CN110462027A - 用肿瘤坏死因子受体超家族（tnfrsf）激动剂扩增肿瘤浸润淋巴细胞（til）及til和tnfrsf激动剂的治疗组合 - Google Patents

用肿瘤坏死因子受体超家族（tnfrsf）激动剂扩增肿瘤浸润淋巴细胞（til）及til和tnfrsf激动剂的治疗组合 Download PDF

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Abstract

本发明提供了用肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂(例如，4‑1BB激动剂、CD27激动剂、糖皮质激素诱导的TNF受体相关激动剂、OX40激动剂、HVEM激动剂或CD95激动剂)扩增肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的方法，并且本文公开了此类扩增的TIL在治疗疾病(如癌症)中的用途。另外，在一些实施方式中，本文公开了可用于治疗疾病(如癌症)的TIL和TNFRSF激动剂的治疗组合，包括它们的组合物、用途和施用方案。

Description

用肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂扩增肿瘤浸润淋 巴细胞(TIL)及TIL和TNFRSF激动剂的治疗组合
相关申请的交叉引用
本国际申请要求2017年1月6日提交的美国临时申请号62/443,556、2017年2月17日提交的美国临时申请号62/460,477、2017年7月14日提交的美国临时申请号62/532,807和2017年10月2日提交的美国临时申请号62/567,151的优先权，其全部内容通过引用并入本文。
技术领域
本文公开了使用肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF，tumor necrosis factorreceptor superfamily)激动剂(例如，4-1BB激动剂、CD27激动剂、糖皮质激素诱导的TNF受体相关激动剂、OX40激动剂、HVEM激动剂或CD95激动剂)扩增肿瘤浸润淋巴细胞(TIL，tumorinfi1trating lymphocyte)的方法，还涉及扩增的TIL在治疗疾病(如癌症)中的应用。此外，本文公开了TIL和TNFRSF激动剂的治疗组合(包括它们的组合物)及其在治疗疾病(如癌症)中的应用。
背景技术
使用过继性自体转移肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)治疗大体积、难治性的癌症代表了一种治疗预后不良患者的有效方法。参见Gattinoni等，Nat.Rev.Immunol.，2006，6，383-393。TIL以T细胞为主，基于IL-2的TIL扩增(随后是“快速扩增过程”(REP，rapid expansionprocess))，由于其速度和效率，已成为TIL扩增的优选方法。参见Dudley等，Science，2002，298，850-54；Dudley等，J.Clin.Oncol.，2005，23，2346-57；Dudley等，J.Clin.Oncol.，2008，26，5233-39；Riddell等，Science 1992，257，238-41；Dudley等，J.Immunother.，2003，26，332-42。为了改善TIL治疗黑色素瘤的临床反应并将TIL疗法扩展到其他肿瘤类型，已对许多方法进行了探索，但取得的成功有限，并且该领域仍具有挑战性。Goff等，J.Clin.Oncol.，2016，34，2389-97；Dudley等，J.Clin.Oncol.，2008，26，5233-39；Rosenberg等，Clin.Cancer Res.，2011，17，4550-57。许多研究重点被放在扩增期间TIL的选择上以选择特定亚群(例如CD8+T细胞)或者靶向驱动突变(driver mutation)，例如突变的ERBB2IP表位，或者KRAS原癌基因中的驱动突变。Tran等，N.Engl.J.Med.，2016，375，2255-62；Tran等，Science，2014，344，641-45。然而，即使此种选择方法可以被发展用于在更大型的临床试验中显示效力，但是它们显著增加了进行TIL治疗的持续时间、复杂性和成本，并且限制了在不同癌症类型中广泛应用TIL疗法的可能性。
4-lBB(也称为CD137和TNFRSF9)最初被鉴定为在激活的T细胞上表达的诱导型共刺激受体，它是TNFRSF的跨膜糖蛋白成员。Watts，Annu.Rev.Immunol.2005，23，23–68。4-1BB是II型跨膜糖蛋白，它在激活的T淋巴细胞上表达，并且它在CD8+T细胞上的表达程度高于CD4+T细胞。4-1BB也在树突状细胞、滤泡树突状细胞、自然杀伤(NK)细胞、粒细胞、炎症部位的血管壁细胞、肿瘤血管和动脉粥样硬化内皮上表达。刺激4-1BB的配体(4-1BBL)在激活的抗原呈递细胞(APC)、骨髓祖细胞和造血干细胞上表达。4-1BB是激活诱导的T细胞共刺激分子。在T细胞中，经由4-lBB的信号传导上调生存基因(survival gene)、增强细胞分裂、诱导细胞因子产生，并防止激活诱导的细胞死亡。目前对4-1BB的理解表明：表达通常依赖于激活，并且包括广泛的免疫细胞亚群，包括激活的NK细胞和NK T细胞(NKT细胞)；调节性T细胞；树突状细胞(DC)，包括滤泡DC；被刺激的肥大细胞、分化骨髓细胞、单核细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和激活的B细胞。4-1BB强烈增强CD8+T细胞的增殖和效应子(effector)功能。4-lBB的交联增强T细胞的增殖、IL-2分泌的生存和细胞溶解的活性。此外，抗4-1BB单克隆抗体具有强抗肿瘤特性，这反过来又是其强大的激活CD8+T细胞、产生IFN-g和诱导细胞溶解标志物的能力的结果。Vinay和Kwon，Mol.Cancer Therapeutics 2012，11，1062-70；Lee等，PLoS One，2013，8，e69677，1-11。
在B细胞受体结合时，激活的正常人B细胞上的4-1BB与它的配体的相互作用刺激增殖并增强生存。在至少两项已发表研究中，已研究了4-1BB的参与在B细胞淋巴瘤中的潜在影响。对几种类型的人原发性NHL样品的评估表明，4-1BB主要在浸润性T细胞而非淋巴瘤细胞上表达。Houot等，Blood，2009，114，3431-38。将4-1BB激动剂与利妥昔单抗和NK细胞一起添加至B淋巴瘤细胞的体外培养物中，结果淋巴瘤杀伤增加。Kohrt等，Blood，2011，117，2423-32。此外，如国际专利申请公开号WO2015/119923中所描述的，在两个实验中使用PF-05082566(剂量为0.001mg/kg至100mg/kg)在食蟹猴中进行B细胞免疫表型分析；在这些实验中，外周血B细胞数不变或减少。
在幼稚T细胞表面检测不到4-1BB，但激活后表达增加。4-1BB激活后，TNFR相关因子(TRAF)家族的两个促生存成员(TRAF1和TRAF2)被募集到4-1BB细胞质尾部，导致NFkB和丝裂原激活蛋白(MAP)激酶(包括Erk、Jnk和p38MAP激酶)级联反应的下游激活。NFkB激活导致Bcl-2家族的促生存成员(Bfl-1和Bel-XL)的上调。促凋亡蛋白Bim以依赖于TRAF1和Erk的方式下调。Sabbagh等，J.Immunol.，2008，180，8093-8101。报道显示，4-1BB激动剂单克隆抗体(mAb)增加共刺激分子表达并显著增强细胞溶解性T淋巴细胞应答，从而在各种模型中产生抗肿瘤功效。4-1BB激动剂mAb在预防和治疗方案以及单一疗法和联合疗法肿瘤模型中均已显示出功效，并且已建立了持久的抗肿瘤保护性T细胞记忆应答。Lynch等，Immunol.Rev.，2008，222，277-286。4-1BB激动剂还抑制各种自身免疫模型中的自身免疫反应。Vinay等，J.Mol.Med.，2006，84，726-36。
OX40受体(OX40)(也称为TNFRSF4、CD134、ACT-4和ACT35)是TNF受体家族的成员，它在激活的CD4+T细胞上表达(参见WO95/12673)。通过存在于激活的B细胞和树突状细胞上的OX40配体(名为OX40L、gp34或ACT-4配体)触发该受体会增强免疫应答期间CD4+T细胞的增殖并影响CD4+记忆T细胞的形成。此外，OX40-OX40L体系介导激活的T细胞与内皮细胞的粘附，从而将激活的CD4+T细胞导向炎症部位。
已显示，OX40+T细胞存在于包含肿瘤浸润淋巴细胞的肿瘤病灶内以及肿瘤细胞阳性引流淋巴结中。Weinberg等，J.Immunol.，2000，164，2160-2169。据显示，在小鼠的几种肿瘤模型中，与对照治疗小鼠相比，肿瘤引发期间体内OX40受体的参与显著延迟并阻止肿瘤的出现。Weinberg等，J.Immunol.，2000，164，2160-2169。因此，已考虑通过施用OX40受体结合剂使OX40受体结合，来增强哺乳动物对抗原的免疫应答(国际专利申请公开号WO1999/042585；Weinberg等，J.Immunol.，2000，164，2160-2169)。临床前研究表明，在几种临床前模型中，用OX40激动剂(包括抗OX40单克隆抗体和OX40L-Fc融合蛋白)治疗荷瘤宿主，结果肿瘤消退。Linch等，Front.Oncol.，2015，34，1-14。
CD27(也称为TNFRSF7)与其他TNFRSF成员(包括CD40、4-1BB和OX40)的活性具有重叠。CD27在T细胞的生存、激活和效应子功能中起关键作用，并且还在NK细胞的增殖和细胞毒活性中起作用。CD27在大多数T细胞(包括幼稚T细胞)上组成性地表达。CD27的配体是CD70，其存在于T细胞、B细胞和树突状细胞上。Oshima等，Int.Immunol.，1998，10，517-26。CD27驱动CD4+T细胞和CD8+T细胞的扩增，CD27在CD28之后起作用以维持T效应细胞生存，并且相比于初次应答，CD27更多地影响二次应答。然而，CD27激活还通过增强调节性T细胞的免疫抑制作用而与肿瘤生长相关。Claus等，Cancer Res.，2012，72，3664-76。其他数据表明，CD27的免疫刺激作用可能超过此种肿瘤促进作用。Aulwurm等，Int.J.Cancer，2006，118，1728-35。在小鼠模型中，激动性(agonistic)CD27单克隆抗体显示出抗肿瘤效力和诱导肿瘤免疫。He等，J.Immunol.，2013，191，4174-83。
糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)是一种共刺激检查点分子，GITR也被称为肿瘤坏死因子受体超家族成员18(TNFRSF18)、激活诱导型TNFR家族受体(AITR)和CD357。GITR在几种细胞类型上表达，包括调节性T细胞(Treg)和效应T细胞、B细胞、NK细胞和抗原呈递细胞。Nocentini和Riccardi，Eur.J.Immunol.，2005，35，1016-1022。GITR由它的缀合物GITR配体(GITRL，conjugate GITR)激活。GITR在刺激免疫应答中起作用，并且GITR的抗原结合蛋白可用于治疗多种需要增加免疫应答的GITR相关疾病或病症。Ko等，J.Exp.Med.，2005，202，885-91；Shimizu等，Nature Immunology，2002，3，135-142；Cohen等，CancerRes.，2006，66，4904-12；Azuma，Crit.Rev.Immunol.，2010，30，547-57。例如，通过GITR刺激T细胞减弱Treg介导的抑制，并增强CD4+T细胞和CD8+T细胞的肿瘤杀伤。GITR以高水平在Treg(例如，CD4+CD25+细胞或CD8+CD25+细胞)中组成性地表达，而且这些细胞激活后会另外上调GITR。Nocentini和Riccardi，Eur.J.Immunol.，2005，35，1016-1022。特别是在T细胞受体(TCR)刺激非最佳的情况下，GITR是CD4+幼稚T细胞和CD8+幼稚T细胞的共激活信号，并诱导和增强增殖和效应子功能。Schaer等，Curr.Opin.Immunol.，2012，24，217-224。在多种免疫治疗应用(例如，癌症、自身免疫疾病、炎症性疾病或感染的治疗)中，由抗原结合GITR蛋白(例如，融合蛋白和包括激动性抗体的抗GITR抗体)引起的增强的免疫应答受到关注。
疱疹病毒侵入介体(HVEM，herpesvirus entry mediator)也称为TNFRSF14和CD270，最初作为单纯疱疹病毒-1(HSV-1)的受体被分离。Montgomery等，Cell，1996，87，427-36。HVEM与TNF家族配体LIGHT和淋巴毒素α同源三聚体(Ltα3)结合。Mauri等，Immunity，1998，8，21-30。T细胞的激活可以通过HVEM-LIGHT相互作用发生，并且该相互作用向T细胞提供共刺激信号，该共刺激信号不依赖CD28信号传导并且可在存在非最佳水平的CD3抗体(OKT-3)时观察到。Tamada等，J.Immunol.，2000，165，4397-404；Harrop等，J.Biol.Chem.，1998，273，27548-56；Tamada等，Nat.Med.，2000，6，283-89；Yu等，Nat.Immuol.，2004，5，141-49。HVEM包含四个富含半胱氨酸结构域(CRD)。del Rio等，J.Leukoc.Biol.，2010，87，223-35。CRD2和CRD3是TNFRSF配体LIGHT的HVEM三聚化所必需的，TNFRSF配体LIGHT通过HVEM向T细胞递送共刺激信号。相反，CRD1和CRD2以单体方式与共抑制性B和T淋巴细胞衰减剂(BTLA)受体和CD160结合，向T细胞提供抑制信号。对HVEM-LIGHT相互作用的研究表明，HVEM-LIGHT相互作用主要对CD8+T细胞具有CD28非依赖性共刺激作用，但也影响CD4+T细胞。Liu等，Int.Immunol.，2003，15，861-70；Scheu等，J.Exp.Med.，2002，195，1613-24。
CD95(也称为Fas、APO-1和TNFRSF6)是45kDa的I型跨膜蛋白，与4-1BB、OX40、GITR、CD27和HVEM不同，CD95含有死亡结构域。Kischkel等，EMBO J.，1995，14，5579-88；Krammer，Nature，2000，407，789-95。诱导型CD95配体(CD95L)与激活T细胞上CD95的结合导致凋亡性细胞死亡，因此CD95通常不与4-1BB、OX40、GITR、CD27和HVEM具有相同的共刺激功能。Strauss等，J.Exp.Med.，2009，206，1379-93。然而，CD95也表现为双功能受体，它在某些条件下对T细胞提供抗细胞凋亡和共刺激作用。Paulsen等，Cell Death Differ.，2011，18，619-31。CD95的参与以剂量依赖性方式调节TCR驱动的信号的产生，其中，高剂量的CD95激动剂或细胞CD95L使T细胞沉默，而较低剂量的这些激动剂则强烈促进TCR驱动的T细胞激活和增殖。
本发明提供了意外发现：TNFRSF激动剂(例如，4-1BB激动剂、CD27激动剂、GITR激动剂、OX40激动剂、HVEM激动剂或CD95激动剂)可用于扩增来自肿瘤的TIL(已知难以从肿瘤中获得TIL并用TIL治疗肿瘤)，并且TNFRSF激动剂可进一步与TIL疗法组合用于治疗患者。
发明内容
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，TNFRSF激动剂选自：4-1BB激动剂、OX40激动剂、CD27激动剂、GITR激动剂、HVEM激动剂、CD95激动剂及它们的组合。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，TNFRSF激动剂是4-1BB激动剂，并且4-1BB激动剂选自：乌瑞鲁单抗(urelumab)、乌托鲁单抗(utomilumab)、EU-101，及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，TNFRSF激动剂是4-1BB激动剂，并且4-1BB激动剂是4-1BB激动剂融合蛋白。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，TNFRSF激动剂是4-1BB激动剂融合蛋白，并且4-1BB激动剂融合蛋白包含：(i)第一可溶性4-1BB结合结构域，(ii)第一肽接头(linker)，(iii)第二可溶性4-1BB结合结构域，(iv)第二肽接头，和(v)第三可溶性4-1BB结合结构域，4-1BB激动剂融合蛋白还包含在N-末端和/或C-末端的其他结构域，并且其中，所述其他结构域包含Fc片段结构域和铰链(hinge)结构域，并且其中，融合蛋白是根据结构I-A或结构I-B的二聚体结构。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，TNFRSF激动剂是OX40激动剂，并且OX40激动剂选自：他利昔珠单抗(tavolixizumab)、GSK3174998、MEDI6469、MEDI6383、MOXR0916、PF-04518600、Creative Biolabs MOM-18455，及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，TNFRSF激动剂是OX40激动剂，并且OX40激动剂是OX40激动剂融合蛋白。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，TNFRSF激动剂是OX40激动剂融合蛋白，并且OX40激动剂融合蛋白包含：(i)第一可溶性OX40结合结构域，(ii)第一肽接头，(iii)第二可溶性OX40结合结构域，(iv)第二肽接头，和(v)第三可溶性OX40结合结构域，OX40激动剂融合蛋白还包含在N-末端和/或C-末端的其他结构域，其中，所述其他结构域包含Fc片段结构域和铰链结构域，并且其中，融合蛋白是根据结构I-A或结构I-B的二聚体结构。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，TNFRSF激动剂是CD27激动剂，并且CD27激动剂是伐立鲁单抗(varlilumab)或它的片段、衍生物、变体或生物仿制药。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，TNFRSF激动剂是CD27激动剂，并且其中，CD27激动剂是CD27激动剂融合蛋白。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，TNFRSF激动剂是CD27激动剂，并且CD27激动剂融合蛋白包含：(i)第一可溶性CD27结合结构域，(ii)第一肽接头，(iii)第二可溶性CD27结合结构域，(iv)第二肽接头，和(v)第三可溶性CD27结合结构域，CD27激动剂融合蛋白还包含在N-末端和/或C-末端的其他结构域，并且其中，所述其他结构域包含Fc片段结构域和铰链结构域，并且其中，融合蛋白是根据结构I-A或结构I-B的二聚体结构。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，TNFRSF激动剂是GITR激动剂，并且GITR激动剂选自：TRX518、6C8、36E5、3D6、61G6、6H6、61F6、1D8、17F10、35D8、49A1、9E5、31H6、2155、698、706、827、1649、1718、1D7、33C9、33F6、34G4、35B10、41E11、41G5、42A11、44C1、45A8、46E11、48H12、48H7、49D9、49E2、48A9、5H7、7A10、9H6，及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，TNFRSF激动剂是GITR激动剂，并且GITR激动剂是GITR激动剂融合蛋白。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，TNFRSF激动剂是GITR激动剂融合蛋白，并且GITR激动剂融合蛋白包含：(i)第一可溶性GITR结合结构域，(ii)第一肽接头，(iii)第二可溶性GITR结合结构域，(iv)第二肽接头，和(v)第三可溶性GITR结合结构域，GITR激动剂融合蛋白还包含在N-末端和/或C-末端的其他结构域，并且其中，所述其他结构域包含Fc片段结构域和铰链结构域，并且其中，融合蛋白是根据结构I-A或结构I-B的二聚体结构。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，TNFRSF激动剂是HVEM激动剂。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，TNFRSF激动剂是HVEM激动剂，并且HVEM激动剂是HVEM激动剂融合蛋白。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，TNFRSF激动剂是HVEM激动剂融合蛋白，并且其中，HVEM激动剂融合蛋白包含：(i)第一可溶性HVEM结合结构域，(ii)第一肽接头，(iii)第二可溶性HVEM结合结构域，(iv)第二肽接头，和(v)第三可溶性HVEM结合结构域，HVEM激动剂融合蛋白还包含在N-末端和/或C-末端的其他结构域，并且其中，所述其他结构域包含Fc片段结构域和铰链结构域，并且其中，融合蛋白是根据结构I-A或结构I-B的二聚体结构。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，还包括步骤：在向患者施用第三TIL群后的第二天开始用TNFRSF激动剂治疗患者，其中，TNFRSF激动剂以0.1mg/kg至50mg/kg的剂量静脉内施用，每4周一次，持续至多8个周期。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，还包括步骤：在从患者切除肿瘤的步骤之前，用TNFRSF激动剂治疗患者，其中，TNFRSF激动剂以0.1mg/kg至50mg/kg的剂量静脉内施用，每4周一次，持续至多8个周期。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，TNFRSF激动剂选自：乌瑞鲁单抗、乌托鲁单抗、EU-101、他利昔珠单抗、Creative Biolabs MOM-18455，及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，第一细胞培养基包含第二种TNFRSF激动剂。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，在初始扩增期间，以选自如下的间隔将TNFRSF激动剂添加至第一细胞培养基中：每天、每两天、每三天、每四天、每五天、每六天、每七天、每两周。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，在快速扩增期间，以选自如下的间隔将TNFRSF激动剂添加至第二细胞培养基中：每天、每两天、每三天、每四天、每五天、每六天、每七天、每两周。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，TNFRSF激动剂以足以使达到细胞培养基中浓度为0.1μg/mL至100μg/mL的浓度来添加。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，TNFRSF激动剂以足以达到细胞培养基中浓度为20μg/mL至40μg/mL的浓度来添加。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，IL-2在第一细胞培养基中以约10IU/mL至约6000IU/mL的初始浓度存在。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，IL-2在第一细胞培养基中以约3000IU/mL的初始浓度存在。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，IL-2在第一细胞培养基中以约800IU/mL至约1100IU/mL的初始浓度存在。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，IL-2在第一细胞培养基中以约1000IU/mL的初始浓度存在。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，IL-2在第二细胞培养基中以约10IU/mL至约6000IU/mL的初始浓度存在。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，IL-2在第二细胞培养基中以约3000IU/mL的初始浓度存在。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，IL-2在第二细胞培养基中以约800IU/mL至约1100IU/mL的初始浓度存在。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，IL-2在第二细胞培养基中以约1000IU/mL的初始浓度存在。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，第一细胞培养基中存在IL-15。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，IL-15在第一细胞培养基中以约5ng/mL至约20ng/mL的初始浓度存在。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，第二细胞培养基中存在IL-15。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，IL-15在第二细胞培养基中以约5ng/mL至约20ng/mL的初始浓度存在。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，第一细胞培养基中存在IL-21。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，IL-21在第一细胞培养基中以约5ng/mL至约20ng/mL的初始浓度存在。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，第二细胞培养基中存在IL-21。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，IL-21在第二细胞培养基中以约5ng/mL至约20ng/mL的初始浓度存在。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，OKT-3抗体在第二细胞培养基中以约10ng/mL至约60ng/mL的初始浓度存在。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，OKT-3抗体在第二细胞培养基中以约30ng/mL的初始浓度存在。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，使用透气性容器进行初始扩增。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，使用透气性容器进行快速扩增。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，还包括步骤：在向患者施用第三TIL群之前，用非清髓性淋巴细胞清除方案治疗患者。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，还包括步骤：在向患者施用第三TIL群之前，用非清髓性淋巴细胞清除方案治疗患者，其中，非清髓性淋巴细胞清除方案包括步骤：以60mg/m2/天的剂量施用环磷酰胺2天，然后以25mg/m2/天的剂量施用氟达拉滨5天。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，还包括步骤：在向患者施用第三TIL群后的第二天开始用递减型(decrescendo)IL-2方案治疗患者，其中，递减型IL-2方案包括：在第1天以18,000,000IU/m2的剂量、在第2天以9,000,000IU/m2的剂量以及在第3天和第4天以4,500,000IU/m2的剂量静脉内施用阿地白介素(Aldesleukin)。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，还包括步骤：在向患者施用第三TIL群后，用聚乙二醇化的IL-2以0.10mg/天至50mg/天的剂量治疗患者。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，还包括步骤：在向患者施用第三TIL群后的第二天开始用高剂量IL-2方案治疗患者。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，还包括步骤：在向患者施用第三TIL群后的第二天开始用高剂量IL-2方案治疗患者，其中，高剂量IL-2方案包括：每8小时静脉滴注输注15分钟来施用600,000IU/kg或720,000IU/kg的阿地白介素或它的生物仿制药或变体，直至耐受。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，该癌症选自：黑色素瘤、卵巢癌、宫颈癌、肺癌、膀胱癌、乳腺癌、头颈癌、肾细胞癌、急性髓性白血病、结肠直肠癌、胆管癌和肉瘤。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，其中，该癌症选自：非小细胞肺癌(NSCLC)、三阴性乳腺癌、双重难治性黑色素瘤(double-refractory melanoma)和葡萄膜(眼)黑色素瘤。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，还包括步骤：在从患者切除肿瘤之前，用PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂治疗患者。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，还包括步骤：在从患者切除肿瘤之前，用PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂治疗患者，其中，PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂选自：尼沃鲁单抗(nivolumab)、兰洛利珠单抗(pembrolizumab)、度伐鲁单抗(durvalumab)、阿特利珠单抗(atezolizumab)、阿维鲁单抗(avelumab)，及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，还包括步骤：在从患者切除肿瘤后，用PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂治疗患者。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，还包括步骤：在从患者切除肿瘤后，用PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂治疗患者，其中，PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂选自：尼沃鲁单抗、兰洛利珠单抗、度伐鲁单抗、阿特利珠单抗、阿维鲁单抗，及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，还包括步骤：在向患者施用第三TIL群后，用PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂治疗患者。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群，还包括步骤：在向患者施用第三TIL群后，用PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂治疗患者，其中，PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂选自：尼沃鲁单抗、兰洛利珠单抗、度伐鲁单抗、阿特利珠单抗、阿维鲁单抗，及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。
在一个实施方式中，本发明提供了一种制备肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群的方法，该方法包括以下步骤：
(b)获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；以及
(e)收获第三TIL群。
在一个实施方式中，本发明提供了肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群，该TIL群可从包括以下步骤的方法获得：
(b)获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；以及
(e)收获第三TIL群。
在一个实施方式中，本发明提供了用于治疗癌症的TIL群。在一个实施方式中，本发明提供了一种用于治疗癌症的药物组合物，该药物组合物包含肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群，其中，肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群可以通过包括以下步骤的方法获得：
(b)获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；以及
(e)收获第三TIL群。
在一个实施方式中，第一TIL群从肿瘤获得。在一个实施方式中，首先从患者切除肿瘤。在一个实施方式中，第一TIL群由肿瘤获得，所述肿瘤为从患者切除的肿瘤。在一个实施方式中，以治疗有效量向癌症患者施用第三TIL群。
在一个实施方式中，本发明提供了一种扩增肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2，并且其中，初始扩增进行11天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3)抗体、外周血单核细胞(PBMC)和TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行11天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)可选地，在基于二甲基亚砜的培养基中冷冻保存第三TIL群。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2，并且其中，初始扩增进行11天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3)抗体、外周血单核细胞(PBMC)和TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行11天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向患者施用治疗有效份的第三TIL群。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2，并且其中，初始扩增进行11天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3)抗体、外周血单核细胞(PBMC)和TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行11天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向患者施用治疗有效份的第三TIL群，
其中，TNFRSF激动剂选自：4-1BB激动剂、OX40激动剂及它们的组合。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2，并且其中，初始扩增进行11天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3)抗体、外周血单核细胞(PBMC)和TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行11天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向患者施用治疗有效份的第三TIL群，
其中，TNFRSF激动剂选自：4-1BB激动剂、OX40激动剂及它们的组合，并且其中，TNFRSF激动剂是4-1BB激动剂，4-1BB激动剂选自：乌瑞鲁单抗、乌托鲁单抗、EU-101、融合蛋白，及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2，并且其中，初始扩增进行11天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3)抗体、外周血单核细胞(PBMC)和TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行11天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向患者施用治疗有效份的第三TIL群，
其中，TNFRSF激动剂选自：4-1BB激动剂、OX40激动剂及它们的组合，并且
其中，TNFRSF激动剂是OX40激动剂，并且OX40激动剂选自：他利昔珠单抗、GSK3174998、MEDI6469、MEDI6383、MOXR0916、PF-04518600、Creative Biolabs MOM-18455，及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合，
其中，在步骤(d)开始时，OX4激动剂以1μg/mL至30μg/mL的浓度存在。
在一个实施方式中，本发明提供了任何前述实施方式所述的方法，其中，在步骤(d)开始时，TNFRSF激动剂以5μg/mL至20μg/mL的浓度存在。
在一个实施方式中，本发明提供了任何前述实施方式所述的方法，其中，在步骤(d)开始时，TNFRSF激动剂以约10μg/mL的浓度存在。
在一个实施方式中，本发明提供了任何前述实施方式所述的方法，其中，在整个步骤(d)中，TNFRSF激动剂维持在1μg/mL至30μg/mL的浓度。
在一个实施方式中，本发明提供了任何前述实施方式所述的方法，其中，在整个步骤(d)中，TNFRSF激动剂维持在5μg/mL至20μg/mL的浓度。
在一个实施方式中，本发明提供了任何前述实施方式所述的方法，其中，在整个步骤(d)中，TNFRSF激动剂维持在约10μg/mL的浓度。
在一个实施方式中，本发明提供了任何前述实施方式所述的方法，其中，与第二TIL群中CD8+TIL相对CD4+TIL的参考比率相比，第三TIL群表现出增加的CD8+TIL相对CD4+TIL的比率。在一个实施方式中，经增加的比率选自：比参考比率至少高1％、比参考比率至少高2％、比参考比率至少高5％、比参考比率至少高10％、比参考比率至少高15％、比参考比率至少高20％、比参考比率至少高25％、比参考比率至少高30％、比参考比率至少高35％、比参考比率至少高40％、比参考比率至少高45％和比参考比率至少高50％。在一个实施方式中，经增加的比率比参考比率高5％至80％。在一个实施方式中，经增加的比率比参考比率高10％至70％。在一个实施方式中，经增加的比率比参考比率高15％至60％。在一个前述实施方式中，参考比率获得自第三TIL群，该第三TIL群对TNFRSF激动剂有应答。
在一个实施方式中，本发明提供了任何前述实施方式所述的方法，其中，该癌症选自：黑色素瘤、葡萄膜(眼)黑色素瘤、卵巢癌、宫颈癌、肺癌、膀胱癌、乳腺癌、头颈癌(头颈部鳞状细胞癌)、肾细胞癌、结肠直肠癌、胰腺癌、胶质母细胞瘤、胆管癌和肉瘤。在一个实施方式中，本发明提供了任何前述实施方式所述的方法，其中，该癌症选自：皮肤黑色素瘤、葡萄膜(眼)黑色素瘤、对铂类耐药的卵巢癌、胰腺导管腺癌、骨肉瘤、三阴性乳腺癌和非小细胞肺癌。
在一个实施方式中，任何前述实施方式可以与以下任何实方式例组合。
在一个实施方式中，该方法是体外(in vitro)或离体(ex vivo)方法。
在一个实施方式中，TNFRSF激动剂选自：4-1BB激动剂、OX40激动剂、CD27激动剂、GITR激动剂、HVEM激动剂、CD95激动剂及它们的组合。
在一个实施方式中，TNFRSF激动剂是4-1BB激动剂。
在一个实施方式中，TNFRSF激动剂是4-1BB激动剂，并且4-1BB激动剂选自：乌瑞鲁单抗、乌托鲁单抗、EU-101，及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。
在一个实施方式中，TNFRSF激动剂是4-1BB激动剂，并且4-1BB激动剂是4-1BB激动剂融合蛋白。
在一个实施方式中，TNFRSF激动剂是4-1BB激动剂融合蛋白，并且4-1BB激动剂融合蛋白包含：(i)第一可溶性4-1BB结合结构域，(ii)第一肽接头，(iii)第二可溶性4-1BB结合结构域，(iv)第二肽接头，和(v)第三可溶性4-1BB结合结构域，4-1BB激动剂融合蛋白还包含在N-末端和/或C-末端的其他结构域，并且其中，所述其他结构域包含Fc片段结构域和铰链结构域，并且其中，融合蛋白是根据结构I-A或结构I-B的二聚体结构。
在一个实施方式中，TNFRSF激动剂是OX40激动剂。
在一个实施方式中，TNFRSF激动剂是OX40激动剂，并且OX40激动剂选自：他利昔珠单抗、GSK3174998、MEDI6469、MEDI6383、MOXR0916、PF-04518600、Creative Biolabs MOM-18455，及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。
在一个实施方式中，TNFRSF激动剂是OX40激动剂，并且OX40激动剂是OX40激动剂融合蛋白。
在一个实施方式中，TNFRSF激动剂是OX40激动剂融合蛋白，并且OX40激动剂融合蛋白包含：(i)第一可溶性OX40结合结构域，(ii)第一肽接头，(iii)第二可溶性OX40结合结构域，(iv)第二肽接头，和(v)第三可溶性OX40结合结构域，OX40激动剂融合蛋白还包含在N-末端和/或C-末端的其他结构域，并且其中，所述其他结构域包含Fc片段结构域和铰链结构域，并且其中，融合蛋白是根据结构I-A或结构I-B的二聚体结构。
在一个实施方式中，TNFRSF激动剂是CD27激动剂。
在一个实施方式中，TNFRSF激动剂是CD27激动剂，并且CD27激动剂是伐立鲁单抗或它的片段、衍生物、变体或生物仿制药。
在一个实施方式中，TNFRSF激动剂是CD27激动剂，并且其中，CD27激动剂是CD27激动剂融合蛋白。
在一个实施方式中，TNFRSF激动剂是CD27激动剂，并且CD27激动剂融合蛋白包含：(i)第一可溶性CD27结合结构域，(ii)第一肽接头，(iii)第二可溶性CD27结合结构域，(iv)第二肽接头，和(v)第三可溶性CD27结合结构域，CD27激动剂融合蛋白还包含在N-末端和/或C-末端的其他结构域，并且其中，所述其他结构域包含Fc片段结构域和铰链结构域，并且其中，融合蛋白是根据结构I-A或结构I-B的二聚体结构。
在一个实施方式中，TNFRSF激动剂是GITR激动剂。
在一个实施方式中，TNFRSF激动剂是GITR激动剂，并且GITR激动剂选自：TRX518、6C8、36E5、3D6、61G6、6H6、61F6、1D8、17F10、35D8、49A1、9E5、31H6、2155、698、706、827、1649、1718、1D7、33C9、33F6、34G4、35B10、41E11、41G5、42A11、44C1、45A8、46E11、48H12、48H7、49D9、49E2、48A9、5H7、7A10、9H6，及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。
在一个实施方式中，TNFRSF激动剂是GITR激动剂，并且GITR激动剂是GITR激动剂融合蛋白。
在一个实施方式中，TNFRSF激动剂是GITR激动剂融合蛋白，并且GITR激动剂融合蛋白包含：(i)第一可溶性GITR结合结构域，(ii)第一肽接头，(iii)第二可溶性GITR结合结构域，(iv)第二肽接头，和(v)第三可溶性GITR结合结构域，GITR激动剂融合蛋白还包含在N-末端和/或C-末端的其他结构域，并且其中，所述其他结构域包含Fc片段结构域和铰链结构域，并且其中，融合蛋白是根据结构I-A或结构I-B的二聚体结构。
在一个实施方式中，TNFRSF激动剂是HVEM激动剂。
在一个实施方式中，TNFRSF激动剂是HVEM激动剂，并且HVEM激动剂是HVEM激动剂融合蛋白。
在一个实施方式中，TNFRSF激动剂是HVEM激动剂融合蛋白，并且其中，HVEM激动剂融合蛋白包含：(i)第一可溶性HVEM结合结构域，(ii)第一肽接头，(iii)第二可溶性HVEM结合结构域，(iv)第二肽接头，和(v)第三可溶性HVEM结合结构域，HVEM激动剂融合蛋白还包含在N-末端和/或C-末端的其他结构域，并且其中，所述其他结构域包含Fc片段结构域和铰链结构域，并且其中，融合蛋白是根据结构I-A或结构I-B的二聚体结构。
在一个实施方式中，TNFRSF激动剂选自：乌瑞鲁单抗、乌托鲁单抗、EU-101、他利昔珠单抗、Creative Biolabs MOM-18455，及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。
在一个实施方式中，第一细胞培养基包含第二种TNFRSF激动剂。
在一个实施方式中，在初始扩增期间，以选自如下的间隔将TNFRSF激动剂添加至第一细胞培养基中：每天、每两天、每三天、每四天、每五天、每六天、每七天、每两周。
在一个实施方式中，在快速扩增期间，以选自如下的间隔将TNFRSF激动剂添加至第二细胞培养基中：每天、每两天、每三天、每四天、每五天、每六天、每七天、每两周。
在一个实施方式中，TNFRSF激动剂以足以达到细胞培养基中浓度为0.1μg/mL至100μg/mL的浓度来添加。
在一个实施方式中，TNFRSF激动剂以足以达到细胞培养基中浓度为20μg/mL至40μg/mL的浓度来添加。
本文提供了关于TNFRSF激动剂的进一步详细说明。
在一个实施方式中，IL-2在第一细胞培养基中以约10IU/mL至约6000IU/mL的初始浓度存在。
在一个实施方式中，IL-2在第一细胞培养基中以约3000IU/mL的初始浓度存在。
在一个实施方式中，IL-2在第一细胞培养基中以约800IU/mL至约1100IU/mL的初始浓度存在。
在一个实施方式中，IL-2在第一细胞培养基中以约1000IU/mL的初始浓度存在。
在一个实施方式中，IL-2在第二细胞培养基中以约10IU/mL至约6000IU/mL的初始浓度存在。
在一个实施方式中，IL-2在第二细胞培养基中以约3000IU/mL的初始浓度存在。
在一个实施方式中，IL-2在第二细胞培养基中以约800IU/mL至约1100IU/mL的初始浓度存在。
在一个实施方式中，IL-2在第二细胞培养基中以约1000IU/mL的初始浓度存在。
在一个实施方式中，IL-15存在于第一细胞培养基中。
在一个实施方式中，IL-15在第一细胞培养基中以约5ng/mL至约20ng/mL的初始浓度存在。
在一个实施方式中，IL-15存在于第二细胞培养基中。
在一个实施方式中，IL-15在第二细胞培养基中以约5ng/mL至约20ng/mL的初始浓度存在。
在一个实施方式中，IL-21存在于第一细胞培养基中。
在一个实施方式中，IL-21在第一细胞培养基中以约5ng/mL至约20ng/mL的初始浓度存在。
在一个实施方式中，IL-21存在于第二细胞培养基中。
在一个实施方式中，IL-21在第二细胞培养基中以约5ng/mL至约20ng/mL的初始浓度存在。
在一个实施方式中，OKT-3抗体在第二细胞培养基中以约10ng/mL至约60ng/mL的初始浓度存在。
在一个实施方式中，OKT-3抗体在第二细胞培养基中以约30ng/mL的初始浓度存在。
在一个实施方式中，初始扩增使用透气性容器进行。
在一个实施方式中，快速扩增使用透气性容器进行。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用于治疗癌症的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群，其中，肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群可通过如本文所述的本发明的方法获得。
在一个实施方式中，本发明提供了一种用于治疗癌症的方法中的药物组合物，该药物组合物包含肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群，其中，肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群可通过如本文所述的本发明的方法获得。
在一个实施方式中，TIL群和/或药物组合物用于与TNFRSF组合治疗癌症。
在一个实施方式中，本发明提供了TIL群与TNFRSF的组合，该组合用于治疗癌症，该TIL群可通过如本文所述的本发明的方法获得。
在一个实施方式中，TIL群和/或药物组合物与TNFRSF激动剂组合用于治疗癌症，其中，在向患者施用第三TIL群后第二天施用TNFRSF激动剂，并且其中，TNFRSF激动剂以0.1mg/kg至50mg/kg的剂量静脉内施用，每4周一次，持续至多8个周期。
在一个实施方式中，TIL群和/或药物组合物与TNFRSF激动剂组合用于治疗癌症，其中，在从患者切除肿瘤的步骤之前施用TNFRSF激动剂，并且其中，TNFRSF激动剂以0.1mg/kg至50mg/kg的剂量静脉内施用，每4周一次，持续至多8个周期。
在一个实施方式中，TIL群和/或药物组合物与非清髓性淋巴细胞清除方案组合用于治疗癌症。
在一个实施方式中，在向患者施用第三TIL群和/或包含第三TIL群的药物组合物之前，使用TIL群和/或药物组合物与非清髓性淋巴细胞清除方案的组合治疗癌症。
在一个实施方式中，在向患者施用第三TIL群和/或包含第三TIL群的药物组合物之前，使用TIL群和/或药物组合物与非清髓性淋巴细胞清除方案的组合治疗癌症，其中，非清髓性淋巴细胞清除方案包括步骤：以60mg/m2/天的剂量施用环磷酰胺2天，然后以25mg/m2/天的剂量施用氟达拉滨5天。本文提供了关于非清髓性淋巴细胞清除方案的进一步详细说明，例如，标题为“非清髓性淋巴细胞清除方案与化疗”。
在一个实施方式中，TIL群和/或药物组合物与IL-2方案组合用于治疗癌症。
在一个实施方式中，IL-2方案是递减型IL-2方案。
在一个实施方式中，在向患者施用第三TIL群和/或包含第三TIL群的药物组合物的第二天开始，使用TIL群和/或药物组合物与递减型IL-2方案的组合治疗癌症，其中，递减型IL-2方案包括：在第1天以18,000,000IU/m2的剂量、在第2天以9,000,000IU/m2的剂量以及在第3天和第4天以4,500,000IU/m2的剂量静脉内施用阿地白介素。
在一个实施方式中，TIL群和/或药物组合物与聚乙二醇化的IL-2组合用于治疗癌症。
在一个实施方式中，在向患者施用第三TIL群和/或包含第三TIL群的药物组合物后，将TIL群和/或药物组合物与聚乙二醇化的IL-2组合用于治疗癌症的方法中，该聚乙二醇化的IL-2以0.10mg/天至50mg/天的剂量施用。
在一个实施方式中，将TIL群和/或药物组合物与高剂量IL-2方案组合用于治疗癌症的方法中。
在一个实施方式中，在向患者施用第三TIL群和/或包含第三TIL群的药物组合物后的第二天开始，使用TIL群和/或药物组合物与高剂量IL-2方案的组合，用于治疗癌症的方法中。
在一个实施方式中，在向患者施用第三TIL群和/或包含第三TIL群的药物组合物后的第二天开始，使用TIL群和/或药物组合物与高剂量IL-2方案的组合，用于治疗癌症的方法中，其中，高剂量IL-2方案包括：每8小时静脉滴注输注15分钟来施用600,000IU/kg或720,000IU/kg的阿地白介素或它的生物仿制药或变体，直至耐受。
在一个实施方式中，TIL群和/或药物组合物用于治疗癌症，其中，癌症选自：黑色素瘤、卵巢癌、宫颈癌、肺癌、膀胱癌、乳腺癌、头颈癌、肾细胞癌、急性髓性白血病、结肠直肠癌、胆管癌和肉瘤。
在一个实施方式中，TIL群和/或药物组合物用于治疗癌症，其中，癌症选自：非小细胞肺癌(NSCLC)、三阴性乳腺癌、双重难治性黑色素瘤和葡萄膜(眼)黑色素瘤。
在一个实施方式中，TIL群和/或药物组合物与PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂组合用于治疗癌症。
在一个实施方式中，TIL群和/或药物组合物与PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂组合用于治疗癌症，其中，PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂选自：尼沃鲁单抗、兰洛利珠单抗、度伐鲁单抗、阿特利珠单抗、阿维鲁单抗，及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。
在一个实施方式中，TIL群和/或药物组合物与PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂组合用于治疗癌症，其中，在从患者切除肿瘤之前施用PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂。
在一个实施方式中，在从患者切除肿瘤之前，使用TIL群和/或药物组合物与PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂的组合治疗癌症，其中，PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂选自：尼沃鲁单抗、兰洛利珠单抗、度伐鲁单抗、阿特利珠单抗、阿维鲁单抗，及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。
在一个实施方式中，TIL群和/或药物组合物与PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂组合用于治疗癌症的方法中。
在一个实施方式中，TIL群和/或药物组合物与PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂组合用于治疗癌症，其中，PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂选自：尼沃鲁单抗、兰洛利珠单抗、度伐鲁单抗、阿特利珠单抗、阿维鲁单抗，及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。
在一个实施方式中，在从患者切除肿瘤之后，将TIL群和/或药物组合物与PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂组合用于治疗癌症的方法中。
在一个实施方式中，在从患者切除肿瘤之后，将TIL群和/或药物组合物与PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂组合用于治疗癌症，其中，PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂选自：尼沃鲁单抗、兰洛利珠单抗、度伐鲁单抗、阿特利珠单抗、阿维鲁单抗，及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。
在一个实施方式中，TIL群和/或药物组合物与PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂组合用于治疗癌症，其中，在向患者施用第三TIL群和/或包含第三TIL群的药物组合物之后，施用PD-1或PD-L1抑制剂。
在一个实施方式中，TIL群和/或药物组合物与PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂组合用于治疗癌症，其中，在向患者施用第三TIL群之后，施用PD-1或PD-L1抑制剂，其中，PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂选自：尼沃鲁单抗、兰洛利珠单抗、度伐鲁单抗、阿特利珠单抗、阿维鲁单抗，及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。本文描述了关于PD-1抑制剂和PD-L1抑制剂的进一步细节，例如，在标题为“PD-1和PD-L1抑制剂的组合”的部分。在一些实施方式中，TIL群和/或包含TIL群的药物组合物还包含如本文所述的一种以上特征，例如，在标题为“TIL的药物组合物、剂量和施用方案”和“TNFRSF激动剂的药物组合物、剂量和施用方案”的部分。
附图说明
当结合附图阅读时，将更好地理解前述发明内容以及本发明的以下详细描述。
图1显示了TIL扩增和处理过程。本公开的TNFRSF激动剂可以用于预REP(pre-REP)阶段(图的上半部分)或REP阶段(图的下半部分)，且当将IL-2添加至每个细胞培养物中时可以添加TNFRSF激动剂。步骤1涉及将4个肿瘤碎片添加至10个G-Rex10烧瓶中。在步骤2，获得约40×106个以上的TIL。在步骤3，(将步骤2所得TIL)分到36个G-Rex 100烧瓶中用于REP。在步骤4，通过离心收获TIL。在大约43天的总处理时间之后，在步骤5获得新鲜TIL产物，此时可以将TIL输注到患者体内。
图2显示了与用TNFRSF激动剂扩增的本发明的TIL一起使用的治疗方案。手术(和肿瘤切除)在开始时发生，并且淋巴细胞清除化疗指如本文其他地方所述的采用化疗的非清髓性淋巴细胞清除。本发明的TNFRSF激动剂也可以在施用TIL后的治疗期间使用，如本文所述。
图3显示了测定结果，该测定使用绿色荧光蛋白(GFP)报告分子(reporter)以剂量依赖性方式确定4-1BB-Fc杂交瘤4B5是否激活Jurkat细胞(表达NF-κB)上的4-1BB信号传导。“二抗”指第二抗体的激活。
图4显示了测定结果，该测定使用GFP报告分子以剂量依赖性方式确定4-1BB-Fc杂交瘤1C4是否激活Jurkat细胞(表达NF-κB)上的4-1BB信号传导。“二抗”指第二抗体的激活。
图5显示了测定结果，该测定使用GFP报告分子以剂量依赖性方式确定4-1BB-Fc杂交瘤9B4是否激活Jurkat细胞(表达NF-κB)上的4-1BB信号传导。“二抗”指第二抗体的激活。
图6显示了测定结果，该测定使用GFP报告分子以剂量依赖性方式确定4-1BB-Fc杂交瘤1D7是否激活Jurkat细胞(表达NF-κB)上的4-1BB信号传导。“二抗”指第二抗体的激活。
图7显示了测定结果，该测定使用GFP报告分子以剂量依赖性方式确定4-1BB-Fc杂交瘤1D10是否激活Jurkat细胞(表达NF-κB)上的4-1BB信号传导。“二抗”指第二抗体的激活。
图8显示了测定结果，该测定使用GFP报告分子以剂量依赖性方式确定4-1BB-Fc杂交瘤3C2是否激活Jurkat细胞(表达NF-κB)上的4-1BB信号传导。“二抗”指第二抗体的激活。
图9显示了测定结果，该测定使用GFP报告分子以剂量依赖性方式确定4-1BB-Fc杂交瘤10D12是否激活Jurkat细胞(表达NF-κB)上的4-1BB信号传导。“二抗”指第二抗体的激活。
图10显示了测定结果，该测定使用GFP报告分子以剂量依赖性方式确定4-1BB-Fc杂交瘤8D2是否激活Jurkat细胞(表达NF-κB)上的4-1BB信号传导。“二抗”指第二抗体的激活。
图11显示了测定结果，该测定使用GFP报告分子以剂量依赖性方式确定4-1BB-Fc杂交瘤4G6是否激活Jurkat细胞(表达NF-κB)上的4-1BB信号传导。“二抗”指第二抗体的激活。
图12显示了测定结果，该测定使用GFP报告分子以剂量依赖性方式确定4-1BB-Fc杂交瘤8E3是否激活Jurkat细胞(表达NF-κB)上的4-1BB信号传导。“二抗”指第二抗体的激活。
图13显示了示例性TIL扩增和生产方案(过程2A)。
图14显示了在过程2A中进行的示例性方法步骤。
图15显示了示例性TIL扩增方案。
图16显示了采用流式细胞术通过4-1BB+细胞的百分比评估的Creative Biolabs(CB)和BPS Biosciences(BPS)4-1BB激动剂抗体的结合亲和力。CB 4-1BB激动剂表现出最高的结合亲和力。
图17显示了通过平均荧光强度(MFI)评估的Creative Biolabs(CB)和BPSBiosciences(BPS)4-1BB激动剂抗体的结合亲和力。CB 4-1BB激动剂表现出最高的结合亲和力。
图18显示了抗4-1BB激动性抗体的NF-κB信号通路激活的评估结果。
图19显示了采用流式细胞术通过OX40+细胞的百分比评估的Creative BiolabsOX40激动剂抗体的结合亲和力。
图20显示了通过平均荧光强度(MFI)评估的Creative Biolabs OX40激动剂抗体的结合亲和力。
图21显示了Creative Biolabs抗OX40激动剂抗体(显示了五种浓度)和商业抗OX40(克隆Ber-ACT35)激动剂之间具有相当的结合亲和力。每个肿瘤名称的第一个字母表示组织学类型：C＝宫颈；H＝头颈(头颈部鳞状细胞癌)；L＝肺；以及M＝黑色素瘤。
图22显示了抗OX40激动剂抗体的NF-κB信号通路激活的评估结果。在有或没有PBMC饲养细胞的情况下，单独用抗OX40或者用同种型对照以1μg/mL、2μg/mL、4μg/mL、8μg/mL和16μg/mL的浓度处理OX40报告细胞24小时。使用一步荧光素酶(One-Step Luciferase)试剂裂解细胞，并通过光度计测量荧光素酶活性。
图23显示了预REP期间的4-1BB和OX40激动剂实验的实验设计。
图24显示了图23的实验设计中使用的肿瘤组织学类型。
图25显示了数据分析策略，它用于评估预REP期间所用的4-1BB和抗OX40激动剂对TIL性能和性质的影响。
图26显示了使用CB 4-1BB激动剂进行细胞扩增的总细胞计数结果(N＝3)。NT＝未测试(对照)。p值>0.99。
图27显示了使用CB OX40激动剂进行细胞扩增的总细胞计数结果(N＝5)。NT＝未测试(对照)。p值为0.06。
图28显示了使用CB 4-1BB激动剂和OX-40激动剂进行细胞扩增的总细胞计数结果(N＝2)。NT＝未测试(对照)。
图29显示了使用CB 4-1BB激动剂进行细胞扩增的总CD8+细胞计数结果(N＝3)。p值为0.5。
图30显示了使用CB OX40激动剂进行细胞扩增的总CD8+细胞计数结果(N＝5)。p值为0.03。
图31显示了使用CB 4-1BB激动剂和OX-40激动剂进行细胞扩增的总CD8+细胞计数结果(N＝2)。NT＝未测试(对照)。
图32显示了使用CB 4-1BB激动剂进行细胞扩增的总CD8+/CD4+细胞计数比率结果(N＝3)。p值为0.2。
图33显示了使用CB OX40激动剂进行细胞扩增的总CD8+/CD4+细胞计数比率结果(N＝5)。p值为0.12。
图34显示了使用CB 4-1BB激动剂和OX-40激动剂进行细胞扩增的总CD8+/CD4+细胞计数比率结果(N＝2)。NT＝未测试(对照)。
图35显示了预REP TIL的REP增殖的实验方案，该预REP TIL是在4-1BB或OX40激动剂的存在下扩增的。
图36显示了在REP中扩增的TIL的扩增倍数，该TIL来自：(在CB 4-1BB激动剂的存在下扩增的)预REP TIL vs未用预REP处理的TIL(NT)。
图37显示了在REP中扩增的TIL的扩增倍数，该TIL来自：(在CB OX40激动剂的存在下扩增的)预REP TIL vs未用预REP处理的TIL(NT)。
图38显示了在REP中扩增的TIL的扩增倍数，该TIL来自：(在CB 4-1BB激动剂和CBOX40激动剂的存在下扩增的)预REP TIL vs未用预REP处理的TIL(NT)。
图39显示了REP阶段期间用于评估CB OX40激动剂的21种TIL细胞系的组织学类型。
图40显示了REP阶段期间评估CB OX40激动剂的实验方案。
图41显示：REP期间OX40激动性抗体的存在优先扩增CD8+TIL(显示为CD3+CD4+细胞的百分比)。
图42显示：REP期间OX40激动性抗体的存在优先扩增CD8+TIL(显示为CD3+CD8+细胞的百分比)。
图43显示：用抗OX40处理后，无应答(non-responder)TIL细胞系的CD4+亚群中未观察到OX40的下调。
图44显示了无应答TIL细胞系和应答(responder)TIL细胞系中CB OX40激动剂剂量滴定的实验细节。
图45显示了应答TIL细胞系中CB OX40激动剂剂量滴定的结果。
图46显示了无应答TIL细胞系中CB OX40激动剂剂量滴定的结果。
图47显示了应答L4005的可比较的TCRvb谱系分布。
图48显示了应答H3005的可比较的TCRvb谱系分布。
图49显示了应答M1022的可比较的TCRvb谱系分布。
序列表简述
SEQ ID NO：1是鼠源单克隆抗体(muromonab，莫罗单抗)重链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：2是鼠源单克隆抗体(莫罗单抗)轻链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：3是重组人IL-2蛋白的氨基酸序列。
SEQ ID NO：4是阿地白介素的氨基酸序列。
SEQ ID NO：5是重组人IL-4蛋白的氨基酸序列。
SEQ ID NO：6是重组人IL-7蛋白的氨基酸序列。
SEQ ID NO：7是重组人IL-15蛋白的氨基酸序列。
SEQ ID NO：8是重组人IL-21蛋白的氨基酸序列。
SEQ ID NO：9是人4-1BB的氨基酸序列。
SEQ ID NO：10是鼠4-1BB的氨基酸序列。
SEQ ID NO：11是4-1BB激动剂单克隆抗体乌托鲁单抗(PF-05082566)的重链。
SEQ ID NO：12是4-1BB激动剂单克隆抗体乌托鲁单抗(PF-05082566)的轻链。
SEQ ID NO：13是4-1BB激动剂单克隆抗体乌托鲁单抗(PF-05082566)的重链可变区(VH)。
SEQ ID NO：14是4-1BB激动剂单克隆抗体乌托鲁单抗(PF-05082566)的轻链可变区(VL)。
SEQ ID NO：15是4-1BB激动剂单克隆抗体乌托鲁单抗(PF-05082566)的重链CDR1。
SEQ ID NO：16是4-1BB激动剂单克隆抗体乌托鲁单抗(PF-05082566)的重链CDR2。
SEQ ID NO：17是4-1BB激动剂单克隆抗体乌托鲁单抗(PF-05082566)的重链CDR3。
SEQ ID NO：18是4-1BB激动剂单克隆抗体乌托鲁单抗(PF-05082566)的轻链CDR1。
SEQ ID NO：19是4-1BB激动剂单克隆抗体乌托鲁单抗(PF-05082566)的轻链CDR2。
SEQ ID NO：20是4-1BB激动剂单克隆抗体乌托鲁单抗(PF-05082566)的轻链CDR3。
SEQ ID NO：21是4-1BB激动剂单克隆抗体乌瑞鲁单抗(BMS-663513)的重链。
SEQ ID NO：22是4-lBB激动剂单克隆抗体乌瑞鲁单抗(BMS-663513)的轻链。
SEQ ID NO：23是4-1BB激动剂单克隆抗体乌瑞鲁单抗(BMS-663513)的重链可变区(VH)。
SEQ ID NO：24是4-1BB激动剂单克隆抗体乌瑞鲁单抗(BMS-663513)的轻链可变区(VL)。
SEQ ID NO：25是4-1BB激动剂单克隆抗体乌瑞鲁单抗(BMS-663513)的重链CDR1。
SEQ ID NO：26是4-1BB激动剂单克隆抗体乌瑞鲁单抗(BMS-663513)的重链CDR2。
SEQ ID NO：27是4-1BB激动剂单克隆抗体乌瑞鲁单抗(BMS-663513)的重链CDR3。
SEQ ID NO：28是4-1BB激动剂单克隆抗体乌瑞鲁单抗(BMS-663513)的轻链CDR1。
SEQ ID NO：29是4-1BB激动剂单克隆抗体乌瑞鲁单抗(BMS-663513)的轻链CDR2。
SEQ ID NO：30是4-lBB激动剂单克隆抗体乌瑞鲁单抗(BMS-663513)的轻链CDR3。
SEQ ID NO：31是TNFRSF激动剂融合蛋白的Fc结构域。
SEQ ID NO：32是TNFRSF激动剂融合蛋白的接头。
SEQ ID NO：33是TNFRSF激动剂融合蛋白的接头。
SEQ ID NO：34是TNFRSF激动剂融合蛋白的接头。
SEQ ID NO：35是TNFRSF激动剂融合蛋白的接头。
SEQ ID NO：36是TNFRSF激动剂融合蛋白的接头。
SEQ ID NO：37是TNFRSF激动剂融合蛋白的接头。
SEQ ID NO：38是TNFRSF激动剂融合蛋白的接头。
SEQ ID NO：39是TNFRSF激动剂融合蛋白的接头。
SEQ ID NO：40是TNFRSF激动剂融合蛋白的接头。
SEQ ID NO：41是TNFRSF激动剂融合蛋白的接头。
SEQ ID NO：42是TNFRSF激动剂融合蛋白的Fc结构域。
SEQ ID NO：43是TNFRSF激动剂融合蛋白的接头。
SEQ ID NO：44是TNFRSF激动剂融合蛋白的接头。
SEQ ID NO：45是TNFRSF激动剂融合蛋白的接头。
SEQ ID NO：46是4-lBB配体(4-1BBL)氨基酸序列。
SEQ ID NO：47是4-1BBL多肽的可溶性部分。
SEQ ID NO：48是4-1BB激动剂抗体4B4-1-1版本1的重链可变区(VH)。
SEQ ID NO：49是4-1BB激动剂抗体4B4-1-1版本1的轻链可变区(VL)。
SEQ ID NO：50是4-1BB激动剂抗体4B4-1-1版本2的重链可变区(VH)。
SEQ ID NO：51是4-1BB激动剂抗体4B4-1-1版本2的轻链可变区(VL)。
SEQ ID NO：52是4-1BB激动剂抗体H39E3-2的重链可变区(VH)。
SEQ ID NO：53是4-1BB激动剂抗体H39E3-2的轻链可变区(VL)。
SEQ ID NO：54是人OX40的氨基酸序列。
SEQ ID NO：55是鼠OX40的氨基酸序列。
SEQ ID NO：56是OX40激动剂单克隆抗体他利昔珠单抗(MEDI-0562)的重链。
SEQ ID NO：57是OX40激动剂单克隆抗体他利昔珠单抗(MEDI-0562)的轻链。
SEQ ID NO：58是OX40激动剂单克隆抗体他利昔珠单抗(MEDI-0562)的重链可变区(VH)。
SEQ ID NO：59是OX40激动剂单克隆抗体他利昔珠单抗(MEDI-0562)的轻链可变区(VL)。
SEQ ID NO：60是OX40激动剂单克隆抗体他利昔珠单抗(MEDI-0562)的重链CDR1。
SEQ ID NO：61是OX40激动剂单克隆抗体他利昔珠单抗(MEDI-0562)的重链CDR2。
SEQ ID NO：62是OX40激动剂单克隆抗体他利昔珠单抗(MEDI-0562)的重链CDR3。
SEQ ID NO：63是OX40激动剂单克隆抗体他利昔珠单抗(MEDI-0562)的轻链CDR1。
SEQ ID NO：64是OX40激动剂单克隆抗体他利昔珠单抗(MEDI-0562)的轻链CDR2。
SEQ ID NO：65是OX40激动剂单克隆抗体他利昔珠单抗(MEDI-0562)的轻链CDR3。
SEQ ID NO：66是OX40激动剂单克隆抗体11D4的重链。
SEQ ID NO：67是OX40激动剂单克隆抗体11D4的轻链。
SEQ ID NO：68是OX40激动剂单克隆抗体11D4的重链可变区(VH)。
SEQ ID NO：69是OX40激动剂单克隆抗体11D4的轻链可变区(VL)。
SEQ ID NO：70是OX40激动剂单克隆抗体11D4的重链CDR1。
SEQ ID NO：71是OX40激动剂单克隆抗体11D4的重链CDR2。
SEQ ID NO：72是OX40激动剂单克隆抗体11D4的重链CDR3。
SEQ ID NO：73是OX40激动剂单克隆抗体11D4的轻链CDR1。
SEQ ID NO：74是OX40激动剂单克隆抗体11D4的轻链CDR2。
SEQ ID NO：75是OX40激动剂单克隆抗体11D4的轻链CDR3。
SEQ ID NO：76是OX40激动剂单克隆抗体18D8的重链。
SEQ ID NO：77是OX40激动剂单克隆抗体18D8的轻链。
SEQ ID NO：78是OX40激动剂单克隆抗体18D8的重链可变区(VH)。
SEQ ID NO：79是OX40激动剂单克隆抗体18D8的轻链可变区(VL)。
SEQ ID NO：80是OX40激动剂单克隆抗体18D8的重链CDR1。
SEQ ID NO：81是OX40激动剂单克隆抗体18D8的重链CDR2。
SEQ ID NO：82是OX40激动剂单克隆抗体18D8的重链CDR3。
SEQ ID NO：83是OX40激动剂单克隆抗体18D8的轻链CDR1。
SEQ ID NO：84是OX40激动剂单克隆抗体18D8的轻链CDR2。
SEQ ID NO：85是OX40激动剂单克隆抗体18D8的轻链CDR3。
SEQ ID NO：86是OX40激动剂单克隆抗体Hu119-122的重链可变区(VH)。
SEQ ID NO：87是OX40激动剂单克隆抗体Hu119-122的轻链可变区(VL)。
SEQ ID NO：88是OX40激动剂单克隆抗体Hu119-122的重链CDR1。
SEQ ID NO：89是OX40激动剂单克隆抗体Hu119-122的重链CDR2。
SEQ ID NO：90是OX40激动剂单克隆抗体Hu119-122的重链CDR3。
SEQ ID NO：91是OX40激动剂单克隆抗体Hu119-122的轻链CDR1。
SEQ ID NO：92是OX40激动剂单克隆抗体Hu119-122的轻链CDR2。
SEQ ID NO：93是OX40激动剂单克隆抗体Hu119-122的轻链CDR3。
SEQ ID NO：94是OX40激动剂单克隆抗体Hu106-222的重链可变区(VH)。
SEQ ID NO：95是OX40激动剂单克隆抗体Hu106-222的轻链可变区(VL)。
SEQ ID NO：96是OX40激动剂单克隆抗体Hu106-222的重链CDR1。
SEQ ID NO：97是OX40激动剂单克隆抗体Hu106-222的重链CDR2。
SEQ ID NO：98是OX40激动剂单克隆抗体Hu106-222的重链CDR3。
SEQ ID NO：99是OX40激动剂单克隆抗体Hu106-222的轻链CDR1。
SEQ ID NO：100是OX40激动剂单克隆抗体Hu106-222的轻链CDR2。
SEQ ID NO：101是OX40激动剂单克隆抗体Hu106-222的轻链CDR3。
SEQ ID NO：102是OX40配体(OX40L)氨基酸序列。
SEQ ID NO：103是OX40L多肽的可溶性部分。
SEQ ID NO：104是OX40L多肽的可选的可溶性部分。
SEQ ID NO：105是OX40激动剂单克隆抗体008的重链可变区(VH)。
SEQ ID NO：106是OX40激动剂单克隆抗体008的轻链可变区(VL)。
SEQ ID NO：107是OX40激动剂单克隆抗体011的重链可变区(VH)。
SEQ ID NO：108是OX40激动剂单克隆抗体011的轻链可变区(VL)。
SEQ ID NO：109是OX40激动剂单克隆抗体021的重链可变区(VH)。
SEQ ID NO：110是OX40激动剂单克隆抗体021的轻链可变区(VL)。
SEQ ID NO：111是OX40激动剂单克隆抗体023的重链可变区(VH)。
SEQ ID NO：112是OX40激动剂单克隆抗体023的轻链可变区(VL)。
SEQ ID NO：113是OX40激动剂单克隆抗体的重链可变区(VH)。
SEQ ID NO：114是OX40激动剂单克隆抗体的轻链可变区(VL)。
SEQ ID NO：115是OX40激动剂单克隆抗体的重链可变区(VH)。
SEQ ID NO：116是OX40激动剂单克隆抗体的轻链可变区(VL)。
SEQ ID NO：117是人源化OX40激动剂单克隆抗体的重链可变区(VH)。
SEQ ID NO：118是人源化OX40激动剂单克隆抗体的重链可变区(VH)。
SEQ ID NO：119是人源化OX40激动剂单克隆抗体的轻链可变区(VL)。
SEQ ID NO：120是人源化OX40激动剂单克隆抗体的轻链可变区(VL)。
SEQ ID NO：121是人源化OX40激动剂单克隆抗体的重链可变区(VH)。
SEQ ID NO：122是人源化OX40激动剂单克隆抗体的重链可变区(VH)。
SEQ ID NO：123是人源化OX40激动剂单克隆抗体的轻链可变区(VL)。
SEQ ID NO：124是人源化OX40激动剂单克隆抗体的轻链可变区(VL)。
SEQ ID NO：125是OX40激动剂单克隆抗体的重链可变区(VH)。
SEQ ID NO：126是OX40激动剂单克隆抗体的轻链可变区(VL)。
SEQ ID NO：127是人CD27的氨基酸序列。
SEQ ID NO：128是猕猴CD27的氨基酸序列。
SEQ ID NO：129是CD27激动剂单克隆抗体伐立鲁单抗(CDX-1127)的重链。
SEQ ID NO：130是CD27激动剂单克隆抗体伐立鲁单抗(CDX-1127)的轻链。
SEQ ID NO：131是CD27激动剂单克隆抗体伐立鲁单抗(CDX-1127)的重链可变区(VH)。
SEQ ID NO：132是CD27激动剂单克隆抗体伐立鲁单抗(CDX-1127)的轻链可变区(VL)。
SEQ ID NO：133是CD27激动剂单克隆抗体伐立鲁单抗(CDX-1127)的重链CDR1。
SEQ ID NO：134是CD27激动剂单克隆抗体伐立鲁单抗(CDX-1127)的重链CDR2。
SEQ ID NO：135是CD27激动剂单克隆抗体伐立鲁单抗(CDX-1127)的重链CDR3。
SEQ ID NO：136是CD27激动剂单克隆抗体伐立鲁单抗(CDX-1127)的轻链CDR1。
SEQ ID NO：137是CD27激动剂单克隆抗体伐立鲁单抗(CDX-1127)的轻链CDR2。
SEQ ID NO：138是CD27激动剂单克隆抗体伐立鲁单抗(CDX-1127)的轻链CDR3。
SEQ ID NO：139是CD27配体(CD70)氨基酸序列。
SEQ ID NO：140是CD70多肽的可溶性部分。
SEQ ID NO：141是CD70多肽的可选的可溶性部分。
SEQ ID NO：142是人GITR(人肿瘤坏死因子受体超家族成员18(TNFRSF18)蛋白)的氨基酸序列。
SEQ ID NO：143是鼠GITR(鼠肿瘤坏死因子受体超家族成员18(TNFRSF18)蛋白)的氨基酸序列。
SEQ ID NO：144是6C8人源化GITR激动剂单克隆抗体的重链变体HuN6C8(糖基化的)的氨基酸序列，CDR2中具有N(天冬酰胺)，对应于美国专利号7,812,135中的SEQ ID NO：60。
SEQ ID NO：145是6C8人源化GITR激动剂单克隆抗体的重链变体HuN6C8(非糖基化的)的氨基酸序列，CDR2中具有N(天冬酰胺)，对应于美国专利号7,812,135中的SEQ ID NO：61。
SEQ ID NO：146是6C8人源化GITR激动剂单克隆抗体的重链变体HuQ6C8(糖基化的)的氨基酸序列，CDR2中具有Q(谷氨酰胺)，对应于美国专利号7,812,135中的SEQ ID NO：62。
SEQ ID NO：147是6C8人源化GITR激动剂单克隆抗体的重链变体HuQ6C8(非糖基化的)的氨基酸序列，CDR2中具有Q(谷氨酰胺)，对应于美国专利号7,812,135中的SEQ ID NO：63。
SEQ ID NO：148是6C8人源化GITR激动剂单克隆抗体的轻链的氨基酸序列，对应于美国专利号7,812,135中的SEQ ID NO：58。
SEQ ID NO：149是前导序列的氨基酸序列，其可任选地与SEQ ID NO：144、SEQ IDNO：145、SEQ ID NO：146或SEQ ID NO：147的氨基酸序列一起被包含在GITR激动剂单克隆抗体中。
SEQ ID NO：150是前导序列的氨基酸序列，其可任选地与SEQ ID NO：148的氨基酸序列一起被包含在GITR激动剂单克隆抗体中。
SEQ ID NO：151是6C8人源化GITR激动剂单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列，对应于美国专利号7,812,135中的SEQ ID NO：1。
SEQ ID NO：152是6C8人源化GITR激动剂单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列，对应于美国专利号7,812,135中的SEQ ID NO：66。
SEQ ID NO：153是6C8人源化GITR激动剂单克隆抗体的轻链可变区的氨基酸序列，对应于美国专利号7,812,135中的SEQ ID NO：2。
SEQ ID NO：154是6C8人源化GITR激动剂单克隆抗体的重链CDR1区的氨基酸序列，对应于美国专利号7,812,135中的SEQ ID NO：3。
SEQ ID NO：155是6C8人源化GITR激动剂单克隆抗体的重链CDR2区的氨基酸序列，对应于美国专利号7,812,135中的SEQ ID NO：4。
SEQ ID NO：156是6C8人源化GITR激动剂单克隆抗体的重链CDR2区的氨基酸序列，对应于美国专利号7,812,135中的SEQ ID NO：19。
SEQ ID NO：157是6C8人源化GITR激动剂单克隆抗体的重链CDR3区的氨基酸序列，对应于美国专利号7,812,135中的SEQ ID NO：5。
SEQ ID NO：158是6C8人源化GITR激动剂单克隆抗体的重链CDR1区的氨基酸序列，对应于美国专利号7,812,135中的SEQ ID NO：6。
SEQ ID NO：159是6C8人源化GITR激动剂单克隆抗体的重链CDR2区的氨基酸序列，对应于美国专利号7,812,135中的SEQ ID NO：7。
SEQ ID NO：160是6C8人源化GITR激动剂单克隆抗体的重链CDR3区的氨基酸序列，对应于美国专利号7,812,135中的SEQ ID NO：8。
SEQ ID NO：161是6C8嵌合GITR激动剂单克隆抗体的重链变体HuN6C8(糖基化的)的氨基酸序列，在CDR2中具有N(天冬酰胺)，对应于美国专利号7,812,135中的SEQ ID NO：23。
SEQ ID NO：162是6C8嵌合GITR激动剂单克隆抗体的重链变体HuQ6C8(非糖基化的)的氨基酸序列，CDR2中具有Q(谷氨酰胺)，对应于美国专利号7,812,135中的SEQ ID NO：24。
SEQ ID NO：163是6C8嵌合GITR激动剂单克隆抗体的轻链的氨基酸序列，对应于美国专利号7,812,135中的SEQ ID NO：22。
SEQ ID NO：164是来自美国专利号8,709,424的GITR激动剂36E5重链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：165是来自美国专利号8,709,424的GITR激动剂36E5轻链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：166是来自美国专利号8,709,424的GITR激动剂3D6重链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：167是来自美国专利号8,709,424的GITR激动剂3D6轻链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：168是来自美国专利号8,709,424的GITR激动剂61G6重链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：169是来自美国专利号8,709,424的GITR激动剂61G6轻链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：170是来自美国专利号8,709,424的GITR激动剂6H6重链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：171是来自美国专利号8,709,424的GITR激动剂6H6轻链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：172是来自美国专利号8,709,424的GITR激动剂61F6重链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：173是来自美国专利号8,709,424的GITR激动剂61F6轻链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：174是来自美国专利号8,709,424的GITR激动剂1D8重链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：175是来自美国专利号8,709,424的GITR激动剂1D8轻链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：176是来自美国专利号8,709,424的GITR激动剂17F10重链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：177是来自美国专利号8,709,424的GITR激动剂17F10轻链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：178是来自美国专利号8,709,424的GITR激动剂35D8重链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：179是来自美国专利号8,709,424的GITR激动剂35D8轻链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：180是来自美国专利号8,709,424的GITR激动剂49A1重链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：181是来自美国专利号8,709,424的GITR激动剂49A1轻链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：182是来自美国专利号8,709,424的GITR激动剂9E5重链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：183是来自美国专利号8,709,424的GITR激动剂9E5轻链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：184是来自美国专利号8,709,424的GITR激动剂31H6重链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：185是来自美国专利号8,709,424的GITR激动剂31H6轻链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：186是来自美国专利号8,709,424的人源化GITR激动剂36E5重链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：187是来自美国专利号8,709,424的人源化GITR激动剂36E5轻链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：188是来自美国专利号8,709,424的人源化GITR激动剂3D6重链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：189是来自美国专利号8,709,424的人源化GITR激动剂3D6轻链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：190是来自美国专利号8,709,424的人源化GITR激动剂61G6重链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：191是来自美国专利号8,709,424的人源化GITR激动剂61G6轻链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：192是来自美国专利号8,709,424的人源化GITR激动剂6H6重链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：193是来自美国专利号8,709,424的人源化GITR激动剂6H6轻链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：194是来自美国专利号8,709,424的人源化GITR激动剂61F6重链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：195是来自美国专利号8,709,424的人源化GITR激动剂61F6轻链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：196是来自美国专利号8,709,424的人源化GITR激动剂1D8重链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：197是来自美国专利号8,709,424的人源化GITR激动剂1D8轻链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：198是来自美国专利号8,709,424的人源化GITR激动剂17F10重链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：199是来自美国专利号8,709,424的人源化GITR激动剂17F10轻链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：200是来自美国专利号8,709,424的人源化GITR激动剂35D8重链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：201是来自美国专利号8,709,424的人源化GITR激动剂35D8轻链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：202是来自美国专利号8,709,424的人源化GITR激动剂49A1重链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：203是来自美国专利号8,709,424的人源化GITR激动剂49A1轻链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：204是来自美国专利号8,709,424的人源化GITR激动剂9E5重链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：205是来自美国专利号8,709,424的人源化GITR激动剂9E5轻链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：206是来自美国专利号8,709,424的人源化GITR激动剂31H6重链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：207是来自美国专利号8,709,424的人源化GITR激动剂31H6轻链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：208是来自美国专利申请公开号US 2013/0108641 A1的GITR激动剂2155可变重链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：209是来自美国专利申请公开号US 2013/0108641 A1的GITR激动剂2155可变轻链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：210是来自美国专利申请公开号US 2013/0108641 A1的GITR激动剂2155人源化(HC1)重链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：211是来自美国专利申请公开号US 2013/0108641 A1的GITR激动剂2155人源化(HC2)重链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：212是来自美国专利申请公开号US 2013/0108641 A1的GITR激动剂2155人源化(HC3a)重链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：213是来自美国专利申请公开号US 2013/0108641 A1的人源化(HC3b)GITR激动剂重链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：214是来自美国专利申请公开号US 2013/0108641 A1的人源化(HC4)GITR激动剂重链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：215是来自美国专利申请公开号US 2013/0108641 A1的2155人源化(LC1)GITR激动剂轻链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：216是来自美国专利申请公开号US 2013/0108641 A1的2155人源化(LC2a)GITR激动剂轻链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：217是来自美国专利申请公开号US 2013/0108641 A1的2155人源化(LC2b)GITR激动剂轻链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：218是来自美国专利申请公开号US 2013/0108641 A1的2155人源化(LC3)GITR激动剂轻链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：219是来自美国专利申请公开号US 2013/0108641 A1的GITR激动剂698可变重链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：220是来自美国专利申请公开号US 2013/0108641 A1的GITR激动剂698可变轻链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：221是来自美国专利申请公开号US 2013/0108641 A1的GITR激动剂706可变重链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：222是来自美国专利申请公开号US 2013/0108641 A1的GITR激动剂706可变轻链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：223是来自美国专利申请公开号US 2013/0108641 A1的GITR激动剂827可变重链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：224是来自美国专利申请公开号US 2013/0108641 A1的GITR激动剂827可变轻链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：225是来自美国专利申请公开号US 2013/0108641 A1的GITR激动剂1718可变重链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：226是来自美国专利申请公开号US 2013/0108641 A1的GITR激动剂1718可变轻链的氨基酸序列。
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SEQ ID NO：301是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂41E11轻链的氨基酸序列。
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SEQ ID NO：311是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂41G5轻链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：312是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂41G5可变重链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：313是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂41G5可变轻链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：314是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂41G5重链CDR1的氨基酸序列。
SEQ ID NO：315是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂41G5重链CDR2的氨基酸序列。
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SEQ ID NO：317是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂41G5轻链CDR1的氨基酸序列。
SEQ ID NO：318是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂41G5轻链CDR2的氨基酸序列。
SEQ ID NO：319是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂41G5轻链CDR3的氨基酸序列。
SEQ ID NO：320是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂42A11重链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：321是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂42A11轻链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：322是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂42A11可变重链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：323是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂42A11可变轻链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：324是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂42A11重链CDR1的氨基酸序列。
SEQ ID NO：325是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂42A11重链CDR2的氨基酸序列。
SEQ ID NO：326是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂42A11重链CDR3的氨基酸序列。
SEQ ID NO：327是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂42A11轻链CDR1的氨基酸序列。
SEQ ID NO：328是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂42A11轻链CDR2的氨基酸序列。
SEQ ID NO：329是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂42A11轻链CDR3的氨基酸序列。
SEQ ID NO：330是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂44C1重链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：331是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂44C1轻链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：332是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂44C1可变重链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：333是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂44C1可变轻链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：334是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂44C1重链CDR1的氨基酸序列。
SEQ ID NO：335是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂44C1重链CDR2的氨基酸序列。
SEQ ID NO：336是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂44C1重链CDR3的氨基酸序列。
SEQ ID NO：337是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂44C1轻链CDR1的氨基酸序列。
SEQ ID NO：338是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂44C1轻链CDR2的氨基酸序列。
SEQ ID NO：339是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂44C1轻链CDR3的氨基酸序列。
SEQ ID NO：340是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂45A8重链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：341是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂45A8轻链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：342是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂45A8可变重链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：343是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂45A8可变轻链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：344是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂45A8重链CDR1的氨基酸序列。
SEQ ID NO：345是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂45A8重链CDR2的氨基酸序列。
SEQ ID NO：346是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂45A8重链CDR3的氨基酸序列。
SEQ ID NO：347是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂45A8轻链CDR1的氨基酸序列。
SEQ ID NO：348是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂45A8轻链CDR2的氨基酸序列。
SEQ ID NO：349是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂45A8轻链CDR3的氨基酸序列。
SEQ ID NO：350是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂46E11重链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：351是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂46E11轻链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：352是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂46E11可变重链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：353是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂46E11可变轻链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：354是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂46E11重链CDR1的氨基酸序列。
SEQ ID NO：355是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂46E11重链CDR2的氨基酸序列。
SEQ ID NO：356是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂46E11重链CDR3的氨基酸序列。
SEQ ID NO：357是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂46E11轻链CDR1的氨基酸序列。
SEQ ID NO：358是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂46E11轻链CDR2的氨基酸序列。
SEQ ID NO：359是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂46E11轻链CDR3的氨基酸序列。
SEQ ID NO：360是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂48H12重链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：361是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂48H12轻链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：362是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂48H12可变重链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：363是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂48H12可变轻链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：364是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂48H12重链CDR1的氨基酸序列。
SEQ ID NO：365是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂48H12重链CDR2的氨基酸序列。
SEQ ID NO：366是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂48H12重链CDR3的氨基酸序列。
SEQ ID NO：367是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂48H12轻链CDR1的氨基酸序列。
SEQ ID NO：368是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂48H12轻链CDR2的氨基酸序列。
SEQ ID NO：369是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂48H12轻链CDR3的氨基酸序列。
SEQ ID NO：370是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂48H7重链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：371是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂48H7轻链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：372是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂48H7可变重链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：373是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂48H7可变轻链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：374是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂48H7重链CDR1的氨基酸序列。
SEQ ID NO：375是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂48H7重链CDR2的氨基酸序列。
SEQ ID NO：376是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂48H7重链CDR3的氨基酸序列。
SEQ ID NO：377是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂48H7轻链CDR1的氨基酸序列。
SEQ ID NO：378是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂48H7轻链CDR2的氨基酸序列。
SEQ ID NO：379是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂48H7轻链CDR3的氨基酸序列。
SEQ ID NO：380是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂49D9重链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：381是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂49D9轻链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：382是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂49D9可变重链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：383是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂49D9可变轻链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：384是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂49D9重链CDR1的氨基酸序列。
SEQ ID NO：385是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂49D9重链CDR2的氨基酸序列。
SEQ ID NO：386是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂49D9重链CDR3的氨基酸序列。
SEQ ID NO：387是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂49D9轻链CDR1的氨基酸序列。
SEQ ID NO：388是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂49D9轻链CDR2的氨基酸序列。
SEQ ID NO：389是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂49D9轻链CDR3的氨基酸序列。
SEQ ID NO：390是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂49E2重链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：391是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂49E2轻链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：392是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂49E2可变重链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：393是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂49E2可变轻链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：394是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂49E2重链CDR1的氨基酸序列。
SEQ ID NO：395是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂49E2重链CDR2的氨基酸序列。
SEQ ID NO：396是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂49E2重链CDR3的氨基酸序列。
SEQ ID NO：397是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂49E2轻链CDR1的氨基酸序列。
SEQ ID NO：398是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂49E2轻链CDR2的氨基酸序列。
SEQ ID NO：399是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂49E2轻链CDR3的氨基酸序列。
SEQ ID NO：400是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂48A9重链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：401是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂48A9轻链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：402是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂48A9可变重链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：403是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂48A9可变轻链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：404是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂48A9重链CDR1的氨基酸序列。
SEQ ID NO：405是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂48A9重链CDR2的氨基酸序列。
SEQ ID NO：406是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂48A9重链CDR3的氨基酸序列。
SEQ ID NO：407是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂48A9轻链CDR1的氨基酸序列。
SEQ ID NO：408是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂48A9轻链CDR2的氨基酸序列。
SEQ ID NO：409是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂48A9轻链CDR3的氨基酸序列。
SEQ ID NO：410是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂5H7重链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：411是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂5H7轻链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：412是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂5H7可变重链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：413是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂5H7可变轻链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：414是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂5H7重链CDR1的氨基酸序列。
SEQ ID NO：415是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂5H7重链CDR2的氨基酸序列。
SEQ ID NO：416是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂5H7重链CDR3的氨基酸序列。
SEQ ID NO：417是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂5H7轻链CDR1的氨基酸序列。
SEQ ID NO：418是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂5H7轻链CDR2的氨基酸序列。
SEQ ID NO：419是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂5H7轻链CDR3的氨基酸序列。
SEQ ID NO：420是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂7A10重链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：421是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂7A10轻链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：422是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂7A10可变重链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：423是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂7A10可变轻链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：424是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂7A10重链CDR1的氨基酸序列。
SEQ ID NO：425是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂7A10重链CDR2的氨基酸序列。
SEQ ID NO：426是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂7A10重链CDR3的氨基酸序列。
SEQ ID NO：427是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂7A10轻链CDR1的氨基酸序列。
SEQ ID NO：428是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂7A10轻链CDR2的氨基酸序列。
SEQ ID NO：429是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂7A10轻链CDR3的氨基酸序列。
SEQ ID NO：430是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂9H6重链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：431是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂9H6轻链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：432是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂9H6可变重链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：433是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂9H6可变轻链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：434是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂9H6重链CDR1的氨基酸序列。
SEQ ID NO：435是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂9H6重链CDR2的氨基酸序列。
SEQ ID NO：436是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂9H6重链CDR3的氨基酸序列。
SEQ ID NO：437是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂9H6轻链CDR1的氨基酸序列。
SEQ ID NO：438是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂9H6轻链CDR2的氨基酸序列。
SEQ ID NO：439是来自美国专利申请公开号US2015/0064204A1的GITR激动剂9H6轻链CDR3的氨基酸序列。
SEQ ID NO：440是GITR配体(GITRL)氨基酸序列。
SEQ ID NO：441是GITRL多肽的可溶性部分。
SEQ ID NO：442是人HVEM(CD270)的氨基酸序列。
SEQ ID NO：443是HVEM配体(LIGHT)氨基酸序列。
SEQ ID NO：444是LIGHT多肽的可溶性部分。
SEQ ID NO：445是LIGHT多肽的可选的可溶性部分。
SEQ ID NO：446是LIGHT多肽的可选的可溶性部分。
SEQ ID NO：447是人CD95同种型1的氨基酸序列。
SEQ ID NO：448是人CD95同种型2的氨基酸序列。
SEQ ID NO：449是人CD95同种型3的氨基酸序列。
SEQ ID NO：450是人CD95同种型4的氨基酸序列。
SEQ ID NO：451是CD95激动剂单克隆抗体E09的重链可变区(VH)。
SEQ ID NO：452是CD95激动剂单克隆抗体E09的轻链可变区(VL)。
SEQ ID NO：453是CD95激动剂单克隆抗体E09的重链CDR1。
SEQ ID NO：454是CD95激动剂单克隆抗体E09的重链CDR2。
SEQ ID NO：455是CD95激动剂单克隆抗体E09的重链CDR3。
SEQ ID NO：456是CD95激动剂单克隆抗体E09的轻链CDR1。
SEQ ID NO：457是CD95激动剂单克隆抗体E09的轻链CDR2。
SEQ ID NO：458是CD95激动剂单克隆抗体E09的轻链CDR3。
SEQ ID NO：459是CD95配体(CD95L)氨基酸序列。
SEQ ID NO：460是CD95L多肽的可溶性部分。
SEQ ID NO：461是CD95L多肽的可选的可溶性部分。
SEQ ID NO：462是CD95L多肽的可选的可溶性部分。
SEQ ID NO：463是PD-1抑制剂尼沃鲁单抗的重链氨基酸序列。
SEQ ID NO：464是PD-1抑制剂尼沃鲁单抗的轻链氨基酸序列。
SEQ ID NO：465是PD-1抑制剂尼沃鲁单抗的重链可变区(VH)氨基酸序列。
SEQ ID NO：466是PD-1抑制剂尼沃鲁单抗的轻链可变区(VL)氨基酸序列。
SEQ ID NO：467是PD-1抑制剂尼沃鲁单抗的重链CDR1氨基酸序列。
SEQ ID NO：468是PD-1抑制剂尼沃鲁单抗的重链CDR2氨基酸序列。
SEQ ID NO：469是PD-1抑制剂尼沃鲁单抗的重链CDR3氨基酸序列。
SEQ ID NO：470是PD-1抑制剂尼沃鲁单抗的轻链CDR1氨基酸序列。
SEQ ID NO：471是PD-1抑制剂尼沃鲁单抗的轻链CDR2氨基酸序列。
SEQ ID NO：472是PD-1抑制剂尼沃鲁单抗的轻链CDR3氨基酸序列。
SEQ ID NO：473是PD-1抑制剂兰洛利珠单抗的重链氨基酸序列。
SEQ ID NO：474是PD-1抑制剂兰洛利珠单抗的轻链氨基酸序列。
SEQ ID NO：475是PD-1抑制剂兰洛利珠单抗的重链可变区(VH)氨基酸序列。
SEQ ID NO：476是PD-1抑制剂兰洛利珠单抗的轻链可变区(VL)氨基酸序列。
SEQ ID NO：477是PD-1抑制剂兰洛利珠单抗的重链CDR1氨基酸序列。
SEQ ID NO：478是PD-1抑制剂兰洛利珠单抗的重链CDR2氨基酸序列。
SEQ ID NO：479是PD-1抑制剂兰洛利珠单抗的重链CDR3氨基酸序列。
SEQ ID NO：480是PD-1抑制剂兰洛利珠单抗的轻链CDR1氨基酸序列。
SEQ ID NO：481是PD-1抑制剂兰洛利珠单抗的轻链CDR2氨基酸序列。
SEQ ID NO：482是PD-1抑制剂兰洛利珠单抗的轻链CDR3氨基酸序列。
SEQ ID NO：483是PD-L1抑制剂度伐鲁单抗的重链氨基酸序列。
SEQ ID NO：484是PD-L1抑制剂度伐鲁单抗的轻链氨基酸序列。
SEQ ID NO：485是PD-L1抑制剂度伐鲁单抗的重链可变区(VH)氨基酸序列。
SEQ ID NO：486是PD-L1抑制剂度伐鲁单抗的轻链可变区(VL)氨基酸序列。
SEQ ID NO：487是PD-L1抑制剂度伐鲁单抗的重链CDR1氨基酸序列。
SEQ ID NO：488是PD-L1抑制剂度伐鲁单抗的重链CDR2氨基酸序列。
SEQ ID NO：489是PD-L1抑制剂度伐鲁单抗的重链CDR3氨基酸序列。
SEQ ID NO：490是PD-L1抑制剂度伐鲁单抗的轻链CDR1氨基酸序列。
SEQ ID NO：491是PD-L1抑制剂度伐鲁单抗的轻链CDR2氨基酸序列。
SEQ ID NO：492是PD-L1抑制剂度伐鲁单抗的轻链CDR3氨基酸序列。
SEQ ID NO：493是PD-L1抑制剂阿维鲁单抗的重链氨基酸序列。
SEQ ID NO：494是PD-L1抑制剂阿维鲁单抗的轻链氨基酸序列。
SEQ ID NO：495是PD-L1抑制剂阿维鲁单抗的重链可变区(VH)氨基酸序列。
SEQ ID NO：496是PD-L1抑制剂阿维鲁单抗的轻链可变区(VL)氨基酸序列。
SEQ ID NO：497是PD-L1抑制剂阿维鲁单抗的重链CDR1氨基酸序列。
SEQ ID NO：498是PD-L1抑制剂阿维鲁单抗的重链CDR2氨基酸序列。
SEQ ID NO：499是PD-L1抑制剂阿维鲁单抗的重链CDR3氨基酸序列。
SEQ ID NO：500是PD-L1抑制剂阿维鲁单抗的轻链CDR1氨基酸序列。
SEQ ID NO：501是PD-L1抑制剂阿维鲁单抗的轻链CDR2氨基酸序列。
SEQ ID NO：502是PD-L1抑制剂阿维鲁单抗的轻链CDR3氨基酸序列。
SEQ ID NO：503是PD-L1抑制剂阿特利珠单抗的重链氨基酸序列。
SEQ ID NO：504是PD-L1抑制剂阿特利珠单抗的轻链氨基酸序列。
SEQ ID NO：505是PD-L1抑制剂阿特利珠单抗的重链可变区(VH)氨基酸序列。
SEQ ID NO：506是PD-L1抑制剂阿特利珠单抗的轻链可变区(VL)氨基酸序列。
SEQ ID NO：507是PD-L1抑制剂阿特利珠单抗的重链CDR1氨基酸序列。
SEQ ID NO：508是PD-L1抑制剂阿特利珠单抗的重链CDR2氨基酸序列。
SEQ ID NO：509是PD-L1抑制剂阿特利珠单抗的重链CDR3氨基酸序列。
SEQ ID NO：510是PD-L1抑制剂阿特利珠单抗的轻链CDR1氨基酸序列。
SEQ ID NO：511是PD-L1抑制剂阿特利珠单抗的轻链CDR2氨基酸序列。
SEQ ID NO：512是PD-L1抑制剂阿特利珠单抗的轻链CDR3氨基酸序列。
具体实施方式
除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的技术人员通常理解的含义相同的含义。本文提及的所有专利和出版物均以引用的方式整体并入本文。
定义
如本文所用，术语“共同施用(co-administration)”、“共同施用(co-administering)”、“与...组合施用(administered in combination with)”、“与...组合施用(administering in combination with)”、“同时”和“共同”包括向受试者施用两种以上活性药物成分(例如，在本发明的一个优选实施方式中，至少一种TNFRSF激动剂和多种TIL)，使得活性药物成分和/或其代谢物同时存在于受试者中。共同施用包括：同时施用不同的组合物、在不同时间施用不同的组合物，或施用其中存在两种以上活性药物成分的组合物。优选同时施用不同的组合物和施用其中存在两种药剂的组合物。
术语“快速扩增”意指在一周的时间内抗原特异性TIL的数量增加至少约3倍(或4倍、5倍、6倍、7倍、8倍或9倍)，更优选在一周的时间内增加至少约10倍(或20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍或90倍)，或者最优选在一周的时间内增加至少约100倍。本文描述了许多快速扩增方案。
本文中的“肿瘤浸润淋巴细胞”或“TIL”指最初作为白细胞获得的细胞群，它们已经离开受试者的血流并迁移至肿瘤。TIL包括但不限于CD8+细胞毒性T细胞(淋巴细胞)、Th1和Th17 CD4+T细胞、天然杀伤细胞、树突状细胞和M1巨噬细胞。TIL包括原代TIL和次代TIL。“原代TIL”是如本文所述从患者组织样品中获得的那些(有时称为“新鲜收获的”)，“次代TIL”是如本文所讨论的已经扩增或增殖的任何TIL细胞群，包括但不限于大量TIL(bulkTIL)和扩增的TIL(“REP TIL”或“后REP(post-REP)TIL”)。
本文的“细胞群”(包括TIL)指许多具有共同特征的细胞。通常，群的数量通常为1×106至1×1010，不同的TIL群包含不同的数量。例如，在IL-2存在下的原代TIL的初始增长产生大约1×108个细胞的大量TIL群。通常，进行REP扩增以提供1.5×109至1.5×1010个细胞的群用于输注。
术语“中枢记忆T细胞”指人细胞中CD45R0+并且组成性地表达CCR7(CCR7高)和CD62L(CD62高)的T细胞亚群。中枢记忆T细胞的表面表型还包括TCR、CD3、CD127(IL-7R)和IL-15R。中枢记忆T细胞的转录因子包括BCL-6、BCL-6B、MBD2和BMI1。在TCR触发后，中枢记忆T细胞主要分泌IL-2和CD40L作为效应子分子。中枢记忆T细胞在血液中的CD4区室(compartment)中占优势，并且在人体中按比率富集在淋巴结和扁桃体。
术语“抗CD3抗体”指抗体或它的变体(例如单克隆抗体)，包括：针对成熟T细胞的T细胞抗原受体中CD3受体的人、人源化、嵌合或鼠抗体。抗CD3抗体包括OKT-3，也称为莫罗单抗(muromonab)。抗CD3抗体还包括UHCT1克隆，也称为T3和CD3ε。其他抗CD3抗体包括例如奥特昔珠单抗(otelixizumab)、特普利珠单抗(teplizumab)和威司利珠单抗(visilizumab)。
术语“OKT-3”(在本文中也称为“OKT3”)指单克隆抗体或其生物仿制药或变体，包括针对成熟T细胞的T细胞抗原受体中CD3受体的人、人源化、嵌合或鼠抗体，还包括市售形式，如OKT-3(30ng/mL，纯MACS GMP CD3，Miltenyi Biotech，Inc.，圣地亚哥，加利福尼亚州，美国)和莫罗单抗或其变体、保守性氨基酸取代、糖型(glycoform)或生物仿制药。莫罗单抗的重链和轻链的氨基酸序列在表1中给出(SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2)。
表1：莫罗单抗的氨基酸序列
术语“IL-2”(在本文中也称为“IL2”)指称为白细胞介素-2的T细胞生长因子，包括所有形式的IL-2，包括人的和哺乳动物的形式、保守性氨基酸取代、糖型、生物仿制药，及它们的变体。IL-2描述于例如Nelson，J.Immunol.，2004，172，3983-88和Malek，Annu.Rev.，Immunol.，2008，26，453-79，其公开内容通过引用并入本文。适用于本发明的重组人IL-2的氨基酸序列在表2中给出(SEQ ID NO：3)。例如，术语IL-2包括人重组形式的IL-2，例如阿地白介素(PROLEUKIN，可从多个供应商商购，每个单独使用的小瓶2200万IU)，以及由CellGenix，Inc.，朴茨茅斯，新罕布什尔州，美国(CELLGRO GMP)或ProSpec-TanyTechnoGene Ltd.，东布朗士维克(East Brunswick)，新泽西，美国(目录号CYT-209-b)商业提供的重组IL-2的形式，以及来自其他供应商的其他商业等效物。阿地白介素(des-丙氨酰-1，丝氨酸-125人IL-2)是一种非糖基化的人重组形式的IL-2，分子量为约15kDa。适用于本发明的阿地白介素的氨基酸序列在表2中给出(SEQ ID NO：4)。术语IL-2还包括如本文所述的聚乙二醇化形式的IL-2，包括聚乙二醇化的IL2前药NKTR-214，可从NektarTherapeutics，南旧金山，加利福尼亚州，美国商购。适用于本发明的NKTR-214和聚乙二醇化的IL-2描述于美国专利申请公开号US2014/0328791A1和国际专利申请公开号WO2012/065086A1中，其公开内容通过引用并入本文。适用于本发明的缀合的IL-2的替代形式描述于美国专利4,766,106、5,206,344、5,089,261和4902,502中，其公开内容通过引用并入本文。适用于本发明的IL-2制剂描述于美国专利6,706,289中，其公开内容通过引用并入本文。
表2：白细胞介素的氨基酸序列
术语“IL-4”(在本文中也称为“IL4”)指称为白细胞介素4的细胞因子，其由Th2 T细胞和嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和肥大细胞产生。IL-4调节幼稚辅助性T细胞(Th0细胞)向Th2 T细胞的分化。参见Steinke和Borish，Respir.Res.2001，2，66-70。在被IL-4激活后，Th2 T细胞随后在正反馈环中产生另外的IL-4。IL-4还刺激B细胞增殖和II类MHC表达，并诱导B细胞类别转换为表达IgE和IgG1。适用于本发明的重组人IL-4可从多个供应商商购，包括ProSpec-Tany TechnoGene Ltd.，东布朗士维克，新泽西，美国(目录号CYT-211)和ThermoFisher Scientific，Inc.，沃尔瑟姆，马萨诸塞州，美国(人IL-15重组蛋白，目录号Gibco CTP0043)。适用于本发明的重组人IL-4的氨基酸序列在表2中给出(SEQ ID NO：5)
术语“IL-7”(在本文中也称为“IL7”)指称为白细胞介素7的糖基化组织衍生的细胞因子，其可以从基质细胞和上皮细胞以及树突状细胞中获得。参见Fry和Mackall，Blood2002，99，3892-904。IL-7可以刺激T细胞的发育。IL-7与IL-7受体结合，IL-7受体是由IL-7受体α和常见γ链受体组成的异二聚体，其在一系列信号中对T细胞在胸腺内的发育和外周生存是重要的。适用于本发明的重组人IL-7可从多个供应商商购，包括ProSpec-TanyTechnoGene Ltd.，东布朗士维克，新泽西，美国(目录号CYT-254)和ThermoFisherScientific，Inc.，沃尔瑟姆，马萨诸塞州，美国(人IL-7重组蛋白，目录号Gibco PHC0071)。适用于本发明的重组人IL-7的氨基酸序列在表2中给出(SEQ ID NO：6)。
术语“IL-15”(在本文中也称为“IL15”)指称为白细胞介素15的T细胞生长因子，包括所有形式的IL-15，包括人的和哺乳动物的形式、其保守性氨基酸取代、糖型、生物仿制药及变体。IL-15描述于例如Fehniger和Caligiuri，Blood 2001，97，14-32中，其公开内容通过引用并入本文。IL-15与IL-2共享β和γ信号传导受体亚单位。重组人IL-15是非糖基化多肽单链，含有114个氨基酸(和N-末端甲硫氨酸)，分子量为12.8kDa。重组人IL-15可从多个供应商商购，包括ProSpec-Tany TechnoGene Ltd.，东布朗士维克，新泽西，美国(目录号CYT-230-b)和ThermoFisher Scientific，Inc.，沃尔瑟姆，马萨诸塞州，美国(人IL-15重组蛋白，目录号34-8159-82)。适用于本发明的重组人IL-15的氨基酸序列在表2中给出(SEQID NO：7)。
术语“IL-21”(在本文中也称为“IL21”)指称为白细胞介素21的多效细胞因子蛋白，包括所有形式的IL-21，包括人的和哺乳动物的形式、其保守性氨基酸取代、糖型、生物仿制药及变体。IL-21描述于例如Spolski和Leonard，Nat.Rev.Drug.Disc.2014，13，379-95，其公开内容通过引用并入本文。IL-21主要由天然杀伤T细胞和激活的人CD4+T细胞产生。重组人IL-21是非糖基化多肽单链，含有132个氨基酸，分子量为15.4kDa。重组人IL-21可从多个供应商商购，包括ProSpec-Tany TechnoGene Ltd.，东布朗士维克，新泽西，美国(目录号CYT-408-b)和ThermoFisher Scientific，Inc.，沃尔瑟姆，马萨诸塞州，美国(人IL-15重组蛋白，目录号14-8219-80)。适用于本发明的重组人IL-21的氨基酸序列在表2中给出(SEQ ID NO：8)。
术语“体内”指发生在哺乳动物受试者体内的事件。
术语“离体”指在人造环境中发生在哺乳动物受试者体外的事件。
术语“体外”指发生在测试系统中的事件。体外测定包括基于细胞的测定(可以使用活细胞或死细胞)并且还可以包括无细胞测定(不使用完整细胞)。
术语“有效量”或“治疗有效量”指如本文所述的化合物或化合物组合的量足以实现预期应用，包括但不限于疾病治疗。治疗有效量可根据预期应用(体外或体内)或所治疗的受试者和疾病状况(例如受试者的体重、年龄和性别)、疾病状况的严重程度或施用方式而变化。该术语还适用于将在靶细胞中诱导特定应答(例如血小板粘附和/或细胞迁移的减少)的剂量。具体剂量将取决于所选择的具体化合物、要遵循的施用方案、化合物是否与其他化合物联合施用、施用时间、施用组织以及携带化合物的物理递送系统。
本文使用的术语“治疗效果”包括治疗益处和/或预防益处。预防效果包括：延迟或消除疾病或病症的出现，延迟或消除疾病或病症的症状发作，减缓、停止或逆转疾病或病症的进展，或它们的任何组合。
术语“QD”、“qd”或“q.d.”表示每日一次(quaque die)、一天一次(once a day)或每天一次(once daily)。术语“BID”、“bid”或“b.i.d.”表示每日两次(bis in die)、一天两次(twice a day)或每天两次(twice daily)。术语“TID”、“tid”或“t.i.d.”表示每日三次(ter in die)、一天三次(three times a day)或每天三次(three times daily)。术语“QID”、“qid”或“q.i.d.”表示每日四次(quater in die)、一天四次(four times a day)或每天四次(four times daily)。
术语“药学上可接受的盐”指来源于本领域已知的各种有机和无机抗衡离子的盐。可以用无机酸和有机酸形成药学上可接受的酸加成盐。可以衍生盐的优选无机酸包括：例如，盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸和磷酸。可以衍生盐的优选有机酸包括：例如，乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸和水杨酸。可以用无机和有机碱形成药学上可接受的碱加成盐。可以衍生盐的无机碱包括：例如，钠、钾、锂、铵、钙、镁、铁、锌、铜、锰和铝。可以衍生盐的有机碱包括：例如，伯胺、仲胺和叔胺，取代的胺，包括天然存在的取代的胺、环胺和碱性离子交换树脂。具体实例包括异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺和乙醇胺。在一些实施方式中，药学上可接受的碱加成盐选自：铵盐、钾盐、钠盐、钙盐和镁盐。术语“共晶”指来源于本领域已知的许多共晶形成体的分子复合物。与盐不同，共晶通常不涉及共晶和药物之间的氢转移，而是涉及分子间相互作用，例如，晶体结构中在共晶形成体和药物之间的氢键、芳环堆积或色散力。
术语“药学上可接受的载体”或“药学上可接受的赋形剂”旨在包括任何和所有的溶剂、分散介质、包衣、抗细菌和抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂，以及惰性成分。此种药学上可接受的载体或药学上可接受的赋形剂在活性药物成分中的用途是本领域熟知的。除非任何常规的药学上可接受的载体或药学上可接受的赋形剂与活性药物成分不相容，否则可预期其在本发明的治疗组合物中的应用。其他活性药物成分(例如其他药物)也可以掺入所述组合物、过程和方法中。
术语“抗原”指诱导免疫应答的物质。在一些实施方式中，抗原是如果由主要组织相容性复合物(MHC)分子呈递，则能够被抗体或T细胞受体(TCR)结合的分子。如本文所用，术语“抗原”还包括T细胞表位。另外，抗原能够被免疫系统识别。在一些实施方式中，抗原能够诱导体液免疫应答或细胞免疫应答，导致B淋巴细胞和/或T淋巴细胞的激活。在某些情况下，这可能需要抗原含有Th细胞表位或与Th细胞表位连接。抗原还可以具有一个以上表位(例如B-表位和T-表位)。在一些实施方式中，抗原优选通常以高度特异性和选择性的方式与其相应的抗体或TCR反应，而不与可由其他抗原诱导的多种其他抗体或TCR反应。
术语“抗体”及其复数形式“抗体”指整个免疫球蛋白及它的任何抗原结合片段(“抗原结合部分”)或单链。“抗体”还指糖蛋白，该糖蛋白包含通过二硫键相互连接的至少两条重(H)链和两条轻(L)链或它的抗原结合部分。每条重链由重链可变区(本文中缩写为VH)和重链恒定区组成。重链恒定区由三个结构域(CH1、CH2和CH3)组成。每条轻链由轻链可变区(本文中缩写为VL)和轻链恒定区组成。轻链恒定区由一个结构域CL组成。抗体的VH和VL区可以进一步细分为高变区(region of hypervariability)(称为互补决定区(CDR)或高变区(HVR)，并且高变区可以散布有更保守的区域(称为框架区(FR，framework region))。每个VH和VL由三个CDR和四个FR组成，按照以下顺序从氨基末端到羧基末端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链和轻链的可变区含有与抗原表位或表位相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，宿主组织或因子包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(Clq)。
术语“单克隆抗体”、“mAb”、“单克隆抗体组合物”或它们的复数形式指制备的抗体分子的单分子组合物。单克隆抗体组合物显示出对特定表位的单一结合特异性和亲和力。可以使用本领域知识和技术来制备对TNFRSF受体具有特异性的单克隆抗体：用合适的抗原注射测试受试者，然后分离表达(具有所需序列或功能特征的)抗体的杂交瘤。编码单克隆抗体的DNA易于使用常规方法分离和测序(例如，通过使用寡核苷酸探针，该探针能够与编码单克隆抗体重链和轻链的基因特异性结合)。杂交瘤细胞用作此种DNA的优选来源。一旦分离，可将DNA置于表达载体中，然后将表达载体转染到宿主细胞(如大肠杆菌细胞、猿猴COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或不产生免疫球蛋白的骨髓瘤细胞)中，以在重组宿主细胞中获得合成的单克隆抗体。下文将更详细地描述抗体的重组产生。
如本文所用，抗体的“抗原结合部分”或“抗原结合片段”(或简称“抗体部分”或“片段”)术语指保留与抗原特异性结合能力的抗体的一个以上片段。已显示，可以通过全长抗体的片段进行抗体的抗原结合功能。抗体的“抗原结合部分”术语内包含的结合片段的实例包括：(i)Fab片段，该片段是由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab′)2片段，该片段是包含两个Fab片段的二价片段，这两个Fab片段在铰链区通过二硫键连接；(iii)Fd片段，该片段由VH和CH1结构域组成；(iv)Fv片段，该片段由抗体单臂的VL和VH结构域组成；(v)结构域抗体(dAb)片段(Ward等，Nature，1989，341，544-546)，该片段可以由VH或VL结构域组成；(vi)分离的互补决定区(CDR)。此外，尽管Fv片段的两个结构域(VL和VH)由不同的基因编码，但它们可以通过重组方法通过合成接头连接，该合成接头使得它们能够作为单个蛋白质链被制备，其中，VL和VH区配对形成单价分子，该单价分子称为单链Fv(scFv)；参见，例如，Bird等，Science，1988，242，423-426；以及Huston等，Proc.Natl.Acad.Sci.美国，1988，85，5879-5883。也旨在将此类scFv抗体包含在术语抗体的“抗原结合部分”或“抗原结合片段”内。使用本领域技术人员已知的常规技术获得这些抗体片段，并以与完整抗体相同的方式筛选这些片段的效用。
如本文所用，术语“人抗体(human antibody)”旨在包含具有可变区的抗体，可变区中的框架区和CDR区均来源于人种系免疫球蛋白序列。此外，如果抗体含有恒定区，则恒定区也来自人种系免疫球蛋白序列。本发明的人抗体可包含不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或位点特异性诱变或通过体内体细胞突变引入的突变)。如本文所用，术语“人抗体”不旨在包括这样的抗体：该抗体中来源于另一个哺乳动物物种(如小鼠)种系的CDR序列被移植到了人类框架序列上。
术语“人单克隆抗体”指表现出单一结合特异性的具有可变区的抗体，可变区中的框架区和CDR区均来自人种系免疫球蛋白序列。在一个实施方式中，人单克隆抗体由杂交瘤产生，该杂交瘤包含从转基因非人动物(例如，转基因小鼠)获得的与无限增殖化细胞融合的B细胞，该B细胞的基因组包含人重链转基因和人轻链转基因。
如本文所用，术语“重组人抗体”包括通过重组方法制备、表达、产生或分离的所有人抗体，例如：(a)从动物(如小鼠)分离的抗体，该动物是人免疫球蛋白基因的转基因或转染色体动物或由其制备的杂交瘤(下文进一步描述)；(b)从宿主细胞(如转染瘤)分离的抗体，该宿主细胞被转化以表达人抗体；(c)从重组、组合人抗体文库分离的抗体；以及(d)通过任何其他方法制备、表达、产生或分离的抗体，该方法涉及将人免疫球蛋白基因序列剪接到其他DNA序列。此类重组人抗体具有可变区，可变区中的框架区和CDR区来自人种系免疫球蛋白序列。然而，在某些实施方式中，可以对此种重组人抗体进行体外诱变(或者，当使用人Ig序列转基因动物时进行体内体细胞诱变)，因此，重组抗体VH和VL区的氨基酸序列(尽管来源于并且与人种系VH和VL序列有关)可能并非天然存在于体内的人抗体种系库(humanantibody germline repertoire)中。
如本文所用，“同种型”指由重链恒定区基因编码的抗体类别(例如，IgM或IgG1)。
短语“识别抗原的抗体”和“对抗原具有特异性的抗体”在本文中可与术语“与抗原特异性结合的抗体”互换使用。
术语“人抗体衍生物”指人抗体的任何修饰形式，包括抗体与另一种活性药物成分或抗体的缀合物。术语“缀合物”、“抗体-药物缀合物”、“ADC”或“免疫缀合物”指与另一治疗部分缀合的抗体或它的片段，可以使用本领域可获得的方法将该治疗部分与本文所述抗体缀合。
术语“人源化抗体(humanized antibody)”、“人源化抗体(humanizedantibodies)”和“人源化”意指这样的抗体：该抗体中来源于另一种哺乳动物物种(如小鼠)种系的CDR序列被移植到了人类框架序列上。可以在人类框架序列内进行另外的框架区修饰。人源化形式的非人(例如，鼠)抗体是嵌合抗体，它含有来自非人免疫球蛋白的最小序列。在大多数情况下，人源化抗体是人免疫球蛋白(受体抗体)，该抗体中来自受体高变区的残基被来自非人物种(例如，小鼠、大鼠、兔或非人灵长类动物)(供体抗体)的具有所需特异性、亲和力和能力的15个高变区的残基替换。在一些情况下，人免疫球蛋白的Fv框架区(FR)残基被相应的非人残基取代。此外，人源化抗体可包含在受体抗体或供体抗体中未发现的残基。进行这些修饰以进一步改善抗体性能。通常，人源化抗体将包含基本上所有的至少一个(通常是两个)可变结构域，在该可变结构域中，所有或基本上所有高变环(hypervariable loop)对应于非人免疫球蛋白的那些，并且所有或基本上所有FR区域是人免疫球蛋白序列的那些。可选地，人源化抗体还包含至少部分免疫球蛋白恒定区(Fc)，通常是人免疫球蛋白的恒定区。进一步细节参见Jones等，Nature，1986，321，522-525；Riechmann等，Nature，1988，332，323-329；以及Presta等，Curr.Op.Struct.Biol.，1992，2，593-596。可以对本文所述的TNFRSF激动剂进行修饰，以使用任何已知在效应子功能和/或FcR结合方面具有改善(例如，减少)的Fc变体。例如，Fc变体可以包括：国际专利申请公开号WO1988/07089A1、WO1996/14339Al、WO1998/05787A1、WO1998/23289A1、WO1999/51642A1、WO99/58572A1、WO2000/09560A2、WO2000/32767A1、WO2000/42072A2、WO2002/44215A2、WO2002/060919A2、WO2003/074569A2、WO2004/016750A2、WO2004/029207A2、WO2004/035752A2、WO2004/063351A2、WO2004/074455A2、WO2004/099249A2、WO2005/040217A2、WO2005/070963A1、WO2005/077981A2、WO2005/092925A2、WO2005/123780A2、WO2006/019447A1、WO2006/047350A2和WO2006/085967A2公开的任何一个氨基酸取代；以及美国专利号5,648,260、5,739,277、5,834,250、5,869,046、6,096,871、6,121,022、6,194,551、6,242,195、6,277,375、6,528,624、6,538,124、6,737,056、6,821,505、6,998,253和7,083,784公开的任何一个氨基酸取代；其公开内容通过引用并入本文。
术语“嵌合抗体(chimeric antibody)”意指这样的抗体：该抗体中可变区序列来源于一个物种而恒定区序列来源于另一个物种，例如可变区序列来源于小鼠抗体而恒定区序列来源于人抗体的抗体。
“双价抗体(diabody)”是具有两个抗原结合位点的小抗体片段。该片段包含与同一多肽链中的轻链可变结构域(VL)相连的重链可变结构域(VH)(VH-VL或VL-VH)。通过使用接头(该接头太短而不允许同一链上的两个结构域配对)，使结构域与另一条链的互补结构域配对，产生两个抗原结合位点。例如，欧洲专利号EP404,097、国际专利公开号WO93/11161和Bolliger等，Proc.Natl.Acad.Sci.美国，1993，90，6444-6448中更全面地描述了双价抗体。
术语“糖基化”指修饰的抗体衍生物。无糖基化(aglycoslated)的抗体缺乏糖基化。例如，可以改变糖基化以增加抗体对抗原的亲和力。例如，可以通过改变抗体序列内的一个以上糖基化位点来实现此种碳水化合物修饰。例如，可以进行一个以上氨基酸取代，它导致一个以上可变区框架糖基化位点的消除，从而消除该位点的糖基化。如美国专利号5,714,350和6,350,861中所述，糖基化可以增加抗体对抗原的亲和力。另外地或可选地，可以制备糖基化类型改变的抗体，例如，岩藻糖残基量减少的低岩藻糖基化抗体，或平分型GlcNac结构增加的抗体。已证明，此种改变的糖基化模式增加了抗体的能力。例如，可以通过在宿主细胞(具有改变的糖基化机制)中表达该抗体来实现此种碳水化合物修饰。本领域已描述过具有改变的糖基化机制的细胞，此种细胞可用作宿主细胞，该宿主细胞表达本发明的重组抗体，从而产生糖基化改变的抗体。例如，细胞系Ms704、Ms705和Ms709缺乏岩藻糖基转移酶基因FUT8(α(1,6)岩藻糖基转移酶)，使得Ms704，Ms705和Ms709细胞系表达的抗体的碳水化合物上缺乏岩藻糖。通过使用两个置换型载体(replacement vector)靶向地破坏CHO/DG44细胞的FUT8基因，从而产生Ms704、Ms705和Ms709FUT8-/-细胞系(参见例如，美国专利公开号2004/0110704或Yamane-Ohnuki等，Biotechnol.Bioeng.，2004，87，614-622)。作为另一个例子，欧洲专利号EP1,176,195描述了具有被功能性破坏的FUT8基因的细胞系，该FUT8基因编码岩藻糖基转移酶，使得此种细胞系表达的抗体表现出低岩藻糖基化(通过减少或消除α1,6键相关的酶)；该专利还描述了对于将岩藻糖添加至与抗体Fc区结合的N-乙酰葡糖胺具有低酶活性或不具有酶活性的细胞系，例如，大鼠骨髓瘤细胞系YB2/0(ATCCCRL 1662)。国际专利公开号WO03/035835描述了变体CHO细胞系Lec13细胞，它将岩藻糖附加到Asn(297)连接的碳水化合物上的能力降低，也导致在该宿主细胞中表达的抗体的低岩藻糖化(也参见Shields等，J.Biol.Chem.，2002，277，26733-26740)。国际专利公开号WO99/54342描述了经工程化以表达糖蛋白修饰糖基转移酶(例如，β(1,4)-N-乙酰葡糖胺基转移酶III(GnTIII))的细胞系，使得在工程细胞系中表达的抗体表现出增加的平分型GlcNac结构，导致抗体的ADCC活性增加(参见Umana等，Nat.Biotech.，1999，17，176-180)。或者，可以使用岩藻糖苷酶切割抗体的岩藻糖残基。例如，如Tarentino等，Biochem.，1975，14，5516-5523所描述的，岩藻糖苷酶(α-L-岩藻糖苷酶)去除抗体的岩藻糖残基。
“聚乙二醇化”指，通常在一个以上PEG基团与抗体或抗体片段连接的条件下，修饰的抗体或融合蛋白或其片段与聚乙二醇(PEG)(如PEG的活性酯或醛衍生物)发生反应。聚乙二醇化可以例如增加抗体的生物学(例如血清)半衰期。优选地，通过与反应性PEG分子(或类似的反应性水溶性聚合物)的酰化反应或烷基化反应进行聚乙二醇化。如本文所用，术语“聚乙二醇”旨在涵盖已用于衍生其他蛋白质的任何形式的PEG，例如单(C1-C10)烷氧基-或芳氧基-聚乙二醇或聚乙二醇-马来酰亚胺。待聚乙二醇化的抗体或蛋白质可以是非糖基化抗体或蛋白质。聚乙二醇化的方法是本领域已知的并且可以应用于本发明所述的抗体，如欧洲专利号EP 0154316和EP 0401384以及美国专利号5,824,778中所述，其公开内容通过引用并入本文。
术语“融合蛋白”或“融合多肽”指结合两种以上单个蛋白质的性质的蛋白质。此类蛋白质至少具有两个直接或通过氨基酸接头共价连接的异源多肽。形成融合蛋白的多肽通常是C-末端被连接至N-末端，尽管它们也可以是C-末端被连接至C-末端、N-末端被连接至N-末端或者N-末端被连接至C-末端。融合蛋白的多肽可以是任何顺序，并且可以包括一种以上的组成多肽(constituent polypeptide)或者两种组成多肽均包括在内。该术语包括构成融合蛋白的抗原的保守修饰的变体、多态性变体、等位基因、突变体、子序列、种间同源物和免疫原性片段。本公开的融合蛋白还可以包含组分抗原或它的免疫原性片段的另外拷贝。融合蛋白可以含有连接在一起并进一步连接至Fc结构域(例如IgG Fc结构域)的一个以上结合结构域。融合蛋白可以进一步连接在一起以模拟单克隆抗体并提供六个以上的结合结构域。可以通过本领域已知的重组方法产生融合蛋白。融合蛋白的制备是本领域已知的，并且描述于例如国际专利申请公开号WO1995/027735A1、WO2005/103077A1、WO2008/025516A1、WO2009/007120A1、WO2010/003766A1、WO2010/010051A1、WO2010/078966A1、美国专利申请公开号US2015/0125419A1和US2016/0272695A1以及美国专利号8,921,519，其各自的公开内容均通过引用并入本文。
当涉及核酸或蛋白质部分的使用时，术语“异源”表示核酸或蛋白质包含两个以上在自然界中彼此不存在相同关系的子序列。例如核酸通常是重组产生的，具有来自无关基因的两个以上序列，它被排列以产生新的功能性核酸，例如来自一个来源的启动子和来自另一个来源的编码区，或来自不同来源的编码区。类似地，异源蛋白质表示该蛋白质包含两个以上在自然界中彼此不存在相同关系的子序列(例如融合蛋白)。
术语“保守性氨基酸取代”指不破坏抗体或融合蛋白与抗原的结合的氨基酸序列修饰。保守性氨基酸取代包括用同一类的氨基酸取代这一类中的氨基酸，其中，类由常见的物理化学氨基酸侧链性质和在自然界中发现的同源蛋白质中(如通过例如标准的Dayhoff频率交换矩阵或BLOSUM矩阵所测定的)的高取代频率定义。已经对六类一般氨基酸侧链进行了分类，包括：I类(Cys)；II类(Ser、Thr、Pro、Ala、Gly)；III类(Asn、Asp、Gln、Glu)；IV类(His、Arg、Lys)；V类(Ile、Leu、Val、Met)；和VI类(Phe、Tyr、Trp)。例如，将Asp替换为另一种III类残基(例如Asn、Gln或Glu)是保守性取代。因此，抗体中预测的非必需氨基酸残基优选被来自相同类的另一种氨基酸残基替换。识别不破坏抗原的氨基酸保守性取代的方法是本领域熟知的(参见例如Brummell等，Biochemistry 1993，32，1180-1187；Kobayashi等，Protein Eng.1999，12，879-884(1999)；以及Burks等，Proc.Natl.Acad.Sci.，美国，1997，94，412-417)。
在两个以上核酸或多肽的情况下，术语“序列同一性”、“百分比同一性”和“序列百分比同一性”(或其同义词，例如“99％相同”)指，当进行比较和比对(视需要引入空位)以获得最大对应性时，两个以上序列或子序列相同或具有指定百分比的相同核苷酸或氨基酸残基，不考虑任何保守性氨基酸取代作为序列同一性的一部分。可以使用序列比较软件或算法或通过目视检查，来测量同一性百分比。本领域已知各种算法和软件可用于获得氨基酸或核苷酸序列的比对。确定序列同一性百分比的合适程序包括，例如可从美国政府的国家生物技术信息中心BLAST网站获得的BLAST程序套件。可以使用BLASTN或BLASTP算法进行两个序列之间的比较。BLASTN用于比较核酸序列，而BLASTP用于比较氨基酸序列。ALIGN、ALIGN-2(Genentech，南旧金山，加利福尼亚州)或可从DNASTAR获得的MegAlign是可用于比对序列的其他公共可用软件程序。本领域技术人员可以通过特定的比对软件确定用于最大比对的适当参数。在某些实施例中，使用比对软件的默认参数。
本发明的某些实施方式包括抗体或融合蛋白的变体。如本文所用，术语“变体”包括但不限于如下的抗体或融合蛋白：其通过在参考抗体的氨基酸序列内或附近的某些位点处的一个以上取代、缺失和/或插入而包含与参考抗体的氨基酸序列不同的氨基酸序列。与参考抗体的氨基酸序列相比，变体在其氨基酸序列中可包含一个以上保守性取代。保守性取代可涉及例如取代相似带电荷或不带电荷的氨基酸。该变体保留了特异性结合参考抗体的抗原的能力。
核酸序列隐含地包括其保守修饰的变体(例如，简并密码子取代)和互补序列，以及明确指出的序列。具体地，可以通过产生此类序列(该序列中一个以上选定(或所有)密码子的第三位点被混合碱基和/或脱氧肌苷残基取代)，来实现简并密码子取代。Batzer等，Nucleic Acid Res.，1991，19，5081；Ohtsuka等，J.Biol.Chem.，1985，260，2605-2608；Rossolini等，Mol.Cell.Probes，1994，8，91-98。术语核酸可与cDNA、mRNA、寡核苷酸和多核苷酸互换使用。
术语“生物仿制药”指生物制品，包括单克隆抗体或融合蛋白，尽管临床上非活性成分存在微小差异，它与美国许可的参考生物产品高度相似，并且就产品的安全性、纯度和效力而言，该生物制品和参考产品之间临床上没有有意义的差异。此外，生物类似或“生物仿制”药是一种生物制药，它类似于已经被欧洲药品管理局授权使用的另一种生物制药。“生物仿制药”一词也被其他国家和地区监管机构同义使用。生物制品或生物制药是由生物来源(例如细菌或酵母)制造或衍生的药物。它们可以由相对小的分子组成，例如人胰岛素或促红细胞生成素，或复杂分子例如单克隆抗体。例如，如果参考单克隆抗体是利妥昔单抗(rituximab)，则由药物管理机构批准的关于利妥昔单抗的生物仿制药单克隆抗体与利妥昔单抗“生物类似”或者是利妥昔单抗的“生物仿制药”。在欧洲，生物类似或“生物仿制”药是一种生物制药，它类似于已经被欧洲药品管理局(EMA)授权使用的另一种生物制药。经修订，欧洲用于类似生物应用的相关法律依据是法规(EC)第726/2004号第6条和指令第2001/83/EC号第10(4)条，因此在欧洲，根据法规(EC)第726/2004号第6条和指令第2001/83/EC号第10(4)条的规定，生物仿制药可以被授权或允许进行授权或作为用于授权的申请主题。已经授权的原始生物医药产品在欧洲可称为“参考药物产品”。CHMP生物仿制药产品指南中概述了将产品视为生物仿制药的一些要求。此外，产品具体指南(包括与单克隆抗体生物仿制药有关的指南)由EMA以产品为基础提供，并在其网站上公布。在质量特征、生物活性、作用机制、安全性和/或功效方面，本文所述的生物仿制药可以与参考药物产品类似。另外，生物仿制药可以用于或旨在用于治疗与参考药物产品相同的病症。因此，可以认为如本文所述的生物仿制药具有与参考药物产品类似或高度相似的质量特征。或者，或另外，可以认为如本文所述的生物仿制药具有与参考药物产品类似或高度相似的生物活性。或者，或另外，可以认为如本文所述的生物仿制药具有与参考药物产品类似或高度相似的安全性。或者，或另外，可以认为如本文所述的生物仿制药具有与参考药物产品类似或高度相似的功效。如本文所述，将欧洲的生物仿制药与已经由EMA授权的参考药物产品进行比较。然而，在某些情况下，在某些研究中可以将生物仿制药与已经在欧洲经济区之外授权的生物医药产品(非欧洲经济区授权的“比较物”)进行比较。这些研究包括例如某些临床和体内非临床研究。如本文所用，术语“生物仿制药”还涉及已经或可以与非EEA授权的比较物比较的生物医药产品。某些生物仿制药是蛋白质，例如抗体、抗体片段(例如，抗原结合部分)和融合蛋白。蛋白质生物仿制药可具有在氨基酸结构中具有不显著影响多肽功能的微小修饰(包括例如氨基酸的缺失、添加和/或取代)的氨基酸序列。生物仿制药可包含与其参考药物产品的氨基酸序列具有97％以上序列同一性的氨基酸序列，例如97％、98％、99％或100％。生物仿制药可包含一种以上与参考药物产品的翻译后修饰不同的翻译后修饰，例如但不限于，糖基化、氧化、脱酰胺和/或截短，条件是该不同不会导致药品的安全性和/或功效发生变化。生物仿制药可具有与参考药物产品相同或不同的糖基化模式。特别地，尽管不是唯一的，如果差异涉及或旨在解决与参考药物产品相关的安全问题，则生物仿制药可具有不同的糖基化模式。另外，生物仿制药可以在例如其强度、药物形式、制剂、赋形剂和/或呈递方面偏离参考药物产品，条件是不损害药品的安全性和功效。在一些实施方式中，生物仿制药作为进一步包含一种以上赋形剂的组合物提供，其中所述一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同。与参考药物产品相比，生物仿制药可包括例如药代动力学(PK)和/或药效学(PD)概况的差异，但仍被认为与参考药物产品足够相似，以获得授权或认为适合授权。在某些情况下，与参考药物产品相比，生物仿制药表现出不同的结合特性，其中，管理机构如EMA认为不同的结合特性不是生物类似产品授权的障碍。术语“生物仿制药”也被其他国家和地区监管机构同义使用。
如本文所用，术语“4-1BB激动剂”可以指特异性结合4-1BB(CD137)抗原的任何抗体或蛋白质。“特异性结合”指结合分子(binding molecule)对非4-1BB分子的结合基本上表现为背景。4-1BB激动剂可以是本领域已知的任何4-1BB激动剂。特别地，它是本文更详细描述的4-1BB激动剂之一。然而，分离的特异性结合4-1BB的结合分子可能与来自其他物种的4-1BB分子具有交叉反应性。例如，4-1BB激动性抗体和蛋白质也可特异性结合T细胞上的人4-1BB(h4-1BB或hCD137)。
如本文所用，术语“OX40激动剂”可以指特异性结合OX40(CD134)抗原的任何抗体或蛋白质。“特异性结合”指结合分子对非OX40分子的结合基本上表现为背景。OX40激动剂可以是本领域已知的任何OX40激动剂。特别地，它是本文更详细描述的OX40激动剂之一。然而，分离的特异性结合OX40的结合分子可能与来自其他物种的OX40分子具有交叉反应性。例如，OX40激动性抗体和蛋白质也可特异性结合T细胞上的人OX40(hOX40或hCD134)。
如本文所用，术语“CD27激动剂”可以指特异性结合CD27抗原的任何抗体或蛋白质。“特异性结合”指结合分子对非CD27分子的结合基本上表现为背景。CD27激动剂可以是本领域已知的任何CD27激动剂。特别地，它是本文更详细描述的CD27激动剂之一。然而，分离的特异性结合CD27的结合分子可能与来自其他物种的CD27分子具有交叉反应性。例如，CD27激动性抗体和蛋白质也可特异性结合T细胞上的人CD27(hCD27)。
如本文所用，术语“GITR激动剂”包括：含有至少一个特异性结合GITR(CD357)的抗原结合位点的分子。“特异性结合”指结合分子对非GITR分子的结合基本上表现为背景。GITR激动剂可以是本领域已知的任何GITR激动剂。特别地，它是本文更详细描述的GITR激动剂之一。然而，分离的特异性结合GITR的结合分子可能与来自其他物种的GITR分子具有交叉反应性。例如，GITR激动性抗体和蛋白质也可特异性结合T细胞和树突状细胞上的人GITR(hGITR)。
如本文所用，术语“HVEM激动剂”包括：含有至少一个特异性结合HVEM(CD270)的抗原结合位点的分子。“特异性结合”指结合分子对非HVEM分子的结合基本上表现为背景。HVEM激动剂可以是本领域已知的任何HVEM激动剂。特别地，它是本文更详细描述的HVEM激动剂之一。然而，分离的特异性结合HVEM的结合分子可能与来自其他物种的HVEM分子具有交叉反应性。例如，HVEM激动性抗体和蛋白质也可特异性结合T细胞上的人HVEM(hHVEM)。
术语“血液恶性肿瘤”指造血和淋巴组织(包括但不限于血液、骨髓、淋巴结和淋巴系统的组织)的哺乳动物癌症和肿瘤。血液恶性肿瘤也称为“液体肿瘤”。血液恶性肿瘤包括但不限于急性淋巴细胞白血病(ALL)、慢性淋巴细胞淋巴瘤(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)、急性髓样白血病(AML)、慢性粒细胞白血病(CML)、急性单核细胞白血病(AMoL)、霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤。术语“B细胞血液恶性肿瘤”指影响B细胞的血液恶性肿瘤。
术语“实体瘤”指通常不包含囊肿或液体区域的异常组织块。实体瘤可以是良性或恶性的。术语“实体瘤癌”指恶性、肿瘤性或癌性实体瘤。实体瘤癌症包括但不限于肉瘤、恶性上皮肿瘤(carcinoma)和淋巴瘤，例如肺癌、乳腺癌、前列腺癌、结肠癌、直肠癌和膀胱癌。实体瘤的组织结构包括相互依赖的组织隔室，包括实质(癌细胞)和支持的基质细胞(癌细胞分散在其中并且可以提供支持的微环境)。
如本文所用，术语“微环境”可以指整个实体或血液学肿瘤微环境，或指微环境内的单个细胞亚群。如本文所用，肿瘤微环境指“细胞，可溶性因子，信号分子，细胞外基质，以及促进肿瘤转化、支持肿瘤生长和侵袭、保护肿瘤免受宿主免疫、促进治疗抵抗力并为显性转移灶的繁殖提供利基的机制诱因”的复杂混合物，如Swartz等，Cancer Res.，2012，72，2473中所述。虽然肿瘤表达应被T细胞识别的抗原，但由于微环境的免疫抑制，免疫系统对肿瘤的清除很少。
为避免疑义，本文旨在将结合本发明的特定方面、实施方式或实施例描述的特定特征(例如整数、特征、值、用途、疾病、配方、化合物或组)理解为适用于本文所述的任何其他方面、实施方式或实施例，除非与其不相容。因此，这些特征可以结合本文定义的任何定义、权利要求或实施例适当使用。本说明书中公开的所有特征(包括任何所附权利要求、摘要和附图)和/或如此公开的任何方法或过程的所有步骤可以以任何组合进行组合，除了其中至少一些特征和/或步骤互斥的组合。本发明不限于任何公开的实施例的任何细节。本发明延伸到本说明书(包括任何所附权利要求、摘要和附图)中公开的特征的任何新颖的或新颖的组合，或者延伸到如此公开的任何方法或过程的步骤的任何新颖的或任何新颖的组合。
术语“约”和“大约”表示在统计上有意义的数值范围内。这样的范围可以在给定值或范围的一个数量级内，优选在50％内，更优选在20％内，更优选在10％内，甚至更优选在5％内。术语“约”或“大约”所包含的可允许变化取决于所研究的特定系统，并且本领域普通技术人员可以容易地理解。此外，如本文所用，术语“约”和“大约”表示大小、尺寸、配方、参数、形状和其他性质和特性不是、也不必是精确的，但可以根据需要是近似的和/或更大的或更小的，反映公差、转换因子、四舍五入、测量误差等，以及本领域技术人员已知的其他因素。通常，大小、尺寸、配方、参数、形状或其他性质或特性是“约”或“近似”的，无论是否明确说明如此。应注意，具有非常不同的尺寸、形状和大小的实施方式可采用所述安排。
当在所附权利要求中以原始和修改的形式使用时，过渡术语“包含”、“基本上由...组成”和“由...组成”定义了关于被排除在权利要求的范围之外的未列举的另外的权利要求要素或步骤(如果有的话)的权利要求范围。术语“包含”旨在是包含性的或开放式的，并且不排除任何另外的、未列举的要素、方法、步骤或材料。术语“由......组成”不包括除权利要求中所述那些之外的任何元素、步骤或材料，并且在材料的情况下，术语“由...组成”不包括与指定材料相关的普通杂质。术语“基本上由......组成”将权利要求的范围限制为指定的元素、步骤或材料以及不会实质上影响所要求保护的发明的基本和新颖特征的那些。在替代实施方式中，本文所述的体现本发明的所有组合物、方法和试剂盒可以更具体地由任意过渡术语“包含”、“基本上由......组成”和“由......组成”定义。
4-1BB(CD137)激动剂
在一个实施方式中，TNFRSF激动剂是4-1BB(CD137)激动剂。4-1BB激动剂可以是任何本领域已知的4-1BB结合分子。4-1BB结合分子可以是能够结合人或哺乳动物4-1BB的单克隆抗体或融合蛋白。4-1BB激动剂或4-1BB结合分子可包含免疫球蛋白分子的任何同种型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、任何类别(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或任何亚类的免疫球蛋白重链。4-1BB激动剂或4-1BB结合分子可具有重链和轻链。如本文所用，术语“结合分子”还包括结合4-1BB的抗体(包括全长抗体)、单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)、人抗体、人源化抗体或嵌合抗体，以及抗体片段(例如，Fab片段、F(ab′)片段、由Fab表达文库产生的片段、任何上述分子的表位结合片段)，以及工程化形式的抗体(例如，scFv分子)。在一个实施方式中，4-1BB激动剂是抗原结合蛋白，它是全人(fully human)抗体。在一个实施方式中，4-1BB激动剂是抗原结合蛋白，它是人源化抗体。在一些实施方式中，用于本发明公开的方法和组合物的4-1BB激动剂包括：抗4-1BB抗体、人抗4-1BB抗体、小鼠抗4-1BB抗体、哺乳动物抗4-1BB抗体、单克隆抗4-1BB抗体、多克隆抗4-1BB抗体、嵌合抗4-1BB抗体、抗4-1BB adnectin、抗4-1BB结构域抗体、单链抗4-1BB片段、重链抗4-1BB片段、轻链抗4-1BB片段、抗4-1BB融合蛋白，及它们的片段、衍生物、缀合物、变体或生物仿制药。已知，激动性抗4-1BB抗体诱导强烈的免疫应答。Lee等，PLOS One，2013，8，e69677。在一个优选的实施方式中，4-1BB激动剂是激动性(agonistic)抗4-1BB人源化或全人单克隆抗体(即来源于单细胞系的抗体)。在一个实施方式中，4-1BB激动剂是EU-101(Eutilex Co.Ltd.)、乌托鲁单抗或乌瑞鲁单抗，或它们的片段、衍生物、缀合物、变体或生物仿制药。在一个优选的实施方式中，4-1BB激动剂是乌托鲁单抗或乌瑞鲁单抗，或它们的片段、衍生物、缀合物、变体或生物仿制药。
在一个优选的实施方式中，4-1BB激动剂或4-1BB结合分子也可以是融合蛋白。在一个优选的实施方式中，与激动性单克隆抗体(通常具有两个配体结合结构域)相比，多聚体4-1BB激动剂(例如，三聚体或六聚体4-1BB激动剂(具有三个或六个配体结合结构域))可以更好地诱导受体(4-1BBL)聚集和细胞内信号传导复合物形成。包含三个TNFRSF结合结构域和IgG1-Fc并且可选地还连接两个以上的这些融合蛋白的三聚体(三价)或六聚体(或六价)或更高聚体的融合蛋白描述于例如Gieffers等，Mol.Cancer Therapeutics，2013，12，2735-47。
已知，激动性4-1BB抗体和融合蛋白诱导强烈的免疫应答。在一个优选的实施方式中，4-1BB激动剂是单克隆抗体或融合蛋白，它以足以降低毒性的方式特异性地结合4-1BB抗原。在一些实施方式中，4-1BB激动剂是激动性4-1BB单克隆抗体或融合蛋白，它消除抗体依赖性细胞毒性(ADCC，antibody-dependent cellular toxicity)，例如NK细胞细胞毒性。在一些实施方式中，4-1BB激动剂是激动性4-1BB单克隆抗体或融合蛋白，它消除抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP，antibody-dependent cell phagocytosis)。在一些实施方式中，4-1BB激动剂是激动性4-1BB单克隆抗体或融合蛋白，它消除补体依赖性细胞毒性(CDC，complement-dependent cytotoxicity)。在一些实施方式中，4-1BB激动剂是激动性4-1BB单克隆抗体或融合蛋白，它消除Fc区功能性。
在一些实施方式中，4-1BB激动剂的特征在于以高亲和力和高激动活性(agonistic activity)与人4-1BB(SEQ ID NO：9)结合。在一个实施方式中，4-1BB激动剂是与人4-1BB(SEQ ID NO：9)结合的结合分子。在一个实施方式中，4-1BB激动剂是与鼠4-1BB(SEQ ID NO：10)结合的结合分子。表3总结了与4-1BB激动剂或结合分子结合的4-1BB抗原的氨基酸序列。
表3：4-1BB抗原的氨基酸序列
在一些实施方式中，所描述的组合物、过程和方法包括4-1BB激动剂，该4-1BB激动剂：与人或鼠4-1BB结合的KD为约100pM以下；与人或鼠4-1BB结合的KD为约90pM以下；与人或鼠4-1BB结合的KD为约80pM以下；与人或鼠4-1BB结合的KD为约70pM以下；与人或鼠4-1BB结合的KD为约60pM以下；与人或鼠4-1BB结合的KD为约50pM以下；与人或鼠4-1BB结合的KD为约40pM以下；或者与人或鼠4-1BB结合的KD为约30pM以下。
在一些实施方式中，该组合物、过程和方法包括4-lBB激动剂，该4-lBB激动剂：与人或鼠4-1BB结合的kassoc为约7.5×105 1/M·s以上；与人或鼠4-1BB结合的kassoc为约7.5×105 1/M·s以上；与人或鼠4-1BB结合的kassoc为约8×105 1/M·s以上；与人或鼠4-1BB结合的kassoc为约8.5×105 1/M·s以上；与人或鼠4-1BB结合的kassoc为约9×105 1/M·s以上；与人或鼠4-1BB结合的kassoc为约9.5×105 1/M·s以上；或者与人或鼠4-1BB结合的kassoc为约1×106 1/M·s以上。
在一些实施方式中，该组合物、过程和方法包括4-lBB激动剂，该4-lBB激动剂：与人或鼠4-1BB结合的kdissoc为约2×10-5 1/s以下；与人或鼠4-1BB结合的kdissoc为约2.1×10-5 1/s以下；与人或鼠4-1BB结合的kdissoc为约2.2×10-5 1/s以下；与人或鼠4-1BB结合的kdissoc为约2.3×10-5 1/s以下；与人或鼠4-1BB结合的kdissoc为约2.4×10-5 1/s以下；与人或鼠4-1BB结合的kdissoc为约2.5×10-5 1/s以下；与人或鼠4-1BB结合的kdissoc为约2.6×10-5 1/s以下；与人或鼠4-1BB结合的kdissoc为约2.7×10-5 1/s以下；与人或鼠4-1BB结合的kdissoc为约2.8×10-5 1/s以下；与人或鼠4-1BB结合的kdissoc为约2.9×10-5 1/s以下；或与人或鼠4-1BB结合的kdissoc为约3×10-5 1/s以下。
在一些实施方式中，该组合物、过程和方法包括4-1BB激动剂，该4-lBB激动剂：与人或鼠4-1BB结合的IC50为约10nM以下；与人或鼠4-1BB结合的IC50为约9nM以下；与人或鼠4-1BB结合的IC50为约8nM以下；与人或鼠4-1BB结合的IC50为约7nM以下；与人或鼠4-1BB结合的IC50为约6nM以下；与人或鼠4-1BB结合的IC50为约5nM以下；与人或鼠4-1BB结合的IC50为约4nM以下；与人或鼠4-1BB结合的IC50为约3nM以下；与人或鼠4-1BB结合的IC50为约2nM以下；或者与人或鼠4-1BB结合的IC50为约1nM以下。
在一个优选的实施方式中，4-1BB激动剂是乌托鲁单抗(也称为PF-05082566或MOR-7480)或它的片段、衍生物、变体或生物仿制药。乌托鲁单抗可从辉瑞公司商购。乌托鲁单抗是免疫球蛋白G2-λ、抗[智人(Homo sapiens)TNFRSF9(肿瘤坏死因子受体(TNFR)超家族成员9、4-1BB、T细胞抗原ILA、CD137)]、智人(全人)单克隆抗体。乌托鲁单抗的氨基酸序列列于表4中。乌托鲁单抗包含：在Asn59和Asn292处的糖基化位点；在第22位至第96位(VH-VL)、第143位至第199位(CH1-CL)、第256位至第316位(CH2)和第362位至第420位(CH3)处的重链链内二硫键；在第22'位至第87'位(VH-VL)和第136'位至第195'位(CH1-CL)处的轻链链内二硫键；在IgG2A同种型第218位至第218位、第219位至第219位、第222位至第222位和第225位至第225位处的重链-重链链间二硫键，在IgG2A/B同种型第218位至第130位、第219位至第219位、第222位至第222位和第225位至第225位处的重链-重链链间二硫键，以及在IgG2B同种型第219位至第130(2)位、第222位至第222位和第225位至第225位处的重链-重链链间二硫键；在IgG2A同种型第130位至第213'(2)位、IgG2A/B同种型第218位至第213'位和第130位至第213'位以及IgG2B同种型第218位至第213'(2)位处的重链-轻链链间二硫键。乌托鲁单抗及它的变体和片段的制备和性质描述于美国专利号8,821,867、8,337,850和9,468,678，以及国际专利申请公开号WO2012/032433A1，其公开内容通过引用并入本文。乌托鲁单抗的临床前特征描述于Fisher等，Cancer Immunolog.&Immunother.，2012，61，1721-33。目前，乌托鲁单抗的各种血液学和实体瘤指征的临床试验包括：美国国立卫生研究院(U.S.National Institutes of Health)临床试验管理(cinicaltrials.gov)识别号NCT02444793、NCT01307267、NCT02315066和NCT02554812。
在一个实施方式中，4-1BB激动剂包含SEQ ID NO：11给出的重链和SEQ ID NO：12给出的轻链。在一个实施方式中，4-1BB激动剂包含分别具有SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：12所示序列的重链和轻链，或它们的抗原结合片段、Fab片段、单链可变片段(scFv)、变体或缀合物。在一个实施方式中，4-1BB激动剂包含分别与SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：12所示序列至少99％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，4-1BB激动剂包含分别与SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：12所示序列至少98％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，4-1BB激动剂包含分别与SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：12所示序列至少97％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，4-1BB激动剂包含分别与SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：12所示序列至少96％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，4-1BB激动剂包含分别与SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：12所示序列至少95％相同的重链和轻链。
在一个实施方式中，4-1BB激动剂包含乌托鲁单抗的重链和轻链CDR或可变区(VR)。在一个实施方式中，4-1BB激动剂重链可变区(VH)包含SEQ ID NO：13所示序列，并且4-1BB激动剂轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO：14所示序列，及它们的保守性氨基酸取代。在一个实施方式中，4-1BB激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：14所示序列至少99％相同。在一个实施方式中，4-1BB激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ IDNO：13和SEQ ID NO：14所示序列至少98％相同。在一个实施方式中，4-1BB激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：14所示序列至少97％相同。在一个实施方式中，4-1BB激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：14所示序列至少96％相同。在一个实施方式中，4-1BB激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：14所示序列至少95％相同。在一个实施方式中，4-1BB激动剂包含scFv抗体，所述scFv抗体包含VH和VL区，所述VH区和VL区分别与SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：14所示序列至少99％相同。
在一个实施方式中，4-1BB激动剂包含：重链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述重链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17所示的序列；和轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19和SEQ ID NO：20所示的序列。
在一个实施方式中，4-lBB激动剂是药物监管机构批准的参考乌托鲁单抗的4-1BB激动剂生物仿制药单克隆抗体。在一个实施方式中，该生物仿制药单克隆抗体包含4-1BB抗体，与参考药物产品或参考生物产品相比，该4-1BB抗体包含与参考药物产品或参考生物产品的氨基酸序列具有至少97％序列同一性(例如，97％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列，并且该氨基酸序列包含一种以上翻译后修饰，其中参考药物产品或参考生物产品是乌托鲁单抗。在一些实施方式中，一种以上翻译后修饰选自糖基化、氧化、脱酰胺和截短中的一种以上。在一些实施方式中，生物仿制药是已授权或提交待授权的4-1BB激动剂抗体，其中，4-1BB激动剂抗体以不同于参考药物产品或参考生物产品制剂的制剂提供，其中参考药物产品或参考生物产品是乌托鲁单抗。4-lBB激动剂抗体可以由药物管理机构(例如，美国FDA和/或欧盟的EMA)授权。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是乌托鲁单抗。在一些实施方式中，该生物仿制剂作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中所述参考药物产品或参考生物产品产品是乌托鲁单抗。
表4：乌托鲁单抗相关的4-1BB激动剂抗体的氨基酸序列
在一个优选的实施方式中，4-1BB激动剂是单克隆抗体乌瑞鲁单抗(也称为BMS-663513和20H4.9.h4a)或它的片段、衍生物、变体或生物仿制药。乌瑞鲁单抗可从Bristol-MyersSquibb，Inc.和Creative Biolabs，Inc.商购。乌瑞鲁单抗是免疫球蛋白G4-κ、抗[智人TNFRSF9(肿瘤坏死因子受体超家族成员9、4-1BB、T细胞抗原ILA、CD137)]、智人(全人)单克隆抗体。乌瑞鲁单抗的氨基酸序列列于表5中。乌瑞鲁单抗包含：在第298位(和第298”位)处的N-糖基化位点；在第22位至第95位(VH-VL)、第148位至第204位(CH1-CL)、第262位至第322位(CH2)和第368位至第426位(CH3)(以及第22”位至第95”位、第148”位至第204”位、第262”位至第322”位和第368”位至第426”位)处的重链链内二硫键；在第23'位至第88'位(VH-VL)和第136'位至第196'位(CH1-CL)(以及第23”'位至第88”'位和第136”'位至第196”'位)处的轻链链内二硫键；在第227位至第227”位和第230位至第230”位处的重链-重链链间二硫键；在第135位至216'位和第135”位至第216”'位处的重链-轻链链间二硫键。乌瑞鲁单抗及它的变体和片段的制备和性质描述于美国专利号7,288,638和8,962,804中，其公开内容通过引用并入本文。乌瑞鲁单抗的临床前和临床特征描述于Segal等，Clin.Cancer，Res.，2016(可从http:/dx.doi.org/10.1158/1078-0432.CCR-16-1272获得)。目前，乌瑞鲁单抗的各种血液学和实体瘤指征的临床试验包括：美国国立卫生研究院临床试验管理识别号NCT01775631、NCT02110082、NCT02253992和NCT01471210。
在一个实施方式中，4-1BB激动剂包含SEQ ID NO：21给出的重链和SEQ ID NO：22给出的轻链。在一个实施方式中，4-lBB激动剂包含分别具有SEQ ID NO：21和SEQ ID NO：22所示序列的重链和轻链，或它们的抗原结合片段、Fab片段、单链可变片段(scFv)、变体或缀合物。在一个实施方式中，4-1BB激动剂包含分别与SEQ ID NO：21和SEQ ID NO：22所示序列至少99％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，4-1BB激动剂包含分别与SEQ ID NO：21和SEQ ID NO：22所示序列至少98％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，4-1BB激动剂包含分别与SEQ ID NO：21和SEQ ID NO：22所示序列至少97％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，4-lBB激动剂包含分别与SEQ ID NO：21和SEQ ID NO：22所示序列至少96％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，4-1BB激动剂包含分别与SEQ ID NO：21和SEQ ID NO：22所示序列至少95％相同的重链和轻链。
在一个实施方式中，4-1BB激动剂包含乌瑞鲁单抗的重链和轻链CDR或可变区(VR)。在一个实施方式中，4-lBB激动剂重链可变区(VH)包含SEQ ID NO：23所示序列，并且4-lBB激动剂轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO：24所示序列，及它们的保守性氨基酸取代。在一个实施方式中，4-1BB激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：23和SEQ ID NO：24所示序列至少99％相同。在一个实施方式中，4-1BB激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ IDNO：23和SEQ ID NO：24所示序列至少98％相同。在一个实施方式中，4-1BB激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：23和SEQ ID NO：24所示序列至少97％相同。在一个实施方式中，4-lBB激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：23和SEQ ID NO：24所示序列至少96％相同。在一个实施方式中，4-1BB激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：23和SEQ ID NO：24所示序列至少95％相同。在一个实施方式中，4-1BB激动剂包含scFv抗体，所述scFv抗体包含VH和VL区，所述VH和VL区分别与SEQ ID NO：23和SEQ ID NO：24所示序列至少99％相同。
在一个实施方式中，4-1BB激动剂包含：重链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述重链CDR1、CDR2和CDR3结构域具有分别SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26和SEQ ID NO：27所示的序列；和轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29和SEQ ID NO：30所示的序列。
在一个实施方式中，4-1BB激动剂是药物监管机构批准的参考乌瑞鲁单抗的4-1BB激动剂生物仿制药单克隆抗体。在一个实施方式中，该生物仿制药单克隆抗体包含4-1BB抗体，与参考药物产品或参考生物产品相比，该4-1BB抗体包含与参考药物产品或参考生物产品的氨基酸序列具有至少97％序列同一性(例如，97％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列，并且该氨基酸序列包含一种以上翻译后修饰，其中参考药物产品或参考生物产品是乌瑞鲁单抗。在一些实施方式中，一种以上翻译后修饰选自糖基化、氧化、脱酰胺和截短中的一种以上。在一些实施方式中，生物仿制药是已授权或提交待授权的4-1BB激动剂抗体，其中，4-1BB激动剂抗体以不同于参考药物产品或参考生物产品制剂的制剂提供，其中参考药物产品或参考生物产品是乌瑞鲁单抗。4-1BB激动剂抗体可以由药物管理机构(例如，美国FDA和/或欧盟的EMA)授权。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是乌瑞鲁单抗。在一些实施方式中，生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是乌瑞鲁单抗。
表5：乌瑞鲁单抗相关的4-1BB激动剂抗体的氨基酸序列
在一个实施方式中，4-1BB激动剂选自：1D8、3Elor、4B4(BioLegend 309809)；H4-1BB-M127(BD Pharmingen 552532)；BBK2(Thermo Fisher MS621PABX)；145501(LeincoTechnologies B591)；由保藏为ATCC号HB-11248细胞系产生并且公开于美国专利号6,974,863的抗体；5F4(BioLegend311503)；C65-485(BD Pharmingen 559446)；美国专利申请公开号US2005/0095244公开的抗体、美国专利号7,288,638公开的抗体(例如20H4.9-IgG1(BMS-663031))、美国专利号6,887,673公开的抗体(例如4E9或BMS-554271)、美国专利号7,214,493公开的抗体、美国专利号6,233,493公开的抗体、美国专利号6,569,997公开的抗体、美国专利号6,905,685中公开的抗体(例如，4E9或BMS-554271)、美国专利号6,362,325公开的抗体(例如1D8或BMS-469492；3H3或BMS-469497；或3E1)、美国专利号6,974,863公开的抗体(如53A2)；美国专利号6,210,669公开的抗体(例如1D8、3B8或3E1)、美国专利号5,928,893所述的抗体、美国专利号6,303,121公开的抗体、美国专利号6,569,997公开的抗体、国际专利申请公开号WO2012/177788、WO2015/119923和WO2010/042433公开的抗体，及它们的片段、衍生物、缀合物、变体或生物仿制药，其中，每个前述专利或专利申请公开的公开内容被并入本文作为参考。
在一个实施方式中，4-1BB激动剂是国际专利申请公开号WO2008/025516A1、WO2009/007120A1、WO2010/003766A1、WO2010/010051A1和WO2010/078966A1；美国专利申请公开号US2011/0027218A1、US2015/0126709A1、US2011/0111494A1、US2015/0110734A1和US2015/0126710A1；以及美国专利号9,359,420、9,340,599、8,921,519和8,450,460中所描述的4-1BB激动性融合蛋白，其公开内容通过引用并入本文。
在一个实施方式中，4-1BB激动剂是如结构I-A(C-末端Fc-抗体片段融合蛋白)或结构I-B(N-末端Fc-抗体片段融合蛋白)所示的4-1BB激动性融合蛋白，或它们的片段、衍生物、结合物、变体或其生物相似物：
在结构I-A和I-B中，圆柱指单个的多肽结合结构域。结构I-A和IB包含三个线性连接的TNFRSF结合结构域(例如，来源于4-1BBL或与4-1BB结合的抗体)，它们折叠形成三价蛋白质，然后通过IgG1-Fc(包括CH3和CH2结构域)连接至第二个三价蛋白质，然后用于通过二硫键(小的细长椭圆)将两种三价蛋白连接在一起，从而稳定结构并提供一种激动剂，该激动剂能够将六种受体和信号蛋白的细胞内信号传导结构域结合在一起以形成信号传导复合物。用圆柱表示的TNFRSF结合结构域可以是scFv结构域，scFv结构域包含例如通过接头连接的VH和VL链，该接头可以包含亲水性残基、Gly和Ser序列(用于柔韧性)以及Glu和Lys(用于溶解性)。可以使用任何scFv结构域设计，例如，de Marco，Microbial Cell Factories，2011，10，44；Ahmad等，Clin.&Dev.Immunol.，2012，980250；Monnier等，Antibodies，2013，2，193-208；或本文其他地方引用的参考文献中描述的那些。此种形式的融合蛋白结构描述于美国专利号9,359,420、9,340,599、8,921,519和8,450,460，其公开内容通过引用并入本文。
表6中给出了结构I-A的其他多肽结构域的氨基酸序列。Fc结构域优选包含完整的恒定结构域(SEQ ID NO：31的第17位至第230位氨基酸)、完整的铰链结构域(SEQ ID NO：31的第1位至第16位氨基酸)或部分铰链结构域(例如，SEQ ID NO：31的第4位至第16位氨基酸)。优选地，用于连接C-末端Fc抗体的接头可选自SEQ ID NO：32至SEQ ID NO：41给出的实施方式，包括适于融合其他多肽的接头。
表6：TNFRSF融合蛋白(包括4-1BB融合蛋白)的氨基酸序列，其具有C-末端Fc-抗体片段融合蛋白的设计(结构I-A)
表7中给出了结构I-B的其他多肽结构域的氨基酸序列。如果Fc抗体片段融合至TNRFSF蛋白的N-末端(如结构I-B所示)，则Fc模块的序列优选如SEQ ID NO：42所示，并且接头序列优选选自SEQ ID NO：43至SEQ ID NO：45所示的那些实施方式。
表7：TNFRSF融合蛋白(包括4-1BB融合蛋白)的氨基酸序列，其具有N-末端Fc-抗体片段融合蛋白的设计(结构I-B)
在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的4-1BB激动剂融合蛋白包含一个以上4-1BB结合结构域，该4-1BB结合结构域选自：乌托鲁单抗的可变重链和可变轻链、乌瑞鲁单抗的可变重链和可变轻链、乌托鲁单抗的可变重链和可变轻链、选自表8中所述可变重链和可变轻链的可变重链和可变轻链、上述可变重链和可变轻链的任何组合，及它们的片段、衍生物、缀合物、变体和生物仿制药。
在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的4-1BB激动剂融合蛋白包含一个以上4-1BB结合结构域，该4-1BB结合结构域包含4-1BBL序列。在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的4-1BB激动剂融合蛋白包含一个以上4-1BB结合结构域，该4-1BB结合结构域包含根据SEQ ID NO：46的序列。在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的4-1BB激动剂融合蛋白包含一个以上4-1BB结合结构域，该4-1BB结合结构域包含可溶性4-1BBL序列。在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的4-1BB激动剂融合蛋白包含一个以上4-1BB结合结构域，该4-1BB结合结构域包含根据SEQ ID NO：47的序列。
在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的4-1BB激动剂融合蛋白包含一个以上4-1BB结合结构域，该4-1BB结合结构域是包含VH区和VL区的scFv结构域，该VH区和VL区各自分别与SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：14所示序列至少95％相同，其中，VH结构域和VL结构域通过接头连接。在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的4-1BB激动剂融合蛋白包含一个以上4-1BB结合结构域，该4-1BB结合结构域是包含VH区和VL区的scFv结构域，该VH区和VL区各自分别与SEQ ID NO：23和SEQ ID NO：24所示序列至少95％相同，其中，VH结构域和VL结构域通过接头连接。在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的4-1BB激动剂融合蛋白包含一个以上4-1BB结合结构域，该4-1BB结合结构域是包含VH区和VL区的scFv结构域，该VH区和VL区各自与表8中给出的VH序列和VL序列至少95％相同，其中，VH结构域和VL结构域通过接头连接。
表8：另外的多肽结构域，其可用作融合蛋白中的4-1BB结合结构域或用作scFv4-1BB激动剂抗体
在一个实施方式中，4-lBB激动剂是4-lBB激动性单链融合多肽，其包含：(i)第一可溶性4-1BB结合结构域，(ii)第一肽接头，(iii)第二可溶性4-1BB结合结构域，(iv)第二肽接头，和(v)第三可溶性4-1BB结合结构域，还包含在N-末端和/或C-末端的其他结构域，并且其中，所述其他结构域是Fab或Fc片段结构域。在一个实施方式中，4-lBB激动剂是4-lBB激动性单链融合多肽，其包含：(i)第一可溶性4-1BB结合结构域，(ii)第一肽接头，(iii)第二可溶性4-1BB结合结构域，(iv)第二肽接头，和(v)第三可溶性4-1BB结合结构域，还包含在N-末端和/或C-末端的其他结构域，其中，所述其他结构域是Fab或Fc片段结构域，其中，各个可溶性4-1BB结构域缺少茎区(stalk region)(其有助于三聚化并提供与细胞膜的一定距离，但不是4-1BB结合结构域的一部分)，并且第一肽接头和第二肽接头独立地具有3至8个氨基酸的长度。
在一个实施方式中，4-1BB激动剂是4-1BB激动性单链融合多肽，其包含：(i)第一可溶性肿瘤坏死因子(TNF)超家族细胞因子结构域，(ii)第一肽接头，(iii)第二可溶性TNF超家族细胞因子结构域，(iv)第二肽接头，和(v)第三可溶性TNF超家族细胞因子结构域，其中，各个可溶性TNF超家族细胞因子结构域缺少茎区，并且第一肽接头和第二肽接头独立地具有3至8个氨基酸的长度，并且其中，各个TNF超家族细胞因子结构域是4-1BB结合结构域。
在一个实施方式中，4-1BB激动剂是4-1BB激动性scFv抗体，其包含与任何前述VL结构域连接的任何前述VH结构域。
在一个实施方式中，4-1BB激动剂激动剂是BPS Bioscience 4-1BB激动剂抗体目录号79097-2，可从BPS Bioscience，圣地亚哥，加利福尼亚州，美国商购。在一个实施方式中，4-1BB激动剂是Creative Biolabs 4-1BB激动剂抗体目录号MOM-18179，可从CreativeBiolabs，Shirley，纽约，美国商购。
OX40(CD134)激动剂
在一个实施方式中，TNFRSF激动剂是OX40(CD134)激动剂。OX40激动剂可以是本领域已知的任何OX40结合分子。OX40结合分子可以是能够结合人或哺乳动物OX40的单克隆抗体或融合蛋白。OX40激动剂或OX40结合分子可包含免疫球蛋白分子的任何同种型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、任何类别(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或任何亚类的免疫球蛋白重链。OX40激动剂或OX40结合分子可具有重链和轻链。如本文所用，术语“结合分子”还包括结合OX40的抗体(包括全长抗体)、单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)、人抗体、人源化抗体或嵌合抗体，以及抗体片段(例如，Fab片段、F(ab′)片段、由Fab表达文库产生的片段、任何上述分子的表位结合片段)，以及工程化形式的抗体(例如，scFv分子)。在一个实施方式中，OX40激动剂是抗原结合蛋白，它是全人抗体。在一个实施方式中，OX40激动剂是抗原结合蛋白，它是人源化抗体。在一些实施方式中，用于本发明公开的方法和组合物的OX40激动剂包括：抗OX40抗体、人抗OX40抗体、小鼠抗OX40抗体、哺乳动物抗OX40抗体、单克隆抗OX40抗体、多克隆抗OX40抗体、嵌合抗OX40抗体、抗OX40 Adnectin、抗OX40结构域抗体、单链抗OX40片段、重链抗OX40片段、轻链抗OX40片段、抗OX40融合蛋白，及它们的片段、衍生物、缀合物、变体或生物仿制药。在一个优选的实施方式中，OX40激动剂是激动性抗OX40人源化或全人单克隆抗体(即，来源于单细胞系的抗体)。
在一个优选的实施方式中，OX40激动剂或OX40结合分子也可以是融合蛋白。例如，Sadun等，J.Immunother.，2009，182，1481-89中描述了包含与OX40L融合的Fc结构域的OX40融合蛋白。在一个优选的实施方式中，与激动性单克隆抗体(通常具有两个配体结合结构域)相比，多聚体4-1BB激动剂(例如，三聚体或六聚体4-1BB激动剂(具有三个或六个配体结合结构域))可以更好地诱导受体(4-1BBL)聚集和细胞内信号传导复合物形成。例如，如Gieffers等，Mol.Cancer Therapeutics，2013，12，2735-47所述，三聚体(三价)或六聚体(或六价)或更高聚体的融合蛋白包含三个TNFRSF结合结构域和IgG1-Fc并且可选地还连接两个以上的这些融合蛋白。
已知，激动性OX40抗体和融合蛋白诱导强烈的免疫应答。Curti等，Cancer Res.，2013，73，7189-98。在一个优选的实施方式中，OX40激动剂是单克隆抗体或融合蛋白，它以足以降低毒性的方式与OX40抗原特异性结合。在一些实施方式中，OX40激动剂是激动性OX40单克隆抗体或融合蛋白，它消除抗体依赖性细胞毒性(ADCC)(例如NK细胞细胞毒性)。在一些实施方式中，OX40激动剂是激动性OX40单克隆抗体或融合蛋白，它消除抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)。在一些实施方式中，OX40激动剂是激动性OX40单克隆抗体或融合蛋白，它消除补体依赖性细胞毒性(CDC)。在一些实施方式中，OX40激动剂是激动性OX40单克隆抗体或融合蛋白，它消除Fc区功能性。
在一些实施方式中，OX40激动剂的特征在于以高亲和力和高激动活性与人OX40(SEQ ID NO：54)结合。在一个实施方式中，OX40激动剂是与人OX40(SEQ ID NO：54)结合的结合分子。在一个实施方式中，OX40激动剂是与鼠OX40(SEQ ID NO：55)结合的结合分子。表9总结了与OX40激动剂或结合分子结合的OX40抗原的氨基酸序列。
表9：OX40抗原的氨基酸序列
在一些实施方式中，该组合物、过程和方法包括OX40激动剂，该OX40激动剂：与人或鼠OX40结合的KD为约100pM以下；与人或鼠OX40结合的KD为约90pM以下；与人或鼠OX40结合的KD为约80pM以下；与人或鼠OX40结合的KD为约70pM以下；与人或鼠OX40结合的KD为约60pM以下；与人或鼠OX40结合的KD为约50pM以下；与人或鼠OX40结合的KD为约40pM以下；或与人或鼠OX40结合的KD为约30pM以下。
在一些实施方式中，该组合物、过程和方法包括OX40激动剂，该OX40激动剂：与人或鼠OX40结合的kassoc为约7.5×105 1/M·s以上；与人或鼠OX40结合的kassoc为约7.5×1051/M·s以上；与人或鼠OX40结合的kassoc为约8×105 1/M·s以上；与人或鼠OX40结合的kassoc为约8.5×105 1/M·s以上；与人或鼠OX40结合的kassoc为约9×105 1/M·s以上；与人或鼠OX40结合的kassoc为约9.5×105 1/M·s以上；或与人或鼠OX40结合的kassoc为约1×106 1/M·s以上。
在一些实施方式中，该组合物、过程和方法包括OX40激动剂，该OX40激动剂：与人或鼠OX40结合的kdissoc为约2×10-5 1/s以下；与人或鼠OX40结合的kdissoc为约2.1×10-5 1/s以下；与人或鼠OX40结合的kdissoc为约2.2×10-5 1/s以下；与人或鼠OX40结合的kdissoc为约2.3×10-5 1/s以下；与人或鼠OX40结合的kdissoc为约2.4×10-5 1/s以下；与人或鼠OX40结合的kdissoc为约2.5×10-5 1/s以下；与人或鼠OX40结合的kdissoc为约2.6×10-5 1/s以下；与人或鼠OX40结合的kdissoc为约2.7×10-5 1/s以下；与人或鼠OX40结合的kdissoc为约2.8×10-5 1/s以下；与人或鼠OX40结合的kdissoc为约2.9×10-5 1/s以下；或与人或鼠OX40结合的kdissoc为约3×10-5 1/s以下。
在一些实施方式中，该组合物、过程和方法包括OX40激动剂，该OX40激动剂：与人或鼠OX40结合的IC50为约10nM以下；与人或鼠OX40结合的IC50为约9nM以下；与人或鼠OX40结合的IC50为约8nM以下；与人或鼠OX40结合的IC50为约7nM以下；与人或鼠OX40结合的IC50为约6nM以下；与人或鼠OX40结合的IC50为约5nM以下；与人或鼠OX40结合的IC50为约4nM以下；与人或鼠OX40结合的IC50为约3nM以下；与人或鼠OX40结合的IC50为约2nM以下；或与人或鼠OX40结合的IC50为约1nM以下。
在一些实施方式中，OX40激动剂是他利昔珠单抗，也称为MEDI0562或MEDI-0562。他利昔珠单抗可从AstraZeneca，Inc.的Medlmmune子公司商购。他利昔珠单抗是免疫球蛋白G1-κ、抗[智人TNFRSF4(肿瘤坏死因子受体(TNFR)超家族成员4、OX40、CD134)]、人源化和嵌合单克隆抗体。他利昔珠单抗的氨基酸序列列于表10中。他利昔珠单抗包含：在第301位和第301”位处的N-糖基化位点，具有岩藻糖基化的复杂型双触角CHO聚糖(fucosylatedcomplex bi-antennary CHO-type glycan)；在第22位至第95位(VH-VL)、第148位至第204位(CH1-CL)、第265位至第325位(CH2)和第371位至第429位(CH3)(和第22”位至第95”位、第148”位至第204”位、第265”位至第325”位和第371”位至第429”位)处的重链链内二硫键；在第23'位至第88'位(VH-VL)和第134'位至第194'位(CH1-CL)(和第23”'位至第88”'位和第134”'位至第194”'位)处的轻链链内二硫键；在第230位至第230”位和第233位至第233”位处的重链-重链链间二硫键；在第224位至在214'位和第224”位至第214”'位的重链-轻链链间二硫键。目前，他利昔珠单抗的各种血液学和实体瘤指征的临床试验包括：美国国立卫生研究院临床试验管理识别号NCT02318394和NCT02705482。
在一个实施方式中，OX40激动剂包含SEQ ID NO：56给出的重链和SEQ ID NO：57给出的轻链。在一个实施方式中，OX40激动剂包含分别具有SEQ ID NO：56和SEQ ID NO：57中所示序列的重链和轻链，或它们的抗原结合片段、Fab片段、单链可变片段(scFv)、变体或缀合物。在一个实施方式中，OX40激动剂包含分别与SEQ ID NO：56和SEQ ID NO：57所示序列至少99％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，OX40激动剂包含分别与SEQ ID NO：56和SEQ ID NO：57所示序列至少98％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，OX40激动剂包含分别与SEQ ID NO：56和SEQ ID NO：57所示序列至少97％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，OX40激动剂包含分别与SEQ ID NO：56和SEQ ID NO：57所示序列至少96％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，OX40激动剂包含分别与SEQ ID NO：56和SEQ ID NO：57所示序列至少95％相同的重链和轻链。
在一个实施方式中，OX40激动剂包含他利昔珠单抗的重链和轻链CDR或可变区(VR)。在一个实施方式中，OX40激动剂重链可变区(VH)包含SEQ ID NO：58所示序列，并且OX40激动剂轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO：59所示序列，及它们的保守性氨基酸取代。在一个实施方式中，OX40激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：58和SEQ ID NO：59所示序列至少99％相同。在一个实施方式中，OX40激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：58和SEQ ID NO：59所示序列至少98％相同。在一个实施方式中，OX40激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：58和SEQ ID NO：59所示序列至少97％相同。在一个实施方式中，OX40激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：58和SEQ ID NO：59所示序列至少96％相同。在一个实施方式中，OX40激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：58和SEQ ID NO：59所示序列至少95％相同。在一个实施方式中，OX40激动剂包含scFv抗体，该scFv抗体包含VH和VL区，该VH和VL区分别与SEQ ID NO：58和SEQ ID NO：59所示序列至少99％相同。
在一个实施方式中，OX40激动剂包含：重链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述重链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：61和SEQ ID NO：62所示的序列；和轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：64和SEQ ID NO：65所示的序列。
在一个实施方式中，OX40激动剂是药物监管机构批准的参考他利昔珠单抗的OX40激动剂生物仿制药单克隆抗体。在一个实施方式中，该生物仿制药单克隆抗体包含OX40抗体，与参考药物产品或参考生物产品相比，该OX40抗体包含与参考药物产品或参考生物产品的氨基酸序列具有至少97％序列同一性(例如，97％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列，并且该氨基酸序列包含一种以上翻译后修饰，其中参考药物产品或参考生物产品是他利昔珠单抗。在一些实施方式中，一种以上翻译后修饰选自糖基化、氧化、脱酰胺和截短中的一种以上。在一些实施方式中，生物仿制药是已授权或提交待授权的OX40激动剂抗体，其中，OX40激动剂抗体以不同于参考药物产品或参考生物产品制剂的制剂提供，其中参考药物产品或参考生物产品是他利昔珠单抗。OX40激动剂抗体可以由药物管理机构(例如，美国FDA和/或欧盟的EMA)授权。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是他利昔珠单抗。在一些实施方式中，生物仿制剂作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是他利昔珠单抗。
表10：他利昔珠单抗相关的OX40激动剂抗体的氨基酸序列
在一些实施方式中，OX40激动剂是11D4，它是可从Pfizer，Inc.商购的全人抗体。11D4的制备和性质描述于美国专利号7,960,515、8,236,930以及9,028,824，其公开内容通过引用并入本文。11D4的氨基酸序列列于表11中。
在一个实施方式中，OX40激动剂包含SEQ ID NO：66给出的重链和SEQ ID NO：67给出的轻链。在一个实施方式中，OX40激动剂包含分别具有SEQ ID NO：66和SEQ ID NO：67所示序列的重链和轻链，或它们的抗原结合片段、Fab片段、单链可变片段(scFv)、变体或缀合物。在一个实施方式中，OX40激动剂包含分别与SEQ ID NO：66和SEQ ID NO：67所示序列至少99％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，OX40激动剂包含分别与SEQ ID NO：66和SEQID NO：67所示序列至少98％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，OX40激动剂包含分别与SEQ ID NO：66和SEQ ID NO：67所示序列至少97％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，OX40激动剂包含分别与SEQ ID NO：66和SEQ ID NO：67所示序列至少96％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，OX40激动剂包含分别与SEQ ID NO：66和SEQ ID NO：67所示序列至少95％相同的重链和轻链。
在一个实施方式中，OX40激动剂包含11D4的重链和轻链CDR或可变区(VR)。在一个实施方式中，OX40激动剂重链可变区(VH)包含SEQ ID NO：68所示序列，并且OX40激动剂轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO：69所示序列，及它们的保守性氨基酸取代。在一个实施方式中，OX40激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：68和SEQ ID NO：69所示序列至少99％相同。在一个实施方式中，OX40激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：68和SEQ IDNO：69所示序列至少98％相同。在一个实施方式中，OX40激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：68和SEQ ID NO：69所示序列至少97％相同。在一个实施方式中，OX40激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：68和SEQ ID NO：69所示序列至少96％相同。在一个实施方式中，OX40激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：68和SEQ ID NO：69所示序列至少95％相同。
在一个实施方式中，OX40激动剂包含：重链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述重链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：71和SEQ ID NO：72所示的序列；和轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：74和SEQ ID NO：75所示的序列。
在一个实施方式中，OX40激动剂是药物监管机构批准的参考11D4的OX40激动剂生物仿制药单克隆抗体。在一个实施方式中，该生物仿制药单克隆抗体包含OX40抗体，与参考药物产品或参考生物产品相比，该OX40抗体包含与参考药物产品或参考生物产品的氨基酸序列具有至少97％序列同一性(例如，97％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列，并且该氨基酸序列包含一种以上翻译后修饰，其中参考药物产品或参考生物产品是11D4。在一些实施方式中，一种以上翻译后修饰选自糖基化、氧化、脱酰胺和截短中的一种以上。在一些实施方式中，生物仿制药是经授权或提交待授权的OX40激动剂抗体，其中，OX40激动剂抗体以与参考药物产品或参考生物产品的制剂不同的制剂提供，其中参考药物产品或参考生物产品是11D4。OX40激动剂抗体可以由药物管理机构(例如，美国FDA和/或欧盟的EMA)授权。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是11D4。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是11D4。
表11：11D4相关的OX40激动剂抗体的氨基酸序列
在一些实施方式中，OX40激动剂是18D8，它是可从Pfizer，Inc.商购的全人抗体。18D8的制备和性质描述于美国专利号7,960,515、8,236,930以及9,028,824，其公开内容通过引用并入本文。18D8的氨基酸序列列于表12中。
在一个实施方式中，OX40激动剂包含SEQ ID NO：76给出的重链和SEQ ID NO：77给出的轻链。在一个实施方式中，OX40激动剂包含分别具有SEQ ID NO：76和SEQ ID NO：77所示序列的重链和轻链，或它们的抗原结合片段、Fab片段、单链可变片段(scFv)、变体或缀合物。在一个实施方式中，OX40激动剂包含分别与SEQ ID NO：76和SEQ ID NO：77所示序列至少99％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，OX40激动剂包含分别与SEQ ID NO：76和SEQID NO：77所示序列至少98％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，OX40激动剂包含分别与SEQ ID NO：76和SEQ ID NO：77所示序列至少97％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，OX40激动剂包含分别与SEQ ID NO：76和SEQ ID NO：77所示序列至少96％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，OX40激动剂包含分别与SEQ ID NO：76和SEQ ID NO：77所示序列至少95％相同的重链和轻链。
在一个实施方式中，OX40激动剂包含18D8的重链和轻链CDR或可变区(VR)。在一个实施方式中，OX40激动剂重链可变区(VH)包含SEQ ID NO：78所示序列，并且OX40激动剂轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO：79所示序列，及它们的保守性氨基酸取代。在一个实施方式中，OX40激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：78和SEQ ID NO：79所示序列至少99％相同。在一个实施方式中，OX40激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：78和SEQ IDNO：79所示序列至少98％相同。在一个实施方式中，OX40激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：78和SEQ ID NO：79所示序列至少97％相同。在一个实施方式中，OX40激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：78和SEQ ID NO：79所示序列至少96％相同。在一个实施方式中，OX40激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：78和SEQ ID NO：79所示序列至少95％相同。
在一个实施方式中，OX40激动剂包含：重链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述重链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：81和SEQ ID NO：82所示的序列；和轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：84和SEQ ID NO：85所示的序列。
在一个实施方式中，OX40激动剂是药物监管机构批准的参考18D8的OX40激动剂生物仿制药单克隆抗体。在一个实施方式中，该生物仿制药单克隆抗体包含OX40抗体，与参考药物产品或参考生物产品相比，该OX40抗体包含与参考药物产品或参考生物产品的氨基酸序列具有至少97％序列同一性(例如，97％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列，并且该氨基酸序列包含一种以上翻译后修饰，其中参考药物产品或参考生物产品是18D8。在一些实施方式中，一种以上翻译后修饰选自糖基化、氧化、脱酰胺和截短中的一种以上。在一些实施方式中，生物仿制药是经授权或提交待授权的OX40激动剂抗体，其中，OX40激动剂抗体以与参考药物产品或参考生物产品的制剂不同的制剂提供，其中参考药物产品或参考生物产品是18D8。OX40激动剂抗体可以由药物管理机构(例如，美国FDA和/或欧盟的EMA)授权。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是18D8。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是18D8。
表12：18D8相关的OX40激动剂抗体的氨基酸序列
在一些实施方式中，OX40激动剂是Hu119-122，其是可从GlaxoSmithKline plc获得的人源化抗体。Hu119-122的制备和性质描述于美国专利号9,006,399和9,163,085以及国际专利公开号WO2012/027328中，其公开内容通过引用并入本文。Hu119-122的氨基酸序列列于表13中。
在一个实施方式中，OX40激动剂包含Hu119-122的重链和轻链CDR或可变区(VR)。在一个实施方式中，OX40激动剂重链可变区(VH)包含SEQ ID NO：86所示序列，并且OX40激动剂轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO：87所示序列，及它们的保守性氨基酸取代。在一个实施方式中，OX40激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：86和SEQ ID NO：87所示序列至少99％相同。在一个实施方式中，OX40激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：86和SEQID NO：87所示序列至少98％相同。在一个实施方式中，OX40激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：86和SEQ ID NO：87所示序列至少97％相同。在一个实施方式中，OX40激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：86和SEQ ID NO：87所示序列至少96％相同。在一个实施方式中，OX40激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：86和SEQ ID NO：87所示序列至少95％相同。
在一个实施方式中，OX40激动剂包含：重链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述重链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：89和SEQ ID NO：90所示的序列；和轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：92和SEQ ID NO：93所示的序列。
在一个实施方式中，OX40激动剂是药物监管机构批准的参考Hu119-122的OX40激动剂生物仿制药单克隆抗体。在一个实施方式中，该生物仿制药单克隆抗体包含OX40抗体，与参考药物产品或参考生物产品相比，该OX40抗体包含与参考药物产品或参考生物产品的氨基酸序列具有至少97％序列同一性(例如，97％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列，并且该氨基酸序列包含一种以上翻译后修饰，其中参考药物产品或参考生物产品是Hu119-122。在一些实施方式中，一种以上翻译后修饰选自糖基化、氧化、脱酰胺和截短中的一种以上。在一些实施方式中，生物仿制药是经授权或提交待授权的OX40激动剂抗体，其中，OX40激动剂抗体以与参考药物产品或参考生物产品的制剂不同的制剂提供，其中参考药物产品或参考生物产品是Hu119-122。OX40激动剂抗体可以由药物管理机构(例如，美国FDA和/或欧盟的EMA)授权。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是Hu119-122。在一些实施方式中，生物仿制剂作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是Hu119-122。
表13：Hu119-122相关的OX40激动剂抗体的氨基酸序列
在一些实施方式中，OX40激动剂是Hu106-222，其是可从GlaxoSmithKline plc获得的人源化抗体。Hu106-222的制备和性质描述于美国专利号9,006,399和9,163,085以及国际专利公开号WO2012/027328中，其公开内容通过引用并入本文。Hu106-222的氨基酸序列列于表14中。
在一个实施方式中，OX40激动剂包含Hu106-222的重链和轻链CDR或可变区(VR)。在一个实施方式中，OX40激动剂重链可变区(VH)包含SEQ ID NO：94所示序列，并且OX40激动剂轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO：95所示序列，及它们的保守性氨基酸取代。在一个实施方式中，OX40激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：94和SEQ ID NO：95所示序列至少99％相同。在一个实施方式中，OX40激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：94和SEQID NO：95所示序列至少98％相同。在一个实施方式中，OX40激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：94和SEQ ID NO：95所示序列至少97％相同。在一个实施方式中，OX40激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：94和SEQ ID NO：95所示序列至少96％相同。在一个实施方式中，OX40激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：94和SEQ ID NO：95所示序列至少95％相同。
在一个实施方式中，OX40激动剂包含：重链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述重链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：97和SEQ ID NO：98所示的序列；和轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：100和SEQ ID NO：101所示的序列。
在一个实施方式中，OX40激动剂是药物监管机构批准的参考Hu106-222的OX40激动剂生物仿制药单克隆抗体。在一个实施方式中，该生物仿制药单克隆抗体包含OX40抗体，与参考药物产品或参考生物产品相比，该OX40抗体包含与参考药物产品或参考生物产品的氨基酸序列具有至少97％序列同一性(例如，97％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列，并且该氨基酸序列包含一种以上翻译后修饰，其中参考药物产品或参考生物产品是Hu106-222。在一些实施方式中，一种以上翻译后修饰选自糖基化、氧化、脱酰胺和截短中的一种以上。在一些实施方式中，生物仿制药是经授权或提交待授权的OX40激动剂抗体，其中，OX40激动剂抗体以与参考药物产品或参考生物产品的制剂不同的制剂提供，其中参考药物产品或参考生物产品是Hu106-222。OX40激动剂抗体可以由药物管理机构(例如，美国FDA和/或欧盟的EMA)授权。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是Hu106-222。在一些实施方式中，生物仿制剂作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是Hu106-222。
表14：Hu106-222相关的OX40激动剂抗体的氨基酸序列
在一些实施方式中，OX40激动剂抗体是MEDI6469(也称为9B12)。MEDI6469是一种鼠单克隆抗体。Weinberg等，J.Immunother.，2006，29，575-585。在一些实施方式中，如Weinberg等，J.Immunother.，2006，29，575-585(其公开内容通过引用整体并入本文)所述，OX40激动剂是由9B12杂交瘤(保藏于Biovest Inc.(马尔文，马萨诸塞州，美国))产生的抗体。在一些实施方式中，抗体包含MEDI6469的CDR序列。在一些实施方式中，抗体包含MEDI6469的重链可变区序列和/或轻链可变区序列。
在一个实施方式中，OX40激动剂是L106 BD(Pharmingen产品号340420)。在一些实施方式中，OX40激动剂包含抗体L106(BD Pharmingen产品号340420)的CDR。在一些实施方式中，OX40激动剂包含抗体L106(BD Pharmingen产品号340420)的重链可变区序列和/或轻链可变区序列。在一个实施方式中，OX40激动剂是ACT35(Santa Cruz Biotechnology，目录号20073)。在一些实施方式中，OX40激动剂包含抗体ACT35(Santa Cruz Biotechnology，目录号20073)的CDR。在一些实施方式中，OX40激动剂包含抗体ACT35(Santa CruzBiotechnology，目录号20073)的重链可变区序列和/或轻链可变区序列。在一个实施方式中，OX40激动剂是鼠单克隆抗体抗mCD134/mOX40(克隆OX86)，可从InVivoMAb，BioXcellInc，西黎巴嫩，新罕布什尔州商购。
在一个实施方式中，OX40激动剂选自以下专利文献中所述的OX40激动剂：国际专利申请公开号WO95/12673、WO95/21925、WO2006/121810、WO2012/027328、WO2013/028231、WO2013/038191和WO2014/148895；欧洲专利申请EP0672141；美国专利申请公开号US2010/136030、US2014/377284、US2015/190506和US2015/132288(包括克隆20E5和12H3)；以及美国专利号7,504,101、7,550,140、7,622,444、7,696,175、7,960,515、7,961,515、8,133,983、9,006,399和9,163,085，其各自的公开内容通过引用整体并入本文。
在一个实施方式中，OX40激动剂是如结构I-A(C-末端Fc-抗体片段融合蛋白)或结构I-B(N-末端Fc-抗体片段融合蛋白)所示的OX40激动性融合蛋白，或它们的片段、衍生物、缀合物、变体或生物仿制药。结构I-A和I-B的性质如上文和美国专利号9,359,420、9,340,599、8,921,519和8,450,460中所述，其公开内容通过引用并入本文。表6中给出了结构I-A的多肽结构域的氨基酸序列。Fc结构域优选包含完整的恒定结构域(SEQ ID NO：31的第17位至第230位氨基酸)、完整的铰链结构域(SEQ ID NO：31的第1位至第16位氨基酸)或部分铰链结构域(例如，SEQ ID NO：31的第4位至第16位氨基酸)。连接C-末端Fc抗体的优选接头可选自SEQ ID NO：32至SEQ ID NO：41给出的实施方式，包括适于融合其他多肽的接头。同样，结构I-B的多肽结构域的氨基酸序列在表7中给出。如果Fc抗体片段融合至TNRFSF融合蛋白的N-末端(如结构I-B所示)，则Fc模块的序列优选如SEQ ID NO：42所示，并且接头序列优选选自SEQ ID NO：43至SEQ ID NO：45所示的那些实施方式。
在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的OX40激动剂融合蛋白包含一个以上OX40结合结构域，该OX40结合结构域选自：他利昔珠单抗的可变重链和可变轻链、11D4的可变重链和可变轻链、18D8的可变重链和可变轻链、Hu119-122的可变重链和可变轻链、Hu106-222的可变重链和可变轻链、选自表15中所述可变重链和可变轻链的可变重链和可变轻链、上述可变重链和可变轻链的任何组合，及它们的片段、衍生物、缀合物、变体和生物仿制药。
在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的OX40激动剂融合蛋白包含一个以上OX40结合结构域，该OX40结合结构域包含OX40L序列。在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的OX40激动剂融合蛋白包含一个以上OX40结合结构域，该OX40结合结构域包含根据SEQ IDNO：102的序列。在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的OX40激动剂融合蛋白包含一个以上OX40结合结构域，该OX40结合结构域包含可溶性OX40L序列。在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的OX40激动剂融合蛋白包含一个以上OX40结合结构域，该OX40结合结构域包含根据SEQ ID NO：103的序列。在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的OX40激动剂融合蛋白包含一个以上OX40结合结构域，该OX40结合结构域包含根据SEQ ID NO：104的序列。
在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的OX40激动剂融合蛋白包含一个以上OX40结合结构域，该OX40结合结构域是包含VH和VL区的scFv结构域，该VH区和VL区各自分别与SEQ ID NO：58和SEQ ID NO：59所示序列至少95％相同，其中，VH结构域和VL结构域通过接头连接。在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的OX40激动剂融合蛋白包含一个以上OX40结合结构域，该OX40结合结构域是包含VH区和VL区的scFv结构域，VH区和VL区各自分别与SEQID NO：68和SEQ ID NO：69所示序列至少95％相同，其中，VH结构域和VL结构域通过接头连接。在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的OX40激动剂融合蛋白包含一个以上OX40结合结构域，该OX40结合结构域是包含VH区和VL区的scFv结构域，VH区和VL区各自分别与SEQ IDNO：78和SEQ ID NO：79所示序列至少95％相同，其中，VH结构域和VL结构域通过接头连接。在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的OX40激动剂融合蛋白包含一个以上OX40结合结构域，该OX40结合结构域是包含VH区和VL区的scFv结构域，VH区和VL区各自分别与SEQ ID NO：86和SEQ ID NO：87所示序列至少95％相同，其中，VH结构域和VL结构域通过接头连接。在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的OX40激动剂融合蛋白包含一个以上OX40结合结构域，该OX40结合结构域是包含VH区和VL区的scFv结构域，VH区和VL区各自分别与SEQ ID NO：94和SEQ ID NO：95所示序列至少95％相同，其中，VH结构域和VL结构域通过接头连接。在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的OX40激动剂融合蛋白包含一个以上OX40结合结构域，该OX40结合结构域是包含VH区和VL区的scFv结构域，VH区和VL区各自与表15中给出的VH序列和VL序列至少95％相同，其中，VH结构域和VL结构域通过接头连接。
表15：另外的多肽结构域，其可用作融合蛋白(例如，结构I-A和I-B)中的OX40结合结构域或用作scFv OX40激动剂抗体
在一个实施方式中，OX40激动剂是OX40激动性单链融合多肽，其包含：(i)第一可溶性OX40结合结构域，(ii)第一肽接头，(iii)第二可溶性OX40结合结构域，(iv)第二肽接头，和(v)第三可溶性OX40结合结构域，还包含在N-末端和/或C-末端的其他结构域，并且其中，所述其他结构域是Fab或Fc片段结构域。在一个实施方式中，OX40激动剂是OX40激动性单链融合多肽，其包含：(i)第一可溶性OX40结合结构域，(ii)第一肽接头，(iii)第二可溶性OX40结合结构域，(iv)第二肽接头，和(v)第三可溶性OX40结合结构域，还包含在N-末端和/或C-末端的其他结构域，其中，所述其他结构域是Fab或Fc片段结构域，其中，各个可溶性OX40结合结构域缺乏茎区(其有助于三聚化并提供与细胞膜的一定距离，但不是OX40结合结构域的一部分)，并且第一肽接头和第二肽接头独立地具有3至8个氨基酸的长度。
在一个实施方式中，OX40激动剂是OX40激动性单链融合多肽，其包含：(i)第一可溶性肿瘤坏死因子(TNF)超家族细胞因子结构域，(ii)第一肽接头，(iii)第二可溶性TNF超家族细胞因子结构域，(iv)第二肽接头，和(v)第三可溶性TNF超家族细胞因子结构域，其中，各个可溶性TNF超家族细胞因子结构域缺少茎区，第一肽接头和第二肽接头独立地具有3至8个氨基酸的长度，并且其中，TNF超家族细胞因子结构域是OX40结合结构域。
在一些实施方式中，OX40激动剂是MEDI6383。MEDI6383是OX40激动性融合蛋白，并且可以如美国专利号6,312,700(其公开内容通过引用并入本文)中所述制备。
在一个实施方式中，OX40激动剂是OX40激动性scFv抗体，其包含与任何前述VL结构域连接的任何前述VH结构域。
在一个实施方式中，OX40激动剂是Creative Biolabs OX40激动剂单克隆抗体MOM-18455，可从Creative Biolabs，Inc.，Shirley，纽约，美国商购。
在一个实施方式中，OX40激动剂是OX40激动剂抗体克隆Ber-ACT35，可从BioLegend，Inc.，圣地亚哥，加利福尼亚州，美国商购。
CD27激动剂
在一个实施方式中，TNFRSF激动剂是CD27激动剂。CD27激动剂可以是本领域已知的任何CD27结合分子。CD27结合分子可以是能够结合人或哺乳动物CD27的单克隆抗体或融合蛋白。CD27激动剂或CD27结合分子可包含免疫球蛋白分子的任何同种型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、任何类别(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或任何亚类的免疫球蛋白重链。CD27激动剂或CD27结合分子可具有重链和轻链。如本文所用，术语“结合分子”还包括结合CD27的抗体(包括全长抗体)、单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)、人抗体、人源化抗体或嵌合抗体和抗体片段(例如，Fab片段、F(ab′)片段、由Fab表达文库产生的片段、任何上述分子的表位结合片段)，以及工程化形式的抗体(例如，scFv分子)。在一个实施方式中，CD27激动剂是抗原结合蛋白，它是全人抗体。在一个实施方式中，CD27激动剂是抗原结合蛋白，它是人源化抗体。在一些实施方式中，用于本发明公开的方法和组合物的CD27激动剂包括：抗CD27抗体、人抗CD27抗体、小鼠抗CD27抗体、哺乳动物抗CD27抗体、单克隆抗CD27抗体、多克隆抗CD27抗体、嵌合抗CD27抗体、抗CD27 Adnectin、抗CD27结构域抗体、单链抗CD27片段、重链抗CD27片段、轻链抗CD27片段、抗CD27融合蛋白，及它们的片段、衍生物、缀合物、变体或生物仿制药。在一个优选的实施方式中，CD27激动剂是激动性抗CD27人源化或全人单克隆抗体(即，来源于单细胞系的抗体)。在一个优选的实施方式中，CD27激动剂是伐立鲁单抗，或它的片段、衍生物、缀合物、变体或生物仿制药。
在一个优选的实施方式中，CD27激动剂或CD27结合分子也可以是融合蛋白。在一个优选的实施方式中，与激动性单克隆抗体(通常具有两个配体结合结构域)相比，多聚体CD27激动剂(例如，三聚体或六聚体CD27激动剂(具有三个或六个配体结合结构域))可以更好地诱导受体(CD27L)聚集和细胞内信号传导复合物形成。例如，如Gieffers等，Mol.Cancer Therapeutics，2013，12，2735-47所述，三聚体(三价)或六聚体(或六价)或更高聚体的融合蛋白包含三个TNFRSF结合结构域和IgG1-Fc并且可选地还连接两个以上的这些融合蛋白。
已知，激动性CD27抗体和融合蛋白诱导强烈的免疫应答。在一个优选的实施方式中，CD27激动剂是单克隆抗体或融合蛋白，它以足以降低毒性的方式与CD27抗原特异性结合。在一些实施方式中，CD27激动剂是激动性CD27单克隆抗体或融合蛋白，它消除抗体依赖性细胞毒性(ADCC)，例如，NK细胞细胞毒性。在一些实施方式中，CD27激动剂是激动性CD27单克隆抗体或融合蛋白，它消除抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)。在一些实施方式中，CD27激动剂是激动性CD27单克隆抗体或融合蛋白，它消除补体依赖性细胞毒性(CDC)。在一些实施方式中，CD27激动剂是激动性CD27单克隆抗体或融合蛋白，它消除Fc区功能性。
在一些实施方式中，CD27激动剂的特征在于以高亲和力和激动活性与人CD27(SEQID NO：127)结合。在一个实施方式中，CD27激动剂是与人CD27(SEQ ID NO：127)结合的结合分子。在一些实施方式中，CD27激动剂的特征在于以高亲和力和激动活性与猕猴CD27(SEQID NO：128)结合。在一个实施方式中，CD27激动剂是与猕猴CD27(SEQ ID NO：128)结合的结合分子。表16总结了与CD27激动剂或结合分子结合的CD27抗原的氨基酸序列。
表16：CD27抗原的氨基酸序列
在一些实施方式中，该组合物、过程和方法包括CD27激动剂，该CD27激动剂：与人或鼠CD27结合的KD为约100pM以下；与人或鼠CD27结合的KD为约90pM以下；与人或鼠CD27结合的KD为约80pM以下；与人或鼠CD27结合的KD为约70pM以下；与人或鼠CD27结合的KD为约60pM以下；与人或鼠CD27结合的KD为约50pM以下；与人或鼠CD27结合的KD为约40pM以下；或与人或鼠CD27结合的KD为约30pM以下。
在一些实施方式中，该组合物、过程和方法包括CD27激动剂，该CD27激动剂：与人或鼠CD27结合的kassoc为约7.5×105 1/M·s以上；与人或鼠CD27结合的kassoc为约7.5×1051/M·s以上；与人或鼠CD27结合的kassoc为约8×105 1/M·s以上；与人或鼠CD27结合的kassoc为约8.5×105 1/M·s以上；与人或鼠CD27结合的kassoc为约9×105 1/M·s以上；与人或鼠CD27结合的kassoc为约9.5×105 1/M·s以上；或与人或鼠CD27结合的kassoc为约1×106 1/M·s以上。
在一些实施方式中，该组合物、过程和方法包括CD27激动剂，该CD27激动剂：与人或鼠CD27结合的kdissoc为约2×10-5 1/s以下；与人或鼠CD27结合的kdissoc为约2.1×10-5 1/s以下；与人或鼠CD27结合的kdissoc为约2.2×10-5 1/s以下；与人或鼠CD27结合的kdissoc为约2.3×10-5 1/s以下；与人或鼠CD27结合的kdissoc为约2.4×10-5 1/s以下；与人或鼠CD27结合的kdissoc为约2.5×10-5 1/s以下；与人或鼠CD27结合的kdissoc为约2.6×10-51/s以下；与人或鼠CD27结合的kdissoc为约2.7×10-5 1/s以下；与人或鼠CD27结合的kdissoc为约2.8×10-5 1/s以下；与人或鼠CD27结合的kdissoc为约2.9×10-5 1/s以下；或与人或鼠CD27结合的kdissoc为约3×10-5 1/s以下。
在一些实施方式中，该组合物、过程和方法包括CD27激动剂，该CD27激动剂：与人或鼠CD27结合的IC50为约10nM以下；与人或鼠CD27结合的IC50为约9nM以下；与人或鼠CD27结合的IC50为约8nM以下；与人或鼠CD27结合的IC50为约7nM以下；与人或鼠CD27结合的IC50为约6nM以下；与人或鼠CD27结合的IC50为约5nM以下；与人或鼠CD27结合的IC50为约4nM以下；与人或鼠CD27结合的IC50为约3nM以下；与人或鼠CD27结合的IC50为约2nM以下；或与人或鼠CD27结合的IC50为约1nM以下。
在一个优选的实施方式中，CD27激动剂是单克隆抗体伐立鲁单抗(也称为CDX-1127或1F5)或它的片段、衍生物、变体或生物仿制药。伐立鲁单抗可从CelldexTherapeutics，Inc.商购。伐立鲁单抗是免疫球蛋白G1-κ、抗[智人抗CD27(TNFRSF7、肿瘤坏死因子受体超家族成员7)]、智人单克隆抗体。伐立鲁单抗的氨基酸序列列于表17中。伐立鲁单抗包含：在299位和第299”位处的N-糖基化位点；在第22位至第96位(VH-VL)、第146位至第202位(CH1-CL)、第263位至第323位(CH2)和第369位至第427位(CH3)(和第22”位至第96”位、第146”位至第202”位、第263”位至第323”位和第369”位至第427”位)处的重链链内二硫键；在第23'位至第88'位(VH-VL)和第134'位至第194'位(CH1-CL)(和第23”'位至第88”'位和第134”'位至第194”'位)处的轻链链内二硫键；在第228位至第228”位和第231位至第231”位处的重链-重链链间二硫键；以及在第222位至第214'位和第222”位至第214”'位处的重链-轻链链间二硫键。伐立鲁单抗的制备和性质描述于国际专利申请公开号WO2016/145085A2和美国专利申请公开号US2011/0274685A1和US2012/0213771A1，其公开内容通过引用并入本文。使用伐立鲁单抗的临床和临床前研究是本领域已知的，并且例如描述于Thomas等，Oncolmmunology，2014，3，e27255；Vitale等，Clin.Cancer Res.，2012，18，3812-21；以及He等，J.Immunol.，2013，191，4174-83。目前，伐立鲁单抗的各种血液学和实体瘤指征的临床试验包括：美国国立卫生研究院临床试验管理识别号NCT01460134、NCT02543645、NCT02413827、NCT02386111和NCT02335918。
在一个实施方式中，CD27激动剂包含SEQ ID NO：129给出的重链和SEQ ID NO：130给出的轻链。在一个实施方式中，CD27激动剂包含分别具有SEQ ID NO：129和SEQ ID NO：130所示序列的重链和轻链，或它们的抗原结合片段、Fab片段、单链可变片段(scFv)、变体或缀合物。在一个实施方式中，CD27激动剂包含分别与SEQ ID NO：129和SEQ ID NO：130所示序列至少99％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，CD27激动剂包含分别与SEQ IDNO：129和SEQ ID NO：130所示序列至少98％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，CD27激动剂包含分别与SEQ ID NO：129和SEQ ID NO：130所示序列至少97％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，CD27激动剂包含分别与SEQ ID NO：129和SEQ ID NO：130所示序列至少96％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，CD27激动剂包含分别与SEQ ID NO：129和SEQID NO：130所示序列至少95％相同的重链和轻链。
在一个实施方式中，CD27激动剂包含伐立鲁单抗的重链和轻链CDR或可变区(VR)。在一个实施方式中，CD27激动剂重链可变区(VH)包含SEQ ID NO：131所示序列，并且CD27激动剂轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO：132所示序列，及它们的保守性氨基酸取代。在一个实施方式中，CD27激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：131和SEQ ID NO：132所示序列至少99％相同。在一个实施方式中，CD27激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：131和SEQ ID NO：132所示序列至少98％相同。在一个实施方式中，CD27激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：131和SEQ ID NO：132所示序列至少97％相同。在一个实施方式中，CD27激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：131和SEQ ID NO：132所示序列至少96％相同。在一个实施方式中，CD27激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：131和SEQ ID NO：132所示序列至少95％相同。
在一个实施方式中，CD27激动剂包含：重链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述重链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：133、SEQ ID NO：134和SEQ ID NO：135所示的序列；和轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：137和SEQ IDNO：138所示的序列。
在一个实施方式中，CD27激动剂是药物监管机构批准的参考伐立鲁单抗的CD27激动剂生物仿制药单克隆抗体。在一个实施方式中，该生物仿制药单克隆抗体包含CD27抗体，与参考药物产品或参考生物产品相比，该CD27抗体包含与参考药物产品或参考生物产品的氨基酸序列具有至少97％序列同一性(例如，97％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列，并且该氨基酸序列包含一种以上翻译后修饰，其中参考药物产品或参考生物产品是伐立鲁单抗。在一些实施方式中，一种以上翻译后修饰选自糖基化、氧化、脱酰胺和截短中的一种以上。在一些实施方式中，生物仿制药是已授权或提交待授权的CD27激动剂抗体，其中，CD27激动剂抗体以与参考药物产品或参考生物产品的制剂不同的制剂提供，其中参考药物产品或参考生物产品是伐立鲁单抗。CD27激动剂抗体可以由药物管理机构(例如，美国FDA和/或欧盟的EMA)授权。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是伐立鲁单抗。在一些实施方式中，该生物仿制剂作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是伐立鲁单抗。
表17：伐立鲁单抗相关的CD27激动剂抗体的氨基酸序列
在一个实施方式中，CD27激动剂是如结构I-A(C-末端Fc-抗体片段融合蛋白)或结构I-B(N-末端Fc-抗体片段融合蛋白)所示的CD27激动性融合蛋白，或它们的片段、衍生物、缀合物、变体或其生物仿制药。结构I-A和I-B的性质如上文和美国专利号9,359,420、9,340,599、8,921,519和8,450,460中所述，其公开内容通过引用并入本文。表6中给出了结构I-A的多肽结构域的氨基酸序列。Fc结构域优选包含完整的恒定结构域(SEQ ID NO：31的第17位至第230位氨基酸)、完整的铰链结构域(SEQ ID NO：31的第1位至第16位氨基酸)或部分铰链结构域(例如，SEQ ID NO：31的第4位至第16位氨基酸)。用于连接C-末端Fc抗体的优选接头可选自SEQ ID NO：32至SEQ ID NO：41给出的实施方式，包括适于融合其他多肽的接头。同样，结构I-B的多肽结构域的氨基酸序列在表7中给出。如果Fc抗体片段融合至TNRFSF融合蛋白的N-末端(如结构I-B所示)，则Fc模块的序列优选如SEQ ID NO：42所示，并且接头序列优选选自SEQ ID NO：43至SEQ ID NO：45所示的那些实施方式。
在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的CD27激动剂融合蛋白包含一个以上CD27结合结构域，该CD27结合结构域选自：伐立鲁单抗的可变重链和可变轻链，以及它们的片段、衍生物、缀合物、变体和生物仿制药。
在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的CD27激动剂融合蛋白包含一个以上CD27结合结构域，该CD27结合结构域包含CD70(CD27L)序列(表18)。在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的CD27激动剂融合蛋白包含一个以上CD27结合结构域，该CD27结合结构域包含根据SEQ ID NO：139的序列。在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的CD27激动剂融合蛋白包含一个以上CD27结合结构域，该CD27结合结构域包含可溶性CD70序列。在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的CD27激动剂融合蛋白包含一个以上CD27结合结构域，该CD27结合结构域包含根据SEQ ID NO：140的序列。在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的CD27激动剂融合蛋白包含一个以上CD27结合结构域，该CD27结合结构域包含根据SEQ ID NO：141的序列。
在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的CD27激动剂融合蛋白包含一个以上CD27结合结构域，该CD27结合结构域是包含VH和VL区的scFv结构域，该VH和VL区各自分别与SEQID NO：131和SEQ ID NO：132所示序列至少95％相同，其中，VH和VL结构域通过接头连接。
表18：另外的多肽结构域，其可用作融合蛋白(例如，结构I-A和I-B)中的CD27结合结构域
在一个实施方式中，CD27激动剂是CD27激动性单链融合多肽，其包含：(i)第一可溶性CD27结合结构域，(ii)第一肽接头，(iii)第二可溶性CD27结合结构域，(iv)第二肽接头，和(v)第三可溶性CD27结合结构域，还包含在N-末端和/或C-末端的其他结构域，并且其中，所述其他结构域是Fab或Fc片段结构域。在一个实施方式中，CD27激动剂是CD27激动性单链融合多肽，其包含：(i)第一可溶性CD27结合结构域，(ii)第一肽接头，(iii)第二可溶性CD27结合结构域，(iv)第二肽接头，和(v)第三可溶性CD27结合结构域，还包含在N-末端和/或C-末端的其他结构域，其中，所述其他结构域是Fab或Fc片段结构域，其中，各个可溶性CD27结合结构域缺少茎区(其有助于三聚化并提供与细胞膜的一定距离，但不是CD27结合结构域的一部分)，并且第一肽接头和第二肽接头独立地具有3至8个氨基酸的长度。
在一个实施方式中，CD27激动剂是CD27激动性单链融合多肽，其包含：(i)第一可溶性肿瘤坏死因子(TNF)超家族细胞因子结构域，(ii)第一肽接头，(iii)第二可溶性TNF超家族细胞因子结构域，(iv)第二肽接头，和(v)第三可溶性TNF超家族细胞因子结构域，其中，各个可溶性TNF超家族细胞因子结构域缺少茎区，第一肽接头和第二肽接头独立地具有3至8个氨基酸的长度，并且其中，TNF超家族细胞因子结构域是CD27结合结构域。
在一个实施方式中，CD27激动剂是美国专利申请公开号US2014/0112942A1、US2011/0274685A1或US2012/0213771A1或国际专利申请公开号WO2012/004367A1所述的CD27激动剂，其公开内容通过引用并入本文。
在一个实施方式中，CD27激动剂是CD27激动性scFv抗体，其包含与任何前述VL结构域连接的任何前述VH结构域。
GITR(CD357)激动剂
在一个实施方式中，TNFRSF激动剂是GITR激动剂。GITR激动剂可以是本领域已知的任何GITR结合分子。GITR结合分子可以是能够结合人或哺乳动物GITR的单克隆抗体或融合蛋白。GITR激动剂或GITR结合分子可包含免疫球蛋白分子的任何同种型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、任何类别(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或任何亚类的免疫球蛋白重链。GITR激动剂或GITR结合分子可具有重链和轻链。如本文所用，术语“结合分子”还包括结合OX40的抗体(包括全长抗体)、单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)、人抗体、人源化抗体或嵌合抗体和抗体片段(例如，Fab片段、F(ab′)片段、由Fab表达文库产生的片段、任何上述分子的表位结合片段)，以及工程化形式的抗体(例如，scFv分子)。在一个实施方式中，GITR激动剂是抗原结合蛋白，它是全人抗体。在一个实施方式中，GITR激动剂是抗原结合蛋白，它是人源化抗体。在一些实施方式中，用于本发明公开的方法和组合物的GITR激动剂包括：抗GITR抗体、人抗GITR抗体、小鼠抗OX40抗体、哺乳动物抗GITR抗体、单克隆抗OX40抗体、多克隆抗OX40抗体、嵌合抗OX40抗体、抗OX40 Adnectin、抗OX40结构域抗体、单链抗OX40片段、重链抗OX40片段、轻链抗OX40片段、抗OX40融合蛋白，及它们的片段、衍生物、缀合物、变体或生物仿制药。在一个优选的实施方式中，OX40激动剂是激动性抗OX40人源化或全人单克隆抗体(即，来源于单细胞系的抗体)。
在一个优选的实施方式中，GITR激动剂或GITR结合分子也可以是融合蛋白。在一个优选的实施方式中，与激动性单克隆抗体(通常具有两个配体结合结构域)相比，多聚体GITR激动剂(例如，三聚体或六聚体GITR激动剂(具有三个或六个配体结合结构域))可以更好地诱导GITR受体聚集和细胞内信号传导复合物形成。例如，如Gieffers等，Mol.CancerTherapeutics，2013，12，2735-47所述，三聚体(三价)或六聚体(或六价)或更高聚体的融合蛋白包含三个TNFRSF结合结构域和IgG1-Fc并且可选地还连接两个以上的这些融合蛋白。
在一些实施方式中，抗GITR抗体的特征在于，在存在刺激剂(stimulating agent)(例如CD3抗体(莫罗单抗或OKT3))的情况下，该抗GITR抗体以高亲和力结合hGITR(SEQ IDNO：142)，并且是激动性的(agonistic)，并且消除Treg细胞对T效应细胞的抑制作用。在一个实施方式中，GITR结合分子结合人GITR(SEQ ID NO：142)。在一个实施方式中，GITR结合分子结合鼠GITR(SEQ ID NO：143)。与GITR结合分子结合的GITR抗原的氨基酸序列总结于表19中。
表19：GITR抗原的氨基酸序列
在一个实施方式中，GITR激动剂是抗原结合蛋白，它是全人抗体。在一个实施方式中，GITR激动剂是抗原结合蛋白，它是人源化抗体。在一个实施方式中，GITR激动剂是抗原结合蛋白，它激活(agonize)人GITR活性。在一个实施方式中，GITR结合分子是抗原结合蛋白，它是全人IgG1抗体。在一个实施方式中，GITR激动剂是抗原结合蛋白，它能够结合Fcγ受体(FcγR)。在一个实施方式中，GITR激动剂是抗原结合蛋白，它能够结合Fcγ受体(FcγR)，从而形成抗原结合蛋白簇。
在一些实施方式中，该组合物、过程和方法包括GITR激动剂，该GITR激动剂：与人或鼠GITR结合的KD为约100pM以下；与人或鼠GITR结合的KD为约90pM以下；与人或鼠GITR结合的KD为约80pM以下；与人或鼠GITR结合的KD为约70pM以下；与人或鼠GITR结合的KD为约60pM以下；与人或鼠GITR结合的KD为约50pM以下；与人或鼠GITR结合的KD为约40pM以下；或与人或鼠GITR结合的KD为约30pM以下。
在一些实施方式中，该组合物、过程和方法包括GITR激动剂，该GITR激动剂：与人或鼠GITR结合的kassoc为约7.5×105 1/M·s以上；与人或鼠GITR结合的kassoc为约7.5×1051/M·s以上；与人或鼠GITR结合的kassoc为约8×105 1/M·s以上；与人或鼠GITR结合的kassoc为约8.5×105 1/M·s以上；与人或鼠GITR结合的kassoc为约9×105 1/M·s以上；与人或鼠GITR结合的kassoc为约9.5×105 1/M·s以上；或与人或鼠GITR结合的kassoc为约1×106 1/M·s以上。
在一些实施方式中，该组合物、过程和方法包括GITR激动剂，该GITR激动剂：与人或鼠GITR结合的kdissoc为约2×10-5 1/s以下；与人或鼠GITR结合的kdissoc为约2.1×10-5 1/s以下；与人或鼠GITR结合的kdissoc为约2.2×10-5 1/s以下；与人或鼠GITR结合的kdissoc为约2.3×10-5 1/s以下；与人或鼠GITR结合的kdissoc为约2.4×10-5 1/s以下；与人或鼠GITR结合的kdissoc为约2.5×10-5 1/s以下；与人或鼠GITR结合的kdissoc为约2.6×10-51/s以下；与人或鼠GITR结合的kdissoc为约2.7×10-5 1/s以下；与人或鼠GITR结合的kdissoc为约2.8×10-5 1/s以下；与人或鼠GITR结合的kdissoc为约2.9×10-5 1/s以下；或与人或鼠GITR结合的kdissoc为约3×10-5 1/s以下。
在一些实施方式中，该组合物、过程和方法包括GITR激动剂，该GITR激动剂：与人或鼠GITR结合的IC50为约10nM以下；与人或鼠GITR结合的IC50为约9nM以下；与人或鼠GITR结合的IC50为约8nM以下；与人或鼠GITR结合的IC50为约7nM以下；与人或鼠GITR结合的IC50为约6nM以下；与人或鼠GITR结合的IC50为约5nM以下；与人或鼠GITR结合的IC50为约4nM以下；与人或鼠GITR结合的IC50为约3nM以下；与人或鼠GITR结合的IC50为约2nM以下；或与人或鼠GITR结合的IC50为约1nM以下。
在一个优选的实施方式中，GITR激动剂是激动性抗GITR单克隆抗体(即，来源于单细胞系的抗体)。已知，激动剂抗GITR抗体诱导强烈的免疫应答。Cohen等，Cancer Res.，2006，66，4904-12；Schaer等，Curr.Opin.Investig.Drugs，2010，11，1378-1386。在一个优选的实施方式中，GITR激动剂是特异性结合GITR抗原的单克隆抗体。在一个实施方式中，GITR激动剂是GITR受体阻断剂。在一些实施方式中，GITR激动剂是激动性抗GITR单克隆抗体，它消除抗体依赖性细胞毒性(ADCC)，例如，NK细胞的细胞毒性。在一些实施方式中，GITR激动剂是消除抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)的激动性抗GITR单克隆抗体。在一些实施方式中，GITR激动剂是消除补体依赖性细胞毒性(CDC)的激动性抗GITR单克隆抗体。
在一个实施方式中，GITR激动剂是激动性抗GITR单克隆抗体TRX518(TolerRx，Inc.)(也称为6C8和Ch-6C8-Agly)。TRX518是完全人源化的(fully-humanized)IgG1抗人GITR单克隆抗体，其中，重链天冬酰胺297被丙氨酸取代以消除N-连接的糖基化，这消除了Fc区功能性(包括ADCC和CDC)。Rosenzweig等，J.Clin.Oncol.，2010，28(补充；摘要el3028)；Jung等，Cur.Opin.Biotechnology，2011，22，858-867。TRX518的氨基酸序列列于表20中。在一些实施方式中，GITR结合分子是抗人GITR单克隆抗体6C8或它的变体。6C8抗体是抗GITR抗体，它以高亲和力结合免疫细胞(例如，人T细胞和树突状细胞)上的人GITR。优选地，此种结合分子消除Treg细胞对T效应细胞的抑制，并且在刺激剂(如CD3)的存在下体外激活部分激活的免疫细胞。在一些实施方式中，GITR结合分子是抗鼠GITR单克隆抗体2F8或它的变体。6C8和2F8抗体及它们的变体的制备、性质和用途描述于美国专利号7,812,135、8,388,967以及9,028,823，其公开内容通过引用并入本文。
在一个实施方式中，激动性抗GITR单克隆抗体包含重链和轻链，该重链选自SEQID NO：144、SEQ ID NO：145、SEQ ID NO：146和SEQ ID NO：147，该轻链包含SEQ ID NO：148。在一个实施方式中，激动性抗GITR单克隆抗体包含重链和轻链，该重链与选自SEQ ID NO：144、SEQ ID NO：145、SEQ ID NO：146和SEQ ID NO：147的序列具有大于99％的序列同一性，该轻链与SEQ ID NO：148具有大于99％的序列同一性。在一个实施方式中，激动性抗GITR单克隆抗体包含重链和轻链，该重链与选自SEQ ID NO：144、SEQ ID NO：145、SEQ ID NO：146和SEQ ID NO：147的序列具有大于98％的序列同一性，该轻链与SEQ ID NO：148具有大于98％的序列同一性。在一个实施方式中，激动性抗GITR单克隆抗体包含重链和轻链，该重链与选自SEQ ID NO：144、SEQ ID NO：145、SEQ ID NO：146和SEQ ID NO：147的序列具有大于95％的序列同一性，该轻链与SEQ ID NO：148具有大于95％的序列同一性。在一个实施方式中，激动性抗GITR单克隆抗体包含重链和轻链，该重链与选自SEQ ID NO：144、SEQ ID NO：145、SEQ ID NO：146和SEQ ID NO：147的序列具有大于90％的序列同一性，该轻链与SEQ IDNO：148具有大于90％的序列同一性。
在一个实施方式中，激动性抗GITR单克隆抗体包含重链，该重链包含SEQ ID NO：149的前导序列，并且该重链还包含选自SEQ ID NO：144、SEQ ID NO：145、SEQ ID NO：146和SEQ ID NO：147的序列。在一个实施方式中，激动性抗GITR单克隆抗体包含轻链，该轻链包含SEQ ID NO：148的前导序列，并且该轻链还包含含有SEQ ID NO：150的序列。
在一个实施方式中，激动性抗GITR单克隆抗体(例如，TRX518)包含可变重链区(VH)和可变轻链区(VL)，该可变重链区选自SEQ ID NO：151和SEQ ID NO：152，该可变轻链区包含SEQ ID NO：153。在一个实施方式中，激动性抗GITR单克隆抗体包含可变重链区和可变轻链区，该可变重链区选自：SEQ ID NO：151的第20位至第138位氨基酸残基和SEQ ID NO：152的第20位至第138位氨基酸残基，该可变轻链区包含SEQ ID NO：153的第20位至第138位氨基酸残基。在一个实施方式中，激动性抗GITR单克隆抗体包含可变重链区和可变轻链区，该可变重链区与选自以下的序列具有大于99％的序列同一性：SEQ ID NO：151的第20位至第138位氨基酸残基和SEQ ID NO：152的第20位至第138位氨基酸残基，该可变轻链区与包含SEQ ID NO：153的第20位至第138位氨基酸残基的序列具有大于99％的序列同一性。在一个实施方式中，激动性抗GITR单克隆抗体包含可变重链区和可变轻链区，该可变重链区与选自以下的序列具有大于98％的序列同一性：SEQ ID NO：151的第20位至第138位氨基酸残基和SEQ ID NO：152的第20位至第138位氨基酸残基，该可变轻链区与包含SEQ ID NO：153的第20位至第138位氨基酸残基的序列具有大于98％的序列同一性。在一个实施方式中，激动性抗GITR单克隆抗体包含可变重链区和可变轻链区，该可变重链区与选自以下的序列具有大于95％的序列同一性：SEQ ID NO：151的第20位至第138位氨基酸残基和SEQ ID NO：152的第20位至第138位氨基酸残基，该可变轻链区与包含SEQ ID NO：153的第20位至第138位氨基酸残基的序列具有大于95％的序列同一性。在一个实施方式中，激动性抗GITR单克隆抗体包含可变重链区和可变轻链区，该可变重链区与选自以下的序列具有大于90％的序列同一性：SEQ ID NO：151的第20位至第138位氨基酸残基和SEQ ID NO：152的第20位至第138位氨基酸残基，该可变轻链区与包含SEQ ID NO：153的第20位至第138位氨基酸残基的序列具有大于90％的序列同一性。
在一个实施方式中，该激动性抗GITR单克隆抗体包含VH区和VL区，所述VH区包含：至少一个CDR1区，该CDR1区包含SEQ ID NO：154的氨基酸序列；至少一个CDR2区，该CDR2区包含选自SEQ ID NO：155和SEQ ID NO：156的氨基酸序列；以及至少一个CDR3区，该CDR3区包含SEQ ID NO：157的氨基酸序列；所述VL区包含：至少一个CDR1区，该CDR1区包含SEQ IDNO：158的氨基酸序列；至少一个CDR2区，该CDR2区包含SEQ ID NO：159的氨基酸序列；以及至少一个CDR3区，该CDR3区包含SEQ ID NO：160的氨基酸序列。在一个实施方式中，本发明提供了分离的核酸分子，该核酸分子编码包含6C8 CDR的多肽序列，例如，编码包含选自下组的氨基酸序列的多肽序列：SEQ ID NO：154、SEQ ID NO：155、SEQ ID NO：156、SEQ ID NO：157、SEQ ID NO：158、SEQ ID NO：159和SEQ ID NO：160。在一个实施方式中，激动性抗GITR单克隆抗体包含由SEQ ID NO：154、SEQ ID NO：156、SEQ ID NO：157、SEQ ID NO：158、SEQID NO：159和SEQ ID NO：160的氨基酸序列表示的六个CDR。在一个实施方式中，特异性结合GITR的GITR结合分子包含由SEQ ID NO：154、SEQ ID NO：155、SEQ ID NO：157、SEQ ID NO：158、SEQ ID NO：158、SEQ ID NO：159和SEQ ID NO：160的氨基酸序列表示的六个CDR。在一个实施方式中，激动性抗GITR单克隆抗体包含具有至少一个CDR结构域的VL，该CDR结构域包含选自SEQ ID NO：158、SEQ ID NO：159和SEQ ID NO：160的氨基酸序列。在一个实施方式中，激动性抗GITR单克隆抗体包含VL，该VL具有至少两个CDR结构域，该CDR结构域包含选自SEQ ID NO：158、SEQ ID NO：159和SEQ ID NO：160的氨基酸序列。在一个实施方式中，激动性抗GITR单克隆抗体包含VL，该VL具有CDR结构域，该CDR结构域包含SEQ ID NO：158、SEQ IDNO：159和SEQ ID NO：160的氨基酸序列。在一个实施方式中，激动性抗GITR单克隆抗体包含VL，该VL具有至少一个CDR结构域，该CDR结构域包含选自SEQ ID NO：154、SEQ ID NO：155和SEQ ID NO：157的氨基酸序列。在一个实施方式中，激动性抗GITR单克隆抗体包含VL，该VL具有至少两个CDR结构域，该CDR结构域包含选自SEQ ID NO：154、SEQ ID NO：155和SEQ IDNO：157的氨基酸序列。在一个实施方式中，激动性抗GITR单克隆抗体包含VL，该VL具有CDR结构域，该CDR结构域包含SEQ ID NO：154、SEQ ID NO：155和SEQ ID NO：157的氨基酸序列。在一个实施方式中，激动性抗GITR单克隆抗体包含VL，该VL具有至少一个CDR结构域，该CDR结构域包含选自SEQ ID NO：154、SEQ ID NO：156和SEQ ID NO：157的氨基酸序列。在一个实施方式中，激动性抗GITR单克隆抗体包含VL，该VL具有至少两个CDR结构域，该CDR结构域包含选自SEQ ID NO：154、SEQ ID NO：156和SEQ ID NO：157的氨基酸序列。在一个实施方式中，激动性抗GITR单克隆抗体包含VL，该VL具有CDR结构域，该CDR结构域包含SEQ ID NO：154、SEQ ID NO：156和SEQ ID NO：157的氨基酸序列。在一个实施方式中，激动性抗GITR单克隆抗体包含VH结构域，该VH结构域包含SEQ ID NO：154中所示的CDR(CDR1)。在一个实施方式中，激动性抗GITR单克隆抗体包含VH结构域，该VH结构域包含SEQ ID NO：155所示的CDR(CDR2，“N”变体)。在一个实施方式中，激动性抗GITR单克隆抗体包含VH结构域，该VH结构域包含SEQ ID NO：156中所示的CDR(CDR3，“Q”变体)。在一个实施方式中，激动性抗GITR单克隆抗体包含VH结构域，该VH结构域包含SEQ ID NO：157中所示的CDR(CDR3)。在一个实施方式中，激动性抗GITR单克隆抗体包含VL结构域，该VL结构域包含SEQ ID NO：158中所示的CDR(CDR1)。在一个实施方式中，激动性抗GITR单克隆抗体包含VL结构域，该VL结构域包含SEQID NO：159中所示的CDR(CDR2)。在一个实施方式中，激动性抗GITR单克隆抗体包含VL结构域，该VL结构域包含SEQ ID NO：160中所示的CDR(CDR3)。
在一个实施方式中，激动性抗GITR单克隆抗体是嵌合6C8单克隆抗体，或它的抗原结合片段、衍生物、缀合物或变体。在一个实施方式中，激动性抗GITR单克隆抗体包含重链和轻链，该重链选自SEQ ID NO：162和SEQ ID NO：163，该轻链包含SEQ ID NO：161。在一个实施方式中，激动性抗GITR单克隆抗体包含重链和轻链，该重链与选自SEQ ID NO：162和SEQ ID NO：163的序列具有大于99％的序列同一性，该轻链与SEQ ID NO：161具有大于99％的序列同一性。在一个实施方式中，激动性抗GITR单克隆抗体包含重链和轻链，该重链与选自SEQ ID NO：162和SEQ ID NO：163的序列具有大于98％的序列同一性，该轻链与SEQ IDNO：161具有大于98％的序列同一性。在一个实施方式中，激动性抗GITR单克隆抗体包含重链和轻链，该重链与选自SEQ ID NO：162和SEQ ID NO：163的序列具有大于95％的序列同一性，该轻链与SEQ ID NO：161具有大于95％的序列同一性。在一个实施方式中，激动性抗GITR单克隆抗体包含：重链，该重链与选自SEQ ID NO：162和SEQ ID NO：163的序列具有大于90％的序列同一性；以及轻链，该轻链与SEQ ID NO：161具有大于90％的序列同一性。
在一个实施方式中，GITR激动剂是药物监管机构批准的参考TRX518或6C8的GITR激动剂生物仿制药单克隆抗体。在一个实施方式中，该生物仿制药单克隆抗体包含GITR抗体，与参考药物产品或参考生物产品相比，该GITR抗体包含与参考药物产品或参考生物产品的氨基酸序列具有至少97％序列同一性(例如，97％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列，并且该氨基酸序列包含一种以上翻译后修饰，其中参考药物产品或参考生物产品是TRX518或6C8。在一些实施方式中，一种以上翻译后修饰选自糖基化、氧化、脱酰胺和截短中的一种以上。在一些实施方式中，生物仿制药是已授权或提交待授权的GITR激动剂抗体，其中，GITR激动剂抗体以与参考药物产品或参考生物产品的制剂不同的制剂提供，其中参考药物产品或参考生物产品是TRX518或6C8。GITR激动剂抗体可以由药物监管机构(例如，美国FDA和/或欧盟的EMA)授权。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是TRX518或6C8。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是TRX518或6C8。
表20：TRX518和6C8相关的GITR激动剂抗体的氨基酸序列
在一个实施方式中，GITR激动剂是激动性抗GITR单克隆抗体，它描述于美国专利号8,709,424；美国专利申请公开号US2012/0189639A1和US2014/0348841A1，以及国际专利申请公开号WO2011/028683A1(Merck Sharp&Dohme Corp.)，其公开内容通过引用并入本文。在一个实施方式中，GITR激动剂是选自下组的激动性抗GITR单克隆抗体，及它们的片段、变体、衍生物或生物仿制药：36E5、3D6、61G6、6H6、61F6、1D8、17F10、35D8、49A1、9E5和31H6。这些抗体的结构、性质和制备描述于美国专利号8,709,424；美国专利申请公开号US2012/0189639A1和US2014/0348841A1，其公开内容通过引用并入本文。
在一些实施方式中，激动性抗GITR单克隆抗体包含：人源化重链可变域(VH)或它的变体、片段或生物仿制药，该VH包含选自下组的序列：SEQ ID NO：164、SEQ ID NO：166、SEQ ID NO：168、SEQ ID NO：170、SEQ ID NO：172、SEQ ID NO：174、SEQ ID NO：176、SEQ IDNO：178、SEQ ID NO：180、SEQ ID NO：182、SEQ ID NO：184、SEQ ID NO：186、SEQ ID NO：188、SEQ ID NO：190、SEQ ID NO：192、SEQ ID NO：194、SEQ ID NO：196、SEQ ID NO：198、SEQ IDNO：200、SEQ ID NO：202、SEQ ID NO：204、SEQ ID NO：206；人源化重链可变域(VH)或它的变体、片段或生物仿制药，该VH包含选自下组的序列：SEQ ID NO：165、SEQ ID NO：165、SEQ IDNO：167、SEQ ID NO：169、SEQ ID NO：171、SEQ ID NO：173、SEQ ID NO：175、SEQ ID NO：177、SEQ ID NO：179、SEQ ID NO：181、SEQ ID NO：183、SEQ ID NO：185、SEQ ID NO：187、SEQ IDNO：189、SEQ ID NO：191、SEQ ID NO：193、SEQ ID NO：195、SEQ ID NO：197、SEQ ID NO：199、SEQ ID NO：201、SEQ ID NO：203、SEQ ID NO：205、SEQ ID NO：207(表21)。在一些实施方式中，激动性抗GITR单克隆抗体还包含重链恒定区，其中，重链恒定区包含γ1，γ2，γ3或γ4人重链恒定区或它们的变体。在一些实施方式中，轻链恒定区包含λ或κ人轻链恒定区。
在一个实施方式中，GITR激动剂是药物监管机构批准的参考36E5、3D6、61G6、6H6、61F6、1D8、17F10、35D8、49A1、9E5和31H6的GITR激动剂生物仿制药单克隆抗体。在一个实施方式中，该生物仿制药单克隆抗体包含GITR抗体，与参考药物产品或参考生物产品相比，该GITR抗体包含与参考药物产品或参考生物产品的氨基酸序列具有至少97％序列同一性(例如，97％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列，并且该氨基酸序列包含一种以上翻译后修饰，其中参考药物产品或参考生物产品是36E5、3D6、61G6、6H6、61F6、1D8、17F10、35D8、49A1、9E5和31H6。在一些实施方式中，该一种以上翻译后修饰选自糖基化、氧化、脱酰胺和截短中的一种以上。在一些实施方式中，生物仿制药是已授权或提交待授权的GITR激动剂抗体，其中，GITR激动剂抗体以与参考药物产品或参考生物产品的制剂不同的制剂提供，其中参考药物产品或参考生物产品是36E5、3D6、61G6、6H6、61F6、1D8、17F10、35D8、49A1、9E5和31H6。GITR激动剂抗体可以由药物监管机构(例如，美国FDA和/或欧盟的EMA)授权。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是36E5、3D6、61G6、6H6、61F6、1D8、17F10、35D8、49A1、9E5和31H6。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是36E5、3D6、61G6、6H6、61F6、1D8、17F10、35D8、49A1、9E5和31H6。
表21：国际专利申请公开号WO2011/028683A1所述GITR激动剂的相关GITR激动剂抗体的氨基酸序列
在一个实施方式中，GITR激动剂是美国专利申请公开号US2013/0108641A1(Sanofi SA)和国际专利申请公开号WO2011/028683A1(Sanofi SA)所述的激动性抗GITR单克隆抗体，其公开内容通过引用并入本文。在一个实施方式中，GITR结合分子包括与人GITR结合的单克隆抗体及它的变体和片段，包括人源化和嵌合重组抗体，包含：重链可变域(VH)和轻链可变结构域(VL)，该VH选自SEQ ID NO：208、SEQ ID NO：210、SEQ ID NO：211、SEQ IDNO：212、SEQ ID NO：213、SEQ ID NO：214、SEQ ID NO：219、SEQ ID NO：221、SEQ ID NO：223和SEQ ID NO：225，该VL选自SEQ ID NO：209、SEQ ID NO：215、SEQ ID NO：216、SEQ ID NO：217、SEQ ID NO：218、SEQ ID NO：220、SEQ ID NO：222、SEQ ID NO：224和SEQ ID NO：226(表22)。在一个实施方式中，GITR结合分子是激动性抗GITR单克隆抗体，其包含：(a)一个、两个或三个重链CDR，该重链CDR选自SEQ ID NO：227、SEQ ID NO：228、SEQ ID NO：229、SEQ IDNO：233、SEQ ID NO：234、SEQ ID NO：235、SEQ ID NO：240、SEQ ID NO：241、SEQ ID NO：242、SEQ ID NO：243、SEQ ID NO：244、SEQ ID NO：245、SEQ ID NO：249，及它们的保守性氨基酸取代；以及(b)一个、两个或三个轻链CDR，该轻链CDR选自SEQ ID NO：230、SEQ ID NO：231、SEQ ID NO：232、SEQ ID NO：236、SEQ ID NO：237、SEQ ID NO：238、SEQ ID NO：239、SEQ IDNO：246、SEQ ID NO：247、SEQ ID NO：248，及它们的保守性氨基酸取代(表22)。在一个实施方式中，GITR激动剂是激动性抗GITR单克隆抗体，其选自2155、698、706、827、1649和1718，及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。
在一个实施方式中，GITR激动剂是药物监管机构批准的参考2155、698、706、827、1649和1718的GITR激动剂生物仿制药单克隆抗体。在一个实施方式中，该生物仿制药单克隆抗体包含GITR抗体，与参考药物产品或参考生物产品相比，该GITR抗体包含与参考药物产品或参考生物产品的氨基酸序列具有至少97％序列同一性(例如，97％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列，并且该氨基酸序列包含一种以上翻译后修饰，其中参考药物产品或参考生物产品是2155、698、706、827、1649和1718。在一些实施方式中，一种以上翻译后修饰选自糖基化、氧化、脱酰胺和截短中的一种以上。在一些实施方式中，生物仿制药是已授权或提交待授权的GITR激动剂抗体，其中，GITR激动剂抗体以与参考药物产品或参考生物产品的制剂不同的制剂提供，其中参考药物产品或参考生物产品是2155、698、706、827、1649和1718。GITR激动剂抗体可以由药物监管机构(例如，美国FDA和/或欧盟的EMA)授权。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是2155、698、706、827、1649和1718。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是2155、698、706、827、1649和1718。
表22：国际专利申请公开号WO2011/028683A1所述GITR激动剂的相关GITR激动剂抗体的氨基酸序列
在一个优选的实施方式中，GITR激动剂是单克隆抗体1D7，或它的片段、衍生物、变体或生物仿制药。1D7可从Amgen，Inc.商购。1D7的制备和性质描述于美国专利申请公开号US2015/0064204A1中，其公开内容通过引用并入本文。1D7的氨基酸序列列于表23中。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含SEQ ID NO：250给出的重链和SEQ ID NO：251给出的轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别具有SEQ ID NO：250和SEQ ID NO：251所示序列的重链和轻链，或它们的抗原结合片段、Fab片段、单链可变片段(scFv)、变体或缀合物。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：250和SEQ ID NO：251所示序列至少99％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ IDNO：250和SEQ ID NO：251所示序列至少98％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：250和SEQ ID NO：251所示序列至少97％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：250和SEQ ID NO：251所示序列至少96％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：250和SEQID NO：251所示序列至少95％相同的重链和轻链。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含1D7的重链和轻链CDR或可变区(VR)。在一个实施方式中，GITR激动剂重链可变区(VH)包含SEQ ID NO：252所示序列，并且GITR激动剂轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO：253所示序列，及它们的保守性氨基酸取代。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：252和SEQ ID NO：253所示序列至少99％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：252和SEQID NO：253所示序列至少98％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：252和SEQ ID NO：253所示序列至少97％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：252和SEQ ID NO：253所示序列至少96％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：252和SEQ ID NO：253所示序列至少95％相同。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含：重链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述重链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：254、SEQ ID NO：255和SEQ ID NO：256所示的序列；以及轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：257、SEQ ID NO：258和SEQ IDNO：259所示的序列。
在一个实施方式中，GITR激动剂是药物监管机构批准的参考1D7的GITR激动剂生物仿制药单克隆抗体。在一个实施方式中，该生物仿制药单克隆抗体包含GITR抗体，与参考药物产品或参考生物产品相比，该GITR抗体包含与参考药物产品或参考生物产品的氨基酸序列具有至少97％序列同一性(例如，97％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列，并且该氨基酸序列包含一种以上翻译后修饰，其中参考药物产品或参考生物产品是1D7。在一些实施方式中，一种以上翻译后修饰选自糖基化、氧化、脱酰胺和截短中的一种以上。在一些实施方式中，生物仿制药是已授权或提交待授权的GITR激动剂抗体，其中，GITR激动剂抗体以与参考药物产品或参考生物产品的制剂不同的制剂提供，其中参考药物产品或参考生物产品是1D7。GITR激动剂抗体可以由药物监管机构(例如，美国FDA和/或欧盟的EMA)授权。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是1D7。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是1D7。
表23：1D7相关的GITR激动剂抗体的氨基酸序列
在一个优选的实施方式中，GITR激动剂是单克隆抗体33C9，或它的片段、衍生物、变体或生物仿制药。33C9可从Amgen，Inc.商购。33C9的制备和性质描述于美国专利申请公开号US2015/0064204A1中，其公开内容通过引用并入本文。33C9的氨基酸序列列于表24中。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含SEQ ID NO：260给出的重链和SEQ ID NO：261给出的轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别具有SEQ ID NO：260和SEQ ID NO：261所示序列的重链和轻链，或它们的抗原结合片段、Fab片段、单链可变片段(scFv)、变体或缀合物。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：260和SEQ ID NO：261所示序列至少99％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ IDNO：260和SEQ ID NO：261所示序列至少98％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：260和SEQ ID NO：261所示序列至少97％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：260和SEQ ID NO：261所示序列至少96％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：260和SEQID NO：261所示序列至少95％相同的重链和轻链。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含1D7的重链和轻链CDR或可变区(VR)。在一个实施方式中，GITR激动剂重链可变区(VH)包含SEQ ID NO：262所示序列，并且GITR激动剂轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO：263所示序列，及它们的保守性氨基酸取代。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：262和SEQ ID NO：263所示序列至少99％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：262和SEQID NO：263所示序列至少98％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：262和SEQ ID NO：263所示序列至少97％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：262和SEQ ID NO：263所示序列至少96％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：262和SEQ ID NO：263所示序列至少95％相同。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含：重链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述重链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：264、SEQ ID NO：265和SEQ ID NO：266所示的序列；以及轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：267、SEQ ID NO：268和SEQ IDNO：269所示的序列。
在一个实施方式中，GITR激动剂是药物监管机构批准的参考33C9的GITR激动剂生物仿制药单克隆抗体。在一个实施方式中，该生物仿制药单克隆抗体包含GITR抗体，与参考药物产品或参考生物产品相比，该GITR抗体包含与参考药物产品或参考生物产品的氨基酸序列具有至少97％序列同一性(例如，97％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列，并且该氨基酸序列包含一种以上翻译后修饰，其中参考药物产品或参考生物产品是33C9。在一些实施方式中，一种以上翻译后修饰选自糖基化、氧化、脱酰胺和截短中的一种以上。在一些实施方式中，生物仿制药是已授权或提交待授权的GITR激动剂抗体，其中，GITR激动剂抗体以与参考药物产品或参考生物产品的制剂不同的制剂提供，其中参考药物产品或参考生物产品是33C9。GITR激动剂抗体可以由药物监管机构(例如，美国FDA和/或欧盟的EMA)授权。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是33C9。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是33C9。
表24：33C9相关的GITR激动剂抗体的氨基酸序列
在一个优选的实施方式中，GITR激动剂是单克隆抗体33F6，或它的片段、衍生物、变体或生物仿制药。33F6可从Amgen，Inc.商购。33F6的制备和性质描述于美国专利申请公开号US2015/0064204A1中，其公开内容通过引用并入本文。33F6的氨基酸序列列于表25中。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含SEQ ID NO：270给出的重链和SEQ ID NO：271给出的轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别具有SEQ ID NO：270和SEQ ID NO：271所示序列的重链和轻链，或它们的抗原结合片段、Fab片段、单链可变片段(scFv)、变体或缀合物。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：270和SEQ ID NO：271所示序列至少99％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ IDNO：270和SEQ ID NO：271所示序列至少98％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：270和SEQ ID NO：271所示序列至少97％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：270和SEQ ID NO：271所示序列至少96％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：270和SEQID NO：271所示序列至少95％相同的重链和轻链。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含33F6的重链和轻链CDR或可变区(VR)。在一个实施方式中，GITR激动剂重链可变区(VH)包含SEQ ID NO：272所示序列，并且GITR激动剂轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO：273所示序列，及它们的保守性氨基酸取代。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：272和SEQ ID NO：273所示序列至少99％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：272和SEQID NO：273所示序列至少98％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：272和SEQ ID NO：273所示序列至少97％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：272和SEQ ID NO：273所示序列至少96％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：272和SEQ ID NO：273所示序列至少95％相同。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含：重链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述重链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：274、SEQ ID NO：275和SEQ ID NO：276所示的序列；以及轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：277、SEQ ID NO：278和SEQ IDNO：279所示的序列。
在一个实施方式中，GITR激动剂是药物监管机构批准的参考33F6的GITR激动剂生物仿制药单克隆抗体。在一个实施方式中，该生物仿制药单克隆抗体包含GITR抗体，与参考药物产品或参考生物产品相比，该GITR抗体包含与参考药物产品或参考生物产品的氨基酸序列具有至少97％序列同一性(例如，97％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列，并且该氨基酸序列包含一种以上翻译后修饰，其中参考药物产品或参考生物产品是33F6。在一些实施方式中，一种以上翻译后修饰选自糖基化、氧化、脱酰胺和截短中的一种以上。在一些实施方式中，生物仿制药是已授权或提交待授权的GITR激动剂抗体，其中，GITR激动剂抗体以与参考药物产品或参考生物产品的制剂不同的制剂提供，其中参考药物产品或参考生物产品是33F6。GITR激动剂抗体可以由药物监管机构(例如，美国FDA和/或欧盟的EMA)授权。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是33F6。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是33F6。
表25：33F6相关的GITR激动剂抗体的氨基酸序列
在一个优选的实施方式中，GITR激动剂是单克隆抗体34G4，或它的片段、衍生物、变体或生物仿制药。34G4可从Amgen，Inc.商购。34G4的制备和性质描述于美国专利申请公开号US2015/0064204A1中，其公开内容通过引用并入本文。34G4的氨基酸序列列于表26中。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含SEQ ID NO：280给出的重链和SEQ ID NO：281给出的轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别具有SEQ ID NO：280和SEQ ID NO：281所示序列的重链和轻链，或它们的抗原结合片段、Fab片段、单链可变片段(scFv)、变体或缀合物。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：280和SEQ ID NO：281所示序列至少99％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ IDNO：280和SEQ ID NO：281所示序列至少98％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：280和SEQ ID NO：281所示序列至少97％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：280和SEQ ID NO：281所示序列至少96％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：280和SEQID NO：281所示序列至少95％相同的重链和轻链。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含34G4的重链和轻链CDR或可变区(VR)。在一个实施方式中，GITR激动剂重链可变区(VH)包含SEQ ID NO：282所示序列，并且GITR激动剂轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO：283所示序列，及它们的保守性氨基酸取代。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：282和SEQ ID NO：283所示序列至少99％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：282和SEQID NO：283所示序列至少98％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：282和SEQ ID NO：283所示序列至少97％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：282和SEQ ID NO：283所示序列至少96％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：282和SEQ ID NO：283所示序列至少95％相同。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含：重链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述重链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：284、SEQ ID NO：285和SEQ ID NO：286所示的序列；以及轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：287、SEQ ID NO：288和SEQ IDNO：289所示的序列。
在一个实施方式中，GITR激动剂是药物监管机构批准的参考34G4的GITR激动剂生物仿制药单克隆抗体。在一个实施方式中，该生物仿制药单克隆抗体包含GITR抗体，与参考药物产品或参考生物产品相比，该GITR抗体包含与参考药物产品或参考生物产品的氨基酸序列具有至少97％序列同一性(例如，97％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列，并且该氨基酸序列包含一种以上翻译后修饰，其中参考药物产品或参考生物产品是34G4。在一些实施方式中，一种以上翻译后修饰选自糖基化、氧化、脱酰胺和截短中的一种以上。在一些实施方式中，生物仿制药是已授权或提交待授权的GITR激动剂抗体，其中，GITR激动剂抗体以与参考药物产品或参考生物产品的制剂不同的制剂提供，其中参考药物产品或参考生物产品是34G4。GITR激动剂抗体可以由药物监管机构(例如，美国FDA和/或欧盟的EMA)授权。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是34G4。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是34G4。
表26：34G4相关的GITR激动剂抗体的氨基酸序列
在一个优选的实施方式中，GITR激动剂是单克隆抗体35B10，或它的片段、衍生物、变体或生物仿制药。35B10可从Amgen，Inc.商购。35B10的制备和性质描述于美国专利申请公开号US2015/0064204A1中，其公开内容通过引用并入本文。35B10的氨基酸序列列于表27中。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含SEQ ID NO：290给出的重链和SEQ ID NO：291给出的轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别具有SEQ ID NO：290和SEQ ID NO：291所示序列的重链和轻链，或它们的抗原结合片段、Fab片段、单链可变片段(scFv)、变体或缀合物。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：290和SEQ ID NO：291所示序列至少99％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ IDNO：290和SEQ ID NO：291所示序列至少98％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：290和SEQ ID NO：291所示序列至少97％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：290和SEQ ID NO：291所示序列至少96％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：290和SEQID NO：291所示序列至少95％相同的重链和轻链。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含35B10的重链和轻链CDR或可变区(VR)。在一个实施方式中，GITR激动剂重链可变区(VH)包含SEQ ID NO：292所示序列，并且GITR激动剂轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO：293所示序列，及它们的保守性氨基酸取代。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：292和SEQ ID NO：293所示序列至少99％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：292和SEQID NO：293所示序列至少98％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：292和SEQ ID NO：293所示序列至少97％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：292和SEQ ID NO：293所示序列至少96％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：292和SEQ ID NO：293所示序列至少95％相同。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含：重链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述重链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：294、SEQ ID NO：295和SEQ ID NO：296所示的序列；以及轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：297、SEQ ID NO：298和SEQ IDNO：299所示的序列。
在一个实施方式中，GITR激动剂是药物监管机构批准的参考35B10的GITR激动剂生物仿制药单克隆抗体。在一个实施方式中，该生物仿制药单克隆抗体包含GITR抗体，与参考药物产品或参考生物产品相比，该GITR抗体包含与参考药物产品或参考生物产品的氨基酸序列具有至少97％序列同一性(例如，97％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列，并且该氨基酸序列包含一种以上翻译后修饰，其中参考药物产品或参考生物产品是35B10。在一些实施方式中，一种以上翻译后修饰选自糖基化、氧化、脱酰胺和截短中的一种以上。在一些实施方式中，生物仿制药是已授权或提交待授权的GITR激动剂抗体，其中，GITR激动剂抗体以与参考药物产品或参考生物产品的制剂不同的制剂提供，其中参考药物产品或参考生物产品是35B10。GITR激动剂抗体可以由药物监管机构(例如，美国FDA和/或欧盟的EMA)授权。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是35B10。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是35B10。
表27：35B10相关的GITR激动剂抗体的氨基酸序列
在一个优选的实施方式中，GITR激动剂是单克隆抗体41E11，或它的片段、衍生物、变体或生物仿制药。41E11可从Amgen，Inc.商购。41E11的制备和性质描述于美国专利申请公开号US2015/0064204A1中，其公开内容通过引用并入本文。41E11的氨基酸序列列于表28中。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含SEQ ID NO：300给出的重链和SEQ ID NO：301给出的轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别具有SEQ ID NO：300和SEQ ID NO：301所示序列的重链和轻链，或它们的抗原结合片段、Fab片段、单链可变片段(scFv)、变体或缀合物。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：300和SEQ ID NO：301所示序列至少99％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ IDNO：300和SEQ ID NO：301所示序列至少98％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：300和SEQ ID NO：301所示序列至少97％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：300和SEQ ID NO：301所示序列至少96％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：300和SEQID NO：301所示序列至少95％相同的重链和轻链。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含41E11的重链和轻链CDR或可变区(VR)。在一个实施方式中，GITR激动剂重链可变区(VH)包含SEQ ID NO：302所示序列，并且GITR激动剂轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO：303所示序列，及它们的保守性氨基酸取代。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：302和SEQ ID NO：303所示序列至少99％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：302和SEQID NO：303所示序列至少98％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：302和SEQ ID NO：303所示序列至少97％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：302和SEQ ID NO：303所示序列至少96％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：302和SEQ ID NO：303所示序列至少95％相同。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含：重链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述重链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：304、SEQ ID NO：305和SEQ ID NO：306所示的序列；以及轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：307、SEQ ID NO：308和SEQ IDNO：309所示的序列。
在一个实施方式中，GITR激动剂是药物监管机构批准的参考41E11的GITR激动剂生物仿制药单克隆抗体。在一个实施方式中，该生物仿制药单克隆抗体包含GITR抗体，与参考药物产品或参考生物产品相比，该GITR抗体包含与参考药物产品或参考生物产品的氨基酸序列具有至少97％序列同一性(例如，97％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列，并且该氨基酸序列包含一种以上翻译后修饰，其中参考药物产品或参考生物产品是41E11。在一些实施方式中，一种以上翻译后修饰选自糖基化、氧化、脱酰胺和截短中的一种以上。在一些实施方式中，生物仿制药是已授权或提交待授权的GITR激动剂抗体，其中，GITR激动剂抗体以与参考药物产品或参考生物产品的制剂不同的制剂提供，其中参考药物产品或参考生物产品是41E11。GITR激动剂抗体可以由药物监管机构(例如，美国FDA和/或欧盟的EMA)授权。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是41E11。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是41E11。
表28：41E11相关的GITR激动剂抗体的氨基酸序列
在一个优选的实施方式中，GITR激动剂是单克隆抗体41G5，或它的片段、衍生物、变体或生物仿制药。41G5可从Amgen，Inc.商购。41G5的制备和性质描述于美国专利申请公开号US2015/0064204A1中，其公开内容通过引用并入本文。41G5的氨基酸序列列于表29中。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含SEQ ID NO：310给出的重链和SEQ ID NO：311给出的轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别具有SEQ ID NO：310和SEQ ID NO：311所示序列的重链和轻链，或它们的抗原结合片段、Fab片段、单链可变片段(scFv)、变体或缀合物。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：310和SEQ ID NO：311所示序列至少99％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ IDNO：310和SEQ ID NO：311所示序列至少98％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：310和SEQ ID NO：311所示序列至少97％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：310和SEQ ID NO：311所示序列至少96％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：310和SEQID NO：311所示序列至少95％相同的重链和轻链。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含41G5的重链和轻链CDR或可变区(VR)。在一个实施方式中，GITR激动剂重链可变区(VH)包含SEQ ID NO：312所示序列，并且GITR激动剂轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO：313所示序列，及它们的保守性氨基酸取代。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：312和SEQ ID NO：313所示序列至少99％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：312和SEQID NO：313所示序列至少98％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：312和SEQ ID NO：313所示序列至少97％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：312和SEQ ID NO：313所示序列至少96％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：312和SEQ ID NO：313所示序列至少95％相同。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含：重链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述重链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：314、SEQ ID NO：315和SEQ ID NO：316所示的序列；以及轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：317、SEQ ID NO：318和SEQ IDNO：319所示的序列。
在一个实施方式中，GITR激动剂是药物监管机构批准的参考41G5的GITR激动剂生物仿制药单克隆抗体。在一个实施方式中，该生物仿制药单克隆抗体包含GITR抗体，与参考药物产品或参考生物产品相比，该GITR抗体包含与参考药物产品或参考生物产品的氨基酸序列具有至少97％序列同一性(例如，97％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列，并且该氨基酸序列包含一种以上翻译后修饰，其中参考药物产品或参考生物产品是41G5。在一些实施方式中，一种以上翻译后修饰选自糖基化、氧化、脱酰胺和截短中的一种以上。在一些实施方式中，生物仿制药是已授权或提交待授权的GITR激动剂抗体，其中，GITR激动剂抗体以与参考药物产品或参考生物产品的制剂不同的制剂提供，其中参考药物产品或参考生物产品是41G5。GITR激动剂抗体可以由药物监管机构(例如，美国FDA和/或欧盟的EMA)授权。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是41G5。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是41G5。
表29：41G5相关的GITR激动剂抗体的氨基酸序列
在一个优选的实施方式中，GITR激动剂是单克隆抗体42A11，或它的片段、衍生物、变体或生物仿制药。42A11可从Amgen，Inc.商购。42A11的制备和性质描述于美国专利申请公开号US2015/0064204A1中，其公开内容通过引用并入本文。42A11的氨基酸序列列于表30中。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含SEQ ID NO：320给出的重链和SEQ ID NO：321给出的轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别具有SEQ ID NO：320和SEQ ID NO：321所示序列的重链和轻链，或它们的抗原结合片段、Fab片段、单链可变片段(scFv)、变体或缀合物。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：320和SEQ ID NO：321所示序列至少99％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ IDNO：320和SEQ ID NO：321所示序列至少98％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：320和SEQ ID NO：321所示序列至少97％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：320和SEQ ID NO：321所示序列至少96％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：320和SEQID NO：321所示序列至少95％相同的重链和轻链。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含42A11的重链和轻链CDR或可变区(VR)。在一个实施方式中，GITR激动剂重链可变区(VH)包含SEQ ID NO：322所示序列，并且GITR激动剂轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO：323所示序列，及它们的保守性氨基酸取代。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：322和SEQ ID NO：323所示序列至少99％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：322和SEQID NO：323所示序列至少98％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：322和SEQ ID NO：323所示序列至少97％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：322和SEQ ID NO：323所示序列至少96％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：322和SEQ ID NO：323所示序列至少95％相同。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含：重链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述重链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：324、SEQ ID NO：325和SEQ ID NO：326所示的序列；以及轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：327、SEQ ID NO：328和SEQ IDNO：329所示的序列。
在一个实施方式中，GITR激动剂是药物监管机构批准的参考42A11的GITR激动剂生物仿制药单克隆抗体。在一个实施方式中，该生物仿制药单克隆抗体包含GITR抗体，与参考药物产品或参考生物产品相比，该GITR抗体包含与参考药物产品或参考生物产品的氨基酸序列具有至少97％序列同一性(例如，97％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列，并且该氨基酸序列包含一种以上翻译后修饰，其中参考药物产品或参考生物产品是42A11。在一些实施方式中，一种以上翻译后修饰选自糖基化、氧化、脱酰胺和截短中的一种以上。在一些实施方式中，生物仿制药是已授权或提交待授权的GITR激动剂抗体，其中，GITR激动剂抗体以与参考药物产品或参考生物产品的制剂不同的制剂提供，其中参考药物产品或参考生物产品是42A11。GITR激动剂抗体可以由药物监管机构(例如，美国FDA和/或欧盟的EMA)授权。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是42A11。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是42A11。
表30：42A11相关的GITR激动剂抗体的氨基酸序列
在一个优选的实施方式中，GITR激动剂是单克隆抗体44C1，或它的片段、衍生物、变体或生物仿制药。44C1可从Amgen，Inc.商购。44C1的制备和性质描述于美国专利申请公开号US2015/0064204A1中，其公开内容通过引用并入本文。44C1的氨基酸序列列于表31中。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含SEQ ID NO：330给出的重链和SEQ ID NO：331给出的轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别具有SEQ ID NO：330和SEQ ID NO：331所示序列的重链和轻链，或它们的抗原结合片段、Fab片段、单链可变片段(scFv)、变体或缀合物。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：330和SEQ ID NO：331所示序列至少99％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ IDNO：330和SEQ ID NO：331所示序列至少98％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：330和SEQ ID NO：331所示序列至少97％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：330和SEQ ID NO：331所示序列至少96％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：330和SEQID NO：331所示序列至少95％相同的重链和轻链。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含44C1的重链和轻链CDR或可变区(VR)。在一个实施方式中，GITR激动剂重链可变区(VH)包含SEQ ID NO：332所示序列，并且GITR激动剂轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO：333所示序列，及它们的保守性氨基酸取代。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：332和SEQ ID NO：333所示序列至少99％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：332和SEQID NO：333所示序列至少98％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：332和SEQ ID NO：333所示序列至少97％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：332和SEQ ID NO：333所示序列至少96％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：332和SEQ ID NO：333所示序列至少95％相同。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含：重链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述重链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：334、SEQ ID NO：335和SEQ ID NO：336所示的序列；以及轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：337、SEQ ID NO：338和SEQ IDNO：339所示的序列。
在一个实施方式中，GITR激动剂是药物监管机构批准的参考44C1的GTSR激动剂生物仿制药单克隆抗体。在一个实施方式中，该生物仿制药单克隆抗体包含GITR抗体，与参考药物产品或参考生物产品相比，该GITR抗体包含与参考药物产品或参考生物产品的氨基酸序列具有至少97％序列同一性(例如，97％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列，并且该氨基酸序列包含一种以上翻译后修饰，其中参考药物产品或参考生物产品是44C1。在一些实施方式中，一种以上翻译后修饰选自糖基化、氧化、脱酰胺和截短中的一种以上。在一些实施方式中，生物仿制药是已授权或提交待授权的GITR激动剂抗体，其中，GITR激动剂抗体以与参考药物产品或参考生物产品的制剂不同的制剂提供，其中参考药物产品或参考生物产品是44C1。GITR激动剂抗体可以由药物监管机构(例如，美国FDA和/或欧盟的EMA)授权。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是44C1。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是44C1。
表31：44C1相关的GITR激动剂抗体的氨基酸序列
在一个优选的实施方式中，GITR激动剂是单克隆抗体45A8，或它的片段、衍生物、变体或生物仿制药。45A8可从Amgen，Inc.商购。45A8的制备和性质描述于美国专利申请公开号US2015/0064204A1中，其公开内容通过引用并入本文。45A8的氨基酸序列列于表32中。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含SEQ ID NO：340给出的重链和SEQ ID NO：341给出的轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别具有SEQ ID NO：340和SEQ ID NO：341所示序列的重链和轻链，或它们的抗原结合片段、Fab片段、单链可变片段(scFv)、变体或缀合物。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：340和SEQ ID NO：341所示序列至少99％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ IDNO：340和SEQ ID NO：341所示序列至少98％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：340和SEQ ID NO：341所示序列至少97％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：340和SEQ ID NO：341所示序列至少96％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：340和SEQID NO：341所示序列至少95％相同的重链和轻链。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含45A8的重链和轻链CDR或可变区(VR)。在一个实施方式中，GITR激动剂重链可变区(VH)包含SEQ ID NO：342所示序列，并且GITR激动剂轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO：343所示序列，及它们的保守性氨基酸取代。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：342和SEQ ID NO：343所示序列至少99％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：342和SEQID NO：343所示序列至少98％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：342和SEQ ID NO：343所示序列至少97％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：342和SEQ ID NO：343所示序列至少96％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：342和SEQ ID NO：343所示序列至少95％相同。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含：重链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述重链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：344、SEQ ID NO：345和SEQ ID NO：346所示的序列；以及轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：347、SEQ ID NO：348和SEQ IDNO：349所示的序列。
在一个实施方式中，GITR激动剂是药物监管机构批准的参考45A8的GITR激动剂生物仿制药单克隆抗体。在一个实施方式中，该生物仿制药单克隆抗体包含GITR抗体，与参考药物产品或参考生物产品相比，该GITR抗体包含与参考药物产品或参考生物产品的氨基酸序列具有至少97％序列同一性(例如，97％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列，并且该氨基酸序列包含一种以上翻译后修饰，其中参考药物产品或参考生物产品是45A8。在一些实施方式中，一种以上翻译后修饰选自糖基化、氧化、脱酰胺和截短中的一种以上。在一些实施方式中，生物仿制药是已授权或提交待授权的GITR激动剂抗体，其中，GITR激动剂抗体以与参考药物产品或参考生物产品的制剂不同的制剂提供，其中参考药物产品或参考生物产品是45A8。GITR激动剂抗体可以由药物监管机构(例如，美国FDA和/或欧盟的EMA)授权。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是45A8。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是45A8。
表32：45A8相关的GITR激动剂抗体的氨基酸序列
在一个优选的实施方式中，GITR激动剂是单克隆抗体46E11，或它的片段、衍生物、变体或生物仿制药。46E11可从Amgen，Inc.商购。46E11的制备和性质描述于美国专利申请公开号US2015/0064204A1中，其公开内容通过引用并入本文。46E11的氨基酸序列列于表33中。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含SEQ ID NO：350给出的重链和SEQ ID NO：351给出的轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别具有SEQ ID NO：350和SEQ ID NO：351所示序列的重链和轻链，或它们的抗原结合片段、Fab片段、单链可变片段(scFv)、变体或缀合物。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：350和SEQ ID NO：351所示序列至少99％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ IDNO：350和SEQ ID NO：351所示序列至少98％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：350和SEQ ID NO：351所示序列至少97％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：350和SEQ ID NO：351所示序列至少96％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：350和SEQID NO：351所示序列至少95％相同的重链和轻链。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含46E11的重链和轻链CDR或可变区(VR)。在一个实施方式中，GITR激动剂重链可变区(VH)包含SEQ ID NO：352所示序列，并且GITR激动剂轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO：353所示序列，及它们的保守性氨基酸取代。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：352和SEQ ID NO：353所示序列至少99％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：352和SEQID NO：353所示序列至少98％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：352和SEQ ID NO：353所示序列至少97％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：352和SEQ ID NO：353所示序列至少96％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：352和SEQ ID NO：353所示序列至少95％相同。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含：重链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述重链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：354、SEQ ID NO：355和SEQ ID NO：356所示的序列；以及轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：357、SEQ ID NO：358和SEQ IDNO：359所示的序列。
在一个实施方式中，GITR激动剂是药物监管机构批准的参考46E11的GITR激动剂生物仿制药单克隆抗体。在一个实施方式中，该生物仿制药单克隆抗体包含GITR抗体，与参考药物产品或参考生物产品相比，该GITR抗体包含与参考药物产品或参考生物产品的氨基酸序列具有至少97％序列同一性(例如，97％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列，并且该氨基酸序列包含一种以上翻译后修饰，其中参考药物产品或参考生物产品是46E11。在一些实施方式中，一种以上翻译后修饰选自糖基化、氧化、脱酰胺和截短中的一种以上。在一些实施方式中，生物仿制药是已授权或提交待授权的GITR激动剂抗体，其中，GITR激动剂抗体以与参考药物产品或参考生物产品的制剂不同的制剂提供，其中参考药物产品或参考生物产品是46E11。GITR激动剂抗体可以由药物监管机构(例如，美国FDA和/或欧盟的EMA)授权。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是46E11。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是46E11。
表33：46E11相关的GITR激动剂抗体的氨基酸序列
在一个优选的实施方式中，GITR激动剂是单克隆抗体48H12，或它的片段、衍生物、变体或生物仿制药。48H12可从Amgen，Inc.商购。48H12的制备和性质描述于美国专利申请公开号US2015/0064204A1中，其公开内容通过引用并入本文。48H12的氨基酸序列列于表34中。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含SEQ ID NO：360给出的重链和SEQ ID NO：361给出的轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别具有SEQ ID NO：360和SEQ ID NO：361所示序列的重链和轻链，或它们的抗原结合片段、Fab片段、单链可变片段(scFv)、变体或缀合物。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：360和SEQ ID NO：361所示序列至少99％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ IDNO：360和SEQ ID NO：361所示序列至少98％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：360和SEQ ID NO：361所示序列至少97％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：360和SEQ ID NO：361所示序列至少96％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：360和SEQID NO：361所示序列至少95％相同的重链和轻链。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含48H12的重链和轻链CDR或可变区(VR)。在一个实施方式中，GITR激动剂重链可变区(VH)包含SEQ ID NO：362所示序列，并且GITR激动剂轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO：363所示序列，及它们的保守性氨基酸取代。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：362和SEQ ID NO：363所示序列至少99％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：362和SEQID NO：363所示序列至少98％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：362和SEQ ID NO：363所示序列至少97％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：362和SEQ ID NO：363所示序列至少96％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：362和SEQ ID NO：363所示序列至少95％相同。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含：重链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述重链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：364、SEQ ID NO：365和SEQ ID NO：366所示的序列；以及轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：367、SEQ ID NO：368和SEQ IDNO：369所示的序列。
在一个实施方式中，GITR激动剂是药物监管机构批准的参考48H12的GITR激动剂生物仿制药单克隆抗体。在一个实施方式中，该生物仿制药单克隆抗体包含GITR抗体，与参考药物产品或参考生物产品相比，该GITR抗体包含与参考药物产品或参考生物产品的氨基酸序列具有至少97％序列同一性(例如，97％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列，并且该氨基酸序列包含一种以上翻译后修饰，其中参考药物产品或参考生物产品是48H12。在一些实施方式中，一种以上翻译后修饰选自糖基化、氧化、脱酰胺和截短中的一种以上。在一些实施方式中，生物仿制药是已授权或提交待授权的GITR激动剂抗体，其中，GITR激动剂抗体以与参考药物产品或参考生物产品的制剂不同的制剂提供，其中参考药物产品或参考生物产品是48H12。GITR激动剂抗体可以由药物监管机构(例如，美国FDA和/或欧盟的EMA)授权。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是48H12。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是48H12。
表34：48H12相关的GITR激动剂抗体的氨基酸序列
在一个优选的实施方式中，GITR激动剂是单克隆抗体48H7，或它的片段、衍生物、变体或生物仿制药。48H7可从Amgen，Inc.商购。48H7的制备和性质描述于美国专利申请公开号US2015/0064204A1中，其公开内容通过引用并入本文。48H7的氨基酸序列列于表35中。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含SEQ ID NO：370给出的重链和SEQ ID NO：371给出的轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别具有SEQ ID NO：370和SEQ ID NO：371所示序列的重链和轻链，或它们的抗原结合片段、Fab片段、单链可变片段(scFv)、变体或缀合物。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：370和SEQ ID NO：371所示序列至少99％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ IDNO：370和SEQ ID NO：371所示序列至少98％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：370和SEQ ID NO：371所示序列至少97％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：370和SEQ ID NO：371所示序列至少96％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：370和SEQID NO：371所示序列至少95％相同的重链和轻链。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含48H7的重链和轻链CDR或可变区(VR)。在一个实施方式中，GITR激动剂重链可变区(VH)包含SEQ ID NO：372所示序列，并且GITR激动剂轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO：373所示序列，及它们的保守性氨基酸取代。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：372和SEQ ID NO：373所示序列至少99％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：372和SEQID NO：373所示序列至少98％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：372和SEQ ID NO：373所示序列至少97％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：372和SEQ ID NO：373所示序列至少96％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：372和SEQ ID NO：373所示序列至少95％相同。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含：重链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述重链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：374、SEQ ID NO：375和SEQ ID NO：376所示的序列；以及轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：377、SEQ ID NO：378和SEQ IDNO：379所示的序列。
在一个实施方式中，GITR激动剂是药物监管机构批准的参考48H7的GITR激动剂生物仿制药单克隆抗体。在一个实施方式中，该生物仿制药单克隆抗体包含GITR抗体，与参考药物产品或参考生物产品相比，该GITR抗体包含与参考药物产品或参考生物产品的氨基酸序列具有至少97％序列同一性(例如，97％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列，并且该氨基酸序列包含一种以上翻译后修饰，其中参考药物产品或参考生物产品是48H7。在一些实施方式中，一种以上翻译后修饰选自糖基化、氧化、脱酰胺和截短中的一种以上。在一些实施方式中，生物仿制药是已授权或提交待授权的GITR激动剂抗体，其中，GITR激动剂抗体以与参考药物产品或参考生物产品的制剂不同的制剂提供，其中参考药物产品或参考生物产品是48H7。GITR激动剂抗体可以由药物监管机构(例如，美国FDA和/或欧盟的EMA)授权。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是48H7。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是48H7。
表35：48H7相关的GITR激动剂抗体的氨基酸序列
在一个优选的实施方式中，GITR激动剂是单克隆抗体49D9，或它的片段、衍生物、变体或生物仿制药。49D9可从Amgen，Inc.商购。49D9的制备和性质描述于美国专利申请公开号US2015/0064204A1中，其公开内容通过引用并入本文。49D9的氨基酸序列列于表36中。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含SEQ ID NO：380给出的重链和SEQ ID NO：381给出的轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别具有SEQ ID NO：380和SEQ ID NO：381所示序列的重链和轻链，或它们的抗原结合片段、Fab片段、单链可变片段(scFv)、变体或缀合物。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：380和SEQ ID NO：381所示序列至少99％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ IDNO：380和SEQ ID NO：381所示序列至少98％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：380和SEQ ID NO：381所示序列至少97％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：380和SEQ ID NO：381中显示的序列至少96％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：380和SEQ ID NO：381所示序列至少95％相同的重链和轻链。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含49D9的重链和轻链CDR或可变区(VR)。在一个实施方式中，GITR激动剂重链可变区(VH)包含SEQ ID NO：382所示序列，并且GITR激动剂轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO：383所示序列，及它们的保守性氨基酸取代。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：382和SEQ ID NO：383所示序列至少99％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：382和SEQID NO：383所示序列至少98％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：382和SEQ ID NO：383所示序列至少97％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：382和SEQ ID NO：383中显示的序列至少96％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：382和SEQ ID NO：383所示序列至少95％相同。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含：重链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述重链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：384、SEQ ID NO：385和SEQ ID NO：386所示序列，及它们的保守性氨基酸取代；以及轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：387、SEQ ID NO：388和SEQ ID NO：389所示的序列。
在一个实施方式中，GITR激动剂是药物监管机构批准的参考49D9的GITR激动剂生物仿制药单克隆抗体。在一个实施方式中，该生物仿制药单克隆抗体包含GITR抗体，与参考药物产品或参考生物产品相比，该GITR抗体包含与参考药物产品或参考生物产品的氨基酸序列具有至少97％序列同一性(例如，97％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列，并且该氨基酸序列包含一种以上翻译后修饰，其中参考药物产品或参考生物产品是49D9。在一些实施方式中，一种以上翻译后修饰选自糖基化、氧化、脱酰胺和截短中的一种以上。在一些实施方式中，生物仿制药是已授权或提交待授权的GITR激动剂抗体，其中，GITR激动剂抗体以与参考药物产品或参考生物产品的制剂不同的制剂提供，其中参考药物产品或参考生物产品是49D9。GITR激动剂抗体可以由药物监管机构(例如，美国FDA和/或欧盟的EMA)授权。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是49D9。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是49D9。
表36：49D9相关的GITR激动剂抗体的氨基酸序列
在一个优选的实施方式中，GITR激动剂是单克隆抗体49E2，或它的片段、衍生物、变体或生物仿制药。49E2可从Amgen，Inc.商购。49E2的制备和性质描述于美国专利申请公开号US2015/0064204A1中，其公开内容通过引用并入本文。49E2的氨基酸序列列于表37中。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含SEQ ID NO：390给出的重链和SEQ ID NO：391给出的轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别具有SEQ ID NO：390和SEQ ID NO：391所示序列的重链和轻链，或它们的抗原结合片段、Fab片段、单链可变片段(scFv)、变体或缀合物。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：390和SEQ ID NO：391所示序列至少99％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ IDNO：390和SEQ ID NO：391所示序列至少98％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：390和SEQ ID NO：391所示序列至少97％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：390和SEQ ID NO：391所示序列至少96％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：390和SEQID NO：391所示序列至少95％相同的重链和轻链。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含49E2的重链和轻链CDR或可变区(VR)。在一个实施方式中，GITR激动剂重链可变区(VH)包含SEQ ID NO：392所示序列，并且GITR激动剂轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO：393所示序列，及它们的保守性氨基酸取代。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：392和SEQ ID NO：393所示序列至少99％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：392和SEQID NO：393所示序列至少98％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：392和SEQ ID NO：393所示序列至少97％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：392和SEQ ID NO：393所示序列至少96％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：392和SEQ ID NO：393所示序列至少95％相同。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含：重链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述重链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：394、SEQ ID NO：395和SEQ ID NO：396所示的序列；以及轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：397、SEQ ID NO：398和SEQ IDNO：399所示的序列。
在一个实施方式中，GITR激动剂是药物监管机构批准的参考49E2的GITR激动剂生物仿制药单克隆抗体。在一个实施方式中，该生物仿制药单克隆抗体包含GITR抗体，与参考药物产品或参考生物产品相比，该GITR抗体包含与参考药物产品或参考生物产品的氨基酸序列具有至少97％序列同一性(例如，97％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列，并且该氨基酸序列包含一种以上翻译后修饰，其中参考药物产品或参考生物产品是49E2。在一些实施方式中，一种以上翻译后修饰选自糖基化、氧化、脱酰胺和截短中的一种以上。在一些实施方式中，生物仿制药是已授权或提交待授权的GITR激动剂抗体，其中，GITR激动剂抗体以与参考药物产品或参考生物产品的制剂不同的制剂提供，其中参考药物产品或参考生物产品是49E2。GITR激动剂抗体可以由药物监管机构(例如，美国FDA和/或欧盟的EMA)授权。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是49E2。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是49E2。
表37：49E2相关的GITR激动剂抗体的氨基酸序列
在一个优选的实施方式中，GITR激动剂是单克隆抗体48A9，或它的片段、衍生物、变体或生物仿制药。48A9可从Amgen，Inc.商购。48A9的制备和性质描述于美国专利申请公开号US2015/0064204A1中，其公开内容通过引用并入本文。48A9的氨基酸序列列于表38中。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含SEQ ID NO：400给出的重链和SEQ ID NO：401给出的轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别具有SEQ ID NO：400和SEQ ID NO：401所示序列的重链和轻链，或它们的抗原结合片段、Fab片段、单链可变片段(scFv)、变体或缀合物。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：400和SEQ ID NO：401所示序列至少99％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ IDNO：400和SEQ ID NO：401所示序列至少98％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：400和SEQ ID NO：401所示序列至少97％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：400和SEQ ID NO：401所示序列至少96％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：400和SEQID NO：401所示序列至少95％相同的重链和轻链。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含48A9的重链和轻链CDR或可变区(VR)。在一个实施方式中，GITR激动剂重链可变区(VH)包含SEQ ID NO：402所示序列，并且GITR激动剂轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO：403所示序列，及它们的保守性氨基酸取代。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：402和SEQ ID NO：403所示序列至少99％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：402和SEQID NO：403所示序列至少98％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：402和SEQ ID NO：403所示序列至少97％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：402和SEQ ID NO：403所示序列至少96％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：402和SEQ ID NO：403所示序列至少95％相同。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含：重链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述重链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：404、SEQ ID NO：405和SEQ ID NO：406所示的序列；以及轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：407、SEQ ID NO：408和SEQ IDNO：409所示的序列。
在一个实施方式中，GITR激动剂是药物监管机构批准的参考48A9的GITR激动剂生物仿制药单克隆抗体。在一个实施方式中，该生物仿制药单克隆抗体包含GITR抗体，与参考药物产品或参考生物产品相比，该GITR抗体包含与参考药物产品或参考生物产品的氨基酸序列具有至少97％序列同一性(例如，97％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列，并且该氨基酸序列包含一种以上翻译后修饰，其中参考药物产品或参考生物产品是48A9。在一些实施方式中，一种以上翻译后修饰选自糖基化、氧化、脱酰胺和截短中的一种以上。在一些实施方式中，生物仿制药是已授权或提交待授权的GITR激动剂抗体，其中，GITR激动剂抗体以与参考药物产品或参考生物产品的制剂不同的制剂提供，其中参考药物产品或参考生物产品是48A9。GITR激动剂抗体可以由药物监管机构(例如，美国FDA和/或欧盟的EMA)授权。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是48A9。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是48A9。
表38：48A9相关的GITR激动剂抗体的氨基酸序列
在一个优选的实施方式中，GITR激动剂是单克隆抗体5H7，或它的片段、衍生物、变体或生物仿制药。5H7可从Amgen，Inc.商购。5H7的制备和性质描述于美国专利申请公开号US2015/0064204A1中，其公开内容通过引用并入本文。5H7的氨基酸序列列于表39中。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含SEQ ID NO：410给出的重链和SEQ ID NO：411给出的轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别具有SEQ ID NO：410和SEQ ID NO：411所示序列的重链和轻链，或它们的抗原结合片段、Fab片段、单链可变片段(scFv)、变体或缀合物。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：410和SEQ ID NO：411所示序列至少99％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ IDNO：410和SEQ ID NO：411所示序列至少98％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：410和SEQ ID NO：411所示序列至少97％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：410和SEQ ID NO：411所示序列至少96％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：410和SEQID NO：411所示序列至少95％相同的重链和轻链。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含5H7的重链和轻链CDR或可变区(VR)。在一个实施方式中，GITR激动剂重链可变区(VH)包含SEQ ID NO：412所示序列，并且GITR激动剂轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO：413所示序列，及它们的保守性氨基酸取代。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：412和SEQ ID NO：413所示序列至少99％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：412和SEQID NO：413所示序列至少98％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：412和SEQ ID NO：413所示序列至少97％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：412和SEQ ID NO：413所示序列至少96％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：412和SEQ ID NO：413所示序列至少95％相同。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含：重链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述重链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：414、SEQ ID NO：415和SEQ ID NO：416所示的序列；以及轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：417、SEQ ID NO：418和SEQ IDNO：419所示的序列。
在一个实施方式中，GITR激动剂是药物监管机构批准的参考5H7的GITR激动剂生物仿制药单克隆抗体。在一个实施方式中，该生物仿制药单克隆抗体包含GITR抗体，与参考药物产品或参考生物产品相比，该GITR抗体包含与参考药物产品或参考生物产品的氨基酸序列具有至少97％序列同一性(例如，97％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列，并且该氨基酸序列包含一种以上翻译后修饰，其中参考药物产品或参考生物产品是5H7。在一些实施方式中，一种以上翻译后修饰选自糖基化、氧化、脱酰胺和截短中的一种以上。在一些实施方式中，生物仿制药是已授权或提交待授权的GITR激动剂抗体，其中，GITR激动剂抗体以与参考药物产品或参考生物产品的制剂不同的制剂提供，其中参考药物产品或参考生物产品是5H7。GITR激动剂抗体可以由药物监管机构(例如，美国FDA和/或欧盟的EMA)授权。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是5H7。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是5H7。
表39：5H7相关的GITR激动剂抗体的氨基酸序列
在一个优选的实施方式中，GITR激动剂是单克隆抗体7A10，或它的片段、衍生物、变体或生物仿制药。7A10可从Amgen，Inc.商购。7A10的制备和性质描述于美国专利申请公开号US2015/0064204A1中，其公开内容通过引用并入本文。7A10的氨基酸序列列于表40中。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含SEQ ID NO：420给出的重链和SEQ ID NO：421给出的轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别具有SEQ ID NO：420和SEQ ID NO：421所示序列的重链和轻链，或它们的抗原结合片段、Fab片段、单链可变片段(scFv)、变体或缀合物。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：420和SEQ ID NO：421所示序列至少99％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ IDNO：420和SEQ ID NO：421所示序列至少98％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：420和SEQ ID NO：421所示序列至少97％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：420和SEQ ID NO：421所示序列至少96％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：420和SEQID NO：421所示序列至少95％相同的重链和轻链。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含7A10的重链和轻链CDR或可变区(VR)。在一个实施方式中，GITR激动剂重链可变区(VH)包含SEQ ID NO：422所示序列，并且GITR激动剂轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO：423所示序列，及它们的保守性氨基酸取代。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：422和SEQ ID NO：423所示序列至少99％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：422和SEQID NO：423所示序列至少98％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：422和SEQ ID NO：423所示序列至少97％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：422和SEQ ID NO：423所示序列至少96％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：422和SEQ ID NO：423所示序列至少95％相同。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含：重链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述重链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：424、SEQ ID NO：425和SEQ ID NO：426所示的序列；以及轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：427、SEQ ID NO：428和SEQ IDNO：429所示的序列。
在一个实施方式中，GITR激动剂是药物监管机构批准的参考7A10的GITR激动剂生物仿制药单克隆抗体。在一个实施方式中，该生物仿制药单克隆抗体包含GITR抗体，与参考药物产品或参考生物产品相比，该GITR抗体包含与参考药物产品或参考生物产品的氨基酸序列具有至少97％序列同一性(例如，97％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列，并且该氨基酸序列包含一种以上翻译后修饰，其中参考药物产品或参考生物产品是7A10。在一些实施方式中，一种以上翻译后修饰选自糖基化、氧化、脱酰胺和截短中的一种以上。在一些实施方式中，生物仿制药是已授权或提交待授权的GITR激动剂抗体，其中，GITR激动剂抗体以与参考药物产品或参考生物产品的制剂不同的制剂提供，其中参考药物产品或参考生物产品是7A10。GITR激动剂抗体可以由药物监管机构(例如，美国FDA和/或欧盟的EMA)授权。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是7A10。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是7A10。
表40：7A10相关的GITR激动剂抗体的氨基酸序列
在一个优选的实施方式中，GITR激动剂是单克隆抗体9H6，或它们的片段、衍生物、变体或生物仿制药。9H6可从Amgen，Inc.商购。9H6的制备和性质描述于美国专利申请公开号US2015/0064204A1中，其公开内容通过引用并入本文。9H6的氨基酸序列列于表41中。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含SEQ ID NO：430给出的重链和SEQ ID NO：431给出的轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别具有SEQ ID NO：430和SEQ ID NO：431中所示序列的重链和轻链，或它们的抗原结合片段、Fab片段、单链可变片段(scFv)、变体或缀合物。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：430和SEQ ID NO：431所示序列至少99％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ IDNO：430和SEQ ID NO：431所示序列至少98％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：430和SEQ ID NO：431所示序列至少97％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：430和SEQ ID NO：431所示序列至少96％相同的重链和轻链。在一个实施方式中，GITR激动剂包含分别与SEQ ID NO：430和SEQID NO：431所示序列至少95％相同的重链和轻链。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含9H6的重链和轻链CDR或可变区(VR)。在一个实施方式中，GITR激动剂重链可变区(VH)包含SEQ ID NO：432所示序列，并且GITR激动剂轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO：433所示序列，及它们的保守性氨基酸取代。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：432和SEQ ID NO：433所示序列至少99％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：432和SEQID NO：433所示序列至少98％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：432和SEQ ID NO：433所示序列至少97％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：432和SEQ ID NO：433所示序列至少96％相同。在一个实施方式中，GITR激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：432和SEQ ID NO：433所示序列至少95％相同。
在一个实施方式中，GITR激动剂包含：重链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述重链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：434、SEQ ID NO：435和SEQ ID NO：436所示的序列；以及轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：437、SEQ ID NO：438和SEQ IDNO：439所示的序列。
在一个实施方式中，GITR激动剂是药物监管机构批准的参考9H6的GITR激动剂生物仿制药单克隆抗体。在一个实施方式中，该生物仿制药单克隆抗体包含GITR抗体，与参考药物产品或参考生物产品相比，该GITR抗体包含与参考药物产品或参考生物产品的氨基酸序列具有至少97％序列同一性(例如，97％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列，并且该氨基酸序列包含一种以上翻译后修饰，其中参考药物产品或参考生物产品是9H6。在一些实施方式中，一种以上翻译后修饰选自糖基化、氧化、脱酰胺和截短中的一种以上。在一些实施方式中，生物仿制药是已授权或提交待授权的GITR激动剂抗体，其中，GITR激动剂抗体以与参考药物产品或参考生物产品的制剂不同的制剂提供，其中参考药物产品或参考生物产品是9H6。GITR激动剂抗体可以由药物监管机构(例如，美国FDA和/或欧盟的EMA)授权。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是9H6。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是9H6。
表41：9H6相关的GITR激动剂抗体的氨基酸序列
在一个实施方式中，GITR激动剂是国际专利申请公开号WO2013/039954A1和WO2011/028683A1；美国专利申请公开号US2013/0108641A1、US2012/0189639A1和US2014/0348841A1；以及美国专利号7,812,135、8,388,967以及9,028,823所述的GITR激动剂，其公开内容通过引用并入本文。在一个实施方式中，GITR激动剂是激动性抗GITR单克隆抗体，其结构和制备描述于美国专利申请公开号US2015/0064204和国际专利申请公开号WO2015/031667A1(Amgen，Inc.)，其公开内容通过引用并入本文。在一个实施方式中，GITR激动剂是选自1D7、33C9、33F6、34G4、35B10、41E11、41G5、42A11、44C1、45A8、46E11、48H12、48H7、49D9、49E2、48A9、5H7、7A10和9H6的全人激动性抗GITR单克隆抗体。在一个实施方式中，GITR激动剂是全人激动性抗GITR单克隆抗体，它的氨基酸序列与选自1D7、33C9、33F6、34G4、35B10、41E11、41G5、42A11、44C1、45A8、46E11、48H12、48H7、49D9、49E2、48A9、5H7、7A10和9H6的抗体的序列同一性大于99％。在一个实施方式中，GITR激动剂是全人源激动性抗GITR单克隆抗体，它的氨基酸序列与选自1D7、33C9、33F6、34G4、35B10、41E11、41G5、42A11、44C1、45A8、46E11、48H12、48H7、49D9、49E2、48A9、5H7、7A10和9H6的抗体的序列同一性大于98％。在一个实施方式中，GITR激动剂是选自9H6v3、5H7v2、33C9v2、41G5v2和7A10v1的全人激动性抗GITR单克隆抗体(如美国专利申请公开号US2015/0064204A1所述，其公开内容通过引用并入本文)。在一个实施方式中，GITR激动剂是全人激动性抗GITR单克隆抗体，它选自44Crv1、45A8v1、49D9v1、49E2v1、48A9v1、5H7v1、5H7v2、5H7v3、5H7v5、5H7v7、5H7v9、5H7v10、5H7v11、5H7v13、5H7v14、5H7v17、5H7v18、5A10v1、7Avv2、7A10v3、7A10v4、7A10v5、9H6v1、9H6v2、9H6v3、9H6v4、9H6v5、9H6v6、33C9v1、33C9v2、33C9v3、33C9v4、33C9v5、41G5v1、41G5v2、41G5v3、41G5v4和41G5v5(如美国专利申请公开号US2015/0064204A1所述，其公开内容通过引用并入本文)。
在一个实施方式中，GITR激动剂是如结构I-A(C-末端Fc-抗体片段融合蛋白)或结构I-B(N-末端Fc-抗体片段融合蛋白)所示的GITR激动融合蛋白，或它们的片段、衍生物、缀合物、变体或生物仿制药。结构I-A和I-B的性质如上文和美国专利号9,359,420、9,340,599、8,921,519和8,450,460中所述，其公开内容通过引用并入本文。表6中给出了结构I-A的多肽结构域的氨基酸序列。Fc结构域优选包含完整的恒定结构域(SEQ ID NO：31的第17位至第230位氨基酸)、完整的铰链结构域(SEQ ID NO：31的第1位至第16位氨基酸)或部分铰链结构域(例如，SEQ ID NO：31的第4位至第16位氨基酸)。用于连接C-末端Fc抗体的优选接头可选自SEQ ID NO：32至SEQ ID NO：41给出的实施方式，包括适于融合其他多肽的接头。同样，结构I-B的多肽结构域的氨基酸序列在表7中给出。如果Fc抗体片段融合至TNRFSF融合蛋白的N-末端(如结构I-B所示)，则Fc模块的序列优选如SEQ ID NO：42所示，并且接头序列优选选自SEQ ID NO：43至SEQ ID NO：45所示的那些实施方式。
在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的GITR激动剂融合蛋白包含一个以上GITR结合结构域，该GITR结合结构域选自TRX518、6C8、36E5、3D6、61G6、6H6、61F6、1D8、17F10、35D8、49A1、9E5、31H6、2155、698、706、827、1649、1718、1D7、33C9、33F6、34G4、35B10、41E11、41G5、42A11、44C1、45A8、46E11、48H12、48H7、49D9、49E2、48A9、5H7、7A10、9H6的可变重链和可变轻链，及它们的片段、衍生物、缀合物、变体和生物仿制药。
在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的GITR激动剂融合蛋白包含一个以上GITR结合结构域，该GITR结合结构域包含GITRL序列(表42)。在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的GITR激动剂融合蛋白包含一个以上GITR结合结构域，该GITR结合结构域包含根据SEQID NO：440的序列。在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的GITR激动剂融合蛋白包含一个以上GITR结合结构域，该GITR结合结构域包含可溶性GITRL序列。在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的GITR激动剂融合蛋白包含一个以上GITR结合结构域，该GITR结合结构域包含根据SEQ ID NO：441的序列。
在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的GITR激动剂融合蛋白包含一个以上GITR结合结构域，该GITR结合结构域是包含VH和VL区的scFv结构域，该VH和VL区各自与上文表18至表39所示的GITR序列的VH和VL至少95％相同，其中，VH和VL结构域通过接头连接。
表42：另外的多肽结构域，其可用作融合蛋白(例如，结构I-A和I-B)中的GITR结合结构域
在一个实施方式中，GITR激动剂是GITR激动性单链融合多肽，其包含：(i)第一可溶性GITR结合结构域，(ii)第一肽接头，(iii)第二可溶性GITR结合结构域，(iv)第二肽接头，和(v)第三可溶性GITR结合结构域，还包含在N-末端和/或C-末端的其他结构域，并且其中，所述其他结构域是Fab或Fc片段结构域。在一个实施方式中，GITR激动剂是GITR激动性单链融合多肽，其包含：(i)第一可溶性GITR结合结构域，(ii)第一肽接头，(iii)第二可溶性GITR结合结构域，(iv)第二肽接头，和(v)第三可溶性GITR结合结构域，还包含在N-末端和/或C-末端的其他结构域，其中，所述其他结构域是Fab或Fc片段结构域，其中，各个可溶性GITR结合结构域缺少茎区(其有助于三聚化并提供与细胞膜的一定距离，但不是GITR结合结构域的一部分)，并且第一肽接头和第二肽接头独立地具有3至8个氨基酸的长度。
在一个实施方式中，GITR激动剂是GITR激动性单链融合多肽，其包含：(i)第一可溶性肿瘤坏死因子(TNF)超家族细胞因子结构域，(ii)第一肽接头，(iii)第二可溶性TNF超家族细胞因子结构域，(iv)第二肽接头，和(v)第三可溶性TNF超家族细胞因子结构域，其中，各个可溶性TNF超家族细胞因子结构域缺少茎区，第一肽接头和第二肽接头独立地具有3至8个氨基酸的长度，并且其中，TNF超家族细胞因子结构域是GITR结合结构域。
在一个实施方式中，GITR激动剂是GITR激动性scFv抗体，它包含与任何前述VL结构域连接的任何前述VH结构域。
HVEM(CD270)激动剂
在一个实施方式中，TNFRSF激动剂是HVEM激动剂。HVEM也称为CD270和TNFRSF14。可以使用本领域已知的任何HVEM激动剂。HVEM结合分子可以是能够与人或哺乳动物HVEM结合的单克隆抗体或融合蛋白。HVEM激动剂或HVEM结合分子可包含免疫球蛋白分子的任何同种型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、任何类别(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或任何亚类的免疫球蛋白重链。HVEM激动剂或HVEM结合分子可具有重链和轻链。如本文所用，术语“结合分子”还包括结合HVEM的抗体(包括全长抗体)、单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)、人抗体、人源化抗体或嵌合抗体和抗体片段(例如，Fab片段、F(ab′)片段、由Fab表达文库产生的片段、任何上述分子的表位结合片段)，以及工程化形式的抗体(例如，scFv分子)。在一个实施方式中，HVEM激动剂是抗原结合蛋白，它是全人抗体。在一个实施方式中，HVEM激动剂是抗原结合蛋白，它是人源化抗体。在一些实施方式中，用于本发明公开的方法和组合物的HVEM激动剂包括：抗HVEM抗体、人抗HVEM抗体、小鼠抗HVEM抗体、哺乳动物抗HVEM抗体、单克隆抗HVEM抗体、多克隆抗HVEM抗体、嵌合抗HVEM抗体、抗HVEM Adnectin、抗HVEM结构域抗体、单链抗HVEM片段、重链抗HVEM片段、轻链抗HVEM片段、抗HVEM融合蛋白，及它们的片段、衍生物、缀合物、变体或生物仿制药。在一个优选的实施方式中，HVEM激动剂是激动性抗HVEM人源化或全人单克隆抗体(即，来源于单细胞系的抗体)。
在一个优选的实施方式中，HVEM激动剂或HVEM结合分子也可以是融合蛋白。在一个优选的实施方式中，与激动性单克隆抗体(通常具有两个配体结合结构域)相比，多聚体HVEM激动剂(例如，三聚体或六聚体HVEM激动剂(具有三个或六个配体结合结构域))可以更好地诱导受体(HVEML)聚集和细胞内信号传导复合物形成。例如，如Gieffers等，Mol.Cancer Therapeutics，2013，12，2735-47所述，三聚体(三价)或六聚体(或六价)或更高聚体的融合蛋白包含三个TNFRSF结合结构域和IgG1-Fc并且可选地还连接两个以上的这些融合蛋白。
已知，激动性HVEM抗体和融合蛋白诱导强烈的免疫应答。在一个优选的实施方式中，HVEM激动剂是单克隆抗体或融合蛋白，它以足以降低毒性的方式与HVEM抗原特异性结合。在一些实施方式中，HVEM激动剂是激动性HVEM单克隆抗体或融合蛋白，它消除抗体依赖性细胞毒性(ADCC)(例如，NK细胞细胞毒性)。在一些实施方式中，HVEM激动剂是激动性HVEM单克隆抗体或融合蛋白，它消除抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)。在一些实施方式中，HVEM激动剂是激动性HVEM单克隆抗体或融合蛋白，它消除补体依赖性细胞毒性(CDC)。在一些实施方式中，HVEM激动剂是激动性HVEM单克隆抗体或融合蛋白，它消除Fc区功能性。
在一些实施方式中，HVEM激动剂的特征在于以高亲和力和激动活性与人HVEM(SEQID NO：442)结合。在一个实施方式中，HVEM激动剂是与人HVEM(SEQ ID NO：442)结合的结合分子。HVEM激动剂或结合分子可结合的HVEM抗原的氨基酸序列总结于表43中。
表43：HVEM(CD270)抗原的氨基酸序列
在一些实施方式中，该组合物、过程和方法包括HVEM激动剂，该HVEM激动剂：与人或鼠HVEM结合的KD为约100pM以下；与人或鼠HVEM结合的KD为约90pM以下；与人或鼠HVEM结合的KD为约80pM以下；与人或鼠HVEM结合的KD为约70pM以下；与人或鼠HVEM结合的KD为约60pM以下；与人或鼠HVEM结合的KD为约50pM以下；与人或鼠HVEM结合的KD为约40pM以下；或与人或鼠HVEM结合的KD为约30pM以下。
在一些实施方式中，该组合物、过程和方法包括HVEM激动剂，该HVEM激动剂：与人或鼠HVEM结合的kassoc为约7.5×105 1/M·s以上；与人或鼠HVEM结合的kassoc为约7.5×1051/M·s以上；与人或鼠HVEM结合的kassoc为约8×105 1/M·s以上；与人或鼠HVEM结合的kassoc为约8.5×105 1/M·s以上；与人或鼠HVEM结合的kassoc为约9×1051/M·s以上；与人或鼠HVEM结合的kassoc为约9.5×105 1/M·s以上；或与人或鼠HVEM结合的kassoc为约1×106 1/M·s以上。
在一些实施方式中，该组合物、过程和方法包括HVEM激动剂，该HVEM激动剂：与人或鼠HVEM结合的kdissoc为约2×10-5 1/s以下；与人或鼠HVEM结合的kdissoc为约2.1×10-5 1/s以下；与人或鼠HVEM结合的kdissoc为约2.2×10-5 1/s以下；与人或鼠HVEM结合的kdissoc为约2.3×10-5 1/s以下；与人或鼠HVEM结合的kdissoc为约2.4×10-5 1/s以下；与人或鼠HVEM结合的kdissoc为约2.5×10-5 1/s以下；与人或鼠HVEM结合的kdissoc为约2.6×10-5 1/s以下；与人或鼠HVEM结合的kdissoc为约2.7×10-5 1/s以下；与人或鼠HVEM结合的kdissoc为约2.8×10-5 1/s以下；与人或鼠HVEM结合的kdissoc为约2.9×10-5 1/s以下；或与人或鼠HVEM结合的kdissoc为约3×10-5 1/s以下。
在一些实施方式中，该组合物、过程和方法包括HVEM激动剂，该HVEM激动剂：与人或鼠HVEM结合的IC50为约10nM以下；与人或鼠HVEM结合的IC50为约9nM以下；与人或鼠HVEM结合的IC50为约8nM以下；与人或鼠HVEM结合的IC50为约7nM以下；与人或鼠HVEM结合的IC50为约6nM以下；与人或鼠HVEM结合的IC50为约5nM以下；与人或鼠HVEM结合的IC50为约4nM以下；与人或鼠HVEM结合的IC50为约3nM以下；与人或鼠HVEM结合的IC50为约2nM以下；或与人或鼠HVEM结合的IC50为约1nM以下。
在一个实施方式中，HVEM激动剂是国际专利申请公开号WO2009/007120A2和美国专利申请公开号US2016/0176941A1所述的HVEM激动剂，其各自的公开内容通过引用并入本文。
在一个实施方式中，HVEM激动剂是HVEM激动剂克隆REA247，其可从MiltenyiBiotech，Inc.(圣地亚哥，CA92121)商购。
在一个实施方式中，HVEM激动剂是如结构I-A(C-末端Fc-抗体片段融合蛋白)或结构I-B(N-末端Fc-抗体片段融合蛋白)所示的HVEM激动性融合蛋白，或它们的片段、衍生物、缀合物、变体或生物仿制药。结构I-A和I-B的性质如上文和美国专利号9,359,420、9,340,599、8,921,519和8,450,460中所述，其公开内容通过引用并入本文。表6中给出了结构I-A的多肽结构域的氨基酸序列。Fc结构域优选包含完整的恒定结构域(SEQ ID NO：31的第17位至第230位氨基酸)、完整的铰链结构域(SEQ ID NO：31的第1位至第16位氨基酸)或部分铰链结构域(例如，SEQ ID NO：31的第4位至第16位氨基酸)。用于连接C-末端Fc抗体的优选接头可选自SEQ ID NO：32至SEQ ID NO：41给出的实施方式，包括适于融合其他多肽的接头。同样，结构I-B的多肽结构域的氨基酸序列在表7中给出。如果Fc抗体片段融合至TRFSF融合蛋白的N-末端(如结构I-B所示)，则Fc模块的序列优选如SEQ ID NO：42所示，并且接头序列优选选自SEQ ID NO：43至SEQ ID NO：45所示的那些实施方式。
在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的HVEM激动剂融合蛋白包含一个以上HVEM结合结构域，该HVEM结合结构域包含LIGHT(HVEM配体)序列(表44)。在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的HVEM激动剂融合蛋白包含一个以上HVEM结合结构域，该HVEM结合结构域包含根据SEQ ID NO：443的序列。在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的HVEM激动剂融合蛋白包含一个以上HVEM结合结构域，该HVEM结合结构域包含可溶性LIGHT序列。在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的HVEM激动剂融合蛋白包含一个以上HVEM结合结构域，该HVEM结合结构域包含根据SEQ ID NO：444的序列。在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的HVEM激动剂融合蛋白包含一个以上HVEM结合结构域，该HVEM结合结构域包含根据SEQ ID NO：445的序列。在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的HVEM激动剂融合蛋白包含一个以上HVEM结合结构域，该HVEM结合结构域包含根据SEQ ID NO：446的序列。
在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的HVEM激动剂融合蛋白包含一个以上HVEM结合结构域，该HVEM结合结构域是包含VH和VL区的scFv结构域，其中，VH和VL结构域通过接头连接。
表44：另外的多肽结构域，其可用作融合蛋白(例如结构I-A和I-B)中的HVEM结合结
构域
在一个实施方式中，HVEM激动剂是HVEM激动性单链融合多肽，其包含：(i)第一可溶性HVEM结合结构域，(ii)第一肽接头，(iii)第二可溶性HVEM结合结构域，(iv)第二肽接头，和(v)第三可溶性HVEM结合结构域，还包含在N-末端和/或C-末端的其他结构域，并且其中，所述其他结构域是Fab或Fc片段结构域。在一个实施方式中，HVEM激动剂是HVEM激动性单链融合多肽，其包含：(i)第一可溶性HVEM结合结构域，(ii)第一肽接头，(iii)第二可溶性HVEM结合结构域，(iv)第二肽接头，和(v)第三可溶性HVEM结合结构域，还包含在N-末端和/或C-末端的其他结构域，其中，所述其他结构域是Fab或Fc片段结构域，其中，各个可溶性HVEM结合结构域缺少茎区(其有助于三聚化并提供与细胞膜的一定距离，但不是HVEM结合结构域的一部分)，并且第一肽接头和第二肽接头独立地具有3至8个氨基酸的长度。
在一个实施方式中，HVEM激动剂是HVEM激动性单链融合多肽，其包含：(i)第一可溶性肿瘤坏死因子(TNF)超家族细胞因子结构域，(ii)第一肽接头，(iii)第二可溶性TNF超家族细胞因子结构域，(iv)第二肽接头，和(v)第三可溶性TNF超家族细胞因子结构域，其中，各个可溶性TNF超家族细胞因子结构域缺少茎区，第一肽接头和第二肽接头独立地具有3至8个氨基酸的长度，并且其中，TNF超家族细胞因子结构域是HVEM结合结构域。
在一个实施方式中，HVEM激动剂是美国专利号7,118,742所述的HVEM激动剂，其公开内容通过引用并入本文。
CD95激动剂
在一个实施方式中，TNFRSF激动剂是CD95激动剂或CD95结合分子。CD95也称为TNFRSF6、Fas受体(FasR)和APO-1。可以使用本领域已知的任何CD95激动剂或CD95结合分子。CD95结合分子可以是能够与人或哺乳动物CD95结合的单克隆抗体或融合蛋白，并且可以以适合T细胞激动活性而非T细胞凋亡活性的浓度使用，如本文其他地方所述。CD95激动剂或CD95结合分子可包含免疫球蛋白分子的任何同种型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、任何类别(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或任何亚类的免疫球蛋白重链。CD95激动剂或CD95结合分子可具有重链和轻链。如本文所用，术语“结合分子”还包括结合CD95的抗体(包括全长抗体)、单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)、人抗体、人源化抗体或嵌合抗体和抗体片段(例如，Fab片段、F(ab′)片段、由Fab表达文库产生的片段、任何上述分子的表位结合片段)，以及工程化形式的抗体(例如，scFv分子)。在一个实施方式中，CD95激动剂是抗原结合蛋白，它是全人抗体。在一个实施方式中，CD95激动剂是抗原结合蛋白，它是人源化抗体。在一些实施方式中，用于本发明公开的方法和组合物的CD95激动剂包括：抗CD95抗体、人抗CD95抗体、小鼠抗CD95抗体、哺乳动物抗CD95抗体、单克隆抗CD95抗体、多克隆抗CD95抗体、嵌合抗CD95抗体、抗CD95 Adnectin、抗CD95结构域抗体、单链抗CD95片段、重链抗CD95片段、轻链抗CD95片段、抗CD95融合蛋白，及它们的片段、衍生物、缀合物、变体或生物仿制药。在一个优选的实施方式中，CD95激动剂是激动性抗CD95人源化或全人单克隆抗体(即，来源于单细胞系的抗体)。
在一个优选的实施方式中，CD95激动剂或CD95结合分子也可以是融合蛋白。在一个优选的实施方式中，与激动性单克隆抗体(通常具有两个配体结合结构域)相比，多聚体CD95激动剂(例如，三聚体或六聚体CD95激动剂(具有三个或六个配体结合结构域))可以更好地诱导受体(CD95L)聚集和细胞内信号传导复合物形成。例如，如Gieffers等，Mol.Cancer Therapeutics，2013，12，2735-47所述，三聚体(三价)或六聚体(或六价)或更高聚体的融合蛋白包含三个TNFRSF结合结构域和IgG1-Fc并且可选地还连接两个以上的这些融合蛋白。
已知，激动性CD95抗体和融合蛋白诱导强烈的免疫应答。在一个优选的实施方式中，CD95激动剂是单克隆抗体或融合蛋白，它以足以降低毒性的方式与CD95抗原特异性结合。在一些实施方式中，CD95激动剂是激动性CD95单克隆抗体或融合蛋白，它消除抗体依赖性细胞毒性(ADCC)(例如，NK细胞细胞毒性)。在一些实施方式中，CD95激动剂是激动性CD95单克隆抗体或融合蛋白，它消除抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)。在一些实施方式中，CD95激动剂是激动性CD95单克隆抗体或融合蛋白，它消除补体依赖性细胞毒性(CDC)。在一些实施方式中，CD95激动剂是激动性CD95单克隆抗体或融合蛋白，它消除Fc区功能性。
在一些实施方式中，CD95激动剂的特征在于以高亲和力和激动活性与人CD95(SEQID NO：447)结合。在一个实施方式中，CD95激动剂是与人CD95(SEQ ID NO：447)结合的结合分子。在一个实施方式中，CD95激动剂是与人CD95(SEQ ID NO：448)结合的结合分子。在一个实施方式中，CD95激动剂是与人CD95(SEQ ID NO：449)结合的结合分子。在一个实施方式中，CD95激动剂是与人CD95(SEQ ID NO：450)结合的结合分子。表45总结了CD95激动剂或结合分子可结合的CD95抗原的氨基酸序列。
表45：CD95抗原的氨基酸序列
在一些实施方式中，该组合物、过程和方法包括CD95激动剂，该CD95激动剂：与人或鼠CD95结合的KD为约100pM以下；与人或鼠CD95结合的KD为约90pM以下；与人或鼠CD95结合的KD为约80pM以下；与人或鼠CD95结合的KD为约70pM以下；与人或鼠CD95结合的KD为约60pM以下；与人或鼠CD95结合的KD为约50pM以下；与人或鼠CD95结合的KD为约40pM以下；或与人或鼠CD95结合的KD为约30pM以下。
在一些实施方式中，该组合物、过程和方法包括CD95激动剂，该CD95激动剂：与人或鼠CD95结合的kassoc为约7×105 1/M·s以上；与人或鼠CD95结合的kassoc为约7.5×105 1/M·s以上；与人或鼠CD95结合的kassoc为约8×105 1/M·s以上；与人或鼠CD95结合的kassoc为约8.5×105 1/M·s以上；与人或鼠CD95结合的kassoc为约9×105 1/M·s以上；与人或鼠CD95结合的kassoc为约9.5×105 1/M·s以上；或与人或鼠CD95结合的kassoc为约1×106 1/M·s以上。
在一些实施方式中，该组合物、过程和方法包括CD95激动剂，该CD95激动剂：与人或鼠CD95结合的kdissoc为约2×10-5 1/s以下；与人或鼠CD95结合的kdissoc为约2.1×10-5 1/s以下；与人或鼠CD95结合的kdissoc为约2.2×10-5 1/s以下；与人或鼠CD95结合的kdissoc为约2.3×10-5 1/s以下；与人或鼠CD95结合的kdissoc为约2.4×10-5 1/s以下；与人或鼠CD95结合的kdissoc为约2.5×10-5 1/s以下；与人或鼠CD95结合的kdissoc为约2.6×10-5 1/s以下；与人或鼠CD95结合的kdissoc为约2.7×10-5 1/s以下；与人或鼠CD95结合的kdissoc为约2.8×10-5 1/s以下；与人或鼠CD95结合的kdissoc为约2.9×10-5 1/s以下；或与人或鼠CD95结合的kdissoc为约3×10-5 1/s以下。
在一些实施方式中，该组合物、过程和方法包括CD95激动剂，该CD95激动剂：与人或鼠CD95结合的IC50为约10nM以下；与人或鼠CD95结合的IC50为约9nM以下；与人或鼠CD95结合的IC50为约8nM以下；与人或鼠CD95结合的IC50为约7nM以下；与人或鼠CD95结合的IC50为约6nM以下；与人或鼠CD95结合的IC50为约5nM以下；与人或鼠CD95结合的IC50为约4nM以下；与人或鼠CD95结合的IC50为约3nM以下；与人或鼠CD95结合的IC50为约2nM以下；或与人或鼠CD95结合的IC50为约1nM以下。
在一个优选的实施方式中，CD95激动剂是单克隆抗体E09，或它的片段、衍生物、变体或生物仿制药。E09的制备和性质描述于Chodorge等，Cell Death&Differ.，2012，19，1187-95。E09的氨基酸序列列于表46中。
在一个实施方式中，CD95激动剂包含E09的重链和轻链CDR或可变区(VR)。在一个实施方式中，CD95激动剂重链可变区(VH)包含SEQ ID NO：451所示序列，并且CD95激动剂轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO：452所示序列，及它们的保守性氨基酸取代。在一个实施方式中，CD95激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：451和SEQ ID NO：452所示序列至少99％相同。在一个实施方式中，CD95激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：451和SEQID NO：452所示序列至少98％相同。在一个实施方式中，CD95激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：451和SEQ ID NO：452所示序列至少97％相同。在一个实施方式中，CD95激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：451和SEQ ID NO：452所示序列至少96％相同。在一个实施方式中，CD95激动剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：451和SEQ ID NO：452所示序列至少95％相同。
在一个实施方式中，CD95激动剂包含：重链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述重链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：453、SEQ ID NO：454和SEQ ID NO：455所示的序列；以及轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：456、SEQ ID NO：457和SEQ IDNO：458所示的序列。
在一个实施方式中，CD95激动剂是药物监管机构批准的参考E09的CD95激动剂生物仿制药单克隆抗体。在一个实施方式中，该生物仿制药单克隆抗体包含CD95抗体，与参考药物产品或参考生物产品相比，该CD95抗体包含与参照的氨基酸序列具有至少97％序列同一性(例如，97％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列，并且该氨基酸序列包含一种以上翻译后修饰，其中参考药物产品或参考生物产品是E09。在一些实施方式中，一种以上翻译后修饰选自糖基化、氧化、脱酰胺和截短中的一种以上。在一些实施方式中，生物仿制药是经授权或提交待授权的CD95激动剂抗体，其中，CD95激动剂抗体以与参考药物产品或参考生物产品的制剂不同的制剂提供，其中参考药物产品或参考生物产品是E09。CD95激动剂抗体可以由药物管理机构(例如，美国FDA和/或欧盟的EMA)授权。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是E09。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是E09。
表46：CD95激动剂抗体E09的氨基酸序列
在一个实施方式中，CD95激动剂是国际专利申请公开号WO2009/007120A2和美国专利申请公开号US2016/0176941A1所述的CD95激动剂，其各自的公开内容通过引用并入本文。
在一个实施方式中，CD95激动剂是如结构I-A(C-末端Fc-抗体片段融合蛋白)或结构I-B(N-末端Fc-抗体片段融合蛋白)所示的CD95激动性融合蛋白，或它们的片段、衍生物、缀合物、变体或生物仿制药。结构I-A和I-B的性质如上文和美国专利号9,359,420、9,340,599、8,921,519和8,450,460中所述，其公开内容通过引用并入本文。表6中给出了结构I-A的多肽结构域的氨基酸序列。Fc结构域优选包含完整的恒定结构域(SEQ ID NO：31的第17位至第230位氨基酸)、完整的铰链结构域(SEQ ID NO：31的第1位至第16位氨基酸)或部分铰链结构域(例如，SEQ ID NO：31的第4位至第16位氨基酸)。用于连接C-末端Fc抗体的优选接头可选自SEQ ID NO：33至SEQ ID NO：41给出的实施方式，包括适于融合其他多肽的接头。同样，结构I-B的多肽结构域的氨基酸序列在表7中给出。如果Fc抗体片段融合至TNRFSF融合蛋白的N-末端(如结构I-B所示)，则Fc模块的序列优选如SEQ ID NO：42所示，并且接头序列优选选自SED ID NO：43至SEQ ID NO：45所示的那些实施方式。
在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的CD95激动剂融合蛋白包含一个以上CD95结合结构域，该CD95结合结构域包含CD95配体序列(表47)。在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的CD95激动剂融合蛋白包含一个以上CD95结合结构域，该CD95结合结构域包含根据SEQ ID NO：459的序列。在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的CD95激动剂融合蛋白包含一个以上CD95结合结构域，该CD95结合结构域包含可溶性LIGHT序列。在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的CD95激动剂融合蛋白包含一个以上CD95结合结构域，该CD95结合结构域包含根据SEQ ID NO：460的序列。在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的CD95激动剂融合蛋白包含一个以上CD95结合结构域，该CD95结合结构域包含根据SEQ ID NO：461的序列。在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的CD95激动剂融合蛋白包含一个以上CD95结合结构域，该CD95结合结构域包含根据SEQ ID NO：462的序列。
在一个实施方式中，根据结构I-A或I-B的CD95激动剂融合蛋白包含一个以上CD95结合结构域，该CD95结合结构域是包含VH和VL区的scFv结构域，其中，VH和VL结构域通过接头连接。
表47：另外的多肽结构域，其可用作融合蛋白(例如，结构I-A和I-B)中的CD95结合结构域
在一个实施方式中，CD95激动剂是CD95激动性单链融合多肽，其包含：(i)第一可溶性CD95结合结构域，(ii)第一肽接头，(iii)第二可溶性CD95结合结构域，(iv)第二肽接头，和(v)第三可溶性CD95结合结构域，还包含在N-末端和/或C-末端的其他结构域，并且其中，所述其他结构域是Fab或Fc片段结构域。在一个实施方式中，CD95激动剂是CD95激动性单链融合多肽，其包含：(i)第一可溶性CD95结合结构域，(ii)第一肽接头，(iii)第二可溶性CD95结合结构域，(iv)第二肽接头，和(v)第三可溶性CD95结合结构域，还包含在N-末端和/或C-末端的其他结构域，其中，所述其他结构域是Fab或Fc片段结构域，其中，各个可溶性CD95结合结构域缺少茎区(其有助于三聚化并提供与细胞膜的一定距离，但不是CD95结合结构域的一部分)，并且第一肽接头和第二肽接头独立地具有3至8个氨基酸的长度。
在一个实施方式中，CD95激动剂是CD95激动性单链融合多肽，其包含：(i)第一可溶性肿瘤坏死因子(TNF)超家族细胞因子结构域，(ii)第一肽接头，(iii)第二可溶性TNF超家族细胞因子结构域，(iv)第二肽接头，和(v)第三可溶性TNF超家族细胞因子结构域，其中，各个可溶性TNF超家族细胞因子结构域缺少茎区，第一肽接头和第二肽接头独立地具有3至8个氨基酸的长度，并且其中，TNF超家族细胞因子结构域是CD95结合结构域。
在一个实施方式中，CD95激动剂是CD95激动性scFv抗体，它包含与任何前述VL结构域连接的任何前述VH结构域。
扩增肿瘤浸润淋巴细胞的方法
在一个实施方式中，本发明提供了一种使用本公开的任何TNFRSF激动剂来扩增TIL群的方法，该方法包括如Jin等，J.Immunotherapy 2012，35，283-292所述的步骤，其公开内容通过引用并入本文。例如可将肿瘤置于酶培养基中并机械分离约1分钟。然后可将混合物在37℃、5％CO2中孵育30分钟，然后再次机械解离约1分钟。在37℃、5％CO2中孵育30分钟后，肿瘤可以第三次机械破碎约1分钟。如果在第三次机械破碎后存在大块组织，可以对样品施加1或2次另外的机械解离，进行或不进行在37℃、5％CO2中的另外30分钟孵育。在最终孵育结束时，如果细胞悬浮液含有大量红细胞或死细胞，可以使用Ficoll进行密度梯度分离以移除这些细胞。在24孔板(Costar 24孔细胞培养簇，平底；Corning Incorporated，Corning，纽约)中开始TIL培养，各个孔可以在2mL含有IL-2(6000IU/mL；Chiron Corp.，埃默里维尔，加利福尼亚州)的完全培养基(CM)中接种1×106个肿瘤消化细胞或大小约1-8mm3的一个肿瘤碎片。CM包含加有GlutaMAX的罗斯威尔公园纪念研究所(RPMI)1640缓冲液，补充有10％人AB血清、25mM Hepes和10mg/mL庆大霉素。可以在具有40mL容量和10cm2透气性硅底的透气性烧瓶(G-Rex 10；Wilson Wolf Manufacturing，新布莱顿)中开始培养，各个烧瓶可以在10-40mL含有IL-2的CM中装载10-40×106个活肿瘤消化细胞或5至30个肿瘤碎片。G-Rex 10和24孔板可以在37℃、5％CO2的湿润培养箱中培养，并且在培养开始后5天，可以移除一半的培养基并用新鲜的CM和IL-2替换，并且在第5天之后，可以每2至3天更换一半培养基。如本文其他地方所述，可以使用本公开的TNFRSF激动剂，使用T-175烧瓶和透气袋或透气性G-Rex烧瓶进行TIL的快速扩增方案(REP)。对于T-175烧瓶中的REP，可以将1×106个TIL悬浮于各个烧瓶中的150mL培养基中。可以以本文所述比率使用本公开的TNFRSF激动剂，在CM和AIM-V培养基的1：1混合物(50/50培养基)中培养TIL，培养基补充有3000IU/mL的IL-2和30ng/mL的抗CD3抗体(OKT-3)。T-175烧瓶可以在37℃、5％CO2中孵育。在第5天可以使用含有3000IU/mL IL-2的50/50培养基更换一半培养基。在第7天，可以将来自2个T-175烧瓶的细胞合并在一个3L袋中，并且可以将300mL含有5％人AB血清和3000IU/mL IL-2的AIM-V添加至300mL TIL悬浮液中。可以每天或每两天计数各个袋中的细胞数，并且可以添加新鲜培养基以使细胞计数保持在0.5至2×106个细胞/mL。对于具有100cm2透气性硅底的500mL容量烧瓶(例如G-Rex 100，Wilson Wolf Manufacturing，如本文其他地方所述)中的REP，可以以本文所述比率(例如1：100)使用TNFRSF激动剂在400mL的50/50培养基中培养5×106或10×106个TIL，培养基补充有3000IU/mL IL-2和30ng/mL抗CD3抗体(OKT-3)。G-Rex100烧瓶可以在37℃、5％CO2中孵育。在第5天，可以取出250mL上清液并置于离心瓶中并以1500rpm(491g)离心10分钟。可以用150mL含有3000IU/mL IL-2的新鲜50/50培养基重新悬浮获得的TIL沉淀，并加回G-Rex 100烧瓶中。当用G-Rex 100烧瓶连续扩增TIL时，在第7天，将各个G-Rex 100中的TIL悬浮于各个烧瓶中存在的300mL培养基中，并将细胞悬浮液分成三个100mL等分试样，其可以用于接种3个G-Rex 100烧瓶。然后可以向各个烧瓶中添加约150mL含有5％人AB血清和3000IU/mL IL-2的AIM-V。然后可以使G-Rex 100烧瓶在37℃、5％CO2下孵育，并且在4天后，可以向各个G-Rex 100烧瓶中添加150mL含有3000IU/mL IL-2的AIM-V。此后，可以在培养的第14天收获细胞，完成REP。
在一个实施方式中，扩增或治疗癌症的方法或过程包括从患者肿瘤样品获得TIL的步骤。可以使用本领域已知的方法获得患者肿瘤样品。例如，可以用酶促肿瘤消化物和来自锐剥离的肿瘤碎片(大小为约1至约8mm3)培养出TIL。此种肿瘤消化物可以通过在酶培养基(例如罗斯威尔公园纪念研究所(RPMI)1640缓冲液、2mM谷氨酸盐、10mcg/mL庆大霉素、30U/mL DNase和1.0mg/mL胶原酶)中孵育然后机械解离(例如使用组织解离剂)来产生。可以通过将肿瘤置于酶培养基中并将肿瘤机械解离约1分钟，然后在37℃、5％CO2中孵育30分钟，然后在上述条件下进行机械解离和孵育的重复循环，直至仅存在小的组织碎片，来产生肿瘤消化物。在该过程结束时，如果细胞悬浮液含有大量红细胞或死细胞，则可以使用FICOLL分支亲水性多糖进行密度梯度分离以除去这些细胞。可以使用本领域已知的替代方法，例如美国专利申请公开号2012/0244133A1所述的那些，其公开内容通过引用并入本文。任何前述方法都可以用于本文所述扩增TIL的方法或过程或者治疗癌症的方法的任何实施方式中。
在一个实施方式中，可以使用如前所述的T-175烧瓶和透气袋(Tran等，J.Immunother.2008，31，742-51；Dudley等，J.Immunother.2003，26，332-42)或透气性培养器皿(G-Rex烧瓶，可从Wilson Wolf Manufacturing Corporation，新布赖顿，明尼苏达，美国商购)进行TIL的快速扩增过程。对于T-175烧瓶中的TIL快速扩增，可以将悬浮于150mL培养基中的1×106个TIL添加至各个T-175烧瓶中。可以用TNFRSF激动剂来培养TIL，其中TIL比TNFRSF激动剂的比率为1：100，并且在CM与AFM-V培养基的1：1混合物中培养细胞，该混合物补充有3000IU(国际单位)/mL的IL-2和30ng/mL的抗CD3抗体(例如，OKT-3)。T-175烧瓶可以在37℃、5％CO2中孵育。可以在第5天使用含有3000IU/mL的IL-2的50/50培养基更换一半培养基。在第7天，将来自两个T-175烧瓶的细胞合并在3L袋中，并将300mL含有5％人AB血清和3000IU/mL IL-2的AIM V添加至300mL的TIL悬浮液中。每天或每两天计数各个袋中的细胞数，并添加新鲜培养基以使细胞计数保持为0.5×106至2.0×106个细胞/mL。
在一个实施方式中，对于在具有100cm2透气性硅底的500mL容量透气性烧瓶(G-Rex 100，可从Wilson Wolf Manufacturing Corporation，新布赖顿，明尼苏达，美国商购)中的TIL快速扩增，可以用TNFRSF激动剂在400mL的50/50培养基中培养5×106或10×106个TIL，该培养基补充有5％人AB血清、3000IU/mL的IL-2和30ng/mL的抗CD3(OKT-3)。可在37℃、5％CO2中孵育G-Rex 100烧瓶。在第5天，可以取出250mL上清液置于离心瓶中并以1500rpm(每分钟转数；491×g)离心10分钟。然后可以用150mL含有5％人AB血清、3000IU/mLIL-2的新鲜培养基重新悬浮浮TIL沉淀物，并将其加回到原G-Rex 100烧瓶中。当TIL在G-Rex 100烧瓶中连续扩增时，在第7天，将各个G-Rex100中的TIL悬浮于各个烧瓶中存在的300mL培养基中，并且可以将细胞悬浮液分成三个100mL等分试样，可用于接种三个G-Rex100烧瓶。然后可以向每个烧瓶中加入150mL含有5％人AB血清和3000IU/mL IL-2的AIM-V。G-Rex 100烧瓶可以在37℃、5％CO2中孵育，4天后，可以向每个G-Rex 100烧瓶中加入150mL含有3000IU/mL IL-2的AIM-V。可以在培养的第14天收获细胞。
在一个实施方式中，TIL可以按如下制备。在完全培养基(CM)中培养2mm3肿瘤碎片，该CM包含AIM-V培养基(Invitrogen Life Technologies，卡尔斯巴德，加利福尼亚州)，该AIM-V培养基补充有2mM谷氨酰胺(Mediatech，Inc.，马纳萨斯，弗吉尼亚州)、100U/mL青霉素(Invitrogen Life Technologies)、100μg/mL链霉素(Invitrogen LifeTechnologies)、5％热灭活的人AB血清(Valley Biomedical，Inc.，温彻斯特，弗吉尼亚州)和600IU/mL rhIL-2(Chiron，埃默里维尔，加利福尼亚州)。对于实体瘤的酶消化，将肿瘤标本切成小块后加至RPMI-1640培养基中，洗涤，在15～22℃下以800rpm离心5分钟，并重新悬浮于酶消化缓冲液(含有0.2mg/mL胶原酶和30U/mL DNase的RPMI-1640培养基)中，然后在室温下旋转过夜。由碎片产生的TIL可以在CM中生长3至4周，并在加有10％二甲基亚砜(DMSO)的热灭活的HAB血清中新鲜扩增或冷冻保存，并储存于-180℃下直至研究时。将从腹水收集物获得的肿瘤相关淋巴细胞(TAL)以3×106个细胞/孔接种于24孔板的CM中。每隔一天使用低功率倒置显微镜检查TIL生长情况。
在一个实施方式中，本发明包括扩增肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的方法，该方法包括使包含至少一种TIL的TIL群与本文所述的TNFRSF激动剂接触，其中，所述TNFRSF激动剂包含至少一种共刺激配体，该共刺激配体与TIL的细胞表面上表达的共刺激分子特异性结合，其中，所述共刺激分子与所述共刺激配体的结合诱导TIL的增殖，从而特异性地扩增TIL。
在一个实施方式中，本发明提供了一种扩增肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群的方法，该方法包括在细胞培养基中使TIL群与一种以上TNFRSF激动剂接触的步骤。
在一个实施方式中，本发明提供了一种扩增肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群的方法，该方法包括在细胞培养基中使TIL群与一种以上TNFRSF激动剂接触的步骤，其中，该一种以上TNFRSF激动剂在细胞培养基中的浓度独立地选自：50ng/mL、100ng/mL、500ng/mL、1μg/mL、5μg/mL，10μg/mL、20μg/mL、30μg/mL、40μg/mLmL、50μg/mL、60μg/mL、70μg/mL、80μg/mL、90μg/mL和100μg/mL。
在一个实施方式中，本发明提供了一种扩增肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群的方法，该方法包括在细胞培养基中使TIL群与一种以上TNFRSF激动剂接触的步骤，其中，细胞培养基还包含初始浓度为约3000IU/mL的IL-2和初始浓度为约30ng/mL的OKT-3抗体。
在一个实施方式中，本发明提供了一种扩增肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群的方法，该方法包括在细胞培养基中使TIL群与一种以上TNFRSF激动剂接触的步骤，其中，细胞培养基还包含初始浓度为约3000IU/mL的IL-2和初始浓度为约30ng/mL的OKT-3抗体，并且其中，该一种以上TNFRSF激动剂包含4-1BB激动剂。
在一个实施方式中，本发明提供了一种扩增肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群的方法，该方法包括在细胞培养基中使TIL群与一种以上TNFRSF激动剂接触的步骤，其中，细胞培养基还包含初始浓度为约3000IU/mL的IL-2和初始浓度为约30ng/mL的OKT-3抗体，并且其中，该一种以上TNFRSF激动剂包含OX40激动剂。
在一个实施方式中，本发明提供了一种扩增肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群的方法，该方法包括在细胞培养基中使TIL群与一种以上TNFRSF激动剂接触的步骤，其中，细胞培养基还包含初始浓度为约3000IU/mL的IL-2和初始浓度为约30ng/mL的OKT-3抗体，并且其中，该一种以上TNFRSF激动剂包含4-1BB激动剂和OX40激动剂。
在一个实施方式中，本发明提供了一种扩增肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群的方法，该方法包括在细胞培养基中使TIL群与一种以上TNFRSF激动剂接触的步骤，其中，细胞培养基还包含初始浓度为约3000IU/mL的IL-2和初始浓度为约30ng/mL的OKT-3抗体，并且其中，该一种以上TNFRSF激动剂包含CD27激动剂。
在一个实施方式中，本发明提供了一种扩增肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群的方法，该方法包括在细胞培养基中使TIL群与一种以上TNFRSF激动剂接触的步骤，其中，细胞培养基还包含初始浓度为约3000IU/mL的IL-2和初始浓度为约30ng/mL的OKT-3抗体，并且其中，该一种以上TNFRSF激动剂包含GITR激动剂。
在一个实施方式中，本发明提供了一种扩增肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群的方法，该方法包括在细胞培养基中使TIL群与一种以上TNFRSF激动剂接触的步骤，其中，细胞培养基还包含初始浓度为约3000IU/mL的IL-2和初始浓度为约30ng/mL的OKT-3抗体，并且其中，该一种以上TNFRSF激动剂包含HVEM激动剂。
在一个实施方式中，本发明提供了一种扩增肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群的方法，该方法包括在细胞培养基中使TIL群与一种以上TNFRSF激动剂接触的步骤，其中，细胞培养基还包含初始浓度为约3000IU/mL的IL-2和初始浓度为约30ng/mL的OKT-3抗体，并且其中，该一种以上TNFRSF激动剂包含CD95激动剂。
在一个实施方式中，本发明提供了一种扩增肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群的方法，该方法包括在细胞培养基中使TIL群与一种以上TNFRSF激动剂接触的步骤，其中，在7天的时间，细胞培养基中TIL群被扩增至少50倍。
在一个实施方式中，本发明提供了一种扩增肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群的方法，该方法包括在细胞培养基中使TIL群与一种以上TNFRSF激动剂接触的步骤，其中，在7天的时间，细胞培养基中TIL群被扩增至少50倍，并且其中，扩增使用透气性容器进行。
在一个实施方式中，可以通过任何合适的方法，使用本公开的TNFRSF激动剂在透气性容器中进行REP。例如，可以在白细胞介素2(IL-2)或白细胞介素-15(IL-15)存在下，使用非特异性T细胞受体刺激快速扩增TIL。非特异性T细胞受体刺激可包括，例如，抗CD3抗体(如约30ng/mL的OKT-3，一种单克隆抗CD3抗体)(可从Ortho-McNeil，Raritan，新泽西或Miltenyi Biotech，Aubum，加利福尼亚州商购)或UHCT-1(可从BioLegend，圣地亚哥，加利福尼亚州，美国商购)。可选地在T细胞生长因子如300IU/mL IL-2或IL-15存在下，可以通过在体外用一种以上癌症抗原(包括其抗原性部分，例如表位)进一步刺激TIL来快速扩增TIL，该抗原可任选地由载体表达，例如人白细胞抗原A2(HLA-A2)结合肽，如0.3μΜMART-1：26-35(27L)或gpl 00：209-217(210M)。其他合适的抗原可包括例如NY-ESO-1、TRP-1、TRP-2、酪氨酸酶癌抗原、MAGE-A3、SSX-2和VEGFR2，或其抗原性部分。TIL也可以通过用表达HLA-A2的抗原呈递细胞上脉冲的相同癌症抗原再刺激而快速扩增。或者，可以用例如经辐照的自体淋巴细胞或用经辐照的HLA-A2+同种异体淋巴细胞和IL-2进一步再刺激TIL。
在一个实施方式中，用于扩增TIL的方法可包括使用约5000mL至约25000mL的细胞培养基、约5000mL至约10000mL的细胞培养基，或约5800mL至约8700mL的细胞培养基。在一个实施方式中，用于扩增TIL的方法可包括使用约1000mL至约2000mL的细胞培养基、约2000mL至约3000mL的细胞培养基、约3000mL至约4000mL的细胞培养基、约4000mL至约5000mL的细胞培养基、约5000mL至约6000mL的细胞培养基、约6000mL至约7000mL的细胞培养基、约7000mL至约8000mL的细胞培养基、约8000mL至约9000mL的细胞培养基、约9000mL至约10000mL的细胞培养基、约10000mL至约15000mL的细胞培养基、约15000mL至约20000mL的细胞培养基，或约20000mL至约25000mL的细胞培养基。在一个实施方式中，使用不超过一种类型的细胞培养基扩增TIL的数量。可以使用任何合适的细胞培养基，例如AIM-V细胞培养基(L-谷氨酰胺，50μM硫酸链霉素和10μM硫酸庆大霉素)细胞培养基(Invitrogen，卡尔斯巴德，加利福尼亚州)。在这方面，本发明的方法有利地减少了扩增TIL数量所需的培养基含量和培养基的种类数量。在一个实施方式中，扩增TIL的数量可以包括以不超过每三天一次或每四天一次的频率喂食细胞。扩增透气性容器中的细胞数量通过降低扩增细胞所需的喂食频率而简化了扩增细胞数量所需步骤。
在一个实施方式中，快速扩增使用透气性容器进行。此类实施方式允许细胞群从约5×105个细胞/cm2扩增至在10×106与30×106个细胞/cm2之间。在一个实施方式中，此种扩增在不进料的条件下发生。在一个实施方式中，只要培养基在透气性烧瓶中位于约10cm的高度，此种扩增就不进行进料。在一个实施方式中，没有进料但是添加一种以上细胞因子。在一个实施方式中，细胞因子可以作为丸剂添加而无需将细胞因子与培养基混合。此种容器、装置和方法在本领域中是已知的并且已经用于扩增TIL，并且包括在美国专利申请公开号US2014/0377739A1、国际专利申请公开WO2014/210036A1、美国专利申请公开号US2013/0115617Al、国际公开WO2013/188427A1、美国专利申请公开号US2011/0136228A1、美国专利号8,809,050、国际专利申请公开WO2011/072088A2、美国专利申请公开号US2016/0208216A1、美国专利申请公开号US2012/0244133A1、国际专利申请公开WO2012/129201A1、美国专利申请公开号US2013/0102075A1，美国专利号8,956,860，国际专利申请公开WO2013/173835A1和美国专利申请公开号US2015/0175966Al所述的那些，其公开内容通过引用并入本文。这些方法也描述于Jin等，J.Immunotherapy2012，35，283-292，其其公开内容通过引用并入本文。
在一个实施方式中，透气性容器是G-Rex 10烧瓶(Wilson Wolf ManufacturingCorporation，新布赖顿，明尼苏达州，美国)。在一个实施方式中，透气性容器包括10cm2的透气性培养表面。在一个实施方式中，透气性容器包括40mL的细胞培养基容量。在一个实施方式中，透气性容器在2次培养基交换后提供1亿至3亿个TIL。
在一个实施方式中，透气性容器是G-Rex 100烧瓶(Wilson Wolf ManufacturingCorporation，新布赖顿，明尼苏达州，美国)。在一个实施方式中，透气性容器包括100cm2的透气性培养表面。在一个实施方式中，透气性容器包括450mL的细胞培养基容量。在一个实施方式中，透气性容器在2次培养基交换后提供10亿至30亿个TIL。
在一个实施方式中，透气性容器是G-Rex 100M烧瓶(Wilson Wolf ManufacturingCorporation，新布赖顿，明尼苏达州，美国)。在一个实施方式中，透气性容器包括100cm2的透气性培养表面。在一个实施方式中，透气性容器包括1000mL细胞培养基容量。在一个实施方式中，透气性容器在无需更换培养基的情况下提供10亿至30亿个TIL。
在一个实施方式中，透气性容器是G-Rex 100L烧瓶(Wilson Wolf ManufacturingCorporation，新布赖顿，明尼苏达州，美国)。在一个实施方式中，透气性容器包括100cm2的透气性培养表面。在一个实施方式中，透气性容器包括2000mL细胞培养基容量。在一个实施方式中，透气性容器在无需更换培养基的情况下提供10亿至30亿个TIL。
在一个实施方式中，透气性容器是G-Rex 24孔板(Wilson Wolf ManufacturingCorporation，新布赖顿，明尼苏达州，美国)。在一个实施方式中，透气性容器包括具有孔的板，其中每个孔包括2cm2的透气性培养表面。在一个实施方式中，透气性容器包括具有孔的板，其中每个孔包括8mL细胞培养基容量。在一个实施方式中，透气性容器在2次培养基更换后提供每孔2千万至6千万个细胞。
在一个实施方式中，透气性容器是G-Rex 6孔板(Wilson Wolf ManufacturingCorporation，新布赖顿，明尼苏达州，美国)。在一个实施方式中，透气性容器包括具有孔的板，其中每个孔包括10cm2的透气性培养表面。在一个实施方式中，透气性容器包括具有孔的板，其中每个孔包括40mL细胞培养基容量。在一个实施方式中，透气性容器在2次培养基更换后提供每孔1亿至3亿个细胞。
在一个实施方式中，第一和/或第二透气性容器中的细胞培养基未经过滤。使用未过滤的细胞培养基可以简化扩增细胞数量所需步骤。在一个实施方式中，第一和/或第二透气性容器中的细胞培养基没有β-巯基乙醇(BME)。
在一个实施方式中，该方法的持续时间包括从哺乳动物获得肿瘤组织样品；在含有细胞培养基的第一透气性容器中培养肿瘤组织样品；从肿瘤组织样品中获得TIL；在含有细胞培养基的第二透气性容器中，使用TNFRSF激动剂扩增TIL的数量持续约14天至约42天(例如约28天)。
在一个实施方式中，在快速扩增中，TIL比TNFRSF激动剂(细胞数比摩尔数)的比率为约1：25、约1：50、约1：100、约1：125、约1：150、约1：175、约1：200、约1：225、约1：250、约1：275、约1：300、约1：325、约1：350、约1：500、约1：1000，或约1：10000。在一个实施方式中，在快速扩增中，TIL比TNFRSF激动剂的比率在1：50至1：300之间。在一个实施方式中，在快速扩增中，TIL比TNFRSF激动剂的比率在1：100至1：200之间。
在一个实施方式中，TIL与TNFRSF激动剂的比率(TIL：TNFRSF激动剂，细胞数：摩尔数)选自：1：5、1：10、1：15、1：20、1：25、1：30、1：35、1：40、1：45、1：50、1：55、1：60、1：65、1：70、1：75、1：80、1：85、1：90、1：95、1：100、1：105、1：110、1：115、1：120、1：125、1：130、1：135、1：140、1：145、1：150、1：155、1：160、1：165、1：170、1：175、1：180、1：185、1：190、1：195、1：200、1：225、1：250、1：275、1：300、1：350、1：400、1：450、1：500、1：1000、1：5000、1：10000和1：50000。
在一个实施方式中，在透气性容器中扩增TIL。使用本领域已知的方法、组分和装置，包括在美国专利申请公开号US2005/0106717A1所述的那些(其公开内容通过引用并入本文)，使用透气性容器，用PBMC来扩增TIL。在一个实施方式中，TIL在透气袋中扩增。在一个实施方式中，使用细胞扩增系统扩增TIL，该细胞扩增系统在透气袋中扩增TIL，例如Xuri细胞扩增系统W25(Xuri Cell Expansion System W25)(GE Healthcare)。在一个实施方式中，使用细胞扩增系统扩增TIL，该细胞扩增系统在透气袋中扩增TIL，例如WAVE生物反应器系统，也称为Xuri细胞扩增系统W5(GE Healthcare)。在一个实施方式中，细胞扩增系统包括透气性细胞袋，其体积选自：约100mL、约200mL、约300mL、约400mL、约500mL、约600mL、约700mL、约800mL、约900mL、约1L、约2L、约3L、约4L、约5L、约6L、约7L、约8L、约9L、约10L、约11L、约12L、约13L、约14L、约15L、约16L、约17L、约18L、约19L、约20L、约25L和约30L。在一个实施方式中，细胞扩增系统包括透气性细胞袋，其体积范围选自：50至150mL、150至250mL、250至350mL、350至450mL、450至550mL、550至650mL、650至750mL、750至850mL、850至950mL，以及950至1050mL。在一个实施方式中，细胞扩增系统包括透气性细胞袋，其体积范围选自：1L至2L、2L至3L、3L至4L、4L至5L、5L至6L、6L至7L、7L至8L、8L至9L、9L至10L、10L至11L、11L至12L、12L至13L、13L至14L、14L至15L、15L至16L、16L至17L、17L至18L、18L至19L，以及19L至20L。在一个实施方式中，细胞扩增系统包括透气性细胞袋，其体积范围选自：0.5L至5L、5L至10L、10L至15L、15L至20L、20L至25L，以及25L至30L。在一个实施方式中，细胞扩增系统使用的摇摆时间(rocketing time)为约30分钟、约1小时、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约24小时、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天、约7天、约8天、约9天、约10天、约11天、约12天、约13天、约14天、约15天、约16天、约17天、约18天、约19天、约20天、约21天、约22天、约23天、约24天、约25天、约26天、约27天和约28天。在一个实施方式中，细胞扩增系统使用的摇摆时间为30分钟至1小时、1小时至12小时、12小时至1天、1天至7天、7天至14天、14天至21天，以及21天至28天。在一个实施方式中，细胞扩增系统使用的摇摆速率(rocketing rate)为约2次摇摆(rocks)/分钟、约5次摇摆/分钟、约10次摇摆/分钟、约20次摇摆/分钟、约30次摇摆/分钟和约40次摇摆/分钟。在一个实施方式中，细胞扩增系统使用的摇摆速率为2次摇摆/分钟至5次摇摆/分钟、5次摇摆/分钟至10次摇摆/分钟、10次摇摆/分钟至20次摇摆/分钟、20次摇摆/分钟至30次摇摆/分钟、30次摇摆/分钟至40次摇摆/分钟。在一个实施方式中，细胞扩增系统使用的摇摆角度为约2°、约3°、约4°、约5°、约6°、约7°、约8°、约9°、约10°、约11°和约12°。在一个实施方式中，细胞扩增系统使用的摇摆角度为2°至3°、3°至4°、4°至5°、5°至6°、6°至7°、7°至8°、8°至9°、9°至10°、10°至11°、11°至12°。
在一个实施方式中，使用TNFRSF激动剂扩增TIL的方法还包括选择肿瘤反应性优异的TIL的步骤。可以使用本领域已知的任何选择方法。例如，美国专利申请公开号2016/0010058A1所述的方法(其公开内容通过引用并入本文)可用于选择肿瘤反应性优异的TIL。
在一个实施方式中，细胞培养基还包含OKT-3抗体。在一个优选的实施方式中，细胞培养基包含约30ng/mL的OKT-3抗体。在一个实施方式中，细胞培养基包含约0.1ng/mL、约0.5ng/mL、约1ng/mL、约2.5ng/mL、约5ng/mL、约7.5ng/mL、约10ng/mL、约15ng/mL、约20ng/mL、约25ng/mL、约30ng/mL、约35ng/mL、约40ng/mL、约50ng/mL、约60ng/mL、约70ng/mL、约80ng/mL、约90ng/mL、约100ng/mL、约200ng/mL、约500ng/mL和约1μg/mL的OKT-3抗体。在一个实施方式中，细胞培养基包含0.1ng/mL至1ng/mL、1ng/mL至5ng/mL、5ng/mL至10ng/mL、10ng/mL至20ng/mL、20ng/mL至30ng/mL、30ng/mL至40ng/mL、40ng/mL至50ng/mL，或50ng/mL至100ng/mL的OKT-3抗体。在一个实施方式中，细胞培养基包含10ng/mL至60ng/mL的OKT-3抗体。
在一个实施方式中，细胞培养基还包含IL-2。在一个优选的实施方式中，细胞培养基包含约3000IU/mL的IL-2。在一个实施方式中，细胞培养基包含约500IU/mL、约700IU/mL、约800IU/mL、约1000IU/mL、约1100IU/mL、约1200IU/mL、约1500IU/mL、约2000IU/mL、约2500IU/mL、约3000IU/mL、约3500IU/mL、约4000IU/mL、约4500IU/mL、约5000IU/mL、约5500IU/mL、约6000IU/mL、约6500IU/mL、约7000IU/mL、约7500IU/mL，或约8000IU/mL的IL-2。在一个实施方式中，细胞培养基包含500至1000IU/mL、800至1200IU/mL、1000至2000IU/mL、2000至3000IU/mL、3000至4000IU/mL、4000至5000IU/mL、5000至6000IU/mL、6000至7000IU/mL、7000至8000IU/mL，或8000IU/mL的IL-2。在一个实施方式中，细胞培养基包含10至6000IU/mL的IL-2。在一个实施方式中，细胞培养基包含500至2000IU/mL的IL-2。在一个实施方式中，细胞培养基包含800至1100IU/mL的IL-2。
在一个实施方式中，例如，如国际专利申请公开号WO2015/189356A1和WO2015/189356A1所述(二者的公开内容均通过引用并入本文)，细胞培养基还包含IL-15。在一个实施方式中，细胞培养基包含约0.1ng/mL、约0.5ng/mL、约1ng/mL、约2.5ng/mL、约5ng/mL、约7.5ng/mL、约10ng/mL、约15ng/mL、约20ng/mL、约25ng/mL、约30ng/mL、约35ng/mL、约40ng/mL、约50ng/mL、约60ng/mL、约70ng/mL、约80ng/mL、约90ng/mL、约100ng/mL、约200ng/mL、约500ng/mL，或约1μg/mL的IL-15。在一个实施方式中，细胞培养基包含0.1ng/mL至100ng/mL、2ng/mL至50ng/mL，或5ng/mL至25ng/mL的IL-15。在一个实施方式中，细胞培养基包含10ng/mL至20ng/mL、20ng/mL至30ng/mL、30ng/mL至40ng/mL、40ng/mL至50ng/mL、50ng/mL至60ng/mL、60ng/mL至70ng/mL、70ng/mL至80ng/mL、80ng/mL至90，或90ng/mL至100ng/mL的IL-15。
在一个实施方式中，例如，如国际专利申请公开号WO2015/189356A1和WO2015/189356A1所述(二者的公开内容均通过引用并入本文)，细胞培养基还包含IL-21。在一个实施方式中，细胞培养基包含约0.1ng/mL、约0.5ng/mL、约1ng/mL、约2.5ng/mL、约5ng/mL、约7.5ng/mL、约10ng/mL、约15ng/mL、约20ng/mL、约25ng/mL、约30ng/mL、约35ng/mL、约40ng/mL、约50ng/mL、约60ng/mL、约70ng/mL、约80ng/mL、约90ng/mL、约100ng/mL、约200ng/mL、约500ng/mL，或约1μg/mL的IL-21。在一个实施方式中，细胞培养基包含0.1ng/mL至100ng/mL、2ng/mL至50ng/mL，或5ng/mL至25ng/mL的IL-21。在一个实施方式中，细胞培养基包含10ng/mL至20ng/mL、20ng/mL至30ng/mL、30ng/mL至40ng/mL、40ng/mL至50ng/mL、50ng/mL至60ng/mL、60ng/mL至70ng/mL、70ng/mL至80ng/mL、80ng/mL至90，或90ng/mL至100ng/mL的IL-21。
在一个实施方式中，细胞培养基还包含IL-4和/或IL-7。
在一个实施方式中，本发明的TNFRSF激动剂可用于扩增T细胞。用于TIL扩增的本发明的任何前述实施方式也可以应用于T细胞的扩增。在一个实施方式中，本发明的TNFRSF激动剂可用于扩增CD8+T细胞。在一个实施方式中，本发明的TNFRSF激动剂可用于扩增CD4+T细胞。在一个实施方式中，本发明的TNFRSF激动剂可用于扩增用嵌合抗原受体转导的T细胞(CAR-T)。在一个实施方式中，本发明的TNFRSF激动剂可用于扩增包含修饰的T细胞受体(TCR)的T细胞。如本领域(例如美国专利号7,070,995、7,446,190、8,399,645、8,916,381和9,328,156，其其公开内容通过引用并入本文)所述，CAR-T细胞可以靶向任何合适的抗原，包括CD19。如本领域(例如美国专利号8,367,804和7,569,664，其其公开内容通过引用并入本文)所述，修饰的TCR细胞可以靶向任何合适的抗原，包括NY-ESO-1、TRP-1、TRP-2、酪氨酸酶癌抗原、MAGE-A3、SSX-2和VEGFR2，或它们的抗原性部分。
在另一个实施例中，图13示意性地显示了称为过程2A的示例性TIL产生/扩增过程。在某些方面，本方法产生TIL，该TIL在施用给受试者/患者后能够增加复制周期，因此本方法产生的TIL相对于较老的TIL(即，在施用给受试者/患者之前还经历了更多轮复制的TIL)可提供另外的治疗益处。文献中已描述了较年轻TIL的特征，例如，Donia等，Scandinavian Journal of Immunology，75：157-167(2012)；Dudley等，Clin.CancerRes.，16：6122-6131(2010)；Huang等，J.Immunother.，28(3)：258-267(2005)；Besser等，Clin.Cancer Res.，19(17)：OFl-OF9(2013)；Besser等，J.Immunother.，32：415-423(2009)；Robbins等，J.Immunol.，2004；173：7125-7130；Shen等，J.Immunother.，30：123-129(2007)；Zhou等，J.Immunother.，28：53-62(2005)；以及Tran等，J.Immunother.，31：742-751(2008)，所有这些文献都通过引用整体并入本文。
如本文所讨论的，本发明可包括与冷冻保存的TIL的再刺激相关的步骤，以在移植给患者之前增加TIL的代谢活性因而增加相对健康，以及测试所述代谢健康的方法。如本文一般概述的，TIL通常取自患者样品并在移植给患者之前进行操作以扩增其数量。在一些实施方式中，可选地，TIL可以进行如下所述的遗传操作。
在一些实施方式中，TIL可以冷冻保存。一旦解冻，也可以在输注给患者之前对它们进行再刺激以增加其新陈代谢。
在一些实施方式中，如下文以及实施例和附图中详细讨论的那样，与常规扩增方法相比，第一次扩增(包括称为预REP的过程)缩短至7至14天，并且第二次扩增(包括称为REP的过程)缩短至7至14天。
图14显示了示例性2A过程。如图14所示和在下文进一步详细说明，在一些实施方式中，第一次扩增(步骤B)缩短至11天，第二次扩增(步骤D)缩短至11天。在一些实施方式中，如下文和实施例和附图中详细讨论的，第一次扩增和第二次扩增的组合(步骤B和步骤D)缩短至22天。可以理解，图14所示和下文所述的过程是示例性的，并且本文所述方法包括对所述步骤的改变和添加以及任何组合。
通常，TIL最初从患者肿瘤样品(“原发性TIL”)获得，然后扩增成更大的群，用于如本文所述的进一步操作，可选地如本文所述进行冷冻保存、再刺激，并可选地评估表型和代谢参数作为TIL健康的指征。
可以使用本领域已知的方法获得患者肿瘤样品，通常通过手术切除、穿刺活检或用于获得含有肿瘤和TIL细胞混合物的样品的其他手段。通常，肿瘤样品可以来自任何实体瘤，包括原发性肿瘤、侵袭性肿瘤或转移性肿瘤。肿瘤样品也可以是液体肿瘤，例如，从血液恶性肿瘤获得的肿瘤。实体瘤可以是任何癌症类型，包括但不限于乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌、结肠直肠癌、肺癌、脑癌、肾癌、胃癌和皮肤癌(包括但不限于鳞状细胞癌、基底细胞癌和黑色素瘤)。在一些实施方式中，有用的TIL获得自恶性黑色素瘤肿瘤，因为据报道这些恶性黑色素瘤肿瘤具有特别高水平的TIL。在一些实施方式中，肿瘤大于约1.5cm但小于约4cm。在一些实施方式中，肿瘤小于4cm。
一旦获得，通常使用锐利切开将肿瘤样品切成1mm3至约8mm3的小块，其中，约2mm3至3mm3是特别有用的。使用酶促肿瘤消化物从这些碎片培养TIL。此种肿瘤消化物可以通过在酶培养基(例如，罗斯威尔公园纪念研究所(RPMI)1640缓冲液、2mM谷氨酸、10mcg/mL庆大霉素、30U/mL DNase和1.0mg/mL胶原酶)中孵育然后机械解离(例如，使用组织解离器)来产生。肿瘤消化物可以如下产生：将肿瘤置于酶培养基中，机械解离肿瘤约1分钟，然后在37℃、5％CO2中孵育30分钟，然后在上述条件下重复循环机械解离和孵育直至只存在小的组织碎片。在该过程结束时，如果细胞悬浮液含有大量红细胞或死细胞，则可以使用FICOLL分支亲水性多糖进行密度梯度分离以除去这些细胞。可以使用本领域已知的替代方法，例如，在美国专利申请公开号2012/0244133A1所述的那些，其公开内容通过引用并入本文。任何前述方法可以用于本文所述的扩增TIL的方法和过程或治疗癌症的方法的任何实施方案中。
通常，收获的细胞悬浮液称为“原代细胞群”或“新鲜收获的”细胞群。
在一个实施方式中，可以从酶促肿瘤消化物和获得自患者的肿瘤碎片来起始培养TIL。
在一些实施方式中，TIL获得自肿瘤碎片。在一些实施方式中，通过锐利切开获得肿瘤碎片。在一些实施方式中，肿瘤碎片为约1mm3至10mm3。在一些实施方式中，肿瘤碎片为约1mm3至8mm3。在一些实施方式中，肿瘤碎片为约1mm3。在一些实施方式中，肿瘤碎片为约2mm3。在一些实施方式中，肿瘤碎片为约3mm3。在一些实施方式中，肿瘤碎片为约4mm3。在一些实施方式中，肿瘤碎片为约5mm3。在一些实施方式中，肿瘤碎片为约6mm3。在一些实施方式中，肿瘤碎片为约7mm3。在一些实施方式中，肿瘤碎片为约8mm3。在一些实施方式中，肿瘤碎片为约9mm3。在一些实施方式中，肿瘤碎片为约10mm3。在一些实施方式中，关于肿瘤碎片为约8～27mm3。在一些实施方式中，肿瘤碎片为约10～25mm3。在一些实施方式中，肿瘤碎片为约15～25mm3。在一些实施方式中，肿瘤碎片为约8～20mm3。在一些实施方式中，肿瘤碎片为约15～20mm3。在一些实施方式中，肿瘤碎片为约8～15mm3。在一些实施方式中，肿瘤碎片为约8～10mm3。
在一些实施方式中，肿瘤碎片的数量为约40至约50个肿瘤碎片。在一些实施方式中，肿瘤碎片的数量为约40个肿瘤碎片。在一些实施方式中，肿瘤碎片的数量为约50个肿瘤碎片。在一些实施方式中，肿瘤碎片大小为约8～27mm3并且肿瘤碎片少于约50个。
在一些实施方式中，TIL获得自肿瘤碎片。在一些实施方式中，肿瘤消化物通过在酶培养基(例如但不限于RPMI 1640、2mM GlutaMAX、10mg/mL庆大霉素、30U/mL DNase和1.0mg/mL胶原酶)中孵育，然后机械解离(GentleMACS，MiltenyiBiotec，Aubum，加利福尼亚州)来产生。将肿瘤置于酶培养基中后，可以机械解离肿瘤约1分钟。然后将溶液在37℃、5％CO2中孵育30分钟，然后再次机械破碎约1分钟。在37℃、5％CO2中再次孵育30分钟后，可以第三次机械破碎肿瘤约1分钟。在一些实施方式中，在第三次机械破碎后，如果存在大块组织，则对样品施加1或2次另外的机械解离，在或不在37℃、5％CO2中进行另外的30分钟孵育。在一些实施方式中，在最终孵育结束时，如果细胞悬浮液含有大量红细胞或死细胞，则可以使用Ficoll进行密度梯度分离以除去这些细胞。
在步骤A中，切开或消化肿瘤碎片后，在有利于TIL生长(相对于肿瘤和其他细胞)的条件下，在含有IL-2的血清中培养所得细胞。在一些实施方式中，在包含灭活的人AB血清和6000IU/mL的IL-2的培养基中的2mL孔中孵育肿瘤消化物。培养此原代细胞群一段时间，通常为3至14天，产生大量TIL群，通常为约1×108个大量TIL细胞。在一些实施方式中，培养此原代细胞群7至14天，产生大量TIL群，通常约1×108个大量TIL细胞。在一些实施方式中，培养此原代细胞群10至14天，产生大量TIL群，通常约1×108个大量TIL细胞。在一些实施方式中，培养此原代细胞群约11天，产生大量TIL群，通常约1×108个大量TIL细胞。在一些实施方式中，培养此原代细胞群约11天，产生大量TIL群，通常小于或等于约200×106个大量TIL细胞。
在一个优选的实施方式中，TIL的扩增可以进行如下：使用如下文和此处所述的初始大量TIL扩增步骤(如图14中所示的步骤B，其可以包括称为预REP的过程)，然后进行如下文步骤D和此处所述的第二次扩增(步骤D，包括称为快速扩增方案(REP)步骤的过程)，随后可选地进行冷冻保存，然后进行如下文和此处所述的第二次步骤D(包括称为再刺激REP步骤的过程)。可选地，可以对从该过程获得的TIL进行如本文所述的表型特征和代谢参数的表征。
在用24孔板开始TIL培养的实施方式中，例如，使用Costar 24孔细胞培养板、平底(康宁公司，康宁，纽约)，每个孔可以接种在2mL含有IL-2(6000IU/mL；Chiron Corp.，埃默里维尔，加利福尼亚州)的完全培养基(CM)中的1×106个肿瘤消化细胞或一个肿瘤碎片。在一些实施方式中，肿瘤碎片为约1mm3至10mm3。
在一些实施方式中，步骤B的CM由含有GlutaMAX的RPMI 1640组成，补充有10％人AB血清、25mM HEPES和10mg/mL庆大霉素。在用容量为40mL、透气性硅底为10cm2的透气性烧瓶(例如，G-Rex10；Wilson Wolf Manufacturing，新布莱顿，MN)开始培养的实施方式中(图1)，每个烧瓶装有在10～40mL含有IL-2的CM中的10×106至40×106个活肿瘤消化细胞或5至30个肿瘤碎片。在37℃、5％CO2的潮湿培养箱中孵育G-Rex10和24孔板，培养开始5天后，移除一半培养基，换上新鲜的CM和IL-2，在第5天后，每2至3天更换一半的培养基。
在一个实施方式中，细胞培养基还包含IL-2。在一个优选的实施方式中，细胞培养基包含约3000IU/mL的IL-2。在一个实施方式中，细胞培养基包含约1000IU/mL、约1500IU/mL、约2000IU/mL、约2500IU/mL、约3000IU/mL、约3500IU/mL、约4000IU/mL、约4500IU/mL、约5000IU/mL、约5500IU/mL、约6000IU/mL、约6500IU/mL、约7000IU/mL、约7500IU/mL或约8000IU/mL的IL-2。在一个实施方式中，细胞培养基包含1000至2000IU/mL、2000至3000IU/mL、3000至4000IU/mL、4000至5000IU/mL、5000至6000IU/mL、6000至7000IU/mL、7000至8000IU/mL或8000IU/mL的IL-2。
在一些实施方式中，如实施例和附图中所讨论的，第一次扩增(包括称为预REP；步骤B的过程)过程缩短至3至14天。在一些实施方式中，如实施例所讨论和图4和图5所示，步骤B的第一次扩增缩短至7至14天。在一些实施方式中，如实施例所讨论和图4和图5所示，步骤B的第一次扩增缩短至10至14天。在一些实施方式中，如实施例所讨论和图4和图5所示，步骤B的第一次扩增缩短至11天。
在一些实施方式中，在如本文所述的步骤B过程期间，IL-2、IL-7、IL-15和IL-21以及它们的组合可以包括在内。
在一些实施方式中，步骤B在封闭系统生物反应器中进行。在一些实施方式中，如本文所述，封闭系统用于TIL扩增。在一些实施方式中，使用单个生物反应器。在一些实施方式中，例如，所用的单个生物反应器是例如GREX-10或GREX-100。
在一些实施方式中，可以使用本领域已知的和本文所述的方法，将来自步骤B的大量TIL群立即冷冻保存。或者，可以对大量TIL群进行第二次扩增(REP)，然后如下所述冷冻保存。
在一些实施方式中，不对步骤B的TIL进行保存，步骤B的TIL直接进行步骤D。在一些实施方式中，如本文进一步所述，过渡发生在封闭系统中。
在一些实施方式中，在收获和初始大量过程后(即，在步骤A和步骤B之后)，TIL细胞群数量增加。这在本文中称为第二次扩增，它可以包括本领域通常称为快速扩增过程(REP)的扩增过程。第二次扩增通常使用在透气性容器中的包含许多组分(包括饲养细胞、细胞因子来源和抗CD3抗体)的培养基来完成。在一些实施方式中，第二次扩增可以包括按比例扩增(scaling-up)以增加第二次扩增所得TIL的数量。
在一个实施方式中，可以使用本公开的方法在透气性容器中进行REP和/或第二次扩增。例如可以在白细胞介素2(IL-2)或白细胞介素-15(IL-15)的存在下，使用非特异性T细胞受体刺激快速扩增TIL。非特异性T细胞受体刺激可包括，例如约30ng/mL的OKT-3，一种小鼠单克隆抗CD3抗体(可从Ortho-McNeil，Raritan，新泽西州或Miltenyi Biotech，Aubum，加利福尼亚州商购)。可选地在T细胞生长因子如300IU/mL IL-2或IL-15存在下，可以通过在体外用一种以上癌症抗原(包括其抗原性部分，例如表位)进一步刺激TIL来快速扩增TIL，该抗原可任选地由载体表达，例如人白细胞抗原A2(HLA-A2)结合肽，例如0.3μMMART-L26-35(27L)或gp 100：209-217(210M)。其他合适的抗原可包括例如NY-ESO-1、TRP-1、TRP-2、酪氨酸酶癌抗原、MAGE-A3、SSX-2和VEGFR2，或其抗原性部分。也可以通过用表达HLA-A2的抗原呈递细胞脉冲的相同癌症抗原再刺激，来快速扩增TIL。或者，可以用例如经辐照的自体淋巴细胞或用经辐照的HLA-A2+同种异体淋巴细胞和IL-2进一步再刺激TIL。
在一个实施方式中，细胞培养基还包含IL-2。在一个优选的实施方式中，细胞培养基包含约3000IU/mL的IL-2。在一个实施方式中，细胞培养基包含约1000IU/mL、约1500IU/mL、约2000IU/mL、约2500IU/mL、约3000IU/mL、约3500IU/mL、约4000IU/mL、约4500IU/mL、约5000IU/mL、约5500IU/mL、约6000IU/mL、约6500IU/mL、约7000IU/mL、约7500IU/mL，或约8000IU/mL的IL-2。在一个实施方式中，细胞培养基包含1000至2000IU/mL、2000至3000IU/mL、3000至4000IU/mL、4000至5000IU/mL、5000至6000IU/mL、6000至7000IU/mL、7000至8000IU/mL，或8000IU/mL的IL-2。
在一个实施方式中，细胞培养基包含OKT3抗体。在一个优选的实施方式中，细胞培养基包含约30ng/mL的OKT3抗体。在一个实施方式中，细胞培养基包含约0.1ng/mL、约0.5ng/mL、约1ng/mL、约2.5ng/mL、约5ng/mL、约7.5ng/mL、约10ng/mL、约15ng/mL、约20ng/mL、约25ng/mL、约30ng/mL、约35ng/mL、约40ng/mL、约50ng/mL、约60ng/mL、约70ng/mL、约80ng/mL、约90ng/mL、约100ng/mL、约200ng/mL、约500ng/mL和约1μg/mL的OKT3抗体。在一个实施方式中，细胞培养基包含0.1ng/mL至1ng/mL、1ng/mL至5ng/mL、5ng/mL至10ng/mL、10ng/mL至20ng/mL，20ng/mL至30ng/mL、30ng/mL至40ng/mL、40ng/mL至50ng/mL、50ng/mL至100ng/mL的OKT3抗体。
在一些实施方式中，在如本文所述的步骤D过程的第二次扩增期间，IL-2、IL-7、IL-15和IL-21以及它们的组合可以包括在内。
在一些实施方式中，第二次扩增可以在包含IL-2、OKT-3和抗原呈递饲养细胞的补充细胞培养基中进行。
在一些实施方式中，抗原呈递饲养细胞(APC)是PBMC。在一个实施方式中，在快速扩增和/或第二次扩增中，TIL比PBMC和/或抗原呈递细胞的比率为约1：25、约1：50、约1：100、约1：125、约1：150、约1：175、约1：200、约1：225、约1：250、约1：275、约1：300、约1：325、约1：350、约1：375、约1：400，或约1：500。在一个实施方式中，在快速扩增和/或第二次扩增中，TIL比PBMC的比率在1：50至1：300之间。在一个实施方式中，在快速扩增和/或第二次扩增中，TIL比PBMC的比率在1：100至1：200之间。
在一个实施方式中，REP和/或第二次扩增在烧瓶中进行，其中，大量TIL与100或200倍过量的灭活饲养细胞、30mg/mL的OKT3抗CD3抗体和3000IU/mL的IL-2混合于150mL培养基中。进行培养基更换(通常通过吸入新鲜培养基替换2/3培养基)，直至细胞转移至替代生长室。如下文更充分讨论的，替代生长室包括GRex烧瓶和透气性容器。
在一些实施方式中，如实施例和附图中所讨论的，第二次扩增(也称为REP过程)缩短至7至14天。在一些实施方式中，第二次扩增缩短至11天。
在一个实施方式中，REP和/或第二次扩增可以使用如前所述的T-175烧瓶和透气袋(Tran等，J.Immunother.，2008，31，742-51；Dudley等，J.Immunother.，2003，26，332-42)或透气性培养皿(G-Rex烧瓶)进行。对于TIL175烧瓶中的TIL快速扩增和/或第二次扩增，可以将悬浮于150mL培养基中的1×106TIL添加至每个T-175烧瓶中。TIL可以在CM和AFM-V培养基的1：1混合物中培养，补充有3000IU/mL的IL-2和30ng/mL的抗CD3。T-175烧瓶可以在37℃、5％CO2中孵育。在第5天，可以使用含有3000IU/mL IL-2的50/50培养基更换一半培养基。在第7天，将来自两个T-175烧瓶的细胞合并在3L袋中，并将300mL含有5％人AB血清和3000IU/mL IL-2的AIMV添加至300mL TIL悬浮液中。每天或每两天计数各个袋中的细胞数，并添加新鲜培养基以使细胞计数保持为0.5×106至2.0×106个细胞/mL。
在一个实施方式中，REP和/或第二次扩增可以在容量为500mL、透气性硅底为100cm2的透气性烧瓶(G-Rex 100，可从Wilson Wolf Manufacturing Corporation，新布莱顿，MN，美国商购)中进行，5×106或10×106TIL可以与PBMC一起培养在400mL的50/50培养基中，补充有5％人AB血清、3000IU/mL IL-2和30ng/mL抗CD3(OKT3)。G-Rex 100烧瓶可以在37℃、5％CO2中孵育。在第5天，可以取出250mL上清液并置于离心瓶中并以1500rpm(491×g)离心10分钟。可以用150mL含有5％人AB血清、3000IU/mL的IL-2的新鲜培养基重新悬浮TIL沉淀，并加回到原来的G-Rex 100烧瓶中。当TIL在G-Rex 100烧瓶中连续扩增时，在第7天，可以将每个G-Rex 100中的TIL悬浮于每个烧瓶中存在的300mL培养基中，并且可以将细胞悬浮液分成可用于接种3个G-Rex 100烧瓶的3个100mL等分试样。然后可以向每个烧瓶中添加150mL含有5％人AB血清和3000IU/mL IL-2的AIM-V。G-Rex 100烧瓶可以在37℃、5％CO2中孵育，4天后，可以向每个G-Rex 100烧瓶中添加150mL含有3000IU/mL IL-2的AIM-V。可以在培养的第14天收获细胞。
在一个实施方式中，REP和/或第二次扩增在烧瓶中进行，其中，大量TIL与100或200倍过量的灭活饲养细胞、30mg/mL OKT3抗CD3抗体和3000IU/mL IL-2混合于150mL培养基中。进行培养基更换(通常通过吸入新鲜培养基替换2/3培养基)，直至细胞转移至替代生长室。如下文更充分讨论的，替代生长室包括GRex烧瓶和透气性容器。
在一个实施方式中，进行REP和/或第二次扩增，还包括选择肿瘤反应性优异的TIL的步骤。可以使用本领域已知的任何选择方法。例如，美国专利申请公开号2016/0010058A1所述的方法(其公开内容通过引用并入本文)可用于选择肿瘤反应性优异的TIL。
REP和/或TIL的第二次扩增可以使用如前所述的T-175烧瓶和透气袋进行(TranKQ、Zhou J、Durflinger KH等，2008，J.Immunother.，31：742-751，和Dudley ME、Wunderlich JR、Shelton TE等，2003，J.Immunother.，26：332-342)或透气性G-Rex烧瓶。在一些实施方式中，使用烧瓶进行REP和/或第二次扩增。在一些实施方式中，使用透气性G-Rex烧瓶进行REP。对于T-175烧瓶中的TIL REP和/或第二次扩增，将约1×106TIL悬浮于约150mL培养基中，并将它加至每个T-175烧瓶中。将TIL与经辐照的(50Gy)同种异体PBMC(作为“饲养”细胞)以1：100比率一起培养，并将细胞在CM和AIM-V培养基的1：1混合物(50/50培养基)中培养，补充有3000IU/mL的IL-2和30ng/mL的抗CD3。将T-175烧瓶在37℃、5％CO2中孵育。在一些实施方式中，在第5天，使用含有3000IU/mL IL-2的50/50培养基更换一半培养基。在一些实施方式中，在第7天，将来自2个T-175烧瓶的细胞合并于3L袋中，并将300mL含有5％人AB血清和3000IU/mL IL-2的AIM-V添加至300mL TIL悬浮液中。可以每天或每两天计数各个袋中的细胞数，并且可以添加新鲜培养基以使细胞计数保持为约0.5×106至约2.0×106个细胞/mL。
对于在具有100cm2透气性硅底(G-Rex 100，WilsonWolf)的500mL容量烧瓶中进行的TIL REP和/或第二次扩增(图1)，约5×106或10×106TIL与经辐照同种异体PBMC以1：100的比率在400mL的50/50培养基中培养，该50/50培养基补充有3000IU/mL的IL-2和30ng/mL的抗CD3。将G-Rex 100烧瓶在37℃、5％CO2中孵育。在一些实施方式中，在第5天，取出250mL上清液并置于离心瓶中并以1500rpm(491g)离心10分钟。然后可以用150mL含有3000IU/mL的IL-2的新鲜50/50培养基重新悬浮浮TIL沉淀，并加回到原来的G-Rex 100烧瓶中。当TIL在G-Rex 100烧瓶中连续扩增时，在第7天，将每个G-Rex 100中的TIL悬浮于每个烧瓶中存在的300mL培养基中，并将细胞悬浮液分成用于接种3个G-Rex 100烧瓶的3个100mL等分试样。然后向每个烧瓶中添加150mL含有5％人AB血清和3000IU/mL IL-2的AIM-V。G-Rex 100烧瓶在37℃、5％CO2中孵育，4天后，向每个G-Rex 100烧瓶中添加150mL含有3000IU/mL IL-2的AIM-V。在培养的第14天收获细胞。
在一个实施方式中，在REP TIL扩增期间和/或在第二次扩增期间，本文所述的第二次扩增步骤(步骤D，包括REP)需要过量的饲养细胞。在许多实施方式中，饲养细胞是从健康献血者的标准全血单位获得的外周血单核细胞(PBMC)。使用标准方法(如Ficoll-Paque梯度分离)获得PBMC。
通常，同种异体PBMC通过辐照或热处理被灭活，用于REP步骤，如实施例(特别是实施例14)所述，它提供了评估经辐照的同种异体PBMC的复制不能(replicationincompetence)的示例性方案。
在一些实施方式中，如果第14天的活细胞总数小于在REP的第0天和/或第二次扩增的第0天(即第二次扩增的开始日)投入培养的初始活细胞数，则认为PBMC复制不能并接受PBMC用于本文所述的TIL扩增步骤。
在一些实施方式中，如果在OKT3和IL-2存在下，与REP的第0天和/或第二次扩增的第0天(即第二次扩增的开始日)投入培养的初始活细胞数相比，第7天和第14天培养的活细胞的总数没有增加，则认为PBMC复制不能并接受PBMC用于本文所述的TIL扩增步骤。在一些实施方式中，PBMC在30ng/mL OKT3抗体和3000RU/mL IL-2的存在下培养。
在一些实施方式中，如果在OKT3和IL-2存在下，与REP的第0天和/或第二次扩增的第0天(即第二次扩增的开始日)投入培养的初始活细胞数相比，第7天和第14天培养的活细胞的总数没有增加，则认为PBMC复制不能并接受PBMC用于本文所述的TIL扩增步骤。在一些实施方式中，PBMC在5～60ng/mL OKT3抗体和1000～6000IU/mL IL-2的存在下培养。在一些实施方式中，PBMC在10～50ng/mL的OKT3抗体和2000～5000IU/mL的IL-2的存在下培养。在一些实施方式中，PBMC在20～40ng/mL OKT3抗体和2000～4000IU/mL IL-2的存在下培养。在一些实施方式中，PBMC在25～35ng/mL OKT3抗体和2500～3500IU/mL IL-2的存在下培养。
在一个实施方式中，人工抗原呈递细胞在REP阶段中用作PBMC的替代物或与PBMC组合。
如本领域已知，本文所述的扩增方法通常使用含有高剂量细胞因子(特别是IL-2)的培养基。
或者，另外可以使用细胞因子的组合进行TIL的快速扩增和/或第二次扩增，其中，IL-2、IL-15和IL-21中的两种以上的组合如国际公开号WO2015/189356和国际公开号WO2015/189357中概述的那样，其全部内容通过引用明确并入本文。因此，可能的组合包括IL-2和IL-15、IL-2和IL-21、IL-15和IL-21，以及IL-2、IL-15和IL-21，发现后者在许多实施方式中特别有用。使用细胞因子的组合特别有利于淋巴细胞(特别是其中所述的T细胞)的产生。
在一些实施方式中，本文所述的扩增方法(包括REP)中使用的培养基还包含抗CD3抗体。与IL-2组合的抗CD3抗体诱导TIL群的T细胞激活和细胞分裂。用全长抗体以及Fab和F(ab′)2片段可以看到此种效果，前者通常是优选的；例如，参见Tsoukas等，J.Immunol.，1985，135，1719，其全部内容通过引用并入本文。
如本领域技术人员所理解的，有许多可用于本发明的合适的抗人CD3抗体，包括来自各种哺乳动物的抗人CD3多克隆和单克隆抗体，包括但不限于鼠、人类、灵长类动物、大鼠和犬抗体。在具体实施方式中，使用OKT3抗CD3抗体(可从Ortho-McNeil，Raritan，新泽西或Miltenyi Biotech，Aubum，加利福尼亚州商购)。
在第二次扩增步骤后，可以收获细胞。在一些实施方式中，在一个、两个、三个、四个或更多个第二次扩增步骤后收获TIL。
可以以任何适当和无菌的方式收获TIL，包括例如通过离心。收获TIL的方法是本领域熟知的，并且任何这样的已知方法可以与本发明方法一起使用。在一些实施方式中，使用自动化系统收获TIL。在一些实施方式中，使用半自动系统收获TIL。在一些实施方式中，使用半自动化机器收获第二次扩增的TIL。在一些实施方式中，使用LOVO系统(例如，可从Benchmark Electronics商购)。在一些实施方式中，收获步骤包括洗涤TIL、配制TIL和/或等分TIL。在一些实施方式中，可选地，细胞在收获后或作为收获的一部分进行冷冻。
在步骤A至E完成后，将细胞转移至容器中以用于对患者施用。
在一个实施方式中，使用本公开的APC扩增的TIL作为药物组合物施用于患者。在一个实施方式中，药物组合物是TIL在无菌缓冲液中的悬浮液。本公开的使用PBMC扩增的TIL可以通过本领域已知的任何合适的途径施用。在一个实施方式中，T细胞以单次动脉内或静脉内输注，输注优选持续约30至60分钟。其他合适的施用途径包括腹膜内、鞘内和淋巴管内。
可以理解，上述步骤A至F中的任何步骤可以重复任何次数，并且可以另外以与上述不同的顺序进行。
在一些实施方式中，可以在最终配制步骤F之前重复一个以上的扩增步骤。这些另外的扩增步骤可以包括上述第一次扩增和/或第二次扩增步骤中的要素(例如，包括在细胞培养基中所描述的组分)。另外的扩增步骤可以进一步包括另外的要素，包括细胞培养基中另外的组分，所述另外的组分在另外的扩增步骤之前和/或期间补充到细胞培养基中。
在其他实施方式中，可以在图14和上述段落中所述的任何扩增步骤之前或之后进行冷冻保存步骤，在该冷冻保存步骤中使用本领域已知的储存方法来保存扩增步骤中产生的细胞，直至生产/扩增过程的剩余步骤需要。
在一个实施方式中，本发明包括一种试剂盒，其用于根据任何前述方法来扩增TIL。
TIL的药物组合物、剂量和施用方案
在一个实施方式中，将使用本公开的过程和方法扩增的TIL作为药物组合物施用于患者。在一个实施方式中，药物组合物是TIL在无菌缓冲液中的悬浮液。使用本公开的过程和方法扩增的TIL可以通过本领域已知的任何合适途径施用。优选地，TIL以单次动脉内或静脉内输注施用，输注优选持续约30至60分钟。其他合适的施用途径包括腹膜内、鞘内和淋巴管内施用。
可以施用任何合适剂量的TIL。优选地，特别是当癌是黑色素瘤时，施用约2.3×1010至约13.7×1010个TIL，平均约7.8×1010个TIL。在一个实施方式中，施用约1.2×1010至约4.3×1010个TIL。
在一些实施方式中，本发明的药物组合物中提供的TIL的数量为约1×106、2×106、3×106、4×106、5×106、6×106、7×106、8×106、9×106、1×107、2×107、3×107、4×107、5×107、6×107、7×107、8×107、9×107、1×108、2×108、3×108、4×108、5×108、6×108、7×108、8×108、9×108、1×109、2×109、3×109、4×109、5×109、6×109、7×109、8×109、9×109、1×1010、2×1010、3×1010、4×1010、5×1010、6×1010、7×1010、8×1010、9×1010、1×1011、2×1011、3×1011、4×1011、5×1011、6×1011、7×1011、8×1011、9×1011、1×1012、2×1012、3×1012、4×1012、5×1012、6×1012、7×1012、8×1012、9×1012、1×1013、2×1013、3×1013、4×1013、5×1013、6×1013、7×1013、8×1013，以及9×1013。在一个实施方式中，本发明的药物组合物中提供的TIL数量的范围为1×106至5×106、5×106至1×107、1×107至5×107、5×107至1×108、1×108至5×108、5×108至1×109、1×109至5×109、5×109至1×1010、1×1010至5×1010、5×1010至1×1011、5×1011至1×1012、1×1012至5×1012，以及5×1012至1×1013。
在一些实施方式中，本发明的药物组合物中提供的TIL的浓度小于药物组合物的例如100％、90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％、0.1％、0.09％、0.08％、0.07％、0.06％、0.05％、0.04％、0.03％、0.02％、0.01％、0.009％、0.008％、0.007％、0.006％、0.005％、0.004％、0.003％、0.002％、0.001％、0.0009％、0.0008％、0.0007％、0.0006％、0.0005％、0.0004％、0.0003％、0.0002％，或0.0001％w/w、w/v或v/v。
在一些实施方式中，本发明的药物组合物中提供的TIL的浓度大于药物组合物的90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、19.75％、19.50％、19.25％、19％、18.75％、18.50％、18.25％、18％、17.75％、17.50％、17.25％、17％、16.75％、16.50％、16.25％、16％、15.75％、15.50％、15.25％、15％、14.75％、14.50％、14.25％、14％、13.75％、13.50％、13.25％13％、12.75％、12.50％、12.25％、12％、11.75％、11.50％、11.25％、11％、10.75％、10.50％、10.25％、10％、9.75％、9.50％、9.25％、9％、8.75％、8.50％、8.25％、8％、7.75％、7.50％、7.25％、7％、6.75％、6.50％、6.25％、6％、5.75％、5.50％、5.25％、5％、4.75％、4.50％、4.25％、4％、3.75％、3.50％、3.25％、3％、2.75％、2.50％、2.25％、2％、1.75％、1.50％、125％、1％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％、0.1％、0.09％、0.08％、0.07％、0.06％、0.05％、0.04％、0.03％、0.02％、0.01％、0.009％、0.008％、0.007％、0.006％、0.005％、0.004％、0.003％、0.002％、0.001％、0.0009％、0.0008％、0.0007％、0.0006％、0.0005％、0.0004％、0.0003％、0.0002％，或0.0001％w/w、w/v或v/v。
在一些实施方式中，本发明的药物组合物中提供的TIL的浓度范围为药物组合物的约0.0001％至约50％、约0.001％至约40％、约0.01％至约30％、约0.02％至约29％、约0.03％至约28％、约0.04％至约27％、约0.05％至约26％、约0.06％至约25％、约0.07％至约24％、约0.08％至约23％、约0.09％至约22％、约0.1％至约21％、约0.2％至约20％、约0.3％至约19％、约0.4％至约18％、约0.5％至约17％、约0.6％至约16％、约0.7％至约15％、约0.8％至约14％、约0.9％至约12％，或约1％至约10％w/w、w/v或v/v。
在一些实施方式中，本发明的药物组合物中提供的TIL的浓度范围为药物组合物的约0.001％至约10％、约0.01％至约5％、约0.02％至约4.5％、约0.03％至约4％、约0.04％至约3.5％、约0.05％至约3％、约0.06％至约2.5％、约0.07％至约2％、约0.08％至约1.5％、约0.09％至约1％、约0.1％至约0.9％w/w、w/v或v/v。
在一些实施方式中，本发明的药物组合物中提供的TIL的量等于或小于10g、9.5g、9.0g、8.5g、8.0g、7.5g、7.0g、6.5g、6.0g、5.5g、5.0g、4.5g、4.0g、3.5g、3.0g、2.5g、2.0g、1.5g、1.0g、0.95g、0.9g、0.85g、0.8g、0.75g、0.7g、0.65g、0.6g、0.55g、0.5g、0.45g、0.4g、0.35g、0.3g、0.25g、0.2g、0.15g、0.1g、0.09g、0.08g、0.07g、0.06g、0.05g、0.04g、0.03g、0.02g、0.01g、0.009g、0.008g、0.007g、0.006g、0.005g、0.004g、0.003g、0.002g、0.001g、0.0009g、0.0008g、0.0007g、0.0006g、0.0005g、0.0004g、0.0003g、0.0002g，或0.0001g。
在一些实施方式中，本发明的药物组合物中提供的TIL的量大于0.0001g、0.0002g、0.0003g、0.0004g、0.0005g、0.0006g、0.0007g、0.0008g、0.0009g、0.001g、0.0015g、0.002g、0.0025g、0.003g、0.0035g、0.004g、0.0045g、0.005g、0.0055g、0.006g、0.0065g、0.007g、0.0075g、0.008g、0.0085g、0.009g、0.0095g、0.01g、0.015g、0.02g、0.025g、0.03g、0.035g、0.04g、0.045g、0.05g、0.055g、0.06g、0.065g、0.07g、0.075g、0.08g、0.085g、0.09g、0.095g、0.1g、0.15g、0.2g、0.25g、0.3g、0.35g、0.4g、0.45g、0.5g、0.55g、0.6g、0.65g、0.7g、0.75g、0.8g、0.85g、0.9g、0.95g、1g、1.5g、2g、2.5g、3g、3.5g、4g、4.5g、5g、5.5g、6g、6.5g、7g、7.5g、8g、8.5g、9g、9.5g，或10g。
本发明的药物组合物中提供的TIL在宽剂量范围内有效。精确的剂量取决于施用途径、施用化合物的形式、待治疗对象的性别和年龄、待治疗对象的体重，以及主治医师的偏好和经验。如果合适，也可以使用临床确定的TIL剂量。使用本文方法施用的药物组合物的量，例如TIL的剂量，将取决于所治疗的人或哺乳动物、病症或病症的严重程度、施用率、活性药物成分的配置和处方医生的自由裁量权。
在一些实施方式中，TIL可以单剂量施用。这种施用可以通过注射，例如静脉内注射。在一些实施方式中，TIL可以多剂量施用。剂量可以是每年一次、两次、三次、四次、五次、六次或超过六次。剂量可以是每月一次、每两周一次、每周一次或每两天一次。只要有必要，TIL的施用可以继续。
在一些实施方式中，TIL的有效剂量为约1×106、2×106、3×106、4×106、5×106、6×106、7×106、8×106、9×106、1×107、2×107、3×107、4×107、5×107、6×107、7×107、8×107、9×107、1×108、2×108、3×108、4×108、5×108、6×108、7×108、8×108、9×108、1×109、2×109、3×109、4×109、5×109、6×109、7×109、8×109、9×109、1×1010、2×1010、3×1010、4×1010、5×1010、6×1010、7×1010、8×1010、9×1010、1×1011、2×1011、3×1011、4×1011、5×1011、6×1011、7×1011、8×1011、9×1011、1×1012、2×1012、3×1012、4×1012、5×1012、6×1012、7×1012、8×1012、9×1012、1×1013、2×1013、3×1013、4×1013、5×1013、6×1013、7×1013、8×1013，以及9×1013。在一些实施方式中，TIL的有效剂量的范围为1×106至5×106、5×106至1×107、1×107至5×107、5×107至1×108、1×108至5×108、5×108至1×109、1×109至5×109、5×109至1×1010、1×1010至5×1010、5×1010至1×1011、5×1011至1×1012、1×1012至5×1012，以及5×1012至1×1013。
在一些实施方式中，TIL的有效剂量的范围为约0.01mg/kg至约4.3mg/kg、约0.15mg/kg至约3.6mg/kg、约0.3mg/kg至约3.2mg/kg、约0.35mg/kg至约2.85mg/kg、约0.15mg/kg至约2.85mg/kg、约0.3mg至约2.15mg/kg、约0.45mg/kg至约1.7mg/kg、约0.15mg/kg至约1.3mg/kg、约0.3mg/kg至约1.15mg/kg、约0.45mg/kg至约1mg/kg、约0.55mg/kg至约0.85mg/kg、约0.65mg/kg至约0.8mg/kg、约0.7mg/kg至约0.75mg/kg、约0.7mg/kg至约2.15mg/kg、约0.85mg/kg至约2mg/kg、约1mg/kg至约1.85mg/kg、约1.15mg/kg至约1.7mg/kg、约1.3mg/kg至约1.6mg/kg、约1.35mg/kg至约1.5mg/kg、约2.15mg/kg至约3.6mg/kg、约2.3mg/kg至约3.4mg/kg、约2.4mg/kg至约3.3mg/kg、约2.6mg/kg至约3.15mg/kg、约2.7mg/kg至约3mg/kg、约2.8mg/kg至约3mg/kg，或约2.85mg/kg至约2.95mg/kg。
在一些实施方式中，TIL的有效剂量的范围为约1mg至约500mg、约10mg至约300mg、约20mg至约250mg、约25mg至约200mg、约1mg至约50mg、约5mg至约45mg、约10mg至约40mg、约15mg至约35mg、约20mg至约30mg、约23mg至约28mg、约50mg约150mg、约60mg至约140mg、约70mg至约130mg、约80mg至约120mg、约90mg至约110mg、约95mg至约105mg、约98mg至约102mg、约150mg至约250mg、约160mg至约240mg、约170mg至约230mg、约180mg至约220mg、约190mg至约210mg、约195mg至约205mg，或约198至约207mg。
有效量的TIL可以通过具有类似用途的药剂的任何可接受的施用方式以单剂量或多剂量施用，包括鼻内和透皮途径，通过动脉内注射、静脉内、腹膜内、肠胃外、肌内、皮下、局部，通过移植或直接注射到肿瘤中，或通过吸入。
TNFRSF激动剂的药物组合物、剂量和施用方案
在一个实施方式中，本发明提供了一种用于治疗本文所述疾病和病症的药物组合物。在一个优选的实施方式中，本发明提供了药物组合物(包括下文描述的那些)用于治疗过度增殖性疾病。在一个优选的实施方式中，本发明提供了药物组合物(包括下文描述的那些)用于治疗癌症。
在一些实施方式中，TNFRSF激动剂抗体制剂包含一种以上赋形剂，该赋形剂选自：三盐酸盐(tris-hydrochloride)、氯化钠、甘露醇、三胺五乙酸、聚山梨酯80、氢氧化钠和盐酸。
在一个实施方式中，通过输注以下剂量的TNFRSF激动剂来将TNFRSF激动剂施用给受试者：约5mg、约8mg、约10mg、约20mg、约25mg、约50mg、约75mg、100mg、约200mg、约300mg、约400mg、约500mg、约600mg、约700mg、约800mg、约900mg、约1000mg、约1100mg、约1200mg、约1300mg约1400mg、约1500mg、约1600mg、约1700mg、约1800mg、约1900mg和约2000mg。在一个实施方式中，每周施用TNFRSF激动剂。在一个实施方式中，每两周施用TNFRSF激动剂。在一个实施方式中，每三周施用TNFRSF激动剂。在一个实施方式中，每月施用TNFRSF激动剂。在一个实施方式中，每3周静脉内施用每剂8mg的TNFRSF激动剂，持续12周(4剂)。在一个实施方式中，以较低的初始剂量施用TNFRSF激动剂，当随后以每月间隔施用时，剂量逐步增加。例如，第一次输注可递送300mg的TNFRSF激动剂，随后8周，每周剂量可递送2000mg的TNFRSF激动剂，然后每月剂量为2000mg的TNFRSF激动剂。
施用的TNFRSF激动剂的量将取决于所治疗的人或哺乳动物、疾病或病症的严重程度、施用率、化合物的配置和处方医师的判断。然而，以单次剂量或分次剂量计，每个剂量的有效剂量为每天每千克体重约0.001mg至约100mg，例如约1mg/kg/天至约35mg/kg/天。对于70kg的人，这将达到约0.05～7g/天，例如约0.05g/天至约2.5g/天。在某些情况下，低于上述范围下限的剂量水平可能是很足够的，而在其他情况下，可以使用较大剂量而不会引起任何有害的副作用，例如，通过将这样的较大剂量分成几个小剂量从而全天施用。TNFRSF激动剂的剂量可以以mg/kg体重或mg/m2体表面积为单位提供。在一个实施方式中，以选自下组的比率来递送TNFRSF激动剂和第二种TNFRSF激动剂(mg/kg或mg/m2)：约20：1、约19：1、约18：1、约17：1、约16：1、约15：1、约14：1、约13：1、约12：1、约11：1、约10：1、约9：1、约8：1、约7：1、约6：1、约5：1、约4：1、约3：1、约2：1、约1：1、约1：2、约1：3、约1：4、约1：5、约1：6、约1：7、约1：8、约1：9、约1：10、约1：11、约1：12、约1：13、约1：14、约1：15、约1：16、约1：17、约1：18、约1：19和约1：20。
在一些实施方式中，TIL和TNFRSF激动剂的组合以单剂量施用。此种施用可以通过注射(例如，静脉内注射)来引入TNFRSF激动剂。
在一些实施方式中，TIL和TNFRSF激动剂的组合以多剂量施用。在一个优选的实施方式中，TIL和TNFRSF激动剂的组合以多剂量施用。TNFRSF激动剂的施用可以是每天一次、每天两次、每天三次、每天四次、每天五次、每天六次或每天超过六次。TIL和TNFRSF激动剂的施用可以是每月一次、每两周一次、每周一次或每两天一次。
在选定的实施方式中，施用TNFRSF激动剂超过1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、14天、28天、2个月、3个月、6个月、12个月或24个月。在某些情况下，视需要可以实现并保持连续施用。
在一些实施方式中，本文公开的TNFRSF激动剂的有效剂量的范围为约1mg至约500mg、约10mg至约300mg、约20mg至约250mg、约25mg至约200mg、约10mg至约200mg、约20mg至约150mg、约30mg至约120mg、约10mg至约90mg、约20mg至约80mg、约30mg至约70mg、约40mgmg至约60mg、约45mg至约55mg、约48mg至约52mg、约50mg至约150mg、约60mg至约140mg、约70mg至约130mg、约80mg至约120mg、约90mg至约110mg、约95mg至约105mg、约150mg至约250mg、约160mg至约240mg、约170mg至约230mg、约180mg至约220mgmg、约190mg至约210mg、约195mg至约205mg，或约198至约202mg。在一些实施方式中，本文公开的TNFRSF激动剂的有效剂量的范围为约25mg、约50mg、约75mg、约100mg、约125mg、约150mg、约175mg、约200mg、约225mg，或约250mg。
在一些实施方式中，本文公开的TNFRSF激动剂的有效剂量的范围为约0.01mg/kg至约4.3mg/kg、约0.15mg/kg至约3.6mg/kg、约0.3mg/kg至约3.2mg/kg、约0.35mg/kg至约2.85mg/kg、约0.15mg/kg至约2.85mg/kg、约0.3mg至约2.15mg/kg、约0.45mg/kg至约1.7mg/kg、约0.15mg/kg至约1.3mg/kg、约0.3mg/kg至约1.15mg/kg、约0.45mg/kg至约1mg/kg、约0.55mg/kg至约0.85mg/kg、约0.65mg/kg至约0.8mg/kg、约0.7mg/kg至约0.75mg/kg、约0.7mg/kg至约2.15mg/kg、约0.85mg/kg至约2mg/kg、约1mg/kg至约1.85mg/kg、约1.15mg/kg至约1.7mg/kg、约1.3mg/kgmg至约1.6mg/kg、约1.35mg/kg至约1.5mg/kg、约2.15mg/kg至约3.6mg/kg、约2.3mg/kg至约3.4mg/kg、约2.4mg/kg至约3.3mg/kg、约2.6mg/kg至约3.15mg/kg、约2.7mg/kg至约3mg/kg、约2.8mg/kg至约3mg/kg，或约2.85mg/kg至约2.95mg/kg。在一些实施方式中，本文公开的TNFRSF激动剂的有效剂量为约0.35mg/kg、约0.7mg/kg、约1mg/kg、约1.4mg/kg、约1.8mg/kg、约2.1mg/kg、约2.5mg/kg、约2.85mg/kg、约3.2mg/kg，或约3.6mg/kg。
在一些实施方式中，本文公开的TNFRSF激动剂的有效剂量的范围为约1mg至约500mg、约10mg至约300mg、约20mg至约250mg、约25mg至约200mg、约1mg至约50mg、约5mg至约45mg、约10mg至约40mg、约15mg至约35mg、约20mg至约30mg、约23mg至约28mg、约50mgmg至约150mg、约60mg至约140mg、约70mg至约130mg、约80mg至约120mg、约90mg至约110mg、或约95mg至约105mg、约98mg约102mg、约150mg至约250mg、约160mg至约240mg、约170mg至约230mg、约180mg至约220mg、约190mg至约210mg、约195mg至约205mg，或约198至约207mg。在一些实施方式中，本文公开的TNFRSF激动剂的有效剂量为约25mg、约50mg、约75mg、约100mg、约125mg、约150mg、约175mg、约200mg、约225mg，或约250mg。
在一些实施方式中，本文公开的TNFRSF激动剂的有效剂量的范围为约0.01mg/kg至约4.3mg/kg、约0.15mg/kg至约3.6mg/kg、约0.3mg/kg至约3.2mg/kg、约0.35mg/kg至约2.85mg/kg、约0.01mg/kg至约0.7mg/kg、约0.07mg/kg至约0.65mg/kg、约0.15mg/kg至约0.6mg/kg、约0.2mg/kg至约0.5mg/kg、约0.3mg/kg至约0.45mg/kg、约0.3mg/kg至约0.4mg/kg、约0.7mg/kg至约2.15mg/kg、约0.85mg/kg至约2mg/kg、约1mg/kg至约1.85mg/kg、约1.15mg/kg至约1.7mg/kg、约1.3mg/kg至约1.6mg/kg、约1.35mg/kg至约1.5mg/kg、约1.4mg/kg至约1.45mg/kg、约2.15mg/kg至约3.6mg/kg、约2.3mg/kg至约3.4mg/kg、约2.4mg/kg至约3.3mg/kg、约2.6mg/kg至约3.15mg/kg、约2.7mg/kg至约3mg/kg、约2.8mg/kg至约3mg/kg，或约2.85mg/kg至约2.95mg/kg。在一些实施方式中，本文公开的TNFRSF激动剂为约0.4mg/kg、约0.7mg/kg、约1mg/kg、约1.4mg/kg、约1.8mg/kg、约2.1mg/kg、约2.5mg/kg、约2.85mg/kg、约3.2mg/kg，或约3.6mg/kg。
在一些实施方式中，TNFRSF激动剂以10mg BID至1000mg BID的剂量施用，剂量包括10mg BID、20mg BID、30mg BID、40mg BID、50mg BID、60mg BID、70mg BID、80mg BID、90mg BID、100mg BID、150mg BID或200mg BID。
在一些实施方式中，本发明的药物组合物中提供的TNFRSF激动剂及其组合的浓度独立地小于药物组合物的例如100％、90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％、0.1％、0.09％、0.08％、0.07％、0.06％、0.05％、0.04％、0.03％、0.02％、0.01％、0.009％、0.008％、0.007％、0.006％、0.005％、0.004％、0.003％、0.002％、0.001％、0.0009％、0.0008％、0.0007％、0.0006％、0.0005％、0.0004％、0.0003％、0.0002％或0.0001％w/w、w/v或v/v。
在一些实施方式中，本发明的药物组合物中提供的TNFRSF激动剂及其组合的浓度独立地大于药物组合物的90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、19.75％、19.50％、19.25％、19％、18.75％、18.50％、18.25％、18％、17.75％、17.50％、17.25％17％、16.75％、16.50％、16.25％、16％、15.75％、15.50％、15.25％15％、14.75％、14.50％、14.25％、14％、13.75％、13.50％、13.25％、13％、12.75％、12.50％、12.25％、12％、11.75％、11.50％、11.25％、11％、10.75％、10.50％、10.25％、10％、9.75％、9.50％、9.25％、9％、8.75％、8.50％、8.25％、8％、7.75％、7.50％、7.25％、7％、6.75％、6.50％、6.25％、6％、5.75％、5.50％、5.25％、5％、4.75％、4.50％、4.25％、4％、3.75％、3.50％、3.25％、3％、2.75％、2.50％、2.25％、2％、1.75％、1.50％、125％、1％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％、0.1％、0.09％、0.08％、0.07％、0.06％、0.05％、0.04％、0.03％、0.02％、0.01％、0.009％、0.008％、0.007％、0.006％、0.005％、0.004％、0.003％、0.002％、0.001％、0.0009％、0.0008％、0.0007％、0.0006％、0.0005％、0.0004％、0.0003％、0.0002％，或0.0001％w/w、w/v或v/v。
在一些实施方式中，药物组合物中TNFRSF激动剂的浓度独立地为药物组合物的约0.0001％至约50％、约0.001％至约40％、约0.01％至约30％、约0.02％至约29％、约0.03％至约28％、约0.04％至约27％、约0.05％至约26％、约0.06％至约25％、约0.07％至约24％、约0.08％至约23％％、约0.09％至约22％、约0.1％至约21％、约0.2％至约20％、约0.3％至约19％、约0.4％至约18％、约0.5％至约17％、约0.6％至约16％、约0.7％至约15％、约0.8％至约14％、约0.9％至约12％，或约1％至约10％w/w、w/v或v/v。
在一些实施方式中，药物组合物中TNFRSF激动剂的浓度独立地为药物组合物的约0.001％至约10％、约0.01％至约5％、约0.02％至约4.5％、约0.03％至约4％、约0.04％至约3.5％、约0.05％至约3％、约0.06％至约2.5％、约0.07％至约2％、约0.08％至约1.5％、约0.09％至约1％、约0.1％至约0.9％w/w、w/v或v/v。
在一些实施方式中，药物组合物中TNFRSF激动剂的浓度独立地等于或小于10g、9.5g、9.0g、8.5g、8.0g、7.5g、7.0g、6.5g、6.0g、5.5g、5.0g、4.5g、4.0g、3.5g、3.0g、2.5g、2.0g、1.5g、1.0g、0.95g、0.9g、0.85g、0.8g、0.75g、0.7g、0.65g、0.6g、0.55g、0.5g、0.45g、0.4g、0.35g、0.3g、0.25g、0.2g、0.15g、0.1g、0.09g、0.08g、0.07g、0.06g、0.05g、0.04g、0.03g、0.02g、0.01g、0.009g、0.008g、0.007g、0.006g、0.005g、0.004g、0.003g、0.002g、0.001g、0.0009g、0.0008g、0.0007g、0.0006g、0.0005g、0.0004g、0.0003g、0.0002g或0.0001g。
在一些实施方式中，药物组合物中TNFRSF激动剂的浓度独立地大于0.0001g、0.0002g、0.0003g、0.0004g、0.0005g、0.0006g、0.0007g、0.0008g、0.0009g、0.001g、0.0015g、0.002g、0.0025g、0.003g、0.0035g、0.004g、0.0045g、0.005g、0.0055g、0.006g、0.0065g、0.007g、0.0075g、0.008g、0.0085g、0.009g、0.0095g、0.01g、0.015g、0.02g、0.025g、0.03g、0.035g、0.04g、0.045g、0.05g、0.055g、0.06g、0.065g、0.07g、0.075g、0.08g、0.085g、0.09g、0.095g、0.1g、0.15g、0.2g、0.25g、0.3g、0.35g、0.4g、0.45g、0.5g、0.55g、0.6g、0.65g、0.7g、0.75g、0.8g、0.85g、0.9g、0.95g、1g、1.5g、2g、2.5，3g、3.5g、4g、4.5g、5g、5.5g、6g、6.5g、7g、7.5g、8g、8.5g、9g、9.5g或10g。
下文所述为非限制性的药物组合物及其制备方法。
注射用药物组合物
在一个优选的实施方式中，本发明提供了一种注射用药物组合物，该注射用药物组合物含有TIL和至少一种TNFRSF激动剂的组合，和它们的组合，以及适于注射(包括瘤内注射或静脉输注)的药物赋形剂。组合物中试剂的组分和量如本文所述。
可以掺入本发明组合物用于注射施用的形式包括：含有芝麻油、玉米油、棉籽油或花生油以及酏剂(elixir)、甘露醇、葡萄糖或无菌水溶液和类似药物载体的水性或油性悬浮液或乳液。
盐水中的水溶液也通常用于注射。也可以使用乙醇、甘油、丙二醇和液态聚乙二醇(及它们的合适的混合物)、环糊精衍生物和植物油。例如，可以通过使用涂层(如卵磷脂)(在分散体(dispersion)的情况下维持所需颗粒大小)和使用表面活性剂来保持适当的流动性。可以通过各种抗细菌剂和抗真菌剂(例如，对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸和硫柳汞)来防止微生物的作用。
根据需要，通过将所需量的TNFRSF激动剂和TIL的组合以及上述列举的各种其他成分(按需)掺入适当的培养基中，然后过滤灭菌，来制备无菌可注射溶液。通常，通过将各种灭菌的活性成分掺入无菌载体中来制备分散体，该无菌载体含有基础分散介质和来自上述列举的那些的所需其他成分。在制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，某些理想的制备方法是真空干燥和冷冻干燥技术，这些技术由先前无菌过滤的溶液产生活性成分和任何其他所需成分的粉末。
其他药物组合物
还可以由本文所述的组合物和一种以上适于舌下、口腔、直肠、骨内、眼内、鼻内、硬膜外或脊柱内施用的药学上可接受的赋形剂来制备药物组合物。此种药物组合物的制剂在本领域中是公知的。参见，例如，Philip O.Anderson、James E.Knoben、William GTroutman主编，Handbook of Clinical Drug Data，第十版，McGraw-Hill，2002年；以及Pratt和Taylor主编，Principles of Drug Action，第三版，Churchill Livingston，纽约，1990年，二者均通过引用整体并入本文。
可以通过能够将化合物递送至作用部位的任何方法来实现TIL和TNFRSF激动剂的组合的施用。这些方法包括口服途径、十二指肠内途径、肠胃外注射(包括静脉内、动脉内、皮下、肌肉内、血管内、腹膜内或输注)、局部施用(例如，透皮施用)、直肠施用、通过导管或支架局部递送或通过吸入。也可以脂肪内(intraadiposally)或鞘内施用该化合物的组合。
本发明还提供试剂盒。该试剂盒包括：即用型TIL和TNFRSF激动剂的组合(单独或以合适的包装组合)，以及书面材料(可以包括使用说明、临床研究讨论和副作用列表)。此类试剂盒还可以包括信息，例如，科学文献参考、包装插页材料、临床试验结果和/或这些的概述等，该信息指示或确定组合物的活性和/或优点，和/或描述剂量、施用、副作用、药物相互作用或对医疗保健提供者有用的其他信息。此类信息可以基于各种研究的结果，例如，使用涉及体内模型的实验动物的研究和基于人体临床试验的研究。试剂盒可以进一步包含另一种活性药物成分。在选定的实施方式中，在试剂盒内，TNFRSF激动剂和TIL以及另一种活性药物成分作为单独的组合物被提供于单独的容器中。在选定的实施方式中，在试剂盒中，选自TNFRSF激动剂和TIL的分子作为单一组合物被提供于容器中。使用的合适的包装和另外的制品(例如，用于液体制剂的量杯、用于使在空气等中的暴露最小化的箔包装)是本领域已知的并且可以包括在试剂盒中。本文所述试剂盒可以提供、销售和/或推荐给健康提供者，包括医生、护士、药剂师、处方官员等。在选定的实施方式中，试剂盒也可以直接销售给消费者。
优选地，上述试剂盒用于治疗本文所述的疾病和病症。在一个优选的实施方式中，试剂盒用于治疗癌症。在一个优选的实施方式中，试剂盒用于治疗实体瘤癌症、淋巴瘤和白血病。
在一个优选的实施方式中，本发明的试剂盒用于治疗癌症，所述癌症包括本文所述的任何癌症。
治疗癌症的方法
本文所述的TIL和TNFRSF激动剂的组合物和组合可用于治疗过度增殖性疾病的方法中。在一个优选的实施方式中，它们用于治疗癌症。在一个优选的实施方式中，本发明提供了一种治疗癌症的方法以及用于治疗癌症的TIL和TNFRSF激动剂的组合物和组合，其中，癌症选自：黑色素瘤、卵巢癌、宫颈癌、肺癌、膀胱癌、乳腺癌、头颈癌、肾细胞癌、急性髓性白血病、结肠直肠癌和肉瘤。在一个优选的实施方式中，本发明提供了一种治疗癌症的方法以及用于治疗癌症的TIL和TNFRSF激动剂的组合物和组合，其中，癌症选自：非小细胞肺癌(NSCLC)或三阴性乳腺癌、双重难治性黑色素瘤和葡萄膜(眼)黑色素瘤。在一个优选的实施方式中，本发明提供了一种用TIL和TNFRSF激动剂的组合治疗癌症的方法，其中，癌症选自：黑色素瘤、卵巢癌、宫颈癌、肺癌、膀胱癌、乳腺癌、头颈癌(头颈部鳞状细胞癌)、肾细胞癌、急性髓性白血病、结肠直肠癌、胆管癌和肉瘤。在一个优选的实施方式中，本发明提供了用于治疗癌症的TIL和TNFRSF激动剂的组合物和组合，其中，癌症选自：黑色素瘤、卵巢癌、宫颈癌、肺癌、膀胱癌、乳腺癌、头颈癌。癌症，肾细胞癌、急性髓性白血病、结肠直肠癌、胆管癌和肉瘤。在一个优选的实施方式中，本发明提供了一种用TIL和TNFRSF激动剂的组合治疗癌症的方法，其中，癌症选自：非小细胞肺癌(NSCLC)或三阴性乳腺癌、双重难治性黑色素瘤和和葡萄膜(眼)黑色素瘤。在一个优选的实施方式中，本发明提供了用于治疗癌症的TIL和TNFRSF激动剂的组合物和组合，其中，癌症选自：非小细胞肺癌(NSCLC)或三阴性乳腺癌、双重难治性黑色素瘤和葡萄膜(眼)黑色素瘤。在一个实施方式中，通过本文所述方法扩增TIL。
在一些实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群；其中，癌症选自：黑色素瘤、卵巢癌、宫颈癌、肺癌、膀胱癌、乳腺癌、头颈癌、肾细胞癌、急性髓性白血病、结肠直肠癌、胆管癌、肉瘤、非小细胞癌细胞肺癌(NSCLC)或三阴性乳腺癌、双重难治性黑色素瘤和葡萄膜(眼)黑色素瘤。
在一些实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群；其中，癌症选自：黑色素瘤、卵巢癌、宫颈癌、肺癌、膀胱癌、乳腺癌、头颈癌、肾细胞癌、急性髓性白血病、结肠直肠癌、胆管癌、肉瘤、非小细胞癌细胞肺癌(NSCLC)或三阴性乳腺癌、双重难治性黑色素瘤和葡萄膜(眼)黑色素瘤。
在一些实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群；其中，癌症是葡萄膜(眼)黑色素瘤。
在一个实施方式中，本发明包括一种试剂盒，该试剂盒用于根据任何前述方法用TIL群治疗癌症。
可以使用本领域已知的动物模型来测试本文所述方法、化合物和化合物组合在治疗、预防和/或控制所示疾病或病症中的功效。用于确定胰腺癌治疗功效的模型描述于Herreros-Villanueva等，World J.Gastroenterol.2012，18，1286-1294。用于确定乳腺癌治疗功效的模型描述于例如Fantozzi，Breast Cancer Res.2006，8，212。用于确定卵巢癌治疗功效的模型描述于例如Mullany等，Endocrinology 2012，153，1585-92；以及Fong等，J.Ovarian Res.2009，2，12。用于确定黑色素瘤治疗功效的模型描述于例如Damsky等，Pigment Cell&Melanoma Res.2010，23，853–859。用于确定肺癌治疗功效的模型描述于例如Meuwissen等，Genes&Development，2005，19，643-664。用于确定肺癌治疗功效的模型描述于例如Kim，Clin.Exp.Otorhinolaryngol.2009，2，55-60；以及Sano，Head NeckOncol.2009，1，32。用于确定结肠直肠癌治疗功效的模型(包括CT26模型)，描述于Castle等，BMC Genomics，2013，15，190；Endo等，Cancer Gene Therapy，2002，9，142-148；Roth等，Adv.Immunol.1994，57，281-351；Fearon等，Cancer Res.1988，48，2975-2980。
IL-2的共同施用
在一个实施方式中，本发明提供了一种用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)群治疗癌症的方法，该方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，其中，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂，并且其中，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞(PBMC)和可选的TNFRSF激动剂，并且其中，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；
(f)向癌症患者施用治疗有效份的第三TIL群；以及
(g)对患者施用IL-2方案。
在一个实施方式中，IL-2方案包括高剂量IL-2方案，其中，高剂量IL-2方案包括：在施用治疗有效份的第三TIL群之后的第二天开始静脉内施用阿地白介素或其生物仿制药或变体，其中，阿地白介素或其生物仿制药或变体以600,000或720,000IU/kg(患者体重)的剂量施用，每8小时静脉推注15分钟，直至耐受，最多14剂。休息9天后，可以重复该时间表进行另外14个剂量，总共最多28个剂量。
在一个实施方式中，IL-2方案包括高剂量IL-2方案，其中，高剂量IL-2方案包括：在施用治疗有效份的第三TIL群之后的第二天开始静脉内施用阿地白介素或其生物仿制药或变体，其中，阿地白介素或其生物仿制药或变体以0.037mg/kg或0.044mg/kg IU/kg(患者体重)的剂量施用，每8小时静脉推注15分钟，直至耐受，最多14剂。休息9天后，可以重复该时间表进行另外14个剂量，总共最多28个剂量。
在一个实施方式中，IL-2方案包括递减型(decrescendo)IL-2方案。递减型IL-2方案已描述于O'Day等，J.Clin.Oncol.1999，17，2752-61和Eton等，Cancer 2000，88，1703-9，其公开内容通过引用并入本文。在一个实施方式中，递减型IL-2方案包括在6小时内静脉内施用18×106IU/m2，然后在12小时内静脉内施用18×106IU/m2，然后在24小时内静脉内施用18×106IU/m2，然后在72小时内静脉内施用4.5×106IU/m2。该治疗循环可每28天重复一次，最多四个循环。在一个实施方式中，递减型IL-2方案包括在第1天18,000,000IU/m2，在第2天9,000,000IU/m2，在第3和4天4,500,000IU/m2。
在一个实施方式中，IL-2方案包括每天、每2天、每4天、每6天、每7天、每14天或每21天，以0.10mg/天至50mg/天的剂量施用聚乙二醇化的IL-2。
非清髓性淋巴细胞清除与化疗
在一个实施方式中，本发明包括用TIL群治疗癌症的方法，其中，根据本公开内容，在输注TIL之前且在用TNFRSF激动剂治疗之前或同时，用非清髓性化疗法预治疗患者。在一个实施方式中，非清髓性化疗法施用环磷酰胺60mg/kg/天，持续2天(TIL输注前第27和26天)和氟达拉滨25mg/m2/天，持续5天(TIL输注前第27至23天)。在一个实施方式中，在根据本公开内容的非清髓性化疗法和TIL输注(在第0天)后，患者每8小时静脉输注720,000IU/kg的IL-2至达到生理耐受。
实验结果表明，过继转移肿瘤特异性T淋巴细胞之前的淋巴细胞清除通过消除调节性T细胞和免疫系统的竞争成分(“细胞因子沉降”)而在提高治疗功效中起关键作用。因此，本发明的一些实施方式在引入本发明的reREP TIL之前对患者使用淋巴细胞清除步骤(有时也称为”免疫抑制调节”)。
通常，采用施用氟达拉滨或环磷酰胺(活性形式称为马磷酰胺)，及它们的组合来完成淋巴细胞清除。此种方法描述于Gassner等，Cancer Immunol Immunother.2011，60，75–85；Muranski等，Nat.Clin.Pract.Oncol.，2006，3，668–681、Dudley等；J.Clin.Oncol.2008，26，5233-5239和Dudley等，J.Clin.Oncol.2005，23，2346–2357，所有这些文献都通过引用整体并入本文。
在一些实施方式中，氟达拉滨以0.5μg/mL～10μg/mL氟达拉滨的浓度施用。在一些实施方式中，氟达拉滨以1μg/mL氟达拉滨的浓度施用。在一些实施方式中，氟达拉滨治疗施用1天、2天、3天、4天、5天、6天或7天或更长时间。在一些实施方式中，氟达拉滨以10mg/kg/天、15mg/kg/天、20mg/kg/天、25mg/kg/天、30mg/kg/天、35mg/kg/天、40mg/kg/天或45mg/kg/天的剂量施用。在一些实施方式中，氟达拉滨治疗以35mg/kg/天施用2～7天。在一些实施方式中，氟达拉滨治疗以35mg/kg/天施用4～5天。在一些实施方式中，氟达拉滨治疗以25mg/kg/天施用4～5天。
在一些实施方式中，通过施用环磷酰胺以0.5μg/mL～10μg/mL的浓度获得马磷酰胺(环磷酰胺的活性形式)。在一些实施方式中，通过施用环磷酰胺以1μg/mL的浓度获得马磷酰胺(活性形式的环磷酰胺)。在一些实施方式中，环磷酰胺治疗施用1天、2天、3天、4天、5天、6天或7天或更长时间。在一些实施方式中，环磷酰胺以100mg/m2/天、150mg/m2/天、175mg/m2/天、200mg/m2/天、225mg/m2/天、250mg/m2/天、275mg/m2/天或300mg/m2/天的剂量施用。在一些实施方式中，静脉(即i.v.)施用环磷酰胺。在一些实施方式中，环磷酰胺治疗以35mg/kg/天施用2～7天。在一些实施方式中，环磷酰胺治疗以250mg/m2/天静脉施用4～5天。在一些实施方式中，环磷酰胺治疗以250mg/m2/天静脉施用4天。
在一些实施方式中，通过将氟达拉滨和环磷酰胺一起施用于患者来进行淋巴细胞清除。在一些实施方式中，氟达拉滨以25mg/m2/天静脉施用且环磷酰胺以250mg/m2/天静脉施用4天。
在一个实施方式中，通过以60mg/m2/天的剂量持续两天施用环磷酰胺进行淋巴细胞清除，然后以25mg/m2/天的剂量施用氟达拉滨持续5天。
与PD-1和PD-L1抑制剂的组合
程序性死亡受体1(PD-1，programmed death 1)是由T细胞、B细胞、自然杀伤(NK)T细胞、激活的单核细胞和树突状细胞表达的288个氨基酸的跨膜免疫检查点受体蛋白。PD-1，也称为CD279，属于CD28家族，人类中的PD-1由染色体2上的Pdcd1基因编码。PD-1由一个免疫球蛋白(Ig)超家族结构域、一个跨膜区和一个细胞内结构域组成，所述细胞内结构域含有基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM，immunoreceptor tyrosine-basedinhibitory motif)和基于免疫受体酪氨酸的开关基序(ITSM，immunoreceptor tyrosine-based switch motif)。如Keir等，Annu.Rev.Immunol.，2008，26，677-704所述，已知PD-1及其配体(PD-L1和PD-L2)在免疫耐受中起关键作用。PD-1提供负调节T细胞免疫应答的抑制信号。PD-L1(也称为B7-H1或CD274)和PD-L2(也称为B7-DC或CD273)在肿瘤细胞和基质细胞上表达，它们可能遇到表达PD-1的激活T细胞，导致T细胞的免疫抑制。PD-L1是由人染色体9上的Cd274基因编码的290个氨基酸的跨膜蛋白。如在最近的临床研究中所证明的，例如Topalian等，N.Eng.J.Med.，2012，366，2443-54所述，通过使用PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂和/或PD-L2抑制剂，阻断PD-1与它的配体PD-L1和PD-L2之间的相互作用可以克服免疫抵抗(immune resistance)。PD-L1在许多肿瘤细胞系中表达，而PD-L2表达主要在树突状细胞和少数肿瘤细胞系中表达。除T细胞(激活后诱导表达PD-1)外，PD-1也在B细胞、天然杀伤细胞、巨噬细胞、激活的单核细胞和树突状细胞上表达。
本文所述的TIL和TNFRSF激动剂的方法、组合物和组合还可以进一步与程序性死亡1(PD-1)、程序性死亡配体1(PD-L1)和/或程序性死亡配体2(PD-L2)的结合抗体、拮抗剂或抑制剂(即阻断剂)组合。在TIL扩增的预REP或REP阶段期间，PD-1、PD-L1和/或PD-L2抑制剂可以与本文所述的TNFRSF激动剂一起用于细胞培养。在手术切除肿瘤之前，或者在输注TIL期间或之后，PD-1、PD-L1和/或PD-L2抑制剂也可以与TNFRSF激动剂联合使用。例如，国际专利申请公开号WO2015/026684A1中描述了将PD-1/PD-L1抑制剂与激动性GITR抗体和包含PD-1/PD-L1拮抗剂和GITR激动剂的组合物联合使用的合适方法，其公开内容通过引用并入本文。
在一个实施方式中，PD-1抑制剂可以是本领域已知的任何PD-1抑制剂或PD-1阻断剂。特别地，它是以下段落中更详细描述的PD-1抑制剂或阻断剂之一。本文涉及PD-1抑制剂的术语“抑制剂(inhibitor)”、“拮抗剂(antagonist)”和“阻断剂(blocker)”可互换使用。为避免疑义，本文提及的作为抗体的PD-1抑制剂可以指化合物或它的抗原结合片段、变体、缀合物或生物仿制药。为避免疑义，本文提及的PD-1抑制剂还可以指小分子化合物或它的药学上可接受的盐、酯、溶剂化物、水合物、共晶或前药。
在一些实施方式中，本文所述的组合物和方法包括PD-1抑制剂。在一些实施方式中，PD-1抑制剂是小分子。在一个优选的实施方式中，PD-1抑制剂是抗体(即抗PD-1抗体)、它的片段(包括Fab片段)或它的单链可变片段(scFv)。在一些实施方式中，PD-1抑制剂是多克隆抗体。在一个优选的实施方式中，PD-1抑制剂是单克隆抗体。在一些实施方式中，PD-1抑制剂竞争性结合PD-1，和/或结合PD-1上的表位。在一个实施方式中，抗体竞争性结合PD-1，和/或结合PD-1上的表位。
在一些实施方式中，所述组合物和方法包括PD-1抑制剂，该PD-1抑制剂：与人PD-1结合的KD为约100pM以下；与人PD-1结合的KD为约90pM以下；与人PD-1结合的KD为约80pM以下；与人PD-1结合的KD为约70pM以下；与人PD-1结合的KD为约60pM以下；与人PD-1结合的KD为约50pM以下；与人PD-1结合的KD为约40pM以下；或与人PD-1结合的KD为约30pM以下；与人PD-1结合的KD为约20pM以下；与人PD-1结合的KD为约10pM以下；与人PD-1结合的KD为约1pM以下。
在一些实施方式中，该组合物和方法包括PD-1抑制剂，该PD-1抑制剂：与人PD-1结合的kassoc为约7×105 1/M·s以上；与人PD-1结合的kassoc为约7.5×105 1/M·s以上；与人PD-1结合的kassoc为约8×105 1/M·s以上；与人PD-1结合的kassoc为约8.5×105 1/M·s以上；与人PD-1结合的kassoc为约9×105 1/M·s以上；与人PD-1结合的kassoc为约9.5×1051/M·s以上；或与人PD-1结合的kassoc为约1×106 1/M·s以上。
在一些实施方式中，该组合物、过程和方法包括结合人PD-1的PD-1抑制剂，该PD-1抑制剂：与人PD-1结合的kdissoc为约2×10-5 1/s以下；与人PD-1结合的kdissoc为约2.1×10-51/s以下；与人PD-1结合的kdissoc为约2.2×10-5 1/s以下；与人PD-1结合的kdissoc为约2.3×10-5 1/s以下；与人PD-1结合的kdissoc为约2.4×10-5 1/s以下；与人PD-1结合的kdissoc为约2.5×10-5 1/s以下；与人PD-1结合的kdissoc为约2.6×10-5 1/s以下；与人PD-1结合的kdissoc为约2.7×10-5 1/s以下；与人PD-1结合的kdissoc为约2.8×10-5 1/s以下；与人PD-1结合的kdissoc为约2.9×10-5 1/s以下；或与人PD-1结合的kdissoc为约3×10-5 1/s以下。
在一些实施方式中，所述组合物、过程和方法包括阻断或抑制人PD-L1或人PD-L2与人PD-1的结合的PD-1抑制剂，该PD-1抑制剂：阻断或抑制人PD-L1或人PD-L2与人PD-1的结合的IC50为约10nM以下；阻断或抑制人PD-L1或人PD-L2与人PD-1的结合的IC50为约9nM以下；阻断或抑制人PD-L1或人PD-L2与人PD-1的结合的IC50为约8nM以下；阻断或抑制人PD-L1或人PD-L2与人PD-1的结合的IC50为约7nM以下；阻断或抑制人PD-L1或人PD-L2与人PD-1的结合的IC50为约6nM以下；阻断或抑制人PD-L1或人PD-L2与人PD-1的结合的IC50为约5nM以下；阻断或抑制人PD-L1或人PD-L2与人PD-1的结合的IC50为约4nM以下；阻断或抑制人PD-L1或人PD-L2与人PD-1的结合的IC50为约3nM以下；阻断或抑制人PD-L1或人PD-L2与人PD-1的结合的IC50为约2nM以下；或阻断或抑制人PD-L1或人PD-L2与人PD-1的结合的IC50为约1nM以下。
在一个实施方式中，PD-1抑制剂是尼沃鲁单抗(可从Bristol-Myers Squibb Co.作为OPDIVO商购)，或它的生物仿制药、抗原结合片段、缀合物或变体。尼沃鲁单抗是一种阻断PD-1受体的全人IgG4抗体。在一个实施方式中，抗PD-1抗体是免疫球蛋白G4κ抗(人CD274)抗体。尼沃鲁单抗被分配的化学文摘社(CAS，Chemical Abstracts Service)登记号为946414-94-4，尼沃鲁单抗也称为5C4、BMS-936558、MDX-1106和ONO-4538。尼沃鲁单抗的制备和性质描述于美国专利号8,008,449和国际专利公开号WO2006/121168中，其公开内容通过引用并入本文。尼沃鲁单抗在各种形式的癌症中的临床安全性和功效已被描述于Wang等，Cancer Immunol Res.，2014，2，846-56；Page等，Αnn.Rev.Med.，2014，65，185-202；以及Weber等，J.Clin.Oncology，2013，31，4311-4318，其公开内容通过引用并入本文。尼沃鲁单抗的氨基酸序列列于表48中。尼沃鲁单抗在第22位至第96位、第140位至第196位、第254位至第314位、第360位至第418位、第22”位至第96”位、第140”位至第196”位、第254”位至第314”位和第360”位至第418”位处具有重链链内二硫键；在第23'位至第88'位、第134'位至第194'位、第23”'位至第88”'位和第134”'位至第194”'位处具有轻链链内二硫键；在第127位至第214'位和第127”位至第214”'位处具有重链-轻链链间二硫键；在第219位至第219”位和第222位至第222”位处具有重链-重链链间二硫键；以及在第290位第290”位处的N-糖基化位点(H CH2 84.4)。
在一个实施方式中，PD-1抑制剂包含SEQ ID NO：463给出的重链和SEQ ID NO：464给出的轻链。在一个实施方式中，PD-1抑制剂包含分别具有SEQ ID NO：463和SEQ ID NO：464所示序列的重链和轻链，或它们的抗原结合片段、Fab片段、单链可变片段(scFv)、变体或缀合物。在一个实施方式中，PD-1抑制剂包含重链和轻链，它们分别与SEQ ID NO：463和SEQ ID NO：464所示序列至少99％相同。在一个实施方式中，PD-1抑制剂包含重链和轻链，它们分别与SEQ ID NO：463和SEQ ID NO：464所示序列至少98％相同。在一个实施方式中，PD-1抑制剂包含重链和轻链，它们分别与SEQ ID NO：463和SEQ ID NO：464所示序列至少97％相同。在一个实施方式中，PD-1抑制剂包含重链和轻链，它们分别与SEQ ID NO：463和SEQ ID NO：464所示序列至少96％相同。在一个实施方式中，PD-1抑制剂包含重链和轻链，它们分别与SEQ ID NO：463和SEQ ID NO：464所示序列至少95％相同。
在一个实施方式中，PD-1抑制剂包含尼沃鲁单抗的重链和轻链CDR或可变区(VR)。在一个实施方式中，PD-1抑制剂重链可变区(VH)包含SEQ ID NO：465所示序列，并且PD-1抑制剂轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO：466所示序列，及它们的保守性氨基酸取代。在一个实施方式中，PD-1抑制剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：465和SEQ ID NO：466所示序列至少99％相同。在一个实施方式中，PD-1抑制剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：465和SEQ ID NO：466所示序列至少98％相同。在一个实施方式中，PD-1抑制剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：465和SEQ ID NO：466所示序列至少97％相同。在一个实施方式中，PD-1抑制剂包含VH和VL区，其各自与SEQ ID NO：465和SEQ ID NO：466所示序列至少96％相同，分别。在一个实施方式中，PD-1抑制剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：465和SEQ ID NO：466所示序列至少95％相同。
在一个实施方式中，PD-1抑制剂包含：重链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述重链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：467、SEQ ID NO：468和SEQ ID NO：469所示的序列；和轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：470、SEQ ID NO：471和SEQ IDNO：472所示的序列。在一个实施方式中，与上述任何抗体相同，该抗体竞争性结合和/或结合至PD-1上的表位。
在一个实施方式中，PD-1抑制剂是药物监管机构批准的参考尼沃鲁单抗的抗PD-1生物仿制药单克隆抗体。在一个实施方式中，该生物仿制药包含抗PD-1抗体，与参考药物产品或参考生物产品相比，该抗PD-1抗体包含与参考药物产品或参考生物产品的氨基酸序列具有至少97％序列同一性(例如，97％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列，并且该氨基酸序列包含一种以上翻译后修饰，其中参考药物产品或参考生物产品是尼沃鲁单抗。在一些实施方式中，一种以上翻译后修饰选自糖基化、氧化、脱酰胺和截短中的一种以上。在一些实施方式中，生物仿制药是经授权或提交待授权的抗PD-1抗体，其中，抗PD-1抗体以与参考药物产品或参考生物产品的制剂不同的制剂提供，其中参考药物产品或参考生物产品是尼沃鲁单抗。抗PD-1抗体可以由药物管理机构(例如，美国FDA和/或欧盟的EMA)授权。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是尼沃鲁单抗。在一些实施方式中，该生物仿制剂作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是尼沃鲁单抗。
表48：尼沃鲁单抗相关的PD-1抑制剂的氨基酸序列
在另一个实施方式中，PD-1抑制剂包含兰洛利珠单抗(可从Merck&Co.，Inc.，Kenilworth，新泽西，美国商购KEYTRUDA)，或它的抗原结合片段、缀合物或变体。兰洛利珠单抗被分配的CAS登记号为1374853-91-4，它也称为lambrolizumab、MK-3475和SCH-900475。兰洛利珠单抗具有免疫球蛋白G4，抗(人蛋白PDCD1(程序性细胞死亡1))(人-小家鼠单克隆重链)，与人-小家鼠单克隆轻链的二硫化物，二聚体结构。兰洛利珠单抗的结构也可以描述为免疫球蛋白G4，抗(人程序性细胞死亡1)；人源化小鼠单克隆[228-L-脯氨酸(H10-S>P)]γ4重链(134-218')-二硫化物，具有人源化小鼠单克隆κ轻链二聚体(226-226”：229-229”)-二硫化物。兰洛利珠单抗的性质、用途和制备描述于国际专利公开号WO2008/156712Al、美国专利号8,354,509以及美国专利申请公开号US2010/0266617A1、US2013/0108651A1和US2013/0109843A2，其公开内容通过引用并入本文。兰洛利珠单抗在各种形式的癌症中的临床安全性和功效描述于Fuerst，Oncology Times，2014，36，35-36；Robert等，Lancet，2014，384，1109-17；以及Thomas等，Exp.Opin.Biol.Ther.，2014，14，1061-1064。兰洛利珠单抗的氨基酸序列列于表49中。兰洛利珠单抗包括以下二硫键：第22位至第96位、第22”位至第96”位、第23'位至第92'位、第23”'位至第92”'位、第134位至第218'位、第134”位至第218”'位、第138'位至第198'位、第138”'位至第198”'位、第147位至第203位、第147”位至第203”位、第226位至第226”位、第229位至第229”位、第261位至第321位、第261”位至第321”位、第367位至第425位和第367”位至第425”位，以及以下糖基化位点(N)：第297位Asn和第297”位Asn。兰洛利珠单抗是IgG4/κ同种型，在Fc区具有稳定的S228P突变；在IgG4铰链区中插入该突变可防止通常在IgG4抗体观察到的半分子的形成。兰洛利珠单抗在每条重链的Fc结构域内的第297位Asn处异质糖基化，对完整抗体产生约149kDa的分子量。兰洛利珠单抗的主要糖型是岩藻糖基化的去半乳糖(agalacto)双触角(diantennary)聚糖形式(G0F)。
在一个实施方式中，PD-1抑制剂包含SEQ ID NO：473给出的重链和SEQ ID NO：474给出的轻链。在一个实施方式中，PD-1抑制剂包含分别具有SEQ ID NO：473和SEQ ID NO：474所示序列的重链和轻链，或它们的抗原结合片段、Fab片段、单链可变片段(scFv)、变体或缀合物。在一个实施方式中，PD-1抑制剂包含重链和轻链，它们分别与SEQ ID NO：473和SEQ ID NO：474所示序列至少99％相同。在一个实施方式中，PD-1抑制剂包含重链和轻链，它们分别与SEQ ID NO：473和SEQ ID NO：474所示序列至少98％相同。在一个实施方式中，PD-1抑制剂包含重链和轻链，它们分别与SEQ ID NO：473和SEQ ID NO：474所示序列至少97％相同。在一个实施方式中，PD-1抑制剂包含重链和轻链，它们分别与SEQ ID NO：473和SEQ ID NO：474所示序列至少96％相同。在一个实施方式中，PD-1抑制剂包含重链和轻链，它们分别与SEQ ID NO：473和SEQ ID NO：474所示序列至少95％相同。
在一个实施方式中，PD-1抑制剂包含兰洛利珠单抗的重链和轻链CDR或可变区(VR)。在一个实施方式中，PD-1抑制剂重链可变区(VH)包含SEQ ID NO：475所示序列，并且PD-1抑制剂轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO：476所示序列，及它们的保守性氨基酸取代。在一个实施方式中，PD-1抑制剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：475和SEQ ID NO：476所示序列至少99％相同。在一个实施方式中，PD-1抑制剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ IDNO：475和SEQ ID NO：476所示序列至少98％相同。在一个实施方式中，PD-1抑制剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：475和SEQ ID NO：476所示序列至少97％相同。在一个实施方式中，PD-1抑制剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：475和SEQ ID NO：476所示序列至少96％相同。在一个实施方式中，PD-1抑制剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：475和SEQID NO：476所示序列至少95％相同。
在一个实施方式中，PD-1抑制剂包含：重链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述重链CDR1、CDR2和CDR3结构域具有分别在SEQ ID NO：477、SEQ ID NO：478和SEQ ID NO：479所示的序列；和轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：480、SEQ ID NO：481和SEQ IDNO：482所示的序列。在一个实施方式中，与上述任何抗体相同，该抗体竞争性结合和/或结合至PD-1上的表位。
在一个实施方式中，PD-1抑制剂是药物监管机构批准的参考兰洛利珠单抗的抗PD-1生物仿制药单克隆抗体。在一个实施方式中，该生物仿制药包含抗PD-1抗体，与参考药物产品或参考生物产品相比，该抗PD-1抗体包含与参考药物产品或参考生物产品的氨基酸序列具有至少97％序列同一性(例如，97％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列，并且该氨基酸序列包含一种以上翻译后修饰，其中参考药物产品或参考生物产品是兰洛利珠单抗。在一些实施方式中，一种以上翻译后修饰选自糖基化、氧化、脱酰胺和截短中的一种以上。在一些实施方式中，生物仿制药是经授权或提交待授权的抗PD-1抗体，其中，抗PD-1抗体以与参考药物产品或参考生物产品的制剂不同的制剂提供，其中参考药物产品或参考生物产品是兰洛利珠单抗。抗PD-1抗体可以由药物管理机构(例如，美国FDA和/或欧盟的EMA)授权。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是兰洛利珠单抗。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是兰洛利珠单抗。
表49：兰洛利珠单抗相关的PD-1抑制剂的氨基酸序列
在一个实施方式中，PD-1抑制剂是市售的抗PD-1单克隆抗体，例如，抗m-PD-1克隆J43(目录号BE0033-2)和RMP1-14(目录号BE0146)(BioXCell，Inc.，西莱巴嫩，新罕布什尔州，美国)。许多市售的抗PD-1抗体是本领域普通技术人员已知的。
在一个实施方式中，PD-1抑制剂是美国专利号8,354,509或美国专利申请公开号2010/0266617Al、2013/0108651A1、2013/0109843A2公开的抗体，其公开内容通过引用并入本文。在一个实施方式中，PD-1抑制剂是美国专利号8,287,856、8,850,247和8,168,757以及美国专利申请公开号2009/0028857Al、2010/0285013A1、2013/0022600A1和2011/0008369A1所述的抗PD-1抗体，其教导通过引用并入本文。在另一个实施方式中，PD-1抑制剂是美国专利号8,735,553B1中公开的抗PD-1抗体，其公开内容通过引用并入本文。在一个实施方式中，PD-1抑制剂是匹地利珠单抗(pidilizumab)，也称为CT-011，它被描述于美国专利号8,686,119中，其公开内容通过引用并入本文。
在一个实施方式中，PD-1抑制剂可以为：小分子或肽，或肽衍生物，例如，美国专利号8,907,053、9,096,642和9,044,442，以及美国专利申请公开号US2015/0087581所述的那些；1,2,4-恶二唑化合物和衍生物，例如，美国专利申请公开号2015/0073024所述的那些；环状肽模拟化合物和衍生物，例如，美国专利申请公开号US2015/0073042所述的那些；环状化合物和衍生物，例如，美国专利申请公开号US2015/0125491所述的那些；1,3,4-恶二唑和1,3,4-噻二唑化合物和衍生物，例如，国际专利申请公开号WO2015/033301所述的那些；基于肽的化合物和衍生物，例如，国际专利申请公开号WO2015/036927和WO2015/04490所述的那些；或基于大环肽的化合物和衍生物，例如，美国专利申请公开号US2014/0294898所述的那些；其各自的公开内容通过引用整体并入本文。
在一个实施方式中，PD-L1或PD-L2抑制剂可以是本领域已知的任何PD-L1或PD-L2抑制剂、拮抗剂或阻断剂。特别地，它是以下段落中更详细描述的PD-L1或PD-L2抑制剂、拮抗剂或阻断剂之一。本文涉及PD-L1和PD-L2抑制剂的术语“抑制剂”、“拮抗剂”和“阻断剂”可互换使用。为避免疑义，本文提及的作为抗体的PD-L1或PD-L2抑制剂可以指化合物或它们的抗原结合片段、变体、缀合物或生物仿制药。为避免疑义，本文提及的PD-L1或PD-L2抑制剂还可以指小分子化合物或它的药学上可接受的盐、酯、溶剂化物、水合物、共晶或前药。
在一些实施方式中，本文所述的组合物、过程和方法包括PD-L1或PD-L2抑制剂。在一些实施方式中，PD-L1或PD-L2抑制剂是小分子。在一个优选的实施方式中，PD-L1或PD-L2抑制剂是抗体(即抗PD-1抗体)，它的片段(包括Fab片段)，或它的单链可变片段(scFv)。在一些实施方式中，PD-L1或PD-L2抑制剂是多克隆抗体。在一个优选的实施方式中，PD-L1或PD-L2抑制剂是单克隆抗体。在一些实施方式中，PD-L1或PD-L2抑制剂竞争性结合PD-L1或PD-L2，和/或结合PD-L1或PD-L2上的表位。在一个实施方式中，抗体竞争性结合PD-L1或PD-L2，和/或结合PD-L1或PD-L2上的表位。
在一些实施方式中，本文提供的PD-L1抑制剂对PD-L1具有选择性，因为该化合物与PD-L1结合或相互作用的浓度显著低于它们与其他受体(包括PD-L2受体)结合或相互作用的浓度。在某些实施方式中，该化合物与PD-L1受体结合的结合常数比与PD-L2受体结合至少高约2倍浓度、至少高约3倍浓度、至少高约5倍浓度、至少高约10倍浓度、至少高约20倍浓度、至少高约30倍浓度、至少高约50倍浓度、至少高约100倍浓度、至少高约200倍浓度、至少高约300倍浓度，或至少高约500倍浓度。
在一些实施方式中，本文提供的PD-L2抑制剂对PD-L2具有选择性，因为该化合物与PD-L2结合或相互作用的浓度显著低于它们与其他受体(包括PD-L1受体)结合或相互作用的浓度。在某些实施方式中，该化合物与PD-L2受体结合的结合常数比与PD-L1受体结合至少高约2倍浓度、至少高约3倍浓度、至少高约5倍浓度、至少高约10倍浓度、至少高约20倍浓度、至少高约30倍浓度、至少高约50倍浓度、至少高约100倍浓度、至少高约200倍浓度、至少高约300倍浓度，或至少高约500倍浓度。
不受任何理论的束缚，据认为肿瘤细胞表达PD-L1，并且T细胞表达PD-1。然而，PD-1或PD-L1抑制剂或阻断剂的功效不需要肿瘤细胞表达PD-L1。在一个实施方式中，肿瘤细胞表达PD-L1。在另一个实施方式中，肿瘤细胞不表达PD-L1。在一些实施方式中，本文所述的方法和组合物包括PD-1和PD-L1抗体的组合(例如本文所述的那些)与TIL组合。PD-1和PD-L1抗体和TIL的组合的施用可以是同时的或顺序的。
在一些实施方式中，所述组合物和方法包括PD-L1和/或PD-L2抑制剂，该PD-L1和/或PD-L2抑制剂：与人PD-L1和/或人PD-L2结合的KD为约100pM以下；与人PD-L1和/或人PD-L2结合的KD为约90pM以下；与人PD-L1和/或人PD-L2结合的KD为约80pM以下；与人PD-L1和/或人PD-L2结合的KD为约70pM以下；与人PD-L1和/或人PD-L2结合的KD为约60pM以下；与人PD-L1和/或人PD-L2结合的KD为约50pM以下；与人PD-L1和/或人PD-L2结合的KD为约40pM以下；或与人PD-L1和/或人PD-L2结合的KD为约30pM以下。
在一些实施方式中，所述组合物和方法包括PD-L1和/或PD-L2抑制剂，该PD-L1和/或PD-L2抑制剂：与人PD-L1和/或人PD-L2结合的kassoc为约7×105 1/M·s以上；与人PD-L1和/或人PD-L2结合的kassoc为约7.5×105 1/M·s以上；与人PD-L1和/或人PD-L2结合的kassoc为约8×105 1/M·s以上；与人PD-L1和/或人PD-L2结合的kassoc为约8.5×105 1/M·s以上；与人PD-L1和/或人PD-L2结合的kassoc为约9×105 1/M·s以上；与人PD-L1和/或人PD-L2结合的kassoc为约9.5×105 1/M·s以上；或与人PD-L1和/或人PD-L2结合的kassoc为约1×1061/M·s以上。
在一些实施方式中，所述组合物和方法包括PD-L1和/或PD-L2抑制剂，该PD-L1和/或PD-L2抑制剂：与人PD-L1和/或人PD-L2结合的kdissoc为约2×10-5 1/s以下；与人PD-L1和/或人PD-L2结合的kdissoc为约2.1×10-5 1/s以下；与人PD-L1和/或人PD-L2结合的kdissoc为约2.2×10-5 1/s以下；与人PD-L1和/或人PD-L2结合的kdissoc为约2.3×10-5 1/s以下；与人PD-L1和/或人PD-L2结合的kdissoc为约2.4×10-5 1/s以下；与人PD-L1和/或人PD-L2结合的kdissoc为约2.5×10-5 1/s以下；与人PD-L1和/或人PD-L2结合的kdissoc为约2.6×10-5 1/s以下；与人PD-L1和/或人PD-L2结合的kdissoc为约2.7×10-5 1/s以下；与人PD-L1和/或人PD-L2结合的kdissoc为约2.8×10-5 1/s以下；与人PD-L1和/或人PD-L2结合的kdissoc为约2.9×10-51/s以下；或与人PD-L1和/或人PD-L2结合的kdissoc为约3×10-5 1/s以下。
在一些实施方式中，所述组合物和方法包括PD-L1和/或PD-L2抑制剂，该PD-L1和/或PD-L2抑制剂：阻断或抑制人PD-L1或人PD-L2与人PD-1的结合，IC50为约10nM以下；阻断或抑制人PD-L1或人PD-L2与人PD-1的结合，IC50为约9nM以下；阻断或抑制人PD-L1或人PD-L2与人PD-1的结合，IC50为约8nM以下；阻断或抑制人PD-L1或人PD-L2与人PD-1的结合，IC50为约7nM以下；阻断或抑制人PD-L1或人PD-L2与人PD-1的结合，IC50为约6nM以下；阻断或抑制人PD-L1或人PD-L2与人PD-1的结合，IC50为约5nM以下；阻断或抑制人PD-L1或人PD-L2与人PD-1的结合，IC50为约4nM以下；阻断或抑制人PD-L1或人PD-L2与人PD-1的结合，IC50为约3nM以下；阻断或抑制人PD-L1或人PD-L2与人PD-1的结合，IC50为约2nM以下；或阻断或抑制人PD-L1或人PD-L2与人PD-1的结合，IC50为约1nM以下。
在一个实施方式中，PD-L1抑制剂是度伐鲁单抗，也称为MEDI4736(它可从AstraZeneca plc.的子公司Medimmune，LLC，盖瑟斯堡，马里兰商购)，或它的抗原结合片段、缀合物或变体。在一个实施方式中，PD-L1抑制剂是美国专利号8,779,108或美国专利申请公开号2013/0034559中公开的抗体，其公开内容通过引用并入本文。度伐鲁单抗的临床疗效已描述于Page等，Ann.Rev.Med，2014，65，185-202；Brahmer等，J.Clin.Oncol.，2014，32，5s(补充，摘要8021)；以及McDermott等，Cancer Treatment Rev.，2014，40，1056-64。度伐鲁单抗的制备和性质描述于美国专利号8,779,108中，其公开内容通过引用并入本文。度伐鲁单抗的氨基酸序列列于表50中。度伐鲁单抗单克隆抗体包含：在第22位至第96位、第22”位至第96”位、第23'位至第89'位、第23”'位至第89”'位、第135'位至第195'位、第135”'位至第195”'位、第148位至第204位、第148”位至第204”位、第215'位至第224位、第215”'位至第224”位、第230位至第230”位、第233位至第233”位、第265位至第325位、第265”位至第325”位、第371位至第429位和第371”位至第429'位处的二硫键；以及在第301位Asn和第301”位Asn处的N-糖基化位点。
在一个实施方式中，PD-L1抑制剂包含SEQ ID NO：483给出的重链和SEQ ID NO：484给出的轻链。在一个实施方式中，PD-L1抑制剂包含分别具有SEQ ID NO：483和SEQ IDNO：484所示序列的重链和轻链，或它们的抗原结合片段、Fab片段、单链可变片段(scFv)、变体或缀合物。在一个实施方式中，PD-L1抑制剂包含重链和轻链，它们分别与SEQ ID NO：483和SEQ ID NO：484所示序列至少99％相同。在一个实施方式中，PD-L1抑制剂包含重链和轻链，它们分别与SEQ ID NO：483和SEQ ID NO：484所示序列至少98％相同。在一个实施方式中，PD-L1抑制剂包含重链和轻链，它们分别与SEQ ID NO：483和SEQ ID NO：484所示序列至少97％相同。在一个实施方式中，PD-L1抑制剂包含重链和轻链，它们分别与SEQ ID NO：483和SEQ ID NO：484所示序列至少96％相同。在一个实施方式中，PD-L1抑制剂包含重链和轻链，它们分别与SEQ ID NO：483和SEQ ID NO：484所示序列至少95％相同。
在一个实施方式中，PD-L1抑制剂包含度伐鲁单抗的重链和轻链CDR或可变区(VR)。在一个实施方式中，PD-L1抑制剂重链可变区(VH)包含SEQ ID NO：485所示序列，并且PD-L1抑制剂轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO：486所示序列，及它们的保守性氨基酸取代。在一个实施方式中，PD-L1抑制剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：485和SEQ ID NO：486所示序列至少99％相同。在一个实施方式中，PD-L1抑制剂包含VH和VL区，它们分别与SEQID NO：485和SEQ ID NO：486所示序列至少98％相同。在一个实施方式中，PD-L1抑制剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：485和SEQ ID NO：486所示序列至少97％相同。在一个实施方式中，PD-L1抑制剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：485和SEQ ID NO：486所示序列至少96％相同。在一个实施方式中，PD-L1抑制剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：485和SEQ ID NO：486所示序列至少95％相同。
在一个实施方式中，PD-L1抑制剂包含：重链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述重链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：487、SEQ ID NO：488和SEQ ID NO：489所示的序列；和轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：490、SEQ ID NO：491和SEQ IDNO：492所示的序列。在一个实施方式中，与任何上述抗体相同，该抗体竞争性结合和/或结合至PD-L1上的表位。
在一个实施方式中，PD-L1抑制剂是药物监管机构批准的参考度伐鲁单抗的抗PD-L1生物仿制药单克隆抗体。在一个实施方式中，该生物仿制药包含抗PD-L1抗体，与参考药物产品或参考生物产品相比，该抗PD-L1抗体包含与参考药物产品或参考生物产品的氨基酸序列具有至少97％序列同一性(例如，97％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列，并且该氨基酸序列包含一种以上翻译后修饰，其中参考药物产品或参考生物产品是度伐鲁单抗。在一些实施方式中，一种以上翻译后修饰选自糖基化、氧化、脱酰胺和截短中的一种以上。在一些实施方式中，生物仿制药是经授权或提交待授权的抗PD-L1抗体，其中，抗PD-L1抗体以与参考药物产品或参考生物产品的制剂不同的制剂提供，其中参考药物产品或参考生物产品是度伐鲁单抗。抗PD-L1抗体可以由药物管理机构(例如，美国FDA和/或欧盟的EMA)授权。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是度伐鲁单抗。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是度伐鲁单抗。
表50：度伐鲁单抗相关的PD-L1抑制剂的氨基酸序列
在一个实施方式中，PD-L1抑制剂是阿维鲁单抗，也称为MSB0010718C(可从MerckKGaA/EMD Serono商购)，或它的抗原结合片段、缀合物或变体。阿维鲁单抗的制备和性质描述于美国专利申请公开号US2014/0341917A1中，其公开内容通过引用明确地并入本文。阿维鲁单抗的氨基酸序列列于表51中。阿维鲁单抗具有：在第22位至第96位、第147位至第203位、第264位至第324位、第370位至第428位、第22”位至第96”位、第147”位至第203”位、第264”位至第324”位和第370”位至第428”位处的重链链内二硫键(C23-C104)；在第22'位至第90'位、第138'位至第197'位、第22”'位至第90”'位和第138”'位至第197”'位处的轻链链内二硫键(C23-C104)；在第223位至第215'位和第223”位至第215”'位处的重链-轻链链间二硫键(h 5-CL126)；在第229位至第229”位和第232位至第232”位处的重链-重链链间二硫键(h 11、h 14)；在第300位和第300”位处的N-糖基化位点(H CH2 N84.4)；岩藻糖基化的复合双触角CHO型聚糖；在第450位和第450'位处的H CHS K2 C-末端赖氨酸剪切。
在一个实施方式中，PD-L1抑制剂包含SEQ ID NO：493给出的重链和SEQ ID NO：494给出的轻链。在一个实施方式中，PD-L1抑制剂包含分别具有SEQ ID NO：493和SEQ IDNO：494所示序列的重链和轻链，或它们的抗原结合片段、Fab片段、单链可变片段(scFv)、变体或缀合物。在一个实施方式中，PD-L1抑制剂包含重链和轻链，它们分别与SEQ ID NO：493和SEQ ID NO：494所示序列至少99％相同。在一个实施方式中，PD-L1抑制剂包含重链和轻链，它们分别与SEQ ID NO：493和SEQ ID NO：494所示序列至少98％相同。在一个实施方式中，PD-L1抑制剂包含重链和轻链，它们分别与SEQ ID NO：493和SEQ ID NO：494所示序列至少97％相同。在一个实施方式中，PD-L1抑制剂包含重链和轻链，它们分别与SEQ ID NO：493和SEQ ID NO：494所示序列至少96％相同。在一个实施方式中，PD-L1抑制剂包含重链和轻链，它们分别与SEQ ID NO：493和SEQ ID NO：494所示序列至少95％相同。
在一个实施方式中，PD-L1抑制剂包含阿维鲁单抗的重链和轻链CDR或可变区(VR)。在一个实施方式中，PD-L1抑制剂重链可变区(VH)包含SEQ ID NO：495所示序列，并且PD-L1抑制剂轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO：496所示序列，及它们的保守性氨基酸取代。在一个实施方式中，PD-L1抑制剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：495和SEQ ID NO：496所示序列至少99％相同。在一个实施方式中，PD-L1抑制剂包含VH和VL区，它们分别与SEQID NO：495和SEQ ID NO：496所示序列至少98％相同。在一个实施方式中，PD-L1抑制剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：495和SEQ ID NO：496所示序列至少97％相同。在一个实施方式中，PD-L1抑制剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：495和SEQ ID NO：496所示序列至少96％相同。在一个实施方式中，PD-L1抑制剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：495和SEQ ID NO：496所示序列至少95％相同。
在一个实施方式中，PD-L1抑制剂包含：重链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述重链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：497、SEQ ID NO：498和SEQ ID NO：499所示的序列；和轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：500、SEQ ID NO：501和SEQ IDNO：502所示的序列。在一个实施方式中，与任何上述抗体相同，该抗体竞争性结合和/或结合至PD-L1上的表位。
在一个实施方式中，PD-L1抑制剂是药物监管机构批准的参考阿维鲁单抗的抗PD-L1生物仿制药单克隆抗体。在一个实施方式中，该生物仿制药包含抗PD-L1抗体，与参考药物产品或参考生物产品相比，该抗PD-L1抗体包含与参考的氨基酸序列具有至少97％序列同一性(例如，97％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列，并且该氨基酸序列包含一种以上翻译后修饰，其中参考药物产品或参考生物产品是阿维鲁单抗。在一些实施方式中，一种以上翻译后修饰选自糖基化、氧化、脱酰胺和截短中的一种以上。在一些实施方式中，生物仿制药是经授权或提交待授权的抗PD-L1抗体，其中，抗PD-L1抗体以与参考药物产品或参考生物产品的制剂不同的制剂提供，其中参考药物产品或参考生物产品是阿维鲁单抗。抗PD-L1抗体可以由药物管理机构(例如，美国FDA和/或欧盟的EMA)授权。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是阿维鲁单抗。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是阿维鲁单抗。
表51：阿维鲁单抗相关的PD-L1抑制剂的氨基酸序列
在一个实施方式中，PD-L1抑制剂是阿特利珠单抗，也称为MPDL3280A或RG7446(可从Roche Holding AG，巴塞尔，瑞士的子公司Genentech，Inc作为TECENTRIQ商购)，或它的抗原结合片段、缀合物或变体。在一个实施方式中，PD-L1抑制剂是美国专利号8,217,149所公开的抗体，其公开内容通过引用明确地并入本文。在一个实施方式中，PD-L1抑制剂是美国专利申请公开号2010/0203056Al、2013/0045200A1、2013/0045201A1、2013/0045202A1或2014/0065135A1公开的抗体，其公开内容通过引用明确地并入本文。阿特利珠单抗的制备和性质描述于美国专利号8,217,149中，其公开内容通过引用并入本文。阿特利珠单抗的氨基酸序列列于表52中。阿特利珠单抗具有：在第22位至第96位、第145位至第201位、第262位至第322位、第368位至第426位、第22”位至第96”位、第145”位至第201”位、第262”位至第322”位和第368”位至第426”位处的重链链内二硫键(C23-C104)；在第23'位至第88'位、第134'位至第194'位、第23”'位至第88”'位和第134”'位至第194”'位处的轻链链内二硫键(C23-C104)；在第221位至第214'位和第221”位至第214”'位处的重链-轻链链间二硫键(h5-CL126)；在第227位至第227”位和第230位至第230”位处的重链-重链链间二硫键(h 11、h14)；在第298位和第298'位处的N-糖基化位点(H CH2 N84.4>A)。
在一个实施方式中，PD-L1抑制剂包含SEQ ID NO：503给出的重链和SEQ ID NO：504给出的轻链。在一个实施方式中，PD-L1抑制剂包含分别具有SEQ ID NO：503和SEQ IDNO：504所示序列的重链和轻链，或它们的抗原结合片段、Fab片段、单链可变片段(scFv)、变体或缀合物。在一个实施方式中，PD-L1抑制剂包含重链和轻链，它们分别与SEQ ID NO：503和SEQ ID NO：504所示序列至少99％相同。在一个实施方式中，PD-L1抑制剂包含重链和轻链，它们分别与SEQ ID NO：503和SEQ ID NO：504所示序列至少98％相同。在一个实施方式中，PD-L1抑制剂包含重链和轻链，它们分别与SEQ ID NO：503和SEQ ID NO：504所示序列至少97％相同。在一个实施方式中，PD-L1抑制剂包含重链和轻链，它们分别与SEQ ID NO：503和SEQ ID NO：504所示序列至少96％相同。在一个实施方式中，PD-L1抑制剂包含重链和轻链，它们分别与SEQ ID NO：503和SEQ ID NO：504所示序列至少95％相同。
在一个实施方式中，PD-L1抑制剂包含阿特利珠单抗的重链和轻链CDR或可变区(VR)。在一个实施方式中，PD-L1抑制剂重链可变区(VH)包含SEQ ID NO：505所示序列，并且PD-L1抑制剂轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO：506所示序列，及它们的保守性氨基酸取代。在一个实施方式中，PD-L1抑制剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：505和SEQ ID NO：506所示序列至少99％相同。在一个实施方式中，PD-L1抑制剂包含VH和VL区，它们分别与SEQID NO：505和SEQ ID NO：506所示序列至少98％相同。在一个实施方式中，PD-L1抑制剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：505和SEQ ID NO：506所示序列至少97％相同。在一个实施方式中，PD-L1抑制剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：505和SEQ ID NO：506所示序列至少96％相同。在一个实施方式中，PD-L1抑制剂包含VH和VL区，它们分别与SEQ ID NO：505和SEQ ID NO：506所示序列至少95％相同。
在一个实施方式中，PD-L1抑制剂包含：重链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述重链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：507、SEQ ID NO：508和SEQ ID NO：509所示的序列；和轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域及它们的保守性氨基酸取代，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域分别具有SEQ ID NO：510、SEQ ID NO：511和SEQ IDNO：512所示的序列。在一个实施方式中，与任何上述抗体相同，该抗体竞争性结合和/或结合至PD-L1上的表位。
在一个实施方式中，抗PD-L1抗体是药物监管机构批准的参考阿特利珠单抗的抗PD-L1生物仿制药单克隆抗体。在一个实施方式中，该生物仿制药包含抗PD-L1抗体，与参考药物产品或参考生物产品相比，该抗PD-L1抗体包含与参考药物产品或参考生物产品的氨基酸序列具有至少97％序列同一性(例如，97％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列，并且该氨基酸序列包含一种以上翻译后修饰，其中参考药物产品或参考生物产品是阿特利珠单抗。在一些实施方式中，一种以上翻译后修饰选自糖基化、氧化、脱酰胺和截短中的一种以上。在一些实施方式中，生物仿制药是经授权或提交待授权的抗PD-L1抗体，其中，抗PD-L1抗体以与参考药物产品或参考生物产品的制剂不同的制剂提供，其中参考药物产品或参考生物产品是阿特利珠单抗。抗PD-L1抗体可以由药物管理机构(例如，美国FDA和/或欧盟的EMA)授权。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是阿特利珠单抗。在一些实施方式中，该生物仿制药作为组合物提供，该组合物还包含一种以上赋形剂，其中，该一种以上赋形剂与参考药物产品或参考生物产品中包含的赋形剂相同或不同，其中参考药物产品或参考生物产品是阿特利珠单抗。
表52：阿特利珠单抗相关的PD-L1抑制剂的氨基酸序列
在一个实施方式中，PD-L1抑制剂包括美国专利申请公开号US2014/0341917A1所述的那些抗体，其公开内容通过引用并入本文。在另一个实施方式中，还包括与任何这些抗体竞争性结合PD-L1的抗体。在一个实施方式中，抗PD-L1抗体是MDX-1105，也称为BMS-935559，其公开于美国专利US7,943,743中，其公开内容通过引用并入本文。在一个实施方式中，抗PD-L1抗体选自美国专利US7,943,743中公开的抗PD-L1抗体，其通过引用并入本文。
在一个实施方式中，PD-L1抑制剂是可商购的单克隆抗体，例如，INVIVOMAB抗m-PD-L1克隆10F.9G2(目录号#BEO101，BioXCell，Inc.，西黎巴嫩，新罕布什尔州，美国)。在一个实施方式中，抗PD-L1抗体是可商购的单克隆抗体，例如，AFFYMETRIX EBIOSCIENCE(MIH1)。许多市售的抗PD-L1抗体是本领域普通技术人员已知的。
在一个实施方式中，PD-L2抑制剂是市售的单克隆抗体，例如，BIOLEGEND24F.10C12小鼠IgG2a，κ同种型(目录号#329602Biolegend，Inc.，圣地亚哥，加利福尼亚州)、SIGMA抗PD-L2抗体(目录号#SAB3500395，Sigma-Aldrich Co.，圣路易斯市，密苏里州)或其他本领域普通技术人员已知的抗PD-L2抗体。
虽然本文显示和描述了本发明的优选实施方式，但是这些实施方式仅作为示例提供，并不旨在以其他方式限制本发明的范围。在实施本发明时可以采用本发明所述实施方式的各种替代方案。
实施例
现在参考以下实施例描述本文包括的实施方式。提供这些实施例仅用于说明的目的，并且本文包括的公开内容决不应被解释为限于这些实施例，而是应该被解释为包括根据本文提供的教导而变得明显的任何和所有变化。
实施例1：扩增TIL的方法和用扩增的TIL治疗癌症的方法
可以使用本领域已知的方法和本文所述任何方法扩增TIL。例如，扩增TIL的方法如图1所示。如本文所述，TNFRSF激动剂可以添加至图1的方法。例如，TNFRSF激动剂可以是4-1BB或OX40激动剂，在预REP或REP阶段期间或在这两个阶段期间，可以以足以促进TIL生长的浓度添加TNFRSF激动剂。TIL的扩增可以进一步与本文所述TNFRSF激动剂组合并与治疗患者中癌症的任何方法进行组合。扩增TIL和用扩增的TIL治疗癌症患者的方法如图2所示。
实施例2：使用4-1BB激动剂扩增TIL的方法
产生4-1BB-Fc杂交瘤并筛选它通过与第二抗体交联激活4-1BB信号通路的能力。使用绿色荧光蛋白(GFP)报告分子以剂量依赖性方式评估杂交瘤上清液激活Jurkat细胞(表达NF-kB)上4-1BB信号传导的能力。将上清液与Jurkat细胞在室温下孵育20分钟，然后在37℃下与山羊抗小鼠二抗(1mg/mL)交联过夜。鉴定出与Jurkat细胞上的4-1BB结合的10个克隆，结果如图3至图12所示。
在Intellicyte上对细胞进行分析，通过GFP报告基因的表达揭示了NKkB通路的激活。结果表明抗体激活Jurkat细胞上的4-1BB通路而没有第二抗体交联。
实施例3：使用乌托鲁单抗或乌瑞鲁单抗和11D4/18D8从离体培养的实体瘤碎片(多组 织学类型)扩增TIL的方法，以及用抗体激活4-1BB和/或OX40对TIL的扩增和功能的影响
TIL主要是在与免疫抑制微环境相关的所有成人肿瘤中发现不同程度地经历过抗原(非幼稚)的T细胞，在免疫抑制微环境中，损伤相关分子模式(DAMP)分子的局部累积以及诱导的检查点受体(包括CTLA-4和PD-1)经常被使用。Chacon等，Clin.Cancer Res.，2015，27，611-21；Joseph等，Clin.Cancer Res.，2011，17，4882-91。这些标志物以及TIM3、LAG3和TIGIT定义了耗尽的表型。因此，TIL表达的共刺激受体改变TIL命运和扩增。TIL上4-1BB和/或OX40的激活使得来自肿瘤碎片的TIL扩增超过单独用IL-2可达到的TIL。其他共刺激受体的激活和/或检查点受体的拮抗作用将进一步增强TIL功能(生存、规避肿瘤免疫抑制)、从肿瘤碎片迁移以及促进体外扩增。此外，这些体外研究可以预测这些抗体单独或与TIL的过继转移相结合的体内应用的反应性。可以测试对这两种激活共刺激分子(例如，OX40、11D4或18D8以及4-1BB、乌托鲁单抗或乌瑞鲁单抗)具有特异性的免疫调节mAb的此种能力。假设肿瘤碎片内的共刺激因子受体4-1BB和OX40的激活增强肿瘤碎片的TIL迁移、增殖、促进记忆表型和新生T细胞的细胞毒性。本研究的主要目的是确定：对(a)4-1BB和OX40的组合或者(b)单独的抗4-1BB和(c)单独的抗OX40具有特异性的mAb是否增加了来自肿瘤碎片的TIL的细胞毒性和记忆表型的生长。
使用15mg各自对(a)OX40和(b)4-1BB具有特异性的纯化mAb。各种组织学类型的肿瘤可以从商业来源获得。总共将获得20个独立的患者肿瘤。肿瘤将在无菌HBSS或其他适当的培养基中运输。仅在层流罩中处理肿瘤以维持无菌条件。如果可能(如果肿瘤直径>0.5cm)，将对一部分肿瘤进行FFPE和/或冷冻保存处理，用于下游IHC和/或DNA/RNA分离。通过IHC的生物标志物分析将包括CD3、CD11c和PD1和PD-L1。只要有可能，获得自体血液样本(至多20mL)并冷冻保存PBMC。如果对肿瘤进行全外显子组测序，来自储存的自体PBMC的外显子组序列将被定义为正常(即没有突变)。或者，可以使用肿瘤单细胞悬浮液。收集后洗涤肿瘤，将肿瘤切成2至3mm的碎片，将肿瘤碎片置于24孔板(每孔1个碎片)或6孔板(每孔4个碎片)中，孔板中加有培养基，该培养基补充有仅6,000IU/mL IL-2(重组)、OX40激动剂、抗4-1BB激动剂，以及OX40和4-1BB激动剂的组合，进行3个重复实验。在可获得足够肿瘤的一些实验中，对IL-2(6,000IU、600IU、60IU以及0IU的IL-2)的滴定进行检测。使用IL-2的赋形剂对照。每种mAb的终浓度为30μg/mL。培养24至48小时后，从每种条件收集250μL上清液，并储存在-20℃，用于随后分析细胞因子和趋化因子浓度(pg/106细胞/24小时)。在预REP的第11天、第21天和/或第天(每个样品至少500,000个细胞)，收集每种条件的TIL。沉淀两等份的TIL并重新悬浮于<10μl的PBS中，于-80℃冷冻。如果收集的细胞少于<106，则仅进行基因表达测定。在第7天，通过移除部分“用过的”培养基并加入等体积的培养基和6000IU/mLIL-2来喂养培养物。将用过的培养基储存于-20℃，使用多重测定法(例如，Luminex 100系统)进行随后的细胞因子/趋化因子分析。如果有足够的肿瘤碎片可用于启动超过1个重复的实验条件，则在第7天将另外的mAb添加至培养物中。TIL培养物再保持14天。在第21天，使用流式细胞术测定总细胞产量、存活率(viability)、细胞表面和细胞内免疫表型。以下标志物包括在内：CD45RA、CCR7、CD3、TCR-α/β、CD4、CD8、CXCR3、CD56、CD27、CD28、PD-1、PD-L1、BTLA、KLRG1、CD137、CD134、CD33、CD57、CD25、CD127、TEVI-3、LAG-3、TIGIT、RAGE和Ki67。如果有足够的细胞可用，也对其他生物标志物进行评估，其他生物标志物包括：CD107a、KG2D、KIRS、趋化因子死亡受体(Fas、DR4)和抗凋亡/促自噬蛋白(BCL-2、BCL-XL、Bim、CD200和LC3/HMGB1)。评估细胞毒性和调节性T细胞的细胞内标志物：粒酶B、pSTAT3、pSTAT1和FOXP3。使用裂解测定法测定TIL的裂解效力(lytic potency)。在可获得另外的肿瘤材料的情况下，将(a)酶消化后产生的肿瘤细胞悬浮液、(b)由上述肿瘤产生的自体肿瘤系，和/或(c)同源细胞系(如果可获得)与收获的TIL共培养，并检测IFN-γ释放。如果获得过量细胞，则冷冻保存这些细胞，用于分离RNA和DNA用于基因表达分析(包括TCR Vβ克隆分析)，可以使用扩大的预算在稍后的时间进行该基因表达分析。如果用抗PDL-1和抗CTLA-4或它们的组合观察到功效(定义如下)，则探究降低肿瘤碎片培养物中指示的mAb的浓度或进行更详细的剂量反应评估的可能性。如果第7天在培养物中可见肿瘤碎片，则收获它们，如果在产生单细胞悬液后有足够的细胞可用，则对它们进行遗传分析和流式细胞仪表型分析(按该优先级；待商榷)。使用适当的荧光mAb板染色后，流式细胞术分析将集中分析T细胞、树突状细胞、巨噬细胞、B细胞和NK细胞的表型。标志物包括：CD11c、CD11b、HLA-II类、CD80、CD86、CD83、CD56、CD16、CD19和CD20。
评估4-1BB激动剂、OX40激动剂及它们的组合的添加对肿瘤碎片培养物的功效，所使用的标准总结如下：
·扩增后TIL数量增加(CD4和/或CD8)
·扩增后Treg数量减少
·效应细胞和Treg细胞中T细胞增殖标志物(Ki67)的变化
·效应/记忆/分化表型的变化：CD27、CD28、CD57、CD45RA、HLA-DR、CCR7、OX40、ICOS、CD45RA；端粒酶长度
·NK细胞(CD3-/CD56+)数量、增殖和激活状态提高
·T细胞的细胞内信号蛋白或磷蛋白水平(例如，AKT与ERK)的探索性变化
·通过重定向裂解(redirected lysis)测量的CTL活性/裂解能力增加
·TIL/肿瘤裂解物、TIL/自体肿瘤和/或TIL/同源肿瘤共培养物中产生的IFN-γ/HMGB1增加。
要进行的另外的实验包括：(1)FFPE或新鲜冷冻的肿瘤材料的全外显子组测序和RNA测序(RNASeq)，以鉴定突变的基因和可能的新表位(neoepitope)，(2)肿瘤碎片培养开始24至48小时后收集的培养上清液的细胞因子和趋化因子分析，(3)第7天从早期培养取出的肿瘤碎片的基因表达分析，(4)使用高通量TCR VβCDR3区域测序分离的TIL的TCR克隆型分析，(5)在IFN-γ诱导自体/同源肿瘤的PD-L1上调的情况下(概述如下)，mAb对储存的TIL的TIL效应子功能的影响，以及通过PCR/IHC/消化分析残留T细胞的剩余碎片。
将使用配对和非配对T检验(Wilcoxon秩和检验和Wilcoxon有符号秩检验)测试检测参数的差异的显著性。多个参数的比较将使用单向和双向ANOVA分析。当适用于评估连续测量之间的相关性时，将使用Spearman回归分析。可以将所有数据制成表格并进行分析。
实施例4：使用4-1BB、OX40和其他TNFRSF成员的六聚体配体扩增TIL
在这个实施例中研究：结构I-A的六聚体融合蛋白(具有与4-1BB、OX40、CD27和其他TNFRSF成员的结合结构域)的激活对来自体外培养的实体瘤碎片(多种组织学类型)的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的扩增和功能的影响。将每种六聚体融合蛋白100mg(例如，4-1BB、OX40和CD27)与从以下适应症获得的肿瘤一起使用：肉瘤、结肠直肠癌、急性髓性白血病、卵巢癌、三阴性乳腺癌、胰腺癌(表达Ras)、肾癌和膀胱癌。各种组织学类型的肿瘤从商业来源获得。获得大约20个独立的患者肿瘤(如上所列，每个适应症2至3个肿瘤)。肿瘤通过无菌HBSS或其他适当的培养基运送到Lion。仅在层流罩中处理肿瘤以维持无菌条件。或者，可以使用肿瘤单细胞悬浮液。收集后洗涤肿瘤，将肿瘤切成2至3mm(长×宽×高)的碎片，将肿瘤碎片置于24孔板(每孔1个碎片)或6孔板(每孔4个碎片)中的细胞培养物中，孔板中加有培养基，该培养基仅补充有6,000IU/mL IL-2(重组)，单独的4-1BB HERA的组合(3个重复)作为对照并且分别使用三个实验条件。使用IL-2的赋形剂对照。HERA的最终浓度为30μg/mL。培养24至48小时后，从每种条件收集250μL上清液，并储存在-20℃，用于随后分析细胞因子和趋化因子浓度(pg/106细胞/24小时)。在“预REP”的第11天、第21天和/或第天(每个样品至少500,000个细胞)，收集每种条件的TIL。将两份等份的TIL沉淀并重新悬浮于<10μL的PBS中并冷冻。如果收集的细胞少于<106，则仅进行基因表达测定。在第7天，通过去除部分“用过的”培养基并加入等体积的培养基和6000IU/mL IL-2来喂养培养物。将用过的培养基储存于-20℃，使用多重测定法(例如，Luminex 100系统)进行随后的细胞因子/趋化因子分析。如果有足够的肿瘤碎片可用于启动超过1个重复的实验条件，则在第7天将另外的配体添加至培养物中。TIL培养物再保持14天。
在第21天，使用流式细胞术确定总细胞产量、存活率、细胞表面和细胞内免疫表型。以下标志物包括在内：CD45RA、CCR7、CD3、TCR-α/β、CD4、CD8、CXCR3、CD56、CD27、CD28、PD-1、PD-L1、BTLA、KLRG1、CD137、CD134、CD33、CD57、CD25、CD127、TIM-3、LAG-3、TIGIT、RAGE和Ki67。如果有足够的细胞可用，也对其他生物标志物进行评估，其他生物标志物包括：CD107a、KG2D、KIRS、趋化因子死亡受体(Fas，DR4)和抗凋亡/前自噬蛋白(BCL-2、BCL-XL、Bim、CD200和LC3/HMGB1)。评估细胞毒性和调节性T细胞的细胞内标志物：粒酶B、pSTAT3、pSTAT1和FOXP3。使用裂解测定法测定TIL的裂解效力。在可获得另外的肿瘤材料的情况下，将(a)酶消化后产生的肿瘤细胞悬浮液、(b)由上述肿瘤产生的自体肿瘤系，和/或(c)同源细胞系(如果可获得)与收获的TIL共培养，并检测IFN-γ释放。如果获得过量细胞，则冷冻保存这些细胞用于分离RNA和DNA，通过Nanostring Human Immunology Panel进行基因表达分析(包括TCR Vβ克隆分析)。如果第7天在培养物中可见肿瘤碎片，则收获它们，如果在产生单细胞悬液后有足够的细胞可用，则对它们进行遗传分析和流式细胞仪表型分析。使用适当的荧光mAb板染色后，流式细胞术分析将集中分析T细胞、树突状细胞、巨噬细胞、B细胞和NK细胞的表型。标志物包括：CD11c、CD11b、HLA-II类、CD80、CD86、CD83、CD56、CD16、CD19和CD20。
用于评估六聚体融合蛋白的添加对肿瘤碎片培养物的功效的标准总结在上文实施例3中，并且进一步的可选标准描述于表53中。
表53：TNFRSF激动剂融合蛋白在TIL扩增过程中的实验性能的附加标准
另外的实验包括：(1)FFPE或新鲜冷冻的肿瘤材料的全外显子组测序和RNA测序，以鉴定突变的基因和可能的新表位，(2)肿瘤碎片培养开始24至48小时后收集的培养上清液的细胞因子和趋化因子分析，(3)第7天从早期培养取出的肿瘤碎片的基因表达分析，(4)使用高通量TCR VβCDR3区域测序分离的TIL的TCR克隆型分析，(5)在IFN-γ诱导自体/同源肿瘤的PD-L1上调的情况下，六聚体融合蛋白对Lion储存的TIL的TIL效应子功能的影响，以及通过PCR/IHC/消化分析残留T细胞的剩余碎片。
将使用配对和非配对T检验(Wilcoxon秩和检验和Wilcoxon有符号秩检验)测试检测参数的差异的显著性。多个参数的比较将使用单向和双向ANOVA分析。当适用于评估连续测量之间的相关性时，将使用Spearman回归分析。
实施例5：评估4-1BB和抗OX40激动性抗体对TIL扩增和效应子功能的影响
此工作的目的是评估4-1BB(乌瑞鲁单抗)和抗OX40激动剂抗体对TIL扩增和效应子功能的影响，并获得扩增期间ICOS和GITR表达的信息。
如下进行抗4-1BB和抗OX40激动剂抗体关于TIL扩增和表型的体外评估。用肿瘤碎片和抽出物(aspirate)进行抗体滴定，以确定用于TIL扩增的合适浓度。评估预REP和REP(在这些特定条件下)中抗4-1BB和抗OX40激动剂对TIL扩增的影响：(1)单独的IL-2+抗4-1BB，(2)单独的IL-2+抗OX40，(3)IL-2+抗41BB+抗OX40，以及(4)单独的IL-2(对照)。通过如下方式评估TIL扩增和表型：(1)CD3+亚群、CD3+CD8+亚群和CD3+CD4+的扩增，以百分比和绝对细胞计数以及存活率计，以及(2)通过使用18色流的流式细胞术评估分化和激活状态；包括ICOS和GITR、Ki67和凋亡标志物的染色。
用抗4-1BB和抗OX40激动性抗体扩增的TIL的TCR谱系(repertoire)和表达谱(profiling)的体外评估如下进行。通过用特异性抗TRBV抗体染色并使用来自iRepertoire，Inc.的市售TCR谱系测定法，显示了用单独的IL-2扩增的TIL的TCR谱系(与治疗条件对比)。使用Nanostring的nCounter VantageTMRNA自适应免疫面板(AdaptiveImmunity Panel)进行单个TIL的表达谱分析。
肿瘤反应性和效应子功能的体外评估如下进行。产生自体肿瘤细胞悬浮液或肿瘤细胞系(尽可能)。与上述治疗条件相比较，评估肿瘤裂解测定中的肿瘤反应性：通过将自体肿瘤细胞/分选的自体肿瘤细胞悬浮液与仅用IL-2扩增的自体TIL共培养。在无法获得自体肿瘤细胞悬浮液/肿瘤细胞系的情况下，将进行抗CD3/CD28/CD137的T细胞激活测定，以通过测量IFN-γ产生/CD107a表达来评估效应子功能。
实施例6：进一步评估4-1BB和OX40抗体对TIL体外扩增及其效应子功能活性的影响
已发现OX40和4-1BB分别由抗原特异性CD4+和CD8+亚群表达。T细胞上共刺激分子(4-1BB和OX40)的激活会增强效应子功能、细胞生存和细胞扩增。据显示，在小鼠模型中，OX40和4-1BB受体的激活改善了TIL扩增和抗肿瘤功能。据显示，抗4-1BB激动性抗体增加了体外扩增所获得黑色素瘤TIL的产量。根据以下方案，可以研究单独和组合的针对4-1BB和OX40的激动剂抗体对TIL的离体扩增及其效应子功能活性的影响。
图13显示了描述了本研究所用的TIL扩增方案。如图15所示，如本文所述，从患者获得肿瘤组织，破碎肿瘤组织并在IL-2存在下进行预REP。然后在IL-2和抗CD3抗体存在下，用经辐照的PBMC对组织进行REP过程(图13)。
本研究中所实施的实验条件如下：
未处理 抗4-1BB 抗OX40 组合 同种型
预REP 10μg/mL 0.5-10μg/mL 0.5-10μg/mL 10μg/mL
REP 10μg/mL 0.5-10μg/mL 0.5-10μg/mL 10μg/mL
可以根据下表通过流式细胞术监测T细胞激活、增殖和衰竭，其中，第1组说明免疫细胞谱系、T细胞亚群和T细胞分化，第2组说明T细胞激活和衰竭：
不受本发明的任何一种理论的限制，预期抗4-1BB和抗OX40激动剂的组合单独或与过程2A组合可以改善预REP TIL(特别是CD3+CD8+TIL亚群)的扩增；提高某些肿瘤的成功率；缩短预REP TIL扩增的持续时间；和/或增强TIL的多功能性，包括抗原再刺激后的效应子功能和细胞生存。
实施例7：评估自体TIL的功效和安全性的临床研究
此实施例描述了评估多种肿瘤类型的自体TIL功效的1/2期临床研究。此调查的目的是根据RECIST v1.1使用客观缓解率(ORR)评估患有卵巢癌和骨肉瘤的受试者的疗效。胰腺导管腺癌(PDAC，pancreatic ductal adenocarcinoma)队列(cohort)的主要目的是通过测量6个月生存率来评估功效。
次要目的可包括：(1)使用RECIST v.1.1评估PDAC的ORR；(2)确定队列内和跨队列的疾病控制率(DCR，disease control rate)；(3)确定缓解持续时间(DOR，duration ofresponse)；(4)确定无病进展生存期(PFS，progression-free survival)和总生存期(OS，overall survival)；(5)进一步表征多种肿瘤类型的TIL过继细胞治疗的安全性。
定义/缩写
ACT 过继细胞疗法，Adoptive Cell Therapy
AE 不良事件，Adverse Event
ALT 丙氨酸转氨酶，Alanine Transaminase
ANC 绝对中性粒细胞计数，Absolute Neutrophil Count
AST 天冬氨酸转氨酶，Aspartate Transaminase
ASMR 年龄标准化死亡率，Age-standardized Mortality Rate
aPTT 活化部分凝血活酶时间，activated Partial ThromboplastinTime
BID 每天两次，Twice Per Day
BSA 体表面积，Body Surface Area
CBC 全血细胞计数，Complete Blood Count
CD4+T CD4+T细胞
CD8+T CD8+T细胞
CFR 美国联邦法规，Code of Federal Regulations
CI 置信区间，Confidence Interval
CLS 毛细血管渗漏综合征，Capillary Leak Syndrome
CMO 合同加工外包，Contract Manufacturing Organization
COPD 慢性阻塞性肺疾病，Chronic Obstructive Pulmonary Disease
CR 完全缓解，Complete Response
CrCl 肌酸酐清除率，Creatinine Clearance
CT 计算机断层扫描，Computed Tomography
CTCAE v4.03 不良事件的通用术语标准4.03版
D5W 5重量％葡萄糖
DCR 疾病控制率，Disease control rate
DOR 缓解持续时间，Duration of Response
EBV Epstein-Barr病毒
ECHO 超声心动图，Echocardiogram
EKG 心电图，Electrocardiogram
EOC 上皮性卵巢癌，Epithelial Ovarian Cancer
EORTC QLQ-C30 欧洲癌症研究和治疗组织生活质量问卷-核心30工具，
European Organisation for Research and Treatment ofCancer
Quality-of-Life Questionnaire-Core 30 instrument
EWV 提前撤回访问，Early Withdrawal Visit
FDA 美国食品和药物管理局，Food and Drug Administration
FEV 用力呼气量，Forced Expiratory Volume
FVC 用力肺活量，Forced Vital Capacity
GCP 优质临床规范，Good Clinical Practice
Hgb 血红蛋白，Hemoglobin
HIV 人类免疫缺陷病毒，Human Immunodeficiency Virus
HRQoL 健康相关的生活质量，Health-related Quality-of-life
ICH 国际协调会议，International Conference on Harmonization
IL 白细胞介素，Interleukin
IND 研究性新药(申请)，Investigational New Drug(Application)
irRECIST 实体肿瘤免疫治疗相关的疗效评估标准，Immune-related
Response Evaluation Criteria in Solid Tumors
IRB 机构审查委员会，Institutional Review Board
IUD 宫内节育器，Intrauterine Device
IV 静脉内，Intravenous
IVPB 借道静脉输液法，Intravenous Piggyback
LVEF 左心室射血分数，Left Ventricular Ejection Fraction
M1 HLA-DR+CD68+M1巨噬细胞
M2 CD163+或CD204+M2巨噬细胞
MRI 磁共振成像，Magnetic Resonance Imaging
MUGA 多门控采集扫描，Multiple Gated Acquisition Scan
NCI 美国国家癌症研究所，National Cancer Institute
Neu CD66b+中性粒细胞
NMA 非清髓，Nonmyeloablative
NS 生理盐水，Normal Saline
OC 卵巢癌，Ovarian Cancer
ORR 客观缓解率，Objective Response Rate
OS 总生存期，Overall Survival
PBMC 外周血单核细胞，Peripheral Blood Mononuclear Cell
PCR 聚合酶链式反应，Polymerase Chain Reaction
PD 疾病进展，Progressive Disease
PDAC 胰腺导管腺癌，Pancreatic Ductal Adenocarcinoma
PE 体检，Physical Exam
PET 正电子发射断层扫描，Positron Emission Tomography
PFS 无病进展生存，Progression-free survival
PHI 个人健康信息，Personal Health Information
PI 首席研究员，Principal Investigator
PJP 肺囊虫肺炎，Pneumonitis Jiroveci Pneumonia
PO 口服，Per Os(by mouth)
PR 部分缓解，Partial Response
PS 体力状况，Performance Status
PT 凝血酶原时间，Prothrombin Time
QTc 校正的QT间期，Corrected QT Interval
RECIST 实体肿瘤的疗效评估标准，Response Evaluation Criteria inSolid
Tumors
REP 快速扩增方案，Rapid Expansion Protocol
SAE 严重不良事件，Serious Adverse Event
SAP 统计分析计划，Statistical Analysis Plan
SD 病情稳定，Stable Disease
SGOT 血清谷氨酸-草酰乙酸转氨酶，Serum Glutamic-oxaloacetic
Transaminase
SGPT 血清谷氨酸-丙酮酸转氨酶，Serum Glutamic-pyruvic
Transaminase
SMX 磺胺甲恶唑，Sulfamethoxazole
STS 软组织肉瘤，Soft Tissue Sarcoma
TCR T细胞受体，T-cell Receptor
TIL 肿瘤浸润淋巴细胞，Tumor-infiltrating lymphocyte
TMA 组织微阵列，Tissue Microarray
TMP 甲氧苄啶，Trimethoprim
Treg FOXP3+调节性T细胞，FOXP3+Regulatory T Cells
TSH 促甲状腺激素，Thyroid Stimulating Hormone
ULN 正常值上限，Upper Limit of Normal
研究设计和终点：本研究旨在评估患有以下疾病的受试者中TIL的功效：a)复发的或常规治疗难以治疗的骨肉瘤；b)对铂类耐药的卵巢癌；以及c)PDAC(该受试者已在一线治疗取得进展或获得最大收益)。每个队列在第一阶段用10个受试者开始，并且根据改进的Simon二阶段设计(Simon’s two stage design)扩展到第二阶段。
首要终点是根据RECIST v1.1的ORR(卵巢癌和骨肉瘤)，以及6个月生存率(PDAC)。PDAC队列的首要终点是6个月生存率。
次要功效终点包括根据RECIST v1.1的ORR(对于PDAC)CRR、DCR、DOR、PFS以及OS。DCR包括完全缓解(CR)、部分缓解(PR)和病情稳定(SD)。安全性终点可能包括AE的总体评估，包括III级或更高级别的非血液学毒性、SAE和按治疗级别出现的AE(treatment-emergent AE)以及与研究治疗的关系。PDAC队列的次要终点是使用RECIST v1.1的ORR。
探索性终点可包括：(1)TIL持续的时间，其通过TIL输注后连续分离的输注T细胞的T细胞受体(TCR)测序来确定，或者替代地对TCR的mRNA进行iRepertoire评估；(2)由免疫相关疗效标准确定的反应；(3)多通道流式细胞术输注时TIL的免疫表型；(4)通过IHC、TCR测序和转录分析进行基线和治疗后肿瘤评估；(5)根据EORTC QLQ-C30调查问卷评估的HRQOL。
参与者入选标准。受试者可以在18至70岁之间(年龄在16至70岁之间的受试者可以参加骨肉瘤队列)。受试者应该愿意并且能够提供知情同意。对于年龄<18岁的患者，其父母或法定监护人应签署书面知情同意书。在适当的情况下，可以根据机构准则获得同意。入组(enrollment)时和开始淋巴细胞清除化疗后7天内ECOG 0或1的临床体力状况。受试者应该具有适于切除活检的肿瘤区域，用于产生与之分离的TIL；此外，受试者还应具有一个用于反应评估的靶样病变。任何先前针对恶性肿瘤的治疗(包括放射治疗、化疗和生物/靶向药物)应在肿瘤切除术前至少28天停止，以便为TIL治疗做准备。
在入组后7至14天(例如7天)内和开始淋巴细胞清除化疗的12小时至48小时(例如24小时)内，受试者可满足一个以上的以下实验室标准：(1)绝对中性粒细胞计数(ANC)>1000/mm3；(2)血红蛋白>8.0g/dL(允许输血)；(3)血小板计数>100,000/mm3；(4)ALT/SGPT和AST/SGOT<2.5×正常上限(ULN)(肝转移患者可能LFT≤5.0×ULN)；(5)计算肌酸酐清除率(Cockcroft-Gault)≥40.0mL/分钟；(6)总胆红素≤1.5×ULN；(7)凝血酶原时间(PT)&激活部分凝血活酶时间(aPTT)≤1.5×ULN(允许维生素K校正)，除非受试者接受抗凝治疗(应根据切除活检前后的制度规范进行管理)；(8)阴性血清妊娠试验(有生育潜力的女性受试者)。
此外，受试者不应该有确认的人类免疫缺陷病毒(HIV)感染。受试者应该具有12导联心电图(EKG)，该心电图显示没有活动性缺血并且校正的QT间期(QTc)小于480ms。40岁及以上的受试者也应进行负性心脏测试(即EKG压力测试、应激铊、多巴酚丁胺超声心动图或其他可能排除心肌缺血的压力测试)。如果进行治疗的研究员认为有必要考虑家族史或风险因素，则年龄小于40岁的受试者可能需要进行压力测试。具有生育潜力的受试者应该愿意在知情同意时开始实施经批准的高效避孕方法，并在淋巴细胞清除方案完成后进行1年。受试者应该能够遵守研究访问计划和其他方案要求。最后，肺功能测试(肺活量测定)证明用力呼气值(FEV)1大于预测值的65％或用力肺活量(FVC)大于预测值的65％。
除满足上述一般入选标准外，受试者还应符合队列特定标准。
对于卵巢癌，受试者可具有高等级的非粘液组织学类型(允许癌肉瘤)。此外，受试者先前可能经历至少两次化疗失败(即一线辅助化疗加上一个用于复发/进展性疾病的其他线(line))。
对于骨肉瘤，受试者可能已经复发或变得难以进行常规治疗，并且已经接受了包括高剂量甲氨蝶呤、多柔比星、顺铂和/或异环磷酰胺的一些组合的方案。
对于胰腺腺癌，受试者可能具有组织学类型或细胞学记录的PDAC与寡转移性疾病的诊断。受试者可以已在一线治疗中取得进展或者获得最大收益。患者可能先前已接受无限制的标准护理治疗。患有腹水或癌病的患者不符合本研究的资格。患者在入组后7天内可能需要≥3.0mg/dL的白蛋白。
参与者排除标准。许多标准可能导致参与者被排除在研究之外：
a.需要静脉注射抗生素的活动性全身性感染(active systemic infection)、凝血功能障碍，或心血管、呼吸系统或免疫系统的其他主要医学疾病。PI或他/她的指定人员应对入组的适当性做出最终决定。
b.活动性病毒性肝炎(active viral hepatitis)患者。
c.筛查时左心室射血分数(LVEF)<45％的患者。
d.有既往过继细胞疗法史的患者。
e.根据不良事件常见毒性标准(CTCAE)v4.03，持续的先前治疗相关毒性大于II级，入组前的周围神经病、脱发或白癜风除外。
f.原发性免疫缺陷。
g.器官或造血干细胞移植的病史。
h.慢性类固醇治疗，但泼尼松(prednisone)或其等效物允许<10mg/天。
i.怀孕或哺乳的患者。
j.主要研究员或他/她的指定人员认为存在严重的精神疾病会妨碍充分的知情同意。
k.临床上显著的自身免疫疾病的病史，包括活动性的、已知的或怀疑的自身免疫疾病。先前检查点抑制剂治疗、白癜风、牛皮癣、I型糖尿病或已消退的儿童哮喘/特应性的副作用已消退的受试者将是此规则的例外。不排除需要间歇使用支气管扩张剂或局部类固醇注射的受试者。对激素替代稳定的甲状腺功能减退症受试者或Sjorgen综合征受试者可能不会被排除。
l.临床上显著的慢性阻塞性肺病(COPD)、哮喘或其他慢性肺病的病史。
m.第二次恶性肿瘤的病史(在过去5年中被诊断出来)。例外包括皮肤基底细胞癌、皮肤鳞状细胞癌或已经过潜在治愈性治疗的原位宫颈癌。
n.已知的活动性中枢神经系统转移和/或癌性脑膜炎的病史。先前治疗脑转移的受试者可以参与，条件是：病症稳定(成像表明第一次试验治疗之前至少四周没有进展性迹象并且任何神经系统症状已经恢复到基线)，没有新的脑转移或脑转移扩大的迹象，并且在开始淋巴细胞清除前至少7天不使用类固醇。
o.在开始淋巴细胞清除前30天内接种了活疫苗。
p.研究员判断会显著增加参与风险的任何其他条件。
治疗的完成或中止(Discontinuation)。治疗的完成可定义为接受任何体积的TIL输注，然后接受至少一剂辅助IL-2。
本研究包括一次性治疗方案，其包括：淋巴细胞清除化疗、TIL输注和辅助IL-2(最多六剂)。如果符合以下任何标准，则应考虑中止研究治疗。但是，除非患者也符合中止参加研究的标准，否则可以尽一切努力继续对所有患者(包括那些未完成整个疗程的患者)进行随访和评估，如事件表中所述。
早期中止治疗的标准为：
a.III级以上的自身免疫，它涉及TIL输注后出现症状的重要器官(心脏、肾脏、脑、眼、肝、结肠、肾上腺、肺)；
b.III级或更高级别的过敏反应，包括支气管痉挛或研究员认为医疗管理后无法解决的全身性荨麻疹；
c.IL-2引起的III级以上毒性，管理96小时内不降至II级以下；
d.研究员确定继续治疗不符合患者的最佳利益；
e.患者撤回。患者(或<18岁以下患者的父母/法定监护人)可以撤回对治疗的同意，而同意继续进行随访评估和/或生存状态；
f.怀孕；
g.患者符合早期中止研究的标准；以及
h.收获肿瘤后和施用TIL或IL-2前，患者已不具有研究资格。
早期中止研究的标准为：
a.患者撤回。患者(或<18岁以下患者的父母/法定监护人)可以撤回同意。应尽一切努力使其同意继续进行生存状态的随访；
b.在收获肿瘤后患者不具有接受研究资格或未接受任何研究治疗；
c.切除手术具有任何并发症或延迟愈合，研究员认为这会增加淋巴细胞清除、过继性TIL治疗和辅助IL-2的风险；
d.体力状况下降至ECOG>1(在开始淋巴结清除前7天内)；
e.死亡；以及
f.失去随访，对患者进行3次有记录的尝试联系后。
一些受试者可能经历肿瘤收获和TIL制备，但可能不接受研究产品的输注。如果因任何原因TIL没有施用给患者，即使在淋巴细胞清除化疗后，仍应继续研究该患者，但数据收集可能会降低至生存状态和开始任何新的抗癌治疗长达3年。此类受试者可能被认为对于功效的统计分析是无价值的并且可以被替换。
如果在输注TIL后，患者开始抗癌治疗或表现出疾病进展，他们可能会留在研究中，但数据收集可能会减少至反应状态、生存状态和长达3年的其他抗癌治疗。
研究试剂。在通知患者预期TIL产生成功后，淋巴细胞清除方案计划开始于第7天。根据研究员的判断，患者可以作为住院患者或门诊患者接受淋巴细胞清除化疗。如临床表现允许对淋巴细胞清除方案进行修改，该修改应遵循如下所述的重度预治疗患者或有骨髓长期恢复史的受试者的氟达拉滨的每日血液学参数。该方案包括每日两剂环磷酰胺(与美司钠)，然后每日服用五剂氟达拉滨，并应按照非清髓性化疗的机构方案/标准施用。制备和施用指南如下所述。受试者应使用实际体重施用，但不得超过理想体重的140％，理想体重如下所述：
a.男性的理想体重＝50kg+2.3×(高度超过60英寸的英寸数)。
示例：5'10”男性受试者的理想体重
50+2.3×10＝73kg
b.女性的理想体重＝45.5kg+2.3×(身高超过60英寸的英寸数)。
示例：5'3”女性受试者的理想体重
45.5+2.3×3＝52.4kg
淋巴细胞清除所需的药物包括环磷酰胺、氟达拉滨和/或美司钠。
在第0天之前淋巴细胞清除(例如，输注时间；治疗方案等)的变化可以记录在病历中，但可以不被认为是方案违规/偏差。
在第6和第7天，可以以20至80mg/kg/天(例如，60mg/kg/天)IV施用在250mL生理盐水(NS)中的环磷酰胺约2小时。在第6和第7天，5重量％葡萄糖(D5W)或NS的美司钠60mg/kg进行24小时静脉注射。如上所述，剂量可以基于患者的实际体重，但是为了防止过度毒性，它可以不超过基于最大理想体重的140％(如上所定义)的剂量。可能存在环磷酰胺剂量的调整。
然后在第1天至第5天，每天以15至50mg/m2(例如，25mg/m2)IV借道(PB，piggyback)输注氟达拉滨约15至30分钟。为了防止氟达拉滨的过度毒性，剂量可以基于体表面积(BSA)，但是可以不超过基于大于最大理想体重140％的体重的表面积计算的剂量。淋巴细胞清除期间每日应评估血液学参数(全血细胞计数[CBC]和差异)。如果在三剂或四剂氟达拉滨后，绝对淋巴细胞计数降至100个细胞/mm3以下，则在与PI讨论后可省略剩余剂量的氟达拉滨。氟达拉滨剂量可根据估计的肌酸酐清除率(CrCl)如下调整：(1)CrCl 50mL/min至79mL/min：将剂量减少至20mg/m2；和/或(2)CrCl 40mL/min至49mL/min：将剂量减少至15mg/m2。
可以在此方案中使用的TIL产物是细胞研究产品，它包含源自患者自身肿瘤的自体TIL的活细胞悬浮液。每剂可含有高达150×109个总的活淋巴细胞。根据总细胞剂量，输注的总体积可高达600mL。
如果尚未住院进行淋巴细胞清除化疗，患者可以在计划的TIL施用前1至2天入院，并在TIL施用前进行过夜静脉补液(intravenous hydration)。根据机构标准，患者可以在IL-2治疗完成前保持住院治疗。
可在完成TIL输注3至24小时后开始IL-2输注。根据机构护理标准，IL-2可以以200,000至1,000,000IU/kg(例如，600,000IU/kg(基于总体重))的剂量施用，可以以每8至12小时的频率通过IV输注施用，并持续至多六剂或耐受。如果患者因IL-2而出现III级或IV级毒性，IL-2剂量可能会被跳过，IL-2常见的可逆III级毒性除外，如腹泻、恶心、呕吐、低血压、皮肤改变、厌食、粘膜炎、吞咽困难，或全身症状(constitutional symptom)和实验室变化。IL-2的管理详见表54。如果通过支持措施可以在24小时内轻松逆转这些毒性，则可以施用另外的剂量。如果超过两剂的IL-2被跳过，则可能停止IL-2施用。此外，可以使用自由裁量权来保持或停止施用。
表54：潜在的阿地白介素毒性的管理
*除非毒性在12小时内没有逆转。
研究步骤和时间表。本研究中可能使用以下步骤。
研究员可能会向潜在受试者通报该研究。可讨论风险、益处和替代方案，并且可在进行任何与研究相关的评估之前签署知情同意文件。
受试者应满足大多数或优选满足所有入选标准，并且优选地不具有排除标准中指定的任何条件。应在开始淋巴细胞清除化疗后7天内记录确认一般、队列、特定和治疗纳入/排除标准。
人口统计数据可包括出生日期(根据当地法规允许)、年龄、性别和种族/民族血统。
在筛查(访问1)，可收集所有患者的相关且重要的医疗/手术史和并发疾病，并根据情况更新。任何先前存在病症的恶化应报告为AE。也可以收集患者先前的抗癌治疗。
可对队列特异性(cohort-specific)癌症诊断进行记录，并从组织学上进行确认。
在同意时，在筛查(访问1)前(最多28天)患者服用的所有药物和疗法(处方和非处方，包括草药补充剂)可收集在数据库中，包括研究中禁止药物的停止日期。在研究期间的任何时间，患者服用的所有药物和疗法或其变化都可以记录在病历中。
可根据CTCAE v4.03对所有基线II级以上毒性进行评估。除非事件与方案规定的步骤有关，筛查后但在入组/肿瘤切除前发生的任何事件可作为病史(Medical History)记录在数据库中。入组/肿瘤切除后发生的任何事件可作为AE捕获在数据库中，直至6个月后访问、受试者被取消研究或开始其他癌症治疗。
生命体征应包括身高、体重、脉搏、呼吸、血压和体温。高度可以仅在筛查(访问1)时测量。可在适用的时间点测量所有其他生命体征。在第0天(访问11/TIL输注)，输注TIL后，可监测生命体征长达约24小时。
可在筛查(访问1)和事件时间表上指示的其他时间点评估ECOG体力状况。
除肿瘤切除术外，所有就诊均可进行体检，并且体检应包括生命体征和体重、头颈部、心血管、肺部、四肢，及其他相关评估。随访期间可针对症状进行检查。检查结果的临床显著变化可记录为所示的不良事件。
如事件时间表(Schedule of Events)所示，可在每次就诊时在当地收集和分析安全性血液和尿液测试。
可在筛查(访问1)时进行高分辨率I类HLA分型法(HLA Class 1typing)的样品收集。
按照机构标准，可在筛查(访问1)时在当地完成下列疾病的血清学检查分析：HIV、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、巨细胞病毒(CMV)、单纯疱疹病毒；Epstein-Barr病毒(EBV)(可能在肿瘤切除/访问2的前3个月内)、查加斯病(Chagas Disease)、人类T细胞淋巴细胞病毒和西尼罗河病毒。还可以筛查镰状细胞病。如临床指示进行另外的测试。
可以仅在筛查时使用Cockcroft-Gault公式现场计算肌酸酐清除率。
所有受试者均可进行基线12导联心电图并通过超声心动图或MUGA评估心室功能。此外，可能会对年龄40岁以上和年龄小于40岁而有心血管疾病或胸痛病史的受试者进行压力测试记录(无局部缺血)。具有异常MUGA或超声心动图的患者在入组前需满足射血分数要求并取得心脏病排除(cardiology clearance)。
肺部评估可在筛查(访问1)后28天内完成。可以接受在筛查(访问1)之前6个月内完成的事先评估。要求FEV1大于预测值的65％或FVC大于预测值的65％。由于异常上呼吸道解剖(例如气管造口术)而无法进行可靠的PFT肺活量测量的患者可以进行6分钟的步行测试以评估肺功能。这些患者应该并且优选地能够步行根据年龄和性别预测的距离的至少80％，并且在整个过程中保持氧饱和度大于90％。
结肠镜检查仅适用于筛查后六个月内因先前的免疫治疗而出现II级以上腹泻或结肠炎的患者。通过视觉评估，筛查后至少6个月无症状或抗PD-1/抗PD-L1治疗后结肠镜检查正常(粘膜未发炎)的患者，可能不需要重复结肠镜检查。
可在基线第21天(访问3)当面进行健康相关生活质量(HRQOL，health relatedquality of life)问卷，并作为随后访问的第一个步骤进行。关于特定时间点，请参见事件时间表。未能填写任何问卷可以不被视为需要报告的偏差。
所有患者的肿瘤评估都需要通过胸部、腹部和骨盆造影的计算机断层扫描(CT)扫描进行射线照相评估。如事件时间表所示进行CT扫描，直至根据修定的RECISTv1.1注意到疾病进展(或如果患者撤回完全同意)。应由参与试验的合格放射科医师评估和记录反应评估。对于对造影剂不耐受的患者，可以允许对胸部、腹部和骨盆进行磁共振成像(MRI)或正电子发射断层扫描(PET)扫描以代替CT扫描。在整个研究过程中，应始终如一地使用相同的评估方法(CT或MRI)和相同的数据采集技术来表征每个已识别和报告的病变。可以在TIL输注后6、12、18和24周进行初始射线照相评估。此后，可以大约每12周评估患者的反应。可以如临床指示进行另外的放射学评估。
在手术活检之前，应确认受试者资格，并且PI或指定人员可以批准患者入组进入临床试验和随后的肿瘤切除。按照机构标准，受试者可以进行手术前咨询，并由进行手术活检的团队对其进行单独的知情同意。理想情况下，靶肿瘤应该先前没有被辐照过。如果肿瘤先前已被辐照过，则辐照和切除应间隔1至6个月(例如，3个月)的最小时间，在此期间应证明靶肿瘤已另外生长。如果入组，预计肿瘤切除发生于预期TIL输注(第0天)的约1至12周(例如，6周)前。TIL是一种自体研究产品，与传统药物生产相比，TIL的获得和递送方式与自体血液产品递送具有更多共同点。必须将患者自己的(自体)研究治疗(TIL)施用给同一个体患者。由于这些原因，在任何时候(包括输注回患者时)，应按照严格方案来获得和处理患者标本，以确保样本的最佳质量和进出加工实验室设备的最短运输时间，并确保始终适当地识别研究产品。
如果在TIL收获的初始切除活检时可以安全地获得另外的或过量的肿瘤组织，则可以获得用于研究的过量肿瘤组织。相较于收集另外的肿瘤组织用于研究，优先提供足够量的肿瘤组织用于生产TIL。应尽一切努力为TIL生产和其他分析获得足够的肿瘤组织。此外，强制性的研究活检可用于确定治疗后的分子和免疫学变化，以及记录肿瘤中输注的T细胞的存在。肿瘤组织分析可包括：1)免疫组织化学，鉴定个体免疫细胞群；和/或2)DNA和RNA分析，包括可能的探索性基因组和转录组学评估和TCR测序，评估输注的回到肿瘤的TIL(在治疗后的活检中)。相较于收集另外的肿瘤组织用于研究，优先提供足够量的肿瘤组织用于生产TIL。应尽一切努力为TIL生产和其他分析获得足够的肿瘤组织。
可以存储来自输注产品(和从这些样品中提取的遗传物质)的高达500×106TIL用于研究。可以对输注的TIL进行流式细胞术分析，并且可以将输注产物的DNA送去TCR测序。这些研究的样本可用于获得输注前后关于疾病和TIL特征的进一步信息。可以从患者收集外周血用于免疫监测和T细胞追踪(利用TCR测序)。可以在肿瘤切除(访问2)处抽取用于免疫监测的血液，并且可在合适时间点进行随后的收集(参见表55和56)。
表55：示例性事件时间表——预治疗阶段和治疗阶段
a生命体征可以包括身高、体重、心率、呼吸频率、血压和温度。身高可以仅在筛查时测量。BSA和BMI可以仅在第7天(访问4)计算。
b在第0天(TIL输注)，除非另有临床指示，生命体征在输注期间可以每30分钟监测，然后可以每小时(+/-15分钟)监测(4小时)，然后常规(每4至6小时)监测，TIL输注后监测至多约24小时。
c 化验：钠、钾、氯化物、总CO2或碳酸氢盐、肌酸酐、葡萄糖、BUN、白蛋白、钙、镁、磷、碱性磷酸酶、ALT/SGPT、AST/SGOT、总胆红素、直接胆红素、LDH、总蛋白、总CK、尿酸和血清肌酸酐。甲状腺检查(包括TSH和游离T4)将在访问1和19进行，并按临床指示进行。凝血：PT、PTT和INR。血液学：分类CBC；尿液分析：胆红素、血液、葡萄糖、酮、pH、蛋白质、比重、颜色和外观。
d在第7天和第6天(访问4至5)持续2天施用加有美司钠的环磷酰胺，然后在第5天至第1天持续5天施用氟达拉滨(访问6至10)。
e在NMA淋巴细胞清除方案的最后一剂药物后，进行1至2天的TIL输注。
f在TIL输注后，约3至24小时内以600,000IU/kg施用初始IL-2，继续每8至12小时施用最多六剂。
表56：示例性事件时间表：治疗后随访和长期随访
aPE可以包括胃肠(腹部、肝脏)、心血管、四肢、头部、眼、耳、鼻，以及咽喉、呼吸系统、皮肤、精神病(精神状态)、一般营养。随访期间可以针对症状进行PE。
b生命体征可以包括体重、心率、呼吸频率、血压和体温。
c 化验：钠、钾、氯化物、总CO2或碳酸氢盐、肌酸酐、葡萄糖、BUN、白蛋白、钙、镁、磷、碱性磷酸酶、ALT/SGPT、AST/SGOT、总胆红素、直接胆红素、LDH、总蛋白、总CK、尿酸和血清肌酸酐。甲状腺检查(包括TSH和游离T4)将按临床指示进行。凝血：PT/PTT/INR。血液学：分类CBC；尿液分析：胆红素、血液、葡萄糖、酮、pH、蛋白质、比重、颜色和外观。
d需要在指定时间点进行胸部、腹部和骨盆的CT扫描。根据研究员的判断，可以进行另外的放射学评估。如果患者对造影剂不耐受，可以使用MPJ。
e筛查后但在入组/肿瘤切除前发生的任何AE，可作为病史记录于数据库中。入组/肿瘤切除后发生的任何AE可以在第168天(访问21/第6个月)并根据临床表现被捕获为AE，或者直至随后抗癌治疗的第一剂，以先发生者为准。归因于方案所需步骤或治疗的所有AE可在第672天(访问25/第24周)收集。
f用于免疫监测的血的抽取将在第168天(访问21/第6个月)至第336天(访问23/第12个月)和ETV的访问时收集。
伴随药物、治疗和步骤。允许使用除抗肿瘤药物外的用于医疗问题的药物。只有获得PI的批准才能考虑那些需要抗炎药物(可能影响TIL施用)的慢性病患者。只要不影响靶病变和非靶病变，允许在肿瘤切除和淋巴细胞清除的间隔期间进行姑息性放射治疗(palliative radiation therapy)。允许使用泼尼松或等效物的全身性类固醇治疗≤10mg/天。根据研究员的判断，在已知疾病恶化或研究治疗新的症状的情况下，允许使用>10mg/天的泼尼松或等效物。在整个试验过程中，伴随药物的任何变化均仅记录在患者的病历中。对于静脉注射CT造影剂过敏的受试者，使用MRI或PET-CT进行放射学评估(无静脉造影)是优选的治疗方法。应尽一切努力保持每位患者的成像模式的一致性。
禁止所有其他抗肿瘤药物和辐照。也不鼓励受试者使用非处方补充剂(over-the-counter supplement)和顺势疗法产品(homeopathic product)，特别是那些具有声称的抗炎特性的产品(如boswelia)。
接受淋巴细胞清除治疗的患者会发生机会性感染(opportunistic infection)，需要进行适当的感染因子预防。经与传染病专家协商，下文列出的预防方案和持续时间可以根据临床表现进行调整。
患者可以接受每天100至1000mg(例如，500mg)的左氧氟沙星(或等效的抗生素)直至ANC恢复至大于500/mm3。
患者可接受每周两次的甲氧苄啶(TMP，trimethoprim)和磺胺甲恶唑(SMX，sulfamethoxazole)的固定组合作为双倍强度(DS，double strength)片剂[DS片剂＝TMP160mg/片和SMX 800mg/片]，口服一天两次(PO BID)。患者可服用TMP/SMX-DS：第7天开始，且淋巴细胞清除后持续至少6个月。对于磺胺过敏的患者，可以施用戊烷脒(Pentamidine)(一旦从医院出院)，每21天300mg IV，淋巴细胞清除后持续6个月。如果出院后IV戊胺脒不可行，可按照护理标准用口服抗生素(如Atovaquone)代替PCP预防，淋巴细胞清除后持续6个月。高剂量IL-2治疗期间，患者可以静脉内施用预防性抗生素。
从TIL输注当天开始，如果患者需要静脉用药，如果患者能够每8小时接受口服用药或接受阿昔洛韦(acyclovir)5mg/kg IVPB，则受试者可每日口服(PO)施用100至1000mg(例如，500mg)的伐昔洛韦(valacylcovir)，持续6个月(或由治疗医生决定)。据报道，IV施用阿昔洛韦可引起可逆性肾功能不全，而口服阿昔洛韦不会。据报道，较高剂量的阿昔洛韦可引起神经毒性，包括谵妄、震颤、昏迷、急性精神障碍和异常脑电图。如果出现症状，可以进行剂量调整或停药。阿昔洛韦可能不能与其他干扰DNA合成的核苷类似物(例如，更昔洛韦)同时使用。对于肾病患者，根据产品标签调整剂量。
从T细胞输注(第0天)开始，患者可以每天口服(PO)氟康唑(Fluconazole)50至500mg(例如200mg)并持续6个月(或由治疗医师决定)。
为减少NMA淋巴细胞清除化疗后嗜中性白血球减少症(neutropenia)的持续时间，可以每天皮下施用非格司亭(Filgrastim)(G-CSF)1至10μg/kg/天(例如5μg/kg/天)直至ANC>500/mm3，至少连续2天。允许对应于300mcg或480mcg剂型的近似剂量。
化疗预处理方案(preparative regimen)期间，昂丹司琼(Ondansetron)可用于控制恶心和呕吐。它可能导致头痛、头晕、肌痛、嗜睡、萎靡和虚弱。较少见的副作用包括胸痛、低血压、瘙痒、便秘和尿潴留(urinary retention)。有关副作用和特定剂量说明的完整列表，请参阅包装说明书。
化疗预处理方案期间，呋塞米(Furosemide)可与环磷酰胺用于促进尿量。不良反应包括头晕、眩晕、感觉异常(paresthesia)、虚弱、直立性低血压(orthostatichypotension)、光敏性、皮疹和瘙痒。有关副作用和特定剂量说明的完整列表，请参阅包装说明书。
患者可以开始使用广谱抗生素：根据局部抗菌谱具有足够的假单胞菌覆盖率的第3代或第4代头孢菌素，或者对于温度≥38.5℃且ANC小于500/mm3的喹诺酮类药物。应尽可能避免氨基糖苷类。所有患有不明原因发热或任何感染性并发症的患者均应获得传染病咨询。
使用每日CBC值作为指导，患者还可以视需要接受血小板和浓缩红细胞(packedred blood cell)。在临床情况的指导下，尝试保持Hgb>8.0g/dL，血小板>20,000/mL。白细胞过滤器可用于所有血液和血小板输注，以减少对输注的WBC的致敏作用并降低CMV感染的风险。应使用经辐照的血液和血液制品。
统计方法的描述。由研究员使用RECIST1.1标准评估，卵巢癌和骨肉瘤组的主要终点是ORR。ORR被推导为：经确定具有CR或部分缓解(PR)的患者数量之和，除以全部治疗分析组(All-Treated analysis set)的患者数量×100％。PDAC队列的主要终点是生存183天的患者百分比。可以基于Kaplan Meier法计算6个月的标志性生存率(landmark survivalrate)。
PFS被定义为：从淋巴细胞清除开始，到PD或因为任何原因的死亡的这段时间(以月为单位)，以较早的事件为准。数据截止或研究结束(即数据库锁定)时未经历PD或死亡的患者，可在最后一次充分肿瘤评估中检查其事件时间。从第一次符合CR或PR(无论先观察到哪种反应)测量标准起，开始测量DOR，直至疾病进展(PD)或死亡发生的第一个日期。数据截止或研究结束前未经历PD或死亡的患者，可在最后一次充分肿瘤评估中检查其事件时间。由研究员根据RECIST v1.1评估，DOR的分析仅基于应答者。DCR被推导为：根据RECISTv1.1，达到PR/CR或SD的患者数量之和，除以全部治疗分析组的患者数量×100％。OS被定义为：从淋巴细胞清除的开始日期，到因为任何原因的死亡的这段时间(以月为单位)。数据截止或研究结束时未到期的患者，可在其已知生存状态的最后日期对其事件时间进行审查。
所有探索性分析都可以是描述性的并通过队列来进行。一些分析结果可与最终临床研究报告分开报告。T细胞谱系分析可用于确定TIL持久性。TIL治疗前后肿瘤的分子和免疫学特征可使用外显子组测序和免疫组化/免疫荧光分析来确定。可以执行由研究员使用irRECIST标准，对测量的ORR、DCR、DOR和PFS进行灵敏度分析。适当时，Pearson相关系数和线性回归可用于量化表型属性(CD8％、CD27和CD28表达等)与肿瘤治疗反应之间的关系。可以评估PDAC患者的基线CA19-9和卵巢癌患者的基线CA-125与功效结果的潜在相关性。
可将III级以上治疗中出现的AE及其发生率与其他癌症疾病类型的TIL的病史数据进行描述性比较。可以用每个队列以及合并的所有队列的95％CI来估计AE发生率。治疗中出现的AE开始于第一剂环磷酰胺，并且从最后一剂IL-2开始最多6个月。
研究处理概要(study disposition summary)可以显示出由于主要原因退出早期研究的患者的数量和百分比，分为两部分：(1)肿瘤收获后淋巴细胞清除前；(2)在第一剂环磷酰胺时或之后。研究终止时接受治疗并被随访生存状态的患者(即完成者)不是本概要的一部分。未接受计划完整研究治疗剂量的患者也可以通过它的主要原因进行概括。
每个队列的肿瘤反应数据的概要可基于：由研究员根据RECIST 1.1评估的最佳总体反应。概要可以显示：通过Wilcoxon评分方法，全部治疗分析组中患者的ORR(置信区间(CI)为80％)和DCR(CI为95％)的百分比。也可以测量中值时间事件(median time-to-event)和标志性比率(landmark rate)：通过KM方法，CI为80％的6个月生存率和CI为95％的DOR、PFS、OS及其他标志性比率。
所有探索性分析都可以是描述性的并通过队列来进行。分析可与本研究的临床研究计划分开定义，并在临床研究报告(CSR)之外独立报告。可以使用EORTC QLQ-C30仪器评估HRQOL，并根据已发布的评估手册进行分析。
样本量。对于卵巢癌和骨肉瘤，Simon二阶段极小极大(minimax)设计可用于独立监测每个队列的功效。零假设(null hypothesis)：待测试的病史反应率为5％，而估计实验队列反应率为20％。在第一阶段，每个队列可以治疗10名患者。如果这10名患者无确认的反应，只要患者可评估，则可以终止该队列。终止可以考虑其他功效估计，包括：靶病变直径总和的减少的最大％；和/或随时间推移PD/死亡的减少的最大％。应通过RECIST 1.1标准确定确认反应，第一次评估为6周，第二次确认性详查为12周。如果研究进展到第二阶段，该队列可以治疗另外的8名患者，因而共18名患者。可以认为，在单边(1-sided)第I类错误率(type I error rate)为10％的情况下，该设计的统计效力(power)≥70％。
对于PDAC，Simon二阶段极小极大设计也可用于监测6个月生存率。零假设：待测试的病史6个月生存率为35％，而估计实验队列生存率为50％(ASCO，2016年1月)。在第一阶段，可以治疗11名患者并随访≥6个月，无需进一步入组。如果从第一次研究药物施用开始计算的183天内，前11名患者中有8名以上患者死亡，则该队列可被视为终止。
否则，可以治疗另外的11名患者，总共22名。如果≥10名患者至少生存183天，则该队列的最终结果可能具有临床意义。在单边第I类错误率为10％的情况下，该设计的统计效力为约70％。
实施例8：预REP和REP步骤期间，使用TNFRSF激动剂扩增TIL的方法
本实施例中使用的抗体描述于本文其他地方，并进一步描述于表57。
表57：4-1BB和OX40激动性单克隆抗体
除了上述单克隆抗体之外，OX40激动剂抗体克隆Ber-ACT35(BioLegend，圣地亚哥，加利福尼亚州，美国)也用于本文所述的选定实验中。
整体实验策略包括以下步骤：试剂采购和验证；体外扩增实验设计；使用新鲜的黑色素瘤、肺肿瘤、宫颈肿瘤样品，在预REP实验的第0天添加抗4-1BB或抗OX40；评估在解冻的头颈癌、肺癌、黑色素瘤、三阴性乳腺癌和乳腺癌的预REP TIL样品中进行21迷你REP(mini-REP)中的抗OX40；以及评估TIL产量和细胞谱系表型(CD4：CD8)、T细胞亚群/扩增表型和功能测定。
评估了两种4-1BB激动剂的抗4-1BB结合亲和力的可比性。用浓度为0.01μg/mL、0.03μg/mL、0.1μg/mL、0.3μg/mL、1μg/mL和3μg/mL的抗4-1BB抗体(Creative Biolabs)或抗4-1BB(BPS Biosciences)和FITC缀合的小鼠抗人IgG对4-1BB报告细胞(reporter cell)进行染色，并通过流式细胞术分析。结果如图16和图17(分别为4-1BB+细胞的％和4-1BB+细胞的平均荧光强度(MFI))所示，结果表明Creative Biolabs(CB)4-1BB乌瑞鲁单抗抗体具有最高的结合亲和力。
还对4-1BB激动剂抗体的NF-κB信号通路的激活进行了评估。用浓度为1μg/mL、2μg/mL、4μg/mL和8μg/mL的抗4-1BB(CB或BPS抗体)处理4-1BB报告细胞24小时。使用一步荧光素酶(One-Step Luciferase)试剂裂解细胞，并通过光度计测量荧光素酶活性。结果如图18所示。测定CB抗体的Log EC50为3.9μg/mL，测定BPS抗体的Log EC50为2.13μg/mL。虽然BPS抗体表现出更大的NF-kB信号传导激活，CB和BPS抗4-1BB激动剂具有相似的Log EC50值。
还评估了CB OX40激动剂的结合亲和力。用浓度为0.01μg/mL、0.03μg/mL、0.1μg/mL、0.3μg/mL、1μg/mL和3μg/mL的抗OX40 Creative Biolabs(CB)激动剂和FITC缀合的小鼠抗人IgG对OX40报告细胞进行染色，并通过流式细胞术分析。OX40+细胞和OX40+细胞的MFI的结果分别如图19和图20所示，结果表明CB OX40具有高结合亲和力。
评估了CB OX40激动剂和OX40激动剂抗体克隆Ber-ACT35(BioLegend，圣地亚哥，加利福尼亚州，美国)这两种OX40激动剂的OX40结合亲和力的可比性。用浓度为0.1μg/mL、0.3μg/mL、1μg/mL、3μg/mL、10μg/mL的抗OX40激动抗体与抗人IgG二抗一起或者单独用抗OX40(克隆Ber-ACT35)对五种不同的组织学类型TIL细胞系(包括子宫颈、头颈部、肺部和黑色素瘤)进行染色。结果如图21所示，结果显示了两种激动剂具有相当的结合亲和力。
还对CB OX40激动剂抗体的NF-κB通路的激活的进行了评估，结果如图22所示。用浓度为1μg/mL、2μg/mL、4μg/mL、8μg/mL和16μg/mL的抗OX40单独或用同种型对照处理OX40报告细胞24小时，有或没有饲养细胞。使用一步荧光素酶(One-Step Luciferase)试剂裂解细胞，并通过光度计测量荧光素酶活性。PBMC饲养细胞的使用利用OX40报告细胞系启动了NF-κB激活，表明聚集参与了激活。
图23显示了预REP步骤期间使用4-1BB和OX40激动剂的实验设计。图24显示了研究的肿瘤组织学类型。图25显示了数据分析策略。使用配对方式(matched-pair manner)分析未处理(仅IL-2)、抗4-1BB和抗OX40。使用此种方法，将样品分成三个不同的组，包括：第1组，未处理和抗4-1BB(n＝3)；第2组，未处理和抗OX40(n＝5)；以及第3组，未处理和抗4-1BB和抗OX40(n＝2)。扩增的总细胞计数结果显示于图26(CB 4-1BB激动剂与未测试，N＝3)；图27(CB OX40激动剂与未测试，N＝5)；以及图28(CB 4-1BB激动剂和OX-40激动剂，N＝2)。细胞扩增的CD8+细胞计数结果显示于图29(CB 4-1BB激动剂和未测试，N＝3)；图30(CB OX40激动剂和未测试，N＝5)；以及图31(CB 4-1BB激动剂和OX-40激动剂，N＝2)。细胞扩增的总的CD8+/CD4+细胞计数比率结果示于图32(CB 4-1BB激动剂和未测试，N＝3)；图33(CB OX40激动剂和未测试，N＝5)；以及图34(CB 4-1BB激动剂和OX-40激动剂，N＝2)。
还使用图35所示方案研究了预REP TIL的REP增殖，该预REP TIL是在4-1BB或OX40激动剂的存在下扩增的。在经辐照的PBMC、抗CD3抗体(30ng/mL)和IL-2(3000IU/mL)的存在下，用CB 4-1BB激动剂或CB OX40激动剂扩增的预REP TIL在REP方案中进一步增殖11天。收获TIL并计数，测定扩增倍数。结果显示于图36、图37和图38。
还对REP阶段期间的OX40的评估进行了测试。用REP对21个来自不同组织学类型(图39)的TIL细胞系进行增殖，添加有浓度为5μg/mL的CB OX40激动剂或同种型对照抗体。实验方案如图40所示。结果显示于图41、图42和图43。令人惊讶的是，REP期间OX40激动剂优先扩增CD8+TIL。用OX40激动剂处理的TIL被分类为应答者或无应答者。
对无应答者和应答者TIL细胞系进行抗OX40剂量滴定，进一步研究此效应，并确定应答者和无应答者中OX40激动剂的最佳浓度。抗OX40处理后，基于增强的CD8+偏度(skewness)，将TIL细胞系分为两组(应答者和无应答者)。遵循图44所示条件，在OX40激动剂或同种型对照抗体存在下，用REP对三种无应答者(L4005、H3005和M1022)和应答者(T6001、T6003和L4002)进行增殖。图45和图46显示：在应答者中观察到了抗OX40处理后CD8+偏度的剂量依赖性方式，浓度为1～10μg/mL时促进偏度。即使在高浓度(30μg/mL)下，无应答者在抗OX40处理后也未表现出CD8+偏度。
还研究了OX40激动剂对应答者TCRvb谱系的影响。为了确定抗OX40(先前显示向CD8+群偏度)是否有倾向地扩增某些TCRvb谱系。在24孔板中用REP对应答者TIL细胞系进行增殖，24孔板内含有单独IL-2或含有IL-2和CDOX40激动剂单克隆抗体(5μg/mL)。在第11天，收获TIL，并用抗CD3、抗CD8、抗CD4和TCRvb谱系抗体对TIL进行染色，并通过流式细胞术分析。三种组织学类型的三种应答者的结果显示于图47、图48和图49。观察到TCRvb谱系的微小变化，表明：在REP期间，结合OX40激动剂的使用，图1或图2的实施方式中缩短的22天的方法所表现出的高度多克隆性(polyclonality)令人惊讶地被保留了。
总之，CB抗OX40抗体的使用显著增强了预REP CD8+TIL扩增，而CB抗4-1BB抗体的使用也显示出了有前景的趋势。无论预处理条件如何，REP扩增倍数都是相当的。令人惊讶的是，OX40激动剂抗体增加了先前使用单独的IL-2培养的TIL的CD8+/CD4+比率。在非应答者TIL中，抗OX40处理后的CD4+亚群中未观察到OX-40的下调。在应答者中观察了到抗OX40处理后CD8+偏度的剂量依赖性方式。尽管观察了到显著的CD8+偏度，但TCRvb谱系的变化十分微小。
序列表
<110> 艾欧凡斯生物治疗公司（Iovance Biotherapeutics, Inc.）
<120> 用肿瘤坏死因子受体超家族（TNFRSF）激动剂扩增肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）及TIL和TNFRSF激动剂的治疗组合
<130> 116983-5008-WO
<160> 512
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 莫罗单抗（Muromonab）的重链
<400> 1
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly Gly Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser
180 185 190
Thr Trp Pro Ser Gln Ser Ile Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser
195 200 205
Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Glu Pro Arg Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 2
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 莫罗单抗的轻链
<400> 2
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala His Phe Arg Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Gly Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr
85 90 95
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Asn Arg Ala Asp Thr Ala Pro
100 105 110
Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn
130 135 140
Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu Asn
145 150 155 160
Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr Thr
180 185 190
Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Asn Glu Cys
210
<210> 3
<211> 134
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 重组人IL-2（rhIL-2）
<400> 3
Met Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu
1 5 10 15
His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr
20 25 30
Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro
35 40 45
Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu
50 55 60
Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His
65 70 75 80
Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu
85 90 95
Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr
100 105 110
Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser
115 120 125
Ile Ile Ser Thr Leu Thr
130
<210> 4
<211> 132
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 阿地白介素
<400> 4
Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu
1 5 10 15
Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn
20 25 30
Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys
35 40 45
Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro
50 55 60
Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg
65 70 75 80
Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys
85 90 95
Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr
100 105 110
Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile
115 120 125
Ser Thr Leu Thr
130
<210> 5
<211> 130
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 重组人IL-4
（rhIL-4）
<400> 5
Met His Lys Cys Asp Ile Thr Leu Gln Glu Ile Ile Lys Thr Leu Asn
1 5 10 15
Ser Leu Thr Glu Gln Lys Thr Leu Cys Thr Glu Leu Thr Val Thr Asp
20 25 30
Ile Phe Ala Ala Ser Lys Asn Thr Thr Glu Lys Glu Thr Phe Cys Arg
35 40 45
Ala Ala Thr Val Leu Arg Gln Phe Tyr Ser His His Glu Lys Asp Thr
50 55 60
Arg Cys Leu Gly Ala Thr Ala Gln Gln Phe His Arg His Lys Gln Leu
65 70 75 80
Ile Arg Phe Leu Lys Arg Leu Asp Arg Asn Leu Trp Gly Leu Ala Gly
85 90 95
Leu Asn Ser Cys Pro Val Lys Glu Ala Asn Gln Ser Thr Leu Glu Asn
100 105 110
Phe Leu Glu Arg Leu Lys Thr Ile Met Arg Glu Lys Tyr Ser Lys Cys
115 120 125
Ser Ser
130
<210> 6
<211> 153
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 重组人IL-7
（rhIL-7）
<400> 6
Met Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser Val
1 5 10 15
Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile Gly
20 25 30
Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His Ile Cys
35 40 45
Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys Leu
50 55 60
Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu His Leu
65 70 75 80
Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly Gln
85 90 95
Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr Lys
100 105 110
Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn Asp
115 120 125
Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp Asn
130 135 140
Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His
145 150
<210> 7
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 重组人IL-15
（rhIL-15）
<400> 7
Met Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val
20 25 30
His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu
35 40 45
Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val
50 55 60
Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn
65 70 75 80
Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn
85 90 95
Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile
100 105 110
Asn Thr Ser
115
<210> 8
<211> 132
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 重组人IL-21
（rhIL-21）
<400> 8
Met Gln Asp Arg His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu Ile Asp Ile Val
1 5 10 15
Asp Gln Leu Lys Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu Phe Leu Pro
20 25 30
Ala Pro Glu Asp Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala Phe Ser Cys
35 40 45
Phe Gln Lys Ala Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn Asn Glu Arg
50 55 60
Ile Ile Asn Val Ser Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro Pro Ser Thr
65 70 75 80
Asn Ala Gly Arg Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys Pro Ser Cys Asp
85 90 95
Ser Tyr Glu Lys Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu Arg Phe Lys Ser
100 105 110
Leu Leu Gln Lys Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg Thr His Gly
115 120 125
Ser Glu Asp Ser
130
<210> 9
<211> 255
<212> PRT
<213> 智人（Homo Sapiens）
<400> 9
Met Gly Asn Ser Cys Tyr Asn Ile Val Ala Thr Leu Leu Leu Val Leu
1 5 10 15
Asn Phe Glu Arg Thr Arg Ser Leu Gln Asp Pro Cys Ser Asn Cys Pro
20 25 30
Ala Gly Thr Phe Cys Asp Asn Asn Arg Asn Gln Ile Cys Ser Pro Cys
35 40 45
Pro Pro Asn Ser Phe Ser Ser Ala Gly Gly Gln Arg Thr Cys Asp Ile
50 55 60
Cys Arg Gln Cys Lys Gly Val Phe Arg Thr Arg Lys Glu Cys Ser Ser
65 70 75 80
Thr Ser Asn Ala Glu Cys Asp Cys Thr Pro Gly Phe His Cys Leu Gly
85 90 95
Ala Gly Cys Ser Met Cys Glu Gln Asp Cys Lys Gln Gly Gln Glu Leu
100 105 110
Thr Lys Lys Gly Cys Lys Asp Cys Cys Phe Gly Thr Phe Asn Asp Gln
115 120 125
Lys Arg Gly Ile Cys Arg Pro Trp Thr Asn Cys Ser Leu Asp Gly Lys
130 135 140
Ser Val Leu Val Asn Gly Thr Lys Glu Arg Asp Val Val Cys Gly Pro
145 150 155 160
Ser Pro Ala Asp Leu Ser Pro Gly Ala Ser Ser Val Thr Pro Pro Ala
165 170 175
Pro Ala Arg Glu Pro Gly His Ser Pro Gln Ile Ile Ser Phe Phe Leu
180 185 190
Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu
195 200 205
Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe
210 215 220
Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly
225 230 235 240
Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
245 250 255
<210> 10
<211> 256
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus Musculus）
<400> 10
Met Gly Asn Asn Cys Tyr Asn Val Val Val Ile Val Leu Leu Leu Val
1 5 10 15
Gly Cys Glu Lys Val Gly Ala Val Gln Asn Ser Cys Asp Asn Cys Gln
20 25 30
Pro Gly Thr Phe Cys Arg Lys Tyr Asn Pro Val Cys Lys Ser Cys Pro
35 40 45
Pro Ser Thr Phe Ser Ser Ile Gly Gly Gln Pro Asn Cys Asn Ile Cys
50 55 60
Arg Val Cys Ala Gly Tyr Phe Arg Phe Lys Lys Phe Cys Ser Ser Thr
65 70 75 80
His Asn Ala Glu Cys Glu Cys Ile Glu Gly Phe His Cys Leu Gly Pro
85 90 95
Gln Cys Thr Arg Cys Glu Lys Asp Cys Arg Pro Gly Gln Glu Leu Thr
100 105 110
Lys Gln Gly Cys Lys Thr Cys Ser Leu Gly Thr Phe Asn Asp Gln Asn
115 120 125
Gly Thr Gly Val Cys Arg Pro Trp Thr Asn Cys Ser Leu Asp Gly Arg
130 135 140
Ser Val Leu Lys Thr Gly Thr Thr Glu Lys Asp Val Val Cys Gly Pro
145 150 155 160
Pro Val Val Ser Phe Ser Pro Ser Thr Thr Ile Ser Val Thr Pro Glu
165 170 175
Gly Gly Pro Gly Gly His Ser Leu Gln Val Leu Thr Leu Phe Leu Ala
180 185 190
Leu Thr Ser Ala Leu Leu Leu Ala Leu Ile Phe Ile Thr Leu Leu Phe
195 200 205
Ser Val Leu Lys Trp Ile Arg Lys Lys Phe Pro His Ile Phe Lys Gln
210 215 220
Pro Phe Lys Lys Thr Thr Gly Ala Ala Gln Glu Glu Asp Ala Cys Ser
225 230 235 240
Cys Arg Cys Pro Gln Glu Glu Glu Gly Gly Gly Gly Gly Tyr Glu Leu
245 250 255
<210> 11
<211> 441
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 乌托鲁单抗的重链
<400> 11
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Trp Ile Ser Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Lys Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Tyr Gly Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro
210 215 220
Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
225 230 235 240
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
245 250 255
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp
260 265 270
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
275 280 285
Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val
290 295 300
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
305 310 315 320
Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly
325 330 335
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
340 345 350
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
355 360 365
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
370 375 380
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
385 390 395 400
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
405 410 415
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
420 425 430
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440
<210> 12
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 乌托鲁单抗的轻链
<400> 12
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Asn Ile Gly Asp Gln Tyr Ala
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gln Asp Lys Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Tyr Thr Gly Phe Gly Ser Leu
85 90 95
Ala Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln
115 120 125
Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly
130 135 140
Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly
145 150 155 160
Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala
165 170 175
Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser
180 185 190
Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val
195 200 205
Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210
<210> 13
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 乌托鲁单抗的重链可变区
<400> 13
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Trp Ile Ser Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Lys Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Tyr Gly Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 14
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 乌托鲁单抗的轻链可变区
<400> 14
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Asn Ile Gly Asp Gln Tyr Ala
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gln Asp Lys Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Tyr Thr Gly Phe Gly Ser Leu
85 90 95
Ala Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 15
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 乌托鲁单抗的重链CDR1
<400> 15
Ser Thr Tyr Trp Ile Ser
1 5
<210> 16
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 乌托鲁单抗的重链CDR2
<400> 16
Lys Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Ser Pro Ser Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 17
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 乌托鲁单抗的重链CDR3
<400> 17
Arg Gly Tyr Gly Ile Phe Asp Tyr
1 5
<210> 18
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 乌托鲁单抗的轻链CDR1
<400> 18
Ser Gly Asp Asn Ile Gly Asp Gln Tyr Ala His
1 5 10
<210> 19
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 乌托鲁单抗的轻链CDR2
<400> 19
Gln Asp Lys Asn Arg Pro Ser
1 5
<210> 20
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 乌托鲁单抗的轻链CDR3
<400> 20
Ala Thr Tyr Thr Gly Phe Gly Ser Leu Ala Val
1 5 10
<210> 21
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 乌瑞鲁单抗的重链
<400> 21
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn His Gly Gly Tyr Val Thr Tyr Asn Pro Ser Leu Glu
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Tyr Gly Pro Gly Asn Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly
100 105 110
Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly
210 215 220
Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
<210> 22
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 乌瑞鲁单抗的轻链
<400> 22
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Ala Leu Thr Phe Cys Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
115 120 125
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
130 135 140
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
145 150 155 160
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
180 185 190
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
195 200 205
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 23
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 乌瑞鲁单抗的重链可变区
<400> 23
Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp
1 5 10 15
Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys
20 25 30
Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe
35 40 45
Ser Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Ile Gly Glu Ile Asn His Gly Gly Tyr Val Thr Tyr Asn Pro
65 70 75 80
Ser Leu Glu Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln
85 90 95
Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr
100 105 110
Tyr Cys Ala Arg Asp Tyr Gly Pro
115 120
<210> 24
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 乌瑞鲁单抗的轻链可变区
<400> 24
Met Glu Ala Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro
1 5 10 15
Asp Thr Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser
20 25 30
Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser
35 40 45
Val Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
50 55 60
Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
100 105 110
<210> 25
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 乌瑞鲁单抗的重链CDR1
<400> 25
Gly Tyr Tyr Trp Ser
1 5
<210> 26
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 乌瑞鲁单抗的重链CDR2
<400> 26
Glu Ile Asn His Gly Gly Tyr Val Thr Tyr Asn Pro Ser Leu Glu Ser
1 5 10 15
<210> 27
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 乌瑞鲁单抗的重链CDR3
<400> 27
Asp Tyr Gly Pro Gly Asn Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Leu
1 5 10
<210> 28
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 乌瑞鲁单抗的轻链CDR1
<400> 28
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 29
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 乌瑞鲁单抗的轻链CDR2
<400> 29
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr
1 5
<210> 30
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 乌瑞鲁单抗的轻链CDR3
<400> 30
Gln Gln Arg Ser Asp Trp Pro Pro Ala Leu Thr
1 5 10
<210> 31
<211> 230
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Fc结构域
<400> 31
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
1 5 10 15
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
20 25 30
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
35 40 45
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
50 55 60
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
65 70 75 80
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
85 90 95
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
100 105 110
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
115 120 125
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
130 135 140
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
145 150 155 160
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
165 170 175
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
180 185 190
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
195 200 205
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
210 215 220
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 32
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 接头
<400> 32
Gly Gly Pro Gly Ser Ser Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
1 5 10 15
Pro Cys Pro Ala Pro Glu
20
<210> 33
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 接头
<400> 33
Gly Gly Ser Gly Ser Ser Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
1 5 10 15
Pro Cys Pro Ala Pro Glu
20
<210> 34
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 接头
<400> 34
Gly Gly Pro Gly Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Lys Ser Cys Asp Lys
1 5 10 15
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
20 25
<210> 35
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 接头
<400> 35
Gly Gly Ser Gly Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Lys Ser Cys Asp Lys
1 5 10 15
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
20 25
<210> 36
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 接头
<400> 36
Gly Gly Pro Gly Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Lys Ser Cys
1 5 10 15
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
20 25
<210> 37
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 接头
<400> 37
Gly Gly Ser Gly Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Lys Ser Cys
1 5 10 15
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
20 25
<210> 38
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 接头
<400> 38
Gly Gly Pro Gly Ser Ser Gly Ser Gly Ser Ser Asp Lys Thr His Thr
1 5 10 15
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
20
<210> 39
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 接头
<400> 39
Gly Gly Pro Gly Ser Ser Gly Ser Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys
1 5 10 15
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
20
<210> 40
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 接头
<400> 40
Gly Gly Pro Ser Ser Ser Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
1 5 10 15
Cys Pro Ala Pro Glu
20
<210> 41
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 接头
<400> 41
Gly Gly Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Gly Ser Asp Lys Thr His
1 5 10 15
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
20 25
<210> 42
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Fc结构域
<400> 42
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Ala Gly Asn Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
20 25 30
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
35 40 45
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
50 55 60
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
65 70 75 80
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
85 90 95
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
100 105 110
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
115 120 125
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
130 135 140
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
145 150 155 160
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
165 170 175
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
180 185 190
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
195 200 205
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
210 215 220
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
225 230 235 240
Leu Ser Leu Ser Pro Gly
245
<210> 43
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 接头
<400> 43
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
1 5 10
<210> 44
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 接头
<400> 44
Ser Ser Ser Ser Ser Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
1 5 10
<210> 45
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 接头
<400> 45
Ser Ser Ser Ser Ser Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
1 5 10 15
<210> 46
<211> 254
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 4-1BBL
<400> 46
Met Glu Tyr Ala Ser Asp Ala Ser Leu Asp Pro Glu Ala Pro Trp Pro
1 5 10 15
Pro Ala Pro Arg Ala Arg Ala Cys Arg Val Leu Pro Trp Ala Leu Val
20 25 30
Ala Gly Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Ala Ala Ala Cys Ala Val Phe
35 40 45
Leu Ala Cys Pro Trp Ala Val Ser Gly Ala Arg Ala Ser Pro Gly Ser
50 55 60
Ala Ala Ser Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp
65 70 75 80
Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val
85 90 95
Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp
100 105 110
Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu
115 120 125
Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe
130 135 140
Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser
145 150 155 160
Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala
165 170 175
Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala
180 185 190
Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala
195 200 205
Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His
210 215 220
Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val
225 230 235 240
Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
245 250
<210> 47
<211> 168
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 4-1BBL的可溶性结构域
<400> 47
Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val Ala Gln Asn Val Leu Leu
1 5 10 15
Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val
20 25 30
Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val
35 40 45
Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg
50 55 60
Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser Val Ser Leu Ala Leu His
65 70 75 80
Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr
85 90 95
Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly
100 105 110
Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val
115 120 125
His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His Ala Trp Gln Leu Thr Gln
130 135 140
Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala
145 150 155 160
Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
165
<210> 48
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 4B4-1-1版本1的重链可变区
<400> 48
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Val Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn Pro Gly Asn Gly His Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Phe Thr Thr Ala Arg Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser
115
<210> 49
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 4B4-1-1版本1的轻链可变区
<400> 49
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Gln Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asp Gly His Ser Phe Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 50
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 4B4-1-1版本2的重链可变区
<400> 50
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Val Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn Pro Gly Asn Gly His Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Phe Thr Thr Ala Arg Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 51
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 4B4-1-1版本2的轻链可变区
<400> 51
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Gln Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asp Gly His Ser Phe Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 52
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> H39E3-2的重链可变区
<400> 52
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Ala His Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
35 40 45
Ser Asp Tyr Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Val Ala Asp Ile Lys Asn Asp Gly Ser Tyr Thr Asn Tyr Ala
65 70 75 80
Pro Ser Leu Thr Asn Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn
85 90 95
Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Leu Thr
115 120
<210> 53
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> H39E3-2的轻链可变区
<400> 53
Met Glu Ala Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro
1 5 10 15
Asp Thr Thr Gly Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala
20 25 30
Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser
35 40 45
Leu Leu Ser Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Trp Tyr Gln Gln Lys
50 55 60
Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Thr Arg Gln
65 70 75 80
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
85 90 95
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala
100 105
<210> 54
<211> 277
<212> PRT
<213> 智人（Homo Sapiens）
<400> 54
Met Cys Val Gly Ala Arg Arg Leu Gly Arg Gly Pro Cys Ala Ala Leu
1 5 10 15
Leu Leu Leu Gly Leu Gly Leu Ser Thr Val Thr Gly Leu His Cys Val
20 25 30
Gly Asp Thr Tyr Pro Ser Asn Asp Arg Cys Cys His Glu Cys Arg Pro
35 40 45
Gly Asn Gly Met Val Ser Arg Cys Ser Arg Ser Gln Asn Thr Val Cys
50 55 60
Arg Pro Cys Gly Pro Gly Phe Tyr Asn Asp Val Val Ser Ser Lys Pro
65 70 75 80
Cys Lys Pro Cys Thr Trp Cys Asn Leu Arg Ser Gly Ser Glu Arg Lys
85 90 95
Gln Leu Cys Thr Ala Thr Gln Asp Thr Val Cys Arg Cys Arg Ala Gly
100 105 110
Thr Gln Pro Leu Asp Ser Tyr Lys Pro Gly Val Asp Cys Ala Pro Cys
115 120 125
Pro Pro Gly His Phe Ser Pro Gly Asp Asn Gln Ala Cys Lys Pro Trp
130 135 140
Thr Asn Cys Thr Leu Ala Gly Lys His Thr Leu Gln Pro Ala Ser Asn
145 150 155 160
Ser Ser Asp Ala Ile Cys Glu Asp Arg Asp Pro Pro Ala Thr Gln Pro
165 170 175
Gln Glu Thr Gln Gly Pro Pro Ala Arg Pro Ile Thr Val Gln Pro Thr
180 185 190
Glu Ala Trp Pro Arg Thr Ser Gln Gly Pro Ser Thr Arg Pro Val Glu
195 200 205
Val Pro Gly Gly Arg Ala Val Ala Ala Ile Leu Gly Leu Gly Leu Val
210 215 220
Leu Gly Leu Leu Gly Pro Leu Ala Ile Leu Leu Ala Leu Tyr Leu Leu
225 230 235 240
Arg Arg Asp Gln Arg Leu Pro Pro Asp Ala His Lys Pro Pro Gly Gly
245 250 255
Gly Ser Phe Arg Thr Pro Ile Gln Glu Glu Gln Ala Asp Ala His Ser
260 265 270
Thr Leu Ala Lys Ile
275
<210> 55
<211> 272
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus Musculus）
<400> 55
Met Tyr Val Trp Val Gln Gln Pro Thr Ala Leu Leu Leu Leu Gly Leu
1 5 10 15
Thr Leu Gly Val Thr Ala Arg Arg Leu Asn Cys Val Lys His Thr Tyr
20 25 30
Pro Ser Gly His Lys Cys Cys Arg Glu Cys Gln Pro Gly His Gly Met
35 40 45
Val Ser Arg Cys Asp His Thr Arg Asp Thr Leu Cys His Pro Cys Glu
50 55 60
Thr Gly Phe Tyr Asn Glu Ala Val Asn Tyr Asp Thr Cys Lys Gln Cys
65 70 75 80
Thr Gln Cys Asn His Arg Ser Gly Ser Glu Leu Lys Gln Asn Cys Thr
85 90 95
Pro Thr Gln Asp Thr Val Cys Arg Cys Arg Pro Gly Thr Gln Pro Arg
100 105 110
Gln Asp Ser Gly Tyr Lys Leu Gly Val Asp Cys Val Pro Cys Pro Pro
115 120 125
Gly His Phe Ser Pro Gly Asn Asn Gln Ala Cys Lys Pro Trp Thr Asn
130 135 140
Cys Thr Leu Ser Gly Lys Gln Thr Arg His Pro Ala Ser Asp Ser Leu
145 150 155 160
Asp Ala Val Cys Glu Asp Arg Ser Leu Leu Ala Thr Leu Leu Trp Glu
165 170 175
Thr Gln Arg Pro Thr Phe Arg Pro Thr Thr Val Gln Ser Thr Thr Val
180 185 190
Trp Pro Arg Thr Ser Glu Leu Pro Ser Pro Pro Thr Leu Val Thr Pro
195 200 205
Glu Gly Pro Ala Phe Ala Val Leu Leu Gly Leu Gly Leu Gly Leu Leu
210 215 220
Ala Pro Leu Thr Val Leu Leu Ala Leu Tyr Leu Leu Arg Lys Ala Trp
225 230 235 240
Arg Leu Pro Asn Thr Pro Lys Pro Cys Trp Gly Asn Ser Phe Arg Thr
245 250 255
Pro Ile Gln Glu Glu His Thr Asp Ala His Phe Thr Leu Ala Lys Ile
260 265 270
<210> 56
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 他利昔珠单抗的重链
<400> 56
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Ser Gly
20 25 30
Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys His Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Asn Gly Ile Thr Tyr His Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ile Thr Ile Asn Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Ser Leu
65 70 75 80
Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Tyr Lys Tyr Asp Tyr Asp Gly Gly His Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 57
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 他利昔珠单抗的轻链
<400> 57
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Lys Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ser Ala Leu Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 58
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 他利昔珠单抗的重链可变区
<400> 58
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Ser Gly
20 25 30
Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys His Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Asn Gly Ile Thr Tyr His Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ile Thr Ile Asn Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Ser Leu
65 70 75 80
Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Tyr Lys Tyr Asp Tyr Asp Gly Gly His Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr
115
<210> 59
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 他利昔珠单抗的轻链可变区
<400> 59
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Lys Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ser Ala Leu Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 60
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 他利昔珠单抗的重链CDR1
<400> 60
Gly Ser Phe Ser Ser Gly Tyr Trp Asn
1 5
<210> 61
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 他利昔珠单抗的重链CDR2
<400> 61
Tyr Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Asn Gly Ile Thr Tyr His
1 5 10
<210> 62
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 他利昔珠单抗的重链CDR3
<400> 62
Arg Tyr Lys Tyr Asp Tyr Asp Gly Gly His Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 63
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 他利昔珠单抗的轻链CDR1
<400> 63
Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn
1 5
<210> 64
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 他利昔珠单抗的轻链CDR2
<400> 64
Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Lys Leu His Ser
1 5 10
<210> 65
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 他利昔珠单抗的轻链CDR3
<400> 65
Gln Gln Gly Ser Ala Leu Pro Trp
1 5
<210> 66
<211> 444
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 11D4的重链
<400> 66
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Ser Gly Trp Tyr Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys
210 215 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
225 230 235 240
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
245 250 255
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe
260 265 270
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
275 280 285
Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr
290 295 300
Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
305 310 315 320
Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr
325 330 335
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
340 345 350
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
355 360 365
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
370 375 380
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser
385 390 395 400
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
405 410 415
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
420 425 430
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 67
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 11D4的轻链
<400> 67
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 68
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 11D4的重链可变区
<400> 68
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Ser Gly Trp Tyr Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 69
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 11D4的轻链可变区
<400> 69
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 70
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 11D4的重链CDR1
<400> 70
Ser Tyr Ser Met Asn
1 5
<210> 71
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 11D4的重链CDR2
<400> 71
Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 72
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 11D4的重链CDR3
<400> 72
Glu Ser Gly Trp Tyr Leu Phe Asp Tyr
1 5
<210> 73
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 11D4的轻链CDR1
<400> 73
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 74
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 11D4的轻链CDR2
<400> 74
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 75
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 11D4的轻链CDR3
<400> 75
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Pro Thr
1 5
<210> 76
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 18D8的重链
<400> 76
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Gln Ser Thr Ala Asp Tyr Tyr Phe Tyr Tyr Gly Met Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu
130 135 140
Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn
195 200 205
Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg
210 215 220
Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 77
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 18D8的轻链
<400> 77
Glu Ile Val Val Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 78
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 18D8的重链可变区
<400> 78
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Gln Ser Thr Ala Asp Tyr Tyr Phe Tyr Tyr Gly Met Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 79
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 18D8的轻链可变区
<400> 79
Glu Ile Val Val Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 80
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 18D8的重链CDR1
<400> 80
Asp Tyr Ala Met His
1 5
<210> 81
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 18D8的重链CDR2
<400> 81
Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 82
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 18D8的重链CDR3
<400> 82
Asp Gln Ser Thr Ala Asp Tyr Tyr Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10 15
<210> 83
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 18D8的轻链CDR1
<400> 83
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 84
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 18D8的轻链CDR2
<400> 84
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr
1 5
<210> 85
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 18D8的轻链CDR3
<400> 85
Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr
1 5
<210> 86
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Hu119-122的重链可变区
<400> 86
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Glu Tyr Glu Phe Pro Ser His
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val
35 40 45
Ala Ala Ile Asn Ser Asp Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Met
50 55 60
Glu Arg Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Tyr Asp Asp Tyr Tyr Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 87
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Hu119-122的轻链可变区
<400> 87
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
35 40 45
Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 88
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Hu119-122的重链CDR1
<400> 88
Ser His Asp Met Ser
1 5
<210> 89
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Hu119-122的重链CDR2
<400> 89
Ala Ile Asn Ser Asp Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Met Glu
1 5 10 15
Arg
<210> 90
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Hu119-122的重链CDR3
<400> 90
His Tyr Asp Asp Tyr Tyr Ala Trp Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 91
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Hu119-122的轻链CDR1
<400> 91
Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Met His
1 5 10 15
<210> 92
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Hu119-122的轻链CDR2
<400> 92
Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5
<210> 93
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Hu119-122的轻链CDR3
<400> 93
Gln His Ser Arg Glu Leu Pro Leu Thr
1 5
<210> 94
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Hu106-222的重链可变区
<400> 94
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Lys Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Asn Pro Tyr Tyr Asp Tyr Val Ser Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 95
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Hu106-222的轻链可变区
<400> 95
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Leu Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 96
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Hu106-222的重链CDR1
<400> 96
Asp Tyr Ser Met His
1 5
<210> 97
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Hu106-222的重链CDR2
<400> 97
Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 98
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Hu106-222的重链CDR3
<400> 98
Pro Tyr Tyr Asp Tyr Val Ser Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 99
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Hu106-222的轻链CDR1
<400> 99
Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala
1 5 10
<210> 100
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Hu106-222的轻链CDR2
<400> 100
Ser Ala Ser Tyr Leu Tyr Thr
1 5
<210> 101
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Hu106-222的轻链CDR3
<400> 101
Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Arg Thr
1 5
<210> 102
<211> 183
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> OX40L
<400> 102
Met Glu Arg Val Gln Pro Leu Glu Glu Asn Val Gly Asn Ala Ala Arg
1 5 10 15
Pro Arg Phe Glu Arg Asn Lys Leu Leu Leu Val Ala Ser Val Ile Gln
20 25 30
Gly Leu Gly Leu Leu Leu Cys Phe Thr Tyr Ile Cys Leu His Phe Ser
35 40 45
Ala Leu Gln Val Ser His Arg Tyr Pro Arg Ile Gln Ser Ile Lys Val
50 55 60
Gln Phe Thr Glu Tyr Lys Lys Glu Lys Gly Phe Ile Leu Thr Ser Gln
65 70 75 80
Lys Glu Asp Glu Ile Met Lys Val Gln Asn Asn Ser Val Ile Ile Asn
85 90 95
Cys Asp Gly Phe Tyr Leu Ile Ser Leu Lys Gly Tyr Phe Ser Gln Glu
100 105 110
Val Asn Ile Ser Leu His Tyr Gln Lys Asp Glu Glu Pro Leu Phe Gln
115 120 125
Leu Lys Lys Val Arg Ser Val Asn Ser Leu Met Val Ala Ser Leu Thr
130 135 140
Tyr Lys Asp Lys Val Tyr Leu Asn Val Thr Thr Asp Asn Thr Ser Leu
145 150 155 160
Asp Asp Phe His Val Asn Gly Gly Glu Leu Ile Leu Ile His Gln Asn
165 170 175
Pro Gly Glu Phe Cys Val Leu
180
<210> 103
<211> 131
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> OX40L的可溶性结构域
<400> 103
Ser His Arg Tyr Pro Arg Ile Gln Ser Ile Lys Val Gln Phe Thr Glu
1 5 10 15
Tyr Lys Lys Glu Lys Gly Phe Ile Leu Thr Ser Gln Lys Glu Asp Glu
20 25 30
Ile Met Lys Val Gln Asn Asn Ser Val Ile Ile Asn Cys Asp Gly Phe
35 40 45
Tyr Leu Ile Ser Leu Lys Gly Tyr Phe Ser Gln Glu Val Asn Ile Ser
50 55 60
Leu His Tyr Gln Lys Asp Glu Glu Pro Leu Phe Gln Leu Lys Lys Val
65 70 75 80
Arg Ser Val Asn Ser Leu Met Val Ala Ser Leu Thr Tyr Lys Asp Lys
85 90 95
Val Tyr Leu Asn Val Thr Thr Asp Asn Thr Ser Leu Asp Asp Phe His
100 105 110
Val Asn Gly Gly Glu Leu Ile Leu Ile His Gln Asn Pro Gly Glu Phe
115 120 125
Cys Val Leu
130
<210> 104
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> OX40L的可溶性结构域（可选的）
<400> 104
Tyr Pro Arg Ile Gln Ser Ile Lys Val Gln Phe Thr Glu Tyr Lys Lys
1 5 10 15
Glu Lys Gly Phe Ile Leu Thr Ser Gln Lys Glu Asp Glu Ile Met Lys
20 25 30
Val Gln Asn Asn Ser Val Ile Ile Asn Cys Asp Gly Phe Tyr Leu Ile
35 40 45
Ser Leu Lys Gly Tyr Phe Ser Gln Glu Val Asn Ile Ser Leu His Tyr
50 55 60
Gln Lys Asp Glu Glu Pro Leu Phe Gln Leu Lys Lys Val Arg Ser Val
65 70 75 80
Asn Ser Leu Met Val Ala Ser Leu Thr Tyr Lys Asp Lys Val Tyr Leu
85 90 95
Asn Val Thr Thr Asp Asn Thr Ser Leu Asp Asp Phe His Val Asn Gly
100 105 110
Gly Glu Leu Ile Leu Ile His Gln Asn Pro Gly Glu Phe Cys Val Leu
115 120 125
<210> 105
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 008的重链可变区
<400> 105
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Arg Tyr Ser Gln Val His Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
115 120
<210> 106
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 008的轻链可变区
<400> 106
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Ala Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr
85 90 95
Tyr Asn His Pro Thr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys
100 105
<210> 107
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 011的重链可变区
<400> 107
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Arg Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
65 70 75 80
Met Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
85 90 95
Asp Arg Tyr Phe Arg Gln Gln Asn Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
115 120
<210> 108
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 011的轻链可变区
<400> 108
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Ala Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr
85 90 95
Tyr Asn His Pro Thr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys
100 105
<210> 109
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 021的重链可变区
<400> 109
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Arg Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Arg Tyr Ile Thr Leu Pro Asn Ala Leu Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
115 120
<210> 110
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 021的轻链可变区
<400> 110
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Val Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr
85 90 95
Lys Ser Asn Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys
100 105
<210> 111
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 023的重链可变区
<400> 111
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Gly Thr Gly Gly Gly Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Met
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Tyr Asp Asn Val Met Gly Leu Tyr Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 112
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 023的轻链可变区
<400> 112
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 113
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 重链可变区
<400> 113
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Val Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Asn Tyr Tyr Gly Ser Ser Leu Ser Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 114
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 114
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 115
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 重链可变区
<400> 115
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Lys Asp Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Ile Tyr Pro Asn Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Asn Gln Asn Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Phe Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Met Gly Tyr His Gly Pro His Leu Asp Phe Asp Val Trp Gly
100 105 110
Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Pro
115 120
<210> 116
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 116
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Ala Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Gly Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Thr Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Ile Asn Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 117
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗体的重链可变区
<400> 117
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ser Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Asn Pro Tyr Tyr Asp Tyr Val Ser Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly His Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 118
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗体的重链可变区
<400> 118
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Lys Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Asn Pro Tyr Tyr Asp Tyr Val Ser Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 119
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗体的轻链可变区
<400> 119
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Arg
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Leu Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 120
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗体的轻链可变区
<400> 120
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Arg
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Leu Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 121
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗体的重链可变区
<400> 121
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Glu Ser Asn Glu Tyr Glu Phe Pro Ser His
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Lys Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Leu Val
35 40 45
Ala Ala Ile Asn Ser Asp Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Met
50 55 60
Glu Arg Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Thr Lys Lys Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Tyr Asp Asp Tyr Tyr Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120
<210> 122
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗体的重链可变区
<400> 122
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Glu Tyr Glu Phe Pro Ser His
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val
35 40 45
Ala Ala Ile Asn Ser Asp Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Met
50 55 60
Glu Arg Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Tyr Asp Asp Tyr Tyr Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 123
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗体的轻链可变区
<400> 123
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105 110
<210> 124
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化抗体的轻链可变区
<400> 124
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
35 40 45
Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 125
<211> 138
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 重链可变区
<400> 125
Met Tyr Leu Gly Leu Asn Tyr Val Phe Ile Val Phe Leu Leu Asn Gly
1 5 10 15
Val Gln Ser Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
20 25 30
Pro Gly Gly Ser Met Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
35 40 45
Ser Asp Ala Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Val Ala Glu Ile Arg Ser Lys Ala Asn Asn His Ala Thr Tyr
65 70 75 80
Tyr Ala Glu Ser Val Asn Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser
85 90 95
Lys Ser Ser Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr
100 105 110
Gly Ile Tyr Tyr Cys Thr Trp Gly Glu Val Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp
115 120 125
Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
130 135
<210> 126
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 126
Met Arg Pro Ser Ile Gln Phe Leu Gly Leu Leu Leu Phe Trp Leu His
1 5 10 15
Gly Ala Gln Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Leu Gly Gly Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Asp
35 40 45
Ile Asn Lys Tyr Ile Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Gly Pro
50 55 60
Arg Leu Leu Ile His Tyr Thr Ser Thr Leu Gln Pro Gly Ile Pro Ser
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Arg Asp Tyr Ser Phe Ser Ile Ser
85 90 95
Asn Leu Glu Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp
100 105 110
Asn Leu Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
115 120 125
<210> 127
<211> 260
<212> PRT
<213> 智人（Homo Sapiens）
<400> 127
Met Ala Arg Pro His Pro Trp Trp Leu Cys Val Leu Gly Thr Leu Val
1 5 10 15
Gly Leu Ser Ala Thr Pro Ala Pro Lys Ser Cys Pro Glu Arg His Tyr
20 25 30
Trp Ala Gln Gly Lys Leu Cys Cys Gln Met Cys Glu Pro Gly Thr Phe
35 40 45
Leu Val Lys Asp Cys Asp Gln His Arg Lys Ala Ala Gln Cys Asp Pro
50 55 60
Cys Ile Pro Gly Val Ser Phe Ser Pro Asp His His Thr Arg Pro His
65 70 75 80
Cys Glu Ser Cys Arg His Cys Asn Ser Gly Leu Leu Val Arg Asn Cys
85 90 95
Thr Ile Thr Ala Asn Ala Glu Cys Ala Cys Arg Asn Gly Trp Gln Cys
100 105 110
Arg Asp Lys Glu Cys Thr Glu Cys Asp Pro Leu Pro Asn Pro Ser Leu
115 120 125
Thr Ala Arg Ser Ser Gln Ala Leu Ser Pro His Pro Gln Pro Thr His
130 135 140
Leu Pro Tyr Val Ser Glu Met Leu Glu Ala Arg Thr Ala Gly His Met
145 150 155 160
Gln Thr Leu Ala Asp Phe Arg Gln Leu Pro Ala Arg Thr Leu Ser Thr
165 170 175
His Trp Pro Pro Gln Arg Ser Leu Cys Ser Ser Asp Phe Ile Arg Ile
180 185 190
Leu Val Ile Phe Ser Gly Met Phe Leu Val Phe Thr Leu Ala Gly Ala
195 200 205
Leu Phe Leu His Gln Arg Arg Lys Tyr Arg Ser Asn Lys Gly Glu Ser
210 215 220
Pro Val Glu Pro Ala Glu Pro Cys Arg Tyr Ser Cys Pro Arg Glu Glu
225 230 235 240
Glu Gly Ser Thr Ile Pro Ile Gln Glu Asp Tyr Arg Lys Pro Glu Pro
245 250 255
Ala Cys Ser Pro
260
<210> 128
<211> 260
<212> PRT
<213> Macaca Nemestrina
<400> 128
Met Ala Arg Pro His Pro Trp Trp Leu Cys Phe Leu Gly Thr Leu Val
1 5 10 15
Gly Leu Ser Ala Thr Pro Ala Pro Lys Ser Cys Pro Glu Arg His Tyr
20 25 30
Trp Ala Gln Gly Lys Leu Cys Cys Gln Met Cys Glu Pro Gly Thr Phe
35 40 45
Leu Val Lys Asp Cys Asp Gln His Arg Lys Ala Ala Gln Cys His Pro
50 55 60
Cys Ile Pro Gly Val Ser Phe Ser Pro Asp His His Thr Arg Pro His
65 70 75 80
Cys Glu Ser Cys Arg His Cys Asn Ser Gly Leu Leu Ile Arg Asn Cys
85 90 95
Thr Ile Thr Ala Asn Ala Val Cys Ala Cys Arg Asn Gly Trp Gln Cys
100 105 110
Arg Asp Lys Glu Cys Thr Glu Cys Asp Pro Pro Pro Asn Pro Ser Leu
115 120 125
Thr Thr Trp Pro Ser Gln Ala Leu Gly Pro His Pro Gln Pro Thr His
130 135 140
Leu Pro Tyr Val Asn Glu Met Leu Glu Ala Arg Thr Ala Gly His Met
145 150 155 160
Gln Thr Leu Ala Asp Phe Arg His Leu Pro Ala Arg Thr Leu Ser Thr
165 170 175
His Trp Pro Pro Gln Arg Ser Leu Cys Ser Ser Asp Phe Ile Arg Ile
180 185 190
Leu Val Ile Phe Ser Gly Met Phe Leu Val Phe Thr Leu Ala Gly Thr
195 200 205
Leu Phe Leu His Gln Gln Arg Lys Tyr Arg Ser Asn Lys Gly Glu Ser
210 215 220
Pro Met Glu Pro Ala Glu Pro Cys Pro Tyr Ser Cys Pro Arg Glu Glu
225 230 235 240
Glu Gly Ser Thr Ile Pro Ile Gln Glu Asp Tyr Arg Lys Pro Glu Pro
245 250 255
Ala Ser Ser Pro
260
<210> 129
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 伐立鲁单抗的重链
<400> 129
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ser Gly Asn Trp Gly Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys Gly Ser Ser
450
<210> 130
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 伐立鲁单抗的轻链
<400> 130
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Arg Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Thr Tyr Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 131
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 伐立鲁单抗的重链可变区
<400> 131
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ser Gly Asn Trp Gly Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 132
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 伐立鲁单抗的轻链可变区
<400> 132
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Arg Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Thr Tyr Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 133
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 伐立鲁单抗的重链CDR1
<400> 133
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Asp
1 5
<210> 134
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 伐立鲁单抗的重链CDR2
<400> 134
Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys
1 5
<210> 135
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 伐立鲁单抗的重链CDR3
<400> 135
Ala Arg Gly Ser Gly Asn Trp Gly Phe Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 136
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 伐立鲁单抗的轻链CDR1
<400> 136
Gln Gly Ile Ser Arg Trp
1 5
<210> 137
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 伐立鲁单抗的轻链CDR2
<400> 137
Ala Ala Ser Gly
1
<210> 138
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 伐立鲁单抗的轻链CDR3
<400> 138
Gln Gln Tyr Asn Thr Tyr Pro Arg Thr
1 5
<210> 139
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CD70（CD27L）
<400> 139
Met Pro Glu Glu Gly Ser Gly Cys Ser Val Arg Arg Arg Pro Tyr Gly
1 5 10 15
Cys Val Leu Arg Ala Ala Leu Val Pro Leu Val Ala Gly Leu Val Ile
20 25 30
Cys Leu Val Val Cys Ile Gln Arg Phe Ala Gln Ala Gln Gln Gln Leu
35 40 45
Pro Leu Glu Ser Leu Gly Trp Asp Val Ala Glu Leu Gln Leu Asn His
50 55 60
Thr Gly Pro Gln Gln Asp Pro Arg Leu Tyr Trp Gln Gly Gly Pro Ala
65 70 75 80
Leu Gly Arg Ser Phe Leu His Gly Pro Glu Leu Asp Lys Gly Gln Leu
85 90 95
Arg Ile His Arg Asp Gly Ile Tyr Met Val His Ile Gln Val Thr Leu
100 105 110
Ala Ile Cys Ser Ser Thr Thr Ala Ser Arg His His Pro Thr Thr Leu
115 120 125
Ala Val Gly Ile Cys Ser Pro Ala Ser Arg Ser Ile Ser Leu Leu Arg
130 135 140
Leu Ser Phe His Gln Gly Cys Thr Ile Ala Ser Gln Arg Leu Thr Pro
145 150 155 160
Leu Ala Arg Gly Asp Thr Leu Cys Thr Asn Leu Thr Gly Thr Leu Leu
165 170 175
Pro Ser Arg Asn Thr Asp Glu Thr Phe Phe Gly Val Gln Trp Val Arg
180 185 190
Pro
<210> 140
<211> 142
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CD70的可溶性结构域
<400> 140
Ser Leu Gly Trp Asp Val Ala Glu Leu Gln Leu Asn His Thr Gly Pro
1 5 10 15
Gln Gln Asp Pro Arg Leu Tyr Trp Gln Gly Gly Pro Ala Leu Gly Arg
20 25 30
Ser Phe Leu His Gly Pro Glu Leu Asp Lys Gly Gln Leu Arg Ile His
35 40 45
Arg Asp Gly Ile Tyr Met Val His Ile Gln Val Thr Leu Ala Ile Cys
50 55 60
Ser Ser Thr Thr Ala Ser Arg His His Pro Thr Thr Leu Ala Val Gly
65 70 75 80
Ile Cys Ser Pro Ala Ser Arg Ser Ile Ser Leu Leu Arg Leu Ser Phe
85 90 95
His Gln Gly Cys Thr Ile Ala Ser Gln Arg Leu Thr Pro Leu Ala Arg
100 105 110
Gly Asp Thr Leu Cys Thr Asn Leu Thr Gly Thr Leu Leu Pro Ser Arg
115 120 125
Asn Thr Asp Glu Thr Phe Phe Gly Val Gln Trp Val Arg Pro
130 135 140
<210> 141
<211> 137
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CD70的可溶性结构域（可选的）
<400> 141
Val Ala Glu Leu Gln Leu Asn His Thr Gly Pro Gln Gln Asp Pro Arg
1 5 10 15
Leu Tyr Trp Gln Gly Gly Pro Ala Leu Gly Arg Ser Phe Leu His Gly
20 25 30
Pro Glu Leu Asp Lys Gly Gln Leu Arg Ile His Arg Asp Gly Ile Tyr
35 40 45
Met Val His Ile Gln Val Thr Leu Ala Ile Cys Ser Ser Thr Thr Ala
50 55 60
Ser Arg His His Pro Thr Thr Leu Ala Val Gly Ile Cys Ser Pro Ala
65 70 75 80
Ser Arg Ser Ile Ser Leu Leu Arg Leu Ser Phe His Gln Gly Cys Thr
85 90 95
Ile Ala Ser Gln Arg Leu Thr Pro Leu Ala Arg Gly Asp Thr Leu Cys
100 105 110
Thr Asn Leu Thr Gly Thr Leu Leu Pro Ser Arg Asn Thr Asp Glu Thr
115 120 125
Phe Phe Gly Val Gln Trp Val Arg Pro
130 135
<210> 142
<211> 241
<212> PRT
<213> 智人（Homo Sapiens）
<400> 142
Met Ala Gln His Gly Ala Met Gly Ala Phe Arg Ala Leu Cys Gly Leu
1 5 10 15
Ala Leu Leu Cys Ala Leu Ser Leu Gly Gln Arg Pro Thr Gly Gly Pro
20 25 30
Gly Cys Gly Pro Gly Arg Leu Leu Leu Gly Thr Gly Thr Asp Ala Arg
35 40 45
Cys Cys Arg Val His Thr Thr Arg Cys Cys Arg Asp Tyr Pro Gly Glu
50 55 60
Glu Cys Cys Ser Glu Trp Asp Cys Met Cys Val Gln Pro Glu Phe His
65 70 75 80
Cys Gly Asp Pro Cys Cys Thr Thr Cys Arg His His Pro Cys Pro Pro
85 90 95
Gly Gln Gly Val Gln Ser Gln Gly Lys Phe Ser Phe Gly Phe Gln Cys
100 105 110
Ile Asp Cys Ala Ser Gly Thr Phe Ser Gly Gly His Glu Gly His Cys
115 120 125
Lys Pro Trp Thr Asp Cys Thr Gln Phe Gly Phe Leu Thr Val Phe Pro
130 135 140
Gly Asn Lys Thr His Asn Ala Val Cys Val Pro Gly Ser Pro Pro Ala
145 150 155 160
Glu Pro Leu Gly Trp Leu Thr Val Val Leu Leu Ala Val Ala Ala Cys
165 170 175
Val Leu Leu Leu Thr Ser Ala Gln Leu Gly Leu His Ile Trp Gln Leu
180 185 190
Arg Ser Gln Cys Met Trp Pro Arg Glu Thr Gln Leu Leu Leu Glu Val
195 200 205
Pro Pro Ser Thr Glu Asp Ala Arg Ser Cys Gln Phe Pro Glu Glu Glu
210 215 220
Arg Gly Glu Arg Ser Ala Glu Glu Lys Gly Arg Leu Gly Asp Leu Trp
225 230 235 240
Val
<210> 143
<211> 228
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus Musculus）
<400> 143
Met Gly Ala Trp Ala Met Leu Tyr Gly Val Ser Met Leu Cys Val Leu
1 5 10 15
Asp Leu Gly Gln Pro Ser Val Val Glu Glu Pro Gly Cys Gly Pro Gly
20 25 30
Lys Val Gln Asn Gly Ser Gly Asn Asn Thr Arg Cys Cys Ser Leu Tyr
35 40 45
Ala Pro Gly Lys Glu Asp Cys Pro Lys Glu Arg Cys Ile Cys Val Thr
50 55 60
Pro Glu Tyr His Cys Gly Asp Pro Gln Cys Lys Ile Cys Lys His Tyr
65 70 75 80
Pro Cys Gln Pro Gly Gln Arg Val Glu Ser Gln Gly Asp Ile Val Phe
85 90 95
Gly Phe Arg Cys Val Ala Cys Ala Met Gly Thr Phe Ser Ala Gly Arg
100 105 110
Asp Gly His Cys Arg Leu Trp Thr Asn Cys Ser Gln Phe Gly Phe Leu
115 120 125
Thr Met Phe Pro Gly Asn Lys Thr His Asn Ala Val Cys Ile Pro Glu
130 135 140
Pro Leu Pro Thr Glu Gln Tyr Gly His Leu Thr Val Ile Phe Leu Val
145 150 155 160
Met Ala Ala Cys Ile Phe Phe Leu Thr Thr Val Gln Leu Gly Leu His
165 170 175
Ile Trp Gln Leu Arg Arg Gln His Met Cys Pro Arg Glu Thr Gln Pro
180 185 190
Phe Ala Glu Val Gln Leu Ser Ala Glu Asp Ala Cys Ser Phe Gln Phe
195 200 205
Pro Glu Glu Glu Arg Gly Glu Gln Thr Glu Glu Lys Cys His Leu Gly
210 215 220
Gly Arg Trp Pro
225
<210> 144
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化6C8的重链变体
<400> 144
Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
65 70 75 80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Thr Arg Arg Tyr Phe Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 145
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化6C8的重链变体
<400> 145
Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
65 70 75 80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Thr Arg Arg Tyr Phe Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 146
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化6C8的重链变体
<400> 146
Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Gln Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
65 70 75 80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Thr Arg Arg Tyr Phe Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 147
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化6C8的重链变体
<400> 147
Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Gln Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
65 70 75 80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Thr Arg Arg Tyr Phe Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 148
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化6C8的轻链
<400> 148
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Thr Asp Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 149
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 6C8重链前导序列
<400> 149
Met Asp Arg Leu Thr Phe Ser Phe Leu Leu Leu Ile Val Pro Ala Tyr
1 5 10 15
Val Leu Ser
<210> 150
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 6C8轻链前导序列
<400> 150
Met Glu Thr Gln Ser Gln Val Phe Val Tyr Met Leu Leu Trp Leu Ser
1 5 10 15
Gly Val Asp Gly
20
<210> 151
<211> 138
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化6C8的重链可变区变体
<400> 151
Met Asp Arg Leu Thr Phe Ser Phe Leu Leu Leu Ile Val Pro Ala Tyr
1 5 10 15
Val Leu Ser Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Lys
20 25 30
Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu
35 40 45
Ser Thr Ser Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys
50 55 60
Gly Leu Glu Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr
65 70 75 80
Asn Pro Ser Leu Lys Ser Gln Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Arg
85 90 95
Asn Gln Val Phe Leu Lys Ile Thr Ser Val Asp Thr Ala Asp Ala Ala
100 105 110
Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Thr Arg Arg Tyr Phe Pro Phe Ala Tyr Trp
115 120 125
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
130 135
<210> 152
<211> 138
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化6C8的重链可变区变体
<400> 152
Met Asp Arg Leu Thr Phe Ser Phe Leu Leu Leu Ile Val Pro Ala Tyr
1 5 10 15
Val Leu Ser Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Lys
20 25 30
Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu
35 40 45
Ser Thr Ser Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys
50 55 60
Gly Leu Glu Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr
65 70 75 80
Gln Pro Ser Leu Lys Ser Gln Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Arg
85 90 95
Asn Gln Val Phe Leu Lys Ile Thr Ser Val Asp Thr Ala Asp Ala Ala
100 105 110
Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Thr Arg Arg Tyr Phe Pro Phe Ala Tyr Trp
115 120 125
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
130 135
<210> 153
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化6C8的轻链可变区
<400> 153
Met Glu Thr Gln Ser Gln Val Phe Val Tyr Met Leu Leu Trp Leu Ser
1 5 10 15
Gly Val Asp Gly Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser
20 25 30
Thr Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn
35 40 45
Val Gly Thr Asn Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
50 55 60
Lys Ala Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp
65 70 75 80
Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn
85 90 95
Asn Val His Ser Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn
100 105 110
Thr Asp Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
115 120 125
<210> 154
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 6C8的重链CDR1
<400> 154
Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser Gly Met Gly Val Gly
1 5 10
<210> 155
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 6C8的重链CDR2变体
<400> 155
His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 156
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 6C8的重链CDR2变体
<400> 156
His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Gln Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 157
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 6C8的重链CDR3
<400> 157
Thr Arg Arg Tyr Phe Pro Phe Ala Tyr
1 5
<210> 158
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 6C8的轻链CDR1
<400> 158
Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala
1 5 10
<210> 159
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 6C8的轻链CDR2
<400> 159
Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser
1 5
<210> 160
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 6C8的轻链CDR3
<400> 160
Gln Gln Tyr Asn Thr Asp Pro Leu Thr
1 5
<210> 161
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 嵌合6C8的重链变体
<400> 161
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Gln Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Arg Asn Gln Val
65 70 75 80
Phe Leu Lys Ile Thr Ser Val Asp Thr Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Thr Arg Arg Tyr Phe Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 162
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 嵌合6C8的重链变体
<400> 162
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Gln Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Arg Asn Gln Val
65 70 75 80
Phe Leu Lys Ile Thr Ser Val Asp Thr Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Thr Arg Arg Tyr Phe Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 163
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 嵌合6C8的轻链变体
<400> 163
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Asn Val His Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Thr Asp Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 164
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 36E5的重链可变区
<400> 164
Glu Val Asn Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Val Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Ile Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Val Gly Gly Tyr Tyr Asp Ser Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ile
100 105 110
Ser Val Thr Asp Ser Ser
115
<210> 165
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 36E5的轻链可变区
<400> 165
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Met Glu Glu Asp Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys Gln Gln Thr Lys
85 90 95
Glu Val Thr Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Ala
<210> 166
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3D6的重链可变区
<400> 166
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Thr Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile His Ala Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Arg Gly Arg Phe Ser Ile Ser Arg Asp Asn Gly Lys Ser Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Thr Gly Ser Phe Met Tyr Ala Ala Asp Tyr Tyr Ile Met Asp Ala
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Ala Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 167
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 3D6的轻链可变区
<400> 167
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Val Ser Leu Ser Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asn Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asp Gly Asn Thr Phe Leu Ser Trp Tyr Phe Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Ser
50 55 60
Asn Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Pro Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln His
85 90 95
Thr His Leu Pro Leu Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg
<210> 168
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 61G6的重链可变区
<400> 168
Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Arg Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe
65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Leu Gly Leu Arg Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 169
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 61G6的轻链可变区
<400> 169
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Leu Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Asn Ser Thr Val Asn Tyr Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Arg Ser Ser Pro Lys Pro Cys Ile Tyr
35 40 45
Leu Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Asn Ser Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Arg Arg Ala
100 105
<210> 170
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 6H6的重链可变区
<400> 170
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Trp Ile Glu Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Ser Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Phe Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Lys Val Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 171
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 6H6的轻链可变区
<400> 171
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Val Thr Cys Thr Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Phe His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Leu Trp
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Thr Met Glu
65 70 75 80
Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Tyr His Arg Ser Pro
85 90 95
Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala
100 105 110
<210> 172
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 61F6的重链可变区
<400> 172
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Arg Ser Val Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Leu Gly Gly Tyr Tyr Asp Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 173
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 61F6的轻链可变区
<400> 173
Asp Ile Val Val Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr
20 25 30
Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Met Glu Glu Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Val Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Ala
<210> 174
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 1D8的重链可变区
<400> 174
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Ser Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Gln Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Arg Asn Gln Val
65 70 75 80
Phe Leu Lys Ile Thr Ser Leu Asp Thr Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Val Arg Ser Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ser Gly Ala Met Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 175
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 1D8的轻链可变区
<400> 175
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asp Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Lys Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Ala Asp Ala Ala Pro
115
<210> 176
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 17F10的重链可变区
<400> 176
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Phe Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Arg Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Thr Gly Asp Arg Ser Tyr Leu Pro Asp Ser Met Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Ile Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln
85 90 95
Arg Tyr Phe Asp Phe Asp Ser Phe Ala Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 177
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 17F10的轻链可变区
<400> 177
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Phe
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Ser Leu Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Lys Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Asp Gln
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly His Thr Leu Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Val Lys Arg Ala Asp Ala Ala
100 105 110
Pro
<210> 178
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 35D8的重链可变区
<400> 178
Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Tyr Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Arg
50 55 60
Gly Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Ser Gln Tyr Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Leu Ser Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ser
85 90 95
Arg Arg His Leu Gly Ser Gly Tyr Gly Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120
<210> 179
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 35D8的轻链可变区
<400> 179
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ala Leu Thr Ile Asn Ser Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln Gln His Ser Tyr Thr Pro Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Arg Arg Ala Asp Ala
100 105 110
Ala Pro
<210> 180
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 49A1的重链可变区
<400> 180
Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Phe Glu Tyr Met
35 40 45
Gly Phe Ile Ser Tyr Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Arg
50 55 60
Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Phe Leu
65 70 75 80
His Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ser
85 90 95
Arg Arg His Leu Ile Ser Gly Tyr Gly Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120
<210> 181
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 49A1的轻链可变区
<400> 181
Val Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Ile Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Asn Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ile Ser Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Arg Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln Gln His Ser Tyr Thr Pro Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Asn Leu Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala
100 105 110
Ala Pro
<210> 182
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 9E5的重链可变区
<400> 182
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr
20 25 30
Gly Val Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala Asn Ile Trp Trp Asp Asp Asp Asn Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Ile His Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Asn Asn Gln Ala
65 70 75 80
Phe Leu Lys Ile Thr Asn Val Asp Thr Ala Glu Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Gln Ile Lys Glu Pro Arg Asp Trp Phe Phe Glu Phe Trp Gly
100 105 110
Pro Gly Thr Met Val Ser Val Ser Ser
115 120
<210> 183
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 9E5的轻链可变区
<400> 183
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Met Pro Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Ile Phe Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Asn Asn Phe
20 25 30
Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Ile Lys Pro Leu Ile
35 40 45
Phe Tyr Thr Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Ser Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr His Gly Phe Pro Asn
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Ala Asp Ala Ala
100 105 110
Pro
<210> 184
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 31H6的重链可变区
<400> 184
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr
20 25 30
Gly Val Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala Asn Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Asn Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Asn Asn Gln Ala
65 70 75 80
Phe Leu Lys Ile Thr Asn Val Asp Thr Ala Glu Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Gln Ile Lys Glu Pro Arg Asp Trp Phe Phe Glu Phe Trp Gly
100 105 110
Pro Gly Thr Met Val Ser Val Ser Ser
115 120
<210> 185
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 31H6的轻链可变区
<400> 185
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Met Pro Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Ile Phe Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Asn Asn Tyr
20 25 30
Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Ile Lys Pro Leu Ile
35 40 45
Phe Tyr Thr Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Ser Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr His Gly Phe Pro Asn
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Ala Asp Ala Ala
100 105 110
Pro
<210> 186
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化36E5的重链可变区
<400> 186
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Val Gly Gly Tyr Tyr Asp Ser Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 187
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化36E5的轻链可变区
<220>
<221> misc_feature
<222> （31）..（31）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> （57）..（57）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 187
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Xaa Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Phe Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
35 40 45
Arg Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Xaa Gln Gly Ser Gly Ile Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Lys
85 90 95
Glu Val Thr Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 110
<210> 188
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化3D6的重链可变区
<220>
<221> misc_feature
<222> （97）..（98）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 188
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile His Ala Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Xaa Xaa Gly Ser Phe Met Tyr Ala Ala Asp Tyr Tyr Ile Met Asp Ala
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 189
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化3D6的轻链可变区
<400> 189
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asp Gly Asn Thr Phe Leu Ser Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln His
85 90 95
Thr His Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg
<210> 190
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化61G6的重链可变区
<220>
<221> misc_feature
<222> （49）..（49）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> （68）..（68）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> （72）..（72）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 190
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Xaa Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Arg Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Xaa Thr Ile Ser Xaa Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Leu Gly Leu Arg Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 191
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化61G6的轻链可变区
<220>
<221> misc_feature
<222> （45）..（46）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 191
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Asn Ser Thr Val Asn Tyr Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Xaa Xaa Ile Tyr
35 40 45
Leu Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Asn Ser Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 192
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化6H6的重链可变区
<220>
<221> misc_feature
<222> （48）..（48）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> （68）..（68）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> （70）..（70）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> （72）..（72）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 192
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Xaa
35 40 45
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Ser Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Xaa Thr Xaa Thr Xaa Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Lys Val Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 193
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化6H6的轻链可变区
<220>
<221> misc_feature
<222> （48）..（48）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> （72）..（72）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 193
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Thr Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Phe His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Xaa
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Xaa Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Tyr His Arg Ser Pro
85 90 95
Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 194
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化61F6的重链可变区
<220>
<221> misc_feature
<222> （48）..（48）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> （68）..（68）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> （70）..（70）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> （72）..（72）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> （74）..（74）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 194
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Xaa
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Arg Ser Val Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
Ala Arg Leu Gly Gly Tyr Tyr Asp Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 195
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化61F6的轻链可变区
<400> 195
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr
20 25 30
Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Val Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 110
<210> 196
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化1D8的重链可变区
<220>
<221> misc_feature
<222> （24）..（24）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> （69）..（69）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> （73）..（73）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> （75）..（75）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> （80）..（80）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> （98）..（98）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 196
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Xaa Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Met Gly Val Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Val Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Ser Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Xaa Thr Ile Ser Xaa Asp Xaa Ser Lys Asn Thr Xaa
65 70 75 80
Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Xaa Arg Ser Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ser Gly Ala Met Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 197
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化1D8的轻链可变区
<400> 197
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asp Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Lys Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg
<210> 198
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化17F10的重链可变区
<220>
<221> misc_feature
<222> （96）..（96）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 198
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Arg Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Thr Gly Asp Arg Ser Tyr Leu Pro Asp Ser Met Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Xaa
85 90 95
Arg Tyr Phe Asp Phe Asp Ser Phe Ala Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 199
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化17F10的轻链可变区
<400> 199
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Phe
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Lys Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 200
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化35D8的重链可变区
<220>
<221> misc_feature
<222> （47）..（48）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> （71）..（71）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> （96）..（96）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 200
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Xaa Xaa
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Arg
50 55 60
Gly Arg Val Thr Ile Ser Xaa Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Xaa
85 90 95
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100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 201
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化35D8的轻链可变区
<220>
<221> misc_feature
<222> （71）..（71）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 201
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Xaa Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Ser Tyr Thr Pro Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 202
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化49A1的重链可变区
<220>
<221> misc_feature
<222> （47）..（48）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> （67）..（67）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> （71）..（71）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> （78）..（78）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> （96）..（96）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 202
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Xaa Xaa
35 40 45
Gly Phe Ile Ser Tyr Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Arg
50 55 60
Ser Arg Xaa Thr Ile Ser Xaa Asp Thr Ser Lys Asn Gln Xaa Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Xaa
85 90 95
Arg Arg His Leu Ile Ser Gly Tyr Gly Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 203
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化49A1的轻链可变区
<220>
<221> misc_feature
<222> （1）..（1）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 203
Xaa Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ile Ser Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Ser Tyr Thr Pro Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 204
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化9E5的重链可变区
<220>
<221> misc_feature
<222> （24）..（24）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> （50）..（51）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> （69）..（69）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> （71）..（71）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> （73）..（73）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> （80）..（80）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> （99）..（99）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 204
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Xaa Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr
20 25 30
Gly Val Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Xaa Xaa Asn Ile Trp Trp Asp Asp Asp Asn Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Ile His Arg Xaa Thr Xaa Ser Xaa Asp Thr Ser Lys Asn Gln Xaa
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Xaa Ile Lys Glu Pro Arg Asp Trp Phe Phe Glu Phe Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 205
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化9E5的轻链可变区
<220>
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<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
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<222> （49）..（49）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> （71）..（71）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 205
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Asn Asn Phe
20 25 30
Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Xaa Leu Ile
35 40 45
Xaa Tyr Thr Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Xaa Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr His Gly Phe Pro Asn
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 206
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化31H6的重链可变区
<220>
<221> misc_feature
<222> （24）..（24）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> （50）..（51）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> （69）..（69）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> （73）..（73）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> （80）..（80）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> （99）..（99）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 206
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Xaa Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr
20 25 30
Gly Val Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Xaa Xaa Asn Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Asn Arg Xaa Thr Ile Ser Xaa Asp Thr Ser Lys Asn Gln Xaa
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Xaa Ile Lys Glu Pro Arg Asp Trp Phe Phe Glu Phe Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 207
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化31H6的轻链可变区
<220>
<221> misc_feature
<222> （46）..（46）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> （49）..（49）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> （71）..（71）
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 207
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Asn Asn Tyr
20 25 30
Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Xaa Leu Ile
35 40 45
Xaa Tyr Thr Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Xaa Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr His Gly Phe Pro Asn
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 208
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2155的重链可变区
<400> 208
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Gly Ala Ser Gly Phe Thr Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ile Ile Ser Thr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Arg
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Val Gly Gly Tyr Tyr Asp Ser Met Asp His Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 209
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2155的轻链可变区
<400> 209
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Thr Val Asp Asn Tyr
20 25 30
Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Met Glu Glu Asp Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 210
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2155 人源化（HC1）的重链
<400> 210
Gln Val Thr Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu Ser Cys Gly Ala Ser Gly Phe Thr Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ile Ile Ser Thr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Arg
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Thr Met Ser Ser Leu Asp Ser Val Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Val Gly Gly Tyr Tyr Asp Ser Met Asp His Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr
115
<210> 211
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2155 人源化（HC2）的重链
<400> 211
Gln Val Thr Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu Ser Cys Gly Ala Ser Gly Phe Thr Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ile Ile Ser Thr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Arg
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Thr Met Ser Ser Leu Asp Ser Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Val Gly Gly Tyr Tyr Asp Ser Met Asp His Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr
115
<210> 212
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2155 人源化（HC3a）的重链
<400> 212
Gln Val Thr Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu Ser Cys Gly Ala Ser Gly Phe Thr Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ile Ile Ser Thr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Lys Phe Arg
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Thr Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Val Gly Gly Tyr Tyr Asp Ser Met Asp His Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr
115
<210> 213
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化（HC3b）的重链
<400> 213
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu Ser Cys Gly Ala Ser Gly Phe Thr Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ile Ile Ser Thr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Lys Phe Arg
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Thr Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Val Gly Gly Tyr Tyr Asp Ser Met Asp His Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr
115
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<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人源化（HC4）的重链
<400> 214
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ile Ile Ser Thr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Val Gly Gly Tyr Tyr Asp Ser Met Asp His Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr
115
<210> 215
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2155人源化（LC1）的轻链
<400> 215
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Thr Val Asp Asn Tyr
20 25 30
Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Met Gln Pro Asp Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu
100 105
<210> 216
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2155人源化（LC2a）的轻链
<400> 216
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Thr Val Asp Asn Tyr
20 25 30
Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Pro Met Gln Pro Asp Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu
100 105
<210> 217
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2155人源化（LC2b）的轻链
<400> 217
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Thr Val Asp Asn Tyr
20 25 30
Gly Ile Ser Tyr Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Pro Met Gln Pro Asp Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu
100 105
<210> 218
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2155人源化（LC3）的轻链
<400> 218
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Thr Val Asp Asn Tyr
20 25 30
Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn
65 70 75 80
Pro Val Glu Ala Asp Asp Thr Ala Asn Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu
100 105
<210> 219
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 698的重链可变区
<400> 219
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Thr Val Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Gly Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Lys Leu Thr Ala Val Thr Ser Ala Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Asp Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Thr Ser Thr Tyr Pro His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 220
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 698的轻链可变区
<400> 220
Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Ser
20 25 30
Ile His Trp Tyr Gln Gln Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile Asn Ser Val Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Asn Trp Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 221
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 706的重链可变区
<400> 221
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Thr Val Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Gly Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Lys Leu Thr Ala Val Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Asn Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Thr Ser Thr Tyr Pro His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 222
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 706的轻链可变区
<400> 222
Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Ser
20 25 30
Ile His Trp Tyr Gln Gln Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile Asn Ser Val Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Asn Asn Trp Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 223
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 827的重链可变区
<400> 223
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Thr Val Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Glu Thr Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Ile His Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Ala Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Ala Gly Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Arg Gly Lys Ala Lys Leu Thr Ala Val Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Asn Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Ser Ser Thr Tyr Pro His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 224
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 827的轻链可变区
<400> 224
Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Ser
20 25 30
Ile His Trp Tyr Gln Gln Arg Thr Asn Asp Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile Asn Ser Val Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Asn Asn Trp Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 225
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 1718的重链可变区
<400> 225
Gln Val Gln Val Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Asp Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Lys Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Phe Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Ser Gly Tyr Gly Asn Tyr Tyr Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 226
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 1718的轻链可变区
<400> 226
Ile Gln Met Thr Gln Ser Ser Ser Tyr Leu Ser Val Ser Leu Gly Gly
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Asp His Ile Lys Asn Trp Leu
20 25 30
Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Val Pro Arg Leu Leu Met Ser
35 40 45
Ala Ala Thr Ser Leu Glu Thr Gly Phe Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Lys Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Thr Glu
65 70 75 80
Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Trp Ser Thr Pro Trp Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 227
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2155的重链CDR3
<400> 227
Val Gly Gly Tyr Tyr Asp Ser Met Asp His
1 5 10
<210> 228
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2155的重链CDR2
<400> 228
Ile Ile Ser Thr Gly Gly Ser Thr Tyr
1 5
<210> 229
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2155的重链CDR1
<400> 229
Gly Phe Thr Ile Ser Ser Tyr Ala Met Ser
1 5 10
<210> 230
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2155的轻链CDR3
<400> 230
Gln Gln Ser Lys Glu Val Pro Trp Thr
1 5
<210> 231
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2155的轻链CDR2
<400> 231
Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser
1 5
<210> 232
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 2155的轻链CDR1
<400> 232
Arg Ala Ser Glu Thr Val Asp Asn Tyr Gly Ile Ser Phe Met Asn
1 5 10 15
<210> 233
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 698和706的重链CDR3
<400> 233
Thr Ser Thr Tyr Pro His Phe Asp Tyr
1 5
<210> 234
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 698和706的重链CDR2
<400> 234
Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Gly
1 5 10
<210> 235
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 698和706的重链CDR1
<400> 235
Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Tyr Trp Met His
1 5 10
<210> 236
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 698的轻链CDR3
<400> 236
Gln Gln Ser Asn Asn Trp Pro Leu Thr
1 5
<210> 237
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 698、706、827和1649的轻链CDR2
<400> 237
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser
1 5
<210> 238
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 698、706、827和1649的轻链CDR1
<400> 238
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Ser Ile His
1 5 10
<210> 239
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 706、827和1649的轻链CDR3
<400> 239
Gln Gln Thr Asn Asn Trp Pro Leu Thr
1 5
<210> 240
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 827和1649的重链CDR3
<400> 240
Ser Ser Thr Tyr Pro His Phe Asp Tyr
1 5
<210> 241
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 827的重链CDR2
<400> 241
Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Ala Gly
1 5 10
<210> 242
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 1649的重链CDR2
<400> 242
Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Ala Gly
1 5 10
<210> 243
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 1718的重链CDR3
<400> 243
Gly Tyr Gly Asn Tyr Tyr Phe Pro Tyr
1 5
<210> 244
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 1718的重链CDR2
<400> 244
Trp Ile Tyr Pro Gly Lys Gly Tyr Thr Asn
1 5 10
<210> 245
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 1718的重链CDR1
<400> 245
Asp Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Tyr Ile
1 5
<210> 246
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 1718的轻链CDR3
<400> 246
Gln Gln Thr Trp Ser Thr Pro Trp Thr
1 5
<210> 247
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 1718的轻链CDR2
<400> 247
Ala Ala Thr Ser Leu Glu Thr
1 5
<210> 248
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 1718的轻链CDR1
<400> 248
Lys Ala Ser Asp His Ile Lys Asn Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 249
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 827和1649的重链CDR1
<400> 249
Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Tyr Trp Ile His
1 5 10
<210> 250
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 1D7的重链
<400> 250
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Thr Val Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Gln Leu Gly Lys Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 251
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 1D7的轻链
<400> 251
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Asn Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 252
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 1D7的重链可变区
<400> 252
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Thr Val Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Gln Leu Gly Lys Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 253
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 1D7的轻链可变区
<400> 253
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Asn Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 254
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 1D7的重链CDR1
<400> 254
Ser Tyr Gly Met His
1 5
<210> 255
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 1D7的重链CDR2
<400> 255
Val Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 256
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 1D7的重链CDR3
<400> 256
Gly Gly Gln Leu Gly Lys Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10
<210> 257
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 1D7的轻链CDR1
<400> 257
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp Leu Gly
1 5 10
<210> 258
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 1D7的轻链CDR2
<400> 258
Asp Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 259
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 1D7的轻链CDR3
<400> 259
Leu Gln His Asn Asn Tyr Pro Trp Thr
1 5
<210> 260
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 33C9的重链
<400> 260
Gln Val Gln Val Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Val Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Leu Leu Gly Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 261
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 33C9的轻链
<400> 261
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His His Ser Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 262
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 33C9的重链可变区
<400> 262
Gln Val Gln Val Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Val Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Leu Leu Gly Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 263
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 33C9的轻链可变区
<400> 263
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His His Ser Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 264
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 33C9的重链CDR1
<400> 264
Ser Tyr Gly Met His
1 5
<210> 265
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 33C9的重链CDR2
<400> 265
Val Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 266
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 33C9的重链CDR3
<400> 266
Gly Gly Leu Leu Gly Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10
<210> 267
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 33C9的轻链CDR1
<400> 267
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp Leu Gly
1 5 10
<210> 268
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 33C9的轻链CDR2
<400> 268
Asp Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 269
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 33C9的轻链CDR3
<400> 269
Leu Gln His His Ser Tyr Pro Trp Thr
1 5
<210> 270
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 33F6的重链
<400> 270
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Val Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Glu Leu Arg Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 271
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 33F6的轻链
<400> 271
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Val Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 272
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 33F6的重链可变区
<400> 272
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Val Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Glu Leu Arg Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 273
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 33F6的轻链可变区
<400> 273
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Val Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 274
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 33F6的重链CDR1
<400> 274
Asn Tyr Gly Met His
1 5
<210> 275
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 33F6的重链CDR2
<400> 275
Val Ile Trp Tyr Val Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 276
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 33F6的重链CDR3
<400> 276
Gly Gly Glu Leu Arg Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10
<210> 277
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 33F6的轻链CDR1
<400> 277
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp Leu Gly
1 5 10
<210> 278
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 33F6的轻链CDR2
<400> 278
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 279
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 33F6的轻链CDR3
<400> 279
Leu Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Trp Thr
1 5
<210> 280
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 34G4的重链
<400> 280
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Gln Leu Gly Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 281
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 34G4的轻链
<400> 281
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 282
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 34G4的重链可变区
<400> 282
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Gln Leu Gly Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 283
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 34G4的轻链可变区
<400> 283
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 284
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 34G4的重链CDR1
<400> 284
Ser Tyr Gly Met His
1 5
<210> 285
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 34G4的重链CDR2
<400> 285
Val Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 286
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 34G4的重链CDR3
<400> 286
Gly Gly Gln Leu Gly Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10
<210> 287
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 34G4的轻链CDR1
<400> 287
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp Leu Gly
1 5 10
<210> 288
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 34G4的轻链CDR2
<400> 288
Asp Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 289
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 34G4的轻链CDR3
<400> 289
Leu Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Trp Thr
1 5
<210> 290
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 35B10的重链
<400> 290
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Ala Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Glu Leu Ser Phe Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 291
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 35B10的轻链
<400> 291
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Asn Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 292
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 35B10的重链可变区
<400> 292
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Ala Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Glu Leu Ser Phe Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 293
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 35B10的轻链可变区
<400> 293
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Asn Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 294
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 35B10的重链CDR1
<400> 294
Ser Tyr Gly Met His
1 5
<210> 295
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 35B10的重链CDR2
<400> 295
Val Ile Trp Tyr Ala Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 296
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 35B10的重链CDR3
<400> 296
Gly Gly Glu Leu Ser Phe Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10
<210> 297
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 35B10的轻链CDR1
<400> 297
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp Leu Gly
1 5 10
<210> 298
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 35B10的轻链CDR2
<400> 298
Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser
1 5
<210> 299
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 35B10的轻链CDR3
<400> 299
Leu Gln His Asn Asn Tyr Pro Trp Thr
1 5
<210> 300
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 41E11的重链
<400> 300
Gln Val Gln Val Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Gln Leu Gly Lys Asp Tyr Tyr Ser Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 301
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 41E11的轻链
<400> 301
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Val Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 302
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 41E11的重链可变区
<400> 302
Gln Val Gln Val Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Gln Leu Gly Lys Asp Tyr Tyr Ser Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 303
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 41E11的轻链可变区
<400> 303
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Val Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 304
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 41E11的重链CDR1
<400> 304
Ser Tyr Gly Met Tyr
1 5
<210> 305
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 41E11的重链CDR2
<400> 305
Val Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Arg
1 5 10 15
Gly
<210> 306
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 41E11的重链CDR3
<400> 306
Gly Gly Gln Leu Gly Lys Asp Tyr Tyr Ser Gly Met Asp Val
1 5 10
<210> 307
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 41E11的轻链CDR1
<400> 307
Arg Ala Ser Gln Val Ile Arg Asn Asp Leu Gly
1 5 10
<210> 308
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 41E11的轻链CDR2
<400> 308
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 309
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 41E11的轻链CDR3
<400> 309
Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 310
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 41G5的重链
<400> 310
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Pro Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Glu Leu Gly Arg Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 311
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 41G5的轻链
<400> 311
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Val Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Asn Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 312
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 41G5的重链可变区
<400> 312
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Pro Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Glu Leu Gly Arg Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 313
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 41G5的轻链可变区
<400> 313
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Val Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Asn Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg
100 105
<210> 314
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 41G5的重链CDR1
<400> 314
Ser Tyr Gly Met His
1 5
<210> 315
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 41G5的重链CDR2
<400> 315
Val Ile Trp Tyr Pro Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 316
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 41G5的重链CDR3
<400> 316
Gly Gly Glu Leu Gly Arg Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10
<210> 317
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 41G5的轻链CDR1
<400> 317
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp Leu Gly
1 5 10
<210> 318
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 41G5的轻链CDR2
<400> 318
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 319
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 41G5的轻链CDR3
<400> 319
Leu Gln His Asn Asn Tyr Pro Trp Thr
1 5
<210> 320
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 42A11的重链
<400> 320
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Gln Leu Gly Tyr Tyr Tyr Tyr Ser Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 321
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 42A11的轻链
<400> 321
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Glu Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Asn Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 322
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 42A11的重链可变区
<400> 322
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Gln Leu Gly Tyr Tyr Tyr Tyr Ser Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 323
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 42A11的轻链可变区
<400> 323
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Glu Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Asn Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 324
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 42A11的重链CDR1
<400> 324
Ser Tyr Gly Met His
1 5
<210> 325
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 42A11的重链CDR2
<400> 325
Val Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 326
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 42A11的重链CDR3
<400> 326
Gly Gly Gln Leu Gly Tyr Tyr Tyr Tyr Ser Gly Met Asp Val
1 5 10
<210> 327
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 42A11的轻链CDR1
<400> 327
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp Leu Gly
1 5 10
<210> 328
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 42A11的轻链CDR2
<400> 328
Asp Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 329
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 42A11的轻链CDR3
<400> 329
Leu Gln His Asn Asn Tyr Pro Trp Thr
1 5
<210> 330
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 44C1的重链
<400> 330
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Thr Val Thr Thr Pro Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 331
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 44C1的轻链
<400> 331
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Thr Tyr
20 25 30
Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Glu Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Cys Ser Tyr Ala Gly Phe
85 90 95
Ser Thr Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 332
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 44C1的重链可变区
<400> 332
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Thr Val Thr Thr Pro Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 333
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 44C1的轻链可变区
<400> 333
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Thr Tyr
20 25 30
Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Glu Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Cys Ser Tyr Ala Gly Phe
85 90 95
Ser Thr Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 334
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 44C1的重链CDR1
<400> 334
Ser Tyr Gly Met His
1 5
<210> 335
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 44C1的重链CDR2
<400> 335
Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 336
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 44C1的重链CDR3
<400> 336
Arg Gly Thr Val Thr Thr Pro Asp Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 337
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 44C1的轻链CDR1
<400> 337
Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Thr Tyr Asn Leu Val Ser
1 5 10
<210> 338
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 44C1的轻链CDR2
<400> 338
Glu Val Ser Lys Arg Pro Ser
1 5
<210> 339
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 44C1的轻链CDR3
<400> 339
Cys Ser Tyr Ala Gly Phe Ser Thr Trp Val
1 5 10
<210> 340
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 45A8的重链
<400> 340
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp His Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Tyr Gly Gly Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 341
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 45A8的轻链
<400> 341
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Thr Tyr
20 25 30
Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Glu Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Ile Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Cys Ser Tyr Ala Gly Tyr
85 90 95
Ser Thr Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Arg Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 342
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 45A8的重链可变区
<400> 342
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp His Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Tyr Gly Gly Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 343
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 45A8的轻链可变区
<400> 343
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Thr Tyr
20 25 30
Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Glu Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Ile Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Cys Ser Tyr Ala Gly Tyr
85 90 95
Ser Thr Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Arg
100 105 110
<210> 344
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 45A8的重链CDR1
<400> 344
Ser Tyr Gly Met His
1 5
<210> 345
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 45A8的重链CDR2
<400> 345
Val Ile Trp His Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 346
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 45A8的重链CDR3
<400> 346
Glu Tyr Gly Gly Asn Phe Asp Tyr
1 5
<210> 347
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 45A8的轻链CDR1
<400> 347
Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Thr Tyr Asn Leu Val Ser
1 5 10
<210> 348
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 45A8的轻链CDR2
<400> 348
Glu Val Ser Lys Arg Pro Ser
1 5
<210> 349
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 45A8的轻链CDR3
<400> 349
Cys Ser Tyr Ala Gly Tyr Ser Thr Trp Val
1 5 10
<210> 350
<211> 454
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 46E11的重链
<400> 350
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Ala Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Ser Leu Tyr Tyr Gly Met Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro
210 215 220
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
225 230 235 240
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
245 250 255
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
260 265 270
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
275 280 285
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
290 295 300
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
305 310 315 320
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
325 330 335
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
340 345 350
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
355 360 365
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
370 375 380
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
385 390 395 400
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
405 410 415
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
420 425 430
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 351
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 46E11的轻链
<400> 351
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ala Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 352
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 46E11的重链可变区
<400> 352
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Ala Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Ser Leu Tyr Tyr Gly Met Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 353
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 46E11的轻链可变区
<400> 353
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ala Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 354
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 46E11的重链CDR1
<400> 354
Ser Tyr Gly Met His
1 5
<210> 355
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 46E11的重链CDR2
<400> 355
Val Ile Trp Tyr Ala Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 356
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 46E11的重链CDR3
<400> 356
Gly Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Ser Leu Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10 15
<210> 357
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 46E11的轻链CDR1
<400> 357
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp Leu Gly
1 5 10
<210> 358
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 46E11的轻链CDR2
<400> 358
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 359
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 46E11的轻链CDR3
<400> 359
Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Trp Thr
1 5
<210> 360
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 48H12的重链
<400> 360
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Ala Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Gln Leu Ala Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 361
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 48H12的轻链
<400> 361
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Asn Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 362
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 48H12的重链可变区
<400> 362
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Ala Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Gln Leu Ala Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 363
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 48H12的轻链可变区
<400> 363
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Asn Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 364
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 48H12的重链CDR1
<400> 364
Ser Tyr Gly Met His
1 5
<210> 365
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 48H12的重链CDR2
<400> 365
Val Ile Trp Tyr Ala Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 366
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 48H12的重链CDR3
<400> 366
Gly Gly Gln Leu Ala Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 48H12的轻链CDR1
<400> 367
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp Leu Gly
1 5 10
<210> 368
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 48H12的轻链CDR2
<400> 368
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 369
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 48H12的轻链CDR3
<400> 369
Leu Gln His Asn Asn Tyr Pro Trp Thr
1 5
<210> 370
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 48H7的重链
<400> 370
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Glu Leu Gly Arg Asp Tyr Tyr Ser Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
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Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 371
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 48H7的轻链
<400> 371
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Val Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Ile
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Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
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Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 372
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 48H7的重链可变区
<400> 372
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 373
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 48H7的轻链可变区
<400> 373
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Val Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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100 105
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 48H7的重链CDR1
<400> 374
Ser Tyr Gly Met Tyr
1 5
<210> 375
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 48H7的重链CDR2
<400> 375
Val Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 376
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 48H7的重链CDR3
<400> 376
Gly Gly Glu Leu Gly Arg Asp Tyr Tyr Ser Gly Met Asp Val
1 5 10
<210> 377
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 48H7的轻链CDR1
<400> 377
Arg Ala Ser Gln Val Ile Arg Asn Asp Leu Gly
1 5 10
<210> 378
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 48H7的轻链CDR2
<400> 378
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 379
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 48H7的轻链CDR3
<400> 379
Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Ile Thr
1 5
<210> 380
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 49D9的重链
<400> 380
Gln Met Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Ala Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Arg Leu Gly Phe Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 381
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 49D9的轻链
<400> 381
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 382
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 49D9的重链可变区
<400> 382
Gln Met Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ala Val Ile Trp Tyr Ala Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 383
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 49D9的轻链可变区
<400> 383
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
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50 55 60
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65 70 75 80
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 49D9的重链CDR1
<400> 384
Ser Tyr Gly Met His
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 49D9的重链CDR2
<400> 385
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1 5 10 15
Gly
<210> 386
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 49D9的重链CDR3
<400> 386
Gly Gly Arg Leu Gly Phe Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10
<210> 387
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 49D9的轻链CDR1
<400> 387
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp Leu Gly
1 5 10
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<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 49D9的轻链CDR2
<400> 388
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 389
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 49D9的轻链CDR3
<400> 389
Leu Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Trp Thr
1 5
<210> 390
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 49E2的重链
<400> 390
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130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
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195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
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Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
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420 425 430
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435 440 445
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<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 49E2的轻链
<400> 391
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Ile Tyr
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85 90 95
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100 105 110
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130 135 140
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Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 392
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 49E2的重链可变区
<400> 392
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Ser Asp Gly Asn Asn Lys Tyr Tyr Glu Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Ser Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Thr Ala Thr Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 393
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 49E2的轻链可变区
<400> 393
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Ile Tyr
20 25 30
Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile His Glu Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Cys Ser Tyr Ala Gly Ile
85 90 95
Ser Thr Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 394
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 49E2的重链CDR1
<400> 394
Ser Tyr Gly Met His
1 5
<210> 395
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 49E2的重链CDR2
<400> 395
Val Ile Trp Ser Asp Gly Asn Asn Lys Tyr Tyr Glu Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 396
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 49E2的重链CDR3
<400> 396
Asp Thr Ala Thr Pro Phe Asp Tyr
1 5
<210> 397
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 49E2的轻链CDR1
<400> 397
Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Ile Tyr Asn Leu Val Ser
1 5 10
<210> 398
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 49E2的轻链CDR2
<400> 398
Glu Val Ser Lys Arg Pro Ser
1 5
<210> 399
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 49E2的轻链CDR3
<400> 399
Cys Ser Tyr Ala Gly Ile Ser Thr Trp Val
1 5 10
<210> 400
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 48A9的重链
<400> 400
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Cys
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Leu Arg Tyr Asn Trp Asn Asp Gly Gly Val Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly Lys
450
<210> 401
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 48A9的轻链
<400> 401
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ile Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu His Trp Tyr Lys Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Arg Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Ser Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 402
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 48A9的重链可变区
<400> 402
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Cys
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Leu Arg Tyr Asn Trp Asn Asp Gly Gly Val Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 403
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 48A9的轻链可变区
<400> 403
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ile Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu His Trp Tyr Lys Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Arg Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Ser Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 404
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 48A9的重链CDR1
<400> 404
Ser Cys Gly Met His
1 5
<210> 405
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 48A9的重链CDR2
<400> 405
Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 406
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 48A9的重链CDR3
<400> 406
Asp Leu Arg Tyr Asn Trp Asn Asp Gly Gly Val Asp Tyr
1 5 10
<210> 407
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 48A9的轻链CDR1
<400> 407
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu His
1 5 10
<210> 408
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 48A9的轻链CDR2
<400> 408
Gly Ala Ser Arg Leu Gln Ser
1 5
<210> 409
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 48A9的轻链CDR3
<400> 409
Gln Gln Ser Ser Ser Thr Pro Leu Thr
1 5
<210> 410
<211> 455
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5H7的重链
<400> 410
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly
20 25 30
Gly Tyr Phe Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Ile Asp Thr Ser Lys Asn His Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Asp Leu Phe Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly Pro Arg Gly Phe
100 105 110
Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
115 120 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
130 135 140
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
145 150 155 160
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
165 170 175
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
180 185 190
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
195 200 205
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu
210 215 220
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
225 230 235 240
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
245 250 255
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
260 265 270
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
275 280 285
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
290 295 300
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
305 310 315 320
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
325 330 335
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
340 345 350
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
355 360 365
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
370 375 380
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
385 390 395 400
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
405 410 415
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
420 425 430
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
435 440 445
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 411
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5H7的轻链
<400> 411
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Val Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ser Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Ser Ser Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 412
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5H7的重链可变区
<400> 412
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly
20 25 30
Gly Tyr Phe Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Ile Asp Thr Ser Lys Asn His Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Asp Leu Phe Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly Pro Arg Gly Phe
100 105 110
Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 413
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5H7的轻链可变区
<400> 413
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Val Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ser Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Ser Ser Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 414
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5H7的重链CDR1
<400> 414
Ser Gly Gly Tyr Phe Trp Ser
1 5
<210> 415
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5H7的重链CDR2
<400> 415
Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 416
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5H7的重链CDR3
<400> 416
Asp Leu Phe Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly Pro Arg Gly Phe Asp Pro
1 5 10 15
<210> 417
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5H7的轻链CDR1
<400> 417
Arg Ala Ser Gln Thr Val Ser Ser Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 418
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5H7的轻链CDR2
<400> 418
Gly Ser Ser Thr Arg Ala Thr
1 5
<210> 419
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5H7的轻链CDR3
<400> 419
Gln Gln Tyr Asp Ser Ser Pro Trp Thr
1 5
<210> 420
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 7A10的重链
<400> 420
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Val Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Ser Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Glu Leu Gly Arg Asp Tyr Tyr Ser Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 421
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 7A10的轻链
<400> 421
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Ser Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 422
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 7A10的重链可变区
<400> 422
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Val Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Ser Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Glu Leu Gly Arg Asp Tyr Tyr Ser Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 423
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 7A10的轻链可变区
<400> 423
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Ser Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 424
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 7A10的重链CDR1
<400> 424
Ser Tyr Gly Met His
1 5
<210> 425
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 7A10的重链CDR2
<400> 425
Val Ile Trp Tyr Val Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 426
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 7A10的重链CDR3
<400> 426
Gly Gly Glu Leu Gly Arg Asp Tyr Tyr Ser Gly Met Asp Val
1 5 10
<210> 427
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 7A10的轻链CDR1
<400> 427
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp Leu Gly
1 5 10
<210> 428
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 7A10的轻链CDR2
<400> 428
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 429
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 7A10的轻链CDR3
<400> 429
Gln Gln His Asn Ser Tyr Pro Trp Thr
1 5
<210> 430
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 9H6的重链
<400> 430
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Arg Leu Gly Lys Asp Tyr Tyr Ser Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 431
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 9H6的轻链
<400> 431
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Thr Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Thr Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 432
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 9H6的重链可变区
<400> 432
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Arg Leu Gly Lys Asp Tyr Tyr Ser Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 433
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 9H6的轻链可变区
<400> 433
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Thr Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Thr Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 434
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 9H6的重链CDR1
<400> 434
Ser Tyr Gly Met His
1 5
<210> 435
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 9H6的重链CDR2
<400> 435
Val Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 436
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 9H6的重链CDR3
<400> 436
Gly Gly Arg Leu Gly Lys Asp Tyr Tyr Ser Gly Met Asp Val
1 5 10
<210> 437
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 9H6的轻链CDR1
<400> 437
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp Leu Gly
1 5 10
<210> 438
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 9H6的轻链CDR2
<400> 438
Ala Thr Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 439
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 9H6的轻链CDR3
<400> 439
Leu Gln His Asn Thr Tyr Pro Trp Thr
1 5
<210> 440
<211> 177
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> GITRL
<400> 440
Met Cys Leu Ser His Leu Glu Asn Met Pro Leu Ser His Ser Arg Thr
1 5 10 15
Gln Gly Ala Gln Arg Ser Ser Trp Lys Leu Trp Leu Phe Cys Ser Ile
20 25 30
Val Met Leu Leu Phe Leu Cys Ser Phe Ser Trp Leu Ile Phe Ile Phe
35 40 45
Leu Gln Leu Glu Thr Ala Lys Glu Pro Cys Met Ala Lys Phe Gly Pro
50 55 60
Leu Pro Ser Lys Trp Gln Met Ala Ser Ser Glu Pro Pro Cys Val Asn
65 70 75 80
Lys Val Ser Asp Trp Lys Leu Glu Ile Leu Gln Asn Gly Leu Tyr Leu
85 90 95
Ile Tyr Gly Gln Val Ala Pro Asn Ala Asn Tyr Asn Asp Val Ala Pro
100 105 110
Phe Glu Val Arg Leu Tyr Lys Asn Lys Asp Met Ile Gln Thr Leu Thr
115 120 125
Asn Lys Ser Lys Ile Gln Asn Val Gly Gly Thr Tyr Glu Leu His Val
130 135 140
Gly Asp Thr Ile Asp Leu Ile Phe Asn Ser Glu His Gln Val Leu Lys
145 150 155 160
Asn Asn Thr Tyr Trp Gly Ile Ile Leu Leu Ala Asn Pro Gln Phe Ile
165 170 175
Ser
<210> 441
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> GITRL的可溶性结构域
<400> 441
Thr Ala Lys Glu Pro Cys Met Ala Lys Phe Gly Pro Leu Pro Ser Lys
1 5 10 15
Trp Gln Met Ala Ser Ser Glu Pro Pro Cys Val Asn Lys Val Ser Asp
20 25 30
Trp Lys Leu Glu Ile Leu Gln Asn Gly Leu Tyr Leu Ile Tyr Gly Gln
35 40 45
Val Ala Pro Asn Ala Asn Tyr Asn Asp Val Ala Pro Phe Glu Val Arg
50 55 60
Leu Tyr Lys Asn Lys Asp Met Ile Gln Thr Leu Thr Asn Lys Ser Lys
65 70 75 80
Ile Gln Asn Val Gly Gly Thr Tyr Glu Leu His Val Gly Asp Thr Ile
85 90 95
Asp Leu Ile Phe Asn Ser Glu His Gln Val Leu Lys Asn Asn Thr Tyr
100 105 110
Trp Gly Ile Ile Leu Leu Ala Asn Pro Gln Phe Ile Ser
115 120 125
<210> 442
<211> 283
<212> PRT
<213> 智人（Homo Sapiens）
<400> 442
Met Glu Pro Pro Gly Asp Trp Gly Pro Pro Pro Trp Arg Ser Thr Pro
1 5 10 15
Arg Thr Asp Val Leu Arg Leu Val Leu Tyr Leu Thr Phe Leu Gly Ala
20 25 30
Pro Cys Tyr Ala Pro Ala Leu Pro Ser Cys Lys Glu Asp Glu Tyr Pro
35 40 45
Val Gly Ser Glu Cys Cys Pro Lys Cys Ser Pro Gly Tyr Arg Val Lys
50 55 60
Glu Ala Cys Gly Glu Leu Thr Gly Thr Val Cys Glu Pro Cys Pro Pro
65 70 75 80
Gly Thr Tyr Ile Ala His Leu Asn Gly Leu Ser Lys Cys Leu Gln Cys
85 90 95
Gln Met Cys Asp Pro Ala Met Gly Leu Arg Ala Ser Arg Asn Cys Ser
100 105 110
Arg Thr Glu Asn Ala Val Cys Gly Cys Ser Pro Gly His Phe Cys Ile
115 120 125
Val Gln Asp Gly Asp His Cys Ala Ala Cys Arg Ala Tyr Ala Thr Ser
130 135 140
Ser Pro Gly Gln Arg Val Gln Lys Gly Gly Thr Glu Ser Gln Asp Thr
145 150 155 160
Leu Cys Gln Asn Cys Pro Pro Gly Thr Phe Ser Pro Asn Gly Thr Leu
165 170 175
Glu Glu Cys Gln His Gln Thr Lys Cys Ser Trp Leu Val Thr Lys Ala
180 185 190
Gly Ala Gly Thr Ser Ser Ser His Trp Val Trp Trp Phe Leu Ser Gly
195 200 205
Ser Leu Val Ile Val Ile Val Cys Ser Thr Val Gly Leu Ile Ile Cys
210 215 220
Val Lys Arg Arg Lys Pro Arg Gly Asp Val Val Lys Val Ile Val Ser
225 230 235 240
Val Gln Arg Lys Arg Gln Glu Ala Glu Gly Glu Ala Thr Val Ile Glu
245 250 255
Ala Leu Gln Ala Pro Pro Asp Val Thr Thr Val Ala Val Glu Glu Thr
260 265 270
Ile Pro Ser Phe Thr Gly Arg Ser Pro Asn His
275 280
<210> 443
<211> 240
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> LIGHT（HVEM配体）
<400> 443
Met Glu Glu Ser Val Val Arg Pro Ser Val Phe Val Val Asp Gly Gln
1 5 10 15
Thr Asp Ile Pro Phe Thr Arg Leu Gly Arg Ser His Arg Arg Gln Ser
20 25 30
Cys Ser Val Ala Arg Val Gly Leu Gly Leu Leu Leu Leu Leu Met Gly
35 40 45
Ala Gly Leu Ala Val Gln Gly Trp Phe Leu Leu Gln Leu His Trp Arg
50 55 60
Leu Gly Glu Met Val Thr Arg Leu Pro Asp Gly Pro Ala Gly Ser Trp
65 70 75 80
Glu Gln Leu Ile Gln Glu Arg Arg Ser His Glu Val Asn Pro Ala Ala
85 90 95
His Leu Thr Gly Ala Asn Ser Ser Leu Thr Gly Ser Gly Gly Pro Leu
100 105 110
Leu Trp Glu Thr Gln Leu Gly Leu Ala Phe Leu Arg Gly Leu Ser Tyr
115 120 125
His Asp Gly Ala Leu Val Val Thr Lys Ala Gly Tyr Tyr Tyr Ile Tyr
130 135 140
Ser Lys Val Gln Leu Gly Gly Val Gly Cys Pro Leu Gly Leu Ala Ser
145 150 155 160
Thr Ile Thr His Gly Leu Tyr Lys Arg Thr Pro Arg Tyr Pro Glu Glu
165 170 175
Leu Glu Leu Leu Val Ser Gln Gln Ser Pro Cys Gly Arg Ala Thr Ser
180 185 190
Ser Ser Arg Val Trp Trp Asp Ser Ser Phe Leu Gly Gly Val Val His
195 200 205
Leu Glu Ala Gly Glu Lys Val Val Val Arg Val Leu Asp Glu Arg Leu
210 215 220
Val Arg Leu Arg Asp Gly Thr Arg Ser Tyr Phe Gly Ala Phe Met Val
225 230 235 240
<210> 444
<211> 147
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> LIGHT的可溶性结构域
<400> 444
Pro Ala Ala His Leu Thr Gly Ala Asn Ser Ser Leu Thr Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Pro Leu Leu Trp Glu Thr Gln Leu Gly Leu Ala Phe Leu Arg Gly
20 25 30
Leu Ser Tyr His Asp Gly Ala Leu Val Val Thr Lys Ala Gly Tyr Tyr
35 40 45
Tyr Ile Tyr Ser Lys Val Gln Leu Gly Gly Val Gly Cys Pro Leu Gly
50 55 60
Leu Ala Ser Thr Ile Thr His Gly Leu Tyr Lys Arg Thr Pro Arg Tyr
65 70 75 80
Pro Glu Glu Leu Glu Leu Leu Val Ser Gln Gln Ser Pro Cys Gly Arg
85 90 95
Ala Thr Ser Ser Ser Arg Val Trp Trp Asp Ser Ser Phe Leu Gly Gly
100 105 110
Val Val His Leu Glu Ala Gly Glu Lys Val Val Val Arg Val Leu Asp
115 120 125
Glu Arg Leu Val Arg Leu Arg Asp Gly Thr Arg Ser Tyr Phe Gly Ala
130 135 140
Phe Met Val
145
<210> 445
<211> 146
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> LIGHT的可溶性结构域（可选的）
<400> 445
Ala Ala His Leu Thr Gly Ala Asn Ser Ser Leu Thr Gly Ser Gly Gly
1 5 10 15
Pro Leu Leu Trp Glu Thr Gln Leu Gly Leu Ala Phe Leu Arg Gly Leu
20 25 30
Ser Tyr His Asp Gly Ala Leu Val Val Thr Lys Ala Gly Tyr Tyr Tyr
35 40 45
Ile Tyr Ser Lys Val Gln Leu Gly Gly Val Gly Cys Pro Leu Gly Leu
50 55 60
Ala Ser Thr Ile Thr His Gly Leu Tyr Lys Arg Thr Pro Arg Tyr Pro
65 70 75 80
Glu Glu Leu Glu Leu Leu Val Ser Gln Gln Ser Pro Cys Gly Arg Ala
85 90 95
Thr Ser Ser Ser Arg Val Trp Trp Asp Ser Ser Phe Leu Gly Gly Val
100 105 110
Val His Leu Glu Ala Gly Glu Lys Val Val Val Arg Val Leu Asp Glu
115 120 125
Arg Leu Val Arg Leu Arg Asp Gly Thr Arg Ser Tyr Phe Gly Ala Phe
130 135 140
Met Val
145
<210> 446
<211> 145
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> LIGHT的可溶性结构域（可选的）
<400> 446
Ala His Leu Thr Gly Ala Asn Ser Ser Leu Thr Gly Ser Gly Gly Pro
1 5 10 15
Leu Leu Trp Glu Thr Gln Leu Gly Leu Ala Phe Leu Arg Gly Leu Ser
20 25 30
Tyr His Asp Gly Ala Leu Val Val Thr Lys Ala Gly Tyr Tyr Tyr Ile
35 40 45
Tyr Ser Lys Val Gln Leu Gly Gly Val Gly Cys Pro Leu Gly Leu Ala
50 55 60
Ser Thr Ile Thr His Gly Leu Tyr Lys Arg Thr Pro Arg Tyr Pro Glu
65 70 75 80
Glu Leu Glu Leu Leu Val Ser Gln Gln Ser Pro Cys Gly Arg Ala Thr
85 90 95
Ser Ser Ser Arg Val Trp Trp Asp Ser Ser Phe Leu Gly Gly Val Val
100 105 110
His Leu Glu Ala Gly Glu Lys Val Val Val Arg Val Leu Asp Glu Arg
115 120 125
Leu Val Arg Leu Arg Asp Gly Thr Arg Ser Tyr Phe Gly Ala Phe Met
130 135 140
Val
145
<210> 447
<211> 335
<212> PRT
<213> 智人（Homo Sapiens）
<400> 447
Met Leu Gly Ile Trp Thr Leu Leu Pro Leu Val Leu Thr Ser Val Ala
1 5 10 15
Arg Leu Ser Ser Lys Ser Val Asn Ala Gln Val Thr Asp Ile Asn Ser
20 25 30
Lys Gly Leu Glu Leu Arg Lys Thr Val Thr Thr Val Glu Thr Gln Asn
35 40 45
Leu Glu Gly Leu His His Asp Gly Gln Phe Cys His Lys Pro Cys Pro
50 55 60
Pro Gly Glu Arg Lys Ala Arg Asp Cys Thr Val Asn Gly Asp Glu Pro
65 70 75 80
Asp Cys Val Pro Cys Gln Glu Gly Lys Glu Tyr Thr Asp Lys Ala His
85 90 95
Phe Ser Ser Lys Cys Arg Arg Cys Arg Leu Cys Asp Glu Gly His Gly
100 105 110
Leu Glu Val Glu Ile Asn Cys Thr Arg Thr Gln Asn Thr Lys Cys Arg
115 120 125
Cys Lys Pro Asn Phe Phe Cys Asn Ser Thr Val Cys Glu His Cys Asp
130 135 140
Pro Cys Thr Lys Cys Glu His Gly Ile Ile Lys Glu Cys Thr Leu Thr
145 150 155 160
Ser Asn Thr Lys Cys Lys Glu Glu Gly Ser Arg Ser Asn Leu Gly Trp
165 170 175
Leu Cys Leu Leu Leu Leu Pro Ile Pro Leu Ile Val Trp Val Lys Arg
180 185 190
Lys Glu Val Gln Lys Thr Cys Arg Lys His Arg Lys Glu Asn Gln Gly
195 200 205
Ser His Glu Ser Pro Thr Leu Asn Pro Glu Thr Val Ala Ile Asn Leu
210 215 220
Ser Asp Val Asp Leu Ser Lys Tyr Ile Thr Thr Ile Ala Gly Val Met
225 230 235 240
Thr Leu Ser Gln Val Lys Gly Phe Val Arg Lys Asn Gly Val Asn Glu
245 250 255
Ala Lys Ile Asp Glu Ile Lys Asn Asp Asn Val Gln Asp Thr Ala Glu
260 265 270
Gln Lys Val Gln Leu Leu Arg Asn Trp His Gln Leu His Gly Lys Lys
275 280 285
Glu Ala Tyr Asp Thr Leu Ile Lys Asp Leu Lys Lys Ala Asn Leu Cys
290 295 300
Thr Leu Ala Glu Lys Ile Gln Thr Ile Ile Leu Lys Asp Ile Thr Ser
305 310 315 320
Asp Ser Glu Asn Ser Asn Phe Arg Asn Glu Ile Gln Ser Leu Val
325 330 335
<210> 448
<211> 314
<212> PRT
<213> 智人（Homo Sapiens）
<400> 448
Met Leu Gly Ile Trp Thr Leu Leu Pro Leu Val Leu Thr Ser Val Ala
1 5 10 15
Arg Leu Ser Ser Lys Ser Val Asn Ala Gln Val Thr Asp Ile Asn Ser
20 25 30
Lys Gly Leu Glu Leu Arg Lys Thr Val Thr Thr Val Glu Thr Gln Asn
35 40 45
Leu Glu Gly Leu His His Asp Gly Gln Phe Cys His Lys Pro Cys Pro
50 55 60
Pro Gly Glu Arg Lys Ala Arg Asp Cys Thr Val Asn Gly Asp Glu Pro
65 70 75 80
Asp Cys Val Pro Cys Gln Glu Gly Lys Glu Tyr Thr Asp Lys Ala His
85 90 95
Phe Ser Ser Lys Cys Arg Arg Cys Arg Leu Cys Asp Glu Gly His Gly
100 105 110
Leu Glu Val Glu Ile Asn Cys Thr Arg Thr Gln Asn Thr Lys Cys Arg
115 120 125
Cys Lys Pro Asn Phe Phe Cys Asn Ser Thr Val Cys Glu His Cys Asp
130 135 140
Pro Cys Thr Lys Cys Glu His Gly Ile Ile Lys Glu Cys Thr Leu Thr
145 150 155 160
Ser Asn Thr Lys Cys Lys Glu Glu Val Lys Arg Lys Glu Val Gln Lys
165 170 175
Thr Cys Arg Lys His Arg Lys Glu Asn Gln Gly Ser His Glu Ser Pro
180 185 190
Thr Leu Asn Pro Glu Thr Val Ala Ile Asn Leu Ser Asp Val Asp Leu
195 200 205
Ser Lys Tyr Ile Thr Thr Ile Ala Gly Val Met Thr Leu Ser Gln Val
210 215 220
Lys Gly Phe Val Arg Lys Asn Gly Val Asn Glu Ala Lys Ile Asp Glu
225 230 235 240
Ile Lys Asn Asp Asn Val Gln Asp Thr Ala Glu Gln Lys Val Gln Leu
245 250 255
Leu Arg Asn Trp His Gln Leu His Gly Lys Lys Glu Ala Tyr Asp Thr
260 265 270
Leu Ile Lys Asp Leu Lys Lys Ala Asn Leu Cys Thr Leu Ala Glu Lys
275 280 285
Ile Gln Thr Ile Ile Leu Lys Asp Ile Thr Ser Asp Ser Glu Asn Ser
290 295 300
Asn Phe Arg Asn Glu Ile Gln Ser Leu Val
305 310
<210> 449
<211> 220
<212> PRT
<213> 智人（Homo Sapiens）
<400> 449
Met Leu Gly Ile Trp Thr Leu Leu Pro Leu Val Leu Thr Ser Val Ala
1 5 10 15
Arg Leu Ser Ser Lys Ser Val Asn Ala Gln Val Thr Asp Ile Asn Ser
20 25 30
Lys Gly Leu Glu Leu Arg Lys Thr Val Thr Thr Val Glu Thr Gln Asn
35 40 45
Leu Glu Gly Leu His His Asp Gly Gln Phe Cys His Lys Pro Cys Pro
50 55 60
Pro Gly Glu Arg Lys Ala Arg Asp Cys Thr Val Asn Gly Asp Glu Pro
65 70 75 80
Asp Cys Val Pro Cys Gln Glu Gly Lys Glu Tyr Thr Asp Lys Ala His
85 90 95
Phe Ser Ser Lys Cys Arg Arg Cys Arg Leu Cys Asp Glu Gly His Gly
100 105 110
Leu Glu Val Glu Ile Asn Cys Thr Arg Thr Gln Asn Thr Lys Cys Arg
115 120 125
Cys Lys Pro Asn Phe Phe Cys Asn Ser Thr Val Cys Glu His Cys Asp
130 135 140
Pro Cys Thr Lys Cys Glu His Gly Ile Ile Lys Glu Cys Thr Leu Thr
145 150 155 160
Ser Asn Thr Lys Cys Lys Glu Glu Gly Ser Arg Ser Asn Leu Gly Trp
165 170 175
Leu Cys Leu Leu Leu Leu Pro Ile Pro Leu Ile Val Trp Val Lys Arg
180 185 190
Lys Glu Val Gln Lys Thr Cys Arg Lys His Arg Lys Glu Asn Gln Gly
195 200 205
Ser His Glu Ser Pro Thr Leu Asn Pro Met Leu Thr
210 215 220
<210> 450
<211> 197
<212> PRT
<213> 智人（Homo Sapiens）
<400> 450
Met Leu Gly Ile Trp Thr Leu Leu Pro Leu Val Leu Thr Ser Val Ala
1 5 10 15
Arg Leu Ser Ser Lys Ser Val Asn Ala Gln Val Thr Asp Ile Asn Ser
20 25 30
Lys Gly Leu Glu Leu Arg Lys Thr Val Thr Thr Val Glu Thr Gln Asn
35 40 45
Leu Glu Gly Leu His His Asp Gly Gln Phe Cys His Lys Pro Cys Pro
50 55 60
Pro Gly Glu Arg Lys Ala Arg Asp Cys Thr Val Asn Gly Asp Glu Pro
65 70 75 80
Asp Cys Val Pro Cys Gln Glu Gly Lys Glu Tyr Thr Asp Lys Ala His
85 90 95
Phe Ser Ser Lys Cys Arg Arg Cys Arg Leu Cys Asp Glu Gly His Gly
100 105 110
Leu Glu Val Glu Ile Asn Cys Thr Arg Thr Gln Asn Thr Lys Cys Arg
115 120 125
Cys Lys Pro Asn Phe Phe Cys Asn Ser Thr Val Cys Glu His Cys Asp
130 135 140
Pro Cys Thr Lys Cys Glu His Gly Ile Ile Lys Glu Cys Thr Leu Thr
145 150 155 160
Ser Asn Thr Lys Cys Lys Glu Glu Gly Ser Arg Ser Asn Leu Gly Trp
165 170 175
Leu Cys Leu Leu Leu Leu Pro Ile Pro Leu Ile Val Trp Gly Asn Ser
180 185 190
Gly Asn Lys Phe Ile
195
<210> 451
<211> 132
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> E09的重链可变区
<400> 451
Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ala Ser Ile Ser Ala Asn
20 25 30
Ser Tyr Tyr Gly Val Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Val Gly Ser Ile Ala Tyr Arg Gly Asn Ser Asn Ser Gly Ser Thr
50 55 60
Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Ala Thr Val Ser Val Asp Thr
65 70 75 80
Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu Arg Leu Thr Ser Val Thr Ala Ala Asp
85 90 95
Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Gln Leu Leu Asp Asp Gly Thr
100 105 110
Gly Tyr Gln Trp Ala Ala Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Met Val
115 120 125
Thr Val Ser Ser
130
<210> 452
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> E09的轻链可变区
<400> 452
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Glu Ala Pro Arg Gln
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Asn Ser Phe Asn Ile Gly Arg Tyr
20 25 30
Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Tyr Asn Asn Leu Arg Phe Ser Gly Val Ser Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Arg Asp Leu Leu
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Thr Trp Asp Asp Thr Leu
85 90 95
Lys Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
100 105 110
<210> 453
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> E09的重链CDR1
<400> 453
Ala Asn Ser Tyr Tyr Gly Val
1 5
<210> 454
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> E09的重链CDR2
<400> 454
Gly Ser Ile Ala Tyr Arg Gly Asn Ser Asn Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr
1 5 10 15
Asn Pro Ser Leu Lys Ser
20
<210> 455
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> E09的重链CDR3
<400> 455
Arg Gln Leu Leu Asp Asp Gly Thr Gly Tyr Gln Trp Ala Ala Phe Asp
1 5 10 15
Val
<210> 456
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> E09的轻链CDR1
<400> 456
Ser Gly Asn Ser Phe Asn Ile Gly Arg Tyr Pro Val Asn
1 5 10
<210> 457
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> E09的轻链CDR2
<400> 457
Tyr Asn Asn Leu Arg Phe Ser
1 5
<210> 458
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> E09的轻链CDR3
<400> 458
Ser Thr Trp Asp Asp Thr Leu Lys Gly Trp Val
1 5 10
<210> 459
<211> 281
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CD95L（CD95配体）
<400> 459
Met Gln Gln Pro Phe Asn Tyr Pro Tyr Pro Gln Ile Tyr Trp Val Asp
1 5 10 15
Ser Ser Ala Ser Ser Pro Trp Ala Pro Pro Gly Thr Val Leu Pro Cys
20 25 30
Pro Thr Ser Val Pro Arg Arg Pro Gly Gln Arg Arg Pro Pro Pro Pro
35 40 45
Pro Pro Pro Pro Pro Leu Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Leu Pro
50 55 60
Pro Leu Pro Leu Pro Pro Leu Lys Lys Arg Gly Asn His Ser Thr Gly
65 70 75 80
Leu Cys Leu Leu Val Met Phe Phe Met Val Leu Val Ala Leu Val Gly
85 90 95
Leu Gly Leu Gly Met Phe Gln Leu Phe His Leu Gln Lys Glu Leu Ala
100 105 110
Glu Leu Arg Glu Ser Thr Ser Gln Met His Thr Ala Ser Ser Leu Glu
115 120 125
Lys Gln Ile Gly His Pro Ser Pro Pro Pro Glu Lys Lys Glu Leu Arg
130 135 140
Lys Val Ala His Leu Thr Gly Lys Ser Asn Ser Arg Ser Met Pro Leu
145 150 155 160
Glu Trp Glu Asp Thr Tyr Gly Ile Val Leu Leu Ser Gly Val Lys Tyr
165 170 175
Lys Lys Gly Gly Leu Val Ile Asn Glu Thr Gly Leu Tyr Phe Val Tyr
180 185 190
Ser Lys Val Tyr Phe Arg Gly Gln Ser Cys Asn Asn Leu Pro Leu Ser
195 200 205
His Lys Val Tyr Met Arg Asn Ser Lys Tyr Pro Gln Asp Leu Val Met
210 215 220
Met Glu Gly Lys Met Met Ser Tyr Cys Thr Thr Gly Gln Met Trp Ala
225 230 235 240
Arg Ser Ser Tyr Leu Gly Ala Val Phe Asn Leu Thr Ser Ala Asp His
245 250 255
Leu Tyr Val Asn Val Ser Glu Leu Ser Leu Val Asn Phe Glu Glu Ser
260 265 270
Gln Thr Phe Phe Gly Leu Tyr Lys Leu
275 280
<210> 460
<211> 136
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CD95L的可溶性结构域
<400> 460
Val Ala His Leu Thr Gly Lys Ser Asn Ser Arg Ser Met Pro Leu Glu
1 5 10 15
Trp Glu Asp Thr Tyr Gly Ile Val Leu Leu Ser Gly Val Lys Tyr Lys
20 25 30
Lys Gly Gly Leu Val Ile Asn Glu Thr Gly Leu Tyr Phe Val Tyr Ser
35 40 45
Lys Val Tyr Phe Arg Gly Gln Ser Cys Asn Asn Leu Pro Leu Ser His
50 55 60
Lys Val Tyr Met Arg Asn Ser Lys Tyr Pro Gln Asp Leu Val Met Met
65 70 75 80
Glu Gly Lys Met Met Ser Tyr Cys Thr Thr Gly Gln Met Trp Ala Arg
85 90 95
Ser Ser Tyr Leu Gly Ala Val Phe Asn Leu Thr Ser Ala Asp His Leu
100 105 110
Tyr Val Asn Val Ser Glu Leu Ser Leu Val Asn Phe Glu Glu Ser Gln
115 120 125
Thr Phe Phe Gly Leu Tyr Lys Leu
130 135
<210> 461
<211> 135
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CD95L的可溶性结构域（可选的）
<400> 461
Ala His Leu Thr Gly Lys Ser Asn Ser Arg Ser Met Pro Leu Glu Trp
1 5 10 15
Glu Asp Thr Tyr Gly Ile Val Leu Leu Ser Gly Val Lys Tyr Lys Lys
20 25 30
Gly Gly Leu Val Ile Asn Glu Thr Gly Leu Tyr Phe Val Tyr Ser Lys
35 40 45
Val Tyr Phe Arg Gly Gln Ser Cys Asn Asn Leu Pro Leu Ser His Lys
50 55 60
Val Tyr Met Arg Asn Ser Lys Tyr Pro Gln Asp Leu Val Met Met Glu
65 70 75 80
Gly Lys Met Met Ser Tyr Cys Thr Thr Gly Gln Met Trp Ala Arg Ser
85 90 95
Ser Tyr Leu Gly Ala Val Phe Asn Leu Thr Ser Ala Asp His Leu Tyr
100 105 110
Val Asn Val Ser Glu Leu Ser Leu Val Asn Phe Glu Glu Ser Gln Thr
115 120 125
Phe Phe Gly Leu Tyr Lys Leu
130 135
<210> 462
<211> 134
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CD95L的可溶性结构域（可选的）
<400> 462
His Leu Thr Gly Lys Ser Asn Ser Arg Ser Met Pro Leu Glu Trp Glu
1 5 10 15
Asp Thr Tyr Gly Ile Val Leu Leu Ser Gly Val Lys Tyr Lys Lys Gly
20 25 30
Gly Leu Val Ile Asn Glu Thr Gly Leu Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Val
35 40 45
Tyr Phe Arg Gly Gln Ser Cys Asn Asn Leu Pro Leu Ser His Lys Val
50 55 60
Tyr Met Arg Asn Ser Lys Tyr Pro Gln Asp Leu Val Met Met Glu Gly
65 70 75 80
Lys Met Met Ser Tyr Cys Thr Thr Gly Gln Met Trp Ala Arg Ser Ser
85 90 95
Tyr Leu Gly Ala Val Phe Asn Leu Thr Ser Ala Asp His Leu Tyr Val
100 105 110
Asn Val Ser Glu Leu Ser Leu Val Asn Phe Glu Glu Ser Gln Thr Phe
115 120 125
Phe Gly Leu Tyr Lys Leu
130
<210> 463
<211> 440
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 尼沃鲁单抗的重链
<400> 463
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Asn Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser
115 120 125
Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp
130 135 140
Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr
145 150 155 160
Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys
180 185 190
Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp
195 200 205
Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala
210 215 220
Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
225 230 235 240
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
245 250 255
Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val
260 265 270
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
275 280 285
Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
290 295 300
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly
305 310 315 320
Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
325 330 335
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr
340 345 350
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
355 360 365
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
370 375 380
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
385 390 395 400
Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe
405 410 415
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
420 425 430
Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440
<210> 464
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 尼沃鲁单抗的轻链
<400> 464
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Asn Trp Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 465
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 尼沃鲁单抗的重链可变区
<400> 465
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Asn Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 466
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 尼沃鲁单抗的轻链可变区
<400> 466
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Asn Trp Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 467
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 尼沃鲁单抗的重链CDR1
<400> 467
Asn Ser Gly Met His
1 5
<210> 468
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 尼沃鲁单抗的重链CDR2
<400> 468
Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 469
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 尼沃鲁单抗的重链CDR3
<400> 469
Asn Asp Asp Tyr
1
<210> 470
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 尼沃鲁单抗的轻链CDR1
<400> 470
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 471
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 尼沃鲁单抗的轻链CDR2
<400> 471
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr
1 5
<210> 472
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 尼沃鲁单抗的轻链CDR3
<400> 472
Gln Gln Ser Ser Asn Trp Pro Arg Thr
1 5
<210> 473
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 兰洛利珠单抗的重链
<400> 473
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
<210> 474
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 兰洛利珠单抗的轻链
<400> 474
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
35 40 45
Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 475
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 兰洛利珠单抗的重链可变区
<400> 475
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 476
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 兰洛利珠单抗的轻链可变区
<400> 476
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
35 40 45
Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 477
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 兰洛利珠单抗的重链CDR1
<400> 477
Asn Tyr Tyr Met Tyr
1 5
<210> 478
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 兰洛利珠单抗的重链CDR2
<400> 478
Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
<210> 479
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 兰洛利珠单抗的重链CDR3
<400> 479
Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 480
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 兰洛利珠单抗的轻链CDR1
<400> 480
Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Leu His
1 5 10 15
<210> 481
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 兰洛利珠单抗的轻链CDR2
<400> 481
Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser
1 5
<210> 482
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 兰洛利珠单抗的轻链CDR3
<400> 482
Gln His Ser Arg Asp Leu Pro Leu Thr
1 5
<210> 483
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 度伐鲁单抗的重链
<400> 483
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Gly Trp Phe Gly Glu Leu Ala Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Ser Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 484
<211> 265
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 度伐鲁单抗的轻链
<400> 484
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser
50 55 60
Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Val Ser
65 70 75 80
Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg
85 90 95
Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg
100 105 110
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg
115 120 125
Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser
130 135 140
Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
145 150 155 160
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
165 170 175
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
180 185 190
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
195 200 205
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
210 215 220
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
225 230 235 240
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
245 250 255
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
260 265
<210> 485
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 度伐鲁单抗的重链可变区
<400> 485
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Gly Trp Phe Gly Glu Leu Ala Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 486
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 度伐鲁单抗的轻链可变区
<400> 486
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Leu Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 487
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 度伐鲁单抗的重链CDR1
<400> 487
Arg Tyr Trp Met Ser
1 5
<210> 488
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 度伐鲁单抗的重链CDR2
<400> 488
Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 489
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 度伐鲁单抗的重链CDR3
<400> 489
Glu Gly Gly Trp Phe Gly Glu Leu Ala Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 490
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 度伐鲁单抗的轻链CDR1
<400> 490
Arg Ala Ser Gln Arg Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 491
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 度伐鲁单抗的轻链CDR2
<400> 491
Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr
1 5
<210> 492
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 度伐鲁单抗的轻链CDR3
<400> 492
Gln Gln Tyr Gly Ser Leu Pro Trp Thr
1 5
<210> 493
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 阿维鲁单抗的重链
<400> 493
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ile Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Tyr Pro Ser Gly Gly Ile Thr Phe Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ile Lys Leu Gly Thr Val Thr Thr Val Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 494
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 阿维鲁单抗的轻链
<400> 494
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser
85 90 95
Ser Thr Arg Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 495
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 阿维鲁单抗的重链可变区
<400> 495
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ile Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Tyr Pro Ser Gly Gly Ile Thr Phe Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ile Lys Leu Gly Thr Val Thr Thr Val Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 496
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 阿维鲁单抗的轻链可变区
<400> 496
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser
85 90 95
Ser Thr Arg Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
100 105 110
<210> 497
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 阿维鲁单抗的重链CDR1
<400> 497
Ser Tyr Ile Met Met
1 5
<210> 498
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 阿维鲁单抗的重链CDR2
<400> 498
Ser Ile Tyr Pro Ser Gly Gly Ile Thr Phe Tyr Ala Asp Thr Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 499
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 阿维鲁单抗的重链CDR3
<400> 499
Ile Lys Leu Gly Thr Val Thr Thr Val Asp Tyr
1 5 10
<210> 500
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 阿维鲁单抗的轻链CDR1
<400> 500
Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr Asn Tyr Val Ser
1 5 10
<210> 501
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 阿维鲁单抗的轻链CDR2
<400> 501
Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser
1 5
<210> 502
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 阿维鲁单抗的轻链CDR3
<400> 502
Ser Ser Tyr Thr Ser Ser Ser Thr Arg Val
1 5 10
<210> 503
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 阿特利珠单抗的重链
<400> 503
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 504
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 阿特利珠单抗的轻链
<400> 504
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 505
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 阿特利珠单抗的重链可变区
<400> 505
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 506
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 阿特利珠单抗的轻链可变区
<400> 506
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 507
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 阿特利珠单抗的重链CDR1
<400> 507
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser Trp Ile His
1 5 10
<210> 508
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 阿特利珠单抗的重链CDR2
<400> 508
Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
1 5 10 15
Lys Gly
<210> 509
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 阿特利珠单抗的重链CDR3
<400> 509
Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr
1 5
<210> 510
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 阿特利珠单抗的轻链CDR1
<400> 510
Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala
1 5 10
<210> 511
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 阿特利珠单抗的轻链CDR2
<400> 511
Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser
1 5
<210> 512
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 阿特利珠单抗的轻链CDR3
<400> 512
Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala Thr
1 5

Claims (158)

1.一种用肿瘤浸润淋巴细胞TIL群治疗癌症的方法，其中，所述方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族TNFRSF激动剂，以及初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3)抗体、外周血单核细胞PBMC和可选的TNFRSF激动剂和第二种TNFRSF激动剂，以及快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向患者施用治疗有效份的第三TIL群。
2.如权利要求1所述的方法，其中，TNFRSF激动剂选自：4-1BB激动剂、OX40激动剂、CD27激动剂、GITR激动剂、HVEM激动剂、CD95激动剂及它们的组合。
3.如权利要求1至2中任一项所述的方法，其中，TNFRSF激动剂是4-1BB激动剂，所述4-1BB激动剂选自：乌瑞鲁单抗、乌托鲁单抗、EU-101、融合蛋白，及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。
4.如权利要求1至2中任一项所述的方法，其中，TNFRSF激动剂是OX40激动剂或它的片段、衍生物、变体、生物仿制药以及它们的组合。
5.如权利要求4所述的方法，其中，4-1BB激动剂融合蛋白包含：(i)第一可溶性4-1BB结合结构域，(ii)第一肽接头，(iii)第二可溶性4-1BB结合结构域，(iv)第二肽接头，和(v)第三可溶性4-1BB结合结构域，4-1BB激动剂融合蛋白还包含在N-末端和/或C-末端的其他结构域，所述其他结构域包含Fc片段结构域和铰链结构域，所述融合蛋白是根据结构I-A或结构I-B的二聚体结构。
6.如权利要求1至2中任一项所述的方法，其中，TNFRSF激动剂是OX40激动剂，所述OX40激动剂选自：他利昔珠单抗、GSK3174998、MEDI6469、MEDI6383、MOXR0916、PF-04518600、Creative Biolabs MOM-18455，及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。
7.如权利要求1至2中任一项所述的方法，其中，TNFRSF激动剂是OX40激动剂，所述OX40激动剂是OX40激动剂融合蛋白。
8.如权利要求7所述的方法，其中，OX40激动剂融合蛋白包含：(i)第一可溶性OX40结合结构域，(ii)第一肽接头，(iii)第二可溶性OX40结合结构域，(iv)第二肽接头，和(v)第三可溶性OX40结合结构域，OX40激动剂融合蛋白还包含在N-末端和/或C-末端的其他结构域，所述其他结构域包含Fc片段结构域和铰链结构域，所述融合蛋白是根据结构I-A或结构I-B的二聚体结构。
9.如权利要求1至2中任一项所述的方法，其中，TNFRSF激动剂是CD27激动剂，所述CD27激动剂是伐立鲁单抗或它的片段、衍生物、变体或生物仿制药。
10.如权利要求1至2中任一项所述的方法，其中，TNFRSF激动剂是CD27激动剂，所述CD27激动剂是CD27激动剂融合蛋白。
11.如权利要求10所述的方法，其中，CD27激动剂融合蛋白包含：(i)第一可溶性CD27结合结构域，(ii)第一肽接头，(iii)第二可溶性CD27结合结构域，(iv)第二肽接头，和(v)第三可溶性CD27结合结构域，CD27激动剂融合蛋白还包含在N-末端和/或C-末端的其他结构域，所述其他结构域包含Fc片段结构域和铰链结构域，所述融合蛋白是根据结构I-A或结构I-B的二聚体结构。
12.如权利要求1至2中任一项所述的方法，其中，TNFRSF激动剂是GITR激动剂，所述GITR激动剂选自：TRX518、6C8、36E5、3D6、61G6、6H6、61F6、1D8、17F10、35D8、49A1、9E5，31H6、2155、698、706、827、1649、1718、1D7、33C9、33F6、34G4、35B10、41E11、41G5、42A11、44C1、45A8、46E11、48H12、48H7、49D9、49E2、48A9、5H7、7A10、9H6，以及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。
13.如权利要求1至2中任一项所述的方法，其中，TNFRSF激动剂是GITR激动剂，所述GITR激动剂是GITR激动剂融合蛋白。
14.如权利要求13所述的方法，其中，GITR激动剂融合蛋白包含：(i)第一可溶性GITR结合结构域，(ii)第一肽接头，(iii)第二可溶性GITR结合结构域，(iv)第二肽接头，和(v)第三可溶性GITR结合结构域，GITR激动剂融合蛋白还包含在N-末端和/或C-末端的其他结构域，所述其他结构域包含Fc片段结构域和铰链结构域，所述融合蛋白是根据结构I-A或结构I-B的二聚体结构。
15.如权利要求1至2中任一项所述的方法，其中，TNFRSF激动剂是HVEM激动剂。
16.如权利要求15所述的方法，其中，HVEM激动剂是HVEM激动剂融合蛋白。
17.如权利要求16所述的方法，其中，HVEM激动剂融合蛋白包含：(i)第一可溶性HVEM结合结构域，(ii)第一肽接头，(iii)第二可溶性HVEM结合结构域，(iv)第二肽接头，和(v)第三可溶性HVEM结合结构域，HVEM激动剂融合蛋白还包含在N-末端和/或C-末端的其他结构域，所述其他结构域包含Fc片段结构域和铰链结构域，所述融合蛋白是根据结构I-A或结构I-B的二聚体结构。
18.如权利要求1至2中任一项所述的方法，其中，TNFRSF激动剂是CD95激动剂。
19.如权利要求1至2中任一项所述的方法，其中，TNFRSF激动剂是CD95激动剂，所述CD95激动剂是CD95激动剂融合蛋白。
20.如权利要求19所述的方法，其中，CD95激动剂是一种融合蛋白，所述融合蛋白包含：(i)第一可溶性CD95结合结构域，(ii)第一肽接头，(iii)第二可溶性CD95结合结构域，(iv)第二肽接头，和(v)第三可溶性CD95结合结构域，所述融合蛋白还包含在N-末端和/或C-末端的其他结构域，所述其他结构域包含Fc片段结构域和铰链结构域，所述融合蛋白是根据结构I-A或结构I-B的二聚体结构。
21.如权利要求1至20中任一项所述的方法，其中，所述方法还包括如下步骤：在向患者施用第三TIL群后的第二天开始用TNFRSF激动剂治疗患者，其中，TNFRSF激动剂以0.1mg/kg至50mg/kg的剂量静脉内施用，每4周一次，持续至多8个周期。
22.如权利要求1至21中任一项所述的方法，其中，所述方法还包括如下步骤：在从患者切除肿瘤的步骤之前，用TNFRSF激动剂治疗患者，其中，TNFRSF激动剂以0.1mg/kg至50mg/kg的剂量静脉内施用，每4周一次，持续至多8个周期。
23.如权利要求1至22中任一项所述的方法，其中，TNFRSF激动剂选自：乌瑞鲁单抗、乌托鲁单抗、EU-101、他利昔珠单抗、Creative Biolabs MOM-18455，及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。
24.如权利要求1至23中任一项所述的方法，其中，第一细胞培养基包含第二种TNFRSF激动剂。
25.如权利要求1至23中任一项所述的方法，其中，TNFRSF激动剂是4-1BB激动剂，第二种TNFRSF激动剂是OX40激动剂。
26.如权利要求1至25中任一项所述的方法，其中，在初始扩增期间，以选自如下的间隔将TNFRSF激动剂添加至第一细胞培养基中：每天、每两天、每三天、每四天、每五天、每六天、每七天、每两周。
27.如权利要求1至26中任一项所述的方法，其中，在快速扩增期间，以选自如下的间隔将TNFRSF激动剂添加至第二细胞培养基中：每天、每两天、每三天、每四天、每五天、每六天、每七天、每两周。
28.如权利要求24至27中任一项所述的方法，其中，TNFRSF激动剂以足以达到细胞培养基中浓度为0.1μg/mL至100μg/mL的浓度来添加。
29.如权利要求28所述的方法，其中，TNFRSF激动剂以足以达到细胞培养基中浓度为20μg/mL至40μg/mL的浓度来添加。
30.如权利要求1至30中任一项所述的方法，其中，IL-2在第一细胞培养基中以约10IU/mL至约6000IU/mL的初始浓度存在。
31.如权利要求31所述的方法，其中，IL-2在第一细胞培养基中以约3000IU/mL的初始浓度存在。
32.如权利要求31所述的方法，其中，IL-2在第一细胞培养基中以约800IU/mL至约1100IU/mL的初始浓度存在。
33.如权利要求33所述的方法，其中，IL-2在第一细胞培养基中以约1000IU/mL的初始浓度存在。
34.如权利要求1至30中任一项所述的方法，其中，IL-2在第二细胞培养基中以约10IU/mL至约6000IU/mL的初始浓度存在。
35.如权利要求35所述的方法，其中，IL-2在第二细胞培养基中以约3000IU/mL的初始浓度存在。
36.如权利要求35所述的方法，其中，IL-2在第二细胞培养基中以约800IU/mL至约1100IU/mL的初始浓度存在。
37.如权利要求35所述的方法，其中，IL-2在第二细胞培养基中以约1000IU/mL的初始浓度存在。
38.如权利要求1至37中任一项所述的方法，其中，IL-15存在于第一细胞培养基中。
39.如权利要求38所述的方法，其中，IL-15在第一细胞培养基中以约5ng/mL至约20ng/mL的初始浓度存在。
40.如权利要求1至39中任一项所述的方法，其中，IL-15存在于第二细胞培养基中。
41.如权利要求40所述的方法，其中，IL-15在第二细胞培养基中以约5ng/mL至约20ng/mL的初始浓度存在。
42.如权利要求1至41中任一项所述的方法，其中，IL-21存在于第一细胞培养基中。
43.如权利要求42所述的方法，其中，IL-21在第一细胞培养基中以约5ng/mL至约20ng/mL的初始浓度存在。
44.如权利要求1至43中任一项所述的方法，其中，IL-21存在于第二细胞培养基中。
45.如权利要求44所述的方法，其中，IL-21在第二细胞培养基中以约5ng/mL至约20ng/mL的初始浓度存在。
46.如权利要求1至45中任一项所述的方法，其中，OKT-3抗体在第二细胞培养基中以约10ng/mL至约60ng/mL的初始浓度存在。
47.如权利要求46所述的方法，其中，OKT-3抗体在第二细胞培养基中以约30ng/mL的初始浓度存在。
48.如权利要求1至47中任一项所述的方法，其特征在于，初始扩增使用透气性容器进行。
49.如权利要求1至48中任一项所述的方法，其中，快速扩增使用透气性容器进行。
50.如权利要求1至49中任一项所述的方法，其中，所述方法还包括如下步骤：在向患者施用第三TIL群之前，用非清髓性淋巴细胞清除方案治疗患者。
51.如权利要求50所述的方法，其中，非清髓性淋巴细胞清除方案包括如下步骤：以60mg/m2/天的剂量施用环磷酰胺2天，然后以25mg/m2/天的剂量施用氟达拉滨5天。
52.如权利要求1至51中任一项所述的方法，其中，所述方法还包括如下步骤：在向患者施用第三TIL群后的第二天开始用递减型IL-2方案治疗患者，其中，所述递减型IL-2方案包括：在第1天以18,000,000IU/m2的剂量、在第2天以9,000,000IU/m2的剂量以及在第3天和第4天以4,500,000IU/m2的剂量静脉内施用阿地白介素。
53.如权利要求1至51中任一项所述的方法，其中，所述方法还包括如下步骤：在向患者施用第三TIL群后，用聚乙二醇化的IL-2以0.10mg/天至50mg/天的剂量治疗患者。
54.如权利要求1至51中任一项所述的方法，其中，所述方法还包括如下步骤：在向患者施用第三TIL群后的第二天开始用高剂量IL-2方案治疗患者。
55.如权利要求54所述的方法，其中，高剂量IL-2方案包括：每8小时静脉滴注输注15分钟来施用600,000IU/kg或720,000IU/kg的阿地白介素或它的生物仿制药或变体，直至耐受。
56.如权利要求1至55中任一项所述的方法，其中，所述癌症选自：黑色素瘤、卵巢癌、宫颈癌、肺癌、膀胱癌、乳腺癌、头颈癌、肾细胞癌、急性髓性白血病、结肠直肠癌、胆管癌和肉瘤。
57.如权利要求1至56中任一项所述的方法，其中，所述癌症选自：非小细胞肺癌NSCLC、三阴性乳腺癌、双重难治性黑色素瘤和葡萄膜(眼)黑色素瘤。
58.如权利要求1至57中任一项所述的方法，其中，所述方法还包括如下步骤：在从患者切除肿瘤之前，用PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂治疗患者。
59.如权利要求58所述的方法，其中，PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂选自：尼沃鲁单抗、兰洛利珠单抗、度伐鲁单抗、阿特利珠单抗、阿维鲁单抗，及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。
60.如权利要求1至59中任一项所述的方法，其中，所述方法还包括如下步骤：在从患者切除肿瘤之后，用PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂治疗患者。
61.如权利要求60所述的方法，其中，PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂选自：尼沃鲁单抗、兰洛利珠单抗、度伐鲁单抗、阿特利珠单抗、阿维鲁单抗，及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。
62.如权利要求1至61中任一项所述的方法，其中，所述方法还包括如下步骤：在向患者施用第三TIL群之后，用PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂治疗患者。
63.如权利要求62所述的方法，其中，PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂选自：尼沃鲁单抗、兰洛利珠单抗、度伐鲁单抗、阿特利珠单抗、阿维鲁单抗，及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。
64.如权利要求1至63中任一项所述的方法，其中，第一细胞培养基还包含IL-4、IL-7或它们的组合。
65.如权利要求1至64中任一项所述的方法，其中，第二细胞培养基还包含IL-4、IL-7或它们的组合。
66.如权利要求1至65中任一项所述的方法，其中，初始扩增进行11天或更短的时间。
67.如权利要求1至65中任一项所述的方法，其中，快速扩增进行11天或更短的时间。
68.一种制备肿瘤浸润淋巴细胞TIL群的方法，其中，所述方法包括以下步骤：
(b)获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，第一细胞培养基包含IL-2和肿瘤坏死因子受体超家族TNFRSF激动剂，初始扩增进行21天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；其中，第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3抗体)、外周血单核细胞PBMC和可选的TNFRSF激动剂，快速扩增进行14天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群。
69.如权利要求68所述的方法，其中，第一TIL群由肿瘤获得，所述肿瘤为从患者切除的肿瘤。
70.如权利要求68至69中任一项所述的方法，其中，TNFRSF激动剂选自：4-1BB激动剂、OX40激动剂、CD27激动剂、GITR激动剂、HVEM激动剂、CD95激动剂和它们的组合。
71.如权利要求68至70中任一项所述的方法，其中，TNFRSF激动剂是4-1BB激动剂。
72.如权利要求68至71中任一项所述的方法，其中，TNFRSF激动剂是4-1BB激动剂，所述4-lBB激动剂选自：乌瑞鲁单抗、乌托鲁单抗、EU-101，及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。
73.如权利要求68至72中任一项所述的方法，其中，TNFRSF激动剂是4-1BB激动剂，所述4-1BB激动剂是4-1BB激动剂融合蛋白。
74.如权利要求68至73中任一项所述的方法，其中，TNFRSF激动剂是4-1BB激动剂融合蛋白，所述4-lBB激动剂融合蛋白包含：(i)第一可溶性4-1BB结合结构域，(ii)第一肽接头，(iii)第二可溶性4-1BB结合结构域，(iv)第二肽接头，和(v)第三可溶性4-1BB结合结构域，所述4-lBB激动剂融合蛋白还包含在N-末端和/或C-末端的其他结构域，所述其他结构域包含Fc片段结构域和铰链结构域，所述融合蛋白是根据结构I-A或结构I-B的二聚体结构。
75.如权利要求68至74中任一项所述的方法，其中，TNFRSF激动剂是OX40激动剂。
76.如权利要求68至75中任一项所述的方法，其中，TNFRSF激动剂是OX40激动剂，所述OX40激动剂选自：他利昔珠单抗、GSK3174998、MEDI6469、MEDI6383、MOXR0916、PF-04518600、Creative Biolabs MOM-18455，及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。
77.如权利要求68至76中任一项所述的方法，其中，TNFRSF激动剂是OX40激动剂，所述OX40激动剂是OX40激动剂融合蛋白。
78.如权利要求68至77中任一项所述的方法，其中，TNFRSF激动剂是OX40激动剂融合蛋白，所述OX40激动剂融合蛋白包含：(i)第一可溶性OX40结合结构域，(ii)第一肽接头，(iii))第二可溶性OX40结合结构域，(iv)第二肽接头，和(v)第三可溶性OX40结合结构域，所述OX40激动剂融合蛋白还包含在N-末端和/或C-末端的其他结构域，所述其他结构域包含Fc片段结构域和铰链结构域，所述融合蛋白是根据结构I-A或结构I-B的二聚体结构。
79.如权利要求68至78中任一项所述的方法，其中，TNFRSF激动剂是CD27激动剂。
80.如权利要求68至79中任一项所述的方法，其中，TNFRSF激动剂是CD27激动剂，所述CD27激动剂是伐立鲁单抗或它的片段、衍生物、变体或生物仿制药。
81.如权利要求68至80中任一项所述的方法，其中，TNFRSF激动剂是CD27激动剂，所述CD27激动剂是CD27激动剂融合蛋白。
82.如权利要求68至81中任一项所述的方法，其中，TNFRSF激动剂是CD27激动剂，所述CD27激动剂融合蛋白包含：(i)第一可溶性CD27结合结构域，(ii)第一肽接头，(iii)第二可溶性CD27结合结构域，(iv)第二肽接头，和(v)第三可溶性CD27结合结构域，CD27激动剂融合蛋白还包含在N-末端和/或C-末端的其他结构域，所述其他结构域包含Fc片段结构域和铰链结构域，所述融合蛋白是根据结构I-A或结构I-B的二聚体结构。
83.如权利要求68至82中任一项所述的方法，其中，TNFRSF激动剂是GITR激动剂。
84.如权利要求68至83中任一项所述的方法，其中，TNFRSF激动剂是GITR激动剂，所述GITR激动剂选自：TRX518、6C8、36E5、3D6、61G6、6H6、61F6、1D8、17F10、35D8、49A1、9E5、31H6、2155、698、706、827、1649、1718、1D7、33C9、33F6、34G4、35B10、41E11、41G5、42A11、44C1、45A8、46E11、48H12、48H7、49D9、49E2、48A9、5H7、7A10、9H6，及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。
85.如权利要求68至84中任一项所述的方法，其中，TNFRSF激动剂是GITR激动剂，所述GITR激动剂是GITR激动剂融合蛋白。
86.如权利要求68至85中任一项所述的方法，其中，TNFRSF激动剂是GITR激动剂融合蛋白，所述GITR激动剂融合蛋白包含：(i)第一可溶性GITR结合结构域，(ii)第一肽接头，(iii)第二可溶性GITR结合结构域，(iv)第二肽接头，和(v)第三可溶性GITR结合结构域，所述GITR激动剂融合蛋白还包含在N-末端和/或C-末端的其他结构域，所述其他结构域包含Fc片段结构域和铰链结构域，所述融合蛋白是根据结构I-A或结构I-B的二聚体结构。
87.如权利要求68至86中任一项所述的方法，其中，TNFRSF激动剂是HVEM激动剂。
88.如权利要求68至87中任一项所述的方法，其中，TNFRSF激动剂是HVEM激动剂，所述HVEM激动剂是HVEM激动剂融合蛋白。
89.如权利要求68至88中任一项所述的方法，其中，TNFRSF激动剂是HVEM激动剂融合蛋白，所述HVEM激动剂融合蛋白包含：(i)第一可溶性HVEM结合结构域，(ii)第一肽接头，(iii)第二可溶性HVEM结合结构域，(iv)第二肽接头，和(v)第三可溶性HVEM结合结构域，所述HVEM激动剂融合蛋白还包含在N-末端和/或C-末端的其他结构域，所述其他结构域包含Fc片段结构域和铰链结构域，所述融合蛋白是根据结构I-A或结构I-B的二聚体结构。
90.如权利要求68至89中任一项所述的方法，其中，TNFRSF激动剂选自：乌瑞鲁单抗、乌托鲁单抗、EU-101、他利昔珠单抗、Creative Biolabs MOM-18455，以及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。
91.如权利要求68至90中任一项所述的方法，其中，第一细胞培养基包含第二种TNFRSF激动剂。
92.如权利要求68至91中任一项所述的方法，其中，在初始扩增期间，以选自如下的间隔将TNFRSF激动剂添加至第一细胞培养基中：每天、每两天、每三天、每四天、每五天、每六天、每七天、每两周。
93.如权利要求68至92中任一项所述的方法，其中，在快速扩增期间，以选自如下的间隔将TNFRSF激动剂添加至第二细胞培养基中：每天、每两天、每三天、每四天、每五天、每六天、每七天、每两周。
94.如权利要求68至93中任一项所述的方法，其中，TNFRSF激动剂以足以达到细胞培养基中浓度为0.1μg/mL至100μg/mL的浓度来添加。
95.如权利要求68至94中任一项所述的方法，其中，TNFRSF激动剂以足以达到细胞培养基中浓度为20μg/mL至40μg/mL的浓度来添加。
96.如权利要求68至95中任一项所述的方法，其中，IL-2在第一细胞培养基中以约10IU/mL至约6000IU/mL的初始浓度存在。
97.如权利要求68至96中任一项所述的方法，其中，IL-2在第一细胞培养基中以约3000IU/mL的初始浓度存在。
98.如权利要求68至97中任一项所述的方法，其中，IL-2在第一细胞培养基中以约800IU/mL至约1100IU/mL的初始浓度存在。
99.如权利要求68至98中任一项所述的方法，其中，IL-2在第一细胞培养基中以约1000IU/mL的初始浓度存在。
100.如权利要求68至99中任一项所述的方法，其中，IL-2在第二细胞培养基中以约10IU/mL至约6000IU/mL的初始浓度存在。
101.如权利要求68至100中任一项所述的方法，其中，IL-2在第二细胞培养基中以约3000IU/mL的初始浓度存在。
102.如权利要求68至101中任一项所述的方法，其中，IL-2在第二细胞培养基中以约800IU/mL至约1100IU/mL的初始浓度存在。
103.如权利要求68至102中任一项所述的方法，其中，IL-2在第二细胞培养基中以约1000IU/mL的初始浓度存在。
104.如权利要求68至103中任一项所述的方法，其中，IL-15存在于第一细胞培养基中。
105.如权利要求68至104中任一项所述的方法，其中，IL-15在第一细胞培养基中以约5ng/mL至约20ng/mL的初始浓度存在。
106.如权利要求68至105中任一项所述的方法，其中，IL-15存在于第二细胞培养基中。
107.如权利要求68至106中任一项所述的方法，其中，IL-15在第二细胞培养基中以约5ng/mL至约20ng/mL的初始浓度存在。
108.如权利要求68至107中任一项所述的方法，其中，IL-21存在于第一细胞培养基中。
109.如权利要求68至108中任一项所述的方法，其中，IL-21在第一细胞培养基中以约5ng/mL至约20ng/mL的初始浓度存在。
110.如权利要求68至109中任一项所述的方法，其中，IL-21存在于第二细胞培养基中。
111.如权利要求68至110中任一项所述的方法，其中，IL-21在第二细胞培养基中以约5ng/mL至约20ng/mL的初始浓度存在。
112.如权利要求68至111中任一项所述的方法，其中，OKT-3抗体在第二细胞培养基中以约10ng/mL至约60ng/mL的初始浓度存在。
113.如权利要求68至112中任一项所述的方法，其中，OKT-3抗体在第二细胞培养基中以约30ng/mL的初始浓度存在。
114.如权利要求68至113中任一项所述的方法，其中，初始扩增使用透气性容器进行。
115.如权利要求68至114中任一项所述的方法，其中，快速扩增使用透气性容器进行。
116.一种肿瘤浸润淋巴细胞TIL群，其中，所述TIL可通过权利要求68至115中任一项所述的方法获得。
117.一种药物组合物，其中，所述药物组合物包含用于治疗癌症的肿瘤浸润淋巴细胞TIL群，所述肿瘤浸润淋巴细胞TIL群可通过权利要求68至115中任一项所述的方法获得，所述药物组合物可选地包含第三TIL群。
118.根据权利要求117所述的用于治疗癌症的药物组合物，其中，所述药物组合物与TNFRSF激动剂组合使用。
119.根据权利要求117所述的用于治疗癌症的药物组合物，其中，所述药物组合物与TNFRSF激动剂组合使用，所述TNFRSF激动剂在向患者施用第三TIL群后的第二天开始施用，所述TNFRSF激动剂以0.1mg/kg至50mg/kg的剂量静脉内施用，每4周一次，持续至多8个周期。
120.根据权利要求117所述的用于治疗癌症的药物组合物，其中，所述药物组合物与TNFRSF激动剂组合使用，所述TNFRSF激动剂在从患者切除肿瘤的步骤之前施用，所述TNFRSF激动剂以0.1mg/kg至50mg/kg的剂量静脉内施用，每4周一次，持续至多8个周期。
121.根据权利要求117所述的用于治疗癌症的药物组合物，其中，所述药物组合物与非清髓性淋巴细胞清除方案组合使用。
122.根据权利要求117所述的用于治疗癌症的药物组合物，其中，在向患者施用第三TIL群之前，将所述药物组合物与清髓性淋巴细胞清除方案组合使用。
123.根据权利要求117所述的用于治疗癌症的药物组合物，其中，所述药物组合物与清髓性淋巴细胞清除方案组合使用，其中，在向患者施用第三TIL群之前，施用非清髓性淋巴细胞清除清除方案，所述非清髓性淋巴细胞清除方案包括如下步骤：以60mg/m2/天的剂量施用环磷酰胺2天，然后以25mg/m2/天的剂量施用氟达拉滨5天。
124.根据权利要求117所述的用于治疗癌症的药物组合物，其中，所述药物组合物与递减型IL-2方案组合使用。
125.根据权利要求117所述的用于治疗癌症的药物组合物，其中，在向患者施用第三TIL群的第二天开始，将所述药物组合物与递减型IL-2方案组合使用，所述递减型IL-2方案包括：在第1天以18,000,000IU/m2的剂量、在第2天以9,000,000IU/m2的剂量以及在第3天和第4天以4,500,000IU/m2的剂量静脉内施用阿地白介素。
126.根据权利要求117所述的用于治疗癌症的药物组合物，其中，所述药物组合物与聚乙二醇化IL-2组合使用。
127.根据权利要求117所述的用于治疗癌症的药物组合物，其中，在向患者施用第三TIL群后，将所述药物组合物与以0.10mg/天至50mg/天的剂量施用的聚乙二醇化的IL-2组合使用。
128.根据权利要求117所述的用于治疗癌症的药物组合物，其中，所述药物组合物与高剂量IL-2方案组合使用。
129.根据权利要求117所述的用于治疗癌症的药物组合物，其中，在向患者施用第三TIL群后的第二天开始，将所述药物组合物与高剂量IL-2方案组合使用。
130.根据权利要求117所述的用于治疗癌症的药物组合物，其中，在向患者施用第三TIL群后的第二天开始，将所述药物组合物与高剂量IL-2方案组合使用，其中，高剂量IL-2方案包括：每8小时静脉滴注输注15分钟来施用600,000IU/kg或720,000IU/kg的阿地白介素或它的生物仿制药或变体，直至耐受。
131.根据权利要求117所述的用于治疗癌症的药物组合物，其中，所述药物组合物与PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂组合使用。
132.根据权利要求117所述的用于治疗癌症的药物组合物，其中，所述药物组合物与PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂组合使用，所述PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂选自：尼沃鲁单抗、兰洛利珠单抗、度伐鲁单抗、阿特利珠单抗、阿维鲁单抗，及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。
133.根据权利要求117所述的用于治疗癌症的药物组合物，其中，所述药物组合物与PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂组合使用，其中，在从患者切除肿瘤之前，施用PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂。
134.根据权利要求117所述的用于治疗癌症的药物组合物，其中，在从患者切除肿瘤之前，将所述药物组合物与PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂组合使用，所述PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂选自：尼沃鲁单抗、兰洛利珠单抗、度伐鲁单抗、阿特利珠单抗、阿维鲁单抗，及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。
135.根据权利要求117的所述用于治疗癌症的药物组合物，其中，在从患者切除肿瘤之后，将所述药物组合物与PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂组合使用。
136.根据权利要求117所述的用于治疗癌症的药物组合物，其中，在从患者切除肿瘤之后，将所述药物组合物与PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂组合使用，所述PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂选自：尼沃鲁单抗、兰洛利珠单抗、度伐鲁单抗、阿特利珠单抗、阿维鲁单抗，及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。
137.根据权利要求117所述的用于治疗癌症的药物组合物，其中，所述药物组合物与PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂组合使用，所述PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂在向患者施用第三TIL群后施用。
138.根据权利要求117所述的用于治疗癌症的药物组合物，其中，所述药物组合物与PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂组合使用，所述PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂在向患者施用第三TIL群之后施用，所述PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂选自：尼沃鲁单抗、兰洛利珠单抗、度伐鲁单抗、阿特利珠单抗、阿维鲁单抗，及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。
139.如权利要求117至138中任一项所述的用于治疗癌症的药物组合物，其中，所述癌症选自：黑色素瘤、卵巢癌、宫颈癌、肺癌、膀胱癌、乳腺癌、头颈癌、肾细胞癌、急性髓性白血病、结肠直肠癌、胆管癌和肉瘤。
140.如权利要求117至138中任一项所述的用于治疗癌症的药物组合物，其中，所述癌症选自：非小细胞肺癌NSCLC、三阴性乳腺癌、双重难治性黑色素瘤和葡萄膜(眼)黑色素瘤。
141.一种用肿瘤浸润淋巴细胞TIL群治疗癌症的方法，其中，所述方法包括以下步骤：
(a)从患者切除肿瘤；
(b)从肿瘤中获得第一TIL群；
(c)在第一细胞培养基中对第一TIL群进行初始扩增，获得第二TIL群，其中，第二TIL群的数量比第一TIL群的数量高至少5倍，所述第一细胞培养基包含IL-2，所述初始扩增进行11天或更短的时间；
(d)在第二细胞培养基中对第二TIL群进行快速扩增，获得第三TIL群，其中，快速扩增开始7天后，第三TIL群的数量比第二TIL群的数量高至少50倍；所述第二细胞培养基包含IL-2、OKT-3(抗CD3)抗体、外周血单核细胞PBMC和TNFRSF激动剂，以及所述快速扩增进行11天或更短的时间；
(e)收获第三TIL群；以及
(f)向患者施用治疗有效份的第三TIL群。
142.如权利要求141所述的方法，其中，TNFRSF激动剂选自：4-1BB激动剂、OX40激动剂及它们的组合。
143.如权利要求142所述的方法，其中，TNFRSF激动剂是4-1BB激动剂，所述4-1BB激动剂选自：乌瑞鲁单抗、乌托鲁单抗、EU-101、融合蛋白，及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。
144.如权利要求142所述的方法，其中，TNFRSF激动剂是OX40激动剂，所述OX40激动剂选自：他利昔珠单抗、GSK3174998、MEDI6469、MEDI6383、MOXR0916、PF-04518600、CreativeBiolabs MOM-18455，及它们的片段、衍生物、变体、生物仿制药和组合。
145.如权利要求141至144中任一项所述的方法，其中，在步骤(d)开始时，TNFRSF激动剂以1μg/mL至30μg/mL的浓度存在。
146.如权利要求145所述的方法，其中，在步骤(d)开始时，TNFRSF激动剂以5μg/mL和20μg/mL之间的浓度存在。
147.如权利要求146所述的方法，其中，在步骤(d)开始时，TNFRSF激动剂以约10μg/mL的浓度存在。
148.如权利要求141至144中任一项所述的方法，其中，在整个步骤(d)中，TNFRSF激动剂维持在1μg/mL至30μg/mL的浓度。
149.如权利要求145所述的方法，其中，在整个步骤(d)中，TNFRSF激动剂维持在5μg/mL至20μg/mL的浓度。
150.如权利要求146所述的方法，其中，在整个步骤(d)中，TNFRSF激动剂维持在约10μg/mL的浓度。
151.如权利要求141至150中任一项所述的方法，其中，与第二TIL群中CD8+TIL相对CD4+TIL的参考比率相比，第三TIL群表现出增加的CD8+TIL相对CD4+TIL的比率。
152.如权利要求151所述的方法，其中，经增加的比率比参考比率至少高5％。
153.如权利要求152所述的方法，其中，经增加的比率比参考比率至少高10％。
154.如权利要求153所述的方法，其中，经增加的比率比参考比率至少高20％。
155.如权利要求154所述的方法，其中，经增加的比率比参考比率至少高35％。
156.如权利要求155所述的方法，其中，经增加的比率比参考比率至少高50％。
157.如权利要求141至156中任一项所述的方法，其中，所述癌症选自：黑色素瘤、葡萄膜(眼)黑色素瘤、卵巢癌、宫颈癌、肺癌、膀胱癌、乳腺癌、头颈癌(头颈部鳞状细胞癌)、肾细胞癌、结肠直肠癌、胰腺癌、胶质母细胞瘤、胆管癌和肉瘤。
158.如权利要求141至156中任一项所述的方法，其中，所述癌症选自：皮肤黑色素瘤、葡萄膜(眼)黑色素瘤、对铂类耐药的卵巢癌、胰腺导管腺癌、骨肉瘤、三阴性乳腺癌和非小细胞肺癌。
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