TW201734042A - 抗淋巴细胞活化基因3(lag-3)抗體 - Google Patents

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Abstract

揭示抗LAG-3抗體。亦揭示包含此等抗體之組成物，以及使用其等之用途及方法。

Description

抗淋巴細胞活化基因3(LAG-3)抗體
發明領域 本發明係有關於結合淋巴細胞活化基因3(LAG-3)的抗體。
發明背景 T細胞衰竭為於許多慢性感染及癌症期間出現之T細胞官能不良的狀態。其被定義為T細胞效應子功能很差、抑制受體之持續表現，以及與功能效應子或記憶T細胞不同的轉錄狀態。衰竭會防礙感染及腫瘤的最佳控制(E John Wherry,Nature Immunology 12, 492-499 (2011))。
T細胞衰竭係特徵在於T細胞功能逐步且進行性的喪失。衰竭於許多慢性淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎病毒(LCMV)感染是明確定義的且一般於抗原持久性的情況下發展，其發生於許多慢性感染之後，包括B型肝炎、C型肝炎及人類免疫不全病毒感染，以及腫瘤轉移期間。衰竭不是始終如一的障礙設定，因為會顯現出表現型及功能缺陷的階段性變化，以及此等細胞與原型的效應子、記憶及應變性缺失的(anergic)T細胞有區別。衰竭的T細胞最常於高惡性度(high-grade)慢性感染期間出現，且抗原刺激的水平及持續期間是進程的關鍵決定因素。(Yi等人，Immunology Apr 2010；129(4):474-481)。
循環人類腫瘤專一性CD8+ T細胞可為胞毒型的且於活體內生產細胞介素，其表示自我(self-)及腫瘤專一性人類CD8+ T細胞會於有效力的免疫療法後達到功能勝任性(functional competence)，諸如用胜肽、不完全佛恩得佐劑(incomplete Freund’s adjuvant)(IFA)及CpG進行疫苗接種或是授受性轉移(adoptive transfer)。與末梢血液相比，T細胞浸潤腫瘤位置通常為功能不全的，加上異常低的細胞介素(cytokine)生產及抑制受體PD-1、CTLA-4、TIM-3及LAG-3之向上調節。功能不全為可逆的，因為從黑色素瘤組織單離的T細胞能於短期活體外(in vitro )培養之後恢復IFN-γ生產。然而，仍然要確定此功能減損是否涉及另外的分子途徑，可能類似動物模式內所界定的T細胞衰竭或無因變性(anergy)。(Baitsch等人，J Clin Invest. 2011;121(6):2350-2360)。
淋巴細胞活化基因3(LAG-3)，亦稱為CD223，係一種由人類LAG3 基因所編碼的第I型跨膜蛋白。於Sierro等人，Expert Opin Ther Targets (2011) 15(1): 91-101內，回顧本文所述之LAG-3的分子性質與生物功能。LAG-3為一種似CD4蛋白，其表現於T細胞(尤其是活化的T細胞)自然殺手細胞、B細胞及漿細胞樣(plasmacytoid)樹狀細胞的表面。LAG-3業已顯示為一種負向共刺激受體，即一種抑制受體。
LAG-3與第II類MHC分子結合，第II類MHC分子為一種以高水平持續表現於抗原呈現細胞(APCs)，例如樹狀細胞、巨噬細胞及B細胞的表面之分子家族。LAG-3的功能係取決於與第II類MHC分子之結合，且經由其之細胞域進行發送訊息(signalling)。
LAG-3為T細胞反應的負向調節子；抑制LAG-3會導致改良的T細胞增殖，而LAG-3之過度表現減損了抗原驅動的T細胞增殖。
T細胞上的LAG-3之交聯作用會減損CD4+ T細胞之TCR媒介的活化作用，導致縮減的增殖作用、較低的IL-2生產及TH 1-型細胞介素(即，IFNγ、TNFα)之生產縮減。LAG-3表現亦為CD4+ CD25+ FoxP3+調節T細胞(Tregs)的特徵。於抗原刺激後LAG-3係以高水平表現於CD8+ T細胞之上，以及CD8+ T細胞上LAG-3之表現係相似地與提升的調節活性及較低的增殖潛力有關連。
研究業已顯示慢性病毒感染後，衰竭的CD8+ T細胞表現多重的抑制受體(諸如，PD-1、CD160及2B4)。LCMV感染後表現高水平的LAG-3，以及PD-1/PD-L1途徑的阻斷組合以LAG-3之阻斷業已顯示會戲劇性地降低慢性感染小鼠的病毒負荷量(Blackburn等人之Nat Immunol (2009) 10:29-37)。PD-1/PD-L1途徑及LAG-3阻斷之組合抑制作用也已顯示出會提供抗腫瘤功效(Jing等人之Journal for ImmunoTherapy of Cancer (2015) 3:2)。
發明概要 本發明係有關於與LAG-3結合之抗體或抗原結合片段。亦揭示重及輕鏈多肽。該抗體、抗原結合片段及多肽可以以經單離及/或純化的形式來提供，以及可以調配成適合用於研究、療法及診斷的組成物。
於一些具體例中，該抗體或抗原結合片段或多肽可以於展現出T細胞衰竭或T細胞無因變性之T細胞，例如CD4+或CD8+ T細胞，有效地恢復T細胞功能。
於本發明的一個態樣中，提供一種抗體或抗原結合片段，該抗體之胺基酸序列可以包含i)至iii)之胺基酸序列，或iv)至vi)之胺基酸序列，或較佳為i)至vi)之胺基酸序列： i)LC-CDR1：X1 X2 SQSX3 X4 X5 X6 X7 X8 X9 X10 X11 X12 X13 (序列辨識編號：53)； ii)LC-CDR2：X14 X15 SX16 RAX17 (序列辨識編號：54)； iii)LC-CDR3：X18 QX19 X20 X21 X22 X23 X24 X25 X26 X27 (序列辨識編號：55)； iv)HC-CDR1：X28 X29 X30 X31 X32 (序列辨識編號：56)； v)HC-CDR2：X33 X34 X35 X36 X37 X38 X39 X40 X41 X42 YAX43 X44 X45 X46 G(序列辨識編號：57)； vi)HC-CDR3：下列中之一者：PFGDFDY(序列辨識編號：30)、LPGWGAYAFDI(序列辨識編號：33)、DPDAANWGFLLYYGMDV(序列辨識編號：35)、ALADFWSGYYYYYYMDV(序列辨識編號：38)，或TWFGELYY(序列辨識編號：41)中之一者； 或其之一變異體，其中該序列(i)至(vi)之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代，其中X1 = R或T；X2 = S、A或T；X3 = L或V；X4 = L或S；X5 = H或S；X6 = S、G或T；X7 = N、F、Y、D或S；X8 = G或L；X9 = Y、A或D；X10 = 缺少或N；X11 =缺少或Y；X12 =缺少、L或F；X13 =缺少(即，沒有胺基酸)或D；X14 = L、G或D；X15 = G或A；X16 = N或S；X17 = S、T或A；X18 = M或Q；X19 = A、Y或G；X20 = L、G或T；X21 = Q、P、S或H；X22 = T、S或W；X23 = P、I、R或L；X24 = Y、T、P或L；X25 =缺少、T、I或G；X26 =缺少、T或L；X27 =缺少或T；X28 = S或E；X29 = Y或L；X30 = Y、G、A或S；X31 = M或I；X32 = H或S；X33 = I、G或V；X34 = I或F；X35 = N、S、I或D；X36 = P或Y；X37 = S、D、I或E；X38 = G、F或D；X39 = G或S；X40 = S、N、T或E；X41 = T、K或A；X42 = S、Y、N或I；X43 = Q或D；X44 = K或S；X45 = F或V；以及X46 為Q或K。
於一些具體例中，LC-CDR1為下列中之一者：RSSQSLLHSNGYNYLD(序列辨識編號：12)、RASQSVSSSFLA(序列辨識編號：15)、RASQSVSSSYLA(序列辨識編號：18)、RSSQSLLHSDGYNYFD(序列辨識編號：20)、RASQSVSSGYLA(序列辨識編號：23)或TTSQSVSSTSLD(序列辨識編號：26)。
於一些具體例中，LC-CDR2為下列中之一者：LGSNRAS(序列辨識編號：13)、GASSRAT(序列辨識編號：16)、GSNRAA(序列辨識編號：21)或DASSRAT (序列辨識編號：24)。
於一些具體例中，LC-CDR3為下列中之一者：MQALQTPYT(序列辨識編號：14)、QQYGPSIT(序列辨識編號：17)、QQYGSSPPIT(序列辨識編號：19)、MQGTHWPPT(序列辨識編號：22)、QQYGSSRPGLT(序列辨識編號：25)或QQYGSSLLT(序列辨識編號：27)。
於一些具體例中，依據本發明任一態樣，HC-CDR1可以為SYX30 X31 X32 (序列辨識編號：58)、X28 X29 X30 MH(序列辨識編號：59)或SYX30 MH(序列辨識編號：60)，其中X28 = S或E；X29 = Y或L；X30 = Y、G、A或S；X31 = M或I；以及X32 = H或S。
於一些具體例中，HC-CDR1為下列中之一者：SYYMH(序列辨識編號：28)、SYGMH(序列辨識編號：31)、SYAMH(序列辨識編號：34)、SYAIS(序列辨識編號：36)或ELSMH (序列辨識編號：39)。
於一些具體例中，HC-CDR2為下列中之一者：IINPSGGSTSYAQKFQG(序列辨識編號：29) VISYDGSNKYYADSVKG(序列辨識編號：32)、GIIPIFGTANYAQKFQG(序列辨識編號：37)或GFDPEDGETIYAQKFQG(序列辨識編號：40)。
於一些具體例中，該抗體或抗原結合片段可以包含合併有下列的CDRs的至少一輕鏈可變異區域： LC-CDR1：X1 X2 SQSX3 X4 X5 X6 X7 X8 X9 X10 X11 X12 X13 (序列辨識編號：53) LC-CDR2：X14 X15 SX16 RAX17 (序列辨識編號：54) LC-CDR3：X18 QX19 X20 X21 X22 X23 X24 X25 X26 X27 (序列辨識編號：55)； 其中X1 = R或T；X2 = S、A或T；X3 = L或V；X4 = L或S；X5 = H或S；X6 = S、G或T；X7 = N、F、Y、D或S；X8 = G或L；X9 = Y、A或D；X10 = 缺少或N；X11 =缺少或Y；X12 =缺少、L或F；X13 =缺少(即，沒有胺基酸)或D；X14 = L、G或D；X15 = G或A；X16 = N或S；X17 = S、T或A；X18 = M或Q；X19 = A、Y或G；X20 = L、G或T；X21 = Q、P、S或H；X22 = T、S或W；X23 = P、I、R或L；X24 = Y、T、P或L；X25 =缺少、T、I或G；X26 =缺少、T或L；以及X27 =缺少或T。
於一些具體例中，該抗體或抗原結合片段可以包含合併有下列的CDRs的至少一輕鏈可變異區域： LC-CDR1：RSSQSLLHSNGYNYLD(序列辨識編號：12) LC-CDR2：LGSNRAS               (序列辨識編號：13) LC-CDR3：MQALQTPYT              (序列辨識編號：14)
於一些具體例中，該抗體或抗原結合片段可以包含合併有下列的CDRs的至少一輕鏈可變異區域： LC-CDR1：RASQSVSSSFLA     (序列辨識編號：15) LC-CDR2：GASSRAT          (序列辨識編號：16) LC-CDR3：QQYGPSIT             (序列辨識編號：17)
於一些具體例中，該抗體或抗原結合片段可以包含合併有下列的CDRs的至少一輕鏈可變異區域： LC-CDR1：RASQSVSSSYLA    (序列辨識編號：18) LC-CDR2：GASSRAT          (序列辨識編號：16) LC-CDR3：QQYGSSPPIT          (序列辨識編號：19)
於一些具體例中，該抗體或抗原結合片段可以包含合併有下列的CDRs的至少一輕鏈可變異區域： LC-CDR1：RSSQSLLHSDGYNYFD(序列辨識編號：20) LC-CDR2：LGSNRAA                   (序列辨識編號：21) LC-CDR3：MQGTHWPPT              (序列辨識編號：22)
於一些具體例中，該抗體或抗原結合片段可以包含合併有下列的CDRs的至少一輕鏈可變異區域： LC-CDR1：RASQSVSSGYLA         (序列辨識編號：23) LC-CDR2：DASSRAT              (序列辨識編號：24) LC-CDR3：QQYGSSRPGLT      (序列辨識編號：25)
於一些具體例中，該抗體或抗原結合片段可以包含合併有下列的CDRs的至少一輕鏈可變異區域： LC-CDR1：TTSQSVSSTSLD      (序列辨識編號：26) LC-CDR2：GASSRAT              (序列辨識編號：16) LC-CDR3：QQYGSSLLT           (序列辨識編號：27)
於一些具體例中，該抗體或抗原結合片段可以包含合併有下列的CDRs的至少一重鏈可變異區域： HC-CDR1：X28 X29 X30 X31 X32 (序列辨識編號：56)； HC-CDR2：X33 X34 X35 X36 X37 X38 X39 X40 X41 X42 Y AX43 X44 X45 X46 G(序列辨識編號：57)； HC-CDR3：PFGDFDY(序列辨識編號：30)、LPGWGAYAFDI(序列辨識編號：33)、DPDAANWGFLLYYGMDV(序列辨識編號：35)、ALADFWSGYYYYYYMDV(序列辨識編號：38)或TWFGELYY(序列辨識編號：41)中之一者； 其中X28 = S或E；X29 = Y或L；X30 = Y、G、A或S；X31 = M或I；X32 = H或S；X33 = I、G或V；X34 = I或F；X35 = N、S、I或D；X36 = P或Y；X37 = S、D、I或E；X38 = G、F或D；X39 = G或S；X40 = S、N、T或E；X41 = T、K或A；X42 = S、Y、N或I；X43 = Q或D；X44 = K或S；X45 = F或V；以及X46 為Q或K。
於一些具體例中，該抗體或抗原結合片段可以包含合併有下列的CDRs的至少一重鏈可變異區域： HC-CDR1：SYYMH                      (序列辨識編號：28) HC-CDR2：IINPSGGSTSYAQKFQG(序列辨識編號：29) HC-CDR3：PFGDFDY                   (序列辨識編號：30)
於一些具體例中，該抗體或抗原結合片段可以包含合併有下列的CDRs的至少一重鏈可變異區域： HC-CDR1：SYGMH                      (序列辨識編號：31) HC-CDR2：VISYDGSNKYYADSVKG(序列辨識編號：32) HC-CDR3：LPGWGAYAFDI         (序列辨識編號：33)
於一些具體例中，該抗體或抗原結合片段可以包含合併有下列的CDRs的至少一重鏈可變異區域： HC-CDR1：SYAMH                      (序列辨識編號：34) HC-CDR2：VISYDGSNKYYADSVKG(序列辨識編號：32) HC-CDR3：DPDAANWGFLLYYGMDV(序列辨識編號：35)
於一些具體例中，該抗體或抗原結合片段可以包含合併有下列的CDRs的至少一重鏈可變異區域： HC-CDR1：SYAIS                    (序列辨識編號：36) HC-CDR2：GIIPIFGTANYAQKFQG(序列辨識編號：37) HC-CDR3：ALADFWSGYYYYYYMDV(序列辨識編號：38)
於一些具體例中，該抗體或抗原結合片段可以包含合併有下列的CDRs的至少一重鏈可變異區域： HC-CDR1：ELSMH                      (序列辨識編號：39) HC-CDR2：GFDPEDGETIYAQKFQG(序列辨識編號：40) HC-CDR3：TWFGELYY           (序列辨識編號：41)
該抗體可以包含合併有圖1或3中顯示的CDRs之至少一輕鏈可變異區域。該抗體可以包含合併有圖2或3中顯示的CDRs之至少一重鏈可變異區域。
該抗體可以包含至少一輕鏈可變異區域(VL )，其含有下列胺基酸序列：序列辨識編號1、12、13、14；或2、15、16、17；或3、18、16、19；或4、20、21、22；或5、23、24、25；或6、26、16、27之一者，或是圖1中顯示的胺基酸序列之一者，或是一胺基酸序列，其與序列辨識編號1、12、13、14；或2、15、16、17；或3、18、16、19；或4、20、21、22；或5、23、24、25；或6、26、16、27之一者，或是與圖1中顯示的VL 鏈胺基酸序列之胺基酸序列，具有至少70%，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性。
該抗體可以包含至少一重鏈可變異區域(VH )，其含有下列胺基酸序列：序列辨識編號7、28、29、30；或8、31、32、33；或9、34、32、35；或10、36、37、38；或11、39、40、41之一者，或是圖2中顯示的胺基酸序列之一者，或是一胺基酸序列，其與序列辨識編號7、28、29、30；或8、31、32、33；或9、34、32、35；或10、36、37、38；或11、39、40、41之一者，或是與圖2中顯示的VH 鏈胺基酸序列之胺基酸序列，具有至少70%，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性。
該抗體可以包含至少一輕鏈可變異區域，其含有下列胺基酸序列：序列辨識編號1、12、13、14；或2、15、16、17；或3、18、16、19；或4、20、21、22；或5、23、24、25；或6、26、16、27之一者，或是圖1中顯示的胺基酸序列之一者(或是一胺基酸序列，其與序列辨識編號1、12、13、14；或2、15、16、17；或3、18、16、19；或4、20、21、22；或5、23、24、25；或6、26、16、27之一者，或是與圖1中顯示的VL 鏈胺基酸序列之胺基酸序列之一者，具有至少70%，更佳為至少75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性)，以及至少一重鏈可變異區域，其含有下列胺基酸序列：序列辨識編號7、28、29、30；或8、31、32、33；或9、34、32、35；或10、36、37、38；或11、39、40、41之一者，或是圖2中顯示的胺基酸序列之一者(或是一胺基酸序列，其與序列辨識編號7、28、29、30；或8、31、32、33；或9、34、32、35；或10、36、37、38；或11、39、40、41之一者，或是與圖2中顯示的VH 鏈胺基酸序列之胺基酸序列之一者，具有至少70%，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性)。
該抗體可選擇性地結合LAG-3，選擇性地為人類或鼠類LAG-3。該抗體可選擇性地具有如上所述之胺基酸序列組分。該抗體可以為IgG。於一個具體例中，提供一種活體外複合物，選擇性地為經單離的，其包含如本文所述與LAG-3結合的一種抗體或抗原結合片段。
該抗體可選擇性地抑制或預防人類LAG-3及人類第II類MHC，或鼠類LAG-3及鼠類第II類MHC之間的交互作用或功能性締合。這種LAG-3及鼠類第II類MHC之間交互作用或功能性締合之抑制或預防，可以抑制或預防第II類MHC媒介的LAG-3活化作用，或第II類MHC/LAG-3發送訊息。
於本發明的一個態樣中，提供一種經單離的輕鏈可變異區域多肽，該輕鏈可變異區域多肽包含下列的CDRs： LC-CDR1：X1 X2 SQSX3 X4 X5 X6 X7 X8 X9 X10 X11 X12 X13 (序列辨識編號：53) LC-CDR2：X14 X15 SX16 RAX17 (序列辨識編號：54) LC-CDR3：X18 QX19 X20 X21 X22 X23 X24 X25 X26 X27 (序列辨識編號：55)； 其中X1 = R或T；X2 = S、A或T；X3 = L或V；X4 = L或S；X5 = H或S；X6 = S、G或T；X7 = N、F、Y、D或S；X8 = G或L；X9 = Y、A或D；X10 = 缺少或N；X11 =缺少或Y；X12 =缺少、L或F；X13 =缺少(即，沒有胺基酸)或D；X14 = L、G或D；X15 = G或A；X16 = N或S；X17 = S、T或A；X18 = M或Q；X19 = A、Y或G；X20 = L、G或T；X21 = Q、P、S或H；X22 = T、S或W；X23 = P、I、R或L；X24 = Y、T、P或L；X25 =缺少、T、I或G；X26 =缺少、T或L；以及X27 =缺少或T。
於一些具體例中，LC-CDR1為下列中之一者：RSSQSLLHSNGYNYLD(序列辨識編號：12)、RASQSVSSSFLA(序列辨識編號：15)、RASQSVSSSYLA(序列辨識編號：18)、RSSQSLLHSDGYNYFD(序列辨識編號：20)、RASQSVSSGYLA(序列辨識編號：23)或TTSQSVSSTSLD(序列辨識編號：26)。於一些具體例中，LC-CDR2為下列中之一者：LGSNRAS(序列辨識編號：13)、GASSRAT(序列辨識編號：16)、LGSNRAA(序列辨識編號：21)或DASSRAT(序列辨識編號：24)。於一些具體例中，LC-CDR3為下列中之一者：MQALQTPYT(序列辨識編號：14)、QQYGPSIT(序列辨識編號：17)、QQYGSSPPIT(序列辨識編號：19)、MQGTHWPPT(序列辨識編號：22)、QQYGSSRPGLT(序列辨識編號：25)或QQYGSSLLT(序列辨識編號：27)。於一些具體例中，該經單離的輕鏈可變異區域多肽能與LAG-3結合。
於本發明的一個態樣中，提供一種經單離的輕鏈可變異區域多肽，其包含一胺基酸序列，其與輕鏈序列：序列辨識編號：1、2、3、4、5或6(圖1)有至少85%的序列同一性。於一些具體例中，該經單離的輕鏈可變異區域多肽能與LAG-3結合。
於本發明的一個態樣中，提供一種經單離的重鏈可變異區域多肽，該重鏈可變異區域多肽包含下列的CDRs： HC-CDR1：X28 X29 X30 X31 X32 (序列辨識編號：56)； HC-CDR2：X33 X34 X35 X36 X37 X38 X39 X40 X41 X42 YAX43 X44 X45 X46 G (序列辨識編號：57)； HC-CDR3：PFGDFDY(序列辨識編號：30)、LPGWGAYAFDI(序列辨識編號：33)、DPDAANWGFLLYYGMDV(序列辨識編號：35)、ALADFWSGYYYYYYMDV(序列辨識編號：38)或TWFGELYY(序列辨識編號：41)中之一者； 其中X28 = S或E；X29 = Y或L；X30 = Y、G、A或S；X31 = M或I；X32 = H或S；X33 = I、G或V；X34 = I或F；X35 = N、S、I或D；X36 = P或Y；X37 = S、D、I或E；X38 = G、F或D；X39 = G或S；X40 = S、N、T或E；X41 = T、K或A；X42 = S、Y、N或I；X43 = Q或D；X44 = K或S；X45 = F或V；以及X46 為Q或K。
於一些具體例中，HC-CDR1為下列中之一者：SYYMH(序列辨識編號：28)、SYGMH(序列辨識編號：31)、SYAMH(序列辨識編號：34)、SYAIS(序列辨識編號：36)或ELSMH(序列辨識編號：39)。於一些具體例中，HC-CDR2為下列中之一者：IINPSGGSTSYAQKFQG(序列辨識編號：29) VISYDGSNKYYADSVKG(序列辨識編號：32)、GIIPIFGTANYAQKFQG(序列辨識編號：37)或EGFDPEDGETIYAQKFQG(序列辨識編號：40)。於一些具體例中，該經單離的重鏈可變異區域多肽能與LAG-3結合。
於本發明的一個態樣中，提供一種經單離的重鏈可變異區域多肽，其包含一胺基酸序列，其與重鏈序列：序列辨識編號：7、8、9、10或11(圖2)有至少85%的序列同一性。於一些具體例中，該經單離的重鏈可變異區域多肽能與LAG-3結合。
於本發明的一個態樣中，提供一種抗體或抗原結合片段，該抗體或抗原結合片段包含一重鏈及一輕鏈可變異區域序列，其中： 該輕鏈包含一LC-CDR1、LC-CDR2、LC-CDR3，其分別與下列有至少85%的整體序列同一性，下列LC-CDR1之一者：X1 X2 SQSX3 X4 X5 X6 X7 X8 X9 X10 X11 X12 X13 (序列辨識編號：53)、RSSQSLLHSNGYNYLD(序列辨識編號：12)、RASQSVSSSFLA(序列辨識編號：15)、RASQSVSSSYLA(序列辨識編號：18)、RSSQSLLHSDGYNYFD(序列辨識編號：20)、RASQSVSSGYLA(序列辨識編號：23)或TTSQSVSSTSLD(序列辨識編號：26)，下列LC-CDR2之一者：X14 X15 SX16 RAX17 (序列辨識編號：54)、LGSNRAS(序列辨識編號：13)、GASSRAT(序列辨識編號：16)、LGSNRAA(序列辨識編號：21)或DASSRAT(序列辨識編號：24)，下列LC-CDR3之一者：X18 QX19 X20 X21 X22 X23 X24 X25 X26 X27 (序列辨識編號：55)、MQALQTPYT(序列辨識編號：14)、QQYGPSIT(序列辨識編號：17)、QQYGSSPPIT(序列辨識編號：19)、MQGTHWPPT(序列辨識編號：22)、QQYGSSRPGLT(序列辨識編號：25)或QQYGSSLLT(序列辨識編號：27)，其中X1 = R或T；X2 = S、A或T；X3 = L或V；X4 = L或S；X5 = H或S；X6 = S、G或T；X7 = N、F、Y、D或S；X8 = G或L；X9 = Y、A或D；X10 = 缺少或N；X11 =缺少或Y；X12 =缺少、L或F；X13 =缺少(即，沒有胺基酸)或D；X14 = L、G或D；X15 = G或A；X16 = N或S；X17 = S、T或A；X18 = M或Q；X19 = A、Y或G；X20 = L、G或T；X21 = Q、P、S或H；X22 = T、S或W；X23 = P、I、R或L；X24 = Y、T、P或L；X25 =缺少、T、I或G；X26 =缺少、T或L；及X27 =缺少或T，以及 該重鏈包含一HC-CDR1、HC-CDR2、HC-CDR3，其分別與下列有至少85%的整體序列同一性，下列HC-CDR1之一者：X28 X29 X30 X31 X32 (序列辨識編號：56)、SYYMH(序列辨識編號：28)、SYGMH(序列辨識編號：31)、SYAMH(序列辨識編號：34)、SYAIS(序列辨識編號：36)或ELSMH(序列辨識編號：39)，下列HC-CDR2之一者：X33 X34 X35 X36 X37 X38 X39 X40 X41 X42 YAX43 X44 X45 X46 G(序列辨識編號：57)、IINPSGGSTSYAQKFQG(序列辨識編號：29) VISYDGSNKYYADSVKG(序列辨識編號：32)、GIIPIFGTANYAQKFQG(序列辨識編號：37)或GFDPEDGETIYAQKFQG(序列辨識編號：40)，下列HC-CDR3之一者：PFGDFDY(序列辨識編號：30)、LPGWGAYAFDI(序列辨識編號：33)、DPDAANWGFLLYYGMDV(序列辨識編號：35)、ALADFWSGYYYYYYMDV(序列辨識編號：38)或TWFGELYY(序列辨識編號：41)，其中X28 = S或E；X29 = Y或L；X30 = Y、G、A或S；X31 = M或I；X32 = H或S；X33 = I、G或V；X34 = I或F；X35 = N、S、I或D；X36 = P或Y；X37 = S、D、I或E；X38 = G、F或D；X39 = G或S；X40 = S、N、T或E；X41 = T、K或A；X42 = S、Y、N或I；X43 = Q或D；X44 = K或S；X45 = F或V；以及X46 為Q或K。
於一些具體例中，序列同一性的程度可以為下列中之一者：86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%。
於本發明的另一個態樣中，提供一種抗體或抗原結合片段，選擇性地為經單離的，其包含一重鏈及一輕鏈可變異區域序列，其中： 該輕鏈序列與輕鏈序列：序列辨識編號：1、2、3、4、5或6(圖1)有至少85%的序列同一性，以及； 該重鏈序列與序列辨識編號：7、8、9、10或11(圖2)之該重鏈序列有至少85%的序列同一性。
於一些具體例中，序列同一性的程度可以為下列中之一者：86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%。
於一些具體例中，該抗體、抗原結合片段或多肽於CDRs之間進一步包含可變異區域輕鏈框架序列，依據LCFR1:LC-CDR1:LCFR2:LC-CDR2:LCFR3: LC-CDR3:LCFR4之排列。框架序列可以衍生自人類一致框架序列。
於本發明的一個態樣中，提供一種經單離的輕鏈可變異區域多肽，選擇性地組合以如本文所述之重鏈可變異區域多肽，該輕鏈可變異區域多肽包含下列的CDRs： LC-CDR1：X1 X2 SQSX3 X4 X5 X6 X7 X8 X9 X10 X11 X12 X13 (序列辨識編號：53) LC-CDR2：X14 X15 SX16 RAX17 (序列辨識編號：54) LC-CDR3：X18 QX19 X20 X21 X22 X23 X24 X25 X26 X27 (序列辨識編號：55)； 其中X1 = R或T；X2 = S、A或T；X3 = L或V；X4 = L或S；X5 = H或S；X6 = S、G或T；X7 = N、F、Y、D或S；X8 = G或L；X9 = Y、A或D；X10 =缺少或N；X11 =缺少或Y；X12 =缺少、L或F；X13 =缺少(即，沒有胺基酸)或D；X14 = L、G或D；X15 = G或A；X16 = N或S；X17 = S、T或A；X18 = M或Q；X19 = A、Y或G；X20 = L、G或T；X21 = Q、P、S或H；X22 = T、S或W；X23 = P、I、R或L；X24 = Y、T、P或L；X25 =缺少、T、I或G；X26 =缺少、T或L；以及X27 =缺少或T。
於一些具體例中，LC-CDR1為下列中之一者：RSSQSLLHSNGYNYLD(序列辨識編號：12)、RASQSVSSSFLA(序列辨識編號：15)、RASQSVSSSYLA(序列辨識編號：18)、RSSQSLLHSDGYNYFD(序列辨識編號：20)、RASQSVSSGYLA(序列辨識編號：23)或TTSQSVSSTSLD(序列辨識編號：26)。於一些具體例中，LC-CDR2為下列中之一者：LGSNRAS(序列辨識編號：13)、GASSRAT(序列辨識編號：16)、LGSNRAA(序列辨識編號：21)或DASSRAT(序列辨識編號：24)。於一些具體例中，LC-CDR3為下列中之一者：MQALQTPYT(序列辨識編號：14)、QQYGPSIT(序列辨識編號：17)、QQYGSSPPIT(序列辨識編號：19)、MQGTHWPPT(序列辨識編號：22)、QQYGSSRPGLT(序列辨識編號：25)或QQYGSSLLT(序列辨識編號：27)。
於一些具體例中，該抗體、抗原結合片段或多肽於CDRs之間進一步包含可變異區域重鏈框架序列，依據HCFR1:HC-CDR1:HCFR2:HC-CDR2:HCFR3: HC-CDR3:HCFR4之排列。框架序列可以衍生自人類一致框架序列。
於本發明的一個態樣中，提供一種經單離的重鏈可變異區域多肽，選擇性地組合以如本文所述之輕鏈可變異區域多肽，該重鏈可變異區域多肽包含下列的CDRs： HC-CDR1：X28 X29 X30 X31 X32 (序列辨識編號：56)； HC-CDR2：X33 X34 X35 X36 X37 X38 X39 X40 X41 X42 YAX43 X44 X45 X46 G(序列辨識編號：57)； HC-CDR3：下列中之一者：PFGDFDY(序列辨識編號：30)、LPGWGAYAFDI(序列辨識編號：33)、DPDAANWGFLLYYGMDV(序列辨識編號：35)、ALADFWSGYYYYYYMDV(序列辨識編號：38)或TWFGELYY(序列辨識編號：41)； 其中X28 = S或E；X29 = Y或L；X30 = Y、G、A或S；X31 = M或I；X32 = H或S；X33 = I、G或V；X34 = I或F；X35 = N、S、I或D；X36 = P或Y；X37 = S、D、I或E；X38 = G、F或D；X39 = G或S；X40 = S、N、T或E；X41 = T、K或A；X42 = S、Y、N或I；X43 = Q或D；X44 = K或S；X45 = F或V；以及X46 為Q或K。
於一些具體例中，HC-CDR1為下列中之一者：SYYMH(序列辨識編號：28)、SYGMH(序列辨識編號：31)、SYAMH(序列辨識編號：34)、SYAIS(序列辨識編號：36)或ELSMH(序列辨識編號：39)。
於一些具體例中，HC-CDR2為下列中之一者：IINPSGGSTSYAQKFQG(序列辨識編號：29) VISYDGSNKYYADSVKG(序列辨識編號：32)、GIIPIFGTANYAQKFQG(序列辨識編號：37)或GFDPEDGETIYAQKFQG(序列辨識編號：40)。
於一些具體例中，該抗體或抗原結合片段可以進一步包含一種人類恆定區域。舉例而言，選自於IgG1、IgG2、IgG3及IgG4中之一者。
於一些具體例中，該抗體或抗原結合片段可以進一步包含一種鼠類恆定區域。舉例而言，選自於IgG1、IgG2A、IgG2B及IgG3中之一者。
於本發明的另外的一個態樣中，提供一種抗體或抗原結合片段，選擇性地為經單離的，其能與LAG-3結合，其為一種雙專一性抗體或雙專一性抗原結合片段。該雙專一性抗體或雙專一性抗原結合片段包含(i)一種如本文所述能與LAG-3結合的抗原結合片段或多肽，以及(ii)一種能與LAG-3之外的標靶蛋白結合的抗原結合片段或多肽。
於一些具體例中，LAG-3之外的標靶蛋白可以為一種細胞表面受體，例如表現於T細胞的細胞表面之上的一種受體。於一些具體例中，細胞表面受體可以為一種免疫查核點受體，例如一種共刺激受體或一種抑制受體。於一些具體例中，共刺激受體可以選自於CD27、CD28、ICOS、CD40、CD122、OX43、4-1BB及GITR。於一些具體例中，抑制受體可以選自於B7-H3、B7-H4、BTLA、CTLA-4、A2AR、VISTA、TIM-3、PD-1及KIR。
於一些具體例中，LAG-3之外的標靶蛋白可以為一種癌症標誌，其之表現與一癌症有關連。於一些具體例中，癌症標誌可以表現於細胞表面。於一些具體例中，癌症標誌可以選自於HER-2、HER-3、EGFR、EpCAM、CD30、CD33、CD38、CD20、CD24、CD90、CD15、CD52、CA-125、CD34、CA-15-3、CA-19-9、CEA、CD99、CD117、CD31、CD44、CD123、CD133、ABCB5及CD45。
於本發明的另一個態樣中，提供一種嵌合抗原受體(CAR)，其包含如本文所述之一抗原結合片段。
於另一個態樣中，本發明提供一種包含如本文所述之CAR的細胞。
於本發明的另一個態樣中，提供一種活體外複合物，其包含如本文所述與LAG-3結合之一種抗體、抗原結合片段、多肽、CAR或細胞。該活體外複合物可以選擇性地予以單離。
於本發明的另一個態樣中，提供一種組成物，例如一種藥學組成物或藥劑。該組成物可以包含如本文所述之一種抗體、抗原結合片段、多肽、CAR或細胞以及至少一藥學上可接受的載劑、賦形劑、佐劑或稀釋劑。
於本發明的另一個態樣中，提供一種經單離的核酸，其編碼如本文所述之抗體、抗原結合片段、多肽或CAR。該核酸可以具有序列辨識編號42、43、44、45、46、47、48、49、50、51或52(圖4)中一者的序列，或由於遺傳密碼簡併的一編碼序列，或可以具有一核苷酸序列，該核苷酸序列與其有至少70%的同一性，選擇性地為下列中之一者的同一性：75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%。
於本發明的一個態樣中，提供一種載體，其包含本文所述之一種核酸。於本發明的另一個態樣中，提供一種宿主細胞，其包含該載體。舉例而言，宿主細胞可以為真核或哺乳動物，例如中國倉鼠卵巢(CHO)，或人類，或者可以為一原核細胞，例如大腸桿菌。
於本發明的一個態樣中，提供一種用於製造如本文所述之抗體、抗原結合片段、多肽或CAR之方法，該方法包含於適合表現編碼該抗體、抗原結合片段、多肽或CAR之載體的條件下培養如本文所述之宿主細胞，以及回收該抗體、抗原結合片段、多肽或CAR。
於本發明的另一個態樣中，提供一種抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物，供使用於療法，或醫學治療方法。於本發明的另一個態樣中，提供一種如本文所述之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物，供使用於治療一T細胞官能不良障礙。於本發明的另一個態樣中，提供一種如本文所述之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物於製造一藥劑或藥學組成物之用途，該藥劑或藥學組成物供使用於治療T細胞官能不良障礙。
於本發明的另一個態樣中，提供一種提升T細胞功能之方法，其包含投與如本文所述之一抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物至一官能不良T細胞。該方法可以於活體外或於活體內執行。
於本發明的另一個態樣中，提供一種治療一T細胞官能不良障礙的方法，該方法包含投與如本文所述之一抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物至一罹患T細胞官能不良障礙的病人。
於本發明的另一個態樣中，提供一種抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物，供使用於治療一癌症。於本發明的另一個態樣中，提供一種如本文所述之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物於製造一藥劑或藥學組成物之用途，該藥劑或藥學組成物供使用於治療一癌症。
於本發明的另一個態樣中，提供一種殺死腫瘤細胞的方法，該方法包含投與如本文所述之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物至一腫瘤細胞。該方法可以於活體外或於活體內執行。殺死腫瘤細胞舉例而言，可以是由於抗體依賴性細胞媒介的細胞毒性(ADCC)、補體依賴性細胞毒性(CDC)或經由與該抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物綴合的一藥物之作用。
於本發明的另一個態樣中，提供一種治療癌症的方法，該方法包含投與如本文所述之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物至罹患一癌症的一病人。
癌症可以是一種過度表現LAG-3的癌症，或是可以包含過度表現LAG-3的細胞。
於本發明的另一個態樣中，提供一種調控一主體內免疫反應的方法，該方法包含投與一種如本文所述之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物至該主體，以使得該主體內的免疫反應被調控。
於本發明的另一個態樣中，提供一種抑制腫瘤細胞生長的方法，其包含投與一種如本文所述之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物。該方法可以於活體外或於活體內進行。於一些具體例中，提供一種抑制一主體內腫瘤細胞生長的方法，該方法包含投與治療有效量的如本文所述之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物至該主體。
於本發明的另一個態樣中，提供一種方法，該方法包含使一種含有或懷疑含有LAG-3的樣本與一種如本文所述之抗體、抗原結合片段、CAR或細胞接觸，以及偵測抗體、抗原結合片段、CAR或細胞與LAG-3的複合物之形成。
於本發明的另一個態樣中，提供一種診斷一主體之一疾病或病況的方法，該方法包含於活體外使來自一主體的樣本與一種如本文所述之抗體、抗原結合片段、CAR或細胞接觸，以及偵測抗體或抗原結合片段、CAR或細胞與LAG-3的複合物之形成。
於本發明另外的態樣中，提供一種如本文所述之抗體、抗原結合片段、CAR或細胞之用途，供用於活體外偵測LAG-3。於本發明的另一個態樣中，提供一種如本文所述之抗體、抗原結合片段、CAR或細胞作為一活體外診斷劑之用途。
於本發明的方法中，該抗體、抗原結合片段、多肽、CAR或細胞可以提供為一種如本文所述之組成物。
於另一個態樣中，本發明提供一種治療或預防一主體內一癌症的方法，其包含： (a) 從一主體單離至少一細胞； (b) 修飾該至少一細胞以表現或包含如本文所述之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、核酸或載體，以及； (c) 投與該經修飾的至少一細胞至一主體。
於另一個態樣中，本發明提供一種治療或預防一主體內一癌症的方法，其包含： (a) 從一主體單離至少一細胞； (b) 導入如本文所述之核酸或載體至該至少一細胞內，藉此修飾該至少一細胞，以及； (c) 投與該經修飾的至少一細胞至一主體。
於另一個態樣中，本發明提供一種部件之套組(a kit of parts)，其包含預定量之如本文所述之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、組成物、核酸、載體或細胞。
於一些具體例中，該抗體可以為如本文所述之克隆(clone)A6、1G11、C2、C12、F5或G8。 抗體
如於本發明之抗體較佳地選擇性地以0.1至3 nM範圍內的KD 與LAG-3(抗原)，較佳為人類或鼠類LAG-3結合。
如於本發明之抗體可以提供呈經單離的形式。
如於本發明之抗體可以展現下列特質中之至少一者： a) 以1µM或更少的KD ，較佳為≤10 nM、≤5 nM、≤3 nM、≤2 nM、≤1.5 nM、≤1.4 nM、≤1.3 nM、≤1.25 nM、≤1.24 nM、≤1.23 nM、≤1.22 nM、≤1.21 nM、≤1.2 nM、≤1.15 nM、≤1.1 nM ≤1.05 nM、≤1 nM、≤900 pM、≤800 pM、≤700 pM、≤600 pM、≤500 pM中的一者之KD ，與人類、小鼠或恆河獼猴LAG-3結合； b) 以BMS-986016與人類、小鼠或恆河獼猴LAG-3結合之親和力，相似的親和力或比其更大的親和力，與人類、小鼠或恆河獼猴LAG-3結合； c)與活化的CD4+T細胞之結合； d)實質顯示與未活化的CD4+T細胞沒有結合； e) 抑制或防止LAG-3與第II類MHC，選擇性地人類LAG-3與人類第II類MHC之間的交互作用(諸如，依LAG-3與達烏地(Daudi)細胞之結合抑制分析來判定)； f) 以1µM或更少的IC50 ，較佳為≤500 nM、≤250 nM ≤200 nM、≤150 nM、≤120 nM、≤110 nM、≤100 nM、≤90 nM、≤80 nM、≤70 nM、≤60 nM、≤50 nM、≤40 nM、≤30 nM、≤30 nM、≤20 nM、≤15 nM、≤10 nM、≤5 nM、≤2.5 nM、≤2 nM、≤1 nM中的一者之IC50 ，抑制或防止LAG-3及第II類MHC，選擇性地人類LAG-3及人類第II類MHC，之間的交互作用； g) 抑制或防止LAG-3及第II類MHC，選擇性地人類LAG-3及人類第II類MHC之間的交互作用，至BMS-986016抑制/防止LAG-3及第II類MHC之間的結合相似的程度或更大的程度； h) 於一種混合淋巴球反應(MLR)分析中使T細胞增殖、IL-2生產及IFNγ生產之一者或更多者增加(例如參見Bromelow等人之J.Immunol Methods , 2001 Jan 1;247(1-2):1-8)； i) 於一種混合淋巴球反應(MLR)分析中使T細胞增殖、IL-2生產及IFNγ生產之一者或更多者，增加至相似於BMS-986016的程度或大於BMS-986016的程度。 j)與LAG-3，選擇性地人類LAG-3，之抗原決定位結合，其與BMS-986016結合之LAG-3之抗原決定位不同； k)對感染回應，而使T細胞增殖、IL-2生產及IFNγ生產之一者或更多者增加； l) 抑制腫瘤生長，選擇性為活體內的腫瘤生長。
於一些具體例中，如本發明之抗體可用於增生一種免疫細胞如T細胞族群之方法內。如本發明之抗體可用於增生帶有所欲特質的免疫細胞族群。
於一些具體例中，一種於如本發明之抗體存在下增生的免疫細胞族群(譬如例如於IL-2存在下，例如透過通過TCR予以刺激而從PBMCs族群增生)，與用可比方法，但缺乏抗體所增生的免疫細胞族群相比，可擁有下列特質中之一者或更多者： (i) 可比的增生細胞總數； (ii) 可比的T細胞數目； (iii) 較低的CD8:CD4細胞比率(表明比起CD8+T細胞，優先增生CD4+T細胞)； (iv) T細胞族群內(諸如，CD4+ T細胞細胞族群內)較低比例的Tregs(諸如，CD4+CD25+FoxP3+ Tregs)； (v) T細胞族群內(諸如，CD4+ T細胞細胞族群內)較高比例的T輔助(Th)細胞； (vi) T細胞族群內較低比例的PD1+細胞(諸如，CD8+PD1+ T細胞及/或CD4+PD1+ T細胞)； (vii) T細胞族群內可比比例的CTLA4+細胞(諸如，CD8+CTLA4+ T細胞及/或CD4+CTLA4+ T細胞)； (viii) T細胞族群內可比比例的IL-13+細胞(諸如，CD8+IL-13+ T細胞及/或CD4+IL-13+ T細胞)； (ix) T細胞族群內可比比例的IFNγ+細胞(諸如，CD8+IFNγ+ T細胞及/或CD4+IFNγ+ T細胞)； (x) T細胞族群內可比比例的TNFα+細胞(諸如，CD8+TNFα+ T細胞及/或CD4+TNFα+ T細胞)； (xi) 較低比例的NK細胞；以及 (xii) 較高比例的B細胞。
於一些具體例中，一種於如本發明之抗體存在下增生的免疫細胞族群(如例如於IL-2存在下，例如透過通過TCR予以刺激而從PBMCs族群增生)，與用可比較方法，但缺乏抗體所增生的免疫細胞族群相比，可擁有下列特質中之一者或更多者：較低的CD8:CD4細胞比率；CD4+ T細胞細胞族群內較低比例的Tregs(諸如，CD4+CD25+FoxP3+ Tregs)；T細胞族群內較高比例的T輔助(Th)細胞；以及T細胞族群內較低比例的PD1+細胞。
按「抗體」包括其之片段或衍生物，或一種合成抗體或合成抗體片段。
鑑於今日關於單株抗體的技術，可製備多數抗原之抗體。抗原結合部分可以為一種抗體的一部分(舉例而言，一種Fab片段)或一種合成抗體片段(舉例而言，一種單鏈Fv片段[ScFv])。對選擇的抗原合適的單株抗體可藉由已知的技術予以製備，舉例而言"Monoclonal Antibodies: A manual of techniques ", H Zola (CRC出版社，1988)之內及"Monoclonal Hybridoma Antibodies: Techniques and Applications ", J G R Hurrell (CRC出版社，1982)之內揭示的該等。Neuberger等人詳述了嵌合型抗體(1988, 8th International Biotechnology Symposium Part 2, 792-799)。
單株抗體(mAbs)係有用於本發明的方法，且為專一靶定一抗原上的一單一抗原決定位之均質的抗體族群。
多株抗體係有用於本發明的方法。單專一性多株抗體為較佳的。合適的多株抗體可使用本技藝眾所周知的方法予以製備。
抗體的抗原結合片段，諸如Fab及Fab2 片段，亦可以使用/提供作為能經遺傳工程處理的抗體及抗體片段。該抗體之可變異重(VH )及可變異輕鏈(VL )域係涉及抗原辨識，早期蛋白酶消化實驗最先確認的事實。由囓齒動物抗體的"人化"，發現到進一步的證實。囓齒動物來源的可變異域可以與人類來源的恆定域融合，以使得形成的抗體保持囓齒動物親代抗體的抗原專一性(Morrison等人之(1984) Proc. Natl. Acad. Sd. USA 81, 6851-6855)。
從涉及全體都含一種或更多種可變異域之細菌的抗體片段表現實驗得知，抗原專一性係由可變異域賦予且不依賴恆定域。此等分子包括似Fab分子(Better等人之(1988) Science 240, 1041)；Fv分子(Skerra等人之(1988) Science 240, 1038)；單鏈Fv(ScFv)分子，其中VH 及VL 的伙伴域係經由一種撓性寡肽予以鍵聯(Bird等人之(1988) Science 242, 423；Huston等人之(1988) Proc. Natl. Acad. Sd. USA 85, 5879)，以及包含經單離的V域之單域抗體(dAbs) (Ward等人之(1989) Nature 341, 544)。於Winter & Milstein (1991) Nature 349, 293- 299內可找到涉及保持其等之專一性結合位址之抗體片段合成技術之一般回顧。
按"ScFv分子"係意指其中VH 及VL 的伙伴域係，例如經由一種撓性寡肽共價鍵聯的分子。
Fab、Fv、ScFv及dAb抗體片段全體可以於大腸桿菌內表現且由大腸桿菌分泌，因而允許輕鬆生產大量的該片段。
整個抗體及F(ab')2 片段為"二價的"。按"二價的"係意指該抗體及F(ab')2 片段具有二個抗原組合位址。相比之下，Fab、Fv、ScFv及dAb抗體片段為單價的，只具有一個抗原組合位址。與LAG-3結合的合成抗體亦可以使用如本技藝眾所周知的噬菌體顯示技術來製造。
本申請案亦提供一種能與LAG-3結合之抗體或抗原結合片段，且其為一種雙專一性抗體或一種雙專一性抗原結合片段。於一些具體例中，該雙專一性抗體或雙專一性抗原結合片段可以為經單離的。
於一些具體例中，該雙專一性抗體及雙專一性抗原結合片段包含一種如本發明之抗原結合片段或多肽。於一些具體例中，該雙專一性抗體及雙專一性抗原結合片段包含一種能與LAG-3結合的抗原結合片段，其中能與LAG-3結合的抗原結合片段包含如本發明之抗原結合片段或多肽或是由如本發明之抗原結合片段或多肽所組成。
於一些具體例中，該雙專一性抗體及雙專一性抗原結合片段包含一種能與LAG-3結合的抗原結合片段，以及一種能與另一種標靶蛋白結合的抗原結合片段。
能與另一種標靶蛋白結合的抗原結合片段可以為能與LAG-3之外的另一種蛋白結合。
於一些具體例中，標靶蛋白可以為一種細胞表面受體。於一些具體例中，標靶蛋白可以為一種表現於一免疫細胞，如T細胞，的細胞表面上的細胞表面受體。於一些具體例中，細胞表面受體可以為一種免疫查核點受體。於一些具體例中，免疫查核點受體可以為一種共刺激受體。於一些具體例中，共刺激受體可以選自於CD27、CD28、ICOS、CD40、CD122、OX43、4-1BB及GITR。於一些具體例中，免疫查核點受體可以為一種抑制受體。於一些具體例中，抑制受體可以選自於B7-H3、B7-H4、BTLA、CTLA-4、A2AR、VISTA、TIM-3、PD-1及KIR。
於一些具體例中，標靶蛋白可以為一種癌症標誌。也就是，標靶蛋白可以為一種蛋白，其之表現(如，向上調節的表現)與癌症有關連。於一些具體例中，癌症標誌可以表現於細胞表面。於一些具體例中，癌症標誌可以為一種受體。於一些具體例中，癌症標誌可以選自於HER-2、HER-3、EGFR、EpCAM、CD30、CD33、CD38、CD20、CD24、CD90、CD15、CD52、CA-125、CD34、CA-15-3、CA-19-9、CEA、CD99、CD117、CD31、CD44、CD123、CD133、ABCB5及CD45。
於一些具體例中，CD27的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CD27抗體克隆0323(Millipore)或瓦利魯單抗(varlilumab) (Celldex Therapeutics)之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CD27結合片段。於一些具體例中，CD28的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CD28抗體克隆CD28.6(eBioscience)、克隆CD28.2、克隆JJ319(Novus Biologicals)、克隆204.12、克隆B-23、克隆10F3(Thermo Scientific Pierce Antibodies)、克隆37407(R&D Systems)、克隆204-12(Abnova Corporation)、克隆15E8(EMD Millipore)、克隆204-12、克隆YTH913.12(AbD Serotec)、克隆B-T3(Acris Antibodies)、克隆9H6E2(Sino Biological)、克隆C28/77(MyBioSource.com)、克隆KOLT-2(ALPCO)、克隆152-2E10(Santa Cruz Biotechnology)或克隆XPH-56(Creative Diagnostics)之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CD28結合片段。於一些具體例中，ICOS的抗原結合片段可以包含，諸如抗-ICOS抗體克隆ISA-3(eBioscience)、克隆SP98(Novus Biologicals)、克隆1G1、克隆3G4(Abnova Corporation)、克隆669222(R&D Systems)、克隆TQ09 (Creative Diagnostics)或克隆C398.4A(BioLegend)之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的ICOS結合片段。於一些具體例中，CD40的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CD40抗體克隆82111(R&D Systems)或ASKP1240 (Okimura等人，AM J Transplant (2014) 14(6) 1290-1299)之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CD40結合片段。於一些具體例中，CD122的抗原結合片段可以包含抗-CD122抗體克隆mikβ2(PharMingen)之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CD122結合片段。於一些具體例中，OX43的抗原結合片段可以包含，諸如US 20130280275、US 8283450或WO2013038191之內揭示的抗-OX43抗體，例如克隆12H3或克隆20E5之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的OX43結合片段。於一些具體例中，4-1BB的抗原結合片段可以包含，諸如抗-4-1BB抗體PF-05082566(Fisher等人，Cancer Immunol Immunother (2012) 61: 1721-1733)或烏瑞魯單抗(urelumab) (BMS-665513；Bristol-Myers Squibb；Li and Liu, Clin Pharmacol (2013)；5: 47-53)之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的4-1BB結合片段。於一些具體例中，GITR的抗原結合片段可以包含，諸如抗-GITR抗體TRX-518(TolerxR ；Schaer等人，(2010) 11(12): 1378-1386)或克隆AIT 518D (LifeSpan Biosciences)之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的GITR結合片段。於一些具體例中，B7-H3的抗原結合片段可以包含，諸如US 20130078234、WO2014160627或WO2011109400之內揭示的抗-B7-H3抗體克隆之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的B7-H3結合片段。於一些具體例中，B7-H4的抗原結合片段可以包含，諸如WO2013067492、WO2009073533或EP2934575之內揭示的抗-B7-H4抗體克隆，舉例而言克隆2H9，之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的B7-H4結合片段。於一些具體例中，BTLA的抗原結合片段可以包含，諸如抗-BTLA抗體克隆1B7、克隆2G8、克隆4C5(Abnova Corporation)、克隆4B8(antibodies-online)、克隆MIH26(Thermo Scientific Pierce Antibodies)、克隆UMAB61(OriGene Technologies)、克隆330104(R&D Systems)、克隆1B4 (LifeSpan BioSciences)、克隆440205、克隆5E7(Creative Diagnostics)之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的BTLA結合片段。於一些具體例中，CTLA4的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CTLA4抗體克隆2F1、克隆1F4(Abnova Corporation)、克隆9H10(EMD Millipore)、克隆BNU3(GeneTex)、克隆1E2、克隆AS32(LifeSpan BioSciences)克隆A3.4H2.H12(Acris Antibodies)、克隆060(Sino Biological)、克隆BU5G3(Creative Diagnostics)、克隆MIH8(MBL International)、克隆A3.6B10.G1或克隆L3D10 (BioLegend)之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CTLA4結合片段。於一些具體例中，A2AR的抗原結合片段可以包含，諸如抗-A2AR抗體克隆7F6(Millipore；Koshiba等人之Molecular Pharmacology (1999)；55: 614-624，之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的A2AR結合片段。於一些具體例中，VISTA的抗原結合片段可以包含，諸如WO2015097536或US20140105912之內揭示的抗-VISTA抗體，例如克隆13F3，之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的VISTA結合片段。於一些具體例中，TIM-3的抗原結合片段可以包含，諸如抗-TIM-3抗體克隆F38-2E2 (BioLegend)、克隆2E2(Merck Millipore；Pires da Silva等人，Cancer Immunol Res (2014) 2(5): 410-422)、克隆6B6E2、克隆024(Sino Biological) 克隆344801(R&D Systems)、克隆E-18、克隆H-191(Santa Cruz Biotechnology)或克隆13A224(United States Biological)，之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的TIM-3結合片段。於一些具體例中，PD-1抗原結合片段可以包含，諸如抗-PD-1抗體克隆J116、克隆MIH4 (eBioscience)、克隆7A11B1(Rockland Immunochemicals Inc.)、克隆192106(R&D Systems)、克隆J110、克隆J105(MBL International)、克隆12A7D7、克隆7A11B1(Abbiotec)、克隆#9X21(MyBioSource.com)、克隆4H4D1(Proteintech Group)、克隆D3W4U、克隆D3O4S(Cell Signaling Technology)、克隆RMP1-30、克隆RMP1-14(Merck Millipore)、克隆EH12.2H7(BioLegend)、克隆10B1227 (United States Biological)、克隆UMAB198、克隆UMAB197(Origene Technologies)、納武單抗(nivolumab) (BMS-936558)、拉姆珠單抗(lambrolizumab)，或是WO 2010/077634或WO 2006/121168之內所述的抗-PD-1抗體，之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的PD-1結合片段。於一些具體例中，KIR的抗原結合片段可以包含，諸如抗-KIR抗體克隆1-7F9(Romagne等人，Blood (2009) 114(13): 2667-2677)、利瑞魯單抗(lirilumab) (BMS-986015；Sola等人，J Immunother Cancer (2013)；1:P40)或是US 2015/0344576或WO 2014/066532之內所述的抗-KIR抗體，之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的KIR結合片段。於一些具體例中，HER-2的抗原結合片段可以包含，諸如抗-HER-2抗體曲妥珠單抗(trastuzumab) (賀癌平(Herceptin))，或是WO 2003/006509或WO 2008/019290之內所述的抗-HER-2抗體，之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的HER-2結合片段。於一些具體例中，HER-3的抗原結合片段可以包含，諸如抗-HER-3抗體克隆MM-121(Lyu等人，Int. J Clin Exp Pathol (2015) 8(6): 6143-6156)、MEHD7945A(Schaefer等人，Cancer Cell (2011) 20(4): 472-486)、AMG 888(U3-1287；Aurisicchio等人，Oncotarget (2012) 3(8): 744-758)，或是WO2008/100624或WO 2013048883之內所述的抗-HER-3抗體，之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的HER-3結合片段。於一些具體例中，EGFR的抗原結合片段可以包含，諸如抗-EGFR抗體帕尼單抗(panitumumab) (ABX-EGF；維必施(Vectibix))、西妥昔單抗(cetuximab)(愛必妥(Erbitux))、尼妥珠單抗(nimotuzumab)、馬妥珠單抗(matazumab) (EMD 7200)或抗體克隆048-006(Sogawa等人，Nucl Med Comm (2012) 33(7): 719-725)之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的EGFR結合片段。於一些具體例中，EpCAM的抗原結合片段可以包含，諸如抗-EpCAM抗體依決洛單抗(edrecolomab)、ING-1、3622W4，或阿德木單抗(adecatumumab) (Munz等人，Cancer Cell Int (2010) 10:44)之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的EpCAM結合片段。於一些具體例中，CD30的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CD30抗體本妥昔單抗(brentuximab) (cAC10)、克隆SGN-30(Wahl等人，Cancer Res 2002 62(13):3736-3742)、克隆5F11(Borchmann等人，Blood (2003) 102(1): 3737-3742)，或是WO 1993024135或WO 2003059282之內所述的抗-CD30抗體，之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CD30結合片段。於一些具體例中，CD33的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CD33抗體林妥珠單抗(lintuzumab) (SGN-33)、吉妥珠單抗(gemtuzumab) (Mylotarg)或克隆hP67.7(Sievers等人，Blood (1999) 93(11): 3678-3684)，之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CD33結合片段。於一些具體例中，CD38的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CD38抗體達雷木單抗(daratumumab) (Darzalex)、SAR650984(Martin等人，J Clin Oncol (2014) 32:5s、(suppl；abstr 8532)或MOR202 (MorphoSys AG)，或是WO 2006099875或US 20100285004之內所述的抗-CD38抗體，之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CD38結合片段。於一些具體例中，CD20的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CD20抗體利妥昔單抗(rituximab)、奥瑞珠單抗(ocrelizumab)、奧菲汀姆單抗(ofatumumab)、奥比妥珠單抗(obinutuzumab)或BM-ca (Kobayashi等人，Cancer Med (2013) 2(2): 130-143)，之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CD20結合片段。於一些具體例中，CD24的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CD24抗體克隆eBioSN3 (eBioscience)、克隆ML5(BD Biosciences)，或是WO 2008059491之內所述的抗-CD24抗體，之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CD24結合片段。於一些具體例中，CD90的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CD90抗體克隆5E10 (BD Biosciences)之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CD90結合片段。於一些具體例中，CD15的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CD15抗體克隆C3D-1、Carb-3(DAKO A/S)、MMA(Roche)或BY87(Abcam)之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CD15結合片段。於一些具體例中，CD52的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CD52抗體阿來組單抗(alemtuzumab)、克隆HI186或克隆YTH34.5 (AbD Serotec)之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CD52結合片段。於一些具體例中，CA-125的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CA-125抗體奥戈伏單抗(oregovomab)之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CA-125結合片段。於一些具體例中，CD34的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CD34抗體克隆561(BioLegend)、克隆581(Beckton Dickinson)或克隆5F3(Sigma Aldrich)之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CD34結合片段。於一些具體例中，CA-15-3的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CA-15-3抗體克隆2F16(USBiological)、克隆TA998 (ThermoFisher Scientific)、克隆1D1(Sigma Aldrich)或Mab AR20.5(Qi等人，Hybrid Hybridomics (2001) 20(5-6): 313-324)，之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CA-15-3結合片段。於一些具體例中，CA-19-9的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CA-19-9抗體克隆116-NS-19-9 (DAKO A/S)、克隆SPM110或克隆121SLE (ThermoFisher Scientific)之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CA-19-9結合片段。於一些具體例中，CEA的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CEA抗體拉貝珠單抗(labetuzumab)、C2-45(Kyowa Hakko Kirin Co. Ltd.)，或是Imakiire等人，Int J Cancer (2004) 108: 564-570或WO 2011034660之內揭示的抗-CEA抗體，之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CEA結合片段。於一些具體例中，CD99的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CD99抗體克隆C7A(Moricoli等人，J Immunol Methods (2014) 408: 35-45)或克隆12E7(DAKO A/S)之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CD99結合片段。於一些具體例中，CD117的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CD117抗體克隆CK6(Lebron等人，Cancer Biol Ther (2014) 15(9): 1208-1218)或克隆104D2(Sigma Aldrich)之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CD117結合片段。於一些具體例中，CD31的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CD31抗體克隆JC70A(DAKO A/S)之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CD31結合片段。於一些具體例中，CD44的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CD44抗體PF-03475952 (Runnels等人，Adv Ther (2010)； 27(3): 168-180)、RG7356 (Vugts等人，MAbs (2014) 6(2): 567-575)、克隆IM7或克隆A3D8(Sigma Aldrich)，之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CD44結合片段。於一些具體例中，CD123的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CD123抗體CSL362 (Nievergall等人，Blood (2014) 123(8):1218-1228)、CSL360(He等人，Leuk Lymphoma (2015) 56(5): 1406-1415) 73G (Jin等人，Cell Stem Cell (2009) 5(1): 31-42)克隆6H6(AbD Serotec)，或是WO 2014130635之內所述的抗-CD123抗體，之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CD123結合片段。於一些具體例中，CD133的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CD133抗體克隆6B3、克隆9G4、克隆AC141(Wang等人，Hybridoma (Larchmt) (2010) 29(3): 241-249)、克隆6B6(Chen等人，Hybridoma (Larchmt) (2010) 29(4): 305-310、克隆AC113(Miltenyi Biotec)，或是WO 2011149493之內所述的抗-CD133抗體，之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CD133結合片段。於一些具體例中，ABCB5的抗原結合片段可以包含，諸如抗-ABCB5抗體克隆5H3C6(Thermo Fisher Scientific)之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的ABCB5結合片段。於一些具體例中，CD45的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CD45抗體YAML568(Glatting等人，J Nucl Med (2006) 47(8): 1335-1341)或克隆BRA-55(Sigma Aldrich)，之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CD45結合片段。
依據本發明之雙專一性抗體之抗原結合片段或雙專一性抗原結合片段可以為任何能與一抗原結合的多肽。於一些具體例中，一種抗原結合片段包含至少三輕鏈CDRs(即，LC-CDR1、LC-CDR2及LC-CDR3)以及三重鏈CDRs (即，HC-CDR1、HC-CDR2及HC-CDR3)，其等一起界定一種抗體或抗原結合片段的抗原結合區域。於一些具體例中，一種抗原結合片段可以包含一種抗體或抗原結合片段之輕鏈可變異域及重鏈可變異域。於一些具體例中，一種抗原結合片段可以包含一種抗體或抗原結合片段之輕鏈多肽及重鏈多肽。
依據本發明之雙專一性抗體及雙專一性抗原結合片段可以提供呈任何合適的形式，諸如Kontermann MAbs 2012, 4(2): 182-197之內所述的該等形式，其之整體內容藉此被併入以作為參考資料。舉例而言，一種雙專一性抗體或雙專一性抗原結合片段可以為一種雙專一性抗體綴合物(諸如，一種IgG2、F(ab’)2 或CovX-Body)、一種雙專一性IgG或似IgG分子(諸如，一種IgG、scFv4 -Ig、IgG-scFv、scFv-IgG、DVD-Ig、IgG-sVD、sVD-IgG、2合1-IgG、mAb2 或Tandemab共同LC (Tandemab common LC))、一種不對稱雙專一性IgG或似IgG分子(諸如，一種kih IgG、kih IgG common LC、CrossMab、kih IgG-scFab、mAb-Fv、電荷對(charge pair)或SEED-體(SEED-body))、一種小型雙專一性抗體分子(諸如，一種雙價抗體(diabody) (Db)、dsDb、DART、scDb、tandAbs、串連scFv(tandem scFv) (taFv)、串連dAb/VHH、三聯體(triple body)、三頭(triple head)、Fab-scFv或F(ab’)2 -scFv2 )、一種雙專一性Fc及CH 3融合蛋白(諸如，一種taFv-Fc、雙-雙價抗體(Di-diabody)、scDb-CH 3、scFv-Fc-scFv、HCAb-VHH、scFv-kih-Fc或scFv-kih-CH 3)，或是一種雙專一性融合蛋白(諸如，一種scFv2 -白蛋白、scDb-白蛋白、taFv-毒素、DNL-Fab3 、DNL-Fab4 -IgG、DNL-Fab4 -IgG-細胞介素2 )。特別參見Kontermann MAbs 2012, 4(2): 182-19之圖2。
熟習此項技術者能設計及製備如本發明之雙專一性抗體及雙專一性抗原結合片段。
生產雙專一性抗體的方法包括例如，用可還原的雙硫或非可還原的硫醚鍵進行抗體或抗體片段之化學交聯作用，舉例而言，如Segal and Bast, 2001. Production of Bispecific Antibodies. Current Protocols in Immunology. 14:IV:2.13:2.13.1–2.13.16之內所述者，其之整體內容藉此被併入以作為參考資料。舉例而言，可以使用N -琥珀醯亞胺-3-(-2-吡啶二硫代)-丙酸酯(SPDP)、經由鉸鏈區SH-基團予以化學交聯，諸如Fab片段，以創造雙硫鍵聯的雙專一性F(ab)2 異二聚體。
其他生產雙專一性抗體的方法包括融合生產抗體的融合瘤，諸如用聚乙二醇，以生產能分泌雙專一性抗體的四源雜交瘤細胞(quadroma cell)，舉例而言如D. M. and Bast, B. J. 2001. Production of Bispecific Antibodies. Current Protocols in Immunology. 14:IV:2.13:2.13.1–2.13.16之內所述者。
依據本發明之雙專一性抗體及雙專一性抗原結合片段可以從諸如，一種編碼抗原結合分子的多肽之核酸建構物之表現而重組地生產，舉例而言，如Antibody Engineering: Methods and Protocols，第二版 (Humana Press, 2012)，於第40章: Production of Bispecific Antibodies: Diabodies and Tandem scFv (Hornig and Färber-Schwarz)，或法國，How to make bispecific antibodies, Methods Mol. Med. 2000；40:333-339，之內所述者，其等二者之整體內容藉此被併入以作為參考資料。
舉例而言，一種編碼二種抗原結合片段之輕及重鏈可變異域的DNA建構物(即，能結合LAG-3的抗原結合片段之輕及重鏈可變異域，以及能與另一種標靶蛋白結合的抗原結合片段之輕及重鏈可變異域)，且於抗原結合片段之間包括編碼一合適的鍵接子之序列或二聚合域，可藉由分子選殖的技術予以製備。重組雙專一性抗體之後能藉由建構物(諸如，於活體外)表現於一合適的宿主細胞(諸如，一種哺乳動物宿主細胞)來生產，以及表現的重組雙專一性抗體繼而能選擇性地予以純化。
抗體可以藉由一種親和力成熟方法來生產，該方法產生一種經修飾的抗體，與未經修飾的親代抗體相比，該經修飾的抗體對抗原的抗體親和力方面有改良。親和力成熟的抗體可藉由本技藝已知的程序來生產，諸如，Marks等人，Rio/Technology 10:779-783 (1992)；Barbas等人之Proc Nat. Acad. Sci. USA 91:3809-3813 (1994)； Schier等人之Gene 169:147-155 (1995)；Yelton等人之J. Immunol. 155:1994-2004 (1995)；Jackson等人，J. Immunol. 154(7):331 0-15 9 (1995)；以及Hawkins等人，J. Mol. Biol. 226:889-896 (1992)。
如本發明之抗體較佳地與LAG-3展現專一性結合。一種專一性地與一標靶分子結合之抗體較佳會以更大的親和力與標靶結合，及/或以其與其他標靶結合更長的持續時間與標靶結合。於一些具體例中，本抗體可以以比PD-1、TIM-3、ICOS、BTLA、CD28或CTLA-4之一者或更多者，更大的親和力與LAG-3結合。於一個具體例中，當以諸如ELISA、SPR、生物層干涉術(Bio-Layer Interferometry)或放射免疫分析(RIA)測量時，一種抗體對不相關標靶結合的程度係小於該抗體對標靶結合的程度之大約10%。任擇地，結合專一性可以就結合親和力方面來反映，其中本發明的抗LAG-3抗體與LAG-3結合之KD ，係比該抗體對另一種標靶分子的KD 更大至少0.1數量級數(即，0.1 x 10n ，n為表示數量級數的整數)。此可以選擇性地為下列中之一者：至少0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.5或2.0。
如本發明之抗體較佳具有下列中一者之解離常數(KD )：≤10nM、≤5nM、≤3nM、≤2nM、≤1.5nM、≤1.4nM、≤1.3nM、≤1.25nM、≤1.24nM、≤1.23nM、≤1.22nM、≤1.21nM、≤1.2nM、≤1.15nM、≤1.1nM ≤1.05nM、≤1nM、≤900pM、≤800pM、≤700pM、≤600pM、≤500pM。KD 可以在大約0.1至大約3 nM的範圍內。一種抗體對其標靶的結合親和力通常就其之解離常數(KD )來說明。 結合親和力可藉由本技藝已知的方法來測量，諸如ELISA、表面電漿子共振(SPR；參見諸如，Hearty等人，Methods Mol Biol (2012) 907:411-442)、生物層干涉術(參見諸如，Lad等人，(2015) J Biomol Screen 20(4): 498-507)，或用抗體的Fab版本及抗原分子執行的放射性標記抗原結合分析(RIA)。
如於本發明之抗體較佳地展現比BMS-986016之結合親和力更大的親和力或相似的親和力，來與LAG-3(如人類LAG-3)結合(舉例而言，描述於WO 2015042246 A1內–WO 2015042246 A1之序列辨識編號：1及2分別為BMS-986016之重鏈及輕鏈胺基酸序列)。
當使用於本文中，與一種參考抗體與標靶分子結合相比，對一假定的標靶分子展現‘更大的親和力’之一種抗體，係以與參考抗體與標靶分子結合的力量相比之下更大的力量與標靶分子結合。一種抗體對一假定的標靶分子之親和力可以定量判定。
一種如本發明的抗體與LAG-3之相對結合親和力，與BMS-986016相比，可以藉由舉例而言，如本文所述之ELISA來予以判定。於一些具體例中，一種如本發明的抗體關於LAG-3可以具有小於或等於BMS-986016關於LAG-3之解離常數(KD )的KD 。
在一些具體例中，一種如本發明的抗體於一假定的分析中對於LAG-3，可以具有比BMS-986016對於LAG-3之親和力為1.01倍或更大，1.05倍或更大，1.1倍或更大，1.15倍或更大，1.2倍或更大，1.25倍或更大，1.3倍或更大，1.35倍或更大，1.4倍或更大，1.45倍或更大，1.5倍或更大之親和力。在一些具體例中，一種如本發明的抗體於一假定的分析中，可以以BMS-986016對於LAG-3的KD 值之0.99倍或更小，0.95倍或更小，0.9倍或更小，0.85倍或更小，0.8倍或更小，0.75倍或更小，0.7倍或更小，0.65倍或更小，0.6倍或更小，0.55倍或更小，0.5倍或更小，的KD 值與LAG-3之結合。
如本發明之抗體較佳會抑制或防止LAG-3及第II類MHC(諸如，人類LAG-3及人類第II類MHC)之間的交互作用，至比BMS-986016抑制/防止LAG-3及第II類MHC之間的結合，更大的程度或相似的程度。與BMS-986016相比，LAG-3及如本發明的LAG-3抗體關於LAG-3之間的交互作用之相對抑制/防止，舉例而言可以如本文實施例8中所述的方式來判定。
舉例而言，與BMS-986016相比，如本發明的抗體對於LAG-3及第II類MHC之間的交互作用之相對抑制/防止，可以用舉例而言如本文中所述的方式來判定。簡言之，一假定的抗體之交互作用之抑制/防止能藉由以下方式來評估：以抗體來預孵育經標示的(諸如螢光標示的)LAG-3，隨後將預混合物施加至表現第II類MHC的細胞(諸如達烏地(Daudi)細胞)，孵育該預混合物及細胞充足的時間以允許LAG-3與第II類MHC之結合，清洗以移除未結合的LAG-3及LAG-3-抗體複合物，以及最終分析該等細胞以偵測該標示。
在一些具體例中，一種如本發明的抗體可以抑制/防止LAG-3及第II類MHC之間的交互作用至大於或等於BMS-986016抑制/防止LAG-3及第II類MHC之間的交互作用的程度。在一些具體例中，一種如本發明的抗體於一假定的分析中可以抑制/防止LAG-3及第II類MHC之間的交互作用，比BMS-986016抑制/防止LAG-3及第II類MHC之間的交互作用，達以下的程度：為1.01倍或更大，1.05倍或更大，1.1倍或更大，1.15倍或更大，1.2倍或更大，1.25倍或更大，1.3倍或更大，1.35倍或更大，1.4倍或更大，1.45倍或更大，1.5倍或更大。
在一些具體例中，一種如本發明的抗體可以以交互作用之半最大抑制的數值(即，抑制LAG-3及第II類MHC之間的交互作用之IC50 值)來抑制/防止LAG-3及第II類MHC之間的交互作用，該數值係低於BMS-986016抑制LAG-3及第II類MHC之間的交互作用之IC50 值。在一些具體例中，一種如本發明的抗體於一假定的分析中，可以以一IC50 值來抑制/防止LAG-3及第II類MHC之間的交互作用，該數值係BMS-986016抑制LAG-3及第II類MHC之間的交互作用之IC50 值的0.99倍或更小，0.95倍或更小，0.9倍或更小，0.85倍或更小，0.8倍或更小，0.75倍或更小，0.7倍或更小，0.65倍或更小，0.6倍或更小，0.55倍或更小，0.5倍或更小。
如本發明的抗體於一種混合淋巴球反應(MLR)分析中較佳會使T細胞增殖、IL-2生產及IFNγ生產之一者或更多者增加。MLR分析可以如Bromelow等人之J.Immunol Methods , 2001 Jan 1;247(1-2):1-8內所述的方式來執行。T細胞增殖可藉由熟悉此藝者已知的方法來評估，諸如藉由3H胸腺嘧啶(tritiated thymidine)之嵌入或藉由CFSE染料稀釋予以測量，例如如Anthony等人，2012 Cells 1:127-140之內所述者。IL-2及/或IFNγ生產可藉由諸如，熟悉此藝者眾所周知的抗體基(antibody-based)方法予以分析，諸如西方墨點法、免疫組織化學法、免疫細胞化學法、流動式細胞測量術、ELISA、ELISPOT，或報導基(reporter-based)的方法。
在一些具體例中，一種如本發明的抗體於一MLR分析中可以使T細胞增殖、IL-2生產及IFNγ生產之一者或更多者，增加至相似於BMS-986016的程度或大於BMS-986016的程度。在一些具體例中，於可比較分析中，一種如本發明的抗體在MLR分析內使T細胞增殖、IL-2生產及IFNγ生產之一者或更多者，可以比MLR分析內對BMS-986016回應於T細胞增殖、IL-2生產及IFNγ生產方面之增加，增大達以下的程度：為1.01倍或更大，1.05倍或更大，1.1倍或更大，1.15倍或更大，1.2倍或更大，1.25倍或更大，1.3倍或更大，1.35倍或更大，1.4倍或更大，1.45倍或更大，1.5倍或更大。
如本發明之抗體可以結合LAG-3之抗原決定位，其與BMS-986016結合之LAG-3之抗原決定位是不同的。於一些具體例中，如本發明之抗體的抗原決定位與BMS-986016和LAG-3結合的抗原決定位不重疊。於一些具體例中，如本發明之抗體不與BMS-986016和LAG-3之結合競爭。
一假定的抗體與LAG-3之抗原決定位可藉由熟悉此藝者眾所周知的方法來判定，包括X射線結晶學、陣列基的寡肽掃描(array-based oligopeptide scanning)、致突變基的定位法(mutagenesis-based mapping)，以及氫-氘交換定位法(hydrogen-deuterium exchange mapping methods)。一種抗原決定位的競爭結合可以如本文所述藉由競爭ELISA或藉由諸如使用SPR之結合反應分析，或藉由生物層干涉術予以分析。
如本發明之抗體可以為"拮抗劑"抗體，其抑制或降低其所結合抗原的生物活性。LAG-3及第II類MHC之間的交互作用之阻斷係透過抑制LAG-3媒介的免疫抑制發送訊息的途徑，而協助恢復T細胞功能。
本發明亦提供一種嵌合抗原受體(CAR)，其包含如本發明之抗原結合片段。
嵌合抗原受體(CARs)為重組受體，其提供抗原結合及T細胞活化功能二者。CAR結構及遺傳工程處理係舉例而言，於Dotti等人之Immunol Rev (2014) 257(1)內被回顧，其之整體藉此被併入以作為參考資料。
CARs包含一種抗原結合區域，其與一細胞膜錨定區及一發送訊息區鍵聯。一種選擇的鉸鏈區可以於抗原結合區域與細胞膜錨定區域之間提供分隔，以及可以作用為一種撓性鍵接子。
一種CAR的抗原結合區域可以以一種抗體的抗原結合區域為基礎，該抗體對CAR靶定的抗原是專一的，或是其他能與標靶結合的製劑為基礎。舉例而言，一種CAR的抗原結合域可以包含一種專一地結合標靶蛋白的抗體之互補性決定區域(CDRs)的胺基酸序列或完整的輕鏈及重鏈可變異區域胺基酸序列。CARs的抗原結合域可以根據其他的蛋白：蛋白的交互作用來靶定抗原，諸如配體：受體結合；舉例而言，已經使用一種根據IL-13之抗原結合域來發展出一種IL-13Rα2-靶定的CAR(參見諸如，Kahlon等人之2004 Cancer Res 64(24): 9160-9166)。
本發明的CAR包含一種LAG-3結合區域。於一些具體例中，本發明的CAR包含一抗原結合區域，其包含如本發明之抗體/抗原結合片段或由如本發明之抗體/抗原結合片段所組成。
本發明的CAR之LAG-3結合區域可以提供為任何合適的形式，例如scFv、Fab等等。於一些具體例中，本發明的CAR之LAG-3結合區域包含一種LAG-3結合scFv或由一種LAG-3結合scFv所組成。
CAR的抗原結合區域與發送訊息區之間提供細胞膜錨定區域。細胞膜錨定區域係提供用於使CAR錨定至一種細胞的細胞膜，該細胞表現CAR，及細胞外空間之抗原結合區域及細胞內部的發送訊息區。於一些具體例中，本發明的CAR包含一種細胞膜錨定區域，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列包含CD3-ζ、CD4、CD8或CD28中一者的跨膜區域胺基酸序列、由CD3-ζ、CD4、CD8或CD28中一者的跨膜區域胺基酸序列所組成，或是衍生自CD3-ζ、CD4、CD8或CD28中一者的跨膜區域胺基酸序列。
當使用於本文中，一種‘衍生自’一參考胺基酸序列之區域包含一胺基酸序列，其與參考序列有至少60%的序列同一性，例如下列中之一者：至少65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的序列同一性。
一種CAR的發送訊息區允許T細胞之活化。CAR的發送訊息區可以包含CD3-ζ的細胞內域之胺基酸序列，其提供表現CAR的T細胞之磷酸化及活化作用之免疫受體酪胺酸的活化模體(immunoreceptor tyrosine-based activation motifs) (ITAMs)。包含其他含ITAM蛋白的序列之發送訊息區亦已經使用於CARs，諸如包含FcγRI之含ITAM區域的域(Haynes等人，2001 J Immunol 166(1):182-187)。包含衍生自CD3-ζ的細胞內域之發送訊息區之CARs通常稱為第一代CARs。
CARs的發送訊息區亦包含衍生自共刺激分子之發送訊息區的共刺激序列，一旦與標靶蛋白結合用以促進表現CAR的T細胞之活化。合適的共刺激分子包括CD28、OX40、4-1BB、ICOS及CD27。具有一種包括額外的共刺激序列之發送訊息區的CARs，通常稱為第二代CARs。
於一些情況中，CARs係予以遺傳工程處理以提供不同的細胞內共刺激發送訊息途徑。舉例而言，與CD28共刺激有關連的發送訊息優先活化磷脂酸肌醇3-激酶(P13K)的途徑，而4-1BB-媒介的發送訊息係經由TNF受體相關因子(TRAF)轉接蛋白。CARs之發送訊息區有時因而含有衍生自超過一個共刺激分子的發送訊息區之共刺激序列。包含一種帶有多重的共刺激序列之發送訊息區的CARs通常稱為第三代CARs。
於一些具體例中，本發明的CAR包含一種或更多種共刺激序列，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列包含CD28、OX40、4-1BB、ICOS及CD27之一者或更多者的細胞內域之胺基酸序列、由CD28、OX40、4-1BB、ICOS及CD27之一者或更多者的細胞內域之胺基酸序列所組成，或是衍生自CD28、OX40、4-1BB、ICOS及CD27之一者或更多者的細胞內域之胺基酸序列。
一種選擇的鉸鏈區可以於抗原結合域與跨膜域之間提供分隔，以及可以作用為一種撓性鍵接子。鉸鏈區可以為撓性域，其允許結合部分定位於不同的方向。鉸鏈區可以衍生自免疫球蛋白的IgG1或CH2CH3區域。於一些具體例中，本發明的CAR包含一種鉸鏈區，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列包含免疫球蛋白的IgG1或CH2CH3區域之鉸鏈區的胺基酸序列、由免疫球蛋白的IgG1或CH2CH3區域之鉸鏈區的胺基酸序列所組成，或是衍生自免疫球蛋白的IgG1或CH2CH3區域之鉸鏈區的胺基酸序列。
CARs可以組合以共刺激配體、嵌合型共刺激受體或細胞介素，以進一步提升T細胞效能、專一性及安全(Sadelain等人，The basic principles of chimeric antigen receptor (CAR) design. Cancer Discov. 2013 April；3(4): 388–398. doi:10.1158/2159-8290. CD-12-0548，其特別被併入本文中以作為參考資料)。
亦提供一種細胞，其包含一種如本發明的CAR。如本發明的CAR可以使用來產生T細胞。經遺傳工程處理使CARs進入T細胞可以在轉導及增生之活體外培養的期間予以執行，諸如發生在授受性T細胞療法的T細胞增生期間。
於一些態樣中，抗體是克隆A6，或是A6的變異體。A6包含下列的CDRs序列： 輕鏈： LC-CDR1：RSSQSLLHSNGYNYLD(序列辨識編號：12) LC-CDR2：LGSNRAS               (序列辨識編號：13) LC-CDR3：MQALQTPYT              (序列辨識編號：14) 重鏈： HC-CDR1：SYYMH                      (序列辨識編號：28) HC-CDR2：IINPSGGSTSYAQKFQG(序列辨識編號：29) HC-CDR3：PFGDFDY                     (序列辨識編號：30)。 CDR序列係藉由Kabat定義來判定。
於一些態樣中，抗體是克隆1G11，或是1G11的變異體。1G11包含下列的CDRs序列： 輕鏈： LC-CDR1：RASQSVSSSFLA          (序列辨識編號：15) LC-CDR2：GASSRAT              (序列辨識編號：16) LC-CDR3：QQYGPSIT                 (序列辨識編號：17) 重鏈： HC-CDR1：SYGMH                      (序列辨識編號：31) HC-CDR2：VISYDGSNKYYADSVKG(序列辨識編號：32) HC-CDR3：LPGWGAYAFDI        (序列辨識編號：33)。 CDR序列係藉由Kabat定義來判定。
於一些態樣中，抗體是克隆C2，或是C2的變異體。C2包含下列的CDRs序列： 輕鏈： LC-CDR1：RASQSVSSSYLA         (序列辨識編號：18) LC-CDR2：GASSRAT              (序列辨識編號：16) LC-CDR3：QQYGSSPPIT              (序列辨識編號：19) 重鏈： HC-CDR1：SYAMH                      (序列辨識編號：34) HC-CDR2：VISYDGSNKYYADSVKG(序列辨識編號：32) HC-CDR3：DPDAANWGFLLYYGMDV(序列辨識編號：35)。 CDR序列係藉由Kabat定義來判定。
於一些態樣中，抗體是克隆C12，或是C12的變異體。C12包含下列的CDRs序列： 輕鏈： LC-CDR1：RSSQSLLHSDGYNYFD(序列辨識編號：20) LC-CDR2：LGSNRAA                   (序列辨識編號：21) LC-CDR3：MQGTHWPPT              (序列辨識編號：22) 重鏈： HC-CDR1：SYAIS                    (序列辨識編號：36) HC-CDR2：GIIPIFGTANYAQKFQG(序列辨識編號：37) HC-CDR3：ALADFWSGYYYYYYMDV(序列辨識編號：38)。 CDR序列係藉由Kabat定義來判定。
於一些態樣中，抗體是克隆F5，或是F5的變異體。F5包含下列的CDRs序列： 輕鏈： LC-CDR1：RASQSVSSGYLA         (序列辨識編號：23) LC-CDR2：DASSRAT              (序列辨識編號：24) LC-CDR3：QQYGSSRPGLT      (序列辨識編號：25) 重鏈： HC-CDR1：ELSMH                      (序列辨識編號：39) HC-CDR2：GFDPEDGETIYAQKFQG(序列辨識編號：40) HC-CDR3：TWFGELYY         (序列辨識編號：41)。 CDR序列係藉由Kabat定義來判定。
於一些態樣中，抗體是克隆G8，或是G8的變異體。G8包含下列的CDRs序列： 輕鏈： LC-CDR1：TTSQSVSSTSLD      (序列辨識編號：26) LC-CDR2：GASSRAT              (序列辨識編號：16) LC-CDR3：QQYGSSLLT           (序列辨識編號：27) 重鏈： HC-CDR1：SYAMH                      (序列辨識編號：34) HC-CDR2：VISYDGSNKYYADSVKG (序列辨識編號：32) HC-CDR3：DPDAANWGFLLYYGMDV(序列辨識編號：35)。 CDR序列係藉由Kabat定義來判定。
如本發明之抗體可以包含A6、1G11、C2、C12、F5或G8之CDRs或下列中之一者：序列辨識編號1及7；2及8；3及9；4及10；5及11；或6及9。於如本發明之抗體中，六個CDR序列中的一或二或三或四者可以變化。一變異體於六個CDR序列中的一或二者可以具有一或二個胺基酸取代。
抗LAG-3克隆之VH 及VL 鏈的胺基酸序列係顯示於圖1及2中。編碼的核苷酸序列係顯示於圖4中。
輕及重鏈CDRs於結合一些不同的框架區域亦可以是特別有用的。因此，具有LC-CDR1-3或HC-CDR1-3之輕及/或重鏈可擁有一任擇的框架區域。合適的框架區域為本技藝眾所周知的的，以及描述於舉例而言，M. Lefranc & G. Le:franc (2001) "The Immunoglobulin FactsBook", Academic Press之內，併入本文中以作為參考資料。
於此說明書中，抗體可具有包含一胺基酸序列之VH 及/或VL 鏈，該胺基酸序列與下列之VH 及/或VL 胺基酸序列的一者或更多者：序列辨識編號1及7；2及8；3及9；4及10；5及11；或6及9，或圖1及2中顯示的一胺基酸序列或數個胺基酸序列，有高百分率的序列同一性。
舉例而言，如本發明之抗體包括會結合LAG-3且具有一VH 或VL 鏈之抗體，該VH 或VL 鏈包含一胺基酸序列，其與為序列辨識編號1至11中一者的VH 或VL 鏈胺基酸序列，或圖1及2中顯示的一胺基酸序列或數個胺基酸序列，具有至少70%，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性。
如本發明之抗體可以被可偵測標示，或至少能被偵測。舉例而言，抗體可以用一放射性原子或著色的分子或螢光分子或能以任何其他方式容易地偵測的分子，予以標示。合適的可偵測分子包括螢光蛋白、螢光素酶、酵素基質以及放射性標記。結合部分可以直接用一種可偵測的標示予以標示或者其可以被間接標示。舉例而言，結合部分可能是一種未標示的抗體，其能被另一種自身標示的抗體所偵測。任擇地，二級抗體可以已經與其生物素(it biotin)結合，且利用經標示的鏈黴抗生物素蛋白(streptavidin)與生物素之結合來間接標示一級抗體。 核酸/載體
本發明提供一種編碼如本發明之抗體、抗原結合片段或CAR的核酸。於一些具體例中，該核酸為從例如其他的核酸或天然存在的生物材料予以純化或單離的。
本發明亦提供一種載體，其包含編碼如本發明之抗體、抗原結合片段或CAR的核酸。
可提供如本發明之核酸及/或載體用於導入至一細胞之內，例如一種初級人類免疫細胞。合適的載體包括質體、二元載體(binary vector)、DNA載體、mRNA載體、病毒載體(諸如，γ反轉錄病毒載體(如鼠類白血病病毒(MLV)-衍生的載體)、慢病毒(lentiviral)載體、腺病毒載體、腺病毒相關病毒載體、牛痘病毒載體及疱疹病毒載體)、轉位子基(transposon-based)載體以及人工染色體(諸如，酵母人工染色體)，例如如同Maus等人，Annu Rev Immunol (2014) 32:189-225或Morgan and Boyerinas, Biomedicines 2016 4, 9之內所述者，二者之整體內容均藉此被併入以作為參考資料。於一些具體例中，病毒載體可以是一種慢病毒、反轉錄病毒、腺病毒，或是單純疱疹病毒載體。於一些具體例中，慢病毒載體可以為pELNS，或是可以衍生自pELNS。於一些具體例中，載體可以是一種編碼CRISPR/Cas9的載體。 包含/表現抗體/片段/CARs的細胞
本發明亦提供一種細胞，其包含或表現一種如本發明的抗體、抗原結合片段或CAR。亦提供一種細胞，其包含或表現一種如本發明的核酸或載體。
細胞可以為一種真核細胞，例如哺乳動物細胞。哺乳動物可以為一人類，或非人類哺乳動物(諸如，兔、天竺鼠、大鼠、小鼠或其他的囓齒動物(包括囓齒目的任何動物)、貓、狗、豬、綿羊、山羊、牛(包括乳牛，例如乳用母牛或牛屬目(orderBos )的任何動物)、馬(包括馬科目(orderEquidae )的任何動物)、驢以及非人類靈長類動物)。
於一些具體例中，細胞可以來自於一人類主體，或是已經從一人類主體獲得。
細胞可以是一種免疫細胞。細胞可以是一種造血來源的細胞，諸如嗜中性球、嗜酸性球、嗜鹼性球、樹突細胞、淋巴球或單核球。淋巴球可以是諸如，T細胞、B細胞、NK細胞、NKT細胞或先天性淋巴細胞 (ILC)，或是其之前驅物。細胞可以表現諸如，CD3多肽(諸如，CD3γ CD3ε CD3ζ或CD3δ)、TCR多肽(TCRα或TCRβ)、CD27、CD28、CD4或CD8。於一些具體例中，細胞是T細胞。於一些具體例中，T細胞是CD3+ T細胞。於一些具體例中，T細胞是CD3+、CD8+ T細胞。於一些具體例中，T細胞是胞毒型T細胞(諸如，胞毒型T淋巴球(CTL))。
於細胞為包含如本發明之CAR的T細胞的情況中，該細胞可以稱為CAR-T細胞。
於一些具體例中，細胞是一種抗原專一性T細胞。於本文的具體例中，一種“抗原專一性”T細胞為一種細胞，其對該T細胞專一的抗原或表現該抗原的細胞回應而展現某些功能特質。於一些具體例中，該等特質為與效應子T細胞，例如胞毒型T細胞有關連的功能特質。於一些具體例中，一抗原專一性T細胞可以舉例而言，對該T細胞專一的抗原或是一種包含/表現該T細胞專一的抗原之細胞回應，而展現一種或更多種下列特質：對於例如一種包含/表現T細胞專一的抗原之細胞之細胞毒性；增殖，IFNγ表現，CD107a表現，IL-2表現，TNFα表現，穿孔蛋白表現，顆粒酶表現，顆粒溶解素(granulysin)表現，及/或FAS配體(FASL)表現。於一些具體例中，T細胞具有專一性的抗原可以是一種病毒的胜肽或多肽，例如艾司坦氏-巴爾氏病毒(Epstein-Barr virus)(EBV)、流行性感冒病毒、麻疹病毒、B型肝炎病毒(HBV)、C型肝炎病毒(HCV)、人類免疫不全病毒(HIV)、淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎病毒(LCMV)、單純疱疹病毒(HSV)或是人類乳頭瘤病毒(HPV)。
本發明亦提供一種用於生產一細胞之方法，該細胞包含如本發明之核酸或載體，該方法包含將如本發明之核酸或載體導入一細胞內。本發明亦提供一種用於生產一細胞之方法，該細胞表現如本發明之抗體、抗原結合片段或CAR，該方法包含將如本發明之核酸或載體導入一細胞內。於一些具體例中，該方法額外包含於適合該細胞表現該核酸或載體之載體的條件下培養該細胞。於一些具體例中，該方法係於活體外執行。
於一些具體例中，將如本發明之經單離的核酸或載體導入一細胞內包含轉導，例如反轉錄病毒轉導。因此，於一些具體例中，該經單離的核酸或載體被包含於一病毒載體內，或該載體是一病毒載體。於一些具體例中，該方法包含藉由電穿孔將如本發明之核酸或載體導入，舉例而言如Koh等人，Molecular Therapy – Nucleic Acids (2013) 2, e114之內所述，其之整體內容藉此被併入以作為參考資料。
本發明亦提供透過依據本發明之生產細胞的方法所獲得或可獲得的細胞。 偵測方法
如本文所述之抗體、抗原結合片段、CAR或細胞可以使用於涉及該抗體、抗原結合片段、CAR或細胞與LAG-3結合的方法之內。此等方法可以涉及抗體、抗原結合片段、CAR或細胞與LAG-3的結合複合物之偵測。確切而言，於一個具體例中，提供一種方法，該方法包含使一種含有或懷疑含有LAG-3的樣本與一種如本文所述之抗體、抗原結合片段、CAR或細胞接觸，以及偵測抗體、抗原結合片段、CAR或細胞與LAG-3的複合物之形成。
合適的方法形式為本技藝眾所周知的，包括免疫分析，諸如三明治分析，例如ELISA。該方法可以涉及用一可偵測的標示，例如螢光、冷光或放射性標記，來標示該抗體、抗原結合片段、CAR或細胞，或是LAG-3，或是二者。LAG-3之表現可藉由舉例而言，以活體組織切片檢查獲得的一組織樣本之免疫組織化學法(IHC)來測量。
此種方法可以提供一種診斷一疾病或病況的方法之基礎，其需要偵測及或定量LAG-3或第II類MHC。此等方法可以於活體外的一病人樣本執行，或是在一病人樣本處理後執行。一旦收集樣本，執行活體外診斷方法時不需要病人在場，且因而該方法可以為一種不於人類或動物體上實施的方法。
此等方法可涉及判定一病人樣本內存在的LAG-3的量。該方法可以進一步包含，對比標準或參考的值來比較判定的量作為該方法達成診斷的一部分。可以使用其他的診斷測試來與於此所述的該等診斷測試結合，以提升診斷或預後的準確度或用於證實使用於此所述的測試所獲得的結果。
癌細胞可以利用LAG-3途徑來創造免疫抑止的環境，其係藉由向上調節LAG-3表現、允許抑制性LAG-3受體於任何浸潤於腫瘤微環境的T細胞上之活化作用，且藉此抑止其等之活性。於許多不同的癌症類型業已證實LAG-3向上調節的表現，以及高LAG-3表現亦已與不良的臨床結果有關聯。
一病人樣本內存在的LAG-3或第II類MHC之水平可以表明一病人可以對一種抗LAG-3抗體之治療作出反應。一樣本內存在高水平的LAG-3或第II類MHC可以使用來選擇病人用於一種抗LAG-3抗體之治療。本發明的抗體因而可以使用來選擇病人用於抗LAG-3療法之治療。
偵測一樣本內的LAG-3可以使用於診斷病人體內的一種T細胞官能不良障礙或癌症病況、診斷一癌症病況的體質，或提供一癌症病況的預後(預知(prognosticating))之目的。診斷或預後可以與現存的(事先診斷的)癌症—可以為良性或惡性的—的病況有關，可以與一懷疑的癌症病況有關，或者可以與篩選病人的癌症病況(其可能是事先未經診斷的)有關。
於一個具體例中，可以偵測CD8+ T細胞上LAG-3的表現水平，俾以指示T細胞衰竭的程度以及疾病狀態的嚴重性。
於一個具體例中，可以偵測第II類MHC於例如，抗原呈現細胞或腫瘤細胞上的表現水平，俾以指示一種疾病狀態，舉例而言感染、組織發炎或一癌症，的存在或嚴重性。
一樣本可以取自於任何組織或身體的流體。樣本可以包含或可以衍生自：一分量的血液；一分量衍生自個體血液的血清，其可以包含所獲得的血液移除纖維蛋白凝塊及血液細胞後的流體部分；一組織樣本或活體組織切片檢查；或自該個體單離的細胞。
如本發明的方法較佳於活體外執行。術語“活體外”打算包含以培養物內的細胞進行的實驗，而術語“活體內”打算包含以完整的多細胞生物進行的實驗。 治療應用
如本發明之抗體、抗原結合片段、CAR、細胞及多肽，以及包含此等製劑的組成物可以提供用於醫學治療方法。治療可以提供給具有需要治療的疾病或病況之主體。疾病或病況可以為下列中之一者：一種T細胞官能不良障礙，包括與一癌症有關連的T細胞官能不良障礙，或一癌症，或是與感染有關連的T細胞官能不良障礙，或一感染。
一種T細胞官能不良障礙可以為一種疾病或病況，其中正常的T-細胞功能受損、造成主體對病原性抗原的免疫反應向下調節，該病原性抗原為例如由外源性媒介(agent)諸如微生物、細菌及病毒感染所產生，或是於一些疾病狀態由宿主產生，諸如以一些癌症的形式(諸如以腫瘤關聯性抗原的形式)。
T細胞官能不良障礙可以包含T細胞衰竭或T細胞無因變性。T細胞衰竭包含CD8+ T-細胞無法增殖或發揮T細胞效應子功能的狀態，諸如細胞毒性以及對抗原刺激回應分泌細胞介素(諸如IFNγ)。衰竭的T細胞亦可特徵在於LAG-3之持續表現，阻斷LAG-3：第II類MHC的交互作用可以逆轉T細胞衰竭以及恢復抗原專一性T細胞反應。
T細胞官能不良障礙可以顯現為一種感染，或是不能發動有效的免疫反應對抗感染。感染可以為慢性、持續性、潛伏或緩慢的，以及可能是細菌、病毒、真菌或寄生蟲感染的結果。確切而言，可以提供治療給有細菌、病毒或是真菌感染的病人。細菌感染的實例包括幽門螺旋桿菌(Helicobacter pylori )感染。病毒感染的實例包括HIV、B型肝炎或C型肝炎感染。
T細胞官能不良障礙可能與一癌症有關連，諸如腫瘤免疫逃避(tumor immune escape)。許多人類腫瘤表現T細胞辨識且能誘發免疫反應的腫瘤關聯性抗原。Woo等人之Cancer Res (2012) 72(4): 917-927描述T細胞功能之調節，其係藉由LAG-3和PD-1之協同作用以促進小鼠的腫瘤免疫逃避。阻斷LAG-3和第II類MHC的交互作用可以抑制此負向免疫調節訊息往腫瘤細胞，以及提升腫瘤專一性CD8+ T細胞免疫性。
亦可以治療癌症，該癌症沒有T細胞官能不良障礙的徵兆，諸如T細胞衰竭，但是使用一種如本發明之抗體、抗原結合片段、CAR、細胞或多肽允許主體抑止LAG-3發送訊息且發動有效的免疫反應伴隨有限的減損、迴避(evasion)或誘發腫瘤免疫逃避。於此等治療方面，該抗體、抗原結合片段、CAR、細胞或多肽可以提供用於一癌症的治療，其牽涉到要避免發展出腫瘤免疫逃避。
亦可以治療過度表現LAG-3之癌症。舉例而言，此等過度表現LAG-3之腫瘤細胞可以藉由LAG-3抗體之治療、藉由抗體依賴性細胞媒介的細胞毒性(ADCC)、補體依賴性細胞毒性(CDC)或使用抗LAG-3抗體-藥物綴合物而直接殺死。
治療的目的可以是預防T細胞官能不良障礙，例如預防感染或癌症的發展或進展。確切而言，該抗體、抗原結合片段、CAR、細胞及多肽可以使用來調配藥學組成物或藥劑，以及主體可以預防性地治療以對抗疾病狀態的發展。此可以在疾病狀態的症狀開始之前發生，及/或可以提供給認為有較大的感染或癌症的發展風險之主體。
治療可以包含連同疫苗的共療法，例如T-細胞疫苗，其可以涉及同時、分別或連續療法，或是疫苗與抗體、抗原結合片段、CAR、細胞或多肽之單一組成物的組合投與。於此上下文內，該抗體、抗原結合片段、CAR、細胞或多肽可以提供作為疫苗的佐劑。衰竭T細胞有限的增殖潛力已經被認為是T-細胞免疫療法失敗的主要原因，以及一種能阻斷或逆轉T細胞衰竭的製劑之組合為改良T-細胞免疫療法功效有潛力的策略(Barber等人，Nature Vol 439, No. 9 p682-687 Feb 2006)。
一種抗體、抗原結合片段、CAR、細胞或多肽之投與較佳為"治療有效量"，此量係足以對個體顯示益處。投與的實際量，以及投與的速率及時間過程會取決於要治療的疾病本質及嚴重性。治療的處方，例如決定劑量等等，係在普通科醫生及其他醫生的責任範圍內，並且典型地要考慮要治療的疾病、個別病人的狀況、遞送的位置、投與的方法以及開業醫生已知的其他因素。以上提及的技術與程序之實例可以於Remington’s Pharmaceutical Sciences, 20th 版，2000, pub. Lippincott, Williams & Wilkins內找到。 調配藥學有用的組成物及藥劑
如本發明之抗體、抗原結合片段、CAR、細胞及多肽可以調配為供臨床使用之藥學組成物，以及可以包含一種藥學上可接受的載劑、稀釋劑、賦形劑或佐劑。
依據本發明，亦提供用於生產藥學上有用的組成物之方法，此等生產方法可以包含選自於下列的一或多個步驟：單離一種如本文所述之抗體、抗原結合片段、CAR、細胞或多肽；及/或混合一種如本文所述之抗體、抗原結合片段、CAR、細胞或多肽，及一藥學上可接受的載劑、佐劑、賦形劑、或稀釋劑。
舉例而言，本發明另外的態樣係有關於一種調配或生產一藥劑或藥學組成物之方法，該藥劑或藥學組成物係供用於治療T細胞官能不良障礙，該方法包含藉由混合一種如本文所述之抗體、抗原結合片段、CAR、細胞或多肽，與一藥學上可接受的載劑、佐劑、賦形劑或稀釋劑，來調配一藥學組成物或藥劑。 感染
一種感染可以是任何的感染或感染疾病，例如細菌、病毒、真菌或是寄生蟲感染。於一些具體例中，可能特別希望治療慢性/持續性的感染，例如此等與T細胞官能不良或T細胞衰竭有關連的感染。
T細胞衰竭為許多慢性感染(包括病毒、細菌及寄生蟲)以及癌症的整個期間出現的T細胞官能不良的狀態，是很明確的(Wherry Nature Immunology Vol.12, No.6, p492-499，2011年六月)。
一種感染或感染疾病可以為LAG-3被向上調節之感染或感染疾病。
可以治療的細菌感染之實例包括由於下列之感染：芽胞桿菌屬物種(Bacillus spp. )、百日咳博德氏桿菌(Bordetella pertussis )、梭菌屬物種(Clostridium spp. )、棒狀桿菌屬物種(Corynebacterium spp. )、霍亂弧菌(Vibrio chloerae )、葡萄球菌屬物種(Staphylococcus spp. )、鏈球菌屬物種(Streptococcus spp. )、大腸桿菌屬(Escherichia )、克留氏菌屬(Klebsiella )、變形桿菌屬(Proteus )、耶氏桿菌屬(Yersinia )、伊文氏桿菌屬(Erwina )、沙門氏桿菌屬(Salmonella )、李氏菌屬物種(Listeria sp )、幽門螺旋桿菌(Helicobacter pylori )、分枝桿菌(mycobacteria) (諸如，結核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis ))以及綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa )。舉例而言，細菌感染可以是敗血症或結核病。
Phillips等人之Am J Pathol (2015) 185(3):820-833描述肺臟內，且特別是實驗性感染結核分枝桿菌的恆河獼猴之肉芽腫病灶內，LAG-3表現的向上調節。
可以治療的病毒感染之實例包括由於下列之感染：流行性感冒病毒、麻疹病毒、B型肝炎病毒(HBV)、C型肝炎病毒(HCV)、人類免疫不全病毒(HIV)、淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎病毒(LCMV)、單純疱疹病毒以及人類乳頭瘤病毒。
慢性病毒感染，諸如由LCMV、HCV、HBV，以及HIV造成的該等，通常涉及躲避免疫廓清作用(immune clearance)機轉。小鼠感染LCMV後表現高水平的LAG-3(Blackburn等人之Nat Immunol (2009) 10:29-37)。Chen等人，J Gastroenterol Hepatol (2015) 30(12):1788-1795描述慢性的C型肝炎病人的C型肝炎病毒專一性CD8+ T細胞功能之負向調節，其可藉由阻斷抗LAG-3抗體的治療而逆轉。Li等人，Immunol Lett (2013) 150 (1-2): 116-122描述LAG-3表現和HBV-專一性CD8+ T細胞官能不良之間的正相關，以及暗示LAG-3於HCC抑止HBV-專一性細胞媒介的免疫性的角色。Tian等人之J Immunol 2015 194(8):3873-3782描述HIV感染的病人，CD4+ 及CD8+ T細胞上向上調節的LAG-3表現以及疾病進展之間的聯繫。
可以治療的真菌感染之實例包括由於下列之感染：鏈隔孢菌屬物種(Alternaria sp )、麴菌屬物種(Aspergillus sp )、念珠菌屬物種(Candida sp )及組織漿菌屬物種(Histoplasma sp. )。真菌感染可以是真菌敗血症或組織漿菌病。T細胞衰竭於媒介真菌感染的重要性已經由諸如，Chang等人之Critical Care (2013) 17:R85，以及Lázár-Molnár等人之PNAS (2008) 105(7): 2658-2663所確立。
可以治療的寄生蟲感染之實例包括瘧原蟲(Plasmodium )物種的感染(諸如，惡性瘧原蟲(Plasmodium falciparum )、約氏瘧原蟲(Plasmodium yoeli )、卵形瘧原蟲(Plasmodium ovale )、間日瘧原蟲(Plasmodium vivax )，或是狨瘧蟲(Plasmodium chabaudi chabaudi )。寄生蟲感染可以為一疾病，諸如瘧疾、萊什曼病及弓蟲症。
於活體內使用抗-PD-L1及抗-LAG-3單株抗體阻斷PD-L1及LAG-3，促成小鼠CD4+ T-細胞功能之恢復、濾泡輔助T細胞、胚芽中心B細胞及漿母細胞的數目擴大、提升的保護性抗體，以及快速清除的血液階段。亦顯示出會阻斷慢性感染的發展(Butler等人，Nature Immunology Vol.13, No.12, p 188-195，2012年二月)。 癌症
一種癌症可以為任何不想要的細胞增殖(或其自身表現出不想要的細胞增殖之任何疾病)、贅生物或腫瘤，或是不想要的細胞增殖、贅生物或腫瘤的風險增高或是體質。癌症可能是良性或惡性的，以及可能為原發性或是繼發性(轉移的)。贅生物或是腫瘤可能為任何異常的細胞生長或增殖，以及可能位於任何的組織內。組織之實例包括腎上腺、腎上腺髓質、肛門、闌尾、膀胱、血液、骨骼、骨髓、腦、胸、盲腸、中樞神經系統(包括或是排除腦) 小腦、子宮頸、結腸、十二指腸、子宮內膜、上皮細胞(例如，腎臟上皮)、膽囊、食道、神經膠細胞、心臟、迴腸、空腸、腎臟、淚腺(lacrimal glad)、喉、肝臟、肺臟、淋巴、淋巴結、淋巴母細胞、上頜骨、縱膈、腸繫膜、子宮肌層、鼻咽、網膜、口腔、卵巢、胰臟、腮腺、周邊神經系統、腹膜、胸膜、前列腺、唾腺、乙狀結腸、皮膚、小腸、軟組織、脾臟、胃、睪丸、胸腺、甲狀腺、舌、扁桃腺、氣管、子宮、女陰、白血球細胞。
要治療的腫瘤可以為神經或非神經系統腫瘤。神經系統腫瘤可以發源於中樞或周邊神經系統，例如神經膠質瘤、神經管胚細胞瘤、腦脊髓膜瘤、神經纖維瘤、室管膜瘤、神經鞘瘤、神經纖維肉瘤、星細胞瘤及寡樹突神經膠細胞瘤。非神經系統癌症/腫瘤可以發源於任何其他非神經組織，實例包括黑色素瘤、間皮瘤、淋巴瘤、骨髓瘤、白血病、非何杰金氏淋巴瘤(Non-Hodgkin's lymphoma) (NHL)、何杰金氏淋巴瘤(Hodgkin's lymphoma)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性骨髓白血病(AML)、骨髓發育不良症候群(myelodysplastic syndrome)(MDS)、皮膚T細胞淋巴瘤(CTCL)、慢性淋巴球性白血病(CLL)、肝癌、表皮樣癌、前列腺癌、乳癌、肺癌、結腸癌、卵巢癌、胰臟癌、胸腺癌、NSCLC、血液癌症及肉瘤。 授受性T細胞轉移療法
於本發明的具體例中，一種治療或預防(prophylaxis)的方法可以包含免疫細胞之授受性細胞轉移。授受性T細胞轉移療法一般而言係指一種從一主體移去白血球細胞的方法，典型地係透過抽取一血液樣本，由血液樣本分離白血球細胞，於活體外或擬體內(ex vivo )增生且返回相同的主體或不同的主體。治療典型目的在於增加主體內所欲的T細胞族群活化型的量/濃度。此等處理對經歷T細胞衰竭的主體可能是有益的。
能阻斷T細胞衰竭機轉或是使其逆轉之抗體，提供了一種提升T細胞活性及促進T細胞增生的手段。
針對免疫查核點受體(諸如LAG-3)的抗體亦可用於T細胞增生之方法，例如用於增生特別感興趣的T細胞族群。舉例而言，抗體可用於T細胞增生之方法，其優先增生具有所欲特質的T細胞亞群(例如優先於具有非所欲特質的T細胞亞群)。
因此，於本發明另外的態樣中，提供一種用於增生一T細胞族群之方法，其中T細胞係於活體外或擬體內與如本發明之抗體、抗原結合片段、CAR、細胞或多肽接觸。
該方法可選擇性地包含一或更多下列步驟：從一主體採集一血液樣本；從該血液樣本單離T細胞；於活體外或擬體內細胞培養物內培養該T細胞(其等可於該處與該抗體、抗原結合片段、CAR、細胞或多肽接觸)，收集增生的T細胞族群；混合該T細胞與一佐劑、稀釋劑或載劑；投與該增生的T細胞至一主體。
因此，於本發明的一些態樣中，提供一種治療有T細胞官能不良障礙的一主體之方法，該方法包含從需要治療的一主體獲得一血液樣本，於如本發明之抗體、抗原結合片段、CAR、細胞或多肽存在下，培養得自於該血液樣本的T細胞，以便增生該T細胞族群，收集增生的T細胞，以及投與該增生的T細胞至需要治療的一主體。
T細胞可以從需要治療的一主體獲得，以及可以予以單離及/或純化。其等可以為一種CD4+ 及/或CD8+ T細胞族群。T細胞可以代表一種經歷T細胞衰竭的族群，以及可以選擇性地具有向上調節的LAG-3表現。
在培養的期間，T細胞可以於適合允許T細胞增生至所欲的細胞數目之條件及時間期間，與該抗體、抗原結合片段、CAR、細胞或多肽接觸。於合適的時間期間之後，可以收穫T細胞，選擇性濃縮，以及可以與合適的載劑、佐劑或稀釋劑混合，且返回主體的身體。一主體可以進行此療法一輪或更多輪。
T細胞增生的方法為本技藝眾所周知的，諸如，如以下所述的該等：Kalamasz等人，J Immunother 2004 Sep-Oct；27(5):405-18；Montes等人，Clin Exp Immunol 2005 Nov;142(2):292-302；Wӧlfl and GreenburgNature Protocols 9 p950-966，2014年三月27日；Trickett and KwanJournal of Immunological Methods Vol. 275, 第1-2期，2003年四月1日，p251-255；Butler等人之PLoSONE 7(1) 12 Jan 2012。
舉例而言，T細胞增生的方法可以包含刺激T細胞。刺激可以包含非專一性刺激，例如藉由抗-CD3/抗-CD28予以治療。T細胞的刺激可以包含專一性刺激，例如以(諸如例如，與抗原呈現細胞表現的MHC複合)的抗原予以治療。T細胞增生的方法可以包含於一種或更多種促進T細胞增殖/增生的因子存在下培養。舉例而言，T細胞增生的方法可以包含於IL-2存在下培養。
於本發明中，執行授受性細胞轉移(ACT)的目的可以是，將一細胞或細胞族群導入至一主體，及/或使一主體內一細胞或細胞族群的頻率增加。
授受性T細胞轉移舉例而言，係描述於Kalos and June 2013, Immunity 39(1): 49-60之內，其之整體內容藉此被併入以作為參考資料。NK細胞之授受性轉移舉例而言，係描述於Davis等人之2015, Cancer J. 21(6): 486–491之內，其之整體內容藉此被併入以作為參考資料。
細胞可以是諸如，嗜中性球、嗜酸性球、嗜鹼性球、樹突細胞、淋巴球或單核球。淋巴球可以是諸如，T細胞、B細胞、NK細胞、NKT細胞或先天性淋巴細胞(ILC)，或是其之前驅物。於一些具體例中，細胞是T細胞。於一些具體例中，T細胞是CD3+ T細胞。於一些具體例中，T細胞是CD3+、CD8+ T細胞。於一些具體例中，T細胞是胞毒型T細胞(諸如，胞毒型T淋巴球(CTL))。於一些具體例中，T細胞是病毒專一性T細胞。於一些具體例中，T細胞對EBV、HPV、HBV、HCV或HIV是專一的。
本發明提供一種治療或呈現(presenting)一主體內一疾病或病況的方法，該方法包含修飾得自一主體的至少一細胞以表現或包含如本發明之抗體、抗原結合片段、CAR、核酸或載體，選擇性地增生經修飾的至少一細胞，以及投與該經修飾的至少一細胞至一主體。
於一些具體例中，該方法包含： (a) 從一主體單離至少一細胞； (b) 修飾該至少一細胞以表現或包含如本發明之抗體、抗原結合片段、CAR、核酸或載體， (c) 選擇性地增生該經修飾的至少一細胞，以及； (d) 投與該經修飾的至少一細胞至一主體。
於一些具體例中，單離出細胞的主體為投與該經修飾細胞的主體(亦即，授受性轉移屬於自體細胞)。於一些具體例中，單離出細胞的主體與投與該經修飾細胞的主體是不同的主體(亦即，授受性轉移屬於同種異體的細胞)。
如本發明之至少一經修飾的細胞可依據熟悉此藝者眾所周知的方法予以修飾。修飾可以包含核酸轉換以永久性或暫時性的表現轉換的核酸。
於一些具體例中，該細胞可額外修飾成包含或表現一種嵌合抗原受體(CAR)，或編碼一CAR之核酸或載體。
可以使用任何合適的遺傳工程處理平台來修飾如本發明之細胞。合適的修飾細胞的方法包括使用例如下列的遺傳工程處理平台：γ反轉錄病毒載體、慢病毒(lentiviral)載體、腺病毒載體、DNA轉染、轉位子為基的基因遞送以及RNA轉染，舉例而言，如Maus等人，Annu Rev Immunol (2014) 32:189-225之內所述者，以上被併入以作為參考資料。
於一些具體例中，該方法可包含一或更多下列步驟：從一主體採集一血液樣本；從該血液樣本單離及/或增生至少一細胞；於活體外或擬體內細胞培養物內培養該至少一細胞；導入如發明之抗體、抗原結合片段、CAR、核酸或載體至該至少一細胞內，藉此修飾該至少一細胞；增生該至少一經修飾細胞；收集該至少一經修飾細胞；混合該經修飾細胞與一佐劑、稀釋劑或載劑；投與該經修飾細胞至一主體。
於一些具體例中，該方法可以額外包含治療該細胞以誘發/提升該抗體、抗原結合片段、CAR、核酸或載體的表現。舉例而言，該核酸/載體可以包含一控制元素用於對特定的製劑治療回應，而可誘發的向上調節來自該核酸/載體之該抗體、抗原結合片段或CAR的表現。於一些具體例中，治療可以藉由對已經投與如發明之經修飾細胞的主體，於活體內投與製劑來進行。於一些具體例中，治療可以藉由對擬體內或於活體外培養物內的細胞，於擬體內或於活體外投與製劑來進行。
熟習此項技術者能夠判定適合用於如本發明之細胞的授受性轉移之試劑及程序，舉例而言參照Dai等人，2016 J Nat Cancer Inst 108(7): djv439，其之整體內容被併入以作為參考資料。
於一相關態樣中，本發明提供一種製備一經修飾細胞的方法，該方法包含導入如發明之抗體、抗原結合片段、CAR、核酸或載體至一細胞內，藉此修飾該至少一細胞。該方法較佳於活體外或擬體內執行。
於一個態樣中，本發明提供一種治療或預防一主體之一疾病或病況的方法，其包含： (a) 從一主體單離至少一細胞； (b) 導入如發明之核酸或載體至該至少一細胞內，藉此修飾該至少一細胞；以及 (c) 投與該經修飾的至少一細胞至一主體。
於一些具體例中，該細胞可額外修飾以導入一種編碼一嵌合抗原受體(CAR)之核酸或載體。
於一些具體例中，該方法額外包含治療或預防性介入，舉例而言用於治療或預防一癌症。於一些具體例中，該治療或預防性介入係選自於化學療法、免疫療法、放射療法、外科手術、疫苗接種及/或激素療法。 同時或相繼投與
組成物可以單獨投與或是組合以其他的治療同時或相繼投與，取決於待治療的病況。
於本說明書中，本發明之抗體、抗原結合片段、CAR、細胞或多肽以及抗感染製劑或化學治療劑(治療劑)可以同時或相繼投與。
於一些具體例中，本發明之抗體、抗原結合片段、CAR、細胞或多肽之治療可以伴隨著化學療法。
同時投與係指一起投與該抗體、抗原結合片段、CAR、細胞或多肽及治療劑，舉例而言作為一種含有二製劑的藥學組成物(組合製備)，或是彼此緊密相連地投與，以及選擇性地經由相同的投與途徑，例如至相同的動脈、靜脈或其他血管。
相繼投與係指投與該抗體、抗原結合片段、CAR、細胞或多肽或治療劑中之一者，接著於假定的時間間隔之後分開投與另一種製劑。二種製劑不需要以相同的途徑投與，雖然於一些具體例中是這種情況。時間間隔可以為任何的時間間隔。
PD-1/PD-L1途徑及LAG-3阻斷之組合抑制也已顯示出會提供抗腫瘤功效(Jing等人之Journal for ImmunoTherapy of Cancer (2015) 3:2；還有Nguyen and Ohashi, Nat Rev Immunol (2015) 15:45-56)。因此，於一個態樣中，本發明提供如本發明之抗體、抗原結合片段、CAR、細胞或多肽供用於與PD-1/PD-L1途徑抑制劑之組合療法。
於一些具體例中，本發明提供連同PD-1、PD-L1或PD-1/PD-L1途徑之抑制劑的組合療法。於一些具體例中，該抑制劑為能抑制或防止PD-1與PD-L1之間的交互作用所媒介之發送訊息的一種製劑。於一些具體例中，該抑制劑為能向下調節PD-1及/或PD-L1的基因或蛋白表現之一種製劑。於一些具體例中，該抑制劑為能抑制或防止PD-1與PD-L1之間結合之一種製劑。於一些具體例中，該抑制劑為一種抗體。於一些具體例中，該抑制劑為一種能與PD-1結合的抗體。於一些具體例中，該抑制劑為一種能與PD-L1結合的抗體。該抗體可以為一種拮抗劑抗體或阻斷抗體。PD-1、PD-L1或PD-1/PD-L1途徑之抑制劑為熟悉此藝者眾所周知的，以及包括舉例而言，納武單抗(nivolumab)、聯合利妥昔單抗(pidilizumab)、BMS 936559、MPDL328oA、派姆單抗(pembrolizumab)及阿維魯單抗(avelumab)。依據本發明預期供使用的PD-1/PDL-1抑制劑包括Sunshine and Taube “PD-1/PD-L1 inhibitors”, Curr. Opin. Pharmacol. 2015, 23:32-38之內所述的該等，其之整體內容藉此被併入以作為參考資料。 抗感染製劑
於治療感染方面，一種本發明之抗體、抗原結合片段、CAR、細胞或多肽可以組合以一抗感染製劑來投與，如上所述。抗感染製劑可以為一種已知對於感染有責任的微生物或病毒有作用的製劑。
合適的抗感染製劑包括抗生素(諸如青黴素、頭孢菌素(cephalosporins)、利福黴素(rifamycin)、閏年黴素(lipiarmycins)、喹諾酮(quinolone)、磺胺(sulfonamides)、大環內酯(macrolides)、林可胺類(lincosamides)、四環黴素、環狀脂肽(cyclic lipopeptides)、甘胺醯環素(glycylcyclines)、噁唑烷酮(oxazolidinones)及閏年黴素(lipiarmycins))、抗病毒劑(諸如反轉錄酶抑制劑、整合酶抑制劑(integrase inhibitors)、轉錄因子抑制劑、反義及siRNA製劑及蛋白酶抑制劑)、抗真菌劑(諸如多烯、咪唑(imidiazoles)、三唑(triazoles)、噻唑(thiazoles)、烯丙胺及棘白菌素(echinocandins))，以及抗寄生蟲劑(諸如抗線蟲劑、抗絛蟲劑、抗吸蟲劑、抗阿米巴劑及抗原蟲劑)。 化學療法
化學療法係指用一種藥物或游離輻射(諸如，利用X射線或γ射線之放射療法)來治療一癌症。於較佳的具體例中，化學療法係指用一種藥物之治療。藥物可以為一化學實體，例如小分子藥品、抗生素、DNA嵌入劑、蛋白抑制劑(諸如激酶抑制劑)，或是一生物製劑，例如抗體、抗體片段、核酸或胜肽適配體、核酸(諸如DNA、RNA)、胜肽、多肽，或是蛋白。藥物可以調配成一藥學組成物或藥劑。調配物可以包含一種或更多種藥物(諸如一種或更多種活性製劑)連同一藥學上可接受的稀釋劑、賦形劑或載劑。
一種治療可以涉及超過一種藥物的投與。一種藥物可以單獨投與或組合以其他的治療同時或相繼投與，取決於待治療的病況。舉例而言，化學療法可以為涉及投與二種藥物的共療法，其等之一者或更多者可以是打算要治療癌症者。
化學療法可以藉由一種或更多種投與途徑予以投與，例如非經腸、靜脈內注射、口腔、皮下、皮內或腫瘤內。
化學療法可以依據一種治療攝生法(regime)來投與。治療攝生法可以是預定的化學療法投與之時刻表、計畫、方案或時間表，其可由醫師或開業醫生予以製備，以及可以修改以適合需要治療的病人。
治療攝生法可以表示下列之一者或更多者：病人被投與的化學療法類型；各藥物或放射線的劑量；投與之間的時間間隔；各治療的長度；任何治療假期(treatment holiday)，設若有，的數目及本質等等。於共療法方面，可以提供指示出各藥物如何被投與之單一治療攝生法。
化學治療藥物及生物製品可以選自於：烷化劑，例如順鉑(cisplatin)、卡鉑(carboplatin)、甲基二(氯乙基)胺(mechlorethamine)、環磷醯胺(cyclophosphamide)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、異環磷醯胺(ifosfamide)；嘌呤或嘧啶抗代謝劑，例如硫唑嘌呤(azathiopurine)或巰嘌呤(mercaptopurine)；生物鹼(alkaloid)及萜類，諸如長春花生物鹼(vinca alkaloid)(諸如長春新鹼(vincristine)、長春鹼(vinblastine)、長春瑞賓(vinorelbine)、長春地辛(vindesine))、鬼臼毒素(podophyllotoxin)、依託泊苷(etoposide)、替尼泊苷(teniposide)、紫杉烷(taxanes)諸如紫杉醇(paclitaxel)(紫杉醇TM (TaxolTM ))、多烯紫杉醇(docetaxel)；拓撲異構酶抑制劑，諸如第I型拓撲異構酶抑制劑喜樹鹼(camptothecin)伊立替康(irinotecan)及拓撲替康(topotecan)，或是第II型拓撲異構酶抑制劑安吖啶(amsacrine)、依託泊苷(etoposide)、依託泊苷磷酸鹽(etoposide phosphate)、替尼泊苷(teniposide)；抗腫瘤抗生素(諸如蒽環類(anthracyline)抗生素)，諸如放線菌素(dactinomycin)、多柔比星(doxorubicin)、阿德力黴素TM (AdriamycinTM ))、表柔比星(epirubicin)、博萊黴素(bleomycin)、雷帕黴素(rapamycin)；抗體基的製劑，諸如抗-PD-1抗體、抗-PD-L1抗體、抗-TIM-3抗體、抗-CTLA-4、抗-4-1BB、抗-GITR、抗-CD27、抗-BLTA、抗-OX43、抗-VEGF、抗-TNFα、抗-IL-2、抗GpIIb/IIIa、抗-CD-52、抗-CD20、抗-RSV、抗-HER2/neu(erbB2)、抗-TNF受體、抗-EGFR抗體、單株抗體或抗原片段實例包括：西妥昔單抗(cetuximab)、帕尼單抗(panitumumab)、英夫利昔單抗(infliximab)、巴利昔單抗(basiliximab)、貝伐單抗(bevacizumab)(癌思停® (Avastin® ))、阿昔單抗(abciximab)、達利珠單抗(daclizumab)、吉妥珠單抗(gemtuzumab)、阿來組單抗(alemtuzumab)、利妥昔單抗(rituximab) (莫須瘤®(Mabthera®))、帕利珠單抗(palivizumab)、曲妥珠單抗(trastuzumab)、依那西普(etanercept)、阿達木單抗(adalimumab)、尼妥珠單抗(nimotuzumab)；EGFR抑制劑諸如厄洛替尼(erlotinib)、西妥昔單抗(cetuximab)及吉菲替尼(gefitinib)；抗血管生成劑，諸如貝伐單抗(bevacizumab) (癌思停®(Avastin®))；癌症疫苗諸如西普魯塞-T(Sipuleucel-T)(普羅文奇®(Provenge®))。
於一個具體例中，化學治療劑為一種抗-PD-1抗體、抗-PD-L1抗體、抗-TIM-3抗體、抗-CTLA-4、抗-41BB、抗-GITR、抗-CD27、抗-BLTA、抗-OX43、抗-VEGF、抗-TNFα、抗-IL2、抗-GpIIb/IIIa、抗-CD-52、抗-CD20、抗-RSV、抗-HER2/neu(erbB2)、抗-TNF受體、抗-EGFR或其他的抗體。於一些具體例中，化學治療劑為一種免疫查核點抑制劑或共刺激分子。
另外的化學治療藥物可以選自於：13-順維他命A酸(13-cis-Retinoic Acid)、2-氯去氧腺苷(2-Chlorodeoxyadenosine)、5-阿扎胞苷5-氟尿嘧啶(5-Azacitidine 5-Fluorouracil)、6-巰嘌呤(6-Mercaptopurine)、6-硫鳥嘌呤(6-Thioguanine)、亞伯杉(Abraxane)、阿古泰因®(Accutane®)、放線菌素-D(Actinomycin-D)阿德力黴素®(Adriamycin®)、阿祖西®(Adrucil®)、癌伏妥®(Afinitor®)、安閣靈®(Agrylin®)、來可得®(Ala-Cort®)、阿地白介素(Aldesleukin)、阿來組單抗(Alemtuzumab)、愛寧達(ALIMTA)、阿利維A酸(Alitretinoin)、硫酸長春花鹼(Alkaban-AQ®)、威克瘤®(Alkeran®)、全反維他命A酸(All-transretinoic Acid)、α干擾素、六甲蜜胺(Altretamine)、胺甲喋呤(Amethopterin)、氨磷汀(Amifostine)、胺麩精(Aminoglutethimide)、安閣靈(Anagrelide)、尼魯米特®(Anandron®)、阿那曲唑(Anastrozole)、阿拉伯糖基胞嘧啶(Arabinosylcytosine)、耐血比®(Aranesp®)、雷狄亞®(Aredia®)、安美達®(Arimidex®)、諾曼癌素®(Aromasin®)、阿倫恩®(Arranon®)、三氧化二砷、天冬醯胺酸酶、ATRA癌思停®(ATRA Avastin®)、阿扎胞苷(Azacitidine)、BCG、BCNU、苯達莫司汀(Bendamustine)、貝伐單抗(Bevacizumab)、貝沙羅汀(Bexarotene)、BEXXAR®、比卡魯胺(Bicalutamide)、BiCNU、撲類惡®(Blenoxane®)、博萊黴素(Bleomycin)、波替單抗(Bortezomib)、硫酸布他卡因(Busulfan)、補束剋®(Busulfex®)、甲醯四氫葉酸鈣(Calcium Leucovorin)、坎帕斯®(Campath®)、開普拓®(Camptosar®)、喜樹鹼-11(Camptothecin-11)、卡培他濱(Capecitabine)、Carac™、卡鉑(Carboplatin)、雙氯乙基亞硝脲(Carmustine)、可蘇多®(Casodex®)、CC-5013、CCI-779、CCNU、CDDP、CeeNU、司比定®(Cerubidine®)、西妥昔單抗(Cetuximab)、苯丁酸氮芥(Chlorambucil)、順鉑(Cisplatin)、醛葉酸(Citrovorum Factor)、克拉屈濱(Cladribine)、皮質酮(Cortisone)、可美淨®(Cosmegen®)、CPT-11、環磷醯胺(Cyclophosphamide)、氨魯米特®(Cytadren®)、阿糖胞苷賽德薩-U®(Cytarabine Cytosar-U®)、環磷醯胺®(Cytoxan®)、達克金(Dacogen)、放線菌素(Dactinomycin)、α達貝泊汀(Darbepoetin Alfa)、達沙替尼(Dasatinib)、道諾黴素(Daunomycin)、道諾黴素(Daunorubicin)、道諾黴素鹽酸鹽(Daunorubicin Hydrochloride)、道諾黴素脂質體(Daunorubicin Liposomal)、多柔比星脂質體®(DaunoXome®)、的確當(Decadron)、地西他濱(Decitabine)、達美固體膚®(Delta-Cortef®)、去氫可的松®(Deltasone®)、地尼白介素(Denileukin，Diftitox)、阿拉伯糖苷胞嘧啶脂質體™(DepoCyt™)、地塞米松(Dexamethasone)、地塞米松醋酸鹽(Dexamethasone Acetate)、地塞米松磷酸鈉(Dexamethasone Sodium Phosphate)、克僂強(Dexasone)、右雷佐生(Dexrazoxane)、DHAD、DIC、地塞米松(Diodex)、多烯紫杉醇(Docetaxel)、多柔比星脂質體®(Doxil®)、多柔比星(Doxorubicin)、多柔比星脂質體(Doxorubicin Liposomal)、羥基脲™(Droxia™)、DTIC、DTIC-Dome®、史耐輝®(Duralone®)、癌立佳™(Eligard™)、艾倫斯™(Ellence™)、益樂鉑™(Eloxatin™)、天冬醯胺酸酶®(Elspar®)、依立適®(Emcyt®)、表柔比星(Epirubicin)、阿法依伯汀(Epoetin Alfa)、愛必妥(Erbitux)、厄洛替尼(Erlotinib)、伊文氏桿菌L-天冬醯胺酸酶(Erwinia L-asparaginase)、雌莫司汀(Estramustine)、依託泊苷乙醇(Ethyol Etopophos®)、依託泊苷(Etoposide)、依託泊苷磷酸鹽(Etoposide Phosphate)、氟他胺®(Eulexin®)、依維莫司(Everolimus)、鈣穩®(Evista®)、依西美坦(Exemestane)、法洛德®(Faslodex®)、復乳納®(Femara®)、惠爾血添(Filgrastim)、氟尿苷(Floxuridine)、福達樂®(Fludara®)、氟達拉濱(Fludarabine)、氟尿嘧啶®(Fluoroplex®)、氟尿嘧啶(Fluorouracil)、氟羥甲基睪酮、氟他胺(Flutamide)、醛葉酸(Folinic Acid)、FUDR®、氟维司群(Fulvestrant)、吉菲替尼(Gefitinib)、吉西他汀(Gemcitabine)、吉妥珠單抗奥唑米星(Gemtuzumab ozogamicin)、格列衛™(Gleevec™)、格立得植入劑®(Gliadel® Wafer)、戈舍瑞林(Goserelin)、顆粒性白血球群落刺激因子、顆粒性白血球巨噬細胞群落刺激因子、賀癌平®(Herceptin®)、地塞米松(Hexadrol)、克瘤靈®(Hexalen®)、六甲蜜胺(Hexamethylmelamine)、HMM、癌康定®(Hycamtin®)、羥基脲®(Hydrea®)、醋酸氫皮質酮®(Hydrocort Acetate®)、氫皮質酮、氫皮質酮磷酸鈉、丁二酸鈉氫皮質酮、氫可酮磷酸鹽(Hydrocortone Phosphate)、羥基脲(Hydroxyurea)、替伊莫單抗(Ibritumomab)、替伊莫單抗(Ibritumomab Tiuxetan)、伊達比星®(Idamycin®)、伊達比星(Idarubicin)、異環磷醯胺®(Ifex®)、IFN-α、異環磷醯胺(Ifosfamide)、IL-11、IL-2、甲磺酸伊馬替尼(Imatinib mesylate)、咪唑甲醯胺(Imidazole Carboxamide)、α干擾素、α-2b干擾素(PEG綴合物)、介白素-2、介白素-11、因治隆®(Intron A®)(α-2b干擾素)、艾瑞莎®(Iressa®)、伊立替康(irinotecan)、異視網酸(Isotretinoin)、伊沙匹隆(Ixabepilone)、易莎平™(Ixempra™)、天冬醯胺酸酶(Kidrolase)、醋酸氫皮質酮®(Lanacort®)、拉帕替尼(Lapatinib)、L-天冬醯胺酸酶(L-asparaginase)、LCR、雷利度胺(Lenalidomide)、來曲唑(Letrozole)、甲醯四氫葉酸(Leucovorin)、瘤克寧(Leukeran)、白胺酸™(Leukine™)、亮丙瑞林(Leuprolide)、長春新鹼(Leurocristine)、祿斯得停™(Leustatin™)、Ara-C脂質體(Liposomal Ara-C)、強體松®(Liquid Pred®)、洛莫司汀(Lomustine)、L-PAM、L-溶肉瘤素(L-Sarcolysin)、柳菩林®(Lupron®)、柳菩林持續性藥效皮下注射劑®(Lupron Depot®)、甲基苄肼®(Matulane®)、目滴(Maxidex)、甲基二(氯乙基)胺(Mechlorethamine)、甲基二(氯乙基)胺鹽酸鹽(Mechlorethamine Hydrochloride)、甲基潑尼松龍®(Medralone®)、美卓佑®(Medrol®)、滅惡速®(Megace®)、甲地孕酮(Megestrol)、醋酸甲地孕酮Megestrol Acetate)、黴法蘭(Melphalan)、巰嘌呤(Mercaptopurine)、美司鈉(Mesna)、美司鈉™(Mesnex™)、胺甲喋呤(Methotrexate)、胺甲喋呤鈉(Methotrexate Sodium)、甲基普賴蘇濃(Methylprednisolone)、潑尼松®(Meticorten®)、絲裂黴素(Mitomycin)、絲裂黴素-C(Mitomycin-C)、雙羥蒽醌(Mitoxantrone)、M-潑尼松龍®(M-Prednisol®)、MTC、MTX、氮芥®(Mustargen®)、氮芥(Mustine)、排多癌®(Mutamycin®)、邁樂寧®(Myleran®)、Mylocel™、麥羅塔®(Mylotarg®)、溫諾平®(Navelbine®)、奈拉濱(Nelarabine)、環磷醯胺®(Neosar®)、倍血添™(Neulasta™)、奥普瑞白介素®(Neumega®)、優保津®(Neupogen®)、蕾莎瓦®(Nexavar®)、尼魯米特®(Nilandron®)、尼魯米特(Nilutamide)、尼噴提®(Nipent®)、氮芥子氣(Nitrogen Mustard)、諾瓦得士®(Novaldex®)、諾安托®(Novantrone®)、體抑素胜(Octreotide)、醋酸奥曲肽(Octreotide acetate)、左旋天冬醯胺酸酶®(Oncospar®)、安可平®(Oncovin®)、地尼白介素-2®(Ontak®)、紫杉醇™(Onxal™)、奥普瑞白介素(Oprevelkin)、潑尼松龍®(Orapred®)、潑尼松龍®(Orasone®)、奥沙利鉑(Oxaliplatin)、紫杉醇(Paclitaxel)、蛋白結合的紫杉醇(Paclitaxel Protein-bound)、帕米膦酸(Pamidronate)、帕尼單抗(Panitumumab)、阿利維A酸®(Panretin®)、伯爾定®(Paraplatin®)、氫化潑尼松®(Pediapred®)、PEG干擾素、培門冬酶(Pegaspargase)、培非格司亭(Pegfilgrastim)、派樂能™(PEG-INTRON™)、PEG-L-天冬醯胺酸酶、PEMETREXED、噴司他丁(Pentostatin)、苯丙胺酸氮芥(Phenylalanine Mustard)、普拉汀諾®(Platinol®)、普拉汀諾-AQ®(Platinol-AQ®)、普賴蘇濃(Prednisolone)、強體松(Prednisone)、潑尼松龍®(Prelone®)、丙卡巴肼(Procarbazine)、PROCRIT®、普留淨®(Proleukin®)、具有卡莫司汀植入物巰基嘌呤®之普利司盤20 (Prolifeprospan 20 with Carmustine Implant Purinethol®)、雷洛昔芬(Raloxifene)、瑞復美®(Revlimid®)、胺甲喋呤®(Rheumatrex®)、利妥昔單抗®(Rituxan®)、利妥昔單抗(Rituximab)、羅飛龍-A®(Roferon-A®)(α-2b干擾素)、魯貝克®(Rubex®)、紅比黴素鹽酸鹽(Rubidomycin hydrochloride)、善得定®善得定LAR®(Sandostatin® Sandostatin LAR®)、沙格司亭(Sargramostim)、舒汝固體膚®(Solu-Cortef®)、舒汝美卓佑®(Solu-Medrol®)、索拉非尼(Sorafenib)、柏萊™(SPRYCEL™)、STI-571、鏈佐黴素(Streptozocin)、SU11248、舒尼替尼(Sunitinib)、紓癌特®(Sutent®)、泰莫西芬(Tamoxifen)、得舒緩®(Tarceva®)、塔革雷汀®(Targretin®)、紫杉醇®(Taxol®)、剋癌易®(Taxotere®)、泰道®(Temodar®)、替莫唑胺(Temozolomide)、坦羅莫司(Temsirolimus)、替尼泊苷(Teniposide)、TESPA、沙利竇邁(Thalidomide)、沙利度胺®(Thalomid®)、TheraCys®、硫鳥嘌呤(Thioguanine)、硫鳥嘌呤硫鳥嘌呤®(Thioguanine Tabloid®)、硫代磷醯胺(Thiophosphoamide)、塞替派®(Thioplex®)、塞替派(Thiotepa)、TICE®、依托泊苷®(Toposar®)、托普迪肯(Topotecan)、托瑞米芬(Toremifene)、特癌適®(Torisel®)、托西莫單抗(Tositumomab)、曲妥珠單抗(Trastuzumab)、普癌汰®(Treanda®)、視網酸(Tretinoin)、胺甲喋呤™(Trexall™)、萃克森®(Trisenox®)、TSPA、泰嘉錠® (TYKERB®)、VCR、維必施™(Vectibix™)、長春鹼®(Velban®)、萬科®(Velcade®)、滅必治®(VePesid®)、凡善能®(Vesanoid®)、醋酸亮丙瑞林植入劑®(Viadur™)、委丹扎®(Vidaza®)、長春鹼(Vinblastine)、長春鹼硫酸鹽(Vinblastine Sulfate)、硫酸長春新鹼注射劑®(Vincasar Pfs®)、長春新鹼(Vincristine)、長春瑞賓(Vinorelbine)、長春瑞賓酒石酸鹽(vinorelbine tartrate)、VLB、VM-26、伏立諾他(Vorinostat)、VP-16、威孟®(Vumon®)、截瘤達®(Xeloda®)、鏈佐星®(Zanosar®)、澤娃靈™ (Zevalin™)、右雷佐生®(Zinecard®)、諾雷德®(Zoladex®)、唑來磷酸(Zoledronic acid)、伏立諾他®(Zolinza)、卓骨祂®(Zometa®)。 投與途徑
如本發明的態樣之抗體、抗原結合片段、CAR、細胞、多肽及其他的治療劑、藥劑及藥學組成物，可以予以調配供一些途徑投與，投與途徑包括但不限於：非經腸、靜脈內、動脈內、肌肉內、皮下的、皮內、腫瘤內以及口腔。抗體、抗原結合片段、CAR、細胞、多肽及其他的治療劑可以調配呈流體或固體形式。流體調配物可以予以調配供注射投與至人類或動物體之選擇部位。 劑量攝生法
可以提供多重劑量的抗體、抗原結合片段、CAR、細胞或多肽。一或更多劑量或是各劑量可以伴隨著另一種治療劑之同時或相繼投與。
多重的劑量可以相隔預定的時間間隔，時間間隔可以選擇自於下列中之一者：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30，或31天，或是1、2、3、4、5，或是6個月。作為舉例，可以每7、14、21或28天(加或減3、2或是1天)給予劑量一次。 套組
於本發明的一些態樣中，提供一種部件之套組(a kit of parts)。於一些具體例中，該套組具有至少一容器，其具有預定量之抗體、抗原結合片段、CAR、細胞或多肽。該套組可以提供一藥劑或藥學組成物形式之抗體、抗原結合片段、CAR、細胞或多肽，以及可以將投與使用說明一起提供給一病人俾以治療一種特定的疾病或病況。可以調配抗體、抗原結合片段、CAR、細胞或多肽以便合適於注射或灌注(infusion)至腫瘤或血液。
於一些具體例中，該套組可以進一步包含至少一容器，其具有預定量之另一種治療劑(諸如，抗感染製劑或化療劑)。於此等具體例中，該套組亦可以包含第二藥劑或藥學組成物，以使得二藥劑或藥學組成物可以同時或分別投與，以便使得其等提供一種用於該特定的疾病或病況之組合治療。亦可以調配治療劑以便合適於注射或灌注至腫瘤或血液。 主體
待治療的主體可以為任何動物或人類。主體較佳為哺乳動物，更佳為人類。主體可以為一非人類哺乳動物，但更佳為人類。主體可以為雄性或雌性。主體可以為一病人。一主體可以已經診斷有需要治療的疾病或病況，或懷疑具有此一疾病或病況。   蛋白表現
合適用於細胞內生產如本發明之多肽的分子生物學技術為本技藝眾所周知的，諸如於Sambrook等人，Molecular Cloning: A Laboratory Manual, New York: Cold Spring Harbor Press, 1989，內闡述的該等。
可以從一核苷酸序列來表現多肽。核苷酸序列可以被包含於細胞內存在的載體之內，或是可以合併至細胞之基因組內。
當使用於本文中，一種“載體”為一種寡核苷酸分子(DNA或RNA)使用作為將外源性遺傳材料轉移至一細胞內的媒介物(vehicle)。載體可以為一表現載體用於表現遺傳材料於細胞內。此載體可以包括一種啟動子序列，其可操縱地鏈接至編碼待表現的基因序列之核苷酸序列。一種載體亦可以包括一終止密碼子及表現增強子。本技藝已知的任何合適的載體、啟動子、增強子及終止密碼子均可以用於從本發明之載體來表現多肽。合適的載體包括質體、二元載體、病毒載體以及人工染色體(諸如，酵母人工染色體)。
於本說明書中，術語“可操縱地鏈接”可以包括一選擇的核苷酸序列及調節性核苷酸序列(諸如，啟動子及/或增強子)共價鍵聯的情況，以這樣的方式以使核苷酸序列表現處於調節序列的影響或控制之下(藉此形成一表現匣)。因而，設若一種調節序列能夠影響核苷酸序列的轉錄，則該調節序列係可操縱地鏈接至選擇的核苷酸序列。在適當情況下，形成的轉錄本繼而可以轉譯成所欲的蛋白或多肽。
可以使用合適多肽表現的任何細胞來生產如本發明之胜肽。細胞可以為一種原核細胞或真核細胞。合適的原核細胞包括大腸桿菌。真核細胞之實例包括酵母細胞、植物細胞、昆蟲細胞或哺乳動物細胞。於一些情況中，細胞不是原核細胞，因為一些原核細胞不允許如真核細胞一般的轉譯後修飾。此外，真核細胞可能有非常高的表現水平，以及能使用適當的標籤容易地從真核細胞純化蛋白。亦可以使用會提升蛋白分泌至培養基內的特異性質體。
生產感興趣的多肽的方法可以涉及一種經修飾以表現該多肽的細胞之培養或發酵。培養或發酵可以於一生物反應器內執行，該生物反應器提供適當的營養、空氣/氧及/或生長因子之供應。透過分區培養培養基/發酵肉湯、萃取蛋白內含物，以及分離個別的蛋白以單離分泌的多肽，而可從細胞收集分泌的蛋白。培養、發酵及分離的技術為熟悉此藝者眾所周知的。
生物反應器包括一種或更多種可以培養細胞的器皿。生物反應器內之培養可以連續發生，伴隨連續的反應物流進入反應器內，以及連續的培養細胞流離開反應器。任擇地，培養可以分批發生。監視及控制生物反應器之環境條件，諸如器皿內之pH、氧、進入及離開的流動速率，以及擾動，以便提供給要培養的細胞最佳的條件。
培養表現感興趣的多肽之細胞後，該種多肽較佳為經單離的。可以使用本技藝已知從細胞培養物分離多肽/蛋白之任何合適的方法。為了從培養物單離感興趣的多肽/蛋白，可能必須先從含有感興趣的多肽/蛋白之培養基分離培養的細胞。設若感興趣的多肽/蛋白係從細胞分泌，則可以藉由離心而使細胞與含有分泌的多肽/蛋白之培養基分離。設若興趣的多肽/蛋白集合於細胞內，離心之前使細胞破裂將是必要的，舉例而言使用超音波處理、快速的凍融或滲透溶解。離心將產生含有培養細胞或是培養細胞之細胞碎片之小丸，以及含有培養基及感興趣的多肽/蛋白之上清液。
繼而可能希望從上清液或培養基單離感興趣的多肽/蛋白，上清液或培養基可能含有其他的蛋白及非蛋白組份。從上清液或培養基分離多肽/蛋白組份一般的做法係透過沉澱。不同溶解度的多肽/蛋白係於不同濃度的沉澱劑，諸如硫酸銨，之下沉澱。舉例而言，於低濃度的沉澱劑下，萃取出水溶性蛋白。因而，透過添加漸增濃度的沉澱劑，可以區分出不同溶解度的蛋白。隨後可以使用透析從分離的蛋白移除硫酸銨。
其他區分不同的多肽/蛋白的方法為本技藝已知的，舉例而言離子交換層析法及粒徑層析法(size chromatography)。此等方法可以使用作為沉澱之替代方案，或是可以於沉澱後執行。
一旦感興趣的多肽/蛋白已經自培養物單離，可能需要使蛋白濃縮。一些濃縮感興趣的蛋白的方法為本技藝已知的，諸如超過濾或冷凍乾燥法。 序列同一性
判定胺基酸或核苷酸序列同一性百分比之排列比對的目的可以以熟悉此藝者已知的各種方式來完成，舉例而言使用可公開取得的電腦軟體，諸如ClustalW 1.82. T-coffee或Megalign(DNASTAR)軟體。當使用此軟體時，較佳使用預設參數，例如空格(gap)罰分或擴展罰分。ClustalW 1.82之預設參數為：蛋白開放空格罰分(Protein Gap Open Penalty) = 10.0，蛋白空格擴展罰分= 0.2，蛋白矩陣(Protein matrix) = Gonnet，蛋白/DNA ENDGAP = -1，蛋白/DNA GAPDIST = 4。
本發明包括所述之態樣與較佳特徵之組合，但是明確不允許或明確避免的這樣的組合被排除。
本文中使用之節標題係僅僅為了編制的目的以及不被解釋為限制所說明的主題。
本發明的態樣及具體例現在將參照附圖予以闡釋，以作為例證。進一步的態樣與具體例對於本技藝中具有技術者會是明顯的。本文中提及的全部文件係併入本文中以作為參考資料。
貫穿本說明，包括隨後的申請專利範圍，除非上下文另外要求，否則會瞭解到用字「包含(comprise)」及變體，例如「包含(comprises)」及「包含(comprising)」，是暗示含括所述的事物或步驟或是事物或步驟組，但是不排除任何其他的事物或步驟或是事物或步驟組。
必須注意到，當使用於本說明書及隨附的申請專利範圍中，除非上下文另外明確指定，否則單數形式「一(a)」、「一(an)」，以及「該」包括複數的指示對象。於本文中範圍可以表達為由「大約」一特定的數值及/或至「大約」另一特定的數值。當表達此一範圍時，另一具體例會包括由該一特定的數值及/或至其他的特定數值。同樣地，當用先行詞「大約」、以近似值表達數值時，會瞭解到該特定的數值構成另一具體例。
較佳實施例之詳細說明實施例 本發明人於下列實施例內說明數種抗LAG-3抗體之單離及特徵化，該等抗體顯示出會專一地結合人類LAG-3，以及阻斷LAG-3與第II類MHC之接合，藉此抑制LAG-3發送訊息。 實施例1：抗-人類LAG-3抗體之單離，以及人類及鼠類或LAG-3之結合
抗LAG-3抗體係自一種人類抗體噬菌體顯示庫、經由三輪篩選之活體外選擇而單離。
人類Fc-偶合的人類LAG-3(LAG-3-Fc) 係予以生物素化以及塗覆於鏈黴抗生物素蛋白(streptavidin)-磁性小珠之上。經塗覆的小珠係使用利用磁性分類來單離抗-LAG-3-專一性噬菌體。一些步驟以除去可能的抗-生物素，以及添加抗-人類Fc抗體至選擇方法內。
於小規模誘發HB2151細胞之後，用ELISA來篩選Fab抗體與人類及鼠類LAG-3結合的能力。簡言之，ELISA平盤係塗覆以人類LAG-3-Fc，以及用酪蛋白溶液予以阻斷。於PBS妥文(Tween)-20予以大量清洗之後，將來自誘發的粗製周質萃取物轉移至存在有配於PBS之7%牛奶的ELISA孔內。於室溫下攪動下及大量清洗90分鐘之後，添加與HRP偶合的山羊抗-人類Fab抗體。一小時後，清洗平盤，以及添加TMB基質。用1M HCl來停止反應，以及測量450nm之光密度及670nm之參考。選擇產生＞0.1之吸光度的抗體作為陽性。第一次克隆性(clonality)篩選係藉由DNA指紋分析來執行；繼而藉由定序來證實克隆性。
選擇於ELISA顯示與人類LAG-3陽性結合的十九個獨特的克隆(圖5)。此等之中，2個克隆顯現出與人類LAG-3之高度結合以及與小鼠LAG-3：A6及C12之交叉反應性。 實施例2：抗-鼠類LAG-3抗體之單離，以及人類及鼠類或LAG-3之結合
抗小鼠LAG-3抗體係以如實施例1之內所述之相同的選擇方法，使用與人類Fc-偶合的小鼠LAG-3，自噬菌體庫單離。
於ELISA顯示與鼠類LAG-3陽性結合的各種克隆被辨識出，除了一個以外，全體均是對小鼠LAG-3專一性的且不會辨識人類LAG-3(圖6)。克隆1G11對人類及小鼠LAG-3顯現出相似的結合。 實施例3：A6、F5及G8抗體與可溶性重組人類LAG-3之結合
IgG1或IgG4形式之抗LAG-3抗體之結合係藉由ELISA來評估。將抗體塗覆於ELISA平盤之上，以及添加生物素化的重組人類LAG-3然後使用鏈黴抗生物素蛋白予以顯色。
圖7顯示A6、F5及G8抗體克隆之結合(二重複之平均值±SD)。所有的抗體均顯現出以劑量依賴方式與LAG-3結合。A6及G8對人類LAG-3展現比F5更高的親和力。同型IgG1或IgG4似乎沒有改變克隆對人類LAG-3之結合作用。 實施例4：A6、F5及G8抗體對暫時轉染表現LAG-3的細胞之結合作用
評估A6、F5及G8抗體與細胞表面上表現的LAG-3之結合能力。簡言之，HEK-293細胞被暫時轉染人類LAG-3，以及於第2天藉由流動式細胞測量術來測量抗體之結合作用。
圖8顯示抗體對LAG-3轉染的細胞或未轉染PBS-處理的對照細胞之結合(顯示幾何平均螢光強度(MFIs))。抗LAG-3抗體A6、F5及G8顯示以相似於參考抗LAG-3抗體BMS-986016的程度，與LAG-3表現細胞的細胞表面結合。F5顯示出比其他的抗體更高的LAG-3結合親和力，但是亦對未轉染的細胞展現出一些非專一性結合。 實施例5：A6、F5及G8抗體與活化的T細胞之結合
評估A6、F5及G8抗體與活化的T細胞之結合。簡言之，自PBMC樣本單離CD4+ 細胞，以及用抗-CD3/CD28小珠刺激3天。繼而添加抗LAG-3抗體至細胞上，以及藉由流動式細胞測量術來測量結合作用。
圖9顯示抗LAG-3抗體與活化及未活化的T細胞之結合(顯示幾何平均螢光強度(MFIs))。F5和G8顯示出與活化的T細胞之高度結合，相似於參考抗LAG-3抗體BMS-986016的程度。A6展現中間水平的結合作用。沒有一個測試的抗體顯示出與未活化的T細胞之非專一性結合。 實施例6：A6、F5及G8抗體與恆河猴LAG-3之結合
使用暫時轉染的HEK-293細胞來測試A6、F5及G8抗體與恆河獼猴LAG-3之結合能力。
圖10顯示抗LAG-3抗體與表現恆河猴LAG-3的細胞及未轉染的陰性對照細胞之結合。A6、F5及G8抗體全體均顯示會與恆河猴LAG-3結合。A6及F5與恆河猴LAG-3之結合很強，而G8之結合較弱。G8與恆河猴LAG-3之結合水平與參考抗LAG-3抗體BMS-986016之結合相似。A6及F5對未轉染的細胞展現小程度的非專一性背景結合。 實施例7：對LAG-3之結合親和力
抗體克隆A6 Fab之親和力係藉由表面電漿子共振分析來測量。簡言之，與人類Fc偶合的人類或小鼠LAG-3係予以固定化於一感應晶片上，以及將不同濃度的抗體施用於晶片上。締合及解離速率係用一種ProteOn XPR 36分析儀(伯樂(Biorad))予以測量，以及計算親和力(KD )。
結果顯示於圖11中。A6顯示與人類LAG-3緩慢的分離(圖11A)；然而，對鼠類LAG-3的交叉結合(cross-binding)未被證實(圖11B)。
抗體克隆A6 Fab對於人類LAG-3的親和力係顯示於圖11C中。
於獨立的分析中，抗體A6、F5及G8與人類LAG-3的親和力係使用生物層干涉術來測量，與參考抗LAG-3抗體BMS-986016相比較。
結果顯示於圖12中。抗體A6、F5及G8全體均顯示對於人類LAG-3具有高的親和力，以及尤其抗體F5及G8顯示出對於人類LAG-3展現比BMS-986016更高的親和力。 實施例8：LAG-3與第II類MHC之締合的抑制作用
測試抗LAG-3抗體其等抑制LAG-3與達烏地(Daudi)細胞表面上表現的第II類MHC之結合能力。
簡言之，與藻紅素偶和的人類LAG-3係於室溫下，以配於FACS緩衝液之各種濃度的抗體予以預孵育30分鐘。將達烏地(Daudi)細胞平盤培養(plated)於96-孔平盤內且在抗CD16/CD32抗體存在下，於Fix/Perm緩衝液內予以固定/透性化(permeabilised)。將預混合物添加至達烏地(Daudi)細胞上，以及於4℃孵育30分鐘。繼而以Perm/Wash緩衝液清洗細胞三次，再懸浮於PBS內且藉由流動式細胞測量術予以分析。
藉由判定染上藻紅素的細胞比例，來計算抗體阻斷LAG-3/MHC-II結合的能力：
A6及1G11抗體二者均顯現出以劑量依賴方式之抑制能力，以及於高濃度能夠完全阻斷LAG-3與MHC-II的結合(圖13)。依據該數據，判定抗體A6及1G11抑制LAG-3與第II類MHC之締合的半最大抑制濃度(IC50 )值。A6係判定為具有62.2 nM之IC50 ，以及1G11係判定具有377.7 nM之IC50 。
於獨立的分析中，抗體克隆A6、F5及G8係如上所述地予以分析其等抑制LAG-3與第II類MHC結合的能力。抗體克隆A6、F5及G8顯現出以劑量依賴方式之抑制能力，以及於高濃度能夠完全阻斷LAG-3與MHC-II的結合(圖14A)。依據該數據，判定抑制LAG-3與第II類MHC之締合的IC50 值；結果顯示於圖14B中。
於進一步的分析中，分析抗體克隆A6、C2、C12、F5及G8其等抑制LAG-3與第II類MHC之結合的能力。抗體阻斷LAG-3與其於達烏地(Daudi)細胞上的配體結合的能力係藉由流動式細胞測量術予以評估。經標示的LAG-3係與抗-LAG-3 Fab抗體或陰性Fab對照予以預孵育，然後添加至達烏地(Daudi)細胞上。於30 min孵育之後，藉由FACS來分析細胞。
結果顯示於圖15中。抗體克隆A6、C2、C12、F5及G8顯現出以劑量依賴方式，阻斷LAG-3與表現第II類MHC的達烏地(Daudi)細胞結合的能力。 實施例9：T細胞衰竭之後恢復T細胞於混合淋巴球反應(MLR)分析之活性
於衰竭之後，T細胞變得對刺激無反應。測試F5及G8抗體其等逆轉衰竭及恢復T細胞於再刺激時會分泌IL-2及IFN-γ之活性的能力。簡言之，來自一供給者的T細胞係與來自HLA-不匹配的供給者之抗原呈現細胞於一種混合淋巴球反應(MLR)分析內混合7天以驅動衰竭。衰竭的細胞繼而於各種濃度的抗LAG-3抗體或對照抗體存在下，用HLA-不匹配的細胞予以再刺激，以及測量IL-2及IFN-γ的分泌作為活化作用之標誌。
圖16及17呈現二個獨立實驗之IL-2(圖16) 及IFN-γ(圖17)的量(顯示三重複之平均值± SD)。黑線表示同型對照存在下偵測到的最大平均背景。F5及G8能夠，至少在高劑量下，恢復T細胞的功能。
抗體F5及G8顯示出比參考抗LAG-3抗體BMS-986016更好的恢復T細胞功能之功效。 實施例10：初步的抗原決定位定位
生物層干涉術係使用來調查不同的抗LAG-3抗體克隆是否與不同的抗原決定位結合。於此等實驗中，一種抗體與感應器結合，以及繼而LAG-3從上面越過且允許與結合的抗體結合。使一些緩衝液流過以沖洗掉未結合的抗體。繼而施用二級抗體，以及分析此二級抗體與LAG-3之結合。二級抗體之結合越強，判定二級抗體的抗原決定位與一級抗體的抗原決定位離得越遠。
圖18呈現所示的抗體，與結合至BMS-986016(圖18A)、A6(圖18B)、F5(圖18C)及G8(圖18D)的LAG-3之結合剖繪。此等剖繪暗示抗體克隆A6、F5及G8與LAG-3結合之抗原決定位與BMS-986016與LAG-3結合之抗原決定位是不同的。並且，清楚顯示抗體克隆F5及G8具有不同的抗原決定位。 實施例11：T細胞於抗LAG-3存在下之增生
分析抗LAG-3抗體對於T細胞增生的影響。下列實驗使用的抗LAG-3抗體為IgG1形式之抗LAG-3抗體克隆F5。
簡言之，將來自二個不同的供給者(ID1及ID2)之末梢血液單核細胞(PBMCs)、以0.5 x 106 個細胞/ml添加至24-孔細胞培養平盤的孔內(1 ml/孔)，以及添加抗-CD3/CD28標記磁珠(Dynabeads)至孔內。
繼而將重組人類IL-2及抗LAG-3抗體克隆F5-IgG1添加至孔，以建立下列條件： (i) IL-2 (100 U/ml) (ii) IL-2 (100 U/ml) + 抗-LAG-3 (10 µg/ml) (iii) IL-2 (100 U/ml) + 抗-LAG-3 (1 µg/ml) (iv) IL-2 (100 U/ml) + 抗-LAG-3 (0.1 µg/ml) (v) IL-2 (100 U/ml) + 抗-LAG-3 (0.01 µg/ml) (vi) 無(只有小珠的對照)
於第3天及第5天，移除0.5 ml的培養基，以及添加1 ml新鮮的細胞培養基。
於第7天，收穫細胞，用不同的細胞表面標誌之抗體予以染色，以及繼而藉由流動式細胞測量術來分析不同的細胞亞群。將結果予以相對於‘只有小珠的對照’組正規化。不同條件之間的比較係藉由ANOVA來執行。
實驗結果係顯示於圖19至28中。
圖19顯示於IL-2及抗LAG-3抗體存在下，用抗CD3/CD28珠子培養之T細胞增生，與沒有抗LAG-3抗體培養相比(即，於IL-2存在下、沒有抗LAG-3抗體，用抗CD3/CD28珠子予以培養)，T細胞的數目沒有改變。
圖20A及20B顯示於不同條件下增生的CD8+ T細胞總數沒有觀察到顯著差異，但是於1 µg/ml及0.1 µg/ml 抗LAG-3抗體存在下增生的細胞，觀察到CD4+ T細胞數目顯著增加。
圖20C顯示於抗LAG-3抗體存在下增生的細胞，與於缺乏抗LAG-3抗體所增生的細胞相比，具有顯著較低的CD8:CD4細胞比率。
圖21顯示於抗LAG-3抗體存在下增生的細胞，CD4+ T細胞族群內具有較低百分率的CD4+CD25+FoxP3+ Tregs。
圖22A及22B顯示於抗LAG-3抗體存在下增生的細胞，CD8+ T細胞族群內具有較低百分率的CD8+PD1+細胞，以及CD4+ T細胞族群內具有較低百分率的CD4+PD1+細胞。
圖23A及24B顯示於不同細胞增生條件下，CD8+及CD4+ T細胞族群內不同T細胞亞族群的百分率。於抗LAG-3抗體存在下之細胞增生，CD4+及CD8+族群內具有較高百分率的TEMRA細胞。
圖24A及24B顯示於抗LAG-3抗體存在下之細胞增生，CD8+ T細胞族群內具有稍微低百分率的CD8+CTLA4+細胞，但是CD4+ T細胞族群內沒有。
圖25A及25B顯示於抗LAG-3抗體存在下增生的細胞，CD8+ T細胞族群內具有較低百分率的CD8+IL-13+細胞，以及CD4+ T細胞族群內具有較低百分率的CD4+IL-13+細胞。
一般而言，IL-13+細胞百分率是低的(＜5%)。
圖26A及26B顯示CD8+ T細胞族群內之CD8+IFNγ+細胞百分率觀察到沒有差異，CD4+ T細胞族群內之CD4+IFNγ+細胞百分率也沒有差異。
圖27A及27B顯示CD8+ T細胞族群內之CD8+TNFα+細胞百分率觀察到沒有差異，CD4+ T細胞族群內之CD4+TNFα+細胞百分率也沒有差異。
圖28A及28B顯示於增生細胞之非T細胞族群內，抗LAG-3抗體存在下增生的細胞具有較低百分率的CD56+細胞(即，NK細胞)，以及較高百分率的CD19+細胞(即B細胞)。
一般而言，所有組別之CD56+及CD19+細胞百分率都很低(＜5%)；增生的T細胞族群之純度＞90%。
總體來說，該等結果暗示於抗LAG-3抗體存在下之增生： (a) 不影響增生細胞的數目； (b) 不影響增生的族群內CD3+細胞的數目； (c) 導致增生的族群內較低比例的CD8:CD4細胞； (d) 導致增生的族群內較低比例的Tregs； (e) 導致增生的族群內較低比例的PD1+； (f) 不顯著影響增生的族群內CTLA4+細胞的比例； (g) 不顯著影響增生的族群內T效應子細胞的比例； (h) 不顯著影響增生的族群內表現Th1細胞介素的細胞比例； (i) 導致增生的族群內較低比例的NK細胞；以及 (j) 導致增生的族群內較高比例的B細胞。
(無)
現在將參照附圖來討論具體例及實驗，以闡釋本發明之原理，其中：圖 1. 抗LAG-3抗體克隆A6、1G11、C2、C12、F5及G8的輕鏈可變異域序列。在CDRs的下面劃線且分別顯示。圖 2. 抗LAG-3抗體克隆A6、1G11、C2、C12、F5及G8的重鏈可變異域序列。在CDRs的下面劃線且分別顯示。圖 3. 表格顯示抗LAG-3抗體克隆A6、1G11、C2、C12、F5及G8的輕鏈及重鏈CDR序列。圖 4. 抗LAG-3抗體克隆A6、1G11、C2、C12、F5及G8的重及輕鏈可變異域序列之核苷酸及編碼的胺基酸序列。圖 5. 長條圖顯示由ELISA判定的抗LAG-3抗體與Fc-偶合的人類及鼠類LAG-3之結合作用。圖 6. 長條圖顯示由ELISA判定的抗LAG-3抗體與Fc-偶合的人類及鼠類LAG-3之結合作用。圖 7. 長條圖顯示由ELISA判定，IgG1或IgG4形式之A6、F5及G8抗體與人類LAG-3之結合作用。顯示三重複之平均值± SD。圖 8. 長條圖顯示IgG1形式之A6、F5及G8抗體與人類LAG-3轉染的HEK293細胞，或未轉染、PBS-處理的對照細胞之結合作用。顯示幾何平均螢光強度(MFIs)。圖 9. 長條圖顯示IgG1形式之A6、F5及G8抗體與活化的CD4+T細胞，或未活化的對照CD4+ T細胞之結合作用。顯示幾何MFIs。圖 10. 長條圖顯示IgG1形式之A6、F5及G8抗體與恆河獼猴LAG-3轉染的HEK293細胞，或未轉染的對照細胞之結合作用。圖 11. 感應圖(Sensorgrams)及表格顯示由表面電漿子共振所判定，A6 Fab與固定化的、Fc-偶合的人類或鼠類LAG-3之結合。(A)感應圖顯示A6 Fab與人類LAG-3之結合。(B)感應圖顯示A6 Fab與鼠類LAG-3之結合。(C)表格顯示A6 Fab對於人類LAG-3的親和力。圖 12. 表格顯示由生物層干涉術所判定，抗體A6、F5、G8及BMS-986016與人類LAG-3的親和力。圖 13. 圖顯示透過A6及1G11 Fab進行的LAG-3與達烏地(Daudi)細胞上第II類MHC之結合的抑制作用。圖 14. 圖及表格顯示LAG-3與達烏地(Daudi)細胞上第II類MHC之結合的抑制作用。(A)圖顯示透過A6、C2、C12、F5及G8進行的LAG-3與達烏地(Daudi)細胞上第II類MHC之結合的抑制作用。(B)表格顯示透過A6、C2、C12、F5及G8進行的LAG-3與第II類MHC之結合的抑制作用之IC50 值。圖 15. 圖顯示透過A6、C2、C12、F5及G8進行的LAG-3與達烏地(Daudi)細胞上第II類MHC之結合的抑制作用。圖 16. 長條圖顯示IgG1形式的F5或G8抗體，或是IgG1同型(isotype)對照治療後，MLR分析之IL-2生產。(A)及(B)顯示二個獨立實驗的結果。顯示三重複之平均值± SD。同型對照存在下偵測到的最大平均背景係以線條表示。圖 17. 長條圖顯示IgG1形式的F5或G8抗體，或是IgG1同型對照治療後，MLR分析之IFN-γ生產。(A)及(B)顯示二個獨立實驗的結果。顯示三重複之平均值± SD。同型對照存在下偵測到的最大平均背景係以線條表示。圖 18. 圖顯示抗LAG-3抗體之抗原決定位的生物層干涉術分析。顯示所示的抗體，與結合至(A) BMS-986016、(B) A6、(C) F5及(D) G8的LAG-3之結合剖繪。圖 19. 圖顯示透過於IL-2存在下，沒有抗LAG-3抗體(克隆F5，IgG1)或是於不同量的抗LAG-3抗體存在下，用抗CD3/CD28珠子予以培養而增生後T細胞數目。細胞數目計數予以相對於‘只有CD3/CD28珠子’之對照條件正規化。圖 20. 圖顯示透過於IL-2存在下，沒有抗LAG-3抗體(克隆F5，IgG1)或是於不同量的抗LAG-3抗體存在下，用抗CD3/CD28珠子予以培養而增生後，(A)CD8+ T細胞及(B)CD4+T細胞數目，以及(C)顯示CD8:CD4細胞比率。細胞數目計數予以相對於‘只有CD3/CD28珠子’之對照條件正規化。圖 21. 圖顯示透過於IL-2存在下，沒有抗LAG-3抗體(克隆F5，IgG1)或是於不同量的抗LAG-3抗體存在下，用抗CD3/CD28珠子予以培養而增生後，CD4+ T細胞族群內CD4+CD25+FoxP3+ Tregs的百分率，予以相對於‘只有CD3/CD28珠子’之對照條件正規化。圖 22. 圖顯示透過於IL-2存在下，沒有抗LAG-3抗體(克隆F5，IgG1)或是於不同量的抗LAG-3抗體存在下，用抗CD3/CD28珠子予以培養而增生後，(A) CD8+ T細胞族群內CD8+PD1+細胞的百分率，及(B)CD4+ T細胞族群內CD4+PD1+細胞的百分率，予以相對於‘只有CD3/CD28珠子’之對照條件正規化。圖 23. 圖顯示透過於IL-2存在下，沒有抗LAG-3抗體(克隆F5，IgG1)或是於不同量的抗LAG-3抗體存在下，用抗CD3/CD28珠子予以培養而增生後，(A)CD8+ T細胞族群及(B)CD4+ T細胞族群內，不同T細胞亞族群百分率，予以相對於‘只有CD3/CD28珠子’之對照條件正規化。圖 24. 圖顯示透過於IL-2存在下，沒有抗LAG-3抗體(克隆F5，IgG1)或是於不同量的抗LAG-3抗體存在下，用抗CD3/CD28珠子予以培養而增生後，(A) CD8+ T細胞族群內CD8+CTLA4+細胞的百分率，及(B)CD4+ T細胞族群內CD4+CTLA4+細胞百分率，予以相對於‘只有CD3/CD28珠子’之對照條件正規化。圖 25. 圖顯示透過於IL-2存在下，沒有抗LAG-3抗體(克隆F5，IgG1)或是於不同量的抗LAG-3抗體存在下，用抗CD3/CD28珠子予以培養而增生後，(A) CD8+ T細胞族群內CD8+IL-13+細胞的百分率，及(B)CD4+ T細胞族群內CD4+IL-13+細胞百分率，予以相對於‘只有CD3/CD28珠子’之對照條件正規化。圖 26. 圖顯示透過於IL-2存在下，沒有抗LAG-3抗體(克隆F5，IgG1)或是於不同量的抗LAG-3抗體存在下，用抗CD3/CD28珠子予以培養而增生後，(A) CD8+ T細胞族群內CD8+IFNγ+細胞的百分率，及(B)CD4+ T細胞族群內CD4+IFNγ+細胞百分率，予以相對於‘只有CD3/CD28珠子’之對照條件正規化。圖 27. 圖顯示透過於IL-2存在下，沒有抗LAG-3抗體(克隆F5，IgG1)或是於不同量的抗LAG-3抗體存在下，用抗CD3/CD28珠子予以培養而增生後，(A) CD8+ T細胞族群內CD8+TNFα+細胞的百分率，及(B)CD4+ T細胞族群內CD4+TNFα+細胞百分率，予以相對於‘只有CD3/CD28珠子’之對照條件正規化。圖 28. 圖顯示透過於IL-2存在下，沒有抗LAG-3抗體(克隆F5，IgG1)或是於不同量的抗LAG-3抗體存在下，用抗CD3/CD28珠子予以培養而增生後，增生的細胞族群內(A)CD56+細胞的百分率，及(B)CD19+細胞百分率，予以 相對於‘只有CD3/CD28珠子’之對照條件正規化。
＜110＞  新加坡科技研究局   ＜120＞  抗淋巴細胞活化基因3(LAG-3)抗體   ＜130＞  RIC/FP7253115   ＜150＞  SG10201601719R ＜151＞  2016-03-04   ＜160＞  57      ＜170＞  PatentIn版本3.5   ＜210＞  1 ＜211＞  112 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  抗LAG-3抗體A6克隆的輕鏈可變異域序列   ＜400＞  1   Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Pro Leu Pro Val Thr Pro Gly 1               5                   10                  15          Glu Pro Ala Ser Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser             20                  25                  30              Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser         35                  40                  45                  Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro     50                  55                  60                      Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65                  70                  75                  80      Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala                 85                  90                  95          Leu Gln Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys             100                 105                 110             ＜210＞  2 ＜211＞  107 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  抗LAG-3抗體1G11克隆的輕鏈可變異域序列   ＜400＞  2   Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1               5                   10                  15          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser             20                  25                  30              Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu         35                  40                  45                   Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser     50                  55                  60                      Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65                  70                  75                  80      Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Pro Ser Ile                 85                  90                  95          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys             100                 105             ＜210＞  3 ＜211＞  109 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  抗LAG-3抗體C2克隆的輕鏈可變異域序列   ＜400＞  3   Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1               5                   10                  15          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser             20                  25                  30              Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu         35                  40                  45                  Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser     50                  55                  60                      Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65                  70                  75                  80      Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro                 85                  90                  95          Pro Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys             100                 105                     ＜210＞  4 ＜211＞  112 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  抗LAG-3抗體C12克隆的輕鏈可變異域序列   ＜400＞  4   Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1               5                   10                  15          Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser             20                  25                  30              Asp Gly Tyr Asn Tyr Phe Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser         35                  40                  45                  Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ala Gly Val Pro     50                  55                  60                      Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65                  70                  75                  80      Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Gly                 85                  90                  95          Thr His Trp Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys             100                 105                 110             ＜210＞  5 ＜211＞  110 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  抗LAG-3抗體F5克隆的輕鏈可變異域序列   ＜400＞  5   Glu Thr Thr Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1               5                   10                  15          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Gly             20                  25                  30              Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu         35                  40                  45                   Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser     50                  55                  60                      Gly Ser Gly Ser Gly Ala Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Gln 65                  70                  75                  80      Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Arg                 85                  90                  95          Pro Gly Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Arg Val Glu Ile Lys             100                 105                 110     ＜210＞  6 ＜211＞  108 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  抗LAG-3抗體G8克隆的輕鏈可變異域序列   ＜400＞  6   Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1               5                   10                  15          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Thr Thr Ser Gln Ser Val Ser Ser Thr             20                  25                  30              Ser Leu Asp Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu         35                  40                  45                   Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser     50                  55                  60                      Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65                  70                  75                  80      Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Leu                 85                  90                  95          Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys             100                 105                 ＜210＞  7 ＜211＞  116 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  抗LAG-3抗體A6克隆的重鏈可變異域序列   ＜400＞  7   Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1               5                   10                  15          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr             20                  25                  30              Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met         35                  40                  45                  Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe     50                  55                  60                      Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65                  70                  75                  80      Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys                 85                  90                  95          Ala Met Pro Phe Gly Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val             100                 105                 110             Thr Val Ser Ser         115         ＜210＞  8 ＜211＞  120 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  抗LAG-3抗體1G11克隆的重鏈可變異域序列   ＜400＞  8   Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Asp Val Val Gln Pro Gly Arg 1               5                   10                  15          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr             20                  25                  30               Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val         35                  40                  45                  Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val     50                  55                  60                       Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65                  70                  75                  80      Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys                 85                  90                  95          Ala Arg Leu Pro Gly Trp Gly Ala Tyr Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln             100                 105                 110             Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser         115                 120     ＜210＞  9 ＜211＞  126 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  抗LAG-3抗體C2及G8克隆的重鏈可變異域序列   ＜400＞  9   Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1               5                   10                  15          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr             20                  25                  30              Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val         35                  40                  45                  Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val     50                  55                  60                      Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65                  70                  75                  80      Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys                 85                  90                  95          Ala Arg Asp Pro Asp Ala Ala Asn Trp Gly Phe Leu Leu Tyr Tyr Gly             100                 105                 110             Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser         115                 120                 125         ＜210＞  10 ＜211＞  126 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  抗LAG-3抗體C12克隆的重鏈可變異域序列   ＜400＞  10   Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1               5                   10                  15          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr             20                  25                  30               Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met         35                  40                  45                  Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe     50                  55                  60                       Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65                  70                  75                  80      Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys                 85                  90                  95          Ala Arg Ala Leu Ala Asp Phe Trp Ser Gly Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr             100                 105                 110             Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser         115                 120                 125         ＜210＞  11 ＜211＞  117 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  抗LAG-3抗體F5克隆的重鏈可變異域序列   ＜400＞  11   Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1               5                   10                  15          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu             20                  25                  30              Ser Met His Trp Val Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met         35                  40                  45                  Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Ala Gln Lys Phe     50                  55                  60                      Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65                  70                  75                  80      Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys                 85                  90                  95          Ala Thr Thr Trp Phe Gly Glu Leu Tyr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu             100                 105                 110             Val Thr Val Ser Ser         115             ＜210＞  12 ＜211＞  16 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  A6克隆LC-CDR1   ＜400＞  12   Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp 1               5                   10                  15          ＜210＞  13 ＜211＞  7 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  A6克隆LC-CDR2   ＜400＞  13   Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser 1               5               ＜210＞  14 ＜211＞  9 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  A6克隆LC-CDR3   ＜400＞  14   Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Tyr Thr 1               5                       ＜210＞  15 ＜211＞  12 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  1G11克隆LC-CDR1   ＜400＞  15   Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Phe Leu Ala 1               5                   10              ＜210＞  16 ＜211＞  7 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  1G11、C2及G8克隆LC-CDR2   ＜400＞  16   Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr 1               5               ＜210＞  17 ＜211＞  8 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  1G11克隆LC-CDR3   ＜400＞  17   Gln Gln Tyr Gly Pro Ser Ile Thr 1               5                   ＜210＞  18 ＜211＞  12 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  C2克隆LC-CDR1   ＜400＞  18   Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala 1               5                   10              ＜210＞  19 ＜211＞  10 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  C2克隆LC-CDR3   ＜400＞  19   Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Pro Ile Thr 1               5                   10      ＜210＞  20 ＜211＞  16 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  C12克隆LC-CDR1   ＜400＞  20   Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asp Gly Tyr Asn Tyr Phe Asp 1               5                   10                  15          ＜210＞  21 ＜211＞  7 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  C12克隆LC-CDR2   ＜400＞  21   Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ala 1               5               ＜210＞  22 ＜211＞  9 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  C12克隆LC-CDR3   ＜400＞  22   Met Gln Gly Thr His Trp Pro Pro Thr 1               5                       ＜210＞  23 ＜211＞  12 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  F5克隆LC-CDR1   ＜400＞  23   Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Gly Tyr Leu Ala 1               5                   10              ＜210＞  24 ＜211＞  7 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  F5克隆LC-CDR2   ＜400＞  24   Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr 1               5               ＜210＞  25 ＜211＞  11 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  F5克隆LC-CDR3   ＜400＞  25   Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Arg Pro Gly Leu Thr 1               5                   10          ＜210＞  26 ＜211＞  12 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  G8克隆LC-CDR1   ＜400＞  26   Thr Thr Ser Gln Ser Val Ser Ser Thr Ser Leu Asp 1               5                   10              ＜210＞  27 ＜211＞  9 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  G8克隆LC-CDR3   ＜400＞  27   Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Leu Leu Thr 1               5                       ＜210＞  28 ＜211＞  5 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  A6克隆HC-CDR1   ＜400＞  28   Ser Tyr Tyr Met His 1               5       ＜210＞  29 ＜211＞  17 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  A6克隆HC-CDR2   ＜400＞  29   Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1               5                   10                  15          Gly         ＜210＞  30 ＜211＞  7 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  A6克隆HC-CDR3   ＜400＞  30   Pro Phe Gly Asp Phe Asp Tyr 1               5               ＜210＞  31 ＜211＞  5 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  1G11克隆HC-CDR1   ＜400＞  31   Ser Tyr Gly Met His 1               5       ＜210＞  32 ＜211＞  17 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  1G11、C2及G8克隆HC-CDR2   ＜400＞  32   Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1               5                   10                  15          Gly         ＜210＞  33 ＜211＞  11 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  1G11 HC-CDR3   ＜400＞  33   Leu Pro Gly Trp Gly Ala Tyr Ala Phe Asp Ile 1               5                   10          ＜210＞  34 ＜211＞  5 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  C2及G8克隆HC-CDR1   ＜400＞  34   Ser Tyr Ala Met His 1               5       ＜210＞  35 ＜211＞  17 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  C2及G8克隆HC-CDR3   ＜400＞  35   Asp Pro Asp Ala Ala Asn Trp Gly Phe Leu Leu Tyr Tyr Gly Met Asp 1               5                   10                  15          Val         ＜210＞  36 ＜211＞  9 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  C12克隆HC-CDR1   ＜400＞  36   Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser 1               5                       ＜210＞  37 ＜211＞  17 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  C12克隆HC-CDR2   ＜400＞  37   Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1               5                   10                  15          Gly         ＜210＞  38 ＜211＞  17 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  C12克隆HC-CDR3   ＜400＞  38   Ala Leu Ala Asp Phe Trp Ser Gly Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Met Asp 1               5                   10                  15          Val         ＜210＞  39 ＜211＞  5 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  F5克隆HC-CDR1   ＜400＞  39   Glu Leu Ser Met His 1               5       ＜210＞  40 ＜211＞  17 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  F5克隆HC-CDR2   ＜400＞  40   Gly Phe Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1               5                   10                  15          Gly         ＜210＞  41 ＜211＞  8 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  F5克隆HC-CDR3   ＜400＞  41   Thr Trp Phe Gly Glu Leu Tyr Tyr 1               5                   ＜210＞  42 ＜211＞  336 ＜212＞  DNA ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  A6克隆核苷酸輕鏈可變異域   ＜400＞  42 gatgttgtga tgactcagtc tccactcccc ctgcccgtca ctcctggaga gccggcctcc       60   atcacctgca ggtccagtca gagcctcctg catagtaatg gatacaacta tttggattgg      120   tacctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc taatcgggcc      180   tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc      240   agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaagctct acaaaccccc      300   tacacttttg gccaggggac caagctggag atcaaa                                336     ＜210＞  43 ＜211＞  321 ＜212＞  DNA ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  1G11克隆核苷酸輕鏈可變異域   ＜400＞  43 gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacg       60   ctctcctgca gggccagtca gagcgttagc agcagcttct tggcctggta ccagcagaaa      120   cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca      180   gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag      240   cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggtc cctcaatcac tttcggcgga      300   gggaccaagg tagagatcaa a                                                321     ＜210＞  44 ＜211＞  327 ＜212＞  DNA ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  C2克隆核苷酸輕鏈可變異域   ＜400＞  44 gaaattgtga tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc       60   ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa      120   cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca      180   gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag      240   cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcacctcc gatcaccttc      300   ggccaaggga cacgactgga gattaaa                                          327     ＜210＞  45 ＜211＞  336 ＜212＞  DNA ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  C12克隆核苷酸輕鏈可變異域   ＜400＞  45 gatgttgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc       60   atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg catagtgatg gatacaacta tttcgattgg      120   tacctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc taatcgggcc      180   gccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc      240   agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaaggtac acactggcct      300   cccacttttg gccaggggac caagctggag atcaaa                                336     ＜210＞  46 ＜211＞  330 ＜212＞  DNA ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  F5克隆核苷酸輕鏈可變異域   ＜400＞  46 gaaacgacac tcacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc       60   ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcggctact tagcctggta ccagcagaaa      120   cctggccagg ctcccaggct cctcatctat gatgcatcca gcagggccac tggcatccca      180   gacaggttca gtggcagtgg gtctggggca gacttcactc tcaccatcag cagactacag      240   cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcaa cagtatggta gttcacgtcc agggctcact      300   ttcggcggag ggaccagggt ggagatcaaa                                       330     ＜210＞  47 ＜211＞  324 ＜212＞  DNA ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  G8克隆核苷酸輕鏈可變異域   ＜400＞  47 gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc       60   ctctcctgca cgaccagtca gagtgttagc agcacctcct tagactggta ccagcagaaa      120   cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcta gcagggccac tggcatccca      180   gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag      240   cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcacttct cactttcggc      300   ggagggacca aggtggagat caaa                                             324     ＜210＞  48 ＜211＞  348 ＜212＞  DNA ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  A6克隆核苷酸重鏈可變異域   ＜400＞  48 gaggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc       60   tcctgcaagg catctggata caccttcacc agctactata tgcactgggt gcgacaggcc      120   cctggacaag ggcttgagtg gatgggaata atcaacccta gtggtggtag cacaagctac      180   gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accagggaca cgtccacgag cacagtctac      240   atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gatgccattc      300   ggagactttg actactgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcaagc                   348     ＜210＞  49 ＜211＞  360 ＜212＞  DNA ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  1G11克隆核苷酸重鏈可變異域   ＜400＞  49 cagctgcagc tgcaggagtc ggggggagac gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc       60   tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct      120   ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa taaatactat      180   gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat      240   ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgc gaggctaccg      300   ggctggggcg cttatgcttt tgatatctgg ggccaaggga caatggtcac cgtctcaagc      360     ＜210＞  50 ＜211＞  378 ＜212＞  DNA ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  C2及G8克隆核苷酸重鏈可變異域   ＜400＞  50 caggtgcagc tggtgcagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc       60   tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatgcta tgcactgggt ccgccaggct      120   ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagcaa taaatactac      180   gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat      240   ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagatccc      300   gacgcggcta actggggatt cttgttgtac tacggtatgg acgtctgggg ccaagggacc      360   acggtcaccg tctcaagc                                                    378     ＜210＞  51 ＜211＞  378 ＜212＞  DNA ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  C12克隆核苷酸重鏈可變異域   ＜400＞  51 caggtccagc tggtacagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc       60   tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc      120   cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcccta tctttggtac agcaaactac      180   gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac      240   atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagagctctg      300   gccgattttt ggagtggtta ctactactac tactacatgg acgtctgggg caaagggacc      360   acggtcaccg tctcaagc                                                    378     ＜210＞  52 ＜211＞  351 ＜212＞  DNA ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  F5克隆核苷酸重鏈可變異域   ＜400＞  52 gaggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc       60   tcctgcaagg tttccggata caccctcact gaattatcca tgcactgggt gcgacagact      120   cctggaaaag ggcttgagtg gatgggaggt tttgatcctg aagatggtga aacaatctac      180   gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accgaggaca catctacaga cacagcctac      240   atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc aaccacatgg      300   ttcggggagt tatattactg gggccagggc accctggtca ccgtctcaag c               351     ＜210＞  53 ＜211＞  16 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  輕鏈CDR1一致序列     ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (1)..(1) ＜223＞  Xaa為R或T   ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (2)..(2) ＜223＞  Xaa為S、A或T   ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (6)..(6) ＜223＞  Xaa為L或V   ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (7)..(7) ＜223＞  Xaa為L或S   ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (8)..(8) ＜223＞  Xaa為H或S   ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (9)..(9) ＜223＞  Xaa為S、G或T   ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (10)..(10) ＜223＞  Xaa為N、F、Y、D或S   ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (11)..(11) ＜223＞  Xaa為G或L   ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (12)..(12) ＜223＞  Xaa為Y、A或D   ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (13)..(13) ＜223＞  Xaa為缺少或N   ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (14)..(14) ＜223＞  Xaa為缺少或Y   ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (15)..(15) ＜223＞  Xaa為缺少、L或F   ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (16)..(16) ＜223＞  Xaa為缺少或D   ＜400＞  53   Xaa Xaa Ser Gln Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1               5                   10                  15          ＜210＞  54 ＜211＞  7 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  輕鏈CDR2一致序列     ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (1)..(1) ＜223＞  Xaa為L、G或D   ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (2)..(2) ＜223＞  Xaa為G或A   ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (4)..(4) ＜223＞  Xaa為N或S   ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (7)..(7) ＜223＞  Xaa為S、T或A   ＜400＞  54   Xaa Xaa Ser Xaa Arg Ala Xaa 1               5               ＜210＞  55 ＜211＞  11 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  輕鏈CDR3一致序列     ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (1)..(1) ＜223＞  Xaa為M或Q   ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (3)..(3) ＜223＞  Xaa為A、Y或G   ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (4)..(4) ＜223＞  Xaa為L、G或T   ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (5)..(5) ＜223＞  Xaa為Q、P、S或H   ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (6)..(6) ＜223＞  Xaa為T、S或W   ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (7)..(7) ＜223＞  Xaa為P、I、R或L   ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (8)..(8) ＜223＞  Xaa為Y、T、P或L   ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (9)..(9) ＜223＞  Xaa為缺少、T、I或G   ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (10)..(10) ＜223＞  Xaa為缺少、T或L   ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (11)..(11) ＜223＞  Xaa為缺少或T   ＜400＞  55   Xaa Gln Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1               5                   10          ＜210＞  56 ＜211＞  5 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  重鏈CDR1一致序列     ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (1)..(1) ＜223＞  Xaa為S或E   ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (2)..(2) ＜223＞  Xaa為Y或L   ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (3)..(3) ＜223＞  Xaa為Y、G、A或S   ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (4)..(4) ＜223＞  Xaa為M或I   ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (5)..(5) ＜223＞  Xaa為H或S   ＜400＞  56   Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1               5       ＜210＞  57 ＜211＞  17 ＜212＞  PRT ＜213＞  人工序列   ＜220＞ ＜223＞  重鏈CDR2一致序列     ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (1)..(1) ＜223＞  Xaa為I、G或V   ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (2)..(2) ＜223＞  Xaa為I或F   ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (3)..(3) ＜223＞  Xaa為N、S、I或D   ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (4)..(4) ＜223＞  Xaa為P或Y   ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (5)..(5) ＜223＞  Xaa為S、D、I或E   ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (6)..(6) ＜223＞  Xaa為G, F或D   ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (7)..(7) ＜223＞  Xaa為G或S   ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (8)..(8) ＜223＞  Xaa為S、N、T或E   ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (9)..(9) ＜223＞  Xaa為T、K或A   ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (10)..(10) ＜223＞  Xaa為S、Y、N或I   ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (13)..(13) ＜223＞  Xaa為Q或D   ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (14)..(14) ＜223＞  Xaa為K或S   ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (15)..(15) ＜223＞  Xaa為F或V   ＜220＞ ＜221＞  其他特徵 ＜222＞  (16)..(16) ＜223＞  Xaa為Q或K   ＜400＞  57   Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Ala Xaa Xaa Xaa Xaa 1               5                   10                  15          Gly

Claims (65)

  1. 一種抗體或抗原結合片段，其能與淋巴細胞活化基因3(LAG-3)結合，選擇性地為經單離的，其具有i)至vi)的胺基酸序列： i) LC-CDR1：X1 X2 SQSX3 X4 X5 X6 X7 X8 X9 X10 X11 X12 X13 (序列辨識編號：53)； ii)LC-CDR2：X14 X15 SX16 RAX17 (序列辨識編號：54)； iii)LC-CDR3：X18 QX19 X20 X21 X22 X23 X24 X25 X26 X27 (序列辨識編號：55)； iv)HC-CDR1：X28 X29 X30 X31 X32 (序列辨識編號：56)； v)HC-CDR2：X33 X34 X35 X36 X37 X38 X39 X40 X41 X42 YAX43 X44 X45 X46 G(序列辨識編號：57)； vi)HC-CDR3：下列中之一者：TWFGELYY(序列辨識編號：41)、PFGDFDY(序列辨識編號：30)、LPGWGAYAFDI(序列辨識編號：33)、DPDAANWGFLLYYGMDV(序列辨識編號：35)或ALADFWSGYYYYYYMDV(序列辨識編號：38)； 或其之一變異體，其中該序列(i)至(vi)之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代，其中X1 = R或T；X2 = S、A或T；X3 = L或V；X4 = L或S；X5 = H或S；X6 = S、G或T；X7 = N、F、Y、D或S；X8 = G或L；X9 = Y、A或D；X10 = 缺少或N；X11 =缺少或Y；X12 =缺少、L或F；X13 =缺少或D；X14 = L、G或D；X15 = G或A；X16 = N或S；X17 = S、T或A；X18 = M或Q；X19 = A、Y或G；X20 = L、G或T；X21 = Q、P、S或H；X22 = T、S或W；X23 = P、I、R或L；X24 = Y、T、P或L；X25 =缺少、T、I或G；X26 =缺少、T或L；X27 =缺少或T；X28 = S或E；X29 = Y或L；X30 = Y、G、A或S；X31 = M或I；X32 = H或S；X33 = I、G或V；X34 = I或F；X35 = N、S、I或D；X36 = P或Y；X37 = S、D、I或E；X38 = G、F或D；X39 = G或S；X40 = S、N、T或E；X41 = T、K或A；X42 = S、Y、N或I；X43 = Q或D；X44 = K或S；X45 = F或V；以及X46 為Q或K。
  2. 如請求項1之抗體或抗原結合片段，其中LC-CDR1為下列中之一者：RASQSVSSGYLA(序列辨識編號：23)、RSSQSLLHSNGYNYLD(序列辨識編號：12)、RASQSVSSSFLA(序列辨識編號：15)、RASQSVSSSYLA(序列辨識編號：18)、RSSQSLLHSDGYNYFD(序列辨識編號：20)或TTSQSVSSTSLD(序列辨識編號：26)。
  3. 如請求項1或請求項2之抗體或抗原結合片段，其中LC-CDR2為下列中之一者：DASSRAT(序列辨識編號：24)、LGSNRAS(序列辨識編號：13)、GASSRAT(序列辨識編號：16)或LGSNRAA(序列辨識編號：21)。
  4. 如請求項1至3中任一項之抗體或抗原結合片段，其中LC-CDR3為下列中之一者：QQYGSSRPGLT(序列辨識編號：25)、MQALQTPYT(序列辨識編號：14)、QQYGPSIT(序列辨識編號：17)、QQYGSSPPIT(序列辨識編號：19)、MQGTHWPPT(序列辨識編號：22)或QQYGSSLLT(序列辨識編號：27)。
  5. 如請求項1至4中任一項之抗體或抗原結合片段，其中HC-CDR1為下列中之一者：ELSMH(序列辨識編號：39)、SYYMH(序列辨識編號：28)、SYGMH(序列辨識編號：31)、SYAMH(序列辨識編號：34)或SYAIS(序列辨識編號：36)。
  6. 如請求項1至5中任一項之抗體或抗原結合片段，其中HC-CDR2為下列中之一者：GFDPEDGETIYAQKFQG(序列辨識編號：40)、IINPSGGSTSYAQKFQG(序列辨識編號：29) VISYDGSNKYYADSVKG(序列辨識編號：32)或GIIPIFGTANYAQKFQG(序列辨識編號：37)。
  7. 如請求項1至6中任一項之抗體或抗原結合片段，其具有合併有下列互補性決定區域(CDRs)的至少一輕鏈可變異區域： LC-CDR1：X1 X2 SQSX3 X4 X5 X6 X7 X8 X9 X10 X11 X12 X13 (序列辨識編號：53) LC-CDR2：X14 X15 SX16 RAX17 (序列辨識編號：54) LC-CDR3：X18 QX19 X20 X21 X22 X23 X24 X25 X26 X27 (序列辨識編號：55)； 其中X1 = R或T；X2 = S、A或T；X3 = L或V；X4 = L或S；X5 = H或S；X6 = S、G或T；X7 = N、F、Y、D或S；X8 = G或L；X9 = Y、A或D；X10 = 缺少或N；X11 =缺少或Y；X12 =缺少、L或F；X13 =缺少或D；X14 = L、G或D；X15 = G或A；X16 = N或S；X17 = S、T或A；X18 = M或Q；X19 = A、Y或G；X20 = L、G或T；X21 = Q、P、S或H；X22 = T、S或W；X23 = P、I、R或L；X24 = Y、T、P或L；X25 =缺少、T、I或G；X26 =缺少、T或L；以及X27 =缺少或T。
  8. 如請求項1至7中任一項之抗體或抗原結合片段，其具有合併有下列的CDRs的至少一輕鏈可變異區域： LC-CDR1：RASQSVSSGYLA(序列辨識編號：23) LC-CDR2：DASSRAT              (序列辨識編號：24) LC-CDR3：QQYGSSRPGLT     (序列辨識編號：25)。
  9. 如請求項1至7中任一項之抗體或抗原結合片段，其具有合併有下列的CDRs的至少一輕鏈可變異區域： LC-CDR1：RSSQSLLHSNGYNYLD(序列辨識編號：12) LC-CDR2：LGSNRAS             (序列辨識編號：13) LC-CDR3：MQALQTPYT        (序列辨識編號：14)。
  10. 如請求項1至7中任一項之抗體或抗原結合片段，其具有合併有下列的CDRs的至少一輕鏈可變異區域： LC-CDR1：RASQSVSSSFLA   (序列辨識編號：15) LC-CDR2：GASSRAT              (序列辨識編號：16) LC-CDR3：QQYGPSIT          (序列辨識編號：17)。
  11. 如請求項1至7中任一項之抗體或抗原結合片段，其具有合併有下列的CDRs的至少一輕鏈可變異區域： LC-CDR1：RASQSVSSSYLA(序列辨識編號：18) LC-CDR2：GASSRAT              (序列辨識編號：16) LC-CDR3：QQYGSSPPIT      (序列辨識編號：19)。
  12. 如請求項1至7中任一項之抗體或抗原結合片段，其具有合併有下列的CDRs的至少一輕鏈可變異區域： LC-CDR1：RSSQSLLHSDGYNYFD(序列辨識編號：20) LC-CDR2：LGSNRAA             (序列辨識編號：21) LC-CDR3：MQGTHWPPT     (序列辨識編號：22)。
  13. 如請求項1至7中任一項之抗體或抗原結合片段，其具有合併有下列的CDRs的至少一輕鏈可變異區域： LC-CDR1：TTSQSVSSTSLD    (序列辨識編號：26) LC-CDR2：GASSRAT             (序列辨識編號：16) LC-CDR3：QQYGSSLLT       (序列辨識編號：27)。
  14. 如請求項1至13中任一項之抗體或抗原結合片段，其具有合併有下列的CDRs的至少一重鏈可變異區域： HC-CDR1：X28 X29 X30 X31 X32 (序列辨識編號：56)； HC-CDR2：X33 X34 X35 X36 X37 X38 X39 X40 X41 X42 YA X43 X44 X45 X46 G (序列辨識編號：57)； HC-CDR3：下列中之一者：TWFGELYY(序列辨識編號：41)、PFGDFDY(序列辨識編號：30)、LPGWGAYAFDI(序列辨識編號：33)、DPDAANWGFLLYYGMDV(序列辨識編號：35)或ALADFWSGYYYYYYMDV(序列辨識編號：38)； 其中X28 = S或E；X29 = Y或L；X30 = Y、G、A或S；X31 = M或I；X32 = H或S；X33 = I、G或V；X34 = I或F；X35 = N、S、I或D；X36 = P或Y；X37 = S、D、I或E；X38 = G、F或D；X39 = G或S；X40 = S、N、T或E；X41 = T、K或A；X42 = S、Y、N或I；X43 = Q或D；X44 = K或S；X45 = F或V；以及X46 為Q或K。
  15. 如請求項1至14中任一項之抗體或抗原結合片段，其具有合併有下列的CDRs的至少一重鏈可變異區域： HC-CDR1：ELSMH                 (序列辨識編號：39) HC-CDR2：GFDPEDGETIYAQKFQG(序列辨識編號：40) HC-CDR3：TWFGELYY    (序列辨識編號：41)。
  16. 如請求項1至14中任一項之抗體或抗原結合片段，其具有合併有下列的CDRs的至少一重鏈可變異區域： HC-CDR1：SYYMH                (序列辨識編號：28) HC-CDR2：IINPSGGSTSYAQKFQG(序列辨識編號：29) HC-CDR3：PFGDFDY           (序列辨識編號：30)。
  17. 如請求項1至14中任一項之抗體或抗原結合片段，其具有合併有下列的CDRs的至少一重鏈可變異區域： HC-CDR1：SYGMH           (序列辨識編號：31) HC-CDR2：VISYDGSNKYYADSVKG(序列辨識編號：32) HC-CDR3：LPGWGAYAFDI(序列辨識編號：33)。
  18. 如請求項1至14中任一項之抗體或抗原結合片段，其具有合併有下列的CDRs的至少一重鏈可變異區域： HC-CDR1：SYAMH           (序列辨識編號：34) HC-CDR2：VISYDGSNKYYADSVKG(序列辨識編號：32) HC-CDR3：DPDAANWGFLLYYGMDV(序列辨識編號：35)。
  19. 如請求項1至14中任一項之抗體或抗原結合片段，其具有合併有下列的CDRs的至少一重鏈可變異區域： HC-CDR1：SYAIS                  (序列辨識編號：36) HC-CDR2：GIIPIFGTANYAQKFQG(序列辨識編號：37) HC-CDR3：ALADFWSGYYYYYYMDV(序列辨識編號：38)。
  20. 如請求項1至19中任一項之抗體或抗原結合片段，其與人類、恆河獼猴或鼠類LAG-3專一地結合。
  21. 如請求項1至20中任一項之抗體或抗原結合片段，其抑制LAG-3及第II類MHC，選擇性地為人類LAG-3及人類第II類MHC之間的交互作用。
  22. 如請求項1至21中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該抗體於展現T細胞衰竭或T細胞無因變性(anergy)之T細胞內有效地恢復T細胞功能。
  23. 一種經單離的輕鏈可變異區域多肽，其包含下列的CDRs： LC-CDR1：X1 X2 SQSX3 X4 X5 X6 X7 X8 X9 X10 X11 X12 X13 (序列辨識編號：53) LC-CDR2：X14 X15 SX16 RAX17 (序列辨識編號：54) LC-CDR3：X18 QX19 X20 X21 X22 X23 X24 X25 X26 X27 (序列辨識編號：55)； 其中X1 = R或T；X2 = S、A或T；X3 = L或V；X4 = L或S；X5 = H或S；X6 = S、G或T；X7 = N、F、Y、D或S；X8 = G或L；X9 = Y、A或D；X10 = 缺少或N；X11 =缺少或Y；X12 =缺少、L或F；X13 =缺少或D；X14 = L、G或D；X15 = G或A；X16 = N或S；X17 = S、T或A；X18 = M或Q；X19 = A、Y或G；X20 = L、G或T；X21 = Q、P、S或H；X22 = T、S或W；X23 = P、I、R或L；X24 = Y、T、P或L；X25 =缺少、T、I或G；X26 =缺少、T或L；以及X27 =缺少或T。
  24. 如請求項23之經單離的輕鏈可變異區域多肽，其中LC-CDR1為下列中之一者：RASQSVSSGYLA(序列辨識編號：23)、RSSQSLLHSNGYNYLD(序列辨識編號：12)、RASQSVSSSFLA(序列辨識編號：15)、RASQSVSSSYLA(序列辨識編號：18)、RSSQSLLHSDGYNYFD(序列辨識編號：20)或TTSQSVSSTSLD (序列辨識編號：26)。
  25. 如請求項23或之請求項24之經單離的輕鏈可變異區域多肽，其中LC-CDR2為下列中之一者：DASSRAT(序列辨識編號：24)、LGSNRAS(序列辨識編號：13)、GASSRAT(序列辨識編號：16)或LGSNRAA (序列辨識編號：21)。
  26. 如請求項23至請求項25中任一項之經單離的輕鏈可變異區域多肽，其中LC-CDR3為下列中之一者：QQYGSSRPGLT(序列辨識編號：25)、MQALQTPYT(序列辨識編號：14)、QQYGPSIT(序列辨識編號：17)、QQYGSSPPIT(序列辨識編號：19)、MQGTHWPPT(序列辨識編號：22)或QQYGSSLLT(序列辨識編號：27)。
  27. 一種經單離的輕鏈可變異區域多肽，其包含一胺基酸序列，其與輕鏈序列：序列辨識編號：1、2、3、4、5或6(圖1)有至少85%的序列同一性。
  28. 一種經單離的重鏈可變異區域多肽，其包含下列的CDRs： HC-CDR1：X28 X29 X30 X31 X32 (序列辨識編號：56)； HC-CDR2：X33 X34 X35 X36 X37 X38 X39 X40 X41 X42 YA X43 X44 X45 X46 G (序列辨識編號：57)； HC-CDR3：下列中之一者：TWFGELYY(序列辨識編號：41)、PFGDFDY(序列辨識編號：30)、LPGWGAYAFDI(序列辨識編號：33)、DPDAANWGFLLYYGMDV(序列辨識編號：35)、ALADFWSGYYYYYYMDV(序列辨識編號：38)； 其中X28 = S或E；X29 = Y或L；X30 = Y、G、A或S；X31 = M或I；X32 = H或S；X33 = I、G或V；X34 = I或F；X35 = N、S、I或D；X36 = P或Y；X37 = S、D、I或E；X38 = G、F或D；X39 = G或S；X40 = S、N、T或E；X41 = T、K或A；X42 = S、Y、N或I；X43 = Q或D；X44 = K或S；X45 = F或V；以及X46 為Q或K。
  29. 如請求項28之經單離的重鏈可變異區域多肽，其中HC-CDR1為下列中之一者：ELSMH(序列辨識編號：39)、SYYMH(序列辨識編號：28)、 SYGMH(序列辨識編號：31)、SYAMH(序列辨識編號：34)或SYAIS(序列辨識編號：36)。
  30. 如請求項28或請求項29之經單離的重鏈可變異區域多肽，其中HC-CDR2為下列中之一者：GFDPEDGETIYAQKFQG(序列辨識編號：40)、IINPSGGSTSYAQKFQG(序列辨識編號：29) VISYDGSNKYYADSVKG(序列辨識編號：32)或GIIPIFGTANYAQKFQG(序列辨識編號：37)。
  31. 一種經單離的重鏈可變異區域多肽，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：7、8、9、10或11(圖2)之重鏈序列有至少85%的序列同一性。
  32. 如請求項23至27中任一項之經單離的輕鏈可變異區域多肽，其係與如請求項28至31中任一項之經單離的重鏈可變異區域多肽組合。
  33. 一種能與LAG-3結合之抗體或抗原結合片段，其包含一重鏈及一輕鏈可變異區域序列，其中： 該輕鏈包含一LC-CDR1、LC-CDR2、LC-CDR3，其分別與下列有至少85%的整體序列同一性：下列LC-CDR1之一者：X1 X2 SQSX3 X4 X5 X6 X7 X8 X9 X10 X11 X12 X13 (序列辨識編號：53)、RASQSVSSGYLA(序列辨識編號：23)、RSSQSLLHSNGYNYLD(序列辨識編號：12)、RASQSVSSSFLA(序列辨識編號：15)、RASQSVSSSYLA(序列辨識編號：18)、RSSQSLLHSDGYNYFD(序列辨識編號：20)或TTSQSVSSTSLD(序列辨識編號：26)，下列LC-CDR2之一者：X14 X15 SX16 RAX17 (序列辨識編號：54)、DASSRAT(序列辨識編號：24)、LGSNRAS(序列辨識編號：13)、GASSRAT(序列辨識編號：16)或LGSNRAA(序列辨識編號：21)，下列LC-CDR3之一者：X18 QX19 X20 X21 X22 X23 X24 X25 X26 X27 (序列辨識編號：55)、QQYGSSRPGLT(序列辨識編號：25)、MQALQTPYT(序列辨識編號：14)、QQYGPSIT(序列辨識編號：17)、QQYGSSPPIT(序列辨識編號：19)、MQGTHWPPT(序列辨識編號：22)或QQYGSSLLT(序列辨識編號：27)；其中X1 = R或T；X2 = S、A或T；X3 = L或V；X4 = L或S；X5 = H或S；X6 = S、G或T；X7 = N、F、Y、D或S；X8 = G或L；X9 = Y、A或D；X10 = 缺少或N；X11 =缺少或Y；X12 =缺少、L或F；X13 =缺少或D；X14 = L、G或D；X15 = G或A；X16 = N或S；X17 = S、T或A；X18 = M或Q；X19 = A、Y或G；X20 = L、G或T；X21 = Q、P、S或H；X22 = T、S或W；X23 = P、I、R或L；X24 = Y、T、P或L；X25 =缺少、T、I或G；X26 =缺少、T或L；及X27 =缺少或T，以及； 該重鏈包含一HC-CDR1、HC-CDR2、HC-CDR3，其分別與下列有至少85%的整體序列同一性：下列HC-CDR1之一者：X28 X29 X30 X31 X32 (序列辨識編號：56)、ELSMH(序列辨識編號：39)、SYYMH(序列辨識編號：28)、SYGMH(序列辨識編號：31)、SYAMH(序列辨識編號：34)或SYAIS(序列辨識編號：36)，下列HC-CDR2之一者：X33 X34 X35 X36 X37 X38 X39 X40 X41 X42 YAX43 X44 X45 X46 G(序列辨識編號：57)、GFDPEDGETIYAQKFQG(序列辨識編號：40)、IINPSGGSTSYAQKFQG(序列辨識編號：29) VISYDGSNKYYADSVKG(序列辨識編號：32)或GIIPIFGTANYAQKFQG(序列辨識編號：37)，下列HC-CDR3之一者：TWFGELYY(序列辨識編號：41)、PFGDFDY(序列辨識編號：30)、LPGWGAYAFDI(序列辨識編號：33)、DPDAANWGFLLYYGMDV(序列辨識編號：35)或ALADFWSGYYYYYYMDV(序列辨識編號：38)；其中X28 = S或E；X29 = Y或L；X30 = Y、G、A或S；X31 = M或I；X32 = H或S；X33 = I、G或V；X34 = I或F；X35 = N、S、I或D；X36 = P或Y；X37 = S、D、I或E；X38 = G、F或D；X39 = G或S；X40 = S、N、T或E；X41 = T、K或A；X42 = S、Y、N或I；X43 = Q或D；X44 = K或S；X45 = F或V；以及X46 為Q或K。
  34. 一種能與LAG-3結合之抗體或抗原結合片段，選擇性地為經單離的，其包含一重鏈及一輕鏈可變異區域序列，其中： 該輕鏈序列與輕鏈序列：序列辨識編號：1、2、3、4、5或6(圖1)有至少85%的序列同一性，以及； 該重鏈序列與序列辨識編號：7、8、9、10或11(圖2)之重鏈序列有至少85%的序列同一性。
  35. 一種抗體或抗原結合片段，選擇性地為經單離的，其能與LAG-3結合，其為一雙專一性抗體或一雙專一性抗原結合片段，其包含(i)一如請求項1至34中任一項之抗原結合片段或多肽，以及(ii)能與LAG-3之外的一標靶蛋白結合的一抗原結合片段或多肽。
  36. 如請求項35之抗體或抗原結合片段，其中能與LAG-3之外的一標靶蛋白結合的該抗原結合片段或多肽能與下列中之一者結合：PD-1、PD-L1、CD27、CD28、ICOS、CD40、CD122、OX43、4-1BB、GITR、B7-H3、B7-H4、BTLA、CTLA-4、A2AR、VISTA、TIM-3、KIR、HER-2、HER-3、EGFR、EpCAM、CD30、CD33、CD38、CD20、CD24、CD90、CD15、CD52、CA-125、CD34、CA-15-3、CA-19-9、CEA、CD99、CD117、CD31、CD44、CD123、CD133、ABCB5及CD45。
  37. 一種嵌合抗原受體(CAR)，其包含如請求項1至36中任一項之抗原結合片段。
  38. 一種包含如請求項37之CAR的細胞。
  39. 一種活體外(in vitro )複合物，選擇性地為經單離的，其包含與LAG-3結合的如請求項1至38中任一項之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR或細胞。
  40. 一種組成物，其包含如請求項1至37中任一項之抗體或抗原結合片段、多肽、CAR或細胞以及至少一藥學上可接受的載劑。
  41. 一種經單離的核酸，其編碼如請求項1至37中任一項之抗體或抗原結合片段、多肽或CAR。
  42. 一種載體，其包含如請求項41之核酸。
  43. 一種宿主細胞，其包含如請求項42之載體。
  44. 一種用於製造如請求項1至37中任一項之抗體、抗原結合片段、多肽或CAR之方法，其包含於適合表現編碼該抗體或抗原結合片段、多肽或CAR之載體的條件下培養如請求項43之宿主細胞，以及回收該抗體或抗原結合片段、多肽或CAR。
  45. 如請求項1至38或40中任一項之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物，其係供用於療法中，或醫學治療方法中。
  46. 如請求項1至38或40中任一項之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物，其係供用於治療一T細胞官能不良障礙。
  47. 如請求項1至38或40中任一項之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物，其係供用於治療癌症。
  48. 如請求項1至38或40中任一項之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物，其係供用於治療一感染疾病。
  49. 一種如請求項1至38或40中任一項之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物於製造一藥劑之用途，該藥劑係供用於治療一T細胞官能不良障礙。
  50. 一種如請求項1至38或40中任一項之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物於製造一藥劑之用途，該藥劑係供用於治療癌症。
  51. 一種如請求項1至38或40中任一項之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物於製造一藥劑之用途，該藥劑係供用於治療一感染疾病。
  52. 一種活體外或活體內提升T細胞功能之方法，其包含投與如請求項1至38或40中任一項之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物至一官能不良T細胞。
  53. 一種治療一T細胞官能不良障礙的方法，其包含投與如請求項1至38或40中任一項之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物至罹患T細胞官能不良障礙的一病人。
  54. 一種治療癌症的方法，其包含投與如請求項1至38或40中任一項之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物至罹患癌症的一病人。
  55. 一種治療一感染疾病的方法，其包含投與如請求項1至38或40中任一項之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物至罹患感染疾病的一病人。
  56. 一種方法，其包含使含有或懷疑含有LAG-3的一樣本與如請求項1至38中任一項之抗體、抗原結合片段、CAR或細胞接觸，以及偵測一抗體、抗原結合片段、CAR或細胞與LAG-3的複合物之形成。
  57. 一種診斷一主體之疾病或病況的方法，該方法包含於活體外使來自該主體的一樣本與如請求項1至38中任一項之抗體、抗原結合片段、CAR或細胞接觸，以及偵測一抗體或抗原結合片段、CAR或細胞與LAG-3的複合物之形成。
  58. 一種選擇或分層(stratifying)以LAG-3或第II類MHC標靶劑治療之一主體的方法，該方法包含於活體外使來自該主體的一樣本與如請求項1至38中任一項之抗體、抗原結合片段、CAR或細胞接觸，以及偵測一抗體或抗原結合片段、CAR或細胞與LAG-3的複合物之形成。
  59. 一種如請求項1至38中任一項之抗體、抗原結合片段、CAR或細胞供用於活體外偵測LAG-3之用途。
  60. 一種如請求項1至38中任一項之抗體、抗原結合片段、CAR或細胞作為一活體外診斷劑之用途。
  61. 一種用於增生一T細胞族群之方法，其中T細胞係於活體外或擬體內(ex vivo )與如請求項1至38或40中任一項之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物接觸。
  62. 一種治療有T細胞官能不良障礙的一主體之方法，該方法包含於如請求項1至38或40中任一項之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物存在下，培養從來自一主體的一血液樣本得到的T細胞，以便增生該T細胞族群，收集增生的T細胞，以及投與該增生的T細胞至需要治療的一主體。
  63. 一種治療或預防一主體內癌症的方法，其包含： (a)從一主體單離至少一細胞； (b)修飾該至少一細胞以表現或包含如請求項1至37、41或42中任一項之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、核酸或載體，以及； (c)投與該經修飾的至少一細胞至一主體。
  64. 一種治療或預防一主體內癌症的方法，其包含： (a)從一主體單離至少一細胞； (b)導入如請求項41之核酸或如請求項42之載體至該至少一細胞內，藉此修飾該至少一細胞，以及； (c)投與該經修飾的至少一細胞至一主體。
  65. 一種部件之套組(a kit of parts)，其包含一預定量之如請求項1至38或40至43中任一項之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、組成物、核酸、載體或細胞。
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