CN114634453A

CN114634453A - 喹唑啉衍生物制备方法及其应用

Info

Publication number: CN114634453A
Application number: CN202210252996.XA
Authority: CN
Inventors: 蔡志强; 迟亮亮; 王博; 韩晓; 郝林林; 秦卫涛; 王亚楠
Original assignee: Shenyang University of Technology
Current assignee: Shenyang University of Technology
Priority date: 2022-03-15
Filing date: 2022-03-15
Publication date: 2022-06-17
Anticipated expiration: 2042-03-15
Also published as: CN114634453B

Abstract

本发明属药物化学技术领域，涉及通式（I）喹唑啉衍生物制备方法及和应用，及其与无机或有机的酸所形成的生理上可接受的盐，含有它们的药物组合物，及在制备治疗肿瘤疾病的药物，特别是特征为异常EGFR家族疾病药物上的应用。所述化合物具有重要价值的药理性质，特别是对因络氨酸激酶所引起的信号转导有抑制作用。

Description

喹唑啉衍生物制备方法及其应用

技术领域

本发明属于药物合成领域，具体地说是喹唑啉衍生物的制备方法及其作为抗肿瘤药物的应用。

背景技术

酪氨酸激酶抑制剂(Tyrosine Kinase Inhibitor)，主要作用于上皮细胞生长因子(Epiderma Growth Factor Receptor，EGFR)。EGFR对癌细胞的生长有重要的影响与控制相关性。如果癌细胞的受体过度表达或是过度活化，癌细胞将会大量增殖，因而连带地增加治愈困难度以及再发的机率。表皮生长因子受体是人表生长因子受体(HER)四大受体之一，其他三个分别是HER2(ErbB2)、HER3(ErbB3)和HER4(ErbB4)。EGFR横跨细胞膜，由膜外配受体结合域，单个跨膜段和包含酪氨酸激酶结构域的胞内区。从结构来看，EGFR是同时具备激酶活性的糖蛋白，它即作为受体，又作为酶，在细胞的增殖、分化、凋亡等生理活动中扮演着重要角色。有证据表明肿瘤细胞的发生和转移常常伴随着HER1(EGFR)和HER2的过表达。

非小细胞肺癌是目前已知的具有EGFR突变特征的癌症之一，许多合成的化合物具有抑制表皮生长因子受体酪氨酸激酶(EGFR-PTK)的活性，尤其以喹唑啉类化合物研究较深，其中阿法替尼于2013年被在美国批准上市治疗非小细胞肺癌。

通过对阿法替尼的临床前、以及临床的数据、专利情况等的分析对比，确立以其为先导化合物，然后根据已报道化合物及生物活性测试数据，利用计算机辅助手段，有目的的对阿法替尼的结构进行设计、合成与筛选，以其找到结构新颖、高特异、活性更好的新型抗肿瘤化合物。

发明内容

发明目的：

本发明的目的是提供一种喹唑啉衍生物和其药学上可接受的盐，尤其是其与无机或有机的酸的生理上可接受的盐类，并提供含有该药理学上有效衍生物的药物制剂及其应用。

技术方案：

通式(Ⅰ)所示的喹唑啉衍生物或其药学上可接受的盐：

其中，R1表示：氢、C1-C3烷基或卤素；R2表示：六元环烷基或烷烃取代的六元杂环氨基；R3表示：C1-C5烷基、C5二烯酮羰基。

R1选自单取代的氟、甲基、二取代的甲基或二取代的甲基和氟；R2选自环己基或乙基吗啉；R3选自异丙基或2-1,4-戊二烯-3-酮基。

喹唑啉衍生物或其药学上可接受的盐与无机酸形成药用盐，适用的酸为：盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸、酒石酸、水杨酸、甲磺酸、琥珀酸、富马酸、丁二酸、乳酸、柠檬酸、苹果酸或马来酸。

所述喹唑啉衍生物或其药学上可接受的盐作为制备治疗以异常EGFR家族疾病的药物中的应用。

所述喹唑啉衍生物或其药学上可接受的盐，以及含有该任一化合物或盐类作为活性成分的药物组合物作为制备抗肿瘤药物的应用。

其用于制备皮下给药或口服的药物制剂。

对人肺腺癌细胞A549、人肺癌耐药细胞H1975具有细胞增殖抑制作用。

优点及效果：

本发明的喹唑啉衍生物还具有但不限于以下有益效果：

(1)喹唑啉衍生物I-a、I-b、I-c和I-e对A549细胞的抑制率分别为81.85％、78.86％、75.94％和66.85％，优于阳性对照药阿法替尼的63.86％；喹唑啉衍生物I-b、I-c、I-d、I-e、I-f、I-h和I-j对耐药性细胞株H1795的生长抑制率分别为94.14％、82.97％、46.45％、51.25％、53.45、73.63％和64.21％，优于阳性对照药阿法替尼42.26％。其中化合物I-b对体外细胞A549和H1975的生长抑制活性IC₅₀(nM/mL)值分别为0.83和1.91(nM/mL)，优于阳性对照阿法替尼的10.41和24.96(nM/mL)。因此，所设计的喹唑啉衍生物具有更好的细胞抑制率。

(2)相对于阿法替尼，本发明所提供的喹唑啉衍生物I-a和I-h具有良好的选择性，喹唑啉衍生物I-a对体外培养A549和H1975细胞的抑制率分别为81.85％和15.24％；喹唑啉衍生物I-h对体外培养A549和H1975细胞的抑制率分别为20.66％和73.63％。由此可见，所设计的喹唑啉衍生物具有更好的选择性，化合物I-a有利于对A549细胞的抑制，化合物I-h有利于对耐药细胞株H1975的抑制。本发明所提供的部分喹唑啉衍生物具有良好的选择性。

具体实施方式：

本发明提供了一类抗耐药性较好的喹唑啉类衍生物。本发明提供了一系列对肺癌细胞株抑制活性较强的喹唑啉衍生物。

基于药物构效关系理论、生物电子等排原理、药代动力学等药物设计原理，本设计以4-氨基喹唑啉为基础，将脂溶性基团环己基和2-吗啉乙基引入喹唑啉环系7位，利用环己基和2-吗啉乙基成醚后的油脂分配系数来改善化合物的理化性质，并对喹唑啉母核4-位和6-位进行结构改造和修饰，以期获得特异性好、选择性好、毒性低的先导化合物，进而得到抗耐药性的靶向抗肿瘤药物。

本发明涉及通式(I)的衍生物或其药学上可接受的盐及其制法，含有该药理学上有效衍生物的药物制剂及其应用。

如下所示，通式(Ⅰ)所示的喹唑啉衍生物或其药学上可接受的盐，通式如下：

其中，R₁表示：氢、C₁-C₃烷基或卤素；R₂表示：六元环烷基或烷烃取代的六元杂环氨基；R₃表示：C₃烷基、C₅酮羰二烯基。

所述的喹唑啉衍生物或其可药用盐，其特征在于：R₁选自单取代的氢、氟、甲基、二取代的甲基或二取代的甲基和氟；R₂选自环己基或乙基吗啉；R₃选自异丙基或2-(1,4-戊二烯-3-酮)基。

所述的喹唑啉衍生物或其药学上可接受的盐，其特征在于：喹唑啉衍生物或其药学上可接受的盐与无机酸形成药用盐，适用的酸为：盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸、酒石酸、水杨酸、甲磺酸、琥珀酸、富马酸、丁二酸、乳酸、柠檬酸、苹果酸或马来酸。

所述任一化合物作为制备治疗以异常EGFR家族疾病的药物中的应用。

所述任一化合物或盐类，以及含有该任一化合物或盐类作为活性成分的药物组合物作为制备抗肿瘤药物的应用。

所述任一化合物或盐类，以及含有该任一化合物或盐类作为活性成分药物组合物的应用，其用于制备皮下给药或口服的药物制剂。

本发明所述的化合物或其可药用盐可以单独或以药物组合物的形式给药。本发明药物组合物可根据给药途径配成各种适宜剂型。使用一种或多种生理学上可接受的载体，包括赋形剂和助剂，它们有利于将活性化合物加工成可以在药学上使用的制剂。适当的制剂形式取决于所选择的给药途径，可以按照本领域熟知的常识进行制备。

给药途径可以是口服、非肠道或局部给药，优选口服和注射形式给药。可以口服的药物制剂包括胶囊剂和片剂等。本发明化合物也可以配制用于肠胃外给药或者透皮给药或者经粘膜给药，或者采用栓剂或者埋植剂的方式给药。本领域技术人员可以理解，本发明化合物可以采用合适的药物释放系统(DDS)以得到更有利的效果。

本发明通过体外(CCK8法)试验表明：具有通式(I)结构的喹唑啉衍生物对人肺腺癌细胞(A-549)、人肺癌耐药细胞(H1975)等具有很强的细胞增殖抑制作用。

下面结合具体实施例对本发明做进一步的说明：

合成式(I)所示的化合物衍生物，通式如下：

其中R₁、R₂和R₃如上定义。

如上所示，以7-氟-6-硝基喹唑啉-4(3H)-酮1为原料，甲苯为溶剂，三乙胺为缚酸剂，三氯氧磷为氯代试剂，生成中间体4-氯-7-氟-6-硝基喹唑啉2；然后与取代的苯胺在加热的条件下，发生亲核取代反应，得到中间体4-取代苯氨基-7-氟-6-硝基喹唑啉3。在室温条件下，以四氢呋喃为溶剂，加入侧链吗啉乙醇或环己醇，室温下反应得到中间体4-取代苯氨基-7-取代氧基-6-硝基喹唑啉4；再利用锌粉与氯化铵进行硝基的还原反应，得到中间体4-取代苯氨基-7-取代氧基-6-硝基喹唑啉5，中间体5再与丙烯酰氯或异丁酰氯发生亲核取代反应，得到目标喹唑啉衍生物I。

实施例1

N-(4-((2,4-二甲基苯基)氨基)-7-(2-吗啉乙氧基)喹唑啉-6-基)-2-亚甲基-3-氧基-4-烯酰胺的合成

将7-氟-6-硝基喹唑啉-4(3H)-酮1(2.0g,9.56mmol)、三乙胺(2.49g,16.26mmol)、甲苯(20mL)和三氯氧磷(2.42g,23.91mmol)依此加入100mL单口瓶内，在回流条件下，反应2小时左右。TLC监测反应进程(乙酸乙酯/石油醚＝2/1)。反应毕，加入2，4-二甲基苯胺(1.16g,9.58mmol)，继续反应2小时，TLC监测反应(乙酸乙酯/石油醚＝2/1)。反应完毕，降至室温，抽滤，干燥，得到黄色固体粉末3a 2.72g，两步总收率：91.0％。m.p.:176.5-177.9℃.¹H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.64(s,1H,ArH),9.97(d,J＝7.7Hz,1H,ArH),8.80(s,1H,ArH),8.05(d,J＝11.6Hz,1H,NH),7.50–6.99(m,3H),2.33(s,3H,CH₃),2.19(s,3H,CH₃).ESI-MS m/z:298.1{[M+H]⁺}.

将吗啉乙醇(2.10g,16.01mmol)、钠氢(0.56g,23.05mmol)与四氢呋喃(20mL)混合于50mL单口烧瓶内，在氮气保护下反应3小时，加入中间体3a，室温反应2～3h。TLC监测反应进程(乙酸乙酯/石油醚＝3/2)，反应结束后，将反应液倒入冰水中，调pH＝7，蒸干溶剂，所得固体经柱层析纯化得黄色固体4a 2.70g，收率74％。m.p.:77.9-81.2℃.¹H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.96(s,1H),9.17(s,1H),8.42(s,1H),7.48(s,1H),7.19–7.12(m,2H),7.06(d,J＝8.1Hz,1H),4.42(t,J＝5.5Hz,2H),3.59–3.56(m,4H),2.77(t,J＝5.5Hz,2H),2.51(dd,J＝3.6,1.9Hz,4H),2.32(s,3H),2.13(s,3H).ESI-MS m/z:409.2{[M+H]⁺}.

将中间体4a(2.00g,4.72mmol)、锌粉(1.54g,23.61mmol)、二氯甲烷(10mL)与甲醇(10mL)混合于100mL单口烧瓶中，再向其中加入饱和氯化铵水溶液20mL，室温搅拌4小时。TLC监测反应进程(二氯乙烷/甲醇＝10/1)，反应结束后，过滤，滤饼用10mL DMF溶解，过滤，向DMF溶液中加入50mL去离子水，过滤，用少量甲醇水溶液洗涤，干燥，得黄白色固体5a1.52g，收率82％。m.p.:83.4-86.8℃.¹H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.90(s,1H),8.32(s,1H),7.45(s,1H),7.29(s,1H),7.19(d,J＝2.1Hz,1H),7.16(s,1H),7.12(s,2H),7.07(s,1H),4.46(s,2H),3.86(s,4H),3.55(s,2H),3.09(s,4H),2.31(s,3H),2.11(s,3H).ESI-MS m/z:379.2{[M+H]⁺}.

将中间体5a(1.00g,2.54mmol)、三乙胺(0.77g,7.62mmol)与N，N-二甲基甲酰胺(10mL)混合于50mL单口烧瓶中，置于-10℃下低温搅拌，再向其中缓慢加入丙烯酰氯(0.575g,6.35mmol)，继续搅拌半小时。TLC监测反应进程(乙酸乙酯/石油醚＝3/1)，反应结束后，向反应液中加入30mL水，再使用乙酸乙酯(2×30mL)萃取，有机相干燥，过滤，浓缩得白色固体粉末N-(4-((2,4-二甲基苯基)氨基)-7-(2-吗啉乙氧基)喹唑啉-6-基)-2-亚甲基-3-氧基-4-烯酰胺(I-a)0.33g，收率：26％。m.p:204.7-207.3℃.¹H NMR(500MHz,Chloroform)δ9.14(s,2H),8.49(s,2H),7.75(d,J＝9.9Hz,4H),7.19(s,2H),7.14–7.03(m,6H),6.91(d,J＝51.9Hz,4H),6.16(s,2H),5.80(s,2H),4.86(s,2H),4.07(s,2H),3.57(s,7H),2.69(s,2H),2.50(s,7H),2.24(s,6H),2.13(s,6H).ESI-MS m/z:502.2{[M+H]⁺}.

实施例2

N-(7-(2-吗啉乙氧基)-4-(对甲苯氨基)喹唑啉-6-基)异丁酰胺的合成

按照实施例1相同的方法制备，将苯胺取代基替换为对甲基苯胺，丙烯酰氯替换为异丁酰氯，经氯代，胺化，烷基化，硝基还原，胺化5步反应合成目标化合物(I-b)0.23g，收率：64％。m.p:89.5-88.2℃.¹H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.64(s,1H),8.42(s,1H),8.34(s,1H),7.30(s,1H),7.12(d,J＝5.7Hz,3H),7.05(s,2H),4.27(s,2H),3.55(s,4H),2.96(s,2H),2.70(s,1H),2.44(s,4H),2.30(s,3H),1.07(s,6H).ESI-MS m/z:450.2{[M+H]⁺}.

实施例3

N-(7-(环己基氧基)-4-(2,4-二甲基苯基)氨基)喹唑啉-6-基)异丁酰胺的合成

按照实施例1相同的方法制备，将吗啉乙醇替换为环己醇，丙烯酰氯替换为异丁酰氯，经氯代，胺化，烷基化，硝基还原，胺化5步反应合成目标化合物(I-c)0.45g，收率：36％。m.p:95.4-96.7℃.¹H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.44(s,1H,NH),9.09(s,1H,ArH),8.66(s,1H,ArH),8.26(s,1H,ArH),7.22(s,1H,NH),7.07(d,J＝21.2Hz,3H,ArH),4.64(s,1H,CH),2.83–2.74(m,1H,CH),2.30(s,3H,CH3),2.11(s,3H,CH3),1.99(s,2H,CH2),1.67(d,J＝42.1Hz,8H,CH2),1.24–1.10(m,6H,CH3).ESI-MS m/z:433.3{[M+H]⁺}.

实施例4

N-(7-(环己基氧基)-4-((4-氟-2-甲基苯基)氨基)喹唑啉-6-基)-2-亚甲基-3-氧基-4-烯酰胺的合成

按照实施例1相同的方法制备，将苯胺取代基替换为2-甲基-4-氟-苯胺，将吗啉乙醇替换为环己醇，经氯代，胺化，烷基化，硝基还原，胺化5步反应合成目标化合物(I-d)0.25g，收率：18％。m.p:125.6-127.9℃.¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.51(s,1H),9.12(s,1H),8.67(s,1H),8.28(s,1H),7.24(s,1H),7.18–7.15(m,1H),7.07(d,J＝6.1Hz,2H),4.67(s,1H),2.82–2.76(m,1H),2.15(s,3H),1.96(s,2H),1.74(s,2H),1.59(dd,J＝22.4,9.6Hz,6H),1.17(s,3H),1.15(s,3H).ESI-MS m/z:475.2{[M+H]⁺}.

实施例5

N-(4-((4-氟-2-甲基苯基)氨基)-7-(2-吗啉乙氧基)喹唑啉-6-基)-2-亚甲基-3-氧基-4-烯酰胺的合成

按照实施例1相同的方法制备，将苯胺取代基替换为2-甲基-4-氟-苯胺，经氯代，胺化，烷基化，硝基还原，胺化5步反应合成目标化合物(I-e)0.28g，收率：57％。m.p:201.4-203.7℃.¹H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.49(s,1H),9.00(d,J＝2.7Hz,1H),8.90(s,1H),7.59(s,1H),7.40(d,J＝2.9Hz,1H),7.31(dd,J＝9.7,2.7Hz,1H),7.16–7.08(m,1H),6.83(dd,J＝17.0,10.2Hz,1H),6.39–6.32(m,2H),6.21(d,J＝3.4Hz,1H),5.89–5.81(m,2H),4.84(s,1H),2.35(s,3H),2.09(s,2H),1.81(s,2H),1.73–1.60(m,4H),1.55–1.49(m,2H).ESI-MSm/z:506.2{[M+H]⁺}.

实施例6

N-(4-((2,4-二甲基苯基)氨基)-7-(2-吗啉乙氧基)喹唑啉-6-基)异丁酰胺的合成

按照实施例1相同的方法制备，将丙烯酰氯替换为异丁酰氯，经氯代，胺化，烷基化，硝基还原，胺化5步反应合成目标化合物(I-f)0.67g，收率68.60％。m.p:113.4-115.8℃.¹H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.52(s,1H),9.18(s,1H),8.69(s,1H),8.28(s,1H),7.30–7.25(m,1H),7.24(s,1H),7.14(dd,J＝9.8,2.8Hz,1H),7.04(td,J＝8.6,3.0Hz,1H),4.29(t,J＝5.6Hz,2H),3.59–3.55(m,4H),2.82(d,J＝5.5Hz,2H),2.77–2.71(m,1H),2.55–2.50(m,4H),2.13(s,3H),1.15(s,3H),1.13(s,3H).ESI-MS m/z:464.3{[M+H]⁺}.

实施例7

N-(7-(环己基氧基)-4-(苯胺基)喹唑啉-6-基)-2-亚甲基-3-氧基-4-烯酰胺的合成

按照实施例1相同的方法制备，将吗啉乙醇替换为环己醇，苯胺取代基换为苯胺，经氯代，胺化，烷基化，硝基还原，胺化5步反应合成目标化合物(I-g)0.46g，收率：32％。m.p:250℃+.¹H NMR(500MHz,Chloroform)δ8.95(s,23H),8.49(s,23H),8.04(s,48H),7.68(s,23H),7.55(s,23H),7.33(s,37H),7.19(s,24H),7.10(s,26H),7.02(s,20H),6.96(s,12H),6.16(s,24H),5.80(s,24H),4.33(s,9H),3.73(s,23H),2.23(s,20H),1.77(s,20H),1.46(dd,J＝30.0,20.0Hz,133H).ESI-MS m/z:443.2{[M+H]⁺}.

实施例8

N-(7-(2-吗啉乙氧基)-4-(苯胺基)喹唑啉-6-基)-2-亚甲基-3-氧基-4-烯酰胺的合成

按照实施例1相同的方法制备，将苯胺取代基换为苯胺，经氯代，胺化，烷基化，硝基还原，胺化5步反应合成目标化合物(I-h)0.36g，收率：51.50％。m.p:127.9-130.7℃.¹HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.59(s,1H,NH),9.05(s,1H,ArH),8.93(s,1H,ArH),7.60(s,1H,NH),7.43(h,J＝1.2Hz,2H,ArH),7.40(d,J＝0.8Hz,1H,ArH),7.34(td,J＝3.0,1.2Hz,2H,ArH),6.75(dd,J＝17.0,10.3Hz,1H,ArH),6.36–6.28(m,2H,＝CH),6.27(dd,J＝1.9,1.0Hz,1H,＝CH),5.84(t,J＝1.8Hz,1H,＝CH),5.79(dd,J＝3.4,2.0Hz,1H,＝CH),4.44(t,J＝5.9Hz,2H,OCH2),3.57–3.53(m,4H,OCH2),2.87(t,J＝5.8Hz,2H,NCH2),2.48(d,J＝1.8Hz,4H,NCH2).ESI-MS m/z:474.2{[M+H]⁺}.

实施例9

N-(7-(环己基氧基)-4-(对甲苯氨基)喹唑啉-6-基)-2-亚甲基-3-氧基-4-烯酰胺的合成

按照实施例1相同的方法制备，将吗啉乙醇换为环己醇，苯胺取代基换为对甲基苯胺，经氯代，胺化，烷基化，硝基还原，胺化5步反应合成目标化合物(I-i)0.43g，收率48％。m.p:236.30-238.50℃.¹H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.43(s,1H,NH),9.04(s,1H,ArH),8.95(d,J＝8.3Hz,1H,ArH),7.98(d,J＝11.8Hz,1H,ArH),7.19(s,1H,NH),7.05(d,J＝1.2Hz,2H,＝CH),6.74(dd,J＝17.0,10.2Hz,1H,＝CH),6.37(t,J＝2.4Hz,1H,＝CH),6.31(dd,J＝3.1,2.0Hz,1H,＝CH),6.21(d,J＝10.0Hz,1H,ArH),5.82(td,J＝10.6,2.0Hz,3H,ArH),2.29(s,4H,CH2),2.22(s,3H,CH3),1.35–1.09(m,6H,CH2).ESI-MS m/z:457.2{[M+H]+}.

实施例10

N-(7-(2-吗啉乙氧基)-4-(对甲苯氨基)喹唑啉-6-基)-2-亚甲基-3-氧基-4-烯酰胺的合成

按照实施例1相同的方法制备，将苯胺取代基换为对甲基苯胺，经氯代，胺化，烷基化，硝基还原，胺化5步反应合成目标化合物(I-j)0.37g，收率：43.67％。m.p:210.7-212.4℃.¹H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.05(s,1H),9.25(s,1H),8.94(s,1H),8.59(s,1H),7.69(s,1H),7.67(s,1H),7.49(s,1H),7.24(s,3H),7.20(s,1H),6.98–6.55(m,1H),6.32(d,J＝15.6Hz,1H),5.81(dd,J＝16.5,10.4Hz,1H),3.86(s,2H),3.57(s,4H),2.77(s,2H),2.52(s,4H),2.31(s,3H).ESI-MS m/z:488.2{[M+H]+}.

实施例11

片剂制备方法如下：

工艺：将活性成分辅料分别过100目筛，称取处方量的主药和辅料(一半羧甲基淀粉钠)充分混合，加入聚乙烯吡咯烷酮水溶液适量制软材，过24目筛，制得湿颗粒于50℃烘箱中干燥约2小时，将剩余羧甲基淀粉钠和硬脂酸镁与颗粒混合均匀，整粒，测定中间体含量，用

浅冲压片。

实施例12

注射液的制备

I-a50 mg

磷酸二氢钠 5mg

柠檬酸 15mg

注射用水 30mL

工艺：取注射用水30mL,称取处方量的柠檬酸、磷酸二氢钠搅拌使溶解，加入样品搅拌溶解，用0.1mol/L的盐酸或氢氧化钠调pH值为5.0，加入0.1％的活性炭吸附30分钟。用0.22μm精滤。按每安瓿5毫升灌装，105℃高温灭菌30分钟即得注射液。

实施例13

化合物I的体外抗肿瘤活性试验

(1)材料

细胞株：人肺腺癌细胞(A549)、人肺癌耐药细胞(H1975)。

试剂：CCK8，Bio-lifesci公司。

仪器：超净工作台，苏州净化设备厂；CO₂培养箱，Thermo公司，型号：HERACell150；倒置显微镜，Carl Zeiss公司，型号：Axiovert 200；酶联免疫检测仪，TECAN公司，型号：Sunrise。

(2)方法

细胞培养：检测前1天，将A549细胞按1000每孔接种于96孔细胞板中，将NCI-H1975细胞按2000每孔接种于96孔细胞板中,每孔接种80μL细胞悬液，细胞板置于37℃，5％CO₂培养箱，孵育过夜。

CCK8法检测：取出培养箱中的细胞板，根据化合物排布图，加入20μL/孔已配置好的化合物工作液到细胞板中，细胞板在37℃，5％CO₂培养箱，避光孵育72小时。结束孵育后，细胞加入CCK8，10uL/孔，置于37℃，5％CO₂培养箱中孵育1小时。在Envision上测定450nm波长处的吸光度，计算抑制率，Bliss法计算受试衍生物的IC₅₀值，试验结果见表1及表2。

抑制率(％)＝(OD_S-OD_NC)/(OD_STSP-OD_NC)×100％

OD_S:样品孔的吸光值(待测化合物)

OD_NC:阴性孔吸光值(细胞+培养基+DMSO)

OD_STSP:STSP孔吸光值(细胞+培养基+10μM STSP)

(3)结果

表1对体外培养细胞的抑制率(％)

表2部分衍生物对体外细胞培养的IC₅₀(nM/mL)

Claims

1.通式(Ⅰ)所示的喹唑啉衍生物或其药学上可接受的盐：

2.根据权利要求1所述的喹唑啉衍生物或其可药用盐，其特征在于：R1选自单取代的氟、甲基、二取代的甲基或二取代的甲基和氟；R2选自环己基或乙基吗啉；R3选自异丙基或2-1,4-戊二烯-3-酮基。

3.根据权利要求1～2所述的喹唑啉衍生物或其药学上可接受的盐，其特征在于：喹唑啉衍生物或其药学上可接受的盐与无机酸形成药用盐，适用的酸为：盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸、酒石酸、水杨酸、甲磺酸、琥珀酸、富马酸、丁二酸、乳酸、柠檬酸、苹果酸或马来酸。

4.权利要求1～2中所述喹唑啉衍生物或其药学上可接受的盐作为制备治疗以异常EGFR家族疾病的药物中的应用。

5.权力要求1～2中所述喹唑啉衍生物或其药学上可接受的盐，以及含有该任一化合物或盐类作为活性成分的药物组合物作为制备抗肿瘤药物的应用。

6.根据权力要求5所述的应用，其用于制备皮下给药或口服的药物制剂。

7.根据权力要求5所述的应用，对人肺腺癌细胞A549、人肺癌耐药细胞H1975具有细胞增殖抑制作用。