JP2023546359A - 腫瘍浸潤リンパ球療法によるnsclc患者の治療 - Google Patents
腫瘍浸潤リンパ球療法によるnsclc患者の治療 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2023546359A JP2023546359A JP2023521133A JP2023521133A JP2023546359A JP 2023546359 A JP2023546359 A JP 2023546359A JP 2023521133 A JP2023521133 A JP 2023521133A JP 2023521133 A JP2023521133 A JP 2023521133A JP 2023546359 A JP2023546359 A JP 2023546359A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- inhibitor
- expansion
- nsclc
- population
- til
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 210000003171 tumor-infiltrating lymphocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 513
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 title claims abstract description 188
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims abstract description 68
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 title description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 266
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 195
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 claims abstract description 187
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 107
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims abstract description 14
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims description 255
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 139
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 claims description 130
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 92
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 80
- 108010074108 interleukin-21 Proteins 0.000 claims description 73
- 102100030704 Interleukin-21 Human genes 0.000 claims description 72
- 230000007704 transition Effects 0.000 claims description 66
- 102000003812 Interleukin-15 Human genes 0.000 claims description 62
- 108090000172 Interleukin-15 Proteins 0.000 claims description 62
- 229960000106 biosimilars Drugs 0.000 claims description 57
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 claims description 56
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 55
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 50
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 claims description 49
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 claims description 38
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 32
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 32
- 238000001802 infusion Methods 0.000 claims description 32
- 230000037437 driver mutation Effects 0.000 claims description 29
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 claims description 26
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 claims description 24
- 229960003301 nivolumab Drugs 0.000 claims description 21
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 20
- 229960002621 pembrolizumab Drugs 0.000 claims description 20
- 229960003852 atezolizumab Drugs 0.000 claims description 15
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 claims description 15
- 229960005386 ipilimumab Drugs 0.000 claims description 15
- 229950002916 avelumab Drugs 0.000 claims description 14
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 14
- 229950009791 durvalumab Drugs 0.000 claims description 14
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 claims description 13
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 claims description 13
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims description 13
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 claims description 12
- 108700025316 aldesleukin Proteins 0.000 claims description 12
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 claims description 12
- 238000013188 needle biopsy Methods 0.000 claims description 12
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical group [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 230000037452 priming Effects 0.000 claims description 12
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims description 11
- 229960005310 aldesleukin Drugs 0.000 claims description 10
- 230000003902 lesion Effects 0.000 claims description 10
- 230000001400 myeloablative effect Effects 0.000 claims description 10
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 claims description 9
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 9
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 claims description 8
- 102100028286 Proto-oncogene tyrosine-protein kinase receptor Ret Human genes 0.000 claims description 8
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 claims description 8
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 claims description 8
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 claims description 8
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 229960004562 carboplatin Drugs 0.000 claims description 7
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 7
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 claims description 7
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 claims description 7
- 229960000390 fludarabine Drugs 0.000 claims description 7
- GIUYCYHIANZCFB-FJFJXFQQSA-N fludarabine phosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC(F)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@@H]1O GIUYCYHIANZCFB-FJFJXFQQSA-N 0.000 claims description 7
- 229960005079 pemetrexed Drugs 0.000 claims description 7
- QOFFJEBXNKRSPX-ZDUSSCGKSA-N pemetrexed Chemical compound C1=N[C]2NC(N)=NC(=O)C2=C1CCC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 QOFFJEBXNKRSPX-ZDUSSCGKSA-N 0.000 claims description 7
- 102100034580 AT-rich interactive domain-containing protein 1A Human genes 0.000 claims description 6
- 102100021975 CREB-binding protein Human genes 0.000 claims description 6
- 108010009392 Cyclin-Dependent Kinase Inhibitor p16 Proteins 0.000 claims description 6
- 102100031480 Dual specificity mitogen-activated protein kinase kinase 1 Human genes 0.000 claims description 6
- 102100028138 F-box/WD repeat-containing protein 7 Human genes 0.000 claims description 6
- 101710105178 F-box/WD repeat-containing protein 7 Proteins 0.000 claims description 6
- 102100037859 G1/S-specific cyclin-D3 Human genes 0.000 claims description 6
- 102100039788 GTPase NRas Human genes 0.000 claims description 6
- 102100036738 Guanine nucleotide-binding protein subunit alpha-11 Human genes 0.000 claims description 6
- 102100038885 Histone acetyltransferase p300 Human genes 0.000 claims description 6
- 102100027755 Histone-lysine N-methyltransferase 2C Human genes 0.000 claims description 6
- 102100027768 Histone-lysine N-methyltransferase 2D Human genes 0.000 claims description 6
- 102100038970 Histone-lysine N-methyltransferase EZH2 Human genes 0.000 claims description 6
- 101000924266 Homo sapiens AT-rich interactive domain-containing protein 1A Proteins 0.000 claims description 6
- 101000896987 Homo sapiens CREB-binding protein Proteins 0.000 claims description 6
- 101000738559 Homo sapiens G1/S-specific cyclin-D3 Proteins 0.000 claims description 6
- 101000744505 Homo sapiens GTPase NRas Proteins 0.000 claims description 6
- 101001072407 Homo sapiens Guanine nucleotide-binding protein subunit alpha-11 Proteins 0.000 claims description 6
- 101001008892 Homo sapiens Histone-lysine N-methyltransferase 2C Proteins 0.000 claims description 6
- 101001008894 Homo sapiens Histone-lysine N-methyltransferase 2D Proteins 0.000 claims description 6
- 101000882127 Homo sapiens Histone-lysine N-methyltransferase EZH2 Proteins 0.000 claims description 6
- 101000605639 Homo sapiens Phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate 3-kinase catalytic subunit alpha isoform Proteins 0.000 claims description 6
- 101000932478 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein kinase FLT3 Proteins 0.000 claims description 6
- 101000742859 Homo sapiens Retinoblastoma-associated protein Proteins 0.000 claims description 6
- 101000984753 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase B-raf Proteins 0.000 claims description 6
- 101001087416 Homo sapiens Tyrosine-protein phosphatase non-receptor type 11 Proteins 0.000 claims description 6
- 206010069755 K-ras gene mutation Diseases 0.000 claims description 6
- 108010068342 MAP Kinase Kinase 1 Proteins 0.000 claims description 6
- 102000007530 Neurofibromin 1 Human genes 0.000 claims description 6
- 108010085793 Neurofibromin 1 Proteins 0.000 claims description 6
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 claims description 6
- 102100038332 Phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate 3-kinase catalytic subunit alpha isoform Human genes 0.000 claims description 6
- 102100020718 Receptor-type tyrosine-protein kinase FLT3 Human genes 0.000 claims description 6
- 102100038042 Retinoblastoma-associated protein Human genes 0.000 claims description 6
- 102100027103 Serine/threonine-protein kinase B-raf Human genes 0.000 claims description 6
- 108010078814 Tumor Suppressor Protein p53 Proteins 0.000 claims description 6
- 102100033019 Tyrosine-protein phosphatase non-receptor type 11 Human genes 0.000 claims description 6
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 102100033793 ALK tyrosine kinase receptor Human genes 0.000 claims description 5
- 101000779641 Homo sapiens ALK tyrosine kinase receptor Proteins 0.000 claims description 5
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 229960000397 bevacizumab Drugs 0.000 claims description 5
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims description 5
- 230000037431 insertion Effects 0.000 claims description 5
- 230000011664 signaling Effects 0.000 claims description 5
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 claims description 5
- 239000012827 ATM inhibitor Substances 0.000 claims description 4
- 229940122531 Anaplastic lymphoma kinase inhibitor Drugs 0.000 claims description 4
- 229940125431 BRAF inhibitor Drugs 0.000 claims description 4
- 101000686031 Homo sapiens Proto-oncogene tyrosine-protein kinase ROS Proteins 0.000 claims description 4
- 229940121730 Janus kinase 2 inhibitor Drugs 0.000 claims description 4
- 229940124785 KRAS inhibitor Drugs 0.000 claims description 4
- 229940123940 PTEN inhibitor Drugs 0.000 claims description 4
- 102100023347 Proto-oncogene tyrosine-protein kinase ROS Human genes 0.000 claims description 4
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 claims description 4
- 229940121647 egfr inhibitor Drugs 0.000 claims description 4
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 claims description 4
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 claims description 4
- 238000002271 resection Methods 0.000 claims description 4
- ZEOWTGPWHLSLOG-UHFFFAOYSA-N Cc1ccc(cc1-c1ccc2c(n[nH]c2c1)-c1cnn(c1)C1CC1)C(=O)Nc1cccc(c1)C(F)(F)F Chemical compound Cc1ccc(cc1-c1ccc2c(n[nH]c2c1)-c1cnn(c1)C1CC1)C(=O)Nc1cccc(c1)C(F)(F)F ZEOWTGPWHLSLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229940125830 FGFR1 inhibitor Drugs 0.000 claims description 3
- 102100023593 Fibroblast growth factor receptor 1 Human genes 0.000 claims description 3
- 101710182386 Fibroblast growth factor receptor 1 Proteins 0.000 claims description 3
- 102100032742 Histone-lysine N-methyltransferase SETD2 Human genes 0.000 claims description 3
- 101000654725 Homo sapiens Histone-lysine N-methyltransferase SETD2 Proteins 0.000 claims description 3
- 101001030211 Homo sapiens Myc proto-oncogene protein Proteins 0.000 claims description 3
- 229940124160 Myc inhibitor Drugs 0.000 claims description 3
- 102100038895 Myc proto-oncogene protein Human genes 0.000 claims description 3
- ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N N-debenzoyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-10-deacetyltaxol Chemical compound O([C@H]1[C@H]2[C@@](C([C@H](O)C3=C(C)[C@@H](OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C=4C=CC=CC=4)C[C@]1(O)C3(C)C)=O)(C)[C@@H](O)C[C@H]1OC[C@]12OC(=O)C)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N 0.000 claims description 3
- 229940126264 SETD2 inhibitor Drugs 0.000 claims description 3
- 229960003668 docetaxel Drugs 0.000 claims description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 claims description 3
- 108010058566 130-nm albumin-bound paclitaxel Proteins 0.000 claims description 2
- 108010004586 Ataxia Telangiectasia Mutated Proteins Proteins 0.000 claims description 2
- 206010072206 Janus kinase 2 mutation Diseases 0.000 claims description 2
- XOGTZOOQQBDUSI-UHFFFAOYSA-M Mesna Chemical compound [Na+].[O-]S(=O)(=O)CCS XOGTZOOQQBDUSI-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 208000032818 Microsatellite Instability Diseases 0.000 claims description 2
- 108010011536 PTEN Phosphohydrolase Proteins 0.000 claims description 2
- 102000014160 PTEN Phosphohydrolase Human genes 0.000 claims description 2
- 229940123237 Taxane Drugs 0.000 claims description 2
- 238000009098 adjuvant therapy Methods 0.000 claims description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 2
- SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N gemcitabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1C(F)(F)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N 0.000 claims description 2
- 229960005277 gemcitabine Drugs 0.000 claims description 2
- 229960004635 mesna Drugs 0.000 claims description 2
- 230000000869 mutational effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000009099 neoadjuvant therapy Methods 0.000 claims description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims description 2
- 229950010773 pidilizumab Drugs 0.000 claims description 2
- 229960003876 ranibizumab Drugs 0.000 claims description 2
- 229950007213 spartalizumab Drugs 0.000 claims description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 claims description 2
- 229960002066 vinorelbine Drugs 0.000 claims description 2
- GBABOYUKABKIAF-GHYRFKGUSA-N vinorelbine Chemical compound C1N(CC=2C3=CC=CC=C3NC=22)CC(CC)=C[C@H]1C[C@]2(C(=O)OC)C1=CC([C@]23[C@H]([C@]([C@H](OC(C)=O)[C@]4(CC)C=CCN([C@H]34)CC2)(O)C(=O)OC)N2C)=C2C=C1OC GBABOYUKABKIAF-GHYRFKGUSA-N 0.000 claims description 2
- 102100039037 Vascular endothelial growth factor A Human genes 0.000 claims 24
- 102000008096 B7-H1 Antigen Human genes 0.000 claims 21
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 claims 21
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 claims 6
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 claims 6
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 6
- 102000015098 Tumor Suppressor Protein p53 Human genes 0.000 claims 3
- 102100033254 Tumor suppressor ARF Human genes 0.000 claims 3
- 190000008236 carboplatin Chemical compound 0.000 claims 3
- 230000002250 progressing effect Effects 0.000 claims 3
- 102000002804 Ataxia Telangiectasia Mutated Proteins Human genes 0.000 claims 1
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 claims 1
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 claims 1
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 abstract description 21
- 238000010586 diagram Methods 0.000 abstract description 13
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 abstract description 4
- 239000002525 vasculotropin inhibitor Substances 0.000 abstract description 4
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 236
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 156
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 137
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 117
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 108
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 93
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 69
- 102100022153 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Human genes 0.000 description 68
- 101710165473 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Proteins 0.000 description 68
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 65
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 61
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 57
- 102100035360 Cerebellar degeneration-related antigen 1 Human genes 0.000 description 52
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 51
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 49
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 49
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 45
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 45
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 44
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 44
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 41
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 40
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 40
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 40
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 39
- 101000851370 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Proteins 0.000 description 38
- 102100036856 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Human genes 0.000 description 38
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 37
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 36
- -1 CD45Ra Proteins 0.000 description 34
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 34
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 34
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 33
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 32
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 32
- 239000012275 CTLA-4 inhibitor Substances 0.000 description 30
- 239000012271 PD-L1 inhibitor Substances 0.000 description 30
- 229940121656 pd-l1 inhibitor Drugs 0.000 description 30
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 29
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 27
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 27
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 27
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 26
- 102000009524 Vascular Endothelial Growth Factor A Human genes 0.000 description 25
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 24
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 24
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 24
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 24
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 23
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 23
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 22
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 22
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 22
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 description 22
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 22
- 229950005972 urelumab Drugs 0.000 description 22
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 21
- 239000012270 PD-1 inhibitor Substances 0.000 description 20
- 239000012668 PD-1-inhibitor Substances 0.000 description 20
- 229940121655 pd-1 inhibitor Drugs 0.000 description 20
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 20
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 19
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 19
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 19
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 19
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 19
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 19
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 19
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 19
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 19
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 18
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 18
- 102100029290 Transthyretin Human genes 0.000 description 18
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 18
- 239000007758 minimum essential medium Substances 0.000 description 18
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 18
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 17
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 16
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 15
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 15
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 15
- 239000000047 product Substances 0.000 description 15
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 15
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 14
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 14
- 210000000270 basal cell Anatomy 0.000 description 14
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 14
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 14
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 14
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 14
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 14
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 14
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 13
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 13
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 12
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 12
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 12
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 12
- 210000003071 memory t lymphocyte Anatomy 0.000 description 12
- 102000000704 Interleukin-7 Human genes 0.000 description 11
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 11
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 11
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 11
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 11
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 10
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 10
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 10
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 10
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 235000004554 glutamine Nutrition 0.000 description 10
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 10
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 10
- 229940126625 tavolimab Drugs 0.000 description 10
- 229950007217 tremelimumab Drugs 0.000 description 10
- 108010008532 Deoxyribonuclease I Proteins 0.000 description 9
- 102100030012 Deoxyribonuclease-1 Human genes 0.000 description 9
- 208000002250 Hematologic Neoplasms Diseases 0.000 description 9
- 108010003272 Hyaluronate lyase Proteins 0.000 description 9
- 102000001974 Hyaluronidases Human genes 0.000 description 9
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 9
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 9
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 9
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 9
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 9
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 9
- 229960002773 hyaluronidase Drugs 0.000 description 9
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 9
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 9
- 210000004910 pleural fluid Anatomy 0.000 description 9
- 229910052720 vanadium Inorganic materials 0.000 description 9
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 description 8
- 108050005493 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Proteins 0.000 description 8
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 8
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 8
- 101001002657 Homo sapiens Interleukin-2 Proteins 0.000 description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 8
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 8
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 8
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 8
- 239000012090 serum-supplement Substances 0.000 description 8
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 8
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 description 8
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 8
- HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N Ala-Gln Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 7
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 7
- 101001055157 Homo sapiens Interleukin-15 Proteins 0.000 description 7
- 229940076838 Immune checkpoint inhibitor Drugs 0.000 description 7
- 102100034922 T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Human genes 0.000 description 7
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 7
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 7
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 7
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 7
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 7
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 7
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 7
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 description 7
- 102000056003 human IL15 Human genes 0.000 description 7
- 239000012274 immune-checkpoint protein inhibitor Substances 0.000 description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 7
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 7
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 7
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 7
- 229960001153 serine Drugs 0.000 description 7
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 6
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 6
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102100036301 C-C chemokine receptor type 7 Human genes 0.000 description 6
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 6
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 6
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 6
- 101000716065 Homo sapiens C-C chemokine receptor type 7 Proteins 0.000 description 6
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 6
- 239000007760 Iscove's Modified Dulbecco's Medium Substances 0.000 description 6
- FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N L-Methionine Natural products CSCCC(N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 6
- MIJPAVRNWPDMOR-ZAFYKAAXSA-N L-ascorbic acid 2-phosphate Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(OP(O)(O)=O)=C1O MIJPAVRNWPDMOR-ZAFYKAAXSA-N 0.000 description 6
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 6
- 229930182844 L-isoleucine Natural products 0.000 description 6
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 6
- 229930195722 L-methionine Natural products 0.000 description 6
- 229930182821 L-proline Natural products 0.000 description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 description 6
- JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N Thiamine Natural products CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 6
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 6
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 6
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 6
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 6
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 6
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 6
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 6
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 6
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 6
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 6
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 6
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 6
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 6
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 6
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 6
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 6
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 6
- 229960002429 proline Drugs 0.000 description 6
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 6
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 6
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 6
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 description 6
- 235000019157 thiamine Nutrition 0.000 description 6
- KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N thiamine Chemical compound CC1=C(CCO)SCN1CC1=CN=C(C)N=C1N KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000011721 thiamine Substances 0.000 description 6
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 description 6
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 6
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 6
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 6
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 6
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 6
- 206010066476 Haematological malignancy Diseases 0.000 description 5
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 5
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 5
- 238000002224 dissection Methods 0.000 description 5
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 5
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 5
- 102000055277 human IL2 Human genes 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 5
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 5
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 5
- JWDFQMWEFLOOED-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 3-(pyridin-2-yldisulfanyl)propanoate Chemical group O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCSSC1=CC=CC=N1 JWDFQMWEFLOOED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QDGAVODICPCDMU-UHFFFAOYSA-N 2-amino-3-[3-[bis(2-chloroethyl)amino]phenyl]propanoic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CC1=CC=CC(N(CCCl)CCCl)=C1 QDGAVODICPCDMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010082808 4-1BB Ligand Proteins 0.000 description 4
- 108090000145 Bacillolysin Proteins 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 4
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 4
- 101001010621 Homo sapiens Interleukin-21 Proteins 0.000 description 4
- 101000852998 Homo sapiens Interleukin-27 subunit alpha Proteins 0.000 description 4
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 4
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 4
- 102100026878 Interleukin-2 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 4
- 102100036678 Interleukin-27 subunit alpha Human genes 0.000 description 4
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 4
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102100027983 Molybdenum cofactor sulfurase Human genes 0.000 description 4
- 102000035092 Neutral proteases Human genes 0.000 description 4
- 108091005507 Neutral proteases Proteins 0.000 description 4
- 102000004473 OX40 Ligand Human genes 0.000 description 4
- 108010042215 OX40 Ligand Proteins 0.000 description 4
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 4
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 4
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 4
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 4
- 102100032101 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 9 Human genes 0.000 description 4
- 229940050528 albumin Drugs 0.000 description 4
- VSRXQHXAPYXROS-UHFFFAOYSA-N azanide;cyclobutane-1,1-dicarboxylic acid;platinum(2+) Chemical compound [NH2-].[NH2-].[Pt+2].OC(=O)C1(C(O)=O)CCC1 VSRXQHXAPYXROS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 4
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 4
- 230000034994 death Effects 0.000 description 4
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 4
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 4
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 4
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 4
- 229960002449 glycine Drugs 0.000 description 4
- 238000011194 good manufacturing practice Methods 0.000 description 4
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 4
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 4
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 4
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 4
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 4
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 4
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 4
- IFGCUJZIWBUILZ-UHFFFAOYSA-N sodium 2-[[2-[[hydroxy-(3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxyphosphoryl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoic acid Chemical compound [Na+].C=1NC2=CC=CC=C2C=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NP(O)(=O)OC1OC(C)C(O)C(O)C1O IFGCUJZIWBUILZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 4
- JJAHTWIKCUJRDK-UHFFFAOYSA-N succinimidyl 4-(N-maleimidomethyl)cyclohexane-1-carboxylate Chemical compound C1CC(CN2C(C=CC2=O)=O)CCC1C(=O)ON1C(=O)CCC1=O JJAHTWIKCUJRDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 4
- VILFTWLXLYIEMV-UHFFFAOYSA-N 1,5-difluoro-2,4-dinitrobenzene Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+]([O-])=O)=C(F)C=C1F VILFTWLXLYIEMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FPKVOQKZMBDBKP-UHFFFAOYSA-N 1-[4-[(2,5-dioxopyrrol-1-yl)methyl]cyclohexanecarbonyl]oxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonic acid Chemical compound O=C1C(S(=O)(=O)O)CC(=O)N1OC(=O)C1CCC(CN2C(C=CC2=O)=O)CC1 FPKVOQKZMBDBKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100025064 Cellular tumor antigen p53 Human genes 0.000 description 3
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 3
- 102100024458 Cyclin-dependent kinase inhibitor 2A Human genes 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010019236 Fucosyltransferases Proteins 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 3
- 101001002709 Homo sapiens Interleukin-4 Proteins 0.000 description 3
- 101001043807 Homo sapiens Interleukin-7 Proteins 0.000 description 3
- 101001018097 Homo sapiens L-selectin Proteins 0.000 description 3
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 3
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 3
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 3
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 3
- 102100033467 L-selectin Human genes 0.000 description 3
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 3
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 3
- 101100519207 Mus musculus Pdcd1 gene Proteins 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 3
- 210000004241 Th2 cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 229940121413 bempegaldesleukin Drugs 0.000 description 3
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 3
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 3
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 3
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 3
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 239000012595 freezing medium Substances 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N hexanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000055229 human IL4 Human genes 0.000 description 3
- 102000052622 human IL7 Human genes 0.000 description 3
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 3
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 3
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 3
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 3
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 3
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 3
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 3
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 3
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 3
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 3
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 3
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 3
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000013341 scale-up Methods 0.000 description 3
- 239000000779 smoke Substances 0.000 description 3
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 3
- LLXVXPPXELIDGQ-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 3-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)benzoate Chemical compound C=1C=CC(N2C(C=CC2=O)=O)=CC=1C(=O)ON1C(=O)CCC1=O LLXVXPPXELIDGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BQWBEDSJTMWJAE-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 4-[(2-iodoacetyl)amino]benzoate Chemical compound C1=CC(NC(=O)CI)=CC=C1C(=O)ON1C(=O)CCC1=O BQWBEDSJTMWJAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RBAFCMJBDZWZIV-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 4-azido-2-hydroxybenzoate Chemical compound OC1=CC(N=[N+]=[N-])=CC=C1C(=O)ON1C(=O)CCC1=O RBAFCMJBDZWZIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NGXDNMNOQDVTRL-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 6-(4-azido-2-nitroanilino)hexanoate Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC(N=[N+]=[N-])=CC=C1NCCCCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O NGXDNMNOQDVTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 2
- GAJBPZXIKZXTCG-VIFPVBQESA-N (2s)-2-amino-3-[4-(azidomethyl)phenyl]propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(CN=[N+]=[N-])C=C1 GAJBPZXIKZXTCG-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- AXKGIPZJYUNAIW-UHFFFAOYSA-N (4-aminophenyl)methanol Chemical compound NC1=CC=C(CO)C=C1 AXKGIPZJYUNAIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GERXSZLDSOPHJV-UHFFFAOYSA-N (4-nitrophenyl) 2-iodoacetate Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C(OC(=O)CI)C=C1 GERXSZLDSOPHJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AASYSXRGODIQGY-UHFFFAOYSA-N 1-[1-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)hexyl]pyrrole-2,5-dione Chemical compound O=C1C=CC(=O)N1C(CCCCC)N1C(=O)C=CC1=O AASYSXRGODIQGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQQBUTMELIQJNY-UHFFFAOYSA-N 1-[4-(2,5-dioxo-3-sulfopyrrolidin-1-yl)oxy-2,3-dihydroxy-4-oxobutanoyl]oxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonic acid Chemical compound O=C1CC(S(O)(=O)=O)C(=O)N1OC(=O)C(O)C(O)C(=O)ON1C(=O)CC(S(O)(=O)=O)C1=O WQQBUTMELIQJNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHYRLCJMMJQUBY-UHFFFAOYSA-N 1-[4-[4-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)phenyl]butanoyloxy]-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonic acid Chemical compound O=C1C(S(=O)(=O)O)CC(=O)N1OC(=O)CCCC1=CC=C(N2C(C=CC2=O)=O)C=C1 VHYRLCJMMJQUBY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UPNUQQDXHCUWSG-UHFFFAOYSA-N 1-[6-(4-azido-2-nitroanilino)hexanoyloxy]-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonic acid Chemical compound O=C1C(S(=O)(=O)O)CC(=O)N1OC(=O)CCCCCNC1=CC=C(N=[N+]=[N-])C=C1[N+]([O-])=O UPNUQQDXHCUWSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VCRPKWLNHWPCSR-UHFFFAOYSA-N 1-diazonio-3-(4-nitrophenoxy)-3-oxoprop-1-en-2-olate Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C(OC(=O)C(=O)C=[N+]=[N-])C=C1 VCRPKWLNHWPCSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CALIYGMVBZRBLV-UHFFFAOYSA-N 2-(4-azidophenyl)-2-oxoacetaldehyde Chemical compound [N-]=[N+]=NC1=CC=C(C(=O)C=O)C=C1 CALIYGMVBZRBLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JPTXVWCBMWCZEP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-8-oxononanoic acid Chemical compound CC(=O)CCCCCC(N)C(O)=O JPTXVWCBMWCZEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NITXODYAMWZEJY-UHFFFAOYSA-N 3-(pyridin-2-yldisulfanyl)propanehydrazide Chemical compound NNC(=O)CCSSC1=CC=CC=N1 NITXODYAMWZEJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZMRMMAOBSFSXLN-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)phenyl]butanehydrazide Chemical compound C1=CC(CCCC(=O)NN)=CC=C1N1C(=O)C=CC1=O ZMRMMAOBSFSXLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- QQZOUYFHWKTGEY-UHFFFAOYSA-N 4-azido-n-[2-[2-[(4-azido-2-hydroxybenzoyl)amino]ethyldisulfanyl]ethyl]-2-hydroxybenzamide Chemical compound OC1=CC(N=[N+]=[N-])=CC=C1C(=O)NCCSSCCNC(=O)C1=CC=C(N=[N+]=[N-])C=C1O QQZOUYFHWKTGEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YRLKXQVDEQEYSN-UHFFFAOYSA-N 4-azidobenzohydrazide Chemical compound NNC(=O)C1=CC=C(N=[N+]=[N-])C=C1 YRLKXQVDEQEYSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010000871 Acute monocytic leukaemia Diseases 0.000 description 2
- 102100021266 Alpha-(1,6)-fucosyltransferase Human genes 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000006306 Antigen Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010083359 Antigen Receptors Proteins 0.000 description 2
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 2
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 2
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 description 2
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M Butyrate Chemical compound CCCC([O-])=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Natural products CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100027207 CD27 antigen Human genes 0.000 description 2
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 2
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 2
- 102000006471 Fucosyltransferases Human genes 0.000 description 2
- 229920002971 Heparan sulfate Polymers 0.000 description 2
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000914511 Homo sapiens CD27 antigen Proteins 0.000 description 2
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 2
- 101001043809 Homo sapiens Interleukin-7 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 2
- 101000581981 Homo sapiens Neural cell adhesion molecule 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000611023 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 6 Proteins 0.000 description 2
- 229920001612 Hydroxyethyl starch Polymers 0.000 description 2
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 2
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 2
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 2
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 description 2
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 description 2
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 2
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 2
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 2
- 108010038498 Interleukin-7 Receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000010782 Interleukin-7 Receptors Human genes 0.000 description 2
- 102100021593 Interleukin-7 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 208000035489 Monocytic Acute Leukemia Diseases 0.000 description 2
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 description 2
- 108700031757 NKTR-214 Proteins 0.000 description 2
- 102100027347 Neural cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 208000002151 Pleural effusion Diseases 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 101100244562 Pseudomonas aeruginosa (strain ATCC 15692 / DSM 22644 / CIP 104116 / JCM 14847 / LMG 12228 / 1C / PRS 101 / PAO1) oprD gene Proteins 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 108010092262 T-Cell Antigen Receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 2
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 2
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 2
- 102100040403 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 6 Human genes 0.000 description 2
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000011467 adoptive cell therapy Methods 0.000 description 2
- 102000012086 alpha-L-Fucosidase Human genes 0.000 description 2
- 108010061314 alpha-L-Fucosidase Proteins 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 229940049595 antibody-drug conjugate Drugs 0.000 description 2
- 238000002617 apheresis Methods 0.000 description 2
- 238000013475 authorization Methods 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 2
- NXVYSVARUKNFNF-UHFFFAOYSA-N bis(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 2,3-dihydroxybutanedioate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)C(O)C(O)C(=O)ON1C(=O)CCC1=O NXVYSVARUKNFNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LNQHREYHFRFJAU-UHFFFAOYSA-N bis(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) pentanedioate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O LNQHREYHFRFJAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VYLDEYYOISNGST-UHFFFAOYSA-N bissulfosuccinimidyl suberate Chemical compound O=C1C(S(=O)(=O)O)CC(=O)N1OC(=O)CCCCCCC(=O)ON1C(=O)C(S(O)(=O)=O)CC1=O VYLDEYYOISNGST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- HQABUPZFAYXKJW-UHFFFAOYSA-N butan-1-amine Chemical compound CCCCN HQABUPZFAYXKJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001273 butane Substances 0.000 description 2
- 230000011712 cell development Effects 0.000 description 2
- 210000003690 classically activated macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 2
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 2
- 108700023159 delta Opioid Receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000048124 delta Opioid Receptors Human genes 0.000 description 2
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 2
- ZLFRJHOBQVVTOJ-UHFFFAOYSA-N dimethyl hexanediimidate Chemical compound COC(=N)CCCCC(=N)OC ZLFRJHOBQVVTOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FRTGEIHSCHXMTI-UHFFFAOYSA-N dimethyl octanediimidate Chemical compound COC(=N)CCCCCCC(=N)OC FRTGEIHSCHXMTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRPQMNYCTSPGCX-UHFFFAOYSA-N dimethyl pimelimidate Chemical compound COC(=N)CCCCCC(=N)OC LRPQMNYCTSPGCX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BVTBRVFYZUCAKH-UHFFFAOYSA-L disodium selenite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][Se]([O-])=O BVTBRVFYZUCAKH-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 210000003162 effector t lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 2
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 125000002446 fucosyl group Chemical group C1([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O1)C)* 0.000 description 2
- 101150023212 fut8 gene Proteins 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 2
- 230000002008 hemorrhagic effect Effects 0.000 description 2
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 2
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 2
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 2
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 2
- 229940050526 hydroxyethylstarch Drugs 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 239000005414 inactive ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 102000008616 interleukin-15 receptor activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 108040002039 interleukin-15 receptor activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 108040006849 interleukin-2 receptor activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- DUWWHGPELOTTOE-UHFFFAOYSA-N n-(5-chloro-2,4-dimethoxyphenyl)-3-oxobutanamide Chemical compound COC1=CC(OC)=C(NC(=O)CC(C)=O)C=C1Cl DUWWHGPELOTTOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJDNQMDRQITEOD-UHFFFAOYSA-N n-butane Chemical compound CCCC IJDNQMDRQITEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N n-pentane Natural products CCCCC OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 2
- RNVCVTLRINQCPJ-UHFFFAOYSA-N o-toluidine Chemical compound CC1=CC=CC=C1N RNVCVTLRINQCPJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960003278 osimertinib Drugs 0.000 description 2
- DUYJMQONPNNFPI-UHFFFAOYSA-N osimertinib Chemical compound COC1=CC(N(C)CCN(C)C)=C(NC(=O)C=C)C=C1NC1=NC=CC(C=2C3=CC=CC=C3N(C)C=2)=N1 DUYJMQONPNNFPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 2
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 description 2
- BZQFBWGGLXLEPQ-REOHCLBHSA-N phosphoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)COP(O)(O)=O BZQFBWGGLXLEPQ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 2
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 2
- 229940087463 proleukin Drugs 0.000 description 2
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 description 2
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 2
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 2
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 2
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 2
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 229960001471 sodium selenite Drugs 0.000 description 2
- 235000015921 sodium selenite Nutrition 0.000 description 2
- 239000011781 sodium selenite Substances 0.000 description 2
- NDDXBASIVDLAME-UHFFFAOYSA-M sodium;1-[3-[2-[[2-(7-azido-4-methyl-2-oxochromen-3-yl)acetyl]amino]ethyldisulfanyl]propanoyloxy]-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonate Chemical compound [Na+].O=C1OC=2C=C(N=[N+]=[N-])C=CC=2C(C)=C1CC(=O)NCCSSCCC(=O)ON1C(=O)CC(S([O-])(=O)=O)C1=O NDDXBASIVDLAME-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- HHSGWIABCIVPJT-UHFFFAOYSA-M sodium;1-[4-[(2-iodoacetyl)amino]benzoyl]oxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonate Chemical compound [Na+].O=C1C(S(=O)(=O)[O-])CC(=O)N1OC(=O)C1=CC=C(NC(=O)CI)C=C1 HHSGWIABCIVPJT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- XSWBNALIBMCQED-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 2-phenyl-2-(pyridin-2-yldisulfanyl)propanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)C(C=1C=CC=CC=1)(C)SSC1=CC=CC=N1 XSWBNALIBMCQED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FXYPGCIGRDZWNR-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 3-[[3-(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)oxy-3-oxopropyl]disulfanyl]propanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCSSCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O FXYPGCIGRDZWNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CHWZKWYQUNKCPC-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 4-[[(2-iodoacetyl)amino]methyl]cyclohexane-1-carboxylate Chemical compound C1CC(CNC(=O)CI)CCC1C(=O)ON1C(=O)CCC1=O CHWZKWYQUNKCPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LWAVGNJLLQSNNN-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 4-azidobenzoate Chemical compound C1=CC(N=[N+]=[N-])=CC=C1C(=O)ON1C(=O)CCC1=O LWAVGNJLLQSNNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FUOJEDZPVVDXHI-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 5-azido-2-nitrobenzoate Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C(N=[N+]=[N-])C=C1C(=O)ON1C(=O)CCC1=O FUOJEDZPVVDXHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GRNALJOZUYFKSS-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 6-[(2-iodoacetyl)amino]hexanoate Chemical compound ICC(=O)NCCCCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O GRNALJOZUYFKSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FDKWRPBBCBCIGA-REOHCLBHSA-N (2r)-2-azaniumyl-3-$l^{1}-selanylpropanoate Chemical compound [Se]C[C@H](N)C(O)=O FDKWRPBBCBCIGA-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- AGGWFDNPHKLBBV-YUMQZZPRSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-amino-3-methylbutanoyl]amino]-5-(carbamoylamino)pentanoic acid Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=O AGGWFDNPHKLBBV-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- YYTDJPUFAVPHQA-VKHMYHEASA-N (2s)-2-amino-3-(2,3,4,5,6-pentafluorophenyl)propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=C(F)C(F)=C(F)C(F)=C1F YYTDJPUFAVPHQA-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- PEMUHKUIQHFMTH-QMMMGPOBSA-N (2s)-2-amino-3-(4-bromophenyl)propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(Br)C=C1 PEMUHKUIQHFMTH-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- JSXMFBNJRFXRCX-NSHDSACASA-N (2s)-2-amino-3-(4-prop-2-ynoxyphenyl)propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(OCC#C)C=C1 JSXMFBNJRFXRCX-NSHDSACASA-N 0.000 description 1
- BJOQKIKXKGJLIJ-NSHDSACASA-N (2s)-2-amino-3-(4-prop-2-ynylphenyl)propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(CC#C)C=C1 BJOQKIKXKGJLIJ-NSHDSACASA-N 0.000 description 1
- NEMHIKRLROONTL-QMMMGPOBSA-N (2s)-2-azaniumyl-3-(4-azidophenyl)propanoate Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(N=[N+]=[N-])C=C1 NEMHIKRLROONTL-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- IBCKYXVMEMSMQM-JTQLQIEISA-N (2s)-3-(3-acetylphenyl)-2-aminopropanoic acid Chemical compound CC(=O)C1=CC=CC(C[C@H](N)C(O)=O)=C1 IBCKYXVMEMSMQM-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- ZXSBHXZKWRIEIA-JTQLQIEISA-N (2s)-3-(4-acetylphenyl)-2-azaniumylpropanoate Chemical compound CC(=O)C1=CC=C(C[C@H](N)C(O)=O)C=C1 ZXSBHXZKWRIEIA-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- SSOORFWOBGFTHL-OTEJMHTDSA-N (4S)-5-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-6-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[2-[(2S)-2-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-6-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S,3S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-6-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-5-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-6-amino-1-[[(2S)-6-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-5-amino-1-[[(2S)-5-carbamimidamido-1-[[(2S)-5-carbamimidamido-1-[[(1S)-4-carbamimidamido-1-carboxybutyl]amino]-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxopentan-2-yl]amino]-1,5-dioxopentan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1,5-dioxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]carbamoyl]pyrrolidin-1-yl]-2-oxoethyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-3-(1H-imidazol-4-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2,6-diaminohexanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]propanoyl]amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)CNC(=O)[C@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](Cc1ccccc1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](Cc1ccccc1)NC(=O)[C@H](Cc1c[nH]cn1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CCCCN)C(C)C)C(C)C)C(C)C)C(C)C)C(C)C)C(C)C)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O SSOORFWOBGFTHL-OTEJMHTDSA-N 0.000 description 1
- DIYPCWKHSODVAP-UHFFFAOYSA-N 1-[3-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)benzoyl]oxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonic acid Chemical compound O=C1C(S(=O)(=O)O)CC(=O)N1OC(=O)C1=CC=CC(N2C(C=CC2=O)=O)=C1 DIYPCWKHSODVAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VOTJUWBJENROFB-UHFFFAOYSA-N 1-[3-[[3-(2,5-dioxo-3-sulfopyrrolidin-1-yl)oxy-3-oxopropyl]disulfanyl]propanoyloxy]-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonic acid Chemical compound O=C1C(S(=O)(=O)O)CC(=O)N1OC(=O)CCSSCCC(=O)ON1C(=O)C(S(O)(=O)=O)CC1=O VOTJUWBJENROFB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KHAWDEWNXJIVCJ-UHFFFAOYSA-N 1-fluoro-4-(4-fluoro-3-nitrophenyl)sulfonyl-2-nitrobenzene Chemical compound C1=C(F)C([N+](=O)[O-])=CC(S(=O)(=O)C=2C=C(C(F)=CC=2)[N+]([O-])=O)=C1 KHAWDEWNXJIVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GNENVASJJIUNER-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-tricyclohexyloxy-1,3,5,2,4,6-trioxatriborinane Chemical compound C1CCCCC1OB1OB(OC2CCCCC2)OB(OC2CCCCC2)O1 GNENVASJJIUNER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASNTZYQMIUCEBV-UHFFFAOYSA-N 2,5-dioxo-1-[6-[3-(pyridin-2-yldisulfanyl)propanoylamino]hexanoyloxy]pyrrolidine-3-sulfonic acid Chemical compound O=C1C(S(=O)(=O)O)CC(=O)N1OC(=O)CCCCCNC(=O)CCSSC1=CC=CC=N1 ASNTZYQMIUCEBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YYDMSFVTLYEPOH-UHFFFAOYSA-N 2,5-dioxo-1-propanoyloxypyrrolidine-3-sulfonic acid Chemical compound CCC(=O)ON1C(=O)CC(S(O)(=O)=O)C1=O YYDMSFVTLYEPOH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UIIGHACVGDYAEQ-UHFFFAOYSA-N 2-(7-azido-4-methyl-2-oxochromen-3-yl)acetic acid Chemical compound C1=C(N=[N+]=[N-])C=CC2=C1OC(=O)C(CC(O)=O)=C2C UIIGHACVGDYAEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SHKUUQIDMUMQQK-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(oxiran-2-ylmethoxy)butoxymethyl]oxirane Chemical compound C1OC1COCCCCOCC1CO1 SHKUUQIDMUMQQK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QYRPOQGYNAOMIK-UHFFFAOYSA-N 2-amino-8-oxooctanoic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CCCCCC=O QYRPOQGYNAOMIK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YHJZWYNRTYKWEC-UHFFFAOYSA-N 2-diazonio-3,3,3-trifluoro-1-(4-nitrophenoxy)prop-1-en-1-olate Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C(OC(=O)C(=[N+]=[N-])C(F)(F)F)C=C1 YHJZWYNRTYKWEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RLFPCLMBTQOMLI-UHFFFAOYSA-N 2-iodo-n-[2-[(2-iodoacetyl)amino]ethyl]acetamide Chemical compound ICC(=O)NCCNC(=O)CI RLFPCLMBTQOMLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YVYRKTXQJJKRJG-UHFFFAOYSA-N 2-iodo-n-[6-[(2-iodoacetyl)amino]hexyl]acetamide Chemical compound ICC(=O)NCCCCCCNC(=O)CI YVYRKTXQJJKRJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XXUNIGZDNWWYED-UHFFFAOYSA-N 2-methylbenzamide Chemical compound CC1=CC=CC=C1C(N)=O XXUNIGZDNWWYED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NUIURNJTPRWVAP-UHFFFAOYSA-N 3,3'-Dimethylbenzidine Chemical compound C1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=CC=2)=C1 NUIURNJTPRWVAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JMUAKWNHKQBPGJ-UHFFFAOYSA-N 3-(pyridin-2-yldisulfanyl)-n-[4-[3-(pyridin-2-yldisulfanyl)propanoylamino]butyl]propanamide Chemical compound C=1C=CC=NC=1SSCCC(=O)NCCCCNC(=O)CCSSC1=CC=CC=N1 JMUAKWNHKQBPGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LKKMLIBUAXYLOY-UHFFFAOYSA-N 3-Amino-1-methyl-5H-pyrido[4,3-b]indole Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C2=C1C=C(N)N=C2C LKKMLIBUAXYLOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JZRBSTONIYRNRI-VIFPVBQESA-N 3-methylphenylalanine Chemical compound CC1=CC=CC(C[C@H](N)C(O)=O)=C1 JZRBSTONIYRNRI-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- IRZQDMYEJPNDEN-UHFFFAOYSA-N 3-phenyl-2-aminobutanoic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C)C1=CC=CC=C1 IRZQDMYEJPNDEN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CMUHFUGDYMFHEI-QMMMGPOBSA-N 4-amino-L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(N)C=C1 CMUHFUGDYMFHEI-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- PZNQZSRPDOEBMS-QMMMGPOBSA-N 4-iodo-L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(I)C=C1 PZNQZSRPDOEBMS-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 102100030310 5,6-dihydroxyindole-2-carboxylic acid oxidase Human genes 0.000 description 1
- 101710163881 5,6-dihydroxyindole-2-carboxylic acid oxidase Proteins 0.000 description 1
- 102000000872 ATM Human genes 0.000 description 1
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 101710146120 Alpha-(1,6)-fucosyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 229920000856 Amylose Polymers 0.000 description 1
- 102100021631 B-cell lymphoma 6 protein Human genes 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 229940122738 CD3 agonist Drugs 0.000 description 1
- 108010029697 CD40 Ligand Proteins 0.000 description 1
- 102100032937 CD40 ligand Human genes 0.000 description 1
- 102100025570 Cancer/testis antigen 1 Human genes 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 241001227713 Chiron Species 0.000 description 1
- 108090001069 Chymopapain Proteins 0.000 description 1
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 description 1
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 1
- 102000036364 Cullin Ring E3 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108091007045 Cullin Ring E3 Ligases Proteins 0.000 description 1
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FDKWRPBBCBCIGA-UWTATZPHSA-N D-Selenocysteine Natural products [Se]C[C@@H](N)C(O)=O FDKWRPBBCBCIGA-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- 102400001059 Dentin sialoprotein Human genes 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 108700023372 Glycosyltransferases Proteins 0.000 description 1
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 1
- 208000021519 Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 101000819490 Homo sapiens Alpha-(1,6)-fucosyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 101000971234 Homo sapiens B-cell lymphoma 6 protein Proteins 0.000 description 1
- 101100005713 Homo sapiens CD4 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000856237 Homo sapiens Cancer/testis antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000987586 Homo sapiens Eosinophil peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 101000920686 Homo sapiens Erythropoietin Proteins 0.000 description 1
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 description 1
- 101000578784 Homo sapiens Melanoma antigen recognized by T-cells 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000615488 Homo sapiens Methyl-CpG-binding domain protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000622137 Homo sapiens P-selectin Proteins 0.000 description 1
- 101000872170 Homo sapiens Polycomb complex protein BMI-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 1
- 101000946860 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD3 epsilon chain Proteins 0.000 description 1
- 101000679851 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000851007 Homo sapiens Vascular endothelial growth factor receptor 2 Proteins 0.000 description 1
- NRSPOJRMDVHRCX-UHFFFAOYSA-N IC=1C(C(C=CC1C)(C)S(=O)(=O)O)I Chemical compound IC=1C(C(C=CC1C)(C)S(=O)(=O)O)I NRSPOJRMDVHRCX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010009817 Immunoglobulin Constant Regions Proteins 0.000 description 1
- 102000009786 Immunoglobulin Constant Regions Human genes 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 102000018682 Interleukin Receptor Common gamma Subunit Human genes 0.000 description 1
- 108010066719 Interleukin Receptor Common gamma Subunit Proteins 0.000 description 1
- 108010038453 Interleukin-2 Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000010789 Interleukin-2 Receptors Human genes 0.000 description 1
- 101710190483 Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 1
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 1
- 102000000743 Interleukin-5 Human genes 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- WTDRDQBEARUVNC-LURJTMIESA-N L-DOPA Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 WTDRDQBEARUVNC-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- WTDRDQBEARUVNC-UHFFFAOYSA-N L-Dopa Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 WTDRDQBEARUVNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N L-Phenylalanyl-L-lysin Natural products NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 102100031413 L-dopachrome tautomerase Human genes 0.000 description 1
- 101710093778 L-dopachrome tautomerase Proteins 0.000 description 1
- 239000002146 L01XE16 - Crizotinib Substances 0.000 description 1
- 206010050017 Lung cancer metastatic Diseases 0.000 description 1
- 208000019693 Lung disease Diseases 0.000 description 1
- 206010052178 Lymphocytic lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 102100028389 Melanoma antigen recognized by T-cells 1 Human genes 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 102100021299 Methyl-CpG-binding domain protein 2 Human genes 0.000 description 1
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 1
- 101100091501 Mus musculus Ros1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100153537 Mus musculus Tnfrsf4 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 1
- KFDFRWUYFLUTBO-JEDNCBNOSA-N N[C@@H](CCCCN)C(=O)O.CC=1N=NN=NC1 Chemical compound N[C@@H](CCCCN)C(=O)O.CC=1N=NN=NC1 KFDFRWUYFLUTBO-JEDNCBNOSA-N 0.000 description 1
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 1
- GEYBMYRBIABFTA-VIFPVBQESA-N O-methyl-L-tyrosine Chemical compound COC1=CC=C(C[C@H](N)C(O)=O)C=C1 GEYBMYRBIABFTA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 1
- 102220567167 Ornithine decarboxylase antizyme 1_R67A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 102100023472 P-selectin Human genes 0.000 description 1
- 108010016731 PPAR gamma Proteins 0.000 description 1
- 102100024894 PR domain zinc finger protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 208000000407 Pancreatic Cyst Diseases 0.000 description 1
- 108010067372 Pancreatic elastase Proteins 0.000 description 1
- 102000016387 Pancreatic elastase Human genes 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 102100028467 Perforin-1 Human genes 0.000 description 1
- KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N Perforine Natural products COC1=C2CCC(O)C(CCC(C)(C)O)(OC)C2=NC2=C1C=CO2 KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003728 Peroxisome Proliferator-Activated Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108090000029 Peroxisome Proliferator-Activated Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102100038825 Peroxisome proliferator-activated receptor gamma Human genes 0.000 description 1
- FADYJNXDPBKVCA-STQMWFEESA-N Phe-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 FADYJNXDPBKVCA-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- 229920001389 Poly(hydroxyalkylmethacrylamide) Polymers 0.000 description 1
- 102100033566 Polycomb complex protein BMI-1 Human genes 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 108010009975 Positive Regulatory Domain I-Binding Factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010071690 Prealbumin Proteins 0.000 description 1
- 108010059712 Pronase Proteins 0.000 description 1
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- YBFSDUDNVCKYTH-UHFFFAOYSA-N S(=O)(=O)(O)C(C(C(=O)O)(NC(C=1C(O)=CC(=CC=1)N=[N+]=[N-])=O)N1C(CCC1=O)=O)CCC Chemical compound S(=O)(=O)(O)C(C(C(=O)O)(NC(C=1C(O)=CC(=CC=1)N=[N+]=[N-])=O)N1C(CCC1=O)=O)CCC YBFSDUDNVCKYTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 101710173693 Short transient receptor potential channel 1 Proteins 0.000 description 1
- 101710173694 Short transient receptor potential channel 2 Proteins 0.000 description 1
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102100035794 T-cell surface glycoprotein CD3 epsilon chain Human genes 0.000 description 1
- ISWQCIVKKSOKNN-UHFFFAOYSA-L Tiron Chemical compound [Na+].[Na+].OC1=CC(S([O-])(=O)=O)=CC(S([O-])(=O)=O)=C1O ISWQCIVKKSOKNN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102000009190 Transthyretin Human genes 0.000 description 1
- LVTKHGUGBGNBPL-UHFFFAOYSA-N Trp-P-1 Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C2=C1C(C)=C(N)N=C2C LVTKHGUGBGNBPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 101710162629 Trypsin inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 229940122618 Trypsin inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 description 1
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 description 1
- HSRXSKHRSXRCFC-WDSKDSINSA-N Val-Ala Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O HSRXSKHRSXRCFC-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- JKHXYJKMNSSFFL-IUCAKERBSA-N Val-Lys Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN JKHXYJKMNSSFFL-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- 102100033177 Vascular endothelial growth factor receptor 2 Human genes 0.000 description 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 239000003070 absorption delaying agent Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 1
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 1
- IBVAQQYNSHJXBV-UHFFFAOYSA-N adipic acid dihydrazide Chemical compound NNC(=O)CCCCC(=O)NN IBVAQQYNSHJXBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006536 aerobic glycolysis Effects 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 150000001336 alkenes Chemical class 0.000 description 1
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000611 antibody drug conjugate Substances 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 150000001502 aryl halides Chemical class 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- HFACYLZERDEVSX-UHFFFAOYSA-N benzidine Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1C1=CC=C(N)C=C1 HFACYLZERDEVSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002715 bioenergetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- PFYXSUNOLOJMDX-UHFFFAOYSA-N bis(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) carbonate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)ON1C(=O)CCC1=O PFYXSUNOLOJMDX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 125000003917 carbamoyl group Chemical group [H]N([H])C(*)=O 0.000 description 1
- XEVRDFDBXJMZFG-UHFFFAOYSA-N carbonyl dihydrazine Chemical compound NNC(=O)NN XEVRDFDBXJMZFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 108010071626 caseinase Proteins 0.000 description 1
- 238000000423 cell based assay Methods 0.000 description 1
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000003570 cell viability assay Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 229960001602 ceritinib Drugs 0.000 description 1
- WRXDGGCKOUEOPW-UHFFFAOYSA-N ceritinib Chemical compound CC=1C=C(NC=2N=C(NC=3C(=CC=CC=3)NS(=O)(=O)C(C)C)C(Cl)=CN=2)C(OC(C)C)=CC=1C1CCNCC1 WRXDGGCKOUEOPW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000038 chest Anatomy 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 229960002976 chymopapain Drugs 0.000 description 1
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 1
- 230000003081 coactivator Effects 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 1
- 230000001010 compromised effect Effects 0.000 description 1
- 230000003750 conditioning effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 229960005061 crizotinib Drugs 0.000 description 1
- KTEIFNKAUNYNJU-GFCCVEGCSA-N crizotinib Chemical compound O([C@H](C)C=1C(=C(F)C=CC=1Cl)Cl)C(C(=NC=1)N)=CC=1C(=C1)C=NN1C1CCNCC1 KTEIFNKAUNYNJU-GFCCVEGCSA-N 0.000 description 1
- NZNMSOFKMUBTKW-UHFFFAOYSA-N cyclohexanecarboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1CCCCC1 NZNMSOFKMUBTKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002726 cyst fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000006240 deamidation Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 229950006137 dexfosfoserine Drugs 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- LSXWFXONGKSEMY-UHFFFAOYSA-N di-tert-butyl peroxide Chemical compound CC(C)(C)OOC(C)(C)C LSXWFXONGKSEMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012969 di-tertiary-butyl peroxide Substances 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000010339 dilation Effects 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 108010007093 dispase Proteins 0.000 description 1
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 229940126534 drug product Drugs 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000006862 enzymatic digestion Effects 0.000 description 1
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 230000037433 frameshift Effects 0.000 description 1
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 1
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 1
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 1
- 230000006237 glutamylation Effects 0.000 description 1
- 230000002414 glycolytic effect Effects 0.000 description 1
- 125000003147 glycosyl group Chemical group 0.000 description 1
- 102000045442 glycosyltransferase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108700014210 glycosyltransferase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000019691 hematopoietic and lymphoid cell neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000009033 hematopoietic malignancy Effects 0.000 description 1
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 1
- 125000003104 hexanoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000050320 human TNFRSF4 Human genes 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011221 initial treatment Methods 0.000 description 1
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 229940028885 interleukin-4 Drugs 0.000 description 1
- 229940100994 interleukin-7 Drugs 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 230000004068 intracellular signaling Effects 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000004324 lymphatic system Anatomy 0.000 description 1
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000002826 magnetic-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 125000005439 maleimidyl group Chemical group C1(C=CC(N1*)=O)=O 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 208000037819 metastatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000011575 metastatic malignant neoplasm Diseases 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 1
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 1
- MBAXWTVHCRPVFW-UHFFFAOYSA-N methyl 3-[(3-imino-3-methoxypropyl)disulfanyl]propanimidate Chemical compound COC(=N)CCSSCCC(=N)OC MBAXWTVHCRPVFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000006540 mitochondrial respiration Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- ODTZGFFHYPHJNS-UHFFFAOYSA-N n-(4-benzoylphenyl)-2-iodoacetamide Chemical compound C1=CC(NC(=O)CI)=CC=C1C(=O)C1=CC=CC=C1 ODTZGFFHYPHJNS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- 210000000581 natural killer T-cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- JRZJOMJEPLMPRA-UHFFFAOYSA-N olefin Natural products CCCCCCCC=C JRZJOMJEPLMPRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 229950002610 otelixizumab Drugs 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000006353 oxyethylene group Chemical group 0.000 description 1
- 210000002741 palatine tonsil Anatomy 0.000 description 1
- 229960000402 palivizumab Drugs 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- TVIDEEHSOPHZBR-AWEZNQCLSA-N para-(benzoyl)-phenylalanine Chemical compound C1=CC(C[C@H](N)C(O)=O)=CC=C1C(=O)C1=CC=CC=C1 TVIDEEHSOPHZBR-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 1
- 239000013610 patient sample Substances 0.000 description 1
- 229930192851 perforin Natural products 0.000 description 1
- 210000004976 peripheral blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- DCWXELXMIBXGTH-QMMMGPOBSA-N phosphonotyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(OP(O)(O)=O)C=C1 DCWXELXMIBXGTH-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 230000004983 pleiotropic effect Effects 0.000 description 1
- 229920000765 poly(2-oxazolines) Polymers 0.000 description 1
- 229920001390 poly(hydroxyalkylmethacrylate) Polymers 0.000 description 1
- 229920001583 poly(oxyethylated polyols) Polymers 0.000 description 1
- 229920002627 poly(phosphazenes) Polymers 0.000 description 1
- 229920000768 polyamine Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- QLNJFJADRCOGBJ-UHFFFAOYSA-N propionamide Chemical compound CCC(N)=O QLNJFJADRCOGBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940080818 propionamide Drugs 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 1
- 108020001580 protein domains Proteins 0.000 description 1
- 238000002708 random mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 229940044551 receptor antagonist Drugs 0.000 description 1
- 239000002464 receptor antagonist Substances 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000011519 second-line treatment Methods 0.000 description 1
- 238000010187 selection method Methods 0.000 description 1
- 229940055619 selenocysteine Drugs 0.000 description 1
- ZKZBPNGNEQAJSX-UHFFFAOYSA-N selenocysteine Natural products [SeH]CC(N)C(O)=O ZKZBPNGNEQAJSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000016491 selenocysteine Nutrition 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 102000034285 signal transducing proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091006024 signal transducing proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035025 signaling receptors Human genes 0.000 description 1
- 108091005475 signaling receptors Proteins 0.000 description 1
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 1
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 230000000391 smoking effect Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012289 standard assay Methods 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 description 1
- TYFQFVWCELRYAO-UHFFFAOYSA-L suberate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCCCCCC([O-])=O TYFQFVWCELRYAO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229950010127 teplizumab Drugs 0.000 description 1
- 150000001467 thiazolidinediones Chemical class 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000009258 tissue cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 229960001322 trypsin Drugs 0.000 description 1
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229940121358 tyrosine kinase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000005483 tyrosine kinase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 108010073969 valyllysine Proteins 0.000 description 1
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 1
- JPZXHKDZASGCLU-LBPRGKRZSA-N β-(2-naphthyl)-alanine Chemical compound C1=CC=CC2=CC(C[C@H](N)C(O)=O)=CC=C21 JPZXHKDZASGCLU-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/66—Phosphorus compounds
- A61K31/664—Amides of phosphorus acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/13—Tumour cells, irrespective of tissue of origin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/20—Interleukins [IL]
- A61K38/2013—IL-2
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/462—Cellular immunotherapy characterized by the effect or the function of the cells
- A61K39/4622—Antigen presenting cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
- A61K39/4633—Antibodies or T cell engagers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
- A61K39/4635—Cytokines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0635—B lymphocytes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
- C12N5/0638—Cytotoxic T lymphocytes [CTL] or lymphokine activated killer cells [LAK]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0646—Natural killers cells [NK], NKT cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5158—Antigen-pulsed cells, e.g. T-cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/80—Vaccine for a specifically defined cancer
- A61K2039/86—Lung
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
- A61K2239/55—Lung
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/23—Interleukins [IL]
- C12N2501/2302—Interleukin-2 (IL-2)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/50—Cell markers; Cell surface determinants
- C12N2501/515—CD3, T-cell receptor complex
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/50—Cell markers; Cell surface determinants
- C12N2501/599—Cell markers; Cell surface determinants with CD designations not provided for elsewhere
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2502/00—Coculture with; Conditioned medium produced by
- C12N2502/11—Coculture with; Conditioned medium produced by blood or immune system cells
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Virology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
本発明は、非小細胞肺癌(NSCLC)の治療のための治療有効性が増加した治療的TIL集団を調製するために、TILを調製するための改善された及び/または短縮されたプロセス及び方法を提供し、該NSCLCは、抗PD-1抗体及び/または抗PD-L1抗体及び/またはVEGF阻害剤による治療に対して不応性であるか、または該NSCLCは、所定の腫瘍割合スコア(TPS)を有する。【選択図】なし
Description
関連出願の相互参照
本出願は、2020年10月6日に出願された米国仮特許第63/088,282号、2020年12月17日に出願された米国仮特許第63/127,027号、及び2021年2月5日に出願された米国仮特許第63/146,402号の優先権を主張するものであり、これらのすべては参照によりそれら全体が本明細書に組み込まれる。
本出願は、2020年10月6日に出願された米国仮特許第63/088,282号、2020年12月17日に出願された米国仮特許第63/127,027号、及び2021年2月5日に出願された米国仮特許第63/146,402号の優先権を主張するものであり、これらのすべては参照によりそれら全体が本明細書に組み込まれる。
局所進行性または転移性非小細胞肺癌(NSCLC)患者の新たな治療選択肢に対する満たされていない重要なニーズが存在し、これらの患者は、新たに診断されたNSCLC患者のおよそ70%を占める(Molina JR,Yang P,Cassivi SD,Schild SE,Adjei AA.Mayo Clin Proc.2008;83(5):584-94)。肺癌は、世界のがん死亡の主な原因であり、2015年にはおよそ170万人の死亡が報告されている。肺癌による死亡のうち、>80%は、非小細胞肺癌(NSCLC)に起因していた(21)。2020年には、米国で肺癌及び気管支癌に起因する推定228,820人の新規症例及び135,720人の死亡が推定される(Siegel RL,2015.CA Cancer J Clin.2015;65(1):5-29)。したがって、NSCLCの治療及び転帰に革命をもたらしたチェックポイント阻害剤(CPI)の承認にもかかわらず、NSCLCには満たされていない重要な医療ニーズが残っている。
全体として、男性及び女性において、喫煙状況に関係なく肺癌を発症する生涯リスクは、それぞれ、およそ14分の1及び17分の1である。しかしながら、肺癌を発症するリスクは、非喫煙者に対して喫煙者でははるかに高く、例えば、喫煙する男性は、がんを発症する可能性が23倍高く、同様に、喫煙する女性は、喫煙しない女性よりも、肺癌を発症する可能性が13倍高い(American Lung Association-Lung cancer fact sheet 2017[American Lung Association-Lung cancer fact sheet]、ワールドワイドウェブlung.org/lung-health-and-diseases/lung-disease-lookup/lung-cancer/resource-library/lung-cancer-fact-sheet.htmlから入手可能)。
チェックポイント阻害剤に先立って、白金ダブレット化学療法が治癒不能なNSCLC患者の初期治療に利用され(Schiller J.H.et al.2002 N Engl J Med 346(2):92-8.)、耐久性が限られた客観的奏効率(ORR)は、20%~30%であった。ペムブロリズマブは、単独または細胞傷害性療法と組み合わせて治療に革命をもたらし、より高い奏効率をもたらし、より耐久性があることも証明された(Gandhi Leena et al.2018N Engl J Med378(22):2078-2092、Paz-Ares L.et al.2018N Engl J Med379(21):2040-2051、Viteri S.et al.2020Transl Lung Cancer Res9(3):828-832、Pacheco J.M.2020Transl Lung Cancer Res 9(1):148-153、Mok T.S.K.et al.2019Lancet393(10183):1819-1830、Nosaki K.et al.2019Lung Cancer135:188-195、Morgensztern D.2019J Thorac Dis11(Suppl15):S1963-S1965、Reck M.et al.2016N Engl J Med375(19):1823-1833)。他のCPIは、NSCLCの第一選択設定において化学療法と組み合わせたORR及び耐久性の改善を実証している(Socinski MA et al 2018 New Engl J Med 378:2288-301)。これらの印象的な結果にもかかわらず、完全な反応はほとんどなく、ほぼすべての患者が反応しないか進行しているため、その後の治療が必要である。
同定されたドライバー変異を有するNSCLC患者の場合、好ましい選択肢は、関連する変異(例えば、表皮成長因子受容体[EGFR]変異のためのオシメルチニブ、ALK変異のためのセリチニブ、またはROS-1変異のためのクリゾチニブ)に向けられた標的TKIによる治療である。腫瘍がPD-L1を発現しているNSCLCの以前に治療されていない患者の場合、利用可能な治療選択肢には、ペムブロリズマブ単独療法(PD-L1発現の腫瘍割合スコア(TPS)が少なくとも50%の患者にのみ一般的に使用される)または化学療法との併用のペムブロリズマブが含まれる。NSCLC及びPD-L1発現が<50%の患者の場合、好ましい選択肢は、ペメトレキセド、カルボプラチンまたはシスプラチン、及びペムブロリズマブの組み合わせである。PD-L1に対するTPSが<1%であり、アクショナブルな(actionable)変異がない患者には、実行可能な治療選択肢がなく、PD-1またはPD-L1 CPIの候補ではない。白金ベースのダブレット化学療法、ベバシズマブ、及びアテゾリズマブの併用は、ニボルマブ、イピリムマブ、及び細胞傷害性療法の併用と同様に、NSCLC患者における別の潜在的な治療選択肢である(Hellmann et al.2019 New Engl J Med 381:2020-31)。
チェックポイント阻害剤療法+化学療法で患者の疾患が進行すると、治療選択肢は限られ、有効性が低く、客観的奏効率は約10%であり、無増悪生存期間(PFS)が短く、毒性も高い。最も一般的に使用される薬剤は、ドセタキソールであるが、VEGF阻害剤と組み合わせた他の単剤細胞傷害剤または細胞傷害剤が用いられることがあるが、いずれも同様の、不良な転帰を有する。故に、チェックポイント阻害剤療法+化学療法後の第2の選択治療において、より良い治療選択肢のための緊急の必要性が存在する。
さらに、現在のTIL製造及び治療プロセスは、長さ、コスト、無菌性の懸念、及び本明細書に記載される他の要因によって制限され、したがって、抗PD-1及び/または抗PD-L1及び/またはVEGF阻害剤治療に対して不応性である患者を治療する可能性が著しく制限されている。実行可能な治療選択肢がほとんどまたはまったく残っていない患者を治療する際に使用するのに適したTIL製造プロセス及びかかるプロセスに基づく治療法を提供することが緊急に必要である。本発明は、抗PD-1、抗PD-L1、及び/またはVEGF阻害剤(VEGF-A阻害剤を含む)治療に対して不応性である非小細胞肺癌(NSCLC)患者の治療に用いることができるTILの生成に使用するための短縮製造プロセスを提供することによって、この必要性を満たす。
本発明は、抗PD-1治療に対して不応性である非小細胞肺癌(NSCLC)患者の治療に使用するために、TILを拡張し、治療的TIL集団を産生するための改善及び/または短縮された方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、非小細胞肺癌(NSCLC)の治療を必要とする対象または患者に腫瘍浸潤リンパ球(TIL)の集団を投与することによって、NSCLCを治療する方法を提供し、対象または患者は、
i.<1%のPD-L1の所定の腫瘍割合スコア(TPS)、
ii.1%~49%のPD-L1のTPSスコア、または
iii.1つ以上のドライバー変異の所定の非存在のうちの少なくとも1つを有する。
i.<1%のPD-L1の所定の腫瘍割合スコア(TPS)、
ii.1%~49%のPD-L1のTPSスコア、または
iii.1つ以上のドライバー変異の所定の非存在のうちの少なくとも1つを有する。
いくつかの実施形態では、本発明は、非小細胞肺癌(NSCLC)の治療を必要とする対象または患者に腫瘍浸潤リンパ球(TIL)の集団を投与することによって、NSCLCを治療する方法を提供し、対象または患者は、
i.<1%のPD-L1の所定の腫瘍割合スコア(TPS)、
ii.1%~49%のPD-L1のTPSスコア、または
iii.1つ以上のドライバー変異の所定の非存在のうちの少なくとも1つを有し、
方法は、
(a)対象から取得された腫瘍試料を複数の腫瘍断片に処理することによって、対象または患者から切除された腫瘍から第1のTIL集団を取得及び/または受容することと、
(b)第1のTIL集団を閉鎖系に付加することと、
(c)IL-2を含む細胞培養培地中で第1のTIL集団を培養することによって第1の拡張を行い、第2のTIL集団を産生することであって、第1の拡張が、第1のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、第1の拡張が、約3~14日間行われて、第2のTIL集団を取得し、ステップ(b)からステップ(c)への移行が、系を開くことなく起こる、第2のTIL集団を産生することと、
(d)第2のTIL集団の細胞培養培地を追加のIL-2、OKT-3、及び抗原提示細胞(APC)で補充することによって第2の拡張を行い、第3のTIL集団を産生することであって、第2の拡張が、約7~14日間行われて、第3のTIL集団を取得し、第3のTIL集団が、治療的TIL集団であり、第2の拡張が、第2のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、ステップ(c)からステップ(d)への移行が、系を開くことなく起こる、第3のTIL集団を産生することと、
(e)ステップ(d)から取得された治療的TIL集団を採取することであって、ステップ(d)からステップ(e)への移行が、系を開くことなく起こる、採取することと、
(f)ステップ(e)からの採取されたTIL集団を注入バッグに移すことであって、ステップ(e)から(f)への移行が、系を開くことなく起こる、移すことと、
(g)凍結保存プロセスを使用して、ステップ(f)から採取されたTIL集団を含む注入バッグを凍結保存することと、
(h)治療上有効な投与量の第3のTIL集団を、ステップ(g)の注入バッグから対象または患者に投与することと、を含む。
i.<1%のPD-L1の所定の腫瘍割合スコア(TPS)、
ii.1%~49%のPD-L1のTPSスコア、または
iii.1つ以上のドライバー変異の所定の非存在のうちの少なくとも1つを有し、
方法は、
(a)対象から取得された腫瘍試料を複数の腫瘍断片に処理することによって、対象または患者から切除された腫瘍から第1のTIL集団を取得及び/または受容することと、
(b)第1のTIL集団を閉鎖系に付加することと、
(c)IL-2を含む細胞培養培地中で第1のTIL集団を培養することによって第1の拡張を行い、第2のTIL集団を産生することであって、第1の拡張が、第1のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、第1の拡張が、約3~14日間行われて、第2のTIL集団を取得し、ステップ(b)からステップ(c)への移行が、系を開くことなく起こる、第2のTIL集団を産生することと、
(d)第2のTIL集団の細胞培養培地を追加のIL-2、OKT-3、及び抗原提示細胞(APC)で補充することによって第2の拡張を行い、第3のTIL集団を産生することであって、第2の拡張が、約7~14日間行われて、第3のTIL集団を取得し、第3のTIL集団が、治療的TIL集団であり、第2の拡張が、第2のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、ステップ(c)からステップ(d)への移行が、系を開くことなく起こる、第3のTIL集団を産生することと、
(e)ステップ(d)から取得された治療的TIL集団を採取することであって、ステップ(d)からステップ(e)への移行が、系を開くことなく起こる、採取することと、
(f)ステップ(e)からの採取されたTIL集団を注入バッグに移すことであって、ステップ(e)から(f)への移行が、系を開くことなく起こる、移すことと、
(g)凍結保存プロセスを使用して、ステップ(f)から採取されたTIL集団を含む注入バッグを凍結保存することと、
(h)治療上有効な投与量の第3のTIL集団を、ステップ(g)の注入バッグから対象または患者に投与することと、を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、非小細胞肺癌(NSCLC)(NSCLCは、抗PD-1及び/または抗PD-L1抗体での治療に対して不応性または耐性である)の治療を必要とする対象または患者に腫瘍浸潤リンパ球(TIL)の集団を投与することによって、NSCLCを治療する方法を提供し、対象または患者は、
i.<1%のPD-L1の所定の腫瘍割合スコア(TPS)、
ii.1%~49%のPD-L1のTPSスコア、または
iii.1つ以上のドライバー変異の所定の非存在のうちの少なくとも1つを有し、
方法は、
(a)対象から取得された腫瘍試料を複数の腫瘍断片に処理することによって、対象から切除された腫瘍から第1のTIL集団を取得することと、
(b)腫瘍断片を閉鎖系に付加することと、
(c)IL-2を含む細胞培養培地中で第1のTIL集団を培養することによって第1の拡張を行い、第2のTIL集団を産生することであって、第1の拡張が、第1のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、第1の拡張が、約3~11日間行われて、第2のTIL集団を取得し、ステップ(b)からステップ(c)への移行が、系を開くことなく起こる、第2のTIL集団を産生することと、
(d)第2のTIL集団の細胞培養培地を追加のIL-2、OKT-3、及び抗原提示細胞(APC)で補充することによって第2の拡張を行い、第3のTIL集団を産生することであって、第2の拡張が、約7~11日間行われて、第3のTIL集団を取得し、第2の拡張が、第2のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、ステップ(c)からステップ(d)への移行が、系を開くことなく起こる、第3のTIL集団を産生することと、
(e)ステップ(d)から取得された第3のTIL集団を採取することであって、ステップ(d)からステップ(e)への移行が、系を開くことなく起こる、採取することと、
(f)ステップ(e)から採取された第3のTIL集団を注入バッグに移すことであって、ステップ(e)から(f)への移行が、系を開くことなく起こる、移すことと、
(g)凍結保存プロセスを使用して、ステップ(f)から採取されたTIL集団を含む注入バッグを凍結保存することと、
(h)治療上有効な投与量の第3のTIL集団を、ステップ(g)の注入バッグから対象に投与することと、を含む。
i.<1%のPD-L1の所定の腫瘍割合スコア(TPS)、
ii.1%~49%のPD-L1のTPSスコア、または
iii.1つ以上のドライバー変異の所定の非存在のうちの少なくとも1つを有し、
方法は、
(a)対象から取得された腫瘍試料を複数の腫瘍断片に処理することによって、対象から切除された腫瘍から第1のTIL集団を取得することと、
(b)腫瘍断片を閉鎖系に付加することと、
(c)IL-2を含む細胞培養培地中で第1のTIL集団を培養することによって第1の拡張を行い、第2のTIL集団を産生することであって、第1の拡張が、第1のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、第1の拡張が、約3~11日間行われて、第2のTIL集団を取得し、ステップ(b)からステップ(c)への移行が、系を開くことなく起こる、第2のTIL集団を産生することと、
(d)第2のTIL集団の細胞培養培地を追加のIL-2、OKT-3、及び抗原提示細胞(APC)で補充することによって第2の拡張を行い、第3のTIL集団を産生することであって、第2の拡張が、約7~11日間行われて、第3のTIL集団を取得し、第2の拡張が、第2のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、ステップ(c)からステップ(d)への移行が、系を開くことなく起こる、第3のTIL集団を産生することと、
(e)ステップ(d)から取得された第3のTIL集団を採取することであって、ステップ(d)からステップ(e)への移行が、系を開くことなく起こる、採取することと、
(f)ステップ(e)から採取された第3のTIL集団を注入バッグに移すことであって、ステップ(e)から(f)への移行が、系を開くことなく起こる、移すことと、
(g)凍結保存プロセスを使用して、ステップ(f)から採取されたTIL集団を含む注入バッグを凍結保存することと、
(h)治療上有効な投与量の第3のTIL集団を、ステップ(g)の注入バッグから対象に投与することと、を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、非小細胞肺癌(NSCLC)の治療を必要とする対象または患者に腫瘍浸潤リンパ球(TIL)の集団を投与することによって、NSCLCを治療する方法を提供し、対象または患者は、
i.<1%のPD-L1の所定の腫瘍割合スコア(TPS)、
ii.1%~49%のPD-L1のTPSスコア、または
iii.1つ以上のドライバー変異の所定の非存在のうちの少なくとも1つを有し、
方法は、
(a)外科的切除、針生検、コア生検、小生検、または対象もしくは患者のNSCLC腫瘍から腫瘍細胞とTIL細胞との混合物を含有する試料を取得するための他の手段から第1のTIL集団を取得及び/または受容することと、
(b)第1のTIL集団を閉鎖系に付加することと、
(c)IL-2を含む細胞培養培地中で第1のTIL集団を培養することによって第1の拡張を行い、第2のTIL集団を産生することであって、第1の拡張が、第1のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、第1の拡張が、約3~11日間行われて、第2のTIL集団を取得し、ステップ(b)からステップ(c)への移行が、系を開くことなく起こる、第2のTIL集団を産生することと、
(d)第2のTIL集団の細胞培養培地を追加のIL-2、OKT-3、及び抗原提示細胞(APC)で補充することによって第2の拡張を行い、第3のTIL集団を産生することであって、第2の拡張が、約7~11日間行われて、第3のTIL集団を取得し、第2の拡張が、第2のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、ステップ(c)からステップ(d)への移行が、系を開くことなく起こる、第3のTIL集団を産生することと、
(e)ステップ(d)から取得された第3のTIL集団を採取することであって、ステップ(d)からステップ(e)への移行が、系を開くことなく起こる、採取することと、
(f)ステップ(e)から採取された第3のTIL集団を注入バッグに移すことであって、ステップ(e)から(f)への移行が、系を開くことなく起こる、移すことと、
(g)凍結保存プロセスを使用して、ステップ(f)から採取されたTIL集団を含む注入バッグを凍結保存することと、
(h)治療上有効な投与量の第3のTIL集団を、ステップ(g)の注入バッグから対象または患者に投与することと、を含む。
i.<1%のPD-L1の所定の腫瘍割合スコア(TPS)、
ii.1%~49%のPD-L1のTPSスコア、または
iii.1つ以上のドライバー変異の所定の非存在のうちの少なくとも1つを有し、
方法は、
(a)外科的切除、針生検、コア生検、小生検、または対象もしくは患者のNSCLC腫瘍から腫瘍細胞とTIL細胞との混合物を含有する試料を取得するための他の手段から第1のTIL集団を取得及び/または受容することと、
(b)第1のTIL集団を閉鎖系に付加することと、
(c)IL-2を含む細胞培養培地中で第1のTIL集団を培養することによって第1の拡張を行い、第2のTIL集団を産生することであって、第1の拡張が、第1のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、第1の拡張が、約3~11日間行われて、第2のTIL集団を取得し、ステップ(b)からステップ(c)への移行が、系を開くことなく起こる、第2のTIL集団を産生することと、
(d)第2のTIL集団の細胞培養培地を追加のIL-2、OKT-3、及び抗原提示細胞(APC)で補充することによって第2の拡張を行い、第3のTIL集団を産生することであって、第2の拡張が、約7~11日間行われて、第3のTIL集団を取得し、第2の拡張が、第2のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、ステップ(c)からステップ(d)への移行が、系を開くことなく起こる、第3のTIL集団を産生することと、
(e)ステップ(d)から取得された第3のTIL集団を採取することであって、ステップ(d)からステップ(e)への移行が、系を開くことなく起こる、採取することと、
(f)ステップ(e)から採取された第3のTIL集団を注入バッグに移すことであって、ステップ(e)から(f)への移行が、系を開くことなく起こる、移すことと、
(g)凍結保存プロセスを使用して、ステップ(f)から採取されたTIL集団を含む注入バッグを凍結保存することと、
(h)治療上有効な投与量の第3のTIL集団を、ステップ(g)の注入バッグから対象または患者に投与することと、を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、非小細胞肺癌(NSCLC)の治療を必要とする対象または患者に腫瘍浸潤リンパ球(TIL)の集団を投与することによって、NSCLCを治療する方法を提供し、対象または患者は、
i.<1%のPD-L1の所定の腫瘍割合スコア(TPS)、
ii.1%~49%のPD-L1のTPSスコア、または
iii.1つ以上のドライバー変異の所定の非存在のうちの少なくとも1つを有し、
方法は、
(a)対象または患者からNSCLC腫瘍を切除することであって、腫瘍が、任意選択で、外科的切除、針生検、コア生検、小生検、またはNSCLC腫瘍から腫瘍細胞とTIL細胞との混合物を含有する試料を取得するための他の手段からの第1のTIL集団を含む、切除することと、
(b)腫瘍断片を閉鎖系に付加することと、
(c)IL-2を含む細胞培養培地中で第1のTIL集団を培養することによって第1の拡張を行い、第2のTIL集団を産生することであって、第1の拡張が、第1のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、第1の拡張が、約3~11日間行われて、第2のTIL集団を取得し、ステップ(b)からステップ(c)への移行が、系を開くことなく起こる、第2のTIL集団を産生することと、
(d)第2のTIL集団の細胞培養培地を追加のIL-2、OKT-3、及び抗原提示細胞(APC)で補充することによって第2の拡張を行い、第3のTIL集団を産生することであって、第2の拡張が、約7~11日間行われて、第3のTIL集団を取得し、第2の拡張が、第2のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、ステップ(c)からステップ(d)への移行が、系を開くことなく起こる、第3のTIL集団を産生することと、
(e)ステップ(d)から取得された第3のTIL集団を採取することであって、ステップ(d)からステップ(e)への移行が、系を開くことなく起こる、採取することと、
(f)ステップ(e)から採取された第3のTIL集団を注入バッグに移すことであって、ステップ(e)から(f)への移行が、系を開くことなく起こる、移すことと、
(g)凍結保存プロセスを使用して、ステップ(f)から採取されたTIL集団を含む注入バッグを凍結保存することと、
(h)治療上有効な投与量の第3のTIL集団を、ステップ(g)の注入バッグから対象に投与することと、を含む。
i.<1%のPD-L1の所定の腫瘍割合スコア(TPS)、
ii.1%~49%のPD-L1のTPSスコア、または
iii.1つ以上のドライバー変異の所定の非存在のうちの少なくとも1つを有し、
方法は、
(a)対象または患者からNSCLC腫瘍を切除することであって、腫瘍が、任意選択で、外科的切除、針生検、コア生検、小生検、またはNSCLC腫瘍から腫瘍細胞とTIL細胞との混合物を含有する試料を取得するための他の手段からの第1のTIL集団を含む、切除することと、
(b)腫瘍断片を閉鎖系に付加することと、
(c)IL-2を含む細胞培養培地中で第1のTIL集団を培養することによって第1の拡張を行い、第2のTIL集団を産生することであって、第1の拡張が、第1のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、第1の拡張が、約3~11日間行われて、第2のTIL集団を取得し、ステップ(b)からステップ(c)への移行が、系を開くことなく起こる、第2のTIL集団を産生することと、
(d)第2のTIL集団の細胞培養培地を追加のIL-2、OKT-3、及び抗原提示細胞(APC)で補充することによって第2の拡張を行い、第3のTIL集団を産生することであって、第2の拡張が、約7~11日間行われて、第3のTIL集団を取得し、第2の拡張が、第2のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、ステップ(c)からステップ(d)への移行が、系を開くことなく起こる、第3のTIL集団を産生することと、
(e)ステップ(d)から取得された第3のTIL集団を採取することであって、ステップ(d)からステップ(e)への移行が、系を開くことなく起こる、採取することと、
(f)ステップ(e)から採取された第3のTIL集団を注入バッグに移すことであって、ステップ(e)から(f)への移行が、系を開くことなく起こる、移すことと、
(g)凍結保存プロセスを使用して、ステップ(f)から採取されたTIL集団を含む注入バッグを凍結保存することと、
(h)治療上有効な投与量の第3のTIL集団を、ステップ(g)の注入バッグから対象に投与することと、を含む。
いくつかの実施形態では、第2のTIL集団は、第1のTIL集団よりも数が少なくとも50倍多い。
いくつかの実施形態では、本発明は、非小細胞肺癌(NSCLC)の治療を必要とする対象または患者に腫瘍浸潤リンパ球(TIL)の集団を投与することによって、NSCLCを治療する方法を提供し、対象または患者は、
i.<1%のPD-L1の所定の腫瘍割合スコア(TPS)、
ii.1%~49%のPD-L1のTPSスコア、または
iii.1つ以上のドライバー変異の所定の非存在のうちの少なくとも1つを有し、
方法は、
(a)外科的切除、針生検、コア生検、小生検、または対象もしくは患者からの腫瘍細胞とTIL細胞との混合物を含有する試料を取得するための他の手段から第1のTIL集団を取得及び/または受容することと、
(c)第1のTIL集団を第1の細胞培養培地と接触させることと、
(d)第1の細胞培養培地中で第1のTIL集団の初期拡張(すなわち、プライミングによる第1の拡張)を行い、第2のTIL集団を取得することであって、第2のTIL集団が、第1のTIL集団よりも数が少なくとも5倍多く、第1の細胞培養培地が、IL-2を含み、任意選択で、プライミングによる第1の拡張が、1~8日の期間にわたって起こる、第2のTIL集団を取得することと、
(e)第2の細胞培養培地中で第2のTIL集団の急速拡張を行い、第3のTIL集団を取得することであって、第2の細胞培養培地が、IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、及び任意選択で照射された同種異系末梢血単核細胞(PBMC)を含み、急速拡張が、14日以内の期間にわたって行われ、任意選択で、急速拡張が、急速拡張の開始後1日、2日、3日、4日、5日、6日、7日、8日、9日または10日にわたって進行することができる、第3のTIL集団を取得することと、
(f)第3のTIL集団を採取することと、
(g)第3のTIL集団の治療上有効な部分をNSCLCを有する対象または患者に投与することと、を含む。
i.<1%のPD-L1の所定の腫瘍割合スコア(TPS)、
ii.1%~49%のPD-L1のTPSスコア、または
iii.1つ以上のドライバー変異の所定の非存在のうちの少なくとも1つを有し、
方法は、
(a)外科的切除、針生検、コア生検、小生検、または対象もしくは患者からの腫瘍細胞とTIL細胞との混合物を含有する試料を取得するための他の手段から第1のTIL集団を取得及び/または受容することと、
(c)第1のTIL集団を第1の細胞培養培地と接触させることと、
(d)第1の細胞培養培地中で第1のTIL集団の初期拡張(すなわち、プライミングによる第1の拡張)を行い、第2のTIL集団を取得することであって、第2のTIL集団が、第1のTIL集団よりも数が少なくとも5倍多く、第1の細胞培養培地が、IL-2を含み、任意選択で、プライミングによる第1の拡張が、1~8日の期間にわたって起こる、第2のTIL集団を取得することと、
(e)第2の細胞培養培地中で第2のTIL集団の急速拡張を行い、第3のTIL集団を取得することであって、第2の細胞培養培地が、IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、及び任意選択で照射された同種異系末梢血単核細胞(PBMC)を含み、急速拡張が、14日以内の期間にわたって行われ、任意選択で、急速拡張が、急速拡張の開始後1日、2日、3日、4日、5日、6日、7日、8日、9日または10日にわたって進行することができる、第3のTIL集団を取得することと、
(f)第3のTIL集団を採取することと、
(g)第3のTIL集団の治療上有効な部分をNSCLCを有する対象または患者に投与することと、を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、非小細胞肺癌(NSCLC)の治療を必要とする対象または患者に腫瘍浸潤リンパ球(TIL)の集団を投与することによって、NSCLCを治療する方法を提供し、対象または患者は、
i.<1%のPD-L1の所定の腫瘍割合スコア(TPS)、
ii.1%~49%のPD-L1のTPSスコア、または
iii.1つ以上のドライバー変異の所定の非存在のうちの少なくとも1つを有し、
方法は、
(a)対象または患者からNSCLC腫瘍を切除することであって、腫瘍が、任意選択で、外科的切除、針生検、コア生検、小生検、またはNSCLC腫瘍から腫瘍細胞とTIL細胞との混合物を含有する試料を取得するための他の手段からの第1のTIL集団を含む、切除することと、
(b)腫瘍を、腫瘍断片に断片化することと、
(c)腫瘍断片を、第1の細胞培養培地と接触させることと、
(d)第1の細胞培養培地中で第1のTIL集団の初期拡張(すなわち、プライミングによる第1の拡張)を行い、第2のTIL集団を取得することであって、第2のTIL集団が、第1のTIL集団よりも数が少なくとも5倍多く、第1の細胞培養培地が、IL-2を含み、任意選択で、プライミングによる第1の拡張が、1~8日の期間にわたって起こる、第2のTIL集団を取得することと、
(e)第2の細胞培養培地中で第2のTIL集団の急速拡張を行い、第3のTIL集団を取得することであって、第2の細胞培養培地が、IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、及び任意選択で照射された同種異系末梢血単核細胞(PBMC)を含み、急速拡張が、14日以内の期間にわたって行われ、任意選択で、急速拡張が、急速拡張の開始後1日、2日、3日、4日、5日、6日、7日、8日、9日または10日にわたって進行することができる、第3のTIL集団を取得することと、
(f)第3のTIL集団を採取することと、
(g)第3のTIL集団の治療上有効な部分をNSCLCを有する対象または患者に投与することと、を含む。
i.<1%のPD-L1の所定の腫瘍割合スコア(TPS)、
ii.1%~49%のPD-L1のTPSスコア、または
iii.1つ以上のドライバー変異の所定の非存在のうちの少なくとも1つを有し、
方法は、
(a)対象または患者からNSCLC腫瘍を切除することであって、腫瘍が、任意選択で、外科的切除、針生検、コア生検、小生検、またはNSCLC腫瘍から腫瘍細胞とTIL細胞との混合物を含有する試料を取得するための他の手段からの第1のTIL集団を含む、切除することと、
(b)腫瘍を、腫瘍断片に断片化することと、
(c)腫瘍断片を、第1の細胞培養培地と接触させることと、
(d)第1の細胞培養培地中で第1のTIL集団の初期拡張(すなわち、プライミングによる第1の拡張)を行い、第2のTIL集団を取得することであって、第2のTIL集団が、第1のTIL集団よりも数が少なくとも5倍多く、第1の細胞培養培地が、IL-2を含み、任意選択で、プライミングによる第1の拡張が、1~8日の期間にわたって起こる、第2のTIL集団を取得することと、
(e)第2の細胞培養培地中で第2のTIL集団の急速拡張を行い、第3のTIL集団を取得することであって、第2の細胞培養培地が、IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、及び任意選択で照射された同種異系末梢血単核細胞(PBMC)を含み、急速拡張が、14日以内の期間にわたって行われ、任意選択で、急速拡張が、急速拡張の開始後1日、2日、3日、4日、5日、6日、7日、8日、9日または10日にわたって進行することができる、第3のTIL集団を取得することと、
(f)第3のTIL集団を採取することと、
(g)第3のTIL集団の治療上有効な部分をNSCLCを有する対象または患者に投与することと、を含む。
非小細胞肺癌(NSCLC)(NSCLCは、抗PD-1及び/または抗PD-L1抗体での治療に対して不応性または耐性である)の治療を必要とする対象または患者に腫瘍浸潤リンパ球(TIL)の集団を投与することによって、NSCLCを治療する方法であって、対象または患者は、
i.<1%のPD-L1の所定の腫瘍割合スコア(TPS)、
ii.1%~49%のPD-L1のTPSスコア、または
iii.1つ以上のドライバー変異の所定の非存在のうちの少なくとも1つを有し、
方法は、
(a)外科的切除、針生検、コア生検、小生検、または対象もしくは患者からの腫瘍細胞とTIL細胞との混合物を含有する試料を取得するための他の手段から第1のTIL集団を取得及び/または受容することと、
(c)第1のTIL集団を第1の細胞培養培地と接触させることと、
(d)第1の細胞培養培地中で第1のTIL集団の初期拡張(すなわち、プライミングによる第1の拡張)を行い、第2のTIL集団を取得することであって、第2のTIL集団が、第1のTIL集団よりも数が少なくとも5倍多く、第1の細胞培養培地が、IL-2を含み、任意選択で、プライミングによる第1の拡張が、1~8日の期間にわたって起こる、第2のTIL集団を取得することと、
(e)第2の細胞培養培地中で第2のTIL集団の急速拡張を行い、第3のTIL集団を取得することであって、第2の細胞培養培地が、IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、及び任意選択で照射された同種異系末梢血単核細胞(PBMC)を含み、急速拡張が、14日以内の期間にわたって行われ、任意選択で、急速拡張が、急速拡張の開始後1日、2日、3日、4日、5日、6日、7日、8日、9日または10日にわたって進行することができる、第3のTIL集団を取得することと、
(f)第3のTIL集団を採取することと、
(g)第3のTIL集団の治療上有効な部分をNSCLCを有する対象または患者に投与することと、を含む。
i.<1%のPD-L1の所定の腫瘍割合スコア(TPS)、
ii.1%~49%のPD-L1のTPSスコア、または
iii.1つ以上のドライバー変異の所定の非存在のうちの少なくとも1つを有し、
方法は、
(a)外科的切除、針生検、コア生検、小生検、または対象もしくは患者からの腫瘍細胞とTIL細胞との混合物を含有する試料を取得するための他の手段から第1のTIL集団を取得及び/または受容することと、
(c)第1のTIL集団を第1の細胞培養培地と接触させることと、
(d)第1の細胞培養培地中で第1のTIL集団の初期拡張(すなわち、プライミングによる第1の拡張)を行い、第2のTIL集団を取得することであって、第2のTIL集団が、第1のTIL集団よりも数が少なくとも5倍多く、第1の細胞培養培地が、IL-2を含み、任意選択で、プライミングによる第1の拡張が、1~8日の期間にわたって起こる、第2のTIL集団を取得することと、
(e)第2の細胞培養培地中で第2のTIL集団の急速拡張を行い、第3のTIL集団を取得することであって、第2の細胞培養培地が、IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、及び任意選択で照射された同種異系末梢血単核細胞(PBMC)を含み、急速拡張が、14日以内の期間にわたって行われ、任意選択で、急速拡張が、急速拡張の開始後1日、2日、3日、4日、5日、6日、7日、8日、9日または10日にわたって進行することができる、第3のTIL集団を取得することと、
(f)第3のTIL集団を採取することと、
(g)第3のTIL集団の治療上有効な部分をNSCLCを有する対象または患者に投与することと、を含む。
いくつかの実施形態では、第3のTIL集団は、急速拡張の開始から7~8日後に、第2のTIL集団よりも数が少なくとも50倍多い。
いくつかの実施形態では、患者または対象は、<1%のPD-L1のTPSを有する。
いくつかの実施形態では、患者または対象は、1%~49%のPD-L1のTPSを有する。
いくつかの実施形態では、患者または対象は、EGFR阻害剤、BRAF阻害剤、ALK阻害剤、c-Ros阻害剤、RET阻害剤、ERBB2阻害剤、BRCA阻害剤、MAP2K1阻害剤、PIK3CA阻害剤、CDKN2A阻害剤、PTEN阻害剤、UMD阻害剤、NRAS阻害剤、KRAS阻害剤、NF1阻害剤、MET阻害剤、TP53阻害剤、CREBBP阻害剤、KMT2C阻害剤、KMT2D変異、ARID1A変異、RB1阻害剤、ATM阻害剤、SETD2阻害剤、FLT3阻害剤、PTPN11阻害剤、FGFR1阻害剤、EP300阻害剤、MYC阻害剤、EZH2阻害剤、JAK2阻害剤、FBXW7阻害剤、CCND3阻害剤、及びGNA11阻害剤による治療のために適応されていないNSCLCを有する。
いくつかの実施形態では、患者または対象は、1つ以上のドライバー変異の所定の非存在を有する。
いくつかの実施形態では、患者または対象は、<1%のPD-L1のTPSを有し、1つ以上のドライバー変異の所定の非存在を有する。
いくつかの実施形態では、1つ以上のドライバーは、EGFR変異、EGFR挿入、EGFRエクソン20、KRAS変異、BRAF変異、BRAF V600変異、ALK変異、c-ROS変異(ROS1変異)、ROS1融合、RET変異、RET融合、ERBB2変異、ERBB2増幅、BRCA変異、MAP2K1変異、PIK3CA、CDKN2A、PTEN変異、UMD変異、NRAS変異、KRAS変異、NF1変異、MET変異、METスプライス及び/または変化したMETシグナル伝達、TP53変異、CREBBP変異、KMT2C変異、KMT2D変異、ARID1A変異、RB1変異、ATM変異、SETD2変異、FLT3変異、PTPN11変異、FGFR1変異、EP300変異、MYC変異、EZH2変異、JAK2変異、FBXW7変異、CCND3変異、及びGNA11変異からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、患者または対象は、<1%のTPSを有し、EGFR阻害剤、BRAF阻害剤、ALK阻害剤、c-Ros阻害剤、RET阻害剤、ERBB2阻害剤、BRCA阻害剤、MAP2K1阻害剤、PIK3CA阻害剤、CDKN2A阻害剤、PTEN阻害剤、UMD阻害剤、NRAS阻害剤、KRAS阻害剤、NF1阻害剤、MET阻害剤、TP53阻害剤、CREBBP阻害剤、KMT2C阻害剤、KMT2D変異、ARID1A変異、RB1阻害剤、ATM阻害剤、SETD2阻害剤、FLT3阻害剤、PTPN11阻害剤、FGFR1阻害剤、EP300阻害剤、MYC阻害剤、EZH2阻害剤、JAK2阻害剤、FBXW7阻害剤、CCND3阻害剤、及びGNA11阻害剤による治療のために適応されていないNSCLCを有する。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、PD-L1の発現が低いか、または全くない。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、化学療法剤による治療に対して不応性または耐性である。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、VEGF-A阻害剤による治療に対して不応性または耐性である。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、化学療法剤で治療されてきたが、現在は化学療法剤で治療されていない。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、化学療法剤で治療されているが、現在は化学療法剤で治療されておらず、<1%のTPSを有する。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、VEGF-A阻害剤で治療されてきたが、現在はVEGF-A阻害剤で治療されていない。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、VEGF-A阻害剤で治療されているが、現在はVEGF-A阻害剤で治療されておらず、<1%のTPSを有する。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、化学療法剤及び/またはVEGF-A阻害剤で治療されているが、現在は化学療法剤及び/またはVEGF-A阻害剤で治療されていない。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、化学療法剤及び/またはVEGF-A阻害剤で治療されているが、現在は化学療法剤及び/またはVEGF-A阻害剤で治療されておらず、<1%のTPSを有する。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、抗PD-1及び/または抗PD-L1抗体で以前に治療されていない。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、抗PD-1及び/または抗PD-L1抗体で以前に治療されておらず、化学療法剤及び/またはVEGF-A阻害剤で以前に治療されている。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、抗PD-1及び/または抗PD-L1抗体で以前に治療されておらず、化学療法剤及び/またはVEGF-A阻害剤で以前に治療されているが、化学療法剤及び/またはVEGF-A阻害剤で現在治療されていない。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、抗PD-1及び/または抗PD-L1抗体で以前に治療されておらず、VEGF-A阻害剤で以前に治療されているが、現在はVEGF-A阻害剤で治療されていない。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、抗PD-1及び/または抗PD-L1抗体で以前に治療されておらず、化学療法剤及び/またはVEGF-A阻害剤で以前に治療されているが、現在は化学療法剤及び/またはVEGF-A阻害剤で治療されていない。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、抗PD-1及び/または抗PD-L1抗体で以前に治療されておらず、PD-L1の発現が低いか、または全くない。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、抗PD-1及び/または抗PD-L1抗体で以前に治療されておらず、化学療法剤及び/またはVEGF-A阻害剤で以前に治療されているが、現在は化学療法剤及び/またはVEGF-A阻害剤で治療されておらず、<1%のTPSを有する。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、抗PD-1及び/または抗PD-L1及び/または抗PD-L2抗体で以前に治療されている。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、抗PD-1及び/または抗PD-L1抗体で以前に治療されており、化学療法剤及び/またはVEGF-A阻害剤で以前に治療されている。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、抗PD-1及び/または抗PD-L1抗体による治療に対して不応性または耐性である。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、抗PD-1及び/または抗PD-L1抗体で以前に治療されており、腫瘍割合スコアは、抗PD-1及び/または抗PD-L1抗体治療の前に決定された。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、抗PD-L1抗体で以前に治療されており、腫瘍割合スコアは、抗PD-L1抗体治療の前に決定されているか、またはNSCLCは、抗PD-1抗体で以前に治療されており、腫瘍割合スコアは、抗PD-1抗体治療の前に決定された。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、化学療法剤及び/またはVEGF-A阻害剤で治療されている。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、抗PD-1及び/または抗PD-L1抗体で以前に治療されておらず、ベースラインで巨大腫瘤病変を有する。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、抗PD-1及び/または抗PD-L1抗体で以前に治療されており、ベースラインで巨大腫瘤病変を有する。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、化学療法剤で治療されており、ベースラインで巨大腫瘤病変を有する。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、化学療法剤及び/またはVEGF-A阻害剤で治療されているが、現在は化学療法剤及び/またはVEGF-A阻害剤で治療されておらず、ベースラインで巨大腫瘤病変を有する。
いくつかの実施形態では、最大腫瘍直径が、横断面もしくは冠状面のいずれかで測定して7cmより大きいか、または腫れたリンパ節が20mm以上の短軸直径を有する場合、巨大腫瘤病変が示される。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、ネオアジュバント療法またはアジュバント療法を含まない、少なくとも2つの以前の全身治療過程に対して不応性または耐性である。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、JS001、TSR-042、ピジリズマブ、BGB-A317、SHR-1210、REGN2810、MDX-1106、PDR001、クローン由来の抗PD-1:RMP1-14、米国特許第8,008,449号に開示される抗PD-1抗体、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、ならびにそれらの断片、誘導体、バリアント、及びバイオシミラーからなる群から選択される抗PD-1または抗PD-L1抗体に対して不応性または耐性である。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、ペムブロリズマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性または耐性である。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、ニボルマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性または耐性である。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、抗CTLA-4抗体に対して不応性または耐性である。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、抗CTLA-4抗体、及びペムブロリズマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性または耐性である。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、抗CTLA-4抗体、及びニボルマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性または耐性である。
いくつかの実施形態では、抗CTLA-4抗体は、イピリムマブまたはそのバイオシミラーである。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、デュルバルマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性または耐性である。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、アテゾリズマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性または耐性である。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、アベルマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性または耐性である。
いくつかの実施形態では、化学療法剤は、白金ダブレット化学療法剤(複数可)である。
いくつかの実施形態では、白金ダブレット化学療法剤療法は、
i)シスプラチン及びカルボプラチンからなる群から選択される第1の化学療法剤と、
ii)ビノレルビン、ゲムシタビン、及びタキサン(例えば、パクリタキセル、ドセタキセル、またはnab-パクリタキセルを含む)からなる群から選択される第2の化学療法剤と、を含む。
i)シスプラチン及びカルボプラチンからなる群から選択される第1の化学療法剤と、
ii)ビノレルビン、ゲムシタビン、及びタキサン(例えば、パクリタキセル、ドセタキセル、またはnab-パクリタキセルを含む)からなる群から選択される第2の化学療法剤と、を含む。
いくつかの実施形態では、第1及び/または第2の化学療法剤を含む化学療法剤は、ペメトレキセドとの組み合わせである。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、カルボプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセド、及びシスプラチンを含む併用療法に対して不応性または耐性である。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、カルボプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセド、シスプラチン、ニボルマブ、及びイピリムマブを含む併用療法に対して不応性または耐性である。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、VEGF-A阻害剤に対して不応性または耐性である。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、ベバシズマブ、ラニビズマブ、及びイクルクマブからなる群から選択されるVEGF-A阻害剤に対して不応性または耐性である。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、ベバシズマブに対して不応性または耐性である。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、1つ以上のドライバー変異の非存在または存在について分析されている。
いくつかの実施形態では、1つ以上のドライバー変異は存在しない。
いくつかの実施形態では、NSCLC治療は、1つ以上のドライバー変異の存在または非存在とは無関係である。
いくつかの実施形態では、1つ以上のドライバー変異は、EGFR変異、EGFR挿入、KRAS変異、BRAF変異、ALK変異、c-ROS変異、c-ROS変異、EML4-ALK、及びMET変異からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、EGFR変異は、NSCLCから小細胞肺癌(SCLC)への腫瘍形質転換をもたらす。
いくつかの実施形態では、NSCLC治療は、高腫瘍変異負荷(高-TMB)及び/またはマイクロサテライト不安定性-高(MSI-高)状態の存在または非存在とは無関係である。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、高-TMB及び/またはMSI-高状態を示す。
いくつかの実施形態では、IL-2は、存在する場合、第1の細胞培養培地中に1000IU/mL~6000IU/mLの間の初期濃度で存在する。
いくつかの実施形態では、存在する場合、IL-2は、1000IU/mL~6000IU/mLの間の初期濃度で存在し、OKT-3抗体は、第2の細胞培養培地中に約30ng/mLの初期濃度で存在する。
いくつかの実施形態では、初期拡張は、存在する場合、ガス透過性容器を使用して行われる。
いくつかの実施形態では、急速拡張は、存在する場合、ガス透過性容器を使用して行われる。
いくつかの実施形態では、第1の細胞培養培地は、存在する場合、IL-4、IL-7、IL-15、IL-21、及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるサイトカインをさらに含む。
いくつかの実施形態では、第2の細胞培養培地は、存在する場合、IL-4、IL-7、IL-15、IL-21、及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるサイトカインをさらに含む。
いくつかの実施形態では、この方法は、第3のTIL集団を患者に投与する前に、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンで患者を治療するステップをさらに含む。
いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンが、シクロホスファミドを60mg/m2/日の用量で2日間投与し、続いてフルダラビンを25mg/m2/日の用量で5日間投与するステップを含む。
いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンが、シクロホスファミドを60mg/m2/日の用量で、フルダラビンを25mg/m2/日の用量で2日間投与し、続いてフルダラビンを25mg/m2/日の用量で3日間投与するステップを含む。
いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、メスナとともに投与される。
いくつかの実施形態では、この方法は、第3のTIL集団を患者に投与した翌日から開始するIL-2レジメンで患者を治療するステップをさらに含む。
いくつかの実施形態では、この方法は、第3のTIL集団を患者に投与したのと同じ日に開始するIL-2レジメンで患者を治療するステップをさらに含む。
いくつかの実施形態では、IL-2レジメンは、許容範囲まで8時間毎に15分間のボーラス静脈内注入として投与される、600,000もしくは720,000IU/kgのアルデスロイキン、またはそのバイオシミラーもしくはバリアントを含む高用量IL-2レジメンである。
いくつかの実施形態では、治療上有効なTIL集団が投与され、約2.3×1010~約13.7×1010TILを含む。
いくつかの実施形態では、初期拡張は、21日以内の期間にわたって行われる。
いくつかの実施形態では、初期拡張は、7日以内の期間にわたって行われる。
いくつかの実施形態では、急速拡張は、7日以内の期間にわたって行われる。
いくつかの実施形態では、ステップ(c)における第1の拡張及びステップ(d)における第2の拡張は、各々、11日の期間内で個別に行われる。
いくつかの実施形態では、ステップ(a)~(f)は、約10日~約24日で行われる。
いくつかの実施形態では、ステップ(a)~(f)は、約10日~約22日で行われる。
配列表の簡単な説明
配列番号1は、ムロモナブの重鎖のアミノ酸配列である。
配列番号1は、ムロモナブの重鎖のアミノ酸配列である。
配列番号2は、ムロモナブの軽鎖のアミノ酸配列である。
配列番号3は、組換えヒトIL-2タンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号4は、アルデスロイキンのアミノ酸配列である。
配列番号5は、IL-2形態である。
配列番号6は、ネムバロイキンアルファのアミノ酸配列である。
配列番号7は、IL-2形態である。
配列番号8は、ムチンドメインポリペプチドである。
配列番号9は、組換えヒトIL-4タンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号10は、組換えヒトIL-7タンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号11は、組換えヒトIL-15タンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号12は、組換えヒトIL-21タンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号13は、IL-2配列である。
配列番号14は、IL-2ムテイン配列である。
配列番号15は、IL-2ムテイン配列である。
配列番号16は、IgG.IL2R67A.H1のHCDR1_IL-2である。
配列番号17は、IgG.IL2R67A.H1のHCDR2である。
配列番号18は、IgG.IL2R67A.H1のHCDR3である。
配列番号19は、IgG.IL2R67A.H1のHCDR1_IL-2カバットである。
配列番号20は、IgG.IL2R67A.H1のHCDR2カバットである。
配列番号21は、IgG.IL2R67A.H1のHCDR3カバットである。
配列番号22は、IgG.IL2R67A.H1のHCDR1_IL-2クロチアである。
配列番号23は、IgG.IL2R67A.H1のHCDR2クロチアである。
配列番号24は、IgG.IL2R67A.H1のHCDR3クロチアである。
配列番号25は、IgG.IL2R67A.H1のHCDR1_IL-2 IMGTである。
配列番号26は、IgG.IL2R67A.H1のHCDR2 IMGTである。
配列番号27は、IgG.IL2R67A.H1のHCDR3 IMGTである。
配列番号28は、IgG.IL2R67A.H1のVH鎖である。
配列番号29は、IgG.IL2R67A.H1の重鎖である。
配列番号30は、IgG.IL2R67A.H1のLCDR1カバットである。
配列番号31は、IgG.IL2R67A.H1のLCDR2カバットである。
配列番号32は、IgG.IL2R67A.H1のLCDR3カバットである。
配列番号33は、IgG.IL2R67A.H1のLCDR1クロチアである。
配列番号34は、IgG.IL2R67A.H1のLCDR2クロチアである。
配列番号35は、IgG.IL2R67A.H1のLCDR3 chothiaである。
配列番号36は、VL鎖である。
配列番号37は、軽鎖である。
配列番号38は、軽鎖である。
配列番号39は、軽鎖である。
配列番号40は、ヒト4-1BBのアミノ酸配列である。
配列番号41は、マウス4-1BBのアミノ酸配列である。
配列番号42は、4-1BBアゴニストモノクローナル抗体ウトミルマブ(PF-05082566)の重鎖である。
配列番号43は、4-1BBアゴニストモノクローナル抗体ウトミルマブ(PF-05082566)の軽鎖である。
配列番号44は、4-1BBアゴニストモノクローナル抗体ウトミルマブ(PF-05082566)の重鎖可変領域(VH)である。
配列番号45は、4-1BBアゴニストモノクローナル抗体ウトミルマブ(PF-05082566)の軽鎖可変領域(VL)である。
配列番号46は、4-1BBアゴニストモノクローナル抗体ウトミルマブ(PF-05082566)の重鎖CDR1である。
配列番号47は、4-1BBアゴニストモノクローナル抗体ウトミルマブ(PF-05082566)の重鎖CDR2である。
配列番号48は、4-1BBアゴニストモノクローナル抗体ウトミルマブ(PF-05082566)の重鎖CDR3である。
配列番号49は、4-1BBアゴニストモノクローナル抗体ウトミルマブ(PF-05082566)の軽鎖CDR1である。
配列番号50は、4-1BBアゴニストモノクローナル抗体ウトミルマブ(PF-05082566)の軽鎖CDR2である。
配列番号51は、4-1BBアゴニストモノクローナル抗体ウトミルマブ(PF-05082566)の軽鎖CDR3である。
配列番号52は、4-1BBアゴニストモノクローナル抗体ウレルマブ(BMS-663513)の重鎖である。
配列番号53は、4-1BBアゴニストモノクローナル抗体ウレルマブ(BMS-663513)の軽鎖である。
配列番号54は、4-1BBアゴニストモノクローナル抗体ウレルマブ(BMS-663513)の重鎖可変領域(VH)である。
配列番号55は、4-1BBアゴニストモノクローナル抗体ウレルマブ(BMS-663513)の軽鎖可変領域(VL)である。
配列番号56は、4-1BBアゴニストモノクローナル抗体ウレルマブ(BMS-663513)の重鎖CDR1である。
配列番号57は、4-1BBアゴニストモノクローナル抗体ウレルマブ(BMS-663513)の重鎖CDR2である。
配列番号58は、4-1BBアゴニストモノクローナル抗体ウレルマブ(BMS-663513)の重鎖CDR3である。
配列番号59は、4-1BBアゴニストモノクローナル抗体ウレルマブ(BMS-663513)の軽鎖CDR1である。
配列番号60は、4-1BBアゴニストモノクローナル抗体ウレルマブ(BMS-663513)の軽鎖CDR2である。
配列番号61は、4-1BBアゴニストモノクローナル抗体ウレルマブ(BMS-663513)の軽鎖CDR3である。
配列番号62は、TNFRSFアゴニスト融合タンパク質のFcドメインである。
配列番号63は、TNFRSFアゴニスト融合タンパク質のリンカーである。
配列番号64は、TNFRSFアゴニスト融合タンパク質のリンカーである。
配列番号65は、TNFRSFアゴニスト融合タンパク質のリンカーである。
配列番号66は、TNFRSFアゴニスト融合タンパク質のリンカーである。
配列番号67は、TNFRSFアゴニスト融合タンパク質のリンカーである。
配列番号68は、TNFRSFアゴニスト融合タンパク質のリンカーである。
配列番号69は、TNFRSFアゴニスト融合タンパク質のリンカーである。
配列番号70は、TNFRSFアゴニスト融合タンパク質のリンカーである。
配列番号71は、TNFRSFアゴニスト融合タンパク質のリンカーである。
配列番号72は、TNFRSFアゴニスト融合タンパク質のリンカーである。
配列番号73は、TNFRSFアゴニスト融合タンパク質のFcドメインである。
配列番号74は、TNFRSFアゴニスト融合タンパク質のリンカーである。
配列番号75は、TNFRSFアゴニスト融合タンパク質のリンカーである。
配列番号76は、TNFRSFアゴニスト融合タンパク質のリンカーである。
配列番号77は、4-1BBリガンド(4-1BBL)アミノ酸配列である。
配列番号78は、4-1BBLポリペプチドの可溶性部分である。
配列番号79は、4-1BBアゴニスト抗体4B4-1-1バージョン1の重鎖可変領域(VH)である。
配列番号80は、4-1BBアゴニスト抗体4B4-1-1バージョン1の軽鎖可変領域(VL)である。
配列番号81は、4-1BBアゴニスト抗体4B4-1-1バージョン2の重鎖可変領域(VH)である。
配列番号82は、4-1BBアゴニスト抗体4B4-1-1バージョン2の軽鎖可変領域(VL)である。
配列番号83は、4-1BBアゴニスト抗体H39E3-2の重鎖可変領域(VH)である。
配列番号84は、4-1BBアゴニスト抗体H39E3-2の軽鎖可変領域(VL)である。
配列番号85は、ヒトOX40のアミノ酸配列である。
配列番号86は、マウスOX40のアミノ酸配列である。
配列番号87は、OX40アゴニストモノクローナル抗体タボリキシズマブ(MEDI-0562)の重鎖である。
配列番号88は、OX40アゴニストモノクローナル抗体タボリキシズマブ(MEDI-0562)の軽鎖である。
配列番号89は、OX40アゴニストモノクローナル抗体タボリキシズマブ(MEDI-0562)の重鎖可変領域(VH)である。
配列番号90は、OX40アゴニストモノクローナル抗体タボリキシズマブ(MEDI-0562)の軽鎖可変領域(VL)である。
配列番号91は、OX40アゴニストモノクローナル抗体タボリキシズマブ(MEDI-0562)の重鎖CDR1である。
配列番号92は、OX40アゴニストモノクローナル抗体タボリキシズマブ(MEDI-0562)の重鎖CDR2である。
配列番号93は、OX40アゴニストモノクローナル抗体タボリキシズマブ(MEDI-0562)の重鎖CDR3である。
配列番号94は、OX40アゴニストモノクローナル抗体タボリキシズマブ(MEDI-0562)の軽鎖CDR1である。
配列番号95は、OX40アゴニストモノクローナル抗体タボリキシズマブ(MEDI-0562)の軽鎖CDR2である。
配列番号96は、OX40アゴニストモノクローナル抗体タボリキシズマブ(MEDI-0562)の軽鎖CDR3である。
配列番号97は、OX40アゴニストモノクローナル抗体11D4の重鎖である。
配列番号98は、OX40アゴニストモノクローナル抗体11D4の軽鎖である。
配列番号99は、OX40アゴニストモノクローナル抗体11D4の重鎖可変領域(VH)である。
配列番号100は、OX40アゴニストモノクローナル抗体11D4の軽鎖可変領域(VL)である。
配列番号101は、OX40アゴニストモノクローナル抗体11D4の重鎖CDR1である。
配列番号102は、OX40アゴニストモノクローナル抗体11D4の重鎖CDR2である。
配列番号103は、OX40アゴニストモノクローナル抗体11D4の重鎖CDR3である。
配列番号104は、OX40アゴニストモノクローナル抗体11D4の軽鎖CDR1である。
配列番号105は、OX40アゴニストモノクローナル抗体11D4の軽鎖CDR2である。
配列番号106は、OX40アゴニストモノクローナル抗体11D4の軽鎖CDR3である。
配列番号107は、OX40アゴニストモノクローナル抗体18D8の重鎖である。
配列番号108は、OX40アゴニストモノクローナル抗体18D8の軽鎖である。
配列番号109は、OX40アゴニストモノクローナル抗体18D8の重鎖可変領域(VH)である。
配列番号110は、OX40アゴニストモノクローナル抗体18D8の軽鎖可変領域(VL)である。
配列番号111は、OX40アゴニストモノクローナル抗体18D8の重鎖CDR1である。
配列番号112は、OX40アゴニストモノクローナル抗体18D8の重鎖CDR2である。
配列番号113は、OX40アゴニストモノクローナル抗体18D8の重鎖CDR3である。
配列番号114は、OX40アゴニストモノクローナル抗体18D8の軽鎖CDR1である。
配列番号115は、OX40アゴニストモノクローナル抗体18D8の軽鎖CDR2である。
配列番号116は、OX40アゴニストモノクローナル抗体18D8の軽鎖CDR3である。
配列番号117は、OX40アゴニストモノクローナル抗体Hu119-122の重鎖可変領域(VH)である。
配列番号118は、OX40アゴニストモノクローナル抗体Hu119-122の軽鎖可変領域(VL)である。
配列番号119は、OX40アゴニストモノクローナル抗体Hu119-122の重鎖CDR1である。
配列番号120は、OX40アゴニストモノクローナル抗体Hu119-122の重鎖CDR2である。
配列番号121は、OX40アゴニストモノクローナル抗体Hu119-122の重鎖CDR3である。
配列番号122は、OX40アゴニストモノクローナル抗体Hu119-122の軽鎖CDR1である。
配列番号123は、OX40アゴニストモノクローナル抗体Hu119-122の軽鎖CDR2である。
配列番号124は、OX40アゴニストモノクローナル抗体Hu119-122の軽鎖CDR3である。
配列番号125は、OX40アゴニストモノクローナル抗体Hu106-222の重鎖可変領域(VH)である。
配列番号126は、OX40アゴニストモノクローナル抗体Hu106-222の軽鎖可変領域(VL)である。
配列番号127は、OX40アゴニストモノクローナル抗体Hu106-222の重鎖CDR1である。
配列番号128は、OX40アゴニストモノクローナル抗体Hu106-222の重鎖CDR2である。
配列番号129は、OX40アゴニストモノクローナル抗体Hu106-222の重鎖CDR3である。
配列番号130は、OX40アゴニストモノクローナル抗体Hu106-222の軽鎖CDR1である。
配列番号131は、OX40アゴニストモノクローナル抗体Hu106-222の軽鎖CDR2である。
配列番号132は、OX40アゴニストモノクローナル抗体Hu106-222の軽鎖CDR3である。
配列番号133は、OX40リガンド(OX40L)アミノ酸配列である。
配列番号134は、OX40Lポリペプチドの可溶性部分である。
配列番号135は、OX40Lポリペプチドの代替可溶性部分である。
配列番号136は、OX40アゴニストモノクローナル抗体008の重鎖可変領域(VH)である。
配列番号137は、OX40アゴニストモノクローナル抗体008の軽鎖可変領域(VL)である。
配列番号138は、OX40アゴニストモノクローナル抗体011の重鎖可変領域(VH)である。
配列番号139は、OX40アゴニストモノクローナル抗体011の軽鎖可変領域(VL)である。
配列番号140は、OX40アゴニストモノクローナル抗体021の重鎖可変領域(VH)である。
配列番号141は、OX40アゴニストモノクローナル抗体021の軽鎖可変領域(VL)である。
配列番号142は、OX40アゴニストモノクローナル抗体023の重鎖可変領域(VH)である。
配列番号143は、OX40アゴニストモノクローナル抗体023の軽鎖可変領域(VL)である。
配列番号144は、OX40アゴニストモノクローナル抗体の重鎖可変領域(VH)である。
配列番号145は、OX40アゴニストモノクローナル抗体の軽鎖可変領域(VL)である。
配列番号146は、OX40アゴニストモノクローナル抗体の重鎖可変領域(VH)である。
配列番号147は、OX40アゴニストモノクローナル抗体の軽鎖可変領域(VL)である。
配列番号148は、ヒト化OX40アゴニストモノクローナル抗体の重鎖可変領域(VH)である。
配列番号149は、ヒト化OX40アゴニストモノクローナル抗体の重鎖可変領域(VH)である。
配列番号150は、ヒト化OX40アゴニストモノクローナル抗体の軽鎖可変領域(VL)である。
配列番号151は、ヒト化OX40アゴニストモノクローナル抗体の軽鎖可変領域(VL)である。
配列番号152は、ヒト化OX40アゴニストモノクローナル抗体の重鎖可変領域(VH)である。
配列番号153は、ヒト化OX40アゴニストモノクローナル抗体の重鎖可変領域(VH)である。
配列番号154は、ヒト化OX40アゴニストモノクローナル抗体の軽鎖可変領域(VL)である。
配列番号155は、ヒト化OX40アゴニストモノクローナル抗体の軽鎖可変領域(VL)である。
配列番号156は、OX40アゴニストモノクローナル抗体の重鎖可変領域(VH)である。
配列番号157は、OX40アゴニストモノクローナル抗体の軽鎖可変領域(VL)である。
配列番号158は、PD-1阻害剤ニボルマブの重鎖アミノ酸配列である。
配列番号159は、PD-1阻害剤ニボルマブの軽鎖アミノ酸配列である。
配列番号160は、PD-1阻害剤ニボルマブの重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列である。
配列番号161は、PD-1阻害剤ニボルマブの軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列である。
配列番号162は、PD-1阻害剤ニボルマブの重鎖CDR1アミノ酸配列である。
配列番号163は、PD-1阻害剤ニボルマブの重鎖CDR2アミノ酸配列である。
配列番号164は、PD-1阻害剤ニボルマブの重鎖CDR3アミノ酸配列である。
配列番号165は、PD-1阻害剤ニボルマブの軽鎖CDR1アミノ酸配列である。
配列番号166は、PD-1阻害剤ニボルマブの軽鎖CDR2アミノ酸配列である。
配列番号167は、PD-1阻害剤ニボルマブの軽鎖CDR3アミノ酸配列である。
配列番号168は、PD-1阻害剤ペムブロリズマブの重鎖アミノ酸配列である。
配列番号169は、PD-1阻害剤ペムブロリズマブの軽鎖アミノ酸配列である。
配列番号170は、PD-1阻害剤ペムブロリズマブの重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列である。
配列番号171は、PD-1阻害剤ペムブロリズマブの軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列である。
配列番号172は、PD-1阻害剤ペムブロリズマブの重鎖CDR1アミノ酸配列である。
配列番号173は、PD-1阻害剤ペムブロリズマブの重鎖CDR2アミノ酸配列である。
配列番号174は、PD-1阻害剤ペムブロリズマブの重鎖CDR3アミノ酸配列である。
配列番号175は、PD-1阻害剤ペムブロリズマブの軽鎖CDR1アミノ酸配列である。
配列番号176は、PD-1阻害剤ペムブロリズマブの軽鎖CDR2アミノ酸配列である。
配列番号177は、PD-1阻害剤ペムブロリズマブの軽鎖CDR3アミノ酸配列である。
配列番号178は、PD-L1阻害剤デュルバルマブの重鎖アミノ酸配列である。
配列番号179は、PD-L1阻害剤デュルバルマブの軽鎖アミノ酸配列である。
配列番号180は、PD-L1阻害剤デュルバルマブの重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列である。
配列番号181は、PD-L1阻害剤デュルバルマブの軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列である。
配列番号182は、PD-L1阻害剤デュルバルマブの重鎖CDR1アミノ酸配列である。
配列番号183は、PD-L1阻害剤デュルバルマブの重鎖CDR2アミノ酸配列である。
配列番号184は、PD-L1阻害剤デュルバルマブの重鎖CDR3アミノ酸配列である。
配列番号185は、PD-L1阻害剤デュルバルマブの軽鎖CDR1アミノ酸配列である。
配列番号186は、PD-L1阻害剤デュルバルマブの軽鎖CDR2アミノ酸配列である。
配列番号187は、PD-L1阻害剤デュルバルマブの軽鎖CDR3アミノ酸配列である。
配列番号188は、PD-L1阻害剤アベルマブの重鎖アミノ酸配列である。
配列番号189は、PD-L1阻害剤アベルマブの軽鎖アミノ酸配列である。
配列番号190は、PD-L1阻害剤アベルマブの重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列である。
配列番号191は、PD-L1阻害剤アベルマブの軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列である。
配列番号192は、PD-L1阻害剤アベルマブの重鎖CDR1アミノ酸配列である。
配列番号193は、PD-L1阻害剤アベルマブの重鎖CDR2アミノ酸配列である。
配列番号194は、PD-L1阻害剤アベルマブの重鎖CDR3アミノ酸配列である。
配列番号195は、PD-L1阻害剤アベルマブの軽鎖CDR1アミノ酸配列である。
配列番号196は、PD-L1阻害剤アベルマブの軽鎖CDR2アミノ酸配列である。
配列番号197は、PD-L1阻害剤アベルマブの軽鎖CDR3アミノ酸配列である。
配列番号198は、PD-L1阻害剤アテゾリズマブの重鎖アミノ酸配列である。
配列番号199は、PD-L1阻害剤アテゾリズマブの軽鎖アミノ酸配列である。
配列番号200は、PD-L1阻害剤アテゾリズマブの重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列である。
配列番号201は、PD-L1阻害剤アテゾリズマブの軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列である。
配列番号202は、PD-L1阻害剤アテゾリズマブの重鎖CDR1アミノ酸配列である。
配列番号203は、PD-L1阻害剤アテゾリズマブの重鎖CDR2アミノ酸配列である。
配列番号204は、PD-L1阻害剤アテゾリズマブの重鎖CDR3アミノ酸配列である。
配列番号205は、PD-L1阻害剤アテゾリズマブの軽鎖CDR1アミノ酸配列である。
配列番号206は、PD-L1阻害剤アテゾリズマブの軽鎖CDR2アミノ酸配列である。
配列番号207は、PD-L1阻害剤アテゾリズマブの軽鎖CDR3アミノ酸配列である。
配列番号208は、CTLA-4阻害剤イピリムマブの重鎖アミノ酸配列である。
配列番号209は、CTLA-4阻害剤イピリムマブの軽鎖アミノ酸配列である。
配列番号210は、CTLA-4阻害剤イピリムマブの重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列である。
配列番号211は、CTLA-4阻害剤イピリムマブの軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列である。
配列番号212は、CTLA-4阻害剤イピリムマブの重鎖CDR1アミノ酸配列である。
配列番号213は、CTLA-4阻害剤イピリムマブの重鎖CDR2アミノ酸配列である。
配列番号214は、CTLA-4阻害剤イピリムマブの重鎖CDR3アミノ酸配列である。
配列番号215は、CTLA-4阻害剤イピリムマブの軽鎖CDR1アミノ酸配列である。
配列番号216は、CTLA-4阻害剤イピリムマブの軽鎖CDR2アミノ酸配列である。
配列番号217は、CTLA-4阻害剤イピリムマブの軽鎖CDR3アミノ酸配列である。
配列番号218は、CTLA-4阻害剤トレメリムマブの重鎖アミノ酸配列である。
配列番号219は、CTLA-4阻害剤トレメリムマブの軽鎖アミノ酸配列である。
配列番号220は、CTLA-4阻害剤トレメリムマブの重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列である。
配列番号221は、CTLA-4阻害剤トレメリムマブの軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列である。
配列番号222は、CTLA-4阻害剤トレメリムマブの重鎖CDR1アミノ酸配列である。
配列番号223は、CTLA-4阻害剤トレメリムマブの重鎖CDR2アミノ酸配列である。
配列番号224は、CTLA-4阻害剤トレメリムマブの重鎖CDR3アミノ酸配列である。
配列番号225は、CTLA-4阻害剤トレメリムマブの軽鎖CDR1アミノ酸配列である。
配列番号226は、CTLA-4阻害剤トレメリムマブの軽鎖CDR2アミノ酸配列である。
配列番号227は、CTLA-4阻害剤トレメリムマブの軽鎖CDR3アミノ酸配列である。
配列番号228は、CTLA-4阻害剤ザリフレリマブの重鎖アミノ酸配列である。
配列番号229は、CTLA-4阻害剤ザリフレリマブの軽鎖アミノ酸配列である。
配列番号230は、CTLA-4阻害剤ザリフレリマブの重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列である。
配列番号231は、CTLA-4阻害剤ザリフレリマブの軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列である。
配列番号232は、CTLA-4阻害剤ザリフレリマブの重鎖CDR1アミノ酸配列である。
配列番号233は、CTLA-4阻害剤ザリフレリマブの重鎖CDR2アミノ酸配列である。
配列番号234は、CTLA-4阻害剤ザリフレリマブの重鎖CDR3アミノ酸配列である。
配列番号235は、CTLA-4阻害剤ザリフレリマブの軽鎖CDR1アミノ酸配列である。
配列番号236は、CTLA-4阻害剤ザリフレリマブの軽鎖CDR2アミノ酸配列である。
配列番号237は、CTLA-4阻害剤ザリフレリマブの軽鎖CDR3アミノ酸配列である。
I.導入
急速拡張プロトコル(REP)によってエクスビボで培養されたTILを利用した養子細胞療法は、黒色腫などのがんを有する患者の宿主免疫抑制後の養子細胞療法に成功している。現在の注入受容パラメータは、TILの組成(例えば、CD28、CD8、またはCD4陽性)の読み取り値、ならびにREP産物の拡張の数値倍率及び生存率に依存している。
急速拡張プロトコル(REP)によってエクスビボで培養されたTILを利用した養子細胞療法は、黒色腫などのがんを有する患者の宿主免疫抑制後の養子細胞療法に成功している。現在の注入受容パラメータは、TILの組成(例えば、CD28、CD8、またはCD4陽性)の読み取り値、ならびにREP産物の拡張の数値倍率及び生存率に依存している。
現在のREPプロトコルは、患者に注入されるTILの健康状態についてほとんど洞察を与えていない。T細胞は、ナイーブT細胞からエフェクターT細胞への成熟の過程で、重大な代謝シフトを起こす(Chang,et al.,Nat.Immunol.2016,17,364を参照、その全体が本明細書に明示的に組み込まれ、特に考察のために、ならびに嫌気性及び好気性代謝のマーカー)。例えば、ナイーブT細胞は、ミトコンドリア呼吸に依存してATPを産生するが、TILなどの成熟した健康なエフェクターT細胞は、高度に解糖系であり、好気性解糖に依存して増殖、移動、活性化、及び抗腫瘍効果に必要な生体エネルギー基質を提供する。
現在のTILの製造及び治療プロセスは、長さ、コスト、無菌性の懸念、及び本明細書に記載される他の要因によって制限されているため、抗PD1に対して不応性であるために患者を治療する可能性は厳しく制限されている。実行可能な治療選択肢がほとんどまたはまったく残っていない患者を治療する際に使用するのに適したTIL製造プロセス及びかかるプロセスに基づく治療法を提供することが緊急に必要である。本発明は、抗PD-1治療に対して不応性である非小細胞肺癌(NSCLC)患者の治療に用いることができるTILを生成する際に使用するための短縮された製造プロセスを提供することによって、この必要性を満たす。
II.定義
他に定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解される意味と同じである。本明細書で参照されるすべての特許及び刊行物は、参照によりそれらの全体が組み込まれる。
他に定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解される意味と同じである。本明細書で参照されるすべての特許及び刊行物は、参照によりそれらの全体が組み込まれる。
本明細書で使用される「同時投与」、「同時投与すること」、「組み合わせて投与される」、「組み合わせて投与すること」、「同時(simultaneous)」、及び「同時(concurrent)」という用語は、対象への2つ以上の医薬品有効成分(本発明の好ましい実施形態では、例えば、複数のTIL)の投与を包含し、医薬品有効成分及び/またはそれらの代謝物の両方が、対象において同時に存在するようにする。同時投与には、別々の組成物での同時投与、別々の組成物での異なる時間での投与、または2つ以上の医薬品有効成分が存在する組成物での投与が含まれる。別々の組成物での同時投与及び両方の薬剤が存在する組成物での投与が好ましい。
「インビボ」という用語は、対象の体内で起こる事象を指す。
「インビトロ」という用語は、対象の体外で起こる事象を指す。インビトロアッセイには、生きている細胞または死んでいる細胞が用いられる細胞ベースのアッセイが包含され、無傷の細胞が用いられない無細胞アッセイも含み得る。
「エクスビボ」という用語は、対象の体から除去された細胞、組織、及び/または器官に対する治療または処置の実施を伴う事象を指す。適切には、細胞、組織、及び/または器官は、外科手術または治療の方法で対象の体に戻され得る。
「急速拡張」という用語は、1週間の期間にわたって少なくとも約3倍(または4、5、6、7、8、もしくは9倍)、より好ましくは1週間の期間にわたって少なくとも約10倍(または20、30、40、50、60、70、80、もしくは90倍)、あるいは最も好ましくは1週間の期間にわたって少なくとも約100倍の抗原特異的TILの数の増加を意味する。本明細書では、いくつかの急速拡張プロトコルが説明されている。
本明細書における「腫瘍浸潤リンパ球」または「TIL」とは、対象の血流を離れて腫瘍に移動した白血球として最初に取得された細胞の集団を意味する。TILには、CD8+細胞傷害性T細胞(リンパ球)、Th1及びTh17 CD4+T細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞、ならびにM1マクロファージが含まれるが、これらに限定されない。TILには、一次TIL及び二次TILの両方が含まれる。「一次TIL」は、本明細書に概説されるように患者組織試料から得られるもの(「新たに採取された」と称されることもある)であり、「二次TIL」は、本明細書で考察される拡張または増殖された任意のTIL細胞集団であり、バルクTIL及び拡張TIL(「REP TIL」または「post-REP TIL」)が含まれるが、これらに限定されない。TIL細胞集団には、遺伝子修飾TILが含まれ得る。
本明細書における「細胞の集団」(TILを含む)とは、共通の形質を共有するいくつかの細胞を意味する。一般に、集団は、概して1×106~1×1010の数の範囲であり、異なるTIL集団は、異なる数を含む。例えば、IL-2の存在下での一次TILの初期成長は、およそ1×108細胞のバルクTILの集団をもたらす。REP拡張は、一般に、注入用の1.5×109~1.5×1010細胞の集団を提供するために行われる。
本明細書における「凍結保存されたTIL」とは、一次、バルク、または拡張(REP TIL)のいずれかのTILが、約-150℃~-60℃の範囲で処理及び保管されることを意味する。凍結保存のための一般的な方法は、実施例を含む本明細書の他の場所にも記載されている。明確にするために、「凍結保存されたTIL」は、一次TILのソースとして使用される可能性のある凍結組織試料と区別することができる。
本明細書における「解凍された凍結保存TIL」とは、以前に凍結保存され、その後、細胞培養温度またはTILが患者に投与され得る温度を含むがこれらに限定されない、室温以上に戻るように処理されたTILの集団を意味する。
TILは、一般に、細胞表面マーカーを使用して生化学的に定義されるか、または腫瘍に浸潤して治療を達成するそれらの能力によって機能的に定義されるかのいずれかであり得る。TILは、一般に、CD4、CD8、TCR αβ、CD27、CD28、CD56、CCR7、CD45Ra、CD95、PD-1、及びCD25のうちの1つ以上のバイオマーカーの発現によって分類され得る。さらに及び代替的に、TILは、患者への再導入時に固形腫瘍に浸潤する能力により機能的に定義され得る。
「凍結保存培地(cryopreservation media)」または「凍結保存培地(cryopreservation medium)」という用語は、細胞の凍結保存に使用できる任意の培地を指す。かかる培地は、7%~10%のDMSOを含む培地を含むことができる。例示的な培地には、CryoStor CS10、Hyperthermasol、及びそれらの組み合わせが含まれる。「CS10」という用語は、Stemcell TechnologiesまたはBiolife Solutionsから入手した凍結保存培地を指す。CS10培地は、商品名「CryoStor(登録商標)CS10」と称され得る。CS10培地は、DMSOを含む無血清の動物成分を含まない培地である。
「セントラルメモリーT細胞」という用語は、ヒトではCD45R0+であり、CCR7(CCR7高)及びCD62L(CD62高)を構成的に発現するT細胞のサブセットを指す。セントラルメモリーT細胞の表面表現型には、TCR、CD3、CD127(IL-7R)、及びIL-15Rも含まれる。セントラルメモリーT細胞の転写因子には、BCL-6、BCL-6B、MBD2、及びBMI1が含まれる。セントラルメモリーT細胞は、TCRトリガー後、エフェクター分子としてIL-2及びCD40Lを主に分泌する。セントラルメモリーT細胞は、血液中のCD4コンパートメントで優勢であり、ヒトではリンパ節及び扁桃腺において比例して濃縮される。
「エフェクターメモリーT細胞」という用語は、セントラルメモリーT細胞と同様にCD45R0+であるが、CCR7の構成的発現を失い(CCR7低)、CD62L発現が不均一であるかまたは低い(CD62L低)、ヒトまたは哺乳動物T細胞のサブセットを指す。セントラルメモリーT細胞の表面表現型には、TCR、CD3、CD127(IL-7R)、及びIL-15Rも含まれる。セントラルメモリーT細胞の転写因子には、BLIMP1が含まれる。エフェクターメモリーT細胞は、インターフェロンガンマ、IL-4、及びIL-5を含む、抗原刺激後に高レベルの炎症性サイトカインを急速に分泌する。エフェクターメモリーT細胞は、血液中のCD8コンパートメントで優勢であり、ヒトでは肺、肝臓、及び腸において比例して濃縮される。CD8+エフェクターメモリーT細胞は、大量のパーフォリンを担持する。
「閉鎖系」という用語は、外部環境に対して閉鎖されている系を指す。細胞培養法に適した任意の閉鎖系を、本発明の方法で用いることができる。閉鎖系には、例えば、密閉G容器が含まれるが、これに限定されない。腫瘍セグメントが閉鎖系に付加されると、TILを患者に投与する準備ができるまで、系は外部環境に開かれない。
腫瘍を破壊するためのプロセスを説明するために本明細書で使用される「断片化すること」、「断片」、及び「断片化された」という用語は、腫瘍組織を破砕、スライス、分割、及び細切するなどの機械的断片化法、ならびに腫瘍組織の物理的構造を破壊するための任意の他の方法を含む。
「末梢血単核細胞」及び「PBMC」という用語は、リンパ球(T細胞、B細胞、NK細胞)及び単球を含む、丸い核を有する末梢血細胞を指す。抗原提示細胞として使用される場合(PBMCは抗原提示細胞の一種である)、末梢血単核細胞は、好ましくは、照射された同種異系末梢血単核細胞である。
「末梢血リンパ球」及び「PBL」という用語は、末梢血から拡張したT細胞を指す。いくつかの実施形態では、PBLは、ドナーからの全血またはアフェレーシス産物から分離される。いくつかの実施形態では、PBLは、CD3+CD45+のT細胞表現型などのT細胞表現型の正または負の選択によって、ドナー由来の全血またはアフェレーシス産物から分離される。
「抗CD3抗体」という用語は、成熟T細胞のT細胞抗原受容体におけるCD3受容体に対するヒト、ヒト化、キメラ、またはマウス抗体を含む、抗体またはそのバリアント、例えば、モノクローナル抗体を指す。抗CD3抗体には、ムロモナブとしても知られるOKT-3が含まれる。抗CD3抗体には、T3及びCD3εとしても知られるUHCT1クローンも含まれる。他の抗CD3抗体には、例えば、オテリキシズマブ、テプリズマブ、及びビシリズマブが含まれる。
「OKT-3」(本明細書では「OKT3」とも称される)という用語は、成熟T細胞のT細胞抗原受容体におけるCD3受容体に対するヒト、ヒト化、キメラ、またはマウス抗体を含む、モノクローナル抗体またはそのバイオシミラーもしくはバリアントを指し、市販の形態、例えば、OKT-3(30ng/mL、MACS GMP CD3 pure、Miltenyi Biotech,Inc.,San Diego,CA,USA)及びムロモナブ、またはそれらのバリアント、保存的アミノ酸置換物、グリコフォーム、またはバイオシミラーを含む。ムロモナブの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列を表1に示す(配列番号1及び配列番号2)。OKT-3を産生することができるハイブリドーマは、American Type Culture Collectionに寄託され、ATCC受託番号CRL8001が割り当てられている。OKT-3を産生することができるハイブリドーマは、European Collection of Authenticated Cell Cultures(ECACC)にも寄託され、カタログ番号86022706が割り当てられている。
「IL-2」(本明細書では「IL2」とも称される)という用語は、インターロイキン-2として知られるT細胞成長因子を指し、ヒト及び哺乳動物形態、保存的アミノ酸置換物、グリコフォーム、バイオシミラー、及びバリアントを含む、IL-2のすべての形態を含む。IL-2は、例えば、Nelson,J.Immunol.2004,172,3983-88及びMalek,Annu.Rev.Immunol.2008,26,453-79に記載されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。本発明での使用に好適な組換えヒトIL-2のアミノ酸配列を表2に示す(配列番号3)。例えば、IL-2という用語は、アルデスロイキン(PROLEUKIN、単回使用バイアル当たり2200万IUで複数の供給業者から市販されている)などのヒト組換えIL-2形態、ならびにCellGenix,Inc.,Portsmouth,NH,USA(CELLGRO GMP)またはProSpec-Tany TechnoGene Ltd.,East Brunswick,NJ,USAによって市販されている組換えIL-2形態(カタログ番号CYT-209-b)及び他のベンダーからの他の商用同等物を包含する。アルデスロイキン(デス-アラニル-1、セリン-125ヒトIL-2)は、およそ15kDaの分子量を有する非グリコシル化ヒト組換えIL-2形態である。本発明での使用に好適なアルデスロイキンのアミノ酸配列を表2に示す(配列番号4)。IL-2という用語はまた、ペグ化IL2プロドラッグベンペガルデスロイキン(NKTR-214、平均6個のリジン残基が[(2,7-ビス{[メチルポリ(オキシエチレン)]カルバモイル}-9H-フルオレン-9-イル)メトキシ]カルボニル)で置換されたN6である、配列番号4のようなペグ化ヒト組換えIL-2)を含む、本明細書に記載のIL-2のペグ化形態も包含し、Nektar Therapeutics(South San Francisco,CA,USA)から入手可能であるか、または国際特許出願公開第WO2018/132496 A1号の実施例19に記載の方法、または米国特許出願公開第US2019/0275133 A1号の実施例1に記載の方法など、当該技術分野で知られている方法によって調製することができ、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。本発明での使用に好適なベンペガルデスロイキン(NKTR-214)及び他のペグ化IL-2分子は、米国特許出願公開第US2014/0328791 A1号及び国際特許出願公開第WO2012/065086 A1号に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。本発明での使用に好適な複合化IL-2の代替形態は、米国特許第4,766,106号、同第5,206,344号、同第5,089,261号、及び同第4,902,502号に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。本発明での使用に好適なIL-2の製剤は、米国特許第6,706,289号に記載されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、本発明での使用に好適なIL-2形態は、Synthorx,Inc.から入手可能なTHOR-707である。本発明での使用に好適なTHOR-707及びIL-2の追加の代替形態の調製ならびに特性は、米国特許出願公開第US2020/0181220 A1号及び同第US2020/0330601 A1号に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、本発明での使用に好適なIL-2形態は、単離及び精製IL-2ポリペプチドと、K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、E61、E62、E68、K64、P65、V69、L72、及びY107から選択されるアミノ酸位置で単離及び精製IL-2ポリペプチドに結合する複合部分と、を含む、インターロイキン2(IL-2)複合体であり、アミノ酸残基の番号付けは配列番号5に対応する。いくつかの実施形態では、アミノ酸位置は、T37、R38、T41、F42、F44、Y45、E61、E62、E68、K64、P65、V69、L72、及びY107から選択される。いくつかの実施形態では、アミノ酸位置は、T37、R38、T41、F42、F44、Y45、E61、E62、E68、P65、V69、L72、及びY107から選択される。いくつかの実施形態では、アミノ酸位置は、T37、T41、F42、F44、Y45、P65、V69、L72、及びY107から選択される。いくつかの実施形態では、アミノ酸位置は、R38及びK64から選択される。いくつかの実施形態では、アミノ酸位置は、E61、E62、及びE68から選択される。いくつかの実施形態では、アミノ酸位置は、E62である。いくつかの実施形態では、K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、E61、E62、E68、K64、P65、V69、L72、及びY107から選択されるアミノ酸残基は、リジン、システイン、またはヒスチジンにさらに変異する。いくつかの実施形態では、アミノ酸残基は、システインに変異する。いくつかの実施形態では、アミノ酸残基は、リジンに変異する。いくつかの実施形態では、K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、E61、E62、E68、K64、P65、V69、L72、及びY107から選択されるアミノ酸残基は、非天然アミノ酸にさらに変異する。いくつかの実施形態では、非天然アミノ酸は、N6-アジドエトキシ-L-リジン(AzK)、N6-プロパルギルエトキシ-L-リジン(PraK)、BCN-L-リジン、ノルボルネンリジン、TCO-リジン、メチルテトラジンリジン、アリルオキシカルボニルリジン、2-アミノ-8-オキソノナン酸、2-アミノ-8-オキソオクタン酸、p-アセチル-L-フェニルアラニン、p-アジドメチル-L-フェニルアラニン(pAMF)、p-ヨード-L-フェニルアラニン、m-アセチルフェニルアラニン、2-アミノ-8-オキソノナン酸、p-プロパルギルオキシフェニルアラニン、p-プロパルギル-フェニルアラニン、3-メチル-フェニルアラニン、L-ドーパ、フッ素化フェニルアラニン、イソプロピル-L-フェニルアラニン、p-アジド-L-フェニルアラニン、p-アシル-L-フェニルアラニン、p-ベンゾイル-L-フェニルアラニン、p-ブロモフェニルアラニン、p-アミノ-L-フェニルアラニン、イソプロピル-L-フェニルアラニン、O-アリルチロシン、O-メチル-L-チロシン、O-4-アリル-L-チロシン、4-プロピル-L-チロシン、ホスホノチロシン、トリ-O-アセチル-GlcNAcp-セリン、L-ホスホセリン、ホスホノセリン、L-3-(2-ナフチル)アラニン、2-アミノ-3-((2-((3-(ベンジルオキシ)-3-オキソプロピル)アミノ)エチル)セラニル)プロパン酸、2-アミノ-3-(フェニルセラニル)プロパン酸、またはセレノシステインを含む。いくつかの実施形態では、IL-2複合体は、野生型IL-2ポリペプチドと比較して、IL-2受容体α(IL-2Rα)サブユニットに対する減少した親和性を有する。いくつかの実施形態では、減少した親和性は、野生型IL-2ポリペプチドと比較して、IL-2Rαに対する結合親和性の約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%、または99%を超える減少である。いくつかの実施形態では、減少した親和性は、野生型IL-2ポリペプチドと比較して、約1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、30倍、50倍、100倍、200倍、300倍、500倍、1000倍以上である。いくつかの実施形態では、複合部分は、IL-2とIL-2Rαとの結合を損なうかまたは遮断する。いくつかの実施形態では、複合部分は、水溶性ポリマーを含む。いくつかの実施形態では、追加の複合部分は、水溶性ポリマーを含む。いくつかの実施形態では、水溶性ポリマーの各々は、独立して、ポリエチレングリコール(PEG)、ポリ(プロピレングリコール)(PPG)、エチレングリコール及びプロピレングリコールのコポリマー、ポリ(オキシエチル化ポリオール)、ポリ(オレフィンアルコール)、ポリ(ビニルピロリドン)、ポリ(ヒドロキシアルキルメタクリルアミド)、ポリ(ヒドロキシアルキルメタクリレート)、ポリ(サッカライド)、ポリ(α-ヒドロキシ酸)、ポリ(ビニルアルコール)、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン(POZ)、ポリ(N-アクリロイルモルホリン)、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、水溶性ポリマーの各々は、独立して、PEGを含む。いくつかの実施形態では、PEGは、直鎖状PEGまたは分岐状PEGである。いくつかの実施形態では、水溶性ポリマーの各々は、独立して、ポリサッカライドを含む。いくつかの実施形態では、ポリサッカライドは、デキストラン、ポリシアル酸(PSA)、ヒアルロン酸(HA)、アミロース、ヘパリン、ヘパランサルフェート(HS)、デキストリン、またはヒドロキシエチルデンプン(HES)を含む。いくつかの実施形態では、水溶性ポリマーの各々は、独立して、グリカンを含む。いくつかの実施形態では、水溶性ポリマーの各々は、独立して、ポリアミンを含む。いくつかの実施形態では、複合部分は、タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、追加の複合部分は、タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質の各々は、独立して、アルブミン、トランスフェリン、またはトランスサイレチンを含む。いくつかの実施形態では、タンパク質の各々は、独立して、Fc部分を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質の各々は、独立して、IgGのFc部分を含む。いくつかの実施形態では、複合部分は、ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、追加の複合部分は、ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、タンパク質の各々は、独立して、XTENペプチド、グリシンリッチホモアミノ酸ポリマー(HAP)、PASポリペプチド、エラスチン様ポリペプチド(ELP)、CTPペプチド、またはゼラチン様タンパク質(GLK)ポリマーを含む。いくつかの実施形態では、単離及び精製IL-2ポリペプチドは、グルタミル化によって修飾される。いくつかの実施形態では、複合部分は、単離及び精製IL-2ポリペプチドと直接的に結合される。いくつかの実施形態では、複合部分は、リンカーを介して単離及び精製されたIL-2ポリペプチドと間接的に結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、ホモ二官能性リンカーを含む。いくつかの実施形態では、ホモ二官能性リンカーは、ロマント試薬ジチオビス(スクシンイミジルプロピオネート)DSP、3’3’-ジチオビス(スルホスクシンイミジルプロピオネート)(DTSSP)、ジスクシンイミジルスベラート(DSS)、ビス(スルホスクシンイミジル)スベラート(BS)、ジスクシンイミジルタータラート(DST)、ジスルホスクシンイミジルタータラート(スルホDST)、エチレングリコビス(スクシンイミジルスクシネート)(EGS)、ジスクシンイミジルグルタラート(DSG)、N,N’-ジスクシンイミジルカーボナート(DSC)、ジメチルアジピミデート(DMA)、ジメチルピメリミデート(DMP)、ジメチルスベリミデート(DMS)、ジメチル-3,3’-ジチオビスプロピオンイミデート(DTBP)、1,4-ジ-(3’-(2’-ピリジルジチオ)プロピオンアミド)ブタン(DPDPB)、ビスマレイミドヘキサン(BMH)、ハロゲン化アリール含有化合物(DFDNB)、例えば、1,5-ジフルオロ-2,4-ジニトロベンゼンまたは1,3-ジフルオロ-4,6-ジニトロベンゼン、4,4’-ジフルオロ-3,3’-ジニトロフェニルスルホン(DFDNPS)、ビス-[β-(4-アジドサリチルアミド)エチル]ジスルフィド(BASED)、ホルムアルデヒド、グルタルアルデヒド、1,4-ブタンジオールジグリシジルエーテル、アジピン酸ジヒドラジド、カルボヒドラジド、o-トルイジン、3,3’-ジメチルベンジジン、ベンジジン、α,α’-p-ジアミノジフェニル、ジヨード-p-キシレンスルホン酸、N,N’-エチレン-ビス(ヨードアセトアミド)、またはN,N’-ヘキサメチレンビス(ヨードアセトアミド)を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーを含む。いくつかの実施形態では、ヘテロ二官能性リンカーは、N-スクシンイミジル3-(2-ピリジルジチオ)プロピオネート(sPDP)、長鎖N-スクシンイミジル3-(2-ピリジルジチオ)プロピオネート(LC-sPDP)、水溶性長鎖N-スクシンイミジル3-(2-ピリジルジチオ)プロピオネート(スルホ-LC-sPDP)、スクシンイミジルオキシカルボニル-α-メチル-α-(2-ピリジルジチオ)トルエン(sMPT)、スルホスクシンイミジル-6-[α-メチル-α-(2-ピリジルジチオ)トルアミド]ヘキサノエート(スルホ-LC-sMPT)、スクシンイミジル-4-(N-マレイミドメチル)シクロヘキサン-1-カルボキシレート(sMCC)、スルホスクシンイミジル-4-(N-マレイミドメチル)シクロヘキサン-1-カルボキシレート(スルホ-sMCC)、m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドロキシスクシンイミドエステル(MB)、m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドロキシスルホスクシンイミドエステル(スルホ-MB)、N-スクシンイミジル(4-ヨードアセチル)アミノベンゾエート(sIAB)、スルホスクシンイミジル(4-ヨードアセチル)アミノベンゾエート(スルホ-sIAB)、スクシンイミジル-4-(p-マレイミドフェニル)ブチレート(sMPB)、スルホスクシンイミジル-4-(p-マレイミドフェニル)ブチレート(スルホ-sMPB)、N-(γ-マレイミドブチリルオキシ)スクシンイミドエステル(GMB)、N-(γ-マレイミドブチリルオキシ)スルホスクシンイミドエステル(スルホ-GMB)、スクシンイミジル6-((ヨードアセチル)アミノ)ヘキサノエート(sIAX)、スクシンイミジル6-[6-(((ヨードアセチル)アミノ)ヘキサノイル)アミノ]ヘキサノエート(slAXX)、スクシンイミジル4-(((ヨードアセチル)アミノ)メチル)シクロヘキサン-1-カルボキシレート(sIAC)、スクシンイミジル6-(((((4-ヨードアセチル)アミノ)メチル)シクロヘキサン-1-カルボニル)アミノ)ヘキサノエート(sIACX)、p-ニトロフェニル ヨードアセテート(NPIA)、カルボニル反応性及びスルフヒドリル反応性架橋剤、例えば、4-(4-N-マレイミドフェニル)酪酸ヒドラジド(MPBH)、4-(N-マレイミドメチル)シクロヘキサン-1-カルボキシル-ヒドラジド-8(M2C2H)、3-(2-ピリジルジチオ)プロピオニルヒドラジド(PDPH)、N-ヒドロキシスクシンイミジル-4-アジドサリチル酸(NHs-AsA)、N-ヒドロキシスルホスクシンイミジル-4-アジドサリチル酸(スルホ-NHs-AsA)、スルホスクシンイミジル
-(4-アジドサリチルアミド)ヘキサノエート(スルホ-NHs-LC-AsA)、スルホスクシンイミジル-2-(p-アジドサリチルアミド)エチル-1,3’-ジチオプロピオネート(sAsD)、N-ヒドロキシスクシンイミジル-4-アジドベンゾエート(HsAB)、N-ヒドロキシスルホスクシンイミジル-4-アジドベンゾエート(スルホ-HsAB)、N-スクシンイミジル-6-(4’-アジド-2’-ニトロフェニルアミノ)ヘキサノエート(sANPAH)、スルホスクシンイミジル-6-(4’-アジド-2’-ニトロフェニルアミノ)ヘキサノエート(スルホ-sANPAH)、N-5-アジド-2-ニトロベンゾイルオキシスクシンイミド(ANB-NO)、スルホスクシンイミジル-2-(m-アジド-o-ニトロベンズアミド)-エチル-1,3’-ジチオプロピオネート(sAND)、N-スクシンイミジル-4(4-アジドフェニル)1,3’-ジチオプロピオネート(sADP)、N-スルホスクシンイミジル(4-アジドフェニル)-1,3’-ジチオプロピオネート(スルホ-sADP)、スルホスクシンイミジル4-(ρ-アジドフェニル)ブチレート(スルホ-sAPB)、スルホスクシンイミジル2-(7-アジド-4-メチルクマリン-3-アセトアミド)エチル-1,3’-ジチオプロピオネート(sAED)、スルホスクシンイミジル7-アジド-4-メチルクマリン-3-アセテート(スルホ-sAMCA)、p-ニトロフェニル ジアゾピルベート(pNPDP)、p-ニトロフェニル-2-ジアゾ-3,3,3-トリフルオロプロピオネート(PNP-DTP)、1-(ρ-アジドサリチルアミド)-4-(ヨードアセトアミド)ブタン(AsIB)、N-[4-(ρ-アジドサリチルアミド)ブチル]-3’-(2’-ピリジルジチオ)プロピオンアミド(APDP)、ベンゾフェノン-4-ヨードアセトアミド、p-アジドベンゾイル ヒドラジド(ABH)、4-(ρ-アジドサリチルアミド)ブチルアミン(AsBA)、またはp-アジドフェニル グリオキサール(APG)を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、任意選択でジペプチドリンカーを含む、切断可能なリンカーを含む。いくつかの実施形態では、ジペプチドリンカーは、Val-Cit、Phe-Lys、Val-Ala、またはVal-Lysを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、切断不可能なリンカーを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、任意選択で、マレイミドカプロイル(mc)、スクシンイミジル-4-(N-マレイミドメチル)シクロヘキサン-1-カルボキシレート(sMCC)、またはスルホスクシンイミジル-4-(N-マレイミドメチル)シクロヘキサン-1-カルボキシレート(スルホ-sMCC)を含むマレイミド基を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、スペーサーをさらに含む。いくつかの実施形態では、スペーサーは、p-アミノベンジルアルコール(PAB)、p-アミノベンジルオキシカルボニル(PABC)、その誘導体、または類似体を含む。いくつかの実施形態では、複合部分は、IL-2複合体の血清半減期を延長することができる。いくつかの実施形態では、追加の複合部分は、IL-2複合体の血清半減期を延長することができる。いくつかの実施形態では、本発明での使用に好適なIL-2形態は、本明細書に記載のIL-2形態のうちのいずれかの断片である。いくつかの実施形態では、本発明での使用に好適なIL-2形態は、米国特許出願公開第US2020/0181220 A1号及び米国特許出願公開第US2020/0330601 A1号に開示されているようにペグ化されている。いくつかの実施形態では、本発明での使用に好適なIL-2形態は、ポリエチレングリコール(PEG)を含む複合部分に共有結合したN6-アジドエトキシ-L-リジン(AzK)を含むIL-2ポリペプチドを含む、IL-2複合体であり、IL-2ポリペプチドは、配列番号5と少なくとも80%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、AzKは、配列番号5内のアミノ酸位置に関して、K35位、F42位、F44位、K43位、E62位、P65位、R38位、T41位、E68位、Y45位、V69位、またはL72位でアミノ酸を置換する。いくつかの実施形態では、IL-2ポリペプチドは、配列番号5に対して1残基のN末端欠失を含む。いくつかの実施形態では、本発明での使用に好適なIL-2形態は、IL-2Rアルファ鎖会合を欠いているが、中間親和性IL-2Rベータ-ガンマシグナル伝達複合体との正常な結合を保持している。いくつかの実施形態では、本発明での使用に好適なIL-2形態は、ポリエチレングリコール(PEG)を含む複合部分に共有結合したN6-アジドエトキシ-L-リジン(AzK)を含むIL-2ポリペプチドを含む、IL-2複合体であり、IL-2ポリペプチドは、配列番号5と少なくとも90%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、AzKは、配列番号5内のアミノ酸位置に関して、K35位、F42位、F44位、K43位、E62位、P65位、R38位、T41位、E68位、Y45位、V69位、またはL72位でアミノ酸を置換する。いくつかの実施形態では、本発明での使用に好適なIL-2形態は、ポリエチレングリコール(PEG)を含む複合部分に共有結合したN6-アジドエトキシ-L-リジン(AzK)を含むIL-2ポリペプチドを含む、IL-2複合体であり、IL-2ポリペプチドは、配列番号5と少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、AzKは、配列番号5内のアミノ酸位置に関して、K35位、F42位、F44位、K43位、E62位、P65位、R38位、T41位、E68位、Y45位、V69位、またはL72位でアミノ酸を置換する。いくつかの実施形態では、本発明での使用に好適なIL-2形態は、ポリエチレングリコール(PEG)を含む複合部分に共有結合したN6-アジドエトキシ-L-リジン(AzK)を含むIL-2ポリペプチドを含む、IL-2複合体であり、IL-2ポリペプチドは、配列番号5と少なくとも98%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、AzKは、配列番号5内のアミノ酸位置に関して、K35位、F42位、F44位、K43位、E62位、P65位、R38位、T41位、E68位、Y45位、V69位、またはL72位でアミノ酸を置換する。
-(4-アジドサリチルアミド)ヘキサノエート(スルホ-NHs-LC-AsA)、スルホスクシンイミジル-2-(p-アジドサリチルアミド)エチル-1,3’-ジチオプロピオネート(sAsD)、N-ヒドロキシスクシンイミジル-4-アジドベンゾエート(HsAB)、N-ヒドロキシスルホスクシンイミジル-4-アジドベンゾエート(スルホ-HsAB)、N-スクシンイミジル-6-(4’-アジド-2’-ニトロフェニルアミノ)ヘキサノエート(sANPAH)、スルホスクシンイミジル-6-(4’-アジド-2’-ニトロフェニルアミノ)ヘキサノエート(スルホ-sANPAH)、N-5-アジド-2-ニトロベンゾイルオキシスクシンイミド(ANB-NO)、スルホスクシンイミジル-2-(m-アジド-o-ニトロベンズアミド)-エチル-1,3’-ジチオプロピオネート(sAND)、N-スクシンイミジル-4(4-アジドフェニル)1,3’-ジチオプロピオネート(sADP)、N-スルホスクシンイミジル(4-アジドフェニル)-1,3’-ジチオプロピオネート(スルホ-sADP)、スルホスクシンイミジル4-(ρ-アジドフェニル)ブチレート(スルホ-sAPB)、スルホスクシンイミジル2-(7-アジド-4-メチルクマリン-3-アセトアミド)エチル-1,3’-ジチオプロピオネート(sAED)、スルホスクシンイミジル7-アジド-4-メチルクマリン-3-アセテート(スルホ-sAMCA)、p-ニトロフェニル ジアゾピルベート(pNPDP)、p-ニトロフェニル-2-ジアゾ-3,3,3-トリフルオロプロピオネート(PNP-DTP)、1-(ρ-アジドサリチルアミド)-4-(ヨードアセトアミド)ブタン(AsIB)、N-[4-(ρ-アジドサリチルアミド)ブチル]-3’-(2’-ピリジルジチオ)プロピオンアミド(APDP)、ベンゾフェノン-4-ヨードアセトアミド、p-アジドベンゾイル ヒドラジド(ABH)、4-(ρ-アジドサリチルアミド)ブチルアミン(AsBA)、またはp-アジドフェニル グリオキサール(APG)を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、任意選択でジペプチドリンカーを含む、切断可能なリンカーを含む。いくつかの実施形態では、ジペプチドリンカーは、Val-Cit、Phe-Lys、Val-Ala、またはVal-Lysを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、切断不可能なリンカーを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、任意選択で、マレイミドカプロイル(mc)、スクシンイミジル-4-(N-マレイミドメチル)シクロヘキサン-1-カルボキシレート(sMCC)、またはスルホスクシンイミジル-4-(N-マレイミドメチル)シクロヘキサン-1-カルボキシレート(スルホ-sMCC)を含むマレイミド基を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、スペーサーをさらに含む。いくつかの実施形態では、スペーサーは、p-アミノベンジルアルコール(PAB)、p-アミノベンジルオキシカルボニル(PABC)、その誘導体、または類似体を含む。いくつかの実施形態では、複合部分は、IL-2複合体の血清半減期を延長することができる。いくつかの実施形態では、追加の複合部分は、IL-2複合体の血清半減期を延長することができる。いくつかの実施形態では、本発明での使用に好適なIL-2形態は、本明細書に記載のIL-2形態のうちのいずれかの断片である。いくつかの実施形態では、本発明での使用に好適なIL-2形態は、米国特許出願公開第US2020/0181220 A1号及び米国特許出願公開第US2020/0330601 A1号に開示されているようにペグ化されている。いくつかの実施形態では、本発明での使用に好適なIL-2形態は、ポリエチレングリコール(PEG)を含む複合部分に共有結合したN6-アジドエトキシ-L-リジン(AzK)を含むIL-2ポリペプチドを含む、IL-2複合体であり、IL-2ポリペプチドは、配列番号5と少なくとも80%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、AzKは、配列番号5内のアミノ酸位置に関して、K35位、F42位、F44位、K43位、E62位、P65位、R38位、T41位、E68位、Y45位、V69位、またはL72位でアミノ酸を置換する。いくつかの実施形態では、IL-2ポリペプチドは、配列番号5に対して1残基のN末端欠失を含む。いくつかの実施形態では、本発明での使用に好適なIL-2形態は、IL-2Rアルファ鎖会合を欠いているが、中間親和性IL-2Rベータ-ガンマシグナル伝達複合体との正常な結合を保持している。いくつかの実施形態では、本発明での使用に好適なIL-2形態は、ポリエチレングリコール(PEG)を含む複合部分に共有結合したN6-アジドエトキシ-L-リジン(AzK)を含むIL-2ポリペプチドを含む、IL-2複合体であり、IL-2ポリペプチドは、配列番号5と少なくとも90%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、AzKは、配列番号5内のアミノ酸位置に関して、K35位、F42位、F44位、K43位、E62位、P65位、R38位、T41位、E68位、Y45位、V69位、またはL72位でアミノ酸を置換する。いくつかの実施形態では、本発明での使用に好適なIL-2形態は、ポリエチレングリコール(PEG)を含む複合部分に共有結合したN6-アジドエトキシ-L-リジン(AzK)を含むIL-2ポリペプチドを含む、IL-2複合体であり、IL-2ポリペプチドは、配列番号5と少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、AzKは、配列番号5内のアミノ酸位置に関して、K35位、F42位、F44位、K43位、E62位、P65位、R38位、T41位、E68位、Y45位、V69位、またはL72位でアミノ酸を置換する。いくつかの実施形態では、本発明での使用に好適なIL-2形態は、ポリエチレングリコール(PEG)を含む複合部分に共有結合したN6-アジドエトキシ-L-リジン(AzK)を含むIL-2ポリペプチドを含む、IL-2複合体であり、IL-2ポリペプチドは、配列番号5と少なくとも98%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、AzKは、配列番号5内のアミノ酸位置に関して、K35位、F42位、F44位、K43位、E62位、P65位、R38位、T41位、E68位、Y45位、V69位、またはL72位でアミノ酸を置換する。
いくつかの実施形態では、本発明での使用に好適なIL-2形態は、ALKS-4230(配列番号6)としても知られるネムバロイキンアルファであり、Alkermes,Inc.から入手可能である。ネムバロイキンアルファは、ペプチジルリンカー(60GG61)を介してヒトインターロイキン2断片(62-132)と融合し、ペプチジルリンカー(133GSGGGS138)を介してヒトインターロイキン2受容体α鎖断片(139-303)と融合し、チャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞で産生され、グリコシル化されている、ヒトインターロイキン2断片(1-59)、バリアント(Cys125>Ser51);G2ペプチドリンカー(60-61)を介してヒトインターロイキン2(IL-2)(4-74)-ペプチド(62-132)と融合し、GSG3Sペプチドリンカー(133-138)を介してヒトインターロイキン2受容体α鎖(IL2Rサブユニットアルファ、IL2Rα、IL2RA)(1-165)-ペプチド(139-303)と融合し、チャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞で産生され、アルファグリコシル化されている、ヒトインターロイキン2(IL-2)(75-133)-ペプチド[Cys125(51)>Ser]-変異体(1-59)としても知られている。ネムバロイキンアルファのアミノ酸配列は、配列番号6に示されている。いくつかの実施形態では、ネムバロイキンアルファは、以下の翻訳後修飾を示す:以下の位置でのジスルフィド架橋:31-116、141-285、184-242、269-301、166-197、または166-199、168-199または168-197(配列番号6の番号付けを使用する)、及び以下の位置でのグリコシル化部位:配列番号6の番号付けを使用する、N187、N206、T212。ネムバロイキンアルファの調製及び特性、ならびに本発明での使用に好適な追加の代替形態のIL-2は、米国特許出願公開第US2021/0038684 A1号及び米国特許第10,183,979号に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、本発明での使用に好適なIL-2形態は、配列番号6と少なくとも80%、少なくとも90%、少なくとも95%、または少なくとも90%の配列同一性を有するタンパク質である。いくつかの実施形態では、本発明での使用に好適なIL-2形態は、配列番号6で示されるアミノ酸配列またはその保存的アミノ酸置換を有する。いくつかの実施形態では、本発明での使用に好適なIL-2形態は、配列番号7のアミノ酸24~452、またはそのバリアント、断片、もしくは誘導体を含む融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、本発明での使用に好適なIL-2形態は、配列番号7のアミノ酸24~452と少なくとも80%、少なくとも90%、少なくとも95%、もしくは少なくとも90%の配列同一性を有するアミノ酸配列、またはそのバリアント、断片、もしくは誘導体を含む融合タンパク質である。本発明での使用に好適な他のIL-2形態は、米国特許第10,183,979号に記載されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。任意選択で、いくつかの実施形態では、本発明での使用に好適なIL-2形態は、ムチンドメインポリペプチドリンカーによって第2の融合パートナーと連結された第1の融合パートナーを含む融合タンパク質であり、第1の融合パートナーは、IL-1Rα、またはIL-1Rαと少なくとも98%のアミノ酸配列同一性を有し、IL-Rαの受容体アンタゴニスト活性を有するタンパク質であり、第2の融合パートナーは、Fc領域を含む免疫グロブリンの全部または一部を含み、ムチンドメインポリペプチドリンカーは、配列番号8、または配列番号8と少なくとも90%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、融合タンパク質の半減期は、ムチンドメインポリペプチドリンカーの非存在下での第2の融合パートナーとの第1の融合パートナーの融合と比較して改善される。
いくつかの実施形態では、本発明での使用に好適なIL-2形態は、相補性決定領域HCDR1、HCDR2、HCDR3を含む、重鎖可変領域(VH)と、LCDR1、LCDR2、LCDR3を含む軽鎖可変領域(VL)と、VHまたはVLのCDRに移植されたIL-2分子またはその断片と、を含む抗体サイトカイン移植タンパク質を含み、抗体サイトカイン移植タンパク質は、制御性T細胞よりもTエフェクター細胞を優先的に拡張させる。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイン移植タンパク質は、相補性決定領域HCDR1、HCDR2、HCDR3を含む、重鎖可変領域(VH)と、LCDR1、LCDR2、LCDR3を含む軽鎖可変領域(VL)と、VHまたはVLのCDRに移植されたIL-2分子またはその断片と、を含み、IL-2分子は、ムテインであり、抗体サイトカイン移植タンパク質は、制御性T細胞よりもTエフェクター細胞を優先的に拡張させる。いくつかの実施形態では、IL-2レジメンは、米国特許出願公開第2020/0270334 A1号に記載されている抗体の投与を含み、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイン移植タンパク質は、相補性決定領域HCDR1、HCDR2、HCDR3を含む、重鎖可変領域(VH)と、LCDR1、LCDR2、LCDR3を含む軽鎖可変領域(VL)と、VHまたはVLのCDRに移植されたIL-2分子またはその断片と、を含み、IL-2分子は、ムテインであり、抗体サイトカイン移植タンパク質は、制御性T細胞よりもTエフェクター細胞を優先的に拡張させ、抗体は、配列番号39を含むIgGクラス軽鎖及び配列番号38を含むIgGクラス重鎖、配列番号37を含むIgGクラスの軽鎖及び配列番号29を含むIgGクラスの重鎖、配列番号39を含むIgGクラス軽鎖及び配列番号29を含むIgGクラス重鎖、配列番号37を含むIgGクラス軽鎖及び配列番号38を含むIgGクラス重鎖からなる群から選択されるIgGクラスの重鎖及びIgGクラスの軽鎖をさらに含む。
いくつかの実施形態では、IL-2分子またはその断片は、VHのHCDR1に移植され、IL-2分子は、ムテインである。いくつかの実施形態では、IL-2分子またはその断片は、VHのHCDR2に移植され、IL-2分子は、ムテインである。いくつかの実施形態では、IL-2分子またはその断片は、VHのHCDR3に移植され、IL-2分子は、ムテインである。いくつかの実施形態では、IL-2分子またはその断片は、VLのLCDR1に移植され、IL-2分子は、ムテインである。いくつかの実施形態では、IL-2分子またはその断片は、VLのLCDR2に移植され、IL-2分子は、ムテインである。いくつかの実施形態では、IL-2分子またはその断片は、VLのLCDR3に移植され、IL-2分子は、ムテインである。
IL-2分子の挿入は、CDRのN末端領域もしくはその近く、CDRの中間領域、またはCDRのC末端領域もしくはその近くであり得る。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイン移植タンパク質は、CDRに組み込まれたIL-2分子を含み、IL2配列はCDR配列をフレームシフトしない。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイン移植タンパク質は、CDRに組み込まれたIL-2分子を含み、IL-2配列はCDR配列のすべてまたは一部を置き換える。IL-2分子による置き換えは、CDRのN末端領域、CDRの中間領域、またはCDRのC末端領域もしくはその近くであり得る。IL-2分子による置き換えは、CDR配列のわずか1個もしくは2個のアミノ酸、またはCDR配列全体であり得る。
いくつかの実施形態では、IL-2分子は、ペプチドリンカーなしで、CDR配列とIL-2配列との間に追加のアミノ酸なしで、CDRに直接的に移植される。いくつかの実施形態では、IL-2分子は、ペプチドリンカーを用いて、CDR配列とIL-2配列との間に1つ以上の追加のアミノ酸を伴って、CDRに間接的に移植される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のIL-2分子は、IL-2ムテインである。いくつかの事例では、IL-2ムテインは、R67A置換を含む。いくつかの実施形態では、IL-2ムテインは、配列番号14または配列番号15のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、IL-2ムテインは、米国特許出願公開第US2020/0270334 A1号の表1のアミノ酸配列を含み、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイン移植タンパク質は、配列番号16、配列番号19、配列番号22及び配列番号25からなる群から選択されるHCDR1を含む。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイン移植タンパク質は、配列番号7、配列番号10、配列番号13及び配列番号16からなる群から選択されるHCDR1を含む。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイン移植タンパク質は、配列番号17、配列番号20、配列番号23、及び配列番号26からなる群から選択されるHCDR2からなる群から選択されるHCDR1を含む。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイン移植タンパク質は、配列番号18、配列番号21、配列番号24、及び配列番号27からなる群から選択されるHCDR3を含む。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイン移植タンパク質は、配列番号28のアミノ酸配列を含むVH領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイン移植タンパク質は、配列番号29のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイン移植タンパク質は、配列番号36のアミノ酸配列を含むVL領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイン移植タンパク質は、配列番号37のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイン移植タンパク質は、配列番号28のアミノ酸配列を含むVH領域及び配列番号36のアミノ酸配列を含むVL領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイン移植タンパク質は、配列番号29のアミノ酸配列を含む重鎖領域及び配列番号37のアミノ酸配列を含む軽鎖領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイン移植タンパク質は、配列番号29のアミノ酸配列を含む重鎖領域及び配列番号39のアミノ酸配列を含む軽鎖領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイン移植タンパク質は、配列番号38のアミノ酸配列を含む重鎖領域及び配列番号37のアミノ酸配列を含む軽鎖領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイン移植タンパク質は、配列番号38のアミノ酸配列を含む重鎖領域及び配列番号39のアミノ酸配列を含む軽鎖領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイン移植タンパク質は、米国特許出願公開第2020/0270334 A1号のIgG.IL2F71A.H1もしくはIgG.IL2R67A.H1、またはそのバリアント、誘導体、もしくは断片、またはその保存的アミノ酸置換体、またはそれと少なくとも80%、少なくとも90%、少なくとも95%、または少なくとも98%の配列同一性を有するタンパク質を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体サイトカイン移植タンパク質の抗体成分は、免疫グロブリン配列、フレームワーク配列、またはパリビズマブのCDR配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体サイトカイン移植タンパク質は、アルデスロイキンまたは同等の分子などであるがこれらに限定されない野生型IL-2分子よりも長い血清半減期を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体サイトカイン移植タンパク質は、表3に記載される配列を有する。
「IL-4」(本明細書では「IL4」とも称される)という用語は、インターロイキン4として知られるサイトカインを指し、これは、Th2 T細胞、ならびに好酸球、好塩基球、及び肥満細胞によって産生される。IL-4は、ナイーブヘルパーT細胞(Th0細胞)からTh2 T細胞への分化を調節する。Steinke and Borish,Respir.Res.2001,2,66-70。IL-4によって活性化されると、Th2 T細胞は、その後、正のフィードバックループで追加のIL-4を産生する。IL-4は、B細胞増殖及びクラスII MHC発現も刺激し、B細胞からのIgE及びIgG1発現へのクラス切り替えを誘導する。本発明での使用に好適な組換えヒトIL-4は、ProSpec-Tany TechnoGene Ltd.,East Brunswick,NJ,USA(カタログ番号CYT-211)及びThermoFisher Scientific,Inc.,Waltham,MA,USA(ヒトIL-15組換えタンパク質、カタログ番号Gibco CTP0043)を含む、複数の供給業者から市販されている。本発明での使用に好適な組換えヒトIL-4のアミノ酸配列を表2に示す(配列番号9)。
「IL-7」(本明細書では「IL7」とも称される)という用語は、インターロイキン7として知られるグリコシル化組織由来のサイトカインを指し、これは、間質細胞及び上皮細胞、ならびに樹状細胞から得ることができる。Fry and Mackall,Blood 2002,99,3892-904。IL-7は、T細胞の発達を刺激することができる。IL-7は、IL-7受容体アルファ及び共通ガンマ鎖受容体からなるヘテロ二量体であるIL-7受容体に結合し、これは、胸腺内でのT細胞発生及び末梢内での生存に重要な一連のシグナルである。本発明での使用に好適な組換えヒトIL-7は、ProSpec-Tany TechnoGene Ltd.,East Brunswick,NJ,USA(カタログ番号CYT-254)及びThermoFisher Scientific,Inc.,Waltham,MA,USA(ヒトIL-15組換えタンパク質、カタログ番号Gibco PHC0071)を含む、複数の供給業者から市販されている。本発明での使用に好適な組換えヒトIL-7のアミノ酸配列を表2に示す(配列番号10)。
「IL-15」(本明細書では「IL15」とも称される)という用語は、インターロイキン-15として知られるT細胞成長因子を指し、ヒト及び哺乳動物形態、保存的アミノ酸置換物、グリコフォーム、バイオシミラー、及びバリアントを含む、IL-2のすべての形態を含む。IL-15は、例えば、Fehniger and Caligiuri,Blood 2001,97,14-32に記載されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。IL-15は、β及びγシグナル伝達受容体サブユニットをIL-2と共有する。組換えヒトIL-15は、12.8kDaの分子量を有する114個のアミノ酸(及びN末端メチオニン)を含む単一の非グリコシル化ポリペプチド鎖である。組換えヒトIL-15は、ProSpec-Tany TechnoGene Ltd.,East Brunswick,NJ,USA(カタログ番号CYT-230-b)及びThermoFisher Scientific,Inc.,Waltham,MA,USA(ヒトIL-15組換えタンパク質、カタログ番号34-8159-82)を含む、複数の供給業者から市販されている。本発明での使用に好適な組換えヒトIL-15のアミノ酸配列を表2に示す(配列番号11)。
「IL-21」(本明細書では「IL21」とも称される)という用語は、インターロイキン-21として知られる多面発現性サイトカインタンパク質を指し、ヒト及び哺乳動物形態、保存的アミノ酸置換物、グリコフォーム、バイオシミラー、及びバリアントを含む、IL-21のすべての形態を含む。IL-21は、例えば、Spolski and Leonard,Nat.Rev.Drug.Disc.2014,13,379-95に記載されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。IL-21は、主にナチュラルキラーT細胞及び活性化ヒトCD4+T細胞によって産生される。組換えヒトIL-21は、15.4kDaの分子量を有する132個のアミノ酸を含む単一の非グリコシル化ポリペプチド鎖である。組換えヒトIL-21は、ProSpec-Tany TechnoGene Ltd.,East Brunswick,NJ,USA(カタログ番号CYT-408-b)及びThermoFisher Scientific,Inc.,Waltham,MA,USA(ヒトIL-21組換えタンパク質、カタログ番号14-8219-80)を含む、複数の供給業者から市販されている。本発明での使用に好適な組換えヒトIL-21のアミノ酸配列を表2に示す(配列番号12)。
「抗腫瘍有効量」、「腫瘍阻害有効量」、または「治療量」が示される場合、投与される本発明の組成物の正確な量は、患者(対象)の年齢、体重、腫瘍サイズ、感染または転移の程度、及び健康状態の個人差を考慮して、医師によって決定され得る。本明細書に記載される腫瘍浸潤リンパ球(例えば、二次TILまたは遺伝子修飾細胞傷害性リンパ球)を含む薬学的組成物が、104~1011細胞/kg体重(例えば、105~106、105~1010、105~1011、106~1010、106~1011、107~1011、107~1010、108~1011、108~1010、109~1011、または109~1010細胞/kg体重)(それらの範囲内のすべての整数値を含む)の投与量で投与され得ると概説され得る。TIL(場合によっては、遺伝子修飾細胞傷害性リンパ球を含む)組成物もまた、これらの投与量で複数回投与され得る。TIL(場合によっては、遺伝的を含む)は、免疫療法で一般的に知られている注入技法を使用することにより投与することができる(例えば、Rosenberg et al.,New Eng.J.of Med.1988,319:1676を参照)。特定の患者に最適な投薬量及び治療レジーム(regime)は、患者を疾患の兆候について監視し、適宜に治療を調整することによって、医学分野の技術者によって容易に決定され得る。
「血液学的悪性腫瘍」、「血液系悪性腫瘍」という用語または相関する意味の用語は、血液、骨髄、リンパ節、及びリンパ系の組織を含むが、これらに限定されない、哺乳動物の造血組織及びリンパ組織のがん及び腫瘍を指す。血液学的悪性腫瘍は、「液体腫瘍」とも称される。血液学的悪性腫瘍には、急性リンパ芽球性白血病(ALL)、慢性リンパ性リンパ腫(CLL)、小リンパ球性リンパ腫(SLL)、急性骨髄性白血病(AML)、慢性骨髄性白血病(CML)、多発性骨髄腫、急性単球性白血病(AMoL)、ホジキンリンパ腫、及び非ホジキンリンパ腫が含まれ得るが、これらに限定されない。「B細胞血液学的悪性腫瘍」という用語は、B細胞を冒す血液学的悪性腫瘍を指す。
「液体腫瘍」という用語は、本来流体である異常な細胞塊を指す。液体腫瘍癌には、白血病、骨髄腫、及びリンパ腫、ならびに他の血液学的悪性腫瘍が含まれるが、これらに限定されない。液体腫瘍から取得されたTILは、本明細書では骨髄浸潤リンパ球(MIL)とも称され得る。末梢血中で循環する液体腫瘍を含む液体腫瘍から得られるTILは、本明細書ではPBLとも称され得る。MIL、TIL、及びPBLという用語は、本明細書で互換的に使用され、細胞が由来する組織タイプに基づいてのみ異なる。
本明細書で使用される「微小環境」という用語は、全体としての固形もしくは血液学的腫瘍微小環境、または微小環境内の細胞の個々のサブセットを指し得る。本明細書で使用される腫瘍微小環境は、Swartz,et al.,Cancer Res.,2012,72,2473に記載されるように、「腫瘍性形質転換を促進し、腫瘍成長及び浸潤を支持し、腫瘍を宿主免疫から保護し、治療抵抗性を助長し、かつ優勢な転移を成功させるニッチを提供する、細胞、可溶性因子、シグナル伝達分子、細胞外マトリックス、及び機械的手がかり」の複合混合物を指す。腫瘍はT細胞によって認識されるべき抗原を発現するが、微小環境による免疫抑制のため、免疫系による腫瘍クリアランスはまれである。
いくつかの実施形態では、本発明は、TIL集団でがんを治療する方法を含み、患者は、本発明によるTILの注入前に骨髄非破壊的化学療法で前治療される。いくつかの実施形態では、TIL集団が提供され得、患者は、本発明によるTILの注入前に骨髄非破壊的化学療法で前治療される。いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的化学療法は、シクロホスファミド60mg/kg/日で2日間(TIL注入の27日前及び26日前)、ならびにフルダラビン25mg/m2/日で5日間(TIL注入の27日前~23日前)である。いくつかの実施形態では、本発明による骨髄非破壊的化学療法及びTIL注入(0日目)後、患者は、生理学的許容範囲まで8時間毎に720,000IU/kgでIL-2の静脈内注入を受ける。
実験的発見は、腫瘍特異的Tリンパ球の養子移入前のリンパ球枯渇が、制御性T細胞及び免疫系の競合要素(「サイトカインシンク」)を排除することによって治療有効性を増強する上で重要な役割を果たすことを示す。したがって、本発明のいくつかの実施形態は、本発明のTILを導入する前に、患者に対してリンパ球枯渇ステップ(「免疫抑制コンディショニング」と称されることもある)を利用する。
「有効量」または「治療有効量」という用語は、疾患治療を含むが、これに限定されない、意図された用途を達成するのに十分である、本明細書に記載の化合物または化合物の組み合わせの量を指す。治療有効量は、意図される用途(インビトロもしくはインビボ)、または治療される対象及び病状(例えば、対象の体重、年齢、及び性別)、病状の重症度、または投与方法に応じて異なり得る。この用語は、標的細胞において特定の応答(例えば、血小板粘着及び/または細胞遊走の低減)を誘導する用量にも適用される。特定の用量は、選択された特定の化合物、従うべき投薬レジメン、化合物が他の化合物と組み合わせて投与されるか、投与のタイミング、それが投与される組織、及び化合物が運ばれる物理的送達系に応じて異なる。
「治療」、「治療すること」、「治療する」などの用語は、所望の薬理学的及び/または生理学的効果を得ることを指す。その効果は、その疾患または症状を完全にまたは部分的に予防するという観点において予防的であり得、及び/または疾患及び/またはその疾患に起因する副作用の部分的または完全な治癒という観点において治療的であり得る。本明細書で使用される「治療」は、哺乳動物、特にヒトにおける疾患のあらゆる治療を包含し、(a)疾患にかかりやすい可能性があるが、まだ疾患を有すると診断されていない対象に疾患が生じるのを予防すること、(b)疾患を抑制すること、すなわち、その発症または進行を抑止すること、及び(c)疾患を軽減すること、すなわち、疾患の退行を引き起こし、及び/または1つ以上の疾患症状を軽減することを含む。「治療」は、疾患または状態がない場合でさえも、薬理学的効果を提供するための薬剤の送達を包含するようにも意図されている。例えば、「治療」は、病状がない場合、例えば、ワクチンの場合に免疫応答を誘発するか、または免疫を与えることができる組成物の送達を包含する。
「異種」という用語は、核酸またはタンパク質の一部に関して使用される場合、核酸またはタンパク質が、自然界では互いに同じ関係では見出されない2つ以上の部分配列を含むことを示す。例えば、核酸は、典型的には、組換え的に産生され、新たな機能的核酸、例えば、ある供給源からのプロモーター及び別の供給源からのコード領域、または異なる供給源からのコード領域を作製するように配置された無関係の遺伝子由来の2つ以上の配列を有する。同様に、異種タンパク質は、そのタンパク質が、自然界では互いに同じ関係では見出されない2つ以上の部分配列を含むことを示す(例えば、融合タンパク質)。
2つ以上の核酸またはポリペプチドの文脈における「配列同一性」、「同一性パーセント」、及び「配列同一性パーセント」(もしくはそれらの同義語、例えば「99%同一」)という用語は、同じであるか、または配列同一性の一部としていかなる保存的アミノ酸置換も考慮せずに、最大一致のために比較し整列させた場合(必要に応じてギャップを導入する)、特定のパーセンテージの同じヌクレオチドもしくはアミノ酸残基を有する2つ以上の配列または部分配列を指す。同一性パーセントは、配列比較ソフトウェアもしくはアルゴリズムを使用して、または目視検査によって測定することができる。アミノ酸またはヌクレオチド配列のアラインメントを取得するために使用され得る様々なアルゴリズム及びソフトウェアが当該技術分野で知られている。配列同一性パーセントの決定に好適なプログラムには、例えば、米国政府の国立生物工学情報センターのBLASTウェブサイトから入手可能なBLASTプログラム一式が含まれる。2つの配列間の比較は、BLASTNまたはBLASTPアルゴリズムのいずれかを使用して実行することができる。BLASTNは、核酸配列を比較するために使用され、BLASTPは、アミノ酸配列を比較するために使用される。DNASTARから入手可能なALIGN、ALIGN-2(Genentech,South San Francisco,California)、またはMegAlignは、配列を整列させるために使用することができる追加の公的に入手可能なソフトウェアプログラムである。当業者であれば、特定のアラインメントソフトウェアによって最大アラインメントに適切なパラメータを決定することができる。ある特定の実施形態では、アラインメントソフトウェアのデフォルトパラメータが使用される。
本明細書で使用される場合、「バリアント」という用語は、参照抗体のアミノ酸配列内または隣接する特定の位置における1つ以上の置換、欠失、及び/または付加により参照抗体のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含む抗体または融合タンパク質を包含するが、これらに限定されない。バリアントは、参照抗体のアミノ酸配列と比較して、そのアミノ酸配列に1つ以上の保存的置換を含み得る。保存的置換は、例えば、同様に荷電したまたは非荷電のアミノ酸の置換を含み得る。バリアントは、参照抗体の抗原に特異的に結合する能力を保持している。バリアントという用語は、ペグ化抗体またはタンパク質も含む。
本明細書における「腫瘍浸潤リンパ球」または「TIL」とは、対象の血流を離れて腫瘍に移動した白血球として最初に取得された細胞の集団を意味する。TILには、CD8+細胞傷害性T細胞(リンパ球)、Th1及びTh17 CD4+T細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞、ならびにM1マクロファージが含まれるが、これらに限定されない。TILには、一次TIL及び二次TILの両方が含まれる。「一次TIL」は、本明細書に概説されるように患者組織試料から得られるもの(「新たに採取された」と称されることもある)であり、「二次TIL」は、本明細書で考察されるように拡張または増殖された任意のTIL細胞集団であり、本明細書で考察されるバルクTIL、拡張TIL(「REP TIL」)、ならびに「reREP TIL」が含まれるが、これらに限定されない。reREP TILは、例えば、第2の拡張TILまたは第2の追加の拡張TIL(例えば、reREP TILと称されるTILを含む、図8のステップDに記載されているものなど)を含み得る。
TILは、一般に、細胞表面マーカーを使用して生化学的に定義されるか、または腫瘍に浸潤して治療を達成するそれらの能力によって機能的に定義されるかのいずれかであり得る。TILは、一般に、CD4、CD8、TCR αβ、CD27、CD28、CD56、CCR7、CD45Ra、CD95、PD-1、及びCD25のうちの1つ以上のバイオマーカーの発現によって分類され得る。さらに及び代替的に、TILは、患者への再導入時に固形腫瘍に浸潤する能力により機能的に定義され得る。TILは、効力によってさらに特徴付けられ得、例えば、インターフェロン(IFN)放出が、約50pg/mLを超える、約100pg/mLを超える、約150pg/mLを超える、または約200pg/mLを超える場合、TILは強力であるとみなされ得る。例えば、インターフェロン(IFNγ)放出が、約50pg/mLを超える、約100pg/mLを超える、約150pg/mLを超える、または約200pg/mLを超える、約300pg/mLを超える、約400pg/mLを超える、約500pg/mLを超える、約600pg/mLを超える、約700pg/mLを超える、約800pg/mLを超える、約900pg/mL、約1000pg/mLを超える場合、TILは強力であるとみなされ得る。
「デオキシリボヌクレオチド」という用語は、天然及び合成の、未修飾及び修飾デオキシリボヌクレオチドを包含する。修飾には、糖部分、塩基部分、及び/またはオリゴヌクレオチド中のデオキシリボヌクレオチド間の結合への変更が含まれる。
「RNA」という用語は、少なくとも1つのリボヌクレオチド残基を含む分子を定義する。「リボヌクレオチド」という用語は、b-D-リボフラノース部分の2’位にヒドロキシル基を有するヌクレオチドを定義する。RNAという用語には、二本鎖RNA、一本鎖RNA、部分的に精製されたRNAなどの単離されたRNA、本質的に純粋なRNA、合成RNA、組換え的に産生されたRNA、ならびに1つ以上のヌクレオチドの付加、欠失、置換、及び/または変化によって天然に存在するRNAとは異なる変化したRNAが含まれる。本明細書に記載のRNA分子のヌクレオチドはまた、非天然に存在するヌクレオチドまたは化学的に合成されたヌクレオチドもしくはデオキシヌクレオチドなどの非標準ヌクレオチドを含み得る。これらの変化したRNAは、類似体または天然に存在するRNAの類似体と称され得る。
「薬学的に許容される担体」または「薬学的に許容される賦形剤」という用語は、ありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤、ならびに不活性成分を含むよう意図されている。医薬品有効成分のためのかかる薬学的に許容される担体または薬学的に許容される賦形剤の使用は、当該技術分野で周知である。任意の従来の薬学的に許容される担体または薬学的に許容される賦形剤が医薬品有効成分と適合しない場合を除いて、本発明の治療用組成物におけるその使用が企図される。他の薬物などの追加の医薬品有効成分を、記載された組成物及び方法に組み込むこともできる。
「約」及び「およそ」という用語は、値の統計的に有意な範囲内を意味する。かかる範囲は、所与の値または範囲の1桁以内、好ましくは50%以内、より好ましくは20%以内、なおより好ましくは10%以内、さらにより好ましくは5%以内であり得る。「約」または「およそ」という用語によって包含される許容偏差は、研究中の特定のシステムに依存し、当業者によって容易に理解され得る。さらに、本明細書で使用される場合、「約」及び「およそ」という用語は、寸法、サイズ、配合、パラメータ、形状、ならびに他の量及び特徴が正確でなく、かつ正確である必要はないが、公差、変換係数、四捨五入、測定誤差など、及び当業者に知られている他の要因を反映して、必要に応じて、およそであってもよく、及び/またはそれよりも大きくても小さくてもよいことを意味する。一般に、寸法、サイズ、配合、パラメータ、形状、または他の量もしくは特徴は、そのように明示的に述べられているかにかかわらず、「約」または「およそ」である。非常に異なるサイズ、形状、及び寸法の実施形態が記載された配置を採用し得ることに留意されたい。
添付の特許請求の範囲で使用される場合、「含む」、「から本質的になる」、及び「からなる」という移行用語は、元の形式及び補正された形式で、存在する場合、列挙されていない追加のクレーム要素またはステップが特許請(複数可)求の範囲から除外されるかに関して特許請求の範囲を定義する。「含む」という用語は、包括的または自由形式であるよう意図されており、いずれの追加の列挙されていない要素、方法、ステップ、または材料も除外しない。「からなる」という用語は、特許請求の範囲で指定されたもの以外のいずれの要素、ステップ、または材料も除外し、後者の場合、指定された材料(複数可)に通常関連する不純物も除外する。「から本質的になる」という用語は、特許請求の範囲を、特定の要素、ステップ、または材料(複数可)、及び特許請求された本発明の基本的及び新規の特徴(複数可)に実質的に影響を及ぼさないに限定する。本発明を具体化する本明細書に記載のすべての組成物、方法、及びキットは、代替の実施形態では、「含む」、「から本質的になる」、及び「からなる」という移行用語のうちのいずれかによってより具体的に定義され得る。
「抗体」及びその複数形の「抗体」という用語は、免疫グロブリン全体及び任意の抗原結合断片(「抗原結合部分」)またはその一本鎖を指す。「抗体」はさらに、ジスルフィド結合によって相互接続された少なくとも2つの重鎖(H)鎖及び2つの軽(L)鎖を含む糖タンパク質、またはその抗原結合部分を指す。各重鎖は、重鎖可変領域(本明細書ではVHと略される)及び重鎖定常領域で構成される。重鎖定常領域は、CH1、CH2、及びCH3の3つのドメインで構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域(本明細書ではVLと略される)及び軽鎖定常領域で構成される。軽鎖定常領域は、1つのドメイン、CLで構成される。抗体のVH及びVL領域は、相補性決定領域(CDR)または超可変領域(HVR)と称され、フレームワーク領域(FR)と呼ばれる、より保存された領域が点在し得る、超可変性の領域にさらに細分化することができる。各VH及びVLは、アミノ末端からカルボキシ末端へと以下の順序で配列された3つのCDR及び4つのFRで構成される:FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重鎖及び軽鎖の可変領域は、1つまたは複数の抗原エピトープと相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞(例えば、エフェクター細胞)及び古典的な補体系の第1の成分(Clq)を含む宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介し得る。
「抗原」という用語は、免疫応答を誘導する物質を指す。いくつかの実施形態では、抗原は、主要組織適合遺伝子複合体(MHC)分子によって提示される場合、抗体またはTCRによって結合されることができる分子である。本明細書で使用される「抗原」という用語はまた、T細胞エピトープを包含する。抗原は、追加として免疫系によって認識されることができる。いくつかの実施形態では、抗原は、体液性免疫応答または細胞性免疫応答を誘導することができ、Bリンパ球及び/またはTリンパ球の活性化につながる。場合によっては、これは、抗原がTh細胞エピトープを含むか、またはそれに結合されることを必要とし得る。抗原はまた、1つ以上のエピトープ(例えば、B-及びT-エピトープ)を有し得る。いくつかの実施形態では、抗原は、好ましくは、典型的には非常に特異的かつ選択的な方法で、対応する抗体またはTCRと反応し、他の抗原によって誘導され得る多数の他の抗体またはTCRとは反応しない。
「モノクローナル抗体」、「mAb」、「モノクローナル抗体組成物」という用語、またはそれらの複数形は、単一分子組成の抗体分子の調製物を指す。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対して単一の結合特異性及び親和性を示す。特定の受容体に特異的なモノクローナル抗体は、試験対象に好適な抗原を注入し、次いで、所望の配列または機能的特徴を有する抗体を発現するハイブリドーマを単離するという当該技術分野における知識及び技術を使用して作製することができる。モノクローナル抗体をコードするDNAは、従来の手順を使用して(例えば、モノクローナル抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって)容易に単離され、配列決定される。ハイブリドーマ細胞は、かかるDNAの好ましい供給源として機能する。一旦単離されると、DNAは、発現ベクターに入れられ、次いで、E.coli細胞、サルCOS細胞、チャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞、または免疫グロブリンタンパク質を産生しない骨髄腫細胞などの宿主細胞にトランスフェクトされて、組換え宿主細胞におけるモノクローナル抗体の合成を取得することができる。抗体の組換え産生については、以下でより詳細に説明する。
本明細書で使用される、抗体の「抗原結合部分」または「抗原結合断片」(または単に「抗体部分」もしくは「断片」)という用語は、抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の1つ以上の断片を指す。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体の断片によって行われ得ることが示されている。抗体の「抗原結合部分」という用語に包含される結合断片の例には、(i)VL、VH、CL、及びCH1ドメインからなる一価断片である、Fab断片、(ii)ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって結合された2つのFab断片を含む二価断片である、F(ab’)2断片、(iii)VH及びCH1ドメインからなるFd断片、(iv)抗体の単一アームのVL及びVHドメインからなるFv断片、(v)VHまたはVLドメインからなり得るドメイン抗体(dAb)断片(Ward,et al.,Nature,1989,341,544-546)、ならびに(vi)単離した相補性決定領域(CDR)が含まれる。Fv断片の2つのドメイン、VL及びVHは、別々の遺伝子によってコードされるが、これらは、組換え方法を使用して、VL及びVH領域が対合して、一本鎖Fv(scFv)として知られる一価分子を形成する単一タンパク質鎖としてそれらを作製することを可能にする合成リンカーによって接合され得、例えば、Bird,et al.,Science 1988,242,423-426、及びHuston,et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA1988,85,5879-5883)を参照されたい。かかるscFv抗体はまた、抗体の「抗原結合部分」または「抗原結合断片」という用語に包含されることを意図している。これらの抗体断片は、当業者に知られている従来の技法を使用して得られ、断片は、無傷の抗体と同じ方法で有用性についてスクリーニングされる。いくつかの実施形態では、scFvタンパク質ドメインは、VH部分及びVL部分を含む。scFv分子は、VLドメインがscFv分子のN末端部分である場合、VL-L-VH、またはVHドメインがscFv分子のN末端部分である場合、VH-L-VLのいずれかとして示される。scFv分子を作製し、好適なペプチドリンカーを設計するための方法は、米国特許第4,704,692号、米国特許第4,946,778号、R.Raag and M.Whitlow,“Single Chain Fvs.”FASEB Vol 9:73-80(1995)及びR.E.Bird and B.W.Walker,Single Chain Antibody Variable Regions,TIBTECH,Vol 9:132-137(1991)に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。
本明細書で使用される「ヒト抗体」という用語は、フレームワーク及びCDR領域の両方が、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する抗体を含むことを意図している。さらに、抗体が定常領域を含む場合、定常領域はまた、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する。本発明のヒト抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基を含み得る(例えば、インビトロでのランダムもしくは部位特異的変異誘発によって、またはインビボでの体細胞変異によって導入される変異)。本明細書で使用される「ヒト抗体」という用語は、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖細胞系に由来するCDR配列が、ヒトフレームワーク配列に移植されている抗体を含むことを意図しない。
「ヒトモノクローナル抗体」という用語は、フレームワーク領域及びCDR領域の両方がヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する単一の結合特異性を示す抗体を指す。いくつかの実施形態では、ヒトモノクローナル抗体は、不死化細胞に融合したヒト重鎖導入遺伝子及び軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有する、トランスジェニック非ヒト動物、例えばトランスジェニックマウスから得られたB細胞を含むハイブリドーマによって産生される。
本明細書で使用される「組換えヒト抗体」という用語は、組換え手段によって調製、発現、作成、または単離されるすべてのヒト抗体、例えば(a)ヒト免疫グロブリン遺伝子またはそれから調製されたハイブリドーマ(以下でさらに説明される)についてトランスジェニックまたはトランス染色体である動物(マウスなど)から単離された抗体、(b)ヒト抗体を発現するように形質転換された宿主細胞から、例えば、トランスフェクトーマから単離された抗体、(c)組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体、及び(d)ヒト免疫グロブリン遺伝子配列を他のDNA配列にスプライシングすることを含む、任意の他の手段によって調製、発現、作成、または単離された抗体を含む。かかる組換えヒト抗体は、フレームワーク及びCDR領域がヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する。しかしながら、ある特定の実施形態では、かかる組換えヒト抗体は、インビトロ変異誘発(または、ヒトIg配列についてトランスジェニックな動物が使用される場合、インビボ体細胞変異誘発)に供され得、したがって、組換え抗体のVH及びVL領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖細胞系VH及びVL配列に由来し、関連しているが、インビボでヒト抗体生殖細胞系レパートリー内に自然に存在しない可能性がある配列である。
本明細書で使用される場合、「アイソタイプ」は、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる抗体クラス(例えば、IgMまたはIgG1)を指す。
「抗原を認識する抗体」及び「抗原に特異的な抗体」という句は、本明細書では「抗原に特異的に結合する抗体」という用語と交換可能に使用される。
「ヒト抗体誘導体」という用語は、抗体と別の医薬品有効成分または抗体とのコンジュゲートを含む、ヒト抗体の任意の修飾形態を指す。「コンジュゲート」、「抗体薬物コンジュゲート」、「ADC」、または「免疫コンジュゲート」という用語は、別の治療部分にコンジュゲートされた抗体またはその断片を指し、これは当該技術分野において使用可能な方法を使用して、本明細書に記載の抗体にコンジュゲートされ得る。
「ヒト化抗体」、「ヒト化抗体(複数)」、及び「ヒト化」という用語は、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖細胞系に由来するCDR配列が、ヒトフレームワーク配列に移植されている抗体を指すことを意図している。追加のフレームワーク領域の修飾は、ヒトフレームワーク配列内で行うことができる。非ヒト(例えば、マウス)抗体のヒト化形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含むキメラ抗体である。ほとんどの場合、ヒト化抗体は、ヒト免疫グロブリン(レシピエント抗体)であり、レシピエントの超可変領域からの残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有するマウス、ラット、ウサギなどの非ヒト種(ドナー抗体)または非ヒト霊長類の15超可変領域からの残基によって置き換えられる。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのFvフレームワーク(FR)残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体には見られない残基を含み得る。これらの修飾は、抗体の性能をさらに向上させるために行われる。一般に、ヒト化抗体は、超可変ループのすべてまたは実質的にすべてが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、FR領域のすべてまたは実質的にすべてがヒト免疫グロブリン配列のものである、少なくとも1つ、典型的には2つの可変ドメインの実質的すべてを含むことになる。ヒト化抗体はまた、任意選択で、免疫グロブリン定常領域(Fc)、典型的にはヒト免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部を含むであろう。さらなる詳細については、Jones,et al.,Nature 1986,321,522-525、Riechmann,et al.,Nature 1988,332,323-329、及びPresta,Curr.Op.Struct.Biol.1992,2,593-596を参照されたい。本明細書に記載される抗体はまた、エフェクター機能及び/またはFcR結合の改善(例えば、低減)を与えることが知られている任意のFcバリアントを用いるように修飾され得る。Fcバリアントは、例えば、国際特許出願公開第WO1988/07089A1号、同第WO1996/14339A1号、同第WO1998/05787A1号、同第WO1998/23289A1号、同第WO1999/51642A1号、同第WO99/58572A1号、同第WO2000/09560A2号、同第WO2000/32767A1号、同第WO2000/42072A2号、同第WO2002/44215A2号、同第WO2002/060919A2号、同第WO2003/074569A2号、同第WO2004/016750A2号、同第WO2004/029207A2号、同第WO2004/035752A2号、同第WO2004/063351A2号、同第WO2004/074455A2号、同第WO2004/099249A2号、同第WO2005/040217A2号、同第WO2005/070963A1号、同第WO2005/077981A2号、同第WO2005/092925A2号、同第WO2005/123780A2号、同第WO2006/019447A1号、同第WO2006/047350A2号、及び同第WO2006/085967A2号、ならびに米国特許第5,648,260号、同第5,739,277号、同第5,834,250号、同第5,869,046号、同第6,096,871号、同第6,121,022号、同第6,194,551号、同第6,242,195号、同第6,277,375号、同第6,528,624号、同第6,538,124号、同第6,737,056号、同第6,821,505号、同第6,998,253号、及び同第7,083,784号(それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる)に開示されるアミノ酸置換のうちのいずれか1つを含み得る。
「キメラ抗体」という用語は、可変領域配列が1つの種に由来し、定常領域配列が別の種に由来する抗体、例えば、可変領域配列がマウス抗体に由来し、定常領域配列がヒト抗体に由来する抗体を指すことを意図している。
「二重特異性抗体(diabody)」は、2つの抗原結合部位を有する小さな抗体断片である。断片は、同じポリペプチド鎖(VH-VLまたはVL-VH)中に軽鎖可変ドメイン(VL)に接続された重鎖可変ドメイン(VH)を含む。同じ鎖上の2つのドメインをペアリングするには短すぎるリンカーを使用すると、ドメインは別のチェーンの相補ドメインとペアリングさせられ、2つの抗原結合部位が作成される。二重特異性抗体は、例えば、欧州特許第EP404,097号、国際特許公開第WO93/11161号、及びBolliger,et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA1993,90,6444-6448においてより完全に記載されている。
「グリコシル化」という用語は、抗体の修飾誘導体を指す。非グリコシル化抗体は、グリコシル化を欠いている。グリコシル化は、例えば、抗原に対する抗体の親和性を増加させるように変化され得る。かかる炭水化物修飾は、例えば、抗体配列内の1つ以上のグリコシル化部位を変化させることによって達成され得る。例えば、1つ以上の可変領域フレームワークのグリコシル化部位の排除をもたらす、1つ以上のアミノ酸置換を行ない、それによってその部位でのグリコシル化を排除することができる。米国特許第5,714,350号及び同第6,350,861号に記載されているように、非グリコシル化は、抗原に対する抗体の親和性を高める可能性がある。加えてまたは代替的に、改変した種類のグリコシル化を有する抗体、例えば、フコシル残基の量が低減した低フコシル化抗体または二分GlcNac構造が増加した抗体が作製され得る。かかるグリコシル化パターンの変化は、抗体の能力を増加させることが実証されている。かかる炭水化物修飾は、例えば、抗体をグリコシル化機構が変化した宿主細胞で発現させることによって達成され得る。グリコシル化機構が変化した細胞については、当該技術分野で説明されており、本発明の組換え抗体を発現させ、それによりグリコシル化が変化した抗体を産生する宿主細胞として使用され得る。例えば、Ms704、Ms705、及びMs709細胞株で発現される抗体が、それらの炭水化物上のフコースを欠くように、細胞株Ms704、Ms705、及びMs709は、フコシルトランスフェラーゼ遺伝子FUT8(アルファ(1,6)フコシルトランスフェラーゼ)を欠く。Ms704、Ms705、及びMs709 FUT8-/-細胞株は、2つの置換ベクターを使用したCHO/DG44細胞中のFUT8遺伝子の標的破壊によって作成された(例えば、米国特許公開第2004/0110704号またはYamane-Ohnuki,et al.,Biotechnol.Bioeng.,2004,87,614-622を参照)。別の例として、欧州特許第EP1,176,195号は、フコシルトランスフェラーゼをコードし、それによりかかる細胞株で発現される抗体が、アルファ1,6結合関連酵素を低減または排除することによって低フコシル化を示す、機能的に破壊されたFUT8遺伝子を有する細胞株を説明しており、抗体のFc領域に結合するN-アセチルグルコサミンにフコースを付加するための酵素活性が低いか、または酵素活性を有しない細胞株、例えばラット骨髄腫細胞株YB2/0(ATCC CRL 1662)についても説明している。国際特許公開第WO03/035835号は、フコースをAsn(297)結合型炭水化物に付着させる能力が低減し、さらにその宿主細胞で発現される抗体の低フコシル化ももたらすバリアントCHO細胞株、Lec13細胞について説明している(Shields,et al.,J.Biol.Chem.2002,277,26733-26740も参照)。国際特許公開第WO99/54342号は、糖タンパク質修飾グリコシルトランスフェラーゼ(例えば、β(1,4)-N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼIII(GnTIII))を発現するように操作され、それにより操作された細胞株で発現される抗体が、二分性GlcNac構造の増加を示し、抗体のADCC活性の増加をもたらす、細胞株について記載している(Umana,et al.,Nat.Biotech.1999,17,176-180も参照)。代替てきに、フコシダーゼ酵素を使用して、抗体のフコース残基を切断でき得る。例えば、フコシダーゼアルファ-L-フコシダーゼは、Tarentino,et al.,Biochem.1975,14,5516-5523に記載されているように、抗体からフコシル残基を除去する。
「ペグ化」は、1つ以上のPEG基が抗体または抗体断片に付着する条件下で、PEGの反応性エステルまたはアルデヒド誘導体などのポリエチレングリコール(PEG)と反応させる、修飾抗体またはその断片を指す。ペグ化は、例えば、抗体の生物学的(例えば、血清)半減期を増加させることができる。好ましくは、ペグ化は、反応性PEG分子(または類似の反応性水溶性ポリマー)とのアシル化反応またはアルキル化反応を介して実行される。本明細書で使用される場合、「ポリエチレングリコール」という用語は、モノ(C1~C10)アルコキシ-もしくはアリールオキシ-ポリエチレングリコール、またはポリエチレングリコール-マレイミドなどの、他のタンパク質を誘導体化するために使用されているPEGの形態のうちのいずれかを包含することが意図される。ペグ化される抗体は、非グリコシル化抗体であり得る。ペグ化のための方法は、当該技術分野で知られており、例えば欧州特許第EP0154316号及び同第EP0401384号、ならびに米国特許第5,824,778号(各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる)に記載されているように、本発明の抗体に適用することができる。
「バイオシミラー」という用語は、モノクローナル抗体またはタンパク質を含む、臨床的に不活性な成分にわずかな違いがあるにもかかわらず、米国で認可された参照バイオ製品と非常に類似しており、製品の安全性、純度、及び効力に関してバイオ製品と参照製品との間に臨床的に意味のある差異がない、バイオ製品を意味する。さらに、類似のバイオまたは「バイオシミラー」医薬品は、欧州医薬品庁によって既に使用が許可されている別のバイオ医薬品に類似したバイオ医薬品である。「バイオシミラー」という用語は、他の国及び地域の規制機関によっても同義的に使用されている。バイオ製品またはバイオ医薬品は、細菌または酵母などの生物源によって作製された、またはそれに由来する医薬品である。それらは、ヒトインスリンもしくはエリスロポエチンなどの比較的小さな分子、またはモノクローナル抗体などの複雑な分子からなり得る。例えば、参照IL-2タンパク質がアルデスロイキン(PROLEUKIN)である場合、アルデスロイキンに関して薬物規制当局によって承認されたタンパク質は、アルデスロイキンの「バイオシミラー」であるか、またはアルデスロイキンの「そのバイオシミラー」である。欧州では、類似のバイオまたは「バイオシミラー」医薬品は、欧州医薬品庁(EMA)によって既に使用が許可されている別のバイオ医薬品に類似したバイオ医薬品である。欧州における同様の生物学的用途に関連する法的根拠は、補正されたRegulation(EC)No 726/2004の第6条及びDirective 2001/83/ECの第10(4)条であり、したがって欧州では、バイオシミラーは、Regulation(EC)No 726/2004の第6条及びDirective 2001/83/ECの第10(4)条の下で、認可または認可申請の対象について認可、承認され得る。すでに認可されているオリジナルのバイオ医薬品は、欧州では「参照医薬品」と称されることがある。バイオシミラーとみなされる製品に対する要件のうちのいくつかは、バイオシミラー医薬品に関するCHMPガイドラインに概説されている。さらに、モノクローナル抗体バイオシミラーに関連するガイドラインを含む製品固有のガイドラインは、EMAによって製品毎に提供され、そのウェブサイトで公開されている。本明細書に記載のバイオシミラーは、品質特徴、生物活性、作用機序、安全性プロファイル、及び/または有効性の点で、参照医薬品に類似している可能性がある。さらに、バイオシミラーは、参照医薬品と同じ状態を治療するために使用され得るか、または使用を意図され得る。したがって、本明細書に記載のバイオシミラーは、参照医薬品と類似または非常に類似した品質特徴を有するとみなされ得る。代替的に、またはさらに、本明細書に記載のバイオシミラーは、参照医薬品と類似または非常に類似した生物活性を有するとみなされ得る。代替的に、またはさらに、本明細書に記載のバイオシミラーは、参照医薬品と類似または非常に類似した安全性プロファイルを有するとみなされ得る。代替的に、またはさらに、本明細書に記載のバイオシミラーは、参照医薬品と類似または非常に類似した効力を有するとみなされ得る。本明細書に記載されているように、欧州におけるバイオシミラーは、EMAによって認可された参照医薬品と比較される。しかしながら、場合によっては、バイオシミラーは、特定の研究で欧州経済領域外で認可されたバイオ医薬品(EEA認可されていない「コンパレーター」)と比較される場合がある。かかる研究には、例えば、特定の臨床研究及びインビボ非臨床研究が含まれる。本明細書で使用される場合、「バイオシミラー」という用語は、EEA認可されていないコンパレーターと比較された、または比較され得るバイオ医薬品にも関する。特定のバイオシミラーは、抗体、抗体断片(例えば、抗原結合部分)、及び融合タンパク質などのタンパク質である。タンパク質バイオシミラーは、ポリペプチドの機能に有意な影響を及ぼさない、アミノ酸構造にわずかな修飾(例えば、アミノ酸の欠失、付加、及び/または置換を含む)を有するアミノ酸配列を有し得る。バイオシミラーは、その参照医薬品のアミノ酸配列に対して97%以上、例えば、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。バイオシミラーは、その違いが医薬品の安全性及び/または有効性の変化をもたらさないならば、1つ以上の翻訳後修飾、例えば、限定されないが、参照医薬品の翻訳後修飾とは異なる、グリコシル化、酸化、脱アミド化、及び/または切断を含み得る。バイオシミラーは、参照医薬品と同一または異なるグリコシル化パターンを有し得る。特に、排他的ではないが、バイオシミラーは、その違いが参照医薬品に関連する安全性の懸念に対処するか、対処することを意図している場合、異なるグリコシル化パターンを有し得る。加えて、バイオシミラーは、医薬品の安全性及び有効性が損なわれないならば、例えば、その強度、剤形、製剤、賦形剤、及び/または提示において参照医薬品から逸脱する可能性がある。バイオシミラーは、参照医薬品と比較して、例えば薬物動態(PK)及び/または薬力学的(PD)プロファイルの違いを含み得るが、それでも、認可される、または認可に適しているとみなされるように、参照医薬品と十分に類似しているとみなされる。特定の状況において、バイオシミラーは、参照医薬品と比較して異なる結合特徴を示し、異なる結合特徴は、EMAなどの規制当局によって類似のバイオ製品としての認可の障壁ではないとみなされる。「バイオシミラー」という用語は、他の国及び地域の規制機関によっても同義的に使用されている。
III.Gen2 TIL製造プロセス
これらの特徴のうちのいくつかを含む、Gen2として知られる(プロセス2Aとしても知られる)TILプロセスの例示的なファミリーが、図1及び2に示される。Gen2の実施形態を図2に示す。
これらの特徴のうちのいくつかを含む、Gen2として知られる(プロセス2Aとしても知られる)TILプロセスの例示的なファミリーが、図1及び2に示される。Gen2の実施形態を図2に示す。
本明細書で考察されるように、本発明は、患者への移植前に凍結保存されたTILを再刺激して、それらの代謝活性、ひいては相対的健康を向上させることに関するステップ、及び当該代謝健康を試験する方法を含み得る。本明細書で一般に概説されるように、TILは、一般に、患者試料から採取され、患者への移植前にそれらの数を拡張するように操作される。いくつかの実施形態では、TILは、以下で考察されるように、任意で遺伝子操作され得る。
いくつかの実施形態では、TILは、凍結保存され得る。解凍した時点で、それらが再刺激されて、患者への注入前に代謝を高めることができる。
いくつかの実施形態では、以下ならびに実施例及び図で詳細に考察されるように、第1の拡張(REP前と称されるプロセス、ならびに図1にステップAとして示されるプロセスを含む)は、3~14日に短縮され、第2の拡張(REPと称されるプロセス、ならびに図1にステップBとして示されるプロセスを含む)は、7~14日に短縮される。いくつかの実施形態では、第1の拡張(例えば、図1にステップBとして記載される拡張)は、11日に短縮され、第2の拡張(例えば、図1にステップDとして記載される拡張)は、11日に短縮される。いくつかの実施形態では、以下ならびに実施例及び図で詳細に考察されるように、第1の拡張と第2の拡張との組み合わせ(例えば、図1にステップB及びステップDとして記載される拡張)は、22日に短縮される。
以下の「ステップ」表記A、B、Cなどは、図1を参照し、本明細書に記載のある特定の実施形態を参照する。以下及び図1におけるステップの順序は例示であり、ステップの任意の組み合わせまたは順序、ならびに追加のステップ、ステップの繰り返し、及び/またはステップの省略は、本出願及び本明細書に開示される方法によって企図される。
A.ステップA:患者の腫瘍試料を取得する
一般に、TILは、最初に患者の腫瘍試料から取得され、その後、本明細書に記載されるさらなる操作のためにより大きい集団に拡張され、任意選択で凍結保存され、本明細書に概説されるように再刺激され、任意選択でTIL健康の指標として表現型及び代謝パラメータについて評価される。
一般に、TILは、最初に患者の腫瘍試料から取得され、その後、本明細書に記載されるさらなる操作のためにより大きい集団に拡張され、任意選択で凍結保存され、本明細書に概説されるように再刺激され、任意選択でTIL健康の指標として表現型及び代謝パラメータについて評価される。
患者の腫瘍試料は、一般に外科的切除、針生検、コア生検、小生検、または腫瘍細胞とTIL細胞との混合物を含有する試料を取得するための他の手段を介して、当該技術分野で知られている方法を使用して取得することができる。いくつかの実施形態では、多病変サンプリングが使用される。いくつかの実施形態では、外科的切除、針生検、コア生検、小生検、または腫瘍細胞とTIL細胞との混合物を含有する試料を取得するための他の手段は、多病変サンプリングを含む(すなわち、患者の1つ以上の腫瘍部位及び/または場所、ならびに同じ場所または近接した1つ以上の腫瘍から試料を取得する)。一般に、腫瘍試料は、原発腫瘍、浸潤性腫瘍、または転移性腫瘍を含む、任意の固形腫瘍に由来し得る。腫瘍試料は、血液系悪性腫瘍から取得された腫瘍などの液体腫瘍であり得る。固形腫瘍は、肺組織のものであり得る。いくつかの実施形態では、有用なTILは、非小細胞肺癌(NSCLC)から得られる。固形腫瘍は、皮膚組織のものであり得る。いくつかの実施形態では、有用なTILは、黒色腫から取得される。
取得された時点で、腫瘍試料は、一般に、鋭的解剖を使用して1~約8mm3の小片に断片化され、約2~3mm3が特に有用である。いくつかの実施形態では、TILは、酵素腫瘍消化物を使用してこれらの断片から培養される。かかる腫瘍消化物は、酵素培地(例えば、Roswell Park Memorial Institute(RPMI)1640緩衝液、2mMグルタメート、10mcg/mLゲンタマイシン、30単位/mL DNase、及び1.0mg/mLコラゲナーゼ)中でのインキュベーション、続いて、機械的解離(例えば、組織解離機を使用する)によって産生され得る。腫瘍消化物は、腫瘍を酵素培地に入れ、腫瘍をおよそ1分間機械的に解離させ、その後、5%CO2中37℃で30分間インキュベートし、続いて、小さい組織片しか存在しなくなるまで、前述の条件下で機械的解離及びインキュベーションのサイクルを繰り返すことによって産生され得る。このプロセスの最後に、細胞懸濁液中に多数の赤血球または死細胞が含まれている場合、FICOLL分岐親水性多糖類を使用した密度勾配分離が行われて、これらの細胞を除去することができる。米国特許出願公開第2012/0244133A1号(その開示は参照により本明細書に組み込まれる)に記載されているものなどの当該技術分野で知られている代替の方法を使用することができる。前述の方法のうちのいずれかが、TILを拡張する方法またはがんを治療する方法について本明細書に記載される実施形態のうちのいずれかにおいて使用され得る。
腫瘍解離酵素混合物には、1つ以上の解離(消化)酵素、例えば、限定されないが、コラゲナーゼ(任意のブレンドまたはコラゲナーゼの種類を含む)、Accutase(商標)、Accumax(商標)、ヒアルロニダーゼ、中性プロテアーゼ(ディスパーゼ)、キモトリプシン、キモパパイン、トリプシン、カゼイナーゼ、エラスターゼ、パパイン、XIV型プロテアーゼ(プロナーゼ)、デオキシリボヌクレアーゼI(DNase)、トリプシン阻害剤、任意の他の解離酵素またはタンパク質分解酵素、及びそれらの任意の組み合わせが含まれ得る。
いくつかの実施形態では、解離酵素は、凍結乾燥酵素から再構成される。いくつかの実施形態では、凍結乾燥酵素は、HBSSなどの滅菌緩衝液の量で再構成される。
いくつかの事例では、コラゲナーゼ(アニマルフリー1型コラゲナーゼなど)を、10mLの滅菌HBSSまたは別の緩衝液で再構成する。凍結乾燥ストック酵素は、2892PZ U/バイアルの濃度であり得る。いくつかの実施形態では、コラゲナーゼは、5mL~15mLの緩衝液中で再構成される。いくつかの実施形態では、再構成後のコラゲナーゼストックは、約100PZ U/mL~約400PZ U/mLの範囲、例えば、約100PZ U/mL~約400PZ U/mL、約100PZ U/mL~約350PZ U/mL、約100PZ U/mL~約300PZ U/mL、約150PZ U/mL~約400PZ U/mL、約100PZ U/mL、約150PZ U/mL、約200PZ U/mL、約210PZ U/mL、約220PZ U/mL、約230PZ U/mL、約240PZ U/mL、約250PZ U/mL、約260PZ U/mL、約270PZ U/mL、約280PZ U/mL、約289.2PZ U/mL、約300PZ U/mL、約350PZ U/mL、または約400PZ U/mLである。
いくつかの実施形態では、中性プロテアーゼは、1mlの滅菌HBSSまたは別の緩衝液中で再構成される。凍結乾燥ストック酵素は、175DMC U/バイアルの濃度であり得る。いくつかの実施形態では、再構成後の中性プロテアーゼストックは、約100DMC/mL~約400DMC/mLの範囲、例えば、約100DMC/mL~約400DMC/mL、約100DMC/mL~約350DMC/mL、約100DMC/mL~約300DMC/mL、約150DMC/mL~約400DMC/mL、約100DMC/mL、約110DMC/mL、約120DMC/mL、約130DMC/mL、約140DMC/mL、約150DMC/mL、約160DMC/mL、約170DMC/mL、約175DMC/mL、約180DMC/mL、約190DMC/mL、約200DMC/mL、約250DMC/mL、約300DMC/mL、約350DMC/mL、または約400DMC/mLである。
いくつかの実施形態において、DNAse Iは、1mlの滅菌HBSSまたは別の緩衝液中で再構成される。凍結乾燥したストック酵素は、4KU/バイアルの濃度であった。いくつかの実施形態では、再構成後のDNase Iストックは、約1KU/mL~10KU/mL、例えば、約1KU/mL、約2KU/mL、約3KU/mL、約4KU/mL、約5KU/mL、約6KU/mL、約7KU/mL、約8KU/mL、約9KU/mL、または約10KU/mLの範囲である。
いくつかの実施形態では、酵素のストックは可変であり、濃度を決定する必要があり得る。いくつかの実施形態では、凍結乾燥ストックの濃度を検証することができる。いくつかの実施形態では、消化カクテルに添加される酵素の最終量は、決定されたストック濃度に基づいて調整される。
いくつかの実施形態では、酵素混合物は、約4.7mlの滅菌HBSS中に約10.2ulの中性プロテアーゼ(0.36DMC U/mL)、21.3ulのコラゲナーゼ(1.2PZ/mL)及び250ulのDNAse I(200U/mL)を含む。
上に示されるように、いくつかの実施形態では、TILは、固形腫瘍に由来する。いくつかの実施形態では、固形腫瘍は、断片化されない。いくつかの実施形態では、固形腫瘍は断片化されず、全腫瘍として酵素消化に供される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、コラゲナーゼ、DNase、及びヒアルロニダーゼを含む酵素混合物中で消化される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、コラゲナーゼ、DNase、及びヒアルロニダーゼを含む酵素混合物中で1~2時間消化される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、コラゲナーゼ、DNase、及びヒアルロニダーゼを含む酵素混合物中で1~2時間、37℃、5%CO2で消化される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、コラゲナーゼ、DNase、及びヒアルロニダーゼを含む酵素混合物中で1~2時間、37℃、5%CO2で回転を伴って消化される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、一定の回転を伴って一晩消化される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、37℃、5%CO2で一定の回転を伴って一晩消化される。いくつかの実施形態では、全腫瘍が酵素と組み合わされて、腫瘍消化反応混合物が形成される。
いくつかの実施形態では、腫瘍は、滅菌緩衝液中の凍結乾燥酵素で再構成される。いくつかの実施形態では、緩衝液は、滅菌HBSSである。
いくつかの実施形態では、酵素混合物は、コラゲナーゼを含む。いくつかの実施形態では、コラゲナーゼは、コラゲナーゼIVである。いくつかの実施形態では、コラゲナーゼの作業ストックは、100mg/mLの10倍作業ストックである。
いくつかの実施形態では、酵素混合物は、DNAseを含む。いくつかの実施形態では、DNAseの作業ストックは、10,000IU/mLの10倍作業ストックである。
いくつかの実施形態では、酵素混合物は、ヒアルロニダーゼを含む。いくつかの実施形態では、ヒアルロニダーゼの作業ストックは、10mg/mLの10倍作業ストックである。
いくつかの実施形態では、酵素混合物は、10mg/mLのコラゲナーゼ、1000IU/mLのDNAse、及び1mg/mLのヒアルロニダーゼを含む。
いくつかの実施形態では、酵素混合物は、10mg/mLのコラゲナーゼ、500IU/mLのDNAse、及び1mg/mLのヒアルロニダーゼを含む。
一般に、採取された細胞懸濁液は、「一次細胞集団」または「新たに採取された」細胞集団と呼ばれる。
いくつかの実施形態では、断片化は、例えば、解剖及び消化を含む物理的断片化を含む。いくつかの実施形態では、断片化は、物理的断片化である。いくつかの実施形態では、断片化は、解剖である。いくつかの実施形態では、断片化は、消化によるものである。いくつかの実施形態では、TILは、患者から取得された腫瘍試料を消化または断片化することから取得された酵素腫瘍消化物及び腫瘍断片から最初に培養され得る。
腫瘍が固形腫瘍であるいくつかの実施形態では、腫瘍試料が、例えば、ステップA(図1に提供される)で取得された後、腫瘍は物理的断片化を受ける。いくつかの実施形態では、断片化は、凍結保存前に起こる。いくつかの実施形態では、断片化は、凍結保存後に起こる。いくつかの実施形態では、断片化は、腫瘍を得た後に、いずれの凍結保存もない場合に起こる。いくつかの実施形態では、腫瘍は断片化され、10、20、30、40個またはそれ以上の断片または小片が、第1の拡張のために各容器内に配置される。いくつかの実施形態では、腫瘍は断片化され、30または40個の断片または小片が、第1の拡張のために各容器内に配置される。いくつかの実施形態では、腫瘍は断片化され、40個の断片または小片が、第1の拡張のために各容器内に配置される。いくつかの実施形態では、複数の断片は、約4~約50個の断片を含み、各断片は、約27mm3の体積を有する。いくつかの実施形態では、複数の断片は、約1300mm3~約1500mm3の総体積を伴う約30~約60個の断片を含む。いくつかの実施形態では、複数の断片は、約1350mm3の総体積を伴う約50個の断片を含む。いくつかの実施形態では、複数の断片は、約1グラム~約1.5グラムの総質量を伴う約50個の断片を含む。いくつかの実施形態では、複数の断片は、約4個の断片を含む。
いくつかの実施形態では、TILは、腫瘍断片から取得される。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、鋭的解剖によって取得される。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約1mm3~10mm3である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約1mm3~8mm3である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約1mm3である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約2mm3である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約3mm3である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約4mm3である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約5mm3である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約6mm3である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約7mm3である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約8mm3である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約9mm3である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約10mm3である。いくつかの実施形態では、腫瘍は、1~4mm×1~4mm×1~4mmである。いくつかの実施形態では、腫瘍は、1mm×1mm×1mmである。いくつかの実施形態では、腫瘍は、2mm×2mm×2mmである。いくつかの実施形態では、腫瘍は、3mm×3mm×3mmである。いくつかの実施形態では、腫瘍は、4mm×4mm×4mmである。
いくつかの実施形態では、腫瘍は、各小片上の出血性、壊死性、及び/または脂肪性組織の量を最小化するために切除される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、各小片上の出血性組織の量を最小化するために切除される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、各小片上の壊死性組織の量を最小化するために切除される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、各小片上の脂肪性組織の量を最小化するために切除される。
いくつかの実施形態では、腫瘍の断片化は、腫瘍の内部構造を維持するために行われる。いくつかの実施形態では、腫瘍の断片化は、メスでのこ引き動作を行うことなく行われる。いくつかの実施形態では、TILは、腫瘍消化物から取得される。いくつかの実施形態では、腫瘍消化物は、例えば、RPMI1640(2mM GlutaMAX、10mg/mLゲンタマイシン、30U/mL DNase、及び1.0mg/mLコラゲナーゼ)であるが、これに限定されない酵素培地中でのインキュベーション、続いて、機械的解離(GentleMACS,Miltenyi Biotec,Auburn,CA)によって生成された。腫瘍を酵素培地に入れた後、腫瘍は、およそ1分間機械的に解離され得る。その後、溶液が5%CO2中37℃で30分間インキュベートされ、その後、およそ1分間再び機械的に破壊され得る。5%CO2中37℃で30分間再びインキュベートした後、腫瘍は、3回目の機械的破壊がおよそ1分間行われ得る。いくつかの実施形態では、大きい組織片が存在する場合、3回目の機械的破壊後、5%CO2中37℃でさらに30分間インキュベートするかにかかわらず、1回または2回の追加の機械的解離が試料に適用された。いくつかの実施形態では、細胞懸濁液が多数の赤血球または死細胞を含む場合、最終インキュベーションの終わりに、Ficollを使用した密度勾配分離が行われて、これらの細胞を除去することができる。
いくつかの実施形態では、第1の拡張ステップの前に採取された細胞懸濁液は、「一次細胞集団」または「新たに採取された」細胞集団と呼ばれる。
いくつかの実施形態では、細胞は、試料採取後に任意選択で凍結され、ステップBに記載される拡張に入る前に凍結保存され得、これは、以下でさらに詳細に説明され、図1及び図8にも例示される。
1.胸水T細胞またはTIL
いくつかの実施形態では、試料は、胸腔内液試料である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のプロセスによる増殖のためのT細胞またはTILの供給源は、胸腔内液試料である。いくつかの実施形態では、試料は、胸水由来試料である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のプロセスによる拡張のためのTILの供給源は、胸水由来試料である。例えば、米国特許公開第2014/0295426号に記載されている方法を参照されたく、これはすべての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、試料は、胸腔内液試料である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のプロセスによる増殖のためのT細胞またはTILの供給源は、胸腔内液試料である。いくつかの実施形態では、試料は、胸水由来試料である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のプロセスによる拡張のためのTILの供給源は、胸水由来試料である。例えば、米国特許公開第2014/0295426号に記載されている方法を参照されたく、これはすべての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、TILと思われる、及び/またはTILを含む任意の胸腔内液または胸水を利用することができる。かかる試料は、NSCLCもしくはSCLCなどの原発性または転移性肺癌に由来し得る。いくつかの実施形態では、試料は、別の臓器、例えば、乳房、卵巣、結腸、または前立腺に由来する二次転移性がん細胞であり得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の拡張方法で使用する試料は、胸膜浸出液である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の拡張方法で使用する試料は、胸膜漏出液である。他の生体試料は、例えば、腹部からの腹水または膵嚢胞液を含む、TILを含有する他の漿液を含み得る。腹水及び胸腔内液は、非常に類似した化学系を伴い、腹部及び肺の両方が、悪性腫瘍における同じ物質の胸膜空間及び腹部空間に中皮線及び流体形態を有し、いくつかの実施形態では、かかる流体は、TILを含有する。本開示が胸水を例示するいくつかの実施形態では、同じ方法が、胸腔内液またはTILを含有する他の嚢胞液を使用して同様の結果で実行されてもよい。
いくつかの実施形態では、胸腔内液は、患者から直接除去された未処理の形態である。いくつかの実施形態では、未処理の胸腔内液は、接触ステップの前に、EDTAまたはヘパリンチューブなどの標準的な採血管に入れられる。いくつかの実施形態では、未処理の胸腔内液は、接触ステップの前に、標準的なCellSave(登録商標)チューブ(Veridex)に入れられる。いくつかの実施形態では、試料は、生存TILの数の減少を避けるために、患者から採取した直後にCellSaveチューブに入れられる。生存可能なTILの数は、4℃であっても、未処理の胸水中に放置された場合、24時間以内に大幅に減少し得る。いくつかの実施形態では、試料は、患者からの除去後1時間、5時間、10時間、15時間、または最大24時間以内に適切な収集チューブ内に入れられる。いくつかの実施形態では、試料は、4℃で、患者からの除去後1時間、5時間、10時間、15時間、または最大24時間以内に適切な収集チューブ内に入れられる。
いくつかの実施形態では、選択された対象からの胸腔内液試料は、希釈され得る。一実施形態では、希釈は、胸腔内液対希釈剤が1:10である。いくつかの実施形態では、希釈は、胸腔内液対希釈剤が1:9である。いくつかの実施形態では、希釈は、胸腔内液対希釈剤が1:8である。いくつかの実施形態では、希釈は、胸腔内液対希釈剤が1:5である。いくつかの実施形態では、希釈は、胸腔内液対希釈剤が1:2である。いくつかの実施形態では、希釈は、胸腔内液対希釈剤が1:1である。いくつかの実施形態では、希釈剤には、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、別の緩衝液、または生理学的に許容される希釈剤が含まれる。いくつかの実施形態では、試料は、患者からの採取及び希釈の直後にCellSaveチューブに配置され、生存可能なTILの減少を回避し、生存可能なTILは、未治療の胸水中に放置された場合、4℃であっても24~48時間以内にかなりの範囲で発生し得る。いくつかの実施形態では、胸腔内液試料は、患者からの除去及び希釈後1時間、5時間、10時間、15時間、24時間、36時間、最大48時間以内に適切な収集チューブ内に入れられる。いくつかの実施形態では、胸腔内液試料は、4℃で、患者からの除去及び希釈後1時間、5時間、10時間、15時間、24時間、36時間、最大48時間以内に適切な収集チューブ内に入れられる。
さらに別の実施形態では、胸腔内液試料は、さらなる処理ステップの前に、従来の手段によって濃縮される。いくつかの実施形態では、胸腔内液のこの前処理は、方法を実施する実験室への輸送のために、またはその後の分析のために(例えば、採取後24~48時間より後に)胸水を凍結保存しなければならない状況において好ましい。いくつかの実施形態では、胸腔内液試料は、それが対象から採取された後に胸腔内液試料を遠心分離し、遠心分離物またはペレットを緩衝液中に再懸濁することによって調製される。いくつかの実施形態では、胸腔内液試料は、輸送または後の分析及び/または処理のために凍結保存される前に、複数の遠心分離及び再懸濁に供される。
いくつかの実施形態では、胸腔内液試料は、濾過法を使用することによって、さらなる処理ステップの前に濃縮される。いくつかの実施形態では、接触ステップで使用される胸腔内液試料は、胸腔内液が膜を通過することを可能にするが腫瘍細胞を保持する、既知で本質的に均一な孔径を含むフィルターを通して流体を濾過することによって調製される。いくつかの実施形態では、膜の細孔の直径は、少なくとも4μMであり得る。いくつかの実施形態では、細孔直径は、5μM以上であり得、他の実施形態では、6、7、8、9、または10μMのうちのいずれかである。濾過後、膜によって保持されたTILを含む細胞を、膜から適切な生理学的に許容される緩衝液にすすいでもよい。次いで、このように濃縮されたTILを含む細胞は、方法の接触ステップで使用することができる。
いくつかの実施形態では、胸腔内液試料(例えば、未処理の胸腔内液を含む)、希釈胸水、または再懸濁細胞ペレットは、試料中に存在する無核赤血球を特異的に溶解する溶解試薬と接触させる。いくつかの実施形態では、このステップは、胸腔内液がかなりの数のRBCを含む状況で、さらなる処理ステップの前に行われる。好適な溶解試薬には、単一の溶解試薬もしくは溶解試薬及びクエンチ試薬、または溶解剤、クエンチ試薬及び固定試薬が含まれる。好適な溶解システムは市販されており、BD Pharm Lyse(商標)システム(Becton Dickenson)が含まれる。他の溶解システムには、Versalyse(商標)システム、FACSlyse(商標)システム(Becton Dickenson)、Immunoprep(商標)システム、またはErythrolyse IIシステム(Beckman Coulter,Inc.)、または塩化アンモニウムシステムが含まれる。いくつかの実施形態では、溶解試薬は、赤血球の効率的な溶解、ならびに胸水におけるTIL及びTILの表現型特性の保存のような主要な要件によって異なり得る。溶解のための単一の試薬を利用することに加えて、本明細書に記載の方法に有用な溶解システムは、第2の試薬、例えば、方法の残りのステップ中に溶解試薬の効果をクエンチまたは遅延させるもの、例えばStabilyse(商標)試薬(Beckman Coulter,Inc.)を含むことができる。溶解試薬の選択または方法の好ましい実施に応じて、従来の固定試薬を使用することもできる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるように、未処理、希釈または多重遠心分離または処理された胸腔内液試料は、本明細書で提供されるようにさらに処理及び/または拡張される前に、約-140℃の温度で凍結保存される。
B.ステップB:第1の拡張
いくつかの実施形態では、本方法は、対象/患者への投与時に複製サイクルを増加させることができ、したがって、より古いTIL(すなわち、対象/患者への投与前により多くの複製ラウンドをさらに受けたTIL)よりも追加の治療的利益を提供し得る、若いTILを得ることを提供する。若いTILの特徴は、文献、例えば、Donia,et al.,Scand.J.Immunol.2012,75,157-167、Dudley,et al.,Clin.Cancer Res.2010,16,6122-6131、Huang,et al.,J.Immunother.2005,28,258-267、Besser,et al.,Clin.Cancer Res.2013,19,OF1-OF9、Besser,et al.,J.Immunother.2009,32:415-423、Robbins,et al.,J.Immunol.2004,173,7125-7130、Shen,et al.,J.Immunother.,2007,30,123-129、Zhou,et al.,J.Immunother.2005,28,53-62、及びTran,et al.,J.Immunother.,2008,31,742-751に記載されており、これらの各々は参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、本方法は、対象/患者への投与時に複製サイクルを増加させることができ、したがって、より古いTIL(すなわち、対象/患者への投与前により多くの複製ラウンドをさらに受けたTIL)よりも追加の治療的利益を提供し得る、若いTILを得ることを提供する。若いTILの特徴は、文献、例えば、Donia,et al.,Scand.J.Immunol.2012,75,157-167、Dudley,et al.,Clin.Cancer Res.2010,16,6122-6131、Huang,et al.,J.Immunother.2005,28,258-267、Besser,et al.,Clin.Cancer Res.2013,19,OF1-OF9、Besser,et al.,J.Immunother.2009,32:415-423、Robbins,et al.,J.Immunol.2004,173,7125-7130、Shen,et al.,J.Immunother.,2007,30,123-129、Zhou,et al.,J.Immunother.2005,28,53-62、及びTran,et al.,J.Immunother.,2008,31,742-751に記載されており、これらの各々は参照により本明細書に組み込まれる。
Tリンパ球及びBリンパ球の多様な抗原受容体は、限られた数であるが、多数の遺伝子セグメントの体細胞組換えによって産生される。これらの遺伝子セグメント:V(可変)、D(多様性)、J(接合)、及びC(一定)は、免疫グロブリン及びT細胞受容体(TCR)の結合特異性及び下流での適用を決定する。本発明は、T細胞レパートリー多様性を示し、かつ増加させるTILを生成するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、本方法によって取得されたTILは、T細胞レパートリー多様性の増加を示す。いくつかの実施形態では、本方法によって取得されたTILは、新たに採取されたTIL及び/または例えば、図1に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたTILと比較して、T細胞レパートリー多様性の増加を示す。いくつかの実施形態では、本方法によって取得されたTILは、新たに採取されたTILならびに/または図5及び/もしくは図6に例示されるようにプロセス1Cと称される方法を使用して調製されたTILと比較して、T細胞レパートリー多様性の増加を示す。いくつかの実施形態では、第1の拡張で取得されたTILは、T細胞レパートリー多様性の増加を示す。いくつかの実施形態では、多様性の増加は、免疫グロブリン多様性及び/またはT細胞受容体多様性の増加である。いくつかの実施形態では、多様性は、免疫グロブリンにあり、免疫グロブリン重鎖にある。いくつかの実施形態では、多様性は、免疫グロブリンにあり、免疫グロブリン軽鎖にある。いくつかの実施形態では、多様性は、T細胞受容体にある。いくつかの実施形態では、多様性は、アルファ、ベータ、ガンマ、及びデルタ受容体からなる群から選択されるT細胞受容体のうちの1つにある。いくつかの実施形態では、T細胞受容体(TCR)アルファ及び/またはベータの発現が増加する。いくつかの実施形態では、T細胞受容体(TCR)アルファの発現が増加する。いくつかの実施形態では、T細胞受容体(TCR)ベータの発現が増加する。いくつかの実施形態では、TCRab(すなわち、TCRα/β)の発現が増加する。
例えば、図1のステップAに記載されるものなどの腫瘍断片の解剖または消化後に、結果として得られた細胞は、腫瘍及び他の細胞よりもTILの成長を好む条件下で、IL-2を含む血清中で培養される。いくつかの実施形態では、腫瘍消化物は、6000IU/mLのIL-2を有する不活性化ヒトAB血清を含む培地中2mLのウェル中でインキュベートされる。この一次細胞集団は、数日間、一般に3~14日間培養され、その結果、バルクTIL集団、一般に約1×108バルクTIL細胞を生じる。いくつかの実施形態では、この一次細胞集団は、7~14日間培養され、その結果、バルクTIL集団、一般に約1×108バルクTIL細胞を生じる。いくつかの実施形態では、この一次細胞集団は、10~14日間培養され、その結果、バルクTIL集団、一般に約1×108バルクTIL細胞を生じる。いくつかの実施形態では、この一次細胞集団は、約11日間培養され、その結果、バルクTIL集団、一般に約1×108バルクTIL細胞を生じる。
好ましい実施形態では、TILの拡張は、以下及び本明細書に記載の初期バルクTIL拡張ステップ(例えば、REP前と称されるプロセスを含み得る、図1のステップBに記載のものなど)、続いて以下のステップD及び本明細書に記載の第2の拡張(ステップD、急速拡張プロトコル(REP)ステップと称されるプロセスを含む)、続いて任意の凍結保存、続いて以下及び本明細書に記載の第2のステップD(再刺激REPステップと称されるプロセスを含む)を使用して行われ得る。このプロセスから取得されたTILは、本明細書に記載の表現型特徴及び代謝パラメータについて任意で特徴付けられ得る。
TIL培養物が24ウェルプレートで開始される実施形態では、例えば、Costar 24ウェル細胞培養クラスター、平底(Corning Incorporated,Corning,NY)を使用して、IL-2(6000IU/mL、Chiron Corp.,Emeryville,CA)を含む2mLの完全培地(CM)中の1×106個の腫瘍消化細胞または1つの腫瘍断片を、各ウェルに播種することができる。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約1mm3~10mm3である。
いくつかの実施形態では、第1の拡張培養培地は、培養培地の略語である「CM」と称される。いくつかの実施形態では、ステップBのCMは、10%ヒトAB血清、25mM Hepes、及び10mg/mLゲンタマイシンを補充した、GlutaMAXを含むRPMI1640からなる。培養物が40mL容量及び10cm2ガス透過性シリコン底部(例えば、G-REX10、Wilson Wolf Manufacturing,New Brighton,MN)を有するガス透過性フラスコ内で開始される実施形態では、各フラスコに、IL-2を含む10~40mLのCM中の10~40×106個の生きた腫瘍消化細胞または5~30個の腫瘍断片を装填した。G-REX10及び24ウェルプレートの両方を、5% CO2中37℃の加湿インキュベーター内でインキュベートし、培養開始から5日後、培地の半分を取り除き、新たなCM及びIL-2と交換し、5日後、培地の半分を2~3日毎に交換した。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される拡張プロセスで使用される培養培地は、無血清培地または合成培地である。いくつかの実施形態では、無血清または合成培地は、基礎細胞培地ならびに血清サプリメント及び/または血清代替物を含む。いくつかの実施形態では、無血清または合成培地は、血清含有培地のロット間の変動に部分的に起因する実験変動を防止及び/または減少させるために使用される。
いくつかの実施形態では、無血清または合成培地は、基礎細胞培地ならびに血清サプリメント及び/または血清代替物を含む。いくつかの実施形態では、基礎細胞培地には、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion Basal Medium、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-Cell Expansion SFM、CTS(商標)AIM-V Medium、CTS(商標)AIM-V SFM、LymphoONE(商標)T-Cell Expansion Xeno-Free Medium、ダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)、最小必須培地(MEM)、イーグル基礎培地(BME)、RPMI1640、F-10、F-12、最小必須培地(αMEM)、グラスゴー最小必須培地(G-MEM)、RPMI成長培地、及びイスコフ改変ダルベッコ培地が含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、血清サプリメントまたは血清代替物には、CTS(商標)OpTmizer T-Cell Expansion Serum Supplement、CTS(商標)Immune Cell Serum Replacement、1つ以上のアルブミンまたはアルブミン代用物、1つ以上のアミノ酸、1つ以上のビタミン、1つ以上のトランスフェリンまたはトランスフェリン代用物、1つ以上の抗酸化剤、1つ以上のインスリンまたはインスリン代用物、1つ以上のコラーゲン前駆体、1つ以上の抗生物質、及び1つ以上の微量元素のうちの1つ以上が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、合成培地は、アルブミンと、グリシン、L-ヒスチジン、L-イソロイシン、L-メチオニン、L-フェニルアラニン、L-プロリン、L-ヒドロキシプロリン、L-セリン、L-スレオニン、L-トリプトファン、L-チロシン、L-バリン、チアミン、還元型グルタチオン、L-アスコルビン酸-2-リン酸塩、鉄飽和トランスフェリン、インスリン、ならびに微量元素部分Ag+、Al3+、Ba2+、Cd2+、Co2+、Cr3+、Ge4+、Se4+、Br、T、Mn2+、P、Si4+、V5+、Mo6+、Ni2+、Rb+、Sn2+、及びZr4+を含有する化合物からなる群から選択される1つ以上の成分と、を含む。いくつかの実施形態では、合成培地は、L-グルタミン、重炭酸ナトリウム、及び/または2-メルカプトエタノールをさらに含む。
いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Immune Cell Serum Replacementは、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion Basal Medium、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFM、CTS(商標)AIM-V Medium、CST(商標)AIM-V SFM、LymphoONE(商標)T-Cell Expansion Xeno-Free Medium、ダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)、最小必須培地(MEM)、イーグル基礎培地(BME)、RPMI1640、F-10、F-12、最小必須培地(αMEM)、グラスゴー最小必須培地(G-MEM)、RPMI成長培地、及びイスコフ改変ダルベッコ培地を含むが、これらに限定されない、従来の成長培地とともに使用される。
いくつかの実施形態では、無血清または合成培地中の総血清代替物濃度(vol%)は、総無血清または合成培地の約1体積%、2体積%、3体積%、4体積%、5体積%、6体積%、7体積%、8体積%、9体積%、10体積%、11体積%、12体積%、13体積%、14体積%、15体積%、16体積%、17体積%、18体積%、19体積%、または20体積%である。いくつかの実施形態では、総血清代替物濃度は、無血清または合成培地の総体積の約3%である。いくつかの実施形態では、総血清代替物濃度は、無血清または合成培地の総体積の約5%である。いくつかの実施形態では、総血清代替物濃度は、無血清または合成培地の総体積の約10%である。
いくつかの実施形態では、無血清または合成培地は、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFM(ThermoFisher Scientific)である。CTS(商標)OpTmizer(商標)のいずれの製剤も、本発明において有用である。CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMは、1LのCTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion Basal Mediumと、26mLのCTS(商標)OpTmizer(商標)T-Cell Expansion Supplementとの組み合わせであり、これらは使用前に一緒に混合される。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)が補充されている。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、55mMの2-メルカプトエタノールとともに、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)が補充されている。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)が補充されており、培地中の2-メルカプトエタノールの最終濃度は、55μMである。
いくつかの実施形態では、合成培地は、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFM(ThermoFisher Scientific)である。CTS(商標)OpTmizer(商標)のいずれの製剤も、本発明において有用である。CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMは、1LのCTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion Basal Mediumと、26mLのCTS(商標)OpTmizer(商標)T-Cell Expansion Supplementとの組み合わせであり、これらは使用前に一緒に混合される。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、55mMの2-メルカプトエタノールとともに、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)が補充されている。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)、55mMの2-メルカプトエタノール、及び2mMのL-グルタミンが補充されている。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)、55mMの2-メルカプトエタノール、及び2mMのL-グルタミンが補充されており、約1000IU/mL~約8000IU/mLのIL-2をさらに含む。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)、55mMの2-メルカプトエタノール、及び2mMのL-グルタミンが補充されており、約3000IU/mLのIL-2をさらに含む。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)、55mMの2-メルカプトエタノール、及び2mMのL-グルタミンが補充されており、約6000IU/mLのIL-2をさらに含む。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)及び55mMの2-メルカプトエタノールが補充されており、約1000IU/mL~約8000IU/mLのIL-2をさらに含む。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)及び55mMの2-メルカプトエタノールが補充されており、約3000IU/mLのIL-2をさらに含む。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)及び55mMの2-メルカプトエタノールが補充されており、約1000IU/mL~約6000IU/mLのIL-2をさらに含む。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)及び約2mMのグルタミンが補充されており、約1000IU/mL~約8000IU/mLのIL-2をさらに含む。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)及び約2mMのグルタミンが補充されており、約3000IU/mLのIL-2をさらに含む。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)及び約2mMのグルタミンが補充されており、約6000IU/mLのIL-2をさらに含む。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)が補充されており、培地中の2-メルカプトエタノールの最終濃度は、55μMである。
いくつかの実施形態では、無血清培地または合成培地には、約0.1mM~約10mM、0.5mM~約9mM、1mM~約8mM、2mM~約7mM、3mM~約6mM、または4mM~約5mMの濃度でグルタミン(すなわち、GlutaMAX(登録商標))が補充されている。いくつかの実施形態では、無血清培地または合成培地には、約2mMの濃度でグルタミン(すなわち、GlutaMAX(登録商標))が補充されている。
いくつかの実施形態では、無血清培地または合成培地には、約5mM~約150mM、10mM~約140mM、15mM~約130mM、20mM~約120mM、25mM~約110mM、30mM~約100mM、35mM~約95mM、40mM~約90mM、45mM~約85mM、50mM~約80mM、55mM~約75mM、60mM~約70mM、または約65mMの濃度で2-メルカプトエタノールが補充されている。いくつかの実施形態では、無血清培地または合成培地には、約55mMの濃度で2-メルカプトエタノールが補充されている。いくつかの実施形態では、培地中の2-メルカプトエタノールの最終濃度は、55μMである。
いくつかの実施形態では、参照により本明細書に組み込まれる国際PCT公開第WO/1998/030679号に記載されている合成培地は、本発明において有用である。その刊行物には、無血清真核細胞培養培地が記載されている。無血清真核細胞培養培地には、無血清培養下で細胞の成長を支持することができる無血清サプリメントを補充した基礎細胞培養培地が含まれる。無血清真核細胞培養培地サプリメントは、1つ以上のアルブミンまたはアルブミン代替物、1つ以上のアミノ酸、1つ以上のビタミン、1つ以上のトランスフェリンまたはトランスフェリン代替物、1つ以上の抗酸化剤、1つ以上のインスリンまたはインスリン代替物、1つ以上のコラーゲン前駆体、1つ以上の微量元素、及び1つ以上の抗生物質からなる群から選択される1つ以上の成分を含むか、またはそれらを組み合わせることによって取得される。いくつかの実施形態では、合成培地は、L-グルタミン、重炭酸ナトリウム、及び/またはベータ-メルカプトエタノールをさらに含む。いくつかの実施形態では、合成培地は、アルブミンまたはアルブミン代替物と、1つ以上のアミノ酸、1つ以上のビタミン、1つ以上のトランスフェリンまたはトランスフェリン代替物、1つ以上の抗酸化剤、1つ以上のインスリンまたはインスリン代替物、1つ以上のコラーゲン前駆体、及び1つ以上の微量元素からなる群から選択される1つ以上の成分と、を含む。いくつかの実施形態では、合成培地は、アルブミンと、グリシン、L-ヒスチジン、L-イソロイシン、L-メチオニン、L-フェニルアラニン、L-プロリン、L-ヒドロキシプロリン、L-セリン、L-スレオニン、L-トリプトファン、L-チロシン、L-バリン、チアミン、還元型グルタチオン、L-アスコルビン酸-2-リン酸塩、鉄飽和トランスフェリン、インスリン、ならびに微量元素部分Ag+、Al3+、Ba2+、Cd2+、Co2+、Cr3+、Ge4+、Se4+、Br、T、Mn2+、P、Si4+、V5+、Mo6+、Ni2+、Rb+、Sn2+、及びZr4+を含有する化合物からなる群から選択される1つ以上の成分と、を含む。いくつかの実施形態では、基礎細胞培地は、ダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)、最小必須培地(MEM)、イーグル基礎培地(BME)、RPMI1640、F-10、F-12、最小必須培地(αMEM)、グラスゴー最小必須培地(G-MEM)、RPMI成長培地、及びイスコフ改変ダルベッコ培地からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、合成培地中のグリシンの濃度は、約5~200mg/Lの範囲であり、L-ヒスチジンの濃度は、約5~250mg/Lであり、L-イソロイシンの濃度は、約5~300mg/Lであり、L-メチオニンの濃度は、約5~200mg/Lであり、L-フェニルアラニンの濃度は、約5~400mg/Lであり、L-プロリンの濃度は、約1~1000mg/Lであり、L-ヒドロキシプロリンの濃度は、約1~45mg/Lであり、L-セリンの濃度は、約1~250mg/Lであり、L-スレオニンの濃度は、約10~500mg/Lであり、L-トリプトファンの濃度は、約2~110mg/Lであり、L-チロシンの濃度は、約3~175mg/Lであり、L-バリンの濃度は、約5~500mg/Lであり、チアミンの濃度は、約1~20mg/Lであり、還元型グルタチオンの濃度は、約1~20mg/Lであり、L-アスコルビン酸-2-リン酸塩の濃度は、約1~200mg/Lであり、鉄飽和トランスフェリンの濃度は、約1~50mg/Lであり、インスリンの濃度は、約1~100mg/Lであり、亜セレン酸ナトリウムの濃度は、約0.000001~0.0001mg/Lであり、アルブミン(例えば、AlbuMAX(登録商標)I)の濃度は、約5000~50,000mg/Lである。
いくつかの実施形態では、合成培地中の非微量元素部分成分は、表4の「1×培地中の濃度範囲」という見出しの下の列にリストされた濃度範囲で存在する。他の実施形態では、合成培地中の非微量元素部分成分は、表4の「1×培地の好ましい実施形態」という見出しの下の列にリストされた最終濃度で存在する。他の実施形態では、合成培地は、無血清サプリメントを含む基礎細胞培地である。これらの実施形態のうちのいくつかでは、無血清サプリメントは、以下の表4の「サプリメント中の好ましい実施形態」という見出しの下の列にリストされたタイプ及び濃度の非微量部分成分を含む。
いくつかの実施形態では、合成培地の浸透圧は、約260~350mOsmolである。いくつかの実施形態では、浸透圧は、約280~310mOsmolである。いくつかの実施形態では、合成培地には、最大約3.7g/L、または約2.2g/Lの重炭酸ナトリウムが補充されている。合成培地には、L-グルタミン(最終濃度約2mM)、1つ以上の抗生物質、非必須アミノ酸(NEAA、最終濃度約100μM)、2-メルカプトエタノール(最終濃度約100μM)がさらに補充されていてもよい。
いくつかの実施形態では、Smith,et al.,Clin Transl Immunology,4(1)2015(doi:10.1038/cti.2014.31)に記載の定義された培地が、本発明において有用である。簡潔には、RPMIまたはCTS(商標)OpTmizerを基礎細胞培地として使用し、0、2%、5%、または10%のいずれかのCTS(商標)Immune Cell Serum Replacementを補充した。
いくつかの実施形態では、第1及び/または第2のガス透過性容器内の細胞培地は、濾過されていない。濾過されていない細胞培地の使用は、細胞の数を拡張するために必要な手順を簡素化することができる。いくつかの実施形態では、第1及び/または第2のガス透過性容器内の細胞培地は、ベータ-メルカプトエタノール(BMEまたはβME、2-メルカプトエタノールとしても知られる、CAS60-24-2)を欠いている。
腫瘍断片の調製後、結果として得られた細胞(すなわち、断片)は、腫瘍及び他の細胞よりもTILの成長を好む条件下で、IL-2を含む血清中で培養される。いくつかの実施形態では、腫瘍消化物は、6000IU/mLのIL-2を有する不活性化ヒトAB血清を含む培地中2mLのウェル中(または、いくつかの事例では、本明細書で概説されるように、APC細胞集団の存在下)でインキュベートされる。この一次細胞集団は、数日間、一般に10~14日間培養され、その結果、バルクTIL集団、一般に約1×108個のバルクTIL細胞を生じる。いくつかの実施形態では、第1の拡張中の成長培地は、IL-2またはそのバリアントを含む。いくつかの実施形態では、ILは、組換えヒトIL-2(rhIL-2)である。いくつかの実施形態では、IL-2ストック溶液は、1mgバイアルにつき20~30×106IU/mgの比活性を有する。いくつかの実施形態では、IL-2ストック溶液は、1mgバイアルにつき20×106IU/mgの比活性を有する。いくつかの実施形態では、IL-2ストック溶液は、1mgバイアルにつき25×106IU/mgの比活性を有する。いくつかの実施形態では、IL-2ストック溶液は、1mgバイアルにつき30×106IU/mgの比活性を有する。いくつかの実施形態では、IL-2ストック溶液は、4~8×106IU/mgのIL-2の最終濃度を有する。いくつかの実施形態では、IL-2ストック溶液は、5~7×106IU/mgのIL-2の最終濃度を有する。いくつかの実施形態では、IL-2ストック溶液は、6×106IU/mgのIL-2の最終濃度を有する。いくつかの実施形態では、IL-2ストック溶液は、実施例5に記載されるように調製される。いくつかの実施形態では、第1の拡張培養培地は、約10,000IU/mLのIL-2、約9,000IU/mLのIL-2、約8,000IU/mLのIL-2、約7,000IU/mLのIL-2、約6000IU/mLのIL-2、または約5,000IU/mLのIL-2を含む。いくつかの実施形態では、第1の拡張培養培地は、約9,000IU/mLのIL-2~約5,000IU/mLのIL-2を含む。いくつかの実施形態では、第1の拡張培養培地は、約8,000IU/mLのIL-2~約6,000IU/mLのIL-2を含む。いくつかの実施形態では、第1の拡張培養培地は、約7,000IU/mLのIL-2~約6,000IU/mLのIL-2を含む。いくつかの実施形態では、第1の拡張培養培地は、約6,000IU/mLのIL-2を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、IL-2さらに含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約3000IU/mLのIL-2を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、IL-2さらに含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約3000IU/mLのIL-2を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約1000IU/mL、約1500IU/mL、約2000IU/mL、約2500IU/mL、約3000IU/mL、約3500IU/mL、約4000IU/mL、約4500IU/mL、約5000IU/mL、約5500IU/mL、約6000IU/mL、約6500IU/mL、約7000IU/mL、約7500IU/mL、または約8000IU/mLのIL-2を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、1000~2000IU/mL、2000~3000IU/mL、3000~4000IU/mL、4000~5000IU/mL、5000~6000IU/mL、6000~7000IU/mL、7000~8000IU/mL、または約8000IU/mLのIL-2を含む。
いくつかの実施形態では、第1の拡張培養培地は、約500IU/mLのIL-15、約400IU/mLのIL-15、約300IU/mLのIL-15、約200IU/mLのIL-15、約180IU/mLのIL-15、約160IU/mLのIL-15、約140IU/mLのIL-15、約120IU/mLのIL-15、または約100IU/mLのIL-15を含む。いくつかの実施形態では、第1の拡張培養培地は、約500IU/mLのIL-15~約100IU/mLのIL-15を含む。いくつかの実施形態では、第1の拡張培養培地は、約400IU/mLのIL-15~約100IU/mLのIL-15を含む。いくつかの実施形態では、第1の拡張培養培地は、約300IU/mLのIL-15~約100IU/mLのIL-15を含む。いくつかの実施形態では、第1の拡張培養培地は、約200IU/mLのIL-15を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約180IU/mLのIL-15を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、IL-15をさらに含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約180IU/mLのIL-15を含む。
いくつかの実施形態では、第1の拡張培養培地は、約20IU/mLのIL-21、約15IU/mLのIL-21、約12IU/mLのIL-21、約10IU/mLのIL-21、約5IU/mLのIL-21、約4IU/mLのIL-21、約3IU/mLのIL-21、約2IU/mLのIL-21、約1IU/mLのIL-21、または約0.5IU/mLのIL-21を含む。いくつかの実施形態では、第1の拡張培養培地は、約20IU/mLのIL-21~約0.5IU/mLのIL-21を含む。いくつかの実施形態では、第1の拡張培養培地は、約15IU/mLのIL-21~約0.5IU/mLのIL-21を含む。いくつかの実施形態では、第1の拡張培養培地は、約12IU/mLのIL-21~約0.5IU/mLのIL-21を含む。いくつかの実施形態では、第1の拡張培養培地は、約10IU/mLのIL-21~約0.5IU/mLのIL-21を含む。いくつかの実施形態では、第1の拡張培養培地は、約5IU/mLのIL-21~約1IU/mLのIL-21を含む。いくつかの実施形態では、第1の拡張培養培地は、約2IU/mLのIL-21を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約1IU/mLのIL-21を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約0.5IU/mLのIL-21を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、IL-21をさらに含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約1IU/mLのIL-21を含む。
いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、抗CD3アゴニスト抗体、例えば、OKT-3抗体を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約30ng/mLのOKT-3抗体を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約0.1ng/mL、約0.5ng/mL、約1ng/mL、約2.5ng/mL、約5ng/mL、約7.5ng/mL、約10ng/mL、約15ng/mL、約20ng/mL、約25ng/mL、約30ng/mL、約35ng/mL、約40ng/mL、約50ng/mL、約60ng/mL、約70ng/mL、約80ng/mL、約90ng/mL、約100ng/mL、約200ng/mL、約500ng/mL、及び約1μg/mLのOKT-3抗体を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、0.1ng/mL~1ng/mL、1ng/mL~5ng/mL、5ng/mL~10ng/mL、10ng/mL~20ngの間、20ng/mL~30ng/mL、30ng/mL~40ng/mL、40ng/mL~50ng/mL、及び50ng/mL~100ng/mLのOKT-3抗体を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、OKT-3抗体を含まない。いくつかの実施形態では、OKT-3抗体は、ムロモナブである。例えば、表1を参照されたい。
いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、細胞培養培地中に1つ以上のTNFRSFアゴニストを含む。いくつかの実施形態では、TNFRSFアゴニストは、4-1BBアゴニストを含む。いくつかの実施形態では、TNFRSFアゴニストは4-1BBアゴニストであり、4-1BBアゴニストは、ウレルマブ、ウトミルマブ、EU-101、融合タンパク質、ならびにそれらの断片、誘導体、バリアント、バイオシミラー、及び組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、TNFRSFアゴニストは、0.1μg/mL~100μg/mLの細胞培養培地中濃度を達成するのに十分な濃度で追加される。いくつかの実施形態では、TNFRSFアゴニストは、20μg/mL~40μg/mLの細胞培養培地中濃度を達成するのに十分な濃度で追加される。
いくつかの実施形態では、1つ以上のTNFRSFアゴニストに加えて、細胞培養培地は、IL-2を約3000IU/mLの初期濃度で、及びOKT-3を約30ng/mLの初期濃度でさらに含み、1つ以上のTNFRSFアゴニストが、4-1BBアゴニストを含む。
いくつかの実施形態では、第1の拡張培養培地は、培養培地の略語である「CM」と称される。いくつかの実施形態では、それは、CM1(培養培地1)と称される。いくつかの実施形態では、CMは、10%ヒトAB血清、25mM Hepes、及び10mg/mLゲンタマイシンを補充した、GlutaMAXを含むRPMI1640からなる。培養物が40mL容量及び10cm2ガス透過性シリコン底部(例えば、G-REX10、Wilson Wolf Manufacturing,New Brighton,MN)を有するガス透過性フラスコ内で開始される実施形態では、IL-2を含む10~40mLのCM中の10~40×106個の生きた腫瘍消化細胞または5~30個の腫瘍断片を、各フラスコに入れた。G-REX10及び24ウェルプレートの両方を、5% CO2中37℃の加湿インキュベーター内でインキュベートし、培養開始から5日後、培地の半分を取り除き、新たなCM及びIL-2と交換し、5日後、培地の半分を2~3日毎に交換した。いくつかの実施形態では、CMは、実施例に記載されるCM1であり、実施例1を参照されたい。いくつかの実施形態では、第1の拡張は、初期細胞培養培地または第1の細胞培養培地中で起こる。いくつかの実施形態では、初期細胞培養培地または第1の細胞培養培地は、IL-2を含む。
いくつかの実施形態では、実施例及び図で考察されるように、第1の拡張(例えば、REP前と称されることもあるものを含み得る、図1のステップBに記載されるものなどのプロセスを含む)プロセスは、3~14日に短縮される。いくつかの実施形態では、実施例で考察され、かつ図4及び図5に示されるように、例えば、図1のステップBに記載される拡張も含む、第1の拡張(例えば、REP前と称されることもあるものを含み得る、図1のステップBに記載されるものなどのプロセスを含む)は、7~14日に短縮される。いくつかの実施形態では、ステップBの第1の拡張は、10~14日に短縮される。いくつかの実施形態では、第1の拡張は、例えば、図1のステップBに記載される拡張において考察されるように、11日に短縮される。
いくつかの実施形態では、第1のTIL拡張は、1日、2日、3日、4日、5日、6日、7日、8日、9日、10日、11日、12日、13日、または14日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第1のTIL拡張は、1日~14日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第1のTIL拡張は、2日~14日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第1のTIL拡張は、3日~14日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第1のTIL拡張は、4日~14日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第1のTIL拡張は、5日~14日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第1のTIL拡張は、6日~14日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第1のTIL拡張は、7日~14日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第1のTIL拡張は、8日~14日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第1のTIL拡張は、9日~14日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第1のTIL拡張は、10日~14日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第1のTIL拡張は、11日~14日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第1のTIL拡張は、12日~14日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第1のTIL拡張は、13日~14日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第1のTIL拡張は、14日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第1のTIL拡張は、1日~11日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第1のTIL増殖は、2日~11日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第1のTIL拡張は、3日~11日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第1のTIL拡張は、4日~11日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第1のTIL拡張は、5日~11日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第1のTIL拡張は、6日~11日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第1のTIL拡張は、7日~11日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第1のTIL拡張は、8日~11日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第1のTIL拡張は、9日~11日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第1のTIL拡張は、10日~11日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第1のTIL拡張は、11日間続行することができる。
いくつかの実施形態では、IL-2、IL-7、IL-15、及び/またはIL-21の組み合わせは、第1の拡張中に組み合わせとして用いられる。いくつかの実施形態では、IL-2、IL-7、IL-15、及び/またはIL-21、ならびにそれらの任意の組み合わせは、例えば、図1による、かつ本明細書に記載されるステップBのプロセス中を含む、第1の拡張中に含まれ得る。いくつかの実施形態では、IL-2、IL-15、及びIL-21の組み合わせは、第1の拡張中に組み合わせとして用いられる。いくつかの実施形態では、IL-2、IL-15、及びIL-21、ならびにそれらの任意の組み合わせは、図1による、かつ本明細書に記載されるステップBのプロセス中に含まれ得る。
いくつかの実施形態では、実施例及び図で考察されるように、第1の拡張(REP前と称されるプロセスを含む、例えば、図1によるステップB)プロセスは、3~14日に短縮される。いくつかの実施形態では、ステップBの第1の拡張は、7~14日に短縮される。いくつかの実施形態では、ステップBの第1の拡張は、10~14日に短縮される。いくつかの実施形態では、第1の拡張は、11日に短縮される。
いくつかの実施形態では、第1の拡張、例えば、図1によるステップBは、閉鎖系バイオリアクター内で行われる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるように、閉鎖系がTIL拡張のために用いられる。いくつかの実施形態では、単一のバイオリアクターが用いられる。いくつかの実施形態では、用いられる単一のバイオリアクターは、例えば、G-REX-10またはG-REX-100である。いくつかの実施形態では、閉鎖系バイオリアクターは、単一のバイオリアクターである。
1.サイトカイン及び他の添加物
本明細書に記載の拡張方法は、一般に、当該技術分野で知られているように、高用量のサイトカイン、特にIL-2を含む培養培地を使用する。
あるいは、TILの急速拡張及び/または第2の拡張のためにサイトカインの組み合わせを使用することは、米国特許出願公開第US2017/0107490A1号(その開示は参照により本明細書に組み込まれる)に記載されているように、IL-2、IL-15及びIL-21のうちの2つ以上の組み合わせを用いて追加として可能である。したがって、可能な組み合わせには、IL-2及びIL-15、IL-2及びIL-21、IL-15及びIL-21、ならびにIL-2またはIL-15及びIL-21が含まれ、後者は、多くの実施形態において特定の用途を見出す。サイトカインの組み合わせの使用は、リンパ球、特にそこに記載されているようにT細胞の生成に特に有利に働く。
本明細書に記載の拡張方法は、一般に、当該技術分野で知られているように、高用量のサイトカイン、特にIL-2を含む培養培地を使用する。
あるいは、TILの急速拡張及び/または第2の拡張のためにサイトカインの組み合わせを使用することは、米国特許出願公開第US2017/0107490A1号(その開示は参照により本明細書に組み込まれる)に記載されているように、IL-2、IL-15及びIL-21のうちの2つ以上の組み合わせを用いて追加として可能である。したがって、可能な組み合わせには、IL-2及びIL-15、IL-2及びIL-21、IL-15及びIL-21、ならびにIL-2またはIL-15及びIL-21が含まれ、後者は、多くの実施形態において特定の用途を見出す。サイトカインの組み合わせの使用は、リンパ球、特にそこに記載されているようにT細胞の生成に特に有利に働く。
いくつかの実施形態では、ステップBはまた、本明細書の他の箇所に記載されるように、OKT-3抗体またはムロモナブの、培養培地への添加を含み得る。いくつかの実施形態では、ステップBはまた、本明細書の他の箇所に記載されるように、4-1BBアゴニストの、培養培地への添加を含んでもよい。いくつかの実施形態では、ステップBはまた、本明細書の他の箇所に記載されるように、OX-40アゴニストの、培養培地への添加を含み得る。他の実施形態では、チアゾリジンジオン化合物などの増殖因子活性化受容体(PPAR)-ガンマアゴニストを含む、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマコアクチベーターI-アルファアゴニストなどの添加剤は、米国特許出願公開第US2019/0307796 A1号(この開示は参照により本明細書に組み込まれる)に記載されるように、ステップB中の培養培地で使用されてもよい。
C.ステップC:第1の拡張から第2の拡張へと移行
いくつかの事例では、例えば、図1に示されるステップBから取得されたTIL集団を含む、第1の拡張から取得されたバルクTIL集団は、以下で考察されるプロトコルを使用して、直ちに凍結保存され得る。あるいは、第2のTIL集団と称される第1の拡張から取得されたTIL集団は、以下で考察されるように、第2の拡張(REPと称されることもある拡張を含み得る)に供され、その後、凍結保存され得る。同様に、遺伝子修飾TILが治療に使用される場合、第1のTIL集団(バルクTIL集団と称されることもある)または第2のTIL集団(いくつかの実施形態では、REP TIL集団と称される集団を含み得る)は、拡張前または第1の拡張後及び第2の拡張前に、好適な治療のために遺伝子修飾に供され得る。
いくつかの事例では、例えば、図1に示されるステップBから取得されたTIL集団を含む、第1の拡張から取得されたバルクTIL集団は、以下で考察されるプロトコルを使用して、直ちに凍結保存され得る。あるいは、第2のTIL集団と称される第1の拡張から取得されたTIL集団は、以下で考察されるように、第2の拡張(REPと称されることもある拡張を含み得る)に供され、その後、凍結保存され得る。同様に、遺伝子修飾TILが治療に使用される場合、第1のTIL集団(バルクTIL集団と称されることもある)または第2のTIL集団(いくつかの実施形態では、REP TIL集団と称される集団を含み得る)は、拡張前または第1の拡張後及び第2の拡張前に、好適な治療のために遺伝子修飾に供され得る。
いくつかの実施形態では、第1の拡張から(例えば、図1に示されるステップBから)取得されたTILは、選択のために表現型決定されるまで保管される。いくつかの実施形態では、第1の拡張から(例えば、図1に示されるステップBから)取得されたTILは保管されず、第2の拡張に直接進む。いくつかの実施形態では、第1の拡張から取得されたTILは、第1の拡張後及び第2の拡張前に凍結保存されない。いくつかの実施形態では、第1の拡張から第2の拡張への移行は、断片化が起こってから約3日、4日、5日、6日、7日、8日、9日、10日、11日、12日、13日、または14日で起こる。いくつかの実施形態では、第1の拡張から第2の拡張への移行は、断片化が起こってから約3日~14日で起こる。いくつかの実施形態では、第1の拡張から第2の拡張への移行は、断片化が起こってから約4日~14日で起こる。いくつかの実施形態では、第1の拡張から第2の拡張への移行は、断片化が起こってから約4日~10日で起こる。いくつかの実施形態では、第1の拡張から第2の拡張への移行は、断片化が起こってから約7日~14日で起こる。いくつかの実施形態では、第1の拡張から第2の拡張への移行は、断片化が起こってから約14日で起こる。
いくつかの実施形態では、第1の拡張から第2の拡張への移行は、断片化が起こってから1日、2日、3日、4日、5日、6日、7日、8日、9日、10日、11日、12日、13日、または14日で起こる。いくつかの実施形態では、第1の拡張から第2の拡張への移行は、断片化が起こってから1日~14日で起こる。いくつかの実施形態では、第1のTIL拡張は、2日~14日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第1の拡張から第2の拡張への移行は、断片化が起こってから3日~14日で起こる。いくつかの実施形態では、第1の拡張から第2の拡張への移行は、断片化が起こってから4日~14日で起こる。いくつかの実施形態では、第1の拡張から第2の拡張への移行は、断片化が起こってから5日~14日で起こる。いくつかの実施形態では、第1の拡張から第2の拡張への移行は、断片化が起こってから6日~14日で起こる。いくつかの実施形態では、第1の拡張から第2の拡張への移行は、断片化が起こってから7日~14日で起こる。いくつかの実施形態では、第1の拡張から第2の拡張への移行は、断片化が起こってから8日~14日で起こる。いくつかの実施形態では、第1の拡張から第2の拡張への移行は、断片化が起こってから9日~14日で起こる。いくつかの実施形態では、第1の拡張から第2の拡張への移行は、断片化が起こってから10日~14日で起こる。いくつかの実施形態では、第1の拡張から第2の拡張への移行は、断片化が起こってから11日~14日で起こる。いくつかの実施形態では、第1の拡張から第2の拡張への移行は、断片化が起こってから12日~14日で起こる。いくつかの実施形態では、第1の拡張から第2の拡張への移行は、断片化が起こってから13日~14日で起こる。いくつかの実施形態では、第1の拡張から第2の拡張への移行は、断片化が起こってから14日で起こる。いくつかの実施形態では、第1の拡張から第2の拡張への移行は、断片化が起こってから1日~11日で起こる。いくつかの実施形態では、第1の拡張から第2の拡張への移行は、断片化が起こってから2日~11日で起こる。いくつかの実施形態では、第1の拡張から第2の拡張への移行は、断片化が起こってから3日~11日で起こる。いくつかの実施形態では、第1の拡張から第2の拡張への移行は、断片化が起こってから4日~11日で起こる。いくつかの実施形態では、第1の拡張から第2の拡張への移行は、断片化が起こってから5日~11日で起こる。いくつかの実施形態では、第1の拡張から第2の拡張への移行は、断片化が起こってから6日~11日で起こる。いくつかの実施形態では、第1の拡張から第2の拡張への移行は、断片化が起こってから7日~11日で起こる。いくつかの実施形態では、第1の拡張から第2の拡張への移行は、断片化が起こってから8日~11日で起こる。いくつかの実施形態では、第1の拡張から第2の拡張への移行は、断片化が起こってから9日~11日で起こる。いくつかの実施形態では、第1の拡張から第2の拡張への移行は、断片化が起こってから10日~11日で起こる。いくつかの実施形態では、第1の拡張から第2の拡張への移行は、断片化が起こってから11日で起こる。
いくつかの実施形態では、TILは、第1の拡張後及び第2の拡張前に保管されず、TILは、第2の拡張に直接進む(例えば、いくつかの実施形態では、図1に示されるステップBからステップDへの移行中に保管されない)。いくつかの実施形態では、移行は、本明細書に記載されるように、閉鎖系内で起こる。いくつかの実施形態では、第1の拡張由来のTILである第2のTIL集団は、移行期間なしで第2の拡張に直接進む。
いくつかの実施形態では、第1の拡張から第2の拡張への移行、例えば、図1によるステップCは、閉鎖系バイオリアクター内で行われる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるように、閉鎖系がTIL拡張のために用いられる。いくつかの実施形態では、単一のバイオリアクターが用いられる。いくつかの実施形態では、用いられる単一のバイオリアクターは、例えば、G-REX-10またはG-REX-100である。いくつかの実施形態では、閉鎖系バイオリアクターは、単一のバイオリアクターである。
D.ステップD:第2の拡張
いくつかの実施形態では、TIL細胞集団は、採取及び初期バルク処理後、例えば、図1に示される、ステップA及びステップB、ならびにステップCと称される移行後に数が拡張される)。このさらなる拡張は、本明細書では第2の拡張と称され、これは、当該技術分野で一般に急速拡張プロセス(REP、ならびに図1のステップDに示されるプロセス)と称される拡張プロセスを含み得る。第2の拡張は、一般に、フィーダー細胞、サイトカイン源、及び抗CD3抗体を含むいくつかの成分を含む培養培地を使用して、ガス透過性容器内で達成される。
いくつかの実施形態では、TIL細胞集団は、採取及び初期バルク処理後、例えば、図1に示される、ステップA及びステップB、ならびにステップCと称される移行後に数が拡張される)。このさらなる拡張は、本明細書では第2の拡張と称され、これは、当該技術分野で一般に急速拡張プロセス(REP、ならびに図1のステップDに示されるプロセス)と称される拡張プロセスを含み得る。第2の拡張は、一般に、フィーダー細胞、サイトカイン源、及び抗CD3抗体を含むいくつかの成分を含む培養培地を使用して、ガス透過性容器内で達成される。
いくつかの実施形態では、第2の拡張または第2のTIL拡張(REPと称されることもある拡張、ならびに図1のステップDに示されるプロセスを含み得る)は、当業者に知られている任意のTILフラスコまたは容器を使用して行われ得る。いくつかの実施形態では、第2のTIL拡張は、7日、8日、9日、10日、11日、12日、13日、または14日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第2のTIL拡張は、約7日~約14日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第2のTIL拡張は、約8日~約14日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第2のTIL拡張は、約9日~約14日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第2のTIL拡張は、約10日~約14日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第2のTIL拡張は、約11日~約14日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第2のTIL拡張は、約12日~約14日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第2のTIL拡張は、約13日~約14日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第2のTIL拡張は、約14日間続行することができる。
いくつかの実施形態では、第2の拡張は、本開示の方法(例えば、REPと称される拡張、ならびに図1のステップDに示されるプロセスを含む)を使用して、ガス透過性容器内で行われ得る。例えば、TILは、インターロイキン-2(IL-2)またはインターロイキン-15(IL-15)の存在下で非特異的T細胞受容体刺激を使用して、急速に拡張され得る。非特異的T細胞受容体刺激は、例えば、抗CD3抗体、例えば約30ng/mLのOKT3、マウスモノクローナル抗CD3抗体(Ortho-McNeil,Raritan,NJもしくはMiltenyi Biotech,Auburn,CAから市販)またはUHCT-1(BioLegend,San Diego,CA,USAから市販)を含み得る。TILは、がんのエピトープ(複数可)などの抗原性部分を含む、第2の拡張中に1つ以上の抗原を含むことによって、インビトロでTILのさらなる刺激を誘導するように拡張することができ、これは、例えば、ヒト白血球抗原A2(HLA-A2)結合ペプチドなどのベクター、例えば、0.3μM MART-1:26-35(27L)またはgpl00:209-217(210M)から、任意選択で300IU/mLのIL-2またはIL-15などのT細胞成長因子の存在下で任意で発現され得る。他の好適な抗原には、例えば、NY-ESO-1、TRP-1、TRP-2、チロシナーゼがん抗原、MAGE-A3、SSX-2、及びVEGFR2、またはそれらの抗原性部分が含まれ得る。TILは、HLA-A2を発現する抗原提示細胞にパルスされたがんの同じ抗原(複数可)で再刺激することによっても急速に拡張され得る。あるいは、TILは、例えば、例として放射線照射された自己リンパ球または放射線照射されたHLA-A2+同種異系リンパ球及びIL-2でさらに再刺激され得る。いくつかの実施形態では、再刺激は、第2の拡張の一部として起こる。いくつかの実施形態では、第2の拡張は、放射線照射された自己リンパ球の存在下で、または放射線照射されたHLA-A2+同種異系リンパ球及びIL-2を用いて起こる。
いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、IL-2さらに含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約3000IU/mLのIL-2を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約1000IU/mL、約1500IU/mL、約2000IU/mL、約2500IU/mL、約3000IU/mL、約3500IU/mL、約4000IU/mL、約4500IU/mL、約5000IU/mL、約5500IU/mL、約6000IU/mL、約6500IU/mL、約7000IU/mL、約7500IU/mL、または約8000IU/mLのIL-2を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、1000~2000IU/mL、2000~3000IU/mL、3000~4000IU/mL、4000~5000IU/mL、5000~6000IU/mL、6000~7000IU/mL、7000~8000IU/mL、または8000IU/mLのIL-2を含む。
いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、OKT-3抗体を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約30ng/mLのOKT-3抗体を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約0.1ng/mL、約0.5ng/mL、約1ng/mL、約2.5ng/mL、約5ng/mL、約7.5ng/mL、約10ng/mL、約15ng/mL、約20ng/mL、約25ng/mL、約30ng/mL、約35ng/mL、約40ng/mL、約50ng/mL、約60ng/mL、約70ng/mL、約80ng/mL、約90ng/mL、約100ng/mL、約200ng/mL、約500ng/mL、及び約1μg/mLのOKT-3抗体を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、0.1ng/mL~1ng/mL、1ng/mL~5ng/mL、5ng/mL~10ng/mL、10ng/mL~20ngの間、20ng/mL~30ng/mL、30ng/mL~40ng/mL、40ng/mL~50ng/mL、及び50ng/mL~100ng/mLのOKT-3抗体を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、OKT-3抗体を含まない。いくつかの実施形態では、OKT-3抗体は、ムロモナブである。
いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、細胞培養培地中に1つ以上のTNFRSFアゴニストを含む。いくつかの実施形態では、TNFRSFアゴニストは、4-1BBアゴニストを含む。いくつかの実施形態では、TNFRSFアゴニストは4-1BBアゴニストであり、4-1BBアゴニストは、ウレルマブ、ウトミルマブ、EU-101、融合タンパク質、ならびにそれらの断片、誘導体、バリアント、バイオシミラー、及び組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、TNFRSFアゴニストは、0.1μg/mL~100μg/mLの細胞培養培地中濃度を達成するのに十分な濃度で追加される。いくつかの実施形態では、TNFRSFアゴニストは、20μg/mL~40μg/mLの細胞培養培地中濃度を達成するのに十分な濃度で追加される。
いくつかの実施形態では、1つ以上のTNFRSFアゴニストに加えて、細胞培養培地は、IL-2を約3000IU/mLの初期濃度で、及びOKT-3を約30ng/mLの初期濃度でさらに含み、1つ以上のTNFRSFアゴニストが、4-1BBアゴニストを含む。
いくつかの実施形態では、IL-2、IL-7、IL-15、及び/またはIL-21の組み合わせは、第2の拡張中に組み合わせとして用いられる。いくつかの実施形態では、IL-2、IL-7、IL-15、及び/またはIL-21、ならびにそれらの任意の組み合わせは、例えば、図1による、かつ本明細書に記載されるステップDのプロセス中を含む、第2の拡張中に含まれ得る。いくつかの実施形態では、IL-2、IL-15、及びIL-21の組み合わせは、第2の拡張中に組み合わせとして用いられる。いくつかの実施形態では、IL-2、IL-15、及びIL-21、ならびにそれらの任意の組み合わせは、図1による、かつ本明細書に記載されるステップDのプロセス中に含まれ得る。
いくつかの実施形態では、第2の拡張は、IL-2、OKT-3、抗原提示フィーダー細胞、及び任意でTNFRSFアゴニストを含む補充された細胞培養培地において実施され得る。いくつかの実施形態では、第2の拡張は、補充された細胞培養培地中で起こる。いくつかの実施形態では、補充された細胞培養培地は、IL-2、OKT-3、及び抗原提示フィーダー細胞を含む。いくつかの実施形態では、第2の細胞培養培地は、IL-2、OKT-3、及び抗原提示細胞(APC、抗原提示フィーダー細胞とも称される)を含む。いくつかの実施形態では、第2の拡張は、IL-2、OKT-3、及び抗原提示フィーダー細胞(すなわち、抗原提示細胞)を含む細胞培養培地中で起こる。
いくつかの実施形態では、第2の拡張培養培地は、約500IU/mLのIL-15、約400IU/mLのIL-15、約300IU/mLのIL-15、約200IU/mLのIL-15、約180IU/mLのIL-15、約160IU/mLのIL-15、約140IU/mLのIL-15、約120IU/mLのIL-15、または約100IU/mLのIL-15を含む。いくつかの実施形態では、第2の拡張培養培地は、約500IU/mLのIL-15~約100IU/mLのIL-15を含む。いくつかの実施形態では、第2の拡張培養培地は、約400IU/mLのIL-15~約100IU/mLのIL-15を含む。いくつかの実施形態では、第2の拡張培養培地は、約300IU/mLのIL-15~約100IU/mLのIL-15を含む。いくつかの実施形態では、第2の拡張培養培地は、約200IU/mLのIL-15を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約180IU/mLのIL-15を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、IL-15をさらに含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約180IU/mLのIL-15を含む。
いくつかの実施形態では、第2の拡張培養培地は、約20IU/mLのIL-21、約15IU/mLのIL-21、約12IU/mLのIL-21、約10IU/mLのIL-21、約5IU/mLのIL-21、約4IU/mLのIL-21、約3IU/mLのIL-21、約2IU/mLのIL-21、約1IU/mLのIL-21、または約0.5IU/mLのIL-21を含む。いくつかの実施形態では、第2の拡張培養培地は、約20IU/mLのIL-21~約0.5IU/mLのIL-21を含む。いくつかの実施形態では、第2の拡張培養培地は、約15IU/mLのIL-21~約0.5IU/mLのIL-21を含む。いくつかの実施形態では、第2の拡張培養培地は、約12IU/mLのIL-21~約0.5IU/mLのIL-21を含む。いくつかの実施形態では、第2の拡張培養培地は、約10IU/mLのIL-21~約0.5IU/mLのIL-21を含む。いくつかの実施形態では、第2の拡張培養培地は、約5IU/mLのIL-21~約1IU/mLのIL-21を含む。いくつかの実施形態では、第2の拡張培養培地は、約2IU/mLのIL-21を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約1IU/mLのIL-21を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約0.5IU/mLのIL-21を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、IL-21をさらに含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約1IU/mLのIL-21を含む。
いくつかの実施形態では、抗原提示フィーダー細胞(APC)は、PBMCである。いくつかの実施形態では、急速拡張及び/または第2の拡張におけるTILのPBMC及び/または抗原提示細胞に対する比は、約1:25、約1:50、約1:100、約1:125、約1:150、約1:175、約1:200、約1:225、約1:250、約1:275、約1:300、約1:325、約1:350、約1:375、約1:400、または約1:500である。いくつかの実施形態では、急速拡張及び/または第2の拡張におけるTILのPBMCに対する比は、1:50~1:300である。いくつかの実施形態では、急速拡張及び/または第2の拡張におけるTILのPBMCに対する比は、1:100~1:200である。
いくつかの実施形態では、REP及び/または第2の拡張は、バルクTILが150mLの培地中の100倍または200倍過剰の不活性化フィーダー細胞、30mg/mLのOKT3抗CD3抗体、及び3000IU/mLのIL-2と混合されているフラスコ内で行われる。細胞が代替の成長チャンバに移されるまで、培地交換が行われる(一般に、新鮮な培地との呼吸による3分の2の培地交換)。代替の成長チャンバには、以下でより完全に考察されるように、G-REXフラスコ及びガス透過性容器が含まれる。
いくつかの実施形態では、実施例及び図で考察されるように、第2の拡張(REPプロセスと称されるプロセスを含み得る)は、7~14日に短縮される。いくつかの実施形態では、第2の拡張は、11日に短縮される。
いくつかの実施形態では、REP及び/または第2の拡張は、以前に記載されたT-175フラスコ及びガス透過性バッグ(Tran,et al.,J.Immunother.2008,31,742-51、Dudley,et al.,J.Immunother.2003,26,332-42)またはガス透過性培養器具(G-REXフラスコ)を使用して行われ得る。いくつかの実施形態では、第2の拡張(急速拡張と称される拡張を含む)は、T-175フラスコ内で行われ、150mLの培地に懸濁された約1×106個のTILが、各T-175フラスコに添加され得る。TILは、3000IU/mLのIL-2及び30ng/mLの抗CD3を補充した、1:1のCMとAIM-V培地との混合物中で培養され得る。T-175フラスコは、5% CO2中37℃でインキュベートされ得る。培地の半分が、3000IU/mLのIL-2を含む50/50培地を使用して5日目に交換され得る。いくつかの実施形態では、7日目に、2つのT-175フラスコからの細胞が3Lバッグ内で組み合わせられ得、5%ヒトAB血清及び3000IU/mLのIL-2を含む300mLのAIM Vが、300mLのTIL懸濁液に添加された。各バッグ内の細胞の数が毎日または隔日計数され、新鮮な培地が添加されて、0.5~2.0×106細胞/mLの細胞数を維持した。
いくつかの実施形態では、第2の拡張(REPと称される拡張、ならびに図1のステップDで参照される拡張を含み得る)は、100cmのガス透過性シリコン底部(G-REX100、Wilson Wolf Manufacturing Corporation,New Brighton,MN,USAから市販されている)を有する500mL容量のガス透過性フラスコ内で行われ得る。5×106または10×106TILは、5%ヒトAB血清、3000IU/mLのIL-2、及び30ng/mLの抗CD3(OKT3)を補充した400mLの50/50培地中、PBMCで培養され得る。G-REX100フラスコは、5%CO2中37℃でインキュベートされ得る。5日目に、250mLの上清が除去され、遠心分離ボトルに入れられ、1500rpm(491×g)で10分間遠心分離される。TILペレットが、5%ヒトAB血清、3000IU/mLのIL-2を含む150mLの新鮮な培地で再懸濁され、元のG-REX100フラスコに戻し添加され得る。TILがG-REX100フラスコ内で連続的に拡張される場合、7日目に、各G-REX100内のTILが、各フラスコに存在する300mLの培地に懸濁され得、細胞懸濁液が3つの100mLアリコートに分割され得、それを使用して、3つのG-REX100フラスコに播種することができる。その後、5%ヒトAB血清及び3000IU/mLのIL-2を含む150mLのAIM-Vが各フラスコに添加され得る。G-REX100フラスコが5%CO2中37℃でインキュベートされ、4日後に、3000IU/mLのIL-2を含む150mLのAIM-Vが、各G-REX100フラスコに添加され得る。培養14日目に、細胞が採取され得る。
いくつかの実施形態では、第2の拡張(REPと称される拡張を含む)は、バルクTILが150mLの培地中の100倍または200倍過剰の不活性化フィーダー細胞、30mg/mLのOKT3抗CD3抗体、及び3000IU/mLのIL-2と混合されているフラスコで行われる。いくつかの実施形態では、培地交換は、細胞が代替の成長チャンバに移されるまで行われる。いくつかの実施形態では、培地の3分の2が、新鮮な培地と呼吸によって交換される。いくつかの実施形態では、代替の成長チャンバには、以下でより完全に考察されるように、G-REXフラスコ及びガス透過性容器が含まれる。
いくつかの実施形態では、第2の拡張(REPと称される増殖を含む)が行われ、優れた腫瘍反応性のためにTILが選択されるステップをさらに含む。当該技術分野で知られている任意の選択方法が使用され得る。例えば、米国特許出願公開第2016/0010058A1号(その開示は参照により本明細書に組み込まれる)に記載されている方法が、優れた腫瘍反応性のためのTILの選択に使用され得る。
任意選択で、細胞生存率アッセイは、当該技術分野で知られている標準的なアッセイを使用して、第2の拡張(REP拡張と称される拡張を含む)後に行われ得る。例えば、死細胞を選択的に標識し、生存率の評価を可能にするトリパンブルー排除アッセイが、バルクTILの試料上で行われ得る。いくつかの実施形態では、TIL試料は、Cellometer K2自動セルカウンター(Nexcelom Bioscience,Lawrence,MA)を使用して計数され、生存率が決定され得る。いくつかの実施形態では、生存率は、標準のCellometer K2 Image Cytometer Automatic Cell Counterプロトコルに従って決定される。
いくつかの実施形態では、TILの第2の拡張(REPと称される拡張を含む)は、以前に記載されているT-175フラスコ及びガス透過性バッグ(Tran,et al.,2008,J Immunother.,31:742-751及びDudley,et al.,2003,J Immunother.,26:332-342)またはガス透過性G-REXフラスコを使用して行われ得る。いくつかの実施形態では、第2の拡張は、フラスコを使用して行われる。いくつかの実施形態では、第2の拡張は、ガス透過性G-REXフラスコを使用して行われる。いくつかの実施形態では、第2の拡張は、T-175フラスコ内で行われ、約1×106個のTILが約150mLの培地に懸濁され、これが各T-175フラスコに添加される。TILは、「フィーダー」細胞として1対100の比率で放射線照射された(50Gy)同種異系PBMCと培養され、細胞が、3000IU/mLのIL-2及び30ng/mLの抗CD3を補充した、1:1のCMとAIM-V培地との混合物(50/50培地)中で培養された。T-175フラスコは、5%CO2中37℃でインキュベートされる。いくつかの実施形態では、培地の半分が、3000IU/mLのIL-2を含む50/50培地を使用して5日目に交換される。いくつかの実施形態では、7日目に、2つのT-175フラスコからの細胞が3Lバッグ内で組み合わせられ、5%ヒトAB血清及び3000IU/mLのIL-2を含む300mLのAIM-Vが、300mLのTIL懸濁液に添加される。各バッグ内の細胞の数が毎日または隔日計数され得、新鮮な培地が添加されて、約0.5~約2.0×106細胞/mLの細胞数を維持することができる。
いくつかの実施形態では、第2の拡張(REPと称される拡張を含む)は、100cm2のガス透過性シリコン底部(G-REX100、Wilson Wolf)を有する500mL容量のフラスコ内で行われ、約5×106または10×106TILが、3000IU/mLのIL-2及び30ng/mLの抗CD3を補充した、400mLの50/50培地中、1対100の比で放射線照射された同種異系PBMCと培養される。G-REX100フラスコは、5%CO2中37℃でインキュベートされる。いくつかの実施形態では、5日目に、250mLの上清が除去され、遠心分離ボトルに入れられ、1500rpm(491g)で10分間遠心分離される。その後、TILペレットが、3000IU/mLのIL-2を含む150mLの新鮮な50/50培地に再懸濁され、元のG-REX100フラスコに戻し添加され得る。TILがG-REX100フラスコ内で連続的に拡張される実施形態では、7日目に、各G-REX100内のTILが、各フラスコ内に存在する300mLの培地に懸濁され、細胞懸濁液が3つの100mLアリコートに分割されて、それを使用して、3つのG-REX100フラスコに播種された。その後、5%ヒトAB血清及び3000IU/mLのIL-2を含む150mLのAIM-Vが各フラスコに添加される。G-REX100フラスコが5%CO2中37℃でインキュベートされ、4日後に、3000IU/mLのIL-2を含む150mLのAIM-Vが、各G-REX100フラスコに添加される。培養14日目に、細胞が採取される。
Tリンパ球及びBリンパ球の多様な抗原受容体は、限られた数であるが、多数の遺伝子セグメントの体細胞組換えによって産生される。これらの遺伝子セグメント:V(可変)、D(多様性)、J(接合)、及びC(一定)は、免疫グロブリン及びT細胞受容体(TCR)の結合特異性及び下流での適用を決定する。本発明は、T細胞レパートリー多様性を示し、かつ増加させるTILを生成するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、本方法によって取得されたTILは、T細胞レパートリー多様性の増加を示す。いくつかの実施形態では、第2の拡張において取得されたTILは、T細胞レパートリー多様性の増加を示す。いくつかの実施形態では、多様性の増加は、免疫グロブリン多様性及び/またはT細胞受容体多様性の増加である。いくつかの実施形態では、多様性は、免疫グロブリンにあり、免疫グロブリン重鎖にある。いくつかの実施形態では、多様性は、免疫グロブリンにあり、免疫グロブリン軽鎖にある。いくつかの実施形態では、多様性は、T細胞受容体にある。いくつかの実施形態では、多様性は、アルファ、ベータ、ガンマ、及びデルタ受容体からなる群から選択されるT細胞受容体のうちの1つにある。いくつかの実施形態では、T細胞受容体(TCR)アルファ及び/またはベータの発現が増加する。いくつかの実施形態では、T細胞受容体(TCR)アルファの発現が増加する。いくつかの実施形態では、T細胞受容体(TCR)ベータの発現が増加する。いくつかの実施形態では、TCRab(すなわち、TCRα/β)の発現が増加する。
いくつかの実施形態では、第2の拡張培養培地(例えば、CM2または第2の細胞培養培地と称されることもある)は、以下でさらに詳細に考察されるように、IL-2、OKT-3、ならびに抗原提示フィーダー細胞(APC)を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される拡張プロセスで使用される培地は、無血清培地または合成培地である。いくつかの実施形態では、無血清または合成培地は、基礎細胞培地ならびに血清サプリメント及び/または血清代替物を含む。いくつかの実施形態では、無血清または合成培地は、血清含有培地のロット間の変動に部分的に起因する実験変動を防止及び/または減少させるために使用される。
いくつかの実施形態では、無血清または合成培地は、基礎細胞培地ならびに血清サプリメント及び/または血清代替物を含む。いくつかの実施形態では、基礎細胞培地には、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion Basal Medium、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-Cell Expansion SFM、CTS(商標)AIM-V Medium、CTS(商標)AIM-V SFM、LymphoONE(商標)T-Cell Expansion Xeno-Free Medium、ダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)、最小必須培地(MEM)、イーグル基礎培地(BME)、RPMI1640、F-10、F-12、最小必須培地(αMEM)、グラスゴー最小必須培地(G-MEM)、RPMI成長培地、及びイスコフ改変ダルベッコ培地が含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、血清サプリメントまたは血清代替物には、CTS(商標)OpTmizer T-Cell Expansion Serum Supplement、CTS(商標)Immune Cell Serum Replacement、1つ以上のアルブミンまたはアルブミン代用物、1つ以上のアミノ酸、1つ以上のビタミン、1つ以上のトランスフェリンまたはトランスフェリン代用物、1つ以上の抗酸化剤、1つ以上のインスリンまたはインスリン代用物、1つ以上のコラーゲン前駆体、1つ以上の抗生物質、及び1つ以上の微量元素のうちの1つ以上が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、合成培地は、アルブミンと、グリシン、L-ヒスチジン、L-イソロイシン、L-メチオニン、L-フェニルアラニン、L-プロリン、L-ヒドロキシプロリン、L-セリン、L-スレオニン、L-トリプトファン、L-チロシン、L-バリン、チアミン、還元型グルタチオン、L-アスコルビン酸-2-リン酸塩、鉄飽和トランスフェリン、インスリン、ならびに微量元素部分Ag+、Al3+、Ba2+、Cd2+、Co2+、Cr3+、Ge4+、Se4+、Br、T、Mn2+、P、Si4+、V5+、Mo6+、Ni2+、Rb+、Sn2+、及びZr4+を含有する化合物からなる群から選択される1つ以上の成分と、を含む。いくつかの実施形態では、合成培地は、L-グルタミン、重炭酸ナトリウム、及び/または2-メルカプトエタノールをさらに含む。
いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Immune Cell Serum Replacementは、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion Basal Medium、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFM、CTS(商標)AIM-V Medium、CST(商標)AIM-V SFM、LymphoONE(商標)T-Cell Expansion Xeno-Free Medium、ダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)、最小必須培地(MEM)、イーグル基礎培地(BME)、RPMI1640、F-10、F-12、最小必須培地(αMEM)、グラスゴー最小必須培地(G-MEM)、RPMI成長培地、及びイスコフ改変ダルベッコ培地を含むが、これらに限定されない、従来の成長培地とともに使用される。
いくつかの実施形態では、無血清または合成培地中の総血清代替物濃度(vol%)は、総無血清または合成培地の約1体積%、2体積%、3体積%、4体積%、5体積%、6体積%、7体積%、8体積%、9体積%、10体積%、11体積%、12体積%、13体積%、14体積%、15体積%、16体積%、17体積%、18体積%、19体積%、または20体積%である。いくつかの実施形態では、総血清代替物濃度は、無血清または合成培地の総体積の約3%である。いくつかの実施形態では、総血清代替物濃度は、無血清または合成培地の総体積の約5%である。いくつかの実施形態では、総血清代替物濃度は、無血清または合成培地の総体積の約10%である。
いくつかの実施形態では、無血清または合成培地は、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFM(ThermoFisher Scientific)である。CTS(商標)OpTmizer(商標)のいずれの製剤も、本発明において有用である。CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMは、1LのCTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion Basal Mediumと、26mLのCTS(商標)OpTmizer(商標)T-Cell Expansion Supplementとの組み合わせであり、これらは使用前に一緒に混合される。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)が補充されている。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、55mMの2-メルカプトエタノールとともに、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)が補充されている。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)が補充されており、培地中の2-メルカプトエタノールの最終濃度は、55μMである。
いくつかの実施形態では、合成培地は、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFM(ThermoFisher Scientific)である。CTS(商標)OpTmizer(商標)のいずれの製剤も、本発明において有用である。CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMは、1LのCTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion Basal Mediumと、26mLのCTS(商標)OpTmizer(商標)T-Cell Expansion Supplementとの組み合わせであり、これらは使用前に一緒に混合される。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、55mMの2-メルカプトエタノールとともに、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)が補充されている。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)、55mMの2-メルカプトエタノール、及び2mMのL-グルタミンが補充されている。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)、55mMの2-メルカプトエタノール、及び2mMのL-グルタミンが補充されており、約1000IU/mL~約8000IU/mLのIL-2をさらに含む。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)、55mMの2-メルカプトエタノール、及び2mMのL-グルタミンが補充されており、約3000IU/mLのIL-2をさらに含む。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)、55mMの2-メルカプトエタノール、及び2mMのL-グルタミンが補充されており、約6000IU/mLのIL-2をさらに含む。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)及び55mMの2-メルカプトエタノールが補充されており、約1000IU/mL~約8000IU/mLのIL-2をさらに含む。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)及び55mMの2-メルカプトエタノールが補充されており、約3000IU/mLのIL-2をさらに含む。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)及び55mMの2-メルカプトエタノールが補充されており、約1000IU/mL~約6000IU/mLのIL-2をさらに含む。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)及び約2mMのグルタミンが補充されており、約1000IU/mL~約8000IU/mLのIL-2をさらに含む。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)及び約2mMのグルタミンが補充されており、約3000IU/mLのIL-2をさらに含む。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)及び約2mMのグルタミンが補充されており、約6000IU/mLのIL-2をさらに含む。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)が補充されており、培地中の2-メルカプトエタノールの最終濃度は、55μMである。
いくつかの実施形態では、無血清培地または合成培地には、約0.1mM~約10mM、0.5mM~約9mM、1mM~約8mM、2mM~約7mM、3mM~約6mM、または4mM~約5mMの濃度でグルタミン(すなわち、GlutaMAX(登録商標))が補充されている。いくつかの実施形態では、無血清培地または合成培地には、約2mMの濃度でグルタミン(すなわち、GlutaMAX(登録商標))が補充されている。
いくつかの実施形態では、無血清培地または合成培地には、約5mM~約150mM、10mM~約140mM、15mM~約130mM、20mM~約120mM、25mM~約110mM、30mM~約100mM、35mM~約95mM、40mM~約90mM、45mM~約85mM、50mM~約80mM、55mM~約75mM、60mM~約70mM、または約65mMの濃度で2-メルカプトエタノールが補充されている。いくつかの実施形態では、無血清培地または合成培地には、約55mMの濃度で2-メルカプトエタノールが補充されている。いくつかの実施形態では、培地中の2-メルカプトエタノールの最終濃度は、55μMである。
いくつかの実施形態では、参照により本明細書に組み込まれる国際PCT公開第WO/1998/030679号に記載されている合成培地は、本発明において有用である。その刊行物には、無血清真核細胞培養培地が記載されている。無血清真核細胞培養培地には、無血清培養下で細胞の成長を支持することができる無血清サプリメントを補充した基礎細胞培養培地が含まれる。無血清真核細胞培養培地サプリメントは、1つ以上のアルブミンまたはアルブミン代替物、1つ以上のアミノ酸、1つ以上のビタミン、1つ以上のトランスフェリンまたはトランスフェリン代替物、1つ以上の抗酸化剤、1つ以上のインスリンまたはインスリン代替物、1つ以上のコラーゲン前駆体、1つ以上の微量元素、及び1つ以上の抗生物質からなる群から選択される1つ以上の成分を含むか、またはそれらを組み合わせることによって取得される。いくつかの実施形態では、合成培地は、L-グルタミン、重炭酸ナトリウム、及び/またはベータ-メルカプトエタノールをさらに含む。いくつかの実施形態では、合成培地は、アルブミンまたはアルブミン代替物と、1つ以上のアミノ酸、1つ以上のビタミン、1つ以上のトランスフェリンまたはトランスフェリン代替物、1つ以上の抗酸化剤、1つ以上のインスリンまたはインスリン代替物、1つ以上のコラーゲン前駆体、及び1つ以上の微量元素からなる群から選択される1つ以上の成分と、を含む。いくつかの実施形態では、合成培地は、アルブミンと、グリシン、L-ヒスチジン、L-イソロイシン、L-メチオニン、L-フェニルアラニン、L-プロリン、L-ヒドロキシプロリン、L-セリン、L-スレオニン、L-トリプトファン、L-チロシン、L-バリン、チアミン、還元型グルタチオン、L-アスコルビン酸-2-リン酸塩、鉄飽和トランスフェリン、インスリン、ならびに微量元素部分Ag+、Al3+、Ba2+、Cd2+、Co2+、Cr3+、Ge4+、Se4+、Br、T、Mn2+、P、Si4+、V5+、Mo6+、Ni2+、Rb+、Sn2+、及びZr4+を含有する化合物からなる群から選択される1つ以上の成分と、を含む。いくつかの実施形態では、基礎細胞培地は、ダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)、最小必須培地(MEM)、イーグル基礎培地(BME)、RPMI1640、F-10、F-12、最小必須培地(αMEM)、グラスゴー最小必須培地(G-MEM)、RPMI成長培地、及びイスコフ改変ダルベッコ培地からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、合成培地中のグリシンの濃度は、約5~200mg/Lの範囲であり、L-ヒスチジンの濃度は、約5~250mg/Lであり、L-イソロイシンの濃度は、約5~300mg/Lであり、L-メチオニンの濃度は、約5~200mg/Lであり、L-フェニルアラニンの濃度は、約5~400mg/Lであり、L-プロリンの濃度は、約1~1000mg/Lであり、L-ヒドロキシプロリンの濃度は、約1~45mg/Lであり、L-セリンの濃度は、約1~250mg/Lであり、L-スレオニンの濃度は、約10~500mg/Lであり、L-トリプトファンの濃度は、約2~110mg/Lであり、L-チロシンの濃度は、約3~175mg/Lであり、L-バリンの濃度は、約5~500mg/Lであり、チアミンの濃度は、約1~20mg/Lであり、還元型グルタチオンの濃度は、約1~20mg/Lであり、L-アスコルビン酸-2-リン酸塩の濃度は、約1~200mg/Lであり、鉄飽和トランスフェリンの濃度は、約1~50mg/Lであり、インスリンの濃度は、約1~100mg/Lであり、亜セレン酸ナトリウムの濃度は、約0.000001~0.0001mg/Lであり、アルブミン(例えば、AlbuMAX(登録商標)I)の濃度は、約5000~50,000mg/Lである。
いくつかの実施形態では、合成培地中の非微量元素部分成分は、表4の「1×培地中の濃度範囲」という見出しの下の列にリストされた濃度範囲で存在する。他の実施形態では、合成培地中の非微量元素部分成分は、表4の「1×培地の好ましい実施形態」という見出しの下の列にリストされた最終濃度で存在する。他の実施形態では、合成培地は、無血清サプリメントを含む基礎細胞培地である。これらの実施形態のうちのいくつかでは、無血清サプリメントは、表4の「サプリメント中の好ましい実施形態」という見出しの下の列にリストされたタイプ及び濃度の非微量部分成分を含む。
いくつかの実施形態では、合成培地の浸透圧は、約260~350mOsmolである。いくつかの実施形態では、浸透圧は、約280~310mOsmolである。いくつかの実施形態では、合成培地には、最大約3.7g/L、または約2.2g/Lの重炭酸ナトリウムが補充されている。合成培地には、L-グルタミン(最終濃度約2mM)、1つ以上の抗生物質、非必須アミノ酸(NEAA、最終濃度約100μM)、2-メルカプトエタノール(最終濃度約100μM)がさらに補充されていてもよい。
いくつかの実施形態では、Smith,et al.,Clin Transl Immunology,4(1)2015(doi:10.1038/cti.2014.31)に記載の定義された培地が、本発明において有用である。簡潔には、RPMIまたはCTS(商標)OpTmizerを基礎細胞培地として使用し、0、2%、5%、または10%のいずれかのCTS(商標)Immune Cell Serum Replacementを補充した。
いくつかの実施形態では、第1及び/または第2のガス透過性容器内の細胞培地は、濾過されていない。濾過されていない細胞培地の使用は、細胞の数を拡張するために必要な手順を簡素化することができる。いくつかの実施形態では、第1及び/または第2のガス透過性容器内の細胞培地は、ベータ-メルカプトエタノール(BMEまたはβME、2-メルカプトエタノールとしても知られる、CAS60-24-2)を欠いている。
いくつかの実施形態では、第2の拡張、例えば、図1によるステップDは、閉鎖系バイオリアクター内で行われる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるように、閉鎖系がTIL拡張のために用いられる。いくつかの実施形態では、単一のバイオリアクターが用いられる。いくつかの実施形態では、用いられる単一のバイオリアクターは、例えば、G-REX-10またはG-REX-100である。いくつかの実施形態では、閉鎖系バイオリアクターは、単一のバイオリアクターである。
いくつかの実施形態では、急速または第2の拡張ステップは、複数のステップに分けられて、(a)TILを、第1の容器、例えば、G-REX-100 MCS容器内での小規模培養で約3~7日間培養することによって急速または第2の拡張を行うことと、その後、(b)小規模培養でのTILを、第1の容器よりも大きい第2の容器、例えば、G-REX-500-MCS容器に移し、小規模培養由来のTILを、第2の容器内でのより大規模な培養で約4~7日間培養することとによって、培養のスケールアップを達成する。
いくつかの実施形態では、急速または第2の拡張ステップは、複数のステップに分けられて、(a)TILを、第1の容器、例えば、G-REX-100 MCS容器内での第1の小規模培養で約3~7日間培養することによって急速または第2の拡張を行うことと、その後、(b)第1の小規模培養由来のTILを、第1の容器とサイズが等しい少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の第2の容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウトを達成し、各第2の容器内で、かかる第2の容器に移された第1の小規模培養由来のTILの一部が第2の小規模培養で約4~7日間培養される。
いくつかの実施形態では、第1の小規模TIL培養物は、TILの複数の約2~5亜集団に配分される。
いくつかの実施形態では、急速または第2の拡張ステップは、複数のステップに分けられて、(a)TILを、第1の容器、例えば、G-REX-100MCS容器内での小規模培養で約3~7日間培養することによって急速または第2の拡張を行うことと、その後、(b)小規模培養由来のTILを、第1の容器よりもサイズが大きい少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の第2の容器、例えば、G-REX-500MCS容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウト及びスケールアップを達成し、各第2の容器内で、かかる第2の容器に移された小規模培養由来のTILの一部がより大規模な培養で約4~7日間培養される。
いくつかの実施形態では、急速または第2の拡張ステップは、複数のステップに分けられ、(a)TILを、第1の容器、例えば、G-REX-100 MCS容器内での小規模培養で約5日間培養することによって急速または第2の拡張を行うことと、その後、(b)小規模培養由来のTILを、第1の容器よりもサイズが大きい2、3、または4個の第2の容器、例えば、G-REX-500 MCS容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウト及びスケールアップを達成し、各第2の容器内で、かかる第2の容器に移された小規模培養由来のTILの一部がより大規模な培養で約6日間培養される。
いくつかの実施形態では、急速または第2の拡張の分割時に、各第2の容器は、少なくとも108個のTILを含む。いくつかの実施形態では、急速または第2の拡張の分割時に、各第2の容器は、少なくとも108個のTIL、少なくとも109個のTIL、または少なくとも1010個のTILを含む。例示的な一実施形態では、各第2の容器は、少なくとも1010個のTILを含む。
いくつかの実施形態では、第1の小規模TIL培養物は、複数の亜集団に配分される。いくつかの実施形態では、第1の小規模TIL培養物は、複数の約2~5亜集団に配分される。いくつかの実施形態では、第1の小規模TIL培養物は、複数の約2、3、4、または5亜集団に配分される。
いくつかの実施形態では、急速または第2の拡張の完了後、複数の亜集団は、治療有効量のTILを含む。いくつかの実施形態では、急速または第2の拡張の完了後、1つ以上のTILの亜集団を一緒にプールして、治療有効量のTILを産生する。いくつかの実施形態では、急速拡張の完了後、TILの各亜集団は、治療有効量のTILを含む。
いくつかの実施形態では、急速または第2の拡張は、複数のステップに分割される前に、約3~7日間行われる。いくつかの実施形態では、急速または第2の拡張の分裂は、急速または第2の拡張の開始後約3日目、4日目、5日目、6日目、または7日目に起こる。
いくつかの実施形態では、急速または第2の拡張の分裂は、第1の拡張(すなわち、REP前拡張)の開始後の約7日目、8日目、9日目、10日目、11日目、12日目、13日目、14日目、15日目、または16日目、17日目、または18日目に起こる。例示的な一実施形態では、急速または第2の拡張の分裂は、第1の拡張の開始後約16日目に起こる。
いくつかの実施形態では、急速または第2の拡張は、分裂後約7~11日間、さらに行われる。いくつかの実施形態では、急速または第2の拡張は、分裂後約5日、6日、7日、8日、9日、10日、または11日間、さらに行われる。
いくつかの実施形態では、分裂前の急速または第2の拡張に使用される細胞培養培地は、分裂後の急速または第2の拡張に使用される細胞培養培地と同じ成分を含む。いくつかの実施形態では、分裂前の急速または第2の拡張に使用される細胞培養培地は、分裂後の急速または第2の拡張に使用される細胞培養培地とは異なる成分を含む。
いくつかの実施形態では、分裂前の急速または第2の拡張に使用される細胞培養培地は、IL-2、任意選択でOKT-3、及びさらに任意選択でAPCを含む。いくつかの実施形態では、分裂前の急速または第2の拡張に使用される細胞培養培地は、IL-2、OKT-3、及びさらに任意選択でAPCを含む。いくつかの実施形態では、分裂前の急速または第2の拡張に使用される細胞培養培地は、IL-2、OKT-3及びAPCを含む。
いくつかの実施形態では、分裂前の急速または第2の拡張に使用される細胞培養培地は、第1の拡張中の細胞培養培地を、IL-2、任意選択でOKT-3及びさらに任意選択でAPCを含む新鮮な培養培地で補充することによって生成される。いくつかの実施形態では、分裂前の急速または第2の拡張に使用される細胞培養培地は、第1の拡張中の細胞培養培地を、IL-2、OKT-3及びAPCを含む新鮮な培養培地で補充することによって生成される。いくつかの実施形態では、分裂前の急速または第2の拡張に使用される細胞培養培地は、第1の拡張中の細胞培養培地を、IL-2、任意選択でOKT-3及びさらに任意選択でAPCを含む新鮮な培養培地で置き換えることによって生成される。いくつかの実施形態では、分裂前の急速または第2の拡張に使用される細胞培養培地は、第1の拡張中の細胞培養培地を、IL-2、OKT-3及びAPCを含む新鮮な細胞培養培地で置き換えることによって生成される。
いくつかの実施形態では、分裂後の急速または第2の拡張に使用される細胞培養培地は、IL-2、及び任意選択でOKT-3を含む。いくつかの実施形態では、分裂後の急速または第2の拡張に使用される細胞培養培地は、IL-2及びOKT-3を含む。いくつかの実施形態では、分裂後の急速または第2の拡張に使用される細胞培養培地は、分裂前の急速または第2の拡張に使用される細胞培養培地を、IL-2及び任意選択でOKT-3を含む新鮮な培養培地で置き換えることによって生成される。いくつかの実施形態では、分裂後の急速または第2の拡張に使用される細胞培養培地は、分裂前の急速または第2の拡張に使用される細胞培養培地を、IL-2及びOKT-3を含む新鮮な培養培地で置き換えることによって生成される。
いくつかの実施形態では、急速な膨張の分裂は、閉鎖系において起こる。
いくつかの実施形態では、急速または第2の拡張中のTIL培養物のスケールアップは、新鮮な細胞培養培地をTIL培養物に添加すること(TILを供給することとも称される)を含む。いくつかの実施形態では、供給は、新鮮な細胞培養培地をTIL培養物に頻繁に添加することを含む。いくつかの実施形態では、供給は、新鮮な細胞培養培地をTIL培養物に一定の間隔で添加することを含む。いくつかの実施形態では、新鮮な細胞培養培地は、一定の流れを介してTILに供給される。いくつかの実施形態では、Xuri W25などの自動細胞拡張システムは、急速な膨張及び供給のために使用される。
1.フィーダー細胞及び抗原提示細胞
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の第2の拡張手順(例えば、図1のステップDに記載されるような拡張、ならびにREPと称されるものを含む)は、REP TIL拡張中及び/または第2の拡張中に過剰のフィーダー細胞を必要とする。多くの実施形態では、フィーダー細胞は、健康な献血者由来の標準の全血単位から得られる末梢血単核細胞(PBMC)である。PBMCは、Ficoll-Paque勾配分離などの標準の方法を使用して取得される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の第2の拡張手順(例えば、図1のステップDに記載されるような拡張、ならびにREPと称されるものを含む)は、REP TIL拡張中及び/または第2の拡張中に過剰のフィーダー細胞を必要とする。多くの実施形態では、フィーダー細胞は、健康な献血者由来の標準の全血単位から得られる末梢血単核細胞(PBMC)である。PBMCは、Ficoll-Paque勾配分離などの標準の方法を使用して取得される。
一般に、同種異系PBMCは、放射線照射または熱処理のいずれかによって不活性化され、実施例に記載されるように、REP手順で使用され、これは、放射線照射された同種異系PBMCの複製無能力を評価するための例示的なプロトコルを提供する。
いくつかの実施形態では、14日目の生細胞の総数が、REPの0日目及び/または第2の拡張の0日目(すなわち、第2の拡張の開始日)に培養された初期の生細胞数よりも少ない場合、PBMCは、複製能力がないとみなされ、本明細書に記載のTIL拡張手順での使用が認められる。
いくつかの実施形態では、7日目及び14日目のOKT3及びIL-2の存在下で培養された生細胞の総数が、REPの0日目及び/または第2の拡張の0日目(すなわち、第2の拡張の開始日)に培養された初期の生細胞数から増加しなかった場合、PBMCは、複製能力がないとみなされ、本明細書に記載のTIL拡張手順での使用が認められる。いくつかの実施形態では、PBMCは、30ng/mLのOKT3抗体及び3000IU/mLのIL-2の存在下で培養される。
いくつかの実施形態では、7日目及び14日目のOKT3及びIL-2の存在下で培養された生細胞の総数が、REPの0日目及び/または第2の拡張の0日目(すなわち、第2の拡張の開始日)に培養された初期の生細胞数から増加しなかった場合、PBMCは、複製能力がないとみなされ、本明細書に記載のTIL拡張手順での使用が認められる。いくつかの実施形態では、PBMCは、5~60ng/mLのOKT3抗体及び1000~6000IU/mLのIL-2の存在下で培養される。いくつかの実施形態では、PBMCは、10~50ng/mLのOKT3抗体及び2000~5000IU/mLのIL-2の存在下で培養される。いくつかの実施形態では、PBMCは、20~40ng/mLのOKT3抗体及び2000~4000IU/mLのIL-2の存在下で培養される。いくつかの実施形態では、PBMCは、25~35ng/mLのOKT3抗体及び2500~3500IU/mLのIL-2の存在下で培養される。
いくつかの実施形態では、抗原提示フィーダー細胞は、PBMCである。いくつかの実施形態では、抗原提示フィーダー細胞は、人工抗原提示フィーダー細胞である。いくつかの実施形態では、第2の拡張におけるTILの抗原提示フィーダー細胞に対する比率は、約1:25、約1:50、約1:100、約1:125、約1:150、約1:175、約1:200、約1:225、約1:250、約1:275、約1:300、約1:325、約1:350、約1:375、約1:400、または約1:500である。いくつかの実施形態では、第2の拡張におけるTILの抗原提示フィーダー細胞に対する比率は、1:50~1:300である。いくつかの実施形態では、第2の拡張におけるTILの、抗原提示フィーダー細胞に対する比は、1:100~1:200である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の第2の拡張手順は、約2.5×109フィーダー細胞:約100×106TILの比を必要とする。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の第2の拡張手順は、約2.5×109フィーダー細胞:約50×106TILの比を必要とする。さらに別の実施形態では、本明細書に記載の第2の拡張手順は、約2.5×109フィーダー細胞:約25×106TILを必要とする。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の第2の拡張手順は、第2の拡張中に過剰のフィーダー細胞を必要とする。多くの実施形態では、フィーダー細胞は、健康な献血者由来の標準の全血単位から得られる末梢血単核細胞(PBMC)である。PBMCは、Ficoll-Paque勾配分離などの標準の方法を使用して取得される。いくつかの実施形態では、人工抗原提示(aAPC)細胞がPBMCの代わりに使用される。
一般に、同種異系PBMCは、放射線照射または熱処理のいずれかによって不活性化され、図及び実施例に記載される例示的な手順を含む、本明細書に記載のTIL拡張手順で使用される。
いくつかの実施形態では、人工抗原提示細胞は、PBMCの代替物として、またはPBMCと組み合わせて、第2の拡張において使用される。
2.サイトカイン
本明細書に記載の拡張方法は、一般に、当該技術分野で知られているように、高用量のサイトカイン、特にIL-2を含む培養培地を使用する。
本明細書に記載の拡張方法は、一般に、当該技術分野で知られているように、高用量のサイトカイン、特にIL-2を含む培養培地を使用する。
あるいは、TILの急速拡張及び/または第2の拡張のためにサイトカインの組み合わせを使用することは、米国特許出願第US2017/0107490 A1号(その開示は参照により本明細書に組み込まれる)に記載されているように、IL-2、IL-15及びIL-21のうちの2つ以上の組み合わせを用いて追加として可能である。したがって、可能な組み合わせには、IL-2及びIL-15、IL-2及びIL-21、IL-15及びIL-21、ならびにIL-2、IL-15、及びIL-21が含まれ、後者は多くの実施形態において特定の用途を見出す。サイトカインの組み合わせの使用は、リンパ球、特にそこに記載されているようにT細胞の生成に特に有利に働く。
いくつかの実施形態では、ステップDはまた、本明細書の他の箇所に記載されるように、OKT-3抗体またはムロモナブの、培養培地への添加を含み得る。いくつかの実施形態では、ステップDはまた、本明細書の他の箇所に記載されるように、4-1BBアゴニストの、培養培地への添加を含んでもよい。いくつかの実施形態では、ステップDはまた、本明細書の他の箇所に記載されるように、OX-40アゴニストの、培養培地への添加を含み得る。加えて、チアゾリジンジオン化合物などの増殖因子活性化受容体(PPAR)-ガンマアゴニストを含む、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマコアクチベーターI-アルファアゴニストなどの添加剤は、米国特許出願公開第US2019/0307796 A1号(この開示は参照により本明細書に組み込まれる)に記載されるように、ステップD中の培養培地で使用されてもよい。
E.ステップE:TILを採取する
第2の拡張ステップ後、細胞が採取され得る。いくつかの実施形態では、TILは、例えば、図1に提供されるように、1、2、3、4つ、またはそれ以上の拡張ステップ後に採取される。いくつかの実施形態では、TILは、例えば、図1に提供されるように、2つの拡張ステップ後に採取される。
第2の拡張ステップ後、細胞が採取され得る。いくつかの実施形態では、TILは、例えば、図1に提供されるように、1、2、3、4つ、またはそれ以上の拡張ステップ後に採取される。いくつかの実施形態では、TILは、例えば、図1に提供されるように、2つの拡張ステップ後に採取される。
TILは、例えば、遠心分離を含む、任意の適切な滅菌様式で採取され得る。TILを採取するための方法は、当該技術分野で周知であり、いずれかのかかる既知の方法が本プロセスで用いられ得る。いくつかの実施形態では、TILは、自動化システムを使用して採取される。
細胞採取機及び/または細胞処理システムは、例えば、Fresenius Kabi、Tomtec Life Science、Perkin Elmer、及びInotech Biosystems International,Incを含む、様々な供給源から市販されている。任意の細胞ベースの採取機が本方法とともに用いられ得る。いくつかの実施形態では、細胞採取機及び/または細胞処理システムは、膜ベースの細胞採取機である。いくつかの実施形態では、細胞採取は、LOVOシステム(Fresenius Kabiによって製造されたもの)などの細胞処理システムによるものである。「LOVO細胞処理システム」という用語は、細胞を含む溶液を、滅菌及び/または閉鎖系環境で回転膜または回転フィルターなどの膜またはフィルターを通してポンプ輸送し、連続フローを可能にし、細胞を処理して、ペレット化せずに上清または細胞培養培地を除去する、任意のベンダーによって製造された任意の機器または装置も指す。いくつかの実施形態では、細胞採取機及び/または細胞処理システムは、滅菌閉鎖系内で、細胞分離、洗浄、流体交換、濃縮、及び/または他の細胞処理ステップを行うことができる。
いくつかの実施形態では、採取、例えば、図1によるステップEは、閉鎖系バイオリアクターから行われる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるように、閉鎖系がTIL拡張のために用いられる。いくつかの実施形態では、単一のバイオリアクターが用いられる。いくつかの実施形態では、用いられる単一のバイオリアクターは、例えば、G-REX-10またはG-REX-100である。いくつかの実施形態では、閉鎖系バイオリアクターは、単一のバイオリアクターである。
いくつかの実施形態では、図1によるステップEは、本明細書に記載のプロセスに従って行われる。いくつかの実施形態では、閉鎖系は、閉鎖系の無菌性及び閉鎖性を維持するために、滅菌条件下でシリンジを介してアクセスされる。いくつかの実施形態では、実施例に記載の閉鎖系が用いられる。
いくつかの実施形態では、TILは、実施例に記載の方法に従って採取される。いくつかの実施形態では、1日目~11日目の間のTILは、実施例における11日目のTIL採取のような、本明細書で言及されるステップにおいて記載される方法を使用して採取される。いくつかの実施形態では、12日目~24日目の間のTILは、実施例における22日目のTIL採取のような、本明細書で言及されるステップにおいて記載される方法を使用して採取される。いくつかの実施形態では、12日目~22日目の間のTILは、実施例における22日目のTIL採取のような、本明細書で言及されるステップにおいて記載される方法を使用して採取される。
F.ステップF:最終製剤及び輸液容器への移行
図1に例示的な順序で提供され、かつ上及び本明細書で詳細に概説されるステップA~Eが完了した後、細胞は、注入バッグまたは無菌バイアルなどの患者への投与に使用するために容器に移される。いくつかの実施形態では、治療的に十分な数のTILが上記の拡張方法を使用して得られると、それらは、患者への投与に使用するために容器に移される。
図1に例示的な順序で提供され、かつ上及び本明細書で詳細に概説されるステップA~Eが完了した後、細胞は、注入バッグまたは無菌バイアルなどの患者への投与に使用するために容器に移される。いくつかの実施形態では、治療的に十分な数のTILが上記の拡張方法を使用して得られると、それらは、患者への投与に使用するために容器に移される。
いくつかの実施形態では、本開示のAPCを使用して拡張されたTILは、薬学的組成物として患者に投与される。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、滅菌緩衝液中のTIL懸濁液である。本開示のPBMCを使用して拡張されたTILは、当該技術分野で知られている任意の好適な経路によって投与され得る。いくつかの実施形態では、T細胞は、単回の動脈内または静脈内注入として投与され、これは、好ましくは、およそ30~60分続く。他の好適な投与経路には、腹腔内、髄腔内、及びリンパ内投与が含まれる。
IV.Gen3 TIL製造プロセス
いかなる特定の理論にも限定されることなく、本発明の方法に記載される、T細胞の活性化をプライミングする、プライミングによる第1の拡張と、それに続くT細胞の活性化を促進する急速な第2の拡張により、「より若い」表現型を保持する拡張されたT細胞の調製が可能になると考えられ、したがって、本発明の拡張されたT細胞が、他の方法によって拡張されたT細胞よりも高いがん細胞に対する細胞傷害性を示すことが予想される。特に、本発明の方法によって教示される、抗CD3抗体(例えば、OKT-3)、IL-2、及び任意選択で抗原提示細胞(APC)への曝露によってプライミングされ、その後、追加の抗CD-3抗体(例えば、OKT-3)、IL-2、及びAPCへのその後の曝露によって促進されるT細胞の活性化が、培養下でT細胞の成熟を限定または回避し、成熟度の低い表現型を有するT細胞集団を産生し、これらのT細胞が、培養下での拡張によってあまり疲弊せず、より高いがん細胞に対する細胞傷害性を示すと考えられる。いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張ステップは、複数のステップに分けられて、(a)T細胞を、第1の容器、例えば、G-REX 100MCS容器内での小規模培養で約3~4日間培養することによって急速な第2の拡張を行うことと、その後、(b)小規模培養でのT細胞を、第1の容器よりも大きい第2の容器、例えば、G-REX500MCS容器に移し、小規模培養由来のT細胞を、第2の容器内のより大規模な培養で約4~7日間培養することとによって、培養のスケールアップを達成する。いくつかの実施形態では、急速な拡張ステップは、複数のステップに分けられて、(a)T細胞を、第1の容器、例えば、G-REX 100MCS容器内での第1の小規模培養で3~4日間培養することによって急速な第2の拡張を行うことと、その後、(b)第1の小規模培養由来のT細胞を、第1の容器とサイズが等しい少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の第2の容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウトを達成し、各第2の容器内で、かかる第2の容器に移された第1の小規模培養由来のT細胞の一部が第2の小規模培養で約4~7日間培養される。いくつかの実施形態では、急速な拡張ステップは、複数のステップに分けられ、(a)T細胞を、第1の容器、例えば、G-REX 100MCS容器内での小規模培養で約3~4日間培養することによって急速な第2の拡張を行うことと、その後、(b)小規模培養由来のT細胞を、第1の容器よりもサイズが大きい少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の第2の容器、例えば、G-REX500MCS容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウト及びスケールアップを達成し、各第2の容器内で、かかる第2の容器に移された小規模培養由来のT細胞の一部がより大規模な培養で約4~7日間培養される。いくつかの実施形態では、急速な拡張ステップは、複数のステップに分けられ、(a)T細胞を、第1の容器、例えば、G-REX 100MCS容器内での小規模培養で約4日間培養することによって急速な第2の拡張を行うことと、その後、(b)小規模培養由来のT細胞を、第1の容器よりもサイズが大きい2、3、または4個の第2の容器、例えば、G-REX500MCS容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウト及びスケールアップを達成し、各第2の容器内で、かかる第2の容器に移された小規模培養由来のT細胞の一部がより大規模な培養で約5日間培養される。
いかなる特定の理論にも限定されることなく、本発明の方法に記載される、T細胞の活性化をプライミングする、プライミングによる第1の拡張と、それに続くT細胞の活性化を促進する急速な第2の拡張により、「より若い」表現型を保持する拡張されたT細胞の調製が可能になると考えられ、したがって、本発明の拡張されたT細胞が、他の方法によって拡張されたT細胞よりも高いがん細胞に対する細胞傷害性を示すことが予想される。特に、本発明の方法によって教示される、抗CD3抗体(例えば、OKT-3)、IL-2、及び任意選択で抗原提示細胞(APC)への曝露によってプライミングされ、その後、追加の抗CD-3抗体(例えば、OKT-3)、IL-2、及びAPCへのその後の曝露によって促進されるT細胞の活性化が、培養下でT細胞の成熟を限定または回避し、成熟度の低い表現型を有するT細胞集団を産生し、これらのT細胞が、培養下での拡張によってあまり疲弊せず、より高いがん細胞に対する細胞傷害性を示すと考えられる。いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張ステップは、複数のステップに分けられて、(a)T細胞を、第1の容器、例えば、G-REX 100MCS容器内での小規模培養で約3~4日間培養することによって急速な第2の拡張を行うことと、その後、(b)小規模培養でのT細胞を、第1の容器よりも大きい第2の容器、例えば、G-REX500MCS容器に移し、小規模培養由来のT細胞を、第2の容器内のより大規模な培養で約4~7日間培養することとによって、培養のスケールアップを達成する。いくつかの実施形態では、急速な拡張ステップは、複数のステップに分けられて、(a)T細胞を、第1の容器、例えば、G-REX 100MCS容器内での第1の小規模培養で3~4日間培養することによって急速な第2の拡張を行うことと、その後、(b)第1の小規模培養由来のT細胞を、第1の容器とサイズが等しい少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の第2の容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウトを達成し、各第2の容器内で、かかる第2の容器に移された第1の小規模培養由来のT細胞の一部が第2の小規模培養で約4~7日間培養される。いくつかの実施形態では、急速な拡張ステップは、複数のステップに分けられ、(a)T細胞を、第1の容器、例えば、G-REX 100MCS容器内での小規模培養で約3~4日間培養することによって急速な第2の拡張を行うことと、その後、(b)小規模培養由来のT細胞を、第1の容器よりもサイズが大きい少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の第2の容器、例えば、G-REX500MCS容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウト及びスケールアップを達成し、各第2の容器内で、かかる第2の容器に移された小規模培養由来のT細胞の一部がより大規模な培養で約4~7日間培養される。いくつかの実施形態では、急速な拡張ステップは、複数のステップに分けられ、(a)T細胞を、第1の容器、例えば、G-REX 100MCS容器内での小規模培養で約4日間培養することによって急速な第2の拡張を行うことと、その後、(b)小規模培養由来のT細胞を、第1の容器よりもサイズが大きい2、3、または4個の第2の容器、例えば、G-REX500MCS容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウト及びスケールアップを達成し、各第2の容器内で、かかる第2の容器に移された小規模培養由来のT細胞の一部がより大規模な培養で約5日間培養される。
いくつかの実施形態では、急速拡張の分割時に、各第2の容器は、少なくとも108個のTILを含む。いくつかの実施形態では、急速拡張の分割時に、各第2の容器は、少なくとも108個のTIL、少なくとも109個のTIL、または少なくとも1010個のTILを含む。例示的な一実施形態では、各第2の容器は、少なくとも1010個のTILを含む。
いくつかの実施形態では、第1の小規模TIL培養物は、複数の亜集団に配分される。いくつかの実施形態では、第1の小規模TIL培養物は、複数の約2~5亜集団に配分される。いくつかの実施形態では、第1の小規模TIL培養物は、複数の約2、3、4、または5亜集団に配分される。
いくつかの実施形態では、急速拡張の完了後、複数の亜集団は、治療有効量のTILを含む。いくつかの実施形態では、急速拡張の完了後、1つ以上のTILの亜集団を一緒にプールして、治療有効量のTILを産生する。いくつかの実施形態では、急速拡張の完了後、TILの各亜集団は、治療有効量のTILを含む。
いくつかの実施形態では、急速拡張は、複数のステップに分割される前に、約1~5日間行われる。いくつかの実施形態では、急速拡張の分裂は、急速拡張の開始後約1日目、2日目、3日目、4日目、または5日目に起こる。
いくつかの実施形態では、急速拡張の分裂は、第1の拡張(すなわち、REP前拡張)の開始後約8日目、9日目、10日目、11日目、12日目、または13日目に起こる。例示的な一実施形態では、急速拡張の分裂は、プライミングによる第1の拡張の開始後約10日目に起こる。例示的な一実施形態では、急速拡張の分裂は、第1の拡張の開始後約11日目に起こる。
いくつかの実施形態では、急速拡張は、分裂後約4~11日間、さらに行われる。いくつかの実施形態では、急速拡張は、分裂後約3日、4日、5日、6日、7日、8日、9日、10日、または11日間、さらに行われる。
いくつかの実施形態では、分裂前の急速拡張に使用される細胞培養培地は、分裂後の急速拡張に使用される細胞培養培地と同じ成分を含む。いくつかの実施形態では、分裂前の急速拡張に使用される細胞培養培地は、分裂後の急速拡張に使用される細胞培養培地とは異なる成分を含む。
いくつかの実施形態では、分裂前の急速拡張に使用される細胞培養培地は、IL-2、任意選択でOKT-3、及びさらに任意選択でAPCを含む。いくつかの実施形態では、分裂前の急速拡張に使用される細胞培養培地は、IL-2、OKT-3、及びさらに任意選択でAPCを含む。いくつかの実施形態では、分裂前の急速拡張に使用される細胞培養培地は、IL-2、OKT-3及びAPCを含む。
いくつかの実施形態では、分裂前の急速拡張に使用される細胞培養培地は、第1の拡張中の細胞培養培地を、IL-2、任意選択でOKT-3及びさらに任意選択でAPCを含む新鮮な培養培地で補充することによって生成される。いくつかの実施形態では、分裂前の急速拡張に使用される細胞培養培地は、第1の拡張中の細胞培養培地を、IL-2、OKT-3及びAPCを含む新鮮な培養培地で補充することによって生成される。いくつかの実施形態では、分裂前の急速拡張に使用される細胞培養培地は、第1の拡張中の細胞培養培地を、IL-2、任意選択でOKT-3及びさらに任意選択でAPCを含む新鮮な培養培地で置き換えることによって生成される。いくつかの実施形態では、分裂前の急速拡張に使用される細胞培養培地は、第1の拡張中の細胞培養培地を、IL-2、OKT-3及びAPCを含む新鮮な細胞培養培地で置き換えることによって生成される。
いくつかの実施形態では、分裂後の急速拡張に使用される細胞培養培地は、IL-2、及び任意選択でOKT-3を含む。いくつかの実施形態では、分裂後の急速拡張に使用される細胞培養培地は、IL-2及びOKT-3を含む。いくつかの実施形態では、分裂後の急速拡張に使用される細胞培養培地は、分裂前の急速拡張に使用される細胞培養培地を、IL-2及び任意選択でOKT-3を含む新鮮な培養培地で置き換えることによって生成される。いくつかの実施形態では、分裂後の急速拡張に使用される細胞培養培地は、分裂前の急速拡張に使用される細胞培養培地を、IL-2及びOKT-3を含む新鮮な培養培地で置き換えることによって生成される。
いくつかの実施形態では、急速な膨張の分裂は、閉鎖系において起こる。
いくつかの実施形態では、急速拡張中のTIL培養物のスケールアップは、新鮮な細胞培養培地をTIL培養物に添加すること(TILを供給することとも称される)を含む。いくつかの実施形態では、供給は、新鮮な細胞培養培地をTIL培養物に頻繁に添加することを含む。いくつかの実施形態では、供給は、新鮮な細胞培養培地をTIL培養物に一定の間隔で添加することを含む。いくつかの実施形態では、新鮮な細胞培養培地は、一定の流れを介してTILに供給される。いくつかの実施形態では、Xuri W25などの自動細胞拡張システムは、急速な膨張及び供給のために使用される。
いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張は、プライミングによる第1の拡張によってもたらされるT細胞の活性化が減少、軽減、衰退、または沈静化し始めた後に行われる。
いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張は、プライミングによる第1の拡張によってもたらされるT細胞の活性化が、正確にまたは約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、または100%減少した後に行われる。
いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張は、プライミングによる第1の拡張によってもたらされるT細胞の活性化が、正確にまたは約1%~100%の範囲のパーセンテージ減少した後に行われる。
いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張は、プライミングによる第1の拡張によってもたらされるT細胞の活性化が、正確にまたは約1%~10%、10%~20%、20%~30%、30%~40%、40%~50%、50%~60%、60%~70%、70%~80%、80%~90%、または90%~100%の範囲のパーセンテージ減少した後に行われる。
いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張は、プライミングによる第1の拡張によってもたらされるT細胞の活性化が、少なくとも正確にまたは約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、または99%減少した後に行われる。
いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張は、プライミングによる第1の拡張によってもたらされるT細胞の活性化が、最大で正確にまたは約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、または100%減少した後に行われる。
いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張によってもたらされるT細胞の活性化の減少は、抗原による刺激に応答してT細胞によって放出されるインターフェロンガンマの量の減少によって決定される。
いくつかの実施形態では、T細胞のプライミングによる第1の拡張は、最大で正確にまたは約7日または約8日の期間中に行われる。
いくつかの実施形態では、T細胞のプライミングによる第1の拡張は、最大で正確にまたは約1日、2日、3日、4日、5日、6日、7日、または8日の期間中に行われる。
いくつかの実施形態では、T細胞のプライミングによる第1の拡張は、1日、2日、3日、4日、5日、6日、7日、または8日の期間中に行われる。
いくつかの実施形態では、T細胞の急速な第2の拡張は、最大で正確にまたは約11日の期間中に行われる。
いくつかの実施形態では、T細胞の急速な第2の拡張は、最大で正確にまたは約1日、2日、3日、4日、5日、6日、7日、8日、9日、10日、または11日の期間中に行われる。
いくつかの実施形態では、T細胞の急速な第2の拡張は、1日、2日、3日、4日、5日、6日、7日、8日、9日、10日、または11日の期間中に行われる。
いくつかの実施形態では、T細胞のプライミングによる第1の拡張は、正確にまたは約1日~正確にまたは約7日の期間中に行われ、T細胞の急速な第2の拡張は、正確にまたは約1日~正確にまたは約11日の期間中に行われる。
いくつかの実施形態では、T細胞のプライミングによる第1の拡張は、最大で正確にまたは約1日、2日、3日、4日、5日、6日、7日、または8日の期間中に行われ、T細胞の急速な第2の拡張は、最大で正確にまたは約1日、2日、3日、4日、5日、6日、7日、8日、9日、10日、または11日の期間中に行われる。
いくつかの実施形態では、T細胞のプライミングによる第1の拡張は、正確にまたは約1日~正確にまたは約8日の期間中に行われ、T細胞の急速な第2の拡張は、正確にまたは約1日~正確にまたは約9日の期間中に行われる。
いくつかの実施形態では、T細胞のプライミングによる第1の拡張は、8日の期間中に行われ、T細胞の急速な第2の拡張は、9日の期間中に行われる。
いくつかの実施形態では、T細胞のプライミングによる第1の拡張は、正確にまたは約1日~正確にまたは約7日の期間中に行われ、T細胞の急速な第2の拡張は、正確にまたは約1日~正確にまたは約9日の期間中に行われる。
いくつかの実施形態では、T細胞のプライミングによる第1の拡張は、7日の期間中に行われ、T細胞の急速な第2の拡張は、9日の期間中に行われる。
いくつかの実施形態では、T細胞は、腫瘍浸潤リンパ球(TIL)である。
いくつかの実施形態では、T細胞は、骨髄浸潤リンパ球(MIL)である。
いくつかの実施形態では、T細胞は、末梢血リンパ球(PBL)である。
いくつかの実施形態では、T細胞は、がんに罹患しているドナーから取得される。
いくつかの実施形態では、T細胞は、がんに罹患している患者から切除された腫瘍から取得されたTILである。
いくつかの実施形態では、T細胞は、血液系悪性腫瘍に罹患している患者の骨髄から取得されたMILである。
いくつかの実施形態では、T細胞は、ドナー由来の末梢血単核細胞(PBMC)から取得されたPBLである。いくつかの実施形態では、ドナーは、がんに罹患している。いくつかの実施形態では、がんは、黒色腫、卵巣癌、子宮内膜癌、甲状腺癌、子宮頸癌、非小細胞肺癌(NSCLC)、肺癌、膀胱癌、乳癌、ヒト乳頭腫ウイルスによって引き起こされるがん、頭頸部癌(頭頸部扁平上皮癌(HNSCC)を含む)、神経膠芽細胞腫(GBMを含む)、胃腸癌、腎癌、及び腎細胞癌からなる群から選択されるがんである。いくつかの実施形態では、がんは、黒色腫、卵巣癌、子宮頸癌、非小細胞肺癌(NSCLC)、肺癌、膀胱癌、乳癌、ヒト乳頭腫ウイルスによって引き起こされるがん、頭頸部癌(頭頸部扁平上皮癌(HNSCC)を含む)、神経膠芽細胞腫(GBMを含む)、胃腸癌、腎癌、及び腎細胞癌からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ドナーは、腫瘍に罹患している。いくつかの実施形態では、腫瘍は、液体腫瘍である。いくつかの実施形態では、腫瘍は、固形腫瘍である。いくつかの実施形態では、ドナーは、血液系悪性腫瘍に罹患している。
本開示の特定の態様では、免疫エフェクター細胞、例えば、T細胞は、FICOLL分離などの当業者に知られている任意の数の技法を使用して対象から収集された血液の単位から得ることができる。好ましい一態様では、個体の循環血液由来の細胞は、アフェレーシスによって取得される。アフェレーシス産物は、典型的には、リンパ球、例えば、T細胞、単球、顆粒球、B細胞、他の有核白血球、赤血球、血小板を含む。一態様では、アフェレーシスによって収集された細胞が洗浄されて、血漿画分が除去され、任意選択で、その後の処理ステップのために細胞を適切な緩衝液または培地に入れられ得る。一実施形態では、細胞は、リン酸緩衝生理食塩水(PBS)で洗浄される。代替の実施形態では、洗浄溶液は、カルシウムを欠き、マグネシウムを欠き得るか、またはすべてではないが多くの二価カチオンを欠き得る。一態様では、T細胞は、赤血球を溶解し、かつ単球を枯渇させることによって、例えば、PERCOLL勾配による遠心分離によって、または対向流遠心溶出法によって末梢血リンパ球から単離される。
いくつかの実施形態では、T細胞は、ドナー由来のリンパ球が濃縮された全血またはアフェレーシス産物から分離されたPBLである。いくつかの実施形態では、ドナーは、がんに罹患している。いくつかの実施形態では、がんは、黒色腫、卵巣癌、子宮内膜癌、甲状腺癌、子宮頸癌、非小細胞肺癌(NSCLC)、肺癌、膀胱癌、乳癌、ヒト乳頭腫ウイルスによって引き起こされるがん、頭頸部癌(頭頸部扁平上皮癌(HNSCC)を含む)、神経膠芽細胞腫(GBMを含む)、胃腸癌、腎癌、及び腎細胞癌からなる群から選択されるがんである。いくつかの実施形態では、がんは、黒色腫、卵巣癌、子宮頸癌、非小細胞肺癌(NSCLC)、肺癌、膀胱癌、乳癌、ヒト乳頭腫ウイルスによって引き起こされるがん、頭頸部癌(頭頸部扁平上皮癌(HNSCC)を含む)、神経膠芽細胞腫(GBMを含む)、胃腸癌、腎癌、及び腎細胞癌からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ドナーは、腫瘍に罹患している。いくつかの実施形態では、腫瘍は、液体腫瘍である。いくつかの実施形態では、腫瘍は、固形腫瘍である。いくつかの実施形態では、ドナーは、血液系悪性腫瘍に罹患している。いくつかの実施形態では、PBLは、正または負の選択法を使用することによって、すなわち、T細胞表現型について、マーカー(複数可)、例えば、CD3+CD45+を使用してPBLを除去することによって、または非T細胞表現型細胞を除去してPBLを残すことによって、リンパ球が濃縮された全血またはアフェレーシス産物から単離される。他の実施形態では、PBLは、勾配遠心分離によって単離される。ドナー組織からPBLを単離した時点で、PBLのプライミングによる第1の拡張は、本明細書に記載される方法のうちのいずれかのプライミングによる第1の拡張ステップに従って、プライミングによる第1の拡張培養下で好適な数の単離されたPBL(いくつかの実施形態では、およそ1×107PBL)を播種することによって開始され得る。
これらの特徴のうちのいくつかを含む、プロセス3として知られる(本明細書ではGen3とも称される)例示的なTILプロセスが、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に示され、本発明のこの実施形態の、Gen2を超える利点のうちのいくつかが、図1、2、8、30、及び31(特に、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に記載される。Gen3の実施形態は、図1、8、及び30(特に、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に示される。プロセス2AまたはGen2またはGen2Aはまた、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許公開第2018/0280436号にも記載されている。Gen3プロセスはまた、国際特許公開第WO2020/096988号に記載されている。
本明細書で考察され、かつ一般に概説されるように、TILは、患者試料から採取され、本明細書に記載され、かつGen3と称されるTIL拡張プロセスを使用して患者に移植する前に、それらの数を拡張するように操作される。いくつかの実施形態では、TILは、以下で考察されるように、任意で遺伝子操作され得る。いくつかの実施形態では、TILは、拡張前または拡張後に凍結保存され得る。解凍した時点で、それらが再刺激されて、患者への注入前に代謝を高めることができる。
いくつかの実施形態では、以下ならびに実施例及び図において詳細に考察されるように、プライミングによる第1の拡張(本明細書において急速拡張前(REP前)と称されるプロセス、ならびに図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)においてステップBとして示されるプロセスを含む)は、1~8日に短縮され、急速な第2の拡張(本明細書において急速拡張プロトコル(REP)と称されるプロセス、ならびに図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)においてステップDとして示されるプロセスを含む)は、1~9日に短縮される。いくつかの実施形態では、以下ならびに実施例及び図において詳細に考察されるように、プライミングによる第1の拡張(本明細書において急速拡張前(REP前)と称されるプロセス、ならびに図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)においてステップBとして示されるプロセスを含む)は、1~8日に短縮され、急速な第2の拡張(本明細書において急速拡張プロトコル(REP)と称されるプロセス、ならびに図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)においてステップDとして示されるプロセスを含む)は、1~8日に短縮される。いくつかの実施形態では、以下ならびに実施例及び図において詳細に考察されるように、プライミングによる第1の拡張(本明細書において急速拡張前(REP前)と称されるプロセス、ならびに図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)においてステップBとして示されるプロセスを含む)は、1~7日に短縮され、急速な第2の拡張(本明細書において急速拡張プロトコル(REP)と称されるプロセス、ならびに図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)においてステップDとして示されるプロセスを含む)は、1~9日に短縮される。いくつかの実施形態では、以下ならびに実施例及び図において詳細に考察されるように、プライミングによる第1の拡張(本明細書において急速拡張前(REP前)と称されるプロセス、ならびに図8(特に、例えば図1B及び/または図8C)においてステップBとして示されるプロセスを含む)は、1~7日に短縮され、急速な第2の拡張(本明細書において急速拡張プロトコル(REP)と称されるプロセス、ならびに図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)においてステップDとして示されるプロセスを含む)は、1~10日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)においてステップBとして記載される拡張)は、8日に短縮され、急速な第2の拡張(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)においてステップDに記載される拡張)は、7~9日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)においてステップBとして記載される拡張)は、8日間であり、急速な第2の拡張(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)においてステップDに記載される拡張)は、8~9日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)においてステップBとして記載される拡張)は、7日に短縮され、急速な第2の拡張(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)においてステップDに記載される拡張)は、7~8日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)においてステップBとして記載される拡張)は、8日に短縮され、急速な第2の拡張(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)においてステップDに記載される拡張)は、8日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)においてステップBとして記載される拡張)は、8日間であり、急速な第2の拡張(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)においてステップDに記載される拡張)は、9日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)においてステップBとして記載される拡張)は、8日間であり、急速な第2の拡張(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)においてステップDに記載される拡張)は、10日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)においてステップBとして記載される拡張)は、7日間であり、急速な第2の拡張(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)においてステップDに記載される拡張)は、7~10日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)においてステップBとして記載される拡張)は、7日間であり、急速な第2の拡張(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)においてステップDに記載される拡張)は、8~10日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)においてステップBとして記載される拡張)は、7日間であり、急速な第2の拡張(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)においてステップDに記載される拡張)は、9~10日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)においてステップBとして記載される拡張)は、7日に短縮され、急速な第2の拡張(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)においてステップDに記載される拡張)は、7~9日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張と急速な第2の拡張(例えば、図8(特に、例えば、図1B及び/または図8C)においてステップB及びステップDとして記載される拡張)との組み合わせは、以下ならびに実施例及び図面において詳細に考察されるように、14~16日間である。特に、本発明のある特定の実施形態が、IL-2の存在下での抗CD3抗体、例えば、OKT-3への曝露、または少なくともIL-2及び抗CD3抗体、例えば、OKT-3の存在下での抗原への曝露によってTILが活性化される、プライミングによる第1の拡張ステップを含むと考えられる。ある特定の実施形態では、上記のようにプライミングによる第1の拡張ステップで活性化されるTILは、第1のTIL集団であり、すなわち、一次細胞集団である。
以下の「ステップ」指定A、B、Cなどは、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)における非限定的な例を参照し、本明細書に記載されるある特定の非限定的な実施形態を参照している。以下及び図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)におけるステップの順序は例示であり、ステップの任意の組み合わせまたは順序、ならびに追加のステップ、ステップの繰り返し、及び/またはステップの省略は、本出願及び本明細書に開示される方法によって企図される。
A.ステップA:患者の腫瘍試料を取得する
一般に、TILは、最初に患者の腫瘍試料(「一次TIL」)から、またはTIL様の特徴を有する末梢血リンパ球を含む末梢血リンパ球などの循環リンパ球から得られ、その後、本明細書に記載されるように、さらなる操作のためにより大きな集団に拡張され、任意選択で凍結保存され、任意選択でTILの健康の指標として表現型及び代謝パラメータについて評価される。
一般に、TILは、最初に患者の腫瘍試料(「一次TIL」)から、またはTIL様の特徴を有する末梢血リンパ球を含む末梢血リンパ球などの循環リンパ球から得られ、その後、本明細書に記載されるように、さらなる操作のためにより大きな集団に拡張され、任意選択で凍結保存され、任意選択でTILの健康の指標として表現型及び代謝パラメータについて評価される。
患者の腫瘍試料は、一般に、外科的切除、針生検、または腫瘍細胞とTIL細胞との混合物を含有する試料を得るための他の手段により、当該技術分野で知られている方法を使用して得ることができる。一般に、腫瘍試料は、原発腫瘍、浸潤性腫瘍、または転移性腫瘍を含む、任意の固形腫瘍に由来し得る。腫瘍試料は、血液系悪性腫瘍から取得された腫瘍などの液体腫瘍であり得る。固形腫瘍は、乳癌、膵臓癌、前立腺癌、結腸直腸癌、肺癌、脳癌、腎癌、胃癌、及び皮膚癌を含むが、これらに限定されない(扁平上皮癌、基底細胞癌、及び黒色腫を含むが、これらに限定されない)、任意の種類のがんであり得る。いくつかの実施形態では、がんは、子宮頸癌、頭頸部癌(例えば、頭頸部扁平上皮癌(HNSCC)を含む)、神経膠芽細胞腫(GBM)、胃腸癌、卵巣癌、肉腫、膵臓癌、膀胱癌、乳癌、トリプルネガティブ乳癌、及び非小細胞肺癌から選択される。いくつかの実施形態では、がんは、黒色腫である。いくつかの実施形態では、悪性黒色腫腫瘍が特に高レベルのTILを有することが報告されているため、有用なTILは、悪性黒色腫腫瘍から取得される。
取得された時点で、腫瘍試料は、一般に、鋭的解剖を使用して1~約8mm3の小片に断片化され、約2~3mm3が特に有用である。TILは、酵素腫瘍消化物を使用してこれらの断片から培養される。かかる腫瘍消化物は、酵素培地(例えば、Roswell Park Memorial Institute(RPMI)1640緩衝液、2mMグルタメート、10mcg/mLゲンタマイシン、30単位/mL DNase、及び1.0mg/mLコラゲナーゼ)中でのインキュベーション、続いて、機械的解離(例えば、組織解離機を使用する)によって産生され得る。腫瘍消化物は、腫瘍を酵素培地に入れ、腫瘍をおよそ1分間機械的に解離させ、その後、5%CO2中37℃で30分間インキュベートし、続いて、小さい組織片しか存在しなくなるまで、前述の条件下で機械的解離及びインキュベーションのサイクルを繰り返すことによって産生され得る。このプロセスの最後に、細胞懸濁液中に多数の赤血球または死細胞が含まれている場合、FICOLL分岐親水性多糖類を使用した密度勾配分離が行われて、これらの細胞を除去することができる。米国特許出願公開第2012/0244133A1号(その開示は参照により本明細書に組み込まれる)に記載されているものなどの当該技術分野で知られている代替の方法を使用することができる。前述の方法のうちのいずれかが、TILを拡張する方法またはがんを治療する方法について本明細書に記載される実施形態のうちのいずれかにおいて使用され得る。
上に示されるように、いくつかの実施形態では、TILは、固形腫瘍に由来する。いくつかの実施形態では、固形腫瘍は、断片化されない。いくつかの実施形態では、固形腫瘍は断片化されず、全腫瘍として酵素消化に供される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、コラゲナーゼ、DNase、及びヒアルロニダーゼを含む酵素混合物中で消化される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、コラゲナーゼ、DNase、及びヒアルロニダーゼを含む酵素混合物中で1~2時間消化される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、コラゲナーゼ、DNase、及びヒアルロニダーゼを含む酵素混合物中で1~2時間、37℃、5%CO2で消化される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、コラゲナーゼ、DNase、及びヒアルロニダーゼを含む酵素混合物中で1~2時間、37℃、5%CO2で回転を伴って消化される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、一定の回転を伴って一晩消化される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、37℃、5%CO2で一定の回転を伴って一晩消化される。いくつかの実施形態では、全腫瘍が酵素と組み合わされて、腫瘍消化反応混合物が形成される。
いくつかの実施形態では、腫瘍は、滅菌緩衝液中の凍結乾燥酵素で再構成される。いくつかの実施形態では、緩衝液は、滅菌HBSSである。
いくつかの実施形態では、酵素混合物は、コラゲナーゼを含む。いくつかの実施形態では、コラゲナーゼは、コラゲナーゼIVである。いくつかの実施形態では、コラゲナーゼの作業ストックは、100mg/mLの10倍作業ストックである。
いくつかの実施形態では、酵素混合物は、DNAseを含む。いくつかの実施形態では、DNAseの作業ストックは、10,000IU/mLの10倍作業ストックである。
いくつかの実施形態では、酵素混合物は、ヒアルロニダーゼを含む。いくつかの実施形態では、ヒアルロニダーゼの作業ストックは、10mg/mLの10倍作業ストックである。
いくつかの実施形態では、酵素混合物は、10mg/mLのコラゲナーゼ、1000IU/mLのDNAse、及び1mg/mLのヒアルロニダーゼを含む。
いくつかの実施形態では、酵素混合物は、10mg/mLのコラゲナーゼ、500IU/mLのDNAse、及び1mg/mLのヒアルロニダーゼを含む。
一般に、腫瘍から取得された細胞懸濁液は、「一次細胞集団」または「新たに取得された」または「新たに単離された」細胞集団と呼ばれる。ある特定の実施形態では、新たに取得されたTIL細胞集団は、抗原提示細胞、IL-12、及びOKT-3を含む細胞培養培地に曝露される。
いくつかの実施形態では、断片化には、例えば、解剖及び消化を含む物理的断片化が含まれる。いくつかの実施形態では、断片化は、物理的断片化である。いくつかの実施形態では、断片化は、解剖である。いくつかの実施形態では、断片化は、消化によるものである。いくつかの実施形態では、TILは、最初に、患者から取得された酵素腫瘍消化物及び腫瘍断片から培養され得る。いくつかの実施形態では、TILは、最初に、患者から取得された酵素腫瘍消化物及び腫瘍断片から培養され得る。
腫瘍が固形腫瘍であるいくつかの実施形態では、腫瘍試料が、例えば、ステップA(図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に提供される)で取得された後、腫瘍は物理的断片化を受ける。いくつかの実施形態では、断片化は、凍結保存前に起こる。いくつかの実施形態では、断片化は、凍結保存後に起こる。いくつかの実施形態では、断片化は、腫瘍を得た後に、いずれの凍結保存もない場合に起こる。いくつかの実施形態では、断片化ステップは、インビトロまたはエクスビボプロセスである。いくつかの実施形態では、腫瘍が断片化され、10、20、30、40個、またはそれ以上の断片または小片が、プライミングによる第1の拡張のために各容器に入れられる。いくつかの実施形態では、腫瘍が断片化され、30個または40個の断片または小片が、プライミングによる第1の拡張のために各容器に入れられる。いくつかの実施形態では、腫瘍が断片化され、40個の断片または小片が、プライミングによる第1の拡張のために各容器に入れられる。いくつかの実施形態では、複数の断片は、約4~約50個の断片を含み、各断片は、約27mm3の体積を有する。いくつかの実施形態では、複数の断片は、約1300mm3~約1500mm3の総体積を伴う約30~約60個の断片を含む。いくつかの実施形態では、複数の断片は、約1350mm3の総体積を伴う約50個の断片を含む。いくつかの実施形態では、複数の断片は、約1グラム~約1.5グラムの総質量を伴う約50個の断片を含む。いくつかの実施形態では、複数の断片は、約4個の断片を含む。
いくつかの実施形態では、TILは、腫瘍断片から取得される。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、鋭的解剖によって取得される。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約1mm3~10mm3である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約1mm3~8mm3である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約1mm3である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約2mm3である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約3mm3である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約4mm3である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約5mm3である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約6mm3である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約7mm3である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約8mm3である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約9mm3である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約10mm3である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、1~4mm×1~4mm×1~4mmである。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、1mm×1mm×1mmである。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、2mm×2mm×2mmである。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、3mm×3mm×3mmである。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、4mm×4mm×4mmである。
いくつかの実施形態では、腫瘍は、各小片上の出血性、壊死性、及び/または脂肪性組織の量を最小限に抑えるために断片化される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、各小片上の出血性組織の量を最小限に抑えるために断片化される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、各小片上の壊死性組織の量を最小限に抑えるために断片化される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、各小片上の脂肪性組織の量を最小限に抑えるために断片化される。ある特定の実施形態では、腫瘍の断片化ステップは、インビトロまたはエクスビボ方法である。
いくつかの実施形態では、腫瘍の断片化は、腫瘍の内部構造を維持するために行われる。いくつかの実施形態では、腫瘍の断片化は、メスでのこ引き動作を行うことなく行われる。いくつかの実施形態では、TILは、腫瘍消化物から取得される。いくつかの実施形態では、腫瘍消化物は、例えば、RPMI1640(2mM GlutaMAX、10mg/mLゲンタマイシン、30U/mL DNase、及び1.0mg/mLコラゲナーゼ)であるが、これに限定されない酵素培地中でのインキュベーション、続いて、機械的解離(GentleMACS,Miltenyi Biotec,Auburn,CA)によって生成された。腫瘍を酵素培地に入れた後、腫瘍は、およそ1分間機械的に解離され得る。その後、溶液が5%CO2中37℃で30分間インキュベートされ、その後、およそ1分間再び機械的に破壊され得る。5%CO2中37℃で30分間再びインキュベートした後、腫瘍は、3回目の機械的破壊がおよそ1分間行われ得る。いくつかの実施形態では、大きい組織片が存在する場合、3回目の機械的破壊後、5%CO2中37℃でさらに30分間インキュベートするかにかかわらず、1回または2回の追加の機械的解離が試料に適用された。いくつかの実施形態では、細胞懸濁液が多数の赤血球または死細胞を含む場合、最終インキュベーションの終わりに、Ficollを使用した密度勾配分離が行われて、これらの細胞を除去することができる。
いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張ステップ前の細胞懸濁液は、「一次細胞集団」または「新たに取得された」または「新たに単離された」細胞集団と呼ばれる。
いくつかの実施形態では、細胞は、試料単離後(例えば、腫瘍試料を得た後及び/または腫瘍試料から細胞懸濁液を得た後)、任意選択で凍結され得、ステップBに記載の拡張に入る前に凍結保存され得、これは以下でさらに詳細に説明されるとともに、図8(特に、例えば図8B)に例示される。
1.コア/小生検由来のTIL
いくつかの実施形態では、TILは、最初に、コア生検または同様の手順によって取得された患者腫瘍試料(「一次TIL」)から得られ、その後、本明細書に記載されるように、さらなる操作のためにより大きい集団に拡張され、任意で凍結保存され、任意で表現型及び代謝パラメータについて評価される。
いくつかの実施形態では、TILは、最初に、コア生検または同様の手順によって取得された患者腫瘍試料(「一次TIL」)から得られ、その後、本明細書に記載されるように、さらなる操作のためにより大きい集団に拡張され、任意で凍結保存され、任意で表現型及び代謝パラメータについて評価される。
いくつかの実施形態では、患者の腫瘍試料は、一般に、小生検、コア生検、針生検、または腫瘍細胞とTIL細胞との混合物を含有する試料を得るための他の手段により、当該技術分野で知られている方法を使用して取得することができる。一般に、腫瘍試料は、原発腫瘍、浸潤性腫瘍、または転移性腫瘍を含む、任意の固形腫瘍に由来し得る。腫瘍試料は、血液系悪性腫瘍から取得された腫瘍などの液体腫瘍であり得る。いくつかの実施形態では、試料は、複数の小さい腫瘍試料または生検に由来し得る。いくつかの実施形態では、試料は、同じ患者由来の単一の腫瘍からの複数の腫瘍試料を含むことができる。いくつかの実施形態では、試料は、同じ患者由来の1、2、3、または4つの腫瘍からの複数の腫瘍試料を含むことができる。いくつかの実施形態では、試料は、同じ患者由来の複数の腫瘍からの複数の腫瘍試料を含むことができる。固形腫瘍は、肺癌及び/または非小細胞肺癌(NSCLC)であり得る。
一般に、腫瘍コアまたは断片から取得された細胞懸濁液は、「一次細胞集団」または「新たに取得された」または「新たに単離された」細胞集団と呼ばれる。ある特定の実施形態では、新たに取得されたTIL細胞集団は、抗原提示細胞、IL-2、及びOKT-3を含む細胞培養培地に曝露される。
いくつかの実施形態では、腫瘍が転移性であり、かつ原発性病変が過去に効率的に治療/除去された場合、転移性病変のうちの1つの除去が必要とされ得る。いくつかの実施形態では、最も侵襲性の低いアプローチは、皮膚病変、または利用可能な場合、首または腋窩領域のリンパ節を除去することである。いくつかの実施形態では、皮膚病変が除去されるか、またはその小生検が除去される。いくつかの実施形態では、リンパ節またはその小生検が除去される。いくつかの実施形態では、肺もしくは肝臓の転移性病変、または腹腔内リンパ節もしくは胸部リンパ節、または小生検が除去される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、黒色腫である。いくつかの実施形態では、黒色腫の小生検は、ほくろまたはその一部分を含む。
いくつかの実施形態では、小生検は、パンチ生検である。いくつかの実施形態では、パンチ生検は、皮膚に押し込まれた円形の刃で取得される。いくつかの実施形態では、パンチ生検は、疑わしいほくろの周りの皮膚に押し込まれた円形の刃で得られる。いくつかの実施形態では、パンチ生検は、皮膚に押し込まれた円形の刃で得られ、丸い皮膚片が採取される。いくつかの実施形態では、小生検は、パンチ生検であり、腫瘍の丸い部分が採取される。
いくつかの実施形態では、小生検は、切除生検である。いくつかの実施形態では、小生検は、切除生検であり、ほくろまたは増殖全体が除去される。いくつかの実施形態では、小生検は、切除生検であり、ほくろまたは増殖全体が、正常に見える皮膚の小縁とともに除去される。
いくつかの実施形態では、小生検は、切開生検である。いくつかの実施形態では、小生検は、切開生検であり、ほくろまたは増殖の最も不規則な部分のみが採取される。いくつかの実施形態では、小生検は、切開生検であり、切開生検は、疑わしいほくろが非常に大きい場合など、他の技法を達成することができない場合に使用される。
いくつかの実施形態では、小生検は、肺生検である。いくつかの実施形態では、小生検は、気管支鏡検査によって取得される。一般に、気管支鏡検査では、患者は麻酔をかけられ、小さい用具が鼻または口を通り、喉を下って気管支通路に入り、そこで小さい用具を使用していくらかの組織を採取する。気管支鏡検査によって腫瘍または成長に到達できないいくつかの実施形態では、経胸腔針生検が用いられ得る。一般に、経胸腔針生検の場合も、患者は麻酔をかけられ、針が皮膚を通して疑わしい場所に直接挿入されて、小さい組織試料を採取する。いくつかの実施形態では、経胸壁針生検は、介入放射線医学(例えば、針をガイドするためのX線またはCT走査の使用)を必要とし得る。いくつかの実施形態では、小生検は、針生検によって取得される。いくつかの実施形態では、小生検は、超音波内視鏡検査によって得られる(例えば、照明を備えた内視鏡であり、口を通して食道に配置される)。いくつかの実施形態では、小生検は、外科的に取得される。
いくつかの実施形態では、小生検は、頭頸部生検である。いくつかの実施形態では、小生検は、切開生検である。いくつかの実施形態では、小生検は、切開生検であり、小さい組織片が異常に見える領域から切り取られる。いくつかの実施形態では、異常な領域に容易にアクセスできる場合、試料は、入院することなく採取され得る。いくつかの実施形態では、腫瘍が口または喉のより深くにある場合、生検は、全身麻酔を用いて手術室で行われる必要があり得る。いくつかの実施形態では、小生検は、切除生検である。いくつかの実施形態では、小生検は、全領域が除去される切除生検である。いくつかの実施形態では、小生検は、細針吸引(FNA)である。いくつかの実施形態では、小生検は、細針吸引(FNA)であり、シリンジに取り付けられた非常に細い針を使用して、腫瘍または塊から細胞を抽出(吸引)する。いくつかの実施形態では、小生検は、パンチ生検である。いくつかの実施形態では、小生検は、パンチ生検であり、パンチ鉗子を使用して、疑わしい領域の一片を採取する。
いくつかの実施形態では、小生検は、子宮頸部生検である。いくつかの実施形態では、小生検は、膣鏡検査によって取得される。一般に、膣鏡検査は、拡大双眼鏡に取り付けられた照明付き拡大器具(膣鏡)の使用を採用し、その後、これを使用して、子宮頸部の表面の小さい切片を生検する。いくつかの実施形態では、小生検は、円錐切除/錐体生検である。いくつかの実施形態では、小生検は、円錐切除/錐体生検であり、子宮頸部からより大きい組織片を採取するために外来手術が必要になる場合がある。いくつかの実施形態では、錐体生検は、診断の確認を助けることに加えて、錐体生検が初期治療となり得る。
「固形腫瘍」という用語は、通常、嚢胞または液体領域を含まない異常な組織塊を指す。固形腫瘍は、良性または悪性であり得る。「固形腫瘍癌」という用語は、悪性、腫瘍性、またはがん性の固形腫瘍を指す。固形腫瘍癌には、肺の癌が含まれる。いくつかの実施形態では、がんは、黒色腫である。いくつかの実施形態では、がんは、非小細胞肺癌(NSCLC)である。固形腫瘍の組織構造には、実質(がん細胞)を含む相互依存的組織区画、及びがん細胞が分散しており、かつ支持微小環境を提供し得る支持間質細胞が含まれる。
いくつかの実施形態では、腫瘍由来の試料は、細針吸引物(FNA)、コア生検、小生検(例えば、パンチ生検を含む)として取得される。いくつかの実施形態では、試料は、最初にG-REX 10に入れられる。いくつかの実施形態では、1つまたは2つのコア生検及び/または小生検試料が存在する場合、試料は、最初にG-REX 10に入れられる。いくつかの実施形態では、3、4、5、6、8、9、または10個以上のコア生検及び/または小生検試料が存在する場合、試料は、最初にG-REX100に入れられる。いくつかの実施形態では、3、4、5、6、8、9、または10個以上のコア生検及び/または小生検試料が存在する場合、試料は、最初にG-REX500に入れられる。
FNAは、例えば、黒色腫を含む皮膚腫瘍から取得することができる。いくつかの実施形態では、FNAは、転移性黒色腫を有する患者からの皮膚腫瘍などの皮膚腫瘍から取得される。いくつかの事例では、黒色腫を有する患者は、外科的治療を以前に受けたことがある。
FNAは、例えば、NSCLCを含む肺腫瘍から得ることができる。いくつかの実施形態では、FNAは、非小細胞肺癌(NSCLC)を有する患者由来の肺腫瘍などの肺腫瘍から取得される。いくつかの事例では、NSCLCを有する患者は、外科的治療を以前に受けたことがある。
本明細書に記載のTILは、FNA試料から得られ得る。いくつかの事例では、FNA試料は、18ゲージ針~25ゲージ針の範囲の細いゲージ針を使用して、患者から得られるか、または単離される。細いゲージ針は、18ゲージ、19ゲージ、20ゲージ、21ゲージ、22ゲージ、23ゲージ、24ゲージ、または25ゲージであり得る。いくつかの実施形態では、患者由来のFNA試料は、少なくとも400,000個のTIL、例えば、400,000個のTIL、450,000個のTIL、500,000個のTIL、550,000個のTIL、600,000個のTIL、650,000個のTIL、700,000個のTIL、750,000個のTIL、800,000個のTIL、850,000個のTIL、900,000個のTIL、950,000個のTIL、またはそれ以上を含み得る。
いくつかの事例では、本明細書に記載のTILは、コア生検試料から取得される。いくつかの事例では、コア生検試料は、11ゲージ針~16ゲージ針の範囲の外科用または医療用針を使用して、患者から得られるか、または単離される。針は、11ゲージ、12ゲージ、13ゲージ、14ゲージ、15ゲージ、または16ゲージであり得る。いくつかの実施形態では、患者由来のコア生検試料は、少なくとも400,000個のTIL、例えば、400,000個のTIL、450,000個のTIL、500,000個のTIL、550,000個のTIL、600,000個のTIL、650,000個のTIL、700,000個のTIL、750,000個のTIL、800,000個のTIL、850,000個のTIL、900,000個のTIL、950,000個のTIL、またはそれ以上を含み得る。
一般に、採取された細胞懸濁液は、「一次細胞集団」または「新たに採取された」細胞集団と呼ばれる。
いくつかの実施形態では、TILは、腫瘍消化物から得られない。いくつかの実施形態では、固形腫瘍コアは、断片化されない。
いくつかの実施形態では、TILは、腫瘍消化物から取得される。いくつかの実施形態では、腫瘍消化物は、例えば、RPMI1640(2mM GlutaMAX、10mg/mLゲンタマイシン、30U/mL DNase、及び1.0mg/mLコラゲナーゼ)であるが、これに限定されない酵素培地中でのインキュベーション、続いて、機械的解離(GentleMACS,Miltenyi Biotec,Auburn,CA)によって生成された。腫瘍を酵素培地に入れた後、腫瘍は、およそ1分間機械的に解離され得る。その後、溶液が5%CO2中37℃で30分間インキュベートされ、その後、およそ1分間再び機械的に破壊され得る。5%CO2中37℃で30分間再びインキュベートした後、腫瘍は、3回目の機械的破壊がおよそ1分間行われ得る。いくつかの実施形態では、大きい組織片が存在する場合、3回目の機械的破壊後、5%CO2中37℃でさらに30分間インキュベートするかにかかわらず、1回または2回の追加の機械的解離が試料に適用された。いくつかの実施形態では、細胞懸濁液が多数の赤血球または死細胞を含む場合、最終インキュベーションの終わりに、Ficollを使用した密度勾配分離が行われて、これらの細胞を除去することができる。
いくつかの実施形態では、第1のTIL集団を取得することは、多病変サンプリング法を含む。
腫瘍解離酵素混合物には、1つ以上の解離(消化)酵素、例えば、限定されないが、コラゲナーゼ(任意のブレンドまたはコラゲナーゼの種類を含む)、Accutase(商標)、Accumax(商標)、ヒアルロニダーゼ、中性プロテアーゼ(ディスパーゼ)、キモトリプシン、キモパパイン、トリプシン、カゼイナーゼ、エラスターゼ、パパイン、XIV型プロテアーゼ(プロナーゼ)、デオキシリボヌクレアーゼI(DNase)、トリプシン阻害剤、任意の他の解離酵素またはタンパク質分解酵素、及びそれらの任意の組み合わせが含まれ得る。
いくつかの実施形態では、解離酵素は、凍結乾燥酵素から再構成される。いくつかの実施形態では、凍結乾燥酵素は、ハンクス平衡塩溶液(HBSS)などの滅菌緩衝液の量で再構成される。
いくつかの事例では、コラゲナーゼ(アニマルフリー1型コラゲナーゼなど)を、10mLの滅菌HBSSまたは別の緩衝液で再構成する。凍結乾燥ストック酵素は、2892PZ U/バイアルの濃度であり得る。いくつかの実施形態では、コラゲナーゼは、5mL~15mLの緩衝液中で再構成される。いくつかの実施形態では、再構成後のコラゲナーゼストックは、約100PZ U/mL~約400PZ U/mLの範囲、例えば、約100PZ U/mL~約400PZ U/mL、約100PZ U/mL~約350PZ U/mL、約100PZ U/mL~約300PZ U/mL、約150PZ U/mL~約400PZ U/mL、約100PZ U/mL、約150PZ U/mL、約200PZ U/mL、約210PZ U/mL、約220PZ U/mL、約230PZ U/mL、約240PZ U/mL、約250PZ U/mL、約260PZ U/mL、約270PZ U/mL、約280PZ U/mL、約289.2PZ U/mL、約300PZ U/mL、約350PZ U/mL、または約400PZ U/mLである。
いくつかの実施形態では、中性プロテアーゼは、1mlの滅菌HBSSまたは別の緩衝液中で再構成される。凍結乾燥ストック酵素は、175DMCU/バイアルの濃度であり得る。いくつかの実施形態では、再構成後の中性プロテアーゼストックは、約100DMC/mL~約400DMC/mLの範囲、例えば、約100DMC/mL~約400DMC/mL、約100DMC/mL~約350DMC/mL、約100DMC/mL~約300DMC/mL、約150DMC/mL~約400DMC/mL、約100DMC/mL、約110DMC/mL、約120DMC/mL、約130DMC/mL、約140DMC/mL、約150DMC/mL、約160DMC/mL、約170DMC/mL、約175DMC/mL、約180DMC/mL、約190DMC/mL、約200DMC/mL、約250DMC/mL、約300DMC/mL、約350DMC/mL、または約400DMC/mLである。
いくつかの実施形態において、DNAse Iは、1mlの滅菌HBSSまたは別の緩衝液中で再構成される。凍結乾燥したストック酵素は、4KU/バイアルの濃度であった。いくつかの実施形態では、再構成後のDNase Iストックは、約1KU/mL~10KU/mL、例えば、約1KU/mL、約2KU/mL、約3KU/mL、約4KU/mL、約5KU/mL、約6KU/mL、約7KU/mL、約8KU/mL、約9KU/mL、または約10KU/mLの範囲である。
いくつかの実施形態では、酵素のストックは変化する可能性があるため、凍結乾燥ストックの濃度を確認し、それに応じて消化カクテルに追加される酵素の最終量を修正することに留意されたい。
いくつかの実施形態では、酵素混合物は、約4.7mlの滅菌HBSS中に約10.2ulの中性プロテアーゼ(0.36DMC U/mL)、21.3ulのコラゲナーゼ(1.2PZ/mL)及び250ulのDNAse I(200U/mL)を含む。
2.胸水T細胞及びTIL
いくつかの実施形態では、試料は、胸腔内液試料である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のプロセスによる増殖のためのT細胞またはTILの供給源は、胸腔内液試料である。いくつかの実施形態では、試料は、胸水由来試料である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のプロセスによる拡張のためのTILの供給源は、胸水由来試料である。例えば、米国特許公開第2014/0295426号に記載されている方法を参照されたく、これはすべての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、試料は、胸腔内液試料である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のプロセスによる増殖のためのT細胞またはTILの供給源は、胸腔内液試料である。いくつかの実施形態では、試料は、胸水由来試料である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のプロセスによる拡張のためのTILの供給源は、胸水由来試料である。例えば、米国特許公開第2014/0295426号に記載されている方法を参照されたく、これはすべての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、TILと思われる、及び/またはTILを含む任意の胸腔内液または胸水を利用することができる。かかる試料は、NSCLCもしくはSCLCなどの原発性または転移性肺癌に由来し得る。いくつかの実施形態では、試料は、別の臓器、例えば、乳房、卵巣、結腸、または前立腺に由来する二次転移性がん細胞に由来し得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の拡張方法で使用する試料は、胸膜浸出液である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の拡張方法で使用する試料は、胸膜漏出液である。他の生体試料は、例えば、腹部からの腹水または膵嚢胞液を含む、TILを含有する他の漿液を含み得る。腹水及び胸腔内液は、非常に類似した化学系を伴い、腹部及び肺の両方が、悪性腫瘍における同じ物質の胸膜空間及び腹部空間に中皮線及び流体形態を有し、いくつかの実施形態では、かかる流体は、TILを含有する。開示される方法が胸水を利用するいくつかの実施形態では、同じ方法が、TILを含有する他の嚢胞液を使用して同様の結果で行われてもよい。
いくつかの実施形態では、胸腔内液は、患者から直接除去された未処理の形態である。いくつかの実施形態では、未処理の胸腔内液は、さらなる処理ステップの前に、EDTAまたはヘパリンチューブなどの標準的な採血管に入れられる。いくつかの実施形態では、未処理の胸腔内液は、さらなる処理ステップの前に、標準的なCellSave(登録商標)チューブ(Veridex)に入れられる。いくつかの実施形態では、試料は、生存TILの数の減少を避けるために、患者から採取した直後にCellSaveチューブに入れられる。生存可能なTILの数は、4℃であっても、未処理の胸水中に放置された場合、24時間以内に大幅に減少し得る。いくつかの実施形態では、試料は、患者からの除去後1時間、5時間、10時間、15時間、または最大24時間以内に適切な収集チューブ内に入れられる。いくつかの実施形態では、試料は、4℃で、患者からの除去後1時間、5時間、10時間、15時間、または最大24時間以内に適切な収集チューブ内に入れられる。
いくつかの実施形態では、選択された対象からの胸腔内液試料は、希釈され得る。一実施形態では、希釈は、胸腔内液対希釈剤が1:10である。いくつかの実施形態では、希釈は、胸腔内液対希釈剤が1:9である。いくつかの実施形態では、希釈は、胸腔内液対希釈剤が1:8である。いくつかの実施形態では、希釈は、胸腔内液対希釈剤が1:5である。いくつかの実施形態では、希釈は、胸腔内液対希釈剤が1:2である。いくつかの実施形態では、希釈は、胸腔内液対希釈剤が1:1である。いくつかの実施形態では、希釈剤には、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、別の緩衝液、または生理学的に許容される希釈剤が含まれる。いくつかの実施形態では、試料は、患者からの採取及び希釈の直後にCellSaveチューブに配置され、生存可能なTILの減少を回避し、生存可能なTILは、未治療の胸水中に放置された場合、4℃であっても24~48時間以内にかなりの範囲で発生し得る。いくつかの実施形態では、胸腔内液試料は、患者からの除去及び希釈後1時間、5時間、10時間、15時間、24時間、36時間、最大48時間以内に適切な収集チューブ内に入れられる。いくつかの実施形態では、胸腔内液試料は、4℃で、患者からの除去及び希釈後1時間、5時間、10時間、15時間、24時間、36時間、最大48時間以内に適切な収集チューブ内に入れられる。
さらに別の実施形態では、胸腔内液試料は、さらなる処理ステップの前に、従来の手段によって濃縮される。いくつかの実施形態では、胸腔内液のこの前処理は、方法を実施する実験室への輸送のために、またはその後の分析のために(例えば、採取後24~48時間より後に)胸水を凍結保存しなければならない状況において好ましい。いくつかの実施形態では、胸腔内液試料は、それが対象から採取された後に胸腔内液試料を遠心分離し、遠心分離物またはペレットを緩衝液中に再懸濁することによって調製される。いくつかの実施形態では、胸腔内液試料は、輸送または後の分析及び/または処理のために凍結保存される前に、複数の遠心分離及び再懸濁に供される。
いくつかの実施形態では、胸腔内液試料は、濾過法を使用することによって、さらなる処理ステップの前に濃縮される。いくつかの実施形態では、さらなる処理で使用される胸腔内液試料は、胸腔内液が膜を通過することを可能にするが腫瘍細胞を保持する、既知で本質的に均一な孔径を含むフィルターを通して流体を濾過することによって調製される。いくつかの実施形態では、膜の細孔の直径は、少なくとも4μMであり得る。いくつかの実施形態では、細孔直径は、5μM以上であり得、他の実施形態では、6、7、8、9、または10μMのうちのいずれかである。濾過後、膜によって保持されたTILを含む細胞を、膜から適切な生理学的に許容される緩衝液にすすいでもよい。次いで、このように濃縮されたTILを含む細胞は、方法のさらなる処理ステップで使用することができる。
いくつかの実施形態では、胸腔内液試料(例えば、未処理の胸腔内液を含む)、希釈胸水、または再懸濁細胞ペレットは、試料中に存在する無核赤血球を特異的に溶解する溶解試薬と接触させる。いくつかの実施形態では、このステップは、胸腔内液がかなりの数のRBCを含む状況で、さらなる処理ステップの前に行われる。好適な溶解試薬には、単一の溶解試薬もしくは溶解試薬及びクエンチ試薬、または溶解剤、クエンチ試薬及び固定試薬が含まれる。好適な溶解システムは市販されており、BD Pharm Lyse(商標)システム(Becton Dickenson)が含まれる。他の溶解システムには、Versalyse(商標)システム、FACSlyse(商標)システム(Becton Dickenson)、Immunoprep(商標)システム、またはErythrolyse IIシステム(Beckman Coulter,Inc.)、または塩化アンモニウムシステムが含まれる。いくつかの実施形態では、溶解試薬は、赤血球の効率的な溶解、ならびに胸水におけるTIL及びTILの表現型特性の保存のような主要な要件によって異なり得る。溶解のための単一の試薬を利用することに加えて、本明細書に記載の方法に有用な溶解システムは、第2の試薬、例えば、方法の残りのステップ中に溶解試薬の効果をクエンチまたは遅延させるもの、例えばStabilyse(商標)試薬(Beckman Coulter,Inc.)を含むことができる。溶解試薬の選択または方法の好ましい実施に応じて、従来の固定試薬を使用することもできる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるように、未処理、希釈または多重遠心分離または処理された胸腔内液試料は、本明細書で提供されるようにさらに処理及び/または拡張される前に、約-140℃の温度で凍結保存される。
1.末梢血から末梢血リンパ球(PBL)を拡張する方法
PBL法1。本発明のいくつかの実施形態では、PBLは、本明細書に記載のプロセスを使用して拡張される。本発明のいくつかの実施形態では、方法は、全血からPBMC試料を取得することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、非CD19+画分の負の選択を使用して、PBMCから純粋なT細胞を単離することによってT細胞を濃縮することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、非CD19+画分の磁気ビーズベースの負の選択を使用して、PBMCから純粋なT細胞を単離することによってT細胞を濃縮することを含む。
PBL法1。本発明のいくつかの実施形態では、PBLは、本明細書に記載のプロセスを使用して拡張される。本発明のいくつかの実施形態では、方法は、全血からPBMC試料を取得することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、非CD19+画分の負の選択を使用して、PBMCから純粋なT細胞を単離することによってT細胞を濃縮することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、非CD19+画分の磁気ビーズベースの負の選択を使用して、PBMCから純粋なT細胞を単離することによってT細胞を濃縮することを含む。
本発明のいくつかの実施形態では、PBL法1は、以下のように行われる:0日目に、凍結保存されたPBMC試料を解凍し、PBMCを計数する。T細胞を、ヒトPan T細胞単離キット及びLSカラム(Miltenyi Biotec)を使用して単離する。
PBL法2。本発明のいくつかの実施形態では、PBLは、全血からPBMC試料を得ることを含むPBL法2を使用して拡張される。PBMC由来のT細胞は、PBMCを37℃で少なくとも3時間インキュベートし、その後、非接着細胞を単離することによって濃縮される。
本発明のいくつかの実施形態では、PBL法2は、以下のように行われる:0日目に、凍結保存されたPMBC試料を解凍し、PBMC細胞を、CM-2培地中の6ウェルプレートに600万細胞/ウェルで播種し、37℃で3時間インキュベートする。3時間後、PBLである非接着細胞を取り出し、計数する。
PBL法3。本発明のいくつかの実施形態では、PBLは、末梢血からPBMC試料を得ることを含むPBL法3を使用して拡張される。B細胞は、CD19+選択を使用して単離され、T細胞は、PBMC試料の非CD19+画分の負の選択を使用して選択される。
本発明のいくつかの実施形態では、PBL法3は、以下のように行われる:0日目に、末梢血から取得された凍結保存されたPBMCを解凍し、計数する。CD19+B細胞を、CD19 Multisortキット、ヒト(Miltenyi Biotec)を使用して選別する。非CD19+細胞画分のうち、T細胞を、ヒトPan T細胞単離キット及びLSカラム(Miltenyi Biotec)を使用して精製する。
いくつかの実施形態では、PBMCは、全血試料から単離される。いくつかの実施形態では、PBMC試料は、PBLを拡張するための出発材料として使用される。いくつかの実施形態では、試料は、拡張プロセス前に凍結保存される。他の実施形態では、新鮮な試料が、PBLを拡張するための出発材料として使用される。本発明のいくつかの実施形態では、T細胞は、当該技術分野で知られている方法を使用してPBMCから単離される。いくつかの実施形態では、T細胞は、ヒトT汎細胞単離キット及びLSカラムを使用して単離される。本発明のいくつかの実施形態では、T細胞は、当該技術分野で知られている抗体選択方法、例えば、CD19の負の選択を使用して、PBMCから単離される。
本発明のいくつかの実施形態では、PBMC試料は、非接着細胞を特定するのに有効な所望の温度である期間インキュベートされる。本発明のいくつかの実施形態では、インキュベーション時間は、約3時間である。本発明のいくつかの実施形態では、温度は、約37℃である。その後、非接着細胞は、上記のプロセスを使用して拡張される。
いくつかの実施形態では、PBMC試料は、キナーゼ阻害剤またはITK阻害剤を含むレジメンで任意選択で前治療された対象または患者由来のものである。いくつかの実施形態では、腫瘍試料は、キナーゼ阻害剤またはITK阻害剤を含むレジメンで前治療された対象または患者由来のものである。いくつかの実施形態では、PBMC試料は、キナーゼ阻害剤またはITK阻害剤を含むレジメンで前治療されており、少なくとも1ヶ月間、少なくとも2ヶ月間、少なくとも3ヶ月間、少なくとも4ヶ月間、少なくとも5ヶ月間、少なくとも6ヶ月間、または1年間、またはそれ以上治療を受けた対象または患者由来のものである。他の実施形態では、PBMCは、イブルチニブなどのITK阻害剤レジメンを現在受けている患者に由来する。
いくつかの実施形態では、PBMC試料は、キナーゼ阻害剤またはITK阻害剤を含むレジメンで前治療されており、キナーゼ阻害剤またはイブルチニブなどのITK阻害剤での治療に不応性である対象または患者由来のものである。
いくつかの実施形態では、PBMC試料は、キナーゼ阻害剤またはITK阻害剤を含むレジメンで前治療されたが、もはやキナーゼ阻害剤またはITK阻害剤での治療を受けていない対象または患者由来のものである。いくつかの実施形態では、PBMC試料は、キナーゼ阻害剤またはITK阻害剤を含むレジメンで前治療されたが、もはやキナーゼ阻害剤またはITK阻害剤での治療を受けておらず、少なくとも1ヶ月間、少なくとも2ヶ月間、少なくとも3ヶ月間、少なくとも4ヶ月間、少なくとも5ヶ月間、少なくとも6ヶ月間、または少なくとも1年間、またはそれ以上治療を受けていない対象または患者由来のものである。他の実施形態では、PBMCは、ITK阻害剤に以前に曝露されたが、少なくとも3ヶ月、少なくとも6ヶ月、少なくとも9ヶ月、または少なくとも1年以内に治療されていない患者に由来する。
本発明のいくつかの実施形態では、0日目に、細胞がCD19+について選択され、それに応じて選別される。本発明のいくつかの実施形態では、選択は、抗体結合ビーズを使用して行われる。本発明のいくつかの実施形態では、純粋なT細胞が、0日目にPBMCから単離される。
本発明のいくつかの実施形態では、イブルチニブまたは他のITK阻害剤で前治療されていない患者の場合、10~15mLのバフィーコートは、約5×109のPBMCを産生し、これは、次いで、約5.5×107のPBLを産生する。
本発明のいくつかの実施形態では、イブルチニブまたは他のITK阻害剤で前治療された患者の場合、拡張プロセスは、約20×109のPBLを産生する。本発明のいくつかの実施形態では、40.3×106のPBMCは、約4.7×105のPBLを産生する。
前述の実施形態のうちのいずれにおいても、PBMCは、全血試料から、アフェレーシスによって、バフィーコートから、またはPBMCを得るための当該技術分野で知られている任意の他の方法から得られ得る。
いくつかの実施形態では、PBLは、米国特許出願公開第US2020/0347350 A1号(この開示は参照により本明細書に組み込まれる)に記載される方法を使用して調製される。
2.骨髄由来のPBMCから骨髄浸潤リンパ球(MIL)を拡張する方法
MIL方法3。本発明のいくつかの実施形態では、方法は、骨髄からPBMCを取得することを含む。0日目に、PBMCがCD3+/CD33+/CD20+/CD14+について選択され、選別され、非CD3+/CD33+/CD20+/CD14+細胞画分が超音波処理され、超音波処理された細胞画分の一部が選択された細胞画分に戻し追加される。
MIL方法3。本発明のいくつかの実施形態では、方法は、骨髄からPBMCを取得することを含む。0日目に、PBMCがCD3+/CD33+/CD20+/CD14+について選択され、選別され、非CD3+/CD33+/CD20+/CD14+細胞画分が超音波処理され、超音波処理された細胞画分の一部が選択された細胞画分に戻し追加される。
本発明のいくつかの実施形態では、MIL法3は、以下のように行われる:0日目に、凍結保存されたPBMC試料を解凍し、PBMCを計数する。細胞を、CD3、CD33、CD20、及びCD14抗体で染色し、選別されたS3e細胞(Bio-Rad)を使用して選別する。細胞を、免疫細胞画分(またはMIL画分)(CD3+CD33+CD20+CD14+)及びAML芽球画分(非CD3+CD33+CD20+CD14+)の2つの画分に選別する。
本発明のいくつかの実施形態では、PBMCは、骨髄から取得される。いくつかの実施形態では、PBMCは、アフェレーシス、吸引、針生検、または当該技術分野で知られている他の同様の手段により骨髄から取得される。いくつかの実施形態では、PBMCは、新鮮である。他の実施形態では、PBMCは、凍結保存される。
本発明のいくつかの実施形態では、MILは、10~50mLの骨髄穿刺液から拡張される。本発明のいくつかの実施形態では、10mLの骨髄穿刺液が患者から取得される。他の実施形態では、20mLの骨髄穿刺液が患者から取得される。他の実施形態では、30mLの骨髄穿刺液が患者から取得される。他の実施形態では、40mLの骨髄穿刺液が患者から取得される。他の実施形態では、50mLの骨髄穿刺液が患者から取得される。
本発明のいくつかの実施形態では、約10~50mLの骨髄穿刺液から産生されたPBMCの数は、約5×107~約10×107PBMCである。他の実施形態では、産生されたPMBCの数は、約7×107PBMCである。
本発明のいくつかの実施形態では、約5×107~約10×107PBMCが、約0.5×106~約1.5×106MILを産生する。本発明のいくつかの実施形態では、約1×106MILが産生される。
本発明のいくつかの実施形態では、骨髄穿刺液から誘導された12×106PBMCは、およそ1.4×105MILを産生する。
前述の実施形態のうちのいずれにおいても、PBMCは、全血試料から、骨髄から、アフェレーシスによって、バフィーコートから、またはPBMCを得るための当該技術分野で知られている任意の他の方法から得られ得る。
いくつかの実施形態では、MILは、米国特許出願公開第US2020/0347350 A1号(この開示は参照により本明細書に組み込まれる)に記載される方法を使用して調製される。
B.ステップB:プライミングによる第1の拡張
いくつかの実施形態では、本方法は、より古いTIL(すなわち、対象/患者への投与前により多くの複製ラウンドをさらに受けたTIL)よりも追加の治療的利益を提供し得る、より若いTILを提供する。若いTILの特徴は、文献、例えば、Donia,et al.,Scand.J.Immunol.2012,75,157-167、Dudley,et al.,Clin.Cancer Res.2010,16,6122-6131、Huang,et al.,J.Immunother.2005,28,258-267、Besser,et al.,Clin.Cancer Res.2013,19,OF1-OF9、Besser,et al.,J.Immunother.2009,32:415-423、Robbins,et al.,J.Immunol.2004,173,7125-7130、Shen,et al.,J.Immunother.,2007,30,123-129、Zhou,et al.,J.Immunother.2005,28,53-62、及びTran,et al.,J.Immunother.,2008,31,742-751に記載されており、これらの各々は参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、本方法は、より古いTIL(すなわち、対象/患者への投与前により多くの複製ラウンドをさらに受けたTIL)よりも追加の治療的利益を提供し得る、より若いTILを提供する。若いTILの特徴は、文献、例えば、Donia,et al.,Scand.J.Immunol.2012,75,157-167、Dudley,et al.,Clin.Cancer Res.2010,16,6122-6131、Huang,et al.,J.Immunother.2005,28,258-267、Besser,et al.,Clin.Cancer Res.2013,19,OF1-OF9、Besser,et al.,J.Immunother.2009,32:415-423、Robbins,et al.,J.Immunol.2004,173,7125-7130、Shen,et al.,J.Immunother.,2007,30,123-129、Zhou,et al.,J.Immunother.2005,28,53-62、及びTran,et al.,J.Immunother.,2008,31,742-751に記載されており、これらの各々は参照により本明細書に組み込まれる。
例えば、図8(特に、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)のステップAに記載されるものなどの腫瘍断片及び/または腫瘍断片の解剖または消化後に、結果として得られた細胞は、腫瘍及び他の細胞よりもTILの成長を好む条件下で、IL-2、OKT-3、及びフィーダー細胞(例えば、抗原提示フィーダー細胞)を含む血清中で培養される。いくつかの実施形態では、IL-2、OKT-3、及びフィーダー細胞は、腫瘍消化物及び/または腫瘍断片とともに培養開始時に(例えば、0日目に)追加される。いくつかの実施形態では、腫瘍消化物及び/または腫瘍断片は、1容器当たり最大60個の断片及び6000IU/mLのIL-2を含む容器内でインキュベートされる。いくつかの実施形態では、この一次細胞集団は、数日間、一般に1~8日間培養され、その結果、バルクTIL集団、一般に約1×108のバルクTIL細胞を生じる。いくつかの実施形態では、この一次細胞集団は、数日間、一般に1~7日間培養され、その結果、バルクTIL集団、一般に約1×108のバルクTIL細胞を生じる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張は、1~8日間起こり、その結果、バルクTIL集団、一般に約1×108のバルクTIL細胞を生じる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張は、1~7日間起こり、その結果、バルクTIL集団、一般に約1×108のバルクTIL細胞を生じる。いくつかの実施形態では、このプライミングによる第1の拡張は、5~8日間起こり、その結果、バルクTIL集団、一般に約1×108のバルクTIL細胞を生じる。いくつかの実施形態では、このプライミングによる第1の拡張は、5~7日間起こり、その結果、バルクTIL集団、一般に約1×108のバルクTIL細胞を生じる。いくつかの実施形態では、このプライミングによる第1の拡張は、約6~8日間起こり、その結果、バルクTIL集団、一般に、約1×108のバルクTIL細胞を生じる。いくつかの実施形態では、このプライミングによる第1の拡張は、約6~7日間起こり、その結果、バルクTIL集団、一般に約1×108のバルクTIL細胞を生じる。いくつかの実施形態では、このプライミングによる第1の拡張は、約7~8日間起こり、その結果、バルクTIL集団、一般に約1×108のバルクTIL細胞を生じる。いくつかの実施形態では、このプライミングによる第1の拡張は、約7日間の期間にわたって生じ、バルクTIL集団、一般に、約1×108のバルクTIL細胞をもたらす。いくつかの実施形態では、このプライミングによる第1の拡張は、約8日間の期間にわたって生じ、バルクTIL集団、一般に、約1×108のバルクTIL細胞をもたらす。
いくつかの実施形態では、TILの拡張は、以下及び本明細書に記載されるプライミングによる第1の拡張ステップ(例えば、REP前またはプライミングREPと称されるプロセスを含み得、0日目及び/または培養開始からのフィーダー細胞を含有する、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)のステップBに記載されるものなど)、続いて以下のステップD及び本明細書に記載される急速な第2の拡張(ステップD、急速拡張プロトコル(REP)ステップと称されるプロセスを含む)、続いて任意選択の凍結保存、続いて以下及び本明細書に記載される第2のステップD(再刺激REPステップと称されるプロセスを含む)を使用して行うことができる。このプロセスから取得されたTILは、本明細書に記載の表現型特徴及び代謝パラメータについて任意で特徴付けられ得る。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約1mm3~10mm3である。
いくつかの実施形態では、第1の拡張培養培地は、培養培地の略語である「CM」と称される。いくつかの実施形態では、ステップBのCMは、10%ヒトAB血清、25mM Hepes、及び10mg/mLゲンタマイシンを補充した、GlutaMAXを含むRPMI1640からなる。
いくつかの実施形態では、240個以下の腫瘍断片が存在する。いくつかの実施形態では、4つ以下の容器に入れられた240個以下の腫瘍断片が存在する。いくつかの実施形態では、容器は、G-REX100 MCSフラスコである。いくつかの実施形態では、60個以下の腫瘍断片が1つの容器に入れられる。いくつかの実施形態では、各容器は、1容器当たり500mL以下の培地を含む。いくつかの実施形態では、培地は、IL-2を含む。いくつかの実施形態では、培地は、6000IU/mLのIL-2を含む。いくつかの実施形態では、培地は、抗原提示フィーダー細胞(本明細書では「抗原提示細胞」とも称される)を含む。いくつかの実施形態では、培地は、容器当たり2.5×108の抗原提示フィーダー細胞を含む。いくつかの実施形態では、培地は、OKT-3を含む。いくつかの実施形態では、培地は、容器当たり30ng/mLのOKT-3を含む。いくつかの実施形態では、容器は、G-REX100 MCSフラスコである。いくつかの実施形態では、培地は、6000IU/mLのIL-2、30ngのOKT-3、及び2.5×108の抗原提示フィーダー細胞を含む。いくつかの実施形態では、培地は、容器当たり6000IU/mLのIL-2、30ng/mLのOKT-3、及び2.5×108の抗原提示フィーダー細胞を含む。
腫瘍断片の調製後、結果として得られた細胞(すなわち、一次細胞集団である断片)は、腫瘍及び他の細胞よりもTILの成長を好み、かつ0日目の培養開始からTILプライミング及び加速された成長を可能にする条件下で、IL-2、抗原提示フィーダー細胞、及びOKT-3を含む培地中で培養される。いくつかの実施形態では、腫瘍消化物及び/または腫瘍断片は、6000IU/mLのIL-2、ならびに抗原提示フィーダー細胞及びOKT-3とインキュベートされる。この一次細胞集団は、数日間、一般に1~8日間培養され、その結果、バルクTIL集団、一般に約1×108のバルクTIL細胞をもたらす。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張中の成長培地は、IL-2またはそのバリアント、ならびに抗原提示フィーダー細胞及びOKT-3を含む。いくつかの実施形態では、この一次細胞集団は、数日間、一般に1~7日間培養され、その結果、バルクTIL集団、一般に約1×108のバルクTIL細胞をもたらす。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張中の成長培地は、IL-2またはそのバリアント、ならびに抗原提示フィーダー細胞及びOKT-3を含む。いくつかの実施形態では、IL-2は、組換えヒトIL-2(rhIL-2)である。いくつかの実施形態では、IL-2ストック溶液は、1mgバイアルにつき20~30×106IU/mgの比活性を有する。いくつかの実施形態では、IL-2ストック溶液は、1mgバイアルにつき20×106IU/mgの比活性を有する。いくつかの実施形態では、IL-2ストック溶液は、1mgバイアルにつき25×106IU/mgの比活性を有する。いくつかの実施形態では、IL-2ストック溶液は、1mgバイアルにつき30×106IU/mgの比活性を有する。いくつかの実施形態では、IL-2ストック溶液は、4~8×106IU/mgのIL-2の最終濃度を有する。いくつかの実施形態では、IL-2ストック溶液は、5~7×106IU/mgのIL-2の最終濃度を有する。いくつかの実施形態では、IL-2ストック溶液は、6×106IU/mgのIL-2の最終濃度を有する。いくつかの実施形態では、IL-2ストック溶液は、実施例Cに記載されるように調製される。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張培養培地は、約10,000IU/mLのIL-2、約9,000IU/mLのIL-2、約8,000IU/mLのIL-2、約7,000IU/mLのIL-2、約6000IU/mLのIL-2、または約5,000IU/mLのIL-2を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張培養培地は、約9,000IU/mLのIL-2~約5,000IU/mLのIL-2を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張培養培地は、約8,000IU/mLのIL-2~約6,000IU/mLのIL-2を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張培養培地は、約7,000IU/mLのIL-2~約6,000IU/mLのIL-2を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張培養培地は、約6,000IU/mLのIL-2を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、IL-2さらに含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張細胞培養培地は、約3000IU/mLのIL-2を含む。ある実施形態では、プライミングによる第1の拡張細胞培養培地は、IL-2をさらに含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張細胞培養培地は、約3000IU/mLのIL-2を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張細胞培養培地は、約1000IU/mL、約1500IU/mL、約2000IU/mL、約2500IU/mL、約3000IU/mL、約3500IU/mL、約4000IU/mL、約4500IU/mL、約5000IU/mL、約5500IU/mL、約6000IU/mL、約6500IU/mL、約7000IU/mL、約7500IU/mL、または約8000IU/mLのIL-2を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張細胞培養培地は、1000~2000IU/mL、2000~3000IU/mL、3000~4000IU/mL、4000~5000IU/mL、5000~6000IU/mL、6000~7000IU/mL、7000~8000IU/mL、または約8000IU/mLのIL-2を含む。
いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張培養培地は、約500IU/mLのIL-15、約400IU/mLのIL-15、約300IU/mLのIL-15、約200IU/mLのIL-15、約180IU/mLのIL-15、約160IU/mLのIL-15、約140IU/mLのIL-15、約120IU/mLのIL-15、または約100IU/mLのIL-15を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張培養培地は、約500IU/mLのIL-15~約100IU/mLのIL-15を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張培養培地は、約400IU/mLのIL-15~約100IU/mLのIL-15を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張培養培地は、約300IU/mLのIL-15~約100IU/mLのIL-15を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張培養培地は、約200IU/mLのIL-15を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張細胞培養培地は、約180IU/mLのIL-15を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張細胞培養培地は、IL-15をさらに含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張細胞培養培地は、約180IU/mLのIL-15を含む。
いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張培養培地は、約20IU/mLのIL-21、約15IU/mLのIL-21、約12IU/mLのIL-21、約10IU/mLのIL-21、約5IU/mLのIL-21、約4IU/mLのIL-21、約3IU/mLのIL-21、約2IU/mLのIL-21、約1IU/mLのIL-21、または約0.5IU/mLのIL-21を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張培養培地は、約20IU/mLのIL-21~約0.5IU/mLのIL-21を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張培養培地は、約15IU/mLのIL-21~約0.5IU/mLのIL-21を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張培養培地は、約12IU/mLのIL-21~約0.5IU/mLのIL-21を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張培養培地は、約10IU/mLのIL-21~約0.5IU/mLのIL-21を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張培養培地は、約5IU/mLのIL-21~約1IU/mLのIL-21を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張培養培地は、約2IU/mLのIL-21を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張細胞培養培地は、約1IU/mLのIL-21を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張細胞培養培地は、約0.5IU/mLのIL-21を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、IL-21をさらに含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張細胞培養培地は、約1IU/mLのIL-21を含む。
いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張細胞培養培地は、OKT-3抗体を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張細胞培養培地は、約30ng/mLのOKT-3抗体を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張細胞培養培地は、約0.1ng/mL、約0.5ng/mL、約1ng/mL、約2.5ng/mL、約5ng/mL、約7.5ng/mL、約10ng/mL、約15ng/mL、約20ng/mL、約25ng/mL、約30ng/mL、約35ng/mL、約40ng/mL、約50ng/mL、約60ng/mL、約70ng/mL、約80ng/mL、約90ng/mL、約100ng/mL、約200ng/mL、約500ng/mL、及び約1μg/mLのOKT-3抗体を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、0.1ng/mL~1ng/mL、1ng/mL~5ng/mL、5ng/mL~10ng/mL、10ng/mL~20ngの間、20ng/mL~30ng/mL、30ng/mL~40ng/mL、40ng/mL~50ng/mL、及び50ng/mL~100ng/mLのOKT-3抗体を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、15ng/mL~30ng/mLのOKT-3抗体を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、30ng/mLのOKT-3抗体を含む。いくつかの実施形態では、OKT-3抗体は、ムロモナブである。表1を参照されたい。
いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張細胞培養培地は、細胞培養培地中に1つ以上のTNFRSFアゴニストを含む。いくつかの実施形態では、TNFRSFアゴニストは、4-1BBアゴニストを含む。いくつかの実施形態では、TNFRSFアゴニストは4-1BBアゴニストであり、4-1BBアゴニストは、ウレルマブ、ウトミルマブ、EU-101、融合タンパク質、ならびにそれらの断片、誘導体、バリアント、バイオシミラー、及び組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、TNFRSFアゴニストは、0.1μg/mL~100μg/mLの細胞培養培地中濃度を達成するのに十分な濃度で追加される。いくつかの実施形態では、TNFRSFアゴニストは、20μg/mL~40μg/mLの細胞培養培地中濃度を達成するのに十分な濃度で追加される。
いくつかの実施形態では、1つ以上のTNFRSFアゴニストに加えて、プライミングによる第1の拡張細胞培養培地は、IL-2を約3000IU/mLの初期濃度で、及びOKT-3を約30ng/mLの初期濃度でさらに含み、1つ以上のTNFRSFアゴニストが、4-1BBアゴニストを含む。いくつかの実施形態では、1つ以上のTNFRSFアゴニストに加えて、プライミングによる第1の拡張細胞培養培地は、IL-2を約6000IU/mLの初期濃度で、及びOKT-3を約30ng/mLの初期濃度でさらに含み、1つ以上のTNFRSFアゴニストが、4-1BBアゴニストを含む。
いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張培養培地は、培養培地の略語である「CM」と称される。いくつかの実施形態では、それは、CM1(培養培地1)と称される。いくつかの実施形態では、CMは、10%ヒトAB血清、25mM Hepes、及び10mg/mLゲンタマイシンを補充した、GlutaMAXを含むRPMI1640からなる。いくつかの実施形態では、CMは、実施例に記載されるCM1であり、実施例Aを参照されたい。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張は、初期細胞培養培地または第1の細胞培養培地中で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張培地または初期細胞培養培地または第1の細胞培養培地は、IL-2、OKT-3、及び抗原提示フィーダー細胞(本明細書ではフィーダー細胞とも称される)を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される拡張プロセスで使用される培地は、無血清培地または合成培地である。いくつかの実施形態では、無血清または合成培地は、基礎細胞培地ならびに血清サプリメント及び/または血清代替物を含む。いくつかの実施形態では、無血清または合成培地は、血清含有培地のロット間の変動に部分的に起因する実験変動を防止及び/または減少させるために使用される。
いくつかの実施形態では、無血清または合成培地は、基礎細胞培地ならびに血清サプリメント及び/または血清代替物を含む。いくつかの実施形態では、基礎細胞培地には、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion Basal Medium、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-Cell Expansion SFM、CTS(商標)AIM-V Medium、CTS(商標)AIM-V SFM、LymphoONE(商標)T-Cell Expansion Xeno-Free Medium、ダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)、最小必須培地(MEM)、イーグル基礎培地(BME)、RPMI1640、F-10、F-12、最小必須培地(αMEM)、グラスゴー最小必須培地(G-MEM)、RPMI成長培地、及びイスコフ改変ダルベッコ培地が含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、血清サプリメントまたは血清代替物には、CTS(商標)OpTmizer T-Cell Expansion Serum Supplement、CTS(商標)Immune Cell Serum Replacement、1つ以上のアルブミンまたはアルブミン代用物、1つ以上のアミノ酸、1つ以上のビタミン、1つ以上のトランスフェリンまたはトランスフェリン代用物、1つ以上の抗酸化剤、1つ以上のインスリンまたはインスリン代用物、1つ以上のコラーゲン前駆体、1つ以上の抗生物質、及び1つ以上の微量元素のうちの1つ以上が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、合成培地は、アルブミンと、グリシン、L-ヒスチジン、L-イソロイシン、L-メチオニン、L-フェニルアラニン、L-プロリン、L-ヒドロキシプロリン、L-セリン、L-スレオニン、L-トリプトファン、L-チロシン、L-バリン、チアミン、還元型グルタチオン、L-アスコルビン酸-2-リン酸塩、鉄飽和トランスフェリン、インスリン、ならびに微量元素部分Ag+、Al3+、Ba2+、Cd2+、Co2+、Cr3+、Ge4+、Se4+、Br、T、Mn2+、P、Si4+、V5+、Mo6+、Ni2+、Rb+、Sn2+、及びZr4+を含有する化合物からなる群から選択される1つ以上の成分と、を含む。いくつかの実施形態では、合成培地は、L-グルタミン、重炭酸ナトリウム、及び/または2-メルカプトエタノールをさらに含む。
いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Immune Cell Serum Replacementは、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion Basal Medium、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFM、CTS(商標)AIM-V Medium、CST(商標)AIM-V SFM、LymphoONE(商標)T-Cell Expansion Xeno-Free Medium、ダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)、最小必須培地(MEM)、イーグル基礎培地(BME)、RPMI1640、F-10、F-12、最小必須培地(αMEM)、グラスゴー最小必須培地(G-MEM)、RPMI成長培地、及びイスコフ改変ダルベッコ培地を含むが、これらに限定されない、従来の成長培地とともに使用される。
いくつかの実施形態では、無血清または合成培地中の総血清代替物濃度(vol%)は、総無血清または合成培地の約1体積%、2体積%、3体積%、4体積%、5体積%、6体積%、7体積%、8体積%、9体積%、10体積%、11体積%、12体積%、13体積%、14体積%、15体積%、16体積%、17体積%、18体積%、19体積%、または20体積%である。いくつかの実施形態では、総血清代替物濃度は、無血清または合成培地の総体積の約3%である。いくつかの実施形態では、総血清代替物濃度は、無血清または合成培地の総体積の約5%である。いくつかの実施形態では、総血清代替物濃度は、無血清または合成培地の総体積の約10%である。
いくつかの実施形態では、無血清または合成培地は、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFM(ThermoFisher Scientific)である。CTS(商標)OpTmizer(商標)のいずれの製剤も、本発明において有用である。CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMは、1LのCTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion Basal Mediumと、26mLのCTS(商標)OpTmizer(商標)T-Cell Expansion Supplementとの組み合わせであり、これらは使用前に一緒に混合される。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)が補充されている。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、55mMの2-メルカプトエタノールとともに、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)が補充されている。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)が補充されており、培地中の2-メルカプトエタノールの最終濃度は、55μMである。
いくつかの実施形態では、合成培地は、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFM(ThermoFisher Scientific)である。CTS(商標)OpTmizer(商標)のいずれの製剤も、本発明において有用である。CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMは、1LのCTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion Basal Mediumと、26mLのCTS(商標)OpTmizer(商標)T-Cell Expansion Supplementとの組み合わせであり、これらは使用前に一緒に混合される。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、55mMの2-メルカプトエタノールとともに、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)が補充されている。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)、55mMの2-メルカプトエタノール、及び2mMのL-グルタミンが補充されている。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)、55mMの2-メルカプトエタノール、及び2mMのL-グルタミンが補充されており、約1000IU/mL~約8000IU/mLのIL-2をさらに含む。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)、55mMの2-メルカプトエタノール、及び2mMのL-グルタミンが補充されており、約3000IU/mLのIL-2をさらに含む。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)、55mMの2-メルカプトエタノール、及び2mMのL-グルタミンが補充されており、約6000IU/mLのIL-2をさらに含む。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)及び55mMの2-メルカプトエタノールが補充されており、約1000IU/mL~約8000IU/mLのIL-2をさらに含む。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)及び55mMの2-メルカプトエタノールが補充されており、約3000IU/mLのIL-2をさらに含む。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)及び55mMの2-メルカプトエタノールが補充されており、約1000IU/mL~約6000IU/mLのIL-2をさらに含む。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)及び約2mMのグルタミンが補充されており、約1000IU/mL~約8000IU/mLのIL-2をさらに含む。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)及び約2mMのグルタミンが補充されており、約3000IU/mLのIL-2をさらに含む。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)及び約2mMのグルタミンが補充されており、約6000IU/mLのIL-2をさらに含む。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)が補充されており、培地中の2-メルカプトエタノールの最終濃度は、55μMである。
いくつかの実施形態では、無血清培地または合成培地には、約0.1mM~約10mM、0.5mM~約9mM、1mM~約8mM、2mM~約7mM、3mM~約6mM、または4mM~約5mMの濃度でグルタミン(すなわち、GlutaMAX(登録商標))が補充されている。いくつかの実施形態では、無血清培地または合成培地には、約2mMの濃度でグルタミン(すなわち、GlutaMAX(登録商標))が補充されている。
いくつかの実施形態では、無血清培地または合成培地には、約5mM~約150mM、10mM~約140mM、15mM~約130mM、20mM~約120mM、25mM~約110mM、30mM~約100mM、35mM~約95mM、40mM~約90mM、45mM~約85mM、50mM~約80mM、55mM~約75mM、60mM~約70mM、または約65mMの濃度で2-メルカプトエタノールが補充されている。いくつかの実施形態では、無血清培地または合成培地には、約55mMの濃度で2-メルカプトエタノールが補充されている。いくつかの実施形態では、培地中の2-メルカプトエタノールの最終濃度は、55μMである。
いくつかの実施形態では、参照により本明細書に組み込まれる国際PCT公開第WO/1998/030679号に記載されている合成培地は、本発明において有用である。その刊行物には、無血清真核細胞培養培地が記載されている。無血清真核細胞培養培地には、無血清培養下で細胞の成長を支持することができる無血清サプリメントを補充した基礎細胞培養培地が含まれる。無血清真核細胞培養培地サプリメントは、1つ以上のアルブミンまたはアルブミン代替物、1つ以上のアミノ酸、1つ以上のビタミン、1つ以上のトランスフェリンまたはトランスフェリン代替物、1つ以上の抗酸化剤、1つ以上のインスリンまたはインスリン代替物、1つ以上のコラーゲン前駆体、1つ以上の微量元素、及び1つ以上の抗生物質からなる群から選択される1つ以上の成分を含むか、またはそれらを組み合わせることによって取得される。いくつかの実施形態では、合成培地は、L-グルタミン、重炭酸ナトリウム、及び/またはベータ-メルカプトエタノールをさらに含む。いくつかの実施形態では、合成培地は、アルブミンまたはアルブミン代替物と、1つ以上のアミノ酸、1つ以上のビタミン、1つ以上のトランスフェリンまたはトランスフェリン代替物、1つ以上の抗酸化剤、1つ以上のインスリンまたはインスリン代替物、1つ以上のコラーゲン前駆体、及び1つ以上の微量元素からなる群から選択される1つ以上の成分と、を含む。いくつかの実施形態では、合成培地は、アルブミンと、グリシン、L-ヒスチジン、L-イソロイシン、L-メチオニン、L-フェニルアラニン、L-プロリン、L-ヒドロキシプロリン、L-セリン、L-スレオニン、L-トリプトファン、L-チロシン、L-バリン、チアミン、還元型グルタチオン、L-アスコルビン酸-2-リン酸塩、鉄飽和トランスフェリン、インスリン、ならびに微量元素部分Ag+、Al3+、Ba2+、Cd2+、Co2+、Cr3+、Ge4+、Se4+、Br、T、Mn2+、P、Si4+、V5+、Mo6+、Ni2+、Rb+、Sn2+、及びZr4+を含有する化合物からなる群から選択される1つ以上の成分と、を含む。いくつかの実施形態では、基礎細胞培地は、ダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)、最小必須培地(MEM)、イーグル基礎培地(BME)、RPMI1640、F-10、F-12、最小必須培地(αMEM)、グラスゴー最小必須培地(G-MEM)、RPMI成長培地、及びイスコフ改変ダルベッコ培地からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、合成培地中のグリシンの濃度は、約5~200mg/Lの範囲であり、L-ヒスチジンの濃度は、約5~250mg/Lであり、L-イソロイシンの濃度は、約5~300mg/Lであり、L-メチオニンの濃度は、約5~200mg/Lであり、L-フェニルアラニンの濃度は、約5~400mg/Lであり、L-プロリンの濃度は、約1~1000mg/Lであり、L-ヒドロキシプロリンの濃度は、約1~45mg/Lであり、L-セリンの濃度は、約1~250mg/Lであり、L-スレオニンの濃度は、約10~500mg/Lであり、L-トリプトファンの濃度は、約2~110mg/Lであり、L-チロシンの濃度は、約3~175mg/Lであり、L-バリンの濃度は、約5~500mg/Lであり、チアミンの濃度は、約1~20mg/Lであり、還元型グルタチオンの濃度は、約1~20mg/Lであり、L-アスコルビン酸-2-リン酸塩の濃度は、約1~200mg/Lであり、鉄飽和トランスフェリンの濃度は、約1~50mg/Lであり、インスリンの濃度は、約1~100mg/Lであり、亜セレン酸ナトリウムの濃度は、約0.000001~0.0001mg/Lであり、アルブミン(例えば、AlbuMAX(登録商標)I)の濃度は、約5000~50,000mg/Lである。
いくつかの実施形態では、合成培地中の非微量元素部分成分は、表4の「1×培地中の濃度範囲」という見出しの下の列にリストされた濃度範囲で存在する。他の実施形態では、合成培地中の非微量元素部分成分は、表4の「1×培地の好ましい実施形態」という見出しの下の列にリストされた最終濃度で存在する。他の実施形態では、合成培地は、無血清サプリメントを含む基礎細胞培地である。これらの実施形態のうちのいくつかでは、無血清サプリメントは、表4の「サプリメント中の好ましい実施形態」という見出しの下の列にリストされたタイプ及び濃度の非微量部分成分を含む。
いくつかの実施形態では、合成培地の浸透圧は、約260~350mOsmolである。いくつかの実施形態では、浸透圧は、約280~310mOsmolである。いくつかの実施形態では、合成培地には、最大約3.7g/L、または約2.2g/Lの重炭酸ナトリウムが補充されている。合成培地には、L-グルタミン(最終濃度約2mM)、1つ以上の抗生物質、非必須アミノ酸(NEAA、最終濃度約100μM)、2-メルカプトエタノール(最終濃度約100μM)がさらに補充されていてもよい。
いくつかの実施形態では、Smith,et al.,Clin Transl Immunology,4(1)2015(doi:10.1038/cti.2014.31)に記載の定義された培地が、本発明において有用である。簡潔には、RPMIまたはCTS(商標)OpTmizerを基礎細胞培地として使用し、0、2%、5%、または10%のいずれかのCTS(商標)Immune Cell Serum Replacementを補充した。
いくつかの実施形態では、第1及び/または第2のガス透過性容器内の細胞培地は、濾過されていない。濾過されていない細胞培地の使用は、細胞の数を拡張するために必要な手順を簡素化することができる。いくつかの実施形態では、第1及び/または第2のガス透過性容器内の細胞培地は、ベータ-メルカプトエタノール(BMEまたはβME、2-メルカプトエタノールとしても知られる、CAS60-24-2)を欠いている。
いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)のステップBに記載されるものなどのプロセスを含み、これは、REP前またはプライミングREPと称されることもあるものを含み得る)プロセスは、実施例及び図において考察されるように、1~8日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)のステップBに記載されるものなどのプロセスを含み、これは、REP前またはプライミングREPと称されることもあるものを含み得る)プロセスは、実施例及び図において考察されるように、2~8日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)のステップBに記載されるものなどのプロセスを含み、これは、REP前またはプライミングREPと称されることもあるものを含み得る)プロセスは、実施例及び図において考察されるように、3~8日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)のステップBに記載されるものなどのプロセスを含み、これは、REP前またはプライミングREPと称されることもあるものを含み得る)プロセスは、実施例及び図において考察されるように、4~8日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)のステップBに記載されるものなどのプロセスを含み、これは、REP前またはプライミングREPと称されることもあるものを含み得る)プロセスは、実施例及び図において考察されるように、5~8日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)のステップBに記載されるものなどのプロセスを含み、これは、REP前またはプライミングREPと称されることもあるものを含み得る)プロセスは、実施例及び図において考察されるように、6~8日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)のステップBに提供されるものなどのプロセスを含み、これは、REP前またはプライミングREPと称されることもあるものを含み得る)プロセスは、実施例及び図において考察されるように、7~8日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)のステップBに提供されるものなどのプロセスを含み、これは、REP前またはプライミングREPと称されることもあるものを含み得る)プロセスは、実施例及び図において考察されるように、8日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)のステップBに記載されるものなどのプロセスを含み、これは、REP前またはプライミングREPと称されることもあるものを含み得る)プロセスは、実施例及び図において考察されるように、1~7日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)のステップBに記載されるものなどのプロセスを含み、これは、REP前またはプライミングREPと称されることもあるものを含み得る)プロセスは、実施例及び図において考察されるように、2~7日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)のステップBに記載されるものなどのプロセスを含み、これは、REP前またはプライミングREPと称されることもあるものを含み得る)プロセスは、実施例及び図において考察されるように、3~7日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)のステップBに記載されるものなどのプロセスを含み、これは、REP前またはプライミングREPと称されることもあるものを含み得る)プロセスは、実施例及び図において考察されるように、4~7日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張(例えば、図8(特に、例えば図8B及び/または図8C)のステップBに記載されるものなどのプロセスを含み、これは、REP前またはプライミングREPと称されることもあるものを含み得る)プロセスは、実施例及び図において考察されるように、5~7日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)のステップBに記載されるものなどのプロセスを含み、これは、REP前またはプライミングREPと称されることもあるものを含み得る)プロセスは、実施例及び図において考察されるように、6~7日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)のステップBに提供されるものなどのプロセスを含み、これは、REP前またはプライミングREPと称されることもあるものを含み得る)プロセスは、実施例及び図において考察されるように、7日間である。
いくつかの実施形態では、プライミングによる第1のTIL拡張は、断片化が起こったとき及び/またはプライミングによる第1の拡張ステップが開始されたときから1日~8日間続行することができる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1のTIL拡張は、断片化が起こったとき及び/またはプライミングによる第1の拡張ステップが開始されたときから1日~7日間続行することができる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1のTIL拡張は、断片化が起こったとき及び/またはプライミングによる第1の拡張ステップが開始されたときから2日~8日間続行することができる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1のTIL拡張は、断片化が起こったとき及び/またはプライミングによる第1の拡張ステップが開始されたときから2日~7日間続行することができる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1のTIL拡張は、断片化が起こったとき及び/またはプライミングによる第1の拡張ステップが開始されたときから3日~8日間続行することができる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1のTIL拡張は、断片化が起こったとき及び/またはプライミングによる第1の拡張ステップが開始されたときから3日~7日間続行することができる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1のTIL拡張は、断片化が起こったとき及び/またはプライミングによる第1の拡張ステップが開始されたときから4日~8日間続行することができる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1のTIL拡張は、断片化が起こったとき及び/またはプライミングによる第1の拡張ステップが開始されたときから4日~7日間続行することができる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1のTIL拡張は、断片化が起こったとき及び/またはプライミングによる第1の拡張ステップが開始されたときから5日~8日間続行することができる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1のTIL拡張は、断片化が起こったとき及び/またはプライミングによる第1の拡張ステップが開始されたときから5日~7日間続行することができる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1のTIL拡張は、断片化が起こったとき及び/またはプライミングによる第1の拡張ステップが開始されたときから6日~8日間続行することができる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1のTIL拡張は、断片化が起こったとき及び/またはプライミングによる第1の拡張ステップが開始されたときから6日~7日間続行することができる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1のTIL拡張は、断片化が起こったとき及び/またはプライミングによる第1の拡張ステップが開始されたときから7日~8日間続行することができる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1のTIL拡張は、断片化が起こったとき及び/またはプライミングによる第1の拡張ステップが開始されたときから8日間続行することができる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1のTIL拡張は、断片化が起こったとき及び/またはプライミングによる第1の拡張ステップが開始されたときから7日間続行することができる。
いくつかの実施形態では、TILのプライミングによる第1の拡張は、1日、2日、3日、4日、5日、6日、7日、または8日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第1のTIL拡張は、1日~8日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第1のTIL拡張は、1日~7日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第1のTIL拡張は、2日~8日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第1のTIL拡張は、2日~7日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第1のTIL拡張は、3日~8日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第1のTIL拡張は、3日~7日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第1のTIL拡張は、4日~8日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第1のTIL拡張は、4日~7日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第1のTIL拡張は、5日~8日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第1のTIL拡張は、5日~7日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第1のTIL拡張は、6日~8日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第1のTIL拡張は、6日~7日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第1のTIL拡張は、7日~8日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第1のTIL拡張は、8日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第1のTIL拡張は、7日間続行することができる。
いくつかの実施形態では、IL-2、IL-7、IL-15、及び/またはIL-21の組み合わせは、プライミングによる第1の拡張中に組み合わせとして用いられる。いくつかの実施形態では、IL-2、IL-7、IL-15、及び/またはIL-21、ならびにそれらの任意の組み合わせは、例えば、図8(特に、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)による、ならびに本明細書に記載されるステップBプロセス中を含む、プライミングによる第1の拡張中に含まれ得る。いくつかの実施形態では、IL-2、IL-15、及びIL-21の組み合わせは、プライミングによる第1の拡張中に組み合わせとして用いられる。いくつかの実施形態では、IL-2、IL-15、及びIL-21、ならびにそれらの任意の組み合わせは、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)による、及び本明細書に記載されるステップBプロセス中に含まれ得る。
いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張、例えば、図8によるステップB(特に、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)は、閉鎖系バイオリアクターにおいて行われる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるように、閉鎖系がTIL拡張のために用いられる。いくつかの実施形態では、バイオリアクターが用いられる。いくつかの実施形態では、バイオリアクターが容器として用いられる。いくつかの実施形態では、用いられるバイオリアクターは、例えば、G-REX-10またはG-REX-100である。いくつかの実施形態では、用いられるバイオリアクターは、G-REX-100である。いくつかの実施形態では、用いられるバイオリアクターは、G-REX-10である。
1.フィーダー細胞及び抗原提示細胞
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるプライミングによる第1の拡張手順(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)からのステップBに記載されるもの、ならびにREP前またはプライミングREPと称されるものなどの拡張を含む))は、TIL拡張の開始時にフィーダー細胞(本明細書では「抗原提示細胞」とも称される)を必要とせず、むしろプライミングによる第1の拡張中に追加される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるプライミングによる第1の拡張手順(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)からのステップBに記載されるもの、ならびにREP前またはプライミングREPと称されるものなどの拡張を含む))は、TIL拡張の開始時にフィーダー細胞(本明細書では「抗原提示細胞」とも称される)を必要とせず、むしろ4~8日目の間の任意の時点でプライミングによる第1の拡張中に追加される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるプライミングによる第1の拡張手順(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)からのステップBに記載されるもの、ならびにREP前またはプライミングREPと称されるものなどの拡張を含む))は、TIL拡張の開始時にフィーダー細胞(本明細書では「抗原提示細胞」とも称される)を必要とせず、むしろ4~7日目の間の任意の時点でプライミングによる第1の拡張中に追加される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるプライミングによる第1の拡張手順(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)からのステップBに記載されるもの、ならびにREP前またはプライミングREPと称されるものなどの拡張を含む))は、TIL拡張の開始時にフィーダー細胞(本明細書では「抗原提示細胞」とも称される)を必要とせず、むしろ5~8日目の間の任意の時点でプライミングによる第1の拡張中に追加される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるプライミングによる第1の拡張手順(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)からのステップBに記載されるもの、ならびにREP前またはプライミングREPと称されるものなどの拡張を含む))は、TIL拡張の開始時にフィーダー細胞(本明細書では「抗原提示細胞」とも称される)を必要とせず、むしろ5~7日目の間の任意の時点でプライミングによる第1の拡張中に追加される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるプライミングによる第1の拡張手順(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)からのステップBに記載されるもの、ならびにREP前またはプライミングREPと称されるものなどの拡張を含む))は、TIL拡張の開始時にフィーダー細胞(本明細書では「抗原提示細胞」とも称される)を必要とせず、むしろ6~8日目の間の任意の時点でプライミングによる第1の拡張中に追加される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるプライミングによる第1の拡張手順(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)からのステップBに記載されるもの、ならびにREP前またはプライミングREPと称されるものなどの拡張を含む))は、TIL拡張の開始時にフィーダー細胞(本明細書では「抗原提示細胞」とも称される)を必要とせず、むしろ6~7日目の間の任意の時点でプライミングによる第1の拡張中に追加される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるプライミングによる第1の拡張手順(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)からのステップBに記載されるもの、ならびにREP前またはプライミングREPと称されるものなどの拡張を含む))は、TIL拡張の開始時にフィーダー細胞(本明細書では「抗原提示細胞」とも称される)を必要とせず、むしろ7または8日目の間の任意の時点でプライミングによる第1の拡張中に追加される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるプライミングによる第1の拡張手順(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)からのステップBに記載されるもの、ならびにREP前またはプライミングREPと称されるものなどの拡張を含む))は、TIL拡張の開始時にフィーダー細胞(本明細書では「抗原提示細胞」とも称される)を必要とせず、むしろ7日目の間の任意の時点でプライミングによる第1の拡張中に追加される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるプライミングによる第1の拡張手順(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)からのステップBに記載されるもの、ならびにREP前またはプライミングREPと称されるものなどの拡張を含む))は、TIL拡張の開始時にフィーダー細胞(本明細書では「抗原提示細胞」とも称される)を必要とせず、むしろ8日目の間の任意の時点でプライミングによる第1の拡張中に追加される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるプライミングによる第1の拡張手順(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)からのステップBに記載されるもの、ならびにREP前またはプライミングREPと称されるものなどの拡張を含む))は、TIL拡張の開始時にフィーダー細胞(本明細書では「抗原提示細胞」とも称される)を必要とせず、むしろプライミングによる第1の拡張中に追加される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるプライミングによる第1の拡張手順(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)からのステップBに記載されるもの、ならびにREP前またはプライミングREPと称されるものなどの拡張を含む))は、TIL拡張の開始時にフィーダー細胞(本明細書では「抗原提示細胞」とも称される)を必要とせず、むしろ4~8日目の間の任意の時点でプライミングによる第1の拡張中に追加される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるプライミングによる第1の拡張手順(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)からのステップBに記載されるもの、ならびにREP前またはプライミングREPと称されるものなどの拡張を含む))は、TIL拡張の開始時にフィーダー細胞(本明細書では「抗原提示細胞」とも称される)を必要とせず、むしろ4~7日目の間の任意の時点でプライミングによる第1の拡張中に追加される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるプライミングによる第1の拡張手順(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)からのステップBに記載されるもの、ならびにREP前またはプライミングREPと称されるものなどの拡張を含む))は、TIL拡張の開始時にフィーダー細胞(本明細書では「抗原提示細胞」とも称される)を必要とせず、むしろ5~8日目の間の任意の時点でプライミングによる第1の拡張中に追加される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるプライミングによる第1の拡張手順(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)からのステップBに記載されるもの、ならびにREP前またはプライミングREPと称されるものなどの拡張を含む))は、TIL拡張の開始時にフィーダー細胞(本明細書では「抗原提示細胞」とも称される)を必要とせず、むしろ5~7日目の間の任意の時点でプライミングによる第1の拡張中に追加される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるプライミングによる第1の拡張手順(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)からのステップBに記載されるもの、ならびにREP前またはプライミングREPと称されるものなどの拡張を含む))は、TIL拡張の開始時にフィーダー細胞(本明細書では「抗原提示細胞」とも称される)を必要とせず、むしろ6~8日目の間の任意の時点でプライミングによる第1の拡張中に追加される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるプライミングによる第1の拡張手順(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)からのステップBに記載されるもの、ならびにREP前またはプライミングREPと称されるものなどの拡張を含む))は、TIL拡張の開始時にフィーダー細胞(本明細書では「抗原提示細胞」とも称される)を必要とせず、むしろ6~7日目の間の任意の時点でプライミングによる第1の拡張中に追加される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるプライミングによる第1の拡張手順(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)からのステップBに記載されるもの、ならびにREP前またはプライミングREPと称されるものなどの拡張を含む))は、TIL拡張の開始時にフィーダー細胞(本明細書では「抗原提示細胞」とも称される)を必要とせず、むしろ7または8日目の間の任意の時点でプライミングによる第1の拡張中に追加される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるプライミングによる第1の拡張手順(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)からのステップBに記載されるもの、ならびにREP前またはプライミングREPと称されるものなどの拡張を含む))は、TIL拡張の開始時にフィーダー細胞(本明細書では「抗原提示細胞」とも称される)を必要とせず、むしろ7日目の間の任意の時点でプライミングによる第1の拡張中に追加される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるプライミングによる第1の拡張手順(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)からのステップBに記載されるもの、ならびにREP前またはプライミングREPと称されるものなどの拡張を含む))は、TIL拡張の開始時にフィーダー細胞(本明細書では「抗原提示細胞」とも称される)を必要とせず、むしろ8日目の間の任意の時点でプライミングによる第1の拡張中に追加される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のプライミングによる第1の拡張手順(例えば、図8(特に、例えば図8B)からのステップBに記載されるもの、ならびにREP前またはプライミングREPと称されるものなどの拡張を含む))は、TIL拡張の開始時及びプライミングによる第1の拡張中にフィーダー細胞(本明細書では「抗原提示細胞」とも称される)を必要する。多くの実施形態では、フィーダー細胞は、同種異系の健康な献血者由来の標準の全血単位から取得される末梢血単核細胞(PBMC)である。PBMCは、Ficoll-Paque勾配分離などの標準の方法を使用して取得される。いくつかの実施形態では、2.5×108のフィーダー細胞が、プライミングによる第1の拡張中に使用される。いくつかの実施形態では、容器当たり2.5×108のフィーダー細胞が、プライミングによる第1の拡張中に使用される。いくつかの実施形態では、GREX-10当たり2.5×108のフィーダー細胞が、プライミングによる第1の拡張中に使用される。いくつかの実施形態では、GREX-100当たり2.5×108のフィーダー細胞が、プライミングによる第1の拡張中に使用される。
一般に、同種異系PBMCは、放射線照射または熱処理のいずれかによって不活性化され、実施例に記載されるように、REP手順で使用され、これは、放射線照射された同種異系PBMCの複製無能力を評価するための例示的なプロトコルを提供する。
いくつかの実施形態では、14日目の総生細胞数が、プライミングによる第1の拡張の0日目に培養された初期の生細胞数よりも少ない場合、PBMCは、複製能力がないとみなされ、本明細書に記載のTIL拡張手順での使用が認められる。
いくつかの実施形態では、7日目のOKT3及びIL-2の存在下で培養された総生細胞数が、プライミングによる第1の拡張の0日目に培養された初期の生細胞数から増加しなかった場合、PBMCは、複製能力がないとみなされ、本明細書に記載のTIL拡張手順での使用が認められる。いくつかの実施形態では、PBMCは、30ng/mLのOKT3抗体及び3000IU/mLのIL-2の存在下で培養される。いくつかの実施形態では、PBMCは、30ng/mLのOKT3抗体及び6000IU/mLのIL-2の存在下で培養される。
いくつかの実施形態では、7日目のOKT3及びIL-2の存在下で培養された総生細胞数が、プライミングによる第1の拡張の0日目に培養された初期の生細胞数から増加しなかった場合、PBMCは、複製能力がないとみなされ、本明細書に記載のTIL拡張手順での使用が認められる。いくつかの実施形態では、PBMCは、5~60ng/mLのOKT3抗体及び1000~6000IU/mLのIL-2の存在下で培養される。いくつかの実施形態では、PBMCは、10~50ng/mLのOKT3抗体及び2000~5000IU/mLのIL-2の存在下で培養される。いくつかの実施形態では、PBMCは、20~40ng/mLのOKT3抗体及び2000~4000IU/mLのIL-2の存在下で培養される。いくつかの実施形態では、PBMCは、25~35ng/mLのOKT3抗体及び2500~3500IU/mLのIL-2の存在下で培養される。いくつかの実施形態では、PBMCは、30ng/mLのOKT3抗体及び6000IU/mLのIL-2の存在下で培養される。いくつかの実施形態では、PBMCは、15ng/mLのOKT3抗体及び3000IU/mLのIL-2の存在下で培養される。いくつかの実施形態では、PBMCは、15ng/mLのOKT3抗体及び6000IU/mLのIL-2の存在下で培養される。
いくつかの実施形態では、抗原提示フィーダー細胞は、PBMCである。いくつかの実施形態では、抗原提示フィーダー細胞は、人工抗原提示フィーダー細胞である。いくつかの実施形態では、第2の拡張におけるTILの抗原提示フィーダー細胞に対する比率は、約1:25、約1:50、約1:100、約1:125、約1:150、約1:175、約1:200、約1:225、約1:250、約1:275、約1:300、約1:325、約1:350、約1:375、約1:400、または約1:500である。いくつかの実施形態では、第2の拡張におけるTILの抗原提示フィーダー細胞に対する比率は、1:50~1:300である。いくつかの実施形態では、第2の増殖におけるTILの抗原提示フィーダー細胞に対する比率は、1:100~1:200である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のプライミングによる第1の拡張手順は、約2.5×108フィーダー細胞:約100×106TILの比を必要とする。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のプライミングによる第1の拡張手順は、約2.5×108フィーダー細胞:約50×106TILの比を必要とする。さらに別の実施形態では、本明細書に記載のプライミングによる第1の増殖手順は、約2.5×108フィーダー細胞:約25×106TILを必要とする。さらに別の実施形態では、本明細書に記載のプライミングによる第1の拡張には、約2.5×108のフィーダー細胞が必要である。さらに別の実施形態では、プライミングによる第1の増殖は、急速な第2の増殖で使用されるフィーダー細胞の数の4分の1、3分の1、12分の5、または半分を必要とする。
いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張における培地は、IL-2を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張における培地は、6000IU/mLのIL-2を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張における培地は、抗原提示フィーダー細胞を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張における培地は、容器当たり2.5×108の抗原提示フィーダー細胞を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張における培地は、OKT-3を含む。いくつかの実施形態では、培地は、容器当たり30ngのOKT-3を含む。いくつかの実施形態では、容器は、GREX100 MCSフラスコである。いくつかの実施形態では、培地は、6000IU/mLのIL-2、30ng/mLのOKT-3、及び2.5×108の抗原提示フィーダー細胞を含む。いくつかの実施形態では、培地は、容器当たり6000IU/mLのIL-2、30ng/mLのOKT-3、及び2.5×108の抗原提示フィーダー細胞を含む。いくつかの実施形態では、培地は、容器当たり500mLの培養培地及び2.5×108の抗原提示フィーダー細胞当たり15μgのOKT-3を含む。いくつかの実施形態では、培地は、容器当たり500mLの培養培地及び15μgのOKT-3を含む。いくつかの実施形態では、容器は、GREX100 MCSフラスコである。いくつかの実施形態では、培地は、500mLの培養培地、6000IU/mLのIL-2、30ng/mLのOKT-3、及び2.5×108の抗原提示フィーダー細胞を含む。いくつかの実施形態では、培地は、容器当たり500mLの培養培地、6000IU/mLのIL-2、15μgのOKT-3、及び2.5×108の抗原提示フィーダー細胞を含む。いくつかの実施形態では、培地は、容器当たり500mLの培養培地及び2.5×108の抗原提示フィーダー細胞当たり15μgのOKT-3を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のプライミングによる第1の拡張手順は、第2の拡張中にTILを超える過剰のフィーダー細胞を必要とする。多くの実施形態では、フィーダー細胞は、同種異系の健康な献血者由来の標準の全血単位から取得される末梢血単核細胞(PBMC)である。PBMCは、Ficoll-Paque勾配分離などの標準の方法を使用して取得される。いくつかの実施形態では、人工抗原提示(aAPC)細胞がPBMCの代わりに使用される。
一般に、同種異系PBMCは、放射線照射または熱処理のいずれかによって不活性化され、図及び実施例に記載される例示的な手順を含む、本明細書に記載のTIL拡張手順で使用される。
いくつかの実施形態では、人工抗原提示細胞は、PBMCの代替物として、またはPBMCと組み合わせて、プライミングによる第1の拡張において使用される。
2.サイトカイン
本明細書に記載の拡張方法は、一般に、当該技術分野で知られているように、高用量のサイトカイン、特にIL-2を含む培養培地を使用する。
本明細書に記載の拡張方法は、一般に、当該技術分野で知られているように、高用量のサイトカイン、特にIL-2を含む培養培地を使用する。
あるいは、国際公開第WO2015/189356号及び同第WO2015/189357号(参照によりそれらの全体が本明細書に明示的に組み込まれる)に一般に概説されているように、IL-2、IL-15、及びIL-21のうちの2つ以上の組み合わせで、TILのプライミングによる第1の拡張のためにサイトカインの組み合わせを使用することもさらに可能である。したがって、可能な組み合わせには、IL-2及びIL-15、IL-2及びIL-21、IL-15及びIL-21、ならびにIL-2、IL-15、及びIL-21が含まれ、後者は多くの実施形態で特に有用である。サイトカインの組み合わせの使用は、リンパ球、特にそこに記載されているようにT細胞の生成に特に有利に働く。表2を参照されたい。
いくつかの実施形態では、ステップBはまた、本明細書の他の箇所に記載されるように、OKT-3抗体またはムロモナブの、培養培地への添加を含み得る。いくつかの実施形態では、ステップBはまた、本明細書の他の箇所に記載されるように、4-1BBアゴニストの、培養培地への添加を含んでもよい。いくつかの実施形態では、ステップBはまた、本明細書の他の箇所に記載されるように、OX-40アゴニストの、培養培地への添加を含み得る。加えて、チアゾリジンジオン化合物などの増殖因子活性化受容体(PPAR)-ガンマアゴニストを含む、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマコアクチベーターI-アルファアゴニストなどの添加剤は、米国特許出願公開第US2019/0307796 A1号(この開示は参照により本明細書に組み込まれる)に記載されるように、ステップB中の培養培地で使用されてもよい。
C.ステップC:プライミングによる第1の拡張から急速な第2の拡張への移行
場合によっては、例えば図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に示されるようにステップBから取得されるTIL集団を含む、プライミングによる第1の拡張から取得されたバルクTIL母集団(REP前と称されることもある拡張を含み得る)は、急速な第2の拡張(これは、急速拡張プロトコル(REP)と称されることもある拡張を含み得る)に供され、次いで、以下で考察されるように凍結保存され得る。同様に、遺伝子修飾TILが療法に使用される場合、プライミングによる第1の拡張由来の拡張TIL集団または急速な第2の拡張由来の拡張TIL集団は、拡張ステップ前またはプライミングによる第1の拡張後及び急速な第2の拡張前に好適な治療のために遺伝子修飾に供され得る。
場合によっては、例えば図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に示されるようにステップBから取得されるTIL集団を含む、プライミングによる第1の拡張から取得されたバルクTIL母集団(REP前と称されることもある拡張を含み得る)は、急速な第2の拡張(これは、急速拡張プロトコル(REP)と称されることもある拡張を含み得る)に供され、次いで、以下で考察されるように凍結保存され得る。同様に、遺伝子修飾TILが療法に使用される場合、プライミングによる第1の拡張由来の拡張TIL集団または急速な第2の拡張由来の拡張TIL集団は、拡張ステップ前またはプライミングによる第1の拡張後及び急速な第2の拡張前に好適な治療のために遺伝子修飾に供され得る。
いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張から(例えば、図8(特に、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に示されるステップBから)取得されたTILは、選択のために表現型決定されるまで保管される。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張から(例えば、図8(特に、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に示されるステップBから)取得されたTILは保管されず、急速な第2の拡張に直接進む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張から取得されたTILは、プライミングによる第1の拡張後及び急速な第2の拡張前に凍結保存されない。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張から第2の拡張への移行は、腫瘍の断片化が起こったとき及び/またはプライミングによる第1の拡張ステップが開始されたときから約2日、3日、4日、5日、6日、7日、または8日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張から急速な第2の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び/またはプライミングによる第1の拡張ステップが開始されたときから約3日~7日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張から急速な第2の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び/またはプライミングによる第1の拡張ステップが開始されたときから約3日~8日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張から第2の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び/またはプライミングによる第1の拡張ステップが開始されたときから約4日~7日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張から第2の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び/またはプライミングによる第1の拡張ステップが開始されたときから約4日~8日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張から第2の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び/またはプライミングによる第1の拡張ステップが開始されたときから約5日~7日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張から第2の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び/またはプライミングによる第1の拡張ステップが開始されたときから約5日~8日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張から第2の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び/またはプライミングによる第1の拡張ステップが開始されたときから約6日~7日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張から第2の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び/またはプライミングによる第1の拡張ステップが開始されたときから約6日~8日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張から第2の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び/またはプライミングによる第1の拡張ステップが開始されたときから約7日~8日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張から第2の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び/またはプライミングによる第1の拡張ステップが開始されたときから約7日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張から第2の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び/またはプライミングによる第1の拡張ステップが開始されたときから約8日で起こる。
いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張から急速な第2の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び/またはプライミングによる第1の拡張ステップが開始されたときから1日、2日、3日、4日、5日、6日、7日、または8日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張から急速な第2の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び/またはプライミングによる第1の拡張ステップが開始されたときから1日~7日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張から急速な第2の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び/またはプライミングによる第1の拡張ステップが開始されたときから1日~8日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張から急速な第2の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び/またはプライミングによる第1の拡張ステップが開始されたときから2日~7日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張から急速な第2の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び/またはプライミングによる第1の拡張ステップが開始されたときから2日~8日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張から第2の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び/またはプライミングによる第1の拡張ステップが開始されたときから3日~7日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張から急速な第2の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び/またはプライミングによる第1の拡張ステップが開始されたときから3日~8日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張から急速な第2の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び/またはプライミングによる第1の拡張ステップが開始されたときから4日~7日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張から急速な第2の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び/またはプライミングによる第1の拡張ステップが開始されたときから4日~8日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張から急速な第2の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び/またはプライミングによる第1の拡張ステップが開始されたときから5日~7日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張から急速な第2の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び/またはプライミングによる第1の拡張ステップが開始されたときから5日~8日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張から急速な第2の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び/またはプライミングによる第1の拡張ステップが開始されたときから6日~7日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張から急速な第2の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び/またはプライミングによる第1の拡張ステップが開始されたときから6日~8日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張から急速な第2の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び/またはプライミングによる第1の拡張ステップが開始されたときから7日~8日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張から急速な第2の拡張への移行は、断片化が起こったとき、及び/またはプライミングによる第1の拡張ステップが開始されたときから7日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張から急速な第2の拡張への移行は、断片化が起こったとき、及び/またはプライミングによる第1の拡張ステップが開始されたときから8日で起こる。
いくつかの実施形態では、TILは、初期第1の拡張後、及び急速な第2の拡張前に保存されず、TILは、急速な第2の拡張に直接進行する(例えば、いくつかの実施形態では、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に示されるようにステップBからステップDへの移行中の保存がない)。いくつかの実施形態では、移行は、本明細書に記載されるように、閉鎖系内で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張由来のTILである第2のTIL集団は、移行期間なしで急速な第2の拡張に直接進む。
いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張から急速な第2の拡張への移行、例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)によるステップCは、閉鎖系バイオリアクター内で行われる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるように、閉鎖系がTIL拡張のために用いられる。いくつかの実施形態では、単一のバイオリアクターが用いられる。いくつかの実施形態では、用いられる単一のバイオリアクターは、例えば、GREX-10またはGREX-100である。いくつかの実施形態では、閉鎖系バイオリアクターは、単一のバイオリアクターである。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張から急速な第2の拡張への移行は、容器サイズのスケールアップを伴う。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張は、急速な第2の拡張よりも小さい容器内で行われる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張は、GREX-100内で行われ、急速な第2の拡張は、GREX-500内で行われる。
D.ステップD:急速な第2の拡張
いくつかの実施形態では、TIL細胞集団は、採取及びプライミングによる第1の拡張後、ステップA及びステップB、ならびに図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D))に示されるように、ステップCと称される移行後に数がさらに拡張される。このさらなる拡張は、本明細書では急速な第2の拡張または急速拡張と称され、これは、当該技術分野で概して急速拡張プロセス(急速拡張プロトコルまたはREP、ならびに図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)のステップDに示されるプロセス)と称される拡張プロセスを含み得る。急速な第2の拡張は、一般に、フィーダー細胞、サイトカイン源、及び抗CD3抗体を含む、いくつかの成分を含む培養培地を使用して、ガス透過性容器内で達成される。いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張開始の1日、2日、3日、または4日後(すなわち、Gen3プロセス全体の8、9、10、または11日目)に、TILは、より大容量の容器に移される。
いくつかの実施形態では、TIL細胞集団は、採取及びプライミングによる第1の拡張後、ステップA及びステップB、ならびに図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D))に示されるように、ステップCと称される移行後に数がさらに拡張される。このさらなる拡張は、本明細書では急速な第2の拡張または急速拡張と称され、これは、当該技術分野で概して急速拡張プロセス(急速拡張プロトコルまたはREP、ならびに図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)のステップDに示されるプロセス)と称される拡張プロセスを含み得る。急速な第2の拡張は、一般に、フィーダー細胞、サイトカイン源、及び抗CD3抗体を含む、いくつかの成分を含む培養培地を使用して、ガス透過性容器内で達成される。いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張開始の1日、2日、3日、または4日後(すなわち、Gen3プロセス全体の8、9、10、または11日目)に、TILは、より大容量の容器に移される。
いくつかの実施形態では、TILの急速な第2の拡張(REPと称されることもある拡張、ならびに図8(特に、例えば図8A及び/または図B及び/または図8C及び/または図8D)のステップDに示されるプロセスを含み得る)は、当業者に知られている任意のTILフラスコまたは容器を使用して行うことができる。いくつかの実施形態では、第2のTIL拡張は、急速な第2の拡張の開始後、1日、2日、3日、4日、5日、6日、7日、8日、9日、または10日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第2のTIL拡張は、急速な第2の拡張の開始後、約1日~約9日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第2のTIL拡張は、急速な第2の拡張の開始後、約1日~約10日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第2のTIL拡張は、急速な第2の拡張の開始後、約2日~約9日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第2のTIL拡張は、急速な第2の拡張の開始後、約2日~約10日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第2のTIL拡張は、急速な第2の拡張の開始後、約3日~約9日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第2のTIL拡張は、急速な第2の拡張の開始後、約3日~約10日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第2のTIL拡張は、急速な第2の拡張の開始後、約4日~約9日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第2のTIL拡張は、急速な第2の拡張の開始後、約4日~約10日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第2のTIL拡張は、急速な第2の拡張の開始後、約5日~約9日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第2のTIL拡張は、急速な第2の拡張の開始後、約5日~約10日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第2のTIL拡張は、急速な第2の拡張の開始後、約6日~約9日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第2のTIL拡張は、急速な第2の拡張の開始後、約6日~約10日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第2のTIL拡張は、急速な第2の拡張の開始後、約7日~約9日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第2のTIL拡張は、急速な第2の拡張の開始後、約7日~約10日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第2のTIL拡張は、急速な第2の拡張の開始後、約8日~約9日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第2のTIL拡張は、急速な第2の拡張の開始後、約8日~約10日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第2のTIL拡張は、急速な第2の拡張の開始後、約9日~約10日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第2のTIL拡張は、急速な第2の拡張の開始後、約1日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第2のTIL拡張は、急速な第2の拡張の開始後、約2日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第2のTIL拡張は、急速な第2の拡張の開始後、約3日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第2のTIL拡張は、急速な第2の拡張の開始後、約4日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第2のTIL拡張は、急速な第2の拡張の開始後、約5日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第2のTIL拡張は、急速な第2の拡張の開始後、約6日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第2のTIL拡張は、急速な第2の拡張の開始後、約7日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第2のTIL拡張は、急速な第2の拡張の開始後、約8日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第2のTIL拡張は、急速な第2の拡張の開始後、約9日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第2のTIL拡張は、急速な第2の拡張の開始後、約10日間続行することができる。
いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張は、本開示の方法(例えば、REPと称される拡張、ならびに図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)のステップDに示されるプロセスを含む)を使用して、ガス透過性容器内で行うことができる。いくつかの実施形態では、TILは、IL-2、OKT-3、及びフィーダー細胞(本明細書では「抗原提示細胞」とも称される)の存在下での急速な第2の拡張において拡張される。いくつかの実施形態では、TILは、IL-2、OKT-3、及びフィーダー細胞の存在下での急速な第2の拡張において拡張され、フィーダー細胞は、プライミングによる第1の拡張において存在するフィーダー細胞の濃度の2倍、2.4倍、2.5倍、3倍、3.5倍、または4倍である最終濃度まで追加される。例えば、TILは、インターロイキン-2(IL-2)またはインターロイキン-15(IL-15)の存在下で非特異的T細胞受容体刺激を使用して、急速に拡張され得る。非特異的T細胞受容体刺激は、例えば、抗CD3抗体、例えば約30ng/mLのOKT3、マウスモノクローナル抗CD3抗体(Ortho-McNeil,Raritan,NJもしくはMiltenyi Biotech,Auburn,CAから市販)またはUHCT-1(BioLegend,San Diego,CA,USAから市販)を含み得る。TILは、がんのエピトープ(複数可)などの抗原性部分を含む、第2の拡張中に1つ以上の抗原を含むことによって、インビトロでTILのさらなる刺激を誘導するように拡張することができ、これは、ベクター、例えば、ヒト白血球抗原A2(HLA-A2)結合ペプチド、例えば、0.3μM MART-1:26-35(27L)またはgpl00:209-217(210M)から、任意選択で300IU/mLのIL-2またはIL-15などのT細胞成長因子の存在下で任意で発現され得る。他の好適な抗原には、例えば、NY-ESO-1、TRP-1、TRP-2、チロシナーゼがん抗原、MAGE-A3、SSX-2、及びVEGFR2、またはそれらの抗原性部分が含まれ得る。TILは、HLA-A2を発現する抗原提示細胞にパルスされたがんの同じ抗原(複数可)で再刺激することによっても急速に拡張され得る。あるいは、TILは、例えば、例として放射線照射された自己リンパ球または放射線照射されたHLA-A2+同種異系リンパ球及びIL-2でさらに再刺激され得る。いくつかの実施形態では、再刺激は、第2の拡張の一部として起こる。いくつかの実施形態では、第2の拡張は、放射線照射された自己リンパ球の存在下で、または放射線照射されたHLA-A2+同種異系リンパ球及びIL-2を用いて起こる。
いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、IL-2さらに含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約3000IU/mLのIL-2を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約1000IU/mL、約1500IU/mL、約2000IU/mL、約2500IU/mL、約3000IU/mL、約3500IU/mL、約4000IU/mL、約4500IU/mL、約5000IU/mL、約5500IU/mL、約6000IU/mL、約6500IU/mL、約7000IU/mL、約7500IU/mL、または約8000IU/mLのIL-2を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、1000~2000IU/mL、2000~3000IU/mL、3000~4000IU/mL、4000~5000IU/mL、5000~6000IU/mL、6000~7000IU/mL、7000~8000IU/mL、または8000IU/mLのIL-2を含む。
いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、OKT-3抗体を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約30ng/mLのOKT-3抗体を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約0.1ng/mL、約0.5ng/mL、約1ng/mL、約2.5ng/mL、約5ng/mL、約7.5ng/mL、約10ng/mL、約15ng/mL、約20ng/mL、約25ng/mL、約30ng/mL、約35ng/mL、約40ng/mL、約50ng/mL、約60ng/mL、約70ng/mL、約80ng/mL、約90ng/mL、約100ng/mL、約200ng/mL、約500ng/mL、及び約1μg/mLのOKT-3抗体を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、0.1ng/mL~1ng/mL、1ng/mL~5ng/mL、5ng/mL~10ng/mL、10ng/mL~20ng/mLの間、20ng/mL~30ng/mL、30ng/mL~40ng/mL、40ng/mL~50ng/mL、及び50ng/mL~100ng/mLのOKT-3抗体を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、15ng/mL~30ng/mLのOKT-3抗体を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、30ng/mL~60ng/mLのOKT-3抗体を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約30ng/mLのOKT-3を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約60ng/mLのOKT-3を含む。いくつかの実施形態では、OKT-3抗体は、ムロモナブである。
いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張における培地は、IL-2を含む。いくつかの実施形態では、培地は、6000IU/mLのIL-2を含む。いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張における培地は、抗原提示フィーダー細胞を含む。いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張における培地は、容器当たり7.5×108の抗原提示フィーダー細胞を含む。いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張における培地は、OKT-3を含む。いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張培地中に、容器当たり500mLの培養培地及び30μgのOKT-3を含む。いくつかの実施形態では、容器は、GREX100 MCSフラスコである。いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張培地中に、6000IU/mLのIL-2、60ng/mLのOKT-3、及び7.5×108の抗原提示フィーダー細胞を含む。いくつかの実施形態では、培地は、容器当たり500mLの培養培地、6000IU/mLのIL-2、30μgのOKT-3、及び7.5×108の抗原提示フィーダー細胞を含む。
いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張における培地は、IL-2を含む。いくつかの実施形態では、培地は、6000IU/mLのIL-2を含む。いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張における培地は、抗原提示フィーダー細胞を含む。いくつかの実施形態では、培地は、容器当たり5×108~7.5×108の抗原提示フィーダー細胞を含む。いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張における培地は、OKT-3を含む。いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張における培地は、容器当たり500mLの培養培地及び30μgのOKT-3を含む。いくつかの実施形態では、容器は、GREX100 MCSフラスコである。いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張における培地は、6000IU/mLのIL-2、60ng/mLのOKT-3、及び5×108~7.5×108の抗原提示フィーダー細胞を含む。いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張における培地は、容器当たり500mLの培養培地、ならびに6000IU/mLのIL-2、30μgのOKT-3、及び5×108~7.5×108の抗原提示フィーダー細胞を含む。
いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、細胞培養培地中に1つ以上のTNFRSFアゴニストを含む。いくつかの実施形態では、TNFRSFアゴニストは、4-1BBアゴニストを含む。いくつかの実施形態では、TNFRSFアゴニストは4-1BBアゴニストであり、4-1BBアゴニストは、ウレルマブ、ウトミルマブ、EU-101、融合タンパク質、ならびにそれらの断片、誘導体、バリアント、バイオシミラー、及び組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、TNFRSFアゴニストは、0.1μg/mL~100μg/mLの細胞培養培地中濃度を達成するのに十分な濃度で追加される。いくつかの実施形態では、TNFRSFアゴニストは、20μg/mL~40μg/mLの細胞培養培地中濃度を達成するのに十分な濃度で追加される。
いくつかの実施形態では、1つ以上のTNFRSFアゴニストに加えて、細胞培養培地は、IL-2を約3000IU/mLの初期濃度で、及びOKT-3を約30ng/mLの初期濃度でさらに含み、1つ以上のTNFRSFアゴニストが、4-1BBアゴニストを含む。
いくつかの実施形態では、IL-2、IL-7、IL-15、及び/またはIL-21の組み合わせは、第2の拡張中に組み合わせとして用いられる。いくつかの実施形態では、IL-2、IL-7、IL-15、及び/またはIL-21、ならびにそれらの任意の組み合わせは、例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)による、ならびに本明細書に記載されるステップDプロセス中を含む、第2の拡張中に含まれ得る。いくつかの実施形態では、IL-2、IL-15、及びIL-21の組み合わせは、第2の拡張中に組み合わせとして用いられる。いくつかの実施形態では、IL-2、IL-15、及びIL-21、ならびにそれらの任意の組み合わせは、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)による、及び本明細書に記載されるステップDプロセス中に含まれ得る。
いくつかの実施形態では、第2の拡張は、IL-2、OKT-3、抗原提示フィーダー細胞、及び任意でTNFRSFアゴニストを含む補充された細胞培養培地において実施され得る。いくつかの実施形態では、第2の拡張は、補充された細胞培養培地中で起こる。いくつかの実施形態では、補充された細胞培養培地は、IL-2、OKT-3、及び抗原提示フィーダー細胞を含む。いくつかの実施形態では、第2の細胞培養培地は、IL-2、OKT-3、及び抗原提示細胞(APC、抗原提示フィーダー細胞とも称される)を含む。いくつかの実施形態では、第2の拡張は、IL-2、OKT-3、及び抗原提示フィーダー細胞(すなわち、抗原提示細胞)を含む細胞培養培地中で起こる。
いくつかの実施形態では、第2の拡張培養培地は、約500IU/mLのIL-15、約400IU/mLのIL-15、約300IU/mLのIL-15、約200IU/mLのIL-15、約180IU/mLのIL-15、約160IU/mLのIL-15、約140IU/mLのIL-15、約120IU/mLのIL-15、または約100IU/mLのIL-15を含む。いくつかの実施形態では、第2の拡張培養培地は、約500IU/mLのIL-15~約100IU/mLのIL-15を含む。いくつかの実施形態では、第2の拡張培養培地は、約400IU/mLのIL-15~約100IU/mLのIL-15を含む。いくつかの実施形態では、第2の拡張培養培地は、約300IU/mLのIL-15~約100IU/mLのIL-15を含む。いくつかの実施形態では、第2の拡張培養培地は、約200IU/mLのIL-15を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約180IU/mLのIL-15を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、IL-15をさらに含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約180IU/mLのIL-15を含む。
いくつかの実施形態では、第2の拡張培養培地は、約20IU/mLのIL-21、約15IU/mLのIL-21、約12IU/mLのIL-21、約10IU/mLのIL-21、約5IU/mLのIL-21、約4IU/mLのIL-21、約3IU/mLのIL-21、約2IU/mLのIL-21、約1IU/mLのIL-21、または約0.5IU/mLのIL-21を含む。いくつかの実施形態では、第2の拡張培養培地は、約20IU/mLのIL-21~約0.5IU/mLのIL-21を含む。いくつかの実施形態では、第2の拡張培養培地は、約15IU/mLのIL-21~約0.5IU/mLのIL-21を含む。いくつかの実施形態では、第2の拡張培養培地は、約12IU/mLのIL-21~約0.5IU/mLのIL-21を含む。いくつかの実施形態では、第2の拡張培養培地は、約10IU/mLのIL-21~約0.5IU/mLのIL-21を含む。いくつかの実施形態では、第2の拡張培養培地は、約5IU/mLのIL-21~約1IU/mLのIL-21を含む。いくつかの実施形態では、第2の拡張培養培地は、約2IU/mLのIL-21を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約1IU/mLのIL-21を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約0.5IU/mLのIL-21を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、IL-21をさらに含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約1IU/mLのIL-21を含む。
いくつかの実施形態では、抗原提示フィーダー細胞(APC)は、PBMCである。いくつかの実施形態では、急速な拡張及び/または第2の拡張におけるTILのPBMC及び/または抗原提示細胞に対する比率は、約1:10、約1:15、約1:20、約1:25、約1:30、約1:35、約1:40、約1:45、約1:50、約1:75、約1:100、約1:125、約1:150、約1:175、約1:200、約1:225、約1:250、約1:275、約1:300、約1:325、約1:350、約1:375、約1:400、または約1:500である。いくつかの実施形態では、急速な拡張及び/または第2の拡張におけるTILのPBMCに対する比率は、1:50~1:300である。いくつかの実施形態では、急速拡張及び/または第2の拡張におけるTILのPBMCに対する比は、1:100~1:200である。
いくつかの実施形態では、REP及び/または急速な第2の拡張は、バルクTILを100倍または200倍過剰の不活性化フィーダー細胞と混合してフラスコ内で行われ、フィーダー細胞濃度は、150mL培地中のプライミングによる第1の拡張、30ng/mLのOKT3抗CD3抗体及び6000IU/mLのIL-2におけるフィーダー細胞濃度の少なくとも1.1倍(1.1×)、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、1.6倍、1.7倍、1.8倍、1.8倍、2倍、2.1倍、2.2倍、2.3倍、2.4倍、2.5倍、2.6倍、2.7倍、2.8倍、2.9倍、3.0倍、3.1倍、3.2倍、3.3倍、3.4倍、3.5倍、3.6倍、3.7倍、3.8倍、3.9倍または4.0倍である。培地交換(一般に、使用済み培地の3分の2の吸引及び等量の新鮮な培地との交換による、3分の2培地交換)は、細胞が代替の成長チャンバに移されるまで行われる。代替の成長チャンバには、以下でより完全に考察されるように、G-REXフラスコ及びガス透過性容器が含まれる。
いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張(REPプロセスと称されるプロセスを含み得る)は、実施例及び図で論じられるように、7~9日間である。いくつかの実施形態では、第2の拡張は、7日間である。いくつかの実施形態では、第2の拡張は、8日間である。いくつかの実施形態では、第2の拡張は、9日間である。
いくつかの実施形態では、第2の拡張(REPと称される拡張、ならびに図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)のステップDで参照される拡張を含み得る)は、100cmのガス透過性シリコン底部(G-REX100、Wilson Wolf Manufacturing Corporation,New Brighton,MN,USAから市販)を有する500mL容量のガス透過性フラスコ内で行うことができる。5×106または10×106TILは、5%ヒトAB血清、3000IU/mLのIL-2、及び30ng/mLの抗CD3(OKT3)で補充された400mLの50/50培地中でPBMCとともに培養され得る。G-REX100フラスコは、5%CO2中37℃でインキュベートされ得る。5日目に、250mLの上清が除去され、遠心分離ボトルに入れられ、1500rpm(491×g)で10分間遠心分離される。TILペレットが、5%ヒトAB血清、6000IU/mLのIL-2を含む150mLの新鮮な培地で再懸濁され、元のGREX-100フラスコに戻し追加され得る。TILがGREX-100フラスコで連続して拡張される場合、10日目または11日目に、TILは、GREX-500などのより大きいフラスコに移され得る。培養14日目に、細胞が採取され得る。培養15日目に、細胞が採取され得る。培養16日目に、細胞が採取され得る。いくつかの実施形態では、培地交換は、細胞が代替の成長チャンバに移されるまで行われる。いくつかの実施形態では、培地の3分の2は、使用済み培地の吸引及び等体積の新鮮な培地との交換によって交換される。いくつかの実施形態では、代替の成長チャンバには、以下でより完全に考察されるように、GREXフラスコ及びガス透過性容器が含まれる。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される拡張プロセスで使用される培地は、無血清培地または合成培地である。いくつかの実施形態では、無血清または合成培地は、基礎細胞培地ならびに血清サプリメント及び/または血清代替物を含む。いくつかの実施形態では、無血清または合成培地は、血清含有培地のロット間の変動に部分的に起因する実験変動を防止及び/または減少させるために使用される。
いくつかの実施形態では、無血清または合成培地は、基礎細胞培地ならびに血清サプリメント及び/または血清代替物を含む。いくつかの実施形態では、基礎細胞培地には、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion Basal Medium、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-Cell Expansion SFM、CTS(商標)AIM-V Medium、CTS(商標)AIM-V SFM、LymphoONE(商標)T-Cell Expansion Xeno-Free Medium、ダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)、最小必須培地(MEM)、イーグル基礎培地(BME)、RPMI1640、F-10、F-12、最小必須培地(αMEM)、グラスゴー最小必須培地(G-MEM)、RPMI成長培地、及びイスコフ改変ダルベッコ培地が含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、血清サプリメントまたは血清代替物には、CTS(商標)OpTmizer T-Cell Expansion Serum Supplement、CTS(商標)Immune Cell Serum Replacement、1つ以上のアルブミンまたはアルブミン代用物、1つ以上のアミノ酸、1つ以上のビタミン、1つ以上のトランスフェリンまたはトランスフェリン代用物、1つ以上の抗酸化剤、1つ以上のインスリンまたはインスリン代用物、1つ以上のコラーゲン前駆体、1つ以上の抗生物質、及び1つ以上の微量元素のうちの1つ以上が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、合成培地は、アルブミンと、グリシン、L-ヒスチジン、L-イソロイシン、L-メチオニン、L-フェニルアラニン、L-プロリン、L-ヒドロキシプロリン、L-セリン、L-スレオニン、L-トリプトファン、L-チロシン、L-バリン、チアミン、還元型グルタチオン、L-アスコルビン酸-2-リン酸塩、鉄飽和トランスフェリン、インスリン、ならびに微量元素部分Ag+、Al3+、Ba2+、Cd2+、Co2+、Cr3+、Ge4+、Se4+、Br、T、Mn2+、P、Si4+、V5+、Mo6+、Ni2+、Rb+、Sn2+、及びZr4+を含有する化合物からなる群から選択される1つ以上の成分と、を含む。いくつかの実施形態では、合成培地は、L-グルタミン、重炭酸ナトリウム、及び/または2-メルカプトエタノールをさらに含む。
いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Immune Cell Serum Replacementは、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion Basal Medium、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFM、CTS(商標)AIM-V Medium、CST(商標)AIM-V SFM、LymphoONE(商標)T-Cell Expansion Xeno-Free Medium、ダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)、最小必須培地(MEM)、イーグル基礎培地(BME)、RPMI1640、F-10、F-12、最小必須培地(αMEM)、グラスゴー最小必須培地(G-MEM)、RPMI成長培地、及びイスコフ改変ダルベッコ培地を含むが、これらに限定されない、従来の成長培地とともに使用される。
いくつかの実施形態では、無血清または合成培地中の総血清代替物濃度(vol%)は、総無血清または合成培地の約1体積%、2体積%、3体積%、4体積%、5体積%、6体積%、7体積%、8体積%、9体積%、10体積%、11体積%、12体積%、13体積%、14体積%、15体積%、16体積%、17体積%、18体積%、19体積%、または20体積%である。いくつかの実施形態では、総血清代替物濃度は、無血清または合成培地の総体積の約3%である。いくつかの実施形態では、総血清代替物濃度は、無血清または合成培地の総体積の約5%である。いくつかの実施形態では、総血清代替物濃度は、無血清または合成培地の総体積の約10%である。
いくつかの実施形態では、無血清または合成培地は、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFM(ThermoFisher Scientific)である。CTS(商標)OpTmizer(商標)のいずれの製剤も、本発明において有用である。CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMは、1LのCTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion Basal Mediumと、26mLのCTS(商標)OpTmizer(商標)T-Cell Expansion Supplementとの組み合わせであり、これらは使用前に一緒に混合される。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、55mMの2-メルカプトエタノールとともに、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)が補充されている。
いくつかの実施形態では、合成培地は、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFM(ThermoFisher Scientific)である。CTS(商標)OpTmizer(商標)のいずれの製剤も、本発明において有用である。CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMは、1LのCTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion Basal Mediumと、26mLのCTS(商標)OpTmizer(商標)T-Cell Expansion Supplementとの組み合わせであり、これらは使用前に一緒に混合される。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、55mMの2-メルカプトエタノールとともに、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)が補充されている。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)、55mMの2-メルカプトエタノール、及び2mMのL-グルタミンが補充されている。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)、55mMの2-メルカプトエタノール、及び2mMのL-グルタミンが補充されており、約1000IU/mL~約8000IU/mLのIL-2をさらに含む。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)、55mMの2-メルカプトエタノール、及び2mMのL-グルタミンが補充されており、約3000IU/mLのIL-2をさらに含む。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)、55mMの2-メルカプトエタノール、及び2mMのL-グルタミンが補充されており、約6000IU/mLのIL-2をさらに含む。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)及び55mMの2-メルカプトエタノールが補充されており、約1000IU/mL~約8000IU/mLのIL-2をさらに含む。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)及び55mMの2-メルカプトエタノールが補充されており、約3000IU/mLのIL-2をさらに含む。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)及び55mMの2-メルカプトエタノールが補充されており、約1000IU/mL~約6000IU/mLのIL-2をさらに含む。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)及び約2mMのグルタミンが補充されており、約1000IU/mL~約8000IU/mLのIL-2をさらに含む。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)及び約2mMのグルタミンが補充されており、約3000IU/mLのIL-2をさらに含む。いくつかの実施形態では、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-cell Expansion SFMには、約3%のCTS(商標)Immune Cell Serum Replacement(SR)(ThermoFisher Scientific)及び約2mMのグルタミンが補充されており、約6000IU/mLのIL-2をさらに含む。
いくつかの実施形態では、無血清培地または合成培地には、約0.1mM~約10mM、0.5mM~約9mM、1mM~約8mM、2mM~約7mM、3mM~約6mM、または4mM~約5mMの濃度でグルタミン(すなわち、GlutaMAX(登録商標))が補充されている。いくつかの実施形態では、無血清培地または合成培地には、約2mMの濃度でグルタミン(すなわち、GlutaMAX(登録商標))が補充されている。
いくつかの実施形態では、無血清培地または合成培地には、約5mM~約150mM、10mM~約140mM、15mM~約130mM、20mM~約120mM、25mM~約110mM、30mM~約100mM、35mM~約95mM、40mM~約90mM、45mM~約85mM、50mM~約80mM、55mM~約75mM、60mM~約70mM、または約65mMの濃度で2-メルカプトエタノールが補充されている。いくつかの実施形態では、無血清培地または合成培地には、約55mMの濃度で2-メルカプトエタノールが補充されている。
いくつかの実施形態では、国際特許出願公開第WO/1998/030679号及び米国特許出願公開第US2002/0076747 A1号(参照により本明細書に組み込まれる)に記載される定義された媒体は、本発明において有用である。その刊行物には、無血清真核細胞培養培地が記載されている。無血清真核細胞培養培地には、無血清培養下で細胞の成長を支持することができる無血清サプリメントを補充した基礎細胞培養培地が含まれる。無血清真核細胞培養培地サプリメントは、1つ以上のアルブミンまたはアルブミン代替物、1つ以上のアミノ酸、1つ以上のビタミン、1つ以上のトランスフェリンまたはトランスフェリン代替物、1つ以上の抗酸化剤、1つ以上のインスリンまたはインスリン代替物、1つ以上のコラーゲン前駆体、1つ以上の微量元素、及び1つ以上の抗生物質からなる群から選択される1つ以上の成分を含むか、またはそれらを組み合わせることによって取得される。いくつかの実施形態では、合成培地は、L-グルタミン、重炭酸ナトリウム、及び/またはベータ-メルカプトエタノールをさらに含む。いくつかの実施形態では、合成培地は、アルブミンまたはアルブミン代替物と、1つ以上のアミノ酸、1つ以上のビタミン、1つ以上のトランスフェリンまたはトランスフェリン代替物、1つ以上の抗酸化剤、1つ以上のインスリンまたはインスリン代替物、1つ以上のコラーゲン前駆体、及び1つ以上の微量元素からなる群から選択される1つ以上の成分と、を含む。いくつかの実施形態では、合成培地は、アルブミンと、グリシン、L-ヒスチジン、L-イソロイシン、L-メチオニン、L-フェニルアラニン、L-プロリン、L-ヒドロキシプロリン、L-セリン、L-スレオニン、L-トリプトファン、L-チロシン、L-バリン、チアミン、還元型グルタチオン、L-アスコルビン酸-2-リン酸塩、鉄飽和トランスフェリン、インスリン、ならびに微量元素部分Ag+、Al3+、Ba2+、Cd2+、Co2+、Cr3+、Ge4+、Se4+、Br、T、Mn2+、P、Si4+、V5+、Mo6+、Ni2+、Rb+、Sn2+、及びZr4+を含有する化合物からなる群から選択される1つ以上の成分と、を含む。いくつかの実施形態では、基礎細胞培地は、ダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)、最小必須培地(MEM)、イーグル基礎培地(BME)、RPMI1640、F-10、F-12、最小必須培地(αMEM)、グラスゴー最小必須培地(G-MEM)、RPMI成長培地、及びイスコフ改変ダルベッコ培地からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、合成培地中のグリシンの濃度は、約5~200mg/Lの範囲であり、L-ヒスチジンの濃度は、約5~250mg/Lであり、L-イソロイシンの濃度は、約5~300mg/Lであり、L-メチオニンの濃度は、約5~200mg/Lであり、L-フェニルアラニンの濃度は、約5~400mg/Lであり、L-プロリンの濃度は、約1~1000mg/Lであり、L-ヒドロキシプロリンの濃度は、約1~45mg/Lであり、L-セリンの濃度は、約1~250mg/Lであり、L-スレオニンの濃度は、約10~500mg/Lであり、L-トリプトファンの濃度は、約2~110mg/Lであり、L-チロシンの濃度は、約3~175mg/Lであり、L-バリンの濃度は、約5~500mg/Lであり、チアミンの濃度は、約1~20mg/Lであり、還元型グルタチオンの濃度は、約1~20mg/Lであり、L-アスコルビン酸-2-リン酸塩の濃度は、約1~200mg/Lであり、鉄飽和トランスフェリンの濃度は、約1~50mg/Lであり、インスリンの濃度は、約1~100mg/Lであり、亜セレン酸ナトリウムの濃度は、約0.000001~0.0001mg/Lであり、アルブミン(例えば、AlbuMAX(登録商標)I)の濃度は、約5000~50,000mg/Lである。
いくつかの実施形態では、合成培地中の非微量元素部分成分は、表4の「1×培地中の濃度範囲」という見出しの下の列にリストされた濃度範囲で存在する。他の実施形態では、合成培地中の非微量元素部分成分は、表4の「1×培地の好ましい実施形態」という見出しの下の列にリストされた最終濃度で存在する。他の実施形態では、合成培地は、無血清サプリメントを含む基礎細胞培地である。これらの実施形態のうちのいくつかでは、無血清サプリメントは、表4の「サプリメント中の好ましい実施形態」という見出しの下の列にリストされたタイプ及び濃度の非微量部分成分を含む。
いくつかの実施形態では、合成培地の浸透圧は、約260~350mOsmolである。いくつかの実施形態では、浸透圧は、約280~310mOsmolである。いくつかの実施形態では、合成培地には、最大約3.7g/L、または約2.2g/Lの重炭酸ナトリウムが補充されている。合成培地には、L-グルタミン(最終濃度約2mM)、1つ以上の抗生物質、非必須アミノ酸(NEAA、最終濃度約100μM)、2-メルカプトエタノール(最終濃度約100μM)がさらに補充されていてもよい。
いくつかの実施形態では、Smith,et al.,Clin Transl Immunology,4(1)2015(doi:10.1038/cti.2014.31)に記載の定義された培地が、本発明において有用である。簡潔には、RPMIまたはCTS(商標)OpTmizerを基礎細胞培地として使用し、0、2%、5%、または10%のいずれかのCTS(商標)Immune Cell Serum Replacementを補充した。
いくつかの実施形態では、第1及び/または第2のガス透過性容器内の細胞培地は、濾過されていない。濾過されていない細胞培地の使用は、細胞の数を拡張するために必要な手順を簡素化することができる。いくつかの実施形態では、第1及び/または第2のガス透過性容器内の細胞培地は、ベータ-メルカプトエタノール(BMEまたはβME、2-メルカプトエタノールとしても知られる、CAS60-24-2)を欠いている。
いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張(REPと称される拡張を含む)が行われ、優れた腫瘍反応性のためにTILが選択されるステップをさらに含む。当該技術分野で知られている任意の選択方法が使用され得る。例えば、米国特許出願公開第2016/0010058A1号(その開示は参照により本明細書に組み込まれる)に記載されている方法が、優れた腫瘍反応性のためのTILの選択に使用され得る。
任意選択で、細胞生存率アッセイは、当該技術分野で知られている標準のアッセイを使用して、急速な第2の拡張(REP拡張と称される拡張を含む)後に行われ得る。例えば、死細胞を選択的に標識し、生存率の評価を可能にするトリパンブルー排除アッセイが、バルクTILの試料上で行われ得る。いくつかの実施形態では、TIL試料は、Cellometer K2自動セルカウンター(Nexcelom Bioscience,Lawrence,MA)を使用して計数され、生存率が決定され得る。いくつかの実施形態では、生存率は、標準のCellometer K2 Image Cytometer Automatic Cell Counterプロトコルに従って決定される。
Tリンパ球及びBリンパ球の多様な抗原受容体は、限られた数であるが、多数の遺伝子セグメントの体細胞組換えによって産生される。これらの遺伝子セグメント:V(可変)、D(多様性)、J(接合)、及びC(一定)は、免疫グロブリン及びT細胞受容体(TCR)の結合特異性及び下流での適用を決定する。本発明は、T細胞レパートリー多様性を示し、かつ増加させるTILを生成するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、本方法によって取得されたTILは、T細胞レパートリー多様性の増加を示す。いくつかの実施形態では、第2の拡張において取得されたTILは、T細胞レパートリー多様性の増加を示す。いくつかの実施形態では、多様性の増加は、免疫グロブリン多様性及び/またはT細胞受容体多様性の増加である。いくつかの実施形態では、多様性は、免疫グロブリンにあり、免疫グロブリン重鎖にある。いくつかの実施形態では、多様性は、免疫グロブリンにあり、免疫グロブリン軽鎖にある。いくつかの実施形態では、多様性は、T細胞受容体にある。いくつかの実施形態では、多様性は、アルファ、ベータ、ガンマ、及びデルタ受容体からなる群から選択されるT細胞受容体のうちの1つにある。いくつかの実施形態では、T細胞受容体(TCR)アルファ及び/またはベータの発現が増加する。いくつかの実施形態では、T細胞受容体(TCR)アルファの発現が増加する。いくつかの実施形態では、T細胞受容体(TCR)ベータの発現が増加する。いくつかの実施形態では、TCRab(すなわち、TCRα/β)の発現が増加する。
いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張培養培地(例えば、CM2または第2の細胞培養培地とも称される)は、以下でさらに詳細に論じられるように、IL-2、OKT-3、ならびに抗原提示フィーダー細胞(APC)を含む。いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張培養培地(例えば、CM2または第2の細胞培養培地とも称される)は、以下でさらに詳細に論じられるように、6000IU/mLのIL-2、30ug/フラスコのOKT-3、ならびに7.5×108の抗原提示フィーダー細胞(APC)を含む。いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張培養培地(例えば、CM2または第2の細胞培養培地とも称される)は、以下でさらに詳細に論じられるように、IL-2、OKT-3、ならびに抗原提示フィーダー細胞(APC)を含む。いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張培養培地(例えば、CM2または第2の細胞培養培地とも称される)は、以下でさらに詳細に論じられるように、6000IU/mLのIL-2、30ug/フラスコのOKT-3、ならびに5×108の抗原提示フィーダー細胞(APC)を含む。
いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張、例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)によるステップDは、閉鎖系バイオリアクターにおいて行われる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるように、閉鎖系がTIL拡張のために用いられる。いくつかの実施形態では、バイオリアクターが用いられる。いくつかの実施形態では、バイオリアクターが容器として用いられる。いくつかの実施形態では、用いられるバイオリアクターは、例えば、G-REX-100またはG-REX-500である。いくつかの実施形態では、用いられるバイオリアクターは、G-REX-100である。いくつかの実施形態では、用いられるバイオリアクターは、G-REX-500である。
いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張ステップは、複数のステップに分けられて、(a)TILを、第1の容器、例えば、G-REX-100 MCS容器内での小規模培養で約3~7日間培養することによって急速な第2の拡張を行うことと、その後、(b)小規模培養でのTILを、第1の容器よりも大きい第2の容器、例えば、G-REX-500-MCS容器に移し、小規模培養由来のTILを、第2の容器内でのより大規模な培養で約4~7日間培養することとによって、培養のスケールアップを達成する。
いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張ステップは、複数のステップに分けられて、(a)TILを、第1の容器、例えば、G-REX-100 MCS容器内での第1の小規模培養で約3~7日間培養することによって急速な第2の拡張を行うことと、その後、(b)第1の小規模培養由来のTILを、第1の容器とサイズが等しい少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の第2の容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウトを達成し、各第2の容器内で、かかる第2の容器に移された第1の小規模培養由来のTILの一部が第2の小規模培養で約4~7日間培養される。
いくつかの実施形態では、第1の小規模TIL培養物は、TILの複数の約2~5亜集団に配分される。
いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張ステップは、複数のステップに分けられて、(a)TILを、第1の容器、例えば、G-REX-100 MCS容器内での小規模培養で約3~7日間培養することによって急速な第2の拡張を行うことと、その後、(b)小規模培養由来のTILを、第1の容器よりもサイズが大きい少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の第2の容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウト及びスケールアップを達成し、各第2の容器内で、かかる第2の容器に移された小規模培養由来のTILの一部がより大規模な培養で約4~7日間培養される。
いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張ステップは、複数のステップに分けられ、(a)TILを、第1の容器、例えば、G-REX-100 MCS容器内での小規模培養で約5日間培養することによって急速または第2の拡張を行うことと、その後、(b)小規模培養由来のTILを、第1の容器よりもサイズが大きい2、3、または4個の第2の容器、例えば、G-REX-500 MCS容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウト及びスケールアップを達成し、各第2の容器内で、かかる第2の容器に移された小規模培養由来のTILの一部がより大規模な培養で約6日間培養される。
いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張の分割時に、各第2の容器は、少なくとも108個のTILを含む。いくつかの実施形態では、急速または第2の拡張の分割時に、各第2の容器は、少なくとも108個のTIL、少なくとも109個のTIL、または少なくとも1010個のTILを含む。例示的な一実施形態では、各第2の容器は、少なくとも1010個のTILを含む。
いくつかの実施形態では、第1の小規模TIL培養物は、複数の亜集団に配分される。いくつかの実施形態では、第1の小規模TIL培養物は、複数の約2~5亜集団に配分される。いくつかの実施形態では、第1の小規模TIL培養物は、複数の約2、3、4、または5亜集団に配分される。
いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張の完了後、複数の亜集団は、治療有効量のTILを含む。いくつかの実施形態では、急速または第2の拡張の完了後、1つ以上のTILの亜集団を一緒にプールして、治療有効量のTILを産生する。いくつかの実施形態では、急速拡張の完了後、TILの各亜集団は、治療有効量のTILを含む。
いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張は、複数のステップに分割される前に、約3~7日間行われる。いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張の分裂は、急速または第2の拡張の開始後約3日目、4日目、5日目、6日目、または7日目に起こる。
いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張の分裂は、第1の拡張(すなわち、REP前拡張)の開始後の約7日目、8日目、9日目、10日目、11日目、12日目、13日目、14日目、15日目、または16日目、17日目、または18日目に起こる。例示的な一実施形態では、急速または第2の拡張の分裂は、第1の拡張の開始後約16日目に起こる。
いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張は、分裂後約7~11日間、さらに行われる。いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張は、分裂後約5日、6日、7日、8日、9日、10日、または11日間、さらに行われる。
いくつかの実施形態では、分裂前の急速な第2の拡張に使用される細胞培養培地は、分裂後の急速な第2の拡張に使用される細胞培養培地と同じ成分を含む。いくつかの実施形態では、分裂前の急速な第2の拡張に使用される細胞培養培地は、分裂後の急速な第2の拡張に使用される細胞培養培地とは異なる成分を含む。
いくつかの実施形態では、分裂前の急速な第2の拡張に使用される細胞培養培地は、IL-2、任意選択でOKT-3、及びさらに任意選択でAPCを含む。いくつかの実施形態では、分裂前の急速な第2の拡張に使用される細胞培養培地は、IL-2、OKT-3、及びさらに任意選択でAPCを含む。いくつかの実施形態では、分裂前の急速な第2の拡張に使用される細胞培養培地は、IL-2、OKT-3及びAPCを含む。
いくつかの実施形態では、分裂前の急速な第2の拡張に使用される細胞培養培地は、第1の拡張中の細胞培養培地を、IL-2、任意選択でOKT-3及びさらに任意選択でAPCを含む新鮮な培養培地で補充することによって生成される。いくつかの実施形態では、分裂前の急速な第2の拡張に使用される細胞培養培地は、第1の拡張中の細胞培養培地を、IL-2、OKT-3及びAPCを含む新鮮な培養培地で補充することによって生成される。いくつかの実施形態では、分裂前の急速な第2の拡張に使用される細胞培養培地は、第1の拡張中の細胞培養培地を、IL-2、任意選択でOKT-3及びさらに任意選択でAPCを含む新鮮な培養培地で置き換えることによって生成される。いくつかの実施形態では、分裂前の急速な第2の拡張に使用される細胞培養培地は、第1の拡張中の細胞培養培地を、IL-2、OKT-3及びAPCを含む新鮮な細胞培養培地で置き換えることによって生成される。
いくつかの実施形態では、分裂後の急速な第2の拡張に使用される細胞培養培地は、IL-2、及び任意選択でOKT-3を含む。いくつかの実施形態では、分裂後の急速な第2の拡張に使用される細胞培養培地は、IL-2及びOKT-3を含む。いくつかの実施形態では、分裂後の急速な第2の拡張に使用される細胞培養培地は、分裂前の急速な第2の拡張に使用される細胞培養培地を、IL-2及び任意選択でOKT-3を含む新鮮な培養培地で置き換えることによって生成される。いくつかの実施形態では、分裂後の急速な第2の拡張に使用される細胞培養培地は、分裂前の急速な第2の拡張に使用される細胞培養培地を、IL-2及びOKT-3を含む新鮮な培養培地で置き換えることによって生成される。
1.フィーダー細胞及び抗原提示細胞
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される急速な第2の拡張手順(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)のステップDに記載されるような拡張、ならびにREPと称されるものを含む)は、REP TIL拡張中及び/または急速な第2の拡張中に過剰のフィーダー細胞を必要とする。多くの実施形態では、フィーダー細胞は、健康な献血者由来の標準の全血単位から得られる末梢血単核細胞(PBMC)である。PBMCは、Ficoll-Paque勾配分離などの標準の方法を使用して取得される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される急速な第2の拡張手順(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)のステップDに記載されるような拡張、ならびにREPと称されるものを含む)は、REP TIL拡張中及び/または急速な第2の拡張中に過剰のフィーダー細胞を必要とする。多くの実施形態では、フィーダー細胞は、健康な献血者由来の標準の全血単位から得られる末梢血単核細胞(PBMC)である。PBMCは、Ficoll-Paque勾配分離などの標準の方法を使用して取得される。
一般に、同種異系PBMCは、放射線照射または熱処理のいずれかによって不活性化され、実施例に記載されるように、REP手順で使用され、これは、放射線照射された同種異系PBMCの複製無能力を評価するための例示的なプロトコルを提供する。
いくつかの実施形態では、7日目または14日目の総生細胞数が、REPの0日目及び/または第2の拡張の0日目(すなわち、第2の拡張の開始日)に培養された初期の生細胞数よりも少ない場合、PBMCは、複製能力がないとみなされ、本明細書に記載のTIL拡張手順での使用が認められる。
いくつかの実施形態では、7日目及び14日目のOKT3及びIL-2の存在下で培養された総生細胞数が、REPの0日目及び/または第2の拡張の0日目(すなわち、第2の拡張の開始日)に培養された初期の生細胞数から増加しなかった場合、PBMCは、複製能力がないとみなされ、本明細書に記載のTIL拡張手順での使用が認められる。いくつかの実施形態では、PBMCは、30ng/mLのOKT3抗体及び3000IU/mLのIL-2の存在下で培養される。いくつかの実施形態では、PBMCは、60ng/mLのOKT3抗体及び6000IU/mLのIL-2の存在下で培養される。いくつかの実施形態では、PBMCは、60ng/mLのOKT3抗体及び3000IU/mLのIL-2の存在下で培養される。いくつかの実施形態では、PBMCは、30ng/mLのOKT3抗体及び6000IU/mLのIL-2の存在下で培養される。
いくつかの実施形態では、7日目及び14日目のOKT3及びIL-2の存在下で培養された総生細胞数が、REPの0日目及び/または第2の拡張の0日目(すなわち、第2の拡張の開始日)に培養された初期の生細胞数から増加しなかった場合、PBMCは、複製能力がないとみなされ、本明細書に記載のTIL拡張手順での使用が認められる。いくつかの実施形態では、PBMCは、30~60ng/mLのOKT3抗体及び1000~6000IU/mLのIL-2の存在下で培養される。いくつかの実施形態では、PBMCは、30~60ng/mLのOKT3抗体及び2000~5000IU/mLのIL-2の存在下で培養される。いくつかの実施形態では、PBMCは、30~60ng/mLのOKT3抗体及び2000~4000IU/mLのIL-2の存在下で培養される。いくつかの実施形態では、PBMCは、30~60ng/mLのOKT3抗体及び2500~3500IU/mLのIL-2の存在下で培養される。いくつかの実施形態では、PBMCは、30~60ng/mLのOKT3抗体及び6000IU/mLのIL-2の存在下で培養される。
いくつかの実施形態では、抗原提示フィーダー細胞は、PBMCである。いくつかの実施形態では、抗原提示フィーダー細胞は、人工抗原提示フィーダー細胞である。いくつかの実施形態では、第2の拡張におけるTILの抗原提示フィーダー細胞に対する比率は、約1:10、約1:25、約1:50、約1:100、約1:125、約1:150、約1:175、約1:200、約1:225、約1:250、約1:275、約1:300、約1:325、約1:350、約1:375、約1:400、または約1:500である。いくつかの実施形態では、第2の拡張におけるTILの抗原提示フィーダー細胞に対する比率は、1:50~1:300である。いくつかの実施形態では、第2の増殖におけるTILの抗原提示フィーダー細胞に対する比は、1:100~1:200である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の第2の拡張手順は、約5×108フィーダー細胞:約100×106TILの比を必要とする。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の第2の拡張手順は、約7.5×108フィーダー細胞:約100×106TILの比を必要とする。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の第2の拡張手順は、約5×108フィーダー細胞:約50×106TILの比を必要とする。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の第2の拡張手順は、約7.5×108フィーダー細胞:約50×106TILの比を必要とする。さらに別の実施形態では、本明細書に記載の第2の拡張手順は、約5×108フィーダー細胞:約25×106TILを必要とする。さらに別の実施形態では、本明細書に記載の第2の拡張手順は、約7.5×108フィーダー細胞:約25×106TILを必要とする。さらに別の実施形態では、急速な第2の拡張は、急速な第2の拡張の2倍の数のフィーダー細胞を必要とする。さらに別の実施形態では、本明細書に記載のプライミングによる第1の拡張が約2.5×108フィーダー細胞を必要とする場合、急速な第2の拡張は、約5×108フィーダー細胞を必要とする。さらに別の実施形態では、本明細書に記載のプライミングによる第1の拡張が約2.5×108フィーダー細胞を必要とする場合、急速な第2の拡張は、約7.5×108フィーダー細胞を必要とする。さらに別の実施形態では、急速な第2の拡張は、プライミングによる第1の拡張の2倍(2.0×)、2.5倍、3.0倍、3.5倍または4.0倍の数のフィーダー細胞を必要とする。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の急速な第2の拡張手順は、急速な第2の拡張中に過剰のフィーダー細胞を必要とする。多くの実施形態では、フィーダー細胞は、同種異系の健康な献血者由来の標準の全血単位から取得される末梢血単核細胞(PBMC)である。PBMCは、Ficoll-Paque勾配分離などの標準の方法を使用して取得される。いくつかの実施形態では、人工抗原提示(aAPC)細胞がPBMCの代わりに使用される。いくつかの実施形態では、PBMCは、プライミングによる第1の拡張に追加されたPBMCの2倍の濃度で、急速な第2の拡張に追加される。
一般に、同種異系PBMCは、放射線照射または熱処理のいずれかによって不活性化され、図及び実施例に記載される例示的な手順を含む、本明細書に記載のTIL拡張手順で使用される。
いくつかの実施形態では、人工抗原提示細胞は、PBMCの代替物として、またはPBMCと組み合わせて、急速な第2の拡張において使用される。
2.サイトカイン
本明細書に記載の急速な第2の拡張方法は、一般に、当該技術分野で知られているように、高用量のサイトカイン、特にIL-2を含む培養培地を使用する。
本明細書に記載の急速な第2の拡張方法は、一般に、当該技術分野で知られているように、高用量のサイトカイン、特にIL-2を含む培養培地を使用する。
あるいは、WO2015/189356及びWO2015/189357(参照によりそれらの全体が本明細書に明示的に組み込まれる)に一般に概説されているように、IL-2、IL-15、及びIL-21のうちの2つ以上の組み合わせで、TILの急速な第2の拡張のためにサイトカインの組み合わせを使用することもさらに可能である。したがって、可能な組み合わせには、IL-2及びIL-15、IL-2及びIL-21、IL-15及びIL-21、ならびにIL-2、IL-15、及びIL-21が含まれ、後者は多くの実施形態で特に有用である。サイトカインの組み合わせの使用は、リンパ球、特にそこに記載されているようにT細胞の生成に特に有利に働く。
いくつかの実施形態では、ステップD(特に、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dから)はまた、本明細書の他の箇所に記載されるように、OKT-3抗体またはムロモナブの、培養培地への添加を含んでもよい。いくつかの実施形態では、ステップDはまた、本明細書の他の箇所に記載されるように、4-1BBアゴニストの、培養培地への添加を含んでもよい。いくつかの実施形態では、ステップD(特に、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dから)はまた、本明細書の他の箇所に記載されるように、OX-40アゴニストの、培養培地への添加を含んでもよい。加えて、チアゾリジンジオン化合物などの増殖因子活性化受容体(PPAR)-ガンマアゴニストを含む、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマコアクチベーターI-アルファアゴニストなどの添加剤は、米国特許出願公開第US2019/0307796 A1号(この開示は参照により本明細書に組み込まれる)に記載されるように、ステップD(特に、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dから)中の培養培地で使用されてもよい。
E.ステップE:TILを採取する
急速な第2の拡張ステップ後、細胞が採取され得る。いくつかの実施形態では、TILは、例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に提供されるように、1、2、3、4、またはそれ以上の拡張ステップ後に採取される。いくつかの実施形態では、TILは、例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に提供されるように、2つの拡張ステップ後に採取される。いくつかの実施形態では、TILは、2つの拡張ステップ、例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に提供されるように、1回のプライミングによる第1の拡張及び1回の急速な第2の拡張の後に採取される。
急速な第2の拡張ステップ後、細胞が採取され得る。いくつかの実施形態では、TILは、例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に提供されるように、1、2、3、4、またはそれ以上の拡張ステップ後に採取される。いくつかの実施形態では、TILは、例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に提供されるように、2つの拡張ステップ後に採取される。いくつかの実施形態では、TILは、2つの拡張ステップ、例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に提供されるように、1回のプライミングによる第1の拡張及び1回の急速な第2の拡張の後に採取される。
TILは、任意の適切な滅菌様式で、例えば、遠心分離によって採取され得る。TILを採取するための方法は、当該技術分野で周知であり、任意のかかる既知の方法が本プロセスとともに用いられ得る。いくつかの実施形態では、TILは、自動化システムを使用して採取される。
細胞採取機及び/または細胞処理システムは、例えば、Fresenius Kabi、Tomtec Life Science、Perkin Elmer、及びInotech Biosystems International,Incを含む、様々な供給源から市販されている。任意の細胞ベースの採取機が本方法とともに用いられ得る。いくつかの実施形態では、細胞採取機及び/または細胞処理システムは、膜ベースの細胞採取機である。いくつかの実施形態では、細胞採取は、LOVOシステム(Fresenius Kabiによって製造されたもの)などの細胞処理システムによるものである。「LOVO細胞処理システム」という用語は、細胞を含む溶液を、滅菌及び/または閉鎖系環境で回転膜または回転フィルターなどの膜またはフィルターを通してポンプ輸送し、連続フローを可能にし、細胞を処理して、ペレット化せずに上清または細胞培養培地を除去する、任意のベンダーによって製造された任意の機器または装置も指す。いくつかの実施形態では、細胞採取機及び/または細胞処理システムは、滅菌閉鎖系内で、細胞分離、洗浄、流体交換、濃縮、及び/または他の細胞処理ステップを行うことができる。
いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張、例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)によるステップDは、閉鎖系バイオリアクターにおいて行われる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるように、閉鎖系がTIL拡張のために用いられる。いくつかの実施形態では、バイオリアクターが用いられる。いくつかの実施形態では、バイオリアクターが容器として用いられる。いくつかの実施形態では、用いられるバイオリアクターは、例えば、G-REX-100またはG-REX-500である。いくつかの実施形態では、用いられるバイオリアクターは、G-REX-100である。いくつかの実施形態では、用いられるバイオリアクターは、G-REX-500である。
いくつかの実施形態では、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)によるステップEは、本明細書に記載のプロセスに従って行われる。いくつかの実施形態では、閉鎖系は、閉鎖系の無菌性及び閉鎖性を維持するために、滅菌条件下でシリンジを介してアクセスされる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるような閉鎖系が用いられる。
いくつかの実施形態では、TILは、本明細書に記載の方法に従って採取される。いくつかの実施形態では、14~16日目のTILが本明細書に記載の方法を使用して採取される。いくつかの実施形態では、TILは、本明細書に記載の方法を使用して14日目に採取される。いくつかの実施形態では、TILは、本明細書に記載の方法を使用して15日目に採取される。いくつかの実施形態では、TILは、本明細書に記載の方法を使用して16日目に採取される。
F.ステップF:最終製剤及び輸液容器への移行
図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に例示的な順序で提供され、かつ上及び本明細書で詳細に概説されるステップA~Eが完了した後、細胞は、注入バッグまたは無菌バイアルなどの患者への投与に使用するために容器に移される。いくつかの実施形態では、治療的に十分な数のTILが上記の拡張方法を使用して得られると、それらは、患者への投与に使用するために容器に移される。
図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に例示的な順序で提供され、かつ上及び本明細書で詳細に概説されるステップA~Eが完了した後、細胞は、注入バッグまたは無菌バイアルなどの患者への投与に使用するために容器に移される。いくつかの実施形態では、治療的に十分な数のTILが上記の拡張方法を使用して得られると、それらは、患者への投与に使用するために容器に移される。
いくつかの実施形態では、本開示の方法を使用して拡張されたTILは、薬学的組成物として患者に投与される。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、滅菌緩衝液中のTIL懸濁液である。本明細書に開示されるように拡張されたTILは、当該技術分野で知られている任意の好適な経路によって投与され得る。いくつかの実施形態では、TILは、単回の動脈内または静脈内注入として投与され、これは、好ましくは、およそ30~60分続く。他の好適な投与経路には、腹腔内、髄腔内、及びリンパ内が含まれる。
V.さらなるGen2、Gen3、及び他のTIL製造プロセスの実施形態
A.PBMCフィーダー細胞比
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の拡張方法で使用される培養培地(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)を参照)は、抗CD3抗体、例えばOKT-3を含む。IL-2と組み合わせた抗CD3抗体は、TIL集団におけるT細胞活性化及び細胞分裂を誘導する。この効果は、全長抗体、ならびにFab及びF(ab’)2断片で見ることができ、前者が一般に好まれ、例えば、Tsoukas et al.,J.Immunol.1985,135,1719を参照されたく、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
A.PBMCフィーダー細胞比
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の拡張方法で使用される培養培地(例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)を参照)は、抗CD3抗体、例えばOKT-3を含む。IL-2と組み合わせた抗CD3抗体は、TIL集団におけるT細胞活性化及び細胞分裂を誘導する。この効果は、全長抗体、ならびにFab及びF(ab’)2断片で見ることができ、前者が一般に好まれ、例えば、Tsoukas et al.,J.Immunol.1985,135,1719を参照されたく、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、PBMCフィーダー層の数は、以下のように計算される:
A.T細胞の体積(10μm直径):V=(4/3)πr3=523.6μm3
B.40μm(4細胞)の高さを有するG-REX100(M)のカラム:V=(4/3)πr3=4×1012μm3
C.カラムBを充填するために必要な細胞数:4×1012μm3/523.6 μm3=7.6×108μm3*0.64=4.86×108
D.四次元空間で最適に活性化され得る細胞の数:4.86×108/24=20.25×106
E.G-REX500に外挿されるフィーダー及びTILの数:TIL:100×106及びフィーダー:2.5×109
この計算では、100cm2の底部を有するシリンジ中でのTILの活性化のために二十面体形状を提供するのに必要な単核細胞の数の近似値が使用される。この計算は、Jin,et.al.,J.Immunother.2012,35,283-292に記載されているように、NCI実験データを密接に反映するT細胞の閾値活性化について、約5×108の実験結果を導き出す。(C)では、乗数(0.64)は、Jaeger and Nagel,Science,1992,255,1523-3によって計算された等価球のランダム充填密度である。(D)において、除数24は、Musin,Russ.Math.Surv.,2003,58,794-795に記載される、四次元空間内の同様のオブジェクトと接触する可能性のある等価球の数または「ニュートン数」である。.
A.T細胞の体積(10μm直径):V=(4/3)πr3=523.6μm3
B.40μm(4細胞)の高さを有するG-REX100(M)のカラム:V=(4/3)πr3=4×1012μm3
C.カラムBを充填するために必要な細胞数:4×1012μm3/523.6 μm3=7.6×108μm3*0.64=4.86×108
D.四次元空間で最適に活性化され得る細胞の数:4.86×108/24=20.25×106
E.G-REX500に外挿されるフィーダー及びTILの数:TIL:100×106及びフィーダー:2.5×109
この計算では、100cm2の底部を有するシリンジ中でのTILの活性化のために二十面体形状を提供するのに必要な単核細胞の数の近似値が使用される。この計算は、Jin,et.al.,J.Immunother.2012,35,283-292に記載されているように、NCI実験データを密接に反映するT細胞の閾値活性化について、約5×108の実験結果を導き出す。(C)では、乗数(0.64)は、Jaeger and Nagel,Science,1992,255,1523-3によって計算された等価球のランダム充填密度である。(D)において、除数24は、Musin,Russ.Math.Surv.,2003,58,794-795に記載される、四次元空間内の同様のオブジェクトと接触する可能性のある等価球の数または「ニュートン数」である。.
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張中に外因的に供給される抗原提示フィーダー細胞の数は、急速な第2の拡張中に外因的に供給される抗原提示フィーダー細胞の数のおよそ半分である。ある特定の実施形態では、この方法は、急速な第2の拡張の細胞培養培地と比較しておよそ50%少ない抗原提示細胞を含む細胞培養培地中でプライミングによる第1の拡張を行うことを含む。
他の実施形態では、急速な第2の拡張中に外因的に供給される抗原提示フィーダー細胞(APC)の数は、プライミングによる第1の拡張中に外因的に供給されるAPCの数よりも多い。
他の実施形態では、急速な第2の拡張中に外因的に供給されるAPCの数の、プライミングによる第1の拡張中に外因的に供給されるAPCの数に対する比は、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約20:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張中に外因的に供給されるAPCの数の、プライミングによる第1の拡張中に外因的に供給されるAPCの数に対する比は、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約10:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張中に外因的に供給されるAPCの数の、プライミングによる第1の拡張中に外因的に供給されるAPCの数に対する比は、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約9:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張中に外因的に供給されるAPCの数の、プライミングによる第1の拡張中に外因的に供給されるAPCの数に対する比は、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約8:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張中に外因的に供給されるAPCの数の、プライミングによる第1の拡張中に外因的に供給されるAPCの数に対する比は、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約7:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張中に外因的に供給されるAPCの数の、プライミングによる第1の拡張中に外因的に供給されるAPCの数に対する比は、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約6:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張中に外因的に供給されるAPCの数の、プライミングによる第1の拡張中に外因的に供給されるAPCの数に対する比は、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約5:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張中に外因的に供給されるAPCの数の、プライミングによる第1の拡張中に外因的に供給されるAPCの数に対する比は、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約4:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張中に外因的に供給されるAPCの数のプライミングによる第1の拡張中に外因的に供給されるAPCの数に対する比率は、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約3:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張中に外因的に供給されるAPCの数の、プライミングによる第1の拡張中に外因的に供給されるAPCの数に対する比は、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約2.9:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張中に外因的に供給されるAPCの数の、プライミングによる第1の拡張中に外因的に供給されるAPCの数に対する比は、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約2.8:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張中に外因的に供給されるAPCの数の、プライミングによる第1の拡張中に外因的に供給されるAPCの数に対する比は、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約2.7:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張中に外因的に供給されるAPCの数の、プライミングによる第1の拡張中に外因的に供給されるAPCの数に対する比は、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約2.6:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張中に外因的に供給されるAPCの数の、プライミングによる第1の拡張中に外因的に供給されるAPCの数に対する比は、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約2.5:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張中に外因的に供給されるAPCの数の、プライミングによる第1の拡張中に外因的に供給されるAPCの数に対する比は、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約2.4:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張中に外因的に供給されるAPCの数の、プライミングによる第1の拡張中に外因的に供給されるAPCの数に対する比は、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約2.3:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張中に外因的に供給されるAPCの数の、プライミングによる第1の拡張中に外因的に供給されるAPCの数に対する比は、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約2.2:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張中に外因的に供給されるAPCの数の、プライミングによる第1の拡張中に外因的に供給されるAPCの数に対する比は、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約2.1:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張中に外因的に供給されるAPCの数の、プライミングによる第1の拡張中に外因的に供給されるAPCの数に対する比は、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約2:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張中に外因的に供給されるAPCの数の、プライミングによる第1の拡張中に外因的に供給されるAPCの数に対する比は、正確にまたは約2:1~正確にまたは約10:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張中に外因的に供給されるAPCの数の、プライミングによる第1の拡張中に外因的に供給されるAPCの数に対する比は、正確にまたは約2:1~正確にまたは約5:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張中に外因的に供給されるAPCの数の、プライミングによる第1の拡張中に外因的に供給されるAPCの数に対する比は、正確にまたは約2:1~正確にまたは約4:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張中に外因的に供給されるAPCの数の、プライミングによる第1の拡張中に外因的に供給されるAPCの数に対する比は、正確にまたは約2:1~正確にまたは約3:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張中に外因的に供給されるAPCの数のプライミングによる第1の拡張中に外因的に供給されるAPCの数に対する比率は、正確にまたは約2:1~正確にまたは約2.9:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張中に外因的に供給されるAPCの数の、プライミングによる第1の拡張中に外因的に供給されるAPCの数に対する比は、正確にまたは約2:1~正確にまたは約2.8:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張中に外因的に供給されるAPCの数の、プライミングによる第1の拡張中に外因的に供給されるAPCの数に対する比は、正確にまたは約2:1~正確にまたは約2.7:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張中に外因的に供給されるAPCの数の、プライミングによる第1の拡張中に外因的に供給されるAPCの数に対する比は、正確にまたは約2:1~正確にまたは約2.6:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張中に外因的に供給されるAPCの数の、プライミングによる第1の拡張中に外因的に供給されるAPCの数に対する比は、正確にまたは約2:1~正確にまたは約2.5:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張中に外因的に供給されるAPCの数の、プライミングによる第1の拡張中に外因的に供給されるAPCの数に対する比は、正確にまたは約2:1~正確にまたは約2.4:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張中に外因的に供給されるAPCの数の、プライミングによる第1の拡張中に外因的に供給されるAPCの数に対する比は、正確にまたは約2:1~正確にまたは約2.3:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張中に外因的に供給されるAPCの数のプライミングによる第1の拡張中に外因的に供給されるAPCの数に対する比率は、正確にまたは約2:1~正確にまたは約2.2:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張中に外因的に供給されるAPCの数の、プライミングによる第1の拡張中に外因的に供給されるAPCの数に対する比は、正確にまたは約2:1~正確にまたは約2.1:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張中に外因的に供給されるAPCの数のプライミングによる第1の拡張中に外因的に供給されるAPCの数に対する比率は、正確にまたは約2:1である。
他の実施形態では、急速な第2の拡張中に外因的に供給されるAPCの数のプライミングによる第1の拡張中に外因的に供給されるAPCの数に対する比率は、正確にまたは約1.1:1、1.2:1、1.3:1、1.4:1、1.5:1、1.6:1、1.7:1、1.8:1、1.9:1、2:1、2.1:1、2.2:1、2.3:1、2.4:1、2.5:1、2.6:1、2.7:1、2.8:1、2.9:1、3:1、3.1:1、3.2:1、3.3:1、3.4:1、3.5:1、3.6:1、3.7:1、3.8:1、3.9:1、4:1、4.1:1、4.2:1、4.3:1、4.4:1、4.5:1、4.6:1、4.7:1、4.8:1、4.9:1、または5:1である。
他の実施形態では、プライミングによる第1の増殖中に外因的に供給されるAPCの数は、正確にまたは約1×108、1.1×108、1.2×108、1.3×108、1.4×108、1.5×108、1.6×108、1.7×108、1.8×108、1.9×108、2×108、2.1×108、2.2×108、2.3×108、2.4×108、2.5×108、2.6×108、2.7×108、2.8×108、2.9×108、3×108、3.1×108、3.2×108、3.3×108、3.4×108、または3.5×108APCであり、急速な第2の増殖中に外因的に供給されるAPCの数は、正確にまたは約3.5×108、3.6×108、3.7×108、3.8×108、3.9×108、4×108、4.1×108、4.2×108、4.3×108、4.4×108、4.5×108、4.6×108、4.7×108、4.8×108、4.9×108、5×108、5.1×108、5.2×108、5.3×108、5.4×108、5.5×108、5.6×108、5.7×108、5.8×108、5.9×108、6×108、6.1×108、6.2×108、6.3×108、6.4×108、6.5×108、6.6×108、6.7×108、6.8×108、6.9×108、7×108、7.1×108、7.2×108、7.3×108、7.4×108、7.5×108、7.6×108、7.7×108、7.8×108、7.9×108、8×108、8.1×108、8.2×108、8.3×108、8.4×108、8.5×108、8.6×108、8.7×108、8.8×108、8.9×108、9×108、9.1×108、9.2×108、9.3×108、9.4×108、9.5×108、9.6×108、9.7×108、9.8×108、9.9×108、または1×109APCである。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張中に外因的に供給されるAPCの数は、正確にまたは約1.5×108APC~正確にまたは約3×108APCの範囲から選択され、急速な第2の拡張中に外因的に供給されるAPCの数は、正確にまたは約4×108APC~正確にまたは約7.5×108APCの範囲から選択される。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張中に外因的に供給されるAPCの数は、正確にまたは約2×108APC~正確にまたは約2.5×108APCの範囲から選択され、急速な第2の拡張中に外因的に供給されるAPCの数は、正確にまたは約4.5×108APC~正確にまたは約5.5×108APCの範囲から選択される。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張中に外因的に供給されるAPCの数は、正確にまたは約2.5×108APCであり、急速な第2の拡張中に外因的に供給されるAPCの数は、正確にまたは約5×108APCである。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張の0日目に追加されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数は、プライミングによる第1の拡張の7日目(例えば、方法の7日目)に追加されるPBMCの数のおよそ半分である。ある特定の実施形態では、方法は、プライミングによる第1の拡張の0日目に抗原提示細胞を第1のTIL集団に追加することと、7日目に抗原提示細胞を第2のTIL集団に追加することとを含み、0日目に追加される抗原提示細胞の数は、プライミングによる第1の拡張の7日目(例えば、方法の7日目)に追加される抗原提示細胞の数のおよそ50%である。
他の実施形態では、急速な第2の拡張の7日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数は、プライミングによる第1の拡張の0日目に外因的に供給されるPBMCの数よりも多い。
他の実施形態では、プライミングによる第1の増殖において外因的に供給されるAPCは、正確にまたは約1.0×106APC/cm2~正確にまたは約4.5×106APC/cm2の範囲から選択される密度で培養フラスコに播種される。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張において外因的に供給されるAPCは、正確にまたは約1.5×106APC/cm2~正確にまたは約3.5×106APC/cm2の範囲から選択される密度で培養フラスコに播種される。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張において外因的に供給されるAPCは、正確にまたは約2×106APC/cm2~正確にまたは約3×106APC/cm2の範囲から選択される密度で培養フラスコに播種される。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張において外因的に供給されるAPCは、正確にまたは約2×106APC/cm2の密度で培養フラスコに播種される。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張において外因的に供給されるAPCは、正確にまたは約1.0×106、1.1×106、1.2×106、1.3×106、1.4×106、1.5×106、1.6×106、1.7×106、1.8×106、1.9×106、2×106、2.1×106、2.2×106、2.3×106、2.4×106、2.5×106、2.6×106、2.7×106、2.8×106、2.9×106、3×106、3.1×106、3.2×106、3.3×106、3.4×106、3.5×106、3.6×106、3.7×106、3.8×106、3.9×106、4×106、4.1×106、4.2×106、4.3×106、4.4×106、または4.5×106APC/cm2の密度で培養フラスコに播種される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張において外因的に供給されるAPCは、正確にまたは約2.5×106APC/cm2~正確にまたは約7.5×106APC/cm2の範囲から選択される密度で培養フラスコに播種される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張において外因的に供給されるAPCは、正確にまたは約3.5×106APC/cm2~正確にまたは約6.0×106APC/cm2の範囲から選択される密度で培養フラスコに播種される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張において外因的に供給されるAPCは、正確にまたは約4.0×106APC/cm2~正確にまたは約5.5×106APC/cm2の範囲から選択される密度で培養フラスコに播種される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張において外因的に供給されるAPCは、正確にまたは約4.0×106APC/cm2の範囲から選択される密度で培養フラスコに播種される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張において外因的に供給されるAPCは、正確にまたは約2.5×106APC/cm2、2.6×106APC/cm2、2.7×106APC/cm2、2.8×106、2.9×106、3×106、3.1×106、3.2×106、3.3×106、3.4×106、3.5×106、3.6×106、3.7×106、3.8×106、3.9×106、4×106、4.1×106、4.2×106、4.3×106、4.4×106、4.5×106、4.6×106、4.7×106、4.8×106、4.9×106、5×106、5.1×106、5.2×106、5.3×106、5.4×106、5.5×106、5.6×106、5.7×106、5.8×106、5.9×106、6×106、6.1×106、6.2×106、6.3×106、6.4×106、6.5×106、6.6×106、6.7×106、6.8×106、6.9×106、7×106、7.1×106、7.2×106、7.3×106、7.4×106、または7.5×106APC/cm2の範囲から選択される密度で培養フラスコに播種される。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張において外因的に供給されるAPCは、正確にまたは約1.0×106、1.1×106、1.2×106、1.3×106、1.4×106、1.5×106、1.6×106、1.7×106、1.8×106、1.9×106、2×106、2.1×106、2.2×106、2.3×106、2.4×106、2.5×106、2.6×106、2.7×106、2.8×106、2.9×106、3×106、3.1×106、3.2×106、3.3×106、3.4×106、3.5×106、3.6×106、3.7×106、3.8×106、3.9×106、4×106、4.1×106、4.2×106、4.3×106、4.4×106、または4.5×106APC/cm2の密度で培養フラスコに播種され、急速な第2の拡張において外因的に供給されるAPCは、正確にまたは約2.5×106APC/cm2、2.6×106APC/cm2、2.7×106APC/cm2、2.8×106、2.9×106、3×106、3.1×106、3.2×106、3.3×106、3.4×106、3.5×106、3.6×106、3.7×106、3.8×106、3.9×106、4×106、4.1×106、4.2×106、4.3×106、4.4×106、4.5×106、4.6×106、4.7×106、4.8×106、4.9×106、5×106、5.1×106、5.2×106、5.3×106、5.4×106、5.5×106、5.6×106、5.7×106、5.8×106、5.9×106、6×106、6.1×106、6.2×106、6.3×106、6.4×106、6.5×106、6.6×106、6.7×106、6.8×106、6.9×106、7×106、7.1×106、7.2×106、7.3×106、7.4×106、または7.5×106APC/cm2の範囲から選択される密度で培養フラスコに播種される。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張において外因的に供給されるAPCは、正確にまたは約1.0×106APC/cm2~正確にまたは約4.5×106APC/cm2の範囲から選択される密度で培養フラスコに播種され、急速な第2の拡張において外因的に供給されるAPCは、正確にまたは約2.5×106APC/cm2~正確にまたは約7.5×106APC/cm2の範囲から選択される密度で培養フラスコに播種される。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張において外因的に供給されるAPCは、正確にまたは約1.5×106APC/cm2~正確にまたは約3.5×106APC/cm2の範囲から選択される密度で培養フラスコに播種され、急速な第2の拡張において外因的に供給されるAPCは、正確にまたは約3.5×106APC/cm2~正確にまたは約6×106APC/cm2の範囲から選択される密度で培養フラスコに播種される。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張において外因的に供給されるAPCは、正確にまたは約2×106APC/cm2~正確にまたは約3×106APC/cm2の範囲から選択される密度で培養フラスコに播種され、急速な第2の拡張において外因的に供給されるAPCは、正確にまたは約4×106APC/cm2~正確にまたは約5.5×106APC/cm2の範囲から選択される密度で培養フラスコに播種される。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張において外因的に供給されるAPCは、正確にまたは約2×106APC/cm2の密度で培養フラスコに播種され、急速な第2の拡張において外因的に供給されるAPCは、正確にまたは約4×106APC/cm2の密度で培養フラスコに播種される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張の7日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数のプライミングによる第1の拡張の0日目に外因的に供給されるPBMCの数に対する比率は、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約20:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張の7日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数の、プライミングによる第1の拡張の0日目に外因的に供給されるPBMCの数に対する比は、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約10:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張の7日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数の、プライミングによる第1の拡張の0日目に外因的に供給されるPBMCの数に対する比は、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約9:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張の7日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数の、プライミングによる第1の拡張の0日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数に対する比は、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約8:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張の7日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数の、プライミングによる第1の拡張の0日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数に対する比は、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約7:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張の7日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数の、プライミングによる第1の拡張の0日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数に対する比は、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約6:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張の7日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数の、プライミングによる第1の拡張の0日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数に対する比は、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約5:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張の7日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数の、プライミングによる第1の拡張の0日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数に対する比は、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約4:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張の7日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数の、プライミングによる第1の拡張の0日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数に対する比は、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約3:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張の7日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数の、プライミングによる第1の拡張の0日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数に対する比は、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約2.9:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張の7日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数の、プライミングによる第1の拡張の0日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数に対する比は、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約2.8:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張の7日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数の、プライミングによる第1の拡張の0日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数に対する比は、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約2.7:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張の7日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数の、プライミングによる第1の拡張の0日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数に対する比は、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約2.6:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張の7日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数の、プライミングによる第1の拡張の0日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数に対する比は、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約2.5:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張の7日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数の、プライミングによる第1の拡張の0日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数に対する比は、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約2.4:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張の7日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数の、プライミングによる第1の拡張の0日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数に対する比は、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約2.3:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張の7日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数の、プライミングによる第1の拡張の0日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数に対する比は、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約2.2:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張の7日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数の、プライミングによる第1の拡張の0日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数に対する比は、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約2.1:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張の7日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数の、プライミングによる第1の拡張の0日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数に対する比は、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約2:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張の7日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数の、プライミングによる第1の拡張の0日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数に対する比は、正確にまたは約2:1~正確にまたは約10:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張の7日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数のプライミングによる第1の拡張の0日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数に対する比率は、正確にまたは約2:1~正確にまたは約5:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張の7日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数のプライミングによる第1の拡張の0日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数に対する比率は、正確にまたは約2:1~正確にまたは約4:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張の7日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数のプライミングによる第1の拡張の0日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数に対する比率は、正確にまたは約2:1~正確にまたは約3:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張の7日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数のプライミングによる第1の拡張の0日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数に対する比率は、正確にまたは約2:1~正確にまたは約2.9:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張の7日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数の、プライミングによる第1の拡張の0日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数に対する比は、正確にまたは約2:1~正確にまたは約2.8:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張の7日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数の、プライミングによる第1の拡張の0日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数に対する比は、正確にまたは約2:1~正確にまたは約2.7:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張の7日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数の、プライミングによる第1の拡張の0日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数に対する比は、正確にまたは約2:1~正確にまたは約2.6:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張の7日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数の、プライミングによる第1の拡張の0日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数に対する比は、正確にまたは約2:1~正確にまたは約2.5:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張の7日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数の、プライミングによる第1の拡張の0日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数に対する比は、正確にまたは約2:1~正確にまたは約2.4:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張の7日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数の、プライミングによる第1の拡張の0日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数に対する比は、正確にまたは約2:1~正確にまたは約2.3:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張の7日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数のプライミングによる第1の拡張の0日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数に対する比率は、正確にまたは約2:1~正確にまたは約2.2:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張の7日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数の、プライミングによる第1の拡張の0日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数に対する比は、正確にまたは約2:1~正確にまたは約2.1:1の範囲から選択される。
他の実施形態では、急速な第2の拡張の7日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数の、プライミングによる第1の拡張の0日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数に対する比率は、正確にまたは約2:1である。
他の実施形態では、急速な第2の拡張の7日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数のプライミングによる第1の拡張の0日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数に対する比率は、正確にまたは約1.1:1、1.2:1、1.3:1、1.4:1、1.5:1、1.6:1、1.7:1、1.8:1、1.9:1、2:1、2.1:1、2.2:1、2.3:1、2.4:1、2.5:1、2.6:1、2.7:1、2.8:1、2.9:1、3:1、3.1:1、3.2:1、3.3:1、3.4:1、3.5:1、3.6:1、3.7:1、3.8:1、3.9:1、4:1、4.1:1、4.2:1、4.3:1、4.4:1、4.5:1、4.6:1、4.7:1、4.8:1、4.9:1、または5:1である。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張の0日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数は、正確にまたは約1×108、1.1×108、1.2×108、1.3×108、1.4×108、1.5×108、1.6×108、1.7×108、1.8×108、1.9×108、2×108、2.1×108、2.2×108、2.3×108、2.4×108、2.5×108、2.6×108、2.7×108、2.8×108、2.9×108、3×108、3.1×108、3.2×108、3.3×108、3.4×108、または3.5×108APC(例えば、PBMCを含む)であり、急速な第2の拡張の7日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数は、正確にまたは約3.5×108、3.6×108、3.7×108、3.8×108、3.9×108、4×108、4.1×108、4.2×108、4.3×108、4.4×108、4.5×108、4.6×108、4.7×108、4.8×108、4.9×108、5×108、5.1×108、5.2×108、5.3×108、5.4×108、5.5×108、5.6×108、5.7×108、5.8×108、5.9×108、6×108、6.1×108、6.2×108、6.3×108、6.4×108、6.5×108、6.6×108、6.7×108、6.8×108、6.9×108、7×108、7.1×108、7.2×108、7.3×108、7.4×108、7.5×108、7.6×108、7.7×108、7.8×108、7.9×108、8×108、8.1×108、8.2×108、8.3×108、8.4×108、8.5×108、8.6×108、8.7×108、8.8×108、8.9×108、9×108、9.1×108、9.2×108、9.3×108、9.4×108、9.5×108、9.6×108、9.7×108、9.8×108、9.9×108、または1x109APC(例えば、PBMCを含む)である。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張の0日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数は、正確にまたは約1×108APC(例えば、PBMCを含む)~正確にまたは約3.5×108APC(例えば、PBMCを含む)の範囲から選択され、急速な第2の拡張の7日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数は、正確にまたは約3.5×108APC(例えば、PBMCを含む)~正確にまたは約1×109APC(例えば、PBMCを含む)の範囲から選択される。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張の0日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数は、正確にまたは約1.5×108APC~約3×108APC(例えば、PBMCを含む)の範囲から選択され、急速な第2の拡張の7日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数は、約4×108APC(例えば、PBMCを含む)~約7.5×108APC(例えば、PBMCを含む)の範囲から選択される。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張の0日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数は、正確にまたは約2×108APC(例えば、PBMCを含む)~正確にまたは約2.5×108APC(例えば、PBMCを含む)の範囲から選択され、急速な第2の拡張の7日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数は、正確にまたは約4.5×108APC(例えば、PBMCを含む)~正確にまたは約5.5×108APC(例えば、PBMCを含む)の範囲から選択される。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張の0日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数は、正確にまたは約2.5×108APC(例えば、PBMCを含む)であり、急速な第2の拡張の7日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)の数は、正確にまたは約5×108APC(例えば、PBMCを含む)である。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張の0日目に追加されるAPC(例えば、PBMCを含む)層の数は、急速な第2の拡張の7日目に追加されるAPC(例えば、PBMCを含む)層の数のおよそ半分である。ある特定の実施形態では、方法は、プライミングによる第1の拡張の0日目に抗原提示細胞層を第1のTIL集団に追加することと、7日目に抗原提示細胞を第2のTIL集団に追加することとを含み、0日目に追加される抗原提示細胞層の数は、7日目に追加される抗原提示細胞層の数のおよそ50%である。
他の実施形態では、急速な第2の拡張の7日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)層の数は、プライミングによる第1の拡張の0日目に外因的に供給されるAPC(例えば、PBMCを含む)層の数よりも多い。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張の0日目は、正確にまたは約2細胞層の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、急速な第2の拡張の7日目は、正確にまたは約4細胞層の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こる。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張の0日目は、正確にまたは約1細胞層の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、急速な第2の拡張の7日目は、正確にまたは約3細胞層の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こる。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張の0日目は、正確にまたは約1.5細胞層~正確にまたは約2.5細胞層の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、急速な第2の拡張の7日目は、正確にまたは約3細胞層の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こる。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張の0日目は、正確にまたは約1細胞層の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、急速な第2の拡張の7日目は、正確にまたは約2細胞層の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こる。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張の0日目は、正確にまたは約1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、または3細胞層の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、急速な第2の拡張の7日目は、正確にまたは約3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、または8細胞層の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こる。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張の0日目は、正確にまたは約1細胞層~正確にまたは約2細胞層の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、急速な第2の拡張の7日目は、正確にまたは約3細胞層~正確にまたは約10細胞層の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こる。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張の0日目は、正確にまたは約2細胞層~正確にまたは約3細胞層の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、急速な第2の拡張の7日目は、正確にまたは約4細胞層~正確にまたは約8細胞層の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こる。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張の0日目は、正確にまたは約2細胞層の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、急速な第2の拡張の7日目は、正確にまたは約4細胞層~正確にまたは約8細胞層の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こる。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張の0日目は、正確にまたは約1、2、または3細胞層の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、急速な第2の拡張の7日目は、正確にまたは約3、4、5、6、7、8、9、または10細胞層の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こる。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張の0日目は、APC(例えば、PBMCを含む)の第1の層の数に等しい第1の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、急速な第2の拡張の7日目は、APC(例えば、PBMCを含む)の第2の層の数に等しい第2の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、APC(例えば、PBMCを含む)の第1の層の数のAPC(例えば、PBMCを含む)の第2の層の数に対する比率は、正確にまたは約1:1.1~正確にまたは約1:10の範囲から選択される。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張の0日目は、APC(例えば、PBMCを含む)の第1の層の数に等しい第1の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、急速な第2の拡張の7日目は、APC(例えば、PBMCを含む)の第2の層の数に等しい第2の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、APC(例えば、PBMCを含む)の第1の層の数の、APC(例えば、PBMCを含む)の第2の層の数に対する比は、正確にまたは約1:1.1~正確にまたは約1:8の範囲から選択される。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張の0日目は、APC(例えば、PBMCを含む)の第1の層の数に等しい第1の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、急速な第2の拡張の7日目は、APC(例えば、PBMCを含む)の第2の層の数に等しい第2の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、APC(例えば、PBMCを含む)の第1の層の数の、APC(例えば、PBMCを含む)の第2の層の数に対する比は、正確にまたは約1:1.1~正確にまたは約1:7の範囲から選択される。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張の0日目は、APC(例えば、PBMCを含む)の第1の層の数に等しい第1の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、急速な第2の拡張の7日目は、APC(例えば、PBMCを含む)の第2の層の数に等しい第2の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、APC(例えば、PBMCを含む)の第1の層の数の、APC(例えば、PBMCを含む)の第2の層の数に対する比は、正確にまたは約1:1.1~正確にまたは約1:6の範囲から選択される。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張の0日目は、APC(例えば、PBMCを含む)の第1の層の数に等しい第1の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、急速な第2の拡張の7日目は、APC(例えば、PBMCを含む)の第2の層の数に等しい第2の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、APC(例えば、PBMCを含む)の第1の層の数の、APC(例えば、PBMCを含む)の第2の層の数に対する比は、正確にまたは約1:1.1~正確にまたは約1:5の範囲から選択される。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張の0日目は、APC(例えば、PBMCを含む)の第1の層の数に等しい第1の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、急速な第2の拡張の7日目は、APC(例えば、PBMCを含む)の第2の層の数に等しい第2の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、APC(例えば、PBMCを含む)の第1の層の数の、APC(例えば、PBMCを含む)の第2の層の数に対する比は、正確にまたは約1:1.1~正確にまたは約1:4の範囲から選択される。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張の0日目は、APC(例えば、PBMCを含む)の第1の層の数に等しい第1の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、急速な第2の拡張の7日目は、APC(例えば、PBMCを含む)の第2の層の数に等しい第2の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、APC(例えば、PBMCを含む)の第1の層の数の、APC(例えば、PBMCを含む)の第2の層の数に対する比は、正確にまたは約1:1.1~正確にまたは約1:3の範囲から選択される。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張の0日目は、APC(例えば、PBMCを含む)の第1の層の数に等しい第1の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、急速な第2の拡張の7日目は、APC(例えば、PBMCを含む)の第2の層の数に等しい第2の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、APC(例えば、PBMCを含む)の第1の層の数の、APC(例えば、PBMCを含む)の第2の層の数に対する比は、正確にまたは約1:1.1~正確にまたは約1:2の範囲から選択される。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張の0日目は、APC(例えば、PBMCを含む)の第1の層の数に等しい第1の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、急速な第2の拡張の7日目は、APC(例えば、PBMCを含む)の第2の層の数に等しい第2の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、APC(例えば、PBMCを含む)の第1の層の数の、APC(例えば、PBMCを含む)の第2の層の数に対する比は、正確にまたは約1:1.2~正確にまたは約1:8の範囲から選択される。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張の0日目は、APC(例えば、PBMCを含む)の第1の層の数に等しい第1の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、急速な第2の拡張の7日目は、APC(例えば、PBMCを含む)の第2の層の数に等しい第2の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、APC(例えば、PBMCを含む)の第1の層の数の、APC(例えば、PBMCを含む)の第2の層の数に対する比は、正確にまたは約1:1.3~正確にまたは約1:7の範囲から選択される。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張の0日目は、APC(例えば、PBMCを含む)の第1の層の数に等しい第1の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、急速な第2の拡張の7日目は、APC(例えば、PBMCを含む)の第2の層の数に等しい第2の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、APC(例えば、PBMCを含む)の第1の層の数の、APC(例えば、PBMCを含む)の第2の層の数に対する比は、正確にまたは約1:1.4~正確にまたは約1:6の範囲から選択される。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張の0日目は、APC(例えば、PBMCを含む)の第1の層の数に等しい第1の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、急速な第2の拡張の7日目は、APC(例えば、PBMCを含む)の第2の層の数に等しい第2の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、APC(例えば、PBMCを含む)の第1の層の数の、APC(例えば、PBMCを含む)の第2の層の数に対する比は、正確にまたは約1:1.5~正確にまたは約1:5の範囲から選択される。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張の0日目は、APC(例えば、PBMCを含む)の第1の層の数に等しい第1の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、急速な第2の拡張の7日目は、APC(例えば、PBMCを含む)の第2の層の数に等しい第2の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、APC(例えば、PBMCを含む)の第1の層の数の、APC(例えば、PBMCを含む)の第2の層の数に対する比は、正確にまたは約1:1.6~正確にまたは約1:4の範囲から選択される。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張の0日目は、APC(例えば、PBMCを含む)の第1の層の数に等しい第1の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、急速な第2の拡張の7日目は、APC(例えば、PBMCを含む)の第2の層の数に等しい第2の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、APC(例えば、PBMCを含む)の第1の層の数の、APC(例えば、PBMCを含む)の第2の層の数に対する比は、正確にまたは約1:1.7~正確にまたは約1:3.5の範囲から選択される。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張の0日目は、APC(例えば、PBMCを含む)の第1の層の数に等しい第1の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、急速な第2の拡張の7日目は、APC(例えば、PBMCを含む)の第2の層の数に等しい第2の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、APC(例えば、PBMCを含む)の第1の層の数の、APC(例えば、PBMCを含む)の第2の層の数に対する比は、正確にまたは約1:1.8~正確にまたは約1:3の範囲から選択される。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張の0日目は、APC(例えば、PBMCを含む)の第1の層の数に等しい第1の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、急速な第2の拡張の7日目は、APC(例えば、PBMCを含む)の第2の層の数に等しい第2の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、APC(例えば、PBMCを含む)の第1の層の数のAPC(例えば、PBMCを含む)の第2の層の数に対する比率は、正確にまたは約1:1.9~正確にまたは約1:2.5の範囲から選択される。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張の0日目は、APC(例えば、PBMCを含む)の第1の層の数に等しい第1の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、急速な第2の拡張の7日目は、APC(例えば、PBMCを含む)の第2の層の数に等しい第2の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、APC(例えば、PBMCを含む)の第1の層の数の、APC(例えば、PBMCを含む)の第2の層の数に対する比は、正確にまたは約1:2である。
他の実施形態では、プライミングによる第1の拡張の0日目は、APC(例えば、PBMCを含む)の第1の層の数に等しい第1の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、急速な第2の拡張の7日目は、APC(例えば、PBMCを含む)の第2の層の数に等しい第2の平均厚さを有する層状APC(例えば、PBMCを含む)の存在下で起こり、第1のAPC(例えば、PBMCを含む)層の数の第2のAPC(例えば、PBMCを含む)層の数に対する比率は、約1:1.1、1:1.2、1:1.3、1:1.4、1:1.5、1:1.6、1:1.7、1:1.8、1:1.9、1:2、1:2.1、1:2.2、1:2.3、1:2.4、1:2.5、1:2.6、1:2.7、1:2.8、1:2.9、1:3、1:3.1、1:3.2、1:3.3、1:3.4、1:3.5、1:3.6、1:3.7、1:3.8、1:3.9、1:4、1:4.1、1:4.2、1:4.3、1:4.4、1:4.5、1:4.6、1:4.7、1:4.8、1:4.9、1:5、1:5.1、1:5.2、1:5.3、1:5.4、1:5.5、1:5.6、1:5.7、1:5.8、1:5.9、1:6、1:6.1、1:6.2、1:6.3、1:6.4、1:6.5、1:6.6、1:6.7、1:6.8、1:6.9、1:7、1:7.1、1:7.2、1:7.3、1:7.4、1:7.5、1:7.6、1:7.7、1:7.8、1:7.9、1:8、1:8.1、1:8.2、1:8.3、1:8.4、1:8.5、1:8.6、1:8.7、1:8.8、1:8.9、1:9、1:9.1、1:9.2、1:9.3、1:9.4、1:9.5、1:9.6、1:9.7、1:9.8、1:9.9、または1:10から選択される。
いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張におけるAPCの数は、約1.0×106APC/cm2~約4.5×106APC/cm2の範囲から選択され、急速な第2の拡張におけるAPCの数は、約2.5×106APC/cm2~約7.5×106APC/cm2の範囲から選択される。
いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張におけるAPCの数は、約1.5×106APC/cm2~約3.5×106APC/cm2の範囲から選択され、急速な第2の拡張におけるAPCの数は、約3.5×106APC/cm2~約6.0×106APC/cm2の範囲から選択される。
いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張におけるAPCの数は、約2.0×106APC/cm2~約3.0×106APC/cm2の範囲から選択され、急速な第2の拡張におけるAPCの数は、約4.0×106APC/cm2~約5.5×106APC/cm2の範囲から選択される。
B.任意選択の細胞培地成分
1.抗CD3抗体
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の拡張方法で使用される培養培地(REPと称されるものを含む、例えば、図1及び8(特に、例えば図8B)を参照)は、抗CD3抗体を含む。IL-2と組み合わせた抗CD3抗体は、TIL集団におけるT細胞活性化及び細胞分裂を誘導する。この効果は、全長抗体、ならびにFab及びF(ab’)2断片で見ることができ、前者が一般に好まれ、例えば、Tsoukas et al.,J.Immunol.1985,135,1719を参照されたく、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
1.抗CD3抗体
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の拡張方法で使用される培養培地(REPと称されるものを含む、例えば、図1及び8(特に、例えば図8B)を参照)は、抗CD3抗体を含む。IL-2と組み合わせた抗CD3抗体は、TIL集団におけるT細胞活性化及び細胞分裂を誘導する。この効果は、全長抗体、ならびにFab及びF(ab’)2断片で見ることができ、前者が一般に好まれ、例えば、Tsoukas et al.,J.Immunol.1985,135,1719を参照されたく、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
当業者によって理解されるように、マウス、ヒト、霊長類、ラット、及びイヌ抗体を含むが、これらに限定されない、様々な哺乳動物由来の抗ヒトCD3ポリクローナル及びモノクローナル抗体を含む、本発明での使用が見出されるいくつかの好適な抗ヒトCD3抗体が存在する。特定の実施形態では、抗CD3抗体ムロモナブであるOKT3が使用される(Ortho-McNeil,Raritan,NJまたはMiltenyi Biotech,Auburn,CAから市販されている)。表1を参照されたい。
当業者によって理解されるように、マウス、ヒト、霊長類、ラット、及びイヌ抗体を含むが、これらに限定されない、様々な哺乳動物由来の抗ヒトCD3ポリクローナル及びモノクローナル抗体を含む、本発明での使用が見出されるいくつかの好適な抗ヒトCD3抗体が存在する。いくつかの実施形態では、抗CD3抗体ムロモナブであるOKT3が使用される(Ortho-McNeil,Raritan,NJまたはMiltenyi Biotech,Auburn,CAから市販されている)。
2.4-1BB(CD137)アゴニスト
いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張及び/または急速な第2の拡張の細胞培養培地は、TNFRSFアゴニストを含む。いくつかの実施形態では、TNFRSFアゴニストは、4-1BB(CD137)アゴニストである。4-1BBアゴニストは、当該技術分野で知られている任意の4-1BB結合分子であり得る。4-1BB結合分子は、ヒトまたは哺乳動物4-1BBに結合することができるモノクローナル抗体または融合タンパク質であり得る。4-1BBアゴニストまたは4-1BB結合分子は、任意のアイソタイプ(例えば、IgG、IgE、IgM、IgD、IgA、及びIgY)、クラス(例えば、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、及びIgA2)、またはサブクラスの免疫グロブリン分子の免疫グロブリン重鎖を含み得る。4-1BBアゴニストまたは4-1BB結合分子は、重鎖及び軽鎖の両方を有し得る。本明細書で使用される場合、結合分子という用語は、抗体(全長抗体を含む)、モノクローナル抗体(全長モノクローナル抗体を含む)、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体(例えば、二重特異性抗体)、ヒト、ヒト化またはキメラ抗体、及び抗体断片、例えば、Fab断片、F(ab’)断片、Fab発現ライブラリーによって産生された断片、上記のうちのいずれかのエピトープ結合断片、ならびに4-1BBに結合する抗体の操作された形態、例えば、scFv分子も含む。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、完全ヒト抗体である抗原結合タンパク質である。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、ヒト化抗体である抗原結合タンパク質である。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法及び組成物に使用するための4-1BBアゴニストには、抗4-1BB抗体、ヒト抗4-1BB抗体、マウス抗4-1BB抗体、哺乳動物抗4-1BB抗体、モノクローナル抗4-1BB抗体、ポリクローナル抗4-1BB抗体、キメラ抗4-1BB抗体、抗4-1BBアドネクチン、抗4-1BBドメイン抗体、一本鎖抗4-1BB断片、重鎖抗4-1BB断片、軽鎖抗4-1BB断片、抗4-1BB融合タンパク質、及びそれらの断片、誘導体、複合体、バリアント、またはバイオシミラーが含まれる。アゴニスト抗4-1BB抗体は、強力な免疫応答を誘導することが知られている。Lee,et al.,PLOS One 2013,8,e69677。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、アゴニスト、抗4-1BBヒト化、または完全ヒトモノクローナル抗体(すなわち、単一の細胞株に由来する抗体)である。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、EU-101(Eutilex Co.Ltd.)、ウトミルマブ、もしくはウレルマブ、またはそれらの断片、誘導体、複合体、バリアント、もしくはバイオシミラーである。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、ウトミルマブもしくはウレルマブ、またはそれらの断片、誘導体、複合体、バリアント、もしくはバイオシミラーである。
いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張及び/または急速な第2の拡張の細胞培養培地は、TNFRSFアゴニストを含む。いくつかの実施形態では、TNFRSFアゴニストは、4-1BB(CD137)アゴニストである。4-1BBアゴニストは、当該技術分野で知られている任意の4-1BB結合分子であり得る。4-1BB結合分子は、ヒトまたは哺乳動物4-1BBに結合することができるモノクローナル抗体または融合タンパク質であり得る。4-1BBアゴニストまたは4-1BB結合分子は、任意のアイソタイプ(例えば、IgG、IgE、IgM、IgD、IgA、及びIgY)、クラス(例えば、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、及びIgA2)、またはサブクラスの免疫グロブリン分子の免疫グロブリン重鎖を含み得る。4-1BBアゴニストまたは4-1BB結合分子は、重鎖及び軽鎖の両方を有し得る。本明細書で使用される場合、結合分子という用語は、抗体(全長抗体を含む)、モノクローナル抗体(全長モノクローナル抗体を含む)、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体(例えば、二重特異性抗体)、ヒト、ヒト化またはキメラ抗体、及び抗体断片、例えば、Fab断片、F(ab’)断片、Fab発現ライブラリーによって産生された断片、上記のうちのいずれかのエピトープ結合断片、ならびに4-1BBに結合する抗体の操作された形態、例えば、scFv分子も含む。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、完全ヒト抗体である抗原結合タンパク質である。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、ヒト化抗体である抗原結合タンパク質である。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法及び組成物に使用するための4-1BBアゴニストには、抗4-1BB抗体、ヒト抗4-1BB抗体、マウス抗4-1BB抗体、哺乳動物抗4-1BB抗体、モノクローナル抗4-1BB抗体、ポリクローナル抗4-1BB抗体、キメラ抗4-1BB抗体、抗4-1BBアドネクチン、抗4-1BBドメイン抗体、一本鎖抗4-1BB断片、重鎖抗4-1BB断片、軽鎖抗4-1BB断片、抗4-1BB融合タンパク質、及びそれらの断片、誘導体、複合体、バリアント、またはバイオシミラーが含まれる。アゴニスト抗4-1BB抗体は、強力な免疫応答を誘導することが知られている。Lee,et al.,PLOS One 2013,8,e69677。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、アゴニスト、抗4-1BBヒト化、または完全ヒトモノクローナル抗体(すなわち、単一の細胞株に由来する抗体)である。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、EU-101(Eutilex Co.Ltd.)、ウトミルマブ、もしくはウレルマブ、またはそれらの断片、誘導体、複合体、バリアント、もしくはバイオシミラーである。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、ウトミルマブもしくはウレルマブ、またはそれらの断片、誘導体、複合体、バリアント、もしくはバイオシミラーである。
いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストまたは4-1BB結合分子は、融合タンパク質である場合もある。いくつかの実施形態では、三量体または六量体4-1BBアゴニスト(3つまたは6つのリガンド結合ドメインを有する)などの多量体4-1BBアゴニストは、典型的に2つのリガンド結合ドメインを有するアゴニストモノクローナル抗体と比較して、優れた受容体(4-1BBL)クラスター化及び内部細胞シグナル伝達複合体形成を誘導し得る。3つのTNFRSF結合ドメイン及びIgG1-Fcを含み、かつ任意選択でこれらの融合タンパク質のうちの2つ以上をさらに結合する三量体(三価)または六量体(もしくは六価)またはそれ以上の融合タンパク質は、例えば、Gieffers,et al.,Mol.Cancer Therapeutics 2013,12,2735-47に記載されている。
アゴニスト4-1BB抗体及び融合タンパク質は、強い免疫応答を誘導することが知られている。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、毒性を低減するのに十分な様式で4-1BB抗原に特異的に結合するモノクローナル抗体または融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、抗体依存性細胞毒性(cellular toxicity)(ADCC)、例えば、NK細胞細胞傷害性(cytotoxicity)を抑制するアゴニスト4-1BBモノクローナル抗体または融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、抗体依存性細胞食作用(ADCP)を抑制するアゴニスト4-1BBモノクローナル抗体または融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、補体依存性細胞傷害性(CDC)を抑制するアゴニスト4-1BBモノクローナル抗体または融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、Fc領域機能性を抑制するアゴニスト4-1BBモノクローナル抗体または融合タンパク質である。
いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、高い親和性及びアゴニスト活性でヒト4-1BB(配列番号9)に結合することを特徴とする。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、ヒト4-1BB(配列番号40)に結合する結合分子である。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、マウス4-1BB(配列番号41)に結合する結合分子である。4-1BBアゴニストまたは結合分子が結合する4-1BB抗原のアミノ酸配列を表5に要約する。
いくつかの実施形態では、記載される組成物、プロセス及び方法は、ヒトもしくはマウス4-1BBに約100pM以下のKDで結合する、ヒトもしくはマウス4-1BBに約90pM以下のKDで結合する、ヒトもしくはマウス4-1BBに約80pM以下のKDで結合する、ヒトもしくはマウス4-1BBに約70pM以下のKDで結合する、ヒトもしくはマウス4-1BBに約60pM以下のKDで結合する、ヒトもしくはマウス4-1BBに約50pM以下のKDで結合する、ヒトもしくはマウス4-1BBに約40pM以下のKDで結合する、またはヒトもしくはマウス4-1BBに約30pM以下のKDで結合する4-1BBアゴニストを含む。
いくつかの実施形態では、記載される組成物、プロセス及び方法は、ヒトもしくはマウス4-1BBに約7.5×105l/M・s以上のkassocで結合する、ヒトもしくはマウス4-1BBに約7.5×105l/M・s以上のkassocで結合する、ヒトもしくはマウス4-1BBに約8×105l/M・s以上のkassocで結合する、ヒトもしくはマウス4-1BBに約8.5×105l/M・s以上のkassocで結合する、ヒトもしくはマウス4-1BBに約9×105l/M・s以上のkassocで結合する、ヒトもしくはマウス4-1BBに約9.5×105l/M・s以上のkassocで結合する、またはヒトもしくはマウス4-1BBに約1×106l/M・s以上のkassocで結合する4-1BBアゴニストを含む。
いくつかの実施形態では、記載される組成物、プロセス及び方法は、ヒトもしくはマウス4-1BBに約2×10-5l/s以下のkdissocで結合する、ヒトもしくはマウス4-1BBに約2.1×10-5l/s以下のkdissocで結合する、ヒトもしくはマウス4-1BBに約2.2×10-5l/s以下のkdissocで結合する、ヒトもしくはマウス4-1BBに約2.3×10-5l/s以下のkdissocで結合する、ヒトもしくはマウス4-1BBに約2.4×10-5l/s以下のkdissocで結合する、ヒトもしくはマウス4-1BBに約2.5×10-5l/s以下のkdissocで結合する、ヒトもしくはマウス4-1BBに約2.6×10-5l/s以下のkdissocで結合する、ヒトもしくはマウス4-1BBに約2.7×10-5l/s以下のkdissocで結合する、ヒトもしくはマウス4-1BBに約2.8×10-5l/s以下のkdissocで結合する、ヒトもしくはマウス4-1BBに約2.9×10-5l/s以下のkdissocで結合する、またはヒトもしくはマウス4-1BBに約3×10-5l/s以下のkdissocで結合する、4-1BBアゴニストを含む。
いくつかの実施形態では、記載される組成物、プロセス及び方法は、ヒトもしくはマウス4-1BBに約10nM以下のIC50で結合する、ヒトもしくはマウス4-1BBに約9nM以下のIC50で結合する、ヒトもしくはマウス4-1BBに約8nM以下のIC50で結合する、ヒトもしくはマウス4-1BBに約7nM以下のIC50で結合する、ヒトもしくはマウス4-1BBに約6nM以下のIC50で結合する、ヒトもしくはマウス4-1BBに約5nM以下のIC50で結合する、ヒトもしくはマウス4-1BBに約4nM以下のIC50で結合する、ヒトもしくはマウス4-1BBに約3nM以下のIC50で結合する、ヒトもしくはマウス4-1BBに約2nM以下のIC50で結合する、ヒトもしくはマウス4-1BBに約1nM以下のIC50で結合する、4-1BBアゴニストを含む。
いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、PF-05082566もしくはMOR-7480としても知られるウトミルマブ、またはその断片、誘導体、バリアント、もしくはバイオシミラーである。ウトミルマブは、Pfizer,Inc.から入手可能である。ウトミルマブは、免疫グロブリンG2-ラムダ、抗[ホモサピエンスTNFRSF9(腫瘍壊死因子受容体(TNFR)スーパーファミリーメンバー9、4-1BB、T細胞抗原ILA、CD137)]、ホモサピエンス(完全ヒト)モノクローナル抗体である。ウトミルマブのアミノ酸配列を表6に示す。ウトミルマブは、Asn59及びAsn292にグリコシル化部位、22-96位(VH-VL)、143-199位(CH1-CL)、256-316位(CH2)、及び362-420位(CH3)に重鎖鎖内ジスルフィド架橋、22’-87’位(VH-VL)及び136’-195’位(CH1-CL)に軽鎖鎖内ジスルフィド架橋、IgG2Aアイソフォーム218-218、219-219、222-222、及び225-225位、IgG2A/Bアイソフォーム218-130、219-219、222-222、及び225-225位、ならびにIgG2Bアイソフォーム219-130(2)、222-222、及び225-225位に鎖間重鎖-重鎖ジスルフィド架橋、ならびにIgG2Aアイソフォーム130-213’(2)位、IgG2A/Bアイソフォーム218-213’位、及び130-213’位、ならびにIgG2Bアイソフォーム218-213’(2)位に鎖間重鎖-軽鎖ジスルフィド架橋を含む。ウトミルマブならびにそのバリアント及び断片の調製及び特性は、米国特許第8,821,867号、同第8,337,850号、及び同第9,468,678号、ならびに国際特許出願公開第WO2012/032433A1(これらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる)に記載されている。ウトミルマブの前臨床特徴は、Fisher,et al.,Cancer Immunolog.& Immunother.2012,61,1721-33に記載される。様々な血液学的及び固形腫瘍適応症におけるウトミルマブの現在の臨床試験には、米国国立衛生研究所のclinicaltrials.gov識別子NCT02444793、NCT01307267、NCT02315066、及びNCT02554812が含まれる。
いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、配列番号42によって示される重鎖及び配列番号43によって示される軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、それぞれ、配列番号42及び配列番号43に示される配列を有する重鎖及び軽鎖、またはそれらの抗原結合断片、Fab断片、一本鎖可変断片(scFv)、バリアント、もしくは複合体を含む。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号42及び配列番号43に示される配列と少なくとも99%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号42及び配列番号43に示される配列と少なくとも98%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号42及び配列番号43に示される配列と少なくとも97%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号42及び配列番号43に示される配列と少なくとも96%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号42及び配列番号43に示される配列と少なくとも95%同一である重鎖及び軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、ウトミルマブの重鎖及び軽鎖CDRまたは可変領域(VR)を含む。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニスト重鎖可変領域(VH)は、配列番号44に示される配列を含み、4-1BBアゴニスト軽鎖可変領域(VL)は、配列番号45に示される配列、及びその保存的アミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号44及び配列番号45に示される配列と少なくとも99%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号44及び配列番号45に示される配列と少なくとも98%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号44及び配列番号45に示される配列と少なくとも97%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号44及び配列番号45に示される配列と少なくとも96%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号44及び配列番号45に示される配列と少なくとも95%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、各々が、配列番号44及び配列番号45に示される配列と少なくとも99%同一であるVH領域及びVL領域を含むscFv抗体を含む。
いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、それぞれ、配列番号46、配列番号47、及び配列番号48に示される配列を有する重鎖CDR1、CDR2及びCDR3ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号49、配列番号50、及び配列番号51に示される配列を有する軽鎖CDR1、CDR2及びCDR3ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。
いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、ウトミルマブに関して薬物規制当局によって承認された4-1BBアゴニストバイオシミラーモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、バイオシミラーモノクローナル抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列と少なくとも97%の配列同一性、例えば、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ参照医薬品または参照バイオ製品と比較して1つ以上の翻訳後修飾を含む4-1BB抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、ウトミルマブである。いくつかの実施形態では、1つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、及び切断のうちの1つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可されたまたは認可を得るために提出された4-1BBアゴニスト抗体であり、4-1BBアゴニスト抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、ウトミルマブである。4-1BBアゴニスト抗体は、米国FDA及び/または欧州連合EMAなどの薬物規制当局によって認可され得る。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、1つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、1つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、ウトミルマブである。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、1つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、1つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、ウトミルマブである。
いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、BMS-663513及び20H4.9.h4aとしても知られるモノクローナル抗体ウレルマブ、またはそれらの断片、誘導体、バリアント、もしくはバイオシミラーである。ウレルマブは、Bristol-Myers Squibb,Inc.及びCreative Biolabs,Inc.から入手可能である。ウレルマブは、免疫グロブリンG4-カッパ、抗[ホモサピエンスTNFRSF9(腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー9、4-1BB、T細胞抗原ILA、CD137)]、ホモサピエンス(完全ヒト)モノクローナル抗体である。ウレルマブのアミノ酸配列を表7に示す。ウレルマブは、298位(及び298’’)にN-グリコシル化部位、22-95位(VH-VL)、148-204位(CH1-CL)、262-322位(CH2)、及び368-426位(CH3)(22’’-95’’、148’’-204’’、262’’-322’’、及び368’’-426’’位)に重鎖鎖内ジスルフィド架橋、23’-88’位(VH-VL)及び136’-196’位(CH1-CL)(23’’’-88’’’及び136’’’-196’’’位)に軽鎖鎖内ジスルフィド架橋、227-227’’位及び230-230’’位に鎖間重鎖-重鎖ジスルフィド架橋ならびに135-216’及び135’’-216’’’に鎖間重鎖-軽鎖ジスルフィド架橋を含む。ウレルマブならびにそのバリアント及び断片の調製及び特性は、米国特許第7,288,638号及び同第8,962,804号に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。ウレルマブの前臨床及び臨床特徴は、Segal,et al.,Clin.Cancer Res.2016に記載されており、http:/dx.doi.org/10.1158/1078-0432.CCR-16-1272で入手可能である。様々な血液学的及び固形腫瘍適応症におけるウレルマブの現在の臨床試験には、米国国立衛生研究所のclinicaltrials.gov識別子NCT01775631、NCT02110082、NCT02253992、及びNCT01471210が含まれる。
いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、配列番号52によって示される重鎖及び配列番号53によって示される軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、それぞれ、配列番号52及び配列番号53に示される配列を有する重鎖及び軽鎖、またはそれらの抗原結合断片、Fab断片、一本鎖可変断片(scFv)、バリアント、もしくは複合体を含む。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号52及び配列番号53に示される配列と少なくとも99%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号52及び配列番号53に示される配列と少なくとも98%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号52及び配列番号53に示される配列と少なくとも97%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号52及び配列番号53に示される配列と少なくとも96%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号52及び配列番号53に示される配列と少なくとも95%同一である重鎖及び軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、ウレルマブの重鎖及び軽鎖CDRまたは可変領域(VR)を含む。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニスト重鎖可変領域(VH)は、配列番号54に示される配列を含み、4-1BBアゴニスト軽鎖可変領域(VL)は、配列番号55に示される配列、及びその保存的アミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号54及び配列番号55に示される配列と少なくとも99%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号54及び配列番号55に示される配列と少なくとも98%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号54及び配列番号55に示される配列と少なくとも97%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号54及び配列番号55に示される配列と少なくとも96%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号54及び配列番号55に示される配列と少なくとも95%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、各々が、配列番号54及び配列番号55に示される配列と少なくとも99%同一であるVH領域及びVL領域を含むscFv抗体を含む。
いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、それぞれ、配列番号56、配列番号57、及び配列番号58に示される配列を有する重鎖CDR1、CDR2及びCDR3ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号59、配列番号60、及び配列番号61に示される配列を有する軽鎖CDR1、CDR2及びCDR3ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。
いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、ウレルマブに関して薬物規制当局によって承認された4-1BBアゴニストバイオシミラーモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、バイオシミラーモノクローナル抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列と少なくとも97%の配列同一性、例えば、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ参照医薬品または参照バイオ製品と比較して1つ以上の翻訳後修飾を含む4-1BB抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、ウレルマブである。いくつかの実施形態では、1つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、及び切断のうちの1つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可されたまたは認可を得るために提出された4-1BBアゴニスト抗体であり、4-1BBアゴニスト抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、ウレルマブである。4-1BBアゴニスト抗体は、米国FDA及び/または欧州連合EMAなどの薬物規制当局によって認可され得る。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、1つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、1つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、ウレルマブである。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、1つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、1つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、ウレルマブである。
いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、1D8、3Elor、4B4(BioLegend 309809)、H4-1BB-M127(BD Pharmingen 552532)、BBK2(Thermo Fisher MS621PABX)、145501(Leinco Technologies B591)、ATCC番号HB-11248として寄託された細胞株によって産生され、米国特許第6,974,863号に開示される抗体、5F4(BioLegend 31 1503)、C65-485(BD Pharmingen 559446)、米国特許出願公開第US2005/0095244号に開示される抗体、米国特許第7,288,638号に開示される抗体(例えば、20H4.9-IgGl(BMS-663031))、米国特許第6,887,673号に開示される抗体(例えば、4E9もしくはBMS-554271)、米国特許第7,214,493号に開示される抗体、米国特許第6,303,121号に開示される抗体、米国特許第6,569,997号に開示される抗体、米国特許第6,905,685号に開示される抗体(例えば、4E9もしくはBMS-554271)、米国特許第6,362,325号に開示される抗体(例えば、1D8もしくはBMS-469492、3H3もしくはBMS-469497、または3El)、米国特許第6,974,863号に開示される抗体(例えば、53A2)、米国特許第6,210,669号に開示される抗体(例えば、1D8、3B8、もしくは3El)、米国特許第5,928,893号に開示される抗体、米国特許第6,303,121号に開示される抗体、米国特許第6,569,997号に開示される抗体、国際特許出願公開第WO2012/177788号、同第WO2015/119923号、及び同第WO2010/042433号に開示される抗体、ならびにそれらの断片、誘導体、複合体、バリアント、またはバイオシミラーからなる群から選択され、前述の特許または特許出願公開の各々の開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、国際特許出願公開第WO2008/025516A1号、同第WO2009/007120A1号、同第WO2010/003766A1号、同第WO2010/010051A1号、及び同第WO2010/078966A1号、米国特許出願公開第US2011/0027218A1号、同第US2015/0126709A1号、同第US2011/0111494A1号、同第US2015/0110734A1号、及び同第US2015/0126710A1号、ならびに米国特許第9,359,420号、同第9,340,599号、同第8,921,519号、及び同第8,450,460号に記載される4-1BBアゴニスト融合タンパク質であり、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、構造I-A(C末端Fc抗体断片融合タンパク質)もしくは構造I-B(N末端Fc抗体断片融合タンパク質)に示されるような4-1BBアゴニスト融合タンパク質、またはそれらの断片、誘導体、コンジュゲート、バリアント、もしくはバイオシミラーである(図18を参照)。構造I-A及びI-Bにおいて、円筒は、個々のポリペプチド結合ドメインを指す。構造I-A及びI-Bは、例えば、4-1BBL(4-1BBリガンド、CD137リガンド(CD137L)、もしくは腫瘍壊死因子スーパーファミリーメンバー9(TNFSF9))または4-1BBに結合する抗体に由来する3つの直線的に連結されたTNFRSF結合ドメインを含み、これらが折り重なって三価タンパク質を形成し、その後、これがIgG1-Fc(CH3及びCH2ドメインを含む)によって第2の三価タンパク質に連結され、その後、これを使用して、三価タンパク質のうちの2つをジスルフィド結合(小さく長細い楕円)によって一緒に連結し、構造を安定化し、6つの受容体及びシグナル伝達タンパク質の細胞内シグナル伝達ドメインを一緒にして、シグナル伝達複合体を形成することができるアゴニストを提供する。円筒として示されるTNFRSF結合ドメインは、例えば、親水性残基及び柔軟性のためのGly及びSer配列、ならびに溶解性のためのGlu及びLysを含み得るリンカーによって結合されたVH鎖及びVL鎖を含む、scFvドメインであり得る。de Marco,Microbial Cell Factories,2011,10,44、Ahmad,et al.,Clin.&Dev.Immunol.2012,980250、Monnier,et al.,Antibodies,2013,2,193-208、または本明細書の他の場所に組み込まれている参照文献に記載されるものなどの任意のscFvドメイン設計が使用され得る。この形態の融合タンパク質構造は、米国特許第9,359,420号、同第9,340,599号、同第8,921,519号、及び同第8,450,460号に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。
図18に示される構造I-Aの他のポリペプチドドメインのアミノ酸配列は、表8に見出される。Fcドメインは、好ましくは、完全な定常ドメイン(配列番号62のアミノ酸17~230)、完全なヒンジドメイン(配列番号62のアミノ酸1~16)、またはヒンジドメインの一部(例えば、配列番号62のアミノ酸4~16)を含む。C末端Fc抗体を結合するための好ましいリンカーは、追加のポリペプチドの融合に好適なリンカーを含む、配列番号63~配列番号72に示される実施形態から選択され得る。
図18に示される構造I-Bの他のポリペプチドドメインのアミノ酸配列は、表9に見出される。Fc抗体断片が構造I-BにあるようなTNRFSF融合タンパク質のN末端に融合される場合、Fcモジュールの配列は、好ましくは、配列番号73に示されるものであり、リンカー配列は、好ましくは、配列番号74~配列番号76に示される実施形態から選択される。
いくつかの複合体実施形態では、構造I-AまたはI-Bによる4-1BBアゴニスト融合タンパク質は、ウトミルマブの可変重鎖及び可変軽鎖、ウレルマブの可変重鎖及び可変軽鎖、ウトミルマブの可変重鎖及び可変軽鎖、表5に記載の可変重鎖及び可変軽鎖から選択される可変重鎖及び可変軽鎖、前述の可変重鎖及び可変軽鎖の任意の組み合わせ、ならびにそれらの断片、誘導体、複合体、バリアント、及びバイオシミラーからなる群から選択される1つ以上の4-1BB結合ドメインを含む。
いくつかの複合体実施形態では、構造I-AまたはI-Bによる4-1BBアゴニスト融合タンパク質は、4-1BBL配列を含む1つ以上の4-1BB結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、構造I-AまたはI-Bによる4-1BBアゴニスト融合タンパク質は、配列番号77による配列を含む1つ以上の4-1BB結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、構造I-AまたはI-Bによる4-1BBアゴニスト融合タンパク質は、可溶性4-1BBL配列を含む1つ以上の4-1BB結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、構造I-AまたはI-Bによる4-1BBアゴニスト融合タンパク質は、配列番号78による配列を含む1つ以上の4-1BB結合ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、構造I-AまたはI-Bによる4-1BBアゴニスト融合タンパク質は、各々が、それぞれ、配列番号43及び配列番号44に示される配列と少なくとも95%同一であるVH領域及びVL領域を含むscFvドメインである1つ以上の4-1BB結合ドメインを含み、VHドメイン及びVLドメインはリンカーによって結合されている。いくつかの実施形態では、構造I-AまたはI-Bによる4-1BBアゴニスト融合タンパク質は、各々が、それぞれ、配列番号54及び配列番号55に示される配列と少なくとも95%同一であるVH領域及びVL領域を含むscFvドメインである1つ以上の4-1BB結合ドメインを含み、VHドメイン及びVLドメインはリンカーによって結合されている。いくつか実施形態では、構造I-AまたはI-Bによる4-1BBアゴニスト融合タンパク質は、各々が、表10に示されるVH配列及びVL配列と少なくとも95%同一であるVH配列及びVL配列を含むscFvドメインである1つ以上の4-1BB結合ドメインを含み、VHドメイン及びVLドメインはリンカーによって結合されている。
いくつか実施形態では、4-1BBアゴニストは、(i)第1の可溶性4-1BB結合ドメイン、(ii)第1のペプチドリンカー、(iii)第2の可溶性4-1BB結合ドメイン、(iv)第2のペプチドリンカー、及び(v)第3の可溶性4-1BB結合ドメインを含む4-1BBアゴニスト一本鎖融合ポリペプチドであり、N末端及び/またはC末端に追加のドメインをさらに含み、追加のドメインは、FabまたはFc断片ドメインである。いくつか実施形態では、4-1BBアゴニストは、(i)第1の可溶性4-1BB結合ドメイン、(ii)第1のペプチドリンカー、(iii)第2の可溶性4-1BB結合ドメイン、(iv)第2のペプチドリンカー、及び(v)第3の可溶性4-1BB結合ドメインを含む4-1BBアゴニスト一本鎖融合ポリペプチドであり、N末端及び/またはC末端に追加のドメインをさらに含み、追加のドメインは、FabまたはFc断片ドメインであり、可溶性4-1BBドメインは各々、茎領域(三量体化に寄与し、細胞膜まである特定の距離を提供するが、4-1BB結合ドメインの一部分ではない)を欠き、第1及び第2のペプチドリンカーは独立して、3~8アミノ酸長を有する。
いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、(i)第1の可溶性腫瘍壊死因子(TNF)スーパーファミリーサイトカインドメイン、(ii)第1のペプチドリンカー、(iii)第2の可溶性TNFスーパーファミリーサイトカインドメイン、(iv)第2のペプチドリンカー、及び(v)第3の可溶性TNFスーパーファミリーサイトカインドメインを含む4-1BBアゴニスト一本鎖融合ポリペプチドであり、可溶性TNFスーパーファミリーサイトカインドメインは各々、茎領域を欠き、第1及び第2のペプチドリンカーは独立して、3~8アミノ酸長であり、各TNFスーパーファミリーサイトカインドメインは、4-1BB結合ドメインである。
いくつか実施形態では、4-1BBアゴニストは、前述のVLドメインのうちのいずれかに連結された前述のVHドメインのうちのいずれかを含む4-1BBアゴニストscFv抗体である。
いくつか実施形態では、4-1BBアゴニストは、BPS Bioscience(San Diego,CA,USA)から市販されているBPS Bioscience 4-1BBアゴニスト抗体カタログ番号79097-2である。いくつかの実施形態では、4-1BBアゴニストは、Creative Biolabs(Shirley,NY,USA)から市販されているCreative Biolabs 4-1BBアゴニスト抗体カタログ番号MOM-18179である。
3.OX40(CD134)アゴニスト
いくつかの実施形態では、TNFRSFアゴニストは、OX40(CD134)アゴニストである。OX40アゴニストは、当該技術分野で知られている任意のOX40結合分子であり得る。OX40結合分子は、ヒトまたは哺乳動物OX40に結合することができるモノクローナル抗体または融合タンパク質であり得る。OX40アゴニストまたはOX40結合分子は、任意のアイソタイプ(例えば、IgG、IgE、IgM、IgD、IgA、及びIgY)、クラス(例えば、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、及びIgA2)、またはサブクラスの免疫グロブリン分子の免疫グロブリン重鎖を含み得る。OX40アゴニストまたはOX40結合分子は、重鎖及び軽鎖の両方を有し得る。本明細書で使用される場合、結合分子という用語は、抗体(全長抗体を含む)、モノクローナル抗体(全長モノクローナル抗体を含む)、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体(例えば、二重特異性抗体)、ヒト、ヒト化またはキメラ抗体、及び抗体断片、例えば、Fab断片、F(ab’)断片、Fab発現ライブラリーによって産生された断片、上記のうちのいずれかのエピトープ結合断片、ならびにOX40に結合する抗体の操作された形態、例えば、scFv分子も含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、完全ヒト抗体である抗原結合タンパク質である。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、ヒト化抗体である抗原結合タンパク質である。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法及び組成物に使用するためのOX40アゴニストには、抗OX40抗体、ヒト抗OX40抗体、マウス抗OX40抗体、哺乳動物抗OX40抗体、モノクローナル抗OX40抗体、ポリクローナル抗OX40抗体、キメラ抗OX40抗体、抗OX40アドネクチン、抗OX40ドメイン抗体、一本鎖抗OX40断片、重鎖抗OX40断片、軽鎖抗OX40断片、抗OX40融合タンパク質、及びそれらの断片、誘導体、複合体、バリアント、またはバイオシミラーが含まれる。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、アゴニスト、抗OX40ヒト化、または完全ヒトモノクローナル抗体(すなわち、単一の細胞株に由来する抗体)である。
いくつかの実施形態では、TNFRSFアゴニストは、OX40(CD134)アゴニストである。OX40アゴニストは、当該技術分野で知られている任意のOX40結合分子であり得る。OX40結合分子は、ヒトまたは哺乳動物OX40に結合することができるモノクローナル抗体または融合タンパク質であり得る。OX40アゴニストまたはOX40結合分子は、任意のアイソタイプ(例えば、IgG、IgE、IgM、IgD、IgA、及びIgY)、クラス(例えば、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、及びIgA2)、またはサブクラスの免疫グロブリン分子の免疫グロブリン重鎖を含み得る。OX40アゴニストまたはOX40結合分子は、重鎖及び軽鎖の両方を有し得る。本明細書で使用される場合、結合分子という用語は、抗体(全長抗体を含む)、モノクローナル抗体(全長モノクローナル抗体を含む)、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体(例えば、二重特異性抗体)、ヒト、ヒト化またはキメラ抗体、及び抗体断片、例えば、Fab断片、F(ab’)断片、Fab発現ライブラリーによって産生された断片、上記のうちのいずれかのエピトープ結合断片、ならびにOX40に結合する抗体の操作された形態、例えば、scFv分子も含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、完全ヒト抗体である抗原結合タンパク質である。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、ヒト化抗体である抗原結合タンパク質である。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法及び組成物に使用するためのOX40アゴニストには、抗OX40抗体、ヒト抗OX40抗体、マウス抗OX40抗体、哺乳動物抗OX40抗体、モノクローナル抗OX40抗体、ポリクローナル抗OX40抗体、キメラ抗OX40抗体、抗OX40アドネクチン、抗OX40ドメイン抗体、一本鎖抗OX40断片、重鎖抗OX40断片、軽鎖抗OX40断片、抗OX40融合タンパク質、及びそれらの断片、誘導体、複合体、バリアント、またはバイオシミラーが含まれる。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、アゴニスト、抗OX40ヒト化、または完全ヒトモノクローナル抗体(すなわち、単一の細胞株に由来する抗体)である。
いくつかの実施形態では、OX40アゴニストまたはOX40結合分子は、融合タンパク質である場合もある。OX40Lに融合されたFcドメインを含むOX40融合タンパク質は、例えば、Sadun,et al.,J.Immunother.2009,182,1481-89に記載されている。いくつかの実施形態では、三量体または六量体OX40アゴニスト(3つまたは6つのリガンド結合ドメインを有する)などの多量体OX40アゴニストは、典型的に2つのリガンド結合ドメインを有するアゴニストモノクローナル抗体と比較して、優れた受容体(OX40L)クラスター化及び内部細胞シグナル伝達複合体形成を誘導し得る。3つのTNFRSF結合ドメイン及びIgG1-Fcを含み、かつ任意選択でこれらの融合タンパク質のうちの2つ以上をさらに結合する三量体(三価)または六量体(もしくは六価)またはそれ以上の融合タンパク質は、例えば、Gieffers,et al.,Mol.Cancer Therapeutics 2013,12,2735-47に記載されている。
アゴニストOX40抗体及び融合タンパク質は、強い免疫応答を誘導することが知られている。Curti,et al.,Cancer Res.2013,73,7189-98。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、毒性を低減するのに十分な様式でOX40抗原に特異的に結合するモノクローナル抗体または融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、抗体依存性細胞毒性(cellular toxicity)(ADCC)、例えば、NK細胞細胞傷害性(cytotoxicity)を抑制するアゴニストOX40モノクローナル抗体または融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、抗体依存性細胞食作用(ADCP)を抑制するアゴニストOX40モノクローナル抗体または融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、補体依存性細胞傷害性(CDC)を抑制するアゴニストOX40モノクローナル抗体または融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、Fc領域機能性を抑制するアゴニストOX40モノクローナル抗体または融合タンパク質である。
いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、高い親和性及びアゴニスト活性でヒトOX40(配列番号85)に結合することを特徴とする。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、ヒトOX40に結合する結合分子である(配列番号85)。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、マウスOX40に結合する結合分子である(配列番号86)。OX40アゴニストまたは結合分子が結合するOX40抗原のアミノ酸配列を表11に要約する。
いくつかの実施形態では、記載される組成物、プロセス、及び方法は、ヒトもしくはマウスOX40に約100pM以下のKDで結合する、ヒトもしくはマウスOX40に約90pM以下のKDで結合する、ヒトもしくはマウスOX40に約80pM以下のKDで結合する、ヒトもしくはマウスOX40に約70pM以下のKDで結合する、ヒトもしくはマウスOX40に約60pM以下のKDで結合する、ヒトもしくはマウスOX40に約50pM以下のKDで結合する、ヒトもしくはマウスOX40に約40pM以下のKDで結合する、またはヒトもしくはマウスOX40に約30pM以下のKDで結合するOX40アゴニストを含む。
いくつかの実施形態では、記載される組成物、プロセス及び方法は、ヒトもしくはマウスOX40に約7.5×105l/M・s以上のkassocで結合する、ヒトもしくはマウスOX40に約7.5×105l/M・s以上のkassocで結合する、ヒトもしくはマウスOX40に約8×105l/M・s以上のkassocで結合する、ヒトもしくはマウスOX40に約8.5×105l/M・s以上のkassocで結合する、ヒトもしくはマウスOX40に約9×105l/M・s以上のkassocで結合する、ヒトもしくはマウスOX40に約9.5×105l/M・s以上のkassocで結合する、またはヒトもしくはマウスOX40に約1×106l/M・s以上のkassocで結合する、OX40アゴニストを含む。
いくつかの実施形態では、記載される組成物、プロセス、及び方法は、ヒトもしくはマウスOX40に約2×10-5l/s以下のkdissocで結合する、ヒトもしくはマウスOX40に約2.1×10-5l/s以下のkdissocで結合する、ヒトもしくはマウスOX40に約2.2×10-5l/s以下のkdissocで結合する、ヒトもしくはマウスOX40に約2.3×10-5l/s以下のkdissocで結合する、ヒトもしくはマウスOX40に約2.4×10-5l/s以下のkdissocで結合する、ヒトもしくはマウスOX40に約2.5×10-5l/s以下のkdissocで結合する、ヒトもしくはマウスOX40に約2.6×10-5l/s以下のkdissocで結合する、ヒトもしくはマウスOX40に約2.7×10-5l/s以下のkdissocで結合する、ヒトもしくはマウスOX40に約2.8×10-5l/s以下のkdissocで結合する、ヒトもしくはマウスOX40に約2.9×10-5l/s以下のkdissocで結合する、またはヒトもしくはマウスOX40に約3×10-5l/s以下のkdissocで結合する、OX40アゴニストを含む。
いくつかの実施形態では、記載される組成物、プロセス、及び方法は、ヒトもしくはマウスOX40に約10nM以下のIC50で結合する、ヒトもしくはマウスOX40に約9nM以下のIC50で結合する、ヒトもしくはマウスOX40に約8nM以下のIC50で結合する、ヒトもしくはマウスOX40に約7nM以下のIC50で結合する、ヒトもしくはマウスOX40に約6nM以下のIC50で結合する、ヒトもしくはマウスOX40に約5nM以下のIC50で結合する、ヒトもしくはマウスOX40に約4nM以下のIC50で結合する、ヒトもしくはマウスOX40に約3nM以下のIC50で結合する、ヒトもしくはマウスOX40に約2nM以下のIC50で結合する、ヒトもしくはマウスOX40に約1nM以下のIC50で結合する、OX40アゴニストを含む。
いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、MEDI0562またはMEDI-0562としても知られるタボリキシズマブである。タボリキシズマブは、AstraZeneca,Inc.の子会社であるMedImmuneから入手可能である。タボリキシズマブは、免疫グロブリンG1-カッパ、抗[ホモサピエンスTNFRSF4(腫瘍壊死因子受容体(TNFR)スーパーファミリーメンバー4、OX40、CD134)]、ヒト化及びキメラモノクローナル抗体である。タボリキシズマブのアミノ酸配列を表12に示す。タボリキシズマブは、301及び301’’位にN-グリコシル化部位(フコシル化複合二分岐CHO型グリカンを有する)、22-95位(VH-VL)、148-204位(CH1-CL)、265-325位(CH2)、及び371-429位(CH3)(及び22’’-95’’、148’’-204’’、265’’-325’’、及び371’’-429’’位)に重鎖鎖内ジスルフィド架橋、23’-88’位(VH-VL)及び134’-194’位(CH1-CL)(及び23’’’-88’’’及び134’’’-194’’’位)に軽鎖鎖内ジスルフィド架橋、230-230”及び233-233”位に重鎖鎖内ジスルフィド架橋、ならびに224-214’及び224’’-214’’’に鎖間重鎖-軽鎖ジスルフィド架橋を含む。様々な固形腫瘍適応症におけるタボリキシズマブの現在の臨床試験には、米国国立衛生研究所のclinicaltrials.gov識別子NCT02318394及びNCT02705482が含まれる。
いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、配列番号87によって示される重鎖及び配列番号88によって示される軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、それぞれ、配列番号87及び配列番号88に示される配列を有する重鎖及び軽鎖、またはそれらの抗原結合断片、Fab断片、一本鎖可変断片(scFv)、バリアント、もしくは複合体を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号87及び配列番号88に示される配列と少なくとも99%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号87及び配列番号88に示される配列と少なくとも98%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号87及び配列番号88に示される配列と少なくとも97%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号87及び配列番号88に示される配列と少なくとも96%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号87及び配列番号88に示される配列と少なくとも95%同一である重鎖及び軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、タボリキシズマブの重鎖及び軽鎖CDRまたは可変領域(VR)を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニスト重鎖可変領域(VH)は、配列番号89に示される配列を含み、OX40アゴニスト軽鎖可変領域(VL)は、配列番号90に示される配列、及びその保存的アミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号89及び配列番号90に示される配列と少なくとも99%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号89及び配列番号90に示される配列と少なくとも98%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号89及び配列番号90に示される配列と少なくとも97%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号89及び配列番号90に示される配列と少なくとも96%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号89及び配列番号90に示される配列と少なくとも95%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、各々が、配列番号89及び配列番号90に示される配列と少なくとも99%同一であるVH領域及びVL領域を含むscFv抗体を含む。
いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、それぞれ、配列番号91、配列番号92、及び配列番号93に示される配列を有する重鎖CDR1、CDR2及びCDR3ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号94、配列番号95、及び配列番号96に示される配列を有する軽鎖CDR1、CDR2及びCDR3ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。
ある実施形態では、OX40アゴニストは、タボリキシズマブに関して薬物規制当局によって承認されたOX40アゴニストバイオシミラーモノクローナル抗体である。ある実施形態いくつかの実施形態では、バイオシミラーモノクローナル抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列と少なくとも97%の配列同一性、例えば、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ参照医薬品または参照バイオ製品と比較して1つ以上の翻訳後修飾を含むOX40抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、タボリキシズマブである。いくつかの実施形態では、1つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、及び切断のうちの1つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可されたまたは認可を得るために提出されたOX40アゴニスト抗体であり、OX40アゴニスト抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、タボリキシズマブである。OX40アゴニスト抗体は、米国FDA及び/または欧州連合EMAなどの薬物規制当局によって認可され得る。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、1つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、1つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、タボリキシズマブである。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、1つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、1つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、タボリキシズマブである。
いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、Pfizer,Inc.から入手可能な完全ヒト抗体である11D4である。11D4の調製及び特性は、米国特許第7,960,515号、同第8,236,930号、及び同第9,028,824号に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。11D4のアミノ酸配列を表13に示す。
いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、配列番号97によって示される重鎖及び配列番号98によって示される軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、それぞれ、配列番号97及び配列番号98に示される配列を有する重鎖及び軽鎖、またはそれらの抗原結合断片、Fab断片、一本鎖可変断片(scFv)、バリアント、もしくは複合体を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号97及び配列番号98に示される配列と少なくとも99%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号97及び配列番号98に示される配列と少なくとも98%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号97及び配列番号98に示される配列と少なくとも97%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号97及び配列番号98に示される配列と少なくとも96%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号97及び配列番号98に示される配列と少なくとも95%同一である重鎖及び軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、11D4の重鎖及び軽鎖CDRまたは可変領域(VR)を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニスト重鎖可変領域(VH)は、配列番号99に示される配列を含み、OX40アゴニスト軽鎖可変領域(VL)は、配列番号100に示される配列、及びその保存的アミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号99及び配列番号100に示される配列と少なくとも99%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号99及び配列番号100に示される配列と少なくとも98%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号99及び配列番号100に示される配列と少なくとも97%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号99及び配列番号100に示される配列と少なくとも96%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号99及び配列番号100に示される配列と少なくとも95%同一であるVH領域及びVL領域を含む。
いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、それぞれ、配列番号101、配列番号102、及び配列番号103に示される配列を有する重鎖CDR1、CDR2及びCDR3ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号194、配列番号105、及び配列番号106に示される配列を有する軽鎖CDR1、CDR2及びCDR3ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。
いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、11D4に関して薬物規制当局によって承認されたOX40アゴニストバイオシミラーモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、バイオシミラーモノクローナル抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列と少なくとも97%の配列同一性、例えば、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ参照医薬品または参照バイオ製品と比較して1つ以上の翻訳後修飾を含むOX40抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、11D4である。いくつかの実施形態では、1つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、及び切断のうちの1つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可されたまたは認可を得るために提出されたOX40アゴニスト抗体であり、OX40アゴニスト抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、11D4である。OX40アゴニスト抗体は、米国FDA及び/または欧州連合EMAなどの薬物規制当局によって認可され得る。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、1つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、1つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、11D4である。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、1つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、1つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、11D4である。
いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、Pfizer,Inc.から入手可能な完全ヒト抗体である18D8である。18D8の調製及び特性は、米国特許第7,960,515号、同第8,236,930号、及び同第9,028,824号に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。18D8のアミノ酸配列を表14に示す。
いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、配列番号107によって示される重鎖及び配列番号108によって示される軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、それぞれ、配列番号107及び配列番号108に示される配列を有する重鎖及び軽鎖、またはそれらの抗原結合断片、Fab断片、一本鎖可変断片(scFv)、バリアント、もしくは複合体を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号107及び配列番号108に示される配列と少なくとも99%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号107及び配列番号108に示される配列と少なくとも98%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号107及び配列番号108に示される配列と少なくとも97%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号107及び配列番号108に示される配列と少なくとも96%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号107及び配列番号108に示される配列と少なくとも95%同一である重鎖及び軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、18D8の重鎖及び軽鎖CDRまたは可変領域(VR)を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニスト重鎖可変領域(VH)は、配列番号109に示される配列を含み、OX40アゴニスト軽鎖可変領域(VL)は、配列番号110に示される配列、及びその保存的アミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号109及び配列番号110に示される配列と少なくとも99%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号109及び配列番号110に示される配列と少なくとも98%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号109及び配列番号110に示される配列と少なくとも97%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号109及び配列番号110に示される配列と少なくとも96%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号109及び配列番号110に示される配列と少なくとも95%同一であるVH領域及びVL領域を含む。
いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、それぞれ、配列番号111、配列番号112、及び配列番号113に示される配列を有する重鎖CDR1、CDR2及びCDR3ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号114、配列番号115、及び配列番号116に示される配列を有する軽鎖CDR1、CDR2及びCDR3ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。
いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、18D8に関して薬物規制当局によって承認されたOX40アゴニストバイオシミラーモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、バイオシミラーモノクローナル抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列と少なくとも97%の配列同一性、例えば、97%、98%、99%または100%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ参照医薬品または参照バイオ製品と比較して1つ以上の翻訳後修飾を含むOX40抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、18D8である。いくつかの実施形態では、1つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、及び切断のうちの1つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可されたまたは認可を得るために提出されたOX40アゴニスト抗体であり、OX40アゴニスト抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、18D8である。OX40アゴニスト抗体は、米国FDA及び/または欧州連合EMAなどの薬物規制当局によって認可され得る。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、1つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、1つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、18D8である。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、1つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、1つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、18D8である。
いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、GlaxoSmithKline plcから入手可能なヒト化抗体である、Hu119-122である。Hu119-122の調製及び特性は、米国特許第9,006,399号及び同第9,163,085号、ならびに国際特許公開第WO2012/027328号に記載されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。Hu119-122のアミノ酸配列を表15に示す。
いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、Hu119-122の重鎖及び軽鎖CDRまたは可変領域(VR)を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニスト重鎖可変領域(VH)は、配列番号117に示される配列を含み、OX40アゴニスト軽鎖可変領域(VL)は、配列番号118に示される配列、及びその保存的アミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号117及び配列番号118に示される配列と少なくとも99%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号117及び配列番号118に示される配列と少なくとも98%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号117及び配列番号118に示される配列と少なくとも97%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号117及び配列番号118に示される配列と少なくとも96%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号117及び配列番号118に示される配列と少なくとも95%同一であるVH領域及びVL領域を含む。
いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、それぞれ、配列番号119、配列番号120、及び配列番号121に示される配列を有する重鎖CDR1、CDR2及びCDR3ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号122、配列番号123、及び配列番号124に示される配列を有する軽鎖CDR1、CDR2及びCDR3ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。
いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、Hu119-122に関して薬物規制当局によって承認されたOX40アゴニストバイオシミラーモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、バイオシミラーモノクローナル抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列と少なくとも97%の配列同一性、例えば、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ参照医薬品または参照バイオ製品と比較して1つ以上の翻訳後修飾を含むOX40抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、Hu119-122である。いくつかの実施形態では、1つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、及び切断のうちの1つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可されたまたは認可を得るために提出されたOX40アゴニスト抗体であり、OX40アゴニスト抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、Hu119-122である。OX40アゴニスト抗体は、米国FDA及び/または欧州連合EMAなどの薬物規制当局によって認可され得る。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、1つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、1つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、Hu119-122である。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、1つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、1つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、Hu119-122である。
いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、GlaxoSmithKline plcから入手可能なヒト化抗体である、Hu106-222である。Hu106-222の調製及び特性は、米国特許第9,006,399号及び同第9,163,085号、ならびに国際特許公開第WO2012/027328号に記載されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。Hu106-222のアミノ酸配列を表16に示す。
いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、Hu106-222の重鎖及び軽鎖CDRまたは可変領域(VR)を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニスト重鎖可変領域(VH)は、配列番号125に示される配列を含み、OX40アゴニスト軽鎖可変領域(VL)は、配列番号126に示される配列、及びその保存的アミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号125及び配列番号126に示される配列と少なくとも99%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号125及び配列番号126に示される配列と少なくとも98%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号125及び配列番号126に示される配列と少なくとも97%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号125及び配列番号126に示される配列と少なくとも96%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号125及び配列番号126に示される配列と少なくとも95%同一であるVH領域及びVL領域を含む。
いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、それぞれ、配列番号127、配列番号128、及び配列番号129に示される配列を有する重鎖CDR1、CDR2及びCDR3ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号130、配列番号131、及び配列番号132に示される配列を有する軽鎖CDR1、CDR2及びCDR3ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。
いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、Hu106-222に関して薬物規制当局によって承認されたOX40アゴニストバイオシミラーモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、バイオシミラーモノクローナル抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列と少なくとも97%の配列同一性、例えば、97%、98%、99%または100%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ参照医薬品または参照バイオ製品と比較して1つ以上の翻訳後修飾を含むOX40抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、Hu106-222である。いくつかの実施形態では、1つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、及び切断のうちの1つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可されたまたは認可を得るために提出されたOX40アゴニスト抗体であり、OX40アゴニスト抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、Hu106-222である。OX40アゴニスト抗体は、米国FDA及び/または欧州連合EMAなどの薬物規制当局によって認可され得る。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、1つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、1つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、Hu106-222である。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、1つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、1つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、Hu106-222である。
いくつかの実施形態では、OX40アゴニスト抗体は、MEDI6469(9B12とも称される)である。MEDI6469は、マウスモノクローナル抗体である。Weinberg,et al.,J.Immunother.2006,29,575-585。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、Weinberg,et al.,J.Immunother.2006,29,575-585に記載されているように、Biovest Inc.(Malvern,MA,USA)に寄託された9B12ハイブリドーマによって産生された抗体であり、その開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、抗体は、MEDI6469のCDR配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、MEDI6469の重鎖可変領域配列及び/または軽鎖可変領域配列を含む。
いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、L106 BD(Pharmingen製品番号340420)である。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、抗体L106(BD Pharmingen製品番号340420)のCDRを含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、抗体L106(BD Pharmingen製品番号340420)の重鎖可変領域配列及び/または軽鎖可変領域配列を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、ACT35(Santa Cruz Biotechnology、カタログ番号20073)である。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、抗体ACT35(Santa Cruz Biotechnology、カタログ番号20073)のCDRを含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、抗体ACT35(Santa Cruz Biotechnology、カタログ番号20073)の重鎖可変領域配列及び/または軽鎖可変領域配列を含む。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、InVivoMAb、BioXcell Inc(West Lebanon,NH)から市販されているマウスモノクローナル抗体抗mCD134/mOX40(クローンOX86)である。
いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、国際特許出願公開第WO95/12673号、同第WO95/21925号、同第WO2006/121810号、同第WO2012/027328号、同第WO2013/028231号、同第WO2013/038191号、及び同第WO2014/148895号、欧州特許出願第EP0672141号、米国特許出願公開第US2010/136030号、同第US2014/377284号、同第US2015/190506号、及び同第US2015/132288号(クローン20E5及び12H3を含む)、ならびに米国特許第7,504,101号、同第7,550,140号、同第7,622,444号、同第7,696,175号、同第7,960,515号、同第7,961,515号、同第8,133,983号、同第9,006,399号、及び同第9,163,085号に記載されるOX40アゴニストから選択され、その各々の開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、構造I-A(C末端Fc抗体断片融合タンパク質)もしくは構造I-B(N末端Fc抗体断片融合タンパク質)に示されるOX40アゴニスト融合タンパク質、またはそれらの断片、誘導体、複合体、バリアント、もしくはバイオシミラーである。構造I-A及びI-Bの特性は、上記及び米国特許第9,359,420号、同第9,340,599号、同第8,921,519号、及び同第8,450,460号に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。図18に示される構造I-Aのポリペプチドドメインのアミノ酸配列は、表9に見出される。Fcドメインは、好ましくは、完全な定常ドメイン(配列番号62のアミノ酸17~230)、完全なヒンジドメイン(配列番号62のアミノ酸1~16)、またはヒンジドメインの一部(例えば、配列番号62のアミノ酸4~16)を含む。C末端Fc抗体を結合するための好ましいリンカーは、追加のポリペプチドの融合に好適なリンカーを含む、配列番号63~配列番号72に示される実施形態から選択され得る。同様に、図18に示される構造I-Bのポリペプチドドメインのアミノ酸配列は、表9に見出される。Fc抗体断片が構造I-BにあるようなTNRFSF融合タンパク質のN末端に融合される場合、Fcモジュールの配列は、好ましくは、配列番号73に示されるものであり、リンカー配列は、好ましくは、配列番号74~配列番号76に示される実施形態から選択される。
いくつかの複合体実施形態では、構造I-AまたはI-BによるOX40アゴニスト融合タンパク質は、タボリキシズマブの可変重鎖及び可変軽鎖、11D4の可変重鎖及び可変軽鎖、18D8の可変重鎖及び可変軽鎖、Hu119-122の可変重鎖及び可変軽鎖、Hu106-222の可変重鎖及び可変軽鎖、表17に記載の可変重鎖及び可変軽鎖から選択される可変重鎖及び可変軽鎖、前述の可変重鎖及び可変軽鎖の任意の組み合わせ、ならびにそれらの断片、誘導体、複合体、バリアント、及びバイオシミラーからなる群から選択される1つ以上のOX40結合ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、構造I-AまたはI-BによるOX40アゴニスト融合タンパク質は、OX40L配列を含む1つ以上のOX40結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、構造I-AまたはI-BによるOX40アゴニスト融合タンパク質は、配列番号133による配列を含む1つ以上のOX40結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、構造I-AまたはI-BによるOX40アゴニスト融合タンパク質は、可溶性OX40L配列を含む1つ以上のOX40結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、構造I-AまたはI-BによるOX40アゴニスト融合タンパク質は、配列番号134による配列を含む1つ以上のOX40結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、構造I-AまたはI-BによるOX40アゴニスト融合タンパク質は、配列番号135による配列を含む1つ以上のOX40結合ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、構造I-AまたはI-BによるOX40アゴニスト融合タンパク質は、各々が、それぞれ、配列番号89及び配列番号90に示される配列と少なくとも95%同一であるVH領域及びVL領域を含むscFvドメインである1つ以上のOX40結合ドメインを含み、VHドメイン及びVLドメインは、リンカーによって結合されている。いくつかの実施形態では、構造I-AまたはI-BによるOX40アゴニスト融合タンパク質は、各々が、それぞれ、配列番号99及び配列番号100に示される配列と少なくとも95%同一であるVH領域及びVL領域を含むscFvドメインである1つ以上のOX40結合ドメインを含み、VHドメイン及びVLドメインは、リンカーによって結合されている。いくつかの実施形態では、構造I-AまたはI-BによるOX40アゴニスト融合タンパク質は、各々が、それぞれ、配列番号109及び配列番号110に示される配列と少なくとも95%同一であるVH領域及びVL領域を含むscFvドメインである1つ以上のOX40結合ドメインを含み、VHドメイン及びVLドメインは、リンカーによって結合されている。いくつかの実施形態では、構造I-AまたはI-BによるOX40アゴニスト融合タンパク質は、各々が、それぞれ、配列番号127及び配列番号128に示される配列と少なくとも95%同一であるVH領域及びVL領域を含むscFvドメインである1つ以上のOX40結合ドメインを含み、VHドメイン及びVLドメインは、リンカーによって結合されている。いくつかの実施形態では、構造I-AまたはI-BによるOX40アゴニスト融合タンパク質は、各々が、それぞれ、配列番号125及び配列番号126に示される配列と少なくとも95%同一であるVH領域及びVL領域を含むscFvドメインである1つ以上のOX40結合ドメインを含み、VHドメイン及びVLドメインは、リンカーによって結合されている。いくつか実施形態では、構造I-AまたはI-BによるOX40アゴニスト融合タンパク質は、各々が、表17に示されるVH配列及びVL配列と少なくとも95%同一であるVH配列及びVL配列を含むscFvドメインである1つ以上のOX40結合ドメインを含み、VHドメイン及びVLドメインは、リンカーによって結合されている。
いくつか実施形態では、OX40アゴニストは、(i)第1の可溶性OX40結合ドメイン、(ii)第1のペプチドリンカー、(iii)第2の可溶性OX40結合ドメイン、(iv)第2のペプチドリンカー、及び(v)第3の可溶性OX40結合ドメインを含むOX40アゴニスト一本鎖融合ポリペプチドであり、N末端及び/またはC末端に追加のドメインをさらに含み、追加のドメインは、FabまたはFc断片ドメインである。いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、(i)第1の可溶性OX40結合ドメイン、(ii)第1のペプチドリンカー、(iii)第2の可溶性OX40結合ドメイン、(iv)第2のペプチドリンカー、及び(v)第3の可溶性OX40結合ドメインを含むOX40アゴニスト一本鎖融合ポリペプチドであり、N末端及び/またはC末端に追加のドメインをさらに含み、追加のドメインは、FabまたはFc断片ドメインであり、可溶性OX40ドメインは各々、茎領域(三量体化に寄与し、細胞膜まである特定の距離を提供するが、OX40結合ドメインの一部分ではない)を欠き、第1及び第2のペプチドリンカーは独立して、3~8アミノ酸長を有する。
いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、(i)第1の可溶性腫瘍壊死因子(TNF)スーパーファミリーサイトカインドメイン、(ii)第1のペプチドリンカー、(iii)第2の可溶性TNFスーパーファミリーサイトカインドメイン、(iv)第2のペプチドリンカー、及び(v)第3の可溶性TNFスーパーファミリーサイトカインドメインを含むOX40アゴニスト一本鎖融合ポリペプチドであり、可溶性TNFスーパーファミリーサイトカインドメインは各々、茎領域を欠き、第1及び第2のペプチドリンカーは独立して、3~8アミノ酸長であり、TNFスーパーファミリーサイトカインドメインは、OX40結合ドメインである。
いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、MEDI6383である。MEDI6383は、OX40アゴニスト融合タンパク質であり、米国特許第6,312,700号に記載されているように調製することができ、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。
いくつか実施形態では、OX40アゴニストは、前述のVLドメインのうちのいずれかに連結された前述のVHドメインのうちのいずれかを含むOX40アゴニストscFv抗体である。
いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、Creative Biolabs,Inc.,Shirley,NY,USAから市販されているCreative Biolabs OX40アゴニストモノクローナル抗体MOM-18455である。
いくつかの実施形態では、OX40アゴニストは、BioLegend,Inc.,San Diego,CA,USAから市販されているOX40アゴニスト抗体クローンBer-ACT35である。
C.任意選択の細胞生存率分析
任意選択で、細胞生存率アッセイは、当該技術分野で知られている標準のアッセイを使用して、プライミングによる第1の拡張(初期バルク拡張と称されることもある)後に行われ得る。したがって、ある特定の実施形態では、方法は、プライミングによる第1の拡張後に細胞生存率アッセイを行うことを含む。例えば、死細胞を選択的に標識し、生存率の評価を可能にするトリパンブルー排除アッセイが、バルクTILの試料上で行われ得る。生存率の試験に使用する他のアッセイには、アラマーブルーアッセイ及びMTTアッセイが含まれるが、これらに限定されない。
任意選択で、細胞生存率アッセイは、当該技術分野で知られている標準のアッセイを使用して、プライミングによる第1の拡張(初期バルク拡張と称されることもある)後に行われ得る。したがって、ある特定の実施形態では、方法は、プライミングによる第1の拡張後に細胞生存率アッセイを行うことを含む。例えば、死細胞を選択的に標識し、生存率の評価を可能にするトリパンブルー排除アッセイが、バルクTILの試料上で行われ得る。生存率の試験に使用する他のアッセイには、アラマーブルーアッセイ及びMTTアッセイが含まれるが、これらに限定されない。
1.細胞計数、生存率、フローサイトメトリー
いくつかの実施形態では、細胞計数及び/または生存率が測定される。CD3、CD4、CD8、及びCD56などであるが、これらに限定されないマーカー、ならびに本明細書に開示または記載される任意の他のマーカーの発現は、FACSCanto(商標)フローサイトメーター(BD Biosciences)を使用して、例えば、BD Bio-sciences(BD Biosciences,San Jose,CA)から市販されているものであるが、これに限定されない抗体を用いたフローサイトメトリーによって測定され得る。細胞は、使い捨てのcチップ血球計数器(VWR,Batavia,IL)を使用して手動で計数することができ、生存率は、トリパンブルー染色を含むが、これに限定されない、当該技術分野で知られている任意の方法を使用して評価することができる。細胞生存率は、米国特許出願公開第2018/0282694号(参照によりその全体が本明細書に組み込まれる)に基づいてアッセイされ得る。細胞生存率は、米国特許公開第2018/0280436号または国際特許公開第WO/2018/081473号(いずれもあらゆる目的のためにそれらの全体が本明細書に組み込まれる)に基づいてアッセイすることもできる。
いくつかの実施形態では、細胞計数及び/または生存率が測定される。CD3、CD4、CD8、及びCD56などであるが、これらに限定されないマーカー、ならびに本明細書に開示または記載される任意の他のマーカーの発現は、FACSCanto(商標)フローサイトメーター(BD Biosciences)を使用して、例えば、BD Bio-sciences(BD Biosciences,San Jose,CA)から市販されているものであるが、これに限定されない抗体を用いたフローサイトメトリーによって測定され得る。細胞は、使い捨てのcチップ血球計数器(VWR,Batavia,IL)を使用して手動で計数することができ、生存率は、トリパンブルー染色を含むが、これに限定されない、当該技術分野で知られている任意の方法を使用して評価することができる。細胞生存率は、米国特許出願公開第2018/0282694号(参照によりその全体が本明細書に組み込まれる)に基づいてアッセイされ得る。細胞生存率は、米国特許公開第2018/0280436号または国際特許公開第WO/2018/081473号(いずれもあらゆる目的のためにそれらの全体が本明細書に組み込まれる)に基づいてアッセイすることもできる。
いくつかの事例では、バルクTIL集団は、以下で考察されるプロトコルを使用して直ちに凍結保存され得る。あるいは、以下で論じられるように、バルクTIL集団がREPに供されて、凍結保存され得る。同様に、遺伝子修飾TILが療法に使用される場合、バルクまたはREP TIL集団が好適な治療のために遺伝子修飾に供され得る。
2.細胞培養
いくつかの実施形態では、上で考察され、図1及び8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に例示されたものを含む、TILを拡張するための方法は、約5,000mL~約25,000mLの細胞培地、約5,000mL~約10,000mLの細胞培地、または約5,800mL~約8,700mLの細胞培地を使用することを含み得る。いくつかの実施形態では、培地は、無血清培地である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張における培地は、無血清である。いくつかの実施形態では、第2の拡張における培地は、無血清である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張及び第2の拡張(急速な第2の拡張とも称される)における培地は、両方とも無血清である。いくつかの実施形態では、TILの数を拡張することは、わずか1種類の細胞培養培地を使用する。任意の好適な細胞培養培地、例えば、AIM-V細胞培地(L-グルタミン、50μMの硫酸ストレプトマイシン、及び10μMの硫酸ゲンタマイシン)細胞培養培地(Invitrogen,Carlsbad CA)が使用され得る。これに関して、本発明の方法は、TILの数を拡張するために必要な培地の量及び培地の種類の数を有利に減少させる。いくつかの実施形態では、TILの数を拡張することは、3日または4日に1回以下の頻度で細胞にフィードすることを含み得る。ガス透過性容器内で細胞の数を拡張することは、細胞を拡張するために必要なフィード頻度を減少させることによって、細胞の数を拡張するために必要な手順を簡素化する。
いくつかの実施形態では、上で考察され、図1及び8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に例示されたものを含む、TILを拡張するための方法は、約5,000mL~約25,000mLの細胞培地、約5,000mL~約10,000mLの細胞培地、または約5,800mL~約8,700mLの細胞培地を使用することを含み得る。いくつかの実施形態では、培地は、無血清培地である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張における培地は、無血清である。いくつかの実施形態では、第2の拡張における培地は、無血清である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第1の拡張及び第2の拡張(急速な第2の拡張とも称される)における培地は、両方とも無血清である。いくつかの実施形態では、TILの数を拡張することは、わずか1種類の細胞培養培地を使用する。任意の好適な細胞培養培地、例えば、AIM-V細胞培地(L-グルタミン、50μMの硫酸ストレプトマイシン、及び10μMの硫酸ゲンタマイシン)細胞培養培地(Invitrogen,Carlsbad CA)が使用され得る。これに関して、本発明の方法は、TILの数を拡張するために必要な培地の量及び培地の種類の数を有利に減少させる。いくつかの実施形態では、TILの数を拡張することは、3日または4日に1回以下の頻度で細胞にフィードすることを含み得る。ガス透過性容器内で細胞の数を拡張することは、細胞を拡張するために必要なフィード頻度を減少させることによって、細胞の数を拡張するために必要な手順を簡素化する。
いくつかの実施形態では、第1及び/または第2のガス透過性容器内の細胞培養培地は、ろ過されていない。濾過されていない細胞培地の使用は、細胞の数を拡張するために必要な手順を簡素化することができる。いくつかの実施形態では、第1及び/または第2のガス透過性容器内の細胞培地は、ベータ-メルカプトエタノール(BME)を欠いている。
いくつかの実施形態では、方法の期間は、哺乳動物から腫瘍組織試料を取得することと、プライミングによる第1の拡張として約1~8日間、例えば約7日間、またはプライミングによる第1の拡張として約8日間にわたってIL-2、1X抗原提示フィーダー細胞、及びOKT-3を含む細胞培地を含有する第1のガス透過性容器内で腫瘍組織試料を培養することと、TILを第2のガス透過性容器に移し、IL-2、2X抗原提示フィーダー細胞、及びOKT-3を含む細胞培地を含有する第2のガス透過性容器内でTILの数を約7~9日間、例えば約7日間、約8日間、または約9日間にわたって拡張することと、を含む。
いくつかの実施形態では、方法の期間は、哺乳動物から腫瘍組織試料を取得することと、プライミングによる第1の拡張として約1~8日間、例えば約7日間にわたってIL-2、1X抗原提示フィーダー細胞、及びOKT-3を含む細胞培地を含有する第1のガス透過性容器内で腫瘍組織試料を培養することと、TILを第2のガス透過性容器に移し、IL-2、2X抗原提示フィーダー細胞、及びOKT-3を含む細胞培地を含有する第2のガス透過性容器内でTILの数を約7~14日間、または約7~9日間、例えば約7日間にわたって拡張することと、を含む。
いくつかの実施形態では、方法の期間は、哺乳動物から腫瘍組織試料を取得することと、プライミングによる第1の拡張として約1~7日間、例えば、約7日間にわたってIL-2、1×抗原提示フィーダー細胞、及びOKT-3を含む細胞培地を収容する第1のガス透過性容器内で腫瘍組織試料を培養することと、TILを第2のガス透過性容器に移し、IL-2、2×抗原提示フィーダー細胞、及びOKT-3を含む細胞培地を収容する第2のガス透過性容器内でTILの数を約7~11日間、例えば約7日間、約8日間、約9日間、約10日間、または約11日間にわたって拡張することと、を含む。
いくつかの実施形態では、TILは、ガス透過性容器内で拡張される。ガス透過性容器は、米国特許出願公開第2005/0106717A1号に記載されるものを含む、当該技術分野で知られている方法、組成物、及びデバイスを使用して、PBMCを使用してTILを拡張するために使用されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、TILは、ガス透過性バッグ内で拡張される。いくつかの実施形態では、TILは、Xuri Cell Expansion System W25(GE Healthcare)などのガス透過性バッグ内のTILを拡張する細胞拡張システムを使用して拡張される。いくつかの実施形態では、TILは、Xuri Cell Expansion System W5(GE Healthcare)としても知られるWAVE Bioreactor Systemなどのガス透過性バッグ内でTILを拡張する細胞拡張システムを使用して拡張される。いくつかの実施形態では、細胞拡張システムは、約100mL、約200mL、約300mL、約400mL、約500mL、約600mL、約700mL、約800mL、約900mL、約1L、約2L、約3L、約4L、約5L、約6L、約7L、約8L、約9L、及び約10Lからなる群から選択される体積を有するガス透過性細胞バッグを含む。
いくつかの実施形態では、TILは、G-REXフラスコ(Wilson Wolf Manufacturingから市販されている)内で拡張され得る。かかる実施形態は、細胞集団が約5×105細胞/cm2~10×106及び30×106細胞/cm2まで拡張するのを可能にする。いくつかの実施形態では、これは、フィードなしである。いくつかの実施形態では、これは、培地がG-REXフラスコ内の約10cmの高さに存在する限り、フィードなしである。いくつかの実施形態では、これは、フィードなしであるが、1つ以上のサイトカインの追加を伴う。いくつかの実施形態では、サイトカインを培地と混合する必要なしに、サイトカインがボーラスとして追加され得る。かかる容器、装置、及び方法は、当該技術分野で知られており、TILを拡張するために使用されており、米国特許出願公開第US2014/0377739A1号、国際公開第WO2014/210036A1号、米国特許出願公開第US2013/0115617A1号、国際公開第WO2013/188427A1、米国特許出願公開第US2011/0136228A1、米国特許第US8,809,050B2号、国際公開第WO2011/072088A2号、米国特許出願公開第US2016/0208216A1号、米国特許出願公開第US2012/0244133A1号、国際公開第WO2012/129201A1号、米国特許出願公開第US2013/0102075A1号、米国特許第US8,956,860B2号、国際公開第WO2013/173835A1号、米国特許出願公開第US2015/0175966A1号に記載されるものを含み、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。かかるプロセスも、Jin et al.,J.Immunotherapy,2012,35:283-292に記載されている。
D.TILにおける遺伝子の任意選択のノックダウンまたはノックアウト
いくつかの実施形態では、本発明の拡張TILは、タンパク質発現を一過的に変化させるために、各々本明細書で提供されるように、閉鎖滅菌製造プロセス中を含む、拡張ステップ前、拡張ステップ中、または拡張ステップ後にさらに操作される。いくつかの実施形態では、一過的に変化したタンパク質発現は、一過性の遺伝子編集によるものである。いくつかの実施形態では、本発明の拡張TILは、TILにおけるタンパク質発現を一過的に変化させることができる転写因子(TF)及び/または他の分子で処理される。いくつかの実施形態では、タンパク質発現を一過的に変化させることができるTF及び/または他の分子は、腫瘍抗原の発現の変化及び/またはTIL集団における腫瘍抗原特異的T細胞の数の変化を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明の拡張TILは、タンパク質発現を一過的に変化させるために、各々本明細書で提供されるように、閉鎖滅菌製造プロセス中を含む、拡張ステップ前、拡張ステップ中、または拡張ステップ後にさらに操作される。いくつかの実施形態では、一過的に変化したタンパク質発現は、一過性の遺伝子編集によるものである。いくつかの実施形態では、本発明の拡張TILは、TILにおけるタンパク質発現を一過的に変化させることができる転写因子(TF)及び/または他の分子で処理される。いくつかの実施形態では、タンパク質発現を一過的に変化させることができるTF及び/または他の分子は、腫瘍抗原の発現の変化及び/またはTIL集団における腫瘍抗原特異的T細胞の数の変化を提供する。
ある特定の実施形態では、方法は、TIL集団を遺伝子編集することを含む。ある特定の実施形態では、この方法は、第1のTIL集団、第2のTIL集団、及び/または第3のTIL集団を遺伝子編集することを含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、1つ以上のタンパク質の発現の促進または1つ以上のタンパク質の発現の阻害、ならびに一組のタンパク質の促進及び別の組のタンパク質の阻害の両方の組み合わせの同時発生のために、リボ核酸(RNA)挿入、例えば、メッセンジャーRNA(mRNA)または低分子(もしくは短)干渉RNA(siRNA)のTIL集団への挿入などのヌクレオチド挿入による遺伝子編集を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の拡張TILは、タンパク質発現の一過性の変化を受ける。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、例えば、図8(特に図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に示されるようなステップAから取得されたTIL集団を含む、第1の拡張前のバルクTIL集団において起こる。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、例えば、図8(例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に示されるように、例えば、ステップBで拡張されたTIL集団におけるものを含む、第1の拡張中に起こる。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、例えば、図8に示されるように、ステップBから取得され、ステップCに含まれるTIL集団である、例えば、第1の拡張と第2の拡張との間の移行中のTIL集団(例えば、本明細書に記載の第2のTIL集団)を含む、第1の拡張後に起こる。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、例えば、図8に示されるように、例えば、ステップCから取得され、ステップDでのその拡張前のTIL集団を含む、第2の拡張前のバルクTIL集団において起こる。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、例えば、図8に示されるように、例えば、ステップDで拡張されたTIL集団(例えば、第3のTIL集団)を含む、第2の拡張中に起こる。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、例えば、図8に示されるように、例えば、ステップDでの拡張から取得されたTIL集団を含む、第2の拡張後に起こる。
いくつかの実施形態では、TIL集団におけるタンパク質発現を一過的に変化させる方法は、エレクトロポレーションステップを含む。エレクトロポレーション法は、当該技術分野で知られており、例えば、Tsong,Biophys.J.1991,60,297-306及び米国特許出願公開第2014/0227237A1号に記載されており、これらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、TIL集団におけるタンパク質発現を一過的に変化させる方法は、リン酸カルシウムトランスフェクションステップを含む。リン酸カルシウムトランスフェクション法(リン酸カルシウムDNA沈殿、細胞表面コーティング、及びエンドサイトーシス)は、当該技術分野で知られており、Graham and van der Eb,Virology 1973,52,456-467、Wigler,et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.1979,76,1373-1376、及びChen and Okayarea,Mol.Cell.Biol.1987,7,2745-2752、ならびに米国特許第5,593,875号に記載されており、これらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、TIL集団におけるタンパク質発現を一過的に変化させる方法は、リポソームトランスフェクションステップを含む。リポソームトランスフェクション法、例えば、カチオン性脂質N-[1-(2,3-ジオレイルオキシ)プロピル]-n,n,n-トリメチルアンモニウムクロリド(DOTMA)及びジオレオイルホスホチジルエタノールアミン(DOPE)の1:1(w/w)リポソーム製剤を用いる方法は、当該技術分野において既知であり、Rose,et al.,Biotechniques 1991,10,520-525及びFelgner,et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1987,84,7413-7417、ならびに米国特許第5,279,833号、同第5,908,635号、同第6,056,938号、同第6,110,490号、同第6,534,484号、及び同第7,687,070号に記載されており、これらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、TIL集団におけるタンパク質発現を一過的に変化させる方法は、米国特許第5,766,902号、同第6,025,337号、同第6,410,517号、同第6,475,994号、及び同第7,189,705号に記載されている方法を使用するトランスフェクションステップを含み、これらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、幹細胞メモリーT細胞(TSCM)の増加をもたらす。TSCMは、抗原を経験したセントラルメモリーT細胞の初期前駆細胞である。TSCMは、一般に、幹細胞を定義する長期生存、自己再生、及び多分化能を示し、一般に、効果的なTIL製品の生成に望ましいものである。TSCMは、養子細胞移植のマウスモデルにおいて他のT細胞サブセットと比較して増強された抗腫瘍活性を示している。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、高い割合のTSCMを含む組成を有するTIL集団をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、TSCMパーセンテージの少なくとも5%、少なくとも10%、少なくとも10%、少なくとも20%、少なくとも25%、少なくとも30%、少なくとも35%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、または少なくとも95%の増加をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、TIL集団中のTSCMの少なくとも1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、または10倍の増加をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、少なくとも5%、少なくとも10%、少なくとも10%、少なくとも20%、少なくとも25%、少なくとも30%、少なくとも35%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、または少なくとも95%のTSCMを有するTIL集団をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、少なくとも5%、少なくとも10%、少なくとも10%、少なくとも20%、少なくとも25%、少なくとも30%、少なくとも35%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、または少なくとも95%のTSCMを有する治療的TIL集団をもたらす。
いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、抗原を経験したT細胞の幼若化をもたらす。いくつかの実施形態では、幼若化には、例えば、増加した増殖、増加したT細胞活性化、及び/または増加した抗原認識が含まれる。
いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、腫瘍由来のTCRレパートリーを保存するために、T細胞の大部分における発現を変化させる。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、腫瘍由来のTCRレパートリーを変化させない。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、腫瘍由来のTCRレパートリーを維持する。
いくつかの実施形態では、タンパク質の一過性の変化は、特定の遺伝子の発現の変化をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、PD-1(PDCD1またはCC279とも称される)、TGFBR2、CCR4/5、CBLB(CBL-B)、CISH、CCR(キメラ共刺激受容体)、IL-2、IL-12、IL-15、IL-21、NOTCH1/2 ICD、CTLA-4、TIM3、LAG3、TIGIT、TET2、TGFβ、CCR2、CCR4、CCR5、CXCR1、CXCR2、CSCR3、CCL2(MCP-1)、CCL3(MIP-1α)、CCL4(MIP1-β)、CCL5(RANTES)、CXCL1/CXCL8、CCL22、CCL17、CXCL1/CXCL8、VHL、CD44、PIK3CD、SOCS1、胸腺細胞選択関連高移動度群(HMG)ボックス(TOX)、アンキリンリピートドメイン11(ANKRD11)、BCL6コリプレッサー(BCOR)、及び/またはcAMPタンパク質キナーゼA(PKA)を含むが、これらに限定されない遺伝子を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、PD-1、TGFBR2、CCR4/5、CTLA-4、CBLB(CBL-B)、CISH、CCR(キメラ共刺激受容体)、IL-2、IL-12、IL-15、IL-21、NOTCH1/2 ICD、TIM3、LAG3、TIGIT、TET2、TGFβ、CCR2、CCR4、CCR5、CXCR1、CXCR2、CSCR3、CCL2(MCP-1)、CCL3(MIP-1α)、CCL4(MIP1-β)、CCL5(RANTES)、CXCL1/CXCL8、CCL22、CCL17、CXCL1/CXCL8、VHL、CD44、PIK3CD、SOCS1、胸腺細胞選択関連高移動度群(HMG)ボックス(TOX)、アンキリンリピートドメイン11(ANKRD11)、BCL6コリプレッサー(BCOR)、及び/またはcAMPタンパク質キナーゼA(PKA)からなる群から選択される遺伝子を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、PD-1を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、TGFBR2を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、CCR4/5を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、CTLA-4を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、CBLBを標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性変化は、CISHを標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、CCR(キメラ共刺激受容体)を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、IL-2を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、IL-12を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、IL-15を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、IL-21を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、NOTCH1/2 ICDを標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、TIM3を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、LAG3を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、TIGITを標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、TET2を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、TGFβを標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、CCR1を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、CCR2を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、CCR4を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、CCR5を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、CXCR1を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、CXCR2を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、CSCR3を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、CCL2(MCP-1)を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、CCL3(MIP-1α)を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、CCL4(MIP1-β)を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、CCL5(RANTES)を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、CXCL1を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、CXCL8を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、CCL22を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、CCL17を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性変化は、VHLを標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、CD44を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、PIK3CDを標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、SOCS1を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性変化は、胸腺細胞選択関連高移動度群(HMG)ボックス(TOX)を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、アンキリンリピートドメイン11(ANKRD11)を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性変化は、BCL6コリプレッサー(BCOR)を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、cAMPタンパク質キナーゼA(PKA)を標的とする。
いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ケモカイン受容体の発現の増加及び/または過剰発現をもたらす。いくつかの実施形態では、一過性タンパク質発現によって過剰発現されるケモカイン受容体は、CCL2(MCP-1)、CCL3(MIP-1α)、CCL4(MIP1-β)、CCL5(RANTES)、CXCL1、CXCL8、CCL22、及び/またはCCL17を含むが、これらに限定されないリガンドを有する受容体を含む。
いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、PD-1、CTLA-4、CBLB、CISH、TIM-3、LAG-3、TIGIT、TET2、TGFβR2、及び/またはTGFβの発現の低下及び/または減少をもたらす(例えば、TGFβ経路の遮断をもたらすことを含む)。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、PD-1の発現の低下及び/または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、CBLB(CBL-B)の発現の低下及び/または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、CISHの発現の低下及び/または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、TIM-3の発現の低下及び/または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、LAG-3の発現の低下及び/または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、TIGITの発現の低下及び/または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、TET2の発現の低下及び/または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、TGFβR2の発現の低下及び/または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、TGFβの発現の低下及び/または減少をもたらす。
いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、例えば、腫瘍部位へのTILの輸送または移動を改善するために、ケモカイン受容体の発現の増加及び/または過剰発現をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、CCR(キメラ共刺激受容体)の発現の増加及び/または過剰発現をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、CCR1、CCR2、CCR4、CCR5、CXCR1、CXCR2、及び/またはCSCR3からなる群から選択されるケモカイン受容体の発現の増加及び/または過剰発現をもたらす。
いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、インターロイキンの発現の増加及び/または過剰発現をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、IL-2、IL-12、IL-15、及び/またはIL-21からなる群から選択されるインターロイキンの発現の増加及び/または過剰発現をもたらす。
いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、NOTCH1/2 ICDの発現の増加及び/または過剰発現をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、VHLの発現の増加及び/または過剰発現をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、CD44の発現の増加及び/または過剰発現をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、PIK3CDの発現の増加及び/または過剰発現をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、SOCS1の発現の増加及び/または過剰発現をもたらす。
いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、cAMPタンパク質キナーゼA(PKA)の発現の低下及び/または減少をもたらす。
いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、PD-1、LAG3、TIM3、CTLA-4、TIGIT、TET2、CISH、TGFβR2、PKA、CBLB、BAFF(BR3)、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される分子の発現の低下及び/または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、PD-1、LAG3、TIM3、CTLA-4、TIGIT、TET2、CISH、TGFβR2、PKA、CBLB、BAFF(BR3)、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される2つの分子の発現の低下及び/または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、PD-1、ならびにLAG3、TIM3、CTLA-4、TIGIT、TET2、CISH、TGFβR2、PKA、CBLB、BAFF(BR3)、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される1つの分子の発現の低下及び/または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、PD-1、CTLA-4、LAG-3、CISH、CBLB、TIM3、TIGIT、及びそれらの組み合わせの発現の低下及び/または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、PD-1、ならびにCTLA-4、LAG3、CISH、CBLB、TIM3、TIGIT、TET2、及びそれらの組み合わせのうちの1つの発現の低下及び/または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、PD-1及びCTLA-4の発現の低下及び/または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、PD-1及びLAG3の発現の低下及び/または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、PD-1及びCISHの発現の低下及び/または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、PD-1及びCBLBの発現の低下及び/または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、PD-1及びTIM3の発現の低下及び/または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、PD-1及びTIGITの発現の低下及び/または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、PD-1及びTET2の発現の低下及び/または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、CTLA-4及びLAG3の発現の低下及び/または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、CTLA-4及びCISHの発現の低下及び/または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、CTLA-4及びCBLBの発現の低下及び/または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、CTLA-4及びTIM3の発現の低下及び/または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、CTLA-4及びTIGITの発現の低下及び/または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、CTLA-4及びTET2の発現の低下及び/または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、LAG3及びCISHの発現の低下及び/または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、LAG3及びCBLBの発現の低下及び/または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、LAG3及びTIM3の発現の低下及び/または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、LAG3及びTIGITの発現の低下及び/または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、LAG3及びTET2の発現の低下及び/または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、CISH及びCBLBの発現の低下及び/または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、CISH及びTIM3の発現の低下及び/または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、CISH及びTIGITの発現の低下及び/または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、CISH及びTET2の発現の低下及び/または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、CBLB及びTIM3の発現の低下及び/または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、CBLB及びTIGITの発現の低下及び/または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、CBLB及びTET2の発現の低下及び/または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、TIM3及びPD-1の発現の低下及び/または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、TIM3及びLAG3の発現の低下及び/または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、TIM3及びCISHの発現の低下及び/または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、TIM3及びCBLBの発現の減少及び/または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、TIM3及びTIGITの発現の低下及び/または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、TIM3及びTET2の発現の低下及び/または減少をもたらす。
いくつかの実施形態では、CCR2、CCR4、CCR5、CXCR2、CXCR3、CX3CR1、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される接着分子は、ガンマレトロウイルスまたはレンチウイルス法によって、第1のTIL集団、第2のTIL集団、または採取されたTIL集団に挿入される(例えば、接着分子の発現が増加する)。
いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、PD-1、LAG3、TIM3、CTLA-4、TIGIT、TET2、CISH、TGFβR2、PKA、CBLB、BAFF(BR3)、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される分子の発現の低下及び/または減少、ならびにCCR2、CCR4、CCR5、CXCR2、CXCR3、CX3CR1、及びそれらの組み合わせの発現の増加及び/または増強をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、PD-1、CTLA-4、LAG3、TIM3、CISH、CBLB、TIGIT、TET2、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される分子の発現の低下及び/または減少、ならびにCCR2、CCR4、CCR5、CXCR2、CXCR3、CX3CR1、及びそれらの組み合わせの発現の増加及び/または増強をもたらす。
いくつかの実施形態では、発現が約5%、約10%、約10%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、または約95%減少する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、または約95%減少する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約75%、約80%、約85%、約90%、または約95%減少する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約80%、約85%、約90%、または約95%減少する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約85%、約90%、または約95%減少する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約80%減少する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約85%減少する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約90%減少する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約95%減少する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約99%減少する。
いくつかの実施形態では、発現が約5%、約10%、約10%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、または約95%増加する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、または約95%増加する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約75%、約80%、約85%、約90%、または約95%増加する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約80%、約85%、約90%、または約95%増加する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約85%、約90%、または約95%増加する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約80%増加する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約85%増加する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約90%増加する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約95%増加する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約99%増加する。
いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、TILにおけるタンパク質発現を一過的に変化させることができる転写因子(TF)及び/または他の分子でのTILの処理によって誘導される。いくつかの実施形態では、SQZベクターを含まないマイクロ流体プラットフォームが、タンパク質発現を一過的に変化させることができる転写因子(TF)及び/または他の分子の細胞内送達のために用いられる。かかる方法は、転写因子を含むタンパク質をT細胞を含む様々な初代ヒト細胞に送達する能力を示す(これらは、米国特許出願公開第US2019/0093073 A1号、同第US2018/0201889 A1号、及び同第US2019/0017072 A1号に記載されており、これらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる)。かかる方法は、TIL集団を、転写因子(TF)及び/または一過性タンパク質発現を誘導することができる他の分子に曝露するために本発明で用いることができ、一過性タンパク質発現を誘導することができる当該TF及び/または他の分子は、腫瘍抗原の発現の増加及び/またはTIL集団における腫瘍抗原特異的T細胞の数の増加をもたらし、それ故に、TIL集団の再プログラミング及び再プログラミングされていないTIL集団と比較して再プログラミングされたTIL集団の治療的有効性の増加をもたらす。いくつかの実施形態では、再プログラミングは、本明細書に記載されるように、TIL開始集団またはTIL前集団(すなわち、再プログラミング前の)集団と比較して、エフェクターT細胞及び/またはセントラルメモリーT細胞の亜集団の増加をもたらす。
いくつかの実施形態では、転写因子(TF)には、TCF-1、NOTCH1/2 ICD、及び/またはMYBが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、転写因子(TF)は、TCF-1である。いくつかの実施形態では、転写因子(TF)は、NOTCH1/2 ICDである。いくつかの実施形態では、転写因子(TF)は、MYBである。いくつかの実施形態では、転写因子(TF)は、さらなるTIL再プログラミングを誘導するために、市販のKNOCKOUT Serum Replacement(Gibco/ThermoFisher)などの誘導多能性幹細胞培養物(iPSC)とともに投与される。いくつかの実施形態では、転写因子(TF)は、さらなるTIL再プログラミングを誘導するために、iPSCカクテルとともに投与される。いくつかの実施形態では、転写因子(TF)は、iPSCカクテルなしで投与される。いくつかの実施形態では、再プログラミングは、TSCMのパーセンテージの増加をもたらす。いくつかの実施形態では、再プログラミングは、TSCMのパーセンテージの約5%、約10%、約10%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、または約95%TSCMの増加をもたらす。
いくつかの実施形態では、上記のようにタンパク質発現を一過的に変化させる方法は、TILの集団を遺伝子修飾する方法と組み合わせられてもよく、1つ以上のタンパク質の産生のための遺伝子の安定した組み込みステップを含む。ある特定の実施形態では、この方法は、TIL集団を遺伝子修飾するステップを含む。ある特定の実施形態では、この方法は、第1のTIL集団、第2のTIL集団、及び/または第3のTIL集団を遺伝子修飾することを含む。いくつかの実施形態では、TIL集団を遺伝子修飾する方法は、レトロウイルス形質導入ステップを含む。いくつかの実施形態では、TIL集団を遺伝子修飾する方法は、レンチウイルス形質導入ステップを含む。レンチウイルス形質導入系は、当該技術分野で知られており、例えば、Levine,et al.,Proc.Nat’l Acad.Sci.2006,103,17372-77、Zufferey,et al.,Nat.Biotechnol.1997,15,871-75、Dull,et al.,J.Virology 1998,72,8463-71、及び米国特許第6,627,442号に記載されており、これらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、TIL集団を遺伝子修飾する方法は、ガンマレトロウイルス形質導入ステップを含む。ガンマレトロウイルス形質導入系は、当該技術分野で知られており、例えば、Cepko and Pear,Cur.Prot.Mol.Biol.1996,9.9.1-9.9.16に記載されており、この開示は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、TIL集団を遺伝子修飾する方法は、トランスポゾン媒介遺伝子導入ステップを含む。トランスポゾン媒介遺伝子導入系は、当該技術分野で知られており、トランスポザーゼが、DNA発現ベクターとしてまたは発現可能なRNAもしくはタンパク質として提供される系を含み、これにより、トランスポザーゼ、例えば、mRNA(例えば、キャップ及びポリA尾部を含むmRNA)として提供されるトランスポザーゼの長期発現がトランスジェニック細胞で起こらないようになる。SB10、SB11、及びSB100xなどのサケ科型Tel様トランスポザーゼ(SBまたはSleeping Beautyトランスポザーゼ)を含む好適なトランスポゾン媒介遺伝子導入系、ならびに増加した酵素活性を有する操作された酵素は、例えば、Hackett,et al.,Mol.Therapy 2010,18,674-83及び米国特許第6,489,458号に記載されており、これらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、TIL中のタンパク質発現の一過性変化は、短干渉RNAまたはサイレンシングRNAとして知られることもある、低分子干渉RNA(siRNA)は、一般に19~25塩基対長の二本鎖RNA分子である。siRNAは、RNA干渉(RNAi)において使用され、相補的なヌクレオチド配列を有する特定の遺伝子の発現に干渉する。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性変化は、発現の低下である。いくつかの実施形態では、TILにおけるタンパク質発現の一過性の変化は、高パーセンテージの2’-OH置換(典型的にはフッ素または-OCH3)を有する化学的に合成された非対称siRNA二重鎖である自己送達RNA干渉(sdRNA)によって誘導され、これはテトラエチレングリコール(TEG)リンカーを使用してその3’末端でコレステロールに複合された、20ヌクレオチドアンチセンス(ガイド)鎖及び13~15塩基センス(パッセンジャー)鎖を含む。短干渉RNAまたはサイレンシングRNAとして知られることもある、低分子干渉RNA(siRNA)は、一般に19~25塩基対長の二本鎖RNA分子である。siRNAは、RNA干渉(RNAi)において使用され、相補的なヌクレオチド配列を有する特定の遺伝子の発現に干渉する。sdRNAは、共有結合及び疎水的に修飾されたRNAi化合物であり、細胞に侵入するために送達媒体を必要としない。sdRNAは、一般に、最小限の二本鎖領域を有する非対称の化学修飾された核酸分子である。sdRNA分子は、典型的に一本鎖領域及び二本鎖領域を含み、分子の一本鎖領域及び二本鎖領域の両方に様々な化学修飾を含み得る。加えて、sdRNA分子は、本明細書に記載されているように、従来の高度なステロール型分子などの疎水性複合体に結合することができる。sdRNA及びかかるsdRNAを作製するための関連方法は、例えば、米国特許出願公開第US2016/0304873 A1号、同第US2019/0211337 A1号、同第US2009/0131360 A1号、及び同第US2019/0048341 A1号、ならびに米国特許第10,633,654号及び同第10,913,948 B2号(これらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる)にも広く記載されている。sdRNA構造、化学、標的化位置、配列の好み等を最適化するために、sdRNA力価予測用のアルゴリズムが開発及び利用されている。これらの分析に基づいて、機能的なsdRNA配列は、一般に、1μMの濃度で70%を超える発現の減少を有すると定義されており、確率は40%を超える。
二本鎖DNA(dsRNA)は、一般に、RNAの相補鎖の対、一般にセンス(パッセンジャー)鎖及びアンチセンス(ガイド)鎖を含む任意の分子を定義するために使用することができ、一本鎖オーバーハング領域を含み得る。siRNAとは対照的に、dsRNAという用語は、一般に、ダイサーを含む切断酵素系の作用によりより大きいdsRNA分子から放出されるsiRNA分子の配列を含む前駆体分子を指す。
いくつかの実施形態では、方法は、CCRを発現するように修飾されたTILを含むTIL集団におけるタンパク質発現の一過性変化を含み、例えば、テトラエチレングリコール(TEG)リンカーを使用して20ヌクレオチドアンチセンス(ガイド)鎖及び3’末端でコレステロールにコンジュゲートされた13~15塩基センス(パッセンジャー)鎖を含む、高いパーセンテージの2’-OH置換(典型的にはフッ素または-OCH3)を有する化学的に合成された非対称siRNA二本鎖である、自己送達RNA干渉(sdRNA)の使用を含む。siRNA及びsdRNAを使用する方法は、Khvorova and Watts,Nat.Biotechnol.2017,35,238-248、Byrne,et al.,J.Ocul.Pharmacol.Ther.2013,29,855-864、及びLigtenberg,et al.,Mol.Therapy,2018,26,1482-93(それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる)に記載されている。いくつかの実施形態では、siRNAの送達は、エレクトロポレーションまたは細胞膜破壊(スクイーズまたはSQZ法など)を使用して達成される。いくつかの実施形態では、TIL集団へのsdRNAの送達は、エレクトロポレーション、SQZ、または他の方法を使用せず、代わりに、TIL集団が培地中1μM/10,000TILの濃度でsdRNAに曝露される1~3日の期間を使用して達成される。ある特定の実施形態では、方法は、TIL集団を培地中1μM/10,000TILの濃度のsdRNAに1~3日間曝露することを含む、TIL集団へのsiRNAまたはsdRNAの送達を含む。いくつかの実施形態では、TIL集団へのsdRNAの送達は、TIL集団が培地中10μM/10,000TILの濃度でsdRNAに曝露される1~3日の期間を使用して達成される。いくつかの実施形態では、TIL集団へのsdRNAの送達は、TIL集団が培地中50μM/10,000TILの濃度でsdRNAに曝露される1~3日の期間を使用して達成される。いくつかの実施形態では、TIL集団へのsdRNAの送達は、TIL集団が培地中0.1μM/10,000TIL~50μM/10,000TILの濃度でsdRNAに曝露される1~3日の期間を使用して達成される。いくつかの実施形態では、TIL集団へのsdRNAの送達は、TIL集団が培地中0.1μM/10,000TIL~50μM/10,000TILの濃度でsdRNAに曝露される1~3日の期間を使用して達成され、sdRNAへの曝露は、培地に新鮮なsdRNAを添加することによって2、3、4、または5回行われる。他の好適なプロセスは、例えば、米国特許出願公開第US2011/0039914A1号、同第US2013/0131141A1号、及び同第US2013/0131142A1号、ならびに米国特許第9,080,171号に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、siRNAまたはsdRNAは、製造中にTIL集団に挿入される。いくつかの実施形態では、sdRNAは、NOTCH1/2 ICD、PD-1、CTLA-4 TIM-3、LAG-3、TIGIT、TGFβ、TGFBR2、cAMPプロテインキナーゼA(PKA)、BAFF BR3、CISH、及び/またはCBLBに干渉するRNAをコードする。いくつかの実施形態では、発現の減少は、例えば、フローサイトメトリー及び/またはqPCRによって評価される、遺伝子サイレンシングのパーセンテージに基づいて決定される。いくつかの実施形態では、発現が約5%、約10%、約10%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、または約95%減少する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、または約95%減少する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約75%、約80%、約85%、約90%、または約95%減少する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約80%、約85%、約90%、または約95%減少する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約85%、約90%、または約95%減少する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約80%減少する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約85%減少する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約90%減少する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約95%減少する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約99%減少する。
siRNAの化学修飾に基づく自己送達可能なRNAi技術を本発明の方法とともに用いて、本明細書に記載されるように、sdRNAをTILに首尾よく送達することができる。非対称siRNA構造及び疎水性リガンドとの骨格修飾の組み合わせ(例えば、Ligtenberg,et al.Mol.Therapy,2018,26,1482-93及び米国特許出願公開第2016/0304873 A1(それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる)を参照)は、sdRNAのヌクレアーゼ安定性を利用して、培養培地に単純に添加することによって、追加の製剤及び方法なしに、sdRNAが培養された哺乳類細胞に浸透することを可能にする。この安定性により、単に培地中のsdRNAの活性濃度を維持することによって、標的遺伝子活性の一定レベルのRNAiを介した減少を支援することができる。理論に拘束されることはないが、sdRNAの骨格安定化は、非分裂細胞で数ヶ月間続く可能性のある遺伝子発現効果の延長された低減を提供する。
いくつかの実施形態では、TILの95%を超えるトランスフェクション効率及び様々な特定のsiRNAまたはsdRNAによる標的の発現の減少が起こる。いくつかの実施形態では、いくつかの未修飾リボース残基を含むsiRNAまたはsdRNAは、RNAi効果の効力及び/または寿命を増加させるために、完全に修飾された配列で置き換えられた。いくつかの実施形態では、発現効果の減少は、12時間、24時間、36時間、48時間、5日間、6日間、7日間、または8日間以上維持される。いくつかの実施形態では、発現効果の低下は、TILのsiRNAまたはsdRNA処理後10日以上で減少する。いくつかの実施形態では、標的発現の発現の70%を超える減少が維持される。いくつかの実施形態では、標的発現の発現の70%を超える減少が維持されるTIL。いくつかの実施形態では、PD-1/PD-L1経路における発現の減少により、TILがより強力なインビボ効果を示すことが可能になり、これは、いくつかの実施形態では、PD-1/PD-L1経路の抑制効果の回避に起因する。いくつかの実施形態では、siRNAまたはsdRNAによるPD-1の発現の減少は、TIL増殖の増加をもたらす。
いくつかの実施形態では、本発明で使用されるsdRNA配列は、標的遺伝子の発現の70%の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるsdRNA配列は、標的遺伝子の発現の75%の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるsdRNA配列は、標的遺伝子の発現の80%の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるsdRNA配列は、標的遺伝子の発現の85%の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるsdRNA配列は、標的遺伝子の発現の90%の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるsdRNA配列は、標的遺伝子の発現の95%の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるsdRNA配列は、標的遺伝子の発現の99%の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるsdRNA配列は、約0.25μM~約4μMの濃度で送達された場合、標的遺伝子の発現の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるsdRNA配列は、約0.25μMの濃度で送達された場合、標的遺伝子の発現の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるsdRNA配列は、約0.5μMの濃度で送達された場合、標的遺伝子の発現の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるsdRNA配列は、約0.75μMの濃度で送達された場合、標的遺伝子の発現の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるsdRNA配列は、約1.0μMの濃度で送達された場合、標的遺伝子の発現の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるsdRNA配列は、約1.25μMの濃度で送達された場合、標的遺伝子の発現の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるsdRNA配列は、約1.5μMの濃度で送達された場合、標的遺伝子の発現の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるsdRNA配列は、約1.75μMの濃度で送達された場合、標的遺伝子の発現の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるsdRNA配列は、約2.0μMの濃度で送達された場合、標的遺伝子の発現の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるsdRNA配列は、約2.25μMの濃度で送達された場合、標的遺伝子の発現の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるsdRNA配列は、約2.5μMの濃度で送達された場合、標的遺伝子の発現の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるsdRNA配列は、約2.75μMの濃度で送達された場合、標的遺伝子の発現の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるsdRNA配列は、約3.0μMの濃度で送達された場合、標的遺伝子の発現の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるsdRNA配列は、約3.25μMの濃度で送達された場合、標的遺伝子の発現の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるsdRNA配列は、約3.5μMの濃度で送達された場合、標的遺伝子の発現の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるsdRNA配列は、約3.75μMの濃度で送達された場合、標的遺伝子の発現の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるsdRNA配列は、約4.0μMの濃度で送達された場合、標的遺伝子の発現の減少を示す。
いくつかの実施形態では、siRNAまたはsdRNAオリゴヌクレオチド剤は、治療剤の安定性及び/または有効性を増加させ、かつ治療される細胞または組織へのオリゴヌクレオチドの効率的な送達をもたらすための1つ以上の修飾を含む。かかる修飾には、2’-O-メチル修飾、2’-O-フルロ修飾、ジホスホロチオエート修飾、2’F修飾ヌクレオチド、2’-O-メチル修飾、及び/または2’デオキシヌクレオチドが含まれ得る。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、例えば、ステロール、コレステロール、ビタミンD、ナフチル、イソブチル、ベンジル、インドール、トリプトファン、及び/またはフェニルを含む1つ以上の疎水性修飾を含むように修飾される。いくつかの実施形態では、化学修飾ヌクレオチドは、ホスホロチオエート、2’-O-メチル、2’デオキシ、疎水性修飾及びホスホロチオエートの組み合わせである。いくつかの実施形態では、糖が修飾され得、修飾された糖には、D-リボース、2’-O-アルキル(2’-O-メチル及び2’-0-エチルを含む)、すなわち、2’-アルコキシ、2’-アミノ、2’-S-アルキル、2’-ハロ(2’-フルオロを含む)、T-メトキシエトキシ、2’-アリルオキシ(-OCH2CH=CH2)、2’-プロパルギル、2’-プロピル、エチニル、エテニル、プロペニル、及びシアノなどが含まれ得るが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、糖部分は、ヘキソースであり得、Augustyns,et al.,Nucl.Acids.Res.1992,18,4711(この開示は参照により本明細書に組み込まれる)に記載されているようにオリゴヌクレオチドに組み込まれ得る。
いくつかの実施形態では、本発明の二本鎖siRNAまたはsdRNAオリゴヌクレオチドは、その全長にわたって二本鎖であり、すなわち、分子のいずれかの末端にも一本鎖配列が突出しておらず、すなわち、平滑末端である。いくつかの実施形態では、個々の核酸分子は、異なる長さであり得る。言い換えれば、本発明の二本鎖siRNAまたはsdRNAオリゴヌクレオチドは、その全長にわたって二本鎖ではない。例えば、2つの別個の核酸分子が使用される場合、アンチセンス配列を含むそれらの分子の一方、例えば、第1の分子は、それにハイブリダイズする(分子の一部分を一本鎖のままにする)第2の分子よりも長い可能性がある。いくつかの実施形態では、単一の核酸分子が使用される場合、いずれかの末端の分子の一部分は、一本鎖のままであり得る。
いくつかの実施形態では、本発明の二本鎖siRNAまたはsdRNAオリゴヌクレオチドは、ミスマッチ及び/またはループもしくはバルジを含むが、オリゴヌクレオチドの長さの少なくとも約70%にわたって二本鎖である。いくつかの実施形態では、本発明の二本鎖オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの長さの少なくとも約80%にわたって二本鎖である。他の実施形態では、本発明の二本鎖siRNAまたはsdRNAオリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの長さの少なくとも約90%~95%にわたって二本鎖である。いくつかの実施形態では、本発明の二本鎖オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの長さの少なくとも約96%~98%にわたって二本鎖である。いくつかの実施形態では、本発明の二本鎖siRNAまたはsdRNAオリゴヌクレオチドは、少なくともまたは最大1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、または15のミスマッチを含む。
いくつかの実施形態では、siRNAまたはsdRNAオリゴヌクレオチドは、例えば、米国特許第5,849,902号(その開示は参照により本明細書に組み込まれる)に記載されているように3’または5’結合を修飾することによって、ヌクレアーゼから実質的に保護され得る。例えば、オリゴヌクレオチドは、「ブロッキング基」を含めることによって耐性にすることができる。本明細書で使用される場合、「ブロッキング基」という用語は、合成のための保護基またはカップリング基のいずれかとして(例えば、FITC、プロピル(CH2-CH2-CH3)、グリコール(-0-CH2-CH2-O-)ホスフェート(PO3
2’’)、リン酸水素、もしくはホスホロアミダイト)、オリゴヌクレオチドまたはヌクレオモノマーに結合され得る置換基(例えば、OH基以外)を指す。「ブロッキング基」は、修飾ヌクレオチド及び非ヌクレオチドエキソヌクレアーゼ耐性構造を含む、オリゴヌクレオチドの5’及び3’末端を保護する「末端ブロッキング基」または「エキソヌクレアーゼブロッキング基」も含み得る。
いくつかの実施形態では、siRNAまたはsdRNA内の隣接するポリヌクレオチドの少なくとも一部分は、代替の結合、例えば、ホスホロチオエート結合によって結合されている。
いくつかの実施形態では、化学修飾は、siRNAまたはsdRNAの細胞取り込みの少なくとも1.5、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500パーセントをもたらし得る。いくつかの実施形態では、C残基またはU残基の少なくとも一方が疎水性修飾を含む。いくつかの実施形態では、複数のC及びUが疎水性修飾を含む。いくつかの実施形態では、C及びUの少なくとも10%、15%、20%、30%、40%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、または少なくとも95%が疎水性修飾を含み得る。いくつかの実施形態では、C及びUのすべてが疎水性修飾を含む。
いくつかの実施形態では、siRNAまたはsdRNA分子は、プロトン化可能なアミンの組み込みにより増強されたエンドソーム放出を示す。いくつかの実施形態では、プロトン化可能なアミンは、センス鎖(RISC負荷後に廃棄される分子の一部分)に組み込まれる。いくつかの実施形態では、本発明のsiRNAまたはsdRNA化合物は、二重鎖領域(10~15塩基長の効率的なRISC侵入に必要)及び4~12ヌクレオチド長の一本鎖領域を13ヌクレオチド二重鎖とともに含む非対称化合物を含む。いくつかの実施形態では、6ヌクレオチドの一本鎖領域が用いられる。いくつかの実施形態では、siRNAまたはsdRNAの一本鎖領域は、2~12個のホスホロチオエートヌクレオチド間結合(ホスホロチオエート修飾と称される)を含む。いくつかの実施形態では、6~8個のホスホロチオエートヌクレオチド間結合が用いられる。いくつかの実施形態では、本発明のsiRNAまたはsdRNA化合物は、安定性を提供し、かつRISC侵入と互換性がある固有の化学修飾パターンを含む。
ガイド鎖は、例えば、RISC侵入に干渉することなく安定性を確証する任意の化学修飾によって修飾することもできる。いくつかの実施形態では、ガイド鎖における化学修飾パターンは、2’Fが修飾され、かつ5’末端がリン酸化されたC及びUヌクレオチドの大部分を含む。
いくつかの実施形態では、siRNAまたはsdRNAのヌクレオチドの少なくとも30%が修飾されている。いくつかの実施形態では、siRNAまたはsdRNAのヌクレオチドの少なくとも30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、または99%が修飾されている。いくつかの実施形態では、siRNAまたはsdRNAのヌクレオチドの100%が修飾されている。
いくつかの実施形態では、sdRNA分子は、最小の二本鎖領域を有する。いくつかの実施形態では、二本鎖である分子の領域は、8~15ヌクレオチド長の範囲である。いくつかの実施形態では、二本鎖である分子の領域は、8、9、10、11、12、13、14、または15ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、二本鎖領域は、13ヌクレオチド長である。ガイド鎖とパッセンジャー鎖との間に100%の相補性が存在する場合もあれば、ガイド鎖とパッセンジャー鎖との間に1つ以上の不一致が存在する場合もある。いくつかの実施形態では、二本鎖分子の一端で、分子は、平滑末端であるか、または1ヌクレオチドのオーバーハングを有するかのいずれかである。分子の一本鎖領域は、いくつかの実施形態では、4~12ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、一本鎖領域は、4、5、6、7、8、9、10、11または12ヌクレオチド長であり得る。いくつかの実施形態では、一本鎖領域は、4ヌクレオチド長未満または12ヌクレオチド長超であることもできる。ある特定の実施形態では、一本鎖領域は、6または7ヌクレオチド長である。
いくつかの実施形態では、siRNAまたはsdRNA分子は、増加した安定性を有する。いくつかの事例では、化学修飾されたsiRNAまたはsdRNA分子は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24時間以上、または24時間超(任意の中間値を含む)の培地中での半減期を有する。いくつかの実施形態では、siRNAまたはsdRNAは、12時間以上の培地中での半減期を有する。
いくつかの実施形態では、siRNAまたはsdRNAは、効力の増加及び/または毒性の低減のために最適化されている。いくつかの実施形態では、ガイド鎖及び/またはパッセンジャー鎖のヌクレオチド長、及び/またはガイド鎖及び/またはパッセンジャー鎖におけるホスホロチオエート修飾の数が、いくつかの態様では、RNA分子の効力に影響を与え得る一方で、2’-フルオロ(2’F)修飾の2’-0-メチル(2’OMe)修飾での置き換えは、いくつかの態様では、分子の毒性に影響を与え得る。いくつかの実施形態では、分子の2’F含有量の減少は、分子の毒性を低減すると予測される。いくつかの実施形態では、RNA分子におけるホスホロチオエート修飾の数は、細胞への分子の取り込み、例えば、細胞への分子の受動的取り込みの効率に影響を及ぼし得る。いくつかの実施形態では、siRNAまたはsdRNAは、2’F修飾を有しないが、それにもかかわらず、細胞取り込み及び組織浸透における同等の有効性を特徴とする。
いくつかの実施形態では、ガイド鎖は、およそ18~19ヌクレオチド長であり、およそ2~14個のリン酸修飾を有する。例えば、ガイド鎖は、リン酸修飾された2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14個、または14個超のヌクレオチドを含み得る。ガイド鎖は、RISCの侵入に干渉することなく増加した安定性を付与する1つ以上の修飾を含み得る。ホスホロチオエート修飾ヌクレオチドなどのリン酸修飾ヌクレオチドは、3’末端にあるか、5’末端にあるか、またはガイド鎖全体に広がっている可能性がある。いくつかの実施形態では、ガイド鎖の3’末端10ヌクレオチドは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10個のホスホロチオエート修飾ヌクレオチドを含む。ガイド鎖は、分子全体に位置し得る2’F及び/または2’OMe修飾も含み得る。いくつかの実施形態では、ガイド鎖の1位のヌクレオチド(ガイド鎖の最も5’側のヌクレオチド)は、2’OMe修飾及び/またはリン酸化されている。ガイド鎖内のC及びUヌクレオチドは、2’F修飾されていてもよい。例えば、19ntガイド鎖の2~10位(または異なる長さのガイド鎖における対応する位置)のC及びUヌクレオチドは、2’F修飾されていてもよい。ガイド鎖内のC及びUヌクレオチドは、2’OMe修飾されている場合もある。例えば、19ntガイド鎖の11~18位(または異なる長さのガイド鎖における対応する位置)のC及びUヌクレオチドは、2’OMe修飾されていてもよい。いくつかの実施形態では、ガイド鎖の最も3’側の末端のヌクレオチドは修飾されていない。ある特定の実施形態では、ガイド鎖内のC及びUの大部分は2’F修飾されており、ガイド鎖の5’末端はリン酸化されている。他の実施形態では、1位及び11~18位のCまたはUは2’OMe修飾されており、ガイド鎖の5’末端はリン酸化されている。他の実施形態では、位置1及び位置11~18のCsまたはUsは2’OMe修飾されており、ガイド鎖の5’末端はリン酸化されており、2~10位のCまたはUは2’F修飾されている。
自己送達可能なRNAi技術は、追加の製剤または技法を必要とすることなくRNAi剤(siRNA、sdRNA、または他のRNAi剤のいずれか)で細胞を直接トランスフェクトする方法を提供する。トランスフェクションが困難な細胞株をトランスフェクトする能力、高いインビボ活性、及び使用の単純さは、従来のsiRNAベースの技法に優る重大な機能的利点を提示する組成物及び方法の特徴であり、したがって、sdRNA法は、本発明のTILにおける標的遺伝子の発現を減少させる方法に関連するいくつかの実施形態で用いられる。sdRNA法により、化学合成された化合物をエクスビボ及びインビボの両方で広範囲の一次細胞及び組織に直接送達することが可能になる。本明細書における本発明のいくつかの実施形態に記載のsdRNAは、Advirna LLC(Worcester,MA,USA)から市販されている。
siRNAまたはsdRNAは、疎水的に修飾されたsiRNA-アンチセンスオリゴヌクレオチドハイブリッド構造として形成され得、例えば、Byrne,et al.,J.Ocular Pharmacol.Therapeut.,2013,29,855-864(その開示は参照により本明細書に組み込まれる)に開示されている。
いくつかの実施形態では、siRNAまたはsdRNAオリゴヌクレオチドは、滅菌エレクトロポレーションを使用して本明細書に記載のTILに送達され得る。ある特定の実施形態では、方法は、siRNAまたはsdRNAオリゴヌクレオチドを送達するためにTIL集団の滅菌エレクトロポレーションを含む。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、膜貫通送達システムと組み合わせて細胞に送達され得る。いくつかの実施形態では、この膜貫通送達システムは、脂質、ウイルスベクターなどを含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド剤は、自己送達RNAi剤であり、いかなる送達剤も必要としない。特定の実施形態では、方法は、TILの集団にsiRNAまたはsdRNAオリゴヌクレオチドを送達するための膜貫通送達システムの使用を含む。
オリゴヌクレオチド及びオリゴヌクレオチド組成物は、本明細書に記載のTILと接触し(例えば、接触させられ、本明細書では投与または送達されるとも称される)、TILによって取り込まれる(TILによる受動的取り込みを含む)。sdRNAは、第1の拡張中(例えば、ステップB)、第1の拡張後(例えば、ステップC中)、第2の拡張前または拡張中(例えば、ステップDの前またはステップD中)、ステップD後及びステップEにおける採取前、ステップFにおける採取中または採取後、ステップFにおける最終製剤化及び/または注入バッグへの移行前または採取中、ならびにステップFにおける任意選択の凍結保存ステップ前に、本明細書に記載のTILに添加され得る。さらに、sdRNAは、ステップFにおける任意の凍結保存ステップから解凍した後に添加され得る。いくつかの実施形態では、PD-1、LAG-3、TIM-3、CISH、CTLA-4、TIGIT、TET2及びCBLBを含む、本明細書に記載の1つ以上のsdRNA標的遺伝子が、100nM~20mM、200nM~10mM、500nm~1mM、1μM~100μM、及び1μM~100μMからなる群から選択される濃度でTIL及び他の薬剤を含む細胞培養培地に添加され得る。いくつかの実施形態では、PD-1、LAG-3、TIM-3、CISH、CTLA-4、TIGIT、TET2及びCBLBを含む、本明細書に記載の1つ以上のsdRNA標的遺伝子は、0.1μM sdRNA/10,000TIL/100μL培地、0.5μM sdRNA/10,000TIL/100μL培地、0.75μM sdRNA/10,000TIL/100μL培地、1μM sdRNA/10,000TIL/100μL培地、1.25μM sdRNA/10,000TIL/100μL培地、1.5μM sdRNA/10,000TIL/100μL培地、2μM sdRNA/10,000TIL/100μL培地、5μM sdRNA/10,000TIL/100μL培地、または10μM sdRNA/10,000TIL/100μL培地からなる群から選択される量でTIL及び他の薬剤を含む細胞培養培地に添加され得る。いくつかの実施形態では、PD-1、LAG-3、TIM-3、CISH、CTLA-4、TIGIT、TET2及びCBLBを含む、本明細書に記載の1つ以上のsdRNA標的遺伝子は、REP前段階またはREP段階中に1日2回、1日1回、2日毎、3日毎、4日毎、5日毎、6日毎、または7日毎にTIL培養物に添加され得る。
sdRNAを含む本発明のオリゴヌクレオチド組成物は、例えば、細胞培養培地にsdRNAを高濃度で溶解し、かつ受動的取り込みが起こるのに十分な時間を許容することによって、拡張プロセス中に本明細書に記載のTILと接触することができる。ある特定の実施形態では、本発明の方法は、TIL集団を、本明細書に記載のオリゴヌクレオチド組成物と接触させることを含む。ある特定の実施形態では、この方法は、オリゴヌクレオチド、例えば、sdRNAを細胞培養培地に溶解することと、細胞培養培地をTIL集団と接触させることとを含む。TILは、本明細書に記載の第1の集団、第2の集団、及び/または第3の集団であり得る。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドの細胞への送達は、リン酸カルシウム、DMSO、グリセロールもしくはデキストラン、エレクトロポレーションを含む好適な技術分野で認識される方法によって、またはトランスフェクションによって、例えば、当該技術分野で知られている方法、例えば、米国特許第4,897,355号、同第5,459,127号、同第5,631,237号、同第5,955,365号、同第5,976,567号、同第10,087,464号、及び同第10,155,945号、ならびにBergan,et al.,Nucl.Acids Res.1993,21,3567(それらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる)に記載される方法を使用して、カチオン性、アニオン性、もしくは中性脂質組成物またはリポソームを使用して増強され得る。
いくつかの実施形態では、1つを超えるsiRNAまたはsdRNAが、標的遺伝子の発現を減少させるために使用されるいくつかの実施形態では、PD-1、TIM-3、CBLB、LAG3、CTLA-4、TIGIT、TET2及び/またはCISHを標的とするsiRNAまたはsdRNAのうちの1つ以上が一緒に使用される。いくつかの実施形態では、PD-1 siRNAまたはsdRNAは、1つを超える遺伝子標的の発現を減少させるために、TIM-3、CBLB、LAG3、CTLA-4、TIGIT、TET2及び/またはCISHのうちの1つ以上とともに使用される。いくつかの実施形態では、LAG3 siRNAまたはsdRNAは、両方の標的の遺伝子発現を減少させるために、CISHを標的とするsiRNAまたはsdRNAと組み合わせて使用される。いくつかの実施形態では、本明細書におけるPD-1、TIM-3、CBLB、LAG3、CTLA-4、TIGIT、TET2及び/またはCISHのうちの1つ以上を標的とするsiRNAまたはsdRNAは、Advirna LLC(Worcester,MA,USA)から市販されている。
いくつかの実施形態では、siRNAまたはsdRNAは、PD-1、LAG3、TIM3、CTLA-4、TIGIT、TET2、CISH、TGFβR2、PKA、CBLB、BAFF(BR3)、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される遺伝子を標的とする。いくつかの実施形態では、siRNAまたはsdRNAは、PD-1、LAG3、TIM3、CTLA-4、TIGIT、TET2、CISH、TGFβR2、PKA、CBLB、BAFF(BR3)、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される遺伝子を標的とする。いくつかの実施形態では、1つのsiRNAまたはsdRNAは、PD-1を標的とし、別のsiRNAまたはsdRNAは、LAG3、TIM3、CTLA-4、TIGIT、TET2、CISH、TGFβR2、PKA、CBLB、BAFF(BR3)、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される遺伝子を標的とする。いくつかの実施形態では、siRNAまたはsdRNAは、PD-1、LAG-3、CISH、CBLB、TIM3、CTLA-4、TIGIT、TET2、及びそれらの組み合わせから選択される遺伝子を標的とする。いくつかの実施形態では、siRNAまたはsdRNAは、PD-1、ならびにLAG3、CISH、CBLB、TIM3、CTLA-4、TIGIT、TET2のうちの1つ、及びそれらの組み合わせから選択される遺伝子を標的とする。いくつかの実施形態では、1つのsiRNAまたはsdRNAは、PD-1を標的とし、1つのsiRNAまたはsdRNAは、LAG3を標的とする。いくつかの実施形態では、1つのsiRNAまたはsdRNAは、PD-1を標的とし、1つのsiRNAまたはsdRNAは、CISHを標的とする。いくつかの実施形態では、1つのsiRNAまたはsdRNAは、PD-1を標的とし、1つのsiRNAまたはsdRNAは、CBLBを標的とする。いくつかの実施形態では、1つのsiRNAまたはsdRNAは、PD-1を標的とし、1つのsiRNAまたはsdRNAは、TIM3を標的とする。いくつかの実施形態では、1つのsiRNAまたはsdRNAは、PD-1を標的とし、1つのsiRNAまたはsdRNAは、CTLA-4を標的とする。いくつかの実施形態では、1つのsiRNAまたはsdRNAは、PD-1を標的とし、1つのsiRNAまたはsdRNAは、TIGITを標的とする。いくつかの実施形態では、1つのsiRNAまたはsdRNAは、PD-1を標的とし、1つのsiRNAまたはsdRNAは、TET2を標的とする。いくつかの実施形態では、1つのsiRNAまたはsdRNAは、LAG3を標的とし、1つのsiRNAまたはsdRNAは、CISHを標的とする。いくつかの実施形態では、1つのsiRNAまたはsdRNAは、LAG3を標的とし、1つのsiRNAまたはsdRNAは、CBLBを標的とする。いくつかの実施形態では、1つのsiRNAまたはsdRNAは、LAG3を標的とし、1つのsiRNAまたはsdRNAは、TIM3を標的とする。いくつかの実施形態では、1つのsiRNAまたはsdRNAは、LAG3を標的とし、1つのsiRNAまたはsdRNAは、CTLA-4を標的とする。いくつかの実施形態では、1つのsiRNAまたはsdRNAは、LAG3を標的とし、1つのsiRNAまたはsdRNAは、TIGITを標的とする。いくつかの実施形態では、1つのsiRNAまたはsdRNAは、LAG3を標的とし、1つのsiRNAまたはsdRNAは、TET2を標的とする。いくつかの実施形態では、1つのsiRNAまたはsdRNAは、CISHを標的とし、1つのsiRNAまたはsdRNAは、CBLBを標的とする。いくつかの実施形態では、1つのsiRNAまたはsdRNAは、CISHを標的とし、1つのsiRNAまたはsdRNAは、TIM3を標的とする。いくつかの実施形態では、1つのsiRNAまたはsdRNAは、CISHを標的とし、1つのsiRNAまたはsdRNAは、CTLA-4を標的とする。いくつかの実施形態では、1つのsiRNAまたはsdRNAは、CISHを標的とし、1つのsiRNAまたはsdRNAは、TIGITを標的とする。いくつかの実施形態では、1つのsiRNAまたはsdRNAは、CISHを標的とし、1つのsiRNAまたはsdRNAは、TET2を標的とする。いくつかの実施形態では、1つのsiRNAまたはsdRNAは、CBLBを標的とし、1つのsiRNAまたはsdRNAは、TIM3を標的とする。いくつかの実施形態では、1つのsiRNAまたはsdRNAは、CBLBを標的とし、1つのsiRNAまたはsdRNAは、CTLA-4を標的とする。いくつかの実施形態では、1つのsiRNAまたはsdRNAは、CBLBを標的とし、1つのsiRNAまたはsdRNAは、TIGITを標的とする。いくつかの実施形態では、1つのsiRNAまたはsdRNAは、CBLBを標的とし、1つのsiRNAまたはsdRNAは、TET2を標的とする。いくつかの実施形態では、1つのsiRNAまたはsdRNAは、TIM3を標的とし、1つのsiRNAまたはsdRNAは、PD-1を標的とする。いくつかの実施形態では、1つのsiRNAまたはsdRNAは、TIM3を標的とし、1つのsiRNAまたはsdRNAは、LAG3を標的とする。いくつかの実施形態では、1つのsiRNAまたはsdRNAは、TIM3を標的とし、1つのsiRNAまたはsdRNAは、CISHを標的とする。いくつかの実施形態では、1つのsiRNAまたはsdRNAは、TIM3を標的とし、1つのsiRNAまたはsdRNAは、CBLBを標的とする。いくつかの実施形態では、1つのsiRNAまたはsdRNAは、TIM3を標的とし、1つのsiRNAまたはsdRNAは、CTLA-4を標的とする。いくつかの実施形態では、1つのsiRNAまたはsdRNAは、TIM3を標的とし、1つのsiRNAまたはsdRNAは、TIGITを標的とする。いくつかの実施形態では、1つのsiRNAまたはsdRNAは、TIM3を標的とし、1つのsiRNAまたはsdRNAは、TET2を標的とする。いくつかの実施形態では、1つのsiRNAまたはsdRNAは、CTLA-4を標的とし、1つのsiRNAまたはsdRNAは、TIGITを標的とする。いくつかの実施形態では、1つのsiRNAまたはsdRNAは、CTLA-4を標的とし、1つのsiRNAまたはsdRNAは、TET2を標的とする。いくつかの実施形態では、1つのsiRNAまたはsdRNAは、TIGITを標的とし、1つのsiRNAまたはsdRNAは、TET2を標的とする。
本明細書で考察されたように、本発明の実施形態は、それらの治療効果を増強するために遺伝子編集を介して遺伝子修飾された腫瘍浸潤リンパ球(TIL)を提供する。本発明の実施形態は、1つ以上のタンパク質の発現の促進及び1つ以上のタンパク質の発現の阻害の両方、ならびにそれらの組み合わせのために、TIL集団へのヌクレオチド挿入(RNAまたはDNA)による遺伝子編集を包含する。本発明の実施形態は、TILを治療的集団に拡張するための方法も提供し、方法は、TILを遺伝子編集することを含む。TIL集団を遺伝子修飾するために使用され得るいくつかの遺伝子編集技術が存在し、それらは本発明による使用に好適である。
いくつかの実施形態では、この方法は、本明細書に記載の第1の集団、第2の集団、及び/または第3の集団におけるTIL集団を遺伝子修飾する方法を含む。いくつかの実施形態では、TIL集団を遺伝子修飾する方法は、1つ以上のタンパク質の産生または阻害(例えば、サイレンシング)のために遺伝子の安定した組み込みステップを含む。いくつかの実施形態では、TIL集団を遺伝子修飾する方法は、エレクトロポレーションステップを含む。エレクトロポレーション法は、当該技術分野で知られており、例えば、Tsong,Biophys.J.1991,60,297-306及び米国特許出願公開第2014/0227237A1号に記載されており、これらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる。米国特許第5,019,034号、同第5,128,257号、同第5,137,817号、同第5,173,158号、同第5,232,856号、同第5,273,525号、同第5,304,120号、同第5,318,514号、同第6,010,613号、及び同第6,078,490号(それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる)に記載されるものなどの当該技術分野で知られている他のエレクトロポレーション法が使用され得る。いくつかの実施形態では、エレクトロポレーション法は、滅菌エレクトロポレーション法である。いくつかの実施形態では、エレクトロポレーション法は、パルスエレクトロポレーション法である。いくつかの実施形態では、エレクトロポレーション法は、TILをパルス電場で処理して、TILの定義及び制御された永続的または一時的変更を変える、操作する、または引き起こすステップを含むパルスエレクトロポレーション法であり、100V/cm以上の電界強度を有する、少なくとも3つの単一オペレーターが制御する、独立してプログラムされたDC電気パルス列をTILに適用するステップを含み、少なくとも3つのDC電気パルス列は、以下の特徴のうちの1つ、2つ、または3つを有する:(1)少なくとも3つのパルスのうちの少なくとも2つのパルス振幅が互いに異なる、(2)少なくとも3つのパルスのうちの少なくとも2つのパルス幅が互いに異なる、及び(3)少なくとも3つのパルスのうちの2つの第1のセットの第1のパルス間隔が、少なくとも3つのパルスのうちの2つの第2のセットの第2のパルス間隔とは異なる。いくつかの実施形態では、エレクトロポレーション法は、TILをパルス電場で処理して、TILの定義及び制御された永続的または一時的変更を変える、操作する、または引き起こすステップを含むパルスエレクトロポレーション法であり、100V/cm以上の電界強度を有する、少なくとも3つの単一オペレーターが制御する、独立してプログラムされたDC電気パルス列をTILに適用するステップを含み、少なくとも3つのパルスのうちの少なくとも2つのパルス振幅が互いに異なる。いくつかの実施形態では、エレクトロポレーション法は、TILをパルス電場で処理して、TILの定義及び制御された永続的または一時的変更を変える、操作する、または引き起こすステップを含むパルスエレクトロポレーション法であり、100V/cm以上の電界強度を有する、少なくとも3つの単一オペレーターが制御する、独立してプログラムされたDC電気パルス列をTILに適用するステップを含み、少なくとも3つのパルスのうちの少なくとも2つのパルス幅が互いに異なる。いくつかの実施形態では、エレクトロポレーション法は、TILをパルス電場で処理して、TILの定義及び制御された永続的または一時的変更を変える、操作する、または引き起こすステップを含むパルスエレクトロポレーション法であり、100V/cm以上の電界強度を有する、少なくとも3つの単一オペレーターが制御する、独立してプログラムされたDC電気パルス列をTILに適用するステップを含み、少なくとも3つのパルスのうちの少なくとも2つの第1のセットの第1のパルス間隔が、少なくとも3つのパルスのうちの2つの第2のセットの第2のパルス間隔とは異なる。いくつかの実施形態では、エレクトロポレーション法は、TILをパルス電場で処理して、TILにおける細孔形成を誘導するステップを含むパルスエレクトロポレーション法であり、100V/cm以上の電界強度を有する、少なくとも3つのDC電気パルス列をTILに適用するステップを含み、少なくとも3つのDC電気パルス列は、以下の特徴のうちの1つ、2つ、または3つを有する:(1)少なくとも3つのパルスのうちの少なくとも2つのパルス振幅が互いに異なる、(2)少なくとも3つのパルスのうちの少なくとも2つのパルス幅が互いに異なる、及び(3)少なくとも3つのパルスのうちの2つの第1のセットの第1のパルス間隔が、少なくとも3つのパルスのうちの2つの第2のセットの第2のパルス間隔とは異なり、これにより、誘導された細孔が比較的長期間にわたって持続され、TILの生存率が維持される。いくつかの実施形態では、TIL集団を遺伝子修飾する方法は、リン酸カルシウムトランスフェクションステップを含む。リン酸カルシウムトランスフェクション法(リン酸カルシウムDNA沈殿、細胞表面コーティング、及びエンドサイトーシス)は、当該技術分野で知られており、Graham and van der Eb,Virology 1973,52,456-467、Wigler,et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.1979,76,1373-1376、及びChen and Okayarea,Mol.Cell.Biol.1987,7,2745-2752、ならびに米国特許第5,593,875号に記載されており、これらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、TIL集団を遺伝子修飾する方法は、リポソームトランスフェクションステップを含む。リポソームトランスフェクション法、例えば、カチオン性脂質N-[1-(2,3-ジオレイルオキシ)プロピル]-n,n,n-トリメチルアンモニウムクロリド(DOTMA)及びジオレオイルホスホチジルエタノールアミン(DOPE)の1:1(w/w)リポソーム製剤を用いる方法は、当該技術分野において既知であり、Rose,et al.,Biotechniques 1991,10,520-525及びFelgner,et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1987,84,7413-7417、ならびに米国特許第5,279,833号、同第5,908,635号、同第6,056,938号、同第6,110,490号、同第6,534,484号、及び同第7,687,070号に記載されており、これらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、TIL集団を遺伝子修飾する方法は、米国特許第5,766,902号、同第6,025,337号、同第6,410,517号、同第6,475,994号、及び同第7,189,705号に記載の方法を使用するトランスフェクションステップを含み、これらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる。TILは、本明細書に記載のTILの第1の集団、第2の集団、及び/または第3の集団であり得る。
ある実施形態によれば、遺伝子編集プロセスは、1つ以上の免疫チェックポイント遺伝子での二本鎖または一本鎖切断の生成を媒介するプログラム可能なヌクレアーゼの使用を含み得る。かかるプログラム可能なヌクレアーゼは、特定のゲノム遺伝子座に切断を導入することによって正確なゲノム編集を可能にし、すなわち、ゲノム内の特定のDNA配列の認識に依存して、ヌクレアーゼドメインをこの位置に標的し、標的配列での二本鎖切断の生成を媒介する。DNAの二本鎖切断は、その後、内因性修復機構を切断部位に動員して、非相同末端結合(NHEJ)または相同指向修復(HDR)のいずれかによるゲノム編集を媒介する。したがって、切断の修復は、標的遺伝子産物を破壊する(例えば、サイレンス、抑制、または増強する)挿入/欠失変異の導入をもたらす可能性がある。
部位特異的ゲノム編集を可能にするために開発されたヌクレアーゼの主要なクラスには、ジンクフィンガーヌクレアーゼ(ZFN)、転写活性化因子様ヌクレアーゼ(TALEN)、及びCRISPR関連ヌクレアーゼ(例えば、CRISPR/Cas9)が含まれる。これらのヌクレアーゼシステムは、DNA認識のモードに基づいて大きく2つのカテゴリーに分類され得、ZFN及びTALENは、タンパク質-DNA相互作用を介して特定のDNA結合を達成するが、Cas9などのCRISPRシステムは、標的DNAと直接塩基対を形成する短いRNAガイド分子によって、かつタンパク質-DNA相互作用によって特定のDNA配列を標的とする。例えば、Cox et al.,Nature Medicine,2015,Vol.21,No.2を参照されたい。
本発明のTIL拡張法に従って使用され得る遺伝子編集法の非限定的な例には、CRISPR法、TALE法、及びZFN法が含まれ、これらは以下でより詳細に説明される。ある実施形態によれば、TILを治療的集団に拡張するための方法は、本明細書に記載の方法のいずれかの実施形態(例えば、Gen3)に従って、または米国特許出願公開第US2020/0299644 A1号及び同第US2020/0121719 A1号、ならびに米国特許第10,925,900号(それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる)に記載されるように実行することができ、方法は、増強された治療効果を提供することができるTILを生成するために、CRISPR法、TALE法、またはZFN法のうちの1つ以上によって、TILの少なくとも一部を遺伝子編集することをさらに含む。ある実施形態によれば、遺伝子編集されたTILは、インビトロでそれらを修飾されていないTILと比較することによって、例えば、修飾されていないTILと比較してインビトロでのエフェクター機能、サイトカインプロファイルなどを評価することによって、治療効果の改善について評価され得る。ある特定の実施形態では、この方法は、CRISPR法、TALE法、及び/またはZFN法を使用してTIL集団を遺伝子編集することを含む。
本発明のいくつかの実施形態では、エレクトロポレーションは、CRISPRシステム、TALENシステム、及びZFNシステムなどの遺伝子編集システムの送達のために使用される。本発明のいくつかの実施形態では、エレクトロポレーションシステムは、フローエレクトロポレーションシステムである。本発明のいくつかの実施形態との使用に好適な、好適なフローエレクトロポレーションシステムの例は、市販のMaxCyte STXシステムである。本発明との使用に好適であり得る、BTX-Harvard Apparatusから入手可能なAgilePulseシステムもしくはECM830、Cellaxess Elektra(Cellectricon)、Nucleofector(Lonza/Amaxa)、GenePulser MXcell(BIORAD)、iPorator-96(Primax)、またはsiPORTer96(Ambion)などのいくつかの代替の市販エレクトロポレーション機器が存在する。本発明のいくつかの実施形態では、エレクトロポレーションシステムは、TIL拡張法の残りとともに、滅菌閉鎖系を形成する。本発明のいくつかの実施形態では、エレクトロポレーションシステムは、本明細書に記載のパルスエレクトロポレーションシステムであり、TIL拡張法の残りとともに、滅菌閉鎖系を形成する。
TILを治療的集団に拡張するための方法は、本明細書に記載の方法のいずれかの実施形態(例えば、Gen3)に従って、または米国特許出願公開第US2020/0299644 A1号及び同第US2020/0121719 A1号、ならびに米国特許第10,925,900号(それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる)に記載されているように実施することができ、方法は、CRISPR法(例えば、CRISPR/Cas9またはCRISPR/Cpf1)によってTILの少なくとも一部を遺伝子編集することをさらに含む。特定の実施形態によれば、TIL拡張プロセス中のCRISPR法の使用は、1つ以上の免疫チェックポイント遺伝子の発現を、治療的TIL集団の少なくとも一部においてサイレンスまたは減少させる。あるいは、TIL拡張プロセス中のCRISPR法の使用は、1つ以上の免疫チェックポイント遺伝子の発現を、治療的TIL集団の少なくとも一部において増強させる。
CRISPRは、「clustered regularly interspaced short palindromic repeats(クラスター化された定期的に間隔をあけた短いパリンドロミックリピート)」の略語である。遺伝子編集のためにCRISPRシステムを使用する方法は、本明細書ではCRISPR法とも称される。RNA及びCasタンパク質を組み込み、かつ本発明に従って使用され得るCRISPRシステムには、3つの型:I型、II型、及びIII型がある。II型CRISPR(Cas9によって例示される)は、最もよく特徴付けられているシステムのうちの1つである。
CRISPR技術は、細菌及び古細菌(単細胞微生物のドメイン)の自然防御機構から適合された。これらの生物は、CRISPR由来のRNA及びCas9を含む様々なCasタンパク質を使用して、外来侵入物のDNAを切り刻んで破壊することによって、ウイルス及び他の異物による攻撃を阻止する。CRISPRは、ヌクレオチド反復配列及びスペーサーの存在という2つの異なる特徴を有するDNAの特殊な領域である。ヌクレオチドの反復配列は、CRISPR領域全体に分布しており、外来DNA(スペーサー)の短いセグメントが反復配列の間に散在している。II型CRISPR/Casシステムでは、スペーサーは、CRISPRゲノム遺伝子座内に組み込まれ、転写され、短いCRISPR RNA(crRNA)に処理される。これらのcrRNAは、トランス活性化crRNA(tracrRNA)にアニーリングし、Casタンパク質による病原性DNAの配列特異的切断及びサイレンシングを指示する。Cas9タンパク質による標的認識には、crRNA内の「シード」配列、及びcrRNA結合領域の上流にある保存されたジヌクレオチドを含むプロトスペーサー隣接モチーフ(PAM)配列が必要である。これにより、CRISPR/Casシステムが再標的されて、crRNAを再設計することにより、実質的にいずれのDNA配列も切断することができる。天然システムにおけるcrRNA及びtracrRNAは、遺伝子操作で使用するために、およそ100ヌクレオチドの単一ガイドRNA(sgRNA)に簡略化され得る。CRISPR/Casシステムは、Cas9エンドヌクレアーゼを発現するプラスミドと必要なcrRNA成分を同時送達することにより、ヒト細胞に直接運搬可能である。Casタンパク質の異なるバリアント(例えば、Cpf1などのCas9のオルソログ)を使用して、標的の制限を低減することができる。
CRISPR法によりTILを永久に遺伝子編集することによってサイレンスまたは阻害され得る遺伝子の非限定的な例には、PD-1、CTLA-4、LAG-3、HAVCR2(TIM-3)、Cish、TGFβ、PKA、CBL-B、PPP2CA、PPP2CB、PTPN6、PTPN22、PDCD1、BTLA、CD160、TIGIT、TET2、CD96、CRTAM、LAIR1、SIGLEC7、SIGLEC9、CD244、TNFRSF10B、TNFRSF10A、CASP8、CASP10、CASP3、CASP6、CASP7、FADD、FAS、SMAD2、SMAD3、SMAD4、SMAD10、SKI、SKIL、TGIF1、IL10RA、IL10RB、HMOX2、IL6R、IL6ST、EIF2AK4、CSK、PAG1、SIT1、FOXP3、PRDM1、BATF、GUCY1A2、GUCY1A3、GUCY1B2、GUCY1B3、TOX、SOCS1、ANKRD11、及びBCORが含まれる。
CRISPR法によりTILを永久に遺伝子編集することによって増強され得る遺伝子の非限定的な例には、CCR2、CCR4、CCR5、CXCR2、CXCR3、CX3CR1、IL-2、IL12、IL-15、及びIL-21が含まれる。
CRISPR法によって標的遺伝子配列の発現を変化させるための、本発明の実施形態に従って使用され得るシステム、方法、及び組成物の例は、米国特許第8,697,359号、同第8,993,233号、同第8,795,965号、同第8,771,945号、同第8,889,356号、同第8,865,406号、同第8,999,641号、同第8,945,839号、同第8,932,814号、同第8,871,445号、同第8,906,616号、及び同第8,895,308号に記載されており、各々の開示は、参照により本明細書に組み込まれる。CRISPR/Cas9及びCRISPR/Cpf1を発現するためのプラスミドなどのCRISPR法を行うための資源は、GenScriptなどの企業から市販されている。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のTIL集団の遺伝子修飾は、米国特許第US9790490号に記載されているCRISPR/Cpf1システムを使用して行うことができ、この開示は参照により本明細書に組み込まれる。
TILを治療的集団に拡張するための方法は、本明細書に記載の方法のいずれかの実施形態(例えば、Gen2)に従って、または米国特許出願公開第US2020/0299644 A1号及び同第US2020/0121719 A1号、ならびに米国特許第10,925,900号に記載されているように実施することができ、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれ、方法は、TALE法によってTILの少なくとも一部を遺伝子編集することをさらに含む。特定の実施形態によれば、TIL拡張プロセス中のTALE法の使用は、1つ以上の免疫チェックポイント遺伝子の発現を、治療的TIL集団の少なくとも一部分においてサイレンスまたは減少させる。あるいは、TIL拡張プロセス中のTALE法の使用は、1つ以上の免疫チェックポイント遺伝子の発現を、治療的TIL集団の少なくとも一部分において増強させる。
TALEは、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ(TALEN「」)を含む、転写活性化因子様エフェクター「」タンパク質を表す。遺伝子編集のためにTALEシステムを使用する方法は、本明細書ではTALE法とも称され得る。TALEは、植物病原菌Xanthomonas属由来の天然に存在するタンパク質であり、各々単一の塩基対を認識する一連の33~35アミノ酸反復ドメインで構成されるDNA結合ドメインを含む。TALE特異性は、反復可変二残基(RVD)として知られる2つの超可変アミノ酸によって決定される。モジュラーTALE反復配列は、隣接するDNA配列を認識するために一緒に結合される。DNA結合ドメイン内の特定のRVDは、標的遺伝子座内の塩基を認識し、予測可能なDNA結合ドメインを組み立てるための構造的特徴を提供する。TALEのDNA結合ドメインは、IIS型FokIエンドヌクレアーゼの触媒ドメインに融合して、標的可能なTALEヌクレアーゼを作製する。部位特異的変異を誘導するために、14~20塩基対のスペーサー領域によって分離された2つの個々のTALENアームがFokIモノマーを密接に接近させて二量体化し、標的とされる二本鎖切断を産生する。
様々な組み立て方法を利用したいくつかの大規模な系統的研究により、TALE反復配列を組み合わせて、実質的にすべてのユーザ定義配列を認識することができることが示されている。カスタム設計されたTALEアレイも、Cellectis Bioresearch(Paris,France)、Transposagen Biopharmaceuticals(Lexington,KY,USA)、及びLife Technologies(Grand Island,NY,USA)から市販されている。本発明での使用に好適なTALE法及びTALEN法は、米国特許公開第US2011/0201118 A1号、同第US2013/0117869 A1号、同第US2013/0315884 A1号、同第US2015/0203871 A1号、及び同第US2016/0120906 A1号に記載されており、これらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる。
TALE法によりTILを永久に遺伝子編集することによってサイレンスまたは阻害され得る遺伝子の非限定的な例には、PD-1、CTLA-4、LAG-3、HAVCR2(TIM-3)、Cish、TGFβ、PKA、CBL-B、PPP2CA、PPP2CB、PTPN6、PTPN22、PDCD1、BTLA、CD160、TIGIT、TET2、CD96、CRTAM、LAIR1、SIGLEC7、SIGLEC9、CD244、TNFRSF10B、TNFRSF10A、CASP8、CASP10、CASP3、CASP6、CASP7、FADD、FAS、SMAD2、SMAD3、SMAD4、SMAD10、SKI、SKIL、TGIF1、IL10RA、IL10RB、HMOX2、IL6R、IL6ST、EIF2AK4、CSK、PAG1、SIT1、FOXP3、PRDM1、BATF、GUCY1A2、GUCY1A3、GUCY1B2、GUCY1B3、TOX、SOCS1、ANKRD11、及びBCORが含まれる。
TALE法によりTILを永久に遺伝子編集することによって増強され得る遺伝子の非限定的な例には、CCR2、CCR4、CCR5、CXCR2、CXCR3、CX3CR1、IL-2、IL12、IL-15、及びIL-21が含まれる。
TALE法によって標的遺伝子配列の発現を変化させるための、本発明の実施形態に従って使用され得るシステム、方法、及び組成物の例は、米国特許第8,586,526号に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。
TILを治療的集団に拡張するための方法は、本明細書に記載の方法のいずれかの実施形態に従って、または米国特許出願公開第US2020/0299644 A1号及び同第US2020/0121719 A1号、ならびに米国特許第10,925,900号に記載されているように実施することができ、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれ、方法は、ジンクフィンガーまたはジンクフィンガーヌクレアーゼ法によってTILの少なくとも一部を遺伝子編集することをさらに含む。特定の実施形態によれば、TIL拡張プロセス中のジンクフィンガー法の使用は、1つ以上の免疫チェックポイント遺伝子の発現を、治療的TIL集団の少なくとも一部においてサイレンスまたは減少させる。あるいは、TIL拡張プロセス中のジンクフィンガー法の使用は、1つ以上の免疫チェックポイント遺伝子の発現を、治療的TIL集団の少なくとも一部において増強させる。
個々のジンクフィンガーは、保存されたββα立体配置でおよそ30個のアミノ酸を含む。αらせんの表面上のいくつかのアミノ酸は、典型的には、異なる選択性レベルでDNAの主溝の3bpと接触する。ジンクフィンガーは、2つのタンパク質ドメインを有する。第1のドメインは、DNA結合ドメインであり、真核生物転写因子を含み、ジンクフィンガーを含む。第2のドメインは、ヌクレアーゼドメインであり、FokI制限酵素を含み、DNAの触媒的切断を担っている。
個々のZFNのDNA結合ドメインは、典型的には、3~6個の個々のジンクフィンガー反復配列を含み、各々9~18塩基対を認識することができる。ジンクフィンガードメインが目的の標的部位に特異的である場合、合計18塩基対を認識する3フィンガーZFNの対でさえ、理論的には、哺乳動物ゲノムの単一遺伝子座を標的とすることができる。新たなジンクフィンガーアレイを生成するための1つの方法は、既知の特異性を有するより小さいジンクフィンガー「モジュール」を組み合わせることである。最も一般的なモジュラーアセンブリプロセスは、各々3塩基対のDNA配列を認識することができる3つの別個のジンクフィンガーを組み合わせて、9塩基対の標的部位を認識することができる3フィンガーアレイを生成することを含む。あるいは、オリゴマー化プールエンジニアリング(OPEN)などの選択ベースのアプローチを使用して、隣接するフィンガー間のコンテキスト依存的相互作用を考慮したランダム化ライブラリーから新たなジンクフィンガーアレイを選択することができる。操作されたジンクフィンガーは、Sangamo Biosciences(Richmond,CA,USA)及びSigma-Aldrich(St.Louis,MO,USA)から市販されている。
ジンクフィンガー法によりTILを永久に遺伝子編集することによってサイレンスまたは阻害され得る遺伝子の非限定的な例には、PD-1、CTLA-4、LAG-3、HAVCR2(TIM-3)、Cish、TGFβ、PKA、CBL-B、PPP2CA、PPP2CB、PTPN6、PTPN22、PDCD1、BTLA、CD160、TIGIT、TET2、CD96、CRTAM、LAIR1、SIGLEC7、SIGLEC9、CD244、TNFRSF10B、TNFRSF10A、CASP8、CASP10、CASP3、CASP6、CASP7、FADD、FAS、SMAD2、SMAD3、SMAD4、SMAD10、SKI、SKIL、TGIF1、IL10RA、IL10RB、HMOX2、IL6R、IL6ST、EIF2AK4、CSK、PAG1、SIT1、FOXP3、PRDM1、BATF、GUCY1A2、GUCY1A3、GUCY1B2、GUCY1B3、TOX、SOCS1、ANKRD11、及びBCORが含まれる。
ジンクフィンガー法によりTILを永久に遺伝子編集することによって増強され得る遺伝子の非限定的な例には、CCR2、CCR4、CCR5、CXCR2、CXCR3、CX3CR1、IL-2、IL12、IL-15、及びIL-21が含まれる。
ジンクフィンガー法によって標的遺伝子配列の発現を変化させるための、本発明の実施形態に従って使用され得るシステム、方法、及び組成物の例は、米国特許第6,534,261号、同第6,607,882号、同第6,746,838号、同第6,794,136号、同第6,824,978号、同第6,866,997号、同第6,933,113号、同第6,979,539号、同第7,013,219号、同第7,030,215号、同第7,220,719号、同第7,241,573号、同第7,241,574号、同第7,585,849号、同第7,595,376号、同第6,903,185号、及び同第6,479,626号に記載されており、これらの各々は参照により本明細書に組み込まれる。
ジンクフィンガー法によって標的遺伝子配列の発現を変化させるための、本発明の実施形態に従って使用され得るシステム、方法、及び組成物の他の例は、Beane,et al.,Mol.Therapy,2015,23 1380-1390に記載されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、TILは、高親和性TCR、例えば、MAGE-1、HER2、もしくはNY-ESO-1などの腫瘍関連抗原で標的とされるTCR、または腫瘍関連細胞表面分子(例えば、メソセリン)もしくは系統制限細胞表面分子(例えば、CD19)に結合するキメラ抗原受容体(CAR)を含むが、これらに限定されない追加の機能を含むように任意選択で遺伝子操作される。いくつかの実施形態では、この方法は、高親和性TCR、例えば、MAGE-1、HER2、もしくはNY-ESO-1などの腫瘍関連抗原で標的とされるTCR、または腫瘍関連細胞表面分子(例えば、メソセリン)もしくは系統制限細胞表面分子(例えば、CD19)に結合するキメラ抗原受容体(CAR)を含むようにTIL集団を遺伝子操作することを含む。適切には、TIL集団は、本明細書に記載の第1の集団、第2の集団及び/または第3の集団であり得る。
E.TIL製造のための閉鎖系
本発明は、TIL培養プロセス中に閉鎖系の使用を提供する。かかる閉鎖系は、微生物汚染の防止及び/または低減を可能にし、より少数のフラスコの使用を可能にし、コスト削減を可能にする。いくつかの実施形態では、閉鎖系は、2つの容器を使用する。
本発明は、TIL培養プロセス中に閉鎖系の使用を提供する。かかる閉鎖系は、微生物汚染の防止及び/または低減を可能にし、より少数のフラスコの使用を可能にし、コスト削減を可能にする。いくつかの実施形態では、閉鎖系は、2つの容器を使用する。
かかる閉鎖系は当該技術分野でよく知られており、例えば、http://www.fda.gov/cber/guidelines.htm及びhttps://www.fda.gov/BiologicsBloodVaccines/GuidanceComplianceRegulatoryInformation/Guidances/Blood/ucm076779.htmで見つけることができる。
滅菌接続装置(STCD)は、互換性のある2本の管間の滅菌溶接をもたらす。この手順により、様々な容器と管径との滅菌接続が可能になる。いくつかの実施形態では、閉鎖系には、実施例に記載のルアーロック系及びヒートシール系が含まれる。いくつかの実施形態では、閉鎖系は、閉鎖系の無菌性及び閉鎖性を維持するために、滅菌条件下でシリンジを介してアクセスされる。いくつかの実施形態では、実施例21に記載の閉鎖系が用いられる。いくつかの実施形態では、TILは、実施例「」において本明細書に記載される方法に従って、最終製品製剤容器に製剤化される。
いくつかの実施形態では、閉鎖系は、腫瘍断片が得られてから、TILを患者に投与するかまたは凍結保存する準備が整うまで、1つの容器を使用する。いくつかの実施形態では、2つの容器が使用される場合、第1の容器は密閉G容器であり、TIL集団が遠心分離され、第1の密閉G容器を開かずに注入バッグに移される。いくつかの実施形態では、2つの容器が使用される場合、注入バッグは、HypoThermosolを含有する注入バッグである。閉鎖系または閉鎖TIL細胞培養系は、腫瘍試料及び/または腫瘍断片が追加されると、系が外部からしっかりと密閉され、細菌、真菌、及び/またはいずれの他の微生物汚染も侵入しない閉鎖環境を形成することを特徴とする。
いくつかの実施形態では、微生物汚染の低減は、約5%~約100%である。いくつかの実施形態では、微生物汚染の低減は、約5%~約95%である。いくつかの実施形態では、微生物汚染の低減は、約5%~約90%である。いくつかの実施形態では、微生物汚染の低減は、約10%~約90%である。いくつかの実施形態では、微生物汚染の低減は、約15%~約85%である。いくつかの実施形態では、微生物汚染の低減は、約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約97%、約98%、約99%、または約100%である。
閉鎖系は、微生物汚染の不在下で及び/または微生物汚染が大幅に低減された状態で、TILの成長を可能にする。
さらに、TIL細胞培養環境のpH、二酸化炭素分圧、及び酸素分圧は各々、細胞が培養されるにつれて変化する。したがって、細胞培養に適切な培地を循環させても、TIL増殖に最適な環境として閉鎖環境を常に一定に維持する必要がある。この目的のために、閉鎖環境の培養液中のpH、二酸化炭素分圧、及び酸素分圧の物理的要因がセンサーによって監視されること、そのシグナルが培養環境の入口に設置されたガス交換器を制御するために使用されること、及び閉鎖環境のガス分圧が細胞培養環境を最適化するように培養液の変化に応じてリアルタイムで調整されることが望ましい。いくつかの実施形態では、本発明は、閉鎖環境のpH、二酸化炭素分圧、及び酸素分圧を測定する監視装置を備えたガス交換器を閉鎖環境の入口に組み込み、かつ監視装置からのシグナルに基づいてガス濃度を自動的に調整することによって細胞培養環境を最適化する閉鎖細胞培養系を提供する。
いくつかの実施形態では、閉鎖環境内の圧力は、連続的または断続的に制御される。すなわち、閉鎖環境内の圧力を、例えば、圧力維持装置によって変化させることができ、それ故に、空間が正圧状態でTILの成長に好適であることを確実にするか、または負圧状態で流体の浸出を促進し、ひいては細胞増殖を促進する。さらに、負圧を断続的に加えることにより、閉鎖環境内の体積の一時的な収縮によって、閉鎖環境内の循環液体を均一かつ効率的に置き換えることが可能である。
いくつかの実施形態では、TILの増殖に最適な培養成分を置換または追加することができ、IL-2及び/またはOKT3などの因子、ならびに組み合わせを追加することができる。
F.TILの任意選択の凍結保存
バルクTIL集団(例えば、第2のTIL集団)または拡張されたTIL集団(例えば、第3のTIL集団)のいずれかを、任意選択で凍結保存することができる。いくつかの実施形態では、凍結保存は、治療的TIL集団に起こる。いくつかの実施形態では、凍結保存は、第2の拡張後に採取されたTILに起こる。いくつかの実施形態では、凍結保存は、図1及び/または8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)の例示的なステップFにおいてTILに起こる。いくつかの実施形態では、TILは、注入バッグ内で凍結保存される。いくつかの実施形態では、TILは、注入バッグに入れる前に凍結保存される。いくつかの実施形態では、TILは、凍結保存され、注入バッグに入っていない。いくつかの実施形態では、凍結保存は、凍結保存培地を使用して行われる。いくつかの実施形態では、凍結保存培地は、ジメチルスルホキシド(DMSO)を含有する。これは、一般に、TIL集団を凍結溶液、例えば、85%補体不活性化AB血清及び15%ジメチルスルホキシド(DMSO)に入れることによって達成される。溶液中の細胞が極低温バイアルに入れられ、-80℃で24時間保存され、任意選択で凍結保存のためにガス状窒素冷凍庫に移される。Sadeghi,et al.,Acta Oncologica 2013,52,978-986を参照されたい。
バルクTIL集団(例えば、第2のTIL集団)または拡張されたTIL集団(例えば、第3のTIL集団)のいずれかを、任意選択で凍結保存することができる。いくつかの実施形態では、凍結保存は、治療的TIL集団に起こる。いくつかの実施形態では、凍結保存は、第2の拡張後に採取されたTILに起こる。いくつかの実施形態では、凍結保存は、図1及び/または8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)の例示的なステップFにおいてTILに起こる。いくつかの実施形態では、TILは、注入バッグ内で凍結保存される。いくつかの実施形態では、TILは、注入バッグに入れる前に凍結保存される。いくつかの実施形態では、TILは、凍結保存され、注入バッグに入っていない。いくつかの実施形態では、凍結保存は、凍結保存培地を使用して行われる。いくつかの実施形態では、凍結保存培地は、ジメチルスルホキシド(DMSO)を含有する。これは、一般に、TIL集団を凍結溶液、例えば、85%補体不活性化AB血清及び15%ジメチルスルホキシド(DMSO)に入れることによって達成される。溶液中の細胞が極低温バイアルに入れられ、-80℃で24時間保存され、任意選択で凍結保存のためにガス状窒素冷凍庫に移される。Sadeghi,et al.,Acta Oncologica 2013,52,978-986を参照されたい。
適切な場合、細胞が冷凍庫から取り出され、溶液のおよそ5分の4が解凍されるまで37℃の水浴中で解凍される。細胞は、一般に、完全培地中に再懸濁され、任意で1回以上洗浄される。いくつかの実施形態では、解凍されたTILは、当該技術分野で知られているように計数され、生存率について評価され得る。
いくつかの実施形態では、TIL集団は、CS10凍結保存培地(CryoStor 10、BioLife Solutions)を使用して凍結保存される。いくつかの実施形態では、TIL集団は、ジメチルスルホキシド(DMSO)を含有する凍結保存培地を使用して凍結保存される。いくつかの実施形態では、TIL集団は、1:1(体積:体積)比のCS10及び細胞培養培地を使用して凍結保存される。いくつかの実施形態では、TIL集団は、約1:1(体積:体積)比のCS10及び細胞培養培地を使用して凍結保存され、追加のIL-2をさらに含む。
上で考察されたように、また図1及び/または8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に示されるステップA~Eで例示されるように、凍結保存は、TIL拡張プロセス全体の様々な時点で起こり得る。いくつかの実施形態では、第1の拡張後のTILの拡張集団(例えば、ステップBに従って提供される、または図1もしくは8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)のステップDによる1回以上の拡張後のTILの拡張集団を凍結保存することができる。凍結保存は、一般に、TIL集団を凍結溶液、例えば、85%補体不活性化AB血清及び15%ジメチルスルホキシド(DMSO)に入れることによって達成され得る。溶液中の細胞が極低温バイアルに入れられ、-80℃で24時間保存され、任意選択で凍結保存のためにガス状窒素冷凍庫に移される。Sadeghi,et al.,Acta Oncologica 2013,52,978-986を参照されたい。いくつかの実施形態では、TILは、5%DMSO中で凍結保存される。いくつかの実施形態では、TILは、細胞培養培地+5%DMSO中で凍結保存される。いくつかの実施形態では、TILは、実施例6に提供される方法に従って凍結保存される。
適切な場合、細胞が冷凍庫から取り出され、溶液のおよそ5分の4が解凍されるまで37℃の水浴中で解凍される。細胞は、一般に、完全培地中に再懸濁され、任意で1回以上洗浄される。いくつかの実施形態では、解凍されたTILは、当該技術分野で知られているように計数され、生存率について評価され得る。
場合によっては、図1または8からのステップB(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)TIL集団は、以下に論じられるプロトコルを使用して、直ちに凍結保存され得る。あるいは、バルクTIL集団を、図1または8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)からのステップC及びステップDに供し、その後、図1または8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)からのステップDの後に凍結保存することができる。同様に、遺伝子修飾されたTILが治療法に使用される場合、図1または8からのステップBまたはステップD(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)を、好適な治療のために遺伝子修飾に供することができる。
G.拡張TILの表現型特徴
いくつかの実施形態では、TILは、本明細書及び実施例に記載されているものを含む、拡張後の多数の表現型マーカーの発現について分析される。いくつかの実施形態では、1つ以上の表現型マーカーの発現が調べられる。いくつかの実施形態では、TILの表現型特徴は、図1または8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)からのステップBにおける第1の拡張後に分析される。いくつかの実施形態では、TILの表現型特徴は、図1または8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)からのステップCにおける遷移中に分析される。いくつかの実施形態では、TILの表現型特徴は、図1または8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)からのステップCによる移行中及び凍結保存後に分析される。いくつかの実施形態では、TILの表現型特徴は、図1または8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)からのステップDにおける第2の拡張後に分析される。いくつかの実施形態では、TILの表現型特徴は、図1または8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)からのステップDによる2回以上の拡張後に分析される。
いくつかの実施形態では、TILは、本明細書及び実施例に記載されているものを含む、拡張後の多数の表現型マーカーの発現について分析される。いくつかの実施形態では、1つ以上の表現型マーカーの発現が調べられる。いくつかの実施形態では、TILの表現型特徴は、図1または8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)からのステップBにおける第1の拡張後に分析される。いくつかの実施形態では、TILの表現型特徴は、図1または8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)からのステップCにおける遷移中に分析される。いくつかの実施形態では、TILの表現型特徴は、図1または8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)からのステップCによる移行中及び凍結保存後に分析される。いくつかの実施形態では、TILの表現型特徴は、図1または8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)からのステップDにおける第2の拡張後に分析される。いくつかの実施形態では、TILの表現型特徴は、図1または8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)からのステップDによる2回以上の拡張後に分析される。
いくつかの実施形態では、マーカーは、CD8及びCD28からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、CD8の発現が調べられる。いくつかの実施形態では、CD28の発現が調べられる。いくつかの実施形態では、CD8及び/またはCD28の発現は、他のプロセス(例えば、例えば図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に提供されるGen3プロセス)と比較して、例えば図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に提供される2Aプロセスと比較して、本発明のプロセスに従って産生されたTIL上でより高い。いくつかの実施形態では、CD8の発現は、他のプロセス(例えば、例えば図8(特に、例えば図8B)に提供されるGen3プロセス)と比較して、例えば図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に提供される2Aプロセスと比較して、本発明のプロセスに従って産生されたTIL上でより高い。いくつかの実施形態では、CD28の発現は、他のプロセス(例えば、例えば図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に提供されるGen3プロセス)と比較して、例えば図8(特に、例えば図8A)に提供される2Aプロセスと比較して、本発明のプロセスに従って産生されたTIL上でより高い。いくつかの実施形態では、高いCD28発現は、より若く、より持続的なTIL表現型を示す。いくつかの実施形態では、1つ以上の調節マーカーの発現が測定される。
いくつかの実施形態では、CD8及び/またはCD28に基づく第1のTIL集団、第2のTIL集団、第3のTIL集団、または採取されたTIL集団の選択は、本明細書に記載の腫瘍浸潤リンパ球(TIL)を拡張するための方法のいずれのステップ中にも行われない。
いくつかの実施形態では、セントラルメモリー細胞のパーセンテージは、他のプロセス(例えば、例えば図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に提供されるGen3プロセス)と比較して、例えば図8(特に、例えば図8A)に提供される2Aプロセスと比較して、本発明のプロセスに従って産生されたTIL上でより高い。いくつかの実施形態では、セントラルメモリー細胞のメモリーマーカーは、CCR7及びCD62Lからなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、CD4+及び/またはCD8+TILメモリーサブセットは、異なるメモリーサブセットに分類され得る。いくつかの実施形態では、CD4+及び/またはCD8+TILは、ナイーブ(CD45RA+CD62L+)TILを含む。いくつかの実施形態では、CD4+及び/またはCD8+TILは、セントラルメモリー(CM、CD45RA-CD62L+)TILを含む。いくつかの実施形態では、CD4+及び/またはCD8+TILは、エフェクターメモリー(EM、CD45RA-CD62L-)TILを含む。いくつかの実施形態では、CD4+及び/またはCD8+TILは、RA+エフェクターメモリー/エフェクター(TEMRA/TEFF、CD45RA+CD62L+)TILを含む。
いくつかの実施形態では、TILは、グランザイムB、パーフォリン、及びグラニュライシンからなる群から選択されるもう1つのマーカーを発現する。いくつかの実施形態では、TILは、グランザイムBを発現する。いくつかの実施形態では、TILは、パーフォリンを発現する。いくつかの実施形態では、TILは、グラニュライシンを発現する。
いくつかの実施形態では、再刺激されたTILは、サイトカイン放出アッセイを使用して、サイトカイン放出についても評価され得る。いくつかの実施形態では、TILは、インターフェロンガンマ(IFN-γ)分泌について評価され得る。いくつかの実施形態では、IFN-γ分泌は、ELISAアッセイによって測定される。いくつかの実施形態では、IFN-γ分泌は、例えば、図8(特に、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に提供されるように、ステップDの後の急速な第2の拡張ステップの後のELISAアッセイによって測定される。いくつかの実施形態では、TILの健康は、IFN-ガンマ(IFN-γ)分泌によって測定される。いくつかの実施形態では、IFN-γ分泌は、活性なTILを示す。いくつかの実施形態では、IFN-γ産生の効力アッセイが用いられる。IFN-γ産生は、細胞傷害能の別の尺度である。IFN-γ産生は、CD3、CD28、及びCD137/4-1BBに対する抗体で刺激されたTILの培地中のサイトカインIFN-γのレベルを決定することによって測定され得る。これらの刺激されたTILからの培地中のIFN-γレベルは、IFN-γ放出を測定することによって決定され得る。いくつかの実施形態では、例えば図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)TILに提供されるようなGen3プロセスのステップDにおけるIFN-γ産生の増加は、例えば図8(特に、例えば図8A)に提供される2AプロセスのステップDと比較して、ステップD TILの細胞傷害能の増加を示している。いくつかの実施形態では、IFN-γ分泌は、1倍、2倍、3倍、4倍、または5倍以上増加する。いくつかの実施形態では、IFN-γ分泌は、1倍増加する。いくつかの実施形態では、IFN-γ分泌は、2倍増加する。いくつかの実施形態では、IFN-γ分泌は、3倍増加する。いくつかの実施形態では、IFN-γ分泌は、4倍増加する。いくつかの実施形態では、IFN-γ分泌は、5倍増加する。いくつかの実施形態では、IFN-γは、Quantikine ELISAキットを使用して測定される。いくつかの実施形態では、IFN-γは、エクスビボでのTIL中で測定される。いくつかの実施形態では、IFN-γは、例えば図8Bの方法を含む、本発明の方法によって産生されたTILを含む、TILにおいてエクスビボで測定される。
いくつかの実施形態では、少なくとも1倍、2倍、3倍、4倍、または5倍以上のIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも1倍多くのIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されるTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも2倍多くのIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されるTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも3倍多くのIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されるTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも4倍多くのIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されるTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも5倍多くのIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されるTILである。
いくつかの実施形態では、少なくとも100pg/mL~約1000pg/mL以上のIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも200pg/mL、少なくとも250pg/mL、少なくとも300pg/mL、少なくとも350pg/mL、少なくとも400pg/mL、少なくとも450pg/mL、少なくとも500pg/mL、少なくとも550pg/mL、少なくとも600pg/mL、少なくとも650pg/mL、少なくとも700pg/mL、少なくとも750pg/mL、少なくとも800pg/mL、少なくとも850pg/mL、少なくとも900pg/mL、少なくとも950pg/mL、または少なくとも1000pg/mL以上のIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも200pg/mLのIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも200pg/mLのIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも300pg/mLのIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも400pg/mLのIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも500pg/mLのIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも600pg/mLのIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも700pg/mLのIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも800pg/mLのIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも900pg/mLのIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも1000pg/mLのIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも2000pg/mLのIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも3000pg/mLのIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも4000pg/mLのIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも5000pg/mLのIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも6000pg/mLのIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも7000pg/mLのIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも8000pg/mLのIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも9000pg/mLのIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも10,000pg/mLのIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも15,000pg/mLのIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも20,000pg/mLのIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも25,000pg/mLのIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも30,000pg/mLのIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも35,000pg/mLのIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも40,000pg/mLのIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも45,000pg/mLのIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも50,000pg/mLのIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。
いくつかの実施形態では、少なくとも100pg/mL/5e5細胞~約1000pg/mL/5e5細胞以上のIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも200pg/mL/5e5細胞、少なくとも250pg/mL/5e5細胞、少なくとも300pg/mL/5e5細胞、少なくとも350pg/mL/5e5細胞、少なくとも400pg/mL/5e5細胞、少なくとも450pg/mL/5e5細胞、少なくとも500pg/mL/5e5細胞、少なくとも550pg/mL/5e5細胞、少なくとも600pg/mL/5e5細胞、少なくとも650pg/mL/5e5細胞、少なくとも700pg/mL/5e5細胞、少なくとも750pg/mL/5e5細胞、少なくとも800pg/mL/5e5細胞、少なくとも850pg/mL/5e5細胞、少なくとも900pg/mL/5e5細胞、少なくとも950pg/mL/5e5細胞、または少なくとも1000pg/mL/5e5細胞以上のIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも200pg/mL/5e5細胞のIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも200pg/mL/5e5細胞のIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも300pg/mL/5e5細胞のIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも400pg/mL/5e5細胞のIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されるTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも500pg/mL/5e5細胞のIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも600pg/mL/5e5細胞のIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも700pg/mL/5e5細胞のIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されるTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも800pg/mL/5e5細胞のIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも900pg/mL/5e5細胞のIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも1000pg/mL/5e5細胞のIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されるTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも2000pg/mL/5e5細胞のIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも3000pg/mL/5e5細胞のIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも4000pg/mL/5e5細胞のIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されるTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも5000pg/mL/5e5細胞のIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも6000pg/mL/5e5細胞のIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも7000pg/mL/5e5細胞のIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されるTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも8000pg/mL/5e5細胞のIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも9000pg/mL/5e5細胞のIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも10,000pg/mL/5e5細胞のIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されるTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも15,000pg/mL/5e5細胞のIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも20,000pg/mL/5e5細胞のIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも25,000pg/mL/5e5細胞のIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されるTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも30,000pg/mL/5e5細胞のIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも35,000pg/mL/5e5細胞のIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも40,000pg/mL/5e5細胞のIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも45,000pg/mL/5e5細胞のIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも50,000pg/mL/5e5細胞のIFN-γ分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。
Tリンパ球及びBリンパ球の多様な抗原受容体は、限られた数であるが、多数の遺伝子セグメントの体細胞組換えによって産生される。これらの遺伝子セグメント:V(可変)、D(多様性)、J(接合)、及びC(一定)は、免疫グロブリン及びT細胞受容体(TCR)の結合特異性及び下流での適用を決定する。本発明は、T細胞レパートリー多様性を示し、かつ増加させるTILを生成するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、本方法によって取得されたTILは、T細胞レパートリー多様性の増加を示す。いくつかの実施形態では、本方法によって得られたTILは、新たに採取されたTIL及び/または例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたTILと比較して、T細胞レパートリー多様性の増加を示す。いくつかの実施形態では、本方法によって取得されたTILは、新たに採取されたTIL及び/または図8(特に、例えば図8A)に例示されるようにGen2と称される方法を使用して調製されたTILと比較して、T細胞レパートリー多様性の増加を示す。いくつかの実施形態では、第1の拡張で取得されたTILは、T細胞レパートリー多様性の増加を示す。いくつかの実施形態では、多様性の増加は、免疫グロブリン多様性及び/またはT細胞受容体多様性の増加である。いくつかの実施形態では、多様性は、免疫グロブリンにあり、免疫グロブリン重鎖にある。いくつかの実施形態では、多様性は、免疫グロブリンにあり、免疫グロブリン軽鎖にある。いくつかの実施形態では、多様性は、T細胞受容体にある。いくつかの実施形態では、多様性は、アルファ、ベータ、ガンマ、及びデルタ受容体からなる群から選択されるT細胞受容体のうちの1つにある。いくつかの実施形態では、T細胞受容体(TCR)アルファ及び/またはベータの発現が増加する。いくつかの実施形態では、T細胞受容体(TCR)アルファの発現が増加する。いくつかの実施形態では、T細胞受容体(TCR)ベータの発現が増加する。いくつかの実施形態では、TCRαβ(すなわち、TCRα/β)の発現が増加する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のプロセス(例えば、Gen3プロセス)は、他のプロセス、例えば、試料中の固有のペプチドCDRの数に基づくGen2と称されるプロセスと比較して、より高いクローン多様性を示す。
いくつかの実施形態では、TILの活性化及び疲弊は、1つ以上のマーカーを調べることによって決定され得る。いくつかの実施形態では、活性化及び疲弊は、多色フローサイトメトリーを使用して決定され得る。いくつかの実施形態では、活性化及び疲弊のマーカーには、CD3、PD-1、2B4/CD244、CD8、CD25、BTLA、KLRG、TIM-3、CD194/CCR4、CD4、TIGIT、CD183、CD69、CD95、CD127、CD103、及び/またはLAG-3)からなる群から選択される1つ以上のマーカーが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、活性化及び疲弊のマーカーには、BTLA、CTLA-4、ICOS、Ki67、LAG-3、PD-1、TIGIT、及び/またはTIM-3からなる群から選択される1つ以上のマーカーが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、活性化及び疲弊のマーカーには、BTLA、CTLA-4、ICOS、Ki67、LAG-3、CD103+/CD69+、CD103+/CD69-、PD-1、TIGIT及び/またはTIM-3からなる群から選択される1つ以上のマーカーが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、T細胞マーカー(活性化及び疲弊マーカーを含む)は、T細胞の活性化、阻害、または機能を調べるために決定及び/または分析され得る。いくつかの実施形態では、T細胞マーカーには、TIGIT、CD3、FoxP3、Tim-3、PD-1、CD103、CTLA-4、LAG-3、BTLA-4、ICOS、Ki67、CD8、CD25、CD45、CD4、及び/またはCD59からなる群から選択される1つ以上のマーカーが含まれ得るが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、3000pg/106TIL~300000pg/106TIL以上のグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、3000pg/106超TIL、5000pg/106超TIL、7000pg/106超TIL、9000pg/106超TIL、11000pg/106超TIL、13000pg/106超TIL、15000pg/106超TIL、17000pg/106超TIL、19000pg/106超TIL、20000pg/106超TIL、40000pg/106超TIL、60000pg/106超TIL、80000pg/106超TIL、100000pg/106超TIL、120000pg/106超TIL、140000pg/106超TIL、160000pg/106超TIL、180000pg/106超TIL、200000pg/106超TIL、220000pg/106超TIL、240000pg/106超TIL、260000pg/106超TIL、280000pg/106超TIL、300000pg/106TIL以上のグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、3000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、5000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、7000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、9000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、11000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、13000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、15000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、17000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、19000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、20000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、40000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、60000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、80000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、100000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、120000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、140000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、160000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、180000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、200000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、220000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、240000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、260000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、280000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、300000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、3000pg/106TIL~300000pg/106TIL以上のグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、3000pg/106超TIL、5000pg/106超TIL、7000pg/106超TIL、9000pg/106超TIL、11000pg/106超TIL、13000pg/106超TIL、15000pg/106超TIL、17000pg/106超TIL、19000pg/106超TIL、20000pg/106超TIL、40000pg/106超TIL、60000pg/106超TIL、80000pg/106超TIL、100000pg/106超TIL、120000pg/106超TIL、140000pg/106超TIL、160000pg/106超TIL、180000pg/106超TIL、200000pg/106超TIL、220000pg/106超TIL、240000pg/106超TIL、260000pg/106超TIL、280000pg/106超TIL、300000pg/106TIL以上のグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、3000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、5000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、7000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、9000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、11000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、13000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、15000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、17000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、19000pg
/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、20000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、40000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、60000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、80000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、100000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、120000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、140000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、160000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、180000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、200000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、220000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、240000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、260000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、280000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、300000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。
/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、20000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、40000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、60000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、80000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、100000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、120000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、140000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、160000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、180000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、200000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、220000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、240000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、260000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、280000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、300000pg/106超のTILグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。
いくつかの実施形態では、1000pg/mL超~300000pg/mL以上のグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、1000pg/mL超、2000pg/mL超、3000pg/mL超、4000pg/mL超、5000pg/mL超、6000pg/mL超、7000pg/mL超、8000pg/mL超、9000pg/mL超、10000pg/mL超、20000pg/mL超、30000pg/mL超、40000pg/mL超、50000pg/mL超、60000pg/mL超、70000pg/mL超、80000pg/mL超、90000pg/mL超、100000pg/mL以上のグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、1000pg/mL超のグランザイムBを示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、2000pg/mL超のグランザイムBを示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、3000pg/mL超のグランザイムBを示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、4000pg/mL超のグランザイムBを示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、5000pg/mL超のグランザイムBを示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、6000pg/mL超のグランザイムBを示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、7000pg/mL超のグランザイムBを示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、8000pg/mL超のグランザイムBを示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、9000pg/mL超のグランザイムBを示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、10000pg/mL超のグランザイムBを示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、20000pg/mL超のグランザイムBを示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、30000pg/mL超のグランザイムBを示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、40000pg/mL超のグランザイムBを示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、50000pg/mL超のグランザイムBを示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、60000pg/mL超のグランザイムBを示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、70000pg/mL超のグランザイムBを示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、80000pg/mL超のグランザイムBを示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、90000pg/mL超のグランザイムBを示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、100000pg/mL超のグランザイムBを示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、120000pg/mL超のグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、140000pg/mL超のグランザイムBを示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、160000pg/mL超のグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、180000pg/mL超のグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、200000pg/mL超のグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、220000pg/mL超のグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、240000pg/mL超のグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、260000pg/mL超のグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、280000pg/mL超のグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、300000pg/mL超のグランザイムB分泌を示すTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dを含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。
いくつかの実施形態では、本発明の拡張方法は、拡張されていないTIL集団と比較して、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dに提供されるようなTILを含む、インビトロで増加したグランザイムB分泌を示す拡張されたTIL集団を産生する。いくつかの実施形態では、本発明の拡張されたTIL集団のグランザイムB分泌は、拡張されていないTIL集団と比較して、少なくとも1倍~50倍以上増加する。いくつかの実施形態では、IFN-γ分泌は、拡張されていないTIL集団と比較して、1倍、少なくとも2倍、少なくとも3倍、少なくとも4倍、少なくとも5倍、少なくとも6倍、少なくとも7倍、少なくとも8倍、少なくとも9倍、少なくとも10倍、少なくとも20倍、少なくとも30倍、少なくとも40倍、少なくとも50倍以上増加する。いくつかの実施形態では、本発明の拡張されたTIL集団のグランザイムB分泌は、拡張されていないTIL集団と比較して、少なくとも1倍増加する。いくつかの実施形態では、本発明の拡張されたTIL集団のグランザイムB分泌は、拡張されていないTIL集団と比較して、少なくとも2倍増加する。いくつかの実施形態では、本発明の拡張されたTIL集団のグランザイムB分泌は、拡張されていないTIL集団と比較して、少なくとも3倍増加する。いくつかの実施形態では、本発明の拡張されたTIL集団のグランザイムB分泌は、拡張されていないTIL集団と比較して、少なくとも4倍増加する。いくつかの実施形態では、本発明の拡張されたTIL集団のグランザイムB分泌は、拡張されていないTIL集団と比較して、少なくとも5倍増加する。いくつかの実施形態では、本発明の拡張されたTIL集団のグランザイムB分泌は、拡張されていないTIL集団と比較して、少なくとも6倍増加する。いくつかの実施形態では、本発明の拡張されたTIL集団のグランザイムB分泌は、拡張されていないTIL集団と比較して、少なくとも7倍増加する。いくつかの実施形態では、本発明の拡張されたTIL集団のグランザイムB分泌は、拡張されていないTIL集団と比較して、少なくとも8倍増加する。いくつかの実施形態では、本発明の拡張されたTIL集団のグランザイムB分泌は、拡張されていないTIL集団と比較して、少なくとも9倍増加する。いくつかの実施形態では、本発明の拡張されたTIL集団のグランザイムB分泌は、拡張されていないTIL集団と比較して、少なくとも10倍増加する。いくつかの実施形態では、本発明の拡張されたTIL集団のグランザイムB分泌は、拡張されていないTIL集団と比較して、少なくとも20倍増加する。いくつかの実施形態では、本発明の拡張されたTIL集団のグランザイムB分泌は、拡張されていないTIL集団と比較して、少なくとも30倍増加する。いくつかの実施形態では、本発明の拡張されたTIL集団のグランザイムB分泌は、拡張されていないTIL集団と比較して、少なくとも40倍増加する。いくつかの実施形態では、本発明の拡張されたTIL集団のグランザイムB分泌は、拡張されていないTIL集団と比較して、少なくとも50倍増加する。
いくつかの実施形態では、IFN-γ分泌と比較して、少なくとも1倍、2倍、3倍、4倍、または5倍以上低いレベルのTNF-α(すなわち、TNF-アルファ)分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、IFN-γ分泌と比較して、少なくとも1倍低いレベルのTNF-α分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、IFN-γ分泌と比較して、少なくとも2倍低いレベルのTNF-α分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、IFN-γ分泌と比較して、少なくとも3倍低いレベルのTNF-α分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、IFN-γ分泌と比較して、少なくとも4倍低いレベルのTNF-α分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、IFN-γ分泌と比較して、少なくとも5倍低いレベルのTNF-α分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。
いくつかの実施形態では、少なくとも200pg/mL/5e5細胞~約10,000pg/mL/5e5細胞以上のTNF-α(すなわち、TNF-アルファ)分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも500pg/mL/5e5細胞~約10,000pg/mL/5e5細胞以上のTNF-α分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも1000pg/mL/5e5細胞~約10,000pg/mL/5e5細胞以上のTNF-α分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも2000pg/mL/5e5細胞~約10,000pg/mL/5e5細胞以上のTNF-α分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも3000pg/mL/5e5細胞~約10,000pg/mL/5e5細胞以上のTNF-α分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも4000pg/mL/5e5細胞~約10,000pg/mL/5e5細胞以上のTNF-α分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも5000pg/mL/5e5細胞~約10,000pg/mL/5e5細胞以上のTNF-α分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも6000pg/mL/5e5細胞~約10,000pg/mL/5e5細胞以上のTNF-α分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも7000pg/mL/5e5細胞~約10,000pg/mL/5e5細胞以上のTNF-α分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも8000pg/mL/5e5細胞~約10,000pg/mL/5e5細胞以上のTNF-α分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。いくつかの実施形態では、少なくとも9000pg/mL/5e5細胞~約10,000pg/mL/5e5細胞以上のTNF-α分泌が可能なTILは、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILである。
いくつかの実施形態では、IFN-γ及びグランザイムBのレベルを測定して、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILの表現型特徴を決定する。いくつかの実施形態では、IFN-γ及びTNF-αのレベルを測定して、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILの表現型特徴を決定する。いくつかの実施形態では、グランザイムB及びTNF-αのレベルを測定して、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILの表現型特徴を決定する。いくつかの実施形態では、IFN-γ、グランザイムB及びTNF-αのレベルを測定して、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8Dの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されたTILの表現型特徴を決定する。
いくつかの実施形態では、表現型特徴付けは、凍結保存後に調べられる。
H.追加のプロセスの実施形態
いくつかの実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球(TIL)を治療的TIL集団に拡張するための方法を提供し、(a)対象から取得された腫瘍試料を複数の腫瘍断片に処理することによって、対象から切除された腫瘍から第1のTIL集団を得ることと、(b)IL-2及びOKT-3を含む細胞培養培地中で第1のTIL集団を培養することによってプライミングによる第1の拡張を行うことであって、プライミングによる第1の拡張を約1~7日間または約1~8日間行って第2のTIL集団を取得し、第2のTIL集団が、第1のTIL集団よりも数が多い、プライミングによる第1の拡張を行うことと、(c)第2のTIL集団を、IL-2、OKT-3、及び外因性抗原提示細胞(APC)を含む細胞培養培地と接触させて急速な第2の拡張を行って第3のTIL集団を産生することであって、急速な第2の拡張を約1~11日間または約1~10日間行って第3のTIL集団を取得し、第3のTIL集団が、治療的TIL集団である、第3のTIL集団を産生することと、(d)ステップ(c)から取得された治療的TIL集団を採取することと、を含む。いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張ステップは、複数のステップに分けられて、(1)第2のTIL集団を、第1の容器、例えば、G-REX100MCS容器内での小規模培養で約3~4日間、または約2~4日間培養することによって急速な第2の拡張を行うことと、その後、(2)小規模培養由来の第2のTIL集団を、第1の容器よりも大きい第2の容器、例えば、G-REX500MCS容器に移すこととによって、培養のスケールアップを達成し、第2の容器内で、小規模培養由来の第2のTIL集団が、より大規模な培養で約4~7日間、または約4~8日間培養される。いくつかの実施形態では、急速な拡張ステップは、複数のステップに分けられて、(1)第2のTIL集団を、第1の容器、例えば、G-REX100MCS容器内での第1の小規模培養で約3~4日間培養することによって急速な第2の拡張を行うことと、その後、(2)第1の小規模培養由来の第2のTIL集団を、第1の容器とサイズが等しい少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の第2の容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウトを達成し、各第2の容器内で、第1の小規模培養由来のかかる第2の容器に移された第2のTIL集団の一部が、第2の小規模培養で約4~7日間、または約約4~8日間培養される。いくつかの実施形態では、急速な拡張ステップは、複数のステップに分けられて、(1)第2のTIL集団を、第1の容器、例えば、G-REX100MCS容器内での小規模培養で約3~4日間、または約2~4日間培養することによって急速な第2の増殖を行うことと、その後、(2)第1の小規模培養由来の第2のTIL集団を、第1の容器よりもサイズが大きい少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の第2の容器、例えば、G-REX500MCS容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウト及びスケールアップを達成し、各第2の容器内で、小規模培養由来のかかる第2の容器に移された第2のTIL集団の一部が、より大規模な培養で約4~7日間、または約4~8日間培養される。いくつかの実施形態では、急速な拡張ステップは、複数のステップに分けられて、(1)第2のTIL集団を、第1の容器、例えば、G-REX 100MCS容器内での小規模培養で約3~4日間培養することによって急速な第2の拡張を行うことと、その後、(2)第1の小規模培養由来の第2のTIL集団を、第1の容器よりもサイズが大きい少なくとも2、3、または4個の第2の容器、例えば、G-REX500MCS容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウト及びスケールアップを達成し、各第2の容器内で、小規模培養由来のかかる第2の容器に移された第2のTIL集団の一部が、より大規模な培養で約5~7日間培養される。
いくつかの実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球(TIL)を治療的TIL集団に拡張するための方法を提供し、(a)対象から取得された腫瘍試料を複数の腫瘍断片に処理することによって、対象から切除された腫瘍から第1のTIL集団を得ることと、(b)IL-2及びOKT-3を含む細胞培養培地中で第1のTIL集団を培養することによってプライミングによる第1の拡張を行うことであって、プライミングによる第1の拡張を約1~7日間または約1~8日間行って第2のTIL集団を取得し、第2のTIL集団が、第1のTIL集団よりも数が多い、プライミングによる第1の拡張を行うことと、(c)第2のTIL集団を、IL-2、OKT-3、及び外因性抗原提示細胞(APC)を含む細胞培養培地と接触させて急速な第2の拡張を行って第3のTIL集団を産生することであって、急速な第2の拡張を約1~11日間または約1~10日間行って第3のTIL集団を取得し、第3のTIL集団が、治療的TIL集団である、第3のTIL集団を産生することと、(d)ステップ(c)から取得された治療的TIL集団を採取することと、を含む。いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張ステップは、複数のステップに分けられて、(1)第2のTIL集団を、第1の容器、例えば、G-REX100MCS容器内での小規模培養で約3~4日間、または約2~4日間培養することによって急速な第2の拡張を行うことと、その後、(2)小規模培養由来の第2のTIL集団を、第1の容器よりも大きい第2の容器、例えば、G-REX500MCS容器に移すこととによって、培養のスケールアップを達成し、第2の容器内で、小規模培養由来の第2のTIL集団が、より大規模な培養で約4~7日間、または約4~8日間培養される。いくつかの実施形態では、急速な拡張ステップは、複数のステップに分けられて、(1)第2のTIL集団を、第1の容器、例えば、G-REX100MCS容器内での第1の小規模培養で約3~4日間培養することによって急速な第2の拡張を行うことと、その後、(2)第1の小規模培養由来の第2のTIL集団を、第1の容器とサイズが等しい少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の第2の容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウトを達成し、各第2の容器内で、第1の小規模培養由来のかかる第2の容器に移された第2のTIL集団の一部が、第2の小規模培養で約4~7日間、または約約4~8日間培養される。いくつかの実施形態では、急速な拡張ステップは、複数のステップに分けられて、(1)第2のTIL集団を、第1の容器、例えば、G-REX100MCS容器内での小規模培養で約3~4日間、または約2~4日間培養することによって急速な第2の増殖を行うことと、その後、(2)第1の小規模培養由来の第2のTIL集団を、第1の容器よりもサイズが大きい少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の第2の容器、例えば、G-REX500MCS容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウト及びスケールアップを達成し、各第2の容器内で、小規模培養由来のかかる第2の容器に移された第2のTIL集団の一部が、より大規模な培養で約4~7日間、または約4~8日間培養される。いくつかの実施形態では、急速な拡張ステップは、複数のステップに分けられて、(1)第2のTIL集団を、第1の容器、例えば、G-REX 100MCS容器内での小規模培養で約3~4日間培養することによって急速な第2の拡張を行うことと、その後、(2)第1の小規模培養由来の第2のTIL集団を、第1の容器よりもサイズが大きい少なくとも2、3、または4個の第2の容器、例えば、G-REX500MCS容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウト及びスケールアップを達成し、各第2の容器内で、小規模培養由来のかかる第2の容器に移された第2のTIL集団の一部が、より大規模な培養で約5~7日間培養される。
いくつかの実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球(TIL)を治療的TIL集団に拡張するための方法であって、(a)対象から得られた腫瘍試料を複数の腫瘍断片に処理することによって、対象から切除された腫瘍から第1のTIL集団を得ることと、(b)IL-2及びOKT-3を含む細胞培養培地中で第1のTIL集団を培養することによってプライミングによる第1の拡張を行うことであって、プライミングによる第1の拡張が約1~8日間行われて第2のTIL集団が取得され、第2のTIL集団は第1のTIL集団よりも数が多い、プライミングによる第1の拡張を行うことと、(c)第2のTIL集団を、IL-2、OKT-3及び外因性抗原提示細胞(APC)を含む細胞培養培地と接触させることによって急速な第2の拡張を行い、第3のTIL集団を産生することであって、急速な第2の拡張が約1~8日間行われて第3のTIL集団が取得され、第3のTIL集団が治療的TIL集団である、第3のTIL集団を産生することと、(d)ステップ(c)から取得された治療的TIL集団を採取することと、を含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張ステップは、複数のステップに分けられて、(1)第2のTIL集団を、第1の容器、例えば、G-REX 100MCS容器内での小規模培養で約2~4日間培養することによって急速な第2の拡張を行うことと、その後、(2)小規模培養由来の第2のTIL集団を、第1の容器よりも大きい第2の容器、例えば、G-REX500MCS容器に移すこととによって、培養のスケールアップを達成し、第2の容器内で、小規模培養由来の第2のTIL集団が、より大規模な培養で約4~8日間培養される。いくつかの実施形態では、急速な拡張ステップは、複数のステップに分けられて、(1)第2のTIL集団を、第1の容器、例えば、G-REX 100MCS容器内での第1の小規模培養で約2~4日間培養することによって急速な第2の拡張を行うことと、その後、(2)第1の小規模培養由来の第2のTIL集団を、第1の容器とサイズが等しい少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の第2の容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウトを達成し、各第2の容器内で、第1の小規模培養由来のかかる第2の容器に移された第2のTIL集団の一部が、第2の小規模培養で約4~6日間培養される。いくつかの実施形態では、急速な拡張ステップは、複数のステップに分けられて、(1)第2のTIL集団を、第1の容器、例えば、G-REX 100MCS容器内での小規模培養で約2~4日間培養することによって急速な第2の拡張を行うことと、その後、(2)第1の小規模培養由来の第2のTIL集団を、第1の容器よりもサイズが大きい少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の第2の容器、例えば、G-REX500MCS容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウト及びスケールアップを達成し、各第2の容器内で、小規模培養由来のかかる第2の容器に移された第2のTIL集団の一部が、より大規模な培養で約4~6日間培養される。いくつかの実施形態では、急速な拡張ステップは、複数のステップに分けられて、(1)第2のTIL集団を、第1の容器、例えば、G-REX100MCS容器内での小規模培養で約3~4日間培養することによって急速な第2の増殖を行うことと、その後、(2)第1の小規模培養由来の第2のTIL集団を、第1の容器よりもサイズが大きい少なくとも2、3、または4個の第2の容器、例えば、G-REX500MCS容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウト及びスケールアップを達成し、各第2の容器内で、小規模培養由来のかかる第2の容器に移された第2のTIL集団の一部が、より大規模な培養で約4~5日間培養される。
いくつかの実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球(TIL)を治療的TIL集団に拡張するための方法であって、(a)対象から得られた腫瘍試料を複数の腫瘍断片に処理することによって、対象から切除された腫瘍から第1のTIL集団を得ることと、(b)IL-2及びOKT-3を含む細胞培養培地中で第1のTIL集団を培養することによってプライミングによる第1の拡張を行うことであって、プライミングによる第1の拡張が約1~7日間行われて第2のTIL集団が得られ、第2のTIL集団は第1のTIL集団よりも数が多い、プライミングによる第1の拡張を行うことと、(c)第2のTIL集団を、IL-2、OKT-3、及び外因性抗原提示細胞(APC)を含む細胞培養培地と接触させることによって急速な第2の拡張を行い、第3のTIL集団を産生することであって、急速な第2の拡張が約1~11日間行われて第3のTIL集団が得られ、第3のTIL集団が治療的TIL集団である、第3のTIL集団を産生することと、(d)ステップ(c)から得られた治療的TIL集団を採取することと、を含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張ステップは、複数のステップに分けられて、(1)第2のTIL集団を、第1の容器、例えば、G-REX 100MCS容器内での小規模培養で約3~4日間培養することによって急速な第2の拡張を行うことと、その後、(2)小規模培養由来の第2のTIL集団を、第1の容器よりも大きい第2の容器、例えば、G-REX500MCS容器に移すこととによって、培養のスケールアップを達成し、第2の容器内で、小規模培養由来の第2のTIL集団が、より大規模な培養で約4~7日間培養される。いくつかの実施形態では、急速な拡張ステップは、複数のステップに分けられて、(1)第2のTIL集団を、第1の容器、例えば、G-REX 100MCS容器内での第1の小規模培養で約3~4日間培養することによって急速な第2の拡張を行うことと、その後、(2)第1の小規模培養由来の第2のTIL集団を、第1の容器とサイズが等しい少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の第2の容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウトを達成し、各第2の容器内で、第1の小規模培養由来のかかる第2の容器に移された第2のTIL集団の一部が、第2の小規模培養で約4~7日間培養される。いくつかの実施形態では、急速な拡張ステップは、複数のステップに分けられて、(1)第2のTIL集団を、第1の容器、例えば、G-REX 100MCS容器内での小規模培養で約3~4日間培養することによって急速な第2の拡張を行うことと、その後、(2)第1の小規模培養由来の第2のTIL集団を、第1の容器よりもサイズが大きい少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の第2の容器、例えば、G-REX500MCS容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウト及びスケールアップを達成し、各第2の容器内で、小規模培養由来のかかる第2の容器に移された第2のTIL集団の一部が、より大規模な培養で約4~7日間培養される。いくつかの実施形態では、急速な拡張ステップは、複数のステップに分けられて、(1)第2のTIL集団を、第1の容器、例えば、G-REX 100MCS容器内での小規模培養で約4日間培養することによって急速な第2の拡張を行うことと、その後、(2)第1の小規模培養由来の第2のTIL集団を、第1の容器よりもサイズが大きい少なくとも2、3、または4個の第2の容器、例えば、G-REX500MCS容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウト及びスケールアップを達成し、各第2の容器内で、小規模培養由来のかかる第2の容器に移された第2のTIL集団の一部が、より大規模な培養で約5日間培養される。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、一次の第1の拡張が、第1のTIL集団を、外因性抗原提示細胞(APC)をさらに含む培養培地と接触させることによって行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法であって、ステップ(c)における培養培地中のAPCの数が、ステップ(b)における培養培地中のAPCの数よりも多い、方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(c)において培養培地に追加の外因性APCが補充されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、急速な第2の拡張において追加されるAPCの数の、ステップ(b)において追加されるAPCの数に対する比が、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約20:1の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、前段落のうちのいずれかに記載されている方法を提供し、他の実施形態では、本発明は、急速な第2の拡張において追加されるAPCの数の、ステップ(b)において追加されるAPCの数に対する比が、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約10:1の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、急速な第2の拡張において追加されるAPCの数の、ステップ(b)において追加されるAPCの数に対する比が、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約9:1の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、急速な第2の拡張において追加されるAPCの数の、ステップ(b)において追加されるAPCの数に対する比が、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約8:1の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、急速な第2の拡張において追加されるAPCの数の、ステップ(b)において追加されるAPCの数に対する比が、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約7:1の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、急速な第2の拡張において追加されるAPCの数の、ステップ(b)において追加されるAPCの数に対する比が、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約6:1の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、急速な第2の拡張において追加されるAPCの数の、ステップ(b)において追加されるAPCの数に対する比が、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約5:1の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、急速な第2の拡張において追加されるAPCの数の、ステップ(b)において追加されるAPCの数に対する比が、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約4:1の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、急速な第2の拡張において追加されるAPCの数の、ステップ(b)において追加されるAPCの数に対する比が、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約3:1の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、急速な第2の拡張において追加されるAPCの数の、ステップ(b)において追加されるAPCの数に対する比が、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約2.9:1の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、急速な第2の拡張において追加されるAPCの数の、ステップ(b)において追加されるAPCの数に対する比が、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約2.8:1の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、急速な第2の拡張において追加されるAPCの数の、ステップ(b)において追加されるAPCの数に対する比が、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約2.7:1の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、急速な第2の拡張において追加されるAPCの数の、ステップ(b)において追加されるAPCの数に対する比が、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約2.6:1の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、急速な第2の拡張において追加されるAPCの数の、ステップ(b)において追加されるAPCの数に対する比が、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約2.5:1の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、急速な第2の拡張において追加されるAPCの数の、ステップ(b)において追加されるAPCの数に対する比が、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約2.4:1の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、急速な第2の拡張において追加されるAPCの数の、ステップ(b)において追加されるAPCの数に対する比が、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約2.3:1の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、急速な第2の拡張において追加されるAPCの数の、ステップ(b)において追加されるAPCの数に対する比が、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約2.2:1の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、急速な第2の拡張において追加されるAPCの数の、ステップ(b)において追加されるAPCの数に対する比が、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約2.1:1の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、急速な第2の拡張において追加されるAPCの数の、ステップ(b)において追加されるAPCの数に対する比が、正確にまたは約1.1:1~正確にまたは約2:1の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、急速な第2の拡張において追加されるAPCの数の、ステップ(b)において追加されるAPCの数に対する比が、正確にまたは約2:1~正確にまたは約10:1の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、急速な第2の拡張において追加されるAPCの数の、ステップ(b)において追加されるAPCの数に対する比が、正確にまたは約2:1~正確にまたは約5:1の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、急速な第2の拡張において追加されるAPCの数の、ステップ(b)において追加されるAPCの数に対する比が、正確にまたは約2:1~正確にまたは約4:1の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、急速な第2の拡張において追加されるAPCの数の、ステップ(b)において追加されるAPCの数に対する比が、正確にまたは約2:1~正確にまたは約3:1の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、急速な第2の拡張において追加されるAPCの数の、ステップ(b)において追加されるAPCの数に対する比が、正確にまたは約2:1~正確にまたは約2.9:1の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、急速な第2の拡張において追加されるAPCの数の、ステップ(b)において追加されるAPCの数に対する比が、正確にまたは約2:1~正確にまたは約2.8:1の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、急速な第2の拡張において追加されるAPCの数の、ステップ(b)において追加されるAPCの数に対する比が、正確にまたは約2:1~正確にまたは約2.7:1の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、急速な第2の拡張において追加されるAPCの数の、ステップ(b)において追加されるAPCの数に対する比が、正確にまたは約2:1~正確にまたは約2.6:1の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、急速な第2の拡張において追加されるAPCの数の、ステップ(b)において追加されるAPCの数に対する比が、正確にまたは約2:1~正確にまたは約2.5:1の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、急速な第2の拡張において追加されるAPCの数の、ステップ(b)において追加されるAPCの数に対する比が、正確にまたは約2:1~正確にまたは約2.4:1の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、急速な第2の拡張において追加されるAPCの数の、ステップ(b)において追加されるAPCの数に対する比が、正確にまたは約2:1~正確にまたは約2.3:1の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、急速な第2の拡張において追加されるAPCの数の、ステップ(b)において追加されるAPCの数に対する比が、正確にまたは約2:1~正確にまたは約2.2:1の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、急速な第2の拡張において追加されるAPCの数の、ステップ(b)において追加されるAPCの数に対する比が、正確にまたは約2:1~正確にまたは約2.1:1の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、急速な第2の拡張において追加されるAPCの数の、ステップ(b)において追加されるAPCの数に対する比率が、正確にまたは約2:1になるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、急速な第2の拡張において追加されるAPCの数の、ステップ(b)において追加されるAPCの数に対する比率が、正確にまたは約1.1:1、1.2:1、1.3:1、1.4:1、1.5:1、1.6:1、1.7:1、1.8:1、1.9:1、2:1、2.1:1、2.2:1、2.3:1、2.4:1、2.5:1、2.6:1、2.7:1、2.8:1、2.9:1、3:1、3.1:1、3.2:1、3.3:1、3.4:1、3.5:1、3.6:1、3.7:1、3.8:1、3.9:1、4:1、4.1:1、4.2:1、4.3:1、4.4:1、4.5:1、4.6:1、4.7:1、4.8:1、4.9:1、または5:1になるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、一次の第1の拡張において追加されるAPCの数が、正確にまたは約1×108、1.1×108、1.2×108、1.3×108、1.4×108、1.5×108、1.6×108、1.7×108、1.8×108、1.9×108、2×108、2.1×108、2.2×108、2.3×108、2.4×108、2.5×108、2.6×108、2.7×108、2.8×108、2.9×108、3×108、3.1×108、3.2×108、3.3×108、3.4×108、または3.5×108APCになるように、かつ急速な第2の拡張において追加されるAPCの数が、正確にまたは約3.5×108、3.6×108、3.7×108、3.8×108、3.9×108、4×108、4.1×108、4.2×108、4.3×108、4.4×108、4.5×108、4.6×108、4.7×108、4.8×108、4.9×108、5×108、5.1×108、5.2×108、5.3×108、5.4×108、5.5×108、5.6×108、5.7×108、5.8×108、5.9×108、6×108、6.1×108、6.2×108、6.3×108、6.4×108、6.5×108、6.6×108、6.7×108、6.8×108、6.9×108、7×108、7.1×108、7.2×108、7.3×108、7.4×108、7.5×108、7.6×108、7.7×108、7.8×108、7.9×108、8×108、8.1×108、8.2×108、8.3×108、8.4×108、8.5×108、8.6×108、8.7×108、8.8×108、8.9×108、9×108、9.1×108、9.2×108、9.3×108、9.4×108、9.5×108、9.6×108、9.7×108、9.8×108、9.9×108、または1×109APCになるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、一次の第1の拡張において追加されるAPCの数が、正確にまたは約1×108APC~正確にまたは約3.5×108APCの範囲から選択され、急速な第2の拡張において追加されるAPCの数が、正確にまたは約3.5×108APC~正確にまたは約1×109APCの範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、一次の第1の拡張において追加されるAPCの数が、正確にまたは約1.5×108APC~正確にまたは約3×108APCの範囲から選択され、急速な第2の拡張において追加されるAPCの数が、正確にまたは約4×108APC~正確にまたは約7.5×108APCの範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、一次の第1の拡張において追加されるAPCの数が、正確にまたは約2×108APC~正確にまたは約2.5×108APCの範囲から選択され、急速な第2の拡張において追加されるAPCの数が、正確にまたは約4.5×108APC~正確にまたは約5.5×108APCの範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、正確にまたは約2.5×108APCが一次の第1の増殖に追加され、かつ正確にまたは約5×108APCが急速な第2の増殖に追加されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、抗原提示細胞が末梢血単核細胞(PBMC)であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、複数の腫瘍断片が複数の別個の容器に分配され、それらの別個の容器の各々内で、第1のTIL集団がステップ(a)において取得され、第2のTIL集団がステップ(b)において取得され、第3のTIL集団がステップ(c)において取得され、ステップ(c)における複数の容器からの治療的TIL集団が組み合わせられて、ステップ(d)から採取されたTIL集団を産生するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、複数の腫瘍が複数の別個の容器に均一に分配されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、複数の別個の容器が少なくとも2個の別個の容器を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、複数の別個の容器が2~20個の別個の容器を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、複数の別個の容器が2~15個の別個の容器を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、複数の別個の容器が2~10個の別個の容器を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、複数の別個の容器が2~5個の別個の容器を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、複数の別個の容器が2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の別個の容器を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、プライミングによる第1の拡張がステップ(b)において第1のTIL集団で行われる各容器の場合、ステップ(c)における急速な第2の拡張が、同じ容器内でかかる第1のTIL集団から産生された第2のTIL集団で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、別個の容器の各々が第1のガス透過性表面積を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、複数の腫瘍断片が単一の容器に分配されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、単一の容器が第1のガス透過性表面積を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、ステップ(b)において、一次の第1の拡張が、第1のTIL集団の細胞培養培地に追加の抗原提示細胞(APC)を補充することによって行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法であって、ステップ(c)において追加されるAPCの数が、ステップ(b)において追加されるAPCの数よりも多く、ステップ(b)において、APCが、正確にまたは約1細胞層~正確にまたは約3細胞層の平均厚さで第1のガス透過性表面積上に層状化される、方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、APCが、正確にまたは約1.5細胞層~正確にまたは約2.5細胞層の平均厚さで第1のガス透過性表面積上に層状化されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、APCが、正確にまたは約2細胞層の平均厚さで第1のガス透過性表面積上に層状化されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、APCが、正確にまたは約1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、または3細胞層の平均厚さで第1のガス透過性表面積上に層状化されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(c)において、APCが、正確にまたは約3細胞層~正確にまたは約10細胞層の平均厚さで第1のガス透過性表面積上に層状化されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(c)において、APCが、正確にまたは約4細胞層~正確にまたは約8細胞層の平均厚さで第1のガス透過性表面積上に層状化されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(c)において、APCが、正確にまたは約3、4、5、6、7、8、9、または10細胞層の平均厚さで第1のガス透過性表面積上に層状化されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(c)において、APCが、正確にまたは約4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、または8細胞層の平均厚さで第1のガス透過性表面積上に層状化されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、プライミングによる第1の拡張が、第1のガス透過性表面積を含む第1の容器内で行われ、ステップ(c)において、急速な第2の拡張が、第2のガス透過性表面積を含む第2の容器内で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、第2の容器が第1の容器よりも大きいように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、ステップ(b)において、一次の第1の拡張が、第1のTIL集団の細胞培養培地に追加の抗原提示細胞(APC)を補充することによって行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法であって、ステップ(c)において追加されるAPCの数が、ステップ(b)において追加されるAPCの数よりも多く、ステップ(b)において、APCが、正確にまたは約1細胞層~正確にまたは約3細胞層の平均厚さで第1のガス透過性表面積上に層状化される、方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、APCが、正確にまたは約1.5細胞層~正確にまたは約2.5細胞層の平均厚さで第1のガス透過性表面積上に層状化されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、APCが、正確にまたは約2細胞層の平均厚さで第1のガス透過性表面積上に層状化されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、APCが、正確にまたは約1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、または3細胞層の平均厚さで第1のガス透過性表面積上に層状化されるように修正された、該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(c)において、APCが、正確にまたは約3細胞層~正確にまたは約10細胞層の平均厚さで第2のガス透過性表面積上に層状化されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(c)において、APCが、正確にまたは約4細胞層~正確にまたは約8細胞層の平均厚さで第2のガス透過性表面積上に層状化されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(c)において、APCが、正確にまたは約3、4、5、6、7、8、9、または10細胞層の平均厚さで第2のガス透過性表面積上に層状化されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(c)において、APCが、正確にまたは約4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、または8細胞層の平均厚さで第2のガス透過性表面積上に層状化されるように修正された、該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、プライミングによる第1の拡張が、第1のガス透過性表面積を含む第1の容器内で行われ、ステップ(c)において、急速な第2の拡張が、第1の容器内で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、ステップ(b)において、一次の第1の拡張が、第1のTIL集団の細胞培養培地に追加の抗原提示細胞(APC)を補充することによって行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法であって、ステップ(c)において追加されるAPCの数が、ステップ(b)において追加されるAPCの数よりも多く、ステップ(b)において、APCが、正確にまたは約1細胞層~正確にまたは約3細胞層の平均厚さで第1のガス透過性表面積上に層状化される、方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、APCが、正確にまたは約1.5細胞層~正確にまたは約2.5細胞層の平均厚さで第1のガス透過性表面積上に層状化されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、APCが、正確にまたは約2細胞層の平均厚さで第1のガス透過性表面積上に層状化されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、APCが、正確にまたは約1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、または3細胞層の平均厚さで第1のガス透過性表面積上に層状化されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(c)において、APCが、正確にまたは約3細胞層~正確にまたは約10細胞層の平均厚さで第1のガス透過性表面積上に層状化されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(c)において、APCが、正確にまたは約4細胞層~正確にまたは約8細胞層の平均厚さで第1のガス透過性表面積上に層状化されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(c)において、APCが、正確にまたは約3、4、5、6、7、8、9、または10細胞層の平均厚さで第1のガス透過性表面積上に層状化されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(c)において、APCが、正確にまたは約4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、または8細胞層の平均厚さで第1のガス透過性表面積上に層状化されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、第1のTIL集団の細胞培養培地を追加の抗原提示細胞(APC)で補充することにより一次の第1の拡張が行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法であって、ステップ(c)において追加されるAPCの数が、ステップ(b)において追加されるAPCの数よりも多く、ステップ(b)において層状化されるAPCの層の平均数の、ステップ(c)において層状化されるAPCの層の平均数に対する比が、正確にまたは約1:1.1~正確にまたは約1:10の範囲から選択される、方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、第1のTIL集団の細胞培養培地を追加の抗原提示細胞(APC)で補充することにより一次の第1の拡張が行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法であって、ステップ(c)において追加されるAPCの数が、ステップ(b)において追加されるAPCの数よりも多く、ステップ(b)において層状化されるAPCの層の平均数の、ステップ(c)において層状化されるAPCの層の平均数に対する比が、正確にまたは約1:1.1~正確にまたは約1:9の範囲から選択される、方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、第1のTIL集団の細胞培養培地を追加の抗原提示細胞(APC)で補充することにより一次の第1の拡張が行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法であって、ステップ(c)において追加されるAPCの数が、ステップ(b)において追加されるAPCの数よりも多く、ステップ(b)において層状化されるAPCの層の平均数の、ステップ(c)において層状化されるAPCの層の平均数に対する比が、正確にまたは約1:1.1~正確にまたは約1:8の範囲から選択される、方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、第1のTIL集団の細胞培養培地を追加の抗原提示細胞(APC)で補充することにより一次の第1の拡張が行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法であって、ステップ(c)において追加されるAPCの数が、ステップ(b)において追加されるAPCの数よりも多く、ステップ(b)において層状化されるAPCの層の平均数の、ステップ(c)において層状化されるAPCの層の平均数に対する比が、正確にまたは約1:1.1~正確にまたは約1:7の範囲から選択される、方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、第1のTIL集団の細胞培養培地を追加の抗原提示細胞(APC)で補充することにより一次の第1の拡張が行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法であって、ステップ(c)において追加されるAPCの数が、ステップ(b)において追加されるAPCの数よりも多く、ステップ(b)において層状化されるAPCの層の平均数の、ステップ(c)において層状化されるAPCの層の平均数に対する比が、正確にまたは約1:1.1~正確にまたは約1:6の範囲から選択される、方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、第1のTIL集団の細胞培養培地を追加の抗原提示細胞(APC)で補充することにより一次の第1の拡張が行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法であって、ステップ(c)において追加されるAPCの数が、ステップ(b)において追加されるAPCの数よりも多く、ステップ(b)において層状化されるAPCの層の平均数の、ステップ(c)において層状化されるAPCの層の平均数に対する比が、正確にまたは約1:1.1~正確にまたは約1:5の範囲から選択される、方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、第1のTIL集団の細胞培養培地を追加の抗原提示細胞(APC)で補充することにより一次の第1の拡張が行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法であって、ステップ(c)において追加されるAPCの数が、ステップ(b)において追加されるAPCの数よりも多く、ステップ(b)において層状化されるAPCの層の平均数の、ステップ(c)において層状化されるAPCの層の平均数に対する比が、正確にまたは約1:1.1~正確にまたは約1:4の範囲から選択される、方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、第1のTIL集団の細胞培養培地を追加の抗原提示細胞(APC)で補充することにより一次の第1の拡張が行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法であって、ステップ(c)において追加されるAPCの数が、ステップ(b)において追加されるAPCの数よりも多く、ステップ(b)において層状化されるAPCの層の平均数の、ステップ(c)において層状化されるAPCの層の平均数に対する比が、正確にまたは約1:1.1~正確にまたは約1:3の範囲から選択される、方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、第1のTIL集団の細胞培養培地を追加の抗原提示細胞(APC)で補充することにより一次の第1の拡張が行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法であって、ステップ(c)において追加されるAPCの数が、ステップ(b)において追加されるAPCの数よりも多く、ステップ(b)において層状化されるAPCの層の平均数の、ステップ(c)において層状化されるAPCの層の平均数に対する比が、正確にまたは約1:1.1~正確にまたは約1:2の範囲から選択される、方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、第1のTIL集団の細胞培養培地を追加の抗原提示細胞(APC)で補充することにより一次の第1の拡張が行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法であって、ステップ(c)において追加されるAPCの数が、ステップ(b)において追加されるAPCの数よりも多く、ステップ(b)において層状化されるAPCの層の平均数の、ステップ(c)において層状化されるAPCの層の平均数に対する比が、正確にまたは約1:1.2~正確にまたは約1:8の範囲から選択される、方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、第1のTIL集団の細胞培養培地を追加の抗原提示細胞(APC)で補充することにより一次の第1の拡張が行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法であって、ステップ(c)において追加されるAPCの数が、ステップ(b)において追加されるAPCの数よりも多く、ステップ(b)において層状化されるAPCの層の平均数の、ステップ(c)において層状化されるAPCの層の平均数に対する比率が、正確にまたは約1:1.3~正確にまたは約1:7の範囲から選択される、方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、第1のTIL集団の細胞培養培地を追加の抗原提示細胞(APC)で補充することにより一次の第1の拡張が行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法であって、ステップ(c)において追加されるAPCの数が、ステップ(b)において追加されるAPCの数よりも多く、ステップ(b)において層状化されるAPCの層の平均数の、ステップ(c)において層状化されるAPCの層の平均数に対する比率が、正確にまたは約1:1.4~正確にまたは約1:6の範囲から選択される、方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、第1のTIL集団の細胞培養培地を追加の抗原提示細胞(APC)で補充することにより一次の第1の拡張が行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法であって、ステップ(c)において追加されるAPCの数が、ステップ(b)において追加されるAPCの数よりも多く、ステップ(b)において層状化されるAPCの層の平均数の、ステップ(c)において層状化されるAPCの層の平均数に対する比率が、正確にまたは約1:1.5~正確にまたは約1:5の範囲から選択される、方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、第1のTIL集団の細胞培養培地を追加の抗原提示細胞(APC)で補充することにより一次の第1の拡張が行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法であって、ステップ(c)において追加されるAPCの数が、ステップ(b)において追加されるAPCの数よりも多く、ステップ(b)において層状化されるAPCの層の平均数の、ステップ(c)において層状化されるAPCの層の平均数に対する比率が、正確にまたは約1:1.6~正確にまたは約1:4の範囲から選択される、方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、第1のTIL集団の細胞培養培地を追加の抗原提示細胞(APC)で補充することにより一次の第1の拡張が行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法であって、ステップ(c)において追加されるAPCの数が、ステップ(b)において追加されるAPCの数よりも多く、ステップ(b)において層状化されるAPCの層の平均数の、ステップ(c)において層状化されるAPCの層の平均数に対する比率が、正確にまたは約1:1.7~正確にまたは約1:3.5の範囲から選択される、方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、第1のTIL集団の細胞培養培地を追加の抗原提示細胞(APC)で補充することにより一次の第1の拡張が行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法であって、ステップ(c)において追加されるAPCの数が、ステップ(b)において追加されるAPCの数よりも多く、ステップ(b)において層状化されるAPCの層の平均数の、ステップ(c)において層状化されるAPCの層の平均数に対する比率が、正確にまたは約1:1.8~正確にまたは約1:3の範囲から選択される、方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、第1のTIL集団の細胞培養培地を追加の抗原提示細胞(APC)で補充することにより一次の第1の拡張が行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法であって、ステップ(c)において追加されるAPCの数が、ステップ(b)において追加されるAPCの数よりも多く、ステップ(b)において層状化されるAPCの層の平均数の、ステップ(c)において層状化されるAPCの層の平均数に対する比率が、正確にまたは約1:1.9~正確にまたは約1:2.5の範囲から選択される、方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、第1のTIL集団の細胞培養培地を追加の抗原提示細胞(APC)で補充することにより一次の第1の拡張が行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法であって、ステップ(c)において追加されるAPCの数が、ステップ(b)において追加されるAPCの数よりも多く、ステップ(b)において層状化されるAPCの層の平均数の、ステップ(c)において層状化されるAPCの層の平均数に対する比率が、正確にまたは約1:2の範囲から選択される、方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、一次の第1の拡張が、第1のTIL集団の細胞培養培地に追加の抗原提示細胞(APC)を補充することによって行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法であって、ステップ(c)において追加されるAPCの数が、ステップ(b)において追加されるAPCの数よりも多く、ステップ(b)において層状化されるAPCの層の平均数の、ステップ(c)において層状化されるAPCの層の平均数に対する比率が、正確にまたは約1:1.1、1:1.2、1:1.3、1:1.4、1:1.5、1:1.6、1:1.7、1:1.8、1:1.9、1:2、1:2.1、1:2.2、1:2.3、1:2.4、1:2.5、1:2.6、1:2.7、1:2.8、1:2.9、1:3、1:3.1、1:3.2、1:3.3、1:3.4、1:3.5、1:3.6、1:3.7、1:3.8、1:3.9、1:4、1:4.1、1:4.2、1:4.3、1:4.4、1:4.5、1:4.6、1:4.7、1:4.8、1:4.9、1:5、1:5.1、1:5.2、1:5.3、1:5.4、1:5.5、1:5.6、1:5.7、1:5.8、1:5.9、1:6、1:6.1、1:6.2、1:6.3、1:6.4、1:6.5、1:6.6、1:6.7、1:6.8、1:6.9、1:7、1:7.1、1:7.2、1:7.3、1:7.4、1:7.5、1:7.6、1:7.7、1:7.8、1:7.9、1:8、1:8.1、1:8.2、1:8.3、1:8.4、1:8.5、1:8.6、1:8.7、1:8.8、1:8.9、1:9、1:9.1、1:9.2、1:9.3、1:9.4、1:9.5、1:9.6、1:9.7、1:9.8、1:9.9、または1:10から選択される、方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第2のTIL集団におけるTILの数の、第1のTIL集団におけるTILの数に対する比が、約1.5:1~約100:1であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第2のTIL集団中のTILの数の第1のTIL集団中のTILの数に対する比率が、正確にまたは約50:1であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第2のTIL集団中のTILの数の、第1のTIL集団中のTILの数に対する比が、正確にまたは約25:1であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第2のTIL集団中のTILの数の、第1のTIL集団中のTILの数に対する比が、正確にまたは約20:1であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第2のTIL集団中のTILの数の、第1のTIL集団中のTILの数に対する比が、正確にまたは約10:1であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、第2のTIL集団の数が、第1のTIL集団よりも少なくとも正確にまたは約50倍多いように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、第2のTIL集団の数が、第1のTIL集団よりも少なくとも正確にまたは約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、または50倍多いように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(c)における第2の期間の開始の正確にまたは約2日または正確にまたは約3日後に、細胞培養培地に追加のIL-2が補充されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、凍結保存プロセスを使用して、ステップ(d)において採取されたTIL集団を凍結保存するステップをさらに含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(d)の後に、(e)ステップ(d)から採取したTIL集団を、任意選択でHypoThermosolを含有する注入バッグに移す追加のステップを行うことを含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、凍結保存プロセスを使用して、ステップ(e)において採取されたTIL集団を含む注入バッグを凍結保存するステップを含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、凍結保存プロセスが、1:1の採取されたTIL集団の凍結保存培地に対する比率を使用して行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、抗原提示細胞が末梢血単核細胞(PBMC)であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、PBMCが放射線照射され、かつ同種異系であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)において細胞培養に追加されるAPCの総数が2.5×108であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(c)において細胞培養に追加されるAPCの総数が5×108であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、APCがPBMCであるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、PBMCが放射線照射され、かつ同種異系であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、抗原提示細胞が人工抗原提示細胞であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(d)での採取が膜ベースの細胞処理システムを使用して行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(d)での採取がLOVO細胞処理システムを使用して行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、複数の断片が1容器当たり正確にまたは約5~正確にまたは約60個の断片を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、複数の断片が1容器当たり正確にまたは約10~正確にまたは約60個の断片を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、複数の断片が1容器当たり正確にまたは約15~正確にまたは約60個の断片を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、複数の断片が1容器当たり正確にまたは約20~正確にまたは約60個の断片を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、複数の断片が1容器当たり正確にまたは約25~正確にまたは約60個の断片を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、複数の断片が1容器当たり正確にまたは約30~正確にまたは約60個の断片を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、複数の断片が1容器当たり正確にまたは約35~正確にまたは約60個の断片を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、複数の断片が1容器当たり正確にまたは約40~正確にまたは約60個の断片を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、複数の断片が1容器当たり正確にまたは約45~正確にまたは約60個の断片を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、複数の断片が1容器当たり正確にまたは約50~正確にまたは約60個の断片を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、複数の断片が1容器当たり正確にまたは約2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、または60個の断片(複数可)を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、各断片が正確にまたは約27mm3の体積を有するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、各断片が正確にまたは約20mm3~正確にまたは約50mm3の体積を有するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、各断片が正確にまたは約21mm3~正確にまたは約30mm3の体積を有するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、各断片が正確にまたは約22mm3~正確にまたは約29.5mm3の体積を有するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、各断片が正確にまたは約23mm3~正確にまたは約29mm3の体積を有するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、各断片が正確にまたは約24mm3~正確にまたは約28.5mm3の体積を有するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、各断片が正確にまたは約25mm3~正確にまたは約28mm3の体積を有するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、各断片が正確にまたは約26.5mm3~正確にまたは約27.5mm3の体積を有するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、各断片が正確にまたは約21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、または50mm3の体積を有するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、複数の断片が正確にまたは約30~正確にまたは約60個の断片を含み、正確にまたは約1300mm3~正確にまたは約1500mm3の総体積を有するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、複数の断片が正確にまたは約50個の断片を含み、正確にまたは約1350mm3の総体積を有するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、複数の断片が正確にまたは約50個の断片を含み、正確にまたは約1グラム~正確にまたは約1.5グラムの総質量を有するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、細胞培養培地がG容器またはXuriセルバッグである容器内に提供されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、細胞培養培地中のIL-2濃度が約10,000IU/mL~約5,000IU/mLであるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、細胞培養培地中のIL-2濃度が約6,000IU/mLであるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、凍結保存培地がジメチルスルホキシド(DMSO)を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、凍結保存培地が7%~10%DMSOを含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)における第1の期間が正確にまたは約1日、2日、3日、4日、5日、6日、または7日の期間内で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(c)における第2の期間が正確にまたは約1日、2日、3日、4日、5日、6日、7日、8日、9日、10日、または11日の期間内で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)における第1の期間及びステップ(c)における第2の期間が各々、正確にまたは約1日、2日、3日、4日、5日、6日、または7日の期間内に個別に行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)における第1の期間及びステップ(c)における第2の期間が各々、正確にまたは約5日、6日、または7日の期間内に個別に行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(b)における第1の期間及びステップ(c)における第2の期間が各々、正確にまたは約7日の期間内に個別に行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(a)~(d)が合計で正確にまたは約14日~正確にまたは約18日で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(a)~(d)が合計で正確にまたは約15日~正確にまたは約18日で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(a)~(d)が合計で正確にまたは約16日~正確にまたは約18日で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(a)~(d)が合計で正確にまたは約17日~正確にまたは約18日で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(a)~(d)が合計で正確にまたは約14日~正確にまたは約17日で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(a)~(d)が合計で正確にまたは約15日~正確にまたは約17日で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(a)~(d)が合計で正確にまたは約16日~正確にまたは約17日で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(a)~(d)が合計で正確にまたは約14日~正確にまたは約16日で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(a)~(d)が合計で正確にまたは約15日~正確にまたは約16日で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(a)~(d)が合計で正確にまたは約14日で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(a)~(d)が合計で正確にまたは約15日で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(a)~(d)が合計で正確にまたは約16日で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(a)~(d)が合計で正確にまたは約17日で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(a)~(d)が合計で正確にまたは約18日で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(a)~(d)が合計で正確にまたは約14日以内で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(a)~(d)が合計で正確にまたは約15日以内で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(a)~(d)が合計で正確にまたは約16日以内で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(a)~(d)が合計で正確にまたは約18日以内で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(d)で採取された治療的TIL集団が、TILの治療上有効な投与量に十分なTILを含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、治療上有効な投与量に十分なTILの数が、正確にまたは約2.3×1010~正確にまたは約13.7×1010であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(c)における第3のTIL集団が、増加した有効性、増加したインターフェロンガンマ産生、及び/または増加したポリクローン性を提供するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(c)における第3のTIL集団が、16日より長いプロセスによって調製されたTILと比較して、少なくとも1倍~5倍以上のインターフェロンガンマ産生を提供するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(c)における第3のTIL集団が、17日より長いプロセスによって調製されたTILと比較して、少なくとも1倍~5倍以上のインターフェロンガンマ産生を提供するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(c)における第3のTIL集団が、18日より長いプロセスによって調製されたTILと比較して、少なくとも1倍~5倍以上のインターフェロンガンマ産生を提供するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、ステップ(c)の第3のTIL集団から取得されたエフェクターT細胞及び/またはセントラルメモリーT細胞が、ステップ(b)の第2の細胞集団から取得されたエフェクターT細胞及び/またはセントラルメモリーT細胞と比較して増加したCD8及びCD28発現を示すように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、方法に列挙された各容器が密閉容器であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、方法に列挙された各容器がG容器であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、方法に列挙された各容器がGREX-10であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、方法に列挙された各容器がGREX-100であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、方法に列挙された各容器がGREX-500であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法によって作製された腫瘍浸潤リンパ球(TIL)の治療的集団を提供する。
他の実施形態では、本発明は、患者の腫瘍組織から調製された腫瘍浸潤リンパ球(TIL)の治療的集団を提供し、この治療的TIL集団は、第1のTIL拡張が抗原提示細胞(APC)またはOKT3を追加せずに行われるプロセスによって調製されたTILと比較して、増加した有効性、増加したインターフェロンガンマ産生、及び/または増加したポリクローン性を提供する。
他の実施形態では、本発明は、患者の腫瘍組織から調製された腫瘍浸潤リンパ球(TIL)の治療的集団を提供し、この治療的TIL集団は、第1のTIL拡張が抗原提示細胞(APC)を追加せずに行われるプロセスによって調製されたTILと比較して、増加した有効性、増加したインターフェロンガンマ産生、及び/または増加したポリクローン性を提供する。
他の実施形態では、本発明は、患者の腫瘍組織から調製された腫瘍浸潤リンパ球(TIL)の治療的集団を提供し、この治療的TIL集団は、第1のTIL拡張がOKT3を追加せずに行われるプロセスによって調製されたTILと比較して、増加した有効性、増加したインターフェロンガンマ産生、及び/または増加したポリクローン性を提供する。
他の実施形態では、本発明は、患者の腫瘍組織から調製された腫瘍浸潤リンパ球(TIL)の治療的集団を提供し、この治療的TIL集団は、第1のTIL拡張が抗原提示細胞(APC)もOKT3も追加せずに行われるプロセスによって調製されたTILと比較して、増加した有効性、増加したインターフェロンガンマ産生、及び/または増加したポリクローン性を提供する。
他の実施形態では、本発明は、患者の腫瘍組織から調製された腫瘍浸潤リンパ球(TIL)の治療的集団を提供し、この治療的TIL集団は、16日より長いプロセスによってプロセスによって調製されたTILと比較して、増加した有効性、増加したインターフェロンガンマ産生、及び/または増加したポリクローン性を提供する。
他の実施形態では、本発明は、患者の腫瘍組織から調製された腫瘍浸潤リンパ球(TIL)の治療的集団を提供し、この治療的TIL集団は、17日より長いプロセスによってプロセスによって調製されたTILと比較して、増加した有効性、増加したインターフェロンガンマ産生、及び/または増加したポリクローン性を提供する。
他の実施形態では、本発明は、患者の腫瘍組織から調製された腫瘍浸潤リンパ球(TIL)の治療的集団を提供し、この治療的TIL集団は、18日より長いプロセスによってプロセスによって調製されたTILと比較して、増加した有効性、増加したインターフェロンガンマ産生、及び/または増加したポリクローン性を提供する。
他の実施形態では、本発明は、増加したインターフェロンガンマ産生を提供する、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の治療的TIL集団を提供する。
他の実施形態では、本発明は、増加したポリクローン性を提供する、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載された治療的TIL集団を提供する。
他の実施形態では、本発明は、増加した有効性を提供する、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の治療的TIL集団を提供する。
他の実施形態では、本発明は、治療的TIL集団が、16日より長いプロセスによって調製されたTILと比較して、少なくとも1倍多いインターフェロンガンマ産生が可能であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の治療的TIL集団を提供する。他の実施形態では、本発明は、治療的TIL集団が、17日より長いプロセスによって調製されたTILと比較して、少なくとも1倍多いインターフェロンガンマ産生が可能であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の治療的TIL集団を提供する。他の実施形態では、本発明は、治療的TIL集団が、18日より長いプロセスによって調製されたTILと比較して、少なくとも1倍多いインターフェロンガンマ産生が可能であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の治療的TIL集団を提供する。他の実施形態では、TILは、例えば、上記のステップA~Fに記載されるように、または上記のステップA~Fに従って(また、例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に示されているように)、本明細書に記載される拡張プロセスに起因する少なくとも1倍多いインターフェロンガンマ産生が可能になる。
他の実施形態では、本発明は、治療的TIL集団が、16日より長いプロセスによって調製されたTILと比較して、少なくとも2倍多いインターフェロンガンマ産生が可能であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の治療的TIL集団を提供する。他の実施形態では、本発明は、治療的TIL集団が、17日より長いプロセスによって調製されたTILと比較して、少なくとも2倍多いインターフェロンガンマ産生が可能であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の治療的TIL集団を提供する。他の実施形態では、本発明は、治療的TIL集団が、18日より長いプロセスによって調製されたTILと比較して、少なくとも2倍多いインターフェロンガンマ産生が可能であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の治療的TIL集団を提供する。他の実施形態では、TILは、例えば、上記のステップA~Fに記載されるように、または上記のステップA~Fに従って(また、例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に示されているように)、本明細書に記載される拡張プロセスに起因する少なくとも2倍多いインターフェロンガンマ産生が可能になる。
他の実施形態では、本発明は、治療的TIL集団が、16日より長いプロセスによって調製されたTILと比較して、少なくとも3倍多いインターフェロンガンマ産生が可能であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の治療的TIL集団を提供する。他の実施形態では、本発明は、治療的TIL集団が、17日より長いプロセスによって調製されたTILと比較して、少なくとも3倍多いインターフェロンガンマ産生が可能であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の治療的TIL集団を提供する。他の実施形態では、本発明は、治療的TIL集団が、18日より長いプロセスによって調製されたTILと比較して、少なくとも3倍多いインターフェロンガンマ産生が可能であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の治療的TIL集団を提供する。他の実施形態では、TILは、例えば、上記のステップA~Fに記載されるように、または上記のステップA~Fに従って(また、例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に示されているように)、本明細書に記載される拡張プロセスに起因する少なくとも3倍多いインターフェロンガンマ産生が可能になる。
他の実施形態では、本発明は、第1のTIL拡張が抗原提示細胞(APC)を追加せずに行われるプロセスによって調製されたTILと比較して、少なくとも1倍多いインターフェロンガンマ産生が可能である腫瘍浸潤リンパ球(TIL)の治療的集団を提供する。他の実施形態では、TILは、例えば、上記のステップA~Fに記載されるように、または上記のステップA~Fに従って(また、例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に示されているように)、本明細書に記載される拡張プロセスに起因する少なくとも1倍多いインターフェロンガンマ産生が可能になる。
他の実施形態では、本発明は、第1のTIL拡張がOKT3を追加せずに行われるプロセスによって調製されたTILと比較して、少なくとも1倍多いインターフェロンガンマ産生が可能である腫瘍浸潤リンパ球(TIL)の治療的集団を提供する。他の実施形態では、TILは、例えば、上記のステップA~Fに記載されるように、または上記のステップA~Fに従って(また、例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に示されているように)、本明細書に記載される拡張プロセスに起因する少なくとも1倍多いインターフェロンガンマ産生が可能になる。
他の実施形態では、本発明は、第1のTIL拡張がAPCを追加せずに行われるプロセスによって調製されたTILと比較して、少なくとも2倍多いインターフェロンガンマ産生が可能であるTILの治療的集団を提供する。他の実施形態では、TILは、例えば、上記のステップA~Fに記載されるように、または上記のステップA~Fに従って(また、例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に示されているように)、本明細書に記載される拡張プロセスに起因する少なくとも2倍多いインターフェロンガンマ産生が可能になる。
他の実施形態では、本発明は、第1のTIL拡張がOKT3を追加せずに行われるプロセスによって調製されたTILと比較して、少なくとも2倍多いインターフェロンガンマ産生が可能である治療的TIL集団を提供する。他の実施形態では、TILは、例えば、上記のステップA~Fに記載されるように、または上記のステップA~Fに従って(また、例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に示されているように)、本明細書に記載される拡張プロセスに起因する少なくとも2倍多いインターフェロンガンマ産生が可能になる。
他の実施形態では、本発明は、第1のTIL拡張がAPCを追加せずに行われるプロセスによって調製されたTILと比較して、少なくとも3倍多いインターフェロンガンマ産生が可能である治療的TIL集団を提供する。他の実施形態では、TILは、例えば、上記のステップA~Fに記載されるように、または上記のステップA~Fに従って(また、例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に示されているように)、本明細書に記載される拡張プロセスに起因する少なくとも1倍多いインターフェロンガンマ産生が可能になる。
他の実施形態では、本発明は、第1のTIL増殖がOKT3を追加せずに行われるプロセスによって調製されたTILと比較して、少なくとも3倍多いインターフェロンガンマ産生が可能である治療的TIL集団を提供する。他の実施形態では、TILは、例えば、上記のステップA~Fに記載されるように、または上記のステップA~Fに従って(また、例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に示されているように)、本明細書に記載される拡張プロセスに起因する少なくとも3倍多いインターフェロンガンマ産生が可能になる。
他の実施形態では、本発明は、腫瘍断片が、小生検(例えば、パンチ生検を含む)、コア生検、コア針生検、または細針吸引物であるように修正された、上記の該当する前の段落のいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、腫瘍断片がコア生検であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、腫瘍断片が細針吸引物であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、腫瘍断片が小生検(例えば、パンチ生検を含む)であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、腫瘍断片がコア針生検であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、(i)方法が、対象由来の腫瘍組織の1つ以上の小生検(例えば、パンチ生検を含む)、コア生検、コア針生検、または細針吸引物から第1のTIL集団を得ることを含み、(ii)方法が、プライミングによる第1の拡張ステップを行う前に、IL-2を含む細胞培養培地中で第1のTIL集団を約3日間培養するステップを行うことを含み、(iii)方法が、約8日間にわたってプライミングによる第1の拡張を行うことを含み、かつ(iv)方法が、約11日間にわたって急速な第2の拡張を行うことを含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。前述の実施形態のうちのいくつかでは、方法のこれらのステップは、約22日で完了する。
他の実施形態では、本発明は、(i)方法が、対象由来の腫瘍組織の1つ以上の小生検(例えば、パンチ生検を含む)、コア生検、コア針生検、または細針吸引物から第1のTIL集団を得ることを含み、(ii)方法が、プライミングによる第1の拡張ステップを行う前に、IL-2を含む細胞培養培地中で第1のTIL集団を約3日間培養するステップを行うことを含み、(iii)方法が、約8日間にわたってプライミングによる第1の拡張を行うことを含み、かつ(iv)方法が、第2のTIL集団の培養物を約5日間培養し、培養物を最大5つの継代培養物に分割し、かつ継代培養物を約6日間培養することによって、急速な第2の拡張を行うことを含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。前述の実施形態のうちのいくつかでは、最大5つの継代培養物が各々、第2のTIL集団の培養が急速な第2の拡張で開始される容器と同じサイズのまたはそれよりも大きい容器内で培養される。前述の実施形態のうちのいくつかでは、第2のTIL集団の培養物は、最大5つの継代培養物間で均等に分けられる。前述の実施形態のうちのいくつかでは、方法のこれらのステップは、約22日で完了する。
他の実施形態では、本発明は、第1のTIL集団が、対象由来の腫瘍組織の1~約20個の小生検(例えば、パンチ生検を含む)、コア生検、コア針生検、または細針吸引物から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、第1のTIL集団が、対象由来の腫瘍組織の1~約10個の小生検(例えば、パンチ生検を含む)、コア生検、コア針生検、または細針吸引物から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、第1のTIL集団が、対象由来の腫瘍組織の1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の小生検(例えば、パンチ生検を含む)、コア生検、コア針生検、または細針吸引物から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、第1のTIL集団が、対象由来の腫瘍組織の1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10個の小生検(例えば、パンチ生検を含む)、コア生検、コア針生検、または細針吸引物から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、第1のTIL集団が、対象由来の腫瘍組織の1~約20個のコア生検から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、第1のTIL集団が、対象由来の腫瘍組織の1~約10個のコア生検から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、第1のTIL集団が、対象由来の腫瘍組織の1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個のコア生検から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、第1のTIL集団が、対象由来の腫瘍組織の1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10個のコア生検から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、第1のTIL集団が、対象由来の腫瘍組織の1~約20個の細針吸引物から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、第1のTIL集団が、対象由来の腫瘍組織の1~約10個の細針吸引物から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、第1のTIL集団が、対象由来の腫瘍組織の1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の細針吸引物から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、第1のTIL集団が、対象由来の腫瘍組織の1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10個の細針吸引物から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、第1のTIL集団が、対象由来の腫瘍組織の1~約20個のコア針生検から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、第1のTIL集団が、対象由来の腫瘍組織の1~約10個のコア針生検から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、第1のTIL集団が、対象由来の腫瘍組織の1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個のコア針生検から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、第1のTIL集団が、対象由来の腫瘍組織の1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10個のコア針生検から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、第1のTIL集団が、対象由来の腫瘍組織の1~約20個の小生検(例えば、パンチ生検を含む)から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、第1のTIL集団が、対象由来の腫瘍組織の1~約10個の小生検(例えば、パンチ生検を含む)から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、第1のTIL集団が、対象由来の腫瘍組織の1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の小生検(例えば、パンチ生検を含む)から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
他の実施形態では、本発明は、第1のTIL集団が、対象由来の腫瘍組織の1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10個の小生検(例えば、パンチ生検を含む)から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、(i)方法が、対象由来の腫瘍組織の1~約10個のコア生検から第1のTIL集団を得ることを含み、(ii)方法が、プライミングによる第1の拡張ステップを行う前に、IL-2を含む細胞培養培地中で第1のTIL集団を約3日間培養するステップを行うことを含み、(iii)方法が、第1のTIL集団を、IL-2、OKT-3、及び抗原提示細胞(APC)を含む培養培地中で約8日間培養することによってプライミングによる第1の拡張ステップを行い、第2のTIL集団を得ることを含み、かつ(iv)方法が、第2のTIL集団を、IL-2、OKT-3、及びAPCを含む培養培地中で約11日間培養することによって急速な第2の拡張ステップを行うことを含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。前述の実施形態のうちのいくつかでは、方法のこれらのステップは、約22日で完了する。
いくつかの実施形態では、本発明は、(i)方法が、対象由来の腫瘍組織の1~約10個のコア生検から第1のTIL集団を取得することを含み、(ii)方法が、プライミングによる第1の拡張ステップを行う前に、IL-2を含む細胞培養培地中で第1のTIL集団を約3日間培養するステップを行うことを含み、(iii)方法が、第1のTIL集団を、IL-2、OKT-3、及び抗原提示細胞(APC)を含む培養培地中で約8日間培養することによってプライミングによる第1の拡張ステップを行い、第2のTIL集団を取得することを含み、かつ(iv)方法が、第2のTIL集団の培養物を、IL-2、OKT-3、及びAPCを含む培養培地中で約5日間培養し、培養物を最大5つの継代培養物に分割し、かつ継代培養物の各々を、IL-2を含む培養培地中で約6日間培養することによって、急速な第2の拡張を行うことを含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。前述の実施形態のうちのいくつかでは、最大5つの継代培養物が各々、第2のTIL集団の培養が急速な第2の拡張で開始される容器と同じサイズのまたはそれよりも大きい容器内で培養される。前述の実施形態のうちのいくつかでは、第2のTIL集団の培養物は、最大5つの継代培養物間で均等に分けられる。前述の実施形態のうちのいくつかでは、方法のこれらのステップは、約22日で完了する。
いくつかの実施形態では、本発明は、(i)方法が、対象由来の腫瘍組織の1~約10個のコア生検から第1のTIL集団を取得することを含み、(ii)方法が、プライミングによる第1の拡張ステップを行う前に、G-REX100Mフラスコ内の0.5LのCM1培養培地中6000IU IL-2/mLを含む細胞培養培地中で第1のTIL集団を約3日間培養するステップを行うことを含み、(iii)方法が、6000IU/mL IL-2、30ng/mL OKT-3、及び約108個のフィーダー細胞を含む0.5LのCM1培養培地を添加し、約8日間培養することによって、プライミングによる第1の拡張を行うことを含み、かつ(iv)方法が、(a)第2のTIL集団を、3000IU/mL IL-2、30ng/mL OKT-3、及び5×109個のフィーダー細胞を有する5LのCM2培養培地を含むG-REX500MCSフラスコに移し、約5日間培養し、(b)109個のTILを、3000IU/mL IL-2を有する5LのAIM-V培地を含む最大5つのG-REX500MCSフラスコの各々に移すことによって培養物を最大5つの継代培養物に分割し、継代培養物を約6日間培養することによって、急速な第2の拡張を行うことを含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。前述の実施形態のうちのいくつかでは、方法のこれらのステップは、約22日で完了する。
いくつかの実施形態では、本発明は、(a)第1のT細胞集団を培養することによってドナーから取得された第1のT細胞集団のプライミングによる第1の拡張を行って成長をもたらし、第1のT細胞集団の活性化をプライミングすることと、(b)ステップ(a)においてプライミングされた第1のT細胞集団の活性化が減衰し始めた後、第1のT細胞集団を培養することによって第1のT細胞集団の急速な第2の拡張を行って成長をもたらし、第1のT細胞集団の活性化を促進して第2のT細胞集団を取得することと、(c)第2のT細胞集団を採取することと、を含む、T細胞を拡張する方法を提供する。いくつかの実施形態では、急速な第2の拡張ステップは、複数のステップに分けられて、(a)第1のT細胞集団を、第1の容器、例えば、G-REX100MCS容器内での小規模培養で約3~4日間培養することによって急速な第2の拡張を行うことと、その後、(b)小規模培養由来の第1のT細胞集団を、第1の容器よりも大きい第2の容器、例えば、G-REX500MCS容器に移し、小規模培養由来の第1のT細胞集団を、第2の容器内での大規模培養で約4~7日間培養することとによって、培養のスケールアップを達成する。いくつかの実施形態では、急速拡張ステップは、複数のステップに分けられ、(a)第1のT細胞集団を、第1の容器、例えば、G-REX100MCS容器内での第1の小規模培養で3~4日間培養することによって急速な第2の拡張を行うことと、その後、(b)第1の小規模培養由来の第1のT細胞集団を、第1の容器とサイズが等しい少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の第2の容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウトを達成し、各第2の容器内で、かかる第2の容器に移された第1の小規模培養由来の第1のT細胞集団の一部が、第2の小規模培養で約4~7日間培養される。いくつかの実施形態では、急速拡張ステップは、複数のステップに分けられ、(a)第1のT細胞集団を、第1の容器、例えば、G-REX100MCS容器内での小規模培養で約3~4日間培養することによって急速な第2の拡張を行うことと、その後、(b)小規模培養由来の第1のT細胞集団を、第1の容器よりもサイズが大きい少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の第2の容器、例えば、G-REX500MCS容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウト及びスケールアップを達成し、各第2の容器内で、かかる第2の容器に移された小規模培養由来の第1のT細胞集団の一部が、より大規模な培養で約4~7日間培養される。いくつかの実施形態では、急速拡張ステップは、複数のステップに分けられ、(a)第1のT細胞集団を、第1の容器、例えば、G-REX100MCS容器内での小規模培養で約4日間培養することによって急速な第2の拡張を行うことと、その後、(b)小規模培養由来の第1のT細胞集団を、第1の容器よりもサイズが大きい2、3、または4個の第2の容器、例えば、G-REX500MCS容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウト及びスケールアップを達成し、各第2の容器内で、かかる第2の容器に移された小規模培養由来の第1のT細胞集団の一部が、より大規模な培養で約5日間培養される。
いくつかの実施形態では、本発明は、急速な第2の拡張ステップが、複数のステップに分けられ、(a)第1のT細胞集団を、第1の容器、例えば、G-REX100MCS容器内での小規模培養で約2~4日間培養することによって急速な第2の拡張を行うことと、その後、(b)小規模培養由来の第1のT細胞集団を、第1の容器よりもサイズが大きい第2の容器、例えば、G-REX500MCS容器に移し、小規模培養由来の第1のT細胞集団を、第2の容器内での大規模培養で約5~7日間培養することとによって、培養のスケールアップを達成するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、急速拡張ステップが、複数のステップに分けられ、(a)第1のT細胞集団を、第1の容器、例えば、G-REX100MCS容器内での第1の小規模培養で2~4日間培養することによって急速な第2の拡張を行うことと、その後、(b)第1の小規模培養由来の第1のT細胞集団を、第1の容器とサイズが等しい少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の第2の容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウトを達成するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法であって、各第2の容器内で、かかる第2の容器に移された第1の小規模培養由来の第1のT細胞集団の一部が、第2の小規模培養で約5~7日間培養される、方法を提供する。
いくつかの実施形態では、急速拡張ステップが、複数のステップに分けられ、(a)第1のT細胞集団を、第1の容器、例えば、G-REX100MCS容器内での小規模培養で約2~4日間培養することによって急速な第2の拡張を行うことと、その後、(b)小規模培養由来の第1のT細胞集団を、第1の容器よりもサイズが大きい少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の第2の容器、例えば、G-REX500MCS容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウト及びスケールアップを達成するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法であって、各第2の容器内で、かかる第2の容器に移された小規模培養由来の第1のT細胞集団の一部が、より大規模な培養で約5~7日間培養される、方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、急速拡張ステップが、複数のステップに分けられ、(a)第1のT細胞集団を、第1の容器、例えば、G-REX100MCS容器内での小規模培養で約3~4日間培養することによって急速な第2の拡張を行うことと、その後、(b)小規模培養由来の第1のT細胞集団を、第1の容器よりもサイズが大きい2、3、または4個の第2の容器、例えば、G-REX500MCS容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウト及びスケールアップを達成するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法であって、各第2の容器内で、かかる第2の容器に移された小規模培養由来の第1のT細胞集団の一部が、より大規模な培養で約5~6日間培養される、方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、急速拡張ステップが、複数のステップに分けられ、(a)第1のT細胞集団を、第1の容器、例えば、G-REX100MCS容器内での小規模培養で約3~4日間培養することによって急速な第2の拡張を行うことと、その後、(b)小規模培養由来の第1のT細胞集団を、第1の容器よりもサイズが大きい2、3、または4個の第2の容器、例えば、G-REX500MCS容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウト及びスケールアップを達成するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法であって、各第2の容器内で、かかる第2の容器に移された小規模培養由来の第1のT細胞集団の一部が、より大規模な培養で約5日間培養される、方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、急速拡張ステップが、複数のステップに分けられ、(a)第1のT細胞集団を、第1の容器、例えば、G-REX100MCS容器内での小規模培養で約3~4日間培養することによって急速な第2の拡張を行うことと、その後、(b)小規模培養由来の第1のT細胞集団を、第1の容器よりもサイズが大きい2、3、または4個の第2の容器、例えば、G-REX500MCS容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウト及びスケールアップを達成するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法であって、各第2の容器内で、かかる第2の容器に移された小規模培養由来の第1のT細胞集団の一部が、より大規模な培養で約6日間培養される、方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、急速拡張ステップが、複数のステップに分けられ、(a)第1のT細胞集団を、第1の容器、例えば、G-REX100MCS容器内での小規模培養で約3~4日間培養することによって急速な第2の拡張を行うことと、その後、(b)小規模培養由来の第1のT細胞集団を、第1の容器よりもサイズが大きい2、3、または4個の第2の容器、例えば、G-REX500MCS容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウト及びスケールアップを達成するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法であって、各第2の容器内で、かかる第2の容器に移された小規模培養由来の第1のT細胞集団の一部が、より大規模な培養で約7日間培養される、方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、ステップ(a)のプライミングによる第1の拡張が最大7日の期間中に行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、ステップ(b)の急速な第2の拡張が最大8日の期間中に行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、ステップ(b)の急速な第2の拡張が最大9日の期間中に行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、ステップ(b)の急速な第2の拡張が最大10日の期間中に行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、ステップ(b)の急速な第2の拡張が最大11日の期間中に行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、ステップ(a)におけるプライミングによる第1の拡張が7日の期間中に行われ、かつステップ(b)の急速な第2の拡張が最大9日の期間中に行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、ステップ(a)におけるプライミングによる第1の拡張が7日の期間中に行われ、かつステップ(b)の急速な第2の拡張が最大10日の期間中に行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、ステップ(a)におけるプライミングによる第1の拡張が7日または8日の期間中に行われ、かつステップ(b)の急速な第2の拡張が最大9日の期間中に行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、ステップ(a)におけるプライミングによる第1の拡張が7日または8日の期間中に行われ、かつステップ(b)の急速な第2の拡張が最大10日の期間中に行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、ステップ(a)におけるプライミングによる第1の拡張が8日の期間中に行われ、かつステップ(b)の急速な第2の拡張が最大9日の期間中に行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、ステップ(a)におけるプライミングによる第1の拡張が8日の期間中に行われ、かつステップ(b)の急速な第2の拡張が最大8日の期間中に行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、ステップ(a)において、第1のT細胞集団がOKT-3及びIL-2を含む第1の培養培地中で培養されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第1の培養培地が4-1BBアゴニスト、OKT-3及びIL-2を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第1の培養培地がOKT-3、IL-2及び抗原提示細胞(APC)を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第1の培養培地が4-1BBアゴニスト、OKT-3、IL-2及び抗原提示細胞(APC)を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、第1のT細胞集団がOKT-3、IL-2及び抗原提示細胞(APC)を含む第2の培養培地中で培養されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第2の培養培地が4-1BBアゴニスト、OKT-3、IL-2及び抗原提示細胞(APC)を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、ステップ(a)において、第1のT細胞集団が、第1のガス透過性表面を含む容器内の第1の培養培地中で培養され(ここで、第1の培養培地が、OKT-3、IL-2及び第1の抗原提示細胞(APC)集団を含み、第1のAPC集団が、第1のT細胞集団のドナーに対して外因性であり、第1のAPC集団が、第1のガス透過性表面上に層状化される)、ステップ(b)において、第1のT細胞集団が、容器内の第2の培養培地中で培養される(ここで、第2の培養培地が、OKT-3、IL-2及び第2のAPC集団を含み、第2のAPC集団が、第1のT細胞集団のドナーに対して外因性であり、第2のAPC集団が、第1のガス透過性表面上に層状化され、第2のAPC集団が、第1のAPC集団よりも多い)ように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、ステップ(a)において、第1のT細胞集団が、第1のガス透過性表面を含む容器内の第1の培養培地中で培養され(ここで、第1の培養培地が、4-1BBアゴニスト、OKT-3、IL-2及び第1の抗原提示細胞(APC)集団を含み、第1のAPC集団が、第1のT細胞集団のドナーに対して外因性であり、第1のAPC集団が、第1のガス透過性表面上に層状化される)、ステップ(b)において、第1のT細胞集団が、容器内の第2の培養培地中で培養される(ここで、第2の培養培地が、OKT-3、IL-2及び第2のAPC集団を含み、第2のAPC集団が、第1のT細胞集団のドナーに対して外因性であり、第2のAPC集団が、第1のガス透過性表面上に層状化され、第2のAPC集団が、第1のAPC集団よりも多い)ように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、ステップ(a)において、第1のT細胞集団が、第1のガス透過性表面を含む容器内の第1の培養培地中で培養され(ここで、第1の培養培地が、OKT-3、IL-2及び第1の抗原提示細胞(APC)集団を含み、第1のAPC集団が、第1のT細胞集団のドナーに対して外因性であり、第1のAPC集団が、第1のガス透過性表面上に層状化される)、ステップ(b)において、第1のT細胞集団が、容器内の第2の培養培地中で培養される(ここで、第2の培養培地が、4-1BBアゴニスト、OKT-3、IL-2及び第2のAPC集団を含み、第2のAPC集団が、第1のT細胞集団のドナーに対して外因性であり、第2のAPC集団が、第1のガス透過性表面上に層状化され、第2のAPC集団が、第1のAPC集団よりも多い)ように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、ステップ(a)において、第1のT細胞集団が、第1のガス透過性表面を含む容器内の第1の培養培地中で培養され(ここで、第1の培養培地が、4-1BBアゴニスト、OKT-3、IL-2及び第1の抗原提示細胞(APC)集団を含み、第1のAPC集団が、第1のT細胞集団のドナーに対して外因性であり、第1のAPC集団が、第1のガス透過性表面上に層状化される)、ステップ(b)において、第1のT細胞集団が、容器内の第2の培養培地中で培養される(ここで、第2の培養培地が、4-1BBアゴニスト、OKT-3、IL-2及び第2のAPC集団を含み、第2のAPC集団が、第1のT細胞集団のドナーに対して外因性であり、第2のAPC集団が、第1のガス透過性表面上に層状化され、第2のAPC集団が、第1のAPC集団よりも多い)ように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第2のAPC集団中のAPCの数の、第1のAPC集団中のAPCの数に対する比が約2:1であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第1のAPC集団中のAPCの数が約2.5×108あり、第2のAPC集団中のAPCの数が約5×108であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、ステップ(a)において、第1のAPC集団が、2層のAPCの平均厚さで第1のガス透過性表面上に層状化されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、第2のAPC集団が、4~8層のAPCから選択される平均厚さで第1のガス透過性表面上に層状化されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、ステップ(b)において第1のガス透過性表面上に層状化されたAPCの平均層数の、ステップ(a)において第1のガス透過性表面上に層状化されたAPCの平均層数に対する比が、2:1であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、ステップ(a)において、第1のAPC集団が約1.0×106APC/cm2~約4.5×106APC/cm2の範囲から選択される密度で第1のガス透過性表面に播種されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、ステップ(a)において、第1のAPC集団が約1.5×106APC/cm2~約3.5×106APC/cm2の範囲から選択される密度で第1のガス透過性表面に播種されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、ステップ(a)において、第1のAPC集団が約2.0×106APC/cm2~約3.0×106APC/cm2の範囲から選択される密度で第1のガス透過性表面に播種されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、ステップ(a)において、第1のAPC集団が正確にまたは約2.0×106APC/cm2の密度で第1のガス透過性表面に播種されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、第2のAPC集団が正確にまたは約2.5×106APC/cm2~正確にまたは約7.5×106APC/cm2の範囲から選択される密度で第1のガス透過性表面に播種されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、第2のAPC集団が正確にまたは約3.5×106APC/cm2~正確にまたは約6.0×106APC/cm2の範囲から選択される密度で第1のガス透過性表面に播種されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、第2のAPC集団が正確にまたは約4.0×106APC/cm2~正確にまたは約5.5×106APC/cm2の範囲から選択される密度で第1のガス透過性表面に播種されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、ステップ(b)において、第2のAPC集団が正確にまたは約4.0×106APC/cm2の密度で第1のガス透過性表面に播種されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、ステップ(a)において、第1のAPC集団が正確にまたは約1.0×106APC/cm2~正確にまたは約4.5×106APC/cm2の範囲から選択される密度で第1のガス透過性表面に播種され、ステップ(b)において、第2のAPC集団が正確にまたは約2.5×106APC/cm2~正確にまたは約7.5×106APC/cm2の範囲から選択される密度で第1のガス透過性表面に播種されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、ステップ(a)において、第1のAPC集団が正確にまたは約1.5×106APC/cm2~正確にまたは約3.5×106APC/cm2の範囲から選択される密度で第1のガス透過性表面に播種され、ステップ(b)において、第2のAPC集団が正確にまたは約3.5×106APC/cm2~正確にまたは約6.0×106APC/cm2の範囲から選択される密度で第1のガス透過性表面に播種されるように修正された、該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、ステップ(a)において、第1のAPC集団が正確にまたは約2.0×106APC/cm2~正確にまたは約3.0×106APC/cm2の範囲から選択される密度で第1のガス透過性表面に播種され、ステップ(b)において、第2のAPC集団が正確にまたは約4.0×106APC/cm2~正確にまたは約5.5×106APC/cm2の範囲から選択される密度で第1のガス透過性表面に播種されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、ステップ(a)において、第1のAPC集団が正確にまたは約2.0×106APC/cm2の密度で第1のガス透過性表面に播種され、ステップ(b)において、第2のAPC集団が正確にまたは約4.0×106APC/cm2の密度で第1のガス透過性表面に播種されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、APCが末梢血単核細胞(PBMC)であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、PBMCが放射線照射され、第1のT細胞集団のドナーに対して外因性であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、T細胞が腫瘍浸潤リンパ球(TIL)であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、T細胞が骨髄浸潤リンパ球(MIL)であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、T細胞が末梢血リンパ球(PBL)であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第1のT細胞集団がドナーの全血からの分離によって取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第1のT細胞集団がドナーのアフェレーシス産物からの分離によって取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第1のT細胞集団が、T細胞表現型の正または負の選択によってドナーの全血またはアフェレーシス産物から分離されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、T細胞表現型がCD3+及びCD45+であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第1のT細胞集団のプライミングによる第1の拡張を行う前に、T細胞がNK細胞から分離されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。いくつかの実施形態では、T細胞は、第1のT細胞集団からのCD3-CD56+細胞の除去によって、第1のT細胞集団中のNK細胞から分離される。いくつかの実施形態では、CD3-CD56+細胞は、CD3-CD56+細胞画分を除去し、かつ陰性画分を回収するゲーティング戦略を使用して、第1のT細胞集団を細胞選別に供することによって、第1のT細胞集団から除去される。いくつかの実施形態では、前述の方法は、高いNK細胞パーセンテージを特徴とする第1のT細胞集団におけるT細胞の拡張のために利用される。いくつかの実施形態では、前述の方法は、高いCD3-CD56+細胞パーセンテージを特徴とする第1のT細胞集団におけるT細胞の拡張のために利用される。いくつかの実施形態では、前述の方法は、多数のNK細胞の存在を特徴とする腫瘍組織におけるT細胞の拡張のために利用される。いくつかの実施形態では、前述の方法は、多数のCD3-CD56+細胞を特徴とする腫瘍組織におけるT細胞の拡張のために利用される。いくつかの実施形態では、前述の方法は、多数のNK細胞の存在を特徴とする腫瘍に罹患している患者から取得された腫瘍組織におけるT細胞の拡張のために利用される。いくつかの実施形態では、前述の方法は、多数のCD3-CD56+細胞の存在を特徴とする腫瘍に罹患している患者から取得された腫瘍組織におけるT細胞の拡張のために利用される。いくつかの実施形態では、前述の方法は、卵巣癌に罹患している患者から取得された腫瘍組織におけるT細胞の拡張のために利用される。
いくつかの実施形態では、本発明は、第1のT細胞集団由来の正確にまたは約1×107T細胞が容器内に播種されて、かかる容器内で一次の第1の拡張を開始するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第1のT細胞集団が複数の容器に分配され、各容器内で、第1のT細胞集団由来の正確にまたは約1×107T細胞が播種されて、かかる容器内で一次の第1の拡張を開始するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、ステップ(c)において採取された第2のT細胞集団が治療的TIL集団であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第1のT細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の1つ以上の小生検(例えば、パンチ生検を含む)、コア生検、コア針生検または細針吸引物から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第1のT細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の1~20個の小生検(例えば、パンチ生検を含む)、コア生検、コア針生検または細針吸引物から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第1のT細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の1~10個の小生検(例えば、パンチ生検を含む)、コア生検、コア針生検または細針吸引物から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第1のT細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の小生検(例えば、パンチ生検を含む)、コア生検、コア針生検または細針吸引物から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第1のT細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10個の小生検(例えば、パンチ生検を含む)、コア生検、コア針生検または細針吸引物から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第1のT細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の1つ以上のコア生検から取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第1のT細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の1~20個のコア生検から取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第1のT細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の1~10個のコア生検から取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第1のT細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個のコア生検から取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第1のT細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10個のコア生検から取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第1のT細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の1つ以上の細針吸引物から取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第1のT細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の1~20個の細針吸引物から取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第1のT細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の1~10個の細針吸引物から取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第1のT細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の細針吸引物から取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第1のT細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10個の細針吸引物から取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第1のT細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の1つ以上の小生検(例えば、パンチ生検を含む)から取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第1のT細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の1~20個の小生検(例えば、パンチ生検を含む)から取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第1のT細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の1~10個の小生検(例えば、パンチ生検を含む)から取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第1のT細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個の小生検(例えば、パンチ生検を含む)から取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第1のT細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10個の小生検(例えば、パンチ生検を含む)から取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第1のT細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の1つ以上のコア針生検から取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第1のT細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の1~20個のコア針生検から取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第1のT細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の1~10個のコア針生検から取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第1のT細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20個のコア針生検から取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第1のT細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10個のコア針生検から取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球(TIL)を治療的TIL集団に拡張するための方法であって、i)IL-2を含む第1の細胞培養倍地中で腫瘍試料を約3日間培養することによって対象における腫瘍の1つ以上の小生検、コア生検、または針生検から得られた腫瘍試料から第1のTIL集団を取得及び/または受容することと、(ii)IL-2、OKT-3、及び抗原提示細胞(APC)を含む第2の細胞培養倍地中で第1のTIL集団を培養することによってプライミングによる第1の拡張を行い、第2のTIL集団を産生することであって、プライミングによる第1の拡張が第1のガス透過性表面積を含む容器内で行われ、プライミングによる第1の拡張が約7日または8日間の第1の期間行われて、第2のTIL集団が得られ、第2のTIL集団は第1のTIL集団よりも数が多い、第2のTIL集団を産生することと、(iii)第2のTIL集団の第2の細胞培養倍地に追加のIL-2、OKT-3、及びAPCを補充することによって急速な第2の拡張を行い、第3のTIL集団を産生することであって、急速な第2の拡張において添加されるAPCの数が、ステップ(ii)において添加されるAPCの数の少なくとも2倍であり、急速な第2の拡張が約11日間の第2の期間行われて、第3のTIL集団が取得され、第3のTIL集団が治療的TIL集団であり、急速な第2の拡張が第2のガス透過性表面積を含む容器内で行われる、第3のTIL集団を産生することと、(iv)ステップ(iii)から取得され治療的TIL集団を採取することと、(v)ステップ(iv)からの採取されたTIL集団を注入バッグに移すことと、を含む、方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球(TIL)を治療的TIL集団に拡張するための方法であって、(i)IL-2を含む第1の細胞培養倍地中で腫瘍試料を約3日間培養することによって対象における腫瘍の1つ以上の小生検、コア生検、または針生検から取得された腫瘍試料から第1のTIL集団を取得及び/または受容することと、(ii)IL-2、OKT-3、及び抗原提示細胞(APC)を含む第2の細胞培養倍地中で第1のTIL集団を培養することによってプライミングによる第1の拡張を行い、第2のTIL集団を産生することであって、プライミングによる第1の拡張が約7日または8日間の第1の期間行われて、第2のTIL集団が取得され、第2のTIL集団は第1のTIL集団よりも数が多い、第2のTIL集団を産生することと、(iii)第2のTIL集団を、IL-2、OKT-3、及びAPCを含む第3の細胞培養培地と接触させることによって急速な第2の拡張を行い、第3のTIL集団を産生することであって、急速な第2の拡張が約11日間の第2の期間行われて、第3のTIL集団が取得され、第3のTIL集団が治療的TIL集団である、第3のTIL集団を産生することと、(iv)ステップ(iii)から取得された治療的TIL集団を採取することと、を含む、方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第2の期間の5日目の後に、培養物が2つ以上の継代培養物に分割され、各継代培養物に追加量の第3の培養培地が補充され、約6日間培養されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第2の期間の5日目の後に、培養物が2つ以上の継代培養物に分割され、各継代培養物にIL-2を含む第4の培養培地が補充され、約6日間培養されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、第2の期間の5日目の後に、培養物が最大5つの継代培養物に分割されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、方法におけるすべてのステップが約24日で完了するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、方法におけるすべてのステップが約22日で完了するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、(i)第1のT細胞集団を培養することによって、ドナーにおける腫瘍の1つ以上の小生検、コア生検、または針生検から取得された腫瘍細胞由来の第1のT細胞集団のプライミングによる第1の拡張を行って成長をもたらし、第1のT細胞集団の活性化をプライミングすることと、(ii)ステップ(a)においてプライミングされた第1のT細胞集団の活性化が減衰し始めた後に、第1のT細胞集団を培養することによって第1のT細胞集団の急速な第2の拡張を行って成長をもたらし、第1のT細胞集団の活性化を促進して第2のT細胞集団を取得することと、(iv)第2のT細胞集団を採取することと、を含む、T細胞を拡張する方法を提供する。いくつかの実施形態では、腫瘍試料は、複数のコア生検から得られる。いくつかの実施形態では、複数のコア生検は、2、3、4、5、6、7、8、9及び10個のコア生検からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、本発明は、T細胞またはTILが腫瘍消化物から取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載される方法。いくつかの実施形態では、腫瘍消化物は、例えば、RPMI1640、2mM GlutaMAX、10mg/mLゲンタマイシン、30U/mL DNase、及び1.0mg/mLコラゲナーゼであるが、これらに限定されない酵素培地中で腫瘍をインキュベートすること、続いて、機械的解離(GentleMACS,Miltenyi Biotec,Auburn,CA)によって生成される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、コラゲナーゼ(任意のブレンドまたはタイプのコラゲナーゼを含む)、Accutase(商標)、Accumax(商標)、ヒアルロニダーゼ、中性プロテアーゼ(ディスパーゼ)、キモトリプシン、キモパパイン、トリプシン、カゼイナーゼ、エラスターゼ、パパイン、プロテアーゼタイプXIV(プロナーゼ)、デオキシリボヌクレアーゼI( DNase)、トリプシン阻害剤、任意の他の解離酵素またはタンパク質分解酵素、及びこれらの任意の組み合わせ等の1つ以上の解離(消化)酵素を含むが、これらに限定されない腫瘍解離酵素混合物の中に配置される。他の実施形態では、腫瘍は、コラゲナーゼ(任意のブレンドまたはタイプのコラゲナーゼを含む)、中性プロテアーゼ(ディスパーゼ)及びデオキシリボヌクレアーゼI(DNase)を含む腫瘍解離酵素混合物中に配置される。
VI.薬学的組成物、投与量、及び投与レジメン
いくつかの実施形態では、本開示の方法を使用して拡張及び/または遺伝子修飾された(CCRを発現するように遺伝子修飾されたTIL、MIL、またはPBLを含む)TIL、MIL、またはPBLは、薬学的組成物として患者に投与される。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、滅菌緩衝液中のTIL懸濁液である。本開示のPBMCを使用して拡張されたTILは、当該技術分野で知られている任意の好適な経路によって投与され得る。いくつかの実施形態では、T細胞は、単回の動脈内または静脈内注入として投与され、これは、好ましくは、およそ30~60分続く。他の好適な投与経路には、腹腔内、髄腔内、及びリンパ内投与が含まれる。
いくつかの実施形態では、本開示の方法を使用して拡張及び/または遺伝子修飾された(CCRを発現するように遺伝子修飾されたTIL、MIL、またはPBLを含む)TIL、MIL、またはPBLは、薬学的組成物として患者に投与される。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、滅菌緩衝液中のTIL懸濁液である。本開示のPBMCを使用して拡張されたTILは、当該技術分野で知られている任意の好適な経路によって投与され得る。いくつかの実施形態では、T細胞は、単回の動脈内または静脈内注入として投与され、これは、好ましくは、およそ30~60分続く。他の好適な投与経路には、腹腔内、髄腔内、及びリンパ内投与が含まれる。
任意の好適な用量のTILが投与され得る。いくつかの実施形態では、特にがんがNSCLCまたは黒色腫である場合、約2.3×1010~約13.7×1010のTILが投与され、平均約7.8×1010のTILである。いくつかの実施形態では、約1.2×1010~約4.3×1010のTILが投与される。いくつかの実施形態では、約3×1010~約12×1010のTILが投与される。いくつかの実施形態では、約4×1010~約10×1010のTILが投与される。いくつかの実施形態では、約5×1010~約8×1010のTILが投与される。いくつかの実施形態では、約6×1010~約8×1010のTILが投与される。いくつかの実施形態では、約7×1010~約8×1010のTILが投与される。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約2.3×1010~約13.7×1010である。いくつかの実施形態では、特にがんが黒色腫である場合、治療上有効な投与量は、約7.8×1010のTILである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約1.2×1010~約4.3×1010のTILである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約3×1010~約12×1010のTILである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約4×1010~約10×1010のTILである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約5×1010~約8×1010のTILである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約6×1010~約8×1010のTILである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約7×1010~約8×1010のTILである。
いくつかの実施形態では、本発明の薬学的組成物で提供されるTILの数は、約1×106、2×106、3×106、4×106、5×106、6×106、7×106、8×106、9×106、1×107、2×107、3×107、4×107、5×107、6×107、7×107、8×107、9×107、1×108、2×108、3×108、4×108、5×108、6×108、7×108、8×108、9×108、1×109、2×109、3×109、4×109、5×109、6×109、7×109、8×109、9×109、1×1010、2×1010、3×1010、4×1010、5×1010、6×1010、7×1010、8×1010、9×1010、1×1011、2×1011、3×1011、4×1011、5×1011、6×1011、7×1011、8×1011、9×1011、1×1012、2×1012、3×1012、4×1012、5×1012、6×1012、7×1012、8×1012、9×1012、1×1013、2×1013、3×1013、4×1013、5×1013、6×1013、7×1013、8×1013、及び9×1013である。いくつかの実施形態では、本発明の薬学的組成物で提供されるTILの数は、1×106~5×106、5×106~1×107、1×107~5×107、5×107~1×108、1×108~5×108、5×108~1×109、1×109~5×109、5×109~1×1010、1×1010~5×1010、5×1010~1×1011、5×1011~1×1012、1×1012~5×1012、及び5×1012~1×1013の範囲内である。
いくつかの実施形態では、本発明の薬学的組成物中に提供されるTILの濃度は、例えば、薬学的組成物の100%、90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%、0.4%、0.3%、0.2%、0.1%、0.09%、0.08%、0.07%、0.06%、0.05%、0.04%、0.03%、0.02%、0.01%、0.009%、0.008%、0.007%、0.006%、0.005%、0.004%、0.003%、0.002%、0.001%、0.0009%、0.0008%、0.0007%、0.0006%、0.0005%、0.0004%、0.0003%、0.0002%、または0.0001%w/w、w/v、またはv/v未満である。
いくつかの実施形態では、本発明の薬学的組成物中に提供されるTILの濃度は、薬学的組成物の90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、20%、19.75%、19.50%、19.25%、19%、18.75%、18.50%、18.25%、18%、17.75%、17.50%、17.25%、17%、16.75%、16.50%、16.25%、16%、15.75%、15.50%、15.25%、15%、14.75%、14.50%、14.25%、14%、13.75%、13.50%、13.25%、13%、12.75%、12.50%、12.25%、12%、11.75%、11.50%、11.25%、11%、10.75%、10.50%、10.25%、10%、9.75%、9.50%、9.25%、9%、8.75%、8.50%、8.25%、8%、7.75%、7.50%、7.25%、7%、6.75%、6.50%、6.25%、6%、5.75%、5.50%、5.25%、5%、4.75%、4.50%、4.25%、4%、3.75%、3.50%、3.25%、3%、2.75%、2.50%、2.25%、2%、1.75%、1.50%、125%、1%、0.5%、0.4%、0.3%、0.2%、0.1%、0.09%、0.08%、0.07%、0.06%、0.05%、0.04%、0.03%、0.02%、0.01%、0.009%、0.008%、0.007%、0.006%、0.005%、0.004%、0.003%、0.002%、0.001%、0.0009%、0.0008%、0.0007%、0.0006%、0.0005%、0.0004%、0.0003%、0.0002%、または0.0001%w/w、w/v、またはv/v超である。
いくつかの実施形態では、本発明の薬学的組成物中に提供されるTILの濃度は、薬学的組成物の約0.0001%~約50%、約0.001%~約40%、約0.01%~約30%、約0.02%~約29%、約0.03%~約28%、約0.04%~約27%、約0.05%~約26%、約0.06%~約25%、約0.07%~約24%、約0.08%~約23%、約0.09%~約22%、約0.1%~約21%、約0.2%~約20%、約0.3%~約19%、約0.4%~約18%、約0.5%~約17%、約0.6%~約16%、約0.7%~約15%、約0.8%~約14%、約0.9%~約12%、または約1%~約10%w/w、w/v、またはv/vの範囲内である。
いくつかの実施形態では、本発明の薬学的組成物中に提供されるTILの濃度は、薬学的組成物の約0.001%~約10%、約0.01%~約5%、約0.02%~約4.5%、約0.03%~約4%、約0.04%~約3.5%、約0.05%~約3%、約0.06%~約2.5%、約0.07%~約2%、約0.08%~約1.5%、約0.09%~約1%、約0.1%~約0.9%w/w、w/v、またはv/vの範囲内である。
いくつかの実施形態では、本発明の薬学的組成物中に提供されるTILの量は、10g、9.5g、9.0g、8.5g、8.0g、7.5g、7.0g、6.5g、6.0g、5.5g、5.0g、4.5g、4.0g、3.5g、3.0g、2.5g、2.0g、1.5g、1.0g、0.95g、0.9g、0.85g、0.8g、0.75g、0.7g、0.65g、0.6g、0.55g、0.5g、0.45g、0.4g、0.35g、0.3g、0.25g、0.2g、0.15g、0.1g、0.09g、0.08g、0.07g、0.06g、0.05g、0.04g、0.03g、0.02g、0.01g、0.009g、0.008g、0.007g、0.006g、0.005g、0.004g、0.003g、0.002g、0.001g、0.0009g、0.0008g、0.0007g、0.0006g、0.0005g、0.0004g、0.0003g、0.0002g、または0.0001g以下である。
いくつかの実施形態では、本発明の薬学的組成物中に提供されるTILの量は、0.0001g、0.0002g、0.0003g、0.0004g、0.0005g、0.0006g、0.0007g、0.0008g、0.0009g、0.001g、0.0015g、0.002g、0.0025g、0.003g、0.0035g、0.004g、0.0045g、0.005g、0.0055g、0.006g、0.0065g、0.007g、0.0075g、0.008g、0.0085g、0.009g、0.0095g、0.01g、0.015g、0.02g、0.025g、0.03g、0.035g、0.04g、0.045g、0.05g、0.055g、0.06g、0.065g、0.07g、0.075g、0.08g、0.085g、0.09g、0.095g、0.1g、0.15g、0.2g、0.25g、0.3g、0.35g、0.4g、0.45g、0.5g、0.55g、0.6g、0.65g、0.7g、0.75g、0.8g、0.85g、0.9g、0.95g、1g、1.5g、2g、2.5、3g、3.5、4g、4.5g、5g、5.5g、6g、6.5g、7g、7.5g、8g、8.5g、9g、9.5g、または10g超である。
本発明の薬学的組成物中に提供されるTILは、広い投与量範囲にわたって有効である。正確な投与量は、投与経路、化合物が投与される形態、治療される対象の性別及び年齢、治療される対象の体重、ならびに主治医の選好及び経験に依存するであろう。適切な場合、TILの臨床的に確立された投与量が使用される場合もある。TILの投与量などの本明細書の方法を使用して投与される薬学的組成物の量は、治療されるヒトまたは哺乳動物、障害または状態の重症度、投与速度、医薬品有効成分の性質、及び処方医師の裁量に依存するであろう。
いくつかの実施形態では、TILは、単回用量で投与され得る。かかる投与は、注射、例えば、静脈内注射によるものであり得る。いくつかの実施形態では、TILは、複数回用量で投与され得る。投薬は、1年に1回、2回、3回、4回、5回、6回、または6回超であり得る。投薬は、月1回、2週間に1回、週1回、または隔日に1回であり得る。TILの投与は、必要な限り継続することができる。
いくつかの実施形態では、TILの有効な投与量は、約1×106、2×106、3×106、4×106、5×106、6×106、7×106、8×106、9×106、1×107、2×107、3×107、4×107、5×107、6×107、7×107、8×107、9×107、1×108、2×108、3×108、4×108、5×108、6×108、7×108、8×108、9×108、1×109、2×109、3×109、4×109、5×109、6×109、7×109、8×109、9×109、1×1010、2×1010、3×1010、4×1010、5×1010、6×1010、7×1010、8×1010、9×1010、1×1011、2×1011、3×1011、4×1011、5×1011、6×1011、7×1011、8×1011、9×1011、1×1012、2×1012、3×1012、4×1012、5×1012、6×1012、7×1012、8×1012、9×1012、1×1013、2×1013、3×1013、4×1013、5×1013、6×1013、7×1013、8×1013、及び9×1013である。いくつかの実施形態では、TILの有効な投与量は、1×106~5×106、5×106~1×107、1×107~5×107、5×107~1×108、1×108~5×108、5×108~1×109、1×109~5×109、5×109~1×1010、1×1010~5×1010、5×1010~1×1011、5×1011~1×1012、1×1012~5×1012、及び5×1012~1×1013の範囲内である。
いくつかの実施形態では、TILの有効な投与量は、約0.01mg/kg~約4.3mg/kg、約0.15mg/kg~約3.6mg/kg、約0.3mg/kg~約3.2mg/kg、約0.35mg/kg~約2.85mg/kg、約0.15mg/kg~約2.85mg/kg、約0.3mg~約2.15mg/kg、約0.45mg/kg~約1.7mg/kg、約0.15mg/kg~約1.3mg/kg、約0.3mg/kg~約1.15mg/kg、約0.45mg/kg~約1mg/kg、約0.55mg/kg~約0.85mg/kg、約0.65mg/kg~約0.8mg/kg、約0.7mg/kg~約0.75mg/kg、約0.7mg/kg~約2.15mg/kg、約0.85mg/kg~約2mg/kg、約1mg/kg~約1.85mg/kg、約1.15mg/kg~約1.7mg/kg、約1.3mg/kg~約1.6mg/kg、約1.35mg/kg~約1.5mg/kg、約2.15mg/kg~約3.6mg/kg、約2.3mg/kg~約3.4mg/kg、約2.4mg/kg~約3.3mg/kg、約2.6mg/kg~約3.15mg/kg、約2.7mg/kg~約3mg/kg、約2.8mg/kg~約3mg/kg、または約2.85mg/kg~約2.95mg/kgの範囲内である。
いくつかの実施形態では、TILの有効な投与量は、約1mg~約500mg、約10mg~約300mg、約20mg~約250mg、約25mg~約200mg、約1mg~約50mg、約5mg~約45mg、約10mg~約40mg、約15mg~約35mg、約20mg~約30mg、約23mg~約28mg、約50mg~約150mg、約60mg~約140mg、約70mg~約130mg、約80mg~約120mg、約90mg~約110mg、または約95mg~約105mg、約98mg~約102mg、約150mg~約250mg、約160mg~約240mg、約170mg~約230mg、約180mg~約220mg、約190mg~約210mg、約195mg~約205mg、または約198~約207mgの範囲内である。
TILの有効量は、鼻腔内経路及び経皮経路を含む、同様の有用性を有する薬剤の認められた投与様式のうちのいずれかによって、動脈内注射によって、静脈内、腹腔内、非経口、筋肉内、皮下、局所、移植によって、または吸入によって、単回用量または複数回用量のいずれかで投与され得る。
いくつかの実施形態では、本発明は、上記の前段落のうちのいずれかに記載の治療的TIL集団を含む注入バッグを提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、上記の前段落のうちのいずれかに記載の治療的TIL集団及び薬学的に許容される担体を含む腫瘍浸潤リンパ球(TIL)組成物を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、上記の前段落のうちのいずれかに記載のTIL組成物を含む注入バッグを提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、上記の前段落のうちのいずれかに記載の治療的TIL集団の凍結保存された調製物を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、上記の前段落のうちのいずれかに記載の治療的TIL集団及び凍結保存された培地を含む腫瘍浸潤リンパ球(TIL)組成物を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、凍結保存培地がDMSOを含むように修正された、上記の前段落のうちのいずれかに記載のTIL組成物を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、凍結保存培地が7~10%のDMSOを含むように修正された、上記の前段落のうちのいずれかに記載のTIL組成物を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、上記の前段落のうちのいずれかに記載のTIL組成物の凍結保存された調製物を提供する。
いくつかの実施形態では、本開示の方法を使用して拡張されたTILは、薬学的組成物として患者に投与される。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、滅菌緩衝液中のTIL懸濁液である。本開示のPBMCを使用して拡張されたTILは、当該技術分野で知られている任意の好適な経路によって投与され得る。いくつかの実施形態では、T細胞は、単回の動脈内または静脈内注入として投与され、これは、好ましくは、およそ30~60分続く。他の好適な投与経路には、腹腔内、髄腔内、及びリンパ内投与が含まれる。
任意の好適な用量のTILが投与され得る。いくつかの実施形態では、特にがんがNSCLCである場合、約2.3×1010~約13.7×1010のTILが投与され、平均は約7.8×1010のTILである。いくつかの実施形態では、約1.2×1010~約4.3×1010のTILが投与される。いくつかの実施形態では、約3×1010~約12×1010のTILが投与される。いくつかの実施形態では、約4×1010~約10×1010のTILが投与される。いくつかの実施形態では、約5×1010~約8×1010のTILが投与される。いくつかの実施形態では、約6×1010~約8×1010のTILが投与される。いくつかの実施形態では、約7×1010~約8×1010のTILが投与される。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約2.3×1010~約13.7×1010である。いくつかの実施形態では、特にがんがNSCLCである場合、治療上有効な投与量は、約7.8×1010TILである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約1.2×1010~約4.3×1010TILである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約3×1010~約12×1010TILである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約4×1010~約10×1010TILである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約5×1010~約8×1010TILである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約6×1010~約8×1010TILである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約7×1010~約8×1010TILである。
いくつかの実施形態では、本発明の薬学的組成物で提供されるTILの数は、約1×106、2×106、3×106、4×106、5×106、6×106、7×106、8×106、9×106、1×107、2×107、3×107、4×107、5×107、6×107、7×107、8×107、9×107、1×108、2×108、3×108、4×108、5×108、6×108、7×108、8×108、9×108、1×109、2×109、3×109、4×109、5×109、6×109、7×109、8×109、9×109、1×1010、2×1010、3×1010、4×1010、5×1010、6×1010、7×1010、8×1010、9×1010、1×1011、2×1011、3×1011、4×1011、5×1011、6×1011、7×1011、8×1011、9×1011、1×1012、2×1012、3×1012、4×1012、5×1012、6×1012、7×1012、8×1012、9×1012、1×1013、2×1013、3×1013、4×1013、5×1013、6×1013、7×1013、8×1013、及び9×1013である。いくつかの実施形態では、本発明の薬学的組成物で提供されるTILの数は、1×106~5×106、5×106~1×107、1×107~5×107、5×107~1×108、1×108~5×108、5×108~1×109、1×109~5×109、5×109~1×1010、1×1010~5×1010、5×1010~1×1011、5×1011~1×1012、1×1012~5×1012、及び5×1012~1×1013の範囲内である。
いくつかの実施形態では、本発明の薬学的組成物中に提供されるTILの濃度は、例えば、薬学的組成物の100%、90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%、0.4%、0.3%、0.2%、0.1%、0.09%、0.08%、0.07%、0.06%、0.05%、0.04%、0.03%、0.02%、0.01%、0.009%、0.008%、0.007%、0.006%、0.005%、0.004%、0.003%、0.002%、0.001%、0.0009%、0.0008%、0.0007%、0.0006%、0.0005%、0.0004%、0.0003%、0.0002%、または0.0001%w/w、w/v、またはv/v未満である。
いくつかの実施形態では、本発明の薬学的組成物中に提供されるTILの濃度は、薬学的組成物の90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、20%、19.75%、19.50%、19.25%、19%、18.75%、18.50%、18.25%、18%、17.75%、17.50%、17.25%、17%、16.75%、16.50%、16.25%、16%、15.75%、15.50%、15.25%、15%、14.75%、14.50%、14.25%、14%、13.75%、13.50%、13.25%、13%、12.75%、12.50%、12.25%、12%、11.75%、11.50%、11.25%、11%、10.75%、10.50%、10.25%、10%、9.75%、9.50%、9.25%、9%、8.75%、8.50%、8.25%、8%、7.75%、7.50%、7.25%、7%、6.75%、6.50%、6.25%、6%、5.75%、5.50%、5.25%、5%、4.75%、4.50%、4.25%、4%、3.75%、3.50%、3.25%、3%、2.75%、2.50%、2.25%、2%、1.75%、1.50%、125%、1%、0.5%、0.4%、0.3%、0.2%、0.1%、0.09%、0.08%、0.07%、0.06%、0.05%、0.04%、0.03%、0.02%、0.01%、0.009%、0.008%、0.007%、0.006%、0.005%、0.004%、0.003%、0.002%、0.001%、0.0009%、0.0008%、0.0007%、0.0006%、0.0005%、0.0004%、0.0003%、0.0002%、または0.0001%w/w、w/v、またはv/v超である。
いくつかの実施形態では、本発明の薬学的組成物中に提供されるTILの濃度は、薬学的組成物の約0.0001%~約50%、約0.001%~約40%、約0.01%~約30%、約0.02%~約29%、約0.03%~約28%、約0.04%~約27%、約0.05%~約26%、約0.06%~約25%、約0.07%~約24%、約0.08%~約23%、約0.09%~約22%、約0.1%~約21%、約0.2%~約20%、約0.3%~約19%、約0.4%~約18%、約0.5%~約17%、約0.6%~約16%、約0.7%~約15%、約0.8%~約14%、約0.9%~約12%、または約1%~約10%w/w、w/v、またはv/vの範囲内である。
いくつかの実施形態では、本発明の薬学的組成物中に提供されるTILの濃度は、薬学的組成物の約0.001%~約10%、約0.01%~約5%、約0.02%~約4.5%、約0.03%~約4%、約0.04%~約3.5%、約0.05%~約3%、約0.06%~約2.5%、約0.07%~約2%、約0.08%~約1.5%、約0.09%~約1%、約0.1%~約0.9%w/w、w/v、またはv/vの範囲内である。
いくつかの実施形態では、本発明の薬学的組成物中に提供されるTILの量は、10g、9.5g、9.0g、8.5g、8.0g、7.5g、7.0g、6.5g、6.0g、5.5g、5.0g、4.5g、4.0g、3.5g、3.0g、2.5g、2.0g、1.5g、1.0g、0.95g、0.9g、0.85g、0.8g、0.75g、0.7g、0.65g、0.6g、0.55g、0.5g、0.45g、0.4g、0.35g、0.3g、0.25g、0.2g、0.15g、0.1g、0.09g、0.08g、0.07g、0.06g、0.05g、0.04g、0.03g、0.02g、0.01g、0.009g、0.008g、0.007g、0.006g、0.005g、0.004g、0.003g、0.002g、0.001g、0.0009g、0.0008g、0.0007g、0.0006g、0.0005g、0.0004g、0.0003g、0.0002g、または0.0001g以下である。
いくつかの実施形態では、本発明の薬学的組成物中に提供されるTILの量は、0.0001g、0.0002g、0.0003g、0.0004g、0.0005g、0.0006g、0.0007g、0.0008g、0.0009g、0.001g、0.0015g、0.002g、0.0025g、0.003g、0.0035g、0.004g、0.0045g、0.005g、0.0055g、0.006g、0.0065g、0.007g、0.0075g、0.008g、0.0085g、0.009g、0.0095g、0.01g、0.015g、0.02g、0.025g、0.03g、0.035g、0.04g、0.045g、0.05g、0.055g、0.06g、0.065g、0.07g、0.075g、0.08g、0.085g、0.09g、0.095g、0.1g、0.15g、0.2g、0.25g、0.3g、0.35g、0.4g、0.45g、0.5g、0.55g、0.6g、0.65g、0.7g、0.75g、0.8g、0.85g、0.9g、0.95g、1g、1.5g、2g、2.5、3g、3.5、4g、4.5g、5g、5.5g、6g、6.5g、7g、7.5g、8g、8.5g、9g、9.5g、または10g超である。
本発明の薬学的組成物中に提供されるTILは、広い投与量範囲にわたって有効である。正確な投与量は、投与経路、化合物が投与される形態、治療される対象の性別及び年齢、治療される対象の体重、ならびに主治医の選好及び経験に依存するであろう。適切な場合、TILの臨床的に確立された投与量が使用される場合もある。TILの投与量などの本明細書の方法を使用して投与される薬学的組成物の量は、治療されるヒトまたは哺乳動物、障害または状態の重症度、投与速度、医薬品有効成分の性質、及び処方医師の裁量に依存するであろう。
いくつかの実施形態では、TILは、単回用量で投与され得る。かかる投与は、注射、例えば、静脈内注射によるものであり得る。いくつかの実施形態では、TILは、複数回用量で投与され得る。投薬は、1年に1回、2回、3回、4回、5回、6回、または6回超であり得る。投薬は、月1回、2週間に1回、週1回、または隔日に1回であり得る。TILの投与は、必要な限り継続することができる。
いくつかの実施形態では、TILの有効な投与量は、約1×106、2×106、3×106、4×106、5×106、6×106、7×106、8×106、9×106、1×107、2×107、3×107、4×107、5×107、6×107、7×107、8×107、9×107、1×108、2×108、3×108、4×108、5×108、6×108、7×108、8×108、9×108、1×109、2×109、3×109、4×109、5×109、6×109、7×109、8×109、9×109、1×1010、2×1010、3×1010、4×1010、5×1010、6×1010、7×1010、8×1010、9×1010、1×1011、2×1011、3×1011、4×1011、5×1011、6×1011、7×1011、8×1011、9×1011、1×1012、2×1012、3×1012、4×1012、5×1012、6×1012、7×1012、8×1012、9×1012、1×1013、2×1013、3×1013、4×1013、5×1013、6×1013、7×1013、8×1013、及び9×1013である。いくつかの実施形態では、TILの有効な投与量は、1×106~5×106、5×106~1×107、1×107~5×107、5×107~1×108、1×108~5×108、5×108~1×109、1×109~5×109、5×109~1×1010、1×1010~5×1010、5×1010~1×1011、5×1011~1×1012、1×1012~5×1012、及び5×1012~1×1013の範囲内である。
いくつかの実施形態では、TILの有効な投与量は、約0.01mg/kg~約4.3mg/kg、約0.15mg/kg~約3.6mg/kg、約0.3mg/kg~約3.2mg/kg、約0.35mg/kg~約2.85mg/kg、約0.15mg/kg~約2.85mg/kg、約0.3mg~約2.15mg/kg、約0.45mg/kg~約1.7mg/kg、約0.15mg/kg~約1.3mg/kg、約0.3mg/kg~約1.15mg/kg、約0.45mg/kg~約1mg/kg、約0.55mg/kg~約0.85mg/kg、約0.65mg/kg~約0.8mg/kg、約0.7mg/kg~約0.75mg/kg、約0.7mg/kg~約2.15mg/kg、約0.85mg/kg~約2mg/kg、約1mg/kg~約1.85mg/kg、約1.15mg/kg~約1.7mg/kg、約1.3mg/kg~約1.6mg/kg、約1.35mg/kg~約1.5mg/kg、約2.15mg/kg~約3.6mg/kg、約2.3mg/kg~約3.4mg/kg、約2.4mg/kg~約3.3mg/kg、約2.6mg/kg~約3.15mg/kg、約2.7mg/kg~約3mg/kg、約2.8mg/kg~約3mg/kg、または約2.85mg/kg~約2.95mg/kgの範囲内である。
いくつかの実施形態では、TILの有効な投与量は、約1mg~約500mg、約10mg~約300mg、約20mg~約250mg、約25mg~約200mg、約1mg~約50mg、約5mg~約45mg、約10mg~約40mg、約15mg~約35mg、約20mg~約30mg、約23mg~約28mg、約50mg~約150mg、約60mg~約140mg、約70mg~約130mg、約80mg~約120mg、約90mg~約110mg、または約95mg~約105mg、約98mg~約102mg、約150mg~約250mg、約160mg~約240mg、約170mg~約230mg、約180mg~約220mg、約190mg~約210mg、約195mg~約205mg、または約198~約207mgの範囲内である。
TILの有効量は、鼻腔内経路及び経皮経路を含む、同様の有用性を有する薬剤の認められた投与様式のうちのいずれかによって、動脈内注射によって、静脈内、腹腔内、非経口、筋肉内、皮下、局所、移植によって、または吸入によって、単回用量または複数回用量のいずれかで投与され得る。
VII.患者を治療する方法
治療方法は、最初のTIL収集及びTILの培養から始まる。かかる方法は両方とも、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Jin et al.,J.Immunotherapy,2012,35(3):283-292によって当該技術分野で説明されている。治療方法の実施形態は、実施例を含む以下の節全体に記載されている。
治療方法は、最初のTIL収集及びTILの培養から始まる。かかる方法は両方とも、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Jin et al.,J.Immunotherapy,2012,35(3):283-292によって当該技術分野で説明されている。治療方法の実施形態は、実施例を含む以下の節全体に記載されている。
本明細書に記載の方法に従って、例えば、上記のステップA~Fに記載されるように、または上記のステップA~Fに従って(また例えば、図1及び/または図8に示されるように)産生される拡張TILは、がんを有する患者の治療における特定の用途を見出す(例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Goff,et al.,J.Clinical Oncology,2016,34(20):2389-239、及び補足内容に記載される)。いくつかの実施形態では、TILは、以前に記載されたように、転移性黒色腫の切除された沈着物から増殖された(参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Dudley,et al.,J Immunother.,2003,26:332-342を参照されたい)。新鮮な腫瘍は、滅菌条件下で解剖され得る。代表的な試料は、正式な病理学的分析のために収集され得る。2mm3~3mm3の単一断片が使用され得る。いくつかの実施形態では、患者当たり5、10、15、20、25、または30個の試料が取得される。いくつかの実施形態では、患者当たり20、25、または30個の試料が取得される。いくつかの実施形態では、患者当たり20、22、24、26、または28個の試料が取得される。いくつかの実施形態では、患者当たり24個の試料が取得される。試料は、24ウェルプレートの個々のウェル内に配置され、高用量IL-2(6,000IU/mL)を含む成長培地中で維持され、腫瘍の破壊及び/またはTILの増殖について監視され得る。処理後に生細胞が残っている腫瘍は、本明細書に記載されるように、単一細胞懸濁液中に酵素的に消化され、凍結保存され得る。
いくつかの実施形態では、成功裏に成長したTILは、表現型分析(CD3、CD4、CD8、及びCD56)のためにサンプリングされ、利用可能な場合、自己腫瘍に対して試験され得る。一晩の共培養によりインターフェロンガンマ(IFN-γ)レベルが200pg/mLを超え、バックグラウンドの2倍になった場合、TILは反応性があるとみなされ得る。(Goff,et al.,J Immunother.,2010,33:840-847、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる)。いくつかの実施形態では、自己反応性または十分な成長パターンの証拠を有する培養物は、急速拡張(REP)と称されることもある第2の拡張を含む、第2の拡張(例えば、図1及び/または図8のステップDに従って提供される第2の拡張)のために選択され得る。いくつかの実施形態では、高い自己反応性(例えば、第2の拡張中の高い増殖)を有する拡張TILが、追加の第2の拡張のために選択される。いくつかの実施形態では、高い自己反応性(例えば、図1及び/または図8のステップDで提供されるような第2の拡張中の高い増殖)を有するTILが、図1及び/または図8のステップDに従って、追加の第2の拡張のために選択される。
注入バッグTILの凍結保存試料の細胞表現型は、表面マーカーCD3、CD4、CD8、CCR7、及びCD45RA(BD BioSciences)のフローサイトメトリー(例えば、FlowJo)、ならびに本明細書に記載の方法のうちのいずれかによって分析され得る。血清サイトカインは、標準的な酵素結合免疫吸着アッセイ技術を使用することにより測定された。血清IFN-gの上昇は、100pg/mL超及び4 3ベースラインレベルを超えると定義された。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法、例えば図1及び/または図8に例示される方法によって産生されるTILは、TILの臨床効果の驚くべき改善を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法、例えば図1及び/または図8に例示される方法によって産生されるTILは、例えば、図1及び/または図8に例示されるもの以外の方法を含む、本明細書に記載されるもの以外の方法によって産生されるTILと比較して、増加した臨床効果を示す。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるもの以外の方法は、プロセス1C及び/または第1世代(Gen1)と称される方法を含む。いくつかの実施形態では、増加した有効性は、DCR、ORR、及び/または他の臨床応答によって測定される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法、例えば図1に例示される方法によって産生されるTILは、例えば、図1及び/または図8に例示されるもの以外の方法を含む、本明細書に記載されるもの以外の方法によって産生されるTILと比較して、同様の応答時間及び安全性プロファイルを示す。
いくつかの実施形態では、IFN-ガンマ(IFN-γ)は、治療有効性及び/または増加した臨床的有効性を示す。いくつかの実施形態では、TILで治療された対象の血液中のIFN-γは、活性なTILを示す。いくつかの実施形態では、IFN-γ産生の効力アッセイが用いられる。IFN-γ産生は、細胞傷害能の別の尺度である。IFN-γ産生は、例えば、図1及び/または図8に記載されるものを含む、本発明の方法によって調製されたTILで治療された対象のエクスビボでの血液、血清、またはTIL中のサイトカインIFN-γのレベルを決定することによって測定することができる。いくつかの実施形態では、IFN-γの増加は、本発明の方法によって産生されたTILで治療された患者における治療有効性を示す。いくつかの実施形態では、IFN-γは、未治療の患者と比較して、及び/または例えば、図1及び/または図8に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたTILで治療された患者と比較して、IFN-γが1倍、2倍、3倍、4倍、または5倍以上増加する。いくつかの実施形態では、IFN-γ分泌は、未治療の患者と比較して、及び/または例えば、図1及び/または図8に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたTILで治療された患者と比較して、1倍増加する。いくつかの実施形態では、IFN-γ分泌は、未治療の患者と比較して、及び/または例えば、図1及び/または図8に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたTILで治療された患者と比較して、2倍増加する。いくつかの実施形態では、IFN-γ分泌は、未治療の患者と比較して、及び/または例えば、図1及び/または図8に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたTILで治療された患者と比較して、3倍増加する。いくつかの実施形態では、IFN-γ分泌は、未治療の患者と比較して、及び/または例えば、図1及び/または図8に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたTILで治療された患者と比較して、4倍増加する。いくつかの実施形態では、IFN-γ分泌は、未治療の患者と比較して、及び/または例えば、図1及び/または図8に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたTILで治療された患者と比較して、5倍増加する。いくつかの実施形態では、IFN-γは、Quantikine ELISAキットを使用して測定される。いくつかの実施形態では、IFN-γは、例えば、図1及び/または図8に記載されるものを含む、本発明の方法によって調製されたTILで治療された対象のエクスビボでのTILにおいて測定される。いくつかの実施形態では、IFN-γは、例えば図1及び/または図8に記載されるものを含む、本発明の方法によって調製されたTILで治療された対象の血液において測定される。いくつかの実施形態では、IFN-γは、例えば、図1及び/または図8に記載されるものを含む、本発明の方法によって調製されたTILで治療された対象のTIL血清において測定される。いくつかの実施形態では、IFN-ガンマ(IFN-γ)は、がんの治療における治療有効性及び/または増加した臨床的有効性を示す。
いくつかの実施形態では、例えば図1及び/または図8のIFN-ガンマ(IFN-γ)に記載されるものを含む、本発明の方法によって調製されるTILは、治療有効性及び/または臨床有効性の増加を示す。いくつかの実施形態では、TILで治療された対象の血液中のIFN-γは、活性なTILを示す。いくつかの実施形態では、IFN-γ産生の効力アッセイが用いられる。IFN-γ産生は、細胞傷害能の別の尺度である。IFN-γ産生は、例えば、図1及び/または図8に記載されるものを含む、本発明の方法によって調製されたTILで治療された対象のエクスビボでの血液、血清、またはTIL中のサイトカインIFN-γのレベルを決定することによって測定することができる。いくつかの実施形態では、IFN-γの増加は、本発明の方法によって産生されたTILで治療された患者における治療有効性を示す。いくつかの実施形態では、IFN-γは、未治療の患者と比較して、及び/または例えば、図1及び/または図8に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたTILで治療された患者と比較して、IFN-γが1倍、2倍、3倍、4倍、または5倍以上増加する。
いくつかの実施形態では、例えば図1及び/または図8に記載されるものを含む、本発明の方法によって調製されるTILは、例えばプロセス1C法と称される方法を含む、図1及び/または図8に例示されていないものを含む他の方法によって産生されるTILと比較して、増加したポリクローン性を示す。いくつかの実施形態では、有意に改善されたポリクローン性及び/または増加したポリクローン性は、治療有効性及び/または増加した臨床的有効性を示す。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、T細胞レパートリーの多様性を指す。いくつかの実施形態では、ポリクローン性の増加は、本発明の方法によって産生されたTILの投与に関する治療有効性を示すことができる。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、例えば、図1及び/または図8に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたTILと比較して、1倍、2倍、10倍、100倍、500倍、または1000倍増加する。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、未治療の患者と比較して、及び/または例えば、図1及び/または図8に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたTILで治療された患者と比較して、1倍増加する。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、未治療の患者と比較して、及び/または例えば、図1及び/または図8に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたTILで治療された患者と比較して、2倍増加する。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、未治療の患者と比較して、及び/または例えば、図1及び/または図8に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたTILで治療された患者と比較して、10倍増加する。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、未治療の患者と比較して、及び/または例えば、図1及び/または図8に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたTILで治療された患者と比較して、100倍増加する。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、未治療の患者と比較して、及び/または例えば、図1及び/または図8に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたTILで治療された患者と比較して、500倍増加する。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、未治療の患者と比較して、及び/または例えば、図1及び/または図8に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたTILで治療された患者と比較して、1000倍増加する。
有効性の尺度には、当該技術分野で知られており、本明細書にも記載されている、疾患制御率(DCR)ならびに全応答率(ORR)が含まれ得る。
いくつかの実施形態では、本発明は、TIL集団でNSCLCを治療する方法を含み、患者は、本開示によるTILの注入前に骨髄非破壊的化学療法で前治療される。いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的化学療法は、シクロホスファミド60mg/kg/日で2日間(TIL注入の27日前及び26日前)、ならびにフルダラビン25mg/m2/日で5日間(TIL注入の27日前~23日前)である。いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的化学療法は、シクロホスファミド60mg/kg/日で2日間(TIL注入の27日前及び26日前)、ならびにフルダラビン25mg/m2/日で3日間(TIL注入の27日前~25日前)である。いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的化学療法は、シクロホスファミド60mg/kg/日で2日間(TIL注入の27日前及び26日前)、続いてフルダラビン25mg/m2/日で3日間(TIL注入の25日前~23日前)である。いくつかの実施形態では、本開示による骨髄非破壊的化学療法及びTIL注入(0日目)後、患者は、生理学的許容範囲まで8時間毎に720,000IU/kgでIL-2の静脈内注入を受ける。
示される疾患または障害の治療、予防、及び/または管理における本明細書に記載の化合物及び化合物の組み合わせの有効性は、ヒト疾患の治療のためのガイダンスを提供する当技術分野で知られている様々なモデルを使用して試験され得る。例えば、肺癌の治療の有効性を決定するためのモデルは、例えば、Meuwissen,et al.,Genes&Development,2005,19,643-664に記載されている。肺癌の治療の有効性を決定するためのモデルは、例えば、Kim,Clin.Exp.Otorhinolaryngol.2009,2,55-60、及びSano,Head Neck Oncol.2009,1,32に記載されている。
いくつかの実施形態では、IFN-ガンマ(IFN-γ)は、NSCLC治療の治療有効性を示す。いくつかの実施形態では、TILで治療された対象の血液中のIFN-γは、活性なTILを示す。いくつかの実施形態では、IFN-γ産生の効力アッセイが用いられる。IFN-γ産生は、細胞傷害能の別の尺度である。IFN-γ産生は、例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に記載される方法を含む、本発明の方法によって調製されたTILで治療された対象の血液中のサイトカインIFN-γのレベルを決定することによって測定され得る。いくつかの実施形態では、本方法によって取得されたTILは、例示された図8(特に、例えば、図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)及び本明細書全体に例示されるようにGen 3プロセスと呼ばれる方法を使用して調製されたTILで治療された対象と比較して、本方法のTILで治療された対象の血液中のIFN-γの増加を提供する。いくつかの実施形態では、IFN-γの増加は、本発明の方法によって産生されたTILで治療された患者における治療有効性を示す。いくつかの実施形態では、IFN-γは、未治療の患者と比較して、及び/または例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたTILで治療された患者と比較して、1倍、2倍、3倍、4倍、または5倍以上増加する。いくつかの実施形態では、IFN-γ分泌は、未治療の患者と比較して、及び/または例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたTILで治療された患者と比較して、1倍増加する。いくつかの実施形態では、IFN-γ分泌は、未治療の患者と比較して、及び/または例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたTILで治療された患者と比較して、2倍増加する。いくつかの実施形態では、IFN-γ分泌は、未治療の患者と比較して、及び/または例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたTILで治療された患者と比較して、3倍増加する。いくつかの実施形態では、IFN-γ分泌は、未治療の患者と比較して、及び/または例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたTILで治療された患者と比較して、4倍増加する。いくつかの実施形態では、IFN-γ分泌は、未治療の患者と比較して、及び/または例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたTILで治療された患者と比較して、5倍増加する。いくつかの実施形態では、IFN-γは、Quantikine ELISAキットを使用して測定される。いくつかの実施形態では、IFN-γは、Quantikine ELISAキットを使用して測定される。いくつかの実施形態では、IFN-γは、本発明の方法によって産生されたTILで治療された患者由来のエクスビボでのTIL中で測定される。いくつかの実施形態では、IFN-γは、本発明の方法によって産生されたTILで治療された患者由来の血液中で測定される。いくつかの実施形態では、IFN-γは、本発明の方法によって産生されたTILで治療された患者由来の血清中で測定される。
いくつかの実施形態では、例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D及び/または図8E及び/または図8F及び/または図8G)に記載される方法を含む、本発明の方法によって調製されたTILは、例えば、プロセス1C法と称される方法などの、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に例示されていないものを含む他の方法によって産生されたTILと比較して、増加したポリクローン性を示す。いくつかの実施形態では、有意に改善されたポリクローン性及び/または増加したポリクローン性は、がん治療に対する治療有効性及び/または増加した臨床的有効性を示す。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、T細胞レパートリーの多様性を指す。いくつかの実施形態では、ポリクローン性の増加は、本発明の方法によって産生されたTILの投与に関する治療有効性を示すことができる。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたTILと比較して、1倍、2倍、10倍、100倍、500倍、または1000倍増加する。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、未治療の患者と比較して、及び/または例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたTILで治療された患者と比較して、1倍増加する。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、未治療の患者と比較して、及び/または例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたTILで治療された患者と比較して、2倍増加する。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、未治療の患者と比較して、及び/または例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたTILで治療された患者と比較して、10倍増加する。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、未治療の患者と比較して、及び/または例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたTILで治療された患者と比較して、100倍増加する。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、未治療の患者と比較して、及び/または例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたTILで治療された患者と比較して、500倍増加する。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、未治療の患者と比較して、及び/または例えば、図8(特に、例えば図8A及び/または図8B及び/または図8C及び/または図8D)に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたTILで治療された患者と比較して、1000倍増加する。
1.NSCLCを治療する方法
本明細書に記載の組成物及び方法は、非小細胞肺癌(NSCLC)を治療するための方法において使用することができ、NSCLCは、抗PD-1または抗PD-L1抗体による治療に対して不応性である。いくつかの実施形態では、NSCLCは、転移性NSCLCである。いくつかの実施形態では、抗PD-1抗体には、例えば、ニボルマブ(BMS-936558,Bristol-Myers Squibb;Opdivo(登録商標))、ペムブロリズマブ(ラムブロリズマブ、MK03475またはMK-3475、Merck;Keytruda(登録商標))、ヒト化抗PD-1抗体JS001(ShangHai JunShi)、モノクローナル抗PD-1抗体TSR-042(Tesaro,Inc.)、ピジリズマブ(抗PD-1 mAb CT-011、Medivation)、抗PD-1モノクローナル抗体BGB-A317(BeiGene)、及び/または抗PD-1抗体SHR-1210(ShangHai HengRui)、ヒトモノクローナル抗体REGN2810(Regeneron)、ヒトモノクローナル抗体MDX-1106(Bristol-Myers Squibb)、及び/またはヒト化抗PD-1 IgG4抗体PDR001(Novartis)が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、PD-1抗体は、クローン:RMP1-14(ラットA)-BioXcellカタログ番号BP0146に由来する。本明細書に記載のステップA~Fに従って産生されたTILとの同時投与方法における使用に好適な他の好適な抗体は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第8,008,449号に開示される抗PD-1抗体である。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、PD-L1に特異的に結合し、PD-1との相互作用を阻害し、それにより、免疫活性を増加させる。PD-L1に結合し、PD-1とPD-L1との間の相互作用を破壊し、抗腫瘍immu2740274ne応答を刺激する当該技術分野で知られている任意の抗体が含まれる。例えば、PD-L1を標的とし、かつ臨床試験中である抗体には、BMS-936559(Bristol-Myers Squibb)及びMPDL3280A(Genentech)が含まれる。PD-L1を標的とする他の好適な抗体は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第7,943,743号に開示されている。PD-1またはPD-L1に結合し、PD-1/PD-L1相互作用を破壊し、抗腫瘍免疫応答を刺激する任意の抗体が含まれることは、当業者には理解されるであろう。
本明細書に記載の組成物及び方法は、非小細胞肺癌(NSCLC)を治療するための方法において使用することができ、NSCLCは、抗PD-1または抗PD-L1抗体による治療に対して不応性である。いくつかの実施形態では、NSCLCは、転移性NSCLCである。いくつかの実施形態では、抗PD-1抗体には、例えば、ニボルマブ(BMS-936558,Bristol-Myers Squibb;Opdivo(登録商標))、ペムブロリズマブ(ラムブロリズマブ、MK03475またはMK-3475、Merck;Keytruda(登録商標))、ヒト化抗PD-1抗体JS001(ShangHai JunShi)、モノクローナル抗PD-1抗体TSR-042(Tesaro,Inc.)、ピジリズマブ(抗PD-1 mAb CT-011、Medivation)、抗PD-1モノクローナル抗体BGB-A317(BeiGene)、及び/または抗PD-1抗体SHR-1210(ShangHai HengRui)、ヒトモノクローナル抗体REGN2810(Regeneron)、ヒトモノクローナル抗体MDX-1106(Bristol-Myers Squibb)、及び/またはヒト化抗PD-1 IgG4抗体PDR001(Novartis)が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、PD-1抗体は、クローン:RMP1-14(ラットA)-BioXcellカタログ番号BP0146に由来する。本明細書に記載のステップA~Fに従って産生されたTILとの同時投与方法における使用に好適な他の好適な抗体は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第8,008,449号に開示される抗PD-1抗体である。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、PD-L1に特異的に結合し、PD-1との相互作用を阻害し、それにより、免疫活性を増加させる。PD-L1に結合し、PD-1とPD-L1との間の相互作用を破壊し、抗腫瘍immu2740274ne応答を刺激する当該技術分野で知られている任意の抗体が含まれる。例えば、PD-L1を標的とし、かつ臨床試験中である抗体には、BMS-936559(Bristol-Myers Squibb)及びMPDL3280A(Genentech)が含まれる。PD-L1を標的とする他の好適な抗体は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第7,943,743号に開示されている。PD-1またはPD-L1に結合し、PD-1/PD-L1相互作用を破壊し、抗腫瘍免疫応答を刺激する任意の抗体が含まれることは、当業者には理解されるであろう。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、抗CTLA-4及び/または抗PD-1ならびに化学療法剤に対して不応性である。いくつかの実施形態では、NSCLCは、抗CTLA-4及び/または抗PD-1ならびに化学療法に対して不応性であり、化学療法剤は、カルボプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセド、シスプラチンである。いくつかの実施形態では、NSCLSは、イピリムマブま(Yervoy(登録商標)などの抗CTLA-4抗体に対して不応性である。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、PD-1(例えば、ペムブロリズマブを含む)と化学療法剤との組み合わせによる治療に対して不応性である。いくつかの実施形態では、化学療法剤(複数可)は、白金ダブレット化学療法剤である。いくつかの実施形態では、白金ダブレット療法は、シスプラチン及びカルボプラチンからなる群から選択される第1の化学療法剤と、ビノレルビン、ゲムシタビン、及びタキサン(例えば、パクリタキセル、ドセタキセル、またはナブ-パクリタキセルを含む)からなる群から選択される第2の化学療法剤と、を含む。いくつかの実施形態では、白金ダブレット化学療法剤は、ペメトレキセドと組み合わされている。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、抗PD-1及び化学療法剤を含む併用治療または併用療法に対して不応性である。いくつかの実施形態では、抗PD-1または抗PD-L1抗体は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、JS001、TSR-042、ピジリズマブ、BGB-A317、SHR-1210、REGN2810、MDX-1106、PDR001、クローン由来の抗PD-1:RMP1-14、米国特許第8,008,449号に開示される抗PD-1抗体、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、ならびにそれらの断片、誘導体、バリアント、及びバイオシミラーからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗PD-1は、ペムブロリズマブである。いくつかの実施形態では、化学療法剤は、白金ダブレット化学療法剤である。いくつかの実施形態では、化学療法剤は、ペメトレキセドと組み合わされている。いくつかの実施形態では、NSCLCは、カルボプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセド、及びシスプラチンを含む併用療法に対して不応性である。いくつかの実施形態では、NSCLCは、カルボプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセド、シスプラチン、ニボルマブ、及びイピリムマブを含む併用療法に対して不応性である。
いくつかの実施形態では、NSCLSは、前治療を受けていない。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、PD-1陰性であり、及び/またはPD-1である対象に由来する。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、抗PD-1または抗PD-L1及び白金ダブレット療法を含む併用療法に対して不応性であり、白金ダブレット療法は、
i)シスプラチン及びカルボプラチンからなる群から選択される第1の化学療法剤と、
ii)ビノレルビン、ゲムシタビン、及びタキサン(例えば、パクリタキセル、ドセタキセル、またはnab-パクリタキセルを含む)からなる群から選択される第2の化学療法剤と、を含む。
i)シスプラチン及びカルボプラチンからなる群から選択される第1の化学療法剤と、
ii)ビノレルビン、ゲムシタビン、及びタキサン(例えば、パクリタキセル、ドセタキセル、またはnab-パクリタキセルを含む)からなる群から選択される第2の化学療法剤と、を含む。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、抗PD-1または抗PD-L1、ペメトレキセド、及び白金ダブレット療法を含む併用療法に対して不応性であり、白金ダブレット療法は、
i)シスプラチン及びカルボプラチンからなる群から選択される第1の化学療法剤と、
ii)ビノレルビン、ゲムシタビン、及びタキサン(例えば、パクリタキセル、ドセタキセル、またはnab-パクリタキセルを含む)からなる群から選択される第2の化学療法剤と、を含む。
i)シスプラチン及びカルボプラチンからなる群から選択される第1の化学療法剤と、
ii)ビノレルビン、ゲムシタビン、及びタキサン(例えば、パクリタキセル、ドセタキセル、またはnab-パクリタキセルを含む)からなる群から選択される第2の化学療法剤と、を含む。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、抗PD-1抗体で治療されている。いくつかの実施形態では、NSCLCは、抗PD-L1抗体で治療されている。いくつかの実施形態では、NSCLC対象は、治療ナイーブである。いくつかの実施形態では、NSCLCは、抗PD-1抗体で治療されていない。いくつかの実施形態では、NSCLCは、抗PD-L1抗体で治療されていない。いくつかの実施形態では、NSCLCは、以前に化学療法剤で治療されている。いくつかの実施形態では、NSCLCは、以前に化学療法剤で治療されているが、もはや化学療法剤で治療されていない。いくつかの実施形態では、NSCLC患者は、抗PD-1/PD-L1ナイーブである。いくつかの実施形態では、NSCLC対象は、低いPD-L1の発現を有する。いくつかの実施形態では、NSCLC対象は、治療ナイーブのNSCLCを有するか、または化学療法治療後であるが、抗PD-1/PD-L1ナイーブである。いくつかの実施形態では、NSCLC対象は、治療ナイーブのNSCLCまたは化学療法治療後であるが、抗PD-1/PD-L1ナイーブであり、低いPD-L1の発現を有する。いくつかの実施形態では、NSCLC対象は、ベースラインで巨大腫瘤病変を有する。いくつかの実施形態では、対象は、ベースラインで巨大腫瘤病変を有し、低いPD-L1の発現を有する。いくつかの実施形態では、NSCLC対象は、検出可能なPD-L1の発現を有しない。いくつかの実施形態では、NSCLC対象は、治療ナイーブのNSCLCまたは化学療法治療後であるが、抗PD-1/PD-L1ナイーブであり、検出可能なPD-L1の発現を有しない。いくつかの実施形態では、対象は、ベースラインで巨大腫瘤病変を有し、検出可能なPD-L1の発現を有しない。いくつかの実施形態では、NSCLC対象は、治療ナイーブのNSCLCまたは化学療法後(例えば、化学療法剤後)であるが、PD-L1の発現が低く、かつ/またはベースラインで巨大腫瘤病変を有する抗PD-1/PD-L1ナイーブである。いくつかの実施形態では、最大腫瘍直径が横方向または冠状面のいずれかで測定された7cmより大きい場合、巨大腫瘤病変が示される。いくつかの実施形態では、巨大腫瘤病変は、20mm以上の短軸直径を有する腫れたリンパ節がある場合に示される。いくつかの実施形態では、化学療法剤は、NSCLCの標準治療の治療薬を含む。
いくつかの実施形態では、PD-L1発現は、腫瘍割合スコアによって決定される。いくつかの実施形態では、不応性NSCLC腫瘍を有する対象は、<1%の腫瘍割合スコア(TPS)を有する。いくつかの実施形態では、不応性NSCLC腫瘍を有する対象は、≧1% TPSを有する。いくつかの実施形態では、不応性NSCLCを有する対象は、抗PD-1及び/または抗PD-L1抗体で以前に治療されており、腫瘍割合スコアは、該抗PD-1及び/または抗PD-L1抗体治療の前に決定された。いくつかの実施形態では、不応性NSCLCを有する対象は、抗PD-L1抗体で以前に治療されており、腫瘍割合スコアは、該抗PD-L1抗体治療の前に決定された。
いくつかの実施形態では、例えば図1及び/または図8に記載されるものを含む、本発明の方法によって調製されるTILは、例えばプロセス1C法と称される方法などの、図1及び/または図8に例示されていないものを含む他の方法によって産生されるTILと比較して、増加したポリクローン性を示す。いくつかの実施形態では、有意に改善されたポリクローン性及び/または増加したポリクローン性は、がん治療に対する治療有効性及び/または増加した臨床的有効性を示す。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、T細胞レパートリーの多様性を指す。いくつかの実施形態では、ポリクローン性の増加は、本発明の方法によって産生されたTILの投与に関する治療有効性を示すことができる。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、例えば、図1に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたTILと比較して、1倍、2倍、10倍、100倍、500倍、または1000倍増加する。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、未治療の患者と比較して、及び/または例えば、図1に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたTILで治療された患者と比較して、1倍増加する。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、未治療の患者と比較して、及び/または例えば、図1に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたTILで治療された患者と比較して、2倍増加する。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、未治療の患者と比較して、及び/または例えば、図1に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたTILで治療された患者と比較して、10倍増加する。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、未治療の患者と比較して、及び/または例えば、図1に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたTILで治療された患者と比較して、100倍増加する。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、未治療の患者と比較して、及び/または例えば、図1に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたTILで治療された患者と比較して、500倍増加する。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、未治療の患者と比較して、及び/または例えば、図1に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたTILで治療された患者と比較して、1000倍増加する。
a.例示的なPD-L1試験方法
いくつかの実施形態では、PD-L1発現は、本明細書に記載の1つのさらなる試験方法を使用して、腫瘍割合スコアによって決定される。いくつかの実施形態では、NSCLC腫瘍を有する対象または患者は、<1%の腫瘍割合スコア(TPS)を有する。いくつかの実施形態では、NSCLC腫瘍は、≧1% TPSを有する。いくつかの実施形態では、NSCLCを有する対象または患者は、抗PD-1及び/または抗PD-L1抗体で以前に治療されており、腫瘍割合スコアは、抗PD-1及び/または抗PD-L1抗体治療の前に決定された。いくつかの実施形態では、NSCLCを有する対象または患者は、抗PD-L1抗体で以前に治療されており、腫瘍割合スコアは、抗PD-L1抗体治療の前に決定された。いくつかの実施形態では、不応性または耐性NSCLC腫瘍を有する対象または患者は、<1%の腫瘍割合スコア(TPS)を有する。いくつかの実施形態では、不応性または耐性NSCLC腫瘍を有する対象または患者は、≧1% TPSを有する。いくつかの実施形態では、不応性または耐性NSCLCを有する対象または患者は、抗PD-1及び/または抗PD-L1抗体で以前に治療されており、腫瘍割合スコアは、抗PD-1及び/または抗PD-L1抗体治療の前に決定された。いくつかの実施形態では、不応性または耐性NSCLCを有する対象または患者は、抗PD-L1抗体で以前に治療されており、腫瘍割合スコアは、抗PD-L1抗体治療の前に決定された。
いくつかの実施形態では、PD-L1発現は、本明細書に記載の1つのさらなる試験方法を使用して、腫瘍割合スコアによって決定される。いくつかの実施形態では、NSCLC腫瘍を有する対象または患者は、<1%の腫瘍割合スコア(TPS)を有する。いくつかの実施形態では、NSCLC腫瘍は、≧1% TPSを有する。いくつかの実施形態では、NSCLCを有する対象または患者は、抗PD-1及び/または抗PD-L1抗体で以前に治療されており、腫瘍割合スコアは、抗PD-1及び/または抗PD-L1抗体治療の前に決定された。いくつかの実施形態では、NSCLCを有する対象または患者は、抗PD-L1抗体で以前に治療されており、腫瘍割合スコアは、抗PD-L1抗体治療の前に決定された。いくつかの実施形態では、不応性または耐性NSCLC腫瘍を有する対象または患者は、<1%の腫瘍割合スコア(TPS)を有する。いくつかの実施形態では、不応性または耐性NSCLC腫瘍を有する対象または患者は、≧1% TPSを有する。いくつかの実施形態では、不応性または耐性NSCLCを有する対象または患者は、抗PD-1及び/または抗PD-L1抗体で以前に治療されており、腫瘍割合スコアは、抗PD-1及び/または抗PD-L1抗体治療の前に決定された。いくつかの実施形態では、不応性または耐性NSCLCを有する対象または患者は、抗PD-L1抗体で以前に治療されており、腫瘍割合スコアは、抗PD-L1抗体治療の前に決定された。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、1%未満(TPS<1%)のPD-L1タンパク質についての任意の強度での部分的または完全な膜染色を示す、抗PD-1または抗PD-L1療法の前に採取された患者からの腫瘍割合スコア(TPS)または生存腫瘍細胞のパーセンテージを示すNSCLCである。いくつかの実施形態では、NSCLCは、<50%、<45%、<40%、<35%、<30%、<25%、<20%、<15%、<10%、<9%、<8%、<7%、<6%、<5%、<4%、<3%、<2%、<1%、<0.9%、<0.8%、<0.7%、<0.6%、<0.5%、<0.4%、<0.3%、<0.2%、<0.1%、<0.09%、<0.08%、<0.07%、<0.06%、<0.05%、<0.04%、<0.03%、<0.02%、及び<0.01%からなる群から選択されるTPSを示すNSCLCである。いくつかの実施形態では、NSCLCは、約50%、約45%、約40%、約35%、約30%、約25%、約20%、約15%、約10%、約9%、約8%、約7%、約6%、約5%、約4%、約3%、約2%、約1%、約0.9%、約0.8%、約0.7%、約0.6%、約0.5%、約0.4%、約0.3%、約0.2%、約0.1%、約0.09%、約0.08%、約0.07%、約0.06%、約0.05%、約0.04%、約0.03%、約0.02%,及び約0.01%からなる群から選択されるTPSを示すNSCLCである。いくつかの実施形態では、NSCLCは、0%~1%のTPSを示すNSCLCである。いくつかの実施形態では、NSCLCは、0%~0.9%のTPSを示すNSCLCである。いくつかの実施形態では、NSCLCは、0%~0.8%のTPSを示すNSCLCである。いくつかの実施形態では、NSCLCは、0%~0.7%のTPSを示すNSCLCである。いくつかの実施形態では、NSCLCは、0%~0.6%のTPSを示すNSCLCである。いくつかの実施形態では、NSCLCは、0%~0.5%のTPSを示すNSCLCである。いくつかの実施形態では、NSCLCは、0%~0.4%のTPSを示すNSCLCである。いくつかの実施形態では、NSCLCは、0%~0.3%のTPSを示すNSCLCである。いくつかの実施形態では、NSCLCは、0%~0.2%のTPSを示すNSCLCである。いくつかの実施形態では、NSCLCは、0%~0.1%のTPSを示すNSCLCである。TPSは、当該技術分野で知られている方法、例えば、Hirsch,et al.J.Thorac.Oncol.2017:12,208-222に記載される方法、あるいはペムブロリズマブまたは他の抗PD-1もしくは抗PD-L1療法による治療前のTPSの決定に使用される方法によって測定され得る。米国食品医薬品局(U.S.Food and Drug Administration)によって承認されたTPSの測定のための方法を使用することもできる。いくつかの実施形態では、PD-L1は、エクソソームPD-L1である。いくつかの実施形態では、PD-L1は、循環腫瘍細胞上に見出される。
いくつかの実施形態では、部分的な膜染色は、1%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%、99%、またはそれ以上を含む。いくつかの実施形態では、完了した膜染色は、およそ100%膜染色を含む。
いくつかの実施形態では、PD-L1の試験は、患者の血清中のPD-L1のレベルを測定することを伴い得る。これらの実施形態では、患者の血清中のPD-L1の測定は、腫瘍の不均一性の不確実性及び連続生検の患者の不快感を除去する。
いくつかの実施形態では、ベースラインまたは標準レベルと比較して、可溶性PD-L1の上昇は、NSCLCにおける予後の悪化と相関する。例えば、Okuma,Y.et al.,2018,Clinical Lung Cancer,19(5):410-417、Vecchiarelli,S.,et al.,2018,Oncotarget,9(25):17554-17563を参照されたい。いくつかの実施形態では、PD-L1は、エクソソームPD-L1である。いくつかの実施形態では、PD-L1は、循環腫瘍細胞上に発現される。
2.ドライバー変異
本明細書で使用される場合、「ドライバー変異」及び/または「アクショナブルな変異」及び/または「発がん性ドライバー変異」という語句は、典型的には、発がん性ドライバー(すなわち、がんドライバーまたはがん誘導物質)とみなされる変異を指す。これらの変異のうちの1つ以上の存在は、伝統的に、標的療法の標的として利用されてきた。多くの場合、ドライバー変異は、例えば、チロシンキナーゼ阻害剤(TKI)を含む標的治療部分での治療のために検査及び/または分析される。かかるドライバー変異は、いくつかの実施形態では、第1選択の治療的処置に対する応答に影響を及ぼすか、または作用することができる。本明細書に記載のTIL療法方法及び組成物は、かかるドライバー変異が患者または対象に存在するか否かにかかわらず、治療に有効である。かかるドライバー変異は、全エクソーム配列決定または特定のドライバー変異の検出を標的とする方法を含む、当該技術分野で知られている任意の方法によって試験及び決定することができる。
本明細書で使用される場合、「ドライバー変異」及び/または「アクショナブルな変異」及び/または「発がん性ドライバー変異」という語句は、典型的には、発がん性ドライバー(すなわち、がんドライバーまたはがん誘導物質)とみなされる変異を指す。これらの変異のうちの1つ以上の存在は、伝統的に、標的療法の標的として利用されてきた。多くの場合、ドライバー変異は、例えば、チロシンキナーゼ阻害剤(TKI)を含む標的治療部分での治療のために検査及び/または分析される。かかるドライバー変異は、いくつかの実施形態では、第1選択の治療的処置に対する応答に影響を及ぼすか、または作用することができる。本明細書に記載のTIL療法方法及び組成物は、かかるドライバー変異が患者または対象に存在するか否かにかかわらず、治療に有効である。かかるドライバー変異は、全エクソーム配列決定または特定のドライバー変異の検出を標的とする方法を含む、当該技術分野で知られている任意の方法によって試験及び決定することができる。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、1つ以上のドライバー変異の存在または非存在を示すNSCLCである。いくつかの実施形態では、NSCLCは、1つ以上のドライバー変異の存在を示すNSCLCである。いくつかの実施形態では、NSCLCは、1つ以上のドライバー変異の非存在を示すNSCLCである。いくつかの実施形態では、NSCLCは、1つ以上のドライバー変異の非存在または存在について分析されている。いくつかの実施形態では、1つ以上のドライバー変異は存在しない。いくつかの実施形態では、NSCLC治療は、1つ以上のドライバー変異の存在または非存在とは無関係である。いくつかの実施形態では、1つ以上のドライバー変異は、EGFR変異、EGFR挿入、EGFRエクソン20、KRAS変異、BRAF変異、BRAF V600E変異、BRAF V600K変異、BRAF V600変異、ALK変異、c-ROS変異(ROS1変異)、ROS1融合、RET変異、RET融合、ERBB2変異、ERBB2増幅、BRCA変異、MAP2K1変異、PIK3CA、CDKN2A、PTEN変異、UMD変異、NRAS変異、KRAS変異、NF1変異、MET変異、METスプライス及び/または変化したMETシグナル伝達、TP53変異、CREBBP変異、KMT2C変異、KMT2D変異、ARID1A変異、RB1変異、ATM変異、SETD2変異、FLT3変異、PTPN11変異、FGFR1変異、EP300変異、MYC変異、EZH2変異、JAK2変異、FBXW7変異、CCND3変異、及びGNA11変異からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、NSCLCは、<1%のTPSを示し、1つ以上のドライバー変異の所定の非存在を有する。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、EGFR阻害剤、BRAF阻害剤、ALK阻害剤、c-Ros阻害剤、RET阻害剤、ERBB2阻害剤、BRCA阻害剤、MAP2K1阻害剤、PIK3CA阻害剤、CDKN2A阻害剤、PTEN阻害剤、UMD阻害剤、NRAS阻害剤、KRAS阻害剤、NF1阻害剤、MET阻害剤、TP53阻害剤、CREBBP阻害剤、KMT2C阻害剤、KMT2D変異、ARID1A変異、RB1阻害剤、ATM阻害剤、SETD2阻害剤、FLT3阻害剤、PTPN11阻害剤、FGFR1阻害剤、EP300阻害剤、MYC阻害剤、EZH2阻害剤、JAK2阻害剤、FBXW7阻害剤、CCND3阻害剤、及びGNA11阻害剤による治療のために適応されていないNSCLCである。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、<1%のTPSを有し、EGFR阻害剤、BRAF阻害剤、ALK阻害剤、c-Ros阻害剤、RET阻害剤、ERBB2阻害剤、BRCA阻害剤、MAP2K1阻害剤、PIK3CA阻害剤、CDKN2A阻害剤、PTEN阻害剤、UMD阻害剤、NRAS阻害剤、KRAS阻害剤、NF1阻害剤、MET阻害剤、TP53阻害剤、CREBBP阻害剤、KMT2C阻害剤、KMT2D変異、ARID1A変異、RB1阻害剤、ATM阻害剤、SETD2阻害剤、FLT3阻害剤、PTPN11阻害剤、FGFR1阻害剤、EP300阻害剤、MYC阻害剤、EZH2阻害剤、JAK2阻害剤、FBXW7阻害剤、CCND3阻害剤、及びGNA11阻害剤による治療のために適応されていないNSCLCである。
いくつかの実施形態では、EGFR変異は、NSCLCから小細胞肺癌(SCLC)への腫瘍形質転換をもたらす。
いくつかの実施形態では、NSCLC(またはその生検)は、高腫瘍変異負荷(高TMB、>10mut/kb)及び/またはマイクロサテライト不安定性高(MSI-高)を示す。いくつかの実施形態では、NSCLC(またはその生検)は、高腫瘍変異負荷(高TMB、>10mut/kb)を示す。いくつかの実施形態では、NSCLC(またはその生検)は、マイクロサテライト不安定性高(MSI-高)を示す。腫瘍変異負荷を評価するための方法及びシステムは、当該技術分野で知られている。かかる方法及びシステムの例示的な開示は、米国特許第9,792,403号、米国出願公開第US20180363066A1号、国際出願公開第WO2013070634号及びWO2018106884号、ならびに参照により本明細書に組み込まれる、Metzker,M.(2010)Nature Biotechnology Reviews 11:31-46(これらのすべては参照によりそれら全体が組み込まれる)に見出され得る。
いくつかの実施形態では、NSCLC(またはその生検)は、高腫瘍変異負荷(高TMB、>10mut/kb)及び/またはマイクロサテライト不安定性高(MSI-高)を示す。いくつかの実施形態では、NSCLC(またはその生検)は、高腫瘍変異負荷(高TMB、>10mut/kb)を示す。いくつかの実施形態では、NSCLC(またはその生検)は、マイクロサテライト不安定性高(MSI-高)を示す。腫瘍変異負荷を評価するための方法及びシステムは、当該技術分野で知られている。かかる方法及びシステムの例示的な開示は、米国特許第9,792,403号、米国出願公開第US20180363066A1号、国際出願公開第WO2013070634号及びWO2018106884号、ならびに参照により本明細書に組み込まれる、Metzker,M.(2010)Nature Biotechnology Reviews 11:31-46(これらのすべては参照によりそれら全体が組み込まれる)に見出され得る。
いくつかの実施形態では、EGFR変異には、例えば、T790M、Ex19Del、L858R、エクソン20挿入、delE709-T710insD、I744_K745insKIPVAI、K745_E746insTPVAIK、E709X、E709K、E709A、エクソン18欠失、G719X、G719A、G719S、L861Q、S768I、L747P、A763_764insFQEA、D770_N771insNPG、A763_764insFQEA、P772_H773insDNPエクソン20挿入、H773_V774insNPHエクソン20挿入、S768I、D770_N771insSVD、V769_D770InsASV、p.K745_E746insIPVAIK、p.K745_E746insTPVAIK、p.I744_K745insKIPVAI、D770_N771insNPG、P772_H773insPNP、A763_Y764insFQEA、及び/またはEGFRキナーゼドメイン重複(EGFR-KDD)が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、EGFR変異には、T790M、Ex19Del、L858R、エクソン20挿入、delE709-T710insD、I744_K745insKIPVAI、K745_E746insTPVAIK、E709X、E709K、E709A、エクソン18欠失、G719X、G719A、G719S、L861Q、S768I、L747P、A763_764insFQEA、D770_N771insNPG、A763_764insFQEA、P772_H773insDNPエクソン20挿入、H773_V774insNPHエクソン20挿入、S768I、D770_N771insSVD、V769_D770InsASV、p.K745_E746insIPVAIK、p.K745_E746insTPVAIK、p.I744_K745insKIPVAI、D770_N771insNPG、P772_H773insPNP、A763_Y764insFQEA、及びEGFRキナーゼドメイン重複(EGFR-KDD)からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、EGFR変異は、例えば、L858R/T790M、Ex19Del/T790M、G719X/L861Q、G719X/S768I(またはS768I/G719X)、S768I/L858R、L858R/E709A、及び/またはE746_T751delinsA+T790Mを含むが、これらに限定されない二重変異である。いくつかの実施形態では、EGFR変異は、L858R/T790M、Ex19Del/T790M、G719X/L861Q、G719X/S768I(またはS768I/G719X)、S768I/L858R、L858R/E709A、及びE746_T751delinsA+T790Mからなる群から選択される二重変異である。
EGFR変異のさらなる開示は、国際出願公開第WO20100020618号(参照によりその全体が本明細書に組み込まれる)に提供される。
いくつかの実施形態では、ALK変異には、EML4-ALKバリアント1(AB274722.1;BAF73611.1)、EML4-ALKバリアント2(AB275889.1;BAF73612.1)、EML4-ALKバリアント3a(AB374361.1;BAG55003.1)、EML4-ALKバリアント3b(AB374362.1;BAG55004.1)、EML4-ALKバリアント4(AB374363.1;BAG75147.1)、EML4-ALKバリアント5a(AB374364.1;BAG75148.1)、EML4-ALKバリアント5b(AB374365.1;BAG75149.1)、EML4-ALKバリアント6(AB462411.1;BAH57335.1)、EML4-ALKバリアント7(AB462412.1;BAH57336.1)、KIF5B-ALK(AB462413.1;BAH57337.1)、NPM-ALK、TPM3-ALK、TFGXL-ALK、TEGL-ALK、TFGS-ALK、A11C-ALK、CLTC-ALK、MSN-ALK、TPM4-ALK、MYH9-ALK、RANBP2-ALK、AL017-ALK、及びCARS-ALKが含まれるが、これらに限定されない(例えば、Pulford et al.,(2004)J.Cell.Physiol.199:330-358を参照)。さらに、熟練者は、ALKキナーゼとその融合パートナーとの間の特定の融合事象に応じて、ALKキナーゼバリアントが生じ得ることを理解するであろう(例えば、EML4は、例えば、Horn and Pao,(2009)J.Clin.Oncol.27:4247-4253に記載されるように、少なくともエクソン2、6a、6b、13、14、及び/または15を融合することができる。)(参照によりその全体が組み込まれる)。
ALK変異のさらなる例は、米国特許第9,018,230号及び第9,458,508号に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、本発明のROS1変異は、ROS1融合であり、ROS1タンパク質のキナーゼドメインを含むROS1ポリペプチドの一部(またはそれをコードするポリヌクレオチド)が別のポリペプチド(またはそれをコードするポリヌクレオチド)の全部または一部に融合し、その第2のポリペプチドまたはポリヌクレオチドの名前が融合において命名される。いくつかの実施形態では、ROS1変異は、ROS1融合タンパク質(例えば、IHCによって)及び/またはROS融合遺伝子(例えば、FISHによって)、及び/またはROS1 mRNA(例えば、qRT-PCRによって)として決定され、好ましくはSLC34A2-ROS1(ROS1エクソン32及び34に融合されたSLC34A2エクソン13del2046及び4)、CD74-ROS1(ROS1エクソン32及び34に融合されたCD74エクソン6)、EZR-ROS1(ROS1エクソン34に融合されたEZRエクソン10)、TPM3-ROS1(ROS1エクソン35に融合されたTPM3エクソン8)、LRIG3-ROS1(ROS1エクソン35に融合されたLRIG3エクソン16)、SDC4-ROS1(ROS1エクソン32に融合されたSDC4エクソン2及び4ならびにROS1エクソン34に融合されたSDC4エクソン)、FIG-ROS1としても知られるGOPC-ROS1(ROS1エクソン35に融合されたGOPCエクソン8及びROS1エクソン36に融合されたGOPCエクソン4)、ならびにG2032R、すなわちROS1G2032Rからなる群から選択されるROS1融合タンパク質を示す。
ROS1変異及びROS融合の追加の開示は、米国特許公開第20100221737号、同第20150056193号、及び同第20100143918号、ならびにPCT公開第WO2010093928号に提供されており、これらのすべては、参照によりそれら全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、RET変異は、RET融合または点変異である。
いくつかの実施形態では、RET点変異には、H6650、K666E、K666M、S686N、G691S、R694Q、M700L、V706M、V706A、E713K、G736R、G748C、A750P、S765P、P766S、E768Q、E768D、L769L、R770Q、D771N、N777S、V7781、Q781R、L790F、Y791F、Y791N、V804L、V804M、V804E、E805K、E806C、Y806E、Y806F、Y806S、Y806G Y806C E818K S819I G823E Y826M R833C P841L P841P E843D R844W、R844Q、R844L、M848T、1852M A866W R873W A876V L881V A883F A883S A883T E884K R886W、S891A、R8970、D898V、E901K 5904F S904C2 K907E K907M R908K G911D R912P R912Q M918T、M918V、M918L6、A919V、E921K、S922P S922Y T930M F961L R972G R982C M1009V D1017N V10416、及びM1064Tが含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、RET融合は、RETと、BCR、BCR、CLIP1、KIFSB、CCDC6、PTClex9、NCOA4、TRIM33、ERC1、FGFRIOP、MBD1、RAB61P2、PRKARIA、TRIM24、KTN1、GOLGA5、HOOK3、KIAA1468、TRIM27、AKAP13、FKBP15、SPECCIL、TBL1XR1、CEP55、CUX1、ACBD5、MYH13、PIBF1、KIAA1217、及びMPRIPからなる群から選択される融合パートナーとの間の融合である。
RET変異の追加の開示は、参照によりそれら全体が本明細書に組み込まれる米国特許第10035789号に提供されている。
いくつかの実施形態では、BRAF変異は、BRAF V600E/K変異である。他の実施形態では、BRAF変異は、非V600E/K変異である。
いくつかの実施形態では、非V600E/K BRAF変異は、キナーゼ活性化変異、キナーゼ障害変異、またはキナーゼ意義不明変異、及びそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態では、キナーゼ活性化変異は、R4621、1463S、G464E、G464R、G464V、G466A、G469A、N58 is、E586K、F595L、L597Q、L597R、L5975、L597V、A598V、T599E、V600R、K601E、5602D、A728V、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、キナーゼ障害変異は、G466E、G466R、G466V、Y472C、K483M、D594A、D594E、D594G、D594H、D594N、D594V、G596R、T599A、5602A、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、キナーゼ意義不明変異は、T4401、5467L、G469E、G469R、G4695、G469V、L584F、L588F、V600 K6OldelinsE、56051、Q609L、E611Q、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、非V600E/K BRAF変異は、D594、G469、K601E、L597、T599重複、L485W、F247L、G466V、BRAF融合、BRAF-AGAP3再配列、BRAFエクソン15スライスバリアント、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Met変異は、点変異、欠失変異、挿入変異、逆行、異常スプライシング、ミスセンス変異、またはc-Metタンパク質の少なくとも1つの生物活性の増加を引き起こす遺伝子拡大、チロシンキナーゼ、例えば、改善された受容体ホモログ二量体化、形成のリガンド結合、体及びヘテロ二量体の増強等を含む。Met変異は、c-Met遺伝子の任意の部分に位置し得る。一実施形態では、変異は、c-MET遺伝子によってコードされるc-METタンパク質のキナーゼドメインにある。いくつかの実施形態では、c-Met変異は、N375、V13、V923、R175、V136、L229、S323、R988、S1058/T1010及びE168における点変異である。
いくつかの実施形態では、ERBB2変異は、ERBB2のアミノ酸配列における点変異である。いくつかの実施形態では、ERBB2の点変異は、アミノ酸置換を引き起こす点変異、mRNAスプライシングを引き起こす点変異、または上流領域における点変異である。ここで、変異は、Q568E、P601R、I628M、P885S、R143Q、R434Q、及びE874Kからなる群から選択される少なくとも1つのアミノ酸置換を引き起こすヌクレオチド変異を含む。
いくつかの実施形態では、ERBB2変異は、ERBB2増幅である。いくつかの実施形態では、ERBB2増幅は、V659E、G309A、G309E、S310F、D769H、D769Y、V777L、P780ins、P780-Y781insGSP、V842I、R896C、K753E、及びL755Sからなる群から選択される点変異を含み、ポリメラーゼ連鎖反応または任意の配列決定技法によって検出され得る(Bose et al.Cancer Discov.2013,3(2),224-237、Zuo et al.Clin Cancer Res 2016,22(19),4859-4869)。
いくつかの実施形態では、BRCA変異は、BRCA1及び/またはBRCA2、好ましくはBRCA1、及び/またはタンパク質生成物がDNA損傷部位においてBRCA1及び/またはBRCA2と会合する1つ以上の他の遺伝子(ATM、ATR、Chk2、H2AX、53BP1、NFBD1、Mre11、Rad50、ニブリン、BRCA1関連環ドメイン(BARD1)、Abraxas、及びMSH2を含む)における変異である。これらの遺伝子のうちの1つ以上の変異は、BRCA1及び/またはBRCA2の変異を模倣する遺伝子発現パターンをもたらし得る。
ある特定の実施形態では、BRCA変異は、非同義変異を含む。いくつかの実施形態では、BRCA変異は、ナンセンス変異を含む。いくつかの実施形態では、BRCA変異は、フレームシフト変異を含む。いくつかの実施形態では、BRCA変異は、スプライシング変異を含む。いくつかの実施形態では、BRCA変異は、変異体mRNAとして、また最終的には変異体タンパク質として発現される。いくつかの実施形態では、BRCA1/2タンパク質は、機能的である。他の実施形態では、BRCA1/2タンパク質は、低下した活性を有する。他の実施形態では、BRCA1/2タンパク質は、非機能的である。
置換に関して本明細書で使用される場合、変異に関しての「=」記号は、一般に、同義置換、サイレントコドン、及び/またはサイレント置換を指す。特に、同義置換(サイレント置換またはサイレントコドンとも呼ばれる)は、タンパク質をコードする遺伝子のエクソンにおける、あるヌクレオチド塩基の別のヌクレオチド塩基の置換を指し、生成されたアミノ酸配列は修飾されない。これは、遺伝子コードが「縮退」であるという事実、すなわち、いくつかのアミノ酸が2つ以上の3塩基対コドンによってコードされるという事実に起因する。所与のアミノ酸のコドンのうちのいくつかは、同じアミノ酸をコードする他のものとはわずか1塩基対だけ異なるため、野生型塩基を代替物のうちの1つに置き換える点変異は、遺伝子の翻訳中に同じアミノ酸を細長いポリペプチド鎖に組み込むことをもたらす。いくつかの実施形態では、非コードDNAに影響を及ぼす同義の置換及び変異は、しばしばサイレント変異とみなされるが、変異がサイレントであり、いかなる影響もないとは限らない。例えば、同義変異は、転写、スプライシング、mRNA輸送、及び翻訳に影響を及ぼし得、それらのいずれも結果として生じる表現型を変化させることができ、同義変異を非サイレントにする。希少なコドンに対するtRNAの基質特異性は、翻訳のタイミングに影響を及ぼし、順番にタンパク質の共翻訳折り畳みに影響を及ぼす可能性がある。これは、多くの種で観察されているコドン使用バイアスに現れている。非同義の置換/変異は、保存的(類似の生理化学的特性を有するアミノ酸への変化)、半保存的(例えば、正に荷電したアミノ酸に対して陰性)、またはラジカル(大幅に異なるアミノ酸)として任意に分類され得るアミノ酸の変化をもたら。いくつかの実施形態では、BRCA変異は、P871L、K1183R、D693N、S1634G、E1038G、S1040N、S694=(=:サイレンスコドン)、M1673I、Q356R、S1436=、L771=、K654Sfs*47、S198N、R496H、R841W、R1347G、H619N、S1533I、L30=、A622V、Y655Vfs*18、R496C、E597K、R1443*、E23Vfs*17、L30F、E111Gfs*3、K339Rfs*2、L512F、D693N、P871S、S1140G、Q1240*、P1770S、R7=、L52F、T176M、A224S、L347=、S561F、E597*、K820E、K893Rfs*107、E962K、M1014I、R1028H、E1258D、E1346K、R1347T、L1439F、H1472R、Q1488*、S1572C、E1602K、R1610C、L1621=、Q1625*、Q1625=、D1754N、R1772Q、R1856*、及びそれらの任意の組み合わせを含むが、これらに限定されないBRCA1変異である。
いくつかの実施形態では、BRCA変異は、V2466A、N289H、N991D、S455=(=;サイレンスコドン)、N372H、H743=、V1269=、S2414=、V2171=、L1521=、T3033Nfs*11、K1132=、T3033Lfs*29、R2842C、N1784Tfs*7、K3326*、K3326*、D1420Y、I605Yfs*9、I3412V、A2951T、T3085Nfs*26、R2645Nfs*3、S1013*、T1915M、F3090=、V3244I、A1393V、R2034C、L1356=、E2981Rfs*37、N1784Kfs*3、K3416Nfs*11、K1691Nfs*15、S1982Rfs*22、及びそれらの任意の組み合わせを含むが、これらに限定されないBRCA2変異である。
いくつかの実施形態では、本発明のNRAS変異には、E63K、Q61R、Q61K、G12D、G13D、Q61R、Q61L、Q61K、G12S、G12C、G13R、Q61H、G12V、G12A、Q61L、G13V、Q61H、Q61H、G12R、G13C、Q61P、G13S、G12D、G13A、G13D、A18T、Q61X、G60E、G12S、Q61=(=:サイレンスコドン)、Q61E、Q61R、A146T、A59T、A59D、Q61=、R68T、A146T、G12A、E62Q、G75=、A91V、及びそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
E132Kいくつかの実施形態では、PIK3CA変異は、置換変異、欠失変異、及び挿入変異を含む。いくつかの実施形態では、変異は、PIK3CAのヘリカルドメイン及びそのキナーゼにおいて起こる。他の実施形態では、PIK3CAのP85BDドメインにおいて。いくつかの実施形態では、PIK3CA変異は、エクソン1、2、4、5、7、9、13、18、及び20にある。いくつかの実施形態では、PIK3CA変異は、エクソン9及び20にある。さらに他の実施形態では、PIK3CA変異は、上記の任意の変異の組み合わせである。これらのエクソンの任意の組み合わせを、任意選択で、他のエクソンの試験と併せて試験することができる。変異の試験は、コード配列全体に沿って行うことができ、または変異がクラスター化することが見出された領域に焦点を当てることができる。変異の特定のホットスポットは、PIK3CAコード配列の1624、1633、1636、及び3140位のヌクレオチドで生じる。
いくつかの実施形態では、PIK3CA変異のサイズは、1~3ヌクレオチドの範囲で小さい。いくつかの実施形態では、PIK3CA変異には、G1624A、G1633A、C1636A、A3140G、G113A、T1258C、G3129T、C3139T、E542K、E545K、Q546R、H1047L、H1047R、及びG2702Tが含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、MAP2K1変異は、体細胞MAP2K1変異、任意選択で、MEK1レベルを上方制御するMAP2K1変異である。いくつかの実施形態では、MAP2K1変異は、RAS/MAPK経路に関連する1つ以上の遺伝子における変異であり、HRAS、KRAS、NRAS、ARAF、BRAF、RAFl、MAP2K2、MAPKl、MAPK3、MAP3K3を含む。ある特定の実施形態では、MAP2K1変異は、RASA、PTEN、ENG、ACVRL1、SMAD4、GDF2、またはそれらの組み合わせからなる群から選択される1つ以上の遺伝子にある。
いくつかの実施形態では、MAP2K1変異には、P124S、Q56P、K57N、E203K、G237*、P124L、G128D、D67N、K57E、E102_I103del、C121S、K57T、K57N、Q56P、P124L、K57N、G128V、Q58_E62del、F53L、I126=、I103_K104del、及びそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
ある特定の実施形態では、KRAS変異は、非同義変異を含む。いくつかの実施形態では、KRAS変異は、ナンセンス変異を含む。いくつかの実施形態では、KRAS変異は、フレームシフト変異を含む。いくつかの実施形態では、KRAS変異は、スプライシング変異を含む。いくつかの実施形態では、KRAS変異は、変異体mRNAとして、また最終的には変異体タンパク質として発現される。いくつかの実施形態では、変異型KRASタンパク質は、機能的である。他の実施形態では、変異型KRASタンパク質は、低下した活性を有する。他の実施形態では、変異型KRASタンパク質は、非機能的である。
いくつかの実施形態では、KRAS変異には、G12D、G12V、G13D、G12C、G12A、G12S、G12R、G13C、Q61H、A146T、Q61R、Q61H、Q61L、G13S、A146V、Q61K、G13R、G12F、K117N、G13A、G13V、A59T、V14I、K117N、Q22K、Q61P、A146P、G13D、L19F、L19F、Q61K、G12V、G60=、G12=、G13=、A18D、T58I、Q61E、E63K、G12L、G13V、A59G、G60D、G10R、G10dup、D57N、A59E、、V14G、D33E、G12I、G13dup、及びそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない(=は、サイレンスコーディングを示す)。
いくつかの実施形態では、NF1変異は、置換変異、欠失変異、ミスセンス変異、異常なスプライシング変異、及び挿入変異を含む。いくつかの実施形態では、NF1変異は、機能喪失(LOF)変異である。いくつかの実施形態では、NF1変異は、R1947X(C5839T)、R304X、エクソン37変異、エクソン4b変異、エクソン7変異、エクソン10b変異、及びエクソン10c変異(例えば、1570G→T,E524X)からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、CDKN2A変異には、R24P、D108G、D108N、D108Y、G125R、P114L、R80*、R58*、H83Y、W110*、P114L、E88*、W110*、E120*、D108Y、D84Y、D84N、E69*、P81L、Q50*、L78Hfs*41、D108N、S12*、P48L、E61*、Y44*、E88K、R80*、D84G、L16Pfs*9、Y129*、D108H,A148T、A36G、A102V、W15*、H83R、A57V、E33*、D74Y、A76V、E153K、D74N、H83D、V82M、R58*、Y129*、E119*、Y44*、D74A、T18_A19dup、Y44Lfs*76、L32_L37del、V28_E33del、D14_L16del、A68T、またはそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
ある特定の実施形態では、PTEN変異は、非同義変異を含む。いくつかの実施形態では、PTEN変異は、ナンセンス変異を含む。いくつかの実施形態では、PTEN変異は、フレームシフト変異を含む。いくつかの実施形態では、PTEN変異は、スプライシング変異を含む。いくつかの実施形態では、変異型PTENは、mRNA及び最終的にはタンパク質として発現される。いくつかの実施形態では、変異型PTENタンパク質は、機能的である。他の実施形態では、変異型PTENタンパク質は、低下した活性を有する。他の実施形態では、変異型PTENタンパク質は、非機能的である。いくつかの実施形態では、PTEN変異には、R130Q、R130G、T319*、R233*、R130*、K267Rfs*9、N323Mfs*21、N323Kfs*2、R173C、R173H、R335*、Q171*、Q245*、E7*、D268Gfs*30、R130Q、Q214*、R130L、C136R、Q298*、Q17*、H93R、P248Tfs*5、I33del、R233*、E299*、G132D、Y68H、T319Kfs*24、N329Kfs*14、V166Sfs*14、V290*、T319Nfs*6、R142W、P38S、A126T、H61R、F278L、S229*、R130P、G129R、R130Qfs*4、P246L、R130*、G165R、C136Y、R173C、I101T、Y155C、D92E、K164Rfs*3、N184Efs*6、G129E,R130G、G36R、F341V、H123Y、C124S、M35VG127E、G165E、及びそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、TP53変異には、R175H、G245S、R248Q、R248W、R249S、R273C、R273H、R282W、C135Y、C141Y、P151S、V157F、R158L、Y163C、V173L、V173M、C176F、H179R、H179Y、H179Q、Y205C、Y220C、Y234C、M237I、C238Y、S241F、G245D、G245C、R248L、R249M、V272M、R273L、P278L、R280T、E285K、E286K、R158H、C176Y、I195T、G214R、G245V、G266R、G266E、P278S、R280K、またはそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。いくつかのさらなる実施形態では、TP53変異は、G245S;R249S;R273C;R273H;C141Y、V157F、R158L、Y163C、V173L、V173M、Y205C、Y220C、G245C、R249M、V272M、R273L、及びE286Kからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、TP53変異は、上記の変異のうちの1つ以上を含む。
いくつかの実施形態では、CREBBP変異には、R1446C、R1446H、S1680del、I1084Sfs*15、P1948L、I1084Nfs*3、?R386*、S893L、R1341*、P1423Lfs*36、P1488L、Y1503H、R1664C、A1824T、R1173*、R1360*、Y1450C、H2228D、S71L、P928=、D1435N、W1502C、Y1503D、R483*、R601Q、S945L、R1103*、R1288W、R1392*、C1408Y、D1435G、R1446L、H1485Y、Q1491K、Q96*、L361M、L524Wfs*6、Q540*、Q1073*、A1100V、R1169C、C1237Y、R1347W、G1411E、W1472C、I1483F、P1488T、R1498*、Y1503F、Q1856*、R1985C、R2104C、S2328L、V2349=、S2377L、及びそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、KMT2C変異には、D348N、P350=、R380L、C391*、P309S、C988F、Y987H、S990G、K2797Rfs*26、V346=、R894Q、R284Q、S806=、R1690=、P986=、A1685S、G315S、Q755*、R909K、T316S、S772L、G838S、L291F、P335=、C988F、Q2680=、E765G、K339N、Y816*、R526P、N729D、G845E、I817Nfs*11、G892R、C1103*、S3660L、F4496Lfs*21、G315C、R886C、D348N、S793=、V919L、R2481S、R2884*、R4549C、M305Dfs*28、T316S、P377=、I455M、T820I、S965=、S730Y、P860S、Q873Hfs*40、R904*、R2610Q、R4478*、及びそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、KMT2D変異には、L1419P、E640D、E541D、E455D、T2131P、K1420R、P2354Lfs*30、G2493=、Q3612=、I942=、T1195Hfs*17、P4170=、P1194H、G1235Vfs*95、P4563=、P647Hfs*283、L449_P457del、P3557=、Q3603=、R1702*、P648Tfs*2、R5501*、R4198*、R4484*、R83Q、R1903*、,R2685*、R4282*、L5326=、R5432W、R2734*、Q2800*、R2830*、Q3745dup、S4010P、R4904*、G5182Afs*61、R5214H、R1615*、Q2380*、R2687*、R2771*、V3089Wfs*30、Q3799Gfs*212、R4536*、R5030C、R5048C、R5432Q、A221Lfs*40、A476T、A2119Lfs*25,P2557L、R2801*、Q3913*、R4420W、G4641=、R5097*、及びそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、ARID1A変異には、が含まれるが、これらに限定されない。例えば、対象は、C884*(*:ナンセンス変異)、E966K、Q1411*、F1720fs(fs:フレームシフト)、G1847fs、C1874fs、D1957E、Q1430、R1721fs、G1255E、G284fs、R1722*、M274fs、G1847fs、P559fs、R1276*、Q2176fs、H203fs、A591fs、Q1322*、S2264*、Q586*、Q548fs、及びN756fsからなる群から選択されるARID1Aの変異を有する。
いくつかの実施形態では、RB1変異には、R320X、R467X、R579X、R455X、R358X、R251X、R787X、R552X、R255X、R556X、Y790X、Q575X、E323X、R661W、R579*、R455*、R556*、R787*、R661W、R445*、R467*、Q217*、Q471*、W195*、Q395*、I680T、E137*、R255*、Q344*、Q62*、E440K、A488V、P777Lfs*33、E322K、R656W、G617Rfs*36、C221*、E440*、Q93*、Q504*、E125*、S834*、E323*、Q685*、S829*、W516*、G435*、Q257*、E79*、S567L、V654M、V654Sfs*14、G100Efs*11、K715*、及びそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、ATM変異は、10744A>G;10744A>G、11482G>A、IVS3-558A>T、146C>G、381delA、IVS8-3delGT、1028delAAAA、1120C>T、1930ins16、IVS16+2T>C、2572T>C、IVS21+1G>A、3085delA、3381delTGAC、3602delTT、4052delT、4396C>T、5188C>T、5290delC、5546delT、5791G>CCT、6047A>G、IVS44-1G>T、6672delGC/6677delTACG、6736dell 1/6749del7、7159insAGCC、7671delGTTT、7705del14、7865C>T、7979delTGT、8177C>T、8545C>T、8565T>A、IVS64+1G>T、及び9010del28を含むが、これらに限定されない、ATM遺伝子配列における変異である。
本発明のいくつかの実施形態では、SETD2変異は、NCBI受託番号NM_014159のmRNA配列の転写開始コドン位置が1に設定されたときの、SETD2タンパク質をコードする遺伝子配列の変化である。いくつかの実施形態では、7558番目のG(グアニン)は、T(チミン)で置換され、4774番目のC(シトシン)は、Tによって置換され、1210番目のA(アデニン)は、Tによって置換され、4883番目は、Gによって置換され、5290番目のCは、Tによって置換され、7072番目のCは、Tによって置換され、4144番目のGは、Tによって置換され、1297は、Tによって置換され、755は、Gによって置換され、7261は、Gによって置換され、6700は、Tによって置換され、2536は、Tによって置換され、7438は、Tによって置換され、3866位での置換、Aの挿入、6712位でのTの挿入、7572位でのTの挿入、913番目のAの欠失、5619番目のCの欠失、塩基4603~4604、894~897の欠失、第1の塩基の欠失、1936番目のCの欠失、3094~3118塩基の欠失、5289位におけるAの挿入、及び6323~6333塩基の欠失。含まれる真のルアーの群から選択される1つ以上の変異。
本発明の一実施形態では、SETD2タンパク質の変異は、2520グルタミン酸後に停止し、1592アルギニン後に停止し、404アルギニン後に停止し、1764グルタミン後に停止し、NCBI受託番号NP_054878に対応するSETD2アミノ酸配列の1032は、第1のセリン後にフレームシフトし、646ヒスチジン後にフレームシフトし、2108番目のバリン後にフレームシフトし、1764グルタミン後にフレームシフトし、298番目のイソロイシン後にフレームシフトし、1289番目のアスパラギン後にフレームシフトし、289番目のセリン以降フレームシフトし、後にフレームシフトし、2525リジン後に停止し、305スレオニン後にフレームシフトし、1873プロリン後にフレームシフトし、1535アスパラギン後にフレームシフトし、2234グルタミン後後に停止し、2536アラニンをスレオニンで置換し、7438グルタミンを停止し、アスパラギンからなる1628基をセリンによって置換し、2358番目のプロリンをセリンによって置換し、1382アラニンをセリンによって置換し、433番目のアルギニンをシトシンによって置換し、252番目のアラニンをグリシンによって置換し、2421スレオニンをアラニンによって置換する。から選択される1つ以上の変異。
いくつかの実施形態では、FLT3変異には、(Q569_E648)ins、D835X、(Q569_E648)delins、(D835_I836)、D835Y、D835V、D835Y、D835H、T227M、I836del、N676K、D835E、Y597_E598insDYVDFREY、D835E、D835del、F594_D600dup、A680V、D839G、D96=、D835H、V491L、D835E、Q989*、D835V、L561=、I836del、P986Afs*27、D7G、D324N、S451F、D835N、L576P、Y597_E598insDVDFREY、V491L、N841T、D324N、Y572C、R595_L601dup、K663R、N676K、F691L、D835A、I836H、N841K、S993L、L832F、I836M、A66V、及びそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、PTPN11変異には、c E76K、A72V、A72T、D61Y、D61V、G60V、E69K、E76G、G507V、S506L、G507A、T73I、E76A、E76Q、S506P、D61N、F71L、E76V、F71L、A72D、V432M、T472M、P495L、N58Y、F285S、S506A、S189A、A465T、R502W、G507R、T511K、D61H、D61G、G507E、G60R、G60A、Q514L、E139D、Y197*、N308D、Q514H、Q514H、N58S、E123D、L206=、A465G、P495S、G507R、及びそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、FGFR1変異には、N577K、K687E、N577K、D166del、T371M、R476W、T350=、E498K、N577D、D683G、R87C、A154D、N303=、A374V、D550=、S633=、V695L、G728=、R765W、P803S、W19C、P56=、R113C、V149I、S158L、D166dupR220C、N224Kfs*8、D249N、R281W、R281Q、A299S、S424L、S461F、S467F、R506Q、及びそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、EP300変異には、D1399N、Y1414C、M1470Cfs*26、Y1111*、H2324Pfs*55、R1627W、N2209_Q2213delinsK、Q2268del、L415P、M1470Nfs*3、E1514K、C1201Y、P1452L、S952*、C1164Y、D1399Y、S507G、Q824*、D1507N、H2324Tfs*29、P925T、P1440L、W1466C、P1502L、A1629V、R1645*、N1700Tfs*9、P1869L、Q65*、A171V、R202*、R580Q、A627V、Q1082*、N1236Kfs*2、N1286S、R1312*、R1356*、C1385F、H1451L、R1462*、Y1467N、Y1467H、R1478H、R1627Q、R86*、R370H、R397*、R754C、P842S、I997V、E1014*、及びそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、MYC変異には、E61T、E68I、R74Q、R75N、W135E、W136E、V394D、L420P、W96E、V325D、L351P、41アミノ酸がN末端で欠失したMYCタンパク質(dN2MYC)、N26S、S161L、P74L、V7M、F153S、E54D、P246、L164V、P74S、A59V、T73I、P72T、T73A、H374R、P17S、T73N、S264N、P72S、Q52del、S21T、P74A、S107N、P75S、S77P、P261S、P74Q、S190R、A59T、F153C、P75H、T73I、S77F、N11S、S21N、P78L、P72L、N9K、S190N、S267F、T73P、P78S、G105D、S187C、L71M、Q10H、L191x、Q50x、L191F、R25K、F130L、Y27S、D195N、D2G、V20A、V6G、V20I、D2H、P75A、G152D、P74T、C40Y、E8K、Q48x、及びそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、EZH2変異は、変化したヒストンメチル化パターンに関連付けられる。いくつかの実施形態では、EZH2変異は、アミノ酸Y641(Y646、触媒ドメインに相当する)のF、N、H、SまたはCのいずれかへの変換をもたらし、H3K27の高トリメチル化をもたらし、リンパ誘発を駆動する。いくつかの実施形態では、EZH2変異は、EZH2 SETドメイン変異、EZH2の過剰発現、他のPRC2サブユニットの過剰発現、ヒストンアセチルトランスフェラーゼ(HAT)の機能変異の喪失、及びMLL2の機能の喪失を含む。EZH2 Y646変異に対してヘテロ接合である細胞は、EZH2タンパク質に対してホモ接合野生型(WT)である細胞、またはY646変異に対してホモ接合である細胞と比較して、H3K27の高トリメチル化をもたらす。
いくつかの実施形態では、EZH2変異には、Y646F、Y646N、D185H、Y646F、Y646S、Y646H、R690H、Y646X、E745K、Y646C、V626M、V679M、R690H、R684H、A682G、E249K、G159R、R288Q、N322S、A692V、R690C、D730*(挿入フレームシフト)、S695L、R684C、M667T、R288*、S644*、D192N、K550T、Q653E、D664G、R347Q、Y646C、G660R、R213C、A255T、S538L、N693K、I55M、R561H、A692V、K515R、Y733*、R63*、Q570*、Q328*、R25Q、T467P、A656V、T573I、C571Y、E725K、R16W、P577L、F145S、V680M、G686D、G135R、K634E、S652F、R298C、G648E、R566H、L149R、R502Q、Y731D、R313W、N675K、S652C、T374Hfs*3、N152Ifs*15、E401Kfs*22、K406Mfs*17、E246*、S624C、I146T、V626M、L674S、H694R、A581S、及びそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、JAK2変異は、G1920T変異、G1920T/C1922T変異、またはG1920A変異と組み合わせたT1923C変異を含むが、これらに限定されないJAK2遺伝子の変異である。いくつかの実施形態では、JAK2変異は、V617F、V617I、R683G、N542_E543del、E543_D544del、R683S、R683X、F537_K539delinsL(フレーム中の欠失)、K539L、N1108S、R1113H、R1063H、R487C、I540Mfs*3(欠失-フレームシフト)、R867Q、K539L、G571S、R1113C、R938Q、R228Q、L830*、E1080*、K539L、C618R、R564Q、D1036H、L1088S、H538Nfs*4、D873N、V392M、I682F、L393V、M535I、C618R、T875N、L611V、D319N、L611S、G921S、H538Y、S1035L、及びそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない1つ以上の置換を含む、変異体JAK2タンパク質である。
いくつかの実施形態では、FBXW7変異は、W244*(*:停止コドン)R222*、R278*、E192A、S282*、E113D、R465H/C、726+1 G>Aスプライス、R505C、R479Q、R465C、R367*、R499Vfs*25(fs*:フレームシフト)、R658*、D600Y、D520N、D520Y、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される点変異である。さらなる実施形態では、FBXW7変異は、R479Q及びS582L、R465H及びS582L、D520N、D520Y及びR14Q、ならびにR367*及びS582Lを含むが、これらに限定されない二重または三重変異である。
いくつかの実施形態では、CCND3変異には、S259A、R271Pfs*53(挿入により引き起こされたフレームシフト)、E51*、Q260*、P199S、T283A、T283P、V287D、D286_T288del、R271Gfs*33、Q276*、R241Q、D238G、R33P、I290K、I290T、I290R、P267fs、P284S、P284L、P100S、E253D、S262I、R14W、R114L、D238N、A266E、R167W、及びそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、GNA11変異には、Q209L、R183C、T257=、R183C、G208Afs*16、Q209H、R183C、Q209P、Q209R、Q209H、?T96=、R210W、R256Q、T334=、G48D、S53G、Q209P、R213Q、及びそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、GNA11変異は、エクソン4において2つの変異、例えば、V182における変異及びT175における変異、またはエクソン5における1つ以上の変異を有する。
3.PD-1及びPD-L1阻害剤との併用
プログラム死1(PD-1)は、T細胞、B細胞、ナチュラルキラー(NK)T細胞、活性化単球、及び樹状細胞によって発現される288アミノ酸の膜貫通免疫チェックポイント受容体タンパク質である。CD279としても知られるPD-1は、CD28ファミリーに属し、ヒトでは第2染色体上のPdcd1遺伝子によってコードされる。PD-1は、1つの免疫グロブリン(Ig)スーパーファミリードメイン、膜貫通領域、ならびに免疫受容体チロシンベースの阻害モチーフ(ITIM)及び免疫受容体チロシンベースのスイッチモチーフ(ITSM)を含む細胞内ドメインからなる。PD-1とそのリガンド(PD-L1及びPD-L2)は、Keir,et al.,Annu.Rev.Immunol.2008,26,677-704に記載されているように、免疫寛容において重要な役割を果たすことが知られている。PD-1は、T細胞の免疫応答を負に調節する阻害シグナルを提供する。PD-L1(B7-H1またはCD274としても知られる)及びPD-L2(B7-DCまたはCD273としても知られる)は、腫瘍細胞及び間質細胞上に発現され、PD-1を発現する活性化T細胞が遭遇する可能性があり、T細胞の免疫抑制につながる。PD-L1は、ヒト第9染色体上のCd274遺伝子によってコードされる290アミノ酸の膜貫通タンパク質である。例えば、Topalian,et al.,N.Eng.J.Med.2012,366,2443-54に記載される最近の臨床研究で実証されているように、PD-1阻害剤、PD-L1阻害剤、及び/またはPD-L2阻害剤の使用による、PD-1とそのリガンドPD-L1及びPD-L2との間の相互作用をブロックすることで、免疫抵抗を克服することができる。PD-L1は、多くの腫瘍細胞株上で発現されるが、PD-L2は、主に樹状細胞及びいくつかの腫瘍株上で発現される発現される。T細胞(活性化後にPD-1を誘導的に発現する)に加えて、PD-1は、B細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、活性化単球、樹状細胞上でも発現される。
プログラム死1(PD-1)は、T細胞、B細胞、ナチュラルキラー(NK)T細胞、活性化単球、及び樹状細胞によって発現される288アミノ酸の膜貫通免疫チェックポイント受容体タンパク質である。CD279としても知られるPD-1は、CD28ファミリーに属し、ヒトでは第2染色体上のPdcd1遺伝子によってコードされる。PD-1は、1つの免疫グロブリン(Ig)スーパーファミリードメイン、膜貫通領域、ならびに免疫受容体チロシンベースの阻害モチーフ(ITIM)及び免疫受容体チロシンベースのスイッチモチーフ(ITSM)を含む細胞内ドメインからなる。PD-1とそのリガンド(PD-L1及びPD-L2)は、Keir,et al.,Annu.Rev.Immunol.2008,26,677-704に記載されているように、免疫寛容において重要な役割を果たすことが知られている。PD-1は、T細胞の免疫応答を負に調節する阻害シグナルを提供する。PD-L1(B7-H1またはCD274としても知られる)及びPD-L2(B7-DCまたはCD273としても知られる)は、腫瘍細胞及び間質細胞上に発現され、PD-1を発現する活性化T細胞が遭遇する可能性があり、T細胞の免疫抑制につながる。PD-L1は、ヒト第9染色体上のCd274遺伝子によってコードされる290アミノ酸の膜貫通タンパク質である。例えば、Topalian,et al.,N.Eng.J.Med.2012,366,2443-54に記載される最近の臨床研究で実証されているように、PD-1阻害剤、PD-L1阻害剤、及び/またはPD-L2阻害剤の使用による、PD-1とそのリガンドPD-L1及びPD-L2との間の相互作用をブロックすることで、免疫抵抗を克服することができる。PD-L1は、多くの腫瘍細胞株上で発現されるが、PD-L2は、主に樹状細胞及びいくつかの腫瘍株上で発現される発現される。T細胞(活性化後にPD-1を誘導的に発現する)に加えて、PD-1は、B細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、活性化単球、樹状細胞上でも発現される。
いくつかの実施形態では、TIL及びPD-1阻害剤は、NSCLCの治療のための併用療法または共療法として投与される。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、前治療を受けていない。いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、フロントライン療法または初期療法として投与される。いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、本明細書に記載のTILと併用して、フロントライン療法または初期療法として投与される。
いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、当該技術分野で知られている任意のPD-1阻害剤またはPD-1遮断剤であり得る。特に、次の段落でより詳細に記載されるPD-1阻害剤または遮断剤のうちの1つである。「阻害剤」、「アンタゴニスト」、及び「遮断剤」という用語は、本明細書では、PD-1阻害剤に関して互換的に使用される。誤解を避けるために、抗体であるPD-1阻害剤への本明細書での言及は、化合物またはその抗原結合断片、バリアント、複合体、もしくはバイオシミラーを指し得る。誤解を避けるために、PD-1阻害剤への本明細書での言及はまた、小分子化合物またはその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物、水和物、共結晶、もしくはプロドラッグを指し得る。
いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、抗体(すなわち、抗PD-1抗体)、Fab断片を含むその断片、またはその一本鎖可変断片(scFv)である。いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、ポリクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、PD-1との結合について競合し、及び/またはPD-1上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、PD-1との結合について競合し、及び/またはPD-1上のエピトープに結合する。
いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、ヒトPD-1に約100pM以下のKDで結合する、ヒトPD-1に約90pM以下のKDで結合する、ヒトPD-1に約80pM以下のKDで結合する、ヒトPD-1に約70pM以下のKDで結合する、ヒトPD-1に約60pM以下のKDで結合する、ヒトPD-1に約50pM以下のKDで結合する、ヒトPD-1に約40pM以下のKDで結合する、ヒトPD-1に約30pM以下のKDで結合する、ヒトPD-1に約20pM以下のKDで結合する、ヒトPD-1に約10pM以下のKDで結合する、またはヒトPD-1に約1pM以下のKDで結合するものである。
いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、ヒトPD-1に約7.5×105l/M・s以上のkassocで結合する、ヒトPD-1に約7.5×105l/M・s以上のkassocで結合する、ヒトPD-1に約8×105l/M・s以上のkassocで結合する、ヒトPD-1に約8.5×105l/M・s以上のkassocで結合する、ヒトPD-1に約9×105l/M・s以上のkassocで結合する、ヒトPD-1に約9.5×105l/M・s以上のkassocで結合する、またはヒトPD-1に約1×106l/M・s以上のkassocで結合するものである。
いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、ヒトPD-1に約2×10-5l/s以下のkdissocで結合する、ヒトPD-1に約2.1×10-5l/s以下のkdissocで結合する、ヒトPD-1に約2.2×10-5l/s以下のkdissocで結合する、ヒトPD-1に約2.3×10-5l/s以下のkdissocで結合する、ヒトPD-1に約2.4×10-5l/s以下のkdissocで結合する、ヒトPD-1に約2.5×10-5l/s以下のkdissocで結合する、ヒトPD-1に約2.6×10-5l/s以下のkdissocで結合する、またはヒトPD-1に約2.7×10-5l/s以下のkdissocで結合する、ヒトPD-1に約2.8×10-5l/s以下のkdissocで結合する、ヒトPD-1に約2.9×10-5l/s以下のkdissocで結合する、またはヒトPD-1に約3×10-5l/s以下のkdissocで結合するものである。
いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、約10nM以下のIC50でのヒトPD-1へのヒトPD-L1もしくはヒトPD-L2の結合を遮断もしくは阻害し、約9nM以下のIC50でのヒトPD-1へのヒトPD-L1もしくはヒトPD-L2の結合を遮断もしくは阻害し、約8nM以下のIC50でのヒトPD-1へのヒトPD-L1もしくはヒトPD-L2の結合を遮断もしくは阻害し、約7nM以下のIC50でのヒトPD-1へのヒトPD-L1もしくはヒトPD-L2の結合を遮断もしくは阻害し、約6nM以下のIC50でのヒトPD-1へのヒトPD-L1もしくはヒトPD-L2の結合を遮断もしくは阻害し、約5nM以下のIC50でのヒトPD-1へのヒトPD-L1もしくはヒトPD-L2の結合を遮断もしくは阻害し、約4nM以下のIC50でのヒトPD-1へのヒトPD-L1もしくはヒトPD-L2の結合を遮断もしくは阻害し、約3nM以下のIC50でのヒトPD-1へのヒトPD-L1もしくはヒトPD-L2の結合を遮断もしくは阻害し、約2nM以下のIC50でのヒトPD-1へのヒトPD-L1もしくはヒトPD-L2の結合を遮断もしくは阻害し、または約1nM以下のIC50でのヒトPD-1へのヒトPD-L1もしくはヒトPD-L2の結合を遮断もしくは阻害するものである。
いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、ニボルマブ(Bristol-Myers Squibb Co.からOPDIVOとして市販されている)、またはそれらのバイオシミラー、抗原結合断片、複合体、もしくはバリアントである。ニボルマブは、PD-1受容体を遮断する完全ヒトIgG4抗体である。いくつかの実施形態では、抗PD-1抗体は、免疫グロブリンG4カッパ、抗(ヒトCD274)抗体である。ニボルマブには、Chemical Abstracts Service(CAS)登録番号946414-94-4が割り当てられており、5C4、BMS-936558、MDX-1106、及びONO-4538としても知られている。ニボルマブの調製及び特性は、米国特許第8,008,449号及び国際特許公開第WO2006/121168号に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。様々な形態のがんにおけるニボルマブの臨床的安全性及び有効性は、Wang,et al.,Cancer Immunol Res.2014,2,846-56;Page,et al.,Ann.Rev.Med.,2014,65,185-202、及びWeber,et al.,J.Clin.Oncology,2013,31,4311-4318に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。ニボルマブのアミノ酸配列を表18に示す。ニボルマブは、22-96、140-196、254-314、360-418、22’’-96’’、140’’-196’’、254’’-314’’、及び360’’-418’’における重鎖内ジスルフィド結合;23’-88’、134’-194’、23’’’-88’’’、及び134’’’-194’’’における軽鎖内ジスルフィド結合;127-214’、127’’-214’’’における重鎖-軽鎖間ジスルフィド結合;219-219’’及び222-222’’における重鎖-重鎖間ジスルフィド結合;ならびに290、290’’におけるN-グリコシル化部位(H CH284.4)を有する。
いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、配列番号158によって与えられる重鎖及び配列番号159によって与えられる軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、それぞれ、配列番号158及び配列番号159に示される配列を有する重鎖及び軽鎖、またはそれらの抗原結合断片、Fab断片、一本鎖可変断片(scFv)、バリアント、もしくは複合体を含む。いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号158及び配列番号159に示される配列と少なくとも99%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号158及び配列番号159に示される配列と少なくとも98%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号158及び配列番号159に示される配列と少なくとも97%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号158及び配列番号159に示される配列と少なくとも96%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号158及び配列番号159に示される配列と少なくとも95%同一である重鎖及び軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、ニボルマブの重鎖及び軽鎖CDRまたは可変領域(VR)を含む。いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤重鎖可変領域(VH)は、配列番号160に示される配列を含み、PD-1阻害剤軽鎖可変領域(VL)は、配列番号161に示される配列、及びその保存的アミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号160及び配列番号161に示される配列と少なくとも99%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号160及び配列番号161に示される配列と少なくとも98%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号160及び配列番号161に示される配列と少なくとも97%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号160及び配列番号161に示される配列と少なくとも96%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号160及び配列番号161に示される配列と少なくとも95%同一であるVH領域及びVL領域を含む。
いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、それぞれ、配列番号162、配列番号163、及び配列番号164に示される配列を有する重鎖CDR1、CDR2及びCDR3ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号165、配列番号166、及び配列番号167に示される配列を有する軽鎖CDR1、CDR2及びCDR3ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、前述の抗体のうちのいずれかと結合するために競合し、及び/またはPD-1上の同じエピトープに結合する。
いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、ニボルマブに関して薬物規制当局によって承認された抗PD-1バイオシミラーモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列に対して少なくとも97%の配列同一性、例えば、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、参照医薬品または参照バイオ製品と比較して、1つ以上の翻訳後修飾を含む、PD-1抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、ニボルマブである。いくつかの実施形態では、1つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、及び切断のうちの1つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可された、または認可のために提出された抗PD-1抗体であり、抗PD-1抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、ニボルマブである。抗PD-1抗体は、米国FDA及び/または欧州連合のEMAなどの薬物規制当局によって認可されている場合がある。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、1つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、1つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、ニボルマブである。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、1つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、1つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、ニボルマブである。
いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、ニボルマブまたはそのバイオシミラーであり、ニボルマブは、約0.5mg/kg~約10mg/kgの用量で投与される。いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、ニボルマブまたはそのバイオシミラーであり、ニボルマブは、約0.5mg/kg、約1mg/kg、約1.5mg/kg、約2mg/kg、約2.5mg/kg、約3mg/kg、約3.5mg/kg、約4mg/kg、約4.5mg/kg、約5mg/kg、約5.5mg/kg、約6mg/kg、約6.5mg/kg、約7mg/kg、約7.5mg/kg、約8mg/kg、約8.5mg/kg、約9mg/kg、約9.5mg/kg、または約10mg/kgの用量で投与される。
いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、ニボルマブまたはそのバイオシミラーであり、ニボルマブは、約200mg~約500mgの用量で投与される。いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、ニボルマブまたはそのバイオシミラーであり、ニボルマブは、約200mg、約220mg、約240mg、約260mg、約280mg、約300mg、約320mg、約340mg、約360mg、約380mg、約400mg、約420mg、約440mg、約460mg、約480mg、または約500mgの用量で投与される。
いくつかの実施形態では、ニボルマブは、転移性非小細胞肺癌を治療するために投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブは、転移性非小細胞肺癌を治療するために、2週間毎に約3mg/kgで、6週間毎に1mg/kgのイピリムマブとともに投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブは、転移性非小細胞肺癌を治療するために、3週間毎に約360mgで、6週間毎に1mg/kgのイピリムマブ及び2サイクルのプラチナダブレット化学療法とともに投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブは、転移性非小細胞肺癌を治療するために、2週間毎に約240mgまたは4週間毎に480mg投与される。
いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、ペムブロリズマブ(Merck&Co.,Inc(Kenilworth,NJ,USA)からKEYTRUDAとして市販されている)、またはそれらの抗原結合断片、複合体、もしくはバリアントを含む。ペムブロリズマブには、CAS登録番号1374853-91-4が割り当てられており、ラムブロリズマブ、MK-3475、及びSCH-900475としても知られている。ペムブロリズマブは、免疫グロブリンG4、抗(ヒトタンパク質PDCD1(プログラム細胞死1))(ヒト-ハツカネズミモノクローナル重鎖)、ヒト-ハツカネズミモノクローナル軽鎖、二量体構造を有するジスルフィドを有する。ペムブロリズマブの構造は、免疫グロブリンG4、抗(ヒトプログラム細胞死1);ヒト化マウスモノクローナルκ軽鎖二量体(226-226’’:229-229’’)-ビスジスルフィドを有するヒト化マウスモノクローナル[228-L-プロリン(H10-S>P)]γ4重鎖(134-218’)-ジスルフィドとしても記載され得る。ペムブロリズマブの特性、使用、及び調製は、国際特許公開第WO2008/156712A1号、米国特許第8,354,509号、ならびに米国特許出願公開第US2010/0266617A1号、同第US2013/0108651A1号、及び同第US2013/0109843A2に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。様々な形態のがんにおけるペムブロリズマブの臨床的安全性及び有効性は、Fuerst,Oncology Times,2014,36,35-36、Robert,et al.,Lancet,2014,384,1109-17、及びThomas,et al.,Exp.Opin.Biol.Ther.,2014,14,1061-1064に記載されている。ペムブロリズマブのアミノ酸配列を表19に示す。ペムブロリズマブは、ジスルフィド架橋:22-96、22’’-96’’、23’-92’、23’’’-92’’’、134-218’、134’’-218’’’、138’-198’、138’’’-198’’’、147-203、147’’-203’’、226-226’’、229-229’’、261-321、261’’-321’’、367-425、及び367’’-425’’、ならびにグリコシル化部位(N):Asn-297及びAsn-297’’を含む。ペムブロリズマブは、Fc領域に安定化S228P変異を有するIgG4/カッパアイソタイプであり、この変異をIgG4ヒンジ領域に挿入すると、IgG4抗体で典型的に観察される半分子の形成が防止される。ペムブロリズマブは、各重鎖のFcドメイン内のAsn297で不均一にグリコシル化されており、無傷の抗体の分子量はおよそ149kDaになる。ペムブロリズマブの優性グリコフォームは、フコシル化アガラクト二分性グリカンフォーム(G0F)である。
いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、配列番号168によって与えられる重鎖及び配列番号169によって与えられる軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、それぞれ、配列番号168及び配列番号169に示される配列を有する重鎖及び軽鎖、またはそれらの抗原結合断片、Fab断片、一本鎖可変断片(scFv)、バリアント、もしくは複合体を含む。いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号168及び配列番号169に示される配列と少なくとも99%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号168及び配列番号169に示される配列と少なくとも98%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号168及び配列番号169に示される配列と少なくとも97%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号168及び配列番号169に示される配列と少なくとも96%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号168及び配列番号169に示される配列と少なくとも95%同一である重鎖及び軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、ペムブロリズマブの重鎖及び軽鎖CDRまたは可変領域(VR)を含む。いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤重鎖可変領域(VH)は、配列番号170に示される配列を含み、PD-1阻害剤軽鎖可変領域(VL)は、配列番号171に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号170及び配列番号171に示される配列と少なくとも99%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号170及び配列番号171に示される配列と少なくとも98%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号170及び配列番号171に示される配列と少なくとも97%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号170及び配列番号171に示される配列と少なくとも96%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号170及び配列番号171に示される配列と少なくとも95%同一であるVH領域及びVL領域を含む。
いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、それぞれ、配列番号172、配列番号173、及び配列番号174に示される配列を有する重鎖CDR1、CDR2及びCDR3ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号175、配列番号176、及び配列番号177に示される配列を有する軽鎖CDR1、CDR2及びCDR3ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、前述の抗体のうちのいずれかと結合するために競合し、及び/またはPD-1上の同じエピトープに結合する。
いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、ペムブロリズマブに関して薬物規制当局によって承認された抗PD-1バイオシミラーモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列に対して少なくとも97%の配列同一性、例えば、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、参照医薬品または参照バイオ製品と比較して、1つ以上の翻訳後修飾を含む、PD-1抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、ペムブロリズマブである。いくつかの実施形態では、1つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、及び切断のうちの1つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可された、または認可のために提出された抗PD-1抗体であり、抗PD-1抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、ペムブロリズマブである。抗PD-1抗体は、米国FDA及び/または欧州連合のEMAなどの薬物規制当局によって認可されている場合がある。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、1つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、1つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、ペムブロリズマブである。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、1つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、1つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、ペムブロリズマブである。
いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、ペムブロリズマブまたはそのバイオシミラーであり、ペムブロリズマブは、約0.5mg/kg~約10mg/kgの用量で投与される。いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、ペムブロリズマブまたはそのバイオシミラーであり、ペムブロリズマブは、約0.5mg/kg、約1mg/kg、約1.5mg/kg、約2mg/kg、約2.5mg/kg、約3mg/kg、約3.5mg/kg、約4mg/kg、約4.5mg/kg、約5mg/kg、約5.5mg/kg、約6mg/kg、約6.5mg/kg、約7mg/kg、約7.5mg/kg、約8mg/kg、約8.5mg/kg、約9mg/kg、約9.5mg/kg、または約10mg/kgの用量で投与される。
いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、ペムブロリズマブまたはそのバイオシミラーであり、ペムブロリズマブは、約200mg~約500mgの用量で投与される。いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、ペムブロリズマブまたはそのバイオシミラーであり、ニボルマブは、約200mg、約220mg、約240mg、約260mg、約280mg、約300mg、約320mg、約340mg、約360mg、約380mg、約400mg、約420mg、約440mg、約460mg、約480mg、または約500mgの用量で投与される。
いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、ペムブロリズマブまたはそのバイオシミラーであり、ペムブロリズマブは、2週間毎、3週間毎、4週間毎、5週間毎、または6週間毎に投与される。
いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、NSCLCを治療するために投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、NSCLCを治療するために、3週間毎に約200mgで投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、NSCLCを治療するために、6週間毎に約400mgで投与される。
いくつかの実施形態では、患者または対象が成人である場合、すなわち、成人適応症の治療、及び6週間毎の400mgの追加の投薬レジメンが用いられ得る。
いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、抗m-PD-1クローンJ43(カタログ番号BE0033-2)及びRMP1-14(カタログ番号BE0146)(Bio X Cell,Inc.,West Lebanon,NH USA)などの市販の抗PD-1モノクローナル抗体である。いくつかの市販の抗PD-1抗体が、当業者に知られている。
いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、米国特許第8,354,509号または米国特許出願公開第2010/0266617 A1号、同第2013/0108651A1号、同第2013/0109843 A2号に開示されている抗体であり、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、米国特許第8,287,856号、同第8,580,247号、及び同第8,168,757号、ならびに米国特許出願公開第2009/0028857 A1号、同第2010/0285013 A1号、同第2013/0022600A1号、及び同第2011/0008369 A1号に記載されている抗PD-1抗体であり、それらの教示は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、米国特許第8,735,553 B1号に開示されている抗PD-1抗体であり、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、CT-011としても知られるピジリズマブであり、これは米国特許第8,686,119号に記載されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、PD-1阻害剤は、米国特許第8,907,053号、同第9,096,642号、及び同第9,044,442号、ならびに米国特許出願公開第US2015/0087581号に記載されるものなどの小分子またはペプチドもしくはペプチド誘導体;米国特許出願公開第2015/0073024号に記載されるものなどの1,2,4-オキサジアゾール化合物及び誘導体;米国特許出願公開第US2015/0073042号に記載されるものなどの環状ペプチド模倣化合物及び誘導体;米国特許出願公開第US2015/0125491号に記載されるものなどの環状化合物及び誘導体;国際特許出願公開第WO2015/033301号に記載されるものなどの1,3,4-オキサジアゾール及び1,3,4-チアジアゾール化合物ならびに誘導体;国際特許出願公開第WO2015/036927号及びWO2015/04490号に記載されるものなどのペプチド系化合物及び誘導体、または米国特許出願公開第US2014/0294898号に記載されるものなどの大環状ペプチド系化合物及び誘導体であり得、各々の開示は参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、TIL及びPD-L1阻害剤またはPD-L2阻害剤は、NSCLCの治療のための併用療法または共療法として投与される。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、前治療を受けていない。いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤またはPD-L2阻害剤は、フロントライン療法または初期療法として投与される。いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤またはPD-L2阻害剤は、本明細書に記載のTILと併用して、フロントライン療法または初期療法として投与される。
いくつかの実施形態では、PD-L1またはPD-L2阻害剤は、当該技術分野で知られている任意のPD-L1もしくはPD-L2阻害剤、アンタゴニスト、または遮断剤であり得る。特に、次の段落でより詳細に記載されるPD-L1もしくはPD-L2阻害剤、アンタゴニスト、または遮断剤のうちの1つである。「阻害剤」、「アンタゴニスト」、及び「遮断剤」という用語は、本明細書では、PD-L1及びPD-L2阻害剤に関して交換可能に使用される。誤解を避けるために、抗体であるPD-L1またはPD-L2阻害剤への本明細書での言及は、化合物またはその抗原結合断片、バリアント、複合体、もしくはバイオシミラーを指し得る。誤解を避けるために、PD-L1またはPD-L2阻害剤への本明細書での言及は、化合物またはその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物、水和物、共結晶、もしくはプロドラッグを指し得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物、プロセス、及び方法は、PD-L1またはPD-L2阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、PD-L1またはPD-L2阻害剤は、小分子である。いくつかの実施形態では、PD-L1またはPD-L2阻害剤は、抗体(すなわち、抗PD-1抗体)、Fab断片を含むその断片、またはその一本鎖可変断片(scFv)である。いくつかの実施形態では、PD-L1またはPD-L2阻害剤は、ポリクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、PD-L1またはPD-L2阻害剤は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、PD-L1またはPD-L2阻害剤は、PD-L1もしくはPD-L2との結合について競合し、及び/またはPD-L1もしくはPD-L2上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、PD-L1もしくはPD-L2との結合について競合し、及び/またはPD-L1もしくはPD-L2上のエピトープに結合する。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるPD-L1阻害剤は、化合物が、PD-L2受容体を含む他の受容体と結合または相互作用するよりも実質的に低い濃度でPD-L1と結合または相互作用するという点で、PD-L1に対して選択的である。特定の実施形態では、化合物は、PD-L2受容体に対するより少なくとも約2倍高い濃度、約3倍高い濃度、約5倍高い濃度、約10倍高い濃度、約20倍高お濃度、約30倍高い濃度、約50倍高い濃度、約100倍高い濃度、約200倍高い濃度、約300倍高い濃度、または約500倍高い濃度である結合定数でPD-L1受容体に結合する。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるPD-L2阻害剤は、化合物が、PD-L1受容体を含む他の受容体と結合または相互作用するよりも実質的に低い濃度でPD-L2と結合または相互作用するという点で、PD-L2に対して選択的である。特定の実施形態では、化合物は、PD-L1受容体に対するより少なくとも約2倍高い濃度、約3倍高い濃度、約5倍高い濃度、約10倍高い濃度、約20倍高お濃度、約30倍高い濃度、約50倍高い濃度、約100倍高い濃度、約200倍高い濃度、約300倍高い濃度、または約500倍高い濃度である結合定数でPD-L2受容体に結合する。
いかなる理論にも縛られることなく、腫瘍細胞はPD-L1を発現し、T細胞はPD-1を発現すると考えられている。しかしながら、腫瘍細胞によるPD-L1の発現は、PD-1またはPD-L1の阻害剤または遮断剤の有効性には必要とされない。いくつかの実施形態では、腫瘍細胞は、PD-L1を発現する。いくつかの実施形態では、腫瘍細胞は、PD-L1を発現しない。いくつかの実施形態では、方法は、TILと組み合わせて、本明細書に記載されるものなどのPD-1及びPD-L1抗体の組み合わせを含むことができる。PD-1及びPD-L1抗体とTILとの組み合わせの投与は、同時または連続的であり得る。
いくつかの実施形態では、PD-L1及び/またはPD-L2阻害剤は、ヒトPD-L1及び/またはPD-L2に約100pM以下のKDで結合する、ヒトPD-L1及び/またはPD-L2に約90pM以下のKDで結合する、ヒトPD-L1及び/またはPD-L2に約80pM以下のKDで結合する、ヒトPD-L1及び/またはPD-L2に約70pM以下のKDで結合する、ヒトPD-L1及び/またはPD-L2に約60pM以下のKDで結合する、ヒトPD-L1及び/またはPD-L2に約50pM以下のKDで結合する、ヒトPD-L1及び/またはPD-L2に約40pM以下のKDで結合する、またはヒトPD-L1及び/またはPD-L2に約30pM以下のKDで結合するものである。
いくつかの実施形態では、PD-L1及び/またはPD-L2阻害剤は、ヒトPD-L1及び/またはPD-L2に約7.5×105l/M・s以上のkassocで結合する、ヒトPD-L1及び/またはPD-L2に約8×105l/M・s以上のkassocで結合する、ヒトPD-L1及び/またはPD-L2に約8.5×105l/M・s以上のkassocで結合する、ヒトPD-L1及び/またはPD-L2に約9×105l/M・s以上のkassocで結合する、ヒトPD-L1及び/またはPD-L2に約9.5×105l/M・s以上のkassocで結合する、またはヒトPD-L1及び/またはPD-L2に約1×106l/M・s以上のkassocで結合するものである。
いくつかの実施形態では、PD-L1及び/またはPD-L2阻害剤は、ヒトPD-L1もしくはPD-L2に約2×10-5l/s以下のkdissocで結合する、ヒトPD-1に約2.1×10-5l/s以下のkdissocで結合する、ヒトPD-1に約2.2×10-5l/s以下のkdissocで結合する、ヒトPD-1に約2.3×10-5l/s以下のkdissocで結合する、ヒトPD-1に約2.4×10-5l/s以下のkdissocで結合する、ヒトPD-1に約2.5×10-5l/s以下のkdissocで結合する、ヒトPD-1に約2.6×10-5l/s以下のkdissocで結合する、ヒトPD-L1もしくはPD-L1に約2.7×10-5l/s以下のkdissocで結合する、またはヒトPD-L1もしくはPD-L2に約3×10-5l/s以下のkdissocで結合するものである。
いくつかの実施形態では、PD-L1及び/またはPD-L2阻害剤は、約10nM以下のIC50でのヒトPD-1へのヒトPD-L1もしくはヒトPD-L2の結合を遮断もしくは阻害し、約9nM以下のIC50でのヒトPD-1へのヒトPD-L1もしくはヒトPD-L2の結合を遮断もしくは阻害し、約8nM以下のIC50でのヒトPD-1へのヒトPD-L1もしくはヒトPD-L2の結合を遮断もしくは阻害し、約7nM以下のIC50でのヒトPD-1へのヒトPD-L1もしくはヒトPD-L2の結合を遮断もしくは阻害し、約6nM以下のIC50でのヒトPD-1へのヒトPD-L1もしくはヒトPD-L2の結合を遮断もしくは阻害し、約5nM以下のIC50でのヒトPD-1へのヒトPD-L1もしくはヒトPD-L2の結合を遮断もしくは阻害し、約4nM以下のIC50でのヒトPD-1へのヒトPD-L1もしくはヒトPD-L2の結合を遮断もしくは阻害し、約3nM以下のIC50でのヒトPD-1へのヒトPD-L1もしくはヒトPD-L2の結合を遮断もしくは阻害し、約2nM以下のIC50でのヒトPD-1へのヒトPD-L1もしくはヒトPD-L2の結合を遮断もしくは阻害し、または約1nM以下のIC50でのヒトPD-1へのヒトPD-L1もしくはヒトPD-L2の結合を遮断するものである。
いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、MEDI4736としても知られるデュルバルマブ(これは、AstraZeneca plc.の子会社であるMedimmune,LLC(Gaithersburg,Maryland)から市販されている)、またはその抗原結合断片、複合体、もしくはバリアントである。いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、米国特許第8,779,108号または米国特許出願公開第2013/0034559号に開示されている抗体であり、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。デュルバルマブの臨床的有効性は、Page,et al.,Ann.Rev.Med.,2014,65,185-202、Brahmer,et al.,J.Clin.Oncol.2014,32,5s(補充、要約8021)、及びMcDermott,et al.,Cancer Treatment Rev.,2014,40,1056-64に記載されている。デュルバルマブの調製及び特性は、米国特許第8,779,108号に記載されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。デュルバルマブのアミノ酸配列を表20に示す。デュルバルマブモノクローナル抗体は、22-96、22’’-96’’、23’-89’、23’’’-89’’’、135’-195’、135’’’-195’’’、148-204、148’’-204’’、215’-224、215’’’-224’’’、230-230’’、233-233’’、265-325、265’’-325’’、371-429、及び371’’-429’におけるジスルフィド結合、ならびにAsn-301及びAsn-301’’におけるN-グリコシル化部位を含む。
いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、配列番号178によって与えられる重鎖及び配列番号179によって与えられる軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、それぞれ、配列番号178及び配列番号179に示される配列を有する重鎖及び軽鎖、またはそれらの抗原結合断片、Fab断片、一本鎖可変断片(scFv)、バリアント、もしくは複合体を含む。いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号178及び配列番号179に示される配列と少なくとも99%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号178及び配列番号179に示される配列と少なくとも98%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号178及び配列番号179に示される配列と少なくとも97%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号178及び配列番号179に示される配列と少なくとも96%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号178及び配列番号179に示される配列と少なくとも95%同一である重鎖及び軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、デュルバルマブの重鎖及び軽鎖CDRまたは可変領域(VR)を含む。いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤重鎖可変領域(VH)は、配列番号180に示される配列を含み、PD-L1阻害剤軽鎖可変領域(VL)は、配列番号181に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号180及び配列番号181に示される配列と少なくとも99%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号180及び配列番号181に示される配列と少なくとも98%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号180及び配列番号181に示される配列と少なくとも97%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号180及び配列番号181に示される配列と少なくとも96%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号180及び配列番号181に示される配列と少なくとも95%同一であるVH領域及びVL領域を含む。
いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、それぞれ、配列番号182、配列番号183、及び配列番号184に示される配列を有する重鎖CDR1、CDR2及びCDR3ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号185、配列番号186、及び配列番号187に示される配列を有する軽鎖CDR1、CDR2及びCDR3ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、前述の抗体のうちのいずれかと結合するために競合し、及び/またはPD-L1上の同じエピトープに結合する。
いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、ペムブロリズマブに関して薬物規制当局によって承認された抗PD-L1バイオシミラーモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列に対して少なくとも97%の配列同一性、例えば、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、参照医薬品または参照バイオ製品と比較して、1つ以上の翻訳後修飾を含む、PD-L1抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、デュルバルマブである。いくつかの実施形態では、1つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、及び切断のうちの1つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可された、または認可のために提出された抗PD-L1抗体であり、抗PD-L1抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、デュルバルマブである。抗PD-L1抗体は、米国FDA及び/または欧州連合のEMAなどの薬物規制当局によって認可されている場合がある。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、1つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、1つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、デュルバルマブである。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、1つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、1つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、デュルバルマブである。
いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、MSB0010718C(Merck KGaA/EMD Seronoから市販されている)としても知られるアベルマブ、またはその抗原結合断片、複合体、もしくはバリアントである。アベルマブの調製及び特性は、米国特許出願公開第US2014/0341917A1号に記載されており、その開示は参照により本明細書に具体的に組み込まれる。アベルマブのアミノ酸配列を表21に示す。アベルマブは、22-96、147-203、264-324、370-428、22’’-96’’、147’’-203’’、264’’-324’’、及び370’’-428’’における重鎖内ジスルフィド結合(C23-C104);22’-90’、138’-197’、22’’’-90’’’、及び138’’’-197’’’における軽鎖内ジスルフィド結合(C23-C104);223-215’及び223’’-215’’’における重鎖-軽鎖内ジスルフィド結合(h5-CL126);229-229’’及び232-232’’における重鎖-重鎖内ジスルフィド結合(h11、h14);300、300’’におけるN-グリコシル化部位(H CH2 N84.4);フコシル化複合体二分性CHO型グリカン;ならびに450及び450’におけるH CHS K2 C末端リジンクリッピングを有する。
いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、配列番号188によって与えられる重鎖及び配列番号189によって与えられる軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、それぞれ、配列番号188及び配列番号189に示される配列を有する重鎖及び軽鎖、またはそれらの抗原結合断片、Fab断片、一本鎖可変断片(scFv)、バリアント、もしくは複合体を含む。いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号188及び配列番号189に示される配列と少なくとも99%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号188及び配列番号189に示される配列と少なくとも98%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号188及び配列番号189に示される配列と少なくとも97%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号188及び配列番号189に示される配列と少なくとも96%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号188及び配列番号189に示される配列と少なくとも95%同一である重鎖及び軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、アベルマブの重鎖及び軽鎖CDRまたは可変領域(VR)を含む。いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤重鎖可変領域(VH)は、配列番号190に示される配列を含み、PD-L1阻害剤軽鎖可変領域(VL)は、配列番号191に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号190及び配列番号191に示される配列と少なくとも99%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号190及び配列番号191に示される配列と少なくとも98%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号190及び配列番号191に示される配列と少なくとも97%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号190及び配列番号191に示される配列と少なくとも96%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号190及び配列番号191に示される配列と少なくとも95%同一であるVH領域及びVL領域を含む。
いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、それぞれ、配列番号192、配列番号193、及び配列番号194に示される配列を有する重鎖CDR1、CDR2及びCDR3ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号195、配列番号196、及び配列番号197に示される配列を有する軽鎖CDR1、CDR2及びCDR3ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、前述の抗体のうちのいずれかと結合するために競合し、及び/またはPD-L1上の同じエピトープに結合する。
いくつかの複合体実施形態では、PD-L1阻害剤は、アベルマブに関して薬物規制当局によって承認された抗PD-L1バイオシミラーモノクローナル抗体である。いくつかの複合体実施形態では、バイオシミラーは、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列に対して少なくとも97%の配列同一性、例えば、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、参照医薬品または参照バイオ製品と比較して、1つ以上の翻訳後修飾を含む、PD-L1抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、アベルマブである。いくつかの実施形態では、1つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、及び切断のうちの1つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可された、または認可のために提出された抗PD-L1抗体であり、抗PD-L1抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、アベルマブである。抗PD-L1抗体は、米国FDA及び/または欧州連合のEMAなどの薬物規制当局によって認可されている場合がある。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、1つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、1つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、アベルマブである。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、1つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、1つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、アベルマブである。
いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、MPDL3280AまたはRG7446としても知られるアテゾリズマブ(Roche Holding AG(Basel,Switzerland)の子会社であるGenentech,Inc.からTECENTRIQとして市販されている)、またはその抗原結合断片、複合体、もしくはバリアントである。いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、米国特許第8,217,149号に開示されている抗体であり、その開示は参照により本明細書に具体的に組み込まれる。いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、米国特許出願公開第2010/0203056A1号、同第2013/0045200A1号、同第2013/0045201A1号、同第2013/0045202A1号、または同第2014/0065135A1号に開示されている抗体であり、その開示は参照により本明細書に具体的に組み込まれる。アテゾリズマブの調製及び特性は、米国特許第8,217,149号に記載されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。アテゾリズマブのアミノ酸配列を表22に示す。アテゾリズマブは、22-96、145-201、262-322、368-426、22’’-96’’、145’’-201’’、262’’-322’’、及び368’’-426’’における重鎖内ジスルフィド結合(C23-C104);23’-88’、134’-194’、23’’’-88’’’、及び134’’’-194’’’における軽鎖内ジスルフィド結合(C23-C104);221-214’及び221’’-214’’’における重鎖-軽鎖内ジスルフィド結合(h5-CL126);227-227’’及び230-230’’における重鎖-重鎖内ジスルフィド結合(h11、h14);ならびに298及び298’におけるN-グリコシル化部位(H CH2 N84.4>A)を有する。
いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、配列番号198によって与えられる重鎖及び配列番号199によって与えられる軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、それぞれ、配列番号198及び配列番号199に示される配列を有する重鎖及び軽鎖、またはそれらの抗原結合断片、Fab断片、一本鎖可変断片(scFv)、バリアント、もしくは複合体を含む。いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号198及び配列番号199に示される配列と少なくとも99%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号198及び配列番号199に示される配列と少なくとも98%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号198及び配列番号199に示される配列と少なくとも97%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号198及び配列番号199に示される配列と少なくとも96%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号198及び配列番号199に示される配列と少なくとも95%同一である重鎖及び軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、アテゾリズマブの重鎖及び軽鎖CDRまたは可変領域(VR)を含む。いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤重鎖可変領域(VH)は、配列番号200に示される配列を含み、PD-L1阻害剤軽鎖可変領域(VL)は、配列番号201に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号200及び配列番号201に示される配列と少なくとも99%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号200及び配列番号201に示される配列と少なくとも98%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号200及び配列番号201に示される配列と少なくとも97%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号200及び配列番号201に示される配列と少なくとも96%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号200及び配列番号201に示される配列と少なくとも95%同一であるVH領域及びVL領域を含む。
いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、それぞれ、配列番号202、配列番号203、及び配列番号204に示される配列を有する重鎖CDR1、CDR2及びCDR3ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号205、配列番号206、及び配列番号207に示される配列を有する軽鎖CDR1、CDR2及びCDR3ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、前述の抗体のうちのいずれかと結合するために競合し、及び/またはPD-L1上の同じエピトープに結合する。
いくつかの実施形態では、抗PD-L1抗体は、アテゾリズマブに関して薬物規制当局によって承認された抗PD-L1バイオシミラーモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列に対して少なくとも97%の配列同一性、例えば、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、参照医薬品または参照バイオ製品と比較して、1つ以上の翻訳後修飾を含む、PD-L1抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、アテゾリズマブである。いくつかの実施形態では、1つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、及び切断のうちの1つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可された、または認可のために提出された抗PD-L1抗体であり、抗PD-L1抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、アテゾリズマブである。抗PD-L1抗体は、米国FDA及び/または欧州連合のEMAなどの薬物規制当局によって認可されている場合がある。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、1つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、1つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、アテゾリズマブである。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、1つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、1つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、アテゾリズマブである。
いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、米国特許出願公開第US2014/0341917A1号に記載されている抗体を含み、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、PD-L1への結合についてこれらの抗体のうちのいずれかと競合する抗体も含まれる。いくつかの実施形態では、抗PD-L1抗体は、BMS-935559としても知られるMDX-1105であり、これは米国特許第7,943,743号に開示されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、抗PD-L1抗体は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第7,943,743号に開示されている抗PD-L1抗体から選択される。
いくつかの実施形態では、PD-L1阻害剤は、INVIVOMAB抗m-PD-L1クローン10F.9G2(カタログ番号BE0101、Bio X Cell,Inc.,West Lebanon,NH,USA)などの市販のモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、抗PD-L1抗体は、AFFYMETRIX EBIOSCIENCE(MIH1)などの市販のモノクローナル抗体である。いくつかの市販の抗PD-L1抗体が、当業者に知られている。
いくつかの実施形態では、PD-L2阻害剤は、BIOLEGEND24F.10C12マウスIgG2a、κアイソタイプ(カタログ番号329602 Biolegend,Inc.,San Diego,CA)、SIGMA抗PD-L2抗体(カタログ番号SAB3500395,Sigma-Aldrich Co.,St.Louis,MO)、または当業者に知られている他の市販のPD-L2抗体などの市販のモノクローナル抗体である。
4.CTLA-4阻害剤との併用
いくつかの実施形態では、TIL及びCTLA-4阻害剤は、NSCLCの治療のための併用療法または共療法として投与される。
いくつかの実施形態では、TIL及びCTLA-4阻害剤は、NSCLCの治療のための併用療法または共療法として投与される。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、前治療を受けていない。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、フロントライン療法または初期療法として投与される。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、本明細書に記載のTILと併用して、フロントライン療法または初期療法として投与される。
細胞傷害性Tリンパ球抗原4(CTLA-4)は、免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーであり、ヘルパーT細胞の表面で発現する。CTLA-4は、CD28依存性T細胞活性化の負の制御因子であり、適応免疫応答のチェックポイントとして機能する。T細胞共刺激タンパク質CD28と同様に、CTLA-4結合抗原は、細胞上でCD80及びCD86を提示する。CTLA-4は抑制シグナルをT細胞に伝達し、CD28は刺激シグナルを伝達する。ヒトCTLA-4に対するヒト抗体は、ウイルス感染及び細菌感染を治療または予防すること、ならびにがんを治療するためのものなど、多くの疾患状態における免疫刺激調節因子として記載されている(WO01/14424及びWO00/37504)。様々な前臨床研究は、モノクローナル抗体などのCTLA-4阻害剤によるCTLA-4遮断が、免疫原性腫瘍に対する宿主免疫応答を増強し、確立された腫瘍を排除することさえ可能であることを示している。イピリムマブ(MDX-010)及びトレメリムマブ(CP-675,206)を含むが、これらに限定されない、様々な種類の固形腫瘍の治療のためのいくつかの完全ヒト抗ヒトCTLA-4モノクローナル抗体(mAb)が、臨床試験で研究されている。
いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、当技術分野で知られている任意のCTLA-4阻害剤またはCTLA-4遮断剤であり得る。特に、次の段落でより詳細に記載されるCTLA-4阻害剤または遮断剤のうちの1つである。「阻害剤」、「アンタゴニスト」、及び「遮断剤」という用語は、本明細書では、CTLA-4阻害剤に関して互換的に使用される。誤解を避けるために、抗体であるCTLA-4阻害剤への本明細書での言及は、化合物またはその抗原結合断片、バリアント、複合体、もしくはバイオシミラーを指し得る。誤解を避けるために、CTLA-4阻害剤への本明細書での言及はまた、小分子化合物またはその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物、水和物、共結晶、もしくはプロドラッグを指し得る。
本発明の方法で使用するための好適なCTLA-4阻害剤には、抗CTLA-4抗体、ヒト抗CTLA-4抗体、マウス抗CTLA-4抗体、哺乳動物抗CTLA-4抗体、ヒト化抗CTLA-4抗体、モノクローナル抗CTLA-4抗体、ポリクローナル抗CTLA-4抗体、キメラ抗CTLA-4抗体、MDX-010(イピリムマブ)、トレメリムマブ、抗CD28抗体、抗CTLA-4アドネクチン、抗CTLA-4ドメイン抗体、一本鎖抗CTLA-4断片、重鎖抗CTLA-4断片、軽鎖抗CTLA-4断片、共刺激経路を刺激するCTLA-4の阻害剤、PCT公開第WO2001/014424号に開示される抗体、PCT公開第WO2004/035607号に開示される抗体、米国特許出願公開第2005/0201994号に開示される抗体、ならびに付与された欧州特許第EP 1212422 B1号に開示された抗体が含まれるが、これらに限定されず、各々の開示が参照により本明細書に組み込まれる。さらなるCTLA-4抗体は、米国特許第5,811,097号、同第5,855,887号、同第6,051,227号、及び同第6,984,720号、PCT公開第WO01/14424号及び同第WO00/37504号、ならびに米国公開第2002/0039581号及び同第2002/086014号に記載されており、各々の開示が参照により本明細書に組み込まれる。本発明の方法で使用することができる他の抗CTLA-4抗体には、例えば、WO98/42752、米国特許第6,682,736号及び同第6,207,156号、Hurwitz et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,95(17):10067-10071(1998)、Camacho et al.,J.Clin.Oncology,22(145):Abstract No.2505(2004)(抗体CP-675206)、Mokyr et al.,Cancer Res.,58:5301-5304(1998)、ならびに米国特許第5,977,318号、同第6,682,736号、同第7,109,003号、及び同第7,132,281号に開示されるものが含まれ、これらの各々の開示は、骨髄非破壊的リンパ枯渇レジメンを参照することにより本明細書に組み込まれる。
さらなるCTLA-4阻害剤には、CD28抗原がその同族リガンドと結合する能力を妨害すること、CTLA-4がその同族リガンドと結合する能力を阻害すること、共刺激経路を介してT細胞応答を増強すること、B7がCD28及び/またはCTLA-4と結合する能力を破壊すること、B7が共刺激経路を活性化する能力を破壊すること、CD80がCD28及び/またはCTLA-4と結合する能力を破壊すること、CD80が共刺激経路を活性化する能力を破壊すること、CD86がCD28及び/またはCTLA-4と結合する能力を破壊すること、CD86が共刺激経路を活性化する能力を破壊すること、及び共刺激経路を一般に活性化されることから破壊することが可能である任意の阻害剤が含まれるが、これらに限定されない。これには、共刺激経路の他のメンバーのなかでもCD28、CD80、CD86、CTLA-4の小分子阻害剤、共刺激経路の他のメンバーのなかでもCD28、CD80、CD86、CTLA-4に対する抗体、共刺激経路の他のメンバーのなかでもC28、CD80、CD86、CTLA-4に指向するアンチセンス分子、共刺激経路の他のメンバーのなかでもCD28、CD80、CD86、CTLA-4に指向するアドネクチン、他のCTLA-4阻害剤のなかでも共刺激経路の他のメンバーのなかでもCD28、CD80、CD86、CTLA-4のRNAi阻害剤(一本鎖及び二本鎖の両方)が必ず含まれる。
いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、約10-6M以下、約10-7M以下、約10-8M以下、約10-9M以下、約10-10M以下、約10-11M以下、約10-12M以下、例えば、約10-13M~10-16Mの間、またはエンドポイントとして前述の値のうちの任意の2つを有する任意の範囲内で、CTLA-4と結合する。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、同じアッセイを使用して比較した場合、イピリムマブのKdの10倍以下のKdでCTLA-4と結合する。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、同じアッセイを使用して比較した場合、イピリムマブとほぼ同じかまたはそれ以下(例えば、最大10倍低いか、または最大100倍低い)のKdでCTLA-4と結合する。いくつかの実施形態では、CD80またはCD86とのCTLA-4結合のCTLA-4阻害剤による阻害のIC50値は、同じアッセイを使用して比較した場合、それぞれCD80またはCD86とのCTLA-4結合のイピリムマブ媒介阻害より10倍以下で大きい。いくつかの実施形態では、CD80またはCD86とのCTLA-4結合のCTLA-4阻害剤による阻害のIC50値は、同じアッセイを使用して比較した場合、それぞれCD80またはCD86とのCTLA-4結合のイピリムマブ媒介性阻害とほぼ同じかまたはそれ以下(例えば、最大10倍低い、または最大100倍低い)である。
いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、好適な対照と比較して、少なくとも20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、または100%、例えば、50%~75%、75%~90%、または90%~100%の間でCTLA-4の発現を阻害する、及び/または生物学的活性を減少させるのに十分な量で使用される。いくつかの実施形態では、CTLA-4経路阻害剤は、好適な対照と比較して、少なくとも20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、または100%、例えば、50%~75%、75%~90%、または90%~100%の間でCTLA-4のCD80、CD86、またはその両方との結合を減少させることにより、CTLA-4の生物学的活性を減少させるのに十分な量で使用される。対象となる薬剤の効果を評価または定量化する状況下における好適な対照は、典型的には、対象となる薬剤、例えば、CTLA-4経路阻害剤に曝露されていないか、または治療されていない(または僅かな量に曝露されているか、または治療されている)同等の生物学的システム(例えば、細胞または対象)である。いくつかの実施形態では、生物学的システムは、それ自体の対照として機能し得る(例えば、生物学的システムは、薬剤への曝露または治療の前に評価され得、曝露または治療が開始または終了した後の状態と比較され得る。いくつかの実施形態では、歴史的対照が使用され得る。
いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、イピリムマブ(Bristol-Myers Squibb Co.からYervoyとして市販されている)、またはそのバイオシミラー、抗原結合断片、複合体、もしくはバリアントである。当該技術分野で知られているように、イピリムマブは、機能的ヒトレパートリーを生成するための重鎖及び軽鎖をコードするヒト遺伝子を有するトランスジェニックマウスに由来する完全ヒトIgG 1κ抗体である、抗CTLA-4抗体を指す。イピリムマブは、そのCAS登録番号477202-00-9及びPCT公開第WO01/14424号で参照することもでき、その全体がすべての目的で参照により本明細書に組み込まれる。それは抗体10DIとして開示されている。具体的には、イピリムマブは、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域(配列番号516を含む軽鎖可変領域を有し、配列番号515を含む重鎖可変領域を有する)を含む。CTLA-4と特異的に結合するヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部位を表す。イピリムマブの薬学的組成物は、イピリムマブ及び1つ以上の希釈剤、ビヒクル及び/または賦形剤を含有するすべての薬学的に許容される組成物を含む。イピリムマブを含有する薬学的組成物の例は、PCT公開第WO2007/67959号に記載されている。イムピリムマブは、静脈内(IV)投与され得る。
いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、配列番号208によって与えられる重鎖及び配列番号209によって与えられる軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、それぞれ、配列番号208及び配列番号209に示される配列を有する重鎖及び軽鎖、またはそれらの抗原結合断片、Fab断片、一本鎖可変断片(scFv)、バリアント、もしくは複合体を含む。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号208及び配列番号209に示される配列と少なくとも99%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号208及び配列番号209に示される配列と少なくとも98%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号208及び配列番号209に示される配列と少なくとも97%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号208及び配列番号209に示される配列と少なくとも96%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号208及び配列番号209に示される配列と少なくとも95%同一である重鎖及び軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、イピリムマブの重鎖及び軽鎖のCDRまたは可変領域(VR)を含む。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤重鎖可変領域(VH)は、配列番号210に示される配列を含み、CTLA-4阻害剤軽鎖可変領域(VL)は、配列番号211に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号210及び配列番号211に示される配列と少なくとも99%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号210及び配列番号211に示される配列と少なくとも98%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号210及び配列番号211に示される配列と少なくとも97%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号210及び配列番号211に示される配列と少なくとも96%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号210及び配列番号211に示される配列と少なくとも95%同一であるVH領域及びVL領域を含む。
いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、それぞれ、配列番号212、配列番号213、及び配列番号214に示される配列を有する重鎖CDR1、CDR2及びCDR3ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号215、配列番号216、及び配列番号217に示される配列を有する軽鎖CDR1、CDR2及びCDR3ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、前述の抗体のうちのいずれかと結合するために競合し、及び/またはCTLA-4上の同じエピトープに結合する。
いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、イピリムマブに関して薬物規制当局によって承認されたCTLA-4バイオシミラーモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列に対して少なくとも97%の配列同一性、例えば、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、参照医薬品または参照バイオ製品と比較して、1つ以上の翻訳後修飾を含む、抗CTLA-4抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、イピリムマブである。いくつかの実施形態では、1つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、及び切断のうちの1つ以上から選択される。イピリムマブのアミノ酸配列を表23に示す。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可された、または認可のために提出された抗CTLA-4抗体であり、抗CTLA-4抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、イピリムマブである。抗CTLA-4抗体は、米国FDA及び/または欧州連合のEMAなどの薬物規制当局によって認可され得る。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、1つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、1つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、イピリムマブである。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、1つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、1つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、イピリムマブである。
いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、イピリムマブまたはそのバイオシミラーであり、イピリムマブは、約0.5mg/kg~約10mg/kgの用量で投与される。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、イピリムマブまたはそのバイオシミラーであり、イピリムマブは、約0.5mg/kg、約1mg/kg、約1.5mg/kg、約2mg/kg、約2.5mg/kg、約3mg/kg、約3.5mg/kg、約4mg/kg、約4.5mg/kg、約5mg/kg、約5.5mg/kg、約6mg/kg、約6.5mg/kg、約7mg/kg、約7.5mg/kg、約8mg/kg、約8.5mg/kg、約9mg/kg、約9.5mg/kg、または約10mg/kgの用量で投与される。
いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、イピリムマブまたはそのバイオシミラーであり、イピリムマブは、約200mg~約500mgの用量で投与される。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、イピリムマブまたはそのバイオシミラーであり、イピリムマブは、約200mg、約220mg、約240mg、約260mg、約280mg、約300mg、約320mg、約340mg、約360mg、約380mg、約400mg、約420mg、約440mg、約460mg、約480mg、または約500mgの用量で投与される。
いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、イピリムマブまたはそのバイオシミラーであり、イピリムマブは、2週間毎、3週間毎、4週間毎、5週間毎、または6週間毎に投与される。
いくつかの実施形態では、イピリムマブは、転移性非小細胞肺癌を治療するために投与される。いくつかの実施形態では、イピリムマブは、転移性非小細胞肺癌を治療するために、6週間毎に約1mg/kgで、2週間毎に3mg/kgのニボルマブとともに投与される。いくつかの実施形態において、イピリムマブは、転移性非小細胞肺癌を治療するために、6週間毎に約1mg/kgで、3週間毎に360mgのニボルマブ及び2サイクルのプラチナダブレット化学療法とともに投与される。
トレメリムマブ(CP-675,206としても知られる)は、完全ヒトIgG2モノクローナル抗体であり、CAS番号745013-59-6を有する。トレメリムマブは、米国特許第6,682,736号(参照により本明細書に組み込まれる)において抗体11.2.1として開示されている。トレメリムマブの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列を、それぞれ表24に示す。トレメリムマブは、黒色腫及び乳癌を含む種々の腫瘍の治療のための臨床試験において研究されており、トレメリムマブは、0.01及び15mg/kgの用量範囲で4週間または12週間毎に単回用量または複数回用量として静脈内投与される。本発明によって提供されるレジメンでは、トレメリムマブは、局所的に、特に皮内または皮下に投与される。皮内または皮下投与されるトレメリムマブの有効量は、典型的には、人当たり5~200mg/用量の範囲である。いくつかの実施形態では、トレメリムマブの有効量は、用量当たり人当たり10~150mg/用量の範囲である。いくつかの特定の実施形態では、トレメリムマブの有効量は、人当たり約10、25、37.5、40、50、75、100、125、150、175、または200mg/用量である。
いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、配列番号218によって与えられる重鎖及び配列番号219によって与えられる軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、それぞれ、配列番号218及び配列番号219に示される配列を有する重鎖及び軽鎖、またはそれらの抗原結合断片、Fab断片、一本鎖可変断片(scFv)、バリアント、もしくは複合体を含む。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号218及び配列番号219に示される配列と少なくとも99%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号218及び配列番号219に示される配列と少なくとも98%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号218及び配列番号219に示される配列と少なくとも97%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号218及び配列番号219に示される配列と少なくとも96%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号218及び配列番号219に示される配列と少なくとも95%同一である重鎖及び軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、トレメリムマブの重鎖及び軽鎖のCDRまたは可変領域(VR)を含む。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤重鎖可変領域(VH)は、配列番号220に示される配列を含み、CTLA-4阻害剤軽鎖可変領域(VL)は、配列番号221に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号220及び配列番号221に示される配列と少なくとも99%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号220及び配列番号221に示される配列と少なくとも98%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号220及び配列番号221に示される配列と少なくとも97%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号220及び配列番号221に示される配列と少なくとも96%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号220及び配列番号221に示される配列と少なくとも95%同一であるVH領域及びVL領域を含む。
いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、それぞれ、配列番号222、配列番号223、及び配列番号224に示される配列を有する重鎖CDR1、CDR2及びCDR3ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号225、配列番号226、及び配列番号227に示される配列を有する軽鎖CDR1、CDR2及びCDR3ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、前述の抗体のうちのいずれかと結合するために競合し、及び/またはCTLA-4上の同じエピトープに結合する。
いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、トレメリムマブに関して薬物規制当局によって承認された抗CTLA-4バイオシミラーモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列に対して少なくとも97%の配列同一性、例えば、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、参照医薬品または参照バイオ製品と比較して、1つ以上の翻訳後修飾を含む、抗CTLA-4抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、トレメリムマブである。いくつかの実施形態では、1つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、及び切断のうちの1つ以上から選択される。トレメリムマブのアミノ酸配列を表24に示す。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可された、または認可のために提出された抗CTLA-4抗体であり、抗CTLA-4抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、トレメリムマブである。抗CTLA-4抗体は、米国FDA及び/または欧州連合のEMAなどの薬物規制当局によって認可され得る。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、1つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、1つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、トレメリムマブである。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、1つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、1つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、トレメリムマブである。
いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、トレメリムマブまたはそのバイオシミラーであり、トレメリムマブは、約0.5mg/kg~約10mg/kgの用量で投与される。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、トレメリムマブまたはそのバイオシミラーであり、トレメリムマブは、約0.5mg/kg、約1mg/kg、約1.5mg/kg、約2mg/kg、約2.5mg/kg、約3mg/kg、約3.5mg/kg、約4mg/kg、約4.5mg/kg、約5mg/kg、約5.5mg/kg、約6mg/kg、約6.5mg/kg、約7mg/kg、約7.5mg/kg、約8mg/kg、約8.5mg/kg、約9mg/kg、約9.5mg/kg、または約10mg/kgの用量で投与される。
いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、トレメリムマブまたはそのバイオシミラーであり、トレメリムマブは、約200mg~約500mgの用量で投与される。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、トレメリムマブまたはそのバイオシミラーであり、トレメリムマブは、約200mg、約220mg、約240mg、約260mg、約280mg、約300mg、約320mg、約340mg、約360mg、約380mg、約400mg、約420mg、約440mg、約460mg、約480mg、または約500mgの用量で投与される。
いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、トレメリムマブまたはそのバイオシミラーであり、トレメリムマブは、2週間毎、3週間毎、4週間毎、5週間毎、または6週間毎に投与される。
いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、Agenusからのザリフレリマブ、またはそのバイオシミラー、抗原結合断片、複合体、もしくはバリアントである。ザリフレリマブは、完全ヒトモノクローナル抗体である。ザリフレリマブには、Chemical Abstracts Service(CAS)登録番号2148321-69-9が割り当てられており、AGEN1884としても知られている。ザリフレリマブの調製及び特性は、米国特許第10,144,779号及び米国特許出願公開第US2020/0024350 A1号に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、配列番号228によって与えられる重鎖及び配列番号229によって与えられる軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、それぞれ、配列番号228及び配列番号229に示される配列を有する重鎖及び軽鎖、またはそれらの抗原結合断片、Fab断片、一本鎖可変断片(scFv)、バリアント、もしくは複合体を含む。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号228及び配列番号229に示される配列と少なくとも99%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号228及び配列番号229に示される配列と少なくとも98%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号228及び配列番号229に示される配列と少なくとも97%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号228及び配列番号229に示される配列と少なくとも96%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号228及び配列番号229に示される配列と少なくとも95%同一である重鎖及び軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、ザリフレリマブの重鎖及び軽鎖のCDRまたは可変領域(VR)を含む。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤重鎖可変領域(VH)は、配列番号230に示される配列を含み、CTLA-4阻害剤軽鎖可変領域(VL)は、配列番号231に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号230及び配列番号231に示される配列と少なくとも99%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号230及び配列番号231に示される配列と少なくとも98%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号230及び配列番号231に示される配列と少なくとも97%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号230及び配列番号231に示される配列と少なくとも96%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号230及び配列番号231に示される配列と少なくとも95%同一であるVH領域及びVL領域を含む。
いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、それぞれ、配列番号231、配列番号233、及び配列番号234に示される配列を有する重鎖CDR1、CDR2及びCDR3ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号235、配列番号236、及び配列番号237に示される配列を有する軽鎖CDR1、CDR2及びCDR3ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、前述の抗体のうちのいずれかと結合するために競合し、及び/またはCTLA-4上の同じエピトープに結合する。
いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、ザリフレリマブに関して薬物規制当局によって承認されたCTLA-4バイオシミラーモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列に対して少なくとも97%の配列同一性、例えば、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、参照医薬品または参照バイオ製品と比較して、1つ以上の翻訳後修飾を含む、抗CTLA-4抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、ザリフレリマブである。いくつかの実施形態では、1つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、及び切断のうちの1つ以上から選択される。ザリフレリマブのアミノ酸配列を表25に示す。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可された、または認可のために提出された抗CTLA-4抗体であり、抗CTLA-4抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、ザリフレリマブである。抗CTLA-4抗体は、米国FDA及び/または欧州連合のEMAなどの薬物規制当局によって認可され得る。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、1つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、1つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、ザリフレリマブである。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、1つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、1つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、ザリフレリマブである。
さらなる抗CTLA-4抗体の例には、AGEN1181、BMS-986218、BCD-145、ONC-392、CS1002、REGN4659、及びADG116が含まれるが、これらに限定されず、これらは当業者に即知である。
いくつかの実施形態では、抗CTLA-4抗体は、以下の特許公開(参照により本明細書に組み込まれる)のうちのいずれかに開示される抗CTLA-4抗体である:US2019/0048096A1、US2020/0223907、US2019/0201334、US2019/0201334、US2005/0201994、EP 1212422 B1、WO2018/204760、WO2018/204760、WO20010/14424、WO2004/035607、WO2003/086459、WO2012/120125、WO2000/037504、WO2009/100140、WO2006/09649、WO2005/092380、WO2007/123737、WO2006/029219、WO2010/0979597、WO2006/12168、及びWO1997/020574。さらなるCTLA-4抗体は、米国特許第5,811,097号、同第5,855,887号、同第6,051,227号、及び同第6,984,720号、PCT公開第WO01/14424号及び同第WO00/37504号、ならびに米国公開第2002/0039581号及び同第2002/086014号、及び/または米国特許第5,977,318号、同第6,682,736号、同第7,109,003号、及び同第7,132,281号に記載されており、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、抗CTLA-4抗体は、例えば、WO98/42752、米国特許第6,682,736号及び同第6,207,156号、Hurwitz et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,95(17):10067-10071(1998)、Camacho et al.,J.Clin.Oncol.,22(145):Abstract No.2505(2004)(抗体CP-675206)、Mokyr et al.,Cancer Res.,58:5301-5304(1998)(参照により本明細書に組み込まれる)に開示されるものである。
いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、WO1996/040915(参照により本明細書に組み込まれる)に開示されるCTLA-4リガンドである。
いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、CTLA-4発現の核酸阻害剤である。例えば、抗CTLA-4 RNAi分子は、PCT公開第WO1999/032619及びWO2001/029058、米国公開第2003/0051263号、同第2003/0055020号、同第2003/0056235号、同第2004/265839号、同第2005/0100913号、同第2006/0024798号、同第2008/0050342号、同第2008/0081373号、同第2008/0248576号、同第2008/055443号、及び/または米国特許第6,506,559号、同第7,282,564号、同第7,538,095号、及び同第7,560,438号(参照により本明細書に組み込まれる)においてMello及びFireによって記載された分子の形態を取り得る。いくつかの事例では、抗CTLA-4 RNAi分子は、欧州特許第EP1309726号(参照により本明細書に組み込まれる)においてTuschlによって記載された二本鎖RNAi分子の形態を取る。いくつかの事例では、抗CTLA-4 RNAi分子は、米国特許第7,056,704号及び同第7,078,196号(参照により本明細書に組み込まれる)においてTuschlによって記載された二本鎖RNAi分子の形態を取る。いくつかの実施形態では、CTLA-4阻害剤は、PCT公開第WO2004081021(参照により本明細書に組み込まれる)に記載されたアプタマーである。
他の実施形態では、本発明の抗CTLA-4 RNAi分子は、米国特許第5,898,031号、同第6,107,094号、同第7,432,249号、及び同第7,432,250号、ならびに欧州出願第EP0928290号(参照により本明細書に組み込まれる)においてCrookeによって記載されたRNA分子である。
5.VEGF-A阻害剤との組み合わせ
いくつかの実施形態では、TIL及びVEGF-A阻害剤は、NSCLCの治療のための併用療法または共療法として投与される。
いくつかの実施形態では、TIL及びVEGF-A阻害剤は、NSCLCの治療のための併用療法または共療法として投与される。
いくつかの実施形態では、NSCLCは、前治療を受けていない。いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、フロントライン療法または初期療法として投与される。いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、本明細書に記載のTILと併用して、フロントライン療法または初期療法として投与される。
VEGF-A(それぞれ、配列番号1及び2に示されるポリヌクレオチド及びポリペプチド配列)は、ホルモン及び細胞外シグナル伝達分子のシスチンノットスーパーファミリーのVEGF/PDGF(血小板由来成長因子)群に属する分泌されたジスルフィド結合ホモ二量体糖タンパク質であり(Vitt et al.,Mol.Endocrinol.,15:681-694,2001を参照)を含み、これらはすべて、典型的なシスチンノット構造を形成する8つの保存されたシステイン残基(ジスルフィド結合によって連結される2つのシステインの二量体であるシスチンにちなんで名付けられる)の存在を特徴とする。異なるmRNAスプライスバリアントによってコードされる、121、145、165、189または206アミノ酸長の5つのヒトVEGF-Aアイソフォーム(VEGF-A121~206)が記載されており、これらはすべて、内皮細胞における分裂形成を刺激することができる。これらのアイソフォームは、VEGF-Aの低親和性受容体として振る舞う、細胞表面及び細胞外マトリックス関連ヘパラン-硫酸プロテオグリカンに対する生物学的活性、受容体特異性、及び親和性が異なる。VEGF-A121は、ヘパリンまたはヘパラン硫酸塩のいずれかに結合せず、VEGF-A145及びVEGF-A165(GenBank受託番号M32977)は、両方ともヘパリンに結合することができ、VEGF-A189及びVEGF-A206は、ヘパリン及びヘパラン硫酸塩に対して最も強い親和性を示す。VEGF-A121、VEGF-A145、及びVEGF-A165は、可溶性形態で分泌されるが、VEGF-A165の大部分は、細胞表面及び細胞外マトリックスプロテオグリカンに限定され、一方、VEGF-A189及びVEGF-A206は、細胞外マトリックスと関連付けられたままである。VEGF-A189及びVEGF-A206の両方は、ヘパリンまたはヘパリナーゼによる処理によって放出され得、これらのアイソフォームがプロテオグリカンを介して細胞外マトリックスに結合していることを示す。細胞結合型VEGF-A180は、プラスミンなどのプロテアーゼによって切断することもでき、その結果、活性可溶性VEGF-A110が放出される。
VEGF-A駆動型血管新生は、がん、眼疾患、及び関節リウマチを含む多様なヒト疾患の病因において主要な役割を有する。Carmeliet et al.,Nature 407:249-257,2000を参照されたい。いくつかの重要なクラスのがんの発症に対するVEGF-Aの重要性の認識は、最近、転移性結腸直腸癌の治療のためのVEGF-Aに対するヒト化モノクローナル抗体であるAVASTIN(商標)の承認に至った。Ferrara et al.,Nat.Rev.Drug Discov.2004,3:391-400,2004を参照されたい。同様に、新生血管性眼障害の病因におけるVEGF-Aの重要性は、新生血管(wet)加齢性黄斑変性症(AMD)の治療のためのヒト化モノクローナル抗体断片であるLUCENTIS(商標)の最近の承認に反映される。
本発明内で使用されるVEGF-A阻害剤には、VEGF-AまたはVEGF-A受容体に結合し、それによって、例えば、VEGFR-1、VEGFR-2、ニューロピリン-1、及び/またはニューロピリン-2などの受容体を発現する細胞上のVEGF-Aの活性を低下させる分子が含まれる。特に、VEGF-A阻害剤は、抗VEGF-A抗体を含む。他の好適なVEGF-A阻害剤としては、VEGFR細胞外ドメインを含む可溶性VEGF-A受容体、ならびにVEGF-Aとその受容体との相互作用を阻害することができるか、またはそうでなければ、VEGF-A受容体を介したVEGF-A誘導細胞内シグナル伝達を阻害することができる小分子アンタゴニストが挙げられる。加えて、非抗体足場に基づく結合タンパク質を用いてもよい。(例えば、Koide et al.,J.Mol.Biol.284:1141-1151,1998、Hosse et al.Protein Sci.15:14-27,2006、及びそこでの参考文献を参照)。本発明内で使用するための好ましいVEGF-A阻害剤としては、PDGFRβの結合部位も含む二重特異性抗体を含む、VEGF-Aに特異的に結合する抗体が挙げられる。VEGF-Aに特異的な抗体は、少なくとも可溶性分泌形態のVEGF-Aに結合し、好ましくは細胞表面関連形態にも結合する。
いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、当該技術分野で知られている任意のVEGF-A阻害剤またはVEGF-A遮断剤であり得る。特に、次の段落でより詳細に記載されるVEGF-A阻害剤または遮断剤のうちの1つである。「阻害剤」、「アンタゴニスト」、及び「遮断剤」という用語は、本明細書では、VEGF-A阻害剤に関して互換的に使用される。誤解を避けるために、抗体であるVEGF-A阻害剤への本明細書での言及は、化合物またはその抗原結合断片、バリアント、複合体、もしくはバイオシミラーを指し得る。誤解を避けるために、VEGF-A阻害剤への本明細書での言及はまた、小分子化合物またはその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物、水和物、共結晶、もしくはプロドラッグを指し得る。
いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、当該技術分野で知られている任意のVEGF-A阻害剤またはVEGF-A遮断剤であり得る。特に、次の段落でより詳細に記載されるVEGF-A阻害剤または遮断剤のうちの1つである。「阻害剤」、「アンタゴニスト」、及び「遮断剤」という用語は、本明細書では、VEGF-A阻害剤に関して互換的に使用される。誤解を避けるために、抗体であるVEGF-A阻害剤への本明細書での言及は、化合物またはその抗原結合断片、バリアント、複合体、もしくはバイオシミラーを指し得る。誤解を避けるために、VEGF-A阻害剤への本明細書での言及はまた、小分子化合物またはその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物、水和物、共結晶、もしくはプロドラッグを指し得る。
いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、抗体(すなわち、抗VEGF-A抗体)、Fab断片を含むその断片、またはその一本鎖可変断片(scFv)である。いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、ポリクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、VEGF-Aとの結合について競合する、及び/またはVEGF-A上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、VEGF-Aとの結合について競合する、及び/またはVEGF-A上のエピトープに結合する。
いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、ヒトVEGF-Aに約100pM以下のKDで結合する、ヒトVEGF-Aに約90pM以下のKDで結合する、ヒトVEGF-Aに約80pM以下のKDで結合する、ヒトVEGF-Aに約70pM以下のKDで結合する、ヒトVEGF-Aに約60pM以下のKDで結合する、ヒトVEGF-Aに約50pM以下のKDで結合する、ヒトVEGF-Aに約40pM以下のKDで結合する、ヒトVEGF-Aに約30pM以下のKDで結合する、ヒトVEGF-Aに約20pM以下のKDで結合する、ヒトVEGF-Aに約10pM以下のKDで結合する、またはヒトVEGF-Aに約1pM以下のKDで結合するものである。
いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、ヒトVEGF-Aに約7.5×105l/M・s以上のkassocで結合する、ヒトVEGF-Aに約7.5×105l/M・s以上のkassocで結合する、ヒトVEGF-Aに約8×105l/M・s以上のkassocで結合する、ヒトVEGF-Aに約8.5×105l/M・s以上のkassocで結合する、ヒトVEGF-Aに約9×105l/M・s以上のkassocで結合する、ヒトVEGF-Aに約9.5×105l/M・s以上のkassocで結合する、またはヒトVEGF-Aに約1×106l/M・s以上のkassocで結合するものである。
いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、ヒトVEGF-Aに約2×10-5l/s以下のkdissocで結合する、ヒトVEGF-Aに約2.1×10-5l/s以下のkdissocで結合する、ヒトVEGF-Aに約2.2×10-5l/s以下のkdissocで結合する、ヒトVEGF-Aに約2.3×10-5l/s以下のkdissocで結合する、ヒトVEGF-Aに約2.4×10-5l/s以下のkdissocで結合する、ヒトVEGF-Aに約2.5×10-5l/s以下のkdissocで結合する、ヒトVEGF-Aに約2.6×10-5l/s以下のkdissocで結合する、またはヒトVEGF-Aに約2.7×10-5l/s以下のkdissocで結合する、ヒトVEGF-Aに約2.8×10-5l/s以下のkdissocで結合する、ヒトVEGF-Aに約2.9×10-5l/s以下のkdissocで結合する、またはヒトVEGF-Aに約3×10-5l/s以下のkdissocで結合するものである。
いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、約10nM以下のIC50でのヒトVEGF-AへのヒトVEGFR-1受容体もしくはヒトVEGFR-2受容体の結合を遮断もしくは阻害し、約9nM以下のIC50でのヒトVEGF-AへのヒトVEGFR-1受容体もしくはヒトVEGFR-2受容体の結合を遮断もしくは阻害し、約8nM以下のIC50でのヒトVEGF-AへのヒトVEGFR-1受容体もしくはヒトVEGFR-2受容体の結合を遮断もしくは阻害し、約7nM以下のIC50でのヒトVEGF-AへのヒトVEGFR-1受容体もしくはヒトVEGFR-2受容体の結合を遮断もしくは阻害し、約6nM以下のIC50でのヒトVEGF-AへのヒトVEGFR-1受容体もしくはヒトVEGFR-2受容体の結合を遮断もしくは阻害し、約5nM以下のIC50でのヒトヒトVEGF-AへのヒトVEGFR-1受容体もしくはヒトVEGFR-2受容体の結合を遮断もしくは阻害し、約4nM以下のIC50でのヒトVEGF-AへのヒトVEGFR-1受容体もしくはヒトVEGFR-2受容体の結合を遮断もしくは阻害し、約3nM以下のIC50でのヒトVEGF-AへのヒトVEGFR-1受容体もしくはヒトVEGFR-2受容体の結合を遮断もしくは阻害し、約2nM以下のIC50でのヒトVEGF-AへのヒトVEGFR-1受容体もしくはヒトVEGFR-2受容体の結合を遮断もしくは阻害し、または約1nM以下のIC50でのヒトVEGF-AへのヒトVEGFR-1受容体もしくはヒトVEGFR-2受容体の結合を遮断もしくは阻害するものである。
いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、ベバシズマブ、またはそのバイオシミラー、抗原結合断片、複合体、もしくはバリアントである。ベバシズマブ(CAS登録番号216974-75-3、AVASTIN(登録商標)、Genentech)は、がん治療に使用される血管内皮成長因子に対する抗VEGFモノクローナル抗体(US7227004、US6884879、US7060269、US7169901、US7297334)であり、これは新生血管形成を遮断することによって腫瘍成長を阻害する。ベバシズマブは、米国で初の臨床的に入手可能な血管新生阻害剤である。転移性結腸癌及びほとんどの形態の転移性非小細胞肺癌の治療のための標準化学療法と組み合わせて、2004年にFDAによって承認された。以下の疾患:補助/非転移性結腸癌、転移性乳癌、転移性腎細胞癌、転移性多型神経膠芽腫新生物、転移性卵巣癌、転移性ホルモン不応性前立腺癌及び転移、転移性膵臓癌または切除不能な局所進行膵臓癌を有する患者におけるその安全性及び有効性を決定するために、いくつかの臨床後研究が進行中である。
ベバシズマブは、ヒトVEGFのその受容体への結合を遮断する、マウス抗hVEGFモノクローナル抗体A.4.6.1からの変異体ヒトIgG1フレームワーク領域及び抗原結合相補性決定領域を含む。ベバシズマブアミノ酸配列(ほとんどのフレームワーク領域を含む)の約93%はヒトIgG1に由来し、配列の約7%はマウス抗体A4.6.1に由来する。ベバシズマブは、約149,000ダルトンの分子量を有し、グリコシル化される。ベバシズマブ及び他のヒト化抗VEGF抗体は、US6884879号にさらに記載されている。追加の抗VEGF抗体としては、国際特許公開第WO2005/012359号の図27~29のいずれかに記載されるG6またはB20シリーズ抗体(例えば、G6-31、B20-4.1)が挙げられる。一実施形態において、B20シリーズ抗体は、残基F17、M18、D19、Y21、Y25、Q89、I91、K101、E103、及びC104を含有するヒトVEGF上の機能性エピトープに結合する。追加のVEGF抗体は、国際特許公開第WO2010148223号に記載されている。
いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、配列番号207によって与えられる重鎖及び配列番号208によって与えられる軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、それぞれ、配列番号207及び配列番号208に示される配列を有する重鎖及び軽鎖、またはそれらの抗原結合断片、Fab断片、一本鎖可変断片(scFv)、バリアント、もしくは複合体を含む。いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号207及び配列番号208に示される配列と少なくとも99%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号207及び配列番号208に示される配列と少なくとも98%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号207及び配列番号208に示される配列と少なくとも97%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号207及び配列番号208に示される配列と少なくとも96%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号207及び配列番号208に示される配列と少なくとも95%同一である重鎖及び軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、ベバシズマブの重鎖及び軽鎖CDRまたは可変領域(VR)を含む。いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤重鎖可変領域(VH)は、配列番号209に示される配列を含み、VEGF-A阻害剤軽鎖可変領域(VL)は、配列番号210に示される配列、及びその保存的アミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号209及び配列番号210に示される配列と少なくとも99%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号209及び配列番号210に示される配列と少なくとも98%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号209及び配列番号210に示される配列と少なくとも97%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号209及び配列番号210に示される配列と少なくとも96%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号209及び配列番号210に示される配列と少なくとも95%同一であるVH領域及びVL領域を含む。
いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、それぞれ、配列番号211、配列番号212、及び配列番号213に示される配列を有する重鎖CDR1、CDR2及びCDR3ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号214、配列番号215、及び配列番号216に示される配列を有する軽鎖CDR1、CDR2及びCDR3ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、前述の抗体のうちのいずれかと結合するために競合し、及び/またはVEGF-A上の同じエピトープに結合する。
いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、ベバシズマブに関して薬物規制当局によって承認されたVEGF-Aバイオシミラーモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列に対して少なくとも97%の配列同一性、例えば、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、参照医薬品または参照バイオ製品と比較して、1つ以上の翻訳後修飾を含む、VEGF-A抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、ベバシズマブである。いくつかの実施形態では、1つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、及び切断のうちの1つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可された、または認可のために提出された抗VEGF-A抗体であり、抗VEGF-A抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、ベバシズマブである。抗VEGF-A抗体は、米国FDA及び/または欧州連合のEMAなどの薬物規制当局によって認可され得る。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、1つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、1つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、ベバシズマブである。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、1つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、1つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、ベバシズマブである。
いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、ラニビズマブ、またはそのバイオシミラー、抗原結合断片、複合体、もしくはバリアントである。ラニビズマブ(CAS登録番号347396-82-1、Lucentis(登録商標))は、ベバシズマブと同じ親マウス抗体から作製されるモノクローナル抗体断片(Fab)である。加齢性黄斑変性症(AMD、またARMD)、加齢性視力喪失の一般的な形態を治療するために承認されている抗血管新生剤である。その副作用の割合は、ベバシズマブのものと同様である。しかしながら、ラニビズマブは、典型的には1用量当たり2,000ドルかかり、一方、同等用量のベバシズマブは、典型的には50ドルかかる。
いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、配列番号217によって与えられる重鎖及び配列番号218によって与えられる軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、それぞれ、配列番号217及び配列番号218に示される配列を有する重鎖及び軽鎖、またはそれらの抗原結合断片、Fab断片、一本鎖可変断片(scFv)、バリアント、もしくは複合体を含む。いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号217及び配列番号218に示される配列と少なくとも99%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号217及び配列番号218に示される配列と少なくとも98%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号217及び配列番号218に示される配列と少なくとも97%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号217及び配列番号218に示される配列と少なくとも96%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号217及び配列番号218に示される配列と少なくとも95%同一である重鎖及び軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、ラニビズマブの重鎖及び軽鎖CDRまたは可変領域(VR)を含む。いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤重鎖可変領域(VH)は、配列番号219に示される配列を含み、VEGF-A阻害剤軽鎖可変領域(VL)は、配列番号220に示される配列、及びその保存的アミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号219及び配列番号220に示される配列と少なくとも99%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号219及び配列番号220に示される配列と少なくとも98%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号219及び配列番号220に示される配列と少なくとも97%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号219及び配列番号220に示される配列と少なくとも96%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号219及び配列番号220に示される配列と少なくとも95%同一であるVH領域及びVL領域を含む。
いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、それぞれ、配列番号221、配列番号222、及び配列番号223に示される配列を有する重鎖CDR1、CDR2及びCDR3ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号224、配列番号225、及び配列番号226に示される配列を有する軽鎖CDR1、CDR2及びCDR3ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、前述の抗体のうちのいずれかと結合するために競合し、及び/またはVEGF-A上の同じエピトープに結合する。
いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、ラニビズマブに関して薬物規制当局によって承認されたVEGF-Aバイオシミラーモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列に対して少なくとも97%の配列同一性、例えば、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、参照医薬品または参照バイオ製品と比較して、1つ以上の翻訳後修飾を含む、VEGF-A抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、ラニビズマブである。いくつかの実施形態では、1つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、及び切断のうちの1つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可された、または認可のために提出された抗VEGF-A抗体であり、抗VEGF-A抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、ラニビズマブである。抗VEGF-A抗体は、米国FDA及び/または欧州連合のEMAなどの薬物規制当局によって認可され得る。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、1つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、1つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、ラニビズマブである。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、1つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、1つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、ラニビズマブである。
いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、イクルクマブ、またはそのバイオシミラー、抗原結合断片、複合体、もしくはバリアントである。イクルクマブ(CAS登録番号1024603-92-6、IMC-18F1としても知られる)は、固形腫瘍の治療のために設計されたヒトモノクローナル抗体である。潜在的な抗血管新生及び抗腫瘍活性を有するヒト血管内皮増殖因子受容体1(VEGFR-1/FLT-1)に対する完全ヒトIgG1モノクローナル抗体。イクルクマブは、下流のシグナル伝達経路の活性化を阻害し、腫瘍血管新生を阻害し得るVEGFR-1の活性に特異的に結合し、阻害し、腫瘍栄養供給のその後の低下は、腫瘍細胞の増殖を阻害し得る。VEGFR-1の腫瘍細胞の過剰発現は、腫瘍血管新生及び腫瘍細胞の増殖及び浸潤と関連し得、VEGFR-1は、VEGFR-2シグナル伝達を調節し得る。
いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、配列番号227によって与えられる重鎖及び配列番号228によって与えられる軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、それぞれ、配列番号227及び配列番号564に示される配列を有する重鎖及び軽鎖、またはそれらの抗原結合断片、Fab断片、一本鎖可変断片(scFv)、バリアント、もしくは複合体を含む。いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号227及び配列番号228に示される配列と少なくとも99%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号227及び配列番号228に示される配列と少なくとも98%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号227及び配列番号228に示される配列と少なくとも97%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号227及び配列番号228に示される配列と少なくとも96%同一である重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号227及び配列番号228に示される配列と少なくとも95%同一である重鎖及び軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、イクルクマブの重鎖及び軽鎖CDRまたは可変領域(VR)を含む。いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤重鎖可変領域(VH)は、配列番号229に示される配列を含み、VEGF-A阻害剤軽鎖可変領域(VL)は、配列番号230に示される配列、及びその保存的アミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号229及び配列番号230に示される配列と少なくとも99%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号229及び配列番号230に示される配列と少なくとも98%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号229及び配列番号230に示される配列と少なくとも97%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号229及び配列番号230に示される配列と少なくとも96%同一であるVH領域及びVL領域を含む。いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号229及び配列番号230に示される配列と少なくとも95%同一であるVH領域及びVL領域を含む。
いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、それぞれ、配列番号231、配列番号232、及び配列番号233に示される配列を有する重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号234、配列番号235、及び配列番号236に示される配列を有する軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、前述の抗体のうちのいずれかと結合するために競合し、及び/またはVEGF-A上の同じエピトープに結合する。
いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、イクルクマブに関して薬物規制当局によって承認されたVEGF-Aバイオシミラーモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列に対して少なくとも97%の配列同一性、例えば、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、参照医薬品または参照バイオ製品と比較して、1つ以上の翻訳後修飾を含む、抗VEGF-A抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、イクルクマブである。いくつかの実施形態では、1つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、及び切断のうちの1つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可された、または認可のために提出された抗VEGF-A抗体であり、抗VEGF-A抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、イクルクマブである。抗VEGF-A抗体は、米国FDA及び/または欧州連合のEMAなどの薬物規制当局によって認可され得る。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、1つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、1つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、イクルクマブである。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、1つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、1つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、イクルクマブである。
いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、デコイVEGF受容体(VEGFトラップとしても知られる)、例えば、米国特許出願公開第US2019/0298801号及び国際特許出願公開第WO2014/006113A1号(参照により本明細書に組み込まれる開示)に開示されるAflibercept(Eylea,Zaltrap)または米国特許出願公開第US2019/0002546号及び同第US2019/0343918号(参照により本明細書に組み込まれる開示)に開示されるConberceptである。デコイVEGF受容体の追加の開示及び例は、米国特許第6,383,486号、同第6,375,929号、同第6,348,333号、同第6,100,071号、及び同第9,777,261号に提供され、それらの開示は参照によりそれら全体が本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、低分子チロシンキナーゼ阻害剤である。低分子チロシンキナーゼは、当業者に知られている。小分子チロシンキナーゼ阻害剤の例としては、ペガプタニブ、パゾパニブ、ラパチニブ、スニチニブ、ソラフェニブ、レゴラフェニブ、ポナチニブ、レンバチニブ、アキシチニブ(AG-013736)、セディラニブ(AZD2171)、バタラニブ、及び/またはルシタニブが挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、VEGF-A阻害剤は、抗VEGFRリボザイム、抗VEGFRアンチセンス、ならびに米国特許第7,148,342号及び国際特許出願第WO2010/058426号(参照によりそれら全体が本明細書に組み込まれる開示)に開示されるVEGFRを阻害するsiRNAである。
6.患者のリンパ球枯渇プレコンディショニング
いくつかの実施形態では、本発明は、TIL集団でがんを治療する方法を含み、患者は、本開示によるTILの注入前に骨髄非破壊的化学療法で前治療される。いくつかの実施形態では、本発明は、骨髄非破壊的化学療法で前治療された患者のがんの治療に使用するためのTIL集団を含む。いくつかの実施形態では、TIL集団は、注入による投与用である。いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的化学療法は、シクロホスファミド60mg/kg/日で2日間(TIL注入の27日前及び26日前)、ならびにフルダラビン25mg/m2/日で5日間(TIL注入の27日前~23日前)である。いくつかの実施形態では、本開示による骨髄非破壊的化学療法及びTIL注入(0日目)後、患者は、生理学的許容範囲まで8時間毎に720,000IU/kgで静脈内的にIL-2(PROLEUKINとして市販されている、アルデスロイキン)の静脈内注入を受ける。ある特定の実施形態では、TIL集団は、IL-2と組み合わせてがんを治療する際に使用するためのものであり、IL-2は、TIL集団の後に投与される。
いくつかの実施形態では、本発明は、TIL集団でがんを治療する方法を含み、患者は、本開示によるTILの注入前に骨髄非破壊的化学療法で前治療される。いくつかの実施形態では、本発明は、骨髄非破壊的化学療法で前治療された患者のがんの治療に使用するためのTIL集団を含む。いくつかの実施形態では、TIL集団は、注入による投与用である。いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的化学療法は、シクロホスファミド60mg/kg/日で2日間(TIL注入の27日前及び26日前)、ならびにフルダラビン25mg/m2/日で5日間(TIL注入の27日前~23日前)である。いくつかの実施形態では、本開示による骨髄非破壊的化学療法及びTIL注入(0日目)後、患者は、生理学的許容範囲まで8時間毎に720,000IU/kgで静脈内的にIL-2(PROLEUKINとして市販されている、アルデスロイキン)の静脈内注入を受ける。ある特定の実施形態では、TIL集団は、IL-2と組み合わせてがんを治療する際に使用するためのものであり、IL-2は、TIL集団の後に投与される。
実験結果は、腫瘍特異的Tリンパ球の養子移入前のリンパ球枯渇が、調節性T細胞及び免疫系の競合要素(「サイトカインシンク」)を排除することによって治療有効性を増強する上で重要な役割を果たすことを示している。したがって、本発明のいくつかの実施形態は、本発明のTILを導入する前に、患者に対してリンパ球枯渇ステップ(「免疫抑制コンディショニング」と称されることもある)を利用する。
一般に、リンパ球枯渇は、フルダラビンまたはシクロホスファミド(マホスファミドと称される活性形態)及びそれらの組み合わせの投与を使用して達成される。かかる方法は、Gassner,et al.,Cancer Immunol.Immunother.2011,60,75-85、Muranski,et al.,Nat.Clin.Pract.Oncol.,2006,3,668-681、Dudley,et al.,J.Clin.Oncol.2008,26,5233-5239、及びDudley,et al.,J.Clin.Oncol.2005,23,2346-2357に記載されており、これらはすべて、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、フルダラビンは、0.5μg/mL~10μg/mLのフルダラビン濃度で投与される。いくつかの実施形態では、フルダラビンは、1μg/mLのフルダラビン濃度で投与される。いくつかの実施形態では、フルダラビン治療は、1日、2日、3日、4日、5日、6日、または7日以上投与される。いくつかの実施形態では、フルダラビンは、10mg/kg/日、15mg/kg/日、20mg/kg/日、25mg/kg/日、30mg/kg/日、35mg/kg/日、40mg/kg/日、または45mg/kg/日の投与量で投与される。いくつかの実施形態では、フルダラビン治療は、35mg/kg/日で2~7日間投与される。いくつかの実施形態では、フルダラビン治療は、35mg/kg/日で4~5日間投与される。いくつかの実施形態では、フルダラビン治療は、25mg/kg/日で4~5日間投与される。
いくつかの実施形態では、シクロホスファミドの活性形態であるマホスファミドは、シクロホスファミドの投与により、0.5μg/mL~10μg/mLの濃度で取得される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドの活性形態であるマホスファミドは、シクロホスファミドの投与により、1μg/mLの濃度で取得される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミド治療は、1日、2日、3日、4日、5日、6日、または7日以上投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、100mg/m2/日、150mg/m2/日、175mg/m2/日、200mg/m2/日、225mg/m2/日、250mg/m2/日、275mg/m2/日、または300mg/m2/日の投与量で投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、静脈内(すなわち、i.v.)投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミド治療は、35mg/kg/日で2~7日間投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミド治療は、250mg/m2/日で4~5日間i.v.投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミド治療は、250mg/m2/日で4日間i.v.投与される。
いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇は、患者にフルダラビンとシクロホスファミドを一緒に投与することによって行われる。いくつかの実施形態では、フルダラビンは、25mg/m2/日でi.v.投与され、シクロホスファミドは、250mg/m2/日で4日間にわたってi.v投与される。
いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇が、シクロホスファミドを60mg/m2/日の用量で2日間投与し、続いてフルダラビンを25mg/m2/日の用量で5日間投与することによって行われる。
いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇が、シクロホスファミドを60mg/m2/日の用量で2日間投与し、フルダラビンを25mg/m2/日の用量で5日間投与することによって行われ、シクロホスファミド及びフルダラビンは、両方とも最初の2日間に投与され、リンパ球枯渇は合計5日間で行われる。
いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇が、シクロホスファミドを約50mg/m2/日の用量で2日間投与し、フルダラビンを約25mg/m2/日の用量で5日間投与することによって行われ、シクロホスファミド及びフルダラビンは、両方とも最初の2日間に投与され、リンパ球枯渇は合計5日間で行われる。
いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇が、シクロホスファミドを約50mg/m2/日の用量で2日間投与し、フルダラビンを約20mg/m2/日の用量で5日間投与することによって行われ、シクロホスファミド及びフルダラビンは、両方とも最初の2日間に投与され、リンパ球枯渇は合計5日間で行われる。
いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇が、シクロホスファミドを約40mg/m2/日の用量で2日間投与し、フルダラビンを約20mg/m2/日の用量で5日間投与することによって行われ、シクロホスファミド及びフルダラビンは、両方とも最初の2日間に投与され、リンパ球枯渇は合計5日間で行われる。
いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇が、シクロホスファミドを約40mg/m2/日の用量で2日間投与し、フルダラビンを約15mg/m2/日の用量で5日間投与することによって行われ、シクロホスファミド及びフルダラビンは、両方とも最初の2日間に投与され、リンパ球枯渇は合計5日間で行われる。
いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇が、シクロホスファミドを60mg/m2/日の用量で、フルダラビンを25mg/m2/日の用量で2日間、続いてフルダラビンを25mg/m2/日の用量で3日間投与することによって行われる。
いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、メスナとともに投与される。いくつかの実施形態では、メスナは、15mg/kgで投与される。メスナが注入されるいくつかの実施形態では、連続的に注入される場合、メスナは、約2時間にわたってシクロホスファミドを注入することができ(-5日目及び/または-4日目)、次いで、各シクロホスファミド用量と同時に開始する24時間にわたって残りの22時間で3mg/kg/時間の速度で注入することができる。
いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇は、第3のTIL集団を患者に投与した翌日から開始するIL-2レジメンで患者を治療するステップをさらに含む。
いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇は、第3のTIL集団を患者に投与したのと同じ日に開始するIL-2レジメンで患者を治療するステップをさらに含む。
いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇は、5日間のプレコンディショニング治療を含む。いくつかの実施形態では、該日は、-5日から-1日、または0日から4日として示される。いくつかの実施形態では、レジメンは、-5日目及び-4日目(すなわち、0日目及び1日目)にシクロホスファミドを含む。いくつかの実施形態では、レジメンは、-5日目及び-4日目(すなわち、0日目及び1日目)に静脈内シクロホスファミドを含む。いくつかの実施形態では、レジメンは、-5日目及び-4日目(すなわち、0日目及び1日目)に60mg/kgの静脈内シクロホスファミドを含む。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、メスナとともに投与される。いくつかの実施形態では、レジメンは、フルダラビンをさらに含む。いくつかの実施形態では、レジメンは、静脈内フルダラビンをさらに含む。いくつかの実施形態では、レジメンは、25mg/m2の静脈内フルダラビンをさらに含む。いくつかの実施形態では、レジメンは、-5日目及び-1日目(すなわち、0~4日目)に25mg/m2の静脈内フルダラビンをさらに含む。いくつかの実施形態では、レジメンは、-5日目及び-1日目(すなわち、0~4日目)に25mg/m2の静脈内フルダラビンをさらに含む。
いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンが、シクロホスファミドを60mg/m2/日の用量で、フルダラビンを25mg/m2/日の用量で2日間投与し、続いてフルダラビンを25mg/m2/日の用量で5日間投与するステップを含む。
いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンが、シクロホスファミドを60mg/m2/日の用量で2日間投与し、続いてフルダラビンを25mg/m2/日の用量で5日間投与するステップを含む。
いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンが、シクロホスファミドを60mg/m2/日の用量で2日間投与し、続いてフルダラビンを25mg/m2/日の用量で3日間投与するステップを含む。
いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンが、シクロホスファミドを60mg/m2/日の用量で、フルダラビンを25mg/m2/日の用量で2日間投与し、続いてフルダラビンを25mg/m2/日の用量で3日間投与するステップを含む。
いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンが、シクロホスファミドを60mg/m2/日の用量で、フルダラビンを25mg/m2/日の用量で2日間投与し、続いてフルダラビンを25mg/m2/日の用量で1日間投与するステップを含む。
いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンが、シクロホスファミドを60mg/m2/日の用量で2日間投与し、続いてフルダラビンを25mg/m2/日の用量で3日間投与するステップを含む。
いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンが、シクロホスファミドを60mg/m2/日の用量で、フルダラビンを25mg/m2/日の用量で2日間投与し、続いてフルダラビンを25mg/m2/日の用量で3日間投与するステップを含む。
いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンは、表29に従って投与される。
いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンは、表30に従って投与される。
いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンは、表31に従って投与される。
いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンは、表32に従って投与される。
いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンは、表33に従って投与される。
いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンは、表34に従って投与される。
いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンは、表35に従って投与される。
いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンは、表36に従って投与される。
いくつかの実施形態では、骨髄破壊的リンパ球枯渇レジメンの前述の実施形態で使用されるTIL注入は、本明細書に記載の任意のTIL組成物であり得、また本明細書に記載されるようなIL-2レジメンの追加及び併用療法(PD-1及び/またはPD-L1阻害剤など)の投与であり得る。
7.IL-2レジメン
いくつかの実施形態では、IL-2レジメンは、高用量IL-2レジメンを含み、高用量IL-2レジメンは、治療的TIL集団の治療有効分量を投与した翌日から静脈内投与されるアルデスロイキンまたはそのバイオシミラーもしくはバリアントを含み、アルデスロイキンまたはそのバイオシミラーもしくはバリアントは、許容範囲まで8時間毎に最大14用量にわたって、0.037mg/kgまたは0.044mg/kg IU/kg(患者の体重)の用量で15分のボーラス静脈内注入を使用して投与される。9日間の休止後、このスケジュールは、さらに14用量、合計最大28用量にわたって繰り返され得る。いくつかの実施形態では、IL-2は、1、2、3、4、5、または6用量で投与される。いくつかの実施形態では、IL-2は、最大6用量の最大投与量で投与される。
いくつかの実施形態では、IL-2レジメンは、高用量IL-2レジメンを含み、高用量IL-2レジメンは、治療的TIL集団の治療有効分量を投与した翌日から静脈内投与されるアルデスロイキンまたはそのバイオシミラーもしくはバリアントを含み、アルデスロイキンまたはそのバイオシミラーもしくはバリアントは、許容範囲まで8時間毎に最大14用量にわたって、0.037mg/kgまたは0.044mg/kg IU/kg(患者の体重)の用量で15分のボーラス静脈内注入を使用して投与される。9日間の休止後、このスケジュールは、さらに14用量、合計最大28用量にわたって繰り返され得る。いくつかの実施形態では、IL-2は、1、2、3、4、5、または6用量で投与される。いくつかの実施形態では、IL-2は、最大6用量の最大投与量で投与される。
いくつかの実施形態では、IL-2レジメンは、デクレッシェンドIL-2レジメンを含む。デクレッシェンドIL-2レジメンは、O’Day,et al.,J.Clin.Oncol.1999,17,2752-61、及びEton,et al.,Cancer 2000,88,1703-9に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、デクレッシェンドIL-2レジメンは、6時間にわたって静脈内投与される18×106IU/m2アルデスロイキン、またはそのバイオシミラーもしくはバリアント、続いて12時間にわたって静脈内投与される18×106IU/m2、続いて24時間にわたって静脈内投与される18×106IU/m2、続いて72時間かけて静脈内投与される4.5×106IU/m2を含む。この治療サイクルは、28日毎に最大4サイクル繰り返され得る。いくつかの実施形態では、デクレッシェンドIL-2レジメンは、1日目の18,000,000IU/m2、2日目の9,000,000IU/m2、3日目及び4日目の4,500,000IU/m2を含む。
いくつかの実施形態では、IL-2レジメンは、低用量IL-2レジメンを含む。Dominguez-Villar and Hafler,Nat.Immunology 2000,19,665-673、Hartemann,et al.,Lancet Diabetes Endocrinol.2013,1,295-305、及びRosenzwaig,et al.,Ann.Rheum.Dis.2019,78,209-217(それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる)に記載されている低用量IL-2レジメンを含む、当該技術分野で知られている任意の低用量IL-2レジメンを使用することができる。いくつかの実施形態では、低用量IL-2レジメンは、m2当たり18×106IUのアルデスロイキン、またはそのバイオシミラーもしくはバリアントを24時間当たり5日間の連続的注入として、その後IL-2療法なしで2~6日間、その後任意にアルデスロイキンまたはそのバイオシミラーもしくはバリアントを静脈内にさらに5日間、24時間当たりm2当たり18×106IUの連続的注入として、その後任意選択でIL-2療法なしで3週間投与することを含み、その後追加のサイクルが投与され得る。
いくつかの実施形態では、IL-2は、最大6用量の最大投与量で投与される。いくつかの実施形態では、高用量IL-2レジメンは、小児の使用に適合される。いくつかの実施形態では、最大6用量まで、8~12時間毎に600,000国際単位(IU)/kgのアルデスロイキンの用量が使用される。いくつかの実施形態では、最大6用量まで、8~12時間毎に500,000国際単位(IU)/kgのアルデスロイキンの用量が使用される。いくつかの実施形態では、最大6用量まで、8~12時間毎に400,000国際単位(IU)/kgのアルデスロイキンの用量が使用される。いくつかの実施形態では、最大6用量まで、8~12時間毎に500,000国際単位(IU)/kgのアルデスロイキンの用量が使用される。いくつかの実施形態では、最大6用量まで、8~12時間毎に300,000国際単位(IU)/kgのアルデスロイキンの用量が使用される。いくつかの実施形態では、最大6用量まで、8~12時間毎に200,000国際単位(IU)/kgのアルデスロイキンの用量が使用される。いくつかの実施形態では、最大6用量まで、8~12時間毎に100,000国際単位(IU)/kgのアルデスロイキンの用量が使用される。
いくつかの実施形態では、IL-2レジメンは、0.10mg/日~50mg/日の用量で、1、2、4、6、7、14、または21日毎にペグ化IL-2を投与することを含む。いくつかの実施形態では、IL-2レジメンは、0.10mg/日~50mg/日の用量で、1、2、4、6、7、14または21日毎に、ベンペガルデスロイキン、またはその断片、バリアント、もしくはバイオシミラーを投与することを含む。
いくつかの実施形態では、IL-2レジメンは、0.10mg/日~50mg/日の用量で、1、2、4、6、7、14、または21日毎に、THOR-707、またはその断片、バリアント、もしくはバイオシミラーを投与することを含む。
いくつかの実施形態では、IL-2レジメンは、TILの投与後に、ネムバロイキンアルファ、またはその断片、バリアント、もしくはバイオシミラーの投与を含む。ある特定の実施形態では、患者にネムバロイキンを1日、2日、4日、6日、7日、14日または21日毎に、0.10mg/日~50mg/日の用量で投与される。
いくつかの実施形態では、IL-2レジメンは、抗体骨格に移植されたIL-2断片の投与を含む。いくつかの実施形態では、IL-2レジメンは、IL-2低親和性受容体と結合する抗体-サイトカイン移植タンパク質の投与を含む。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイン移植タンパク質は、相補性決定領域HCDR1、HCDR2、HCDR3を含む、重鎖可変領域(VH)と、LCDR1、LCDR2、LCDR3を含む軽鎖可変領域(VL)と、VHまたはVLのCDRに移植されたIL-2分子またはその断片と、を含み、抗体サイトカイン移植タンパク質は、制御性T細胞よりもTエフェクター細胞を優先的に拡張させる。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイン移植タンパク質は、相補性決定領域HCDR1、HCDR2、HCDR3を含む、重鎖可変領域(VH)と、LCDR1、LCDR2、LCDR3を含む軽鎖可変領域(VL)と、VHまたはVLのCDRに移植されたIL-2分子またはその断片と、を含み、IL-2分子は、ムテインであり、抗体サイトカイン移植タンパク質は、制御性T細胞よりもTエフェクター細胞を優先的に拡張させる。いくつかの実施形態では、IL-2レジメンは、0.10mg/日~50mg/日の用量で、1、2、4、6、7、14または21日毎に、配列番号29及び配列番号38からなる群から選択される重鎖と、配列番号37及び配列番号39からなる群から選択される軽鎖と、を含む抗体、またはその断片、バリアント、もしくはバイオシミラーを投与することを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体サイトカイン移植タンパク質は、アルデスロイキン(Proleukin(登録商標))または同等の分子などであるがこれらに限定されない野生型IL-2分子よりも長い血清半減期を有する。
いくつかの実施形態では、骨髄破壊的リンパ球枯渇レジメンの前述の実施形態で使用されるTIL注入は、本明細書に記載の任意のTIL組成物であり得、また、TIL注入の代わりにMIL及びPBLの注入、ならびに本明細書に記載のIL-2レジメンの追加及び併用療法(PD-1及び/またはPD-L1阻害剤及び/またはCTLA-4阻害剤など)の投与を含み得る。
8.追加の治療方法
いくつかの実施形態では、本発明は、非小細胞肺癌(NSCLC)の治療を必要とする対象または患者に腫瘍浸潤リンパ球(TIL)の集団を投与することによって、NSCLCを治療する方法を提供し、対象または患者は、
i.PD-L1<1%の所定の腫瘍割合スコア(TPS)、
ii.1%~49%のPD-L1のTPSスコア、または
iii.1つ以上のドライバー変異の所定の非存在のうちの少なくとも1つを有し、ドライバー変異は、EGFR変異、EGFR挿入、EGFRエクソン20、KRAS変異、BRAF変異、ALK変異、c-ROS変異(ROS1変異)、ROS1融合、RET変異、RET融合、ERBB2変異、ERBB2増幅、BRCA変異、MAP2K1変異、PIK3CA、CDKN2A、PTEN変異、UMD変異、NRAS変異、KRAS変異、NF1変異、MET変異、METスプライス及び/または変化したMETシグナル伝達、TP53変異、CREBBP変異、KMT2C変異、KMT2D変異、ARID1A変異、RB1変異、ATM変異、SETD2変異、FLT3変異、PTPN11変異、FGFR1変異、EP300変異、MYC変異、EZH2変異、JAK2変異、FBXW7変異、CCND3変異、及びGNA11変異からなる群から選択され、この方法は、
(a)対象から取得された腫瘍試料を複数の腫瘍断片に処理することによって、対象または患者から切除された腫瘍から第1のTIL集団を取得及び/または受容することと、
(b)第1のTIL集団を閉鎖系に付加することと、
(c)IL-2を含む細胞培養培地中で第1のTIL集団を培養することによって第1の拡張を行い、第2のTIL集団を産生することであって、第1の拡張が、第1のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、第1の拡張が、約3~14日間行われて、第2のTIL集団を取得し、ステップ(b)からステップ(c)への移行が、系を開くことなく起こる、第2のTIL集団を産生することと、
(d)第2のTIL集団の細胞培養培地を追加のIL-2、OKT-3、及び抗原提示細胞(APC)で補充することによって第2の拡張を行い、第3のTIL集団を産生することであって、第2の拡張が、約7~14日間行われて、第3のTIL集団を取得し、第3のTIL集団が、治療的TIL集団であり、第2の拡張が、第2のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、ステップ(c)からステップ(d)への移行が、系を開くことなく起こる、第3のTIL集団を産生することと、
(e)ステップ(d)から得られた治療的TIL集団を採取することであって、ステップ(d)からステップ(e)への移行が、系を開くことなく起こる、採取することと、
(f)ステップ(e)からの採取されたTIL集団を注入バッグに移すことであって、ステップ(e)から(f)への移行が、系を開くことなく起こる、移すことと、
(g)凍結保存プロセスを使用して、ステップ(f)からの採取されたTIL集団を含む注入バッグを凍結保存することと、
(h)治療上有効な投与量の第3のTIL集団を、ステップ(g)の注入バッグから対象または患者に投与することと、を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、非小細胞肺癌(NSCLC)の治療を必要とする対象または患者に腫瘍浸潤リンパ球(TIL)の集団を投与することによって、NSCLCを治療する方法を提供し、対象または患者は、
i.PD-L1<1%の所定の腫瘍割合スコア(TPS)、
ii.1%~49%のPD-L1のTPSスコア、または
iii.1つ以上のドライバー変異の所定の非存在のうちの少なくとも1つを有し、ドライバー変異は、EGFR変異、EGFR挿入、EGFRエクソン20、KRAS変異、BRAF変異、ALK変異、c-ROS変異(ROS1変異)、ROS1融合、RET変異、RET融合、ERBB2変異、ERBB2増幅、BRCA変異、MAP2K1変異、PIK3CA、CDKN2A、PTEN変異、UMD変異、NRAS変異、KRAS変異、NF1変異、MET変異、METスプライス及び/または変化したMETシグナル伝達、TP53変異、CREBBP変異、KMT2C変異、KMT2D変異、ARID1A変異、RB1変異、ATM変異、SETD2変異、FLT3変異、PTPN11変異、FGFR1変異、EP300変異、MYC変異、EZH2変異、JAK2変異、FBXW7変異、CCND3変異、及びGNA11変異からなる群から選択され、この方法は、
(a)対象から取得された腫瘍試料を複数の腫瘍断片に処理することによって、対象または患者から切除された腫瘍から第1のTIL集団を取得及び/または受容することと、
(b)第1のTIL集団を閉鎖系に付加することと、
(c)IL-2を含む細胞培養培地中で第1のTIL集団を培養することによって第1の拡張を行い、第2のTIL集団を産生することであって、第1の拡張が、第1のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、第1の拡張が、約3~14日間行われて、第2のTIL集団を取得し、ステップ(b)からステップ(c)への移行が、系を開くことなく起こる、第2のTIL集団を産生することと、
(d)第2のTIL集団の細胞培養培地を追加のIL-2、OKT-3、及び抗原提示細胞(APC)で補充することによって第2の拡張を行い、第3のTIL集団を産生することであって、第2の拡張が、約7~14日間行われて、第3のTIL集団を取得し、第3のTIL集団が、治療的TIL集団であり、第2の拡張が、第2のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、ステップ(c)からステップ(d)への移行が、系を開くことなく起こる、第3のTIL集団を産生することと、
(e)ステップ(d)から得られた治療的TIL集団を採取することであって、ステップ(d)からステップ(e)への移行が、系を開くことなく起こる、採取することと、
(f)ステップ(e)からの採取されたTIL集団を注入バッグに移すことであって、ステップ(e)から(f)への移行が、系を開くことなく起こる、移すことと、
(g)凍結保存プロセスを使用して、ステップ(f)からの採取されたTIL集団を含む注入バッグを凍結保存することと、
(h)治療上有効な投与量の第3のTIL集団を、ステップ(g)の注入バッグから対象または患者に投与することと、を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、非小細胞肺癌(NSCLC)の治療を必要とする対象または患者に腫瘍浸潤リンパ球(TIL)の集団を投与することによって、NSCLCを治療する方法を提供し、この方法は、
(a)PD-L1のPD-L1発現及び腫瘍割合スコア(TPS)について患者の腫瘍を試験することと、
(b)1つ以上のドライバー変異の所定の非存在について患者を試験することであって、ドライバー変異が、EGFR変異、EGFR挿入、EGFRエクソン20、KRAS変異、BRAF変異、ALK変異、c-ROS変異(ROS1変異)、ROS1融合、RET変異、RET融合、ERBB2変異、ERBB2増幅、BRCA変異、MAP2K1変異、PIK3CA、CDKN2A、PTEN変異、UMD変異、NRAS変異、KRAS変異、NF1変異、MET変異、METスプライス及び/または変化したMETシグナル伝達、TP53変異、CREBBP変異、KMT2C変異、KMT2D変異、ARID1A変異、RB1変異、ATM変異、SETD2変異、FLT3変異、PTPN11変異、FGFR1変異、EP300変異、MYC変異、EZH2変異、JAK2変異、FBXW7変異、CCND3変異、及びGNA11変異からなる群から選択される、試験することと、
(c)患者が、約1%~約49%のPD-L1のTPSスコアを有していることを判定し、また患者がドライバー変異を有しないことを判定することと、
(d)対象から取得された腫瘍試料を複数の腫瘍断片に処理することによって、対象または患者から切除された腫瘍から第1のTIL集団を取得及び/または受容することと、
(e)第1のTIL集団を閉鎖系に付加することと、
(f)IL-2を含む細胞培養培地中で第1のTIL集団を培養することによって第1の拡張を行い、第2のTIL集団を産生することであって、第1の拡張が、第1のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、第1の拡張が、約3~14日間行われて、第2のTIL集団を取得し、ステップ(e)からステップ(f)への移行が、系を開くことなく起こる、第2のTIL集団を産生することと、
(g)第2のTIL集団の細胞培養培地を追加のIL-2、OKT-3、及び抗原提示細胞(APC)で補充することによって第2の拡張を行い、第3のTIL集団を産生することであって、第2の拡張が、約7~14日間行われて、第3のTIL集団を取得し、第3のTIL集団が、治療的TIL集団であり、第2の拡張が、第2のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、ステップ(f)からステップ(g)への移行が、系を開くことなく起こる、第3のTIL集団を産生することと、
(h)ステップ(d)から取得された治療的TIL集団を採取することであって、ステップ(d)からステップ(e)への移行が、系を開くことなく起こる、採取することと、
(i)ステップ(e)から採取されたTIL集団を注入バッグに移すことであって、ステップ(e)から(f)への移行が、系を開くことなく起こる、移すことと、
(j)凍結保存プロセスを使用して、ステップ(f)から採取されたTIL集団を含む注入バッグを凍結保存することと、
(k)治療上有効な投与量の第3のTIL集団を、ステップ(g)の注入バッグから対象または患者に投与することと、を含む。
(a)PD-L1のPD-L1発現及び腫瘍割合スコア(TPS)について患者の腫瘍を試験することと、
(b)1つ以上のドライバー変異の所定の非存在について患者を試験することであって、ドライバー変異が、EGFR変異、EGFR挿入、EGFRエクソン20、KRAS変異、BRAF変異、ALK変異、c-ROS変異(ROS1変異)、ROS1融合、RET変異、RET融合、ERBB2変異、ERBB2増幅、BRCA変異、MAP2K1変異、PIK3CA、CDKN2A、PTEN変異、UMD変異、NRAS変異、KRAS変異、NF1変異、MET変異、METスプライス及び/または変化したMETシグナル伝達、TP53変異、CREBBP変異、KMT2C変異、KMT2D変異、ARID1A変異、RB1変異、ATM変異、SETD2変異、FLT3変異、PTPN11変異、FGFR1変異、EP300変異、MYC変異、EZH2変異、JAK2変異、FBXW7変異、CCND3変異、及びGNA11変異からなる群から選択される、試験することと、
(c)患者が、約1%~約49%のPD-L1のTPSスコアを有していることを判定し、また患者がドライバー変異を有しないことを判定することと、
(d)対象から取得された腫瘍試料を複数の腫瘍断片に処理することによって、対象または患者から切除された腫瘍から第1のTIL集団を取得及び/または受容することと、
(e)第1のTIL集団を閉鎖系に付加することと、
(f)IL-2を含む細胞培養培地中で第1のTIL集団を培養することによって第1の拡張を行い、第2のTIL集団を産生することであって、第1の拡張が、第1のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、第1の拡張が、約3~14日間行われて、第2のTIL集団を取得し、ステップ(e)からステップ(f)への移行が、系を開くことなく起こる、第2のTIL集団を産生することと、
(g)第2のTIL集団の細胞培養培地を追加のIL-2、OKT-3、及び抗原提示細胞(APC)で補充することによって第2の拡張を行い、第3のTIL集団を産生することであって、第2の拡張が、約7~14日間行われて、第3のTIL集団を取得し、第3のTIL集団が、治療的TIL集団であり、第2の拡張が、第2のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、ステップ(f)からステップ(g)への移行が、系を開くことなく起こる、第3のTIL集団を産生することと、
(h)ステップ(d)から取得された治療的TIL集団を採取することであって、ステップ(d)からステップ(e)への移行が、系を開くことなく起こる、採取することと、
(i)ステップ(e)から採取されたTIL集団を注入バッグに移すことであって、ステップ(e)から(f)への移行が、系を開くことなく起こる、移すことと、
(j)凍結保存プロセスを使用して、ステップ(f)から採取されたTIL集団を含む注入バッグを凍結保存することと、
(k)治療上有効な投与量の第3のTIL集団を、ステップ(g)の注入バッグから対象または患者に投与することと、を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、非小細胞肺癌(NSCLC)の治療を必要とする対象または患者に腫瘍浸潤リンパ球(TIL)の集団を投与することによって、NSCLCを治療する方法を提供し、この方法は、
(a)PD-L1のPD-L1発現及び腫瘍割合スコア(TPS)について患者の腫瘍を試験することと、
(b)1つ以上のドライバー変異の所定の非存在について患者を試験することであって、ドライバー変異が、EGFR変異、EGFR挿入、EGFRエクソン20、KRAS変異、BRAF変異、ALK変異、c-ROS変異(ROS1変異)、ROS1融合、RET変異、RET融合、ERBB2変異、ERBB2増幅、BRCA変異、MAP2K1変異、PIK3CA、CDKN2A、PTEN変異、UMD変異、NRAS変異、KRAS変異、NF1変異、MET変異、METスプライス及び/または変化したMETシグナル伝達、TP53変異、CREBBP変異、KMT2C変異、KMT2D変異、ARID1A変異、RB1変異、ATM変異、SETD2変異、FLT3変異、PTPN11変異、FGFR1変異、EP300変異、MYC変異、EZH2変異、JAK2変異、FBXW7変異、CCND3変異、及びGNA11変異からなる群から選択される、試験することと、
(c)患者が、約1%未満のPD-L1のTPSスコアを有していることを判定し、また患者がドライバー変異を有しないことを判定することと、
(d)対象から取得された腫瘍試料を複数の腫瘍断片に処理することによって、対象または患者から切除された腫瘍から第1のTIL集団を取得及び/または受容することと、
(e)第1のTIL集団を閉鎖系に付加することと、
(f)IL-2を含む細胞培養培地中で第1のTIL集団を培養することによって第1の拡張を行い、第2のTIL集団を産生することであって、第1の拡張が、第1のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、第1の拡張が、約3~14日間行われて、第2のTIL集団を取得し、ステップ(e)からステップ(f)への移行が、系を開くことなく起こる、第2のTIL集団を産生することと、
(g)第2のTIL集団の細胞培養培地を追加のIL-2、OKT-3、及び抗原提示細胞(APC)で補充することによって第2の拡張を行い、第3のTIL集団を産生することであって、第2の拡張が、約7~14日間行われて、第3のTIL集団を取得し、第3のTIL集団が、治療的TIL集団であり、第2の拡張が、第2のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、ステップ(f)からステップ(g)への移行が、系を開くことなく起こる、第3のTIL集団を産生することと、
(h)ステップ(d)から取得された治療的TIL集団を採取することであって、ステップ(d)からステップ(e)への移行が、系を開くことなく起こる、採取することと、
(i)ステップ(e)から採取されたTIL集団を注入バッグに移すことであって、ステップ(e)から(f)への移行が、系を開くことなく起こる、移すことと、
(j)凍結保存プロセスを使用して、ステップ(f)から採取されたTIL集団を含む注入バッグを凍結保存することと、
(k)治療上有効な投与量の第3のTIL集団を、ステップ(g)の注入バッグから対象または患者に投与することと、を含む。
(a)PD-L1のPD-L1発現及び腫瘍割合スコア(TPS)について患者の腫瘍を試験することと、
(b)1つ以上のドライバー変異の所定の非存在について患者を試験することであって、ドライバー変異が、EGFR変異、EGFR挿入、EGFRエクソン20、KRAS変異、BRAF変異、ALK変異、c-ROS変異(ROS1変異)、ROS1融合、RET変異、RET融合、ERBB2変異、ERBB2増幅、BRCA変異、MAP2K1変異、PIK3CA、CDKN2A、PTEN変異、UMD変異、NRAS変異、KRAS変異、NF1変異、MET変異、METスプライス及び/または変化したMETシグナル伝達、TP53変異、CREBBP変異、KMT2C変異、KMT2D変異、ARID1A変異、RB1変異、ATM変異、SETD2変異、FLT3変異、PTPN11変異、FGFR1変異、EP300変異、MYC変異、EZH2変異、JAK2変異、FBXW7変異、CCND3変異、及びGNA11変異からなる群から選択される、試験することと、
(c)患者が、約1%未満のPD-L1のTPSスコアを有していることを判定し、また患者がドライバー変異を有しないことを判定することと、
(d)対象から取得された腫瘍試料を複数の腫瘍断片に処理することによって、対象または患者から切除された腫瘍から第1のTIL集団を取得及び/または受容することと、
(e)第1のTIL集団を閉鎖系に付加することと、
(f)IL-2を含む細胞培養培地中で第1のTIL集団を培養することによって第1の拡張を行い、第2のTIL集団を産生することであって、第1の拡張が、第1のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、第1の拡張が、約3~14日間行われて、第2のTIL集団を取得し、ステップ(e)からステップ(f)への移行が、系を開くことなく起こる、第2のTIL集団を産生することと、
(g)第2のTIL集団の細胞培養培地を追加のIL-2、OKT-3、及び抗原提示細胞(APC)で補充することによって第2の拡張を行い、第3のTIL集団を産生することであって、第2の拡張が、約7~14日間行われて、第3のTIL集団を取得し、第3のTIL集団が、治療的TIL集団であり、第2の拡張が、第2のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、ステップ(f)からステップ(g)への移行が、系を開くことなく起こる、第3のTIL集団を産生することと、
(h)ステップ(d)から取得された治療的TIL集団を採取することであって、ステップ(d)からステップ(e)への移行が、系を開くことなく起こる、採取することと、
(i)ステップ(e)から採取されたTIL集団を注入バッグに移すことであって、ステップ(e)から(f)への移行が、系を開くことなく起こる、移すことと、
(j)凍結保存プロセスを使用して、ステップ(f)から採取されたTIL集団を含む注入バッグを凍結保存することと、
(k)治療上有効な投与量の第3のTIL集団を、ステップ(g)の注入バッグから対象または患者に投与することと、を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、非小細胞肺癌(NSCLC)の治療を必要とする対象または患者に腫瘍浸潤リンパ球(TIL)の集団を投与することによって、NSCLCを治療する方法を提供し、この方法は、
(a)PD-L1のPD-L1発現及び腫瘍割合スコア(TPS)について患者の腫瘍を試験することと、
(b)1つ以上のドライバー変異の非存在について患者を試験することであって、ドライバー変異が、EGFR変異、EGFR挿入、KRAS変異、BRAF変異、ALK変異、c-ROS変異(ROS1変異)、ROS1融合、RET変異、またはRET融合からなる群から選択される、試験することと、
(c)患者が、約1%~約49%のPD-L1のTPSスコアを有していることを判定し、また患者がドライバー変異を有しないことを判定することと、
(d)対象から取得された腫瘍試料を複数の腫瘍断片に処理することによって、対象または患者から切除された腫瘍から第1のTIL集団を取得及び/または受容することと、
(e)第1のTIL集団を閉鎖系に付加することと、
(f)IL-2を含む細胞培養培地中で第1のTIL集団を培養することによって第1の拡張を行い、第2のTIL集団を産生することであって、第1の拡張が、第1のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、第1の拡張が、約3~14日間行われて、第2のTIL集団を取得し、ステップ(e)からステップ(f)への移行が、系を開くことなく起こる、第2のTIL集団を産生することと、
(g)第2のTIL集団の細胞培養培地を追加のIL-2、OKT-3、及び抗原提示細胞(APC)で補充することによって第2の拡張を行い、第3のTIL集団を産生することであって、第2の拡張が、約7~14日間行われて、第3のTIL集団を取得し、第3のTIL集団が、治療的TIL集団であり、第2の拡張が、第2のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、ステップ(f)からステップ(g)への移行が、系を開くことなく起こる、第3のTIL集団を産生することと、
(h)ステップ(d)から取得された治療的TIL集団を採取することであって、ステップ(d)からステップ(e)への移行が、系を開くことなく起こる、採取することと、
(i)ステップ(e)から採取されたTIL集団を注入バッグに移すことであって、ステップ(e)から(f)への移行が、系を開くことなく起こる、移すことと、
(j)凍結保存プロセスを使用して、ステップ(f)から採取されたTIL集団を含む注入バッグを凍結保存することと、
(k)治療上有効な投与量の第3のTIL集団を、ステップ(g)の注入バッグから対象または患者に投与することと、を含む。
(a)PD-L1のPD-L1発現及び腫瘍割合スコア(TPS)について患者の腫瘍を試験することと、
(b)1つ以上のドライバー変異の非存在について患者を試験することであって、ドライバー変異が、EGFR変異、EGFR挿入、KRAS変異、BRAF変異、ALK変異、c-ROS変異(ROS1変異)、ROS1融合、RET変異、またはRET融合からなる群から選択される、試験することと、
(c)患者が、約1%~約49%のPD-L1のTPSスコアを有していることを判定し、また患者がドライバー変異を有しないことを判定することと、
(d)対象から取得された腫瘍試料を複数の腫瘍断片に処理することによって、対象または患者から切除された腫瘍から第1のTIL集団を取得及び/または受容することと、
(e)第1のTIL集団を閉鎖系に付加することと、
(f)IL-2を含む細胞培養培地中で第1のTIL集団を培養することによって第1の拡張を行い、第2のTIL集団を産生することであって、第1の拡張が、第1のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、第1の拡張が、約3~14日間行われて、第2のTIL集団を取得し、ステップ(e)からステップ(f)への移行が、系を開くことなく起こる、第2のTIL集団を産生することと、
(g)第2のTIL集団の細胞培養培地を追加のIL-2、OKT-3、及び抗原提示細胞(APC)で補充することによって第2の拡張を行い、第3のTIL集団を産生することであって、第2の拡張が、約7~14日間行われて、第3のTIL集団を取得し、第3のTIL集団が、治療的TIL集団であり、第2の拡張が、第2のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、ステップ(f)からステップ(g)への移行が、系を開くことなく起こる、第3のTIL集団を産生することと、
(h)ステップ(d)から取得された治療的TIL集団を採取することであって、ステップ(d)からステップ(e)への移行が、系を開くことなく起こる、採取することと、
(i)ステップ(e)から採取されたTIL集団を注入バッグに移すことであって、ステップ(e)から(f)への移行が、系を開くことなく起こる、移すことと、
(j)凍結保存プロセスを使用して、ステップ(f)から採取されたTIL集団を含む注入バッグを凍結保存することと、
(k)治療上有効な投与量の第3のTIL集団を、ステップ(g)の注入バッグから対象または患者に投与することと、を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、非小細胞肺癌(NSCLC)の治療を必要とする対象または患者に腫瘍浸潤リンパ球(TIL)の集団を投与することによって、NSCLCを治療する方法を提供し、この方法は、
(a)PD-L1のPD-L1発現及び腫瘍割合スコア(TPS)について患者の腫瘍を試験することと、
(b)1つ以上のドライバー変異の非存在について患者を試験することであって、ドライバー変異が、EGFR変異、EGFR挿入、KRAS変異、BRAF変異、ALK変異、c-ROS変異(ROS1変異)、ROS1融合、RET変異、またはRET融合からなる群から選択される、試験することと、
(c)患者が、約1%未満のPD-L1のTPSスコアを有していることを判定し、また患者がドライバー変異を有しないことを判定することと、
(d)対象から取得された腫瘍試料を複数の腫瘍断片に処理することによって、対象または患者から切除された腫瘍から第1のTIL集団を取得及び/または受容することと、
(e)第1のTIL集団を閉鎖系に付加することと、
(f)IL-2を含む細胞培養培地中で第1のTIL集団を培養することによって第1の拡張を行い、第2のTIL集団を産生することであって、第1の拡張が、第1のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、第1の拡張が、約3~14日間行われて、第2のTIL集団を取得し、ステップ(e)からステップ(f)への移行が、系を開くことなく起こる、第2のTIL集団を産生することと、
(g)第2のTIL集団の細胞培養培地を追加のIL-2、OKT-3、及び抗原提示細胞(APC)で補充することによって第2の拡張を行い、第3のTIL集団を産生することであって、第2の拡張が、約7~14日間行われて、第3のTIL集団を取得し、第3のTIL集団が、治療的TIL集団であり、第2の拡張が、第2のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、ステップ(f)からステップ(g)への移行が、系を開くことなく起こる、第3のTIL集団を産生することと、
(h)ステップ(d)から取得された治療的TIL集団を採取することであって、ステップ(d)からステップ(e)への移行が、系を開くことなく起こる、採取することと、
(i)ステップ(e)から採取されたTIL集団を注入バッグに移すことであって、ステップ(e)から(f)への移行が、系を開くことなく起こる、移すことと、
(j)凍結保存プロセスを使用して、ステップ(f)から採取されたTIL集団を含む注入バッグを凍結保存することと、
(k)治療上有効な投与量の第3のTIL集団を、ステップ(g)の注入バッグから対象または患者に投与することと、を含む。
(a)PD-L1のPD-L1発現及び腫瘍割合スコア(TPS)について患者の腫瘍を試験することと、
(b)1つ以上のドライバー変異の非存在について患者を試験することであって、ドライバー変異が、EGFR変異、EGFR挿入、KRAS変異、BRAF変異、ALK変異、c-ROS変異(ROS1変異)、ROS1融合、RET変異、またはRET融合からなる群から選択される、試験することと、
(c)患者が、約1%未満のPD-L1のTPSスコアを有していることを判定し、また患者がドライバー変異を有しないことを判定することと、
(d)対象から取得された腫瘍試料を複数の腫瘍断片に処理することによって、対象または患者から切除された腫瘍から第1のTIL集団を取得及び/または受容することと、
(e)第1のTIL集団を閉鎖系に付加することと、
(f)IL-2を含む細胞培養培地中で第1のTIL集団を培養することによって第1の拡張を行い、第2のTIL集団を産生することであって、第1の拡張が、第1のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、第1の拡張が、約3~14日間行われて、第2のTIL集団を取得し、ステップ(e)からステップ(f)への移行が、系を開くことなく起こる、第2のTIL集団を産生することと、
(g)第2のTIL集団の細胞培養培地を追加のIL-2、OKT-3、及び抗原提示細胞(APC)で補充することによって第2の拡張を行い、第3のTIL集団を産生することであって、第2の拡張が、約7~14日間行われて、第3のTIL集団を取得し、第3のTIL集団が、治療的TIL集団であり、第2の拡張が、第2のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、ステップ(f)からステップ(g)への移行が、系を開くことなく起こる、第3のTIL集団を産生することと、
(h)ステップ(d)から取得された治療的TIL集団を採取することであって、ステップ(d)からステップ(e)への移行が、系を開くことなく起こる、採取することと、
(i)ステップ(e)から採取されたTIL集団を注入バッグに移すことであって、ステップ(e)から(f)への移行が、系を開くことなく起こる、移すことと、
(j)凍結保存プロセスを使用して、ステップ(f)から採取されたTIL集団を含む注入バッグを凍結保存することと、
(k)治療上有効な投与量の第3のTIL集団を、ステップ(g)の注入バッグから対象または患者に投与することと、を含む。
いくつかの実施形態では、第2のTIL集団は、第1のTIL集団よりも数が少なくとも50倍多い。
いくつかの実施形態では、本発明は、治療上有効な投与量の、上記の前段落のうちのいずれかに記載の治療的TIL集団を対象に投与することを含む、がんを有する対象を治療するための方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、治療上有効な投与量の、上記の前段落のうちのいずれかに記載のTIL組成物を対象に投与することを含む、がんを有する対象を治療するための方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、それぞれ、治療上有効な投与量の治療的TIL集団及び上記の前段落のうちのいずれかに記載のTIL組成物を投与する前に、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンが対象に投与されるように修正された、上記の前段落のうちのいずれかに記載のがんを有する対象を治療するための方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンが、60mg/m2/日の用量で2日間のシクロホスファミドの投与に続いて、25mg/m2/日の用量で5日間のフルダラビンを投与するステップを含むように修正された、上記の前段落のうちのいずれかに記載のがんを有する対象を治療するための方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、対象にTIL細胞を投与した翌日に開始する、高用量のIL-2レジメンで対象を治療するステップをさらに含むように修正された、上記の前段落のうちのいずれかに記載のがんを有する対象を治療するための方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、高用量IL-2レジメンが、許容範囲まで8時間毎に15分間のボーラス静脈内注入として投与される600,000または720,000IU/kgを含むように修正された、上記の前段落のうちのいずれかに記載のがんを有する対象を治療するための方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、がんが固形腫瘍であるように修正された、上記の前段落のうちのいずれかに記載のがんを有する対象を治療するための方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、がんが黒色腫、卵巣癌、子宮頸癌、非小細胞肺癌(NSCLC)、肺癌、膀胱癌、乳癌、ヒト乳頭癌ウイルスによって引き起こされるがん、頭頸部癌(頭頸部扁平上皮癌(HNSCC)を含む)、神経膠芽細胞腫(GBMを含む)、胃腸癌、腎癌、または腎細胞癌であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載のがんを有する対象を治療するための方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、がんが黒色腫、HNSCC、子宮頸癌、NSCLC、膠芽腫(GBMを含む)、及び胃腸癌であるように修正された、上記の前段落のうちのいずれかに記載のがんを有する対象を治療するための方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、がんが黒色腫であるように修正された、上記の前段落のうちのいずれかに記載のがんを有する対象を治療するための方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、がんがHNSCCであるように修正された、上記の前段落のうちのいずれかに記載のがんを有する対象を治療するための方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、がんが子宮頸癌であるように修正された、上記の前段落のうちのいずれかに記載のがんを有する対象を治療するための方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、がんがNSCLCであるように修正された、上記の前段落のうちのいずれかに記載のがんを有する対象を治療するための方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、がんが膠芽腫(GBMを含む)であるように修正された、上記の前段落のうちのいずれかに記載のがんを有する対象を治療するための方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、がんが胃腸癌であるように修正された、上記の前段落のうちのいずれかに記載のがんを有する対象を治療するための方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、がんが超変異癌であるように修正された、上記の前段落のうちのいずれかに記載のがんを有する対象を治療するための方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、がんが小児の超変異癌であるように修正された、上記の前段落のうちのいずれかに記載のがんを有する対象を治療するための方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、治療上有効な投与量の治療的TIL集団を対象に投与することを含む、がんを有する対象を治療するための方法で使用するための、上記の前段落のうちのいずれかに記載の治療的TIL集団を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、治療上有効な投与量のTIL組成物を対象に投与することを含む、がんを有する対象を治療するための方法で使用するための、上記の前段落のうちのいずれかに記載のTIL組成物を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、治療上有効な投与量の、上記の前段落のうちのいずれかに記載の治療的TIL集団または上記の前段落のうちのいずれかに記載のTIL組成物を対象に投与する前に、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンが対象に投与されるように修正された、上記の前段落のうちのいずれかに記載の治療的TIL集団または上記の前段落のうちのいずれかに記載のTIL組成物を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンが、60mg/m2/日の用量で2日間のシクロホスファミドの投与に続いて、25mg/m2/日の用量で5日間のフルダラビンを投与するステップを含むように修正された、上記の前段落のうちのいずれかに記載の治療的TIL集団またはTIL組成物を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、TIL細胞を患者に投与した翌日から開始する、高用量IL-2レジメンで患者を治療するステップをさらに含むように修正された、上記の前段落のうちのいずれかに記載の治療的TIL集団またはTIL組成物を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、高用量IL-2レジメンが、許容範囲まで8時間毎に15分間のボーラス静脈内注入として投与される600,000または720,000IU/kgを含むように修正された、上記の前段落のうちのいずれかに記載の治療的TIL集団またはTIL組成物を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、がんが固形腫瘍であるように修正された、上記の前段落のうちのいずれかに記載の治療的TIL集団またはTIL組成物を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、がんが黒色腫、卵巣癌、子宮頸癌、非小細胞肺癌(NSCLC)、肺癌、膀胱癌、乳癌、ヒト乳頭癌ウイルスによって引き起こされるがん、頭頸部癌(頭頸部扁平上皮癌(HNSCC)を含む)、神経膠芽細胞腫(GBMを含む)、胃腸癌、腎癌、または腎細胞癌であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の治療的TIL集団またはTIL組成物を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、がんが黒色腫、HNSCC、子宮頸癌、NSCLC、神経膠芽腫(GBMを含む)、及び胃腸癌であるように修正された、上記の前段落のうちのいずれかに記載の治療的TIL集団またはTIL組成物を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、がんが黒色腫であるように修正された、上記の前段落のうちのいずれかに記載の治療的TIL集団またはTIL組成物を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、がんがHNSCCであるように修正された、上記の前段落のうちのいずれかに記載の治療的TIL集団またはTIL組成物を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、がんが子宮頸癌であるように修正された、上記の前段落のうちのいずれかに記載の治療的TIL集団またはTIL組成物を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、がんがNSCLCであるように修正された、上記の前段落のうちのいずれかに記載の治療的TIL集団またはTIL組成物を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、がんが膠芽腫(GBMを含む)であるように修正された、上記の前段落のうちのいずれかに記載の治療的TIL集団またはTIL組成物を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、がんが胃腸癌であるように修正された、上記の前段落のうちのいずれかに記載の治療的TIL集団またはTIL組成物を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、がんが超変異癌であるように修正された、上記の前段落のうちのいずれかに記載の治療的TIL集団またはTIL組成物を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、がんが小児の超変異癌であるように修正された、上記の前段落のうちのいずれかに記載の治療的TIL集団またはTIL組成物を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、治療上有効な投与量の治療的TIL集団を対象に投与することを含む、対象におけるがんを治療する方法における上記の前段落のうちのいずれかに記載の治療的TIL集団の使用を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、治療上有効な投与量のTIL組成物を対象に投与することを含む、対象におけるがんを治療する方法における上記の前段落のうちのいずれかに記載のTIL組成物の使用を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンを対象に投与すること、次いで治療上有効な投与量の、上記の前段落のうちのいずれかに記載の治療的TIL集団または上記の前段落のうちのいずれかに記載のTIL組成物を対象に投与することと、を含む、対象におけるがんを治療する方法における、上記の前段落のうちのいずれかに記載の治療的TIL集団または上記の前段落のうちのいずれかに記載のTIL組成物の使用を提供する。
本明細書に包含される実施形態は、これから以下の実施例を参照して説明される。これらの実施例は、例示のみを目的として提供されており、本明細書に包含される本開示は、決してこれらの実施例に限定されると解釈されるべきではなく、むしろ、本明細書で提供される教示の結果として明らかになるありとあらゆる変形を包含すると解釈されるべきである。
実施例1:REP前プロセス及びREPプロセス用の培地の調製
この実施例は、非小細胞肺癌(NSCLC)を含む様々な腫瘍タイプに由来する腫瘍浸潤リンパ球(TIL)の培養を含むプロトコルで使用するための組織培養培地の調製手順を説明する。この培地を、本出願及び実施例に記載のTILのうちのいずれかの調製に使用することができる。
この実施例は、非小細胞肺癌(NSCLC)を含む様々な腫瘍タイプに由来する腫瘍浸潤リンパ球(TIL)の培養を含むプロトコルで使用するための組織培養培地の調製手順を説明する。この培地を、本出願及び実施例に記載のTILのうちのいずれかの調製に使用することができる。
CM1の調製
以下の試薬を冷蔵から取り出し、37℃の水浴中で温めた。(RPMI1640、ヒトAB血清、200mM L-グルタミン)。濾過される体積に適した0.2umフィルターユニットの上部に成分の各々を追加することによって、以下の表37に従ってCM1培地を調製した。4℃で保存する。
以下の試薬を冷蔵から取り出し、37℃の水浴中で温めた。(RPMI1640、ヒトAB血清、200mM L-グルタミン)。濾過される体積に適した0.2umフィルターユニットの上部に成分の各々を追加することによって、以下の表37に従ってCM1培地を調製した。4℃で保存する。
使用日に、37℃の水浴中で必要量のCM1を事前に温め、6000IU/mlのIL-2を追加した。
表38に従って必要に応じた追加の補充。
CM2の調製
調製したCM1を冷蔵庫から取り出すか、または上記のセクション7.3に従って新鮮なCM1を調製する。AIM-V(登録商標)を冷蔵庫から取り出し、調製したCM1を滅菌培地ボトル内で同等体積のAIM-V(登録商標)と混合することによって、必要な量のCM2を調製した。使用日に3000IU/mLのIL-2をCM2培地に追加した。使用日に3000IU/mLのIL-2を含む十分な量のCM2を作製した。CM2培地ボトルにその名前、調製者のイニシャル、濾過/調製日、2週間の有効期限をラベル付けし、組織培養に必要になるまで4℃で保存した。
調製したCM1を冷蔵庫から取り出すか、または上記のセクション7.3に従って新鮮なCM1を調製する。AIM-V(登録商標)を冷蔵庫から取り出し、調製したCM1を滅菌培地ボトル内で同等体積のAIM-V(登録商標)と混合することによって、必要な量のCM2を調製した。使用日に3000IU/mLのIL-2をCM2培地に追加した。使用日に3000IU/mLのIL-2を含む十分な量のCM2を作製した。CM2培地ボトルにその名前、調製者のイニシャル、濾過/調製日、2週間の有効期限をラベル付けし、組織培養に必要になるまで4℃で保存した。
CM3の調製
使用が必要になった日にCM3を調製した。CM3は、AIM-V(登録商標)培地と同じであり、使用日に3000IU/mLのIL-2を補充した。IL-2ストック溶液をAIM-Vのボトルまたはバッグに直接追加することによって、実験のニーズに十分な量のCM3を調製した。穏やかに振盪することによって十分に混合した。ボトルに、AIM-Vに追加した直後に「3000IU/mL IL-2」とラベル付けする。過剰なCM3が存在する場合は、培地名、調製者のイニシャル、培地を調製した日、及びその有効期限(調製後7日)でラベル付けしたボトル内で4℃で保管した。4℃で7日間保管した後、IL-2を補充した培地を廃棄した。
使用が必要になった日にCM3を調製した。CM3は、AIM-V(登録商標)培地と同じであり、使用日に3000IU/mLのIL-2を補充した。IL-2ストック溶液をAIM-Vのボトルまたはバッグに直接追加することによって、実験のニーズに十分な量のCM3を調製した。穏やかに振盪することによって十分に混合した。ボトルに、AIM-Vに追加した直後に「3000IU/mL IL-2」とラベル付けする。過剰なCM3が存在する場合は、培地名、調製者のイニシャル、培地を調製した日、及びその有効期限(調製後7日)でラベル付けしたボトル内で4℃で保管した。4℃で7日間保管した後、IL-2を補充した培地を廃棄した。
CM4の調製
CM4は、CM3と同じであり、2mM GlutaMAX(商標)(最終濃度)を追加で補充した。1LのCM3毎に、10mlの200mM GlutaMAX(商標)を追加した。IL-2ストック溶液及びGlutaMAX(商標)ストック溶液をAIM-Vのボトルまたはバッグに直接追加することによって、実験のニーズに十分な量のCM4を調製した。穏やかに振盪することによって十分に混合した。ボトルに、AIM-Vに追加した直後に「3000IL/nil IL-2及びGlutaMAX」とラベル付けした。過剰なCM4が存在する場合、培地名、「GlutaMAX」、及びその有効期限(調製後7日)でラベル付けしたボトル内で4℃で保管した。4℃で7日間保管した後、IL-2を補充した培地を廃棄した。
CM4は、CM3と同じであり、2mM GlutaMAX(商標)(最終濃度)を追加で補充した。1LのCM3毎に、10mlの200mM GlutaMAX(商標)を追加した。IL-2ストック溶液及びGlutaMAX(商標)ストック溶液をAIM-Vのボトルまたはバッグに直接追加することによって、実験のニーズに十分な量のCM4を調製した。穏やかに振盪することによって十分に混合した。ボトルに、AIM-Vに追加した直後に「3000IL/nil IL-2及びGlutaMAX」とラベル付けした。過剰なCM4が存在する場合、培地名、「GlutaMAX」、及びその有効期限(調製後7日)でラベル付けしたボトル内で4℃で保管した。4℃で7日間保管した後、IL-2を補充した培地を廃棄した。
実施例2:IL-2、IL-15、及びIL-21サイトカインカクテルの使用
この実施例は、実施例A~GのTILプロセスと組み合わせた、追加のT細胞成長因子として機能するIL-2、IL-15、及びIL-21サイトカインの使用を説明する。
この実施例は、実施例A~GのTILプロセスと組み合わせた、追加のT細胞成長因子として機能するIL-2、IL-15、及びIL-21サイトカインの使用を説明する。
本明細書に記載のプロセスを使用して、TILは、培養の開始時に、実験の一方のアームにおいてIL-2の存在下で非小細胞肺癌(NSCLC)腫瘍から、及びもう一方のアームではIL-2の代わりにIL-2、IL-15、及びIL-21の組み合わせから成長させることができる。REP前の完了時に、培養物を、拡張、表現型、機能(CD107a+及びIFN-γ)、及びにTCR Vβレパートリーについて評価した。IL-15及びIL-21は、本明細書の他の場所に記載されており、Gruijlらにおいて、IL-21は、CD27+CD28+腫瘍浸潤リンパ球の拡張を促進し、細胞傷害能が高く、調節性T細胞の側副拡張が少ない、Santegoets,S.J.,J Transl Med.,2013,11:37(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3626797/)。
結果は、IL-2、IL-15、及びIL-21処理条件でのCD4+及びCD8+細胞の両方で、IL-2のみの条件と比較して増強したTIL拡張(>20%)が観察できることを示し得る。IL-2単独培養物と比較して、IL-2、IL-15、及びIL-21で処理した培養物から取得されたTILには、歪んだTCR Vβレパートリーを伴う主にCD8+集団への歪みがあった。IFN-γ及びCD107aは、IL-2単独で処理したTILと比較して、IL-2、IL-15、及びIL-21で処理したTILで上昇した。
実施例3:ガンマ線照射末梢単核細胞の個々のロットを適格性確認する
この実施例は、本明細書に記載の例示的な方法において同種異系フィーダー細胞として使用するためのガンマ線照射末梢単核細胞(PBMC、単核細胞またはMNCとしても知られる)の個々のロットを適格性確認するための簡略化された手順を説明する。
この実施例は、本明細書に記載の例示的な方法において同種異系フィーダー細胞として使用するためのガンマ線照射末梢単核細胞(PBMC、単核細胞またはMNCとしても知られる)の個々のロットを適格性確認するための簡略化された手順を説明する。
照射された各MNCフィーダーロットは、個々のドナーから調製した。各ロットまたはドナーは、精製された抗CD3(クローンOKT3)抗体及びインターロイキン-2(IL-2)の存在下でREP内のTILを拡張する能力について個々にスクリーニングした。さらに、フィーダー細胞の各ロットを、TILを添加せずに試験し、受けたガンマ線の線量がそれらを複製不全にするのに十分であることを確認した。
TILのREPには、ガンマ線を照射し、成長を停止させたMNCフィーダー細胞が必要である。フィーダーMNCの膜受容体は、抗CD3(クローンOKT3)抗体に結合し、REPフラスコ内のTILに架橋し、TILを刺激して拡張させる。フィーダーロットは、個々のドナーから採取した全血の白血球アフェレーシスから調製した。白血球アフェレーシス産物を、Ficoll-Hypaque上で遠心分離し、洗浄し、照射し、GMP条件下で凍結保存した。
TIL療法を受けた患者には、移植片対宿主病(GVHD)を引き起こす可能性があるため、生存可能なフィーダー細胞を注入しないことが重要である。したがって、フィーダー細胞は、細胞にガンマ線を照射することによって成長を停止させ、再培養時に二本鎖DNA切断が起こり、MNC細胞の細胞生存性が喪失する。
フィーダーロットを、2つの基準:1)共培養でTILを100倍超拡張する能力、及び2)複製不全で評価した。
フィーダーロットを、直立したT25組織培養フラスコ内で培養された2つの主要なREP前 TIL株を利用して、mini-REP形式で試験した。各TIL株は、REPでの活性化に応答して増殖する能力が独特であるため、フィーダーロットを、2つの異なるTIL株に対して試験した。対照として、上記の基準を満たすことが歴史的に示されている多くの照射されたMNCフィーダー細胞を、試験ロットと並行して実行した。
1回の実験で試験されたすべてのロットが同等の試験を受けることを保証するために、すべての条件及びすべてのフィーダーロットを試験するために、同じREP前TIL株の十分なストックが利用可能であった。
試験したフィーダー細胞の各ロットに、合計6つのT25フラスコがあった:REP前TIL株#1(2フラスコ)、REP前TIL株#2(2フラスコ)、及びフィーダー対照(2フラスコ)。TIL株番号1及び番号2を含むフラスコは、フィーダーロットがTILを拡張する能力を評価した。フィーダー対照フラスコは、フィーダーロットの複製不全を評価した。
A.実験プロトコル
-2/3日目、TIL株の解凍CM2培地を調製し、37℃の水浴中で温める。3000IU/mLのIL-2を補充した40mLのCM2を調製する。使用まで保温する。IL-2を含まない20mLの予熱したCM2を、使用したTIL株の名前がラベル付けされた2本の50mLコニカルチューブの各々に入れる。LN2ストレージから2つの指定されたREP前TIL株を取り出し、バイアルを組織培養室に移した。少量の氷が残るまで、37℃の水浴内の密封されたジッパーストレージバッグ内にバイアルを入れて解凍した。
-2/3日目、TIL株の解凍CM2培地を調製し、37℃の水浴中で温める。3000IU/mLのIL-2を補充した40mLのCM2を調製する。使用まで保温する。IL-2を含まない20mLの予熱したCM2を、使用したTIL株の名前がラベル付けされた2本の50mLコニカルチューブの各々に入れる。LN2ストレージから2つの指定されたREP前TIL株を取り出し、バイアルを組織培養室に移した。少量の氷が残るまで、37℃の水浴内の密封されたジッパーストレージバッグ内にバイアルを入れて解凍した。
無菌トランスファーピペットを使用して、各バイアルの内容物を、調製した、ラベル付けされた50mLのコニカルチューブ中の20mLのCM2に直ちに移した。細胞を洗浄し、400×CFで5分間遠心分離するために、IL-2なしのCM2を使用して40mLにQS。上清を吸引し、3000IU/mLのIL-2で補充された5mLの温かいCM2に再懸濁した。
自動セルカウンターを使用して細胞を計数するために、少量のアリコート(20μL)を重複して取り出した。計数を記録した。計数しながら、TIL細胞を含む50mLのコニカルチューブを、加湿した37℃、5% CO2インキュベーターに入れ、ガス交換を可能にするためにキャップを緩めた。細胞濃度を決定し、TILを、3000IU/mLのIL-2を補充したCM2中で1×106細胞/mLに希釈した。
mini-REPの0日目まで、加湿した37℃のインキュベーターで必要な数のウェルにおいて、24ウェル組織培養プレートの1ウェル当たり2mLで培養した。混乱及び潜在的な相互汚染を避けるために、別々の24ウェル組織培養プレートで異なるTIL株を培養した。
0日目、Mini-REPを開始する試験されるフィーダーロットの数に十分なCM2培地を調製した(例えば、一度に4つのフィーダーロットを試験するために、800mLのCM2培地を調製した)。上記で調製したCM2の一部を等分し、細胞培養のために3000IU/mLのIL-2で補充した(例えば、4つのフィーダーロットを一度に試験するために、3000IU/mLのIL-2で500mLのCM2培地を調製する)。
相互汚染を防ぐために各TIL株を別々に操作し、TIL培養物を入れた24ウェルプレートをインキュベーターから取り出し、BSCに移した。
無菌トランスファーピペットまたは100~1000μLピペッター及びチップを使用して、約1mLの培地を、使用されるTILの各ウェルから取り出し、24ウェル組織培養プレートの未使用のウェルに入れる。
新鮮な無菌トランスファーピペットまたは100~1000μLピペッター及びチップを使用して、残りの培地をウェル内のTILと混合して細胞を再懸濁し、次いで細胞懸濁液を、TILロット名のラベルが付いた50mLコニカルチューブに移し、容量を記録した。
予備の培地でウェルを洗浄し、その容量を同じ50mLコニカルチューブに移した。細胞を400×CFで回転させて、細胞ペレットを収集する。培地上清を吸引除去し、3000IU/mLのIL-2を含有する2~5mLのCM2培地に細胞ペレットを再懸濁し(採取したウェルの数及びペレットのサイズに基づいて使用される容量)、容量は、1.3×106細胞/mLを超える濃度を保証するのに十分である必要がある。
血清学的ピペットを使用して、細胞懸濁液を十分に混合し、容量を記録した。自動セルカウンターを使用して細胞を計数するために、200μLを取り出した。計数しながら、TIL細胞を含む50mLのコニカルチューブを、加湿した5% CO2、37℃インキュベーターに入れ、ガス交換を可能にするためにキャップを緩めた。計数を記録した。
TIL細胞を含有する50mLのコニカルチューブをインキュベーターから取り出し、3000IU/mLのIL-2で補充された温かいCM2中、1.3×106細胞/mLの濃度でそれらの細胞を再懸濁した。キャップを緩めた状態で、50mLのコニカルチューブをインキュベーターに戻した。
第2のTIL株について、上記のステップを繰り返した。
TILを実験用のT25フラスコに入れる直前に、TILを、以下の通り1:10に希釈して1.3×105細胞/mLの最終濃度にした。
MACS GMP CD3ピュア(OKT3)作用溶液を調製するOKT3のストック溶液(1mg/mL)を4℃の冷蔵庫から取り出し、BSCに入れた。mini-REPの培地では、最終濃度30ng/mLのOKT3を使用した。
実験の各T25フラスコ内の20mLに対して600ngのOKT3が必要であり、これは、20mL毎に60μLの10μg/mL溶液、または各フィーダーロットについて試験した6つのフラスコすべてで360μLに相当する。
試験した各フィーダーロットについて、400μLの1:100希釈の1mg/mL OKT3を、10μg/mLの作業濃度で作製した(例えば、4つのフィーダーロットを一度に試験する場合、1600μLの1:100希釈の1mg/mL OKT3:16μLの1mg/mL OKT3+3000IU/mLのIL-2を含む1.584mLのCM2培地を作製する)。
T25フラスコを調製するフィーダー細胞を調製する前に、各フラスコにラベルを付け、フラスコにCM2培地を充填した。フラスコを37℃の加湿した5% CO2インキュベーターに入れ、残りの成分を添加するのを待つ間、培地を保温した。一旦フィーダー細胞が調製されると、各フラスコ内のCM2に成分が添加される。
さらなる情報を表39に提供する。
フィーダー細胞を調製する。このプロトコルについて試験されたロット当たり78×106フィーダー細胞の最小値が必要であった。SDBBによって凍結された各1mLバイアルは、凍結時に100×106個の生細胞を有していた。液体N2ストレージからの解凍時の50%の回収率を仮定すると、ロット当たり少なくとも2つの1mLバイアルのフィーダー細胞を解凍して、各REPに推定100×106個の生細胞を与えることが推奨された。あるいは、1.8mLバイアルで供給された場合、1つのバイアルだけで十分なフィーダー細胞が提供された。
フィーダー細胞を解凍する前に、試験される各フィーダーロットにIL-2を含まないおよそ50mLのCM2を予熱した。指定されたフィーダーロットバイアルをLN2ストレージから取り出し、ジッパーストレージバッグに入れ、氷上に置いた。37℃の水浴に浸すことによって、閉じたジッパーストレージバッグ内のバイアルを解凍した。バイアルをジッパーバッグから取り出し、70% EtOHでスプレーまたはワイプし、BSCに移した。
トランスファーピペットを使用して、フィーダーバイアルの内容物を、50mLのコニカルチューブ中の30mLの温かいCM2に直ちに移した。バイアルを少量のCM2で洗浄して、バイアル内の残留細胞を除去し、400×CFで5分間遠心分離した。上清を吸引し、3000IU/mLのIL-2を加えた4mLの温かいCM2に再懸濁した。自動セルカウンターを使用して細胞を計数するために、200μLを取り出した。計数を記録した。
3000IU/mLのIL-2を加えた温かいCM2中、1.3×107細胞/mLで細胞を再懸濁した。TIL細胞を1.3×106細胞/mLから1.3×105細胞/mLに希釈した。
共培養物を準備する。TIL細胞を1.3×106細胞/mLから1.3×105細胞/mLに希釈した。4.5mLのCM2培地を15mLのコニカルチューブに添加した。インキュベーターからTIL細胞を取り出し、10mLの血清ピペットを使用して十分に再懸濁した。1.3×106細胞/mLのTIL懸濁液から0.5mLの細胞を取り出し、15mLのコニカルチューブ中の4.5mLの培地に添加した。TILストックバイアルをインキュベーターに戻した。よく混ぜた。第2のTIL株に対して繰り返した。
単一フィーダーロット用に予熱した培地を入れたフラスコを、インキュベーターからBSCに移した。1mLのピペットチップで数回上下にピペッティングすることによってフィーダー細胞を混合し、そのフィーダーロットの各フラスコに1mL(1.3×107細胞)を移した。60μLのOKT3作用ストック(10μg/mL)を各フラスコに追加した。2つの対照フラスコをインキュベーターに戻した。
各TILロットの1mL(1.3×105)を、対応するラベルの付いたT25フラスコに移した。フラスコをインキュベーターに戻し、直立させてインキュベートした。5日目まで乱さなかった。試験したすべてのフィーダーロットについて、この手順を繰り返した。
5日目、培地変更3000IU/mLのIL-2でCM2を調製した。各フラスコには10mLが必要である。10mLピペットを使用して、3000IU/mLのIL-2を含む10mLの温かいCM2を各フラスコに移した。フラスコをインキュベーターに戻し、7日目まで直立させてインキュベートした。試験したすべてのフィーダーロットについて繰り返した。
7日目、採取インキュベーターからフラスコを取り出し、BSCに移し、フラスコの底部の細胞層を乱さないように注意する。フラスコの底部で成長する細胞を乱すことなく、各試験フラスコから10mLの培地を取り出し、対照フラスコの各々から15mLの培地を取り出した。
10mLの血清ピペットを使用して、残りの培地に細胞を再懸濁し、よく混合して細胞の塊をすべて破壊した。ピペッティングすることによって細胞懸濁液を完全に混合した後、細胞計数のために200μLを取り出した。自動セルカウンター装置とともに適切な標準操作手順を使用して、TILを計数した。7日目に計数を記録した。試験したすべてのフィーダーロットについて、この手順を繰り返した。
フィーダー対照フラスコは、複製不全について評価し、TILを含むフラスコは、0日目からの倍率拡張について評価した。
7日目、フィーダー対照フラスコの14日目までの継続フィーダー対照フラスコの7日目の計数を完了した後、3000IU/mLのIL-2を含む15mLの新鮮なCM2培地を対照フラスコの各々に追加した。対照フラスコをインキュベーターに戻し、14日目まで直立位置でインキュベートした。
14日目、フィーダー対照フラスコの長期非増殖インキュベーターからフラスコを取り出し、BSCに移し、フラスコの底部の細胞層を乱さないように注意した。フラスコの底部で成長する細胞を乱すことなく、各対照フラスコからおよそ17mLの培地を取り出した。5mLの血清ピペットを使用して、残りの培地に細胞を再懸濁し、よく混合して細胞の塊をすべて破壊した。各フラスコについて、容量を記録した。
ピペッティングすることによって細胞懸濁液を完全に混合した後、細胞計数のために200μLを取り出した。TILは、自動セルカウンター装置と併せて適切な標準操作手順を使用して計数し、計数を記録した。試験したすべてのフィーダーロットについて、この手順を繰り返した。
B.結果及び承認基準プロトコル
結果ガンマ線照射の線量は、フィーダー細胞を複製不全にするのに十分であった。すべてのロットは、評価基準を満たすことが予想され、また0日目と比較して、REP培養の7日目に残っているフィーダー細胞の総有効数の低減を示した。すべてのフィーダーロットは、REP培養の7日目までのTIL成長の100倍拡張の評価基準を満たすことが予想された。フィーダー対照フラスコの14日目の計数は、7日目に見られた非増殖傾向を継続すると予想された。
結果ガンマ線照射の線量は、フィーダー細胞を複製不全にするのに十分であった。すべてのロットは、評価基準を満たすことが予想され、また0日目と比較して、REP培養の7日目に残っているフィーダー細胞の総有効数の低減を示した。すべてのフィーダーロットは、REP培養の7日目までのTIL成長の100倍拡張の評価基準を満たすことが予想された。フィーダー対照フラスコの14日目の計数は、7日目に見られた非増殖傾向を継続すると予想された。
承認基準フィーダー細胞の各ロットについて試験された各複製TIL株について、以下の承認基準が満たされた。承認基準は、以下の表40に示すように、2倍であった。
30ng/mLのOKT3抗体及び3000IU/mLのIL-2の存在下で培養した場合に、MNCフィーダー細胞の複製を不全にするのに十分な放射線量を評価した。複製不全は、REPの7日目及び14日目の自動細胞計数によって決定された総生細胞数(TVC)によって評価した。
承認基準は、「成長なし」であり、これは、REPの0日目に培養された最初の生細胞数から7日目及び14日目に総生細胞数が増加していないことを意味する。
フィーダー細胞がTIL拡張をサポートする能力を評価した。TIL成長は、REPの0日目の培養開始からREPの7日目までの生細胞の倍率拡張の観点から測定された。自動細胞計数によって評価されるように、7日目に、TIL培養物は最低100倍の拡張を達成した(すなわち、REPの0日目に培養された生TIL細胞の総数の100倍超)。
承認基準を満たさないMNCフィーダーロットの偶発性試験MNCフィーダーロットが上で概説された承認基準のうちのいずれかを満たさなかった場合は、以下のステップを実行してロットを再試験し、単純な実験者エラーを原因として除外する。
ロットの衛星試験バイアルが2つ以上残っている場合は、ロットを再試験した。ロットの衛星試験バイアルが1つ残っているか、まったく残っていない場合、上記の承認基準に従ってロットは失敗であった。
適格となるには、問題のロット及び対照ロットが、上記の承認基準を達成する必要があった。これらの基準を満たすと、ロットは使用のために放出される。
実施例4:IL-2ストック溶液(CELLGENIX)の調製
この実施例は、精製されて凍結乾燥された組換えヒトインターロイキン-2を、rhIL-2の使用を含むものを含む、本出願及び実施例に記載されるものすべてを含む、さらなる組織培養プロトコルでの使用に好適なストック試料に溶解するプロセスを説明する。
この実施例は、精製されて凍結乾燥された組換えヒトインターロイキン-2を、rhIL-2の使用を含むものを含む、本出願及び実施例に記載されるものすべてを含む、さらなる組織培養プロトコルでの使用に好適なストック試料に溶解するプロセスを説明する。
手順
0.2%酢酸溶液(HAc)を調製した。29mLの滅菌水を、50mLのコニカルチューブに移した。50mLのコニカルチューブに1mLの1N酢酸を追加した。チューブを2~3回反転させながら十分に混合した。Steriflipフィルターを使用した濾過によってHAc溶液を滅菌した。
0.2%酢酸溶液(HAc)を調製した。29mLの滅菌水を、50mLのコニカルチューブに移した。50mLのコニカルチューブに1mLの1N酢酸を追加した。チューブを2~3回反転させながら十分に混合した。Steriflipフィルターを使用した濾過によってHAc溶液を滅菌した。
PBS中の1% HSAを調製する。4mLの25%HSAストック溶液を、150mLの滅菌フィルターユニット内の96mLのPBSに追加した。溶液を濾過した。4℃で保管した。調製したrhIL-2の各バイアルについて、フォームに記入する。
rhIL-2ストック溶液を調製した(最終濃度6×106IU/mL)。rhIL-2の各ロットは異なり、1)1バイアル当たりのrhIL-2の質量(mg)、2)rhIL-2の比活性(IU/mg)、及び3)推奨される0.2%HAc再構成体積(mL)などの製造業者の分析証明書(COA)に見られる情報を必要とした。
以下の等式を使用して、rhIL-2ロットに必要な1%HSAの体積を計算した。
例えば、CellGenixのrhIL-2ロット10200121 COAによると、1mgバイアルの比活性は、25×106IU/mgである。rhIL-2を2mLの0.2%HAc中で再構成することが推奨される。
IL-2バイアルのゴム栓をアルコールワイプで拭いた。3mLシリンジに取り付けた16G針を使用して、推奨体積の0.2%HAcをバイアルに注入した。針を抜くときに栓が外れないように注意した。バイアルを3回反転させ、すべての粉末が溶解するまで回転させた。栓を慎重に取り外し、アルコールワイプ上に置いた。計算した体積の1%HSAをバイアルに追加した。
rhIL-2溶液の保管。短期保管(72時間未満)の場合、バイアルを4℃で保管した。長期保管(72時間超)の場合、バイアルをより小さい体積に等分し、使用の準備が整うまで-20℃でクライオバイアル内で保管した。凍結/解凍サイクルを回避した。調製日から6ヶ月後に有効期限が切れた。Rh-IL-2ラベルに、ベンダー及びカタログ番号、ロット番号、有効期限、オペレーターのイニシャル、濃度、ならびにアリコート体積を含めた。
実施例5:凍結保存プロセス
この実施例では、CryoMed制御速度冷凍庫、モデル7454(Thermo Scientific)を使用して、本明細書に記載の手順で調製したTILの凍結保存プロセス方法について説明する。
この実施例では、CryoMed制御速度冷凍庫、モデル7454(Thermo Scientific)を使用して、本明細書に記載の手順で調製したTILの凍結保存プロセス方法について説明する。
使用した機器は以下の通りであった:アルミニウムカセットホルダーラック(CS750フリーザーバッグに対応)、750mLバッグ用凍結保存カセット、低圧(22psi)液体窒素タンク、冷蔵庫、熱電対センサー(バッグ用リボンタイプ)、及びCryoStore CS750冷凍バッグ(OriGen Scientific)。
凍結プロセスは、核形成から-20℃まで0.5℃の速度、及び-80℃の終了温度まで毎分1℃の冷却速度を提供する。プログラムパラメータは、以下の通りである:ステップ1-4℃で待つ、ステップ2:-4℃まで1.0℃/分(試料温度)、ステップ3:-45℃まで20.0℃/分(チャンバ温度)、ステップ4:-10.0℃まで10.0℃/分(チャンバ温度)、ステップ5:-20℃まで0.5℃/分(チャンバ温度)、及びステップ6:-80℃まで1.0℃/分(試料温度)。
実施例6:合成培地を用いた腫瘍拡張プロセス
上記で開示されるプロセスは、CM1培地及びCM2培地を、合成培地(例えば、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-Cell Expansion SFM、ThermoFisher、例えば、DM1及びDM2を含む)で置き換えることによって行われ得る。
上記で開示されるプロセスは、CM1培地及びCM2培地を、合成培地(例えば、CTS(商標)OpTmizer(商標)T-Cell Expansion SFM、ThermoFisher、例えば、DM1及びDM2を含む)で置き換えることによって行われ得る。
実施例7:抗PD-1抗体によるNSCLC治療
患者集団:
治療ナイーブのNSCLCまたは化学療法後であるが抗PD-1/PD-L1ナイーブ
患者集団:
治療ナイーブのNSCLCまたは化学療法後であるが抗PD-1/PD-L1ナイーブ
治療スケジュール:
腫瘍断片は、最大4用量の抗PD-1/PD-L1で治療し、原発性不応性の患者を、凍結保存され、即時進行の際に使用する準備ができているTIL製品で治療する。原発性不応性の患者は、2用量後に進行した可能性がある。
腫瘍断片は、最大4用量の抗PD-1/PD-L1で治療し、原発性不応性の患者を、凍結保存され、即時進行の際に使用する準備ができているTIL製品で治療する。原発性不応性の患者は、2用量後に進行した可能性がある。
再発患者はまた、進行時に治療することもできる(タイミングは、数ヶ月から数年後まで異なる場合がある)。
最大6用量の全強IL-2。
前述の同じ製造順列でさらに検討する患者集団:
●治療ナイーブのNSCLCまたは化学療法後であるが抗PD-1/PD-L1ナイーブ
●治療ナイーブのNSCLCまたは化学療法後であるが、低いPD-L1の発現を有する抗PD-1/PD-L1ナイーブ
●治療ナイーブのNSCLCまたは化学療法後であるが、PD-L1の発現が低い及び/またはベースラインで巨大腫瘤病変を有する抗PD-1/PD-L1ナイーブ。(例えば、巨大腫瘤病変は、横断面または冠状面のいずれかで測定された最大腫瘍径が7cmを超えるか、またはCTで短軸直径が20mm以上の腫脹したリンパ節が巨大腫瘤と定義された場合に示され、例えば、Samejima,J.,Japanese Journal of Clinical Oncology,45(11):1050-10541 2015を参照)
●治療ナイーブのNSCLCまたは化学療法後であるが抗PD-1/PD-L1ナイーブ
●治療ナイーブのNSCLCまたは化学療法後であるが、低いPD-L1の発現を有する抗PD-1/PD-L1ナイーブ
●治療ナイーブのNSCLCまたは化学療法後であるが、PD-L1の発現が低い及び/またはベースラインで巨大腫瘤病変を有する抗PD-1/PD-L1ナイーブ。(例えば、巨大腫瘤病変は、横断面または冠状面のいずれかで測定された最大腫瘍径が7cmを超えるか、またはCTで短軸直径が20mm以上の腫脹したリンパ節が巨大腫瘤と定義された場合に示され、例えば、Samejima,J.,Japanese Journal of Clinical Oncology,45(11):1050-10541 2015を参照)
実施例8:凍結保存TIL細胞療法の例示的GEN2産生
この実施例は、Iovance Biotherapeutics,Inc.のcGMP製造を説明する。現在の適正組織基準及び現在の適正製造基準に従った、G-REXフラスコ内のTIL細胞療法プロセス。この実施例は、現在の適正組織基準及び現在の適正製造基準に従った、G-REXフラスコ内のTIL細胞療法プロセスの例示的なcGMP製造を説明する。
この実施例は、Iovance Biotherapeutics,Inc.のcGMP製造を説明する。現在の適正組織基準及び現在の適正製造基準に従った、G-REXフラスコ内のTIL細胞療法プロセス。この実施例は、現在の適正組織基準及び現在の適正製造基準に従った、G-REXフラスコ内のTIL細胞療法プロセスの例示的なcGMP製造を説明する。
0日目のCM1培地の調製BSC内で、試薬をRPMI1640培地ボトルに追加した。ボトル当たり追加された以下の試薬を追加した:不活化ヒトAB血清(100.0mL)、GlutaMax(10.0mL)、硫酸ゲンタマイシン、50mg/mL(1.0mL)、2-メルカプトエタノール(1.0mL)を加熱する
BSCから不要な材料を取り出した。BSCから培地試薬を抜き取り、配合された洗浄培地の調製のために硫酸ゲンタマイシン及びHBSSをBSCの中に残した。
IL-2アリコートを解凍した。すべての氷が融解するまで、1つの1.1mLのIL-2アリコート(6×106IU/mL)(BR71424)を解凍した。IL-2:ロット番号及び有効期限を記録した。
IL-2ストック溶液を培地に移した。BSC内で、1.0mLのIL-2ストック溶液を、調製されたCM1の0日目培地ボトルに移した。CM1の0日目培地1ボトル及びIL-2(6×106IU/mL)1.0mLを追加した。
G-REX100MCSをBSCの中に通過させた。無菌的にG-REX100MCS(W3013130)をBSCの中に通過させた。
すべての完全なCM1の0日目培地をG-REX100MCSフラスコにポンプで注入した。組織断片円錐形またはGRex100MCS。
0日目の腫瘍洗浄培地の調製BSC内で、5.0mLのゲンタマイシン(W3009832またはW3012735)を1本の500mLのHBSS培地(W3013128)ボトルに追加した。ボトル当たりの追加:HBSS(500.0mL)、硫酸ゲンタマイシン、50mg/mL(5.0mL)。1Lの0.22ミクロンフィルターユニット(W1218810)を通して調製されたゲンタマイシンを含有するHBSSを濾過した。
0日目の腫瘍処理腫瘍検体を取得し、即時に処理のために2~8℃における部屋に移した。腫瘍洗浄培地を等分した。腫瘍洗浄1は、8インチ鉗子(W3009771)を使用して行う。腫瘍を検体ボトルから取り出し、調製した「洗浄1」皿に移す。この後、腫瘍洗浄2及び腫瘍洗浄3が続く。腫瘍を測定し、評価した。腫瘍領域全体の30%未満が壊死及び/または脂肪組織であることが観察されたかどうかを評価した。該当する場合、クリーンアップ解剖を行う。腫瘍が大きく、外部の組織の30%未満が壊死/脂肪性であることが観察された場合、メス及び/または鉗子の組み合わせを使用して、腫瘍の内側構造を温存しながら壊死/脂肪組織を除去することによって、「クリーンアップ解剖」を行った。腫瘍を切除した。メス及び/または鉗子の組み合わせを使用して、腫瘍検体を均等で適切なサイズの断片(最大6つの中間断片)に切断した。中間腫瘍断片を移した。腫瘍断片を、およそ3×3×3mmのサイズの小片に切除した。乾燥を防止するために中間断片を保存した。中間断片の解剖を繰り返した。収集された切片の数を決定した。望ましい組織が残っている場合、「好ましい中間断片」6ウェルプレートから追加の好ましい腫瘍片を選択し、最大50片のために液滴を充填した。
コニカルチューブを準備した。腫瘍片を50mLのコニカルチューブに移した。G-REX100MCSのためのBSCを準備した。インキュベーターからG-REX100MCSを取り出した。無菌的にG-REX100MCSフラスコをBSCの中に通過させた。腫瘍断片をG-REX100MCSフラスコに追加した。切片を均等に分配した。
以下のパラメータにおいてG-REX100MCSをインキュベートした:G-REXフラスコをインキュベートした:温度LEDディスプレイ:37.0±2.0℃、CO2パーセンテージ:5.0±1.5 %CO2.計算:培養の時間、下限=培養の時間+252時間、上限=培養の時間+276時間。
プロセスが完了した後、いずれの残りの温められた培地も廃棄し、IL-2のアリコートを解凍した。
11日目-培地の調製インキュベーターを監視した。インキュベーターパラメータ:温度LEDディスプレイ:37.0±2.0℃、CO2パーセンテージ:5.0±1.5 %CO2.
3本の1000mLのRPMI1640培地(W3013112)ボトル及び3本の1000mLのAIM-V(W3009501)ボトルを、インキュベーター内で30分間以上温めた。インキュベーターからRPMI1640培地を取り出した。RPMI1640培地を調製した。培地を濾過した。3つのIL-2の1.1mLのアリコート(6×106IU/mL)(BR71424)を解凍した。インキュベーターからAIM-V培地を取り出した。IL-2をAIM-Vに追加した。10LのLabtainerバッグ及びリピータポンプ移送セットを、BSCの中に無菌的に移した。
10LのLabtainer培地バッグを準備した。Baxaポンプを準備した。10LのLabtainer培地バッグを準備した。培地を10LのLabtainerにポンプで注入した。Labtainerバッグからポンプマティックを取り出した。
培地を混合した。バッグを穏やかにマッサージして混合した。試料計画に従って培地を試料採取した。20.0mLの培地を取り出し、50mLのコニカルチューブに入れた。細胞計数希釈管を準備した。BSC内で「細胞計数希釈液用」及びロット番号でラベル付けされた4.5mLのAIM-V培地を、4本の15mLコニカルチューブに追加した。BSCから2~8℃に試薬を移送した。1L移送パックを準備した。(プロセス注記5.11に従って)BSC溶接の外側で、「完全なCM2の11日目培地」バッグに取り付けられた移送セットへの1L移送パックを準備した。フィーダー細胞移送パックを準備した。完全なCM2の11日目培地をインキュベートした。
11日目-TIL採取前処理表。インキュベーターパラメータ:温度LEDディスプレイ:37.0±2.0℃、CO2パーセンテージ:5.0±1.5 % CO2.インキュベーターからG-REX100MCSを取り出した。300mL移送パックを準備した。移送パックをG-REX100MCSに溶接した。
TIL採取及びTIL採取の開始のためにフラスコを準備する。TILが採取された。GatheRexを使用して、血液フィルターを介して細胞懸濁液を300mLの移送パックに移した。付着した細胞について膜を点検した。
フラスコ膜をすすいだ。G-REX100MCS上のクランプを閉じた。すべてのクランプが閉じられていることを確実にした。TIL及び「上清」移送パックを熱融着した。TIL懸濁液の体積を計算した。試料採取のために上清移送パックを準備した。
Bac-T試料を引き出した。BSC内で、1L「上清」移送パックからおよそ20.0mLの上清を引き上げ、無菌50mLコニカルチューブに分注する。
試料計画に従ってBacTを接種した。適切なサイズのシリンジを使用して調製されたBacTとラベル付けされた50mLコニカルから1.0mLの試料を取り出し、嫌気性ボトルに接種した。
TILをインキュベートした。必要とされるまで、TIL移送パックをインキュベーターに入れた。細胞計数及び計算を行った。行われた細胞計数の生細胞濃度及び生存率の平均を決定した。生存率÷2。生細胞濃度÷2。計数の上限及び下限を決定した。下限:生細胞濃度の平均×0.9。上限:生細胞濃度の平均×1.1。許容限界内の両方の計数を確認した。行われた4つすべての計数から平均生細胞濃度を決定した。
TIL懸濁液の調整された体積:細胞計数試料を取り出した後のTIL懸濁液の調整された体積を計算する。総TIL細胞体積(A)。取り出された細胞計数試料の体積(4.0mL)(B)調整された総TIL細胞体積C=A-B。
総生TIL細胞を計算した。平均生細胞濃度*:総体積、総生細胞:C=AxB.
フローサイトメトリーのための計算:総生TIL細胞数が、4.0×107個以上であった場合、フローサイトメトリー試料のために1.0×107個の細胞を取得するための体積を計算した。
フローサイトメトリーに必要とされる総生細胞:1.0×107個の細胞。フローサイトメトリーに必要とされる細胞の体積:生細胞濃度を1.0×107個の細胞Aで割ったもの。
2.0×108個の生細胞に等しいTIL懸濁液の体積を計算した。必要に応じて、取り出すTIL細胞の過剰体積を計算し、過剰なTILを取り出し、必要に応じてTILをインキュベーターに入れた。必要に応じて、取り出された全過剰TILを計算した。
凍結のための標的細胞濃度が1.0×108細胞/mLである過剰なTIL細胞に追加するCS-10培地の量を計算した。必要に応じて、過剰なTILを遠心分離した。コニカルチューブを観察し、CS-10を追加した。
バイアルを充填した。1.0mLの細胞懸濁液を、適切なサイズの凍結バイアルに等分した。残留体積を適切なサイズのクライオバイアルに等分した。体積が≦0.5mLである場合、体積が0.5mLになるまでCS10をバイアルに追加する。
凍結保存のための1×107個の細胞を取得するために必要とされる細胞の体積を計算した。凍結保存のために試料を取り出した。TILをインキュベーターに入れた。
試料の凍結保存コニカルチューブを観察し、CS-10をゆっくりと追加し、追加された0.5mLのCS10の体積を記録した。
11日目-フィーダー細胞フィーダー細胞を取得した。LN2冷凍庫から少なくとも2つの異なるロット番号を伴うフィーダー細胞の3つのバッグを取得した。解凍する準備が整うまで、細胞をドライアイス上で保管した。水浴またはcryothermを準備した。37.0±2.0℃の水浴またはcytothermにおいて約3~5分間、または氷が消滅するまで、フィーダー細胞を解凍した。インキュベーターから培地を取り出した。解凍されたフィーダー細胞をプールした。フィーダー細胞を移送パックに追加した。シリンジから移送パックにフィーダー細胞を分注した。プールされたフィーダー細胞を混合し、移送パックをラベル付けした。
移送パック内のフィーダー細胞懸濁液の総体積を計算した。細胞計数試料を取り出した。各試料に別個の3mLシリンジを使用して、不要注入ポートを使用してフィーダー細胞懸濁液移送パックから4×1.0mLの細胞計数試料を引き出した。各試料をラベル付けされたクライオバイアルに等分した。細胞計数を行い、増倍率を決定し、プロトコルを選択し、増倍率を入力した。行われた細胞計数の生細胞濃度及び生存率の平均を決定した。計数の上限及び下限を決定し、限界内で確認した。
フィーダー細胞懸濁液の調整された体積。細胞計数試料を取り出した後のフィーダー細胞懸濁液の調整された体積を計算した。総生フィーダー細胞を計算した。必要に応じて追加のフィーダー細胞を取得した。必要に応じて追加のフィーダー細胞を解凍した。第4のフィーダー細胞バッグをジップトップバッグに入れ、37.0±2.0℃の水浴またはcytotherm内で約3~5分間解凍し、追加のフィーダー細胞をプールした。体積を測定した。シリンジ内のフィーダー細胞の体積を測定し、以下に記録した(B)。フィーダー細胞の新しい総体積を計算した。フィーダー細胞を移送パックに追加した。
必要に応じて希釈液を調製し、4.5mLのAIM-V培地を4本の15mLコニカルチューブに追加した。細胞計数を準備した。各試料に対して別個の3mLシリンジを使用して、不要注入ポートを使用して、フィーダー細胞懸濁液移送パックから4×1.0mLの細胞計数試料を取り出した。細胞計数及び計算を行った。行われた4つすべての計数から平均生細胞濃度を決定した。フィーダー細胞懸濁液の体積を調整し、細胞計数試料を取り出した後のフィーダー細胞懸濁液の調整された体積を計算した。4.0mLを差し引いた総フィーダー細胞体積が取り出された。5×109個の生フィーダー細胞を取得するために必要とされたフィーダー細胞懸濁液の体積を計算した。過剰なフィーダー細胞体積を計算した。取り出す過剰なフィーダー細胞の体積を計算した。過剰なフィーダー細胞を取り出した。
1.0mLシリンジ及び16G針を使用して、0.15mLのOKT3を引き上げ、OKT3を追加した。フィーダー細胞懸濁液移送パックを熱融着した。
11日目 G-REX充填及びシード設定G-REX500MCS。「完全なCM2の11日目培地」をインキュベーターから取り出し、培地をG-REX500MCSにポンプで注入した。4.5Lの培地をG-REX500MCSにポンプで注入し、フラスコ上にマークされたラインまで充填した。必要に応じてフラスコを熱融着し、インキュベートした。フィーダー細胞の懸濁液移送パックを、G-REX500MCSに溶接した。フィーダー細胞をG-REX500MCSに追加した。熱融着した。TIL懸濁液移送パックをフラスコに溶接した。TILをG-REX500MCSに追加した。熱融着した。G-REX500MCSを37.0±2.0℃でインキュベートした。CO2パーセンテージ:5.0±1.5 %CO2。
インキュベーション時間帯を計算した。16日目にインキュベーターからG-REX500MCSを取り出すための適切な時間を決定するための計算を行った。下限:インキュベーションの時間+108時間。上限:インキュベーションの時間+132時間。
11日目 過剰TIL凍結保存該当:過剰TILバイアルを凍結させた。凍結前にCRFが設定されていることを検証した。凍結保存を行った。バイアルを速度制御された冷凍庫から適切な保管場所に移した。凍結の完了時に、バイアルをCRFから適切な保管容器に移した。バイアルを適切な保管場所に移した。LN2における保管場所を記録した。
16日目 培地の調製AIM-V培地を事前に温めた。培地バッグ1、2、及び3について培地が温められた時間を計算した。すべてのバッグが12~24時間の持続時間にわたって温められていることを確実にした。上清用の10LのLabtainerを設定した。ルアーコネクタを使用して、流体ポンプ移送セットのより大きな直径の端部を10LのLabtainerバッグのメス型ポートのうちの1つに取り付けた。上清用の10LのLabtainerを設定し、ラベル付けした。上清用の10LのLabtainerを設定した。BSCから取り出す前に、すべてのクランプが閉じられていることを確実にした。注記:上清バッグは、培地調製と同時に行われ得るTIL採取中に使用された。
IL-2を解凍した。すべての氷が融解するまで、CTS AMI V培地の1バッグ当たりIL-2(6×106IU/mL)(BR71424)の5×1.1mLアリコートを解凍した。100.0mLのGlutaMax(商標)を等分した。IL-2をGlutaMax(商標)に追加した。配合用のCTS AIM V培地バッグを準備した。配合用のCTS AIM V培地バッグを準備した。ステージBaxaポンプ。培地を配合することを準備した。GlutaMax(商標)+IL-2をバッグにポンプで注入した。パラメータを監視した:温度LEDディスプレイ:37.0±2.0℃、CO2パーセンテージ:5.0±1.5% CO2.完全なCM4の16日目培地を温めた。希釈液を調製した。
16日目 REP分割インキュベーターパラメータを監視した:温度LEDディスプレイ:37.0±2.0℃、CO2パーセンテージ:5.0±1.5 %CO2.インキュベーターからG-REX500MCSを取り出した。1Lの移送パックを準備し、TIL懸濁液としてラベル付けし、1Lの重量を量った。
G-REX500MCSの減容約4.5Lの培養上清をG-REX500MCSから10LのLabtainerに移した。
TIL採取用のフラスコを準備した。上清を取り出した後に、赤色ラインへのすべてのクランプを閉じた。
TIL採取の開始。フラスコを激しく叩き、培地を旋回させて細胞を解放し、すべての細胞が引き離されていることを確実にする。
TIL採取。TIL懸濁液移送パックにつながるすべてのクランプを解放した。GatheRexを使用して、細胞懸濁液をTIL懸濁液移送パックの中に移した。注記:すべての細胞及び培地が収集されるまで、傾斜した縁を必ず維持すること。付着した細胞について膜を点検した。フラスコ膜をすすいだ。G-REX100MCS上のクランプを閉じた。TILを含む移送パックを熱融着した。上清を含む10LのLabtainerを熱融着した。細胞懸濁液を伴う移送パックの重量を記録し、細胞懸濁液を計算した。試料を取り出すための移送パックを準備した。細胞上清から試験試料を取り出した。
無菌性及びBacT試験サンプリング。調製したBacTラベル付けされた15mLのコニカルから1.0mLの試料を取り出した。細胞計数試料を取り出した。BSC内で、各試料に別個の3mLシリンジを使用して、「TIL懸濁液」移送パックから4×1.0mLの細胞計数試料を取り出した。
マイコプラズマ試料を取り出した。3mLシリンジを使用して、TIL懸濁液移送パックから1.0mLを取り出し、調製された「マイコプラズマ希釈液」とラベル付けされた15mLコニカルチューブに入れた。
播種用の移送パックを準備した。TILをインキュベーターに入れた。細胞懸濁液をBSCから取り出し、必要とされるまでインキュベーターに入れた。細胞計数及び計算を行った。最初に、0.5mLの細胞懸濁液を調製された4.5mLのAIM-V培地に追加することによって、細胞計数試料を希釈し、1:10希釈液を生じた。行われた細胞計数の生細胞濃度及び生存率の平均を決定した。計数の上限及び下限を決定した。注記:希釈は、細胞の期待濃度に基づいて調整され得る。行われた4つすべての計数から平均生細胞濃度を決定した。TIL懸濁液の調整された体積。細胞計数試料を取り出した後のTIL懸濁液の調整された体積を計算した。5.0mLを差し引いた総TIL細胞体積が試験のために取り出された。
総生TIL細胞を計算した。播種するフラスコの総数を計算した。注記:播種するG-REX500MCSフラスコの最大数は5であった。播種するフラスコの計算された数が5つを超えた場合、5つのみが利用可能な細胞懸濁液の体積全体を使用して播種された。
二次培養用のフラスコの数を計算した。準備されたバッグに加えて必要とされる培地バッグの数を計算した。計算されたように必要とされる2つのG-REX-500Mフラスコ毎に「CM4の16日目培地」の1つの10Lバッグを準備した。追加の培地が調製され、温められている間に、続けて第1のGREX-500Mフラスコ(複数可)を播種した。計算された数の決定された追加の培地バッグを調製し、温めた。G-REX500MCSを充填した。培地をポンプで注入するように準備し、4.5Lの培地をG-REX500MCSにポンプで注入した。熱融着した。充填を繰り返した。フラスコをインキュベートした。新しいG-REX500MCSフラスコに追加するTIL懸濁液の標的体積を計算した。フラスコの計算された数が5つを超える場合、5つのみが細胞懸濁液の体積全体を使用して播種されるであろう。播種用のフラスコを準備した。インキュベーターからG-REX500MCSを取り出した。ポンプで注入するためのG-REX500MCSを準備した。大型フィルターラインを除くすべてのクランプを閉じた。インキュベーターからTILを取り出した。播種用の細胞懸濁液を調製した。(プロセス注記5.11に従って)「TIL懸濁液」移送パックをポンプ入口ラインに滅菌溶接した。TIL懸濁液バッグを秤の上に置いた。
フラスコにTIL懸濁液を播種した。計算されたTIL懸濁液の体積をフラスコにポンプで注入した。熱融着した。残りのフラスコを充填した。
インキュベーターを監視した。インキュベーターパラメータ:温度LEDディスプレイ:37.0±2.0℃、CO2パーセンテージ:5.0±1.5 % CO2.フラスコをインキュベートした。
22日目にインキュベーターからG-REX500MCSを取り出す時間範囲を決定した。
22日目 洗浄緩衝液の調製10LのLabtainerバッグを準備した。BSC内で、ルアー接続を介して4インチ血漿移送セットを10LのLabtainerバッグに取り付けた。10LのLabtainerバッグを準備した。BSCから外に移す前に、すべてのクランプを閉じた。注記:採取される2つのG-REX500MCSフラスコ毎に、1つの10L Labtainerバッグを準備した。Plasmalyteを3000mLバッグにポンプで注入し、ポンプを反転させてバッグの位置を操作することによって、3000mLのOrigenバッグから空気を除去した。ヒトアルブミン25%を3000mLのバッグに追加した。120.0mLの最終体積のヒトアルブミン25%を取得した。
IL-2希釈液を調製した。10mLシリンジを使用して、LOVO洗浄緩衝液バッグ上の無針注入ポートを使用して、5.0mLのLOVO洗浄緩衝液を取り出した。LOVO洗浄緩衝液を50mLのコニカルチューブに分注した。
等分されたCRFブランクバッグLOVO洗浄緩衝液。100mLのシリンジを使用して、無針注入ポートから70.0mLのLOVO洗浄緩衝液を引き上げた。
すべての氷が融解するまで、1つの1.1mLのIL-2(6×106IU/mL))を解凍した。50μLのIL-2ストック(6×106IU/mL)を「IL-2希釈液」とラベル付けされた50mLのコニカルチューブに追加した。
凍結保存調製。5つのクライオカセットを2~8℃に置き、最終製品の凍結保存のためにそれらを前調整した。
細胞計数希釈液を調製した。BSC内で、ロット番号及び「細胞計数希釈液用」でラベル付けされた4.5mLのAIM-V培地を、4本の別個の15mLコニカルチューブに追加した。細胞計数を準備した。4つのクライオバイアルをバイアル番号(1~4)でラベル付けした。使用されるBSCの下でバイアルを保存した。
22日目 TIL採取インキュベーターを監視した。インキュベーターパラメータ温度LEDディスプレイ:37±2.0℃、CO2パーセンテージ:5%±1.5%.インキュベーターからG-REX500MCSフラスコを取り外した。TIL収集バッグを準備し、ラベル付けした。余分な接続を密封した。減容:約4.5Lの上清をG-REX500MCSから上清バッグに移した。
TIL採取用のフラスコを準備した。TILの収集を開始した。フラスコを激しく叩き、培地旋回させて細胞を解放した。すべての細胞が引き離されていることを確実にした。TILの収集を開始した。TIL懸濁液収集バッグにつながるすべてのクランプを解放した。TIL採取。GatheRexを使用して、TIL懸濁液を3000mLの収集バッグに移した。付着した細胞について膜を点検した。フラスコ膜をすすいだ。G-Rex500MCS上のクランプを閉じ、すべてのクランプが閉じていることを確実にした。細胞懸濁液をLOVOソースバッグの中に移した。すべてのクランプを閉じた。熱融着した。4×1.0mLの細胞計数試料を取り出した。
細胞計数を行った。NC-200及びプロセス注記5.14を利用して、細胞計数及び計算を行った。最初に、0.5mLの細胞懸濁液を調製された4.5mLのAIM-V培地に追加することによって、細胞計数試料を希釈した。これは、1:10希釈液を生じた。行われた細胞計数の平均生存率、生細胞濃度、及び総有核細胞濃度を決定した。計数の上限及び下限を決定した。行われた細胞計数の平均生存率、生細胞濃度、及び総有核細胞濃度を決定した。LOVOソースバッグの重量を量った。総生TIL細胞を計算した。総有核細胞を計算した。
マイコプラズマ希釈液を調製した。ルアー試料ポートを介して1つの上清バッグから10.0mLを取り出し、15mLコニカルに入れた。
「TIL G-REX採取」プロトコルを行い、最終製品の標的体積を決定した。使い捨てキットを装填した。濾液バッグを取り出した。濾液容量を入力した。濾液容器をベンチトップの上に置いた。PlasmaLyteを取り付けた。PlasmaLyteが取り付けられていることを検証し、PlasmaLyteが動いていることを観察した。ソース容器をチューブに取り付け、ソース容器が取り付けられていることを検証した。PlasmaLyteが動いていることを確認した。
最終製剤及び充填標的体積/バッグの計算。ブランクバッグを配合するためのCS-10及びLOVO洗浄緩衝液の体積を計算した。CRFブランクを調製した。
最終製品に追加するIL-2の体積を計算した。所望される最終IL-2濃度(IU/mL)-300IU/mL。IL-2作業ストック:6×104 IU/mL.接続装置を組み立てた。4S-4M60をCC2細胞接続に滅菌溶接した。CS750クライオバッグを準備したハーネスに滅菌溶接した。CS-10バッグを4S-4M60のスパイクに溶接した。IL-2とともにTIL調製した。適切なサイズのシリンジを使用して、「IL-2 6×104」アリコートから決定されたIL-2の量を取り出した。配合されたTILバッグをラベル付けした。配合されたTILバッグを装置に追加した。CS10を追加した。シリンジを交換した。約10mLの空気を100mLのシリンジに引き込み、装置上の60mLシリンジを交換した。CS10を追加した。CS-750バッグを準備した。細胞を分注した。
最終製品バッグから空気を除去し、保持液を得た。最後の最終製品バッグが充填されると、すべてのクランプを閉じた。10mLの空気を新しい100mLシリンジに引き込み、装置のシリンジを交換する。保持液を50mLコニカルチューブに分注し、管を「保持液」及びロット番号としてラベル付けした。各バッグについて空気除去ステップを繰り返した。
目視検査を含み、凍結保存のための最終製品を調製した。凍結保存までクライオバッグを低温パック上で、または2~8℃で保持した。
細胞計数試料を取り出した。適切なサイズのピペットを使用して、2.0mLの保持液を取り出し、細胞計数に使用されるように15mLコニカルチューブに入れる。細胞計数及び計算を行った。注記:1つだけの試料を適切な希釈に希釈し、希釈が十分であることを検証した。追加の試料を適切な希釈倍率に希釈し、計数を進めた。行われた細胞計数の生細胞濃度及び生存率の平均を決定した。計数の上限及び下限を決定した。注記:希釈は、細胞の期待濃度に基づいて調整され得る。生細胞濃度及び生存率の平均を決定した。計数の上限及び下限を決定した。IFN-γを計算した。最終製品バッグを熱融着した。
以下の例示的試料計画に従って試料をラベル付けし、収集した。
無菌性及びBacT試験。試験試料採取。BSC内で、適切なサイズのシリンジを使用して収集された保持細胞懸濁液から1.0mLの試料を取り出し、嫌気性ボトルに接種する。好気性ボトルについて上記を繰り返す。
最終製品の凍結保存制御速度冷凍庫(CRF)を準備した。CRFが設定されていることを検証した。CRFプローブを設定した。最終製品及び試料をCRFに入れた。4℃±1.5℃に達し、CRF実行を進めるために必要な時間を決定した。CRFが完了し、保管された。実行の完了後にCRFを停止させた。カセット及びバイアルをCRFから取り出した。保存のためにカセット及びバイアルを蒸気相LN2に移した。保管場所を記録した。
最終医薬品の後処理及び分析には、以下の試験が含まれた:(22日目)フローサイトメトリーによる22日目REPのCD3+細胞の決定、(22日目)グラム染色法(GMP)、(22日目)ゲルクロットLALアッセイ(GMP)による細菌内毒素試験、(16日目)BacT滅菌アッセイ(GMP)、(16日目)TD-PCRによるマイコプラズマDNA検出(GMP)、許容される外観属性、(22日目)BacT滅菌アッセイ(GMP)(22日目)、(22日目)IFN-ガンマアッセイ。本明細書に記載の他の効力アッセイもまた、TIL製品を分析するために用いられる。
実施例9:GEN3拡張プラットフォームの例示的な実施形態
0日目
腫瘍洗浄培地を調製した。培地を開始前に温めた。5mLのゲンタマイシン(50mg/mL)を500mLボトルのHBSSに添加した。5mLの腫瘍洗浄培地を、OKT3希釈に使用する15mLのコニカルチューブに添加した。フィーダー細胞バッグを調製した。フィーダー細胞をフィーダー細胞バッグに無菌で移し、使用するまで37℃で保管するか、または凍結させた。37℃の場合、フィーダー細胞を計数した。凍結させた場合、解凍した後にフィーダー細胞を計数した。
0日目
腫瘍洗浄培地を調製した。培地を開始前に温めた。5mLのゲンタマイシン(50mg/mL)を500mLボトルのHBSSに添加した。5mLの腫瘍洗浄培地を、OKT3希釈に使用する15mLのコニカルチューブに添加した。フィーダー細胞バッグを調製した。フィーダー細胞をフィーダー細胞バッグに無菌で移し、使用するまで37℃で保管するか、または凍結させた。37℃の場合、フィーダー細胞を計数した。凍結させた場合、解凍した後にフィーダー細胞を計数した。
フィーダー細胞濃度の最適範囲は、5×104~5×106細胞/mLである。4.5mLのAIM-Vを含む4つのコニカルチューブを準備した。各細胞計数について0.5mLの細胞画分を追加した。総生フィーダー細胞数が1×109細胞以上であった場合、進んでフィーダー細胞濃度を調整した。フィーダー細胞の体積を計算し、第1のフィーダー細胞バッグから取り出して、1×109細胞を第2のフィーダー細胞バッグに添加した。
p1000マイクロピペットを使用して、900μLの腫瘍洗浄培地をOKT3アリコート(100μL)に移した。シリンジ及び滅菌技法を使用して、0.6mLのOKT3を吸引し、第2のフィーダー細胞バッグに添加した。培地体積を全体積2Lに調整した。第2のフィーダー細胞バッグをインキュベーターに移した。
OKT3製剤の詳細:OKT3は、100μLのアリコート中のバイアル(1mg/mL)からの元のストック濃度でアリコートされ、凍結されてもよい。1mLのバイアル当たり約10倍のアリコート。-80℃で保管した。0日目:15μg/フラスコ、すなわち500mL中30ng/mL~60μL最大約1アリコート。
5mLの腫瘍洗浄培地を、過剰腫瘍片とラベル付けした6ウェルプレートのすべてのウェルに添加した。解剖中に腫瘍を水和状態に保持する際に、腫瘍洗浄培地をさらなる使用のために利用可能にした。50mLの腫瘍洗浄培地を、各100mmペトリ皿に追加した。
解剖皿のふたの下の定規を参照として使用して、腫瘍を27mm3断片(3×3×3mm)に解剖した。60個の断片に達するまで中間断片を解剖した。生成した最終断片の数に応じて、最終断片の総数を計数し、G-REX-100MCSフラスコを調製した(一般に、1フラスコ当たり60個の断片)。
断片チューブ1~断片チューブ4とラベル付けしたコニカルチューブ内に好ましい組織断片を保持した。起源とする断片チューブの数に応じて、フィーダー細胞懸濁液を播種するG-REX-100MCSフラスコの数を計算した。
フィーダー細胞バッグをインキュベーターから取り出し、G-REX-100MCSを播種する。D0(0日目)とラベル付けする。
G-REX-100MCS中の培養物への腫瘍断片の追加滅菌条件下で、腫瘍断片培養物(D0)1とラベル付けしたG-REX-100MCS及び断片チューブとラベル付けした50mLのコニカルチューブのキャップを緩めた。開いた断片チューブ1を回転させ、同時にG-REX100MCSのキャップをわずかに持ち上げた。断片を含む培地を、回転している間にG-REX100MCSに追加した。G-REX100MCSに移送された断片の数を記録した。
断片がGREXフラスコの底に配置された時点で、7mLの培地を吸引し、7つの1mLアリコートを作製した(拡張された特徴付け用に5mL、滅菌試料用に2mL)。拡張された特徴付け用の5つのアリコート(最終断片培養上清)を、必要になるまで-20℃で保管した。
1本の嫌気性BacT/Alertボトル及び1本の好気性BacT/Alertボトルに各々1mLの最終断片培養上清を接種した。サンプリングしたフラスコ毎に繰り返す。
7日目~8日目
フィーダー細胞バッグを調製した。凍結時に37℃の水浴中で3~5分間フィーダーバッグを解凍した。凍結している場合、フィーダー細胞を計数した。フィーダー細胞濃度の最適範囲は、5×104~5×106細胞/mLである。4.5mLのAIM-Vを含む4つのコニカルチューブを準備した。各細胞計数について0.5mLの細胞画分を新しいクライオバイアル管に追加した。試料を十分に混合し、細胞計数を続けた。
フィーダー細胞バッグを調製した。凍結時に37℃の水浴中で3~5分間フィーダーバッグを解凍した。凍結している場合、フィーダー細胞を計数した。フィーダー細胞濃度の最適範囲は、5×104~5×106細胞/mLである。4.5mLのAIM-Vを含む4つのコニカルチューブを準備した。各細胞計数について0.5mLの細胞画分を新しいクライオバイアル管に追加した。試料を十分に混合し、細胞計数を続けた。
総生フィーダー細胞数が2×109細胞以上であった場合、次のステップに進んでフィーダー細胞濃度を調整した。フィーダー細胞の体積を計算し、第1のフィーダー細胞バッグから取り出して、2×109細胞を第2のフィーダー細胞バッグに追加した。
p1000マイクロピペットを使用して、900μLのHBSSを100μLのOKT3アリコートに移す。上下に3回ピペッティングして混合する。2つのアリコートを調製した。
OKT3製剤の詳細:OKT3は、バイアル(1mg/mL)からの元のストック濃度でアリコートされ、凍結されてもよい。1mLのバイアル当たり約10倍のアリコート。-80℃で保管した。7日目/8日目:30μg/フラスコ、すなわち500mL中60ng/mL~120μl最大約2アリコート。
シリンジ及び滅菌技法を使用して、0.6mLのOKT3を吸引し、フィーダー細胞バッグに添加して、すべて添加されたことを確認した。培地量を合計2Lに調整した。第2のOKT3アリコートで繰り返し、フィーダー細胞バッグに追加した。第2のフィーダー細胞バッグをインキュベーターに移した。
フィーダー細胞懸濁液を含むG-REX100MCSフラスコの準備。0日目に生成されたG-REXフラスコの数に従って処理するためにG-REX-100MCSフラスコの数を記録した。G-REXフラスコをインキュベーターから取り出し、第2のフィーダー細胞バッグをインキュベーターから取り出した。
フィーダー細胞懸濁液を添加する前の上清の除去:1本の10mLシリンジをG-REX100フラスコに接続し、5mLの培地を引き上げた。5つの1mLアリコート(拡張された特徴付け用に5mL)を作製し、治験依頼者からの要求があるまで、拡張された特徴付け用に5つのアリコート(最終断片培養上清)を-20℃で保管した。各G-REX100フラスコにラベル付けし、繰り返した。
フラスコの数に応じた、特徴付け用の5~20×1mL試料:
・5mL=1フラスコ
・10mL=2フラスコ
・15mL=3フラスコ
・20mL=4フラスコ
・5mL=1フラスコ
・10mL=2フラスコ
・15mL=3フラスコ
・20mL=4フラスコ
フィーダー細胞をG-REX100MCSに播種し続け、G-REX100MCSフラスコ毎に繰り返した。無菌移送法を使用して、各G-REX-100MCSフラスコに重量で500mLの第2のフィーダー細胞バッグを重力移送し(1g=1mLと想定)、量を記録した。7日目培養とラベル付けし、G-REX100フラスコ毎に繰り返した。G-REX-100MCSフラスコをインキュベーターに移した。
10~11日目
第1のG-REX-100MCSフラスコを取り出し、滅菌条件を使用して、10mLシリンジを使用して7mLの前処理培養上清を取り出した。7つの1mLアリコートを作製した(拡張された特徴付け用に5mL、滅菌試料用に2mL)。
第1のG-REX-100MCSフラスコを取り出し、滅菌条件を使用して、10mLシリンジを使用して7mLの前処理培養上清を取り出した。7つの1mLアリコートを作製した(拡張された特徴付け用に5mL、滅菌試料用に2mL)。
フラスコを注意深く混合し、新たな10mLシリンジを使用して10mLの上清を取り出し、D10/11マイコプラズマ上清とラベル付けした15mLのチューブに移す。
フラスコを注意深く混合し、新しい注射器を使用して、処理されるフラスコの数に応じて以下の量を除去した。
・1フラスコ=40mL
・2フラスコ=20mL/フラスコ
・3フラスコ=13.3mL/フラスコ
・4フラスコ=10mL/フラスコ
・1フラスコ=40mL
・2フラスコ=20mL/フラスコ
・3フラスコ=13.3mL/フラスコ
・4フラスコ=10mL/フラスコ
合計40mLをすべてのフラスコから取り出し、「10/11日目QC試料」とラベル付けした50mLのコニカルチューブにプールし、必要になるまでインキュベーター内で保管すべきである。細胞計数を行い、細胞を割り当てた。
必要になるまで-20℃以下で拡張された特徴付けのために5つのアリコート(前処理培養上清)を保管した。1本の嫌気性BacT/Alertボトル及び1本の好気性BacT/Alertボトルに各々1mLの前処理培養上清を接種した。
細胞懸濁液をG-REX-500MCSに移し、G-REX-100MCS毎に繰り返した。滅菌条件を使用して、各G-REX-100MCSの内容物をG-REX-500MCSに移し、一度に約100mLの液体移送を監視した。G-REX-100MCSの容量が500mLに低減したとき、移送を停止した。
移送ステップ中、10mLシリンジを使用し、G-REX-100MCSからシリンジに10mLの細胞懸濁液を引き上げた。培養中のフラスコの数に従って指示に従った。1つのフラスコのみの場合:2つのシリンジを使用して合計20mLを取り出した。フラスコが2つの場合:1フラスコ当たり10mLを取り出した。フラスコが3つの場合:1フラスコ当たり7mLを取り出した。フラスコが4つの場合:1フラスコ当たり5mLを取り出した。細胞懸濁液を1本の一般的な50mLのコニカルチューブに移した。細胞計数ステップ及びQC試料までインキュベーター内で保管する。QCに必要な細胞の総数は、約20e6細胞であった:4×0.5mLの細胞数(細胞数を最初に希釈しなかった)。
アッセイに必要な細胞の量は、以下の通りである。
1.本明細書に記載されるものなどの効力アッセイ、またはIFN-γもしくはグランザイムBアッセイのための最小10×106細胞
2.マイコプラズマのための1×106細胞
3.CD3+/CD45+のためのフローサイトメトリーのための5×106細胞
1.本明細書に記載されるものなどの効力アッセイ、またはIFN-γもしくはグランザイムBアッセイのための最小10×106細胞
2.マイコプラズマのための1×106細胞
3.CD3+/CD45+のためのフローサイトメトリーのための5×106細胞
G-REX-500MCSフラスコをインキュベーターに移した。
QC試料を調製した。この実施形態のアッセイには少なくとも15×108細胞が必要であった。アッセイは、細胞数及び生存率、マイコプラズマ(1×106細胞/平均生存濃度)、フロー(5×106細胞/平均生存濃度)及びIFN-gアッセイ(5×106細胞~1×106細胞を含み、8~10×106細胞が、IFN-γアッセイに必要である。
10×106細胞/mLで凍結保存のための細胞画分の体積を計算し、調製するバイアルの数を計算した。
16~17日目
洗浄緩衝液の調製(1% HSA Plasmalyte A)。HSA及びPlasmalyteを5Lバッグに移して、LOVO洗浄緩衝液を作製した。滅菌条件を使用して、総体積125mLの25%HSAを5Lバッグに移した。10mLまたは40mLの洗浄緩衝液を取り出し、「IL-2 6×104IU/mL」チューブに移した(IL-2を事前に調製した場合は10mL、IL-2を新たに調製した場合は40mL)。
洗浄緩衝液の調製(1% HSA Plasmalyte A)。HSA及びPlasmalyteを5Lバッグに移して、LOVO洗浄緩衝液を作製した。滅菌条件を使用して、総体積125mLの25%HSAを5Lバッグに移した。10mLまたは40mLの洗浄緩衝液を取り出し、「IL-2 6×104IU/mL」チューブに移した(IL-2を事前に調製した場合は10mL、IL-2を新たに調製した場合は40mL)。
Plasmalyte+1% HSAに添加する再構成IL-2の量を計算した:再構成IL-2の量=(IL-2の最終濃度×最終量)/IL-2の比活性(標準アッセイに基づく)。IL-2の最終濃度は、6×104IU/mLであった。最終体積は、40mLであった。
再構成IL-2に必要なIL-2の計算された初期体積を取り出し、「IL-2 6×104IU/mL」チューブに移した。事前に調製したアリコートから100μLのIL-2 6×106IU/mLを、10mLのLOVO洗浄緩衝液を含有する「IL-2 6×104IU/mL」とラベル付けしたチューブに追加した。
約4500mLの上清をG-REX-500MCSフラスコから取り出した。残りの上清を回転させ、細胞を細胞収集プールバッグに移した。すべてのG-REX-500MCSフラスコで繰り返した。
60mLの上清を除去し、マイコプラズマ検出を含む品質管理アッセイのために上清チューブに添加した。+2~8℃で保管した。
細胞収集細胞を計数した。4.5mLのAIM-Vを含む4つの15mLコニカルチューブを準備する。これらは、事前に準備してもよい。最適な範囲は、5×104~5×106細胞/mLである。(1:10希釈が推奨された)。1:10希釈の場合、事前に調製した4500μLのAIM Vに、500μLのCFを追加する。希釈倍率を記録した。
TC(総細胞)LOVO前(生+死)を計算した=
平均総細胞
濃度(TC濃度LOVO前)
(生+死)
X
ソースバッグの体積
平均総細胞
濃度(TC濃度LOVO前)
(生+死)
X
ソースバッグの体積
TVC(総生細胞)LOVO前(生)を計算した=
平均総生細胞
濃度(TVC LOVO前)
(生)
X
LOVOソースバッグの体積
平均総生細胞
濃度(TVC LOVO前)
(生)
X
LOVOソースバッグの体積
総細胞(TC)数が5×109超であった場合、5×108細胞を取り出して、MDA保持試料として凍結保存する。5×108÷平均TC濃度(ステップ14.44)=取り出す体積
総細胞(TC)数が5×109以下であった場合、4×106細胞を取り出して、MDA保持試料として凍結保存する。4×106÷平均TC濃度=取り出す体積。
総細胞数が決定された場合、取り出す細胞の数は、150×109生細胞の保持を可能にすべきである。TVC LOVO前5×108もしくは4×106を確認するか、または該当なしである。取り出す細胞の体積量を計算した。
バッグに残っている残りの総細胞を計算した。TC(総細胞)LOVO前[平均総細胞濃度×残りの体積=残りのTC LOVO前]を計算した。
残存する細胞の総数に従って、表44の対応するプロセスを選択する。
使用したプロセスに対応して添加するIL-2の量を選択する。次のように計算された体積:保持量×2×300IU/mL=必要とされるIL-2のIU。必要なIL-2のIU/6×104IU/mL=LOVO後バッグに追加するIL-2の体積。添加したすべての体積を記録した。さらなる分析のために試料をクライオバイアル内に得た。
細胞製品を十分に混合した。該当する場合、凍結保存を含むさらなる処理のためにすべてのバッグを密封した。
得られたクライオバイアル試料に対して、内毒素、IFN-γ、無菌性、及び必要に応じて他のアッセイを行った。
実施例10:GEN2及びGEN3の例示的なプロセス
この実施例は、Gen2及びGen3のプロセスを示す。Gen2プロセス及びGen3プロセスのTILは、一般に腫瘍の外科的切除によって個々の患者から得られ、その後、エクスビボで拡張された自己TILで構成されている。Gen3プロセスのプライミングによる第1の拡張ステップは、インターロイキン-2(IL-2)及びモノクローナル抗体OKT3の存在下での細胞培養であり、放射線照射された末梢血単核細胞(PBMC)の足場上のT細胞共受容体CD3を標的とする。
この実施例は、Gen2及びGen3のプロセスを示す。Gen2プロセス及びGen3プロセスのTILは、一般に腫瘍の外科的切除によって個々の患者から得られ、その後、エクスビボで拡張された自己TILで構成されている。Gen3プロセスのプライミングによる第1の拡張ステップは、インターロイキン-2(IL-2)及びモノクローナル抗体OKT3の存在下での細胞培養であり、放射線照射された末梢血単核細胞(PBMC)の足場上のT細胞共受容体CD3を標的とする。
Gen2 TIL製品の製造は、2つの相からなる:1)急速拡張前(REP前)及び2)急速拡張プロトコル(REP)。REP前中に、切除腫瘍を、各寸法2~3mmの50個以下の断片に切断し、血清含有培養培地(10% HuSABを補充したRPMI1640培地)及び6,000IU/mLのインターロイキン-2(IL-2)で11日間培養した。11日目にTILを採取し、大規模二次REP拡張に導入した。REPは、5日間の3000IU/mLのrhIL-2を補充した5L体積のCM2中の150μgのモノクローナル抗CD3抗体(OKT3)を装填した5×109個の放射線照射された同種異系PBMCフィーダー細胞の共培養におけるREP前由来の200×106個以下の生細胞の活性化からなる。16日目に、培養物を90%減容させ、細胞画分を1フラスコ当たり1×109個以上の生リンパ球で複数のG-REX-500フラスコに分割し、CM4で5Lにする。TILをさらに6日間インキュベートする。REPを22日目に採取し、洗浄し、製剤化し、凍結保存した後に、注入のために臨床現場に-150℃で発送する。
Gen3 TIL製品の製造は、3つの相からなる:1)プライミングによる第1の拡張プロトコル、2)急速な第2の拡張プロトコル(急速拡張相またはREPとも称される)、及び3)継代培養分割。プライミングによる第1の拡張TIL増殖を行うために、切除した腫瘍を各寸法2~3mm以下の120個以下の断片に切断した。プライミングによる第1の拡張の0日目に、OKT-3を装填したおよそ2.5×108個の放射線照射された同種異系PBMCフィーダー細胞のフィーダー層を、3つの100MCS容器の各々内のおよそ100cm2の表面積上に確立した。腫瘍断片を、各々が500mLの血清含有CM1培養培地及び6,000IU/mLのインターロイキン-2(IL-2)及び15ugのOKT-3を含む3つの100MCS容器に分布し、その中で7日間培養した。7日目に、OKT-3を負荷したおよそ5×108個の同種異系の照射されたPBMCフィーダー細胞の追加のフィーダー細胞層を、3つの100MCS容器の各々において腫瘍断片化培養相に組み込み、500mLのCM2培養培地及び6,000IU/mLのIL-2及び30μgのOKT-3で培養することによってREPを開始した。REPの開始を、100MCS容器へのOKT3を装填したフィーダー細胞の閉鎖系流体移送を使用して、同じ容器内のプライミングによる第1の拡張培養物全体を活性化することによって増強した。Gen3の場合、TILのスケールアップまたは分割に、細胞培養物全体を閉鎖系流体移送によってより大きい容器にスケーリングし、移し(100Mフラスコから500Mフラスコに)、追加の4LのCM4培地を添加するプロセスステップを含めた。REP細胞を16日目に採取し、洗浄し、製剤化し、凍結保存した後に、注入のために臨床現場に-150℃で発送した。
全体として、Gen3プロセスは、より短く、よりスケーラブルであり、かつ簡単に修正可能な拡張プラットフォームであり、堅牢な製造及びプロセス比較可能性に適するように適応する。
0日目に、両方のプロセスについて、腫瘍を3回洗浄し、断片をランダム化し、2つのプールに分けた(プロセス毎に1つのプール)。Gen2プロセスの場合、断片を、6,000IU/mLのrhIL-2を含有する1LのCM1培地を含む1つのGREX100MCSフラスコに移した。Gen3プロセスでは、断片を、6,000IU/mLのrhIL-2、15ugのOKT-3及び2.5×108個のフィーダー細胞を含有する500mLのCM1を含む1つのG-REX-100MCSフラスコに移した。Rep開始日のTILの播種は、各プロセスに従って異なる日に起こった。G-REX G-REX-100MCSフラスコを90%減容させたGen2プロセスの場合、収集した細胞懸濁液を新たなG-REX-500MCSに移して、IL-2(3000IU/mL)+5×109フィーダー細胞及びOKT-3(30ng/mL)を含有するCM2培地中で11日目にREPを開始した。細胞が拡張し、プロトコルに従って16日目にIL-2(3000IU/mL)を有するCM4培地を含む複数のG-REX-500MCSフラスコに分割した。その後、培養物を採取し、プロトコルに従って22日目に凍結保存した。Gen3プロセスの場合、REPの開始は7日目に起こり、同じG-REX-100MCSをREPの開始に使用した。簡潔には、IL-2(6000IU/mL)及び5×108個のフィーダー細胞を30ugのOKT-3とともに含有する500mLのCM2培地を各フラスコに添加した。9~11日目に、培養をスケールアップした。G-REX100Mの全体積(1L)をG-REX-500MCSに移し、IL-2(3000IU/mL)を含有する4LのCM4を添加した。フラスコを5日間インキュベートした。培養物を採取し、16日目に凍結保存した。
比較には、2つの肺腫瘍(L4054及びL4055)と1つの黒色腫腫瘍(M1085T)の3つの異なる腫瘍を含めた。
L4054及びL4055の場合、CM1培地(培養培地1)、CM2培地(培養培地2)、及びCM4培地(培養培地4)を事前に調製し、4℃で保持した。CM1培地及びCM2培地を、培地を濾過した場合の細胞増殖と培地を濾過しなかった場合の細胞増殖を比較するために、濾過せずに調製した。
L4055腫瘍の場合、REPの開始及びスケールアップ時に、培地を事前に37℃で最大24時間温めた。
結果達成された生細胞の総数について、Gen3の結果はGen2の30%以内であった。Gen3最終製品は、再刺激後により高いINF-γ産生を示した。Gen3最終製品は、存在する固有の全CDR3配列によって測定される、増加したクローンの多様性を示した。Gen3最終製品は、より長い平均テロメア長を示した。
Gen2及びGen3プロセスでのREP前及びREP拡張は、上記の手順に従った。各腫瘍について、2つのプールに同数の断片を含めた。腫瘍のサイズが小さいため、1フラスコ当たりの最大断片数は達成されなかった。総REP前細胞(TVC)を採取し、Gen2プロセスの場合は11日目に、Gen3プロセスの場合は7日目に計数した。2つのREP前群を比較するために、細胞計数を培養物中に提供された断片の数で割り、1断片当たりの平均生細胞を計算した。以下の表46に示されるように、Gen2プロセスは、Gen3プロセスと比較して、1断片当たりより多くの細胞を一貫して成長させた。REP前TVCを7で割り、その後、11を掛けて計算した、11日目にGen3プロセスで予想されるTVC数の外挿計算。
Gen2及びGen3プロセスの場合、TVCをプロセス条件毎に計数し、生細胞パーセントをプロセス日毎に生成した。採取時に、22日目(Gen2)及び16日目(Gen3)の細胞を収集し、TVC数を確立した。その後、TVCを0日目に提供された断片の数で割り、1断片当たりの平均生細胞を計算した。倍率拡張を、採取したTVCをREP開始TVCで割ることによって計算した。表47に示されるように、Gen2とGen3を比較すると、倍率拡張はL4054の場合では同様であり、L4055の場合、倍率拡張はGen2プロセスの方が高かった。具体的には、この場合、培地をREP開始日の前に24温めた。M1085Tの場合のGen3でもより高い倍率拡張が観察された。REP TVCを16で割り、その後、22を掛けて計算した、22日目にGen3プロセスで予想されるTVC数の外挿計算。
表48:TIL最終製品の生存率%:採取時に、最終TIL REP製品を生存率%の放出基準と比較した。Gen2及びGen3プロセスのすべての条件は、70%の生存率基準を超えており、プロセス及び腫瘍間で同等であった。
採取時に、最終TIL REP製品を生存率%の放出基準と比較した。Gen2及びGen3プロセスのすべての条件は、70%の生存率基準を超えており、プロセス及び腫瘍間で同等であった。
1フラスコ当たりの断片の数が最大必要数未満であったため、採取日の推定細胞計数を腫瘍毎に計算した。推定は、臨床腫瘍が0日目に2つまたは3つのフラスコに播種するのに十分な大きさであるという予想に基づいた。
免疫表現型決定-TIL最終製品の表現型マーカー比較。3つの腫瘍L4054、L4055、及びM1085Tは、Gen2及びGen3プロセスの両方でTIL拡張を受けた。採取時に、REP TIL最終製品をフローサイトメトリー分析にかけ、純度、分化、及びメモリーマーカーを試験した。すべての条件で、TCR a/b+細胞パーセンテージは90%超であった。
Gen3プロセスから採取したTILは、Gen2プロセスから採取したTILと比較して、より高いCD8及びCD28発現を示した。Gen2プロセスは、より高いCD4+パーセンテージを示した。
Gen3プロセスから採取したTILは、Gen2プロセス由来のTILと比較して、セントラルメモリー区画でより高い発現を示した。
活性化及び疲弊マーカーを2つの腫瘍L4054及びL4055由来のTILで分析して、Gen2及びGen3 TIL拡張プロセス由来の最終TIL製品を比較した。活性化及び疲弊マーカーは、Gen2プロセスとGen3プロセスとの間で同等であった。
再刺激時のインターフェロンガンマ分泌採取日、Gen2の場合は22日目、Gen3の場合は16日目に、TILは、L4054及びL4055の場合、コーティングした抗CD3プレートで一晩再刺激を受けた。M1085Tでの再刺激は、抗CD3、CD28、及びCD137ビーズを使用して行った。すべての条件で再刺激の24時間後に上清を収集し、上清を凍結させた。ELISAによるIFNγ分析を、同じELISAプレートを使用して両方のプロセス由来の上清で同時に評価した。分析した3つの腫瘍で、Gen3プロセス由来のIFNγのより高い産生が観察された。
培養培地中のIL-2レベルの測定Gen2プロセスとGen3プロセスとの間のIL-2消費量を比較するために、腫瘍L4054及びL4055で、REPの開始時、スケールアップ時、及び採取日に細胞上清を収集した。細胞培養上清中のIL-2の量を、R&Dの定量ELISAキットによって測定した。一般的な傾向は、IL-2濃度が、Gen2プロセスと比較して、Gen3プロセスにおいて高いままであることを示す。これは、プロセス全体を通して培地のキャリーオーバーと相まってGen3のREP開始時のIL-2濃度がより高い(6000IU/mL)ことに起因する可能性がある。
代謝基質及び代謝物分析D-グルコース及びL-グルタミンなどの代謝基質のレベルを、全培地消費量の代わりに測定した。乳酸及びアンモニアなどのそれらの相互代謝物を測定した。グルコースは、ATPの形態でエネルギーを産生するためにミトコンドリアによって利用される培地中の単糖である。グルコースが酸化されると、乳酸が産生される(乳酸塩は乳酸のエステルである)。乳酸塩は、細胞の指数関数的成長期中に強く産生される。高レベルの乳酸塩は、細胞培養プロセスに悪影響を及ぼす。
L4054及びL4055の使用済み培地を、Gen2プロセス及びGen3プロセスの両方で、REP開始時、スケールアップ時、及び採取日に収集した。使用済み培地の収集は、Gen2の場合は11日目、16日目、及び22日目、Gen3の場合は7日目、11日目、及び16日目であった。上清を、グルコース、乳酸、グルタミン、GlutaMax(商標)、及びアンモニアの濃度についてCEDEXバイオアナライザーで分析した。
L-グルタミンは、細胞培養培地製剤に必要な不安定な必須アミノ酸である。グルタミンにはアミンが含まれており、このアミド構造基は、窒素を細胞に輸送して送達することができる。L-グルタミンが酸化すると、細胞によって有毒なアンモニア副産物が産生される。L-グルタミンの分解に対抗するために、Gen2及びGen3プロセスの培地に、水溶液中でより安定しており、かつ自発的に分解しないGlutaMax(商標)を補充した。2つの腫瘍株では、Gen3アームは、プロセス中のL-グルタミン及びGlutaMax(商標)の減少、ならびにREP全体でアンモニアの増加を示した。Gen2アームでは、L-グルタミン及びGlutaMax(商標)の濃度が一定であり、アンモニア産生のわずかな増加が観察された。Gen2及びGen3のプロセスは、アンモニアについて採取日に同等であり、L-グルタミン分解にわずかな違いが見られた。
テロメアは、Flow-FISHによって繰り返される。Flow-FISH技術を使用して、Gen2及びGen3プロセスでのL4054及びL4055のテロメア反復の平均長を測定した。相対テロメア長(RTL)の決定を、DAKO製のフローサイトメトリー分析用Telomere PNAキット/FITCを使用して計算した。Gen3は、Gen2と同等のテロメア長を示した。
CD3分析各プロセスで生成された細胞製品のクローン多様性を決定するために、L4054及びL4055の採取したTIL最終製品をサンプリングし、T細胞受容体のCDR3部分の配列決定によるクローン多様性分析についてアッセイした。
表50は、採取したTIL細胞製品のL4054における共有される固有のCDR3配列パーセンテージに関するGen2とGen3との比較を示す。199個の配列がGen3最終製品とGen2最終製品との間で共有され、Gen3最終製品と共有されるGen2由来の固有のCDR3配列の上位80%の97.07%に相当する。
表51は、採取したTIL細胞製品のL4055における共有される固有のCDR3配列パーセンテージに関するGen2とGen3との比較を示す。1833個の配列がGen3最終製品とGen2最終製品との間で共有され、Gen3最終製品と共有されるGen2由来の固有のCDR3配列の上位80%の99.45%に相当する。
CM1及びCM2培地は、濾過せずに事前に調製し、腫瘍L4055の場合、Gen2及びGen3プロセスで使用するまで4℃で保持した。
Gen2及びGen3プロセスのREP開始日に、腫瘍L4055の場合、培地を37℃で事前に24時間温めた。
これらのプロセスで収集した上清中にLDHは測定されなかった。
M1085T TIL細胞計数を、K2 cellometer細胞カウンターを使用して実行した。
腫瘍M1085Tでは、代謝分析用の上清、活性化及び疲弊マーカー分析用のTIL製品、テロメア長、及びCD3-TCRvb分析などの試料は入手できなかった。
結論この実施例では、3つの独立したドナー腫瘍組織を、機能的品質属性に加えて、拡張された表現型特徴付け、ならびにGen2プロセス及びGen3プロセス間の培地消費に関して比較する。
Gen2とGen3のREP前及びREP拡張比較を、生成された全生細胞及び全有核細胞集団の生存率に関して評価した。採取日のTVC細胞用量は、Gen2(22日)とGen3(16日)との間で同等ではなかった。Gen3細胞用量は、採取時に収集した全生細胞の約40%であり、Gen2よりも低かった。
REP前採取は、7日目ではなく11日目に起こり、REP採取は、16日目ではなく22日目に起こると仮定して、Gen3プロセスの外挿細胞数を計算した。どちらの場合も、Gen3は、Gen2プロセスと比較してTVCの数値が近いことを示し、初期活性化により、TILの成長が増強したことを示す。
Gen3プロセスでの追加フラスコ(2つまたは3つ)の外挿値の場合、処理される腫瘍サイズがより大きいと仮定し、記載されるようにプロセス毎に必要な最大断片数に到達する。22日目のGen2プロセスと比較して、Gen3プロセスの16日目の採取時にTVCで同様の用量に到達可能であり得ることが観察された。この観察は重要であり、培養物の早期活性化がTIL処理時間を短縮したことを示す。
Gen2とGen3のREP前及びREP拡張比較を、生成された全生細胞及び全有核細胞集団の生存率に関して評価した。採取日のTVC細胞用量は、Gen2(22日)とGen3(16日)との間で同等ではなかった。Gen3細胞用量は、採取時に収集した全生細胞の約40%であり、Gen2よりも低かった。
表現型特徴付けに関して、Gen2プロセスと比較してGen3プロセスでの3つの腫瘍でより高いCD8+及びCD28+発現が観察された。
Gen3プロセスは、Gen2プロセスと比較してわずかに高いセントラルメモリー区画を示した。
Gen2プロセス及びGen3プロセスは、Gen3プロセスの持続期間がより短いにもかかわらず、同等の活性化及び疲弊マーカーを示した。
IFNガンマ(IFNγ)産生は、分析した3つの腫瘍において、Gen2と比較してGen3最終製品において3倍高かった。このデータは、Gen3プロセスがGen2プロセスと比較して高機能でより強力なTIL製品を生成したことを示し、Gen3でのCD8及びCD28発現がより高いことに起因する可能性がある。表現型特徴付けは、Gen2プロセスと比較して3つの腫瘍でCD8+、CD28+発現へのGen3の肯定的な傾向を示唆した。
Gen2とGen3との間のTIL最終製品のテロメア長は同等であった。
グルコース及び乳酸塩レベルは、Gen2最終製品とGen3最終製品との間で同等であり、プロセス日毎に減容除去が実行されなかったこと、及びGen2と比較してプロセスにおける培地全体の体積が少ないことに起因して、Gen3プロセスの培地の栄養素レベルが影響されなかったことを示唆する。
全体として、Gen3プロセスは、Gen2プロセスと比較してほぼ2倍の処理時間の短縮を示し、これにより、Gen3プロセスによって拡張されたTIL製品の売上原価(COG)の有意な削減がもたらされるであろう。
IL-2消費は、Gen2プロセスでのIL-2消費の一般的な傾向を示しており、Gen3プロセスでは、古い培地が除去されなかったため、IL-2が高かった。
Gen3プロセスは、CDR3 TCRab配列分析によって測定されたより高いクローン多様性を示した。
Gen3プロセスを使用して、REP前の0日目のフィーダー及びOKT-3の追加により、TILの初期活性化が可能になり、TIL成長が可能になった。
表52は、現在のGen2プロセスと比較したGen3プロセスの様々な実施形態及び成果を説明する。
実施例11:例示的なGEN3プロセス(GEN3.1とも称される)
この実施例は、「TIL拡張のためのGen2プロセスとGen3プロセスとの間の比較可能性」に関するさらなる研究について説明する。Gen3プロセスを、表現型及び機能プロファイルを維持しながら、最終総生細胞(TVC)出力を増やすことを目的として、プロセスの初期に活性化ステップを含むように修正した。以下に記載されるように、Gen3実施形態をさらなる実施形態として修正し、本明細書におけるこの実施例ではGen3.1と称する。
この実施例は、「TIL拡張のためのGen2プロセスとGen3プロセスとの間の比較可能性」に関するさらなる研究について説明する。Gen3プロセスを、表現型及び機能プロファイルを維持しながら、最終総生細胞(TVC)出力を増やすことを目的として、プロセスの初期に活性化ステップを含むように修正した。以下に記載されるように、Gen3実施形態をさらなる実施形態として修正し、本明細書におけるこの実施例ではGen3.1と称する。
いくつかの実施形態では、Gen3.1 TIL製造プロセスは、以下の4つのオペレーター介入を有する。
1.腫瘍断片の単離及び活性化:プロセスの0日目に腫瘍を解剖し、最終断片を各々約3×3mm(合計で最大240個の断片)を生成し、1~4つのG-REX100MCSフラスコ内で培養した。各フラスコは、最大60個の断片、6,000IUのrhIL-2、15μgのOKT3、及び2.5×108個の放射線照射した同種異系単核細胞を補充した500mLのCM1またはDM1培地を含んだ。培養物を37℃で6~8日間インキュベートした。
2.TIL培養再活性化:7~8日目に、いずれの場合も6,000IUのrhIL-2、30μgのOKT3、及び5×108個の放射線照射した同種異系単核細胞を補充したCM2またはDM1培地をゆっくり添加することによって、培養物を補充した。フラスコの底にある既存の細胞を乱さないように注意した。培養物を37℃で3~4日間インキュベートした。
3.培養のスケールアップ:10~11日目に生じる。培養のスケールアップ中に、G-REX100MCSの全内容物を、いずれの場合も3,000IU/mLのIL-2を補充した4LのCM4またはDM2を含むG-REX500MCSフラスコに移した。採取するまでフラスコを37℃で5~6日間インキュベートした。
4.採取/洗浄/製剤化:16~17日目に、フラスコを減容させ、プールする。細胞を濃縮し、1%HSAを含有するPlasmaLyte A pH7.4で洗浄した。洗浄した細胞懸濁液を、CryoStor10と1:1の比で配合し、300IU/mLの最終濃度までrhIL-2を補充した。
1.腫瘍断片の単離及び活性化:プロセスの0日目に腫瘍を解剖し、最終断片を各々約3×3mm(合計で最大240個の断片)を生成し、1~4つのG-REX100MCSフラスコ内で培養した。各フラスコは、最大60個の断片、6,000IUのrhIL-2、15μgのOKT3、及び2.5×108個の放射線照射した同種異系単核細胞を補充した500mLのCM1またはDM1培地を含んだ。培養物を37℃で6~8日間インキュベートした。
2.TIL培養再活性化:7~8日目に、いずれの場合も6,000IUのrhIL-2、30μgのOKT3、及び5×108個の放射線照射した同種異系単核細胞を補充したCM2またはDM1培地をゆっくり添加することによって、培養物を補充した。フラスコの底にある既存の細胞を乱さないように注意した。培養物を37℃で3~4日間インキュベートした。
3.培養のスケールアップ:10~11日目に生じる。培養のスケールアップ中に、G-REX100MCSの全内容物を、いずれの場合も3,000IU/mLのIL-2を補充した4LのCM4またはDM2を含むG-REX500MCSフラスコに移した。採取するまでフラスコを37℃で5~6日間インキュベートした。
4.採取/洗浄/製剤化:16~17日目に、フラスコを減容させ、プールする。細胞を濃縮し、1%HSAを含有するPlasmaLyte A pH7.4で洗浄した。洗浄した細胞懸濁液を、CryoStor10と1:1の比で配合し、300IU/mLの最終濃度までrhIL-2を補充した。
DPを制御速度凍結で凍結保存し、気相液体窒素中に貯蔵した。*完全標準TIL培地1、2、または4(CM1、CM2、CM4)は、上記のように、合成培地(DM1またはDM2)と称されるCTS(商標)OpTmizer(商標)T細胞無血清拡張培地の代用となり得た。
プロセスの説明0日目に、腫瘍を3回洗浄し、その後、3×3×3の最終断片に断片化した。全腫瘍を断片化した時点で、最終断片を均等にランダム化し、3つのプールに分割した。1つのランダム化断片プールを各群に導入し、3つの実験マトリックス毎に同じ数の断片を添加した。
全TIL拡張プロセスにわたって、腫瘍L4063拡張を標準培地で行い、腫瘍L4064拡張を合成培地(CTS OpTmizer)で行った。培地の成分を本明細書に記載する。
CM1完全培地1:2mM GlutaMax(商標)、10%ヒトAB血清、ゲンタマイシン(50ug/mL)、2-メルカプトエタノール(55uM)を補充したRPMI+グルタミン。6000IU/mLのIL-2を補充した最終培地製剤
CM2完全培地2:50% CM1培地+50% AIM-V培地。6000IU/mLのIL-2を補充した最終培地製剤
CM4完全培地4:GlutaMax(商標)(2mM)を補充したAIM-V。3000IU/mLのIL-2を補充した最終培地製剤
CTS(商標)OpTmizer(商標)T-Cell Expansion Supplement(26mL/L)を補充したCTS(商標)OpTmizer(商標)T-Cell Expansion Basal Medium。
DM1:CTS(商標)OpTmizer(商標)T-Cell Expansion Supplement(26mL/L)、及びCTS(商標)Immune Cell SR(3%)をGlutaMax(2mM)とともに補充したCTS(商標)OpTmizer(商標)T-Cell Expansion Basal Medium。6,000IU/mLのIL-2を補充した最終製剤。
DM2:CTS(商標)OpTmizer(商標)T-Cell Expansion Supplement(26mL/L)、及びCTS(商標)Immune Cell SR(3%)をGlutaMax(2mM)とともに補充したCTS(商標)OpTmizer(商標)T-Cell Expansion Basal Medium。3,000IU/mLのIL-2を補充した最終製剤。
使用したすべてのタイプの培地、すなわち、完全培地(CM)及び合成培地(DM)を事前に調製し、使用前日まで4℃で保持し、プロセス日前に事前に最長24時間にわたってインキュベーター内で37℃で温めた。
TIL培養再活性化は、両方の腫瘍で7日目に起こった。スケールアップは、L4063では10日目、L4064では11日目に起こった。両方の培養物を採取し、16日目に凍結保存した。
達成した結果Gen3.0プロセス及びGen3.1プロセスの細胞計数及び生存率%を決定した。すべての条件下での拡張は、この実施例に説明される詳細に従った。
腫瘍毎に、断片を同数の3つのプールに分割した。腫瘍のサイズが小さいため、1フラスコ当たりの断片の最大数は達成されなかった。3つの異なるプロセスについて、総生細胞及び細胞生存率を条件毎に評価した。細胞計数を、7日目の再活性化のTVC、10日目(L4064)または11日目(L4063)のスケールアップのTVC、及び16/17日目の採取時のTVCとして決定した。
7日目及び10/11日目の細胞計数をFIOで測定した。倍率拡張を、16/17日目の採取時のTVCを7日目の再活性化日のTVCで割ることによって計算した。3つの群を比較するために、採取日のTVCを、0日目の培養物中に添加した断片の数で割って、1断片当たりの生細胞の平均を計算した。
L4063及びL4064について、細胞計数及び生存率アッセイを行った。Gen3.1-試験プロセスは、両方の腫瘍でGen3.0プロセスよりも多くの1断片当たりの細胞数をもたらした。
総生細胞数及び倍率拡張、プロセス中の生存率%再活性化時に、スケールアップして採取し、すべての条件で生存率%を行った。16/17日目の採取日に、最終TVCを生存率%の放出基準と比較した。評価したすべての条件は、70%の生存率基準を超え、プロセス及び腫瘍全体で同等であった。
免疫表現型決定-TIL最終製品の表現型特徴付け。最終製品をフローサイトメトリー分析にかけ、純度、分化、及びメモリーマーカーを試験した。集団の割合は、すべての条件で、TCRα/β細胞、CD4+細胞、及びCD8+細胞で一貫していた。
REP TILの拡張表現型分析を行った。TIL製品は、両方の腫瘍でGen3.0と比較してGen3.1条件でより高いCD4+細胞パーセンテージを示し、両方の条件でGen3.1条件と比較してGen3.0でより高いCD8+集団由来のCD28+細胞パーセンテージを示した。
Gen3.0プロセス及びGen3.1プロセスから採取したTILは、CD4+細胞及びCD8+細胞でのCD27及びCD56発現、ならびにCD4+ゲート細胞集団での同等のCD28発現と同等の表現型マーカーを示した。TIL最終製品のメモリーマーカーの比較:
16日目に採取したTILの凍結試料を分析のために染色した。TILメモリーステータスは、Gen3.0プロセスとGen3.1プロセスとの間で同等であった。TIL最終製品の活性化及び疲弊マーカーの比較:
活性化及び疲弊マーカーは、CD4+細胞及びCD8+細胞上でゲートされたGen3.0プロセスとGen3.1プロセスとの間で同等であった。
再刺激時のインターフェロンガンマ分泌採取したTILは、L4063及びL4064用のコーティングされた抗CD3プレートで一晩再刺激を受けた。Gen3.0プロセスと比較して、分析した2つの腫瘍で、より高いGen3.1プロセスからのIFNγ産生が観察された。
培養培地中のIL-2レベルの測定すべての条件及びプロセス間のIL-2消費レベルを比較するために、細胞上清を、7日目の再活性化の開始時、10日目(L4064)/11日目(L4063)のスケールアップ時、及び16/17日目の採取及び凍結時に収集した。その後、上清を解凍し、分析した。細胞培養上清中のIL-2の量を、製造業者のプロトコルによって測定した。
全体的なGen3プロセス及びGen3.1プロセスは、同じ培地条件で評価した全プロセス中のIL-2消費に関して同等であった。L4063及びL4064用に収集した使用済み培地のIL-2濃度(pg/mL)分析。
代謝物分析使用済み培地の上清を、L4063及びL4064について、すべての条件で、7日目の再活性化の開始時、10日目(L4064)または11日目(L4063)のスケールアップ時、及び16/17日目の採取時に、L4063及びL4064から収集した。上清をCEDEXバイオアナライザーでグルコース、乳酸塩、グルタミン、GlutaMax(商標)、及びアンモニアの濃度について分析した。
合成培地は、完全培地(2g/L)と比較してより高いグルコース濃度4.5g/Lを有する。全体として、グルコースの濃度及び消費量は、各培地タイプ内でGen3.0プロセス及びGen3.1プロセスにおいて同等であった。
乳酸塩の増加が観察され、乳酸塩の増加は、Gen3.0条件とGen3.1条件との間、及び再活性化拡張に使用した2つの培地(完全培地と合成培地)間で同等であった。
いくつかの場合において、標準基礎培地は、2mMのL-グルタミンを含有し、培養条件下でL-グルタミンのL-グルタミン酸塩及びアンモニアへの自然分解を補うために、2mMのGlutaMax(商標)で補充された。
いくつかの場合において、使用した合成(無血清)培地は、基礎培地にL-グルタミンを含有せず、最終濃度が2mMになるまでGlutaMax(商標)のみで補充された。GlutaMax(商標)は、L-アラニンとL-グルタミンのジペプチドであり、水溶液中でL-グルタミンよりも安定しており、グルタミン酸塩及びアンモニアに自発的に分解しない。代わりに、ジペプチドは、個々のアミノ酸に徐々に解離し、それにより、より低いが十分な濃度のL-グルタミンを維持して、強力な細胞成長を維持する。
いくつかの場合において、グルタミン濃度及びGlutaMax(商標)濃度は、スケールアップ日にわずかに減少したが、採取日には再活性化日と比較して同様またはより近いレベルへの増加を示した。L4064の場合、グルタミン濃度及びGlutaMax(商標)濃度は、全プロセス中、異なる条件間で同様の速度でわずかな分解を示した。
アンモニア濃度は、2mMのGlutaMaxを含有する合成培地中で成長させた試料よりも、2mMのグルタミン+2mMのGlutaMaxを含有する標準培地中で成長させた試料で高かった。さらに、予想通り、培養の過程にわたってアンモニアの段階的増加または蓄積があった。3つの異なる試験条件間でアンモニア濃度に差はなかった。
Flow-FISHによるテロメア反復:Flow-FISH技術を使用して、Gen3プロセス及びGen3.1プロセス下でのL4063及びL4064のテロメア反復の平均長を測定した。相対テロメア長(RTL)の決定を、DAKO製のフローサイトメトリー分析用Telomere PNAキット/FITCを使用して計算した。テロメアアッセイを行った。試料のテロメア長を、対照細胞株(1301白血病)と比較した。対照細胞株は、長くて安定したテロメアを有する四倍体細胞株であり、相対テロメア長の計算を可能にする。両方の腫瘍で評価したGen3プロセス及びGen3.1プロセスは、同等のテロメア長を示した。
TCR Vβレパートリー分析
TCR Vβレパートリー分析
各プロセスで生成された細胞製品のクローン多様性を決定するために、TIL最終製品をT細胞受容体のCDR3部分の配列決定によるクローン多様性分析のためにアッセイした。
3つのパラメータを3つの条件間で比較した。
●固有のCDR3(uCDR3)の多様性指数
●共有されるuCDR3の%
●uCDR3の上位80%の場合:
○共有されるuCDR3コピーの%を比較する
○固有のクロノタイプの頻度を比較する
●固有のCDR3(uCDR3)の多様性指数
●共有されるuCDR3の%
●uCDR3の上位80%の場合:
○共有されるuCDR3コピーの%を比較する
○固有のクロノタイプの頻度を比較する
対照及びGen3.1試験、TILで採取した細胞製品で共有される固有のCDR3配列パーセンテージ:975個の配列がGen3試験最終製品とGen2試験最終製品との間で共有され、Gen3.1と共有されるGen3由来の固有のCDR3配列の上位80%の88%に相当する。
対照及びGen3.1試験、TILで採取した細胞製品で共有される固有のCDR3配列パーセンテージ:2163個の配列がGen3試験最終製品とGen2試験最終製品との間で共有され、Gen3.1と共有されるGen3由来の固有のCDR3配列の上位80%の87%に相当する。
異なるプロセスについて、16日目の採取時に収集した1×106個の細胞から特定された固有のCD3配列の数。Gen3.1試験条件は、試料内の固有のペプチドCDRの数に基づいて、Gen3.0と比較してわずかに高いクローン多様性を示した。
シャノンエントロピー多様性指数は、比較のための信頼性の高い一般的なメトリックであり、両方の腫瘍に対するGen3.1条件は、Gen3.0プロセスよりもわずかに高い多様性を示し、Gen3.1試験条件のTCR VβレパートリーがGen3.0プロセスよりもポリクローナルであることを示唆する。
加えて、Gen3.1試験条件のTCR Vβレパートリーは、腫瘍L4063及びL4064の両方でGen3.0プロセスの対応するレパートリーと87%を超える重複を示した。
再活性化日のGen3.1試験L4064の使用済み培地のIL-2濃度の値は、期待値を下回った(Gen3.1対照及びGen3.0条件と同様であった)。
低い値はピペッティングエラーに起因した可能性があったが、最小限の試料しか採取できなかったため、アッセイを繰り返すことができなかった。
結論0日目のフィーダー及びOKT-3を含むGen3.1試験条件は、Gen3.0及びGen3.1対照と比較して、16日目の採取時の細胞用量のTVCがより高いことを示した。Gen3.1試験条件のTVC最終製品は、Gen3.0よりも約2.5倍高かった。
試験した腫瘍試料の両方について、0日目にOKT-3及びフィーダーを添加したGen3.1試験条件は、採取時にフラスコの最大容量に達した。これらの条件下で、0日目に最大4つのフラスコを開始した場合、最終細胞用量は、80~100×109TILである可能性があった。
最終TIL製品の純度、疲弊、活性化、及びメモリーマーカーを含む表現型特徴付けなどのすべての品質属性が、Gen3.1試験とGen3.0プロセスとの間で維持された。
最終TIL製品のIFN-γ産生は、分析した2つの腫瘍において、Gen3.0と比較して、0日目にフィーダー及びOKT-3を添加したGen3.1で3倍高く、Gen3.1プロセスが強力なTIL製品を生成したことを示唆する。
試験条件にわたって、グルコースまたは乳酸塩レベルに差異は観察されなかった。培地条件にわたって、Gen3.0プロセスとGen3.1プロセスとの間でグルタミン及びアンモニアに差異は観察されなかった。培地上の低レベルのグルタミンは、細胞増殖を制限しておらず、培地へのGlutaMax(商標)のみの添加が、細胞を増殖させるのに必要な栄養素を与えるのに十分であることを示唆する。
11日目及び10日目のスケールアップは、それぞれ、プロセスの採取日に到達した細胞数に関して大きな差異を示さず、代謝物の消費量は、全プロセスにわたって両方の場合で同等であった。この観察結果は、Gen3.0最適化プロセスが処理日に柔軟性を有し、それにより、製造スケジュールの柔軟性を促進することができることを示唆している。
0日目にフィーダー及びOKT-3を添加したGen3.1プロセスは、Gen3.0と比較して、CDR3 TCRab配列分析によって測定されたより高いクローン多様性を示した。
図32は、Gen3プロセス(Gen3最適化プロセス)の実施形態を説明する。標準培地及びCTS Optimizer無血清培地を、Gen3最適化プロセスTIL拡張に使用することができる。CTS Optimizerの場合、培地のGlutaMax(商標)を最終濃度4mMに増加させるために無血清培地が推奨される。
実施例12:CLL患者におけるPBMC由来のPBLを選択及び拡張する例示的な実施形態。
PBMCを患者から収集し、後に使用するために凍結させるか、または新鮮な状態で使用するかのいずれかを行う。十分な量の末梢血を収集して、本発明の方法における出発材料用に少なくとも約400,000,000(400×106)個のPBMCを産生する。方法の0日目に、6×106IU/mLのIL-2を新たに調製するかまたは解凍し、使用する準備ができるまで4℃または氷上で保存する。200mLのCM2培地を、100mLのCM1培地(GlutaMAX(登録商標)を含有する)を100mLのAIM-Vと合わせ、その後、それをAIM-Vと1:1で希釈してCM2を作製することによって調製する。CM2を光から保護し、使用しないときはしっかりと密閉する。
PBMCを患者から収集し、後に使用するために凍結させるか、または新鮮な状態で使用するかのいずれかを行う。十分な量の末梢血を収集して、本発明の方法における出発材料用に少なくとも約400,000,000(400×106)個のPBMCを産生する。方法の0日目に、6×106IU/mLのIL-2を新たに調製するかまたは解凍し、使用する準備ができるまで4℃または氷上で保存する。200mLのCM2培地を、100mLのCM1培地(GlutaMAX(登録商標)を含有する)を100mLのAIM-Vと合わせ、その後、それをAIM-Vと1:1で希釈してCM2を作製することによって調製する。CM2を光から保護し、使用しないときはしっかりと密閉する。
以下のステップをすべて、滅菌細胞培養条件下で行う。CM2のアリコートを、凍結したPBMC試料の解凍及び/または洗浄に使用するために、37℃の水浴内の50mLコニカルチューブ中で温める。凍結PBMC試料を使用する場合、試料を冷凍庫から取り出し、解凍する準備が整うまでドライアイス上で保管する。PBMCクライオバイアルを解凍する準備が整った時点で、5mLのCM2培地を50mLの滅菌コニカルチューブに入れる。PBMC試料クライオバイアルを、数個の氷晶しか残らなくなるまで37℃の水浴中に配置する。温めたCM2培地を、1:1の試料:培地体積比(約1mL)で試料バイアルに滴加する。全内容物をクライオバイアルから取り出し、50mLのコニカルチューブ内の残りのCM2培地に移す。追加の1~2mLのCM2培地を使用してクライオバイアルをすすぎ、クライオバイアルの全内容物を取り出し、50mLのコニカルチューブに移す。その後、コニカルチューブ内の体積を追加のCM2培地で15mLに調整し、穏やかに回転させて、細胞をすすぐ。その後、コニカルチューブを400gで5分間、室温で遠心分離して、細胞ペレットを収集する。
上清をペレットから除去し、コニカルチューブにキャップをし、その後、細胞ペレットを、例えば、粗面に沿ってチューブをこすることによって破砕する。約1mLのCM2培地を細胞ペレットに添加し、ペレット及び培地をピペットで5~10回上下に吸引して、細胞ペレットを破砕する。さらに3~5mLのCM2培地をチューブに添加し、ピペットで混合して、細胞を懸濁する。この時点で、細胞懸濁液の体積を記録する。自動セルカウンター、例えばNexcelom Cellometer K2で細胞を計数するために、100uLの細胞懸濁液を管から取り出す。試料中の生細胞の数を決定し、記録する。
表現型決定及び他の特徴付け実験のために、最低5×106個の細胞を保存する。保管した細胞を室温で5分間、400gで回転させて、細胞ペレットを収集する。細胞ペレットを凍結培地(20%DMSOを含有する滅菌熱不活性化FBS)に再懸濁する。保存した細胞の1つまたは2つのアリコートを凍結培地中で凍結し、-80℃の冷凍庫内のセルフリーザー(Mr.Frosty)でアリコートをゆっくりと凍結させる。-80℃で最低24時間後、液体窒素ストレージに移す。
以下のステップでは、予冷した溶液を使用し、素早く作業し、細胞を冷たく保つ。次のステップは、PBMC試料のT細胞画分を精製することである。これは、Pan T細胞単離キット(Miltenyi、カタログ番号130-096-535)を使用して完了する。PBS、0.5% BSA、及び2mM EDTAを含有するpH7.2の無菌濾過洗浄緩衝液で細胞を洗浄することによって、精製用の細胞を調製する。PBMC試料を400gで5分間遠心分離して、細胞ペレットを収集する。上清を吸引除去し、細胞ペレットを107個の細胞毎に40uLの洗浄緩衝液中に再懸濁する。107個の細胞毎に10uLのPan T細胞ビオチン抗体カクテルを添加する。十分に混合し、冷蔵庫内または氷上で5分間インキュベートする。107個の細胞毎に30uLの洗浄緩衝液を添加する。107個の細胞毎に20uLのPan T細胞マイクロビーズカクテルを添加する。十分に混合し、冷蔵庫内または氷上で10分間インキュベートする。LSカラムを調製し、細胞をマイクロビーズから磁気的に分離する。LSカラムをQuadroMACS磁場に配置する。LSカラムを、3mLの冷たい洗浄緩衝液で洗浄し、洗浄液を収集して廃棄する。細胞懸濁液をカラムに適用し、フロースルー(非標識細胞)を収集する。このフロースルーは、濃縮されたT細胞画分(PBL)である。カラムを3mLの洗浄緩衝液で洗浄し、最初のフロースルーと同じチューブ内にフロースルーを収集する。チューブにキャップをし、氷上に置く。これは、T細胞画分またはPBLである。LSカラムを磁場から取り除き、カラムを5mLの洗浄緩衝液で洗浄し、非T細胞画分(磁気標識細胞)を別のチューブ内に収集する。両方の画分を400gで5分間遠心分離し、細胞ペレットを収集する。上清を両方の試料から吸引し、ペレットを破砕し、各ペレットに対して3000IU/mLのIL-2を補充した1mLのCM2培地中で細胞を再懸濁し、上下に5~10回ピペットしてペレットを破砕する。1~2mLのCM2を各試料に添加し、各試料を十分に混合し、次のステップのために組織培養インキュベーター内で保管する。各試料から約50uLのアリコートを取り出し、細胞を計数し、数及び生存率を記録する。
その後、T細胞(PBL)をDunabeads(商標)Human T-Expander CD3/CD28で培養する。Dynabeadsのストックバイアルを、中速で30秒間ボルテックスする。ビーズの必要なアリコートを、ストックバイアルから1.5mLの滅菌マイクロチューブに取り出す。ビーズを含有する1.5mLのマイクロチューブに1mLのビーズ洗浄液を添加することによって、ビーズをビーズ洗浄液で洗浄する。穏やかに混合する。チューブをDynaMag(商標)-2磁石上に置き、ビーズが磁石に向かって引き寄せられるまで30分間放置する。洗浄液をビーズから吸引し、チューブを磁石から取り外す。3000IU/mLのIL-2を補充した1mLのCM2培地をビーズに添加する。マイクロチューブの全内容物を、15mLまたは50mLのコニカルチューブに移す。IL-2を含むCM2培地を使用して、ビーズを約500,000/mLの最終濃度にする。
T細胞(PBL)とビーズを以下のように一緒に培養する。0日目:G-Rex-REX24ウェルプレート中、合計7mL/ウェルで、500,000T細胞、500,000 CD3/CD28 Dynabeads、及びIL-2を補充したCM2を添加する。プロセスの次のステップまで、G-Rex-REXプレートを加湿した37℃、5% CO2インキュベーターに配置する(4日目)。残りの細胞を、Mr.Frostyセルフリーザーを使用してCS10凍結保存培地中で凍結させる。細胞の非T細胞画分を、Mr.Frostyセルフリーザーを使用してCS10凍結保存培地中で凍結させる。4日目に、培地を交換する。培地の半分(約3.5mL)を、G-rexプレートの各ウェルから取り出す。37℃に温めた3000IU/mLのIL-2を補充した十分な量(約3.5mL)のCM4培地を添加して、各試料ウェルから取り出した培地を交換する。G-rexプレートをインキュベーターに戻す。
7日目に、細胞をREPによる拡張のために調製する。G-rexプレートをインキュベーターから取り出し、培地の半分を各ウェルから取り出し、廃棄する。細胞を残りの培地に再懸濁し、15mLのコニカルチューブに移す。ウェルを、37℃に温めた3000IU/mLのIL-2を補充した各1mLのCM4で洗浄し、洗浄培地を細胞とともに同じ15mLのチューブに移す。細胞の代表的な試料を取り出し、自動セルカウンターを使用して計数する。1×106個未満の生細胞が存在する場合、0日目にDynabead拡張プロセスを繰り返す。残りの細胞を、バックアップ拡張のために、または表現型決定及び他の特徴付け研究のために凍結させる。1×106個以上の生細胞が存在する場合、REP拡張は0日目からのプロトコルに従って複製で設定される。あるいは、十分な細胞を用いて、1フラスコ当たり10~15×106個のPBL、及び3000IU/mLのIL-2を補充した最終量100mL/ウェルのCM4培地中の1:1比のDynabeads:PBLを使用して、G-rex 10M培養フラスコ内の拡張を設定することができる。プレート及び/またはフラスコをインキュベーターに戻す。過剰なPBLを等分し、-80℃の冷凍庫内のMr.Frostyセルフリーザーでゆっくりと凍結し、-80℃で最低24時間後に液体窒素ストレージに移すことができる。これらのPBLを、拡張のために、または表現型決定もしくは他の特徴付け研究のために、バックアップ試料として使用することができる。
11日目に、培地を交換する。培地の半分をG-rexプレートの各ウェルまたはフラスコのいずれかから取り出し、37℃で3000IU/mLのIL-2を補充した同量の新鮮なCM4培地と交換する。
14日目に、PBLを採取する。G-rexプレートを使用する場合、培地の約半分をプレートの各ウェルから取り出し、廃棄する。PBL及びビーズを残りの培地に懸濁し、15mLの滅菌コニカルチューブ(チューブ1)に移す。ウェルを37℃に温めた1~2mLの新鮮なAIM-V培地で洗浄し、洗浄液をチューブ1に移す。チューブ1にキャップをし、DynaMag(商標)-15磁石中に1分間置き、ビーズが磁石に引き寄せられるようにする。細胞懸濁液を新しい15mLの管(管2)に移し、ビーズを37℃で2mLの新鮮なAIM-Vで洗浄する。チューブ1をさらに1分間磁石中に戻して置き、その後、洗浄培地をチューブ2に移す。最終洗浄ステップ後、必要に応じてウェルを組み合わせてもよい。細胞の代表的な試料を取り出し、計数し、数及び生存率を記録する。計数中、チューブをインキュベーターに入れてもよい。細胞が非常に密に見える場合、追加のAIM-V培地をチューブ2に添加してもよい。フラスコを使用する場合、フラスコ内の体積を約10mLに低減する必要がある。フラスコの内容物を混合し、15mLのコニカルチューブ(チューブA)に移す。フラスコを上記のように2mLのAIM-V培地で洗浄し、洗浄培地も管Aに移す。管Aにキャップをして、DynaMag(商標)-15 Magnetに1分間入れ、ビーズが磁石に引き寄せられるようにする。細胞懸濁液を新たな15mLのチューブ(チューブB)に移し、ビーズを37℃で2mLの新鮮なAIM-Vで洗浄する。チューブAをさらに1分間磁石中に戻して置き、洗浄培地をチューブBに移す。最終洗浄ステップ後、必要に応じてウェルを組み合わせてもよい。細胞の代表的な試料を取り出し、計数し、数及び生存率を記録する。計数中、チューブをインキュベーターに入れてもよい。細胞が非常に密に見える場合、追加のAIM-V培地をチューブBに添加してもよい。細胞を、新鮮な状態で使用しても、所望の濃度でCS10保存培地中で凍結させてもよい。
実施例13:固形腫瘍を有する患者における自己腫瘍浸潤リンパ球の第2相多施設研究
研究設計
概要
この実施例では、本出願ならびにこの実施例に記載されるように調製されたTILを使用して、TILをペムブロリズマブと組み合わせて、またはTILを単剤療法として使用してACTを評価する、前向き、非盲検、マルチコホート、非ランダム化、多施設第2相試験について説明する。
研究設計
概要
この実施例では、本出願ならびにこの実施例に記載されるように調製されたTILを使用して、TILをペムブロリズマブと組み合わせて、またはTILを単剤療法として使用してACTを評価する、前向き、非盲検、マルチコホート、非ランダム化、多施設第2相試験について説明する。
目的:
一次:
治験責任医師が評価した固形腫瘍の奏効評価基準(RECIST1.1)を使用して、客観的奏効率(ORR)によって決定されるように、MM、HNSCC、もしくはNSCLC患者におけるペムブロリズマブと組み合わせた自己TILの有効性、またはCPIによる治療中もしくは治療後に以前に進行した再発もしくは不応性(r/r)NSCLC患者における単剤療法としてのTILの有効性を評価すること。
一次:
治験責任医師が評価した固形腫瘍の奏効評価基準(RECIST1.1)を使用して、客観的奏効率(ORR)によって決定されるように、MM、HNSCC、もしくはNSCLC患者におけるペムブロリズマブと組み合わせた自己TILの有効性、またはCPIによる治療中もしくは治療後に以前に進行した再発もしくは不応性(r/r)NSCLC患者における単剤療法としてのTILの有効性を評価すること。
グレード3以上の治療下で発現した有害事象(TEAE)の発生率によって測定される、MM、HNSCC、及びNSCLC患者におけるペムブロリズマブと組み合わせたTILの安全性プロファイル、またはr/r NSCLC患者における単剤療法としてのTILの安全性プロファイルを特徴付けること。
二次:
完全奏効(CR)率、奏効期間(DOR)、疾患制御率(DCR)、治験責任医師によって評価されたRECIST1.1を使用した無増悪生存期間(PFS)、及び全生存期間(OS)を使用して、MM、HNSCC、及びNSCLC患者におけるペムブロリズマブと組み合わせた自己TILの有効性、またはr/r NSCLC患者における単剤療法としてのTILの有効性をさらに評価すること。
完全奏効(CR)率、奏効期間(DOR)、疾患制御率(DCR)、治験責任医師によって評価されたRECIST1.1を使用した無増悪生存期間(PFS)、及び全生存期間(OS)を使用して、MM、HNSCC、及びNSCLC患者におけるペムブロリズマブと組み合わせた自己TILの有効性、またはr/r NSCLC患者における単剤療法としてのTILの有効性をさらに評価すること。
コホート:
コホート1A:免疫療法を除く3つ以下の以前の全身療法を伴う、切除不能なステージIIICもしくはステージIV、またはMMの患者におけるペムブロリズマブと組み合わせたTIL療法。以前に治療を受けた場合、患者は、最近の治療中または治療後にX線写真で進行が記録されていなければならない。
コホート1A:免疫療法を除く3つ以下の以前の全身療法を伴う、切除不能なステージIIICもしくはステージIV、またはMMの患者におけるペムブロリズマブと組み合わせたTIL療法。以前に治療を受けた場合、患者は、最近の治療中または治療後にX線写真で進行が記録されていなければならない。
コホート2A:免疫療法を除く3つ以下の以前の全身療法を伴う、進行性、再発性、または転移性のHNSCC(例えば、ステージT1N1-N2B、T2-4N0-N2b)の患者におけるペムブロリズマブと組み合わせたTIL療法。以前に治療を受けた場合、患者は、最近の治療中または治療後にX線写真で進行が記録されていなければならない。
コホート3A:免疫療法を除く3つ以下の以前の全身療法を伴う、局所進行性または転移性(ステージIII~IV)NSCLC患者におけるペムブロリズマブと組み合わせたTIL療法。以前に治療を受けた場合、患者は、最近の治療中または治療後にX線写真で進行が記録されていなければならない。
コホート3B:3つ以下の以前の全身療法の一部として、CPI(例えば、抗PD-1/抗PD-L1)による全身療法を以前に受けたことがあるステージIIIまたはステージIVのNSCLC患者における単剤としてのTIL療法。以前に治療を受けた場合、患者は、最近の治療中または治療後にX線写真で進行が記録されていなければならない。
有効な標的療法が利用可能ながん遺伝子駆動腫瘍を有するコホート3A及び3B(NSCLC)の患者は、少なくとも1つの標的療法を受けていなければならない。
すべての患者は、シクロホスファミド及びフルダラビンからなる非骨髄破壊的リンパ球枯渇(NMA-LD)プレコンディショニングレジメンの前に、自己凍結保存TIL療法(コホートの割り当てに応じて、ペムブロリズマブの有無にかかわらず)を受けた。TIL注入後、最大6回のIVインターロイキン-2(IL-2)の最大用量が投与された。
以下の一般的な研究期間は、特に明記されていない限り、4つのコホートすべてで行われた。
スクリーニング及び腫瘍切除:研究登録から最大4週間(28日)、TIL製品の製造:腫瘍切除からおよそ22日以内、及び以下で考察される治療期間。
治療期間(コホート1A、2A、及び3A):NMA-LD(7日)、TIL注入(1日)、続いてIL-2投与(1~4日)を含む最大2年。患者は、TIL産生のための腫瘍切除及びベースライン走査の完了後であるが、NMA-LDレジメンの開始前にペムブロリズマブの単回注入を受ける。ペムブロリズマブの次の用量は、IL-2の完了後以降であり、その後2年(24ヶ月)以内または疾患の進行もしくは許容できない毒性のいずれか早い方までQ3W±3日間継続する。治療終了(EOT)来院は、ペムブロリズマブの最後の用量後30日以内に起こった。該当する場合、この来院は評価終了(EOA)来院と組み合わされ得る(例えば、ペムブロリズマブの中止は、疾患の進行時または新しい抗がん療法の開始時に起こった)。
治療期間(コホート3B):NMA-LD(7日)、TIL、注入(1日)、続いてIL-2投与(1~4日)を含む最大12日。EOT来院は、患者がIL-2の最後の用量を受けたときに起こった。EOT来院は、治療中止後30日以内に行われ、評価期間中にこの間隔内に起こる予定の任意の来院と組み合わせることができる。
評価期間:0日目のTIL注入後に開始し、疾患の進行時に終了し、新しい抗がん療法の開始、研究評価への同意の部分的撤回、または5年(60ヶ月)のいずれか早い方。患者が疾患の進行に達するか、または新しい抗がん療法を開始すると、評価終了(EOA)来院が起こった。
本明細書に記載されるように調製されたTILを用いたTIL自己療法は、以下のステップから構成されていた。
1.TIL細胞製品の供給源として機能する自己組織を提供するための腫瘍切除。
2.中央の適正製造基準(GMP)施設で産生されたTIL製品。
3.7日間のNMA-LDプレコンディショニングレジメン。
4.コホート1A、2A、及び3A:患者は、TIL産生のための腫瘍切除及びベースライン走査の完了後であるが、NMA-LDレジメンの開始前にペムブロリズマブの単回注入を受ける。ペムブロリズマブの次の用量は、IL-2の完了後以降であり、その後Q3W±3日継続する。
5.自己TIL製品の注入(0日目)、ならびに
6.最大6用量までのIV IL-2投与。
1.TIL細胞製品の供給源として機能する自己組織を提供するための腫瘍切除。
2.中央の適正製造基準(GMP)施設で産生されたTIL製品。
3.7日間のNMA-LDプレコンディショニングレジメン。
4.コホート1A、2A、及び3A:患者は、TIL産生のための腫瘍切除及びベースライン走査の完了後であるが、NMA-LDレジメンの開始前にペムブロリズマブの単回注入を受ける。ペムブロリズマブの次の用量は、IL-2の完了後以降であり、その後Q3W±3日継続する。
5.自己TIL製品の注入(0日目)、ならびに
6.最大6用量までのIV IL-2投与。
コホート1A、2A、及び3Aでは、ペムブロリズマブの次の用量は、IL-2の完了後以降であり、その後2年(24ヶ月)以内または疾患の進行もしくは許容できない毒性のいずれか早い方までQ3W±3日間継続する。
コホート1A、2A、及び3Aのフローチャートは、図7に見出すことができる。コホート3Bのフローチャートは、図8に見出すことができる。患者は、腫瘍の適応によって適切なコホートに割り当てられた。
TIL療法+ペムブロリズマブ(コホート1A、2A、及び3A)
患者はスクリーニングされ、腫瘍切除のための手術が予定された。その後、患者は1つ以上の腫瘍病変を切除し、TIL産生のために中央製造施設に送られた。
患者はスクリーニングされ、腫瘍切除のための手術が予定された。その後、患者は1つ以上の腫瘍病変を切除し、TIL産生のために中央製造施設に送られた。
次に、NMA-LDレジメンは模倣され、-7日目及び-6日目にメスナ(部位当たりの標準治療またはUSPI/SmPC)を含む2日間のIVシクロホスファミド(60mg/kg)、ならびにその後5日間のIVフルダラビン(25mg/m2:-5日目~-1日目)で構成された。
コホート1A、2A、及び3Aの患者は、TIL産生のために腫瘍切除の完了後にペムブロリズマブの単回注入を受け、NMA-LDレジメンの開始前にベースライン走査を受けた。600,000IU/kgの用量でIVでのIL-2投与は、0日目のTIL注入の完了の3時間後、ただし24時間後までに開始された。追加のIL-2投与は、最大6用量まで、およそ8~12時間毎に行われる。ペムブロリズマブの第2の用量は、IL-2の完了後以降であった。患者は、第2のペムブロリズマブ投与前に、すべてのIL-2関連毒性(グレード≦2)から回復している必要がある。ペムブロリズマブは、その後2年以内(24ヶ月)または疾患の進行もしくは許容できない毒性のいずれか早い方まで、Q3W±3日間継続する。
単剤としてのTIL療法(コホート3B)
患者はスクリーニングされ、腫瘍切除のための手術が予定された。その後、患者は1つ以上の腫瘍病変を切除し、TIL産生のために中央製造施設に送られた。
患者はスクリーニングされ、腫瘍切除のための手術が予定された。その後、患者は1つ以上の腫瘍病変を切除し、TIL産生のために中央製造施設に送られた。
次に、NMA-LDレジメンは、-7日目及び-6日目にメスナ(部位当たりの標準治療またはUSPI/SmPC)を含む2日間のIVシクロホスファミド(60mg/kg)、ならびにその後5日間のIVフルダラビン(25mg/m2:-5日目~-1日目)で構成された。
腫瘍由来の自己TIL製品の注入は、フルダラビンの最後の用量から24時間以内に起こった。600,000IU/kgの用量でIVでのIL-2投与は、TIL注入の完了後3時間後、ただし24時間後までに開始された可能性がある。
追加のIL-2投与は、最大6用量まで、およそ8~12時間毎に行われた。
腫瘍浸潤リンパ球の産生及び拡張
TIL自己細胞製品は、患者の腫瘍/病変に由来する生存可能な細胞傷害性Tリンパ球で構成されており、中央のGMP施設でエクスビボで製造される。例えば、TIL産生プロセスを示す例示的なフロー図を図9に示す。
TIL自己細胞製品は、患者の腫瘍/病変に由来する生存可能な細胞傷害性Tリンパ球で構成されており、中央のGMP施設でエクスビボで製造される。例えば、TIL産生プロセスを示す例示的なフロー図を図9に示す。
TIL製造プロセスは、個々の患者毎に直径1.5cm以上の原発性または続発性転移性腫瘍病変(複数可)を外科的に切除した後に臨床現場で開始された。様々な解剖学的位置からの複数の腫瘍病変を切除して、腫瘍組織の全凝集体をまとめることができるが、輸送ボトルに存在する生体保存培地の量が限られているため、凝集体は、直径4.0cm、または重量10gを超えてはならない。
腫瘍病変(複数可)が生体保存輸送ボトルに入れられると、それは中央のGMP製造施設への速達宅配便を使用して2℃~8℃で出荷される。到着時に、腫瘍標本(複数可)を断片に解剖し、その後、ヒト組換えIL-2を用いたプレ急速拡張プロトコル(Pre-REP)において約11日間培養した。
次いで、これらのREP前細胞を、IL-2、OKT3([ムロモナブ-CD3]としても知られるヒトCD3に対するマウスモノクローナル抗体)、及びフィーダー細胞としての照射された同種異系末梢血単核細胞(PBMC)の存在下で11日間、急速拡張プロトコル(REP)を使用してさらに拡張した。
次いで、拡張した細胞を採取し、洗浄し、配合し、凍結保存し、速達宅配便で臨床現場に出荷した。TIL細胞製品の剤形は、TILが由来する患者への注入の準備ができている凍結保存された自己の「生細胞懸濁液」であった。患者は、製品仕様当たり1×109~150×109生細胞の間に含まれる、製造及び放出された製品の全用量を受容することとした。臨床経験は、客観的な腫瘍応答がこの用量範囲全体で達成されたことを示し、これも安全であることが示されている(Radvanyi L.G.,et al.,Clin Cancer Res.2012;18(24):6758-70)。製品の全用量は、最大4つの注入バッグで提供された。
TIL細胞製品を受容する患者の準備
この研究で使用されたNMA-LDプレコンディショニングレジメン(すなわち、2日間のシクロホスファミド及びメスナ、続いて5日間のフルダラビン)は、国立癌研究所によって開発及び試験された方法に基づいていた(Rosenberg S.A.,et al.,Clin Cancer Res.2011;17(13):4550-7、Radvanyi L.G.,et al.,Clin Cancer Res.2012;18(24):6758-70、Dudley M.E.,et al.,J Clin Oncol.2008;26(32):5233-9、Pilon-Thomas S,et al.,J Immunother.2012;35(8):615-20、Dudley M.E.,et al.,J Clin Oncol.2005;23(10):2346-57、及びDudley M.E.,et al.,Science.2002;298(5594):850-4)。7日間のプレコンディショニングレジメンに続いて、患者にTIL細胞製品を注入した。
この研究で使用されたNMA-LDプレコンディショニングレジメン(すなわち、2日間のシクロホスファミド及びメスナ、続いて5日間のフルダラビン)は、国立癌研究所によって開発及び試験された方法に基づいていた(Rosenberg S.A.,et al.,Clin Cancer Res.2011;17(13):4550-7、Radvanyi L.G.,et al.,Clin Cancer Res.2012;18(24):6758-70、Dudley M.E.,et al.,J Clin Oncol.2008;26(32):5233-9、Pilon-Thomas S,et al.,J Immunother.2012;35(8):615-20、Dudley M.E.,et al.,J Clin Oncol.2005;23(10):2346-57、及びDudley M.E.,et al.,Science.2002;298(5594):850-4)。7日間のプレコンディショニングレジメンに続いて、患者にTIL細胞製品を注入した。
TIL注入後、8~12時間毎にIV IL-2(600,000IU/kg)を投与し、最初の用量は、TIL注入の完了後3~24時間の間に投与し、最大6回まで継続した。施設の基準に従って、IL-2の用量は、実際の体重に基づいて計算することができる。
患者集団の選択
コホート1A:
患者は、切除不能なMMの確定診断を受けた(ステージIIICまたはステージIV、米国癌合同委員会[AJCC]病期分類システムに従って組織学的に確認された)。眼内黒色腫患者は除外された。患者は、以前に免疫腫瘍学を標的とした薬剤を受けていてはならない。BRAF変異が陽性の場合、患者は、以前にBRAF/MEK標的療法を受けていた可能性があった。
コホート1A:
患者は、切除不能なMMの確定診断を受けた(ステージIIICまたはステージIV、米国癌合同委員会[AJCC]病期分類システムに従って組織学的に確認された)。眼内黒色腫患者は除外された。患者は、以前に免疫腫瘍学を標的とした薬剤を受けていてはならない。BRAF変異が陽性の場合、患者は、以前にBRAF/MEK標的療法を受けていた可能性があった。
コホート2A:
患者は、進行性、再発性、及び/または転移性のHNSCCを有しており、治療ナイーブであり得、病理学レポートを介した原発腫瘍の組織学的診断が必要である。患者は、以前に免疫療法レジメンを受けていてはならない。
患者は、進行性、再発性、及び/または転移性のHNSCCを有しており、治療ナイーブであり得、病理学レポートを介した原発腫瘍の組織学的診断が必要である。患者は、以前に免疫療法レジメンを受けていてはならない。
コホート3A:
患者は、ステージIIIまたはステージIVのNSCLC(扁平上皮癌、腺癌、大細胞癌)の確定診断を受けた。有効な標的療法が利用可能ながん遺伝子駆動腫瘍を有する患者は、少なくとも1つの標的療法を受けていた。
患者は、ステージIIIまたはステージIVのNSCLC(扁平上皮癌、腺癌、大細胞癌)の確定診断を受けた。有効な標的療法が利用可能ながん遺伝子駆動腫瘍を有する患者は、少なくとも1つの標的療法を受けていた。
コホート3B:
患者は、ステージIIIまたはステージIVのNSCLC(扁平上皮癌、腺癌、大細胞癌)の確定診断を受けており、以前にCPI(例えば、抗PD-1/抗PD-L1)による全身療法を受けていた。有効な標的療法が利用可能ながん遺伝子駆動腫瘍を有する患者は、少なくとも1つの標的療法を受けていた。
患者は、ステージIIIまたはステージIVのNSCLC(扁平上皮癌、腺癌、大細胞癌)の確定診断を受けており、以前にCPI(例えば、抗PD-1/抗PD-L1)による全身療法を受けていた。有効な標的療法が利用可能ながん遺伝子駆動腫瘍を有する患者は、少なくとも1つの標的療法を受けていた。
コホート1A、2A、及び3Aの免疫療法を除き、すべての患者は、最大3つの全身抗がん療法を受けていた(以下の包含基準を参照)。以前に治療を受けた場合、患者は、最近の治療中または治療後にX線写真で進行が確認されていた。
包含基準
患者は、研究に参加するために以下の包含基準をすべて満たしている必要がある。
1.すべての患者は、組織学的または病理学的にそれぞれの組織学的悪性腫瘍の確定診断を受けた。
○切除不能または転移性黒色腫(コホート1A)
○頭頸部の進行性、再発性、または転移性扁平上皮癌(コホート2A)
○ステージIIIまたはステージIVのNSCLC(扁平上皮癌、非扁平上皮癌、腺癌、大細胞癌)(コホート3A及び3B)。
2.コホート1A、2A、及び3Aのみ:患者は、免疫療法ナイーブであった。以前に治療された場合、患者は、最近の治療中または治療後に進行していた。コホート1A、2A、及び3Aは、最大3つの全身性抗がん療法を以前に受けている可能性があり、具体的には以下の通りである。
〇コホート1Aにおいて:切除不能または転移性黒色腫(ステージIIICまたはステージIV)を有する患者。BRAF変異陽性の場合、患者は、BRAF阻害剤を投与されている可能性がある。
〇コホート2Aにおいて:切除不能または転移性HNSCCの患者。最初の化学放射線療法を受けていた患者は許可された。
〇コホート3Aにおいて:ステージIIIまたはステージIVのNSCLC(扁平上皮癌、非扁平上皮癌、腺癌、または大細胞癌)を有し、免疫療法ナイーブであり、局所進行または転移の状況で3つ以下の以前の全身療法後に進行した患者。アジュバントもしくはネオアジュバントの設定で、または根治的化学放射線療法の一部として全身療法を受けた患者は適格であり、以前の全身療法の完了から12ヶ月以内に疾患が進行した場合、1つの治療を受けたとみなされた。標的療法に感受性のある変異を有する既知のがん遺伝子ドライバー(例えば、EGFR、ALK、ROS)を有する患者は、少なくとも1つの標的療法の後に進行したに違いない。
3.コホート3Bのみ:ステージIIIまたはステージIVのNSCLC(扁平上皮癌、非扁平上皮癌、腺癌、または大細胞癌)を有し、3つ以下の以前の全身療法の一部として、CPI(例えば、抗PD-1/抗PD-L1)による全身療法を以前に受けていた患者。
○患者は、最近の治療中または治療後にX線写真で進行が確認されていた。
○アジュバントもしくはネオアジュバントの設定で、または根治的化学放射線療法の一部として全身療法を受けた患者は適格であり、以前の全身療法の完了から12ヶ月以内に疾患が進行していた場合、1つの治療を受けたとみなされた。
○標的療法に感受性のある変異を有する既知のがん遺伝子ドライバー(例えば、EGFR、ALK、ROS)を有する患者は、少なくとも1つの標的療法の後に進行したに違いない。
4.患者は、TIL治験薬産生のために、切除後に最少直径1.5cmの切除可能な病変(または凝集病変)を少なくとも1つ有していた。外科的切除が患者に追加のリスクをもたらさない限り、腫瘍組織を、複数の多様な転移性病変から得ることが奨励された。
○TIL生成のために切除が検討されている病変が、以前に照射された領域内にある場合、その病変は、切除前にX線写真で進行を示している必要がある。
○患者は、プロトコルが必要とする検査に適正な組織病理標本を有していなければならない。
5.患者は、TIL製造の腫瘍切除の後に、標準かつ周知のRECIST1.1ガイドラインによって定義されているように、残留する測定可能な疾患を有していた(例えば、Eisenhauer,European Journal of Cancer 45:228-247(2009)を参照、www.project.eortc.org/recist/wp-content/uploads/sites/4/2015/03/RECISTGuidelines.pdfでも入手可能)。
○以前に照射された領域内の病変は、それらの病変で疾患の進行が示されていない限り、標的病変として選択されなかった。
○RECIST毎に依然として測定可能なTIL生成のために部分的に切除された病変を、非標的病変として選択することができるが、応答評価の標的病変としては機能することができなかった。
6.患者は、同意時に18歳以上であった。
7.患者の米国東海岸癌臨床試験グループ(Eastern Cooperative Oncology Group、ECOG)のパフォーマンスステータスは0または1であり、推定平均余命は3ヶ月以上であった。
8.妊娠可能性のある患者または妊娠可能性のあるパートナーがいる患者は、治療中に承認された非常に効果的な避妊方法を実践し、すべてのプロトコル関連療法を受けてから12ヶ月間継続しなければならなかった(注記:生殖可能性のある女性は、治療中及びIL-2の最後の投与後12ヶ月間、またはペムブロリズマブの最後の投与後4ヶ月間のいずれか遅い時期に有効な避妊法を使用することとした)。男性は、研究中または治療中止後12ヶ月のいずれか遅い方で、精子を提供することができなかった。
9.患者は、以下の血液学的パラメータを有していた:
○絶対好中球数(ANC)≧1000/mm3、
○ヘモグロビン≧9.0g/dL、
〇血小板数≧100,000/mm3。
10.患者は、適正な臓器機能を有していた:
○血清アラニンアミノトランスフェラーゼ(ALT)/血清グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ(SGPT)及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ(AST)/SGOTが、正常上限(ULN)の3倍以下、肝転移がULNの5倍以下の患者。
○スクリーニング時にコッククロフト・ゴールト式を使用して推定されたクレアチニンクリアランス≧40mL/分。
〇総ビリルビン≦2mg/dL。
○ジルベール症候群の患者は、総ビリルビン≦3mg/dLでなければならない。
11.患者は、ヒト免疫不全ウイルス(HIV1及びHIV2)に対して血清陰性であった。B型肝炎ウイルス表面抗原(HBsAg)、B型肝炎コア抗体(抗HBc)、または急性もしくは慢性感染を示すC型肝炎ウイルス(抗HCV)の血清学が陽性の患者は、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)に基づくウイルス量及び特定のウイルス曝露の局所有病率に応じて登録した。
12.患者は、最初の試験治療(すなわち、NMA-LDまたはペムブロリズマブの開始)の前に、以下に詳述されるように、最小期間の以前の抗がん療法(複数可)からのウォッシュアウト期間を有していた。
○標的療法:ウォッシュアウトが治療の開始の最低14日前であれば、上皮成長因子受容体(EGFR)、MEK、BRAF、ALK、ROS1または他の標的薬剤(例えば、エルロチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、オシメルチニブ、クリゾチニブ、セリチニブ、ロラチニブ)による以前の標的療法が許可された。
○化学療法:ウォッシュアウトが治療開始の最低21日前であれば、アジュバント、ネオアジュバント、または根治的化学療法/化学放射線療法が許可された。
○コホート3Bのみの免疫療法、抗PD-1、他のmAb、またはワクチンによる以前のチェックポイント標的療法は、NMA-LDの開始前21日以上のウォッシュアウト期間で許可された。
○緩和的放射線療法:脱毛症、皮膚色素沈着の変化、または他の臨床的に重要でない事象、例えば小領域放射線皮膚炎または直腸もしくは尿意切迫感を除いて、すべての放射線関連毒性がグレード1またはベースラインに解決された場合、以前の外部ビーム放射線療法が許可された
○RECIST1.1を介して応答のターゲットとして評価されている腫瘍病変(複数可)は、放射線ポータルの外側にあったが、ポータル内の場合は、進行が実証されていなければならない(上記の包含基準を参照)。
○手術/事前に計画された手順:創傷治癒が起こり、すべての合併症が解消され、腫瘍切除の前に少なくとも14日が経過している場合(主要な手術手順の場合)、以前の外科的手順(複数可)が許可された。
13.患者は、コホートの割り当て前に、脱毛症または白斑を除いて、以前のすべての抗がん治療関連有害事象(TRAE)からグレード1以下(有害事象の一般用語基準[CTCAE]による)に回復していた。
14.以前の抗がん療法から安定したグレード2以上の毒性を有する患者は、医療モニターと相談した後、ケースバイケースで検討された。
15.ペムブロリズマブによる治療によって悪化すると合理的に予想されない不可逆的毒性を有するコホート1A、2A、及び3Aの患者は、医療モニターとの協議後にのみ含まれた。コホート3Bの患者のみ、免疫チェックポイント阻害剤CPI(複数可)による以前の治療の結果として、グレード2以上の下痢または大腸炎が記録されている患者は、少なくとも6ヶ月間無症候性であったか、または治療後腫瘍切除前の目視評価による結腸内視鏡検査で正常でなければならない。
16.患者は、保護された健康情報の使用及び開示について、書面による承認を提供していなければならない。
患者は、研究に参加するために以下の包含基準をすべて満たしている必要がある。
1.すべての患者は、組織学的または病理学的にそれぞれの組織学的悪性腫瘍の確定診断を受けた。
○切除不能または転移性黒色腫(コホート1A)
○頭頸部の進行性、再発性、または転移性扁平上皮癌(コホート2A)
○ステージIIIまたはステージIVのNSCLC(扁平上皮癌、非扁平上皮癌、腺癌、大細胞癌)(コホート3A及び3B)。
2.コホート1A、2A、及び3Aのみ:患者は、免疫療法ナイーブであった。以前に治療された場合、患者は、最近の治療中または治療後に進行していた。コホート1A、2A、及び3Aは、最大3つの全身性抗がん療法を以前に受けている可能性があり、具体的には以下の通りである。
〇コホート1Aにおいて:切除不能または転移性黒色腫(ステージIIICまたはステージIV)を有する患者。BRAF変異陽性の場合、患者は、BRAF阻害剤を投与されている可能性がある。
〇コホート2Aにおいて:切除不能または転移性HNSCCの患者。最初の化学放射線療法を受けていた患者は許可された。
〇コホート3Aにおいて:ステージIIIまたはステージIVのNSCLC(扁平上皮癌、非扁平上皮癌、腺癌、または大細胞癌)を有し、免疫療法ナイーブであり、局所進行または転移の状況で3つ以下の以前の全身療法後に進行した患者。アジュバントもしくはネオアジュバントの設定で、または根治的化学放射線療法の一部として全身療法を受けた患者は適格であり、以前の全身療法の完了から12ヶ月以内に疾患が進行した場合、1つの治療を受けたとみなされた。標的療法に感受性のある変異を有する既知のがん遺伝子ドライバー(例えば、EGFR、ALK、ROS)を有する患者は、少なくとも1つの標的療法の後に進行したに違いない。
3.コホート3Bのみ:ステージIIIまたはステージIVのNSCLC(扁平上皮癌、非扁平上皮癌、腺癌、または大細胞癌)を有し、3つ以下の以前の全身療法の一部として、CPI(例えば、抗PD-1/抗PD-L1)による全身療法を以前に受けていた患者。
○患者は、最近の治療中または治療後にX線写真で進行が確認されていた。
○アジュバントもしくはネオアジュバントの設定で、または根治的化学放射線療法の一部として全身療法を受けた患者は適格であり、以前の全身療法の完了から12ヶ月以内に疾患が進行していた場合、1つの治療を受けたとみなされた。
○標的療法に感受性のある変異を有する既知のがん遺伝子ドライバー(例えば、EGFR、ALK、ROS)を有する患者は、少なくとも1つの標的療法の後に進行したに違いない。
4.患者は、TIL治験薬産生のために、切除後に最少直径1.5cmの切除可能な病変(または凝集病変)を少なくとも1つ有していた。外科的切除が患者に追加のリスクをもたらさない限り、腫瘍組織を、複数の多様な転移性病変から得ることが奨励された。
○TIL生成のために切除が検討されている病変が、以前に照射された領域内にある場合、その病変は、切除前にX線写真で進行を示している必要がある。
○患者は、プロトコルが必要とする検査に適正な組織病理標本を有していなければならない。
5.患者は、TIL製造の腫瘍切除の後に、標準かつ周知のRECIST1.1ガイドラインによって定義されているように、残留する測定可能な疾患を有していた(例えば、Eisenhauer,European Journal of Cancer 45:228-247(2009)を参照、www.project.eortc.org/recist/wp-content/uploads/sites/4/2015/03/RECISTGuidelines.pdfでも入手可能)。
○以前に照射された領域内の病変は、それらの病変で疾患の進行が示されていない限り、標的病変として選択されなかった。
○RECIST毎に依然として測定可能なTIL生成のために部分的に切除された病変を、非標的病変として選択することができるが、応答評価の標的病変としては機能することができなかった。
6.患者は、同意時に18歳以上であった。
7.患者の米国東海岸癌臨床試験グループ(Eastern Cooperative Oncology Group、ECOG)のパフォーマンスステータスは0または1であり、推定平均余命は3ヶ月以上であった。
8.妊娠可能性のある患者または妊娠可能性のあるパートナーがいる患者は、治療中に承認された非常に効果的な避妊方法を実践し、すべてのプロトコル関連療法を受けてから12ヶ月間継続しなければならなかった(注記:生殖可能性のある女性は、治療中及びIL-2の最後の投与後12ヶ月間、またはペムブロリズマブの最後の投与後4ヶ月間のいずれか遅い時期に有効な避妊法を使用することとした)。男性は、研究中または治療中止後12ヶ月のいずれか遅い方で、精子を提供することができなかった。
9.患者は、以下の血液学的パラメータを有していた:
○絶対好中球数(ANC)≧1000/mm3、
○ヘモグロビン≧9.0g/dL、
〇血小板数≧100,000/mm3。
10.患者は、適正な臓器機能を有していた:
○血清アラニンアミノトランスフェラーゼ(ALT)/血清グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ(SGPT)及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ(AST)/SGOTが、正常上限(ULN)の3倍以下、肝転移がULNの5倍以下の患者。
○スクリーニング時にコッククロフト・ゴールト式を使用して推定されたクレアチニンクリアランス≧40mL/分。
〇総ビリルビン≦2mg/dL。
○ジルベール症候群の患者は、総ビリルビン≦3mg/dLでなければならない。
11.患者は、ヒト免疫不全ウイルス(HIV1及びHIV2)に対して血清陰性であった。B型肝炎ウイルス表面抗原(HBsAg)、B型肝炎コア抗体(抗HBc)、または急性もしくは慢性感染を示すC型肝炎ウイルス(抗HCV)の血清学が陽性の患者は、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)に基づくウイルス量及び特定のウイルス曝露の局所有病率に応じて登録した。
12.患者は、最初の試験治療(すなわち、NMA-LDまたはペムブロリズマブの開始)の前に、以下に詳述されるように、最小期間の以前の抗がん療法(複数可)からのウォッシュアウト期間を有していた。
○標的療法:ウォッシュアウトが治療の開始の最低14日前であれば、上皮成長因子受容体(EGFR)、MEK、BRAF、ALK、ROS1または他の標的薬剤(例えば、エルロチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、オシメルチニブ、クリゾチニブ、セリチニブ、ロラチニブ)による以前の標的療法が許可された。
○化学療法:ウォッシュアウトが治療開始の最低21日前であれば、アジュバント、ネオアジュバント、または根治的化学療法/化学放射線療法が許可された。
○コホート3Bのみの免疫療法、抗PD-1、他のmAb、またはワクチンによる以前のチェックポイント標的療法は、NMA-LDの開始前21日以上のウォッシュアウト期間で許可された。
○緩和的放射線療法:脱毛症、皮膚色素沈着の変化、または他の臨床的に重要でない事象、例えば小領域放射線皮膚炎または直腸もしくは尿意切迫感を除いて、すべての放射線関連毒性がグレード1またはベースラインに解決された場合、以前の外部ビーム放射線療法が許可された
○RECIST1.1を介して応答のターゲットとして評価されている腫瘍病変(複数可)は、放射線ポータルの外側にあったが、ポータル内の場合は、進行が実証されていなければならない(上記の包含基準を参照)。
○手術/事前に計画された手順:創傷治癒が起こり、すべての合併症が解消され、腫瘍切除の前に少なくとも14日が経過している場合(主要な手術手順の場合)、以前の外科的手順(複数可)が許可された。
13.患者は、コホートの割り当て前に、脱毛症または白斑を除いて、以前のすべての抗がん治療関連有害事象(TRAE)からグレード1以下(有害事象の一般用語基準[CTCAE]による)に回復していた。
14.以前の抗がん療法から安定したグレード2以上の毒性を有する患者は、医療モニターと相談した後、ケースバイケースで検討された。
15.ペムブロリズマブによる治療によって悪化すると合理的に予想されない不可逆的毒性を有するコホート1A、2A、及び3Aの患者は、医療モニターとの協議後にのみ含まれた。コホート3Bの患者のみ、免疫チェックポイント阻害剤CPI(複数可)による以前の治療の結果として、グレード2以上の下痢または大腸炎が記録されている患者は、少なくとも6ヶ月間無症候性であったか、または治療後腫瘍切除前の目視評価による結腸内視鏡検査で正常でなければならない。
16.患者は、保護された健康情報の使用及び開示について、書面による承認を提供していなければならない。
除外基準
以下の基準のうちのいずれかを満たす患者は、研究から除外した。
1.ブドウ膜/眼起源の黒色腫を有する患者
2.過去20年以内に非骨髄破壊的または骨髄破壊的化学療法レジメンを含む、臓器同種移植または以前の細胞移植療法を受けていた患者。(注記:この基準は、以前のTIL治療で以前のNMA-LDレジメンがあったことを除いて、TILによる再治療を受けている患者に適用可能であった。)
3.症候性及び/または未治療の脳転移を有する患者。
○・脳転移が確実に治療された患者は、
医療モニターと相談した後、治療の開始前に患者が
2週間以上臨床的に安定しており、治療後の磁気共鳴
画像法(MRI)による新しい脳病変がなく、患者が継続する
コルチコステロイド治療を必要としない場合に登録が検討される。
4.登録から21日以内に全身ステロイド療法を受けている患者。
5.妊娠中または授乳中の患者。
6.治験責任医師の意見では、研究参加のリスクが高い、活動性の医学的疾患(複数可)、例えば全身性感染症(例えば、梅毒もしくは抗生物質を必要とする他の感染症)、凝固障害、または心臓血管系、呼吸器系、もしくは免疫系の他の活動性の主要な医学的疾患を有していた患者。
7.患者は、活動性または以前に記録された自己免疫または炎症性障害(肺炎、炎症性腸疾患[例えば、大腸炎もしくはクローン病]、憩室炎[憩室症を除く]、全身性紅斑性狼瘡、サルコイドーシス症候群、またはウェゲナー症候群[多発血管炎を伴う肉芽腫症、グレイブス病、関節リウマチ、下垂体炎、ブドウ膜炎等])を有しない場合がある。以下は、この基準の例外であった。
○白斑または脱毛症を有する患者。
○甲状腺機能低下症(例えば、橋本症候群に続く)が安定している患者
○ホルモン補充療法。
○全身療法を必要としない任意の慢性皮膚疾患。
○食事療法だけで制御されるセリアック病の患者。
8.治療開始前28日以内に生ワクチン接種または弱毒化ワクチン接種を受けていた患者。
9.何らかの形態の原発性免疫不全症(重症複合免疫不全症[SCID]及び後天性免疫不全症候群[AIDS]など)を有していた患者。
10.治験薬のいずれかの成分に対する過敏症の病歴を有する患者。TILは、以下のうちのいずれかを含むがこれらに限定されない、TIL製品製剤のいずれかの成分に対する既知の過敏症を有する患者には投与されなかった。
○・NMA-LD(シクロホスファミド、メスナ、及びフルダラビン)
〇・プロロイキン(登録商標)、アルデスロイキン、IL-2
○・アミノグリコシド系抗生物質(すなわち、ストレプトマイシン、ゲンタマイシン[ゲンタマイシン過敏症の皮膚検査陰性者を除く])
○・ジメチルスルホキシドを含むTIL製品製剤の任意の成分
○[DMSO]、HSA、IL-2、及びデキストラン-40
〇・ペムブロリズマブ
11.左心室駆出率(LVEF)が45%未満の患者、またはニューヨーク心臓協会クラスII以上の患者。60歳以上の患者、あるいは虚血性心疾患、胸痛、または臨床的に重大な心房性及び/または心室性不整脈の病歴のある患者において、不可逆的な壁運動異常を示す心臓ストレス試験。
○治験依頼者の医療モニターの承認を得て、駆出率及び心臓病クリアランスが十分であれば、心臓ストレス試験に異常がある患者を登録することができた。
12.閉塞性または拘束性肺疾患があり、予測正常値の60%以下のFEV1(1秒の強制呼気量)が記録されている患者。
○・患者が上気道の解剖学的構造の異常(すなわち、気管切開)のために信頼できる肺活量測定を行うことができなかった場合は、6分間の歩行試験を使用して呼吸機能を評価した。年齢及び性別に対して予測される少なくとも80%の距離を歩くことができなかった患者、または試験中の任意の時点で低酸素症の証拠を示した患者(SpO2<90%)は除外される。
13.過去3年以内に別の原発性悪性腫瘍があった患者(治療を必要としなかった、または1年以上前に治癒的に治療された患者を除き、治験責任医師の判断では、非黒色腫皮膚癌、DCIS、LCIS、前立腺癌グリーソンスコア≦6または膀胱癌を含むが、これらに限定されない重大な再発リスクをもたらさなかった)。
14.治療開始から21日以内に治験薬を用いた別の臨床試験への参加。
以下の基準のうちのいずれかを満たす患者は、研究から除外した。
1.ブドウ膜/眼起源の黒色腫を有する患者
2.過去20年以内に非骨髄破壊的または骨髄破壊的化学療法レジメンを含む、臓器同種移植または以前の細胞移植療法を受けていた患者。(注記:この基準は、以前のTIL治療で以前のNMA-LDレジメンがあったことを除いて、TILによる再治療を受けている患者に適用可能であった。)
3.症候性及び/または未治療の脳転移を有する患者。
○・脳転移が確実に治療された患者は、
医療モニターと相談した後、治療の開始前に患者が
2週間以上臨床的に安定しており、治療後の磁気共鳴
画像法(MRI)による新しい脳病変がなく、患者が継続する
コルチコステロイド治療を必要としない場合に登録が検討される。
4.登録から21日以内に全身ステロイド療法を受けている患者。
5.妊娠中または授乳中の患者。
6.治験責任医師の意見では、研究参加のリスクが高い、活動性の医学的疾患(複数可)、例えば全身性感染症(例えば、梅毒もしくは抗生物質を必要とする他の感染症)、凝固障害、または心臓血管系、呼吸器系、もしくは免疫系の他の活動性の主要な医学的疾患を有していた患者。
7.患者は、活動性または以前に記録された自己免疫または炎症性障害(肺炎、炎症性腸疾患[例えば、大腸炎もしくはクローン病]、憩室炎[憩室症を除く]、全身性紅斑性狼瘡、サルコイドーシス症候群、またはウェゲナー症候群[多発血管炎を伴う肉芽腫症、グレイブス病、関節リウマチ、下垂体炎、ブドウ膜炎等])を有しない場合がある。以下は、この基準の例外であった。
○白斑または脱毛症を有する患者。
○甲状腺機能低下症(例えば、橋本症候群に続く)が安定している患者
○ホルモン補充療法。
○全身療法を必要としない任意の慢性皮膚疾患。
○食事療法だけで制御されるセリアック病の患者。
8.治療開始前28日以内に生ワクチン接種または弱毒化ワクチン接種を受けていた患者。
9.何らかの形態の原発性免疫不全症(重症複合免疫不全症[SCID]及び後天性免疫不全症候群[AIDS]など)を有していた患者。
10.治験薬のいずれかの成分に対する過敏症の病歴を有する患者。TILは、以下のうちのいずれかを含むがこれらに限定されない、TIL製品製剤のいずれかの成分に対する既知の過敏症を有する患者には投与されなかった。
○・NMA-LD(シクロホスファミド、メスナ、及びフルダラビン)
〇・プロロイキン(登録商標)、アルデスロイキン、IL-2
○・アミノグリコシド系抗生物質(すなわち、ストレプトマイシン、ゲンタマイシン[ゲンタマイシン過敏症の皮膚検査陰性者を除く])
○・ジメチルスルホキシドを含むTIL製品製剤の任意の成分
○[DMSO]、HSA、IL-2、及びデキストラン-40
〇・ペムブロリズマブ
11.左心室駆出率(LVEF)が45%未満の患者、またはニューヨーク心臓協会クラスII以上の患者。60歳以上の患者、あるいは虚血性心疾患、胸痛、または臨床的に重大な心房性及び/または心室性不整脈の病歴のある患者において、不可逆的な壁運動異常を示す心臓ストレス試験。
○治験依頼者の医療モニターの承認を得て、駆出率及び心臓病クリアランスが十分であれば、心臓ストレス試験に異常がある患者を登録することができた。
12.閉塞性または拘束性肺疾患があり、予測正常値の60%以下のFEV1(1秒の強制呼気量)が記録されている患者。
○・患者が上気道の解剖学的構造の異常(すなわち、気管切開)のために信頼できる肺活量測定を行うことができなかった場合は、6分間の歩行試験を使用して呼吸機能を評価した。年齢及び性別に対して予測される少なくとも80%の距離を歩くことができなかった患者、または試験中の任意の時点で低酸素症の証拠を示した患者(SpO2<90%)は除外される。
13.過去3年以内に別の原発性悪性腫瘍があった患者(治療を必要としなかった、または1年以上前に治癒的に治療された患者を除き、治験責任医師の判断では、非黒色腫皮膚癌、DCIS、LCIS、前立腺癌グリーソンスコア≦6または膀胱癌を含むが、これらに限定されない重大な再発リスクをもたらさなかった)。
14.治療開始から21日以内に治験薬を用いた別の臨床試験への参加。
研究エンドポイント及び計画された分析
一次エンドポイント及び二次エンドポイントは、コホートによって別々に分析した。
一次エンドポイント及び二次エンドポイントは、コホートによって別々に分析した。
一次エンドポイント:
ORRは、有効性分析セットの中でRECIST1.1に従って治験責任医師が評価した最良の応答として確認されたPRまたはCRのいずれかを達成した患者の割合として定義された。
ORRは、有効性分析セットの中でRECIST1.1に従って治験責任医師が評価した最良の応答として確認されたPRまたはCRのいずれかを達成した患者の割合として定義された。
客観的反応を各疾患評価毎に評価し、ORRは、対応する両側90% CIを用いて二項比率として表された。各コホートの一次分析は、評価期間の早期に進行/期限切れまたは中止されない限り、コホート毎に治療を受けたすべての患者が12ヶ月間追跡される機会があるときに行った。
安全性一次エンドポイントは、各コホート内のグレード3以上のTEAE発生率によって測定され、対応する両側90% CIの二項比率として表された。
二次エンドポイント:
有効性:
二次有効性エンドポイントは、次のように定義された。
有効性:
二次有効性エンドポイントは、次のように定義された。
治験責任医師によって評価された確認済みCRを達成した応答者に基づくCR率。DCRは、確認されたPR/CRまたは持続的なSD(少なくとも6週間)を達成した患者数の合計を、有効性分析セットの患者数で割り、100%を掛けたものとして導き出された。CR率及びDCRは、点推定及びその両側90% CIを使用して要約した。
DORは、客観的な応答を達成した患者の間で定義された。再発性もしくは進行性疾患が客観的に記録された最初の日付、またはその後の抗がん療法の受容もしくは患者の死亡(最初に記録された方)まで、初回応答(PR/CR)基準が満たされていることから測定した。PDを経験していない、またはデータカットもしくは最終データベースロックの時点より前に死亡していない患者は、腫瘍状態の適切な評価が行われた最終日に事象時間が打ち切られる。
PFSは、リンパ球枯渇からPDまでの時間(月単位)、または何らかの原因による死亡のいずれか早い方の事象として定義された。PDを経験していない、またはデータカットもしくは最終データベースロックの時点で死亡していない患者は、腫瘍状態の適切な評価が行われた最終日に事象時間が打ち切られた。
OSは、リンパ球枯渇の時点から何らかの原因による死亡までの時間(月単位)として定義された。データカットまたは最終的なデータベースロックの時点までに死亡していない患者は、既知の生存状態の最終日に事象時間が打ち切られた。
DOR、PFS、及びOSは、右側打ち切りを受けた。カプラン・マイヤー法を使用して、事象までの時間の有効性エンドポイントを要約する。腫瘍評価のベースラインデータは、すべてのコホートのリンパ球枯渇前の最後の走査であった。
上記の有効性パラメータは、ベースラインの疾患特徴:BRAFステータス(コホート1Aのみ)、HPVステータス(コホート2Aのみ)、扁平上皮または非扁平上皮肺疾患(コホート3A及び3Bのみ)、ならびに抗PD-L1ステータスによって定義されたサブセットに適用可能なコホートについて推定される。
実施例14:固形腫瘍を有する患者における自己腫瘍浸潤リンパ球の第2相多施設研究
研究設計
概要
この実施例では、本出願ならびにこの実施例に記載されるように調製されたTILを使用して、TILをペムブロリズマブと組み合わせて、またはTILを単剤療法として使用してACTを評価する、前向き、非盲検、マルチコホート、非ランダム化、多施設第2相試験について説明する。
研究設計
概要
この実施例では、本出願ならびにこの実施例に記載されるように調製されたTILを使用して、TILをペムブロリズマブと組み合わせて、またはTILを単剤療法として使用してACTを評価する、前向き、非盲検、マルチコホート、非ランダム化、多施設第2相試験について説明する。
目的:
一次:
治験責任医師が評価した固形腫瘍の奏効評価基準(RECIST1.1)を使用して、客観的奏効率(ORR)によって決定されるように、MM、HNSCC、もしくはNSCLC患者におけるペムブロリズマブと組み合わせた自己TILの有効性、またはCPIによる治療中もしくは治療後に以前に進行した再発もしくは不応性(r/r)NSCLC患者における単剤療法としてのTILの有効性を評価すること。
一次:
治験責任医師が評価した固形腫瘍の奏効評価基準(RECIST1.1)を使用して、客観的奏効率(ORR)によって決定されるように、MM、HNSCC、もしくはNSCLC患者におけるペムブロリズマブと組み合わせた自己TILの有効性、またはCPIによる治療中もしくは治療後に以前に進行した再発もしくは不応性(r/r)NSCLC患者における単剤療法としてのTILの有効性を評価すること。
グレード3以上の治療下で発現した有害事象(TEAE)の発生率によって測定される、MM、HNSCC、及びNSCLC患者におけるペムブロリズマブと組み合わせたTILの安全性プロファイル、またはr/r NSCLC患者における単剤療法としてのTILの安全性プロファイルを特徴付けること。
二次:
完全奏効(CR)率、奏効期間(DOR)、疾患制御率(DCR)、治験責任医師によって評価されたRECIST1.1を使用した無増悪生存期間(PFS)、及び全生存期間(OS)を使用して、MM、HNSCC、及びNSCLC患者におけるペムブロリズマブと組み合わせた自己TILの有効性、またはr/r NSCLC患者における単剤療法としてのTILの有効性をさらに評価すること。
完全奏効(CR)率、奏効期間(DOR)、疾患制御率(DCR)、治験責任医師によって評価されたRECIST1.1を使用した無増悪生存期間(PFS)、及び全生存期間(OS)を使用して、MM、HNSCC、及びNSCLC患者におけるペムブロリズマブと組み合わせた自己TILの有効性、またはr/r NSCLC患者における単剤療法としてのTILの有効性をさらに評価すること。
コホート:
コホート1A:免疫療法を除く3つ以下の以前の全身療法を伴う、切除不能なステージIIICもしくはステージIV、またはMMの患者におけるペムブロリズマブと組み合わせたTIL療法。以前に治療を受けた場合、患者は、最近の治療中または治療後にX線写真で進行が記録されていなければならない。
コホート1A:免疫療法を除く3つ以下の以前の全身療法を伴う、切除不能なステージIIICもしくはステージIV、またはMMの患者におけるペムブロリズマブと組み合わせたTIL療法。以前に治療を受けた場合、患者は、最近の治療中または治療後にX線写真で進行が記録されていなければならない。
コホート2A:免疫療法を除く3つ以下の以前の全身療法を伴う、進行性、再発性、または転移性のHNSCC(例えば、ステージT1N1-N2B、T2-4N0-N2b)の患者におけるペムブロリズマブと組み合わせたTIL療法。以前に治療を受けた場合、患者は、最近の治療中または治療後にX線写真で進行が記録されていなければならない。
コホート3A:免疫療法を除く3つ以下の以前の全身療法を伴う、局所進行性または転移性(ステージIII~IV)NSCLC患者におけるペムブロリズマブと組み合わせたTIL療法。以前に治療を受けた場合、患者は、最近の治療中または治療後にX線写真で進行が記録されていなければならない。
コホート3B:3つ以下の以前の全身療法の一部として、CPI(例えば、抗PD-1/抗PD-L1)による全身療法を以前に受けたことがあるステージIIIまたはステージIVのNSCLC患者における単剤としてのTIL療法。以前に治療を受けた場合、患者は、最近の治療中または治療後にX線写真で進行が記録されていなければならない。
有効な標的療法が利用可能ながん遺伝子駆動腫瘍を有するコホート3A及び3B(NSCLC)の患者は、少なくとも1つの標的療法を受けていなければならない。
すべての患者は、シクロホスファミド及びフルダラビンからなる非骨髄破壊的リンパ球枯渇(NMA-LD)プレコンディショニングレジメンの前に、自己凍結保存TIL療法(コホートの割り当てに応じて、ペムブロリズマブの有無にかかわらず)を受けた。TIL注入後、最大6回のIVインターロイキン-2(IL-2)の最大用量が投与された。
以下の一般的な研究期間は、特に明記されていない限り、4つのコホートすべてで行われた。
スクリーニング及び腫瘍切除:研究登録から最大4週間(28日)、TIL製品の製造:腫瘍切除からおよそ22日以内、及び以下で考察される治療期間。
治療期間(コホート1A、2A、及び3A):NMA-LD(7日)、TIL注入(1日)、続いてIL-2投与(1~4日)を含む最大2年。患者は、TIL産生のための腫瘍切除及びベースライン走査の完了後であるが、NMA-LDレジメンの開始前にペムブロリズマブの単回注入を受ける。ペムブロリズマブの次の用量は、IL-2の完了後以降であり、その後2年(24ヶ月)以内または疾患の進行もしくは許容できない毒性のいずれか早い方までQ3W±3日間継続する。治療終了(EOT)来院は、ペムブロリズマブの最後の用量後30日以内に起こった。該当する場合、この来院は評価終了(EOA)来院と組み合わされ得る(例えば、ペムブロリズマブの中止は、疾患の進行時または新しい抗がん療法の開始時に起こった)。
治療期間(コホート3B):NMA-LD(7日)、TIL、注入(1日)、続いてIL-2投与(1~4日)を含む最大12日。EOT来院は、患者がIL-2の最後の用量を受けたときに起こった。EOT来院は、治療中止後30日以内に行われ、評価期間中にこの間隔内に起こる予定の任意の来院と組み合わせることができる。
評価期間:0日目のTIL注入後に開始し、疾患の進行時に終了し、新しい抗がん療法の開始、研究評価への同意の部分的撤回、または5年(60ヶ月)のいずれか早い方。患者が疾患の進行に達するか、または新しい抗がん療法を開始すると、評価終了(EOA)来院が起こった。
本明細書に記載されるように調製されたTILを用いたTIL自己療法は、以下のステップから構成されていた。
1.TIL細胞製品の供給源として機能する自己組織を提供するための腫瘍切除。
2.中央の適正製造基準(GMP)施設で産生されたTIL製品。
3.7日間のNMA-LDプレコンディショニングレジメン。
4.コホート1A、2A、及び3A:患者は、TIL産生のための腫瘍切除及びベースライン走査の完了後であるが、NMA-LDレジメンの開始前にペムブロリズマブの単回注入を受ける。ペムブロリズマブの次の用量は、IL-2の完了後以降であり、その後Q3W±3日継続する。
5.自己TIL製品の注入(0日目)、ならびに
6.最大6用量までのIV IL-2投与。
1.TIL細胞製品の供給源として機能する自己組織を提供するための腫瘍切除。
2.中央の適正製造基準(GMP)施設で産生されたTIL製品。
3.7日間のNMA-LDプレコンディショニングレジメン。
4.コホート1A、2A、及び3A:患者は、TIL産生のための腫瘍切除及びベースライン走査の完了後であるが、NMA-LDレジメンの開始前にペムブロリズマブの単回注入を受ける。ペムブロリズマブの次の用量は、IL-2の完了後以降であり、その後Q3W±3日継続する。
5.自己TIL製品の注入(0日目)、ならびに
6.最大6用量までのIV IL-2投与。
コホート1A、2A、及び3Aでは、ペムブロリズマブの次の用量は、IL-2の完了後以降であり、その後2年(24ヶ月)以内または疾患の進行もしくは許容できない毒性のいずれか早い方までQ3W±3日間継続する。
コホート1A、2A、及び3Aのフローチャートは、図7に見出すことができる。コホート3Bのフローチャートは、図8に見出すことができる。患者は、腫瘍の適応によって適切なコホートに割り当てられた。
TIL療法+ペムブロリズマブ(コホート1A、2A、及び3A)
患者はスクリーニングされ、腫瘍切除のための手術が予定された。その後、患者は1つ以上の腫瘍病変を切除し、TIL産生のために中央製造施設に送られた。
患者はスクリーニングされ、腫瘍切除のための手術が予定された。その後、患者は1つ以上の腫瘍病変を切除し、TIL産生のために中央製造施設に送られた。
次に、NMA-LDレジメンは模倣され、-7日目及び-6日目にメスナ(部位当たりの標準治療またはUSPI/SmPC)を含む2日間のIVシクロホスファミド(60mg/kg)、ならびにその後5日間のIVフルダラビン(25mg/m2:-5日目~-1日目)で構成された。
コホート1A、2A、及び3Aの患者は、TIL産生のために腫瘍切除の完了後にペムブロリズマブの単回注入を受け、NMA-LDレジメンの開始前にベースライン走査を受けた。600,000IU/kgの用量でIVでのIL-2投与は、0日目のTIL注入の完了の3時間後、ただし24時間後までに開始された。追加のIL-2投与は、最大6用量まで、およそ8~12時間毎に行われる。ペムブロリズマブの第2の用量は、IL-2の完了後以降であった。患者は、第2のペムブロリズマブ投与前に、すべてのIL-2関連毒性(グレード≦2)から回復している必要がある。ペムブロリズマブは、その後2年以内(24ヶ月)または疾患の進行もしくは許容できない毒性のいずれか早い方まで、Q3W±3日間継続する。
単剤としてのTIL療法(コホート3B)
患者はスクリーニングされ、腫瘍切除のための手術が予定された。その後、患者は1つ以上の腫瘍病変を切除し、TIL産生のために中央製造施設に送られた。
患者はスクリーニングされ、腫瘍切除のための手術が予定された。その後、患者は1つ以上の腫瘍病変を切除し、TIL産生のために中央製造施設に送られた。
次に、NMA-LDレジメンは、-7日目及び-6日目にメスナ(部位当たりの標準治療またはUSPI/SmPC)を含む2日間のIVシクロホスファミド(60mg/kg)、ならびにその後5日間のIVフルダラビン(25mg/m2:-5日目~-1日目)で構成された。
腫瘍由来の自己TIL製品の注入は、フルダラビンの最後の用量から24時間以内に起こった。600,000IU/kgの用量でIVでのIL-2投与は、TIL注入の完了後3時間後、ただし24時間後までに開始された可能性がある。
追加のIL-2投与は、最大6用量まで、およそ8~12時間毎に行われた。
腫瘍浸潤リンパ球の産生及び拡張
TIL自己細胞製品は、患者の腫瘍/病変に由来する生存可能な細胞傷害性Tリンパ球で構成されており、中央のGMP施設でエクスビボで製造される。例えば、TIL産生プロセスを示す例示的なフロー図を図9に示す。
TIL自己細胞製品は、患者の腫瘍/病変に由来する生存可能な細胞傷害性Tリンパ球で構成されており、中央のGMP施設でエクスビボで製造される。例えば、TIL産生プロセスを示す例示的なフロー図を図9に示す。
TIL製造プロセスは、個々の患者毎に直径1.5cm以上の原発性または続発性転移性腫瘍病変(複数可)を外科的に切除した後に臨床現場で開始された。様々な解剖学的位置からの複数の腫瘍病変を切除して、腫瘍組織の全凝集体をまとめることができるが、輸送ボトルに存在する生体保存培地の量が限られているため、凝集体は、直径4.0cm、または重量10gを超えてはならない。
腫瘍病変(複数可)が生体保存輸送ボトルに入れられると、それは中央のGMP製造施設への速達宅配便を使用して2℃~8℃で出荷される。到着時に、腫瘍標本(複数可)を断片に解剖し、その後、ヒト組換えIL-2を用いたプレ急速拡張プロトコル(Pre-REP)において約11日間培養した。
次いで、これらのREP前細胞を、IL-2、OKT3([ムロモナブ-CD3]としても知られるヒトCD3に対するマウスモノクローナル抗体)、及びフィーダー細胞としての照射された同種異系末梢血単核細胞(PBMC)の存在下で11日間、急速拡張プロトコル(REP)を使用してさらに拡張した。
次いで、拡張した細胞を採取し、洗浄し、配合し、凍結保存し、速達宅配便で臨床現場に出荷した。TIL細胞製品の剤形は、TILが由来する患者への注入の準備ができている凍結保存された自己の「生細胞懸濁液」であった。患者は、製品仕様当たり1×109~150×109生細胞の間に含まれる、製造及び放出された製品の全用量を受容することとした。臨床経験は、客観的な腫瘍応答がこの用量範囲全体で達成されたことを示し、これも安全であることが示されている(Radvanyi L.G.,et al.,Clin Cancer Res.2012;18(24):6758-70)。製品の全用量は、最大4つの注入バッグで提供された。
TIL細胞製品を受容する患者の準備
この研究で使用されたNMA-LDプレコンディショニングレジメン(すなわち、2日間のシクロホスファミド及びメスナ、続いて5日間のフルダラビン)は、国立癌研究所によって開発及び試験された方法に基づいていた(Rosenberg S.A.,et al.,Clin Cancer Res.2011;17(13):4550-7、Radvanyi L.G.,et al.,Clin Cancer Res.2012;18(24):6758-70、Dudley M.E.,et al.,J Clin Oncol.2008;26(32):5233-9、Pilon-Thomas S,et al.,J Immunother.2012;35(8):615-20、Dudley M.E.,et al.,J Clin Oncol.2005;23(10):2346-57、及びDudley M.E.,et al.,Science.2002;298(5594):850-4)。7日間のプレコンディショニングレジメンに続いて、患者にTIL細胞製品を注入した。
この研究で使用されたNMA-LDプレコンディショニングレジメン(すなわち、2日間のシクロホスファミド及びメスナ、続いて5日間のフルダラビン)は、国立癌研究所によって開発及び試験された方法に基づいていた(Rosenberg S.A.,et al.,Clin Cancer Res.2011;17(13):4550-7、Radvanyi L.G.,et al.,Clin Cancer Res.2012;18(24):6758-70、Dudley M.E.,et al.,J Clin Oncol.2008;26(32):5233-9、Pilon-Thomas S,et al.,J Immunother.2012;35(8):615-20、Dudley M.E.,et al.,J Clin Oncol.2005;23(10):2346-57、及びDudley M.E.,et al.,Science.2002;298(5594):850-4)。7日間のプレコンディショニングレジメンに続いて、患者にTIL細胞製品を注入した。
TIL注入後、8~12時間毎にIV IL-2(600,000IU/kg)を投与し、最初の用量は、TIL注入の完了後3~24時間の間に投与し、最大6回まで継続した。施設の基準に従って、IL-2の用量は、実際の体重に基づいて計算することができる。
患者集団の選択
コホート1A:
患者は、切除不能なMMの確定診断を受けた(ステージIIICまたはステージIV、米国癌合同委員会[AJCC]病期分類システムに従って組織学的に確認された)。眼内黒色腫患者は除外された。患者は、以前に免疫腫瘍学を標的とした薬剤を受けていてはならない。BRAF変異が陽性の場合、患者は、以前にBRAF/MEK標的療法を受けていた可能性があった。
コホート1A:
患者は、切除不能なMMの確定診断を受けた(ステージIIICまたはステージIV、米国癌合同委員会[AJCC]病期分類システムに従って組織学的に確認された)。眼内黒色腫患者は除外された。患者は、以前に免疫腫瘍学を標的とした薬剤を受けていてはならない。BRAF変異が陽性の場合、患者は、以前にBRAF/MEK標的療法を受けていた可能性があった。
コホート2A:
患者は、進行性、再発性、及び/または転移性のHNSCCを有しており、治療ナイーブであり得、病理学レポートを介した原発腫瘍の組織学的診断が必要である。患者は、以前に免疫療法レジメンを受けていてはならない。
患者は、進行性、再発性、及び/または転移性のHNSCCを有しており、治療ナイーブであり得、病理学レポートを介した原発腫瘍の組織学的診断が必要である。患者は、以前に免疫療法レジメンを受けていてはならない。
コホート3A:
患者は、ステージIIIまたはステージIVのNSCLC(扁平上皮癌、腺癌、大細胞癌)の確定診断を受けた。有効な標的療法が利用可能ながん遺伝子駆動腫瘍を有する患者は、少なくとも1つの標的療法を受けていた。
患者は、ステージIIIまたはステージIVのNSCLC(扁平上皮癌、腺癌、大細胞癌)の確定診断を受けた。有効な標的療法が利用可能ながん遺伝子駆動腫瘍を有する患者は、少なくとも1つの標的療法を受けていた。
コホート3B:
患者は、ステージIIIまたはステージIVのNSCLC(扁平上皮癌、腺癌、大細胞癌)の確定診断を受けており、以前にCPI(例えば、抗PD-1/抗PD-L1)による全身療法を受けていた。有効な標的療法が利用可能ながん遺伝子駆動腫瘍を有する患者は、少なくとも1つの標的療法を受けていた。
患者は、ステージIIIまたはステージIVのNSCLC(扁平上皮癌、腺癌、大細胞癌)の確定診断を受けており、以前にCPI(例えば、抗PD-1/抗PD-L1)による全身療法を受けていた。有効な標的療法が利用可能ながん遺伝子駆動腫瘍を有する患者は、少なくとも1つの標的療法を受けていた。
コホート1A、2A、及び3Aの免疫療法を除き、すべての患者は、最大3つの全身抗がん療法を受けていた(以下の包含基準を参照)。以前に治療を受けた場合、患者は、最近の治療中または治療後にX線写真で進行が確認されていた。
包含基準
患者は、研究に参加するために以下の包含基準をすべて満たしている必要がある。
1.すべての患者は、組織学的または病理学的にそれぞれの組織学的悪性腫瘍の確定診断を受けた。
○切除不能または転移性黒色腫(コホート1A)
○頭頸部の進行性、再発性、または転移性扁平上皮癌(コホート2A)
○ステージIIIまたはステージIVのNSCLC(扁平上皮癌、非扁平上皮癌、腺癌、大細胞癌)(コホート3A及び3B)。
2.コホート1A、2A、及び3Aのみ:患者は、免疫療法ナイーブであった。以前に治療された場合、患者は、最近の治療中または治療後に進行していた。コホート1A、2A、及び3Aは、最大3つの全身性抗がん療法を以前に受けている可能性があり、具体的には以下の通りである。
〇コホート1Aにおいて:切除不能または転移性黒色腫(ステージIIICまたはステージIV)を有する患者。BRAF変異陽性の場合、患者は、BRAF阻害剤を投与されている可能性がある。
〇コホート2Aにおいて:切除不能または転移性HNSCCの患者。最初の化学放射線療法を受けていた患者は許可された。
〇コホート3Aにおいて:ステージIIIまたはステージIVのNSCLC(扁平上皮癌、非扁平上皮癌、腺癌、または大細胞癌)を有し、免疫療法ナイーブであり、局所進行または転移の状況で3つ以下の以前の全身療法後に進行した患者。アジュバントもしくはネオアジュバントの設定で、または根治的化学放射線療法の一部として全身療法を受けた患者は適格であり、以前の全身療法の完了から12ヶ月以内に疾患が進行した場合、1つの治療を受けたとみなされた。標的療法に感受性のある変異を有する既知のがん遺伝子ドライバー(例えば、EGFR、ALK、ROS)を有する患者は、少なくとも1つの標的療法の後に進行したに違いない。
3.コホート3Bのみ:ステージIIIまたはステージIVのNSCLC(扁平上皮癌、非扁平上皮癌、腺癌、または大細胞癌)を有し、3つ以下の以前の全身療法の一部として、CPI(例えば、抗PD-1/抗PD-L1)による全身療法を以前に受けていた患者。
○患者は、最近の治療中または治療後にX線写真で進行が確認されていた。
○アジュバントもしくはネオアジュバントの設定で、または根治的化学放射線療法の一部として全身療法を受けた患者は適格であり、以前の全身療法の完了から12ヶ月以内に疾患が進行していた場合、1つの治療を受けたとみなされた。
○標的療法に感受性のある変異を有する既知のがん遺伝子ドライバー(例えば、EGFR、ALK、ROS)を有する患者は、少なくとも1つの標的療法の後に進行したに違いない。
4.患者は、TIL治験薬産生のために、切除後に最少直径1.5cmの切除可能な病変(または凝集病変)を少なくとも1つ有していた。外科的切除が患者に追加のリスクをもたらさない限り、腫瘍組織を、複数の多様な転移性病変から得ることが奨励された。
○TIL生成のために切除が検討されている病変が、以前に照射された領域内にある場合、その病変は、切除前にX線写真で進行を示している必要がある。
○患者は、プロトコルが必要とする検査に適正な組織病理標本を有していなければならない。
5.患者は、TIL製造の腫瘍切除の後に、標準かつ周知のRECIST1.1ガイドラインによって定義されているように、残留する測定可能な疾患を有していた(例えば、Eisenhauer,European Journal of Cancer 45:228-247(2009)を参照、www.project.eortc.org/recist/wp-content/uploads/sites/4/2015/03/RECISTGuidelines.pdfでも入手可能)。
○以前に照射された領域内の病変は、それらの病変で疾患の進行が示されていない限り、標的病変として選択されなかった。
○RECIST毎に依然として測定可能なTIL生成のために部分的に切除された病変を、非標的病変として選択することができるが、応答評価の標的病変としては機能することができなかった。
6.患者は、同意時に18歳以上であった。
7.患者の米国東海岸癌臨床試験グループ(Eastern Cooperative Oncology Group、ECOG)のパフォーマンスステータスは0または1であり、推定平均余命は3ヶ月以上であった。
8.妊娠可能性のある患者または妊娠可能性のあるパートナーがいる患者は、治療中に承認された非常に効果的な避妊方法を実践し、すべてのプロトコル関連療法を受けてから12ヶ月間継続しなければならなかった(注記:生殖可能性のある女性は、治療中及びIL-2の最後の投与後12ヶ月間、またはペムブロリズマブの最後の投与後4ヶ月間のいずれか遅い時期に有効な避妊法を使用することとした)。男性は、研究中または治療中止後12ヶ月のいずれか遅い方で、精子を提供することができなかった。
9.患者は、以下の血液学的パラメータを有していた:
○絶対好中球数(ANC)≧1000/mm3、
○ヘモグロビン≧9.0g/dL、
〇血小板数≧100,000/mm3。
10.患者は、適正な臓器機能を有していた:
○血清アラニンアミノトランスフェラーゼ(ALT)/血清グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ(SGPT)及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ(AST)/SGOTが、正常上限(ULN)の3倍以下、肝転移がULNの5倍以下の患者。
○スクリーニング時にコッククロフト・ゴールト式を使用して推定されたクレアチニンクリアランス≧40mL/分。
〇総ビリルビン≦2mg/dL。
○ジルベール症候群の患者は、総ビリルビン≦3mg/dLでなければならない。
11.患者は、ヒト免疫不全ウイルス(HIV1及びHIV2)に対して血清陰性であった。B型肝炎ウイルス表面抗原(HBsAg)、B型肝炎コア抗体(抗HBc)、または急性もしくは慢性感染を示すC型肝炎ウイルス(抗HCV)の血清学が陽性の患者は、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)に基づくウイルス量及び特定のウイルス曝露の局所有病率に応じて登録した。
12.患者は、最初の試験治療(すなわち、NMA-LDまたはペムブロリズマブの開始)の前に、以下に詳述されるように、最小期間の以前の抗がん療法(複数可)からのウォッシュアウト期間を有していた。
○標的療法:ウォッシュアウトが治療の開始の最低14日前であれば、上皮成長因子受容体(EGFR)、MEK、BRAF、ALK、ROS1または他の標的薬剤(例えば、エルロチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、オシメルチニブ、クリゾチニブ、セリチニブ、ロラチニブ)による以前の標的療法が許可された。
○化学療法:ウォッシュアウトが治療開始の最低21日前であれば、アジュバント、ネオアジュバント、または根治的化学療法/化学放射線療法が許可された。
○コホート3Bのみの免疫療法、抗PD-1、他のmAb、またはワクチンによる以前のチェックポイント標的療法は、NMA-LDの開始前21日以上のウォッシュアウト期間で許可された。
○緩和的放射線療法:脱毛症、皮膚色素沈着の変化、または他の臨床的に重要でない事象、例えば小領域放射線皮膚炎または直腸もしくは尿意切迫感を除いて、すべての放射線関連毒性がグレード1またはベースラインに解決された場合、以前の外部ビーム放射線療法が許可された
○RECIST1.1を介して応答のターゲットとして評価されている腫瘍病変(複数可)は、放射線ポータルの外側にあったが、ポータル内の場合は、進行が実証されていなければならない(上記の包含基準を参照)。
○手術/事前に計画された手順:創傷治癒が起こり、すべての合併症が解消され、腫瘍切除の前に少なくとも14日が経過している場合(主要な手術手順の場合)、以前の外科的手順(複数可)が許可された。
13.患者は、コホートの割り当て前に、脱毛症または白斑を除いて、以前のすべての抗がん治療関連有害事象(TRAE)からグレード1以下(有害事象の一般用語基準[CTCAE]による)に回復していた。
14.以前の抗がん療法から安定したグレード2以上の毒性を有する患者は、医療モニターと相談した後、ケースバイケースで検討された。
15.ペムブロリズマブによる治療によって悪化すると合理的に予想されない不可逆的毒性を有するコホート1A、2A、及び3Aの患者は、医療モニターとの協議後にのみ含まれた。コホート3Bの患者のみ、免疫チェックポイント阻害剤CPI(複数可)による以前の治療の結果として、グレード2以上の下痢または大腸炎が記録されている患者は、少なくとも6ヶ月間無症候性であったか、または治療後腫瘍切除前の目視評価による結腸内視鏡検査で正常でなければならない。
16.患者は、保護された健康情報の使用及び開示について、書面による承認を提供していなければならない。
患者は、研究に参加するために以下の包含基準をすべて満たしている必要がある。
1.すべての患者は、組織学的または病理学的にそれぞれの組織学的悪性腫瘍の確定診断を受けた。
○切除不能または転移性黒色腫(コホート1A)
○頭頸部の進行性、再発性、または転移性扁平上皮癌(コホート2A)
○ステージIIIまたはステージIVのNSCLC(扁平上皮癌、非扁平上皮癌、腺癌、大細胞癌)(コホート3A及び3B)。
2.コホート1A、2A、及び3Aのみ:患者は、免疫療法ナイーブであった。以前に治療された場合、患者は、最近の治療中または治療後に進行していた。コホート1A、2A、及び3Aは、最大3つの全身性抗がん療法を以前に受けている可能性があり、具体的には以下の通りである。
〇コホート1Aにおいて:切除不能または転移性黒色腫(ステージIIICまたはステージIV)を有する患者。BRAF変異陽性の場合、患者は、BRAF阻害剤を投与されている可能性がある。
〇コホート2Aにおいて:切除不能または転移性HNSCCの患者。最初の化学放射線療法を受けていた患者は許可された。
〇コホート3Aにおいて:ステージIIIまたはステージIVのNSCLC(扁平上皮癌、非扁平上皮癌、腺癌、または大細胞癌)を有し、免疫療法ナイーブであり、局所進行または転移の状況で3つ以下の以前の全身療法後に進行した患者。アジュバントもしくはネオアジュバントの設定で、または根治的化学放射線療法の一部として全身療法を受けた患者は適格であり、以前の全身療法の完了から12ヶ月以内に疾患が進行した場合、1つの治療を受けたとみなされた。標的療法に感受性のある変異を有する既知のがん遺伝子ドライバー(例えば、EGFR、ALK、ROS)を有する患者は、少なくとも1つの標的療法の後に進行したに違いない。
3.コホート3Bのみ:ステージIIIまたはステージIVのNSCLC(扁平上皮癌、非扁平上皮癌、腺癌、または大細胞癌)を有し、3つ以下の以前の全身療法の一部として、CPI(例えば、抗PD-1/抗PD-L1)による全身療法を以前に受けていた患者。
○患者は、最近の治療中または治療後にX線写真で進行が確認されていた。
○アジュバントもしくはネオアジュバントの設定で、または根治的化学放射線療法の一部として全身療法を受けた患者は適格であり、以前の全身療法の完了から12ヶ月以内に疾患が進行していた場合、1つの治療を受けたとみなされた。
○標的療法に感受性のある変異を有する既知のがん遺伝子ドライバー(例えば、EGFR、ALK、ROS)を有する患者は、少なくとも1つの標的療法の後に進行したに違いない。
4.患者は、TIL治験薬産生のために、切除後に最少直径1.5cmの切除可能な病変(または凝集病変)を少なくとも1つ有していた。外科的切除が患者に追加のリスクをもたらさない限り、腫瘍組織を、複数の多様な転移性病変から得ることが奨励された。
○TIL生成のために切除が検討されている病変が、以前に照射された領域内にある場合、その病変は、切除前にX線写真で進行を示している必要がある。
○患者は、プロトコルが必要とする検査に適正な組織病理標本を有していなければならない。
5.患者は、TIL製造の腫瘍切除の後に、標準かつ周知のRECIST1.1ガイドラインによって定義されているように、残留する測定可能な疾患を有していた(例えば、Eisenhauer,European Journal of Cancer 45:228-247(2009)を参照、www.project.eortc.org/recist/wp-content/uploads/sites/4/2015/03/RECISTGuidelines.pdfでも入手可能)。
○以前に照射された領域内の病変は、それらの病変で疾患の進行が示されていない限り、標的病変として選択されなかった。
○RECIST毎に依然として測定可能なTIL生成のために部分的に切除された病変を、非標的病変として選択することができるが、応答評価の標的病変としては機能することができなかった。
6.患者は、同意時に18歳以上であった。
7.患者の米国東海岸癌臨床試験グループ(Eastern Cooperative Oncology Group、ECOG)のパフォーマンスステータスは0または1であり、推定平均余命は3ヶ月以上であった。
8.妊娠可能性のある患者または妊娠可能性のあるパートナーがいる患者は、治療中に承認された非常に効果的な避妊方法を実践し、すべてのプロトコル関連療法を受けてから12ヶ月間継続しなければならなかった(注記:生殖可能性のある女性は、治療中及びIL-2の最後の投与後12ヶ月間、またはペムブロリズマブの最後の投与後4ヶ月間のいずれか遅い時期に有効な避妊法を使用することとした)。男性は、研究中または治療中止後12ヶ月のいずれか遅い方で、精子を提供することができなかった。
9.患者は、以下の血液学的パラメータを有していた:
○絶対好中球数(ANC)≧1000/mm3、
○ヘモグロビン≧9.0g/dL、
〇血小板数≧100,000/mm3。
10.患者は、適正な臓器機能を有していた:
○血清アラニンアミノトランスフェラーゼ(ALT)/血清グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ(SGPT)及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ(AST)/SGOTが、正常上限(ULN)の3倍以下、肝転移がULNの5倍以下の患者。
○スクリーニング時にコッククロフト・ゴールト式を使用して推定されたクレアチニンクリアランス≧40mL/分。
〇総ビリルビン≦2mg/dL。
○ジルベール症候群の患者は、総ビリルビン≦3mg/dLでなければならない。
11.患者は、ヒト免疫不全ウイルス(HIV1及びHIV2)に対して血清陰性であった。B型肝炎ウイルス表面抗原(HBsAg)、B型肝炎コア抗体(抗HBc)、または急性もしくは慢性感染を示すC型肝炎ウイルス(抗HCV)の血清学が陽性の患者は、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)に基づくウイルス量及び特定のウイルス曝露の局所有病率に応じて登録した。
12.患者は、最初の試験治療(すなわち、NMA-LDまたはペムブロリズマブの開始)の前に、以下に詳述されるように、最小期間の以前の抗がん療法(複数可)からのウォッシュアウト期間を有していた。
○標的療法:ウォッシュアウトが治療の開始の最低14日前であれば、上皮成長因子受容体(EGFR)、MEK、BRAF、ALK、ROS1または他の標的薬剤(例えば、エルロチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、オシメルチニブ、クリゾチニブ、セリチニブ、ロラチニブ)による以前の標的療法が許可された。
○化学療法:ウォッシュアウトが治療開始の最低21日前であれば、アジュバント、ネオアジュバント、または根治的化学療法/化学放射線療法が許可された。
○コホート3Bのみの免疫療法、抗PD-1、他のmAb、またはワクチンによる以前のチェックポイント標的療法は、NMA-LDの開始前21日以上のウォッシュアウト期間で許可された。
○緩和的放射線療法:脱毛症、皮膚色素沈着の変化、または他の臨床的に重要でない事象、例えば小領域放射線皮膚炎または直腸もしくは尿意切迫感を除いて、すべての放射線関連毒性がグレード1またはベースラインに解決された場合、以前の外部ビーム放射線療法が許可された
○RECIST1.1を介して応答のターゲットとして評価されている腫瘍病変(複数可)は、放射線ポータルの外側にあったが、ポータル内の場合は、進行が実証されていなければならない(上記の包含基準を参照)。
○手術/事前に計画された手順:創傷治癒が起こり、すべての合併症が解消され、腫瘍切除の前に少なくとも14日が経過している場合(主要な手術手順の場合)、以前の外科的手順(複数可)が許可された。
13.患者は、コホートの割り当て前に、脱毛症または白斑を除いて、以前のすべての抗がん治療関連有害事象(TRAE)からグレード1以下(有害事象の一般用語基準[CTCAE]による)に回復していた。
14.以前の抗がん療法から安定したグレード2以上の毒性を有する患者は、医療モニターと相談した後、ケースバイケースで検討された。
15.ペムブロリズマブによる治療によって悪化すると合理的に予想されない不可逆的毒性を有するコホート1A、2A、及び3Aの患者は、医療モニターとの協議後にのみ含まれた。コホート3Bの患者のみ、免疫チェックポイント阻害剤CPI(複数可)による以前の治療の結果として、グレード2以上の下痢または大腸炎が記録されている患者は、少なくとも6ヶ月間無症候性であったか、または治療後腫瘍切除前の目視評価による結腸内視鏡検査で正常でなければならない。
16.患者は、保護された健康情報の使用及び開示について、書面による承認を提供していなければならない。
除外基準
以下の基準のうちのいずれかを満たす患者は、研究から除外した。
1.ブドウ膜/眼起源の黒色腫を有する患者
2.過去20年以内に非骨髄破壊的または骨髄破壊的化学療法レジメンを含む、臓器同種移植または以前の細胞移植療法を受けていた患者。(注記:この基準は、以前のTIL治療で以前のNMA-LDレジメンがあったことを除いて、TILによる再治療を受けている患者に適用可能であった。)
3.症候性及び/または未治療の脳転移を有する患者。
○・脳転移が根治的に治療された患者は、治療開始前に患者が2週間以上にわたって臨床的に安定し、治療後の磁気共鳴画像法(MRI)による新たな脳病変がなく、患者が継続的なコルチコステロイド治療を必要としない場合、医療モニターと相談した後に登録が検討される。
4.登録から21日以内に全身ステロイド療法を受けている患者。
5.妊娠中または授乳中の患者。
6.治験責任医師の意見では、研究参加のリスクが高い、活動性の医学的疾患(複数可)、例えば全身性感染症(例えば、梅毒もしくは抗生物質を必要とする他の感染症)、凝固障害、または心臓血管系、呼吸器系、もしくは免疫系の他の活動性の主要な医学的疾患を有していた患者。
7.患者は、活動性または以前に記録された自己免疫または炎症性障害(肺炎、炎症性腸疾患[例えば、大腸炎もしくはクローン病]、憩室炎[憩室症を除く]、全身性紅斑性狼瘡、サルコイドーシス症候群、またはウェゲナー症候群[多発血管炎を伴う肉芽腫症、グレイブス病、関節リウマチ、下垂体炎、ブドウ膜炎等])を有しない場合がある。以下は、この基準の例外であった。
○白斑または脱毛症を有する患者。
○甲状腺機能低下症(例えば、橋本症候群に続く)が安定している患者
○ホルモン補充療法。
○全身療法を必要としない任意の慢性皮膚疾患。
○食事療法だけで制御されるセリアック病の患者。
8.治療開始前28日以内に生ワクチン接種または弱毒化ワクチン接種を受けていた患者。
9.何らかの形態の原発性免疫不全症(重症複合免疫不全症[SCID]及び後天性免疫不全症候群[AIDS]など)を有していた患者。
10.治験薬のいずれかの成分に対する過敏症の病歴を有する患者。TILは、以下のうちのいずれかを含むがこれらに限定されない、TIL製品製剤のいずれかの成分に対する既知の過敏症を有する患者には投与されなかった。
○・NMA-LD(シクロホスファミド、メスナ、及びフルダラビン)
〇・プロロイキン(登録商標)、アルデスロイキン、IL-2
○・アミノグリコシド系抗生物質(すなわち、ストレプトマイシン、ゲンタマイシン[ゲンタマイシン過敏症の皮膚検査陰性者を除く])
○・ジメチルスルホキシドを含むTIL製品製剤の任意の成分
○[DMSO]、HSA、IL-2、及びデキストラン-40
〇・ペムブロリズマブ
11.左心室駆出率(LVEF)が45%未満の患者、またはニューヨーク心臓協会クラスII以上の患者。60歳以上の患者、あるいは虚血性心疾患、胸痛、または臨床的に重大な心房性及び/または心室性不整脈の病歴のある患者において、不可逆的な壁運動異常を示す心臓ストレス試験。
○治験依頼者の医療モニターの承認を得て、駆出率及び心臓病クリアランスが十分であれば、心臓ストレス試験に異常がある患者を登録することができた。
12.閉塞性または拘束性肺疾患があり、予測正常値の60%以下のFEV1(1秒の強制呼気量)が記録されている患者。
○・患者が上気道の解剖学的構造の異常(すなわち、気管切開)のために信頼できる肺活量測定を行うことができなかった場合は、6分間の歩行試験を使用して呼吸機能を評価した。年齢及び性別に対して予測される少なくとも80%の距離を歩くことができなかった患者、または試験中の任意の時点で低酸素症の証拠を示した患者(SpO2<90%)は除外される。
13.過去3年以内に別の原発性悪性腫瘍があった患者(治療を必要としなかった、または1年以上前に治癒的に治療された患者を除き、治験責任医師の判断では、非黒色腫皮膚癌、DCIS、LCIS、前立腺癌グリーソンスコア≦6または膀胱癌を含むが、これらに限定されない重大な再発リスクをもたらさなかった)。
14.治療開始から21日以内に治験薬を用いた別の臨床試験への参加。
以下の基準のうちのいずれかを満たす患者は、研究から除外した。
1.ブドウ膜/眼起源の黒色腫を有する患者
2.過去20年以内に非骨髄破壊的または骨髄破壊的化学療法レジメンを含む、臓器同種移植または以前の細胞移植療法を受けていた患者。(注記:この基準は、以前のTIL治療で以前のNMA-LDレジメンがあったことを除いて、TILによる再治療を受けている患者に適用可能であった。)
3.症候性及び/または未治療の脳転移を有する患者。
○・脳転移が根治的に治療された患者は、治療開始前に患者が2週間以上にわたって臨床的に安定し、治療後の磁気共鳴画像法(MRI)による新たな脳病変がなく、患者が継続的なコルチコステロイド治療を必要としない場合、医療モニターと相談した後に登録が検討される。
4.登録から21日以内に全身ステロイド療法を受けている患者。
5.妊娠中または授乳中の患者。
6.治験責任医師の意見では、研究参加のリスクが高い、活動性の医学的疾患(複数可)、例えば全身性感染症(例えば、梅毒もしくは抗生物質を必要とする他の感染症)、凝固障害、または心臓血管系、呼吸器系、もしくは免疫系の他の活動性の主要な医学的疾患を有していた患者。
7.患者は、活動性または以前に記録された自己免疫または炎症性障害(肺炎、炎症性腸疾患[例えば、大腸炎もしくはクローン病]、憩室炎[憩室症を除く]、全身性紅斑性狼瘡、サルコイドーシス症候群、またはウェゲナー症候群[多発血管炎を伴う肉芽腫症、グレイブス病、関節リウマチ、下垂体炎、ブドウ膜炎等])を有しない場合がある。以下は、この基準の例外であった。
○白斑または脱毛症を有する患者。
○甲状腺機能低下症(例えば、橋本症候群に続く)が安定している患者
○ホルモン補充療法。
○全身療法を必要としない任意の慢性皮膚疾患。
○食事療法だけで制御されるセリアック病の患者。
8.治療開始前28日以内に生ワクチン接種または弱毒化ワクチン接種を受けていた患者。
9.何らかの形態の原発性免疫不全症(重症複合免疫不全症[SCID]及び後天性免疫不全症候群[AIDS]など)を有していた患者。
10.治験薬のいずれかの成分に対する過敏症の病歴を有する患者。TILは、以下のうちのいずれかを含むがこれらに限定されない、TIL製品製剤のいずれかの成分に対する既知の過敏症を有する患者には投与されなかった。
○・NMA-LD(シクロホスファミド、メスナ、及びフルダラビン)
〇・プロロイキン(登録商標)、アルデスロイキン、IL-2
○・アミノグリコシド系抗生物質(すなわち、ストレプトマイシン、ゲンタマイシン[ゲンタマイシン過敏症の皮膚検査陰性者を除く])
○・ジメチルスルホキシドを含むTIL製品製剤の任意の成分
○[DMSO]、HSA、IL-2、及びデキストラン-40
〇・ペムブロリズマブ
11.左心室駆出率(LVEF)が45%未満の患者、またはニューヨーク心臓協会クラスII以上の患者。60歳以上の患者、あるいは虚血性心疾患、胸痛、または臨床的に重大な心房性及び/または心室性不整脈の病歴のある患者において、不可逆的な壁運動異常を示す心臓ストレス試験。
○治験依頼者の医療モニターの承認を得て、駆出率及び心臓病クリアランスが十分であれば、心臓ストレス試験に異常がある患者を登録することができた。
12.閉塞性または拘束性肺疾患があり、予測正常値の60%以下のFEV1(1秒の強制呼気量)が記録されている患者。
○・患者が上気道の解剖学的構造の異常(すなわち、気管切開)のために信頼できる肺活量測定を行うことができなかった場合は、6分間の歩行試験を使用して呼吸機能を評価した。年齢及び性別に対して予測される少なくとも80%の距離を歩くことができなかった患者、または試験中の任意の時点で低酸素症の証拠を示した患者(SpO2<90%)は除外される。
13.過去3年以内に別の原発性悪性腫瘍があった患者(治療を必要としなかった、または1年以上前に治癒的に治療された患者を除き、治験責任医師の判断では、非黒色腫皮膚癌、DCIS、LCIS、前立腺癌グリーソンスコア≦6または膀胱癌を含むが、これらに限定されない重大な再発リスクをもたらさなかった)。
14.治療開始から21日以内に治験薬を用いた別の臨床試験への参加。
研究エンドポイント及び計画された分析
一次エンドポイント及び二次エンドポイントは、コホートによって別々に分析した。
一次エンドポイント及び二次エンドポイントは、コホートによって別々に分析した。
一次エンドポイント:
ORRは、有効性分析セットの中でRECIST1.1に従って治験責任医師が評価した最良の応答として確認されたPRまたはCRのいずれかを達成した患者の割合として定義された。
ORRは、有効性分析セットの中でRECIST1.1に従って治験責任医師が評価した最良の応答として確認されたPRまたはCRのいずれかを達成した患者の割合として定義された。
客観的反応を各疾患評価毎に評価し、ORRは、対応する両側90% CIを用いて二項比率として表された。各コホートの一次分析は、評価期間の早期に進行/期限切れまたは中止されない限り、コホート毎に治療を受けたすべての患者が12ヶ月間追跡される機会があるときに行った。
安全性一次エンドポイントは、各コホート内のグレード3以上のTEAE発生率によって測定され、対応する両側90% CIの二項比率として表された。
二次エンドポイント:
有効性:
二次有効性エンドポイントは、次のように定義された。
有効性:
二次有効性エンドポイントは、次のように定義された。
治験責任医師によって評価された確認済みCRを達成した応答者に基づくCR率。DCRは、確認されたPR/CRまたは持続的なSD(少なくとも6週間)を達成した患者数の合計を、有効性分析セットの患者数で割り、100%を掛けたものとして導き出された。CR率及びDCRは、点推定及びその両側90% CIを使用して要約した。
DORは、客観的な応答を達成した患者の間で定義された。再発性もしくは進行性疾患が客観的に記録された最初の日付、またはその後の抗がん療法の受容もしくは患者の死亡(最初に記録された方)まで、初回応答(PR/CR)基準が満たされていることから測定した。PDを経験していない、またはデータカットもしくは最終データベースロックの時点より前に死亡していない患者は、腫瘍状態の適切な評価が行われた最終日に事象時間が打ち切られる。
PFSは、リンパ球枯渇からPDまでの時間(月単位)、または何らかの原因による死亡のいずれか早い方の事象として定義された。PDを経験していない、またはデータカットもしくは最終データベースロックの時点で死亡していない患者は、腫瘍状態の適切な評価が行われた最終日に事象時間が打ち切られた。
OSは、リンパ球枯渇の時点から何らかの原因による死亡までの時間(月単位)として定義された。データカットまたは最終的なデータベースロックの時点までに死亡していない患者は、既知の生存状態の最終日に事象時間が打ち切られた。
DOR、PFS、及びOSは、右側打ち切りを受けた。カプラン・マイヤー法を使用して、事象までの時間の有効性エンドポイントを要約する。腫瘍評価のベースラインデータは、すべてのコホートのリンパ球枯渇前の最後の走査であった。
上記の有効性パラメータは、ベースラインの疾患特徴:BRAFステータス(コホート1Aのみ)、HPVステータス(コホート2Aのみ)、扁平上皮または非扁平上皮肺疾患(コホート3A及び3Bのみ)、ならびに抗PD-L1ステータスによって定義されたサブセットに適用可能なコホートについて推定される。
実施例15:固形腫瘍を有する患者における自己腫瘍浸潤リンパ球の第2相多施設研究
この実施例の研究は、選択された固形腫瘍(転移性黒色腫、頭頸部扁平上皮癌、及び非小細胞肺癌(NSCLC))の患者における自己腫瘍浸潤リンパ球(TIL)の第2相多施設グローバル非盲検研究である。この実施例は、実施例10~17を含む本明細書の実施例に従って製造され、本出願全体を通して説明され、凍結保存されるTIL製品を使用し、22日間の製造プロセスを有する。患者がシクロホスファミド(60mg/kg×2日)及びフルダラビン(25mg2/m×5日)による骨髄非破壊的リンパ球枯渇の調製レジメンを完了した後、TIL製品の単回注入を行った。以下に説明されるように、4つの患者コホートが存在する。
●コホート1A(併用コホート):免疫療法ナイーブであり、以前の全身療法が3つ以下である、IIIC期またはIV期の切除不能または転移性黒色腫の患者。これらの患者は、ペムブロリズマブと合わせてTIL製品を受容する。
●コホート2A(併用コホート):免疫療法ナイーブであり、以前の全身療法が3つ以下である、進行性、再発性、または転移性の頭頸部扁平上皮癌患者。これらの患者は、ペムブロリズマブと合わせてTIL製品を受容する。
●コホート3A(併用コホート):免疫療法ナイーブであり、以前の全身療法が3つ以下である、局所進行性または転移性(ステージIII-IV)のNSCLC患者。これらの患者は、ペムブロリズマブと合わせてTIL製品を受容する。
●コホート3B(単剤コホート):3つ以下の全身療法の一部として、チェックポイント阻害剤(抗PD-1/抗PD-L1)による全身療法を以前に受けたことがある、ステージIII-IVのNSCLC患者。これらの患者は、単剤としてTIL製品を受容する。
この実施例の研究は、選択された固形腫瘍(転移性黒色腫、頭頸部扁平上皮癌、及び非小細胞肺癌(NSCLC))の患者における自己腫瘍浸潤リンパ球(TIL)の第2相多施設グローバル非盲検研究である。この実施例は、実施例10~17を含む本明細書の実施例に従って製造され、本出願全体を通して説明され、凍結保存されるTIL製品を使用し、22日間の製造プロセスを有する。患者がシクロホスファミド(60mg/kg×2日)及びフルダラビン(25mg2/m×5日)による骨髄非破壊的リンパ球枯渇の調製レジメンを完了した後、TIL製品の単回注入を行った。以下に説明されるように、4つの患者コホートが存在する。
●コホート1A(併用コホート):免疫療法ナイーブであり、以前の全身療法が3つ以下である、IIIC期またはIV期の切除不能または転移性黒色腫の患者。これらの患者は、ペムブロリズマブと合わせてTIL製品を受容する。
●コホート2A(併用コホート):免疫療法ナイーブであり、以前の全身療法が3つ以下である、進行性、再発性、または転移性の頭頸部扁平上皮癌患者。これらの患者は、ペムブロリズマブと合わせてTIL製品を受容する。
●コホート3A(併用コホート):免疫療法ナイーブであり、以前の全身療法が3つ以下である、局所進行性または転移性(ステージIII-IV)のNSCLC患者。これらの患者は、ペムブロリズマブと合わせてTIL製品を受容する。
●コホート3B(単剤コホート):3つ以下の全身療法の一部として、チェックポイント阻害剤(抗PD-1/抗PD-L1)による全身療法を以前に受けたことがある、ステージIII-IVのNSCLC患者。これらの患者は、単剤としてTIL製品を受容する。
2人のNSCLC患者がコホート3B(免疫チェックポイント阻害剤後のTIL単独)に登録され、42日目に最初の反応評価来院を完了した)を以下に説明する。
患者Aは、ステージIVA肺腺癌と診断された63歳の女性である。彼女は、ペムブロリズマブ、カルボプラチン/ベバシズマブ、及びビノレルビンを含む3つの以前の全身療法を受けていた。以前のペムブロリズマブ療法に対する彼女の最良の応答は、進行性疾患であり、カルボプラチン/ベバシズマブに対する応答は、部分応答であり、彼女のビノレルビン応答は、評価できなかった(彼女は応答評価の前に中止した)。彼女は、TILの生成のために下葉肺切除術を受け、TIL製品の3.75×109個の細胞を注入した。患者は、最初の応答評価(42日目)のために来院し、そこでのコンピューター断層撮影(CT)走査は、ベースライン走査と比較して腫瘍量の4%低減を示し、これはRECIST1.1による安定した疾患応答である。
患者Bは、ステージIVBの基底細胞扁平上皮癌と診断された70歳の女性である。彼女は、カルボプラチン/アブラキサン、ニボルマブ、及びシスプラチン/ゲムシタビンを含む3つの以前の治療を受けていた。以前のカルボ/アブラキサンに対する彼女の最良の応答は評価できなかった(毒性のために治療が中止された)、ニボルマブに対する応答は、進行性疾患であり、シスプラチン/ゲムシタビンは部分応答であった。彼女は、TILの生成のために脾臓病変切除を受け、TIL製品の39×109個の細胞を注入した。患者は、最初の応答評価(42日目)のために来院し、そこでのCT走査は、ベースライン走査と比較して腫瘍量の44%低減を示し、これはRECIST1.1による部分応答である。
実施例16:局所進行性または転移性非小細胞肺癌患者における自己腫瘍浸潤リンパ球の第2相多施設研究
この実施例は、局所進行性、切除不能または転移性の非小細胞肺癌(NSCLC)で、アクショナブルなドライバー変異がなく、チェックポイント阻害剤(CPI)+化学療法±ベバシズマブ(ベバシズマブ(AVASTIN)、VEGFA阻害剤を含む)からなる承認された単一の全身療法中の疾患進行またはそれに続く疾患進行を有する患者の治療に関するものであり、治療のためのコホートを以下に要約する。
●コホート1:CPI治療前に腫瘍がプログラム細胞死リガンド1(PD-L1)を発現しなかった患者(腫瘍割合スコア[TPS]<1%)。
●コホート2:CPI治療前に腫瘍がPD-L1(TPS≧1%)を発現した患者。コホート3:CPI治療前に腫瘍がPD-L1(TPS<1%)を発現しなかった患者で、以下のうちの少なくとも1つが原因でTIL生成のための外科的採取を安全に受けられない患者:
〇許容できない外科的リスク、または
〇固形腫瘍における奏効評価基準(RECIST)v1.1評価には、外科的にアプローチ可能な病変が必要であった。
●コホート4:再治療コホート:この研究のコホート1、2または3でTILベースの免疫療法で以前に治療されたことのある患者。
この実施例は、局所進行性、切除不能または転移性の非小細胞肺癌(NSCLC)で、アクショナブルなドライバー変異がなく、チェックポイント阻害剤(CPI)+化学療法±ベバシズマブ(ベバシズマブ(AVASTIN)、VEGFA阻害剤を含む)からなる承認された単一の全身療法中の疾患進行またはそれに続く疾患進行を有する患者の治療に関するものであり、治療のためのコホートを以下に要約する。
●コホート1:CPI治療前に腫瘍がプログラム細胞死リガンド1(PD-L1)を発現しなかった患者(腫瘍割合スコア[TPS]<1%)。
●コホート2:CPI治療前に腫瘍がPD-L1(TPS≧1%)を発現した患者。コホート3:CPI治療前に腫瘍がPD-L1(TPS<1%)を発現しなかった患者で、以下のうちの少なくとも1つが原因でTIL生成のための外科的採取を安全に受けられない患者:
〇許容できない外科的リスク、または
〇固形腫瘍における奏効評価基準(RECIST)v1.1評価には、外科的にアプローチ可能な病変が必要であった。
●コホート4:再治療コホート:この研究のコホート1、2または3でTILベースの免疫療法で以前に治療されたことのある患者。
治療は、患者指向の療法のための個々の患者の腫瘍由来の自己TILベースの免疫療法を使用して行われる。
研究の詳細
自己TIL療法レジメン
TILベースの免疫療法治療レジメンは、TILベースの免疫療法注入の前に合計5日間のシクロホスファミド及びフルダラビンを使用したNMA-LD調製レジメンのコースを含み、TILベースの免疫療法注入後のIL-2投与(最大6回の用量)の限られたコースを含んでいた。移送されたTILの移植、拡張、及び活性化をサポートするために、NMA-LD調製レジメン及びIL-2をレジメンに含めた。
自己TIL療法レジメン
TILベースの免疫療法治療レジメンは、TILベースの免疫療法注入の前に合計5日間のシクロホスファミド及びフルダラビンを使用したNMA-LD調製レジメンのコースを含み、TILベースの免疫療法注入後のIL-2投与(最大6回の用量)の限られたコースを含んでいた。移送されたTILの移植、拡張、及び活性化をサポートするために、NMA-LD調製レジメン及びIL-2をレジメンに含めた。
いくつかの調製レジメンがTIL療法と併せて使用されていた。NMA-LDの調製レジメンには、シクロホスファミド/フルダラビン、全身照射(TBI)、または両方の組み合わせが含まれた。本例示的な研究は、cy-fluレジメンを利用した。現在の研究で使用されているNMA-LD調製レジメンは、国立がん研究所(NCI)によって開発及び試験された方法に基づいており、患者の入院期間を短縮するために、2日間のシクロホスファミドと5日間のフルダラビンを併用した。各患者は、TILベースの免疫療法の注入前にNMA-LD調製レジメンを受ける。
治療の簡単な説明
治療は、すぐに注入可能な自己TILベースの免疫療法であった。TILベースの免疫療法は、個々の患者の腫瘍から取得され、サイトカインIL-2及びマウスモノクローナル抗体(mAb)からヒトCD3(OKT3)の存在下での細胞培養を介してエクスビボで拡張した自己TILから構成された。
治療は、すぐに注入可能な自己TILベースの免疫療法であった。TILベースの免疫療法は、個々の患者の腫瘍から取得され、サイトカインIL-2及びマウスモノクローナル抗体(mAb)からヒトCD3(OKT3)の存在下での細胞培養を介してエクスビボで拡張した自己TILから構成された。
最終医薬品は、IV注入のために製剤化された凍結保存された生細胞懸濁液であった。エクスビボ拡張自己TILは、0.5%ヒト血清アルブミン(HSA)及び300IU/mL(12ng/mL)のIL-2を用いて、CryoStor(登録商標)CS10凍結保存培地/PlasmaLyte(最終ジメチルスルホキシド[DMSO]濃度:5%)中で製剤化した。製剤化された製品を、気相液体窒素中で-150℃未満に制御された速度で凍結し、クライオシッパーで適切な臨床現場に発送し、患者に注入するために使用する前に解凍した。
TILの産生及び拡張
製造プロセスは、生存可能な腫瘍材料を含有する腫瘍病変の外科的切除またはコア生検によって臨床現場で開始された。複数の別個の病変生検の集合体を患者から切除することもでき、患者の安全性が認められる場合は奨励された。腫瘍検体を輸送培地に置き、速達便で2~8℃で適正製造基準(GMP)製造施設に発送した。GMP製造施設に到着すると、腫瘍検体を断片に解剖し、次いで活性化し(初期拡張ステップ)、急速拡張プロトコル(REP)段階に必要な生細胞の最小数を生成した。腫瘍はまた、酵素的に解離することもでき、TILは、REPに進む前にバイオマーカーの発現のために選択することができる。REPステージ(第2の拡張ステップ)は、IL-2、OKT3、及び照射された同種異系末梢血単核細胞(PBMC)の存在下で細胞をさらに拡張させる。次いで、REP拡張細胞を採取し、洗浄し、血液輸送/注入バッグ中に製剤化して、宅配便によって臨床現場に発送する。TILベースの免疫療法の製造プロセスの図は、図34及び35に提供される。
製造プロセスは、生存可能な腫瘍材料を含有する腫瘍病変の外科的切除またはコア生検によって臨床現場で開始された。複数の別個の病変生検の集合体を患者から切除することもでき、患者の安全性が認められる場合は奨励された。腫瘍検体を輸送培地に置き、速達便で2~8℃で適正製造基準(GMP)製造施設に発送した。GMP製造施設に到着すると、腫瘍検体を断片に解剖し、次いで活性化し(初期拡張ステップ)、急速拡張プロトコル(REP)段階に必要な生細胞の最小数を生成した。腫瘍はまた、酵素的に解離することもでき、TILは、REPに進む前にバイオマーカーの発現のために選択することができる。REPステージ(第2の拡張ステップ)は、IL-2、OKT3、及び照射された同種異系末梢血単核細胞(PBMC)の存在下で細胞をさらに拡張させる。次いで、REP拡張細胞を採取し、洗浄し、血液輸送/注入バッグ中に製剤化して、宅配便によって臨床現場に発送する。TILベースの免疫療法の製造プロセスの図は、図34及び35に提供される。
TILベースの免疫療法最終製品の各凍結保存バッグを、患者特有のラベルでラベル付けした。TILベースの免疫療法は、患者に投与するために製造施設から臨床現場に発送された。
この実施例は、局所的に進行した切除不能または転移性NSCLCを有する患者におけるTILベースの免疫療法を評価する前向き、非盲検、マルチコホート、非ランダム化、多施設第2相研究に関連していた。
以下のコホートを研究した。
以下のコホートを研究した。
コホート1:既知のアクショナブルなドライバー変異がなく、CPI治療の前に腫瘍がPD-L1(腫瘍割合スコア[TPS]<1%)を発現しなかったステージIVのNSCLC患者、CPI+化学療法±ベバシズマブの併用からなる単一の承認された全身療法中またはその後に疾患進行が認められた患者、TIL産生のために直径が最小1.5cmの少なくとも1つの切除可能な病変(または凝集した病変)を有し、切除後にRECIST1.1によって定義されるように少なくとも1つの残りの測定可能な病変を有していた患者における、単剤療法としてのTILベースの免疫療法。
コホート2:既知のアクショナブルなドライバー変異がなく、CPI治療の前に腫瘍がPD-L1(TPS>1%)を発現したステージIVのNSCLC患者、CPI+化学療法±ベバシズマブの併用からなる単一の承認された全身療法中またはその後に疾患進行が認められた患者、及びTIL産生のために直径が最小1.5cmの少なくとも1つの切除可能な病変(または凝集した病変)を有し、切除後にRECIST1.1によって定義されるように少なくとも1つの残りの測定可能な病変を有していた患者における、単剤療法としてのTILベースの免疫療法。
コホート3:任意の既知のアクショナブルなドライバー変異がなく、腫瘍がCPI治療の前にPD-L1(TPS<1%)を発現しなかったステージIVのNSCLC患者、CPI+化学療法±ベバシズマブの併用からなる単一の承認された全身療法中またはその後に疾患進行が認められた患者、及び以下:1)許容できない外科的リスク、または2)外科的にアプローチ可能な病変が、RECIST評価のために必要である、のうちの少なくとも1つが原因でTIL生成のための外科的採取を安全に受けることができなかった患者における、単剤療法としてのTILベースの免疫療法。
コホート4:コホート1、2または3への参加の一環として以前にTILベースの免疫療法を受けた患者における、再治療としてのTILベースの免疫療法単剤療法。
コホート1、2、3、及び4について、すべての患者は、シクロホスファミド及びフルダラビンからなる骨髄非破壊的リンパ球枯渇(NMA-LD)前処置レジメンが先行して、自己凍結保存TILベースの免疫療法を受けた。TILベースの免疫療法注入後、最大6用量のIV IL-2(アルデスロイキンまたはそのバイオシミラーもしくはバリアントなど)を投与した。あるいは、デクレッシェンドIL-2または低用量IL-2を、本明細書に記載されるように使用してもよい。
TILベースの免疫療法による自己TIL療法には、以下の一般的なステップが含まれていた。
●自己TIL細胞製品のソースとして機能した自己組織を提供するための腫瘍採取、
●中央適正製造基準(GMP)施設における自己TILベースの免疫療法治験薬(IP)の製造、
●5日間の骨髄非破壊的リンパ球枯渇(NMA-LD)前処置レジメン、
●TILベースの免疫療法製品の注入(0日目)、及び
●6用量以下のIV IL-2の投与。
●自己TIL細胞製品のソースとして機能した自己組織を提供するための腫瘍採取、
●中央適正製造基準(GMP)施設における自己TILベースの免疫療法治験薬(IP)の製造、
●5日間の骨髄非破壊的リンパ球枯渇(NMA-LD)前処置レジメン、
●TILベースの免疫療法製品の注入(0日目)、及び
●6用量以下のIV IL-2の投与。
主な目的:
独立審査委員会(IRC)(コホート1及び2)または治験責任医師コホート3及びコホート4によって評価された、固形腫瘍の奏効評価基準(RECIST1.1)を使用して、客観的奏効率(ORR)によって決定されたチェックポイント阻害剤(複数可)(CPI[s])+化学療法±ベバシズマブからなる単一の承認された全身療法中またはその後に疾患進行が認められた、アクショナブルなドライバー変異がない、局所的に進行した切除不能または転移性のNSCLC患者におけるTILベースの免疫療法の有効性を評価した。
独立審査委員会(IRC)(コホート1及び2)または治験責任医師コホート3及びコホート4によって評価された、固形腫瘍の奏効評価基準(RECIST1.1)を使用して、客観的奏効率(ORR)によって決定されたチェックポイント阻害剤(複数可)(CPI[s])+化学療法±ベバシズマブからなる単一の承認された全身療法中またはその後に疾患進行が認められた、アクショナブルなドライバー変異がない、局所的に進行した切除不能または転移性のNSCLC患者におけるTILベースの免疫療法の有効性を評価した。
副次的目的:
RECIST1.1を使用してORRによって決定され、治験責任医師によって評価される(コホート1及び2)、TILベースの免疫療法の有効性を評価した。
RECIST1.1を使用してORRによって決定され、治験責任医師によって評価される(コホート1及び2)、TILベースの免疫療法の有効性を評価した。
完全奏効率(CR);奏効期間(DOR);疾患制御率(DCR);RECIST1.1を使用して、IRC(コホート1及び2)ならびに治験責任医師(すべてのコホート)によって評価される無増悪生存期間(PFS);ならびに全生存期間(OS)を使用して、TILベースの免疫療法の有効性をさらに評価した。
グレード≧3の治療下で発現した有害事象(TEAE)の発生率によって測定した、NSCLC患者におけるTILベースの免疫療法の安全性プロファイルを特徴付けた。
コホート3のみ:コア生検からTILベースの免疫療法を生成する効率を評価した。
探索的目的:
TILベースの免疫療法の持続性を評価し、反応、転帰、及び毒性変数に影響を与える可能性のある免疫相関を特定した。
TILベースの免疫療法の持続性を評価し、反応、転帰、及び毒性変数に影響を与える可能性のある免疫相関を特定した。
それぞれの適応症固有の健康関連生活の質(HRQoL)パラメータを評価した。
エンドポイント-主要エンドポイント:
ORRは、IRC(コホート1及び2)または治験責任医師(コホート3及び4)によってRECIST1.1に従って評価された。
ORRは、IRC(コホート1及び2)または治験責任医師(コホート3及び4)によってRECIST1.1に従って評価された。
エンドポイント-副次的エンドポイント:
重症度、重篤度、研究治療との関係、ならびに重篤な有害事象(SAE)、治療関連有害事象、及び早期治療中止または評価期間からの離脱または死亡につながる有害事象を含む、治療下で発現した有害事象(TEAE)の特徴。
重症度、重篤度、研究治療との関係、ならびに重篤な有害事象(SAE)、治療関連有害事象、及び早期治療中止または評価期間からの離脱または死亡につながる有害事象を含む、治療下で発現した有害事象(TEAE)の特徴。
RECIST1.1(コホート1及び2)に従ってIRCによって評価された、CR(完全奏効)率、DOR(奏効期間)、DCR(疾患制御率)、及びPFS(無増悪生存期間)。
RECIST1.1(すべてのコホート)に従って治験責任医師によって評価された、ORR(客観的奏効率)、CR率、DOR、DCR、及びPFS。
OS(全生存)。
コア生検から生成されたTIL製品の成功率(コホート3)。
エンドポイント-探索的エンドポイント:
TIL製品を含むT細胞のインビボ持続性を、経時的に患者の血液中のTIL製品特異的T細胞受容体-ベータ相補性決定領域3(CDR3)配列の存在を監視することによって評価した。製品及び末梢血試料中に存在するCDR3配列を、ディープシーケンシングを使用して同定した。
TIL製品を含むT細胞のインビボ持続性を、経時的に患者の血液中のTIL製品特異的T細胞受容体-ベータ相補性決定領域3(CDR3)配列の存在を監視することによって評価した。製品及び末梢血試料中に存在するCDR3配列を、ディープシーケンシングを使用して同定した。
TILベースの免疫療法の活性の予測及び薬力学的臨床バイオマーカーの同定を目的とした探索的エンドポイント:
●TILベースの免疫療法の表現型及び機能的特徴、
●腫瘍組織の免疫プロファイル、
●TIL製品、腫瘍組織、及び/またはPBMCの遺伝子発現プロファイル、
●腫瘍の変異ランドスケープ、
●循環免疫因子、ならびに
●PBMCの免疫組成物。
●TILベースの免疫療法の表現型及び機能的特徴、
●腫瘍組織の免疫プロファイル、
●TIL製品、腫瘍組織、及び/またはPBMCの遺伝子発現プロファイル、
●腫瘍の変異ランドスケープ、
●循環免疫因子、ならびに
●PBMCの免疫組成物。
欧州がん研究治療機関(EORTC)の生活の質質問票(QLQ)C30及びQLQ LC13によって評価されたHRQoL(健康関連の生活の質)。
研究デザインの詳細:
前向き、非盲検、マルチコホート、非ランダム化、多施設第2相研究では、TILベースの免疫療法による養子細胞療法(ACT)が評価された。
前向き、非盲検、マルチコホート、非ランダム化、多施設第2相研究では、TILベースの免疫療法による養子細胞療法(ACT)が評価された。
すべての患者は、以下のステップからなるTILベースの免疫療法を受けた。
●腫瘍採取は自己TIL細胞製品のソースとして機能する自己組織を提供した、
●中央適正製造基準(GMP)施設における自己TILベースの免疫療法治験薬(IP)の製造、
●5日間の骨髄非破壊的リンパ球枯渇(NMA-LD)前処置レジメン、
●TILベースの免疫療法製品の注入(0日目)、及び
●6用量以下のIV IL-2の投与。
●腫瘍採取は自己TIL細胞製品のソースとして機能する自己組織を提供した、
●中央適正製造基準(GMP)施設における自己TILベースの免疫療法治験薬(IP)の製造、
●5日間の骨髄非破壊的リンパ球枯渇(NMA-LD)前処置レジメン、
●TILベースの免疫療法製品の注入(0日目)、及び
●6用量以下のIV IL-2の投与。
別段の指定がない限り、以下の一般的な連続期間が4つのコホートすべてで発生する。
1.スクリーニング期間:インフォームドコンセントフォーム(ICF)の署名から登録まで
2.前治療期間:登録から調製NMA-LDレジメンの開始まで。
3.治療期間:調製NMA-LDの開始から治療終了(EOT)来院まで。これは、NMA-LD(-5日目~-1日目)、TILベースの免疫療法注入(0日目)、続いてIL-2投与(0日目または1~3日目または4日目)を含む、8~9日間の治療で構成された。EOTは、0日目のおよそ30日後に起こった。
4.治療後のフォローアップ期間。これは以下で構成されている。
a.治療後有効性フォローアップ期間(TEFU):疾患の進行または新しい抗がん療法の開始のいずれか早い方によって促される、EOT来院から研究完了(治療後5年[60ヶ月])または有効性評価終了(EOEA)来院まで。
b.長期フォローアップ期間(LTFU):上記のようなEOEAから研究完了まで(治療後5年[60ヶ月])。
1.スクリーニング期間:インフォームドコンセントフォーム(ICF)の署名から登録まで
2.前治療期間:登録から調製NMA-LDレジメンの開始まで。
3.治療期間:調製NMA-LDの開始から治療終了(EOT)来院まで。これは、NMA-LD(-5日目~-1日目)、TILベースの免疫療法注入(0日目)、続いてIL-2投与(0日目または1~3日目または4日目)を含む、8~9日間の治療で構成された。EOTは、0日目のおよそ30日後に起こった。
4.治療後のフォローアップ期間。これは以下で構成されている。
a.治療後有効性フォローアップ期間(TEFU):疾患の進行または新しい抗がん療法の開始のいずれか早い方によって促される、EOT来院から研究完了(治療後5年[60ヶ月])または有効性評価終了(EOEA)来院まで。
b.長期フォローアップ期間(LTFU):上記のようなEOEAから研究完了まで(治療後5年[60ヶ月])。
研究参加者(登録患者)は、早期にLTFUに移行する(例えば、同意の部分的撤回、または何らかの理由でTILベースの免疫療法を受けないと判断された場合)。研究の早期中止は、治験依頼者による同意撤回、死亡、フォローアップ不能、または研究終了のいずれかによって促された。研究デザインのフローチャートを図36に提示する。
詳細な用量及び治療スケジュール:
TILベースの免疫療法
患者は、0日目(すなわち、-5日目~-1日目)に予定されているTILベースの免疫療法注入の前に開始された5日間の前処置NMA-LDレジメンを受ける。NMA LDレジメンは、-5日目及び-4日目のメスナ(現場の標準治療またはUSPI/SmPC毎)を伴う2日間の静脈内(IV)シクロホスファミド(60mg/kg)、及び5日間のフルダラビンIV(25mg/m2、-5日目~-1日目)で構成された。
TILベースの免疫療法
患者は、0日目(すなわち、-5日目~-1日目)に予定されているTILベースの免疫療法注入の前に開始された5日間の前処置NMA-LDレジメンを受ける。NMA LDレジメンは、-5日目及び-4日目のメスナ(現場の標準治療またはUSPI/SmPC毎)を伴う2日間の静脈内(IV)シクロホスファミド(60mg/kg)、及び5日間のフルダラビンIV(25mg/m2、-5日目~-1日目)で構成された。
600,000IU/kgの用量でIVでのIL-2 IV投与は、0日目のTILベースの免疫療法注入の完了の3時間後、ただし24時間後までに開始された。追加のIL-2用量は、およそ8~12時間毎に、最大6回の合計用量で与えた。
メスナの調製
メスナは、シクロホスファミド投与に関連する出血性膀胱炎のリスクを低減するために投与された。メスナは、局所標準に従って連続的または断続的な注入として投与された。
メスナは、シクロホスファミド投与に関連する出血性膀胱炎のリスクを低減するために投与された。メスナは、局所標準に従って連続的または断続的な注入として投与された。
シクロホスファミドの量が減少した場合、メスナの総用量は調整されなかった。施設標準に従ってメスナ注入または注入の量を希釈する。
シクロホスファミド及びメスナの注入
250mLまたは500mLの総体積通のシクロホスファミド(60mg/kg)(例えば、水[D5W]中5%のデキストロースまたは0.9%の塩化ナトリウム[NaCl])。
250mLまたは500mLの総体積通のシクロホスファミド(60mg/kg)(例えば、水[D5W]中5%のデキストロースまたは0.9%の塩化ナトリウム[NaCl])。
メスナ(15mg/kg)を、連続的に注入した場合、シクロホスファミドをおよそ2時間にわたって(-5日目及び-4日目に)注入し、次いで、各シクロホスファミド用量と同時に開始して24時間にわたって、好適な希釈剤中で残りの22時間、3mg/kg/時間の速度で注入した。
投与された総用量は、シクロホスファミドの用量の少なくとも1.3倍であった。出血性膀胱炎の予防のために、高用量または継続用量のメスナを投与することができる。
フルダラビンの注入
フルダラビン(25mg/m2)は、-5日目~-1日目の5日間連続して1日1回、およそ30分間にわたってIV投与されるものとした。
フルダラビン(25mg/m2)は、-5日目~-1日目の5日間連続して1日1回、およそ30分間にわたってIV投与されるものとした。
参加期間:
全体として、研究参加期間は、治療から完了まで最大5年となる。
全体として、研究参加期間は、治療から完了まで最大5年となる。
選択された包含基準:
NSCLC(扁平上皮、非扁平上皮、腺癌、大細胞、または混合組織型)の組織学的または病理学的に確定された診断を受けており、受けたCPI治療(すなわち、最初の治療選択を通知した歴史的TPS)の前に腫瘍割合スコア(TPS)によって決定されたPD-L1発現状態が文書化されていなければならない(コホート1及び3の場合、TPS<1%、ならびにコホート2の場合、TPS≧1%)。
NSCLC(扁平上皮、非扁平上皮、腺癌、大細胞、または混合組織型)の組織学的または病理学的に確定された診断を受けており、受けたCPI治療(すなわち、最初の治療選択を通知した歴史的TPS)の前に腫瘍割合スコア(TPS)によって決定されたPD-L1発現状態が文書化されていなければならない(コホート1及び3の場合、TPS<1%、ならびにコホート2の場合、TPS≧1%)。
CPI及び化学療法を同時に含む単一の全身療法を受けており、この単一の全身療法では放射線疾患の進行が記録されている。
アジュバントまたはネオアジュバント設定における、または決定的な化学放射線療法の一部としての以前の全身療法は、疾患がそのような療法の完了の間または12ヶ月以内に進行しなかった場合、治療選択として計数されなかった。このプロトコルのTIL治療前は、コホート4(再治療)患者の治療選択として計数されなかった。
運動耐性が予想される年齢の正常範囲の85%以上であり、虚血または臨床的に重大な不整脈の徴候または症状はなかった。
米国東海岸がん臨床試験グループ(Eastern Cooperative Oncology Group、ECOG)のパフォーマンスステータスは0または1であり、治験責任医師の意見において、推定平均余命は6ヶ月超であった。
コホート1及び2:TIL産生のために、直径が最小1.5cmの切除可能な病変(または凝集病変)を少なくとも1つ有していなければならない。
コホート3のみ:患者は、単一のRECIST1.1測定可能な病変を有し、外科的採取のために利用可能な追加の病変がないか、またはTIL生成のために安全に外科的採取を受けることができないが、TIL生成のために十分な放射線学的ガイド付きコア生検を介して安全に腫瘍採取を有することができる。
コホート4:いずれかのパラダイムに従った。
すべてのコホート:採取を検討した病変が以前に照射された領域内にあった場合、病変は、採取前にX線画像による進行を示し、照射は登録の少なくとも3ヶ月前に完了していなければならない。患者は、プロトコルが必要とする検査に適正な組織病理標本を有していなければならない。
TIL製造のための腫瘍採取後、すべての患者は、以下の事項を考慮して、RECIST1.1によって定義されるように、少なくとも1つの残りの測定可能な病変を有していなければならない。
●以前に照射された領域内の病変は、それらの病変に進行が示され、照射が登録の少なくとも3ヶ月前に完了していない限り、標的病変として選択されなかった。
●コホート1及び2のみ:RECIST v1.1毎に依然として測定可能なTIL生成のために外科的に部分切除された病変を、非標的病変として選択することができるが、応答評価の標的病変としては機能することができなかった。
●コホート3のみ:TIL生成のコア生検に他の病変が利用できなかった場合、単一のRECIST v1.1測定可能病変が、コア生検の採取部位及び応答モニタリングの病変の両方として機能していた可能性がある。
●コホート4:いずれかのパラダイムに従ってもよいが、応答には少なくとも1つのRECIST v1.1測定可能な病変がある必要がある。
●以前に照射された領域内の病変は、それらの病変に進行が示され、照射が登録の少なくとも3ヶ月前に完了していない限り、標的病変として選択されなかった。
●コホート1及び2のみ:RECIST v1.1毎に依然として測定可能なTIL生成のために外科的に部分切除された病変を、非標的病変として選択することができるが、応答評価の標的病変としては機能することができなかった。
●コホート3のみ:TIL生成のコア生検に他の病変が利用できなかった場合、単一のRECIST v1.1測定可能病変が、コア生検の採取部位及び応答モニタリングの病変の両方として機能していた可能性がある。
●コホート4:いずれかのパラダイムに従ってもよいが、応答には少なくとも1つのRECIST v1.1測定可能な病変がある必要がある。
有効性評価:
NSCLC患者における単一療法としてのTILベースの免疫療法の以下の有効性パラメータを各コホートで調査した:ORR、CR率、DOR、DCR、PFS、及びOS。
NSCLC患者における単一療法としてのTILベースの免疫療法の以下の有効性パラメータを各コホートで調査した:ORR、CR率、DOR、DCR、PFS、及びOS。
統計上の考慮事項:
統計解析は、有効性及び安全性パラメータの推定に基づいており、コホート別に行われる。正式な統計学的比較は、コホート間で適用されなかった。
統計解析は、有効性及び安全性パラメータの推定に基づいており、コホート別に行われる。正式な統計学的比較は、コホート間で適用されなかった。
主要有効性エンドポイントは、IRC(コホート1及び2)または治験責任医師(コホート3及び4)によってRECIST v1.1に従って評価されたORRであった。
ORR、CR率、及びDCRを、Clopper-Pearson exact法に基づく点推定及び両側95%信頼限界を使用して要約した。DOR、PFS、及びOSなどの事象までの時間有効性エンドポイントを要約するために、Kaplan-Meier法を使用した。DOR分析は、客観的奏効を達成した患者に対して行った。
安全性解析は記述的であり、研究の中止、バイタルサイン、及び臨床検査につながるTEAE、SAE、及びAEの要約に基づいていた。
試料サイズの決定:
コホート1、2及び3において、TILベースの免疫療法を注入された計画患者の総数は、およそ95人であった。
コホート1、2及び3において、TILベースの免疫療法を注入された計画患者の総数は、およそ95人であった。
コホート1及び2:各コホートでおよそ40人の患者。各コホートについて、ミニマックスを用いたサイモンの2段階デザイン(Simon,1989)を使用して、ORR>10%の代替仮説に対する≦10% ORRの帰無仮説を検証した。第1段階では、25人の患者が集められた。これらの25人の患者で治療に応答する患者が2人以下であれば、コホートを終了することができた。それ以外の場合、ステージ1の解析と同時に、合計40人の患者に対してステージ2への拡張が起こった。第2段階の終わりに、合計40人の患者のうち少なくとも7人の患者が治療に反応した場合、帰無仮説は却下された。この2段階デザインは、0.1の片側アルファレベルでのTILベースの免疫療法のための20% ORRの仮定に基づいて、10% ORRの帰無仮説を却下するために70%のパワーを提供した。
コホート3:およそ15人の患者が計画され、これにより、Clopper-Pearson exact法による半幅90%信頼区間(CI)<0.23の推定ORRが得られた。
コホート4:再治療コホート:この研究のコホート1、2または3でTILベースの免疫療法で以前に治療されたことのある患者。
実施例17:再発性非小細胞肺癌(NSCLC)患者に単独で投与されるIOVANCE腫瘍浸潤リンパ球(TIL)に対する完全奏効(CR):症例報告
序文
NSCLCは最も一般的で致命的ながんであり、世界的な有病率は年間200万人以上、170万人以上が死亡しています。治療の選択肢は限られており、白金ダブレット化学療法及びチェックポイント阻害剤(CPI)を含む標準治療に失敗した後の再発転移性NSCLC(mNSCLC)を有する患者の予後は依然として不良である。CPI後に進行した患者にとって、NSCLCには満たされていない重要な医療ニーズが残っている。
序文
NSCLCは最も一般的で致命的ながんであり、世界的な有病率は年間200万人以上、170万人以上が死亡しています。治療の選択肢は限られており、白金ダブレット化学療法及びチェックポイント阻害剤(CPI)を含む標準治療に失敗した後の再発転移性NSCLC(mNSCLC)を有する患者の予後は依然として不良である。CPI後に進行した患者にとって、NSCLCには満たされていない重要な医療ニーズが残っている。
腫瘍浸潤リンパ球(TIL)による養子細胞療法は、黒色腫、子宮頸癌、NSCLC及びHNSCCを単独でまたはチェックポイント阻害剤(CPI)と組み合わせて含む様々な悪性腫瘍において応答を示している。
PD-L1発現レベルが1%未満の重度に前治療された患者の症例研究において、TIL療法の安全性及び有効性が提示される。
方法
我々は、咳及び風邪の症状を呈した後に診断された転移性NSCLCを有する72歳の女性、非喫煙者について報告している。検査には、135mmの肺腫瘤を示す胸部コンピューター断層撮影(CT)が含まれていた。病期分類では、肺、脾臓及び結節性リンパ病変が同定された(T4N1M1b、ステージIVB)、PD-L1<1%)。生検により基底様扁平上皮細胞癌が確認された。治療法は、カルボプラチン及び+Nabパクリタキセルで開始したが、アレルギー反応及び耐容性の低さにより3サイクル後に中止した。第二選択の治療法は、ニボルマブからなり、疾患の進行により4サイクル後に中止した。患者のPD-L1レベルは、1%未満であった。次いで、ゲムシタビン及びシスプラチンダブレット療法の第三選択レジメンを投与した。4サイクル後にシスプラチンを中止し、6サイクル後にゲムシタビンを完了した。初期反応の後、疾患の進行が観察された。
我々は、咳及び風邪の症状を呈した後に診断された転移性NSCLCを有する72歳の女性、非喫煙者について報告している。検査には、135mmの肺腫瘤を示す胸部コンピューター断層撮影(CT)が含まれていた。病期分類では、肺、脾臓及び結節性リンパ病変が同定された(T4N1M1b、ステージIVB)、PD-L1<1%)。生検により基底様扁平上皮細胞癌が確認された。治療法は、カルボプラチン及び+Nabパクリタキセルで開始したが、アレルギー反応及び耐容性の低さにより3サイクル後に中止した。第二選択の治療法は、ニボルマブからなり、疾患の進行により4サイクル後に中止した。患者のPD-L1レベルは、1%未満であった。次いで、ゲムシタビン及びシスプラチンダブレット療法の第三選択レジメンを投与した。4サイクル後にシスプラチンを中止し、6サイクル後にゲムシタビンを完了した。初期反応の後、疾患の進行が観察された。
ゲムシタビンを完了してからおよそ4ヶ月後、疾患が横隔膜の下で急速に進行し、患者は(NCT03645928)、TILによるACTを評価する前向き、非盲検、マルチコホート、非ランダム化、多施設第2相研究に登録した。患者のECOGパフォーマンスステータスは1であり、ベースライン標的病変径和SODは50mmであり、TILを受ける前の研究では、スクリーニングからベースラインまでSODが127%増加した。患者は、TIL生成のために腫瘍切除を受け、単回療法及び1回治療としてTILを受けた。前処置化学療法は、シクロホスファミド/フルダラビン、次いでTIL、続いて3用量の600,000IU/kg IL-2(すなわち、アルデスロイキン)からなった。RECIST v1.1を使用して、治験責任医師による有効性評価とともに、治療の耐容性及び安全性を継続的に評価した。
結果
有害事象は、リンパ破壊及びIL-2の既知の毒性と一致していた。治療中に発生した有害事象は、急性、自己制限、管理可能であり、かつ持続期間が短かった。有害事象≧G3は、G4汎血球減少症、G3低血圧症及び菌血症に限定された。患者は、重篤な有害事象を経験しなかった。
有害事象は、リンパ破壊及びIL-2の既知の毒性と一致していた。治療中に発生した有害事象は、急性、自己制限、管理可能であり、かつ持続期間が短かった。有害事象≧G3は、G4汎血球減少症、G3低血圧症及び菌血症に限定された。患者は、重篤な有害事象を経験しなかった。
6週目に、標的病変におけるPRの部分奏効(44%減少)が患者の最初の評価で観察された。TILの投与後7ヵ月で、直径和(SOD)の低減が48%減少したとき、陽電子放射断層撮影(PET)CTを実施し、残留CT病変内で代謝活性を示さなかった。患者は、PET-CTによって完全奏効(CR)とみなされる。試験は、TIL投与後15ヶ月で継続し、総SOD減少率は60%に達した。患者は、TIL投与以来、他の抗がん療法を投与する必要がなかった。
結論
この症例提示は、本出願に記載のTILによる治療が、CPIを含む複数の標準的なケア療法の後にmNSCLCで疾患進行を有する転移性NSCLC患者に治療選択肢を提供することができることを実証する。登録は進行中であり、NSCLC患者におけるTILの影響を監視及び評価するための研究が続けられている。
この症例提示は、本出願に記載のTILによる治療が、CPIを含む複数の標準的なケア療法の後にmNSCLCで疾患進行を有する転移性NSCLC患者に治療選択肢を提供することができることを実証する。登録は進行中であり、NSCLC患者におけるTILの影響を監視及び評価するための研究が続けられている。
実施例18:凍結保存TIL細胞療法の例示的生産
この実施例は、現在の適正組織基準及び現在の適正製造基準に従った、G-REXフラスコ内のTIL細胞療法プロセスの例示的なcGMP製造を説明する。
この実施例は、現在の適正組織基準及び現在の適正製造基準に従った、G-REXフラスコ内のTIL細胞療法プロセスの例示的なcGMP製造を説明する。
主要なプロセス情報
0日目のCM1培地の調製
BSC内で、試薬をRPMI1640培地ボトルに追加した。ボトル当たり追加された以下の試薬を追加した:不活化ヒトAB血清(100.0mL)、GlutaMax(10.0mL)、硫酸ゲンタマイシン、50mg/mL(1.0mL)、2-メルカプトエタノール(1.0mL)を加熱した。
0日目のCM1培地の調製
BSC内で、試薬をRPMI1640培地ボトルに追加した。ボトル当たり追加された以下の試薬を追加した:不活化ヒトAB血清(100.0mL)、GlutaMax(10.0mL)、硫酸ゲンタマイシン、50mg/mL(1.0mL)、2-メルカプトエタノール(1.0mL)を加熱した。
BSCから不要な材料を取り出した。BSCから培地試薬を抜き取り、配合された洗浄培地の調製のために硫酸ゲンタマイシン及びHBSSをBSCの中に残した。
IL-2アリコートを解凍した。すべての氷が融解するまで、1つの1.1mLのIL-2アリコート(6×106IU/mL)(BR71424)を解凍した。IL-2:ロット番号及び有効期限を記録した。
IL-2ストック溶液を培地に移した。BSC内で、1.0mLのIL-2ストック溶液を、調製されたCM1の0日目培地ボトルに移した。CM1の0日目培地1ボトル及びIL-2(6×106IU/mL)1.0mLを追加した。
G-REX100MCSをBSCの中に通過させた。無菌的にG-REX100MCS(W3013130)をBSCの中に通過させた。
すべての完全なCM1の0日目培地をG-REX100MCSフラスコにポンプで注入した。組織断片円錐形またはGRex100MCS。
0日目の腫瘍洗浄培地の調製
BSC内で、5.0mLのゲンタマイシン(W3009832またはW3012735)を1本の500mLのHBSS培地(W3013128)ボトルに追加した。ボトル当たりの追加:HBSS(500.0mL)、硫酸ゲンタマイシン、50mg/mL(5.0mL)。1Lの0.22ミクロンフィルターユニット(W1218810)を通して調製されたゲンタマイシンを含有するHBSSを濾過した。
BSC内で、5.0mLのゲンタマイシン(W3009832またはW3012735)を1本の500mLのHBSS培地(W3013128)ボトルに追加した。ボトル当たりの追加:HBSS(500.0mL)、硫酸ゲンタマイシン、50mg/mL(5.0mL)。1Lの0.22ミクロンフィルターユニット(W1218810)を通して調製されたゲンタマイシンを含有するHBSSを濾過した。
0日目の腫瘍処理
腫瘍を取得した。QARから腫瘍検体を取得し、即時に処理のために2~8℃における部屋に移した。
腫瘍を取得した。QARから腫瘍検体を取得し、即時に処理のために2~8℃における部屋に移した。
腫瘍洗浄培地を等分した。
8インチ鉗子(W3009771)を使用した腫瘍洗浄1、検体ボトルから腫瘍を取り出し、調製された「洗浄1」皿に移した。腫瘍洗浄2及び腫瘍洗浄3が続いた。
腫瘍を測定した。腫瘍を評価した。腫瘍領域全体の30%未満が壊死及び/または脂肪組織であることが観察されたかどうかを評価した。該当する場合:クリーンアップ解剖。腫瘍が大きく、外部の組織の30%未満が壊死/脂肪性であることが観察された場合、メス及び/または鉗子の組み合わせを使用して、腫瘍の内側構造を温存しながら壊死/脂肪組織を除去することによって、「クリーンアップ解剖」を行った。
メス及び/または鉗子の組み合わせを使用して、腫瘍を解剖し、腫瘍検体を均等で適切なサイズの断片(最大6つの中間断片)に切断した。中間腫瘍断片を移した。腫瘍断片をサイズが約3×3×3mmの切片に解剖した。乾燥を防止するために中間断片を保存した。
中間断片解剖を繰り返した。収集された切片の数を決定した。望ましい組織が残っている場合、「好ましい中間断片」6ウェルプレートから追加の好ましい腫瘍片を選択し、最大50片のために液滴を充填した。
コニカルチューブを準備した。腫瘍片を50mLコニカルチューブに移した。G-REX100MCSのためにBSCを準備した。インキュベーターからG-REX100MCSを取り出した。無菌的にG-REX100MCSフラスコをBSCの中に通過させた。腫瘍断片をG-REX100MCSフラスコに追加した。切片を均等に分配した。
以下のパラメータにおいてG-REX100MCSをインキュベートした:G-REXフラスコをインキュベートした:温度LEDディスプレイ:37.0±2.0℃、CO2パーセンテージ:5.0±1.5 %CO2.計算:培養の時間、下限=培養の時間+252時間、上限=培養の時間+276時間。
プロセスが完了した後、いずれの残りの温められた培地も廃棄し、IL-2のアリコートを解凍した。
11日目-培地の調製
インキュベーターを監視した。インキュベーターを監視した。インキュベーターパラメータ:温度LEDディスプレイ:37.0±2.0℃、CO2パーセンテージ:5.0±1.5 %CO2.
インキュベーターを監視した。インキュベーターを監視した。インキュベーターパラメータ:温度LEDディスプレイ:37.0±2.0℃、CO2パーセンテージ:5.0±1.5 %CO2.
3本の1000mLのRPMI1640培地(W3013112)ボトル及び3本の1000mLのAIM-V(W3009501)をインキュベーター内で30分間以上温めた。インキュベーターからRPMI1640培地を取り出した。RPMI1640培地を調製した。培地を濾過した。3つのIL-2の1.1mLのアリコート(6×106IU/mL)(BR71424)を解凍した。インキュベーターからAIM-V培地を取り出した。IL-2をAIM-Vに追加した。10LのLabtainerバッグ及びリピータポンプ移送セットをBSCの中に無菌的に移した。
10LのLabtainer培地バッグを準備した。Baxaポンプを準備した。10LのLabtainer培地バッグを準備した。培地を10LのLabtainerにポンプで注入した。Labtainerバッグからポンプマティックを取り出した。
培地を混合した。バッグを穏やかにマッサージして混合した。試料計画に従って培地を試料採取した。20.0mLの培地を取り出し、50mLコニカルチューブに入れた。
BSC内で細胞計数希釈チューブを準備し、「細胞計数希釈液用」及びロット番号でラベル付けされた4.5mLのAIM-V培地を4本の15mLコニカルチューブに追加した。BSCから2~8℃に試薬を移送した。1L移送パックを準備した。(プロセス注記5.11に従って)BSC溶接の外側で、「完全なCM2の11日目培地」バッグに取り付けられた移送セットへの1L移送パックを準備した。フィーダー細胞移送パックを準備した。完全なCM2の11日目培地をインキュベートした。
11日目-TIL採取
前処理表。インキュベーターパラメータ:温度LEDディスプレイ:37.0±2.0℃、CO2パーセンテージ:5.0±1.5 %CO2.インキュベーターからG-REX100MCSを取り出した。300mL移送パックを準備した。移送パックをG-REX100MCSに溶接した。
前処理表。インキュベーターパラメータ:温度LEDディスプレイ:37.0±2.0℃、CO2パーセンテージ:5.0±1.5 %CO2.インキュベーターからG-REX100MCSを取り出した。300mL移送パックを準備した。移送パックをG-REX100MCSに溶接した。
TIL採取及びTIL採取の開始のためにフラスコを準備した。TILが採取された。GatheRexを使用して、血液フィルターを通して300mL移送パックの中に細胞懸濁液を移した。付着した細胞について膜を点検した。
フラスコ膜をすすいだ。G-REX100MCS上のクランプを閉じた。すべてのクランプが閉じられていることを確実にした。TIL及び「上清」移送パックを熱融着した。TIL懸濁液の体積を計算した。試料採取のために上清移送パックを準備した。
Bac-T試料を引き出した。BSC内で、1L「上清」移送パックから約20.0mLの上清を引き上げ、滅菌50mLコニカルチューブに分注する。
試料計画に従ってBacTを接種した。適切なサイズのシリンジを使用して調製されたBacTとラベル付けされた50mLコニカルから1.0mLの試料を取り出し、嫌気性ボトルに接種した。
TILをインキュベートした。必要とされるまでTIL移送パックをインキュベーターに入れた。細胞計数及び計算を行った。行われた細胞計数の生細胞濃度及び生存率の平均を決定した。生存率÷2。生細胞濃度÷2。計数の上限及び下限を決定した。下限:生細胞濃度の平均×0.9。上限:生細胞濃度の平均×1.1。許容限界内の両方の計数を確認した。行われた4つすべての計数から平均生細胞濃度を決定した。
TIL懸濁液の体積を調整した。細胞計数試料を取り出した後のTIL懸濁液の調整された体積を計算する。総TIL細胞体積(A)。除去された細胞計数試料の体積(4.0ml)(B)調整された総TIL細胞体積C=A-B。
総生TIL細胞を計算した。平均総細胞濃度*:総体積、総生細胞:C=A×B.
フローサイトメトリーのための計算:総生TIL細胞数が4.0×107個以上であった場合、フローサイトメトリー試料のために1.0×107個の細胞を取得するための体積を計算した。
フローサイトメトリーに必要とされる総生細胞:1.0×107個の細胞。フローサイトメトリーに必要とされる細胞の体積:1.0×107個の細胞Aで除算された生細胞濃度。
2.0×108個の生細胞に等しいTIL懸濁液の体積を計算した。必要に応じて、取り出すTIL細胞の過剰体積を計算し、過剰なTILを取り出し、必要に応じてTILをインキュベーターに入れた。必要に応じて、取り出された全過剰TILを計算した。
凍結のための標的細胞濃度が1.0×108細胞/mLである過剰なTIL細胞に追加するCS-10培地の量を計算した。必要に応じて、過剰なTILを遠心分離した。コニカルチューブを観察し、CS-10を追加した。
バイアルを充填した。適当なサイズのクライオバイアルに等分された1.0mL細胞懸濁液。SOP-00242毎の適切なサイズのクライオバイアルに等分された残余の体積。体積が≦0.5mLである場合、体積が0.5mLになるまでCS10をバイアルに追加する。
試料のTIL凍結保存
凍結保存のための1×107個の細胞を取得するために必要とされる細胞の体積を計算した。凍結保存のために試料を取り出した。TILをインキュベーターに入れた。
試料の凍結保存
凍結保存のための1×107個の細胞を取得するために必要とされる細胞の体積を計算した。凍結保存のために試料を取り出した。TILをインキュベーターに入れた。
試料の凍結保存
コニカルチューブを観察し、CS-10をゆっくりと追加し、追加された0.5mLのCS10を記録した。
11日目-フィーダー細胞
フィーダー細胞を取得した。LN2冷凍庫から少なくとも2つの異なるロット番号を伴うフィーダー細胞の3つのバッグを取得した。解凍する準備が整うまで、細胞をドライアイス上で保管した。水浴またはCryothermを準備した。37.0±2.0℃の水浴またはcytothermにおいて約3~5分間、または氷が消滅するまで、フィーダー細胞を解凍した。インキュベーターから培地を取り出した。解凍されたフィーダー細胞をプールした。フィーダー細胞を移送パックに追加した。シリンジから移送パックにフィーダー細胞を分注した。プールされたフィーダー細胞を混合し、移送パックをラベル付けした。
フィーダー細胞を取得した。LN2冷凍庫から少なくとも2つの異なるロット番号を伴うフィーダー細胞の3つのバッグを取得した。解凍する準備が整うまで、細胞をドライアイス上で保管した。水浴またはCryothermを準備した。37.0±2.0℃の水浴またはcytothermにおいて約3~5分間、または氷が消滅するまで、フィーダー細胞を解凍した。インキュベーターから培地を取り出した。解凍されたフィーダー細胞をプールした。フィーダー細胞を移送パックに追加した。シリンジから移送パックにフィーダー細胞を分注した。プールされたフィーダー細胞を混合し、移送パックをラベル付けした。
移送パック内のフィーダー細胞懸濁液の総体積を計算した。
細胞計数試料を取り出した。各試料に別個の3mLシリンジを使用して、不要注入ポートを使用してフィーダー細胞懸濁液移送パックから4×1.0mLの細胞計数試料を引き出した。各試料をラベル付けされたクライオバイアルに等分した。細胞計数を行い、増倍率を決定し、プロトコルを選択し、増倍率を入力した。行われた細胞計数の生細胞濃度及び生存率の平均を決定した。計数の上限及び下限を決定し、限界内で確認した。
フィーダー細胞懸濁液の体積を調整した。細胞計数試料を取り出した後のフィーダー細胞懸濁液の調整された体積を計算した。全生存フィーダー細胞を計算した。必要に応じて追加のフィーダー細胞を取得した。必要に応じて追加のフィーダー細胞を解凍した。第4のフィーダー細胞バッグをジップトップバッグに入れ、37.0±2.0℃の水浴またはcytotherm内で約3~5分間解凍し、追加のフィーダー細胞をプールした。体積を測定した。シリンジ内のフィーダー細胞の体積を測定し、以下に記録した(B)。フィーダー細胞の新しい総体積を計算した。フィーダー細胞を移送パックに追加した。
必要に応じて希釈液を調製し、4.5mLのAIM-V培地を4本の15mLコニカルチューブに追加した。細胞計数を準備した。各試料に別個の3mLシリンジを使用して、不要注入ポートを使用して、フィーダー細胞懸濁液移送パックから4×1.0mLの細胞計数試料を取り出した。細胞計数及び計算を行った。行われた4つすべての計数から平均生細胞濃度を決定した。フィーダー細胞懸濁液の体積を調整し、細胞計数試料を除去した後のフィーダー細胞懸濁液の調整された体積を計算した。4.0mLを差し引いた総フィーダー細胞体積が取り出された。5×109個の生存フィーダー細胞を取得するために必要とされたフィーダー細胞懸濁液の体積を計算した。過剰なフィーダー細胞体積を計算した。取り出す過剰なフィーダー細胞の体積を計算した。過剰なフィーダー細胞を取り出した。
1.0mLシリンジ及び16G針を使用して、0.15mLのOKT3を引き上げ、OKT3を追加した。フィーダー細胞懸濁液移送パックを熱融着した。
11日目のG-REX充填及び播種
G-REX500MCSを設定した。「完全なCM2の11日目培地」をインキュベーターから取り出し、培地をG-REX500MCSにポンプで注入した。4.5Lの培地をG-REX500MCSにポンプで注入し、フラスコ上にマークされたラインまで充填した。必要に応じてフラスコを熱融着し、インキュベートした。フィーダー細胞の懸濁液移送パックを、G-REX500MCSに溶接した。フィーダー細胞をG-REX500MCSに追加した。熱融着した。TIL懸濁液移送パックをフラスコに溶接した。TILをG-REX500MCSに追加した。熱融着した。G-REX500MCSを37.0±2.0℃でインキュベートした。CO2パーセンテージ:5.0±1.5 %CO2.
G-REX500MCSを設定した。「完全なCM2の11日目培地」をインキュベーターから取り出し、培地をG-REX500MCSにポンプで注入した。4.5Lの培地をG-REX500MCSにポンプで注入し、フラスコ上にマークされたラインまで充填した。必要に応じてフラスコを熱融着し、インキュベートした。フィーダー細胞の懸濁液移送パックを、G-REX500MCSに溶接した。フィーダー細胞をG-REX500MCSに追加した。熱融着した。TIL懸濁液移送パックをフラスコに溶接した。TILをG-REX500MCSに追加した。熱融着した。G-REX500MCSを37.0±2.0℃でインキュベートした。CO2パーセンテージ:5.0±1.5 %CO2.
インキュベーション時間帯を計算した。16日目にインキュベーターからG-REX500MCSを取り出すための適切な時間を決定するための計算を行った。下限:インキュベーションの時間+108時間。上限:インキュベーションの時間+132時間。
11日目の過剰TIL凍結保存
該当:過剰TILバイアルを凍結させた。凍結前にCRFが設定されていることを検証した。凍結保存を行った。バイアルを速度制御された冷凍庫から適切な保管場所に移した。凍結の完了時に、バイアルをCRFから適切な保管容器に移した。バイアルを適切な保管場所に移した。LN2における保管場所を記録した。
該当:過剰TILバイアルを凍結させた。凍結前にCRFが設定されていることを検証した。凍結保存を行った。バイアルを速度制御された冷凍庫から適切な保管場所に移した。凍結の完了時に、バイアルをCRFから適切な保管容器に移した。バイアルを適切な保管場所に移した。LN2における保管場所を記録した。
16日目の培地の調製
AIM-V培地を事前に温めた。培地バッグ1、2、及び3について培地が温められた時間を計算した。すべてのバッグが12~24時間の持続時間にわたって温められていることを確実にした。上清用の10LのLabtainerを設定した。ルアーコネクタを使用して、流体ポンプ移送セットのより大きな直径の端部を10LのLabtainerバッグのメス型ポートのうちの1つに取り付けた。上清用の10LのLabtainerを設定し、ラベル付けした。上清用の10LのLabtainerを設定した。BSCから取り出す前に、すべてのクランプが閉じられていることを確実にした。注記:上清バッグは、培地調製と同時に行われ得るTIL採取中に使用された。
AIM-V培地を事前に温めた。培地バッグ1、2、及び3について培地が温められた時間を計算した。すべてのバッグが12~24時間の持続時間にわたって温められていることを確実にした。上清用の10LのLabtainerを設定した。ルアーコネクタを使用して、流体ポンプ移送セットのより大きな直径の端部を10LのLabtainerバッグのメス型ポートのうちの1つに取り付けた。上清用の10LのLabtainerを設定し、ラベル付けした。上清用の10LのLabtainerを設定した。BSCから取り出す前に、すべてのクランプが閉じられていることを確実にした。注記:上清バッグは、培地調製と同時に行われ得るTIL採取中に使用された。
IL-2を解凍した。すべての氷が融解するまで、CTS AMI V培地の1つのバッグ当たりIL-2(6×106IU/mL)(BR71424)の5×1.1mLアリコートを解凍した。100.0mLのGlutaMaxを等分した。IL-2をGlutaMaxに追加した。配合用のCTS AIM V培地バッグを準備した。配合用のCTS AIM V培地バッグを準備した。ステージBaxaポンプ。培地を配合することを準備した。GlutaMax+IL-2をバッグにポンプで注入した。パラメータを監視した:温度LEDディスプレイ:37.0±2.0℃、CO2パーセンテージ:5.0±1.5 %CO2.完全なCM4の16日目培地を温めた。希釈液を調製した。
16日目のREP分割
インキュベーターパラメータを監視した:温度LEDディスプレイ:37.0±2.0℃、CO2パーセンテージ:5.0±1.5 %CO2.インキュベーターからG-REX500MCSを取り出した。1Lの移送パックを準備し、TIL懸濁液としてラベル付けし、1Lの重量を量った。
インキュベーターパラメータを監視した:温度LEDディスプレイ:37.0±2.0℃、CO2パーセンテージ:5.0±1.5 %CO2.インキュベーターからG-REX500MCSを取り出した。1Lの移送パックを準備し、TIL懸濁液としてラベル付けし、1Lの重量を量った。
G-REX500MCSの減容約4.5Lの培養上清をG-REX500MCSからSOP-01777当たり10LのLabtainerに移した。
TIL採取用のフラスコを準備した。上清を取り出した後に、赤色ラインへのすべてのクランプを閉じた。
TIL採取の開始。フラスコを激しく叩き、培地を旋回させて細胞を解放し、すべての細胞が引き離されていることを確実にする。
TIL採取。TIL懸濁液移送パックにつながるすべてのクランプを解放した。GatheRexを使用して、細胞懸濁液をTIL懸濁液移送パックの中に移した。注記:すべての細胞及び培地が収集されるまで、傾斜した縁を必ず維持すること。付着した細胞について膜を点検した。フラスコ膜をすすいだ。G-REX100MCS上のクランプを閉じた。TILを含む移送パックを熱融着した。上清を含む10LのLabtainerを熱融着した。細胞懸濁液を伴う移送パックの重量を記録し、細胞懸濁液を計算した。試料を取り出すための移送パックを準備した。細胞上清から試験試料を取り出した。
無菌性及びBacT試験試料採取:調製されたBacTとラベル付けされた15mLのコニカルから1.0mLの試料を取り出した。細胞計数試料を取り出した。BSC内で、各試料に別個の3mLシリンジを使用して、「TIL懸濁液」移送パックから4×1.0mLの細胞計数試料を取り出した。
マイコプラズマ試料を取り出した。3mLシリンジを使用して、TIL懸濁液移送パックから1.0mLを取り出し、調製された「マイコプラズマ希釈液」とラベル付けされた15mLコニカルに入れた。
播種用の移送パックを準備した。TILをインキュベーターに入れた。細胞懸濁液をBSCから取り出し、必要とされるまでインキュベーターに入れた。細胞計数及び計算を行った。最初に、0.5mLの細胞懸濁液を調製された4.5mLのAIM-V培地に追加することによって、細胞計数試料を希釈し、1:10希釈液を生じた。行われた細胞計数の生細胞濃度及び生存率の平均を決定した。計数の上限及び下限を決定した。注記:希釈は、細胞の期待濃度に基づいて調整され得る。行われた4つすべての計数から平均生細胞濃度を決定した。TIL懸濁液の体積を調整した。細胞計数試料を取り出した後のTIL懸濁液の調整された体積を計算した。5.0mLを差し引いた総TIL細胞体積が試験のために取り出された。
総生TIL細胞を計算した。播種するフラスコの総数を計算した。注記:播種するG-REX500MCSフラスコの最大数は5であった。播種するフラスコの計算された数が5つを超えた場合、5つのみが利用可能な細胞懸濁液の体積全体を使用して播種された。
二次培養用のフラスコの数を計算した。準備されたバッグに加えて必要とされる培地バッグの数を計算した。計算されたように必要とされる2つのG-REX-500Mフラスコ毎に「CM4の16日目培地」の1つの10Lバッグを準備した。追加の培地が調製され、温められている間に、続けて第1のGREX-500Mフラスコ(複数可)を播種した。計算された数の決定された追加の培地バッグを調製し、温めた。G-REX500MCSを充填した。培地をポンプで注入するように準備し、4.5Lの培地をG-REX500MCSにポンプで注入した。熱融着した。充填を繰り返した。フラスコをインキュベートした。新しいG-REX500MCSフラスコに追加するTIL懸濁液の標的体積を計算した。フラスコの計算された数が5つを超える場合、5つのみが細胞懸濁液の体積全体を使用して播種されるであろう。播種用のフラスコを準備した。インキュベーターからG-REX500MCSを取り出した。ポンプで注入するためのG-REX500MCSを準備した。大型フィルターラインを除くすべてのクランプを閉じた。インキュベーターからTILを取り出した。播種用の細胞懸濁液を調製した。(プロセス注記5.11に従って)「TIL懸濁液」移送パックをポンプ入口ラインに滅菌溶接した。TIL懸濁液バッグを秤の上に置いた。
フラスコにTIL懸濁液を播種した。計算されたTIL懸濁液の体積をフラスコにポンプで注入した。熱融着した。残りのフラスコを充填した。
インキュベーターを監視した。インキュベーターパラメータ:温度LEDディスプレイ:37.0±2.0℃、CO2パーセンテージ:5.0±1.5 %CO2.フラスコをインキュベートした。
22日目にインキュベーターからG-REX500MCSを取り出す時間範囲を決定した。
22日目の洗浄緩衝液の調製
10LのLabtainerバッグを準備した。BSC内で、ルアー接続を介して4インチ血漿移送セットを10LのLabtainerバッグに取り付けた。10LのLabtainerバッグを準備した。BSCから外に移す前に、すべてのクランプを閉じた。注記:採取される2つのG-REX500MCSフラスコ毎に、1つの10L Labtainerバッグを準備した。Plasmalyteを3000mLバッグにポンプで注入し、ポンプを反転させてバッグの位置を操作することによって、3000mLのOrigenバッグから空気を除去した。ヒトアルブミン25%を3000mLバッグに追加した。120.0mLの最終体積のヒトアルブミン25%を取得した。
10LのLabtainerバッグを準備した。BSC内で、ルアー接続を介して4インチ血漿移送セットを10LのLabtainerバッグに取り付けた。10LのLabtainerバッグを準備した。BSCから外に移す前に、すべてのクランプを閉じた。注記:採取される2つのG-REX500MCSフラスコ毎に、1つの10L Labtainerバッグを準備した。Plasmalyteを3000mLバッグにポンプで注入し、ポンプを反転させてバッグの位置を操作することによって、3000mLのOrigenバッグから空気を除去した。ヒトアルブミン25%を3000mLバッグに追加した。120.0mLの最終体積のヒトアルブミン25%を取得した。
IL-2希釈液を調製した。10mLシリンジを使用して、LOVO洗浄緩衝液バッグ上の無針注入ポートを使用して、5.0mLのLOVO洗浄緩衝液を取り出した。LOVO洗浄緩衝液を50mLコニカルチューブに分注した。
CRFブランクバッグLOVO洗浄緩衝液が等分された。100mLシリンジを使用して、無針注入ポートから70.0mLのLOVO洗浄緩衝液を引き上げた。
IL-2を解凍した。すべての氷が融解するまで、1つの1.1mLのIL-2(6×106IU/mL))を解凍した。IL-2の調製。50μLのIL-2ストック(6×106IU/mL)を、「IL-2希釈液」とラベル付けされた50mLコニカルチューブに追加した。
凍結保存調製。5つのクライオカセットを2~8℃に置き、最終製品の凍結保存のためにそれらを前調整した。
細胞計数希釈液を調製した。BSC内で、ロット番号及び「細胞計数希釈液用」でラベル付けされた4.5mLのAIM-V培地を4本の別個の15mLコニカルチューブに追加した。細胞計数を準備した。4つのクライオバイアルをバイアル番号(1~4)でラベル付けした。使用されるBSCの下でバイアルを保存した。
22日目のTIL採取
インキュベーターを監視した。インキュベーターパラメータ温度LEDディスプレイ:37±2.0℃のCO2パーセンテージ:5%±1.5%.インキュベーターからG-REX500MCSフラスコを取り外した。TIL収集バッグを準備し、ラベル付けした。余分な接続を密封した。減容:約4.5Lの上清をG-REX500MCSから上清バッグに移した。
インキュベーターを監視した。インキュベーターパラメータ温度LEDディスプレイ:37±2.0℃のCO2パーセンテージ:5%±1.5%.インキュベーターからG-REX500MCSフラスコを取り外した。TIL収集バッグを準備し、ラベル付けした。余分な接続を密封した。減容:約4.5Lの上清をG-REX500MCSから上清バッグに移した。
TIL採取用のフラスコを準備した。TILの収集を開始した。フラスコを激しく叩き、培地旋回させて細胞を解放した。すべての細胞が引き離されていることを確実にした。TILの収集を開始した。TIL懸濁液収集バッグにつながるすべてのクランプを解放した。TIL採取。GatheRexを使用して、TIL懸濁液を3000mL収集バッグの中に移した。付着した細胞について膜を点検した。フラスコ膜をすすいだ。G-Rex500MCS上のクランプを閉じ、すべてのクランプが閉じていることを確実にした。細胞懸濁液をLOVOソースバッグの中に移した。すべてのクランプを閉じた。熱融着した。4×1.0mLの細胞計数試料を取り出した。
細胞計数を行った。NC-200及びプロセス注記5.14を利用して、細胞計数及び計算を行った。最初に、0.5mLの細胞懸濁液を調製された4.5mLのAIM-V培地の中に追加することによって、細胞計数試料を希釈した。これは、1:10希釈液を生じた。行われた細胞計数の平均生存率、生細胞濃度、及び総有核細胞濃度を決定した。計数の上限及び下限を決定した。行われた細胞計数の平均生存率、生細胞濃度、及び総有核細胞濃度を決定した。LOVOソースバッグの重量を量った。総生TIL細胞を計算した。総有核細胞を計算した。
マイコプラズマ希釈液を調製した。ルアー試料ポートを介して1つの上清バッグから10.0mLを取り出し、15mLコニカルに入れた。
LOVO
「TIL G-REX採取」プロトコルを行い、最終製品の標的体積を決定した。使い捨てキットを装填した。濾液バッグを取り出した。濾液容量を入力した。濾液容器をベンチトップの上に置いた。PlasmaLyteを取り付けた。PlasmaLyteが取り付けられていることを検証し、PlasmaLyteが動いていることを観察した。ソース容器をチューブに取り付け、ソース容器が取り付けられていることを検証した。PlasmaLyteが動いていることを確認した。
「TIL G-REX採取」プロトコルを行い、最終製品の標的体積を決定した。使い捨てキットを装填した。濾液バッグを取り出した。濾液容量を入力した。濾液容器をベンチトップの上に置いた。PlasmaLyteを取り付けた。PlasmaLyteが取り付けられていることを検証し、PlasmaLyteが動いていることを観察した。ソース容器をチューブに取り付け、ソース容器が取り付けられていることを検証した。PlasmaLyteが動いていることを確認した。
最終製剤及び充填
標的体積/バッグの計算。ブランクバッグを配合するためのCS-10及びLOVO洗浄緩衝液の体積を計算した。CRFブランクを調製した。
標的体積/バッグの計算。ブランクバッグを配合するためのCS-10及びLOVO洗浄緩衝液の体積を計算した。CRFブランクを調製した。
最終製品に追加するIL-2の体積を計算した。所望される最終IL-2濃度(IU/mL)-300IU/mL。IL-2作業ストック:6×104IU/mL.接続装置を組み立てた。4S-4M60をCC2細胞接続に滅菌溶接した。(プロセス注記5.11に従って)CS750クライオバッグを準備されたハーネスに滅菌溶接した。CS-10バッグを4S-4M60のスパイクに溶接した。IL-2を用いてTILを調製した。適切なサイズのシリンジを使用して、「IL-2 6×104」アリコートから決定されたIL-2の量を取り出した。配合されたTILバッグをラベル付けした。配合されたTILバッグを装置に追加した。CS10を追加した。シリンジを交換した。約10mLの空気を100mLシリンジに引き込み、装置上の60mLシリンジを交換した。CS10を追加した。CS-750バッグを準備した。細胞を分注した。
最終製品バッグから空気を除去し、保持液を得た。最後の最終製品バッグが充填されると、すべてのクランプを閉じた。10mLの空気を新しい100mLのシリンジに引き込み、装置上のシリンジを交換した。保持液を50mLコニカルチューブに分注し、チューブを「保持液」及びロット番号としてラベル付けした。各バッグについて空気除去ステップを繰り返した。
目視検査を含み、凍結保存のための最終製品を調製した。凍結保存までクライオバッグを低温パック上で、または2~8℃で保持した。
細胞計数試料を取り出した。適切なサイズのピペットを使用して、2.0mLの保持液を取り出し、細胞計数に使用されるために15mLコニカルチューブに入れた。細胞計数及び計算を行った。注記:1つだけの試料を適切な希釈に希釈し、希釈が十分であることを検証した。追加の試料を適切な希釈倍率に希釈し、計数を進めた。行われた細胞計数の生細胞濃度及び生存率の平均を決定した。計数の上限及び下限を決定した。注記:希釈は、細胞の期待濃度に基づいて調整され得る。生細胞濃度及び生存率の平均を決定した。計数の上限及び下限を決定した。IFN-γを計算した。最終製品バッグを熱融着した。
以下の例示的試料計画に従って試料をラベル付けし、収集した。
無菌性及びBacT。試験試料採取。BSC内で、適切なサイズのシリンジを使用して収集された保持細胞懸濁液から1.0mLの試料を取り出し、嫌気性ボトルに接種する。好気性ボトルについて上記を繰り返す。
最終製品の凍結保存
速度制御された冷凍庫を準備した。CRFが設定されていることを検証した。CRFプローブを設定した。最終製品及び試料をCRFに入れた。4℃±1.5℃に達し、CRF実行を進めるために必要な時間を決定した。CRFが完了し、保管された。実行の完了後にCRFを停止させた。カセット及びバイアルをCRFから取り出した。保存のためにカセット及びバイアルを蒸気相LN2に移した。保管場所を記録した。
速度制御された冷凍庫を準備した。CRFが設定されていることを検証した。CRFプローブを設定した。最終製品及び試料をCRFに入れた。4℃±1.5℃に達し、CRF実行を進めるために必要な時間を決定した。CRFが完了し、保管された。実行の完了後にCRFを停止させた。カセット及びバイアルをCRFから取り出した。保存のためにカセット及びバイアルを蒸気相LN2に移した。保管場所を記録した。
後処理の概要
後処理:最終医薬品
(22日目)フローサイトメトリーによる22日目のREPでのCD3+細胞の決定
(22日目)グラム染色方法(GMP)
(22日目)ゲルクロットLALアッセイ(GMP)による細菌内毒素試験
(16日目)BacT無菌性アッセイ(GMP)
(16日目)TD-PCR(GMP)によるマイコプラズマDNA検出
後処理:最終医薬品
(22日目)フローサイトメトリーによる22日目のREPでのCD3+細胞の決定
(22日目)グラム染色方法(GMP)
(22日目)ゲルクロットLALアッセイ(GMP)による細菌内毒素試験
(16日目)BacT無菌性アッセイ(GMP)
(16日目)TD-PCR(GMP)によるマイコプラズマDNA検出
許容される外観属性
(22日目)BacT無菌性アッセイ(GMP)(22日目)
(22日目)IFN-ガンマアッセイ
(22日目)BacT無菌性アッセイ(GMP)(22日目)
(22日目)IFN-ガンマアッセイ
上記の実施例は、当業者に対して、本発明の組成物、システム及び方法の実施形態の作製方法及び使用方法の完全な開示及び説明を提供するために提示されており、本発明者らが自身の発明とみなすものの範囲を限定することを意図しない。当業者に明らかな、本発明を実施するための上記のモードの修正は、添付の特許請求の範囲内にあることを意図している。本明細書で言及するすべての特許及び刊行物は、本発明が属する分野の当業者のレベルを示す。
すべての見出し及びセクションの指定は、明確化及び参照の目的のみのために使用されており、いかなる方法でも限定するものとしてみなされない。例えば、当業者は、本明細書に記載の本発明の趣旨及び範囲に従って異なる見出し及びセクションから様々な態様を適宜組み合わせることの有用性を理解する。
本明細書で引用されたすべての参考文献は、各個々の刊行物または特許もしくは特許出願がすべての目的のためにその全体が参照により組み込まれることが具体的かつ個別に示されているのと同じ程度にすべての目的のためにそれらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
当業者に明らかであるように、本出願の趣旨及び範囲から逸脱することなく、本出願の多くの修正及び変形が加えられてもよい。本明細書に記載の特定の実施形態及び実施例はほんの一例として提供されており、本出願は、特許請求の範囲が権利を与えられる等価物の全範囲に加えて、添付の特許請求の範囲の用語によってのみ限定されるべきである。
Claims (90)
- 非小細胞肺癌(NSCLC)の治療を必要とする対象または患者に腫瘍浸潤リンパ球(TIL)の集団を投与することによって、前記NSCLCを治療する方法であって、前記対象または前記患者が、
i.<1%のPD-L1の所定の腫瘍割合スコア(TPS)、
ii.1%~49%のPD-L1のTPSスコア、または
iii.1つ以上のドライバー変異の所定の非存在のうちの少なくとも1つを有する、前記方法。 - 非小細胞肺癌(NSCLC)の治療を必要とする対象または患者に腫瘍浸潤リンパ球(TIL)の集団を投与することによって、前記NSCLCを治療する方法であって、前記対象または前記患者が、
i.<1%のPD-L1の所定の腫瘍割合スコア(TPS)、
ii.1%~49%のPD-L1のTPSスコア、または
iii.1つ以上のドライバー変異の所定の非存在のうちの少なくとも1つを有し、
前記方法が、
(a)前記対象から取得された腫瘍試料を複数の腫瘍断片に処理することによって、前記対象または前記患者から切除された腫瘍から第1のTIL集団を取得及び/または受容することと、
(b)前記第1のTIL集団を閉鎖系に付加することと、
(c)IL-2を含む細胞培養培地中で前記第1のTIL集団を培養することによって第1の拡張を行い、第2のTIL集団を産生することであって、前記第1の拡張が、第1のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、前記第1の拡張が、約3~14日間行われて、前記第2のTIL集団を取得し、ステップ(b)からステップ(c)への移行が、前記系を開くことなく起こる、前記第2のTIL集団を産生することと、
(d)前記第2のTIL集団の前記細胞培養培地を追加のIL-2、OKT-3、及び抗原提示細胞(APC)で補充することによって第2の拡張を行い、第3のTIL集団を産生することであって、前記第2の拡張が、約7~14日間行われて、前記第3のTIL集団を取得し、前記第3のTIL集団が、治療的TIL集団であり、前記第2の拡張が、第2のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、ステップ(c)からステップ(d)への移行が、前記系を開くことなく起こる、前記第3のTIL集団を産生することと、
(e)ステップ(d)から取得された前記治療的TIL集団を採取することであって、ステップ(d)からステップ(e)への移行が、前記系を開くことなく起こる、前記採取することと、
(f)ステップ(e)から採取された前記TIL集団を注入バッグに移すことであって、ステップ(e)から(f)への移行が、前記系を開くことなく起こる、前記移すことと、
(g)凍結保存プロセスを使用して、ステップ(f)からの前記採取されたTIL集団を含む前記注入バッグを凍結保存することと、
(h)治療上有効な投与量の前記第3のTIL集団を、ステップ(g)の前記注入バッグから前記対象または前記患者に投与することと、を含む、前記方法。 - 非小細胞肺癌(NSCLC)(前記NSCLCは、抗PD-1及び/または抗PD-L1抗体での治療に対して不応性または耐性である)の治療を必要とする対象または患者に腫瘍浸潤リンパ球(TIL)の集団を投与することによって、前記NSCLCを治療する方法であって、前記対象または前記患者が、
i.<1%のPD-L1の所定の腫瘍割合スコア(TPS)、
ii.1%~49%のPD-L1のTPSスコア、または
iii.1つ以上のドライバー変異の所定の非存在のうちの少なくとも1つを有し、
前記方法が、
(a)前記対象から取得された腫瘍試料を複数の腫瘍断片に処理することによって、前記対象から切除された腫瘍から第1のTIL集団を取得することと、
(b)前記腫瘍断片を閉鎖系に付加することと、
(c)IL-2を含む細胞培養培地中で前記第1のTIL集団を培養することによって第1の拡張を行い、第2のTIL集団を産生することであって、前記第1の拡張が、第1のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、前記第1の拡張が、約3~11日間行われて、前記第2のTIL集団を取得し、ステップ(b)からステップ(c)への移行が、前記系を開くことなく起こる、前記第2のTIL集団を産生することと、
(d)前記第2のTIL集団の前記細胞培養培地を追加のIL-2、OKT-3、及び抗原提示細胞(APC)で補充することによって第2の拡張を行い、第3のTIL集団を産生することであって、前記第2の拡張が、約7~11日間行われて、前記第3のTIL集団を取得し、前記第2の拡張が、第2のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、ステップ(c)からステップ(d)への移行が、前記系を開くことなく起こる、前記第3のTIL集団を産生することと、
(e)ステップ(d)から取得された前記第3のTIL集団を採取することであって、ステップ(d)からステップ(e)への移行が、前記系を開くことなく起こる、前記採取することと、
(f)ステップ(e)から採取された前記第3のTIL集団を注入バッグに移すことであって、ステップ(e)から(f)への移行が、前記系を開くことなく起こる、前記移すことと、
(g)凍結保存プロセスを使用して、ステップ(f)からの前記採取されたTIL集団を含む前記注入バッグを凍結保存することと、
(h)治療上有効な投与量の前記第3のTIL集団を、ステップ(g)の前記注入バッグから前記対象に投与することと、を含む、前記方法。 - 非小細胞肺癌(NSCLC)の治療を必要とする対象または患者に腫瘍浸潤リンパ球(TIL)の集団を投与することによって、前記NSCLCを治療する方法であって、前記対象または前記患者が、
i.<1%のPD-L1の所定の腫瘍割合スコア(TPS)、
ii.1%~49%のPD-L1のTPSスコア、または
iii.1つ以上のドライバー変異の所定の非存在のうちの少なくとも1つを有し、
前記方法が、
(a)外科的切除、針生検、コア生検、小生検、または前記対象もしくは前記患者のNSCLC腫瘍から腫瘍細胞とTIL細胞との混合物を含有する試料を取得するための他の手段から第1のTIL集団を取得及び/または受容することと、
(b)前記第1のTIL集団を閉鎖系に付加することと、
(c)IL-2を含む細胞培養培地中で前記第1のTIL集団を培養することによって第1の拡張を行い、第2のTIL集団を産生することであって、前記第1の拡張が、第1のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、前記第1の拡張が、約3~11日間行われて、前記第2のTIL集団を取得し、ステップ(b)からステップ(c)への移行が、前記系を開くことなく起こる、前記第2のTIL集団を産生することと、
(d)前記第2のTIL集団の前記細胞培養培地を追加のIL-2、OKT-3、及び抗原提示細胞(APC)で補充することによって第2の拡張を行い、第3のTIL集団を産生することであって、前記第2の拡張が、約7~11日間行われて、前記第3のTIL集団を取得し、前記第2の拡張が、第2のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、ステップ(c)からステップ(d)への移行が、前記系を開くことなく起こる、前記第3のTIL集団を産生することと、
(e)ステップ(d)から取得された前記第3のTIL集団を採取することであって、ステップ(d)からステップ(e)への移行が、前記系を開くことなく起こる、前記採取することと、
(f)ステップ(e)から採取された前記第3のTIL集団を注入バッグに移すことであって、ステップ(e)から(f)への移行が、前記系を開くことなく起こる、前記移すことと、
(g)凍結保存プロセスを使用して、ステップ(f)からの前記採取されたTIL集団を含む前記注入バッグを凍結保存することと、
(h)治療上有効な投与量の前記第3のTIL集団を、ステップ(g)の前記注入バッグから前記対象または前記患者に投与することと、を含む、前記方法。 - 非小細胞肺癌(NSCLC)の治療を必要とする対象または患者に腫瘍浸潤リンパ球(TIL)の集団を投与することによって、前記NSCLCを治療する方法であって、前記対象または前記患者が、
i.<1%のPD-L1の所定の腫瘍割合スコア(TPS)、
ii.1%~49%のPD-L1のTPSスコア、または
iii.1つ以上のドライバー変異の所定の非存在のうちの少なくとも1つを有し、
前記方法が、
(a)前記対象または前記患者からNSCLC腫瘍を切除することであって、前記腫瘍が、任意選択で、外科的切除、針生検、コア生検、小生検、またはNSCLC腫瘍から腫瘍細胞とTIL細胞との混合物を含有する試料を取得するための他の手段からの第1のTIL集団を含む、前記切除することと、
(b)前記腫瘍断片を閉鎖系に付加することと、
(c)IL-2を含む細胞培養培地中で前記第1のTIL集団を培養することによって第1の拡張を行い、第2のTIL集団を産生することであって、前記第1の拡張が、第1のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、前記第1の拡張が、約3~11日間行われて、前記第2のTIL集団を取得し、ステップ(b)からステップ(c)への移行が、前記系を開くことなく起こる、前記第2のTIL集団を産生することと、
(d)前記第2のTIL集団の前記細胞培養培地を追加のIL-2、OKT-3、及び抗原提示細胞(APC)で補充することによって第2の拡張を行い、第3のTIL集団を産生することであって、前記第2の拡張が、約7~11日間行われて、前記第3のTIL集団を取得し、前記第2の拡張が、第2のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、ステップ(c)からステップ(d)への移行が、前記系を開くことなく起こる、前記第3のTIL集団を産生することと、
(e)ステップ(d)から取得された前記第3のTIL集団を採取することであって、ステップ(d)からステップ(e)への移行が、前記系を開くことなく起こる、前記採取することと、
(f)ステップ(e)から採取された前記第3のTIL集団を注入バッグに移すことであって、ステップ(e)から(f)への移行が、前記系を開くことなく起こる、前記移すことと、
(g)凍結保存プロセスを使用して、ステップ(f)からの前記採取されたTIL集団を含む前記注入バッグを凍結保存することと、
(h)治療上有効な投与量の前記第3のTIL集団を、ステップ(g)の前記注入バッグから前記対象に投与することと、を含む、前記方法。 - 前記第2のTIL集団が、前記第1のTIL集団よりも数が少なくとも50倍多い、請求項2~5のいずれか1項に記載の方法。
- 非小細胞肺癌(NSCLC)の治療を必要とする対象または患者に腫瘍浸潤リンパ球(TIL)の集団を投与することによって、前記NSCLCを治療する方法であって、前記対象または前記患者が、
i.<1%のPD-L1の所定の腫瘍割合スコア(TPS)、
ii.1%~49%のPD-L1のTPSスコア、または
iii.1つ以上のドライバー変異の所定の非存在のうちの少なくとも1つを有し、
前記方法が、
(a)外科的切除、針生検、コア生検、小生検、または前記対象もしくは前記患者からの腫瘍細胞とTIL細胞との混合物を含有する試料を取得するための他の手段から第1のTIL集団を取得及び/または受容することと、
(c)前記第1のTIL集団を第1の細胞培養培地と接触させることと、
(d)前記第1の細胞培養培地中で前記第1のTIL集団の初期拡張(すなわち、プライミングによる第1の拡張)を行い、第2のTIL集団を取得することであって、前記第2のTIL集団が、前記第1のTIL集団よりも数が少なくとも5倍多く、前記第1の細胞培養培地が、IL-2を含み、任意選択で、前記プライミングによる第1の拡張が、1~8日の期間にわたって起こる、前記第2のTIL集団を取得することと、
(e)第2の細胞培養培地中で前記第2のTIL集団の急速拡張を行い、第3のTIL集団を取得することであって、前記第2の細胞培養培地が、IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、及び任意選択で照射された同種異系末梢血単核細胞(PBMC)を含み、前記急速拡張が、14日以下の期間にわたって行われ、任意選択で、前記急速拡張が、前記急速拡張の開始後1日、2日、3日、4日、5日、6日、7日、8日、9日または10日にわたって進行することができる、前記第3のTIL集団を取得することと、
(f)前記第3のTIL集団を採取することと、
(g)前記第3のTIL集団の治療上有効な部分を前記NSCLCを有する前記対象または前記患者に投与することと、を含む、前記方法。 - 非小細胞肺癌(NSCLC)の治療を必要とする対象または患者に腫瘍浸潤リンパ球(TIL)の集団を投与することによって、前記NSCLCを治療する方法であって、前記対象または前記患者が、
i.<1%のPD-L1の所定の腫瘍割合スコア(TPS)、
ii.1%~49%のPD-L1のTPSスコア、または
iii.1つ以上のドライバー変異の所定の非存在のうちの少なくとも1つを有し、
前記方法が、
(a)前記対象または前記患者からNSCLC腫瘍を切除することであって、前記腫瘍が、任意選択で、外科的切除、針生検、コア生検、小生検、またはNSCLC腫瘍から腫瘍細胞とTIL細胞との混合物を含有する試料を取得するための他の手段からの第1のTIL集団を含む、前記切除することと、
(b)前記腫瘍を、腫瘍断片に断片化することと、
(c)前記腫瘍断片を、第1の細胞培養培地と接触させることと、
(d)前記第1の細胞培養培地中で前記第1のTIL集団の初期拡張(すなわち、プライミングによる第1の拡張)を行い、第2のTIL集団を取得することであって、前記第2のTIL集団が、前記第1のTIL集団よりも数が少なくとも5倍多く、前記第1の細胞培養培地が、IL-2を含み、任意選択で、前記第1のプライミングによる拡張が、1~8日の期間にわたって起こる、前記第2のTIL集団を取得することと、
(e)第2の細胞培養培地中で前記第2のTIL集団の急速拡張を行い、第3のTIL集団を取得することであって、前記第2の細胞培養培地が、IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、及び任意選択で照射された同種異系末梢血単核細胞(PBMC)を含み、前記急速拡張が、14日以内の期間にわたって行われ、任意選択で、前記急速拡張が、前記急速拡張の開始後1日、2日、3日、4日、5日、6日、7日、8日、9日または10日にわたって進行することができる、前記第3のTIL集団を取得することと、
(f)前記第3のTIL集団を採取することと、
(g)前記第3のTIL集団の治療上有効な部分を前記NSCLCを有する前記対象または前記患者に投与することと、を含む、前記方法。 - 非小細胞肺癌(NSCLC)(前記NSCLCは、抗PD-1及び/または抗PD-L1抗体での治療に対して不応性または耐性である)の治療を必要とする対象または患者に腫瘍浸潤リンパ球(TIL)の集団を投与することによって、前記NSCLCを治療する方法であって、前記対象または前記患者が、
i.<1%のPD-L1の所定の腫瘍割合スコア(TPS)、
ii.1%~49%のPD-L1のTPSスコア、または
iii.1つ以上のドライバー変異の所定の非存在のうちの少なくとも1つを有し、
前記方法が、
(a)外科的切除、針生検、コア生検、小生検、または前記対象もしくは前記患者からの腫瘍細胞とTIL細胞との混合物を含有する試料を取得するための他の手段から第1のTIL集団を取得及び/または受容することと、
(c)前記第1のTIL集団を第1の細胞培養培地と接触させることと、
(d)前記第1の細胞培養培地中で前記第1のTIL集団の初期拡張(すなわち、プライミングによる第1の拡張)を行い、第2のTIL集団を取得することであって、前記第2のTIL集団が、前記第1のTIL集団よりも数が少なくとも5倍多く、前記第1の細胞培養培地が、IL-2を含み、任意選択で、前記プライミングによる第1の拡張が、1~8日の期間にわたって起こる、前記第2のTIL集団を取得することと、
(e)第2の細胞培養培地中で前記第2のTIL集団の急速拡張を行い、第3のTIL集団を取得することであって、前記第2の細胞培養培地が、IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、及び任意選択で照射された同種異系末梢血単核細胞(PBMC)を含み、前記急速拡張が、14日以内の期間にわたって行われ、任意選択で、前記急速拡張が、前記急速拡張の開始後1日、2日、3日、4日、5日、6日、7日、8日、9日または10日にわたって進行することができる、前記第3のTIL集団を取得することと、
(f)前記第3のTIL集団を採取することと、
(g)前記第3のTIL集団の治療上有効な部分を前記NSCLCを有する前記対象または前記患者に投与することと、を含む、前記方法。 - 前記第3のTIL集団が、前記急速拡張の開始から7~8日後に、前記第2のTIL集団よりも数が少なくとも50倍多い、請求項7~9のいずれか1項に記載の方法。
- 前記患者または前記対象が、<1%のPD-L1のTPSを有する、請求項1~10に記載の方法。
- 前記患者または前記対象が、1%~49%のPD-L1のTPSを有する、請求項1~10に記載の方法。
- 前記患者または前記対象が、EGFR阻害剤、BRAF阻害剤、ALK阻害剤、c-Ros阻害剤、RET阻害剤、ERBB2阻害剤、BRCA阻害剤、MAP2K1阻害剤、PIK3CA阻害剤、CDKN2A阻害剤、PTEN阻害剤、UMD阻害剤、NRAS阻害剤、KRAS阻害剤、NF1阻害剤、MET阻害剤、TP53阻害剤、CREBBP阻害剤、KMT2C阻害剤、KMT2D変異、ARID1A変異、RB1阻害剤、ATM阻害剤、SETD2阻害剤、FLT3阻害剤、PTPN11阻害剤、FGFR1阻害剤、EP300阻害剤、MYC阻害剤、EZH2阻害剤、JAK2阻害剤、FBXW7阻害剤、CCND3阻害剤、及びGNA11阻害剤による治療のために適応されていないNSCLCを有する、請求項1~10に記載の方法。
- 前記患者または前記対象が、1つ以上のドライバー変異の所定の非存在を有する、請求項1~10に記載の方法。
- 前記患者または前記対象が、<1%のPD-L1のTPSを有し、1つ以上のドライバー変異の所定の非存在を有する、請求項1~10に記載の方法。
- 前記1つ以上のドライバーが、EGFR変異、EGFR挿入、EGFRエクソン20、KRAS変異、BRAF変異、BRAF V600変異、ALK変異、c-ROS変異(ROS1変異)、ROS1融合、RET変異、RET融合、ERBB2変異、ERBB2増幅、BRCA変異、MAP2K1変異、PIK3CA、CDKN2A、PTEN変異、UMD変異、NRAS変異、KRAS変異、NF1変異、MET変異、METスプライス及び/または変化したMETシグナル伝達、TP53変異、CREBBP変異、KMT2C変異、KMT2D変異、ARID1A変異、RB1変異、ATM変異、SETD2変異、FLT3変異、PTPN11変異、FGFR1変異、EP300変異、MYC変異、EZH2変異、JAK2変異、FBXW7変異、CCND3変異、及びGNA11変異からなる群から選択される、請求項15に記載の方法。
- 前記患者または前記対象が、<1%のTPSを有し、EGFR阻害剤、BRAF阻害剤、ALK阻害剤、c-Ros阻害剤、RET阻害剤、ERBB2阻害剤、BRCA阻害剤、MAP2K1阻害剤、PIK3CA阻害剤、CDKN2A阻害剤、PTEN阻害剤、UMD阻害剤、NRAS阻害剤、KRAS阻害剤、NF1阻害剤、MET阻害剤、TP53阻害剤、CREBBP阻害剤、KMT2C阻害剤、KMT2D変異、ARID1A変異、RB1阻害剤、ATM阻害剤、SETD2阻害剤、FLT3阻害剤、PTPN11阻害剤、FGFR1阻害剤、EP300阻害剤、MYC阻害剤、EZH2阻害剤、JAK2阻害剤、FBXW7阻害剤、CCND3阻害剤、及びGNA11阻害剤による治療のために適応されていないNSCLCを有する、請求項1~10に記載の方法。
- 前記NSCLCが、PD-L1の発現が低いか、または全くない、請求項1~15に記載の方法。
- 前記NSCLCが、化学療法剤による治療に対して不応性または耐性である、請求項1~18に記載の方法。
- 前記NSCLCが、VEGF-A阻害剤による治療に対して不応性または耐性である、請求項1~19に記載の方法。
- 前記NSCLCが、化学療法剤で治療されているが、現在は化学療法剤で治療されていない、請求項1~20に記載の方法。
- 前記NSCLCが、化学療法剤で治療されているが、現在は化学療法剤で治療されておらず、<1%のTPSを有する、請求項1~21に記載の方法。
- 前記NSCLCが、VEGF-A阻害剤で治療されているが、現在はVEGF-A阻害剤で治療されていない、請求項1~22に記載の方法。
- 前記NSCLCが、VEGF-A阻害剤で治療されているが、現在はVEGF-A阻害剤で治療されておらず、<1%のTPSを有する、請求項1~23に記載の方法。
- 前記NSCLCが、化学療法剤及び/またはVEGF-A阻害剤で治療されているが、現在は化学療法剤及び/またはVEGF-A阻害剤で治療されていない、請求項1~24に記載の方法。
- 前記NSCLCが、化学療法剤及び/またはVEGF-A阻害剤で治療されているが、現在は化学療法剤及び/またはVEGF-A阻害剤で治療されておらず、<1%のTPSを有する、請求項1~25に記載の方法。
- 前記NSCLCが、抗PD-1及び/または抗PD-L1抗体で以前に治療されていない、請求項1~26に記載の方法。
- 前記NSCLCが、抗PD-1及び/または抗PD-L1抗体で以前に治療されておらず、化学療法剤及び/またはVEGF-A阻害剤で以前に治療されている、請求項1~27に記載の方法。
- 前記NSCLCが、抗PD-1及び/または抗PD-L1抗体で以前に治療されておらず、化学療法剤及び/またはVEGF-A阻害剤で以前に治療されているが、現在は化学療法剤及び/またはVEGF-A阻害剤で治療されていない、請求項1~28に記載の方法。
- 前記NSCLCが、抗PD-1及び/または抗PD-L1抗体で以前に治療されておらず、VEGF-A阻害剤で以前に治療されているが、現在はVEGF-A阻害剤で治療されていない、請求項1~29に記載の方法。
- 前記NSCLCが、抗PD-1及び/または抗PD-L1抗体で以前に治療されておらず、化学療法剤及び/またはVEGF-A阻害剤で以前に治療されているが、現在は化学療法剤及び/またはVEGF-A阻害剤で治療されていない、請求項1~30に記載の方法。
- 前記NSCLCが、抗PD-1及び/または抗PD-L1抗体で以前に治療されておらず、PD-L1の発現が低いか、または全くない、請求項1~31に記載の方法。
- 前記NSCLCが、抗PD-1及び/または抗PD-L1抗体で以前に治療されておらず、化学療法剤及び/またはVEGF-A阻害剤で以前に治療されているが、現在は化学療法剤及び/またはVEGF-A阻害剤で治療されておらず、<1%のTPSを有する、請求項1~32に記載の方法。
- 前記NSCLCが、抗PD-1及び/または抗PD-L1及び/または抗PD-L2抗体で以前に治療されている、請求項1~26に記載の方法。
- 前記NSCLCが、抗PD-1及び/または抗PD-L1抗体で以前に治療されており、化学療法剤及び/またはVEGF-A阻害剤で以前に治療されている、請求項1~26または34に記載の方法。
- 前記NSCLCが、抗PD-1及び/または抗PD-L1抗体による治療に対して不応性または耐性である、請求項1~26または33または34に記載の方法。
- 前記NSCLCが、抗PD-1及び/または抗PD-L1抗体で以前に治療されており、前記腫瘍割合スコアが、前記抗PD-1及び/または抗PD-L1抗体治療の前に決定された、請求項1~26または33~35に記載の方法。
- 前記NSCLCが、抗PD-L1抗体で以前に治療されており、前記腫瘍割合スコアが、前記抗PD-L1抗体治療の前に決定されているか、または前記NSCLCが、抗PD-1抗体で以前に治療されており、前記腫瘍割合スコアが、前記抗PD-1抗体治療の前に決定された、請求項1~26または33~36に記載の方法。
- 前記NSCLCが、化学療法剤及び/またはVEGF-A阻害剤で治療されている、請求項1~38に記載の方法。
- 前記NSCLCが、抗PD-1及び/または抗PD-L1抗体で以前に治療されておらず、ベースラインで巨大腫瘤病変を有する、請求項1~33に記載の方法。
- 前記NSCLCが、抗PD-1及び/または抗PD-L1抗体で以前に治療されており、ベースラインで巨大腫瘤病変を有する、請求項1~26または33~39に記載の方法。
- 前記NSCLCが、化学療法剤で治療されており、ベースラインで巨大腫瘤病変を有する、請求項1~41に記載の方法。
- 前記NSCLCが、化学療法剤及び/またはVEGF-A阻害剤で治療されているが、現在は化学療法剤及び/またはVEGF-A阻害剤で治療されておらず、巨大腫瘤病変を有する、請求項1~41に記載の方法。
- 最大腫瘍直径が、横断面もしくは冠状面のいずれかで測定して7cmより大きいか、または腫れたリンパ節が20mm以上の短軸直径を有する場合、巨大腫瘤病変が示される、請求項40~43に記載の方法。
- 前記NSCLCが、ネオアジュバントまたはアジュバント療法を含まない、少なくとも2つの以前の全身治療過程に対して不応性または耐性である、請求項1~44に記載の方法。
- 前記NSCLCが、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、JS001、TSR-042、ピジリズマブ、BGB-A317、SHR-1210、REGN2810、MDX-1106、PDR001、クローン由来の抗PD-1:RMP1-14、米国特許第8,008,449号に開示される抗PD-1抗体、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、ならびにそれらの断片、誘導体、バリアント、及びバイオシミラーからなる群から選択される抗PD-1または抗PD-L1抗体に対して不応性または耐性である、請求項1~45に記載の方法。
- 前記NSCLCが、ペムブロリズマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性または耐性である、請求項1~46に記載の方法。
- 前記NSCLCが、ニボルマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性または耐性である、請求項1~47に記載の方法。
- 前記NSCLCが、抗CTLA-4抗体に対して不応性または耐性である、請求項1~48に記載の方法。
- 前記NSCLCが、抗CTLA-4抗体及びペムブロリズマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性または耐性である、請求項1~49に記載の方法。
- 前記NSCLCが、抗CTLA-4抗体、及びニボルマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性または耐性である、請求項1~50に記載の方法。
- 前記抗CTLA-4抗体が、イピリムマブまたはそのバイオシミラーである、請求項49、50、及び/または51に記載の方法。
- 前記NSCLCが、デュルバルマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性または耐性である、請求項1~52に記載の方法。
- 前記NSCLCが、アテゾリズマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性または耐性である、請求項1~53に記載の方法。
- 前記NSCLCが、アベルマブまたはそのバイオシミラーに対して不応性または耐性である、請求項1~54に記載の方法。
- 前記化学療法剤が、白金ダブレット化学療法剤(複数可)である、請求項19~55に記載の方法。
- 前記白金ダブレット化学療法剤療法が、
i)シスプラチン及びカルボプラチンからなる群から選択される第1の化学療法剤と、
ii)ビノレルビン、ゲムシタビン及びタキサン(例えば、パクリタキセル、ドセタキセルまたはnab-パクリタキセルを含む)からなる群から選択される第2の化学療法剤と、を含む、請求項56に記載の方法。 - 前記第1及び/または第2の化学療法剤を含む前記化学療法剤が、ペメトレキセドとの組み合わせである、請求項56または57に記載の方法。
- 前記NSCLCが、カルボプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセド、及びシスプラチンを含む併用療法に対して不応性または耐性である、請求項56~58に記載の方法。
- 前記NSCLCが、カルボプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセド、シスプラチン、ニボルマブ、及びイピリムマブを含む併用療法に対して不応性または耐性である、請求項56~59に記載の方法。
- 前記NSCLCが、VEGF-A阻害剤に対して不応性または耐性である、請求項1~60に記載の方法。
- 前記NSCLCが、ベバシズマブ、ラニビズマブ、及びイクルクマブからなる群から選択されるVEGF-A阻害剤に対して不応性または耐性である、請求項1~61に記載の方法。
- 前記NSCLCが、ベバシズマブに対して不応性または耐性である、請求項1~62に記載の方法。
- 前記NSCLCが、1つ以上のドライバー変異の非存在または存在について分析されている、請求項1~63のいずれか1項に記載の方法。
- 1つ以上のドライバー変異が存在しない、請求項64のいずれか1項に記載の方法。
- 前記NSCLC治療が、1つ以上のドライバー変異の存在または非存在とは無関係である、請求項64または65のいずれか1項に記載の方法。
- 前記1つ以上のドライバー変異が、EGFR変異、EGFR挿入、KRAS変異、BRAF変異、ALK変異、c-ROS変異、c-ROS変異、EML4-ALK、及びMET変異からなる群から選択される、請求項64~66のいずれか1項に記載の方法。
- 前記EGFR変異が、NSCLCから小細胞肺癌(SCLC)への腫瘍形質転換をもたらす、請求項67に記載の方法。
- 前記NSCLC治療が、高腫瘍変異負荷(高-TMB)及び/またはマイクロサテライト不安定性-高(MSI-高)状態の存在または非存在とは無関係である、請求項1~67のいずれか1項に記載の方法。
- 前記NSCLCが、高-TMB及び/またはMSI-高状態を示す、請求項1~67のいずれか1項に記載の方法。
- 前記IL-2が、存在する場合、前記第1の細胞培養培地中に1000IU/mL~6000IU/mLの間の初期濃度で存在する、請求項1~68のいずれか1項に記載の方法。
- 前記IL-2が、存在する場合、前記第2の細胞培養培地中に1000IU/mL~6000IU/mLの間の初期濃度で存在し、前記OKT-3抗体が、約30ng/mLの初期濃度で存在する、請求項1~68のいずれか1項に記載の方法。
- 前記初期拡張が、存在する場合、ガス透過性容器を使用して行われる、請求項1~72のいずれか1項に記載の方法。
- 前記急速拡張が、存在する場合、ガス透過性容器を使用して行われる、請求項1~73のいずれか1項に記載の方法。
- 前記第1の細胞培養培地が、存在する場合、IL-4、IL-7、IL-15、IL-21、及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるサイトカインをさらに含む、請求項1~74のいずれか1項に記載の方法。
- 前記第2の細胞培養培地が、存在する場合、IL-4、IL-7、IL-15、IL-21、及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるサイトカインをさらに含む、請求項1~75のいずれか1項に記載の方法。
- 前記第3のTIL集団を前記患者に投与する前に、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンで前記患者を治療するステップをさらに含む、請求項1~76のいずれか1項に記載の方法。
- 前記骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンが、シクロホスファミドを60mg/m2/日の用量で2日間投与し、続いてフルダラビンを25mg/m2/日の用量で5日間投与するステップを含む、請求項77に記載の方法。
- 前記骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンが、シクロホスファミドを60mg/m2/日の用量で、及びフルダラビンを25mg/m2/日の用量で2日間投与し、続いてフルダラビンを25mg/m2/日の用量で3日間投与するステップを含む、請求項77に記載の方法。
- 前記シクロホスファミドは、メスナとともに投与される、請求項79~79に記載の方法。
- 前記患者への前記第3のTIL集団の投与の翌日に開始するIL-2レジメンで前記患者を治療するステップをさらに含む、請求項1~80のいずれか1項に記載の方法。
- 前記患者への前記第3のTIL集団の投与と同日に開始するIL-2レジメンで前記患者を治療するステップをさらに含む、請求項1~80のいずれか1項に記載の方法。
- 前記IL-2レジメンが、許容範囲まで8時間毎に15分間のボーラス静脈内注入として投与される、600,000もしくは720,000IU/kgのアルデスロイキン、またはそのバイオシミラーもしくはバリアントを含む高用量IL-2レジメンである、請求項1~82のいずれか1項に記載の方法。
- 治療上有効なTIL集団が投与され、約2.3×1010~約13.7×1010TILを含む、請求項1~83のいずれか1項に記載の方法。
- 前記初期拡張が、21日以内の期間にわたって行われる、請求項7~83のいずれか1項に記載の方法。
- 前記初期拡張が、7日以内の期間にわたって行われる、請求項7~83のいずれか1項に記載の方法。
- 前記急速拡張が、7日以内の期間にわたって行われる、請求項7~83のいずれか1項に記載の方法。
- ステップ(c)における前記第1の拡張及びステップ(d)における前記第2の拡張が、各々11日の期間内に個別に行われる、請求項2~6または11~83のいずれか1項に記載の方法。
- ステップ(a)~(f)が、約10日~約24日で行われる、請求項2~6または11~83のいずれか1項に記載の方法。
- ステップ(a)~(f)が、約10日~約22日で行われる、請求項2~6または11~83のいずれか1項に記載の方法。
Applications Claiming Priority (7)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US202063088282P | 2020-10-06 | 2020-10-06 | |
US63/088,282 | 2020-10-06 | ||
US202063127027P | 2020-12-17 | 2020-12-17 | |
US63/127,027 | 2020-12-17 | ||
US202163146402P | 2021-02-05 | 2021-02-05 | |
US63/146,402 | 2021-02-05 | ||
PCT/US2021/053841 WO2022076606A1 (en) | 2020-10-06 | 2021-10-06 | Treatment of nsclc patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2023546359A true JP2023546359A (ja) | 2023-11-02 |
Family
ID=78536651
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2023521133A Pending JP2023546359A (ja) | 2020-10-06 | 2021-10-06 | 腫瘍浸潤リンパ球療法によるnsclc患者の治療 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20230372397A1 (ja) |
EP (2) | EP4225330A1 (ja) |
JP (1) | JP2023546359A (ja) |
CA (1) | CA3195019A1 (ja) |
WO (1) | WO2022076952A1 (ja) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB201700621D0 (en) | 2017-01-13 | 2017-03-01 | Guest Ryan Dominic | Method,device and kit for the aseptic isolation,enrichment and stabilsation of cells from mammalian solid tissue |
AU2020408017A1 (en) | 2019-12-20 | 2022-07-14 | Instil Bio (Uk) Limited | Devices and methods for isolating tumor infiltrating lymphocytes and uses thereof |
WO2023225181A1 (en) * | 2022-05-20 | 2023-11-23 | Instil Bio, Inc. | Tumor infiltrating lymphocytes and anti-pd-1 antibody combination therapy for the treatment of cancer |
Family Cites Families (170)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0154316B1 (en) | 1984-03-06 | 1989-09-13 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Chemically modified lymphokine and production thereof |
US4897355A (en) | 1985-01-07 | 1990-01-30 | Syntex (U.S.A.) Inc. | N[ω,(ω-1)-dialkyloxy]- and N-[ω,(ω-1)-dialkenyloxy]-alk-1-yl-N,N,N-tetrasubstituted ammonium lipids and uses therefor |
US5206344A (en) | 1985-06-26 | 1993-04-27 | Cetus Oncology Corporation | Interleukin-2 muteins and polymer conjugation thereof |
US4766106A (en) | 1985-06-26 | 1988-08-23 | Cetus Corporation | Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation |
US4704692A (en) | 1986-09-02 | 1987-11-03 | Ladner Robert C | Computer based system and method for determining and displaying possible chemical structures for converting double- or multiple-chain polypeptides to single-chain polypeptides |
US4946778A (en) | 1987-09-21 | 1990-08-07 | Genex Corporation | Single polypeptide chain binding molecules |
DE3883899T3 (de) | 1987-03-18 | 1999-04-22 | Sb2, Inc., Danville, Calif. | Geänderte antikörper. |
US5128257A (en) | 1987-08-31 | 1992-07-07 | Baer Bradford W | Electroporation apparatus and process |
ATE131081T1 (de) | 1988-01-21 | 1995-12-15 | Massachusetts Inst Technology | Molekültransport durch gewebe mit der verwendung von elektroporation. |
US6780613B1 (en) | 1988-10-28 | 2004-08-24 | Genentech, Inc. | Growth hormone variants |
US6362325B1 (en) | 1988-11-07 | 2002-03-26 | Advanced Research And Technology Institute, Inc. | Murine 4-1BB gene |
US6303121B1 (en) | 1992-07-30 | 2001-10-16 | Advanced Research And Technology | Method of using human receptor protein 4-1BB |
CA2006596C (en) | 1988-12-22 | 2000-09-05 | Rika Ishikawa | Chemically-modified g-csf |
US5089261A (en) | 1989-01-23 | 1992-02-18 | Cetus Corporation | Preparation of a polymer/interleukin-2 conjugate |
US4902502A (en) | 1989-01-23 | 1990-02-20 | Cetus Corporation | Preparation of a polymer/interleukin-2 conjugate |
US5279833A (en) | 1990-04-04 | 1994-01-18 | Yale University | Liposomal transfection of nucleic acids into animal cells |
US5264618A (en) | 1990-04-19 | 1993-11-23 | Vical, Inc. | Cationic lipids for intracellular delivery of biologically active molecules |
CA2019758C (en) | 1990-06-25 | 2001-09-04 | Kevin L. Firth | Improved electroporation device and method |
US5137817A (en) | 1990-10-05 | 1992-08-11 | Amoco Corporation | Apparatus and method for electroporation |
US5173158A (en) | 1991-07-22 | 1992-12-22 | Schmukler Robert E | Apparatus and methods for electroporation and electrofusion |
AU3178993A (en) | 1991-11-25 | 1993-06-28 | Enzon, Inc. | Multivalent antigen-binding proteins |
US5714350A (en) | 1992-03-09 | 1998-02-03 | Protein Design Labs, Inc. | Increasing antibody affinity by altering glycosylation in the immunoglobulin variable region |
DK0636028T3 (da) | 1992-04-03 | 2004-07-12 | Univ California | Selvorganiserende polynucleotidleveringssystem omfattende et amfipatisk kationisk peptid |
US5304120A (en) | 1992-07-01 | 1994-04-19 | Btx Inc. | Electroporation method and apparatus for insertion of drugs and genes into endothelial cells |
US5273525A (en) | 1992-08-13 | 1993-12-28 | Btx Inc. | Injection and electroporation apparatus for drug and gene delivery |
US5318514A (en) | 1992-08-17 | 1994-06-07 | Btx, Inc. | Applicator for the electroporation of drugs and genes into surface cells |
PT672141E (pt) | 1992-10-23 | 2003-09-30 | Immunex Corp | Metodos de preparacao de proteinas oligomericas soluveis |
US5631237A (en) | 1992-12-22 | 1997-05-20 | Dzau; Victor J. | Method for producing in vivo delivery of therapeutic agents via liposomes |
GB9317380D0 (en) | 1993-08-20 | 1993-10-06 | Therexsys Ltd | Transfection process |
US5821332A (en) | 1993-11-03 | 1998-10-13 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Receptor on the surface of activated CD4+ T-cells: ACT-4 |
US6989434B1 (en) | 1994-02-11 | 2006-01-24 | Invitrogen Corporation | Reagents for intracellular delivery of macromolecules |
US5691188A (en) | 1994-02-14 | 1997-11-25 | American Cyanamid Company | Transformed yeast cells expressing heterologous G-protein coupled receptor |
AU2946295A (en) | 1994-06-27 | 1996-01-19 | Johns Hopkins University, The | Targeted gene delivery system |
US5908635A (en) | 1994-08-05 | 1999-06-01 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Method for the liposomal delivery of nucleic acids |
US5484720A (en) | 1994-09-08 | 1996-01-16 | Genentech, Inc. | Methods for calcium phosphate transfection |
GB9422383D0 (en) | 1994-11-05 | 1995-01-04 | Wellcome Found | Antibodies |
US5830430A (en) | 1995-02-21 | 1998-11-03 | Imarx Pharmaceutical Corp. | Cationic lipids and the use thereof |
DE69624436T2 (de) | 1995-04-08 | 2003-08-28 | Lg Chemical Ltd., Seoul/Soul | Humaner 4-1bb spezifischer humaner antikörper und diesen produzierende zellinie |
US6121022A (en) | 1995-04-14 | 2000-09-19 | Genentech, Inc. | Altered polypeptides with increased half-life |
US5739277A (en) | 1995-04-14 | 1998-04-14 | Genentech Inc. | Altered polypeptides with increased half-life |
US5869046A (en) | 1995-04-14 | 1999-02-09 | Genentech, Inc. | Altered polypeptides with increased half-life |
US6096871A (en) | 1995-04-14 | 2000-08-01 | Genentech, Inc. | Polypeptides altered to contain an epitope from the Fc region of an IgG molecule for increased half-life |
US5981501A (en) | 1995-06-07 | 1999-11-09 | Inex Pharmaceuticals Corp. | Methods for encapsulating plasmids in lipid bilayers |
CA2222328C (en) | 1995-06-07 | 2012-01-10 | Inex Pharmaceuticals Corporation | Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer |
US6010613A (en) | 1995-12-08 | 2000-01-04 | Cyto Pulse Sciences, Inc. | Method of treating materials with pulsed electrical fields |
AU3968897A (en) | 1996-08-02 | 1998-02-25 | Bristol-Myers Squibb Company | A method for inhibiting immunoglobulin-induced toxicity resulting from the use of immunoglobulins in therapy and in vivo diagnosis |
US5849902A (en) | 1996-09-26 | 1998-12-15 | Oligos Etc. Inc. | Three component chimeric antisense oligonucleotides |
BR9712278A (pt) | 1996-10-11 | 1999-08-31 | Bristol Myers Squibb Co | Processos e composições para imunomodulação |
WO1998023289A1 (en) | 1996-11-27 | 1998-06-04 | The General Hospital Corporation | MODULATION OF IgG BINDING TO FcRn |
AU5734998A (en) | 1997-01-10 | 1998-08-03 | Life Technologies, Inc. | Embryonic stem cell serum replacement |
US6277375B1 (en) | 1997-03-03 | 2001-08-21 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Immunoglobulin-like domains with increased half-lives |
ATE466948T1 (de) | 1997-03-11 | 2010-05-15 | Univ Minnesota | Dns-basiertes transposon-system für die einführung von nucleinsäure in die dns einer zelle |
GB9710809D0 (en) | 1997-05-23 | 1997-07-23 | Medical Res Council | Nucleic acid binding proteins |
US6475994B2 (en) | 1998-01-07 | 2002-11-05 | Donald A. Tomalia | Method and articles for transfection of genetic material |
US6312700B1 (en) | 1998-02-24 | 2001-11-06 | Andrew D. Weinberg | Method for enhancing an antigen specific immune response with OX-40L |
AU746454B2 (en) | 1998-03-02 | 2002-05-02 | Massachusetts Institute Of Technology | Poly zinc finger proteins with improved linkers |
ES2532910T3 (es) | 1998-04-02 | 2015-04-01 | Genentech, Inc. | Variantes de anticuerpos y fragmentos de los mismos |
US6242195B1 (en) | 1998-04-02 | 2001-06-05 | Genentech, Inc. | Methods for determining binding of an analyte to a receptor |
US6194551B1 (en) | 1998-04-02 | 2001-02-27 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants |
US6528624B1 (en) | 1998-04-02 | 2003-03-04 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants |
DK2180007T4 (da) | 1998-04-20 | 2017-11-27 | Roche Glycart Ag | Glycosyleringsteknik for antistoffer til forbedring af antistofafhængig cellecytotoxicitet |
GB9809951D0 (en) | 1998-05-08 | 1998-07-08 | Univ Cambridge Tech | Binding molecules |
EP1105427A2 (en) | 1998-08-17 | 2001-06-13 | Abgenix, Inc. | Generation of modified molecules with increased serum half-lives |
EP1006183A1 (en) | 1998-12-03 | 2000-06-07 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Recombinant soluble Fc receptors |
US6534261B1 (en) | 1999-01-12 | 2003-03-18 | Sangamo Biosciences, Inc. | Regulation of endogenous gene expression in cells using zinc finger proteins |
US7013219B2 (en) | 1999-01-12 | 2006-03-14 | Sangamo Biosciences, Inc. | Regulation of endogenous gene expression in cells using zinc finger proteins |
US6737056B1 (en) | 1999-01-15 | 2004-05-18 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants with altered effector function |
KR101077001B1 (ko) | 1999-01-15 | 2011-10-26 | 제넨테크, 인크. | 효과기 기능이 변화된 폴리펩티드 변이체 |
US20030104526A1 (en) | 1999-03-24 | 2003-06-05 | Qiang Liu | Position dependent recognition of GNN nucleotide triplets by zinc fingers |
US7030215B2 (en) | 1999-03-24 | 2006-04-18 | Sangamo Biosciences, Inc. | Position dependent recognition of GNN nucleotide triplets by zinc fingers |
ES2571230T3 (es) | 1999-04-09 | 2016-05-24 | Kyowa Hakko Kirin Co Ltd | Procedimiento para controlar la actividad de una molécula inmunofuncional |
US7189705B2 (en) | 2000-04-20 | 2007-03-13 | The University Of British Columbia | Methods of enhancing SPLP-mediated transfection using endosomal membrane destabilizers |
US6627442B1 (en) | 2000-08-31 | 2003-09-30 | Virxsys Corporation | Methods for stable transduction of cells with hiv-derived viral vectors |
US6706289B2 (en) | 2000-10-31 | 2004-03-16 | Pr Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for enhanced delivery of bioactive molecules |
GB0029407D0 (en) | 2000-12-01 | 2001-01-17 | Affitech As | Product |
EP1355919B1 (en) | 2000-12-12 | 2010-11-24 | MedImmune, LLC | Molecules with extended half-lives, compositions and uses thereof |
HUP0600342A3 (en) | 2001-10-25 | 2011-03-28 | Genentech Inc | Glycoprotein compositions |
US20040002587A1 (en) | 2002-02-20 | 2004-01-01 | Watkins Jeffry D. | Fc region variants |
US20040132101A1 (en) | 2002-09-27 | 2004-07-08 | Xencor | Optimized Fc variants and methods for their generation |
KR20040088572A (ko) | 2002-03-01 | 2004-10-16 | 이뮤노메딕스, 인코오포레이티드 | 제거율 증강을 위한 양특이성 항체 점 돌연변이들 |
CA2481657A1 (en) | 2002-04-09 | 2003-10-16 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Cells of which genome is modified |
WO2003106498A2 (en) | 2002-06-13 | 2003-12-24 | Crucell Holland, B.V. | Agonistic binding molecules to the human ox40 receptor |
US6887673B2 (en) | 2002-07-30 | 2005-05-03 | Bristol-Myers Squibb Company | Humanized antibodies against human 4-1BB |
US7425619B2 (en) | 2002-08-14 | 2008-09-16 | Macrogenics, Inc. | FcγRIIB specific antibodies and methods of use thereof |
EP2345671B8 (en) | 2002-09-27 | 2023-01-11 | Xencor, Inc. | Optimized fc variants and methods for their generation |
JP4768439B2 (ja) | 2002-10-15 | 2011-09-07 | アボット バイオセラピューティクス コーポレイション | 変異誘発による抗体のFcRn結合親和力又は血清半減期の改変 |
US7355008B2 (en) | 2003-01-09 | 2008-04-08 | Macrogenics, Inc. | Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same |
CA2542116C (en) | 2003-10-08 | 2015-01-27 | Wilson Wolf Manufacturing Corporation | Cell culture methods and devices utilizing gas permeable materials |
US7288638B2 (en) | 2003-10-10 | 2007-10-30 | Bristol-Myers Squibb Company | Fully human antibodies against human 4-1BB |
GB0324368D0 (en) | 2003-10-17 | 2003-11-19 | Univ Cambridge Tech | Polypeptides including modified constant regions |
WO2005077981A2 (en) | 2003-12-22 | 2005-08-25 | Xencor, Inc. | Fc POLYPEPTIDES WITH NOVEL Fc LIGAND BINDING SITES |
UA86605C2 (ru) | 2004-01-12 | 2009-05-12 | Аплайд Молекьюлер Иволюшн, Инк. | Антитело, которое содержит вариант исходного человеческого fс-участка |
EP2053062A1 (en) | 2004-03-24 | 2009-04-29 | Xencor, Inc. | Immunoglobin variants outside the Fc region |
WO2005123780A2 (en) | 2004-04-09 | 2005-12-29 | Protein Design Labs, Inc. | Alteration of fcrn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis |
WO2006085967A2 (en) | 2004-07-09 | 2006-08-17 | Xencor, Inc. | OPTIMIZED ANTI-CD20 MONOCONAL ANTIBODIES HAVING Fc VARIANTS |
SI2471813T1 (sl) | 2004-07-15 | 2015-03-31 | Xencor, Inc. | Optimirane Fc variante |
WO2006047350A2 (en) | 2004-10-21 | 2006-05-04 | Xencor, Inc. | IgG IMMUNOGLOBULIN VARIANTS WITH OPTIMIZED EFFECTOR FUNCTION |
WO2006050172A2 (en) | 2004-10-29 | 2006-05-11 | University Of Southern California | Combination cancer immunotherapy with co-stimulatory molecules |
AU2006244497B2 (en) | 2005-05-06 | 2011-09-22 | Providence Health & Services - Oregon | Trimeric OX40L-immunoglobulin fusion protein and methods of use |
PL2439273T3 (pl) | 2005-05-09 | 2019-08-30 | Ono Pharmaceutical Co., Ltd. | Ludzkie przeciwciała monoklonalne przeciwko białku programowanej śmierci komórki 1(pd-1) oraz metody leczenia nowotworów z wykorzystaniem przeciwciał anty-pd-1 samodzielnie lub w połączeniu z innymi immunoterapeutykami |
TWI466269B (zh) | 2006-07-14 | 2014-12-21 | Semiconductor Energy Lab | 非揮發性記憶體 |
EP1894940A1 (en) | 2006-08-28 | 2008-03-05 | Apogenix GmbH | TNF superfamily fusion proteins |
RU2009135824A (ru) | 2007-02-27 | 2011-04-10 | Дженентек, Инк. (Us) | Антитела-антагонисты против ох40 и их применение в лечении воспалительных и аутоиммунных заболеваний |
EP3321277B1 (en) | 2007-07-10 | 2019-09-18 | Apogenix AG | Tnf superfamily collectin fusion proteins |
CA2702028A1 (en) | 2007-10-02 | 2009-04-09 | Rxi Pharmaceuticals Corp. | Tripartite rnai constructs |
ES2526887T3 (es) | 2007-12-14 | 2015-01-16 | Bristol-Myers Squibb Company | Método para producir moléculas de unión al receptor OX40 humano |
CN104975020B (zh) | 2008-02-11 | 2020-01-17 | 菲奥医药公司 | 经修饰的RNAi多核苷酸及其用途 |
WO2010003766A2 (en) | 2008-06-17 | 2010-01-14 | Apogenix Gmbh | Multimeric tnf receptors |
PL2604693T3 (pl) | 2008-07-21 | 2016-09-30 | Jednołańcuchowe cząsteczki TNFSF | |
US10138485B2 (en) | 2008-09-22 | 2018-11-27 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Neutral nanotransporters |
WO2010042433A1 (en) | 2008-10-06 | 2010-04-15 | Bristol-Myers Squibb Company | Combination of cd137 antibody and ctla-4 antibody for the treatment of proliferative diseases |
US8664366B2 (en) | 2009-01-09 | 2014-03-04 | Apogenix Gmbh | Fusion proteins forming trimers |
SG181559A1 (en) | 2009-12-08 | 2012-07-30 | Wolf Wilson Mfg Corp | Improved methods of cell culture for adoptive cell therapy |
US20130115617A1 (en) | 2009-12-08 | 2013-05-09 | John R. Wilson | Methods of cell culture for adoptive cell therapy |
US8956860B2 (en) | 2009-12-08 | 2015-02-17 | Juan F. Vera | Methods of cell culture for adoptive cell therapy |
RU2615143C2 (ru) | 2010-03-24 | 2017-04-04 | Адвирна | Самодоставляющие PHKi соединения уменьшенного размера |
AU2011232365A1 (en) | 2010-03-24 | 2012-10-25 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | RNA interference in dermal and fibrotic indications |
US9095504B2 (en) | 2010-03-24 | 2015-08-04 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | RNA interference in ocular indications |
EP2571512B1 (en) | 2010-05-17 | 2017-08-23 | Sangamo BioSciences, Inc. | Novel dna-binding proteins and uses thereof |
WO2011159369A1 (en) | 2010-06-14 | 2011-12-22 | Iowa State University Research Foundation, Inc. | Nuclease activity of tal effector and foki fusion protein |
ME02678B (me) | 2010-08-23 | 2017-06-20 | Univ Texas | Antitijela na ox-40 i postupci njihove primjene |
EP2614082B1 (en) | 2010-09-09 | 2018-10-03 | Pfizer Inc | 4-1bb binding molecules |
US8962804B2 (en) | 2010-10-08 | 2015-02-24 | City Of Hope | Meditopes and meditope-binding antibodies and uses thereof |
IL295201A (en) | 2010-11-12 | 2022-10-01 | Nektar Therapeutics | Conjugations of a part of il-2 and a polymer, preparations containing them and their uses |
WO2012112730A2 (en) | 2011-02-15 | 2012-08-23 | Merrimack Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for delivering nucleic acid to a cell |
WO2012129201A1 (en) | 2011-03-22 | 2012-09-27 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Methods of growing tumor infiltrating lymphocytes in gas-permeable containers |
US20140115726A1 (en) | 2011-04-05 | 2014-04-24 | Cellectis | New tale-protein scaffolds and uses thereof |
WO2012177788A1 (en) | 2011-06-20 | 2012-12-27 | La Jolla Institute For Allergy And Immunology | Modulators of 4-1bb and immune responses |
TW201312117A (zh) | 2011-07-28 | 2013-03-16 | Univ Pennsylvania | 用以診斷與漿液相關之腫瘤細胞的症狀及特性的方法及試劑 |
AU2012299421B2 (en) | 2011-08-23 | 2016-02-04 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Anti-OX40 antibodies and methods of using the same |
EP2756521A4 (en) | 2011-09-16 | 2015-04-22 | Univ Pennsylvania | RNA-MANIPULATED T-CELLS FOR THE TREATMENT OF CANCER |
GB201116092D0 (en) | 2011-09-16 | 2011-11-02 | Bioceros B V | Antibodies and uses thereof |
JP6219832B2 (ja) | 2011-10-17 | 2017-10-25 | マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー | 細胞内送達 |
US9579338B2 (en) | 2011-11-04 | 2017-02-28 | Nitto Denko Corporation | Method of producing lipid nanoparticles for drug delivery |
CN112574949A (zh) | 2012-05-18 | 2021-03-30 | 威尔逊沃夫制造公司 | 改进的用于过继细胞治疗的细胞培养方法 |
EP3276000A3 (en) | 2012-05-25 | 2018-02-21 | Cellectis | Methods for engineering allogeneic and immunosuppressive resistant t cell for immunotherapy |
US10815500B2 (en) | 2012-06-05 | 2020-10-27 | Cellectis | Transcription activator-like effector (TALE) fusion protein |
WO2013184942A1 (en) | 2012-06-08 | 2013-12-12 | Alkermes, Inc. | Ligands modified by circular permutation as agonists and antagonists |
SG11201407819UA (en) | 2012-06-11 | 2014-12-30 | Wolf Wilson Mfg Corp | Improved methods of cell culture for adoptive cell therapy |
CN105121648B (zh) | 2012-12-12 | 2021-05-07 | 布罗德研究所有限公司 | 用于序列操纵的系统、方法和优化的指导组合物的工程化 |
AU2013359262C1 (en) | 2012-12-12 | 2021-05-13 | Massachusetts Institute Of Technology | CRISPR-Cas component systems, methods and compositions for sequence manipulation |
US8697359B1 (en) | 2012-12-12 | 2014-04-15 | The Broad Institute, Inc. | CRISPR-Cas systems and methods for altering expression of gene products |
WO2014093694A1 (en) | 2012-12-12 | 2014-06-19 | The Broad Institute, Inc. | Crispr-cas nickase systems, methods and compositions for sequence manipulation in eukaryotes |
DK2931898T3 (en) | 2012-12-12 | 2016-06-20 | Massachusetts Inst Technology | CONSTRUCTION AND OPTIMIZATION OF SYSTEMS, PROCEDURES AND COMPOSITIONS FOR SEQUENCE MANIPULATION WITH FUNCTIONAL DOMAINS |
AU2013359212B2 (en) | 2012-12-12 | 2017-01-19 | Massachusetts Institute Of Technology | Engineering and optimization of improved systems, methods and enzyme compositions for sequence manipulation |
RU2671897C2 (ru) | 2013-03-01 | 2018-11-07 | Дзе Юнайтед Стейтс Оф Америка, Эз Репрезентед Бай Дзе Секретари, Департмент Оф Хелс Энд Хьюман Сёрвисез | Способы получения из опухоли обогащенных популяций реактивных в отношении опухоли т-клеток |
NZ712903A (en) | 2013-03-18 | 2018-07-27 | Biocerox Prod Bv | Humanized anti-cd134 (ox40) antibodies and uses thereof |
US11311575B2 (en) | 2013-05-13 | 2022-04-26 | Cellectis | Methods for engineering highly active T cell for immunotherapy |
CA2916244A1 (en) | 2013-06-24 | 2014-12-31 | Wilson Wolf Manufacturing Corporation | Closed system device and methods for gas permeable cell culture process |
WO2015084897A2 (en) | 2013-12-02 | 2015-06-11 | Mirimmune, Llc | Immunotherapy of cancer |
SG11201604979WA (en) | 2013-12-17 | 2016-07-28 | Genentech Inc | Combination therapy comprising ox40 binding agonists and pd-1 axis binding antagonists |
EP3102604B1 (en) | 2014-02-04 | 2020-01-15 | Pfizer Inc | Combination of a pd-1 antagonist and a 4-1bb agonist for treating cancer |
CN106574244B (zh) | 2014-06-11 | 2022-01-07 | 保利比奥斯博特有限责任公司 | 用细胞因子组合物扩增淋巴细胞用于主动细胞免疫治疗 |
US9790490B2 (en) | 2015-06-18 | 2017-10-17 | The Broad Institute Inc. | CRISPR enzymes and systems |
MA42902A (fr) * | 2015-07-08 | 2018-05-16 | Univ Johns Hopkins | Lymphocytes infiltrant la moelle (mil) en tant que source de lymphocytes t pour une thérapie par des récepteurs chimériques d'un antigène (car) |
CA2988996A1 (en) | 2015-07-09 | 2017-01-12 | Massachusetts Institute Of Technology | Delivery of materials to anucleate cells |
WO2017070151A1 (en) | 2015-10-19 | 2017-04-27 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Reduced size self-delivering nucleic acid compounds targeting long non-coding rna |
CN108779475A (zh) | 2016-01-12 | 2018-11-09 | Sqz生物技术公司 | 复合物的细胞内递送 |
EP4180520A1 (en) | 2016-10-26 | 2023-05-17 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | Restimulation of cryopreserved tumor infiltrating lymphocytes |
CN109890406A (zh) | 2016-11-10 | 2019-06-14 | 尼克塔治疗公司 | 肿瘤免疫治疗性治疗方法 |
CN110462027A (zh) | 2017-01-06 | 2019-11-15 | 艾欧凡斯生物治疗公司 | 用肿瘤坏死因子受体超家族(tnfrsf)激动剂扩增肿瘤浸润淋巴细胞(til)及til和tnfrsf激动剂的治疗组合 |
JP7250679B2 (ja) | 2017-01-10 | 2023-04-03 | ネクター セラピューティクス | Tlr作動薬化合物のマルチアームポリマーコンジュゲート及び関連の免疫療法治療の方法 |
JOP20190224A1 (ar) | 2017-03-29 | 2019-09-26 | Iovance Biotherapeutics Inc | عمليات من أجل إنتاج الخلايا اللمفاوية المرتشحة للأورام واستخداماتها في العلاج المناعي |
WO2018209115A1 (en) * | 2017-05-10 | 2018-11-15 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | Expansion of tumor infiltrating lymphocytes from liquid tumors and therapeutic uses thereof |
WO2018215936A1 (en) | 2017-05-24 | 2018-11-29 | Novartis Ag | Antibody-cytokine engrafted proteins and methods of use in the treatment of cancer |
BR112020002271A2 (pt) | 2017-08-03 | 2020-07-28 | Synthorx, Inc. | conjugados de citocina para o tratamento de doenças proliferativas e infecciosas |
SG11202104615VA (en) | 2018-11-05 | 2021-06-29 | Iovance Biotherapeutics Inc | Processes for production of tumor infiltrating lymphocytes and uses of the same in immunotherapy |
US20230039976A1 (en) * | 2018-11-05 | 2023-02-09 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | Selection of improved tumor reactive t-cells |
CN114949240A (zh) | 2019-02-06 | 2022-08-30 | 新索思股份有限公司 | Il-2缀合物及其使用方法 |
US20210038684A1 (en) | 2019-06-11 | 2021-02-11 | Alkermes Pharma Ireland Limited | Compositions and Methods for Cancer Immunotherapy |
-
2021
- 2021-10-06 JP JP2023521133A patent/JP2023546359A/ja active Pending
- 2021-10-06 EP EP21802087.3A patent/EP4225330A1/en active Pending
- 2021-10-06 US US18/247,877 patent/US20230372397A1/en active Pending
- 2021-10-06 CA CA3195019A patent/CA3195019A1/en active Pending
- 2021-10-15 EP EP21805781.8A patent/EP4225331A1/en active Pending
- 2021-10-15 WO PCT/US2021/055304 patent/WO2022076952A1/en unknown
- 2021-10-15 US US18/247,878 patent/US20230374453A1/en active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2022076952A1 (en) | 2022-04-14 |
US20230372397A1 (en) | 2023-11-23 |
CA3195019A1 (en) | 2022-04-14 |
EP4225331A1 (en) | 2023-08-16 |
US20230374453A1 (en) | 2023-11-23 |
EP4225330A1 (en) | 2023-08-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2024506557A (ja) | 修飾された腫瘍浸潤リンパ球を作製する方法及び養子細胞療法におけるそれらの使用 | |
JP2023523855A (ja) | 腫瘍浸潤リンパ球の製造方法及び免疫療法におけるその使用 | |
JP2022512899A (ja) | 抗pd-1抗体に対して不応性のnsclc患者の治療 | |
JP2023554395A (ja) | Ctla-4及びpd-1阻害剤と併用した腫瘍浸潤リンパ球療法による治療 | |
JP2024510505A (ja) | Cd39/cd69選択に関連した腫瘍浸潤リンパ球(til)拡張及びtilにおける遺伝子ノックアウトのための方法 | |
JP2023546359A (ja) | 腫瘍浸潤リンパ球療法によるnsclc患者の治療 | |
JP2024500403A (ja) | 腫瘍浸潤リンパ球によるがんの治療 | |
WO2022076606A1 (en) | Treatment of nsclc patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies | |
JP2024515189A (ja) | 細胞免疫療法におけるキメラ共刺激受容体、ケモカイン受容体、及びそれらの使用 | |
JP2024519029A (ja) | Pd-1遺伝子編集された腫瘍浸潤リンパ球及び免疫療法におけるその使用 | |
JP2023524108A (ja) | 改良された腫瘍反応性t細胞の選択 | |
JP2024501452A (ja) | Braf阻害剤及び/またはmek阻害剤と併用した腫瘍浸潤リンパ球治療によるがん患者の治療 | |
JP2023544199A (ja) | 腫瘍浸潤リンパ球療法によるnsclc患者の治療 | |
EP4377446A1 (en) | Treatment of cancer patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies in combination with kras inhibitors | |
JP2024509184A (ja) | 腫瘍保存及び細胞培養組成物 | |
JP2024527961A (ja) | Kras阻害剤と併用した腫瘍浸潤リンパ球療法によるがん患者の治療 | |
WO2023196877A1 (en) | Treatment of nsclc patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies | |
JP2024526898A (ja) | 固形腫瘍断片の凍結保存のための方法 | |
EP4404969A1 (en) | Expansion processes and agents for tumor infiltrating lymphocytes | |
WO2023086803A1 (en) | Methods of expansion treatment utilizing cd8 tumor infiltrating lymphocytes | |
KR20240109615A (ko) | Pd-1 talen 녹다운을 사용한 til 생성물의 생성 방법 | |
WO2024030758A1 (en) | Chimeric costimulatory receptors, chemokine receptors, and the use of same in cellular immunotherapies |