SK14497A3

SK14497A3 - Substituted quinazolinic derivatives, a method for producing them, pharmaceutical composition containing them and their use

Info

Publication number: SK14497A3
Application number: SK144-97A
Authority: SK
Inventors: Allan Wissner; Bernard D Johnson; Middleton B Floyd; Douglas B Kitchen
Original assignee: American Cyanamid Co
Priority date: 1996-02-05
Filing date: 1997-02-03
Publication date: 1997-09-10
Also published as: AR005706A1; IL120141A; HU9700344D0; MX9700883A; JP3984319B2; CA2196640C; US5760041A; JPH09221478A; HUP9700344A2; BR9700850A; CN1177833C; HUP9700344A3; CZ293980B6; NO970501L; KR970061877A; CN1161330A; CA2196640A1; NO970501D0; NO308298B1; AU1252897A

Description

Substituované chinazolínové deriváty, spôsob ich výroby, farmaceutický prostriedok s ich obsahom a ich použitie

Oblasť techniky

V

I chinazolínových látok a ich Látky podľa tohto vynálezu proteín-tyrozínových kináz

Vynález sa týka niektorých farmaceutický prijateľných solí. inhibujú pôsobenie niektorých (PTK) receptora rastového faktora, čím inhibujú abnormálny rast niektorých typov buniek. Látky podľa tohto vynálezu sú preto protirakovinové činidlá a sú užitočné na liečenie rakoviny cicavcov. Okrem toho sa tento vynález týka výroby takýchto chinazolínov, ich použitia na liečenie rakoviny a farmaceutických prípravkov, ktoré ich obsahujú.

Doterajší stav techniky

Proteín-tyrozínové kinázy sú triedou enzýmov, ktoré katalyzujú prenos fosfátovej skupiny z ATP na tyrozínový zvyšok umiestnený na proteínovom substráte. Proteín-tyrozínové kinázy jasne hrajú úlohu pri normálnom raste buniek. Mnoho proteínov receptorov rastových faktorov pôsobí ako tyrozínové kinázy a rozlišujú sa týmto procesom, ktorý vykonávajú. Interakcia rastových faktorov s týmito receptormi je potrebná aj pri normálnej regulácii rastu buniek. Za určitých podmienok sa však ako dôsledok buď mutácie alebo nadexpresie tieto receptory stávajú deregulovanými; čoho dôsledkom je nekontrolované množenie sa buniek, ktoré môže viesť k rastu nádoru a nakoniec k chorobe známej ako rakovina [Vilks A. F. , Adv. Cancer Res. , 60., 43 (1993) a Parsons, J. T. ; Parsons, S. J., Important Advances in Oncology, DeVita V. T. Ed. , J. B. Lippincott Co., Phila., 3 (1993)]. Medzi kinázami receptora rastového faktora a ich proto-onkogénmi, ktoré boli identifikované a ktoré sú cieľmi látok podľa tohto vynálezu, sú kináza receptora epidermového rastového faktora (EGF-R kináza, proteínový produkt erbB onkogénu), a produkt tvorený pomocou erbB-2 (tiež označovaný ako neu alebo HER2)

4, onkogénu. Pretože jav fosforylácie je nevyhnutným signálom, aby nastalo delenie buniek, a pretože nadexpresia alebo mutácia kináz sú spojené s rakovinou, inhibítor tohto javu, inhibítor proteín-tyrozínovej kinázy, bude mať terapeutickú hodnotu pri liečení rakoviny a iných chorôb charakterizovaných nekontrolovaným alebo abnormálnym rastom buniek. Napríklad nadexpresia receptorovej kinázy produktu erbB-2 onkogénu sa považuje za spojenú s rakovinou prsníka a vaječníkov ľudí [Salmon, D. J., a spol. Science, 244. 707 (1989) a Science, 235. 1146 (1987)]. Deregulácia EGF-R kinázy sa považuje za spojenú s epidermoidnými tumormi [Reiss, M., a spol., Cancer Res., 51, 6254 (1991)], tumormi prsníka [Macias. A., a spol., Anticancer Res. 7, 459 (1987)], a tumormi zahrnujúcimi iné hlavné orgány [Gullick, V. J., Brit. Med. Bull., 47. 87 (1991) ] . Pre význam úlohy hranej kinázami deregulovaného receptora v patogenéze rakoviny sa mnohé nedávne štúdie zaoberali s vývojom špecifických PTK inhibítorov ako potenciálnych protirakovinových terapeutických činidiel [niektoré nedávne prehľady: Búrke, T. R., Drugs Future, 17 . 119 (1992) a Chang, C. J.; Geahlen, R. L., J. Nat. Prod., 55. 1529 (1992)].

Látkami podľa tohto vynálezu sú niektoré 4-anilinochi nazolíny. V tejto patentovej prihláške je chinazolínový kruhový systém číslovaný tak, ako je označené na vzorci uvedenom nižšie:

Bolo zaznamenané, že ďalšie 4-anilinochinazolíny, ktoré sa líšia aj povahou aj umiestnením substituentov v polohách 5 až 8 v porovnaní s látkami podľa tohto vynálezu, majú PTK inhibičnú aktivitu. Z Európskej patentovej prihlášky 520,722 A1 sú známe niektoré 4-anilinochinazolíny, ktoré obsahujú v polohách 5 až 8 ako substituenty vodík, chlór, trifluórmetyl alebo nitroskupinu. Žiadna z látok vyššie zmienenej prihlášky nemá unikátnu kombináciu substituentov obsiahnutú v látkach podľa tohto vynálezu. Okrem toho stojí za zmienku, že hoci je protirakovinové použitie nárokované pre látky vyššie zmienenej Európskej patentovej prihlášky, nie je poskytnutá demonštrácia protirakovinového účinku in vivo. Z Európskej patentovej prihlášky 566,226 A1 sú známe niektoré 4-anilinochinazolíny, ktoré voliteľne obsahujú v polohách 5 až 8 rôzne substituenty. Žiadna z látok vyššie zmienených prihlášok nemá unikátnu kombináciu substituentov obsiahnutú v látkach podľa tohto vynálezu. Okrem toho stojí za zmienku, že hoci je protirakovinové použitie nárokované pre látky vyššie zmienenej Európskej patentovej prihlášky, nie je poskytnutá demonštrácia protirakovinového účinku in vivo. Jediná in vivo aktivita opísaná vo vyššie zmienenej Európskej patentovej prihláške je inhibícia TGF-alfa stimulovaného rastu hepatocytov potkanov. Z Európskej patentovej prihlášky 635,498 A1 sú známe niektoré 4-anilinochinazolíny, ktoré voliteľne majú v polohe 6 rôzne substituenty, kým v polohe 7 musia mať halogén. Žiadna z látok vyššie zmienenej prihlášky nemá unikátnu kombináciu substituentov obsiahnutú v látkach podlá tohto vynálezu. Okrem toho stojí za zmienku, že hoci je protirakovinové použitie nárokované pre látky vyššie zmienenej Európskej patentovej prihlášky, nie je poskytnutá demonštrácia protirakovinového účinku in vivo. Jediná in vivo aktivita opísaná vo vyššie zmienenej Európskej patentovej prihláške je inhibícia TGF-alfa stimulovaného rastu hepatocytov potkanov. Okrem toho sú známe niektoré chinazolínové inhibítory, ktoré nemajú 4-anilinoskupinu. Z Európskej patentovej prihlášky 602,851 A1 sú známe niektoré chinazolíny, ktoré nemajú anilinoskupinu v polohe 4 a ktoré voliteľne majú v polohách 5 až 8 rôzne substituenty. Žiadna z látok vyššie zmienenej prihlášky nemá unikátnu kombináciu substituentov obsiahnutú v látkach podľa tohto vynálezu. Okrem toho stojí za zmienku, že hoci je protirakovinové použitie nárokované pre látky vyššie zmienenej Európskej patentovej prihlášky, nie je poskytnutá demonštrácia protirakovinového účinku in vivo. Jediná in vivo aktivita opísaná vo vyššie zmienenej Európskej patentovej prihláške je inhibícia TGF-alfa stimulovaného rastu hepatocytov potkanov. Z patentovej prihlášky VO 95/19774 sú známe niektoré heterocykly, ktoré sú inhibítormi PTK, ktoré majú podobný pyrimidínový kruh ako 4-anilinochinazolíny podľa tohto vynálezu. Táto vyššie zmienená prihláška sa nezmieňuje o 4-anilinochinazolínoch ani o unikátnej kombinácii substituentov obsiahnutej v látkach podľa tohto vynálezu. Okrem toho stojí za zmienku, že hoci je protirakovinové použitie nárokované pre látky vyššie zmienenej patentovej prihlášky, nie je poskytnutá demonštrácia protirakovinového účinku in vivo. Z patentovej prihlášky VO 95/157581 sú známe niektoré chinazolíny, ktoré voliteľne obsahujú v polohách 5 až 7 rôzne substituenty. Žiadna z látok vyššie zmienenej prihlášky nemá unikátnu kombináciu substituentov, obsiahnutú v látkach podľa tohto vynálezu. Okrem toho stojí za zmienku, že hoci je protirakovinové použitie nárokované pre látky vyššie zmienenej patentovej prihlášky, nie je poskytnutá demonštrácia protirakovinového účinku in vivo.

Okrem vyššie zmienených patentových prihlášok mnoho publikácii opisuje 4-anilinochinazolíny: Fry, D. V., a spol., Science, 265, 1093 (1994), Rewcastle G. V., a spol., J. Med. Chem. , 38., 3482 (1995) a Bridges A. J. , a spol. , J Med. Chem. , 39. 267 (1996). Žiadna z látok· opísaných v týchto publikáciách nemá unikátnu kombináciu substituentov obsiahnutú v látkach podľa tohto vynálezu. Okrem toho stojí za zmienku, že v týchto správach nie je poskytnutá demonštrácia protirakovinového účinku in vivo.

PTK katalyzuje prenos fosfátovej skupiny z molekuly ATP na tyrozínový zvyšok umiestnený na proteínovom substráte. Inhibítory doteraz v odbore známe sú obvykle konkurenčné buď s ATP alebo s proteínovým substrátom kinázy. Niktoré z týchto inhibítorov, takzvané zmiešané konkurenčné inhibítory pôsobia ako reverzibilné inhibítory. 4-anilinochinazolíny známe v odbore sú reverzibilné inhibítory, ktoré sú konkurenčné s ATP [Fry, D. V., a spol., Science, 265. 1093

- 5 (1994)]. Pretože koncentrácia ATP v bunke je normálne veľmi vysoká (milimolárna), látky, ktoré sú konkurenčné s ATP, môžu mať malú in vivo aktivitu, pretože je nepravdepodobné, že tieto látky by mohli dosiahnuť koncentrácie v bunke, ktoré sú potrebné na nahradenie ATP z jeho miest naviazania. Ako je demonštrované, chinazolínové inhibítory podľa tohto vynálezu majú jedinečnú schopnosť inhibovať tieto PTK ireverzibilným spôsobom a preto so nie-konkurenčné pre ATP alebo proteínový substrát. Látky podľa tohto vynálezu môžu pôsobiť ako ireverzibilné ihibítory účinkom faktu, že môžu tvoriť kovalentné väzby na aminokyselinové zvyšky umiestnené na aktívnom mieste enzýmu. Ako je uvedené nižšie, toto spôsobí zvýšenú terapeutickú užitočnosť látok podľa tohto vynálezu v porovnaní s inhibítormi reverzibilného typu. Zvlášť je ukázané, že je to unikátna povaha a kombinácia substituentov obsiahnutých v látkach podľa tohto vynálezu, ktorá vedie k ireverzibilnému viazaniu inhibítora na enzým. Tieto jedinečné vlastnosti látok podľa tohto vynálezu prispievajú k ich schopnosti inhibovať rast ľudských nádorov v in vivo modeloch rakoviny.

Podstata vynálezu

Tento vynález poskytuje látku vzorca 1:

kde:

X je fenyl výhodne substituovaný jedným alebo viacerými substituentami vybranými zo skupiny pozostávajúcej z halogénu, alkylu s 1 až 6 uhlíkovými atómami, alkoxylu s 1 až 6 uhlíkovými atómami, hydroxyskupiny, trifluórmetylu, kyanoskupiny, nitroskupiny, karboxyskupiny, karboalkoxyskupiny z 2 až 7 uhlíkovými atómami, karboalkylu s 2 až 7 uhlíkovými atómami, aminoskupiny a alkylaminoskupiny s 1 až 6 uhlíkovými atómami;

R a Rl sú každý nezávisle, vodík, halogén, alkyl s 1 až 6 uhlíkovými atómami, alkoxyl s 1 až 6 uhlíkovými atómami , hydroxyl alebo trifluórmetyl;

R je vodík, alkyl s 1 až 6 uhlíkovými atómami, alkoxyl s 1 až 6 uhlíkovými atómami, hydroxyl, trifluórmetyl;

Y je radikál vybraný zo skupiny pozostávajúcej z

a _z

R je nezávisle vodík, alkyl s 1 až 6 uhlíkovými atómami, karboxyl, karboalkoxyskupina s 1 až 6 uhlíkovými atómami, fenyl alebo karboalkyl s 2 až 7 uhlíkovými atómami;

n - 2 až 4;

alebo jej farmaceutický prijateľnú sol, s výhradou že každý

O

R^J v Y môže byl rovnaký alebo rôzny.

Farmaceutický prijateľné soli sú tie, ktoré sú odvodené od organických alebo anorganických kyselín, ako sú napríklad kyseliny: octová, mliečna, citrónová, vínna, jantárová, maleínová, malónová, glukónová, chlorovodíková, bromovodíková, fosforečná, dusičná, sírová, metánsulfónová a podobné známe prijateľné kyseliny.

Alkylové časti alkylových, alkoxylových, karboalkoxylových, karboalkylových a alkylamínových substituentov zahrnujú priamy reťazec ako aj rozvetvené uhlíkové reťazce. Karboxyl je definovaný ako -CO₂H radikál. Karboalkoxyskupina s 2 až 7 uhlíkovými atómami je definovaná ako -CC^R radikál, kde R je alkylový radikál s 1 až 6 uhlíkovými atómami. Karboalkyl je definovaný ako -COR radikál, kde R je alkylový radikál s 1 až 6 uhlíkovými atómami. Ak je X substituovaný, potom je výhodné, ak je to mono-, di- alebo tri-substituovaná skupina, najvýhodnejšie je to monosubstituovaná skupina. Keď látky podlá tohto vynálezu obsahujú asymetrické centrum, pokrýva tento vynález individuálne R a S enantioméry, ako aj racemáty takýchto látok.

Z látok podľa tohto vynálezu výhodné členy zahrnujú

Ί tie, v ktorých R, R a R sú vodíky; a tie, v ktorých R, R a R^ sú vodíky a X je buď nesubstituovaný alebo monosubstituovaný s halogénom alebo alkylom s 1 až 6 uhlíkovými atómami .

Príprava látok podľa tohto vynálezu so vzorcom 9 je opísaná nižšie na Schéme A, kde R, R , R , R , X a n sú definované a R^ je alkyl s 1 až 6 uhlíkovými atómami (výhodne izobutyl), Y’ je radikál vybraný zo skupiny pozostávajúcej z:

kde každý R je nezávisle vodík, alkyl s 1 až 6 uhlíkovými atómami, karboxyl, karboalkoxyskupina s 1 až 6 uhlíkovými atómami, fenyl, alebo karboalkyl s 2 až 7 uhlíkovými atómami. Podľa vyznačenia reakcie uvedeného na schéme A, 5-nitroantranilonitril so vzorcom 2 sa zahrieva na asi 100 °C, s rozpúšťadlom alebo bez neho, ktoré obsahuje prebytok dimetylformamid-dimetylacetálu na vytvorenie amidínu so vzorcom 3. Zahrievanie roztoku amidínu 3 a anilínu 4 v kyseline octovej počas 1 až 5 hodín poskytne 6-nitro-4-anilinochinazolíny so vzorcom 5. Redukcia nitroskupiny látky 5 za použitia redukčného činidla, ako je napríklad železo v zmesi kyselina octová-alkohol pri zvýšenej teplote poskytne 6-amino-anilinochinazolíny so vzorcom 6. Acylácia 6 buď s chloridom kyseliny so vzorcom 7 alebo zmiešaným anhydridom so vzorcom 8 (ktorý sa pripraví zo zodpovedajúcej karboxylovej kyseliny) v inertnom rozpúšťadle, ako je napríklad tetrahydrofurán (THF) v prítomnosti organickej zásady, ako je napríklad pyridín alebo trietylamín, poskytne látky podlá tohto vynálezu predstavované vzorcom 9. V tých prípadoch, kde 7 alebo 8 majú asymetrický uhlíkový atóm, môžu sa použiť ako racemáty alebo ako jednotlivé R a S enantioméry, v tom prípade látky podľa tohto vynálezu budú v racemickej alebo R a S opticky aktívnej forme. 5-nitro-antranilonitrily so vzorcom 2 potrebné na prípravu látok podlá tohto vynálezu sú buď už známe v tomto odbore alebo sa môžu pripraviť metódami známymi v tomto odbore, ako je podrobne uvedené v nasledujúcich odRecl. Tráv. Chim. Pays-Bas, 43., 710 (1924); Tráv. Chim. Pays-Bas, 65 , 468, 469 (1046);

J. Amer. Chem Soc., 82., 6058, 6063 (1960);

J. Amer. Chem Soc., 82.

kazoch: Baudet. Hartmans, Recl Taylor a spol. Taylor a spol.

3152, 3154 (1960);

Deshpande; Seshadri, Indián J. Chem. 11, 538 (1973); Katritzki, Alan.R.; Laurentzo, Kathleen S., J. Org. Chem., 51. (1986); Niclas, Hans-Joachim; Bohle, Matthias; Riek, Jens-Detlev; Zeuner, Frank; Zoelch, Lothar, Z. Chem., 25(4), 137 až 138 (1985).

Schéma A

(CH3)₂NCH(OCH₃)2

DMF

X-NH₂

CH₃CO₂H, (3)

Fe

CH₃CO₂H, C₂H₅OH

(5)

Príprava látok podľa tohto vynálezu so vzorcom 12 je “I O Q opísaná nižšie na Schéme B, kde R, R , R , R , X a n sú ako je opísané vyššie. R^ sú nezávisle vodík, fenyl alebo alkyl s 1 až 6 uhlíkovými atómami. Podľa vyznačenia reakcie uvedeného v Schéme B, 6-amino-anilinochinazolíny so vzorcom 10 (pripravené ako je uvedené na Schéme A) sa acylujú s cyklickým anhydridom so vzorcom 11 v inertnom rozpúšťadle, ako je napríklad tetrahydrofurán, v prítomnosti organického zásaditého katalyzátora, ako je napríklad pyridín alebo trietylamín.

* ιό Schéma B

Reprezentatívne látky podľa tohto vynálezu sa hodnotili vo viacerých štandardných farmakologických testovacích postupoch, ktoré ukázali, že látky podľa tohto vynálezu majú významnú aktivitu ako inhibítory proteín-tyrozínových kináz, a sú činidlami proti bujneniu. Na základe aktivity ukázanej v štandardných farmakologických testovacích postupoch sú látky podľa tohto vynálezu užitočné ako antineoplastické činidlá. Použité testovacie postupy a získané výsledky sú uvedené nižšie.

Príprava látok podľa tohto vynálezu so vzorcom 19 je opísaná nižšie v Schéme C, kde Y’, R^ a X sú opísané vyššie. Podľa reakcií vyznačených na Schéme C sa 4-chlór-6nitrochinazolín 13 (Morley, J. S. a Simpson, J. Chem Soc., 360 (1948)) redukuje na 6-amino-4-chlórchinazolín 14, za použitia redukujúceho činidla, ako je napríklad hydrogénsiričitan sodný, v dvojfázovom systéme pozostávajúcom z tetrahydrofuránu a vody v prítomnosti malého množstva katalyzátora fázového prenosu. Acylácia látky 14 buď s chloridom kyseliny so vzorcom 15 alebo so zmiešaným anhydridom so vzorcom 16 (ktorý sa pripraví zo zodpovedajúcej karboxylovej kyseliny) v inertnom rozpúšťadle, ako je napríklad tetrahydrofurán (THF), v prítomnosti organickej zásady, ako je napríklad pyridín alebo N-metylmorfolín, poskytne látky so vzorcom 17. V tých prípadoch, kde 15 alebo 16 majú majú asymetrický uh•4 =-11líkový atóm, môžu sa použiť ako racemáty alebo ako jednotlivé R a S enantioméry, v tom prípade látky podľa tohto vynálezu budú v racemickej alebo R a S opticky aktívnej forme. Zahrievanie látky so vzorcom 17 s anilínom so vzorcom 18 v inertnom rozpúšťadle, ako je napríklad izopropanol, poskytne látky podľa tohto vynálezu predstavované vzorcom 19.

Schéma C

Y’—

Cl (15) or

Y·

THF, pyridín alebo N-metylmorfolín

OCO R <16)

(17) x-nh₂ <18) (CH₃)₂CHOH

Príprava látok podľa tohto vynálezu opísaná nižšie na Schéme D, kde Y’, R^ a šie. Podľa reakcií vyznačených na Schéme látky 20 (pripravenej ako je uvedené na Schéme A) redukuje na zodpovedajúcu aminozlúčeninu 21 za použitia paládiového katalyzátora a zdroja vodíka, ktorým môže byť vodík samotný alebo cyklohexén. Acylácia látky 21 buď s chloridom kyseliny so vzorcom 26 je X sú opísané vyšD sa nitroskupina so vzorcom 22 alebo so zmiešaným anhydridom so vzorcom 23 (ktorý sa pripraví zo zodpovedajúcej karboxylovej kyseliny) v inertnom rozpúšťadle, ako je napríklad tetrahydrofurán (THF) , v prítomnosti organickej zásady, ako je napríklad pyridín alebo N-metylmorfolín, poskytne látky so vzorcom 24. V tých prípadoch, kde 22 alebo 23 majú majú asymetrický uhlíkový atóm, môžu sa použiť ako racemáty alebo ako jednotlivé R a S enantioméry, v tom prípade látky podľa tohto vynálezu budú v racemickej alebo R a S opticky aktívnej forme. Zahrievanie látky so vzorcom 24 s anilínom so vzorcom 25 v inertnom rozpúšťadle, ako je napríklad kyselina octová, poskytne látky podľa tohto vynálezu predstavované vzorcom 26.

Schéma D

0₂N •C N

N^N(CH₃)₂ cyklohexén CH₃OH, Pd/C

H₂N .C N ^^KN^N(CH₃)2 (21) (20)

(22) (23)

THF, pyridín alebo (C₂H₅)₃N .C N

H^N(CH₃)₂ (24)

H₂N-X (25) kyselina octová

(26)

Inhibícia kinázy (EGF-R) receptora epidermového rastového faktora

Testované látky sa hodnotili z hľadiska schopnosti inhibovaf fosforyláciu tyrozínového zvyšku na peptidovom substráte katalyzovanú enzýmom kináza receptora epidermového rastového faktora. Peptidový substrát (RR-SRC) mal sekvenciu arg-arg-leu-ile-glu-asp-ala-glu-tyr-ala-ala-arg-gly. Enzým sa získal ako membránový extrakt buniek A431 (American Type Culture Collection, Rockville, MD) . Bunky A431 sa pestovali v bankách T175 na 80 % splynutie. Bunky sa dva krát premyli fosfátom pufrovanou soľankou (PBS) bez Ca^ . Banky sa rotačné trepali 1,5 hodiny v 20 ml PBS s 1.0 mmol/1 kyselinou etyléndiamíntetraoctovou (EDTA) pri laboratórnej teplote a centrifugovali sa pri 600xg počas 10 minút. Bunky sa solubilizovali v 1 ml na 5 x 10^ buniek v studenom lýzovacom pufri (10 mmol/1 kyselina 4-(2-hydroxyetyl)-1-piperazínetánsulfónová (HEPES), pH 7,6, 10 mmol/1 NaCl, 2 mmol/1 EDTA, 1 mmol/1 .fenylmetylsulfonylfluorid (PMSF), 10 mg/ml aprotinín, 10 mg/ml leupeptín, 0,1 mmol/1 ortovanadičnan sodný) v Dounceovom homogenizátore s 10 kmitmi na ľade. Lyzát sa centrifugoval pri 600xg počas 10 minút najprv na očistenie od zlomkov buniek a supernatant sa ďalej centrifugoval pri lOOOOOxg počas 30 minút pri 4 °C. Membránová peleta sa suspendovala v 1,5 ml HNG pufra (50 mmol/1 HEPES, pH 7,6, 125 mmol/1 NaCl, 10 % hmotnostných glycerolu). Membránový extrakt sa rozdelil na alikvóty, ihneď sa zmrazil v kvapalnom dusíku a uložil sa pri -70 C.

Pripravili sa zásobné roztoky testovaných látok 10 mg/ml v 100 % dimetylsulfoxide (DMSO). Pred experimentom sa zásobné roztoky riedili na 500 mmol/1 s pufrom (30 mmol/1 HEPES, pH 7,4) a potom sa pripravila séria zriedení na požadovanú koncentráciu.

Alikvót A431 membránového extraktu (10 mg/ml) sa zriedil s 30 mmol/ HEPES (pH 7,4) tak, aby poskytol koncentráciu proteínu 50 ug/ml. Do 4 μΐ enzýmového prípravku sa pridal EGF (1 μΐ pri 12 pg/ml) a inkuboval sa počas 10 minút na ľa- 14 de, nasledovali 4 μΐ testovanej látky alebo pufra; táto zmes sa inkubovala na ľade počas 30 minút. Pridal sa k nej 33p_ATP (370 MBq/ml) zriedený 1:10 v skúšobnom pufri spolu so substrátovým peptidom pri koncentrácii 0,5 mmol/1 (kontrolné reakcie bez testovanej látky) a reakcia sa nechala prebiehal počas 30 minút pri 30 °C. Reakcia sa zastavila s 10 % hmotnostných TCA a nechala sa na ľade počas najmenej 10 minút po ktorých sa skúmavky mikrocentrifugovali pri plnej rýchlosti počas 15 minút. Podiely zo supernatantov sa naniesli ako škvrny na P81 fosfocelulózové disky a premyli

I sa dva krát s roztokom 1 % hmotnostné kyseliny octovej a potom vodou počas 5 minút, po čom nasledovalo scintilačné meranie. Inhibičné údaje pre reprezentatívne látky podľa tohto vynálezu sú uvedené nižšie v Tabuľke 1. IC^q sú koncentrácie testovanej látky potrebné na zníženie celkového množstva fosforylovaného substrátu na 50 %. Percento inhibície testovanej látky sa určilo pre najmenej tri rôzne koncentrácie a hodnoty IC^q sa vyhodnotili z krivky odozvy na dávku. Percento inhibície sa hodnotilo podľa nasledujúceho vzorca:

%inhibície = 100 - [CPM(liečivo)/CPM(kontrolná vzorka)]xl00 kde CPM(liečivo) je v jednotkách impulzy za minútu a je to číslo predstavujúce množstvo rádioaktívne označeného ATP a a (g- P) včleneného na RR-SRC peptidovom substráte pomocou enzýmu po 30 minútach pri 30 °C v prítomnosti testovanej látky podľa scintilačného merania. CPM(kontrolná vzorka) je v jednotkách impulzy za minútu a je to číslo predstavujúce množstvo rádioaktívne označeného ATP (g- ^JP) včleneného na RR-SRC peptidovom substráte pomocou enzýmu po 30 minútach pri 30 °C v neprítomnosti testovanej látky podlá scintilačného merania. CPM hodnoty sa korigovali na hodnoty pozadia poskytované pre ATP bez prítomnosti enzymatickej reakcie. IC_5Q hodnoty uvedené v Tabuľke 1 sú priemery z uvedeného počtu uskutočnených testov.

Tabuľka 1

Inhibícia kinázy (EGF-R) receptora epidermového rastového faktora

Látka		^IC50 (μπιοί/ΐ)	Počet testov
Príklad	4	0,012	5
Príklad	5	0,198	4
Príklad	6	0,500	1
Príklad	7	0,05	1
Príklad	8	0,04	2
Príklad	9	0,002	20
Príklad	10	0,11	2
Príklad	11	0,056	4
Príklad	13	10⁷	1
Príklad	14	1,2	1

Stanovenie kovalentného viazania testovanej látky na kinázu receptora epidermového rastového faktora

Alikvót A431 enzýmového extraktu (pripraveného ako je opísané vyššie) sa zriedil na 50 až 100 μg/ml s 30 mmol/1 HEPES pufrom s pH 7,4, ktorý obsahoval‘EGF s koncentráciou 12 gg/ml tak, že za štandardných testovacích podmienok bude prebiehať reakcia asi na 2 % a konečná EGF koncentrácia.j e 2,4 pg/ml (ako v štandardnej skúške opísanej vyššie). Táto zmes sa pred použitím inkubovala najmenej 10 minút pri 4 °C. Tento enzýmový preparát sa použil pre nasledujúce dialýzne testovacie postupy.

K 60 μΐ enzýmového prípravku sa pridalo 48 μΐ testovanej látky rozpustenej v 5 % dimetylsulfoxide (DMSO) (alebo len 48 μΐ 5 % DMSO pre kontrolnú vzorku). Koncentrácie testovanej látky sa vybrali tak, aby boli 20 až 100 krát nad IC_5Q hodnotou na zabezpečenie ideálne 80 až 90 % inhibície.

Roztok inhibítora enzýmu, sa inkuboval počas 45 až 60 minút pri 4 °C. Pre nedialyzované kontrolné testovacie postupy sa hodnotil 9 μΐ alikvót roztoku ihibitora enzýmu podľa štandardného postupu opísaného vyššie. Pre dialyzované testovacie postupy sa 60 μΐ alikvót roztoku ihibitora enzýmu umiestnil do studne Pierce Microdialyzer System 100 a dialyzoval sa pri 4 °C oproti 30 mmol/1 HEPES, ktorý obsahoval 1,25 μg/ml EGF, počas 24 hodín s dvoma výmenami pufra (minimum 3 hodiny dialýzy pred každou výmenou). Použili sa membrány na molekulovú hmotnosť 8000. Alikvót 9 μΐ (najmenej dve opakovania) dialyzovaného roztoku sa hodnotili na aktivitu podľa štandardného postupu, ktorý je opísaný vyššie. Enzým bez prídavku testovanej látky si zachoval po dialýze 50 až 90 % svojej počiatočnej aktivity. Dialyzované roztoky testovanej látky bez pridaného enzýmu sa tiež vyhodnocovali na ubezpečenie, že látky sú dialyzovateľné.

Ak enzymatická aktivita nie je po dialýze obnovená, potom sa zistilo, že testovaná látka sa viaže kovalentne (nevratná inhibícia). Ak sa po dialýze aktivita enzýmu do značnej miery obnoví, potom sa zistilo, že testovaná látka nie je viazaná kovalentne (reverzibilná inhibícia). Výsledky stanovení kovalentného viazania sa môžu vyjadriť ako % obnovenej aktivity, ktoré sa vypočíta pomocou nasledujúceho vzorca, ktorý využíva % inhibície pred dialýzou a po nej:

% obnovenej % inhib. pred dial. - % inhib. po dial.

aktivity = -——- x 100 % inhibície pred dialýzou

Hodnota pre % obnovenej aktivity blízko 100 % indikuje nekovalentne viazanie (reverzibilná inhibícia). Hodnota pre % obnovenej aktivity veľmi pod 100 % indikuje kovalentné viazanie (ireverzibilná inhibícia). Výsledky získané pre stanovenie kovalentného viazania na EGF-R kinázu pre reprezentatívne látky podľa tohto vynálezu sú uvedené nižšie v Tabulke 2. Pre účely porovnania poskytuje Tabuľka 2 tiež údaje pre N-(3-brómfenyl)-6,7-dimetoxy-4-chinazolínamín. Tento chinazolínový inhibítor bol identifikovaný ako silný inhibítor EGF-R kinázy (1994); Rewcastle (1995) a Bridges spol., Science, 265. 1093 J. Med. Chem. , 38., 3482, J. Med. Chem., 39, 267 [Fry, D. V. a G. V. a spol.,

A. J . a spol. , (1996)] a je zahrnutý v Európskej patentovej prihláške 566,226 A1. Výsledky opakovaných nezávislých hodnotení pre každú hodnotenú látku sú uvedené v Tabuľke 2:

Tabuľka 2

Látka	% obnovenej	aktivity	Záver
Príklad 4	20	11	17	kovalentne (ireverzibilné viazanie)
Príklad 9 N-(3-brómfenyl)-6,7-	9	4		kovalentne (ireverzibilné viazanie) nekovalentne
dimetoxy-4-chinazo- línamín	102	70	107	(reverzibilné viazanie)

Výsledky v Tabuľke 2 ukazujú, že látky podľa tohto vynálezu inhibujú EGF-R kinázu ireverzibilným spôsobom, pričom tvoria kovalentné spojenie na aminokyselinový zvyšok umiestnený na enzýme. Vzhľadom na to sú významne odlišné od obvyklých 4-anilinochinazolínov, ako je napríklad N-(3-brómfenyl)-6,7-dimetoxy-4-chinazolínamín, ktorý sa viaže reverzibilným spôsobom. Ako bude načrtnuté nižšie, tento rozdiel schopnosti viazania medzi látkami podľa tohto vynálezu a obvyklými chinazolínovými inhibítormi doteraz známymi v odbore, vedie k významne zlepšenej biologickej aktivite a preto k väčšej terapeutickej užitočnosti.

Π

Inhibícia rastu buniek podľa merania zabudovania [^Hj-tymidínu

Reprezentatívne látky podľa tohto vynálezu sa hodnotili z hľadiska schopnosti inhibovať rast bunkových kmeňov opísaných nižšie in vitro. Inhibícia sa kvantifikuje meraním poklesu zabudovania rádioaktívne označeného tymidínu, ak sa bunky pestujú v prítomnosti inhibítora. A431 a SKBR3 bunkové kmene sa získali z American Type Culture Collection, Rockville, MD. Neu-3T3 bunky sa získali transfekovaním NIH3T3 myších fibroblastov s aktivovaným potkaním Neu onkogénom. NHEK bunky sa získali z Clonetics (San Diego, CA). Bunky sa rutinne pestovali vo vlhčenom inkubátore v 5 % hmotnostných CC>2 vo vzduchu. Tieto bunkové kmene sú závislé od rastových faktorov, ktoré sú ligandami pre receptorové tyrozínkinázy, ktoré sú cieľmi látok podľa tohto vynálezu, a majú nasledujúce charakteristiky:

A431: Bunky ľudského epidermoidného karcinómu s nadexpresiou EGFR

Neu-3T3: NIH 3T3 bunky transfekované s aktivovaným

Neu onkogénom

NHEK: EGF-závislé normálne ludské epidermové keratinocyty

SKBR3: Bunky ľudského karcinómu prsníka s nadexpresiou ErbB2 génu

Bunkové kmene sa pestovali vo vhodnom prostredí opísanom nižšie A431:

Neu-3T3:

SKBR3:

Dulbeccovo modifikované Eagles médium, vysokoglukózové, BRL/Gibco (10 % fetálne hovädzie sérum (FBS), glutamín, penicilín-streptomycín

Dulbecco R., Freeman G. Virology 8, 396 (1959). Dulbeccovo modifikované Eagles médium, vysokoglukózové, (10 % fetálne hovädzie sérum (FBS), Glutamín, Penicilín-streptomycín

Roswell Park Memoriál Inštitúte 1640 V/GLU (10 % FBS, GLU, PS)

Moore G.E., Gerner, R.E. a Franklin H.A., A.M.A. 199. 516 (1967).

NHEK: Keratinocytové rastové médium, Clonetics

Boyce S.T. a ham R.G. , In Vitro 17 , 239 (Súhrn č. 159) (1981).

Bunky boli naočkované v množstve 10000 buniek na kalíšok na 96 kalíškové platne s úplným prostredím a nechali sa rásť do log fázy. V tomto stupni sa úplné prostredie nahradilo s prostredím 0,5 % FBS (pre bunky rastúce v 10 % FBS) alebo prostredím s chýbajúcim epidermovým rastovým faktorom (EGF) (pre bunky rastúce v prostredí bez séra). Po inkubácii počas noci v nízkosérovom prostredí (alebo v prostredí s chýbajúcim EGF), sa pridali látky, ktoré sa vyhodnocovali a bunky zostali v prítomnosti látok počas 48 až 72 hodín. Prostredie s testovanou látkou sa potom odstránilo a späť sa pridalo úplné prostredie. Bunky sa nechali rásť počas 18 hodín. Potom nasledovala inkubácia v [Hjtymidíne (37 MBq/ml v sérum/EGF prostredí) počas 4 hodín. Bunky sa lyžovali v 0,5 mol/1 NaOH počas najmenej 30 minút pri 37 ^eC a analyzovala sa rádioaktivita.

Údaje o inhibícii rastu buniek sú uvedené nižšie v Tabuľke 3. IC50 k°^ncen'^trácia testovanej látky potrebná na

Q zmenšenie množstva zabudovaného [^JH]tymidínu na 50 %. Percento inhibície hodnotenou látkou sa určilo pre najmenej tri rôzne koncentrácie a IC^q sa vyhodnotili z krivky odozvy na dávku. Percento inhibície sa hodnotilo podľa nasledujúceho vzorca:

%inhibície = 100 - [CPM(liečivo)/CPM(kontrolná vzorka)jxlOO

Kde CPM(liečivo) je v jednotkách impulzy za minútu a je to číslo vyjadrujúce množstvo [^Hjtymidínu zabudovaného do DNA, keď bunky rástli v prítomnosti testovanej látky, podľa merania kvapalným scintilátorom. CPM(kontrolná vzorka) je v jednotkách impulzy za minútu a je to číslo vyjadrujúce množstvo

-α , [^JH]tymidínu zabudovaného do DNA, keď bunky rástli v neprítomnosti testovanej látky, podľa merania kvapalným scintilátorom.

Tabuľka 3

Inhibícia rastu buniek podľa merania zabudovania [^H]-tymidínu

Látka	A431 (gmol/l)	SKBR3 (gmol/l)	NHEK (gmol/l)	NEU3T3 (gmol/l)
Príklad	4	0,07	>50	0,17	>50
Príklad	5	0,825	0.30	0,17	10
Príklad	6	27	>50	4,5	>50
Príklad	7	0,45	5,5	0,45	7,5
Príklad	8	0,22	7	0,5	0,3
Príklad	9	0,011	1,057	0,002	0,002
Príklad	10	60	>50	>50	15
Príklad	11	0,8	4	0,85	0,4

In vivo inhibícia rastu ľudských epidermoidných tumorov (A431)

BALB/c nu/nu samičky myší (Charles River, Vilmington, MA) boli použité pri in vivo štandardných farmakologických testovacích postupoch. Ľudské epidermoidné karcinómové bunky A-431 (American Type Culture Collection, Rockville, Maryland # CRL-155) sa pestovali in vitro tak, ako je opísané vyššie. Jednotky 5x10^ buniek sa injektovali subkutánne do myší. Keď tumor dosiahol veľkosť 100 až 150 mg, boli myši náhodne rozdelené do liečebných skupín (deň nula). Myši sa liečili IP jeden raz denne buď v dňoch 1, 5 a 9 alebo v dňoch 1 až 10 po zistení závažného nádoru s dávkami buď 80, 40 alebo 20 mg/kg/dávku hodnotenej látky v 0,2 % Klucelovom roztoku.

Kontrolné zvieratá nedostávali liečivo. Hmotnosť tumoru sa určila každých 7 dní [(dĺžka x šírka )/2] počas 28 dní po zistení závažného hmotnosť tumoru v hmotnosťou tumoru nádoru. Relatívny rast tumoru (priemerná dňoch 7, 14, 21 a 28 podelená priemernou v deň nula) sa určili pre každú liečenú skupinu. Hodnota %T/C (tumor/kontrol) sa určila delením relatívneho rastu tumoru liečenej skupiny relatívnym rastom tumoru placebovej skupiny a násobením 100. Látka sa považuje za aktívnu, ak sa zistí %T/C 42%.

Inhibičné výsledky získané pre látku 9 sú uvedené nižšie v Tabuľke 4.

Tabulka 4

In vivo inhibícia rastu ľudských epidermoidných tumorov (A431) na myšiach látkou z Príkladu 9

Dávka(mg/ kg/dávku^a)	RTG^b	%T/C^c	RTG^b	%T/C	RTG^b	%T/C	RTG^b	%T/C	S/T^d

IP	deň 7	deň 14	deň 21	deň 28
♦kontrola	3,68	7,91	11,41	15,04	10/10
*80	0,71	18	0,91	11	1,07	9	1,36	9	5/5
»40	1,48	40	2,23	28	3,05	27	4,04	27	5/5
*20	1,72	47	2,69	34	4,33	38	6,18	41	5/5
* *20	0,75	20	1,01	13	1,25	11	2,53	17	5/5

a) Liečivo podávané IP v dňoch 1, 5, 9 * alebo v dňoch 1'až **

Priemerná hm. tumoru v deň 7,14,21,28

b) Relat.rast tumoru=Priemerná hm. tumoru v deň 0 relatívny rast tumoru liečenej skupiny

c) %T/C = - x 100 relatívny rast tumoru placebo skupiny

d) S/T = počet prežívajúcich/počet liečených v deň +28 po zistení závažného tumoru.

Schopnosť látky z Príkladu 9 a N-(3-brómfenyl)-6,7-dimetoxy-4-chinazolínamínu inhibovať rast ľudských epidermoidných tumorov (A431) in vivo sa porovnáva nižšie v Tabuľke 5. N-(3-brómfenyl)-6,7-dimetoxy-4-chinazolínamín bol vybraný ako porovnávacia látka, pretože tento chinazolínový inhibítor bol identifikovaný ako silný inhibítor EGF-R kinázy [Fry, D. V. a spol., Science, 265. 1093 (1994); Rewcastle G. V. a spol. , J. Med. Chem. , 3.8, 3482, (1995) a Bridges A. J. a spol., J. Med. Chem., 39., 267 (1996)] a je zahrnutý v Európskej patentovej prihláške 566,226 A1.

Tabuľka 5

Porovnanie inhibície in vivo látkou z Príkladu 9 a N-(3brómfenyl)-6,7-dimetoxy-4-chinazolínamínom rastu ludských epidermoidných tumorov (A431) na myšiach. Dávka 20 mg/kg/dávku IP

Látka	RTG^b	%T/C^c	RTG^b	%T/C	RTG^b	%T/C	RTG^b	%T/C	S/T^d
deň 7	deň 14	deň 21	deň 28
* kontrola	3,1	5,65	7,79	10,3	10/10
Príklad 9	1,11	35	1,26	22	1,51	19	2,55	22	14/15
* *	3,03	95	6,58	116	10,5	128	14,47	140	15/15

* * N-(3-brómfenyl)-6,7-dimetoxy-4-chinazolínamín

a) Liečivo podávané IP v dňoch 1 až 15.

Priemerná hm. tumoru v deň 7,14,21,28

b) Relat.rast tumoru^Priemerná hm. tumoru v deň 0 relatívny rast tumoru liečenej skupiny

c) %T/C = - x 100 relatívny rast tumoru placebo skupiny

Ako vidno v Tabuľkách 4 až 5 látky podľa tohto vynálezu inhibujú rast ľudských tumorov u cicavcov a sú teda užitočné ako antineoplastické činidlá. Z tohto hľadiska existuje výrazný rozdiel oproti obvyklým 4-anilinochinazolínom, ako je napríklad N-(3-brómfenyl)-6,7-dimetoxy-4-chinazolínamín, ktorý je bez antineoplastickej aktivity.

Schopnosť látky z Príkladu 9 inhibovať rast ľudských epidermoidných tumorov (A431) in vivo sa porovnávala so štrukturálne podobnými látkami N-[4-[(3-metylfenyl)araino]-6chinazolinyl]-7-fluór-2-propénamidom (označovaný ako Porovnanie A) a N-[4-[(3-brómfenyl)amino]-6-chinazolinyl]butánamid (označovaný ako Porovnanie B), ktoré sú pokryté Európskymi patentovými prihláškami 635,488 A1 a 566,226 A1. Výsledky týchto porovnaní sú uvedené v Tabuľkách 6 a 7.

Tabuľka 6

Porovnanie inhibície in vivo látkou z Príkladu 9 a N-[4-[(3metylfenyl)amino]-6-chinazolinyl]-7-fluór-2-propénamidom (Porovnanie A) rastu ľudských epidermoidných tumorov (A431) na myšiach.

Látka	RTG^b	%T/C^c	RTG^b	%T/C^c	RTG^b	%T/C^c	S/T^d
deň 7	deň 14	deň 21
kontrola	5,52	11,63	7,79	10/10
Príklad 9 (80 mg/kg)	1,25	18*	2,50	21*	3,77	24*	10/10
Porovnanie A (80 mg/kg)	3,39	61	5,60	48	7,68	48	10/10
Príklad 9 (20 mg/kg)	0,79	14*	1,39	12*	2,55	16*	10/10
Porovnanie A (20 mg/kg) íA	4,82	87	7,36	63	8,75	56	9/10

a) Liečivo podávané IP. Dávky kontrolnej skupiny a 80 mg/kg sa podávali v dňoch 1,5 a 9; dávky 20 mg/kg v dňoch 1 až 10.

Priemerná hm. tumoru v deň 7,14,21

b) Relat.rast tumoru = -^;Priemerná hm. tumoru v deň 0 relatívny rast tumoru liečenej skupiny

c) %T/C = - x 100 relatívny rast tumoru placebo skupiny

d) S/T = počet prežívajúcich/počet liečených v deň +21 po zistení závažného tumoru.

* označuje štatistickú významnosť p < 0,01.

Tabuľka 7

Porovnanie inhibície in vivo látkou z Príkladu 9 a N-[4-[(3brómfenyl)amino]-6-chinazolinyl]-butánamidom (Porovnanie B) rastu ľudských epidermoidných tumorov (A431) na myšiach.

Látka	RTG^b	%T/C^c	RTG^b	%T/C	RTG^b	%T/C	RTG^b	%T/C	S/T^d
deň 7	deň 14	deň 21	deň 28
kontrola	3,56	5,55	5,85 4	7,63	10/10
Príklad 9 (80 mg/kg)	0,89	25*	1,50	27*	2,44	42*	3,45	45*	5/5.
Porovn. B (80 mg/kg)	3,37	95	5,43	98	6,21	106	10,26	142	5/5
Porovn. B (20 mg/kg)	2,90	81	4,19	75	5,62	96	8,04	105	5/5

Priemerná hm. tumoru v deň 7,14,21,28

b) Relat.rast tumoru = ——Priemerná hm. tumoru v deň 0 relatívny rast tumoru liečenej skupiny

c) %T/C = -_:--—-^:- x 100 relatívny rast tumoru placebo skupiny

* označuje štatistickú významnosť p < 0,01.

Získané výsledky v Tabuľkách 6 a 7 ukazujú, že látka z Príkladu 9, reprezentatívna látka podlá tohto vynálezu, významne (p < 0,01) inhibuje rast ľudského epidermoidného tumoru in vivo. Štrukturálne najbližšie látky z Európskych patentových prihlášok 635,488 A1 (Porovnanie A) a 566,226 A1 (Porovnanie B) boli podstatne menej aktívne, než látka z Príkladu 9 a obe nedokázali významne znížiť rast tumoru pri oboch testovaných dávkach.

Na základe výsledkov získaných pre reprezentatívne látky podľa tohto vynálezu sú látky podľa tohto vynálezu zvlášť užitočné na liečenie, inhibovaním rastu alebo likvidovaním neoplaziem. Konkrétne sú látky podľa tohto vynálezu užitočné na liečenie, inhibovaním alebo likvidovaním neoplaziem, ktoré majú expresiu EGF-R, ako sú napríklad neoplazmy prsníka, obličiek, močového mechúra, úst, larynxu, pažeráka, žalúdka, hrubého čreva, vaječníkov alebo pľúc.

Látky podľa tohto vynálezu sa môžu pripraviť čisté alebo sa môžu pre podávanie kombinovať s jedným alebo viacerými farmaceutický prijateľnými nosičmi. Napríklad rozpúšťadlá, zried’ovadlá a podobne, a môžu sa podávať orálne vo formách, ako sú napríklad tablety, kapsule, dispergovatelné prášky, granule, alebo suspenzie obsahujúce napríklad od asi 0,05 do 5 % hmotnostných suspendujúceho činidla, sirupy obsahujúce napríklad od asi 10 do 50 % hmotnostných cukru, elixíry obsahujúce napríklad od asi 20 do 50 % hmotnostných etanolu a podobne, alebo parenterálne vo forme sterilného injektova26 teľného roztoku alebo suspenzie obsahujúcej od asi 0,05 do 5 % hmotnostných suspendujúceho činidla v izotonickom prostredí. Takéto farmaceutické prípravky môžu obsahoval, napríklad od asi 0,05 do asi 90 % hmotnostných aktívnej zložky v spojení s nosičom, obvyklejšie medzi asi 5 % hmotnostných a 60 % hmotnostných.

Účinná dávka použitej aktívnej zložky sa môže menil v závislosti od konkrétnej použitej látky, spôsobu podávania a závažnosti liečeného stavu. Vo všeobecnosti sa však uspokojivé výsledky získali, ak sa látky podľa tohto vynálezu podávali v dennej dávke od asi 0,5 do asi 1000 mg/kg telesnej hmotnosti, voliteľne podávané v delených dávkach dva až štyri krát denne, alebo vo forme so spomaleným uvoľňovaním. Pre väčšinu velkých cicavcov je celková denná dávka od asi 1 do 1000 mg, výhodne od asi 2 do 500 mg. Dávkové formy vhodné pre interné použitie zahrnujú od asi 0,5 do 1000 mg aktívnej látky v tesnej zmesi s tuhým alebo kvapalným farmaceutický prijateľným nosičom. Tento dávkový režim sa môže upravil tak, aby poskytol optimálnu terapeutickú odozvu. Napríklad sa môže niekoľko rozdelených dávok podával denne alebo sa dávka môže proporcionálne znížil podľa indikácie požiadavkami terapeutickej situácie.

Tieto aktívne látky sa môžu podával orálnou ako aj intravenóznou, intramuskulárnou, alebo subkutánnou cestou. Tuhé nosiče zahrnujú škrob, laktózu, hydrogénfosforečnan vápenatý, mikrokryštalickú celulózu, sacharózu a kaolín, kým kvapalné nosiče zahrnujú sterilnú vodu, polyetylénglykoly, neiónové povrchovoaktívne látky a jedlé oleje, ako sú kukuričný, podzemnicový a sézamový olej, ako je vhodné pre povahu aktívnej zložky a konkrétnu formu požadovaného podávania. Obvykle používané adjuvanty na prípravu farmaceutických zmesí sa môžu výhodne zahrnúl, ako napríklad ochucovacie činidlá, farbiace činidlá, konzervačné činidlá a antioxidanty, napríklad vitamín E, kyselina askorbová, BHT a BHA.

Výhodné farmaceutické zmesi z hladiska ľahkej prípravy a podávania sú tuhé zmesi, zvlášl tablety a kapsule plnené tuhou látkou alebo kvapalinou. Výhodné je orálne podávanie týchto látok.

V niektorých prípadoch môže byť žiadúce podávať látky priamo do dýchacích ciest vo forme aerosólu.

Tieto aktívne látky sa tiež môžu podávať parenterálne alebo intraperitoneálne. Roztoky alebo suspenzie týchto aktívnych látok ako voľných zásad alebo farmaceutický prijateľných solí sa môžu pripraviť vo vode vhodne zmiešané s povrchovoaktívnou látkou, ako je napríklad hydroxy-propylcelulóza. Disperzie sa tiež môžu pripraviť v glycerole, kvapalných polyetylénglykoloch a ich zmesiach v olejoch. Za obyčajných podmienok uskladnenia a použitia obsahujú tieto prípravky konzervačné látky na zabránenie rastu mikroorganizmov .

Farmaceutické formy vhodné na injektovateľné použitie zahrnujú sterilné vodné roztoky alebo disperzie a sterilné prášky pre pohotovostnú prípravu sterilných injektovatelných roztokov alebo disperzií. Vo všetkých prípadoch musí byť forma sterilná a musí byť tekutá v takom rozsahu, aby bola aplikovateľná striekačkou. Musí byť stabilná za podmienok výroby a uskladnenia a musí byť chránená pred kontaminačným pôsobením mikroorganizmov, ako sú napríklad baktérie a huby. Nosičom môže byť rozpúšťadlo alebo disperzné prostredie obsahujúce napríklad vodu, etanol, polyol (napríklad glycerol, propylénglykol a kvapalný polyetylénglykol), ich vhodné zmesi a rastlinné oleje. ‘

Na liečenie rakoviny sa látky podľa tohto vynálezu môžu podávať v spojení s inými anti-tumorovými látkami alebo s ožarovaním. Tieto iné látky alebo liečenie ožarovaním sa môže poskytovať v tom istom alebo rôznom čase ako látky podľa tohto vynálezu. Tieto spojené terapie môžu pôsobiť synergicky a spôsobiť zvýšenú účinnosť. Napríklad sa látky podľa tohto vynálezu môžu použiť v spojení s mitotickými inhibítormi, ako je napríklad taxol alebo vinblastin, alkylujúcimi činidlami, ako je napríklad cisplatina alebo cyklofosamid, antimetabolitmi, ako je napríklad 5-fluóruracil alebo hydroxymočovina, DNA interkalátormi, ako je napríklad adriamycin alebo bleomycin, topoizomerázovými inhibítormi, ako je nap28 ríklad etopsid alebo kamptotecin a antiestrogénmi, ako je napríklad tamoxifen.

Príprava reprezentatívnych príkladov látok podľa tohto vynálezu je opísaná nižšie.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad 1

N ’ - (2-kyano-4-nitrofenyl)-N,N-dimetylformamidín

Podiel 40,8 g 5-nitro-antranilonitrilu a 40 ml N,N-dimetylf ormamid-dimetylacetálu sa zahrievali na parnom kúpeli počas 2 hodín. Rozpúšťadlá sa odstránili za zníženého tlaku a zvyšok sa rozpustil v dichlórmetáne. Po prepustení tohto roztoku cez Magnesol sa rozpúšťadlo odstránilo. Po premytí s éterom sa získalo 50,8 g N’-(2-kyano-4-nitrofenyl)-N,Ndimetylformamidínu.

Príklad 2

N-(3-brómfenyl)-6-nitro-4-chinazolínamín

Roztok 23,74 ml 3-brómanilínu a 40,5 g N’-(2-kyano-4nitrofenyl)-N,N-dimetylformamidínu v 100'ml ľadovej kyseliny octovej sa premiešavalo a zahrievalo na olejovom kúpeli na 148 °C počas 1,5 hodiny. Po ochladení, filtrácia výslednej tuhej látky poskytla kvantitatívny výťažok N-(3-brómfenyl)6-nitro-4-chinazolínamínu: t.t, = 267 až 270 °C; hmotnostné spektrum (m/e): 345.

Príklad 3

N-(3-brómfenyl)-4,6-chinazolíndiamín

Zmes 34,5 g N-(3-brómfenyl)-6-nitro-4-chinazolínamínu a 16,8 g práškového železa v 150 ml metanolu a 150 ml ľadovej kyseliny octovej sa zahrievala na olejovom kúpeli na 120 °C počas 2 hodín. Po filtrácii tuhej látky sa k filtrátu pridal tuhý uhličitan sodný, čím sa získala tuhá látka. Táto sa odfiltrovala a tuhá látka sa extrahovala metanolom. Extrakty sa opracovali aktívnym uhlím a odparili sa na tuhú látku. Po premytí tuhej látky éterom sa získalo 27,5 g N-(3-brómfenyl)-4,6-chinazolíndiamínu: hmotnostné spektrum (m/e): 315.

Príklad 4

Kyselina 4-[[4-[(3-brómfenyl)amino]-6-chinazoliny1]amino]-4oxo-(Z)-2-buténová

Podiel 15 ml pyridínu sa pridal k 1,6 g N-(3-brómfenyl) -4,6-chinazolíndiamínu a 0,6 g anhydridu kyseliny maleínovej. Po premiešavaní počas noci, sa rozpúšťadlá odstránili na rotačnej odparovačke. Tuhá látka sa rozpustila v asi 400 ml horúceho etanolu a nerozpustný materiál sa odfiltroval, čím sa získalo 0,33 g kyseliny 4-[[4-[(3-brómfenyl)amino]6-chinazolinyl]amino]-4-oxo-(Z)-2-buténovej: hmotnostné spektrum (m/e): M+H 413, 415.

Príklad 5

Etylester kyseliny 4-[[4-[(3-brómfenyl)amino]-6-chinazolinyl]amino]-4-oxo-(E)-2-buténovej

Roztok N-(3-brómfenyl)-4,6-chinazolíndiamínu v 15 ml pyridínu sa ochladil na ľadovom kúpeli a po kvapkách sa pridal roztok 1,22 g etylfumarylchloridu v 10 ml dichlórmetánu. Po premiešavaní počas 1,5 hodiny sa reakčná zmes ponechala dosiahnuť laboratórnu teplotu. Rozpúšťadlá sa odstránili za zníženého tlaku a zvyšok sa opracoval vodou. Červená tuhá látka sa odfiltrovala a extrahovala sa do horúceho acetónu. Po odfiltrovaní nerozpustného materiálu sa filtrát skoncentroval, čím poskytol 0,45 g etylesteru kyseliny 4-[[4-[(3-brómfenyl)amino]-6-chinazolinyl]-amino]-4-oxo-(E)-2-buténo30 vej: 1.1. = 259 až 263 °C, hmotnostné spektrum (m/e): M+H

441, 443.

Príklad 6

N- [ 4-[(3-brómfenyl)amino]-6-chinazolinyl]-3-metyl-2-buténamid

Roztok 1,58 g N-(3-brómfenyl)-4,6-chinazolíndiamínu v 15 ml pyridínu sa ochladil na ladovom kúpeli a po kvapkách sa pridal roztok 0,67 ml 3,3-dimetylakryloylchloridu v 7 ml éteru. Po premiešavaní a chladení počas 2 hodín sa rozpúšťadlá sa odstránili za zníženého tlaku. Zvyšok sa opracoval vodou a výsledná tuhá látka sa rekryštalizovala z metylcelosovu, čím poskytla 0,97 g N-[4-[(3-brómfenyl)amino]-6-chinazolinyl ]-3-metyl-2-buténamidu: t.t. = 300 až 301 °C, hmotnostné spektrum (m/e): M+H 396, 398.

Príklad 7

N-[4-[(3-brómfenyl)amino]-6-chinazolinyl] - (E)-2-buténamid

Roztok 1,6 g N-(3-brómfenyl)-4,6-chinazolíndiamínu v 15 ml pyridínu sa ochladil na ľadovom kúpeli a po kvapkách sa pridal roztok 0,57 ml trans-krotonoylchloridu v 6 ml éteru. Po premiešavaní a chladení počas 2 hodín sa rozpúšťadlá sa odstránili za zníženého tlaku. Zvyšok sa opracoval vodou a výsledná tuhá látka sa rekryštalizovala z n-butanolu, čím poskytla 0,69 g N-[4-[(3-brómfenyl)amino]-6-chinazolinyl](E)-2-buténamidu: 1.1. = 153 až 160 °C, hmotnostné spektrum (m/e): M+H 383, 385.

Príklad 8

N-[4-[(3-brómfenyl)amino]-6-chinazolinyl]-2-metyl-2-propénamid

Roztok 1,6 g N-(3-brómfenyl)-4,6-chinazolíndiamínu v 15 ml pyridínu sa ochladil na ľadovom kúpeli a po kvapkách sa pridal roztok 0,59 ml metakroylchloridu v 6 ml éteru. Po premiešavaní a chladení počas 2 hodín sa rozpúšťadlá sa odstránili za zníženého tlaku. Zvyšok sa opracoval vodou a výsledná tuhá látka sa rozpustila v n-butanole (zahrievanie). Prídavok éteru do ochladeného roztoku poskytol 0,44 g N-[4[(3-brómfenyl)amino]- 6-chinazolinyl]-2-metyl-2-propénamidu:

1.1. = 240 až 245 °C, hmotnostné spektrum (m/e): M+H 383,

385.

i

Príklad 9

N-[4-[(3-brómfenyl)amino]-6-chinazolinyl]-2-butínamid

Roztok 0,50 g kyseliny 2-butínovej v 10 ml tetrahydrofuránu sa ochladil na ladovom kúpeli. Pridal sa podiel 0,79 ml izobutylchlórformiátu, nasledovaný podielom 0,66 ml N-metylmorfolínu. Asi po 1 minúte sa pridal roztok 1,6 g N-(3-brómfenyl)-4,6-chinazolíndiamínu v 10 ml· pyridínu. Reakčná zmes sa ponechala dosiahnuť laboratórnu teplotu a premiešavala sa počas noci. Rozpúšťadlá sa odstránili za zníženého tlaku a tuhá látka sa rekryštalizovala z n-butanolu, čím poskytla 1,07 g N-[4-[(3-brómfenyl)amino]-6-chinazolinyl ]- 2- butínamidu : hmotnostné spektrum (m/e): M+H 381, 383.

Príklad 10

Kyselina 4-[[4-[(3-brómfenyl)amino]-6-chinazolinyl]amino]-4oxo-(E)-2-buténová

Podiel 2,5 ml 10 mol/1 vodného roztoku hydroxidu sodného sa pridal ku 2,3 g etylesteru kyseliny 4-[[4-[(3-brómfenyl) amino]-6-chinazolinyl]amino]-4-oxo-(E)-2-buténovej (Príklad 5) v 25 ml etanolu. Po premiešavaní počas hodiny sa pridalo 2,1 ml koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej a reakčná zmes sa premiešavala ďalšie 2 hodiny. Výsledná tuhá látka sa rekryštalizovala z n-butanolu, čím poskytla 0,97 g kyseliny 4-[[4-[(3-brómfenyl)amino]-6-chinazolinyl]amino]-4oxo-(E)-2-buténovej: hmotnostné spektrum (m/e): M+H 413.

Príklad 11

N-[4-[ (3-brómfenyl)amino]-6-chinazolinyl]- 2,4-hexadiénamid

Roztok 0,67 g kyseliny 2,4-hexadiénovej v 10 ml tetrahydrof uránu sa ochladil na ľadovom kúpeli. Pridal sa podiel 0,79 ml izobutylchlórformiátu, nasledovaný podielom 0,66 ml N-metylmorfolínu. Asi po 1 minúte sa pridal roztok 1,6 g N-(3-brómfenyl)-4,6-chinazolíndiamínu v 10 ml pyridínu. Reakčná zmes sa ponechala dosiahnuť laboratórnu teplotu a premiešavala sa počas noci. Rozpúšťadlá sa odstránili za zníženého tlaku a tuhá látka sa rekryštalizovala, čím poskytla 1,0 g N-[4-[(3-brómfenyl)amino]-6-chinazolinyl]-2,4-hexadiénamidu: t.t. = 258 až 260 °C.

Príklad 12

N-[4 -[(3-brómfenyl)amino]-6-chinazolinyl]-2-cyklopenténamid

Roztok 0,43 g kyseliny 2-cyklopenténovej v 5 ml tetrahydrof uránu sa ochladil na ľadovom kúpeli. Pridal sa podiel 0,49 ml izobutylchlórformiátu, nasledovaný podielom 0,41 ml N-metylmorfolínu. Asi po 1 minúte sa pridal roztok 1,0 g N-(3-brómfenyl)-4,6-chinazolíndiamínu v 10 ml pyridínu. Reakčná zmes sa ponechala dosiahnuť laboratórnu teplotu a premiešavala sa počas noci. Pridal sa ďalší 0,5 ekvivalent zmiešaného anhydridu. Zmes sa premiešavala počas 5 hodín. Rozpúšťadlá sa odstránili za zníženého tlaku a tuhá látka sa čistila chromatografiou na silikagéli, čím poskytla 0,30 g N-[4-[(3-brómfenyl)amino]-6-chinazolinyl]-2-cyklopenténamidu: hmotnostné spektrum (m/e): 409 (M+H, EI).

Príklad 13

N- [4- [ (3-brómfenyl)amino] -6-chinazolinyl] -2-propériamid

Roztok 2,0 g N-(3-brómfenyl)-4,6-chinazolíndiamínu v 10 ml pyridínu sa ochladil na ľadovom kúpeli a po kvapkách sa pri 0 °C pridal roztok 0,61 ml akryloylchloridu v 30 ml éteru. Po premiešavaní pri laboratórnej teplote počas 3,5 hodiny sa rozpúšťadlá sa odstránili za zníženého tlaku. Zvyšok sa čistil chromatografiou, čím poskytol 0,2 g N-[4-[(3brómfenyl)amino]-6-chinazolinyl]-2-propénamidu: hmôtnostné spektrum (m/e): M+H 369.

Príklad 14

N-[4-[(3-brómfenyl)amino]-6-chinazolinyl]-(3-fenyl-2-propínamid)

Roztok 0,93 g kyseliny 3-fenyl-2-propínovej v 10 ml tetrahydrof uránu sa ochladil na ľadovom kúpeli. Pridal sa podiel 0,82 ml izobutylchlórformiátu, nasledovaný podielom 0,69 ml N-metylmorfolínu. Asi po 1 minúte sa pridal roztok 1,0 g N-(3-brómfenyl)-4,6-chinazolíndiamínu v 7 ml pyridínu. Reakcia prebiehala pri 0 °C počas 1 hodiny. Rozpúšťadlá sa odstránili za zníženého tlaku a tuhá látka sa čistila chromatograf iou na silikagéli, čím poskytla 0,01 g N-[4-[(3brómfenyl)amino]-6-chinazolinyl]-(3-fenyl-2-propínamidu): hmotnostné spektrum (m/e): 443,2, 445.2 (M+H, ionizácia nárazom elektrónov).

Príklad 15

6-amino-4-chlórchinazolín

Zmes pozostávajúca z 3,25 g 4-chlór-6-nitrochinazolínu, 10,8 g hydrogénsiričitanu sodného a 0,3 g katalyzátora fázového prenosu (CgH^j) gNCHg+Cl^- v 97 m'l tetrahydrofuránu a 32 ml vody sa rýchlo premiešavala počas 2 hodín. Zmes sa zriedila éterom a organická vrstva sa oddelila. Organický roztok sa premyl soľankou a potom sa sušil nad síranom horečnatým. Roztok sa prepustil cez malú kolónu zo silikagélu. Rozpúšťadlo sa odstránilo pri 30 °C za zníženého tlaku, čím poskytlo 6-amino-4-chlórchinazolín, ktorý sa použil v nasledujúcom kroku bez ďalšieho čistenia.

Príklad 16 [4-chlór-6-chinazolinyl]-2-butínamid

Roztok 1,64 g kyseliny 2-butínovej v 46 ml tetrahydrofuránu sa ochladil na ľadovom kúpeli. Pridal sa podiel 2,34 ml izobutylchlórformiátu, nasledovaný podielom 4,13 ml N-metylmorfolínu. Asi po 10 minútach sa vylial do roztoku 6-amino-4-chlórchinazolínu v 46 ml tetrahydrofuránu. Táto zmes sa premiešavala pri laboratórnej teplote počas 2 hodín. Zmes sa vyliala do zmesi soľanky a nasýteného hydrogénuhličitanu sodného a extrahovala sa éterom. Éterový roztok sa sušil nad síranom horečnatým a prefiltroval sa. Rozpúšťadlo sa odstránilo, čím poskytlo [4-chlór-6-chinazolinyl]-2-butínamid ako zafarbený olej, ktorý sa použil v nasledujúcom kroku bez ďalšieho čistenia.

<

Príklad 17

N-[4-[(3-brómfenyl)amino]-6-chinazolinyl]-2-butínamid

Roztok pozostávajúci z 1,76 g [4-chlór-6-chinazolinyl]2-butínamidu a 1,23 g 3-brómanilínu sa refluxoval pod inertnou atmosférou v 23 ml izopropanolu počas 40 minút. Zmes sa ochladila na laboratórnu teplotu a pridalo sa 200 ml éteru, čím sa získalo 0,4 g N-[4-[(3-brómfenyl)amino]-6-chinazolinyl]-2-butínamidu ako hydrochloridová soľ. Neutralizácia roztokom hydrogénuhličitanu sodného, extrahovanie etylacetátom, odstránenie rozpúšťadla a rekryštalizácia z 1-butanolu poskytli N-[4-[(3-brómfenyl)amino]-6-chinazolinyl]- 2-butínamid ako voľnú zásadu.

Príklad 18

N’-(4-amino-2-kyanofenyl)-N,N-dimetylformamidín

Roztok 6,0 g (27,5 mmol) N’-(2-kyano-4-nitrofenyl)N,N-dimetylformamidínu, 33,9 g (41,8 ml, 412,4 mmol) cyklohexénu a 0,6 g 10 % hmotnostných Pd/C v 360 ml metanolu sa refluxoval počas 4 hodín. Horúca zmes sa prefiltrovala cez Celíte. Rozpúšťadlo sa odstránilo a zvyšok sa rekryštalizoval zo zmesi chloroform-chlorid uhličitý, čím poskytol 4,9 g (95 %) látka z názvu tohto príkladu ako svetlošedú tuhú látku. hmotnostné spektrum (m/e): 188,9 (M+H, ionizácia nárazom elektrónov).

Príklad 19

N-[3-kyano-4-[[(dimetylamino)metylén]amino]fenyl]-2-butínamid

K roztoku 2,01 g (23,9 mmol) kyseliny 2-butínovej a 2,9 ml (22,3 mmol) izobutylchlórformiátu v 30 ml tetrahydrofuránu, ktorý sa premiešaval pri 0 °C pod dusíkom, sa počas 3 minút pridal 2,42 g (2,63 ml, 22,3 mmol) N-metylmorfolínu. Po premiešavaní počas 15 minút sa počas 4 minút pridal roztok N’-(4-amino-2-kyanofenyl)-N,N-dimetylformamidínu a 1,6 g (1,75 ml, 15,9 mmol) metylmorfolínu v 25 ml tetrahydrofuránu. Zmes sa premiešavala počas 30 minút pri 0 °C a 30 minút pri laboratórnej teplote. Zmes sa zriedila so 70 ml etylacetátu a vyliala sa do zmesi soľänky a nasýteného hydrogénuhličitanu sodného. Organická vrstva sa sušila (MgSO^) a prefiltrovala sa cez vrstvu silikagélu. Rozpúšťadlo sa odstránilo a zvyšok sa premiešal s 50 ml éteru. Suspendovaná tuhá látka sa oddelila, čím poskytla 3,61 g (86 %) špinavobielej tuhej látky, hmotnostné spektrum (m/e): 255,0 (M+H, ionizá36 cia nárazom elektrónov).

Príklad 20

N-[4-[(3 -brómfenyl)araino]-6-chinazolinyl]-2-butínamid

Roztok 3,0 g (11,8 mmol) N-[3-kyano-4-[[(dimetylamino)metylén]amino]fenyl]-2-butínamidu a 2,23 g (12,98 mmol) 3-brómanilínu v 18 ml kyseliny octovej sa refluxoval jemne za premiešavania pod dusíkom počas 1 hodiny 15 minút. Zmes sa ochladila na ľadovom kúpeli a vytvorila sa tuhá hmota. Tuhá látka sa oddelila filtráciou a premyla sa zmesou éter-acetonitril 1:1, čím poskytla tuhú látku, ktorá sa rekryštalizovala z etanolu, čím poskytla 2,51 g N-[4-[(3-brómfenyl)amino]-6-chinazolinyl]-2-butínamidu: hmotnostné spektrum (m/e): 381, 383.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Látka so vzorcom kde:

X je fenyl výhodne substituovaný jedným alebo viacerými substituentami vybranými zo skupiny pozostávajúcej z halogénu, alkylu s 1 až 6 uhlíkovými atómami, alkoxylu s 1 až 6 uhlíkovými atómami, hydroxyskupiny, trifluórmetylu, kyanoskupiny, nitroskupiny, karboxyskupiny, karboalkoxyskupiny z 2 až 7 uhlíkovými atómami, karboalkylu s 2 až 7 uhlíkovými atómami, aminoskupiny a alkylaminoskupiny s 1 až 6 uhlíkovými atómami;

R a R¹ sú každý nezávisle, vodík, halogén, alkyl s 1 až 6 uhlíkovými atómami, alkoxyl s 1 až 6 uhlíkovými atómami , hydroxyl alebo trifluórmetyl;

R je vodík, alkyl s 1 až 6 uhlíkovými atómami, alkoxyl s 1 až 6 uhlíkovými atómami, hydroxyl, trifluórmetyl;

Y je radikál vybraný zo skupiny pozostávajúcej z je . nezávisle vodík, alkyl s 1 až 6 uhlíkovými atómami, karboxyl, karboalkoxyskupina s 1 až 6 uhlíkovými atómami , fenyl alebo karboalkyl s 2 až 7 uhlíkovými atómami;

n = 2 až 4;

alebo jej farmaceutický prijateľnú sol, s výhradou že každý

Q

R^J v Y môže byť rovnaký alebo rôzny.
2. Látka podľa nároku 1, kde R, R¹ a R^z sú vodíky alebo jej farmaceutický prijateľná soľ.
3. Látka podľa nároku 2, kde X je nesubstituovaný alebo substituovaný halogénom alebo alkylom s 1 až 6 uhlíkovými atómami.
4. Látka podľa nároku 1, ktorou je N-[4-[(3-brómfenyl)amino]-6-chinazolinyl]-2-butínamid alebo jeho farmaceutický prijatelná soľ.
5. Látka podľa nároku 1, ktorou je N-[4-[(3-brómfenyl)amino]-6-chinazolinyl]-2-metyl-2-propénamid alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
6. Látka podľa nároku 1, ktorou je N-[4-[(3-brómfenyl)amino]-6-chinazolinyl]-2,4-hexadiénamid alebo jeho farmaceutický prijatelná soľ. ,
7. Látka podľa nároku 1, ktorou je N-[4-[(3-brómfenyl)amino]-6-chinazolinyl]-(E)-2-buténamid alebo jeho farmaceutický prijateľná sol.
8. Látka podľa nároku 1, ktorou je N-[4-[(3-brómfenyl)amino]-6-chinazolinyl]-3-metyl-2-buténamid alebo jeho farmaceutický prijatelná sol.
9. Látka podľa nároku 1, ktorou je kyselina 4-[[4-[(3brómfenyl)amino]-6-chinazolinyl]-amino]-4-oxo-(Z)-2-buténová alebo jej farmaceutický prijatelná soľ.
10. Látka podľa nároku 1, ktorou je kyselina 4-.[[4-[(3brómfenyl)amino]-6-chinazolinyl]-amino]-4-oxo-(E)-2-buténová alebo jej farmaceutický prijateľná soľ.
11. Látka podľa nároku 1, ktorou je etylester kyseliny 4 - [ [4-[(3-brómfenyl)-amino]-6-chinazolinyl]amino]-4-oxo-(E)2-buténovej alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
12. Látka podľa nároku 1, ktorou je N-[4-[(3-brómfenyl)amino]-6-chinazolinyl]-2-cyklopenténamid alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
13. Látka podľa nároku 1, ktorou je N-[4-[(3-brómfenyl) amino]- 6-chinazolinyl]-2-propénamid alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
14. Látka podľa nároku 1, ktorou je N-[4-[(3-brómfenyl) amino]-6-chinazolinyl]-(3 - fenyl-2-propínamid) alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ.
15. Spôsob inhibovania biologických účinkov deregulovaanej proteín-tyrozín kinázy u cicavcov, vyznačuj úc .i sa t ý m, že zahrnuje podávanie týmto cicavcom účinného množstva látky so vzorcom kde:

X je fenyl výhodne substituovaný jedným alebo viacerými substituentami vybranými zo skupiny pozostávajúcej z halogénu, alkylu s 1 až 6 uhlíkovými atómami, alkoxylu s 1 až 6 uhlíkovými atómami, hydroxyskupiny, trifluórmetylu, kyanoskupiny, nitroskupiny, karboxyskupiny, karboalkoxyskupiny z 2 až 7 uhlíkovými atómami, karbo40 alkylu s 2 až 7 uhlíkovými atómami, aminoskupiny a alkylaminoskupiny s 1 až 6 uhlíkovými atómami;

R a R¹ sú každý nezávisle, vodík, halogén, alkyl s 1 až 6 uhlíkovými atómami, alkoxyl s 1 až 6 uhlíkovými atómami, hydroxyl alebo trifluórmetyl;

R je vodík, alkyl s 1 až 6 uhlíkovými atómami, alkoxyl s 1 až 6 uhlíkovými atómami, hydroxyl, trifluórmetyl;

Y je radikál vybraný zo skupiny pozostávajúcej z o

R je nezávisle vodík, alkyl s 1 az 6 uhlíkovými atómami, karboxyl, karboalkoxyskupina s 1 až 6 uhlíkovými atómami, fenyl alebo karboalkyl s 2 až 7 uhlíkovými atómami;

n = 2 až 4;

alebo jej farmaceutický prijateľnú soľ, s výhradou že každý

Q

R v Y môže byt rovnaký alebo rôzny. ·
16. Spôsob liečenia inhibovaním rastu alebo likvidácie novotvarov u cicavcov, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje podávanie týmto cicavcom účinného množstva látky so vzorcom (D kde :

X je fenyl výhodne substituovaný jedným alebo viacerými substituentami vybranými zo skupiny pozostávajúcej z halogénu, alkylu s 1 až 6 uhlíkovými atómami, alkoxylu s 1 až 6 uhlíkovými atómami, hydroxyskupiny, trifluórmetylu, kyanoskupiny, nitroskupiny, karboxyskupiny, karboalkoxyskupiny z 2 až 7 uhlíkovými atómami, karboalkylu s 2 až 7 uhlíkovými atómami, aminoskupiny a alkylaminoskupiny s 1 až 6 uhlíkovými atómami;

R a R¹ sú každý nezávisle, vodík, halogén, alkyl s 1 až 6 uhlíkovými atómami, alkoxyl s 1 až 6 uhlíkovými atómami , hydroxyl alebo trifluórmetyl;

R je vodík, alkyl s 1 až 6 uhlíkovými atómami, alkoxyl s 1 až 6 uhlíkovými atómami, hydroxyl, trifluórmetyl;

Y je radikál vybraný zo skupiny pozostávajúcej z

R^J je nezávisle vodík, alkyl s 1 až 6 uhlíkovými atómami, karboxyl, karboalkoxyskupina s 1 až 6 uhlíkovými atómami, fenyl alebo karboalkyl s 2 až 7 uhlíkovými atómami;

n = 2 až 4;

alebo jej farmaceutický prijateľnú soľ, s výhradou že každý

Q

R^J v Y môže byť rovnaký alebo rôzny.
17. Spôsob podľa nároku 16, vyznačujúci sa tým, že novotvar má expresiu EGFR.

1.8. Spôsob podľa nároku 16, vyznačujúci sa tým, že novotvar je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z neoplaziem prsníka, obličiek, močového mechúra, úst, larynxu, pažeráka, žalúdka, hrubého .čreva, vaječníkov a pľúc.
19. Farmaceutická zmes, vyznačuj ú tým, že zahrnuje látku so vzorcom c a sa (1)

X je fenyl výhodne substituovaný jedným alebo viacerými substituentami vybranými zo skupiny pozostávajúcej z halogénu, alkylu s 1 až 6 uhlíkovými atómami, alkoxylu s 1, až 6 uhlíkovými atómami, hydroxyskupiny, trifluórmetylu, kyanoskupiny, nitroskupiny, karboxyskupiny, karboalkoxyskupiny z 2 až 7 uhlíkovými atómami, karboalkylu s 2 až 7 uhlíkovými atómami, aminoskupiny a alkylaminoskupiny s 1 až 6 uhlíkovými atómami;

R a R·*· sú každý nezávisle, vodík, halogén, alkyl s 1 až 6 uhlíkovými atómami, alkoxyl s 1 až 6 uhlíkovými arómami, hydroxyl alebo trifluórmetyl;

R je vodík, alkyl s 1 až 6 uhlíkovými atómami, alkoxyl s 1 až 6 uhlíkovými atómami, hydroxyl, trifluórmeryl;

Y je radikál vybraný zo skupiny pozostávajúcej z (C(R³)₂)„ je nezávisle vodík, alkyl s 1 až 6 uhlíkovými atómami, karboxyl, karboalkoxyskupina s 1 až 6 uhlíkovými atómami, fenyl alebo karboalkyl s 2 až 7 uhlíkovými atómami;

n = 2 až 4;

alebo jej .farmaceutický prijateľnú sol, s výhradou že každý a · '

R^J v Y môže byť rovnaký alebo rôzny a farmaceutický prijateľný nosič.
20. Spôsob prípravy látky so vzorcom:

1 2 , kde R, R , R a X su ako podlá nároku 1; Y’ je radikál vybraný zo skupiny pozostávajúcej z:

a kde každý R je nezávisle vodík, alkyl s 1 až 6 uhlíkovými atómami, karboxyl, karboalkoxyskupina s 1 až 6 uhlíkovými atómami, fenyl, alebo karboalkyl s 2 až 7 uhlíkovými atómami; n je celé číslo 2 až 4, ktorý zahrnuje opracovanie antranilonitrilu so vzorcom:

s dimetylformamid-dimetylacetálom s rozpúšťadlom alebo bez neho, čím sa poskytne látka so vzorcom:

zahrievanie tejto látky s anilínom so vzorcom:

x-nh₂ v kyslom organickom rozpúšťadle, čím sa poskytne 6-nitrochinazolín so vzorcom opracovanie tejto látky s redukčným činidlom, čím sa poskytne 6-amino-chinazolín so vzorcom:

a reagovanie tejto látky s chloridom kyseliny alebo zmiešaným anhydridom so vzorcami:

y—

OCOR⁴ kde R⁴ je alkyl s 1 až 6 uhlíkovými atómami.
21. Spôsob prípravy látky so vzorcom:

-t O ₁ kde R, R , R a X sú ako podľa nároku 1 a (Z) označuje konfiguráciu dvojitej väzby, ktorý zahrnuje reagovanie látky so vzorcom:

s cyklickým anhydridom so vzorcom:

R*

R0 c

kde R sú nezávisle vodík, fenyl alebo alkyl s 1 až 6 uhlíkovými atómami, v inertnom rozpúšťadle v prítomnosti organickej zásady.
22. Spôsob prípravy látky so vzorcom:

kde X je ako podľa nároku 1; Y’ je ako podľa nároku 20, ktorý zahrnuje redukovanie látky so vzorcom:

s hydrogénsiričitanom sodným a katalyzátorom fázového prenosu v rozpúšťadlovej zmesi zahrnujúcej inertné organické rozpúšťadlo a vodu, čím sa poskytne látka so vzorcom:

reagovanie tejto látky s chloridom kyseliny alebo zmiešaným anhydridom so vzorcami:

O θ

Y'—alebo Y’—

Cl

OCO R⁴ kde R⁴ je alkyl s 1 až 6 uhlíkovými atómami, v prítomnosti amínovej zásady v inertnom rozpúšťadle, čím sa poskytne látka so vzorcom:

a zahrievanie tejto látky s anilínom so vzorcom x-nh₂ v inertnom rozpúšťadle.
23. Spôsob prípravy látky so vzorcom:

kde X je ako podľa nároku 1; Y’ je ako podľa nároku 20, kto rý zahrnuje redukovanie látky so vzorcom:

0₂n

CN '^^Kn'^N(CH₃)₂ s paládiovým katalyzátorom a zdrojom vodíka v inertnom roz púšťadle, čím sa poskytne látka so vzorcom:

H₂N

CN reagovanie tejto látky s chloridom kyseliny alebo zmiešaným anhydridom so vzorcami:

O θ

Y'—4^ alebo Y'^-—

Cl

OCO R⁴ kde R⁴ je alkyl s 1 až 6 uhlíkovými atómami, v prítomnosti amínovej zásady v inertnom rozpúšťadle, čím sa poskytne látka so vzorcom:

CN a zahrievanie tejto látky s anilínom so vzorcom x-nh₂ v kyslom rozpúšťadle.