CZ303446B6 - Zpusob získávání lipidu z mikroorganismu - Google Patents

Zpusob získávání lipidu z mikroorganismu Download PDF

Info

Publication number
CZ303446B6
CZ303446B6 CZ20022506A CZ20022506A CZ303446B6 CZ 303446 B6 CZ303446 B6 CZ 303446B6 CZ 20022506 A CZ20022506 A CZ 20022506A CZ 20022506 A CZ20022506 A CZ 20022506A CZ 303446 B6 CZ303446 B6 CZ 303446B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
microorganisms
lipids
lipid
cells
acid
Prior art date
Application number
CZ20022506A
Other languages
English (en)
Inventor
M. Ruecker@Craig
Patrick Adu-Peasah@Swithin
S. Engelhardt@Brian
T. Veeder@George
Original Assignee
Martek Biosciences Corporation
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=22647287&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CZ303446(B6) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Martek Biosciences Corporation filed Critical Martek Biosciences Corporation
Publication of CZ303446B6 publication Critical patent/CZ303446B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11B—PRODUCING, e.g. BY PRESSING RAW MATERIALS OR BY EXTRACTION FROM WASTE MATERIALS, REFINING OR PRESERVING FATS, FATTY SUBSTANCES, e.g. LANOLIN, FATTY OILS OR WAXES; ESSENTIAL OILS; PERFUMES
    • C11B3/00—Refining fats or fatty oils
    • C11B3/006—Refining fats or fatty oils by extraction
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11B—PRODUCING, e.g. BY PRESSING RAW MATERIALS OR BY EXTRACTION FROM WASTE MATERIALS, REFINING OR PRESERVING FATS, FATTY SUBSTANCES, e.g. LANOLIN, FATTY OILS OR WAXES; ESSENTIAL OILS; PERFUMES
    • C11B1/00—Production of fats or fatty oils from raw materials
    • C11B1/02—Pretreatment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11B—PRODUCING, e.g. BY PRESSING RAW MATERIALS OR BY EXTRACTION FROM WASTE MATERIALS, REFINING OR PRESERVING FATS, FATTY SUBSTANCES, e.g. LANOLIN, FATTY OILS OR WAXES; ESSENTIAL OILS; PERFUMES
    • C11B3/00—Refining fats or fatty oils
    • C11B3/001—Refining fats or fatty oils by a combination of two or more of the means hereafter
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/06—Lysis of microorganisms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P23/00—Preparation of compounds containing a cyclohexene ring having an unsaturated side chain containing at least ten carbon atoms bound by conjugated double bonds, e.g. carotenes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P25/00—Preparation of compounds containing alloxazine or isoalloxazine nucleus, e.g. riboflavin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P33/00—Preparation of steroids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6409—Fatty acids
    • C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6409—Fatty acids
    • C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
    • C12P7/6432—Eicosapentaenoic acids [EPA]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6409—Fatty acids
    • C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
    • C12P7/6434—Docosahexenoic acids [DHA]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6436—Fatty acid esters
    • C12P7/6445—Glycerides
    • C12P7/6463—Glycerides obtained from glyceride producing microorganisms, e.g. single cell oil
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6436—Fatty acid esters
    • C12P7/6445—Glycerides
    • C12P7/6472—Glycerides containing polyunsaturated fatty acid [PUFA] residues, i.e. having two or more double bonds in their backbone

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Fats And Perfumes (AREA)
  • Extraction Or Liquid Replacement (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

Predložené rešení poskytuje zpusob extrahování lipidu z mikroorganismu bez použití nepolárního organického rozpouštedla jako extrakcního rozpouštedla. Zvlášte pak poskytuje zpusob extrahování lipidu z mikroorganismu lyzováním bunek a odstranení slouceniny a/nebo materiálu rozpustných ve vode promýváním smesi lyzovaných bunek vodnými promývacími roztoky tak dlouho, dokud se nezíská v podstate neemulgovaný lipid.

Description

Předložený vynález se týká způsobu získávání lipidů z mikroorganismů extrahováním bez použití jakéhokoli významného množství nepolárního organického rozpouštědla.
Dosavadní stav techniky
Typický způsob výroby lipidů z mikroorganismů, jako je zvláště výroba omega-3 vysoce nenasycené mastné kyseliny, lipidové směsi bohaté na dokosahexaenovou kyselinu (DHA), zahrnuje pěstování mikroorganismů, které jsou schopny produkovat žádaný lipid, ve fermentoru, v nádrži nebo v bioreaktoru, izolování mikrobiální biomasy, její vysušení a extrahování intracelulárních lipidů lipidy mikroorganismů extrahovány po prasknutí (tj. lyžování) vysušených buněk těchto mikroorganismů. Extrahované lipidy mohou být dále přečištěny. Vyrobí se tak lipidy s vysokou čistotou a/nebo kvalitou. Mikroorganismy se obecně izolují nejdříve zředěním fermentační živné půdy vodou a odstřeďováním směsi, tak, aby se izolovaly mikroorganismy. Buňky se pak vysuší a jestliže se lipidy neextrahují bezprostředně nebo brzy po tom, buňky se zabalí, například do vakuově zatavených sáčků, aby se zabránilo degradaci lipidů.
Naneštěstí proces sušení vystavuje mikroorganismy účinku tepla, které může poškodit lipidy, tj. snižovat kvalitu lipidů, jestliže se provádí nesprávně. U vakuově zatavených sáčků se mohou objevit netěsnosti, které mohou dále degradovat kvalitu lipidů díky vystavení mikroorganismů působení vzduchu. Navíc, jestliže vysušené mikroorganismy nejsou zpracovány s antioxidačním činidlem, lipidy se mohou dále degradovat tím, že jsou vystaveny účinkům vzduchu nebo světla. Například karotenoidy, xanthofyly a mastné kyseliny s dlouhým řetězcem, jako je DHA, se mohou degradovat díky oxidaci vzduchem a/nebo světlem. Dále pak v některých případech se u některých pracovníků, kteří jsou vystaveni působení účinku sušených mikroorganismů, se může vyvinout alergická reakce, což vytváří bezpečnostní a/nebo zdravotní riziko pro tyto pracovníky.
Navíc, při výrobě v průmyslovém měřítku mohou velká množství těkavých a hořlavých nepolárních organických rozpouštědel použitím při extrakci lipidů vytvořit rizikové pracovní podmínky.
Použití nepolárního organického rozpouštědla při procesu extrakce může způsobit, že je nutné použít olejový regenerační systém odolný vůči explozi, což zvyšuje cenu izolace lipidů. Navíc, použití nepolárního organického rozpouštědla při extrahování lipidů z mikroorganismů dává vznik odpadnímu proudu nepolárního organického rozpouštědla, což vyžaduje příslušný způsob likvidace a to dále zvyšuje cenu celkové výroby extrakce lipidů.
Existuje tedy potřeba způsobu extrahování lipidů z mikroorganismů, který nevyžaduje použití nepolárního organického rozpouštědla. Existuje také potřeba způsobu extrakce lipidů z mikroorganismů, které nevyžaduje drahý stupeň sušení mikroorganismů před extrakcí.
Podstata vynálezu
Jedno provedení podle předloženého vynálezu poskytuje způsob získávání lipidu z mikroorganismů, který se vyznačuje tím, že zahrnuje:
a) lyžování buněk mikroorganismů za vzniku lyžované buněčné směsi,
b) zpracování lyžované buněčné směsi, kterým se získá rozdělaná směs fází, která obsahuje těžkou vrstvu a lehkou vrstvu, přičemž lehká vrstva je bohatá na lipid,
c) oddělení těžké vrstvy od lehké vrstvy bohaté na lipid, a
d) získání lipidu a/nebo lipidových frakcí z lehké vrstvy.
Jiné provedení podle předloženého vynálezu poskytuje způsob získávání lipidů z mikroorganismů, který se vyznačuje tím, že zahrnuje:
a) pěstování mikroorganismů v kultivačním médiu,
b) zpracování uvedeného kultivačního média a buněk mikroorganismů tak, aby se uvolnily intercelulámí lipidy,
c) vystavení kultivačního média, které obsahuje uvolněné intercelulámí lipidy, působení gravitačního dělení, takže se vytvoří lehká fáze obsahující lipid a těžká fáze,
d) oddělení uvedené lehké fáze od uvedené těžké fáze,
e) zpracování uvedené lehké fáze tak, aby došlo k rozbití emulze vytvořené mezi uvedeným lipidem a vodou, a
f) izolování surového lipidu.
Podle jiného provedení podle předloženého vynálezu se získává způsob izolace lipidů z mikroorganismů, který se vyznačuje tím, že zahrnuje:
a) pěstování uvedených mikroorganismů v kultivačním médiu,
b) zpracování buněk mikroorganismů z uvedeného kultivačního média bez sušení uvedených buněk tak, aby se uvolnily intercelulámí lipidy,
c) vystavení kultivačního média, které obsahuje uvolněné intercelulámí lipidy, působení gravitačního dělení, takže se vytvoří lehká fáze obsahující lipid a těžká fáze,
d) oddělení uvedené lehké fáze od uvedené těžké fáze,
e) zpracování uvedené lehké fáze tak, aby došlo k rozbití emulze vytvořené mezi uvedeným lipidem a vodou, a
f) izolování surového lipidu.
Mikroorganismy se s výhodou kultivují ve fermentačním médiu ve fermentoru. Mikroorganismy se mohou kultivovat také fotosyntetický ve fotobioreaktoru nebo v nádrži. S výhodou mikroorganismy znamenají mikroorganismy bohaté na lipidy výhodněji jsou mikroorganismy vybrány ze skupiny sestávající z řas, bakterií, hub a protistů, výhodněji se mikroorganismy vyberou ze skupiny sestávající ze zlatých řas, zelených řas, dinoflageláte, kvasinek, hub rodu Mortierella a Stramenopiles. S výhodou mikroorganismy zahrnují mikroorganismy rodu Mortierella, rodu Crypthecodinium a řadu Thraustochytriales, a výhodněji jsou mikroorganismy vybrány z rodu Thraustochytrium, Schizochy triům nebo jejich směsí, výhodněji jsou mikroorganismy vybrány ze skupiny sestávající z mikroorganismů, které mají identifikující znaky ATCC číslo 20888, ATCC číslo 20889, ATCC číslo 20890, ATCC číslo 20891 a ATCC číslo 20892, kmenů Mortierella schmuckeri, kmenu Crypthecodinium cohniii. mutovaných kmenů odvozených od jakéhokoliv z předcházejících mikroorganismů ajejich směsí.
Mezi zpracování buněk patří zpracování ta, aby se uvolnily lipidy, jako je lyžování, prasknutí nebo permeabilizace. Pojmy, lýze, lyžování, lyžován atd. tak jak se zde používají, budou použí-2CZ 303446 B6 vány genericky pro označení takového zpracování, které uvolňuje intercelulámí lipidy, včetně rozbití buněk nebo permeabilizace buněk. S výhodou je toto zpracování vybráno ze skupiny sestávající ze zahřívání buněk, vystavení buněk účinků, bazických podmínek, vystavení buněk účinkům chelatační sloučeniny nebo z jejich kombinací. Výhodněji lyžování nebo prasknutí buněk zahrnuje zahřívání buněk na alespoň 50 °C, přičemž se buňky vystaví účinkům bazických podmínek, chelatační sloučenině nebo jejich směsím.
S výhodou gravitační dělení zahrnuje projití kultivační živné půdy obsahující uvolněné intercelulámí lipidy odstředivkou, jako je vrstvená disková separační nebo dekantační odstředivka.
Oddělená lyžovaná buněčná směs obsahuje těžkou vrstvu, která obsahuje vodný roztok, který obsahuje pevné materiály pocházející z lyžovaných buněk, a lehkou vrstvu, která obsahuje lipidy. Lehká a těžká vrstva se mohou od sebe oddělit odstřeďováním. Lipidy mohou být přítomny v emulgovaném stavu. Lehká vrstva může být dále promyta vodným promývacím roztokem tak dlouho, dokud lipid není v podstatě neemulgován. S výhodou zpracování, které rozbije emulzi, zahrnuje smíchání emulze s vodou, alkoholem, acetonem nebo jejich směsmi a vystavení této směsí působení gravitačního dělení. S výhodou se tento postup provádí bez použití nepolárních organických rozpouštědel, jako je hexan.
Jestliže lípidový extrakční způsob podle předloženého vynálezu zahrnuje použití mikroorganismů z fermentační ho procesu, extrakční proces může zahrnovat také soiubilizovánt alespoň části proteinových sloučenin ve fermentační živné půdě přidáním báze vybrané ze skupiny, která sestává z hydroxidů, uhličitanů, hydrogenuhličitanu, fosforečnanů ajejich směsí.
Způsob podle předloženého vynálezu může zahrnovat také zahřátí mikroorganismů na teplotu alespoň asi 50 °C. S výhodou se do kultivačního média přidá chemická sloučenina, jako je báze, aby se napomohlo lyžování buněk.
Jako alternativa k zahřívání se buňky mohou lyžovat za přítomnosti chelatační sloučeniny, jako je EDTA. Vedle toho, že napomáhají lyžování nebo prasknutí buněk, chelatační činidla asistují při prevenci oxidace lipidů během zpracování komplexováním iontů (navázáním na ionty) kovů produkujících volné radikály ve fermentační živné půdě, jako je železo nebo měď. Výhodnými formami chelatačních činidel jsou takové formy, které jsou považovány za činidla vhodná do potravy nebo stupně GRAS (obecně uznávaná jako bezpečná; z anglického Generally Recognized As Safe”). Mezi účinné chelatační sloučeniny patří EDTA, kyselina citrónová nebo citran, kyselina mléčná, fosforečnan, sodný, polyfosfát, hexametafosforečnan, EGTA, DTP A, kyselina fytová nebo CDTA a další formy solí těchto sloučenin. V jednom provedení se sodná sůl EDTA přidává k buňkám, aby se buněčné stěny degradovaly komplexováním dvojvazných kationtů, které napomáhají držet buněčné stěny vcelku. Tento způsob se může provádět za vyšších teplot s menším množstvím EDTA nebo za nižších teplot s vyššími koncentracemi EDTA. Bylo například zjištěno, že buňky Schizochytrium sp. bohaté na DHA mohou být permeabilizovány a/nebo rozbity přidáním EDTA ke kulturám na konci fermentačního procesu. Pro napomáhání prasknutí buněk je vyžadována koncentrace 10 000.10'4 % při 30 °C, koncentrace 5000.10'4 % při 50 °C a při teplotách nad 70 °C jsou účinné koncentrace nižší než 1000.104 % hmotn. Chelatační činidla se mohou přidávat k fermentační živné půdě proto, aby způsobila že buňky se snadněji rozbijí fyzikálním způsobem, jako je homogenizace. Vedle chelatačního činidla se může také přidávat voda, aby se zvýšil vnitřní osmotický tlak, aby se buňky lyžovaly.
S výhodou jsou mikroorganismy schopny růst při hodnot slanosti menší než asi 12 g/l chloridu sodného, výhodněji menší než asi 5 g/1 chloridu sodného a nej výhodněji menší než asi 3 g/1 chloridu sodného. S výhodou jsou mikroorganismy schopny růst při hodnotách slanosti menších než asi 7 g/1 sodíku a menších než asi 250 mg/l chloridu. Chlorid je s výhodou přítomen v množství od asi 70 do asi 150 mg/l.
-3CZ 303446 B6
Mikroorganismy s výhodou obsahují alespoň asi 20 % hmotn. lipidu, výhodněji alespoň asi 30 % hmotn. a nejvýhodněji alespoň asi 40 %. Alternativně alespoň asi 20 % lipidu znamená cholesterol, fytosteroly, desmosterol, tokotrienoly, tokoferoly, ubichinony, karotenopidy a xanthofyly, jako je beta-karoten, lutein, lykopen, astaxanthin, zeaxanthin, kanthaxanthin a mastné kyseliny, jako jsou konjugované kyseliny linolové a omega-3 a omega-6 vysoce nenasycené mastné kyseliny, jako je eikosapentaenová kyselina, dokosapentaenová kyselina a dokosahexaenová kyselina, arachidonová kyselina, stearidonová kyselina, dihomogamalinolenová kyselina a gamalino lenová kyselina nebo jejich směsi, s výhodou alespoň asi 30 % a výhodněji alespoň asi 40 %.
Podle jednoho zvláštního aspektu předloženého vynálezu jsou mikroorganismy schopny produkovat alespoň asi 0,1 gramu na litr za hodinu směsi lipidů, s výhodou zahrnující cholesterol, fytosteroly, desmosterol, tokotrienoly, tokoferoly, ubichinony, karotenoidy a xanthofyly, jak je betakarioten, lutein, lykopen astaxanthin, zeaxanthin, kanthaxanthin a mastné kyseliny, jak jsou konjugované kyseliny linolové a omega-3 a omega-6 vysoce nenasycené mastné kyseliny, jako je eikosapentaenová kyselina, dokosapentaenová kyselina a dokosahexaenová kyselina, arachidonová kyselina, stearidonová kyselina, dihomogamalinolenová kyselina a gama-linolenová kyselina nebo jejich směsi, výhodněji alespoň asi 0,2 g/l/h, ještě výhodněji alespoň asi 0,3 g/l/h a nej výhodněji alespoň asi 0,4 g g/l/h.
Podle jiného aspektu podle předloženého vynálezu je mikroorganismus vybrán ze skupiny sestávající z řas, hub, bakterií a protistů. S výhodou mikroorganismy znamenají řád Thraustochytriales. Výhodněji se mikroorganismy vyberou ze skupiny sestávající zrodu Thraustochytrium, Schizochytriwn ajejich směsí. A nejvýhodněji jsou mikroorganismy vybrány ze skupiny sestávající z mikroorganismů, které mají identifikující znaky ATCC číslo 20888, ATCC číslo 20889, ATCC číslo 20890, ATCC číslo 20891 a ATCC číslo 20892, mutovaných kmenů odvozených od kteréhokoliv z předcházejících mikroorganismů ajejich směsí. S výhodou jsou mikroorganismy vybrány ze skupiny sestávající z mikroorganismů, které mají identifikující znaky ATCC číslo 20888 a ATCC číslo 20889, výhodněji ATCC číslo 20888, kmenů Mortierella schmuckeri, kmenů Crypthecodinium cohnii, mutovaných kmenů odvozených od kteréhokoliv z předcházejících mikroorganismů ajejich směsí.
V následující části popisu jsou stručně popsány výkresy.
Obrázek 1 je průtokový diagram jednoho provedení bez rozpouštědlového extrakčního procesu podle předloženého vynálezu.
V další části popisuje uveden podrobný popis vynálezu.
Předložený vynález se týká způsobu extrahování, shromažďování, izolování nebo získávání lipidů z mikroorganismů. Způsob podle předloženého vynálezu je aplikovatelný na extrahování rozmanitých lipidů z rozmanitých mikroorganismů, například extrahování lipidů obsahujících cholesterol, fytosteroly, desmosterol, tokotrienoly, tokoferoly, ubichinony, karotenoidy a xanthofyly, jako je beta-karoten, lutein, lykopen, astaxanthin, zeaxanthin, kanthaxanthin a mastné kyseliny, jako jsou konjugované kyseliny linoleové a omega—3 a omega-6 vysoce nenasycené mastné kyselina, jako je eikosapentaenová kyselina, dokosapentaenová kyselina a dokosahexaenová kyselina, arachidonová kyselina, stearidonová kyselina, dihomogamalinolenová kyselina a gamalinolenová kyselina nebo jejich směsi, výhodněji omega-3 vysoce nenasycené mastné kyseliny, jako je dokosahexaenová kyselina (DHA), eikosapentaenová kyselina (EPA) a/nebo dokosapentaenová kyselina (DPA) (tj. omega-3 forma DPA), zvláště lipidů, které obsahují elativně velké množství DHA, z mikroorganismů, které je produkují, a extrahování lipidů obsahujících omega6 vysoce nenasycené mastné kyseliny, jako je arachidonová kyselina a dokosapentaenová kyselina (DPA) (tj. omega-6 forma DPA), z mikroorganismů, které je produkují. Příklady mikroorganismů, které produkují relativně velká množství omega-3 vysoce nenasycených mastných kyselin, jsou pospány v USA patentech 5 340 594 a 5 340 742, oba Barclaye, a příklady mikroorga-4 .
nismů, které produkují relativně vysoké množství arachidonové kyseliny, jsou popsány v USA patentu 5 583 019, Barclaye. Všechny shora uvedené patentyjsou zde celé zahrnuty jako odkazy.
Kvůli stručnosti je však podrobný popis tohoto vynálezu předložen za účelem vhodnosti a ilustrace na příkladu extrahování lipidů obsahujících omega-3 vysoce nenasycenou mastnou kyselinu z mikroorganismů, které ji produkují, zvláště extrahování lipidů z mikroorganismů, které produkují relativně vysoké množství DHA. Tomu je však třeba rozumět tak, že tento vynález, jako celek, není míněn tak, že by tímto byl omezen, a že zručný odborník z oblasti techniky si uvědomí, že podstata předloženého vynálezu bude aplikovatelná na jiné mikroorganismy produkující rozmanité složení lipidů podle zde popsaných způsobů. Mezi tyto mikroorganismy patří takové mikroorganismy, jako jsou houby, protisty, řasy a bakterie, které produkují rozmanité lipidy, jako jsou fosfolipidy, volné mastné kyseliny, estery mastných kyselin, včetně triglyceridů mastných kyselin, steroly, pigmenty (např. karotenoidy a oxykarotenoidy)d a další lipidy, a sloučeniny související s lipidy, jako jsou fotosteroly, ergothionin, kyselina lipoová a antioxidační činidla, mezi která patří beta-karoten, tokotrienoly a tokoferol. Mezi výhodné lipidy a sloučeniny související s lipidy patří, ale bez omezení na ně, cholesterol, fytosteroly, desmosterol, tokotrienoly, tokoferoly, ubichinony, karotenoidy a xanthoxyly, jako je beta-karoten, lutein, lykopen, astaxanthin, zeaxanthin, kanthaxanthin a mastné kyseliny, jako jsou konjugované kyseliny linoleové a omega-3 a omega-6 vysoce nenasycené mastné kyseliny, jako je eikosapentaenová kyselina, dokosapentaenová kyselina a dokosahexaenová kyselina, arachidonová kyselina, stearidonová kyselina, dihomogamalinolenová kyselina a gama-linolenová kyselina nebo jejich směsi. Kvůli stručnosti, pokud není jinak uvedeno, pojem lipid znamená lipid a/nebo sloučeniny související s lipidy. Další lipidy a mikroorganismy, které mohou být vhodné pro použití v předloženém vynálezu, budou snadno zřejmé odborníkům z oblasti techniky.
Mezi typický způsob výroby mikrobiálního lipidu (zvláště oleje obsahujícího omega-3 vysoce nenasycenou mastnou kyselinu, jako je DGHA) patří pěstování mikroorganismů, které produkují DHA, ve fermentoru, izolování mikroorganismů, vysušení mikrobiální biomasy a extrahování intracelulámích lipidů nepolárním organickým rozpouštědlem, např. hexanem. Extrahovaný lipid se obecně dále přečistí takže se vyrobí lipid s vysokou čistotou a/nebo kvalitou. Mezi isoace mikroorganismů patří zředění fermentační živné půdy vodou a odstřeďování směsi tak, aby se izolovaly mikroorganismy. Jestliže se lipidy neextrahují bezprostředně nebo brzy po izolování mikroorganismů, izolované mikroorganismy se typicky vysuší, například v bubnové sušičce, a zataví se do balíku, např. do pytlů zatavených ve vakuu, aby se předešla degradace lipidů. Naneštěstí však sušící proces vystavuje mikroorganismy účinkům tepla, které může poškodit, tj. degradovat kvalitu lipidu, jestliže se neprovádí správně. Tato zabalení může však mít otvory, které mohou dále degradovat kvalitu lipidů. Navíc, jestliže vysušené mikroorganismy nejsou ošetřeny antioxidaěním činidlem, může vystavení mikroorganismů účinům vzduchu a/nebo světla lipidy dále degradovat.
Izolování surového oleje patří z fermentační živné půdy se těmto problémům vyhýbá. Vyhnutí se stupni extrakce nepolární organickým rozpouštědlem snižuje cenu výroby a také odstraňuje vystavení pracovníků účinkům sušených mikroorganismů, což může u někteiých jedinců způsobit alergickou odpověď.
Předložený vynález poskytuje způsob získání lipidů z mikroorganismů použitím extrakčního způsobu v podstatě bez nepolárního organického rozpouštědla (tj. jde o bezrozpouštědlový extrakční způsob). Pojem bezrozpouštědlový extrakční způsob označuje takový způsob extrakce, který, jestliže se používá vodné nebo polární rozpouštědlo, potom toto vodné nebo polární rozpouštědlo obsahuje méně než asi 5% nepolárního organického rozpouštědla, a výhodou méně než asi 4 %, výhodněji méně než asi 2 %, a nejvýhodněji méně než 1 %. Rozpouštědla se mohou po užívat v postupových stupních, jako je tomu při způsobu přečištění. Způsob podle předloženého vynálezu může zahrnovat získání nebo izolování mikroorganismů, s výhodou z fermentačního procesu. Na rozdíl od způsobu podle předchozí oblasti techniky, jako je extrakce olejů ze sójových bobů, při které se sójové boby musí vysušit, způsob podle předloženého vynálezu nevyža-5 CZ 303446 B6 duje stupeň sušení před extrakěním procesem. Způsoby podle předloženého vynálezu jsou tedy aplikovatelné na extrahování lipidů z mikrobiální biomasy obsahující alespoň asi 10 % hmotnostních zachycené vody, s výhodou alespoň asi 20 %, výhodněji alespoň asi 30 % a nej výhodněji alespoň asi 50 %. Jestliže se mikroorganismy získávají z fermentačního procesu, způsob podle předloženého vynálezu může zahrnovat přidání báze k fermentaění živné půdě, aby se rozpustily jakékoliv proteinové sloučeniny, které mohou být v živné půdě přítomny. Báze znamenají takové látky, které vykazují alkalické (bazické) reakce ve vodných roztocích, tj. přitahují protony a d i soci ují na hydroxidové ionty. Báze by měla být dostatečně silná, aby hydroxy lovala nebo solubilizovala alespoň část proteinových sloučenin, které mohou být v živné půdě přítomny. Báze, které jsou užitečné pro solubilizování proteinů, jsou dobře známy odborníkům z oblasti techniky. Mezi příklady bází, které jsou užitečné ve způsobech podle předloženého vynálezu, patří, ale bez omezení na ně, hydroxidy, uhličitany a hydrogenuhličitany lithné, sodné, draselné, vápenaté a uhličitan hořečnatý. Mohou se používat také další velmi bazické sloučeniny, jako jsou bazické fosforečnanové soli, jakoje fosforečnan sodný.
Způsob podle předloženého vynálezu může zahrnovat také prasknutí nebo lyžování buněk mikroorganismů, aby se uvolnily lipidy, které jsou přítomny uvnitř buněk. Buňky mohou být lyžovány použitím jakýchkoliv známých způsobů, mezi které patří chemické, tepelné a mechanické způsoby zahrnující, ale bez omezení na ně, francouzský lis, mlýny, působení ultrazvuku, homogenizaci a parní explozi a jejich kombinace. Při tepelném lyžování buněk se fermentaění živná půda obsahující mikroorganismy zahřívá tak dlouho, dokud buňky, tj. buněčné stěny, mikroorganismů nedegradují nebo se nerozpadnou. Typicky se fermentaění živná půda zahřeje na teplotu alespoň asi 50 °C, s výhodou alespoň asi 75 °C, výhodněji alespoň asi 100 °C, a nejvýhodněji alespoň asi 130 °C. Důležitým aspektem tohoto způsobuje udržovat teplotu pod takovou teplotou, při které mohou být extrahované lipidy degradovány. Tepelné lyžování buněčných stěn mikroorganismů je zvláště užitečné pro mikroorganismy, jejichž buněčné stěny jsou sestaveny z proteinů. Během toho způsobu může být vrchní část fermentoru naplněna dusíkem nebo jiným inertním plynem, aby se zabránilo oxidaci lipidů kyslíkem,
Zahřívání živné půdy také denaturuje proteiny a napomáhá solubilizovat organické materiály, včetně proteinů. Stupeň zahřívání fermentaění živné půdy se může provádět jakýmkoliv ze známých způsobů, mezi které patří in line výměník tepla, s výhodou zaváděním páry do fermentaění živné půdy a udržováním této živné půdy na žádané teplotě po dobu kratší než asi 90 minut, s výhodou kratší než asi 60 minut a výhodněji kratší než asi 30 minut.
Extrakční způsob bez rozpouštědla podle předloženého vynálezu může zahrnovat také alespoň částečné oddělení spotřebované fermentaění živné půdy od lipidů. Typicky se to provádí odstřeďováním, např. projitím živného prostředí vrstvenou diskovou, dělicí nebo dekantační odstředivkou a izolováním lipidů z emulzní fáze. Odstřeďování směsi vede ke směsi dvou fází obsahující těžkou vrstvu a lehkou vrstvu. Těžkou vrstvou je typická vodná fáze, která obsahuje většinu buněčných zbytků. Lehká fáze, která obsahuje emulgované lipidy, se potom zředí vodou, opět se rozdělí na směs dvou fází a lehká vrstva se opět izoluje. Tento způsob ředění vodou, dělení a izolace (tj. způsob promývání) se může provádět kontinuálně přiváděním vody a odstraňováním těžké vrstvy z procesu nebo se může provádět celý postup v jednotlivých stupních. Postup promývání se obvykle opakuje tak dlouho, dokud se nezíská v podstatě neemulgovaná tuková vrstva, i když se mohou získat menší množství emulze. Předpokládá se, že mezifází emulze olej-voda je stabilizováno zbylými buněčnými zbytky, které se odstraní při postupu promýváním. Během, postupu promývání se postupně snižuje množství přidané vody, aby se zvýšil obsah lipidu. I když přilit rychlé snižování množství napájené vody může vést ke ztrátě tuků ve vodné fázi, příliš pomalé snižování množství vody vede k neúčinnému postupu promývání. Příslušnou rychlost snižování přiváděné vody lze snadno stanovit pozorováním nebo analyzováním oddělené vodné vrstvy. Obecně je tuková vrstva, tj. lehká vrstva, zabarvena; v mnoha případech proto lze stanovit příslušnou rychlost snižování přivádění vody jednoduše analyzováním nebo pozorováním barvy vodné vrstvy, které se od tukové vrstvy odděluje.
-6 CZ 303446 B6
Emulze může být také, a to s výhodou, rozbita. Olej se izoluje použitím deolejujícího způsobu uvedeného ve spisu Wo 96/05278, který je zde celý zahrnut jako odkaz. Podle tohoto způsobu se sloučenina rozpustná ve vodě, např. alkohol a/nebo aceton, přidá k emulzi oleje ve vodě, aby se emulze rozbila a výsledná směs se rozdělí na odstředivce. Izolovaný tuk se může dále přečistit použitím podobného postupu, jaký se používá při přečištění standardních rostlinných olejů. Ve stručnosti - způsob čištění lipidu obecně zahrnuje hydratování fosfolipidů přidáním kyseliny fosforečné k lipidu, následuje přidání hydroxidu sodného pro zneutralizování volných mastných kyselin. Tyto sloučeniny se odstraní odstřeďováním. Potom následuje stupeň promývání vodou, aby se dále odstranila jakákoliv zbývající množství hydratovaných fosfolipidů (gumy) a zneuio tralizovaných mastných kyselin (mýdlový kal) v tuku. Výsledný tuk se vybělí použitím TrysilurM a standardní bělící hlinky. Přidá se také kyselina citrónová, aby se odstranily dvojné ionty kovu komplexací. Trysil™ a bělící hlinka se pak odstraní filtrací. Vyrobí se tak vyčištěný lipid. Vybělený lipid se může zfiltrovat za studená, aby se odstranily sloučeniny s vysokou teplotou tání, které mohou být v lipidu přítomny. Tento stupeň je však obvykle vyžadován zřídka.
Výsledný lipid může být dále přečištěn odstraněním jakýchkoliv složek s nízkou molekulovou hmotností, které mohou být přítomny. Typicky se tyto složky odstraňují proplachováním parou za vyšší teplot ve vysokém vakuu. Tento způsob také ničí jakékoliv peroxidové vazby, které mohou být přítomny, snižuje nebo odstraňuje pachy a napomáhá zlepšit stabilitu oleje. Potom se může k výslednému lipidu zbavenému pachu přidat antioxidační činidlo, aby se zlepšila stabilita produktu.
Během postupu čištění se izolovaný lipid může ochladit, aby se odstranily sloučeniny s vysokou teplotou tání, jako jsou nasycené mastné kyseliny. Tento postup ochlazení obvykle zahrnuje roz25 puštění izolovaného lipidu v organickém rozpouštědle, např. hexanu, ochlazení výsledného organického roztoku a zfiltrování tohoto roztoku, aby se z lipidu nebo ze stearinové fáze odstranily složky s vysokou teplotou tání. Tento postup ochlazení obvykle poskytuje čirý lipid, zvláště tehdy, jestliže izolovaný lipid je zakalený nebo matný. Je třeba si uvědomit, že použití rozpouštědla, jako je hexan, je přijatelné v takových postupech, jako je shora popsaný způsob přečiš30 tění. Izolovaný lipid může být také hluboko zmražen a ztuhlé nečistoty mohou být odfiltrovány bez použití rozpouštědla.
Shora uvedené postupy přečištění, bělení a zbavení pachu by se mělo používat u lipidových směsí bohatých na triglyceridy. Také, nebo vedle tohoto postupu, mohou být odděleny a vyčiště35 ny další lipidy, například pigmenty nebo karotenoidy, napr. roztřepáním mezi různá rozpouštědla, chromatografickými způsoby atd.
I když způsob podle předloženého vynálezu může zahrnovat izolování mikroorganismů z fermentaěního procesu, jednou výhodou předloženého vynálezu je to, že umožňuje provádět fermentaci mikroorganismů a izolaci lipidů v jediné nádobě. Například po fermentaci lze do fermentační nádoby přidat bázi a zahřívat směs, aby se buňky izolovaly. Po rozdělení fáze na těžkou vrstvu a lehkou vrstvu se lehká vrstva může přenést do jiné nádoby pro další zpracování nebo se těžká vrstva může z fermentační nádoby odstranit, například odebráním dnem fermentační nádoby, a zbývající lehká vrstva se může dále zpracovat ve stejné fermentační nádobě.
Jestliže koncentrace lipidů v buňkách mikrobiální kultury je vysoká (např. vyšší než asi 20 %), ale koncentrace buněk je nízká (např. menší než asi 40 g/l), jak je tomu u buněk narostlých v kontinuálních fermentačních systémech, nebo kultivace je obtížná (např. křehké buňky), aby vyrostly buňky, nebo se kultury produkují v kultivačních systémech založených na fotosyntéze, buňky mohou být zkoncentrovány, např. odstřeďováním, zfiltrováním nebo usazením před tím, než se použijí způsoby podle tohoto vynálezu, jestliže je to nutné.
Další předměty, výhody a nové znaky tohoto vynálezu budou zřejmé zručnému odborníkovi z oblasti techniky po prozkoumání následujícího příkladů vynálezu, které nejsou zamýšleny jako omezující.
-7CZ 303446 B6
Příklady provedení vynálezu
Proces reprodukovatelnosti se vyznačuje tím, že se vyrobí tři vzorky plně přečištěného oleje, užívající olej z nového extrakěního způsobu bez rozpouštědla. Vzorek extrahovaný hexanem byl také plně přečištěn, aby sloužil jako kontrola. Stupně fermentace, extrakce a izolace oleje byly prováděny ve velkém měřítku, zatímco studie přečištění oleje byly prováděny v malém měřítku. Plně přečištěné vzorky oleje byly analyzovány, aby byl prokázán proces reprodukovatelnosti.
Fermentace
Mikroorganismus bohatý na olej (Schizochytrium sp.) byl nechán růst ve fermentoru o objemu 5400 litrů. Získala se tak fermentační živná půda pro následující procesy extrakce. Pro generování výchozí živné půdy pro tři způsoby extrakce bez rozpouštědla byla použita jediná dávka. Fermentace byla nechána běžet 94 hodin, při čemž byla hladina glukózy regulována na 13 g/1. Po této době bylo ukončeno napájení kukuřičným sirupem. Po čtyřech dalších hodinách hladiny zbývající glukózy klesly na < 5 g/1. To vedlo ke konečnému stáří 98 hodin. Konečný objem živné půdy byl 4311 litrů. Konečný výtěžek byl 146 g/1 suché hmotnosti buněk. Jak rostla kontaminace v procesu tak celková analýza konečného vzorku živné půdy selhaly v tom, aby vykázaly jakékoliv známky kontaminace.
Kontrolní vzorek extrahovaný hexanem
Malý podíl živné půdy z fermentační dávky byl vysušen v bubnu a extrahován hexanem. Tento podíl sloužil jako kontrolní vzorek. Biomasa meziproduktu byla izolována sušičkou s dvojím bubnem. Analýza tohoto lipidu je uvedena v tabulce l.
Tabulka 1
Analýza biomasy Szchizochytrium sp. vysušené v bubnu.
parametr hodnota obsah DHA (základ FAME) 35,7 % obsah oleje 62,7 % peroxidová hodnota (mekv./kg) 2,6 celkový počet desek (počet jednotek tvořících kolonie/g) <50 obsah DHA 20,3 % obsah FAME 56,9 % *Vztaženo na buněčnou suchou hmotnost
Způsob extrakce bez rozpouštědla
Surový olej byl získán zpracováním tři podílů o objemu 1800 litrů (přibližně) fermentační živné půdy. Každý 18001 podíl z fermentoru byl zpracován odděleně, přičemž se vycházelo ze stupně bazického/tepelného zpracování. Každý podíl byl zpracován s 20 gramy 45% KOH na litr a za- 8 CZ 303446 B6 hříván na 130 °C asi 30 minut procházením páry fermentační živnou půdou. Surový olej byl izolován ze zpracované živné půdy použitím komerční odstředivky se stohovanými disky Westfalia HFA-100. Soukromé výsledky pro parametry různých procesů jsou uvedeny v tabulce 2.
Výsledky analýzy konečného surového oleje jsou uvedeny v tabulce 3.
Tabulka 2 io Data zpracování ze způsobu extrakce bez rozpouštědla
SFE-1 SFE-2 SFE-3
zpracování živné půdy
objem zpracované živné půdy 12961 12961 1161 l
konečné pH zpracování 7,5 8,0 8,7
konečný objem po zpracování teplem 17461 1791 I 13861
zvýšení objemu z kondenzátu 34,7% 38,2% 19,4%
první projití emulze
celkový objem 8101 598,51 670,5 I
odhadnutá koncentrace oleje (hmotn.) 12,0% 24,5% 16,1%
zdánlivá hustota (g/ml) 0,986 0,991 0,999
izolace oleje
celkem izolováno surového oleje 91 kg 82 kg 87 kg
číslo dávky DHA oleje SF1A SF2A SF3A
Tabulka 3 Analýza dávek DHA oleje z procesu extrakce bez rozpouštědla
parametr SF1A SF2A SF3A
obsah DHA (% FAME) 39,0 % 38,6 % 39,2 %
peroxidová hodnota (mekv./kg) 4,6 1,8 2,0
hodnota kyselosti (mg KOH/g) N/D N/D N/D
obsah vlhkosti N/D N/D N/D
-9CZ 303446 B6
Přečištění
Vzorek z každého podílu surového oleje byl v malém měřítku ochlazen, přečištěn, vybělen a zba5 ven vůně, stejně jako vzorek surového oleje z kontroly extrahované hexanem. Různá data zpracování z těchto pokusů v malém měřítku jsou uvedena v tabulce 4, včetně účinnosti izolace z různých stupňů zpracování. I když je těžké nalézt toho příliš mnoho v účinnostech izolace pro způsoby v dávkovém měřítku, jelikož ztrácejí tendence byly nepřiměřeně velké, hodnoty uvedené v tabulce 4 ukazují, že tyto hodnoty pro vzorky extrahované bez rozpouštědla mají tendenci podio porovat hodnoty naměřené pro kontrolu extrahovanou hexanem sjedinou výjimkou, kterou je stupeň ochlazování. I když účinnost izolace během stupně ochlazování pro hexanovou kontrolu byla nižší než účinnosti pozorované pro další tři vzorky, tento rozdíl je ze statistického hlediska nevýznamný. Vysoké ztráty během stupně ochlazování způsobily, že celková účinnost izolace pro vzorek hexanové kontroly je rovněž nižší. Nemělo by být očekáváno, že nižší výtěžek by měl mít významný dopad na celkovou kvalitu oleje. Shrnuto - rozdíly ve zpracování různých vzorů oleje byly minimální.
Tabulka 4
Různá data zpracování ze stupňů čištění oleje
HEX-1 SF1A SF2A SF3A
podmínky zpracování
koncentrace micelu 45,0% 52,9 % 52,8 % 45,0 %
rychlost průtoku páry 3,4% 3,4% 2,5% 2,2%
účinnost izolace
zchlazení 80,6% 92,3 % 87,7 % 85,5 %
přečištění 89,4 % 84,8% 91,8% 95,0 %
promývání vodou 90,6% 94,5% 95,8 % 81,2%
bělení 86,1 % 89,2 % 87,3% 84,1 %
zbavení pachu 97,4 % 96,1 % 97,2 % 97,5 %
zabalení 88,2% 89,7 % 89,3 % 95,8 %
celkem 48,2% 56,9 % 58,5% 51,8%
Byly analyzovány plně přečištěné olejové vzorky ze tří cyklů extrakce bez rozpouštědel a z kontroly extrahované hexanem a výsledky jsou uvedeny v tabulce 5. Uvedeny jsou také odpovídající specifikace uvolnění pro každý parametr.
Vzorek výchozího surového oleje z cyklu extrakce bez rozpouštědla byl analyzován také na obsah železa. Obsah železa tohoto vzorku byl 0,08.10'4 %. Koncentrace všech dalších stopových kovů byly pod jejich příslušnými detekčními limity.
- 10CZ 303446 B6
Tabulka 5
QC výsledky pro RBD DHA olej ze způsobu extrakce bez rozpouštědla při srovnání s olejem extrahovaným hexanem
hexan extrakce bez rozpouštědla
cyklus id.č. HEX-1 SFA1 SFA2 SFA3
peroxidová hodnota
(mekv/kg) 0,28 0,69 0,35 0,34
hodnota kyselosti
(mg KOH/g)) 0,17 0,11 0,57 0,24
vlhkost a těkavé složky 0,00% 0,06 % 0,00% 0,00%
stopové prvky (,10-4 %)
olovo <0,20 <0,20 <0,20 <0,20
arsen <0,20 <0,20 <0,20 <0,20
železo 0,22 0,21 0,56 0,02
měď <0,05 <0,05 <0,05 <0,05
rtuť <0,20 <0,20 <0,20 <0,20
DHA (% FAME) 36,9 37,3 37,0 37,7
DHA (mg/g oleje) 342 345 343 351
hexan (10* ** ***%) <3 <3 <3 <3
* Hodnota byla snížena na 0,22 g KOH/g po opakování přečištění a bělení.
** Vzorek byl analyzován San Diego Fermentation Sciences Analytical Group.
*** Hodnota byla snížena na < 0,02,. 10'4 % po zopakování stupňů přečištění a bělení.
V tabulce 6 je uvedeno přímější srovnání výsledků průměrných analýz pro tři vzorky ze způsobu extrakce bez rozpouštědla při srovnání s výsledky pro hexanovou kontrolu.
- 11 CZ 303446 B6
Tabulka 6
Srovnání průměrných hodnot
hexan extrakce bez rozpouštědla
parametr kontrola střed stodch. CV % rozd.
peroxidová hodnota
(mekv/kg) 0,28 0,46 0,20 43,3 % 64,3%
hodnota kyselosti
(mg KOH/g)) 0,17 0,19’ 0,06 33,3% 11,1 %
vlhkost a těkavé
složky 0,00 % 0,02 % 0,03 % 173% ND
stopové prvky (.1 (Γ* %)
olovo <0,20 <0,20 N/A N/A 0,0%
arsen <0,20 <0,20 N/A N/A 0,0%
železo 0,22 0,26 0,27 104% 18,2%
měcf <0,05 <0,05 NZA N/A 0.0%
rtuť <0,20 <0,20 N/A N/A 0,0%
DHA (% FAME) 36,9% 37,3 % 0,4 % 0,9 % 1,1 %
DHA (mg/g oleje) 342 346 4 1,2% 1,2%
hexan (104 %) <3 <3 N/A N/A 0,0%
* Vypočteno použitím hodnoty kyselosti pro přepracovaný vzorek.
Výsledky z tohoto pokusu jasně ukazují, že způsob extrakce bez rozpouštědla je jak reprodukovalo telný tak lipidy z extrakce bez rozpouštědla jsou relativně nerozlišitelné od lipidů získaných způsobem extrakce hexanem v pojmech provedení a kvality produktu. Konečný produkt ze způsobu extrakce bez rozpouštědla je v podstatě ekvivalentní s lipidy z běžného způsobu extrakce na základě hexanu, když se stanovují podobnosti mezi profily mastných kyselin a sterolu produktu z těchto dvou způsobů.
Mezi předložený vynález v různých provedeních patří složky, způsoby, postupy, systémy a/nebo zařízení v podstatě tak, jak jsou zde navrženy a popsány, včetně různých provedení, subkombinací a jejich podsestav. Zruční odborníci z oblasti techniky pochopí jak provádět a používat předložený vynález po pochopení předloženého objevu. Předložený vynález, v různých provedeních, zahrnuje získání zařízení a způsobů v nepřítomnosti položek neuvedených a/nebo nepopsaných
- 12CZ 303446 B6 zde nebo v jejich různých provedeních, včetně nepřítomnosti takových položek, které mohou být používány v předešlých zařízeních nebo způsobech, např. pro zlepšení provedení, dosažení snadnosti a/nebo snížení ceny provedení.
Předcházející diskuse tohoto vynálezu zde byla prezentována pro účely ilustrace a popisu. Předcházející popis není považován za omezení tohoto vynálezu na formu nebo formy zde popsané. I když popis vynálezu zahrnuje popis jednoho nebo více provedení a jistých obměn a modifikací, další změny a modifikace jsou v rozsahu tohoto vynálezu, např. takové, které mohou být ve zručnosti a znalosti odborníka z oblasti techniky po porozumění předloženému popisu. Úmyslem je získat práva, která zahrnují alternativní provedení v povoleném rozsahu, včetně alternativních, vzájemně zaměnitelných a/nebo ekvivalentních struktur, funkcí, rozsahů nebo stupňů k těm, které jsou zde nárokovány, ať již jsou takové alternativní, vzájemně zaměnitelné a/nebo ekvivalentní struktury, funkce, rozsahy nebo stupně zde popsány nebo nikoliv, a bez úmyslu veřejně věnovat jakýkoliv patentovatelný předmět.

Claims (33)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Způsob získání lipidů z mikroorganismů, v y z n a č uj í c í se tím, že obsahuje:
    a) lyžování buněk mikroorganismů pěstovaných ve fermentační živné půdě pro uvolnění intra25 celulámích lipidů a vytvoření lyžované buněčné směsi;
    b) podrobení lyžované buněčné směsi procesu gravitačního dělení, kterým se získá směs s rozdělenými fázemi, která obsahuje těžkou vrstvu a lehkou vrstvu, přičemž těžká vrstva obsahuje vodnou fázi a lehká vrstva obsahuje lipidy, a přičemž se způsob provádí v médiu, které
    30 obsahuje méně než 5 % nepolárního organického rozpouštědla, přičemž se pro získání lipidu nepoužívá extrakce nepolárním organickým rozpouštědlem;
    c) oddělení těžké vrstvy od lehké vrstvy; a 35 d) získání lipidů z lehké vrstvy.
  2. 2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že dále obsahuje, před stupněm a), stupeň solubilizování alespoň části jakýchkoliv proteinových sloučenin přítomných ve fermentační živné půdě.
  3. 3. Způsob podle nároku 2, vyznačující se tím, že stupeň solubilizování proteinových sloučenin obsahuje uvedení fermentační živné půdy do kontaktu s bází.
  4. 4. Způsob podle nároku 1, vy z n a č uj í c í se tím, že výroba směsi s oddělenými fáze45 mi ve stupni b) obsahuje odstřeďování lyžované buněčné směsi.
  5. 5. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že lyžování v a) obsahuje zpracování vybrané ze skupiny sestávající ze zahřívání buněk, vystavení buněk účinkům bazické sloučeniny, vystavení buněk účinkům chelatační sloučeniny nebo jejich kombinací.
  6. 6. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že stupeň a) lyžování obsahuje přidání báze k fermentační živné půdě.
  7. 7. Způsob podle nároku 6, vyznačující se tím, že se báze vybere ze skupiny 55 sestávající z hydroxidů, uhličitanů, hydrogenuhličitanů, fosforečnanů a jejich směsí.
    - 13 CZ 303446 B6
  8. 8. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že lyžování v a) obsahuje zahřátí mikroorganismů na teplotu alespoň 50 °C.
    5
  9. 9. Způsob podle nároku 8, vyznačující se tím, že dále obsahuje zahřátí buněk na alespoň 50 °C před tím, během, nebo po tom, co se buňky vystaví působení bazické sloučeniny, chelatační sloučeniny nebo jejich směsí.
  10. 10. Způsob podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že ío lyžování v a) obsahuje lyžování bez sušení buněk pro uvolnění intracelulámích lipidů.
  11. 11. Způsob podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že stupeň c) oddělení dále obsahuje:
    15 i) přidání vodného promývacího roztoku k lehké vrstvě;
    i i) oddělení vodného promývacího roztoku od lehké vrstvy; a iii) opakování stupňů i) a ii) dokud je lipid neemulgovaný.
  12. 12. Způsob podle kteréhokoli z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že stup20 ně lyžování, podrobení dělení a oddělení se opakují alespoň třikrát, aby se získaly lipidy.
  13. 13. Způsob podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že lehká vrstva obsahuje emulgovaný lipid.
  14. 14. Způsob podle nároku 13, vyznačující se tím, že emulgovaný lipid obsahuje suspenzi lipidu ve vodné fázi.
  15. 15. Způsob podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, vodná fáze obsahuje pevné buněčné materiály.
    vyznačující se tím že
  16. 16. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že gravitační dělení obsahuje projetí fermentačního média obsahujícího uvolněné intracelulámí lipidy vrstvenou diskovou, separační nebo dekantační odstředivkou.
    35
  17. 17. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že gravitační dělení obsahuje odstřeďování.
  18. 18. Způsob podle nároku 1, v y z n a č uj í c í se tím, že stupeň a) obsahuje stupně:
    40 i) uvedení fermentační živné půdy do kontaktu s bází, čímž se rozpustí alespoň část jakýchkoliv proteinových sloučenin přítomných ve fermentační živné půdě; a i i) zvýšení teploty mikroorganismů ve fermentační živné půdě na alespoň 50 °C, čímž dochází k lýze buněk mikroorganismů za vzniku lyžované buněčné směsi;
    a že stupeň d) zahrnuje:
    i) přidání vodného promývacího roztoku k lehké vrstvě;
    ii) oddělení látek o různých hustotách ze směsi stupně i);
    50 iii) odstranění těžké vrstvy ze směsí rozdělených fází; a iv) opakování stupňů i) až iv) dokud je lipid neemulgovaný.
    - 14CZ 303446 B6
  19. 19. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že obsahuje stupně:
    a) lyžování fermentační živné půdy a buněk pěstovaných v uvedené fermentační živné půdě
    5 pro uvolnění intracelulámích lipidů;
    b) vystavení fermentační živné půdy, která obsahuje uvolněné intracelulámí lipidy, působení gravitačního dělení, aby se vytvořila směs oddělených fází obsahující těžkou vrstvu a lehkou vrstvu, přičemž těžká vrstva obsahuje vodnou fázi a lehká vrstva obsahuje lipidy;
    c) oddělení lehké fáze od těžké fáze; a
    d) získání lipidů z lehké fáze zpracováním lehké fáze tak, aby došlo k rozbití emulze vytvořené mezi lipidem a vodou, a získání surového lipidu.
  20. 20. Způsob podle nároku 19, vyznačující se tím, že stupeň lyžování se provádí bez sušení buněk pro uvolnění intracelulámích lipidů.
  21. 21. Způsob podle nároku 19, vyznačující se tím, že stupeň rozbití emulze obsahuje 20 smíchání emulze s vodou, alkoholem nebo acetonem a podrobení směsi gravitačnímu dělení.
  22. 22. Způsob podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že se provádí v médiu, které obsahuje méně než 4 % nepolárního organického rozpouštědla.
    25
  23. 23. Způsob podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že se provádí v médiu, které obsahuje méně než 2 % nepolárního organického rozpouštědla.
  24. 24. Způsob podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že se provádí v médiu, které obsahuje méně než 1 % nepolárního organického rozpouštědla.
  25. 25. Způsob podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že provádí bez přítomnosti nepolárního organického rozpouštědla.
  26. 26. Způsob podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že
    35 buňkami mikroorganismů je mikrobiální biomasa, která obsahuje alespoň 10% hmotnostních zadržené vody.
  27. 27. Způsob podle kteréhokoliv z přecházejících nároků, vyznačující se tím, že buňkami mikroorganismů je mikrobiální biomasa, která obsahuje alespoň 20% hmotnostních
    40 zadržené vody.
  28. 28. Způsob podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že buňkami mikroorganismů je mikrobiální biomasa, která obsahuje alespoň 30% hmotnostních zadržené vody.
  29. 29. Způsob podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že buňkami mikroorganismů je mikrobiální biomasa, která obsahuje alespoň 50 % hmotnostních zadržené vody.
    50 30. Způsob podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že lipidy získané způsobem se podrobí dalšímu přečištění nebo zpracování, takže se získá vyčištěný lipid.
    31. Způsob podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že
    55 lipidy získané způsobem se bělí a zbavují se prachu.
    - 15 CZ 303446 B6
    32. Způsob podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že mikroorganismy se získávají z fermentačního procesu.
    5 33. Způsob podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že mikroorganismy jsou schopny růst při hodnotě slanosti menší než asi 12 g/1 chloridu sodného.
    34. Způsob podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že mikroorganismy jsou mikroorganismy bohaté na lipidy.
    35. Způsob podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že mikroorganismy obsahují alespoň 20 % hmotnostních lipidu.
    36. Způsob podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že
    15 mikroorganismy jsou vybrány ze skupiny sestávající z řas, hub, bakterií a protistů.
    37. Způsob podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že mikroorganismy zahrnují mikroorganismy ze skupiny sestávající ze zlaté řasy, zelené řasy, dinoflagelátů, kvasinek, hub rodu Mortierella, a Stramenopiles.
    38. Způsob podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že mikroorganismy obsahují mikroorganismy řádu Thraustochytriales.
    39. Způsob podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že
    25 mi kroorgan i srny j so u vy brány z rodu Thraustochytri um, Schizochytri um a j ej i ch směs í.
    40. Způsob podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že mikroorganismy jsou vybrány ze skupiny sestávající z mikroorganismů, které mají identifikační znaky ATCC číslo 20888, ATCC číslo 20889, ATCC číslo 20890, ATCC číslo 20891 a ATCC
  30. 30 číslo 20892, kmeny Mortierella schmuckeri, kmeny Crypthocodinium cohnii, mutované kmeny odvozené od kteréhokoliv z předcházejících mikroorganismů, a jejich směsi.
    41. Způsob podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že mikroorganismy jsou schopny produkovat alespoň 0,1 gramu na litr za hodinu alespoň jedné
  31. 35 sloučeniny vybrané ze skupiny složené z cholesterolu, fytosterolů, desmosterolu, tokotrienolů, tokoferolů, ubichinonů, karotenoidů a xanthofvlú jako je beta-karoten, lutein, lykopen, astaxanthin, zeaxanthin, kanthaxanthin, mastných kyselin jako jsou konjugované kyseliny linolové, aomega-3 a omega—6 vysoce nenasycených mastných kyselin jako je eikosapentaenová kyselina, dokosapentaenová kyselina, dokosahexaenová kyselina, arachidonová kyselina, stearidonová
  32. 40 kyselina, dihomogamalinolenová kyselina a gama-linolenová kyselina nebo jejich směsí,
  33. 42. Způsob podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že alespoň 20 % lipidu z mikroorganismu znamená alespoň jednu sloučeninu vybranou ze skupiny složené z cholesterolu, fytosterolů, desmosterolu, tokotrienolů, tokoferolů, ubichinonů, karote45 noidů a xanthofylů jako je beta-karoten, lutein, lykopen, astaxanthin, zeaxanthin, kanthaxanthin, mastných kyselin jako jsou konjugované kyseliny linolové a omega-3 a omega-6 vysoce nenasycených mastných kyselin jako je eikosapentaenová kyselina, dokosapentaenová kyselina, dokosahexaenová kyselina, arachidonová kyselina, stearidonová kyselina, dihomogamalinolenová kyselina a gama-linolenová kyselina nebo jejich směsí.
CZ20022506A 2000-01-19 2001-01-19 Zpusob získávání lipidu z mikroorganismu CZ303446B6 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US17712500P 2000-01-19 2000-01-19

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ303446B6 true CZ303446B6 (cs) 2012-09-19

Family

ID=22647287

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ20022506A CZ303446B6 (cs) 2000-01-19 2001-01-19 Zpusob získávání lipidu z mikroorganismu

Country Status (24)

Country Link
US (8) US6750048B2 (cs)
EP (4) EP1252324B1 (cs)
JP (5) JP4020642B2 (cs)
KR (8) KR20140079870A (cs)
CN (1) CN100460513C (cs)
AT (1) ATE485385T1 (cs)
AU (7) AU780619B2 (cs)
BR (1) BR0107699B1 (cs)
CA (2) CA2772540A1 (cs)
CZ (1) CZ303446B6 (cs)
DE (1) DE60143287D1 (cs)
DK (1) DK1252324T3 (cs)
ES (3) ES2352001T3 (cs)
HK (1) HK1050716A1 (cs)
HU (1) HUP0300556A3 (cs)
IL (5) IL150772A0 (cs)
MX (4) MX350779B (cs)
NO (2) NO20023449L (cs)
NZ (1) NZ520287A (cs)
PL (1) PL356587A1 (cs)
PT (1) PT1252324E (cs)
RU (1) RU2336307C2 (cs)
WO (1) WO2001053512A1 (cs)
ZA (1) ZA200205790B (cs)

Families Citing this family (204)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2000516480A (ja) 1998-03-17 2000-12-12 コンリンコ，インコーポレイテッド 共役リノール酸組成物
US7776353B1 (en) 1998-03-17 2010-08-17 Aker Biomarine Asa Conjugated linoleic acid compositions
US7078051B1 (en) 1998-08-11 2006-07-18 Natural Asa Conjugated linoleic acid alkyl esters in feedstuffs and food
US7101914B2 (en) 1998-05-04 2006-09-05 Natural Asa Isomer enriched conjugated linoleic acid compositions
CZ303446B6 (cs) * 2000-01-19 2012-09-19 Martek Biosciences Corporation Zpusob získávání lipidu z mikroorganismu
AU2001251449B2 (en) 2000-04-06 2005-04-07 Conlinco, Inc. Conjugated linoleic acid compositions
JP5258134B2 (ja) 2000-04-18 2013-08-07 エイカー バイオマリン アーエスアー 共役リノール酸粉末
EP1178118A1 (en) * 2000-08-02 2002-02-06 Dsm N.V. Isolation of microbial oils
US6677470B2 (en) 2001-11-20 2004-01-13 Natural Asa Functional acylglycerides
EP2239028A1 (en) * 2001-12-12 2010-10-13 Martek Biosciences Corporation Extraction and Winterization of Lipids From Oilseed and Microbial Sources
CA2484334C (en) 2002-05-03 2013-01-22 Martek Biosciences Corporation High-quality lipids and methods for producing by enzymatic liberation from biomass
US6743931B2 (en) 2002-09-24 2004-06-01 Natural Asa Conjugated linoleic acid compositions
JP4733043B2 (ja) 2003-10-02 2011-07-27 マーテック バイオサイエンシーズ コーポレーション 改変された量の塩化物およびカリウムを使用した微細藻類における高レベルのｄｈａの産生法
US7566570B2 (en) 2004-01-26 2009-07-28 Martek Biosciences Corporation Method for the separation of phospholipids from phospholipid-containing materials
UA94038C2 (ru) 2005-03-18 2011-04-11 Майкробиа, Инк. Продуцирование каротиноидов в маслянистых дрожжах и грибах
EA200870001A1 (ru) * 2005-05-12 2009-10-30 Мартек Байосайенсиз Корпорейшн Гидролизат биомассы, его применение и производство
EP1899453B1 (en) * 2005-06-07 2013-12-18 Ocean Nutrition Canada Limited Eukaryotic microorganisms for producing lipids and antioxidants
WO2007005725A2 (en) 2005-07-01 2007-01-11 Martek Biosciences Corporation Polyunsaturated fatty acid-containing oil product and uses and production thereof
US8277849B2 (en) 2006-01-19 2012-10-02 Solazyme, Inc. Microalgae-derived compositions for improving the health and appearance of skin
US8298548B2 (en) 2007-07-18 2012-10-30 Solazyme, Inc. Compositions for improving the health and appearance of skin
US20100242345A1 (en) * 2006-05-19 2010-09-30 LS9, Inc Production of fatty acids & derivatives thereof
US8110670B2 (en) 2006-05-19 2012-02-07 Ls9, Inc. Enhanced production of fatty acid derivatives
US8877465B2 (en) * 2006-07-05 2014-11-04 Photonz Corporation Limited Production of ultrapure EPA and polar lipids from largely heterotrophic culture
JP4854418B2 (ja) * 2006-07-28 2012-01-18 花王株式会社 ドデカヒドロ−３ａ，６，６，９ａ−テトラメチルナフト［２，１−ｂ］フラン原料の製造方法
US9023616B2 (en) * 2006-08-01 2015-05-05 Dsm Nutritional Products Ag Oil producing microbes and method of modification thereof
WO2008042338A2 (en) 2006-09-28 2008-04-10 Microbia, Inc. Production of carotenoids in oleaginous yeast and fungi
US8262776B2 (en) * 2006-10-13 2012-09-11 General Atomics Photosynthetic carbon dioxide sequestration and pollution abatement
WO2008060571A2 (en) * 2006-11-13 2008-05-22 Aurora Biofuels, Inc. Methods and compositions for production and purification of biofuel from plants and microalgae
JP2010523113A (ja) * 2007-04-03 2010-07-15 イー・アイ・デュポン・ドウ・ヌムール・アンド・カンパニー マルチザイム（ｍｕｌｔｉｚｙｍｅ）および多価不飽和脂肪酸の製造におけるその使用
US20090004715A1 (en) * 2007-06-01 2009-01-01 Solazyme, Inc. Glycerol Feedstock Utilization for Oil-Based Fuel Manufacturing
WO2008155410A1 (en) * 2007-06-21 2008-12-24 Novozymes A/S Production of lipids containing poly-unsaturated fatty acids
CA2692355C (en) * 2007-06-29 2018-09-11 Martek Biosciences Corporation Production and purification of esters of polyunsaturated fatty acids
AU2008300002B2 (en) * 2007-09-12 2014-04-10 Dsm Ip Assets B.V. Biological oils and production and uses thereof
AU2008304180B2 (en) * 2007-09-27 2014-02-27 Genomatica, Inc. Reduction of the toxic effect of impurities from raw materials by extractive fermentation
EP2211881A4 (en) * 2007-11-01 2012-01-04 Wake Forest University School Of Medicine COMPOSITIONS AND METHODS FOR PREVENTING AND TREATING DISEASES AFFECTING MAMMALS
US8343753B2 (en) * 2007-11-01 2013-01-01 Wake Forest University School Of Medicine Compositions, methods, and kits for polyunsaturated fatty acids from microalgae
WO2009149470A1 (en) 2008-06-06 2009-12-10 Aurora Biofuels, Inc. Vcp-based vectors for algal cell transformation
US20100022393A1 (en) * 2008-07-24 2010-01-28 Bertrand Vick Glyphosate applications in aquaculture
US20100077654A1 (en) * 2008-09-23 2010-04-01 LiveFuels, Inc. Systems and methods for producing biofuels from algae
US20100236137A1 (en) * 2008-09-23 2010-09-23 LiveFuels, Inc. Systems and methods for producing eicosapentaenoic acid and docosahexaenoic acid from algae
US9896642B2 (en) 2008-10-14 2018-02-20 Corbion Biotech, Inc. Methods of microbial oil extraction and separation
US20100303957A1 (en) * 2008-10-14 2010-12-02 Solazyme, Inc. Edible Oil and Processes for Its Production from Microalgae
US20100297331A1 (en) * 2008-10-14 2010-11-25 Solazyme, Inc. Reduced Fat Foods Containing High-Lipid Microalgae with Improved Sensory Properties
US20100303989A1 (en) * 2008-10-14 2010-12-02 Solazyme, Inc. Microalgal Flour
US20100297323A1 (en) * 2008-10-14 2010-11-25 Solazyme, Inc. Gluten-free Foods Containing Microalgae
US20100297325A1 (en) * 2008-10-14 2010-11-25 Solazyme, Inc. Egg Products Containing Microalgae
US20100297295A1 (en) * 2008-10-14 2010-11-25 Solazyme, Inc. Microalgae-Based Beverages
US20100303961A1 (en) * 2008-10-14 2010-12-02 Solazyme, Inc. Methods of Inducing Satiety
US20100303990A1 (en) * 2008-10-14 2010-12-02 Solazyme, Inc. High Protein and High Fiber Algal Food Materials
CN102271525B (zh) * 2008-10-14 2015-01-07 索拉兹米公司 微藻生物质的食品组合物
US8927522B2 (en) 2008-10-14 2015-01-06 Solazyme, Inc. Microalgal polysaccharide compositions
US8809037B2 (en) 2008-10-24 2014-08-19 Bioprocessh20 Llc Systems, apparatuses and methods for treating wastewater
WO2010054322A1 (en) 2008-11-07 2010-05-14 Solazyme, Inc. Cosmetic compositions comprising microalgal components
WO2010059598A1 (en) * 2008-11-18 2010-05-27 LiveFuels, Inc. Methods for producing fish with high lipid content
ES2714096T3 (es) 2008-11-28 2019-05-27 Corbion Biotech Inc Producción de aceites adaptados en microorganismos heterotróficos
AU2009333461B2 (en) * 2008-12-08 2015-10-15 Sapphire Energy, Inc. Removal of nitrogen from a chlorophyll or pheophytin containing biomass
US8940340B2 (en) * 2009-01-22 2015-01-27 Aurora Algae, Inc. Systems and methods for maintaining the dominance of Nannochloropsis in an algae cultivation system
CA2751275A1 (en) 2009-02-02 2010-08-05 Martek Biosciences Corporation Use of docosahexaenoic acid in treating mild cognitive impairment
US8143051B2 (en) * 2009-02-04 2012-03-27 Aurora Algae, Inc. Systems and methods for maintaining the dominance and increasing the biomass production of nannochloropsis in an algae cultivation system
SE534278C2 (sv) * 2009-02-17 2011-06-28 Alfa Laval Corp Ab Ett kontinuerligt förfarande för isolering av oljor från alger eller mikroorganismer
US8207363B2 (en) * 2009-03-19 2012-06-26 Martek Biosciences Corporation Thraustochytrids, fatty acid compositions, and methods of making and uses thereof
CA2754952C (en) 2009-03-19 2018-11-06 Martek Biosciences Corporation Thraustochytrids, fatty acid compositions, and methods of making and uses thereof
US8476060B2 (en) * 2009-04-13 2013-07-02 Board Of Regents, The University Of Texas System Process for separating lipids from a biomass
WO2010121094A1 (en) 2009-04-17 2010-10-21 Livefuels. Inc. Systems and methods for culturing algae with bivalves
US20100297749A1 (en) * 2009-04-21 2010-11-25 Sapphire Energy, Inc. Methods and systems for biofuel production
CN102612550A (zh) * 2009-04-22 2012-07-25 R·富尔顿三世 可流化的基于藻类的粉末状燃料及其制造和使用方法
EP2425007A4 (en) 2009-04-27 2013-01-02 Ls9 Inc PREPARATION OF FATTY ACID ESTERS
US9187778B2 (en) 2009-05-04 2015-11-17 Aurora Algae, Inc. Efficient light harvesting
US8580540B2 (en) 2009-05-26 2013-11-12 Solazyme, Inc. Fractionation of oil-bearing microbial biomass
US8865468B2 (en) * 2009-10-19 2014-10-21 Aurora Algae, Inc. Homologous recombination in an algal nuclear genome
US8809046B2 (en) 2011-04-28 2014-08-19 Aurora Algae, Inc. Algal elongases
US8865452B2 (en) * 2009-06-15 2014-10-21 Aurora Algae, Inc. Systems and methods for extracting lipids from wet algal biomass
US9101942B2 (en) * 2009-06-16 2015-08-11 Aurora Algae, Inc. Clarification of suspensions
US8769867B2 (en) * 2009-06-16 2014-07-08 Aurora Algae, Inc. Systems, methods, and media for circulating fluid in an algae cultivation pond
US8747930B2 (en) * 2009-06-29 2014-06-10 Aurora Algae, Inc. Siliceous particles
US20100325948A1 (en) * 2009-06-29 2010-12-30 Mehran Parsheh Systems, methods, and media for circulating and carbonating fluid in an algae cultivation pond
CN101585759B (zh) * 2009-07-08 2012-05-23 内蒙古金达威药业有限公司 从双鞭甲藻发酵液中提取dha不饱和脂肪酸的方法
WO2011006144A1 (en) 2009-07-10 2011-01-13 Martek Biosciences Corporation Methods of treating and preventing neurological disorders using docosahexaenoic acid
WO2011011463A2 (en) * 2009-07-20 2011-01-27 Aurora Biofuels, Inc. Manipulation of an alternative respiratory pathway in photo-autotrophs
US20110082205A1 (en) 2009-10-01 2011-04-07 Panker Cynthia A Docosahexaenoic Acid Gel Caps
US8765983B2 (en) * 2009-10-30 2014-07-01 Aurora Algae, Inc. Systems and methods for extracting lipids from and dehydrating wet algal biomass
US8748160B2 (en) * 2009-12-04 2014-06-10 Aurora Alage, Inc. Backward-facing step
EP2519642B1 (en) * 2009-12-28 2017-10-25 DSM IP Assets B.V. Recombinant thraustochytrids that grow on xylose, and compositions, methods of making, and uses thereof
CN107858297A (zh) 2009-12-28 2018-03-30 Dsm Ip资产公司 在蔗糖上生长的重组破囊壶菌和其组合物、制备方法及用途
JP5920890B2 (ja) * 2010-01-19 2016-05-18 ディーエスエム アイピー アセッツ ビー．ブイ． エイコサペンタエン酸生成微生物、脂肪酸組成物、ならびにそれらを作る方法およびそれらの使用
US8303818B2 (en) * 2010-06-24 2012-11-06 Streamline Automation, Llc Method and apparatus using an active ionic liquid for algae biofuel harvest and extraction
US8313648B2 (en) 2010-04-06 2012-11-20 Heliae Development, Llc Methods of and systems for producing biofuels from algal oil
US8115022B2 (en) 2010-04-06 2012-02-14 Heliae Development, Llc Methods of producing biofuels, chlorophylls and carotenoids
US8211308B2 (en) 2010-04-06 2012-07-03 Heliae Development, Llc Extraction of polar lipids by a two solvent method
AU2011237703A1 (en) * 2010-04-06 2012-10-11 Heliae Development, Llc Selective extraction of proteins from freshwater or saltwater algae
US8211309B2 (en) 2010-04-06 2012-07-03 Heliae Development, Llc Extraction of proteins by a two solvent method
US8475660B2 (en) 2010-04-06 2013-07-02 Heliae Development, Llc Extraction of polar lipids by a two solvent method
WO2011127127A2 (en) 2010-04-06 2011-10-13 Arizona Board Of Regents For And On Behalf Of Arizona State University Extraction with fractionation of oil and co-products from oleaginous material
US8273248B1 (en) 2010-04-06 2012-09-25 Heliae Development, Llc Extraction of neutral lipids by a two solvent method
US8202425B2 (en) 2010-04-06 2012-06-19 Heliae Development, Llc Extraction of neutral lipids by a two solvent method
US8308951B1 (en) 2010-04-06 2012-11-13 Heliae Development, Llc Extraction of proteins by a two solvent method
US10125331B2 (en) * 2010-04-29 2018-11-13 Advanced Energy Development Renewable oil refining processes
CA2801057C (en) 2010-05-28 2019-06-18 Solazyme, Inc. Tailored oils produced from recombinant heterotrophic microorganisms
AU2011261455B2 (en) 2010-06-01 2016-03-24 Dsm Ip Assets B.V. Extraction of lipid from cells and products therefrom
NL2004832C2 (en) * 2010-06-07 2011-12-08 Evodos B V Separating biomass from an aqueous medium.
MY163938A (en) 2010-06-14 2017-11-15 Io-Mega Holding Corp Method for the production of algae derived oils
EP2598641B1 (en) 2010-07-26 2014-05-21 Sapphire Energy, Inc. Process for the recovery of oleaginous compounds from biomass
US9028696B2 (en) 2010-07-26 2015-05-12 Sapphire Energy, Inc. Process for the recovery of oleaginous compounds from biomass
US8906236B2 (en) 2010-07-26 2014-12-09 Sapphire Energy, Inc. Process for the recovery of oleaginous compounds and nutrients from biomass
CN103180422A (zh) 2010-09-21 2013-06-26 国际壳牌研究有限公司 含微生物油和微生物物质的混合物的分离方法
CA3024641A1 (en) 2010-11-03 2012-05-10 Corbion Biotech, Inc. Microbial oils with lowered pour points, dielectric fluids produced therefrom, and related methods
US20120329138A1 (en) 2010-12-23 2012-12-27 Shell Oil Company Process for separation of a mixture containing a microbial substance and a liquid
US8722359B2 (en) 2011-01-21 2014-05-13 Aurora Algae, Inc. Genes for enhanced lipid metabolism for accumulation of lipids
CN102617431B (zh) * 2011-01-28 2013-09-25 天津滨海索尔特生物技术中心有限公司 用无机碱提取盐藻中的β-胡萝卜素的方法
MX351063B (es) 2011-02-02 2017-09-29 Terravia Holdings Inc Aceites adaptados producidos a partir de microorganismos oleaginosos recombinantes.
RU2605328C2 (ru) * 2011-02-16 2016-12-20 Соликс Алгредиентс, Инк. Композиция, набор и способ извлечения целевых соединений из биомассы
US8926844B2 (en) 2011-03-29 2015-01-06 Aurora Algae, Inc. Systems and methods for processing algae cultivation fluid
US8569530B2 (en) 2011-04-01 2013-10-29 Aurora Algae, Inc. Conversion of saponifiable lipids into fatty esters
AU2012249377A1 (en) 2011-04-28 2013-11-14 Aurora Algae, Inc. Algal desaturases
US8752329B2 (en) 2011-04-29 2014-06-17 Aurora Algae, Inc. Optimization of circulation of fluid in an algae cultivation pond
JP2014513964A (ja) 2011-05-06 2014-06-19 ソラザイム、インク キシロースを代謝する遺伝子操作微生物
US9487716B2 (en) 2011-05-06 2016-11-08 LiveFuels, Inc. Sourcing phosphorus and other nutrients from the ocean via ocean thermal energy conversion systems
US20140099684A1 (en) * 2011-05-26 2014-04-10 Council Of Scientific & Industrial Research Engine worthy fatty acid methyl ester (biodiesel) from naturally occuring marine microalgal mats and marine microalgae cultured in open salt pans together with value addition of co-products
FR2975705B1 (fr) * 2011-05-27 2014-12-26 Roquette Freres Procede d'extraction du squalene a partir de microalgues
US8365462B2 (en) 2011-05-31 2013-02-05 Heliae Development, Llc V-Trough photobioreactor systems
USD682637S1 (en) 2011-06-10 2013-05-21 Heliae Development, Llc Aquaculture vessel
USD679965S1 (en) 2011-06-10 2013-04-16 Heliae Development, Llc Aquaculture vessel
USD661164S1 (en) 2011-06-10 2012-06-05 Heliae Development, Llc Aquaculture vessel
AU2012285803B2 (en) 2011-07-21 2016-08-25 Dsm Ip Assets B.V. Eicosapentaenoic acid-producing microorganisms, fatty acid compositions, and methods of making and uses thereof
US9222112B2 (en) 2011-07-21 2015-12-29 Dsm Ip Assets B.V. Eicosapentaenoic acid-producing microorganisms, fatty acid compositions, and methods of making and uses thereof
WO2013024174A1 (en) 2011-08-18 2013-02-21 Dsm Ip Assets B.V. Dha triglyceride, dha free fatty acid, and dha ethyl ester emulsions, and methods of treating spinal cord injury
AU2012333227B2 (en) 2011-11-01 2016-08-11 Dsm Ip Assets B.V. Oxidatively stable polyunsaturated fatty acid containing oil
WO2013075116A2 (en) 2011-11-17 2013-05-23 Heliae Development, Llc Omega 7 rich compositions and methods of isolating omega 7 fatty acids
CN103131529B (zh) * 2011-11-23 2016-02-24 丰益(上海)生物技术研发中心有限公司 一种提取微生物油脂的方法
ES2744868T3 (es) 2012-04-18 2020-02-26 Corbion Biotech Inc Aceites hechos a medida
WO2013166065A1 (en) 2012-04-30 2013-11-07 Aurora Algae, Inc. ACP Promoter
CN103421595A (zh) * 2012-05-25 2013-12-04 丰益(上海)生物技术研发中心有限公司 一种提取微生物油脂的方法
CA2877937A1 (en) 2012-06-29 2014-01-03 BP Biofuels UK Limited Process for separation of renewable materials from microorganisms
CN103589503B (zh) * 2012-08-13 2015-09-30 丰益(上海)生物技术研发中心有限公司 一种高效提取微生物油脂的方法
KR101470078B1 (ko) * 2012-08-21 2014-12-08 현대자동차주식회사 이산화탄소 포집ㆍ고정ㆍ전환을 통한 온실가스 감축 및 부가가치화 방법
US10098371B2 (en) 2013-01-28 2018-10-16 Solazyme Roquette Nutritionals, LLC Microalgal flour
US9816079B2 (en) 2013-01-29 2017-11-14 Terravia Holdings, Inc. Variant thioesterases and methods of use
US9567615B2 (en) 2013-01-29 2017-02-14 Terravia Holdings, Inc. Variant thioesterases and methods of use
EP2953480B1 (de) * 2013-02-05 2020-06-03 Evonik Operations GmbH Verbesserung der bioverfügbarkeit von wertstoffen aus mikroorganismen
EP2762009A1 (de) * 2013-02-05 2014-08-06 Evonik Industries AG Verbesserung der Bioverfügbarkeit von Wertstoffen aus Mikroorganismen
PT2970926T (pt) 2013-03-13 2018-03-22 Dsm Nutritional Products Ag Modificação genética de microrganismos
US9290749B2 (en) 2013-03-15 2016-03-22 Solazyme, Inc. Thioesterases and cells for production of tailored oils
US9266973B2 (en) 2013-03-15 2016-02-23 Aurora Algae, Inc. Systems and methods for utilizing and recovering chitosan to process biological material
US9783836B2 (en) 2013-03-15 2017-10-10 Terravia Holdings, Inc. Thioesterases and cells for production of tailored oils
WO2014186395A1 (en) 2013-05-15 2014-11-20 Solazyme, Inc. Cosmetic compositions comprising microalgal oil
EP2826384A1 (de) 2013-07-16 2015-01-21 Evonik Industries AG Verfahren zur Trocknung von Biomasse
FR3009619B1 (fr) 2013-08-07 2017-12-29 Roquette Freres Compositions de biomasse de microalgues riches en proteines de qualite sensorielle optimisee
EP3052636A2 (en) 2013-10-04 2016-08-10 Solazyme, Inc. Tailored oils
KR102143001B1 (ko) * 2013-11-01 2020-08-11 에스케이이노베이션 주식회사 초음속 분산기를 이용한 유질 미생물 파쇄 공정 및 이를 이용한 바이오 오일의 제조방법
MX2016008228A (es) 2013-12-20 2016-11-28 Dsm Ip Assets Bv Procedimiento para la obtención de aceite microbiano a partir de células microbianas.
BR112016014208B1 (pt) 2013-12-20 2022-09-20 Dsm Nutricional Products Ag Método de extração de lipídeos a partir de uma população de micro-organismos
PT3626806T (pt) 2013-12-20 2024-07-31 Mara Renewables Corp Métodos para recuperar óleo de microrganismos
TWI646189B (zh) * 2013-12-20 2019-01-01 荷蘭商Ｄｓｍ智慧財產有限公司 用於從微生物細胞獲得微生物油之方法（五）
CA2934491C (en) 2013-12-20 2023-09-26 Dsm Ip Assets B.V. Processes for obtaining microbial oil from microbial cells
NZ721417A (en) 2013-12-20 2022-07-01 Dsm Ip Assets Bv Processes for obtaining microbial oil from microbial cells
EP3083545B1 (en) 2013-12-20 2023-08-02 DSM IP Assets B.V. Processes for obtaining microbial oil from microbial cells
ES2764273T3 (es) 2014-07-10 2020-06-02 Corbion Biotech Inc Nuevos genes de cetoacil ACP sintasa y uso de los mismos
EP3660149A1 (en) 2014-07-24 2020-06-03 Corbion Biotech, Inc. Variant thioesterases and methods of use
BR112017005370A2 (pt) 2014-09-18 2017-12-12 Terravia Holdings Inc acil-acp tioesterases e mutantes das mesmas
US11464244B2 (en) 2014-10-02 2022-10-11 Evonik Operations Gmbh Feedstuff of high abrasion resistance and good stability in water, containing PUFAs
CN106793803B (zh) 2014-10-02 2021-03-09 赢创运营有限公司 通过挤压含pufa的生物质来制备含pufa的饲料的方法
EP3200604B1 (de) 2014-10-02 2021-11-03 Evonik Operations GmbH Verfahren zur herstellung eines futtermittels
CA2958457C (en) 2014-10-02 2022-10-25 Evonik Industries Ag Process for producing a pufa-containing biomass which has high cell stability
BR112017012648B1 (pt) 2014-12-22 2020-12-08 Unilever N.V composição oral ou tópica e uso de um agonista de fator nuclear eritróide 2 relacionado ao fator 2 e um agonista do receptor hepático x como agentes ativos em uma composição oral ou tópica para beneficiar o crescimento da fibra capilar e/ou induzir o elemento de resposta antioxidante (are)
KR20160096478A (ko) * 2015-02-05 2016-08-16 주식회사 이코원 탄소 발열 모듈 및 이를 이용한 탄소 발열 튀김기
AR104042A1 (es) 2015-03-26 2017-06-21 Mara Renewables Corp Producción de alta densidad de biomasa y aceite utilizando glicerol en bruto
WO2016156528A1 (en) 2015-03-31 2016-10-06 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Emulsions for parenteral administration
US20160298104A1 (en) * 2015-04-07 2016-10-13 Decant Treatment Systems, Llc Method for electrical treatment of fluid medium containing biological matter and a system for its implementation
CN107750155A (zh) 2015-05-22 2018-03-02 费森尤斯卡比德国有限公司 用于肠胃外给药的维生素a
WO2016188876A1 (en) 2015-05-22 2016-12-01 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Vitamin a for parenteral administration
CN107849514A (zh) 2015-07-13 2018-03-27 玛拉可再生能源公司 增强木糖的微藻代谢
ITUB20152958A1 (it) 2015-08-06 2017-02-06 Eni Spa Metodo per concentrare una sospensione cellulare comprendente una biomassa mucillaginosa di lieviti oleaginosi.
KR102680258B1 (ko) * 2016-04-18 2024-07-02 서울바이오시스 주식회사 공기 청정기
CN109477079A (zh) 2016-05-12 2019-03-15 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 增加微藻中ω-3多不饱和脂肪酸产量的方法
US10851395B2 (en) 2016-06-10 2020-12-01 MARA Renewables Corporation Method of making lipids with improved cold flow properties
US11419350B2 (en) 2016-07-01 2022-08-23 Corbion Biotech, Inc. Feed ingredients comprising lysed microbial cells
JP6947810B2 (ja) * 2016-07-13 2021-10-13 ディーエスエム アイピー アセッツ ビー．ブイ．Ｄｓｍ Ｉｐ Ａｓｓｅｔｓ Ｂ．Ｖ． 油糧微生物を含む発酵ブロスから多価不飽和脂肪酸を含む微生物油を抽出するための方法
US11946017B2 (en) 2016-07-13 2024-04-02 Evonik Operations Gmbh Method of separating lipids from a lysed lipids containing biomass
US11406614B2 (en) 2016-10-11 2022-08-09 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Composition comprising EPA and DHA for an enhanced efficacy of anticancer agents
WO2018122057A1 (en) * 2016-12-27 2018-07-05 Evonik Degussa Gmbh Method of isolating lipids from a lipids containing biomass
US11352651B2 (en) 2016-12-27 2022-06-07 Evonik Operations Gmbh Method of isolating lipids from a lipids containing biomass
CN111356767A (zh) 2017-08-17 2020-06-30 赢创运营有限公司 通过限制至少两种限制性营养源增强脂质的产生
EP3470502A1 (en) * 2017-10-13 2019-04-17 Evonik Degussa GmbH Method of separating lipids from a lysed lipids containing biomass
EA202090440A1 (ru) 2017-09-21 2020-07-17 Эвоник Оперейшенс ГмбХ Улучшенное получение липидов путем ограничения по меньшей мере двух источников лимитирующих питательных веществ
EP3527664A1 (en) 2018-02-15 2019-08-21 Evonik Degussa GmbH Method of isolating lipids from a lipids containing biomass
WO2019122030A1 (en) * 2017-12-22 2019-06-27 Dsm Ip Assets B.V. Method of separating lipids from a lysed lipids containing biomass
CN112004919A (zh) * 2018-03-30 2020-11-27 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 通过肉汤洗涤减少乳液的方法
US20210024966A1 (en) * 2018-03-30 2021-01-28 Dsm Ip Assets B.V. Method of obtaining a microbial oil and a method of reducing emulsion by maintaining a low concentration of carbohydrate
RU2760575C1 (ru) 2018-05-15 2021-11-29 Эвоник Оперейшнс Гмбх Способ выделения липидов из содержащей липиды биомассы с помощью гидрофобного диоксида кремния
US11976253B2 (en) 2018-05-15 2024-05-07 Evonik Operations Gmbh Method of isolating lipids from a lysed lipids containing biomass by emulsion inversion
US20210290526A1 (en) 2018-07-03 2021-09-23 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Lipid emulsion for parenteral administration
FR3085825B1 (fr) 2018-09-14 2021-07-16 Fermentalg Huile de microorganismes riche en acide docosahexaenoique
FR3085962B1 (fr) * 2018-09-14 2021-06-18 Fermentalg Procede d'extracton d'une huile riche en pufa
CN112969796A (zh) 2018-11-09 2021-06-15 赢创运营有限公司 用于生产具有增加的多不饱和脂肪酸含量的生物质的方法
EP3877535A1 (de) * 2018-11-09 2021-09-15 Evonik Operations GmbH Verfahren zur herstellung einer leicht aufschliessbaren biomasse mit erhöhtem gehalt an polyungesättigten fettsäuren
CN113543653A (zh) 2018-12-14 2021-10-22 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 具有增强的适口性的含有多不饱和脂肪酸的食品成分及其制造方法
BR112022005497A2 (pt) 2019-12-20 2022-06-21 Fresenius Kabi Austria Gmbh Método para produzir emulsões de óleo em água
CN111235035A (zh) * 2019-12-30 2020-06-05 嘉必优生物技术（武汉）股份有限公司 一种裂殖壶菌突变株及其用于制备二十二碳六烯酸油脂的方法和应用
FR3111912A1 (fr) 2020-06-24 2021-12-31 Fermentalg Procédé de culture de microorganismes pour l’accumulation de lipides
FR3130842A1 (fr) 2021-12-22 2023-06-23 CarbonWorks Procede de captation des phytotoxines dans un reacteur biologique
WO2023175141A1 (en) * 2022-03-18 2023-09-21 Purac Biochem B.V. Method for reducing fermentation broth viscosity
WO2023220060A1 (en) * 2022-05-11 2023-11-16 C16 Biosciences, Inc. Enzymatic lysis for extraction of bioproducts from yeast
WO2024119170A2 (en) 2022-12-02 2024-06-06 Dsm Ip Assets B.V. Fermentatively-produced retinoid containing compositions, and the methdos of making and using the same
KR20240109876A (ko) * 2023-01-05 2024-07-12 주식회사 밤비콜라 커피박을 이용한 칸디다 봄비콜라의 배양방법 및 이로부터의 배양물

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5130242A (en) * 1988-09-07 1992-07-14 Phycotech, Inc. Process for the heterotrophic production of microbial products with high concentrations of omega-3 highly unsaturated fatty acids
WO1996005278A1 (de) * 1994-08-16 1996-02-22 Dr. Frische Gmbh Verfahren zur gewinnung von nicht wasserlöslichen, nativen produkten aus nativen stoffgemengen mit hilfe der zentrifugalkraft
US5539133A (en) * 1992-06-12 1996-07-23 Milupa Aktiengesellschaft Process for extracting lipids with a high production of long-chain highly unsaturated fatty acids
WO1997004121A1 (en) * 1995-07-18 1997-02-06 Zeneca Limited Extraction of triglycerides from microorganisms
WO1998003671A1 (en) * 1996-07-23 1998-01-29 Nagase Biochemicals, Ltd. Process for preparing docosahexaenoic acid and docosapentaenoic acid

Family Cites Families (118)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2753362A (en) * 1951-05-18 1956-07-03 Standard Brands Inc Process of extracting lipids from plant and animal tissue
GB808128A (en) * 1955-12-01 1959-01-28 Nat Res Dev A method of increasing the fatty contents of such micro-organisms as yeasts, bacteria and moulds
US3089821A (en) 1959-10-28 1963-05-14 Merck & Co Inc Process for the preparation of lipids
DE2056896B2 (de) * 1970-02-18 1979-12-06 Veb Schwermaschinenbau Kombinat Ernst Thaelmann Magdeburg, Ddr 3011 Magdeburg Verfahren zur gleichzeitigen Gewinnung von Fett und Protein aus pflanzlichen, ölhaltigen Rohstoffen und Zwischenprodukten
US3878232A (en) * 1970-09-28 1975-04-15 Staley Mfg Co A E Extraction process to improve the quality and yield of crude vegetable oils
US4504473A (en) * 1982-06-30 1985-03-12 Ribi Immunochem Research, Inc. Pyridine soluble extract of a microorganism
DE3248167A1 (de) * 1982-12-27 1984-06-28 Wintershall Ag, 3100 Celle Trehaloselipidtetraester
US4792418A (en) 1985-08-14 1988-12-20 Century Laboratories, Inc. Method of extraction and purification of polyunsaturated fatty acids from natural sources
JPS6244170A (ja) 1985-08-19 1987-02-26 Agency Of Ind Science & Technol モルテイエレラ属糸状菌体の超臨界流体による抽出方法
US4680314A (en) 1985-08-30 1987-07-14 Microbio Resources, Inc. Process for producing a naturally-derived carotene/oil composition by direct extraction from algae
JPH0634730B2 (ja) * 1986-06-16 1994-05-11 鐘淵化学工業株式会社 パルミトレイン酸の製造法
DK199887D0 (da) 1987-04-15 1987-04-15 Danisco Bioteknologi As Gaerstamme
FR2621327B1 (fr) 1987-10-06 1990-01-05 Commissariat Energie Atomique Procede de production et d'extraction de polysaccharides a partir d'une culture de porphyridium cruentum et dispositif pour la mise en oeuvre du procede
JPH0198494A (ja) 1987-10-09 1989-04-17 Agency Of Ind Science & Technol バイオリアクター
US5340742A (en) 1988-09-07 1994-08-23 Omegatech Inc. Process for growing thraustochytrium and schizochytrium using non-chloride salts to produce a microfloral biomass having omega-3-highly unsaturated fatty acids
US6451567B1 (en) 1988-09-07 2002-09-17 Omegatech, Inc. Fermentation process for producing long chain omega-3 fatty acids with euryhaline microorganisms
US5340594A (en) 1988-09-07 1994-08-23 Omegatech Inc. Food product having high concentrations of omega-3 highly unsaturated fatty acids
US5173409A (en) 1989-12-08 1992-12-22 Ecogen Inc. Recovery of bt endotoxin protein from lysed cell mixtures
FR2656874B1 (fr) * 1990-01-11 1992-04-03 Commissariat Energie Atomique Procede de production et d'extraction d'anti-oxydants a partir d'une culture de micro-organismes et photobioreacteur pour la mise en óoeuvre de ce procede.
US5407957A (en) 1990-02-13 1995-04-18 Martek Corporation Production of docosahexaenoic acid by dinoflagellates
US5658767A (en) * 1991-01-24 1997-08-19 Martek Corporation Arachidonic acid and methods for the production and use thereof
US6270828B1 (en) 1993-11-12 2001-08-07 Cargrill Incorporated Canola variety producing a seed with reduced glucosinolates and linolenic acid yielding an oil with low sulfur, improved sensory characteristics and increased oxidative stability
FR2686619B1 (fr) * 1992-01-28 1995-07-13 Commissariat Energie Atomique Procede de production selective de lipides poly-insatures a partir d'une culture de micro-algues du type porphyridium et cuve utilisee dans ce procede.
US5476787A (en) 1992-04-24 1995-12-19 Director-General Of Agency Of Industrial Science And Technology Method of removing nitrogen impurities from water using hydrocarbon-producing microalga
JPH072724A (ja) * 1993-03-24 1995-01-06 Nippon Sanso Kk １３ｃ標識アラキドン酸とその誘導体及び製造方法
JPH06340577A (ja) * 1993-03-24 1994-12-13 Nippon Sanso Kk １３ｃ標識イコサペンタエン酸とその誘導体及び製造方法
FR2719222B1 (fr) * 1994-05-02 1996-06-21 Rocher Yves Biolog Vegetale Vésicules lipidiques, leur procédé de fabrication et leurs applications.
US5583019A (en) 1995-01-24 1996-12-10 Omegatech Inc. Method for production of arachidonic acid
JP2764572B2 (ja) * 1995-04-17 1998-06-11 工業技術院長 ドコサヘキサエン酸生産能を有する新規微生物及びそれを用いたドコサヘキサエン酸の製造方法
EP0823475B1 (en) 1995-04-17 2009-06-17 National Institute of Advanced Industrial Science and Technology Novel microorganisms capable of producing highly unsaturated fatty acids and process for producing highly unsaturated fatty acids by using the microorganisms
DE69508558T2 (de) * 1995-05-04 1999-08-26 Societe Des Produits Nestle S.A. Verfahren zur Fraktionierung von Fettsäuren
JP3985035B2 (ja) * 1995-09-14 2007-10-03 独立行政法人産業技術総合研究所 （ｎ−６）系ドコサペンタエン酸含有油脂ならびに該油脂の製造方法および用途
US6255505B1 (en) 1996-03-28 2001-07-03 Gist-Brocades, B.V. Microbial polyunsaturated fatty acid containing oil from pasteurised biomass
EP0969086A1 (en) 1996-07-03 2000-01-05 Sagami Chemical Research Center Microorganisms producing docosahexaenoic acid and process for the production of docosahexaenoic acid
US5951875A (en) 1996-12-20 1999-09-14 Eastman Chemical Company Adsorptive bubble separation methods and systems for dewatering suspensions of microalgae and extracting components therefrom
WO1998039468A1 (fr) * 1997-03-04 1998-09-11 Suntory Limited Procede pour preparer un acide gras hautement insature (aghi) et lipide contenant cet aghi
UA67742C2 (uk) 1997-05-02 2004-07-15 Дсм Іп Ассетс Б.В. Спосіб виділення кристалічної каротиноїдної сполуки з мікробної каротиноїдвмісної біомаси
US7585645B2 (en) 1997-05-27 2009-09-08 Sembiosys Genetics Inc. Thioredoxin and thioredoxin reductase containing oil body based products
EP1905309A1 (en) 1997-05-27 2008-04-02 SemBioSys Genetics Inc. Uses of oil bodies
US6566583B1 (en) 1997-06-04 2003-05-20 Daniel Facciotti Schizochytrium PKS genes
JP3836231B2 (ja) * 1997-10-17 2006-10-25 日本化学飼料株式会社 ホタテガイ中腸腺から得られる高度不飽和脂肪酸含有油及びその製造方法
WO1999025157A1 (fr) 1997-11-12 1999-05-20 Mitsubishi Denki Kabushiki Kaisha Dispositif electroluminescent et structure destinee au blindage de celui-ci
JP2000041684A (ja) 1998-07-29 2000-02-15 Daicel Chem Ind Ltd 新規なｄ−アミノアシラーゼおよびその製造方法、並びに該ｄ−アミノアシラーゼを利用したｄ−アミノ酸の製造方法
FR2782921B1 (fr) 1998-09-09 2002-09-20 Dior Christian Parfums Extrait lipidique de l'algue skeletonema, procede de preparation et utilisation dans des domaines cosmetique et pharmaceutique, notamment dermatologique
US6166231A (en) 1998-12-15 2000-12-26 Martek Biosciences Corporation Two phase extraction of oil from biomass
JP2000245492A (ja) 1999-03-02 2000-09-12 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd 微生物抽出脂質
US6344349B1 (en) 1999-12-06 2002-02-05 Decant Technologies Llc Process and system for electrical extraction of intracellular matter from biological matter
CZ303446B6 (cs) 2000-01-19 2012-09-19 Martek Biosciences Corporation Zpusob získávání lipidu z mikroorganismu
CA2398053C (en) 2000-04-12 2011-02-01 Westfalia Separator Industry Gmbh Method for the fractionation of oil and polar lipid-containing native raw materials
DE10018213A1 (de) 2000-04-12 2001-10-25 Westfalia Separator Ind Gmbh Verfahren zur Fraktionierung von öl-und lecithinhaltigen nativen Rohstoffen
EP1178118A1 (en) 2000-08-02 2002-02-06 Dsm N.V. Isolation of microbial oils
US20060060520A1 (en) 2001-06-25 2006-03-23 Bomberger David C Systems and methods using a solvent for the removal of lipids from fluids
AU2002323409A1 (en) 2001-08-24 2003-03-10 Martek Biosciences Boulder Corporation Products containing highly unsaturated fatty acids for use by women and their children during stages of preconception, pregnancy and lactation/post-partum
EP2239028A1 (en) 2001-12-12 2010-10-13 Martek Biosciences Corporation Extraction and Winterization of Lipids From Oilseed and Microbial Sources
CA2484334C (en) 2002-05-03 2013-01-22 Martek Biosciences Corporation High-quality lipids and methods for producing by enzymatic liberation from biomass
ES2712854T3 (es) 2002-06-19 2019-05-16 Dsm Ip Assets Bv Aceite microbiano y procedimientos para su procesamiento
JP4733043B2 (ja) 2003-10-02 2011-07-27 マーテック バイオサイエンシーズ コーポレーション 改変された量の塩化物およびカリウムを使用した微細藻類における高レベルのｄｈａの産生法
KR101194235B1 (ko) 2004-03-01 2012-10-29 산토리 홀딩스 가부시키가이샤 장쇄 고도 불포화 지방산을 구성요소로서 포함하는 인지질의 제조방법, 및 그 이용
US20050239198A1 (en) 2004-04-27 2005-10-27 Baxter International, Inc. Stirred-tank reactor system
EP1597976B1 (en) 2004-05-21 2013-01-30 Nestec S.A. Use of polyol esters of fatty acids in aerated frozen confection with improved nutritional attributes
DE102004062141A1 (de) 2004-12-23 2006-07-06 Nutrinova Nutrition Specialties & Food Ingredients Gmbh Verfahren zur Herstellung eines Rohöls aus Gemischen von Mikroorganismen und Pflanzen, das so hergestellte Öl sowie die spezifischen Verwendungen des so hergestellten und gegebenenfalls zusätzlich raffinierten Öls
DE102005003624A1 (de) 2005-01-26 2006-07-27 Nutrinova Nutrition Specialties & Food Ingredients Gmbh Herstellung und Anwendung eines antioxidativ wirksamen Extraktes aus Crypthecodinium sp.
NZ563125A (en) 2005-06-03 2009-11-27 Mcfarlane Marketing Aust Pty L Lipid extract of mussels and method for preparation thereof
EP1899453B1 (en) 2005-06-07 2013-12-18 Ocean Nutrition Canada Limited Eukaryotic microorganisms for producing lipids and antioxidants
WO2007005725A2 (en) 2005-07-01 2007-01-11 Martek Biosciences Corporation Polyunsaturated fatty acid-containing oil product and uses and production thereof
US7527734B1 (en) 2005-11-15 2009-05-05 Shepherd Samuel L Rapid non-equilibrium decompression of microorganism-containing waste streams
EP1996686A1 (en) 2006-02-07 2008-12-03 Universitetet I Oslo Omega 3
US8877465B2 (en) 2006-07-05 2014-11-04 Photonz Corporation Limited Production of ultrapure EPA and polar lipids from largely heterotrophic culture
EP1887011A1 (en) 2006-08-09 2008-02-13 Thermphos Trading GmbH Alpha amino acid phosphonic acid compounds, method of preparation and use thereof
EP2074214A2 (en) 2006-09-28 2009-07-01 Microbia, Inc. Production of sterols in oleaginous yeast and fungi
US20080083352A1 (en) 2006-10-10 2008-04-10 Ernest Peter Tovani Vehicle Table System
KR100810314B1 (ko) 2006-10-11 2008-03-04 삼성전자주식회사 휴대 단말기의 키 입력 장치
WO2008060571A2 (en) 2006-11-13 2008-05-22 Aurora Biofuels, Inc. Methods and compositions for production and purification of biofuel from plants and microalgae
EA200900728A1 (ru) 2006-12-01 2009-12-30 Норт Каролина Стейт Юниверсити Способ превращения биомассы в топливо
US20100227042A1 (en) 2006-12-22 2010-09-09 Christopher Penet Enzyme-Assisted De-Emulsification of Aqueous Lipid Extracts
KR20100039846A (ko) 2007-06-14 2010-04-16 닉콜라오스 미트로포울로스 바이오연료용 조류의 성장
US20100226977A1 (en) 2007-08-29 2010-09-09 Aker Biomarine Asa Low viscosity phospholipid compositions
AU2008300002B2 (en) 2007-09-12 2014-04-10 Dsm Ip Assets B.V. Biological oils and production and uses thereof
JP4594998B2 (ja) * 2008-05-21 2010-12-08 株式会社日立製作所 エレベーターかごの速度検出装置の検査方法。
ITMI20081203A1 (it) 2008-06-30 2010-01-01 Eni Spa Procedimento per l'estrazione di acidi grassi da biomassa algale
EP2145942A1 (de) 2008-07-15 2010-01-20 Lonza Ltd. Verfahren zur Isolierung von Ölen aus Zellen und Biomasse
US20120036767A1 (en) 2008-08-04 2012-02-16 Larach Mario C Continuous cultivation, harvesting, and extraction of photosynthetic cultures
DK2337857T3 (en) 2008-10-02 2017-05-22 Ramon Nieves Gonzalez MICROALGE EXTRACT CONTAINING POLYUM Saturated W3 FAT ACIDS AND PROCEDURE FOR EXTRACING OIL FROM MICRO-ORGANISMS
CN102271525B (zh) 2008-10-14 2015-01-07 索拉兹米公司 微藻生物质的食品组合物
SE534278C2 (sv) 2009-02-17 2011-06-28 Alfa Laval Corp Ab Ett kontinuerligt förfarande för isolering av oljor från alger eller mikroorganismer
US9296985B2 (en) 2009-03-10 2016-03-29 Valicor, Inc. Algae biomass fractionation
US8207363B2 (en) 2009-03-19 2012-06-26 Martek Biosciences Corporation Thraustochytrids, fatty acid compositions, and methods of making and uses thereof
US8476060B2 (en) 2009-04-13 2013-07-02 Board Of Regents, The University Of Texas System Process for separating lipids from a biomass
US8580540B2 (en) 2009-05-26 2013-11-12 Solazyme, Inc. Fractionation of oil-bearing microbial biomass
KR101659765B1 (ko) 2009-09-28 2016-09-27 삼성전자주식회사 다중 모드 휴대용 단말기에서 전력 소모를 줄이기 위한 장치 및 방법
US20110256268A1 (en) 2010-04-14 2011-10-20 Solazyme, Inc. Oleaginous Yeast Food Compositions
AU2011261455B2 (en) 2010-06-01 2016-03-24 Dsm Ip Assets B.V. Extraction of lipid from cells and products therefrom
MY163938A (en) 2010-06-14 2017-11-15 Io-Mega Holding Corp Method for the production of algae derived oils
EP2598641B1 (en) 2010-07-26 2014-05-21 Sapphire Energy, Inc. Process for the recovery of oleaginous compounds from biomass
US9028696B2 (en) 2010-07-26 2015-05-12 Sapphire Energy, Inc. Process for the recovery of oleaginous compounds from biomass
US8192627B2 (en) 2010-08-06 2012-06-05 Icm, Inc. Bio-oil recovery methods
US20120040428A1 (en) 2010-08-13 2012-02-16 Paul Reep Procedure for extracting of lipids from algae without cell sacrifice
US20120129244A1 (en) 2010-10-17 2012-05-24 Michael Phillip Green Systems, methods and apparatuses for dewatering, flocculating and harvesting algae cells
CN101985637B (zh) 2010-11-02 2014-05-07 嘉必优生物工程（武汉）有限公司 一种微生物油脂的提取方法
DK2450425T3 (da) 2010-11-08 2014-07-07 Neste Oil Oyj Fremgangsmåde til lipidekstraktion fra biomasse
AU2012214187A1 (en) 2011-02-12 2013-05-02 Phycal, Inc. Aqueous extraction methods for high lipid microorganisms
CN103649313B (zh) 2011-03-07 2017-10-24 Dsm营养产品股份公司 工程化破囊壶菌属微生物
WO2012125611A2 (en) 2011-03-15 2012-09-20 Iowa State University Research Foundation Oil extraction from microalgae
FR2975705B1 (fr) 2011-05-27 2014-12-26 Roquette Freres Procede d'extraction du squalene a partir de microalgues
CN102433215A (zh) 2011-09-22 2012-05-02 厦门汇盛生物有限公司 一种从真菌或藻类中物理破壁提取油脂的方法
CN102388988B (zh) 2011-11-08 2013-01-23 中国农业科学院油料作物研究所 一种微生物油的分提方法
WO2013075116A2 (en) 2011-11-17 2013-05-23 Heliae Development, Llc Omega 7 rich compositions and methods of isolating omega 7 fatty acids
WO2013156720A2 (fr) 2012-04-16 2013-10-24 Roquette Freres Procédé de raffinage du squalène produit par microalgues
CA2877937A1 (en) 2012-06-29 2014-01-03 BP Biofuels UK Limited Process for separation of renewable materials from microorganisms
EP3083545B1 (en) 2013-12-20 2023-08-02 DSM IP Assets B.V. Processes for obtaining microbial oil from microbial cells
SG10201911379QA (en) 2013-12-20 2020-01-30 Dsm Ip Assets Bv Process for extracting lipids for use in production of biofuels
NZ721417A (en) 2013-12-20 2022-07-01 Dsm Ip Assets Bv Processes for obtaining microbial oil from microbial cells
TWI646189B (zh) 2013-12-20 2019-01-01 荷蘭商Ｄｓｍ智慧財產有限公司 用於從微生物細胞獲得微生物油之方法（五）
CA2934491C (en) 2013-12-20 2023-09-26 Dsm Ip Assets B.V. Processes for obtaining microbial oil from microbial cells
MX2016008228A (es) 2013-12-20 2016-11-28 Dsm Ip Assets Bv Procedimiento para la obtención de aceite microbiano a partir de células microbianas.
PT3626806T (pt) 2013-12-20 2024-07-31 Mara Renewables Corp Métodos para recuperar óleo de microrganismos
BR112016014208B1 (pt) 2013-12-20 2022-09-20 Dsm Nutricional Products Ag Método de extração de lipídeos a partir de uma população de micro-organismos
MX2017000109A (es) 2014-07-07 2017-05-23 Commw Scient Ind Res Org Procesos para producir productos industriales de lipidos vegetales.

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5130242A (en) * 1988-09-07 1992-07-14 Phycotech, Inc. Process for the heterotrophic production of microbial products with high concentrations of omega-3 highly unsaturated fatty acids
US5539133A (en) * 1992-06-12 1996-07-23 Milupa Aktiengesellschaft Process for extracting lipids with a high production of long-chain highly unsaturated fatty acids
WO1996005278A1 (de) * 1994-08-16 1996-02-22 Dr. Frische Gmbh Verfahren zur gewinnung von nicht wasserlöslichen, nativen produkten aus nativen stoffgemengen mit hilfe der zentrifugalkraft
US5928696A (en) * 1994-08-16 1999-07-27 Dr. Frische Gmbh Process for extracting native products which are not water-soluble from native substance mixtures by centrifugal force
WO1997004121A1 (en) * 1995-07-18 1997-02-06 Zeneca Limited Extraction of triglycerides from microorganisms
WO1998003671A1 (en) * 1996-07-23 1998-01-29 Nagase Biochemicals, Ltd. Process for preparing docosahexaenoic acid and docosapentaenoic acid

Also Published As

Publication number Publication date
US20040229325A1 (en) 2004-11-18
JP4537887B2 (ja) 2010-09-08
US20080044875A1 (en) 2008-02-21
AU2005202980C1 (en) 2009-04-02
EP2295594B1 (en) 2018-04-04
JP2010051328A (ja) 2010-03-11
EP2295595A1 (en) 2011-03-16
ES2675517T3 (es) 2018-07-11
IL206960A0 (en) 2010-12-30
CA2397655C (en) 2012-06-05
JP5722536B2 (ja) 2015-05-20
KR101429236B1 (ko) 2014-08-12
ZA200205790B (en) 2003-07-28
HUP0300556A2 (hu) 2003-06-28
IL150772A0 (en) 2003-02-12
US7781193B2 (en) 2010-08-24
US20020001833A1 (en) 2002-01-03
KR100995575B1 (ko) 2010-11-19
NO20110858L (no) 2002-09-17
JP2015133969A (ja) 2015-07-27
ES2735987T3 (es) 2019-12-23
IL201756A (en) 2011-06-30
US9738851B2 (en) 2017-08-22
KR20120070588A (ko) 2012-06-29
WO2001053512A1 (en) 2001-07-26
IL150772A (en) 2010-06-16
PT1252324E (pt) 2010-12-16
AU780619B2 (en) 2005-04-07
NO20023449L (no) 2002-09-17
AU2019226124A1 (en) 2019-09-26
BR0107699B1 (pt) 2014-05-27
JP5756137B2 (ja) 2015-07-29
JP2003520046A (ja) 2003-07-02
US7351558B2 (en) 2008-04-01
CN101463371A (zh) 2009-06-24
EP1252324B1 (en) 2010-10-20
DE60143287D1 (de) 2010-12-02
MXPA02007092A (es) 2003-02-24
KR20150020609A (ko) 2015-02-26
US6750048B2 (en) 2004-06-15
HUP0300556A3 (en) 2010-03-29
AU2016203318A1 (en) 2016-06-09
US7662598B2 (en) 2010-02-16
KR101180462B1 (ko) 2012-09-06
AU2005202980A1 (en) 2005-08-04
AU2014203384B2 (en) 2016-03-03
JP2005278650A (ja) 2005-10-13
CN100460513C (zh) 2009-02-11
PL356587A1 (en) 2004-06-28
HK1050716A1 (en) 2003-07-04
AU2014203384A1 (en) 2014-07-10
EP1252324A1 (en) 2002-10-30
US20080044876A1 (en) 2008-02-21
AU2963601A (en) 2001-07-31
JP2013099365A (ja) 2013-05-23
MX350779B (es) 2017-09-18
CA2397655A1 (en) 2001-07-26
KR20110000592A (ko) 2011-01-03
US10329515B2 (en) 2019-06-25
KR20130032395A (ko) 2013-04-01
KR20080007279A (ko) 2008-01-17
EP1252324A4 (en) 2005-02-09
RU2336307C2 (ru) 2008-10-20
MX297659B (en) 2012-03-29
KR101591834B1 (ko) 2016-02-18
EP2295594A1 (en) 2011-03-16
IL206961A (en) 2011-11-30
US20140212936A1 (en) 2014-07-31
ES2352001T3 (es) 2011-02-14
RU2002119551A (ru) 2004-02-20
DK1252324T3 (da) 2010-12-20
BR0107699A (pt) 2003-01-14
EP2302065A1 (en) 2011-03-30
NZ520287A (en) 2004-01-30
AU2018200956A1 (en) 2018-03-01
NO20023449D0 (no) 2002-07-18
EP2295595B1 (en) 2019-05-01
US20170298288A1 (en) 2017-10-19
US20080038800A1 (en) 2008-02-14
CN1416469A (zh) 2003-05-07
MX275361B (en) 2010-04-21
US20190256797A1 (en) 2019-08-22
KR20140079870A (ko) 2014-06-27
AU2005202980B2 (en) 2008-07-10
AU2012200890A1 (en) 2012-03-08
JP4020642B2 (ja) 2007-12-12
AU2012200890B2 (en) 2014-07-31
KR20030013367A (ko) 2003-02-14
KR101429238B1 (ko) 2014-08-12
CA2772540A1 (en) 2001-07-26
ATE485385T1 (de) 2010-11-15
KR20100051131A (ko) 2010-05-14
MX232239B (es) 2005-11-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ303446B6 (cs) Zpusob získávání lipidu z mikroorganismu
AU2008229885B2 (en) Solventless extraction process
TWI293648B (en) Solventless extraction process

Legal Events

Date Code Title Description
MK4A Patent expired

Effective date: 20210119