CN111393529B

CN111393529B - 与ox40l非竞争结合的抗ox40抗体

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Publication number: CN111393529B
Application number: CN202010107498.7A
Authority: CN
Inventors: 宁金鹰; 郝锋; 贺锋; 宁明萱
Original assignee: Kangyuan Bochuang Biotechnology Beijing Co ltd
Current assignee: Kangyuan Bochuang Biotechnology Beijing Co ltd
Priority date: 2018-01-29
Filing date: 2018-01-29
Publication date: 2022-02-22
Anticipated expiration: 2038-01-29
Also published as: CN110092832B; CN110092832A; WO2019144677A1; CN111393529A

Abstract

本发明为与OX40L非竞争结合的抗OX40抗体，提供一种能够特异性结合OX40的抗体，所述抗体与OX40配体OX40L为非竞争结合关系，因此与OX40L具有协同激活作用。此外，本发明提供编码所述抗体的核酸序列，包含所述核酸序列的载体以及用所述载体转化或转染的宿主细胞。更进一步地，本发明提供所述抗体的制药用途。

Description

与OX40L非竞争结合的抗OX40抗体

技术领域

本发明涉及抗体药物领域，具体而言，本发明涉及一种抗OX40抗体及其用途。

背景技术

OX40是1型跨膜糖蛋白，近30年前作为一个激活的T细胞表达的细胞表面抗原得到报道。自发现以来，它被证实是T细胞和肿瘤坏死因子受体家族成员的共刺激分子，也称为“肿瘤坏死因子受体超家族成员4”或CD134，基因的名称为TNFRSF4。

OX40的分子量为50kD，具有胞质尾、跨膜结构域和胞外区。目前OX40只有一个已知配体，即OX40L(CD252)，其表达在活化的APC细胞上，OX40与其配体的结合会共刺激T细胞增殖和细胞因子的产生。OX40对T细胞的刺激是通过胞浆内细胞信号传导实现的，如NF-κB以及T细胞活化核因子(NFAT)的激活，后者可以提高如survivin、细胞周期蛋白依赖性激酶、Bcl-2抗凋亡分子、细胞因子和细胞因子受体的表达。

OX40是长期T细胞免疫的共刺激分子，同时在CD4+T细胞应答和T细胞依赖B细胞增殖分化中起着积极的促进作用。发现OX40在小鼠T细胞表面的表达通常发生在同源抗原识别后的24小时和96小时之间。使用激活性的OX40抗体，直接促进了不同的效应T细胞亚群增加生存。

此外，OX40在肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的表达已经有了不同深入的研究，如在乳腺癌、黑色素瘤、淋巴瘤、头颈部肿瘤中。另外发现OX40在结肠癌肿瘤组织中高表达，在肠系膜淋巴结或在浸润性边缘淋巴的OX40的表达与整体生存率相关。

正是因为OX40对T细胞具有激活作用，其涉及多种疾病，并可应用于肿瘤免疫治疗及器官移植的抗排异等多个领域。因此，共刺激分子OX40属于下一代目前在肿瘤学早期临床试验中检测的免疫治疗靶点。

目前国内外已有一些公司或者机构针对OX40开始了一些研究，包括开发针对该靶点的激动剂，例如小分子及生物大分子抗体的药物开发。几种OX40单克隆抗体目前正在进行早期癌症临床试验。但是，目前的数据显示，此类激动剂大都和OX40L有对OX40结合的竞争关系，因此在此类激动剂激活OX40的同时也失去了天然配体对OX40的激活作用。例如，国际上现有的OX40抗体大都与OX40L竞争性结合OX40，即抗体与OX40的结合位点和OX40L与OX40的结合位点有部分重合，所以当抗体作为激动剂激活了OX40及其下游信号通路时，却失去了OX40L作为天然配体也同时激活OX40的功能。

因此，本领域仍然存在对新型抗OX40抗体的需要。

发明内容

本发明要解决的技术问题是，提供一种新型抗OX40抗体，所述抗体对OX40具有高亲和力，能有效激活OX40蛋白及其下游的信号通路，同时所述抗体与OX40配体OX40L为非竞争结合关系，因此与OX40L具有协同激活作用，从而克服现有抗OX40抗体的不足。

针对上述技术问题，本发明的目的是提供一种新型抗OX40抗体或其功能性片段，并基于该新型OX40抗体或片段，提供其用途。

本发明的技术方案如下：

本发明的发明人以OX40蛋白的胞外区与小鼠IgG2a FC标签构建的融合蛋白作为免疫原，免疫小鼠，利用杂交瘤技术，筛选在分子水平和细胞水平上与OX40亲和力最好的杂交瘤细胞株，利用HT1080-OX40稳转细胞在亲和力高的细胞株里采用ELISA方法筛选激活功能最好的杂交瘤细胞株并测定抗体序列。

一方面，本发明提供一种能够特异性结合OX40的抗体，所述抗体与OX40的天然配体结合OX40的不同表位。换言之，本发明提供的抗体与OX40的天然配体OX40L没有与OX40结合的竞争关系，在结合、进而激活OX40时仍不影响天然配体对OX40的结合、激活作用。

检测本发明的抗体与OX40的结合，发现本发明的抗体以2-15nM、优选4-6nM的亲和力与OX40结合。所述亲和力通过本申请实施例9中所述的BIACORE实验测得。

所述抗体包含重(H)链和/或轻(L)链，其中：

所述重链在其重链可变区(VH)中包含H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3，H-CDR1具有如SEQID NO:1、4、7或10所示的氨基酸序列，H-CDR2具有如SEQ ID NO:2、5、8或11所示的氨基酸序列，H-CDR3具有如SEQ ID NO:3、6、9或12所示的氨基酸序列；

和/或，

所述轻链在其轻链可变区(VL)中包含L-CDR1、L-CDR2和L-CDR3，其中L-CDR1具有如SEQ ID NO:13、16、19或22所示的氨基酸序列，L-CDR2具有如SEQ ID NO:14、17、20或23所示的氨基酸序列，L-CDR3具有如SEQ ID NO:15、18、21或24所示的氨基酸序列。

优选地，关于本发明的抗体：

所述重链在其重链可变区中包含选自以下的H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3的组合：

(1)具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的H-CDR1、具有如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的H-CDR2和具有如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的H-CDR3；

(2)具有如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列的H-CDR1、具有如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列的H-CDR2和具有如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列的H-CDR3；

(3)具有如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列的H-CDR1、具有如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列的H-CDR2和具有如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的H-CDR3；和

(4)具有如SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的H-CDR1、具有如SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列的H-CDR2和具有如SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列的H-CDR3；

和/或

所述轻链在其轻链可变区中包含选自以下的L-CDR1、L-CDR2和L-CDR3的组合：

(1)具有如SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列的L-CDR1、具有如SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列的L-CDR2和具有如SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列的L-CDR3；

(2)具有如SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列的L-CDR1、具有如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列的L-CDR2和具有如SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列的L-CDR3；

(3)具有如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列的L-CDR1、具有如SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列的L-CDR2和具有如SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列的L-CDR3；和

(4)具有如SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列的L-CDR1、具有如SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列的L-CDR2和具有如SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列的L-CDR3。

优选地，所述重链可变区包含如SEQ ID NO:25、26、27或28所示的氨基酸序列或者包含与如SEQ ID NO:25、26、27或28所示的氨基酸序列具有至少75％、优选至少80％、更优选至少85％、进一步优选至少90％、甚至优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；

和/或

所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:29、30、31或32所示的氨基酸序列或者包含与如SEQ ID NO:29、30、31或32所示的氨基酸序列具有至少75％、优选至少80％、更优选至少85％、进一步优选至少90％、甚至优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。

更优选地，所述抗体包含选自以下的重链可变区和轻链可变区的组合：

(1)包含如SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列或者包含与如SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列具有至少75％、优选至少80％、更优选至少85％、进一步优选至少90％、甚至优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区；和

包含如SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列或者包含与如SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列具有至少75％、优选至少80％、更优选至少85％、进一步优选至少90％、甚至优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区；

(2)包含如SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列或者包含与如SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列具有至少75％、优选至少80％、更优选至少85％、进一步优选至少90％、甚至优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区；和

包含如SEQ ID NO:30所示的氨基酸序列或者包含与如SEQ ID NO:30所示的氨基酸序列具有至少75％、优选至少80％、更优选至少85％、进一步优选至少90％、甚至优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区；

(3)包含如SEQ ID NO:27所示的氨基酸序列或者包含与如SEQ ID NO:27所示的氨基酸序列具有至少75％、优选至少80％、更优选至少85％、进一步优选至少90％、甚至优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区；和

包含如SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列或者包含与如SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列具有至少75％、优选至少80％、更优选至少85％、进一步优选至少90％、甚至优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区；以及

(4)包含如SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列或者包含与如SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列具有至少75％、优选至少80％、更优选至少85％、进一步优选至少90％、甚至优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链可变区；和

包含如SEQ ID NO:32所示的氨基酸序列或者包含与如SEQ ID NO:32所示的氨基酸序列具有至少75％、优选至少80％、更优选至少85％、进一步优选至少90％、甚至优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链可变区。

除了可变区之外，本发明的抗体在其重链中还包含小鼠源重链恒定区；和/或，在其轻链中还包含小鼠源轻链恒定区；

更优选地，所述抗体包含选自以下的重链和轻链的组合：

(1)包含如SEQ ID NO:33所示的氨基酸序列或者包含与如SEQ ID NO:33所示的氨基酸序列具有至少75％、优选至少80％、更优选至少85％、进一步优选至少90％、甚至优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链；和

包含如SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列或者包含与如SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列具有至少75％、优选至少80％、更优选至少85％、进一步优选至少90％、甚至优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链；

(2)包含如SEQ ID NO:34所示的氨基酸序列或者包含与如SEQ ID NO:34所示的氨基酸序列具有至少75％、优选至少80％、更优选至少85％、进一步优选至少90％、甚至优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链；和

包含如SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列或者包含与如SEQ ID NO:38所示的氨基酸序列具有至少75％、优选至少80％、更优选至少85％、进一步优选至少90％、甚至优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链；

(3)包含如SEQ ID NO:35所示的氨基酸序列或者包含与如SEQ ID NO:35所示的氨基酸序列具有至少75％、优选至少80％、更优选至少85％、进一步优选至少90％、甚至优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链；和

包含如SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列或者包含与如SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列具有至少75％、优选至少80％、更优选至少85％、进一步优选至少90％、甚至优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链；以及

(4)包含如SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列或者包含与如SEQ ID NO:35所示的氨基酸序列具有至少75％、优选至少80％、更优选至少85％、进一步优选至少90％、甚至优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的重链；和

包含如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列或者包含与如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列具有至少75％、优选至少80％、更优选至少85％、进一步优选至少90％、甚至优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的轻链。

本发明的抗体是单克隆抗体、单链抗体、单域抗体、完全或部分人源化的抗体或者嵌合抗体；

更优选地，所述抗体是免疫球蛋白，优选为IgA、IgD、IgE、IgG或IgM，更优选为IgG1；

具体地，所述抗体选自抗体I3E3、H1E6、161B3和H1K1。

另一方面，本发明还提供一种核酸分子，所述核酸分子编码本发明抗体的重链可变区、轻链可变区、重链和/或轻链；

优选地，所述核酸分子包含如SEQ ID NO:41、42、43、44、45、46、47或48所示的核苷酸序列。

本发明的核酸分子可以被克隆到载体中，进而转化或转染宿主细胞。因此又一方面，本发明还提供一种载体，所述载体包含本发明的核酸分子。所述载体可以为真核表达载体、原核表达载体、人工染色体及噬菌体载体等。

本发明的载体或核酸分子可以用于转化或转染宿主细胞，用于保存或抗体表达等目的。因此，还一方面，本发明提供一种宿主细胞，所述宿主细胞包含本发明的核酸分子和/或载体，或者所述宿主细胞被本发明的核酸分子和/或载体转化或转染。宿主细胞可以是任何原核或真核细胞，例如细菌或昆虫、真菌、植物或动物细胞。

本发明提供的抗体可以利用本领域已知的任何方法获得。例如，可以先由本发明提供的核酸分子获得所述抗体的重链可变区和/或轻链可变区，或者获得所述抗体的重链和/或轻链，然后与所述抗体的任选其他结构域组装成抗体；或者，在允许本发明提供的宿主细胞表达所述抗体的重链可变区和/或轻链可变区或者所述抗体的重链和/或轻链以组装成所述抗体的情况下，培养所述宿主细胞。任选地，所述方法还包括回收产生的抗体的步骤。

本发明提供的抗体、核酸分子、载体和/或宿主细胞可以被包含在药物组合物中，更特别地被包含在药物制剂中，从而根据实际需要用于各种目的。因此，在又一方面，本发明还提供一种药物组合物，所述药物组合物包含本发明所述的抗体或其片段、核酸分子、载体和/或宿主细胞，以及任选的药学上可接受的辅料。

再一方面，本发明还提供所述抗体、核酸分子、载体、宿主细胞和/或药物组合物在制备用于预防或治疗疾病的药物中的用途，所述疾病包括肿瘤或癌症，例如黑色素瘤、肺癌、霍奇金淋巴瘤、膀胱癌、肾癌、肝癌、食管癌、非霍奇金淋巴瘤、乳腺癌、甲状腺癌、胃癌、肠癌、鼻咽癌、胰腺癌、前列腺癌、白血病、喉癌、口腔癌、耳部眼部肿瘤、胆道癌、胆囊癌、肾上腺癌、生殖系统肿瘤、多发性骨髓瘤、神经系统肿瘤。

另一方面，本发明还提供一种预防或治疗疾病的方法，所述方法包括给有此需要的受试者施用本发明的抗体、核酸分子、载体、宿主细胞和/或药物组合物，所述疾病包括肿瘤或癌症，例如黑色素瘤、肺癌、霍奇金淋巴瘤、膀胱癌、肾癌、肝癌、食管癌、非霍奇金淋巴瘤、乳腺癌、甲状腺癌、胃癌、肠癌、鼻咽癌、胰腺癌、前列腺癌、白血病、喉癌、口腔癌、耳部眼部肿瘤、胆道癌、胆囊癌、肾上腺癌、生殖系统肿瘤、多发性骨髓瘤、神经系统肿瘤；

优选地，所述受试者为哺乳类动物；更优选地，所述受试者为人。

并且，本发明还提供一种增强T细胞免疫应答的方法，所述方法包括给有此需要的受试者施用本发明的抗体、核酸分子、载体、宿主细胞和/或药物组合物；

其中，所述增强T细胞免疫应答包括增强T细胞的细胞因子产生；优选地，细胞因子包括IL-8和/或IFN-γ。

在本发明的上述方法中，还可以联合施用其他药物，例如所述方法还包括给受试者施用至少一种选自下述的药物：TLR9拮抗剂例如CpG、IDO1抑制剂、PD1、PDL1、CTLA4等抑制剂类药物，以及肿瘤疫苗类药物。

再一方面，本发明还提供所述抗体、核酸分子、载体、宿主细胞和/或药物组合物在制备用于诊断疾病的试剂中的用途，所述疾病包括肿瘤或癌症，例如黑色素瘤、肺癌、霍奇金淋巴瘤、膀胱癌、肾癌、肝癌、食管癌、非霍奇金淋巴瘤、乳腺癌、甲状腺癌、胃癌、肠癌、鼻咽癌、胰腺癌、前列腺癌、白血病、喉癌、口腔癌、耳部眼部肿瘤、胆道癌、胆囊癌、肾上腺癌、生殖系统肿瘤、多发性骨髓瘤、神经系统肿瘤。

另一方面，本发明还提供一种诊断疾病的方法，所述方法包括使本发明的抗体、核酸分子、载体、宿主细胞和/或药物组合物与来自受试者的样品相接触，所述疾病包括肿瘤或癌症，例如黑色素瘤、肺癌、霍奇金淋巴瘤、膀胱癌、肾癌、肝癌、食管癌、非霍奇金淋巴瘤、乳腺癌、甲状腺癌、胃癌、肠癌、鼻咽癌、胰腺癌、前列腺癌、白血病、喉癌、口腔癌、耳部眼部肿瘤、胆道癌、胆囊癌、肾上腺癌、生殖系统肿瘤、多发性骨髓瘤、神经系统肿瘤；

又一方面，本发明提供一种试剂盒，所述试剂盒包括本发明的抗体、核酸分子、载体、宿主细胞和/或药物组合物。所述试剂盒可以用于治疗或诊断用途。

与现有技术相比，本发明提供了一种新型的能够特异性结合OX40的抗体。本发明的抗体如下进行筛选和制备：以OX40蛋白的胞外区与小鼠IgG2a FC标签构建的融合蛋白作为免疫原，免疫小鼠，利用杂交瘤技术，筛选在分子水平和细胞水平上与OX40亲和力最好的杂交瘤细胞株，利用HT1080-OX40稳转细胞在亲和力高的细胞株里采用ELISA方法筛选激活功能最好的杂交瘤细胞株并测定抗体序列。最终，本发明筛选出具有出乎意料的高OX40亲和力和T细胞活化能力的抗体，例如抗体I3E3、H1E6、161B3和H1K1。

与现有抗OX40抗体相比，本发明的抗体具有以下特点：

本发明的抗OX40抗体对人源OX40蛋白具有高亲和力，能有效激活OX40蛋白及其下游的信号通路，同时本发明的抗OX40抗体与OX40L非竞争地结合，因此并不影响OX40与其配体OX40L的结合。因此，本发明的抗OX40抗体能够与OX40L协同激活OX40蛋白及其下游的信号通路，从而与下游蛋白TRAF2和TRAF5的相互作用而激活NF-κB，同时促进凋亡抑制剂BCL2和BCL2lL1/BCL2-XL的表达，从而抑制T细胞凋亡，达到长期刺激T细胞免疫的功能。因此该OX40抗体能够运用于治疗肿瘤疾病药物的制备中。另外，本发明的抗OX40抗体还可作为诊断试剂，用于诊断涉及OX40蛋白表达的疾病。

附图说明

以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：

图1显示了本发明的抗体与抗原OX40结合的ELISA检测结果。

图2显示了本发明的抗体与抗原OX40结合的FACS检测结果。

图3显示了本发明的抗体刺激OX40稳转细胞产生IL-8的ELISA检测结果。

图4显示了本发明的抗体与OX40L非竞争地结合OX40的FACS检测结果。

图5显示了本发明的抗体与抗原OX40结合的Biacore检测结果。

图6显示了本发明的抗体增强OKT3激活原代T细胞释放IFN-γ的检测结果。

具体实施方式

以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些实施例仅用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的药材原料、试剂材料等，如无特殊说明，均为市售购买产品。

实施例1本发明杂交瘤细胞的制备

用包含OX40蛋白(来自Genbank登记号NM_003327.3)的胞外区(SEQ ID NO:49)与小鼠IgG2a-FC(来自Genbank登记号AAH31470.1)的融合蛋白作为免疫原免疫小鼠，5只小鼠皮下免疫，5只小鼠肌肉免疫，佐剂采用quick antibody 5W水溶性佐剂，加强免疫以后2周测效价，选取效价高的两只小鼠进行免疫冲击，3天之后进行下文所述的细胞融合。

取准备融合的两只小鼠，取血清，然后解剖后，取脾脏，分离脾细胞，与培养的骨髓瘤细胞进行融合，铺96孔板，同时加入选择性培养基进行筛选，7天后换液，10天后进行ELISA检测，选择OD值大于阴性对照10倍以上的再进行流式细胞仪检测。

挑选双阳的细胞，通过细胞有限稀释法进行亚克隆铺板，挑选单克隆细胞。将挑选出的单克隆细胞，取培养上清，进行ELISA检测及流式细胞仪检测，挑选双阳的细胞扩大培养。

实施例2本发明杂交瘤细胞的培养上清与OX40结合的ELISA检测

用包含OX40蛋白(来自Genbank登记号NM_003327.3)的胞外区(SEQ ID NO:49)与人的IgG1-FC(来自Genbank登记号CAC20454.1)用包被液稀释至1-2μg/ml，然后以50-100μl/孔加入酶标板孔中，置4℃过夜或37℃吸附2小时。弃去孔内的液体，同时用洗涤液洗3次，每次3-5分钟，拍干。每孔加入200μl封闭液4℃过夜或37℃封闭2小时。用洗涤液洗3次，此时包被板可在-20℃或4℃保存备用。

向每孔中加入50-100μl待检杂交瘤细胞的培养上清，同时设立阳性对照(加入融合小鼠的血清)、阴性对照(加入正常小鼠的血清)和空白对照(加入培养基)。在37℃孵育1-2小时，洗涤，拍干。然后向每孔中加入酶标二抗，为1:10000稀释的辣根过氧化物酶标记的羊抗小鼠IgG(SIGMA，货号A9044-2ml)，每孔50-100μl，37℃孵育1-2小时，洗涤，拍干。向每孔中加入新鲜配制的底物显色液TMB 50-100μl，37℃孵育10-30分钟。

加入2mol/L H₂SO₄终止反应，在酶联免疫阅读仪上读取OD值。

结果判定：以P/N>2:1(P代表阳性数值，N代表正常小鼠血清数值)为阳性。若阴性对照孔无色或接近无色，阳性对照孔明确显色，则可直接用肉眼观察结果。

实施例3本发明杂交瘤细胞的培养上清与OX40结合的FACS检测

将OX40蛋白(来自Genbank登记号NM_003327.3)的胞外区(SEQ ID NO:49)构建到PLVX病毒包装载体(clontech，virus package mix，货号631275)，转染293T细胞包装病毒，用该病毒感染HEK293细胞，加药嘌呤霉素(puromycin)筛选得到耐药细胞株即稳定转染OX40的HEK293。然后将HEK293-OX40细胞在含2％FBS的PBS中制备成细胞浓度为10⁷个细胞/ml的细胞悬液。

向每个流式管(样品管)中放入50μl细胞悬液，然后加入50μl待检杂交瘤细胞的培养上清，4℃孵育60分钟。向每个流式管中加入1ml的流式缓冲液，1200rpm下离心5分钟，弃上清，重复洗涤三次。同时设置对照管1(不加入培养上清和下文的二抗，仅加入细胞悬液)和对照管2(不加入培养上清，仅加入细胞悬液和下文的二抗)。

然后向每个流式管中加入100μl流式缓冲液进行重悬，根据实验要求加入5μl PE标记的抗人Fc标签的二抗(Biolegend，货号409304)，4℃避光孵育30分钟，然后加入1ml流式缓冲液，室温下1200rpm离心5分钟，弃上清，重复洗涤三次。

再次向每个流式管中加入250μl流式缓冲液，重悬混匀，上机检测。

实施例4本发明杂交瘤细胞的培养上清刺激OX40稳转细胞产生IL-8的检测

用OX40蛋白(来自Genbank登记号NM_003327.3)的胞外区(SEQ ID NO:49)构建到PLVX病毒包装载体(clontech，virus package mix，货号631275)，转染293T细胞包装病毒，用该病毒感染HT1080细胞，加药嘌呤霉素(puromycin)筛选得到耐药细胞株即稳定转染OX40的HT1080。然后收集处于对数生长期的HT1080-OX40细胞，在补充10％FBS的1640培养基中制备成细胞浓度为1 x 10⁶个细胞/ml的细胞悬液。

将100μl细胞悬液加入96孔板中，细胞培养箱中孵育过夜。然后弃去96孔板中的培养基，用PBS洗涤一次。加入50μl～100μl待检杂交瘤细胞的培养上清，培养箱中孵育6小时后收集上清。

用EILSA试剂盒检测上清中IL-8含量。基于检测到的IL-8含量，选择相应的单克隆细胞，提RNA，再反转录cDNA，连入测序载体中进行测序分析。示例性抗体示于下表1。

表1

对于测序得到的针对OX40靶点的抗体DNA序列，重新设计引物，合成基因，连入真核表达载体中，转化DH5a感受态细胞，37℃恒温培养箱培养过夜，挑单克隆菌株送公司测序鉴定。挑选序列正确的菌株，摇菌，大提质粒，转染哺乳动物表达细胞293F，置于37℃、5％CO2的培养箱中，表达培养7天。

收取表达上清，离心，过滤，选择protein G亲和层析柱，进行纯化，纯化的抗体通过SDS-PAGE电泳检测纯度，用BCA蛋白检测试剂盒检测抗体浓度，分装，保存于-80℃冰箱中备用。

实施例5本发明的抗体与OX40结合的ELISA检测

实验过程参照实施例2，不同之处在于，向包被板的每孔中加入待检抗体、阳性参考抗体(Ref；Genetech，1A7抗体，参见US2015/307617A1)，和阴性参考抗体(hIgG1)，浓度参见图1。

实验结果见图1。

实施例6本发明的抗体与OX40结合的FACS检测

实验过程参照实施例3，不同之处在于，向每个流式管中放入50μl细胞悬液之后，加入待检抗体、阳性参考抗体(Ref；Genetech，1A7抗体，参见US2015/307617A1)，和阴性参考抗体(hIgG1)，浓度参见图2。同时设置对照管1(不加入抗体和下文的二抗，仅加入细胞悬液)和对照管2(不加入抗体，仅加入细胞悬液和下文的二抗)。

实验结果见图2。

实施例7本发明的抗体刺激OX40稳转细胞产生IL-8的检测

实验过程参照实施例4，不同之处在于，向96孔板的每孔中加入待检抗体、阳性参考抗体(Ref；Genetech，1A7抗体，参见US2015/307617A1)，和阴性参考抗体(hIgG1)，浓度参见图3。

实验结果见图3。

实施例8本发明的抗体与OX40L非竞争关系的FACS检测

将HEK293-OX40细胞在含2％FBS的PBS中制备成细胞浓度为10⁷个细胞/ml的细胞悬液。

向每个流式管(样品管)中放入50μl细胞悬液，然后加入OX40L-hFC融合蛋白(SinoBiological Inc，货号13127-H01H-50)和不同的20μg/ml本发明的抗体或阳性参考抗体(Ref；Genetech，1A7抗体，参见US2015/307617A1)，4℃孵育60分钟。向每个流式管中加入1ml的流式缓冲液，1200rpm下离心5分钟，弃上清，重复洗涤三次。同时设置对照管1(不加入抗体、融合蛋白和下文的二抗，仅加入细胞悬液)和对照管2(不加入抗体和融合蛋白，仅加入细胞悬液和下文的二抗)。

然后向每个流式管中加入100μl流式缓冲液进行重悬，根据实验要求加入5μl PE标记的抗人Fc二抗(Biolegend，货号：409304)，4℃避光孵育30分钟，然后加入1ml流式缓冲液，室温下1200rpm离心5分钟，弃上清，重复洗涤三次。

实验结果见图4。结果表明，抗体I3E3、H1E6、161B3和H1K1在5μg/ml的浓度下均与OX40L同时结合OX40，由此证明抗体I3E3、H1E6、161B3和H1K1与OX40L均非竞争地结合OX40。

实施例9本发明表达纯化后的抗体与OX40结合的亲和力检测

将实施例1中的融合蛋白在PBS缓冲溶液中制备成最高浓度为30nM的溶液，并3倍稀释为6个浓度并设0浓度对照。将本发明的抗体在PBS中制备为20nM的溶液。

用Biacore T200测定抗体抗原的亲和力。使用CM5芯片捕获本发明的抗体之后，将抗原OX40小鼠IgG2a Fc标签蛋白流过芯片，具体条件为：流速30μl/min；抗原抗体结合时间200秒，解离时间500秒。测得的结果用仪器专用配套软件拟合，以分析抗体与抗原的亲和力。

实验结果见图5。结果表明，I3E3的KD值为4.4nM，H1K1的KD值为11nM，H1E6的KD值为5.1nM。

实施例10本发明的抗体增强OKT3激活原代T细胞释放IFN-γ的检测

采用常规方法制备PMBC，然后在RPMI-1640培养基中制备成细胞浓度为5 x 10⁷个细胞/mL的细胞悬液，取2ml置于5ml流式管中。然后向每ml细胞悬液中加入50μl CD4+T细胞富集混合物(Cell Enrichment Cocktail)，混匀置于室温孵育10分钟。

每ml细胞悬液中加入100μl EasySep^TM D磁珠，混匀，置于室温孵育5分钟。然后补加RPMI-1640培养基至总体积2.5ml，混匀，然后将流式管置于磁铁中5分钟。颠倒磁铁和流式管，将混合物导入新的5ml流式管中。对于待分离的CD4+T细胞，按照2X10⁶个细胞/ml的浓度加入5μg/ml PHA及20U/ml IL2，激活48小时。

用1μg/ml抗小鼠FC抗体(SIGMA，货号M3534)包被96孔板12小时。然后每孔加入105个/40μl上文激活的CD4+T细胞，再加入10μl 10μg/ml OKT3抗体。

之后，以20μg/ml起始以10X梯度在PBS中稀释待检抗体、阳性参考抗体(Ref；Genetech，1A7抗体，参见US2015/307617A1)和阴性参考抗体(hIgG1)，加入50μl抗体稀释液，混匀，继续培养72小时。收集上清，用INF-gamma ELISA试剂盒检测抗体对T细胞的激活作用。

实验结果见图6。结果表明，抗体I3E3、H1E6、161B3和H1K1在不同浓度下均可刺激产生IFN-γ，在2μg/ml浓度左右达到最大刺激。

以上对本发明具体实施方式的描述并不限制本发明，本领域技术人员可以根据本发明作出各种改变或变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明所附权利要求的范围。

序列表

<110> 康源博创生物科技（北京）有限公司

<120> 与OX40L非竞争结合的抗OX40抗体

<130> LC17110072-D

<160> 49

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 10

<212> PRT

<213> artificial sequence

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Gly Phe Thr Phe Ser Asp Phe Tyr Met Gly

1 5 10

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Ala Ser Arg Asn Lys Ala Tyr Asp Tyr Thr Thr Ala Tyr Ser Ala Ser

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Val Lys Gly

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Asp Asp Gly Tyr Tyr Pro Met Asp Tyr

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Trp Ile Phe Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys

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Gly

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Trp Asp Gly Tyr Tyr Glu Gly Asp Tyr Phe Asp Asn

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Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Asp Met Ser

1 5 10

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<211> 17

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Thr Ile Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Phe Leu Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

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<211> 12

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<400> 9

Arg Tyr Gly Gln Gly Gly Gly Tyr Ala Met Asp Tyr

1 5 10

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Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Ser Trp Ile His

1 5 10

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<211> 17

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Asp Ile His Pro Asn Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

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<211> 13

<212> PRT

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<400> 12

Ser Tyr Gly Asn Tyr Lys Asp Tyr Tyr Gly Met Asp Tyr

1 5 10

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Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Met His

1 5 10 15

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Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser

1 5

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<211> 9

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Gln His Ser Arg Glu Leu Pro Leu Thr

1 5

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Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Lys Tyr Ile Ala

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Tyr Thr Ser Thr Leu Gln Pro

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Leu Gln Tyr Val Asn Leu Tyr Thr

1 5

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Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Tyr

1 5 10

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<211> 7

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Leu Thr Ser Asn Leu Ala Ser

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Gln Gln Trp Ser Arg Asn Pro Leu Thr

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Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp Gly Asp Ser Tyr Met Asn

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Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser

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Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Tyr Thr

1 5

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<400> 25

Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Phe

20 25 30

Tyr Met Gly Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Arg Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Ala Ala Ser Arg Asn Lys Ala Tyr Asp Tyr Thr Thr Ala Tyr Ser Ala

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Ile Val Ser Arg Asp Thr Ser Gln Ser Ile

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ala Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr

85 90 95

Tyr Cys Ala Arg Asp Asp Gly Tyr Tyr Pro Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

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Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Thr

1 5 10 15

Ser Val Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Trp Ile Phe Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Arg Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Trp Asp Gly Tyr Tyr Glu Gly Asp Tyr Phe Asp Asn Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

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<211> 121

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Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Phe Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Asp Met Ser Trp Ile Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Phe Leu Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Tyr Gly Gln Gly Gly Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

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Glu Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ser Val Leu Val Arg Pro Gly Thr

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Ser

20 25 30

Trp Ile His Trp Ala Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asp Ile His Pro Asn Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Val Asp Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Arg Ser Tyr Gly Asn Tyr Lys Asp Tyr Tyr Gly Met Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

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<211> 111

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<400> 29

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser

20 25 30

Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His

65 70 75 80

Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg

85 90 95

Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105 110

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Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly

1 5 10 15

Gly Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Lys Tyr

20 25 30

Ile Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Gly Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

His Tyr Thr Ser Thr Leu Gln Pro Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Arg Asp Tyr Ser Phe Asn Ile Ser Asn Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Val Asn Leu Tyr Thr

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Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

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<210> 31

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Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Leu Met Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met

20 25 30

Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Arg Ser Ser Pro Lys Ala Trp Ile Tyr

35 40 45

Leu Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Arg Asn Pro Leu Thr

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Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

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<210> 32

<211> 112

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Asp Ile Leu Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

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Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp

20 25 30

Gly Asp Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His

65 70 75 80

Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn

85 90 95

Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

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<211> 450

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<400> 33

Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Phe

20 25 30

Tyr Met Gly Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Arg Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Ala Ala Ser Arg Asn Lys Ala Tyr Asp Tyr Thr Thr Ala Tyr Ser Ala

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Ile Val Ser Arg Asp Thr Ser Gln Ser Ile

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ala Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr

85 90 95

Tyr Cys Ala Arg Asp Asp Gly Tyr Tyr Pro Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

210 215 220

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly

225 230 235 240

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

245 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

260 265 270

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

275 280 285

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

290 295 300

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

305 310 315 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

325 330 335

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

340 345 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

355 360 365

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

385 390 395 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

405 410 415

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

420 425 430

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

435 440 445

Gly Lys

450

<210> 34

<211> 451

<212> PRT

<213> artificial sequence

<400> 34

Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Thr

1 5 10 15

Ser Val Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Trp Ile Phe Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Arg Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Trp Asp Gly Tyr Tyr Glu Gly Asp Tyr Phe Asp Asn Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser

115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala

130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val

145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala

165 170 175

Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val

180 185 190

Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His

195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys

210 215 220

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly

225 230 235 240

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

245 250 255

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His

260 265 270

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

275 280 285

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr

290 295 300

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

305 310 315 320

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile

325 330 335

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

340 345 350

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser

355 360 365

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

370 375 380

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

405 410 415

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

435 440 445

Pro Gly Lys

450

<210> 35

<211> 451

<212> PRT

<213> artificial sequence

<400> 35

Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Phe Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Asp Met Ser Trp Ile Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Phe Leu Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Tyr Gly Gln Gly Gly Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser

115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala

130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val

145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala

165 170 175

Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val

180 185 190

Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His

195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys

210 215 220

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly

225 230 235 240

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

245 250 255

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His

260 265 270

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

275 280 285

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr

290 295 300

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

305 310 315 320

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile

325 330 335

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

340 345 350

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser

355 360 365

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

370 375 380

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

405 410 415

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

435 440 445

Pro Gly Lys

450

<210> 36

<211> 452

<212> PRT

<213> artificial sequence

<400> 36

Glu Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ser Val Leu Val Arg Pro Gly Thr

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Ser

20 25 30

Trp Ile His Trp Ala Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asp Ile His Pro Asn Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Val Asp Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Arg Ser Tyr Gly Asn Tyr Lys Asp Tyr Tyr Gly Met Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro

115 120 125

Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr

130 135 140

Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr

145 150 155 160

Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro

165 170 175

Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr

180 185 190

Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn

195 200 205

His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser

210 215 220

Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu

225 230 235 240

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

245 250 255

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

260 265 270

His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

275 280 285

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr

290 295 300

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

305 310 315 320

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro

325 330 335

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

340 345 350

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val

355 360 365

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

370 375 380

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

385 390 395 400

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr

405 410 415

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

420 425 430

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

435 440 445

Ser Pro Gly Lys

450

<210> 37

<211> 218

<212> PRT

<213> artificial sequence

<400> 37

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser

20 25 30

Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His

65 70 75 80

Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg

85 90 95

Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg

100 105 110

Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln

115 120 125

Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr

130 135 140

Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser

145 150 155 160

Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr

165 170 175

Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys

180 185 190

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro

195 200 205

Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 38

<211> 213

<212> PRT

<213> artificial sequence

<400> 38

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly

1 5 10 15

Gly Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Lys Tyr

20 25 30

Ile Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Gly Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

His Tyr Thr Ser Thr Leu Gln Pro Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Arg Asp Tyr Ser Phe Asn Ile Ser Asn Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Val Asn Leu Tyr Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro

100 105 110

Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr

115 120 125

Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys

130 135 140

Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu

145 150 155 160

Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser

165 170 175

Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala

180 185 190

Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe

195 200 205

Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 39

<211> 213

<212> PRT

<213> artificial sequence

<400> 39

Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Leu Met Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met

20 25 30

Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Arg Ser Ser Pro Lys Ala Trp Ile Tyr

35 40 45

Leu Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Arg Asn Pro Leu Thr

85 90 95

Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro

100 105 110

Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr

115 120 125

Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys

130 135 140

Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu

145 150 155 160

Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser

165 170 175

Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala

180 185 190

Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe

195 200 205

Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 40

<211> 218

<212> PRT

<213> artificial sequence

<400> 40

Asp Ile Leu Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp

20 25 30

Gly Asp Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His

65 70 75 80

Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn

85 90 95

Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

100 105 110

Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln

115 120 125

Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr

130 135 140

Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser

145 150 155 160

Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr

165 170 175

Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys

180 185 190

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro

195 200 205

Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 41

<211> 360

<212> DNA

<213> artificial sequence

<400> 41

gaggtgaagc tggtggaatc tggaggaggc ttggtacagc ctgggggttc tctgagactc 60

tcctgtgcaa cttctgggtt caccttcagt gatttctaca tggggtgggt ccgccagcct 120

ccagggaaga gactggagtg gattgctgca agtagaaaca aagcttatga ttatacaaca 180

gcatacagtg catctgtgaa gggtcggttc atcgtctcca gagacacttc ccaaagcatc 240

ctctaccttc agatgaatgc cctgagagct gaggacactg ccatttatta ctgtgcaaga 300

gatgatggtt actaccctat ggactactgg ggtcaaggaa cctcagtcac cgtctcctca 360

<210> 42

<211> 363

<212> DNA

<213> artificial sequence

<400> 42

gaggtgaagc tggtggagtc tggagctgag ctggtaaagc ctgggacttc agtgaggttg 60

tcctgcaagg cttctggcta caccttcaca agctatgata taaattgggt gaggcagagg 120

cctgaacagg gacttgagtg gattggatgg atttttcctg gagatggtag tactaagtac 180

aatgagaagt tcaagggcaa ggccacactg actacagaca aatcctccag cacagtctac 240

atgcagctca gcaggctgac atctgaggac tctgctgtct atttctgtgc aagatgggat 300

ggttactacg agggggacta ctttgacaac tggggccaag gcaccactct cacagtctcc 360

tca 363

<210> 43

<211> 363

<212> DNA

<213> artificial sequence

<400> 43

caggtgcagc tgaaggagag cggcggcgac ctggtgaagc ccggcggcag cctgaagctg 60

agctgcgccg ccttcggctt caccttcagc agctacgaca tgagctggat cagacagacc 120

cccgacaaga gactggagtg ggtggccacc atcagcagcg gcggcaccta cacctacttc 180

ctggacagcg tgaagggcag attcaccatc agcagagaca acgccaagaa caccctgtac 240

ctgcagatga gcagcctgag aagcgaggac accgccatgt actactgcgc cagaagatac 300

ggccagggcg gcggctacgc catggactac tggggccagg gcaccagcgt gaccgtgagc 360

agc 363

<210> 44

<211> 366

<212> DNA

<213> artificial sequence

<400> 44

gaggtccagc tgcagcagcc tgggtctgtg ctggtgaggc ctggaacttc agtgaagctg 60

tcctgcaagg cttctggcta caccttcacc agctcctgga ttcactgggc gaggcagagg 120

cctggacaag gccttgagtg gattggagac attcatccta atagtggtaa tactaactat 180

aatgagaagt tcaagggcaa ggccacactg actgtagaca catcctccag tacagcctac 240

gtggatctca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct attattgtgt aagaagctat 300

ggtaactaca aggattacta tggtatggac tattggggtc aaggaacctc agtcaccgtc 360

tcctca 366

<210> 45

<211> 334

<212> DNA

<213> artificial sequence

<400> 45

gacatccagc tgactcagtc tcctgcttcc ttagctgtat ctctggggca gagggccacc 60

atctcatgca gggccagcaa aagtgtcagt acatctggct atagttatat gcactggtac 120

caacagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctatc ttgcatccaa cctagaatct 180

ggggtccctg ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 240

cctgtggagg aggaggatgc tgcaacctat tactgtcagc acagtaggga gcttcccctc 300

acgttcggtg ctgggaccaa gctggagctg aaac 334

<210> 46

<211> 321

<212> DNA

<213> artificial sequence

<400> 46

gacattgtga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctctgggagg caaagtcacc 60

atcacttgca aggcaagcca agacattaac aagtatatag cttggtacca acacaagcct 120

ggaaaaggtc ctaggctgct cattcattac acatctacat tacagccagg catcccatca 180

agattcagtg gaagtgggtc tgggagagat tattccttca acatcagcaa cctggagcct 240

gaagatattg caacttatta ttgtctacag tatgttaatc tgtacacgtt cggagggggg 300

accaagctgg aaataaaacg t 321

<210> 47

<211> 318

<212> DNA

<213> artificial sequence

<400> 47

cagatcgtgc tgacccagag ccccgccctg atgagcgcca gccccggcga gaaggtgacc 60

atgacctgca gcgccagcag cagcgtgagc tacatgtact ggtaccagca gaagcccaga 120

agcagcccca aggcctggat ctacctgacc agcaacctgg ccagcggcgt gcccgccaga 180

ttcagcggca gcggcagcgg caccagctac agcctgacca tcagcagcat ggaggccgag 240

gacgccgcca cctactactg ccagcagtgg agcagaaacc ccctgacctt cggcgccggc 300

accaagctgg agctgaag 318

<210> 48

<211> 336

<212> DNA

<213> artificial sequence

<400> 48

gacattctga tgacccagtc tccagcttct ttggctgtgt ctctagggca gagggccacc 60

atctcctgca aggccagcca aagtgttgat tatgatggtg atagttacat gaactggtat 120

caacagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctatg ctgcatccaa tctagaatct 180

gggatcccag ccaggtttag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 240

cctgtggagg aggaggatgc tgcaacctat tactgtcagc aaagtaatga ggatccgtac 300

acgttcggag gggggaccaa gctggaaata aaacgt 336

<210> 49

<211> 214

<212> PRT

<213> homo sapiens

<400> 49

Met Cys Val Gly Ala Arg Arg Leu Gly Arg Gly Pro Cys Ala Ala Leu

1 5 10 15

Leu Leu Leu Gly Leu Gly Leu Ser Thr Val Thr Gly Leu His Cys Val

20 25 30

Gly Asp Thr Tyr Pro Ser Asn Asp Arg Cys Cys His Glu Cys Arg Pro

35 40 45

Gly Asn Gly Met Val Ser Arg Cys Ser Arg Ser Gln Asn Thr Val Cys

50 55 60

Arg Pro Cys Gly Pro Gly Phe Tyr Asn Asp Val Val Ser Ser Lys Pro

65 70 75 80

Cys Lys Pro Cys Thr Trp Cys Asn Leu Arg Ser Gly Ser Glu Arg Lys

85 90 95

Gln Leu Cys Thr Ala Thr Gln Asp Thr Val Cys Arg Cys Arg Ala Gly

100 105 110

Thr Gln Pro Leu Asp Ser Tyr Lys Pro Gly Val Asp Cys Ala Pro Cys

115 120 125

Pro Pro Gly His Phe Ser Pro Gly Asp Asn Gln Ala Cys Lys Pro Trp

130 135 140

Thr Asn Cys Thr Leu Ala Gly Lys His Thr Leu Gln Pro Ala Ser Asn

145 150 155 160

Ser Ser Asp Ala Ile Cys Glu Asp Arg Asp Pro Pro Ala Thr Gln Pro

165 170 175

Gln Glu Thr Gln Gly Pro Pro Ala Arg Pro Ile Thr Val Gln Pro Thr

180 185 190

Glu Ala Trp Pro Arg Thr Ser Gln Gly Pro Ser Thr Arg Pro Val Glu

195 200 205

Val Pro Gly Gly Arg Ala

210

Claims

1.一种能够特异性结合OX40的抗体，所述抗体与OX40的天然配体结合OX40的不同表位，所述抗体在其重链可变区和轻链可变区中包含：

(1)如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的H-CDR1、如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的H-CDR2和如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的H-CDR3；和，如SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列的L-CDR1、如SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列的L-CDR2和如SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列的L-CDR3；

(2)如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列的H-CDR1、如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列的H-CDR2和如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的H-CDR3；和，如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列的L-CDR1、如SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列的L-CDR2和如SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列的L-CDR3；或

(3)如SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的H-CDR1、如SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列的H-CDR2和如SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列的H-CDR3；和，如SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列的L-CDR1、如SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列的L-CDR2和如SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列的L-CDR3。

2.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述抗体包含以下重链可变区和轻链可变区的组合：

(1)包含如SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列的重链可变区；和，包含如SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列的轻链可变区；

(2)包含如SEQ ID NO:27所示的氨基酸序列的重链可变区；和，包含如SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列的轻链可变区；或

(3)包含如SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列的重链可变区；和，包含如SEQ ID NO:32所示的氨基酸序列的轻链可变区。

3.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述抗体在其重链中还包含小鼠源重链恒定区；和，在其轻链中还包含小鼠源轻链恒定区。

4.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述抗体包含以下重链和轻链的组合：

(1)包含如SEQ ID NO:33所示的氨基酸序列的重链；和

包含如SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列的轻链；

(2)包含如SEQ ID NO:35所示的氨基酸序列的重链；和

包含如SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列的轻链；或

(3)包含如SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列的重链；和

包含如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列的轻链。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的抗体，其特征在于，所述抗体是单克隆抗体、单链抗体、完全或部分人源化的抗体或者嵌合抗体。

6.根据权利要求5所述的抗体，其特征在于，所述抗体是嵌合抗体。

7.根据权利要求5所述的抗体，其特征在于，所述抗体是免疫球蛋白。

8.根据权利要求7所述的抗体，其特征在于，所述免疫球蛋白为IgA、IgD、IgE、IgG或IgM。

9.根据权利要求7所述的抗体，其特征在于，所述免疫球蛋白为IgG1。

10.一种核酸分子，所述核酸分子包含编码权利要求1至9中任一项所述抗体的重链可变区的核苷酸序列和轻链可变区的核苷酸序列；或包含编码权利要求1至9中任一项所述抗体的重链的核苷酸序列和轻链的核苷酸序列。

11.根据权利要求10所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包含：

(1)如SEQ ID NO:41所示的核苷酸序列和如SEQ ID NO:45所示的核苷酸序列；

(2)如SEQ ID NO:43所示的核苷酸序列和如SEQ ID NO:47所示的核苷酸序列；或

(3)如SEQ ID NO:44所示的核苷酸序列和如SEQ ID NO:48所示的核苷酸序列。

12.一种载体，所述载体包含权利要求10或11所述的核酸分子。

13.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含权利要求10或11所述的核酸分子或权利要求12所述的载体。

14.一种宿主细胞，所述宿主细胞被权利要求10或11所述的核酸分子或权利要求12所述的载体转化或转染。

15.一种药物组合物，所述药物组合物包含权利要求1至9中任一项所述的抗体、权利要求10或11所述的核酸分子、权利要求12所述的载体或权利要求13或14所述的宿主细胞，以及任选的药学上可接受的载体。

16.一种试剂盒，所述试剂盒包括权利要求1至9中任一项所述的抗体、权利要求10或11所述的核酸分子、权利要求12所述的载体、权利要求13或14所述的宿主细胞或权利要求15所述的药物组合物。