KR20210036913A

KR20210036913A - 섬유성 유착 및 다른 질병과 상태들을 치료하는 고분자량 푸칸

Info

Publication number: KR20210036913A
Application number: KR1020217001215A
Authority: KR
Inventors: 크리스토퍼 마이클 케빈 스프링게이트; 이안 밀렛; 세일리시 해레시 대스와니; 해성 선
Original assignee: 에이알시 메디컬 디바이시즈 인코포레이션
Priority date: 2018-07-27
Filing date: 2019-07-24
Publication date: 2021-04-05
Also published as: AU2019310194A1; AU2022203958A1; MX2021000864A; MX2021000860A; EP3829600A1; KR20210036914A; EP3830183A1; MX2021000863A; IL280174A; JP2022177054A; WO2020019081A1; TW202019443A; AU2019310656A1; BR112021000631A2; JP2021533218A; KR20210040359A; CN112513104A; PH12021550105A1; JP2021531305A; CN112533989A

Abstract

본원의 조성물, 시스템, 장치, 재료 및 방법 등은 고분자량 푸칸을 제공한다. 이런 고분자량 푸칸은 공급원료 푸칸 조성물이나 원하는 고분자량 구간/부분을 포함하는 넓은 분자량 분포를 갖는 푸칸을 갖는 다른 출발이나 초기 푸칸 조성물로부터 수득될 수 있다(즉, 이는 고분자량 푸칸이 유도될 수 있으며, 이런 출발 푸칸 조성물은 미정제이거나 아니거나 미리 가공이나 정제된 것일 수 있다). 원하는 고분자량 푸칸은 본질적으로 출발 푸칸의 넓은 분자량 분포의 원하는 고분자량 구간/부분으로 구성된 분자량 분포를 가지며, 여기서 저분자량 말단에서의 넓은 분자량 분포의 상당량은 모든 잔류량이 중요하지 않도록 제거, 억제 또는 감쇠되었다.

Description

섬유성 유착 및 다른 질병과 상태들을 치료하는 고분자량 푸칸

본원은 공동계류중인 미국 가특허출원 62,711,364(2018년 7 월 27 일 출원); 미국 가특허출원. 62,711,372(2018 년 7 월 27 일 출원); 미국 가특허출원 62/711,335(2018 년 7 월 27 일 출원); 미국 가특허출원 62/713,399(2018 년 8 월 1 일 출원); 미국 가특허출원 62/722,135(2018 년 8 월 23 일 출원); 미국 가특허출원 62/755,311(2018 년 11 월 2 일 출원); 미국 가특허출원 62/793,514(2019 년 1 월 17 일 출원); 미국 가특허출원 62/861,223(2019 년 6 월 13 일 출원); 공동 계류중인 미국 가특허출원62/713,392(2018 년 8 월 1 일 출원); 미국 가특허출원 62/713,413(2018 년 8 월 1 일 출원); 미국 가특허출원 62/722,137( 2018 년 8월 23일 출원); 미국 가특허출원 62/755,318(2018년 11월 2일 출원); 미국 가특허출원 62/861,228(2019년 6월 13일 출원); 공동 계류중인 미국 가특허출원 62/755,328(2018 년 11월 2일 출원); 미국 가특허출원 62/793,654(2019 년 1 월 17 일 출원); 및 미국 가특허출원 62/861,235(2019 년 6 월 13 일 출원)의 이익을 주장하고, 모든 출원은 전체가 참조로 본 명세서에 포함된다.

(후코이단 포함한) 푸칸은 황산화 다당류로, 일반적으로 많은 당기로 구성된 분자이며 당기에 부착된 황 원자를 갖고 있음을 의미한다. 주요 당기는 "푸코스"라 하는데, 이것은 6 개의 탄소 원자를 갖는 화학식 C₆H₁₂O₅를 갖는 당이다. "후코이단"(또는 후코이딘)은 갈조류(해초)에서 유도된 푸칸을 나타낸다. 푸칸은 단독으로나 다른 당의 혼합물로, 예를 들어 자일로스, 갈락토스, 글루코스, 글루쿠론산 및/또는 만노스와 같은 당의 혼합물로 존재할 수 있다. 이런 다른 당은 푸칸과 함께 해조류나 기타 공급원에서 추출할 수 있다. 푸칸은 현재 본 명세서에서 언급된 갈조류(해조류), 해삼 등과 같은 천연 공급원으로부터 유래되지만, "푸칸"은 최종 공급원에 관계없이 본원에서 논의된 푸칸의 화학적 및 구조적 모티프를 갖는 중합체 분자를 포함한다.

후코이단은 Hizikia fusiforme, Himanthalia Elongata, Kjellmaniella crassifolia, Laminaria brasiliensis, Laminaria cichorioides, Laminaria hyperborea, Laminaria japonica, Laminaria saccharina, Lessonia trabeculata, Macrocystis pyrifera, Saccharina laponica, Saccharina laponica, Saccharina, Saccharina, confusum, Sargassum fusiforme 및 Undaria pinnatifida을 포함한 다양한 종의 갈조류로부터 얻을 수 있지만, 이에 한정되지도 않는다. 예로 든 종들은 모두 Phaeophyceae의 분류학적인 분류에 속하며 이들 종의 대부분은 Fucales 및 Laminariaceae 계통에 속한다.

후코이단을 포함한 푸칸은 섬유성 유착의 형성을 방지, 억제 및 치료하는 장벽 장치로서의 역할에 효과적인 것으로 나타났다. 푸칸은 다른 관련 질병 및 상태의 치료에도 효과적임이 밝혀졌다.

따라서, 원하는 황화 수준 및/또는 의학적으로 생존가능한 저엔도톡신 수준을 갖도록 변형되는 것을 포함해 원하는 고분자량을 갖는 푸칸을 포함한 조성물에 대한 요구가 여전히 충족되지 않았다. 본원의 조성물, 시스템 및 방법 등은 이런저런 장점들을 제공한다.

어떤 면에서, 본원의 조성물, 시스템, 방법 등은 후코이단이 고분자량 분포를 포함하거나 구성되도록 고분자량 푸칸을 포함하는데, 이 분자량 분포의 60 %w/w 이상은 본질적으로 다음으로 구성된 수성 겔투과 크로마토그래피 셋업을 이용해 측정했을 때 100kDa를 초과할 수 있다:

유효 분자량 범위가 약 50kDa 내지 5,000kDa이고 히드록실화 폴리메타크릴레이트 기반 겔로 채워진 내경 7.8mm의 300mm 분석 겔투과 크로마토그래피 컬럼 1개, 유효 분자량 범위가 약 1kDa 내지 6,000kDa이고 히드록실화 폴리메타크릴레이트 기반 겔로 채워진 내경 7.8mm의 300mm 분석 겔투과 크로마토그래피 컬럼 1개, 및 히드록실화 폴리메타크릴레이트 기반 겔로 채워진 내경 6mm의 40mm 가드 컬럼 1개로서, 약 30 ℃로 컬럼 구획에 들어있는2 개의 분석 겔투과 크로마토그래피 컬럼과 1 개의 보호 컬럼;

약 30 ℃의 굴절률 검출기;

0.6ml/min로 실행되는 0.1M 질산나트륨 이동상; 및

피크 분자량이 약 2,200kDa인 첫 번째 덱스트란 표준, 피크 분자량이 약 720kDa내지 760kDa인 두 번째 덱스트란 표준, 피크분자량이 약 470kDa 내지 510kDa인 세 번째 덱스트란 표준, 피크 분자량이 약 370kDa 내지 410kDa인 네 번째 덱스트란 표준, 피크분자량이 약 180kDa 내지 220kDa인 다섯 번째 덱스트란 표준, 및 피크 분자량이 약 40kDa 내지 55kDa인 여섯 번째 덱스트란 표준으로 구성된 피크분자량 표준 곡선에 대한 정량화.

분자량 분포의 적어도 약 70 %w/w, 80 %w/w, 90 %w/w, 93 %w/w, 94 %w/w, 95 %w/w, 97 %w/w, 98 %w/w 또는 99 %w/w가 100kDa보다 클 수 있다. 중량 평균 분자량은 약 100kDa 내지 10,000kDa; 약 140kDa 내지 8,100kDa; 약 370kDa 내지 8100kDa; 약 370kDa 내지 5300kDa; 약 370kDa 내지 8100kDa; 약 370kDa 내지 5300kDa; 약 370kDa 내지 1900kDa; 약 590kDa 내지 1600kDa; 약 590kDa 내지 1600kDa; 또는 약 860kDa 내지 1600kDa일 수 있다. 또는, 중량 평균 분자량이 약 1,100kDa, 약 1,200kDa, 또는 약 1,300kDa 일 수 있다. 수평균분자량은 약 50kDa 내지 3,000kDa; 약 60kDa 내지 2,000kDa; 약 140kDa 내지 2,000kDa; 약 140kDa 내지 520kDa; 또는 약 230kDa 내지 450kDa일 수 있다. 이 분포의 55 %w/w, 71 %w/w 또는 91 %w/w 이상은 약 200kDa보다 클 수 있다. 또는, 이 분포의 22 %, 54 %w/w 또는 90 %w/w 이상이 약 500kDa보다 클 수 있다.

일부 실시예에서, 고분자량 푸칸은 분자량 분포의 약 61 %w/w 내지 80 %w/w가 전술한 수성 겔투과 크로마토그래피 셋업을 사용해 측정했을 때 약 200kDa 내지 1600kDa인 분자량 분포를 갖거나 이루어질 수 있다. 고분자량 푸칸은 전술한 수성 겔투과 크로마토그래피 셋업을 사용해 측정했을 때 분포의 적어도 60 %w/w가 약 1600kDa보다 클 수 있는 분자량 분포로 본질적으로 구성되거나 포함할 수도 있다.

설페이트 함량은 약 20 %w/w 내지 60 % w/w, 약 30 %w/w 내지 55 % w/w, 또는 약 32 %w/w 내지 52 %w/w 일 수 있다. 총 탄수화물 함량은 약 27 %w/w 내지 80 %w/w 일 수 있다. 총 탄수화물 함량의 백분율로서 총 푸코스 함량은 적어도 약 30 % w/w, 50 % w/w, 70 % w/w, 80 % w/w, 90 %w/w 또는 95 % w/w일 수 있다. 총 탄수화물 함량의 백분율로서 총 갈락토오스 함량은 약 60 %w/w 미만, 약 2 %w/w 내지 20 %w/w, 또는 약 10 %w/w 미만일 수 있다. 총 탄수화물 함량의 백분율로서 글루쿠론산, 만노스, 람노스, 글루코스 및 자일로스 함량의 총량은 약 30 %w/w 미만일 수 있다.

50 mg/mL의 농도로 물에 용해되었을 때 고분자량 푸칸은 점도가 약 4cP 내지 50cP, 10cP내지 40cP; 또는 15cP 내지 30cP 일 수 있다. 고분자량 푸칸은 흰색 고체 일 수 있으며 1mg/mL내지 100mg/mL의 농도로 물에 용해되면 투명한 무색 용액이 될 수 있다. 푸칸은 약 5 % w/w 또는 2 % w/w 미만의 아세틸 함량을 포함할 수 있다. 푸칸은 256-512 스캔 각각의 8증분으로 탄소차원의 10-30ppm 범위에서5mm 콜드프로브가 장착된 600MHz 분광계에서 용매 신호 억제를 사용하여 70℃에서 2D ¹H-¹³C 이종핵 다중 양자 일관성으로 측정했을 때 실질적으로 0 %w/w의 아세틸 함량을 포함할 수 있다.

또한, 섬유성 유착 치료를 포함해, 고분자량 푸칸을 제조/사용하는 방법도 본원에 포함된다. 의학적으로 허용되는 완충액이나 희석제에 치료 유효량의 고분자량 푸칸을 포함할 수 있는 의학적으로 허용되는 푸칸 조성물도 본원에 더 포함된다. 이 방법은 질환 또는 질환을 치료하기 위해 본원에서 의학적으로 허용되는 푸칸 조성물을 선택하는 단계와, 약 0.5 mg/kg 내지 50 mg/kg; 0.04 mg/kg 내지 25 mg/kg; 0.2 mg/kg 내지 10 mg/kg; 1mg/kg 내지 5mg/kg; 1.5 mg/kg 내지 3 mg/kg; 5mg/kg 내지 10mg/kg을 포함하는 치료학적 유효량을 투여하는 단계를 포함할 수 있은 동물의 질환 또는 질환을 치료하는 방법도 포함한다.

이런 상태나 질병은 동물의 표적 부위에서 섬유성 유착일 수 있고, 투여는 표적 부위에 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함할 수 있다.

의료 조성물은 약 0.02 mg/mL 내지 100 mg/mL의 고분자량 푸칸일 수 있으며, 여기서 의료 조성물은 동물의 질병이나 상태를 치료하도록 구성된다. 의료 조성물이 약 0.5 mg/mL 내지 5 mg/mL 또는 약 2.5 mg/mL의 고분자량 푸칸일 수도 있다.

의료조성물은 액체 의료기기를 포함하는 의료기기나, 액체 제약 조성물인 제약 조성물일 수도 있다.

본원의 방법은 또한 약 0.01 mL/kg 내지 15 mL/kg; 약 0.03 mL/kg 내지 4 mL/kg; 약 0.06 mL/kg 내지 2 mL/kg; 또는 약 2 mL/kg 내지 4 mL/kg의 동물의 질병이나 상태를 치료하기 위한 의료 조성물을 포함한 용량 범위의 사용을 포함할 수도 있다.

환자의 섬유성 유착을 치료하는 방법은 의료조성물을 환자의 표적 부위에 투여하는 것을 포함할 수 있다. 표적 부위는 수술 부위일 수 있고, a) 수술 부위의 수술 상처를 개봉한 후, b) 수술 중, c) 수술 상처를 닫은 후 중 적어도 하나에서 투여할 수 있다. 수술 후 수술 상처를 닫기 전에 투여할 수도 있다. 투여에 3 분, 2 분 또는 1 분 미만이 소요될 수 있다. 표적 부위는 병변, 마모 및 손상 부위 중 적어도 하나 일 수 있다. 표적 부위가 골반강, 복강, 등강, 두개강, 척수강, 복강, 흉강, 심낭강, 피부, 관절 근육, 힘줄 및 인대 중 적어도 하나일 수도 있다.

또, 본원의 방법이 고분자량 푸칸을 수득하는 방법을 포함할 수도 있고, 이 방법은 다음 단계들을 포함할 수 있다

원하는 고분자량 푸칸 구간을 포함해 넓은 분자량 분포를 갖는 출발 푸칸 조성물을 출발 용액에 제공하는 단계;

출발 용액을 제 1 고분자량 컷오프 접선유동여과 필터를 통한 제 1 접선유동여과를 하여 제 1 투과물푸칸 조성물을 생성하는 단계; 및

제 1 투과물 푸칸 조성물을 제 2 저분자량 컷오프 접선유동여과 필터를 통한 제 2 접선유동여과를 하여 본질적으로 원하는 고분자량 푸칸으로 구성된 제 2 잔류물 푸칸 조성물을 생성하는 단계.

이 방법은 본질적으로 원하는 고분자량 푸칸으로 구성된 제 2 잔류물 푸칸 조성물을 수집하는 단계를 더 포함할 수 있고, 제 1 고분자량 컷오프 접선유동여과 필터는 약 50kDa 내지 1000kDa의 고분자량 컷오프를 가지며, 제 2 저분자량 컷오프 접선유동여과 필터는 약 30kDa 내지 100kDa의 저분자량 컷오프를 가질수 있다. 고분자량 컷오프가 약 300kDa이고 저분자량 컷오프는 약 100kDa일 수도 있다.

분자량 푸칸을 얻는 방법은 다음 단계들을 포함할 수 있다 :

출발 용액에 원하는 고분자량 푸칸 구간을 갖는 넓은 분자량 분포를 갖는 출발 푸칸 조성물을 제공하는 단계;

출발 용액을 제1 저분자량 컷오프 접선유동여과 필터를 통한 접선유동여과를 하여 제 1 잔류물 푸칸 조성물을 생성하는 단계; 및

제 1 잔류물 푸칸 조성물을 제 2 고분자량 컷오프 접선유동여과 필터를 통한 접선유동여과를 하여 본질적으로 원하는 고분자량 푸칸으로 구성된 제 2 투과물 푸칸 조성물을 생성하는 단계.

이 방법은 본질적으로 원하는 고분자량 푸칸으로 구성된 제 2 투과물 푸칸 조성물을 수집하는 단계를 더 포함할 수 있다. 제 1 접선유동여과는 제 1 저분자량 컷오프 접선유동여과 필터를 통해 출발 용액을 투석여과하는 것을 포함할 수 있다. 제 2 접선유동여과는 제 2 고분자량 컷오프 접선유동여과 필터를 통해 제 1 잔류물 푸칸 조성물을 투석여과하는 것을 포함할 수 있다. 제 1 저분자량 컷오프 접선유동여과 필터는 약 30kDa 내지 100kDa의 저분자량 컷오프를 가지며, 제 2 고분자량 컷오프 접선유동여과 필터는 약 50kDa 내지 1000kDa의 고분자량 컷오프를 가질 수 있다. 저분자량 컷오프가 약 100kDa이고, 고분자량 컷오프가 약 300kDa일 수도 있다.

고분자량 푸칸을 얻는 방법이 아래 단계들을 포함할 수 있다 :

출발 용액에 원하는 고분자량 푸칸 구간을 포함해 넓은 분자량 분포를 갖는 출발 푸칸 조성물을 제공하되, 출발 푸칸 조성물이 푸칸의 설페이트기에 이온결합된 저원자량 양이온을 포함하는 단계; 및

원하는 고분자량 푸칸으로 구성된 잔류물 푸칸 조성물을 생성하기 위해 저원자량 양이온보다 더 큰 분자량을 갖는 양이온 첨가제를 포함한 양이온 첨가제 용액에 대해 출발 용액을 접선유동여과하는 단계.

이 방법은 본질적으로 원하는 고분자량 푸칸으로 구성된 잔류물 푸칸 조성물을 수집하는 단계를 더 포함할 수 있다. 저원자량 양이온은 알칼리 금속, 알칼리토금속, 알루미늄 및 암모늄 중 하나 이상을 포함한다. 양이온 첨가제는 콜린, 폴리비닐피롤리돈, 타우린, 폴리아민, 키토산, 히스톤 및 콜라겐 중 적어도 하나를 포함할 수 있다. 이 방법은 출발 용액을 접선유동여과하기 전에 양이온 첨가제를 출발 용액에 첨가하는 단계를 더 포함할 수 있다. 접선유동여과시 양이온 첨가제 용액에 대해 출발 용액을 투석여과할 수 있다. 이 방법은 또한 제 1 접선유동여과 필터의 분자량 컷오프보다 낮은 분자량 컷오프를 갖는 제 2 접선유동여과 필터로 염용액에 대해 잔류물 푸칸 조성물을 투석여과해 양이온 첨가제를 제거하는 단계를 더 포함할 수 있다.

염용액은 염화물, 브롬화물, 요오드화물, 불화물, 황산염, 아황산염, 탄산염, 중탄산염, 인산염, 질산염, 아질산염, 아세테이트, 구연산염, 알칼리 금속, 알칼리토금속, 알루미늄 및/또는 암모늄의 규산염 및/또는 시안화물을 포함할 수 있다. 이 방법은 저이온 강도 용액에 대해 잔류물 푸칸 조성물을 투석여과해 염을 제거하는 단계를 더 포함할 수 있다.

고분자량 푸칸을 얻는 방법은 다음 단계들을 포함할 수 있다 :

원심분리기의 하단부와 상단부 사이에 구배재료를 갖는 투과장벽을 갖는 원심분리기를 제공하는 단계;

원하는 고분자량 푸칸 구간을 포함해 넓은 분자량 분포를 갖는 출발 푸칸 조성물을 원심분리기내 투과 장벽 위에 두는 단계; 및

본질적으로 원하는 고분자량 푸칸으로 구성된 침전물을 생성하기에 충분한 시간 동안 원심분리기를 원심분리하는 단계.

이 방법은 원심분리기로부터 원하는 고분자량 푸칸을 수집하는 단계를 더 포함할 수 있다. 투과 장벽이 단일 구간의 구배재료를 갖거나, 복수 구간의 구배재료 가질 수 있다. 구배재료는 수크로스, 폴리수크로스, 글리세롤, 소르비톨, CsCl, Cs₂SO₄, KBr, 디아트리조에이트, Nycodenz® 및 이오딕사놀 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 원심력은 약 10,000 내지 1,000,000 중력, 또는 60,000 내지 500,000 중력일 수 있다.

고분자량 푸칸을 얻는 방법이 다음 단계들을 포함할 수도 있다 :

하단과 상단을 갖는 원심분리기를 제공하는 단계;

원하는 고분자량 푸칸 구간을 포함해 넓은 분자량 분포를 갖는, 출발 용액의 출발 푸칸 조성물을 원심분리기에 두는 단계; 및

이 방법이 원심분리기로부터 원하는 고분자량 푸칸을 침전물로 수집하는 단계를 더 포함할 수 있다. 원심력은 약 60,000 내지 1,000,000 중력, 또는 200,000 내지 500,000 중력일 수 있다.

고분자량 푸칸을 얻는 방법은 다음 단계들을 포함할 수도 있다 :

원하는 고분자량 푸칸 구간을 포함해 넓은 분자량 분포를 갖는 출발 푸칸 조성물을 겔 전기영동에 적용하되, 출발 푸칸 조성물을이 전기영동 겔에서 질량 대 전하 비율에 따라 변위되는 단계;

본질적으로 원하는 고분자량 푸칸으로 구성된 전기영동 겔 부분을 선택하는 단계; 및

선택된 전기영동 겔 부분에서 원하는 고분자량 푸칸을 추출하는 단계.

출발 푸칸 조성물을 겔 전기영동할 때 전기영동 겔에 10 Volt/cm 내지 200 Volt/cm 전위차를 가할 수 있다. 전기영동 겔은 아가로스, 폴리아크릴아미드, 폴리디메틸아크릴아미드 및 전분 중 적어도 하나를 포함할 수 있다. 전기영동 겔이 트리스-아세테이트 EDTA, 트리스-보레이트 EDTA 및 포스페이트 완충 식염수 중 적어도 하나를 더 포함할 수도 있다. 선택된 전기영동 겔 부분에서 원하는 고분자량 푸칸을 추출할 때 용매에서 선택된 전기영동 겔 부분을 교반할 수 있다. 용매는 물, 메탄올, 에탄올 및 이소프로판올 중 적어도 하나를 포함할 수 있다.

고분자량 푸칸을 얻는 방법은 다음을 포함할 수 있다 :

원하는 고분자량 푸칸 구간을 포함해 넓은 분자량 분포를 갖는 출발 푸칸 조성물과, 이온교환 거대다공성 수지를 제공하는 단계; 및

출발 푸칸 조성물을 이온교환 거대다공성 수지와 이온교환해 원하는 고분자량 푸칸으로 구성된 이온교환 처리된 푸칸 조성물을 얻는 단계.

이 방법이 이온교환 처리된 푸칸 조성물로부터 원하는 고분자량 푸칸을 수집하는 단계를 더 포함할 수 있다. 출발 푸칸 조성물을 제공하는 단계가 출발 푸칸 조성물을 이온교환하기 전에 출발 푸칸 조성물을 탈염하는 단계를 더 포함할 수 있다. 출발 푸칸 조성물:이온교환 거대다공성 수지의 질량비는 약 1:100 내지 10:1 , 또는 1:10 내지 5:1일 수 있다. 출발 푸칸 조성물은 약 5 분 내지 100 시간 이온교환될 수 있다. 이온교환 거대다공성 수지는 음이온교환 거대다공성 수지 및 혼합 전하 거대다공성 수지 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 음이온교환 거대다공성 수지는 강염기 거대다공성 수지일 수 있다. 강염기 거대다공성 수지는 4차 아민기를 포함할 수 있다. 음이온교환 거대다공성 수지가 약염기 거대다공성 수지일 수도 있다. 약염기 거대다공성 수지는 1 차, 2 차 또는 3 차 아민기 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 이온교환 거대다공성 수지가 스티렌, 아가로스, 덱스트란, 아크릴레이트, 메타크릴레이트, 메틸 메타크릴레이트, 부틸 메타크릴레이트, 디비닐벤젠, 셀룰로스, 실리카 및 세라믹 중 적어도 하나를 포함할 수 있다. 이온교환 거대다공성 수지는 약 5 nm 내지 1000 nm, 약 10 nm 내지 100 nm, 또는 약 15 nm 내지 50 nm의 기공 크기를 갖는다. 이온교환 거대다공성 수지는 약 50kDa 내지 50,000kDa, 약 1,000kDa 내지 9,000kDa, 또는 약 100kDa 내지 1,000kDa의 배제한계를 가질 수 있다. 출발 푸칸 조성물은 약 5 분 내지 100 시간 또는 약 1 시간 내지 30 시간 음이온-교환될 수 있다.

출발 용액내 원하는 고분자량 푸칸 구간을 포함해 넓은 분자량 분포를 갖는 출발 푸칸 조성물과, 겔 매질을 제공하는 단계;

출발 푸칸 조성물이 분자량에 따라 겔 매질을 가로 질러 제 1 입력 말단에서 제 2 출력 말단까지 위치하도록, 출발 용액을 겔투과 크로마토그래피에 적용하는 단계; 및

원하는 고분자량 푸칸 구간으로 구성된 적어도 하나의 부분표본을 제 2 출력 말단으로부터 수집하는 단계.

이 방법은 여러 부분표본들을 수집해 조합하는 단계를 더 포함할 수 있다. 겔 매질은 컬럼에 들어있을 수 있다. 겔 매질은 폴리히드록시메타크릴레이트, 설폰화 스티렌-디비닐벤젠, 실리카, 친수성 결합 상이나 중합체, 폴리스티렌, 디비닐벤젠, 메타크릴레이트, 메틸 메타크릴레이트, 부틸 메타크릴레이트, 셀룰로스, 세라믹, 아가로스 및 덱스트란 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 겔 매질은 약 3 nm 내지 3000 nm, 3 nm 내지 3000 nm, 약 5 nm 내지 10,000 nm, 약 10 nm 내지 100 nm, 약 50 nm 내지 500 nm, 약 200 nm 내지 2,000 nm, 또는 약 500 nm 내지 5,000 nm 의 기공 크기를 갖고, 배제한계는 약 100Da 100,000kDa, 약 100kDa 내지 30,000kDa, 약 1,000kDa 내지 100,000kDa, 약 1,000kDa 내지 10,000kDa, 또는 약 5,000kDa 내지 50,000kDa이다.

이런저런 측면, 특징 및 실시예가 다음의 상세한 설명 및 첨부 도면을 포함하여 설명된다. 명시적으로 다르게 언급되지 않는한, 모든 실시예, 측면, 특징 등은 임의의 원하는 방식으로 혼합 및 정합, 결합 및 치환 될 수 있다.

도 1은 순차 접선유동여과를 사용하여 분자량에 기초한 출발 푸칸 조성물의 구획하기 위한 예시적인 2-필터 시스템의 개략도로, 출발 푸칸은 넓은 분자량 분포를 갖는다.
도 2는 순차 접선유동여과를 사용하여 분자량에 기초한 출발 푸칸 조성물의 구획하기 위한 2-필터 시스템의 다른 실시예의 개략도로, 출발 푸칸은 넓은 분자량 분포를 갖는다.
도 3은 양이온 증강 접선유동여과를 사용하여 출발 푸칸 조성물로부터 원하는 고분자량 푸칸을 얻기위한 시스템의 개략도로, 출발 푸칸은 넓은 분자량 분포를 갖는다.
도 4는 다구간 구배재료를 장벽을 사용하여 출발 푸칸 조성물로부터 고분자량 푸칸을 원심분리 침전시키기위한 시스템의 개략도로, 출발 푸칸은 넓은 분자량 분포를 갖는다.
도 5는 단일구간 장벽을 사용하여 출발 푸칸 조성물로부터 고분자량 푸칸을 원심분리 침전시키기위한 시스템의 개략도로, 출발 푸칸은 넓은 분자량 분포를 갖는다.
도 6은 겔 전기영동-추출법으로 출발 푸칸 조성물로부터 고분자량 푸칸을 얻기위한 시스템의 개략도로, 출발 푸칸은 넓은 분자량 분포를 갖는다.
도 7은 넓은 분자량 분포를 갖는 출발 푸칸 조성물로부터 투석여과에 의해 고분자량 푸칸을 수득하기위한 예시적인 시스템의 개략도.
도 8은 이온흡착을 사용하여 출발 푸칸 조성물로부터 원하는 고분자량 푸칸을 얻기위한 시스템의 개략도로, 출발 푸칸은 넓은 분자량 분포를 갖는다.
9A는 본원의 방법에 따라 처리된 특정 푸칸이 구조변화를 겪는 것을 입증하는 NMR 결과를 도시한다.
도 9b는 본원의 방법에 따라 처리된 특정 푸칸이 화학구조 변화를 겪는 것을 입증하는 2-D NMR 결과를 도시한다.
도 10은 다구획 수크로스 장벽을 사용하여 출발 푸칸 조성물로부터 고분자량 푸칸의 원심분리 침전을위한 시스템의 개략도로, 출발 푸칸은 넓은 분자량 분포를 갖는다.
도면은 본원의 일 실시예를 보여준다. 도면은 반드시 일정 축척일 필요는 없으며 특정 특징은 본 시스템, 방법 등을 예시하고 설명하는데 도움이되는 방식으로 과장되거나 다르게 표현될 수 있다. 여기서 시스템, 방법 등의 실제 실시예는 다른 특징이나 단계를 가질 수도 있지만, 도면에는 표시되지 않는다. 본 명세서에 제시된 예시는 하나 이상의 형태로 시스템, 방법 등의 실시예를 예시하고, 이런 예시는 어떠한 방식으로든 본 발명의 내용의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다. 본 명세서의 실시예는 완전하지 않으며 예를 든 것일 뿐이고, 다음의 상세한 설명에 개시된 정확한 형태로 제한되지 않는다.

본원에 제시된 현재의 조성물, 시스템, 방법 등은 정제된 고분자량 푸칸을 포함한다. 본 조성물은 의학적 치료, 수술 후 치료, 질병 억제 등에 효과적일 수 있다. 일부 구체예에서, 푸칸은 후코이단이다. 본 발명의 고분자량 푸칸은 그 자체가 의료 기기, 의료 물질, 조합 제품 또는 제약상 허용되는, 치료학적 및/또는 의학적으로 유효한 조성물일 수 있거나 포함될 수 있다.

다음 단락은 임의의 적당한 반응 혼합물을 사용하여 수행 될 수 있는 다양한 방법을 통해 출발 푸칸 및 조성물로부터 본원의 고분자량 푸칸 및 조성물을 생성하는데 사용될 수 있는 일부 방법론에 대해 설명한다.

조성물

본원에 제시된 현재의 조성물, 시스템 등은 특정 실시예에서 외과적 유착과 같은 섬유성 유착, 관절염, 건선 또는 기타 원하는 질병의 치료를 위한 치료 유효량의 고분자량 푸칸을 포함하는 푸칸 및 의학적으로 허용되는 고분자량 푸칸 조성물을 제공한다.

본원에 제시된 고분자량 푸칸은 섬유성 유착과 다른 표적, 질병 및/또는 상태의 억제, 예방, 제거, 감소 또는 기타 치료를 포함해 여러 예에 사용될 수 있다. 치료는 조성물이 표적 질환이나 다른 상태의 발병을 감소나 예방하는 것을 포함하며, 예를 들어 표적 부위에서 섬유성 유착의 형성을 감소 또는 예방하고, 이는 전형적으로 외과 의사나 다른 개업의가 섬유성 유착(또는 다른 질병이나 상태)을 갖거나 합리적으로 의심하는 것으로 확인한 선택된 표적 부위이고, 또한 예를 들어 이미 존재하는 섬유성 유착의 제거를 포함하여 기존 질병이나 다른 상태의 제거를 하는 것을 포함한다. 이런 억제, 예방, 제거, 감소 또는 기타 치료를 위해 푸칸 조성물은 의학적으로 허용되는 의료 기기, 의료 재료, 조합 제품 또는 결합제, 보조제, 부형제 등과 같은 추가 성분을 포함하는 약제 학적으로 유효한 조성물로는 물론, 원하는 경우, 조성물내에 포함되지만 푸칸에 부착되지 않고 및/또는 푸칸에 부착될 수 있는 2 차 약물과 같은 다른 의학적 활성물질로도 제공될 수 있다.

고분자량 푸칸의 분자량 분포는 임의의 원하는 적절한 측정 시스템을 사용하여 측정될 수 있다. 서로 다른 시스템은 본질적으로 동일한 구성을 갖는 서로 다른 구성에서나 다르게 측정할 때 동일한 배치에서 서로 다른 판독값이나 결과를 산출할 수 있다. 적당한 측정 시스템으로, 유효 분자량 범위가 약 50~5,000kDa인 히드록실화 폴리메타크릴레이트-기반 겔로 채워진 7.8mm 내경의 300mm 분석 겔투과 크로마토그래피 컬럼 1 개, 유효 분자량 범위가 약 1~6,000kDa인 하이드록실화 폴리메타크릴레이트-기반 겔로 채워진 7.8m내경의 300mm 분석 겔투과 크로마토그래피 컬럼 1개, 히드록실화 폴리메타크릴레이트-기반 겔로 채워진 6mm 내경의 40mm 가드 컬럼 1개로서, 약 30℃의 컬럼구획에 들어있는 2개의 분석 겔투과 크로마토그래피 컬럼과 1개의 가드 컬럼; 약 30℃의 굴절률 검출기; 0.6mL/min으로 실행되는 0.1M 질산나트륨 이동상; 및 피크 분자량이 약 2,200kDa인 제1 덱스트란 표준, 피크분자량이 약 720~760 kDa인 제2 덱스트란 표준, 피크분자량이 약 470~ 510 kDa인 제3 덱스트란 표준, 피크분자량이 약 370~ 410 kDa인 제 4 덱스트란 표준, 피크분자량이 약 180~ 220 kDa인 제 5 덱스트란 표준, 및 피크 분자량이 약 40~55 kDa인 제6 덱스트란 표준으로 이루어지는 피크분자량 표준곡선에 대한 정량화로 이루어지는 수성 겔투과 크로마토그래피 셋업이 있다. 피크분자량 표준곡선이 3~5 kDa의 피크분자량을 갖는 덱스트란 표준을 더 가질 수도 있다.

본원의 고분자량 푸칸은 100kDa 이상의 중량 평균 분자량을 가질 수 있고 100kDa 이상의 분자량 분포의 약 50 %w/w 이상을 포함할 수 있다. 이런 고분자량 푸칸은 중량 평균 분자량이 100kDa 미만이고 같은 용량에서 100kDa 위의 분자량 분포의 약 50% 미만을 포함하는 푸칸보다 섬유성 유착의 억제, 예방, 제거, 감소 및/또는 기타 치료에 더 큰 효능을 보인다. 같은 용량으로. 중량 평균 분자량이 300kDa를 초과하고분자량 분포의 약 70 % 이상이 100kDa를 초과하는 고분자량 푸칸이 섬유성 유착의 억제, 예방, 제거, 감소 및/또는 기타 치료에 훨씬 더 큰 효능을 보이기도 한다.

또, 본원의 고분자량 푸칸이 약 65%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 99% 이상의 수술 후 유착의 효과적인 예방, 억제 또는 기타 치료를 보이는 섬유성 유착의 억제, 예방, 제거, 감소 또는 기타 치료에 사용할 수도 있다. 이런 고분자량 푸칸이 다른 표적의 치료를할 수도 있다.

본원의 고분자량 푸칸은 약 60%, 70%, 7 %, 80%, 90%, 95% 또는 99%w/w이상이 100kDa 이상의 분자량을 갖는 분자량 분포를 가질 수 있다.

또, 고분자량 푸칸이 약 100kDa 내지 10,000kDa, 약 140kDa나 200kDa 내지 9,000kDa, 약 350kDa나 370kDa 내지 8,000kDa, 약 450kDa내지 7,000kDa, 약 580kDa 내지 5,300kDa나 6,000kDa, 약 580kDa나 590kDa 내지 5,500kDa, 약 400kDa 내지 2,800kDa 또는 약 800kDa나 860kDa 내지 약 2,000kDa, 예를 들어 약 850kDa, 약 930kDa, 약 1,100kDa , 약 1,200kDa, 약 1,300kDa, 약 1,600kDa 및 약 1,800kDa의 중량 평균 분자량을 가질 수도 있다.

또는, 고분자량 푸칸이 약 60kDa나 70kDa 내지 7,000kDa, 약 100kDa나 140kDa 내지 6000kDa, 약 200kDa나 230kDa 내지 5000kDa, 약 250kDa 내지 4000kDa, 약 350kDa 내지 3000kDa, 약 500kDa 내지 2000kDa, 또는 약 400kDa 내지 1000kDa, 예를 들어, 약 450kDa, 500kDa, 550kDa, 600kDa, 650kDa, 700kDa 및 750kDa 의 피크분자량을 가질 수 있다.

또는, 고분자량 푸칸이 약 50kDa 내지 3,000kDa, 약 100kDa 내지 2,000kDa, 약 200kDa 내지 1,500kDa, 약 300kDa 내지 2,000kDa, 약 400kDa 내지 1,000kDa, 또는 약 250kDa 내지 약 600kDa, 예를 들어 약 300kDa, 350kDa, 400kDa, 450kDa, 500kDa 및 550kDa 의 수평균분자량을 가질 수 있다.

또, 고분자량 푸칸이 푸칸의 약 55 %w/w 또는 60 %w/w 초과가 200kDa 이상의 분자량, 또는 푸칸의 약 70 %w/w나 71 %w/w 초과가 200kDa 이상의 분자량을 갖는 분자량 분포를 가질 수 있다. 또는, 고분자량 푸칸이 푸칸의 22 %w/w나 30 %w/w 초과가 500kDa 초과의 분자량, 또는 푸칸의 50 % w/w나 54 % w/w초과가 500kDa 초과의 분자량을 갖는 분자량 분포를 가질 수도 있다.

또, 고분자량 푸칸이 푸칸의 약 10 %w/w 미만이 50kDa 미만의 분자량, 푸칸의 약 5 %w/w 미만이 50kDa 미만의 분자량, 또는 푸칸의 약 2 %w/w 미만이 50kDa 미만의 분자량을 갖는 분자량 분포를 가질 수도 있다.

또는, 고분자량 푸칸이 푸칸의 약 5 %w/w 미만이 10kDa 미만의 분자량, 또는 약 푸칸의 2 %w/w 미만의 10kDa 이하의 분자량을 갖는 분자량 분포를 가질 수도 있다.

또는, 고분자량 푸칸이 푸칸의 약 5 %w/w 미만이 5kDa 미만의 분자량, 또는 약 2 %w/w 미만이 5kDa 미만의 분자량을 갖는 분자량 분포를 가질 수도 있다.

또는, 고분자량 푸칸이 푸칸의 61 %w/w 내지 80 %w/w나 85 %w/w가 200kDa 내지 1600kDa의 분자량을 갖는 분자량 분포를 가질 수 있다. 보다 구체적으로, 푸칸의 70 %w/w 이상은 200kDa 이상의 분자량을, 그리고 푸칸의 30 % 이상은 500kDa 이상의 분자량을 가질 수 있다.

또는, 고분자량 푸칸이 푸칸의 약 20 % w/w, 40 %w/w 또는 60 %w/w 초과가 1600kDa 이상의 분자량을 갖는 분자량 분포를 가질 수도 있다. 보다 구체적으로, 푸칸의 약 70 %w/w 초과가 200kDa 초과의 분자량을 갖거나, 푸칸의 80 % w/w 초과가 200kDa 초과의 분자량을 가질 수 있다.

본원의 고분자량 푸칸은 약 14 %w/w 내지 70 % w/w, 약 20 %w/w 내지 60 % w/w, 약 30 % w./w 내지 55 % w/w, 또는 약 32 %w/w나 35 %w/w 내지 52 % w/w의 황화 수준을 가질 수 있다

본원의 고분자량 푸칸은 1:0.5 내지 1:4, 약 1:0.8 내지 1:3.5, 약 1:1 내지 1:2.5, 약 1:1.2 내지 1:2.0, 또는 약 1:1.5 내지 1:3의 총 푸코스:총 설페이트의 몰비를 가질 수 있다.

또, 고분자량 푸칸이 약 1:0.5 내지 1:4, 약 1:0.8 내지 1:3.5, 약 1:1 내지 1:2.5, 약 1:1.2 내지 1:2.0, 또는 약 1:1.5 내지 1:3의 총 푸코스와 갈락토스:총 설페이트의 몰비를 가질 수 있다.

고분자량 푸칸이 27 %w/w 내지 80 % w/w, 약 30 %w/w 내지 70 % w/w, 약 40 % w/ w 내지 90 % w/w, 또는 약 50 %w/w 내지 96 % w/w 의 총 탄수화물 함량을 가질 수 있다.

고분자량 푸칸이 총 탄수화물의 백분율로서 약 30 %w/w 내지 100 % w/w, 약 40 %w/w 내지 95 % w/w, 약 50 %w/w 내지 90 % w/w, 약 80 %w/w 내지 100 % w/w, 또는 약 90 %w/w 내지 100 % w/w 의 푸코스 함량을 가질 수 있다.

고분자량 푸칸이 약 0 %w/w 내지 60 % w/w, 약 3 %w/w 내지 30 % w/w, 약 2 %w/w 내지 20 %w/w 또는 약 5 %w/w 내지 10 % w/w 의 총 탄수화물의 백분율로서 갈락토스 함량을 가질 수 있다.

본원의 고분자량 푸칸이 약 0 %w/w 내지 10 % w/w의 총 탄수화물 함량의 백분율로서 글루쿠론산 함량, 0 %w/w 내지 7 % w/w의 총 탄수화물 함량의 백분율로서의 만노스 함량, 0 % w/w내지 4 %w/w의 총 탄수화물 함량의 백분율로서의 람노스 함량/w 및 0 % w/w내지 20 % w/w의 총 탄수화물 함량의 백분율로서의 자일로스 함량을 가질 수 있다. 고분자량 푸칸이 총 탄수화물 함량의 백분율로서 총 글루쿠론산, 만노스, 람노스, 글루코스 및 자일로스 함량을 약 30 %w/w 나 12 %%w/w 미만으로 가질 수도 있다.

일부 실시예에서, 본원의 고분자량 푸칸은 물에 50 mg/mL의 농도로 용해될 때 약 4 cP 내지 50 cP, 약 5 cP 내지 40 cP, 약 10 cP 내지 30 cP, 약 15 cP, 약 20 cP 내지 25 cP 의 점도를 가질 수 있다. 어떤 실시예에서는, 고분자량 푸칸 조성물이 1mg/mL 내지 100mg/mL의 물에 용해되었을 때 투명하고 무색, 투명하고 밝은 노란색 또는 투명하고 밝은 갈색 중 하나의 용액을 형성한다.

어떤 실시예에서는, 고분자량 푸칸이 약 5% w/w 미만, 약 2% w/w 미만 및 약 0% w/w 의 아세틸 함량을 가질 수 있다. 또는 고분자량 푸칸 조성물의 푸칸이 탄소 차원내 10-30ppm범위에서 각각 256-512 스캔마다 8 증분으로, 5 mm 콜드 프로브를 갖춘 600MHz 분광계에서 용매 신호 억제와 함께 70℃에서 2D ¹H-¹³C 이종핵 다중 양자 일관성으로 측정했을 때 실질적으로 0% w/w 아세틸 함량을 포함할 수 있다.

방법

원하는 고분자량 구간을 포함해 그 이상으로 확장된 넓은 분자량 분포(넓은 분자량 분포의 출발 푸칸)를 갖는 공급원료 푸칸 조성물과 같은 출발 푸칸 조성물로부터 수득된 고분자량 푸칸을 수득하기위한 방법, 시스템 등이 제시되는데, 원하는 고분자량 구간은 넓은 고분자량 분포의 일부이고, 이때 저분자량 말단의 넓은 분자량 분포의 양이 제거, 억제 또는 감쇠된다. 이들 방법 중 적어도 하나는 예를 들어, 분자량 분포의 약 60 %, 70 %, 80 %, 90 % 또는 95 %w/w 넘게 100kDa를 초과하는 고분자량 푸칸의 제조에 사용될 수 있다. 일부 실시예에서, 본 개시 내용은 의료 및 외과적 적용, 예를 들어 외과적 유착의 예방에 적당한 고분자량 푸칸을 제시한다.

접선유동여과

본원의 일부 방법은 접선유동여과(TFF)를 이용한다. 주어진 TFF 필터에 대한 공칭 분자량 컷오프(MWCO; nominal molecular weight cut-off) 값은 필터 장벽을 통과하지 않은 분자를 포함한 용액을 잔류물 측에 선택적으로 유지하여, 일반적으로 투과면에 대한 장벽을 교차/투과하는 분자의 분자량보다 큰 분자량 및/또는 크기를 갖는다. 따라서 TFF 필터의 분자량 컷오프 값은 일반적으로 주어진 폴리머나 공칭 컷오프 값에 대해 절대적이지 않다. 주어진 TFF 필터는 공칭 분자량 컷오프 위아래 양쪽에서 일부 분자를 통과하거나 유지한다. 특정 폴리머에 대한 공칭 TFF 필터의 실제 컷오프 값과 효과는 특정 폴리머에 대해 루틴하게 결정될 수 있다.

다수의 인자가 TFF 필터의 투과 거동에 영향을 미칠 수 있다. 이런 인자는 TFF 필터 자체나 표적 중합체의 속성에 의존할 수 있다. 예를 들어 표적 중합체의 접힘 거동과 접힌 구조는 TFF 필터의 MWCO장벽을 교차/비교차할 때 표적 중합체의 거동에 영향을 미칠 수 있다. 주지하는 바와 같이, 여러 요인이 TFF 필터의 투과 거동에 영향을 미칠 수 있다. 예를 들어, 제조 방법이 특정 TFF 필터의 구멍 크기를 다양하게할 수 있으며, 이런 다양성은 공칭 MWCO보다 크고 작은 구멍들을 모두 포함할 수 있다. 따라서, 공칭 분자량 컷오프 값을 갖는 TFF 필터는 공칭 분자량 컷오프 값에서 분자를 실질적으로 통과/유지할 수 있지만, 이런 값 위아래의 일부 분자를 통과/유지할 수도 있다.

겔투과 크로마토그래피

겔투과 크로마토그래피("GPC")를 사용하여 실험예에 대해 수득된 분자량 분포를 평가했다. 겔투과 크로마토그래피에 사용할 수 있는 다양한 매개변수, 컬럼 및 표준이 있어 분자량 분석에 사용할 수 있는 다양한 기기 설정이 가능하다. 본원의 분자량 측정을 위해 GPC는 다음 매개변수를 사용하여 수행했다: 이동상은 0.6mL/min로 운용된 0.1M 질산나트륨이었고, 컬럼구획과 검출기는 30도 였다. Waters 2414 굴절률 검출기를 검출에 사용했다.

적당한 GPC 컬럼은 수성 용매와 호환되는 GPC 컬럼, 예를 들어 설폰화 스티렌-디 비닐 벤젠, NH-관능화 아크릴레이트 공중합체 네트워크, 개질 실리카 및 하이드록실화 폴리메타크릴레이트 기반 겔 중 하나 이상으로 채워진 컬럼을 포함한다. 본 분석을 위해, 6μm 입경 하이드록실화 폴리메타크릴레이트 기반 겔로 채워진 내경(ID) 6mm의 40mm 길이 가드 컬럼 1 개, 제외 한계가 약 7,000 kDa이고 유효 분자량 범위가 약 50 kDa~5,000 kDa인 12 μm 입경 하이드록실화 폴리메타크릴레이트 기반 겔로 채워진 7.8 mm ID의 제1 300mm 분석 GPC 컬럼, 및 제외 한계가 약 7,000 kDa이고 유효 분자량 범위가 약 1kDa~6,000kDa인 10 μm 입경 히드록실화 폴리메타크릴레이트 기반 겔로 채워진 7.8mm ID의 제2 300 mm 분석 GPC 컬럼의 3개의 컬럼이 직렬로 사용되었다. 이 컬럼 셋업의 총 유효 분자량 범위는 약 1kDa~6,000kDa 였다. 이런 컬럼 셋업 예로는 직렬로 연결된 Ultrahydrogel® guard-Ultrahydrogel® 2000-Ultrahydrogel® Linear 컬럼이 있다.

American Polymer Standards Corporation의 추적 가능한 표준들로 구성된 표준 곡선에 대해 실행된 샘플들을 정량화했다: DXT670K(피크 분자량 = 401kDa), DXT530K(피크 분자량 = 490kDa), DXT500K(피크 분자량 = 390kDa), DXT270K(피크 분자량 = 196kDa), DXT225K(피크 분자량 = 213kDa ), DXT150K(피크 분자량 = 124kDa), DXT55K(피크 분자량 = 50kDa), DXT50K(피크 분자량 = 44kDa) 및 DXT5K(피크 분자량 = 4kDa), 이들 표준의 피크 분자량은 약 4 kDa 내지 2,200 kDa이다. 사용된 표준 곡선은 예를 들어 Dextran 3755 kDa, Dextran 50 kDa 및 Dextran 55 kDa 그리고 여기서 논의된 3 내지 6 개의 추가 추적가능 표준들중 적어도 하나를 포함할 수 있으며, 보정 포인트는 사용된 보정 제의 피크 분자량이다. 예제 교정 곡선은 DXT3755K, DXT 820K, DXT530K, DXT500K, DXT225K 및 DXT55K로 구성될 수 있다. 여기 사용된 컬럼은 푸칸의 정량화에 사용된 표준의 피크 분자량 범위와 그 이상으로 확장된 총 유효 분자량 범위를 가졌다.

여기서 푸칸/후코이단 중합체에 대해 언급된 분자량은 특정 분자량으로부터 분자량이 증감함에 따라 양이나 백분율로 증감하는 더 높거나 낮은 분자량의 분자 분포가 항상 존재하는 분자량의 값이다. 이 분포는 일반적으로 가우스나 왜곡된 가우스 모양을 가질 수 있지만 반드시 그런 것도 아니다.

표의 결과는 분자량 분포의 특정 특성에 사용되는 약어를 포함한다. 겔투과 크로마토그래피는 GPC, 피크 체류 시간은 PRT, 피크분자량은 PMW, 중량평균분자량은 WAMW, 수평균분자량은 NAMW로, 백분율 분포는 % dist, 분자량은 MW, 다분산지수는 PDI, 분자량 컷오프는 MWCO로 표시한다.

이제 고분자량 푸칸을 생성하는데 사용될 수 있는 일부 방법론에 대해 설명한다.

순차적 접선유동여과 구획화

순차적 TFF 구획법으로 넓은 분자량 분포의 출발 푸칸 조성물로부터 고분자량 푸칸을 얻을 수 있다. 이 방법은 다음을 포함할 수 있다: 원하는 분자량 구간, 예를 들어 고분자량 구간과 넓은 분자량 분포를 갖는 출발 푸칸 조성물을 제공하는 단계; 출발 분자량 분포내에 평균 분자량 컷오프를 갖는 제1의 고MWCO 접선유동여과 필터를 통해 출발 푸칸 조성물을 접선유동여과하는 단계; 제 1 TFF 필터로부터 출발 푸칸 조성물에 비해 감소된 비율의 고분자량 푸칸을 갖는 제 1 투과물 푸칸 조성물을 수집하는 단계; 제 1 TFF 필터보다 시작 분자량 분포 내에 더 낮은 평균 분자량 컷오프를 갖는 제 2의 저MWCO 접선유동여과 필터를 통해 제 1 투과물 푸칸 조성물을 접선유동여과하는 단계; 및 제 2 TFF 필터로부터 잔류물 푸칸 조성물내 원하는 분자량 구간을 갖는 푸칸을 수집하는 단계.

이 방법은 원하는대로 추가 단계를 포함할 수 있어, 예를 들어 원하는 크기보다 큰 입자나 성분이나 기타 원치 않는 물질을 여과할 수 있는 예비필터를 통해 출발 푸칸 조성물을 예비여과하는 단계를 포함할 수 있다. 출발 푸칸 조성물을 제 1 TFF 필터에 통과시키는 것은 출발 푸칸 조성물에 압력을 가하면서 TFF 필터에 출발 푸칸 조성물을 통과시키는 것을 포함할 수 있다. 제 1 TFF 필터의 투과물 푸칸 조성물을 제 2 TFF 필터에 통과시키는 것은 제 1 TFF 필터의 투과물 푸칸 조성물에 압력을 가하면서 제 1 TFF 필터의 투과물 푸칸 조성물을 제 2 TFF 필터에 통과시키는 것을 포함할 수 있다.

제 1 TFF 필터에 출발 푸칸 조성물을 통과시키는 것은 제 1 TFF 필터를 통해 제 1 TFF 필터의 잔류물 푸칸 조성물을 재순환시키는 것을 포함할 수 있다. 제 1 TFF 필터에 제 1 TFF 필터의 잔류물 푸칸 조성물을 재순환시키는 것은 제 1 TFF 필터에 잔류물 푸칸 조성물을 투석여과하는 것을 포함할 수 있다. 제 1 TFF 필터를 통해 제 1 TFF 필터의 잔류물 푸칸 조성물을 재순환시키는 것은 제 1 TFF 필터의 투과물 푸칸 조성물의 중량 평균 분자량을 결정하는 것을 포함할 수 있다. 제 1 TFF 필터에 제 1 TFF 필터의 잔류물 푸칸 조성물을 재순환시키는 것은 제 1 TFF 필터의 투과물 푸칸 조성물내 푸칸의 중량 평균 분자량이 소정의 원하는 값을 가질 때까지 제 1 TFF 필터에 제 1 TFF 필터의 잔류물 푸칸 조성물을 재순환시키는 것을 포함할 수 있다.

제 1 TFF 필터로부터의 투과물 푸칸 조성물을 제 2 TFF 필터에 통과시키는 것은 제 2 TFF 필터를 통해 투과 푸칸 조성물을 재순환시키는 것을 포함할 수 있다. 투과물 푸칸 조성물을 제 2 TFF 필터에서 재순환시키는 것은 투과물 푸칸 조성물을 제 2 TFF 필터에서 투석여과하는 것을 포함할 수 있다. 제 2 TFF 필터를 통해 투과물 푸칸 조성물을 재순환시키는 것은 제 2 TFF 필터의 잔류물 푸칸 조성물의 중량 평균 분자량을 결정하는 것을 포함할 수 있다. 제 2 TFF 필터를 통해 투과 푸칸 조성물을 재순환시키는 것은 제 2 TFF 필터의 잔류물 푸칸 조성물의 중량 평균 분자량이 소정의 원하는 값을 가질 때까지 제 2 TFF 필터를 통해 푸칸을 재순환시키는 것을 포함할 수 있다.

도 1은 2 개의 상이한, 고-저분자량 컷오프(MWCO) TFF 필터를 포함하는 분자량 기반 구획 시스템(고-저)(100)을 개략적으로 도시하며, 도시된 실시예에서 고분자량 컷오프 TFF 필터(110)와 저분자량 컷오프 TFF 필터(120)로 제공되는데; 이런 TFF 필터는 모든 가능한 포맷으로 제공될 수 있으며, 여기서는 카세트를 사용한다. 고분자량 컷오프 TFF 필터(110)는 저분자량 컷오프 TFF 필터(120)의 MWCO보다 큰 MWCO를 갖는다. 일례로, 고분자량 컷오프 TFF 필터(110)는 30kDa, 50kDa, 70kDa, 100kDa, 300kDa 및 1000kDa 의 MWCO를 갖는 반면 저분자량 컷오프 TFF 필터(120)의 MWCO는 예를 들어 5kDa, 10kDa, 30kDa, 50kDa 및 100kDa 일 수 있다. 예를 들어, 고분자량 컷오프 TFF 필터와 저분자량 컷오프 TFF 필터를 조합하면, 분자량 기반 구획 시스템(고-저)(100)을 사용하여 5-30kDa, 10-30kDa, 5-50kDa, 10-50kDa, 30-50kDa, 10-70kDa, 30-70kDa, 50-70kDa, 5-100kDa, 10-100kDa, 30-100kDa, 50-100kDa, 70-100kDa, 5-300kDa, 10-300kDa, 30-300kDa, 50-300kDa, 70-300kDa 및 100-300kDa의 분자량 컷오프 TFF 필터들 사이의 분자량 구간을 얻을 수 있다. 분자량 구간이 고분자량 구간일 수도 있다.

출발 푸칸 조성물은 입력 공급라인(102)을 통해 고 MWCO 서브시스템 푸칸 용기(116)에 용액으로 공급된다. 출발 푸칸은 0.1 %w/v 내지 30 %w/v, 1 %w/v내지 10 %w/v , 또는 5 %w/v 농도로 적당한 용매에 존재할 수 있다. 적절한 용매내의 출발 푸칸은 원치않는 입자상 물질을 제거하기 위해 예비필터(104)를 통해 예비여과될 수 있다. 출발 푸칸 조성물을 함유하는 용액은 예를 들어 다른 푸칸 처리 단계나 푸칸의 하류 사용을 위해 원하는대로 원하는 완충제, 희석제 등의 다른 비-푸칸 성분을 포함할 수 있다. 예비필터의 게이지(유효 구멍 크기)는 일반적으로 분자량 기반 구획 시스템(고-저)(100)에 의해 분리되는 최대 폴리머 분자보다 크다.

고 MWCO 서브시스템 펌프(114)는 고 MWCO TFF 필터 공급라인(112)을 통해 고 MWCO TFF 서브시스템(130)의 고분자량 컷오프 TFF 필터(110)에 출발 푸칸 조성물을 함유하는 용액을 펌핑한다. 고분자량 컷오프 TFF 필터(110) 일반적으로 입력 유체가 잔류면의 필터를 통과할 수 있도록 설계된 카세트로 제공된다. 분자량 컷오프 필터의 형식은 제한없이 플레이트-프레임 시스템; 나선형으로 감긴 카트리지 시스템; 중공 섬유 시스템; 플로우셀 시스템; 및 원심분리 필터 시스템일 수 있다. 투과물은 고MWCO 서브시스템 투과물 출력라인(119)을 통해 빠져 나가고 처리된 입력 유체, 즉 잔류액은 고MWCO 서브시스템 잔류물 복귀라인(118)을 통해 잔류물로 남는다. 고MWCO 서브시스템 펌프(114)는 잔류측과 투과측 사이에서 고분자량 컷오프 필터(110)에 압력을 가한다. 도 1에 도시된 바와 같이, 고분자량 컷오프 TFF 필터(110)로부터의 잔류액은 고MWCO 서브시스템 잔류물 복귀라인(118)을 통해 고MWCO 서브시스템 푸칸 용기(116)로 복귀되는 반면, 투과액은 고MWCO TFF 서브시스템(130) 밖에서 사용할 수 있도록 고MWCO 서브시스템 투과물 출력라인(119)을 통해 생성된다. 고MWCO 서브시스템 펌프(114)가 고분자량 컷오프 TFF 필터(110)를 통해 예비여과된 푸칸과 잔류물을 재순환하는 동안, 용매가 고MWCO 서브시스템 용매 공급라인(115)을 통해 고MWCO 서브시스템 용매 용기(117)로부터 공급됨으로써, 예를 들어 투과액을 통해 손실된 용매를 보충하거나 입력 시작 푸칸과 용매의 소정 횟수의 통과부피가 고분자량 컷오프 TFF 필터(110)를 통해 순환되도록 한다.

고-저 MWCO 인터-서브시스템 밸브(113)는 상기 처리중에 컷오프(닫힘)될 수 있고, 고 MWCO TFF 서브시스템(130)의 고분자량 컷오프 TFF 필터(110)로부터의 투과액은 저 MWCO TFF 서브시스템(140)의 저 MWCO 서브시스템 푸칸 용기(126)에 공급되기 전에 저장이나 다른 용도로 용기(도시되지 않음)에 모일 수 있다. 출발 푸칸 조성물이 고MWCO TFF 서브시스템(130)을 통해 원하는만큼 순환될 수도 있다.

고MWCO TFF 서브시스템(130)으로부터 수집된 투과물은 고MWCO 서브시스템 투과물 출력라인(119)을 통해 저 MWCO TFF 서브시스템(140)의 저 MWCO 서브시스템 푸칸 용기(126)에 공급될 수 있다. 수집된 투과물이 저 MWCO 서브시스템 푸칸 용기(126)까지 용기(도시 안됨)로 보내질 수도 있다. 고-저 MWCO 인터-서브시스템 밸브(113)가 개방 상태로 유지되고, 고분자량 컷오프 TFF 필터(110)의 투과물이 고MWCO 서브시스템 투과물 출력라인(119)을 통해 저 MWCO 서브시스템 푸칸 용기(126)에 연속적으로 공급될 수도 있다. 고분자량 컷오프 TFF 필터(110)의 투과물의 고분자량 분포는 출발 푸칸 조성물의 고분자량 분포에 비해 감쇠되거나 억제된다.

저MWCO TFF 서브시스템(140)에 공급된 투과물은 고분자량 컷오프 TFF 필터(110)에서 설명한 것처럼 저분자량 컷오프 TFF 필터(120)를 통해 비슷하게 여과된다. 즉, 고MWCO TFF 서브시스템(130)의 투과물이 저MWCO 서브시스템 푸칸 용기(126)에 공급된 뒤, 저MWCO 서브시스템 펌프(124)가 이를 저MWCO TFF 필터 공급라인(122)을 통해 저MWCO TFF 서브시스템(140)의 저분자량 컷오프 TFF 필터(120)로 펌핑한다. 저MWCO 서브시스템 펌프(124)는 저분자량 컷오프 TFF 필터(120)의 잔류물과 투과물 사이로 압력 수준을 유지한다. 도 1에서, 저분자량 컷오프 TFF 필터(120)의 잔류물은 저MWCO 서브시스템 잔류물 복귀라인(128)을 통해 저MWCO 서브시스템 푸칸 용기(126)로 복귀되는 반면, 투과물은 저MWCO TFF 서브시스템(140) 밖에서의 다른 용도나 폐기를 위해 저MWCO 서브시스템 투과물 출력라인(129)을 통해 생성된다. 저MWCO 서브시스템 펌프(124)가 고분자량 컷오프 TFF 필터(110)의 투과물을 재순환시키고 저분자량 컷오프 TFF 필터(120)의 잔류물을 저분자량 컷오프 TFF로 다시 보내면(고분자량 컷오프 여과 필터와 마찬가지로, 이런 재순환은 원하는만큼 자주 반복될 수 있음), 저MWCO 서브시스템 용매 공급라인(125)과 저MWCO 서브시스템 푸칸용기(126)를 통해 저MWCO 서브시스템 용매 용기(127)로부터 용매가 공급되어 저MWCO 서브시스템을 투과물 출력라인(129)을 통해 손실된 용매를 보충하거나, 저분자량 컷오프 TFF 필터(120)의 소정 횟수의 통과부피와 용매가 저분자량 컷오프 TFF 필터(120)를 통해 순환되도록 한다.

저MWCO TFF 서브시스템(140)의 접선유동여과 동안, 저MWCO 서브시스템 잔류물 라인 밸브(106)가 폐쇄될 수 있다. 고MWCO TFF 서브시스템(130)으로부터 저MWCO TFF 서브시스템(140)에 공급된 투과물이 원하는 정도로 여과되면, 저MWCO 서브시스템 잔류물 라인 밸브(106)가 개방되고 저분자량 컷오프 TFF필터(120)의 잔류물이 저MWCO 서브시스템 잔류물 출력라인(108)을 통해 공급된다. 이 경우, 출발 푸칸 조성물, 예를 들어 고분자량 푸칸으로부터 원하는 분자량 구간을 푸칸에 제공한다.

출력 푸칸은 일반적으로 고분자량 컷오프 TFF 필터(110)의 평균 분자량 컷오프와 저분자량 컷오프 TFF 필터(120)의 평균 분자량 컷오프 사이의 분자량 분포를 갖는 원하는 분자량 구간을 갖는다. 그러나, 출발 푸칸 분자량 분포의 폭과 복잡성 및 폴리머 거동과 TFF 필터의 가변성을 고려하면, 출력 폴리머 분자량 분포가 두 개의 TFF 필터의 평균 분자량 컷오프 값들 사이에서 피크가 아닐 수 있다. 예를 들어, 푸칸이 과도하게 높거나 낮게 접히면, 원하는 분자량 구간에서 크기는 적당하지만 비정상적으로 조밀하거나 않은 푸칸의 선택을 가져올 수 있다. 따라서, 전술한 순차적 TFF 뒤에 있는 푸칸의 관점에서, 원하는 분자량 구간은 본질적으로 분자량 기반 분리 시스템(고-저)(100)에 공급된 원래의 출발 푸칸 조성물에서 파생된 원하는 분자량 구간으로 구성된다.

다른 실시예들이 다음을 포함할 수 있다:원하는 분자량 구간, 예를 들어 고분자량 구간과 출발 분자량 분포를 갖는 출발 푸칸 조성물을 제공하는 단계; 출발 푸칸 조성물을 출발 분자량 분포내의 평균 분자량 컷오프를 갖는 제 1 접선유동여과 필터를 통해 출발 푸칸 조성물을 접선유동여과시키는 단계; 출발 푸칸 조성물과 비교해 감소된 비율의 저분자량 푸칸을 포함하는 제 1 잔류물 푸칸 조성물을 제 1 TFF 필터로부터 수집하는 단계; 제 1 TFF 필터보다 출발 분자량 분포 내에서 더 높은 평균 분자량 컷오프를 갖는 제 2 접선유동여과 필터를 통해 제 1 잔류물 푸칸 조성물을 접선유동여과시키는 단계; 및 투과액 푸칸 조성물내의 원하는 분자량 구간을 갖는 푸칸을 제 2 TFF 필터로부터 수집하는 단계.

이 방법은 원하는 크기보다 큰 성분들을 여과할 수 있는 예비필터를 통해 출발 푸칸 조성물을 예비여과하는 것을 더 포함할 수 있다. 출발 푸칸 조성물을 제 1 TFF 필터에 통과시키는 것은 출발 푸칸 조성물에 압력을 가하면서 제 1 TFF 필터에 출발 푸칸 조성물을 통과시키는 것을 포함할 수 있다. 제 1 MCWO 필터의 잔류물 푸칸 조성물을 제 2 TFF 필터에 통과시키는 것은 제 1 TFF 필터의 잔류물 푸칸 조성물에 압력을가하면서 제 1 TFF 필터의 잔류물 푸칸 조성물을 제 2 TFF 필터에 통과시키는 것을 포함할 수 있다.

제 1 TFF 필터를 통해 출발 푸칸 조성물을 통과시키는 것은 제 1 TFF 필터를 통해 제 1 TFF 필터의 잔류물 푸칸 조성물을 재순환시키는 것을 포함할 수 있다. 제 1 TFF 필터로 제 1 TFF 필터의 잔류물 푸칸 조성물을 재순환시키는 것은 제 1 TFF 필터로 잔류물 푸칸 조성물을 투석여과하는 것을 포함할 수 있다. 제 1 TFF 필터를 통해 제 1 TFF 필터의 잔류물 푸칸 조성물을 재순환시키는 것은 제 1 TFF 필터의 잔류물 푸칸 조성물의 중량 평균 분자량을 결정하는 것을 포함할 수 있다. 제 1 TFF 필터를 통해 제 1 TFF 필터의 잔류물 푸칸 조성물을 재순환시키는 것은 제 1 TFF 필터의 잔류물 푸칸 조성물내 푸칸의 중량 평균 분자량이 소정 값이 될 때까지 제 1 TFF 필터로 제 1 TFF 필터의 잔류물 푸칸 조성물을 재순환시키는 것을 포함할 수 있다.

제 1 TFF 필터로부터의 잔류물 푸칸 조성물을 제 2 TFF 필터에 통과시키는 것은 제 2 TFF 필터를 통해 잔류물 푸칸 조성물을 재순환시키는 것을 포함할 수 있다. 잔류물 푸칸 조성물을 제 2 TFF 필터로 재순환시키는 것은 제 2 TFF 필터로 잔류물 푸칸 조성물을 투석여과하는 것을 포함할 수 있다. 제 2 TFF 필터를 통해 잔류물 푸칸 조성물을 재순환시키는 것은 제 2 TFF 필터의 투과물 푸칸 조성물의 중량 평균 분자량을 결정하는 것을 포함할 수 있다. 제 2 TFF 필터에서 잔류물 푸칸 조성물을 재순환시키는 것은 제 2 TFF 필터의 투과물 푸칸 조성물의 중량 평균 분자량이 소정의 원하는 값을 가질 때까지 제 2 TFF 필터에서 잔류물 푸칸 조성물을 재순환시키는 것을 포함할 수 있다.

도 2는 본 명세서의 방법, 시스템 등의 다른 실시예를 도시한다. 도 2에서는, 도 1의 서브시스템(130,140)이 분자량 기반 구획 시스템(고-저)(100')'을 형성하기위한 공정 순서의 관점에서 역전된다. 도 1의 방법처럼, 출발 푸칸은 입력 공급라인(102)을 통해 시스템으로 들어가고 예비필터(104)에서 예비여과된다. 그러나, 도 1의 방법과는 대조적으로, 예비여과된 출발 푸칸은 먼저 저MWCO TFF 서브시스템(140)에서 처리된 다음 고MWCO TFF 서브시스템(130)에서 처리된다. 저MWCO TFF 서브시스템(140)에서, 출발 푸칸 조성물은 저분자량 컷오프 TFF 필터(120)를 통과하고, 이 필터는 평균 MWCO 값이 더 낮은 TFF 필터이다. 이 실시예에서, 저분자량 컷오프 TFF 필터(120)의 투과물이 아닌 잔류물이 저MWCO 서브시스템 잔류물 출력라인(121)의 저분자량 컷오프 TFF 필터(120)를 나간다. 이런 잔류물은 저-고 MWCO 인터-서브시스템 밸브(123)를 나가, 고MWCO TFF 서브시스템(130)의 고MWCO 서브시스템 푸칸 용기(116)에 공급된다. 이어서, 이 잔류물은 고MWCO TFF 필터 공급라인(112)을 통해 고MWCO 서브시스템 펌프(114)에 의해 펌핑되어, 고분자량 컷오프 TFF 필터(110)를 통과하고, 이 필터는 MWCO가 더 높은 TFF 필터이다.

저MWCO TFF 서브시스템(140)내에서, 저MWCO 서브시스템 펌프(124)는 저MWCO TFF 필터 공급라인(122)을 통해 저MWCO 서브시스템 푸칸 용기(126)로부터 저분자량 컷오프 TFF 필터(120)로 투과물을 펌핑한다. 도 2에서, 저분자량 컷오프 TFF 필터(120)의 잔류물은 저MWCO 서브시스템 잔류물 복귀라인(128)을 통해 저MWCO 서브시스템 푸칸 용기(126)로 복귀되는 반면, 투과물은 추가 사용 또는 폐기를 위해 저MWCO 서브시스템 투과물 출력라인(129)을 통해 생성된다. 잔류물이 저분자량 컷오프 TFF 필터(120)를 다시 통과해 재순환되면, 저 MWCO 서브시스템 용매 공급라인(125)과 저 MWCO 서브시스템 푸칸용기(126)를 통해 저 MWCO 서브시스템 용매용기(127)로부터 용매가 공급되어, 저MWCO 서브시스템 투과물 출력라인(129)을 통해 손실된 용매를 보충하고, 저분자량 컷오프 TFF 필터(120)의 소정 횟수의 통과부피의 잔류물과 용매를 저분자량 컷오프를 TFF 필터(120)를 통해 순환시킬 수 있다.

저-고 MWCO 인터-서브시스템 밸브(123)는 상기 처리 동안 닫힐 수 있으며, 저MWCO TFF 시스템(140)의 저분자량 컷오프 TFF 필터(120)의 잔류물은 고MWCO TFF 서브시스템(130)의 고MWCO 서브시스템 푸칸 용기(116)에 공급되기 전에 용기(미도시)에 수집 될 수 있다. 수집된 잔류물은 저MWCO 서브시스템 잔류물 출력라인(121)을 통해 고MWCO TFF 서브시스템(130)의 고MWCO 서브시스템 푸칸 용기(116)에 공급된다. 한편, 수집된 잔류물이 고MWCO 서브시스템 푸칸 용기(116)로 이송될 수도 있다. 또는, 저MWCO 인터-서브시스템 밸브(123)가 개방되고, 저분자량 컷오프 TFF 필터(120)의 잔류물이 저MWCO 서브시스템 잔류물 출력라인(121)을 통해 고MWCO 서브시스템 푸칸 용기(116) 지속적으로 공급될 수도 있다. 저분자량 컷오프 TFF 필터(120)로부터의 잔류물의 저분자량의 분포는 출발 푸칸내 저분자량 분자의 분포와 비교해 감쇠되거나 억제된다.

고MWCO TFF 서브시스템(130)이 저MWCO TFF 서브시스템(140)의 저분자량 컷오프 TFF 필터(120)로부터의 잔류물을 처리함에 따라, 고MWCO 서브시스템 투과물 출력라인(119)에서 고분자량 컷오프 TFF 필터(110)의 투과물이 생성된다. 고MWCO 서브시스템 펌프(114)가 고분자량 컷오프 TFF 필터(110)를 통해 저MWCO TFF 서브시스템(140)의 잔류물 푸칸을 재순환시키는 동안, 용매는 고MWCO 서브시스템 용매 공급라인(115)을 통해 고MWCO 서브시스템 용매 용기(117)로부터 공급되어 투과물을 통해 손실된 용매를 보충하거나, 저MWCO TFF 서브시스템(140)의 소정 횟수의 통과부피의 잔류물과 용매가 용매가 고분자량 컷오프 TFF 필터(110)를 통해 순환되도록 한다.

도 2에서, 고분자량 컷오프 TFF 필터(110)로부터의 잔류액은 고MWCO 서브시스템 잔류물 복귀라인(118)을 통해 고MWCO 서브시스템 푸칸 용기(116)로 복귀되는 반면, 투과액은 고MWCO TFF 서브시스템(130) 외부에서 사용하기 위해 고MWCO 서브시스템 투과물 출력라인(119)을 통해 생성된다. 도 2에서, 고MWCO 서브시스템 투과물 출력라인(119)을 통해 생성된 원하는 분자량 구간을 갖는 출력 푸칸은 주로 제 1 고분자량 컷오프 TFF 필터(110)의 평균 분자량 컷오프와 제 2 저분자량 컷오프 TFF 필터(120)의 평균 분자량 컷오프 사이의 분자량 분포를 갖는다. 그러나 출발 푸칸 분자량 분포의 폭과 복잡성 및 폴리머 거동과 TFF 필터의 가변성을 고려할 때, 출력 폴리머 분자량 분포는 두 TFF 필터의 평균 분자량 컷오프 값들 사이에서 피크가 아닐 수 있다. 예를 들어, 푸칸이 과도하게 높거나 낮게 접히면 원하는 분자량 구간에서 크기는 적당하지만 비정상적으로 조밀하거나 않은 푸칸을 선택할 수 있다. 따라서, 전술한 순차적 TFF 뒤에 있는 푸칸의 관점에서, 출력 푸칸은 분자량 기반 구획 시스템(저-고)(100')에 공급된 원래의 출발 푸칸 조성물로부터 유래된 원하는 분자량 구간의 푸칸으로 구성된다. 원하는 분자량 구간을 갖는이 출력 푸칸은 또한 예비필터(104)에 의해 예비여과된 후 생성된 예비여과된 출발 푸칸 조성물로부터 유도된 뒤 저MWCO TFF 서브시스템(140)에 공급될 수 있다.

양이온 증강 접선유동여과

고분자량 푸칸은 양이온 증강 TFF에 의해 넓은 분자량 분포의 출발 푸칸으로부터 얻을 수 있으며, 이 방법은 다음을 포함한다: 저원자량 양이온과, 원하는 고분자량 분포를 갖는 분자량 분포를 포함한 출발 푸칸 조성물을 제공하는 단계; 저원자량 양이온을 첨가제 양이온으로 대체하기 위해 저원자량 양이온보다 큰 분자량의 양이온을 갖는 양이온 첨가제로 출발 푸칸 조성물을 양이온 처리하는 단계; 양이온 처리된 푸칸 조성물을 원하는 고분자량 푸칸 구간의 분자량 분포에 기초한 평균 분자량 컷오프를 갖는 제 1 접선유동여과 필터에 접선유동여과하여, 제 1 잔류물 푸칸 조성물을 생성하는 단계; 제 1 잔류물 푸칸 조성물을 양이온 첨가제의 분자량 분포에 기초한 평균 분자량 컷오프를 갖는 제 2 저MWCO 접선유동여과 필터를 통해 접선유동여과하여, 제 2 잔류물 푸칸 조성물을 생성하는 단계; 제 2 잔류물 푸칸 조성물을 염용액으로 투석여과하여 제 3 잔류물 푸칸 조성물을 생성하는 단계; 제 3 푸칸 잔류물 조성물을 저전도도 투석여과 용액으로 동일한 제 2 접선유동여과 필터를 통해 투석여과하여 제 4 잔류물 푸칸 조성물을 생성하는 단계; 및 원하는 고분자량 푸칸을 포함하는 제 4 잔류물 용액을 수집하는 단계.

이 방법은 원하는대로 다른 단계들, 예를 들어 원하는 크기보다 큰 입자나 성분이나 기타 원치않는 물질들을 여과할 수 있는 예비필터를 통해 출발 푸칸 조성물을 예비여과하는 단계를 더 포함할 수 있다. 출발 푸칸 조성물을 제 1 TFF 필터에 통과시키는 것은 출발 푸칸 조성물에 압력을가하면서 TFF 필터에 출발 푸칸 조성물을 통과시키는 것을 포함할 수 있다. 제 1 TFF 필터의 잔류물 푸칸 조성물을 제 2 TFF 필터에 통과시키는 것은 제 1 TFF 필터의 잔류물 푸칸 조성물에 압력을가하면서 제 1 TFF 필터의 잔류물 푸칸 조성물을 제 2 TFF 필터에 통과시키는 것을 포함할 수 있다.

제 1 잔류물 푸칸 조성물을 제 2 접선유동여과 필터를 통해 접선유동여과하고 제 2 잔류물 푸칸 조성물을 염용액으로 처리하는 것을 동시에 수행할 수 있다. 제 2 잔류물 푸칸 조성물을 염으로 처리하는 것은 제 2 잔류물 푸칸 조성물을 염화물, 브롬화물, 요오드화물, 불화물, 황산염, 아황산염, 탄산염, 중탄산염, 인산염, 질산염, 아질산염, 아세테이트, 구연산염, 알칼리 금속, 알칼리 토금속, 알루미늄 및/또는 암모늄의 규산염 및/또는 시안화물로 처리하는 것을 포함할 수 있다. 제 1 잔류물 푸칸 조성물을 나트륨염으로 처리하는 것은 제 1 잔류물을 염화나트륨으로 처리하는 것을 포함할 수 있다.

양이온 첨가제로 출발 푸칸 조성물을 처리하는 양이온은 출발 푸칸내의 저 원자량 양이온보다 더 큰 분자량의 양이온을 갖는 양이온 첨가제로 출발 푸칸을 처리하는 것을 포함할 수 있다. 양이온 첨가제는 다중양이온 첨가제일 수 있다. 양이온 첨가제로 출발 푸칸 조성물을 처리하는 양이온은 출발 푸칸내의 저원자량 양이온보다 큰 분자량의 양성이온을 갖는 양쪽이온 첨가제로 출발 푸칸을 처리하는 것을 포함할 수 있다.

양이온 처리된 푸칸 조성물을 제 1 접선유동여과 필터를 통해 접선유동여과하는 것은 제 1 TFF 필터로 양이온 처리된 푸칸 조성물을 재순환시키는 것을 포함할 수 있다. 양이온-처리된 푸칸 조성물을 제 1 TFF 필터에서 재순환시키는 것은 양이온 첨가제의 용액을 사용하여 제 1 TFF 필터에서 양이온-처리된 푸칸 조성물을 투석여과하는 것을 포함할 수 있다. 제 1 TFF 필터를 통해 양이온 처리된 푸칸 조성물을 재순환시키는 것은 양이온 처리된 푸칸 조성물내 푸칸의 중량 평균 분자량을 결정하는 것을 포함할 수 있다. 제 1 TFF 필터를 통해 양이온 처리된 푸칸 조성물을 재순환시키는 것은 양이온 처리된 푸칸 조성물내 양이온 처리된 푸칸의 중량 평균 분자량이 소정의 원하는 값을 가질 때까지 제 1 TFF 필터를 통해 양이온 처리된 푸칸 조성물을 재순환시켜, 제 1 잔류물 푸칸 조성물을 생산하는 것을 포함할 수 있다.

제 1 잔류물 푸칸 조성물을 제 2 저MWCO 접선유동여과 필터에 접선유동여과하는 것은 제 2 TFF 필터를 통해 제 1 잔류물 푸칸 조성물을 재순환시키는 것을 포함할 수 있다. 제 2 TFF 필터를 통해 제 1 잔류물 푸칸 조성물을 재순환시키는 것은 염용액으로 제 2 TFF 필터의 제 1 잔류물 푸칸 조성물을 투석여과하는 것을 포함할 수 있다. 제 2 TFF 필터를 통해 제 1 잔류물 푸칸 조성물을 재순환시키는 것은 제 1 잔류물 푸칸 조성물내 푸칸의 중량 평균 분자량을 결정하는 것을 포함할 수 있다. 제 1 잔류물 푸칸 조성물을 제 2 TFF 필터에서 재순환시키는 것은 제 1 잔류물 푸칸 조성물로부터의 푸칸의 중량 평균 분자량이 소정의 원하는 값을 가질 때까지 제 2 잔류물 푸칸 조성물을 제 2 TFF 필터상에서 재순환시켜 제 2 잔류물 푸칸 조성물을 생성하는 것을 포함할 수 있다.

제 2 잔류물 푸칸 조성물을 염용액으로 투석여과하는 것은 제 2 잔류물 푸칸 조성물을 제 2 TFF 필터에서 재순환시키는 것을 포함할 수 있다. 제 2 TFF 필터를 통해 제 2 잔류물 푸칸 조성물을 재순환시키는 것은 제 1 TFF 필터의 제 2 잔류물 푸칸 조성물을 염화물, 브롬화물, 요오드화물, 불화물, 황산염, 아황산염, 탄산염, 중탄산염, 알칼리 금속, 알칼리 토금속, 알루미늄 및 암모늄, 예를 들어 염화나트륨의 인산염 및 질산염 중 적어도 하나를 포함하는 염용액으로 투석여과하는 것을 포함할 수 있다. 제 3 잔류물 푸칸 조성물을 제 2 MWCO 접선유동여과 필터에 접선유동여과하는 것은 제 2 TFF 필터를 통해 제 3 잔류물 푸칸 조성물을 재순환시키는 것을 포함할 수 있다. 제 2 TFF 필터를 통해 제 3 잔류물 푸칸 조성물을 재순환시키는 것은 저전도도 용액으로 제 2 TFF 필터의 제 3 잔류물 푸칸 조성물을 투석여과하는 것을 포함할 수 있다. 저전도도 용액은 탈이온수 일 수 있다.

양이온 첨가제로 출발 푸칸 조성물을 처리하는 양이온은 입력 푸칸을 콜린, 폴리비닐피롤리돈, 타우린, 폴리아민, 키토산, 히스톤 및 콜라겐 중 하나 이상으로 처리하는 것을 포함할 수 있다.

도 3은 분자량을 기준으로 푸칸의 분리를위한 양이온 증강 TFF 시스템(CATS)(100")'의 개략도이다. CATS(100")'는도 1~2의 요소들을 이용한다. 출발 푸칸 조성물을 함유하는 용액이 입력 공급라인(102)을 통해 고MWCO 서브시스템 푸칸 용기(116)로 공급된다. 적절한 용매의 출발 푸칸 조성물은 바람직하지 않은 입자상 물질을 제거하기 위해 예비필터(104)를 통해 예비여과될 수 있다. 출발 푸칸 조성물을 함유하는 용액은 예를 들어 다른 푸칸 처리단계나 푸칸의 하류 사용을 위해 원하는대로 원하는 완충제, 희석제 등과 같은 추가 비-푸칸 성분을 포함할 수 있다. 예비필터의 게이지는 일반적으로 CATS(100")에 의해 분리되는 최대 폴리머 분자보다 크다.

양이온 첨가제, 예를 들어 콜린, 폴리비닐피롤리돈, 폴리아닐린은 고MWCO 서브시스템 푸칸 용기(116)에서 예비여과된 출발 푸칸 조성물에 첨가될 수 있다. 고MWCO 서브시스템 펌프(114)는 고MWCO TFF 필터 공급라인(112)을 통해 고MWCO TFF서브시스템(130')의 고MWCO TFF 필터(150)로 푸칸을 펌핑한다. 고 MWCO TFF 필터(150)는 일반적으로 이곳에 공급된 입력유체가 잔류물측에서 필터를 통과하도록 디자인된 카세트로 공급되고, 투과물은 출력라인을 통해 빠져나가고 처리된 입력유체는 다른 출력라인을 통해 잔류물로 남겨진다. 분자량 컷오프 필터의 형식은 제한없이 플레이트-프레임 시스템; 나선형으로 감긴 카트리지 시스템; 중공 섬유 시스템; 플로우셀 시스템; 및 원심필터 시스템일 수 있다. 여기서, 고MWCO TFF 필터(150)의 컷오프 분자량은 양이온 첨가제로 예비여과된 출발 푸칸을 처리해 얻은 양이온 처리된 푸칸의 고분자량 말단의 원하는 부분을 분리하도록 선택된다.

고MWCO 서브시스템 펌프(114)는 고MWCO TFF 필터(150)에 잔류물측과 투과물측 사이의 압력 수준을 가한다. 도 3에서, 고MWCO TFF 필터(150)의 잔류물은 고MWCO 서브시스템 잔류물 복귀라인(118)을 통해 고MWCO 서브시스템 푸칸 용기(116)로 복귀되는 반면, 투과물은 고MWCO TFF 서브시스템(130 ') 외부에서 사용하기 위해 고MWCO 서브시스템 투과물 출력라인(119)을 통해 생성되거나 폐기된다. 고MWCO 서브시스템 펌프(114)가 예비여과된 출발 푸칸 조성물과 잔류물을 고MWCO TFF 필터(150)로 재순환하는 동안, 양이온 첨가제 플러시 용액 용기(137)의 양이온 첨가제 플러시 용액이 양이온 첨가제 플러시 용액 공급라인(135)을 통해 공급되어, 예를 들어 고MWCO 서브시스템 투과물 출력라인(119)의 투과물을 통해 손실된 용액을 보충하거나, 입력 출발과 양이온 첨가제 플러시 용액의 소정의 횟수의 통과부피가 고MWCO TFF 필터(150)를 통해 순환되도록 한다. 양이온 첨가제 플러시 용액 밸브(136)를 제어하여, 양이온 첨가제 플러시 용액을 펄스 공정으로 추가할 수 있다. 한편, 양이온 첨가제 플러시 용액이 연속 모드로 첨가될 수도 있다. 또는, 양이온 첨가제 플러시 용액이 한 번에 모두 첨가될 수도 있다. 콜린이 입력 출발 푸칸을 위한 양이온 첨가제로 선택 되었다면, 채택된 양이온 첨가제 플러시 용액은 염화콜린과 같은 콜린 용액이다. 고MWCO TFF 필터(150)를 통해 처리할 잔류물과 콜린 플러시 용액의 통과부피의 수가 예정될 수 있는데, 4회분 부피가 일반적으로 사용된다.

고-저 MWCO 인터-서브시스템 밸브(113)는 상기 처리 동안 폐쇄(닫힘)될 수 있으며, 고MWCO TFF 서브시스템(130 ')의 고MWCO TFF 필터(150)의 잔류물은 저MWCO TFF 서브시스템(140 ')의 저MWCO 서브시스템 푸칸 용기(126)에 공급되기 전에 용기(도시되지 않음)에 수집된다. 수집된 잔류물은 이후 고MWCO 서브시스템 잔류물 출력라인(111)을 통해 저MWCO TFF 서브시스템(140 ')의 저MWCO 서브시스템 푸칸 용기(116)에 공급될 수 있다. 한편, 수집된 잔류물이 용기(도시되지 않음)에서 저MWCO 서브시스템 푸칸 용기(126)에 옮겨질 수도 있다. 또는, 고-저MWCO 인터-서브시스템 밸브(113)가 개방되어 있고, 고MWCO TFF 필터(150)의 잔류물이 고MWCO 서브시스템 잔류물 출력라인(111)을 통해 지속적으로 저MWCO 서브시스템 푸칸 용기(126)에 공급될 수도 있다. 고MWCO TFF 필터(150)의 잔류물내 저분자량 분자의 분포는 출발 푸칸 조성물내 저분자량 분자의 분포와 비교해 약화되거나 억제된다.

저MWCO TFF 서브시스템(140 ')은 양이온 처리된 푸칸에서 콜린 양이온을 제거하고 나트륨 양이온을 푸칸으로 복원하여, 양이온 처리된 푸칸을 원래의 이온 성분으로 되돌리지만, 원하는 고분자량 분포는 다르다. 저MWCO TFF 서브시스템(140')에 의한 푸칸 용액의 처리 동안, 저 MWCO 서브시스템 푸칸용기(126)로부터의 저MWCO 서브시스템 잔류물 출력라인(108)을 제어하는 저MWCO 서브시스템 출력밸브(106')가 폐쇄될 수 있다. 저MWCO TFF 서브시스템(140 ')이 고MWCO TFF 서브시스템(130')의 고 MWCO TFF 필터(150)로부터의 잔류물을 처리함에 따라, 저 MWCO TFF 필터(160)의 투과물은 저MWCO 서브시스템 투과물 출력라인(129)에서 생성되어, 다른 곳에서 사용되거나 폐기된다.

저MWCO 서브시스템 펌프(114)가 저MWCO TFF 필터(160)를 통해 저MWCO TFF 서브시스템(140 ')의 잔류물을 재순환시키는 동안, 나트륨염용액, 예를 들어 2M NaCl 용액이 나트륨염용액 제어밸브(144)의 적절한 제어에 의해 나트륨염용액 공급라인(146)을 통해 나트륨염용액 용기(142)로부터 공급될 수 있다. 이 방법을 위해, 저MWCO TFF 필터(160)의 컷오프 분자량은 나트륨염 처리로 푸칸에서 방출된 양이온 첨가제를 분리하도록 선택된다. 저MWCO TFF 서브시스템(140 ')의 프로세스가 진행됨에 따라, 푸칸상의 콜린 양이온을 NaCl의 나트륨 양이온으로 대체하여 생성된 유리 염화콜린은 저MWCO TFF 필터(160)의 투과물로 이동하고 저MWCO 서브시스템 투과물 출력라인(129)을 통해 CATS(100")를 떠난다. 나트륨염용액은 예를 들어 저MWCO 서브시스템 투과물 출력라인(129)의 투과물을 통해 손실된 용액을 보충하거나, 고MWCO TFF 서브시스템(130 ')으로부터소정 횟수의 통과부피의 나트륨염용액과 잔류물을 저MWCO TFF 필터(160)를 통해 순환시크는데 사용된다. 나트륨염용액 제어밸브(144)를 제어하여, 나트륨염용액이 펄스 공정으로 첨가되거나, 연속 모드로 첨가될 수 있다. 적절한 수의 통과부피의 나트륨염용액과 잔류물이 저MWCO TFF 필터(160)를 통해 순환될 때, 나트륨염용액 제어밸브(144)는 폐쇄되고 저전도도의 투석여과액 밸브(145)는 개방될 수 있다. 저MWCO TFF 필터(160)를 통해 처리할 나트륨염용액의 통과부피의 수가 예정될 수 있다. 저MWCO 서브시스템 펌프(124)는 저MWCO TFF 필터(160)에 잔류물측과 투과물측 사이의 압력을 가한다. 도 3에서, 저MWCO TFF 필터(160)의 잔류물은 저MWCO 서브시스템 잔류물 복귀라인(128)을 통해 저MWCO 서브시스템 푸칸 용기(126)로 복귀되는 반면, 투과물은 저MWCO TFF 서브시스템(140 ') 외부에서 사용하도록 저MWCO 서브시스템 투과물 출력라인(129)을 통해 생성되거나 폐기된다.

저전도도 투석여과액 밸브(145)는 저전도도 투석여과액 용기(143)의 저전도도 투석여과액이 저전도도 투석여과액 공급라인(147)을 통해 저MWCO 서브시스템 푸칸 용기(126)로 들어가도록 개방될 수 있으며, 잔류물과 저전도도 투석여과액은 저MWCO TFF 필터(160)의 잔류물의 나트륨염 처리 동안 생성된 유리 나트륨염을 제거하기 위해 저MWCO TFF 필터(160)에서 처리된다. 저전도도 투석여과액이 탈이온수일 수 있다. 이를 위해, 저MWCO 서브시스템 투과물 출력라인(129)의 투과물의 전도도를 측정해 원하는 수준으로 낮출 수 있고, 이는 나트륨염이 적절히 제거되었음을 나타낸다. 저 MWCO TFF 필터(160)를 통해 처리하기위한 저전도도 투석여과 용액의 통과부피의 수가 예정될 수 있다. 나트륨염이 저MWCO TFF 필터(160)의 잔류물로부터 적절하게 제거되면, 저전도도 투석여과액 밸브(145)가 닫히고 저MWCO 서브시스템 잔류물 출력라인(108)이 개방되어 저MWCO 서브시스템 잔류물 출력라인(108)에 CATS(100")의 생성물을 전달한다.

원심분리 침전

고분자량 푸칸은 원심분리 침전법으로 넓은 분포의 출발 푸칸에서 구할 수 있다.

도 4에는 출발 푸칸 조성물로부터 고분자량 푸칸을 원심분리 침전시키기위한 원심분리 침전 시스템(600)이 도시되어있다. 이 시스템(600)은 구배형 투과장벽(620)을 갖춘 원심분리기(610)를 포함한다. 투과장벽은 원심분리기(610)의 제 1 하단부(630)부터 제 2 상단부(640)를 향해 밀도가 구배형으로 감소할 수 있다. 구배형 투과장벽(620)이 다른 밀도의 다른 재료로 구성될 수도 있다. 구배형 투과장벽(620)이 다른 농도의 한가지 용질이 적당한 용매에 용해된 용액으로 구성될 수도 있다. 적당한 용매로는 물과 물-알코올 용액이 있다. "구배 물질"로도 알려진 용질로는 글리세롤, 소르비톨, CsCl, Cs₂SO₄, KBr, 디아트리조에이트, Nycodenz®, 이오딕사놀 및(폴리)수크로스를 포함한 적당한 당류 중 하나 이상일 수 있다. 구배형 투과장벽(620)은 원심분리기(610)의 제1 하단부(630)에서 제 2 상단부(640)까지 물질 농도가 연속적으로 감소하는 구배를 가질 수 있다. 한편, 구배형 투과장벽(620)아 복수의 별개의 밀도구배, 예컨대 도 4와 같은 구배형 투과장벽 구간(620a,620b,620c)을 가질 수도 있다. 입자 물질을 제거하기 위해 예비필터를 통해 적절하게 예비여과된 출발 푸칸 조성물을 함유하는 용액이 원심분리기(610)의 제 2 상단부(640)에 근접해 투과장벽(620)에 접촉하는 출발 푸칸 조성물(650)이 되도록 배치된다. 이런 예비필터가 0.22 ㎛ 입자 필터일 수 있다.

작동시, 원심분리기는 도4의 원심력 화살표(660)로 표시된 것처럼 원심분리기의 제 2 상단부(640)부터 제 1 하단부(630)로 향하는 힘 성분을 갖는 원심력을 받는다. 이것은 도4의 원심분리 박스(670)로 개략적으로 도시된 원심분리기로 달성될 수 있다. 적절한 원심분리는 당 업계에 잘 알려져 있어 여기서는 더이상 설명하지 않는다. 원심력은 약 1,000 내지 1,000,000 중력, 예를 들어 약 10,000 내지 200,000 중력, 약 60,000 내지 500,000 중력 및 약 190,000 내지 800,000 중력일 수 있다.

도 4의 시스템과 관련해, 출발 푸칸 조성물로부터 고분자량 푸칸을 원심분리 침전시키는 방법은 제 1 바닥 구배의 투과장벽 재료 단부(622)를 갖는 구배형 투과장벽(620)을 원심분리기(610)의 제1 하단부(630)에 접촉시키는 단계; 원하는 고분자량 구간을 갖는 출발 푸칸 조성물을 원심분리기(610)의 제 2 상단부(640)에 근접한 구배형 투과장벽(620)의 반대쪽 제 2 최상 구배형 투과장벽 재료 단부(624)와 접촉 배치하는 단계; 원심분리기(610)의 제 2 상단부(640)에서 제 1 하단부(630)로 향하는 원심력(660)을 원심분리기(610)에 가하는 단계; 및 원심분리기(610)의 제 1 하단부(630)에 침전된 고분자량 푸칸을 수집하는 단계를 포함한다. 최저 밀도 구배 물질과 접촉되게 출발 푸칸 조성물(650)을 배치하는 단계는 적당한 예비필터를 통해 출발 푸칸 조성물을 예비여과하는 것을 포함할 수 있다.

원심분리기(610)내에 구배형 투과장벽(620)을 두는 것은 복수의 구배물질 구간을 두는 것을 포함할 수 있으며, 구배물질 구간의 밀도는 원심분리기(610)의 제 1 하단부(630)에서 제 2 상단부(640)로 갈수록 감소한다. 원심분리기(610)내에 구배형 투과장벽(620)을 두는 것은 원심분리기(610)내에 사카라이드로 된 구배형 투과장벽(620)을 두는 것을 포함할 수 있다. 원심분리기(610)내에 구배형 투과장벽(620)을 두는 것은 원심분리기(610)내에 수크로스로 된 구배형 투과장벽(620)을 두는 것을 포함할 수도 있다. 원심분리기(610)내에 구배형 투과장벽(620)을 두는 것은 원심분리기(610)내에 글리세롤, 소르비톨, CsCl, Cs₂SO₄, KBr, 디아트리조에이트, Nycodenz® 및 이오딕사놀 중 적어도 하나로 된 구배형 투과장벽(620)을 두는 것을 포함할 수도 있다. 원심분리기(610)내에 구배형 투과장벽(620)을 두는 것이 원심분리기(610)내에 용매에 용해된 구배재로 된 구배형 투과장벽(620)을 두는 것을 포함할 수도 있다. 원심분리기(610)내에 구배형 투과장벽(620)을 두는 것이 원심분리기(610)내에 물과 물-알코올 용액 중 하나에 용해된 구배재로 된 구배형 투과장벽(620)을 두는 것을 포함할 수도 있다.

도 5는 출발 푸칸 조성물로부터 고분자량 푸칸을 원심분리 침전시키기위한 원심분리 침전 시스템(600 ')의 또 다른 실시예를 도시한다. 이 실시예는 제 1 바닥 투과장벽 재료 단부(622 ')가 원심분리기(610)의 제 1 하단부(630)와 접촉하는 구배재로 된 단일 장벽 구간(620c')를 갖는 투과장벽(620')을 사용한다. 출발 푸칸 조성물은 투과장벽(620')의 대향하는 제 2 상단 투과장벽 재료 단부(624')와 직접 접촉한다. 이 방법에서는 원심분리기(610)의 제 2 상단부(640)로부터 제 1 하단부(630)로 향하는 원심력(660)을 원심분리기에 가하고, 제 1 하단부(630)에서 침전된 고분자량 푸칸을 수집한다. 최저 밀도 구배 물질과 접촉되게 출발 푸칸 조성물(650)을 배치하는 것은 적당한 예비필터를 통해 출발 푸칸 조성물을 예비여과하는 것을 포함할 수 있다.

한편, 장벽을 필요로하지 않으며 출발 푸칸 조성물을 담은 용기가(610)가 원심분리기의 제 2 상단부(640)로부터 제 1 하단부(630)로 향하는 원심력(660)을 원심분리기에 가하고 원심분리기(610)의 제 1 하단부(630)에서 침전된 고분자량 푸칸을 수집할 수도 있다.

겔 전기영동-추출

고분자량 푸칸은 겔 전기영동-추출법으로 넓은 분자량 분포의 출발푸칸에서 얻을 수 있다. 이 방법은 다음 단계들을 포함할 수 있다:원하는 고분자량 구간을 갖는 출발 푸칸 조성물을 겔 전기영동에 적용하되, 출발 푸칸 조성물이 인가된 전위차에 의해 질량 대 전하 비율에 따라 변위되는 단계; 전위차와 원하는 고분자량 푸칸에 기초하여 전기영동 겔의 일부를 선택하는 단계; 및 선택된 겔 부분으로부터 원하는 고분자량 푸칸을 추출하는 단계.

출발 푸칸 조성물을 겔 전기영동에 적용하는 것은 먼저 바람직하지 않은 입자상 물질을 제거하기 위해 예비필터를 통해 용액내 출발 푸칸 조성물을 예비여과하는 것을 포함할 수 있다. 출발 푸칸 조성물을 겔 전기영동하는 것은 0.1 %w/v 내지 30 %w/v 농도의 용액에서 출발 푸칸 조성물을 제조하는 것을 포함할 수 있다. 원하는 고분자량 푸칸을 추출하는 것은 0.1mm와 1000mm 사이의 거리에 대해 전위차의 방향을 따라 연장되는 겔 부분으로부터 원하는 고분자량 푸칸을 추출하는 것을 포함할 수 있다. 원하는 고분자량 푸칸을 추출하는 것은 물, 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, 물/알코올 혼합물 및 염용액 중 하나를 사용하여 겔 부분을 추출하는 것을 포함할 수 있다.

출발 푸칸 조성물을 겔 전기영동하는 것은 소정의 시간 용액내 출발 푸칸 조성물을 대체하는 것을 포함할 수 있다. 전기영동 겔을 가로 질러 출발 푸칸 조성물을 겔 전기영동하는 것은 겔이 완충액에 침지되는 동안 전기영동 겔을 가로 질러 출발 푸칸 조성물을 대체하는 것을 포함할 수 있다. 출발 푸칸 조성물을 전기영동 겔을 가로 질러 겔 전기영동하는 것은 겔 물질과 완충액으로부터 겔을 제조하는 것을 포함할 수 있다. 겔 물질 및 완충액으로부터 겔을 제조하는 것은 아가로스, 폴리아크릴아미드, 폴리디메틸아크릴아미드 및 전분 중 하나와 완충액으로부터 겔을 제조하는 것을 포함할 수 있다. 겔 재료와 완충액으로부터 겔을 제조하는 것은 겔 재료와 함께 트리스-아세테이트 EDTA, 트리스-보레이트 EDTA 및 인산염 완충 식염수 중 하나로부터 겔을 제조하는 것을 포함할 수 있다. 인가된 전위차에 의해 출발 푸칸 조성물을 대체하는 것은 약 1 내지 500 Volt/cm, 예를 들어 약 5 내지 50 Volt/cm, 약 10 내지 200 Volt/cm 및 약 50 내지 300 Volt/cm 의 인가된 전계 강도의 작용하에 출발 푸칸 조성물을 대체하는 것을 포함할 수 있다.

출발 푸칸 조성물로부터 원하는 고분자량 푸칸을 얻기위한 전기영동 추출 시스템(900)이 도 6에 도시되어있다. 전기영동-추출 시스템(900)은 전기영동 겔(916)이 들어있는 전기영동 챔버(910) 및 전기영동 완충액(918)을 포함한다. 전기영동 겔(916) 재료는 아가로스, 폴리아크릴아미드 및 전분 중 하나일 수 있다. 전기영동 완충액(918)은 트리스-아세테이트 EDTA, 트리스-보레이트 EDTA 및 인산염 완충 식염수 중 하나일 수 있다. 전기영동 겔(916)의 제 1면에 근접하고 평행하게 웰(912)이 전기영동 겔(916) 안에 형성되고, 용액내 출발 푸칸 조성물이 웰(912) 안에 위치한다.

직류 전원(920)은 캐소드(922) 및 애노드(924)에 의해 전기영동 챔버(910)의 전기영동 완충액(918)에 전위차를 가한다. 캐소드(922)와 애노드(924) 사이의 전위차는 출발 푸칸 조성물에서 푸칸 음이온을 유도하여, 화살표(926) 방향으로 음극(922)에서 멀어지고 양극(924)쪽으로 이동시켜, 전위차가 주어진 시간 유지되는 경우, 출발 푸칸 조성물의 다른 분자량 분자들이 애노드(924)를 향한 다른 거리에 의해 웰(912)로부터 변위되도록 한다. 변위 속도는 푸칸 분자의 질량 대 전하 비율에 의해 결정된다. 저분자량 푸칸은 더 빠르게 변위되고 전위차의 작용하에 일정 시간 후에 고분자량 푸칸보다 더 멀리 변위된다. 이론적 변위 거리(914)는 상이한 분자량 푸칸 분자들의 상이한 이론적 변위 거리를 나타내며, 저분자량 푸칸 분자는 임의의 주어진 기간에 캐소드(922)로부터 더 멀리 변위된다.

전기영동 후 출발 푸칸 조성물로부터 원하는 고분자량 푸칸을 얻기 위해, 전기영동 겔(916)의 상응하는 부분이 선택되고 겔의 이 부분으로부터 고분자량 푸칸이 추출된다. 이를 위한 방법으로 전기영동 겔(916)의 일부를 추출 용액에 담그고 겔-용액 혼합물을 교반할 수 있다. 일례로, 흔들기로나 고전단 혼합으로 교반할 수 있다.

막투석여과

고분자량 푸칸은 막 투석여과에 의해 넓은 분자량 분포의 출발 푸칸으로부터 얻을 수 있다. 주어진 투석여과막의 공칭 MWCO 값은 일반적으로 투석여과막을 교차/투과하지 않는 분자의 분자량보다 작은 분자량의 분자들을 갖는 용액의 통과를 선택적으로 허용한다. 투석여과막의 분자량 컷오프 값은 일반적으로 주어진 폴리머나 공칭 컷오프 값에 대해 절대적이지 않고; 주어진 투석여과막이 공칭 분자량 컷오프 위아래 양쪽의 일부 분자들을 통과시키거나 보유한다. 특정 폴리머에 대한 공칭 MWCO 투석여과막의 실제 컷오프 값과 효과는 특정 폴리머에 대해 루틴하게 결정될 수 있다.

투석여과막의 투과 거동에 영향을 미치는 인자가 여럿 있을 수 있다. 이런 인자는 투석여과막 자체나 표적 중합체의 속성에 좌우된다. 예를 들어 표적 중합체의 접힘 거동과 접힌 구조가 투석여과막의 MWCO장벽을 교차/비교차할 때의 표적 중합체의 거동에 영향을 미칠 수 있다. 투석여과막 자체와 관련해, 제조 방법상 특정 투석여과막 내에 다양한 구멍 크기를 유발할 수 있으며, 이런 다양성은 공칭 MWCO 컷오프보다 크거나 작은 구멍을 포함할 수 있다. 따라서, 공칭 분자량 컷오프 값을 갖는 투석여과막은 공칭 분자량 컷오프 값 미만의 분자 통과를 허용하지만, 이런 값보다 낮거나 높은 일부 분자를 통과/유지할 수도 있다.

이 방법은 원하는 고분자량 구간을 갖는 출발 푸칸 조성물을 100kDa 이상의 분자량 컷오프를 갖는 막을 통해 투석여과하여 고분자량을 갖는 투석여과된 푸칸 조성물을 생성하는 단계; 및 고분자량 푸칸을 갖는 투석여과된 푸칸 조성물을 수집하는 단계를 포함할 수 있다.

도 7에 출발 푸칸 조성물로부터 고분자량 푸칸을 얻기위한 막투석여과 시스템(800)이 도시되어있다. 이 시스템(800)은 저분자량 푸칸 분자를 통과시키는 투석여과막(825)을 갖는 투석여과셀(820)을 포함한다. 적당한 용매내 출발 푸칸 조성물은 막투석여과 시스템(800)으로 들어가서 입력 공급라인(801)과 예비필터(802)를 통해 푸칸 용기(810)로 간다. 예비필터는 예를 들어 원치않는 입자를 제거할 0.22 μm 예비필터 일 수 있다. 문제.

예비여과된 출발 푸칸 조성물은 투석여과 시스템 펌프(814)에 의해 투석여과시스템 공급라인(812)과 투석여과액 복귀라인(816)을 통해 투석여과막(825)의 제 1측면의 투석여과셀(820)을 통해 순환된다. 투석여과액은 툿헉펌프(834)에 의해 투석여과액 공급라인(832)과 투석여과액 복귀라인(836)을 통해 투석여과막(825)의 제 2측면의 투석여과셀(820)을 통해 순환된다. 투석여과액은 투석여과막(825)을 자유롭게 통과하도록 선택된다. 적당한 투석여과액은 탈이온수 및 염화나트륨, 인산완충액, 인산나트륨, 인산 완충 식염수, 트리스-HCl 완충액, 시트르산나트륨, 시트레이트 완충액, 아스코르브산 나트륨, 아스코르브산, 아황산나트륨 및 에틸렌디아민- 테트라 아세트산(EDTA)의 용액을 포함하지만 이에 한정되지도 않는다. 적당한 투석여과막은 분자량이 200kDa를 넘는 푸칸 분자의 통과를 우선적으로 중지하도록 선택된 기공 크기를 갖는다. 더 적당한 투석여과막은 300kDa, 500kDa 및 1000kDa 이상의 분자량 분자의 통과를 우선적으로 중지하는 기공 크기를 갖는다. 이들 막 각각은 넓은 출발 분자량 분포에 비해 컷오프 분자량을 갖거나 투석여과막 기공크기보다 작은 분자량을 갖는 푸칸 분자들을 갖는 출발 푸칸 조성물로부터 상응하는 고분자량 푸칸을 구하도록 채택된다. 투석여과막은 셀룰로오스 에스테르 및 재생 셀룰로오스 막 중 하나 일 수 있으나 이에 제한되지 않는다. 출발 푸칸 조성물을 함유하는 용액의 농도는 0.1 %w/v 내지 30 %w/v 일 수 있다.

푸칸 분자가 투석여과막(825)을 통과함에 따라 그 농도가 투석여과액에 축적되면서 투석여과 과정을 억제하기 시작한다. 원하는 시점에서 투석여과액 공급밸브(845)가 개방되고 투석여과액 공급라인(842)을 통해 투석여과액 공급용기(840)로부터 투석여과액 용기(830)로 신선한 투석여과액이 들어갈 수 있다.

적절한 투석여과 기간 후, 투석여과액 배출밸브(815)가 개방되어 투석여과된 푸칸 조성물이 투석여과액 배출라인(818)을 통해 투석여과시스템(800)에서 나갈 수 있다. 투석여과액 배출밸브(835)가 개방되어 저분자량 푸칸 분자들을 갖는 투석여과액을 투석여과액 배출라인(838)에 보낼 수 있다.

선택적 침전

선택적침전법으로 넓은 분자량 분포의 출발 푸칸에서 고분자량 푸칸을 얻을 수 있다. 이 방법은 다음 단계들을 포함할 수 있다:물에 출발 푸칸 조성물이 있는 용액으로서 원하는 고분자량 구간을 갖는 출발 푸칸 조성물을 제공하는 단계; 출발 푸칸 조성물을 함유하는 용액에 푸칸 침전제를 첨가하여 과포화 푸칸-용매 혼합물을 얻는 단계; 이온-침전 유발 화합물을 과포화 푸칸-용매 혼합물에 첨가하여 출발 푸칸 조성물 및 잔류물 푸칸을 함유하는 용액으로부터 침전된 고분자량 푸칸을 생성함으로써 넓은 분자량 분포의 출발 푸칸의 침전을 유발하는 단계; 및 상기 혼합물로부터 침전된 고분자량 푸칸을 추출하는 단계. 적당한 푸칸-침전제는 상대 극성이 0.765 미만인 용매, 예를 들어 에탄올, 이소프로판올, 프로판올, 아세톤, 메탄올, 디메틸 술폭시드, 디메틸 포름아미드, 에틸렌 글리콜, 테트라히드로푸란, 아세토니트릴, 글라임, 디글림 및 디옥산이 있는데, 침전 유체의 극성이 낮아지면서 푸칸 용해도도 낮아진다. 상대 극성 값은 흡수 스펙트럼의 용매 이동을 측정하여 일반화할 수 있다(Christian Reichardt, Solvents and Solvent Effects in Organic Chemistry, Wiley-VCH Publishers, 3rd ed., 2003 참조). 적당한 이온 침전 유발 화합물은 1가, 2가 및 3가 양이온의 염 및 염기, 예컨대 염화물, 브롬화물, 요오드화물, 불화물, 황산염, 아황산염, 탄산염, 중탄산염, 인산염, 질산염, 아질산염, 아세테이트, 구연산염, 규산염, 수산화물, 알칼리 금속의 산화물 및/또는 시안화물, 알칼리토금속, 알루미늄 및/또는 암모늄을 포함 하나 이에 제한되지 않는다. 한편, 이온 침전 유발 화합물이 NaCl, KCl, NaOH, MgCl₂ 및 CaCl₂ 중 적어도 하나를 포함할 수도 있다. 물에서의 출발 푸칸 조성물의 적절한 농도는 0.01 %w/v 내지 30 %w/v이다. 이 방법에 사용되는 특정 푸칸이 후코이단을 포함 하나 이에 제한되지도 않는다.

이 방법은 푸칸 침전제를 첨가하기 전에 출발 푸칸 조성물을 탈염하는 것을 더 포함할 수 있다. 탈염은 분자량 컷오프 필터를 통해 출발 푸칸 조성물을 투석여과하는 것을 포함할 수 있다. 투석여과는 출발 푸칸 조성물을 증류수로 투석여과하는 것을 포함할 수 있다. 투석여과는 원하는 고분자량 푸칸내 원하는 분자량보다 작은 분자량 컷오프, 예를 들어 5kDa, 10kDa, 30kDa, 50kDa, 70kDa, 100kDa, 200kDa 또는 300kDa 분자량 컷오프를 갖는 분자량 컷오프 필터를 통해 출발 푸칸 조성물을 투석여과하는 것을 포함할 수 있다. 이 방법은 바람직하지 않은 입자 물질을 제거하는데 적당한 예비필터를 통해 출발 푸칸 조성물을 함유하는 용액을 예비여과하는 것을 더 포함할 수 있다.

혼합물로부터 침전된 고분자량 푸칸을 추출하는 방법으로 원심분리, 침강, 여과 및 유체역학적 유동분리 중 적어도 하나를 이용할 수 있다.

음이온흡착

음이온흡착법으로 넓은 분자량 분포의 출발 푸칸에서 고분자량 푸칸을 얻을 수 있다. 이 방법은 다음 단계들을 포함할 수 있다:원하는 고분자량 구간을 갖는 넓은 출발 분자량 분포를 갖는 출발 푸칸 조성물을 출발 용액에 용해시키는 단계; 출발 용액내 출발 푸칸 조성물을 출발 푸칸 분자량 분포내의 원하는 분리 분자량에 의거한 기공 크기를 갖는 이온교환 거대다공성 수지와 이온교환하여 출발 푸칸 조성물을 1 차 이온교환 처리된 출발 푸칸 조성물로 변환하는 단계; 원하는 고분자량 푸칸을 포함하는 1차 이온교환 처리된 푸칸 조성물을 수집하는 단계; 출발 푸칸 조성물과의 이온교환 후 거대다공성 수지에서 푸칸 분자를 염용액으로 추출하여, 저분자량 푸칸 풍부 염용액을 생성하는 단계; 저분자량 푸칸 풍부 염용액을 탈염하여 제 2 이온교환 처리된 푸칸 조성물을 형성하는 단계; 및 저분자량 푸칸을 포함하는 제 2 이온교환 처리된 푸칸 조성물을 수집하는 단계.

방법은 이온교환을하기 전에 출발 푸칸 조성물을 탈염하는 것을 더 포함할 수 있다. 탈염은 분자량 컷오프 TFF 필터로 출발 푸칸 조성물을 투석여과 여과하는 것을 포함할 수 있다. 투석여과 여과는 고분자량 푸칸내 원하는 분자량보다 작은 분자량 컷오프를 갖는 분자량 컷오프 TFF 필터, 예컨대 5kDa, 10kDa, 30kDa, 50kDa, 70kDa, 100kDa 및/또는 300kDa 분자량 컷오프 TFF 필터로 출발 푸칸 조성물을 투석여과 여과하는 것을 포함할 수 있다.

출발 푸칸 조성물로부터 원하는 고분자량 푸칸 조성물을 제조하는 방법이 다음 단계들을 포함할 수도 있다: 원하는 고분자량 분포를 갖는 넓은 출발 분자량 분포를 갖는 출발 푸칸 조성물을 출발 용액에 용해하는 단계; 용해된 출발 푸칸 조성물을 출발 푸칸 분자량 분포내의 원하는 분리 분자량에 기초한 기공 크기를 갖는 이온교환 거대다공성 수지와 이온교환하여, 출발 푸칸 조성물을 제 1 이온교환 처리된 푸칸 조성물로 변환하는 단계; 및 원하는 고분자량 푸칸을 포함하는 제 1 이온교환 처리된 푸칸 조성물을 수집하는 단계. 또, 이온교환을 하기 전에 출발 푸칸 조성물을 탈염하는 단계를 더 포함할 수도 있다. 탈염은 분자량 컷오프 TFF 필터로 출발 푸칸 조성물을 투석여과 여과하는 것을 포함할 수 있다. 투석여과 여과는 원하는 고분자량 푸칸의 분자량 분포내의 원하는 분자량보다 작은 분자량 컷오프를 갖는 분자량 컷오프 TFF 필터, 예를 들어 5kDa, 10kDa, 30kDa, 50kDa, 70kDa, 100kDa 및/또는 300kDa 분자량 컷오프 TFF 필터로 출발 푸칸 조성물을 투석여과 여과하는 것을 포함할 수 있다.

거대다공성 수지를 염용액에 적용하는 것은 거대다공성 수지를 나트륨염용액, 예를 들어 염화물, 브롬화물, 요오드화물, 불화물, 황산염, 아황산염, 탄산염, 중탄산염, 인산염, 질산염, 아질산염, 아세트산 염, 구연산염, 규산염 및/또는 알칼리 금속, 알칼리 토금속, 알루미늄 및/또는 암모늄의 시안화물 중 적어도 하나를 포함하는 용액에 적용하는 것을 포함할 수 있다. 거대다공성 수지를 나트륨염용액에 적용하는 것은 거대다공성 수지를 염화나트륨 용액에 적용하는 것을 포함할 수 있다. 저분자량 푸칸 풍부 염용액을 탈염하는 것은 분자량 컷오프 TFF 필터로 저분자량 푸칸 풍부 염용액을 투석여과 여과하는 것을 포함할 수 있다. 투석여과 여과는 예를 들어 원하는 저분자량 푸칸 풍부 염용액의 분자량 분포내 원하는 분자량보다 작은 분자량 컷오프를 갖는 분자량 컷오프 TFF 필터, 예컨대 5kDa, 10kDa, 30kDa, 50kDa, 70kDa 및/또는 100kDa 분자량 컷오프 TFF 필터 로 저분자량 푸칸 풍부 염용액을 투석여과하는 것을 포함할 수 있다.

용해된 출발 푸칸 조성물을 이온교환 거대다공성 수지로 이온교환하는 것은 출발 푸칸 대 수지의 비율을 소정의 질량비로 조정하는 것을 포함할 수 있다. 소정의 질량비는 푸칸:수지가 약 1:100 내지 10:1, 5:1 또는 2:1일 수 있다. 다른 실시예에서, 이 질량비가 약 1:100 내지 1:1일 수 있다. 또는, 이 질량비가 약 1:100 내지 1:2일 수 있다. 또는, 약 1:50내지 1:5 일 수 있다. 또는, 약 1:20내지 1:1, 예를 들어 약 1:2, 1:4,1:6, 1:8, 1:10일 수도 있다.

용해된 출발 푸칸 조성물을 이온-교환 거대다공성 수지와 이온교환하는 것은 용해된 출발 푸칸 조성물을 소정의 시간 수지와 이온교환하는 것을 포함할 수 있다. 이 시간은 0 내지 300시간일 수 있다. 또는, 이 시간이 0 내지 100시간일 수도 있다. 또는, 이 시간이 5분 내지 30시간, 예를 들어 약 8 내지 24시간일 수 있다. 또는, 1 내지 10 시간, 예를 들어 4 내지 10 시간일 수 있다. 또는, 약 2 내지 5 시간 일 수 있다.

용해된 출발 푸칸 조성물을 이온교환 거대다공성 수지와 이온교환하는 것은 용해된 출발 푸칸 조성물을 음이온교환 거대다공성 수지와 이온교환하는 것을 포함할 수 있다. 용해된 출발 푸칸 조성물을 음이온교환 거대다공성 수지와 이온교환하는 것은 용해된 출발 푸칸 조성물을 강염기나 약염기 음이온교환 거대다공성 수지와 이온교환하는 것을 포함할 수 있다. "강염기"와 "약염기"는 일반적인 의미로 사용된다. 예를 들어, "강염기"는 일반적인 이온교환 환경에서 전하를 잃지 않는 수지로 예컨대 4차 아민 관능화 수지이고, 약염기는 높은 pH 조건에서 전하를 잃지 않는 수지로 예컨대 1차, 2차 또는 3차 아민 관능화 수지이다. 용해된 출발 푸칸 조성물을 이온교환하는 것은 용해된 출발 푸칸 조성물을 혼합 전하 거대다공성 수지와 이온교환하는 것을 포함할 수 있다.

용해된 출발 푸칸 조성물을 음이온교환 거대다공성 수지와 이온교환하는 것은 용해된 출발 푸칸 조성물을 1 차, 2 차, 3 차 및 4 차 아민기 중 적어도 하나를 포함하는 거대다공성 수지와 이온교환하는 것을 포함할 수 있다. 1 차 아민기는 NH₂ 기일 수 있다. 2차 아민기는 벤질 아민기 및 디메틸 아민기 중 적어도 하나일 수 있다. 3 차 아민기는 디에틸 아미노 에틸기 및 디메틸 아미노 에틸기 중 적어도 하나 일 수 있다. 4차 아민기는 트리메틸 암모늄 및 트리에틸 암모늄 기일 수 있다. 수지는 스티렌, 아가로스, 덱스트란, 아크릴레이트, 메타크릴레이트, 메틸 메타크릴레이트, 부틸 메타크릴레이트, 디비닐벤젠, 셀룰로스, 실리카 및 세라믹 중 하나 이상을 포함할 수 있지만 이에 제한되지 않는다.

용해된 출발 푸칸 조성물을 이온교환 거대다공성 수지로 이온교환하는 것은 용해된 출발 푸칸 조성물을 5~1000 nm, 예를 들어 5~100 nm, 10/15 ~ 50 nm, 20 ~ 80 nm, 5 ~ 30 nm, 100 ~ 500 nm, 300 ~ 900 nm 또는 200 ~ 400의 기공 크기를 갖는 이온교환 수지로 이온교환하는 것을 포함할 수 있다. 용해된 출발 푸칸 조성물을 이온교환 거대다공성 수지와 이온교환하는 것은 용해된 출발 푸칸 조성물을 이온교환 수지와 이온교환하는 것을 포함할 수 있으며, 배제 한계는 50~50,000 kDa, 예를 들어 50~10,000 kDa, 100~5,000 kDa, 10,000~40,000 kDa, 1,000~9,000 kDa, 2,000~7,000 kDa 또는 500~2,000kDa 이다. 제외 한계는 구형 단백질의 제외 한계를 기반으로할 수 있다.

도 8은 분자량에 기초한 푸칸의 구획을 위한 예시적인 이온흡착 시스템(300)의 개략도이다. 출발 푸칸 조성물을 포함하는 용액은 입력 공급라인(301)과 예비필터(306)를 통해 TFF 서브시스템 푸칸 용기(176)에 공급된다. 탈염 공정에서, 접선유동여과(TFF) 서브시스템 펌프(174)가 TFF 서브시스템 필터 공급라인(172)을 통해 출발 푸칸 조성물을 TFF 서브시스템(170)의 TFF 필터(171)로 펌핑한다. TFF 필터(171)의 포맷은 플레이트- 시스템; 나선형으로 감긴 카트리지 시스템; 중공 사 시스템; 플로우 셀 시스템; 및 원심분리 필터 시스템 중의 어느 하나일 수 있다.

도 8의 시스템에서, TFF 서브시스템(170)은 담수화 서브시스템 역할을 한다. TFF 필터(171)는 일반적으로 공급된 입력 유체가 잔류물 측에서 필터를 통과하도록 설계된 카세트로 공급되며, 투과물은 한쪽 출력라인을 통해 빠져 나가고 처리된 입력 유체는 다른 출력라인을 통해 잔류물로 남게된다. 이 방법의 경우, TFF 필터(171)의 컷오프 분자량은 이온교환 서브시스템(180)에서의 후속 이온흡착 처리를 위해 푸칸을 잔류물로 유지하면서 출발 푸칸 용액내 염 성분의 투과를 하도록 선택된다. TFF 서브시스템 펌프(174)는 TFF 필터(171)의 압력 수준을 잔류물측과 투과물측 사이로 유지한다. 도 8에서, TFF 필터(171)의 잔류물은 TFF 서브시스템 잔류물 라인(178)을 통해 TFF 서브시스템 푸칸 용기(176)로 복귀되는 반면, 원치 않는 비-푸칸 염 성분을 포함하는 투과물은 TFF 서브시스템(170) 외부에서 사용하기 위해 TFF 서브시스템 투과물 출력라인(179)을 통해 생성되거나 폐기된다.

TFF 서브시스템 펌프(174)가 TFF 필터(171)를 통해 출발 푸칸 조성물과 잔류물을 재순환시키는 동안, TFF 서브시스템 용매 용기(177)로부터의 저전도도 플러시 용액과 물은 TFF 서브시스템 용매 공급라인(175)을 통해 공급될 수 있다. 이 플러시 용액은TFF 서브시스템 투과물 출력라인(179)의 투과액을 통해 손실된 잔류액을 보충하거나 입력 출발 푸칸과 용매의 소정 횟수의 통과부피가 TFF 필터(171)를 통해 순환되도록 한다. TFF 서브시스템 용매 공급밸브(173)를 제어하여, 플러시 용액을 펄스 방식이나 연속 방식으로 첨가할 수 있다. 용매를 추가하는 연속 모드는 효율성에 장점이 있다. TFF 필터(171)를 통해 처리할 용매의 통과부피횟수는 미리 결정될 수 있다. 이 용매는 탈이온수일 수 있다.

인터-서브시스템 밸브(302)가 이런 처리과정 동안 동안 폐쇄되고, TFF 서브시스템(170)의 TFF 필터(171)의 잔류물이 이온교환 서브시스템(180)의 이온교환 서브시스템 푸칸 용기(186)에 공급되기 전에 용기(도시되지 않음)에 수집될 수 있다. 수집된 잔류물은 TFF 서브시스템 잔류물 출력라인(303)을 통해 이온교환 서브시스템(180)의 이온교환 서브시스템 푸칸 용기(186)에 공급될 수 있다. 한편, 수집된 잔류물이 용기(도시되지 않음)에서 이온교환 서브시스템 푸칸 용기로 이송될 수도 있다. 또는, 인터-서브시스템 밸브(302)가 개방된 상태에서 TFF 필터(171)의 잔류물이 TFF 서브시스템 잔류물 출력라인(303)을 통해 연속적으로 이온교환 서브시스템 푸칸 용기(186)에 공급될 수도 있다. 이온교환 서브시스템(180)에 공급된 잔류물은 이온교환에서 푸칸의 처리를 간섭할 수 있는 저염 함량을 갖고 탈염된 푸칸조성물로 예상할 수 있다.

이온교환 서브시스템(180)의 이온교환기(181)는 소정 부피의 거대다공성 이온교환 수지(189)를 포함한다. 거대다공성 이온교환 수지는 음이온교환 수지나 혼합 전하 수지이다. 거대다공성 이온교환 수지(189)의 기공 크기는 넓은 분자량 분포를 갖는 용액으로부터 소정의 값 미만의 분자량의 푸칸 분자를 우선적으로 흡착해, 소정 값보다 큰 분자량을 갖는 푸칸 분자를 용액에 남겨두도록 선택된다. 이런 수지는 디비닐벤젠과 가교 결합되고 4 차 암모늄기를 함유하는 기공을 갖는 구형 입자의 스티렌을 기반으로한다. 기공 크기는 10~100nm일 수 있다. 푸칸 분자는 푸칸 분자의 유체 역학적 크기에 기초하여 수지의 기공에 우선적으로 흡착되거나 않을 수 있다.

이온교환기(181)내 TFF 서브시스템(170)으로부터의 탈염 푸칸 조성물의 처리 동안, 이온교환 서브시스템 푸칸 용기(186)로부터의 이온교환 서브시스템 출력라인(305)을 제어하는 이온교환 서브시스템 출력밸브(304)가 폐쇄될 수 있다. 이온교환 서브시스템 염용액 공급밸브(183b)와 이온교환 서브시스템 염용액 복귀밸브(183c)도 유사하게 폐쇄되고 이온교환 서브시스템 푸칸 복귀밸브(183a)가 개방될 수 있다. 이온교환 서브시스템 푸칸 펌프(184a)가 이온교환 서브시스템 푸칸 공급라인(182a)과 이온교환 서브시스템 푸칸 펌프(184a)를 거쳐 이온교환기(181)를 통해 탈염 푸칸 조성물을 함유하는 용액을 재순환시키는 동안, 거대다공성 이온교환 수지(189)는 저분자량 푸칸 분자를 흡착하여, 이온교환 서브시스템 푸칸 복귀라인(188a)의 용액이 원하는 고분자량 푸칸을 함유하게 한다. 이온교환기(181)를 통과한 후, 원하는 고분자량 푸칸을 포함하는 용액은 이온교환 서브시스템 푸칸 복귀 라인(188a)을 통해 이온교환 서브시스템 푸칸 용기(186)로 복귀된다.

이온교환 서브시스템 푸칸 용기(186)내 푸칸의 평균 분자량을 측정이나 모니터링할 수 있다. 이온교환 서브시스템 푸칸 용기(186)내 용액이 적절한 기간 동안 순환되거나 용액내 푸칸이 소정의 원하는 평균 분자량 값에 도달하면, 이온교환 서브시스템 출력밸브(304)를 열어, 이온교환 서브시스템 출력라인(305)을 통해 제1 이온교환처리된 푸칸 조성물을 이온흡착 시스템(300)의 제 1 출력 생성물로 생성한다. 제 1 출력 생성물은 예를 들어 분자량 분포를 갖는 고분자량 푸칸을 포함하며, 이때 저분자량 말단에서 입력 시작 푸칸 분자량 분포의 양이 억제되거나 감쇠되어, 최종 분자량 분포가 입력 공급라인(301)의 이온흡착 시스템(300)에 공급된 입력 출발 푸칸 조성물의 분자량 본포의 높은 말단을 향해 변위된다.

이온교환 서브시스템 출력밸브(304)와 이온교환 서브시스템 푸칸 복귀밸브(183a)가 다시 닫히고, 이온교환 서브시스템 염용액 공급밸브(183b)와 이온교환 서브시스템 염용액 복귀밸브(183c)가 열려 이온교환 서브시스템 염용액 용기(187)의 염용액이 이온교환 서브시스템 염용액 공급라인(182b)을 통해 이온교환 서브시스템(180)의 들여보낸다. 이온교환 서브시스템 염용액 펌프(184b)는 이제 이온교환기(181)내 거대다공성 이온교환 수지(189)를 통한 이온교환 서브시스템 염용액 공급라인(182b)을 통해 염용액을 순환시키고, 이온교환 서브시스템 염용액 복귀라인(188b)와 이온교환 염용액 복귀밸브(183b)를 통해 이온교환 서브시스템 염용액 용기(187)로 다시 들어간다. 이 과정에서, 염은 거대다공성 이온교환 수지의 기공에 흡착 된 푸칸을 대체하고 이온교환 서브시스템(180)에서 순환하는 염용액에 유리된 푸칸을 방출한다. 염용액은 소정 시간 순환 될 수 있다. 한편, 이온교환 서브시스템(180)내 염용액내 푸칸의 평균 분자량이 측정될 수 있고, 염용액내 푸칸의 평균 분자량이 소정의 원하는 값에 도달하면 염용액의 재순환이 종료될 수 있다.

또는, 이온교환 서브시스템 염용액 용기(187)로부터의 염용액 순환을 개시하기 전에 소정량의 저이온 함량 용액이 수지를 세척하는데 사용될 수도 있다. 저이온 함량 용액이 탈이온수일 수 있다.

이 때, 이온교환 서브시스템 출력밸브(304)가 다시 열리고 이온교환 서브시스템(180)의 펌프와 밸브가 적절히 동작해 이온흡착 시스템(300)의 제 2 생성물이 저분자량 푸칸 풍부 염용액 형태로 이온교환 서브시스템 출력라인(305)으로부터 인출되도록할 수 있다. 제 2 생성물은 적당한 원심분리 필터나 접선유동여과 필터로 여과되어 저분자량 푸칸을 원치않는 염으로부터 분리할 수 있다. 이 경우 제2 출력 저분자량 푸칸을 생성한다. 제 2 출력 저분자량 푸칸은 전술한 제 1 출력 고분자량 푸칸과 대조적으로 푸칸 분자량 분포를 가지며, 이때 고분자량 말단의 입력 출발 푸칸 부분이 억제나 감쇠되어, 최종 분자량 분포는 입력 공급라인(301)의 이온흡착 시스템(300)에 공급된 입력 출발 푸칸 조성물의 분자량 분포의 하단을 향해 변위된다.

출발 푸칸 분자량 분포의 폭과 복자도 및 중합체 거동과 이온교환 수지의 변동을 감안할 때, 2 개의 출력 푸칸 분자량 분포들은 거대다공성 이온교환 수지의 기공 크기에서 예상되는 곳에서 피크가 아닐수 있다. 그러나, 이것이 피크일 경우, 2개 출력 푸칸 분자량 분포들이 여전히 서로에 대해 변위되어, 출발 푸칸 조성물이 제1 생성물에 해당하는 상대적 고분자량 푸칸과, 제2 생성물에 해당하는 상대적 저분자량 푸칸으로 구획될 수 있다. 제1 생성물은 수지에 의해 우선적으로 흡착되지 않는 크고 무거운 푸칸 분자에 해당하는 반면, 제2 생성물은 반대로 수지에 의해 우선적으로 흡착되는 푸칸 분자에 해당하며 흡착되지 않은 것보다 평균적으로 작고 가볍다.

분취용 겔투과 크로마토그래피

분취용 겔투과 크로마토그래피로 넓은 분자량 분포의 출발 푸칸에서 고분자량 푸칸을 얻을 수 있다. 이 방법은 수용액내 중합체의 겔투과 크로마토그래피(GPC)에 대해 규정된 겔 매질을 컬럼 포맷으로 제공하는 단계; 겔 매질상의 겔투과 크로마토그래피에 적당한 수성 용매에 용해된 원하는 고분자량 구간을 갖는 출발 푸칸 조성물을 제공하는 단계; 출발 푸칸 조성물을 함유하는 용액을 분취용 겔투과 크로마토그래피에 적용하고, 이 푸칸은 칼럼의 제 1 입력말단과 제 2 출력말단 사이의 소정의 유속으로 칼럼내의 겔 매질을 가로 질러 분자량에 따라 변위되는 단계; 출발 푸칸 조성물의 원하는 구획에 기초하여 소정의 부분표본으로 컬럼의 제 2 출력 말단으로부터 용리액을 수집하고, 각 부분표본은 구획된 푸칸 조성물을 포함하는 단계; 원하는 고분자량 푸칸을 포함하는 모인 GPC 부분표본 조성물을 얻기 위해 출발 푸칸 조성물의 원하는 구획에 기초하여 원하는 부분표본을 모으는 단계.

출발 푸칸 조성물을 함유하는 용액을 분취용 겔투과 크로마토그래피에 적용하는 것은 먼저 원치 않는 입자상 물질을 제거하기 위해 예비필터를 통해 용액내 출발 푸칸 조성물을 예비여과하는 것을 포함할 수 있다. 출발 푸칸 조성물을 함유하는 용액을 분취용 겔투과 크로마토그래피에 적용하는 것은 0.1 내지 20 %w/v 농도의 용액에서 출발 푸칸 조성물을 제조하는 것을 포함할 수 있다. 출발 푸칸 조성물을 함유하는 용액을 분취용 겔투과 크로마토그래피에 적용하는 것은 겔 매질을 함유하는 컬럼을 통한 변위를 달성하기 위해 연동 펌프, 등용매 펌프, 바이너리 펌프, 4차 펌프 및 구배 펌프 중 하나 이상을 사용하는 것을 포함할 수 있다. 출발 푸칸 조성물을 함유하는 용액을 분취용 겔투과 크로마토그래피에 적용하는 것은 0.0005~5 mL/min/cm^2,, 0.01~0.25 mL/min/cm^2,, 0.05mL/min/cm², 0.1 mL/min/cm², 0.15 mL/min/cm² 및 0.2 mL/min/cm²의 유속으로 겔 매질을 함유하는 컬럼을 통해 용액을 변위하는 것을 포함할 수 있다.

컬럼의 제2 출력 말단에서 용리액을 수집하는 것은 약 0.1 ~ 1000 mL, 약 1 ~ 100 mL, 약 5 ~ 50 mL, 약 10 mL, 약 20 mL, 약 30 mL 및 약 40 mL 의 용리액 부분표본들을 량을 수집하는 것을 포함할 수 있다. 컬럼의 제2 출력말단에서 부분표본들을 수집하는 것은 분석 GPC로 부분표본들의 분자량 분포를 측정하는 것을 포함할 수 있다. 분석 GPC에 의한 부분표본 측정을 컬럼 용리액 수집과 동시에 할 수도 있다.

원하는 부분표본들을 모으는 것은 분석 GPC로 부분표본들의 분자량 분포를 측정하고 원하는 분자량 분포를 가진 부분표본만 모으는 것을 포함할 수 있다. 컬럼 용리액 수집과 동시에 원하는 부분표본들을 모을 수도 있다.

사용된 겔 매질이 폴리히드록시메타크릴레이트, 설폰화 스티렌-디비닐벤젠, 실리카, 친수성 결합 상이나 중합체, 폴리스티렌, 디비닐벤젠, 메타크릴레이트, 메틸 메타크릴레이트, 부틸 메타크릴레이트, 셀룰로스, 세라믹, 아가로스 및 덱스트란 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 사용된 겔 매질이 직경이 약 3nm, 5nm, 10nm, 20nm, 50nm, 100nm, 200nm, 500nm, 1,000nm, 2,000nm, 3,000nm, 5,000nm 및 10,000nm 중 하나 이상인 기공을 가질 수 있다. 사용된 겔 매질이 약 100 Da, 100kDa 1,000kDa, 5,000kDa, 10,000kDa, 30,000kDa, 50,000kDa 및 100,000kDa 중 적어도 하나의 배제 한계를 갖는 기공을 가질 수도 있다. 배제 한계는 구형 단백질이나 다당류, 예를 들어 덱스트란 및/또는 풀루란에 대한 배제 한계를 기반으로할 수 있다.

출발 푸칸 조성물을 용해시키는데 사용되는 용매는 물, 질산나트륨, 질산리튬, 인산일나트륨, 인산이나트륨, 인산삼나트륨, 염화리튬, 브롬화리튬, 요오드화리튬 염화나트륨, 브롬화나트륨, 나트륨, 요오드화물, 염화칼륨, 브롬화칼륨, 요오드화칼륨, 수산화나트륨, 수산화리튬, 수산화칼륨, 황산나트륨, 아황산나트륨, 메탄올, 에탄올 및 아세토니트릴 중 하나 이상을 포함할 수 있다.

화학구조 변경

본원에서 논의된 방법, 시스템 등은 푸칸 조성물의 푸칸의 화학구조 변경을 포함할 수 있다. 화학구조 변경은 푸칸으로부터 관능기, 예를 들어, 푸칸 구조로부터 O-아세틸, N-아세틸, 메톡시, 하이드록실, 카르복실산 및/또는 설페이트 관능기의 제거를 포함할 수 있다. 화학구조 변경은 예를 들어 산, 염기, 세제 및/또는 산화제와 같은 다양한 화학 시약의 사용을 포함할 수 있다.

질환과 상태

섬유성 유착

섬유성 유착은 일반적으로 수술 후 신체의 두 부분 사이에 형성되는 일종의 흉터이다(이런 섬유성 유착을 수술 유착이라고도 함). 섬유성 유착은 심각한 문제를 일으킬 수 있다. 예를 들어, 여성 생식기관(난소, 나팔관)과 관련된 섬유성 유착은 불임, 성교통 및 심한 골반 통증을 유발하고, 장에서 발생하는 섬유성 유착은 장폐쇄나 막힘을 유발하며, 섬유성 유착은 심장, 척추 및 손 주변과 같은 다른 위치에서도 형성될 수 있다. 수술 외에도 자궁 내막증, 감염, 화학요법, 방사선, 외상 및 암에 의해 섬유성 유착이 생길 수도 있다.

다양한 섬유성 유착이 여기서 논의된다. 수술 유착, 수술 후 유착, 골반 염증성 질환으로 인한 유착, 기계적 손상으로 인한 유착, 방사선에 의한 유착, 방사선 치료로 인한 유착, 외상으로 인한 유착, 이물질 존재로 인한 유착과 같은 용어는 모두 유사한 메커니즘으로 인해 조직이 서로 유착되는 것을 말하며 모두 섬유성 유착이라는 용어에 포함된다.

섬유성 유착 형성은 신체에서 정상적으로 분리된 조직이 서로 성장하는 복잡한 과정이다. 외과적 유착(수술 후 유착이라고도 함)은 외상에 대한 조직의 정상적인 상처 치유반응에서 발생하며 모든 복부 수술 환자의 2/3 이상에서 발생하는 것으로 보고되었다(Ellis, H., Surg. Gynecol. Obstet.133:497(1971)). 이런 섬유성 유착의 결과는 다양하며 수술 부위나 관련된 질병 부위와 같은 부위에 따라 다르다. 문제는 만성통증, 장폐색, 심장수술 후 사망위험 증가 등이 포함될 수 있다는 것이다(diZerega, GS, Prog. Clin. Biol. Res. 381:1-18(1993); diZerega, GS, Fertil. Steril. 61:219-235(1994); Dobell, AR, Jain, AK, Ann. Thorac. Surg. 37:273-278(1984)). 생식 연령대의 여성에서 자궁, 나팔관 또는 난소와 관련된 섬유성 유착은 모든 불임 사례의 약 20 %를 차지하는 것으로 추정된다(Holtz, G., Fertil. Steril. 41:497-507(1984); Weibel, MA 및 Majno, G. Am. J. Surg. 126:345-353(1973)).

섬유성 유착 형성 과정은 처음에 섬유소 프레임웍의 형성과 정상적인 조직 복구를 포함한다. 정상적인 복구 과정은 중피 복구와 함께 섬유소용해를 허용한다. 그러나, 섬유성 유착 형성에서 섬유 아세포가 네트워크로 증식하고 혈관신생이 일어나 약 3 ~ 5 일 이내에 조직화된 섬유성 유착이 확립됨에 따라 섬유소 기질이 성숙해진다(Buckman, RF, et al., J. Surg. Res. 21:67-76(1976); Raferty, AT, J. Anat. 129:659-664(1979)). 염증 과정에는 외상 조직에서 호중구 활성화, 인접 조직의 섬유소 침착 및 결합, 대식세포 침습, 해당 부위로의 섬유 아세포 증식, 콜라겐 침착, 혈관신생 및 영구 섬유성 유착 조직의 형성이 포함된다.

외과적 유착을 방지하기 위한 다양한 시도가 있었다. 여기에는 외과적 외상을 수반하는 생화학적 및 세포적 이벤트에 영향을주는 것을 목표로하는 약리학적 접근법과 영향을 받은 조직의 분리를 위한 장벽 방법이 포함된다. 예를 들어, 복막 세척, 헤파린 용액, 응고촉진제 사용, 현미경이나 복강경 수술법 사용과 같은 수술법 수정, 수술 장갑에서 활석 제거, 장막 표면의 부착을 최소화하기위한 더 작은 봉합사 사용과 물리적 장벽(필름, 겔 또는 용액) 시도가 모두 시도되었다. 현재 예방 요법에는 섬유소침착 예방, 염증 감소(스테로이드 및 비스테로이드 항염증제) 및 섬유소 침착 제거가 포함된다.

수술 후 유착의 형성을 방지하기위한 중재적 시도에는 하이드로플로테이션 기술 또는 장벽 장치의 사용이 포함되었다. 하이드로플로테이션은 덱스트란(Adhesion Study Group, Fertil. Steril. 40:612-619(1983)) 또는 카르복시메틸셀룰로오스(Elkins, TE, et al., Fertil. Steril. 41: 926-928(1984))와 같은 다량의 폴리머 용액을 장기를 분리하기위한 시도로 수술 공간으로 주입하는 것을 포함한다. 산화된 재생 셀룰로오스(예:Interceed ??), 폴리테트라플루오로에틸렌(Gore-tex 수술용 멤브레인) 및 변형된 히알루론산/카르복시메틸셀룰로오스(HA/CMC) 조합으로 된 완전 재흡수성 멤브레인(Seprafilm ??)으로 만든 합성 차단막도 동물과 인간 모두에서 수술 후 유착 형성 감소에 사용되었다(Burns, JW, et al., Eur. J. Surg. Suppl. 577:40-48(1997); Burns, JW, et al., Fertil. Steril. 66:814-821(1996); Becker, JM, et al., J. Am. Coll. Surg.183:297-306(1996)). 이런 HA/CMC 막의 성공은 섬유성 유착이 형성될 때 복막상처 복구 과정 동안 조직 분리를 제공하는 능력에서 비롯될 수 있다. 막은 적용 후 3-5일간 손상된 조직에 투명한 점성 코팅을 형성하는 것으로 관찰되었으며, 이 기간은 수술 후 유착 형성의 시간 경과와 일치한다(Ellis, H., Br. J. Surg. 50:10-16(1963)). 안타깝게도 이 방법은 제한적으로만 성공했다.

복막염은 복막의 염증을 수반한다. 복막염은 복통, 복부 압통 및 복부 보호와 같은 심각한 문제를 일으킬 수 있다. 복막염은 자발적, 해부학적 및/또는 복막 투석여과 관련 염증을 수반할 수 있다. 복막염은 감염, 예를 들어 속이 빈 점막 천공, 복막 파괴, 자연 세균성 복막염, 전신 감염으로 인한 감염 및 복막염이 발생할 수 있다. 복막염이 복막으로의 멸균체액의 누출과 같은 감염을 수반하지 않을 수도 있고, 멸균 복부 수술이 복막염을 유발할 수 있다. 복막염을 예방 및/또는 치료하기위한 다양한 시도가 있었다. 예를 들어, 정맥 재수화, 항생제 및 수술과 같은 일반적인 지원 조치. 바람직하게는 부작용이 거의없이 복막염을 억제하거나 달리 치료 및/또는 예방하기위한 화합물, 조성물, 방법 등(전달 접근법 포함)에 대한 충족되지 않은 요구가 있다.

본원에 논의된 고분자량 푸칸 의료 조성물은 환자의 섬유성 유착을 치료하는데 사용될 수 있으며, 고분자량 푸칸 의료 조성물, 의료 기기, 조합 또는 제약 제품의 구성 요소에 포함되거나 구성될 수 있고, 섬유성 유착을 치료하도록 구성될 수 있다. 예컨대 고분자량 푸칸 의료 조성물이나 의료기기가 생리학적 염용액에 용해된 고분자량 푸칸 조성물의 약 0.02 mg/mL 내지 100 mg/mL, 예를 들어 0.1 mg/mL, 0.2 mg/mL, 0.3 mg/mL, 0.5 mg/mL, 0.9 mg/mL, 1 mg/mL, 2.5 mg/mL, 5 mg/mL 7.5 mg/mL를 포함할 수 있다. 생리학적 염용액은 예를 들어 Lactated Ringer 's Injection USP(LRS), 생리 식염수 및 생리학적 덱스트란 용액일 수 있다.

본원에서 액체일 수 있는 고분자량 푸칸 의료 조성물과 의료 기기는 완충제, 안정화제, 보존제, 보조제 등과 같은 제약상 허용되는 부형제를 함유할 수 있다. 이런 고분자량 푸칸 의료 조성물과 의료 조성물 장치는 약 0.01 mL/kg(환자 또는 표적의 체중 킬로그램 당) 내지 10 mL/kg 또는 15 mL/kg의 푸칸 의료 조성물이나 장치를 투여하여 수술 전, 수술 중 또는 수술 후 섬유성 유착을 치료하는데 사용할 수 있다. 투여량과 장치 양에는 예를 들어 약 0.03 mL/kg, 0.1 mL/kg, 0.2 mL/kg, 0.4 mL/kg, 0.5 mL/kg, 0.6 mL/kg, 1 mL/kg, 1.2 mL/kg, 2 mL/kg, 3 mL/kg, 4 mL/kg, 5 mL/kg, 8 mL/kg, 10 mL/kg 및 15 mL/kg의 고분자량 푸칸 의료 조성물이나 의료 기기를 환자의 수술 부위에 사용한다. 한편, 이런 고분자량 푸칸 의료 조성물과 의료 기기는 임의의 선택된 표적 부위, 예를 들어 병변, 찰과상, 손상 부위, 수술 부위 및 수술 후 부위에 약 0.04mg/kg 또는 0.1 mg/kg 내지 25 mg/kg 또는 50 mg/kg을 투여함으로써 섬유성 유착을 치료하는데 사용될 수도 있다. 이런 용량의 예를 들면 본원의 고분자량 푸칸 조성물을 포함하는 본원의 푸칸의 약 0.04 mg/kg, 0.075 mg/kg, 0.1 mg/kg, 0.2 mg/kg, 0.5 mg/kg, 1 mg/kg, 1.3 mg/kg, 1.5 mg/kg, 2mg/kg, 3mg/kg, 4mg/kg, 5mg/kg, 7.5mg/kg, 8mg/kg, 10mg/kg, 15mg/kg, 20mg/kg, 25mg/kg 및 50 mg/kg을 환자의 수술 부위에 전달한다. 투여는 예를 들어 일반적으로 표적 영역 전체에 액체 의료 조성물이나 의료 기기를 주입하고; 액체 의료 조성물이나 의료 기기를 표적 영역내의 특정 위치(들)로 향하게하고; 액체 의료 조성물이나 의료 기기를 표적 영역내의 특정 위치(들)에 분무하며; 또는 외과의나 다른 개업의가 섬유성 유착의 발달에 특히 민감하거나 관련이 있는 것으로 확인한 특정 위치(들)에 트로카, 카테터, 내시경 또는 기타 최소 침습성 장치를 통해 스프레이 어플리케이터가 될 수 있는 어플리케이터로 액체 의료 조성물이나 의료 기기를 분무하거나 전달하여 이루어질 수 있다. 또 다른 면에서, 투여는 수술 상처를 개봉하고 수술 전에; 수술 중; 또는 수술 후 수술 상처가 닫히기 전에 할 수도 있다. 원한다면, 액체 의료 조성물이나 의료 기기가 수술이 완료된 후에도(예를 들어 주사기 및 바늘을 통해) 투여 될 수도 있고 비수술 표적 부위에도 투여 될 수 있다. 환자의 수술 부위는 예를 들어 골반강, 복강, 등강, 두개강, 척추, 복강, 흉강, 심낭강, 피부, 관절, 근육, 힘줄 또는 인대 중 적어도 하나 일 수 있다. 고분자량 푸칸 의료 조성물이나 의료 기기를 환자의 수술 부위에 투여하는 것은 약 15 분, 10 분, 8 분, 6 분, 5 분, 4 분, 3 분, 2 분, 1 분, 45 초, 30 초, 20 초, 15 초, 10 초 및 5 초 이내에 완료될 수 있다.

고분자량 푸칸 의료 조성물이나 의료 기기를 수술 부위에 투여하는 예는 고분자량 푸칸 의료 조성물이나 의료 기기를 제왕절개 수술 부위에 투여; 미세 혈관 자유 플랩 재건수술, 전체 두께 피부이식 수술, VY 전진 플랩 수술, 근막 회전 피판 수술, 관절 성형수술, 유방절제술 수술, 격리 절제술 수술, 받침 접시 수술, 절골 수술, 골성형 수술, 슬개 절제 수술, 활막 절제 수술, 캡슐 절제 수술, 힘줄이나 인대 수리 수술, 건용해 수술, 건절개 수술, 근막절개 수술, 반월판 수리 수술, 척추 절제술 수술, 사골절제술 수술, Caldwell Luc 수술, 누낭 비강 절제술 수술, 용해 코공막 수술, 흉선 절제술 수술, 공압 용해 수술, 폐렴 절제술 수술, 흉강 성형 수술, 담즙 절제술 수술, 문맥 고혈압 수술, 비장 절제술 수술, 식도 절제술 수술 , 복막염 수술, 위 절제술 수술, 공장간연결 수술, 복강경 담낭 절제 수술, 복강경 총 담관 탐사 수술, 위장관 절제 수술, 비만 수술, 장절제 및 문합 수술, 퇴적 간절제 수술, 엽절제 수술, 췌장 수술, 췌장 십이지장 절제 수술, 종양 절제 수술, 복강경 신장 절제 수술, 방광 절제 수술, 복부 또는 골반 유착 용해 수술, 자궁 경부 절개 수술, 난관 성형 수술, 자궁외 임신 복강경 수술, 관절 대체 수술, 골절 복구 수술, 자궁 적출 수술, 담낭 제거 수술, 심장 우회 수술, 혈관 성형 수술, 죽종 절제 수술, 유방 생검 수술, 경동맥 내막 절제 수술, 백내장 수술, 관상 동맥 우회 수술, 확장 및 소파술 수술, 탈장 수술, 요통 수술, 부분 대장 절제 수술, 전립선 절제 수술, 편도선 절제 수술, 수술 상처 개봉 후, 수술 중, 수술 상처 봉합 전 및/또는 폐쇄 후 외과 상처 등이 있다.

일반 암

암은 미국에서 두 번째 주요 사망 원인이며 모든 사망자의 20% 이상을 차지한다. 암은 증식성 질환이며 특정 세포의 통제되지 않은 분열로 하나 이상의 종양이 형성될 수 있다. 암을 치료하기 위해 수술, 방사선, 화학요법 및 이들의 조합을 포함해 많은 방법이 사용된다. 수술은 일부 국소 종양에 사용되는 비교적 일반적인 방법이지만 종양 절제 후 종양이 재발할 가능성이 여전히 높다.

암과 기타 증식성 질환의 치료는 비암성 건강한 조직에 대한 손상이나 독성 가능성 때문에 제한적이다. 방사선 및 외과적 치료과정은 일반적으로 종양 부위에 국한된다. 그러나 암조직을 외과적으로 제거하는 환자에게는 상당한 위험이 있을 수 있다(예:전립선이나 뇌종양 제거시, 예를 들어 절제 필요성 감소를 통해 주변 생명 조직에 수리 불가능한 손상을 입힐 위험이 있을 수 있다). 또, 전립선 암의 1차 치료로 시행되고있는 집중 방사선 치료에서도 비슷한 위험이 있다. 암의 화학 치료에서는 약물이 전신 투여되고, 이런 약물은 암세포에 독성이 있도록 설계되었지만(일반적으로) 비 암성 세포에도 독성이 있어 환자가 암에 대한 약물치료를받을 때 상당히 아플 수 있다. 경험적으로, 종양 전문의는 환자가 견딜 수 있는 약물의 용량을 투여하지만, 이런 용량도 암 치료에 성공적이지 않을 때가 많다.

암 치료법의 한 가지 문제는 질병의 국소 재발이었다. 예를 들어, 약 70 만 명의 미국인이 매년 국소암 진단을 받고(전체 암 환자의 약 64%) 거의 50 만명이 외과적 치료를 받는다. 안타깝게도 초기 치료 후 재발로 치료받은 환자의 32%(초기 수술 부위에서 약 21 % 재발, 먼 전이 부위에서 11 % 재발), 매년 약 100,000명의 환자가 국소적 암 재발로 사망한다. 이것은 유방절제술을 받은 환자의 39%가 질병의 국소 재발을 경험하는 유방암에서 특히 사실이다.

단계법은 환자의 암(고형 종양)의 진행을 판단하는 방법이다. 단순하게 암이 얼마나 진행되었는지에 따라 환자를 세 그룹 또는 단계로 분류한다:

1기: 장기의 일부를 외과적으로 제거하여 암을 치료할 수 있다. 절제 가능 단계라고도 한다.

2기: 암이 절제가능한 지점을 지나 진행되었지만 여전히 장기 자체에 국한되어 있다.

3기: 종양이 다른 기관으로 퍼졌다.

많은 암은 예를 들어 5-플루오로우라실(Efudex), 빈카 알칼로이드(예, 빈크리스틴(Oncovin)), 안트라사이클린(예, 독소루비신(Adriamycin)), 시스플라틴(Platinol-AQ), 젬시타빈 염산염(Gemzar), 메토트렉세이트 및 파클리탁셀을 포함하는 항증식제로 치료된다. 항증식제, 메토트렉세이트 및 파클리탁셀과 관련된 독성의 일부 예는 본원의 다른 곳에서 논의된다. 메토트렉세이트는 예를 들어 방광암, 유방암, 자궁경부암, 두경부암, 간암, 폐암 및 고환암을 포함한 여러 암을 치료하는데 사용된다. Paclitaxel은 예를 들어 난소암, 유방암 및 비-소세포 폐암을 포함한 여러 암을 치료하는데 사용되된다(Compendium of Pharmaceutical and Specialties Thirty-fifth Edition, 2000).

5-플루오로우라실로 인한 독성은 심근 허혈과 같은 심혈관 독성; 행복감, 급성 소뇌 증후군 및 운동 실조와 같은 중추 신경계 독성; 탈모증 및 피부염과 같은 피부 독성; 메스꺼움, 구토 및 구강 또는 위장 궤양과 같은 위장 독성; 백혈구 감소증, 혈소판 감소증 및 빈혈과 같은 혈액학적 독성; 아나필락시스 및 접촉 과민증과 같은 과민성 독성; 눈물샘 증가, 광 공포증 및 결막염과 같은 안과 독성; 그리고 열과 같은 다른 독성을 포함한다. 5-플루오로우라실은 유방암, 결장 직장암, 위암, 간암, 방광암, 두경부암, 비-소세포 폐암, 난소암, 췌장암, 전립선암 등 많은 암을 치료하는데 사용되었다(Compendium of Pharmaceutical and Specialties Thirty-fifth Edition, 2000).

빈크리스틴으로 인한 독성에는 소아 발작 및 환각과 같은 중추 신경계 독성; 탈모증과 같은 피부 독성; 베시컨트와 같은 유출 독성; 메스꺼움, 구토, 변비 및 구내염과 같은 위장 독성; 골수 억제와 같은 혈액학적 독성; 말초신경 병증 및 자율신경 병증과 같은 신경학적 독성; 이중 시력, 일시적 실명 및 시신경 위축과 같은 안과 독성; 소변 정체, 고요산혈증 및 방광 무력증과 같은 신장/대사 독성; 숨가쁨과 같은 호흡기 독성; 및 어린이의 발열과 같은 기타 독성이 있다. 이런 항증식제는 호지킨 병, 소세포 폐, 윌름 종양, 고환암 등 여러 암을 치료하는데 사용되었다(Compendium of Pharmaceutical and Specialties Thirty-fifth Edition, 2000).

독소루비신으로 인한 독성은 심전도 이상, 심근 병증과 같은 심혈관 독성; 탈모증, 손발톱 변화와 같은 피부 독성; 베시컨트와 같은 유출 위험 독성; 메스꺼움, 구토, 구내염과 같은 위장 독성; 붉은색 소변과 같은 비뇨생식기 독성; 골수 억제와 같은 혈액학적 독성; 아나필락시스, 피부 발진과 같은 과민성 독성; 결막염과 같은 안구 독성; 불임과 같은 생식 독성; 및 고요산혈증과 같은 기타 독성이 있다. 이 항증식제는 유방암, 소세포 폐암, 난소암 등 여러 암 치료에 사용되고 있다(Compendium of Pharmaceutical and Specialties Thirty-fifth Edition, 2000).

시스플라틴으로 인한 독성에는 심전도 변화와 같은 심혈관 독성; 과다색소 침착과 같은 피부 독성; 자극제와 같은 유출 위험 독성; 메스꺼움 및 구토와 같은 위장 독성; 골수억제 및 용혈성 빈혈과 같은 혈액학적 독성; 아나필락시스와 같은 과민성 독성; 말초신경 병증 및 급성 뇌병증과 같은 신경근 독성; 구후신경염과 같은 안구 독성; 청력상실 및 이명과 같은 이과 독성; 독성신병증 및 저칼륨 혈증과 같은 신장/대사 독성; 및 불임과 같은 기타 독성이 있다. 이 항증식제는 방광암, 소세포 폐암, 난소암, 고환암, 뇌암, 유방암, 자궁경부암, 두경부암, 간 모세포종 암, 갑상선암 등 여러 암을 치료하는데 사용된다(Compendium of Pharmaceutical and Specialties Thirty-fifth Edition, 2000). 젬시타빈 염산염으로 인한 독성은 예를 들어 골수억제와 같은 혈액학적 독성; 메스꺼움, 구토 및 구내염과 같은 위장 독성; 혈청트랜스 아미나 제의 일시적인 상승과 같은 간 독성; 단백뇨, 혈뇨, 용혈성 요독 증후군 및 신부전과 같은 신장 독성; 발진 및 탈모증과 같은 피부 독성; 부종 및 말초 부종과 같은 부종 독성; 및 발열과 같은 기타 독성이 있다. 이 항증식제는 췌장암 및 비소세포성 폐암 치료에 사용된다(Compendium of Pharmaceutical and Specialties Thirty-fifth Edition, 2000).

본 논의는 전립선암, 유방암, 췌장암, 간암, 신장암, 비뇨생식기계, 뇌, 위장관계, 호흡기, 두경부 등의 국소암이나 고형암의 예방이나 치료를 포함한다. 본원의 조성물 등은 확산이나 전신 수송에 의해 유효 농도의 고분자량 푸칸이 종양 및/또는 전이부에 도달하도록 하여 표적 종양으로부터 다소 떨어진 부위로의 고분자량 푸칸의 제어 방출을 함으로써 전이를 비롯한 암을 예방이나 치료할 수 있다. 이런 암 중 일부는 다음 단락에서 자세히 설명한다.

전립선암

전립선암은 전립선을 감싸는 세포에서 발생하는 악성 종양으로, 미국에서 올해 약 200,000명의 전립선암 환자가 생기고 30,000명 이상이 사망할 것으로 예상된다. 전립선암의 사망률은 약 15%이다. 암은 전립선 내에 남아있거나 주변 조직이나 먼 부위(대부분 림프절 및 뼈)로 퍼질수 있다. 일반적으로 전립선암은 조용히 퍼져 전립선을 넘어 진행된 경우에만 증상을 보인다. 일부 연구에 의하면, 전립선암이 초기 단계에서 진단 및 치료된 경우 5 년 생존율이 94 %이다.

전립선암은 종종 50세 이상 남성의 질병으로 논의되곤 한다. 실제로 전립선암 남성의 80%는 60 세 이상이다. 남성이 일생 동안 전립선암 진단을 받을 확률은 약 10분의 1로 여성이 유방암에 걸릴 확률과 거의 같다. 새로 보고된 사례의 수는 종종 증상이 나타나기 훨씬 전의 발병 초기에 질병을 발견할 수 있는 개선된 검사로 인해 최근 몇년 동안 급격히 증가했다. 특정 해에 전립선암에 걸릴 가능성은 나이가 들면서 증가하지만 50 세 이후에는 급격히 증가한다.

전립선암에 대한 현재의 치료 옵션은 질병 진행 정도, 환자의 연령 및 전반적인 건강 상태에 따라 달라진다. 초기 단계의 암만 앓고 있거나 다른 심각한 질병을 앓고있는 노인 환자는 보수적으로 치료할 수 있는 반면 암이 진행된 환자는 더 공격적인 치료를 받을 수 있다. 전립선암은 방사선 요법(외부 빔 방사선 또는 근접 요법), 호르몬 금단 또는 거세(수술 또는 화학적), 항증식제, 수술, 기대 요법(즉, "감시대기") 등 다양한 방법으로 치료되었다. 어떤 치료도 절대적인 치료를 보장하지 않으며 일부는 상당한 부작용이 있다.

초기 단계 전립선암(즉, 종양이 전립선에 국한 됨)은 "감시대기"로 치료할 수 있다. 전반적인 건강 상태가 양호하고 종양이 전립선에 국한된 환자에게는 전립선암 수술이 권장된다. 70세 미만 남성의 국소 전립선암에 대한 일반적인 치료법은 근치적 전립선 절제술(즉, 전립선의 외과적 제거)이다.

암이 전립선 부위에 국한된 환자는 일반적으로 외부 빔 방사선(EBR)으로 치료된다. 방사선은 암세포를 죽이고 종양을 축소시킨다. EBR은 국소 전립선암 치료의 20 % 미만을 차지하며 이들 환자의 약 50%가 방사선 치료 후 재발을 겪는다. 초기 단계의 전립선암 발견과 환자의 수요 증가와 함께 근접 치료(즉, 국소 방사선 요법) 사용이 증가할 것으로 예상된다. 1995년에는 새로 진단된 환자의 2.5%만이 근접 치료를 받았다. 근접 치료는 전립선 종양에 방사성 금속“씨앗"을 이식하는 것을 포함한다.

확산된 전립선암에 대한 치료는 고환제거나 호르몬요법을 포함한다. 둘다 암 성장을 주도하는 테스토스테론의 생성을 억제하거나 중지하는데 사용된다. 모든 전립선암 환자의 20% 정도는 호르몬요법을 받는다. 호르몬요법에는 고세렐린 아세테이트(Zoladex)나 류프로렐린드 아세테이트(Lupron)가 포함된다. 전립선암 치료에 사용되는 항증식제는 5-플루오로우라실을 포함한다.

유방암

미국에서 유방암은 여성에게 가장 흔한 암으로 매년 약 180,000건의 새로운 사례가 진단되고 있다(남성 유방암은 유방암의 5% 정도를 차지). 여성의 사망 원인으로 폐암을 능가했으며 연간 약 50,000명의 사망자가 발생하고 있다. 미국 여성이 일생 동안 유방암에 걸릴 확률이 8분의 1(약 13 %)이다. 지난 10년간 대부분의 보고된 유방암은 작고 원발성(독립적으로 발생하며 전이로 인한것이 아님) 종양이었다. 새로 진단받은 환자의 약 70~80 %가 초기 질환(1기나 2기)을 보였으며, 대다수는 겨드랑이 림프절이 관여하지 않았다.

대부분의 유방암은 암종(즉, 상피 조직에서 자라는 악성 종양)이다. 유방암의 1% 미만은 육종이거나 결합조직, 뼈, 근육 또는 지방에서 발생하는 종양이다. 또한 대부분의 유방암(약 75 %)은 유관을 둘러싸는 조직에서 발생하는 유관 암종이다. 훨씬 적은 수의 암(약 7 %)이 유방 소엽내에서 발견되며 소엽 암종이라 한다. 파제트 병(유륜암 및 유두암)과 염증성 암종이 거의 모든 다른 형태의 유방암을 차지한다.

유방암 치료는 복잡하고 많은 요인에 따라 달라진다. 두 가지 중요한 요소는 종양의 유형과 진행 단계이다. 특히 종양 특성은 개인을(1) 암 재발 위험이 낮은 사람과(2) 암 재발 위험이 높은 사람의 두 그룹으로 구분하는데 도움이 된다. 특정 예후 요인은 환자를 이 그룹 중 하나에 둔다. 이런 요인으로 종양 크기; 여성 호르몬 에스트로겐과 프로게스테론(ER/PR) 수용체의 존재; 세포 성장주기 단계(종양 세포가 활발하게 분열하고 있는지 또는 "S 기"인지 여부); "her-2-neu 단백질"로 알려진 단백질의 존재; 종양 등급, 종양 세포 분화 또는 변화의 지표; 및 종양 배수성, 종양 세포내의 유전 물질 세트의 수가 있다.

림프절 침범없는 원발성 질환의 치료는 종괴절제술과 방사선요법에 의한다. 더 중요한 림프절 침범은 유방절제술과 보조림프절 제거를 요할 수 있다. 이 단계에서 전이 및 국소 재발 가능성이 높다. 전이성 질환의 치료는 완화적인 방법으로, 면역억제, 세포 독성 및 백혈구 감소증인 방사선요법과 화학요법을 포함한다. 예를 들어 5-플루오로우라실, 독소루비신, 메토트렉세이트 및 파클리탁셀을 포함한 항증식제의 유방암에 대한 사용이 승인되었다.

췌장암

췌장은 위와 소장 근처에 위치한 소화기관으로, 효소와 호르몬의 생산이라는 두 가지 주요 기능을 가지고 있다. 췌장암은 외분비(즉, 효소) 췌장(예: 전형적인 췌장선암)에서 발생하거나 내분비(즉, 호르몬) 췌장에서 발생할 수 있다.

외분비 췌장의 암은 매우 심각한 건강 문제를 일으킨다. 미국에서는 매년 약 28,000명이 췌장암 진단을 받으면서 매년 거의 같은 수가 이 질병으로 사망한다. 췌장암은 남성과 여성에서 똑같이 발생한다. 진단의 어려움, 췌장암의 본질적인 공격적 특성 및 사용가능한 드문 전신치료 옵션으로 인해 췌장선암으로 진단된 환자의 약 4 %만이 진단 후 5년 동안 생존한다. 췌장암은 유방암, 폐암, 결장암 및 전립선암에 이어 암 사망의 5 번째 주요 원인이 된다.

췌장암에 대한 치료의 선택은 주로 종양의 단계에 달려 있다. 가능한 치료에는 수술, 증식방지제, 방사선 및 생물학적 요법이 포함된다. 수술은 일반적으로 암이 절제 가능한 것으로 간주되는 1기 환자를 위한 것이다. 때때로 방사선 및 수술 전후에 투여되는 항증식제와 같은 요법의 조합은 환자의 생존 가능성을 높일 수 있다. 절제 불가능한 것으로 간주되는 췌장암(일반적으로 2 기 이상)은 임상 시험에서 항증식제를 사용해 치료할 수 있다. 예를 들어, 젬시타빈이나 5-플루오로우라실과 같은 항증식제는 췌장암에 대해 어느 정도 효과가 있었고 젬시타빈은 완화제로 사용되었다. 이런 항증식제로 인한 독성은 본원의 다른 곳에서 설명한다. 방사선 요법은 화학 요법과 함께 사용하면 췌장암에 어느정도 효과가 있다. 방사선 요법만으로도 증상을 완화할 수 있다. 이 치료법은 2기 이후의 췌장암에서도 사용된다.

방광암

1998년에 미국에서 54,000건 이상의 새로운 방광암 사례가 진단되고 이 질병으로 약 15,000명이 사망한 것으로 추정되었다. 방광암은 미국 남성에서 4번째로 가장 흔한 암이며 미국 여성에서 9번째로 흔한 암이다. 여성보다 남성에서 3배 더 자주 발생한다. 주로 노인질환인 방광암은 질병과 사망의 중요한 원인이다. 방광암의 위험은 나이가 들어감에 따라 급격히 증가한다(50 세 이상에서 발생하는 경우의 80 %). 모든 방광암 사망의 절반 이상이 70세 이후에 발생한다. 65 세 이상의 백인 남성에서 방광암의 연간 질병률은 다음과 같다: 1,000 명당 약 2 건; 이는 65세 미만 1,000명당 0.1건의 비율과 대조된다. 일생 동안 방광암 발병 확률은 3% 이상이다. 그러나 방광암으로 인한 사망률은 낮다(<1 %). 방광암은 40 세 미만의 사람들에게서는 거의 발생하지 않는다.

최근 연구는 특정 유전자와 유전된 대사 능력이 방광암에서 역할을 할 수 있음을 시사한다. 과도 세포암(TCC; transitional cell carcinoma)은 방광암의 가장 흔한 형태이다. TCC는 일반적으로 줄기와 같은 기저부에서 표피(표면), 유두(사마귀 모양), 외생성(외부 성장) 덩어리로 발생한다. 그러나 어떤 경우에는 TC가 넓은 기저에 부착되거나 움푹 들어간 병변내에서 궤양으로 보일 수도 있다. 유두 TCC는 종종 나중에 개별 세포 특성을 탈분화시키거나 상실하는 과형성 영역으로 시작된다. 유두 TCC의 약 10~30 %만이 침습성 암으로 발전한다. 대조적으로, 비유두 형태의 TCC는 침습적이 될 가능성이 더 높다. 언급했듯이 이런 TCC는 궤양이 있거나 평평하게 보일 수 있다. 역형성 상피로 구성된 편평한 비유두성 TCC는 상피내 암종(CIS 또는 TIS)으로 분류된다. CIS의 조직은 크고, 눈에 띄는 핵소체(세포내 원형체, 단백질 합성에 관여함)를 가지고 있으며 정상적인 극성이없는 세포를 포함한다.

방광암의 치료는 많은 요인에 따라 달라진다. 이런 요인 중 가장 중요한 것은 현재 존재하는 종양의 유형과 그 단계이다. 일반적인 치료에는 경요도 절제술(TUR), 전기 수술, 레이저 수술, 방광내 치료, 항증식제, 수술 요법, 방광 절제술 및 방사선 치료가 포함된다. 방광암 치료에 사용되는 항증식제의 예는 5-플루오로우라실, 시스플라틴 및 메토트렉세이트를 포함한다. 항증식제, 5-플루오로우라실, 시스플라틴 및 메토트렉세이트로 인한 독성은 본원의 다른 곳에서 설명한다.

뇌암

뇌종양은 종종 수술이 불가능하며 환자의 80 % 이상이 진단 후 12 개월 이내에 사망한다. 미국에서 매년 약 18,000건의 새로운 원발성 두개내(뇌)암이 진단되며 이는 전체 성인암의 약 2%를 차지한다. 이들 중 50 % 이상이 고등급 교종(즉, 다형성아교모세포종 및 역형성 성상세포종 종양)이다. 이런 종양이 있는 환자는 종종 운동 기능 장애, 발작 및 시력이상과 같은 심각한 장애를 겪는다.

뇌조직에서 시작되는 종양은 원발성 뇌종양으로 알려져 있다. 원발성 뇌종양은 시작되는 조직의 유형에 따라 분류된다. 가장 흔한 뇌종양은 신경아교(지지) 조직에서 시작되는 신경교종이다. 다른 뇌종양으로 성상세포종, 뇌간교종, 뇌반종 및 희돌기교종이 있다.

뇌종양의 외과적 제거는 대부분의 유형 및 대부분의 위치에서 권장되었으며 신경기능 보존의 제약 내에서 가능한한 완전해야 한다. 이 규칙의 예외는 임상 증거로 진단되고 약 50%는 초기수술없이 치료되는 교두교종과 같은 심부종양이 있다. 그러나 많은 경우 생검으로 진단이 수행된다. 정위 생검은 접근과 절제가 어려운 병변에 사용할 수 있다. 드물게 치료할 수 없거나 절제할 수 없는 뇌종양이 있는 환자는 종양의 국소 조절을 개선하기 위해 외부 방사선 요법과 함께 사용되는 방사선민감제, 고열 또는 조직내근접치료를 평가하거나 새로운 약물과 생물학적 반응개질제를 평가하는 연구를 위한 임상시험 후보로 보아야 한다.

방사선 요법은 대부분의 종양 유형의 치료에 중요한 역할을 하며 치료율을 높이거나 무병생존을 연장할 수 있다. 방사선 요법은 또한 처음에 수술만으로 치료받은 환자의 재발 치료에 유용할 수 있다. 화학 요법은 수술 및 방사선 요법 전, 중, 후에 사용할 수 있다. 재발 종양도 화학 요법으로 치료한다. 뇌암 치료에 사용되는 항증식제는 시스플라틴을 포함한다. 이 항증식제와 관련된 독성의 예는 본원의 다른 곳에서 설명한다.

재발협착증

재발협착증은 혈관벽이 두꺼워지고 혈관에 의해 공급되는 조직으로의 혈류 손실을 초래하는 만성 혈관손상의 일종이다. 이 염증성 질환은 혈관폐쇄를 완화하는 모든 조작을 포함한 혈관재건 절차에 대한 반응으로 발생할 수 있다. 따라서 재발협착증은 이런 절차의 효과를 제한하는 주요 제한 요인이다.

본 논의는 예를 들어 올리고뉴클레오티드 치료제와 항염증제의 조합물의 치료적 유효량을 혈관에 투여함으로써 재발협착증의 예방이나 치료를 포함한다. 적당한 조성물은 재발협착증 부위나 잠재적 재발협착증 부위에 외과적으로 이식될 수 있거나 중합체 페이스트나 겔로서 카테터를 통해 주입될 수 있는 중합체 담체를 포함한다. 이런 조성물은 전술한 고분자량 푸칸을 포함할 수 있다.

관절염

류마티스 관절염(RA; Rheumatoid arthritis)은 통증, 부기, 활액 세포 증식(판누스 형성) 및 관절조직 파괴를 특징으로하는 쇠약성 만성 염증질환이다. 진행 단계에서 이 질환은 종종 중요한 장기를 손상시키고 치명적일 수 있다. 이 질병은 면역계의 여러 구성원(대식세포/단핵구, 호중구, B 세포 및 T 세포) 복잡한 사이토카인 상호작용과 활액 세포 기능 장애 및 증식을 포함한다. 메토트렉세이트(methotrexate)와 같은 질병 수정 항류마티스 약물(DMARD)로의 조기 공격적 치료가 권장되었으며, 이 약물은 여기서 논의된다.

결정 유도성 관절염은 관절에서 대식세포와 호중구의 결정 유도 활성화 이후 수일간 극심한 통증이 뒤따르는 특징이 있다. 질병이 진행되어 에피소드 간격이 짧아지고 환자의 사망률이 증가한다. 이 질환은 증상에 따라 일반적으로 디클로페낙나트륨(Voltaren)과 같은 비스테로이드성 항염증제(NSAID)로 치료된다. 이 항염증제는 어지러움, 두통과 같은 중추신경계 독성; 발진 및 가려움증과 같은 피부 독성; 악화 된 궤양 성 대장염 및 크론 병과 같은 위장 독성; 급성 신부전 및 신장 유두 괴사와 같은 비뇨 생식기 독성; 무과립구증, 백혈구 감소증 및 혈소판 감소증과 같은 혈액 학적 독성; 상승 된 간 트랜스 아미나 제 및 간염과 같은 간 독성; 및 천식 및 아나필락시스와 같은 기타 독성을 포함하는 독성을 갖는다.

본 논의는 예를 들어 치료 유효량의 올리고뉴클레오티드 치료제 및 선택적으로 항염증제를 환자에게 투여함으로써 류마티스 관절염의 예방하거나 치료하는 것에 관한 것이다. 적당한 조성물은 항염증제의 제어 방출 담체로서 관절에 주입될 수 있는 중합체 담체 및 올리고뉴클레오티드 치료제(이는 중합체 담체에 혼입됨)의 제어 방출 담체로서 미세 입자를 포함한다. 적당한 조성물은 본원에서 논의된 고분자량 푸칸을 포함할 수 있다. 이런 중합체 담체는 중합체 미소 구체, 페이스트 또는 겔 형태를 취할 수 있다.

염증 상태

본원의 조성물 등은 예를 들어 올리고뉴클레오티드 치료제와 항염증제를 함유하는 조성물을 환자에게 투여하는 것을 포함하는 호중구를 포함하는 염증 상태를 임의로 억제하거나 치료할 수 있다. 이런 상태의 예로는 결정성 관절염; 골관절염; 비류마티스성 염증성 관절염; 혼합 결합 조직 질환; 쇼그렌 증후군; 강직성 척추염; 베체트 증후군; 유육종증; 건선; 습진; 염증성 장질환; 만성 염증성 폐질환; 신경계 장애; 및 다발성 경화증이 있다. 이런 질병 중 일부는 뒤에 자세히 설명한다.

만성 염증성 피부질환(건선 및 습진 포함)

건선은 가려움증, 화상, 따끔거림 및 쉽게 출혈하는 융기되고 두꺼워진 비늘 모양의 병변을 특징으로하는 일반적인 만성 염증성 피부질환이다. 이런 질병은 질병의 후기 단계에서 세포증식과 혈관신생 성분을 갖지만 환자는 종종 관절염 상태를 동반한다. 이 증상은 프레드니손과 같은 스테로이드성 항염증제나 메토트렉세이트와 같은 항증식제로 치료할 수 있다. 본원의 조성물은 만성 염증성 피부질환, 예를 들어 건선 및/또는 습진을 억제하거나 달리 치료 및/또는 예방하는데에도 사용될 수 있다.

다음은 본원의 조성물로 치료될 수 있는 염증성 질환의 다른 예이다: 동정맥 기형(혈관 기형); 월경 과다; 급성 출혈; 중추신경계 장애; 비기능항진증; 건선과 같은 염증성 피부질환; 습진성 질환(아토피성 피부염, 접촉성 피부염, 습진); 면역 수포성 질환; 및 류마티스 성 관절염, 혼합 결합 조직 질환, 쇼그렌 증후군, 강직성 척추염, 베체트 증후군, 유육종증, 결정성 관절염 및 골관절염을 포함한 다양한 질환을 포함하는 염증성 관절염(모두 두드러진 증상으로 염증이 있는 관절염을 특징으로 함).

빈혈

빈혈은 혈액공급의 제한을 수반하며, 이는 적절한 조직기능에 필요한 산소, 포도당 및 기타 성분의 공급 부족을 포함해 조직의 손상 및/또는 기능장애를 초래할 수 있다. 빈혈은 심각한 문제를 일으킬 수 있다. 예를 들어, 조직이 산소결핍이나 괴사되고 혈전이 형성될 수 있다. 빈혈을 예방 및/또는 치료하기 위한 다양한 시도가 있었다. 예를 들어, 혈류복원이나 재관류가 있지만, 혈액복원에는 산소의 재도입이 수반되며, 이는 자유 라디칼 생성으로 인한 추가 손상을 유발하여 재관류 손상을 초래할 수 있다. 재관류 손상은 심각한 문제를 일으킬 수 있다. 본원의 조성물은 빈혈 및/또는 재관류 손상을 억제하거나 달리 치료 및/또는 예방하는데 사용될 수 있다.

내독소혈증

내독소혈증은 혈액에 엔도톡신(내독소)이 있는 것이다. 내독소혈증은 심각한 문제를 일으킬 수 있다. 예를 들어, 내독소혈증은 패혈성 쇼크를 유발할 수 있다. 본원의 조성물은 내독소혈증을 억제하거나 달리 치료 및/또는 예방하는데 사용될 수 있다.

켈로이드 흉터

켈로이드 형질은 상처를 솟아오른 흉터로 치유한다. 켈로이드 형질의 융기된 흉터에는 비정상적인 섬유성 흉터가 있다. 켈로이드 특성은 예를 들어 통증 및 외형과 같은 심각한 문제를 유발한다. 본 발명의 조성물은 켈로이드 형질 및 그로인해 생긴 흉터를 억제하거나, 달리 치료 및/또는 예방하는데 사용될 수 있다.

켈로이드(켈로이드 흉터)는 정상 피부에 비해 성장이 확장되는 흉터 유형이다. 켈로이드는 I 형 및 III 형 콜라주 비정상 성장을 포함하여 비정상적인 콜라겐 성장을 포함한다. 켈로이드는 통증, 가려움증과 같은 심각한 문제를 일으키며 감염되면 궤양을 일으킬 수도 있다. 수술, 드레싱, 스테로이드 주사 및 레이저요법의 사용을 포함해 켈로이드를 치료하거나 예방하려는 시도가 있었다. 본원의 조성물은 켈로이드를 억제하거나, 달리 치료 및/또는 예방하는데 사용될 수 있다.

피부염

피부염은 아토피성 피부염과 접촉성 피부염을 포함해 피부의 염증을 말한다. 예를 들어, 접촉성 피부염은 피부가 이물질과 접촉한 후 국소발진 및/또는 피부자극을 일으킨다. 아토피 피부염은 만성적으로 재발하는 소양성 피부질환으로, 때때로 prurigo Besnier, 신경 피부염, 내인성 습진, 굴곡성 습진, 유아성 습진, 아동기 습진 및 prurigo diathsique라고도 한다. 습진은 피부염의 한 형태이다. 다른 유형의 피부염에는 해면성 피부염, 지루성 피부염(비듬), 이염성 피부염(폼폴릭스), 수포성 피부염 및 두드러기가 있다. 피부염은 건성피부, 피부발진, 피부부종, 피부발적, 피부가려움, 피부딱지, 갈라짐, 물집, 분비물 및 출혈과 같은 심각한 문제를 일으킬 수 있다. 코르티코 스테로이드와 콜타르의 사용을 포함해 피부염을 치료/예방하기 위한 시도가 있었다. 본원의 조성물은 아토피성 피부염, 습진, 접촉성 피부염, 해면성 피부염, 지루성 피부염, 이염성 피부염, 수포성 피부염 및 두드러기를 포함한 피부염을 억제하거나 달리 치료 및/또는 예방하는데 사용될 수 있다.

딸기코

딸기코는 전형적으로 안면홍반을 특징으로하는 만성 질환/상태로서, 이마, 코 또는 뺨의 발적으로 시작해 목, 귀, 두피 및 가슴에도 발적을 일으키는 심각한 문제를 일으킬 수 있다. 예를 들어 딸기코는 모세혈관 확장증, 구진, 농포, 고통스러운 감각 등의 다른 증상을 일으킬 수 있으며, 진행된 경우에는 코뿔소(붉은 엽상코)가 발생할 수 있다. 딸기코 아형에는 홍반 모세혈관 확장성 주사, 구진주사, 식물성 주사 및 안구주사가 포함된다. 항염증제와 항생제의 사용을 포함해 딸기코를 치료하거나 예방하려는 시도가 있었다. 본원의 조성물은 홍반 모세혈관 확장성, 구진, 딸기코 및 안구아형을 포함한 딸기코를 억제하거나, 달리 치료 및/또는 예방하는데 사용될 수 있다.

의료 기기, 의료 재료, 조합품 및 의약품

본원은 의료 기기, 의료 재료, 조합품 또는 제약상 허용되는 용기에 본원의 조성물을 포함하는 의료 기기, 의료 재료, 조합품 및 제약 제품을 제공하기도 한다. 이런 제품은 일반적으로 의료 기기, 의료 재료, 조합품, 의약품 또는 바이오 의약품의 제조, 사용 또는 판매를 규제하는 관리 기관에서 규정한 형식으로 용기와 관련된 통지를 포함할 수 있으며, 이에 따라 이 통지는 예를 들어 증식성 질환이나 염증성 질환(염증성 관절염, 재협착, 외과적 유착, 건선 및 복막염 등)을 치료하기위한 인간이나 동물 투여용으로 고분자량 푸칸 조성물이 항증식제나 항염증제로 승인되었다는 통지와 같은 조성물의 기관에 의한 승인을 반영한다. 고분자량 푸칸 조성물의 사용에 대한 지침이 포함될 수도 있다. 이런 지침에는 환자의 투여 및 투여방식과 관련된 정보가 포함될 수 있다.

본원은 조성물 자체의 제조를 포함해, 전술한 고분자량 푸칸 조성물, 시스템 등의 다양한 요소를 제조하는 방법은 물론, 상태, 질병 등의 치료를 포함하는 이를 사용하는 방법에 관한 것이기도 하다.

본원은 전술한 고분자량 푸칸 조성물을 포함하는 섬유성 유착, 관절염, 건선 또는 기타 질병의 치료를 위한 의료 기기, 의료 재료, 의료 조합품 및 제약품을 포함하기도 한다. 재료 등은 원하는대로 외과적 유착, 관절염, 건선 또는 기타 질병과 같은 섬유성 유착을 치료하기위한 의약에 사용될 수 있다. 또, 약제학적으로 허용되는 부형제나 완충액과 함께 전술한 후코이단과 같은 약제학적 유효량의 푸칸을 조합하는 것을 포함해, 인간 환자를 포함한 환자에서 섬유성 유착, 관절염 및 건선 중 적어도 하나와 관련된 증상을 감소시킬 수 있는 약제를 제조 및 사용하는 방법이 제공된다.

다음 실시예들은 본원의 특정 실시양태의 일례일 뿐이고, 개시내용과 청구 범위를 제한하지 않는다.

실시예 1: 화학구조 변경

Laminaria hyperborea로부터 삼출-추출물을 얻었다. 삼출-추출물을 여과하고 100kDa 필터를 통해 접선유동여과(TFF)로 작은 분자들을 제거했다. 생성된 잔류물 샘플을 동결건조하여 변경되지 않은 샘플 A를 얻었다. 생성된 잔류물을 10M NaOH 용액을 첨가하여 0.25M NaOH로 만들고 실온에 16시간 두었다. 이어서 생성된 샘플을 50kDa 필터를 통해 원심분리 여과하고 생성된 잔류물을 수집해 동결건조하여 염기처리된 샘플 B를 얻었다. 변경되지 않은 샘플 A와 염기처리된 샘플 B 모두 양성자 핵자기공명 분광법(¹H-NMR)으로 분석하고, 그 결과 ¹H-NMR 스펙트럼이 도 9A에 도시되어 있다.

도 9A는 구해진 푸칸의 화학구조 변형을 입증하며, 변형되지 않은 샘플 A에 존재하는 약 2.0ppm의 화학적 이동을 갖는 넓은 피크는 염기처리된 샘플 B에는 존재하지 않는다.

변형되지 않은 샘플 A와 염기처리/변형된 샘플 B는 2D ¹H-¹³C 이종핵 다중 양자 일관성(HMQC) 방법으로 더 분석되었다. 도 9B 에 도시된 HMQC 스펙트럼은 5mm 콜드 프로브를 갖춘 600MHz 분광기에서 용매신호 억제를 통해 70℃에서 얻었다. HMQC 스펙트럼의 많은 수의 스캔은 각각 256~512 스캔의 8증분으로 탄소 차원의 10-30 ppm 범위에서 구했고; 이런 스캔들을 결합하여 도 9B의 스펙트럼을 만들었다.

변형되지 않은 샘플 A에 대한 HMQC 스펙트럼은 O-아세틸기에 해당하는 교차-피크를 가지며, 이를 도 9B에 원형 신호로 표시했다. 이런 교차-피크는 염기처리된 샘플 B의 스펙트럼에는 존재하지 않는다. 이는 푸칸에서 아세틸기가 제거되어 NaOH 처리로 염기처리된 샘플 B에서 푸칸의 화학구조 변형을 보여준다.

실시예2: 접선유동여과

접선유동여과로 고분자량 푸칸을 얻을 수 있다. 넓은 분포의 출발 푸칸은 50mg/mL의 증류수에 용해된다. 여기서는 원치 않는 저분자량 성분을 제거하기 위해 넓은 분포의 푸칸을 100kDa 분자량 컷오프(MWCO) TFF 카세트를 통해 증류수에 대해 투석여과하고, 고분자량 푸칸을 포함한 TFF 공정의 잔류물을 수집한다. 투석여과는 임의의 원하는 MWCO TFF 필터, 예를 들어 50kDa, 70kDa, 100kDa, 300kDa, 500kDa 및 1000kDa MWCO TFF 카세트로할 수 있다. 생성된 고분자량 푸칸은 넓은 분자량 분포의 출발 푸칸보다 높은 평균 분자량을 갖는다.

실시예 3: 순차적 접선유동여과 구획화

0.22 미크론 필터를 통해 예비여과된 365.6kDa의 중량 평균 분자량과 다분산 지수(PDI) = 3.58을 갖는 넓은 분자량 분포의 출발 후코이단을 제공했다. 고MWCO TFF 카세트로는 Pall of Port of Washington에서 공급한 100kDa MWCO의 TFF 필터 카세트를 사용했으며, 저MWCO TFF 카세트로는 Pall of Port of Washington에서 공급한 50kDa TFF 카세트를 사용했다. 이 과정을 다음 TFF 카세트 쌍에 대해 반복했니다: 매사추세츠 주 벌링턴의 Millipore에서 공급하는 MWCO 300kDa의 TFF 필터, Pall of Port of Washington에서 공급하는 MWCO 100kDa의 TFF 필터, Pall of Port of Washington에서 공급하는 MWCO 50kDa의 TFF 필터, Pall of Port of Washington에서 공급하는 30kDa의 필터, Pall of Port of Washington에서 30kDa의 TFF 필터, Pall of Port of Washington에서 이 공급하는 10kDa의 TFF 필터. 카세트는 모두 PES(Polyethersulfone) 유형이다.

이런 순차적 접선 저 여과 후, 출발 푸칸 분자량 분포의 고분자량 구간을 갖는 고분자량 푸칸을 포함하는 다양한 수득 푸칸들을 겔투과 크로마토그래피(GPC)를 사용해 분석했다. 결과는 아래 표 1과 같다.

	GPC PRT (Mins)	PMW(kDa)	WAMW(kDa)	NAMW (kDa)	% dist. MW> 100kDa	% dist. MW> 200kDa	% dist. MW> 500kDa	PDI
입력	25.51	299.6	365.6	102.2	76.3	57.2	23.1	3.58
MWCO의 TFF 필터쌍(kDa)
300-100	25.62	278.3	394.2	151.9	83.5	63.3	24.9	2.60
100-50	27.96	59.8	125.1	42.6	37.3	17.4	3.3	2.94
50-30	30.33	12.6	20.6	9.8	1.6	0.3	0.0	2.11
30-10	34.22	1.0	2.1	1.2	--	--	--	1.66

표 1. 후코이단의TFF 구획화

실시예 4: 양이온 증강 접선유동여과

0.22 마이크론 필터를 통해 예비여과된 다분산지수(PDI)가 3.24인 중량 평균 분자량이 436.4kDa의 출발 용액내 넓은 분자량 분포 입력 출발 후코이단 조성물이 제공되었다. 생체 적합성 수용성 4 차 암모늄염인 콜린이 화학 첨가제로 선택되었다. 콜린을 예비여과된 출발 용액에 1:2의 콜린:후코이단 질량비로 첨가하고 생성된 혼합물을 콜린이 용해될 때까지 교반했다. 콜린은 후코이단 분자의 황산염 부위에 결합하거나 않을 수 있다. 첫 번째 TFF 공정에서, 콜린 처리 후코이단 용액을 300kDa 필터 카세트를 통해 접선유동여과를 거쳐 콜린 처리된 잔류물인 콜린 결합 고분자량 후코이단을 포함하는 첫 번째 잔류물을 얻었다. 이 첫 번째 콜린 증강 TFF 공정 동안, 콜린 처리 후코이단 용액을 4 통과부피의1 %w/v 콜린 플러시 용액으로 투석여과했다. 첫 번째 TFF 공정의 콜린 처리된 잔류물을 수집하고 두 번째 TFF 공정을 거쳐 콜린 양이온을 나트륨 양이온으로 대체했다.

탈콜린 TFF 공정인 제 2 TFF 공정은 콜린 양이온을 나트륨 양이온으로 대체하기 위해 잔류물을 NaCl로 처리하는 동안 50kDa 필터 카세트에서 제 1 TFF 공정의 콜린 처리된 잔류물을 투석여과하는 것을 포함한다. 여기서, 콜린 처리된 잔류물은 4 부피의 2 M NaCl로 투석여과되어 고분자량 후코이단에서 콜린 첨가제를 제거했다. 두 번째 TFF 공정의 탈콜린 잔류물은 과잉 NaCl의 제거를 표시하도록 투과물의 전도도가 5 mS/cm 미만으로 떨어질 때까지 탈이온수로 투석여과되었다. 전술 한 바와 같이 양이온 증강 TFF 후, 고분자량 푸칸을 포함하는 공정의 다양한 잔류물의 샘플들을 겔투과 크로마토그래피(GPC)를 사용하여 분석했고, 그 결과는 아래 표 2와 같다.

	GPC PRT (Mins)	PMW(kDa)	WAMW (kDa)	NAMW (kDa)	% dist. MW> 100kDa	% dist. MW> 200kDa	% dist. MW> 500kDa	PDI
입력	24.67	436.4	490.7	151.3	82.3	66.1	34.8	3.24
TFF 필터잔류물의 MWCO(kDa)
300	24.71	423.6	525.5	206.7	88.5	72.6	37.3	2.54
100	24.10	639.8	740.7	411.0	97.9	90.6	59.1	1.80

Table 2. 후코이단의 양이온 증강 TFF 구획화

실시예5: 원심분리 침전

0.22㎛ 예비필터로 예비여과된 0.5 %w/v 출발 후코이단 조성물을 함유하는 출발 용액이 제공되었다. 물의 20 %, 10 % 및 5 %w/v 수크로스의 단계 구배가 원심분리 튜브에 생겼는데, 5% 층이 최상층이고 20% 층이 바닥층이다. 그 후 출발 후코이단 조성물을 함유하는 0.5 % 출발 용액을 5 %w/v 수크로스 층 위에 층을 이루었다. 최종 층 구조는 도 10과 같다. 4개의 층이 있는 튜브를 190,000중력(g)으로 6 시간 원심분리했다. 상청액을 따라내고 원하는 고분자량 푸칸을 포함해 원심분리 튜브에 남아있는 침전물을 물에 재용해시켰다. 재용해된 고분자량 푸칸을 겔투과 크로마토그래피(GPC)로 분석한 결과는 아래 표 3과 같다.

	GPC PRT (Mins)	PMW(kDa)	WAMW(kDa)	NAMW (kDa)	% dist. MW> 100kDa	% dist. MW> 200kDa	% dist. MW> 500kDa	PDI
입력	24.57	471.7	590.1	200.6	87.4	72.3	40.3	2.94
재용해된 후코이단 침전	22.95	1472.9	1113.0	492.3	98.2	91.0	69.1	2.26

표 3. 5%-10%-20% 수크로스 장벽을 사용한 후코이단의 원심분리 침전

실시예 6: 겔 전기영동-추출

넓은 분자량 분포를 갖는 출발 후코이단 조성물이 제공되었다. 출발 후코이단 조성물을 50mg/mL로 용해시키고, 0.22미크론 필터로 예비여과하고, 380mL 아가로스로 주조된 0.5 % 아가로스 겔에 로딩했다. 로딩된 겔을 TAE 완충액으로도 알려진 40mM 트리스-아세테이트 1mM EDTA의 실행 완충액에 담갔다. 출발 후코이단 조성물 웰에 근접한 애노드로 50 분간 90V의 전압을 완충액에 가하여, 후코이단이 겔을 통해 질량 대 전하 비율로 분리되도록했다. 시각화를 위해, 후코이단을 염색하는 것으로 알려진 염료인 메틸렌 블루로 겔을 염색했다. 그 후 아가로스 겔을 웰에서 1cm부터 시작해 웰에 평행한 1cm 너비의 구간으로 절단했다. 겔의 구간들을 증류수에서 교반하면서 혼합물을 흔들어 겔에서 후코이단 구간들을 추출했다.

고분자량 후코이단을 잠재적으로 포함하는 전기영동 추출 후코이단 구간을 겔투과 크로마토그래피(GPC)로 분석한 결과가 아래 표 4이다.

	GPC PRT (Mins)	PMW(kDa)	WAMW(kDa)	NAMW (kDa)	% dist. MW> 100kDa	% dist. MW> 200kDa	% dist. MW> 500kDa	PDI
입력	24.67	462.6	581.3	170.9	86.7	73.0	40.8	3.40
겔 구간의 간격
1-2 cm	25.07	349.4	619.9	81.33	71.3	55.9	30.7	7.62
2-3 cm	25.16	327.8	362.0	118.2	76.2	56.7	23.9	3.06
3-4 cm	25.47	263.6	288.4	103.7	70.9	48.8	16.7	2.78
4-5 cm	25.58	242.7	279.1	66.0	62.8	42.2	14.9	4.23

표 4: TAE 완충액으로 아가로스 겔을 통해 예비여과된 출발 후코이단의 전기영동-기반 분리의 GPC 결과.

실시예7: 막투석여과

0.22 미크론 필터로 예비여과된 출발 후코이단 조성물을 함유하는 5 %w/v 출발 용액이 제공되었다. 출발 용액을 공칭 분자량 컷오프 300kDa의 셀룰로오스 아세테이트 투석여과튜브에 넣었다. 투석여과튜브를 밀봉하고 탈이온수 20리터가 담긴 용기에 넣었다. 탈이온수를 12 시간마다 새로운 탈이온수로 교체하여 막 기공을 통한 지속적인 확산을 유지했다. 투석여과 과정은 약 5 일간 계속되었다.

예비여과된 출발 후코이단 조성물과 투석여과튜브내의 투석여과후 고분자량 후코이단 모두 겔투과 크로마토그래피(GPC)로 분석한 결과가 아래 표 5와 같다.

	GPC PRT (Mins)	PMW(kDa)	WAMW (kDa)	NAMW (kDa)	% dist. MW> 100kDa	% dist. MW> 200kDa	% dist. MW> 500kDa	PDI
입력	24.57	471.7	590.1	200.6	87.4	72.4	40.3	2.94
투석여과된 후코이단	24.29	599.1	777.0	374.5	96.8	88.6	57.0	2.07

표 5: 막을 통한 탈이온수에 대한 후코이단의 투석여과의 GPC 결과membrane.

실시예 8: 선택적 침전

침전 과정을 방해할 수 있는 원치 않는 저분자량 염을 제거하기 위해 0.22㎛ 예비필터로 예비여과되고 100kDa TFF 카세트에서 탈이온수로 투석여과를 통해 탈염된 출발 후코이단 조성물이 제공되었다. 증류수에서 예비여과되고 탈염된 출발 후코이단의 일련의 동일한 출발 용액을 제조했다. 용매 조성물은 소정의 상이한 농도의 에탄올로 만들어졌다. 이렇게 아래 표 6에서 확인된 용액 조성으로부터 후코이단의 침전을 위한 다른 용매 환경들을 준비했다. NaCl 형태의 최소량의 이온 제제를 각 용액 조성물에 첨가하여 후코이단의 침전을 개시했다. 침전물과 용액 조성물의 혼합물을 2300중력으로 10 분간 원심분리했다. 액체 상청액을 따라내고 고체 후코이단을 수집했다.

고체 후코이단을 증류수에 재용해하고 겔투과 크로마토그래피로 분석한 결과가 아래 표 6이다.

후코이단 용액내 에탄올%	GPC PRT (Mins)	PMW(kDa)	WAMW(kDa)	NAMW (kDa)	% dist. MW> 100kDa	% dist. MW> 200kDa	% dist. MW> 500kDa	PDI
40	24.85	394.1	447.0	133.5	76.6	62.5	31.3	3.35
50	25.96	182.1	347.9	149.2	80.8	53.9	20.3	2.33
60	25.43	263.1	335.5	119.1	73.9	51.9	20.0	2.82
70	24.91	376.1	382.6	117.2	75.7	56.8	25.4	3.26

표 6. 침전제로 에탄올을 사용한 후코이단의 선택적 침전

실시예 9: 음이온흡착

약 500mg의 넓은 분자량 분포의 탈염된 출발 후코이단을 함유하는 출발 용액을 약 14mL의 DEAE-Sepharose® 수지에서 약 16 시간 재순환시켜 저분자량 후코이단을 수지상의 활성 부위에 결합했다. 약 16 시간 후 재순환 용액이 수집하여, 수지에 결합된 저분자량 후코이단으로부터 고분자량 후코이단을 분리했다. 10 %w/v NaCl을 수지에서 4 시간 재순환시켜 수지로부터 저분자량 후코이단을 변위시켰다. 그후 후코이단 풍부 염용액을 수집하고 5kDa 원심분리 필터로 탈염하여 수집된 저분자량 후코이단을 원치않는 염에서 분리했다. 탈염된 출발 후코이단, 이온교환 과정에서 흡착되지 않은 고분자량 후코이단, 수지에서 추출한 저분자량 후코이단에 대해 GPC를 한 결과가 아래 표 7과 같다.

	GPC PRT (Mins)	PMW(kDa)	WAMW (kDa)	NAMW (kDa)	% dist. MW> 100kDa	% dist. MW> 200kDa	% dist. MW> 500kDa	PDI
입력	24.57	462.4	576.6	198.0	87.1	71.9	39.6	2.91
후코이단 미흡착	24.20	601.3	844.5	391.4	96.8	90.9	60.5	2.16
후코이단 흡착	25.82	193.6	245.8	119.2	73.0	43.8	10.7	2.06

표 7: 후코이단: DEAE-Sepharose 수지의 음이온교환 구획화

실시예 10: 음이온흡착

약 1g의 넓은 분자량 분포의 탈염 후코이단을 함유하는 출발 용액을 약 10g Amberlyst® A26 수지와 약 16 시간 혼합하여 저분자량 후코이단을 수지의 활성 부위에 결합했다. 이어서, 고분자량 후코이단을 포함한 용액을 따라내어 수지에서 분리했다. 20 %w/v NaCl을 수지와 약 4 시간 혼합하여 저분자량 후코이단을 수지에서 제거했다. 다음 후코이단 풍부 염용액을 수지에서 분리하고 5kDa 원심분리 필터로 탈염하여 수집된 저분자량 후코이단을 원치않는 염에서 분리했다. 탈염된 출발 후코이단, 이온교환 과정에서 흡착되지 않은 고분자량 후코이단, 수지에서 추출한 저분자량 후코이단에 대해 GPC를 한 결과가 아래 표 8이다.

	GPC PRT (Mins)	PMW(kDa)	WAMW (kDa)	NAMW (kDa)	% dist. MW> 100kDa	% dist. MW> 200kDa	% dist. MW> 500kDa	PDI
Input	25.02	517.7	536.9	148.2	82.7	67.7	38.1	3.62
Fucoidan not adsorbed	24.73	625.8	867.4	463.1	98.7	93.0	62.6	1.87
Fucoidan adsorbed	27.30	112.4	172.3	86.4	58.0	25.4	4.7	2.00

표 8: 후코이단: Amberlyst ?? A26 OH의 음이온교환 분리

실시예 11: 음이온흡착

약 1g의 넓은 분자량 분포의 탈염된 후코이단을 함유하는 출발 용액을 3개의 별개의 용기에서 약 10g의 3 가지 수지(Amberlyst® A26 OH-, Ambersep® 900 OH- 및 Lewatit® VPOC 1065)와 혼합했다. 용액-수지 혼합물을 약 16 시간 배양하여 저분자량 후코이단을 수지상의 활성 부위에 결합했다. 다음, 고분자량 후코이단을 포함한 용액을 따라내어 수지에서 분리했다. Amberlyst® 및 Ambersep® 제품의 기공에는 4차 아민기가 있는 반면 Lewatit 제품의 기공에는 1차 벤질아민기가 있었다. 처음 두 제품은 강염기성 음이온교환 수지이고 세 번째 제품은 약염기성 음이온교환 수지였다. 이온교환 과정에서 흡착되지 않은 후코이단을 GPC로 분석한 결과가 아래 표 9에 있다.

	GPC PRT (Mins)	PMW(kDa)	WAMW (kDa)	NAMW (kDa)	% dist. MW> 100kDa	% dist. MW> 200kDa	% dist. MW> 500kDa	PDI
입력	24.66	461.9	521.5	151.8	83.0	67.3	36.5	3.44
사용 수지
Ambersep ^® 900 OH ^-	24.51	513.0	609.1	323.6	96.1	85.5	47.3	1.88
Amberlyst ^® A26 OH ^-	24.58	489.8	591.0	309.5	95.6	83.5	45.1	1.91
Lewatit ^® VPOC 1065	24.54	501.2	585.6	219.6	89.5	75.3	42.4	2.67

표 9: 후코이단의 음이온교환 분리: 3개 수지에서 재순환시켜 제조된 후코이단의 비교

실시예 12: 음이온흡착

약 1g의 넓은 분자량 분포의 탈염 후코이단을 함유하는 출발 용액을 최대 53 시간 약 10g Ambersep® 900 OH-와 혼합했다. 이온교환 과정에서 흡착되지 않은 혼합물의 후코이단을 음이온흡착 과정에서 다양한 시점에서 GPC로 분석한 결과가 아래 표 10에 있다.

	GPC PRT (Mins)	PMW(kDa)	WAMW (kDa)	NAMW (kDa)	% dist. MW> 100kDa	% dist. MW> 200kDa	% dist. MW> 500kDa	PDI
입력	26.71	624.2	955.9	339.9	95.2	84.6	56.3	2.81
이온교환시간
1	26.66	642.4	1049.2	386.0	96.6	87.3	59.5	2.72
4	26.42	756.4	1151.7	470.9	98.2	91.7	65.5	2.45
24	26.33	801.9	1205.2	589.9	99.5	95.9	72.1	2.04
53	26.25	843.6	1257.9	656.9	99.8	97.5	75.6	1.91

표 10. 후코이단의 음이온교환 분리: 음이온교환 시간의 비교

실시예 13: 음이온흡착

약 1g의 넓은 분자량 분포의 탈염 후코이단을 함유하는 출발 용액을 다양한 양의 Ambersep® 900 OH-와 약 16 시간 혼합하여 저분자량 후코이단을 수지상의 활성 부위에 결합했다. 이어서, 고분자량 후코이단을 포함한 용액을 따라내 수지에서 분리했다. 이온교환 과정에서 흡착되지 않은 후코이단을 GPC로 분석한 결과가 아래 표 11이다.

	GPC PRT (Mins)	PMW(kDa)	WAMW (kDa)	NAMW (kDa)	% dist. MW> 100kDa	% dist. MW> 200kDa	% dist. MW> 500kDa	PDI
입력	24.66	442.4	498.5	146.3	82.4	66.1	34.8	3.41
후코이단:수지의 질량비
1:1	24.51	491.1	548.1	203.2	87.6	72.0	39.0	2.70
1:5	24.48	500.9	633.9	306.6	95.3	82.9	46.6	2.07
1:10	24.41	523.8	688.1	376.4	98.0	88.8	51.9	1.83

표 11. 후코이단의 음이온교환 분리: 후코이단 대 수지의 비교

실시예 14: 분취용 겔투과 크로마토그래피

넓은 분자량 분포를 갖는 출발 후코이단 조성물이 제공된다. 출발 후코이단 조성물은 60mL 0.1M 질산나트륨에 10mg/mL로 용해된다. 출발 후코이단 조성물을 포함하는 출발 용액 20mL를 Sepax® SRT-10/ 10C SEC-1000, Agilent® PL Aquagel®-OH MIXED-H 및 TSKGel® G4000SW를 각각 포함하는 50mm 내경, 250mm 길이 컬럼 각각을 통해 40mL/min으로 펌핑하고, 컬럼 모두에는 개질된 실리카-친수성 결합상 겔 매질이 들어있다. 용출은 0.1 M 질산나트륨을 사용하여 동일한 유속으로 수행된다. 용출 5 분 후, 총 1000mL나 25개의 부분표본들이 수집될 때까지 40mL 부분표본들을 수집한다. 각 부분표본 샘플의 분자량 분포는 분석 GPC로 측정한다. 200kDa에서 600kDa, 600kDa에서 1000kDa, 1000kDa에서 1400kDa, 1400kDa에서 1800kDa 사이의 중량 평균 분자량을 갖는 부분표본들을 모으고, 나머지는 폐기한다. 각각 모인 분취용 GPC 부분표본 조성물은 원하는 고분자량 푸칸을 포함한다.

실시예 15; 분취용 겔투과 크로마토그래피

넓은 분자량 분포를 갖는 출발 후코이단 조성물이 제공된다. 출발 후코이단 조성물은 0.1M 질산나트륨 60mL에 10mg/mL로 용해된다. 출발 후코이단 조성물을 포함하는 시작 용액 20mL를 Waters® HSPgel AQ MB-H, PSS® Suprema® Combination Ultrahigh 및 TSKGel® GMPWXL을 포함하는 내경 50mm, 길이 250mm 컬럼 각각을 통해 40mL/min으로 펌핑하고, 모든 컬럼에 하이드록실화 폴리메타크릴레이트 기반 겔 매질이 들어있다. 0.1M 질산나트륨을 사용하여 동일한 유속으로 용출을 수행한다. 용출 5 분 후, 총 1000mL나 25 개의 부분표본들이 수집 될 때까지 40mL 부분표본들을 수집한다. 각 부분표본 샘플의 분자량 분포를 분석 GPC로 측정한다. 100kDa 이상의 분자량 분포의 90 % 이상, 200kDa 이상의 분자량 분포의 80 % 이상 및/ 또는 500kDa 이상의 분자량 분포의 50 % 이상을 갖는 부분표본들을 모으고, 나머지는 폐기한다. 각각 모인 분취용 GPC 부분표본 조성물은 원하는 고분자량 푸칸을 포함한다.

실시예16: 저-고 분자량 푸칸의 제조

본원의 방법은 고분자량 푸칸을 얻기 위해 임의의 방식으로 사용, 조합, 변형 및 치환 될 수 있다.

(일부는 고분자량을 갖고 일부는 저분자량을 갖는) 20개 푸칸들이 의료 및 외과적 적용시 고분자량과 저분자량 푸칸의 효능을 평가하기 위해 넓은 분자량 분포를 갖는 공급원료/출발 푸칸 조성물로부터 제조되었다. 20 개의 푸칸을 이하 푸칸 1 내지 20이라 한다. 푸칸 1 내지 5는 밝은 갈색 고체, 푸칸 6, 8 내지 15 및 17은 백색 고체였다. 푸칸 1 내지 6의 저분자량 푸칸의 제조는 여러가지 방법들에 관련된다. 푸칸 3은 갈조류에서 추출되고 저분자량 푸칸인 것으로 밝혀졌다. 푸칸 2는 FMC BioPolymer®에서 구했고 저분자량 푸칸인 것으로 밝혀졌다. 푸칸 1과 5는 100kDa 미만의 MWCO TFF 필터를 사용하여 실시예 3의 방법으로 구했다. 푸칸 4는 실시예 10의 방법으로 구했다. 푸칸 6은 과산화수소로 화학적 분해하여 구했다.

푸칸 7 내지 20의 고분자량 푸칸의 제조에는 수산화나트륨 및 일부 경우에 다른 염기로 처리하는 것을 포함해 여러 방법들에 관련된다. 푸칸 7, 8, 11, 12 내지 17 및 20의 제조는 실시예 12의 방법과 저이온 강도 용액에 대한 접선유동여과의 조합을 포함한다. 푸칸 10의 제조는 전술한 양이온 증강 접선유동여과와 순차적 접선유동여과 방법의 조합을 포함한다. 푸칸 9, 18 및 19는 갈조류에서 추출되었으며, 저이온 강도 용액에 대한 접선유동여과로 더 처리되었고 고분자량 푸칸인 것으로 밝혀졌다.

실시예17: 푸칸 7 내지 14를 만드는데 사용된 미정제 푸칸의 분자량 결정

겔투과 크로마토그래피를 사용하여 푸칸 7 내지 14를 만드는데 사용된 미정제 푸칸의 분자량 분포를 평가했다. 미정제 푸칸 1은 푸칸 7 및 푸칸 8을 만드는데 사용된 미정제 푸칸을 나타낸다. 푸칸 2는 미정제 푸칸이고 푸칸 9, 10, 11 및 13을 만드는데 사용된다. 푸칸 3은 푸칸 12를 만드는데 사용되는 미정제 푸칸을 말한다. 푸칸 4는 푸칸 14를 만드는데 사용되는 미정제 푸칸을 나타낸다. 이런 분석 결과가 표 12이다.

아래 표의 결과는 분자량 분포의 특정 특성에 사용되는 약어를 포함한다. 겔투과 크로마토그래피는 GPC, 피크 분자량은 PMW, 중량 평균 분자량은 WAMW, 수평균 분자량은 NAMW, 백분율 분포는 % dist., 분자량은 MW, 다분산지수는 PDI로 표시된다.

	PMW(kDa)	WAMW (kDa)	NAMW (kDa)	% dist. <10kDa	% dist. <20kDa	% dist. <50kDa	% dist. >100kDa	% dist. >200kDa	% dist. >500 kDa	PDI
미정제 푸칸 1	92.0	259.3	22.1	8.3	14.7	30.4	52.3	34.7	14.5	11.7
미정제 푸칸 2	512.3	535.3	128.5	0.5	2.1	8.9	80.4	65.1	36.6	4.2
미정제 푸칸 3	594.6	493.4	4.4	22.0	27.3	35.7	57.4	49.3	31.3	113.3
미정제 푸칸 4	662.5	790.6	245.4	0.1	0.5	3.4	90.9	80.2	52.0	3.2

실시예 18: 저-고 분자량 푸칸의 분자량 결정

겔투과 크로마토그래피를 사용하여 푸칸 1 내지 20에 대해 얻은 분자량 분포를 평가했다.

표 13과 14는 20 개의 푸칸에 대해 얻은 분자량 분포 프로파일을 나열한다. 표 14는 표 13에 나타낸 동일한 20 개의 푸칸에 대한 분자량 분포 프로파일을 제공하며, 표 13에 나타낸 것과 다른 방식으로 분자량 분포 프로파일을 제공함으로써 다양한 푸칸의 분자량 분포에 대한 두 가지 다른 관점을 제공한다. 결과에서 알 수 있듯이 푸칸의 넓은 분자량 분포가 달성되었다. 28kDa에서 8250kDa 사이의 중량 평균 분자량을 가진 푸칸은 복수의 분포 프로파일로 얻었다.

아래 표의 결과는 분자량 분포의 특정 특성에 사용되는 약어를 포함한다. 겔투과 크로마토그래피는 GPC, 피크 분자량은 PMW, 중량 평균 분자량은 WAMW, 수 평균 분자량은 NAMW, 백분율 분포는 % dist., 분자량은 MW, 다분산지수는 PDI로 표시된다.

	PMW(kDa)	WAMW (kDa)	NAMW (kDa)	% dist. <10kDa	% dist. <20kDa	% dist. <50kDa	% dist. >100kDa	% dist. >200kDa	% dist. >500 kDa	PDI
푸칸 1	17.5	28.3	14.2	16.6	51.7	87.9	3.0	0.6	0.0	1.99
푸칸 2	21.0	72.4	9.9	26.5	44.0	67.3	18.4	9.1	2.3	7.29
푸칸 3	70.4	105.9	52.4	0.6	5.8	33.1	35.3	12.1	1.3	2.02
푸칸 4	107.1	136.1	79.9	0.1	1.5	15.4	53.4	19.8	1.1	1.70
푸칸 5	80.2	171.9	60.4	0.8	5.3	26.5	47.9	25.4	6.6	2.84
푸칸 6	195.1	192.1	87.4	0.4	2.3	14.0	64.4	35.8	5.5	2.20
푸칸 7	242.5	366.5	137.2	0.0	0.5	7.0	77.7	54.6	21.9	2.67
푸칸 8	307.1	395.8	170.2	0.0	0.2	4.0	83.8	62.2	25.4	2.33
푸칸 9	459.3	514.0	198.5	0.1	0.4	3.4	87.8	71.4	37.2	2.62
푸칸 10	390.2	497.9	228.9	0.0	0.0	1.7	90.4	73.3	35.1	2.17
푸칸 11	457.3	592.8	300.9	0.0	0.0	0.7	95.4	82.9	43.8	1.97
푸칸 12	535.8	760.1	350.6	0.0	0.1	0.9	96.5	88.3	54.3	2.17
푸칸 13	612.3	857.0	448.7	0.0	0.0	0.2	98.6	92.4	61.4	1.91
푸칸 14	393.1	930.1	296.6	0.0	0.0	1.1	93.6	81.1	43.6	3.14
푸칸 15	409.4	772.0	291.8	0.0	0.0	1.1	94.0	81.5	43.6	2.65
푸칸 16	743.0	1618.0	387.5	0.0	0.1	1.4	92.9	86.6	68.2	4.18
푸칸 17	686.2	1876.7	524.9	0.0	0.0	0.3	98.4	93.0	69.9	3.58
푸칸 18	6238.6	3957.4	519.7	0.0	0.1	1.7	82.3	78.8	71.4	7.61
푸칸 19	4315.2	5336.8	2009.5	0.0	0.0	0.0	93.7	93.3	90.1	2.66
푸칸 20	6170.2	8101.9	846.3	0.0	0.0	0.3	94.7	91.1	83.6	9.57

표 13: 20개 푸칸의 분자량 분포에 대한 첫번째 관점

	% dist. <5kDa	% dist. between 5-60kDa	% dist. between 60-200kDa	% dist. between 200-1600kDa	% dist. >1600kDa
푸칸 1	3.5	87.9	8.1	0.6	0.0
푸칸 2	13.0	58.6	19.4	9.0	0.0
푸칸 3	0.0	41.3	46.6	12.1	0.0
푸칸 4	0.0	20.9	59.1	20.1	0.0
푸칸 5	0.1	32.8	41.7	25.0	0.4
푸칸 6	0.0	18.5	45.6	35.8	0.0
푸칸 7	0.0	10.0	35.4	52.3	2.4
푸칸 8	0.0	6.2	31.5	60.0	2.3
푸칸 9	0.0	5.0	23.6	67.4	4.0
푸칸 10	0.0	3.0	23.7	69.8	3.5
푸칸 11	0.0	1.3	15.8	78.0	4.9
푸칸 12	0.0	1.3	10.5	78.9	9.4
푸칸 13	0.0	0.3	7.2	80.4	12.0
푸칸 14	0.0	1.8	16.3	68.7	13.1
푸칸 15	0.0	1.7	16.1	72.4	9.8
푸칸 16	0.0	2.1	9.4	60.9	37.6
푸칸 17	0.0	0.5	6.5	62.4	30.6
푸칸 18	0.0	2.3	5.7	35.2	56.8
푸칸 19	0.0	0.0	0.3	24.9	74.8
푸칸 20	0.0	0.6	5.2	28.7	65.5

표 14: 20개 푸칸의 분자량 분포에 대한 두번째 관점

실시예 19: 고분자량 푸칸의 황산염, 총탄수화물 및 단당류 함량

고분자량 푸칸 7 내지 18 및 20을 탈이온수에 용해시키고, 산성 조건에서 가수분해하고, 유도결합 플라즈마 질량분석법(ICP-MS)으로 총 황 함량 % w/ w에 대해 분석하고, 브리티시 컬럼비아주 버나비의 ALS 환경 연구소에서 수행했다. 푸칸의 % w/ w 황산염 함량을 얻기 위해 황 함량에 황산염 대 황의 몰비를 곱하여 황 함량을 황산염 함량으로 변환했다. 푸칸 7 내지 18 및 푸칸 20의 황산염 함량은 아래 표 15와 같다.

	황산염 함량(% w/w)
푸칸 7	23.93
푸칸 8	40.95
푸칸 9	40.32
푸칸 10	33.15
푸칸 11	44.87
푸칸 12	41.02
푸칸 13	36.18
푸칸 14	40.45
푸칸 15	39.79
푸칸 16	14.39
푸칸 17	51.30
푸칸 18	21.11
푸칸 20	25.60

표 15. 푸칸 7 내지 18과 20의 황산염 함량

고분자량 푸칸 7, 11, 16, 18 및 20을 조지아 대학교의 복합 탄수화물 연구 센터에서 수행한 가스 분광법-질량 분광법(GC-MS)으로 총 탄수화물과 단당류 조성에 대해 분석했다. 고분자량 푸칸은 산성 메탄올 분해로 유도되어 O-trimethylsilyl (O-TMS) 유도체를 생성했다. 유도된 후, 이 푸칸은 Supelco Equity-1 융합 실리카 모세관 컬럼 (30m, 0.25mm 내경)을 사용하여 Agilent 5975C 질량 분석 검출기에 인터페이스된 Agilent 7890A 가스 크로마토그래피 시스템에서 분석된다. 고분자량 푸칸의 총 탄수화물 함량과 단당류 조성에 대한 결과는 아래 표 16과 같고, 탄수화물은“carb”로 표시한다.

	총 carb. 함량(푸칸의 %w/w)	푸코스(총 carb 함량의 % w/w)	갈락토스 총 carb 함량의 % w/w)	크실로스 (총 carb 함량의 % w/w)	만노스(총 carb 함량의 % w/w)	람노스(총 carb 함량의 % w/w)
푸칸 7	32.7	44.4	52.9	0.5	0.4	0.3
푸칸 11	59.5	91.9	8.1	0.0	0.0	0.0
푸칸 16	25.9	48.3	9.9	15.5	5.9	0.3
푸칸 18	41.2	92.0	4.7	2.1	0.4	0.2
푸칸 20	30.1	84.7	10.6	3.3	0.9	0.0

표 15. 5개 푸칸의 총 탄수화물과 단당류 성분푸칸s

실시예 20: 쥐의 경막외 유착 치료

실시예 18에서 확인된 20 개의 푸칸을 사용한 후코이단 용액을 Lactated Ringers Injection USP (LRS)에서 준비했다. 푸칸 1내지 16, 18 및 20은 100mg/mL로, 푸칸 19는 50mg/mL로, 푸칸 17은 500mg/mL로 준비했다. Sprague Dawley 쥐, 쥐의 평균 체중 및 아래 표 17에 표시된 킬로그램 당 밀리그램의 투여량으로 Laminectomy 수술을 했다. 요추를 따라 선 블록이 부피바카인 용액으로 만들어졌다. 쥐의 등을 깨끗이 닦은 다음 멸균 커튼으로 덮었다. 요추 근막은 정중선 피부 절개를 통해 열리고, 절개되었으며, 그 밑의 척추 층을 노출시키도록 절개되었다. 척추 중앙의 뼈가 제거되었다. 시술 내내 Lactated Ringer 's Injection USP (LRS)로 관개하고 면봉으로 압력을 가하여 지혈을 유지했다. 노출된 경막은 15 마이크로 리터의 LRS (대조군)이나 후코이단 용액으로 직접 도포되었다. 근육과 피부 층을 봉합사로 봉합하고 쥐를 1주일간 회복시킨 후 유착 정량화를 위해 희생시켰다. 경막에 유착의 존재와 크기가 기록되었다. 유착 및 노출된 경막의 치수를 기록하고 전체 노출된 경막면적의 백분율로서 유착면적인 유착범위 백분율을 계산하는데 사용되었다.

식 1: 유착범위 (%) = 100 x 경막외 유착면적 ÷ 총 노출된 경막면적

LRS를 투여받은 대조군은 식 1을 사용하여 65 % 유착범위를 갖는 것으로 결정되었다. 표 13 내지 16의 20 개의 푸칸에 대한 유착범위가 아래 표 17과 같이 대조군에 비해 유착범위가 감소했다. 유착범위가 대조군에 비해 증가한 경우 음수 값을 보였다.

	평균중량 (kg)	투여량(mg)	중량당 용량(mg/kg)	채점된 쥐의 수	대조군에 대한 유착범위 감소율%
푸칸 1	0.41	1.5	3.7	4	-40%(즉, 대조군에 비해 섬유성유착 증가율 40%)
푸칸 2	0.59	1.5	2.5	3	9%
푸칸 3	0.39	1.5	3.8	4	-10%
푸칸 4	0.65	1.5	2.3	4	83%
푸칸 5	0.53	1.5	2.9	4	46%( 즉, 대조군에 비해 섬유성유착 감소율 46%)
푸칸 6	0.46	1.5	3.3	4	44%
푸칸 7	0.47	1.5	3.2	3	100%
푸칸 8	0.36	1.5	4.2	3	100%
푸칸 9	0.39	1.5	3.8	2	100%
푸칸 10	0.40	1.5	3.8	4	100%
푸칸 11	0.58	1.5	2.6	2	100%
푸칸 12	0.44	1.5	3.4	2	100%
푸칸 13	0.64	1.5	2.3	3	100%
푸칸 14	0.37	1.5	4.0	4	100%
푸칸 15	0.50	1.5	3.0	3	100%
푸칸 16	0.45	1.5	3.3	3	100%
푸칸 17	0.59	7.5	12.8	3	100%
푸칸 18	0.59	1.5	2.5	2	100%
푸칸 19	0.39	0.8	1.9	3	100%
푸칸 20	0.56	1.5	2.7	2	100%

표 17: 20 가지 푸칸을 이용한 대조군 LRS에 대한 경막외 유착의 감소표 17의 결과를 표 13 및 14에 주어진 푸칸의 분자량과 비교하여 알 수 있듯이, 중량 평균 분자량이 130kDa 이상이고 분자량 분포의 약 60 % 이상이 100kDa를 초과하는 푸칸은 동일한 용량에서 100kDa 초과의 평균분자량이100kDa를 넘는 분자량 분포의 60% 이하를 푸칸보다 쥐의 경막외 유착의 억제, 예방, 제거, 감소 또는 기타 치료에 더 큰 효능을 보인다. 또한 중량 평균 분자량이 300kDa를 초과하고 분자량 분포의 약 70 % 이상이 100kDa를 초과하는 푸칸이 같은 복용량에서 쥐 경막외 유착의 억제, 예방, 제거, 감소 또는 기타 치료에서 훨씬 더 큰 효능을 보인다는 추가 징후가 있다.

실시예 21: 푸칸 1 과 10으로 토끼 자궁뿔 유착 치료

토끼의 양쪽 자궁뿔에 대한 자궁뿔 수술을 했다. 수술 전에 토끼의 체중을 측정 한 다음 케타민과 자일라진을 사전 투약하여 수술을 준비했다.

Lactated Ringers Injection USP에서 0.07mg/mL로 후코이단 용액을 준비하고, 여과로 살균했다. 모든기구는 무균 상태였으며 수술 내내 무균 영역이 유지되었다. 복부를 세척하고 정중선 복부 절개를 통해 들어갔다. 자궁뿔을 노출하고 긁어 손상시켰고, 근처의 복벽도 긁었다. 손상된 자궁뿔과 복벽을 나란히 놓고 봉합사로 고정했다. 15mL/kg 후코이단 용액을 절개를 닫기 전에 복강에 도포했다. 수술 2주 후 유착을 평가했다. 자로 자궁뿔 유착 길이를 측정했다. 총 손상된 자궁뿔 길이의 백분율로서의 유착길이인 자궁뿔 유착범위 백분율은 다음과 같이 계산되었다.

식 2: 유착범위(%) = 100 x 자궁뿔 유착길이 ÷ 총 손상된 자궁뿔 길이

동일한 수술법을 3 마리의 뉴질랜드 흰토끼에게 하였고, 후코이단 용액 대신 15mL/kg의 대조군 Lactated Ringer 's Injection USP (LRS)를 투여했다.

LRS를 투여받은 대조군은 식 2를 사용하여 41 % 유착범위를 갖는 것으로 결정되었다. 표 18은 푸칸 1과 10에 대해 전술한 방법을 사용하여 얻은 결과를 보여 주며, 이들 푸칸은 대부분의 분자량 분포가 100kDa 이하나 심지어 50kDa 이하인 푸칸과, 대부분의 분자량 분포가 100kDa 이상이나 심지어 200kDa 이상인 푸칸이다. 아래 표의 결과는 대조군에 비해 유착범위가 감소한 것을 나타낸다.

	용량(mg/kg)	자궁뿔 수	대조군에 대한 자궁뿔 유착의 감소율%
푸칸 1 - 저분자량	1	6	21%(즉, 대조군에 비해 섬유성유착 21% 감소)
푸칸 10 - 고분자량	1	8	100%

표 18: 대조군 LRS 에 대한 2가지 푸칸을 사용한 토끼 자궁뿔 유착의 감소

표 18에서 보듯이, 분포의 대부분이 100kDa 이상, 또는 심지어 200kDa 이상인 푸칸은 같은 용량에서 100kDa 이하 또는 심지어 50kDa 이하의 분포를 갖는 푸칸과 비교했을 때 토끼 자궁뿔 유착의 억제, 예방, 제거, 감소 또는 기타 치료에 더 높은 효능을 보인다.

실시예 22: 푸칸 17로 토끼 자궁뿔 유착 치료

외과적 유착 억제에 있어서 고분자량 푸칸 17의 효능을 결정하기 위해, 총 3 마리의 뉴질랜드 흰토끼의 양쪽 뿔에 대해 다음의 이중 자궁뿔(DUH) 수술을 했다. 수술 전에 토끼의 체중을 측정한 다음 케타민과 자일라진을 사전 투약하여 수술을 준비했다.

Lactated Ringers Injection USP(LRS)에서 5mg/mL로 후코이단 용액을 준비하고, 여과로 살균했다. 모든기구는 무균 상태였으며 수술 내내 무균 영역이 유지되었다. 복부를 세척하고 정중선 복부 절개를 통해 들어갔다. 자궁뿔을 노출시키고 긁어 손상시켰고, 근처의 복벽도 긁었다. 손상된 자궁뿔과 복벽을 나란히 놓고 봉합사로 고정했다. 근육 상단 1/3과 하단 1/3을 닫고 5 mL/kg의 후코이단 용액을 복강에 도포했다. 근육 절개를 일시적으로 닫고 후코이단 용액을 복강에 30 분간 두었다. 근육 절개를 재개하고 복강을 10mL/kg LRS로 씻어내었다. 절개가 닫히기 전에 복강에 있는 대부분의 체액이 흡입되었다. 수술 2주 후 유착을 평가했다. 자로 자궁뿔 유착 길이를 측정했다. 전체 손상된 자궁뿔 길이의 백분율로서의 유착길이인 자궁뿔 유착범위 백분율은 식 2를 사용하여 계산되었다.

표 19는 고분자량 푸칸의 대표적인 예인 푸칸 17에 대해 전술한 방법으로 구한 결과를 보여준다. 아래 표의 결과는 점수가 매겨진 6 개의 자궁뿔의 평균 유착길이로 표시된다.

표 19는 푸칸 17로 6 개의 자궁뿔을 치료한 결과를 제공한다.

	용량(mg/kg)	자궁뿔 수	평균 유착길이%
푸칸 17	25	6	0%(즉, 유착이 없다)

표 19: 푸칸 17 을 이용한 유착길이

표 19에서보듯이, 고분자량 푸칸을 사용해 수술후 자궁뿔 유착을 성공적으로 억제, 방지, 제거, 감소 또는 치료할 수 있다.

실시예23: 고분자량 푸칸 조성물로 치료된 자궁뿔 섬유성 유착

외과적 유착 억제에 있어, 약 228kDa의 수평균 분자량, 약 1210kDa의 중량 평균 분자량, 약 575kDa의 피크 분자량 및 분자량 분포의 89 %가 100kDa 이상이고 약 30 %가 1000kDa 이상인 고분자량 푸칸 조성물의 효능을 결정하기 위해, 총 20 마리의 뉴질랜드 흰토끼의 양쪽 뿔에 다음의 이중 자궁뿔 (DUH) 수술을 했다. 수술 전에 토끼의 체중을 측정 한 다음 미다졸람과 덱스메디토미딘을 사전 투약하여 수술을 준비했다.

Lactated Ringers Injection USP(LRS)에서 0.02 mg/mL, 0.1 mg/mL, 0.5 mg/mL 또는 2.5 mg/mL의 각 농도로 후코이단 용액은 준비하고 여과로 살균했다. 모든기구는 무균 상태였으며 수술 내내 무균 영역이 유지되었다. 복부를 세척하고 정중선 복부 절개를 통해 들어갔다. 자궁뿔을 노출시키고 긁어 손상시켰고, 근처의 복벽도 긁었다. 손상된 자궁뿔과 복벽을 나란히 놓고 봉합사로 고정했다. 약 2mL/kg의 후코이단 용액을 절개를 닫기 전에 복강에 도포했다. 수술 2 주 후 유착을 평가했다. 5 마리의 토끼를 치료하고 준비된 각 후코이단 농도에 대해 평가했다. 자로 자궁뿔 유착길이를 측정했다. 자궁뿔 유착길이는 식 2로 계산한다.

대조를 위해 5 마리의 다른 뉴질랜드 흰토끼에 같은 수술을 했고, 각각 후코이단 용액 대신 약 2 mL/kg의 대조군 Lactated Ringer 's Injection USP (LRS)를 투여받았다. LRS를 투여한 대조군은 식 2를 사용하여 100% 유착범위를 갖는 것으로 결정되었다. 표 20은 다양한 농도와 용량에서 고분자량 푸칸 조성물에 대해 전술한 방법으로 얻은 결과를 보여주고(총 40개 자궁뿔 치료, 고분자량 푸칸 조성물의 농도당 10개씩); 그 결과는 대조군에 비해 유착범위가 감소한 것으로 나타난다.

농도(mg/mL)	투여량(mg/kg)	자궁뿔 수	대조군에 대한 자궁뿔 유착범위 감소%
0.02	0.04	10	10%(대조군에 비해 섬유성유착 10% 감소)
0.1	0.2	10	30%(대조군에 비해 섬유성유착 30% 감소)
0.5	1	10	71%(대조군에 비해 섬유성유착 71% 감소)
2.5	5	10	95%(대조군에 비해 섬유성유착 95% 감소)

표 20: 대조군 LRS에 대한 고분자량 푸칸을 사용한 토끼 자궁뿔 유착의 감소표 20에서보듯이, 고분자량 푸칸을 사용해 수술후 자궁뿔 유착을 성공적으로 억제, 방지, 제거, 감소 또는 치료할 수 있다.

본 명세서에서 사용된 모든 용어는 문맥이나 정의가 달리 명시하지 않는한 일반적인 의미로 사용된다. 또, 달리 명시적으로 표시되지 않는한, 본 명세서에서 "또는"의 사용은 "및"을 포함하고 그 반대의 경우도 마찬가지다. 비제한적인 용어는 명시 적으로 언급되지 않는한 제한적인 것으로 해석되어서는 안되며, 문맥이 달리 명시하지 않는한 명확하게 나타내지 않는다(예를 들어, "포함하는", "갖는"은 일반적으로 "제한없이 포함하는"을 나타냄). "a", "an"및 "the"와 같은 청구 범위를 포함하는 단수 형태는 명시 적으로 언급되지 않는한 복수 참조를 포함하거나 문맥이 달리 명시적으로 표시하지 않는다.

달리 표시되지 않는한, 실시예의 특징, 특징의 조건 또는 관계 특성을 수정하는 "실질적으로" 및 "약"과 같은 본원의 형용사는 이런 조건이나 특성이 의도된 적용례에 대한 실시예의 작동에 허용되는 허용한계내에서 정의됨을 나타낸다.

본 방법, 구성, 시스템 등의 범위는 수단 플러스 기능 및 단계 플러스 기능 개념을 모두 포함한다. 그러나, "수단"이란 단어가 청구범위에서 구체적으로 언급되지 않는한, 청구범위는 "수단 플러스 기능"관계를 나타내는 것으로 해석되어서는 안되며, 이 단어가 청구범위에 구체적으로 언급되었으면 "수단 플러스 기능"관계를 나타내는 것으로 해석되어야 한다. 마찬가지로, "단계"라는 단어가 청구범위에 구체적으로 언급되지 않는 한, 청구범위는 "단계 플러스 기능"관계를 나타내는 것으로 해석되어서는 안되며, 청구범위에 구체적으로 언급되어 있으면 "단계 플러스 기능"관계를 나타내는 것으로 해석되어야 한다.

전술한 바로부터, 특정 실시예가 예시의 목적으로 본 명세서에서 논의되었지만, 본 명세서에서의 논의의 정신 및 범위를 벗어나지 않고 다양한 수정이 이루어질 수 있음을 이해할 것이다. 따라서, 시스템 및 방법 등은 여기에 설명된 주제의 모든 순열 및 조합뿐만 아니라 그러한 수정을 포함하고 첨부된 청구항이나 설명이나 도면에서 적절한 지원을 갖는 다른 청구항에 의한 경우를 제외하고는 제한되지 않는다.

100 분자량 기반 구획 시스템 (고-저)
100 ′ 분자량 기반 구획 시스템 (낮은에서 높은 것)
100 ''양이온 증강 TFF 시스템 (CATS)
102 입력 공급라인
104 예비필터
106 저MWCO 서브시스템 보유 라인 밸브
106 '저MWCO 서브시스템 출력밸브
108 저MWCO 서브시스템 출력라인
110 고분자량 컷오프 TFF 필터
111 고MWCO 서브시스템 출력라인
112 고MWCO TFF 필터 공급라인
113 Higher-to-Lower MWCO inter-subsystem 밸브
114 고MWCO 서브시스템 펌프
115 고MWCO 서브시스템 용매 공급라인
116 고MWCO 서브시스템 푸칸 용기
117 고MWCO 서브시스템 용매 용기
118 고MWCO 서브시스템 복귀라인
119 고MWCO 서브시스템 출력라인
120 저분자량 컷오프 TFF 필터
121 저MWCO 서브시스템 출력라인
122 저MWCO TFF 필터 공급라인
123 저-고MWCO 서브시스템 간 밸브
124 저MWCO 서브시스템 펌프
125 저MWCO 서브시스템 용매 공급라인
126 저MWCO 서브시스템 푸칸 용기
127 저MWCO 서브시스템 용매 용기
128 저MWCO 서브시스템 복귀라인
129 저MWCO 서브시스템 투과물 출력라인
130 고MWCO TFF 서브시스템
130 '고MWCO TFF 서브시스템
135 양이온 첨가제 플러시 용액 공급라인
136 양이온 첨가제 플러시 용액 밸브
137 양이온 첨가제 플러시 용액 용기
140 저MWCO 서브시스템
140 '저MWCO TFF 서브시스템
142 나트륨 염용액 용기
143 저전도도 투석여과액 용기
144 나트륨 염용액 제어밸브
145 저전도도 투석여과 솔루션 밸브
146 나트륨 염용액 공급라인
147 저전도도 투석여과액 공급라인
150 고MWCO TFF 필터
160 낮은 MWCO TFF 필터
600출발 푸칸 조성물로부터 고분자량 푸칸을 얻기위한 원심분리 침전 시스템
600 '출발 푸칸 조성물로부터 고분자량 푸칸을 얻기위한 원심분리 침전 시스템
610 원심분리기
620 구배형 투과장벽
620 ′ 투과장벽
620a~c 장벽구간
620c ′ 단일 장벽구간
622 제 1 바닥 구배의 투과장벽 재료 단부
622 ′ 제 1 바닥 투과장벽 재료 단부
624 제 2 최상 구배형 투과장벽 재료 단부
624 ′ 제 2 최상 구배형 투과장벽 재료 단부
630 원심분리기의 제1 하단부
640 원심분리기의 제2 상단부
650 출발 푸칸 조성물
660 원심분리기의 원심력 방향을 나타내는 화살표
670 원심분리 박스
900 전기영동 추출 시스템
910 전기영동 챔버
912 웰
914 이론적 변위 거리
916 전기영동 겔
918 전기영동 완충액
920 직류 전원
922 음극
924 양극
926 이동 방향 화살표 (음이온 변위 방향 표시)
800 출발 푸칸 조성물로부터 고분자량 푸칸을 얻기위한 막투석여과 시스템
801 입력 공급라인
802 예비필터
810 푸칸 용기
812 투석여과 시스템 공급라인
814 투석여과 시스템 펌프
815 투석여과된 유체 출력밸브
816 투석여과액 복귀라인
818 투석여과된 유체 출력 라인
820 투석여과 세포
825 투석여과막
830 투석여과 용기
832 투석여과액 공급라인
834 투석여과액 펌프
835 투석여과액 배출밸브
836 투석여과액 복귀라인
838 투석여과액 배출라인
840 투석여과액 용기
842 투석여과액 공급라인
845 투석여과액 공급 밸브
170 접선유동여과 (TFF) 서브시스템
171 TFF 필터
172 TFF 서브시스템 필터 공급라인
173 TFF 서브시스템 용매 공급 밸브
174 TFF 서브시스템 펌프
175 TFF 서브시스템 용매 공급라인
176 TFF 서브시스템 푸칸 용기
177 TFF 서브시스템 용매 용기
178 TFF 서브시스템 보유 라인
179 TFF 서브시스템 투과 출력 라인
180 이온교환 서브시스템
181 이온교환 용기
182a 이온교환 서브시스템 푸칸 공급라인
182b 이온교환 서브시스템 염용액 공급라인
183a 이온교환 서브시스템 푸칸 복귀밸브
183b 이온교환 서브시스템 염용액 공급 밸브
183c 이온교환 서브시스템 염용액 복귀밸브
184a 이온교환 서브시스템 푸칸 펌프
184b 이온교환 서브시스템 염용액 펌프
186 이온교환 서브시스템 푸칸 용기
187 이온교환 서브시스템 염용액 용기
188a 이온교환 서브시스템 푸칸 복귀라인
188b 이온교환 서브시스템 염용액 복귀라인
189 거대다공성 이온교환 수지
300 이온흡착 시스템
301 입력 공급라인
302 인터-서브시스템 밸브
303 TFF 서브시스템 출력라인
304 이온교환 서브시스템 출력밸브
305 이온교환 서브시스템 출력 라인
306 예비필터

Claims

수성 겔투과 크로마토그래피 셋업을 이용해 측정했을 때 분자량 분포의 적어도 92% w/w가 100 kDa를 넘는 분자량분포로 이루어진 고분자량 푸칸에 있어서:
상기 수성 겔투과 크로마토그래피 셋업이,
유효 분자량 범위가 50~5,000kDa인 히드록실화 폴리메타크릴레이트-기반 겔로 채워진 7.8mm 내경의 300mm 분석 겔투과 크로마토그래피 컬럼 1 개, 유효 분자량 범위가 1~6,000kDa인 하이드록실화 폴리메타크릴레이트-기반 겔로 채워진 7.8m내경의 300mm 분석 겔투과 크로마토그래피 컬럼 1개, 히드록실화 폴리메타크릴레이트-기반 겔로 채워진 6mm 내경의 40mm 가드 컬럼 1개로서, 30℃의 컬럼구획에 들어있는 2개의 분석 겔투과 크로마토그래피 컬럼과 1개의 가드 컬럼;
30℃의 굴절률 검출기;
0.6mL/min으로 실행되는 0.1M 질산나트륨 이동상; 및
피크 분자량이 약 2,200kDa인 제1 덱스트란 표준, 피크분자량이 약 720~760 kDa인 제2 덱스트란 표준, 피크분자량이 약 470~ 510 kDa인 제3 덱스트란 표준, 피크분자량이 약 370~ 410 kDa인 제 4 덱스트란 표준, 피크분자량이 약 180~ 220 kDa인 제 5 덱스트란 표준, 및 피크 분자량이 약 40~55 kDa인 제6 덱스트란 표준으로 이루어지는 피크분자량 표준곡선에 대한 정량화;로 이루어지는 고분자량 푸칸.
제1항에 있어서, 분자량 분포의 적어도 93% w/w가 100 kDa를 넘는 고분자량 푸칸.
제1항에 있어서, 분자량 분포의 적어도 94% w/w가 100 kDa를 넘는 고분자량 푸칸.
제1항에 있어서, 분자량 분포의 적어도 95% w/w가 100 kDa를 넘는 고분자량 푸칸.
제1항에 있어서, 분자량 분포의 적어도 97% w/w가 100 kDa를 넘는 고분자량 푸칸.
제1항에 있어서, 분자량 분포의 적어도 98% w/w가 100 kDa를 넘는 고분자량 푸칸.
제1항에 있어서, 분자량 분포의 적어도 99% w/w가 100 kDa를 넘는 고분자량 푸칸.
제1항 내지 제7항 중의 어느 하나에 있어서, 중량평균분자량이 100 kDa 내지 10,000 kDa인 고분자량 푸칸.
제8항에 있어서, 중량평균분자량이 140 kDa 내지 8,100 kDa인 고분자량 푸칸.
제8항에 있어서, 중량평균분자량이 370 kDa 내지 8,100 kDa인 고분자량 푸칸.
제8항에 있어서, 중량평균분자량이 370 kDa 내지 5300 kDa인 고분자량 푸칸.
제8항에 있어서, 중량평균분자량이 370 kDa 내지 1900 kDa인 고분자량 푸칸.
제8항에 있어서, 중량평균분자량이 590 kDa 내지 1600 kDa인 고분자량 푸칸.
제8항에 있어서, 중량평균분자량이 860 kDa 내지 1600 kDa인 고분자량 푸칸.
제8항에 있어서, 중량평균분자량이 1100 kDa인 고분자량 푸칸.
제8항에 있어서, 중량평균분자량이 1200 kDa인 고분자량 푸칸.
제8항에 있어서, 중량평균분자량이 1300 kDa인 고분자량 푸칸.
제1항 내지 제17항 중의 어느 하나에 있어서, 수평균분자량이 50 kDa 내지 3,000 kDa인 고분자량 푸칸.
제18항에 있어서, 수평균분자량이 60 kDa 내지 2,000 kDa인 고분자량 푸칸.
제18항에 있어서, 수평균분자량이 140 kDa 내지 2,000 kDa인 고분자량 푸칸.
제18항에 있어서, 수평균분자량이 140 kDa 내지 520 kDa인 고분자량 푸칸.
제18항에 있어서, 수평균분자량이 230 kDa 내지 450 kDa인 고분자량 푸칸.
제1항 내지 제22항 중의 어느 하나에 있어서, 분자량분포의 적어도 55% w/w가 200 kDa보다 큰 고분자량 푸칸.
제23항에 있어서, 분자량분포의 적어도 71% w/w가 200 kDa보다 큰 고분자량 푸칸.
제23항에 있어서, 분자량분포의 적어도 91% w/w가 200 kDa보다 큰 고분자량 푸칸.
제1항 내지 제25항 중의 어느 하나에 있어서, 분자량분포의 적어도 22% w/w가 500 kDa보다 큰 고분자량 푸칸.
The high-molecular-weight fucan of claim 26, wherein at least 54% w/w of the distribution is greater than about 500 kDa.
제26항에 있어서, 분자량분포의 적어도 90% w/w가 500 kDa보다 큰 고분자량 푸칸.
수성 겔투과 크로마토그래피 셋업을 이용해 측정했을 때 분자량 분포의 61% w/w 내지 80% w/w가 200 kDa 내지 1600 kDa인 분자량분포로 이루어진 고분자량 푸칸에 있어서:
상기 수성 겔투과 크로마토그래피 셋업이,
유효 분자량 범위가 50~5,000kDa인 히드록실화 폴리메타크릴레이트-기반 겔로 채워진 7.8mm 내경의 300mm 분석 겔투과 크로마토그래피 컬럼 1 개, 유효 분자량 범위가 1~6,000kDa인 하이드록실화 폴리메타크릴레이트-기반 겔로 채워진 7.8m내경의 300mm 분석 겔투과 크로마토그래피 컬럼 1개, 히드록실화 폴리메타크릴레이트-기반 겔로 채워진 6mm 내경의 40mm 가드 컬럼 1개로서, 30℃의 컬럼구획에 들어있는 2개의 분석 겔투과 크로마토그래피 컬럼과 1개의 가드 컬럼;
30℃의 굴절률 검출기;
0.6mL/min으로 실행되는 0.1M 질산나트륨 이동상; 및
피크 분자량이 약 2,200kDa인 제1 덱스트란 표준, 피크분자량이 약 720~760 kDa인 제2 덱스트란 표준, 피크분자량이 약 470~ 510 kDa인 제3 덱스트란 표준, 피크분자량이 약 370~ 410 kDa인 제 4 덱스트란 표준, 피크분자량이 약 180~ 220 kDa인 제 5 덱스트란 표준, 및 피크 분자량이 약 40~55 kDa인 제6 덱스트란 표준으로 이루어지는 피크분자량 표준곡선에 대한 정량화;로 이루어지는 고분자량 푸칸.
수성 겔투과 크로마토그래피 셋업을 이용해 측정했을 때 분자량 분포의 적어도60% w/w 가 1600 kDa보다 큰 분자량분포로 이루어진 고분자량 푸칸에 있어서:
상기 수성 겔투과 크로마토그래피 셋업이,
유효 분자량 범위가 50~5,000kDa인 히드록실화 폴리메타크릴레이트-기반 겔로 채워진 7.8mm 내경의 300mm 분석 겔투과 크로마토그래피 컬럼 1 개, 유효 분자량 범위가 1~6,000kDa인 하이드록실화 폴리메타크릴레이트-기반 겔로 채워진 7.8m내경의 300mm 분석 겔투과 크로마토그래피 컬럼 1개, 히드록실화 폴리메타크릴레이트-기반 겔로 채워진 6mm 내경의 40mm 가드 컬럼 1개로서, 30℃의 컬럼구획에 들어있는 2개의 분석 겔투과 크로마토그래피 컬럼과 1개의 가드 컬럼;
30℃의 굴절률 검출기;
0.6mL/min으로 실행되는 0.1M 질산나트륨 이동상; 및
피크 분자량이 약 2,200kDa인 제1 덱스트란 표준, 피크분자량이 약 720~760 kDa인 제2 덱스트란 표준, 피크분자량이 약 470~ 510 kDa인 제3 덱스트란 표준, 피크분자량이 약 370~ 410 kDa인 제 4 덱스트란 표준, 피크분자량이 약 180~ 220 kDa인 제 5 덱스트란 표준, 및 피크 분자량이 약 40~55 kDa인 제6 덱스트란 표준으로 이루어지는 피크분자량 표준곡선에 대한 정량화;로 이루어지는 고분자량 푸칸.
제1항 내지 제30항 중의 어느 하나에 있어서, 황산염 함량이 20% w/w 내지 60% w/w인 고분자량 푸칸.
제31항에 있어서, 황산염 함량이 30% w/w 내지 55% w/w인 고분자량 푸칸.
제31항에 있어서, 황산염 함량이 32% w/w 내지 52% w/w인 고분자량 푸칸.
제1항 내지 제33항 중의 어느 하나에 있어서, 총 탄수화물 함량이 27% w/w 내지 80% w/w인 고분자량 푸칸.
제34항에 있어서, 총 탄수화물 함량의 백분율로서의 총 푸코스 함량이 적어도 30% w/w인 고분자량 푸칸.
제34항에 있어서, 총 탄수화물 함량의 백분율로서의 총 푸코스 함량이 적어도 50% w/w인 고분자량 푸칸.
제34항에 있어서, 총 탄수화물 함량의 백분율로서의 총 푸코스 함량이 적어도 70% w/w인 고분자량 푸칸.
제34항에 있어서, 총 탄수화물 함량의 백분율로서의 총 푸코스 함량이 적어도 80% w/w인 고분자량 푸칸.
제34항에 있어서, 총 탄수화물 함량의 백분율로서의 총 푸코스 함량이 적어도 90% w/w인 고분자량 푸칸.
제34항에 있어서, 총 탄수화물 함량의 백분율로서의 총 푸코스 함량이 적어도 95% w/w인 고분자량 푸칸.
제34항에 있어서, 총 탄수화물 함량의 백분율로서의 총 갈락토스 함량이 60% w/w 미만인 고분자량 푸칸.
제34항에 있어서, 총 탄수화물 함량의 백분율로서의 총 갈락토스 함량이 2% w/w 내지20% w/w인 고분자량 푸칸.
제34항에 있어서, 총 탄수화물 함량의 백분율로서의 총 갈락토스 함량이 10% w/w 미만인 고분자량 푸칸.
제34항에 있어서, 총 탄수화물 함량의 백분율로서의 글르쿠론산, 만노스, 람노스, 글루코스 및 자일로스의 총 함량이 30% w/w 미만인 고분자량 푸칸.
제1항 내지 제44항 중의 어느 하나에 있어서, 50 mg/mL의 농도로 물에 용해되었을 때의 고분자량 푸칸이 4 cP 내지 50 cP의 점도를 갖는 고분자량 푸칸.
제1항 내지 제44항 중의 어느 하나에 있어서, 50 mg/mL의 농도로 물에 용해되었을 때의 고분자량 푸칸이 10 cP 내지 40 cP의 점도를 갖는 고분자량 푸칸.
제1항 내지 제44항 중의 어느 하나에 있어서, 50 mg/mL의 농도로 물에 용해되었을 때의 고분자량 푸칸이 15 cP 내지 30 cP의 점도를 갖는 고분자량 푸칸.
제1항 내지 제47항 중의 어느 하나에 있어서, 고분자량 푸칸이 백색 고체인 고분자량 푸칸.
제1항 내지 제48항 중의 어느 하나에 있어서, 1 mg/mL 내지 100 mg/mL 농도로 물에 용해되었을 때의 고분자량 푸칸이 투명무색의 용액을 형성하는 고분자량 푸칸.
제1항 내지 제49항 중의 어느 하나에 있어서, 푸칸이 5% w/w 미만의 아세틸 함량을 포함하는 고분자량 푸칸.
제1항 내지 제49항 중의 어느 하나에 있어서, 푸칸이 2% w/w 미만의 아세틸 함량을 포함하는 고분자량 푸칸.
제1항 내지 제49항 중의 어느 하나에 있어서, 푸칸이 256-512 스캔 각각의 8증분으로 탄소차원의 10-30ppm 범위에서5mm 콜드프로브가 장착된 600MHz 분광계에서 용매 신호 억제를 사용하여 70℃에서 2D ¹H-¹³C 이종핵 다중 양자 일관성으로 측정했을 때 0 %w/w의 아세틸 함량을 포함하는 고분자량 푸칸.
제1항 내지 제52항 중의 어느 하나의 고분자량 푸칸의 제조 방법.
제1항 내지 제52항 중의 어느 하나의 고분자량 푸칸을 이용하는 것을 포함하는 방법.
제54항에 있어서, 상기 이용이 섬유성 유착의 치료를 포함하는 방법.
의학적으로 허용되는 완충제나 희석제내에 제1항 내지 제52항 중의 어느 하나의 고분자량 푸칸의 약학적 유효량을 포함하는, 의학적으로 허용되는 푸칸 조성물.
동물의 상태나 질병 치료를 위해 제56항의 의학적으로 허용되는 푸칸 조성물을 선택하는 단계와, 0.5 mg/kg 내지 50 mg/kg의 고분자량 푸칸의 약학적 유효량을 동물에 투여하는 단계를 포함하는 동물의 상태나 질병 치료방법.
동물의 상태나 질병 치료를 위해 제56항의 의학적으로 허용되는 푸칸 조성물을 선택하는 단계와, 0.04 mg/kg 내지 25 mg/kg의 고분자량 푸칸의 약학적 유효량을 동물에 투여하는 단계를 포함하는 동물의 상태나 질병 치료방법.
제57항 또는 제58항에 있어서, 약학적 유효량이 0.2 mg/kg 내지 10 mg/kg인 동물의 상태나 질병 치료방법.
제57항 또는 제58항에 있어서, 약학적 유효량이 1 mg/kg 내지 5 mg/kg인 동물의 상태나 질병 치료방법.
제57항 또는 제58항에 있어서, 약학적 유효량이 1.5 mg/kg 내지 3 mg/kg인 동물의 상태나 질병 치료방법.
제57항 또는 제58항에 있어서, 약학적 유효량이 5 mg/kg 내지 10 mg/kg인 동물의 상태나 질병 치료방법.
제57항 내지 제62항 중의 어느 하나에 있어서, 상태나 질병이 동물의 표적부의 섬유성 유착이고, 투여하는 단계에서 약학적 유효량을 표적부에 투여하는 것을 포함하는 동물의 상태나 질병 치료방법.
제1항 내지 제52항 중의 어느 하나의 고분자량 푸칸 0.02 mg/mL 내지 100 mg/mL을 포함하는 의학적 조성물에 있어서:
동물의 질병이나 상태를 치료하도록 구성된 의학적 조성물.
제64항에 있어서, 0.5 mg/mL 내지 5 mg/mL의 고분자량 푸칸을 포함하는 의학적 조성물.
제64항에 있어서, 2.5 mg/mL 의 고분자량 푸칸을 포함하는 의학적 조성물.
제64항 내지 제66항 중의 어느 하나에 있어서, 상기 의학적 조성물이 의료기기인 의학적 조성물.
제64항 내지 제66항 중의 어느 하나에 있어서, 상기 의학적 조성물이 액체 의료기기인 의학적 조성물.
제64항 내지 제66항 중의 어느 하나에 있어서, 상기 의학적 조성물이 약학적 조성물인 의학적 조성물.
제64항 내지 제66항 중의 어느 하나에 있어서, 상기 의학적 조성물이 액체 약학적 조성물인 의학적 조성물.
제64항 내지 제70항 중의 어느 하나에 있어서, 질병이나 상태가 섬유성 유착인 의학적 조성물.
동물의 질병이나 상태 치료를 위한, 제64항 내지 제71항 중의 어느 하나의 의학적 조성물 0.01 mL/kg 내지 15 mL/kg을 포함하는 투여량 범위의 용도.
동물의 질병이나 상태 치료를 위한, 제64항 내지 제71항 중의 어느 하나의 의학적 조성물 0.03 mL/kg 내지 4 mL/kg을 포함하는 투여량 범위의 용도.
동물의 질병이나 상태 치료를 위한, 제64항 내지 제71항 중의 어느 하나의 의학적 조성물 0.06 mL/kg 내지 2 mL/kg을 포함하는 투여량 범위의 용도.
동물의 질병이나 상태 치료를 위한, 제64항 내지 제71항 중의 어느 하나의 의학적 조성물 2 mL/kg 내지 4 mL/kg을 포함하는 투여량 범위의 용도.
소정의 질병이나 상태를 갖고있거나 갖고있다고 의심되는 환자의 선택된 표적부를 확인하는 단계와, 제64항 내지 제71항 중의 어느 하나의 의학적 조성물을 환자의 표적부에 투여하는 단계를 포함하는, 환자의 질병이나 상태의 치료방법.
제76항에 있어서, 질병이나 상태가 섬유성 유착인, 환자의 질병이나 상태의 치료방법.
제76항 또는 제77항에 있어서, 표적부가 수술부위이고, 상기 투여가 a) 수술부위의 수술상처를 개봉한 뒤, b) 수술중, 및 c) 수술상처를 닫은 뒤 중의 적어도 하나에서 실행되는, 환자의 질병이나 상태의 치료방법.
제76항 또는 제77항에 있어서, 상기 투여가 수술뒤 수술상처를 닫기 전에 실행되는, 환자의 질병이나 상태의 치료방법.
제76항 또는 제77항에 있어서, 상기 투여가 3분 미만 이루어지는, 환자의 질병이나 상태의 치료방법.
제76항 또는 제77항에 있어서, 상기 투여가 2분 미만 이루어지는, 환자의 질병이나 상태의 치료방법.
제76항 또는 제77항에 있어서, 상기 투여가 1분 미만 이루어지는, 환자의 질병이나 상태의 치료방법.
제76항 또는 제77항에 있어서, 표적부가 병변, 찰과상, 손상 부위 중의 적어도 하나인, 환자의 질병이나 상태의 치료방법.
제76항 또는 제77항에 있어서, 표적부가 골반강, 복강, 등강, 두개강, 척수강, 흉강, 심낭강, 피부, 관절, 근육, 힘줄 및 인대 중 적어도 하나인, 환자의 질병이나 상태의 치료방법.
고분자량 푸칸을 구하는 방법에 있어서:
원하는 고분자량 푸칸 구간을 갖는 넓은 분자량분포의 출발 푸칸 조성물을 출발 용액에 제공하는 단계;
제1 투과물 푸칸 조성물을 생성하기 위해 제1 고분자량 컷오프 접선유동여과 필터를 통해 출발 용액을 제1 접선유동여과하는 단계; 및
원하는 고분자량 푸칸으로 이루어진 제2 잔류물 푸칸 조성물을 생성하기 위해 제2 저분자량 컷오프 접선유동여과 필터를 통해 제1 투과물 푸칸 조성물을 제2 접선유동여과하는 단계;를 포함하는 방법.
제85항에 있어서, 원하는 고분자량 푸칸으로 이루어진 제2 잔류물 푸칸 조성물을 수집하는 단계를 더 포함하는 방법.
제85항에 있어서, 제1 고분자량 컷오프 접선유동여과 필터가 50 kDa 내지 1000 kDa의 고잔자량 컷오프를 갖고, 제2 저분자량 컷오프 접선유동여과 필터가 30 kDa 내지 100 kDa의 저분자량 컷오프를 갖는 방법.
제87항에 있어서, 고분자량 컷오프가 300 kDa이고 저분자량 컷오프가 100 kDa인 방법.
고분자량 푸칸을 구하는 방법에 있어서:
원하는 고분자량 푸칸 구간을 갖는 넓은 분자량분포의 출발 푸칸 조성물을 출발 용액에 제공하는 단계;
제1 잔류물 푸칸 조성물을 생성하기 위해 제1 저분자량 컷오프 접선유동여과 필터를 통해 출발 용액을 접선유동여과하는 단계; 및
원하는 고분자량 푸칸으로 이루어진 제2 투과물 푸칸 조성물을 생성하기 위해 제2 고분자량 컷오프 접선유동여과 필터를 통해 제1 잔류물 푸칸 조성물을 접선유동여과하는 단계;를 포함하는 방법.
제89항에 있어서, 원하는 고분자량 푸칸으로 이루어진 제2 투과물 푸칸 조성물을 수집하는 단계를 더 포함하는 방법.
제89항에 있어서, 제1 접선유동여과시 제1 저분자량 컷오프 접선유동여과 필터를 통해 출발 용액을 투석여과하는 방법.
제89항에 있어서, 제2 접선유동여과시 제2 고분자량 컷오프 접선유동여과 필터를 통해 제1 잔류물 푸칸 조성물을 투석여과하는 방법.
제89항에 있어서, 제1 저분자량 컷오프 접선유동여과 필터가 30 kDa 내지 100 kDa의 저분자량 컷오프를 갖고, 제2 고분자량 컷오프 접선유동여과 필터가 50 kDa 내지 1000 kDa의 고분자량 컷오프를 갖는 방법.
제92항에 있어서, 저분자량 컷오프가 100 kDa이고 고분자량 컷오프가 300 kDa인 방법.
고분자량 푸칸을 구하는 방법에 있어서:
출발 용액에 원하는 고분자량 푸칸 구간을 포함해 넓은 분자량 분포를 갖는 출발 푸칸 조성물을 제공하되, 출발 푸칸 조성물이 푸칸의 설페이트기에 이온결합된 저원자량 양이온을 포함하는 단계; 및
원하는 고분자량 푸칸으로 구성된 잔류물 푸칸 조성물을 생성하기 위해 저원자량 양이온보다 더 큰 분자량을 갖는 양이온 첨가제를 포함한 양이온 첨가제 용액에 대해 출발 용액을 접선유동여과하는 단계;를 포함하는 방법.
제95항에 있어서, 원하는 고분자량 푸칸으로 구성된 잔류물 푸칸 조성물을 수집하는 단계를 더 포함하는 방법.
제95항에 있어서, 저원자량 양이온이 알칼리 금속, 알칼리토금속, 알루미늄 및 암모늄 중의 적어도 하나를 포함하는 방법.
제95항에 있어서, 양이온 첨가제가 콜린, 폴리비닐피롤리돈, 타우린, 폴리아민, 키토산, 히스톤 및 콜라겐 중의 적어도 하나를 포함하는 방법.
제95항에 있어서, 출발 용액을 접선유동여과하기 전에 양이온 첨가제를 출발 용액에 첨가하는 단계를 더 포함하는 방법.
제95항에 있어서, 접선유동여과시 양이온 첨가제 용액에 대해 출발 용액을 투석여과하는 방법.
제95항에 있어서, 제 1 접선유동여과 필터의 분자량 컷오프보다 낮은 분자량 컷오프를 갖는 제 2 접선유동여과 필터로 염용액에 대해 잔류물 푸칸 조성물을 투석여과해 양이온 첨가제를 제거하는 단계를 더 포함하는 방법.
제101항에 있어서, 염용액이 염화물, 브롬화물, 요오드화물, 불화물, 황산염, 아황산염, 탄산염, 중탄산염, 인산염, 질산염, 아질산염, 아세테이트, 구연산염, 알칼리 금속, 알칼리토금속, 알루미늄 및/또는 암모늄의 규산염 및/또는 시안화물을 포함하는 방법.
제101항에 있어서, 저이온 강도 용액에 대해 잔류물 푸칸 조성물을 투석여과해 염을 제거하는 단계를 더 포함하는 방법.
고분자량 푸칸을 구하는 방법에 있어서:
원심분리기의 하단부와 상단부 사이에 구배재료를 갖는 투과장벽을 갖는 원심분리기를 제공하는 단계;
원하는 고분자량 푸칸 구간을 포함해 넓은 분자량 분포를 갖는 출발 푸칸 조성물을 원심분리기내 투과 장벽 위에 두는 단계; 및
원하는 고분자량 푸칸으로 구성된 침전물을 생성하기에 충분한 시간 동안 원심분리기를 원심분리하는 단계;를 포함하는 방법.
제104항에 있어서, 원심분리기로부터 원하는 고분자량 푸칸을 수집하는 단계를 더 포함하는 방법.
제104항에 있어서, 투과 장벽이 단일 구간의 구배재료를 갖는 방법.
제104항에 있어서, 투과 장벽이 복수 구간의 구배재료를 갖는 방법.
제106항 또는 제107항에 있어서, 구배재료가 수크로스, 폴리수크로스, 글리세롤, 소르비톨, CsCl, Cs₂SO₄, KBr, 디아트리조에이트, Nycodenz® 및 이오딕사놀 중의 적어도 하나를 포함하는 방법.
제104항에 있어서, 원심력이 10,000 내지 1,000,000 중력인 방법.
제104항에 있어서, 원심력이 60,000 내지 500,000 중력인 방법.
고분자량 푸칸을 구하는 방법에 있어서:
하단과 상단을 갖는 원심분리기를 제공하는 단계;
원하는 고분자량 푸칸 구간을 포함해 넓은 분자량 분포를 갖는, 출발 용액의 출발 푸칸 조성물을 원심분리기에 두는 단계; 및
원하는 고분자량 푸칸으로 구성된 침전물을 생성하기에 충분한 시간 동안 원심분리기를 원심분리하는 단계;를 포함하는 방법.
제111항에 있어서, 원심분리기로부터 원하는 고분자량 푸칸을 침전물로 수집하는 단계를 더 포함하는 방법.
제111항에 있어서, 원심력이 60,000 내지 1,000,000 중력인 방법.
제111항에 있어서, 원심력이 200,000 내지 500,000 중력인 방법.
고분자량 푸칸을 구하는 방법에 있어서:
원하는 고분자량 푸칸 구간을 포함해 넓은 분자량 분포를 갖는 출발 푸칸 조성물을 겔 전기영동에 적용하되, 출발 푸칸 조성물이 전기영동 겔에서 질량 대 전하 비율에 따라 변위되는 단계;
원하는 고분자량 푸칸으로 구성된 전기영동 겔 부분을 선택하는 단계; 및
선택된 전기영동 겔 부분에서 원하는 고분자량 푸칸을 추출하는 단계;를 포함하는 방법.
제115항에 있어서, 출발 푸칸 조성물을 겔 전기영동할 때 전기영동 겔에 10 Volt/cm 내지 200 Volt/cm 전위차를 가하는 방법.
제115항에 있어서, 전기영동 겔이 아가로스, 폴리아크릴아미드, 폴리디메틸아크릴아미드 및 전분 중의 적어도 하나를 포함하는 방법.
제117항에 있어서, 전기영동 겔이 트리스-아세테이트 EDTA, 트리스-보레이트 EDTA 및 포스페이트 완충 식염수 중의 적어도 하나를 더 포함하는 방법.
제115항에 있어서, 선택된 전기영동 겔 부분에서 원하는 고분자량 푸칸을 추출할 때 용매에서 선택된 전기영동 겔 부분을 교반하는 방법.
제119항에 있어서, 용매가 물, 메탄올, 에탄올 및 이소프로판올 중의 적어도 하나를 포함하는 방법.
고분자량 푸칸을 구하는 방법에 있어서:
원하는 고분자량 푸칸 구간을 포함해 넓은 분자량 분포를 갖는 출발 푸칸 조성물과, 이온교환 거대다공성 수지를 제공하는 단계; 및
출발 푸칸 조성물을 이온교환 거대다공성 수지와 이온교환해 원하는 고분자량 푸칸으로 구성된 이온교환 처리된 푸칸 조성물을 얻는 단계;를 포함하는 방법.
제121항에 있어서, 이온교환 처리된 푸칸 조성물로부터 원하는 고분자량 푸칸을 수집하는 단계를 더 포함하는 방법.
제121항에 있어서, 출발 푸칸 조성물을 제공하는 단계가 출발 푸칸 조성물을 이온교환하기 전에 출발 푸칸 조성물을 탈염하는 단계를 더 포함하는 방법.
제121항에 있어서, 출발 푸칸 조성물:이온교환 거대다공성 수지의 질량비가 1:100 내지 10:1인 방법.
제124항에 있어서, 상기 질량비가 1:10 내지 약 5:1인 방법.
제121항에 있어서, 출발 푸칸 조성물이 5 분 내지 100 시간 이온교환되는 방법.
제121항에 있어서, 이온교환 거대다공성 수지가 음이온교환 거대다공성 수지와 혼합 전하 거대다공성 수지 중의 적어도 하나를 포함하는 방법.
제127항에 있어서, 음이온교환 거대다공성 수지가 강염기 거대다공성 수지인 방법.
제128항에 있어서, 강염기 거대다공성 수지가 4 차 아민기를 포함하는 방법.
제127항에 있어서, 음이온교환 거대다공성 수지가 약염기 거대다공성 수지인 방법.
제130항에 있어서, 약염기 거대다공성 수지가 1차, 2차 또는 3차 아민기 중의 적어도 하나를 포함하는 방법.
제121항에 있어서, 이온교환 거대다공성 수지가 스티렌, 아가로스, 덱스트란, 아크릴레이트, 메타크릴레이트, 메틸 메타크릴레이트, 부틸 메타크릴레이트, 디비닐벤젠, 셀룰로스, 실리카 및 세라믹 중의 적어도 하나를 포함하는 방법.
제121항에 있어서, 이온교환 거대다공성 수지가 5 nm 내지 1000 nm의 기공크기를 갖는 방법.
제133항에 있어서, 상기 기공크기가 10 nm 내지 100 nm인 방법.
제133항에 있어서, 상기 기공크기가 15 nm 내지 50 nm인 방법.
제121항에 있어서, 이온교환 거대다공성 수지가 50kDa 내지 50,000kDa의 배제한계를 갖는 방법.
제136항에 있어서, 상기 배제한계가 1,000kDa 내지 9,000kDa인 방법.
제136항에 있어서, 상기 배제한계가 100kDa 내지 1,000kDa인 방법.
고분자량 푸칸을 구하는 방법에 있어서:
출발 용액내 원하는 고분자량 푸칸 구간을 포함해 넓은 분자량 분포를 갖는 출발 푸칸 조성물과, 겔 매질을 제공하는 단계;
출발 푸칸 조성물이 분자량에 따라 겔 매질을 가로 질러 제 1 입력 말단에서 제 2 출력 말단까지 위치하도록, 출발 용액을 겔투과 크로마토그래피에 적용하는 단계; 및
원하는 고분자량 푸칸 구간으로 구성된 적어도 하나의 부분표본을 제 2 출력 말단으로부터 수집하는 단계;를 포함하는 방법.
제139항에 있어서, 여러 부분표본들을 수집해 조합하는 단계를 더 포함하는 방법.
제139항에 있어서, 겔 매질이 컬럼에 들어있는 방법.
제139항에 있어서, 겔 매질이 폴리히드록시메타크릴레이트, 설폰화 스티렌-디비닐벤젠, 실리카, 친수성 결합 상이나 중합체, 폴리스티렌, 디비닐벤젠, 메타크릴레이트, 메틸 메타크릴레이트, 부틸 메타크릴레이트, 셀룰로스, 세라믹, 아가로스 및 덱스트란 중의 적어도 하나를 포함하는 방법.
제139항에 있어서, 겔 매질이 3 nm 내지 10000 nm의 기공크기를 갖는 방법.
제143항에 있어서, 상기 기공크기가 3 nm 내지 3000 nm인 방법.
제139항에 있어서, 겔 매질이 100 Da 내지 100,000 kDa의 배제한계를 갖는 방법.
제145항에 있어서, 겔 매질이 100 kDa 내지 30,000 kDa의 배제한계를 갖는 방법.