UA119319C2 - Гуманізоване антитіло до cd134 (ox40) і його застосування - Google Patents
Гуманізоване антитіло до cd134 (ox40) і його застосування Download PDFInfo
- Publication number
- UA119319C2 UA119319C2 UAA201508893A UAA201508893A UA119319C2 UA 119319 C2 UA119319 C2 UA 119319C2 UA A201508893 A UAA201508893 A UA A201508893A UA A201508893 A UAA201508893 A UA A201508893A UA 119319 C2 UA119319 C2 UA 119319C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- human
- antibody
- amino acid
- humanized
- zeo
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 140
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 133
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 106
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 106
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims abstract description 30
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims abstract description 22
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims abstract description 20
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 11
- 239000000556 agonist Substances 0.000 claims abstract description 7
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 465
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 324
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 320
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 claims description 222
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 140
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 114
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 79
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 67
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 56
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 51
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 47
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims description 28
- 238000010276 construction Methods 0.000 claims description 19
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 13
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 claims description 13
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 claims description 9
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 9
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 9
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 9
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 9
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 9
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 9
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 9
- 230000001270 agonistic effect Effects 0.000 claims description 8
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 8
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 claims description 7
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 claims description 7
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 claims description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 102220097830 rs757411357 Human genes 0.000 claims description 4
- 241000283086 Equidae Species 0.000 claims description 3
- 241001494479 Pecora Species 0.000 claims description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 3
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 claims description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 2
- 230000008775 paternal effect Effects 0.000 claims 5
- 241000566113 Branta sandvicensis Species 0.000 claims 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims 2
- NUMXHEUHHRTBQT-AATRIKPKSA-N 2,4-dimethoxy-1-[(e)-2-nitroethenyl]benzene Chemical compound COC1=CC=C(\C=C\[N+]([O-])=O)C(OC)=C1 NUMXHEUHHRTBQT-AATRIKPKSA-N 0.000 claims 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 240000008100 Brassica rapa Species 0.000 claims 1
- 101100314454 Caenorhabditis elegans tra-1 gene Proteins 0.000 claims 1
- 244000304337 Cuminum cyminum Species 0.000 claims 1
- 235000007129 Cuminum cyminum Nutrition 0.000 claims 1
- 241000353790 Doru Species 0.000 claims 1
- 241001235128 Doto Species 0.000 claims 1
- 101100460157 Drosophila melanogaster nenya gene Proteins 0.000 claims 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 claims 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims 1
- 241000581652 Hagenia abyssinica Species 0.000 claims 1
- 101100017029 Hordeum vulgare HINA gene Proteins 0.000 claims 1
- 241000283162 Inia geoffrensis Species 0.000 claims 1
- 101100240595 Mus musculus Nipal4 gene Proteins 0.000 claims 1
- XQVWYOYUZDUNRW-UHFFFAOYSA-N N-Phenyl-1-naphthylamine Chemical compound C=1C=CC2=CC=CC=C2C=1NC1=CC=CC=C1 XQVWYOYUZDUNRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 101100491259 Oryza sativa subsp. japonica AP2-2 gene Proteins 0.000 claims 1
- CBENFWSGALASAD-UHFFFAOYSA-N Ozone Chemical compound [O-][O+]=O CBENFWSGALASAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 241000282320 Panthera leo Species 0.000 claims 1
- 241000036848 Porzana carolina Species 0.000 claims 1
- YASAKCUCGLMORW-UHFFFAOYSA-N Rosiglitazone Chemical compound C=1C=CC=NC=1N(C)CCOC(C=C1)=CC=C1CC1SC(=O)NC1=O YASAKCUCGLMORW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 240000006394 Sorghum bicolor Species 0.000 claims 1
- 235000011684 Sorghum saccharatum Nutrition 0.000 claims 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 claims 1
- 235000009430 Thespesia populnea Nutrition 0.000 claims 1
- 241001648319 Toronia toru Species 0.000 claims 1
- 241000289690 Xenarthra Species 0.000 claims 1
- 244000309464 bull Species 0.000 claims 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 claims 1
- 239000000571 coke Substances 0.000 claims 1
- 230000035622 drinking Effects 0.000 claims 1
- 235000019382 gum benzoic Nutrition 0.000 claims 1
- JXDYKVIHCLTXOP-UHFFFAOYSA-N isatin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(=O)NC2=C1 JXDYKVIHCLTXOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 101150058482 ku gene Proteins 0.000 claims 1
- 239000003595 mist Substances 0.000 claims 1
- 229940028444 muse Drugs 0.000 claims 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 claims 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 claims 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 claims 1
- GMVPRGQOIOIIMI-DWKJAMRDSA-N prostaglandin E1 Chemical compound CCCCC[C@H](O)\C=C\[C@H]1[C@H](O)CC(=O)[C@@H]1CCCCCCC(O)=O GMVPRGQOIOIIMI-DWKJAMRDSA-N 0.000 claims 1
- 239000011435 rock Substances 0.000 claims 1
- LZNWYQJJBLGYLT-UHFFFAOYSA-N tenoxicam Chemical compound OC=1C=2SC=CC=2S(=O)(=O)N(C)C=1C(=O)NC1=CC=CC=N1 LZNWYQJJBLGYLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 102100022153 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Human genes 0.000 abstract description 81
- 101000679851 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Proteins 0.000 abstract description 25
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 124
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 83
- 101710165473 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Proteins 0.000 description 79
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 77
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 61
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 61
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 60
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 58
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 55
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 55
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 55
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 55
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 45
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 44
- 102000004473 OX40 Ligand Human genes 0.000 description 43
- 108010042215 OX40 Ligand Proteins 0.000 description 43
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 42
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 42
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 38
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 38
- 230000006870 function Effects 0.000 description 36
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 36
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 36
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 35
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 33
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 30
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 28
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 28
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 28
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 28
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 27
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 26
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 26
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 26
- JLESVLCTIOAHPT-UHFFFAOYSA-N mmai Chemical compound C1=C(C)C(OC)=CC2=C1CC(N)C2 JLESVLCTIOAHPT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 24
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 24
- 102100033772 Complement C4-A Human genes 0.000 description 23
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 23
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 23
- 102000050320 human TNFRSF4 Human genes 0.000 description 23
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 23
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 22
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 22
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 22
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 20
- 239000002957 persistent organic pollutant Substances 0.000 description 20
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 20
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 19
- 241000726103 Atta Species 0.000 description 18
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 18
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 18
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 18
- 229920002704 polyhistidine Polymers 0.000 description 18
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 18
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 16
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 16
- 230000004044 response Effects 0.000 description 16
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 15
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 14
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 14
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 14
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 14
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 14
- 229910052722 tritium Inorganic materials 0.000 description 14
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 13
- YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N Tritium Chemical compound [3H] YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 13
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 13
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 13
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 13
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 13
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 13
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 13
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 13
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 12
- 101150065478 SKO1 gene Proteins 0.000 description 12
- 101150060303 SOK2 gene Proteins 0.000 description 12
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 12
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 12
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 12
- 238000009738 saturating Methods 0.000 description 12
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 12
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 11
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 11
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 11
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 11
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 11
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 11
- 241000894007 species Species 0.000 description 11
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 11
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 11
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 10
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 10
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 10
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 10
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 10
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 10
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 9
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 9
- 210000003162 effector t lymphocyte Anatomy 0.000 description 9
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 9
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 9
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 9
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 9
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 9
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 9
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 9
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 9
- 238000000954 titration curve Methods 0.000 description 9
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 8
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 8
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 8
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 8
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 8
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 8
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 8
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 8
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 8
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 7
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 7
- 101100018424 Mus musculus Ids gene Proteins 0.000 description 7
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 7
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 7
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 7
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 7
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 7
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 7
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 7
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 7
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 7
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 7
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 7
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 7
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 6
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 6
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 6
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 6
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 6
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 6
- 101001027128 Homo sapiens Fibronectin Proteins 0.000 description 6
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 6
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 6
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 6
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 6
- PKAHQJNJPDVTDP-UHFFFAOYSA-N methyl cyclopropanecarboxylate Chemical compound COC(=O)C1CC1 PKAHQJNJPDVTDP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 6
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 6
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 6
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 6
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 6
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 6
- 101001002657 Homo sapiens Interleukin-2 Proteins 0.000 description 5
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 5
- 101100460719 Mus musculus Noto gene Proteins 0.000 description 5
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 5
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 5
- 101100187345 Xenopus laevis noto gene Proteins 0.000 description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 5
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 5
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 5
- 230000005975 antitumor immune response Effects 0.000 description 5
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 5
- 208000027697 autoimmune lymphoproliferative syndrome due to CTLA4 haploinsuffiency Diseases 0.000 description 5
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 5
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 5
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 5
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 5
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 5
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 5
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 5
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 5
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 5
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 5
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 5
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 5
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 5
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 5
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 5
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 5
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 5
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 5
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 5
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 5
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 5
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 5
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 5
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 5
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 101000716803 Homo sapiens Protein SCO1 homolog, mitochondrial Proteins 0.000 description 4
- 101000939500 Homo sapiens UBX domain-containing protein 11 Proteins 0.000 description 4
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 4
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 4
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 4
- 102100020866 Protein SCO1 homolog, mitochondrial Human genes 0.000 description 4
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 4
- 102100029645 UBX domain-containing protein 11 Human genes 0.000 description 4
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 4
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 4
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 4
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 4
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 4
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 4
- 239000010432 diamond Substances 0.000 description 4
- 229910003460 diamond Inorganic materials 0.000 description 4
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 4
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 4
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 102000055277 human IL2 Human genes 0.000 description 4
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 4
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 4
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 4
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 4
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 4
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 4
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001103870 Adia Species 0.000 description 3
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 3
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 3
- 102000008102 Ankyrins Human genes 0.000 description 3
- 108010049777 Ankyrins Proteins 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 3
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 101000764263 Homo sapiens Tumor necrosis factor ligand superfamily member 4 Proteins 0.000 description 3
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 3
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- 208000006994 Precancerous Conditions Diseases 0.000 description 3
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 208000015634 Rectal Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 3
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 3
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 3
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 3
- 125000000151 cysteine group Chemical class N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 3
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000006240 deamidation Effects 0.000 description 3
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 3
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 3
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 3
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 238000001794 hormone therapy Methods 0.000 description 3
- 102000051450 human TNFSF4 Human genes 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 3
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 3
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 3
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 3
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 3
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 3
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 3
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 3
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 3
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 3
- 206010038038 rectal cancer Diseases 0.000 description 3
- 201000001275 rectum cancer Diseases 0.000 description 3
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 3
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 3
- 206010046766 uterine cancer Diseases 0.000 description 3
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 3
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 2
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 2
- 101100501772 Arabidopsis thaliana ESR2 gene Proteins 0.000 description 2
- 101100492787 Caenorhabditis elegans mai-1 gene Proteins 0.000 description 2
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 2
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 2
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 2
- 210000003751 DN2 alpha-beta immature T lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- UOACKFBJUYNSLK-XRKIENNPSA-N Estradiol Cypionate Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H](C4=CC=C(O)C=C4CC3)CC[C@@]21C)C(=O)CCC1CCCC1 UOACKFBJUYNSLK-XRKIENNPSA-N 0.000 description 2
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 2
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 101000628693 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase 25 Proteins 0.000 description 2
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 2
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 2
- 102100034349 Integrase Human genes 0.000 description 2
- -1 Kunitz domains Proteins 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 2
- 241000407429 Maja Species 0.000 description 2
- 101100382376 Mus musculus Cap1 gene Proteins 0.000 description 2
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 2
- 108010079855 Peptide Aptamers Proteins 0.000 description 2
- 108091008103 RNA aptamers Proteins 0.000 description 2
- 229910019567 Re Re Inorganic materials 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100026737 Serine/threonine-protein kinase 25 Human genes 0.000 description 2
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108700023707 TUG1 Proteins 0.000 description 2
- NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N Tamoxifen Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(/CC)=C(C=1C=CC(OCCN(C)C)=CC=1)/C1=CC=CC=C1 NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N 0.000 description 2
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 241000838698 Togo Species 0.000 description 2
- 102000009618 Transforming Growth Factors Human genes 0.000 description 2
- 108010009583 Transforming Growth Factors Proteins 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 208000002495 Uterine Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 2
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 2
- 238000011360 adjunctive therapy Methods 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 230000005809 anti-tumor immunity Effects 0.000 description 2
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 2
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 2
- JKKPSTXVKNWEAH-VWHZSNQBSA-N bbip Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1N(C(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)CNC(=O)C=2C=CC(=CC=2)C(=O)C=2C=CC=CC=2)CCC1 JKKPSTXVKNWEAH-VWHZSNQBSA-N 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 2
- 125000000837 carbohydrate group Chemical group 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 2
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 2
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 230000003325 follicular Effects 0.000 description 2
- 101150077246 gas5 gene Proteins 0.000 description 2
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 2
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 2
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 2
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 2
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 238000010212 intracellular staining Methods 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 2
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 201000005249 lung adenocarcinoma Diseases 0.000 description 2
- 201000005243 lung squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 210000003071 memory t lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000011325 microbead Substances 0.000 description 2
- 210000002500 microbody Anatomy 0.000 description 2
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 2
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 2
- 229940099990 ogen Drugs 0.000 description 2
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 2
- 230000008823 permeabilization Effects 0.000 description 2
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 2
- 108010086662 phytohemagglutinin-M Proteins 0.000 description 2
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 2
- 208000017805 post-transplant lymphoproliferative disease Diseases 0.000 description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 2
- ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N rapamycin Natural products COCC(O)C(=C/C(C)C(=O)CC(OC(=O)C1CCCCN1C(=O)C(=O)C2(O)OC(CC(OC)C(=CC=CC=CC(C)CC(C)C(=O)C)C)CCC2C)C(C)CC3CCC(O)C(C3)OC)C ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 208000002491 severe combined immunodeficiency Diseases 0.000 description 2
- 229960002930 sirolimus Drugs 0.000 description 2
- QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N sirolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N 0.000 description 2
- 208000000649 small cell carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 238000011477 surgical intervention Methods 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 description 2
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 2
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 2
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- 125000002987 valine group Chemical group [H]N([H])C([H])(C(*)=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- QRXMUCSWCMTJGU-UHFFFAOYSA-L (5-bromo-4-chloro-1h-indol-3-yl) phosphate Chemical compound C1=C(Br)C(Cl)=C2C(OP([O-])(=O)[O-])=CNC2=C1 QRXMUCSWCMTJGU-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- AASYSXRGODIQGY-UHFFFAOYSA-N 1-[1-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)hexyl]pyrrole-2,5-dione Chemical compound O=C1C=CC(=O)N1C(CCCCC)N1C(=O)C=CC1=O AASYSXRGODIQGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RTQWWZBSTRGEAV-PKHIMPSTSA-N 2-[[(2s)-2-[bis(carboxymethyl)amino]-3-[4-(methylcarbamoylamino)phenyl]propyl]-[2-[bis(carboxymethyl)amino]propyl]amino]acetic acid Chemical compound CNC(=O)NC1=CC=C(C[C@@H](CN(CC(C)N(CC(O)=O)CC(O)=O)CC(O)=O)N(CC(O)=O)CC(O)=O)C=C1 RTQWWZBSTRGEAV-PKHIMPSTSA-N 0.000 description 1
- XMTQQYYKAHVGBJ-UHFFFAOYSA-N 3-(3,4-DICHLOROPHENYL)-1,1-DIMETHYLUREA Chemical compound CN(C)C(=O)NC1=CC=C(Cl)C(Cl)=C1 XMTQQYYKAHVGBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZEZPDHKACVMMCD-UHFFFAOYSA-N 5,6-dihydroimidazo[2,1-b][1,3]thiazol-3-ylmethyl n,n'-dicyclohexylcarbamimidothioate Chemical compound C=1SC2=NCCN2C=1CSC(=NC1CCCCC1)NC1CCCCC1 ZEZPDHKACVMMCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 208000014697 Acute lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010052747 Adenocarcinoma pancreas Diseases 0.000 description 1
- 241000272814 Anser sp. Species 0.000 description 1
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 1
- 241000219194 Arabidopsis Species 0.000 description 1
- 101100505262 Arabidopsis thaliana GN gene Proteins 0.000 description 1
- 101100348618 Arabidopsis thaliana NIK2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100257261 Arabidopsis thaliana SOC1 gene Proteins 0.000 description 1
- BFYIZQONLCFLEV-DAELLWKTSA-N Aromasine Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CC(=C)C2=C1 BFYIZQONLCFLEV-DAELLWKTSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091008875 B cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 241000170006 Bius Species 0.000 description 1
- 241000283725 Bos Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241001609030 Brosme brosme Species 0.000 description 1
- 102000003930 C-Type Lectins Human genes 0.000 description 1
- 108090000342 C-Type Lectins Proteins 0.000 description 1
- 101100171060 Caenorhabditis elegans div-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100243548 Caenorhabditis elegans pfd-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100310918 Caenorhabditis elegans sra-28 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010058019 Cancer Pain Diseases 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000010667 Carcinoma of liver and intrahepatic biliary tract Diseases 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 240000008365 Celosia argentea Species 0.000 description 1
- 235000000722 Celosia argentea Nutrition 0.000 description 1
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000008574 D-amino acids Chemical group 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 101100285903 Drosophila melanogaster Hsc70-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010058314 Dysplasia Diseases 0.000 description 1
- 206010014733 Endometrial cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010014759 Endometrial neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 description 1
- 101150031329 Ets1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- VWUXBMIQPBEWFH-WCCTWKNTSA-N Fulvestrant Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3[C@H](CCCCCCCCCS(=O)CCCC(F)(F)C(F)(F)F)CC2=C1 VWUXBMIQPBEWFH-WCCTWKNTSA-N 0.000 description 1
- 206010017993 Gastrointestinal neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 1
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- 108010069236 Goserelin Proteins 0.000 description 1
- BLCLNMBMMGCOAS-URPVMXJPSA-N Goserelin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](COC(C)(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NNC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CC=C(O)C=C1 BLCLNMBMMGCOAS-URPVMXJPSA-N 0.000 description 1
- 206010073069 Hepatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 101001081590 Homo sapiens DNA-binding protein inhibitor ID-1 Proteins 0.000 description 1
- 101001024566 Homo sapiens Ecto-ADP-ribosyltransferase 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000885616 Homo sapiens Galactoside alpha-(1,2)-fucosyltransferase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101100182729 Homo sapiens LY6K gene Proteins 0.000 description 1
- 101000982628 Homo sapiens Prolyl 3-hydroxylase OGFOD1 Proteins 0.000 description 1
- 101000874364 Homo sapiens Protein SCO2 homolog, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 101150090950 Hsc70-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 241000257303 Hymenoptera Species 0.000 description 1
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000012745 Immunoglobulin Subunits Human genes 0.000 description 1
- 108010079585 Immunoglobulin Subunits Proteins 0.000 description 1
- 102000012960 Immunoglobulin kappa-Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010090227 Immunoglobulin kappa-Chains Proteins 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- 238000012369 In process control Methods 0.000 description 1
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 102220565519 Killer cell immunoglobulin-like receptor 2DL2_M55A_mutation Human genes 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 244000207740 Lemna minor Species 0.000 description 1
- 235000006439 Lemna minor Nutrition 0.000 description 1
- 108010000817 Leuprolide Proteins 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 208000008771 Lymphadenopathy Diseases 0.000 description 1
- 102100032129 Lymphocyte antigen 6K Human genes 0.000 description 1
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 1
- 241000829100 Macaca mulatta polyomavirus 1 Species 0.000 description 1
- 208000025205 Mantle-Cell Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 206010054949 Metaplasia Diseases 0.000 description 1
- 206010027480 Metastatic malignant melanoma Diseases 0.000 description 1
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 1
- 108010085220 Multiprotein Complexes Proteins 0.000 description 1
- 102000007474 Multiprotein Complexes Human genes 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 101100009348 Mus musculus Depp1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000764258 Mus musculus Tumor necrosis factor ligand superfamily member 4 Proteins 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 101100075854 Oryza sativa subsp. japonica MADS50 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000566145 Otus Species 0.000 description 1
- 241000282577 Pan troglodytes Species 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 241001282135 Poromitra oscitans Species 0.000 description 1
- 235000001855 Portulaca oleracea Nutrition 0.000 description 1
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 102100026942 Prolyl 3-hydroxylase OGFOD1 Human genes 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 102100035546 Protein SCO2 homolog, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 1
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 101100009350 Rattus norvegicus Depp gene Proteins 0.000 description 1
- 101100438645 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) CBT1 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010061934 Salivary gland cancer Diseases 0.000 description 1
- 240000005499 Sasa Species 0.000 description 1
- 101100150366 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) sks2 gene Proteins 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 241000713311 Simian immunodeficiency virus Species 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 208000000102 Squamous Cell Carcinoma of Head and Neck Diseases 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 101150003236 TUBG1 gene Proteins 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 description 1
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 1
- 208000035868 Vascular inflammations Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 240000006365 Vitis vinifera Species 0.000 description 1
- 208000033559 Waldenström macroglobulinemia Diseases 0.000 description 1
- 206010048232 Yawning Diseases 0.000 description 1
- 241001178076 Zaga Species 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 239000003070 absorption delaying agent Substances 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 1
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011374 additional therapy Methods 0.000 description 1
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 1
- 238000012867 alanine scanning Methods 0.000 description 1
- 229960000548 alemtuzumab Drugs 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 108010004469 allophycocyanin Proteins 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 1
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 229960002932 anastrozole Drugs 0.000 description 1
- YBBLVLTVTVSKRW-UHFFFAOYSA-N anastrozole Chemical compound N#CC(C)(C)C1=CC(C(C)(C#N)C)=CC(CN2N=CN=C2)=C1 YBBLVLTVTVSKRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011319 anticancer therapy Methods 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 238000011398 antitumor immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-L aspartate group Chemical group N[C@@H](CC(=O)[O-])C(=O)[O-] CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-L 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 230000003190 augmentative effect Effects 0.000 description 1
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 1
- 229960000190 bacillus calmette–guérin vaccine Drugs 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 229960000397 bevacizumab Drugs 0.000 description 1
- 101150003083 bib gene Proteins 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 201000000053 blastoma Diseases 0.000 description 1
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 230000005907 cancer growth Effects 0.000 description 1
- 239000012830 cancer therapeutic Substances 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229960005395 cetuximab Drugs 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 238000011342 chemoimmunotherapy Methods 0.000 description 1
- 208000009060 clear cell adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 238000003271 compound fluorescence assay Methods 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 230000004940 costimulation Effects 0.000 description 1
- 108091008034 costimulatory receptors Proteins 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 230000007402 cytotoxic response Effects 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 210000004544 dc2 Anatomy 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 230000017858 demethylation Effects 0.000 description 1
- 238000010520 demethylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- ZWIBGKZDAWNIFC-UHFFFAOYSA-N disuccinimidyl suberate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCCCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O ZWIBGKZDAWNIFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000804 electron spin resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 201000008184 embryoma Diseases 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 201000003914 endometrial carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000002357 endometrial effect Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 229960000255 exemestane Drugs 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000013213 extrapolation Methods 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012921 fluorescence analysis Methods 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000022244 formylation Effects 0.000 description 1
- 238000006170 formylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229960002258 fulvestrant Drugs 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 229960003297 gemtuzumab ozogamicin Drugs 0.000 description 1
- 238000012215 gene cloning Methods 0.000 description 1
- 238000010448 genetic screening Methods 0.000 description 1
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 description 1
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 1
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 229960002913 goserelin Drugs 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 201000009277 hairy cell leukemia Diseases 0.000 description 1
- 201000000459 head and neck squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 102000054886 human ART4 Human genes 0.000 description 1
- 102000049143 human ID1 Human genes 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000033444 hydroxylation Effects 0.000 description 1
- 238000005805 hydroxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- 229960001001 ibritumomab tiuxetan Drugs 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 108091008042 inhibitory receptors Proteins 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 230000004073 interleukin-2 production Effects 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007916 intrasternal administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 description 1
- 230000026045 iodination Effects 0.000 description 1
- 238000006192 iodination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004190 ion pair chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910000458 iridium tetroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000006317 isomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052747 lanthanoid Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002602 lanthanoids Chemical class 0.000 description 1
- 229960003881 letrozole Drugs 0.000 description 1
- HPJKCIUCZWXJDR-UHFFFAOYSA-N letrozole Chemical compound C1=CC(C#N)=CC=C1C(N1N=CN=C1)C1=CC=C(C#N)C=C1 HPJKCIUCZWXJDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GFIJNRVAKGFPGQ-LIJARHBVSA-N leuprolide Chemical compound CCNC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)CC1=CC=C(O)C=C1 GFIJNRVAKGFPGQ-LIJARHBVSA-N 0.000 description 1
- 229960004338 leuprorelin Drugs 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000008297 liquid dosage form Substances 0.000 description 1
- 201000002250 liver carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000000711 locust bean gum Substances 0.000 description 1
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000018555 lymphatic system disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002794 lymphocyte assay Methods 0.000 description 1
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- FEIWNULTQYHCDN-UHFFFAOYSA-N mbba Chemical compound C1=CC(CCCC)=CC=C1N=CC1=CC=C(OC)C=C1 FEIWNULTQYHCDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004296 megestrol acetate Drugs 0.000 description 1
- RQZAXGRLVPAYTJ-GQFGMJRRSA-N megestrol acetate Chemical compound C1=C(C)C2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@@](C(C)=O)(OC(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RQZAXGRLVPAYTJ-GQFGMJRRSA-N 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 230000015689 metaplastic ossification Effects 0.000 description 1
- 208000037819 metastatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000011575 metastatic malignant neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000021039 metastatic melanoma Diseases 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 208000025113 myeloid leukemia Diseases 0.000 description 1
- DASJFYAPNPUBGG-UHFFFAOYSA-N naphthalene-1-sulfonyl chloride Chemical compound C1=CC=C2C(S(=O)(=O)Cl)=CC=CC2=C1 DASJFYAPNPUBGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JPXMTWWFLBLUCD-UHFFFAOYSA-N nitro blue tetrazolium(2+) Chemical compound COC1=CC(C=2C=C(OC)C(=CC=2)[N+]=2N(N=C(N=2)C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC(=CC=2)[N+]([O-])=O)=CC=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 JPXMTWWFLBLUCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- 201000002094 pancreatic adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229960001972 panitumumab Drugs 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 1
- 235000013550 pizza Nutrition 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229940057838 polyethylene glycol 4000 Drugs 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 230000013823 prenylation Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 201000005825 prostate adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229960000856 protein c Drugs 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000018 receptor agonist Substances 0.000 description 1
- 229940044601 receptor agonist Drugs 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 125000006853 reporter group Chemical group 0.000 description 1
- 230000008672 reprogramming Effects 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 1
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 description 1
- 201000003804 salivary gland carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000008299 semisolid dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 231100000161 signs of toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 239000007909 solid dosage form Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- JJAHTWIKCUJRDK-UHFFFAOYSA-N succinimidyl 4-(N-maleimidomethyl)cyclohexane-1-carboxylate Chemical compound C1CC(CN2C(C=CC2=O)=O)CCC1C(=O)ON1C(=O)CCC1=O JJAHTWIKCUJRDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 230000019635 sulfation Effects 0.000 description 1
- 238000005670 sulfation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008093 supporting effect Effects 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 229960001603 tamoxifen Drugs 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 235000013616 tea Nutrition 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 229960005026 toremifene Drugs 0.000 description 1
- XFCLJVABOIYOMF-QPLCGJKRSA-N toremifene Chemical compound C1=CC(OCCN(C)C)=CC=C1C(\C=1C=CC=CC=1)=C(\CCCl)C1=CC=CC=C1 XFCLJVABOIYOMF-QPLCGJKRSA-N 0.000 description 1
- 229960005267 tositumomab Drugs 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 229960000575 trastuzumab Drugs 0.000 description 1
- 229950007217 tremelimumab Drugs 0.000 description 1
- 150000003649 tritium Chemical class 0.000 description 1
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 1
- 229940121358 tyrosine kinase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 208000012991 uterine carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 229940026385 zzip Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/74—Inducing cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/75—Agonist effect on antigen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Винахід стосується виділеного гуманізованого антитіла, яке зв'язується з CD134 людини. Також винахід стосується виділеної молекули нуклеїнової кислоти, вектору, що містить молекулу нуклеїнової кислоти, клітини-хазяїна, способу підсилення імунної відповіді у суб’єкта, фармацевтичної композиції та виділеного агоністичного антитіла, яке зв’язується з CD134 людини.
Description
Дана заявка на патент претендує на пріоритет на підставі заявки ЕР13159794.0, поданої 18 березня 2013 року.
Область техніки
Даний винахід відноситься до антитіл, до застосування таких антитіл і, зокрема, до гуманізованих антитіл, які зв'язуються з СЮО134, для лікування раку.
Рівень техніки
Підсилення протипухлинної функції Т-клітин являє собою унікальний підхід для лікування раку. Існує значна кількість свідчень того, що пухлинні клітини "вислизають" від імунної системи шляхом індукції активної імунної толерантності, опосередкованої, головним чином, регуляторними Т-лімфоцитами (Тгед; Оцелаа еї а. Іттипої Кем 2011; 241:104-118). Внаслідок цього, як представляється, рівновага між ефекторними (тобто прямо або опосередковано знищуючими пухлинні клітини) Т-лімфоцитами (Тей) і викликаючими імунну толерантність (тобто придушення ефекторної функції і виживаності Тей) Тгед є ключовим для здійснення ефективної протипухлинної імунотерапії. Інакше кажучи, ефективна протипухлинна імунна відповідь може бути отримана шляхом підсилення ефекторної функції пухлино-спефцифічних
Тей і/або шляхом послаблення супресорної функції пухлино-спефцифічних Тгед. Ключовим рецептором, який, як було показано, опосередковує дані відповіді, є рецептор СО134 (ОХ40). (бБуидатитга, К, ІвНії, М, УМУеіпрега, А. Тнпегарешіс іагдеїпуд ої Ше еМесіог Т-сеїЇ со-вітиаюгу тоіесше ОХ40. Маїшиге Вем Ітт 2004; 4: 420-431).
СО134 (також відомий як ОХ40, ТМЕКБЗЕ4 і АСТЗ5) є членом суперсімейства рецептора фактора некрозу пухлини. Даний поверхневий костимулюючий рецептор СО134 експресується на активованих Т-лімфоцитах і відіграє важливу роль у виживанні і функціонуванні даних клітин.
Присутність СЮО134-експресуючих Т-лімфоцитів була продемонстрована в різних злоякісних пухлинах людини і у дренуючих лімфатичних вузлах пацієнтів, що страждають від раку (Ватвіай еї а). Ат у) Зигу 2000; 179: 400-406; Мецо єї аі. Ат У 5ийигу 1997; 174: 258-265).
Зв'язування рецептора СО134 миші іп мімо (злитими білками розчинного ліганда ОХ40 миші (ОХ401І) і імуноглобуліну, або міметиками ОХ40ІЇ миші, такими як специфічні антитіла проти
СО134 миші) у мишей, що мають пухлину, підсилює протипухлинний імунітет, призводить до виживаності без ознак пухлини на мишачих моделях різних клітинних ліній злоякісних пухлин мишей, наприклад, лімфоми, меланоми, саркоми, раку товстої кишки, раку молочної залози і гліоми (з5идатига єї аЇ. Маїиге Кем Ітт 2004; 4: 420-431).
Було запропоновано підсилювати імунну відповідь ссавця на антиген із залученням ОХАОК за допомогою застосування засобу, що зв'язує ОХ40ОЕ (публікація міжнародного патенту Мо МО 99/42585). Хоча даний документ відноситься, у цілому, до засобів, що зв'язують ОХ40, у зазначеному документі зроблено акцент на застосуванні ОХ40Ї або його частин; опис антитіл проти ОХ40 проводять у контексті того, що вони еквівалентні ОХ401. У цьому зв'язку, коли група
МУеіпрегу (М/єіїпрегу еї а). у Іттипійег 2006; 29: 575-585) проводила дослідження на нелюдиноподібних мавпах, знову свідомо було обрано антитіло, яке зв'язується із сайтом зв'язування ОХ401 і, як правило, виступає міметиком ОХ401.
АІ-ЗпаткКНапі із співавт. (Енг У Спет 1996; 26: 1695-1699) застосовували антитіло проти
ОХ40 за назвою ОХ86, яке не блокує зв'язування ОХ40Ї, з метою вивчити диференціальну експресію ОХ40 на активованих Т-клітинах миші; і НігесСппогп-Сутегтап із співавт. У Ехр Мей 2009; 206: 1103-1116) застосовували ОХ86 разом із циклофосфамідом в якості потенційної хіміоїмунотерапії в моделі на мишах. Однак не очікується, що ОХ86 буде зв'язуватися з ОХ40 людини і, з огляду роботи Умеіпрего, при виборі антитіла, яке буде ефективним для людини, дослідник буде вибирати антитіло, яке зв'язується із сайтом зв'язування ОХ401.
Зв'язування рецептора СО134 людини іп мімо (специфічними антитілами проти СО134 людини, які взаємодіють із ОХ401І -зв'язуючим доменом на СО134 людини; 05 2009/0214560 АТ) на мишах з тяжкою комбінованою імунною недостатністю (ТКІН) підсилює протипухлинний імунітет, що призводить до інгібування росту пухлини на різних лініях клітин злоякісних пухлин людини, наприклад, лімфоми, раку передміхурової залози, раку товстої кишки і раку молочної залози.
Точні механізми протипухлинної імунної відповіді, опосередкованої зв'язуванням СО134 людини, у людини ще не встановлені, однак вважають, що дані типи відповіді опосередковує трансмембранний шлях передачі сигналів за участю СО134, який стимулюється взаємодією з
ОХ40І. Дана взаємодія опосередкована зв'язуванням тримірного ОХ40Ї з СО134. У сучасних варіантах протиракової терапії запропоновано застосування тримеризованого ліганда ОХ40 в якості більш ефективного засобу, ніж антитіла проти ОХ40 (Моїті5 еї аЇ. Мої Іттипої 2007; 44: 3112-3121). бо Короткий опис винаходу
Відповідно до даного винаходу запропонована зв'язуюча молекула, яка містить (а) варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність згідно з
Фігурою 27 або варіант зазначеної послідовності, що містить 1, 2 або З амінокислотні заміни; імабо (5) варіабельну область легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність згідно з
Фігурою 27 або варіант зазначеної послідовності, що містить 1, 2 або З амінокислотні заміни.
Відповідно до даного винаходу також запропонована зв'язуюча молекула, яка містить (а) варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність згідно з
Фігурою 26 або варіант зазначеної послідовності, що містить 1, 2 або З амінокислотні заміни; імабо (б) варіабельну область легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність згідно з
Фігурою 26 або варіант зазначеної послідовності, що містить 1, 2 або З амінокислотні заміни.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу виділені зв'язуючі молекули зв'язуються з СО134 людини. Зв'язуючі молекули згідно із даним винаходом можуть не запобігати зв'язуванню рецептора СО134 (0Х40) людини з лігандом ОХ40 (ОХ401).
Такі зв'язуючі молекули включають підходящі антитіла проти СО134, антиген-зв'язуючі фрагменти антитіл проти СО134 і похідні антитіл проти СО134. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу зв'язуюча молекула зв'язується з СО134 людини з Ка, що становить 1 х 107 М або менше. Зв'язуюча молекула має агоністичну активність щодо СО134 людини на
Т-ефекторних клітинах і/або антагоністичну активність щодо СО134 людини на Т-регуляторних клітинах. Відповідно деяким наступним варіантам реалізації даного винаходу зв'язуюча молекула являє собою моноклональне антитіло людини, яке специфічно зв'язується з СЮО134 людини з Ка, що становить 100 нМ або менше, наприклад, менше 50 нМ або менше 20 нМ.
Відповідно до даного винаходу також запропонована композиція, яка містить одну або декілька зазначених зв'язуючих молекул і фармацевтично прийнятний носій. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу зазначена зв'язуюча молекула являє собою моноклональне антитіло людини проти СО134 або антиген-зв'язуючий фрагмент зазначеного антитіла. Зазначена композиція може також містити додаткові фармацевтичні засоби, такі як імунотерапевтичні засоби, хіміотерапевтичні засоби і гормональні терапевтичні засоби.
Відповідно до даного винаходу також запропоновані діагностичні і терапевтичні способи застосування зв'язуючих молекул. Згідно з деякими варіантами реалізації відповідно до даного винаходу запропоновано спосіб лікування або запобігання раку в ссавця, що включає введення зазначеному ссавцеві терапевтично ефективної кількості зв'язуючої молекули або композиції, що містить зв'язуючу молекулу, описану в даній заявці. Відповідно деяким іншим варіантам реалізації даного винаходу в даному описі запропоновано спосіб підсилення імунної відповіді в ссавця, що включає введення зазначеному ссавцеві терапевтично ефективної кількості зв'язуючої молекули або композиції, що містить зв'язуючу молекулу. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу зв'язуюча молекула, яку застосовують у зазначених способах, являє собою моноклональне антитіло людини проти СО134 або антиген-зв'язуючий фрагмент зазначеного антитіла, який зв'язується з СО134 людини, причому зазначене антитіло не запобігає зв'язуванню рецептора СО134 (ОХ40) людини з лігандом ОХ40 (ОХ401).
У даному винаході також запропоновані молекули нуклеїнової кислоти, які кодують амінокислотну послідовність зв'язуючої молекули, вектори, що містять такі нуклеїнові кислоти, клітини-господарі, що містять зазначені вектори, і способи одержання зазначених зв'язуючих молекул.
У даному описі також запропоновані інші аспекти, які будуть зрозумілі з повного опису, включаючи формулу винаходу.
Опис фігур
Фігура 1. Залежність від часу і ефект дози при впливі ФГА-М (фітогемагглютиніну-М) на експресію поверхневого СО134 людини Т-лімфоцитами людини.
Фігура 2. Експресія СО134 людини на спочиваючих і активованих ФГА-М С04 Т-лімфоцитах людини.
Фігура 3. Характеристики зв'язування клону АСТЗ5, клону 12НЗ ї клону 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини на стимульованих ФГА-М Т-лімфоцитах, експресуючих СЮО134 людини.
Фігура 4. Зв'язування клону 12Н3 і клону 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини на стимульованих ФГА-М С04 Т-лімфоцитах і СО8 Т-лімфоцитах, експресуючих СЮО134 людини.
Фігура 5. Перехресна конкуренція неміченого клону 12Н3 або клону 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини з комерційним клоном АСТЗ35 або клоном 1106 антитіла миші проти
СО134, кон'югованим з ФЕ (фікоеритрином), на стимульованих ФГА-М Т-лімфоцитах, бо експресуючих СО134 людини.
Фігура 6. Одночасне зв'язування клону 12Н3 або клону 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини з ОХ40Ї. людини на стимульованих ФГА-М Т-лімфоцитах, експресуючих СО134 людини.
Фігура 7. Залежності від часу ефекту впливу стимулюючих бусин з антитілами проти СОЗ людини/антитілами проти СО28 людини она експресію поверхневого СО134 людини ефекторними Т-лімфоцитами (Теїй) і регуляторними Т-лімфоцитами (Тгед) людини.
Фігура 8. Ефект дози при впливі клону 12Н3 або клону 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини або ОХ40І людини на проліферацію стимульованих ФГА-М Т-лімфоцитів, експресуючих
СО134 людини.
Фігура 9. Ефект об'єднання клону 12Н3 антитіла миші проти СО134 людини з ОХ40Ї. людини або клону 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини з ОХ40Ї людини на проліферацію стимульованих ФГА-М Т-лімфоцитів, експресуючих СО134 людини.
Фігура 10. Ефект впливу клону 12Н3 або клону 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини або
ОХ40Ї людини на проліферацію стимульованих стимулюючими бусинами з антитілами проти
СОЗ людини/антитілами проти СО28 людини ефекторних Т-лімфоцитів людини, експресуючих
СО134 людини.
Фігура 11. Ефект впливу клону 12Н3 або клону 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини або
ОХ40Ї людини на проліферацію стимульованих стимулюючими бусинами з антитілами проти
СОЗ людини/антитілами проти СО28 людини регуляторних Т-лімфоцитів людини, експресуючих
СО134 людини.
Фігура 12. Ефект клону 12НЗ антитіла миші проти СО134 людини на опосередковану ОХ40І. людини проліферацію ефекторних (А) і регуляторних (В) Т-лімфоцитів людини, стимульованих стимулюючими бусинами з антитілами проти СОЗ людини/антитілами проти СО28 людини, експресуючих СО134 людини.
Фігура 13. Ефект впливу клону 12Н3 або клону 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини або
ОХ40Ї людини на опосередковану регуляторними Т-лімфоцитами людини, експресуючими
СОр134 людини, супресію проліферації Т-ефекторних лімфоцитів людини, експресуючих СО134 людини.
Фігура 14. Зв'язування клону 20Е5 химерного антитіла І(д4к людини проти СО134 людини (з додаванням і без додавання ІЛ-2) на стимульованих бусинами СО3/С028 С04 Т-лімфоцитах і
Зо СО8 Т-лімфоцитах, експресуючих СЮО134 людини.
Фігура 15. Ефект клону 20Е5 химерного антитіла ЇЯ004к людини проти СО134 людини або
ОХ40Ї людини на проліферацію стимульованих ФГА-М Т-лімфоцитів, експресуючих СО134 людини.
Фігура 16. Ефект дози при впливі клону 20Е5 химерного антитіла (9034к людини проти
СО134 людини або ОХ40Ї людини на проліферацію стимульованих ФГА-М Т-лімфоцитів, експресуючих СО134 людини.
Фігура 17. Ефект об'єднання клону 20Е5 химерного антитіла (у034к людини проти СО134 людини з ОХ40Ї людини на проліферацію стимульованих ФГА-М Т-лімфоцитів, експресуючих
СО134 людини.
Фігура 18. Ефект клону 20Е5 химерного антитіла |3054к людини проти СО134 людини або
ОХ40Ї людини (з додаванням і без додавання ІЛ-2) на проліферацію стимульованих бусинами
Срз/Сраг8 Т-лімфоцитів, експресуючих СО134 людини.
Фігура 19. Зв'язування клонів 12Н3 і 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини з невідновленим і відновленим рекомбінантним злитим білююм СО134 людини:Есу людини. (А)
Аналіз у нередукуючих (а, Б) і редукуючих (с, 4) (В) Характер електрофоретичної рухливості рекомбінантного злитого білла СО134 людини:Рсу людини (рлСО134) у нередукуючих (а, Б) і редукуючих (с, 4) умовах із застосуванням офарблювання кумаси діамантовим (С) Вестерн-
Блотинг у нередукуючих (а, Б) і редукуючих (с, 4) умовах рекомбінантного злитого білка СО134 людини:Рсу людини після впливу контрольного антитіла миші ізотипу (ДС 1к (мідс1) або клонів 12НЗ їі 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини (м12НЗ і м20Е»5, відповідно.
Фігура 20. Схематичне зображення цистеїн-багатих доменів (СКО) у повнорозмірному
СОр134 людини (позначена як "СКОТ1") і в різних усічених формах СО134 людини (позначені як "скОр2","сОоЗ", "СО" ії "усічений (ус) СКО4").
Фігура 21. Зв'язування клонів 12Н3 ії 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини на клітинній лінії 293-Р, тимчасово трансфікованою конструкцією повнорозмірного СО134 людини (позначена "СКО1") або різними усіченими конструкціями СО134 людини (позначені "СКО2", "скорз3","Сра" і "усічений (ус) СКО4").
Фігура 22. Зв'язування клонів 12Н3 і 20Е5 химерного антитіла Ідс4к і/або Їдб1к людини проти СО134 людини на клітинній лінії 293-Е, тимчасово трансфікованою конструкцією повнорозмірного СО134 людини (позначена "СКО1") або різними усіченими конструкціями
С0134 людини (позначені "СКО2", "СКО3", "СКОа" ії "усічений (ус) СКО4").
Фігура 23. Зв'язування клону 12Н3 антитіла миші проти СО134 людини (А) і клону 12Н3 химерного антитіла (3054к людини проти СО134 людини (В) з пептидом, отриманим з СО134 людини, що відповідає амінокислотній послідовності А1!-модуля усіченого СКОЗ-А1-модуля субдомену СО (відповідно до визначення Іі аїга еї а. Єиг У Іттипої! 1994; 24: 677 683).
Фігура 24. Варіабельні області моноклонального антитіла 20Е5.
Варіабельні області миші (м2ОЕБ5МН і м20Е5МІ); варіабельні області важких ланцюгів гуманізованого антитіла 20Е5 (л20Е5 1, л20Е5 2 і л20Е5 ІЗ) і варіабельні області легких ланцюгів гуманізованого антитіла 20Е5 (л20Е5 1 і л20Е5 І2). м20Е5МН: 5ЕБЕО ІЮ МО: 4; м2ОЕ5М!: 5ЕО ІЮ МО 5.
Фігура 25. Варіабельні області моноклонального антитіла 12Н3.
Варіабельні області миші (м'2НЗМН і м12НЗМІ); варіабельні області важких ланцюгів гуманізованого антитіла 12Н3 (лі2Н3 Пп, л12Н3З п2 їі лі2Н3 ПЗ) і варіабельні області легких ланцюгів гуманізованого антитіла 12Н3 (л12Н3 1 ї лІі2Н3 І2). мІ2НЗМН: 5ЕО ІЮО МО: 12;
М12НЗУГ: 5ЕО ІЮ МО: 13.
Фігура 26. Варіабельні області гуманізованого антитіла 20Е5.
Фігура 27. Варіабельні області гуманізованого антитіла 12Н3.
Фігура 28. Характеристики зв'язування версій МІТНІ, М 1МН2, МІЛМНЗ (А) ї МГ2НІ, МІ 2УНа2,
МІ2УНЗ (В) клону 20Е5 гуманізованого антитіла дС4к людини проти СО134 людини із приєднаним до планшета рекомбінантним СО134 людини.
Фігура 29. Характеристики зв'язування версій МІТНІ, М 1МН2, МІЛМНЗ (А) ї МГ2НІ, МІ 2УНа2,
МІ2УМНЗ (В) клону 12Н3 гуманізованого антитіла дС4к людини проти СО134 людини із приєднаним до планшета рекомбінантним СО134 людини.
Фігура 30. Характеристики зв'язування біотинильованого батьківського клону 12Н3 антитіла миші проти СО134 людини із приєднаним до планшета рекомбінантним СО134 людини.
Фігура 31. Характеристики конкуренції гуманізованих версій М1НІ, МІТМН2г, МІЛМНІЗ (А) і
МІ2НІ, МІ2УН2г, МІ2УМНЗ (В) клону 12Н3 антитіла (дб4к людини проти СО134 людини з біотинильованим батьківським клоном 12Н3 антитіла миші проти СО134 людини (у концентрації
Зо ЕСово, що становить 20 нг/мл) за зв'язування з приєднаним до планшета рекомбінантним СО134 людини.
Фігура 32. Рівні експресії повнорозмірного СО134 людини на клоні Мо 5 (А) і на клоні Мо 23 (В) стабільно трансфікованою клітинною лінією 293-Е.
Фігура 33. Характеристики зв'язування гуманізованих версій МІ1НІ, М'1МН2, МІ 1МНІЗ (А) і
МІ2НІ, МІ2УМН2, МІ2УНЗ (В) клону 20Е5 антитіла (дб4к людини проти СО134 людини з поверхневим СО134 людини на клоні Мо 5 стабільно трансфікованою клітинною лінією 293-Е.
Фігура 34. Характеристики зв'язування гуманізованих версій МІ1НІ, М'1МН2, МІ 1МНІЗ (А) і
МІ2НІ, МІ2УН2, МІ2УНЗ (В) клону 12Н3 антитіла (9б4к людини проти СО134 людини з поверхневим СО134 людини на клоні Мо 5 стабільно трансфікованою клітинною лінією 293-Е.
Фігура 35. Характеристики зв'язування версій гуманізованих МІТНІ, МІТМН2г, МІЛМНЗ (А) і
МІ2НІ, МІ2УН2, МІ2УНЗ (В) клону 12Н3 антитіла (9б4к людини проти СО134 людини з поверхневим СО134 людини на клоні Мо 23 стабільно трансфікованою клітинною лінією 293-Е.
Фігура 36. Зв'язування гуманізованих версій МІНІ, МІГ1МН2г, М 1МНЗ, МІ 2НІ, МІ 2МНа2,
МІ2УНЗ клону 12Н3 антитіла (дС4к людини проти СО134 людини на клітинній лінії 293-Е, тимчасово трансфікованою конструкцією повнорозмірного СЮО134 людини (позначена "СКО1") або різними конструкціями усіченого СО134 людини (позначені "СКОЗ" і "СО".
Фігура 37. Зв'язування гуманізованої версії МІ ТНІ клону 20Е5 антитіла І(дс4к людини проти
СО134 людини она клітинній лінії 293-Р, тимчасово трансфікованою конструкцією повнорозмірного СО134 людини (позначена "СКО1") або різними конструкціями усіченого
СО134 людини (позначені "СКОЗ" і "СКО4").
Фігура 38. Характеристики зв'язування клону 12Н3 біотинильованого батьківського антитіла миші проти СО134 людини з поверхневим СО134 людини на клоні Мо 5 стабільно трансфікованою клітинною лінією 293-Е.
Фігура 39. Характеристики конкуренції гуманізованих версій МІ1НІ, МІ1МН2г, МІ1МНІЗ (А) і
МІ2НІ, МІ2МН2, МІ/2УНЗ (В) клону 12Н3 антитіла (дб4к людини проти СО134 людини з біотинильованим батьківським клоном 12Н3 антитіла миші проти СО134 людини (у концентрації
ЕСвзо, що становить 700 нг/мл) за зв'язування з поверхневим СО134 людини на клоні Мо 5 стабільно трансфікованою клітинною лінією 293-Р.
Фігура 40. Понижувальна регуляція експресії БОХРЗ на експандованих Тгед 60 (604-0025-00127 діт/-) розчинним ОХ40Ї і розчинним антитілом ІдсС1 12Н3 миші проти
СО134 людини у зазначених концентраціях. На осі М представлена середня геометрична інтенсивність флуоресценції (геом. СІФ) ЕОХРЗ, встановлена із застосуванням антитіла проти
ЕОХЗР, приєднаного до ФЕ. м12Н3-Ідс1 12Н3 миші. Дані являють собою результат аналізу зразка, отриманого від одного донора, у трьох повторах.
Фігура 41. Стовпчикова діаграма аналізів ЕАС5, що демонструє ослаблення інгібуючого ефекту Тгед на проліферацію Теїй приєднаним до планшета гуманізованим антитілом 12Н3
МІМНІ проти СО134 людини у порівнянні з контрольним ізотипом. Клітини Теї виявляли за допомогою барвника Сеїйгасе "м МіоІеї. Співвідношення Тгед:Тефекторні становило 1:2.
Фігура 42. Ефект зазначених приєднаних до планшета антитіл проти СО134 людини на проліферацію Тей клітин у співвідношенні Тгед:Тей 0:1 (без Тгед) (фігура 42А) або 1:4 (фігура 428), виділених від донора 7015, відкладений на графіку як функція індексу реплікації. М-мишії; х:химерний; л-людини. "р«е0,05; "р«0, 017 ра«0,001 у порівнянні з контрольним ізотипом мідс1.
ОХ40Ї людини використовували разом з (ОХ401І) або без (ОХ401. без Ні) антитіл проти Нів.
Фігура 43. Вирівнювання гуманізованих варіабельних областей (МН) важкого ланцюга, отриманих з батьківського антитіла 20Е5 миші проти СО134 людини. 5ЕО ІЮ МО зазначений для кожної послідовності наприкінці назви кожної послідовності (20Е5 МНІ 64 - амінокислотна послідовність «ЕО ІЮ МО: 64 і т.д.).
Фігура 44. Вирівнювання гуманізованих варіабельних областей (МН) важкого ланцюга, отриманих з батьківського антитіла 12Н3 миші проти СО134 людини. ЗЕО ІО МО зазначений для кожної послідовності наприкінці назви кожної послідовності (1283 МНІ 69 - амінокислотна послідовність «ЕО ІЮ МО: 69 і т.д.).
Опис винаходу
Активація Т-клітин опосередкована не лише стимуляцією антигеном через рецептори Т- клітин, але також костимулюючими сигналами від костимулюючих молекул. Серед декількох костимулюючих молекул ОХ40 (СО134), член сімейства рецептора фактора некрозу пухлини (ФНП), відіграє ключову роль у виживаності і гомеостазі ефекторних Т-клітин і Т-клітин пам'яті.
Згідно із загальноприйнятим розумінням костимуляції ОХ40, взаємодія між ОХ40 і лігандом
ОХх40 (ОХ401І) здійснюється, коли активовані Т-клітини зв'язуються із професійними антиген- презентуючими клітинами (АПК). Після цього функції Т-клітин, у тому числі продукція цитокінів, експансія і збереження життєздатності, підсилюються костимулюючими сигналами ОХ40.
Взаємодія між ОХ40 і ОХ401І. здійснюється під час взаємодії Т-клітин і дендритних клітин (ДК) через 2-3 дні після розпізнавання антигену. Т-клітини, що експресують ОХ40, також можуть взаємодіяти із клітинами, експресуючими ОХ401, відмінними від ДК, і одержувати сигнал ОХ40 від клітини, яка може генерувати важливі сигнали для утворення Т-клітин пам'яті, підсилення відповіді ТП2 і пролонгації запальних відповідей. Таким чином, оптимальна взаємодія між ОХ40 і
ОХ40Ї може відбуватися у два етапи: ОХ40Ї, який експресується на активованих СО4 Т- клітинах, взаємодіє з ОХ40, який експресується на інших реактивних СО4 Т-клітинах, що призводить до оптимального утворення СО4 Т-клітин пам'яті (5огоозп еї аї. У Іттипо! 2006; 176: 5975-87), або ОХ40Ї, який експресується на СО4-- акцесорних клітинах, може стимулювати збереження життєздатності клітини ТН2 у результаті взаємодії з ОХ40 на клітинах ТН2 (Кіт еї аї.
Іттипйу 200318: 643-54). Крім того, експресія ОХ40ІЇ на В-клітинах необхідна для утворення
ТА2 іп мімо, але не для утворення ТПА1 (І іпоп еї аї. ) Ехр Меа 2003; 197: 875-83), і гладкі клітини, що експресують ОХ40І, прямо підсилюють ефекторну функцію Т-клітин у результаті взаємодії між ОХ40 на Т-клітинах і ОХ40Ї на гладких клітинах (Казпіжакига еї аї. 9 Іттипої 2004; 173: 5247-5257; МаКає еї аї. ) Іттипо! 2006; 176: 2238-2248). Крім цього, оскільки ендотеліальні клітини також експресують ОХ401. (Іпига еї аїІ. У Ехр Мей 1996; 183: 2185-95), зв'язування ОХ40 з ендотеліальними клітинами може бути залучене у васкулярне запалення. Надлишок сигналів
ОХ40, спрямованих як до реактивних Т-клітин, так і до регуляторних Т-клітин, пригнічує імунодепресію, опосередковану Тгед. Сигнали ОХ40, що надходять у реактивні Т-клітини, роблять дані клітини стійкими до супресії, опосередкованої Тгед. З іншого боку, сигнали ОХ40, що надходять у клітини Тгед, прямо інгібують супресивну функцію Тгед, хоча спірним залишається питання, чи можуть сигнали ОХ40 контролювати рівень експресії Еохр3 у клітинах
Тгед. Крім цього, навмисна стимуляція ОХ40 інгібує диференціацію клітин іТгед (індуцибельних клітин Тгед), яка залежить від ТФР (трансформучого фактора росту)-бета. Дане інгібування може бути опосередковане частково ефекторними цитокінами, такими як ІЛ-4 і ІФН-гама, які продукуються ефекторними Т-клітинами, стимульованими ОХ40. Важливо, що блокування
ОХ40І значно стимулює диференціацію іТгед і викликає толерантність до трансплантата, яка може бути опосередкована клітинами Тгед. Внаслідок цього ОХ40 являє собою можливу молекулярну мішень для контролю опосередкованого Т-клітинами аутоїмунітету. Більше того, у 60 нещодавніх дослідженнях повідомлялося, що взаємодія між ОХ401Ї, яка експресується гладкими клітинами, і ОХ40, яка експресується клітинами Тгед, може взаємно пригнічувати функцію гладких клітин і супресивну функцію клітин Тгед (гі еї а. Іттипйу 2008; 29: 771-81; Рісопезе єї а!. Віоса 2009;114: 2639-48).
Миші являють собою оптимальний експериментальний об'єкт для імунологів, і вивчення імунних відповідей мишей привело до глибокого розуміння сутнісних причин і взаємозв'язків у механізмах імунної системи людини. Загальна структура системи миші і людини представляється цілком аналогічною; однак також існують значні відмінності. Наприклад, у мишей СО134 експресується на Тей після активації, тоді як Тгед експресують СО134 конститутивно (Рісопезе еї аї. У Ехр Мей 2008; 205: 825-839). У людини СО134 експресується як на Теїї, так і на Тгед винятково після активації (див. нижче, наприклад, приклад 2 (9), "Експресія
СОр134 на ефекторних і регуляторних Т-лімфоцитах людини після стимуляції стимулюючими бусинами з антитілами проти СОЗ людини/антитілами проти СО28 людини"). Більше того, Тгед миші для досягнення супресії викликають апоптоз Теїї миші (Рапаїуап еї аІ. Маг Іттипої 2007; 8: 1353; бспейноїа еї аі. Маї Іттипо!ї 2007; 8: 1285-1287), тоді як Тгед людини для досягнення супресії не викликають апоптоз Тей людини (Мегсоцієп еї а. Ріо5 ОМЕ 2009; 4: е7183). У сукупності ці дані свідчать про різні ролі СО134 у супресивній функції Тгед в імунних системах людини і миші.
Термін "зв'язуюча молекула" охоплює (1) антитіло, (2) антиген-зв'язуючий фрагмент антитіла і (3) похідну антитіла, кожний з яких визначений у даній заявці. Термін "зв'язується з
СО134" або "зв'язування з СО134" відноситься до зв'язування зв'язуючої молекули, як визначено в даній заявці, з рецептором СО134 в аналізі іп міго, такому як аналіз Віасоге або аналіз Осіеї (на основі поверхневого плазмонного резонансу). Зв'язуюча молекула має афінність зв'язування (Ка), що становить приблизно 1 х 105 М або менше, наприклад, приблизно 5 х 107 М або менше, приблизно 1 х 10-7 М або менше, приблизно 1 х 108 М або менше, приблизно 1 х 109 М або менше, приблизно 1 х 10-79 М або менше, приблизно 1 х 10-17
М або менше або приблизно 1 х 10-72 М або менше.
Термін "виділене антитіло" або "виділена зв'язуюча молекула" відноситься до антитіла або зв'язуючої молекули, які: (1) не зв'язані із природними компонентами, з якими вони зв'язані в природньому стані; (2) вільні від інших білків того ж виду; (3) експресовані клітиною іншого виду;
Зо або (4) не існують у природі. Приклади виділених антитіл включають антитіло проти СО134, яке було очищене афінним способом із застосуванням СО134, антитіло проти СО134, отримане в гібридомах або інших клітинних лініях іп міго, гуманізовані антитіла проти СО134 і антитіло людини проти СО134, отримане від трансгенної тварини.
Термін "агоніст" відноситься до зв'язуючої молекули, як визначено в даній заявці, яка при зв'язуванні з СО134 (1) стимулює або активує СО134, (2) підсилює, стимулює, індукує, збільшує або продовжує активність, присутність або функцію СО134 або (3) підсилює, стимулює, збільшує або індукує експресію СО134. Термін "антагоніст" відноситься до зв'язуючої молекули, як визначено в даній заявці, яка при зв'язуванні з СО134 (1) інгібує або пригнічує СО134, (2) інгібує або пригнічує активність, присутність або функцію СО134 або (3) інгібує або пригнічує експресію СО134.
Термін "антитіло" відноситься до молекули імуноглобуліну, яка, як правило, складається із двох ідентичних пар поліпептидних ланцюгів, причому кожна пара містить один "важкий" (Н) ланцюг і один "легкий" (І) ланцюг. Легкі ланцюги людини підрозділяють на капа (к) і лямбда (Х).
Важкі ланцюги підрозділяються на мю, дельта, гама, альфа або епсілон і визначають ізотип антитіла як І9М, дО, Ід, ІдА ії ЧЕ, відповідно. Кожний важкий ланцюг містить варіабельну область важкого ланцюга (у даній заявці скорочено іменується як НСМК або МН) і константну область важкого ланцюга. Константні області важкого ланцюга Ідо, Ідс і ІдА містять три домени,
СНІ, СН? ї СНУ, їі константні області важкого ланцюга ІДМ ії ІДЕ містять чотири домени, СНІ,
СН2, СНЗ ї СН4А. Кожний легкий ланцюг містить варіабельну область легкого ланцюга (у даній заявці скорочено іменується як І СУК або МІ) і константну область легкого ланцюга. Константна область легкого ланцюга містить один домен, Сі. Константні області антитіл можуть опосередковувати зв'язування імуноглобуліну із тканинами або факторами господаря, у тому числі з різними клітинами імунної системи (наприклад, ефекторними клітинами). Області МН і МІ. можна також розділити на області гіперваріабельності, які називають областями, що визначають комплементарність (сотріетепіагіу аегептіпіпу гедіоп5, СОК), розділені областями, які є більш консервативними і які називають каркасними областями (їгтате гедіоп5, ЕК). кожна
МН і МІ. складається із трьох СОК і чотирьох ЕК, організованих від аміно-кінця до карбокси-кінця в наступному порядку: ЕК1, СОКІ, ЕК2, СОМ2, ЕКЗ, СОКЗ, ЕКА4. Варіабельні області кожної пари важкий/легкий ланцюг (МН і МІ), відповідно, як правило, утворюють сайт зв'язування 60 антитіла. Розподіл амінокислот у кожній області або домені відповідають визначеннями Кебота
(Кабваї, Зедиепсез ої Ргоївїп5 ої Іттипоіодісаї! Іпіегеві, Маїйопаї! Іпзійшез ої Неапй, Веїпезаа, Ма. (1987 і 1991)) або відповідно до визначень Чотия (Споїпіа еї аї!., Соптоптаїйоп5 ої іттиподіобиїїп
Пурегмагіавіє тедіоп5, Маїиге 1989; 342(6252):877-83). Термін "антитіло" охоплює антитіла миші, гуманізовані антитіла, антитіла людини і химерні антитіла, а також антитіло, яке являє собою мультимерну форму антитіла, такі як димери, тримери або мультимери більш високого порядку мономерних антитіл. Антитіло також охоплює моноспецифічні, біспецифічні або мультиспецифічні антитіла, а також будь-яку іншу модифіковану конфігурацію молекули імуноглобуліну, яка містить антиген-, що розпізнає сайт необхідної специфічності. Даний термін також охоплює антитіло, зв'язане або приєднане до групи, відмінної від антитіла. Також термін "антитіло" не обмежений будь-яким конкретним способом одержання антитіла. Наприклад, даний термін включає моноклональні антитіла, рекомбінантні антитіла і поліклональні антитіла.
Термін "похідна антитіла" або "похідна" антитіла відноситься до молекули, здатної до зв'язування з тим самим антигеном (тобто СО134 людини), з яким зв'язується антитіло, що і містить амінокислотну послідовність антитіла, приєднану до додаткового молекулярного угрупування. Амінокислотна послідовність антитіла, що міститься в похідній антитіла, може являти собою повнорозмірне антитіло або може являти собою будь-яку частину або частини повнорозмірного антитіла. Додаткове молекулярне угрупування може являти собою біологічну або хімічну молекулу. Приклади додаткових молекулярних угрупувань включають хімічні групи, пептиди, білки (такі як ферменти, антитіла), амінокислоти і хімічні сполуки. Додаткове молекулярне угрупування можна використовувати в якості засобу для виявлення, маркерної мітки, терапевтичного або фармацевтичного засобу. Амінокислотна послідовність антитіла може бути приєднана або пов'язана з додатковим угрупуванням шляхом нековалентного зв'язування, хімічної комбінації, генетичного злиття або іншими способами. Термін "похідна антитіла" також охоплює химерні антитіла, гуманізовані антитіла і молекули, отримані в результаті модифікацій амінокислотних послідовностей антитіла СО134, таких як консервативні амінокислотні заміни, вставки і приєднання.
Термін "антиген-зв'язуючий фрагмент" антитіла відноситься до однєїй або до декількох частин повнорозмірного антитіла, які зберігають здатність зв'язуватися з тим самим антигеном (тобто СО134 людини), з яким зв'язується антитіло. Термін "антиген-зв'язуючий фрагмент"
Зо також охоплює частину антитіла, яка є частиною більшої молекули, утвореної в результаті нековалентного або ковалентного зв'язування, або частини антитіла з однією або декількома додатковими молекулярними угрупуваннями. Приклади додаткових молекулярних угрупувань включають амінокислоти, пептиди або білки, такі як корова область стрептавідину, які можна використовувати для одержання тетрамірної молекули 5сЕм (Кіргіуапом еї аІ. Нит Апііродіе5
Нубгідотаз 1995; 6(3): 93-101). Типові антиген-зв'язуючі фрагменти являють собою МН і/або МІ. антитіла.
Термін "химерне антитіло" відноситься до антитіла, яке містить амінокислотні послідовності, отримані від двох різних видів, таких як людина і миша, як правило, комбінацію варіабельних областей (важкого і легкого ланцюга) миші і константних областей (важкого і легкого ланцюга) людини.
Термін "епітоп" відноситься до частини антигена, здатного до специфічного зв'язування з антитілом або з рецептором Т-клітин або будь-яким іншим способом взаємодіючої з молекулою. "Епітоп" також позначається в даній області техніки як "антигенна детермінанта". Епітоп, як правило, складається з хімічно активних поверхневих угрупувань молекул, таких як амінокислоти або вуглевод або бічні ланцюги цукрів. Епітоп може бути "лінійним" або "нелінійним/конформаційним". Коли бажаний епітоп визначений (наприклад, у результаті картування епітопів), можна одержати антитіла проти даного епітопа. Одержання і характеристика антитіл може також надавати інформацію щодо бажаних епітопів. Виходячи з даної інформації, потім можна провести скринінг антитіл для виявлення тих 3 них, які зв'язуються 3 тим самим епітопом, наприклад, у результаті проведення перехресних конкурентних досліджень для виявлення антитіл, які конкурентно зв'язуються один з одним, тобто антитіл, що конкурують за зв'язування з антигеном.
Термін "клітина-господар" відноситься до клітини, у яку був введений вектор експресії.
Термін охоплює не тільки конкретну клітину-суб'єкт, але також нащадків такої клітини. Оскільки в послідовних поколіннях можуть виникати певні модифікації у зв'язку із впливом навколишнього середовища або мутації, таке потомство може не бути ідентичним батьківській клітині, але також буде включено в об'єм терміну "клітина-господар".
Термін "антитіло людини" ("людське антитіло") відноситься до антитіла, що містить амінокислотні послідовності винятково послідовності імуноглобуліну людини. Антитіло людини бо може містити вуглеводні ланцюги миші, якщо воно було отримано в миші, у клітині миші або в гібридомі, отриманої із клітини миші. Антитіла людини можуть бути отримані багатьма способами, відомими у даній області техніки.
Термін "гуманізоване антитіло" відноситься до антитіла, яке містить декілька або всі з СОК антитіла тварини, відмінні від людини, тоді як каркасні і константні області антитіла містять амінокислотні залишки, отримані з послідовностей антитіла людини. Гуманізовані антитіла, як правило, одержують шляхом трансплантації СОК з антитіла миші в послідовності каркасної області людини з наступною зворотною заміною певних залишків каркасної області людини відповідними залишками миші з вихідного антитіла. Термін "гуманізоване антитіло" також відноситься до антитіла, отриманого не від людини, у якій з метою зменшення імуногенності були вилучені, як правило, в одній або декількох варіабельних областях, один або декілька епітопів, що характеризуються високою ймовірністю утворення епітопа Т-клітини і/або В-клітини людини. Амінокислотну послідовність епітопа можна вилучити повністю або частково. Однак, як правило, амінокислотну послідовність змінюють шляхом заміни однієї або декількох амінокислот, які утворюють епітоп, однією або декількома іншими амінокислотами, за допомогою чого амінокислотна послідовність замінюється послідовністю, яка не утворює епітоп
Т-клітини і/або В-клітини людини. Амінокислоти замінюють амінокислотами, які присутні у відповідному положенні (положеннях) у відповідній варіабельній області важкого або варіабельній області легкого ланцюга людини, залежно від ситуації.
Термін "ссавець" відноситься до будь-якого виду тварин класу Ссавці. Приклади ссавців включають: людей; лабораторних тварин, таких як пацюки, миші, мавпи і морські свинки; свійських тварин, таких як кролики, велика рогата худоба, вівці, кози, кішки, собаки, коні і свині і подібних тварин.
Термін "виділена нуклеїнова кислота" відноситься до молекули нуклеїнової кислоти, отриманої від КДНК або, що має синтетичне походження, або до їхньої комбінації, відділеної від інших молекул нуклеїнових кислот присутніх у природному джерелі нуклеїнової кислоти.
Термін "Ка" відноситься до рівноважної константи дисоціації при взаємодії певного антитіла з певним антигеном і використовується для опису афінності зв'язування між лігандом (таким як антитіло) і білком (таким як СО134). Чим менша рівноважна константа дисоціації, тем міцніше зв'язування ліганда або тем вища афінність між лігандом і білком. Значення Ка можна виміряти
Зо методом поверхневого плазмонного резонансу, наприклад, із застосуванням системи ВІАСОКЕ 1 або Осієї. Термін "антитіло проти СО134" відноситься до антитіла, як визначено в даній заявці, здатного зв'язуватися з СО134 людини.
Терміни "рецептор ОХ40", "рецептор СО134" ії "СО0134" використовуються в даній заявці взаємозамінно і включають СО134 людини, а також варіанти, ізоформи і види, гомологічні
СОр134 людини. Відповідно, молекули, що зв'язують СО134 людини, розкриті в даній заявці, можуть, у деяких випадках, також зв'язуватися з СО134 видів, відмінних від людини. Наприклад зв'язуючі молекули згідно із даним винаходом можуть мати перехресну реактивність із іншими спорідненими антигенами, наприклад, з СО134 інших видів, таких як людина або мавпа, наприклад, Масаса Газсісціагі5 (яванська макака, супо) або Рап ігодіодуге5 (шимпанзе, спітр). В інших випадках зв'язуючі молекули можуть бути повністю специфічними до СО134 людини і можуть не демонструвати видову або інші типи перехресної реактивності. Наприклад, дані молекули не будуть зв'язуватися з СО134 миші або пацюка.
Термін "специфічно зв'язується з СО134 людини" означає, що значення Ка зв'язуючої молекули при зв'язуванні з СО134 людини є меншим приблизно в 10 раз, 50 раз або 100 раз, ніж значення Ка при зв'язуванні даної молекули з, наприклад, СО40О0 людини, що визначають із застосуванням аналізу, описаного в даній заявці або відомого фахівцеві в даній області техніки (наприклад, аналізу ВІАсоге).
В якості альтернативи, визначення того, що конкретний агент специфічно зв'язується з рецептором ОХ40 можна легко здійснити із застосуванням або адаптацією загальноприйнятих процедур. В одному з підходящих аналізів іп міго застосовують процедуру вестерн-блотингу (описану в багатьох стандартних керівництвах, у тому числі в "Апіїродіе5, А І арогагогу Мапиаї!" ру Напоу апа І апе). Для визначення того, що даний агент, що зв'язується з рецептором ОХ40, специфічно зв'язується з білюоюм ОХ40 людини, із клітин ссавця, які не експресують антиген
ОХ40, такий як клітини, відмінні від лімфоцитів (наприклад, клітина СО5 або клітина СНО), трансформованих молекулою нуклеїнової кислоти, що кодує ОХ40, виділяють сумарний білок клітин. В якості негативного контролю сумарний білок клітин також виділяють із відповідних нетрансформованих клітин. Потім отримані препарати білків аналізують методом електрофорезу в поліакриламідному гелі (ПААГ) у неденатуруючих або денатуруючих умовах.
Після цього білки переносять на мембрану (наприклад, нітроцелюлозну) методом вестерн- 60 блотингу, і агент, дослідження якого проводять, інкубують з мембраною. Після промивання мембрани для видалення агента, що неспецифічно зв'язався, присутність агента, що зв'язався, визначають із застосуванням антитіла, напрацьованого проти досліджуваного агента, кон'югованого із засобом для виявлення, таким як фермент лужна фосфатаза; застосування субстрату 5-бром-4-хлор-3-індоліл фосфату/нітроголубого тетразолію призводить до утворення густої синьої сполуки в результаті дії лужної фосфатази, приєднаної до антитіла. При використанні даної методики агенти, які специфічно зв'язуються з ОХ40 людини, будуть зв'язуватися зі смугою ОХ40 людини (яка буде розміщена в конкретному положенні на гелі, обумовленому молекулярною масою) в екстракті із трансформованих ОХ40 клітин, тоді як в екстракті з нетрансформованих клітин буде спостерігатися незначне зв'язування або зв'язування буде відсутнє. Неспецифічне зв'язування агента з іншими білками може виникнути і може бути виявлене у вигляді слабкого сигналу при проведенні вестерн-блотингу.
Неспецифічну природу даного зв'язування фахівець у даній області техніки може розпізнати за слабким сигналом, отриманим при проведенні вестерн-блотингу, у порівнянні з потужним первинним сигналом, що виникає у результаті специфічного зв'язування агента/білка ОХ40 людини. В ідеалі агент, що зв'язується з рецептором ОХ40, не буде зв'язуватися з білками, виділеними з нетрансформованих клітин. Крім аналізів зв'язування із застосуванням екстрагованих білків, передбачувані агенти, що зв'язуються з рецептором ОХ40, можна досліджувати для підтвердження їхньої здатності зв'язуватися по суті тільки з рецептором ОХ40 іп мімо шляхом кон'югації агента із рлуоресцентною міткою (такою як ФІТ|) і аналізу зв'язування даного агента з активованою антигеном популяцією СО4«Т-клітин і неактивованою популяцією
Т- клітин методом сортування флуоресцентно-активованих клітин (Ріпогезсепсе Асіїмаїєей СеїЇ
Богіїпуд, РАС5). Засіб, який зв'язується по суті тільки з рецептором ОХ40, буде офарблювати тільки активовані СО4--Т-клітини.
Термін "вектор" відноситься до молекули нуклеїнової кислоти, здатної переносити іншу молекулу нуклеїнової кислоти в клітину-господар. Приклади векторів включають плазміди, вірусні вектори, космідні або фагові вектори і експресуючі вектори "голої" ДНК або РНК. Деякі вектори здатні до автономної реплікації в клітині-господарі, у яку їх вводять. Деякі вектори здатні до інтеграції в геном клітини-господаря при введенні в клітину-господар і, таким чином, проходять реплікацію разом з геномом господаря. Деякі вектори здатні направляти експресію
Зо генів, з якими вони функціонально зв'язані, і внаслідок цього їх можна назвати "векторами експресії".
У даній заявці двадцять загальноприйнятих амінокислот і їх скорочені найменування використовуються загальноприйнятим чином.
У даному винаході запропоновано виділене антитіло, яке зв'язується з СО134 людини, що містить варіабельну область легкого ланцюга (МІ) згідно 5ЕО ІЮ МО: 100 і варіабельну область важкого ланцюга (МН), який містить області, що визначають комплементарність, важкого ланцюга (НСОК), НСОКІ, НСОК2 і НСОКЗ, і в деяких випадках, що містить 1, 2 або З амінокислотні заміни в МІ. згідно ЗЕО ІЮ МО: 100.
ЗЕО ІЮ МО: 100:
РІОМТО5РБОБІ БАБМАО ВМТ СКАБОВМИААМАММООКРИаКАРК
ГИ АБТАНТаМРХВЕБаХ:2О5ОТОЕТІ ТЗІ ОРЕОБАТУУСООМІМУРІ ТЕО СТКМЕЇКЕ; де
Хії являє собою 0 або 5; і
Хіг являє собою С або 5.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу, описаними у даній заявці, виділене антитіло містить МН амінокислотну послідовність, що містить, 52Е20 ІЮО МО: 152, яка в деяких випадках містить 1, 2 або З амінокислотні заміни в МН згідно ЗЕО ІЮ МО: 152.
ЗЕО ІО МО: 152:
ОМОЇ МОБОАЕХІККРИЗЗУКУЗСКАБОМ ТЕКОМ ТМНУУВОАРОСИЇ ЕМ ХгасіуРМХЗа С ГУ
МОМЕКОВХАТХ5ТХхеОКЗТЗТАУМЕЇ 551 ВБЕОТАУУУСАВХх;аУНаРНІ ОБОММ ОСТ УТМУ55; де
БО Хі являє собою М або І ;
Хг являє собою М або І;
Хз являє собою М, О, А або Е;
Ха являє собою М або А;
Х5 являє собою І або І;
Хе являє собою А або М; і
Х7 являє собою М, І або І.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу, описаними у даній заявці, виділене антитіло містить МН амінокислотну послідовність, що містить, 562 ІЮ МО: 99, яка в деяких випадках містить 1, 2 або З амінокислотні заміни в МН згідно ЗЕО ІЮ МО: 99. (510) ЗЕО І МО: 99:
ОМОЇ МОБСАЕУМККРИаБЗУКУЗСКАБОа МУ ТЕКОМТМНУМАОАРОСС ЕМ Х7аСсІМРММИаСОТУМ
ОМЕКОЕХаТХОТХ10ОК5Т5ТАХУМЕЇ 55ІІ Е5ЕОТАМУУСАКЕМОУНОРНІ ОБЕОМУУСОСТТУТМ55; де
Х7 являє собою І або М;
Хв являє собою А або У;
Хе являє собою І. або; і
Хо являє собою МУ або А.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу, описаними у даній заявці, виділене антитіло містить Мі. згідно БЕО ІЮ МО: 100 їі МН згідно 5ЕО ІЮ МО: 152.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу, описаними у даній заявці, виділене антитіло містить НСОКЗ амінокислотну послідовність, що містить, ЗЕО ІЮ МО: 16, 144 або 145.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу, описаними у даній заявці, виділене антитіло містить НСОК2 амінокислотну послідовність, що містить, ЗЕО ІЮО МО: 15, 141, 142 або 143.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу, описаними у даній заявці, виділене антитіло містить НСОК'І амінокислотну послідовність, що містить, зХЕО ІЮО МО: 14.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу, описаними у даній заявці, виділене антитіло містить а) МІ. амінокислотну послідовність, що містить, зЕО ІЮ МО: 67 або 68; і
МН амінокислотну послідовність, що містить, зЗЕО ІЮО МО: 69, 70, 71, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 146, 147 або 148, яка в деяких випадках містить 1, 2 або З амінокислотні заміни в лінійних положеннях амінокислотних залишків МН 11, 55 або 99; або
В) МІ. ї МН амінокислотні послідовності, що містять і. ЗЕОІЮ МО: 67 і 69, відповідно; і. ЗЕО ІЮО МО: 67 і 70, відповідно; ії. ЗЕО ІЮ МО: 67 і 71, відповідно; ім. з«ЕО ІЮО МО: 68 і 69, відповідно; м. ЗЕО ІО МО: 68 і 70, відповідно; або мі. ЗЕО ІЮ МО: 68 і 71, відповідно.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу, описаними у даній заявці, виділене антитіло містить Мі. і МН згідно БЕО ІЮ МО: 67 і 119,6711120,671121,67 і 122,67 і 123, 67 і 124, 67і125,671126,671127,671128,671129,671130,671131,671132,671133, 67 і 146, 67 і 147. 67 і 148,68 1119, 681 120,68 і 121, 681 122,681 123,68 і 124,68 і 125, 68 і 126,68 і 127, 68 і 128, 681і129,681130,68і131,681 132,68 133, 68 і 146, 68 і 147 або 68 і 148, відповідно.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу, описаними у даній заявці, антитіло являє собою агоніст СО134.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу, описаними у даній заявці, антитіло містить заміну в Ес-області.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу, описаними у даній заявці, заміна включає заміну 5267Е/І 328Б, заміну Е2330/52370/Н2680/Р2710/АЗЗОВ, заміну
М234А/2237А/Р2385/Н268А/УЗ309І /АЗ305/Р3315 або заміну М252у/5254Т/1256Е, де нумерація залишків наведена відповідно до ЄО Іпаех.
Антитіла, амінокислотні послідовності важкого ланцюга, легкого ланцюга, МН або Мі. яких несуттєво відрізняються від таких, описаних у даній заявці, включені в об'єм даного винаходу.
Несуттєві відмінності являють собою заміни 1, 2, 3, 4, 5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 або 15 амінокислот у послідовності варіабельної області антитіла, які не виявляють негативної дії на властивості антитіла. Амінокислотні послідовності, по суті ідентичні послідовностям варіабельної області, розкритим у даній заявці, включені в об'єм даного винаходу. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу ідентичність послідовностей може становити приблизно 90 95, 91 9, 92 90, 93 95, 94 95, 95 95, 96 95, 97 90, 98 95, 99 95 або більше. Відсоток ідентичності можна визначити, наприклад, за допомогою попарного вирівнювання (із застосуванням настроювань за замовчуванням модуля АїЇдпХ програмного забезпечення Уесіог
МТІ м.9.0.0 (Іпийгодеп, Сапзбайд, СА). Білкові послідовності згідно із даним винаходом можна використовувати в якості шуканої послідовності для здійснення пошуку в загальнодоступних або патентних базах даних, наприклад, для виявлення споріднених послідовностей. Типові програми, які застосовують для здійснення такого пошуку, являють собою програми ХВІ А5Т або ВІ А5ТР (пер /Лмлм/м/ псбі піт/піпй дом), або СепотеОцезі М (СепотеОиевзі, Мезірогоцоп,
МА), настроєні із застосуванням параметрів за замовчуванням.
Як правило, несуттєва відмінність включає одну або декілька консервативних 60 амінокислотних замін амінокислотою, яка має аналогічний заряд, гідрофобність або стереохімічні характеристики, в антиген-зв'язуючому сайті або в каркасній області без негативної зміни властивостей антитіла. Консервативні заміни можуть також бути введені для поліпшення властивостей антитіла, наприклад, стабільності або афінності. 1,2, 3,4,5,6, 7,8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 або 15 амінокислотних замін можуть бути введені в послідовності УН або МІ.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу 1, 2 або З заміни уводять в УН або МІ. антитіла, описаного в даній заявці. Типові консервативні амінокислотні заміни представлені в таблиці 1. Більш того, будь-який природний залишок у поліпептиді може також бути замінений аланіном, що було раніше описано у випадку скануючого аланіном мутагенезу (Масіеппап еї аї (1998) Асі РНузіої. Зсапа. Биррі. 643:55-67; Зазакі єї а! (1998) Аду. Віорвзу5. 35:1-24).
Антитіла проти СО134, описані в даній заявці, які були модифіковані для поліпшення стабільності, селективності, перехресної реактивності, афінності, імуногенності або інших бажаних біологічних або біофізичних властивостей, включені в об'єм даного винаходу. На стабільність антитіл впливає численна кількість факторів, у тому числі (1) упакування ядра окремих доменів, що впливає на їхню внутрішню стабільність, (2) білок-білкові поверхневі взаємодії, які впливають при утворенні пар НС і с, (3) екранування полярних і заряджених залишків, (4) мережа Н-сполук між полярними і зарядженими залишками; і (5) розподіл на поверхні заряджених і полярних залишків крім інших усередині- і міжмолекулярних сил (УМО еї а|., У. Мої. Віої., 305:989-1010, 2001). Потенційні залишки, що дестабілізують структуру, можна виявити, опираючись на кристалічну структуру антитіла, і вплив залишків на стабільність антитіла можна вивчити шляхом одержання і оцінки варіантів, що містять мутації виявлених залишків.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу, описаними у даній заявці, виділене антитіло містить 1, 2 або З амінокислотні заміни в лінійних положеннях залишків 11, 55 або 99
УН.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу, описаними у даній заявці, 1, 2 або
З амінокислотні заміни в лінійних положеннях залишків МН являють собою М11Ї, М550, М55А,
М55Е, М991І. або МО91.
Заміни в лінійних положеннях залишків 11, 55 або 99 МН можуть поліпшити стабільність антитіла і/або підсилити його агоністичну активність.
Зо Амінокислотні заміни можуть бути введені, наприклад, шляхом ПЛР -мутагенезу (патент
США Мо4,683,195). Бібліотеки варіантів можуть бути отримані із застосуванням добре відомих способів, наприклад, із застосуванням випадкових (ММК) або невипадкових кодонів, наприклад, кодонів ОМК, які кодують 11 амінокислот (Аа, Су5, Ар, Сім, Су, Гуз, Азп, Аг, Зег, Туг, Тгр), і скринінга бібліотек для виявлення варіантів з бажаними властивостями.
Хоча варіанти реалізації, що проілюстровані в прикладах, включають пари варіабельних областей, одна з важкого ланцюга і одна з легкого ланцюга, фахівець у даній області техніки розуміє, що альтернативні варіанти реалізації можуть містити окремі варіабельні області важкого або легкого ланцюга. Окрему варіабельну область можна застосовувати для проведення скринінга для виявлення варіабельних доменів, здатних утворювати дводоменний специфічний антиген-зв'язуючий фрагмент, здатний, наприклад, зв'язуватися з СО134 людини, яка має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 1. Скринінг можна проводити методами скринінга на основі фагового дисплея із застосуванням, наприклад, багаторівневого подвійного комбінаторного підходу, розкритого в міжнародній публікації патенту Мо УМО1992/01047. У даному підході індивідуальну колонію, що містить клон Н- або І -ланцюги, застосовують для інфікування повної бібліотеки клонів, що кодують інший ланцюг (І або Н), і отриманий у результаті дволанцюговий специфічний антиген-зв'язуючий домен вибирають відповідно до методик фагового дисплея, як було описано. Внаслідок цього індивідуальні поліпептидні ланцюги МН і МІ. є придатними для виявлення додаткових антитіл, що специфічно зв'язуються з СО134 людини, яка має послідовність 5ЕО ІЮО МО: 1, із застосуванням способів, описаних у міжнародній публікації патенту Мо МУО1992/01047.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу, описаними у даній заявці, виділене антитіло містить амінокислотні послідовності НСОК1, НСОК2 і НСОКЗ згідно а. ЗЕО ІО МО: 14, 15 і 144, відповідно;
Б. 5ЕОІЮ МО: 14, 15 ії 145, відповідно; с. 5ЕО ІЮ МО: 14, 141, і16, відповідно; а. 5ЕО ІЮО МО: 14, 141 і144, відповідно; е. ЗЕО ІЮО МО: 14, 141 і 145, відповідно;
Її. ЗЕО ІЮ МО: 14, 142 і 16, відповідно; 9. ЗЕО ІО МО: 14, 142 і 144, відповідно; бо Й. 5ЕО ІЮ МО: 14, 142 і145, відповідно.
і. ЗЕО ІЮ МО: 14, 143 і 16, відповідно;
Ї. ЗЕ МО: 14, 143 і 144, відповідно; або
К. ЗЕО ІЮ МО: 14, 143 і 145, відповідно.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу, описаними у даній заявці, антитіла, що містять певні послідовності СОК важкого ланцюга і легкого ланцюга, описані в даній заявці, являють собою гуманізовані, людські антитіла або антитіла Овіттипі;еа М (деімунізовані).
Людські антитіла або антитіла Оеіттипілей"М можуть бути отримані, як описано в даній заявці. Гуманізовані антитіла, як правило, відносяться до антитіла, у якому сайт зв'язування з антигеном отриманий від виду, відмінного від людини, а каркасні області варіабельної області отримані від послідовностей імуноглобуліну людини. Гуманізовані антитіла можуть містити заміни в каркасних областях, внаслідок чого каркасна область може не бути точною копією експресованого імуноглобуліну людини або послідовностей гену зародкової лінії. Гуманізовані антитіла проти СО134 можуть бути отримані, наприклад, у мишах ВаїБр/с із застосуванням стандартних способів. Антитіла, отримані в мишах ВаїЇБ/с або інших тварин, відмінних від людини, можна гуманізувати із застосуванням різних методик для одержання послідовностей, більш близьких до послідовностей людини. Типові методики гуманізації, у тому числі відбір акцепторних каркасних областей людини, відомі фахівцям у даній області техніки і включають трансплантацію СОК (патент США Мо 5,225,539), трансплантацію 5ОК (патент США Мо 6,818,749), зміну поверхні (Раїїп, Мої Іттипої! 28:489-499, 1991), зміну поверхні залишків, що визначають специфічність (публікація патенту США Мо 2010/0261620), адаптацію до людини (або адаптацію до каркасної області людини) (публікація патенту США Ме Ш52009/0118127), супер-гуманізацію (патент США Мо 7,709, 226) і направлену селекцію (О5брогп еї а!., МеїШйоа5 36:61-68, 2005; патент США Мо 5,565,332).
Гуманізовані антитіла можна додатково оптимізувати для поліпшення селективності або афінності даних антитіл відносно бажаного антигену шляхом вбудовування змінених підтримуючих залишків каркасної області для збереження афінності зв'язування (зворотні мутації) із застосуванням методик, таких як методики, що розкриті і описані в міжнародній публікації патенту Мо МУО1990/007861 і в міжнародній публікації патенту Мо УМО1992/22653.
Імуноефекторні властивості антитіла згідно із даним винаходом можна модулювати шляхом модифікацій Ес за допомогою методик, відомих фахівцям у даній області техніки. Наприклад, ефекторні функції Ес, такі як зв'язування С1д, комплемент-залежна цитотоксичність (СОС, сотріетепі дерепаеєпі суїшюїохісйу), антитіло-залежна клітково-опосередкована цитотоксичність (АОСС, апііроду-дерепаепі сейЙшіаг суїоїохісйу), фагоцитоз знижуюча регуляція рецепторів клітинної поверхні (наприклад, В-клітинного рецептора; ВСЕ) і т.д., можна модулювати шляхом модифікації залишків в Ес, відповідальних за дані активності, за допомогою зв'язування з активуючими Ес-гама рецепторами (Бсук) Есук!І, ЕсуКПа або ЕсувкІ, або з інгібуючим рецептором ЕсуКІІЬ. Фармакокінетичні властивості можна також підсилити шляхом мутагенезу залишків Ес-домену, направленого на збільшення періоду напівжиття антитіла шляхом модулювання Ес-зв'язуючої афінності з неонатальним Ес-рецептором ЕсКп. Типові модифікації
Ес являють собою 5228Р/І 234А/ 235А Ідс4, М252У/52541/1256Е 1Ід02 (ПОаїгАсдпа еї аї., у Віо!
Сет 281:23514-24, 2006); або М234А/5237А/Р2385, М234А/5237А/Н2680,
Н2б8А/ЛУЗОЗІ /А3305/Р331 або М234А/5237А/Р2385/Н268АЛ/ЗОЗІ /А3305/Р 3315 І9б2 (міжнародна публікація патенту Мо МЛО2011/066501) або модифікації, описані в патенті США Мо 6,737,056 (нумерація залишків відповідно до ЄШО Іпаех). Ес-афінність антитіла щодо інгібіторного
ЕсукІр можна збільшити для підсилення перехресного зв'язування антитіла і агоністичних сигналів. Типові модифікації Ес, які підсилюють Ес-зв'язування з ЕсукКіІІЮ, являють собою
З267Е/І 328Е і Е2330/52370/Н2680/Р2716/АЗЗОЕ (нумерація залишків відповідно до Є) Іпаех).
Інший варіант реалізації даного винаходу являє собою виділене антитіло, яке зв'язується з
СОр134 людини, що містить варіабельну область легкого ланцюга (МІ) згідно БЕО ІЮ МО: 98 і варіабельну область важкого ланцюга (МН), який містить області, що визначають комплементарність, важкого ланцюга (НСОК) НСОКІ1, НСОКЗ2 ї НСОКЗ, яка в деяких випадках містить 1, 2 або З амінокислотні заміни в М 5ЕО ІЮ МО: 98.
ЗЕО І МО: 98:
РІОМТО5РБОБІ БАБМАОВМТІТСВАБОВІЗММІ МУ МООКРОКАХ5КІ ПИУТЗАІ НИ УРЗАЕЗИаБ аБатТОмМТІ ТІ ОРЕОБАТУХССООСМТ РУТРСОСТКМЕЇїКВ, де Хо являє собою М або Р; і
Хв являє собою Е або У.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу, описаними у даній заявці, виділене антитіло містить МН амінокислотну послідовність, що містить, ЗЕО ІО МО: 134, яка в деяких 60 випадках містить 1, 2 або З амінокислотні заміни в МН згідно ЗЕО ІЮ МО: 134.
ЗЕО ІЮО МО: 134
ОМОЇ МОБОАЕХІККРОАБУКУМЗСКАБИУТЕТ5УУМНУУВОАРООВГ ЕМ ХгОахІМР УМХхЗаТКиУМ
ЕКЕКОаВХАТХ5Т5ОХ65АЗТАХУМЕЇ 551 ВБЕОТАМУУСАМУМИа55І 5Х7ДО ММ СОСТІ МТМ55; де
Х1 являє собою М або |;
Х2 являє собою М або І;
ХЗ являє собою 0, 0, А, 5 або Е;
ХА являє собою У або А;
Х5 являє собою І або І;
Хб являє собою Т абокК;і
Х7 являє собою М, І. або
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу, описаними у даній заявці, виділене антитіло містить МН амінокислотну послідовність, що містить, 2620 ІЮ МО: 97, яка в деяких випадках містить 1, 2 або З амінокислотні заміни в МН згідно ЗЕО ІЮ МО: 97.
ЗЕО ІЮ МО: 97:
ОМОЇ МОБСАЕМККРИОАБУКУЗСКАБИаУТЕТ5УММНУУВОАРООВІ ЕМ Х МІМРУМОИаТКУМЕ
КЕКОаВХ2ТХзЗТ5ОХ«5АЗБТАММЕЇ 55І ВБЕОТАМУМСАМУМИа55І БМОММ/СОСТІ МТУ55; де
Хі являє собою І або М;
Хг являє собою А або У;
Хз являє собою І або; і
Ха являє собою К або Т.
Згідно з деяким варіантом реалізації даного винаходу, описаним в даній заявці, виділене антитіло містить Мі. згідно зЕО ІЮ МО: 99 і МН згідно 5ЕО ІЮ МО: 134.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу, описаними у даній заявці, виділене антитіло містить НСОКЗ амінокислотну послідовність, що містить, ЗЕО ІЮО МО: 8, 139 або 140.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу, описаними у даній заявці, виділене антитіло містить НСОКІ2 амінокислотну послідовність, що містить, ЗЕО ІЮ МО: 7, 135, 136, 137 або 138.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу, описаними у даній заявці, виділене антитіло містить НСОК'І амінокислотну послідовність, що містить, зХЕО ІЮО МО: 6.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу, описаними у даній заявці, виділене антитіло містить а. МІ амінокислотну послідовність, що містить, зЕО ІЮО МО: 62 або 63; і
МН амінокислотну послідовність, що містить, зЗЕО ІЮО МО: 64, 65, 66, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 149, 150 або 151, яка в деяких випадках містить 1, 2 або 3 амінокислотні заміни в лінійних положеннях амінокислотних залишків МНІ11, 56 або 106; або
Б. МІ. ї МН, що містить амінокислотні послідовності згідно і. ЗЕО ІЮ МО: 62 і 64, відповідно; і. ЗЕО ІЮО МО: 62 і 65, відповідно; ії. 5ЕО ІО МО: 62 і 66, відповідно; ім. ЗЕО ІЮО МО: 63 і 64, відповідно; м. ЗЕО ІО МО: 63 і 65, відповідно; або мі. ЗЕО ІЮ МО: 63 і 66, відповідно.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу, описаними у даній заявці, виділене антитіло містить МІ. ї МН згідно ЗЕО ІЮО МО: 62і64,62і65,621і66,621101,621і102,62 і 103, 62 104,621і105,621і106,621і107,621108,621і109,621110,621111,62 і 112,62 і 113, 62 і 114, 621 115,621116,621117,621118,621і149,621і150,62і151.63164,63165,63166,631101,63Ї
БО 102,631і103,631104,631105,631106,631107,631108,631109,631110,631111,631 112,63 113,631114,631115,631і116,631117,631118,63 1 149,63 1150, 63 і 151.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу, описаними у даній заявці, виділене антитіло містить 1, 2 або З амінокислотні заміни в лінійних положеннях залишків МН 11, 56 або 106.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу, описаними у даній заявці, 1, 2 або
З амінокислотні заміни в лінійних положеннях залишків МН являють собою М11І, 0560, О56А, 0565, О56Е, М106І або М1061. 1, 2 або 3 амінокислотні заміни в лінійних положеннях залишків 11, 55 або 99 МН можуть поліпшувати стабільність антитіла і/або підсилювати його агоністичну активність. бо У даному винаході запропонована зв'язуюча молекула, яка містить
(а) варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність згідно з фігурою 27 (ЗЕО ІЮ МО: 99) або варіант зазначеної послідовності, що містить 1, 2 або З амінокислотні заміни; і/або (б) варіабельну область легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність згідно з фігурою 27 (ЗЕО ІЮ МО: 100) або варіант зазначеної послідовності, що містить 1, 2 або З амінокислотні заміни.
У даному винаході також запропонована зв'язуюча молекула, яка містить (а) варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність згідно з фігурою 26 (ЗЕО ІЮ МО: 97) або варіант зазначеної послідовності, що містить 1, 2 або З амінокислотні заміни; і/або (б) варіабельну область легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність згідно з фігурою 26 (ЗЕО ІЮ МО: 98) або варіант зазначеної послідовності, що містить 1, 2 або З амінокислотні заміни.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу зв'язуюча молекула зв'язується з
СО0134 людини. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу зв'язуюча молекула не запобігає зв'язуванню рецептора СО134 людини (ОХ40) з лігандом ОХ40 (ОХ401).
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу ефект відносно зв'язування ОХ401. з
СО0134 зменшується на не більше ніж 50 95 на Т-клітинах, експресуючих СО134 людини, при концентрації, у якій зв'язування із зазначеною молекулою СО134 є насиченим, або при концентрації, що перевищує зазначену концентрацію.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу при концентрації зв'язуючої молекули 70 нМ ефект відносно зв'язування ОХ40І з СО134 зменшується на не більше ніж 70 95 на Т-клітинах, експресуючих СО134 людини.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу зв'язуюча молекула зв'язується з епітопом позаклітинного домену СО134 людини, що містять амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ
МО: 34, БЕО ІЮО МО: 35; ЗЕО ІЮ МО: 36, ЗЕО ІО МО: 38 і/або 5ЕО ІО МО: 92.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу зв'язуюча молекула являє собою
Еар-фрагмент, одноланцюговий Ем (5сЕм)-фрагмент або антитіло.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло являє собою антитіло Ідс,
Зо ІЧА, ІдО, ІЧЗЕ або ІдМ, таке як антитіло ІдС1, Ідс2, ІДО3 або Ідс4. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло являє собою антитіло Ідс1 або Ідсаі.
У даному винаході також запропонована молекула нуклеїнової кислоти, що кодує зв'язуючу молекулу або антитіло згідно із даним винаходом. Також запропонована молекула нуклеїнової кислоти, що кодує варіабельну область важкого ланцюга, важкий ланцюг, варіабельну область легкого ланцюга або легкий ланцюг гуманізованого антитіла згідно із даним винаходом. Типові гуманізовані антитіла являють собою гуманізоване антитіло 12Н3 або гуманізоване антитіло 20Е5 згідно із даним винаходом.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу молекула нуклеїнової кислоти кодує (а) варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність згідно з фігурою 27 (ЗЕО ІЮ МО: 99) або варіант зазначеної послідовності, що містить 1, 2 або З амінокислотні заміни; і/або (б) варіабельну область легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність згідно з фігурою 27 (ЗЕО ІЮ МО: 100) або варіант зазначеної послідовності, що містить 1, 2 або З амінокислотні заміни.
Згідно з іншим варіантом реалізації даного винаходу молекула нуклеїнової кислоти кодує варіабельну область гуманізованого антитіла батьківського антитіла 12Н3 миші. Варіабельну область вибирають із варіабельних областей антитіла 12Н3 МІТ1МНІ; 12Н3 М1МН2; 123 МІ1МНЗ; 12Н3 МІ2УНІ; 12Н3 МІ2УН2; або 12Н3 МІ2УНЗ. Амінокислотні послідовності типових варіабельних областей представлені в ЗЕО ІЮ МО: 67, 68, 69, 70 і 71.
Згідно з іншим варіантом реалізації в даному винаході запропонована молекула нуклеїнової кислоти, яка кодує амінокислотну послідовність варіабельної області важкого ланцюга гуманізованого антитіла 12Н3, представлену в ЗЕО ІЮО МО: 69, 70 і 71. Згідно з іншим варіантом реалізації в даному винаході запропонована молекула нуклеїнової кислоти, яка кодує амінокислотну послідовність варіабельної області легкого ланцюга гуманізованого антитіла 12НЗ, представлену в 5ЕО ІО МО: 67 і 68.
Згідно з іншим варіантом реалізації даного винаходу молекула нуклеїнової кислоти кодує варіабельну область гуманізованого антитіла батьківського антитіла миші 20Е5. Типові варіабельні області являють собою варіабельні області антитіла 20Е5 МІ'1МНІ; 20Е5 МІ'1МН2; 20Е5 МІТМНУЗ; 20Е5 МІ2МНІ; 20Е5 МІ2МН2г; і 20Е МІ2МНУЗ. Амінокислотні послідовності 60 типових варіабельних областей представлені в ЗЕО ІЮО МО: 62, 63, 64, 65 і 66.
Згідно з іншим варіантом реалізації в даному винаході запропонована молекула нуклеїнової кислоти, яка кодує амінокислотну послідовність варіабельну область важкого ланцюга гуманізованого антитіла 20Е5, представлену в ЗЕО ІЮО МО: 64, 65 і 66. Згідно з іншим варіантом реалізації в даному винаході запропонована молекула нуклеїнової кислоти, яка кодує амінокислотну послідовність варіабельну область легкого ланцюга гуманізованого антитіла 20Е5, представлену в ЗЕО ІЮ МО: 62 або 63.
У даному винаході також запропонована молекула нуклеїнової кислоти, яка кодує важкий або легкий ланцюг антитіла або варіабельну область важкого або легкого ланцюга гуманізованого антитіла, що містять гуманізовану варіабельну область, яка обрана з гуманізованих варіабельних областей антитіл 12Н3 МІ'1МНІ; 12Н3 МІ1МН2; 12Н3 МІ 1МНЗ; 12Н3 МІ2УНІ; 12Н3 МІ2УН2г; 12Н3 МІ2УНЗ; 2065 МІ1МНІ; 20Е5 МІТМН2г; 20Е5 МІЛУНЗ; 20Е5 МІ2МНІ1; 20Е5 МІ2МН2г; або 20Е МІ2МНЗ (як позначено в попередньому абзаці і у прикладах).
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу молекула нуклеїнової кислоти, яка кодує важкі або легкі ланцюги гуманізованого антитіла або варіабельні області важкого або легкого ланцюгів гуманізованого антитіла, являє собою молекулу нуклеїнової кислоти, яка кодує легкий ланцюг гуманізованого антитіла 12Н3 згідно БЕО ІЮО МО: 90 (за винятком М-термінальної сигнальної послідовності "УРМОМЕМРАОГІ СІ І ЦІ УМЕРОАКС") або гуманізований важкий ланцюг гуманізованого антитіла 12Н3 згідно 5ЕО ІЮО МО: 87 (за винятком сигнальної послідовності "МЕГ СІ ЗУ АП Камо".
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу молекула нуклеїнової кислоти, яка кодує важкий або легкий ланцюг гуманізованого антитіла або варіабельну область важкого або легкого ланцюга гуманізованого антитіла, являє собою молекулу нуклеїнової кислоти, яка кодує легкий ланцюг гуманізованого антитіла 12Н3 згідно БЕО ІЮО МО: 90 (за винятком М-термінальної сигнальної послідовності "УМОМЕМРАОГІ СІ І ЦІ УМЕРОАКС") або гуманізований важкий ланцюг 12НЗ згідно ЗЕО ІЮО МО: 88 (за винятком сигнальної послідовності "МЕС ЗУМІЄ АПКОМОС.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу молекула нуклеїнової кислоти, яка кодує важкий або легкий ланцюг гуманізованого антитіла або варіабельну область легкого ланцюга або важкого ланцюга гуманізованого антитіла, являє собою молекулу нуклеїнової
Зо кислоти, яка кодує легкий ланцюг гуманізованого антитіла 12Н3 згідно 5ЕО ІЮО МО: 90 (за винятком М-термінальної сигнальної послідовності "МОМеЕМРАОГ І СІ ГІ УМЕРСАКС") або важкий ланцюг гуманізованого антитіла 12Н3 згідно 5ЕО ІЮО МО: 89 (за винятком сигнальної послідовності "МЕ СІ ЗУМІЄ АП КОМОС.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу молекула нуклеїнової кислоти, яка кодує важкі або легкі ланцюги гуманізованого антитіла або варіабельну область важкого або легкого ланцюга гуманізованого антитіла, являє собою молекулу нуклеїнової кислоти, яка кодує легкий ланцюг гуманізованого антитіла 12Н3 згідно БЕО ІЮО МО: 91 (за винятком М-термінальної сигнальної послідовності "МОМЕМУРАОГ І СІ І І М/ЕРОАКС") або важкий ланцюг гуманізованого антитіла 12Н3 згідно Б5ЕО ОО МО: 87 (за винятком сигнальної послідовності "МЕГ СІ ЗУ АП Камо".
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу молекула нуклеїнової кислоти, яка кодує важкий або легкий ланцюг гуманізованого антитіла або варіабельну область важкого або легкого ланцюга гуманізованого антитіла, являє собою молекулу нуклеїнової кислоти, яка кодує легкий ланцюг гуманізованого антитіла 12НЗ згідно 5ЕО ІЮ МО: 91 (за винятком М-термінальної сигнальної послідовності "МОМЕМУРАОГ І СІ І І М/ЕРОАКС") або важкий ланцюг гуманізованого антитіла 12Н3 згідно Б5ЕО ОО МО: 88 (за винятком сигнальної послідовності "МЕГ СІ ЗУ АП Камо".
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу молекула нуклеїнової кислоти, яка кодує важкий або легкий ланцюг гуманізованого антитіла або варіабельну область важкого або легкого ланцюга гуманізованого антитіла, являє собою молекулу нуклеїнової кислоти, яка кодує легкий ланцюг гуманізованого антитіла 12Н3 згідно БЕО ІЮО МО: 91 (за винятком М-термінальної сигнальної послідовності "МОМЕМУРАОГ І СІ І І М/ЕРОАКС") або важкий ланцюг гуманізованого антитіла 12Н3 згідно Б5ЕО ОО МО: 89 (за винятком сигнальної послідовності "МЕГ СІ ЗУ АП Камо".
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу молекула нуклеїнової кислоти, яка кодує важкий або легкий ланцюг гуманізованого антитіла або варіабельну область важкого або легкого ланцюга гуманізованого антитіла, являє собою молекулу нуклеїнової кислоти, яка кодує легкий ланцюг гуманізованого антитіла 20Е5 згідно ЗЕО ІЮО МО: 85 (за винятком М-термінальної сигнальної послідовності "МШЕМЗОМЕМЕГ І. 5МТАСМНОЬ") або важкий ланцюг гуманізованого антитіла 20Е5 згідно ЗЕО ОО МО: 82 (за винятком сигнальної послідовності "МЕУЗОаМУЕМЕ І ЗУТАаМУН.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу молекула нуклеїнової кислоти, яка кодує важкий або легкий ланцюг гуманізованого антитіла або варіабельну область важкого або легкого ланцюга гуманізованого антитіла, являє собою молекулу нуклеїнової кислоти, яка кодує легкий ланцюг гуманізованого антитіла 20Е5 згідно ЗЕО ІЮО МО: 85 (за винятком М-термінальної сигнальної послідовності "МШЕМЗОМЕМЕГ І. 5МТАСМНОЬ") або важкий ланцюг гуманізованого антитіла 20Е5 згідно ЗЕО ОО МО: 83 (за винятком сигнальної послідовності "МЕУЗОаМУЕМЕ І ЗУТАаМУН.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу молекула нуклеїнової кислоти, яка кодує важкий або легкий ланцюг гуманізованого антитіла або варіабельну область важкого або легкого ланцюга гуманізованого антитіла, являє собою молекулу нуклеїнової кислоти, яка кодує легкий ланцюг гуманізованого антитіла 20Е5 згідно ЗЕО ІЮО МО: 85 (за винятком М-термінальної сигнальної послідовності "МШЕМЗОМЕМЕГ І. 5МТАСМНОЬ") або важкий ланцюг гуманізованого антитіла 20Е5 згідно 5ЕО ОО МО: 84 (за винятком сигнальної послідовності "МЕУЗОаМУЕМЕ І ЗУТАаМУН.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу молекула нуклеїнової кислоти, яка кодує важкий або легкий ланцюг гуманізованого антитіла або варіабельну область важкого або легкого ланцюга гуманізованого антитіла, являє собою молекулу нуклеїнової кислоти, яка кодує легкий ланцюг гуманізованого антитіла 20Е5 згідно ЗЕО ІЮО МО: 86 (за винятком М-термінальної сигнальної послідовності "ШМЕМЗОМЕМЕГ І. 5МТАСМНОЗ") або важкий ланцюг гуманізованого антитіла 20Е5 згідно 5ЕО ОО МО: 82 (за винятком сигнальної послідовності "МЕУЗОаМУЕМЕ І ЗУТАаМУН.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу молекула нуклеїнової кислоти, яка кодує важкий або легкий ланцюг гуманізованого антитіла або варіабельну область важкого або легкого ланцюга гуманізованого антитіла, являє собою молекулу нуклеїнової кислоти, яка кодує легкий ланцюг гуманізованого антитіла 20Е5 згідно ЗЕО ІЮО МО: 86 (за винятком М-термінальної сигнальної послідовності "МШМЕМЗОМЕМЕІ 5МТАСМН5Ь") або важкий ланцюг гуманізованого антитіла 20Е5 згідно 5ЕО ОО МО: 83 (за винятком сигнальної послідовності
Зо "МЕУЗОаМУЕМЕ І ЗУТАаМУН.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу молекула нуклеїнової кислоти, яка кодує гуманізовані важкий або легкий ланцюг або варіабельну область важкого або легкого ланцюга гуманізованого антитіла, являє собою молекулу нуклеїнової кислоти, яка кодує легкий ланцюг гуманізованого антитіла 20Е5 згідно 5ЕБО ІЮ МО: 86 (за винятком М-термінальної сигнальної послідовності "МЕУМУЗОМЕМЕГ І. ЗМТАСМНЗ") або важкий ланцюг гуманізованого антитіла 20Е5 згідно 5ЕО ОО МО: 84 (за винятком сигнальної послідовності "МЕУЗОаМУЕМЕ І ЗУТАаМУН.
Молекули нуклеїнової кислоти, які кодують амінокислотні послідовності, представлені в 5»Е0
ІО МО: 62-71 і/або 5ЕО ІЮ МО: 82-91, являють собою молекули нуклеїнової кислоти, що мають послідовність, представлену в ЗЕО ІЮ МО: 72-81.
Послідовність нуклеїнової кислоти, представлена в 5ЕО ІЮО МО: 72, кодує амінокислотну послідовність, представлену в ЗЕО ІЮО МО: 82. Нуклеїнові кислоти 58 - 414 з 5ЕО ІЮ МО: 72 кодують амінокислотну послідовність, представлену в ЗЕО ІЮ МО: 64.
Послідовність нуклеїнової кислоти, представлена в 5ЕО ІЮО МО: 73, кодує амінокислотну послідовність, представлену в 5ЕО ІЮ МО: 83. Нуклеїнові кислоти 58 - 414 з 5ЕО ІЮ МО: 73 кодують амінокислотну послідовність, представлену в ЗЕО ІЮ МО: 65.
Послідовність нуклеїнової кислоти, представлена в 5ЕО ІЮО МО: 74, кодує амінокислотну послідовність, представлену в 5ЕО ІЮО МО: 84. Нуклеїнові кислоти 58 - 414 з 5ЕО ІЮ МО: 74 кодують амінокислотну послідовність, представлену в ЗЕО ІЮ МО: 66.
Послідовність нуклеїнової кислоти, представлена в 5ЕО ІЮО МО: 75, кодує амінокислотну послідовність, представлену в 5ЕО ІЮО МО: 85. Нуклеїнові кислоти 58 - 381 з 5ЕО ІЮ МО: 75 кодують амінокислотну послідовність, представлену в ЗЕО ІЮ МО: 62.
Послідовність нуклеїнової кислоти, представлена в 5ЕО ІЮО МО: 76, кодує амінокислотну послідовність, представлену в 5ЕО ІЮО МО: 86. Нуклеїнові кислоти 58 - 381 з 5ЕО ІЮ МО: 76 кодують амінокислотну послідовність, представлену в ЗЕО ІЮ МО: 63.
Послідовність нуклеїнової кислоти, представлена в 5ЕО ІЮО МО: 77, кодує амінокислотну послідовність, представлену в ЗЕО ІЮО МО: 87. Нуклеїнові кислоти 58 - 420 з 5ЕО ІЮ МО: 77 кодують амінокислотну послідовність, представлену в ЗЕО ІЮ МО: 69.
Послідовність нуклеїнової кислоти, представлена в 5ЕО ІЮО МО: 78, кодує амінокислотну послідовність, представлену в 5ЕО ІЮО МО: 88. Нуклеїнові кислоти 58 - 420 з 5ЕО ІЮ МО: 78 кодують амінокислотну послідовність, представлену в ЗЕО ІЮ МО: 70.
Послідовність нуклеїнової кислоти, представлена в 5ЕО ІЮО МО: 79, кодує амінокислотну послідовність, представлену в 5ЕО ІЮО МО: 89. Нуклеїнові кислоти 58 - 420 з 5ЕО ІЮ МО: 79 кодують амінокислотну послідовність, представлену в ЗЕО ІЮ МО: 71.
Послідовність нуклеїнової кислоти, представлена в 5ЕО ІЮО МО: 80, кодує амінокислотну послідовність, представлену в 5ЕО ІЮО МО: 90. Нуклеїнові кислоти 67 - 390 з 5ЕО ІЮ МО: 80 кодують амінокислотну послідовність, представлену в ЗЕО ІЮ МО: 67.
Послідовність нуклеїнової кислоти, представлена в 5ЕО ІЮО МО: 81, кодує амінокислотну послідовність, представлену в ЗЕО ІЮ МО: 91. Нуклеїнові кислоти 67 - 390 з 5ЕО ІЮ МО: 81 кодують амінокислотну послідовність, представлену в ЗЕО ІЮ МО: 68.
У деяких варіантах реалізації даного винаходу запропонована молекула нуклеїнової кислоти, що містить послідовність нуклеїнової кислоти, представлену в ЗЕО ІЮ МО: 72, 5ЕО ІЮ
МО: 73, 5ЕО І МО: 74, 5ЕО ІО МО: 75, 5ЕО І МО: 76, 5ЕО ІЮ МО: 77, 5ЕО 10 МО: 78, 5ЕО І
МО: 79, ЗЕО ІЮ МО: 80 і/або 5ЕО ІЮ МО: 81. Згідно із переважним варіантом реалізації даного винаходу молекула нуклеїнової кислоти містить послідовність без послідовності нуклеїнової кислоти, що кодує сигнальний пептид. Це пояснюється тим, що можна застосовувати численну кількість різних сигнальних пептидів. Таким чином, у даному винаході запропонована молекула нуклеїнової кислоти, що містить послідовність нуклеїнової кислоти, представлену в ЗЕО ІЮ МО: 72, З5БЕО ІО МО: 73, 5ЕО І МО: 74, 5ЕО ІО МО: 75, 5ЕО ІЮ МО: 76, 5ЕО ІЮ МО: 77, 5ЕО І МО: 78, ЗЕО ІЮ МО: 79, 5ЕО ІЮО МО: 80 і/або 5ЕО ІЮО МО: 81, у якій послідовність нуклеїнової кислоти, що кодує сигнальний пептид, відсутня або замінена послідовністю нуклеїнової кислоти, що кодує різні сигнальні пептиди, що підходять для направленої екскреції кодуючого поліпептиду.
Згідно з деякими варіантами реалізації в даному винаході запропонована молекула нуклеїнової кислоти, що містить залишки нуклеїнової кислоти 58 - 414 з БЕО ІЮ МО: 72; залишки нуклеїнової кислоти 58 - 414 з БЕО ІЮ МО: 73; залишки нуклеїнової кислоти 58 - 414 з БЕО ІЮ МО: 74;
Ко) залишки нуклеїнової кислоти 58 - 381 з БЕО ІЮ МО: 75; залишки нуклеїнової кислоти 58 - 381 з БЕО ІЮ МО: 76; залишки нуклеїнової кислоти 58 - 420 з БЕО ІЮ МО: 77; залишки нуклеїнової кислоти 58 - 420 з БЕО ІЮ МО: 78; залишки нуклеїнової кислоти 58 - 420 з БЕО ІЮ МО: 79; залишки нуклеїнової кислоти 67 - 390 з БЕО ІЮ МО: 80; або залишки нуклеїнової кислоти 67 - 390 з БЕО ІЮ МО: 81
Згідно з деякими варіантами реалізації в даному винаході запропонована молекула нуклеїнової кислоти, що кодує варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 101-133 або 146-148.
У даному винаході також запропонований носій або вектор для доставки генів, що містить нуклеїнову кислоту згідно із даним винаходом.
Також запропонована виділена або рекомбінантна клітина або культура клітин іп міго, що містить нуклеїнову кислоту або вектор згідно із даним винаходом. Клітина переважно являє собою клітину-господаря, як визначено в даній заявці. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу клітина являє собою клітину, широко використовувану для одержання антитіл, таку як клітина СНО, клітина СНО-КІ5М (І опа Віоіодісв, УМаїКегзмШе, МО), клітина СНО-КІ (АТС СВІ -61), клітина М5О (Європейська колекція клітинних культур, Еигореап СоПесіоп ої
Се Сийигез (ЕСАСС), Заїїєригу, ММШп5зіе, ШОК, ЕСАСС М. 85110503), клітина 5Р2/0 (Американська колекція типових культур, Атегісап Туре Сийиге СоПесіоп (АТСС), Мапаззав,
МА, СВІ --1581), клітина НЕК 293-Е, клітина РЕК.Сб, клітина БО (АТСС СКІ -1646), клітина Ад653 (АТС СВІ -1580) або гібридома. Згідно з іншим варіантом реалізації даного винаходу клітина являє собою клітину комахи.
У даному винаході також запропоновано спосіб одержання зв'язуючої молекули, який відрізняється тим, що в його результаті одержують зв'язуючу молекулу згідно з даною формулою винаходу або антитіло згідно з даною формулою винаходу. Отримане антитіло виділяють із клітинної культури, супернатанту/середовища клітинної культури або їх комбінації.
Виділене антитіло очищують і впаковують у контейнер, переважно контейнер для зберігання або транспортування.
У даному винаході також запропонована зв'язуюча молекула або антитіло згідно із даним винаходом для застосування при лікуванні індивідуума, який потребує підсилення імунної відповіді.
Також запропонована зв'язуюча молекула або антитіло згідно із даним винаходом для застосування в запобіганні або лікуванні раку в індивідуума, який потребує такого запобігання або лікування.
Також запропонована зв'язуюча молекула або антитіло згідно із даним винаходом для застосування при лікуванні індивідуума, що страждає від або підданого ризику розвитку хронічної вірусної і/або внутрішньоклітинної бактеріальної інфекції.
У даному винаході також запропонована фармацевтична композиція, що містить зв'язуючу молекулу або антитіло згідно із даним винаходом і фармацевтично прийнятний носій.
У даному винаході запропоновані виділені зв'язуючі молекули, які зв'язуються з СО134 людини, у тому числі антитіла проти СО134, антиген-зв'язуючі фрагменти антитіл проти СО134 і похідні антитіл проти СО134. Зв'язуючі молекули характеризуються щонайменше одним з наступних функціональних властивостей: (а) зв'язуються з СО134 людини з Ка, що становить 1 х 105 М або менше, і (Б) не запобігають зв'язуванню рецептора СО134 людини (ОХ40) з лігандом ОХ40 (ОХ401)); (с) мають агоністичну активність щодо СО134 людини на Т-ефекторних клітинах і/або антагоністичну активність щодо СО134 людини на Т-регуляторних клітинах; (4) не зв'язуються з рецептором СО40 у концентрації більше 500 нМ; (є) не зв'язуються з рецептором
С0137 у концентраціях більше 500 нМ; (7) не зв'язуються з рецептором СО271 у концентраціях більше 500 нМ; (9) здатні підсилювати продукцію ІЛ-2 виділеними Т-клітинами людини; (й) здатні підсилювати імунну відповідь; (ї) здатні інгібувати ріст пухлинних клітин; і () мають терапевтичний ефект відносно раку. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу зв'язуюча молекула зв'язується з СЮО134 людини з Ка, що становить 1 х 10-7 М або менше, або 1 х 108 М або менше, або 5 х 1 х 109 М або менше.
Антитіла і інші зв'язуючі молекули згідно із даним винаходом можуть бути отримані за допомогою загальноприйнятих методик і потім піддані скринінгу для виявлення і одержання зв'язуючих молекул, які не запобігають зв'язуванню ОХ40Ї з СО134. Наприклад, можуть бути обрані зв'язуючі молекули, які зв'язуються з СО134 навіть у випадку, коли СО134 піддають
Зо впливу насичуючій концентрації ОХ401І.
У деяких варіантах реалізації в даному винаході запропоновано антитіло миші, людини або гуманізоване антитіло, яке зв'язується з СО134 людини. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло миші, людини або гуманізоване антитіло являє собою моноклональне антитіло, яке специфічно зв'язується з СО134 людини з Ка, що становить 100 нМ або менше або 10 нМ або менше, і/або має агоністичну активність щодо СО134 людини, яка призводить до стимуляції Т-ефекторних клітин і/або супресії Т-регуляторних клітин. Типове зазначене антитіло являє собою клон моноклонального антитіла 12Н3. Амінокислотна послідовність повної варіабельної області важкого ланцюга і амінокислотні послідовності трьох СОМ варіабельної області важкого ланцюга (МН) клону антитіла 12Н3 представлені в 5ЕО ІЮ МО: 12 ї 14-16, відповідно. Амінокислотна послідовність повної варіабельної області легкого ланцюга і амінокислотні послідовності трьох СОК варіабельної області легкого ланцюга (МІ) клону антитіла 12Н3 представлені в 5ЗЕО ІЮО МО: 13 ї 17-19, відповідно. Інше типове антитіло являє собою клон моноклонального антитіла 20Е5. Амінокислотна послідовність повної варіабельної області важкого ланцюга і амінокислотні послідовності трьох СОК варіабельної області важкого ланцюга (МН) клону антитіла 20Е5 представлені в 5ЕО ІЮ МО: 4 і 6-8, відповідно. Амінокислотна послідовність повної варіабельної області легкого ланцюга і амінокислотні послідовності трьох
СОК варіабельної області легкого ланцюга (МІ) клону антитіла 20Е5 представлені в 5ЕО ІЮ МО: 5 і 9-11, відповідно. Інші типові антитіла являють собою гуманізовані антитіла 12Н3 М1МНІ, 12Н3 МІ1МН2г, 12Н3 МІ1МНЗ, 12Н3 МІ2УНІ, 12Н3 МІ2МН2, 12Н3 МІ2УНЗ і гуманізовані антитіла 20Е5 МІ1ТМНІ, 20Е5 МІ1МН2, 20Е5 МІ1МНЗ, 20Е5 МІ2МНІ, 20Е5 МІ 2УН2, 20Е5 МІ 2УНЗ, а також оптимізовані варіанти даних антитіл, що містять варіабельні області важкого ланцюга, описані в прикладі 14. Дані антитіла містять послідовності варіабельної області ЗЕО ІЮ МО: 67 (12Н3 МІ), 5ЕО ІО МО: 68 (12Н3 МІ 2), ЗЕО ІО МО: 69 (12Н3 УНІ), 5ЕО
ІО МО: 70 (12Н3 МН2), 5ЕО ІО МО: 71 (12Н3 МНЗ), 5ЕО ІЮО МО: 62 (20Е5 МІ), 5ЕО І МО: 63 (20Е5 МІ2), 5ЕО І МО: 64 (20Е5 МНІ), 5ЕО І МО: 65 (20Е5 МН2), 5ЕО І МО: 66 (20Е5 УНЗ) і варіабельні області, представлені в таблицях 6 і 9, що мають амінокислотну послідовність, представлену в ЗЕО ІЮ МО: 101-133 ї 146-151.
У даному винаході також запропоновані антитіла, що містять гуманізовану варіабельну область, яка обрана з гуманізованих варіабельних областей антитіл 12Н3 МІ!ТМНІ1; 60 12Н3 МІТМнНг; 12нНЗ МІ 1МНЗІ; 12Н3 МІ2МНІ; 12Н3 МІ2МН2г; 12Н3 МІ2УНЗ; 20Е5 МІТУНІ;
20Е5 МІТМН2; 20Е5 МІ 1МНІЗ; 20Е5 МІ 2УНІ; 20Е5 МІ2МН2; або 20Е МІ 2УНЗ (як зазначено в попередньому абзаці і у прикладах), або варіабельну область важкого ланцюга згідно ЗЕО ІЮ
МО: 101-133 і 146-151.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу гуманізоване антитіло являє собою гуманізоване антитіло 12Н3, що містить легкий ланцюг згідно 5ЕО ІЮ МО: 90 (за винятком М- термінальної сигнальної послідовності "ШОМАМРАСІ СО ЦІ МУМЕРОАКС") і важкий ланцюг згідно 5ЕО ІЮ МО: 87 (за винятком сигнальної послідовності "ШМЕСЇ ЗУМІЄ АПКОМОС.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу гуманізоване антитіло являє собою гуманізоване антитіло 12Н3, що містить легкий ланцюг згідно 5ЕО ІЮ МО: 90 (за винятком М- термінальної сигнальної послідовності "ШОМАМРАОГ СО ГІ МУЕРОАКС") і важкий ланцюг згідно 5ЕО ІЮ МО: 88 (за винятком сигнальної послідовності "МЕ СІ ЗУМЕСГ А КОМОС".
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу гуманізоване антитіло являє собою гуманізоване антитіло 12Н3, що містить легкий ланцюг згідно ЗЕО ІО МО: 90 (за винятком М- термінальної сигнальної послідовності "ШОМАМРАСІ СО ЦІ МУМЕРОАКС") і важкий ланцюг згідно 5ЕО ІЮ МО: 89 (за винятком сигнальної послідовності "МЕ СІ ЗУМЕСГ А КОМОС".
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу гуманізоване антитіло являє собою гуманізоване антитіло 12Н3, що містить легкий ланцюг згідно 5ЕО ІЮ МО: 91 (за винятком М- термінальної сигнальної послідовності "ШОМАМРАСІ СО ЦІ МУМЕРОАКС") і важкий ланцюг згідно 5ЕО ІЮ МО: 87 (за винятком сигнальної послідовності "ШМЕСЇ ЗУМІЄ АПКОМОС.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу гуманізоване антитіло являє собою гуманізоване антитіло 12Н3, що містить легкий ланцюг згідно 5ЕО ІЮ МО: 91 (за винятком М- термінальної сигнальної послідовності "ШОМАКМРАОСІ СІ СГ УУЕРОАКС") і важкий ланцюг згідно 5ЕО ІЮ МО: 88 (за винятком сигнальної послідовності "МЕ СІ ЗУМЕСГ А КОМОС".
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу гуманізоване антитіло являє собою гуманізоване антитіло 12Н3, що містить легкий ланцюг згідно ЗЕО ІО МО: 91 (за винятком М- термінальної сигнальної послідовності "ШОМАМРАСІ СО ЦІ МУМЕРОАКС") і важкий ланцюг згідно 5ЕО ІЮ МО: 89 (за винятком сигнальної послідовності "МЕ СІ ЗУМЕСГ А КОМОС".
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу гуманізоване антитіло являє собою гуманізоване антитіло 20Е5, що містить легкий ланцюг згідно 5ЕО ІЮО МО: 85 (за винятком М-
Зо термінальної сигнальної послідовності "МШЕМЗОМЕМЕГІ 5МТАСМУН5З") і важкий ланцюг згідно
ЗЕО ІЮО МО: 82 (за винятком сигнальної послідовності "МЕМ5ОМЕМЕ 5МТАСМНЗ".
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу гуманізоване антитіло являє собою гуманізоване антитіло 20Е5, що містить легкий ланцюг згідно 5ЕО ІЮО МО: 85 (за винятком М- термінальної сигнальної послідовності "ШЕМЗСОМЕМЕГ І ЗМТАСМН5Ь") і важкий ланцюг згідно
ЗЕО ІЮО МО: 83 (за винятком сигнальної послідовності "МЕУУ5ОМЕМЕС5МТАСМНБЗ".
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу гуманізоване антитіло являє собою гуманізоване антитіло 20Е5, що містить легкий ланцюг згідно ЗЕО ІЮ МО: 85 (за винятком М- термінальної сигнальної послідовності "МШЕУМУЗОМЕМЕГГ ЗМТАСМН5В") і важкий ланцюг згідно
ЗЕО ІЮО МО: 84 (за винятком сигнальної послідовності "МЕУУ5ОМЕМЕС5МТАСМНБЗ".
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу гуманізоване антитіло являє собою гуманізоване антитіло 20Е5, що містить легкий ланцюг згідно 5ЕО ІЮО МО: 86 (за винятком М- термінальної сигнальної послідовності "МШЕУМУЗОМЕМЕГГ ЗМТАСМН5В") і важкий ланцюг згідно
ЗЕО ІЮО МО: 82 (за винятком сигнальної послідовності "МШМЕМ5ОМЕМЕ 5МТАСМНЗ".
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу гуманізоване антитіло являє собою гуманізоване антитіло 20Е5, що містить легкий ланцюг згідно БЕО І МО: 86 (за винятком М- термінальної сигнальної послідовності "МШМЕУУЗОМЕМЕ ГІ 5МТАСМН5З") і важкий ланцюг згідно
ЗЕО ІЮО МО: 83 (за винятком сигнальної послідовності "МЕУУ5ОМЕМЕС5МТАСМНБЗ".
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу гуманізоване антитіло являє собою гуманізоване антитіло 20Е5, що містить легкий ланцюг згідно 5ЕО ІЮ МО: 86 (за винятком М- термінальної сигнальної послідовності "МШЕМЗОМЕМЕГІ 5МТАСМУН5З") і важкий ланцюг згідно
ЗЕО ІЮО МО: 84 (за винятком сигнальної послідовності "МЕУУ5ОМЕМЕС5МТАСМНБЗ".
Антитіла згідно із даним винаходом можуть містити одну або декілька з даних СОК або одну або декілька з даних СОР з 1, 2 або З амінокислотними замінами в кожній СОК. Заміни можуть бути "консервативними" замінами. Консервативні заміни, що забезпечують одержання функціонально аналогічних амінокислот, добре відомі в даній області техніки і описані, наприклад, у таблиці 1 УМО 2010/019702, яка включена в дану заявку за допомогою посилання.
Типові консервативні заміни представлені в таблиці 1. Амінокислоти позначені із застосуванням широко відомого трибуквеного коду. (516)
Таблиця 1
Ле 77777771 1 бешМа,МевАа, Ре, Ме: (СО
З врахуванням того, що клон 12НЗ ї клон 20Е5 зв'язуються з СО134 людини, послідовності
МН ї МІ. кожного з них можуть бути "змішані і сполучені" з іншими антитілами проти СО134 для одержання додаткових антитіл. Зв'язування таких "змішаних і сполучених" антитіл 3 СО134 людини можна вивчити із застосуванням аналізів зв'язування, відомих у даній області техніки, у тому числі аналізів, описаних у прикладах. В одному випадку, коли області МН і МІ. змішані і сполучені, послідовність УН, утворену в результаті конкретного спарювання МН//І, замінюють подібною в структурному відношенні послідовністю МН. Аналогічно, в іншому випадку послідовність МІ, утворену в результаті певного спарювання МН/Л., замінюють послідовністю
МІ, подібною в структурному відношенні.
Молекули, що містять тільки одну або дві області СОМ (у деяких випадках, навіть тільки одну СОК або її частину, особливо СОКЗ), здатні підтримувати антиген-зв'язуючу активність антитіла, з якого була отримана (були отримані) СОК. Див., наприклад, І ашпе еї аї. УВС 1997; 272: 30937-44; Моппеї єї аї. УВС 1999; 274:3789-96; Ом єї а. Майте Віоїесппоіоду 2007; 25: 921- 9; І адпег єї аІ. Маїште Віоїесппоіоду 2007; 25: 875-7; Неар вї а!ї. ) Сеп Міго! 2005; 86: 1791-1800;
Місаїзе еї аї. Ргоїєїп Зсієпсе 2004; 13: 1882-91; Майднап апа 5оїїа220 Сотбріпаюгта! Спетівігу в
Нідп Тпгопдприї Зстеепіпд 2001; 4:417-430; Ойціоспо Маїшге 1993; 362: 293-4; Ревві єї а). Маїшге 1993; 362: 367-9; Віапсні еї аї. У Мої! Віо! 1994; 236: 649-59; і Сао еї аї. У Віої Спет 1994; 269: 32389-93.
Відповідно, один варіант реалізації даного винаходу являє собою виділене антитіло проти
СО134 людини, яке містить: (а) варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 12; (5) варіабельну область легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 13.
Згідно з наступним варіантом реалізації даного винаходу запропонована виділена молекула, що зв'язує СО134, яка містить: (ах СОМКІ важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 14; і/або (Б) СОМК2 важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІО МО: 15; (або (с) СОКЗ важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 16.
Згідно з наступним варіантом реалізації даного винаходу запропонована виділена молекула,
Зо що зв'язує СО134, яка містить (а)Ж) СОКІ легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 17; або (5) СОМК2 легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 18; і/або (с) СОКЗ легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 19.
Відповідно, один варіант реалізації даного винаходу являє собою виділене антитіло проти
СО134 людини, яке містить: (а) варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 4; (5) варіабельну область легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО: 5.
Згідно з наступним варіантом реалізації даного винаходу запропонована виділена молекула, що зв'язує СО134, яка містить: (а) СОКІ важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ЕС І МО: 6; і/або (Б) СОК2 важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 7; і/або (с) СОКЗ важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 8.
Згідно з наступним варіантом реалізації даного винаходу запропонована виділена молекула, що зв'язує СО134, яка містить (а) СОКІ легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 9; і/або (5) СОК2 легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 10; і/або (с) СОКЗ легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 11.
Зважаючи на те, що клон 12Н3 і клон 20Е5 зв'язуються з СО134 людини і що антиген- зв'язуюча специфічність забезпечується в першу чергу областями СОКІ, СОК2 і СОМЗ, послідовності СОКІ, СОК2 і СОКЗ МН і послідовності СОКІ!, СОК2 ії СОКЗ МІ. можна "змішувати і сполучати" для створення додаткових антитіл проти СО134. Наприклад, СОК з різних антитіл проти СО134 можна змішувати і сполучати, хоча кожне антитіло буде, як правило, містити
СОКІ1, СОК2 ії СОКЗ МН і СОКІ1, СОК2 ї СОКЗ М. Зв'язування таких "змішаних і сполучених" антитіл з СЮО134 можна вивчити із застосуванням аналізів зв'язування, описаних вище або в прикладах (наприклад, аналізи ЕГІЗА, Віасоге). В одному випадку, коли змішують і сполучають послідовності СОК МН, послідовність СОКІ, СОК2 і/або СОКЗ з конкретної послідовності МН замінюють послідовністю (послідовностями) СОР, подібними в структурному відношенні.
Аналогічно, коли змішують і сполучають послідовності СОР. МІ, послідовність СОК1, СОМ і/або
СОКЗ з конкретної послідовності МІ, як правило, замінюють послідовністю (послідовностями)
СОР, подібними в структурному відношенні. Середньому фахівцеві в даній області техніки очевидно, що нові послідовності МН і МІ можуть бути створені в результаті заміни однієї або декількох послідовностей областей СОК МН і/або Мі. структурно подібними послідовностями з послідовностей СОК, розкритих у даній заявці.
Клас (наприклад, Ідс, ІМ, ІЧЕ, ІдА або Ідбо) і підклас (наприклад, дос, Ідса2, доз або Ідсаі) антитіл проти СЮО134 можна визначити будь-яким підходящим способом, таким як ЕГІЗА або вестерн-блотинг, а також іншими методиками. В якості альтернативи, клас і підклас можна визначити шляхом секвенування всіх або частини константних доменів важкого і/або легкого ланцюгів антитіла, порівняння їх амінокислотних послідовностей з відомими амінокислотними послідовностями різних класів і підкласів імуноглобулінів і визначення класу і підкласу антитіла.
Антитіла проти СО134 можуть являти собою молекулу дос, І9М, ІЧЗ4Е, ІдА або дО. Наприклад, антитіла проти СО134 можуть являти собою |до, який відноситься до підкласу Ідс1, Ідс2, ОЗ або Ідс4. Таким чином, в іншому аспекті даного винаходу запропоновано спосіб зміни класу або підкласу антитіла проти СО134 на інший клас або підклас.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло проти СО134 відноситься до ізотипу ІД04. Зв'язуючі молекули згідно з варіантом реалізації даного винаходу включають моноклональні антитіла, їх фрагменти, пептиди і інші хімічні угрупування. Моноклональні антитіла можуть бути отримані загальноприйнятими способами імунізації ссавця з наступним виділенням із плазми В-клітин, продукуючих моноклональні антитіла, що представляють інтерес, і злиття із клітиною мієломи.
Згідно з різними варіантами реалізації даного винаходу замість фактичного антитіла група зв'язування може являти собою міметик антитіла (наприклад, на основі кістяка, відмінного від кістяка антитіла), аптамер РНК, малу молекулу або СоуХ-Воду.
Слід приймати до уваги, що міметики антитіл (наприклад, структури на основі кістяка, відмінного від кістяка антитіла, які характеризуються високим ступенем стабільності і при цьому забезпечують варіабельність у певних положеннях) можна застосовувати для створення молекулярної бібліотеки, з якої можна одержати групи зв'язування. Фахівець в області біохімії добре знайомий з багатьма такими молекулами. Такі молекули можна застосовувати в якості групи зв'язування в засобі згідно із даним винаходом.
Типові міметики антитіл обговорюються в публікації ЗКегїтга еї аї. (2007, Си. Оріп. Віоїесп., 18: 295-304) і включають: афітіла (також називані тринектинами; Мудгеп еї а!., 2008, РЕВЗ5 У, 275, 2668-2676); СТО (С-їуре Ієсііп-їКе аотаїп, лектинові домени С-типу, також називані тетранектинами; Тпедегзеп еї а!., Іппомайоп5 Рпагтас. Тесппої. (2006), 27-30); аднектини (також називані монотілами; Коїде еї аї., Меп. Мої. Віої!., 352 (2007), 95-109); антикаліни (Зспіепибег еї а. Огид Оівсомегу Тодау (2005), 10, 23-33); ОАВРІіп (дезідпейд апКугіп гереаї ргоївіпв5, бо сконструйовані білки на основі анкіринових повторів, анкірини; Віпл еї аї., Маї. Віоїеснпої. (2004),
22, 575-582); авімери (5іїмегтап еї аї., Маї. Віотесппої. (2005), 23, 1556-1561); мікротіла (Ктгаизе еї аІ., РЕВ5 У), (2007), 274, 86-95); пептидні аптамери (Вогопоцізх еї аї., Ехрегі. Оріп. ВіоїЇ. Тег. (2005), 5, 783-797); домени Кунітца (АкКиссі еї аї., у). Рпагтасої. Ехр. Тпег. (2006) 318, 803-809); афіліни (Неу єї а!., Тгепав. Віоїтесппої. (2005), 23, 514-522).
Відповідно, переважно, що міметик антитіла вибирають із групи, що складається з або, що включає афітіла, тетранектини (СТІ), аднектини (монотіла), антикаліни, САКРІПпП (анкірини), авімери, імаб, мікротіла, пептидні аптамери, домени Кунітца, аптамери і афіліни.
Під "малою молекулою" розуміють низькомолекулярну органічну сполуку з молекулярною масою 900 Дальтон або менше. Хоча більші біополімери, такі як нуклеїнові кислоти, білки і полісахариди (такі як крохмаль або целюлоза) не відносяться до "малих молекул" мономери, що входять до їхнього складу (рибо- або дезоксирибонуклеотиди, амінокислоти і моносахариди, відповідно) і олігомери (тобто короткі полімери, такі як динуклеотиди, пептиди, такі як антиоксидант глутатіон, і дисахариди, такі як сахароза) включені в даний термін. Одержання малих молекул описане в публікаціях Мауез 8 УМпйсотре, 2005, Адм. Огид Оеїїм. Кем. 57:1742-78 і Коої-Вегпвівїп 2 ОПШоп, 2008, Сит. РНнагт. Юев. 14:55-62.
Соух-Воду одержують шляхом ковалентного приєднання фармакофору через лінкер до сайту зв'язування спеціально розробленого антитіла, що забезпечує ефективне перепрограмування антитіла (Тгудег еї аїЇ, 2007, Віоога. Мей. Спет. Гей, 17:501-6).
Результатом даного процесу є новий клас хімічних угрупувань, який утворюється, коли кожен компонент вносить бажані властивості в інтактне СоуХ-Воду, - зокрема, отримане угрупування має біологічні дії пептиду і збільшений період напівжиття антитіла.
Антитіла людини можна одержати декількома різними способами, у тому числі із застосуванням експресійних бібліотек імуноглобуліну людини (бігаїадепе Согр., а ЧоїЇа,
Саїїйогпіа; Сатбгідде Апіїбоду Тесппоіоду ЦЯ. Гопдоп, Епаіїапа) для одержання фрагментів антитіла людини (МН, МІ, Ем, Ба, Рар або (Баб)2), і із застосуванням даних фрагментів для конструювання повного антитіла людини шляхом злиття з даними фрагментами відповідної частини із застосуванням методик, подібних методик одержання химерного антитіла.
Наприклад, антитіла людини можна виділити з бібліотек фагового дисплея, експресуючих варіабельні області важкого і легкого ланцюга антитіла у вигляді злитих білків з білком оболонки
Зо бактеріофага ріХ, як описано в публікації ЗНі еї а! (2010) 9. Мої. Вісі. 397:385-96 і міжнародній публікації РСТ Мо УУО09/085462). Антитіла людини також можна одержати в трансгенних мишах з геномом імуноглобуліну людини. Такі миші доступні, наприклад, від Ардепіх, Іпс., Егетопі,
Ведепегоп (пНир:// млум/ тгедепегоп сот), Нагроиг Апііроадіє5 (пНру/ мм Ппагбоигапіїродієб5 сот), Ореп Мопосіопаї Тесппоіоду, Іпс. (ОМ) (пир// м/мли оптіїпс пе), Кутар (пер:// млмум/ Кутар сот), Тгіаппі (пЕр:// ммлигіаппі сот) і
Абіехіз (пир: // м/млуи абіехіб5.сот). Крім приєднання Еу-областей важкого і легкого ланцюгів для утворення одноланцюгового пептиду, можна сконструювати Раб і експресувати його подібними способами (М.). Емапз еї аї. У Ітттипої Мей 1995; 184: 123-138).
Антитіла ЮОеІттипілед "М являють собою антитіла, у яких потенційно імуногенні епітопи Т- клітин були вилучені, як описано в міжнародній заявці на патент РСТ/5В98/01473. Внаслідок цього, очікується, що імуногенність даних антитіл у людині буде усунута або по суті зменшена при застосуванні іп мімо. Зв'язуючі молекули на основі імуноглобуліну згідно із даним винаходом можуть містити імуногенні епітопи Т-клітин (у випадку наявності), які видаляють за допомогою таких способів.
Усі з повністю або частково людських антитіл, описаних вище, є менш імуногенними, ніж повністю мишачі антитіла або антитіла, отримані не від людини, у вигляді фрагментів і одноланцюгових антитіл. Внаслідок цього всі дані молекули (або їхні похідні) менш імовірно викличуть імунну або алергійну відповідь. Отже, такі молекули є більш підходящими для введення людині іп мімо, ніж антитіла, що повністю відмінні від антитіл людини, особливо, коли
БО необхідне періодичне або тривале введення.
Біспецифічні антитіла можна застосовувати в якості засобів, що утворюють поперечні зв'язки між СО134 людини однієї і тієї ж цільової клітини людини або між СО134 людини на двох різних цільових клітинах людини. Такі біспецифічні антитіла мають специфічність до кожного із двох різних епітопів на СО134 людини. Дані антитіла і спосіб їх одержання описані в патенті
США Мо 5,534,254 (Стеаййме Віотоїесціев, Іпс.). Різні варіанти реалізації біспецифічних антитіл, описані в патентах, включають об'єднання одноланцюгового Ем з пептидними лінкерами, у тому числі Зег-Сув, (СПу)-Сув, (Нів)в-(Сіу)ї-Сух, хелатуючими засобами і хімічними або дисульфідними зв'язуючими речовинами, у тому числі бісмалеїмідогексаном Кі бісмалеімідокапроїлом.
Області МІ. і/або МН антитіл згідно із даним винаходом можна сконструювати в інші варіанти реалізації біспецифічних повнорозмірних антитіл, де кожне плече антитіла зв'язується з окремим антигеном або епітопом. Такі біспецифічні антитіла можуть бути отримані, наприклад, шляхом модулювання СНЗ-взаємодій між важкими ланцюгами двох антитіл з утворенням біспецифічних антитіл із застосуванням методик, таких як методики, що описані в патенті США
Мо 7,695,936; міжнародній публікації патенту Ме М/О2004/111233; публікації патенту США Мо 052010/0015133; публікації патенту США Ме 052007/0287170; міжнародній публікації патенту Мо
УО2008/119353; публікації патенту США Ме И52009/0182127; публікації патенту США Мо 052010/0286374; публікації патенту США Ме 052011/0123532; міжнародній публікації патенту Мо
УМО2011/131746; міжнародній публікації патенту Мо УМО2011/143545; або публікації патенту США
Мо Ш5З2012/0149876. Додаткові біспецифічні структури, у які можуть бути вбудовані області МІ. іМабо МН антитіл згідно із даним винаходом, являють собою, наприклад, імуноглобуліни з подвійним варіабельним доменом (міжнародна публікація патенту Ме УМО2009/134776) або структури, які містять різні домени димеризації для сполуки двох плечей антитіла з різною специфічністю, такі як лейцинова блискавка або домени димеризації колагену (міжнародна публікація патенту Мо М/О2012/022811, патент США Мо 5,932,448; патент США Мо 6,833,441).
Молекули, відмінні від антитіл, можна виділити або піддати скринінгу з бібліотеки сполук загальноприйнятими способами. Автоматизована система для створення і скринінга бібліотеки сполук описана в патентах США МоМо 5,901,069 і 5,463,564. Більш сфокусований підхід включає тривимірне моделювання сайту зв'язування, а потім одержання сімейства молекул, відповідних до моделі. Дані молекули потім піддають скринінгу для пошуку молекул з оптимальними характеристиками зв'язування.
Інший підхід полягає в створенні бібліотек рекомбінантних пептидів з наступним скринінгом даних бібліотек для виявлення пептидів, які зв'язуються з епітопом СО134 людини, що представляють інтерес. Див., наприклад, патент США Мо 5,723,322. Даний епітоп є таким самим, як епітоп, з яким зв'язуються моноклональні антитіла, що описані в прикладах нижче. Молекули можуть бути отримані або виділені порівняно легко відповідно до методик, добре відомих у даній області техніки, якщо такий епітоп відомий.
У наступному варіанті реалізації даного винаходу запропоновані похідні будь-яких антитіл
Зо проти СО134, описаних вище. Відповідно одному конкретному аспекту даного винаходу похідну антитіла одержують у результаті модифікацій амінокислотних послідовностей клону 12Н3 і/або клону 20Е5. Можна модифікувати амінокислотні послідовності будь-яких областей ланцюга антитіла, таких як каркасні області, області СОК або константні області. Модифікації можуть бути введені за допомогою стандартних методик, відомих у даній області техніки, таких як сайт- направлений мутагенез і випадковий ПЛР-опосередкований мутагенез, і можуть включати природні, а також неприродні амінокислоти. Типи модифікацій включають вставки, делеції, заміни або комбінації зазначених модифікацій однієї або декількох амінокислот антитіла проти ср134. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу похідна антитіла містить 1, 2, 3, або 4 амінокислотні заміни в СОМ важкого ланцюга і/або одну амінокислотну заміну в СОК легкого ланцюга. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу похідна антитіла проти СО134 містить одну або декілька амінокислотних замін щодо амінокислотної послідовності гена людини зародкової лінії. Згідно з конкретним варіантом реалізації даного винаходу одна або декілька з даних замін щодо зародкової лінії перебувають в області СОК2 важкого ланцюга. Відповідно іншому конкретному варіанту реалізації даного винаходу амінокислотні заміни щодо зародкової лінії перебувають в одному або декількох тих самих положеннях, що і заміни щодо зародкової лінії в клоні антитіла 12НЗ і клоні 20Е5. Згідно з іншим варіантом реалізації даного винаходу амінокислотна заміна являє собою заміну одного або декількох цистеїнів в антитілі іншим залишком, таким як, без обмеження, аланін або серин.
Цистеїн може являти собою канонічний або неканонічний цистеїн. Заміни можуть бути введені в
СОР або в каркасну область варіабельного домену або в константний домен антитіла. Інший тип амінокислотної заміни являє собою видалення пар аспарагін-гліцин, які утворюють потенційні сайти деамідування, шляхом зміни одного або обох залишків. Згідно з ще одним варіантом реалізації даного винаходу амінокислотна заміна являє собою консервативну амінокислотну заміну. Відповідно одному варіанту реалізації даного винаходу похідна антитіла має 1, 2, З або 4 консервативні амінокислотні заміни в областях СОМ важкого ланцюга щодо амінокислотних послідовностей клону 12Н3 і/або клону 20Е5. Інший тип модифікації антитіла проти СО134 являє собою зміну вихідного характеру глікозилювання антитіла. Термін "зміна" відноситься до видалення однієї або декількох вуглеводних груп присутніх в антитілі, і/або до додавання одного або декількох сайтів глікозилювання, які не присутні в антитілі.
Глікозилювання антитіла є, як правило, М-зв'язаним. М-зв'язане глікозилювання відноситься до приєднання вуглеводної групи до бічного ланцюга залишку аспарагіну. Приклади інших модифікацій включають ацилювання, амідування, ацетилювання, перехресне зшивання, циклізацію, формілювання, гідроксилювання, йодування, метилювання, міристиолування, утворення дисульфідного зв'язку, деметилювання, утворення ковалентних поперечних зшивок, утворення цистеїну, окиснення, фосфорилювання, пренилювання, пегилювання, протеолі процесінг і сульфатилюанння.
У наступному варіанті реалізації даного винаходу запропоновано похідну антитіла, яка містить антитіло проти СО134 або антиген-зв'язуючий фрагмент зазначеного антитіла, як описано в даній заявці, приєднаний до додаткового молекулярного угрупування. Приклади додаткових молекулярних угрупувань включають фармацевтичні засоби, пептиди або білки, а також засоби для виявлення або мітки. Конкретні приклади фармацевтичних засобів, які можна приєднувати до антитіла проти СО134, включають цитотоксичні засоби або інші терапевтичні засоби для лікування раку, а також радіоактивні ізотопи. Конкретні приклади пептидів або білків, які можна приєднувати до антитіла проти СО134, включають антитіла, які можуть являти собою те саме антитіло проти СО134 або інше антитіло. Конкретні приклади засобів для виявлення або міток, які можна приєднувати до антитіла проти СО134, включають (1) флуоресцентні сполуки, такі як флуоресцеїн, флуоресцеїну ізотіоціонат, фікоеритрин, родамін, нафтален- сульфоніл хлорид і люмінофори на основі комплексів лантанидів; (2) ферменти, такі як пероксидаза хріну, лужна фосфатаза, люцифераза і глюкозооксидаза; (3) біотин; (4) визначений поліпептидний епітоп, який розпізнається вторинною репортерною групою, такі як парні послідовності лейцинової блискавки, метал-зв'язуючі домени, епітопні мітки і сайти зв'язування вторинних антитіл. У наступному варіанті реалізації даного винаходу запропонована похідна антитіла, яка являє собою мультимерну форму антитіла проти СО134, таку як димери, тримери антитіла або мультимери мономерного антитіла більш високого порядку. Індивідуальні мономери в мультимері антитіла можуть бути ідентичними або різними, тобто мультимері антитіла можуть бути гетеромерними або гомомерними. Мультимеризацію антитіла можна здійснити шляхом природньої агрегації. Наприклад, деякий відсоток очищених препаратів антитіла (наприклад, очищених молекул ІдДС1) спонтанно утворює агрегати білка, що містять
Зо гомодимери антитіла, а також інші мультимери антитіла більш високого порядку. В якості альтернативи, гомодимери антитіла можуть бути утворені за допомогою методик хімічного зв'язування, відомих у даній області техніки. Підходящі зшиваючі сполуки включають сполуки, які є гетеробіфункціональними, такі як складний ефір м-малеїімідобензоїл-М-гідроксисукциніміду,
М-сукцинімідил З-ацетилтіо-ацетат і сукцинімідил 4-(малеімідометил)сциклогексан-1- карбоксилат), або гомобіфункціональними (такими як дисукцинімідил суберат). Такі лінкери комерційно доступні. Також можуть бути отримані антитіла для мультимеризації за допомогою методик рекомбінантної ДНК, відомих у даній області техніки.
У наступному варіанті реалізації даного винаходу запропоновано похідну антитіла, яка являє собою химерне антитіло, що містить амінокислотну послідовність антитіла проти СО134 людини, описаного в даній заявці вище. В іншому прикладі всі з СОК химерного антитіла отримані з антитіла проти СО134 людини. В іншому прикладі в химерному антитілі поєднують
СОК від більш ніж одного антитіла проти СО134 людини. Також химерне антитіло може містити каркасні області, отримані з одного антитіла проти СО134 людини, і одну або декілька СОК з одного або декількох інших антитіл людини. Химерні антитіла можуть бути отримані із застосуванням загальноприйнятих способів, відомих у даній області техніки. Відповідно деяким конкретним варіантам реалізації даного винаходу химерне антитіло містить одну, дві або три
СОК з варіабельної області важкого ланцюга або з варіабельної області легкого ланцюга антитіла, обраного із клону антитіла 12НЗ і/або клону антитіла 20Е5.
Приклади інших похідних антитіл, запропонованих у даному винаході, включають одноланцюгові антитіла, діатіла, доменні антитіла, нанотіла і унітіла. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу моноклональні антитіла можуть являти собою химерні антитіла, гуманізовані антитіла, антитіла людини, антитіла ОеїЇттипілей "мМ, біспецифічні антитіла, одноланцюгові антитіла, фрагменти, у тому числі Раф, К(ар)2, Ем або інші фрагменти, які зберігають функцію зв'язування з антигеном батьківського антитіла. Одноланцюгові антитіла ("сг") і спосіб їх одержання описані в патенті США Мо 4,946,778. "Одноланцюгове антитіло" (5СЕм) складається з окремого поліпептидного ланцюга, що містить домен МІ, приєднаний до домену МН, де домен МІ. і домен МН спарені для утворення моновалентної молекули. Одноланцюгове антитіло можна одержати згідно зі способом, відомим у даній області техніки (див., наприклад, публікації Вігі еї аї., (1988) Зсіеєпсе 242:423-426 і 60 Низюгп еї аї., (1988) Ргос. Майї). Асад. сі. ОБА 85:5879-5883). "Діатіло" складається із двох ланцюгів, причому кожний ланцюг містить варіабельну область важкого ланцюга, приєднану до варіабельної області легкого ланцюга на тому самому поліпептидному ланцюзі, приєднаному коротким пептидним лінкером, де дві області на тому самому ланцюзі утворюють пари не один з одним, але з комплементарними доменами на іншому ланцюзі для утворення біспецифічної молекули. Способи одержання діатіл відомі в даній області техніки (Див., наприклад, публікації
НоїІдег Р. еї аї., (1993) Ргос. Май. Асай. 5сі. ОБА 90:6444-6448, і РоЦак К. 4. еї аї., (1994) зЗігисіцге 2:1121-1123). Доменні антитіла (Д4АБ) являють собою малі функціональні зв'язуючі одиниці антитіл, відповідні до варіабельних областей важкого або легкого ланцюгів антитіл.
Доменні антитіла добре експресуються в клітинних системах бактерій, дріжджів і ссавців.
Додаткові подробиці щодо доменних антитіл і способів їх одержання відомі в даній області техніки (див., наприклад, патенти США МоМо 6,291,158; 6,582,915; 6,593,081; УМО04/003019 і
М003/002609). Нанотіла одержують із важких ланцюгів антитіла. Нанотіло, як правило, містить один варіабельний домен і два константні домени (СН2 і СНЗ) їі зберігає антиген-зв'язуючу здатність вихідного антитіла. Нанотіла можна одержати із застосуванням способів, відомих у даній області техніки (див., наприклад, патент США Мо 6,765,087, патент США Мо 6,838,254, УМО 06/079372). Унітіла складаються з одного легкого ланцюга і одного важкого ланцюга антитіла
Ід9с4. Унітіла можна одержати шляхом видалення шарнірної області антитіла Ідс4. Додаткові подробиці відносно унітіл і способів їх одержання можна знайти в міжнародній заявці
МО2007/059782.
Крім групи зв'язування, молекули згідно із даним винаходом можуть додатково містити групу для збільшення періоду напівжиття молекули іп мімо, таку як, але не обмежуючись ними, поліетиленгліколь (ПЕГ), сироватковий альбумін людини, групи глікозилювання, жирні кислоти і декстран. Такі додаткові групи можна кон'югувати або будь-яким іншим способом об'єднати із групами зв'язування із застосуванням способів, добре відомих у даній області техніки.
У наступному аспекті даного винаходу запропонована молекула нуклеїнової кислоти, що кодує амінокислотну послідовність зв'язуючої молекули, яка зв'язується з СО134, згідно з першим аспектом даного винаходу. Амінокислотна послідовність, яку кодує молекула нуклеїнової кислоти, може являти собою будь-яку частину інтактного антитіла, таку як СОК, послідовність, що містить одну, дві або три СОЕ, або варіабельну область важкого або легкого
Зо ланцюга, або може являти собою повнорозмірний важкий ланцюг або легкий ланцюг. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу молекула нуклеїнової кислоти кодує амінокислотну послідовність, яка містить (1) область СОМКЗ, зокрема, область СОКЗ важкого ланцюга клону антитіла 12Н3 і/або клону антитіла 20Е5; (2) варіабельну область важкого ланцюга або варіабельну область легкого ланцюга клону антитіла 12Н3 і/або клону антитіла 20Е5; або (3) важкий ланцюг або легкий ланцюг клону антитіла 12НЗ і/або клону антитіла 20Е5.
Згідно з іншими варіантами реалізації даного винаходу молекула нуклеїнової кислоти кодує поліпептид, який містить амінокислотну послідовність, обрану із групи, що включає 5ЕО ІЮО МО: 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 або 19, або із групи, що включає ЗЕО ІЮ МО: 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 або 11.
Молекули нуклеїнової кислоти, запропоновані в даному винаході, можна одержати з будь- якого джерела, яке продукує антитіло проти СО134 згідно із даним винаходом. мРНК клітин, продукуючих антитіло проти СО134, можна виділити за допомогою стандартних методик, клонувати і/або ампліфікувати із застосуванням ПЛР і методик конструювання і піддати скринінгу із застосуванням стандартних протоколів для одержання молекул нуклеїнової кислоти, що кодують амінокислотну послідовність антитіла проти СО134. мРНК можна застосовувати для одержання кДНК для застосування в полімеразній ланцюговій реакції (ПЛР) або кДНК для клонування генів антитіла. Відповідно одному варіанту реалізації даного винаходу молекулу нуклеїнової кислоти одержують із гібридоми, яка експресує антитіло проти СО134, описане вище, переважно гібридоми, однією з партнерів злиття якої є клітина трансгенної тварини, відмінної від людини, яка експресує гени імуноглобуліну людини. Згідно з іншим варіантом реалізації даного винаходу гібридома отримана з нетрансгенної тварини, відмінної від людини.
Молекулу нуклеїнової кислоти, що кодує важкий ланцюг антитіла проти СО134, можна сконструювати шляхом злиття молекули нуклеїнової кислоти, що кодує варіабельну область важкого ланцюга, з молекулою нуклеїнової кислоти, що кодує константну область важкого ланцюга. Аналогічно, молекулу нуклеїнової кислоти, що кодує легкий ланцюг антитіла проти
СО134, можна сконструювати шляхом злиття молекули нуклеїнової кислоти, що кодує варіабельну область легкого ланцюга, з молекулою нуклеїнової кислоти, що кодує константну область легкого ланцюга. Молекули нуклеїнової кислоти, що кодують ланцюги МН і Мі, можуть бути перетворені в гени повнорозмірного антитіла шляхом вбудовування даних молекул у 60 вектори експресії, що вже кодують константну область важкого ланцюга і константну область легкого ланцюга, відповідно, так, що сегмент МН функціонально пов'язаний із сегментом (сегментами) константної області важкого ланцюга (СН) у межах вектора і сегмент МІ. функціонально пов'язаний із сегментом константної області легкого ланцюга (СІ) у межах вектора. В якості альтернативи, молекули нуклеїнової кислоти, що кодують ланцюги МН або Мі, перетворять у гени повнорозмірного антитіла шляхом приєднання, наприклад, лігування, молекули нуклеїнової кислоти, що кодує ланцюг УН, до молекули нуклеїнової кислоти, що кодує ланцюг СН, із застосуванням стандартних методик молекулярної біології. Даного результату можна дося/гтися і із застосуванням молекул нуклеїнової кислоти, що кодують ланцюги Мі. і сі.
Молекули нуклеїнової кислоти, що кодують повнорозмірні важкий і/або легкий ланцюги, потім можна експресувати у клітині, у яку були введені дані молекули, і виділити антитіло проти
Сор134.
Молекули нуклеїнової кислоти можна застосовувати для рекомбінантної експресії більших кількостей антитіл проти СО134, як описано нижче. Молекули нуклеїнової кислоти можна також застосовувати для одержання інших зв'язуючих молекул, запропонованих у даному винаході, таких як химерні антитіла, одноланцюгові антитіла, імунсоадгезини, діатіла, мутуючі антитіла, біспецифічні антитіла і похідні антитіл, описані у даній заявці. Відповідно одному варіанту реалізації даного винаходу молекулу нуклеїнової кислоти застосовують в якості зонда або ПЛР- праймера для конкретних послідовностей антитіла. Наприклад, зонд молекули нуклеїнової кислоти можна застосовувати в способах діагностики, або ПЛР-праймер молекули нуклеїнової кислоти можна застосовувати для ампліфікації областей ДНК, які можна використовувати, серед іншого, для виділення послідовностей нуклеїнової кислоти для застосування при одержанні варіабельних областей антитіл проти СО134.
Якщо отримані молекули ДНК, що кодують сегменти МН і МІ. антитіла проти СО134, даними молекулами ДНК можна потім маніпулювати із застосуванням методик рекомбінантної ДНК, наприклад, для перетворення варіабельної області генів у гени ланцюгів повнорозмірного антитіла, у гени Габ-фрагмента, у ген зсЕм, або дану варіабельну область можна вмонтувати в біспецифічні антитіла.
У наступному аспекті даного винаходу запропоновано вектор, який містить молекулу нуклеїнової кислоти, описану в даній заявці вище. Молекула нуклеїнової кислоти може кодувати
Зо частину легкого ланцюга або важкого ланцюга (таку як СОК або варіабельну область), повнорозмірний легкий або важкий ланцюг, поліпептид, який містить частину або повнорозмірний важкий або легкий ланцюг, або амінокислотну послідовність похідного антитіла або антиген-зв'язуючого фрагмента.
Приклад підходящого вектора експресії являє собою вектор, який кодує функціонально повну послідовність СН або Сі імуноглобуліну людини з відповідними сайтами рестрикції, сконструйованими таким чином, що будь-яка послідовність МН або Мі. може бути вбудована і експресована. Вектор експресії може кодувати сигнальний пептид, який полегшує секрецію амінокислотної послідовності ланцюга антитіла із клітини-господаря. ДНК, що кодує амінокислотну послідовність ланцюга антитіла, можна клонувати у вектор так, щоб сигнальний пептид був зв'язаний у рамці зчитування з аміно-кінцем амінокислотної послідовності ланцюга антитіла. Сигнальний пептид може являти собою сигнальний пептид імуноглобуліну або гетерологічний сигнальний пептид (тобто сигнальний пептид білка, відмінного від імуноглобуліну). Крім послідовності нуклеїнової кислоти, що кодує амінокислотну послідовність антитіла проти СО134 (гени МН, МІ. антитіла, повнорозмірних важкого і/або повнорозмірного легкого ланцюга), вектори експресії несуть регуляторні послідовності, які контролюють експресію генів ланцюга антитіла в клітині-господарі. Дизайн вектора експресії, у тому числі відбір регуляторних послідовностей, може залежати від таких факторів, як вибір клітини- господаря, яку будуть трансформувати, рівня експресії бажаного білка і подібних факторів.
Регуляторні послідовності для експресії в клітинах-господарах ссавців включають вірусні елементи, які направляють високі рівні експресії білка в клітинах ссавців, такі як промотори і/або енхансери, отримані з ретровірусних ІТК, цитомегаловірусу (СММУ) (такі як промотор/енхансер
СМУМ), вірусу мавп 40 (5М40) (такі як промотор/«енхансер 5М40), аденовірусу, (наприклад, великий пізній промотор аденовірусу (АаМмі Р)), поліоми, а також сильні промотори ссавців, такі як промотори нативного імуноглобуліну і актину.
Клітина-господар може являти собою клітину ссавця, комаху, рослини, бактерії або дріжджів. Приклади клітинних ліній ссавців, що підходять для використання в якості клітини- господаря, включають клітини яєчника китайського хом'ячка (СНО), клітини М5О, клітини РЕК-
Сб, клітини ЗР2/0, клітини НЕК-293Т, клітини МІН-3ТЗ3, клітини Неїа, клітини нирки новонародженого хом'яка (ВНК), клітини нирки африканської зеленої мавпи (СО5), клітини 60 гепатоклітинної карциноми людини (наприклад, Нер 2), клітини легені людини, клітини А549 і численну кількість інших клітинних ліній. Приклади ліній клітин комах включають клітини 519 або
Приклади клітин-господарів рослин включають види Місойапа, арабідопсис, ряску, кукурудзу, пшеницю, картоплю і подібні рослини. Бактеріальні клітини-господарі включають Е. соїї і види 5ігеріотусев.
Приклади клітин-господарів дріжджів включають Засспаготусез сегемівзіає і Ріспіа равіогів.
Амінокислотні послідовності зв'язуючої молекули, яка експресується різними клітинними лініями або в трансгенних тваринах, можуть мати різне глікозилювання. Однак усі зв'язуючі молекули, що кодуються молекулами нуклеїнової кислоти, запропонованими в даній заявці, або, що містять амінокислотні послідовності, запропоновані в даній заявці, є частиною даного винаходу, незалежно від глікозилювання зв'язуючих молекул.
В іншому аспекті даного винаходу запропоновано спосіб одержання молекули, що зв'язує
СО134, як визначено вище, із застосуванням фагового дисплея. Зазначений спосіб включає (а) синтез бібліотеки антитіл людини на фаги, (б) скринінг бібліотеки із застосуванням СО134 або її частини, (с) виділення фагу, який зв'язується з СО134 або його частиною, і (4) одержання антитіла з фагу. Один типовий спосіб одержання бібліотеки антитіл включає наступні етапи: (а) імунізація тварини, відмінної від людини, що містить локус імуноглобуліну людини, за допомогою СО134 або його антигенної частини для утворення імунної відповіді; (Б) виділення антитіло-продукуючих клітин з імунізованої тварини; (с) виділення РНК, що кодує легкий і важкий ланцюги антитіл проти СО134, з виділених клітин; (4) зворотна транскрипція РНК для одержання кДНК; (є), ампліфікація кКДНК; і () вбудовування кДНК у вектор фагового дисплея, у результаті чого антитіла експресуються на фаги. Рекомбінантні антитіла проти СО134 людини або антиген-зв'язуючі фрагменти зазначених антитіл можна виділити шляхом скринінга рекомбінантних комбінаторних бібліотек антитіл. Бібліотеки можуть являти собою 5сЕх- бібліотеки фагового дисплея, створені із застосуванням КДНК Мі і МН людини, отриманих із
МРНК, виділеної з В-клітин. Способи одержання і скринінга таких бібліотек відомі в даній області техніки. Набори для створення бібліотек фагового дисплея комерційно доступні.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу запропонована композиція, наприклад, фармацевтична композиція, що містить одну зв'язуючу молекулу або їх комбінацію,
Зо як описано в даній заявці, і необов'язково фармацевтично прийнятний носій. Композиції можна одержувати за допомогою загальноприйнятих способів, відомих у даній області техніки. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу композиція містить антитіло проти СО134 або антиген-зв'язуючий фрагмент зазначеного антитіла. Згідно з конкретним варіантом реалізації даного винаходу композиція містить клон антитіла 12Н3З і/або клон антитіла 20Е5 або антиген- зв'язуючий фрагмент будь-якого з даних антитіл. Згідно з іншими варіантами реалізації даного винаходу композиція містить похідну клону антитіла 12Н3 і/або клону антитіла 20Е5. Згідно з іншими варіантами реалізації даного винаходу фармацевтична композиція містить гуманізовані антитіла 12Н3 МІЇМНІ, 12Н3 МІ1МН2г, 12Н3 МІ1МНЗ, 12Н3 МІ2МНІ, 12Н3 МІ2УН2, 12Н3 МІ2УНЗ, 20Е5 МІТУНІ, 20Е5 МІ 1МН2, 20Е5 МІ 1МНЗ, 20Е5 МІ2МНІ, 20Е5 МІ2МН2 або 20Е5 МІ2УНЗ. Згідно з іншими варіантами реалізації даного винаходу фармацевтична композиція містить варіант гуманізованих антитіл, описаних вище, що містить варіабельні області важкого ланцюга згідно ЗЕО ІЮ МО: 101-133 або 146-151. Термін "фармацевтично прийнятний носій" відноситься до будь-якої неактивної речовини, яка підходить для застосування в сполуках для доставки зв'язуючої молекули. Носій може являти собою речовину, що перешкоджає склеюванню, речовину, що зв'язує, речовину, що покриває, розпушувач, наповнювач або розріджувач, консервант (такий як антиоксидант, антибактеріальний або протигрибковий засіб), підсолоджуючу речовину, засіб, що відтерміновує усмоктування, речовину, що змочує, емульгуючу речовину, буфер і таке інше.
Непептидні молекули згідно із даним винаходом можна вводити пероральним шляхом, у тому числі у вигляді суспензії, таблеток і таке інше. Рідкі сполуки можна вводити за допомогою інгаляції ліофілізованих мікрокапсул або мікрокапсул, що перебувають у формі аерозолю.
Також можна застосовувати супозиторії. Можна застосовувати додаткові фармацевтичні носії, щоб контролювати тривалість дії молекули згідно із даним винаходом. Дозу і режим введення сполуки, яку вибирають, можна визначити в результаті стандартних процедур, добре відомих у даній області техніки. Такі процедури включають екстраполяцію передбачуваного режиму дозування на моделях на тваринах і визначення оптимального дозування в ході клінічного дослідження з метою визначення оптимальної дози на людях.
Композиції можуть перебувати в будь-яких підходящих формах, таких як рідкі, напівтверді і тверді лікарські форми. Різні лікарські форми композицій можна одержати за допомогою 60 загальноприйнятих методик, відомих у даній області техніки.
Відносна кількість зв'язуючої молекули, що включена в композицію, буде варіювати залежно від численної кількості факторів, таких як бажані характеристики вивільнення (і фармакодинамічні характеристики, конкретна застосовувана зв'язуюча молекула і носії, а також лікарська форма. Кількість зв'язуючої молекули в одиничній дозованій формі буде, як правило, представляти ту кількість, яка викликає терапевтичний ефект, однак може також являти собою меншу кількість. Як правило, дана кількість буде варіювати від приблизно 0,001 відсотка до приблизно 99 відсотків, від приблизно 0,1 відсотка до приблизно 70 відсотків, або від приблизно 1 відсотка до приблизно 30 відсотків відносно загальної маси лікарської форми.
Крім зв'язуючої молекули, у композицію можна включити один або декілька додаткових терапевтичних засобів або дані засоби можна застосовувати окремо в якості частини того ж режиму лікування. Приклади додаткових терапевтичних засобів описані в даній заявці нижче.
Підходяща кількість додаткового терапевтичного засобу, який необхідно включити в композицію, може легко вибрати фахівець у даній області техніки; дана кількість буде варіювати залежно від численної кількості факторів, таких як конкретні застосовувані засіб і носії, лікарська форма, бажані характеристики вивільнення і фармакодинамічні характеристики. Кількість додаткового терапевтичного засобу, включеного в одиничну лікарську форму, буде, як правило, являти собою таку кількість засобу, яка викликає терапевтичний ефект, однак може також являти собою меншу кількість.
Зв'язуючі молекули і фармацевтичні композиції, що містять зв'язуючу молекулу, запропоновану в даному винаході, є придатними для терапевтичних, діагностичних або інших цілей, таких як підсилення імунної відповіді, лікування раку, підсилення ефективності інших варіантів терапії раку або підсилення ефективності вакцини, і мають численну кількість варіантів застосування, таких як застосування в якості лікарських препаратів або діагностичних засобів.
Таким чином, згідно із переважним аспектом у даному винаході запропоновані способи застосування зв'язуючих молекул або фармацевтичних композицій.
У наступному аспекті даного винаходу запропоновано спосіб модуляції протипухлинних імунних відповідей, опосередкованих СО134 людини, у тому числі підсилення ефекторної функції Теї людини, експресуючих СО134 людини, і/або послаблення супресивної функції Тгед людини, експресуючих СО134 людини, із застосуванням зв'язуючих молекул, які зв'язуються з
СО134 людини, у тому числі антитіл проти СО134 людини, які (1) запобігають взаємодії існуючого в природі ОХ40Ї людини з рецептором СО134 людини і/або (2) не блокують клітинну передачу сигналів, опосередковану СО134 людини, після зв'язування з ним існуючого в природі
ОХ40І людини.
У наступному аспекті даного винаходу запропоновано спосіб модуляції протипухлинних імунних відповідей, опосередкованих СО134 людини, у тому числі підсилення ефекторної функції Теї людини, експресуючих СО134 людини, і/або послаблення супресивної функції Тгед людини, експресуючих СО134 людини, із застосуванням зв'язуючих молекул, які зв'язуються з
СОр134 людини, описаних у даній заявці.
В іншому аспекті даного винаходу запропоновано спосіб модуляції протипухлинних імунних відповідей, опосередкованих СЮО134 людини, причому зазначений спосіб не включає зв'язуючі молекули, які зв'язуються з СЮО134 людини, у тому числі антитіла проти СО134 людини, такі як міметики ОХ40Ї. людини, які взаємодіють із доменом зв'язування ОХ40І. людини на рецепторі
СОр134 людини і/або блокують клітинну передачу сигналів ОХ40Ї. людини-СО134 людини.
У даному винаході розкриті зв'язуючі молекули, які зв'язуються з СО134 людини, у тому числі антитіла проти СО134 людини, для протипухлинних терапевтичних цілей. Антитіла проти
СО134 людини зв'язуються з позаклітинним доменом СО134 людини. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіла проти СО134 людини зв'язуються з областями зв'язування, відмінними від областей зв'язування ОХ401 (тобто антитіла проти СО134 людини не повністю блокують зв'язування ОХ40Ї людини з СЮО134 людини) на позаклітинному домені
СОр134 людини на активованих Теїї людини і Тгед людини.
Відповідно одному конкретному аспекту даного винаходу запропоновані способи підсилення імунної відповіді у ссавця, що включають введення зазначеному ссавцеві терапевтично ефективної кількості зв'язуючої молекули, описаної в даній заявці. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу зв'язуюча молекула являє собою антитіло проти СО134 або антиген- зв'язуючий фрагмент зазначеного антитіла, і ссавець являє собою людину. Згідно з наступним варіантом реалізації даного винаходу зв'язуюча молекула являє собою клон антитіла 12НЗ і/або клон антитіла 20Е5, або антиген-зв'язуючий фрагмент будь-якого з даних антитіл, гуманізоване антитіло 12Н3 або гуманізоване антитіло 20Е5. Термін "підсилення імунної відповіді" означає стимулювання, індукування, збільшення, поліпшення або розширення будь-якої відповіді імунної 60 системи ссавця. Імунна відповідь може являти собою клітинну відповідь (тобто клітинно-
опосередковану, таку як відповідь, опосередкована цитотоксичними Т-лімфоцитами), або гуморальна відповідь (тобто антитіло-опосередкована відповідь), а також може являти собою первинну або вторинну імунну відповідь. Приклади підсилення імунної відповіді включають збільшення Т-клітинної активності СО4-- хелперів і утворення цитолітичних Т-клітин. Підсилення імунної відповіді можна оцінити із застосуванням численної кількості вимірювань іп міїго або іп мімо, відомих фахівцям у даній області техніки, включаючи, але не обмежуючись ними, аналізи цитотоксичних Т-лімфоцитів, вивільнення цитокінів (наприклад, продукції ІЛ-2), ремісії пухлин, виживаності тварин, що несуть пухлину, продукції антитіл, проліферації імунних клітин, експресії маркерів клітинної поверхні і цитотоксичності. Відповідно одному варіанту реалізації даного винаходу зазначений спосіб підсилює клітинну імунну відповідь, зокрема, цитотоксичну відповідь Т-клітин.
В одному аспекті даного винаходу запропонована зв'язуюча молекула, яка зв'язується з
СсОр134 людини, причому при насичуючій концентрації, зазначеної зв'язуючої молекули або при концентрації, що перевищує насичуючу концентрацію, ефект відносно зв'язування ОХ40Ї. з
СО0134 зменшується не більше ніж на 70 95 на Т-клітинах, експресуючих СО134 людини, що вимірюють методом флуоресцентного аналізу на основі проточної цитометрії, описаним у прикладі 2(). Більш переважно, ефект відносно зв'язування ОХ40Ї з СО134 зменшується не більше ніж на приблизно 60 95, або приблизно 50 95, або приблизно 40 95, або приблизно 30 95, або приблизно 20 95, або приблизно 10 95 або менше, або перважно зменшення зв'язування відсутнє повністю.
В іншому аспекті даного винаходу запропонована зв'язуюча молекула, причому при концентрації зв'язуючої молекули 70 нМ ефект відносно зв'язування ОХ40Ї з СО134 зменшується не більше ніж на 70 95 на Т-клітинах, експресуючих СО134 людини, що вимірюють методом флуоресцентного аналізу на основі проточної цитометрії, описаним у прикладі 2(0).
Більш переважно, ефект відносно зв'язування ОХ40Ї з СО134 зменшується не більше ніж на приблизно 60 95, або приблизно 50 95, або приблизно 40 95, або приблизно 30 95, або приблизно 2095, або приблизно 1095 або менше, або переважне зменшення зв'язування відсутнє повністю.
В іншому аспекті даного винаходу запропонована зв'язуюча молекула, яка конкурує за
Зо зв'язування з СЮО134 людини з антитілом, яке містить (1) варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 12, і (2) варіабельну область легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 13, що було показано в результаті перехресної конкуренції між неміченою зазначеною зв'язуючою молекулою і флуоресцентно- міченим зазначеним антитілом на стимульованих ФГА Т-лімфоцитах, експресуючих СО134 людини, яку вимірюють методом проточної цитометрії (описаний нижче в прикладі 2(6)).
Зв'язування із зазначеним антитілом при насичуючій концентрації, або при концентрації, що перевищує насичуючу концентрацію, зменшується щонайменше на приблизно 50 95, або приблизно 60 95, або приблизно 70 95, або приблизно 80 95, або приблизно 90 95 або більше, або припиняється при аналізі перехресної конкуренції із зазначеною зв'язуючою молекулою.
В іншому аспекті даного винаходу запропонована зв'язуюча молекула, яка конкурує за зв'язування з СЮО134 людини з антитілом, яке містить (1) варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 4, і (2) варіабельну область легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ЖЕО ІЮ МО: 5, що було показано в результаті перехресної конкуренції між неміченою зазначеною зв'язуючою молекулою і флуоресцентно- міченим зазначеним антитілом на стимульованих ФГА Т-лімфоцитах, експресуючих СО134 людини, яку вимірюють методом проточної цитометрії (описаний нижче в прикладі 2(е)).
Зв'язування із зазначеним антитілом при насичуючій концентрації, або при концентрації, що перевищує насичуючу концентрацію, зменшується щонайменше на приблизно 50 95, або приблизно 60 95, або приблизно 70 95, або приблизно 80 95, або приблизно 90 95 або більше, або припиняється при аналізі перехресної конкуренції із зазначеною зв'язуючою молекулою.
В іншому аспекті даного винаходу запропонована зв'язуюча молекула, яка зв'язується з
СО134 людини, причому ефект відносно зв'язування ОХ40Ї з СО134 на Т-клітинах, експресуючих СО134 людини, зменшується не більше ніж на приблизно 70 95, або приблизно 60 95, або приблизно 50 95, або приблизно 40 95, або приблизно 30 95, або приблизно 20 95, або приблизно 10 95 або менше зв'язуючою молекулою, і причому зазначена зв'язуюча молекула також не перешкоджає імуностимулюючим і/або проліферативним відповідям ОХ40Ї. людини на
Т-ефекторних клітинах, експресуючих СО134 людини.
В іншому аспекті даного винаходу запропонована зв'язуюча молекула, яка зв'язується з
СО0134 людини, причому зазначена зв'язуюча молекула не запобігає зв'язуванню рецептора бо СО0134 людини (ОХ40) з лігандом ОХ40 (ОХ401)), і причому зазначена зв'язуюча молекула також не перешкоджає імуностимулюючим і/або проліферативним відповідям ОХ40Ї людини на Т- ефекторних клітинах, експресуючих СЮО134 людини.
В іншому аспекті даного винаходу запропонована зв'язуюча молекула, яка зв'язується з
СО134 людини, причому ефект відносно зв'язування ОХ40Ї з СО134 на Т-клітинах, експресуючих СО134 людини, зменшується не більше ніж на приблизно 70 95, або приблизно 60 95, або приблизно 50 95, або приблизно 40 95, або приблизно 30 95, або приблизно 20 95, або приблизно 10 95 або менше зв'язуючою молекулою, і причому зазначена зв'язуюча молекула підсилює імуностимулюючі і/або проліферативні відповіді ОХ40Ї людини на Т-ефекторних клітинах, експресуючих СО134 людини.
В іншому аспекті даного винаходу запропонована зв'язуюча молекула, яка зв'язується з
СО0134 людини, причому зазначена зв'язуюча молекула не запобігає зв'язуванню рецептора
СОр134 людини (0Х40) з лігандом ОХ40 (ОХ401), і причому зазначена зв'язуюча молекула підсилює імуностимулюючі і/або проліферативні відповіді ОХ40Ї людини на Т-ефекторних клітинах, експресуючих СО134 людини.
В іншому аспекті даного винаходу запропонована зв'язуюча молекула, яка зв'язується з
СОр134 людини, причому ефект відносно зв'язування ОХ40Ї з СО134 на Т- клітинах людини, експресуючих СО134 людини, зменшується не більше ніж на приблизно 70 95, або приблизно 60 95, або приблизно 50 95, або приблизно 40 95, або приблизно 30 95, або приблизно 20 95, або приблизно 10 95 або менше зв'язуючою молекулою, і причому зазначена зв'язуюча молекула також не перешкоджає відповідям супресорної функції ОХ40Ї людини на Т-регуляторних клітинах, експресуючих СО134 людини.
В іншому аспекті даного винаходу запропонована зв'язуюча молекула, яка зв'язується з
СО134 людини, причому зазначена зв'язуюча молекула не запобігає зв'язуванню рецептора
СОр134 людини (0ОХ40) з лігандом ОХ40 (ОХ401)),, і причому зазначена зв'язуюча молекула також не перешкоджає відповідям супресорної функції ОХ40Ї людини на Т-регуляторних клітинах, експресуючих СО134 людини.
В іншому аспекті даного винаходу запропонована зв'язуюча молекула, яка зв'язується з
СОр134 людини, причому ефект відносно зв'язування ОХ40Ї з СО134 на Т- клітинах людини, експресуючих СО134 людини, зменшується не більше ніж на приблизно 70 95, або приблизно
Ко) 60 95, або приблизно 50 95, або приблизно 40 95, або приблизно 30 95, або приблизно 20 95, або приблизно 10 95 або менше зв'язуючою молекулою, і причому зазначена зв'язуюча молекула підсилює відповіді супресорної функції ОХ40Ї людини она Т-регуляторних клітинах, експресуючих СО134 людини.
В іншому аспекті даного винаходу запропонована зв'язуюча молекула, яка зв'язується з
СО0134 людини, причому зазначена зв'язуюча молекула не запобігає зв'язуванням рецептора
СО134 людини (0Х40) з лігандом ОХ40 (ОХ401І), і причому зазначена зв'язуюча молекула підсилює відповіді супресорної функції ОХ40Ї людини она Т-регуляторних клітинах, експресуючих СО134 людини.
В іншому аспекті даного винаходу запропонована зв'язуюча молекула, яка зв'язується з
СО134 людини, причому ефект відносно зв'язування ОХ40Ї з СО134 на Т-клітинах, експресуючих СО134 людини, зменшується не більше ніж на приблизно 70 95, або приблизно 60 95, або приблизно 50 95, або приблизно 40 95, або приблизно 30 95, або приблизно 20 95, або приблизно 10 95 або менше зв'язуючою молекулою, і причому зазначена зв'язуюча молекула також не перешкоджає проліферативним відповідям ОХ40їЇ. людини на Т-регуляторних клітинах, експресуючих СО134 людини.
В іншому аспекті даного винаходу запропонована зв'язуюча молекула, яка зв'язується з
СОр134 людини, причому зазначена зв'язуюча молекула не інгібує або запобігає зв'язуванню рецептора СО134 людини (0ОХ40) з лігандом ОХ40 (ОХ40І), і причому зазначена зв'язуюча молекула також не перешкоджає проліферативним відповідям ОХ40Ї людини на Т- регуляторних клітинах, експресуючих СО134 людини.
В іншому аспекті даного винаходу запропонована зв'язуюча молекула, яка зв'язується з
СО134 людини, причому ефект відносно зв'язування ОХ40Ї з СО134 на Т-клітинах, експресуючих СО134 людини, зменшується не більше ніж на приблизно 70 95, або приблизно 60 95, або приблизно 50 95, або приблизно 40 95, або приблизно 30 95, або приблизно 20 95, або приблизно 10 95 або менше зв'язуючою молекулою, і причому зазначена зв'язуюча молекула інгібує проліферативні відповіді ОХ40Ї людини на Т-регуляторних клітинах, експресуючих
СО134 людини.
В іншому аспекті даного винаходу запропонована зв'язуюча молекула, яка зв'язується з
СОр134 людини, причому зазначена зв'язуюча молекула не інгібує або запобігає зв'язуванню бо рецептора СО134 людини (0ОХ40) з лігандом ОХ40 (ОХ401І), і причому зазначена зв'язуюча
Зо молекула інгібує проліферативні відповіді ОХ40Ї людини на Т-регуляторних клітинах, експресуючих СО134 людини.
Підходящий спосіб вимірювання одночасного зв'язування ОХ40І і антитіла проти СО134 описується у такий спосіб. Флуоресцентний сигнал ФІТЦ (середня геометрична або середня інтенсивність флуоресценції (СІФ)) зв'язування ОХ40Ї людини на стимульованих ФГА МКПК (мононуклеарних клітинах периферичної крові), експресуючих СО134 людини, при відсутності антитіла проти СО134 людини приймають за 100 95. Флуоресцентний сигнал ФЕ (фікоеритрин) (СІФ) зв'язування антитіла проти СО134 людини на стимульованих ФГА МКПК, експресуючих
СО134 людини, при відсутності ОХ40Ї людини приймають за 10095. Зменшення даного флуоресцентного сигналу ФІТЦ і флуоресцентного сигналу ФЕ, коли до стимульованих ФГА
МКПК, експресуючим СО134 людини, одночасно додають як ОХ401І. людини, так і антитіла проти сС0р134 людини, переважно не перевищує приблизно 70 95, або приблизно 60 95, або приблизно 50 95, або приблизно 40 95, або приблизно 30 95, або приблизно 20 95, або приблизно 10 95 або менше.
Підходящий спосіб вимірювання відсутності перешкоджання ОХ40 І-опосередкованим проліферативним відповідям Тей є наступним. Включення міченого тритієм тимідину або ВгаШ в
Те, експресуючі СО134 людини, після обробки ОХ40Ї людини приймають за 100 95. Зміна (тобто зменшення або збільшення) даного включення міченого тритієм тимідину або Вга|М, коли до активованих (наприклад, стимульованих ФГА або стимульованих бусинами з антитілами проти СОЗ/антитілами проти СО28) Теїї, експресуючим СО134 людини, одночасно додають як
ОХ40І людини, так і антитіла проти СО134 людини, переважно не перевищує приблизно 30 95, або приблизно 20 95, або приблизно 10 95 або менше.
Підходящий спосіб вимірювання підсилення опосередкованих ОХ40ІЇ проліферативних відповідей Теїї є наступним. Включення міченого тритієм тимідину або ВгаШ в Теїї, експресуючі
СО134 людини, після обробки ОХ40Ї людини приймають за 10095. Підсилення даного включення міченого тритієм тимідину або Вгй, коли до активованих (наприклад, стимульованих ФГА або стимульованих бусинами з антитілами проти СОЗ/антитілами проти сра28) Теїї, експресуючих СО134 людини, одночасно додають як ОХ40І людини, так і антитіла проти СО134 людини, переважно становить більше ніж приблизно 30 95, або приблизно 40 95,
Ко) або приблизно 50 95, або приблизно 60 95, або приблизно 70 95, або більше.
Підходящий спосіб вимірювання відсутності перешкоджання ОХ40 І-опосередкованої супресорної функції Тгед є наступним. Включення міченого тритієм тимідину або Вга) в Теїй, експресуючі СО134 людини, які культивують разом з Тгед, експресуючими СО134 людини (наприклад, співвідношення Тей/Тгед-1:1), після обробки ОХ40Ї. людини приймають за 100 95.
Зміна (тобто зменшення або збільшення) даного включення міченого тритієм тимідину або
ВгдО, коли до активованих (наприклад, стимульованих ФГА або стимульованих бусинами з антитілами проти СОЗ/антитілами проти СО28) Тей, експресуючих СО134 людини, які культивують разом з Тгед, експресуючими СО134 людини (наприклад, співвідношення
ТепЛтед-1:1), одночасно додають як ОХ40Ї людини, так і антитіла проти СО134 людини, переважно не перевищує приблизно 30 95, або приблизно 2095, або приблизно 10 95 або менше.
Підходящий спосіб вимірювання підсилення ОХ40 І-опосередкованої супресорної функції
Тгед є наступним. Включення міченого тритієм тимідину або ВгдО в Теїї, експресуючі СО134 людини, які культивують разом з Тгед, експресуючими СО134 людини (наприклад, співвідношення Тей/Ігед-1:1), після обробки ОХ40Ї людини приймають за 100 95. Підсилення даного включення міченого тритієм тимідину або ВгдО, коли до активованих (наприклад, стимульованих ФГА або стимульованих бусинами з антитілами проти СОЗ/антитілами проти сра28) Те, експресуючих СО134 людини, які культивують разом з Тгед, експресуючими СО134 людини (наприклад, співвідношення Тепй/Ігед-1:1), одночасно додають як ОХ40Ї людини, так і
БО антитіла проти СО134 людини, переважно становить більше ніж приблизно 30 95, або приблизно 40 95, або приблизно 50 95, або приблизно 60 95, або приблизно 70 95, або більше.
Підходящий спосіб вимірювання відсутності перешкоджання ОХ40 І-опосередкованих проліферативних відповідей Тгед є наступним. Включення міченого тритієм тимідину або Вгаи в
Тгед, експресуючі СЮО134 людини, після обробки ОХ40Ї людини, приймають за 100 95. Зміна (тобто зменшення або збільшення) даного включення міченого тритієм тимідину або Вгаи, коли до активованих (наприклад, стимульованих ФГА або стимульованих бусинами з антитілами проти СОЗ/антитілами проти СО28) Тгед, експресуючих СО134 людини, одночасно додають як
ОХ40І людини, так і антитіла проти СО134 людини, переважно не перевищує приблизно 30 95, або приблизно 20 95, або приблизно 10 95 або менше.
Підходящий спосіб вимірювання інгібування опосередкованих ОХ40Ї проліферативних відповідей Тгед є наступним. Включення міченого тритієм тимідину або ВгаШ в Тгед, експресуючі
СО134 людини, після обробки ОХ40Ї людини приймають за 10095. Зменшення даного включення міченого тритієм тимідину або Вгй, коли до активованих (наприклад, стимульованих ФГА або стимульованих бусинами з антитілами проти СОЗ/антитілами проти сра28) Тгед, експресуючих СО134 людини, одночасно додають як ОХ401Ї. людини, так і антитіла проти СО134 людини, становить переважно більше ніж приблизно 30 95, або приблизно 40 95, або приблизно 50 95, або приблизно 60 95, або приблизно 70 95, або більше.
В іншому аспекті даного винаходу запропоновано спосіб лікування раку у ссавця, що включає введення зазначеному ссавцеві терапевтично ефективної кількості зв'язуючої молекули, описаної в даній заявці.
Згідно з деяким варіантом реалізації даного винаходу зв'язуюча молекула являє собою клон антитіла 12Н3 і/або клон антитіла 20Е5 або антиген-зв'язуючий фрагмент будь-якого з даних антитіл. Згідно з наступним варіантом реалізації даного винаходу ссавець являє собою людину.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу зв'язуюча молекула являє собою антитіло 12Н3 МІТУНІ, що містить МН згідно 5ЕО ІЮО МО: 69 і МІ. згідно БЕО ІЮО МО: 67.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу зв'язуюча молекула являє собою антитіло 12Н3 МІ 1МУНа, що містить МН згідно 5ЕО ІЮО МО: 70 їі МІ. згідно БЕО ІЮО МО: 67.
Відповідно іншому переважному варіанту реалізації даного винаходу запропонований спосіб запобігання раку у ссавця, що включає введення зазначеному ссавцеві терапевтично ефективної кількості зв'язуючої молекули, описаної в даній заявці.
Термін "запобігання раку" відноситься до відстрочення, інгібуванню або запобіганню маніфестації раку у ссавця, у якого маніфестації канцерогенезу або онкогенезу не доведені, але виявлена схильність до раку, яка була визначена, наприклад, у результаті генетичного скринінгу або будь-яким іншим способом. Даний термін також охоплює лікування ссавця, що має передпухлинний стан, з метою зупинки прогресії або індукції ремісії передпухлинних станів у напрямку злоякісного новоутворення. Приклади передпухлинних станів включають гіперплазію, дисплазію і метаплазію. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу зв'язуюча молекула являє собою антитіло проти СО134 або фрагмент зазначеного антитіла, як описано в
Зо даній заявці. Згідно з наступним варіантом реалізації даного винаходу запропонована зв'язуюча молекула, обрана із клону антитіла 12Н3 і/або клону антитіла 20Е5, або антиген-зв'язуючий фрагмент будь-якого з даних антитіл. Згідно з наступним варіантом реалізації даного винаходу ссавець являє собою людину.
Терміни "лікувати" або "лікування" відносяться як до терапевтичного лікування, так і до профілактичних або превентивних заходів, метою яких є запобігання або вповільнення (зменшення) небажаної фізіологічної зміни або порушення, такого як розвиток або поширення пухлини або клітин пухлини. Корисні або бажані клінічні результати включають полегшення симптомів, зниження ступеня захворювання, стабілізацію (тобто відсутність погіршення) стану захворювання, відстрочення або вповільнення прогресування захворювання, поліпшення або тимчасове полегшення стану захворювання, а також ремісію (часткову або повну), таку, шо можливо або неможливо визначити. "Лікування" також може позначати продовження тривалості життя в порівнянні з очікуваною тривалістю життя, якби суб'єкт не одержував лікування.
Суб'єкти, що мають потребу в лікуанні включають, як таких, що вже мають патологічний стан або порушення, так і схильних до стану або порушення, або суб'єктів, у яких стан або порушення необхідно запобігти. Будь-які з антитіл згідно із даним винаходом можна застосовувати в зазначених способах згідно із даним винаходом.
Інший варіант реалізації даного винаходу являє собою спосіб лікування раку, що включає введення пацієнтові, який має потребу в такому лікуванні, антитіла проти СО134, що містить МН згідно 5ЕО ІО МО: 152 і МІ згідно БЕО ІЮ МО: 100, протягом часу, якого достатньо для лікування раку.
Інший варіант реалізації даного винаходу являє собою спосіб лікування раку, що включає введення пацієнтові, який має потребу в такому лікуванні, антитіла проти СО134, що містить МН згідно БЕО ІЮ МО: 134 ї МІ. згідно БЕО ІЮО МО: 98, протягом часу, якого достатньо для лікування раку.
Інший варіант реалізації даного винаходу являє собою спосіб лікування раку, що включає введення пацієнтові, який має потребу в такому лікуванні, антитіла проти СЮО134, що містить
МН згідно 5ЕО ІО МО: 67 і МІ згідно БЕО ІЮ МО: 69;
МН згідно 5БЕО ІО МО: 67 і МІ згідно БЕО ІЮО МО: 70;
МН згідно БЕО ІО МО: 67 і МІ згідно БЕО ІЮ МО: 71; 60 МН згідно БЕО ІО МО: 68 і МІ згідно БЕО ІЮ МО: 69;
МН згідно ЗЕО ІЮО МО: 68 і МІ. згідно 5ЕО ІЮ МО: 70; або
МН згідно БЕО ІЮО МО: 68 і МІ згідно БЕО ІЮ МО: 71; протягом часу, якого достатньо для лікування раку.
Численна кількість варіантів раку, у тому числі злоякісні або доброякісні і/або первинні або вторинні, можна лікувати або запобігати способом згідно із даним винаходом. Приклади таких варіантів раку відомі фахівцям у даній області техніки і перераховані в стандартних посібниках, таких як МегокК Мапиа! ої Оіадпозіз апа Тпегару (опублікований МегсК). Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу рак являє собою рак, який, як правило, піддається імунотерапії, але також рак, який раніше не піддавали імунотерапії. Типові варіанти раку являють собою меланому (наприклад, метастатичну злоякісну меланому), ренальний рак (наприклад, світлоклітинну карциному), рак передміхурової залози (наприклад, гормонорезистентну аденокарциному передміхурової залози), аденокарциному підшлункової залози, рак молочної залози, рак товстої кишки, рак легенів (наприклад, недрібноклітинний рак легенів), рак стравоходу, пласкоклітинну карциному голови і шиї, рак печінки, рак яєчників, рак шийки матки, рак щитоподібної залози, гліобластому, гліому, лейкоз, лімфому і інші злоякісні новоутворення. Рак може являти собою таку, що не піддається лікуванню або рецидивуючу злоякісну карциному, лімфому, бластому, саркому і лейкоз, пласкоклітинний рак, рак легенів (у тому числі дрібноклітинний рак легенів, недрібноклітинний рак легенів, аденокарциному легенів і пласкоклітинну карциному легенів), рак черевної порожнини, гепатоклітинний рак, гастричний рак або рак шлунку (у тому числі рак шлунково-кишкового тракту), рак підшлункової залози, гліобластому, рак шийки матки, рак яєчників, рак печінки, рак сечового міхура, гепатому, рак молочної залози, рак товстої кишки, рак товстої і прямої кишок, карциному ендометрія або матки, карциному слинних залоз, рак нирок або ренальний рак, рак печінки, рак передміхурової залози, рак зовнішніх жіночих статевих органів, рак щитоподібної залози, карциному печінки і різні типи раку голови і шиї, а також В-клітинну лімфому (у тому числі неходжкінську лімфому (НХЛ) низького ступеня злоякісності/фолікулярну НХЛ; дрібноклітинну лімфоцитарну (ДЛ) НХЛ;
НХЛ середньому ступеня злоякісності/фолікулярну НХЛ; дифузійну НХЛ середнього ступеня злоякісності; імунобласний НХЛ високого ступеня злоякісності; лімфобласний НХЛ високого ступеня злоякісності; дрібноклітинну НХЛ із нерозсіченими ядрами високого ступеня
Зо злоякісності; НХЛ із масивною лімфаденопатією; мантійноклітинну лімфому; лімфому, викликану СНІДом; і макроглобулінемію Вальденстрема); хронічний лімфоцитарний лейкоз (ХЛЛ); гострий лімфобласний лейкоз (ГЛЛ); волосяноклітинний лейкоз; хронічний мієлобласний лейкоз; множинну мієлому і посттрансплантаційне лімфопроліферативне порушення (ПТЛП).
Згідно з іншим варіантом реалізації даного винаходу зв'язуючі молекули можна вводити самі по собі у вигляді монотерапії або вводити в комбінації з одним або декількома додатковими терапевтичними засобами або терапіями. Таким чином, згідно з іншим варіантом реалізації даного винаходу запропонований спосіб лікування або запобігання раку шляхом комбінованої терапії, причому зазначений спосіб включає введення зв'язуючої молекули, описаної в даній заявці, у комбінації з однією або декількома додатковими терапіями або терапевтичними засобами. Термін "додаткова терапія" відноситься до терапії, у якій в якості терапевтичного засобу не використовується зв'язуюча молекула, запропонована в даному винаході. Термін "додатковий терапевтичний засіб" відноситься до будь-якого терапевтичного засобу, відмінного від зв'язуючої молекули, запропонованої в даному винаході. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу зв'язуюча молекула являє собою клон 12НЗ і/або клон 20Е5 антитіла проти СО134 людини, антиген-зв'язуючий фрагмент будь-якого з даних антитіл або гуманізоване антитіло 12Н3 або гуманізоване антитіло 20Е5. Відповідно одному конкретному аспекту в даному винаході запропонована комбінована терапія для лікування раку у ссавця, яка включає введення зазначеному ссавцеві терапевтично ефективної кількості зв'язуючої молекули, запропонованої в даному винаході, у комбінації з одним або декількома додатковими терапевтичними засобами. Згідно з наступним варіантом реалізації даного винаходу ссавець являє собою людину.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу рак являє собою рак передміхурової залози, рак товстої кишки, рак легенів, гематобластоз, меланому або рак сечового міхура.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу рак являє собою рак передміхурової залози.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу рак являє собою рак товстої кишки.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу рак являє собою рак легенів.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу рак являє собою гематобластоз. бо Згідно з деяким варіантом реалізації рак являє собою меланому.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу рак являє собою рак сечового міхура.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу рак легенів являє собою дрібноклітинний рак легенів, недрібноклітинний рак легенів, аденокарциному легенів або пласкоклітинну карциному легенів.
Широку різноманітність терапевтичних засобів для лікування раку можна застосовувати в комбінації зі зв'язуючою молекулою. Середньому фахівцеві в даній області техніки відома наявність і розвиток інших терапій раку, які можна застосовувати в комбінації зі способами і зв'язуючими молекулами згідно із даним винаходом і які не обмежені формами терапії, викладеними в даній заявці. Приклади категорій додаткових терапевтичних засобів, які можна застосовувати в комбінованій терапії для лікування раку, включають (1) хіміотерапевтичні засоби, (2) імунотерапевтичні засоби і (3) гормональні терапевтичні засоби.
Термін "хіміотерапевтичний засіб" відноситься до хімічної або біологічної речовини, яка може викликати загибель ракових клітин або перешкоджати розподілу, відновленню, росту і/або функції ракових клітин. Приклади хіміотерапевтичних засобів включають засоби, що описані в заявках М/О 2006/088639, УМО 2006/129163 ї О5 .20060153808, опис яких включено в дану заявку за допомогою посилання.
Термін "імунотерапевтичні засоби" відноситься до хімічної або біологічної речовини, яка може підсилювати імунну відповідь ссавця. Приклади імунотерапевтичних засобів включають: бацилу Кальметта-Герена (ВСО); цитокіни, такі як інтерферони; вакцини, такі як персоналізована імунотерапія МумМах, Опумах-Р, Опсорпнаде, ОВММАСІ, Рамід, Ргохепдєе, МАХ,
І омахіп С, Віомахір, СМХХ і Меимах; і антитіла, такі як алемтузумаб (САМРАТНВІ), бевацизумаб (АМАБТІМФ)), цетуксимаб (ЕКВІТОХФ), гемтузумаб озогаміцин (ММІ ОТАКОФ), ібритумомаб тіуксетан (2ЕМАГІМФ)), панітумумаб (МЕСТІВІХФ), ритуксимаб (КІТОХАМЕ, МАВТНЕКАФ), трастузумаб (НЕКСЕРТІМФ), тоситумомаб (ВЕХХАКФ), тремелімумаб, САТ-3888 і антитіла- агоністи рецептора СО40, описані в міжнародній заявці УМО 2003/040170.
Термін "засіб для гормональної терапії" відноситься до хімічної або біологічної речовини, інгібуючого або пригнічуючого утворення гормону або інгіуючого або протидіючого ефекту гормону на ріст і/або виживаність ракових клітин. Приклади таких засобів, що підходять для способів, описаних у даній заявці, включають засоби, розкриті в О5 20070117809. Приклади конкретних засобів для гормональної терапії включають тамоксифен (МОЇ МАОЕХФ), торемифен (Рагезіоп), фулвестрант (ЕАБІ ООЕХФ)), анастрозол (АКІМІОЕХФ), ексеместан (АКОМАЗІМФ), летрозол (ЕЕМАКАФ), ацетат мегестролу (МЕСАСЕФ), госерелін (2ОГАОЕХФ) і леупролід (ГОРКОМФ)). Зв'язуючі молекули згідно із даним винаходом можуть також бути використані в комбінації з нелікарськими гормональними терапіями, такими як (1) хірургічні способи повного або часткового видалення органів або залоз, о приймали участь в утворенні гормону, таких як яєчники, яєчка, надниркова залоза і гіпофіз, і (2) променева терапія, при якій на органи або залози пацієнта впливають випромінюванням у кількості, достатній для інгібування або пригнічення утворення цільового гормону.
Згідно з іншим варіантом реалізації даного винаходу запропонований спосіб лікування або запобігання раку шляхом комбінованої терапії, причому зазначений спосіб включає введення зв'язуючої молекули, описаної в даній заявці, і хірургічного втручання для видалення пухлини.
Зв'язуючу молекулу можна вводити ссавцеві перед, під час або після зазначеного хірургічного втручання.
Комбінована терапія для лікування раку також охоплює комбінацію зв'язуючої молекули, запропонованої в даному винаході, із променевою терапією, такою як іонізуюча (електромагнітна) променева терапія (наприклад, рентгенівське випромінювання або гама- випромінювання) і променева терапія пучком незаряджених часток (наприклад, випромінювання з високою лінійною передачею енергії). Джерело випромінювання може бути розташоване поза або усередині ссавця. Зв'язуючу молекулу можна вводити ссавцеві перед, під час або після променевої терапії.
Зв'язуючі молекули і композиції, запропоновані в даному винаході, можуть бути введені будь-яким підходящим ентеральним або парентеральним шляхом введення. Термін "ентеральний шлях" введення відноситься до введення через будь-яку частину шлунково- кишкового тракту. Приклади ентеральних шляхів введення включають пероральний, трансмукозальний, трансбуккальний і ректальний шлях введення або внутрішньошлунковий шлях уведення. "Парентеральний шлях" введення відноситься до шляху введення, відмінного від ентерального шляху введення. Підходящий шлях і спосіб введення можуть варіювати залежно від численної кількості факторів, таких як конкретне використовуване антитіло, бажана бо швидкість усмоктування, конкретна використовувана композиція або лікарська форма, тип або тяжкість розладу, який піддають лікуванню, конкретне місце дії і стан пацієнта, і можуть бути легко обрані фахівцем у даній області техніки.
Термін "терапевтично ефективна кількість" зв'язуючої молекули відноситься до кількості, ефективній для передбачуваної терапевтичної мети. Наприклад, у контексті підсилення імунної відповіді "-ерапевтично ефективна кількість" являє собою будь-яку кількість, яка є ефективною для стимулювання, індукування, підвищення, поліпшення або підсилення будь-якої відповіді імунної системи ссавця. У контексті лікування захворювання "терапевтично ефективна кількість" являє собою будь-яку кількість, достатню для надання будь-якого бажаного або корисного ефекту у ссавця, що одержує лікування, такого як інгібування наступного росту або поширення ракових клітин, загибель ракових клітин, інгібування повторного виникнення раку, зменшення болю, пов'язаного з раком, поліпшення виживаності ссавця. У способі запобігання раку "герапевтично ефективна кількість" являє собою будь-яку кількість, ефективну для відстрочення, інгібування або запобігання маніфестації раку у ссавця, якому вводять зв'язуючу молекулу.
Терапевтично ефективна кількість зв'язуючої молекули зазвичай варіює від приблизно 0,001 до приблизно 500 мг/кг і частіше від приблизно 0,05 до приблизно 100 мг/кг маси тіла ссавця.
Наприклад, зазначена кількість може становити приблизно 0,3 мг/кг, 1 мг/кг, З мг/кг, 5 мг/кг, 10 мг/кг, 50 мг/кг або 100 мг/кг маси тіла ссавця. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу терапевтично ефективна кількість антитіла проти СО134 людини перебуває в діапазоні приблизно від 0,1 до 30 мг/кг маси тіла ссавця. Конкретний рівень дози для введення може бути легко визначений фахівцем у даній області техніки і буде залежати від численної кількості факторів, таких як тип і тяжкість порушення, яке піддають лікуванню, конкретна використовувана зв'язуюча молекула, шлях уведення, час уведення, тривалість лікування, конкретна застосовувана додаткова терапія, вік, стать, маса тіла, стан, загальний стан здоров'я і попередній анамнез пацієнта, що одержує лікування, і подібних факторів, добре відомих в даній області техніки.
Зв'язуючу молекулу або композицію зазвичай вводять декілька разів. Інтервали між окремими дозами можуть становити, наприклад, тиждень, місяць, три місяці або рік. Типовий режим лікування включає введення один раз на тиждень, один раз кожні два тижні, один раз
Зо кожні три тижні, один раз кожні чотири тижні, один раз на місяць, один раз кожні З місяці або один раз кожні 6 місяців. Типові режими лікування для антитіла проти СО134 людини включають внутрішньовенне введення 1 мг/кг маси тіла або З мг/кг маси тіла із застосуванням одного з наступних режимів дозування: (1) кожні чотири тижні для шести введень, потім кожні три місяці; (2) кожні три тижні; (3) З мг/кг маси тіла однократно з наступним уведенням 1 мг/кг маси тіла кожні три тижні.
У даному винаході запропонована зв'язуюча молекула, яка зв'язується з СО134 людини, причому зазначена зв'язуюча молекула не запобігає зв'язуванню рецептора СО134 людини (ОХ40) з лігандом ОХ40 (ОХ401). Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу при насичуючій концентрації, зазначеної молекули або при концентрації, що перевищує насичуючу концентрацію, ефект відносно зв'язування ОХ40Ї з СО134 зменшується не більше ніж на 50 95 на Т-клітинах, експресуючих СО134 людини. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу при концентрації зв'язуючої молекули 70 нМ ефект відносно зв'язування ОХ40І з
СОр134 зменшується на не більше ніж 70 95 на Т-клітинах, експресуючих СО134 людини.
У даному винаході також запропонована зв'язуюча молекула, яка містить: (а) варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ
МО:12 або варіант зазначеної послідовності, що містить 1, 2 або З амінокислотні заміни; і/або (б) варіабельну область легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ
МО:13 або варіант зазначеної послідовності, що містить 1, 2 або З амінокислотні заміни.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу зв'язуюча молекула містить (ах СОКІ важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:14 або варіант зазначеної послідовності, що містить 1, 2 або З амінокислотні заміни; (Б) СОК2 важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:15 або варіант зазначеної послідовності, що містить 1, 2 або З амінокислотні заміни; і/або (с) СОКЗ важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:16 або варіант зазначеної послідовності, що містить 1, 2 або З амінокислотні заміни.
Згідно із переважним варіантом реалізації даного винаходу зв'язуюча молекула містить (ах СОКІ легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:17 або варіант зазначеної послідовності, що містить 1, 2 або З амінокислотні заміни; (Б) СОК2 легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:18 або 60 варіант зазначеної послідовності, що містить 1, 2 або З амінокислотні заміни; і/або
(с) СОКЗ легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:19 або варіант зазначеної послідовності, що містить 1, 2 або З амінокислотні заміни.
У даному винаході також запропонована зв'язуюча молекула, яка конкурує за зв'язування з
СОр134 людини з антитілом, що містять: (а) варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ
МО:12; і (б) варіабельну область легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ
МО:13.
Також запропонована зв'язуюча молекула, яка містить: (а) варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ
МО:4 або варіант зазначеної послідовності, що містить 1, 2 або З амінокислотні заміни; і/або (б) варіабельну область легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 560 ІЮ
МО:5 або варіант зазначеної послідовності, що містить 1, 2 або З амінокислотні заміни.
Відповідно одному варіанту реалізації даного винаходу зв'язуюча молекула згідно із даним винаходом містить (ах СОКІ важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО:б6 або варіант зазначеної послідовності, що містить 1, 2 або З амінокислотні заміни; (Б) СОК2 важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:7 або варіант зазначеної послідовності, що містить 1, 2 або З амінокислотні заміни; і/або (с) СОКЗ важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:8 або варіант зазначеної послідовності, що містить 1, 2 або З амінокислотні заміни.
Відповідно одному варіанту реалізації даного винаходу зв'язуюча молекула згідно із даним винаходом містить (а) СОКІ1 легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:9 або варіант зазначеної послідовності, що містить 1, 2 або З амінокислотні заміни; (Б) СОК2 легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:10 або варіант зазначеної послідовності, що містить 1, 2 або З амінокислотні заміни; і/або (с) СОКЗ легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО:11 або варіант зазначеної послідовності, що містить 1, 2 або З амінокислотні заміни.
Зо Відповідно одному варіанту реалізації даного винаходу зв'язуюча молекула конкурує за зв'язування з СО134 людини з антитілом, яке містить: (а) варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ
МО 4; і (б) варіабельну область легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність 560 ІЮ
МО:5.
Відповідно одному варіанту реалізації даного винаходу зв'язуюча молекула специфічно зв'язується з епітопом амінокислотної послідовності позаклітинного домену СО134 людини.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу зв'язуюча молекула зв'язується з епітопом позаклітинного домену СО134 людини, що містять амінокислотну послідовність: (а) БЕО ІЮ МО: 34; (В) 5ЕО ІЮ МО: 35 (с) зЕО ІЮ МО:3З6; (4) ЗЕО ІО МО:38; і/або (4) БЕО І МО:С92.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу зв'язуюча молекула не запобігає зв'язуванню рецептора СО134 людини з лігандом ОХ40 (ОХ401І) на імунокомпетентних клітинах людини, експресуючих СО134 людини (наприклад, активованих Теїї і/або активованих Тгеод), які залучені в інгібування росту пухлинних клітин людини.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу зв'язуюча молекула підсилює зв'язування і/або імуностимулюючі відповіді ліганда ОХ40 людини (ОХ40Ї) на імунокомпетентних клітинах людини, експресуючих СО134 людини (наприклад, активованих Теїї і/або активованих Тгеод), які залучені в інгібування росту пухлинних клітин людини.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу зв'язуюча молекула не запобігає зв'язуванню СО134 людини з лігандом ОХ40 (ОХ401) і не перешкоджає імуностимулюючим і/або проліферативним відповідям ОХ40Ї людини на Т-ефекторних клітинах, експресуючих СО134 людини.
У даному винаході також запропонована зв'язуюча молекула, яка зв'язується з СО134 людини, причому зазначена зв'язуюча молекула не запобігає зв'язуванню СО134 людини з лігандом ОХ40 (ОХ401І) і не підсилює імуностимулюючі і/або проліферативні відповіді ОХ4А0Ї. бо людини на Т-ефекторних клітинах, експресуючих СО134 людини.
Зб
У даному винаході також запропонована зв'язуюча молекула, яка зв'язується з СО134 людини, причому зазначена зв'язуюча молекула не запобігає зв'язуванню СО134 людини з лігандом ОХ40 (ОХ401І) і не перешкоджає відповідям супресорної функції ОХ40І. людини на Т- регуляторних клітинах, експресуючих СО134 людини.
Також запропонована зв'язуюча молекула, яка зв'язується з СО134 людини, причому зазначена зв'язуюча молекула не запобігає зв'язуванню СО134 людини з лігандом ОХ40 (ОХ401І) ії підсилює відповіді супресорної функції ОХ40Ї людини на Т-регуляторних клітинах, експресуючих СО134 людини.
Також запропонована зв'язуюча молекула, яка зв'язується з СО134 людини, причому зазначена зв'язуюча молекула не запобігає зв'язуванню СО134 людини з лігандом ОХ40 (ОХ401), але не перешкоджає проліферативним відповідям ОХ40Ї. людини на Т-регуляторних клітинах, експресуючих СО134 людини.
Також запропонована зв'язуюча молекула, яка зв'язується з СО134 людини, причому зазначена зв'язуюча молекула не запобігає зв'язуванню СО134 людини з лігандом ОХ40 (ОХ40І), але інгібує проліферативні відповіді ОХ40Ї людини на Т-регуляторних клітинах, експресуючих СО134 людини.
Зв'язуюча молекула згідно із даним винаходом являє собою переважно зв'язуючу молекулу, причому при насичуючій концентрації, зазначеної молекули або при концентрації, що перевищує насичуючу концентрацію, ефект відносно зв'язування ОХ40І з СО134 зменшується не більше ніж на 50 95 на Т-клітинах, експресуючих СО134 людини.
Зв'язуюча молекула згідно із даним винаходом являє собою переважно зв'язуючу молекулу, причому при концентрації зазначеної зв'язуючої молекули 70 нМ ефект відносно зв'язування
ОХ40Ї з СО134 зменшується не більше ніж на 7095 на Т-клітинах, експресуючих СО134 людини.
Відповідно одному варіанту реалізації даного винаходу зв'язуюча молекула згідно із даним винаходом являє собою гуманізоване антитіло. Згідно з іншим варіантом реалізації даного винаходу зв'язуюча молекула згідно із даним винаходом являє собою химерне, гуманізоване антитіло або антитіло Оєіттипігейд М або фрагмент зазначених антитіл.
Згідно ще одному варіанту реалізації даного винаходу зв'язуюча молекула згідно із даним винаходом являє собою антитіло, міметик антитіла (наприклад, на основі кістяка, відмінного від кістяка антитіла), аптамер РНК, малу молекулу або СоуХ-Воду.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу зв'язуюча молекула згідно із даним винаходом являє собою антитіло Ідс, ІдА, дО, ІДЕ або Ідм, таке як антитіло Їдс1, Ідс2, ІдДСЗ або Ідсаі.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу зв'язуюча молекула являє собою антитіло Ід.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло являє собою антиген- зв'язуючий фрагмент антитіла, наприклад, який обраний із групи, що включає: Ем-фрагменти (наприклад, одноланцюгові Ем і зв'язані дисульфідними зв'язками Ем); Гар-подібні фрагменти (наприклад, Гар-фрагменти, Рар'-фрагменти і Е(ар")2- фрагменти); і доменні антитіла. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антиген-зв'язуючий фрагмент або зв'язуюча група являє собою 5сЕм. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу зв'язуюча група являє собою рекомбінантне антитіло. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу зв'язуюча група являє собою моноклональне антитіло.
У даному винаході також запропонована молекула нуклеїнової кислоти, що кодує зв'язуючу молекулу за будь-яким пунктом попередньої формули винаходу, за умови, що зв'язуюча група являє собою поліпептид.
Також запропонований вектор, що містить щонайменше одну молекулу нуклеїнової кислоти згідно із даним винаходом.
Також запропонована клітина-господар, що містить вектор або нуклеїнову кислоту згідно із даним винаходом. Клітина-господар переважно отримана з ссавця або комахи.
У даному винаході також запропонований процес одержання зв'язуючої молекули згідно із даним винаходом, що включає наступні етапи (ї) одержання молекул, що зв'язуються з СО134, і (ї) скринінг зазначених молекул з метою виявлення і одержання зв'язуючих молекул, які не запобігають зв'язуванню ОХ40Ї з СО134. Етап (ії) переважно включає виявлення зв'язуючих молекул, які зв'язуються з СЮО134 після впливу на СО134 насичуючій концентрації ОХ40Г. Якщо зв'язуюча молекула являє собою моноклональне антитіло, процес одержання зв'язуючої молекули включає імунізацію тварини СО134 людини, одержання гібридом, секретуючих антитіла проти СО134, і скринінг для виявлення гібридом, продукуючих антитіла проти СО134. У 60 даному винаході також запропонована зв'язуюча молекула згідно із даним винаходом або отримана згідно із даним винаходом для застосування в запобіганні або лікуванні раку у суб'єкта, який має потребу в такому запобіганні або лікуванні. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу рак являє собою рак легенів, рак передміхурової залози, рак молочної залози, рак голови і шиї, рак стравоходу, рак шлунка, рак товстої кишки, рак товстої і прямої кишок, рак сечового міхура, рак шийки матки, рак матки, рак яєчників, рак печінки, гематобластоз, меланому або будь-яке інше захворювання або порушення, яке характеризується неконтрольованим ростом клітин.
Також запропонований спосіб підсилення імунної відповіді в суб'єкта-людини, що включає введення зазначеному суб'єктові-людині терапевтично ефективної кількості зв'язуючої молекули згідно із даним винаходом або отриманої згідно із даним винаходом і необов'язково фармацевтично прийнятного носія. Посилена імунна відповідь може включати збільшення імуностимулюючої/ефекторної функції Т-ефекторних клітин, необов'язково як результат проліферації даних клітин, і/або понижувальну регуляцію імуносупресорної функції Т- регуляторних клітин, необов'язково без експансії кількості даних клітин.
Також запропонований спосіб лікування раку у суб'єкта-людини, яка потребує такого лікування, що включає введення зазначеному суб'єктові-людині терапевтично ефективної кількості зв'язуючої молекули згідно із даним винаходом або отриманої згідно із даним винаходом. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу рак являє собою рак легенів, рак передміхурової залози, рак молочної залози, рак голови і шиї, рак стравоходу, рак шлунку, рак товстої кишки, рак товстої і прямої кишок, рак сечового міхура, рак шийки матки, рак матки, рак яєчників, рак печінки, гематобластоз, меланому або будь-яке захворювання або порушення, яке характеризується неконтрольованим ростом клітин.
Також запропонований спосіб зменшення розміру пухлини або інгібування росту ракових клітин у суб'єкта або зменшення або інгібування розвитку метастатичного раку у суб'єкта, що страждає від раку, що включає введення суб'єктові-людині зв'язуючої молекули згідно із даним винаходом або отриманої згідно із даним винаходом.
У даному винаході також запропоноване застосування зв'язуючої молекули згідно із даним винаходом або отриманої згідно із даним винаходом для одержання лікарського препарату для лікування або запобігання раку.
Зо Також запропонована фармацевтична композиція, що містить зв'язуючу групу згідно із даним винаходом або отриману згідно із даним винаходом разом з одним або декількома фармацевтично прийнятними розріджувачами або допоміжними речовинами. Композиція переважно є підходящою для парентерального введення в організм людини, наприклад, шляхом внутрішньовенного, внутрішньом'язового, внутрішньошкірного, інтраперитонеального, внутрішньопухлинного, інтравезикального, внутрішньоартеріального, інтратекального, інтракапсулярного, інтраорбітального, інтракардіального, транстрахеального, внутрішньосуглобного, субкапсулярного, субарахноїдального, інтраспінального, епідурального, інтрастернального або підшкірного введення.
Додаткові варіанти реалізації даного винаходу
Нижче наведені деякі додаткові пронумеровані варіанти реалізації даного винаходу згідно з описами винаходу, представленими у даній заявці. Властивості варіантів реалізації даного винаходу, наведених вище, що описані, як такі, що мають відношення до винаходу, розкритого в даній заявці, також відносяться до кожного і усіх без винятку даних додаткових пронумерованих варіантів реалізації. 1. Виділене антитіло, яке зв'язується з СО134 людини, що містить варіабельну область легкого ланцюга (МІ) згідно 5БЕО ІЮО МО: 100 і варіабельну область важкого ланцюга (УН), який містить області, що визначають комплементарність, важкого ланцюга (НСОК) НСОКІ1, НОСОК і
НСОКЗ, що необов'язково містить 1, 2 або З амінокислотні заміни в Мі. згідно ЗЕО ІЮ МО: 100. 2. Антитіло згідно з варіантом реалізації 1, що відрізняється тим, що зазначена МН містить
БО амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 152, що необов'язково містить 1, 2 або З амінокислотні заміни в МН згідно 5ЕО ІЮО МО: 152. 3. Антитіло згідно з варіантом реалізації 1 або 2, що відрізняється тим, що зазначена УН містить амінокислотну послідовність 5ЕО І МО: 99, що необов'язково містить 1, 2 або З амінокислотні заміни в МН згідно 5ЕО ІЮ МО: 99. 4. Антитіло згідно будь-якому з варіантів реалізації 1-3, що відрізняється тим, що зазначена
НСОСОКЗ містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 16, 144 або 145. 5. Антитіло згідно з варіантом реалізації 4, що відрізняється тим, що зазначена НСОК2 містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 15, 141, 142 або 143. 6. Антитіло згідно з варіантом реалізації 5, що відрізняється тим, що зазначена НСОК!1 60 містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 14.
7. Антитіло згідно будь-якому з варіантів реалізації 1-6, що відрізняється тим, що: а. зазначена МІ. містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 67 або 68; і р. зазначена МН містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 69, 70, 71, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 146, 147 або 148, які в деяких випадках містять заміни в лінійних положеннях амінокислотних залишків 11, 55 або 99; або с. зазначені МІ. і МН містять амінокислотні послідовності і. ЗЕОІЮ МО: 67 і 69, відповідно; і. ЗЕО ІЮО МО: 67 і 70, відповідно; ії. ЗЕО ІЮ МО: 67 і 71, відповідно; ім. «ЕО ІЮО МО:5 68 і 69, відповідно; м. ЗЕО ІО МО: 68 і 70, відповідно; або мі. ЗЕО ІЮ МО: 68 і 71, відповідно. 8. Антитіло згідно будь-якому з варіантів реалізації 1-7, що відрізняється тим, що заміни в лінійних положеннях амінокислотних залишків являють собою М11І, М550), М55А, М55Е, МО9І. або МОЗ91І. 9. Антитіло згідно будь-якому з варіантів реалізації 1-8, що відрізняється тим, що зазначена зв'язуюча молекула зв'язується з епітопом позаклітинного домену СО134 людини, що містять амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 34, 5ЕО ІЮ МО: 35; 5ЕО ІЮ МО: 36, 5ЕО ІО МО: 38 або
ЗЕО І МО: 92. 10. Антитіло згідно будь-якому з варіантів реалізації 1-9, що відрізняється тим, що зазначене антитіло являє собою гуманізоване антитіло або антитіло Оеєіттипігеатм. 11. Антитіло згідно будь-якому з варіантів реалізації 1-10, що відрізняється тим, що зазначене антитіло являє собою агоніст СО134. 12. Антитіло згідно будь-якому з варіантів реалізації 1-11, що відрізняється тим, що зазначене антитіло відноситься до ізотипу ІдС1, Ідс2, ДОЗ або Ідса4. 13. Антитіло згідно будь-якому з варіантів реалізації 1-12, що відрізняється тим, що зазначене антитіло містить заміну в Ес-області. 14. Антитіло згідно з варіантом реалізації 13, що відрізняється тим, що зазначена заміна модулює зв'язування антитіла з Ес-гама рецептором (Есук) або з неонатальним Ес-рецептором
Коо) (ЕсАп). 15. Антитіло згідно з варіантом реалізації 14, що відрізняється тим, що зазначена заміна включає заміну 5267ЕЛ/ 328БЕ, заміну Е2330/52370р/Н2680/Р2716/АЗЗОЕ, заміну
М2З4А/2237А/Р2385/Н268АЛ/ЗОЗІ /А3305/Р 3315 або заміну М252у/52541/1256Е, де нумерація залишків наведена відповідно до ЄО Іпаех. 16. Виділена молекула нуклеїнової кислоти, що кодує МН або Мі згідно будь-якому з варіантів реалізації 1-3 або 7. 17. Вектор, що містить молекулу нуклеїнової кислоти згідно з варіантом реалізації 16. 18. Клітина-господар, що містить вектор згідно з варіантом реалізації 17. 19. Антитіло згідно будь-якому з варіантів реалізації 1-15, 23-37, 41-45 або 49 для застосування при лікуванні суб'єкта, який потребує підсилення імунної відповіді. 20. Антитіло згідно будь-якому з варіантів реалізації 1-15, 23-37, 41-45 або 49 для застосування при лікуванні раку. 21. Антитіло згідно з варіантом реалізації 20 для застосування при лікуванні раку, причому рак являє собою рак передміхурової залози, рак товстої кишки, рак легенів, гематобластоз, меланому або рак сечового міхура. 22. Фармацевтична композиція, що містить антитіло згідно будь-якому з варіантів реалізації 1-15, 23-37 або 41-45 і фрармацевтично прийнятний носій. 23. Виділене антитіло, яке зв'язується з СО134 людини, що містить варіабельну область легкого ланцюга (МІ) згідно ЗЕО ІЮ МО: 98 і варіабельну область важкого ланцюга (МН), який містить області, що визначають комплементарність, важкого ланцюга (НСОК) НОСОК, НСОК2 і
НСОКЗ, що необов'язково містить 1, 2 або З амінокислотні заміни в МІ. згідно БЕО ІЮ МО: 98. 24. Антитіло згідно з варіантом реалізації 23, що відрізняється тим, що зазначена МН містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 134, що необов'язково містить 1, 2 або З амінокислотні заміни в МН згідно 5ЕО ІЮО МО: 134. 25. Антитіло згідно з варіантами реалізації 23 або 24, що відрізняється тим, що зазначена
МН містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 97, що необов'язково містить 1, 2 або З амінокислотні заміни в МН згідно 5ЕО ІЮ МО: 97. 26. Антитіло згідно будь-якому з варіантів реалізації 23-25, що відрізняється тим, що зазначена НСОКЗ містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 8, 139 або 140.
27. Антитіло згідно з варіантом реалізації 26, що відрізняється тим, що зазначена НСОК2 містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 7, 135, 136, 137 або 138. 28. Антитіло згідно з варіантом реалізації 27, що відрізняється тим, що зазначена НСОКІ1 містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 6. 29. Антитіло згідно будь-якому з варіантів реалізації 23-29, що відрізняється тим, що: а. зазначена МІ. містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 62 або 63; і р. зазначена МН містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 64, 65, 66, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 149, 150 або 151, у деяких випадках таку, що містить заміни в лінійних положеннях амінокислотних залишків 11, 56 або 106; або с. зазначені МІ. і МН містять амінокислотні послідовності і. ЗЕО ІЮ МО: 62 і 64, відповідно; і. ЗЕО ІЮО МО: 62 і 65, відповідно; ії. ЗЕО ІЮ МО: 62 і 66, відповідно; ім. ЗЕО ІЮО МО: 63 і 64, відповідно; м. ЗЕО ІО МО: 63 і 65, відповідно; або мі. ЗЕО ІЮ МО: 63 і 66, відповідно. 30. Антитіло згідно будь-якому з варіантів реалізації 23-29, що відрізняється тим, що заміни в лінійних положеннях амінокислотних залишків являють собою М11І, 0560, ЮО56А, 0565, О56Е,
М106І або М1061. 31. Антитіло згідно будь-якому з варіантів реалізації 23-30, що відрізняється тим, що зазначене антитіло зв'язується з епітопом позаклітинного домену СЮО134 людини, що містять амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 34, 5ЕО ІЮ МО: 35; 5ЕО ІЮО МО: 36, 5ЕО ІЮО МО: 38 або
ЗЕО І МО: 92. 32. Антитіло згідно будь-якому з варіантів реалізації 23-31, що відрізняється тим, що зазначене антитіло являє собою гуманізоване антитіло або антитіло ЮОєіттипі;еатм. 33. Антитіло згідно будь-якому з варіантів реалізації 23-32, що відрізняється тим, що зазначене антитіло являє собою агоніст СО134. 34. Антитіло згідно будь-якому з варіантів реалізації 23-33, що відрізняється тим, що
Зо зазначене антитіло відноситься до ізотипу ІдС1, Ідс2, ІдО3 або Ід. 35. Антитіло згідно будь-якому з варіантів реалізації 23-34, що відрізняється тим, що зазначене антитіло містить заміну в Ес-області. 36. Антитіло згідно з варіантом реалізації 35, що відрізняється тим, що зазначена заміна модулює зв'язування антитіла з Ес-гама рецептором (Есук) або з неонатальним Ес-рецептором (ЕсАп). 37. Антитіло згідно з варіантом реалізації 36, що відрізняється тим, що зазначена заміна включає заміну 5267ЕЛ/ 328БЕ, заміну Е2330/52370р/Н2680/Р2716/АЗЗОЕ, заміну 234А/5237А/Р2385/Н268АЛЗОЗІ /АЗ3305/Р3315 або заміну М252у/52541/1256Е, де нумерація залишків наведена відповідно до ЄО Іпаех. 38. Виділена молекула нуклеїнової кислоти, що кодує МН або Мі згідно будь-якому з варіантів реалізації 23-37. 39. Вектор, що містить молекулу нуклеїнової кислоти згідно з варіантом реалізації 38. 40. Клітина-господар, що містить вектор згідно з варіантом реалізації 39. 41. Виділене агоністичне антитіло, яке зв'язується з СЮО134 людини, що містить варіабельну область легкого ланцюга (МІ) і варіабельну область важкого ланцюга (УН), який містить області, що визначають комплементарність, важкого ланцюга (НСОК) НСОКІ, НСОК2 і НОСОК, і області, що визначають комплементарність, легкого ланцюга (СО) І СОК1, СО і СО, що відрізняється тим, що а. зазначена НСОМІ1 містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 14;
БО р. зазначена НОСОК містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО:15, 141, 142 або 143; с. зазначена НСОКЗ містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 16, 144 або 145; а. зазначена СОМ містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО: 17; е. зазначена І СОК2 містить амінокислотну послідовність ЖЕО ІЮ МО: 18; і
Її. зазначена ГСОКЗ містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 19; за умови, що зазначене антитіло не містить МН, що містить амінокислотні послідовності
НСОКІ, НСОК2 і НСОКЗ згідно 5ЕБЕО ІО МО: 14, 15 ї 16, і Мі, що містить амінокислотні послідовності Ї/СОК1, СОК2 ії СОЗ згідно ЗЕО ІО МО: 17, 18 і 19. 42. Виділене антитіло згідно з варіантом реалізації 41, що відрізняється тим, що зазначене антитіло містить послідовності НСОК1, НСОК2 і НСОКЗ згідно 60 а. ЗЕБЕО ІО МО: 14, 15, 144, відповідно,
Б. 5ЕОІЮ МО: 14, 141, 16, відповідно; с. ЗЕО ІЮО МО: 14, 142, 16, відповідно; а. 5ЕО ІО МО: 14, 141, 144, відповідно; або е. ЗЕО ІО МО: 14, 142, 144, відповідно. 43. Виділене антитіло згідно з варіантами реалізації 41 або 42, що відрізняється тим, що зазначене антитіло являє собою гуманізоване антитіло, антитіло Оеіттипі;7еатм або антитіло людини. 44. Виділене антитіло згідно будь-якому з варіантів реалізації 41-43, що відрізняється тим, що зазначене антитіло відноситься до ізотипу ІдС1, Ідс2, ІдеЗ або дві. 45. Виділене антитіло згідно будь-якому з варіантів реалізації 41-44, що відрізняється тим, що зазначене антитіло містить заміну в Ес-області, яка модулює зв'язування антитіла з Есо-гама рецептором (ЕсукК) або з неонатальним Ес-рецептором (БсКп), причому зазначена заміна включає заміну 5267Е/ 328Б, заміну Ег2330/52370/Н2680/Р2716/АЗЗОК, заміну
М234А/5237А/Р2385/Н268АЛ/ЗОЗІ /А3305/Р 3315 або заміну М252у/5254Т/1256Е, де нумерація залишків наведена відповідно до Є) Іпаех. 46. Виділена молекула нуклеїнової кислоти, що кодує МН або Мі згідно з варіантом реалізації 41. 47. Вектор, що містить молекулу нуклеїнової кислоти згідно з варіантом реалізації 46. 48. Клітина-господар, що містить вектор згідно з варіантом реалізації 47. 49. Виділене агоністичне антитіло, яке зв'язується з СЮО134 людини, що містить варіабельну область легкого ланцюга (МІ) і варіабельну область важкого ланцюга (МН), що містить області, які визначають комплементарність, важкого ланцюга (НСОК) НСОКІ1, НСОК2 і НСОКУ, і області, які визначають комплементарність, легкого ланцюга (СОК) І СОК1, 1 СОКк2 і ГСОКЗ, що відрізняється тим, що а. зазначена НСОМКІ1 містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮ МО: 6; р. зазначена НСОКІ містить амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО:7, 135, 136, 137 або 138; с. зазначена НСОКЗ містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 8, 139 або 140; а. зазначена СОМ містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 9;
Ко) е. зазначена І СОК2 містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ МО: 10; і
Її. зазначена ГСОКЗ містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 11; д. за умови, що зазначене антитіло не містить МН, що містить амінокислотні послідовності
НСОК, НСОК2 і НСОКЗ згідно ЗЕО ІО МО: 6, 7 і 8, і МІ, що містить амінокислотні послідовності
ГСОКІ, І СО2 ії СОКЗ згідно ЗЕО ІЮО МО: 9, 10 і 11.
У даному винаході також запропоновані наступні варіанти реалізації 21. Зв'язуюча молекула, яка містить (а) варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність згідно з фігурою 27 або варіант зазначеної послідовності, що містить 1, 2 або З амінокислотні заміни; імабо (5) варіабельну область легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність згідно з фігурою 27 або варіант зазначеної послідовності, що містить 1, 2 або З амінокислотні заміни. 22. Зв'язуюча молекула, яка містить (а) варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність згідно з фігурою 26 або варіант зазначеної послідовності, що містить 1, 2 або З амінокислотні заміни; імабо (б) варіабельну область легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність згідно з фігурою 26 або варіант зазначеної послідовності, що містить 1, 2 або З амінокислотні заміни. 23. Зв'язуюча молекула згідно з варіантом реалізації 21 або варіантом реалізації 22, яка зв'язується з СЮО134 людини. 24. Зв'язуюча молекула згідно будь-якому з варіантів реалізації 71-3, причому зазначена зв'язуюча молекула не запобігає зв'язуванню рецептора СО134 людини (ОХ40) з лігандом ОХ40 (ОХ401). 25. Зв'язуюча молекула згідно будь-якому з варіантів реалізації 21-4, що відрізняється тим, що при концентрації, у якій зв'язування із зазначеною молекулою СО134 є насиченим, або в концентрації, що перевищує зазначену концентрацію, ефект відносно зв'язування ОХ40І з
СОр134 зменшується не більше ніж на 50 95 на Т-клітинах, експресуючих СО134 людини. 26. Зв'язуюча молекула згідно будь-якому з варіантів реалізації 21-5, що відрізняється тим, що при концентрації зазначеної зв'язуючої молекули 70 нМ ефект відносно зв'язування ОХ401 з
СОр134 зменшується на не більше ніж 70 95 на Т-клітинах, експресуючих СО134 людини.
271. Зв'язуюча молекула згідно будь-якому з варіантів реалізації 21-6, що відрізняється тим, що зазначена зв'язуюча молекула зв'язується з епітопом позаклітинного домену СО134 людини, що містять амінокислотну послідовність «ЕС ІЮ МО: 34, БЕО ІЮО МО: 35; 5ЕО ІЮ МО: 36, 5ЕО І
МО: 38 і/або 5ЕО І МО: 92. 28. Зв'язуюча молекула згідно будь-якому з варіантів реалізації 21-7, яка являє собою Еабр- фрагмент, одноланцюговий Ем (5сЕм)-фрагмент або антитіло. 29. Антитіло згідно з варіантом реалізації 78, яке являє собою гуманізоване антитіло або антитіло Оеіттипіеа "м Ід, ІА, дО, ЧЕ або Ідм, таке як антитіло ЇдС1, Ідс2, ІдОоЗ або Ідс4. 2710. Молекула нуклеїнової кислоти, що кодує зв'язуючу молекулу або антитіло згідно будь- якому з варіантів реалізації 21-9. 211. Носій або вектор для доставки генів, що містить нуклеїнову кислоту згідно з варіантом реалізації 210. 2712. Виділена або рекомбінантна клітина, або культура клітин іп міго, що містить нуклеїнову кислоту або вектор згідно з варіантом реалізації 210 або 211. 213. Спосіб одержання зв'язуючої молекули, що відрізняється тим, що в результаті зазначеного способу одержують зв'язуючу молекулу згідно будь-якому з варіантів реалізації 21- 8 або антитіло згідно з варіантом реалізації 279. 2714. Зв'язуюча молекула або антитіло згідно будь-якому з варіантів реалізації 21-9 для застосування при лікуванні індивідуума, який потребує підсилення імунної відповіді. 215. Зв'язуюча молекула або антитіло згідно будь-якому з варіантів реалізації 71-9 для застосування в запобіганні або лікуванні раку у індивідуума, який потребує такого запобігання або лікування. 2716. Фармацевтична композиція, що містить зв'язуючу молекулу або антитіло згідно будь- якому з варіантів реалізації 21-9 ії фармацевтично прийнятний носій.
Даний винахід додатково проілюстрований наступними прикладами, які не слід тлумачити будь-яким способом, що може обмежити об'єм даного винаходу. Навпаки, слід розуміти, що можна вдатися до різних інших варіантів реалізації, модифікації і їх еквівалентів, які після прочитання опису в даній заявці можуть бути обрані фахівцем у даній області техніки без відходу від суті даного винаходу і/або об'єму прикладеної формули винаходу.
Приклади
Приклад 1. Одержання моноклональних антитіл миші проти СО134 (хОХ40) людини (а). Одержання клітин комах 519, експресуючих поверхневий СО134
КДНК, що кодує білок СО134 людини (СепВапк Мо САВ 96543.1; див. 5БО ІЮ МО:1), оптимізували для експресії в клітинах комах 519 (Бродоїега Пиаірегда) і синтезували за допомогою СЕМЕАКТ, Кедепзриго, Сегптапу (див. БЕО ІЮО МО: 2; кат. Мо 0904551 (внутрішній код ВС МО076)). Дану кКДНК субклонували в бакуловірусну трансферну плазміду рмі 1393 (набір для трансфекції ВО, кат. Мо 560129; ВО Віобсіепсе5). Потім клітини комах 519 (АТСС) котрансфікували трансферною плазмідою рмі 1393, що містить КДНК, що кодує СО134 людини, разом із ДНК ВасшосоїЇй Васиіомігихє ОМА (набір для трансфекції ВО), і інкубували при температурі 27 "С протягом 4-5 днів. Після даного етапу котрансфекції супернатант відбирали, зберігали при температурі 4 "С і використовували для інфікування більшої кількості клітин комах 919 для ампліфікації вірусу. З даною метою клітини комах 519 трансфікували ампліфікованим рекомбінантним бакуловірусом і інкубували при температурі 27 "С протягом 3-5 днів. Дані клітини комах 519 збирали, промивали стерильним ФБР (фосфатним буферним розчином), розділяли на аліквоти об'ємом «з: 2 х 105 клітин/250 мкл у ФБР і зберігали при температурі -80 "С для одержання лізатів клітин. Перед зберіганням експресію СО134 людини на поверхні трансфікованих клітин комах 519 підтверджували із застосуванням антитіл миші проти СО134 людини, кон'юЮгованих з фікоеритрином (ФЕ), 1:10 (клон АСТЗ35; ВО Віозсієепсе5), і методу проточної цитометрії. (Б). Імунізація і одержання моноклональних антитіл миші проти СО134 людини
Мишам ВА! В;с (самки, вік 6 тижнів; Спагіе5 Кімег І арогафгіє5з) вводили підшкірну ін'єкцію х 400 мкл лізатів клітин комах 519, трансфікованих СО134 людини (аліквота лізату клітин 250 мкл - 250 мкл повного ад'юванта Фрейнда; бідта) у День 0. Аналогічні підшкірні ін'єкції із застосуванням лізатів клітин комах 519, трансфікованих СО134 людини, і неповного ад'юванта
Фрейнда (Зідта) вводили в День 21 і День 42. Інтраперитонеальні бустер-ін'єкції лізатів клітин комах, трансфікованих СО134 людини (250 мкл/миша), без ад'юванта вводили в День 61 і в
День 62. У день 65 спленоцити імунізованих мишей зливали із клітинами мієломи 5Р2/0 (05М2) із застосуванням стандартної гібридомної технології, спочатку описаної авторами Копіег апа
Міївівїп (Мате 1975; 256: р495-497). Коротко, імунізованих мишей вбивали, потім спленоцити бо виділяли із селезінки і промивали безсироватковим середовищем орії-МЕМ І із середовищем
СішамМах (середовище ЗЕ; Іпмйгодеп). Клітини мієломи 5Р2/0-А914, ріст яких був логарифмічним, промивали середовищем 5Е і додавали до спленоцитів з одержанням співвідношення спленоцитів і клітин мієломи 5:1. Клітини осаджували центрифугуванням, супернатант відкидали. Потім додавали по краплях 1 мл 3795 (06./ об.) розчину поліетиленгліколя 4000 (Мегск) протягом 60 сек., після чого клітини інкубували протягом ще 60 сек. при температурі 37 "С. Додавали 8 мл середовища 5БЕ, після чого повільно додавали 5 мл середовища оріїі-МЕМ І з Сішамах/10 95 (06./ об.) ембріональною телячою сироваткою (ЕТС;
Водіпсо) при легкому перемішуванні. Через 30 хвилин при кт. клітини осаджували центрифугуванням, промивали середовищем орії-МЕМ І з сСішамах/10 96 ЕТС для видалення залишкового полієтиленгліколя і, нарешті, висіювали в концентрації 105 клітин/200 мкл на лунку в середовищі орії-МЕМ І з сішамМах/10 95 ЕТС/50х Нубгі-Мах "М аміноптерином (інгібітор синтезу
ДНК йде помо; Зідта). Починаючи із дня 7, селекційне середовище з аміноптерином поновлювали кожні 2-3 дня, і в день 14 середовище змінювали на середовище оріїі-МЕМ І з
СішамМах/10 95 ЕТС. Гібридоми, які продукували антитіла (класу ІДС миші) проти СО134 людини (проводили скринінг загальноприйнятим методом ЕГІЗА і методиками проточної цитометрії із застосуванням злитого білка рекомбінантний СО134 людини:Рсу людини (КУО Зувіетв; див. приклад 11 (а) нижче) і бластів стимульованих ФГА(Коспе) СО4 Т-клітин, експресуючих СО134 людини (див. приклад 2 (а) нижче) в якості мішеней, відповідно) експандували, заморожували і субклонували шляхом граничних розведень. Моноклональні антитіла, специфічні проти СО134 людини, очищували із застосуванням колонок з білююом З (ЗЕ Неайкнсаге), і в результаті одержували клон 12НЗ і клон 20Е5 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини.
Приклад 2. Характеристика клонів 12Н3З і 20Е5 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини методом проточної цитометрії (а). Експресія СО134 на стимульованих ФГА Т-лімфоцитах людини
Мононуклеарні клітини периферичної крові (МКПК) людини від здоровіших донорів (була отримана інформована згода) виділяли в результаті центрифугування в градієнті щільності на приладі Гутрпоргер (1,077 г/мл; Мусотейа). Потім 1-2 х 106 МКПК/мл у культуральному середовищі КРМІ-1640 (сібсо), що містить 10 95 ембріональну телячу сироватку (Воаіпсо) і 50 мкг/мл гентаміцину (сірсо), стимулювали 0, 0,1, 1,0 або 10,0 мкг/мл фітогемагглютиніну-М (ФГА-
Зо М; Воспе) при температурі 37 "С/5 95 СО» протягом 1-3 днів. Після культивування МКПК збирали і поміщали в концентрації 1 - 2 х 106 клітин/мл в охолоджений льодом фосфатний буферний сольовий розчин, що містить 0,1 95 бичачого сироваткового альбуміну (Зідта)/0,05 95 МаМз (ФБР/БСА/МамМ») з додаванням 1095 змішаної сироватки людини (ЗСЛ; блокування Есу- рецепторів; Віоуупінакег). Клітини інкубували з 10 мкг/мл комерційно доступного антитіла миші проти СО134 людини, клон АСТЗ5 (ізотип (91 миші; ВО Віозсіепсе5, АІрпеп аап де Ні|п, Те
МеїщШегіапа5) протягом 30 хвилин при температурі 4 "С. Після тривалого промивання у
ФБР/БСА/МамМз клітини інкубували з розведеними у співвідношенні 1:200 антитілами кози проти
ЧО миші, кон'югованими з ФЕ (Часкзоп ІттипокКезеагсі), протягом 30 хвилин при температурі 4 "С. Після тривалого промивання у ФБР/БСА/МаМ»з клітини інкубували з розведеними у співвідношенні 1:20 антитілами миші проти СОЗ людини, кон'югованими із флуоресцеїн ізотіоціонатом (ФІТЦ) (ВО Віозсіепсе5), для виявлення Т-лімфоцитів протягом 30 хвилин при температурі 4 "С. Після тривалого промивання у ФБР/БСА/МамМ»з клітини фіксували в 2 95 формальдегіді у ФБР/БСА/Мамз протягом 30 хвилин при температурі 4 "С. Зв'язування антитіл вимірювали із застосуванням методу проточної цитометрії (ГРАСЗСаїїриг; ВО Віозсіепсев).
Як показано на фігурі 1 (п-1 від кожного донора), нестимульовані/спочиваючі Т-лімфоцити людини, отримані з периферичної крові, не експерсували будь-який СО134, однак ФГА дозозалежним чином стимулював експресію поверхневого СЮО134 СОдгпозитивними Т-лімфоцитами людини. Після впливу 10 мкг/мл ФГА рівні експресії СО134 на активованих СОдгпозитивних Т. лімфоцитах людини, як представлялося, досягали плато між "день 1" і "день 2", однак відсоток
СО134 людинигозитивних/(5 будпозитивних Т-лімфоцитів збільшувався залежно від часу протягом експерименту. (Б). Експресія СО134 на субпопуляції стимульованих ФГА СО4 Т-лімфоцитів людини
Були отримані стимульовані ФГА (у концентрації 0 їі 10 мкг/мл протягом 1 дня; див. вище) Т- лімфоцити, експресуючі СО134 людини. Клітини збирали і поміщали в концентрації 1-2 х 106 клітин/імл в охолоджений льодом ФБР/БСА/МамМз з додаванням 1095 ЗСЛ (блокування Есу- рецепторів; Віом/півакег). Клітини інкубували з розведеним у співвідношенні 1:10 антитілом миші проти СО4 людини, кон'Югованим з ФІТЦ (ВО Віобзсіепсе5), або з розведеним у співвідношенні 1:10 антитілом миші проти СО8 людини, кон'югованим з ФІТЦ (ВО Віозсіепсев), у комбінації з розведеним у співвідношенні 1:10 комерційно доступним клоном АСТЗ5 антитіла бо миші проти СО134 людини, кон'югованим з ФЕ (ВО Віозсіепсе5), протягом 30 хвилин при температурі 4 "С. Після тривалого промивання у ФБР/БСА/МамМ»з клітини фіксували в 2 95 формальдегіді у ФБР/БСА/Мамз протягом 30 хвилин при температурі 4 "С. Зв'язування антитіл вимірювали із застосуванням методу проточної цитометрії (ГАСЗзСаїїбиг; ВО Віозсіепсев).
Як показано на фігурі 2, експресія СО134 спостерігалася на стимульованих ФГА СОд позитивних
Т-лімфоцитах людини і не спостерігалася на спочиваючих СОдгозитивних Т-лімфоцитах людини.
Незначна експресія СО134 була виявлена на активованих ФГА СОдгпозитивних Т-лімфоцитах людини і не спостерігалася на спочиваючих СОдпозитивних Т-длімфоцитах людини (дані не показані). (с). Зв'язування клонів 12Н3З і 20Е5 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини на стимульованих ФГА Т-лімфоцитах, експресуючих СО134 людини
Були отримані стимульовані ФГА (у концентрації 10 мкг/мл протягом 2 днів; див. вище) Т- лімфоцити, експресуючі СО134 людини. Клітини збирали і поміщали в концентрації 1-2 х 106 клітин/імл в охолоджений льодом ФБР/БСА/МамМз з додаванням 1095 ЗСЛ (блокування Есу- рецепторів; Віом/пінакег). Клітини інкубували з 0, 0,007, 0,02, 0,07, 0,2, 0,6, 1,9, 5,6, 16,7, 50,0 мкг/мл комерційно доступного клону АСТЗ5 антитіла миші проти СО134 людини (ізотип Ідс1 миші; ВО Віозсіепсе5) і клону 12Н3 або клону 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини протягом 30 хвилин при температурі 4 "С. Після тривалого промивання у ФБР/БСА/Мам:з клітини інкубували з розведеними у співвідношенні 1:200 антитілами кози проти дс миші, кон'югованими з ФЕ (даскзоп ІттипокКезеагсі), протягом 30 хвилин при температурі 4 "С. Після тривалого промивання у ФБР/БСА/Мамз клітини інкубували з розведеним у співвідношенні 1:20 антитілом миші проти СОЗ людини, кон'югованим з ФІТЦ (ВО Віозсіепсе5), протягом 30 хвилин при температурі 4"С для виявлення Т-лімфоцитів. Після тривалого промивання у
ФБР/БСА/Мамз клітини фіксували в 2 95 формальдегіді у ФБР/БСА/Мамз протягом 30 хвилин при температурі 4 "С. Зв'язування антитіл вимірювали із застосуванням методу проточної цитометрії (ГРАСзСаїїриг; ВО Віозсієепсев).
Як показано на фігурі З (середнє х СВ (стандартне відхилення); результати, отримані на зразках від двох донорів), клон АСТЗ5, клон 12Н3 і клон 20Н5 антитіла миші проти СО134 людини насичували поверхневі молекули СО134 людини на стимульованих ФГА СОгпозитивних Т. лімфоцитах у концентрації приблизно 5,0-10,0 мкг/мл. Із застосуванням зразків від даних двох
Зо донорів половинне максимальне зв'язування спостерігалося при концентрації з 0,5 мкг/мл для клону 12Н3 антитіла миші проти СО134 людини і при концентрації - 2,5 мкг/мл для клону АСТЗ35 і клону 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини. (4). Зв'язування клонів 12НЗ ї 20Е5 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини на стимульованих ФГА СО 4-позитивних і СО 8-позитивних Т-лімфоцитах, експресуючих СО134 людини
Були отримані стимульовані ФГА (у концентрації 20 мкг/мл протягом 1 дня; див. вище) Т- лімфоцити, експресуючі СО134 людини. Клітини збирали і поміщали в концентрації 1-2 х 106 клітин/імл в охолоджений льодом ФБР/БСА/МамМз з додаванням 1095 ЗСЛ (блокування Есу- рецепторів; Віому/пічакег). Клітини інкубували з 20,0 мкг/мл контролю (ізотип (дСік миші) (ВО
Віозсіепсе5) або з 20,0 мкг/мл клону 12Н3 або клону 20Е5 моноклонального антитіла миші проти
СО134 людини протягом 30 хвилин при температурі 4 "С. Після тривалого промивання у
ФБР/БСА/Мамз клітини інкубували з розведеними у співвідношенні 1:100 антитілами кози проти
ЧО миші, кон'югованими з ФЕ (даскзоп ІттипокКезеагсі), протягом 30 хвилин при температурі 4 "С. Після тривалого промивання у ФБР/БСА/Мам:з клітини інкубували протягом 30 хвилин при температурі 47С з розведеним у співвідношенні 1:20 антитіллом миші проти СО4 людини, кон'югованим з ФІТЦ (ВО Віозсіепсев), або з розведеним у співвідношенні 1:20 антитілом миші проти СО8 людини, кон'югованим з ФІТЦ (ВО Віозсіепсе5), для виявлення субпопуляцій Т- лімфоцитів. Після тривалого промивання у ФБР/БСА/МамМз клітини фіксували в 295 формальдегіді у ФБР/БСА/Мамз протягом 30 хвилин при температурі 4 "С. Зв'язування антитіл вимірювали із застосуванням методу проточної цитометрії (ГРАСзСаїїбиг; ВО Віозсіепсев).
Як показано на фігурі 4, клон 12НЗ їі клон 20Е5 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини демонстрували позитивне забарвлення на субпопуляції активованих СОд позитивних Т. лімфоцитів людини і незначне позитивне забарвлення на субпопуляції активованих СОд позитивних
Т-лімфоцитів людини. (є). Перехресна конкуренція немічених клонів 12Н3 і 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини з кон'юЮгованими з ФЕ комерційними антитілами миші проти СО134 на стимульованих
ФГА Т-лімфоцитах, експресуючих СЮО134 людини
Були отримані стимульовані ФГА (у концентрації 10 мкг/мл або в концентрації 20 мкг/мл протягом 4 днів або протягом 1 дня, відповідно; див. вище) Т-лімфоцити, експресуючі СО134 бо людини. Клітини збирали і поміщали в концентрації 1-2 х 106 клітин/мл в охолоджений льодом
ФБР/БСА/МамМз з додаванням 1095 ЗСЛ (блокування Есу-рецепторів; ВіоуУмпінакег). Клітини інкубували з 20 мкг/мл неміченого клону 12Н3 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини або з 10 мкг/мл неміченого клону 20Е5 протягом 30 хвилин при температурі 4 "с.
Клітини потім інкубували з розведеним у співвідношенні 1:20 комерційно доступним клоном
АСТЗ5 (ВО Віозсіепсе5) або клоном 1106 (ВО Віозсіепсе5; див. також патент Содаїгеу) антитіла миші проти СО134 людини, кон'югованим з ФЕ, протягом 30 хвилин при температурі 4 "С. Після тривалого промивання у ФБР/БСА/МаМз клітини фіксували в 295 формальдегіді у
ФБР/БСА/МамМз протягом 30 хвилин при температурі 4 "С. Зв'язування комерційно доступних кон'югованих з ФЕ антитіл проти СО134 вимірювали із застосуванням методу проточної цитометрії (ГРАСзСаїїриг; ВО Віозсієепсев).
Як показано на фігурі 5, попередня інкубація з неміченим клоном антитіла 12Н3 миші проти
СОр134 людини частково блокувала зв'язування комерційного клону І 106 антитіла миші проти
СОр134 людини, кон'югованого з ФЕ, з СО134 людини на стимульованих ФГА Т-лімфоцитах.
Попередня інкубація з неміченим клоном антитіла 20Е5 миші проти СО134 людини незначно блокувала зв'язування комерційного клону 106 антитіла миші проти СО134, кон'югованого з
ФЕ, з СО134 людини на стимульованих ФГА Т-лімфоцитах. Попередня інкубація з неміченими клоном 12НЗ ї клоном 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини не виявляла дії на зв'язування комерційного клону антитіла АСТЗ35 миші проти СО134 людини, кон'югованого з ФЕ, з СО134 людини на стимульованих ФГА Т-лімфоцитах.
Дані результати демонструють, що клон 12Н3 антитіла миші проти СО134 людини специфічно розпізнає СО134 людини (частково блокуючи зв'язування клону 1106) на стимульованих ФГА Т-лімфоцитах і зв'язується (ії) з неїдентичним епітопом на СО134 людини, який був розпізнаний комерційним клоном 106 антитіла миші проти СО134 людини. Дані результати також демонструють, що клон 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини (ії) специфічно розпізнає СО134 людини (незначно блокуючи зв'язування клону 1106) на стимульованих ФГА Т-лімфоцитах і (ії) зв'язується з неідентичним епітопом, який був розпізнаний комерційним клоном 1106 антитіла миші проти СО134 людини. Більше того, дані результати демонструють, що клон 12Н3З ії клон 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини, як представляється, розпізнають епітопи СО134 людини на стимульованих ФГА Т-лімфоцитах, які
Зо відрізняються від епітопів, розпізнаваних комерційним клоном АСТЗ5 антитіла миші проти
СОр134 людини. Крім цього, дані результати демонструють, що клон 12Н3 і клон 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини, як представляється, розпізнають різні епітопи СО134 людини (що доведено частковим блокуванням у порівнянні з незначним блокуванням зв'язування 1106, відповідно) на стимульованих ФГА Т-лімфоцитах. (0. Одночасне зв'язування рекомбінантного ліганда ОХ40 людини і клонів 12Н3 і 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини на стимульованих ФГА Т-лімфоцитах, експресуючих СО134 людини.
Були отримані стимульовані ФГА (у концентрації 10 мкг/мл протягом 1 дня; див. вище) Т- лімфоцити, експресуючі СО134 людини. Клітини збирали і поміщали в концентрації 1-2 х 106 клітин/імл в охолоджений льодом ФБР/БСА/МамМз з додаванням 1095 ЗСЛ (блокування Есу- рецепторів; ВіоуУупінакег). Клітини інкубували з 10,0 мкг/мл міченого полігістидином рекомбінантного ліганда ОХ40 людини (ОХ40І; КО бувіетв) у комбінації з 50,0 мкг/мл антитіла проти полігістидину (9051 миші, клон АОІ1.1.10; КшО БЗубіет5) протягом 30 хвилин при температурі 4 "С. Після тривалого промивання у ФБР/БСА/МамМз клітини інкубували з розведеними у співвідношенні 1:100 антитілами кози проти ДО миші, кон'югованими з ФІТЦ (Часкзоп ІттипоКезеагсі), протягом 30 хвилин при температурі 4 "С. Після тривалого промивання у ФБР/БСА/МамМз клітини інкубували з 10,0 мкг/мл біотинильованого (із застосуванням М-гідроксисукцинімідо-біотину від Ріегсе) клону 12Н3 або клону 20Е5 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини протягом 30 хвилин при температурі 4 "С.
Після тривалого промивання у ФБР/БСА/Мамз клітини інкубували з розведеним у співвідношенні 1:100 стрептавідином, кон'юЮгованим з ФЕ (даскбоп ІттипокКезеагсі), протягом 30 хвилин при температурі 4 "С. Після тривалого промивання у ФБР/БСА/МамМ»з клітини фіксували у 2 95 формальдегіді у ФБР/БСА/МамМз протягом 30 хвилин при температурі 4 "С. Зв'язування ОХ40І. людини і антитіла проти СО134 людини вимірювали із застосуванням методу проточної цитометрії (ГРАСзСаїїриг; ВО Віозсієепсев).
Як показано на фігурі 6, як клон 12Н3 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини, так і клон 20Е5 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини зв'язується одночасно з
ОХ40Ї людини на стимульованих ФГА Т-лімфоцитах, експресуючих СО134 людини. Дані результати свідчать, що клон 12Н3 ії клон 20Е5 моноклонального антитіла миші проти СО134 бо людини не взаємодіють із епітопами в межах області зв'язування ОХ40ІЇ на рецепторі СО134 людини. Даний результат відрізняється від результату, отриманого на комерційно доступному клоні 106 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини (5їаптога Опімегейу/зЗоатеу патент ЕР 0 726 952 ВІ), який розпізнає епітоп у межах області зв'язування ОХ40Ї людини на рецепторах СО134 людини (Тауїог апа 5спмаг2. У Іттипо!ї Меїпоаз 2001; 255: 67-72; Кіїпеїа доїа Іпвійше/Стой патент УМО 2007/062235 АЗ2). (9). Експресія СЮО134 на ефекторних і регуляторних Т-лімфоцитах людини після стимуляції стимулюючими бусинами з антитілами проти людини СОЗ/антитілами проти людини СО28 бра Т-лімфоцити людини виділяли із МКПК шляхом позитивної селекції із застосуванням антитіл миші проти СО4 людини, кон'югованих з мікробусинами (Мійепуі Віоїес) і колонок
МагіомМАС5'М Мадпей/ З (Мійепуі Віоїес). Потім дані СО4 Т-лімфоцити забарвлювали кон'югованими з ФІТЦ антитілами миші проти СО4 людини (Юако) і кон'юЮгованими з ФЕ антитілами миші проти СО25 людини (ВО Віозсіепсе5). СОдпозитивні /Г)обнегативні традиційні ефекторні Т-лімфоцити (Тей) і СОЮдгпозитивниУ рабою регуляторні Т-лімфоцити (Тгед) сортували із застосуванням клітинного сортеру для проточної цитометрії Айга (ВесКтап СоийМег). У результаті забезпечували збагачення »95 95 Тей і »9595 Тгед. Тепй і Тгед поміщали в концентрації 2,5 х 105 клітин/мл у культуральне середовище ЕРМІ-1640/зІшамах (сірсо) з додаванням 0,02 мМ пірувату (сібсо), 100 Од./мл пеніциліну (сірсо), 100 мкг/мл стрептоміцину (сірсо) і 10 95 інактивованої теплом ЗСЛ (ЗСЛи; від І МІ). Потім клітини висіювали в концентрації 2,5 х 107 клітин/200 мкл/лунку на 96-ямкові планшети з опуклим дном (сгеїіпег) і стимулювали стимулюючими бусинами з антитілами миші проти СОЗ людини/антитілами миші проти СО28 людини (бусини СОЗ/С0О28; Іпмігодеп) у концентрації 1 бусина/2 клітини в присутності 25 Од./мл рекомбінантного інтерлейкіну-2 людини (РгоЇеиКіп?Ф від Момагів РІпагтасешісаіє ОК ЦЯ) при температурі 37 "С/5 95 С02 протягом 2-8 днів. Після культивування клітини збирали і поміщали в концентрації 1-2 х 106 клітин/мл в охолоджений льодом ФБР/О0,295 БСА і одночасно забарвлювали розведеним у співвідношенні 1:50 кон'югованим з ФІТЦ антитілом миші проти ср4 людини (бако), розведеним у співвідношенні 1:10 кон'югованим з ФЕ антитілом миші проти
Ср25 людини (ВО Віозсіепсе5), розведеним у співвідношенні 1:50 кон'юЮгованим з ЕСО м антитілом миші проти СОЗ людини (ВесКтап-СоциНег), розведеними у співвідношенні 1:10 кон'югованими з РЕ-Су Мм5 антитілами миші проти СО134 людини (клон АТОЗ5; ВО Віозсіепсебв) і
Зо розведеним у співвідношенні 1:10 кон'югованим з РЕ-Су"м7 антитілом миші проти СО127 людини (еВіозсіепсе5). Зв'язування антитіл вимірювали із застосуванням методу проточної цитометрії (ЕАСзСаїїриг; ВО Віозсіепсев5).
Як показано на фігурі 7 (п-1 від кожного донора), нестимульовані/спочиваючі (день 0) Тей людини і Тгед людини, виділені з периферичної крові, не експерсували будь-який СО134, однак стимульовані бусинами СО3/СО028 Тей людини і Тгед людини експерсували поверхневий
Ср134. Експресія СО134 на активованих Теїї людини і Тгед людини досягала максимуму через 2 дні культивування і зменшувалася через 5 і 8 днів культивування.
Приклад 3. Біологічна характеристика клонів 12Н3 і 20Е5 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини (а). Проліферація стимульованих ФГА Т-лімфоцитів, експресуючих СО134 людини, після обробки клонами 12НЗ і 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини.
Були отримані стимульовані ФГА (у концентрації 0 їі 10 мкг/мл протягом 1 дня; див. вище) Т- лімфоцити, експресуючі СО134 людини. Клітини збирали і суспендували в концентрації 2 х 106 клітин/мл у культуральному середовищі КРМІ (сірсо), що містить 10 95 ембріональну телячу сироватку (Водіпсо) і 50 мкг/мл гентаміцину (Сібсо). Клітини висіювали в концентрації 0,1 х 105 клітин/100 мкл/лунку (тобто 1 х 105 клітин/мл) на 96- ямкові планшети із пласким дном (Согпіпо) і піддавали впливу 0, 0,025, 0,25, 2,5 або 25,0 мкг/мл клону 12Н3 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини або клону 20Е5 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини або/і в комбінації з 0, 0,01, 0,1 або 1,0 мкг/мл міченого полігістидином рекомбінантного ОХ40І. людини (у присутності антитіла миші проти полігістидину, КУ Зузіет5, у молярному співвідношенні 1:5) при температурі 37 "С/5 95 СО2 протягом 6 днів. Через 6 днів проліферацію клітин вимірювали із застосуванням набору для колориметричного аналізу (включення Вгаю)
Сеїї Ргоїїтегайоп ЕГІБА М (Коспеє) і зчитувального обладнання для аналізу ЕГІЗА (ВіоКаа) при довжині хвилі А450 нм.
Як показано на фігурі 8 (середнє х СВ, п--4 із застосуванням зразка, отриманого від одного донора), клон 12Н3 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини і клон 20Е5 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини дозозалежним чином стимулювали проліферацію стимульованих ФГА Т-лімфоцитів, експресуючих СО134 людини. Клон 12Н3 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини стимулював проліферацію в концентрації 60 0,25, 2,5 і 25 мкг/мл. Клон 12Н3 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини стимулював проліферацію в концентрації 2,5 і 25 мкг/мл. Крім цього, ОХ40Ї людини також дозозалежним чином стимулював проліферацію стимульованих ФГА Т-лімфоцитів, експресуючих СО134 людини. ОХ40Ї людини стимулював проліферацію в концентрації 0,1 їі 1,0 мкг/мл. Спочиваючі (без стимуляції ФГА) СО134 людини "егативні Т-лімфоцити не демонстрували будь-яких проліферативних відповідей після обробки клоном 12Н3 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини, клоном 20Е5 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини або ОХ40Ї людини (дані не показані).
Як показано на фігурі 9 (середнє х СВ, п-2 із застосуванням зразка, отриманого від одного донора), клон 12Н3 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини (у концентрації 2,5 і 25 мкг/мл), клон 20Е5 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини (у концентрації 2,5 і 25 мкг/мл) і ОХ40Ї людини (у концентрації 1,0 мкг/мл) стимулювали проліферацію стимульованих ФГА Т-лімфоцитів, експресуючих СО134 людини. У необробленому зразку (тільки середовище) або зразку, обробленому контролем, ізотипом І(дсїік миші (у концентрації 2,5 і 25 мкг/мл; ВО Віозсіепсе5), не спостерігалося будь-якого ефекту на проліферацію стимульованих ФГА Т-лімфоцитів, експресуючих СО134 людини. Комбінація клону 12Н3 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини в концентрації 2,5 і 25 мкг/мл (або в менших концентраціях; дані не показані)) або клону 20Е5 моноклонального антитіла миші проти
СО0134 людини в концентрації 2,5 і 25 мкг/мл (або в менших концентраціях; дані не показані) з
ОХ401Ї людини в концентрації 1,0 мкг/мл (або у менших концентраціях; дані не показані) не продемонструвала будь-якої взаємної (тобто синергетичної або адитивної, або інгібуючої) дії на проліферацію стимульованих ФГА Т-лімфоцитів, експресуючих СО134 людини. (Б). Проліферація Т-ефекторних і Т-регуляторних лімфоцитів, експресуючих СО134 людини, стимульованих бусинами з антитілами проти СОЗ людини/антитілами проти СО28 людини, після обробки клонами 12НЗ і 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини бра Т-лімфоцити людини виділяли із МКПК шляхом негативної селекції із застосуванням коктейлю антитіл миші (ВО Віозсіепсе5), спрямованих проти СО8 людини (клон КРА-Т8), СО14 людини (клон М5Е2), СО16 людини (клон 3058), СО19 людини (клон 457), СОЗЗ3 людини (клон
РбБ7.6), СО56 людини (клон В159) і СО0235а людини (НІК2). Після інкубаці з кон'югованими з
БОупабреад5Фф антитілами вівці проти ДС миші (Іпмігодеп) СО4 Т-лімфоцити, що незв'язалися
Зо відбирали за допомогою прилада Оупа! Мадпеїїс Рагіїсіє Сопсепігайог, МРС 7-6 (Іпуітодеп). З даних збагачених СО4 Т-лімфоцитів СО25"еп Тгед і СО 5Бнегативні Теї виділяли методом МАС5- сортингу із застосуванням 10 мкл антитіл миші проти СО25 людини, кон'югованих з мікробусинами (Мікепуї Віоїес)/107 клітин, і колонок МіпіМАС "М Мадпе/М5 (колонки Мійепуї
Віоїес МагіомМАС5 "мМ Мадпей З (Мінепуї Віотес). У результаті забезпечували збагачення 90 95
Тей ії »90 95 Тгед. Тей і Тгед поміщали в концентрації 0,25 х 106 клітин/мл у культуральне середовище КРМІ-1640/сзІщамах (сірсо) з додаванням 0,02 мМ пірувату (сірсо), 100 Од./мл пеніциліну (сірсо), 100 мкг/мл стрептоміцину ((ірсо) і 10 956 ЗСЛи. Потім Теїй і Тгед висіювали в концентрації 2,5 х 104 клітин/200 мкл/лунку (тобто 0,125 х 105 клітин/мл) на 96-ямкові планшети з опуклим дном (Сгеіпег; і стимулювали бусинами СО3/С028 (Іпмігодеп) у концентрації 1 бусина/5 клітин з додаванням або без додавання 5,0 мкг/мл клону 12Н3 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини, 5,0 мкг/мл клону 20Е5 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини, 1,0 мкг/мл міченого полігістидином рекомбінантного ОХ40Ї. людини (у присутності антитіла миші проти полігістидину, КО Зузіетв5, у молярному співвідношенні 1:5), комбінацією 5,0 мкг/мл клону 12Н3 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини з 1,0 мкг/мл міченого полігістидином рекомбінантного ОХ40Ї людини (у присутності антитіла миші проти полігістидину в молярному співвідношенні 1:5), або комбінацією 5,0 мкг/мл клону 20Е5 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини і 1,0 мкг/мл міченого полігістидином рекомбінантного ОХ40Ї. людини (у присутності антитіла миші проти полігістидину в молярному співвідношенні 1:5) при температурі 37 "С/5 95 СО» протягом 4 або 5 днів. Через 4 або 5 днів проліферацію клітин вимірювали із застосуванням включення 0,5 мкКи міченого тритієм тимідину (Регкіп 5 ЕІтег) і В-лічильника (Сапреїта-РаскКага).
Як показано на фігурі 10 (середнє х СВ), хоча стимулюючі бусини СО3/С028 самі по собі стимулювали значну проліферацію Тейї, експресуючих СО134 людини (тобто середовище), клон 12Н3 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини або ОХ40Ї людини стимулювали додаткову проліферацію стимульованих бусинами СО3/С028 Тей, експресуючих СО134 людини. Клон 20Е5 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини не стимулював додаткову проліферацію Тей, стимульованих бусинами СО3/СО028, експресуючих СО134 людини.
Як показано на фігурі 11 (середнє х СПС (стандартна помилка середнього) від 5 донорів), 60 клон 12Н3 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини і клон 20Е5 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини не викликав проліферації або викликав незначну проліферацію стимульованих бусинами СО3/С028 Тгед, експресуючих СО134 людини, тоді як
ОХ40Ї людини стимулював дуже сильну проліферацію стимульованих бусинами СО3/С028
Тгед, експресуючих СО134 людини.
Як показано на фігурі 12А (середнє х СВ), клон 12Н3 моноклонального антитіла миші проти
СО134 людини в комбінації з ОХ40Ї людини не продемонстрував будь-якої взаємної (тобто інгібуючої, синергетичної або адитивної) дії на стимульовані бусинами СО3/С028 Ттгед, експресуючі СО134 людини. Більше того, клон 20Е5 моноклонального антитіла миші проти
СО134 людини в комбінації з ОХ40Ї людини не продемонстрував будь-якої взаємної (тобто інгібуючої, синергетичної або адитивної) дії на стимульовані бусинами СО3/С028 Ттед, експресуючі СО134 людини (дані не показані).
Як показано на фігурі 128 (середнє х СВ), на відміну від дії (відсутність будь-якої дії), спостережуваної при проліферативних відповідях, опосередкованих ОХ40Ї людини, на стимульованих бусинами СО3/С2028 Тгед, експресуючих СО134 людини, клон 12Н3 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини інтенсивно пригнічував проліферативні відповіді, опосередковані ОХ40Ї людини, на стимульованих бусинами СО3/С2028 Ттгед, експресуючих СО134 людини. (с). Супресорна функція Т-регуляторних лімфоцитів, стимульованих бусинами з антитілами проти СОЗ людини/антитілами проти СО28 людини, експресуючих СО134 людини, після обробки клонами 12НЗ і 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини
Ср4і Т-лімфоцити людини виділяли із МКПК, і Тей і Тгед збагачували, як описано в прикладі
З(5) вище. Тей і Тгед поміщали в концентрації 0,25 х 105 клітин/мл у культуральне середовище
ЕРМІ 1640/бІщамах (сСірсо) з додаванням 0,02 мМ пірувату (сірсо), 100 Од./мл пеніциліну (сірсо), 100 мкг/мл стрептоміцину (5ірсо) і 10 95 ЗСЛи. Потім Теїй висіювали в концентрації 2,5 х 107 клітин/200 мкл/лунку (тобто 0,125 х 106 Теп/мл) і спільно культивували з 2,5 х 104 супресивними Тгед/200 мкл/лунку (тобто 0,125 х 105 Тгед/мл; співвідношення Тей/Ігед-1:1) на 9б-лункових планшетах з опуклим дном (сОгеїіпег). Дані спільно культивовані культури Теп/Ігед стимулювали бусинами СО3/С028 (Іпмігодеп) у концентрації 1 бусина/10 клітин з додаванням або без додавання 5,0 мкг/мл клону 12Н3 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини, 5,0 мкг/мл клону 20Е5 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини і 1,0 мкг/мл міченого полігістидином рекомбінантного ОХ40Ї людини (в присутності антитіла миші проти полігістидину, КО Зузіет5, у молярному співвідношенні 1:5) при температурі 37 "С/5 95 СбО»2 протягом 5 днів. Через 5 днів проліферацію клітин вимірювали із застосуванням включення 0,5 мкКи міченого тритієм тимідину (Регкіп 5 ЕІтег) і В-лічильника (Сапреїта-Раскага).
Як показано на фігурі 13 (середнє х СВ), Тгед людини пригнічували проліферативні відповіді
Теї людини, стимульовані бусинами СО3/С028 (тобто середовище). Дана супресивна функція
Тгед людини послаблялася в присутності клону 12Н3 моноклонального антитіла миші проти
СО0134 людини або в присутності ОХ40Ї людину. Клон 20Е5 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини не виявляв дії на супресивну функцію Тгед людини.
Приклад 4. Молекулярногенетична характеристика клонів 20Е5 ї 12Н3 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини (а). Ізотипування і розщеплення за Едманом
Клас імуноглобуліну миші, ізотип і тип легкого ланцюга клонів 20Е5 і 12Н3 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини, очищених за допомогою білка с, визначали із застосуванням набору Ізобігір'ї Моизе Мопосіопа! Апіїбоду Ізоїуре Кії (Коспе). Було показано, що як клон 20Е5, так і клон 12Н3 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини містять важкий ланцюг Ідс1 і легкий ланцюг капа (к).
Після стандартного аналізу методом ДСН-ПААГ електрофорезу із застосуванням готового гелю і системи МиРаде? Момех? (Іпумйтодеп) в редукуючих умовах (ДТТ (дитіотреїтол) і нагрівання до 70"С) клон 20Е5 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини переносили на полівінілиденфторидну (РОМЕ/Лттобіїоп-Р) мембрану для переносу (Міїйїїроге) і забарвлювали кумаси діамантовим блакитним (ВіоКадй). Потім смуги важкого і легкого ланцюгів (50 кДа і 25 кДа, відповідно) вирізали з РУОЮЕ мембрани і використовували для аналізу методом розщеплення за Едманом (який проводили з підшию ЕигоЗедиепсе, Сгопіпдеп, Те МеїПегіапавз) для визначення М-термінальної амінокислотної послідовності. Результати для клону 20Е5 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини представлені в ЗЕО ІЮО МО.З ї 5ЕО ІО
МО.61. Були визначені одинадцять амінокислот М-кінця важкого ланцюга і 11 амінокислот М- кінця легкого ланцюга. (5). ПЛ; з ОТ
Клітини гібридоми клону 20Е5 їі 12Н3 збирали з культури клітин. Клітини промивали ФБР, розділяли на аліквоти, поміщали у флакони, що містять по 5 х 105 клітин, і зберігали у вигляді дебрису при температурі -80 "С. Клітинний дебрис використовували для виділення РНК із застосуванням набору Кпеазу Міпі ІзоЇайоп КИ (ОІАСЕМ). Визначали концентрацію РНК (А260 нм) і РНК зберігали при температурі -80 "С. Сумарний вихід виділеної РНК склав 27,3 мкг і 58,4 мкг для клону 20Е5 і клону 12НЗ, відповідно (співвідношення А260/А280 в обох випадках 1,9). За допомогою зворотньої транскриптази з 1 мкг РНК синтезували кДНК із застосуванням набору
Кемепдіатм Н Міпих Рігеї 5ігапа соОМА 5упіпевів Кії (Геппепіав) і зберігали при температурі - 2076.
На підставі ізотипу (каппаЛдаб1і миші) і аналізу розщеплення за Едманом клону 20Е5 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини для ампліфікації М-областей клону 20Е5 моноклонального антитіла миші проти СЮО134 людини були розроблені наступні праймери:
Мо праймера." Послідовність"" БЕО ІЮ Мо. Напрямок Ген 201 ОЗАСАСТТОСТОСАССАТСАС 39 антизмістовий мкаппа 266 САСТОСАТОСТОООААСАТО 40 антизмістовий мкаппа 203 ВОССАСТОСАТАСАСАСАТО 41 антизмістовий мідс1 204 ТОСАСАСОСАТССАСАСТТ 42 антизмістовий мідс 1 259 ВССААДИТАСААУТМСАВСАВНМ/ЗМОС 43 змістовий 20Е5НС 260 ОСОТАСААТТАСАКСАНКУУЗМО ССС 44 змістовий 20Е5НС 265 ОСОСАТАТАСАКАТОАСМСАКАС 45 змістовий 20Е5І С х номер згідно із внутрішньою системою кодування Віосего5; "к вироджені праймери: М-А, С, с або Т, У-С або Т, К-А або с, МУ-А або Т і 550 або С.
На підставі ізотипу (каппа/до1і миші) клону 12Н3 моноклонального антитіла миші проти
СсОр134 людини і змістовних праймерів, що гібридизуються із КДНК, що кодує сигнальні пептиди миші (частково на підставі Апіроду Епдіпеегіпд Моїште 1 Копіегтапп, Коїапа Е.; бабеї, єтетап (Ед5.), Зргіпдег бар МапиаЇє5, 2па еа., 2010), для ампліфікації М-областей клону 12Н3 моноклонального антитіла миші проти СЮО134 людини були розроблені наступні праймери:
Мо праймера." Послідовність"" БЕО ІЮ Мо. Напрямок Ген 416 САЯТасСАТАСАСАСАТОСОСОО 46 антизмістовий мідс1
Зо 394 АСТОСАТОСТОООСААСАТОС 47 антизмістовий мкаппа 405 АТОССАТОСАСОСТЕТАТСАТ5УТСТТ 48 змістовий сигнальний пептид 410 АТООКАТОСАОСКОСОСТСТТТ МТС 49 змістовий сигнальний пептид 389 АТО ОСУ/ТСАААСАТОСАСТСАСА 50 змістовий сигнальний пептид х номер згідно із внутрішньою системою кодування Віосего5; "к вироджені праймери: М-А, С, с або Т, У-С або Т, К-А або б, МУ-А або Т, і 5-50 або С,
МАС або А і К-С або Т.
Праймери 201 і 266 є антизмістовними, розробленими для гібридизації в межах константної області гена капа миші в положеннях 214-232 і 236-255, відповідно (на підставі облікового номера У00807 Іверсія М00807.11).
Праймери 203 і 204 є антизмістовними, розробленими для гібридизації в межах константної області (91 миші в положеннях 115-134 і 221-240, відповідно (на підставі облікового номера 300453 |версія У00453.11).
Праймери 259 і 260 є змістовними виродженими праймерами (виродження 512 і 256, відповідно) які гібридизуються на М-кінці (амінокислоти 1-8 і 2-9, відповідно) важкого ланцюга клону 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини на підставі розщеплення за Едманом.
Праймер 265 є змістовним виродженим праймером (виродження 16), який гібридизується на
М-кінці (амінокислоти 1-7) легкого ланцюга клону 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини на підставі розщеплення за Едманом.
Праймер 416 є антизмістовним, розробленим для гібридизації в межах константної області 991 миші в положеннях 111-131 (на підставі облікового номера 900453 Іверсія У00453.11).
Праймер 394 є антизмістовним, розробленим для гібридизації в межах константної області гена капа миші в положеннях 235-254 (на підставі облікового номера 00807 Іверсія М00807.11).
Праймери 389, 405 і 410 є виродженими праймерами (виродження 2, 8 і 8, відповідно), які гібридизуються з послідовністю сигнального пептиду антитіла миші. Праймер 389 був розроблений для легкого ланцюга, праймери 405 і 410 - для важкого ланцюга.
Праймери 201, 266, 203, 204, 259, 260 і 265 використовували в різних комбінаціях для ампліфікації варіабельних областей клону 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини, а праймери 416, 394, 405, 410 ії 389 використовували в різних комбінаціях для ампліфікації варіабельних областей клону 12Н3 антитіла миші проти СО134 людини. Численну кількість бо різних ПЛР проводили із застосуванням в якості матриці отриманих кДНК обох клонів.
ДНК-полімеразу Ассиргіте"М Ріх (Іпийгодеп) використовували для ампліфікації варіабельних областей важкого і легкого ланцюга клону 20Е5 і клону 12Н3 антитіла миші проти СО134 людини.ПЛР-продукти аналізували на 1 95 агарозному гелі. Продукти ПЛР-реакцій очищували на гелі і клонували у вектор рСВ-Вішпі ІПІ-ТОРО? для аналізу послідовностей. У плазмідах, що містять ПЛР-вставку, клоновані вставки аналізували шляхом секвенування ДНК (аналіз проводили за допомогою 5еїгмісх5 В.М., І еїдеп, Те Меїпегіапах або Масгодеп, Атвіегдат, Те
Меїйпегіапаз) із застосуванням Т7 для одержання консенсусної послідовності М-областей клонів 20Е5 і 12Н3 антитіла миші проти СО134 людини. Одинадцять реакцій інформативних послідовностей важкого ланцюга і З реакції інформативних послідовностей легкого ланцюга одержували для клону 20Е5 антитіла миші проти СО134. П'ять реакцій інформативних послідовностей важкого ланцюга і З реакції інформативних послідовностей легкого ланцюга одержували для клону 12Н3 антитіла миші проти СО134. На підставі даної інформації визначали консенсусні послідовності М-областей обох антитіл (див. ЗЕО ІЮ МО. 4, 5, 12 і 13).
Приклад 5. Створення химерних Ідс4/каппа людини і/або Їде1 /каппа людини (тобто заміна константних доменів миші константними доменами Ідс/каппа людини) клонів 20Е5 їі 12Н3 моноклонального антитіла людини проти СО134 людини
На підставі визначених М-областей миші (див. приклад 4 (Б) вище) було проведено конструювання клонів 20Е5 і 12НЗ антитіла миші проти СО134 для одержання версій химерного антитіла людини. Із цією метою в СЕМЕАКТ (Кедепз5бриго, Септапу) були замовлені послідовності КДНК, оптимізовані для клітин СНО (див. ЗЕО ІЮ МО. 20 (кодує важкий ланцюг
Іц404 клону 20Е5 химерного антитіла людини), 5ЕО ІЮ МО. 21 (кодує легкий ланцюг к клону 20Е5 химерного антитіла людини), 5ЕО ІЮ МО. 22 (кодує важкий ланцюг Ідс1 клону 20Е5 химерного антитіла людини), 5ЕО ІЮО МО. 23 (кодує важкий ланцюг Ід4 клону 12Н3 химерного антитіла людини) і 5ЕО ІЮО МО. 24 (кодує легкий ланцюг к клону 12Н3 химерного антитіла людини), що кодують сигнальний пептид миші, за яким слідує варіабельна область легкого ланцюга, приєднана до константної області капа людини, або за яким слідує варіабельна область важкого ланцюга, приєднана до константної області (ІД людини. Дане конструювання було проведено для обох антитіл; для клону 20Е5 варіабельна область важкого ланцюга була приєднана до константної області (954 людини або Ідс1 людини; для клону 12Н3 варіабельна
Зо область важкого ланцюга була приєднана до константної області ІдсС4 людини. Із застосуванням підходящих рестрикційних ферментів отримані кДНК субклонували в отримані із пкДНКЗ.1 плазміди експресії. Химерні антитіла експерсували із застосуванням системи експресії
Егеебіуїет МАХ СНО (клітини СНО-5) (Іпмігодеп). Експресовані антитіла очищували із застосуванням колонок для афінної хроматографії з білююм А (СЕ Неайсаге). Химерні амінокислотні послідовності див. в хЕО ІЮО МО. 25, 26, 27, 28 129.
Приклад 6. Характеристика зв'язування клону 20Е5 химерного моноклонального антитіла
Ідс4/каппа людини і/або Ідс1/каппа людини проти СО134 людини (а). Характеристики зв'язування клону 20Е5 моноклонального антитіла Ідс4к людини проти
СО0134 людини на СО4-позитивних Т-лімфоцитах, стимульованих ФГА, експресуючих СО134 людини
Були отримані стимульовані ФГА (у концентрації 10 мкг/мл протягом 1 дня; див. вище) Т- лімфоцити, експресуючі СО134 людини. Клітини збирали і поміщали в концентрації 1-2 х 106 клітин/мл в охолоджений льодом ФБР/БСА/МамМмз. Клітини інкубували з 0, 0,007, 0,02, 0,07, 0,2, 0,6, 1,9, 5,6, 16,7, 50,0 мкг/мл клону 20Е5 химерного антитіла (дС4к людини проти СО134 людини протягом 30 хвилин при температурі 4"С. Після тривалого промивання у
ФБР/БСА/Маміз клітини інкубували з розведеними у співвідношенні 1:50 кон'югованими з ФІТЦ антитілами миші проти Їде4 людини (5ідта) протягом 30 хвилин при температурі 4 "С. Після тривалого промивання у ФБР/БСА/Мамз клітини інкубували з розведеним у співвідношенні 1:10 кон'югованим з ФЕ антитілом миші проти СО4 людини (ВО Віозбсіепсе5) протягом 30 хвилин при температурі 4 "С. Після тривалого промивання у ФБР/БСА/МамМ»з клітини фіксували в 2 95 формальдегіді у ФБР/БСА/Мамз протягом 30 хвилин при температурі 4 "С. Зв'язування антитіл вимірювали із застосуванням методу проточної цитометрії (ЕАСзСаїїриг; ВО Віозсіепсев5).
Клон 20Е5 химерного антитіла (49034к людини проти СО134 людини насичував поверхневі молекули СО134 людини на стимульованих ФГА СОдгпозитивних Т-лімфоцитах у концентрації приблизно 5,0-10,0 мкг/мл (дані не показані). Половинне максимальне зв'язування спостерігалося при концентрації клону 20Е5 химерного антитіла (д04к людини проти СО134 людини : 1,0 мкг/мл (дані не показані). (Б). Зв'язування клону 20Е5 химерного моноклонального антитіла ІдС4к людини проти
СО134 людини на стимульованих ФГА СО 4-позитивних і СО 8-позитивних Т-лімфоцитах, бо експресуючих СО134 людини
Були отримані стимульовані ФГА (у концентрації 10 мкг/мл протягом 1 дня; див. вище) Т- лімфоцити, експресуючі СО134 людини. Клітини збирали і поміщали в концентрації 1-2 х 106 клітин/"мл в охолоджений льодом ФБР/БСА/МамМ». Клітини інкубували з додаванням або без додавання 20,0 мкг/мл клону 20Е5 химерного антитіла (39034к людини проти СО134 людини протягом 30 хвилин при температурі 4 "С. Після тривалого промивання у ФБР/БСА/МамМз клітини інкубували протягом 30 хвилин при температурі 4 "С з розведеними у співвідношенні 1:200 кон'югованими з ФЕ антитілами кози проти дб людини (Есу-специфічними) (Часк5оп
ІптітипоКезеагсп) протягом 30 хвилин при температурі 4 "С. Після тривалого промивання у
ФБР/БСА/Мамз клітини інкубували з розведеним у співвідношенні 1:10 кон'югованим з ФІТЦ антитілом миші проти СО4 людини (ВО Віозсіепсе5) або з розведеним у співвідношенні 1:10 кон'югованим з ФІТЦ антитілом миші проти СО8 людини (ВО Віозсіепсе5) для виявлення субпопуляцій Т-лімфоцитів. Після тривалого промивання у ФБР/БСА/Мам»з клітини фіксували в 2 ую формальдегіді у ФБР/БСА/МамМз протягом 30 хвилин при температурі 4 "С. Зв'язування антитіл вимірювали із застосуванням методу проточної цитометрії (БАСзЗсСаїйи"; во
Віозсієпсеб).
Клон 20Е5 химерного антитіла І(д4к людини проти СО134 людини демонстрував позитивне забарвлення на субпопуляції активованих ФГА СО4-позитивних Т-лімфоцитів людини і незначне позитивне забарвлення на субпопуляції активованих ФГА СО8-позитивних Т-лімфоцитів людини (дані не показані). (с). Зв'язування клону 20Е5 химерного моноклонального антитіла дб4к людини проти
СО134 людини на СО4-позитивних і СО8-позитивних Т-лімфоцитах, стимульованих стимулюючими бусинами з антитілами проти людини СОЗ/антитілами проти людини СО28, експресуючих СО134 людини
Мононуклеарні клітини периферичної крові (МКПК) людини від здоровіших донорів (була отримана інформована згода) виділяли в результаті центрифугування в градієнті щільності на приладі Гутрпоргер (1,077 г/мл; Мусотей). Потім 1 х 106 МКПК/мл у культуральному середовищі КРМІ-1640 (сібсо), що містить 10 95 ембріональну телячу сироватку (Воаіпсо) і 50 мкг/мл гентаміцину (сібсо), стимулювали стимулюючими бусинами з антитілами миші проти
СО3 людини/антитілами миші проти СО28 людини (бусини СО3З/СО028; Іпмігодеп) у концентрації
Зо 1 бусина/4 клітини при відсутності або в присутності 25 Од./мл рекомбінантного інтерлейкіну-2 людини (РергоТесії) при температурі 37 "С/5 95 СО» протягом 1 дня. Після культивування МКПК збирали і поміщали в концентрації 1-2 х 109 клітин/мл в охолоджений льодом ФБР/БСА/Мамз.
Клітини інкубували з додаванням або без додавання 20,0 мкг/мл клону 20Е5 химерного антитіла
Іцое4к людини проти СО134 людини протягом 30 хвилин при температурі 4 "С. Після тривалого промивання у ФБР/БСА/МаМз клітини інкубували з розведеними у співвідношенні 1:200 кон'югованими з ФЕ антитілами кози проти дб людини (Есу-специфічними) (Часк5оп
ІптітипоКезеагсп) протягом 30 хвилин при температурі 4 "С. Після тривалого промивання у
ФБР/БСА/Мамз клітини інкубували протягом 30 хвилин при температурі 4 "С з розведеним у співвідношенні 1:10 кон'югованим з ФІТЦ антитілом миші проти СО4 людини (ВО Віоз5сіепсе5) або з розведеним у співвідношенні 1:10 кон'югованим з ФІТЦ антитілом миші проти СО8 людини (ВО Віозсіепсе5) для виявлення субпопуляцій Т-лімфоцитів. Після тривалого промивання у
ФБР/БСА/Мамз клітини фіксували у 2 95 формальдегіді у ФБР/БСА/Мамз протягом 30 хвилин при температурі 4 "С. Зв'язування антитіл вимірювали із застосуванням методу проточної цитометрії (ЕАСзСаїїриг; ВО Віозсіепсев5).
Як показано на фігурі 14, клон 20Е5 химерного антитіла (д904к людини проти СО134 людини демонстрував позитивне забарвлення на субпопуляції Срдпозитивних Т-лімфоцитів людини, активованих бусинами СО3/СО028, і незначне позитивне забарвлення на субпопуляції
СОдгпозитивних Т-лімфоцитів, активованих бусинами СО3/СО28. Будь-якої очевидної дії при додаванні рекомбінантного ІЛ-2 людини не спостерігалося.
Приклад 7. Біологічна характеристика клону 20Е5 химерного моноклонального антитіла
Ідс4/каппа людини проти СО134 людини (а). Проліферація стимульованих ФГА Т-лімфоцитів, експресуючих СО134 людини, після обробки клоном 20Е5 химерного моноклонального антитіла (д4к людини проти СО134 людини
Були отримані стимульовані ФГА (10 мкг/мл протягом 1 дня; див. вище) Т-лімфоцити, експресуючі СО134 людини. Клітини збирали і суспендували в концентрації 2 х 106 клітин/мл у культуральному середовищі КРМІ (сібсо), що містить 10 95 ембріональну телячу сироватку (Водіпсо) і 50 мкг/мл гентаміцину (сірсо). Клітини висіювали в концентрації 0,1 х 106 клітин/100 мкл/лунку (тобто 1 х 105 клітин/мл) на 96-ямкові планшети із пласким дном (Соппіпод) і піддавали впливу 25,0 мкг/мл клону 20Е5 химерного антитіла Ід4к людини проти СЮО134 людини або 25,0 бо мкг/мл контрольного антитіла |(304к людини проти СО40 людини (РО102; Рапсепеїіс5) або 1,0 мкг/мл міченого полігістидином рекомбінантного ОХ40Ї людини (у присутності антитіла миші проти полігістидину, КО Зузіетв5, у молярному співвідношенні 1:5) при температурі 37 "С/5 до
Со» протягом 6 днів. Через 6 днів проліферацію клітин вимірювали із застосуванням набору для колориметричного аналізу (включення ВгаМ) СеїЇ Ргоїйегайоп ЕГІБА м (Коспе) і зчитувального обладнання для аналізу ЕГІЗА (ВіоКад) при довжині хвилі А450 нм.
Як показано на фігурі 15 (середнє х СВ), клон 20Е5 химерного антитіла І(дс4к людини проти
СО134 людини (л20Е5) і ОХ40Ї людини стимулювали проліферацію стимульованих ФГА Т- лімфоцитів, експресуючих СО134 людини. Відсутність обробки (тільки середовище) або обробка контрольним антитілом Їд4к людини проти СО40 людини (лідс4) не виявляли будь-якої дії на проліферацію стимульованих ФГА Т-лімфоцитів, експресуючих СО134 людини. (Б). Проліферація стимульованих ФГА Т-лімфоцитів, експресуючих СО134 людини, після обробки клоном 20Е5 химерного моноклонального антитіла Ідс4к людини проти СО134 людини в комбінації з рекомбінантним ОХ40Ї. людини
Були отримані стимульовані ФГА (10 мкг/мл протягом 1 дня; див. вище) Т-лімфоцити, експресуючі СО134 людини. Клітини збирали і суспендували в концентрації 2 х 109 клітин/мл у культуральному середовищі КРМІ (сібсо), що містить 10 95 ембріональну телячу сироватку (Водіпсо) і 50 мкг/мл гентаміцину (сірсо). Клітини висіювали в концентрації 0,1 х 105 клітин/100 мкл/лунку (тобто 1 х 106 клітин/мл) на 9б6-лункових планшетах із пласким дном (Соппіпо) і піддавали впливу 0, 0,025, 0,25, 2,5 або 25,0 мкг/мл клону 20Е5 химерного антитіла Ідса4к людини проти СО134 людини або/ в комбінації з 0, 0,01, 0,1, або 1,0 мкг/мл міченого полігістидином рекомбінантного ОХ40Ї людини (у присутності антитіла миші проти полігістидину, КО Зузіет5, у молярному співвідношенні 1:5) при температурі 37 "С/5 95 СбО»2 протягом 6 днів. Через 6 днів проліферацію клітин вимірювали із застосуванням набору для колориметричного аналізу (включення ВгаМ) СеїЇ Ргоїйегайоп ЕГІБА м (Коспе) і зчитувального обладнання для аналізу ЕГІЗА (ВіоКад) при довжині хвилі А450 нм.
Як показано на фігурі 16 (середнє х СВ), клон 20Е5 химерного антитіла І(дс4к людини проти
СО134 людини (л20Е5) і ОХ40Ї людини дозозалежним чином стимулювали проліферацію стимульованих ФГА Т-лімфоцитів, експресуючих СО134 людини. Клон 20Е5 химерного антитіла
ІЯб4к людини проти СО134 людини залежно від донора стимулював проліферацію в
Зо концентрації 2,5 або 25 мкг/мл (донор 1) або в концентрації 0,25, 2,5 і 25 мкг/мл (донор 2). Крім цього, ОХ40Ї. людини залежно від донора стимулював проліферацію в концентрації 0,1 або 1,0 мкг/мл (донор 1) або в концентрації 0,01, 0,1 і 1,0 мкг/мл (донор 2).
Як показано на фігурі 17 (середнє х СВ), комбінація клону 20Е5 химерного антитіла І|ддсак людини проти СО134 людини (л20Е5) у концентрації 2,5 і 25 мкг/мл (або в менших концентраціях; дані не показані) з ОХ40Ї людини у концентрації 0,1 і 1,0 мкг/мл (або в менших концентраціях; дані не показані) не продемонструвала будь-якої взаємної (тобто синергетичної або адитивної, або інгібуючої) дії на проліферацію стимульованих ФГА Т-лімфоцитів, експресуючих СО134 людини. (с). Проліферація стимульованих стимулюючими бусинами з антитілами проти СОЗ3 людини/антитілами проти СО28 людини Т-лімфоцитів, експресуючих СО134 людини, після обробки клоном 20Е5 химерного моноклонального антитіла (д4к людини проти СО134 людини
Мононуклеарні клітини периферичної крові (МКПК) людини від здоровіших донорів (була отримана інформована згода) виділяли в результаті центрифугування в градієнті щільності на приладі Гутрпоргер (1,077 г/мл; Мусотей). Потім МКПК висіювали в концентрації 0,1 х 105 клітин/100 мкл/лунку (тобто 1 х 106 клітин/мл) на 9б-лункових планшетах із пласким дном (Сотіпод) у культуральному середовищі КРМІ-1640 ((ібсо), що містить 10 95 ембріональну телячу сироватку (Водіпсо) і 50 мкг/мл гентаміцину (сірсо), і стимулювали стимулюючими бусинами з антитілами миші проти СОЗ людини/антитілами миші проти СО28 людини (бусини со3/С028; Іпмігодеп) у концентрації 1 бусина/2 клітини при відсутності або в присутності 25
Од./мл рекомбінантного інтерлейкіну-2 людини (РергоТесі) при температурі 37 "С/5 95 СО».
Через 1 день або через 2 дні (з додаванням і без додавання інтерлейкіну-2) стимульовані бусинами СО3/С028 Т-лімфоцити, експресуючі СО134 людини, піддавали впливу 25,0 мкг/мл клону 20Е5 химерного антитіла (д)034к людини проти СО134 людини або 1,0 мкг/мл міченого полігістидином рекомбінантного ОХ40Ї людини (у присутності антитіла миші проти полігістидину, КО Зувіет5, у молярному співвідношенні 1:5) при температурі 37 "С/595 бО2 протягом б днів або протягом 5 днів, відповідно. Клітини, які початково стимулювали комбінацією бусин СОЗ3/С028 з рекомбінантним інтерлейкіном-2 людини, повторно стимулювали за 1 день до вимірювання проліферації клітин 25 Од./мл рекомбінантного інтерлейкіну-2 людини. Через 6 днів або через 5 днів впливу клону 20Е5 химерного антитіла Їу54к людини бо проти СО134 людини або ОХ40Ї людини проліферацію клітин вимірювали із застосуванням набору для колориметричного аналізу (включення Вга)) Сеї! Ргоїїйегайоп ЕГІБА "мМ (Коснпе) і зчитувального обладнання для аналізу ЕГІЗА (ВіоКадй) при довжині хвилі А450 нм.
Як показано на фігурі 18 (середнє хз СВ, п-З із застосуванням зразка, отриманого від одного донора), хоча стимулюючі бусини СО3/СО028 самі по собі (тобто середовище) стимулювали значну проліферацію Т-лімфоцитів, експресуючих СО134 людини, клон 20Е5 химерного антитіла (дс4к людини проти СО134 людини (л20Е5) і ОХ40Ї людини стимулювали додаткову проліферацію стимульованих бусинами СО3/С028 Т-лімфоцитів, експресуючих СО134 людини.
Додавання інтерлейкіну-2, як представляється, підсилювало тільки базову (тобто викликану середовищем) проліферацію стимульованих бусинами СО3/С028 Т-лімфоцитів, експресуючих
СО134 людини. (4). Імуностимулюючі відповіді у мавп макак-резус після обробки клонами 12Н3 і 20Е5 (химерного) антитіла людини проти СО134 людини
Нелюдиноподібних приматів мавпи макаки-резус можна імунізувати білком вірусу імунодефіциту мавп, др130, як описано Умеіпрего із співавт. «У Іттипоїпег 2006; 29: 575-585).
Очікується, що в дренувальних лімфатичних вузлах імунізованих мавп, які одержували клони 12Н3 і 20Е5 антитіла людини (наприклад, химерного або гуманізованого або деімунізованого;х наприклад, підкласу дДС1 або Іде4 людини) проти СО134 людини, буде спостерігатися збільшення лімфатичних вузлів у порівнянні з контрольними імунізованими мавпами. Очікується, що у тварин, які одержували клони 12Н3 або 20Е5 антитіла миші або гуманізованого антитіла, у порівнянні з контролем буде спостерігатися збільшення титрів др130- специфічних антитіл і збільшення відповідей Т-клітин, які довго живуть. Не повинно спостерігатися будь-яких виражених ознак токсичності у мавп, які одержували лікування.
Приклад 8. Характеристика доменів і епітопів СО134 людини, розпізнаваних клонами 12НЗ і 20Е5 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини (а). Зв'язування клонів 12Н3 ії 20Е5 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини з невідновленим і відновленим рекомбінантним злитим білюм СО134 людини:Рсу людини (вестерн-блотинг).
По 1300 або 650 нг/доріжку (для фарбуванн кумаси діамантовим блакитним) або 250 нг/доріжку (для вестерн-блотинга) рекомбінантного злитого білю»а СО134 людини:Есу людини
Зо (до) (КО Зузіетв) аналізували метод електрофорезу з застосуванням 4-12 9о Тгів-Ві5 гелей і електродного буфера МОРЗ5З (Іпмігодеп) у різних нередукуючих і редукуючих умовах (див. фігуру 19-А) у готовій І 0О5-ПААГ денатуруючій системі для електрофорезу МиРаде? Момех?. Потім рекомбінантний злитий білок СЮО134 людини:Рсу людини забарвлювали кумаси діамантовим блакитним (ВіоКад) або переносили на полівінілиденфторидну (РОМЕ) мембрану для переносу (Міпйіроге). Після блокування ФБР/О0,05 95 Твін 20/1 95 БСА фракція М (Коспе) протягом 20 хв. при кл. РОМЕ мембрани інкубували з 100 нг/мл клону 12Н3 або клону 20Е5 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини протягом 1 години при к.т. Паралельно 100 нг/мл контрольного антитіла миші ізотипу Ідсік (ВО Віозсіепсе5) використовували в якості негативного контролю. Після тривалого промивання у ФБР/0О,0595 Твін 20 визначали зв'язування клону 12Н3 або клону 20Е5 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини з розведеними у співвідношенні 1:5000 кон'югованими з пероксидазою хріну Есу-специфічними антитілами кози проти імуноглобулінів миші (Чдаскзоп ІттипокКезеагсі) протягом 1 години при к.т. з наступним додаванням готового до застосування розчину субстрату ТМБ (Зідта) для колориметричного виявлення.
Як показано на фігурі 19-В, рекомбінантний злитий білок СО134 людини:Рсу людини у нередукуючих (і денатуруючих умовах 05 з термічною денатурацією і без неї, умоваа і Б, відповідно) умовах демонстрував молекулярну масу «130-140 кДа. В нередукуючих умовах без нагрівання (умова а) спомтерігали дві смужки у безпосередній близькості, що свідчить про те, що фракція рекомбінантного злитого білка СО134 людини:(їсу людини не повністю денатурувала/розгорнулася. В нередукуючих умовах, з нагріванням (умова Б) спостерігалася одна смужка, що свідчить про тей факт, що рекомбінантний злитий білок СО134 людини: Есу людини повністю денатурував/розгорнувся. Рекомбінантний злитий білок СО134 людини: Есу людини в редукуючих умовах (і денатуруючих умовах ГО5 з термічною денатурацією і без неї, умова с і а, відповідно) призводив до появи смуг з «110 кДа (умова с) і «60-65 кДа (умова ад).
Перше спостереження свідчило про неповне відновлення рекомбінантного злитого білка СО134 людини:Есу людини, останнє спостереження свідчило про повне відновлення/розщеплення дисульфідних містків, що поєднують два Есу-фрагменти, отримані від (Д61 людини, у межах кожної молекули рекомбінантного злитого білка СЮО134 людини:Есу людини.
Як показано на фігурі 19-С, як клон 12Н3, так і клон 20Е5 антитіла миші проти СО134 бо людини розпізнавали рекомбінантний злитий білок СО134 людини:Есу людини в нередукуючих умовах (і денатуруючих умовах І 05 з термічною денатурацією і без неї, умова а і Б, відповідно) з переважно -130 кДа. Навпаки, клон 12Н3 антитіла миші проти СО134 людини продемонстрував тільки незначне зв'язування з рекомбінантним злитим білюм СО134 людини:!Есу людини в редукуючих умовах (і денатуруючих умовах ГО05 з термічною денатурацією і без неї, умова с і д, відповідно), тоді як клон 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини продемонстрував сильне зв'язування з рекомбінантним злитим білюм СО134 людини:!Есу людини в редукуючих умовах (і денатуруючих умовах ГО05 з термічною денатурацією і без неї, умова с і й, відповідно).
Дані результати демонструють, що клон 12Н3 і клон 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини специфічно розпізнають СО134 людини. Більше того, дані результати демонструють, що клон 12НЗ ї клон 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини, як представляється, розпізнають різні епітопи СЮО134 людини, що доводиться відповідним незначним зв'язуванням (клон 12Н3) у порівнянні із сильним зв'язуванням (клон 20Е5) з рекомбінантним злитим білююм СО134 людини:!Есу людини в редукуючих умовах (і денатуруючих умовах ГО05 з термічною денатурацією і без неї). Дані результати свідчать, що клон 12Н3 антитіла миші проти СО134 людини розпізнавав епітоп на СО134 людини, який є не чутливим до денатурації (І О5 і теплова обробка) і чутливим до відновлення (тобто до розщеплення ДТТ дисульфідного містка (містків) - найбільш ймовірно, що перебувають у цистеїн-багатих доменах (СКО)). Дані результати свідчать, що клон 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини розпізнає епітоп на СО134 людини, який є не чутливим до денатурації (І О5 і теплова обробка) і не чутливим до відновлення (тобто до розщеплення ДТТ дисульфідного містка (містків) - найбільш ймовірно, що перебувають в
Св). (Б). Зв'язування клонів 12Н3 і 20Е5 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини з повнорозмірною конструкцією СО134 людини і різними усіченими конструкціями СО134 людини, які експресуються на клітинній лінії 293-Е (доменне картування)
З метою аналізу однозначної специфічності клонів 12Н3З ї 20Е5 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини визначали розташування епітопу (епітопів), розпізнаваних клонами 12Н3 ї 20Е5 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини, методом доменного картування. Здатність клонів 12Н3 їі 20Е5 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини
Зо зв'язуватися з усіченими конструкціями СО134 людини, які експресуються на поверхні клітин 297-Е (отриманих з НЕК), визначали в результаті аналізу РАС5.
На підставі літературних даних (Зм/і55-Ргої: РАЗ489.1; І аїга єї аї. Єиг ) Іттипої! 1994; 24: 677-683; Водтег еї аї. Ттепа5 Віоспет сі 2002; 27: 19-26; Сотраап еї аї. Зіписіцгте 2006; 14: 1321-1330; публікація патенту США Мо 2011/0028688 А!) були встановлені цистеїн-багаті домени (СКО) і шарніроподібна структура в позаклітинній області СО134 людини. СКО кодуються СКОТТ, СКО2, (усіченим) СКОЗ, (усіченим) СКО4 (див. фігуру 20). СКО містять топологічно різні типи модулів, які називають А-модуль і В-модуль (див. також фігуру 20). А- модулі являють собою С-подібні структури, а В-модулі являють собою 5-подібні структури.
Типовий СКО зазвичай складається з А1-82-модулів або А2-В1-модулів (або, менше часто, відмінної пари модулів, наприклад, А1-В1) з 6 консервативними залишками цистеїна, де число позначає кількість дисульфідних містків у межах кожного модуля (див. також фігуру 20). Як показано на фігурі 20, були отримані і експресовані 5 різних конструкцій СО134 людини: (1) конструкція повнорозмірного СО134 людини, яка починається з М-термінального СКО1 (тобто
А1-82-модуль СКО1 охоплює амінокислоти 29-65), внаслідок цього позначена як "СКО1" і утримуюча амінокислоти 1-277 (див. з«ЕО ІЮО МО. 1), (2) конструкція "СКО2", яка починається з
М-термінального СКО2 (тобто А1-82-модуль СКО2 охоплює амінокислоти 66-107) і містить амінокислоти 66-277, приєднані до амінокислот 1-28 сигнального пептиду (див. з«ЕО ІЮ МО. 30), (3) конструкція "СКОЗ", яка починається з М-термінального СКОЗ (тобто А1-81-модуль СКОЗ охоплює амінокислоти 108-146 (відповідно до Сотраап еї аї. бігисішге 2006; 14: 1321-1330) або усічений А 1-модуль СКОЗ охоплює амінокислоти 108-126 (відповідно до і аїга еї аї. Еиг У
Ітітипо! 1994; 24: 677-683)) і містить амінокислоти 108-277, приєднані до амінокислот 1-28 сигнального пептиду (див. ЗЕО ІЮ МО. 31), (4) конструкція "СКО4", яка складається з М- термінального СКО4 або В1-модуля субдомену СКОЗ/А1-модуля усіченого СКО4 (тобто А1-В1- модуль СКО4 охоплює амінокислоти 127-167 (І аїга єї а)ї. Єиг ) Іттипої! 1994; 24: 677-683), або комбінація (не показана на фігурі 20) В1-модуля субдомену СКОЗ з АТ1-модулем усіченого СКО4 охоплює амінокислоти 127-146 з амінокислотами 147-167, відповідно (Сотраап еї аї. 5ігисіиге 2006; 14: 1321-1330)), і містять амінокислоти 127-277, приєднані до амінокислот 1-28 сигнального пептиду (див. ЗБ ІО МО. 32), і (5) конструкція "усічений (ус) СКО4", яка складається з М-термінального В1-модуля усіченого СЕКО4 або субдомену СРЕО4 (тобто А1- 60 модуль усіченого СКО4 охоплює амінокислоти 147-167 (Сотраап єї аІ. Бігисіцге 2006; 14: 1321-
1330) або В1-модуль субдомену СКО4 (не показаний на фігурі 20; І аїга еї аІ. Єиг У Іттипої 1994; 24: 677-683) охоплює амінокислоти 147-167) і містить амінокислоти 147-277, приєднані до амінокислот 1-28 сигнального пептиду (див. зХЕО ІО МО. 33). Дані 5 конструкцій СО134 людини були отримані шляхом ПЛР-складання із застосуванням ДНК-полімерази Ассиргіте"М Ріх (Іпийгодеп) і праймерів, представлених у наступній таблиці:
Мо праймера." Послідовність 5ЕО ІЮ Мо. Напрямок Ген 362 СТСОСАТССОССАССАТОТОССТО 51 змістовий СО134 лідерний 363 АбААТТСТТАТТАСАТСТТОСССА 55 антизмістовий СЮО134 кінцевий 364 АСТОТСАСТОСАССсСстТОоСООтТеСС 52 змістовий СКО2 365 ОВОСАССОСАСООСТССАСТОАСАСТ 53 антизмістовий СКО2 366 АСТОТСАСТОСААООСТОСАСОСОСТ 54 змістовий СКОЗ 367 АОСССТОСАССТТССАСТОАСАСТ 56 антизмістовий СКОЗ 368 АСТОТСАСТОСАСССтТОССССССТ 57 змістовий СКО4 369 АОСООООСАСОСТССАСТОАСАСТ 58 антизмістовий СКО4 370 АСТОТСАСТОСАТОСАСССТОСОСТ 59 змістовий СКО4 усічений 371 АВССАСОСТОСАТССАСТОАСАСТ 60 антизмістовий СКО4 усічений х Ме праймера відповідно до внутрішньої системи кодування Віосего5
Коротко, КДНК, що кодує амінокислоти 1-28 сигнального пептиду, і кКДНК, що кодує амінокислоти 66-277 СО134 людини, ампліфікували із застосуванням пари праймерів 362/365 і 364/363, відповідно, у реакції ПЛР із повнорозмірним СО134 людини в якості матриці. Потім конструкцію "СКО2" одержували із застосуванням даних двох продуктів ПЛР шляхом ПЛР- складання із застосуванням пари праймерів 362/363. КДНК конструкцію, що кодує, "СКО2", субклонували в плазміди експресії, отримані із пКДНКЗ.1, із застосуванням підходящих сайтів рестрикції. Аналогічно, конструкцію "СКОЗ" (амінокислоти 1-28 сигнального пептиду, приєднані до амінокислот 108-277 СО134 людини), конструкцію "СКО4" (амінокислоти 1-28 сигнального пептиду, приєднані до амінокислот 127-277) і конструкцію "усіченого СКО4" (амінокислоти 1-28 сигнального пептиду, приєднані до амінокислот 147-277) одержували і субклонували в плазмідах експресії отриманих із пкДНКЗ.1, із застосуванням відповідних праймерів, представлених у вищевказаній таблиці. Більше того, повнорозмірний СО134 людини (5ЕО ІЮ
Зо МО. 1) також повторно клонували в плазмідах експресії, отриманих із пкКДНКЗ.1.
Із застосуванням системи експресії Егеебіуїе"М 293 (Іпмйгодеп) клітини 293-Е Егеебіує"м (Іпмігодеп) тимчасово трансфікували 5 отриманими варіантами СО134 людини. Через 48-72 год. аналізували поверхневу експресію СО134 людини на трансфікованих клітинах у ході аналізу ЕАСЗ5. Із цією метою трансфіковані клітини збирали і поміщали в концентрації 1-2 х 106 клітин/мл в охолоджений льодом ФБР/БСА/Мам»з. Клітини інкубували з 20,0 мкг/мл клонів 12Н3 і 20Е5 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини протягом 30 хвилин при температурі 4 "С. Паралельно 20,0 мкг/мл контрольного антитіла ізотипу дбїк миші (ВО Віозсіепсев5) використовували в якості негативного контролю. Після тривалого промивання у ФБР/БСА/МамМз клітини інкубували з розведеними у співвідношенні 1:200 кон'югованими з ФЕ антитілами кози проти дб миші (Есу-специфічними) (Часкбоп ІттипоКезеагспй) протягом 30 хвилин при температурі 4 "С. Після тривалого промивання у ФБР/БСА/МамМ»з клітини фіксували в 2 95 формальдегіді у ФБР/БСА/Мамз протягом 30 хвилин при температурі 4 "С. Зв'язування антитіл вимірювали із застосуванням методу проточної цитометрії (ЕАСзСаїїриг; ВО Віозсіепсев5).
Як показано на фігурі 21, як клон 12НЗ, так і клон 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини розпізнавали повнорозмірний (позначений як конструкція "СКО1" СО134 людини на трансфікованих клітинах 293-Е, тоді як клон 12Н3 і клон 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини не продемонстрували зв'язування на неправильно трансфікованих клітинах 293-Р.
Більше того, клони 12Н3 і 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини розпізнавали усічені варіанти СО134 людини, у яких були відсутні СКО1 і СКО1-СКО2 (позначені як конструкція "СКО2" ї конструкція "СКОЗ", відповідно) на трансфікованих клітинах 293-Р. Навпаки, зв'язування клону 12Н3 антитіла миші проти СО134 людини з усіченим варіантом СО134 людини, у якій був відсутній А1-модуль САО1-СВО2-усіченого СКОЗ (позначено як конструкція "СтОра"), було дуже слабким, і зв'язування клону 12Н3 антитіла миші проти СО134 людини з усіченим варіантом СО134 людини, у якій були відсутні Аї-модуль СКО1-СВО 2-усіченого
САОЗ-А1-модуль субдомену СКО4 (відповідно до визначення Іі аїга єї аЇ. Єиг У Іттипої 1994; 24: 677-683) або, в якості альтернативи, АТЇ-В1 модуль СКО1-СНО2-СКОЗ (відповідно до визначення Сотраап еї аї. 5ігисішге 2006; 14: 1321-1330; позначено як конструкція "уССКО4"), повністю було відсутнє, тоді як клон 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини продемонстрував сильне зв'язування з усіченим варіантом СО134 людини, у якій був відсутній А1-модуль СКО 1- бо СвАО2-усіченого СКОЗ (позначено як конструкція "СЕКО4") і з усіченим варіантом СО134 людини,
у якій були відсутні А1-модуль СКО1-СВОр2-усіченого СКОЗ3-АТ1-модуль субдомену СКО4 (відповідно до визначення іаїла еї а). Еиг 9) Іттипої 1994; 24: 677 683), або, в якості альтернативи, А1-В1-модуль СКО1-СН!02-СКОЗ (відповідно до визначення Сотраап еї аї. зігисіцге 2006; 14: 1321-1330; позначено як конструкція "уУсССО 4").
Дані результати демонструють, що клони 12НЗ ї 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини специфічно розпізнають СО134 людини (трансфекція повнорозмірним СО134 людини в порівнянні з неправильною трансфекцією). Більше того, дані результати демонструють, що клони 12НЗ ї 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини, як представляється, розпізнають різні епітопи СО134 людини, що доводиться відповідною відсутністю зв'язування (із застосуванням клону 12Н3З) у порівнянні із сильним зв'язуванням (із застосуванням клону 20Е5) з усіченим варіантом СО134 людини, у якій був відсутній А1-модуль СКО1-СВО2-усіченого СКОЗ (позначено як конструкція "СЕО4"), і з усіченим варіантом СО134 людини, у якій був відсутній
А1-модуль СКО1-СНО2-усіченого СКОЗ3-АТ-модуль субдомену СКО4 (відповідно до визначення
І аїга еї аІ. Еиг У Іттипої 1994; 24: 677 683) або, в якості альтернативи, АТ1-В1-модуль СКО1-
СпО2-СКОЗ (відповідно до визначення Сотраагп еї аї. Зігисіиге 2006; 14: 1321-1330; позначено як конструкція "уУССКО4"). Дані результати демонструють, що клон 12Н3 антитіла миші проти
СОр134 людини, як представляється, не розпізнає епітоп СО134 людини в СКО!1 і СКО2, і клон 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини, як представляється, не розпізнає епітоп СО134 людини в СКО1, СКО2 і усіченому А1-модулі СКОЗ3-АТ1-модулі субдомену СКОЯ4 (відповідно до визначення і аїа еї аїІ. Еиг У Іттипої 1994; 24: 677-683) або, в якості альтернативи, А1-В1 модулі СКО1-С!02-СКОЗ (відповідно до визначення Сотраап еї аї. бігисійге 2006; 14: 1321- 1330). Дані результати демонструють, що клон 12Н3 антитіла миші проти СО134 людини, як представляється, розпізнає лінійний або нелінійний/конформаційний епітоп в А1-модулі усіченого СКОЗ (відповідно до визначення і аа еї а). Еиг 9 Іттипо!ї 1994; 24: 677-683) з амінокислотною послідовністю 108-126 (тобто 19-мірний пептид КСЕАСТОРІ ОБУКРОМОСА; див. 5ЕО ІЮ МО: 34) на позаклітинному СО134 людини, або амінокислотна послідовність 108- 126 (тобто 19-мірний пептид КСКАСТОРІ ОБУКРОМОСА; див. ЗЕО ІЮ МО: 34) утворює частину для зв'язування з нелінійним/конформаційним епітопом в А1-модулі усіченого СКОЗ/А1-В1- модулі СКО4 (у відповідності з визначенням Гаїга еї аЇ. Еиг У Іттипої! 1994; 24: 677-683), і,
Зо можливо, у шарніроподібній структурі, з амінокислотною послідовністю 108-214 (див. ЗЕО ІЮ
МО: 35) на позаклітинному СО134 людини. Дані результати демонструють, що клон 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини, як представляється, розпізнає лінійний або нелінійний/конформаційний епітоп в А17-модулі усіченого СКО4 (відповідно до визначення
Сотраап єї аї. бігисіште 2006; 14: 1321-1330), і, можливо, у шарніроподібній структурі, з амінокислотною послідовністю 147-214 (5ЕО ІО МО:36) на позаклітинному СО134 людини.
Із застосуванням кристалографічного дослідження Соптраап еї аї. (біписіиге 2006; 14: 1321- 1330) нещодавно виявили критичне залучення СКО1, СКО2 (особливо петлі А1 і залишків, розташованих безпосередньо за нею) і СКОЗ (у першу чергу, петлі АТ) на СО134 людини в ході взаємодії з лігандом ОХ40 (С0252)39УС0134 (-50ОХ40). Дане відкриття добре узгоджується з результатами, отриманими авторами даного винаходу, що (1, див. вище) клон 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини, як представляється, не розпізнає епітоп СО134 людини в А1-модулі
СКО1, СКО?2 і усіченого СКОЗ3-А1 модулі субдомена СРО (відповідно до визначення і аїга еї аї.
Ешиг У Іттипої! 1994; 24: 677-683) або, в якості альтернативи, в АТ-В1-модулі СКО1-С!А02-СВОЗ (відповідно до визначення Сотраап еї аї. Зігисішге 2006; 14: 1321-1330) на позаклітинному
СО134 людини, і (2, див. вище) клон 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини зв'язується одночасно з ОХ40І. людини на стимульованих ФГА Т-лімфоцитах, експресуючих СО134 людини.
Дані результати свідчать, що клон 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини розпізнає епітоп на
СО0134 людини, який не був критично залучений у взаємодію СО134 людини з ОХ40ІЇ людини.
Більше того, результати, отримані авторами даного винаходу, згідно з якими (1, див. вище) клон 12Н3 антитіла миші проти СО134 людини, як представляється, розпізнає лінійний або нелінійний/конформаційний епітоп в А1-модулі усіченого СКОЗ (відповідно до визначення Іі аї7а еї а). Єик У Іттипої! 1994; 24: 677-683) з амінокислотною послідовністю 108-126 (тобто 19-мірний пептид КСЕАСТОРІ ОБУКРОМОСА; див. 5ЕО ІЮ МО: 34) на позаклітинному СО134 людини, або амінокислотна послідовність 108-126 (тобто 19-мірний пептид ЕСКАСТОРІ ОЗМКРОМОСА; див.
ЗЕО ІЮО МО: 34) утворює частину для зв'язування з нелінійним/конформаційним епітопом в А1- модулі усіченого СКОЗ/ А1-В81-модулі СКО4 (у відповідності з визначенням і аїга еї аї. Єиг /
Іттипо! 1994; 24: 677-683), і, можливо, у шарніроподібній структурі, з амінокислотною послідовністю 108-214 (див. «ЕО ІЮ МО: 35) на позаклітинному СО134 людини, і (2, див. вище) клон 12Н3 антитіла миші проти СО134 людини зв'язується одночасно з ОХ40Ї людини на бо стимульованих ФГА Т-лімфоцитах, експресуючих СО134 людини, підтверджують припущення,
що епітоп (як описане вище) на СО134 людини, який був розпізнаний клоном 12Н3 антитіла миші проти СО134 людини, не був критично залучений у взаємодію СО134 людини з ОХ40І. людини. (с). Картування епітопа (1) клону 12Н3 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини із застосуванням пептиду, отриманого з СО134 людини, і методу ЕГІЗА
З метою наступного аналізу однозначної специфічності клону 12Н3 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини визначали розташування епітопа, розпізнаваного клоном 12Н3 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини, шляхом картування епітопа.
Здатність клону 12Н3 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини зв'язуватися з пептидом, отриманим з СО134 людини, який відповідав амінокислотній послідовності А71-модуля усіченого СКОЗ3-А1-модуля субдомену СКО4 (відповідно до визначення іаї7а еї аї. Еиг У
Іттітипої 1994; 24: 677 683), визначали методом ЕГІЗА.
На 96-ямкові планшети для аналізу методом ЕГІЗА із пласким дном (Согпіпд) наносили по 10 нг/лунку пептиду, отриманого з СО134 людини, (синтезований Рерзсап Ргезіо, І еїузіай, Те
МеїШегіапав5), який відповідав амінокислотній послідовності А1-модуля усіченого СКОЗ-А1- модуля субдомену СКО4 (див. ЗЕО ІО МО: 38), або по 10 нг/лунку контрольного пептиду, отриманого з фібронектину людини (синтезований Рерзсап Ргевію, І еїзуєтад, Тпе МеїепгіапаФв5), який відповідав амінокислотній послідовності структурного домену екстра-типу ЇЇ (див. ЗЕО ІЮ
МО: 37) У ФБР протягом ночі при температурі 4 "С. Після тривалого промивання у ФБР/0,05 95
Твін 20 планшети блокували ФБР/О,05 95 Твін 20/1 95 БСА фракція М (Коспе) протягом 1 години при к.т. Потім планшети інкубували з 0, 0,00005-50,0 (10-кратні розведення в блокувальному буфері) мкг/мл клону 12Н3 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини або контрольного антитіла миші ізотипу (дсСік (ВО Віозсіепсе5) протягом 1 години при к.т. Після тривалого промивання у ФБР/О,05 95 Твін 20 визначали зв'язування антитіл з розведеними у співвідношенні 1:5000 кон'югованими з пероксидазою хріну Есу-специфічними антитілами кози проти до миші (даскзоп ІттипокКезеагсії) протягом 1 години при к.т. з наступним додаванням готового до застосування розчину субстрату ТМБ (Іпмігодеп) для колориметричного виявлення.
Після додавання 1 М На2505х оптичну щільність вимірювали при довжині хвилі 450 нМ (опорна довжина хвилі 655 нм) із застосуванням зчитувального обладнання для мікропланшетів
Коо) (ВіоРад).
Як показано на фігурі 23А (п-1), клон 12Н3 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини дозозалежним чином і специфічно зв'язується з пептидом, отриманим з СО134 людини, тоді як контрольне антитіло миші ізотипу (ДСбік не демонструвало зв'язування з пептидом, отриманим з СО134 людини. Як клон 12Н3 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини, так і контрольне антитіло ізотипу (дСбік не демонстрували зв'язування з контрольним пептидом, отриманим з фібронектину людини.
Дані результати демонструють, що клон 12Н3 антитіла миші проти СО134 людини специфічно розпізнає епітоп на СО134 людини (пептид, отриманий з СО134 людини, у порівнянні з контрольним пептидом, отриманим з фібронектину людини). Більше того, дані результати демонструють, що клон 12Н3 антитіла миші проти СО134 людини, як представляється, розпізнає лінійний або нелінійний/конформаційний епітоп в А1-модулі усіченого СКОЗ3-А1-модулі субдомену СРО (відповідно до визначення і аїга єї а). Єиг У Іттипої 1994; 24: 677-683) з амінокислотною послідовністю 108-146 (тобто 39-мірний пептид
ВАВСВАатоРІ О5МКРОМОСАРСРРОНЕЗБРОЮОМОАСКРУМТМ; див. ЗЕБЕО ОО МО: 38) на позаклітинному СО134 людини. (4) Картування епітопа (2) клонів 12Н3 ї 20Е5 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини із застосуванням технології картування епітопа СІ ІРЗ від Рерзсап
Технологію картування епітопа СІІРЗ від Рерзсап (ІГеїузіаа, Тпе Меїйпепапавз) можна застосовувати для визначення епітопів, розпізнаваних клонами 12НЗ і 20Е5 антитіла миші проти
СОр134 людини. Дана технологія СІ ІР5 дозволяє визначати лінійні, конформаційні епітопи, епітопи переривчастого типу і комплексні епітопи, що включають димерні або мультимерні білкові комплекси. З даною метою в якості білка-мішені використовують лінійну амінокислотну послідовність СО134 людини - ОХ40 (5ЕО ІЮО МО: 1).
Приклад 9. Характеристика доменів і епітопів СО134 людини, розпізнаваних клонами 12НЗ і 20Е5 химерного моноклонального антитіла Ідс4/каппа і/або Ідс1/каппа людини проти СО134 людини (а). Зв'язування клонів 12Н3 і 20Е5 химерного моноклонального антитіла Ідс4к і/або І(дсїк людини проти СО134 людини з повнорозмірною конструкцією СО134 людини і з різними усіченими конструкціями СО134 людини, які експресуються на клітинній лінії 293-Е (доменне бо картування)
З метою аналізу однозначної специфічності клонів 12НЗ і 20Е5 химерного моноклонального антитіла дсС4к і/або (дсбїк людини проти СО134 людини визначали розташування епітопа (епітопів), розпізнаваних клонами 12НЗ і 20Е5 химерного моноклонального антитіла Ідса4к і/або
І9Оїк людини проти СО134 людини, методом доменного картування. Здатність клонів 12Н3 і 20Е5 химерного моноклонального антитіла І(дс4к і/або (д9сїк людини проти СО134 людини зв'язуватися з усіченими конструкціями СО134 людини (див. приклад 8 (Б) вище), який експресується на поверхні клітин 297-Е (отриманих з НЕК), визначали в результаті аналізу
ЕАС5Б.
Із застосуванням системи експресії Ргеезіуїе"М 293 (Іпмігодеп) клітини Егеебіуе"М 293-Е (Іпмігодеп) тимчасово трансфікували 5 отриманими варіантами СО134 людини (див. вище).
Через 48-72 год. аналізували експресію поверхневого СО134 людини на трансфікованих клітинах у ході аналізу ГАС5. Із цією метою трансфіковані клітини збирали і поміщали в концентрації 1-2 х 105 клітин/мл в охолоджений льодом ФБР/БСА/Мамз»з. Клітини інкубували з додаванням або без додавання 20,0 мкг/мл клонів 12Н3 і 20Е5 химерного моноклонального антитіла Ідс4к і/або (ІЯ40їк людини проти СО134 людини протягом 30 хвилин при температурі 4 "С. Після тривалого промивання у ФБР/БСА/МаМ»з клітини інкубували з розведеними у співвідношенні 1:200 кон'югованими з ФЕ антитілами кози проти ІдсСс людини (Есу- специфічними) (даскбзоп ІттипоКезеагс) протягом 30 хвилин при температурі 4 "С. Після тривалого промивання у ФБР/БСА/МаМз клітини фіксували в 295 формальдегіді у
ФБР/БСА/МамМз протягом 30 хвилин при температурі 4 "С. Зв'язування антитіл вимірювали із застосуванням методу проточної цитометрії (ЕАСЗСаїїриг; ВО Віозсіепсев).
Як показано на фігурі 22, як клон 12Н3 химерного моноклонального антитіла Ідсак і дк людини проти СО134 людини, так і клон 20Е5 химерного моноклонального антитіла Ідсак людини проти СО134 людини демонстрували характеристики зв'язування з різними усіченими конструкціями СО134 людини на трансфікованих клітинах, які були ідентичні характеристикам зв'язування їх відповідних аналогів батьківських клонів 12Н3 і 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини (див. приклад 8 (Б) вище; для порівняння, див. фігуру 22 у порівнянні з фігурою 21). (Б). Картування епітопа клону 12Н3 химерного моноклонального антитіла (9034к людини проти СО134 людини із застосуванням пептиду, отриманого з СО134 людини, і методу ЕГІЗА
Зо З метою додаткового аналізу однозначної специфічності клону 12Н3 химерного моноклонального антитіла ІдбС4к людини проти СО134 людини розташування епітопа, розпізнаваного клоном 12Н3 химерного моноклонального антитіла І(дс4к людини проти СЮО134 людини, визначали шляхом картування епітопа. Здатність клону 12Н3 химерного моноклонального антитіла Дб4к людини проти СО134 людини зв'язуватися з пептидом, отриманим з СО134 людини, який відповідав амінокислотній послідовності АТ-модуля усіченого
САОЗ-А1-модуля субдомену СКОЯ4 (відповідно до визначення Іі аїга єї аїЇ. Єиг У Іттипої! 1994; 24: 677-683), визначали методом ЕГІ5А.
На 96-ямкові планшети для аналізу ЕГІЗА із пласким дном (Согпіпд) наносили по 10 нг/лунку пептиду, отриманого з СО134 людини (синтезований Рерзсап Ргезіо, І еІзуєїтай, Тпе МешШепапаФв), який відповідав амінокислотній послідовності А1-модуля усіченого СКОЗ-АТ1-модуля субдомену
СКО4 (див. ЗЕБО 10 МО. 38), або по 10 нг/лунку контрольного пептиду, отриманого з фібронектину людини (синтезованого Рербхсап Ргевіо, І еїувєїад, Тпе Меїпепапав), який відповідав амінокислотній послідовності екстра-типу ЇЇ структурного домену (див. «ЕО ІЮ МО. 37) у ФБР протягом ночі при температурі 4 "С. Після тривалого промивання у ФБР/О,05 95 Твін 20, планшети блокували ФБР/О,05 95 Твін 20/1 95 БСА фракція М (Коспе) протягом 1 години при к.т. Потім планшети інкубували з 0, 0,00005-50,0 (10-кратні розведення в блокувальному буфері) мкг/мл клону 12Н3 химерного моноклонального антитіла Ї(д04к людини проти СО134 людини або контрольного антитіла І(д4к людини проти СО40 людини (Віоси) протягом 1 години при к.т. Після тривалого промивання у ФБР/0О,05 95 Твін 20 визначали зв'язування антитіл з розведеними у співвідношенні 1:5000 кон'югованими з пероксидазою хріну Есу-специфічними антитілами кози проти людини Ідс (даскбзоп ІттипоКезеагс!) протягом 1 години при к.т. з наступним додаванням готового до застосування розчину субстрату ТМБ (Іпмігодеп) для колориметричного виявлення. Після додавання 1 М На50О5 оптичну щільність вимірювали при довжині хвилі 450 нМ (опорна довжина хвилі 655 нм) із застосуванням зчитувального обладнання для мікропланшетів (ВіоКкад).
Як показано на фігурі 23В (п-1), клон 12Н3 химерного моноклонального антитіла Ідсак людини проти СО134 людини дозозалежним чином і специфічно зв'язується з пептидом, отриманим з СО134 людини, тоді як контрольне антитіло Їу034к людини проти СО40 людини не демонструвало зв'язування з пептидом, отриманим з СО134 людини. Як клон 12Н3 химерного бо моноклонального антитіла Ід4к людини проти СО134 людини, так і контрольне антитіло Ісак людини проти СО40 не демонстрували зв'язування з контрольним пептидом, отриманим з фібронектину людини.
Дані результати демонструють, що клон 12Н3 химерного моноклонального антитіла Ісак людини проти СО134 людини специфічно розпізнає епітоп на СО134 людині (пептид, отриманий з СО134 людини, у порівнянні з контрольним пептидом, отриманим з фібронектину людини).
Більше того, дані результати демонструють, що клон 12Н3 химерного моноклонального антитіла (дС4к людини проти СО134 людини, як представляється, розпізнає лінійний або нелінійний/конформаційний епітоп в А1-модулі усіченого СКОЗ3-А1-модулі субдомену СКО4 (відповідно до визначення і аїга еї а. Еиг У Іттипо!ї 1994; 24: 677-683) з амінокислотною послідовністю 108-146 (тобто 39-мірний пептид
ЕСКАСТОРІ ОБУКРОМОСАРСРРОНЕЗРООМОАСКРУМТМ; див. БО ОО МО: 38) на позаклітинному СО134 людини.
Приклад 10. Створення клонів 20Е5 їі 12Н3 гуманізованого моноклонального антитіла
Ідо4/каппа проти СО134 людини
На підставі визначених М-областей миші (див. приклад 2 (Б) вище) клонів 12Н3 їі 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини були отримані гуманізовані версії антитіла.
Гуманізовані послідовності варіабельної області легкого ланцюга і гуманізовані послідовності варіабельної області важкого ланцюга клонів 12Н3 ії 20Е5 антитіла миші проти
СОр134 людини одержували із застосуванням технології РОЇ (яку здійснювали за допомогою
Рапагота Кезеагсп Іпзійше, Зиппумаіе, СА, ОСОБА). Гуманізовані амінокислотні послідовності варіабельної області легкого ланцюга і варіабельної області важкого ланцюга див. в ХЕО ІЮ МО: 62 (20Е5-МІ 1), 63 (20Е5-МІ 2), 64 (20Е5-УНІ), 65 (20Е5-УН2г), 66 (20Е5-МНЗ), апа 5ЕО ІО МО. 67 (12Н3-МІ 1), 68 (12Н3-МІ 2), 69 (12Н3-МНІ), 70 (12Н3-УНг), 71 (12Н3-МНЗ).
Після даного конструювання в СЕМЕАКТ (Кедепзриго, бептапу) замовляли послідовності
КДНК, оптимізовані для Стгісеїшив5 дгізени5 (див. ЗЕО ІЮ МО: 72, 73, 74 (кодують гуманізовані версії повнорозмірного важкого ланцюга Ідс4 клону 20Е5, тобто МНІ, МН2, МНЗ, відповідно),
ЗЕО ІЮ МО. 75, 76 (кодують гуманізовані версії повнорозмірного легкого ланцюга к клону 20Е5, тобто 20Е5 МІ1, 20Е5 МІ2, відповідно), ЗЕО ІЮ МО: 77, 78, 79 (кодують гуманізовані версії повнорозмірного важкого ланцюга Ідс4 12Н3З, тобто МНІ, МН2, МНУЗ, відпов.) і ЗЕО ІЮ МО. 80, 81
Зо (кодують гуманізовані версії повнорозмірного легкого ланцюга к клону 12Н3, тобто МІ1, МІ 2, відпов.)), що кодують сигнальний пептид, за яким іде гуманізована варіабельна область важкого ланцюга, приєднана до константної області Ід54 людини, або за яким іде гуманізована варіабельна область легкого ланцюга, приєднана до константної області капа людини: (1) для експресії гуманізованих версій клону 20Е5 антитіла проти СО134 людини для обох гуманізованих важкого і легкого ланцюга використовували сигнальний пептид важкого ланцюга імуноглобуліну миші і (2) для експресії гуманізованих версій клону 12Н3 антитіла проти СО134 людини для гуманізованого важкого ланцюга використовували сигнальний пептид важкого ланцюга імуноглобуліну людини, і для гуманізованого легкого ланцюга використовували сигнальний пептид ланцюга капа імуноглобуліну людини. Також усі гуманізовані антитіла експерсували у вигляді стабілізованих молекул 9054 людини відповідно до Апдаї еї аї. (Мої.
Ітітипої., Мої. ЗО, Мо. 1, рр. 105-108, 1993). Із застосуванням підходящих рестрикційних ферментів отримані кКДНК субклонували в плазмідах експресії, отриманих із пкДНКЗ.1.
Гуманізовані версії клону 20Е5 антитіла проти СО134 людини експерсували (із застосуванням системи експресії Егеесіуіїе "М МАХ СНО (І Ше Тесппоїодіе5). Гуманізовані версії клону 12Н3 антитіла проти СО134 людини експерсували із застосуванням системи експресії
Егеебіує М 293 (І їе Тесппоіодієв). Отримані гуманізовані антитіла очищували із застосуванням колонок для афінної хроматографії з білююом А (ЗЕ Неайсаге). Таким чином, були отримані шість очищених гуманізованих версій клону антитіла 20Е5, тобто 20Е5 МІ1МНІ, 20Е5 МІ'1МН2, 2-Е5 МІ 1ТМНЗ, 20Е5 МІ2МНІ, 20Е5 МІ2МН2 і 20Е5 МІ2МНУЗ, і були отримані шість очищених гуманізованих версій клону антитіла 12Н3, тобто 12Н3 МІТМНІ, 12Н3 МІ1МН2, 12Н3 МІ1МНЗ, 12н3 МІ2УНІ, 123 МІ2МН?2 і 12Н3 МІ 2УНЗ.
Гуманізовані амінокислотні послідовності див. в зЗЕО ІЮО МО: 82, 83, 84 (кодують гуманізовані версії повнорозмірного важкого ланцюга Ідс4 клону 20Е5, тобто УНІ, МН2, МНЗ, відпов.), БЕО
ІО МО. 85, 86 (кодують гуманізовані версії повнорозмірного легкого ланцюга (клону 20Е5, тобто
МІ1, МІ, відпов.), БЕО ІЮ МО. 87, 88, 89 (кодують гуманізовані версії повнорозмірного важкого ланцюга Іде4 клону 12Н3, тобто МНІ, МН2, МНЗ, відпов.) і 5ЕО ІО МО. 90, 91 (кодують гуманізовані версії повнорозмірного легкого ланцюга (клону 12Н3, тобто МІ 1, МІ 2, відпов.).
Приклад 11. Характеристика зв'язування клонів 20Е5 і 12Н3 гуманізованого моноклонального антитіла Ідс4/каппа проти СО134 людини
(а). Зв'язування клонів 20Е5 і 12Н3 гуманізованого моноклонального антитіла Ідс4к проти
СсОр134 людини з рекомбінантним злитим білком СО134 людини:Рсу людини (ЕГІЗА)
На 96-ямкові планшети для аналізу ЕГІЗА із пласким дном (Согпіпд) наносили по 50 нг/лунку рекомбінантного злитого білка СО134 людини:Есу людини (Ід01) (КО бЗухіетв5) у ФБР протягом ночі при температурі 4 "С. Після тривалого промивання у ФБР/О,05 95 Твін 20 планшети блокували ФБР/0,05 95 Твін 20/1 95 БСА фракція М (Коспе) протягом 1 години при к.т. Потім планшети інкубували з 0, 0,0003-20,0 (З-кратне розведення в блокувальному буфері) мкг/мл батьківського клону 120Е5 або 12НЗ антитіла миші проти СО134 людини, клону 120Е5 або клону 12Н3 химерного антитіла (304к людини проти СО134 і шести версій клонів 120Е5 або 12Н3 гуманізованих антитіл (Дс4к проти СО134 людини протягом 1 години при к.т. Після тривалого промивання у ФБР/0О,05595 Твін 20 визначали зв'язування антитіл з розведеними у співвідношенні 1:5000 кон'юЮюгованими з пероксидазою хріну антитілами кози проти імуноглобулінів миші (Есу-специфічними) (Часкбзоп ІттипоКевзеагсй) або з розведеними у співвідношенні 1:4000 кон'юЮюгованими з о пероксидазою хріну антитілами кози проти імуноглобулінів людини (к-специфічними) (Зошійегп Віоїеспй) протягом 1 години при кт. з наступним додаванням готового до застосування розчину субстрату ТМБ (Іпмйгодеп) для колориметричного виявлення. Після додавання 1 М На50О5 оптичну щільність вимірювали при довжині хвилі 450 нм (опорна довжина хвилі 655 нм) із застосуванням зчитувального обладнання для мікропланшетів (ВіокКад).
Як показано на фігурі 28 (п-2), клон 20Е5 химерного антитіла (304к людини проти СО134 людини і усі шість версій клону 20Е5 гуманізованого антитіла І(дс4к проти СО134 людини дозозалежним чином і специфічно зв'язуються з рекомбінантним СО134 людини. Клон 20Е5 химерного антитіла дс4к людини проти СО134 людини і гуманізовані версії 20Е5 МІ1НЗ, 20Е5 МІ2НІ, 20Е5 МІ2УНЗ2 і 20Е5 МІ 2УНЗ клону 20Е5 антитіла (дсС4к проти СО134 людини продемонстрували ідентичні криві титрування, що свідчить про ідентичність їхньої афінності зв'язування з антигеном СО134 (половинне максимальне зв'язування ЕСво « 100 нг/мл), тоді як гуманізовані версії 20Е5 МІ 1НІ ї20Е5 МІ/1На2 клону 20Е5 антитіла ІдДс4к проти СО134 людини, як представляється, продемонстрували не суттєво меншу афінність зв'язування (ЕСво х 150 нг/мл). У зв'язку з використанням вторинних антитіл, специфічних до різних ланцюгів
Зо імуноглобуліну (тобто антитіла миші виявляли за допомогою антитіл, специфічних до ланцюга
Есу, тоді як химерне антитіло людини і гуманізовані антитіла виявляли за допомогою антитіл, специфічних до ланцюга к), провести порівняння між кривою титрування (дані не показані) батьківського клону 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини і кривими титрування химерного антитіла людини і гуманізованих версій клону 20Е5 антитіла (дс4к проти СО134 людини було неможливе.
Як показано на фігурі 29 (п-2), клон 12Н3 химерного антитіла (304к людини проти СО134 людини і усі шість гуманізованих версій клону 12Н3 антитіла (дС4к людини проти СО134 дозозалежним чином і специфічно зв'язуються з рекомбінантним СО134 людини. Клон 12Н3 химерного антитіла Ід)034к людини проти СО134 людини і усі шість гуманізованих версій клону 12Н3 антитіла ІдС4к проти СО134 людини -12Н3 МІНІ, 12нН3 МІ/Т1Н2, 12Н3 МІлНЗ, 12нН3 МІНІ, 12Н3 МІ 2МНна їі 12Н3 МІ2УНЗ - продемонстрували неїідентичні криві титрування, які свідчать, що всі шість гуманізованих версій клону 12Н3З антитіла І(дс4к проти СО134 людини продемонстрували незначно більшу афінність зв'язування з антигеном СО134 (ЕСво хз 50 нг/мл), ніж клон 12Н3 химерного антитіла (д4к людини проти СО134 людини (ЕС5о - 100 нг/мл). У зв'язку з використанням вторинних антитіл, специфічних до різних ланцюгів імуноглобуліну (тобто антитіла миші виявляли за допомогою антитіл, специфічних до ланцюга Есу, тоді як химерне антитіло людини і гуманізовані антитіла виявляли за допомогою антитіл, специфічних до ланцюга к), провести порівняння між кривою титрування (дані не показані) батьківського клону 12Н3 антитіла миші проти СО134 людини і кривими титрування химерного антитіла людини і гуманізованих версій клону 12Н3 антитіла ІдсС4к проти СО134 людини було неможливе. (Б). Конкуренція клону 12Н3 гуманізованого моноклонального антитіла Ідс4к проти СО134 людини з біотинильованим батьківським клоном 12Н3 моноклонального антитіла миші проти
СОБ134 людини за зв'язування з рекомбінантним злитим білюм СО134 людини:Рсу людини (ЕБНІЗА).
Перед проведенням конкурентного вимірювання методом ЕГІЗА визначали значення ЕСво біотинильованого (із застосуванням М-гідроксисукцинімідо-біотину від Ріегсе) батьківського клону 12Н3 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини (див. нижче опис методу), яке, як було виявлено, становило приблизно 20 нг/мл (див. фігуру 30, п-3). Потім досліджували бо заміну біотинильованого батьківського клону 12Н3 моноклонального антитіла миші проти СО134 бо людини і його ідентифікованої концентрації ЕСво неміченим батьківським клоном 12НЗ антитіла миші проти СО134 людини, клоном 12Н3 химерного антитіла (9с4к людини проти СО134 людини і шістьома гуманізованими версіями клону 12Н3 антитіла Ід4к проти СО134 людини.
На 96-ямкові планшети для аналізу ЕГІЗА із пласким дном (Согпіпд) наносили по 50 нг/лунку рекомбінантного злитого білька СО134 людини: Есу людини (401) (850 Зувіет5) у ФБР протягом ночі при температурі 4"С. Після тривалого промивання у ФБР/О0,05 95 Твін 20 планшети блокували ФБР/О0,05 95 Твін 20/1 95 БСА фракція М (Коспе) протягом 1 години при к.т.
Потім планшети інкубували з 0, 0,001 - 60,0 (З-кратне розведення в блокувальному буфері) мкг/мл неміченого батьківського клону 12Н3 антитіла миші проти СО134 людини, клону 12Н3 химерного антитіла Ід4к людини проти СЮО134 людини або шістьома гуманізованими версіями клону 12Н3З антитіла Ідс4к проти СО134 людини в комбінації з 20 нг/мл (ЕСво) біотинильованого батьківського клону 12Н3 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини протягом 1 години при к.т. Після тривалого промивання у ФБР/О,05 95 Твін 20 визначали зв'язування біотинильованого батьківського клону 12Н3 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини з розведеним у співвідношенні 1:5000 кон'6Ютгованим з пероксидазою хріну стрептавідином (даскзоп ІттипокКезеагсії) протягом 1 години при к.т. з наступним додаванням готового до застосування розчину субстрату ТМБ (Іпмігодеп) для колориметричного виявлення.
Після додавання 1 М На25О»х оптичну щільність вимірювали при довжині хвилі 450 нм (опорна довжина хвилі 655 нм) із застосуванням зчитувального обладнання для мікропланшетів (ВіоРад).
Як показано на фігурі 31 (п-2), немічений батьківський клон 12Н3 антитіла миші проти
СОр134 людини і клон 12НЗ неміченого химерного антитіла І(д4к людини проти СО134 людини демонстрували ідентичне заміщення біотинильованого батьківського клону 12Н3 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини, яке свідчило, що батьківський клон 12Н3 антитіла миші проти СО134 людини і клон 12НЗ химерного антитіла Ідс4к людини проти СО134 людини демонстрували ідентичну афінність зв'язування з антигеном СО134 (половинне максимальне заміщення або інгібування (ІСво) біотинильованого батьківського клону 12Н3 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини в концентрації ж- 750 нг/мл). Усі шість немічених гуманізованих версій клону 12НЗ антитіла Ідс4к проти СО134 людини - 12Н3 МІНІ,
Зо 12Н3 МІ1Н2, 12Н3 МІ/1НЗ, 12Н3 МІ2НІ, 12Н3 МІ2МН2 і 1283 МІ2УМНЗ - демонстрували аналогічне заміщення біотинильованого батьківського клону 12Н3 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини, яке свідчать, що всі шість немічених гуманізованих версій клону 12Н3З антитіла Ідс4к проти СО134 людини демонстрували аналогічну афінність зв'язування з антигеном СО134 (ІСво - 250-300 нг/мл).
Дані результати демонструють, що всі шість гуманізованих версій клону 12Н3 антитіла
Ідб4к проти СО134 людини продемонстрували більшу афінність зв'язування з антигеном
СО134, ніж батьківський клон 12Н3 антитіла миші проти СО134 людини і клон 12Н3 химерного антитіла І(дс4к людини проти СО134 людини. (с). Зв'язування клонів 20Е5 і 12Н3 гуманізованого моноклонального антитіла Ідс4к проти
СО0134 людини з повнорозмірною конструкцією СО134 людини, яка експресується на клітинній лінії 293-Е (ЕАС5)
З метою детального аналізу зв'язування клонів 20Е5 і 12Н3 гуманізованого моноклонального антитіла ІдС4к проти СО134 людини зв'язуючу ємність клонів 20Е5 і 12Н3 гуманізованого моноклонального антитіла Ідс4к проти СО134 людини з поверхневим повнорозмірним СО134 людини на клітинних лініях 293-Е (стабільні трансфектанти) визначали методом проточної цитометрії, а також порівнювали з характеристиками зв'язування їх відповідних аналогів батьківських антитіл миші проти СО134 людини.
Повнорозмірний СО134 людини (5ЕО ІЮО МО. 1) повторно клонували в плазмідах експресії, отриманих із пКкДНКЗ.1 (див. приклад 11 (4) нижче). Дану плазміду повнорозмірного СО134 людини трансфікували в клітини 293-ї Егееб5 ме "М (ІШе Тесппоіодієв) із застосуванням системи експресії Егеебіуе"М 293 (І е Тесппоодієвз). Клітини, стабільно трансфіковані повнорозмірним
СО134 людини (клон Мо 5 з високим рівнем експресії поверхневого СО134 і клон Мо 23 із середнім рівнем експресії поверхневого СЮО134; див. фігуру 32) вибирали із застосуванням 125 мкг/мл 5418 (сірсо), збирали і поміщали в концентрації 1-2 х 106 клітин/мл в охолоджений льодом ФБР/БСА/Мамз з додаванням 50 мкг/мл очищених до людини (Зідітта; блокування Есу- рецепторів). Клітини інкубували з 0, 0,005-50 мкг/мл (10-кратні розведення у ФБР/БСА/МамМ»»; усі версії клону 20Е5) або 0,002-20 мкг/мл (10-кратні розведення у ФБР/БСА/Мамз; усі версії клону 12Н3) батьківського клону 20Е5 або клону 12Н3З антитіла миші проти СО134 людини, клону 20Е5 або клону 12Н3 химерного антитіла Ідс4к людини проти СО134 людини і шести гуманізованих бо версій клону 20Е5 або клону 12Н3З ІдОС4к антитіла проти СЮО134 людини протягом 30 хвилин при температурі 4 "С. Паралельно контрольне антитіло миші ізотипу (дк (ВО Віозсіепсев5; 50,0 або 20,0 мкг/мл) і контрольне химерне антитіло людини ізотипу Ідс4к (клон сСп5012 від РапсСепеїіс5; 50,0 або 20,0 мкг/мл) використовували в якості негативних контролів. Після тривалого промивання у ФБР/БСА/МаМз клітини інкубували з розведеними у співвідношенні 1:200 кон'югованими з ФЕ антитілами кози проти Ідс миші (Есу-специфічними) (Часкзоп
ІтітипоКезеагсії) або з розведеними у співвідношенні 1:200 кон'юЮгованими з ФЕ антитілами кози проти ЇДо людини (Есу-специфічними) (даскзоп ІттипокКезеагсі) протягом 30 хвилин при температурі 4 "С. Після тривалого промивання у ФБР/БСА/МамМ»з клітини фіксували в 2 95 формальдегіді у ФБР/БСА/Мамз протягом 30 хвилин при температурі 4 "С. Зв'язування антитіл вимірювали із застосуванням методу проточної цитометрії (ГАСЗзСаїїбиг; ВО Віозсіепсев).
Як показано на фігурі 33 (клон Мо 5 клітин, трансфікованих повнорозмірних СО134 людини, з високим рівнем експресії поверхневого СО134; п-1), батьківський клон 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини, клон 20Е5 химерного антитіла (904к людини проти СО134 людини і усі шість гуманізованих версій клону 20Е5 антитіла (дс4к проти СО134 людини дозозалежним чином і специфічно зв'язуються з СО134 людини, який експресується на поверхні клітини.
Батьківський клон 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини, клон 20Е5 химерного антитіла
ІдСа4к людини проти СО134 людини і гуманізовані версії 20Е5 МІ/1НЗ, 20Е5 МІНІ, 20Е5 МІ2МН2 ії 20Е5 МІ2МНЗ клону 20Е5 антитіла Ідс4к людини проти СО134 продемонстрували аналогічні криві титрування, що свідчить, що їхні афінності зв'язування з антигеном СО134 є аналогічними, тоді як гуманізовані версії МІ1НІ ї МІ 1Н2 клону 20Е5 антитіла
Ідс4Кк людини проти СО134, як представляється, продемонстрували незначно меншу афінність зв'язування.
Як показано на фігурі 34 (клон Мо 5 клітин, трансфікованих повнорозмірним СО134 людини, з високим рівнем експресії поверхневого СЮО134; п-2), батьківський клон 12Н3 антитіла миші проти СО134 людини, клон 12Н3 химерного антитіла Ї(д04к людини проти СО134 людини і усі шість гуманізованих версій клону 12Н3 антитіла (дб54к проти СО134 людини дозозалежним чином і специфічно зв'язуються з СО134 людини, який експресується на поверхні клітини.
Батьківський клон 12Н3 антитіла миші проти СО134 людини, клон 12Н3 химерного антитіла
ІдС4к людини проти СО134 людини і гуманізовані версії 12Н3 МІНІ ї 12Н3 МІ2МНЗ клону
Зо 12Н3 антитіла І(дс4к проти СО134 людини продемонстрували ідентичні криві титрування, що свідчить про ідентичність їх афінності зв'язування з антигеном СО134, тоді як гуманізовані версії 12Н3 МІНІ, 12Н3 МІ/1Н2, 12Н3 МІ 1НЗ ії 12Н3 МІ 2Н2 клону 12Н3З антитіла Ідс4к проти СО134 людини, як представляється, продемонстрували незначно більшу афінність зв'язування.
Як показано на фігурі 35 (клон Мо 23 клітин, трансфікованих повнорозмірним СО134 людини, із середнім рівнем експресії поверхневого; п-2), батьківський клон 12Н3 антитіла миші проти
СОр134 людини, клон 12Н3 химерного антитіла (д54к людини проти СО134 людини і усі шість гуманізованих версій клону 12Н3 антитіла І(д004к проти СО134 людини дозозалежним чином і специфічно зв'язуються з СО134 людини, який експресується на поверхні клітини. Батьківський клон 12Н3З антитіла миші проти СО134 людини і клон 12Н3 химерного антитіла (9034к людини проти СО134 людини продемонстрували аналогічні криві титрування, що свідчить, що їх афінності зв'язування з антигеном СО134 є аналогічними (ЕСво » 200 нг/мл), тоді як усі шість гуманізованих версій клону 12Н3 антитіла ІдС4к проти СО134 людини - 12Н3 МІНІ, 12Н3 МІ/1Н2, 12Н3 МІ 1НЗ, 12Н3 МІ2НІ, 12Н3 МІ2МНІО їі 12Н3 МІ 2МНЗ, як представляється, продемонстрували більшу афінність зв'язування (ЕСво « 200 нг/мл).
Дані результати проточної цитометрії, узяті разом, демонструють, що гуманізовані версії 20Е5 МІ 1ТНЗ, 20Е5 МІНІ, 20Е5 МІ2МН2, 20Е5 МІ2УНЗ клону 20Е5 антитіла ІдСб4к проти
СО0134 людини, батьківський клон 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини і клон 20Е5 химерного антитіла Ід4к людини проти СО134 людини продемонстрували аналогічну афінність зв'язування з антигеном СО134, тоді як гуманізовані версії 20Е5 МІТНІ і 20Е5 МІ/1Н2 клону 20Е5 антитіла І(дс4к проти СО134 людини, як представляється, продемонстрували незначно меншу афінність зв'язування з антигеном СО134. Крім цього, дані результати демонструють, що всі шість гуманізованих версій клону 12Н3 антитіла ІдсбС4к проти СО134 людини продемонстрували більшу афінність зв'язування з антигеном СО134, ніж батьківський клон 12Н3 антитіла миші проти СО134 людини і клон 12Н3 химерного антитіла Ідс54к людини проти СЮО134 людини. (4). Зв'язування клонів 12Н3 і 20Е5 гуманізованого моноклонального антитіла Ідс4к проти
СОр134 людини з повнорозмірною конструкцією СО134 людини і з різними усіченими конструкціями СО134 людини, експресованими на клітинній лінії 293-Е (доменне картування
ЕАС5Б).
З метою аналізу однозначної специфічності клонів 12Н3 і 20Е5 гуманізованого моноклонального антитіла ІдсС4к проти СО134 людини, визначали розташування епітопа, розпізнаваного клонами 12Н3 і 20Е5 гуманізованого моноклонального антитіла Ідс4к проти
СОр134 людини, методом доменного картування. Здатність клонів 12Н3З їі 20Е5 гуманізованого моноклонального антитіла (904к проти СО134 людини зв'язуватися з конструкціями усіченого
СОр134 людини, експресованими на поверхні клітин 297-Е (отриманих з НЕК), визначали в ході аналізу методом проточної цитометрії.
На підставі літературних даних (Зм/і55-Ргої: РАЗ3489.1; І аїга єї аї. ЕЄиг ) Іттипої! 1994; 24: 677-683; Водтег еї аї. Ттепа5 Віоспет сі 2002; 27: 19-26; Сотраап еї аї. Зіписіцгте 2006; 14: 1321-1330; публікація патенту США Мо 2011/0028688), були встановлені цистеїн-багаті домени (СКО) і шарніроподібна структура в позаклітинній області СО134 людини. СКО кодуються
СсСКО1, СКО2, (усіченим) СКОЗ, (усіченим) СКОЯ4 (див. фігуру 20). СКО містять топологічно різні типи модулів, які називають А-модуль і В-модуль (див. також фігуру 20). А-модулі являють собою С-подібні структури, а В-модулі являють собою 5-подібні структури. Типовий СКО зазвичай складається з А1-82-модулів або А2-В1-модулів (або, менше часто, відмінної пари модулів, наприклад, А1-В1) з б консервативними залишками цистеїну, де число позначає кількість дисульфідних містків у межах кожного модуля (див. також фігуру 20). Як показано на фігурі 20, були отримані і експресовані З різні конструкції СО134 людини: (1) конструкція повнорозмірного СЮО134 людини, яка починається з М-термінального СКО1 (тобто А1-82-модуль
СКОЇ охоплює амінокислоти 29-65), внаслідок цього позначена як "СКО1" ії утримуюча амінокислоти 1-277 (див. 5ЕБЕО ІЮ МО. 1), (2) конструкція "СКОЗ", яка починається з М- термінального СКОЗ (тобто АТ1-В1-модуль СКОЗ охоплює амінокислоти 108-146 (відповідно до
Сотраап єї аїЇ. Бігисіште 2006; 14: 1321-1330) або А1-модуль усіченого СКОЗ охоплює амінокислоти 108-126 (відповідно до І аїга еї аІ. Еиг У Іттипої 1994; 24: 677-683)), і містять амінокислоти 108-277, приєднані до амінокислот 1-28 сигнального пептиду (див. хЕО ІЮ МО: 31), (3) конструкція "СКО4", яка складається з М-термінального В1-модуля СКО4 або субдомену
САОЗ/ АТ1-модуля усіченого СКО4 (тобто А1-81-модуль СКО4 охоплює амінокислоти 127- 167 (аа єї аІ. Єик У Іттипої! 1994; 24: 677-683) або комбінація (не показана на фігурі 20) В1- модуля субдомену СКОЗ з А1Т-модулем усіченого СКО4 охоплює амінокислоти 127-146 з амінокислотами 147-167, відповідно (Сотраап еї аї. Зігисішге 2006; 14: 1321-1330)), і містять амінокислоти 127-277, приєднані до амінокислот 1-28 сигнального пептиду (див. ЗЕО ІЮ МО: 32). Дані З конструкції СО134 людини були отримані шляхом ПЛР-складання із застосуванням
ДНК-полімерази Ассиргіте"М ріх (Іпмігодеп) і праймерів, представлених у таблиці 2.
Таблиця 2
Мо - - ЗЕО х Ме праймера. відповідно до внутрішньої системи кодування Віосего5
Коротко, КкКДНК, що кодують амінокислоти, 1-28 сигнального пептиду, і кКДНК, що кодують амінокислоти 66-277 СО134 людини, ампліфікували із застосуванням пари праймерів 362/367 і 366/363, відповідно, у реакції ПЛР із повнорозмірним СО134 людини в якості матриці. Потім конструкцію "СКОЗ" одержували із застосуванням даних двох продуктів ПЛР шляхом ПЛР- складання із застосуванням пари праймерів 362/363. КДНК конструкцію, що кодує, "СКОЗ", субклонували в плазмідах експресії, отриманих із пкДНКЗ.1, із застосуванням підходящих сайтів рестрикції. Аналогічно конструкцію "СКО4" (амінокислоти 1-28 сигнального пептиду, приєднані до амінокислот 127-277) одержували і субклонували в плазмідах експресії, отриманих із пкДНКЗ.1, із застосуванням відповідних праймерів, представлених у вищевказаній таблиці.
Більше того, повнорозмірний СО134 людини (5ЕО ІЮ МО: 1) також повторно клонували в плазмідах експресії, отриманих із пкДНКЗ.1.
Із застосуванням системи експресії ЕгеебіуетМм 293 (Пе Тесппоіодієв) клітини 293-Е
Егеебіує"М (Пе ТесНпоїодієє) тимчасово трансфікували З отриманими варіантами СО134 людини. Через 48 год. аналізували експресію поверхневого СО134 людини на трансфікованих клітинах в ході аналізу ГАС5. Із цією метою трансфіковані клітини збирали і поміщали в концентрації 1-2 х 105 клітин/мл в охолоджений льодом ФБР/БСА/Мамз з додаванням 50 мкг/мл очищених ДО людини (Зідта; блокування Есу рецепторів). Клітини інкубували з 20,0 мкг/мл батьківських клонів 12Н3 і 20Е5 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини з 20,0 мкг/мл клонів 12Н3З ї 20Е5 химерного антитіла І(дс4к людини проти СЮО134 людини, з 20,0 мкг/мл шести гуманізованих версій клону 12Н3 антитіла І(дс4к проти СО134 людини і з 20,0 мкг/мл гуманізованої версії 20Е5 МІ 1МУНІ1 клону 20Е5 антитіла Ідс4к проти СО134 людини протягом 30 хвилин при температурі 4 "С. Паралельно 20,0 мкг/мл контрольного антитіла миші ізотипу (ДСК (ВО Віозсієеєпсе5) і 20,0 мкг/мл контрольного химерного антитіла людини ізотипу дДО4кК (клон сп5012 від Рапсепеїіс5) використовували в якості негативних контролів. Після тривалого промивання у ФБР/БСА/МаМз клітини інкубували з розведеними у співвідношенні 1:200 кон'югованими з ФЕ антитілами кози проти дос миші (ЕБсу специфічними) (Часк5оп
ІтітипоКезеагсії) або з розведеними у співвідношенні 1:200 кон'юЮгованими з ФЕ антитілами кози проти До людини (Есу- специфічними) (аскзоп ІттипокКезеагсії) протягом 30 хвилин при температурі 4 "С. Після тривалого промивання у ФБР/БСА/МамМз клітини інкубували з розведеними у співвідношенні 1:200 кон'югованими з ФЕ антитілами кози проти до миші (Есу- специфічними) (даскбзоп ІттипоКезеагс) протягом 30 хвилин при температурі 4 "С. Після тривалого промивання у ФБР/БСА/МамМз клітини фіксували в 295 формальдегіді у
ФБР/БСА/МамМз протягом 30 хвилин при температурі 4 "С. Зв'язування антитіл вимірювали із застосуванням методу проточної цитометрії (ГРАСЗСаїїриг; ВО Віозсіепсев).
Як показано на фігурі 36, батьківський клон 12Н3З антитіла миші проти СО134 людини, клон 12Н3 химерного антитіла І(дс4к людини проти СО134 людини і усі шість гуманізованих версій клону 12НЗ антитіла Ідс4к проти СО134 людини розпізнавали повнорозмірний (позначений як конструкція "СКО1") СО134 людини і усічений варіант СО134 людини, у яких були відсутні
САОБ1-СКО2 (позначені як конструкція "СКОЗ3"), на трансфікованих клітинах 293-Е, тоді як батьківський клон 12Н3 антитіла миші проти СО134 людини, клон 12Н3 химерного антитіла
ІцОе4к людини проти СО134 людини і усі шість гуманізованих версій клону 12Н3 антитіла ІдДс4кК проти СО134 людини не продемонстрували зв'язування на неправильно трансфікованих клітинах 293-Е. Навпаки, зв'язування батьківського клону 12Н3 антитіла миші проти СО134
Зо людини, клону 12Н3 химерного антитіла (904к людини проти СО134 людини і усіх шести гуманізованих версій клону 12Н3 антитіла (дс4к проти СО134 людини з усіченим варіантом
СО0134 людини, у якій був відсутній АТ-модуль СКО1-СВО2-усіченого СКОЗ (позначений як конструкція "СЕКО4"), було дуже слабким або було відсутнє, тоді як батьківський клон 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини продемонстрував сильне зв'язування з даним усіченим варіантом СО134 людини, у якій був відсутній А1-модуль СКО1-СВО2-усіченого СКОЗ (позначений як конструкція "СКО4") на трансфікованих клітинах 293-Е, що підтверджує, що дані останні клітини 293-Е експерсували дану усічену версію поверхневого СО134.
Як показано на фігурі 37, батьківський клон 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини, клон 20Е5 химерного антитіла ІдС4к людини проти СО134 людини і гуманізована версія 20Е5 МІЛУНІ клону 20Е5 антитіла І(дс4к проти СО134 людини розпізнавали повнорозмірний (позначений як конструкція "СКО1" СО134 людини, усічений варіант СО134 людини, у яких були відсутні СКО1-СКО2 (позначений як конструкція "СКОЗ3"), і усічений варіант СО134 людини, у якому був відсутній А1!-модуль СКО1-СВО2-усіченого СКОЗ (позначений як конструкція "СКО4"), на трансфікованих клітинах 293-Е, тоді як батьківський клон 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини, клон 20Е5 химерного антитіла І(д9054к людини проти СО134 людини і гуманізована версія 20Е5 МІ 1МНІ клону 20Е5 антитіла дсС4к проти СО134 людини не продемонстрували зв'язування на хибно трансфікованих клітинах 293-Р.
Дані результати демонструють, що батьківські клони 12Н3 і 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини, клони 12Н3 і 20Е5 химерного антитіла (9054к людини проти СО134 людини, усі шість гуманізованих версій клону 12Н3 антитіла І(дс04к проти СО134 людини і гуманізована версія 20Е5 МІ/1МНІ клону антитіла І(дс4к проти СО134 людини специфічно розпізнає СЮО134 людини (порівняння трансфекції повнорозмірним СО134 людини з неправильною трансфекцією). Більше того, дані результати демонструють, що клони 12НЗ і 20Е5 антитіла проти СО134 людини, як представляється, розпізнають різні епітопи СО134 людини, що доводиться відповідною відсутністю зв'язування (із застосуванням клону 12НЗ) у порівнянні із сильним зв'язуванням (із застосуванням клону 20Е5) з усіченим варіантом СО134 людини, у якому був відсутній А1- модуль СКО1-СВО2-усіченого СКОЗ (позначений як конструкція "СКО4"). Дані результати демонструють, що клон 12Н3 антитіла миші проти СО134 людини, клон 12Н3 химерного антитіла (дС4к людини проти СО134 людини і усі шість гуманізованих версій клону 12Н3 60 антитіла І(д4к проти СО134 людини, як представляється, не розпізнають епітоп СО134 людини на СКО!1 ї СКО2. Клон 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини, клон 20Е5 химерного антитіла
ІцОе4к людини проти СО134 людини і гуманізована версія М 1УНІ клону 20Е5 антитіла Ісак проти СО134 людини, як представляється, не розпізнають епітоп СО134 людини в А1-модулі
Сско1, СКбаІ ї усіченого СКОЗ (відповідно до визначення і аїга еї аІ. Еиг У Іттипої 1994; 24: 677-683). Дані результати демонструють, що клон 12Н3 антитіла миші проти СО134 людини, клон 12Н3 химерного антитіла Ї(д034к людини проти СО134 людини і усі шість гуманізованих версій клону 12Н3 антитіла І(дс4к проти СО134 людини, як представляється, розпізнають лінійний або нелінійний/конформаційний епітоп в А1-модулі усіченого СКОЗ (відповідно до визначення І аїга єї аї. ЕЄиг У Іттипої 1994; 24: 677-683) з амінокислотною послідовністю 108- 126 (тобто 19-мірний пептид КСКАСТОРІОЗУКРОМОСА; див. 5БО 10 МО: 34) на позаклітинному СО134 людини, або амінокислотна послідовність 108-126 (тобто 19-мірний пептид КСКАСТОРІ ОБУКРОМОСА; див. 5ЕО ІЮО МО: 34) утворює частину для зв'язування з нелінійним/конформаційним епітопом на А1-модулі усіченого СКОЗ/А1-В1-модулі СКО4 (у відповідності з визначенням і аа еї а. Еиг У Іттипої 1994; 24: 677-683), і, можливо, у шарніроподібній структурі, з амінокислотною послідовністю 108-214 (див. БЕО ІЮО МО: 35) на позаклітинному СО134 людини. Дані результати демонструють, що клон 20Е5 антитіла миші проти СО134 людини, клон 20Е5 химерного антитіла (д4к людини проти СО134 людини і клон 20Е5 МІ ЛУМНІ сгуманізованого антитіла дсС4к проти СО134 людини, як представляється, розпізнають лінійний або нелінійний/конформаційний епітоп в А1-В1-модулі СКО4 (відповідно до визначення іаїа еї аІ. Еиг У Іттипої 1994; 24: 677-683), і, можливо, у шарніроподібній структурі, з амінокислотною послідовністю 127-214 (5ЕО ІЮ МО: 92) на позаклітинному СО134 людини. (є). Конкуренція клону 12Н3 гуманізованого моноклонального антитіла дс4к проти СО134 людини з біотинильованим батьківським клоном 12Н3 моноклонального антитіла миші проти
СО134 людини за зв'язування з поверхневим СО134 людини на клоні Мо 5 стабільно трансфікованою клітинною лінією 293-Е (ГАС5)
Перед проведенням вимірювання конкуренції методом проточної цитометрії визначали ЕС5о біотинильованого (із застосуванням М-гідроксисукцинімідо-біотину від Ріегсе) батьківського клону 12Н3 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини (див. нижче опис методу), у
Зо результаті якого було виявлено, що значення ЕСво становить приблизно 700 нг/мл (див. фігуру 38, п-2). Потім досліджували заміщення біотинильованого батьківського клону 12Н3 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини у виявленій концентрації ЕС5о неміченим батьківським клоном 12Н3 антитіла миші проти СО134 людини, клоном 12Н3 химерного антитіла (д4к людини проти СО134 людини і шістьома гуманізованими версіями клону 12Н3 антитіла ІЧ04к проти СО134 людини.
Повнорозмірний СО134 людини (5ЕО ІЮ МО1) повторно клонували в плазмідах експресії, отриманих із пКкДНКЗ.1 (див. приклад 11 (с) вище). Дану плазміду повнорозмірного СО134 людини трансфікували в клітини 293-Е Егеебіуе "М (І Ше Тесппоіодіє5) із застосуванням системи експресії Егеебіуе"М 293 (І е Тесппоодієвз). Клітини, стабільно трансфіковані повнорозмірним
СОр134 людини (клон Мо 5 з високим рівнем експресії поверхневого СО134, див. фігуру 32), відбирали із застосуванням 125 мкг/мл 5418 (сібсо), збирали і поміщали в концентрації 1-2 х 105 клітин/мл в охолоджений льодом ФБР/БСА/МамМз з додаванням 50 мкг/мл очищених ІдО людини (Зідта; блокування Есу-рецепторів). Клітини інкубували з 0,003-50,0 (5-кратне розведення у ФБР/БСА/Маміз) неміченого батьківського клону 12Н3 антитіла миші проти СО134 людини, клону 12Н3 химерного антитіла ІдС4к людини проти СО134 людини і шести гуманізованих версій клону 12Н3 антитіла (д04к проти СО134 людини в комбінації з 700 нг/мл (ЕСво) біотинильованого батьківського клону 12Н3 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини протягом 30 хвилин при температурі 4 "С. Після тривалого промивання у
ФБР/БСА/МамМз визначали зв'язування біотинильованого батьківського клону 12Н3 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини з розведеним у співвідношенні 1:200 кон'югованим з ФЕ стрептавідином (Часкзоп ІттипоКезеатгсі) протягом 30 хвилин при температурі 4 "С. Після тривалого промивання у ФБР/БСА/МамМ»з клітини фіксували в 2 95 формальдегіді у ФБР/БСА/МамМз протягом 30 хвилин при температурі 4 "С. Зв'язування біотинильованого батьківського клону 12Н3 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини вимірювали із застосуванням методу проточної цитометрії (РАСзСаїйри" во
Віозсіепсев).
Як показано на фігурі 39 (п-2), немічений батьківський клон 12Н3 антитіла миші проти
СОр134 людини і немічений клон 12Н3 химерного антитіла |(д9034к людини проти СО134 людини демонстрували ідентичне заміщення біотинильованого батьківського клону 12Н3 60 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини, яке свідчило, що батьківський клон 12Н3 антитіла миші проти СО134 людини і клон 12Н3 химерного антитіла І(дс54к людини проти СО134 людини демонстрували ідентичні афінності зв'язування з антигеном СО134 (половинне максимальне заміщення або інгібування (ІСво) біотинильованого батьківського клону 12Н3 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини в концентрації - 3,5 мкг/мл). Усі шість немічених гуманізованих версій клону 12НЗ антитіла І(дс4к проти СО134 людини - 12Н3 МІНІ, 12Н3 МІ1Н2, 12Н3 МІ/1НЗ, 12Н3 МІ2НІ, 12Н3 МІ2МН2 і 1283 МІ2УМНЗ - демонстрували ідентичне заміщення біотинильованого батьківського клону 12Н3 моноклонального антитіла миші проти СО134 людини, яке свідчить, що всі шість немічених гуманізованих версій клону 12Н3 антитіла (дсС4к проти СО134 людини демонструють ідентичні афінності зв'язування з антигеном СО134 (ІСво з 1,5 мкг/мл).
Дані результати демонструють, що всі шість версій клону 12Н3 гуманізованого антитіла
Ідб4к проти СО134 людини продемонстрували більшу афінність зв'язування з антигеном
СО134, ніж батьківський клон 12Н3 антитіла миші проти СО134 людини і клон 12Н3 химерного антитіла І(д4к людини проти СО134 людини.
Приклад 12. Антитіла проти СО134 пригнічують експресію РОХЗР у клітинах Тгед
Виділення і експансія Тгед: ГеиКораск5 одержували від ВіоІодіса! Зресіаціев (СоїІатаг, РА), і червоні кров'яні клітини лізували буфером АСК (5гетсеї| їесппоЇодіеє5, Мапсоимег, ВС, Сапада) на льоді. Клітини промивали і ресуспендували в електродному буфері АШОМАСЗ5. Тгед виділяли за допомогою набору СО4-С025-4С20127адіт/- Тгед на сортері АШОМАСЗ Рго і/або І О колонках з
ОцадгоМАСЗ5, усі з яких були отримані від Мікепуї Віотесіп (Зап Оіедо, СА) згідно з інструкцією виробника. Тгед підраховували і висіювали на 24-ямкові планшети в концентрації 1 х 106
Тгед/лунку в середовищі ТехМАС5 з бусинами для експансії Тгтед (частки МАСс5ІіВеай, з попередньо нанесеними антитілами проти СОЗ і СО28; Міпепуї Віоїесі) згідно з інструкцією виробника. Клітини культивували у співвідношенні 4 бусини/клітину в присутності «500 МЕ/мл
ІЛ-2 ї Рапаміцину (100 нм). Через 5 днів після виділення клітини переносили на б-ямковий планшет і додавали по 40 мкл бусин/лунку, середовище з ІЛ-2 (500 МЕ/мл) і Рапаміцин (100 нм).
Середовище, що містить ІЛ-2, додавали в необхідній кількості і клітини переносили на 10 мм круглодонні планшети і вирощували далі. Через 30 днів бусини видаляли за допомогою
МАС5БІМАС перед наступним застосуванням.
Зо Активація Тгед: Експандовані Тгед мітили барвником СеїЇНгасе Міоіеї згідно з інструкцією виробника (І їе Тесппоіодіев, сгапа Ізіапа, М'У). 1,5 х 105 експандованих Тгед і З х 105 бусин для експансії Тгед (частки МАС5ЗіВеадй з попередньо нанесеними антитілами проти СОЗ ії СО28;
Мінепуї Віоїесп) висіювали на 9б-лункових планшетах зі скругленим дном і інкубували при температурі 37 "С у середовищі Х-МІМО 15 з додаванням 5 95 сироватки, 1 95 Реп-5ігер і -500
МЕ/мл ІЛ-2 з додаванням або без додавання 12Н3 (0,5 і 5 мкг/мл) і/або ОХ40Ї людини (1 мкг/мол, КО Зувзіетв) і МАТ проти Нів (1 мкг/мл, КО Зузіетв). Через З дні клітини повторно стимулювали коктейлем для активації лейкоцитів з ВО соїдіРішд (2 мкл/мол, ВО Віозсіепсев,
Зап чщозе, СА) протягом 5 годин, промивали і забарвлювали за допомогою набору ГІМЕ/ЮЕАОФ
Еїхабіе Меаг-іг Оеай СеїЇ Зіаіп КИ (І йе Тесппоїодіеєв5) згідно з інструкцією виробника. Клітини промивали один раз, і після фіксації/пермеабілізації проводили внутрішньоклітинне забарвлення за допомогою набору Еохр3 / Тгапзсогіріоп Расіог 5іаіпіпд Вийег 5еї (еВіозсіепсе,
Зап Оіедо, СА) згідно із протоколом виробника. Застосовували наступні антитіла: СОЗ М500 (клон 5РЗ4-2, ВО Віозсіепсе5); ЕОХРЗ РЕ (клон 2060, Віоіеєдепа); СО04 РегСР (клон ОКТА,
Віоїедепа); і ОХ40 (клон АСТЗ5, еВіозсіепсе). Клітини інкубували протягом 30 хвилин при температурі 4 "С ї промивали. Клітини аналізували в проточному цитометрі ВО Сапіо (ВО
Віозсіепсе5) і аналізували із застосуванням програмного забезпечення Біом/.до (АвпіІапа, ОК), налаштованого на відбір живих одиночних СО3-СО04ж. Записували середню геометричну інтенсивність флуоресценції, отриману для ФЕ проти ЕОХРЗ (К-Фікоеритрин) (геосСіФ).
Результати, представлені на фігурі 40, свідчать, що як антитіло 12Н3 миші проти СО134 людини (191), так ії 0Х40Ї людини зменшували експресію БОХРЗ в експандованих Тгед (604-0025-00127 діт/-) Коли 12Н3 ії ОХ40Ї використовували в комбінації, дія супресії експресії РГОХРЗ була аддитивною. Результати свідчать, що антитіло 12Н3 миші проти імуноглобулінів людини прямо впливає на функцію Тгед, а не тільки за допомогою його ролі на ефекторні Т-клітини. Дані являють собою результат аналізу зразка від одного донора в трьох повторах.
Приклад 13. Приєднані до планшета гуманізовані антитіла проти СО134 збільшують супресію Тгед клітин Теїї
Оцінювали ефект гуманізованих антитіл проти СО134 12Н3 М ТУНІ1 або 12Н3 МІ 1МНаІ2 (обоє
ІЧо4/к) на супресію Тгед функції Тейї.
Тгед виділяли, експандували і активували, як описано в прикладі 12. Де зазначено, на 96- ямкові планшети із круглим дном наносили по 12Н3 МІ ТМУНІ або 12Н3 МІ 1МНЗ2 антитіла або контрольних ізотипів (10 мкг/мл), розведених у ФБР. Планшети інкубували протягом 2 годин при температурі 37 "С, потім промивали і використовували для аналізу супресії. СО4-- ефекторні Т- клітини (Тей), виділені від того самого донора, що і Тгед, очищували від заморожених МКПК із застосуванням сортеру АшШОоОМАС5 Рго і набору для виділення СО4- від Мінепуі Віоїесп відповідно до інструкцій виробника. Потім клітини Тей мітили барвником Сеїйгасе "м Міоіеї згідно з інструкцією виробника (І їе ТесппоЇодіє5, сгапа Ісбіапа, МУ). Клітини Теїї ресуспендували в середовищі Х-МІМО 15 з додаванням 5 9о сироватки, 1 95 Реп-5ігер. У кожну лунку додавали 1 х 105 клітин. Тгед додавали у співвідношенні Тгед:Тей 0:1 (Теїйї самі по собі), 1:2, 1:4 і 1:8. Бусини
Ттєд Зирргезвіоп Іпзресіог (Мікепуї Віоїесі) промивали і додавали до лунок у співвідношенні 1 бусина на клітину (Тей або Тгед). Кінцевий об'єм у кожній лунці доводили до 200 мкл. Планшети інкубували при температурі 37 "С протягом 4 днів. Клітини повторно стимулювали коктейлем для активації лейкоцитів з ВО Со|ІдіРінд (2 мкл/мл, ВО Віозсіепсе5, Зап дУозе, СА) протягом 5 годин, промивали і забарвлювали за допомогою набору ГІМЕ/ЮЕАО? ГРіхаріє Меаг-ІВ Оєаа Сеї
Зіаійп Кі (Іїе ТесппоЇодіев) згідно з інструкцією виробника. Клітини промивали і проводили забарвлення поверхні за допомогою об'єднаних з АФЦ (аллофікоцианіном) антитіл проти ОХ40 (клон АСТЗ5, еВіозсіепсе) З наступним внутрішньоклітинним забарвленням.
Фіксацію/пермеабілізацію проводили за допомогою набору Еохр3/ Тгапзсгіріоп Расіог 5іаіпіпд
Вийег Зеї (еВіозсіепсе, Зап Оіедо, СА) згідно із протоколом виробника. Використовували наступні антитіла: СОЗ М500 (клон 5Р34-2, ВО Віозсієпсе5); СО4 ФІТЦ (клон КРА-ТА, Віоієдепа).
Клітини інкубували протягом 30 хвилин при температурі 4 С і промивали. Клітини аналізували на проточному цитометрі ВО Сапіо (ВО Віозсіепсев) і аналізували із застосуванням програмного забезпечення Біомло (А5Піапа, ОК), настроєного на відбір живих одиночних 603-004 СеІПасе-.
Приєднані до планшета гуманізовані антитіла 12Н3 послабляли інгібування Тгед проліферації Теїї. На фігурі 41 представлена колонкова діаграма аналізів ЕАС5 з порівнянням проліферації клітин Тей, стимульованих бусинами Тгед бирргевзіоп Іп5ресіог (Міпепуї, Зап
Ріедо, СА) і оброблених приєднаними до планшета 12Н3 МІ 1УНІ або контрольним ізотипом
Зо Ід4054 у присутності Тгед у співвідношенні Тгед/Тей 1:2. У порівнянні з контрольним ізотипом (ліде4) 12Н3 МІ1МНІ послабляв інгібуючу дію Тгед на проліферацію Тей, про що свідчить збільшення кількості клітин у послідовних піках (менша інтенсивність флуоресценції), що представляють почергові розділення клітин, виявлені за допомогою барвника СеїЇйгасе "м Міо|еї.
Барвник СеїШгасе "м Міоіеї зв'язується з активованими аміногрупами усередині клітин.
На фігурі 42 представлений ефект химерного антитіла 12Н3 (Ід04/к людини), гуманізованих антитіл 12Н3 МІ 1ЛУНІ або 12Н3 МІ 1УНЗ2 (обоє Ідса/к) самих по собі або в комбінації з ОХ401. (5 мкг/мл)/МАТ проти Ні5 (5 мкг/мл) на реплікацію Тей клітин при співвідношенні Тгед:Тей 0:1 (фігура 42А) або 1:4 (фігура 42В) на клітинах, виділених від одного донора. При відсутності Тгед (фігура 42А) стимулюючі бусини СО2/С03/С028 самі по собі стимулювали проліферацію Теї, експресуючих СО134 людини (тобто контроль ізотипу). Химерне і гуманізоване антитіла проти
СОр134, а також ОХ40І. стимулювали проліферацію СО4--Т-клітин у порівнянні з контрольним ізотипом. Проліферація незначно збільшувалася у випадку комбінації 283 МІ 1МН2 (5Е2) з
ОХ40Ї. У присутності Тгтед (фігура 428) стимулюючі бусини СО2/С03/С6028 самі по собі стимулювали меншу проліферацію СО4 Т-клітин у порівнянні із проліферацією СО4 Т-клітин без супресії Тгед (індекс реплікації приблизно З у порівнянні із приблизно 5). Супресія Тгед послаблялася в присутності химерного антитіла 12Н3, гуманізованих антитіл 1283 МІ1МНІ і 1283 МІ1МН2, а також ОХ401Ї. Комбінація 12Н3 МІ1МНІ або 12Н3 МІ1МН2 з ОХ40І. демонструвала незначну синергетичну дію. На фігурі Тей проліферацію клітин виражали у вигляді індексу реплікації, який являє собою вимірювання ступеня експансії Тей клітин, що поділилися щонайменше один раз, у відповідь на стимул (наприклад, кількість клітин у мільйонах по закінченню культивування, які перетерпіли щонайменше один розподіл).
У таблиці 3 наведені узагальнюючі результати ефекту 1283 МНІМН2 (ІдбС4/к) на дію проліферації Тей у присутності Тгед у співвідношенні Тгед/Тей 0:1, 1:2 і 1:4 для 12Н3 МІ 1МН2 (док) у клітинах, отриманих від 5 донорів. Ступінь проліферації виражали у вигляді індексу реплікації. При відсутності Тед 12Н3 М/1УН2 стимулювало проліферацію клітин Теї для всіх клітин, отриманих від донорів, у порівнянні з контрольним ізотипом (Теїї, активовані із застосуванням бусин СО2/С03/С028). У присутності Тгед у співвідношенні Тгед/Тей 1:2 або 1:4 присутність 12Н3 МІ 1УН2 послабляло супресію Тгед для всіх клітин, отриманих від донора.
Результати свідчать, що 12Н3 МІ/ТМУНІ ї 12Н3 МІ 1МН2 виявляють ефект на СО4-ефекторні
Т-клітини, що стимулює їхню проліферацію, і що антитіла наділяють Теїй деяким ступенем стійкості до Тгед або що Тгед самі по собі є менше супресивними в присутності антитіл.
Таблиця З
Співвідношення о о о ізотип МІ тУнаг ізотип МІ тУнаг ізотип М т1МУна2 773 | 53 | 71024 | 476 | 600 | 454 | 523
Приклад 14. Оптимізація гуманізованих антитіл
Оптимізація гуманізованих антитіл 20Е5.
НОСОК2 варіабельних областей гуманізованого важкого ланцюга (МН) 20Е5 МНІ, 20Е5 УН?2і 20Е5 МНЗ містить мотив ізомеризації в положеннях залишків МН 56-57 (ОС, ЮО5вС57). Для дослідження ефекту замін у положеннях 56 залишок аспартату (0) замінювали гліцином (5), аланіном (А), серином (5) або глутаматом (Е).
НСОКЗ варіабельних областей гуманізованого важкого ланцюга 20Е5 МНІ, 20Е5 УН?2 і 20Е5 МНЗ містить метіонін (М) у положенні 106 (М106). Метіонін, імовірно, у значній мірі екранований, однак для зменшення ризику окиснення метіонін у положенні 106 замінювали лейцином (І) або ізолейцином (1).
Положення 11 у варіабельних областях гуманізованого важкого ланцюга 20Е5 МНІ, 20Е5 МН2 і 20Е5 МУНЗ містить валін (М). Заміни в даному положенні можуть впливати на антитіло і внаслідок цього на його функцію (Кієїп еї аї тАбз5 5:22-33, 2013). Для дослідження ефекту замін у положеннях 11 залишок валіну (М) замінювали лейцином (І).
Мутації вводили в кожну варіабельну область важкого ланцюга 20Е5 МНІ, 20Е5 УН?2 і 20Е5 МНЗ із застосуванням стандартних способів. Мутантні послідовності НСОК2 представлені в таблиці 4 і мутантні послідовності НСОКЗ представлені в таблиці 5. Оптимізовані гуманізовані варіабельні області 20Е5, що містять одиничні заміни представлені в таблиці 6. Вирівнювання батьківських і оптимізованих областей МН презентовано на фігурі 43А і фігурі 43В. Назви оптимізованих областей МН вказують на батьківську МН і проведену заміну. Додаткові оптимізовані варіабельні області можуть бути отримані шляхом введення замін одночасно в положеннях 11, 56 і/або 106 із застосуванням стандартних способів.
Утворювали пари отриманих у результаті областей МН з варіабельними областями легкого ланцюга 20Е5 МІ/1 або 20Е5 МІ2, і отримані в результаті антитіла експерсували у вигляді
Зо Іцс4/к із застосуванням стандартних способів. Досліджували зв'язування антитіл з СЮО134 із застосуванням ЕГІЗА відповідно до протоколу, описаного в прикладі 11А. Потім досліджували здатність антитіл викликати проліферацію клітин Тей і пригнічувати інгібуючу дію Тгед на проліферацію Тей із застосуванням протоколів, описаних у прикладі 13. Антитіла, що мають порівняні властивості з батьківським гуманізованим антитілом 20Е5, вибирали для подальших досліджень.
Таблиця 4
Таблиця 5
Таблиця 6
Оптимізація гуманізованих антитіл 12Н3.
НОСОК варіабельних областей гуманізованого важкого ланцюга (МН) 12Н3 УНІ, 12Н3 УН?2і 12Н3 МНЗ містить мотив деамідування (ММС) у залишках 54-56 (М5аМ»е5(ї56). Для мінімізації ризику деамідування аспарагін у положеннях 55 (М55) замінювали глутаміном (С), аланіном (А) або глутаматом (Є).
НСОКЗ варіабельних областей гуманізованого важкого ланцюга 12Н3 УНІ, 12Н3 УН?2 і 12Н3 МНЗ містить метіонін (М) у положеннях 99 (МОУ99). Метіонін, імовірно, у значній мірі екранований, однак для зменшення ризику окиснення метіонін у положеннях 99 замінювали лейцином (Г) або ізолейцином (1).
Положення 11 у варіабельних областях гуманізованих важких ланцюгів 12Н3 УНІ, 12Н3 МН2І2 ї 12Н3 МНЗ містить валін (М). Заміни в даному положенні можуть впливати на антитіло і внаслідок цього на його функцію (Кієїп еї аї тАбз5 5:22-33, 2013). Для дослідження ефекту замін у положенні 11 залишок валіну (МУ) замінювали лейцином (ГІ).
Мутації вводили в кожну варіабельну область важкого ланцюга 12Н3 УНІ, 12Н3 МН?2 і 12Н3 МНЗ із застосуванням стандартних способів. Мутантні послідовності НСОК2 представлені в таблиці 7 і мутантні послідовності НСОКЗ представлені в таблиці 8. Оптимізовані гуманізовані варіабельні області 12Н3, що містять одиничні заміни представлені в таблиці 9. Вирівнювання батьківських і оптимізованих областей МН презентовано на фігурі 44. Назви оптимізованих областей УН вказують на батьківську МН і проведену заміну. Додаткові оптимізовані варіабельні області можуть бути отримані шляхом введення замін одночасно в положення 11, 55 і/або 99 із застосуванням стандартних способів.
Утворювали пари отриманих в результаті областей УН з варіабельними областями легкого ланцюга 12Н3 МІ/1 або 12Н3 МІ2, і отримані в результаті антитіла експерсували у вигляді
Іцс4/к із застосуванням стандартних способів. Досліджували зв'язування антитіл з СО134 із застосуванням ЕГІЗА відповідно до протоколу, описаного в прикладі 11А. Потім досліджували здатність антитіл викликати проліферацію клітин Тей і пригнічувати інгібуючу дію Тгед на
Зо проліферацію Теїй із застосуванням протоколів, описаних у прикладі 13. Антитіла, що мають порівняні властивості з батьківським гуманізованим антитілом 12Н3, вибирали для подальших досліджень.
Таблиця 7 5ЕО І МО: Послідовність НСОВ2
СІУРМОСазтТУМОМЕКО МББО
СІМРМАСОЗТУМОМЕКО МББА
СІУРМЕСОЗТУМОМЕКО МББЕ
Таблиця 8 5ЕО І МО: Послідовність НСОБЗ
ІОУНаРНІООгОМ МІ.
ІСУНОРНІОРОМ МІ
Таблиця 9 5ЕО І МО: 123 УНІ М550 123 МН2 М550 123 УМНЗ М550 12Н3 МНІ М5БА 12Н3 МН2 М5БА 12Н3 МНЗ М5ББА 123 УНІ М55Е 12Н3 МН2 М5Б5Е 123 МНЗ М5Б5Е 12Н3 УНІ МО991. 12Н3 МН2 М991І. 123 УНЗ МО. 12Н3 МНІ МО) 12Н3 МНа Мо 12Н3 МНЗ МО 12Н3 УНІ М. 12Н3 МН2 МІ. 123 МНЗ М.
ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
«114» ВіосегохХ Ргобист5 В.М. «120» АНТИТІЛА ПРОТИ С0134 (ОХ48) 1 ЗАСТОСУВАННЯ ЗАЗНАЧЕНИХ АНТИТІЛ «138» РІОТОагаАРСВО «152» ер 131597984,6 «151» 8813-83-18 «1585 ЕР 1315957954,5 «1515 2813-23-18 «1585» 152 «17805 РаїептїІп мегеіоп 3.5 «2185 1 «2115 277 «212 РТ «2135 пото 5зарієпе «220» «92213 5ІОМАЮ «222» (135..(98) «220» «221» ТЯАМ5МЕМН «222» (2315)..(235) «1805 1
Мек Суз Уаї б1у Аїа Аг АгЕ Ге біу Агвобіу Рко Суз А1в Аза Гец 1 5 10 15
Сем іїен іє біу себ біу бе бес Те Уаї Трг о біу сец Ні Су5 Уава1 29 25 за
О1у Ар Тс о Туг бго бег о А5п Ар Агв оСуз Суз Ні піц Су5 Аг Рго 46 45 51у Азп біу Меї Уві бег Аги Су5 б5ег Аге бЗег бів Азп ТНг о МУаї Су за 55 Ба
АгЕ Рго Суз біу Рго б1у Рне Туг Азп А5р Уаї Ма1ї бек бег ув Рго 65 79 75 во
Су їу5 го Су5 Тип Тир Су Д5п Гео Ася Заг біу 5ег 51 Аге Гуз 85 Зо 95 бій феч Сух Тиг Аїа ТВг бій Азр о Таб уаї Су5 АгЕ Суз Аге Аїа біу 189 105 118
Тне бій Рго Гей Ар обег Туг іу5 Рго біу Уаї Азр Суз Аїа Рго Сув 115 128 125
Рго Рго біу Ніє РБе баг Рго біу А5р Ап б1п А1їв Суб іу5 Рго Тер 138 135 і42
Так о А5п о Сує ТИг ген А1їа біу губ Ні Те о бен біб Рго діа бег Ап 145 158 155 168 бек Бег Ар Аіа ї1а Су5 бій Абр Агв Ар о Рго Рго Аза ТНг обіп Рго 165 178 175 біп бів Твг бій біу Рго Рго Азїа Агя Рго ТТ1е ТВс Маї бів Ргсо Те 186 185 188 біб АТа Тер Рго Аге Те о бебс б1й бБіу Рео бег Тлг Ак Рго МУаї сіц 195 206 285
Уаії Рго біу біу Аг Аіа Уаі Аїа Аїа Т16 їез біу Гени 51у ГБец Маї 219 215 228 іез Б1у Гей бец 0І1у Рго Мей Азїа Т1іе зей Гец Аїз Тео Туг їеи ей 225 230 235 240
АевБ Аг Абробіп Ав оіед бго Рго дер Аїа Ні Ку5 Рго Рго біу с1у 245 258 255 сіу бек Рпе Ага ТипгоРго Тїе біп біз бій біп Аїа А5р А1а Ні 5ег 268 265 270
Те о ївен д1іа був Тіє 275 «2180» 2 «211» 834
«2172» ДНК «213» Штучна «2295 «223» Послідовність КДНК С0134 людини, оптимізована для клітин комах 579 «4885 2 аСЕТЕСВЕВБ БСЕСТСЕТСв ТСТВБВЕсеЄ БВІСсСсСТвЕсСВ СТЕСТСТВСЇ СТВ ва сСІВЕВССТВЄ ссастртісас Тврастссас ТрсЕїврЕсв асасстассс сЕссзасвас 120 сСВЕТвСТвСс асваатвсав всстввсавс крсаїсвиїтро сесрвіїрстс ссвітТсссВе 150 азсассежрвії вссвтсссжрР СсВВСсСссвЕЖ Їсстасазсв асесввівсс сіссаврвесс 240
Твсаарсстї всасттреїтв ївассессес жссЕВТТссвЕ авсвсаввса вствсвсасс зав встасссаве асаствїств таретївсавв вствевсавассс авсссствва стсстасаав, зей сссЕвТЕссв аствсвстсс стдсссссст ввісастест стсссвесва саавссвевст 420
ТЕсаавссаї врассавастр сассстввої весаарсаса сссівСсавсс сестіссвас лава
Тсстссвасв стаїссснсяа веВссвївас ссссоствста стсавасстса вванасісавр 5438 вВссссссся стсвтсссаї сассвтвсав сссассваве сіжїЕвссссв Тассісссва вав
БЕасстадса сіарвссівї ввБарвївссс ЕєВІявІСсЕСя СТВІ ВсСТво татїсстревс ооо
СТЕВЕССТВВ ТЕСТ ССТ встреЕТсссЄ стВЕСТатсс ТЕСтввстст втасстсстр 720 свісвівасс аксвіствЕсс ссссвасвсії сасвавсссс ствреТевТВЕ ТЕССТЕССвЕ 788 асссссатсс аввавранса вестрасвст састссассс Серссзавайє став 834 «ід» З «2115 «2125 РЕК «2135 Штучна «2205 «2235 М-термінальна амінокислотна послідовність важкого ланцюга клону 29Е5 «ва» З біи мМаї віп сей бій біп бек біу Рго біб Гец 1 5 18 «218» 4 «2115 119 «2175 РЕТ «2135 Штучна
«223» Амінокислотна послідовність варіабельної області важкого ланцюга клону 28Е5 «002 4 512 Маї сій ее 010 бій беб о біу Рго біб Ген о Уаї Гу5 Рко біу АїЇа 1 5 16 15
Зег Уаї їу5 Ме бек Суб Гу дів бек біу Тук ТВг оРБе Тиг баг Тує 29 25 зо уаї Меє Ні5 Тер уві (уз біп Гуз Рго біу біп біу їги 51 Тер Те 35 ла 45 сіу Туг 112 Азп о Рго Туг Азп Азр біу ТВгб Суб Туг Азп бід Гуз Рпе вО мує біу Су5 Аїа ТВг оБбец Твиг обег Ар губ Зек бег обес Тг АїТа Тугс 65 7а 75 за
Мет біб ей 5ег бер ен Тиг бБег о1у Ар бер Аїа Уаії Туг Туг Суб 85 90 з5
Аіїа АзпоТук Туг б1у бек бег Гец бег Меї А5р тує Тер біу біп сту 108 185 110
Тег обБег Уві Тиг о Уаії бег бек 115 «2105 5 «211» 188 «2127 РВТ «213» Штучна «2205 «-223з Амінокислотна послідовність Варіабельної області легкого ланцюга клону 2ОЕ5 «1002 5
Ар ї1е біп Меж Тигобіп ТВг Те бегобег івей бег А1а его Ге біу 1 5 19 15
А5р АгЕ Маі Те Іі бек Суз АгЕ Аіїа б5ег біп А5зр ІТ1а бак Аве Туг 2а 25 за
Кей А5зпоТероТуг біп бій Буз Рго Абвробіу ТгоМаї уз еп Гей Ті да 45
Тує Тук ТВе обЗебг Агроїец Ні бек біу Маі Рго бег Аге Рне бЗег б1у зо 55 ва зег біу Зег біу того Ар Туг бег Бей ТВе 112 бег о А5п о ївеи бій бій 65 7а 75 во бій А5р ї1іеє Аза Таб оТуг Рпе Суб бій біп біу Ази Тк оїен Рго Тер 85 за 95
Тис РБе біу сту біу Тиг щує Ген бі їТе їу5 ге 188 105 «2185 6 -23ї1» 10 «21225 РВТ «2135 Штучна «2205 «223» Амінокислотна послідовність СОВІ1 важкого ланцюга клону 20Е5 «4005 5 сіу Тус Те Ре ТБбг о5ек Туг Маіїі Меї Ніє 1 5 18 «2105 7 «231» 17 «212» РЕТ «2135 Штучна «220» «2235 Амінокислотна послідовність СОБКО важкого ланцюга клону 29Е5 «480905 7
Туг Ті деп Рго Туг Адяп А5зроб1іу Тйгоїує Туб Ап бід їу5 РНе гу 1 5 10 15 віу
«218» 8 «2115 10 «212» РТ «213» Штучна «22а» «223» Амінокислотна послідовність СОКЗ3 важкого ланцюга клону 29Е5 «4005 8
Туг Тує біу б5ег бЗег (еп бег Мебє А5р Туг 1 5 18 «кг1йа» 9 «-211: 1 «2125 РЕК «2135 Штучна «225 «223» дмінокислотна послідовність СОВКі легкого ланцюга клому 29Е5 «ва» 9
АгвЕ А1їа бег біп Ар Ге 5ег Аза Туг Сей Ап 1 5 18 «218» 10 «2115 7 «2125 РЕТ «2135 Штучна «228» «2235 Амінокислотна послідовність СОВ2 легкого ланцюга клону 20Е5 «43880» 18
Туг Трг баг о Агя Ге Ні бег 1 5 «21805 11 «21125 9 «2125 РКТ «2137 Штучна «2295 «223» Амінокислотна послідовність СОВКЗ легкого ланцюга клону 2065 «аа» 11 сотТпобіп біу Ап ТНК ово Рго ТсроТве 1 З «918» 17 «211» 121 «2122 РАТ «213» Штучна «228» «223» Амінокислотна послідовність варіабельної області важкого ланцюга клону 12н3 «два» 12 бій Ма1і бій Гей бій біп бек біу Рго 530 Гени Уаії їу5 Рко сіу Аїа 1 5 18 15
Заг Уаі 1їу5 І1е бер Суб Гуз Тк озег о біу Тук ТНг Рпе губ Ар Туг 28 25 за
Тие Меє Ні5 Тер о Ма1ї Суз бій бег Ні5 бі Ку5 5ег о їец бі Тер їіє 4 45 бВіу сіу Кі Тук Ргро дб5п Асп о п1у б1у бек ТиБ Туг А5п піп Дело еле зе 55 ва
Гуз Азр Гуз Аза ТВг овен Те Маії Ар огух 5ек бек о бве ТП о АЇа Туг 65 79 75 ва
Мек біш Рпбе АгЕ бБег Гец Тиб бег сій Дер бег Аїа Маї Туг Тугб Суз 85 96 35
Аіа Асв Мех біу Туг Ні біу Рго Ніб Гей Азр Блйе Абр о уаї Тер О01У 188 185 118
Аіїа біу ТиР Те Уаї ТНг Уві бегс Рго 115 128 «2105 13 «211» 198 «2125 РКТ -2313» Штучна «220» «223» Амінокислотна послідовність варіабельної області легкого ланцюга клону
12Н3 «два» 13
Ар І1е Узі Меї Тиг бій бек Ні ух Ре Мет бек Так о бег цех 01у 1 5 186 15
Авр АгЕ Маї бек Іі Таг о Суз їу5 Аїа бег біп Азр Уві біу Аїа Діа 29 25 за
Уаї Аїа Тер Туг бій бій Гуз Рго б1іу біп бег Рго 1у5 Гецп їв їТі1е 35 48 45
Тукє Тер діа 5ег ТЬг Абе Ні ТВб о біу Маії Рго Ад5р Агв Ре тТВге б1у ва сіу біу баг п1у ТВг Ар Ре ТПгобеи ТВе І1е бег о А5п Маї біп 5ег 65 70 75 ва біш Абр їец Тиг Ар о Тує Рпе Суб сіп біп Туг Т1є ДяпоТук Рго Ге 5 за 35
ТВе о Рбе біу бІіу б1іу Тиг Гу Рец бі ї18е іу5 Аве 128 185 «2105 14 «2115 10 «2122 РЕТ «2135 Штучна «229» «223» Амінокислотна послідовність СОКі важкого ланцюга клону 13НЗ3 «408» 14 біу Туг Те Ре Гух Ахр Туг Тие Меї Ні 1 5 18 «-21805 15 «2115 17 «2122 РЕТ «2135 Штучна «22892 «223» Амінокислотна послідовмість СОК? важкого ланцюга клому 12Н3
«дао» 15 біу тТіе Туг Рго А5п деп біу біу 5Бег ТигоТуєб Аби бів А5п Ре Су 1 5 16 15
Ар «210» 16 «2115 12 «21225 РТ «213» Штучна «2205 «22335 Амінокислотна послідовність СОКЗ важкого ланцюга клону І12Н3 «4аа» 16
Меї біу Туг Ні біу Рго Ні іец Азр Рбе Ар Уаї 1 5 1а «2185 317 «211» 131 «2122 РЕТ «2135 Штучна «2285 «223» Амінокислотна послідовність СОВКІ легкого ланцюга клону 12Н3 «380» 17 іїу5 Аїа баг 01п Дер Уаї сіу діа А1а Уві Ад1а і З 12 «210» 18 «2115 7 «2122 РЕТ «2135 Штучна «229» «2235 Амінокислотна послідовність СОВО легкого ланцюга клону 12Н3 «3400» 18
Тер Аїа бек Тег Аге Ні Твг 1 5 «2185 19 «-2115 9
«2125 РЕ «213» Штучна «7285 «223» Амінокислотна послідовність СОКЗ легкого лавцюга клону 12Н3 «4005 19 тп бів Тук (Те Азо Тує Рро Гей Твге 1 5 «21835 20 «21ї» 1398 «2125 ДНК «2135 Штучна «2285 «223» Оптимізована для СНО послідовність, яка кодує ланцюг ї2б54 химерного клону 2925 людини «4805 20 аєЕВавСЕва всеБаВТНІХ тТасвексств стдавсвтва ссвствЕсву всастсавав во вЕвсавстеЕс вясавтсавв ссссравсів вісаарссїв всЕставсЕЇ гзаратвавс 128
ТЕтТаазвста всристасас сттсаставс тасвсваїис астнветсаз всавзавссс 180 ввссавквсс ГТЕвактвваї сєвистататї аасссстата асвасвесас таавтатавс 248 ваваавтєта арвесааввс Тасссіїваст арсваїаарі ставстстас сесстататр за ваавствєста вЕствастав їваавраєсавс вссвІстаст аствовстаа сбастасрес 368 тставссівт статедаста стреЕссяв вВБСастансе ТЕаСссВЕвІс КТарсеставс зга асставааренсс ставсвїувтт ссссстврсс ссствстста ратстастар свавтстасс ва
ВсССВСІСТрРВ вСствссІвВЕї сааврасіас їТїссссяавс ссвівассві савстявааїт 540 арсвЕсСЕсІсС грастансеве сесрсасасс СТссстрссв Трстврсарєс тарсрроств бай тТатавтствї ставсвтревї сассетївсст автїставсс СревЕсастаа васстасасс 5во
ТЕсаасевтре ассасаавссо сістаасасє азретїрваса авсрввінва зіствавіас 720
ВЕСССТСССТ вссссссств ссствссссЄ рааєсттстре всррасстав свтвТкссТеЕ 780 жеісссасстїа авсстаакра сассствато аксеставай сссссваарж васствсвв ща
БЕВЕСТЕНасе Трссасаврвра зваєсссвав рЕссавієста аттрисасвї ррасрисвїв зав ваавтсвсаса всеставвасє Гваавсстава рарваасарт Ствастстає стабаввеЕвс Бо вісавсеїес твассвевстї всассарвас ївЕсСтваасЕ рсааввавіа тТавеївтава 1820
ЕСвїстазса авевсствсс тТарсістаїс наавазваста їсеставвнес Єавааввнсосар 1089 сставанавс стсависєтв свссствссс сставісаве зававатвас їаарзатсар 1148 віятссастна ссівсстЕвІ саврввсттс тассставсв атаїєсвссяї скавтрявав 1298 тстаасввсс вавсссваваа саастатазв астасссссс сІртвстТвва Тансвасерви 1259 анстєсттсс трбастсаср встрвассевїр ваїазвіста веїресавра арЕсаасетс 1322 тЕсавсєврта «свїрасрса свариссств сасаатсастї асастсараа вЕсастрарс їзва стіввессівЕ всварїва 1398 «2185 23 «2115 702 «2125 ДНК «213» Штучна «22ах «223» Оптимівована для СНО послідовність, яка кодує ланцюг каппа химерного клону 29Е5 людини «4005 83 асввавівва ЕсЕБАВТНИС тТаїріїссів сбравсясва ссрсїввЕсЕС всасісават ва астсаваїва стсавастас стставсств авсестанссо тЕрЕсватав автвастати 120 авствтавав ставтсавва таїсеставс ТтТасстівзасї врїтаїсавса вавасссвас 186 ввсассвтва авствстває стастасасс Іставаствс асесавесвї всссустанв 248
ТстЗЕсвЕТа всБиТаріви сассвастає аврссбраста ссЕстазсст внаасарнав зав вататєсеста сстассттстя їсавсСсарневс васасссіяс ссіврасстї серсяваввс зво аставеЕстви ваазтгсзавсв вассвтвасс встссстсав ТЕЖ татстї сссасставс 428 васварсарвс їваавеЕссре сассрставс вЕсеВЕрІрсс сТвствзасав СтТсСтассся два ававаавстїа аресесавїв вазавтвваї аасрссствс арісавеисав сЕстсаррвав 543 їсавісассв арсарвасіс тайрватавс асстатавсо ЄвЕсіавсас ссівасссів вав тстваресся астасванаа всасааввіс Тасессївся аанїнастса ссавевнастре ве
ЕСтТакссссв гвастаавїс сІгївзабава вЕсвантест ва 722 «2105 22 «2115 1407
«2172» ДНК «213» Штучна «7285 «223» Оптимізована для СНО послідовність, яка кодує ланцюг ївбі химерного клону 29Е5 людини «408» 27 агввавтїнеї саввсвївії сасвіїсств ствансяїва ссвсівесвї всастсавав 5
ВЕрСсавстрс аварсавЕсарр ссссрардств вЕсазрсств врсЕстарсвї рааватвавс 122 тріааавста ксвристасає стссазсїарс бтасвіраїврс астврессаа рсавзарссс 188
ЕвЕсСаневсс ТЕвантвваї сЕвЕстатаїї: вассссївта асвасвивсас Кавеївтавс 248 ваваарієта авревіааавис тасссіваст арсваїаарі старврстстас срестатате зав вааствЕста вІствастав ївааватавс вссекстаст аствсвстаа стастасввс зво
ТставсстівЕ статерастіа стррвЕЇсав ввсаставсв Єрассвтвіс Тарсестарс зга астаавенся ставсвєвсї ссссстввсс сставстста аржїстастарв сеЕвЕсвисасс 480
ВССВСІСТЕВ БСТЕсСсСтТВЕІ сваврасіавс ТЕсссспарс ссвЕївассеЕї Савсівеаах зай авсевсвсіс тІвастансвв авбдсасасс жбссссвссв Трсївсавїс тавсевсств вав татавржствї стізвсвсввЕ сассвтвссї авсїставссо їррЕсастса васствіаїс Ба
ТЕсаасвєва ассасаарся стстаасасте азрвтрраса аязаветвра асставарісс 728
ТЕсватаана стсасассти Тсссссствс сствсссств авствстЕвВ аввасставх 780 вІяКісству тсссасссва всстаарввс асссіваїва ссїсївввас сссосвававів 848 ассівсеЕсвя стввтврасес сартїсасрав дасссівзая Тезавтсїїаа Єтивтасвтв зва васввсевіве завівсасаз сЕстваавасі аарссіарав зеразасавта жзасістасс з5о
Татаревїсв їсСавсртвсї вассвтвств сассаррастї врстраасвв сзаанавтахт 1820 аавтртазав СвІстзасаа ввссстрсса всссстатсв аваанастаї сеставервся 1280 аарввїсарс сіарвваасс Єсарвїістас ассстрсссс сіарізвева свавстваст 1148 аарзаїсаве Есарсствас Есвїствитс ааревстіст ассстарсва таксрссвіс 12080 кавтрервавї стаасреїса рсссввравс вастаєаава стассссссс теЕтвстввах 1260 авсрвасевта встЕсЕссст всастстааа страссетве аїзантсстав вЕвевсарвсав 1326 вЕїзасевтрі Ссавстріав свІвВтїдсас рарвссствс зсаатсвсса састсававар 1388 тсаствавсс твавссссвя тТаврЕра 1487 «2105 723 «211» 1404 «212» ДНК «2135 Штучна «2га» «223» Оптимізована для СНО послідовність, яка кодує ланцюг їв04 химерного клону 12Н3 людини «ов» 23 аєрвавтввії стврівстї Таївїїсстір стріссятвра ссрсверІрі ссасавсвар Ба вівсансінс висавіссве ссестіравств ЕСравасств всвссіссвї взаратстсс 128 твсаавасст ссввстасає стісапрвас тТасасааївс аствреїтваа асавтсссас 186 ввсаавіссї теравївнає сЕвсевазаїс Тассссааваса асресерстс сасствсаас 249 саваасіїса арвасавивс сассствасс вСрвасавв? сстсстссас своестатате зав ваасстсенї ссстрасстіс сваввастсс вссвтнтаст асінсясссв васвврвстас зв сасввссссс асстрнаїсї свасвсртве весеЕствиса ссассвбвас сетністсса 428 вставсасса авеЕвсссстс СсвІВСТСсСсТ СсТЕВссСсСІ встсссвНКс сассіссвав ако тсСтассвося сесСТВеестТВ сствЕсрава вастасттсс ссдавсссяє васавсетсс 53а
ТвЕаастстр всвссствас савсвеЕсвтр сасассттісс сеЕвссвТвЕсЕ всавтсстсс Бавй ввсствтастї ссствксстс свівеїваса всЕсссісст ссарссївве сассазрасс ББО
Тасасстдіа звсЕївдассв сварсссісс аасассавря свЕЗВсавЕсн вив вавтсї 729 ваятасввсс стссстнсяс ассітвсссії всссствааї СІстввисвв аССІТссВТВ 78 тЕСссСтВЕЕсСс ссессазавсо сааввасасс стввтватсї сссвиасссс сезавтрвасс вай
ТЕСВЕВВЕре Тррасетвтїс ссаараарає сссваретсс автїсавіїр ртасевтррас зва вЕсеїврваар їрсасаасвс сазрассазр сссарадавр засавієсаа сессавсстає зей
СсВЕЕТНЕТЕЄ соБЕВсСтвас свівствсасє савраствеЕс Тваасвяисай аравтасаае 1828
ТЕсававексї ссаасванвир сствсссавс тстаєсвава адасааїтстс саавессаар 1089 вЕССсСавсссо всЕавсссса вВБТЕсасаєс ствсстссса вссаавзава дасрассаар 1140 ааєсавеїет ссстрастто їстратбрава вевстІстасс ссіссвататї свссвтсвав 1288
ТВЕКзЕСсСса асввссавсс свавазсазвс тасзарассая сссссссівЕ вствевстсс 1260 васввстсстї ссСТтссствса стстсвистя асавтнвата авісссввЕсв всааваарвс 1526 васвісттіст сствстссвІ ваївсасвве всссівсаса ассастасасє ссараввтсс їз ствсссства всстввшсза вав 14684 «21а» 28 «2115 792 «212з ДНК «2135 Штучна «22аУ «2235 Оптимізована для СНО послідовність, яка кодує ланцюг каппа химерного клону 12Н3 людини «48085 24 асввавсеЕнт ссЕБТЕТСОЇ Тагестсств сСтртссетва ссЕсСТввсвІ всастссвах Бо ассвІваїва сссавіссса савевтжтатр тссасстссс Євевсвасав аврїстстатї 128 асствсаави сстосссарвна свхреЕвсвстІ ВСсСЕТЕНССХ БЕтаїсадса ваавсссевс 1509 савіссссса звсівствраї стаствврсс їссассаввс всвссЕВсСЕЇ всссвасава аа
Стсассввсв вавестстври сассрасттс ассстрасаа сстІссазсят всавтссває зав касствассв астасетстея ссавсавтаї аїсСсвастасєс ссстрассії севсеваврвс зва ассааєстре ааваїсаансв вассвтвесс встссстсся ТВсІТатсЕЄ сесвсссісс ага васваксанс сваавіссвн сассвостсс всвеЕстТвсс сествазсаа стЕстасссс 489 сЕсвавЕсса аветвсавія давребрявс васрссствс авїссявсва стсссвавва 5аа їссвтвасся ввсарвастс сааррасавнс асстастссс Твтсстссас сствассств ва їссзаввссоя астасвавназ всасвавеів їасевссівсе зарівасєсса ссаревсстр ва
Тссавссссв трассазвїс сттсзассрв весравтвсі за 782 «2195 25 «211» 465 «2125 РВТ «213» Штучна «2285» «29235 Амінокислотна послідовність ланцюга Ірб4 химерного клону 20Е5 людини «лад» 25
Мет бій Тер бег біу Маї Рпе Меї Ре їецч (ей бег Маії Тиг Аза біу
1 5 10 15 маї ніх бак бій Ма) 515 їец бій біп бег біу Рео біц Гец Маї цух 2а 25 за
Вго 01у А1Та бег Маї су« Мебї бег Суз Ту5 АТа бек біу Туг ТВг Рпе да 45
Тигобакє Тус Маї Мет Ні Тер Уаї уз біп уз Рго аіу біп 01у Гец 8 55 68 бій Тер 116 б1у тує 1182 АбпоБго Тук Ад5п о Абробіу Таг фу Туг Ап в5 7а 75 89 біч їуз Ріпа Гуз біу губ Аіа Тгроїеу ТБг бек А5роГ уз бег о бЗег баг 85 за 95
Тае Аїа Тут Меї бі Ге бег бег їе) Трг обебг біз А5р бег А1Та Маї 188 105 318
Тук Ту Су5 АТа А5п Туг Тук біу бег бек іїеи бег Мет Азр о Туг Тер 115 128 125 біу бій біу Тйг обег мМаї Таг оУаії бек обве Аїа бек ТВге о іу5 біу рго 130 135 їла 5ег Маї Ре Рго бе АЗїа Рго Суб5 бег ДгЕ 5ег тТйго5ег бі бег Твге 145 158 155 і6о
Аїа Аїа івен б1у Су5з Гей Уаї бу5 А5р Туг Ре Рго о1и Рго Маї Твг 165 178 175 уаі бек Тгр Азп бек БІу Аїа їец Тийб бек б1у Ма1ї Ніє Таб РНе Рго 188 185 1958
А1а Ммаї (ен бій 5ег бек б1у Гез Туг бег Гец бек б5ег Маї Маї Тйг 195 28а 205
Маії Рго 5ег бек бег іец біу ТВгоГуз Таг оТус Тпг Суб Абп о Маї А5р 218 215 228
Ні уз Рго бек Ази ТВгофуз Мві Ар о їу5 Агсв Маї 01 бек Гуз Туг 225 238 235 249 сіу Рго Рго Су5 Рго Рго Су5 Рго Аїа Рго бій Ре Ге бі біу Рго за 2за 255 бег Маі Ре ре РбБа Рго Рго Гу5 Рго Гу5 Ар о Тийг бе Меє Т1е 5ег 2658 255 270
АгЕ Тигб Рго бій Узі ТВг Су5 Уаї Маї Ма1ї А5р Маі бег бІ1в 010 А5р 275 28а 285
Рго бі Маї біп РБа деп Тер оТук Маї Азр біу Уаі а10 маі Ніб5 Ап 298 295 зва
Діа уз Те Гу5 бро Ас бій біо біб Бпе А5а 5ег Тийгб Туг о Асе Май за зів 315 320
Мазі 5ег Маї без Тег оМаї бен Ніз біп Ар Тер Ге Абп біу Був біс 325 330 335
Туг Гу Су Гуз Маї Зег А5п Су біу Гей Рго Заг бег 1182 оц Гу зав 45 зБ5а
ТВг о ЇТе б5ег о Гу5 АтТа (уз біу біп Рго Агв бій Рго біл о Уаії Тує ТВг 355 зва 3655
Кен о Рго Рго 5зеб о бТ1й біз біз Меї Тпб о фуб5 Абп о біп Маї бег Геу Таг 378 375 зве
Су« Ге Маї Ту біу Ре Тує Рго бевг Абр Тіе АтТа Маі бій Тго біц за5 зай 395 заз 5ег о А5п біу біп Рго біш А5п Абп о Тук о фу5 ТВге Тк Рео Рго Маї Бе доб що 315
Азр 5ек Азр о зіу 5ек Ре Ре іє Туг б5ег Аг о іг2ец ТНг Маї А5ор Гуз лего У 438 бек Агв Тгробій бід біу Ахп Узі Рпе беб Суз 5ег Уаї Меб Ні 53 аз5 зав 445
АТа ем Ні5 А5п Ні5 Тук Те бій Губє бег (ей баг оіви 5ег сего 01у 4585 455 або
Гуз 465 «2125 26 «2115 233 «2125 РАТ «2135 Штучна «22ах «223» Амінокислотна послідовність ланцюга каппа химерного клону 20Е5 людини «аа» 26
Меї біб Тер обег біу Уві Ре Меї Рбе Гео Гео бег о Уаі Те Аза біу 1 5 18 15
Уві Ні зег Ар Ті бій Меї Те біб ТБге Те бегб беб гей бег Аза 29 25 36
Зег зе» біу Ар Аг Уаі ТНг ї1е бек Суб5 Агв Аіїа 5ег біп Ар Це 4а 45
Зег А5п о Туг Цец А5п о ТрроТуг бів бій Куб Рро Абзробіу Твг омаї уз за 55 ва меп без Тіе Тує Туг Типг обег АгЕ їео Ніє 5екг біу Маї Рго 5аг Аг 65 78 75 за
Бе бег о біу бек біу б5ег біу Таб о Аб5р Тук бек їв Тие Тіє Зег дп 85 за 5
Іен а10 біп біо Абр Тіе АТа Те Туг Реве Су біп біп б1у А5п ТЕг 190 1805 110
Гей Бго Тер Те Ре біу біу б5Біу ТБг о Су5 їез бій Т1е губ АгЕ Тиг 115 122 125
Уаі АТа Аїа Рго 5ег Маї Рпйе Тіе Рйе Рго Рго 5ег Азр б1іц біп Гео
139 135 1460
Кує бек біу Тс Аїа баг о Маї Ма1ї Су5 іей іей Ап Авп о Рпе Туєс Реса 145 158 155 168
АгЕ Бій Аїа Гуз Маї сій Тер Гу5 Маії Ар А5п Аза ее біп 5ег б5іу 3165 178 175
Азп о баг біп бій бек маї Тиг бі бій Абзр о 5ек 1у5 Ар бек ТВг о Туг 188 185 1959 зег Ген бег бек ТВг Бей Тиг о Кен бег уз Аза Азр Туг 510 Гуз Ні 195 29а 295
Їу5 Маі Туг АтТа Су5 бі Мазі Тк Ні біп б1у Ге бек об5ег Рго Уві 218 215 228
Тигру бег Ре д5п АгЕ біу віч Су 225 230 «2105 727 «2115» 468 «212» РЕТ «2135 Штучна «228» «223» Амінокислотна послідовність ланцюга Івбі химерного 29Е5 людини «4085 727
Меї б1ц Тер 5ег оїу Маї Рпе Меї Рпе Сен їй бек Уа1ї ТВг Аїа біу 1 5 18 15 уаії Ніб5 бег біз Уаії бів 1ец біп біп бек бБіу Рко біц Гео Уві Гуз 29 25 за
Рго а1у діа бБег Ма1і Гу5 Меї бЗег Суб їу5з Аїа бег біу Туг Тис Рве ня 45
ТВигобек Туг УМаі Мебї Ні Тер Маї Гуз біп Суб Рго біу біп біу г еи
З 58 бів Тер Тіє біу Туг Ті Ахп Рго Тук Д5п о д5робіу ТВб Гу Тубк доп
65 79 75 за ори фу5 бБйе гу біу ух АТа Тег обец Тбг о 5Зек Азр ух 5ег бок бег 85 9еа 35
Тиг Аїа Туг Меї сіб Їец бег бЗег їГец Таб о бегс б1іц А5р бЗег діа Уаї 198 125 116
Тугб Тук Суб АтТа Ап Туг Туг 5іу бек бег Сей беб Ме Авро тує Тер 115 123 125 сіу біп біу Тиг обЗег Уа1ї Тиг МУаі бЗег о бег Аза бег Тігоїу5 б1іу Рго 136 135 146
Зег Маі Ре Рго Гей Діаз Рго 5егробег Гуз бек ТВг баг біу біу Тиг 145 158 І55 і60
Аїаза ді Ге біу Су Бе Уаз Куб Ар о Тує Ре Рго бі Рго Уаії Тег 155 179 175 уаї баг Тер о Асбп о 5ар о бі1у Діаз Гео ТВге о5ек о біу уві Ні ТВБ Ре рго і80 185 ії190
Аїа Уві ем біб бег о бег 01у їеу Тук бвг оієц бек о бег УаіЗі Уаї ТЬг 95 2980 205
Маі Рго Явг 5Зег баг Іво біу ТБ біп Те Тує І1ї6е Суб А5п о Уаі Деп 210 215 о
Ніб фу Рго бБег Абп Тйгофїуб5 Ма3і Азр о їуз ух Маї бій Рго Гуз Зег 225 238 235 284
Суз А5р Гуз ТВ Ні ТагоСух Рго Рго Су Рго Аїа Рго бі) Тец Гем 245 258 255 біу бБ1іу Рго бег мМаії Ріе їец РБе Рго Рго Гуз Рго ух Авр Тиг Гей 268 2655 278
Мет Т1е 5ег АгЕ ТБгоРго бі) Узі Те Суз Маї Маї Маї Аб5р Ма1 бег 275 285а 285
Ні і Ар Рго бі Маї уз Рпе А5п Тер о Туг Уаї А5р біу Маї Бій 298 295 зе
Маї Ні Азп Аза Гуз ТВгофу5 Рго Ага о біц бі) бій Туб А5п обЗег Тр зо5 319 315 зав
Тус Агро Уаї Уаї зег Уаї бен ТНг Уайї Ге Ні5 біп Ар Тер гей Авп 325 330 335 сБіу уз б1ц Туг Суб Су 1у5 Уаї б5ес Ап іу5 дія Гай Рго АТа рко зав 345 зза
Те бій їу5 Те Ї1е бек Гує« Аза Туз бІу бій го Акгв бій Рго б1п 355 360 265
Маї Тук Тег о їец Рго Рго бек Абе о Азр обі івго тТВге Гуз Аза біп МУаї 370 375 зва его оЇец Тиб Суб Гей Маї уз б1у Рйе Туг Рго зег Азр Т1е Аїа Уві 2385 зза 395 4а0 бій Тер бі бек Азп о біу біп Рго бі Ап Ази о Туб Гу ТВе ТВе Рго 485 318 815
Рго Маії (ей Дер бег А5зр біу бег Ре Ре Цей Тук б5ег Гуз їец тТвВе 428 425 аза
Ууаї А5р їу5 б5ег о Агя Тгр біп бій біу А5п Ма1! Рпе бБег Суб 5ег Уві 4з5 448 445
Меє Ні5 біс Аза іє) Ні5 Аби Ні Туєс Тпе бій фуб5 бек Бей 5ег Тец а5а 455 465о 5ег Рго біу гу «210» 28 «2115 467 «212 РЕКТ «2135 Штучна
«223» Амімокислотна послідовність ланцюга Іро4 химерного 192Н3 людини «4885 28
Мет бій Тгр бек спіу Уаі Ре Меї Ре сей сей бек Маії Тиг Аіа біу 1 5 16 15
Уа1ї ніх б5ег бі Маї біп їец біл біп бес біу Рго 014 Геч Маї Гуз 28 25 зе
Рго 61у А1а бег Маїі ух Т1і2е бег Су Гу5 Тр обЗег Б1у Туг ТВг о Рле да 45 іу5 А5р Тук Те Меж Ні Тер оМаї Гуз біп бек НІі5 бі Гу5 бег г ец 58 А ва
Бій Тер їТе біу біу Т1є Туг Рго Азп деп о1у біу 5ег Тиг о Туг Ап 655 79 75 во біп Ази Ре Гуз Ар обу Аїа ТК оїео ТвгоУаї А5р о Гу 5ег б5ег бег 85 за 95
Тве Аїз Тує Меї бі РеБе Аге бЗег іви Тнг обЗег обі Ар бЗег А1їа Уаї т8а 185 110
Туг Туг Су діа Аге Меї біу Туг Ніб5 біу Рго Ніб5 Ген А5р Ре А5р 115 128 125
Уаії Тер біу Аїв б1у Тигб Тапе Уаії Таб о Уа1і 5Зег Рго Аїа бек ТиИг Суб 136 135 148 біу бго бег Уаі Рпе Рго сей Аїа Рко Су5з бер Аг бек Тс б5еє бі 145 159 155 іса
Бе Тиг діз А1а гец біу Суб івеч Маї їу5 Абр Тук Ре Рго бій Рго 165 т178 175
Уаії Тиг Маі бег Тер А5п бек 5іу Аїа івеи Таб обЗебг біу Уаї Ні Те 189 185 199
Ре Рго діа Уаї Гени біп бек 5Бег біу їв Туг 5ег 1) 5еаг бег Уві
195 286 205
Маї Тие о Уаії Рго 5ег баб о бебс Кец біу ТВгоСу5 Таб Тус Те Суб деп 218 215 222
Маї Азр Ні Гуз Рго бек Ап Тйг о Бух Маї Ар о 1у5 Агв о Маві 01 баг 225 239 235 гАВ їу5 Ту біу Рго Рго Су5 Рго Рго Суб Рго Аіа Рго 01 Рпе без а1у 245 250 255 біу Рго 5ег Уаі РВе Гей Ре Рго Рго уз Рго ух А5р Тиг Гбеи Меї 250 285 27
Т1е бег оАгв ТпгоРго бі маії Таб оСуб5 уві Маї Маї Азр УМаії 5ег віп 275 289 285 іш А5р о Рго біб Маї біп Ре Аби ТгроТуб Маї А5р 01у Ма1ї бій МУаї 238 235 зай
Ні Ап АТа їу5 Тиг огГує Бго Абв біз біц бів Ре АєпобБеб Те Тук за5 318 315 з2а
Аєв Уві Маї 5ег Уаі Гей ТвВг Узі Гец Ні бій «р Тер оіей Ап біу 325 339 335 ух бій Туг ух Суз Гу Маї бек Азп Гу5х біу Геч Рго бег бег І1е зав 345 359 18 фу Те ї1е баб Гуз А1їа уз біу бій Рго Абе бів Рго бій Уві 355 зва 365
Тут Тиг оГец Рго Рго бег біп бі 510 Мех Тйг о іїу5 Азв біп Уаії бег 378 375 зве зей Тпгб Су5х Гей маї Суз біу РНе Туг Рго баг Азр 112 А1а Маї бій 385 заа за5 4ва
Тер би бег Ап б3іу біл Рго 010 Абп Аа Тугб Гуз Таб Тег Рго бео 4да5 з1а 415 уаї бе) Ар бег Азр сп1у б5ег РБе Рпе їв Туг бер Агро Ге Тег Уаї 429 325 ззе
Ар Куб бБег АєБ Тгр біп бі б1у Абп о Уаії Ре бЗег Су5з бек мУаі1 Ме азЗь дав 445
Ніє 513 А1їа бе Ні Абп Нія Туг Тиг біб уз бег озеу бег Гец 5ег 458 455 4ва
Меи біу Гуз 365 «2185 29 «-211»5 233 «2125 РЕ «2135 Штучна «228» «223» Амінокислотна послідовність ланцюга каппа химерного клону 32Н3 людини «ах 283
Мет бі) Трр о бек біу Уаі Рпе Меї Рбе ів їен бЗег Уаї Тег АТа 51У і 5 16 15 узі нів ек Ар ТТе Маї Меї Те бій бегс Ні Гуз РБе Меї бер Трг зо бек Ге сіу А5р Агро Узі бек ї1е Тиг о Су5 Туз А1а 5ек бій Ар Уаї да 45 б1у Аїа А1а Маї Аїа Тер Туг біп біп Губ5 Ргро бі1у бій бег Рго Туз 5а 55 ва іеноїівец Ше Тує Тер Аїа бег ТВе Агроніз ТВг о біу Уаї Рго Ар Ага 7а 75 38
Бе тТпг о біу біу біу бес бБІ1у ТНг о Азр Ре ТагоГей Те 116 5ег Ап в5 за а5
Уаї біп бек біб Ар Гец Тс Абр о Ту Рпе Су біп бів Туг І1е Аза 128 185 110
Туг Рго Сен Тег о РНе с1у 5іу біу Ти оїу5 Гео бій т1е Гу Ага Тс 115 128 125
Уаії А1а АЇ3 Рео бег маії Рне Т1е Рбе Рго Рго 5ег Дер біц бій Гей 138 135 146
Муз Зег біу Тиг Аїа бек Маї Маї Суб Ге Гей А5р А5зп РНе Туг Рго 145 158 155 168
АгеЕ бів А1їа їу5 Узі бі1п Тер Суб5 Маї А5р А5п А1а Ге бів бег щ1у 155 178 175
Ап обег віп 010 Бег Маї Тве біц біп А5р бек губ А5р бе Таг Тує ї18о 155 198 ек Гео бег обег ТйгбоГеу Те без бег Їу5 Авфа АброТує бів їу5 Ні 195 280 295
Суз Маї Тук Аїа Суз бій Маї Тег Ні біп біу Се бег бек Рго Уві 218 215 22а
ТНг о їуб5 бЗег Рпе Ап Аге б1у б1Ч Суз 725 230 «210» 36 «211» 240 «21725 РЕТ «233» Штучна «228» «223» Амінокислотна послідовність С02134 СКО2 людини (ак 1-28 з« 665-277) «2202 «221» 5ІСМА. «2225 (13..(283 «22» «221» ТКАН5МЕМ «222» (178)..1198) «Абах 38
Межї Су маїі сіу Дів АгБ Агвоівсу аіу Агро обіу Рго Су5 Аіїа АТа І єм 1 З 19 15 беч бец о їеб сіу се б1у бе бег Твг оУаі Тг біу Рго Суб5 піу рРго 28 25 за оРу Ре Туг А5п о Аяр о Уаї Маї 5ег бек Ту Рго Субз Гу Рго Суб ТВе 48 45
Тер Суб Аби Ге) Абе бег о біу бег б1ц Агроїу5 бій їв Суз ТВг діа 58 55 во
Тиг бій Азр ТВе Маі Суб Агв Су Агв Аіїа біу Таг о бІп бго іго Авр 65 70 75 за бек Туг Гуз Рго біу Ма1і дер Су5 Аїд Рго Суз Рго Рго біу Ні Рпе 85 9е 95
Зег Рго б1у Ар Ап біп Аїа Су уз го Тер ТВг о Авп о Су5 тТВгс Гей 188 195 110 діа б1у Гу5 Ні ТВг оїеу бів Рко Аза 5ег А5п обегобег Абр Аїа Те 115 128 125
Суз бій Ар Аг Ар о Рго Рго Аза ТВсе біп Рго біп бій тТБгб біп біу 132 135 112
Рго Рго А1з Агв Рго Ті Тс о Маї бій Рго ТВг обі) Аа Тср бго Ага 145 150 155 169
ТНг обер бІ1п пбіу ро бег Тпг о Агв о Рго маї бі) Мві Рго бБіу о1у АгеЕ 165 178 175
Аїз Мазі Аїа А1із ТІе ей біу іч б1іу івй Ма)! Ге бу їецп ву 91у 152 185 198
Рго ей Аза Т1іє їеи їен А1а їер Туг іви їеу Абе Аг Азр о біп Аге 195 280 205
Їїец Рго Рго Д5р АтТа Ніб5 зуб Рго Рро біу бвіу біу бег Рне Агя Тпг 218 215 229
Рго І1е бів бій бій бів АтТа Дер Аза Нія Зак Так ів діа Гуз Т1е 225 238 235 248 «218» 31 «2115 398 «8125 РА «213» Штучна «2292 «223» Амінокислотна послідовність С0134 СКОЗ людини (ак 1-28 «5 108-277) «2205 «2213 5ІОМАІ. «22275 (135..(28) «2297 «291» ТКАМ5МЕМ «2225 (136).,(156) «4805 31
Меї Су5 Маії біу Аїа Аге Агн о іен 6біу Ага біу Рго Сух Аіа Аїв Тец 1 5 18 15 їем бен сечо 5іу Сез о1у бе бег Те Маї Тис біу АгЕ Суб Аге Аів 28 25 за сіу Ти Біп Рго ієц Азробегс Туб Гуз Рго біу Маї Ар Су5 Аа Рго зла 45
Су5 Рго Рко біу Ніб5 Рбе 5ег Рго піу Дер Азп біп Лів Суз Гу Рго 58 55 50
Тер оТвг Ап Суз ТВе обеу Аїа біу їуб5 Ні Так оїез біп Рго Аїз бег 65 78 75 зо
А5п бек бЗег Ар Аїа Ї1е Суз б1і0 Абр о Аге Авр Рго Рро діа Тпг іп 85 96 35
Рго бів бій Тйгобіп бі1іу Бго Рго діа Абе о Рго ї1е Те Уа1і бій рго 388 185 110
Твг 010 А1Та Тер оРго Асб ТВг обзеє біп біу Рго баг Твг о Асв Рго Уві 115 1268 125
1 уві Рго біу сіу Аге АЇа Уві Аїа ліз Тіє гей біу Геч сбіу їец 138 135 140
Уаї Кен біу ей Ген біу Рго (ец Аза Т1е Гей зе А1їа гей Тує Ген 145 150 155 169
Мей Агро Абе Ар обіп Абе бен Рго Рго Азр Аїа Ні Гу Рго Рго б1у 155 178 175 бБіу біу бег Рпе Аге ТВг о Рго Тіє б1п бій 610 бій А1їа А5р АТа Ні
Іва 185 192 сен ТВбг Гей АтТа ух Т1е 195 «2105 32 «211» 173 «2122 РЕТ «213» Штучна «229» «223» Амінокислотна послідовність СО0О134 СКраА людини (ак 1-28 25 197-377) «2г2а» «2215 5ІОСМА «22235 (13..(28) «27202 «221» ТКАМОМЕМ «2225 (1173.,.(137) «4005 32
Мек Суб Маї біу діа АеБ Агя Гец біу Агя б51іу Рго Суб Аїа Аїа Гец 1 5 18 15
Їец беб ец біу Ген бім їец бек ТВге о Маії Тиг о біу Рго Суб Рго Роб за б1у Ні ве бЗеєб орга біу А5зр Абзп о біп Аїа Сує Су5 Рво Тер Те Або
Су Тик о іген дів біу їує Ні ТийгоГецй бій Рго Аза бек А5зп бес 5ег ва
Ар Аіїа ЩЦіе Суз бій Ар Агв А5р о Рго Ргсо Аїа Тпг обіп Рго бій вій 65 79 75 ва
Твгоб)ій біу Рро Рго Аза Асв о бго Тіе ТВг мМаі біп Рко Те біз діа 85 зе 95
Тер Рго Абе Тие о бегб бій біу Рго 5ег Тпг о АКв Рго Маї бій Уві Бго ї18о 195 118 біу біу Агв Аїа Ма1і діа Ата Т1е їв біу Сеш біу їв мМаї ігр 01у 115 120 125
ІЇей ін біу Рго Гез АтТа Ті ів іец Д1Із їеб Туг Гей їен Аге Аг 138 135 148
Ар бій Агросїеб Ро Рго Авр о Аза Ні Туз Рго Рго б1у біу 01у баг 145 158 155 166
Рпе Агро Тиг оРго їі1іе біп бій бі біп Азїа Абзр Аза Ні 5еє Тр оїец 165 170 175
А1Та Гуз Т1е «2105 33 «2115 159 -2125 РЕТ «213» Штучна «22а» «223» Амінокислотна послідовність усіченого С0134 СВО4 людини (ак 1-28 2« 147-277) «2205 «2215 ЗІСМДІ «2225 (13..(28) «220» «221» ТКАМЗМЕМ «2223 (973)..4117) «4005 23
Мет Су5 Маї біу Аїа Аге Агв Гей біу Агв біу Рго Сух Діа Аїа І ец 1 З 18 15 іви фец іви біу сез б1у бе бег Тпб о мМаї Тс біу Суб5 Тк Се АїЇв 29 25 за сіу іу5 Ні Тк Гей бій Рго Ад13 бег А5п бек бег Ар АЗіа ї1е Сух да 45 бій А5р Агв А5р о Рго Рго Аіа тб обіп Рго біп бій Тег бій біу Рго 5а 55 ве
Бго Аїа Агв о Рго Ті6 ТВгомаії 018 Рго Те 610 Аїа Тер Рго Аев Тпг 655 7а 75 ва ее бій біу Рго Бег Тиг Агя Рго Маї а1й0 Уаії Рго с1у бІіу Аге Аїа 85 за 95 маі Аіз Аїа Ї1е ен б1у Кеш біу їеч Маї Ген б1у Гей Гео б1іу Рго 160 105 118 ів Азїа Т1ів ев без Аїа іо Тугб Се) Се Абе Абе А5робій Авбр їв 115 126 125
Вго Рго Азр Діаз Ні Гуз Рго Рко біу біу біу бег Рнпе Агв Тйг Рго 139 135 148 ї1іе біп б01їн біз біп ліа др Аїа Ні5 5еб Таг осей Ата уз Тіє 145 150 155 «21а» 34 «2115 19 к212з РЕТ «21335 Ното харієпь «4805 34
Агв оСуз Агв АТа б1іу Таб біл Рго Ге Ар бег Туг Гу5 Рго о1у маї 1 5 19 15
Ар Суз5 Аїа
«219» 35 «211» 187 «2125 РАТ «213» Ното 5арієпе «дае» 35
Аг Суб Агр оАТа сіу Тагсобіп Рго Гей Ар о б5ег Туг Гу5 Рго бі1у Уаї 1 5 18 15
А5р Суб А1їа Рго Сує Рго Рго б1у Ніє Ре бЗег Рго б1у Авр Азп бій 28 25 за
Аїа Суб вує Вго Тер оТВг оАвп о Сує Те оГеч Аїа б1у Гу5 Ніє тТВг Гей да 45 біп Рго Аїа бег деп обер о бег Дер Аіа Тіе Су5 біб А5р АгЕ Азр Рго 5а 55 бо
Бго Аїа Твгобіп Рго біп бі) ТВбе о аЗ1п біу Рео Рео Аза Ася Рго І1е 655 78 75 во
Тве Уві бій рРко ТВе біб Аза Тер Рго Аг Тпробег бІ1п біу Рро 5ег 85 за 95
Тік Аг о Рго Уаї бій Маії Рго біу біу АгЕ АТа 168 185 «2105 26 «211» 68 «212» РКТ «213» Ното заріепь5 «48805 36
Суз ТВг Гей дДіа біу Гуз Ні ТВгоївц біб Рго А1їа 5ег Аб5п баб 5ег 1 5 16 15
Дер А1їа Т1е Сух5 бій Ар Агв Ар о Рго Рго Аїа ТВге бій Рго біп біц 28 25 за
Твг обіп б1у Рго Рго Аїа АгроРго І1е Те о Уаі біп Рго Те біз Аза 35 48 45
Тер Рко Ася Те бег біп б1у Рго 5ек Тк Акр Рго Уві бі Уаї Рго 50 55 Бо біу б1у Ага А1а 65 «21605 37 «2115 29 «21225 РАТ «213» Ното 5арієп5 «4205 37
Те Ту б5ег беє Рго біц Ар б1у Ії Ні5 бій іей Рлйе Рго Азїа Рго 1 5 18 15
А5р біу бБіц бій Ар Те о Аїа бій гео бів біу сіу Сує 2а 25 «210» 38 «511» за «2122 РВТ «2135 Ното 5арієпь «41065 38
Аге Суб Ав о Ата біу Тк біо Рго гео А5робЗек Туг Гу Рго віу Уві 1 5 19 15
Ар Суб Аїа Рго Суб Рко Рго біу Ні Рпе бег Рко б5іу Або Ап віп 26 25 за
Аіа Суз (у5 Рко ТРрр о Тве Аб5а «2105 35 «2115 29 «2125 ДНК «2135 Штучна «2295 «223» антизмістовий праймер мкаппа (праймер Ж: 281) «1005 395 васавтїївві всарсатсав 28
«2105 40 «211» 20 «2125 ДНК «213» Штучна «2297 «223» антизмістовий праймер мкаппа (праймер Ж: 266) «дод» 40 сасівраєре СеввЕрааратр 28 «218» 841 «2115 28 «2125 ДНК к213» Штучна 4223» «223» антизмістовий праймер мівб1і (праймер Е 203) «ава» 41
Евссавтівва Тарасаваїв 28 «81й» 42 «2115 20 «2125 ДНК «2135 Штучна «22а» «223» антизмістовий праймер мівб1і (праймер Ж 208) «49ах» 42
ТЕвасарева тссаравтїс 28 «71825 83 «2113: 25 «212» ДНК «2132 Штучна «2285 «223» змістовий праймер 29Е5НС (праймер Ж 259) к?2а» «221» тібзс Ттеатуге «222 (183у..514) «223» п янляє собою а, с, 5 Збо Є «2285 «27215» тібзс Тевїуге «2223: (233)5..123)
«223» п являє собою а, с, в або ї «вах 43
Есваантаса зуїпсагсаг «зпрЕ 25 «21987 44 «2112 25 х217» ДНК «213» Штучна «22ах» «223» змістовий праймер 20Е5НС (праймер Ж 269) «22а5» «2213 тібзс Театуге «22235 (2835..4298) «223» п являє собою а, с, 8 або «2295 «29715 тібзс теваїге «222» (23)..(23) «2232 п являє собою а, с, в або с «два» 44 всЕсасзаїтї асагсагю5п дрпсс 25 «2185 45 «2115 27 «2125 ДНК «2135 Штучна «22957 «9225» змістовий праймер 20Е51СЄ (праймер Ж 265) «28» «2215 тізс Театуге «222» (173,.(17) «223» п являє собою а, с, 5 або ї «41095 45 всрататаса гатраспсаг ас 22 «їй» 45 «-2115 21 «2125 ДНК «2135 Штучна «270» «223» антизмістовий праймер мівбі (праймер ЖШ 416)
«41995 46 савтївватан асаратрнвв в 21 «210» 47 «2115 28 «2135 ДНК «2135 Штучна «2205 «2235 антизмістовий праймер мкапта (праймер Ж: 394) «два» 47 аствваїреї євравватрви 28 «210» 48 «2115 26 «212» ДНК «2135 Штучна «22а» «2232 вмістовий праймер сигнального пептиду (праймер Ж 405) «дда» 48 асявваєвна фсігтатссат бутси 28 «2105 895 «211х 26 «2125 ДНК «2135 Штучна «2285» «223» змістовий праймер сигнального пептиду (праймер Е 410) «дав» 89 абевгсаївра ескКеевІсКї тс 256 «21а» 50 «211» 24 «21225 ДНК «2135 Штучна «220» «223» змістовий праймер сигнального пептиду (праймер Ж 389) «аа» 58 асввнсшсса ааваїрвавт саса 284 «-21а5 51
«2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна «228» «223» змістовий праймер лідерної послідовності С0134 (праймер Ж 362) «ва» 51 сеісеваєсся ссассатєеїтв свв 34 «2185 52 «2115 24 «212 ДНК «2135 Штучна «вах «2233 змістовий праймер КО2 (праймер Ж 3654) «два» 572 аствїсаств вассствсри їссс 24 «2185 53 «2115 28 «212» ДНК «213» Штучна «2285 «223» антизмістовий праймер СА (праймер Ж 365) «лава» 53
БЕвассвсав ввІссавтяз савс 28 «213» 54 «25112» 24 «2125 ДНК «2132 Штучна «2295 «223» авмістовий праймер СКОЗ (праймер Ж 3656) «4005 54 аствеЕсастр раареєрсар ЕСЕ 24 «21й» 55 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна «2205 «2235 праймер кінцевої послідовності СО134 (праймер КЕ 363)
«414995 55 аваатсстса ставаєстсв всса 24 «210» 556 «2112 24 «2125 ДНК «2135 Штучна «2205 «2235 антизмістовий праймер СКОЗ (праймер ЖК 367) «вах 56 авссстрсас стсссавтва сарї 24 «2193: 57 «2115 28 «2125 ДНК «213» Штузна «22ах «8232 змістовий праймер СВОЯ (праймер Ж 368) «4дао» 57 аствісасів вассстнссс сесії 24 «21805 58 «211» 28 «2125 ДНК «213» Штучна «228» «993» антизмістовий праймер СЕРА (праймер Ж 369) «давав» 58 агняввЕнсав ввсссавіяа са 28 «210» 59 «211» 24 «212» ДНК «2135 Штучна «2285 «223» змістовий праймер усіченого СВОЯ (праймер Ж 378) «два» 59 аствтсастя ватрдсассст євст 24 «21ї1а» ба
«2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна «228» «223» антизмістовий праймер усіченого САВА (праймер Ж 373) «ва» Ба авссавеввтв сатссавїна сарї 34 «2185 61 «211» 11 «2125 РТ «2135 Штучна «2205 «2233 М-термінальна амінокислотна послідовність легкого ланцюга клону 29Е5 «ла» 61
Ар Ті бій Меї ТЬге бій Тик ТВгс 5ег бек Гви 1 5 18 «2105 є «2112» 198 «2125 РНТ «213» Штузна послідовність «220» «723» дмівокислотма послідовність, гуманізована способом РОВІ варіабельнмої області легкого ланцюга мії клону 2065 «ааа» 62
Азр Те біп Меї Тпг обіп 5Зег Рго 5ег 5ег (сей Зег Аїа бег уві сіу 1 5 18 15
Азр Аг Уаі ТВг Хі ТиИб о Сує Агев Аза бБег бій Ар ї1іе бег Азв Туг 28 25 за іїец Ав ТгроТує бів біп Гуз Рго б1у Суб А1а Рго Гу5 їв ве Пе да 45
Тук Тут Тнк Бег дев Бе) Ніяє бек о біу Узі Рго 5ег Агв Рпе баг о1у за 55 ба бек біу бег о біу Так о Абр о Туг Тк іє Те І1е 5ег бек Ге б1п бро 78 78 во бі Азр РбБе АДіа ТиПг тує Тук Суз біл біп б1іу Ал Таб оїец рРго Тер 85 90 35
Те впе біу біп біу ТВе гу5 Маї бі Ті1е (у5 АгЕ 10 105 «210» 53 «2115 188 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2285 «223» Амінокислотна послідовність, гуманізована способом РОЇ варіабельної області легкого ланцюга Мі2 клону 20Е5 «аа» 63
Дер Ті а1й Меї Тагобіп 5ег о Ргро бек о5ег Ії во бег Аїа бег Уві біу 1 5 18 15
Азр о Аге Маї Те Ті Тс о Су5 АгЕ АЇїв бБег біп Азр І1е 5ег Ап Туг 28 25 36
Іец Абп Тер Тує біп біп Гуз Рго біу уз А1Та Маі уз їеб ів Те 35 ла 45
Туг Тук ТВг Заг Агро огГеу Ні бег біу Мі Рго бег АгеЕ Ре 5ег віу ва бБег осіу баг Ту тТВг Ар о Туг Те Ге) Те Те бек о бег Гецч віп Ро 65 70 75 58 біц А5о Ре Аїд тик Тує Рпе Суб бій біп біу Абп Тпе Гео Рго Тер 85 за 5
Тег РВе біу бів бІіу Тпгоїуз Маї бі) ТТе 1у5 АгЕ 3100 165 «210» 54 «2315 119 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність
«223» Амінокислотна послідовність, гуманізована способом РОЇ варіабельної області важкого ланцюга УНІ клону 20Е5 «аа» є а1п мМаї біп о їецп Маії біп бег біу Аіїіа бі Маії їуб5 у Рго біу діа 1 а 10 15 бек Уві Гу мМаї Зег Сух Гу5 Аіа 5ек біу Тугє Те Ре ТВг бек Тук 28 25 за
Маі Мет Ні Тер о Маі Агро біп д1а Рео біу біп Аг Гец бі Тер Меє ча 45 біу Тує Ті деп Рго Туг Ахп о Азробіу Таб Гуз Ту Азп 10 ух Рве 5а 55 6о
Гуз б1у АгвоУаї ТВе от1е ТНгобев А5ро Таб об5ес діа бег Тег АТа Туг 655 78 75 ва
Мек сій Ге бег бег Гей Аги о бБег бій А5р Те Аза Уаї Туг Тук Сув 85 аа 95
А1а А5ав о Туг Тує біу бег бек Бен бЗег Мет Азр Тує Тгр біу біп біу 188 105 1185
Твг зей Маї Те Маії 5ек о бесг 115 «210» 55 «21ї» 119 «23225 РКТ «2135 Штучна послідовність «220» «2235 Амінокислотна послідовність, гуманізована способом РОЇ варіабельної області важкого ланцюга УН2 клону 20Е5 «два» 65 біп Уаї бій ей Уаї бт1п бек біу Аїа бій Маї ух уз Рго б1у діа 1 в 16 15 бег о Маї Гуз уві 5ег Су5 1у5 АТа 5ег біу Ту Тиг о РНе ТЕг обеє Туг
28 25 за
Маї Меє Ні5 Тер Маії Аг оїп діа Рго сбіу біп Акв івец біз Тер Це 48 45 бІ1Уу Туг Хі А«п о рРго Туг Ап А5робіу ТагоГу5 Тук Ап 10 ух Рае 5а 55 6о іїу5 б51у Агв Аїа Тпге їіе Тиг бек А5р Те б5ег Аза бЗег Те Аза Туг 65 78 75 ва
Меї бін їГеу бег о бег Тез Аги бег бій д5р тб о А1а Маї Тує Тук Сув 85 із, 95
Аіфа Аби Туг Туг біу бБег баг (ей бег Меб А5р о Туг Тер б1у біп 01у 126 185 ті
Таб офец Маї Тнг Уві барв бег 115 «210» 56 «21152: 19 «2125 РКТ «2135 Штучна послідовність «2205 «2235 Амінокислотна послідовність, гуманізована способом РОЇ варіабельної області важкого ланцюга УНЗ клону 20Е5 «ава» 56 біп Маї біп іецй Уаї б1п бег біу Аза бій Маї ух Гуз Рго бім Аїв ії 5 18 15 бЗег Уві Гуз Уві бек Суз іу5 діа бек б1у Тук Так РБе Ти о бег Туг 28 25 зо
Уаї Меї Ні Тгр Маі Аг біп АТа Рго біу бій АгЕ їіви біб Тер Іі 35 48 45 біу Туг Т1е Ап Рго Туг Аєп А5робіу Тк оїуз Туг А5п біц Був Ре
Ба 55 по іу« біу Агв АтТа Тпгоїео Те 5ег Ар оіух Зак Аїа ес ТП Ата Тугб 65 78 75 ва
Меї бід іецй бег баг оіец Агро бЗег бі Ар ТТГ Аїа Маї Тує Тук Сув 85 па 95
Ата Ап о Тук Тук біу бек бег ієм бЗег Меї А5р Туг Тер біу бін б1у 100 185 ма
Тис їєеб Уаі Твг оМаї бек 5ег 115 «2185 67 «211» 1868 «2125 РЕКТ «213» Штучна послідовність «2205» «223» дмінокислотна послідовність, гуманізована способом РОЇ варіабельної області легкого ланцюга Мі клону 12Н3 «Ада» 67
Дер Ті6 аїп Мет Таробій 5ег Рго 5ег бек Гей 5Зег Аіа бег Узі 51у і 5 16 15
Азр Абе Маії Те Т12е ТЬг Суб Туз Аїз бег бій Ар Уві біу Аз Аа зо маії Аїа Тер о Туг біп б1п Туз Рго б1у їу5 Аїа Рео Гу Ге іец Т1е 3з 48 45
Туг Тер Аїа бЗег Твг Абе Ні Те о біу Маі Рго бег Аг Рпе 5ег о1у 5а 55 ва
Бег б1у бек біу ТВг о АвроРве ТВге оїец Те ЇТе 5зебобег о їгез Біп рго 7о 75 86 бій Ар Ре Діа Те Тук Туг Суб бів біп Туг Ї1е Абп о Туг Рго Тец 85 за 5
Те РВа біу біу б1у Тиг ух Маї біц ї11іє ух АгеЕ 168 185
«210» 68 «211» 308 «2125 РАТ «213» Штучна послідовність «2297 «223» Амінокислотна послідовність, гуманізована способом РОЇ варіабельної області легкого ланцюга М(/2 клону 12Н3 «аа» 68
Ар т11е біп Меї Те біб бег РКО бегобег івец беб А18 бег Уаї б1у 1 5 18 15
Ар Агро оУаї Тйг о тіє ТВг оСуз ух Аїа 5ег 51п Абр Уаії біу Аза А1а за чаї Аїа Тгр о Туг бій біп бує Рго б1іу Гу А1а Рго Гу Геци їви ї1в зла 45
Туг Тер Аїа бек Твгс оАсв НІ Тс о б1у Маї Рго Авр Аг Ре 5ег біу во
Сіу сіу б5ег пб1у ТБгр Ар Ре Те обео ТВе Хі бек обеє бе бій Рго 65 78 75 ва бій А5р Ре Ата тВг о Туг Тук Су біп біп Туг І1е А5п о Туг Рго ве 85 96 а5
ТВе Рне біу біу біу Так Цу5 Уаї біб Хе Гуз АгЕ 186 185 «210» 69 «2113 121 «2122 РЕВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Амінокислотна послідовність, гуманізована способом РОЇ варіабельної області важкого ланцюга мні клону 12Н3 «400» 65 сіп ма1і біп ін ма) біб о беб біу Аїз бій Ууаї уз фує Рго біу 5ег 1 5 18 15
Бег Мві Су Маії бЗег Су5 уз Аіїа 5ек біу Туг Тиг Рбе Гу Ар ТтТуг 28 25 3а
ТВг Меї Ні Тер Маї Агро біп Діаз Рго сіу біб бІ1у Гей бі Тгр Мех да 45 біу біу Т1е Туг Рго А5п А5п біу біу бЗес Тйг Туг А5п біл о Абп РБе 5а 55 во
Іу5 Азр Ага Ма! ТВаге о ї1е Тие Аїа Азр о гу5 бегс Тс бек Те Аза Туг 65 78 75 во
Меї бій (ей о беб бег Ген Агв о бег біо А5р Те Аіз Уаії Тук о Туєс Сує 85 за 95 діа Др Мет біу Тук Нія біу Рко Ніх Гей Азр Рбе дхр Уві Тер біу тва 195 118 біп біу Тиб ТйгоМа1ї Таб оМа1ї 5ег обег 115 125 «2105 78 «21» 151 «2123 РЕТ «2135 Штучна послідовність «2205 «223» Амінокислотна послідовність, гуманізована способом РОЇ варіабельної області важкого ланцюга УНО клону 32Н2 «4005 79 біп Уаі біл Гей Маії бій о б5ег б1у Аза біб Маї Гуз Куб Рго біу б5ег 1 5 18 15
Зег Уві їу« Ма1і бек Сує 1у5 А1а бег біу Туг ТВг о Рпе губ Ар Туг 29 25 за
Тиг Мет Ні Тер оМаі Ас біб АТа вго біу віп біу їен біз Тер Тіє 35 40 45 біу біу т1є Туг бго А5а Абпобіу б1у бек Таб о Туг Аяп Біп Азп вве за 55 ва уз Ар Ага оУаі Тигосец Те Аїа дер уз бБег Тпг бек Тиг Аза Тук 65 79 75 ва
Мет 510 (ей бек бек (ей Аг 5ег бін Абр ТВг АТа Ма1ї Тук Туг Су 85 зо З діва Агв Меж біу Туєг нія бБіу Рго Ніях ей А5р Рпе А5р Уві Тер біу 160 195 118 біп біу Те Твб Ма1і Те Маї 5егобек 115 1282 «2105 71 «211: 121 «2122 РЕТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» Амінокислотна послідовність, гуманізована способом РОЮ варіабельної області важкого ланцюга УНЗ клону 12Н3 «4805 71 біп Маі біп ісен Уві віп бег б1у Аїа бі Ма1ї Гуз їу5 Рго біу бег 1 5 186 15
Зег Маі 1їуз Маі 5ег оСує їу5 Аїа бег біу Туг ТВг о Рпе (у Др Тук 28 25 за
ТвгоМет Ні Тер оУаі Агб бів діа Рго 51у біп бБ1іу Кеш біз Тер ї1е 35 за 45 біу бвіу Тіе Ту бко А5п деп біу біу бек Тиг Туг Ап бів Аби Рпе 5 ва
Іїуз А5р АРЕ Аїа ТВгоїєц Тс Уаї Ар о Губ бег ТВгобеє ТВг о А1а Тугє
Б 78 78 80
Межї бі їец бег бек 1ец Агв обег бій Дер Тваг о Атїа мМаї Тує Тугє Сув 85 98 за
Аїа АгЕ Меї біу Туг Ні5 бу Рго Ні їец Азр Ре Ар МУаї Тер 01у
182 і1а5 118
Іа біу Тийг Те маї Тве Ма) 5ег бек 115 120 «21й» 72 «211» 1398 «2125 ДНК «2135 Штучна послідовність «2295 «223» Послідовність КДНК, оптимізована для Сгісебиій5 ргібец5, що кодує гуманізований важкий ланцюг Ірб4 клону 20Е5, який містить гуманізовану способом
РЕ мні «ав» 72 агбЕвааверра всеЕвсеТвТї саївіїссір СТрЕіссетїра ссесерваві дсасвеєсак во всясавсіввЕ Твсартствя сессвваятсв аадааасств всессіссвї ваврвтвссс 128 ївсазвевссї ссвестасас стїтассавс тТасетватес астеЕвесвЕсв асаввсссст 180 вЕссараває СрЕВатрЕяаї вБЕВСстТасаїс вассссіваса асрасрвсасє сазестасвас 248 вакаантїса зевБЕсанавіїі вассаїєсавсс тссвасасст ссвсестссас свсестасате зай кзаствссстї ссствсЕврдав сваввасасс вссЕтетасї аствсвссва стастасвес зба тсстсссЕвІ стасбврнаста сірЕвессав ввсассстсв ТевассеЕтвЕс сЕСсСтвставс ага ассаваанвисс сстссвівсї Сссествнос ссттвстсса ваїссасстс свадтстасс 4859 весЕстсіввЕ вствсстсВї Баврваствас СЕсссєсвавс ссвтрасавї весттввавс аа
ТСТЕВсСЕссс твасестссвв сетвсасаса Тстссанств свстнсансс сЕссвЕссТВ вай їастссстві ссжссвісвІ ваствівсстї їссісїавсс Тервсассав расстасасєс вва
ТЕІааситнв ассасаавсс стссазсавсс аавеїтрраса арсяретрна аєсізартас 728 вВвСсстсстЕ всссассств ссствсссст ваастєствв всвявссттс свв сстВ 7885 жЕтсссесва авссосаарва сассстваїтв ассісссвва сссссраавїі рассівсрів зав втЕвівваїтв свісссарва араїсссвав вїрсавтїса атїреЕїасеї ввасеесвітв зав
Езавівсаса асвссаавас саврсоссара равеиазасаві саастєсасє стассревів зва
БЕЕСССВІвЕС Трассвунст всассарвяат Трестразся рсзаввавта саавтнсаар 1а28 вЕвІсСсзаса аверсствсс сіссввсзіс вазваарасса їстссавввЕє сзавевссар 1888 ссессвевЕЗас сссарвтвїа сасаствссї ссаввссавр авваваєтвас саввавссав т140
ЕСвЕсСсства сСсТБЕСТсВЕ вазаввстїс Тасссстсся атаєсвссвї резахтерварв 1280 тссзасвЕсс веЕсстрарав свастасвав ассасссссс ствЕсвствва сессвасервс 1258
ТссЕКСТЕСсС тТрІастстся сстрассвтв васвавтссс врінвсавса анрсаасвїв 1328 тЕстсствВсї ствтурасеса свавессств сасвассасї асасссанаа вВЕсСсствОсс 11389
СЕВТСТСЕрея всаввтав 1398 «21ах 73 «2115 1398 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «22а» «223» Послідовність КДНК, оптимізована для Сгісеєиіи5 вгібзец5, що кодує гуманізований важкий ланцюг ІнбЯ4 клону 20Е5, який містить гуманізовану способом врІ Ума «4892 73 аксввавівва ссвЕсвКеКІ саївіїссів стві сСсеВтва ссЕсвЕНавІ всаттстсар ва віясавстве ївсавтстри сессраанся ааввааасств всвЕссіссяї вааянсяссс 128 твсСвааввсстї ссвЕстасас стттассавс тасвіваївс асіввнисвсЕ асаввссссії 188 врЕссаранає ТвБаатеЕнаї сввстасаїс аасссстаса асрасврсас саавтасєвас 248 ванзавеєїса зеЕБЕсСанарвс сассавтісасс тссрасасст ствсстссас свостасате зав
Езасівїсст ссстесвЕаЕ сЕВпрЕВСсСассо БССвїВТаст асівсвссаа стастасевс зва їсстссстві статеваста ствввессав ввсассстся їрассвтвкс стіствстанс 42а ассзвавввсс сстссвівЕї Тсстстввос сстївстсса ватссасстс сварістасс ава вссвсістяВ вствсстсВї ваарвастає стссссравс ссверасавтї вЕсттрезас БА
ТСЕввсвссс Евассєссве свірсасаса ФЕТссавстр Твстрсавтс сіссвросів вав
Тастссствї сетссвїсес ваствєвсст ссстставсс ївЕрсассва васстасасс Ба
Твізасвіве вссасависс стссвзасасс аареїрраса авсеввтеЕва аїстівартас 720
ЕВСССТССТТ всссассств сєсствссссії вааттєсівв всвеВвсстїс сеївттссів 7ва тЕЕсссссаа авсссазаррвра сассстїраїв аєстісссвва сссссваавї расствсвв зай
ВЕЕВТввВаїв ТвЕсссавевз араїсссвав всрсавтїса астрясасвї крвасевсете зага кааківсаса асессаарас саврсссара вавраасавтї Єсаастссас стассввеїе зва
ЕСВЕсСсвКЕС Свассвівст всассаврат Ірествазся вЕсаааванта сазвувсаар 18209 вІвїссааса вевБЕсСствсо стіссаввсатс Базаадасса Сстссаавес свавевссав 1880 ссссвяраас сссаврвтвіа сасаствссї ссавессавЕ авраватвас саавзассав 1140
ЕЕВЕсСсссва сствЕсСтТсВЄ раававесттс тассссіссв атаїсвссвї враатереав. 1298
Тссаасввсє звсстраврав саастасвар ассасссссс стрївствяра стссвасеьвс 1252 тссжКстїсс хвтастстся сствассисв расаантссс ррїнрсарра аврсзасвів 1328 тгстссЕвся сЕвРЕратрса свавЕсСсстТв сасвассасї асасссарай вЕсссівтсс їзва
СЕВЕСТсСЄве всаавтан 1398 «21аз 78 «2115 5398 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «22а» «223» Послідовність КДНК, оптимізована для Сгісеїціц5 вгрізеия, що кодує гуманізований важкий ланцюг ї8нО4 клону 2925, який містить гуманізовану способом
Ррі. уні «480» 74 асввавідва єсЕвсЕсеиЕТ саївстсств стріссвтва ссЕсвевавї рсаєтстсав 5о вінсакстнв ївсавтстви сЕСсваантся зарааасств всесетссвІ взаврвтвтсс 128 тЕсвавесстї ссвистасас стттассавс тасвїваївс аствретеЕсв асаввсссст і8в8 вЕвссававас тявааєвватє севстасаїс аасссстїаса асвасерсас саавтасаавс 248 вавааріїса зеврсаравс сасссівасс тссвасаавї сівсстїссаєс свестасате зав вааствЕсст ссстрсярав сварвасасс вссеївтаст астівсвссаз стастасеврс 68 тсстсссеву стаєрвасіа стрррессав крсассстсв їрассвтвес стстрстарс 428 ассазеЕввсс сетссвТвЕС Єсстстврсос ссттвстсса раєссасстс сравїстасс аа вссвсістре встівссссвІ вваввастас ЕСссссвравс ссрірасавтї вЕсСтісвваас зав
ТСстТЕвсСЕсСес Твасстссев свівсасаса ТЕтбссарвств ЄрстрСсавіс сЕССЕРрРССІВ вай тастссствї сстссвісве вастрівсст Тсстставсс Срервсассва васставсасс ББО
ТвІзасевєве зссасаввсс сіссвасасс ааретревса авсрертївЕва вістаавтас 729 вЕВсСсстсстЕ всссассств ссствссссї даатттсівЕ вСсСрЕВССТТС СЕТ ссІв 780 тЕтсссссаз авсссааввна сассстраїв ассісссвра сссссвЕВЗавтї вассівсвсв з40 віввсЕнати свїсссарев арасссснад БЕСясантіїса атїіввБІасеї врасивсвтев заг ваавївсаса асессвавас саврсссава вавраасавнї їсаасіссас стассвявів зва
КЕВІСсСЕСЕсС Свассвтвсі всассаневї їрЕсіваасе рсазаравтіа саавтисааве 1028 вЕвтІссааса звврсствсе сіссавсаїс равазрасса ссЕссавврс сававряссар, 16582 ссссвеЕваас сссаррсвта сасаствссї ссзарссаве аарараєрас саанзассав 11438 втвїссства сствїстсвЕ Бававесєтєтс тассссіссв аїатєсевссеї веваїревав 1288 їссаасрисс арссіранаа саастасаар ассасссссє сівінстівва сіссвасевс 1258
ЖТСстЕсЕЕсс хвтасестсв сствзссвТя васаавнтссс веТеЕсСаЗЕва аресВзасвтв 1520
ЖССЕСсССтвсяЕ СстЕвБтТватсеса сварвссств сасваєсасо асасссаваа вЕссствЕсс 13зва
СЕВССТсСЄвв Есзавтав 13958 «210» 75 «2115 702 «212» ДНК «2135 Штучна послідовність «к22а» «2235 Послідовність кКДНК, оптимізована для Сгісеїціня вгРізеце, що кодує гуманізований легкий ланцюг клону 20Е5, який містить гуманізовану способом РО. мі «808» 75 атряааїнва всесвіт саївсїссів стріссяєвра ссвсирразву всасансвас ва асссарвраєра сссавксесс сіссввсоств Тствссіств сеЕвсСввсав автрассаєс 120 асстрісвиЕ сстсссарва сасстссаас Тассіваастї врртаїсарса взавсссеврс 180 ааввссссса авсерстрат стастасасс їсссврестрс астссврсвї вссстстара 248
ІЕсгІссвЕсї сівЕстссве сассврасіає ассстрасса їсарстсссії рсавсссвар зов вастїсвсса сстастастр ссарсаррис аасассстврс сстррассії Ерессаррвс 360 ассазврвївЕ аваєсварся бвассвтавссо всссстіссЕ ЄВЕЕсСатстТЄ жссассстсс аа дасвавсарс їлаавтсівне сассесттсс яЕсСВЕЕТвсс сЕСтНаасаа СЕССТВсссС 48е свсвавревсса зеЕївсавтв вваррїврас аасвссстТвс автссввсваа сісссаврав 5адй аврсЕївассе аксарвасіс саврвасавс асстастссс жрісстссас сствасссів вай
Іссааввсся астасванза всасааввів ТасесствсЕ аавїнассса ссаввнсоств 65БО
Тстзвксссв трассавиїс ТІтсвассвв вЕсвантвст зе 782 «2135 756 «21135 702 «2125 ДНК «2135 Штучна послідовність «229» «223» Послідовність КДНК, оптимізована для Сгісебній5 ргізен5, що кодує гуманізований легкий ланцюг клону З0Е5, який містить гуманізовану способом РО. ма «4095 76 асвваасвЕна всЕвсЕСВІЇ саївЕсттсств сСіІвтссвТва ссЕсевнавї ксасавсвас Ба асссаватва сссартсссс стссавсств Тстесстств ЄЕвисвасав адртїрассатс 128 асствісввЕв сстсссадва сасстссавс тасствазсї рЕтассарса вазасссевс 1809 ааввссвтра звисівстваї сіастасасс тсссввствс астссвисвї рессістара 24а тт сссввст сеБЕсСтссвя сассвастат ассствасса тсанстссст всаясссває зав кастссвста сстасттств їсавсаавис ваасасєссіївс ссіврассії ТевссвееЕрвс зва ассааветве аааїсаансв вассвтіарсс всесстїсся ТВЕЇсаїстЕ Єссасссісс 428 васвансанс сваавеістви сассвстїсс вссвЕнтвсс сеЕствБазсваа стЕстасссс 488 сЕсванеЕсса аврртвсавія давребряас васвсссівс авіссявсва стсссвивав зав авсетвасся аясаврвастс сааррасанс асстастссс сЕЕсстссас сствассств вва їссваввсся зстіасвараз всасзавниїв Тасессівсв зарівассса ссарввссію вва
ТСтарссссе грассаваавїс ТТїсзассрв ресравтвст ав 782 «2185 77 «211» 1484 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2285 «2923» Послідовність «ДНК, оптимізована для Сгісеїоіцй5 дгізеи5, що кодує гуманізований важкий ланцюг ІрйШ4 клону 12Н3, який містить гуманізовану способом
РОГ УНІ
«вах 77 асвкавствєе всствісств ваєсттсств ствЕссвісс грааревсвї всавтвссав во
ЕсвсавстеЕн свсавксівр сЕсСсразрів аавразассся встсстссвї вааввтвісс 129 тдсзарвстї ссвЕстасасє стІссвавнас тасассатеис астревтеЕсе асавнсссст 189 врасаврвсс Трвавївваї вЕвсервсаїтс тассстазса асевсявсіс сасстасаас гав саваастєса авватїававі вассаєсасс вссвасазвї ссассіссас сесстзсатв 388 ваастріссії ссствсрвар срадрасасс вссвЕвтасї астрівсссе раєввастає зва сасеввссссс зсстрватїєїї їрасесвїре рессанрвяса ссассвтрас свсвтсстсі 429
ЕСЕЄсСтасса аврясссстс свТВЕКссст стввсссстЕ всїссаввіс сасстссвав зва тстассвссв стствевстр ссісвЕсвнаав вастасттсс ссвансствї расавтвісс зай
ТвнаасеЕсіїв всЕСсСсСтвас СІСТВЕСВТВ Сасасстттс савствтвЕст дсарісстсс вав ввсствтаст ссстрвісстїс свісвЄраса вівссстсса всїстІствре сассавваєсс 5 їасассянта асвсрвасса саавссстсс азасассвавн СЕВасзаксв вЕСВЕваєст 729 завіасввсс сТссстЕссс Тест твссса дссссіваві СТСТвВисСЕБ всссвесеТЕ 7ва тКсствЕТсс ссссаазвсс сааввасасєс стваєраїст сссивасссс сваавтяасе 540
ТВсЕСевсвЕ ТЕрасвсвіс ссарваанаї сссвавеївс авїїсвасїв втасетеввас зав вЕсЕТЕваав ївсасаасвс саарассавар сстарараве васавтїсва савсасстас 968
СЕВЕВТВВІНЕ ссвІВсСсвас свтвствсас сарваєтвес Тразсврсаз авантасзає 1920
ТЕсвзавеївї ссвасвадяя сствссттсс авсаїтсраав арассвісїс саариссаав те8а квссарвсссс рераавсссса врівсасаса стрссіссаа вссавразна ваїсврассаав 1148 адссарвЕві сссівасств Естсрівзаа вЕсіїстасс сстссвазіаї свссвікрав Мега
Треравтсса асевссавсс тТваразсавс Тасаавасса ссссссствЕ встрвастсс 1268 васввстісстї жсттсстврта стстсрсств ассвевваса авртсссреїр всаврезавес 1328 аасежвіжсії сстЕСЕСссвї ваїрсасрав вссстрСсаса зссастасає ссарзарісс 12388 стнЕссствс сествеЕрааа втаа 1464 «2105 78 -211» 3304 «2127 ДНК «2135 Штучна послідовність
«223» Послідовність КДНК, оптимізована для Сгісециій5 дгібзец5, що кодує гуманізований важкий ланцюг Ірба клону 12Н3, який містить гуманізовану способом
РО мнНІ «да» 78 атявавсівв ясствіссів бассттсєстя сінрссаїсс тТваавнвсяї всактсвссав ва
Есвсавствеи тксавїстве сЕссвазвів аарааассся ЕстсстссвІ вааврівсс 128
Івсаавестї ссвЕстасеас стїсваврас тТасассатрс асеЕрвеївсея асарвсссст 188 врасавевсс їрраатсеваї сврсвеЕсатс тассстааса асрисвристіс сасстасаас 288 садвастіїса авратававї вассстрасс вссрасавнї ссассіссас свсствсаїв зав вааствіссї сссівсвнар сваврасасс вссвтвіасі аствівссср расвевстас зба сасвЕссссс зсствваїуї їрасвтвїрЕ вЕссаневса ссассрівас свертсстсх 420
ЕСЕЕсСтасся аревсссстс свтвсЕсссї стірвсссстЄ всіссавратс сасстссвар. зва
Хстассвсся СЕСТЕВЕСТВ сССТСЕсваве вастасттсс ссвавсствї васарівісс з4й
Тввзасіств всвссствас СІСТРеСРіТЕ сасассттїс сарстеїисії всарїсстсс вага вЕССТвТаст ссствтсстс свссвсраса втврссостсса всістстрев сассзавасс 5во тасасствіа асвтЕвнвасса сававссстсс авасассааве Срврасвавсв ветвЕЗзатсї 728 азвіасевсс сіссствссс жсстсвссса всссстрааї СТствврсЕв асссавсете 788 тКсствжЕКсс ссссааавсс свадвасасєс стваїстватся сссввасссс сраавтвасе з4а
ТЕСЕТВЕТВЕ ТвБаєвтЕїс ссарявававії сссравевївс аріїсваєїв втасетевас зав явнсясЕваан тесасвасвс саавассавае сставаравя азсантіїсаа сансасстас о6а сЕввВівВЕві ссвівствас свінсівсас сарваїтврес їваасввсаз авадвіасзарй 1820
Трсзавеїтяї ссаасаарря сстрссїіїсс арсаєсраза авассатєстс сзариссзав 1888 квссавсссс вераасссса врїртасаса стрсстїссаа вссавваавва раїрассаве 1140 аассаввевії сесівасств Єсісрївааа вВСТЕсівасс сстссватаї своссвтрваз 1288 тввЕвавтсса всвЕссавсс їрарзасавас тасаараєса ссссссстрт вствврастсс 1260 васЕвВсСЕсст ТСТЕсстЕта сєтсісрсств ассртвраса аравссввів всарезавевс 1326 засвЕвтЕсї сствсЕссвІ вабврсасврав вссстрсаса ассастасас ссаравевтсс 13850
СТЕЕСССЕВЕ стстрЕвЕааа діа іла4
«213» 79 «211» 14654 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2295 «223» Послідовність КДНК, оптимізована для Сгісебь1іц5 рдгізец5, що кодує гуманізований важкий ланцюг ІрО4 клону 12Н3, який містить гуманізовану способом
РО мУНнЗ «дай» 79 аскравсірр всствїсств вассттсств сіввссаїсс трааревсеї всартрссав ва
ЕхЕсавнсіве ТвЕсарістря сессваавів ваввалсссв всіссіссвЕ вавррївтсс 128 ївсаарвстії ссевстасас стїсааврас тасассатро асєвеивівсв асавесссся 188 вкасаврреЕсс ївЕВвасвваї сЕвсвЕсСВіс тассставса асррсоввсїс сасстасаас 240 савзастєса арраєсевес сассстрасєс вІврасаанї ссассіїстає сесстасатр, зав кзаствхсстї ссстЕсЕрав свареасаєс вссЕсвІасТ астрівсссв васевнистас зво сасявссссс вссівваїтї ГрасеївБівЕ вЕсСсарявса ссассетває вржЕїсСсСІсХ 420 встсссасса вевЕсссстс ств ссї стввсссст всіссаваєс сасстссває 488
Тстассвссв стІстввЕсСтв сстсвтвавзв вастастїсс ссвавествї вассвівтсс 54ав
ТЕЕВастстр весЕСІСтТвас стІствесетТЕ сасассттсс стрстеитвсї рсавїставс 5ОВ вЕсСсСТВТастї ссствЕсСстс свТсвІвасс всВссттсса всхстстввЕ сассзавасс во тасасстрта асетррасса савессстсс васассавееЕ СЕрасзавсв яЕсЕвЕВасси 778 аавтасенсс стссствссс Сссттвссса вссссівзаї СтсСтввЕсвЕ асстїссвів 788
ЕсСсствтїтсє ссссадансо сааррасаєс ствраєратсі сссвЕВсссс сваавірасс заа
ТЕсСВІвЕснЕ стрЕаєвсвіс ссарязана?ї сссраввтївс арїссаасєїв вЕасисеврас зав весвтвЕаар їрсасзасвс саарассаве сстарараре авсавіїсаа сарсасстас з68
СсЕВЕБТЕВЕВІ ссвівствас срівствсас сарваїїврос їваасррсвза зрартїасаар 1822
ТЕсазаврінї ссаавасаарри сссрвсставс ссаїсвава авассаїсіс сааррссаає 1889
Евссавсссс вррадсссса ввїрївсаса ствссєтссав вссарвавва раївассавв 1148 зассаветеї ссстрасств КсСтсврірааа рвстЕстасс сстссватаїє сессвтввав 1268
ТЕрвавтсса зсЕнссавсс Єрарвасвас тасаврасса ссссссствЕї вЕстриастсс 1259 васеЕвстсся тстІЕсствта стстІсдестТв асактврата аравссврів всвЕвЕзаррвс 1358 аасвєвіксії сствстссвІ ваїрсасрав вссствсаса ассастасає ссаваавтісс 1388 севтсссЕВх стствЕЕаав встав 1484 «213» во «21ї5 711 «2125 ДНК «2135 Штучна послідовність «2295» «223» Послідовність КДНК, оптимізована для Сгісебній5 ргізен5, що кодує гуманізований легкий ланцюг клону 12Н3, який містить гуманізовану способом РО.
М
«4095 80 асвЕвасатєвс веЕСВвСсСсСвс Тсакствстів враїствстівс свсівІвЕІ сссавЕсвос Ба аваєвсраса їссараєвас ссавтссссс тТссарссіївї ствссіствє вЕрсвасава 120 вЕЕвассатса сатвсзавис стсссавдас вЕТрЕВанссв ссвЕвВстІтв віВІсавсав 150 аавЕсстввса вирсссссав вотвстваїс таствряссї стассараса сассевсвте 24а сестссаватї тстссвисСтТс ТввстстВЕс ассвасттта ссстрассат савстсссте зав савсссраве асіїсвссас стастаєтеис савсавізса Єсаастассс сствасссіс зва вЕсСЕВавнса ссаависяра заїсаавсяв ассяєЄревсся стссстссвї рітсатсттс 428 ссасссттссв зсвавсавсії єзадвтсснвс ассвстїств ссвІвБТвСст встрзасаас 48 тІстассссс всвариссва деТЕсСаВитТрЕ вавесвваса асвссствса яЕссврсаас зав тсссарезаї ссвртвассва всаврастсс ааррасавнса сетастссстї вісстссасс вва ствассстві ссаарвссва стасраваав сасаавитві асессївсва авївасссас вва савввсствї ставссссвї вассзавіст Ссїсаассвев всрарівста а 1 «2185 83 «211» 711 «212» ДНК «213» Штучна послідовність «2285 «2923» Послідовність «ДНК, оптимізована для Сгісеїоіцй5 дгізеи5, що кодує гуманізований легкий ланцюг клону 1233, який містить гуманізовану способом РО. м «ла» 81 асвевасасес вЕвТвсссвс їсарствств врастівсівс ЖЕСЕРІЕРЕЄ сесарвсесс во арабсвсваса їссараєнає ссавтсссосс Тссавсствї ствостсТЕЇ веЕсеасава 129 віязссаїса сабрсаанвс сісссаврнас вСвявавссв ссвіБЕСсТСВ втаїсавсар 189 заясстррса аресссссва вствЕстватс таствивосст стассаваса сассярсвїв гай сссвасаваї сстствесве свваїстівнис ассвастїса ссствассат савстссств зов сарсссваря зежЕїсвссас стастасівс сарсарізса їсааставссс сстрасстес зва вЕсЕваврса ссаавресвра азтсвзавсвв ассрїнвссв стссстссво вексатсттс 420 ссассттссв асварсарстї ваввЕссярс авссвстїств ГсевЕвівссЄ всіравсзас зва їЕсСтТассссс всвавессаваа вртвсавріве аареєрнаса асвсссівса віссвисаас заа тсссаввазі ссЕсвассва всаврасісс аарвасавса сстасіссст вЕсстссасс вав севассствЕ ссаарессра стасвараве сасаавеївї асевссївсва автїрасссас вва савЕвсствї ставссссвіІ вассаавтст їСсавассврв рсвантяста а 711 «210» 82 «2115 455 «2123 РТ «2135 Штучна послідовність «220» «7235 Амінокислотма послідовність гуманізованого легкого ланцюга Іва клону 29Е5,; що містить гуманізовану способом РОЮ УНІ «два» 82
Мет бі Тгробег біу Уаї Рпе Межї Ре їв Гей бег Уві Тпе Аїв біу 1 З 19 15
Уаї Ні бег біп УМаї бій іє Мві біп 5ег 01у АТа бі Маї | у5 Гуз 28 25 за
Рго біу А1ів бег Уаі суб Уаї 5егоСу5з Гу« А1а баг о б1іу Туг ТаВге Рва
Тие обБег Туг Ммаї Меї Ні« Тгр Уві Аге бБіп Аїа Рго 5іу бІп Аге Ге 5а 55 во біб Тер Меї бт1у Туг Ііе Аб5п о Рго Туг Азп Дер о біу ТР оГу5 Тує Ап
65 78 75 за ори фу5 бБйе гу біу Аг Маї Те Тіє Тбг 5Зек А5р ТВго5ег Аїа бег 85 9еа 35
Тиг Аїа Туг Меї сіб іец бег бЗег Гец Абе бег б1й А5р Те діа Уаї 198 125 116
Туг Тук Сув АїТа Ап Тук Туг біу 5ег бег Сец бЗег Межї дер тує Тер 115 123 125 сіу біп біу Тиг оген Уаії Тиг Уаі бЗег обег Аза бег Тігоїу5 б1іу Рго 138 135 149
Зег Маі Ре Рго Гей Діаз Рго Суб бЗег АгЕ бек ТВг баг бій бБег Тег 145 158 І55 і60
Аїаза ді Ге біу Су Бе Уаз Куб Ар о Тує Ре Рго бі Рго Уаії Тег 155 179 175 уаї баг Тер о Асбп о 5ар о бі1у Діаз Гео ТВге о5ек о біу уві Ні ТВБ Ре рго і80 185 ії190
Аїа Уві ем біб бег о бег 01у їеу Тук бвг оієц бек о бег УаіЗі Уаї ТЬг 195 2980 205
Маі Рго Явг о 5Зег баг о Тїви біу ТБ о фуз Те о Тує Тс Суб А5п о Уаї Др 210 215 о
Ніб фу Рго бБег Абп Тйгофїуб5 Ма3і Азр о їу5 Агро оМаї бій бек офу5 Туг 225 238 235 2434 51у Рео Рго Сух Рго Рго Су Рго АТа Рго бі Ре Гец біу біу Рго 245 258 255
Зег Маі Ре ен Рпе Рго Рго Гу5 Рго їує Ар ТиИг оїей Мет Ії 5ег 268 2655 278
АгЕ Тиг о Рго біш уаї Те Суз Уаї Уа! Маї А5зр Маї бер бІп бій Азр 275 285а 285
Рго бі Маі біп Рипе Ап Тер Туг Маії А5р б1у Маі 01 мМа1і Ні дп 298 295 зе
Атїа бу5 ТВгоГу5 Рго Аг бі біз б1й Ре А5зп о бЗег ТВг о Туг Агя Уаї зо5 319 315 зав
Маії Зег Маії Бе ТпгоУаї бен Ні5 бів А5р Тср о іїен Абзп о біу Гуз бій 325 330 335
Тмг уз Сує їу5 Уві бЗег Асп Гуз бі Гей Рро бег бег І1е 010 Гу зада 345 з5а
Таг І1е бег о іу5 АТ1а Гуз біу біп Рго Агб бі Рго п01п мМаі Тук ТВе 368 365
Їец бго Рго его біп 010 біц Мек Тигоїу5 Або біп Маї баг оїец Тиг з7а 375 зна
Суз ес Маї уз сіу ВНе Тує Рго бек Абр Ті Аїз Уві 615 Тер 619 2385 зза 395 4а0 бек Ази біу бів Рго бій А5п А5поТуб уз ТВге Те Ргро Рго Уві Гей 485 318 83815
Дер бег Ар біу бек Ре Ра фе Туг бек дгеоїец ТгоУуді А5р у5 42а 425 аза зе Ак Тгробіп аї0 біу А5п о Уаі Рпе 5ег Сує бек Маії Мет Ні5 ази 335 ло 445
А1Тїа Геш Ні Абп Ні Тує Те обій губ бег іеи бег Їєц Берг Те пбіу а5а 455 465о їув 465 «218» 83 «2115 465 «212» РЕ «213» Штучна послідовність
«223» Амімокислотна послідовність гуманізованого легкого ланцюга Ірод клону 29Е5, що містить гуманізовану способом РР УНІ «00» 83
Меї бі Тгробеє б1у Уві бле Меї Рпе їеу ен бек Уаї Тивг Аза 51У 1 5 18 15
Уаї Ні бек біп Узі 5іпй їеи Угі бій бег біу АТа б01у мМаї у5 ух 28 25 зо
Рго б1іу А1а бек Уаі Гуз Маї бег Су5 Гуз АТа 5ег б1у Туг Тег РВе 48 45
Тиг о 5ег Туг Ма1і Меї Ні Тер Уа) Ас о біп Аїа Рго біу біб АгБ Бен 5а 55 Бо біц ТеРр о ї1е 01у Туєб Т16 АзпоРго Тук Азп Абробіу ТВгб о їбу5 Туг Абп 65 78 75 ва біб Суб Рпе іу5 01у Агя Ада Тиб Т1е Тигобег АД5р Те об5ег ДІВ 5евг 35 за 95
ТВг Аїда Туг Меї бі гей его бек їв) Абе бек бі Авр Таб Аїва Маї 1809 105 116
Туг Туг Су Дів А5п Туг Тук біу бег 5ег о іен бег Мебї Ар Туг Тгр 115 129 125 б1у 1 б1у ТВг без Маї ТВгоУаі 5ег обег Аза бег ТНг о Гух біу Рго 138 135 14е 5ег Уаї Рипе Рго ге Аіїа Рго Суб Зег Агро обег ТИгР о5ег бі баб Тр 145 1506 155 168
А1їа Аїа їен б1іу Су5 Гец хмаії губ А5р Туг Рпе Рго бій Рго Маї ТВг 1655 178 175
Уві бег Тгр Азп бег біу А1а їв Ти о бег біу Ма1ї Ні ТВе РНе Рго 188 185 198
АЇїз Ма1і Сец бій бег бек с1у цез Тук бек Ге 5ег бек Ма1і Уаї Так 195 288 295
Уаї Бго бБег бег бег оїец бІіу Тйгоїу5 ТигоТук ТВг о Суз А5п Ма1ї Ар 218 215 228
Ніє їу5 Рго бБег Аєп ТИ о фує Маї А5р Гуз АгЕ Маї 61 бег Гу5 Туг 225 230 235 240 біу Рго Рго Су5 го Рго Су5 Рго Аїа Рго 610 Рбе Гай бі1у б1у рко 245 2508 255 сег Уаі Ре ігеб Ра бро Рго Гу Рго у Дер Таб оГео Межї ї16є 5ег 269 265 7
Ас отТас о Рко бій маї ТВ Суз Узі Уаі Маії Азр Ма1і бек біп 01 дер 275 280 285
Рго аїч Маї біп РБє Азп Тер Тус Маї Ар сіу Маї бій Уві Ні5 Авп 230 235 зва
А1а їу5 ТигР оГух Рго Аг бій біб біп Ре Азпоба" Те Тує Агв Маї за5 зів 315 328 уаії бек Маї їец Те о Уаї Меч Ні біп А5р Тгробез Ап с1у їуб5 бід 325 330 335
Тук Суб Су5 Гуз Уаї 5Бег А5п о їує біу гей Рго 5ег о бБег Її бій Гу з4аа за5 358
Тве ТТ бегоїу5 Афа їу5 біу біп Рго Аг обі) Рго бій Уаії Туг Тег 355 зва 365 іеи Рго Рго бег бій біш 51 Меї Те о іу5 Авп о біп Уві 5зег Гей ТАг 370 375 зо
Су їєй Маї Гу бБіу Рпе Туг Рго бег Аб5р о Т1е Аза Уві бі Тер бій 385 зза 95 лао бек А5зп біу бій Рго бі Абхп о Азп о Тукофуз Те Тпе Рго Рго Маї гей
4о5 та 415
АБр бек Ар біу 5ег Рпе Ре Гец Тує бег АгЕ їв ТвВг омаї Азр ог ух 420 425 зо ек Аг Тгробіп бів 01у АЗп о Уаї! Ре б5ег Суб 5ег Уді Меї Ні 51 435 440 445
АтТа сей нів Ап Ні Туг Тийг бій уз бег їей бег о геи 5ег офіс 01у з5а 455 450
Гуз 465 «21а»У ВА «2115 455 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2285» «223» Дмінокислотна послідовність гуманізованого легкого ланцюга Інб4 клону 255, що містить гуманізовану способом РІЯ. УНЗ «лав» 84
Меї бій Тер обег біу Уаї РБе Меб Ре іец о їец бег Уві Те А1з а1у 1 5 18 15
Уаії Ні бЗег біп Уві б1п іец уві біп бег біу Аїа біц Уві (ух Гуз 23 за
Рго б1у А1а бЗег Уві Гуз маві бек Суб Цу5 А1їа бег б1у Туг Те РНе за А5
Тне бек Туг Уаї Меє Ні Тгр Уаї Агб біп АТа Рго біу бій Агр ей 5а 55 ва бін Тер Т1іе біу Туг І1е Депо Рро Туг Абзлп о А5р о б1у Те губ Туб Ап 78 75 80 а1іш Гує Рпе губ б1у АгБ А1а ТНг огГец Тс о 5зег Дер Туз бег А1а 5ег 85 за 95
Тк Аїа Туг Мет біб Гей бек 5ег Гей Агробег 10 Азр ТНе Аза Уаї 182 185 116
Туг Ту Суб Аїа А5п о Туг Туг б1у бБег Зег Сеи Зег Меї А5р Тує Тер 115 129 125 біу б51іп біу Тиг Гец Маї Трг о Уві бегобег А1а бег їВге о фу5 бі Рго 138 135 148 бЗег Маі Рре Рго (ез Аіа Рго Суб5 бег Агробек ТВг о бег пи его Те 145 158 155 1652
Аіа А1а Ге ту Су5 Ге Маї ух Ар о Тує Ре го біб Бго Уаї Те 165 172 175
Маї бек Тер Азп о бег піу Діаз їео Тс бек біу Мазі Ні ТВге Ре вбго 188 185 190
Азїа Маії Бей біп 5ег бег біу ей Туг бег ієн 5еог бег Маії Уаї ТНг 195 206 285
Уаі Рго бЗег 5бег о бег іец б1у ТВг огуз Те о Туг Типг Суз Азп МУаї Азр 210 715 220
Ні Гу Рго бег Ази Те ух Маії А5р о їу5 Агв о Маї бій 5еаб о фув Туг 225 239 235 280 81у Рко Бго Суб Рро Бго Суб Рко Діва Рго 01 Ре Се о1у бБіу Рро 245 258 255
Зег Маії Рпе Сей Рпйе Рго Рго Гуз Рго іу« Ар Тв оїеу Меї ТІє 5ег 2695 255 272
АгвоТВгоРго бін Уаї Те Суз Уві Ма! Узі Абр Маї бег б1й 531: Авр 275 28а 285
Рго бій маї б1п Ре Азп Тер Тук о маї А5робіу Маїі б1и Ма Ні Ап 250 295 300 діва Гуз ТВговфуз Рго Аг біб біб біп РБе Ап обеєс Тйг о Туг Аге Уві
65 318 315 320
Маї бек Уаї ес Тпе Уаї іє Ні біп Абр Тер во Абп о біу суб б1й 325 з3о 335
Тут Гуз Сух Гуз Маї Зег Ап губ біу Гей Рго 5ег бЗег Т1е біц у5 з4а 345 358
Тиг о Т1е бег Гуз Діа ух пзу біп Рго Агв біц Рго біп Маї Туг Те 369 365
Ге рго Рго 5ек біп б1ц бій Меб ТВгоїу5 А5п бій Уаї 5Зег о гбеш Тве 370 75 зве
Су Гей Уаї їу5 б1у Рве Туг Рго бег А5р Ге діз Ма1і бій Тер бій 385 398 395 300 бер А5п о віу біп Рго бій А5в Аби Туг о Суб Те ТВе Рро Рго Уві 1ей 485 л18 4315
Дер бак А5р біу 5ар Ре Бе їецу Тусб бек АгБ Гео Типг Маї Або Гуз 428 425 4аза бек Агв Тер бів січ біу А5п Узі Ре боб Су 5ак о Маї Межб Ні бід 435 446 лав
Діа сецу Ніз Депо Ні Тує ТНК бій Гуз 5ег Се брг Ген бег ви біу 4509 455 460
Гу 4е5 «214» 85 «2115 233 «2125 РЕК «213» Штучна послідовність «228» «2235 Амінокислотна послідовність гуманізованого легкого ланцюга клону 20Е5, що містить гуманізовану способом РО. 11 «аа» 85
Мет бій Тер о бег біу Уаї Рбе Меї Ре ів ївец бек Уві Те Ата б1іу 1 5 18 15
Маї Ні бег Ар Т1є бій Мес ТВг о біп бек Рго бек бек Гео 5ег Аїв 28 25 за
Зее Уаї б1у Ар Аге оМУаї Тпг Т1е ТВ о Суз Аг АТа бег бів Азр ї1е да 45 зе АБ Туг ей Ази Тер Тує бій біп губ Рго біу їу5 АтТа Рго гу 58 55 ва іїец Сен ї1е Туг Туг ТВг обег Агя Ге Ні бек біу Маі Рго 5ег АгеЕ 655 7а 75 ва
Ре бег Біу бег б1у баг сіу Тк Ар о Туг Тгобеб Те ІЇ1їе бег о 5ег 85 за 95
Мец бів Рго бій А5р Ре діз Те о Туг Тук Суб біп біп біу Абп Так 3190 185 110
Яви рго Тер Тигб Ре біу бій б1іу Таб оСує чаї біо Т1іе Гу5 Аке Тиг 115 126 125
Ууаї А13з АТа Рго бек Уаі Рпе 112 РБе Рго Рго бег Ар 010 віп бе 138 135 146
Му5 Заг б1у ТВг А1їа бег Уві Уаі Суб Кец Гей А5зп Абп Ре Тук Рго 145 150 155 160
АКБ біц АтТа Гуз Уві біп Тер бу« Уві А5р Абп Аза Сей бій баг 1у 165 178 175
А5побег бів бі бек Уві Тк об5іш біб Абр бек руб Ар бек ТВг о Туг 188 185 1982 бек рей Зег бег Тйгоїец ТНб огез Бек о іу5 Аїа Ар Туг 61 Туз Ні 195 298 285
Зїу« Ммаї Тує Аїа Суз бін Уаї Те Ніб бій бБіу Гео о беєб бег Рго Уаї1 218 215 228
Ти" бує бБег Рпе Ап Ага б1у бід Су 225 238 «2195 86 «211» 233 «2125 Рв «а13» Штучна послідовність «228» «2235 Амінокислотна послідовність гуманізованого легкого ланцюга клону 20Е5, що містить гуманізовану способом РОЇ мі? «1005 зб
Мет 51 Тер обег біу Маї Рбе Меї Рипе ієй Гей бЗег Ма1 Тиеб Аїв об1у 1 З 10 15
Уаї Ні5 бег Дер Тіє біп Меї Таб обіп бек Рго 5ег бек ви 5ег Аів 28 25 3а
Зег о мМаї біу Азр Аге Уаї Твгої1іе Тег Суб Агв Аза бег о біп Азр Т1е за 45
Зег Абп о Туг Ге Азп Тер Туг о б3іп біп фу Рго біу їу5 АтТа Узі гу 5а 55 ва
Меч бец їіе Туг Туг Тбг о 5Зег Агв о іеу Ні5 5ег біу мМаі Рго 5ег АгеЕ 7а 75 во
Рпе бег о біу бог біу бек біу Те Ар о Туг Тк Ге) Те Іі 5евоб5еб 85 зе 95
Їец бів Рко біш А5зр Рбе діа Те о Туг Ре Суб біп бій 1у Абп о Тиг 108 125 110
Іїецш Рго Тер Тйг Рве біу біп біу Тиг Гуз Маі бій ТІе 1у5 Агв ТЕг 115 126 125
Маї А1їз АТа Рго бес Уві Ре Т1іе Рбе Рго Рго бег Ахр б16 бІп Гей 138 125 146
Гуз Баг біу таг АТа 5ег Уаї! мМаії Суз іеп ей Азп Азп Рне Тук Рко
145 159 155 150
Аге бі Аїа Ту Маї б1іп Тер обуз Маї Абр деп Аїа іви бій бог б1у 165 178 175
Ап о бЗег бій бій зЗеб Узі Тиб бій бій Ар обес іух А5робег ТВг Туг 180 185 1938
Зег ївец о бегобег Те фе) Тиг оїей бегб гу діа Азр Туг біц фу Ні 195 298 225
Гуз Маії Туг АтТа Су5 б10 Маї Тпг ні біб б1у Гей бек бЗег Рго Уаї 210 215 228
ТВг вуз Бег Рпе Ап Ага біу бій Суб 225 238 «218» 87 «2311» 467 «9327 РАТ «213» Штучна послідовність «2285 «223» Амінокислотна послідовність гуманізованого легкого ланцюга Твб4і клону 12н3, що містить гуманізовану способом РО УНІ «4005 87
Мек біз еч біу се бег Тер Т1іе РБе Гец їв діа Тіе їез Гуз Біу 1 5 18 15
Маї б1п Суб біл Уаї біп сечо Уві біп бек біу А1з б1ч Мві Куб5 у 28 25 за
Рго 01у бег 5ег Уаї їу5 Маї бег Суз Гуз Аїіз баг б01у Туг Те Ріє 48 45 їу Ар Туг тТВге Мет Ніє Тгр Ма) Агеобіп діа Рго біу біп о1у Гец 5а 55 ве бін Тер Меж біу 6б1у Тіе Туг Рго Аеп Азп біу біу бег ТВг Туг Азп 78 75 ва
З1п А5п Рнє 1у5 Азо Агв о Маї Твг о І1е Тйг о Аїа Ар о їу5 5еб Тег 5ес 85 99 95
Тиг Аїа Тук Меж сій Ген баг б5ег оїец Аге 5ег 51 Ар Таг діа Уаї 180 195 о
Туг Туг Суз АТа Аг Меї бі Туг Ні біу Рго Ніб їец Абр Рпе А5р 115 120 125 чаї Тер 01у біл біу Те Тиг оМаї Тс Маї бек обег А1їа бег Того Єуз 130 135 148
Сіу Рго бек Уві РБе Рго Ге Аіа Рго Сує бек Аг бег ТПг баг 1 145 158 155 їі бек Тиг о АТа діа іеу бї1у Суз ес Ма3і Гу5 Азр о Туг Впе Рго о1ц Рго 165 179 175
Маії Тве о Уаї беє Тер А5п беєс а1у Лів Гео Тпгобеє біу Маї Ніб Тег 150 1855 198
Рпе Рео А1а Уаії Ге біп бег о 5ег біу Ге Туєг бег ів бег бЗег Маї 195 2958 295
Уаі Тк Уа) Рго бек обег бБег бе біу Те о буз Те Туг Так Суб Депп 210 215 228
Уаії А5р Ні Суб Рко 5ег Ап ТВг Гуз Маї Аб5р Гуз Аг Уві бій баг 225 238 235 248 їу« Тук біу Рго Рго Суб Рго бго Суб рРго Аіа Рго біш бле ев б1у 245 255 255
О1у Рго бек Уаї Ріє їеш Ре Рго Рго іуб5 Рго їу5 Азр ТВг о Гей Меє 250 255 27
Іїе бек Агв Тег Рго бін Уаї Тк оСуз Маі Маї Уа) Абр Маї зег біп 2758 28580 285 бій А5в о Рго біц мазі біп Ре Абп Тер оТуб мМа1і Ар обіу Узі бій Уві
298 295 зо
Ні Авп Аїв уз ТпгоГуб5 Рго Агро біо бі бій Ре Ал о5ек Таб Туг 305 зів 15 328
АгЕ Маї Маі бек Маї сец ТиИг Уаї Гец Ні5 біп Азр Тер о бей Ап о б5іу 325 зза 335 їУу5 бі Тук уз Суз уз Уві бак Ап Гу віу їв Рго бек бек Т1е 346 345 358 бін вух Тпг о Т1е бБег Гуз Діаз Гуз біу бі1п Рго Агро бій Рго біп Уаї 355 зва 365
Тук Таб огГец Рго Рго бег біп бій біб Меб Тйгогуз Ап бів Уаі баг 378 375 386
Се тВе Суб сец о Маї Кух5 біу РБе Туг Рго 5ег Ар І1е дДіз Уві 0їи 385 зза 395 4ва
Тер обі бег Ап о віу п1а Рго біб А5п Або Туб Гу Те ТвВе рРго рго 385 418 415
Уаі їец дер б5ег Абр о біу бег Рбе Ре іео Туб 5еаб о Абв о іей Тиг Уві 429 а25 азеа
Азр Гуз бег Аг Тер біп біш біу А5п Маї Рпе брг Суз бег Уві Мех 435 ай 445
Ніз Бій Аїа гей Ніз Азп Ні Туг Те бій іух 5ег Ге бег о їви бег 458 455 4ба іїви біу | у5 465 «2195 вв «211» 467 «2125 РТ «213» Штучна послідовність «2295 «2235 Амінокислотна послідовність гуманізованого легкого ланцюга І8б4 клону що містить гуманізовану способом РО УНІ «00» 88
Мек бій бен біу сей бег Тер Тіе Ре іец їец Аза Т1е Гей уз біу 1 З 16 15
Уа1ї бій Сузх біп Маї бір без уа1 біп бегс б1у Азїа б1ц Маї уз Гуз за 25 за
Рго біу б5ег бег Маї ух Маі бег Су Гу5 А1їа бег Б1іу Туг ТВг Рпе да 45 іїу5 АБр Тук ТВе Меї Ні5 Ткр Маії Агро біп Азіа Рго біу біп біу г ец зв 55 ва бій Тер їТе біу біу Т1е Тук Рго Абп о деп біу біу бек Тиг Туг Ав 655 70 75 во біп Ази Ре Гуз Ар Абе оУаії Таб оїео Твг діа А5рогбу 5ег ТВг бег 85 за 95
Тве Аїз Тує Меї бій Рец бег бЗег іви Абе бЗегобіц А5р Твг Аза МУаї т8а 185 110
Туг Туг Су діа Аге Меї біу Туг Ніб5 біу Рго Ніб5 Ген А5р Ре А5р 115 128 125
Уаії Тер біу біп б1у Тиб Тапе Уві Таб о Уа1і 5Зег баб Аїа бек ТиИг Суб 138 135 148 біу бго бег Уаі Рпе Рго сей Аїа Рко Су5з бер Аг бек Тс б5еє бі 145 1508 155 і62
Бек Тиб дів А1їа без біу Суб5 ів Маї їуб5 Абр Тує Ре Рго бій Рго 165 178 175
Уаії Тиг Маї бек Тер Аза бек біу Аза ім ТйгоЗегб біу Маї Ні Тпе 189 185 199
Ре Рго діа Уаї іец біп бек 5ег біу зе Туг 5ег Ге) 5ег бег Уві
195 286 205
Маї Тие о Уаії Рго 5ег баб о бебс Кец біу ТВгоСу5 Таб Тус Те Суб деп 218 215 222
Маї Азр Ні Гуз Рго бек Ап Тйг о Бух Маї Ар о 1у5 Агв о Маві 01 баг 225 239 235 гАВ їу5 Ту біу Рго Рго Су5 Рго Рго Суб Рго Аіа Рго 01 Рпе без а1у 245 250 255 біу Рго 5ег Уаі РВе Гей Ре Рго Рго уз Рго ух А5р Тиг Гбеи Меї 250 285 27
Т1е бег оАгв ТпгоРго бі маії Таб оСуб5 уві Маї Маї Азр УМаії 5ег віп 275 289 285 іш А5р о Рго біб Маї біп Ре Аби ТгроТуб Маї А5р 01у Ма1ї бій МУаї 238 235 зай
Ні Ап АТа їу5 Тиг огГує Бго Абв біз біц бів Ре АєпобБеб Те Тук за5 318 315 з2а
Аєв Уві Маї 5ег Уаі Гей ТвВг Узі Гец Ні бій «р Тер оіей Ап біу 325 339 335 ух бій Туг ух Суз Гу Маї бек Азп Гу5х біу Геч Рго бег бег І1е зав 345 359 18 фу Те ї1е баб Гуз А1їа уз біу бій Рго Абе бів Рго бій Уві 355 зва 365
Тут Тиг оГец Рго Рго бег біп бі 510 Мех Тйг о іїу5 Азв біп Уаії бег 378 375 зве зей Тпгб Су5х Гей маї Суз біу РНе Туг Рго баг Азр 112 А1а Маї бій 385 заа за5 4ва
Тер би бег Ап б3іу біл Рго 010 Абп Аа Тугб Гуз Таб Тег Рго бео 4да5 з1а 415 уаї бе) Ар бег Азр сп1у б5ег РБе Рпе їв Туг бер Агро Ге Тег Уаї 420 325 338
Ар Куб бБег АєБ Тгр біп бі б1у Абп о Уаії Ре бЗег Су5з бек мУаі1 Ме 435 448 дд5
Ніє 513 А1їа бе Ні Абп Нія Туг Тиг біб уз бег озеу бег Гец 5ег 458 455 зва
Меи біу Гуз 465 «2195 89 «2115 457 «2125 РЕ «2135 Штучна послідовність «228» «223» Амінокислотна послідовність гуманізованого легкого ланцюга Іра клону і12н3, що містить гуманізовану способом РІЇ. УНІ «48005 89
Меї 510 івци б1іу їец бег Тгр Ї1е Ре їв їео Аза Ті ей їу5 61у 1 5 16 15
Уаі біп Суз біп Уаї біп Геш Уаї сій бек б1іу АЇз бій Уаї їу5 уз 28 25 за
Рго біу бер бБег Уві Бу5 Уві бек Су5 їує А1а баг о біу Тут Те Ре 48 45 іїу5 Ар Тут Тпг о Меї НІ Тер УМаї Ася бій Аза Рго біу бів бі1у ви 56 55 65О біш Тер Т1е біу сіу Ті Туг Рго Ап А5п сіу Б1у бег ТВг о Туг Авп о» 75 75 50 біп А5п Ре Гуз Ар Аг А1а Тйгоїей Тиб Маї Ар їу5 бег ТНг 5ег 85 зе за
ТНг о Аїа Тук Мет біц ї6й бебс о5ег о геу Абе о 5ег бі) Азр ТНг Аза Уві і80 105 119
Туг Тут Суз Аїа Абе Меї ОЇ1у Туг Ніб біу Рго Ніб5 іец Ар Рпе Дер 115 128 125
Уаї Тер 01у б5іп б1у Те о ТиИб о Уаї ТК Маї бег о 5ег Аіва бег Тег Гу 136 155 146 бІу Рго бег Маі Рпе Рго сен А1їа Рко Сух 5ек Агр бЗег ТИг о беє б1ц 145 159 155 159
Ззек ТВг діа Аїа їеб о1у Суб Ген Маї уз Ар о Туг Рпе Рго біш Рко 155 178 175
Уа1 Те Уаї бег Тер А5п о бег біу Аіїа еп ТАйкБ бек біу Маї Ні ТНг 180 185 158
Рпе Рго Аза Маії Сецч біп бег бБег біу сеу Туг Заг фе бег Баг Уаї 195 290 285 чаї тик Уві Рго 5ар обег бег о їец біу Те Суб Те Ту Таб Су Ап 21а 215 229
Уаі А5р Ні5 Гу Рга бек А5п Тбгобуз Уві Азр Гуз Абв о Маі бі) бе 225 230 235 24а
Ку Туг біу Рго Рго Суб Рго Рго Суз Рго Аів Рго бі; Ре Гео біу 245 2558 255 о1у рео 5ег Уаї Рне (ей Ре Рго Рго уз Рго Куб Азр Те оїеу Меї 258 2655 279
ІТ1е б5ег Агв Тие о Рго бій Уа) Те Суб Уаіїі маї Мзі Азр Уаї бег біп 275 280 285 ій Ав5р ого бі маї бів Рбе Депо Тер Туб мМаі А5р б1іу Уаї біо чаї 238 295 зав
Ні А5п о Д1із уз ТВгогуз Рго Абе бії бій біб Ре А5п о беє ТВг Туг за5 316 зі5 328
АгЕ Ма1і Уаі бек Маії Гей Таб Узі Сей Ні5 біп др о Трро Ге Аха оі1у 325 3за 335 іу5 бій Тук уз Суз Суб маії бег Ап Туз біу зен Ро бег 5ег Пе зао 3А5 3595 бій Ту Тиг їіеє бЗег Гуз Ата Гу5 вБіу біп Рго АгБ бі Рго бів Уаї 355 з5а 355
Тме Таб огец бго Рго бег бій 51 010 Меї ТБ оїує А5п бів Маі1ї 5ег 370 375 зяа
Гео ТВгоСу5 їгн Уаі Буз біу РБе Туг Рко 5ег Ар Тіе Аіа Уаїі Ф1ц 385 заа 395 лоб
Тер біб бег Ап біу бі1п Рго біб Абп о дДяй Туб руч Тиб о ТВге Рго Бго 405 316 415
Маії Гей Авр бек Азр біу бег Рпе Ре Ген Тує 5ег Аг Сец Тйг Уві 420 425 4338
Ар ув Зег Дге Тер біп 610 біу Абзп оУаї РБе бег Суз бБег Ма1ї Меї 435 440 445
Ні біш Аза їец Ні5 А5ап Ні Тує ТВг бій уз бек Геу бак їец 5ег 450 а55 лова іез біу Гу 465 «2185 зе «21ї1х 235 «212» РЕТ «2135 Штучна лослідовність «22а» «223» Амінокислотна послідовність гуманізованого легкого ланцюга клону 12Н3, що містить гуманізовану способом РОЇ Мі 1 «4805 986
Мет Дер Меї Агв Маї Ркго Аїа бій Гео іви біу ги Гєц Гей їв Тер 1 З 16 15
Рпе Рго біу Аїа Агн Су» Авр тів біп Меї Тпге обіп 5ег о Рго 5ег 5ег 28 25 за їец бек Аіа бег маії б5іу А5р Аге Уаі ТВг Ті Те о Сує Бу Аїв 5Бег 35 аа 45 біп А5зр Маі1і б5іу Аїа Діа Уаї Аіїіа Тер Ту біп бій Гу5 Рго біу Гу во
Аїа Рго ув Ге ієц Ті Туг Тер Аів беє Те Агро Ні Те 51у Уаї1 655 70 75 за
ВБго зег Аг Рпе бег біу 5ег біу бек бБіу Те А5ро Ре Тигогец Те 85 960 95
Ііе бер обег ів біп Рго біз Ар Ре АТа Тпг оТує Туг Су біп віп 188 185 110
Тук 1Т1е Ап о Туб Рго бе) ТВбоББе біу біу біу Тайг оцуз Ма1ї бій Тіє 115 120 125 іїу5 АгЕ ТВг оМаі Аїа Аїа Рго Берг Уаі РНе Тіе РБе Рго Рго бег Ар 13а 135 112 бів бІп Бей бує бег біу Тис Аїа 5ег Уа)! мУаі Су5 Сен ївец А5п АБИ 145 158 155 1650
Рпе Тук Рго Аге бі Аїа Гух Маї біп Тер Суб Мазі Ар Азп АТа Гец 165 178 175 бів его біу Азп обЗег бій 510 бег о Маї Тпгб о а1їу бій Азр 5ег Гуз Азр 18589 185 1998
Бег Тиб Ту бак о їеу Ззег бек ТвгоГву Те оїеу зег Гуз Аіа Або Тук 195 280 205 бій вуз Ні5 Гуз Маії Туг Аїа Суз бій Маі Тнг Ніє біп 01у ей 5ег 216 215 229 бег о Рго Уві Те їу5 бек Ре Депп Агро біу біц Суб 225 238 235 «218» 91 «211» 236 «2122 РТ «213» Штучна послідовність «228» «2235 Амінокислотна послідовність гуманізованого легкого ланцюга клону 12Н3, що містить гуманізовану способом РЕ М «ва» 91
Меї Азр Меб Аги о Уаї Рго АЇВв біп ге їео біу іен о 1Ї2ец Беш Гей Тер ня 5 18 15
Рпе Рго б1у Аїа АгЕ Суб Ар Тіе біп Мет Те біп баг Рго 5ег 5ег 28 25 за їец бег Аіа бег Ма1ї біу А5р Дгв Уаї ТВге Ї1е Таб Суб їу5 Аїа бег 48 45 біп А5р Маі бБіу Аіз Аїа маії Аїа Трр Тук біп сій Су5 Рго о1у Гуз 58 55 во
Аіа рго Гуз їв їв І1е Туєс Тер Аіз бес Те Агв Ні Тпе б1у Маї 65 75 75 ва
Бго А5р Абе Рпе бек біу біу біу бег біу Тс Аб5р бе Тає Гец ТАг 85 90 35 ї1е 5ег бек івеи біп Рго бій А5р Ре АТа Те оТуг Туг Суз біп біп 3188 185 її
Ту ТТ1ае Ай Туб Рго ївецй Тве РВе біу біу біу тйг о їуз Уві бій тіє 115 120 125 у Агро Твг о Маї Аїа Аза Рго бЗего Уа! Рпе І1і2е Ре Рго Рго 5ег Ар 138 135 148 бій сіп іє уз бек біу Тйг Аїа бек Уаї Ма1і Суз ев їец Ап А5п 145 150 155 1658
Рпе Туг Рго Аг біб А1а уз Уві віп Тер Гу5 Маії А5р А5п Аза їец 165 170 175 біп 5ег б3іу Ап бег біп 51 бегоМУаії Тиг бій бій Ар бек Ку А5р 180 185 198
Бек ТНВг Тут Бег Гец бек обег ТВгобе) Те це 5ег о Гуз Аїа Азр Тусг 195 282 285 бій уз Ні іу5 Маї Туєс А1з Су 010 Маї Тийг Ні віп 01у Ге Бер 218 215 220 сег Рго Маії Тигоїу5 бег Реве Азп Агб ату 51и Сув 225 230 235 «21805 92 «2113: 885 «2122 РЕТ «2135 Штучна послідовність «229» «2235 Амінокислотна послідовність А1-Ві-модуля СВІ «414805 32
Рго Су Рго Рго б1у Ні Рбе 5ег Рго біу Азр Ап піп Діа Суз гу 1 5 18 15
Рго Тер Те Аба Суб ТНгоівй АЇа сіу Гу5 Ні Тиг Бей біл Рео дів 28 23 за
Зег Абпобег о бег Абр о лів ТІ1е Сух біц Азр Абе Ар о Рго Рго Аїв Те за 45 сбіп Рко бій біц Те бій б1іу Рго Рго А1а Абе РгОо Т1е ТВг Уаії бій 58 55 ва
Рго Тйг обі діа Тер Рго АгсвоТйгобес біп біу Рго Зег ТНг Аге Рго 78 75 о уві бій Маї Рго б1Іу біу Агр Аїа 85
«210» 95 «211» 308 «2125 РАТ «213» Штучна послідовність «2297 «223» Амінокислотна послідовність, гуманізована способом РОЇ варіабельної області легкого ланцюга Уії клону 29Е5 «40» 93
Ар т11е біп Меї Те біб бег РКО бегобег івец беб А18 бег Уаї б1у 1 5 18 15
Ар Агро уаії Ти Тіє тТВгоСуб5 Агв АТа бег о б1п Аброзт1е бег Абп Тукг за іец Ап Тер оТуг бій біп Гу Рго б1іу Гу Аа Рго ух Геи їв І1в зла 45
Туг Туг ТВг о бек Агро їв НІі5 бег бі1у Маії Рго бег АгЕ Ре 5ег біу
Бо
Зес сіу бег б1у ТВг Ар о Тує Те бе) ТВе Хі бек обеє сеї бій Рго 65 78 75 ва бій А5р Ре Ата тВг о Туг Тук Су біп біп б1у Аза Тиб о їв Рго Тер 85 96 а5
ТВе Рне біу біп біу Так цу5 Уаї біб Хе Гуз АгЕ 186 185 «2180» 94 «211» 198 «2122 РЕВТ «213» Штучна послідовність «220» «223» Амінокислотна послідовність, гуманізована способом РОЇ варіабельної області легкого ланцюга Мі2 клону 20Е5 «400» 94
А5р тТ1е біп Меї ТВБе біб бег Рго бег о бегс іви бек Азіа 5ег Уаї сіу 1 5 18 15
Азр Аг Уаії Тиг о Ті1е ТВгб оСуз Абе А1їа бег біп Ар тТ1іе 5ег Аза Туг 28 25 3а
Кей А5а ТрроТує бів бій уз Рго біу Туз Аїа маії Су5 еп без Це де 45
Тус Туг ТигоБег Агв Ге) Ніє бег біу Уа1і Рго 5бег Агр РНе баг 01Уу 5еа 55 68 бен п1у бег біу Тег Абр Ту Тигофец Тийг о ї1е бег о бег о їви бій Рго 65 7а 75 ва біб Абр ве Аїа ТБгоТук Ре Суб біп біп біу Азв Тргоїви Рро Тер 85 за 95
Тег о Рвйе біу біп б1у Те Гуз Уві 610 Ті фуб5 Дге 189 1905 «210: 95 «211» 1988 «212» РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «22325 Амінокислотма послідовність, гуманізована способом РОЇ варіабельної області легкого ланцюга МЬ1ї клому 12Н3 «аро» 95
А5р КТіе біп Меї Те бій бег Рго бег баг ге бек Аїа бег Уаї біу 1 5 18 15
А5зр Ага Маії Тпг о ї1а Тигб о Сух фує Аза бег б51й Ар Маї біу Аїа Аїа 28 25 зо чМаї Аїа Тер Туг бів сій Гу5 Рро біу Гу5 Аза Рго бу5 іо ей Те 35 30 45
Туг Тер А1їа 5еб Те Ас Ні Те біу Уа)! Рго бек Аве РБе бек б1у 58 55 во
Бек 5іу бег біу Тйг Абзор Рбе Тигоївео Те ті6 бег бек ве бїп вго 70 75 ща бі Азр РбБе АДіа Те тує Тук Суз біп біп Тус 112 Ап Тугк Рго Сей 85 90 35
Те впе біу біу біу ТВг Гу5 Маії бі Ті1е (у5 АгЕ 105 «210» 95 «2115 188 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2285 «223» Амінокислотна послідовність, гуманізована способом РОЇ варіабельної області легкого ланцюга Мі2 клону 12Н3 «два» 95
Дер Ті а1й Меї Тагобіп 5ег о Ргро бек о5ег Ії во бег Аїа бег Уві біу 1 5 18 15
Азр Аг УМаї ТВг Бі Тйб о Суз ух Аїв бег біп Азр Уві біу Аїз Аа 28 25 36
Уаї Ата Тер Туг біз біп їуз Рго біу уз А1а Рго їуз їеб ів Те ла 45
Туг Тер Аіїв Заг ТигоАгя Ні Тис біу Мі Рго Азр Абе Ре 5ег віу 5а 55 ва біу сіу баг а1у тТпг Ар РБе Те Ге) Те Те бек о бег Гецч віп Рго 65 70 75 8 біц А5о Ре Аїда тик о Тує Тут Су5 бій бій Туг БЩіе дяп о Тує Рго Ге 85 за 5
Тег РВе біу біу бІіу Тпгоїуз Маї бі) ТТе 1у5 АгЕ 3100 165 «2105 97 «2315 119 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність
«223» Варіазабельна область важкого ланцюга гуманізованого антитіла 20Е5 «228» «221» МАВТАНТ «2225 (48у..(48) «223» може також являти собою Меї «2295» 42215 УАВІАНТ «2225 (85Н)..(568) «223» може також являти собою Уві «2285 «2215 МАКІТАМТ «2225 (703..(78) «223 може також являти собою Ті «22ах «221» МАКІАМТ «29225 (74у..(74) «223» може також являти собою ТНг «да» 97 біп Маії біп Се маі біп о бег біу Аза біб Уаі іу5 ух Рго біу дів 1 5 18 15 баг Уаі іує Маії бег Су буз Аїа 5ег біу Туг ТВг Ре ТВг о 5Зег Тук 28 25 за
Уаї Мет Ні5 Тер Уаі Агро осіп Аїа бро біу бій Агро їв бій Тер Це 48 45 біу Тує ТІе Ахп о Рго Туг Ап Азр о біу Таб Суб Туг Ахп біб бух Рле 58 55 ва іу5 біу А"в АтТа ТБгоїеу ТБг бек Ар гу бек Аіз его ТнНе Аїа Туг 65 75 75 а
Мек біц Гей 5ег бес Бей Аг бег бій Азр ТВ А1їа Уаї Туг Туг Су 96 5
Аїа А5п о Туг Туг біу бек бег Бей 5ег Меж А5р Туг Тгр біу біп біу 188 185 116
Тигоїец о Маї Те Маї бек бег 115 «210» 98 «211» 388 «2125 РТ «213» Штучна послідовність «2295» «223» Варіабельна область легкого ланцюга гуманізованого знтитіла 20Е5 «224» «2215 МАКТАМТ «2225 (44), (44) «223» Може також являти собою Рго «2208» «221» УАКТАНТ «2222 (873..(87) «29235» Може також являти собою Туг «4005 98
Авр Т1е бів Меї Тпг о б124 бег о Рго бег обег Гей бег Аза 5ег Уві аі1іу 1 З 10 15
Азр Агро Уві Тиг о ї1іе ТВг Суб Аг А1Та бег біп Ар Т1е 5Зег А5воТуг 26 у за
Меч Ап о ТгроТуг бів обіп бу5 Рго бі Гуз Аіз Маі Су бе ей Пе да 45
Туг Тує Ти" обег Дгж Бай Ні его біу Маі Рго 5ег о Аге Рпе бер б1у ба бек сіу бег біу Так о Аб5р Ту Тк фе Тигб Т1е 5ег бек гг б1й Ро е5 78 75 о; біб А5р Ре АтТа ТВгоТук Рве Суз біп біп б1у А5в Те Гей бго Тер 55 за 95
Те вве біу біп біу Тиг Гуз Уаї сій тіе Туз АгеЕ 168 105 «2105 99
«2115 121 «2125 РЕК «213» Штучна послідовність «22а» «223» Варіабельна область важкого ланцюга гуманізованого антитіла 12Н3 «ха» «221» УАНІАМТ «2225 (88у..(48) «223» Може також являти собою Меї «228» «2215 УАКТАМТ «222» (683..(658) «2235 Може також являти собою Уаї «228» «2215 УАКТАНТ «2222 (793..(78) «2723» Може також вивляти собою Ііе «229» «2215 МАЯТАНТ «22235 (72)..472) «223» Може також являти собою Аа «дао» 99 біп Уаї біп Ге Маї б1п бак с1у Аза бій Маії 1у5 Бу5 Рко біу бек 1 5 185 15 бег Маі Гуз Уві бек Су5 бує А13 бек біу Туг Тіг РБе Гуз А5р Туг 2а 25 зе
Тийе Меї Ніх Тер Маї Аг біп Аїа Рго біу бій б1іу Сей б010 Тер Ше сіу біу Ті Туг Рго А5п Азп об1у біу бЗег Тк Туг Абп бів Азп о РБбе зе 55 во
Гуз Азр АгЕ АТїа ТВГ о Ббец Те Уаі Азр о 1у5 бег ТНгобеє ТТГ Аза Тук 78 75 во
Меє біш (еп бег 5Зег еп Ага 5ег бі А5р Тйг Аіїз Маі Туг Туг Су в за 95
АТтТа Аг Меї біу Тук Ні аТу Рго Ні іец дер Ре Д5р Маії Тер біу 199 195 118 біп біу ТВг о Те Уаі ТВе Маї бос б5евг 115 120 «-1а» 309 «211» 308 «2125 РКТ «2135 Штучна послідовність «22» «2235 Варіабельна область легкого ланцюга гуманівованого антитіла 12Н3 «2295 «221» УАКІАМТ «2272» (68). (68) «223» Може також являти собою 5ег «220» «2215 ХАКІАМТ «223» (6535..(65) «223» Може також являти собою бек «480» 300
Азр ї1Те біп Меї ТВг бій 5ег Рго бек бек їеу 5ег А1а Зег Ма1ї б1у 1 5 18 15
Ар Аги Ууаії Тиг оті ТВг оСу5 Суб Аїа бебобіп Ар о Маії б0іу Аїа Аа 28 25 зо
Уаї А1а Тер Туг біп біп Суб Рго біу 1у5 Аза Рго Суб Тез Се ЩШае ча 45
Тут Тир Ата бЗеє ТВгоАгкя Ні Твг обіу Маї Рео Абр Агро Ре 5Зег біу ва сбіу са1у бек біу ТВг А5р РВе Тйгоїе) Твг о Т1е бегобег є біп Рго 65 75 75 зо бій А5р Ре діа Тийг о Туг Туг о Су5 бій біп Туг 112 Ап о Туг Рго Гей 85 98 з5
Те РНе біу біу б1у Тиг Гуз Маї біз 112 їу5 АгЕ і80 105 «2195 101 «211» 1319 «2122 РЕТ «2137» Штучна послідовність «ха» «223» послідовність важкого ланцюга антитіла «дай» 181 біп Узі бій Ге Маї біп бек біу Аза бі Уа) їу5 Гуз Рко Ф1у Аїа 1 5 16 15
Зег Маї Гуз Уаї 5ег Суз5 ух Діва бек біу Тук Тег РБе Те о бег Туг 28 25 за
Маії Меї Мія Тер Маі Аге біп Аїа Рго біу піп Агф о їец 010 Тер Меї 4ла 45 бІ1у Туг Т1іе Абп Рго Туєк Абп біу біу ТВгоСуз Тує Аб5п о бім губ Ре
БО іуз Б1у Агв Маї ТВг ЇТТе ТНгобЗег А5роТВе Зег Аїа бек Тиг АТа Туг 65 7а 75 о
Меє бій їец 5зег бег їец Аг бег би Азр ТБ Аза Маії Туг Туг Су 85 98 35
Аіа А5п о Туг Туг б1у бБег бБег Гец заг Меї Аб5р Туг Тер біу біп біу 189 185 118
Типг без Уа1і Таб Узі 5еє 5ег 115 «2105 182 «-2115 119 «2125 РЕ «2132 Штучна послідовність «22085 «223» послідовність важкого ланцюга антитіла «аа» 102
Зі Мма1і бій бе Маії б1п бек біу Ада бій маі бу5 уз Рго біу діа 1 5 19 15
Заг Уаї їуб5 маії 5ег Суб уз А1а бег біу Тук ТВг Ре Тиг о бег Туг 28 25 30
Уаї Меє ніх Тер Маії Аге б1й А1Та Рго біу біп Аг їец бі Тер 11е за 45 біу Тує 112 Ап Рго Туг Авп біу б1у Тйг о фує Тугс Ап бі Гуз Рле
Ба 55 ва іїу5 біу АгЕ Ата ТВг оті Трг бег Азр ТВге бек Аіз бекє Тк АїТа Тусє 65 78 75 ва
Меж бір іеи бег обег Гей Аге о бег іч Дер Тв А1їа Уаії Тує Туг Су» 98 5
Аіа Ази Тук Туг біу бек Зег Геци бек Мет Ар Тук Тер о біу біп о1у 129 185 119
ТнК ев Уаі ТигоМУаї бег б5ег 115 «2105 193 «2135 119 «2125 РКТ «2135 Штучна послідовність «229» «223» послідовність важкого ланцюга антитіла «4005 193 сіп Уаї бій без уаї біп б5ег біу Аїа бій Маі Гуз Гуз Рго 0і1у Аїз 1 5 18 15
Зег Маії ух уа1і бек Сух 1у5 Аїа бек біу Туг ТВг Ре Тире о бег Туг 28 25 за
Уві Мет Ні5 Тгр Уві Аг 015 Аїа Рго б1іу біп АгБ ін бій Тер Те 35 зла 45
ОТу Тує І18 А5п Рго Тук Ап біу бі Тк бух Туг Аза біш Суб РвВе 5а 55 Бо їу5 01у Агв Аїа ТпгоГец ТНгобег Абр Туз бег АТа Зег ТВг Аїа Туг 65 70 75 ча
Мет 519 Гей 5ег бЗег Ген Аг бЗег бі А5р Тпг Аза Маї Тут Туг Суб 85 за 55
Аіа А5п Туг Туг біу бек бег іеи бек Меї А5р о Туг Тер біу бій б1у 18о 1985 118
Тис о ієн Маї ТНг о МУа1і бек о 5ег 115 «210» 1984 «21їз 315 «2122 РЕТ «213» Штучна послідовність «320» «293» послідовність важкого ланцюга антитіла «3005 164 біп Уаі бій їв Уа1ї бів бег біу Аїз аТї0 Маї Гуз Гуз Рго б1іу Аа 3 5 19 15 бек Маї Су Маї бек Су Туз Аза бег біу Тує ТВгоВНе Тиг баг Тук 23 за
Маї Меб Ні Тер Уаі Аг біп Азїа Рго біу б1іп Агв Гей біб Тер Меї 430 А5 а1у тТук І1а А5п о Рго Туг Азп АТа біу Те їу5 Туб Ап біб Бу Ре 5а 55 ва їує б1у Аг Ма1і ТиготТіє Те о бег Азр Те 5ег Аїа бег ТВг Аїа Туг 78 75 во
Меї с10 ів бБег бег Тїец Агро обег біц Азр ТВг о А1Та Уаї Туг Тук Суб 85 аа 95
АТа Азп Туг Тукг Ту бек обег Гез бег Меї Авр Туг Тгр біу біб 5іу 180 185 110
ТНг о бги Уаї Таб Уаї 5ег 5ег 115 «218» 1065 «2115 119 «2125 РА «213» Штучна послідовність «228» «923» послідовність важкого ланцюга антитіла «4085 305 біл Маї біп Геч Маї біп 5ег б1у АТа біц Маї Гу5 Гу5 Рго о1у Аа 1 5 і8 15 бег Маі (у5 Ма)і бег Су5з їує Аїа бек о біу Туг Тиг Ре ТНг бар Туг 7а 25 за маї Меї Ні Тер Уаї Аг біп Аїа Рго біу біп АгЕ се би Тер Те да 45 біу Тує Т1ве Ап Ргро Туг Аза Аіа біу ТВе гу Тук Абзп бій губ РВе зо 55 бо іу5 біу Аг Діа Тйб І16 Тпгбобек АБроТйг бек А1їа бек Твг Діа Тує 65 7а 75 во
Меє бій (ей бЗег бег ів Аге бер бій А5р Тк А1з Ма1ї Тує Туг Суб 85 за 5
Аіїа А5п о Тує Туг біу бЗег бер іец бЗег Меї А5р о Туг Тер б1у віп біу 18а 185 318
Тиг Гец Маї Те о Уді б5ег 5ег 115 «21605 186 «211» 119 «2123 РЕТ
«213» Штучна послідовність ч«22а» «2723» послідовність важкого ланцюга антитіла «а4вао» 108 б5іп Уа1ї сій ів Маї бій бек обіу Азіа бів Уві їу5 Гуз Рго біу Аїда 1 5 16 15
Зег уаї 1їу5 Маії бек Су5 гГу5 діва бек біу Тук ТВг о РБе Тпг баг Тує 28 25 зо
Маії Ме ні5 Тер Уві Агв біп АТа Рго б3іу біп Агв Ге 51 Тер Те 35 48 45 сіу Тугв ї12а Абп Рго Туг Авзп Аза біу ТВг Суб Туг Ап бій Гуз Рпе ве
Му біу Аг Аїа ТВг о Баец Тнг об5ег Ар обу 5ек Аіа бег Тг Аїа Туг 65 78 75 за меж біб еп баг бек ге АгеЕ 5ег 01 Ар ТБ Аза Уаії Тує Туг Су» 85 96 з5
Аіа АзпоТук Тує біу баг бег рец бе Меї А5р о Тук Тер біу біп сту 109 105 110
Тег гер Уві Таб Уві бег 5ег 115 «210» 187 «211» 119 «2125 РВТ «21323 Штучна послідовність «220У «223 послідовність важкого ланцюга антитіла «49805 187 с1іп Уаї 5іп цей уаї біп бек б1у Аїа бій Маї уз Гуз Рго аіу АІ1та 1 5 18 15 бек Маії уз Ма! баг Суз їу5 АТїа бек біу Тук тТйг РНе Тиг бек Туг
28 25 за
Маї Меє Ні5 Тер Маії Аг оїп діа Рго сбіу біп Акб івец біз) Тер Мет 35 48 45 бІ1Уу Туг Хі А«п о рРго Туг Ахпобег біу ТигоГу5 Тук Ап 10 ух Рае 5а 55 во іїу5 51у Агро Маї Тпе їіе Тиг бек А5р Те б5ег Аза бЗег Те Аза Туг 65 78 75 ва
Меї бін їГеу бег о бег Тез Аги бег бій д5р тб о А1а Маї Тує Тук Сув 85 із, 95
Аіфа Аби Туг Туг біу бБег баг (ей бег Меб А5р о Туг Тер б1у біп 01у 126 185 ті
Таб оїец Маіїі ТНг оМаї баг бесг 115 «2105 7л8 «21152: 19 «2125 РКТ «2135 Штучна послідовність «2205 «2235 послідовність важкого ланцюга антитіла «4005 188 біп Маі віп о їей Уві біп бег б01у Аіа пн маі уз Суб Рго біу Аїа 1 5 та 15
Бек Маії Гу« Маії бек Сує Туз Аїа бег біу Тук ТВг о ВПпе Таг обЗег Тугк 28 25 за
Маї Меє Ні5 Тер Уаі Аге бій АтТа ВБго біу бій Агв Ген бій Тир Т1є 35 за де с1у Тук т1е дей Рго Туг Ап бек о біу Те Туз Туг Ахп о б15 вуз Рне
Ба їуз біу АдгРЕ Аїа Тег о Іі1іе тТВго5ег Дер Те о5ег А1а бег твг о АЇа Туг
65 78 75 за
Меї бі (ер бег 5ег Гео Аге бек бій А5р тп Аїа Мві Туг Туєс Сух 85 за 95
АТа АЗзп о Туг Тук 01у 5ег о бег оїец бек Меї А5р Тук Тгр бі біп біу 198 125 118
Тис ген Уаії Тиг о Маії бек зЗег 115 «2185 1905 «2115 319 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2285 «223» послідовність важкого ланцюга антитіла «ав» 103 біп Маї біп бе Маї бій бег б1у Аза біз Ма! їу5 уз Рго зу Аїа 1 5 10 15 бЗег Маі Гуз Маї бег о Су5з Туз Аїа бег біу Тук Тег Рре Тпг бег Тугк 20 25 за ча1ї Меї Ні Тгр о Уаії Аг біп Аза Рго біу 610 Аксв Гей біб) Тер Те 35 40 45 біу Туг Тіе Ап оРго Туг Азп бек біу ТВгбоБу5 Ту А5п бі) Су РВе 5а 5 Ба іЇу5 ві Агв Аіїа ТйгбоГеу Тпг бек А5р Гу бег о Аїа бек ТАг Аїа Туг 79 75 во
Меї 010 іец о бег бег огец Аге бег бі) А5р ТВг Аїа Маї Туг Туг Суб ва за 95
АТа А5зп о Тує Туг біу бег 5ег о іву бег Меї Азр Туг Тер 51у біп біу іїаа 105 118
Тег о їеци Уаї ТВе Уаї 5ег 5ве
«2195 119 «2115 119 «212 РКЕТ «213» Штучна послідовність «2гах «223» послідовність важкого ланцюга антитіла «дай» 110 іп Узі бій Сай Маї б1л бек біу Аза бі Маі їу5 Су5 Рго біу Аїа 1 5 18 15 его Маії Гуз Маї бег Су5 Гух5х Діва бег біу Тук Те РБе Те о бег Туг 2а 25 за
Маії Меї Мія Тер Маі Аге біп Аїа Рго біу піп АгфЕ о їец 010 Тер Меї 4ла 45 біу Тут Ті Авзп Рго Туг Азп о біц біу ТБгоГуз Туг Абзп бім губ РнНе во іуз Б1у Агв Маї ТВг ЇТТе ТНгобЗег А5роТВе Зег Аїа 5ес Тег АТа Туг 65 70 75 88
Меє бій їец 5зег бег їец Аг бег би Азр ТБ Аза Маії Туг Туг Су 85 9а 35
Аіа А5п о Туг Туг б1у бБег бБег Гец заг Меї Аб5р Туг Тер біу біп біу 180 185 118
Типг без Уа1і Тае Узі 5еє 5ег 115 «-2105 11 «-2115 119 «2125 РЕ «2132 Штучна послідовність «22085 «223» послідовність важкого ланцюга антитіла «аа» Мі
Зі Мма1і бій бе Маії б1п бек біу Ада бій маі бу5 уз Рго біу діа 1 5 19 15
Заг Уаї їуб5 маії 5ег Суб уз А1а бег біу Тук ТВг Ре Тиг о бег Туг 28 25 30
Уаї Меє ніх Тер Маії Аге б1й А1Та Рго біу біп Аг їец бі Тер 11е за 45 біу Ту 112 Ап Рго Туг Авп бі бі1у Тйг фу Тугс Али бі Гуз Рле
Ба 55 ва іїу5 біу АгЕ Ата ТВг оті Трг бег Азр ТВге бек Аіз бекє Тк АїТа Тусє 65 78 75 ва
Меж бір іеи бег обег Гей Аге о бег іч Дер Тв А1їа Уаії Тує Туг Су» 98 5
Аіа Ази Тук Туг біу бек Зег Геци бек Мет Ар Тук Тер о біу біп о1у 129 185 119
ТнК ев Уаі ТигоМУаї бег б5ег 115 «-2105 112 «2135 119 «2125 РКТ «2135 Штучна послідовність «229» «223» послідовність важкого ланцюга антитіла «4005 112 сіп Уаї бій без уаї біп б5ег біу Аїа бій Маі Гуз Гуз Рго 0і1у Аїз 1 5 18 15
Зег Маії ух уа1і бек Сух 1у5 Аїа бек біу Туг ТВг Ре Тире о бег Туг 28 25 за
Уві Мет Ні5 Тгр Уві Аг 015 Аїа Рго б1іу біп АгБ ін бій Тер Те 35 зла 45
ОТу Тує І18 А5п Рго Тук Ап біз бі Тк о Буб Туг Аза біш Суб РвВе 5а 55 Бо їу5 01у Агв Аїа ТпгоГец ТНгобег Абр Туз бег АТа Зег ТВг Аїа Туг 65 70 75 ча
Мет 519 Гей 5ег бЗег Ген Аг бЗег бі А5р Тпг Аза Маї Тут Туг Суб 85 за 55
Аіа А5п Туг Туг біу бек бег іеи бек Меї А5р о Туг Тер біу бій б1у 18о 1985 118
Тис о ієн Маї ТНг о МУа1і бек о 5ег 115 «210» 113 «21їз 315 «2122 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «293» послідовність важкого ланцюга антитіла «4005 113 біп Уаі бій їв Уа1ї бів бег біу Аїз аТї0 Маї Гуз Гуз Рго б1іу Аа 3 5 19 15 бек Маї Су Маї бек Су Туз Аза бег біу Тує ТВгоВНе Тиг баг Тук 23 за
Маї Меб Ні Тер Уаі Аг біп Азїа Рго біу б1іп Агв Гей біб Тер Меї 430 А5 а1у тТук І1а А5п о Рго Туг Азп Абзробіу Те їу5 Туб Ап біб Бу Рене 5а 55 ва їує б1у Аг Ма1і ТиготТіє Те о бег Азр Те 5ег Аїа бег ТВг Аїа Туг 78 75 во
Меї с10 ів бБег бег Тїец Агро обег біц Азр ТВг о А1Та Уаї Туг Тук Суб 85 аа 95
АТа Азп Туг Тукг Ту бек обег о Гез бегоїеу Авр Туг Трр о біу біб 5іу 180 185 110
ТНг о бги Уаї Таб Уаї 5ег 5ег 115 «3185 14 «2115 119 «2125 РА «213» Штучна послідовність «228» «923» послідовність важкого ланцюга антитіла «-4085 114 біл Маї біп Геч Маї біп 5ег б1у АТа біц Маї Гу5 Гу5 Рго о1у Аа 1 5 і8 15 бег Маі (у5 Ма)і бег Су5з їує Аїа бек о біу Туг Тиг Ре ТНг бар Туг 7а 25 за маї Меї Ні Тер Уаї Аг біп Аїа Рго біу біп АгЕ се би Тер Те да 45 біу Тує Т1в Ап Ргро Туг Аза Азробіу ТВе гу Тук Абзп бій губ РВе зо 55 бо іу5 біу Аг Діа Тйб І16 Тпгбобек АБроТйг бек А1їа бек Твг Діа Тує 65 7а 75 во
Меє бій (ей бЗег бег ів Аге бер бій А5р Тк А1з Ма1ї Тує Туг Суб 85 за 5
Аіїа А5п о Тує Туг біу бЗег бер іец 5Зег Гей Аб5р Ту Тер б1у віп біу 18а 185 318
Тиг Гец Маї Те о Уді б5ег 5ег 115 «2105 115 «211» 119 «2123 РЕТ
«213» Штучна послідовність ч«22а» «2723» послідовність важкого ланцюга антитіла «лай» 115 б5іп Уа1ї сій ів Маї бій бек обіу Азіа бів Уві їу5 Гуз Рго біу Аїда 1 5 16 15
Зег уаї 1їу5 Маії бек Су5 гГу5 діва бек біу Тук ТВг о РБе Тпг баг Тує 28 25 зо
Маії Ме ні5 Тер Уві Агв біп АТа Рго б3іу біп Агв Ге 51 Тер Те 35 48 45 біу Туг 1182 Азп о Рго Тук Ап Ар о 51у ТБг оГСує Тує Ап бін Гу РНе ве
Му біу Аг Аїа ТВг о Баец Тнг об5ег Ар обу 5ек Аіа бег Тг Аїа Туг 65 78 75 за меж біб еп баг бек ге АгеЕ 5ег 01 Ар ТБ Аза Уаії Тує Туг Су» 85 96 з5
Аіа АзпоТук Тує біу баг бег Гец бе іви Дер о Тук Тер біу біп сту 109 105 110
Тег гер Уві Таб Уві бег 5ег 115 «210» 116 «211» 119 «2125 РВТ «21323 Штучна послідовність «220У «223 послідовність важкого ланцюга антитіла «49805 116 с1іп Уаї 5іп цей уаї біп бек б1у Аїа бій Маї уз Гуз Рго аіу АІ1та 1 5 18 15 бек Маії уз Ма! баг Суз їу5 АТїа бек біу Тук тТйг РНе Тиг бек Туг
28 25 за
Маї Меє Ні5 Тер Маії Аг оїп діа Рго сбіу біп Акб івец біз) Тер Мет 35 48 45 бІ1Уу Туг Хі А«п о рРго Туг Ап А5робіу ТагоГу5 Тук Ап 10 ух Рае 5а 55 во іїу5 51у Агро Маї Тпе їіе Тиг бек А5р Те б5ег Аза бЗег Те Аза Туг 65 78 75 ва
Меї бін їГеу бег о бег Тез Аги бег бій д5р тб о А1а Маї Тує Тук Сув 85 із, 95
Аіфа Аби Туг Тут біу бБег баг Гей бег І1е А5р о Туг Тер б1у біп 01у 126 185 ті
Таб оїец Маіїі ТНг оМаї баг бесг 115 «2105 117 «21152: 19 «2125 РКТ «2135 Штучна послідовність «2205 «2235 послідовність важкого ланцюга антитіла «4005 117 біп Маі віп о їей Уві біп бег б01у Аіа пн маі уз Суб Рго біу Аїа 1 5 та 15
Бек Маії Гу« Маії бек Сує Туз Аїа бег біу Тук ТВг о ВПпе Таг обЗег Тугк 28 25 за
Маї Меє Ні5 Тер Уаі Аге бій АтТа ВБго біу бій Агв Ген бій Тир Т1є 35 зла 45 с1у Тук т1е дей Рго Туг Азп Авр б1у Тиеб Туз Туг Ахп о б15 вуз Рне
Ба їуз біу АдгРЕ Аїа Тег о Іі1іе тТВго5ег Дер Те о5ег А1а бег твг о АЇа Туг
65 78 75 за
Меї бі (ер бег 5ег Гео Аге бек бій А5р тп Аїа Мві Туг Туєс Сух 85 за 95
АТа АЗзп о Туг Тук 01у 5ег о бег оїец бек Тіе А5р Тук Тгр бі біп біу 198 125 118
Тис ген Уаії Тиг о Маії бек зЗег 115 «2185 118 «2115 319 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «2285 «223» послідовність важкого ланцюга антитіла «ав» 118 біп Маї біп бе Маї бій бег б1у Аза біз Ма! їу5 уз Рго зу Аїа 1 5 10 15 бЗег Маі Гуз Маї бег о Су5з Туз Аїа бег біу Тук Тег Рре Тпг бег Тугк 20 25 за ча1ї Меї Ні Тгр о Уаії Аг біп Аза Рго біу 610 Аксв Гей біб) Тер Те 35 40 45 біу Туг Пе Ап оРго Туг А5п дбр біу ТВгобм5 Тук А5п о біц Су РБе 5а 5 Ба іЇу5 ві Агв Аіїа ТйгбоГеу Тпг бек А5р Гу бег о Аїа бек ТАг Аїа Туг 79 75 во
Меї 010 іец о бег бег огец Аге бег бі) А5р ТВг Аїа Маї Туг Туг Суб ва за 95
АТа А5зп о Тує Туг біу бег 5ег оіву бег І16 Азр Туг Тер 51у біп біу іїаа 105 118
Тег о їеци Уаї ТВе Уаї 5ег 5ве
«2195 119 «21125 121 «212 РКЕТ «213» Штучна послідовність «2гах «223» послідовність важкого ланцюга антитіла «дай» 119 іп Узі бій Сай Маї б1л бек біу Аза бі Маі їу5 Су5 Рго біу бег 1 5 18 15 его Маії Гуз Маї бег Су5 Гух Діва бег біу Тук Те РБе Гуз Азр Туг 2а 25 за
Ти Меї Мія Тер Маі Аге біп Аїа Ргео біу піп біу їец 010 Тер Меї 4ла 45 біу біу ті Тує Рго Азп о біп біу біу бег ТиПг о Тує Аб5п бій Ап РНе во іуз А5р Агв Маї ТВг о ТТе Тнг АТа А5рофуз Зег Тиб о 5ес Тег АТа Туг 65 7а 75 о
Меє бій їец 5зег бег їец Аг бег би Азр ТБ Аза Маії Туг Туг Су 85 9а 35
Аіа АгЕ Мет сту тує Ні5 сіу Рго Ні5 Гей Аб5р Рле Аб5р Маі Тер біу 180 185 118 біп біу Тйгб Тпге Узі Те о Маі1ї бек б5ег 115 128 «2105 1230 «2115 121 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність 2205 «223» послідовність важкого ланцюга антитіла «40аз5 120
Зі Мма1і бій бе Маії б1п бек біу Ада бій мМаі бу5 Гуз Рго біу б5ег 1 5 19 15
Заг Уаї їуб5 маії 5ег Суб уз А1а бег біу Тук ТВг Ре губ Ар Туг 28 25 30
Тве Ме Ні Тер ма1і Агро бій Аза Рео бі біп с1у ее бі Тер Ше за 45 біу біу 112 Туг Рго Абп обіп біу б1у бег Тиг Тугс А5п 010 Дей Рле
Ба 55 ва іїу5 Аб5р АгЕ Маві ТВгобеб Тег А1їа АзроГух бек Таб бек Тк АїТа Тусє 65 78 75 ва
Меж бір іеи бег обег Гей Аге о бег іч Дер Тв А1їа Уаії Тує Туг Су» 98 5
Аіа Аге Меї сіу Туг Ні5 біу Рго Ні5 Цец дер Рае Ар Уаї Тер 6Іу 129 185 119 чіп біу ТВб о Тиг омМаї ТНг Уаї беє 5ег 115 128 «2310» 121 «21і5 131 «2125 РЕТ «2135 Штучна послідовність «220» «223: послідовність важкого ланцюга антитіла «4805 121 сіп Уаї бій гей Уаї біп бег біу Аїа бі Маі Гуз уз Рго б1у 5ег 1 5 18 15 зег Уаі уз Маї бек Су«х 1у5 Аїа бег біу Туг ТВг Ре Суб А5р Туг 28 25 за
Тиг Мет Ні Тер Уві Аг біб Аза Рго с1іу біп біу ен біч Тер Пе 35 зла 45 соіу Б1у І18 Тук Рго дД5посбі)й біу біу бек Тиг о Туг Аза біп деп РвВе 5а 55 Бо їу5 Ар Агв Аїа ТпгоГец ТВгомаї Ар Гуз бег ТВг обег ТВг Аїа Туг 65 70 75 ча
Мет 519 Гей 5ег бЗег Ген Аг бЗег бі А5р Тпг Аза Маї Тут Туг Суб 85 за 55
Аіз Аг Меж 5іу Туг Нія біу Рко Ні Гец А5р Рпе Азр Маії Тер 51у 188 185 118
Сів біу Тне Тебе Ма1і Так Уві бег бек 115 120 «2105 122 «21і1з 121 «2122 РЕТ «213» Штучна послідовність «229» «2923 послідовність важкого ланцюга антитіла «400» 122 біп Уаі бій іїво Ма1і біб бег біу Аїз Ти Маї уз Гу5 Рго бІ1у 5ег 1 5 18 15 бек Маї Сух Маї бек Суз їу5 Аза бег біу Туг ТВг о Рпе Суз Ар Туг 29 дз за
ТВг Ме Ні То Уаі Аг біп Азїа Рго біу біп б1у без бій Тер Мет за 5 с1у 01у ТТе Туг Рго Аб5п Аїа біу біу бек ТВг о Туг Ап бій А5п о Рне 5а 55 ва ух Ар Аг Ма1і Тийг о їІ3Зе те Аїа А5зр ух 5ег ТВг о 5ег ТВг А1їа Туг 78 75 во
Меї біц іемчм бек бег 1ец Агро обег бій Азр ТВг Аза Маії Туг Тук Суб 85 ав 95
АТа Акв Меї біу Туг Ні5 бі1у Рко Ні5 їец Авр Рпе Ар Ма1і Тгр б5іу 180 185 110 біп б1у ТВг о Типг о мМаї ТВе маї бег бек 115 129 «2185 123 «2115» 171 «2125 РЕ «213» Штучна послідовність чага» «925» послідовність важкого ланцюга антитіла «4087 323 сіл Уаї біп Гец МУМаї біп Заг о біу Аза біц Маї Гуз Гуз Рго б1у бек 1 5 і8 15 б5ег Маі (уз Уаї Бег Су5 бує Діа баг обіу Тут Тиг Ре Гу5 Азр Туг за 25 за
Те Мет Ні Тер Маї Аг бій Аїв Рго біу віп б1у Сей би тТрр Те да 435 біу біу Т1іе Туєг Рга А5п Аза біу бБіу бег Тк тує Аза бій Абп РБе за 55 ва їух Азр Аг о Уаї Тег ово Таб Аза А5року5 бег ТвВгобеє Те Аа Туг 655 70 75 во
Мет б1ц Сей бЗег бег їв Аг бек бі) А5р Те Аїз мМаї Тує Туг Су 85 за 25
А1а Аг Мет біу Туг Ні б01у Рго Ні Гей Ад5р Рпе Ахр Уві Тер біу зіва 185 318 бій біу Те тВг оУаї Тне Уаії 5ег о бег 115 128 «2105 124 «2115 121 «212» РТ
«213» Штучна послідовність ч«22а» «2723» послідовність важкого ланцюга антитіла «аа» 124 б5іп Уа1ї сій ів Маї бій бек обіу Азіа бів Уві їу5 Гуз Рко біу бек 1 5 16 15
Зег уаї 1їу5 Маії бек Суб гГу5 діва бек біу Тук ТВг РБе Гуз Азо Туг 28 25 зо
Те Меє Ні5 Тер Уві АєсвБ о біп АТа Рео біу біп біу їеи 01 Тер Тіе 4а 45 сіу сіу ї12а Туг Рго Азп Аїа сіу біу бБег Тиг Туг Ап біп Абп Рпе 58 55 ве
Муз Др Аг Аїа ТВг оба Твг оМмаії Ар обу 5ек ТгБ о бег Тг Аїа Тує вх 78 75 за меж біб еп баг бек ге АгеЕ 5ег 01 Ар ТБ Аза Уаії Тує Туг Су» 85 96 з5
Аіа Аг Меї біу Туг Ні5 біу Рго Ні5 іви А5р о РБе А5р о Маії Тер Ту 109 105 110 біп біу Тиге ТнгоУаї Те Маї 5еб 5ег 115 129 «210» 125 «211» 121 «2125 РВТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» послідовність важкого ланцюга антитіла «ва» 125 біп Маї 5іп Гей муаї біп бек б51іу Аїа бій Маї ух бу5 РрРго біу 5ег 1 5 16 15 бвг оМа)! уз Уві баг Суз 1у5 Аїа бек біу Туг Тг РНе Гу Ар Туг
20 25 зе
Тве Меє Ні5 Тер Маії Аг о1п Діаз Рго біу біп б1у їв біц Тер Мет 35 48 45 бі 5іу Хі Тук Рго Ап бій біу біу бег Таб о Тук Ап б1пй Абап Рае
Ба 55 6о іїу5 д5р Агро Маї Те їі Тиг діа А5р рух бег Те о бЗег Те Аза Туг 65 79 75 ва
Меї бін їГеу бег о бег Тез Аги бег бій д5р тб о А1а Маї Тує Тук Сув 85 9 95
Аза Аге Мет 5іу Туг Ніб біу Рго Ні їец Азр Рпе Ар Уаї Тер 01Уу 108 185 тів біп біу Те Тнгб Мві Те Уві 5ег 5ег 115 128 «2105 126 «811: 1 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність «22605 «2235 послідовність важкого ланцюга антитіла «4895 126 біп Маі б5іп Гей Уві біп бег біу Аіа а1іц Уві гГу5 Суб Рго біу 5ег 1 5 18 15 бек Маї губ Маії бек Су іу5 А1їа бег біу Туг Таг Рпе 15 Абр Тук 20 25 за
Тпг оМежє Ні Тгр о Маі Агро бів А1а бго біу біп 5іу Ген бі Тер Ії 35 зо 45 с1і1у б1у т1е Тук Рго Азп бій біу 51у бек Тайе Туг Ап бів о Абзп Ре
Ба
Гуз Ар Агв Уві Те є Тве Аіа А5ро обу 5ег Тигб обеб Таг о АЇаз Туг
65 78 75 за
Меї бі (ер бег 5ег Гео Аге бек бій А5р тп Аїа Мві Туг Туєс Сух 85 за 95
АІТа Аг Меб б5іу Тує Ні біу Рго Ніх Се Ар РПе Ар о Ма1 Тер біу 180 125 118 біп біу тає ТР оМаії Таб о Уаії бег баг 115 129 «2185 127 «2115 13721 «2122 РЕКТ «2135 Штучна послідовність «2285 «223» послідовність важкого ланцюга антитіла «1885 127 біп Маї біп без Маї біп бег біу Аза біз Ма! їу5 уз Рго пу бег 1 5 18 15 бЗег Маі Гу5 Маї Зег о Суз Гуз А1а бек біу Тук Тиг Ре Гуз А5р Туг 28 25 за
Те Мет Ні Тер о Маії Ас о біп Аза Рго біу б1п біу Гей бій Тер Т12 35 43а 45 сіу сіу Тіе Туг Рго А5п біб бі1іу біу бБес Типг Тук Ап бій А5п Рве 5а 55 ба
ЇУу5 А5р Аг Аів тТиБ о Бец Тпе Уві А5роГу5 беб ТВе 5еє Твг Аїа Тук 70 75 во
Меї б1Іц ей бег о бег ей Аге бек біб А5р Тиг А1їа Уаї Туг Туг Суб 85 за 95
А1а Агв Меє біу Туг Ні біу Рко Ні Сей Ар Рре Дхр Маї Тер біу 188 185 118 бій біу Тие ТВе о Маії Те Уві 5ег бек
115 129 «2195 128 «211» 121 «2122 РЕТ «2137» Штучна послідовність «ха» «223» послідовність важкого ланцюга антитіла «дай» 198 біп Узі бій Ге Маї біп бек біу Аза бі Уа) їу5 Гуз Рко 01у баг 1 5 16 15
Зег Маї Гуз Уаї 5ег Суз5 ух Діва бек біу Тук Тег РБе Гуз А5зр Туг 28 25 за
Тиеб Мет Ні Тер Маії Асв бій Аїа Рео біу біп біу їец бій Тер Меї 4ла 45 біу біу ті Тує Рго Азп Абп біу біу бег ТиПг о Тує Аб5п бій Ап РНе
БО іуз А5р Агв Маї ТВг о ТТе Тнг АТа А5рофуз Зег Тиб бек Тиг АТа Туг 65 7а 75 о
Меє бій їец 5зег бег їец Аг бег би Азр ТБ Аза Маії Туг Туг Су 85 98 35
Аіа АгЕ Гец сту тує Ні5 сіу Рго Ні5 Гей Аб5р Рле Аб5р Маі Тер біу 189 185 118 біп біу Тйг Тпг о Узі Тег о Маі1ї бек б5ег 115 128 «2105 129 «2115 121 «2125 РЕТ «213» Штучна послідовність 2205 «223» послідовність важкого ланцюга антитіла «40аз5 129
Зі Мма1і бій бе Маії б1п бек біу Ада бій мМаі бу5 Гуз Рго біу б5ег 1 5 19 15
Заг Уаї їуб5 маії 5ег Суб уз А1а бег біу Тук ТВг Ре губ Ар Туг 28 25 30
Тве Ме Ні Тер ма1і Агро бій Аза Рео бі біп с1у ее бі Тер Ше за 45 біу біу 112 Туг Рго Абп Авп біу б1у бег Тиг о Туг А5п 010 Дей Рле
Ба 55 ва іїу5 Аб5р АгЕ Маві ТВгобеб Тег А1їа АзроГух бек Таб бек Тк АїТа Тусє 65 78 75 ва
Меж бір іеи бег обег Гей Аге о бег іч Дер Тв А1їа Уаії Тує Туг Су» 98 5
Аіа АгвоСец біу Туг Ні5 біу Рго Ні5 Мец дер РвБе Ар Уаї Тер 6Іу 129 185 119 чіп біу ТВб о Тиг омМаї ТНг Уаї беє 5ег 115 128 «2310» 138 «21і5 131 «2125 РЕТ «2135 Штучна послідовність «220» «223: послідовність важкого ланцюга антитіла «4005 139 сіп Уаї бій гей Уаї біп бег біу Аїа бі Маі Гуз уз Рго б1у 5ег 1 5 18 15 зег Уаі уз Маї бек Су«х 1у5 Аїа бег біу Туг ТВг Ре Суб А5р Туг 28 25 за
Тиг Мет Ні Тер Уві Аг біб Аза Рго с1іу біп біу ен біч Тер Пе 35 зла 45 соіу Б1у І18 Тук Рго Д5п Ап біу бі бек Тиг Туг Аза біп деп РвВе 5а 55 Бо їу5 Ар Агв Аїа ТпгоГец ТВгомаї Ар Гуз бег ТВг обег ТВг Аїа Туг 65 70 75 ча
Мет 519 Гей 5ег бЗег Ген Аг бЗег бі А5р Тпг Аза Маї Тут Туг Суб 85 за 55
Аіз Аг іец 5іу Туг Нія біу Рко Ні Гец А5р Рпе Азр Маії Тер 51у 188 185 118
Сів біу Тне Тебе Ма1і Так Уві бег бек 115 120 «2105 131 «21і1з 121 «2122 РЕТ «213» Штучна послідовність «229» «2923 послідовність важкого ланцюга антитіла «00» 131 біп Уаі бій іїво Ма1і біб бег біу Аїз Ти Маї уз Гу5 Рго бІ1у 5ег 1 5 18 15 бек Маї Сух Маї бек Суз їу5 Аза бег біу Туг ТВг о Рпе Суз Ар Туг 29 дз за
ТВг Ме Ні То Уаі Аг біп Азїа Рго біу біп б1у без бій Тер Мет за 5 с1у 01у ТТе Туг Рго Аб5п о Азп біу біу бек ТВг о Туг Ап бій А5п о Рне 5а 55 ва ух Ар Аг Ма1і Тийг о їІ3Зе те Аїа А5зр ух 5ег ТВг о 5ег ТВг А1їа Туг 78 75 во
Меї біц іемчм бек бег 1ец Агро обег бій Азр ТВг Аза Маії Туг Тук Суб 85 ав 95
АТа Агв І1є біу Туг Ні5 бі1у Рко Ні5 їеу Авр Рпе Ар Ма1і Тгр б5іу 180 185 110 біп б1у ТВг о Типг о мМаї ТВе маї бег бек 115 129 «2185 1372 «2115» 171 «2125 РЕ «213» Штучна послідовність чага» «925» послідовність важкого ланцюга антитіла «408 132 сіл Уаї біп Гец МУМаї біп Заг о біу Аза біц Маї Гуз Гуз Рго б1у бек 1 5 і8 15 б5ег Маі (уз Уаї Бег Су5 бує Діа баг обіу Тут Тиг Ре Гу5 Азр Туг за 25 за
Те Мет Ні Тер Маї Аг бій Аїв Рго біу віп б1у Сей би тТрр Те да 435 біу біу Т1іе Тубг Рга А5п Азо біу бБіу бег Тк Ту Аза бій А5п РБе за 55 ва їух Азр Аг о Уаї Тег ово Таб Аза А5року5 бег ТвВгобеє Те Аа Туг 655 70 75 во
Мет б1ц Сей бЗег бег їв Аг бек бі) А5р Те Аїз мМаї Тує Туг Су 85 за 25
А1а Аг Т1е біу Туг Ні б1у Рго Ні Гей Ад5р Рпе Ар Уві Тер біу зіва 185 318 бій біу Те тВг оУаї Тне Уаії 5ег о бег 115 128 «2105 153 «2115 121 «212» РТ
«213» Штучна послідовність ч«22а» «2723» послідовність важкого ланцюга антитіла «да» 133 б5іп Уа1ї сій ів Маї бій бек обіу Азіа бів Уві їу5 Гуз Рко біу бек 1 5 16 15
Зег уаї 1їу5 Маії бек Суб гГу5 діва бек біу Тук ТВг РБе Гуз Азо Туг 28 25 зо
Те Меє Ні5 Тер Уві АєсвБ о біп АТа Рео біу біп біу їеи 01 Тер Тіе 35 48 45 сіу сіу ї12а Туг Рго Ап Азп біу біу бБег Тиг Туг Ап біп Абп о Рпе ве
Муз Др Аг Аїа ТВг оба Твг оМмаії Ар обу 5ек ТгБ о бег Тг Аїа Тує 65 70 75 за меж біб еп баг бек ге АгеЕ 5ег 01 Ар ТБ Аза Уаії Тує Туг Су» 85 96 з5
Аіа Аг тів біу Туг Ні5 біу Рго Ні5 ви А5р о РБе А5р о Маії Тер Ту 109 105 116 біп біу Тиге ТнгоУаї Те Маї 5еб 5ег 115 129 «21025 134 «211» 119 «2125 РВТ «213» Штучна послідовність «2205 «223» послідовність важкого ланцюга антитіла «270» «221» УАКТАМНЕ «222у (113..131) «223» Може також являти собою 1 ей «2205
«221» МУАКТАМТ «222» (483..(48) «223» Може також являти собою Т1е «27а» «221» МАВТАНТ «2225 (5635..456) «223» Може також являти собою 0іу, Аза, бек або 51и «228» 4221» МАВІАМНТ «2225 (58)..(68) «223» Може також являти собою діа «2225 «2215 УАКІАМТ «2225 (78У..(78) «223» Може також являти собою Т1в «ага» «221» МАКІАМТ «2225 (74у..(74) «223» Може також являти собою Гу «22085 «221» УМАВІАМТ «2222 (186)..(106) «2235 Може також являти собою Се або Пе «4905 134 ста Маї біп Гео маї бів бег біу Аза бій Маї іу5 Гу« Рго біу Аїа 1 5 1а 15 5ег Маії ух Ма! бЗег Сух Гу5 АІТа бек біу Туг Тиг о Рпе ТВг о 5ег Тук за
Уаї Межф Ніб5 Тер о Маї Абе о біп Аза Рго біу біп Абе о Гец бій Тер Меє да 45 біу Туг 116 А5п о Рго Тук Азп о д5робіу ТВгогу5 Туб А5п ОТ гу Рве за 55 68 їу5 біу Аг о Маї ТНг оре тТвгобеб Ар оте о б5ег діз беб о Твг А1а тує 65 79 75 ва
Мек біз 1ец обег бег бе Агя бег бі) Ар ТВг діа Уаї Туг Тук Су за 25
АТа Азп Туг Тукг Ту бек обег Гез бег Меї Авр Туг Тгр біу біб 5іу 190 185 118
Тиг о ївги Уаії Тийб Маї 5ег баг 115 «32185 135 «211» 18 «2125 РА «213» Штучна послідовність «22» «923» послідовність СОВ2 антитіла «вав» 135
Туг Т16 Азп Ро Туг Азп бо1Ту п1у ТВг Гуз Туг Абзп біц губ РвВе 1 5 18 15
Му б1у «21а» 1336 «2115 17 «2122» РЕТ «2135 Штучна послідовність «220» «223» послідовність СОКО антитіла «авд0» 136
Туг ТІ Ап Рго Туг А5п Аїа біу ТБ Оу Тук А5п обід Гу5 вве вує 1 5 18 15 віу «2105 137 «2115 17 «212» РЕТ «213» Штучна послідовність «гихах «223» послідовність СОВ2 антитіла «аа» 137
Тук 112 Ап оРго Туб Депо бек біу Тк оїуб5 Туг дп бів Гу Рне (ув 1 5 16 15 сіу «2185 138 «2115 17 «2125 Рв «213» Штучна послідовність «а2а5 «223» послідовність СОК2 антитіла «аа» 138
Тут Пе Ази Рго Туг А5п бі б1у Те Гуз Тук Азп о біц руб РБе Гуз ї 5 18 15 сіу «ій» 139 «2115 ій «212» РКТ «2135 Штучна послідовність «228» «223» послідовність СКЗ антитіла «49805 135
Туг Тур біу бег 5ег Гец бег Гец А5р Туг 1 в 18 «21805 140 «-211»5 ій «21225 РЕТ «2135 Штучна послідовність «2295 «223» послідовність СОКЗ антитіла «90» 140
Туг Туг біу бег 5ег Бе бег 118 Ар Туг ії 5 1а
«2182 141 «2115 17 «21275 РАК «213» Штучна послідовність «2285 «223» послідавність СОК2 знтитіла «лова» 141
ЗІ1у Т1е Тук Рго Ап бій ту біу бек ТНг о Туг Азп біп А5ап Рве і уз 1 5 18 15
Ар «2іах 342 «2115 17 «2125 РЕКТ «213» Штучна послідовність «2285 «223» послідовність СОВ2 антитіла «аваа» 182
О1у 116 Туг Рго Азп АТа б1у б1у ес ТВе Туг Ап біп Ав Рпе Гуз 1 5 18 15
Авр «2185 143 «2115 17 «2122 РА «213» Штучна послідовність «22йх «223» послідовність СОВК2 антитіла «400» 143 біу Т1е Туг Рго А5о біб біу б01у 5ег ТигоТук Ази біп Азп РВе Гуз 1 5 18 15
А5р
«2105 144 «21ї1х 31 «2125 РВК «213» Штучна послідовність «8205 «223» послідовність СОКЗ зититіла «аа» 144 їес біу тує Ніз біу Рго Ні Гей А5р Ре дер Уаї 1 З 19 «2185 145 «2115 31 «2122 РЕТ «213» Штучна послідовність «2285 «293» послідовність СОВЗ3 антитіла «4895 145
ІТе біу Тук Ні біу Рго Ні Гец Ар РБе Ар Маї 1 З 10 «2105 і46 «21ї» 1371 «2127 РЕВТ «213» Штучна послідовність «228» «223» послідовність важкого ланцюга антитіла «ай» 146 зЗіп Ууаї біп еп Маї біп бЗег а41у Аїа біц Сей іу5 Гуз Ргро б1у 5ег 1 5 ій 15 ес Маі (уз Уаї бБег Су5 їуз АТа б5ег о біу Туєб Тиг о РПпе їу5 Азр о Туг 28 25 за
Тпгб Меї Ні Тер Маї Аг біп А1а Рго біжу 615 біу Гей бій Тер Меї 35 да 45 сіу сіу Т1е Туг Рго Ап Аза біу біу бег ТВг Туг А5п бій А5п РвВе 5 ва
Туз Ар Ага Уаї ТИє 116 Таг Аза Авр Му5 бБег Тие бек ТНт Аїа тус 65 7а 75 80
Мет бій їец баб бег Гец Агв бег бій Абр ТВг Аза Узі Туг Тує Суб 55 зо з5
Ата Агв Меї 01у Туг Ні5 Бу Рго Ні Гей Ар Ре А5р Маі Тго Оу те 1855 118 бБіп біу ТВе о Тпе Маї тб маї бег б5еє 115 128 «2185 147 «2115 121 «212» РА «213» Штучна послідовність «220» «223» послідовність важкого ланцюга антитіла «да» 147 біп Уаї б1п ге) Уаї б1й бек піу Ата бі Сеп їу5 Суб Рго о1у бек і 5 16 15 бег о Уаі Гуз Мві бек Су5 Гу5 Діа баг оату Тук тТАг Ре ув Ар Тує 20 25 зо
Те Межї Ні Тгр Уві Аг біп Аза Рго біу біп б1у ви біб Тер тів 35 4а 45 біу б1у Т1е Туг Рго А5п о А5п біу біу бег Те Тує А5п бів Аб5п РНе 5а 55 ГКІо; уз А5р Агв Уа1ї Твгоївей Таб АТа Ар огГуз бег о Таг бег ТВг А1їа Туг 7о 75 за
Меє бій їбеи бег баг Те дДгр бек бі Ар ТНг о А1іа ма1ї Туг Тує Су в5 за 95
А1а АгБ Меє біу Туг Ні5 01у Рго Ні5з іецп Ар Рпе Азр Уві Тер бу 188 185 118 с1іп біу Твг о Твб о Маї ТВгб Уаї Зег 5ег 115 128 «гій» 348 «2112 151 «212 РЕТ «213» Штучна послідовність «220» «2235 послідовність важкого ланцюга антитіла «аа» 358 о1п Уві біп о їец Уаії біп 5ег б1іу Аїа бій Те іїу5 їу5 Рго біу 5ег 1 5 186 15
Заг Уаі 1їу5 Маі 5ег Суб уз А1з 5ег біу Туг ТЕГ Рне губ Ар Туг 28 25 зо
Тие Межє Ні5 Тер Ммаї АєБб сіп АДіа Рго біу біл біу бец бі Тер І1іе зло 45 біу біу Ті Тук Рго Абп Ап о пі1у 01у бек ТигБ Туг Ап пб1а0 Дело еле за 55 ба
Гуз Азр АгвЕ Аза ТВеобец Те Маії Ар огГух бек Таб обевє Те Аїаз Тує 65 70 755 5а
Мек бій Гео 5ег обер Геи Дгя бес пій Ар ТВг о А1їа Маї Туг Туг Суз 98 з5
Аіз Аге Меї бі1у Туг Ні біу Рго Ніб5 Гей Азр Рле А5р Уаї Тер п1Уу 188 195 ї18 б1іп б01у Типгб Таб Уаї Тпг Уві бес 5ег 115 1208 «-2105 149 «2112 159 «2125 РЕтТ «213» Штучна послідовність «228» «223» послідовність важкого ланцюга антитіла
«4005 34595 соїп оМаї бів без мМаї бів беє біу Аіа бій Кей фбуб ух Рго сіу Аза 1 5 18 15 бек Уві їуз Уаї Зег Сух« їу5 Аїа бек біу Тут Те о ВВе Трг о 5ег Тук 28 25 за
Ууаї Меж ні Тер Маії Агр піп діа Рко біу біп Агро оГеч бій Тр Меє біу Тут 112 д5п о рго Туг А5п Азробіу ТВгоТГуз Туг Ази оІч уз Рве 58 55 6о іїув б1у Аг Маі Тве о ї1е Тпгб бек Азр о ТВг о5ев Аїа баб Тгб Азїа Туг 65 78 75 ва
Меї січ Сай бек бег Сей Агя бЗег біз А5р Тпг Аіа Уаї Туг Туг Суб 85 зе 95
Діз А5п о Туг Ту біу бБеє бек Ген бег Мет А5р Туг Тер зу б1п біу 198 105 та
ТВйг оГен Маї Те Уві бер бог 115 «216» 158 «2115 119 «2122 РЕТ «213» Штучна послідовність «229» «2235 послідовність важкого ланцюга антитіла «400» 1595 біп Ма1 віп іо Уаі біп о бес біу діва бій ієеч їу5 ух Рго б5іу АТа 1 5 18 15 5Зегк Уді Гуз Ма1 бег Су Гуз АТа бег о біу Туєб ТВг о РНе ТВге обег Туг аа 25 за
Уаї Меж Ні тгр Уаї Адги біп Аїа Рго біу бій Агв овен б1и Тер 112 за 45
ОоТу Тук Ті АБп о Рго Тук Абп Ар б1іу ТБг Оу Туб Аби бі фу Рба ва їу5 б1у АгЕ Аіа Тйг 1іе Тиг о бЗег дД5р ТАК о бег діа бек Твг діа Тук 65 7а 75 88
Меє 51 іео бег бек 1ец АгЕ бек 510 Азр о Тиг Аза Уві Тугє Тук Сух 85 зо 95 діа Ап оТуг Туг о1у бес о5ег іеуи бек Меї Авр Туг Тгр оіу біп біу 1650 105 116
Тиг о івен уаії Тр о Уаї бек 5еаг 115 «2105 151 «21ї» 319 «2122 РЕТ «213» Штучна послідовність «228» «223» послідовність важкого ланцюга антитіла «Зара» 151 біп Уаії бій це Уаї біп бег біу Аїа бі Ге о фу5 Су5 Рго біу А1а і 5 18 15 бен Маі Су5 Маї 5ег Су5 (у5 Аїа Зак пІТу Ту Так о Рпе ТпОг о 5ек Туск 28 25 зе
Маї Мет Ніє Тер омМаї Аг бій Аїа Рго біу бів Ася Гей бів Тер Ті за 48 45 с1у Туг Т16 Або Рго Туг Аза АбробБіу Тйгоіух Туг Азп бій Був Рне 5а 55 6о уз б1у Аг діа Тйгоїен Тнгобек о АброГСу5 бег АТїа бек Таб о АТа Туг 655 70 75 80
Мес ої ем бег 5ег о їви Акр о 5аг бій А5р о тТнг Аза Маї Туг Тук Су
85 90 5
АТа Ап Тук Туг біу бек бег Кеш бос Меж Ар Туг Тер бБіу бів с1у 128 1895 116
Тик Ге Уві Тийб Уаї бег бег 115 «-21а5 152 «211» 121 «2125 РЕТ «2135 Штучна послідовність «в2ах -2232 послідовність важкого ланцюга антитіла «22895 «2921» МУАКІАНТ «г?х 4113..(0) «2823» Може також являти собою Гем «ага» «291» МАВІАМТ «222» (883..148) «2235 Може також являти собою Т1єе «2» «221» УЧАКІАМТ «2225 (553..(55) «223» Може також являти собою біп, Аіа або бій «228» «2215 УАКІАМТ «229225 (Б8В),.(68) «223» Може також являти собою Аїа «228» «221 УАКТАНТ «2223 4703..(70) «223» Може також являти собою Гей «2205 «221» МАБІАМНТ «822» (72у..(178) «223» Може також являти собою чаї «ей» «2212 МАКІАМТ «222 (993..(99) «2235 Може також являти собою гей або Ії11є
«вад» 152 оїп Маї бів їез Маї біб бес біу Аіїа бій Маї фуб5 ух Рго біу 5ег 1 З 10 15 бек Уві їуз Уаї Зег Сух« їу5 Аїа бек біу Тут Те РБе ух Дер Тук 28 25 за
ТНе Має нів Тер Маії Агро обіп діа Рко біу біп 61у їеч бій Тр Меє за 45 сіу біу 112 Туг Рго Азп А5зп бІ1у біу 5ег ТР оТуг Ази біІп деп Рве 58 55 6о іїув Ар Аг Маі ТВе о Ї1е Тпг Аза Азр о Гуз Бек ТВг баб Тгб Аїа Туг 65 7а 75 за
Меї січ Сай бек бег Сей Агя бЗег біз А5р Тпг Аіа Уаї Туг Туг Суб 85 зе 5 діа Аке Мет біу Тук Нія бБіу Рго Нія іец А5р РБе Ар Уаї Тгр Біу 168 185 пла біп б1у Те ТВг оУа1ї Тк Уві бек баг 115 126
Claims (5)
1. Виділене гуманізоване антитіло, яке зв'язується з СЮО134 людини, що містить варіабельну область легкого ланцюга (МІ) з 5БЕО ІЮ МО: 98 і варіабельну область важкого ланцюга (МН) з ЗЕО ІЮО МО: 134.
2. Антитіло за п. 1, яке відрізняється тим, що зазначена МН містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 97.
3. Антитіло за п. 1, яке відрізняється тим, що ділянка НСОКЗ варіабельної області важкого ланцюга містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮО МО: 8, 139 або 140.
4. Антитіло за п. 1, яке відрізняється тим, що ділянка НСОК2 варіабельної області важкого ланцюга містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮО МО: 7, 135, 136, 137 або 138.
5. Антитіло за п. 1, яке відрізняється тим, що ділянка НСОКІ1 варіабельної області важкого ланцюга містить амінокислотну послідовність ХЕО ІЮО МО: 6.
6. Антитіло за п. 1, яке відрізняється тим, що: а) зазначена МІ. містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 62 або 63; і зазначена МН містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 64, 65, 66, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 149, 150 або 151, яка в деяких випадках містить 1, 2 або З амінокислотні заміни в лінійних положеннях амінокислотних залишків 11, 56 або 106 УН; або р) зазначені М. і МН містять амінокислотні послідовності, ї) ЗЕО ІЮО МО: 62 і 64, відповідно, і) 5ЕО ІЮ МО: 62 і 65, відповідно, ії) зЕО ІЮО МО: 62 і 66, відповідно, їм) зЕО ІЮ МО: 63 і 64, відповідно, м) ЗЕО ІЮ МО: 63 і 65, відповідно, або м) ЗЕО ІО МО: 63 і 66, відповідно.
7. Антитіло за п. 6, яке відрізняється тим, що зазначена Мі. містить 5ЕО ІЮ МО: 63, і зазначена МН містить ЗЕО ІЮО МО: 66.
8. Антитіло за п. 6, яке відрізняється тим, що зазначені 1, 2 або 3 амінокислотні заміни в лінійних положеннях амінокислотних залишків МН являють собою М11І, 0560, О56А, 0565, О56Е, М106ї. або М1061.
9. Антитіло за п. 1, яке відрізняється тим, що зазначене антитіло зв'язується з епітопом позаклітинного домену СЮО134 людини, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 35; 5ЕО ІЮ МО: 36 або 5ЕО ІЮО МО: 92.
10. Антитіло за будь-яким із пп. 1-9, яке відрізняється тим, що зазначене антитіло являє собою деїімунізоване антитіло.
11. Антитіло за будь-яким із пп. 1-10, яке відрізняється тим, що зазначене антитіло являє собою агоніст СО134.
12. Антитіло за п. 1, яке відрізняється тим, що зазначене антитіло являє собою антитіло ізотипу ІДС1, ІдСс2, ДОЗ або дося.
13. Антитіло за п. 1, яке відрізняється тим, що зазначене антитіло містить заміну в Ес-області.
14. Антитіло за п. 1, яке відрізняється тим, що зазначена заміна модулює зв'язування зазначеного антитіла з Ес-гамма рецептором (Есук) або з неонатальним Ес-рецептором (ЕсКп).
15. Антитіло за п. 1, яке відрізняється тим, що зазначена заміна включає заміну 5267Е/ 328БЕ, заміну Е2330/52370/Н2680/Р2710/АЗЗОВ, заміну М234А5237 А/Р2385/Н268АЛ/ЗОЗІ /А3305/Р 3315 або заміну М252Уу/52541/1256Е, де нумерація залишків наведена відповідно до ЄО Іпаех.
16. Виділена молекула нуклеїнової кислоти, що кодує МН і МІ. за будь-яким із пп. 1-15.
17. Вектор, що містить молекулу нуклеїнової кислоти за п. 16.
18. Клітина-хазяїн, що містить вектор за п. 17, для експресії антитіла за п. 1
19. Спосіб підсилення імунної відповіді в суб'єкта, який включає введення зазначеному суб'єкту, що має в цьому потребу, антитіла за будь-яким із пп. 1-15, протягом часу, достатнього для підсилення імунної відповіді.
20. Спосіб лікування раку в суб'єкта, який включає введення зазначеному суб'єкту, що потребує такого лікування, антитіла за будь-яким із пп. 1-15, протягом часу, достатнього для лікування зазначеного раку.
21. Спосіб за п. 20, який відрізняється тим, що зазначений рак являє собою рак передміхурової залози, рак товстої кишки, рак легенів, гематобластоз, меланому або рак сечового міхура.
22. Фармацевтична композиція, яка містить антитіло за будь-яким із пп. 1-15 і фармацевтично прийнятий носій.
23. Виділене агоністичне антитіло, яке зв'язується з СЮО134 людини, що містить варіабельну область легкого ланцюга (МІ), яка містить області, що визначають комплементарність, легкого ланцюга (СОМ) І СОК1, 1 СОК2 і 1 СО, і варіабельну область важкого ланцюга (МН), яка містить області, що визначають комплементарність, важкого ланцюга (НСОК) НСОКІ1, НОСОК і НОСОК, при цьому зазначене антитіло містить НСОКІ1, НОСОК ії НСОКЗ, що має послідовності: а) ЗЕО ІО МО: 6, 7, 139, відповідно, В) ЗЕОІЮО МО: 6, 7, 140, відповідно, с) ЗЕО ІЮ МО: 6, 135, 8, відповідно, 9) 5ЕО ІЮО МО: 6, 135, 139, відповідно, е) ЗЕО ІЮО МО: 6, 135, 140, відповідно, 9 5ЕО ІО МО: 6, 136, 8, відповідно, 9) ЗЕО ІЮО МО: 6, 136, 139, відповідно, Р") ЗЕО ІО МО: 6, 136, 140, відповідно, ї) ЗЕО ІЮ МО: 6, 137, 8, відповідно, І) ЗЕОІЮ МО: 6, 137, 139, відповідно, КЮ) ЗЕО ІО МО: 6, 137, 140, відповідно, І) ЗЕО ІЮО МО: 6, 138, 8, відповідно, т) ЗЕО ІО МО: 6, 138, 139, відповідно, або п) ЗЕО ІО МО: 6, 138, 140, відповідно, і при цьому о) зазначена І СОМ містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 9, р) зазначена І СОМ2 містить амінокислотну послідовність хЕО ІЮ МО: 10; і ад) зазначена І СОКЗ містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 11. донор і зе 0 МЕМ ФГА донор 1 8 хв -к 04 МЕРОМ ГА ше т що «де 10 мкгімл ФІ А щої? я чо дня не 0 МКТАМА ФА 8580 - - - ; 2 зо і и Оу я 0
Б. а ВЕ о ; ща | о за що " й 0 16 ; день день і день день З день день день? день З донор 2 донор 2 т 5 дото -8 40 5 в І ве : БО і НЕ М) а 80 ЕВ ефе т 25 КН Ше пий З зо в не 0 я ї фр со и мові дини х - деньО день! день день 3 день день! день день 3 Фігура 1 с ІсрЯ Т.клі ЄСтимульовані чо Із «ДІТИ Ни і . споливаючі клІтивВ ФГА/активовані СТ Т-клітини ї2. ! : 23 - Е ; : -е ! і ! в ! І : ВЕ ШЕ | Ек ШК З як - КІ ! я ЕЕ: и | : ше не о зо оо я оз зи Контроль Цеб1) Контроль Пес І) МЕ ї Ох ШЕ г Оохтсоє ча ! ; ; Ка 4 Ї шк ох ї ше Ки сш ен ще в ха, ат Кк | ше 5. МИ ШІ: ШЕ. | ш Я боями Я яд яд и СІ са Фігура 2 - 100.00 « ктпея АЕУРІЄ ше о т «ка кпов АСУ / чу Ли ! я во «вн клон 12НЯ і це З ст Б | і ще - В водо: - клон 205 у у; З о "в яке Я нор З ще зі щ Я / Її ГЕ ШИ | /д в, ї і ЩЕ - х - Я руно феннняй о ю | Ж л/ щ В ще лу Б «0 І і ги се З000 3 ЩЕ з Я 2000 им пов 1. Ди Кн пнніннннтнн 0007 Ой 07 ще 05 18 5 Мт 5 Що Пес мкг/мл Фігура 3 ь я ринкові що че вс основи З е с олово и г ставні опваюсо те ; -- З Дж ож ; ; ; З їх ж ; х с - Ї | Коже; і ве і «3 її те ск з т СокЯо ВІ ен: хі: ші Я ша: ! т з Ву м НИ : ж. є Б ОВ В У я шо и ж т ях ! ЗЕ :. Шк о ча с Догютько м ор т е. ее ов дж їх пок ок іккножик ско - ІНЬ : б з ще. ! ст м МН о и тем о яз Я Й М сь 4 Ж ОохА | ав нн ШИНКОЮ я й Ооха «у че Е Ше я ї «І же ї ня се що г же 1 ах; ож КЕ: о яю ве Ж чий БСК ШЕ с НИ нео и я рокі Б ОО Я Те ! 14 й ЧНННКООВ і А у я ее вк і са М оон ОЦІ юС («о -- ее уесю ди рен керу з 2 ток Ти я 2 чу Шан з У вх ст с: ИН 1: НИ 1 НЄ шани СОра сор Фігура 4 зене фон зт ПОПередня інкубація з клоном 12Н3 Клон АСЕ 35 або 1. 106, меня пелпередня інкубація з клоном 205 кон'ютований з ФЕ, самопо собі Що АСТЗ5 | ! 06) -- 4 о ї ї- нух КУ Ген ! и ! Не БО і и е- Ше | Ше ША ге Я і до 10 З : З ч ї Я В.
Бо з ! и ие те се МИ НН ПНТ Е Я СТІ Фе 1ло6- БЕ Донор 1 Донор 2 Фігура 5
Я - . . М щі ре сіні качттнакжтчу чт коокіткірікпівкоічнойкн ку ОО й очні сіннк К СВ інкжлетовмк я до ве 2 звану Брсь с | шо ві | і т ! ро : ! 5 Б
В . і шо ; 1 ! я т е Б г: Я де ще й г НК Я З - ШИ ш А. З ОНИ зожохаии 0 ГБ появ я ве ст» М з З Те ЕЕ Я о оо Контроль ПРО Ох. Контроць ПВС) б Мт 5 газ онатохао "і їв ооЕВ'юЮХаО З ж цУ З вену, хату как Ме ие, Ж ї Я ск Ї Ю Я. с, ; ее ек - ; т ах Я ше ше ВИДИ я 2 : ВО, Ін І я ля сш а МН би чо оз ях їз Фо зоб Контроль Пес ха, ха. Фігура 6 Донорі Донор 2 100 з о З09 щ ЗНО я нав ш в ех м во зе и м Во Ж сш М І ех шо 791 "ль ВО Во / ч 8 о х
80. 4 х о 5 ; А тю й нн ою б Фе Юі г с то Я Я Сея й ви /Звактінеюннвняни і - й і Ше ш 0 2 5 В в о 2 5 8 Час культивування (лні) Час культивування (дні) Фігура 7
0 ро о тоні т ! Т д 50 1 о р гоБв Ко о і я Кк Ге і Ж шк сш. ща і ай жених ке 200 ! ря В'як: 156 1 но сен ре ; щ | ; ; щ щі ш ва. ! пвтаоге лев ще 25 ЇОХ401. або МАТ проти ОХЯО, мкг/мл «Фігура 5 Е да мкума МАТ я 25 мкг/мл МАТ а в. Е Е З о Ж яву: ча 50 ! ! і що Зо 3 | Ще ! де 300 ; , й рені Ех зба 3 Е шо йю | пу ао то бо ще т г 5 зо, | ще В жо, Її о в г І щі 5 во І не дд середовище що! 12н3 2оє5 ДО о середовище юс 1293 в: В СТ середовище М | мкг/мл ОХ, Фігура 9
Донор 1 (пеб) Донор 2 (п-3) 8 воооо до вооюю В кл яна ; В, я 5 0 ! в 46000 | | ; - т- 40006 | ! Не | щ о, | ше шк нене Ж де їх 000 ВЕ шк т і же є шк | Ж особ і ЩЕ шо 20000 ЩЕ х 90001 Е - ! ще В ! ! шщ щ обо ЩЕ шк ЩЕ 5 люо000 1 середовище ЯМУ Я0ББ Охеб середовище 49Н3 05 ОХ: Фігура 10 Донор 3 (п-3) - тою. м ЕЗ . 5 во. щ . 5 5000 лиш Шо оо - Зоо ЩІ 5 ши ше ш- щЕ сереловище т2нЗ Ф9ЕЯ ОоХадЮ Фігура 10 (продовження)
- ф 1400 - є і, ш ющО . : В і Бе вч і і ще. 5 800 | щ їз ще кім я 409 з с | шк З зі шщ | щи середовище 123 2ОЕ5 Охаві.
Фігура 11 А Донор І (ред) Донор 2 (1-2) ВооО0о в лофод, В 70000 -к т ооо ! шк зажнк Е- вббов. зак ще Шо 7900. | ! кв чвово - й ВО0000 я | шк ж Я 0000 ш Ж БОбоої ЩЕ ; ШЕ що Збо00 5 30 000 3 : ке дО збо Ше ше ооо ЩЕ і 5 | ше ще 2 ! що їНЮЮ г ев ! Не: ! ! і ша т зпелов! охо.
Оохае Ка ї.
Х се: середовище ОКО рн середовище тн 600 00 В звсоб в зв оро п 16000 з шк ші мо. я щ- Б 0001. ще що ою кВ шо 8000. нн доЄ о ! : В ве ЩЕ й то ! ! щ «000 ш І щ во ше Я середовище Ж охю середовище ОХ ох Фігура 12 р ля З рр Доавор 1 (п-3) Донор (п-а) 90 80 а Й ї- 70 Ще ; Що г. й я 70 КЕ й ж у есиекнекичеєкснояякнечихнохжтвекаматмематнах є . о що і Ї І я, БО лока еухенжектявежоєтжевує, зкгжуакаховнтва й дово ! й во - й ОЗ : х 40 г . : ж 40 Я : ко яке ші | й | Еш За Е ! Е ! ! Е що д ді ! ! 10 -ю1 | | г ! ря 5 -й я савсбосой вс б і вн, з середовище 723 2ОК5 ОхЯОЇ, середовище НІ 255 Ооха.
Фігура ІЗ Без ЛАЗ ЗЛ Я Й на - ї р й Я ОохХао ще о у х 4 дао ох б ев | ої с-м: -- її ен: | - АНА: -- з 5, ТЯ 5 ее САЖА КЖаЯЙ с ж КК Вт й доввоввнї щі 3 с. е УЖ ОСТ ення Ї зо «Те яке ЗЕ сестченнї о Не о Ше М а о о сСсой сом «с Й гоже КЗ Кос -З Й й І по КЕ : НАШ м е Я ОБ Як Шо ШИ МОЄ | З їжу 85: Ге є вав у Как пі.
Ве ха КО ех ЕВ | - А о а ж КЕ з КУ : - я З УКВ Бу бод Ше ме пн и З Сов сов Фігура 14
Донор 1 (пе3) Донор 2 (пе) -х ни в - обі Со Я в 08 о, т К о. ще - т о . до т щі що ов ш В аз ! шо 96 | в 02 | ! ВІЙ ж во 5 ї т ог І ДО с о вередовише ЛІЯ лаву Ох З середовище лівсоЯї лоОБУ ОХ, Фігура 15 Донор З (п-2) Донор 4 (п-3) Р вд ! роя Ше .
о. - | Фо " к- 04 і й - їв | ! ща п Оз ї- 03 ої щей ! г і ні ! | с ові ! щоб Е шо ов і шоб щ я | шк Ф і т У Е . і с й Е не | ;. і ш о і Е ; шо о СОМ. ше Не З середовище лівбя ло0Б5 охо. що середовище лівої я20Б5 ОхЯО Фігура 15 (продовження) Лонор 5 (п-3 щ- Донор З (3) зв, Ба ї ба - Е що шк В 061 і Е ! І 04 шк щ 5 а2і ще ще Бо МВ ЩЕ Не со, нення Не В ! оіннноно як середовище ліво лов Ох. Фігура І5 (продовження)
Данор 1 (ве) Донор 2 (а-і пух шин д в в з о . ; с ав яр ве -в- ЛОбЕХ Ї ОО сяк лловх - зм у і Е -ї я : - ОХ, щі довело охн, . ав є яд - ФВ) ї ІЗ жо о. л за - дж Щи ща | ші щш з й і й
- 0.3 з 4 , 7 пз Кая і на | І на і ше щ і щ й с | ІЙ о їй й Ф 9, зв нич я ДИ шя В и 5 т б ооо ой ов 0 бом онов 05 0025 ТОХАОЇ. або язоєв|. мими ОХ або лайк), мери Фігура 16 Донорі (пе) - Зб митами я?ОБ5 г5мжгмл о пОБУ дежмжкгми Лобо ЗХ мкгіма лорі В ов, 08 од ог - ов 05 | ше 05 . 05 т оз Я оз . . 63 і я ї | що і що бе | ше б 2 в. мо . а | ві. я Др донна т сюоуоолінндой ня В Бобннйнскй нав ЯН 4 : в до середовище ЛООЕХ середовище ЛООЕЗ середовище ЛУОБУ середовище /лЛ20Б5 "Донор 2 (пе) ЧО 0 лямкомт лов 35 мкгіма п20К5 За мкпйс ЯЛОВУ 000 об мкрми яб3 щоб 951 8 ов Ба ові ов | 0,8 Я мо ШИН 04 пео же ба а ' 03 ХВ шк 93 оз 63 Баш аз оз ва м | о с шо в ві ше ше ШОН - ня т ссредовище ЛООЕ5 середовніще ЛОБ сереловище. Л20Б5 середовище лок ГІ Серелавних ш ЗмимаОхаоі Що миє» ОХ. Фігура 17
День 1 (-ІЛ-2) День І (ІЛ-2) - 00 ооо т оо | ово Ш ш 07о : ; а. сх й 0.50 щ Я о х 040 гед: ее 5 о шо в 5 020 ше ва 5 оо ще во що дю чо Орос що середовище ЛК ОХЯОЇ, середовище л20Е5 ОХ, День 2 (-ІЛ-2) День 2 (НІЛ-А2) - бВО | Фев . - Во і і ово шк що ото : то ЩЕ З дво | о т - в 05о : вв Що т до ! | 040 | я щ 030 оо щк 5 020 020 : З 5 ТО зл нк ще Ж е боп Й з до я сад . Й, нанінння середовище л2055 ОХ. середовище ЛеОЕЗ ОХ, Фігура І8 С00010оредук умови 01 нарівання 00 ба 17- | - они сив нин п нн под по овавко пи по піні кн пива АВ я : х нини пн нн нн І: Я МОЯ і йо й а рлс0134 Б Д кла ся с : : ' лові о0овіЗзов Ммкг/доріжка 1952: а Б с а Фігура 19 міг 1 мі2Ні Мм20г5 кДа що
5б. з» плям як ; бак: ВОДНЕ а всва а бБсиа а в са Фігура 19 (продовження) Конструкції рРЛСОІЗЯ спр: СО» СКЗ СсКО3е стра: ус СКра» їакі-й саке іа лова ял іак ЗОЙЯХ? аж иг ен ж ЩА Кк ОВ в Ше НЕ щ пу я То в ши и НН и в. ше: нене х АВ (М - ЛАЗ. под х своя Ше Ше з НН своя і5 ІВ) чав. Мн: и | Я) (4 -е ( шарнір ) арнір ) вані) І зерні) | шарнір пан) й птн 7 ши т я І Мемиавнна осн пені "ке я "7 Зрідно Баїхверає Бик Іпизивої 1094 я Згідно Семіраяаткеї ві. Зігаепюа 906 Фігура 20
Конструкції" ЛСБІЗ4 Хибна СК СкО2 ЗАГ Ів ВІ мівсіі ІН З ТЕ 1 - й ! 1 ! яті з ке дя "и чої во ді 1 сера ит Ї їз и чо ча ло зо мнгат ния БА вк НЕ - В ча В ві мівбі 206535 5 ій 851 щі 1 пе ЕЗ собів еконанакоютя ої фай си, неї «кам збо они ни ен ие ни зоб о чо о ци Експресія СО134 пеню ютннекнсанноьі насильно фр: зззхже ОН чною КВлОон ІО2НЗ або «ОБ ЇСТЬ миші Фігура 21 Конструкції ло134 СКЗ СГ СІМ кі ІБК Бе мівбт 123 5 АНУ А Б | Д че за и чн зони зр ние 1 ЖЕ І Бе Ток Е зе Е Ге ! мівбі20Е5 5 І жк ШЕ я Ф 1 ве ля щ ка і с-овбвноввйні вн й їж й й і заданьниєя Хі мило ачаяо о зебзоче юю й юв ну яжквожх Фон я ЖКном 2Ні або 2065 1831 миші Чигура 21 (продовження)
Конструкції ЛЄБІЗЯ Хибна ско ско
2. Ку ,; ; я и В Ей щК В ; В і викни ов. - Кк х Е ух Е й Я лірб4 123 ї Е щ-к 15 ще ков НІ бо 2ОБх Ве Мона! є Іва ни и Ююн 12Н3 бо 2065 че вада" яд не лю химерного ро людини ЕХ 5 В. ЕК 8 | В ліві 20Е5 | І У 1 ше АН а шко у хо снення Чезаре пробне зе чат ре. - сликкіооююєтт Фу й ; вх с Е Ж ях 5 Ь Я м ї лівб42055 5 | В і Ку ех Се ; я пе сх у чай І ж | дні, Ва гема вени за зони 0 лоба ну ни Експресія СІ134 покине тон стека Фігура 22 Конструкції лСБІЗ34 СОКУ Сскра уеспра ВІ ЕІ ІВ щи ц 4 Уа : н Ко. 15 що ) в'я ов лірб412Н3 В 18 у ІВ й 5 як ДА машин ЖКлон 1213 або 20К5 а «3 сек, . с: їн - Б Кі двсвог і і й: повели химерного її ВюлиНи бай бно збо це Її |. а лівСб120Б5 8 | ІВ в Го) : ЗЕ: | й Кі Я: й ВІ і А Як - бика В ех яю сей й с Бар вет збо оиаовяай оба и ния бе и ни я ГА лівб4 2085 В ШЕ я. З у ве ой т їх Їй ший Ав в НИЗ збо о об яо желе и чо ние" Експресія СІ)134. ннооносоеютоснтюстооєюкюстнекюввсссовсоноосоо ооо тосеопотнинотововсетекиесесосвенскеюовотесос у ЧФигура 22 (продовження)
А . Контрольний пептид Пептил о лоерІЗа Фооля рок контрольний мів шо Яд роб контрольний міо! і оз роко антитіло міні прожи лСрІЗЯ - та р ае антнтіло мі2НУ Її. б -к Й | ти лі Я їз 12 5 8 проти лС134 / в ОВ 1 5 бв ж 8 т ов й ОЯ4 во вм й В дя Бо, і шк в и В Ши пе п вно й ак и З що й Й ук и, : ; бив Зав баб бме 05 8 0059 са бле бЗиао бе бе 5 5 0050 МІСТ, мкглми Їмівсті. мкг/мл Фігура 23 в и ма Я мк я и р Контрольний чептид. Пептид о лобІЗа4. Ж ш- е о: Е 20, ж т яв реє контрольний мІікОЯ г БВ Я ие. контрольний міро4 гм 18 58 ефе антитіло ЛІННЯ проти яС 134 КО Б БЕ фе антихіло лі? Ні с. й о, Те 5 не-Е проти СВІ / А 12 - і 5 о в 10 і Гай Кс сід й що б 5 о. і ява. - 04 іх о 0 ; в 0 Ще, : й : де а ; ЩЕ бос й то 00. фреон нори ЕЕ бю І дру зн уні» би бе бно Бад" па 5 5 т Якби баб бе 0.5 5 Во іміест). мкг/мл мес), мкг/мл Фиугура 23 (продовження)
Фігура 24 вІдижеУВ еепіддезвезтхрудвийнаскатуву тут кину врувовскукзікУкахі зок ховтаутокмох ев аи ну усю утік коки шЛОЕХ вх печу їафанеккріавеУкевк косу крук рококо кує кіс ік вас аапкутаїях косо ус юкусезуаауКУ и хх дону ке уз хоецаококрідооков ким сумка ве тику упокткото ків зпувазскоеі вк куявоєвуУ ау мам уві я я хто сепісдезасуУвкркиУскта ких родтів цу ува с кут ккодахакокВо я севльвігечагатуусзпу в івуйрютикУєния мо Ешеун єкхаїцаациекУкракосюввскко взути акрів тут Ук Ве іїкепкоактлувейзкітювйевоууєалстучт хіт ттуча пОЖа ве омани о з ин п п а п и он зп м о де З Ек с НО м З и чо МАХ лзовя ва З зн З З З ПАНИ А зи ЗО ВИД ЗЕ ЗА З и р З нн ен в КН ве на ть ин ДЕ и М а з А п А А я п а з п А А в пу З я тазом верст пуізавіирєтіхво випа єсм су ровехічуукнті крихкі сиха кс иувігтапир су свиту Ківш жайКВолЕ двору ізазудцІусІкстиЗа і оуїмкуєскрскаркігімутатійпмурактепк учас ва ума успо в тіре ничих полюк пісттчерувіксвУіу п ства воутючиахрохаекіїхутсзх ватра тка каувіги корка су айву ткквике млоБЕУи підводити іній жст тт су сну крику: сл оуорае науку овець аку тт ох: КИ Кх ав нин м на м ж п п ох С п в А он ЗО З С ча и птн їх п и м м м п а я Кр и о п п Є З С КН о З и Й оОКЕ 13 «ЕД ЕХ пок їх моаКкО 53 ЛШ вх е ЗБК Я лОВИши Мх ВБИВ мІтвЗун пУФфіахурнічкровюткувсокіхцук КиусюниткЧя Вуха вус Ууп якос смаках сву мекв аУ у ВЕ Му І кох УКВ,
З.ТІБХ вх ЯУціоцеааехккриввехснокзанп Ейр тковру яко уві тлом копи ВЕ ке зоуус юс увовп ие курми ЗиУ ку птціссзуаеукирунискУусвазуут ка лиман уривки уУсіаіглкосанусокковІ Втома Ух Згікнх ові. улицичанукюмуве вину Киу ет ров ра хода урп подув каси кві ява койве ку ус Вау н в гади лов міхазчв КУЗісчахорчзУкріавУвинев ок МеВ пи мокалікикза соусі гетівауууєтеси мік жаги е лада пі кмин ан и С с В З а ок ин пи а м и п и о яавя вх етан и як І в и в зе В А Аа о в а а КАХ з за о и пр Я хі2н3 3 Ева СУМ з М в и с: Пр о а ар з с КЗ ОН А п о соня заз: бзчУюрчянківокаі фіто схнцапаавтя супу ад жеанетя пухку кзпецатісаиксчахак увів іки лі га її плекав) кодікуУт скит да ув рКоМх і уж вх итрк г Кзазеоцеаїкхкіаіпрейлатиустаузкуруктадвіучених аз їе фе азризіваокой ківі ува у и ракарк Хі утаоквод уки ІсзваіЧоникаіУусчту ЛУ ит ВикЕ МІйИЗХХ. пзтюкоаниглятязаактя уко пуп ЧкреВк а юхот с ура к усю сі збуцвю утоо пв п КооккзнЯ КЕ загна ді екс ких ж ми ВН А п но А ку РЕ ЗАКО чия са З о о Я ЛЕВІ КЕ вими ее и М КА а з пом мн о п А АВ в З айКя де Вшд бі яЗЖВЗ їй т БЕФ ФК ЛУЗІ пі т ЗКО 55 , о уДЕЗ ЗК ож БЕО ТО Фігура 25 лТвх ж ж Вко Оі
Варабельна область важкого ланцюга гуманізованого антитіла 2025 (5БО ІБ МО: 97) очи ОБОАЕ УККРС АВУКУ ЧЗОКАБ СУТЕР БУУМН ЯУНВОвВ БСОДЬ ЖУХІсЯ ІВРУМ ОСТЕХ БЕКЕК СВХоТХа ТОрУ;В АЕТАУ МКБШВ В5ЕО ТАТУ САМтХ сив МОЖ ОбТЬУу ТУ де Хіт або М, Хо: А або У, Хі М абоїї Хо К або Варізбєльна область легкого ланцюга гуманізованого антитіла 20Е5 (520 1 МО: 98) РІПМТ ОВка БАБУ ЗПЕМХ ІТСВА ЩОПІЯ МУБМЖ ХООКе ЗКАЖУКЮ ВМЬІХЙ такой щоб каз зеетТО УТ ЗЯБОВ ЕОТАТ тхзСОо сВтТОВ МТКсО тТкУВ ІЕЕ де Хе М або Рі Хе або Фігура 26 Варіабельна область важкого ланцюга гуманізованого антитіла І2НЗ (ЗО 1О МО; 99) оУсІм 5ОоДЕ УККРО БЗУКУ ВСКАЖ СУТЕК ОУЖМН МУРОМ ВООС БНХУОЄ ТІЖВММ пояТУ МОМЕК ОАХетх» ТКооОКа ТетТАУ МБ 1В85ЕО ТАУЖУ ПАБМИ НЕРВ БОКУ ЯСОСТ ТУКУХ З; де Х»- І ябо М, Хв А або У, Хо |, або ! АюзУу вбо А Варіабельна область легкого ланцюга гуманізованого антитіла 12НЗ(5ЕО НО МО: 100) Піст обра ілАВУ СОКУТ ІТСКА БООМО АЛУДИ СЮЖЕ БКАРКЕ ОББІЖМ АБТВН О ТОУККІХ вЕБОК БОТО ЕТОТІ БЗЦОВ БОРАТ ТУСОО ЖІМУР ГТЕОС ОТЕУЕ ІКВ де Хи-Юабові Хр б або 5 Фігура 27
- А т В КЗ т В же химерне 205 Сай ко химерне 2065 М як гуманізеване 2025 УТ2УНІ дя св -йе гуманізоване 2025 УТІУНІ Ж як «ве гуманізонане 2305 УТ 2У НІ МО чаеогуманізоване 2065 ТЛ УНІЇ: СС ке оче гуманізоване 20Б5 МІОМНЯ Су в чан туманізоване 2055 УГА МНЯ а ї во «ун : уманізоване ЛЬ МАМАЯ. палайе що в К.зпічнії 1 рун, з що КАР щи 5 єв /й вв во й до. я - Ка в Й и сі а я й й Ж то ді їся Бе с увнесу вав Й Ж дюоднифрт в о жов і . Ф он в и а в Фо Зб сі хв сова яви в я Я Ов ри Те ся А аа яка и їх обо со с є ся сот зо ю мо С - оку о Пес, мкг/мл о Небі, мкома Фігура 28 я А к З як химерне 2913 т ке химерне 203 5 ча: гуманізоване ОН МІГ УНІ 5 «ек гуманізоване 203 БОМ їй там Ж туманізаване ЗОН МСТУНОУ на св яв гуманізонане ОН МОМ 2079 іде гуманізоване 03 МЛ УНІ Фан гуманізоване 20Н3 МІОМІ щш і г х з . х ре я - ЧЕ ода я огидно, ою ін доОо у а ї- : й з у. З з КК до яв ; о Ка Бе ? т і З в 5 | Її що : Ва й ж що Н М, Е В ЕЕ : р -Ф й - зр, : й ш таз зн дО. розетки руни о фронтон ун росі : рвана ак тн щі іони де со т ще Фо к . « и зуба це смс а ня я ч й ско я фах « ака «в вові З зи Фо и Же шщ З У а я аз й ; о о Пес, мкг/ма Пост), мкглмя Фігура 29 за сів
Ж. і т - «ко 5 мок і Я то ! нище КГ: ЕбСха з ЗО нг мл.
0.5 ж З па ! БК мини з кн Пес). мкс/ми Фігура 30 А В мої , моз Я «В. а сьо А Бе ба я ши ве 3 же и ТУ. 1 г М век квт ВК Ше : ї З мі ше: т дь: | й Н У че ноз о дооя. Я Се У ь ч шо : ха Я ов - В 6 їж і» Ж зве батьківське 12143: миті ; я зойк батьківське 125 миші 7 ; ї ОО здухимерне НІ ; Я 1 яерохимерне ТЗНЯ і ; зфетуманізоване ІІНЗ ЛІНІ Ж В ТОЙ туманізоване І2НУ МІУ ше Іон зе гуманооваце НІ УВІУНІ ро дл «в гуманізоване НО МСЗУТО Щі» їх жд гуманізоване Т2НЯ МЛМ НЯ 5 Й ен й «фе гуманізоване ЗНУ УНІ а ги в в о о й Я З ни я м дйни 4. Я ЗА в (5 то АК а Є ОНА х б ав ДК (й и и ий М и и и и м Цебі. мколчя Пес), мкгамл Фігура 31 к з ШЕ! С ох і б Бо ї га З х ій л | да М х З ; 7 "ж Й й М : я: Е ї реч 19 40402105 309406 4024031: зекріікчсх бо жіннни Клов 12НЗ АТ миші проти СБІЗ4(20О мкг/мл) Фігура 32 А В -ї ш ее батьківське 2005 миші ее те батьківське 205 мин ш ж й Фо ЗА химерне Л0КО що Лек химерне 20ОБ5 х Ве гуманізовяне 20 УБТУНИ й В й гумацізовано 2025 КІМН тро 0 ЩО бе зуманіюване ОБО УБІУНО ОВ, ХО ОО яйетуманізоване 2ОБ5 УТОУНО ДР т М зе туманізованє ЗОБУ БУМ З | ся се зі гуманізвване ЗОБУ МСІМНІ й що й.
З о до й шк до зв щи 2 ча ОБ | у: в Ж і я же Ко Й й Що ду "З Еш й іх -ОЗ Е) 8 5 й Зх о 5 йй ші Ів шо ти В й і ше СЕ вт Я С ода й їй В кое : "я св й ЕЕ 0 х ники Я 2 Ф «а я кни ж ми: мн не ни І Пі, мет/мл Пебі, мкгУМмл Фігура 33
А в «фебитьківське Т2НУ миші ро здехимерне І2НЗ "койтьківське 123 миші ге ТВ ожверуманізвване ЗНА МЕГУКИ ж пе жихимерне 12НІ Ех «вегуманізоваче НУ УБІ УНІ ОО евкгумавізаване ЗНЗ ОО МН т зу йетуманізоване І2НІ КЛІЖНУ ї Я Й «етуманізоване ІЗНЯ МОУ НО -к Е що. а і В ММ однгуманізоване 1283 УГ ЗУ НІ Кох р г те й вк Яд. х ро Кк ІК. ку ще 7 Я Вк - В /. ж по де ке газ і с У» щ 5 1 й : - Фе г ль б во жо 1 ї вд о. . а РІ Кі : 2 В Я. х ги Ех ре З : го Із ; І. а бо о зд : я У Ї Сук У ж шо о Я же ї ще 5 г "й ша Ме и а я -й й дя Е д я сни р й Дресьай а ще З рання й - ще ок ЗЕ У о щ- и Щі 5 ня «е ще й і. Песі. мкг/мл Пес, мкг/мл ля З Фігура 34 А В ча батьківське СН мніні «батьківське ТЕНУ лиш зве кимерне ІН зак химерне І2НУ По зва п бтуманізоване ЗНУ МІ МН - Ок зеіуманізоване ЗНЗ УБІ УНІ ШО 0бетуманізоване НА УВІ УНІ ЩО звевуминізаване ЗНЗ УТО УНо Фо осдя бтуманізоване 2НУ М МНЗ сиве ш «е«туманізоване ГІНА Ура ун я Ж що ка ЧАЙ гАНЯ р Чех яр НИ х до-х А че іа шко Кт Н и Б 5 скдеж з й ЧК - за Н Й й - м ща їй я а - че їт- я ях 5:
іа. ш ДИ в п Той ІІ Ії ОБ вв, А, т в о. С ж ж у Я Н жо щоб. М од ЯНА. 4 тов Й. мо ЛЕ я ї Ф Й Я з, В 45 Я В я ГИ г, ох Зо ж - 5 ; 55 що 26 й, Б що ра ее т й - і ми щ шу Одне й - А ! с ; З її ух че ; їй ши З ж ши нн о и. Пес, мкг/мл Пес. мкг/мл Фігура 35
Конструкції ясСі3а Хибна ВО сна НЕ їх Й - їх С . ту В пан дит г нин 5 я ЗОЕЯ миші є кі | вк и Мини Бі Не: і В ; Ії в щі є ! бі то С С с В СЕ ОН КІ ; ; с. 1293 миші 5 | я і ; ! і в в її, : В в р. в, І ; хе спогонідрееснні. 5 Зіни, еко днк о ння що Зщбов ах кій Є ж оо чо якою щи п В НО - : х х Б В В ши К суку В : З І В і химерне ЗНЗ 1 В і й З ев щи; «З свуннее «з Мнтя ! з шо ож А ок еко ов што во жук ой Й оайк жу ми окя пиття КСПресія СІ 34. пенеенеюннююскомотек носа сини пюжнокномнаненся минав ння Вод ї Е пчеккчнх ФОН і яке АЛ проти СІ Фігура 36 Конструкції СТІ З Хибна сщи СВО не ех Ук зі мя одер «джеюдкнєк 18; дероєвоьювкюєчкннкюкакжінкніня, БО меминклктенвмтавннсян руннкянх Гуманізоване ЛНУ Щ шк: Е | Е | | Е МУ я 1 ві ШУ і! їв ІСее З ро 1 ! ет Ж Н ЕМ Ж чо дк Ше «З Й т «й Ше КОЖНЕ: ти 5 ко ок Яке сн -- 2 й е х в й йе- пеклі конів Й - е , у Гуманізовавне 12Н3 : Е Кк З ! з Е | В ї умУ Е СВК Е г Ж ж є Я з і Уже Ж Гея дей І; ще | т, Я : Бачиш ; свой з» Зеклврини «а фон : фкобретюе песволшн Мо «й шої є ще ве ми й г нх о не п «З ко Ех ко ях й ях - 7 І вЯ зі В і В і 5. Гумавізоване 12Н3 я, | В їх і ві : г г; ІН щі і і і : З а о ми Бон ЩО тб жо ой У о ам оножи ШО ЖИ ОК кб окй ; тіженйкя Фон т ; : - . ; і ляшкши АТ проти СОЮЗ Фігура 36 (продовження!
Конструкції ЛСЮВ За Б: Й длеедттти я - : ж етнаттіниктснк ВЕ. рсннкнкчньн й Кая Ж З р пн! Сх М в: ХЕ г Гуманізоване ЗНЯВ 1 ШИ: Е ! в І: | Я ; УГІМНІ й В 1 ши ГЕ ! 51 ! ше ПЕ; шо: С ше шк ще Еш Е «ння Зеніт, кс сні «о нн редак І М о и в М Не ОН ОВО х ренні покоях ЗВ доднкенсявттняня В джинс ттокттнттнну шо м і й і ві 8 НЕ І Гуманізоване 123 В ї і і: і й | Е - І ! ЛИН м Ол су ГО Ї
УСЕ. ее й о. К . | СК зе, з ян зн «о фено Й одрокататння сова Я ОЕМ я ви сни ниж М щоки т оре хх хе т їх ке по Їх ге гу - х тя КУ д ри ЕЕ нини Я шини рт Е - 5 Я ї ї Н ві ще | и ще Туманізонане 13 В, 1 в. В. Е і | і; і І нище Гья У ЗЕ. Е і; хя2УнІ бік кі Еш ши ще р Кто о ождй зуй ся Ной ож ж ку Ж ожЕ о МО ко зегзкуєю ФОН: яз Тура , й й с вемше ДО проти СТ Фігура 36 (продовження) Конструкції лСГІЗЯ Хийна сврі снЗ3 СОЯ 2: 5 й й В піді реж нд с кі о репост нініногітттечекаює, 2ОБУ миті в ік Еощш І: Е. я Ге г що і жк 5 Е й щ Її є а. щ Й ї се - ; : ск Увврваа оон суб че сонне | «ха шен ЖЕ ооня що ОК же ВИ зок КК МЕ оз чає яко оо п Й з м З ; нки 5 оопеойінквот 8. ; В» о 8 я : химерне 20Б5 51 я Її с В я ві ОО Е Зх ще. ши ще в З іще: З ах ра ! ож я Ж они оче ке Сое с: ЗМ оч жо Ще оз ху . щі є В Кк о Е , жУМВанізонане 205 І: | 5 5 СЕ ЧчЛУНІ Еш Ж 51 ! г ві: ШЕ: в. теки етилен ше Еш с ни йо не ВУ жи ше: ШЕ НК і зніжкчнч Фон Експресія С за поемою осот совно ооо но кон номютвносооо онов фр.
І. наши АТ проти СТІ І й Фігура 37 ха я Ку ко її 2 ше щ зх 3 ї - щи ек з Ж НИ ш здо "ше Що Ж !
о. й Ж М ря зви КК Ще; й : шо ОО ЕЄСха 2 700 нгімп ! - к .
щ В. ЖЕ І З Ка м Е 3 с Яни кг ню я щ . В «В зі : Е сві де са ух у «0 і, Ж я о ей он аа суму с «У ще: р сей Гу ща й 7 Пес, мктУмМя ск ж Фігура 35 - А В с 2 і в щи В зад г: пе Н Я й ХНИ : боти : сс Й , Жолео звой НИ» К , ве 5ю вд саке Ве хе той Докссейнта фін ВО ще 1 К 5 мой й: вок Бач В 7 Б " чу, ГБ) я зап У : і. х й а до Ж ще шо о Ж щовов х. же Вб : - Ж що 000007 батьківське 2093 миши ь жд ж Кк «фе обатьківське 12 мини - 5 СКООЯОБО бе химерне 20Н3 Ле з КЕ тоб 0 я химерне 1283 : 2» дор ік туманізоване ЛОНЗ УСНІ у з МО дддое туманізоване ТЗЕЯ УБІУНІ х що че туманізоване 203 Біо - Е й «ре зуманізоване ІЗ УЗ Я І 8 7 «й туманізоване оБНІ УЇДМНЗ В є: що «бе туманізоване 1213 УТІМ НІ я є і ти й х ков а: На НЯ Кк и ми Пес), мкг/ми Песі, мкт/ма Фігура 39
РОХРІ воовя но ве З « ; й що ще о ше « ї » жр«005 у порівнянні З ізотинпом ; ; ге : че ШЕ: пу лен 8 » Я як кре, 01 у порівнянні з ізотипом р.
Я . З в ото т й ь х
5. - щ т- щ 2. 5 ее ОВ я я я 8 ОВО г - ж а Я Я - й Ж д ж Ж В Е -- я з хе кі іа --і її ст - ж а со сту ма - рев -- хе їмай ік - ни ря - т- т- ГУ Ф- х Ж щ-Ф - си - Ж ЧЕ х х - со
- . Я о Фігура 40 щ й ВН її ! Бо лвоа- "ціа шо ва- ! ОК Е Ши у НО я місіеї Севеасе: Зразки:співнідцошення ітд Тейі Не Коцнтраоль ізотину ліво (приєлнаний до планети - ДНУ МУСЕ УНІ ІЕС (приєднаний до планета) Фігура 41 п я Ба з . й вх ше а пі і ізуенй 5 : же 5 І в вів ж поь ч В -оокожк щі 5 ше ( вої : ле ств Се ЩА: Ве Ос а оон Є До-о: к в ш щі що їй ш що ЕВ ЕТ та Нв : вав й шо ЕЕ ЕЕ 1 сто пої я ве: ни: ек шин тт ще ли ли р ек о г Фігура А2А Ол 4 ж ще Ед І В лов. ЕЇ а у | ті «В Е д. ї . ж - Е іно ее А Й я ще 1 г Фо ї - 5 Я 4 іа я ЩІ ще Мамі "і Ж до ОО с, В поь сх ПИ В ко ВИС, Я в: щі чена а Га. тіні 9 - к в ОщОЖО В ш що в 5 вок ква ни щН я БЕ БЕ ст се ге с св що м ко со т- ні я рені - І со Б в 8 я зе Фігура 428 гоже чні 4 ОМОБУОВСАКеККососУКуУ СКАТ ЕТ ОУМНИУ в АР ОО ЕНМОУ КУ КОСТЕУ я ОУСічовсвЕМКо САУ КАСУ ТЕТ УМНИСВОВРООВЬКЕ ХЕ МРУВИОТЕХ гсБ5 Уця 86 МОБ УЦВОСАЕЧККВОВсУКУЮСЕАВСУТКТВУУМНИУКОВЕ ВК КРУНЮТКХ 2О0ж5 УНІ бЯБе НЯ.
ОМ ЧОВОАЕТККРСвеУМуЕсКАВОХТКТВУУМНИУ ВО ДРОВ КИМОХІКРУВИОТКХ гок5 УНо паб Та ПУЛОВЕР КИВОАЕУКУВСКАВО ТЕТУ уМНИУКОВОЦОВЬЕНІСЯ НВО КУ ?0Е5 УЗ Пес З ОУОГМИВОВЕУККРОДЕУКУЄСКАВСТТКУБВУУМНИУВОАСОВСЕК ОХ ІВРУВОСТКУ 2ок5 і роб 04 ОТО ОСВСАБУККРСВвВУКУВСКАВСУТЕТВУУМНИУВОАРО ВСЕ МОХІНРУМАЮТКУ 20Е5 ун; ВабА 305 ОХОЛОВ САКУККРОАБУКУВСКАВСУТРТВУЧМННУВОАРООВЬЕНІСУІМРУКАСТКУ 20ОЖ5 УВУ ОУБА ПЕ ОУОБТЧОвСВЕУККРОАВОМУВСКАВСУТТВЕУМНИВОВРООВЕНІ ХІМ РУМаЄТКУ тож УНІ пебЕ 107 ОУСІЧОВСВКУККРОДЕОНУЗСКАВОСТТК ТУ УМНИУВОВЕСОВІЕНМОХІНРвУМЕОТКУ ОБО Уно пбев тов ОХОТМОВОВЕУККРОАБУКУЗСКАВОХТЕТВТУМНИУВОВРООВОЕНІСХІНЕУМяСТКХ зок УЗ рубе 109 ПУСТЛОВСАКУККРОАЕСКИВСКАБСУТЕ ТВ УЛ ЮТВОВРОСВОКИТОУТНВУКяСТКУ док тні рабЕ 115 СУСгтОББАКУКЕРОАБУКУВСКАВОУТІВЕУМНИУАОдРОопВІКУМоуЇВеУМЕСТКУ ОБО ня вОБЕ ОТОБтОВОоаКУКЕРОАВУКУЧСКАСОІТЕУТВУУМНИУВОАРОСВІЕНІОУЇНЕВЕСТАХ ож УКЯ ОЗЕК 15 ОУТОГУОБОАКУККРОАЕУКУВСКАВСУТКТВЕУУМНИУВОАрОВОЕМНІсУІНеХМЕсТКу 2бЕ5 УНІ МІШВЕ 113 СУМІ ОТОббАЕУККРсавуУКУЗСКАЗОСУТЕТЗУЧМНИСВОАРОВІвКМОХІненратку 205 чні мів 134 ОУСТОЗСАЕУККРІАВУКУНСКАЗОУТКТВУЧМНИ ВОДО ВІКНІСЖІНРУНОСТКУ 2овя чн3 мібв 115 ОТОПУОВОДЕУККРОВВУКУЄСКАЗСТТЕТОУМНИВОВВООВьЕНІ СУ ІМеУВОБТКУ ЇОжя УНІ МІВЕІ 316 ОЗОГИОВСАБУККРИЛСУКУЗСКАЗСУТКУВТУМНИсВОовРСОВБКУМСХІМРУМВОТКХ зож5 УНІ міОбї 317 ШУСОБООВСАЕУКЕРОДВУКУЄСКАБОТТЕТВУУМНИВОДРООВОЕИІСХЕНРУНОСТЮХ зоб УнЗ міоєїт 316 ПУСТО АЕУКИРОАЗУКУЄСКАВОУТЕТВХУЮНИВОВРООВЬКИ КУ ЕМРУНОСТКУ ож тні Чі, 149 СУПІ ОВСАЕБКУРОЕОКУЄСКАВОТТКТЕУУМНИУВОВОСВОВУМС І МРУЮОСТКХ 2оЖБ чно мії 185 ПРОБА КУРСАВУКУСКАВСТТЕТОУМНЕУВОДРООВЬЕНІСХІМРУЮОСТКУ 2гажЕБ чна іі Бі ОУОІЗСЯСАКІЖКРСАШУКУЧСКАВСЯ ТТ ВУУМНИУВОАВОСВі ЕМ ОсУХНРУВООТКУ
Можож жо ж жя ух ою же ЖК Ж ЖК Ж ЖОЖ ЖЖ Ж ОКО КОЮ Ж КК ЖЖ й ї ок жо
Фігура 43
2ожа УНІ й КЕКЕКСВУТ ТОРТ ВИТАУМЕЕВОВОВОТАХУТСАМУ СЕ ВІ ВМОУНО СТУ ТМ тож Уно яд МЕКУКСВАТІТЕНТВАСТАУМКІ ВІ ВЕВрТАУЖУсАМУ СВОЮ УТУея ож УНІ БЕ МЕКЕКОВАТЬТНОКОАЕТАТМЕСЯВІ КВОТ УТусАЧТУСсВ В МОМОТ УвЕ закя уві зв МИ МЕКЕКОНУТІТНОТОАЗТЛУМЕ ОБО вОогтАУутсАнУсВв МОУ юООЄТьУ тов зожша чит Вес 109 МЕКТМСВАТІТЕОТОВАЕТАУМЕ ОВ ВОБОТАУУУСАНУ ОВТ ОМОУМСОЄТУТТВВ 2сЕЯ УНЗ БВЗВШ З МЕКЕКСНАТИТИСКОВИТАХУМИСЕВВОЕОТАУУСАНУ ооо ТУ Вя ока уні Веєв ТО МЕКЕКОВУТТТВОТІАВТАХМЕКВІВЕЕОТАУсАНТУвЯЗБВМОУМООСТІ ТУ Ва 2ож5 УМ? роб 105 МЕКЕКСВАТІТОВТОАЗТАХМЕСЗЛЬАЕЕОТВУХУСАМУУСВВЦЕМОУИВОСТОУТУВА 2бЕ5 УНЗ ПяБА 106 МЕКРЕОНАТЬТООКЗАБТАЯМЕ ЗІЗ ЕОТАУчУСАНУ УВО СЯМОУКОССТЬОТУВА зок УНІ ЗБЕ 107 МЕКТИСКУТІТЕОТВАЕТВУМЕВВІВВЕОСТАУУУСАМУУСОВЕ МОУ МСОСТЬТУВ В ТОК УВО рУБЕ 108 КЕКТКОНАТІТаОТЗАЕТАУМтЬ ВВ ЕПТАУУХСАНУО ВМО НВОстІ А ТУВА тож УнЗ раб 1п9 МЕКРКОВАТІТБОКОАВТВУМКЗВЬВОЕОТАУУТОАКУТОВЛЬВМОоУНоОсТтіУТУва 2оБЬ чні раби 110 МНЕКРКОВУТІТЕОТЯДЕТАУМЕВОСВЕКОТВУУУСВМНЕУУСІВЬВМОУМОВсТЬУТУВ У г2ожЗ не рей пі МЕКРКБВАТІТВОТІАВТАУМЕСВВіВКОГТАУУУсАКТ УСЕ МОУИСОТМ У 205 УНЗ рУбЕ 312 МЕКЕКОВАТЬТОПКОАСТАУМЕБОВІВОЕОТАуУУСАМУУСОВЕЕМОУМСОСТЬУТчУяВ 2оБ5 УНІ міо 115 МЕКЕКОНУТІТВСТВАСТАМЕБОВІВОКрІДУУУСАнуУВВВЕеБрУКОоОСтТвУТУВВ 20Е5 уно МіО. 114 МЕКЕКСКАТІТВОТВАСТАУМЕСОВСНЗЕОрТАУХУСАНУХОВВЬВБоУ ВОМС той УНІ МміОЄЬ 115 МЕКЕКОНАТІТаПКЗАсТАУМЕООЯБВБЕОТАУУХСАМуУТОВВОБОЖИСОвТІТУ ВЕ ЗпЕ5 УНІ МІОКІ 116 МЕКЕКОНУТІТІОТЛоТАХУМЕІОНЬНОКОТАУСАНУТОЧДЬоІНУМСОСТТУВЕ 20Е5 чно мійбІ 317 МЕХУКСВАТІТВОТІВЕТАУМЕЬОЗЬАЗЕОТАУУ САНУ ВУМООСТвУТУВ 29ЕБ тн3 мібвбії я МЕКЕКОВАТЕТВОКОДОТАУМЕЗЗЬВОВИТАУХУСАМУТСОВІ НІ ВУСТ ЕУТУВ В Фов5 ні Уулів за МЕКЕКОВУТІТООТОАОТАУМЕВОЄІВЗЕрІДУХУСАНХ УСЕ ВМрУНОООТ ТУ ВВ зоко Уня Уїїь 150 МЕКЕКОНАТЕТяМ ВІВ ТАМЕСИВІВОКОТАУХСАМУТОВЕ ЗВО НООСТУТУВ В БЕЗ УНІ Мі 151. МЕКЕКОВАТОТВОКВАЗТАУМЕБАИаБАЕКОТАУТУСАМУУсІВЗОВМОУМООСТЬТУВ В
Кокс тож х ж н я ж. кА ее в в З с см нн в А В Я кож ж же южж жк й око
Фігура 43 (Продовження)
їїча уні ба ПУССУОПОДЕМЕКРОВОУКУВСКАОЖТУКОУТИНИУВОВРЕОСЬКИМООТЖРиМОВЕТУ тї2н3 УНІ Зо ОУОБУЮВСАБУККЕОВБУКИВСКАВСХТЕКОУТИНИУВОАРоОссКв Са ТУвММОвЕКХ ї2н3 УнЗ ПУТ УШБОАКУККРОЗБУКУЗСКАЗОУТЕКПУТМНИУВОВРООсЬЕВІВОТувВННОоСВтХ на уві МУЗ) ПУСІУОВСАКУККРОЗБУКУВСКАНСТТЕКОТМНИУВОА ооо КИМОСІуРКОСОВТУ 12нНі чну хо 150 УСП ВаУКкАРОВНУКИВСКАОЗТТЕКОУТМНиУКИВрОоОВЬВЖІссзХ НОСОВ 1283 УЗ МБО х93 ОСУССУСВОДЕМКЕРОВНУКУВСКАВОУТКОВУТМНИУКОвРСОСЬЕМІССТУРМДООВТХ і3н3 УНІ МО5ЗА 192 ОУСЬУОБЕАВУККРОВОУКУЗСКАЗОУТЕКОУ ТММ ВОЛА РООСЬЕКМОСІХРМАСОВТУХ 12н3 Ума кмббА З ОЮА УЕКРОББУКИОКАБСУТЕКОУ МИМО ОООЕНІССТХ МАСОВЕ з12н3 Ми МмебБА 124 УСІ ВСАКУКИРОПВУКУВСКАВСУТЕКрУТИНИУвОАВООИСЕКІ ОЇ РМАсОВТУ 12вЗ уві чЗБЕ 125 ОМОЕМОВСАЕУЕКРОВЕУКУВСКАВСЖТЕКОІМННУ НАВОДИМО РЕКС 1883 чУно наак за ОНИ ОЗОАЕУКИРОЗВУКУВОКАОУТЕКОТТМННУВОАРООЗОКИХООІТРМЕООВТХ їїня УЗ мае 197 ОМОСЧОВОДЕККРОББУКУВСКАЗОУТЕКОУТМНКУКОВРООЗПНИТОСІЖРНЕЗОВИХ 17н35 уві МУЗ 128 ОУМОБУСВЗОАЕУККЕСВБУКУНОКАООУГЕКОВУТМНеУКОвРООСТЬЕЯМОСІРММОСЕТХ їгн3 но Ммеф, 159 ОЧУМОВОВЕУККРОБЗУКУВСКАВСУТЕКОУІМНИВОДЕООсОКиТОссІ У ВМИМОСВТХ 1253 УнЗ Моз 130 СУОБУСЕПАКУКЕРСОВУКУВСКАВИХТЕКОУМНИУВОЛЕСОСЬЕН КОСІ У ВИКО їгнІ чні Моз 131 ОТОБУСЦВОДКУККРОВУКУВСКАВСХТЕУКОУТМННУВОА ООН веНОваТХ т13н3 УНо ме9І 135 ПИ МОБСАКУККРСОЗВУКУВСКАВСХГТЕКОТТМНИУКОДРООССТКИХОСІЖВММОБВТУ ізн УНІ МмЗ9І 133 ОМОБЧОВОАКУККРОВВУКУВСКАВОХТЕКОТТМНИКОАВОоОСЬВИ БОС РММОСВТХ з2н3 У І їв ОУОІКОБОДЕСККРОБВУКУВСКАВОУТУКОУТМНИУКОДЛРООСЬКММОВІЕММОСЕКХ 1283 чно мії 167 ОЧОСУОЗСАБЬККРОВНУКУВСКАОСЯТТКОУТМНИВОАРООСсЕНІОосІУвМщООЕ ке 12583 УНЗ 5115 148 ОУОПУСЗСАВЕККРОВЧУКУВСКАЛСУТЕКОУТМНМУВОДЕОСОСЬКУТОсТУ ВИКО Й КВ жк жи, с а а и и КК З ЕЕ и А в ж и в В ЕЕ ї ех я МН.
Шк жк «Фігура 44 Тана уні 63 МОШЕКОоНУТІТАОКОТОТАМЕВСКЬАОКрІВУ У СВНМОХНОСгНЬОКОоУМОСТЕМ УВА їн чні 75 МОтКОВУТЬТАрКВ ОТАК ТАУТЖСВЕМХНОВИ ОК НУМО УТУВО 123 т83 71 МОМЕКОВАТЬТУЮИСТЯТвАХМЕІпЯВрАЕЕОТАУЄКСАКМОУНОСВВОВЕПВУМНСОВТТУТУВЕ і8на смі ка5О 319 КОМЕКОВУТІТАЮКЕТЕТАУМЕСО ВІ ВИВОТАСУЖСАКМОЖНСВНСБОКОУМСОСТТУКини і2в3 уно К5БО 150 МОКеКОВУТІТЛІЖЕТВТАТМЕБОВЬКІКОТУВУХтСВВМОУПОВННеВУВОсООтТТУ Ук і2н3 хвЗ М55О 321 МОБЕКрЕАТІТУПЕЗ ВТМ ЕСТЛУТУСВВМИУНОРНОВКОЩСОСЕТУТУ ВВ 12к3 уні М55А 128 МОМЕКОВУТІТАОКВТЕТАУМЕНОЗБВОЕОТАЧХХУСАВМОХНеРНІПЕВУМОСЮТТУТИ ВЕ з2н3 УНІ МоБА 153 МОМЕКОВОКСТАВЕВТО САМЕ ВОЕОТАМХУСАВМОХНІКНОСОКОуМОООтТтУ ТВ і2нз УмЗ МБ5А 174 ВОМТКОВАТИТУрКЕТаТАУМЕБОЗСАВВОТАУЖУСАВМОТНОРИБОКОУуМСОстТтТМтТУВО І12На УНІ МЯЗЕК 125 КОМЕКОВУТІТАЮКВТВТАУМЕКОВЬВОВрТАУУУСАВМСТНОоРНІБОУНООТТУТУ ВВ 1253 на МмУБЖ 126 МОБЕКОВУТЕТАрКВТВТАУМЕСЕНВІ ЕП САВМОХПСРНІК СУМНО ТТУТУЄВ 123 УНІ МОБЕ 197 МОКЕКОВАТОГУПКОТИТАУМЕО В ВБЕСІВУ САМЕ НОСВ СОРОМУ ТУВЕ 123 уні мазі, 128 МОоМЕкоВУТЕТАСКИТЕТАУМЕСЕиВЬВВЕНТАУУУСАКОЖНОТНЬОСКОУМОСТТУТУВО 1283 УНІ моз 188 МОМЕКОнУТЬТАПКиІЗТЛІМИІ ВВЕ сТАУХУСАНЬСЯНСВНЬОКОУИСОСТТУТУ ВІ ї2нЗ слиЗ Ме9І, 138 МОМЕКОВАТІТУрКаТОТАУМЕСяВЬВЕЕОТАТТУУСсАВЬОУНОоВиБОКОУИСОсТгУТУнО іїгн3 мні мазі 13 МнОМеКОВУТІТАОрКЕТОТВУМЕК ОВО ТАМХХСАВІСУНОРНООКОУНОДОТТУТУВО ї28на мно МмеаЗзї 332 МОХЕКОВУТИТДОКОТАТАУМЕКАЧ ІНВЕСТ ВУХУСАВІСУНОРНЬОЕВУМСОЄСТТУТУВЕ ібн3 уні мої 133 МОХРЕПСНАТІТУЮрКОТОТудЖМКЕ ОБ ВЕПТАУХ САНУ ВНЬО ІН СТТУТУВа таня УНІ мії 146 МОКЕКОВУТІТАПКаТВТАХМЕНОВЬВВЕОТАУТУСЬВМОУВОвНЬСЕрУЮСОСТТУТУВЕ ї2н3 Ума УїВК 147 чОМЕКОВУ ВІ ТАПКОТОТАЖМЕІ ОЗОН ЕСТАЧУСАКМОТНОРН ОКУ ТУТ У ВЕ ізну унх Ух 198 МОМЕКОКАТИТУрКОТОТАуУМЕгІЗАВЕСТАУХЖСАВМСЯ ОРНОМУ ТУВА ОО ЖОКСКОЮ В у ОКОТОЖ ОО, ЖЖ Ж Ж ВОЮ ЖК СВОЮ КОЖ Ж ОК А ЖЖ Ж КВ ЖЖ ж ЕК сво і о в Я Фігура 44 (продовження)
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP13159794 | 2013-03-18 | ||
| PCT/NL2014/050162 WO2014148895A1 (en) | 2013-03-18 | 2014-03-18 | Humanized anti-cd134 (ox40) antibodies and uses thereof |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA119319C2 true UA119319C2 (uk) | 2019-06-10 |
Family
ID=47891522
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAA201508893A UA119319C2 (uk) | 2013-03-18 | 2014-03-18 | Гуманізоване антитіло до cd134 (ox40) і його застосування |
Country Status (32)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US9790281B2 (uk) |
| EP (2) | EP2976361B1 (uk) |
| JP (1) | JP2016515544A (uk) |
| KR (1) | KR20160006168A (uk) |
| CN (1) | CN105229032A (uk) |
| AU (2) | AU2014238546C1 (uk) |
| BR (1) | BR112015023862A2 (uk) |
| CA (1) | CA2907436A1 (uk) |
| CL (2) | CL2015002793A1 (uk) |
| CR (1) | CR20150498A (uk) |
| CY (1) | CY1120752T1 (uk) |
| DK (1) | DK2976361T3 (uk) |
| EA (1) | EA201591495A1 (uk) |
| ES (1) | ES2687282T3 (uk) |
| HK (1) | HK1215035A1 (uk) |
| HR (1) | HRP20181478T1 (uk) |
| HU (1) | HUE040234T2 (uk) |
| IL (1) | IL241701A0 (uk) |
| LT (1) | LT2976361T (uk) |
| MD (2) | MD4633B1 (uk) |
| MX (2) | MX2015013288A (uk) |
| NZ (1) | NZ712903A (uk) |
| PE (1) | PE20160690A1 (uk) |
| PH (1) | PH12015502185A1 (uk) |
| PL (1) | PL2976361T3 (uk) |
| PT (1) | PT2976361T (uk) |
| RS (1) | RS57840B1 (uk) |
| SG (2) | SG10201708048XA (uk) |
| SI (1) | SI2976361T1 (uk) |
| UA (1) | UA119319C2 (uk) |
| WO (1) | WO2014148895A1 (uk) |
| ZA (1) | ZA201507021B (uk) |
Families Citing this family (121)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB201116092D0 (en) * | 2011-09-16 | 2011-11-02 | Bioceros B V | Antibodies and uses thereof |
| JP6548631B2 (ja) | 2013-03-14 | 2019-07-24 | ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ レランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティー | ドナー特異的抗体を検出する方法及び該方法を実施するためのシステム |
| MX2015013288A (es) | 2013-03-18 | 2016-04-07 | Biocerox Prod Bv | Anticuerpos anti-cd134 (ox40) humanizados y usos de los mismos. |
| EP3083687A2 (en) | 2013-12-17 | 2016-10-26 | F. Hoffmann-La Roche AG | Combination therapy comprising ox40 binding agonists and pd-1 axis binding antagonists |
| AU2015241038A1 (en) | 2014-03-31 | 2016-10-13 | Genentech, Inc. | Combination therapy comprising anti-angiogenesis agents and OX40 binding agonists |
| TW201619200A (zh) | 2014-10-10 | 2016-06-01 | 麥迪紐有限責任公司 | 人類化抗－ｏｘ４０抗體及其用途 |
| SG11201703521UA (en) | 2014-11-03 | 2017-05-30 | Genentech Inc | Methods and biomarkers for predicting efficacy and evaluation of an ox40 agonist treatment |
| EP3215850B1 (en) | 2014-11-03 | 2019-07-03 | F. Hoffmann-La Roche AG | Assays for detecting t cell immune subsets and methods of use thereof |
| US20160152720A1 (en) | 2014-11-06 | 2016-06-02 | Genentech, Inc. | Combination therapy comprising ox40 binding agonists and tigit inhibitors |
| SG11201703605QA (en) | 2014-11-17 | 2017-06-29 | Genentech Inc | Combination therapy comprising ox40 binding agonists and pd-1 axis binding antagonists |
| JP6744326B2 (ja) * | 2015-01-08 | 2020-08-19 | バイオエヌテック エスエーＢｉｏｎｔｅｃｈ Ｓｅ | アゴニスト性ｔｎｆ受容体結合物質 |
| PT3265123T (pt) | 2015-03-03 | 2023-02-01 | Kymab Ltd | Anticorpos, usos e métodos |
| AU2016246695A1 (en) | 2015-04-07 | 2017-10-26 | Genentech, Inc. | Antigen binding complex having agonistic activity and methods of use |
| RS59847B1 (sr) * | 2015-04-28 | 2020-02-28 | Mitsubishi Tanabe Pharma Corp | Protein koji vezuje rgma i njegova upotreba |
| CA2984794A1 (en) | 2015-05-07 | 2016-11-10 | Agenus Inc. | Anti-ox40 antibodies and methods of use thereof |
| ES2936317T3 (es) * | 2015-05-29 | 2023-03-16 | Bristol Myers Squibb Co | Anticuerpos contra OX40 y usos de los mismos |
| WO2017046746A1 (en) | 2015-09-15 | 2017-03-23 | Acerta Pharma B.V. | Therapeutic combinations of a btk inhibitor and a gitr binding molecule, a 4-1bb agonist, or an ox40 agonist |
| CN108602887B (zh) | 2015-10-02 | 2022-06-21 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 对共刺激性tnf受体特异性的双特异性抗体 |
| WO2017063162A1 (zh) * | 2015-10-15 | 2017-04-20 | 苏州丁孚靶点生物技术有限公司 | 抗ox40抗体及其应用 |
| CN108472382A (zh) | 2015-10-30 | 2018-08-31 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 抗-因子d抗体变体缀合物及其用途 |
| HRP20220436T1 (hr) | 2015-11-03 | 2022-05-27 | Janssen Biotech, Inc. | Protutijela koja se specifično vežu na pd-1 i njihove uporabe |
| GB201519481D0 (en) | 2015-11-04 | 2015-12-16 | Cancer Rec Tech Ltd | Immunomodulatory antibodies |
| US10527613B2 (en) * | 2015-11-10 | 2020-01-07 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Biomarker detection methods and systems and kits for practicing same |
| EP3383430A4 (en) | 2015-12-02 | 2019-12-18 | Agenus Inc. | ANTIBODIES AND METHOD FOR USE THEREOF |
| SG11201805422WA (en) | 2016-01-11 | 2018-07-30 | Inhibrx Inc | Multivalent and multispecific ox40-binding fusion proteins |
| DE102016105069A1 (de) | 2016-03-18 | 2017-09-21 | Eberhard Karls Universität Tübingen Medizinische Fakultät | Antivirale Immuntherapie durch Membranrezeptorligation |
| JP2019528082A (ja) * | 2016-06-08 | 2019-10-10 | シャンハイ ジャオ トン ユニバーシティ スクール オブ メディシン | アゴニスト抗体の活性を増強する抗体重鎖定常領域配列 |
| KR102531889B1 (ko) | 2016-06-20 | 2023-05-17 | 키맵 리미티드 | 항-pd-l1 및 il-2 사이토카인 |
| WO2018027204A1 (en) | 2016-08-05 | 2018-02-08 | Genentech, Inc. | Multivalent and multiepitopic anitibodies having agonistic activity and methods of use |
| US10669344B2 (en) | 2016-08-12 | 2020-06-02 | Janssen Biotech, Inc. | Engineered antibodies and other Fc-domain containing molecules with enhanced agonism and effector functions |
| WO2018031400A1 (en) * | 2016-08-12 | 2018-02-15 | Janssen Biotech, Inc. | Fc engineered anti-tnfr superfamily member antibodies having enhanced agonistic activity and methods of using them |
| TWI788307B (zh) | 2016-10-31 | 2023-01-01 | 美商艾歐凡斯生物治療公司 | 用於擴增腫瘤浸潤性淋巴細胞之工程化人造抗原呈現細胞 |
| EP3535291A1 (en) | 2016-11-01 | 2019-09-11 | Genmab B.V. | Polypeptide variants and uses thereof |
| EP3534947A1 (en) | 2016-11-03 | 2019-09-11 | Kymab Limited | Antibodies, combinations comprising antibodies, biomarkers, uses & methods |
| EP3538152A4 (en) | 2016-11-09 | 2020-09-30 | Agenus Inc. | ANTI-OX40 ANTIBODIES, ANTI-GITR ANTIBODIES AND METHOD OF USING THEREOF |
| AU2017377036B2 (en) * | 2016-12-15 | 2022-06-23 | Abbvie Biotherapeutics Inc. | Anti-OX40 antibodies and their uses |
| AU2017384528A1 (en) * | 2016-12-19 | 2019-07-04 | Ichnos Sciences SA | Novel TNFR agonists and uses thereof |
| WO2018129332A1 (en) | 2017-01-06 | 2018-07-12 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | Expansion of tumor infiltrating lymphocytes (tils) with tumor necrosis factor receptor superfamily (tnfrsf) agonists and therapeutic combinations of tils and tnfrsf agonists |
| WO2018134787A2 (en) * | 2017-01-20 | 2018-07-26 | Magenta Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for the depletion of cd137+ cells |
| CA3053222A1 (en) | 2017-02-10 | 2018-08-16 | Genmab B.V. | Polypeptide variants and uses thereof |
| CN108623686A (zh) | 2017-03-25 | 2018-10-09 | 信达生物制药(苏州)有限公司 | 抗ox40抗体及其用途 |
| CN113480654B (zh) | 2017-03-28 | 2022-06-10 | 礼进生物医药科技（上海）有限公司 | 用于增强肿瘤微环境中免疫应答的治疗剂和方法 |
| EP3635097A1 (en) | 2017-06-05 | 2020-04-15 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | Methods of using tumor infiltrating lymphocytes in double-refractory melanoma |
| JP7089149B2 (ja) | 2017-07-31 | 2022-06-22 | ミツミ電機株式会社 | レンズ駆動装置、カメラモジュール、およびカメラ搭載装置 |
| EP3672611A4 (en) * | 2017-08-25 | 2021-07-14 | Janssen Biotech, Inc. | TYPE III DOMAINS OF FIBRONECTIN BINDER FCyRII, THEIR CONJUGATES AND MULTISPECIFIC MOLECULES INCLUDING THEM |
| JP2021501801A (ja) | 2017-11-01 | 2021-01-21 | ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ | 癌の処置に用いるための免疫刺激アゴニスト抗体 |
| SG11202004457XA (en) | 2017-11-17 | 2020-06-29 | Iovance Biotherapeutics Inc | Til expansion from fine needle aspirates and small biopsies |
| SG11202003443TA (en) | 2017-11-24 | 2020-05-28 | Eucure Beijing Biopharma Co Ltd | Anti-ox40 antibodies and uses thereof |
| JP7057492B2 (ja) | 2017-12-28 | 2022-04-20 | ミツミ電機株式会社 | レンズ駆動装置、カメラモジュール、及びカメラ搭載装置 |
| WO2019136459A1 (en) | 2018-01-08 | 2019-07-11 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | Processes for generating til products enriched for tumor antigen-specific t-cells |
| US11713446B2 (en) | 2018-01-08 | 2023-08-01 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | Processes for generating TIL products enriched for tumor antigen-specific T-cells |
| EP3737743A1 (en) | 2018-01-08 | 2020-11-18 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | Processes for generating til products enriched for tumor antigen-specific t-cells |
| CN111393529B (zh) * | 2018-01-29 | 2022-02-22 | 康源博创生物科技(北京)有限公司 | 与ox40l非竞争结合的抗ox40抗体 |
| JP2021512962A (ja) | 2018-02-13 | 2021-05-20 | アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド | アデノシンａ２ａ受容体アンタゴニストによる腫瘍浸潤性リンパ球（ｔｉｌ）の拡大培養並びにｔｉｌ及びアデノシンａ２ａ受容体アンタゴニストの治療的組み合わせ |
| TW202003565A (zh) | 2018-03-23 | 2020-01-16 | 美商必治妥美雅史谷比公司 | 抗mica及/或micb抗體及其用途 |
| WO2019191133A1 (en) | 2018-03-27 | 2019-10-03 | Bristol-Myers Squibb Company | Real-time monitoring of protein concentration using ultraviolet signal |
| MA52533A (fr) | 2018-04-27 | 2021-03-03 | Iovance Biotherapeutics Inc | Procédé en circuit fermé pour l'amplification et l'edition de gènes de lymphocytes d'infiltration des tumeurs et leurs utilisations en immunothérapie |
| BR112020023026A2 (pt) | 2018-05-11 | 2021-02-09 | WuXi Biologics Ireland Limited | anticorpos completamente humanos contra ox40, método para a sua preparação e sua utilização |
| SG11202011024WA (en) * | 2018-05-23 | 2020-12-30 | Beigene Ltd | Anti-ox40 antibodies and methods of use |
| CN112638375A (zh) | 2018-06-15 | 2021-04-09 | 旗舰创业创新五公司 | 通过后细胞信号传导因子的调节来增加免疫活性 |
| WO2020014583A1 (en) | 2018-07-13 | 2020-01-16 | Bristol-Myers Squibb Company | Ox-40 agonist, pd-1 pathway inhibitor and ctla-4 inhibitor combination for use in a mehtod of treating a cancer or a solid tumor |
| EP3837285A1 (en) | 2018-08-13 | 2021-06-23 | Inhibrx, Inc. | Ox40-binding polypeptides and uses thereof |
| TW202031273A (zh) | 2018-08-31 | 2020-09-01 | 美商艾歐凡斯生物治療公司 | 抗ｐｄ－１抗體難治療性之非小細胞肺癌（ｎｓｃｌｃ）病患的治療 |
| BR112021003678A2 (pt) | 2018-09-20 | 2021-05-18 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | métodos para criopreservar tecido de tumor, para fabricar, para preparar e para expandir linfócitos infiltrantes de tumor, para tratar um indivíduo com câncer e para tratar câncer para um indivíduo humano, e, fragmento de tumor criopreservado . |
| CN112969469A (zh) | 2018-11-05 | 2021-06-15 | 艾欧凡斯生物治疗公司 | 抗pd-1抗体难治性nsclc患者的治疗 |
| JP2022506508A (ja) | 2018-11-05 | 2022-01-17 | アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド | Ａｋｔ経路阻害剤を利用したｔｉｌの拡大培養 |
| BR112021008266A2 (pt) | 2018-11-05 | 2022-01-04 | Iovance Biotherapeutics Inc | Métodos para expandir linfócitos infiltrantes de tumor em uma população terapêutica de linfócitos infiltrantes de tumor e para tratar um sujeito com câncer, e, população terapêutica de linfócitos infiltrantes de tumor |
| PE20211292A1 (es) | 2018-11-05 | 2021-07-20 | Iovance Biotherapeutics Inc | Procesos para la produccion de linfocitos infiltrantes de tumor y usos de estos en inmunoterapia |
| WO2020119793A1 (en) * | 2018-12-14 | 2020-06-18 | Wuxi Biologics (Shanghai) Co., Ltd. | Humanized antibodies against ox40, method for preparing the same, and use thereof |
| JP2022514023A (ja) | 2018-12-19 | 2022-02-09 | アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド | 操作されたサイトカイン受容体対を使用して腫瘍浸潤リンパ球を拡大培養する方法及びその使用 |
| WO2020142626A1 (en) * | 2019-01-04 | 2020-07-09 | Gigagen, Inc. | Anti-ox40 binding proteins and methods of use thereof |
| WO2020172658A1 (en) | 2019-02-24 | 2020-08-27 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods of isolating a protein |
| AU2020256125A1 (en) | 2019-03-29 | 2021-11-18 | Turnstone Biologics Corp. | Ex vivo methods for producing a T cell therapeutic and related compositions and methods |
| MA55805A (fr) | 2019-05-03 | 2022-03-09 | Flagship Pioneering Innovations V Inc | Métodes de modulation de l'activité immunitaire |
| WO2020232029A1 (en) | 2019-05-13 | 2020-11-19 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | Methods and compositions for selecting tumor infiltrating lymphocytes and uses of the same in immunotherapy |
| EP3973274A1 (en) | 2019-05-23 | 2022-03-30 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods of monitoring cell culture media |
| WO2020243570A1 (en) | 2019-05-30 | 2020-12-03 | Bristol-Myers Squibb Company | Cell localization signature and combination therapy |
| KR20220016156A (ko) | 2019-05-30 | 2022-02-08 | 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 | 면역-종양학 요법에의 적합성을 위한 다종양 유전자 시그너쳐 |
| EP3976832A1 (en) | 2019-05-30 | 2022-04-06 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods of identifying a subject suitable for an immuno-oncology (i-o) therapy |
| CN110172090B (zh) * | 2019-06-03 | 2020-04-03 | 中山标佳生物科技有限公司 | Cd134单克隆抗体及其制备方法和癌症治疗中的应用 |
| EP4048295A1 (en) | 2019-10-25 | 2022-08-31 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | Gene editing of tumor infiltrating lymphocytes and uses of same in immunotherapy |
| WO2021108727A1 (en) | 2019-11-27 | 2021-06-03 | Myst Therapeutics, Inc. | Method of producing tumor-reactive t cell composition using modulatory agents |
| CA3161104A1 (en) | 2019-12-11 | 2021-06-17 | Cecile Chartier-Courtaud | Processes for the production of tumor infiltrating lymphocytes (tils) and methods of using the same |
| WO2021127217A1 (en) | 2019-12-17 | 2021-06-24 | Flagship Pioneering Innovations V, Inc. | Combination anti-cancer therapies with inducers of iron-dependent cellular disassembly |
| BR112022011949A2 (pt) | 2019-12-17 | 2022-11-22 | Amgen Inc | Dupla de interleucina-2/agonista do receptor tnf para uso em terapia |
| CN113045655A (zh) * | 2019-12-27 | 2021-06-29 | 高诚生物医药(香港)有限公司 | 抗ox40抗体及其用途 |
| JP2023516636A (ja) | 2020-02-27 | 2023-04-20 | ミスト セラピューティクス リミテッド ライアビリティ カンパニー | 腫瘍反応性ｔ細胞のエクスビボ富化および増大のための方法ならびに関連するその組成物 |
| TW202208617A (zh) | 2020-05-04 | 2022-03-01 | 美商艾歐凡斯生物治療公司 | 用於產生腫瘤浸潤性淋巴球的過程及其在免疫療法中的用途 |
| TW202208616A (zh) | 2020-05-04 | 2022-03-01 | 美商艾歐凡斯生物治療公司 | 改良之腫瘤反應性ｔ細胞的選擇 |
| CN111518209B (zh) * | 2020-05-09 | 2023-07-25 | 郑州航空港百桥生物科技有限公司 | 特异性结合人ox40的单克隆抗体及其应用 |
| US20230355804A1 (en) | 2020-06-29 | 2023-11-09 | Flagship Pioneering Innovations V, Inc. | Viruses engineered to promote thanotransmission and their use in treating cancer |
| WO2022047412A1 (en) | 2020-08-31 | 2022-03-03 | Bristol-Myers Squibb Company | Cell localization signature and immunotherapy |
| JP2023544410A (ja) | 2020-10-05 | 2023-10-23 | ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー | タンパク質を濃縮するための方法 |
| WO2022076606A1 (en) | 2020-10-06 | 2022-04-14 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | Treatment of nsclc patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies |
| JP2023546359A (ja) | 2020-10-06 | 2023-11-02 | アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド | 腫瘍浸潤リンパ球療法によるｎｓｃｌｃ患者の治療 |
| WO2022120179A1 (en) | 2020-12-03 | 2022-06-09 | Bristol-Myers Squibb Company | Multi-tumor gene signatures and uses thereof |
| WO2022125941A1 (en) | 2020-12-11 | 2022-06-16 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | Treatment of cancer patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies in combination with braf inhibitors and/or mek inhibitors |
| AU2021401302A1 (en) | 2020-12-17 | 2023-07-06 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | Treatment with tumor infiltrating lymphocyte therapies in combination with ctla-4 and pd-1 inhibitors |
| EP4262827A1 (en) | 2020-12-17 | 2023-10-25 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | Treatment of cancers with tumor infiltrating lymphocytes |
| JP2024503265A (ja) | 2020-12-28 | 2024-01-25 | ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー | 抗体組成物およびその使用の方法 |
| MX2023007650A (es) | 2020-12-28 | 2023-09-11 | Bristol Myers Squibb Co | Metodos de tratamiento de tumores. |
| MX2023009100A (es) | 2021-02-03 | 2023-09-25 | Mozart Therapeutics Inc | Agentes aglutinantes y métodos para usar los mismos. |
| AU2022246895A1 (en) | 2021-03-31 | 2023-10-19 | Flagship Pioneering Innovations V, Inc. | Thanotransmission polypeptides and their use in treating cancer |
| EP4314068A1 (en) | 2021-04-02 | 2024-02-07 | The Regents Of The University Of California | Antibodies against cleaved cdcp1 and uses thereof |
| CA3215830A1 (en) | 2021-04-19 | 2022-10-27 | Rafael CUBAS | Chimeric costimulatory receptors, chemokine receptors, and the use of same in cellular immunotherapies |
| US20240182593A1 (en) * | 2021-05-27 | 2024-06-06 | Yuhan Corporation | Ox40 agonist and use thereof |
| EP4363059A1 (en) | 2021-06-29 | 2024-05-08 | Flagship Pioneering Innovations V, Inc. | Immune cells engineered to promote thanotransmission and uses thereof |
| WO2023009716A1 (en) | 2021-07-28 | 2023-02-02 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | Treatment of cancer patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies in combination with kras inhibitors |
| WO2023076876A1 (en) | 2021-10-26 | 2023-05-04 | Mozart Therapeutics, Inc. | Modulation of immune responses to viral vectors |
| AR127482A1 (es) | 2021-10-27 | 2024-01-31 | Iovance Biotherapeutics Inc | Sistemas y métodos para coordinar la fabricación de células para inmunoterapia específica de paciente |
| WO2023086803A1 (en) | 2021-11-10 | 2023-05-19 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | Methods of expansion treatment utilizing cd8 tumor infiltrating lymphocytes |
| WO2023147486A1 (en) | 2022-01-28 | 2023-08-03 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | Tumor infiltrating lymphocytes engineered to express payloads |
| WO2023173011A1 (en) | 2022-03-09 | 2023-09-14 | Bristol-Myers Squibb Company | Transient expression of therapeutic proteins |
| WO2023178329A1 (en) | 2022-03-18 | 2023-09-21 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods of isolating polypeptides |
| WO2023201369A1 (en) | 2022-04-15 | 2023-10-19 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | Til expansion processes using specific cytokine combinations and/or akti treatment |
| WO2023235847A1 (en) | 2022-06-02 | 2023-12-07 | Bristol-Myers Squibb Company | Antibody compositions and methods of use thereof |
| WO2024030758A1 (en) | 2022-08-01 | 2024-02-08 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | Chimeric costimulatory receptors, chemokine receptors, and the use of same in cellular immunotherapies |
| WO2024054992A1 (en) | 2022-09-09 | 2024-03-14 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods of separating chelator |
| US20240174732A1 (en) | 2022-10-05 | 2024-05-30 | Flagship Pioneering Innovations V, Inc. | Nucleic acid molecules encoding trif and additional polypeptides and their use in treating cancer |
| WO2024151687A1 (en) | 2023-01-09 | 2024-07-18 | Flagship Pioneering Innovations V, Inc. | Genetic switches and their use in treating cancer |
| WO2024151885A1 (en) | 2023-01-13 | 2024-07-18 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | Use of til as maintenance therapy for nsclc patients who achieved pr/cr after prior therapy |
Family Cites Families (89)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4683195A (en) | 1986-01-30 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences |
| US5225539A (en) | 1986-03-27 | 1993-07-06 | Medical Research Council | Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies |
| US4946778A (en) | 1987-09-21 | 1990-08-07 | Genex Corporation | Single polypeptide chain binding molecules |
| IL162181A (en) | 1988-12-28 | 2006-04-10 | Pdl Biopharma Inc | A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same |
| US6291158B1 (en) | 1989-05-16 | 2001-09-18 | Scripps Research Institute | Method for tapping the immunological repertoire |
| GB9015198D0 (en) | 1990-07-10 | 1990-08-29 | Brien Caroline J O | Binding substance |
| AU675916B2 (en) | 1991-06-14 | 1997-02-27 | Genentech Inc. | Method for making humanized antibodies |
| ES2136092T3 (es) | 1991-09-23 | 1999-11-16 | Medical Res Council | Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados. |
| US5932448A (en) | 1991-11-29 | 1999-08-03 | Protein Design Labs., Inc. | Bispecific antibody heterodimers |
| ATE408012T1 (de) | 1991-12-02 | 2008-09-15 | Medical Res Council | Herstellung von autoantikörpern auf phagenoberflächen ausgehend von antikörpersegmentbibliotheken |
| DE69333807T2 (de) | 1992-02-06 | 2006-02-02 | Chiron Corp., Emeryville | Marker für krebs und biosynthetisches bindeprotein dafür |
| US6765087B1 (en) | 1992-08-21 | 2004-07-20 | Vrije Universiteit Brussel | Immunoglobulins devoid of light chains |
| US6838254B1 (en) | 1993-04-29 | 2005-01-04 | Conopco, Inc. | Production of antibodies or (functionalized) fragments thereof derived from heavy chain immunoglobulins of camelidae |
| US5821332A (en) | 1993-11-03 | 1998-10-13 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Receptor on the surface of activated CD4+ T-cells: ACT-4 |
| US5591629A (en) | 1994-04-29 | 1997-01-07 | Mayo Foundation For Medical Education & Research | Monoclonal antibodies which promote central nervous system remyelination |
| US7473423B2 (en) | 1994-04-29 | 2009-01-06 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Human IgM antibodies, and diagnostic and therapeutic uses thereof particularly in the central nervous system |
| US5463564A (en) | 1994-09-16 | 1995-10-31 | 3-Dimensional Pharmaceuticals, Inc. | System and method of automatically generating chemical compounds with desired properties |
| US5504004A (en) | 1994-12-20 | 1996-04-02 | Michigan Biotechnology Institute | Process for making succinic acid, microorganisms for use in the process and methods of obtaining the microorganisms |
| US5731168A (en) | 1995-03-01 | 1998-03-24 | Genentech, Inc. | Method for making heteromultimeric polypeptides |
| AU734476B2 (en) | 1997-11-05 | 2001-06-14 | Baylor College Of Medicine | Sequences for targeting metastatic cells |
| JP4741074B2 (ja) * | 1998-02-24 | 2011-08-03 | シスターズ オブ プロビデンス イン オレゴン | Ｏｘ−４０レセプター結合因子又はそれをコードする核酸を含む組成物並びに抗原特異的免疫応答を増強するための方法 |
| US6818749B1 (en) | 1998-10-31 | 2004-11-16 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Variants of humanized anti carcinoma monoclonal antibody cc49 |
| US6737056B1 (en) | 1999-01-15 | 2004-05-18 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants with altered effector function |
| US20020004041A1 (en) | 1999-02-19 | 2002-01-10 | Albert Matthew L. | Methods for abrogating a cellular immune response |
| US7666414B2 (en) | 2001-06-01 | 2010-02-23 | Cornell Research Foundation, Inc. | Methods for treating prostate cancer using modified antibodies to prostate-specific membrane antigen |
| WO2003002609A2 (en) | 2001-06-28 | 2003-01-09 | Domantis Limited | Dual-specific ligand and its use |
| EP2298809A3 (en) | 2001-07-12 | 2012-02-15 | FOOTE, Jefferson | Super humanized antibodies |
| US6833441B2 (en) | 2001-08-01 | 2004-12-21 | Abmaxis, Inc. | Compositions and methods for generating chimeric heteromultimers |
| AR039067A1 (es) | 2001-11-09 | 2005-02-09 | Pfizer Prod Inc | Anticuerpos para cd40 |
| US7550140B2 (en) | 2002-06-13 | 2009-06-23 | Crucell Holland B.V. | Antibody to the human OX40 receptor |
| CN1678634A (zh) | 2002-06-28 | 2005-10-05 | 多曼蒂斯有限公司 | 免疫球蛋白单个变体抗原结合区及其特异性构建体 |
| US8597911B2 (en) | 2003-06-11 | 2013-12-03 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Process for producing antibodies |
| CA2573293A1 (en) | 2004-07-10 | 2006-02-16 | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | Methods for discovering antibodies specific to cancer cells and antibodies discovered thereby |
| US20080008719A1 (en) | 2004-07-10 | 2008-01-10 | Bowdish Katherine S | Methods and compositions for the treatment of prostate cancer |
| TWI309240B (en) | 2004-09-17 | 2009-05-01 | Hoffmann La Roche | Anti-ox40l antibodies |
| CN101072578A (zh) | 2004-10-29 | 2007-11-14 | 南加州大学 | 用共刺激分子的联合癌症免疫疗法 |
| CA2588157A1 (en) | 2004-11-17 | 2006-05-26 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Cancer immunotherapy incorporating p53 |
| EP1844073A1 (en) | 2005-01-31 | 2007-10-17 | Ablynx N.V. | Method for generating variable domain sequences of heavy chain antibodies |
| US7189097B2 (en) | 2005-02-11 | 2007-03-13 | Winchester Electronics Corporation | Snap lock connector |
| WO2006106905A1 (ja) | 2005-03-31 | 2006-10-12 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | 会合制御によるポリペプチド製造方法 |
| US7592429B2 (en) * | 2005-05-03 | 2009-09-22 | Ucb Sa | Sclerostin-binding antibody |
| EP1896030A1 (en) | 2005-06-03 | 2008-03-12 | Pfizer Products Incorporated | Combinations of erbb2 inhibitors with other therapeutic agents in the treatment of cancer |
| US8324194B2 (en) | 2005-11-22 | 2012-12-04 | Incyte Corporation | Combination therapy for the treatment of cancer |
| TWI461436B (zh) | 2005-11-25 | 2014-11-21 | Kyowa Hakko Kirin Co Ltd | 人類ｃｄ１３４（ｏｘ４０）之人類單株抗體及其製造及使用方法 |
| US20070255631A1 (en) | 2005-11-28 | 2007-11-01 | Douglas Schmidt | Product catalog management system and method |
| EP1973576B1 (en) | 2005-11-28 | 2019-05-15 | Genmab A/S | Recombinant monovalent antibodies and methods for production thereof |
| WO2007110205A2 (en) | 2006-03-24 | 2007-10-04 | Merck Patent Gmbh | Engineered heterodimeric protein domains |
| CA2656923A1 (en) | 2006-06-21 | 2007-12-27 | Genentech, Inc. | Crystal structures of ox40l and ox40l complexed with ox40 receptor |
| US20090182127A1 (en) | 2006-06-22 | 2009-07-16 | Novo Nordisk A/S | Production of Bispecific Antibodies |
| WO2008079849A2 (en) * | 2006-12-22 | 2008-07-03 | Genentech, Inc. | Antibodies to insulin-like growth factor receptor |
| CL2008000578A1 (es) | 2007-02-27 | 2008-10-10 | Genentech Inc | Anticuerpo antagonista aislado anti-receptor ox40 humano; molecula de acido nucleico que lo codifica; vector y celula huesped; metodo de produccion; composicion que lo comprende; su uso para tratar trastornos mediados por ox40; y metodo para detectar |
| CN104497143B (zh) | 2007-03-29 | 2020-08-25 | 健玛保 | 双特异性抗体及其制造方法 |
| CN101293924A (zh) * | 2007-04-24 | 2008-10-29 | 上海国健生物技术研究院 | 骨桥蛋白的功能表位、与其特异性结合的单克隆抗体及其在制备抗肿瘤转移药物中的用途 |
| US8748356B2 (en) | 2007-10-19 | 2014-06-10 | Janssen Biotech, Inc. | Methods for use in human-adapting monoclonal antibodies |
| SI2851374T1 (sl) | 2007-12-14 | 2017-08-31 | Bristol-Myers Squibb Company | Vezavne molekule k humanemu ox40 receptorju |
| ES2564523T3 (es) | 2007-12-19 | 2016-03-23 | Janssen Biotech, Inc. | Diseño y generación de bibliotecas de presentación en fago por pIX de novo humanas mediante fusión con pIX o pVII, vectores, anticuerpos y métodos |
| EP2235064B1 (en) | 2008-01-07 | 2015-11-25 | Amgen Inc. | Method for making antibody fc-heterodimeric molecules using electrostatic steering effects |
| KR20110014607A (ko) | 2008-04-29 | 2011-02-11 | 아보트 러보러터리즈 | 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도 |
| WO2010019702A2 (en) | 2008-08-12 | 2010-02-18 | Oncomed Pharmaceuticals, Inc. | Ddr1-binding agents and methods of use thereof |
| WO2010045340A1 (en) | 2008-10-14 | 2010-04-22 | Centocor Ortho Biotech Inc. | Methods of humanizing and affinity-maturing antibodies |
| US8137933B2 (en) | 2008-11-12 | 2012-03-20 | Schering Corporation | Mammalian expression vector pUHAB |
| HUE042114T2 (hu) * | 2009-02-17 | 2019-06-28 | Ucb Biopharma Sprl | Humán OX40-re specifikus ellenanyag-molekulák |
| ES2708124T3 (es) | 2009-04-27 | 2019-04-08 | Oncomed Pharm Inc | Procedimiento para preparar moléculas heteromultiméricas |
| EA025245B1 (ru) * | 2009-05-08 | 2016-12-30 | Вэксинекс, Инк. | Антитела против cd100 и способы их применения |
| US8447543B2 (en) | 2009-09-08 | 2013-05-21 | Aerovironment, Inc. | Electric vehicle simulator and analyzer (EVSA) for electric vehicle supply equipment |
| EA030792B1 (ru) | 2009-11-30 | 2018-09-28 | Янссен Байотек, Инк | МУТИРОВАННЫЕ Fc АНТИТЕЛ С УСТРАНЕННЫМИ ЭФФЕКТОРНЫМИ ФУНКЦИЯМИ |
| CN103097417B (zh) | 2010-04-20 | 2019-04-09 | 根马布股份公司 | 含异二聚体抗体fc的蛋白及其制备方法 |
| JP6022444B2 (ja) | 2010-05-14 | 2016-11-09 | ライナット ニューロサイエンス コーポレイション | ヘテロ二量体タンパク質ならびにそれを生産および精製するための方法 |
| EP2420253A1 (en) | 2010-08-20 | 2012-02-22 | Leadartis, S.L. | Engineering multifunctional and multivalent molecules with collagen XV trimerization domain |
| AU2011293558B2 (en) * | 2010-08-23 | 2014-07-31 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Anti-OX40 antibodies and methods of using the same |
| AU2011325833C1 (en) | 2010-11-05 | 2017-07-13 | Zymeworks Bc Inc. | Stable heterodimeric antibody design with mutations in the Fc domain |
| JP5925307B2 (ja) | 2011-06-30 | 2016-05-25 | オーエフエス ファイテル，エルエルシー | １５５０ｎｍの波長範囲における使用のためのファイバストレッチャモジュール |
| PE20142243A1 (es) * | 2011-07-11 | 2015-01-11 | Glenmark Pharmaceuticals Sa | Anticuerpos que se unen a ox40 y sus usos |
| EP2748199B1 (en) * | 2011-08-23 | 2019-08-28 | Board of Regents, The University of Texas System | Anti-ox40 antibodies and methods of using the same |
| GB201116092D0 (en) * | 2011-09-16 | 2011-11-02 | Bioceros B V | Antibodies and uses thereof |
| UA112203C2 (uk) | 2011-11-11 | 2016-08-10 | Юсб Фарма С.А. | Злитий білок біоспецифічного антитіла, який зв'язується з ox40 людини та сироватковим альбуміном людини |
| MX2015013288A (es) | 2013-03-18 | 2016-04-07 | Biocerox Prod Bv | Anticuerpos anti-cd134 (ox40) humanizados y usos de los mismos. |
| EP3083687A2 (en) | 2013-12-17 | 2016-10-26 | F. Hoffmann-La Roche AG | Combination therapy comprising ox40 binding agonists and pd-1 axis binding antagonists |
| PL3126394T3 (pl) | 2014-03-31 | 2020-05-18 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Przeciwciała anty-OX40 i sposoby stosowania |
| AU2015241038A1 (en) | 2014-03-31 | 2016-10-13 | Genentech, Inc. | Combination therapy comprising anti-angiogenesis agents and OX40 binding agonists |
| TW201619200A (zh) | 2014-10-10 | 2016-06-01 | 麥迪紐有限責任公司 | 人類化抗－ｏｘ４０抗體及其用途 |
| EP3215850B1 (en) | 2014-11-03 | 2019-07-03 | F. Hoffmann-La Roche AG | Assays for detecting t cell immune subsets and methods of use thereof |
| SG11201703521UA (en) | 2014-11-03 | 2017-05-30 | Genentech Inc | Methods and biomarkers for predicting efficacy and evaluation of an ox40 agonist treatment |
| US20160152720A1 (en) | 2014-11-06 | 2016-06-02 | Genentech, Inc. | Combination therapy comprising ox40 binding agonists and tigit inhibitors |
| SG11201703605QA (en) | 2014-11-17 | 2017-06-29 | Genentech Inc | Combination therapy comprising ox40 binding agonists and pd-1 axis binding antagonists |
| GB201500319D0 (en) | 2015-01-09 | 2015-02-25 | Agency Science Tech & Res | Anti-PD-L1 antibodies |
| AU2016246695A1 (en) | 2015-04-07 | 2017-10-26 | Genentech, Inc. | Antigen binding complex having agonistic activity and methods of use |
| CA2984794A1 (en) | 2015-05-07 | 2016-11-10 | Agenus Inc. | Anti-ox40 antibodies and methods of use thereof |
| US10669344B2 (en) | 2016-08-12 | 2020-06-02 | Janssen Biotech, Inc. | Engineered antibodies and other Fc-domain containing molecules with enhanced agonism and effector functions |
-
2014
- 2014-03-18 MX MX2015013288A patent/MX2015013288A/es unknown
- 2014-03-18 BR BR112015023862A patent/BR112015023862A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2014-03-18 ES ES14715138T patent/ES2687282T3/es active Active
- 2014-03-18 AU AU2014238546A patent/AU2014238546C1/en not_active Ceased
- 2014-03-18 EA EA201591495A patent/EA201591495A1/ru unknown
- 2014-03-18 KR KR1020157029388A patent/KR20160006168A/ko not_active Application Discontinuation
- 2014-03-18 NZ NZ712903A patent/NZ712903A/en not_active IP Right Cessation
- 2014-03-18 DK DK14715138.5T patent/DK2976361T3/en active
- 2014-03-18 PE PE2015002046A patent/PE20160690A1/es unknown
- 2014-03-18 LT LTEP14715138.5T patent/LT2976361T/lt unknown
- 2014-03-18 MD MDA20150102A patent/MD4633B1/ro not_active IP Right Cessation
- 2014-03-18 RS RS20181085A patent/RS57840B1/sr unknown
- 2014-03-18 HU HUE14715138A patent/HUE040234T2/hu unknown
- 2014-03-18 MD MDA20180107A patent/MD20180107A2/ro not_active Application Discontinuation
- 2014-03-18 WO PCT/NL2014/050162 patent/WO2014148895A1/en active Application Filing
- 2014-03-18 PT PT14715138T patent/PT2976361T/pt unknown
- 2014-03-18 EP EP14715138.5A patent/EP2976361B1/en active Active
- 2014-03-18 EP EP18173123.3A patent/EP3409690A1/en not_active Withdrawn
- 2014-03-18 PL PL14715138T patent/PL2976361T3/pl unknown
- 2014-03-18 SG SG10201708048XA patent/SG10201708048XA/en unknown
- 2014-03-18 CA CA2907436A patent/CA2907436A1/en not_active Abandoned
- 2014-03-18 CN CN201480028619.1A patent/CN105229032A/zh active Pending
- 2014-03-18 SI SI201430856T patent/SI2976361T1/sl unknown
- 2014-03-18 JP JP2016504276A patent/JP2016515544A/ja active Pending
- 2014-03-18 UA UAA201508893A patent/UA119319C2/uk unknown
- 2014-03-18 SG SG11201507781VA patent/SG11201507781VA/en unknown
- 2014-03-20 US US14/221,212 patent/US9790281B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2015
- 2015-09-16 CL CL2015002793A patent/CL2015002793A1/es unknown
- 2015-09-17 PH PH12015502185A patent/PH12015502185A1/en unknown
- 2015-09-17 IL IL241701A patent/IL241701A0/en unknown
- 2015-09-17 MX MX2019004649A patent/MX2019004649A/es unknown
- 2015-09-18 CR CR20150498A patent/CR20150498A/es unknown
- 2015-09-21 ZA ZA2015/07021A patent/ZA201507021B/en unknown
-
2016
- 2016-03-14 HK HK16102900.7A patent/HK1215035A1/zh unknown
-
2017
- 2017-09-11 US US15/700,986 patent/US10273307B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2018
- 2018-09-14 CY CY181100953T patent/CY1120752T1/el unknown
- 2018-09-17 HR HRP20181478TT patent/HRP20181478T1/hr unknown
- 2018-12-24 CL CL2018003807A patent/CL2018003807A1/es unknown
-
2019
- 2019-01-10 AU AU2019200164A patent/AU2019200164A1/en not_active Abandoned
- 2019-03-13 US US16/351,852 patent/US20190202928A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| UA119319C2 (uk) | Гуманізоване антитіло до cd134 (ox40) і його застосування | |
| US20220096651A1 (en) | Antibodies and chimeric antigen receptors specific for receptor tyrosine kinase like orphan receptor 1 (ror1) | |
| CN110291109B (zh) | 人程序性死亡受体pd-1的单克隆抗体及其片段 | |
| WO2017219934A1 (zh) | 一种高效稳定表达抗体的杀伤性细胞及其用途 | |
| UA115316C2 (uk) | Зв'язувальна молекула, яка зв'язується з cd134 людини, та фармацевтична композиція, що її містить | |
| UA125818C2 (uk) | Химерні рецептори антигенів на основі однодоменних антитіл і способи їх застосування | |
| UA125611C2 (uk) | Біспецифічні молекули, що мають імунореактивність відносно pd-1 і ctla-4, і способи їх застосування | |
| UA119571C2 (uk) | Антитіло проти lag3 і його антигензв'язувальний фрагмент | |
| UA122395C2 (uk) | Антитіло проти tigit | |
| UA124575C2 (uk) | Пептид для лікування раку | |
| UA127450C2 (uk) | Рекомбінантний поліпептид, що зв'язується з cd123 | |
| UA125580C2 (uk) | Конструкція біспецифічного антитіла, що зв'язується з мезотеліном і кд3 (cd3) | |
| UA126269C2 (uk) | АНТИТІЛОПОДІБНИЙ ЗВ’ЯЗУВАЛЬНИЙ БІЛОК, ЯКИЙ СПЕЦИФІЧНО ЗВ’ЯЗУЄТЬСЯ З ПОЗАКЛІТИННИМ ДОМЕНОМ CD3<font face="Symbol">e</font> ЛЮДИНИ І З CD123<font face="Symbol">e</font> | |
| UA119659C2 (uk) | Антитіло до pd-1, його антигензв'язуючий фрагмент та їхнє медичне застосування | |
| UA119673C2 (uk) | Біспецифічне fc-діатіло, здатне імуноспецифічно зв'язуватися з епітопом pd-1 і з епітопом lag-3, та його застосування | |
| UA120247C2 (uk) | Антитіло до ceacam5 і його застосування | |
| US9017683B2 (en) | Highly effective anti-cadherin antibody for induction of antibody-dependent cellular cytotoxicity in vivo | |
| UA118950C2 (uk) | Поліпептид, який зв'язує специфічний мембранний антиген простати та комплекс т-клітинного рецептора | |
| US20220249637A1 (en) | Combination therapy of a cell-mediated cytotoxic therapy and an inhibitor of a prosurvival bcl2 family protein | |
| CN113825771A (zh) | 针对密蛋白18a2的抗体及其应用 | |
| WO2012176765A1 (ja) | 抗ヒトｐ－カドへリン（ｃｄｈ３）遺伝子組み換え抗体 | |
| ES2959953T3 (es) | Métodos para producir composiciones celulares genéticamente modificadas y composiciones relacionadas | |
| CN111094982A (zh) | 用于治疗和诊断癌症的tim-3拮抗剂 | |
| UA126389C2 (uk) | Антигензв'язувальний білок проти gitr і спосіб його застосування | |
| US20210252067A1 (en) | Methods and compositions for chimeric antigen receptor targeting cancer cells |