  25                  30
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
        35                  40                  45
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
65                  70                  75                  80
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                85                  90                  95
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Cys Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
Thr His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>16
<211>531
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>SEQ ID NO：5的成熟蛋白，添加了3’Met
<221>CDS
<222>(1)...(531)
<400>16
atg gtt cct gtc gcc agg ctc cgc ggg gct ctc ccg gat gca agg ggc    48
Met Val Pro Val Ala Arg Leu Arg Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly
 1               5                   10                  15
tgc cac ata gcc cag ttc aag tcc ctg tct cca cag gag ctg cag gcc    96
Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala
             20                  25                  30
ttt aag agg gcc aaa gat gcc tta gaa gag tcg ctt ctg ctg aag gac    144
Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp
         35                  40                  45
tgc aag tgc cgc tcc cgc ctc ttc ccc agg acc tgg gac ctg agg cag    192
Cys Lys Cys Arg Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln
     50                  55                  60
ctg cag gtg agg gag cgc ccc gtg gct ttg gag gct gag ctg gcc ctg    240
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
 65                  70                  75                  80
acg ctg aag gtt ctg gag gcc acc gct gac act gac cca gcc ctg ggg    288
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Gly
                 85                  90                  95
gat gtc ttg gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cat atc ctc tcc cag    336
Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln
            100                 105                 110
ctc cgg gcc tgt atc cag cct cag ccc acg gca ggg ccc agg acc cgg    384
Leu Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg
        115                 120                 125
ggc cgc ctc cac cat tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc cca aaa aag    432
Gly Arg Leu His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys
    130                 135                 140
gag tcc cct ggc tgc ctc gag gcc tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc    480
Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg
145                 150                 155                 160
ctc ctc acg cga gac ctg aat tgt gtt gcc agc ggg gac ctg tgt gtc    528
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
tga                                                                531
 *
<210>17
<211>176
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>SEQ ID NO：5的成熟蛋白，添加了3’Met
<400>17
Met Val Pro Val Ala Arg Leu Arg Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly
 1               5                  10                  15
Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala
            20                  25                  30
Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp
        35                  40                  45
Cys Lys Cys Arg Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln
    50                  55                  60
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
65                  70                  75                  80
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Gly
                85                  90                  95
Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln
            100                 105                 110
Leu Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg
        115                 120                 125
Gly Arg Leu His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys
    130                 135                 140
Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg
145                 150                 155                 160
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
<210>18
<211>528
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-28A突变体C48S
<221>CDS
<222>(1)...(528)
<400>18
gtt cct gtc gcc agg ctc cac ggg gct ctc ccg gat gca agg ggc tgc    48
Val Pro Val Ala Arg Leu His Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly Cys
 1               5                   10                  15
cac ata gcc cag ttc aag tcc ctg tct cca cag gag ctg cag gcc ttt    96
His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala Phe
             20                  25                  30
aag agg gcc aaa gat gcc tta gaa gag tcg ctt ctg ctg aag gac tcc    144
Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp Ser
         35                  40                  45
agg tgc cac tcc cgc ctc ttc ccc agg acc tgg gac ctg agg cag ctg    192
Arg Cys His Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln Leu
     50                  55                  60
cag gtg agg gag cgc ccc atg gct ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg    240
Gln Val Arg Glu Arg Pro Met Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
 65                  70                  75                  80
ctg aag gtt ctg gag gcc acc gct gac act gac cca gcc ctg gtg gac    288
Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Val Asp
                 85                  90                  95
gtc ttg gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cat atc ctc tcc cag ttc    336
Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Phe
            100                 105                 110
cgg gcc tgt atc cag cct cag ccc acg gca ggg ccc agg acc cgg ggc    384
Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg Gly
        115                 120                 125
cgc ctc cac cat tgg ctg tac cgg ctc cag gag gcc cca aaa aag gag    432
Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu
    130                 135                 140
tcc cct ggc tgc ctc gag gcc tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc    480
Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu
145                 150                 155                 160
ctc acg cga gac ctg aat tgt gtt gcc agt ggg gac ctg tgt gtc tga    528
Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val  *
                165                 170                 175
<210>19
<211>175
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-28A突变体C48S
<400>19
Val Pro Val Ala Arg Leu His Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly Cys
 1               5                  10                  15
His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala Phe
            20                  25                  30
Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp Ser
        35                  40                  45
Arg Cys His Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Met Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
65                  70                  75                  80
Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Val Asp
                85                  90                  95
Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Phe
            100                 105                 110
Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg Gly
        115                 120                 125
Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu
    130                 135                 140
Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu
145                 150                 155                 160
Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
<210>20
<211>531
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>met IL-28A突变体C49S
<221>CDS
<222>(1)...(531)
<400>20
atg gtt cct gtc gcc agg ctc cac ggg gct ctc ccg gat gca agg ggc    48
Met Val Pro Val Ala Arg Leu His Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly
 1               5                   10                  15
tgc cac ata gcc cag ttc aag tcc ctg tct cca cag gag ctg cag gcc    96
Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala
             20                  25                  30
ttt aag agg gcc aaa gat gcc tta gaa gag tcg ctt ctg ctg aag gac    144
Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp
         35                  40                  45
tcc agg tgc cac tcc cgc ctc ttc ccc agg acc tgg gac ctg agg cag    192
Ser Arg Cys His Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln
     50                  55                  60
ctg cag gtg agg gag cgc ccc atg gct ttg gag gct gag ctg gcc ctg    240
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Met Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
 65                  70                  75                  80
acg ctg aag gtt ctg gag gcc acc gct gac act gac cca gcc ctg gtg    288
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Val
                 85                  90                  95
gac gtc ttg gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cat atc ctc tcc cag    336
Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln
            100                 105                 110
ttc cgg gcc tgt atc cag cct cag ccc acg gca ggg ccc agg acc cgg    384
Phe Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg
        115                 120                 125
ggc cgc ctc cac cat tgg ctg tac cgg ctc cag gag gcc cca aaa aag    432
Gly Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys
    130                 135                 140
gag tcc cct ggc tgc ctc gag gcc tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc    480
Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg
145                 150                 155                 160
ctc ctc acg cga gac ctg aat tgt gtt gcc agt ggg gac ctg tgt gtc    528
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
tga                                                                531
 *
<210>21
<211>176
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>met IL-28A突变体C49S
<400>21
Met Val Pro Val Ala Arg Leu His Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly
 1               5                  10                  15
Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala
            20                  25                  30
Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp
        35                  40                  45
Ser Arg Cys His Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln
    50                  55                  60
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Met Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
65                  70                  75                  80
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Val
                85                  90                  95
Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln
            100                 105                 110
Phe Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg
        115                 120                 125
Gly Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys
    130                 135                 140
Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg
145                 150                 155                 160
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
<210>22
<211>528
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-28A突变体C50S
<221>CDS
<222>(1)...(528)
<400>22
gtt cct gtc gcc agg ctc cac ggg gct ctc ccg gat gca agg ggc tgc    48
Val Pro Val Ala Arg Leu His Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly Cys
 1               5                   10                  15
cac ata gcc cag ttc aag tcc ctg tct cca cag gag ctg cag gcc ttt    96
His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala Phe
             20                  25                  30
aag agg gcc aaa gat gcc tta gaa gag tcg ctt ctg ctg aag gac tgc    144
Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp Cys
         35                  40                  45
agg tcc cac tcc cgc ctc ttc ccc agg acc tgg gac ctg agg cag ctg    192
Arg Ser His Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln Leu
     50                  55                  60
cag gtg agg gag cgc ccc atg gct ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg    240
Gln Val Arg Glu Arg Pro Met Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
 65                  70                  75                  80
ctg aag gtt ctg gag gcc acc gct gac act gac cca gcc ctg gtg gac    288
Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Val Asp
                 85                  90                  95
gtc ttg gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cat atc ctc tcc cag ttc    336
Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Phe
            100                 105                 110
cgg gcc tgt atc cag cct cag ccc acg gca ggg ccc agg acc cgg ggc    384
Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg Gly
        115                 120                 125
cgc ctc cac cat tgg ctg tac cgg ctc cag gag gcc cca aaa aag gag    432
Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu
    130                 135                 140
tcc cct ggc tgc ctc gag gcc tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc    480
Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu
145                 150                 155                 160
ctc acg cga gac ctg aat tgt gtt gcc agt ggg gac ctg tgt gtc tga    528
Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val  *
                165                 170                 175
<210>23
<211>175
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-28A突变体C50S
<400>23
Val Pro Val Ala Arg Leu His Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly Cys
 1               5                  10                  15
His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala Phe
            20                  25                  30
Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp Cys
        35                  40                  45
Arg Ser His Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Met Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
65                  70                  75                  80
Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Val Asp
                85                  90                  95
Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Phe
            100                 105                 110
Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg Gly
        115                 120                 125
Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu
    130                 135                 140
Ser Pro GIy Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu
145                 150                 155                 160
Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
<210>24
<211>531
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>met IL-28A突变体C51S
<221>CDS
<222>(1)...(531)
<400>24
atg gtt cct gtc gcc agg ctc cac ggg gct ctc ccg gat gca agg ggc    48
Met Val Pro Val Ala Arg Leu His Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly
 1               5                   10                  15
tgc cac ata gcc cag ttc aag tcc ctg tct cca cag gag ctg cag gcc    96
Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala
             20                  25                  30
ttt aag agg gcc aaa gat gcc tta gaa gag tcg ctt ctg ctg aag gac    144
Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp
         35                  40                  45
tgc agg tcc cac tcc cgc ctc ttc ccc agg acc tgg gac ctg agg cag    192
Cys Arg Ser His Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln
     50                  55                  60
ctg cag gtg agg gag cgc ccc atg gct ttg gag gct gag ctg gcc ctg    240
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Met Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
 65                  70                  75                  80
acg ctg aag gtt ctg gag gcc acc gct gac act gac cca gcc ctg gtg    288
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Val
                 85                  90                  95
gac gtc ttg gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cat atc ctc tcc cag    336
Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln
            100                 105                 110
ttc cgg gcc tgt atc cag cct cag ccc acg gca ggg ccc agg acc cgg    384
Phe Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg
        115                 120                 125
ggc cgc ctc cac cat tgg ctg tac cgg ctc cag gag gcc cca aaa aag    432
Gly Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys
    130                 135                 140
gag tcc cct ggc tgc ctc gag gcc tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc    480
Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg
145                 150                 155                 160
ctc ctc acg cga gac ctg aat tgt gtt gcc agt ggg gac ctg tgt gtc    528
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
tga                                                                531
 *
<210>25
<211>176
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>met IL-28A突变体C51S
<400>25
Met Val Pro Val Ala Arg Leu His Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly
 1               5                  10                  15
Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala
            20                  25                  30
Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp
        35                  40                  45
Cys Arg Ser His Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln
    50                  55                  60
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Met Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
65                  70                  75                  80
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Val
                85                  90                  95
Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln
            100                 105                 110
Phe Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg
        115                 120                 125
Gly Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys
    130                 135                 140
Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg
145                 150                 155                 160
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
<210>26
<211>546
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-29突变体C171S
<221>CDS
<222>(1)...(546)
<400>26
ggt ccg gtt ccg acc tct aaa cca acc acc act ggt aaa ggt tgc cac    48
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His
 1               5                   10                  15
atc ggt cgt ttc aaa tct ctg tct ccg cag gaa ctg gct tct ttc aaa    96
Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
             20                  25                  30
aaa gct cgt gac gct ctg gaa gaa tct ctg aaa ctg aaa aac tgg tct    144
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
         35                  40                  45
tgc tct tct ccg gtt ttc ccg ggt aac tgg gat ctg cgt ctg ctg cag    192
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
     50                  55                  60
gtt cgt gaa cgt ccg gtt gct ctg gaa gct gaa ctg gct ctg acc ctg    240
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
 65                  70                  75                  80
aaa gtt ctg gaa gct gct gca ggt cct gct ctg gaa gat gtt ctg gat    288
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                 85                  90                  95
cag ccg ctg cac act ctg cac cac atc ctg tct cag ctg cag gct tgc    336
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
att caa ccg caa ccg acc gct ggt ccg cgt ccg cgt ggt cgt ctg cac    384
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
cac tgg ctg cat cgt ctg cag gaa gct ccg aaa aaa gaa tct gct ggt    432
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
tgc ctg gaa gct tct gtt acc ttc aac ctg ttc cgt ctg ctg acc cgt    480
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
gat ctg aaa tac gtt gct gat ggt aac ctg tct ctg cgt acc tct acc    528
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Ser Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
cat ccg gaa tct acc taa                                            546
His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>27
<211>181
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-29突变体C171S
<400>27
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His
 1               5                  10                  15
Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
            20                  25                  30
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
        35                  40                  45
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
    50                  55                  60
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
65                  70                  75                  80
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                85                  90                  95
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Ser Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>28
<211>549
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>met IL-29突变体C172S
<221>CDS
<222>(1)...(549)
<400>28
atg ggt ccg gtt ccg acc tct aaa cca acc acc act ggt aaa ggt tgc    48
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys
 1               5                   10                  15
cac atc ggt cgt ttc aaa tct ctg tct ccg cag gaa ctg gct tct ttc    96
His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
             20                  25                  30
aaa aaa gct cgt gac gct ctg gaa gaa tct ctg aaa ctg aaa aac tgg    144
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
         35                  40                  45
tct tgc tct tct ccg gtt ttc ccg ggt aac tgg gat ctg cgt ctg ctg    192
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
     50                  55                  60
cag gtt cgt gaa cgt ccg gtt gct ctg gaa gct gaa ctg gct ctg acc    240
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
 65                  70                  75                  80
ctg aaa gtt ctg gaa gct gct gca ggt cct gct ctg gaa gat gtt ctg    288
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                 85                  90                  95
gat cag ccg ctg cac act ctg cac cac atc ctg tct cag ctg cag gct    336
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
tgc att caa ccg caa ccg acc gct ggt ccg cgt ccg cgt ggt cgt ctg    384
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
cac cac tgg ctg cat cgt ctg cag gaa gct ccg aaa aaa gaa tct gct    432
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
ggt tgc ctg gaa gct tct gtt acc ttc aac ctg ttc cgt ctg ctg acc    480
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
cgt gat ctg aaa tac gtt gct gat ggt aac ctg tct ctg cgt acc tct    528
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Ser Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
acc cat ccg gaa tct acc taa                                       549
Thr His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>29
<211>182
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>met IL-29突变体C172S
<400>29
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys
 1               5                  10                  15
His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
            20                  25                  30
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
        35                  40                  45
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
65                  70                  75                  80
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                85                  90                  95
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Ser Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
Thr His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>30
<211>525
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>SEQ ID NO：18的简并序列
<221>misc_feature
<222>(1)...(525)
<223>n＝A，T，C或G
<400>30
gtnccngtng cnmgnytnca yggngcnytn ccngaygcnm gnggntgyca yathgcncar 60
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garwsnytny tnytnaarga ywsnmgntgy caywsnmgny tnttyccnmg nacntgggay 180
ytnmgncary tncargtnmg ngarmgnccn atggcnytng argcngaryt ngcnytnacn 240
ytnaargtny tngargcnac ngcngayacn gayccngcny tngtngaygt nytngaycar 300
ccnytncaya cnytncayca yathytnwsn carttymgng cntgyathca rccncarccn 360
acngcnggnc cnmgnacnmg nggnmgnytn caycaytggy tntaymgnyt ncargargcn 420
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ytnacnmgng ayytnaaytg ygtngcnwsn ggngayytnt gygtn                 525
<210>31
<211>525
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>SEQ ID NO：20的简并序列
<221>misc_feature
<222>(1)...(525)
<223>n＝A，T，C或G
<400>31
gtnccngtng cnmgnytnca yggngcnytn ccngaygcnm gnggntgyca yathgcncar 60
ttyaarwsny tnwsnccnca rgarytncar gcnttyaarm gngcnaarga ygcnytngar 120
garwsnytny tnytnaarga ywsnmgntgy caywsnmgny tnttyccnmg nacntgggay 180
ytnmgncary tncargtnmg ngarmgnccn atggcnytng argcngaryt ngcnytnacn 240
ytnaargtny tngargcnac ngcngayacn gayccngcny tngtngaygt nytngaycar 300
ccnytncaya cnytncayca yathytnwsn carttymgng cntgyathca rccncarccn 360
acngcnggnc cnmgnacnmg nggnmgnytn caycaytggy tntaymgnyt ncargargcn 420
ccnaaraarg arwsnccngg ntgyytngar gcnwsngtna cnttyaayyt nttymgnytn 480
ytnacnmgng ayytnaaytg ygtngcnwsn ggngayytnt gygtn                 525
<210>32
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<212>DNA
<213>人工序列
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<223>SEQ ID NO：22的简并序列
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<223>n＝A，T，C或G
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garwsnytny tnytnaarga ywsnmgntgy caywsnmgny tnttyccnmg nacntgggay 180
ytnmgncary tncargtnmg ngarmgnccn atggcnytng argcngaryt ngcnytnacn 240
ytnaargtny tngargcnac ngcngayacn gayccngcny tngtngaygt nytngaycar 300
ccnytncaya cnytncayca yathytnwsn carttymgng cntgyathca rccncarccn 360
acngcnggnc cnmgnacnmg nggnmgnytn caycaytggy tntaymgnyt ncargargcn 420
ccnaaraarg arwsnccngg ntgyytngar gcnwsngtna cnttyaayyt nttymgnytn 480
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garwsnytny tnytnaarga ywsnmgntgy caywsnmgny tnttyccnmg nacntgggay 180
ytnmgncary tncargtnmg ngarmgnccn atggcnytng argcngaryt ngcnytnacn 240
ytnaargtny tngargcnac ngcngayacn gayccngcny tngtngaygt nytngaycar 300
ccnytncaya cnytncayca yathytnwsn carttymgng cntgyathca rccncarccn 360
acngcnggnc cnmgnacnmg nggnmgnytn caycaytggy tntaymgnyt ncargargcn 420
ccnaaraarg arwsnccngg ntgyytngar gcnwsngtna cnttyaayyt nttymgnytn 480
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<210>34
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<213>人工序列
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<223>SEQ ID NO：26的简并序列
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<223>n＝A，T，C或G
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garwsnytny tnytnaarga ywsnmgntgy caywsnmgny tnttyccnmg nacntgggay 180
ytnmgncary tncargtnmg ngarmgnccn atggcnytng argcngaryt ngcnytnacn 240
ytnaargtny tngargcnac ngcngayacn gayccngcny tngtngaygt nytngaycar 300
ccnytncaya cnytncayca yathytnwsn carttymgng cntgyathca rccncarccn 360
acngcnggnc cnmgnacnmg nggnmgnytn caycaytggy tntaymgnyt ncargargcn 420
ccnaaraarg arwsnccngg ntgyytngar gcnwsngtna cnttyaayyt nttymgnytn 480
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<210>35
<211>525
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>SEQ ID NO：28的简并序列
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<222>(1)...(525)
<223>n＝A，T，C或G
<400>35
gtnccngtng cnmgnytnca yggngcnytn ccngaygcnm gnggntgyca yathgcncar 60
ttyaarwsny tnwsnccnca rgarytncar gcnttyaarm gngcnaarga ygcnytngar 120
garwsnytny tnytnaarga ywsnmgntgy caywsnmgny tnttyccnmg nacntgggay 180
ytnmgncary tncargtnmg ngarmgnccn atggcnytng argcngaryt ngcnytnacn 240
ytnaargtny tngargcnac ngcngayacn gayccngcny tngtngaygt nytngaycar 300
ccnytncaya cnytncayca yathytnwsn carttymgng cntgyathca rccncarccn 360
acngcnggnc cnmgnacnmg nggnmgnytn caycaytggy tntaymgnyt ncargargcn 420
ccnaaraarg arwsnccngg ntgyytngar gcnwsngtna cnttyaayyt nttymgnytn 480
ytnacnmgng ayytnaaytg ygtngcnwsn ggngayytnt gygtn                 525
<210>36
<211>175
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-28A突变体C48X
<221>VARIANT
<222>(48)...(48)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val或Asn
<400>36
Val Pro Val Ala Arg Leu His Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly Cys
 1               5                  10                  15
His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala Phe
            20                  25                  30
Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp Xaa
        35                  40                  45
Arg Cys His Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Met Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
65                  70                  75                  80
Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Val Asp
                85                  90                  95
Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Phe
            100                 105                 110
Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg Gly
        115                 120                 125
Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu
    130                 135                 140
Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu
145                 150                 155                 160
Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
<210>37
<211>176
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>met IL-28A突变体C49X
<221>VARIANT
<222>(49)...(49)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val或Asn
<400>37
Met Val Pro Val Ala Arg Leu His Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly
 1               5                  10                  15
Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala
            20                  25                  30
Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp
        35                  40                  45
Xaa Arg Cys His Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln
    50                  55                  60
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Met Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
65                  70                  75                  80
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Val
                85                  90                  95
Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln
            100                 105                 110
Phe Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg
        115                 120                 125
Gly Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys
    130                 135                 140
Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg
145                 150                 155                 160
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
<210>38
<211>175
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-28A突变体C50X
<221>VARIANT
<222>(50)...(50)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val或Asn
<400>38
Val Pro Val Ala Arg Leu His Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly Cys
 1               5                  10                  15
His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala Phe
            20                  25                  30
Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp Cys
        35                  40                  45
Arg Xaa His Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Met Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
65                  70                  75                  80
Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Val Asp
                85                  90                  95
Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Phe
            100                 105                 110
Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg Gly
        115                 120                 125
Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu
    130                 135                 140
Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu
145                 150                 155                 160
Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
<210>39
<211>176
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>met IL-28A突变体C51X
<221>VARIANT
<222>(51)...(51)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val或Asn
<400>39
Met Val Pro Val Ala Arg Leu His Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly
 1               5                  10                  15
Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala
            20                  25                  30
Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp
        35                  40                  45
Cys Arg Xaa His Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln
    50                  55                  60
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Met Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
65                  70                  75                  80
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Val
                85                  90                  95
Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln
            100                 105                 110
Phe Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg
        115                 120                 125
Gly Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys
    130                 135                 140
Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg
145                 150                 155                 160
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
<210>40
<211>181
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-29突变体C171X
<221>VARIANT
<222>(171)...(171)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val或Asn
<400>40
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His
 1               5                  10                  15
Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
            20                  25                  30
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
        35                  40                  45
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
    50                  55                  60
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
65                  70                  75                  80
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                85                  90                  95
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>41
<211>182
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>met IL-29突变体C172X
<221>VARIANT
<222>(172)...(172)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val或Asn
<400>41
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys
 1               5                  10                  15
His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
            20                  25                  30
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
        35                  40                  45
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
65                  70                  75                  80
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                85                  90                  95
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
Thr His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>42
<211>49
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC40923
<400>42
tccagggaat tcatataggc cggccaccat gaaactagac atgactggg             49
<210>43
<211>74
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC43152
<400>43
ggggtgggta caaccccaga gctgttttaa ggcgcgcctc tagactattt ttagacacac 60
aggtccccac tggc                                                   74
<210>44
<211>50
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC29740
<400>44
ttgacaatta atcatcggct cgtataatgt gtggaattgt gagcggataa            50
<210>45
<211>42
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC29741
<400>45
tctgatttaa tctgtatcag gctgaaaatc ttatctcatc cg                     42
<210>46
<211>62
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC29736
<400>46
gtggaattgt gagcggataa caatttcaca cagaattcat taaagaggag aaattaactc 60
cc                                                                62
<210>47
<211>63
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC29738
<400>47
gctgaaaatc ttatctcatc cgccaaaaca cccgggagtt aatttctcct ctttaatgaa 60
ttc                                                               63
<210>48
<211>78
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC44566
<400>48
tcttccagag cgtcacgagc ttttttgaaa gaagccagtt cctgcggaga cagagatttg 60
aaacgaccga tgtggcaa                                               78
<210>49
<211>84
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC44565
<400>49
tcgtgacgct ctggaagaat ctctgaaact gaaaaactgg tcttgctctt ctccggtttt 60
cccgggtaac tgggatctgc gtct                                        84
<210>50
<211>71
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC44564
<400>50
aacagaagct tccaggcaac cagcagattc ttttttcgga gcttcctgca gacgatgcag 60
ccagtggtgc a                                                      71
<210>51
<211>73
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC44563
<400>51
aactggctct gaccctgaaa gttctggaag ctgctgcagg tcctgctctg gaagatgttc 60
tggatcagcc gct                                                    73
<210>52
<211>74
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC44562
<400>52
tcagggtcag agccagttca gcttccagag caaccggacg ttcacgaacc tgcagcagac 60
gcagatccca gtta                                                   74
<210>53
<211>76
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC44561
<400>53
tcagctgcag gcttgcattc aaccgcaacc gaccgctggt ccgcgtccgc gtggtcgtct 60
gcaccactgg ctgcat                                                 76
<210>54
<211>60
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC44560
<400>54
atgcaagcct gcagctgaga caggatgtgg tgcagagtgt gcagcggctg atccagaaca 60
<210>55
<211>62
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC44559
<400>55
atgggtccgg ttccgacctc taaaccaacc accactggta aaggttgcca catcggtcgt 60
tt                                                                62
<210>56
<211>65
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC44558
<400>56
ttaggtagat tccggatggg tagaggtacg caggcacagg ttaccatcag caacgtattt 60
cagat                                                             65
<210>57
<211>69
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC44557
<400>57
tgcctggaag cttctgttac cttcaacctg ttccgtctgc tgacccgtga tctgaaatac 60
gttgctgat                                                         69
<210>58
<211>41
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC44340
<400>58
cgttgctgat ggtaacctgt ctctgcgtac ctctacccat c                     41
<210>59
<211>41
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC44341
<400>59
gatgggtaga ggtacgcaga gacaggttac catcagcaac g                     41
<210>60
<211>68
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC41212
<400>60
ctagaaataa ttttgtttaa ctttaagaag gagatatata tatgggccct gtccccactt 60
ccaagccc                                                          68
<210>61
<211>67
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC41041
<400>61
tctgtatcag gctgaaaatc ttatctcatc cgccaaaaca ttaggtggac tcagggtggg 60
ttgacgt                                                           67
<210>62
<211>65
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC43431
<400>62
ctagaaataa ttttgtttaa ctttaagaag gagatatata tatggttcct gtcgccaggc 60
tccac                                                             65
<210>63
<211>67
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC43437
<400>63
taatctgtat caggctgaaa atcttatctc atccgccaaa acatcagaca cacaggtccc 60
cactggc                                                           67
<210>64
<211>39
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC44327
<400>64
gtggccgatg ggaacctgtc cctgagaacg tcaacccac                         39
<210>65
<211>39
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC44328
<400>65
gtgggttgac gttctcaggg acaggttccc atcggccac                        39
<210>66
<211>83
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC45399
<400>66
tcaggtccca ggtcctgggg aagaggcggg agtggcacct ggagtccttc agcagaagcg 60
actcttctaa ggcatctttg gcc                                         83
<210>67
<211>531
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>来自pYEL7b的成熟zcyto20
<221>CDS
<222>(1)...(531)
<400>67
atg gtt cct gtc gcc agg ctc cac ggg gct ctc ccg gat gca agg ggc    48
Met Val Pro Val Ala Arg Leu His Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly
 1               5                   10                  15
tgc cac ata gcc cag ttc aag tcc ctg tct cca cag gag ctg cag gcc    96
Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala
             20                  25                  30
ttt aag agg gcc aaa gat gcc tta gaa gag tcg ctt ctg ctg aag gac    144
Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp
         35                  40                  45
tgc agg tgc cac tcc cgc ctc ttc ccc agg acc tgg gac ctg agg cag    192
Cys Arg Cys His Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln
     50                  55                  60
ctg cag gtg agg gag cgc ccc atg gct ttg gag gct gag ctg gcc ctg    240
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Met Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
 65                  70                  75                  80
acg ctg aag gtt ctg gag gcc acc gct gac act gac cca gcc ctg gtg    288
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Val
                 85                  90                  95
gac gtc ttg gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cat atc ctc tcc cag    336
Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln
            100                 105                 110
ttc cgg gcc tgt atc cag cct cag ccc acg gca ggg ccc agg acc egg    384
Phe Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg
        115                 120                 125
ggc cgc ctc cac cat tgg ctg tac cgg ctc cag gag gcc cca aaa aag    432
Gly Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys
    130                 135                 140
gag tcc cct ggc tgc ctc gag gcc tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc    480
Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg
145                 150                 155                 160
ctc ctc acg cga gac ctg aat tgt gtt gcc agt ggg gac ctg tgt gtc    528
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
tga                                                                531
 *
<210>68
<211>83
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC45398
<400>68
ggccaaagat gccttagaag agtcgcttct gctgaaggac tccaggtgcc actcccgcct 60
cttccccagg acctgggacc tga                                         83
<210>69
<211>83
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC45397
<400>69
gctgcctcag gtcccaggtc ctggggaaga ggcgggagtg ggacctgcag tccttcagca 60
gaagcgactc ttctaaggca tct                                         83
<210>70
<211>83
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC45396
<400>70
agatgcctta gaagagtcgc ttctgctgaa ggactgcagg tcccactccc gcctcttccc 60
caggacctgg gacctgaggc age                                         83
<210>71
<211>1013
<212>DNA
<213>智人
<220>
<221>CDS
<222>(14)...(991)
<400>71
ccagcgtccg tcc atg gcg tgg agc ctt ggg agc tgg ctg ggt ggc tgc     49
               Met Ala Trp Ser Leu Gly Ser Trp Leu Gly Gly Cys
                1               5                   10
ctg ctg gtg tca gca ttg gga atg gta cca cct ccc gaa aat gtc aga    97
Leu Leu Val Ser Ala Leu Gly Met Val Pro Pro Pro Glu Asn Val Arg
         15                  20                  25
atg aat tct gtt aat ttc aag aac att cta cag tgg gag tca cct gct    145
Met Asn Ser Val Asn Phe Lys Asn Ile Leu Gln Trp Glu Ser Pro Ala
     30                  35                  40
ttt gcc aaa ggg aac ctg act ttc aca gct cag tac cta agt tat agg    193
Phe Ala Lys Gly Asn Leu Thr Phe Thr Ala Gln Tyr Leu Ser Tyr Arg
 45                  50                  55                  60
ata ttc caa gat aaa tgc atg aat act acc ttg acg gaa tgt gat ttc    241
Ile Phe Gln Asp Lys Cys Met Asn Thr Thr Leu Thr Glu Cys Asp Phe
                 65                  70                  75
tca agt ctt tcc aag tat ggt gac cac acc ttg aga gtc agg gct gaa    289
Ser Ser Leu Ser Lys Tyr Gly Asp His Thr Leu Arg Val Arg Ala Glu
             80                  85                  90
ttt gca gat gag cat tca gac tgg gta aac atc acc ttc tgt cct gtg    337
Phe Ala Asp Glu His Ser Asp Trp Val Asn Ile Thr Phe Cys Pro Val
         95                 100                 105
gat gac acc att att gga ccc cct gga atg caa gta gaa gta ctt gct    385
Asp Asp Thr Ile Ile Gly Pro Pro Gly Met Gln Val Glu Val Leu Ala
    110                 115                 120
gat tct tta cat atg cgt ttc tta gcc cct aaa att gag aat gaa tac    433
Asp Ser Leu His Met Arg Phe Leu Ala Pro Lys Ile Glu Asn Glu Tyr
125                 130                 135                 140
gaa act tgg act atg aag aat gtg tat aac tca tgg act tat aat gtg    481
Glu Thr Trp Thr Met Lys Asn Val Tyr Asn Ser Trp Thr Tyr Asn Val
                145                 150                 155
caa tac tgg aaa aac ggt act gat gaa aag ttt caa att act ccc cag    529
Gln Tyr Trp Lys Asn Gly Thr Asp Glu Lys Phe Gln Ile Thr Pro Gln
            160                 165                 170
tat gac ttt gag gtc ctc aga aac ctg gag cca tgg aca act tat tgt    577
Tyr Asp Phe Glu Val Leu Arg Asn Leu Glu Pro Trp Thr Thr Tyr Cys
        175                 180                 185
gtt caa gtt cga ggg ttt ctt cct gat cgg aac aaa gct ggg gaa tgg    625
Val Gln Val Arg Gly Phe Leu Pro Asp Arg Asn Lys Ala Gly Glu Trp
    190                 195                 200
agt gag cct gtc tgt gag caa aca acc cat gac gaa acg gtc ccc tcc    673
Ser Glu Pro Val Cys Glu Gln Thr Thr His Asp Glu Thr Val Pro Ser
205                 210                 215                 220
tgg atg gtg gcc gtc atc ctc atg gcc tcg gtc ttc atg gtc tgc ctg    721
Trp Met Val Ala Val Ile Leu Met Ala Ser Val Phe Met Val Cys Leu
                225                 230                 235
gca ctc ctc ggc tgc ttc tcc ttg ctg tgg tgc gtt tac aag aag aca    769
Ala Leu Leu Gly Cys Phe Ser Leu Leu Trp Cys Val Tyr Lys Lys Thr
            240                 245                 250
aag tac gcc ttc tcc cct agg aat tct ctt cca cag cac ctg aaa gag    817
Lys Tyr Ala Phe Ser Pro Arg Asn Ser Leu Pro Gln His Leu Lys Glu
        255                 260                 265
ttt ttg ggc cat cct cat cat aac aca ctt ctg ttt ttc tcc ttt cca    865
Phe Leu Gly His Pro His His Asn Thr Leu Leu Phe Phe Ser Phe Pro
    270                 275                 280
ttg tcg gat gag aat gat gtt ttt gac aag cta agt gtc att gca gaa    913
Leu Ser Asp Glu Asn Asp Val Phe Asp Lys Leu Ser Val Ile Ala Glu
285                 290                 295                 300
gac tct gag agc ggc aag cag aat cct ggt gac agc tgc agc ctc ggg    961
Asp Ser Glu Ser Gly Lys Gln Asn Pro Gly Asp Ser Cys Ser Leu Gly
                305                 310                 315
acc ccg cct ggg cag ggg ccc caa agc tag gctctgagaa ggaaacacac      1011
Thr Pro Pro Gly Gln Gly Pro Gln Ser  *
            320                 325
tc                                                                 1013
<210>72
<211>49
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC40922
<400>72
tccagggaat tcatataggc cggccaccat ggctgcagct tggaccgtg              49
<210>73
<211>71
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物ZC43153
<400>73
ggggtgggta caaccccaga gctgttttaa ggcgcgcctc tagactattt ttaggtggac 60
tcagggtggg t                                                      71
<210>74
<211>546
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL29突变体C15X，Asn169
<221>CDS
<222>(1)...(546)
<221>variation
<222>(44)...(45)
<223>n＝A，G，T，或C
<400>74
ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc dnn cac    48
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Xaa His
 1               5                   10                  15
att ggc agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc aag    96
Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
             20                  25                  30
aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg agt    144
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
         35                  40                  45
tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc cag    192
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
     50                  55                  60
gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg ctg    240
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
 65                  70                  75                  80
aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta gac    288
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                 85                  90                  95
cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc tgt    336
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc cac    384
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct ggc    432
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg cga    480
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg aay ctg tgt ctg aga acg tca acc    528
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Cys Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
cac cct gag tcc acc tga                                            546
His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>75
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<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>VARIANT
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Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Xaa His
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Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
            20                  25                  30
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
        35                  40                  45
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
    50                  55                  60
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
65                  70                  75                  80
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                85                  90                  95
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
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Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
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His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
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Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Cys Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
His Pro Glu Ser Thr
            180
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atg ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc dnn    48
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Xaa
 1               5                   10                  15
cac att ggc agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc    96
His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
             20                  25                  30
aag aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg    144
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
         35                  40                  45
agt tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc    192
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
     50                  55                  60
cag gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg    240
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
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ctg aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta    288
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
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gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc    336
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
tgt atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc    384
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
cac cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct    432
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
ggc tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg    480
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
cga gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg aay ctg tgt ctg aga acg tca    528
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Cys Leu Arg Thr Ser
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acc cac cct gag tcc acc tga                                        549
Thr His Pro Glu Ser Thr  *
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His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
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Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
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Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
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Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
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Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                  140
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Cys Leu Arg Thr Ser
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Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Xaa His
 1               5                   10                  15
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Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
             20                  25                  30
aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg agt    144
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
         35                  40                  45
tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc cag    192
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
     50                  55                  60
gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg ctg    240
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
 65                  70                  75                  80
aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta gac    288
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                 85                  90                  95
cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc tgt    336
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
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atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc cac    384
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct ggc    432
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg cga    480
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
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gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg gay ctg tgt ctg aga acg tca acc    528
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Cys Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
cac cct gag tcc acc tga                                            546
His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>79
<211>181
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL29突变体C15X，Asp169
<221>VARIANT
<222>(15)...(15)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>79
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Xaa His
 1               5                  10                  15
Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
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Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
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Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
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His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
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His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>80
<211>549
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<213>人工序列
<220>
<223>Met IL29突变体C16X，Asp170
<221>CDS
<222>(1)...(549)
<221>variation
<222>(47)...(48)
<223>n＝A，T，G，或C
<400>80
atg ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc dnn    48
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cac att ggc agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc    96
His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
             20                  25                  30
aag aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg    144
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
        35                  40                  45
agt tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc    192
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
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cag gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg    240
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
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gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc    336
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Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
cac cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct    432
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
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Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
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Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Cys Leu Arg Thr Ser
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acc cac cct gag tcc acc tga                                        549
Thr His Pro Glu Ser Thr  *
            180
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<211>182
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL29突变体C16X，Asp170
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Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
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ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc tgc cac    48
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att ggc agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc aag    96
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gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg ctg    240
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
 65                  70                  75                  80
aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta gac    288
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                 85                  90                  95
cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc tgt    336
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
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cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct ggc    432
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg cga    480
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg gay ctg dnn ctg aga acg tca acc    528
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
cac cct gag tcc acc tga                                            546
His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>83
<211>181
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL29突变体Asp169，C171X
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<222>(171)...(171)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
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Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His
 1               5                  10                  15
Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
            20                  25                  30
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
        35                  40                  45
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
    50                  55                  60
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
65                  70                  75                  80
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                85                  90                  95
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>84
<211>549
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
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<221>variation
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atg ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc tgc    48
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys
 1               5                   10                  15
cac att ggc agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc    96
His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
             20                  25                  30
aag aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg    144
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
         35                  40                  45
agt tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc    192
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
     50                  55                  60
cag gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg    240
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
 65                  70                  75                  80
ctg aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta    288
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                 85                  90                  95
gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc    336
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
tgt atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc    384
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
cac cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct    432
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
ggc tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg    480
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
cga gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg gay ctg dnn ctg aga acg tca    528
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Xaa Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
acc cac cct gag tcc acc tga                                        549
Thr His Pro Glu Ser Thr  *
            180
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<211>182
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL29突变体Asp170，C172X
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Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys
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His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
            20                  25                  30
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
        35                  40                  45
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
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Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
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Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Xaa Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
Thr His Pro Glu Ser Thr
            180
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<212>DNA
<213>人工序列
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<223>IL29突变体T10P，Asn169，C171X
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<223>n＝A，T，G，或C
<400>86
ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc ccn act ggg aag ggc tgc cac    48
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Pro Thr Gly Lys Gly Cys His
 1               5                   10                  15
att ggc agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc aag    96
Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
             20                  25                  30
aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg agt    144
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
         35                  40                  45
tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc cag    192
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
     50                  55                  60
gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg ctg    240
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
 65                  70                  75                  80
aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta gac    288
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                 85                  90                  95
cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc tgt    336
3ln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc cac    384
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct ggc    432
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg cga    480
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg aac ctg dnn ctg aga acg tca acc    528
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
cac cct gag tcc acc tga                                            546
His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>87
<211>181
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL29突变体T10P，Asn169，C171X
<221>VARIANT
<222>(171)...(171)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>87
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Pro Thr Gly Lys Gly Cys His
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Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
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Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
        35                  40                  45
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
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Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
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Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
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Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
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His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
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Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
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Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr
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His Pro Glu Ser Thr
            180
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<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL29突变体T11P，Asn170，C172X
<221>CDS
<222>(1)...(549)
<221>variation
<222>(515)...(516)
<223>n＝A，T，G，或C
<400>88
atg ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc ccn act ggg aag ggc tgc    48
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Pro Thr Gly Lys Gly Cys
 1               5                   10                  15
cac att ggc agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc    96
His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
             20                  25                  30
aag aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg    144
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
         35                  40                  45
agt tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc    192
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
     50                  55                  60
cag gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg    240
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
 65                  70                  75                  80
ctg aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta    288
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
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gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc    336
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
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tgt atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc    384
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
cac cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct    432
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
ggc tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg    480
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
cga gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg aac ctg dnn ctg aga acg tca    528
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
acc cac cct gag tcc acc tga                                        549
Thr His Pro Glu Ser Thr  *
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<212>PRT
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<223>Met IL29突变体T11P，Asn170，C172X
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<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
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Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Pro Thr Gly Lys Gly Cys
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His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
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Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
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Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
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Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
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Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
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His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
Thr His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>90
<211>546
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL29突变体T10P，C15X，Asn169
<221>CDS
<222>(1)...(546)
<221>variation
<222>30，44，45
<223>n＝A，T，G，或C
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ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc ccn act ggg aag ggc dnn cac    48
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Pro Thr Gly Lys Gly Xaa His
 1               5                   10                  15
att ggc agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc aag    96
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Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
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tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc cag    192
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
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gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg ctg    240
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
 65                  70                  75                  80
aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta gac    288
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
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cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc tgt    336
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc cac    384
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct ggc    432
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg cga    480
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg aay ctg tgt ctg aga acg tca acc    528
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Cys Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
cac cct gag tcc acc tga                                            546
His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>91
<211>181
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL29突变体T10P，C15X，Asn169
<221>VARIANT
<222>(15)...(15)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>91
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Pro Thr Gly Lys Gly Xaa His
 1               5                  10                  15
Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
            20                  25                  30
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
        35                  40                  45
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
    50                  55                  60
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
65                  70                  75                  80
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                85                  90                  95
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Cys Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>92
<211>549
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL29突变体T11P，C16X，Asn170
<221>CDS
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<221>variation
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<223>n＝A，T，G，或C
<400>92
atg ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc ccn act ggg aag ggc dnn    48
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Pro Thr Gly Lys Gly Xaa
 1               5                   10                  15
cac att ggc agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc    96
His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
             20                  25                  30
aag aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg    144
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
         35                  40                  45
agt tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc    192
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
     50                  55                  60
cag gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg    240
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
 65                  70                  75                  80
ctg aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta    288
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                 85                  90                  95
gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc    336
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
tgt atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc    384
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
cac cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct    432
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
ggc tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg    480
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
cga gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg aay ctg tgt ctg aga acg tca    528
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Cys Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
acc cac cct gag tcc acc tga                                        549
Thr His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>93
<211>182
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL29突变体T11P，C16X，Asn170
<221>VARIANT
<222>(16)...(16)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
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Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Pro Thr Gly Lys Gly Xaa
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His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
            20                  25                  30
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
        35                  40                  45
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
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Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                85                  90                  95
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Cys Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
Thr His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>94
<211>546
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL29突变体T10P，Asp169，C171X
<221>CDS
<222>(1)...(546)
<221>variation
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<223>n＝A，T，G，或C
<400>94
ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc ccn act ggg aag ggc tgc cac    48
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Pro Thr Gly Lys Gly Cys His
 1               5                   10                  15
att ggc agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc aag    96
Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
             20                  25                  30
aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg agt    144
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
         35                  40                  45
tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc cag    192
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
     50                  55                  60
gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg ctg    240
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
 65                  70                  75                  80
aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta gac    288
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                 85                  90                  95
cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc tgt    336
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc cac    384
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct ggc    432
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg cga    480
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg gay ctg dnn ctg aga acg tca acc    528
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
cac cct gag tcc acc tga                                           546
His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>95
<211>181
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL29突变体T10P，Asp169，C171X
<221>VARIANT
<222>(171)...(171)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>95
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Pro Thr Gly Lys Gly Cys His
 1               5                  10                  15
Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
            20                  25                  30
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
        35                  40                  45
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
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Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
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Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                85                  90                  95
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
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Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr
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His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>96
<211>549
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL29突变体T11P，Asp170，C172X
<221>CDS
<222>(1)...(549)
<221>variation
<222>33，515，516
<223>n＝A，T，G，或C
<400>96
atg ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc ccn act ggg aag ggc tgc    48
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Pro Thr Gly Lys Gly Cys
 1               5                   10                  15
cac att ggc agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc    96
His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
             20                  25                  30
aag aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg    144
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
         35                  40                  45
agt tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc    192
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
     50                  55                  60
cag gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg    240
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
 65                  70                  75                  80
ctg aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta    288
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                 85                  90                  95
gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc    336
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
tgt atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc    384
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
cac cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct    432
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
ggc tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg    480
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
cga gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg gay ctg dnn ctg aga acg tca    528
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Xaa Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
acc cac cct gag tcc acc tga                                        549
Thr His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>97
<211>182
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL29突变体T11P，Asp170，C172X
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Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Pro Thr Gly Lys Gly Cys
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His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
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Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
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Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
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Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Xaa Leu Arg Thr Ser
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Thr His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>98
<211>546
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL29突变体T10P，C15X，Asp169
<221>CDS
<222>(1)...(546)
<221>variation
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<223>n＝A，T，G，或C
<400>98
ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc ccn act ggg aag ggc dnn cac    48
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Pro Thr Gly Lys Gly Xaa His
 1               5                   10                  15
att ggc agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc aag    96
Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
             20                  25                  30
aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg agt    144
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
         35                  40                  45
tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc cag    192
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
     50                  55                  60
gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg ctg    240
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
 65                  70                  75                  80
aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta gac    288
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                 85                  90                  95
cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc tgt    336
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc cac    384
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct ggc    432
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg cga    480
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg gay ctg tgt ctg aga acg tca acc    528
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Cys Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
cac cct gag tcc acc tga                                            546
His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>99
<211>181
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL29突变体T10P，C15X，Asp169
<221>VARIANT
<222>(15)...(15)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>99
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Pro Thr Gly Lys Gly Xaa His
 1               5                  10                  15
Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
            20                  25                  30
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
        35                  40                  45
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
     50                  55                  60
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
65                  70                  75                  80
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                85                  90                  95
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Cys Leu Arg Thr Ser Thr
                 165                 170                 175
His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>100
<211>549
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL29突变体T11P，C16X，Asp170
<221>CDS
<222>(1)...(549)
<221>variation
<222>33，47，48
<223>n＝A，T，G，或C
<400>100
atg ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc ccn act ggg aag ggc dnn    48
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Pro Thr Gly Lys Gly Xaa
 1               5                   10                  15
cac att ggc agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc    96
His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
             20                  25                  30
aag aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg    144
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
         35                  40                  45
agt tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc    192
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
     50                  55                  60
cag gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg    240
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
 65                  70                  75                  80
ctg aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta    288
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                 85                  90                  95
gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc    336
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
tgt atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc    384
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
cac cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct    432
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
ggc tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg    480
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
cga gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg gay ctg tgt ctg aga acg tca    528
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Cys Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
acc cac cct gag tcc acc tga                                        549
Thr His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>101
<211>182
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL29突变体T11P，C16X，Asp170
<221>VARIANT
<222>(16)...(16)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>101
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Pro Thr Gly Lys Gly Xaa
 1               5                  10                  15
His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
            20                  25                  30
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
        35                  40                  45
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
65                  70                  75                  80
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                85                  90                  95
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Cys Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
Thr His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>102
<211>546
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL29突变体G18D，Asnl69，C171X
<221>CDS
<222>(1)...(546)
<221>variation
<222>(512)...(513)
<223>n＝A，T，G，或C
<400>102
ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc tgc cac    48
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His
 1               5                   10                  15
att gay agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc aag    96
Ile Asp Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
             20                  25                  30
aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg agt    144
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
         35                  40                  45
tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc cag    192
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
     50                  55                  60
gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg ctg    240
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
 65                  70                  75                  80
aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta gac    288
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                 85                  90                  95
cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc tgt    336
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc cac    384
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct ggc    432
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg cga    480
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg aac ctg dnn ctg aga acg tca acc    528
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
cac cct gag tcc acc tga                                            546
His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>103
<211>181
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL29突变体G18D，Asn169，C171X
<221>VARIANT
<222>(171)...(171)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>103
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His
 1               5                  10                  15
Ile Asp Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
            20                  25                  30
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
        35                  40                  45
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
    50                  55                  60
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
65                  70                  75                  80
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                85                  90                  95
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>104
<211>549
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL29突变体G19D，Asn170，C172X
<221>CDS
<222>(1)...(549)
<221>variation
<222>(515)...(516)
<223>n＝A，T，G，或C
<400>104
atg ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc tgc    48
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys
 1               5                   10                  15
cac att gay agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc    96
His Ile Asp Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
             20                  25                  30
aag aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg    144
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
         35                  40                  45
agt tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc    192
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
     50                  55                  60
cag gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg    240
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
 65                  70                  75                  80
ctg aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta  288
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                 85                  90                  95
gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc  336
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
tgt atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc  384
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
cac cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct  432
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
ggc tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg  480
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
cga gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg aac ctg dnn ctg aga acg tca  528
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
acc cac cct gag tcc acc tga                                      549
Thr His Pro Glu Ser Thr *
            180
<210>105
<211>182
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL29突变体G19D，Asn170，C172X
<221>VARIANT
<222>(172)...(172)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>105
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys
 1               5                  10                  15
His Ile Asp Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
            20                  25                  30
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
        35                  40                  45
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
65                  70                  75                  80
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                85                  90                  95
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
Thr His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>106
<211>546
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL29突变体C15X，G18D，Asn169
<221>CDS
<222>(1)...(546)
<221>variation
<222>(44)...(45)
<223>n＝A，T，G，或C
<400>106
ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc dnn cac    48
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Xaa His
 1               5                   10                  15
att gay agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc aag    96
Ile Asp Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
             20                  25                  30
aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg agt    144
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
         35                  40                  45
tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc cag    192
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
     50                  55                  60
gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg ctg    240
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
 65                  70                  75                  80
aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta gac    288
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                 85                  90                  95
cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc tgt    336
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc cac    384
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct ggc    432
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg cga    480
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg aay ctg tgt ctg aga acg tca acc    528
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Cys Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
cac cct gag tcc acc tga                                            546
His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>107
<211>181
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL29突变体C15X，G18D，Asn169
<221>VARIANT
<222>(15)...(15)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>107
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Xaa His
 1               5                  10                  15
Ile Asp Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
            20                  25                  30
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
        35                  40                  45
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
    50                  55                  60
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
65                  70                  75                  80
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                85                  90                  95
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Cys Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>108
<211>549
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL29突变体C16X，G19D，Asn170
<221>CDS
<222>(1)...(549)
<221>variation
<222>(47)...(48)
<223>n＝A，T，G，或C
<400>108
atg ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc dnn  48
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Xaa
 1               5                   10                  15
cac att gay agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc  96
His Ile Asp Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
             20                  25                  30
aag aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg  144
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
         35                  40                  45
agt tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc  192
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
     50                  55                  60
cag gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg  240
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
 65                  70                  75                  80
ctg aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta  288
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                 85                  90                  95
gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc  336
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
tgt atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc  384
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
cac cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct  432
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
ggc tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg  480
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
cga gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg aay ctg tgt ctg aga acg tca  528
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Cys Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
acc cac cct gag tcc acc tga                                      549
Thr His Pro Glu Ser Thr *
            180
<210>109
<211>182
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL29突变体C16X，G19D，Asn170
<221>VARIANT
<222>(16)...(16)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>109
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Xaa
 1               5                  10                  15
His Ile Asp Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
            20                  25                  30
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
        35                  40                  45
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
65                  70                  75                  80
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                85                  90                  95
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Cys Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
Thr His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>110
<211>546
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL29突变体G18D，Asp169，C171X
<221>CDS
<222>(1)...(546)
<221>variation
<222>(512)...(513)
<223>n＝A，T，G，或C
<400>110
ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc tgc cac  48
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His
 1               5                   10                  15
att gay agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc aag  96
Ile Asp Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
             20                  25                  30
aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg agt  144
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
         35                  40                  45
tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc cag  192
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
     50                  55                  60
gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg ctg  240
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
 65                  70                  75                  80
aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta gac  288
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                 85                  90                  95
cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc tgt  336
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc cac  384
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct ggc  432
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg cga  480
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg gay ctg dnn ctg aga acg tca acc  528
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
cac cct gag tcc acc tga                                          546
His Pro Glu Ser Thr *
            180
<210>111
<211>181
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL29突变体G18D，Asp169，C171X
<221>VARIANT
<222>(171)...(171)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>111
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His
 1               5                  10                  15
Ile Asp Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
            20                  25                  30
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
        35                  40                  45
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
    50                  55                  60
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
65                  70                  75                  80
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                85                  90                  95
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>112
<211>549
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL29突变体G19D，Asp170，C172X
<221>CDS
<222>(1)...(549)
<221>variation
<222>(515)...(516)
<223>n＝A，T，G，或C
<400>112
atg ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc tgc    48
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys
 1               5                   10                  15
cac att gay agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc    96
His Ile Asp Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
             20                  25                  30
aag aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg    144
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
         35                  40                  45
agt tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc    192
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
     50                  55                  60
cag gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg    240
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
 65                  70                  75                  80
ctg aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta    288
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                 85                  90                  95
gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc    336
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
tgt atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc    384
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
cac cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct    432
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
ggc tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg    480
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
cga gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg gay ctg dnn ctg aga acg tca    528
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Xaa Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
acc cac cct gag tcc acc tga                                      549
Thr His Pro Glu Ser Thr *
            180
<210>113
<211>182
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL29突变体G19D，Asp170，C172X
<221>VARIANT
<222>(172)...(172)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>113
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys
 1               5                  10                  15
His Ile Asp Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
            20                  25                  30
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
        35                  40                  45
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
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65                  70                  75                  80
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                85                  90                  95
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
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His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
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Thr His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>114
<211>546
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL29突变体C15X，G18D，Asp169
<221>CDS
<222>(1)...(546)
<221>variation
<222>(44)...(45)
<223>n＝A，T，G，或C
<400>114
ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc dnn cac  48
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Xaa His
 1               5                   10                  15
att gay agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc aag  96
Ile Asp Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
             20                  25                  30
aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg agt  144
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
         35                  40                  45
tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc cag  192
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
     50                  55                  60
gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg ctg  240
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
 65                  70                  75                  80
aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta gac  288
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                 85                  90                  95
cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc tgt  336
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc cac  384
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct ggc  432
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg cga  480
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg gay ctg tgt ctg aga acg tca acc  528
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Cys Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
cac cct gag tcc acc tga                                          546
His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>115
<211>181
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL29突变体C15X，G18D，Asp169
<221>VARIANT
<222>(15)...(15)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>115
Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Xaa His
 1               5                  10                  15
Ile Asp Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys
            20                  25                  30
Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser
        35                  40                  45
Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln
    50                  55                  60
Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu
65                  70                  75                  80
Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp
                85                  90                  95
Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys
            100                 105                 110
Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His
        115                 120                 125
His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly
    130                 135                 140
Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg
145                 150                 155                 160
Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Cys Leu Arg Thr Ser Thr
                165                 170                 175
His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>116
<211>549
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL29突变体C16X，G19D，Asp170
<221>CDS
<222>(1)...(549)
<221>variation
<222>(47)...(48)
<223>n＝A，T，G，或C
<400>116
atg ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc dnn  48
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Xaa
 1               5                   10                  15
cac att gay agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc  96
His Ile Asp Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
             20                  25                  30
aag aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg  144
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
         35                  40                  45
agt tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc  192
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
     50                  55                  60
cag gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg  240
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
 65                  70                  75                  80
ctg aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta  288
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                 85                  90                  95
gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc  336
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
tgt atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc  384
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
cac cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct  432
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
ggc tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg  480
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
cga gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg gay ctg tgt ctg aga acg tca  528
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Cys Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
acc cac cct gag tcc acc tga                                      549
Thr His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>117
<211>182
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL29突变体C16X，G19D，Asp170
<221>VARIANT
<222>(16)...(16)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>117
Met Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Xaa
 1               5                  10                  15
His Ile Asp Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
            20                  25                  30
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
        35                  40                  45
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
65                  70                  75                  80
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                85                  90                  95
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asp Leu Cys Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
Thr His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>118
<211>57
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>信号序列
<221>CDS
<222>(1)...(57)
<400>118
atg gct gca gct tgg acc gtg gtg ctg gtg act ttg gtg cta ggc ttg  48
Met Ala Ala Ala Trp Thr Val Val Leu Val Thr Leu Val Leu Gly Leu
 1               5                   10                  15
gcc gtg gca                                                      57
Ala Val Ala
<210>119
<211>19
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>信号序列
<400>119
Met Ala Ala Ala Trp Thr Val Val Leu Val Thr Leu Val Leu Gly Leu
 1               5                  10                  15
Ala Val Ala
<210>120
<211>66
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>信号序列
<221>CDS
<222>(1)...(66)
<400>120
atg gtg ccc acc aca ttg gct tgg acc gtg gtg ctg gtg act ttg gtg  48
Met Val Pro Thr Thr Leu Ala Trp Thr Val Val Leu Val Thr Leu Val
 1               5                   10                  15
cta ggc ttg gcc gtg gca                                          66
Leu Gly Leu Ala Val Ala
             20
<210>121
<211>22
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>信号序列
<400>121
Met Val Pro Thr Thr Leu Ala Trp Thr Val Val Leu Val Thr Leu Val
 1               5                  10                  15
Leu Gly Leu Ala Val Ala
            20
<210>122
<211>528
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-28B C48S
<221>CDS
<222>(1)...(528)
<221>variation
<222>(143)...(144)
<223>n＝A，T，G，或C
<400>122
gtt cct gtc gcc agg ctc cgc ggg gct ctc ccg gat gca agg ggc tgc  48
Val Pro Val Ala Arg Leu Arg Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly Cys
 1               5                   10                  15
cac ata gcc cag ttc aag tcc ctg tct cca cag gag ctg cag gcc ttt  96
His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala Phe
             20                  25                  30
aag agg gcc aaa gat gcc tta gaa gag tcg ctt ctg ctg aag gac dnn  144
Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp Xaa
         35                  40                  45
aag tgc cgc tcc cgc ctc ttc ccc agg acc tgg gac ctg agg cag ctg  192
Lys Cys Arg Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln Leu
     50                  55                  60
cag gtg agg gag cgc ccc gtg gct ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg  240
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
 65                  70                  75                  80
ctg aag gtt ctg gag gcc acc gct gac act gac cca gcc ctg ggg gat  288
Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Gly Asp
                 85                  90                  95
gtc ttg gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cat atc ctc tcc cag ctc  336
Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu
            100                 105                 110
cgg gcc tgt atc cag cct cag ccc acg gca ggg ccc agg acc cgg ggc  384
Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg Gly
        115                 120                 125
cgc ctc cac cat tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc cca aaa aag gag  432
Arg Leu His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu
    130                 135                 140
tcc cct ggc tgc ctc gag gcc tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc  480
Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val  Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu
145                 150                 155                 160
ctc acg cga gac ctg aat tgt gtt gcc agc ggg gac ctg tgt gtc tga  528
Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val  *
                165                 170                 175
<210>123
<211>175
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>VARTANT
<222>(48)...(48)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<223>IL-28B C48S
<400>123
Val Pro Val Ala Arg Leu Arg Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly Cys
 1               5                  10                  15
His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala Phe
             20                  25                  30
Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp Xaa
        35                  40                  45
Lys Cys Arg Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
65                  70                  75                  80
Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Gly Asp
                85                  90                  95
Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu
            100                 105                 110
Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg Gly
        115                 120                 125
Arg Leu His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu
    130                 135                 140
Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu
145                 150                 155                 160
Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
<210>124
<211>531
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL-28B C49S
<221>CDS
<222>(1)...(531)
<221>variation
<222>(146)...(147)
<223>n＝A，T，G，或C
<400>124
atg gtt cct gtc gcc agg ctc cgc ggg gct ctc ccg gat gca agg ggc    48
Met Val Pro Val Ala Arg Leu Arg Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly
 1               5                   10                  15
tgc cac ata gcc cag ttc aag tcc ctg tct cca cag gag ctg cag gcc    96
Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala
             20                  25                  30
ttt aag agg gcc aaa gat gcc tta gaa gag tcg ctt ctg ctg aag gac    144
Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp
         35                  40                  45
dnn aag tgc cgc tcc cgc ctc ttc ccc agg acc tgg gac ctg agg cag    192
Xaa Lys Cys Arg Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln
     50                  55                  60
ctg cag gtg agg gag cgc ccc gtg gct ttg gag gct gag ctg gcc ctg    240
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
 65                  70                  75                  80
acg ctg aag gtt ctg gag gcc acc gct gac act gac cca gcc ctg ggg    288
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Gly
                 85                  90                  95
gat gtc ttg gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cat atc ctc tcc cag    336
Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln
            100                 105                 110
ctc cgg gcc tgt atc cag cct cag ccc acg gca ggg ccc agg acc cgg    384
Leu Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg
        115                 120                 125
ggc cgc ctc cac cat tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc cca aaa aag    432
Gly Arg Leu His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys
    130                 135                 140
gag tcc cct ggc tgc ctc gag gcc tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc    480
Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg
145                 150                 155                 160
ctc ctc acg cga gac ctg aat tgt gtt gcc agc ggg gac ctg tgt gtc    528
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
tga                                                                531
 *
<210>125
<211>176
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>VARIANT
<222>(49)...(49)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<223>Met IL-28B C49S
<400>125
Met Val Pro Val Ala Arg Leu Arg Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly
 1               5                  10                  15
Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala
            20                  25                  30
Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp
        35                  40                  45
Xaa Lys Cys Arg Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln
    50                  55                  60
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
65                  70                  75                  80
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Gly
                85                  90                  95
Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln
            100                 105                 110
Leu Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg
        115                 120                 125
Gly Arg Leu His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys
    130                 135                 140
Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg
145                 150                 155                 160
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
<210>126
<211>528
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-28B C50S
<221>CDS
<222>(1)...(528)
<221>variation
<222>(149)...(150)
<223>n＝A，T，G，或C
<400>126
gtt cct gtc gcc agg ctc cgc ggg gct ctc ccg gat gca agg ggc tgc  48
Val Pro Val Ala Arg Leu Arg Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly Cys
 1               5                   10                  15
cac ata gcc cag ttc aag tcc ctg tct cca cag gag ctg cag gcc ttt  96
His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala Phe
             20                  25                  30
aag agg gcc aaa gat gcc tta gaa gag tcg ctt ctg ctg aag gac tgc  144
Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp Cys
         35                  40                  45
aag dnn cgc tcc cgc ctc ttc ccc agg acc tgg gac ctg agg cag ctg  192
Lys Xaa Arg Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln Leu
     50                  55                  60
cag gtg agg gag cgc ccc gtg gct ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg  240
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
 65                  70                  75                  80
ctg aag gtt ctg gag gcc acc gct gac act gac cca gcc ctg ggg gat  288
Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Gly Asp
                 85                  90                  95
gtc ttg gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cat atc ctc tcc cag ctc  336
Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu
            100                 105                 110
cgg gcc tgt atc cag cct cag ccc acg gca ggg ccc agg acc cgg ggc  384
Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg Gly
        115                 120                 125
cgc ctc cac cat tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc cca aaa aag gag  432
Arg Leu His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu
    130                 135                 140
tcc cct ggc tgc ctc gag gcc tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc  480
Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu
145                 150                 155                 160
ctc acg cga gac ctg aat tgt gtt gcc agc ggg gac ctg tgt gtc tga  528
Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val  *
                165                 170                 175
<210>127
<211>175
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>VARIANT
<222>(50)...(50)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<223>IL-28B C50S
<400>127
Val Pro Val Ala Arg Leu Arg Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly Cys
 1               5                  10                  15
His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala Phe
            20                  25                  30
Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp Cys
        35                  40                  45
Lys Xaa Arg Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
65                  70                  75                  80
Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Gly Asp
                85                  90                  95
Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu
            100                 105                 110
Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg Gly
        115                 120                 125
Arg Leu His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu
    130                 135                 140
Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu
145                 150                 155                 160
Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
<210>128
<211>531
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL-28B C51S
<221>CDS
<222>(1)...(531)
<221>variation
<222>(152)...(153)
<223>n＝A，T，G，或C
<400>128
atg gtt cct gtc gcc agg ctc cgc ggg gct ctc ccg gat gca agg ggc  48
Met Val Pro Val Ala Arg Leu Arg Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly
 1               5                   10                  15
tgc cac ata gcc cag ttc aag tcc ctg tct cca cag gag ctg cag gcc  96
Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala
             20                  25                  30
ttt aag agg gcc aaa gat gcc tta gaa gag tcg ctt ctg ctg aag gac  144
Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp
         35                  40                  45
tgc aag dnn cgc tcc cgc ctc ttc ccc agg acc tgg gac ctg agg cag  192
Cys Lys Xaa Arg Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln
     50                  55                  60
ctg cag gtg agg gag cgc ccc gtg gct ttg gag gct gag ctg gcc ctg  240
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
 65                  70                  75                  80
acg ctg aag gtt ctg gag gcc acc gct gac act gac cca gcc ctg ggg    288
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Gly
                 85                  90                  95
gat gtc ttg gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cat atc ctc tcc cag    336
Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln
            100                 105                 110
ctc cgg gcc tgt atc cag cct cag ccc acg gca ggg ccc agg acc cgg    384
Leu Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg
        115                 120                 125
ggc cgc ctc cac cat tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc cca aaa aag    432
Gly Arg Leu His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys
    130                 135                 140
gag tcc cct ggc tgc ctc gag gcc tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc    480
Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg
145                 150                 155                 160
ctc ctc acg cga gac ctg aat tgt gtt gcc agc ggg gac ctg tgt gtc    528
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
tga                                                                531
 *
<210>129
<211>176
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>VARIANT
<222>(51)...(51)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<223>Met TL-28B C51S
<400>129
Met Val Pro Val Ala Arg Leu Arg Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly
 1               5                  10                  15
Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala
            20                  25                  30
Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp
        35                  40                  45
Cys Lys Xaa Arg Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln
    50                  55                  60
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
65                  70                  75                  80
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Thr Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Gly
                85                  90                  95
Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln
            100                 105                 110
Leu Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg
        115                 120                 125
Gly Arg Leu His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys
    130                 135                 140
Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg
145                 150                 155                 160
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
<210>130
<211>528
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-28B C48S T87S H135Y
<221>CDS
<222>(1)...(528)
<221>variation
<222>143，144，261
<223>n＝A，T，G，或C
<400>130
gtt cct gtc gcc agg ctc cgc ggg gct ctc ccg gat gca agg ggc tgc  48
Val Pro Val Ala Arg Leu Arg Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly Cys
 1               5                   10                  15
cac ata gcc cag ttc aag tcc ctg tct cca cag gag ctg cag gcc ttt    96
His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala Phe
             20                  25                  30
aag agg gcc aaa gat gcc tta gaa gag tcg ctt ctg ctg aag gac dnn    144
Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp Xaa
         35                  40                  45
aag tgc cgc tcc cgc ctc ttc ccc agg acc tgg gac ctg agg cag ctg    192
Lys Cys Arg Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln Leu
     50                  55                  60
cag gtg agg gag cgc ccc gtg gct ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg    240
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
 65                  70                  75                  80
ctg aag gtt ctg gag gcc wsn gct gac act gac cca gcc ctg ggg gat    288
Leu Lys Val Leu Glu Ala Xaa Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Gly Asp
                 85                  90                  95
gtc ttg gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cat atc ctc tcc cag ctc    336
Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu
            100                 105                 110
cgg gcc tgt atc cag cct cag ccc acg gca ggg ccc agg acc cgg ggc    384
Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg Gly
        115                 120                 125
cgc ctc cac cat tgg ctg tay cgg ctc cag gag gcc cca aaa aag gag    432
Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu
    130                 135                 140
tcc cct ggc tgc ctc gag gcc tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc    480
Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu
145                 150                 155                 160
ctc acg cga gac ctg aat tgt gtt gcc agc ggg gac ctg tgt gtc tga    528
Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val  *
                165                 170                 175
<210>131
<211>175
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>VARIANT
<222>(48)...(48)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<221>VARIANT
<222>(87)...(87)
<223>Xaa＝Ser
<223>IL-28B C48S T87S H135Y
<400>131
Val Pro Val Ala Arg Leu Arg Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly Cys
 1               5                  10                  15
His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala Phe
            20                  25                  30
Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp Xaa
        35                  40                  45
Lys Cys Arg Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
65                  70                  75                  80
Leu Lys Val Leu Glu Ala Xaa Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Gly Asp
                85                  90                  95
Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu
            100                 105                 110
Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg Gly
        115                 120                 125
Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu
    130                 135                 140
Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu
145                 150                 155                 160
Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
<210>132
<211>531
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL-28B C49S T88S H136Y
<221>CDS
<222>(1)...(531)
<221>variation
<222>146，147，264
<223>n＝A，T，G，或C
<400>132
atg gtt cct gtc gcc agg ctc cgc ggg gct ctc ccg gat gca agg ggc    48
Met Val Pro Val Ala Arg Leu Arg Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly
 1               5                   10                  15
tgc cac ata gcc cag ttc aag tcc ctg tct cca cag gag ctg cag gcc    96
Cvs His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala
             20                  25                  30
ttt aag agg gcc aaa gat gcc tta gaa gag tcg ctt ctg ctg aag gac    144
Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp
         35                  40                  45
dnn aag tgc cgc tcc cgc ctc ttc ccc agg acc tgg gac ctg agg cag    192
Xaa Lys Cys Arg Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln
     50                  55                  60
ctg cag gtg agg gag cgc ccc gtg gct ttg gag gct gag ctg gcc ctg    240
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
 65                  70                  75                  80
acg ctg aag gtt ctg gag gcc wsn gct gac act gac cca gcc ctg ggg    288
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Xaa Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Gly
                 85                  90                  95
gat gtc ttg gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cat atc ctc tcc cag    336
Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln
            100                 105                 110
ctc cgg gcc tgt atc cag cct cag ccc acg gca ggg ccc agg acc cgg    384
Leu Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg
        115                 120                 125
ggc cgc ctc cac cat tgg ctg tay cgg ctc cag gag gcc cca aaa aag  432
Gly Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys
    130                 135                 140
gag tcc cct ggc tgc ctc gag gcc tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc  480
Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Ash Leu Phe Arg
145                 150                 155                 160
ctc ctc acg cga gac ctg aat tgt gtt gcc agc ggg gac ctg tgt gtc  528
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
tga                                                              531
 *
<210>133
<211>176
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>VARIANT
<222>(49)...(49)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<221>VARIANT
<222>(88)...(88)
<223>Xaa＝Ser
<223>Met IL-28B C49S T88S H136Y
<400>133
Met Val Pro Val Ala Arg Leu Arg Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly
 1               5                  10                  15
Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala
            20                  25                  30
Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp
        35                  40                  45
Xaa Lys Cys Arg Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln
    50                  55                  60
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
65                  70                  75                  80
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Xaa Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Gly
                85                  90                  95
Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln
            100                 105                 110
Leu Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg
        115                 120                 125
Gly Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys
    130                 135                 140
Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg
145                 150                 155                 160
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
<210>134
<211>528
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-28B C50S T87S H135Y
<221>CDS
<222>(1)...(528)
<221>variation
<222>149，150，261
<223>n＝A，T，G，或C
<400>134
gtt cct gtc gcc agg ctc cgc ggg gct ctc ccg gat gca agg ggc tgc  48
Val Pro Val Ala Arg Leu Arg Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly Cys
 1               5                   10                  15
cac ata gcc cag ttc aag tcc ctg tct cca cag gag ctg cag gcc ttt  96
His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala Phe
             20                  25                  30
aag agg gcc aaa gat gcc tta gaa gag tcg ctt ctg ctg aag gac tgc  144
Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp Cys
         35                  40                  45
aag dnn cgc tcc cgc ctc ttc ccc agg acc tgg gac ctg agg cag ctg  192
Lys Xaa Arg Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln Leu
     50                  55                  60
cag gtg agg gag cgc ccc gtg gct ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg  240
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
 65                  70                  75                  80
ctg aag gtt ctg gag gcc wsn gct gac act gac cca gcc ctg ggg gat  288
Leu Lys Val Leu Glu Ala Xaa Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Gly Asp
                 85                  90                  95
gtc ttg gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cat atc ctc tcc cag ctc  336
Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu
            100                 105                 110
cgg gcc tgt atc cag cct cag ccc acg gca ggg ccc agg acc cgg ggc  384
Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg Gly
        115                 120                 125
cgc ctc cac cat tgg ctg tay cgg ctc cag gag gcc cca aaa aag gag  432
Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu
    130                 135                 140
tcc cct ggc tgc ctc gag gcc tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc  480
Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu
145                 150                 155                 160
ctc acg cga gac ctg aat tgt gtt gcc agc ggg gac ctg tgt gtc tga  528
Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val  *
                165                 170                 175
<210>135
<211>175
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>VARIANT
<222>(50)...(50)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<221>VARIANT
<222>(87)...(87)
<223>Xaa＝Ser
<223>IL-28B C50S T87S H135Y
<400>135
Val Pro Val Ala Arg Leu Arg Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly Cys
 1               5                  10                  15
His Ile Ala Gln Phe Lvs Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala Phe
            20                  25                  30
Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp Cys
        35                  40                  45
Lys Xaa Arg Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
65                  70                  75                  80
Leu Lys Val Leu Glu Ala Xaa Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Gly Asp
                85                  90                  95
Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu
            100                 105                 110
Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg Gly
        115                 120                 125
Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu
    130                 135                 140
Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu
145                 150                 155                 160
Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
<210>136
<211>531
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>Met IL-28B C51S T88S H136Y
<221>CDS
<222>(1)...(531)
<221>variation
<222>152，153，264
<223>n＝A，T，G，或C
<400>136
atg gtt cct gtc gcc agg ctc cgc ggg gct ctc ccg gat gca agg ggc    48
Met Val Pro Val Ala Arg Leu Arg Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly
 1               5                   10                  15
tgc cac ata gcc cag ttc aag tcc ctg tct cca cag gag ctg cag gcc    96
Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala
             20                  25                  30
ttt aag agg gcc aaa gat gcc tta gaa gag tcg ctt ctg ctg aag gac    144
Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp
         35                  40                  45
tgc aag dnn cgc tcc cgc ctc ttc ccc agg acc tgg gac ctg agg cag    192
Cys Lys Xaa Arg Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln
     50                  55                  60
ctg cag gtg agg gag cgc ccc gtg gct ttg gag gct gag ctg gcc ctg    240
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
 65                  70                  75                  80
acg ctg aag gtt ctg gag gcc wsn gct gac act gac cca gcc ctg ggg    288
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Xaa Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Gly
                 85                  90                  95
gat gtc ttg gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cat atc ctc tcc cag    336
Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln
            100                 105                 110
ctc cgg gcc tgt atc cag cct cag ccc acg gca ggg ccc agg acc cgg    384
Leu Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg
        115                 120                 125
ggc cgc ctc cac cat tgg ctg tay cgg ctc cag gag gcc cca aaa aag    432
Gly Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys
    130                 135                 140
gag tcc cct ggc tgc ctc gag gcc tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc    480
Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg
145                 150                 155                 160
ctc ctc acg cga gac ctg aat tgt gtt gcc agc ggg gac ctg tgt gtc    528
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
tga                                                                531
 *
<210>137
<211>176
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>VARIANT
<222>(51)...(51)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<221>VARIANT
<222>(88)...(88)
<223>Xaa＝Ser
<223>Met IL-28B C51S T88S H136Y
<400>137
Met Val Pro Val Ala Arg Leu Arg Gly Ala Leu Pro Asp Ala Arg Gly
 1               5                  10                  15
Cys His Ile Ala Gln Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Gln Ala
            20                  25                  30
Phe Lys Arg Ala Lys Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Leu Leu Lys Asp
        35                  40                  45
Cys Lys Xaa Arg Ser Arg Leu Phe Pro Arg Thr Trp Asp Leu Arg Gln
    50                  55                  60
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
65                  70                  75                  80
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Xaa Ala Asp Thr Asp Pro Ala Leu Gly
                85                  90                  95
Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu Hi s HisIle Leu Ser Gln
            100                 105                 110
Leu Arg Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Thr Arg
        115                 120                 125
Gly Arg Leu His His Trp Leu Tyr Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys
    130                 135                 140
Glu Ser Pro Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg
145                 150                 155                 160
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Asn Cys Val Ala Ser Gly Asp Leu Cys Val
                165                 170                 175
<210>138
<211>543
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-29 C170X，在N末端甲硫氨酸和甘氨酸后截短
<221>variation
<222>(509)...(510)
<223>n＝A，T，G，或C
<221>CDS
<222>(1)...(543)
<400>138
cct gtc ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc tgc cac att  48
Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His Ile
 1               5                   10                  15
ggc agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc aag aag  96
Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys Lys
             20                  25                  30
gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg agt tgc  144
Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser Cys
         35                  40                  45
agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc cag gtg  192
Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln Val
     50                  55                  60
agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc etg acg ctg aag  240
Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys
 65                  70                  75                  80
gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta gac cag  288
Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp Gln
                 85                  90                  95
ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc tgt atc  336
Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys Ile
            100                 105                 110
cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc cac cac  384
Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His His
        115                 120                 125
tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct ggc tgc  432
Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly Cys
    130                 135                 140
ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg cga gac  480
Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp
145                 150                 155                 160
ctc aaa tat gtg gcc gat ggg aac ctg dnn ctg aga acg tca acc cac  528
Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr His
                165                 170                 175
cct gag tcc acc tga                                              543
Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>139
<211>180
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>VARIANT
<222>(170)...(170)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<223>IL-29 C170X，在N末端甲硫氨酸和甘氨酸后截短
<400>139
Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His Ile
 1               5                  10                  15
Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys Lys
            20                  25                  30
Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trn Ser Cys
        35                  40                  45
Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln Val
    50                  55                  60
Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys
65                  70                  75                  80
Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp Gln
                85                  90                  95
Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys Ile
            100                 105                 110
Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His His
        115                 120                 125
Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly Cys
    130                 135                 140
Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp
145                 150                 155                 160
Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr His
                165                 170                 175
Pro Glu Ser Thr
            180
<210>140
<211>540
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-29 C169X，在N末端甲硫氨酸、甘氨酸和脯氨酸后截短
<221>variation
<222>(506)...(507)
<223>n＝A，T，G，或C
<221>CDS
<222>(1)...(540)
<400>140
gtc ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc tgc cac att ggc  48
Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His Ile Gly
 1               5                   10                  15
agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc aag aag gcc  96
Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys Lys Ala
             20                  25                  30
agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg agt tgc agc  144
Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser Cys Ser
         35                  40                  45
tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc cag gtg agg  192
Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln Val Arg
     50                  55                  60
gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg ctg aag gtc  240
Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys Val
 65                  70                  75                  80
ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta gac cag ccc  288
Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp Gln Pro
                 85                  90                  95
ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc tgt atc cag  336
Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys Ile Gln
            100                 105                 110
cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc cac cac tgg  384
Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His His Trp
        115                 120                 125
ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct ggc tgc ctg  432
Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly Cys Leu
    130                 135                 140
gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg cga gac ctc  480
Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu
145                 150                 155                 160
aaa tat gtg gcc gat ggg aac ctg dnn ctg aga acg tca acc cac cct  528
Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr His Pro
                165                 170                 175
gag tcc acc tga                                                  540
Glu Ser Thr  *
<210>141
<211>179
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>VARIANT
<222>(169)...(169)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<223>L-29 C169X，在N末端甲硫氨酸、甘氨酸和脯氨酸后截短
<400>141
Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His Ile Gly
 1               5                  10                  15
Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys Lys Ala
            20                  25                  30
Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser Cys Ser
        35                  40                  45
Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln Val Arg
    50                  55                  60
Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys Val
65                  70                  75                  80
Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp Gln Pro
                85                  90                  95
Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys Ile Gln
            100                 105                 110
Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His His Trp
        115                 120                 125
Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly Cys Leu
    130                 135                 140
Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu
145                 150                 155                 160
Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr His Pro
                165                 170                 175
Glu Ser Thr
<210>142
<211>537
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-29 C168X，在N末端甲硫氨酸、甘氨酸、脯氨酸和缬氨酸后截短
<221>variat
<222>(503)...(504)
<223>n＝A，T，G，或C
<221>CDS
<222>(1)...(537)
<400>142
ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc tgc cac att ggc agg    48
Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His Ile Gly Arg
 1               5                   10                  15
ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc aag aag gcc agg    96
Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys Lys Ala Arg
             20                  25                  30
gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg agt tgc agc tct    144
Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser Cys Ser Ser
         35                  40                  45
cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc cag gtg agg gag    192
Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln Val Arg Glu
     50                  55                  60
cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg ctg aag gtc ctg    240
Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys Val Leu
 65                  70                  75                  80
gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta gac cag ccc ctt    288
Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu
                 85                  90                  95
cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc tgt atc cag cct    336
His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys Ile Gln Pro
            100                 105                 110
cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc cac cac tgg ctg    384
Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His His Trp Leu
        115                 120                 125
cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct ggc tgc ctg gag    432
His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly Cys Leu Glu
    130                 135                 140
gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg cga gac ctc aaa    480
Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu Lys
145                 150                 155                 160
tat gtg gcc gat ggg aac ctg dnn ctg aga acg tca acc cac cct gag  528
Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr His Pro Glu
                165                 170                 175
tcc acc tga                                                      537
Ser Thr  *
<210>143
<211>178
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-29 C168X，在N末端甲硫氨酸、甘氨酸、脯氨酸和缬氨酸后截短
<221>VARIANT
<222>(168)...(168)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>143
Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His Ile Gly Arg
 1               5                  10                  15
Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys Lys Ala Arg
            20                  25                  30
Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser Cys Ser Ser
        35                  40                  45
Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln Val Arg Glu
    50                  55                  60
Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys Val Leu
65                  70                  75                  80
Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu
                85                  90                  95
His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys Ile Gln Pro
            100                 105                 110
Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His His Trp Leu
        115                 120                 125
His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly Cys Leu Glu
    130                 135                 140
Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu Lys
145                 150                 155                 160
Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr His Pro Glu
                165                 170                 175
Ser Thr
<210>144
<211>534
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-29 C167X，在N末端甲硫氨酸、甘氨酸、脯氨酸、缬氨酸和脯氨酸后截短
<221>variation
<222>(500)...(501)
<223>n＝A，T，G，或C
<221>CDS
<222>(1)...(534)
<400>144
act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc tgc cac att ggc agg ttc  48
Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His Ile Gly Arg Phe
 1               5                   10                  15
aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc aag aag gcc agg gac  96
Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys Lys Ala Arg Asp
             20                  25                  30
gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg agt tgc agc tct cct  144
Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser Cys Ser Ser Pro
         35                  40                  45
gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc cag gtg agg gag cgc  192
Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln Val Arg Glu Arg
     50                  55                  60
cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg ctg aag gtc ctg gag  240
Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys Val Leu Glu
 65                  70                  75                  80
gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta gac cag ccc ctt cac  288
Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His
                 85                  90                  95
acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc tgt atc cag cct cag  336
Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys Ile Gln Pro Gln
            100                 105                 110
ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc cac cac tgg ctg cac  384
Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His His Trp Leu His
        115                 120                 125
cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct ggc tgc ctg gag gca  432
Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly Cys Leu Glu Ala
    130                 135                 140
tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg cga gac ctc aaa tat  480
Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu Lys Tyr
145                 150                 155                 160
gtg gcc gat ggg aac ctg dnn ctg aga acg tca acc cac cct gag tcc  528
Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr His Pro Glu Ser
                165                 170                 175
acc tga                                                          534
Thr  *
<210>145
<211>177
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-29 C167X，在N末端甲硫氨酸、甘氨酸、脯氨酸、缬氨酸和脯氨酸后截短
<221>VARIANT
<222>(167)...(167)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>145
Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His Ile Gly Arg Phe
 1               5                  10                  15
Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys Lys Ala Arg Asp
            20                  25                  30
Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser Cys Ser Ser Pro
        35                  40                  45
Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln Val Arg Glu Arg
    50                  55                  60
Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys Val Leu Glu
65                  70                  75                  80
Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His
                85                  90                  95
Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys Ile Gln Pro Gln
            100                 105                 110
Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His His Trp Leu His
        115                 120                 125
Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly Cys Leu Glu Ala
    130                 135                 140
Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu Lys Tyr
145                 150                 155                 160
Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr His Pro Glu Ser
                165                 170                 175
Thr
<210>146
<211>531
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-29 C166X，在N末端甲硫氨酸、甘氨酸、脯氨酸、缬氨酸、脯氨酸和苏氨酸后截短
<221>variation
<222>(497)...(498)
<223>n＝A，T，G，或C
<221>CDS
<222>(1)...(531)
<400>146
tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc tgc cac att ggc agg ttc aaa  48
Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His Ile Gly Arg Phe Lys
 1               5                   10                  15
tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc aag aag gcc agg gac gcc  96
Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys Lys Ala Arg Asp Ala
             20                  25                  30
ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg agt tgc agc tct cct gtc    144
Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser Cys Ser Ser Pro Val
         35                  40                  45
ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc cag gtg agg gag cgc cct    192
Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro
     50                  55                  60
gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg ctg aag gtc ctg gag gcc    240
Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala
 65                  70                  75                  80
gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta gac cag ccc ctt cac acc    288
Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr
                 85                  90                  95
ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc tgt atc cag cct cag ccc    336
Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro
            100                 105                 110
aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc cac cac tgg ctg cac cgg    384
Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His His Trp Leu His Arg
        115                 120                 125
ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct ggc tgc ctg gag gca tct    432
Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly Cys Leu Glu Ala Ser
    130                 135                 140
gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg cga gac ctc aaa tat gtg    480
Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu Lys Tyr Val
145                 150                 155                 160
gcc gat ggg aac ctg dnn ctg aga acg tca acc cac cct gag tcc acc    528
Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr His Pro Glu Ser Thr
                165                 170                 175
tga                                                                531
 *
<210>147
<211>176
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-29 C166X，在N末端甲硫氨酸、甘氨酸、脯氨酸、缬氨酸、脯氨酸和苏氨酸后截短
<221>VARIANT
<222>(166)...(166)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>147
Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His Ile Gly Arg Phe Lys
 1               5                  10                  15
Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys Lys Ala Arg Asp Ala
            20                  25                  30
Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser Cys Ser Ser Pro Val
        35                  40                  45
Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro
    50                  55                  60
Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala
65                  70                  75                  80
Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr
                85                  90                  95
Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro
            100                 105                 110
Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His His Trp Leu His Arg
        115                 120                 125
Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly Cys Leu Glu Ala Ser
    130                 135                 140
Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu Lys Tyr Val
145                 150                 155                 160
Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr His Pro Glu Ser Thr
                165                 170                 175
<210>148
<211>528
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-29 C165X，在N末端甲硫氨酸、甘氨酸、脯氨酸、缬氨酸、脯氨酸、苏氨酸和丝
氨酸后截短
<221>variation
<222>(494)...(495)
<223>n＝A，T，G，或C
<221>CDS
<222>(1)...(528)
<400>148
aag ccc acc aca act ggg aag ggc tgc cac att ggc agg ttc aaa tct  48
Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His Ile Gly Arg Phe Lys Ser
 1               5                   10                  15
ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc aag aag gcc agg gac gcc ttg  96
Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu
             20                  25                  30
gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg agt tgc agc tct cct gtc ttc  144
Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe
         35                  40                  45
ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc cag gtg agg gag cgc cct gtg  192
Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val
     50                  55                  60
gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg ctg aag gtc ctg gag gcc gct  240
Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala
 65                  70                  75                  80
gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta gac cag ccc ctt cac acc ctg  288
Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu
                 85                  90                  95
cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc tgt atc cag cct cag ccc aca  336
His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr
            100                 105                 110
gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc cac cac tgg ctg cac cgg ctc  384
Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His His Trp Leu His Arg Leu
        115                 120                 125
cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct ggc tgc ctg gag gca tct gtc  432
Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val
    130                 135                 140
acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg cga gac ctc aaa tat gtg gcc  480
Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala
145                 150                 155                 160
gat ggg aac ctg dnn ctg aga acg tca acc cac cct gag tcc acc tga  528
Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr His Pro Glu Ser Thr  *
                165                 170                 175
<210>149
<211>175
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-29 C165X，在N末端甲硫氨酸、甘氨酸、脯氨酸、缬氨酸、脯氨酸、苏氨酸和丝氨酸后截短
<221>VARIANT
<222>(165)...(165)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>149
Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His Ile Gly Arg Phe Lys Ser
 1               5                  10                  15
Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu
            20                  25                  30
Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe
        35                  40                  45
Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val
    50                  55                  60
Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala
65                  70                  75                  80
Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu
                85                  90                  95
His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr
            100                 105                 110
Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His His Trp Leu His Arg Leu
        115                 120                 125
Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val
    130                 135                 140
Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala
145                 150                 155                 160
Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr His Pro Glu Ser Thr
                165                 170                 175
<210>150
<211>552
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>在N末端Met后插入Leu的IL-29，C173X
<221>variation
<222>(518)...(519)
<223>n＝A，T，G，或C
<221>CDS
<222>(1)...(552)
<400>150
atg ytn ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc  48
Met Leu Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly
 1               5                   10                  15
tgc cac att ggc agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc  96
Cys His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser
             20                  25                  30
ttc aag aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac  144
Phe Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn
         35                  40                  45
tgg agt tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt  192
Trp Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu
     50                  55                  60
ctc cag gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg  240
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
 65                  70                  75                  80
acg ctg aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc  288
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val
                 85                  90                  95
cta gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag  336
Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln
            100                 105                 110
gcc tgt atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc  384
Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg
        115                 120                 125
ctc cac cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc  432
Leu His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser
    130                 135                 140
gct ggc tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc  480
Ala Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu
145                 150                 155                 160
acg cga gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg aac ctg dnn ctg aga acg  528
Thr Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr
                165                 170                 175
tca acc cac cct gag tcc acc tga                                  552
Ser Thr His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>151
<211>183
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>在N末端Met后插入Leu的IL-29，C173X
<221>VARIANT
<222>(173)...(173)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>151
Met Leu Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly
 1               5                  10                  15
Cys His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser
            20                  25                  30
Phe Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn
        35                  40                  45
Trp Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu
    50                  55                  60
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
65                  70                  75                  80
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val
                85                  90                  95
Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln
            100                 105                 110
Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg
        115                 120                 125
Leu His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser
    130                 135                 140
Ala Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu
145                 150                 155                 160
Thr Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr
                165                 170                 175
Ser Thr His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>152
<211>549
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-29 G2L C172X
<221>variation
<222>(515)...(516)
<223>n＝A，T，G，或C
<221>CDS
<222>(1)...(549)
<400>152
atg ytn cct gtc ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc tgc  48
Met Leu Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys
 1               5                   10                  15
cac att ggc agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc  96
His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
             20                  25                  30
aag aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg    144
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
         35                  40                  45
agt tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc    192
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
     50                  55                  60
cag gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg    240
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
 65                  70                  75                  80
ctg aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta    288
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                 85                  90                  95
gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc    336
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
tgt atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc    384
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
cac cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct    432
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
ggc tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg    480
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
cga gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg aac ctg dnn ctg aga acg tca    528
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
acc cac cct gag tcc acc tga                                        549
Thr His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>153
<211>182
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-29 G2L C172X
<221>VARIANT
<222>(172)...(172)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>153
Met Leu Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys
 1               5                  10                  15
His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
            20                  25                  30
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
        35                  40                  45
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
65                  70                  75                  80
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                85                  90                  95
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
Thr His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>154
<211>552
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>在N末端Met后插入Ile的IL-29，C173X
<221>variation
<222>(518)...(519)
<223>n＝A，T，G，或C
<221>CDS
<222>(1)...(552)
<400>154
atg ath ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc  48
Met Ile Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly
 1               5                   10                  15
tgc cac att ggc agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc  96
Cys His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser
             20                  25                  30
ttc aag aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac  144
Phe Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn
         35                  40                  45
tgg agt tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt  192
Trp Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu
     50                  55                  60
ctc cag gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg  240
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
 65                  70                  75                  80
acg ctg aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc  288
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val
                 85                  90                  95
cta gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag  336
Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln
            100                 105                 110
gcc tgt atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc  384
Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg
        115                 120                 125
ctc cac cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc  432
Leu His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser
    130                 135                 140
gct ggc tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc  480
Ala Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu
145                 150                 155                 160
acg cga gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg aac ctg dnn ctg aga acg  528
Thr Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr
                165                 170                 175
tca acc cac cct gag tcc acc tga                                  552
Ser Thr His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>155
<211>183
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>在N末端Met后插入Ile的IL-29，C173X
<221>VARIANT
<222>(173)...(173)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>155
Met Ile Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly
 1               5                  10                  15
Cys His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser
            20                  25                  30
Phe Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn
        35                  40                  45
Trp Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu
    50                  55                  60
Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu
65                  70                  75                  80
Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val
                85                  90                  95
Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln
            100                 105                 110
Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg
        115                 120                 125
Leu His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser
    130                 135                 140
Ala Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu
145                 150                 155                 160
Thr Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr
                165                 170                 175
Ser Thr His Pro Glu Scr Thr
            180
<210>156
<211>549
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>IL-29 G2I C172X
<221>variation
<222>(515)...(516)
<223>n＝A，T，G，或C
<221>CDS
<222>(1)...(549)
<400>156
atg ath cct gtc ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg aag ggc tgc  48
Met Ile Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys
 1               5                   10                  15
cac att ggc agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc  96
His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
             20                  25                  30
aag aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg  144
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
         35                  40                  45
agt tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc  192
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
     50                  55                  60
cag gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg  240
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
 65                  70                  75                  80
ctg aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta    288
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                 85                  90                  95
gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc    336
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
tgt atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc    384
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
cac cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct    432
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
ggc tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg    480
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
cga gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg aac ctg dnn ctg aga acg tca    528
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
acc cac cct gag tcc acc tga                                        549
Thr His Pro Glu Ser Thr  *
            180
<210>157
<211>182
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>IL-29 G2I C172X
<221>VARIANT
<222>(172)...(172)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>157
Met Ile Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys
 1               5                  10                  15
His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe
            20                  25                  30
Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp
        35                  40                  45
Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu
    50                  55                  60
Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr
65                  70                  75                  80
Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu
                85                  90                  95
Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala
            100                 105                 110
Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu
        115                 120                 125
His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala
    130                 135                 140
Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr
145                 150                 155                 160
Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser
                165                 170                 175
Thr His Pro Glu Ser Thr
            180
<210>158
<211>531
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>N末端Met后氨基酸残基2-7被删除的IL-29，C166X
<221>variation
<222>(497)...(498)
<223>n＝A，T，G，或C
<221>CDS
<222>(1)...(531)
<400>158
atg aag ccc acc aca act ggg aag ggc tgc cac att ggc agg ttc aaa    48
Met Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His Ile Gly Arg Phe Lys
 1               5                   10                  15
tct ctg tca cca cag gag cta gcg agc ttc aag aag gcc agg gac gcc    96
Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys Lys Ala Arg Asp Ala
             20                  25                  30
ttg gaa gag tca ctc aag ctg aaa aac tgg agt tgc agc tct cct gtc    144
Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser Cys Ser Ser Pro Val
         35                  40                  45
ttc ccc ggg aat tgg gac ctg agg ctt ctc cag gtg agg gag cgc cct    192
Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro
     50                  55                  60
gtg gcc ttg gag gct gag ctg gcc ctg acg ctg aag gtc ctg gag gcc    240
Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala
 65                  70                  75                  80
gct gct ggc cca gcc ctg gag gac gtc cta gac cag ccc ctt cac acc    288
Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr
                 85                  90                  95
ctg cac cac atc ctc tcc cag ctc cag gcc tgt atc cag cct cag ccc    336
Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro
            100                 105                 110
aca gca ggg ccc agg ccc cgg ggc cgc ctc cac cac tgg ctg cac cgg    384
Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His His Trp Leu His Arg
        115                 120                 125
ctc cag gag gcc ccc aaa aag gag tcc gct ggc tgc ctg gag gca tct    432
Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly Cys Leu Glu Ala Ser
    130                 135                 140
gtc acc ttc aac ctc ttc cgc ctc ctc acg cga gac ctc aaa tat gtg    480
Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu Lys Tyr Val
145                 150                 155                 160
gcc gat ggg aac ctg dnn ctg aga acg tca acc cac cct gag tcc acc    528
Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr His Pro Glu Ser Thr
                165                 170                 175
tga                                                                531
 *
<210>159
<211>176
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>N末端Met后氨基酸残基2-7被删除的IL-29，C166X
<221>VARIANT
<222>(166)...(166)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>159
Met Lys Pro Thr Thr Thr Gly Lys Gly Cys His Ile Gly Arg Phe Lys
 1               5                  10                  15
Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu Ala Ser Phe Lys Lys Ala Arg Asp Ala
            20                  25                  30
Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu Lys Asn Trp Ser Cys Ser Ser Pro Val
        35                  40                  45
Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu Arg Leu Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro
    50                  55                  60
Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu Ala Leu Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala
65                  70                  75                  80
Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr
                85                  90                  95
Leu His His Ile Leu Ser Gln Leu Gln Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro
            100                 105                 110
Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg Gly Arg Leu His His Trp Leu His Arg
        115                 120                 125
Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys Glu Ser Ala Gly Cys Leu Glu Ala Ser
    130                 135                 140
Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg Leu Leu Thr Arg Asp Leu Lys Tyr Val
145                 150                 155                 160
Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu Arg Thr Ser Thr His Pro Glu Ser Thr
                165                 170                 175
<210>160
<211>558
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>在N末端Met后插入Glu、Ala和Glu的IL-29，C175X
<221>variation
<222>(524)...(525)
<223>n＝A，T，G，或C
<221>CDS
<222>(1)...(558)
<400>160
atg gar gcn gar ggc cct gtc ccc act tcc aag ccc acc aca act ggg  48
Met Glu Ala Glu Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly
 1               5                   10                  15
aag ggc tgc cac att ggc agg ttc aaa tct ctg tca cca cag gag cta  96
Lys Gly Cys His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu
             20                  25                  30
gcg agc ttc aag aag gcc agg gac gcc ttg gaa gag tca ctc aag ctg  144
Ala Ser Phe Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu
         35                  40                  45
aaa aac tgg agt tgc agc tct cct gtc ttc ccc ggg aat tgg gac ctg  192
Lys Asn Trp Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu
     50                  55                  60
agg ctt ctc cag gtg agg gag cgc cct gtg gcc ttg gag gct gag ctg  240
Arg Leu Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu
 65                  70                  75                  80
gcc ctg acg ctg aag gtc ctg gag gcc gct gct ggc cca gcc ctg gag  288
Ala Leu Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu
                 85                  90                  95
gac gtc cta gac cag ccc ctt cac acc ctg cac cac atc ctc tcc cag  336
Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln
            100                 105                 110
ctc cag gcc tgt atc cag cct cag ccc aca gca ggg ccc agg ccc cgg  384
Leu Gln Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg
        115                 120                 125
ggc cgc ctc cac cac tgg ctg cac cgg ctc cag gag gcc ccc aaa aag  432
Gly Arg Leu His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys
    130                 135                 140
gag tcc gct ggc tgc ctg gag gca tct gtc acc ttc aac ctc ttc egc  480
Glu Ser Ala Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg
145                 150                 155                 160
ctc ctc acg cga gac ctc aaa tat gtg gcc gat ggg aac ctg dnn ctg  528
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu
                165                 170                 175
aga acg tca acc cac cct gag tcc acc tga                          558
Arg Thr Ser Thr His Pro Glu Ser Thr  *
            180                 185
<210>161
<211>185
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>在N末端Met后插入Glu、Ala和Glu的IL-29，C175X
<221>VARIANT
<222>(175)...(175)
<223>Xaa＝Ser，Ala，Thr，Val，或Asn
<400>161
Met Glu Ala Glu Gly Pro Val Pro Thr Ser Lys Pro Thr Thr Thr Gly
 1               5                  10                  15
Lys Gly Cys His Ile Gly Arg Phe Lys Ser Leu Ser Pro Gln Glu Leu
            20                  25                  30
Ala Ser Phe Lys Lys Ala Arg Asp Ala Leu Glu Glu Ser Leu Lys Leu
        35                  40                  45
Lys Asn Trp Ser Cys Ser Ser Pro Val Phe Pro Gly Asn Trp Asp Leu
    50                  55                  60
Arg Leu Leu Gln Val Arg Glu Arg Pro Val Ala Leu Glu Ala Glu Leu
65                  70                  75                  80
Ala Leu Thr Leu Lys Val Leu Glu Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Glu
                85                  90                  95
Asp Val Leu Asp Gln Pro Leu His Thr Leu His His Ile Leu Ser Gln
            100                 105                 110
Leu Gln Ala Cys Ile Gln Pro Gln Pro Thr Ala Gly Pro Arg Pro Arg
        115                 120                 125
Gly Arg Leu His His Trp Leu His Arg Leu Gln Glu Ala Pro Lys Lys
    130                 135                 140
Glu Ser Ala Gly Cys Leu Glu Ala Ser Val Thr Phe Asn Leu Phe Arg
145                 150                 155                 160
Leu Leu Thr Arg Asp Leu Lys Tyr Val Ala Asp Gly Asn Leu Xaa Leu
                165                 170                 175
Arg Thr Ser Thr His Pro Glu Ser Thr
            180                 185

Claims (27)

1.治疗癌症的方法，其包括给需要其的患者施用治疗有效量的多肽，所述多肽选自SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161，其中所述癌症选自B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、非何杰金氏淋巴瘤、多发性骨髓瘤、急性髓细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、肾细胞癌、宫颈癌、黑色素瘤、甲状腺癌、恶性胶质瘤、乳腺癌、结肠癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌、卵巢癌、睾丸癌、卡波西肉瘤和骨癌。
2.权利要求1的方法，其中所述多肽还包含聚乙二醇。
3.权利要求2的方法，其中所述聚乙二醇通过末端氨基共价地连接至所述多肽。
4.权利要求2的方法，其中所述聚乙二醇是大约20kD、30kD或40kD。
5.权利要求2的方法，其中所述聚乙二醇是线性的或分枝的。
6.权利要求2的方法，其中所述聚乙二醇是单甲氧基-PEG丙醛。
7.权利要求1的方法，其中所述患者是哺乳动物。
8.权利要求7的方法，其中所述患者是人。
9.治疗癌症的方法，其包括给需要其的患者施用治疗有效量的多肽，所述多肽和选自SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的序列具有至少95％的序列同一性，其中所述癌症选自B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、非何杰金氏淋巴瘤、多发性骨髓瘤、急性髓细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、肾细胞癌、宫颈癌、黑色素瘤、甲状腺癌、恶性胶质瘤、乳腺癌、结肠癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌、卵巢癌、睾丸癌、卡波西肉瘤和骨癌。
10.治疗癌症的方法，其包括给需要其的患者施用治疗有效量的制剂，所述制剂包含：和选自SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的序列具有至少95％的序列同一性的多肽；和
药物可接受的媒介物；和
其中所述癌症选自B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、非何杰金氏淋巴瘤、多发性骨髓瘤、急性髓细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、肾细胞癌、宫颈癌、黑色素瘤、甲状腺癌、恶性胶质瘤、乳腺癌、结肠癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌、卵巢癌、睾丸癌、卡波西肉瘤和骨癌。
11.治疗癌症的方法，其包括给需要其的患者施用治疗有效量的制剂，所述制剂包含：
和选自SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的序列具有至少95％的序列同一性的多肽；
第二多肽；
药物可接受的媒介物；和
其中所述癌症选自B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、非何杰金氏淋巴瘤、多发性骨髓瘤、急性髓细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、肾细胞癌、宫颈癌、黑色素瘤、甲状腺癌、恶性胶质瘤、乳腺癌、结肠癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌、卵巢癌、睾丸癌、卡波西肉瘤和骨癌。
12.权利要求11的方法，其中所述第二多肽是干扰素。
13.权利要求12的方法，其中所述第二多肽是干扰素α、干扰素β或干扰素γ。
14.抑制癌症的进展的方法，其包括给需要其的患者施用治疗有效量的多肽，所述多肽和选自SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的序列具有至少95％的序列同一性，其中所述癌症选自B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、非何杰金氏淋巴瘤、多发性骨髓瘤、急性髓细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、肾细胞癌、宫颈癌、黑色素瘤、甲状腺癌、恶性胶质瘤、乳腺癌、结肠癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌、卵巢癌、睾丸癌、卡波西肉瘤和骨癌。
15.抑制癌症的进展的方法，其包括给需要其的患者施用治疗有效量的制剂，所述制剂包含：
和选自SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的序列具有至少95％的序列同一性的多肽；
第二多肽；
药物可接受的媒介物；和
其中所述癌症选自B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、非何杰金氏淋巴瘤、多发性骨髓瘤、急性髓细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、肾细胞癌、宫颈癌、黑色素瘤、甲状腺癌、恶性胶质瘤、乳腺癌、结肠癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌、卵巢癌、睾丸癌、卡波西肉瘤和骨癌。
16.延迟癌症发生的方法，其包括给需要其的患者施用治疗有效量的多肽，所述多肽和选自SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的序列具有至少95％的序列同一性，其中所述癌症选自B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、非何杰金氏淋巴瘤、多发性骨髓瘤、急性髓细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、肾细胞癌、宫颈癌、黑色素瘤、甲状腺癌、恶性胶质瘤、乳腺癌、结肠癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌、卵巢癌、睾丸癌、卡波西肉瘤和骨癌。
17.延迟癌症发生的方法，其包括给需要其的患者施用治疗有效量的制剂，所述制剂包含：
和选自SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的序列具有至少95％的序列同一性的多肽；
第二多肽；
药物可接受的媒介物；和
其中所述癌症选自B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、非何杰金氏淋巴瘤、多发性骨髓瘤、急性髓细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、肾细胞癌、宫颈癌、黑色素瘤、甲状腺癌、恶性胶质瘤、乳腺癌、结肠癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌、卵巢癌、睾丸癌、卡波西肉瘤和骨癌。
18.减少癌症的严重度的方法，其包括给需要其的患者施用治疗有效量的多肽，所述多肽和选自SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的序列具有至少95％的序列同一性，其中所述癌症选自B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、非何杰金氏淋巴瘤、多发性骨髓瘤、急性髓细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、肾细胞癌、宫颈癌、黑色素瘤、甲状腺癌、恶性胶质瘤、乳腺癌、结肠癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌、卵巢癌、睾丸癌、卡波西肉瘤和骨癌。
19.减少癌症的严重度的方法，其包括给需要其的患者施用治疗有效量的制剂，所述制剂包含：
和选自SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的序列具有至少95％的序列同一性的多肽；
第二多肽；
药物可接受的媒介物；和
其中所述癌症选自B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、非何杰金氏淋巴瘤、多发性骨髓瘤、急性髓细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、肾细胞癌、宫颈癌、黑色素瘤、甲状腺癌、恶性胶质瘤、乳腺癌、结肠癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌、卵巢癌、睾丸癌、卡波西肉瘤和骨癌。
20.抑制癌症的至少一种病症或症状的方法，其包括给需要其的患者施用治疗有效量的多肽，所述多肽和选自SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的序列具有至少95％的序列同一性，其中所述癌症选自B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、非何杰金氏淋巴瘤、多发性骨髓瘤、急性髓细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、肾细胞癌、宫颈癌、黑色素瘤、甲状腺癌、恶性胶质瘤、乳腺癌、结肠癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌、卵巢癌、睾丸癌、卡波西肉瘤和骨癌。
21.抑制癌症的至少一种病症或症状的方法，其包括给需要其的患者施用治疗有效量的制剂，所述制剂包含：
和选自SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的序列具有至少95％的序列同一性的多肽；
第二多肽；
药物可接受的媒介物；和
其中所述癌症选自B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、非何杰金氏淋巴瘤、多发性骨髓瘤、急性髓细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、肾细胞癌、宫颈癌、黑色素瘤、甲状腺癌、恶性胶质瘤、乳腺癌、结肠癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌、卵巢癌、睾丸癌、卡波西肉瘤和骨癌。
22.抑制非何杰金氏淋巴瘤的至少一种病症或症状的方法，其包括给需要其的患者施用治疗有效量的多肽，所述多肽和选自SEQ IDNO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的序列具有至少95％的序列同一性，其中所述至少一种病症或症状选自颈部、腋窝或腹股沟中的淋巴结无痛肿胀、盗汗、不明原因的发烧、体重减轻和过度疲劳。
23.抑制非何杰金氏淋巴瘤的至少一种病症或症状的方法，其包括给需要其的患者施用治疗有效量的制剂，所述制剂包含：
和选自SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的序列具有至少95％的序列同一性的多肽；
第二多肽；和
药物可接受的媒介物；和
其中所述至少一种病症或症状选自颈部、腋窝或腹股沟中的淋巴结无痛肿胀、盗汗、不明原因的发烧、体重减轻和过度疲劳。
24.抑制多发性骨髓瘤的至少一种病症或症状的方法，其包括给需要其的患者施用治疗有效量的多肽，所述多肽和选自SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的序列具有至少95％的序列同一性，其中所述至少一种病症或症状选自背部疼痛、身高减少、贫血、肾损伤、反复的呼吸道感染和高血钙症。
25.抑制多发性骨髓瘤的至少一种病症或症状的方法，其包括给需要其的患者施用治疗有效量的制剂，所述制剂包含：
和选自SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的序列具有至少95％的序列同一性的多肽；
第二多肽；和
药物可接受的媒介物；
其中所述至少一种病症或症状选自背部疼痛、身高减少、贫血、肾损伤、反复的呼吸道感染和高血钙症。
26.抑制头颈部肿瘤的至少一种病症或症状的方法，其包括给需要其的患者施用治疗有效量的多肽，所述多肽和选自SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的序列具有至少95％的序列同一性，其中所述至少一种病症或症状选自在数周内不能愈合的头部或颈部的溃疡或疮区域、吞咽困难、呼吸或说话困难、口中麻木的感觉、鼻出血、持续耳痛、听觉困难以及口或颈的肿胀或肿块。
27.抑制头颈部肿瘤的至少一种病症或症状的方法，其包括给需要其的患者施用治疗有效量的制剂，所述制剂包含：
和选自SEQ ID NO：2、4、6、13、15、17、19、21、23、25、27、29、36、37、38、39、40、41、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157和161的序列具有至少95％的序列同一性的多肽；
第二多肽；和
药物可接受的媒介物；
其中所述至少一种病症或症状选自在数周内不能愈合的头部或颈部的溃疡或疮区域、吞咽困难、呼吸或说话困难、口中麻木的感觉、鼻出血、持续耳痛、听觉困难以及口或颈的肿胀或肿块。
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