JP2911056B2 - ヒト４−１ｂｂに特異的なモノクローナル抗体およびこれを産生する細胞株 - Google Patents

ヒト４−１ｂｂに特異的なモノクローナル抗体およびこれを産生する細胞株

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Description

【発明の詳細な説明】 発明の分野 本発明は、ヒト４−1BBに対して特異的な、免疫抑制
活性を有するモノクローナル抗体（MAb）、この可変部
をコードするポリヌクレオチド、およびこれを産生する
ハイブリドーマ細胞株に関する。さらに詳細には、本発
明は活性化されたＴ細胞に選択的に発現されるヒト４−
1BBに特異的にモノクロナール抗体、このモノクロナー
ル抗体の可変部をコードするポリヌクレオチドおよびこ
れから推定されるアミノ酸配列、このモノクロナール抗
体を産生するハイブリドーマ細胞株、この細胞株の製造
方法、およびこのモノクロナール抗体またはその変異体
を含む免疫抑制剤に関する。
発明の背景 人体内での免疫反応は次のように記述できる一連の過
程によって誘発される。まず、抗原は、抗原提示細胞の
食作用などによって内部へ入り細胞性リゾチームによっ
て分解され、その断片は主要組織適合遺伝子複合体（Ma
jor histocompatibility complex:MHC）クラスII分子と
複合体を形成する。生成した複合体は抗原提示細胞の外
表面へ移動した後、ヘルパーＴ細胞の抗原受容体によっ
て認識されて抗原−特異的体液性免疫反応をもたらす。
一方、ウイルス抗原などの抗原が細胞内に生成すると、
これは細胞内で分解され、その断片がMHCクラスＩ分子
と複合体を形成する。生成した複合体はウイルス−生成
細胞の外表面へ移動し、この複合体が細胞毒性Ｔ細胞の
抗原受容体によって認識されると抗原−特異的細胞性免
疫反応が開始される。
次いで、Ｔ細胞と抗原提示細胞は活性化初期段階に入
り補助分子（accessory molecule）とよばれる新しい分
子がそれらの表面に発現される。Ｔ細胞上の補助分子は
抗原提示細胞上で対応する配位子に結合し、この結合は
Ｔ細胞および抗原提示細胞の活性を促進させることによ
って種々の免疫反応を推進させる。代表的な補助分子は
B7−１、B7−２、CD28、CTLA4、CD40、CD40配位子、４
−1BBおよび４−1BB配位子分子を含む（Goodwin et a
l.,Eur.J.Immunol.,23,2631（1993））。
前述した補助分子の結合は免疫細胞の活性化および免
疫反応の誘発のために必須である。したがって、かかる
結合の遮断は免疫反応の抑制において決定的な役割をす
る。また、免疫反応は付属分子を発現する活性化された
Ｔ細胞のみを除くことによって阻害され得る。
前述した補助分子の一つである４−1BBは、活性化さ
れたネジミＴ細胞によって発現される蛋白質として初め
て記述され（Kwon,B.S.,et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.U.
S.A.,84,2896−2900（1987）およびKwon,B.S.,and Weis
sman,S.M.,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,86,1963−1967
（1989））、次いで、内在性膜蛋白質の腫瘍壊死因子
（tumor necrosis factor、TNF）受容体群の一つをコー
ドすることが明らかになった（Mallett,S.and Barclay,
A.N.,Immunol.Today,12,220−222（1991））。この受容
体群の特徴は細胞外領域にシステインの富むモチーフが
存在することである。この群の他の構成員はNGFR、CD4
0、OX−40、CD27、TNFR−Ｉ、TNFR−II、FasおよびCD30
を含む（Smith,C.A.,et al.,Cell,76,959−962（199
4）；およびBeutler,B.and VanHuffel,C.,Science,264,
667−668（1994））。４−1BBは55kDaのホモ二量体であ
り、コンカナバリンＡ（ConA）、フォトヘマグルチニン
（PHA）およびイオノマイシン、または抗−CD3iで活性
化される際、種々のネズミＴ細胞株、胸腺細胞および成
熟Ｔ細胞上に発現される（Kwon,B.S.,et al.,Cell.Immu
nol.,121,414−422（1989）；およびPollok,K.E.,et a
l.,J.Immunol.,150,771−781（1993））。４−1BBは特
異的にp56lckと共に免疫沈殿し、Con A−刺激された胸
腺細胞で自身の発現を上向調節すると明らかになった
（Kim,Y.J.,et al.,J.Immunol.,151,1255−1262（199
3））。かかる結果は４−1BBが細胞内信号伝達において
役割を果たすということを示唆している（Kim,Y.J.,et
al.,J.Immunol.,151,1255−1262（1993））。
マウスＴ細胞表面上の４−1BBをモノクロナール抗体
（MAb）で架橋結合させると、抗−CD3iで最適以下に活
性化される際Ｔ細胞の増殖が数倍増加した（Pollok et
al.、上掲）。４−1BBに対する配位子（４−1BBL）は活
性化されたマクロファージおよび成熟Ｂ細胞上に発見さ
れる（Goodwin,R.G.,et al.,Eur.J.Immunol.,232631−2
641（1993）;Pollok,K.E.,et al.,Eur.J.Immunol.,24,3
67−374（1994）；およびAlderson,M.R.,et al.,Eur.J.
Immunol.,24,2219−2227（1994））。４−1BBLは、TNF
受容体群の構成員に結合する分子群を形成するTNF、LT
−Ａ、LT−Ｂ、CD40LおよびCD27Lと同族関係を持つ（Go
odwin,et al.、上掲；およびAlderson et al.、上
掲）。最近の研究は、４−1BB−アルカリ性ホスファタ
ーゼ融合蛋白質が、B7分子の存在または不在下でＴ細胞
の活性化を遮断することを示しており、これによって、
Ｔリンパ球の活性化を共同刺激することにおける４−1B
Bおよび４−1BBL相互作用の重要性が証明された（DeBen
edette,M.A.,et al.,J.Exp.Med.,181985−992（199
5））。ヒト４−1BB（h4−1BB）をコードする遺伝子
は、活性化されたヒト末梢Ｔ細胞のcDNAライブラリから
最近分離され（Alderson,et al.、上掲）、明らかにさ
れたそのアミノ酸配列は細胞質領域での高い保存性と共
にネズミ４−1BBと60％の同一性を示した。
一方、臓器移植の成功の可否は、移植した臓器に対し
て臓器受領者の免疫学的拒絶反応をいかに効果的に抑制
するかに左右される。移植した臓器は、もし受領者の免
疫系によって認識されないと拒絶の問題が起こらず正常
に機能するであろう。しかし、大部分の場合、移植した
臓器は受領者の免疫系によって外来抗原として認識さ
れ、したがって、拒絶反応を防ぐために普通は免疫抑制
剤を用いる。例示される免疫抑制剤は、サイクロスポリ
ン、抗−リンパ球グロブリン（ALG）、抗−胸腺細胞グ
ロブリン（ATG）およびOKT3を含む。しかし、このよう
な免疫抑制剤は、活性化された免疫細胞のみでなく正常
な細胞にも作用する傾向があるため、深刻な副作用を惹
起する。
免疫系の最も重要な機能の一つは、自己抗原を認識
し、これを外来抗原と区別することである。正常な生理
条件下においては、免疫系は自己抗原に対しては反応し
ないで（すなわち“免疫寛容”）外来抗原に対してのみ
反応する。しかし、この免疫寛容機能が崩壊すると免疫
系が自己抗原を外来抗原として認識する自己免疫反応を
起こし得、これによって自己抗原、および最終的に自己
細胞、組織および器官を破壊し得る（“自己免疫疾
患”）。
30種以上の疾患が、かかる自己免疫反応によって直接
または間接に惹起されることが知られており、例示され
る自己免疫疾患には、慢性関節リウマチ、全身性紅斑性
狼瘡、重症筋無力症、糸球体腎炎、悪性再生不良性貧
血、甲状線疾患、睾丸炎が含まれる。
今のところかかる自己免疫疾患が正確にどのように惹
起されるのか明らかでないので自己免疫疾患を治療する
ために制限的でありまた多くの場合非効果的な方法、た
とえば、自己免疫反応によって惹起される炎症反応を抑
制する抗炎症剤の投与、活発に増殖する細胞に対して細
胞毒性を有するメトトレキセートを用いた治療、過度な
免疫反応を抑制するための放射線治療法または胸管ドレ
ナージ、および抗−リンパ球グロブリン（ALG）および
抗−胸腺細胞グロブリン（ATG）のような免疫抑制抗リ
ンパ球血清（ASL）の投与による方法のみが現在用いら
れている。かかる治療は短期的には効果をいくらか示す
が、長期的には正常免疫細胞の損傷に至る。
したがって、正常免疫細胞を損傷することなく、活性
化された免疫細胞に選択的に作用する安全な免疫抑制剤
の開発が必要とされている。
発明の概要 したがって、本発明の目的は、活性化された免疫細胞
上に発現される補助分子に対して特異的なモノクロナー
ル抗体を提供することである。
本発明の他の目的は、このモノクロナール抗体の可変
部をコードするポリヌクレオチドおよびそれにコードさ
れたアミノ酸配列を提供することである。
本発明のまた他の目的は、このモノクロナール抗体を
産生できるハイブリドーマ細胞株およびこの細胞株の製
造方法を提供することである。
本発明のまた他の目的は、前記モノクロナール抗体ま
たはその変異体を含む免疫抑制剤を提供することであ
る。
本発明の一つの態様によって、活性化されたＴ細胞上
に発現される４−1BBに対して特異性を有するモノクロ
ナール抗体および前記モノクロナール抗体またはその変
異体を含む免疫抑制剤が提供される。
図面の簡単な説明 本発明の前述した目的および他の目的および特徴は、
添付の図面を参照した下記の説明から明らかになる。
図１は、モノクロナール抗体4B4−１−１の純度を確
認するためのSDS−PAGEの結果を示し、 図2Aは、4B4−１−１ VH遺伝子のヌクレオチド配列
およびその推論されるアミノ酸配列を示し、図2Bは、4B
4−１−１ VH遺伝子のアミノ酸配列をリウマチ因子−
結合抗体（A5′CL）の配列と比較したものであり、 図3Aは、4B4−１−１ VL遺伝子のヌクレオチド配列
およびその推論されるアミノ酸配列を示し、図3Bは、4B
4−１−１ VL遺伝子のアミノ酸配列を公表された最も
相同的なVL遺伝子（VK23.32′CL）の配列と比較したも
のであり、 図４は、正常なヒトCD4+T細胞、およびCon Aで24時間
刺激されて活性化されたヒトCD4+T細胞に対するMAb 4B
−１−１の特異性を示し、 図５は、正常なヒトCD8+T細胞、およびCon Aで24時間
刺激されて活性化されたヒトCD8+T細胞に対するMAb 4B
4−１−１の特異性を示し、 図６は、７日または９日間行われた一方アレルゲン性
混合リンパ球反応に対するMAb 4B4−１−１の阻害効果
を示す。
発明の詳細な説明 本発明の一つの態様によって、活性化されたヒトＴ細
胞のみに発現されるヒト４−1BBに対して特異的な、4B4
−１−１と命名されたモノクロナール抗体が提供され
る。
MAb 4B4−１−１の重鎖可変部（VH）をコードする遺
伝子は、図2Aに示した499 bp配列を含み、帰結された
そのアミノ酸配列は、すべての保存されたアミノ酸残基
を含み、19個のアミノ酸からなるリーダー配列、典型的
なマウスVH領域（118アミノ酸）および重鎖不変部の一
部で構成されている。4B4−１−１ VH領域のアミノ酸
配列を10個のネズミVHグループ（Kabat,E.A.,et al.,Se
quences of Immunological Interest,5th Ed.,National
Institutes of Health,Bethesla,1991）のアミノ酸配
と比べると、4B4−１−１のVH断片がサブグループII
（Ｂ）に属し、リウマチ因子−結合抗体（A5′CL）のア
ミノ酸配列と相同であるということが分かる（86.2％一
致、90.5％類似；図２）。4B4−１−１のVH断片のアミ
ノ酸配列とA5′CLのアミノ酸配列間の大部分の相違点は
超可変領域（CDR1、CDR2およびCDR3）にある。また、4B
4−１−１のＤおよびJH断片はDFL16.2およびJH3にそれ
ぞれ最も密接に係わっている。
MAb 4B4−１−１の軽鎖可変部（VL）をコードする遺
伝子は、図3Aに示した372 bp配列を含み、明らかにさ
れたそのアミノ酸配列はマウス免疫グロブリンVL領域
（107アミノ酸）および軽鎖不変部の一部（14アミノ
酸）で構成されている。明らかにされたVL遺伝子のアミ
ノ酸配列4B4−１−１の軽鎖がサブグループＶに属し、V
K23.32′CLと非常に近接（93.8％一致、94.8％類似；図
3B）しているのみでなく、JK断片はMUSJK1と最も近接し
ているということを示す。
本発明のモノクロナール抗体は、前述したヌクレオチ
ド配列情報に基づいて合成した合成VHおよびVL遺伝子を
腫瘍細胞株内に移し、この細胞株を培養するか、または
骨髄腫細胞をh4−1BBで免疫したマウスの脾臓細胞と融
合させて生産したハイブリドーマ細胞株を培養すること
によって製造できる。
特に、h4−1BBに対してモノクローナル抗体を産生で
きるハイブリドーマ細胞株は次のように製造できる。
１）抗原製造 本発明で抗原として用いられるヒト4B4−１−１は、
アルダーソン（Alderson et al.,Eur.J.Immunol.,24,22
19（1994））によって記述されたアミノ酸配列を用い
て、当分野で公知の化学的ペプチド合成方法に従って製
造するか、または、化学的に合成されるか人体から分離
されるh4−1BBをコードするDNAを遺伝工学的技術によっ
て発現させることによって製造できる。たとえば、h4−
1BBは、ヒト４−1BBおよびグルタチオンＳ−トランスフ
ェラーゼ（GST）のグルタチオン−結合領域をコードす
る全長cDNA配列を含む発現ベクトルを構築し、これをE.
coliで発現させ、生成したh4−1BB−GST融合蛋白質をグ
ルタチオン−セファロース4Bカラム（Pharmacia LKB Bi
otechnology Inc.）などの適切なクロマトグラフィーカ
ラムを用いて精製することによって製造できる。このグ
ルタチオン−結合領域は第Xa因子などを用いて融合蛋白
質から切り出すことができ、グルタチオン−セファロー
ス4Bカラムを用いて除くことができる。
２）免疫 マウスの免疫は、h4−1BBまたは組み換えh4−1BBを含
む細胞などの免疫源を通常の方法によってマウスに連続
的に注入することによって行われ得る。たとえば、適当
量の免疫源をマウスに静脈内、皮下、または腹腔内に注
射し、２週または３週間隔に２回以上追加接種して総抗
原量が100ないし200μg/マウスになるようにする。この
注射液は必要に応じて適当量のフロイント完全アジュバ
ントまたはフロイント不完全アジュバンドを含むことが
できる。
３）細胞融合 最後の追加接種から３日後、免疫されたマウスから脾
臓細胞を分離し、これをミッシェルとシーギーによって
記述された方法（Mishell and Shiigi,Selected Method
s in Cellular Immunology,W.H.Freeman ＆ Company,19
80）のような通常の方法に従ってSP2/0−Ag14骨髄腫細
胞（ATCC CRL1581）などの骨髄腫細胞と融合させる。
脾臓細胞と骨髄細胞は1:1ないし1:4の範囲の比で使用す
る。細胞融合を促進するため、ポリエチレングリコール
（PEG）4000のような融合促進剤を使用し得る。細胞融
合段階で使用に適した培地の例としてはRPMI1640（Gibc
o BRL Life Technologies Inc.）があり、かかる培地は
一般に10−15％（v/v）牛胎児血清（FBS）を含む。
４）ハイブリドーマ細胞の選別 融合した細胞を、ヒポキサンチン、チミジンおよびア
ミノプテリンを含む15％FBSを含むRPMI1640倍地（Gibco
BRL Life Technologies Inc.）のような細胞培養倍地
で培養し、７日ないし10日後に培養上澄液を用いるELIS
A検定法によって４−1BBに対して特異的な抗体を生産す
る陽性ハイブリドーマクローンを選別する。また、限界
希釈技法、プラーク法、スポット法、凝集検定法および
オートラジオグラフィー免疫検定法のような通常の方法
を用いて陽性クローンを選別できる。
４−1BBに対して特異的な抗体を生産するかかるハイ
ブリドーマ細胞中の一つの株を4B4−１−１と命名し、
特許手続き上の微細物寄託の国際的承認に関するブダペ
スト条約の規定下で、1995年３月21日付で韓国遺伝子銀
行（Korean Collection for Type Cultures（KCTC）；
住所：大韓民国大田広域市305−600儒城郵便局私書函11
5、韓国科学技術研究院生命工学研究所）に寄託番号KCT
C0157BPのもとに寄託した。
本発明のモノクロナール抗体は、このハイブリドーマ
細胞株をRPMI培地などの適切な細胞培養培地で培養する
か、またはこのハイブリドーマ細胞株をプリスタン（Pr
istaneR）注射を受けたマウスに注入したマウスから腹
水を得ることによって生産できる。このモノクロナール
抗体は、蛋白質Ａ−セファロースを用いるアフィニティ
ーカラムクロマトグラフィーなどの通常に方法に従っ
て、前記で得られた培養上澄液または腹水から精製でき
る。
精製したモノクロナール抗体のCon A−活性化された
Ｔ細胞に対する結合力は、フローサイトメトリーで測定
でき、その免疫抑制活性は試験管内混合リンパ球反応を
用いて測定できる。抗−４−1BBモノクロナール抗体はC
on A−活性化されたＴ細胞に対して強い結合力を示し、
また、試験管内混合リンパ球反応でリンパ球増殖を抑制
する能力によって立証されるように、免疫抑制活性を有
する。
高い薬剤学的効能を有すると共に抗−抗体反応を全く
起こさないか、ほとんど起こさない前述した本発明の抗
−４−1BBモノクロナール抗体のいかなる変異体もまた
本発明の範囲に含まれる。代表的なかかる変異体に、キ
メラ抗体およびひと化抗体が含まれる。
下記製造例および実施例は、本発明の範囲を制限する
のではなく、本発明をさらに詳細に例示するためのもの
で、特に言及しない限り、実施例で用いられた実験方法
は参照実施例によって実施できる。
なお、以下固体中の固体、液体中の液体および液体中
の固体に対する百分率は、特に言及しない限り、それぞ
れ重量／重量、体積／体積および重量／体積に基づいた
ものである。
実施例1:ハイブリドーマ細胞株の製造 （段階１）抗原の製造 ヒト４−1BBおよびグルタチオンＳ−トランスフェラ
ーゼ（GST）のグルタチオン結合分域をコードする全長c
DNA配列を含むpGEX−3X発現ベクトル（Pharmacia LKB B
iotechnology Inc.）を構築した。E.coliをこのベクト
ルで形質転換させ、形質転換体を培養して４−1BB−GST
融合蛋白質を発現させた。融合蛋白質はグルタチオン−
セファロース4Bカラム（Pharmacia LKB Biotechnology
Inc.）を用いて精製した。
（段階２）免疫 フロイント完全アジュバント0.1mlに懸濁した４−1BB
−GST20μｇを６ないし８週齢の雌BALB/cマウス（Labor
atory Animal Center in Seoul National University,S
eoul,Korea）に腹腔内注射し、フロイント不完全アジュ
バントに乳化させた４−1BB−GST20μｇを用いてそれぞ
れ３週間隔に２回接種した。
最後の追加接種から３日後、免疫されたマウスの尾か
ら少量の血液試料を得、参考例の方法に従ってELISAに
よって抗−４−1BB抗体の力価を測定した。抗体力価が
一定水準を経過すると、細胞融合への利用のため免疫し
たマウスから脾臓細胞を分離した。
（段階３）細胞融合 ミッシェルとシーギーの前記文献に記述されている実
験方法に従って、ポリエチレングリコール4000（Gibco
BRL Life Technologies Inc.）の存在下で段階２で得ら
れた脾臓細胞をSP2/0−Ag14骨髄細胞（ATCC CRL1581）
と1:2の比で混合した。
融合後、細胞をHAT培地（１×10-4Mヒポキサンチン、
1.6×10-6Mチミジンおよび４×10-7Mアミノプテリン（G
ibco BRL Life Technologies Inc.）を含む15％牛胎児
血清（FBS;Gibco BRL Life Technologies Inc.）を含有
するRPMI1640培地）に懸濁させ、96−ウェル微量培養浅
皿に加えた後、培養器を用いて５％CO2大気下、37℃で
培養した。融合してから６、７または８日後、培養培地
の半分を新鮮な培地に代替した。細胞の増殖を逆相顕微
鏡で観察し、細胞を充分に成長させた後、96−ウェル微
量培養浅皿で得られた上澄液を用いてELISA検定法を行
った。
（段階４）ハイブリドーマ細胞株の選別 ４−1BB−GST200ngを含むリン酸塩緩衝食塩水（PBS,p
H7.2）0.1mlでイムロンIIプレート（Immulon II plate,
Nunc Inc.）のウェルを４℃で一晩コーティングした。
ウェルをPBSで３回洗浄し、１％牛血清アルブミンを含
むPBSを用いて室温で１時間ブロックした。
PBS中で１％牛血清アルブミンと混合した段階３で得
られたハイブリドーマ培養上澄液100μl/ウェルをウェ
ルに加え、プレートを２時間培養した。
プレートをPBSで数回洗浄し、アルカリ性ホスファタ
ーゼが結合されたヤギ−抗マウスIg（Southern Biotech
nology Associates Inc.）の1000倍希釈液0.1ml各ウェ
ルに加え、プレートを２時間培養した。ウェルをPBSで
数回洗浄し、リン酸ｐ−ニトロフェニル二ナトリウムを
炭酸塩緩衝液に1mg/mlの濃度で溶解させて製造した基質
溶液（pH9.6,Sigma Chemical Co.）を0.1ml/ウェルの量
で加えた。プレートを10分間放置し、405nmでの試料の
光学密度（O.D.）をEmaxマイクロプレートリーダー（Mo
lecular Devices）で測定した。
前記ELISAで陽性結果を示したウェルの細胞を24−ウ
ェルプレートに移した後培養した。この細胞培養液が４
−1BBに対する結合力を有するかを調査するため、４−1
BB−GST融合蛋白質および４−1BBを用いて前記と同様な
ELISA手順を繰り返した。細胞培養上澄液中の抗体の結
合活性はELISAで405nmでの試料のO.D.と示し、対照群と
して牛血清アルブミン（BSA）を用いた。その結果は下
記表Ｉに示した。
表Ｉ コーティング蛋白質 ４−1BB−GST ４−1BB BSA O.D.（結合力） 2.30 2.43 0.06 表Ｉから理解されるように、ハイブリドーマ細胞培養
液は４−1BBと特異的に反応する。
４−1BBに特異的に作用する抗体を産生するハイブリ
ドーマ細胞を選別するため、培養上澄液を１個細胞／ウ
ェルの濃度で希釈し、プレートを前記と同じ条件で10日
間培養した。４−1BB分子に特異性を有する抗体を生産
する細胞株をELISAで確認し、4B4−１と命名した。前記
と同じ方法に従ってクローニングして抗−４−1BBモノ
クロナール抗体を産生する細胞株4B4−１−１を得た。
ハイブリドーマ細胞株4B4−１−１は1995年３月21日
付で韓国遺伝子銀行（KCTC）；住所：大韓民国大田広域
市305−600儒城郵便局私書函115、韓国科学技術研究院
生命工学研究所）に寄託番号KCTC0157BPとして寄託され
た。
実施例2:ハイブリドーマ細胞株を用いた抗体の製造 4B−１−１細胞１×106個をプリスタン（PristaneR:
2、６、10、14−テトラメチルペンタデカン、Sigma Che
mical Co.）0.5mlで処理したBALB/cマウスの腹膜に注入
した。10日後、マウスから腹水を取った。この腹水を蛋
白質−ＡセファロースCL−4Bカラム（Pharmacia LKB Bi
otechnology Inc.）でアフィニティークロマトグラフィ
ーを行ってモノクロナール抗体を精製した。モノクロナ
ール抗体の量は約1mg/ml腹水であった。
このモノクロナール抗体の特性を抗体分析キット（Ca
l biochem Cat.No.386445）で測定した結果、本発明の
モノクロナール抗体はIgG1であり、軽鎖κ鎖のイソタイ
プを有することが明らかになった。
また、この抗体をラムリの方法（W.K.Laemmli,Natur
e.277,680（1970）に従って、ドデシル硫酸ナトリウム
ポリアクリルアミドゲル電気泳動（SDS−PAGE）で処理
した後、クーマシーブルーで染色した。その結果は図１
に示すように観察された強いバンドはIgGの重鎖および
軽鎖に該当する。この結果はモノクロナール抗体が純粋
であるということを示す。図１で、第１列ないし３列は
モノクロナール抗体4B4−１−１の重鎖および軽鎖を示
し、第４列ないし６列は全モノクロナール抗体を示し、
第７列は標準分子量マーカーを示す。
実施例3:ヌクレオチドおよびアミノ酸配列分析 グアニジウムイソチオシアン酸塩−CsC1勾配法（Chir
gwin,J.J.,et al.,Biochemistry,18,5294−5299（197
9））を用いて実施例２で製造した4B4−１−１ハイブリ
ドーマ細胞1x108個からRNAを分離した。RNAペレットを
ジエチルピロカルボネート（DEPC）で処理された水に溶
解し、RNaseを含有しないDNase（Boehringer−Mannheim
Co.）で処理した。クイックプレップミクロmRNA精製キ
ット（QuickPrep Micro mRNA Purification Kit,Pharma
cia LKB Biotechnology Inc.）を用いてmRNAを分離し
た。ＣγまたはCKプライマー（Korea Biotech,Inc,;表
２）と共にMMLV（Moloney murine leukemia virus）逆
転写酵素（Boehringer−Mannheim Co.）を製造社の指示
に従って用いて、全RNA約５μｇまたはmRNA25ngからcDN
Aを製造した。製造したcDNAをフェノール／クロロホル
ムで抽出した後、エタノールで沈殿させて精製した。
重鎖可変部（VH）遺伝子を増幅させるため、末端デオ
キシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（Boehringer−
Mannheim Co.）によってcDNAの３′−末端に（dG）ｓ末
端を加えた。50μｌ規模のポリメラーゼ連鎖反応（PC
R）を94℃で１分、55℃で２分、および72℃で３分で構
成された温度サイクルで35回繰り返すことによってcDNA
鋳型を増幅させた。γ鎖の不変部（Ｃγ）遺伝子の配列
に相補的なＣγプライマーおよびdG−末端に相補的な
（dC）17オリゴマーはPCR用プライマーとして用いられ
た。１次PCR産物１μｌ分画を前記と同じ温度サイクル
を25回繰り返すことによってさらに増幅させた。
軽鎖可変部（VL）遺伝子を製造するため、cDNAを合成
し、前記と同じ条件下で前記温度サイクルを35回繰り返
すことによって増幅させた。Ｋ鎖の不変部（CK）遺伝子
の配列に相当するCKプライマーおよびCK鎖のＮ−末端の
DNA配列に相当するN4またはN6プライマーがPCR用プライ
マーとして用いられた（表２）。PCR産物を２％アガロ
ースゲル上で分解し、目的DNAバンドを切り取って電気
溶出した後、TAクローニングキット（Invitrogen）を用
いてpCRTMIIベクトル内にクローニングした。
鋳型プラスミドDNAをマジックミニプレップ（MagicTM
Minipreps）DNA精製システム（Promega Biotec）を用い
て精製し、シークエネーズ2.0版試薬キット（Sequenase
version2.0reagent Kit,Amersham）とプライマーSP6お
よびT7（Promega Biotec）を用いてジデオキシ鎖終結法
（dideoxy chain termination method）によって配列を
決定した。DNA配列はPCGENEソフトウェア、Blastデータ
ベースを用い、文献（Kabat,E.A.,et al.,Sequences of
Proteins of Immunological Interest,1991）を参照し
て分析した。
（１）MAb 4B4−１−１のVH 全RNAからMAb 4B4−１−１のVHcDNAを製造し、不変
部にハイブリドーマを形成するダウンストリームプライ
マー（Ｃγプライマー）およびdG−末端にハイブリドを
形成するアップストリームプライマー（（dC）17）を用
いる固定（anchored）PCR法（Ohara,O.,et al.,Proc.Na
tl.Acad.Sci.,U.S.A.,86,6883−6887（1989））によっ
てクローニングした。DNA配列分析によってMAb 4B4−
１−１のVHcDNAが499bpを含むことが明らかになった
が、この断片の末端でdG−末端は発見されなかった（図
2A）。この遺伝子の推定されたアミノ酸配列は、アミノ
酸19個のリーダー配列、典型的なマウスVH領域（118ア
ミノ酸）および重鎖不変部の一部の全ての保存アミノ酸
残基を含むことを示した。
4B4−１−1VH領域のアミノ酸配列を10個のネズミVHグ
ループの配列（Kabat et al.,前記文献）と比較するこ
とによって4B4−１−１のVH断片がサブグループII
（Ｂ）に属することが判明し、GenBankデータベースの
相同性調査によってこのアミノ酸配列がリウマチ因子−
結合抗体（A5′CL）の配列と最も高い相同性を有するこ
とが明らかになった（86.2％一致、90.5％類似；図2
B）。4B4−１−１のVH断片とA5′CL間の大部分のアミノ
酸相違点は超可変領域（CDR1、CDR2およびCDR3）で発見
された。前記配列データはまた4B4−１−１のＤおよびJ
H断片らがDFL16.2およびJH3に最も密接に関連している
ことを示す。
図２は4B4−１−１ VH遺伝子のヌクレオチド配列お
よびその推定されるアミノ酸配列を示す。相補性決定域
（Complementary determining regions,CDR）およびア
ミノ酸の番号付けはカバット（Kabat et al.,前記文
献）による定義に従う。CDRsは相当するアミノ酸残基の
下に実線で示されている。不変部の短い断片も示されて
おり、PCRのために用いられたプライマー領域は網掛け
で示されている。
図2Bは4B4−１−１およびリウマチ因子−結合抗体（A
5′CL）のVH遺伝子アミノ酸配列を示す。関係のない二
つの蛋白質の残基は‘＊’で示され、類似の残基は
‘・’で示され、CDRsは網掛けで示されている。
（２）MAb 4B4−１−１のVL ハイブリドーマ4B4−１−１の全mRNAからMAb 4B4−
１−１のVLcDNAを製造し、プライマーN4またはN6を用い
たPCR法によってクローニングした。PCR生成物のヌクレ
オチド配列分析によってプライマーN4またはN6を用いる
PCRから得られたDNA断片は363bpからなり、互いに同一
であることが明らかになった（図3A）。
推定されたこの遺伝子のアミノ酸配列は、マウス免疫
グロブリンVL領域（107アミノ酸）および軽鎖不変部の
一部（14アミノ酸）を含むということを示す。VL遺伝子
のアミノ酸配列は、4B4−１−１の軽鎖がアブグループ
Ｖに属し、VK23.32′CLと非常に類似（93.8％同一性、9
4.8％類似性；図3B）しているのみでなく、JK断片がMUS
JK1の非常に近接していることを示す。
4B4−１−１のVL遺伝子はＮ−末端に対応するプライ
マーを用いるPCRによってクローニングされ、この遺伝
子の最初の24個のヌクレオチドは、プライマーから誘導
されたものであって本来存在しない可能性もある。これ
は4B4−１−１のキメラ抗体の抗原結合活性に影響を及
ぼし得る。したがって、最初の８個の残基におけるアミ
ノ酸配列を調査した結果、それは最後の残基がグルタミ
ンの代わりにプロリンであることを除いては、ヌクレオ
チド配列から判定されたものと一致した。グルタミンが
プロリンによって代替されると、異なる構造を有する抗
原結合部位が生成されると思われる。前記結果を確認す
るために、さらに短いプライマー、すなわち、N21（表I
I）を用いてVL遺伝子をクローニングした。クローニン
グした遺伝子は、実際８番目の位置にプロリンと翻訳さ
れるCCAをコドンとして含んでいた。
図3Aは4B4−１−１ VL遺伝子のヌクレオチド配列お
よびその推定されるアミノ酸配列を示す。‘＋’はN6プ
ライマーを用いてクローニングしたVL遺伝子ではＱであ
る８番目のアミノ酸を示し、他の記号は図2Aでの定義と
同じ意味を有する。図3Bは4B4−１−１ VL遺伝子およ
び公開された相同性VL遺伝子（VK23.32′CL）の推論さ
れたアミノ酸配列を示し、他の記号は図2Bでの定義と同
じ意味を有する。
試験例1:活性化されたＴ細胞とMAb 4B4−１−１の反応 健康な成人の静脈血液試料20mlをヘパリンの入ってい
る滅菌管に入れ、直ちに同容量のPBS（pH7.2）と混合し
た。15ml管にHISTOPAQUE−1077（Sigma Chemical Co.）
3mlを加えて室温で放置した。
その後、HISTOPAQUE−1077層と血漿層の境界面に集め
られたリンパ球をピペットを用いて取り、15ml管に入れ
た。PBS10mlを管に加え、250xgで10分間遠心分離した。
沈殿した細胞をPBS10mlとよく混合した後、前記と同様
な条件で２回遠心分離して末梢血液リンパ球（PBL）を
分離した。
リンパ球を活性化させるため、2x106細胞/mlのリンパ
球を基準として10μg/mlのコンカナバリンＡ（Con A）
を加え、この混合物を一定期間培養した。Con Aで活性
化されたリンパ球をトリパンブルーで染色し、顕微鏡で
観察して細胞数を測定した。
モノクロナール抗体4B4−１−１を、2x106細胞を基準
として50μｌの量でその細胞に加え、混合物を４℃で30
分間反応させた。その後、反応混合物を２％牛血清アル
ブミンを含むPBSで２回洗浄し、フルオレセインイソチ
オシアン酸塩（FITC）が結合されたヤギ抗−マウスIg
（Becton Dickinson）20μｌをそれに加え、混合物を暗
所にて４℃で30分間培養した。生成物を２％牛血清アル
ブミンを含むPBSで２回洗浄した。Ｒ−フィコエリトリ
ン（RPE）が結合されたマウス抗−ヒトCD4+T MAb（Dak
o、Carpinteria）またはマウス抗−ヒトCD8+T MAb（Se
rotec,Oxford）20μｌをそれに加え、混合物を４℃で30
分間反応させた。生成物を２％牛血清アルブミンを含む
PBSで２回洗浄し、リンパ球を１％ホルムアルデヒドで
固定した後ファックスター プラス フロー サイトメ
ター（FACStar plus flow cytometer）で分析してリン
パ球の染色像を検討した。その結果を図４および５に示
す。
図4Aは正常なCD4+細胞のMAb 4B4−１−１との反応性
を示すが、ここではCD4+T細胞の17％が陽性反応を示
し、図4BはCon Aで24時間活性化したCD4+T細胞のMAb 4
B4−１−１との反応性を示すが、ここではCD4+T細胞の7
2％が陽性反応を示す。
図5Aは正常なCD8+T細胞のMAb 4B4−１−１との反応
性を示すが、ここではCD8+T細胞の36％が陽性反応を示
し、図5BはCon Aで24時間活性化されたCD8+T細胞のMAb
4B4−１−１との反応性を示すが、ここではCD8+T細胞
の89％が陽性反応を示す。
前記結果から分かるように、活性化されたCD4+T細胞
およびCD8+T細胞は、活性化されなかった正常のＴ細胞
より著しく高いMAb 4B4−１−１に対する反応性を示
す。
試験例2:MAb 4B4−１−１の免疫抑制活性に対する試験
管内（invitro）試験 試験例１と同じ手順に従って、ヒトから二つの末梢血
液リンパ球（PBL）試料を得た。
あるヒトから採取した細胞1x105個を3000ラッドで照
射された別の人の細胞1x105個と混合した。混合した細
胞を96−ウェル培養プレートのウェルに入れ4B4−１−
１を０、0.15、0.6、2.5、10または40μg/mlの濃度で各
ウェルに加えた。プレートを７日また９日間培養し、各
ウェルでの細胞の増殖を次のように測定した。１μCiの
3H−チミジンを各ウェルに加え、プレートを８時間培養
した。細胞をガラスフィルター膜に集め、この膜を5ml
シンチレーションバイアルに入れた。2.5mlのシンチレ
ーションカクテルをバイアルに加え、β−カウンターを
用いて3H−チミジンのcpmを測定した。抑制率（％）は
次のように計算した。
図６は一方アレルゲン性混合リンパ球反応に対するMA
b 4B4−１−１の抑制効果を示し、前記反応は７日（−
■−）または９日（−□−）間行われ、10μg/ml MAb
4B4−１−１の添加によって52％または67％抑制され
た。この結果は本発明のモノクロナール抗体、すなわ
ち、MAb 4B4−１−１が顕著な免疫活性を有することを
示す。
試験例3:慢性関節リウマチ患者の滑膜Ｔ細胞に対するMA
b 4B4−１−１の特異性 慢性関節リウマチ患者の膝関節から得られた滑液20ml
をペパリンを含む滅菌管に入れ、管を室温で400xgで10
分間遠心分離した。沈殿した細胞を蒸留水に10分間懸濁
して赤血球を除いた。このように得られた滑膜細胞をリ
ンパ球トリパンブルーで染色して細胞数を測定した。
一方、試験例１と同じ手順に従って、慢性関節リウマ
チ患者から末梢血液リンパ球（PBL）を得た。
モノクロナール抗体4B4−１−１を、2x106細胞当り50
μｌの量で関節滑液リンパ球またはPBLに加えた後、混
合物を４℃で30分間反応させた。反応が終わると、生成
物を２％牛胎児血清アルブミンを含むPBSで２回洗浄し
た。生成物にフルオレセインイソチオシアン酸（FITC）
が結合されたヤギ抗−マウスIg（Becton Dickinson）20
μｌを加え、混合物を暗所で４℃で30分間培養した。生
成物を２％牛血清アルブミンを含むPBSで２回洗浄し、
Ｒ−フィコエリトリン（RPE）が結合されたマウス抗−
ヒトCD4+T MAb（Dako,Carpinteria）またはマウス抗−
ヒトCD8+T MAb（Serotec,Oxford）20μｌをそれに加え
た。混合物を暗所で４℃で30分間培養した。生成物を２
％牛血清アルブミンを含むPBSで２回洗浄し、リンパ球
を１％ホルムアルデヒド溶液で固定した後、ファックス
ター フロー サイトメター（Becton Dickinson）で単
球の染色様相を調査した。その結果を表３に示す。
表３から分かるように、MAb 4B4−１−１と反応でき
る細胞は、関節滑液Ｔ細胞より末梢血液Ｔ細胞により多
く含まれる。すなわち、関節炎患者の関節滑液リンパ球
の大部分のＴ細胞はMAb 4B4−１−１と結合し得る。し
たがって、MAb 4B4−１−１またはこの変異体を慢性関
節リウマチ患者に投与してMAb 4B4−１−１と結合する
細胞を除くことによって慢性関節リウマチを治療でき
る。
上記のように、抗−h4−1BBモノクロナール抗体は、
４−1BB分子を遮断して活性化されたＴ細胞を除くこと
によって種々の免疫反応を抑制できる。したがって、本
発明のモノクロナール抗体は、種々の自己免疫疾患を治
療するか、臓器移植後拒絶反応を防ぐための免疫抑制剤
として使用できる。
本発明を前記の具体的な実施形態と関連させて記述し
たが、当分野の熟練者は本発明を多様に変形および変化
させ得るが、これらは添付の請求範囲によって定義され
る本発明の範囲内に含まれるものと理解されるべきであ
る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ (Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91） (56)参考文献 国際公開95／7984（ＷＯ，Ａ１) 国際公開94／26290（ＷＯ，Ａ１) Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．24 （1994）ｐ．2219−2227 (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)

Claims (9)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】重鎖および軽鎖可変部が下記のアミノ酸配
    列： を含むヒト４−1BBに特異性を有するモノクロナール抗
    体。
  2. 【請求項２】下記のヌクレオチド配列： を含むヒト４−1BBに特異性を有するモノクロナール抗
    体の重鎖可変部をコードするポリヌクレオチド。
  3. 【請求項３】下記ヌクレオチド配列： を含む、ヒト４−1BBに特異性を有するモノクロナール
    抗体の軽鎖可変部をコードするポリヌクレオチド。
  4. 【請求項４】ヒト４−1BBで免疫されたマウスから脾臓
    細胞を回収し、この脾臓細胞を骨髄腫細胞と融合させ、
    融合した細胞を培養することを特徴とする、請求項１記
    載のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞
    株の製造方法。
  5. 【請求項５】請求項１記載のモノクロナール抗体を産生
    するハイブリドーマ細胞株。
  6. 【請求項６】ハイブリドーマ細胞株が4B4−１−１（KCT
    C0157BP）である請求項５記載のハイブリドーマ細胞
    株。
  7. 【請求項７】請求項１記載のモノクロナール抗体のキメ
    ラ抗体。
  8. 【請求項８】請求項１記載のモノクロナール抗体を含む
    免疫抑制組成物。
  9. 【請求項９】自己免疫疾患の処置のための請求項８記載
    の免疫抑制組成物。
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Families Citing this family (99)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6303121B1 (en) * 1992-07-30 2001-10-16 Advanced Research And Technology Method of using human receptor protein 4-1BB
US20060002904A9 (en) * 1988-11-07 2006-01-05 Kwon Byoung S Receptor and related products and methods
US6362325B1 (en) * 1988-11-07 2002-03-26 Advanced Research And Technology Institute, Inc. Murine 4-1BB gene
US20060063923A1 (en) * 1992-07-30 2006-03-23 Kwon Byoung S 4-1BB peptides and methods for use
DE69435261D1 (de) * 1993-09-16 2010-02-25 Univ Indiana Res & Tech Corp Menschlicher rezeptor h4-1bb
NZ334691A (en) * 1996-10-11 2000-12-22 Bristol Myers Squibb Co Compositions of anti-4-1BB antibody effective for immunomodulation and treatment of T-cell autoimmune disease
US6051228A (en) * 1998-02-19 2000-04-18 Bristol-Myers Squibb Co. Antibodies against human CD40
US20030096976A1 (en) * 1998-11-17 2003-05-22 Hong Hyo Jeong Humanized antibodies LB-00503 and LB-00506 specific for human 4-1BB and pharmaceutical compositions comprising said humanized antibodies
KR20000034847A (ko) * 1998-11-17 2000-06-26 성재갑 인간 4-1비비 분자에 대한 인간화 항체 및 이를 포함하는 약학조성물
US20040001863A1 (en) * 1998-12-03 2004-01-01 Shau-Chi Chi Immortal cell line derived from grouper Epinephelus coioides and its applications therein
PT1234031T (pt) 1999-11-30 2017-06-26 Mayo Foundation B7-h1, uma nova molécula imunoregulatória
IL152450A0 (en) 2000-05-12 2003-05-29 Genzyme Corp COMPOUNDS HAVING TNF-alpha SIGNAL MODULATING ACTIVITY
US7320789B2 (en) * 2001-09-26 2008-01-22 Wyeth Antibody inhibitors of GDF-8 and uses thereof
AU2002364935A1 (en) 2001-10-09 2003-06-23 Mayo Foundation For Medical Education And Research Enhancement of immune responses by 4-1bb-binding agents
JP2005536511A (ja) * 2002-07-15 2005-12-02 マヨ ファウンデーション フォー メディカル エデュケーション アンド リサーチ ４−１ｂｂ結合物質を用いる治療及び予防
JP2006500921A (ja) * 2002-07-30 2006-01-12 ブリストル−マイヤーズ　スクイブ　カンパニー ヒト４−１ｂｂに対するヒト化抗体
EP1388544A1 (en) * 2002-07-31 2004-02-11 D. Collen Research Foundation vzw Anti-idiotypic antibodies against factor VIII inhibitor and uses thereof
EP1545578A4 (en) 2002-08-28 2010-07-07 Immunex Corp COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING CARDIOVASCULAR DISEASES
WO2004055513A2 (en) * 2002-12-16 2004-07-01 Herbert Schwarz Use of cd137 antagonists for the treatment of tumors
US20040197312A1 (en) * 2003-04-02 2004-10-07 Marina Moskalenko Cytokine-expressing cellular vaccine combinations
US7288638B2 (en) 2003-10-10 2007-10-30 Bristol-Myers Squibb Company Fully human antibodies against human 4-1BB
US7674884B2 (en) * 2003-12-10 2010-03-09 Novimmune S.A. Neutralizing antibodies and methods of use thereof
MX2007004176A (es) * 2004-10-06 2007-06-15 Mayo Foundation B7-h1 y metodos de diagnosis, prognosis, y tratamiento de cancer.
US20060182744A1 (en) * 2005-02-15 2006-08-17 Strome Scott E Anti-CD137 antibody as an agent in the treatment of cancer and glycosylation variants thereof
US20080019905A9 (en) * 2005-02-18 2008-01-24 Strome Scott E Method of using an anti-CD137 antibody as an agent for radioimmunotherapy or radioimmunodetection
KR20080068089A (ko) * 2005-10-21 2008-07-22 지티씨바이오쎄라퓨틱스,인크. 항체 의존성 세포 독성 활성이 증강된 항체, 그 생산 및사용 방법
US20100015642A1 (en) * 2006-01-05 2010-01-21 Kwon Eugene D B7-h1 and survivin in cancer
US20090215084A1 (en) * 2006-01-05 2009-08-27 Mayo Foundation For Medical Education And Research B7-h1 and b7-h4 in cancer
WO2007124361A2 (en) * 2006-04-20 2007-11-01 Mayo Foundation For Medical Education And Research Soluble b7-h1
WO2009111315A2 (en) * 2008-02-29 2009-09-11 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods for reducing granulomatous inflammation
US20110229460A1 (en) * 2008-05-01 2011-09-22 Gtc Biotherapeutics, Inc. anti-cd137 antibody as an agent in the treatment of inflammatory conditions
US8475790B2 (en) 2008-10-06 2013-07-02 Bristol-Myers Squibb Company Combination of CD137 antibody and CTLA-4 antibody for the treatment of proliferative diseases
US8324352B2 (en) 2009-12-07 2012-12-04 Decimmune Therapeutics, Inc. Anti-inflammatory antibodies and uses therefor
EP2970445A4 (en) 2013-03-12 2017-02-22 Decimmune Therapeutics Inc. Humanized anti-n2 antibodies
US9302005B2 (en) 2013-03-14 2016-04-05 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods and materials for treating cancer
US10259875B2 (en) 2013-10-01 2019-04-16 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods for treating cancer in patients with elevated levels of BIM
EP3066127A1 (en) 2013-11-06 2016-09-14 Bristol-Myers Squibb Company Immunotherapeutic dosing regimens and combinations thereof
EP3102604B1 (en) 2014-02-04 2020-01-15 Pfizer Inc Combination of a pd-1 antagonist and a 4-1bb agonist for treating cancer
US10302653B2 (en) 2014-05-22 2019-05-28 Mayo Foundation For Medical Education And Research Distinguishing antagonistic and agonistic anti B7-H1 antibodies
US10517875B2 (en) 2014-07-23 2019-12-31 Mayo Foundation for Medical Engineering and Research Targeting DNA-PKcs and B7-H1 to treat cancer
EP3322431A2 (en) 2015-07-16 2018-05-23 Biokine Therapeutics Ltd. Compositions and methods for treating cancer
EP3331919A1 (en) 2015-08-07 2018-06-13 GlaxoSmithKline Intellectual Property Development Limited Combination therapy comprising anti ctla-4 antibodies
WO2017046746A1 (en) 2015-09-15 2017-03-23 Acerta Pharma B.V. Therapeutic combinations of a btk inhibitor and a gitr binding molecule, a 4-1bb agonist, or an ox40 agonist
US10875923B2 (en) 2015-10-30 2020-12-29 Mayo Foundation For Medical Education And Research Antibodies to B7-H1
TWI788307B (zh) 2016-10-31 2023-01-01 美商艾歐凡斯生物治療公司 用於擴增腫瘤浸潤性淋巴細胞之工程化人造抗原呈現細胞
CA3082255A1 (en) 2016-11-23 2020-06-10 Translational Drug Development, Llc Benzamide and active compound compositions and methods of use
US20200121719A1 (en) 2017-01-06 2020-04-23 Iovance Biotherapeutics, Inc. Expansion of tumor infiltrating lymphocytes (tils) with tumor necrosis factor receptor superfamily (tnfrsf) agonists and therapeutic combinations of tils and tnfrsf agonists
US10576161B2 (en) 2017-01-20 2020-03-03 Magenta Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the depletion of CD137+ cells
TW201919662A (zh) 2017-06-05 2019-06-01 美商艾歐凡斯生物治療公司 對雙重難治性黑色素瘤使用腫瘤浸潤性淋巴細胞之方法
MX2020000342A (es) 2017-07-11 2020-08-17 Compass Therapeutics Llc Anticuerpos agonistas que se unen a cd137 humano y sus usos.
CN111511762A (zh) 2017-08-21 2020-08-07 天演药业公司 抗cd137分子及其用途
WO2019089753A2 (en) 2017-10-31 2019-05-09 Compass Therapeutics Llc Cd137 antibodies and pd-1 antagonists and uses thereof
TWI701259B (zh) * 2017-11-09 2020-08-11 大陸商上海懷越生物科技有限公司 ４﹘１ｂｂ抗體及其製備方法和應用
EP3710576A1 (en) 2017-11-17 2020-09-23 Iovance Biotherapeutics, Inc. Til expansion from fine needle aspirates and small biopsies
WO2019100052A2 (en) 2017-11-20 2019-05-23 Compass Therapeutics Llc Cd137 antibodies and tumor antigen-targeting antibodies and uses thereof
US11713446B2 (en) 2018-01-08 2023-08-01 Iovance Biotherapeutics, Inc. Processes for generating TIL products enriched for tumor antigen-specific T-cells
WO2019136459A1 (en) 2018-01-08 2019-07-11 Iovance Biotherapeutics, Inc. Processes for generating til products enriched for tumor antigen-specific t-cells
BR112020013848A2 (pt) 2018-01-08 2020-12-01 Iovance Biotherapeutics, Inc. métodos para expandir linfócitos infiltrantes de tumor e para tratar um indivíduo com câncer, população de linfócitos infiltrantes de tumor, e, método para avaliar fatores de transcrição
CN111065652A (zh) * 2018-01-22 2020-04-24 江苏恒瑞医药股份有限公司 抗4-1bb抗体、其抗原结合片段及其医药用途
WO2019148445A1 (en) 2018-02-02 2019-08-08 Adagene Inc. Precision/context-dependent activatable antibodies, and methods of making and using the same
CA3090795A1 (en) 2018-02-13 2019-08-22 Iovance Biotherapeutics, Inc. Expansion of tumor infiltrating lymphocytes (tils) with adenosine a2a receptor antagonists and therapeutic combinations of tils and adenosine a2a receptor antagonists
MX2020010264A (es) 2018-03-29 2020-11-06 Iovance Biotherapeutics Inc Procesos para la produccion de linfocitos infiltrantes en tumor y usos de los mismos en inmunoterapia.
US20210230287A1 (en) * 2018-04-10 2021-07-29 Wuxi Biologics (Shanghai) Co., Ltd. A monoclonal antibody against human 4-1bb, method for preparing the same, and use thereof
KR20210005138A (ko) 2018-04-27 2021-01-13 이오반스 바이오테라퓨틱스, 인크. 종양 침윤 림프구의 확장 및 유전자 편집을 위한 폐쇄 방법 및 면역요법에서의 그의 용도
WO2019217753A1 (en) 2018-05-10 2019-11-14 Iovance Biotherapeutics, Inc. Processes for production of tumor infiltrating lymphocytes and uses of same in immunotherapy
TW202031273A (zh) 2018-08-31 2020-09-01 美商艾歐凡斯生物治療公司 抗ｐｄ－１抗體難治療性之非小細胞肺癌（ｎｓｃｌｃ）病患的治療
SG11202101787XA (en) 2018-09-20 2021-04-29 Iovance Biotherapeutics Inc Expansion of tils from cryopreserved tumor samples
CA3118493A1 (en) 2018-11-05 2020-05-14 Iovance Biotherapeutics, Inc. Expansion of tils utilizing akt pathway inhibitors
KR20210099573A (ko) 2018-11-05 2021-08-12 이오반스 바이오테라퓨틱스, 인크. 개선된 종양 반응성 t-세포의 선택
JP2022506586A (ja) 2018-11-05 2022-01-17 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド 腫瘍浸潤リンパ球の産生のためのプロセスおよび免疫療法におけるその使用
KR20210091212A (ko) 2018-11-05 2021-07-21 이오반스 바이오테라퓨틱스, 인크. 항-pd-1 항체에 불응성인 nsclc 환자의 치료
CA3123392A1 (en) 2018-12-19 2020-06-25 Iovance Biotherapeutics, Inc. Methods of expanding tumor infiltrating lymphocytes using engineered cytokine receptor pairs and uses thereof
KR20220002336A (ko) 2019-03-29 2022-01-06 미스트 쎄라퓨틱스, 엘엘씨 T 세포 치료제를 제조하기 위한 생체외 방법 및 관련 조성물 및 방법
WO2020232029A1 (en) 2019-05-13 2020-11-19 Iovance Biotherapeutics, Inc. Methods and compositions for selecting tumor infiltrating lymphocytes and uses of the same in immunotherapy
AU2020320349A1 (en) * 2019-07-26 2022-02-17 Abl Bio Inc. Anti-EGFR/anti-4-1BB bispecific antibody and use thereof
EP4048295A1 (en) 2019-10-25 2022-08-31 Iovance Biotherapeutics, Inc. Gene editing of tumor infiltrating lymphocytes and uses of same in immunotherapy
IL293350A (en) 2019-11-27 2022-07-01 Myst Therapeutics Llc A method for producing tumor-reactive t cells using modulatory substances
JP2023506734A (ja) 2019-12-11 2023-02-20 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド 腫瘍浸潤リンパ球（ｔｉｌ）の産生のためのプロセス及びそれを使用する方法
WO2021167908A1 (en) 2020-02-17 2021-08-26 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods for expansion of tumor infiltrating lymphocytes and use thereof
WO2021174208A1 (en) 2020-02-27 2021-09-02 Myst Therapeutics, Llc Methods for ex vivo enrichment and expansion of tumor reactive t cells and related compositions thereof
CN113563473A (zh) 2020-04-29 2021-10-29 三生国健药业（上海）股份有限公司 四价双特异性抗体、其制备方法和用途
TW202208616A (zh) 2020-05-04 2022-03-01 美商艾歐凡斯生物治療公司 改良之腫瘤反應性ｔ細胞的選擇
JP2023523855A (ja) 2020-05-04 2023-06-07 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド 腫瘍浸潤リンパ球の製造方法及び免疫療法におけるその使用
WO2022011270A2 (en) * 2020-07-09 2022-01-13 Lankenau Institute For Medical Research Compositions comprising antibodies to human ido-2
WO2022076606A1 (en) 2020-10-06 2022-04-14 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of nsclc patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies
EP4225330A1 (en) 2020-10-06 2023-08-16 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of nsclc patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies
WO2022125941A1 (en) 2020-12-11 2022-06-16 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of cancer patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies in combination with braf inhibitors and/or mek inhibitors
WO2022133149A1 (en) 2020-12-17 2022-06-23 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of cancers with tumor infiltrating lymphocytes
JP2023554395A (ja) 2020-12-17 2023-12-27 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド Ｃｔｌａ－４及びｐｄ－１阻害剤と併用した腫瘍浸潤リンパ球療法による治療
WO2022170219A1 (en) 2021-02-05 2022-08-11 Iovance Biotherapeutics, Inc. Adjuvant therapy for cancer
EP4301138A2 (en) 2021-03-05 2024-01-10 Iovance Biotherapeutics, Inc. Tumor storage and cell culture compositions
KR20240037185A (ko) 2021-04-19 2024-03-21 이오반스 바이오테라퓨틱스, 인크. 키메라 공동자극 수용체, 케모카인 수용체, 및 세포 면역치료에서의 이의 용도
EP4340850A1 (en) 2021-05-17 2024-03-27 Iovance Biotherapeutics, Inc. Pd-1 gene-edited tumor infiltrating lymphocytes and uses of same in immunotherapy
WO2023009716A1 (en) 2021-07-28 2023-02-02 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of cancer patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies in combination with kras inhibitors
WO2023049862A1 (en) 2021-09-24 2023-03-30 Iovance Biotherapeutics, Inc. Expansion processes and agents for tumor infiltrating lymphocytes
AR127482A1 (es) 2021-10-27 2024-01-31 Iovance Biotherapeutics Inc Sistemas y métodos para coordinar la fabricación de células para inmunoterapia específica de paciente
WO2023086803A1 (en) 2021-11-10 2023-05-19 Iovance Biotherapeutics, Inc. Methods of expansion treatment utilizing cd8 tumor infiltrating lymphocytes
WO2023147486A1 (en) 2022-01-28 2023-08-03 Iovance Biotherapeutics, Inc. Tumor infiltrating lymphocytes engineered to express payloads
WO2024030758A1 (en) 2022-08-01 2024-02-08 Iovance Biotherapeutics, Inc. Chimeric costimulatory receptors, chemokine receptors, and the use of same in cellular immunotherapies

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5530101A (en) * 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
WO1994026290A1 (en) * 1993-05-07 1994-11-24 Immunex Corporation Cytokine designated 4-1bb ligand and human receptor that binds thereto
DE69435261D1 (de) * 1993-09-16 2010-02-25 Univ Indiana Res & Tech Corp Menschlicher rezeptor h4-1bb

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４（１９９４）ｐ．２２１９−２２２７

Also Published As

Publication number Publication date
ES2185770T3 (es) 2003-05-01
DE69624436D1 (de) 2002-11-28
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JPH09509067A (ja) 1997-09-16
WO1996032495A1 (en) 1996-10-17
US5928893A (en) 1999-07-27
PT766745E (pt) 2003-02-28
EP0766745A1 (en) 1997-04-09
DE69624436T2 (de) 2003-08-28
EP0766745B1 (en) 2002-10-23
DK0766745T3 (da) 2002-11-25

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