BR112021000626A2

BR112021000626A2 - Composições de fucanos altamente purificadas e/ou modificadas para o tratamento de aderências fibrosas

Info

Publication number: BR112021000626A2
Application number: BR112021000626-5A
Authority: BR
Inventors: Christopher Michael Kevin Springate; Ian Millet; Sailesh Haresh Daswani; Hesong Sun; Aileen Shao Ting Yang; Hoi Ting Wong; Anuj Yadav; Gemma Regan
Original assignee: Arc Medical Devices Inc.
Priority date: 2018-07-27
Filing date: 2019-07-24
Publication date: 2021-04-13
Also published as: WO2020019081A1; CA3106464A1; MX2021000863A; SG11202100390SA; WO2020019079A1; JP7477238B2; PH12021550106A1; US11938145B2; PH12021550105A1; US20210290658A1; JP2022177066A; AU2019312088A1; CN112533989A; US11446326B2; AU2019310360B2; BR112021000623A2; TW202019444A; PH12021550103A1; TW202007399A; AU2019310194B2

Abstract

composições de fucanos altamente purificadas e/ou modificadas para o tratamento de aderências fibrosas. a presente invenção refere-se a composições, métodos, sistemas, etc, que são fucanos modificados e/ou purificados e composições contendo fucano correspondentes que inibem as aderências fibrosas entre outras vantagens. as composições de fucanos e fucanos purificados/modificados têm um nível reduzido de componentes não funcionais ou impurezas, tais como aquelas encontradas em uma composição de fucano de partida. tais componentes ou impurezas indesejáveis reduzidos incluem, por exemplo, componentes indesejados ligados ao fucano e compostos na composição que não são parte ou ligados ao fucano.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para “COMPOSIÇÕES DE FUCANO ALTAMENTE PURIFICADAS E/OU

MODIFICADAS PARA O TRATAMENTO DE ADERÊNCIAS FIBROSAS”. PEDIDO DE PRIORIDADE

[001] O presente pedido reivindica o benefício do pedido de patente provisório copendente dos Estados Unidos no. 62.711.364, depositado em 27 de julho de 2018; O pedido provisório de patente dos Estados Unidos nº 62.711.372, depositado em 27 de julho de 2018; O pedido provisório de patente dos Estados Unidos nº 62/711.335, depositado em 27 de julho de 2018; Pedido de Patente Provisório dos Estados Unidos No. de série 62/713.399, depositado em 1 de agosto de 2018; Pedido de patente provisório dos Estados Unidos nº 62/722.135, depositado em 23 de agosto de 2018; Pedido de patente provisório dos Estados Unidos No. 62/755.311, depositado em 2 de novembro de 2018; Pedido de patente provisório dos Estados Unidos nº 62/793.514, depositado em 17 de janeiro de 2019; Pedido de patente provisório dos Estados Unidos nº 62/861.223, depositado em 13 de junho de 2019; Pedido de Patente Provisório dos Estados Unidos copendente No. de série 62/713.392, depositado em 1 de agosto de 2018; Pedido de patente provisório dos Estados Unidos No. 62/713.413, depositado em 1 de agosto de 2018; Pedido de patente provisório dos Estados Unidos nº 62/722.137, depositado em 23 de agosto de 2018; Pedido de patente provisório dos Estados Unidos No. 62/755.318, depositado em 2 de novembro de 2018; Pedido de patente provisório dos Estados Unidos nº 62/861.228, depositado em 13 de junho de 2019; Pedido de Patente Provisório dos Estados Unidos copendente No. de série 62/755.328, depositado em 2 de novembro de 2018; Pedido de patente provisório dos Estados Unidos No. 62/793.654, depositado em 17 de janeiro de 2019; e, pedido de patente provisório dos Estados Unidos No. 62/861.235, depositado em 13 de junho de 2019, todos os pedidos são incorporados neste documento por referência em sua totalidade.

ANTECEDENTES

[002] Os fucanos (incluindo o fucoidano) são polissacarídeos sulfatados. Em termos gerais, isso significa que eles são moléculas compostas por vários grupos de açúcar e também têm átomos de enxofre ligados aos grupos de açúcar. O principal grupo de açúcares é denominado “fucose”, que é um açúcar com 6 átomos de carbono e fórmula química C6H12O5. “Fucoidano” (ou fucoidina) indica fucanos derivados de algas marrons (algas marinhas). Os fucanos podem existir sozinhos ou em uma mistura de outros açúcares, por exemplo, em uma mistura de açúcares como xilose, galactose, glicose, ácido glicurônico e/ou manose. Esses outros açúcares podem ser extraídos das algas marinhas ou de outra fonte com o fucano. Embora os fucanos sejam atualmente derivados de fontes naturais, como algas marrons (algas marinhas), pepinos do mar, etc., mencionados aqui, “fucanos” inclui moléculas de polímero com os motivos químicos e estruturais dos fucanos, conforme discutido neste documento, independentemente da fonte (s) final (is) dos fucanos.

[003] O fucoidano pode ser obtido a partir de uma variedade de espécies de algas marrons, incluindo, mas não se limitando a: Adenocystis utricularis, Ascophyllum nodosum, Chorda filum, Cystoseirabies marina, Durvillaea antarctica, Ecklonia kurome, Ecklonia maxima, Eisenia bicyclis, Fucus evanescens, Fucus vesiculosis, Hizikia fusiforme, Himanthalia Elongata, Kjellmaniella crassifolia, Laminaria brasiliensis, Laminaria cichorioides, Laminaria hyperborea, Laminaria japonica, Laminaria saccharina, Lessonia trabeculata, Macrocystis pyrifera, Pelvetia fastigiata, Pelvetia Canaliculata, Saccharina japonica, Saccharina latissima, Sargassum stenophylum, Sargassum thunbergii, Sargassum confusum, Sargassum fusiforme e Undaria pinnatifida. Essas espécies exemplares são todas da classe taxonômica Phaeophyceae e a maioria dessas espécies se enquadra nas famílias de Fucales e Laminariaceae.

[004] Foi demonstrado que os fucanos, incluindo o fucoidano, são eficazes em servir como um dispositivo de barreira para prevenir, inibir e tratar a formação de aderências fibrosas. Eles também encontraram uso no tratamento de outras doenças e condições relacionadas.

[005] Assim, não foi atendida a necessidade de preparação de fucanos purificados, incluindo esses fucanos sendo modificados para ter distribuições de peso molecular desejadas e/ou níveis de sulfato. As presentes composições, sistemas e métodos, etc., fornecem estas e/ou outras vantagens.

SUMÁRIO

[006] Composições, métodos, sistemas, etc., são fornecidos fucanos e composições contendo fucanos que inibem aderências fibrosas entre outras vantagens. Os fucanos e as composições de fucanos aqui compreendem fucanos, incluindo fucanos purificados/modificados, tendo níveis particulares de componentes de fucano especificados desejados. O corpo deste pedido frequentemente se refere a fucanos purificados/modificados e composições de fucanos purificados/modificados; tais referências incluem todas as composições de fucanos/fucanos aqui, exceto nas reivindicações ou a menos que claramente limitado a fucanos purificados/modificados/composições de fucanos purificados/modificados do contexto. Em algumas modalidades, os fucanos e as composições que os contêm são adequados para aplicações médicas e cirúrgicas. Os fucanos e as composições de fucanos têm um nível reduzido de componentes não fucanos ou impurezas, tais como aqueles encontrados em uma composição de fucano matéria-prima. Tais componentes indesejáveis ou impurezas incluem, por exemplo, componentes indesejáveis que estão ligados ao fucano (por exemplo, iônico, covalente, ligação de hidrogênio, etc.) e compostos na composição que não fazem parte ou quimicamente e/ou ionicamente ligados ao fucano. Os componentes de fucano indesejados podem ser quantificados em comparação (por exemplo, p/p) com o fucano. Os compostos não fucanos e componentes indesejados de fucanos podem daqui em diante coletivamente ser referidos como impurezas do fucano e/ou das composições que compreendem o fucano aqui. Esses fucanos purificados/modificados podem, por exemplo, reduzir complicações perigosas durante o uso médico e cirúrgico de fucanos devido a impurezas.

[007] As presentes composições, métodos, sistemas, etc., fornecem composições compreendendo fucanos desejados, incluindo fucanos purificados/modificados obtidos a partir de composições de fucanos iniciais (isto é, composições de fucanos a partir dos quais os fucanos purificados/modificados podem ser derivados; tais composições de fucanos iniciais podem ser derivados; ou pode não ser cru ou ter sido previamente processado, tal como uma composição de fucano matéria-prima), bem como métodos de obtenção de tais fucanos purificados/modificados desejados e métodos de uso de tais fucanos purificados/modificados.

[008] Em alguns aspectos, os presentes sistemas, dispositivos e métodos, etc., fornecem composições compreendendo fucanos compreendendo um teor total de fucose, galactose, sulfato e contraíons de mais de 90% em p/p, 92% em p/p, 94% em p/p, 95% em p/p, 97% em p/p, 97,5% em p/p, 98%, 98,8%, 99%, 99,5% ou 99,9% em p/p. Em algumas modalidades, o teor de fucose pode ser superior a 25% em p/p, 30% em p/p, 35% em p/p; o teor de galactose pode ser menor do que 10% em p/p ou 5% em p/p. O teor total de contraíons pode ser menor do que 17% em p/p ou 14% em p/p. O contraíon pode ser um contraíon farmaceuticamente aceitável, como alumínio, arginina, benzatina, cloroprocaína, colina, sódio, potássio, lítio, amônio, etilenodiamina, dietilamina, dietanolamina, etanolamina, histidina, lisina, N-metil glicamina, meglumina, procaína, trietilamina, zinco, cálcio e magnésio. Em algumas modalidades, o contraíon pode compreender, consistir em ou consistir essencialmente em pelo menos um dentre sódio e potássio.

[009] Em certas modalidades, as composições fornecidas que compreendem os fucanos purificados/modificados podem compreender um teor total de fucose, galactose e sulfato superior a 75% em p/p, 80% em p/p, 84% em p/p. Pelo menos 60% em p/p da distribuição de peso molecular pode ser maior que 100 kDa, um peso molecular médio ponderado maior que 100 kDa e/ou peso molecular máximo maior que 70 kDa. Uma abordagem exemplar para determinar tal distribuição é usar uma configuração de cromatografia de permeação em gel aquoso compreendendo ou consistindo essencialmente em:

[0010] uma coluna de cromatografia de permeação em gel analítica de 300 mm com um diâmetro interno de 7,8 mm acondicionado com gel à base de polimetacrilato hidroxilado, tendo uma faixa de peso molecular efetivo entre cerca de 50 kDa e cerca de

5.000 kDa, uma coluna de cromatografia de permeação em gel analítica de 300 mm com um diâmetro interno de 7,8 mm acondicionado com gel à base de polimetacrilato hidroxilado, tendo uma faixa de peso molecular efetivo de entre cerca de 1 kDa e cerca de 6.000 kDa e uma coluna de guarda de 40 mm com um diâmetro interno de 6 mm acondicionado com gel à base de polimetacrilato hidroxilado, as duas colunas de cromatografia de permeação em gel analítica e uma coluna de guarda contida em um compartimento de coluna a cerca de 30 ⁰C;

[0011] um detector de índice refrativo a cerca de 30 ⁰C;

[0012] fase móvel de nitrato de sódio 0,1 M conduzida a 0,6 mL/min; e

[0013] quantificação contra uma curva padrão de peso molecular máximo consistindo essencialmente em um primeiro padrão de dextrano com um peso molecular máximo de cerca de 2.200 kDa, um segundo padrão de dextrano com um peso molecular máximo entre cerca de 720 kDa e cerca de 760 kDa, um terceiro padrão de dextrano com um peso molecular máximo entre cerca de 470 kDa e cerca de 510 kDa, um quarto padrão de dextrano com um peso molecular máximo entre cerca de 370 kDa e cerca de 410 kDa, um quinto padrão de dextrano com um peso molecular máximo entre cerca de 180 kDa e cerca de 220 kDa, e um sexto padrão de dextrano com um peso molecular máximo entre cerca de 40 kDa e 55 kDa. A curva padrão de peso molecular máximo pode compreender ainda um padrão de dextrano com um peso molecular máximo entre cerca de 3 kDa e cerca de 5 kDa.

[0014] As composições fornecidas que compreendem os fucanos podem ter um peso molecular médio em número superior a 50 kDa, um nível de sulfatação entre 20% em p/p e 60% em p/p ou entre 30% em p/p e 55% em p/p ou 35% em p/p e 52% em p/p.

[0015] O teor total de carboidratos pode estar entre 27% em p/p e 80% em p/p. O teor total de fucose como uma porcentagem do teor total de carboidratos pode ser de pelo menos cerca de 30% em p/p, 50% em p/p, 70% em p/p, 90% em p/p ou 95% em p/p. O teor total de galactose como uma porcentagem do teor total de carboidratos pode ser menor do que cerca de 60% em p/p ou 20% em p/p. O teor total de ácido glicurônico, manose, ramnose, glicose e xilose como uma porcentagem do teor total de carboidratos pode ser menor do que cerca de 30% em p/p.

[0016] Também são fornecidos aqui métodos que compreendem fazer ou usar as composições fornecidas que compreendem os fucanos purificados/modificados aqui. O uso pode compreender o tratamento de aderências fibrosas.

[0017] Em algumas modalidades, as composições de fucano aqui incluem composições de fucano sólido e compreendem pelo menos 90% em p/p de fucanos, tais como fucanos purificados/modificados aqui, a composição de fucano sólido compreendendo ainda um teor total de água menor do que 7% em p/p , 6% em p/p, 5% em p/p, 4% em p/p, 3% em p/p, 2% em p/p, 1% em p/p ou 0,1% em p/p.

[0018] Em certas modalidades, as composições aqui são composições de fucano medicamente aceitáveis compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz dos fucanos purificados/modificados aqui em um tampão ou diluente medicamente aceitável. Os métodos aqui incluem o tratamento de uma aderência fibrosa em um animal, como um humano, compreendendo a seleção de fucanos purificados/modificados aqui para inibir a aderência fibrosa e a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz da composição ou o fucano dentro da composição em uma faixa de dosagem entre 0,5 mg/kg e 50 mg/kg de composições aqui para o sítio de uma ferida do animal. O intervalo de dosagem também pode ser entre 1 mg/kg e 25 mg/kg. Os métodos também podem compreender o uso de uma faixa de dosagem compreendendo entre 0,5 mg/kg e 50 mg/kg, ou entre 1 mg/kg e 25 mg/kg, para tratar uma doença ou distúrbio direcionado, incluindo, por exemplo, aderências fibrosas.

[0019] Também são fornecidos aqui métodos de preparação de composições compreendendo fucanos purificados/modificados aqui, incluindo, por exemplo, métodos para remover impurezas de uma composição de fucano de partida, como uma composição de fucano matéria-prima, para obter fucanos purificados/modificados. Tais métodos podem compreender, por exemplo:

[0020] fornecer uma composição de fucano de partida compreendendo impurezas;

[0021] adicionar um auxiliar de floculação à composição de fucano de partida para produzir uma mistura de reação;

[0022] flocular as impurezas por aquecimento da mistura de reação para produzir impurezas floculadas; e

[0023] remover as impurezas floculadas.

[0024] Fornecer as composições de fucano de partida pode compreender o fornecimento das composições de fucano de partida como uma solução, e os métodos ainda podem compreender a coleta dos fucanos purificados/modificados em uma solução de impurezas reduzidas. A floculação das impurezas pode compreender o aquecimento da mistura de reação em excesso da pressão atmosférica e o auxiliar de floculação pode compreender um sal, tal como cloreto, brometo, iodeto, fluoreto, sulfato, sulfito, carbonato, bicarbonato, fosfato, nitrato, nitrito, acetato, citrato, silicato e/ou cianeto de um metal alcalino, metal alcalino-terroso, alumínio e/ou amônio. O auxiliar de floculação pode compreender uma base tal como hidróxido e/ou óxido de um metal alcalino, metal alcalino-terroso, alumínio e/ou amônio.

[0025] As impurezas removidas compreendem pelo menos um dentre particulados, lipídeos, ácidos graxos, florotaninos, laminarinas, alginatos, proteínas, produtos de reação de Maillard, fucoxantina, clorofila, bactérias, componentes celulares e DNA.

[0026] Métodos adicionais para remover impurezas das composições de fucano de partida para obter fucanos purificados/modificados podem compreender:

[0027] fornecer composições de fucano de partida como um sólido e um meio de extração incapaz de dissolver fucanos, configurado para dissolver impurezas;

[0028] misturar as composições de fucano de partida com o meio de extração para produzir uma mistura dos fucanos purificados/modificados e o meio de extração; e

[0029] separar os fucanos purificados/modificados do meio de extração.

[0030] Os métodos podem compreender ainda coletar as composições que compreendem os fucanos purificados/modificados como um sólido. O meio de extração pode compreender pelo menos um solvente orgânico com uma polaridade relativa menor do que 0,765. Os valores de polaridade relativa podem ser normalizados a partir de medições de desvios de solvente de espectros de absorção. Veja, por exemplo, Christian Reichardt, Solvents and Solvent Effects in Organic Chemistry, Wiley-VCH Publishers, 3ª ed., 2003. O solvente orgânico pode compreender pelo menos um dentre etanol, isopropanol, metanol, benzeno, éter dietílico, decametilciclopentassiloxano, acetato de etila, butanol, hexano, heptano, heptanol, octanol e decanol. O meio de extração pode ainda compreender pelo menos um dentre uma base, um detergente e um agente oxidante. Fornecer as composições de fucano de partida em uma forma sólida pode compreender a precipitação das composições de fucano de partida de uma solução. As impurezas removidas podem compreender pelo menos um dentre particulados, lipídeos, ácidos graxos, florotaninos, laminarinas, alginatos, proteínas, produtos de reação de Maillard, fucoxantina, clorofila, bactérias, componentes celulares e DNA.

[0031] Outros métodos para a remoção de impurezas das composições de fucano de partida para obter fucanos purificados/modificados podem compreender:

[0032] fornecer composições de fucano de partida compreendendo impurezas, incluindo impurezas suspensas em uma solução;

[0033] precipitar as impurezas da solução usando um precipitante de impurezas multivalente iônico, produzindo assim uma mistura de impurezas suspensas, impurezas precipitadas e uma solução de sobrenadante; e

[0034] separar as impurezas suspensas e as impurezas precipitadas da solução de sobrenadante.

[0035] Os métodos também podem compreender a coleta da solução de sobrenadante que compreende as composições que compreendem os fucanos purificados/modificados.

[0036] O precipitante de impureza multivalente iônico pode compreender um sal de um cátion divalente ou trivalente; o sal pode ser um cloreto, brometo, iodeto, fluoreto, sulfato, sulfito, carbonato, bicarbonato, fosfato, nitrato, nitrito, acetato, citrato, silicato e/ou cianeto. O cátion pode ser um metal alcalino-terroso, zinco, alumínio, cobre e/ou ferro. O precipitante de impureza multivalente iônico pode compreender uma base de um cátion divalente ou trivalente. A base pode ser um hidróxido e/ou óxido de um metal alcalino-terroso, zinco, alumínio, cobre e/ou ferro.

[0037] A separação das impurezas suspensas e impurezas precipitadas da solução de sobrenadante pode compreender ainda a floculação das impurezas suspensas e impurezas precipitadas pela adição de um floculante à mistura de impurezas suspensas, impurezas precipitadas e solução de sobrenadante. O floculante pode compreender pelo menos um dentre sulfato de alumínio e potássio; sulfato de sódio e alumínio; sulfato de amônio e alumínio; cloreto de cálcio; fosfato de sódio; hidróxido de alumínio; cloreto de alumínio; cloreto férrico; sulfato férrico; sulfato ferroso; silicato de sódio; silicato de cálcio; fosfato de cálcio; cloreto de zinco; carbonato de cálcio; bicarbonato de cálcio; sulfato de potássio; fosfato de magnésio; acrilamidas; ácido acrílico; cloridrato de alumínio; cloreto de polialumínio; taninos; formaldeído; melamina; cloreto de metila de N,N- dimetilaminoetil acrilato; quaternário de cloreto de metila de N,N- dimetilaminoetil metacrilato; e cloreto de polidialildimetil-amônio. Os métodos também podem compreender a manutenção de um pH entre cerca de 7 e 14. A manutenção do pH pode compreender a adição de base. As impurezas removidas podem compreender pelo menos um dentre particulados, lipídeos, ácidos graxos, florotaninos, laminarinas, alginatos, proteínas, produtos de reação de Maillard, fucoxantina, clorofila, bactérias, componentes celulares e DNA.

[0038] Os métodos para a remoção de impurezas das composições de fucano de partida para obter fucanos purificados/modificados podem compreender:

[0039] fornecer composições de fucano de partida compreendendo impurezas;

[0040] ajustar o pH das composições de fucano de partida entre cerca de 8 e 14;

[0041] adicionar às composições de fucano de partida um agente de ruptura celular configurado para lisar componentes celulares para produzir uma mistura de reação compreendendo o agente de ruptura celular, lisados biomoleculares e as composições de fucano de partida; e

[0042] remover o agente de ruptura celular e lisados biomoleculares da mistura de reação.

[0043] Fornecer as composições de fucano de partida pode compreender o fornecimento das composições de fucano de partida como uma solução, e os métodos ainda podem compreender a coleta das composições que compreendem os fucanos purificados/modificados como um sólido ou em uma solução de impurezas reduzidas.

O agente de ruptura celular pode compreender um detergente, que pode ser um detergente aniônico, um detergente catiônico ou um detergente não iônico.

O detergente pode compreender pelo menos um dentre dodecilsulfato de sódio (SDS), cloreto de benzalcônio, Triton X 100®, Triton X 114®, detergentes Brij®, detergentes Tween®, desoxicolato de sódio e alquilbenzenossulfonatos.

A remoção do agente de ruptura celular e lisados biomoleculares pode compreender adicionar à mistura de reação um floculante configurado para flocular o agente de ruptura celular e lisados biomoleculares.

A remoção do agente de ruptura celular pode compreender adicionar à mistura de reação um precipitante configurado para tornar o agente de ruptura celular insolúvel na mistura de reação, produzindo precipitados.

A remoção dos lisados biomoleculares pode compreender adicionar à mistura de reação um precipitante configurado para tornar os lisados biomoleculares insolúveis na mistura de reação, produzindo precipitados.

Os métodos podem compreender ainda adicionar à mistura de reação um floculante configurado para flocular os precipitados.

O floculante pode compreender pelo menos um dentre sulfato de alumínio e potássio; sulfato de sódio e alumínio; sulfato de amônio e alumínio; cloreto de cálcio; fosfato de sódio; hidróxido de alumínio; cloreto de alumínio; cloreto férrico; sulfato férrico; sulfato ferroso; silicato de sódio; silicato de cálcio; fosfato de cálcio; cloreto de zinco; carbonato de cálcio; bicarbonato de cálcio; sulfato de potássio; fosfato de magnésio; acrilamidas; ácido acrílico; cloridrato de alumínio; cloreto de polialumínio; taninos; formaldeído; melamina; cloreto de metila de N,N-dimetilaminoetil acrilato; quaternário de cloreto de metila de N,N-dimetilaminoetil metacrilato; e cloreto de polidialildimetil- amônio.

[0044] A remoção do detergente aniônico pode compreender adsorção aniônica; a remoção do detergente catiônico pode compreender adsorção catiônica; a remoção do detergente não iônico pode compreender a separação da fase micelar; e, a remoção do detergente pode compreender adsorção hidrofóbica. A remoção do detergente pode compreender:

[0045] diluir a mistura de reação até que a concentração do detergente possa estar abaixo de uma concentração predeterminada; e

[0046] submeter a mistura de reação compreendendo o detergente à diafiltração sobre um filtro de filtração de fluxo tangencial com uma redução de peso molecular acima do maior peso molecular do detergente.

[0047] Os métodos também podem compreender a adição de um agente quelante à mistura de reação após fornecer as composições de fucano de partida e antes de remover o agente de ruptura celular. O agente quelante pode compreender ácido etilenodiaminatetraacético (EDTA), 2,3-dimercapto-1-propanol, etilenodiamina, porfina e/ou ácido cítrico, e os métodos ainda podem compreender a adição de um agente de extinção de oxidante à mistura de reação antes de remover o agente de ruptura celular para extinguir oxidantes na mistura de reação, ou adicionar um agente bacteriostático à mistura de reação após fornecer as composições de fucano de partida e antes de remover o agente de ruptura celular. O agente bacteriostático pode compreender sulfito de sódio, ácido etilenodiaminatetraacético (EDTA), cloreto de benzalcônio, etanol e/ou tioureia. As impurezas removidas podem compreender pelo menos um dentre particulados, lipídeos, ácidos graxos, florotaninos, laminarinas, alginatos, proteínas, produtos de reação de Maillard, fucoxantina, clorofila, bactérias, componentes celulares e DNA.

[0048] Métodos para a remoção de impurezas das composições de fucano de partida para obter as composições que compreendem os fucanos purificados/modificados também podem compreender:

[0049] fornecer composições de fucano de partida compreendendo impurezas em uma solução de partida aquosa;

[0050] misturar a solução de partida aquosa com um solvente orgânico para produzir uma mistura de fase orgânica aquosa; e

[0051] separar a mistura de fase aquosa-orgânica para obter uma porção aquosa e uma porção orgânica.

[0052] Os métodos podem ainda compreender a coleta da porção aquosa que compreende os fucanos purificados/modificados. O solvente orgânico pode compreender pelo menos um solvente orgânico com uma polaridade relativa menor que 0,765, que pode ser pelo menos um dentre etanol, isopropanol, metanol, benzeno, decametilciclopentassiloxano, acetato de etila, hexano, heptanol, octanol, decanol, heptano, acetato de isobutila, anisol, acetato de isopropila, 1-butanol, acetato de butila, metilisobutilcetona, pentano, 1- pentanol, éter etílico e acetato de propila. As impurezas removidas podem compreender pelo menos um dentre particulados, lipídeos, ácidos graxos, florotaninos, laminarinas, alginatos, proteínas, produtos de reação de Maillard, fucoxantina, clorofila, bactérias, componentes celulares e DNA.

[0053] Métodos para modificar o teor catiônico das composições de fucano de partida podem compreender:

[0054] fornecer composições de fucano de partida em uma solução de partida; e

[0055] diafiltrar a solução de partida através de um filtro de filtração de fluxo tangencial com uma solução de um agente quelante através de um filtro de filtração de fluxo tangencial para produzir composições de fucano retentado.

[0056] O agente quelante pode compreender pelo menos um dentre ácido etilenodiamina-tetraacético (EDTA), 2,3-dimercapto-1- propanol, etilenodiamina, porfina ou ácido cítrico. As composições de fucano retentado podem compreender um teor catiônico consistindo essencialmente em sódio e/ou potássio.

[0057] Métodos para remover impurezas das composições de fucano de partida para obter fucanos purificados/modificados podem compreender ainda:

[0058] fornecer composições de fucano de partida compreendendo impurezas;

[0059] submeter as composições de fucano de partida a uma pressão acima de 70 bar e uma temperatura adequada acima de 30 °C em um extrator supercrítico; e

[0060] encher o extrator supercrítico com um fluido supercrítico para remover as impurezas do fluido supercrítico; e

[0061] remover o fluido supercrítico contendo as impurezas extraídas após um período de tempo predeterminado.

[0062] Os métodos podem compreender ainda coletar os fucanos purificados/modificados que permanecem no extrator supercrítico; a pressão pode estar entre cerca de 70 bar e cerca de 2.000 bar e a temperatura pode estar entre cerca de 30 °C e cerca de 300 °C. As composições de fucano de partida podem ser um líquido ou um sólido. O fluido supercrítico pode compreender pelo menos um dentre dióxido de carbono, etanol, etano, ácido clorídrico, ácido fluorídrico, ácido sulfúrico e ácido nítrico. A quantidade de tempo predeterminada pode ser entre cerca de 5 minutos e 50 horas. As impurezas removidas podem compreender pelo menos um dentre particulados, lipídeos, ácidos graxos, florotaninos, laminarinas, alginatos, proteínas, produtos de reação de Maillard, fucoxantina, clorofila, bactérias, componentes celulares e DNA.

[0063] Estes e outros aspectos, características e modalidades são apresentados neste pedido, incluindo a seguinte Descrição Detalhada e desenhos anexos. A menos que expressamente indicado de outra forma, todas as modalidades, aspectos, recursos, etc., podem ser misturados e pareados, combinados e permutados de qualquer maneira desejada.

[0064] Estes e outros aspectos, características e modalidades são apresentados neste pedido, incluindo a seguinte Descrição Detalhada e desenhos anexos. A menos que expressamente indicado de outra forma, todas as modalidades, aspectos, recursos, etc., podem ser misturados e pareados, combinados e permutados de qualquer maneira desejada.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0065] A FIG. 1 representa esquematicamente um sistema exemplar para modificar o teor catiônico de uma composição de fucano de partida e remover componentes não fucanos de baixo peso molecular usando um agente quelante em filtração de fluxo tangencial.

[0066] A FIG. 2A representa resultados de RMN demonstrando que certos fucanos tratados de acordo com métodos aqui sofrem mudanças estruturais nos fucanos.

[0067] A FIG. 2B representa resultados de RMN 2-D demonstrando que certos fucanos tratados de acordo com métodos aqui sofrem mudanças estruturais nos fucanos.

[0068] Os desenhos apresentam modalidades exemplares de alguns aspectos das presentes composições, métodos, etc. As modalidades dos sistemas, métodos, etc., neste documento, podem incluir outras características ou etapas não mostradas nos desenhos. Além disso, as exemplificações apresentadas neste documento ilustram modalidades dos sistemas, métodos, etc., em uma ou mais formas, e tais exemplificações não devem ser interpretadas como limitando o escopo da descrição de qualquer maneira. As modalidades neste documento não são exaustivas e não limitam a descrição à forma precisa descrita, por exemplo, na seguinte descrição detalhada.

DESCRIÇÃO DETALHADA

[0069] As composições, sistemas, métodos atuais, etc., aqui apresentados compreendem fucanos purificados/modificados. As presentes composições podem ser eficazes para tratamentos médicos, tratamentos pós-cirúrgicos, inibição de doenças, etc. Em algumas modalidades, o fucano é fucoidano. Os presentes fucanos purificados/modificados podem ser eles próprios, ou podem ser incluídos em ou em dispositivos médicos, materiais médicos, produtos de combinação ou em composições farmaceuticamente aceitáveis, terapeuticamente e/ou medicamente eficazes.

[0070] Os parágrafos a seguir se voltam para uma breve discussão geral de algumas das composições aqui compreendendo fucanos purificados/modificados, incluindo aqueles que podem ser criados usando as metodologias aqui discutidas a partir de composições de fucano de partida por meio de vários métodos que podem ser realizados usando qualquer mistura de reação adequada, tal como soluções, suspensões, sólidos, géis ou outras modalidades dependendo do(s) método(s) escolhido(s). Composições

[0071] As composições, sistemas, etc. atuais aqui apresentados fornecem, em certas modalidades, composições de fucano purificado/modificado medicamente aceitáveis compreendendo quantidades terapeuticamente eficazes de composições de fucano purificado/modificado para o tratamento de aderências fibrosas, como aderências cirúrgicas, bem como artrite, psoríase ou outras doenças, conforme desejado. A fucansina purificada/modificada nas composições pode compreender mais do que cerca de 75% em p/p de fucose total, galactose e sulfato, por exemplo, mais do que cerca de 80% em p/p e mais de 84% em p/p de fucose total, galactose e sulfato. Em algumas modalidades, os fucanos purificados/modificados podem compreender ainda até pelo menos cerca de 5%, 7%, 9%, 10% ou 11% em p/p de pelo menos um contraíon. Em algumas modalidades, o contraíon é um contraíon farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, o contraíon é ionicamente ligado ao grupo sulfato presente no fucano. Contraíons farmaceuticamente aceitáveis podem incluir pelo menos um dentre alumínio, arginina, benzatina, cloroprocaína, colina, sódio, potássio, lítio, amônio, etilenodiamina, dietilamina, dietanolamina, etanolamina, histidina, lisina, N-metil glicamina, meglumina, procaína, trietilamina, zinco, cálcio e magnésio. O componente contendo enxofre do fucano é ligado por meio de uma ligação C-O-S. O oxigênio em tal ligação pode ser considerado principalmente ligado ao carbono ou ao enxofre, dependendo de vários fatores. O termo “sulfato”, quando aqui usado, refere-se a ambas as modalidades.

[0072] Em certas modalidades, os fucanos purificados/modificados aqui compreendem pelo menos cerca de 85% em p/p, 90% em p/p, 94% em p/p, 97% em p/p ou 98% em p/p de fucose, galactose, sulfato e contraíons. Contraíons exemplares incluem até cerca de 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14% ou 15% em p/p de cálcio, magnésio, potássio e/ou sódio. Em algumas modalidades, o fucano purificado/modificado compreende pelo menos cerca de 25%, 30% ou 35% em p/p de fucose. Em algumas modalidades, o fucano purificado/modificado compreende menos do que cerca de 10%, 5% ou 4% em p/p de galactose. Em algumas modalidades, o fucano purificado/modificado consiste essencialmente em, ou consiste em, tal total de componentes de fucose, galactose, sulfato e contraíons. Em algumas modalidades, os fucanos neste documento carecem substancialmente ou completamente de todos os componentes de açúcar, exceto fucose e galactose. Em algumas modalidades, os fucanos aqui substancialmente ou completamente carecem de um ou mais de ácido glicurônico, manose, ramnose, xilose, galactose ou glicose; como usado nesta frase, “substancialmente falta” indica que a presença, se houver, de tais componentes de açúcar é baixa o suficiente para que a presença seja farmaceuticamente e medicamente imaterial.

[0073] Em algumas modalidades adicionais, os fucanos purificados/modificados aqui podem ser usados para uma pluralidade de aplicações, incluindo a inibição, prevenção, remoção, redução ou outro tratamento de aderências fibrosas e outros alvos e outras doenças e/ou condições. O tratamento inclui que os fucanos reduzem ou previnem o desenvolvimento de uma doença alvo ou outra condição, como a redução ou prevenção da formação de aderências fibrosas em um sítio alvo, que é tipicamente um sítio alvo selecionado identificado por um cirurgião ou outro médico como compreendendo ou razoavelmente suscetível a ter aderências fibrosas (ou outras doenças ou condições), e também inclui a eliminação de doenças existentes ou outras condições, incluindo, por exemplo, a eliminação de aderências fibrosas já existentes. Para tal inibição, prevenção, remoção, redução ou outro tratamento, o fucano é tipicamente fornecido em um dispositivo médico medicamente aceitável, produto de combinação ou composição farmaceuticamente eficaz que contém componentes adicionais, tais como ligantes, adjuvantes, excipientes, etc., também como, se desejado, substâncias medicamente ativas adicionais, como fármacos secundários que estão contidos na composição, mas não ligados ao fucano e/ou que podem ser ligados ao fucano.

[0074] Em ainda outras modalidades, as composições que compreendem os fucanos purificados/modificados aqui podem ser sólidos, por exemplo, composições sólidas compreendendo um teor de água menor do que cerca de 7% em p/p, por exemplo, menos do que cerca de 6%, 5% em p/p, 4% em p/p, 3% em p/p ou 2% em p/p de teor de água.

[0075] A distribuição de peso molecular dos fucanos purificados/modificados pode ser medida usando qualquer sistema de medição apropriado desejado. Diferentes sistemas podem produzir diferentes leituras ou resultados de diferentes composições tendo essencialmente a mesma composição, ou mesmo da mesma batelada quando medido de forma diferente. Um sistema de medição adequado é um conjunto de cromatografia de permeação em gel aquoso que consiste essencialmente em uma coluna de cromatografia de permeação em gel analítica de 300 mm com um diâmetro interno de 7,8 mm acondicionado com gel à base de polimetacrilato hidroxilado, tendo uma faixa de peso molecular efetivo entre cerca de 50 kDa e cerca de 5.000 kDa, uma coluna de cromatografia de permeação em gel analítica de 300 mm com um diâmetro interno de 7,8 mm acondicionado com gel à base de polimetacrilato hidroxilado, tendo uma faixa de peso molecular efetivo entre cerca de 1 kDa e cerca de

6.000 kDa e uma coluna de guarda de 40 mm com um diâmetro interno de 6 mm acondicionada com gel à base de polimetacrilato hidroxilado, as duas colunas analíticas de cromatografia de permeação em gel e uma coluna de guarda contida em um compartimento de coluna a cerca de 30 ⁰C, um detector de índice refrativo a cerca de 30 ⁰C, fase móvel de nitrato de sódio 0,1 M conduzida a 0,6 mL/min, e quantificação contra uma curva padrão de peso molecular máximo consistindo essencialmente em um primeiro dextrano padrão com um peso molecular máximo de cerca de 2.200 kDa, um segundo dextrano padrão com peso molecular máximo entre cerca de 720 kDa e cerca de 760 kDa, um terceiro dextrano padrão com um peso molecular máximo entre cerca de 470 kDa e cerca de 510 kDa, quarto padrão de dextrano com um peso molecular máximo entre cerca de 370 kDa e cerca de 410 kDa, um quinto padrão de dextrano com um peso molecular máximo entre cerca de 180 kDa e cerca de 220 kDa e um sexto padrão de dextrano com um peso molecular máximo entre cerca de 40 kDa e 55 kDa. A curva padrão de peso molecular máximo pode compreender ainda um padrão de dextrano com um peso molecular máximo entre 3 kDa e 5 kDa.

[0076] Os fucanos purificados/modificados aqui podem ter uma distribuição de peso molecular em que pelo menos cerca de 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 90%, 92%, 97% ou 98% em p/p da distribuição é maior que 100 kDa. Os fucanos purificados/modificados aqui podem compreender fucanos com uma distribuição de peso molecular em que pelo menos cerca de 50%, 60%, 70%, 80% ou 90% em p/p da distribuição é superior a 200 kDa. Os fucanos purificados/modificados aqui podem ter uma distribuição de peso molecular em que pelo menos cerca de 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% ou 75% em p/p da distribuição é maior que 500 kDa. Os fucanos purificados/modificados aqui podem ter uma distribuição de peso molecular em que pelo menos cerca de 5%, 10%, 20%, 30% ou 40% em p/p da distribuição é maior que 1600 kDa.

[0077] Os fucanos purificados/modificados aqui podem ter um peso molecular médio ponderado superior a cerca de 100 kDa, por exemplo, entre cerca de 100 kDa e cerca de 10.000 kDa, entre cerca de 200 kDa e cerca de 8.000 kDa, entre cerca de 350 kDa e cerca de

8.000 kDa, entre cerca de 450 kDa e cerca de 8.000 kDa, entre cerca de 580 kDa e cerca de 8.000 kDa, ou entre cerca de 800 kDa e cerca de 2.000 kDa. Os fucanos purificados/modificados aqui podem ter um peso molecular máximo maior que cerca de 70 kDa, por exemplo,

entre cerca de 70 kDa e cerca de 1200 kDa, entre cerca de 100 kDa e cerca de 1200 kDa, entre cerca de 200 kDa e cerca de 1200 kDa, entre cerca de 400 kDa e cerca de 1200 kDa, ou entre cerca de 400 kDa e cerca de 900 kDa.

[0078] Os fucanos purificados/modificados aqui podem ter um peso molecular médio em número superior a cerca de 50 kDa, entre cerca de 50 kDa e cerca de 1.000 kDa, entre cerca de 70 kDa e cerca de 1000 kDa, entre cerca de 150 kDa e cerca de 1000 kDa, entre cerca de 250 kDa e cerca de 1000 kDa, ou entre cerca de 250 kDa e cerca de 700 kDa.

[0079] Os fucanos purificados/modificados aqui podem ter um nível de sulfatação entre cerca de 10% em p/p e 70% em p/p, entre cerca de 20% em p/p e 65% em p/p, entre cerca de 30% em p/p e 60% em p/p, ou entre cerca de 40% em p/p e 60% em p/p.

[0080] Os fucanos purificados/modificados aqui podem ter uma relação molar de fucose total: sulfato total entre cerca de 1:0,5 e 1:4, entre cerca de 1:0,8 e 1:3,5, entre cerca de 1:1 e 1:2,5, entre cerca de 1:1,2 e 1:2,0, ou entre cerca de 1:1,5 e 1:3. Os fucanos purificados/modificados aqui podem ter uma relação molar de fucose total mais galactose: sulfato total entre cerca de 1:0,5 e 1:4, entre cerca de 1:0,8 e 1:3,5, entre cerca de 1:1 e 1:2,5, entre cerca de 1:1,2 e 1:2,0, ou entre cerca de 1:1,5 e 1:3.

[0081] Os fucanos purificados/modificados aqui podem ter um teor total de carboidratos entre cerca de 27% em p/p e 70% em p/p, entre cerca de 30% em p/p e 80% em p/p, entre cerca de 40% em p/p e 90% em p/p, ou entre cerca de 50% em p/p e 96% em p/p. Os fucanos purificados/modificados aqui podem ter um teor de fucose como uma porcentagem do carboidrato total de cerca de 30% em p/p e 100% em p/p, entre cerca de 495% em p/p, ou entre cerca de 50% em p/p e 90% em p/p. Os fucanos aqui podem ter um teor de galactose como uma porcentagem do carboidrato total de 0% em p/p e 60% em p/p, entre cerca de 5% em p/p e 30% em p/p, ou entre cerca de 8% em p/p e 10% em p/p. Os fucanos aqui podem ter um teor de ácido glicurônico como uma porcentagem do teor total de carboidratos entre cerca de 0% em p/p e 10% em p/p, um teor de manose como uma porcentagem do teor total de carboidratos entre cerca de 0% em p/p e 7% em p/p, um teor de ramnose como uma porcentagem do teor total de carboidratos entre 0% em p/p e 4% em p/p, e um teor de xilose como uma porcentagem do teor total de carboidratos entre 0% em p/p e 20% em p/p . Os fucanos aqui podem ter um teor total de ácido glicurônico, manose, ramnose, glicose e xilose de menos do que cerca de 30% em p/p, ou menos do que cerca de 12% em p/p.

[0082] Em algumas modalidades, os fucanos purificados/modificados aqui, quando dissolvidos a uma concentração de 50 mg/mL em água, têm uma viscosidade entre cerca de 4 cP e cerca de 50 cP, entre cerca de 5 cP e cerca de 40 cP, entre cerca de 10 cP e cerca de 30 cP, cerca de 15 cP, cerca de 20 cP e cerca de 25 cP. Em certas modalidades, os fucanos purificados/modificados aqui, quando dissolvidos em água de 1 mg/mL a 100 mg/mL, formam uma solução que é um de claro e incolor, claro e amarelo claro ou claro e marrom claro.

[0083] Os fucanos purificados/modificados aqui podem ser fornecidos em uma pasta, gel, adesivo, filme, spray, líquido, loção, creme, solução, suspensão, sólido, implante, microesfera ou outra forma desejada.

[0084] As composições aqui apresentadas podem ser um sólido consistindo essencialmente em fucanos purificados/modificados. O fucano purificado/modificado pode consistir essencialmente em fucose, galactose, sulfato e contraíons.

[0085] Os fucanos purificados/modificados aqui podem estar em uma solução compreendendo entre cerca de 0,01 mg/mL e cerca de 300 mg/mL de fucano, por exemplo, entre cerca de 0,1 mg/mL e cerca de 100 mg/mL, entre cerca de 1 mg/mL e cerca de 50 mg/mL e entre cerca de 20 mg/mL e cerca de 80 mg/mL. O fucano pode consistir essencialmente em fucose, galactose, sulfato e contraíons.

[0086] Os fucanos purificados/modificados podem estar em um gel compreendendo entre cerca de 100 mg/mL e cerca de 1000 mg/mL de fucano, por exemplo, entre cerca de 100 mg/mL e cerca de 500 mg/mL e entre cerca de 300 mg/mL e cerca de 800 mg/mL. O fucano pode consistir essencialmente em fucose, galactose, sulfato e contraíons.

[0087] Os fucanos purificados/modificados podem estar em um filme compreendendo entre cerca de 100 mg/mL e cerca de 1000 mg/mL de fucano, por exemplo, entre cerca de 100 mg/mL e cerca de 500 mg/mL e entre cerca de 300 mg/mL e cerca de 800 mg/mL. O fucano pode consistir essencialmente em fucose, galactose, sulfato e contraíons.

[0088] Os fucanos purificados/modificados aqui podem ser administrados como um componente de um dispositivo médico, produto de combinação e/ou composição farmacêutica compreendendo qualquer número de excipientes farmaceuticamente aceitáveis, por exemplo, gelatina, hipromelose, lactose, água para injeção USP, cloreto de sódio, sódio fosfato, citrato de sódio, ascorbato de sódio, tampões de fosfato, tampões de citrato, tampões de fosfato-citrato, plurônico, celulose, alginato, acrilato, ácido hialurônico, polietileno glicol, quitosana, excipiente injetável e injeção de Ringer com lactato USP.

[0089] Os fucanos purificados/modificados aqui podem ser administrados como uma pasta, gel, adesivo, filme, spray, líquido, loção, creme, solução, suspensão, sólido, implante, microesfera ou outra forma desejada.

[0090] Os fucanos purificados/modificados podem ser administrados por via intravenosa, intra-articular, intralesional, intravaginal, retal, intramuscular, intraperitoneal, subcutânea, tópica, intranasal, intraocular ou vias de administração oral. Os fucanos purificados/modificados podem ser entregues diretamente no sítio da doença. Os fucanos purificados/modificados podem ser continuamente liberados no sítio da doença por meio da liberação controlada de uma forma de dosagem polimérica.

[0091] Os fucanos purificados/modificados aqui podem ser administrados como um componente de uma composição farmacêutica compreendendo os fucanos purificados/modificados e pelo menos um outro fármaco. O fármaco pode ser pelo menos um dentre paclitaxel, doxorrubicina, camptotecina, etoposídeo, mitoxantrona, metotrexato, menadiona, plumbagina, juglone, beta- lapercona, ciclosporina, sulfasalazina, esteroide, rapamicina, retinoide, docetaxel, colchicina, oligonucleotídeo antissenso e ribozima.

[0092] Em certas modalidades, os fucanos purificados/modificados aqui podem ter um teor de acetila menor do que cerca de 5% em p/p, menos do que cerca de 2% em p/p e cerca de 0% em p/p. Em algumas modalidades, os fucanos purificados/modificados aqui compreendem substancialmente 0% em p/p de teor de acetila quando medido por coerência quântica múltipla heteronuclear 2D 1H-13C a 70 °C com supressão de sinal de solvente em um espectrômetro de 600 MHz equipado com sonda fria de 5 mm, em a faixa de 10-30 ppm na dimensão de carbono, em 8 incrementos de 256-512 varreduras cada. Métodos

[0093] Métodos, sistemas, etc., são fornecidos para purificar e/ou modificar um fucano, por exemplo, a partir de uma composição de fucano de partida compreendendo fucanos, por exemplo, uma composição de matéria-prima de fucano ou outras composições contendo fucano. “Impurezas”, quando aqui usado, referem-se a qualquer componente do fucano que não seja fucose, galactose, sulfato ou um contraíon, e a qualquer componente não fucano ou composto ou substância presente em uma composição compreendendo um fucano.

Impurezas podem ser ligadas ao fucano, por exemplo, proteínas ionicamente e/ou quimicamente ligadas ao fucano, resíduos de açúcar que não sejam fucose e galactose que fazem parte da estrutura polimérica do fucano, outros sacarídeos quimicamente ligados ao fucano e não fucano impurezas que não estão ligadas ao fucano, mas estão presentes em uma composição de fucano de partida, como uma composição de fucano matéria-prima.

Exemplos de tais impurezas incluem, mas não estão limitados a particulados, lipídeos, ácidos graxos, florotaninos, laminarinas, alginatos, proteínas, produtos de reação de Maillard, fucoxantina, clorofila, bactérias, componentes celulares e DNA, vários dos quais contêm cromóforos e resultam na presença de cores marrom, amarelo e verde nas composições de fucano de partida e várias das quais podem ser ionicamente e/ou quimicamente ligadas a ou parte do fucano na composição de fucano de partida.

Em certas modalidades, os métodos, etc., aqui podem ser usados para preparar fucanos purificados/modificados compreendendo pelo menos cerca de 88% em p/p, 89% em p/p, 90% em p/p, 91% em p/p, 92% em p/p, 93% em p/p, 94% em p/p, 95% em p/p, 96% em p/p, 97% em p/p, 97,1% em p/p, 98% em p/p, 98,8% em p/p, 99% em p/p, 99,5% em p/p, ou 99,9% em p/p de fucose, galactose, sulfato e contraíons.

Em algumas modalidades, o fucano purificado/modificado compreende pelo menos cerca de 75%, 78%, 80%, 82% ou 84% em p/p de fucose, galactose e sulfato.

Em algumas modalidades, o fucano purificado/modificado compreende menos que cerca de 0,1%, 0,5%, 1%, 2,9%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11% ou 12% em p/p de impurezas.

Algumas dessas impurezas podem causar complicações perigosas no uso médico e/ou cirúrgico de fucanos.

[0094] Em algumas modalidades, a descrição atual apresenta fucanos purificados/modificados com baixos níveis de impurezas que são adequados para aplicações médicas e cirúrgicas, por exemplo, a prevenção de aderências fibrosas.

[0095] Os parágrafos a seguir se voltam para uma breve discussão geral de algumas das metodologias que podem ser usadas para criar os fucanos purificados/modificados aqui. Floculação fisicamente induzida

[0096] Uma composição de fucano de partida, tal como uma composição de fucano matéria-prima, compreendendo altos níveis de impurezas sofre uma floculação de impurezas, que pode ser uma floculação fisicamente induzida. O método pode compreender: fornecer uma composição de fucano de partida; adicionar um auxiliar de floculação à composição de fucano de partida para produzir uma mistura de reação; flocular as impurezas na composição de fucano de partida por aquecimento da mistura de reação; separar as impurezas floculadas da mistura de reação; e coletar o fucano purificado/modificado desejado após a separação.

[0097] A floculação das impurezas por aquecimento da mistura de reação pode compreender o aquecimento da mistura de reação enquanto a mistura de reação é submetida a uma pressão superior à pressão atmosférica. Auxiliares de floculação adequados incluem, sem limitação, sais e/ou bases, por exemplo, cloretos, brometos, iodetos, fluoretos, sulfatos, sulfitos, carbonatos, bicarbonatos, fosfatos, nitratos, nitritos, acetatos, citratos, silicatos, óxidos, hidróxidos e/ou cianetos de um metal alcalino, metal alcalino-terroso, alumínio e/ou amônio, por exemplo, cloreto de sódio, sulfato de sódio, cloreto de potássio, sulfato de cálcio, fosfato de sódio, nitrato de sódio, cloreto de lítio, nitrato de lítio, cloreto de amônio, carbonato de sódio, hidróxido de sódio . A separação das impurezas floculadas da mistura de reação pode compreender um ou mais dentre centrifugação, filtragem, sedimentação ou separação por fluxo hidrodinâmico da mistura de reação.

[0098] Os métodos, etc., aqui podem compreender ainda a dessalinização da composição de fucano de partida antes de adicionar um auxiliar de floculação. A dessalinização pode compreender a diafiltração da composição de fucano de partida como uma solução em água através de um filtro de filtração de fluxo tangencial de redução de peso molecular (MWCO) (TFF). A diafiltração pode compreender a diafiltração da composição de fucano de partida com água destilada. O filtro de TFF de redução de peso molecular pode ter uma redução de peso molecular menor do que um ponto ou alvo de separação de peso molecular desejado em ou para o fucano purificado/modificado, por exemplo, uma redução de peso molecular de 50 kDa, 70 kDa, 100 kDa, 200 kDa, 300 kDa, 500 kDa ou 1000 kDa.

[0099] O método pode ser executado em ambientes básicos e neutros. A adição de um auxiliar de floculação à composição de fucano de partida pode, portanto, compreender tornar a composição de fucano de partida básica para prevenir ou inibir a degradação do fucano na composição de fucano de partida, porque os fucanos são propensos à degradação em ambientes ácidos. Em outras modalidades, o método pode ser realizado mantendo a mistura de reação em ou próximo a um pH de 7 ou mais.

[00100] Em algumas modalidades, a composição de fucano de partida pode ser fornecida como uma solução. Exemplos de fucanos adequados para o tratamento pelo método acima inclui, sem limitação, fucoidano, e a concentração do fucano em solução pode estar entre 0,01% em p/v e 50% em p/v. As impurezas que podem ser removidas pelo método acima incluem, sem limitação, particulados, lipídeos, ácidos graxos, florotaninos, laminarinas, alginatos, proteínas, produtos de reação de Maillard, fucoxantina, clorofila, bactérias, componentes celulares e DNA. Extração de fase sólida

[00101] Os fucanos em uma composição de fucano de partida, como uma composição de fucano matéria-prima contendo níveis indesejáveis de impurezas, incluindo níveis muito elevados de impurezas, como em uma composição de matéria-prima bruta, são submetidos a uma extração em fase sólida. Os métodos podem compreender: fornecer na forma sólida uma composição de fucano de partida compreendendo impurezas e um meio de extração incapaz de dissolver fucanos, configurado para dissolver as impurezas; misturar a composição de fucano de partida com o meio de extração para formar uma mistura de uma composição de fucano sólido não dissolvido e um meio de extração, o meio de extração contendo impurezas dissolvidas; separar o fucano de estado sólido não dissolvido purificado do meio de extração contendo impurezas dissolvidas; e coleta do fucano purificado/modificado como um sólido após a remoção do fucano purificado/modificado do meio de extração. A separação pode compreender um ou mais de, por exemplo, centrifugação, filtração, sedimentação e separação de fluido hidrodinâmico.

[00102] Os meios de extração podem compreender, por exemplo, um ou mais dentre uma base, um detergente e um agente oxidante. Os meios de extração adequados que não dissolvem o fucano incluem solventes orgânicos com uma polaridade relativa menor do que 0,765, por exemplo, etanol, isopropanol, metanol, benzeno, éter dietílico, decametilciclopentassiloxano, acetato de etila, butanol, hexano, heptano, heptanol, octanol e decanol. As bases adequadas incluem, sem limitação, hidróxido de sódio, hidróxido de potássio, hidróxido de lítio e hidróxido de cálcio. Os agentes oxidantes adequados incluem, sem limitação, um ou mais dentre peróxido de hidrogênio, peróxido de ureia e alvejantes oxidantes, incluindo hipoclorito de sódio. Os detergentes adequados incluem, sem limitação, tensoativos não iônicos, por exemplo, as gamas de detergentes Tween®, Brij® e Triton®; tensoativos aniônicos, por exemplo, dodecilsulfato de sódio (SDS), desoxicolato de sódio; e tensoativos catiônicos, por exemplo, cloreto de benzalcônio (BAC). Fucanos particulares que se prestam aos métodos aqui incluem, mas não estão limitados a fucoidano. A mistura da composição de fucano original, por exemplo, de partida, com o meio de extração pode se estender de um minuto a 120 horas.

[00103] Os métodos podem compreender ainda a dessalinização da composição de fucano de partida antes de fornecer na forma sólida a composição de fucano de partida. A dessalinização pode compreender a diafiltração da composição de fucano de partida como uma solução em água através de um filtro de filtração de fluxo tangencial de redução de peso molecular (MWCO) (TFF). A diafiltração pode compreender a diafiltração da composição de fucano de partida com água destilada. O filtro de TFF de redução de peso molecular pode ter uma redução de peso molecular menor do que um ponto ou alvo de separação de peso molecular desejado em ou para o fucano purificado/modificado, por exemplo, uma redução de peso molecular de 50 kDa, 70 kDa, 100 kDa, 200 kDa, 300 kDa, 500 kDa ou 1000 kDa. A diafiltração pode compreender ainda a pré-filtração da composição de fucano de partida através de um pré-filtro adequado para remover o material particulado. O método pode ainda compreender a liofilização de uma composição de fucano de partida adequada em solução antes de fornecer na forma sólida a composição de fucano de partida. O método pode compreender ainda a precipitação de uma solução de uma composição de fucano de partida adequada antes de fornecer na forma sólida a composição de fucano de partida. Os precipitantes adequados incluem, sem limitação, etanol, isopropanol, propanol, acetona, metanol, dimetilsulfóxido, dimetilformamida, etileno glicol, tetra-hidrofurano, acetonitrila, glima, diglima, dioxano, a solubilidade do fucano diminuindo conforme a polaridade do fluido precipitante diminui. As impurezas que podem ser removidas pelo método acima incluem, sem limitação, particulados, lipídeos, ácidos graxos, florotaninos, laminarinas, alginatos, proteínas, produtos de reação de Maillard, fucoxantina, clorofila, bactérias, componentes celulares e DNA. Precipitação quimicamente induzida

[00104] Uma composição de fucano de partida, tal como uma composição de fucano matéria-prima, contendo altos níveis de impurezas incluindo, por exemplo, partículas suspensas, sofre uma precipitação de impurezas quimicamente induzida. Em certas modalidades, os métodos podem compreender: fornecer uma composição de fucano de partida em uma solução de partida; precipitar as impurezas da solução de partida por meio de um precipitante de impureza multivalente iônico para fornecer uma mistura de impurezas suspensas, impurezas precipitadas e sobrenadante; separando as impurezas suspensas e impurezas precipitadas da solução de sobrenadante; e coletar a solução de sobrenadante compreendendo o fucano purificado/modificado desejado após separação das impurezas suspensas e impurezas precipitadas do sobrenadante.

[00105] Os precipitantes de impurezas adequados incluem sais multivalentes iônicos e/ou bases de cátions divalentes e trivalentes. Exemplos de tais sais adequados incluem, sem limitação, cloretos, brometos, iodetos, fluoretos, sulfatos, sulfitos, carbonatos, bicarbonatos, fosfatos, nitratos, nitritos, acetatos, citratos, silicatos e/ou cianetos de metais alcalino-terrosos, zinco, alumínio, cobre e ferro. Exemplos de tais bases adequadas incluem, sem limitação, hidróxidos e/ou óxidos de metais alcalino-terrosos, zinco, alumínio, cobre e/ou ferro. Separar as impurezas suspensas e as impurezas precipitadas da solução do sobrenadante pode compreender a floculação das impurezas na mistura. Os floculantes adequados incluem, sem limitação, sulfato de alumínio e potássio; sulfato de sódio e alumínio; sulfato de amônio e alumínio; cloreto de cálcio; fosfato de sódio; hidróxido de alumínio; cloreto de alumínio; cloreto férrico; sulfato férrico; sulfato ferroso; silicato de sódio; silicato de cálcio; fosfato de cálcio; cloreto de zinco; carbonato de cálcio; bicarbonato de cálcio; sulfato de potássio; fosfato de magnésio; acrilamidas; ácido acrílico; cloridrato de alumínio; cloreto de polialumínio; taninos; formaldeído; melamina; cloreto de metila de N,N-dimetilaminoetil acrilato; quaternário de cloreto de metila de N,N-dimetilaminoetil metacrilato; e cloreto de polidialildimetil-amônio. Como pode ser visto na lista anterior de floculantes, em algumas modalidades, o floculante pode ser o precipitante de impureza. A separação das impurezas precipitadas, suspensas e/ou floculadas da solução de sobrenadante pode compreender pelo menos um dentre centrifugação, filtragem, sedimentação e separação por fluxo hidrodinâmico da mistura de impurezas e a solução de sobrenadante.

[00106] Os métodos podem compreender ainda a dessalinização da composição de fucano de partida antes de fornecer a composição de fucano de partida. A dessalinização pode compreender a diafiltração da composição de fucano de partida como uma solução aquosa através de um filtro de TFF. A diafiltração pode compreender a diafiltração da composição de fucano de partida com água destilada. A diafiltração pode compreender a diafiltração da composição de fucano de partida através de um filtro de TFF com uma MWCO de 5 kDa, 10 kDa, 30 kDa, 50 kDa, 70 kDa ou 100 kDa. A diafiltração pode compreender ainda a pré-filtração da composição de fucano de partida através de um pré-filtro adequado para remover o material particulado.

[00107] Os métodos podem compreender ainda manter um pH entre cerca de 7 e 14 para inibir ou prevenir a degradação de fucanos em ambientes ácidos. A manutenção do pH entre cerca de 7 e 14 pode compreender a adição de uma base adequada, por exemplo, hidróxido de sódio. Uma base adequada pode ser adicionada à composição de fucano de partida antes de precipitar as impurezas da solução por meio de um precipitante de impureza multivalente iônico. Em outras modalidades, uma base adequada pode ser adicionada à mistura de impurezas precipitadas e solução de sobrenadante após a precipitação de impurezas da solução por meio de um precipitante de impureza multivalente iônico. Em ainda outras modalidades, uma base adequada pode ser adicionada à solução de sobrenadante após a separação das impurezas suspensas e impurezas precipitadas da solução de sobrenadante.

[00108] Exemplos de fucanos adequados para tratamento pelo método acima incluem, sem limitação, fucoidano, e a concentração do fucano em solução pode estar entre 0,01% em p/v e 50% em p/v. As impurezas que podem ser removidas pelo método acima incluem, sem limitação, particulados, lipídeos, ácidos graxos, florotaninos, laminarinas, alginatos, proteínas, produtos de reação de Maillard, fucoxantina, clorofila, bactérias, componentes celulares e DNA. Lise e floculação

[00109] Uma composição de fucano de partida, como uma composição de fucano matéria-prima, contendo altos níveis de impurezas sofre lise e floculação. Os métodos neste exemplo podem compreender: fornecer uma composição de fucano de partida; tornar a composição de fucano de partida alcalina; adicionar à composição de fucano de partida um agente de ruptura celular para produzir uma mistura de reação, o agente de ruptura celular lisando componentes celulares na composição de fucano de partida e liberando na mistura de reação alcalina lisados compreendendo componentes biomoleculares; remover da mistura de reação o agente de ruptura celular e pelo menos uma porção das impurezas para deixar não degradado o fucano purificado desejado.

[00110] A remoção do agente de ruptura celular pode compreender qualquer um ou mais dentre precipitação, floculação, filtração de fluxo tangencial, separação de fase micelar, adsorção iônica e adsorção hidrofóbica. A remoção de impurezas pode compreender qualquer um ou mais de precipitação, floculação, filtração de fluxo tangencial, separação de fase micelar, adsorção iônica e hidropsorção. Qualquer um desses métodos de remoção ou combinações de métodos de remoção pode compreender centrifugação, filtragem, sedimentação ou separação de fluxo hidrodinâmico de qualquer mistura de fases sólidas e líquidas.

[00111] Os agentes desreguladores celulares adequados incluem, sem limitação, detergentes aniônicos, não iônicos e catiônicos, por exemplo, dodecil sulfato de sódio (SDS), cloreto de benzalcônio, Triton X 100®, Triton X 114®, detergentes Brij®, detergentes Tween®, desoxicolato de sódio e alquilbenzenossulfonatos.

[00112] Em uma modalidade dos métodos, o agente de ruptura celular é dodecilsulfato de sódio (SDS) e a remoção do agente de ruptura celular compreende a adição de um precipitante para tornar o agente de ruptura celular insolúvel na mistura de reação alcalina e, desse modo, precipitar o agente de ruptura celular. Nesta modalidade, a remoção do agente de ruptura celular pode ainda compreender adicionar um floculante à mistura de reação para flocular o agente de ruptura celular precipitado e junto com ele pelo menos uma porção das impurezas. A remoção do agente de ruptura celular pode ainda compreender a centrifugação após a floculação.

[00113] Os precipitantes adequados para dodecilsulfato de sódio e alquilbenzenossulfonatos incluem, sem limitação, hidróxido de potássio, cloreto de potássio, cloreto de cálcio, carbonato de cálcio e cloreto de bário. Os floculantes adequados incluem, sem limitação, sulfato de alumínio e potássio; sulfato de sódio e alumínio; sulfato de amônio e alumínio; cloreto de cálcio; fosfato de sódio; hidróxido de alumínio; cloreto de alumínio; cloreto férrico; sulfato férrico; sulfato ferroso; silicato de sódio; silicato de cálcio; fosfato de cálcio; cloreto de zinco; carbonato de cálcio; bicarbonato de cálcio; sulfato de potássio; fosfato de magnésio; acrilamidas; ácido acrílico; cloridrato de alumínio; cloreto de polialumínio; taninos; formaldeído; melamina; cloreto de metila de N,N-dimetilaminoetil acrilato; quaternário de cloreto de metila de N,N-dimetilaminoetil metacrilato; e cloreto de polidialildimetil- amônio.

[00114] Deve ser entendido aqui que o agente de ruptura celular pode sofrer uma mudança no processo de precipitação. Por exemplo, sem limitação, se o agente de ruptura celular for dodecil sulfato de sódio (SDS), o precipitante pode ser hidróxido de potássio (KOH) e o cátion de sódio pode ser substituído como parte do processo de precipitação por potássio, o dodecil sulfato de potássio resultante sendo insolúvel na mistura de reação e, assim, precipitando. O dodecil sulfato de cátion, que funcionalmente é a porção de ruptura celular do SDS, permanece intacto neste processo.

[00115] Em ainda outras modalidades dos métodos, o agente de ruptura celular pode ser um ou mais dentre dodecil sulfato de sódio (SDS) e desoxicolato de sódio e a remoção do agente de ruptura celular compreende adsorção aniônica. A adsorção aniônica pode compreender a adição de um adsorvente carregado positivamente adequado por um período de tempo adequado, seguido pela remoção do adsorvente. A adsorção aniônica pode compreender ainda o fluxo da mistura de reação sobre uma coluna ou filtro acondicionado com um adsorvente carregado positivamente adequado a uma taxa de fluxo adequada.

[00116] Em ainda outras modalidades dos métodos, o agente de ruptura celular pode ser cloreto de benzalcônio e a remoção do agente de ruptura celular compreende a adsorção catiônica. A adsorção catiônica pode compreender a adição de um adsorvente carregado negativamente adequado por um período de tempo adequado, seguido pela remoção do adsorvente. A adsorção catiônica pode compreender ainda o fluxo da mistura de reação sobre uma coluna ou filtro acondicionado com um adsorvente carregado negativamente adequado a uma taxa de fluxo adequada.

[00117] Em ainda outras modalidades dos métodos, o agente de ruptura celular pode ser um ou mais dentre os detergentes Triton X 100®, Triton X 114®, Brij® e Tween® e a remoção do agente de ruptura celular compreende a separação da fase micelar. A separação de fase micelar pode compreender a alteração da temperatura da mistura de reação de modo que a temperatura da mistura de reação exceda o ponto de turvação do agente de ruptura celular. A separação de fase micelar pode compreender a centrifugação da mistura de reação para obter a separação de fase desejada.

[00118] Em outras modalidades de métodos, o agente de ruptura celular pode ser qualquer um ou mais de dodecil sulfato de sódio (SDS), cloreto de benzalcônio, Triton X 100®, Triton X 114®, detergentes Brij®, detergentes Tween®, desoxicolato de sódio e alquilbenzenossulfonatos, e a remoção do agente de ruptura celular compreendem um ou mais dentre adsorção hidrofóbica e uma combinação de diluição e filtração de fluxo tangencial (TFF). A adsorção hidrofóbica pode compreender a adição de um adsorvente hidrofóbico adequado por um período de tempo adequado, seguido pela remoção do adsorvente. A adsorção hidrofóbica pode compreender fluir a mistura de reação sobre uma coluna ou filtro acondicionado com um adsorvente hidrofóbico adequado a uma taxa de fluxo adequada. A remoção por diluição e TFF pode compreender diluir a mistura de reação de modo que o agente de ruptura celular caia abaixo de sua concentração micelar crítica e, assim, possa ser removido por meio de filtração de fluxo tangencial sobre um filtro de TFF de redução de peso molecular adequada (MWCO) que permite a permeação do agente de ruptura celular a partir de um retentado contendo fucano. A remoção por diluição e TFF pode envolver a diafiltração da mistura de reação sobre o filtro de TFF com um número adequado de diavolumes.

[00119] Os métodos podem compreender ainda a adição de um agente quelante à mistura de reação para quelar cátions multivalentes livres na mistura de reação. O agente quelante pode ser adicionado após fornecer a composição de fucano de partida e antes da remoção do agente de ruptura celular. Os métodos podem compreender ainda a extinção de oxidantes na mistura de reação. A extinção de oxidantes pode compreender a adição de um agente de extinção de oxidante à mistura de reação antes ou após a remoção do agente de ruptura celular.

[00120] Os métodos podem compreender a adição de um agente bacteriostático à mistura de reação. O agente bacteriostático pode ser adicionado após fornecer a composição de fucano de partida e antes da remoção do agente de ruptura celular. Os agentes bacteriostáticos adequados incluem, sem limitação, sulfito de sódio, ácido etilenodiaminatetraacético (EDTA), cloreto de benzalcônio, etanol e tioureia.

[00121] Os agentes quelantes adequados incluem, sem limitação, ácido etilenodiaminatetracético (EDTA), 2,3-dimercapto-1-propanol, etilenodiamina, porfina e ácido cítrico. Os agentes de extinção de oxidantes adequados incluem, sem limitação, sais de sulfito, nitrito e fosfito. Como é evidente a partir do acima, vários dos compostos listados podem ter mais de uma função nos métodos.

[00122] Os adsorventes hidrofóbicos adequados incluem, sem limitação, carvão ativado, terra de diatomácea, resinas não iônicas de éster acrílico, resinas não iônicas de poliestireno, resinas não iônicas de estireno-divinilbenzeno (DVB). Os adsorventes aniônicos adequados incluem, sem limitação: resinas de estireno-DVB funcionalizadas com amina, resinas de metacrilato funcionalizadas com amina, resinas de metacrilato de metila funcionalizadas com amina, resinas de metacrilato de butil funcionalizadas com amina, resinas de agarose funcionalizadas com amina, resinas de dextrano funcionalizadas com amina, resinas de cerâmica funcionalizadas com silicato de amina funcionalizadas e agente de remoção de lipídeos (LRA).

[00123] Em algumas modalidades, a composição de fucano de partida pode ser fornecida como uma solução. Exemplos de fucanos adequados para tratamento pelo método acima incluem, sem limitação, fucoidano. A composição de fucano de partida pode ter uma concentração de fucano em solução superior a 0,1% em p/v e menor do que 30% em p/v. O agente de ruptura celular pode ter uma concentração em solução superior a 0,1% em p/v e menor do que 60% em p/v. As impurezas que podem ser removidas pelo método acima incluem, sem limitação, particulados, lipídeos, ácidos graxos, florotaninos, laminarinas, alginatos, proteínas, produtos de reação de Maillard, fucoxantina, clorofila, bactérias, componentes celulares e DNA.

Extração líquido-líquido

[00124] Os fucanos em uma composição de fucano de partida, como uma composição de fucano matéria-prima contendo níveis indesejáveis de impurezas, são submetidos à extração líquido-líquido. Os métodos podem compreender: fornecer a composição de fucano de partida em uma solução de partida aquosa; misturar a solução de partida com um solvente orgânico para obter uma mistura de fase orgânica aquosa tendo uma porção aquosa compreendendo um fucano purificado/modificado e uma porção orgânica compreendendo impurezas hidrofóbicas; separar a porção aquosa da porção orgânica; e coletar a porção aquosa compreendendo o fucano purificado/modificado.

[00125] Os métodos podem compreender ainda a dessalinização da composição de fucano de partida antes de misturar com a solução aquosa de partida um solvente orgânico. A dessalinização pode compreender a diafiltração da composição de fucano de partida como uma solução em água através de um filtro de filtração de fluxo tangencial de redução de peso molecular (MWCO) (TFF). A diafiltração pode compreender a diafiltração da composição de fucano de partida com água destilada. O filtro de TFF de redução de peso molecular pode ter uma redução de peso molecular menor do que um ponto ou alvo de separação de peso molecular desejado em ou para o fucano purificado/modificado, por exemplo, uma redução de peso molecular de 5 kDa, 10 kDa, 30 kDa, 50 kDa, 70 kDa, 100 kDa, 200 kDa, 300 kDa, 500 kDa ou 1000 kDa. A diafiltração pode compreender ainda a pré-filtração da composição de fucano de partida através de um pré-filtro adequado para remover o material particulado.

[00126] A mistura da solução aquosa de partida com um solvente orgânico pode compreender agitar a mistura de solvente orgânico- aquoso, agitar a mistura de solvente orgânico-aquoso, expor a mistura de solvente orgânico-aquoso a cisalhamento elevado, recircular a fase aquosa na fase orgânica e recircular a fase orgânica na fase aquosa.

[00127] Separar a porção aquosa da porção orgânica pode compreender pelo menos um dentre pelo menos umrifugação, decantação, separação por funil de separação e separação por fluxo hidrodinâmico.

[00128] Os solventes orgânicos adequados para uso com este método incluem solventes orgânicos com uma polaridade relativa menor do que 0,765, por exemplo, heptano, acetato de isobutila, anisol, acetato de isopropila, 1-butanol, acetato de butila, metilisobutilcetona, pentano, 1-pentanol, acetato de etila, éter etílico e acetato de propila. A fase orgânica pode conter impurezas, por exemplo, sem limitação, lipídeos, ácidos graxos, florotanino, proteínas, fucoxantina e/ou clorofila. Diafiltração

[00129] Fucanos em uma composição de fucano de partida, como uma composição de fucano matéria-prima contendo níveis indesejáveis de impurezas, sofre diafiltração. Os métodos podem compreender: submeter a composição de fucano de partida em uma solução de partida à diafiltração com uma solução de agente quelante através de um primeiro filtro de filtração de fluxo tangencial para produzir uma primeira composição de fucano retentado e uma solução permeada de componentes catiônicos quelados; e submeter a primeira composição de fucano retentado à diafiltração com uma solução de diafiltração secundária através de um segundo filtro de filtração de fluxo tangencial para separar o agente quelante residual da primeira composição de fucano retentado, produzindo uma segunda composição de fucano retentado compreendendo o fucano purificado/modificado desejado. Submeter a primeira composição de fucano retentado à diafiltração através de um segundo filtro de filtração de fluxo tangencial pode compreender submeter a primeira composição de fucano retentado à diafiltração através do primeiro filtro de filtração de fluxo. Ou seja, o mesmo filtro pode ser usado em ambos os processos de diafiltração.

[00130] Submeter a composição de fucano de partida à diafiltração pode compreender a pré-filtração da composição de fucano de partida através de um pré-filtro para remover matéria particulada indesejada. Submeter a composição de fucano de partida à diafiltração com um agente quelante pode compreender submeter a composição de fucano de partida à diafiltração com um de ácido etilenodiamina-tetraacético (EDTA), 2,3-dimercapto-1-propanol, etilenodiamina, porfina ou ácido cítrico.

[00131] A composição de fucano de partida pode ter uma concentração de fucano em solução superior a 0,1% em p/v e menor do que 30% em p/v. O agente quelante pode ter uma concentração em solução superior a 0,1% em p/v e menor do que 60% em p/v. As composições de primeiro e/ou segundo retentado resultantes podem compreender um teor catiônico que consiste essencialmente em sódio e/ou potássio.

[00132] A FIG.1 mostra um diagrama esquemático de um sistema de modificação de teor catiônico 1200 para obter uma modificação do teor catiônico e/ou nível de uma composição de fucano de partida. Uma composição de fucano de partida em solução é fornecida através da linha de alimentação de entrada 1202 para o vaso de fucano 1216. O fucoidano de partida em um solvente adequado pode ser pré-filtrado através do pré-filtro 1204 para remover qualquer matéria particulada indesejada. O calibre do pré-filtro será tipicamente maior do que as maiores moléculas de polímero a serem separadas por meio do sistema de modificação de teor catiônico 1200.

[00133] A bomba de entrada de TFF 1214 bombeia a composição de fucano para o filtro de TFF 1210 através da linha de alimentação TFF 1212. O filtro de TFF 1210 é normalmente fornecido como um cassete projetado para permitir que um fluido de entrada fornecido a ele passe sobre seu filtro em seu lado retentado, enquanto permite um permeado para sair por meio de uma linha de saída e o fluido de entrada tratado para sair como retentado por meio de outra linha de saída. A bomba de entrada de TFF 1214 fornece um nível de pressão sobre o filtro de TFF 1210 entre seus lados de retentado e permeado. Na FIG.1, o retentado do filtro de TFF 1210 é retornado ao vaso de fucano 1216 via linha de retorno de retentado TFF 1218 e válvula de retentado TFF 1217, enquanto o permeado é produzido através da linha de saída de permeado de TFF 1219 para uso fora do sistema de modificação de teor catiônico 1200 ou para ser descartado.

[00134] Enquanto a bomba de entrada de TFF 1214 recircula o fucoidano pré-filtrado e o retentado sobre o filtro de TFF 1210, um agente quelante, por exemplo, sem limitação, um dentre ácido etilenodiamina-tetraacético (EDTA), 2,3-dimercapto-1-propanol, etileno diamina, porfina ou ácido cítrico, pode ser adicionado à composição de fucano de partida no vaso de fucano 1216 do primeiro recipiente de solução de diafiltração 1220 através da primeira linha de fornecimento de solução de diafiltração 1225. O agente quelante é usado para repor o solvente perdido através do permeado na linha de saída de permeado de TFF 1219 e/ou para garantir que um número predeterminado de diavolumes de fucano de entrada e agente quelante circulem sobre o filtro de TFF 1210. O agente quelante sequestra os cátions na composição de fucano de partida, em particular cátions multivalentes, como quelatos que então passam através do filtro de TFF 1210 para o permeado. Ao controlar a primeira válvula de solução de diafiltração 1224, o agente quelante pode ser adicionado em um processo de pulso. Em outras modalidades, o agente quelante pode ser adicionado em um modo contínuo. O número de diavolumes de agente quelante para processar através do filtro de TFF 1210 pode ser predeterminado. O processo pode ser continuado por umperíodo de tempo predeterminado, por exemplo, entre cerca de 1 e cerca de 6 horas, entre cerca de 3 e cerca de 12 horas e entre cerca de 10 e cerca de 24 horas. O processo pode ser continuado para um número predeterminado de diavolumes do agente quelante, por exemplo, entre cerca de 1 e cerca de 4 diavolumes, entre cerca de 3 e cerca de 6 diavolumes, entre cerca de 5 e cerca de 10 diavolumes e entre cerca de 7 e cerca de 20 diavolumes. O processo pode ser continuado e o teor catiônico no vaso de fucano 1216 pode ser medido e o processo de TFF terminado quando um teor catiônico desejado foi atingido, por exemplo, um teor catiônico compreendendo abaixo de 10 partes por milhão (ppm), abaixo de 1 ppm, abaixo de 0,1 ppm e abaixo de 0,01 ppm de cátions multivalentes. A diafiltração da composição de fucano de partida em solução através do filtro de TFF 1210 com a primeira solução de diafiltração proporciona uma primeira composição de fucano retentado com um teor catiônico modificado.

[00135] A próxima etapa no processo é remover o agente quelante restante da primeira composição de fucano retentado no vaso de fucano 1216. Isso pode ser feito fechando a primeira válvula de solução de diafiltração 1224, válvula de saída do sistema de modificação de teor catiônico 1206 e permitindo uma solução de diafiltração secundária de segundo recipiente de solução de diafiltração 1230 para entrar no vaso de fucano 1216 através da segunda linha de fornecimento de solução de diafiltração 1235 e segunda válvula de solução de diafiltração 1234. A mistura no vaso de fucano 1216 é então submetida a TFF através do filtro de TFF 1210 como antes via linha de fornecimento de TFF 1212, bomba de entrada de TFF 1214, linha de retorno de retentado TFF 1218 e válvula de retentado TFF 1217. A solução de diafiltração secundária pode compreender, por exemplo, sem limitação, qualquer um ou mais dentre água desionizada, uma solução de um agente bacteriostático e um sal. O agente bacteriostático pode ser, por exemplo, sem limitação, sulfito de sódio, EDTA, cloreto de benzalcônio, etanol, tioureia. Os sais adequados incluem, sem limitação, cloreto de sódio, cloreto de potássio, fosfato de sódio, bicarbonato de amônio, solução salina tamponada com fosfato.

[00136] A solução de diafiltração secundária é usada para repor o solvente perdido através do permeado na linha de saída de permeado de TFF 1219 e/ou para garantir que um número predeterminado de diavolumes da primeira composição de fucano retentado e solução de diafiltração secundária circulem sobre o filtro de TFF 1210. Controlando a segunda válvula de solução de diafiltração 1234, a solução de diafiltração secundária pode ser adicionada em um processo de pulso. Em outras modalidades, a solução de diafiltração secundária pode ser adicionada em um modo contínuo. O número de diavolumes de solução de diafiltração secundária para processar sobre o filtro de TFF 1210 pode ser predeterminado. O processo pode ser continuado por um período de tempo predeterminado, por exemplo, entre cerca de 1 e cerca de 6 horas, entre cerca de 3 e cerca de 12 horas e entre cerca de 10 e cerca de 24 horas. O processo pode ser continuado para um número predeterminado de diavolumes do agente quelante, por exemplo, entre cerca de 1 e cerca de 4 diavolumes, entre cerca de 3 e cerca de 6 diavolumes, entre cerca de 5 e cerca de 10 diavolumes e entre cerca de 7 e cerca de 20 diavolumes, por exemplo, um teor catiônico abaixo de 10 partes por milhão (ppm), abaixo de 1 ppm, abaixo de 0,1 ppm e abaixo de 0,01 ppm de cátions multivalentes. O processo pode ser continuado e a concentração de agente quelante residual no vaso de fucano 1216 pode ser medida e o processo de TFF terminado quando uma concentração de agente quelante residual adequadamente baixa for atingida, por exemplo, um nível de agente quelante residual abaixo de 10 ppm, abaixo de 1 ppm, abaixo de 0,1 ppm e abaixo de 0,01 ppm. A segunda composição de fucano de retentado resultante no vaso de fucano 1216 compreende o produto de fucano purificado/modificado do processo do sistema de modificação de teor catiônico 1200. Como desejado, a segunda composição de fucano de retentado resultante no vaso de fucano 1216 pode ser removida do vaso de fucano 1216 via linha de saída do sistema de modificação de teor catiônico 1208. Extração de fluido supercrítica

[00137] Os fucanos em uma composição de fucano, como uma composição de fucano de partida contendo níveis indesejáveis de impurezas, são submetidos a uma extração de fluido supercrítica. Os métodos podem compreender: fornecer a composição de fucano de partida como um sólido; colocar a composição de fucano de partida em um extrator supercrítico; submeter a composição de fucano de partida no extrator supercrítico a uma pressão adequada acima de 70 bar; aquecer a composição de fucano de partida no extrator supercrítico a uma temperatura adequada acima de 30 °C; encher o extrator supercrítico com um fluido supercrítico para produzir um fucano purificado/modificado e um fluido supercrítico contendo impurezas extraídas; remover o fluido supercrítico contendo impurezas extraídas do extrator supercrítico após um período de tempo predeterminado; e recuperar o fucano purificado/modificado.

[00138] Preencher o extrator supercrítico com um fluido supercrítico pode compreender o prepreencher oextrator supercrítico com dióxido de carbono. O dióxido de carbono supercrítico pode ser suplementado com etanol entre 2% em v/v e 10% em v/v. Em algumas modalidades,

o dióxido de carbono supercrítico pode ser suplementado com aproximadamente 5% em v/v de etanol como um cossolvente. Fluidos supercríticos alternativos ao dióxido de carbono para uso com este método incluem, mas não estão limitados a etanol, etano, ácido clorídrico, ácido fluorídrico, ácido sulfúrico e ácido nítrico.

[00139] Submeter o fucano de partida a uma pressão adequada pode compreender submeter a composição de fucano de partida a uma pressão entre cerca de 70 bar e cerca de 2000 bar. Submeter a composição de fucano de partida a uma temperatura adequada pode compreender submeter a composição de fucano de partida a uma temperatura entre cerca de 30 °C e cerca de 300 °C.

[00140] A remoção do fluido supercrítico contendo as impurezas extraídas após um período de tempo predeterminado pode compreender a remoção do fluido supercrítico após cerca de 5 minutos a cerca de 50 horas, por exemplo, entre cerca de 10 minutos a cerca de 1 hora, entre cerca de 30 minutos a cerca de 5 horas, entre cerca de 1 hora a cerca de 24 horas e entre cerca de 5 horas a cerca de 48 horas.

[00141] O método pode compreender ainda a dessalinização da composição de fucano de partida antes de colocar a composição de fucano de partida em um extrator supercrítico. A dessalinização pode compreender a diafiltração da composição de fucano de partida como uma solução em água através de um filtro de filtração de fluxo tangencial de redução de peso molecular (MWCO) (TFF). A diafiltração pode compreender a diafiltração da composição de fucano de partida com água destilada. O filtro de TFF de redução de peso molecular pode ter uma redução de peso molecular menor do que um ponto ou alvo de separação de peso molecular desejado em ou para o fucano purificado/modificado, por exemplo, uma redução de peso molecular de 50 kDa, 70 kDa, 100 kDa, 200 kDa, 300 kDa, 500 kDa ou

1000 kDa. A diafiltração pode compreender ainda a pré-filtração da composição de fucano de partida através de um pré-filtro adequado para remover o material particulado. Modificação Estrutural Química

[00142] Os métodos, sistemas etc. discutidos neste documento podem compreender a modificação estrutural química dos fucanos, incluindo os fucanos em uma composição de fucanos. A modificação estrutural química pode envolver a remoção de grupos funcionais do fucano, por exemplo, grupos funcionais O-acetila, N-acetila, metóxi, hidroxila, carboxílico e/ou sulfato da estrutura do fucano. A modificação estrutural química pode envolver o uso de uma ampla variedade de reagentes químicos, por exemplo, ácidos, bases, detergentes e/ou agentes oxidantes. Filtração de fluxo tangencial

[00143] Alguns dos métodos aqui discutidos utilizam filtração de fluxo tangencial (TFF). Consistente com a identificação típica de filtros de filtração de fluxo tangencial (TFF), o valor de redução de peso molecular nominal (MWCO) para um determinado filtro de TFF irá reter seletivamente em seu lado retentado uma solução contendo moléculas que não cruzaram a barreira do filtro e, portanto, geralmente têm pesos moleculares e/ou tamanhos maiores do que o peso molecular das moléculas que cruzam/permeiam a barreira para o lado do permeado. Assim, os valores de redução de peso molecular para filtros de TFF são tipicamente não absolutos para qualquer polímero ou valor de redução nominal: um determinado filtro de TFF irá passar ou reter algumas moléculas acima e abaixo da redução de peso molecular nominal. A redução real/valores seletivos e os efeitos de um filtro de TFF nominal para um polímero particular podem ser determinados rotineiramente para o polímero particular.

[00144] Vários fatores podem afetar o comportamento de permeação dos filtros de TFF. Esses fatores podem ser dependentes dos próprios filtros de TFF ou dependentes de um atributo dos polímeros alvo, por exemplo, o comportamento de dobramento e a estrutura dobrada do polímero alvo podem afetar o comportamento do polímero alvo ao cruzar/não cruzar a MWCO do filtro de TFF barreira. Em relação aos próprios filtros de TFF, como é conhecido, uma série de fatores pode afetar o comportamento de permeação dos filtros de TFF. Por exemplo, métodos de fabricação podem causar uma variedade de tamanhos de orifícios dentro do filtro de TFF específico, variedade essa que pode incluir orifícios maiores e menores do que a MWCO nominal. Assim, um filtro de TFF com um valor de redução de peso molecular nominal irá substancialmente passar/reter moléculas no valor de redução de peso molecular nominal, mas também pode passar/reter algumas moléculas abaixo e/ou acima de tal valor. Cromatografia de permeação em gel

[00145] A cromatografia de permeação em gel foi usada para avaliar as distribuições de peso molecular obtidas para os exemplos experimentais. Há um grande número de diferentes parâmetros, colunas e padrões disponíveis para uso em cromatografia de permeação em gel, resultando em uma variedade de configurações de instrumentação disponíveis para a análise de peso molecular. Para as determinações de peso molecular aqui, a GPC foi conduzida usando os seguintes parâmetros: A fase móvel era de nitrato de sódio 0,1 M conduzida a 0,6 mL/min. O compartimento da coluna e o detector estavam a 30 ⁰C. Um detector de índice refrativo Waters 2414 foi usado para detecção.

[00146] Colunas de GPC adequadas incluem colunas de GPC compatíveis com solventes aquosos, por exemplo, colunas acondicionadas com pelo menos um dentre estireno-divinilbenzeno sulfonado, rede de copolímero de acrilato funcionalizado com NH,

sílica modificada e gel à base de polimetacrilato hidroxilado. Para as análises aqui, três colunas foram usadas em série, compreendendo uma coluna de guarda de 40 mm de comprimento com um diâmetro interno (ID) de 6 mm acondicionada com gel à base de polimetacrilato hidroxilado de tamanho de partícula de 6 μm, seguido por uma primeira coluna analítica de GPC de 300 mm com uma ID de 7,8 mm acondicionada com gel à base de polimetacrilato hidroxilado de tamanho de partícula de 12 μm que tem um limite de exclusão de cerca de 7.000 kDa e uma faixa de peso molecular efetivo entre cerca de 50 kDa e cerca de 5.000 kDa, seguido por uma segunda coluna analítica de GPC de 300 mm com uma ID de 7,8 mm acondicionado com gel à base de polimetacrilato hidroxilado de tamanho de partícula de 10 μm que tem um limite de exclusão de cerca de 7.000 kDa e uma faixa de peso molecular eficaz entre cerca de 1 kDa e cerca de 6.000 kDa. A faixa de peso molecular total efetivo da coluna configurada estava entre cerca de 1 kDa e cerca de 6.000 kDa. Um exemplo dessa configuração de coluna pode ser as colunas Ultrahydrogel® guard- Ultrahydrogel® 2000-Ultrahydrogel® Linear conectadas em série.

[00147] As amostras executadas foram quantificadas contra uma curva padrão que compreende padrões rastreáveis da American Polymer Standards Corporation: DXT3755K (peso molecular máximo = 2164 kDa), DXT820K (peso molecular máximo = 745 kDa), DXT760K (peso molecular máximo = 621 kDa), DXT670K (peso molecular máximo = 401 kDa), DXT530K (peso molecular máximo = 490 kDa), DXT500K (peso molecular máximo = 390 kDa), DXT270K (peso molecular máximo = 196 kDa), DXT225K (peso molecular máximo = 213 kDa), DXT150K (peso molecular máximo = 124 kDa), DXT55K (peso molecular máximo = 50 kDa), DXT50K (peso molecular máximo = 44 kDa) e DXT5K (peso molecular máximo = 4 kDa), o peso molecular máximos desses padrões estando entre cerca de 4 kDa e cerca de 2,200 kDa. A curva padrão usada pode, por exemplo, incluir Dextrano 3755 kDa, pelo menos um dentre Dextrano 50 kDa e Dextrano 55 kDa, e entre 3 a 6 padrões rastreáveis adicionais aqui discutidos, os pontos de calibração sendo os pesos moleculares máximos dos calibrantes usados. Um exemplo de curva de calibração pode consistir em DXT3755K, DXT 820K, DXT530K, DXT500K, DXT225K e DXT55K. As colunas usadas neste documento tinham uma faixa de peso molecular total efetivo que abrangia e se estendia além da faixa de peso molecular máximo dos padrões usados para quantificação dos fucanos.

[00148] Um peso molecular declarado para um polímero de fucano/fucoidano aqui é um valor de peso molecular sobre o qual sempre haverá uma distribuição de moléculas de pesos moleculares maiores e menores, aumentando ou diminuindo em quantidade ou porcentagem conforme o peso molecular aumenta ou diminui longe de o peso molecular especificado. A distribuição pode, mas não é obrigada a ter uma forma geralmente gaussiana ou gaussiana distorcida.

[00149] Os resultados nas tabelas aqui contidas abreviaturas usadas para certas características de uma distribuição de peso molecular. A cromatografia de permeação em gel é denotada por GPC, o tempo de retenção de pico é denotado por PRT, o peso molecular máximo é denotado por PMW, o peso molecular médio é denotado por WAMW, o peso molecular médio numérico é denotado por NAMW, a distribuição percentual é denotada por% dist. , o peso molecular é denotado por MW, o índice de polidispersidade é denotado por PDI e a redução de peso molecular é denotada por MWCO. Doenças e condições Aderências fibrosas

[00150] A aderência fibrosa é um tipo de cicatriz que se forma entre duas partes do corpo, geralmente após a cirurgia (aderência cirúrgica). As aderências fibrosas podem causar problemas graves. Por exemplo, aderências fibrosas envolvendo os órgãos reprodutivos femininos (ovários, trompas de Falópio) podem causar infertilidade, dispareunia e fortes dores pélvicas. As aderências fibrosas que ocorrem no intestino podem causar obstrução ou bloqueio intestinal, e aderências fibrosas também podem se formar em outros lugares, como ao redor do coração, coluna e na mão. Além da cirurgia, as aderências fibrosas podem ser causadas, por exemplo, por endometriose, infecção, quimioterapia, radiação, trauma e câncer.

[00151] Uma variedade de aderências fibrosas é discutida neste documento. Termos como aderências cirúrgicas, aderências pós- cirúrgicas, aderências pós-operatórias, aderências devido à doença inflamatória pélvica, aderências devido a lesão mecânica, aderências devido à radiação, aderências devido ao tratamento de radiação, aderências devido a trauma e aderências devido à presença de material estranho todos os materiais referem-se à aderência de tecidos uns aos outros devido a um mecanismo similar e estão incluídos no termo aderências fibrosas.

[00152] A formação de aderências fibrosas é um processo complexo no qual os tecidos normalmente separados no corpo se transformam uns nos outros. As aderências cirúrgicas (também conhecidas como aderências pós-cirúrgicas) se desenvolvem a partir da resposta normal de cicatrização de feridas dos tecidos ao trauma e foram relatadas como ocorrendo em mais de dois terços de todos os pacientes cirúrgicos abdominais (Ellis, H., Surg. Gynecol. Obstet. 133: 497 (1971)). As consequências dessas aderências fibrosas são variadas e dependem do sítio da cirurgia ou de outro sítio, como o sítio da doença, envolvido. Os problemas podem incluir dor crônica,

obstrução dos intestinos e até mesmo um risco aumentado de morte após cirurgia cardíaca (diZerega, GS, Prog. Clin. Biol. Res. 381:1-18 (1993); diZerega, GS, Fertil. Steril. 61:219-235 (1994); Dobell, AR, Jain, AK, Ann. Thorac. Surg. 37: 273-278 (1984)). Em mulheres em idade reprodutiva, as aderências fibrosas envolvendo o útero, as trompas de falópio ou os ovários são estimados em cerca de 20% de todos os casos de infertilidade (Holtz, G., Fertil. Steril. 41:497-507 (1984); Weibel, MA e Majno, G. Am. J. Surg. 126: 345-353 (1973)).

[00153] O processo de formação de aderência fibrosa envolve inicialmente o estabelecimento de uma estrutura de fibrina e o reparo do tecido normal. O processo normal de reparo permite a fibrinólise ao lado do reparo mesotelial. No entanto, na formação de aderência fibrosa, a matriz de fibrina amadurece à medida que os fibroblastos proliferam na rede e a angiogênese ocorre resultando no estabelecimento de uma aderência fibrosa organizada em cerca de 3 a 5 dias (Buckman, RF, et al., J. Surg. Res. 21: 67-76 (1976); Raferty, AT, J. Anat. 129: 659-664 (1979)). Os processos inflamatórios incluem ativação de neutrófilos nos tecidos traumatizados, deposição de fibrina e ligação de tecidos adjacentes, invasão de macrófagos, proliferação de fibroblastos na área, deposição de colágeno, angiogênese e o estabelecimento de tecidos de aderência fibrosa permanente.

[00154] Várias tentativas foram feitas para prevenir aderências cirúrgicas. Estes envolvem abordagens farmacológicas destinadas a influenciar os eventos bioquímicos e celulares que acompanham os traumas cirúrgicos, bem como métodos de barreira para a separação dos tecidos afetados. Por exemplo, o uso de lavagem peritoneal, soluções heparinizadas, pró-coagulantes, modificação de técnicas cirúrgicas como o uso de técnicas cirúrgicas microscópicas ou laparoscópicas, a eliminação do talco das luvas cirúrgicas, o uso de suturas menores e o uso de barreiras físicas (filmes, géis ou soluções)

visando minimizar a aposição de superfícies serosas, têm tudo foi tentado. Atualmente, as terapias preventivas também incluem a prevenção da deposição de fibrina, redução da inflamação (anti- inflamatórios esteroidais e não esteroidais) e remoção dos depósitos de fibrina.

[00155] As tentativas de intervenção para prevenir a formação de aderências pós-cirúrgicas incluem o uso de técnicas de hidroflotação ou dispositivos de barreira. A hidroflotação envolve a instilação de grandes volumes de soluções de polímero, como dextrano (Adhesion Study Group, Fertil. Steril. 40:612-619 (1983)), ou carboximetilcelulose (Elkins, TE, et al., Fertil. Steril. 41:926-928 (1984)), no espaço cirúrgico na tentativa de manter os órgãos separados. Membranas de barreira sintéticas feitas de celulose regenerada oxidada (por exemplo, Interceed™), politetrafluoroetileno (membrana cirúrgica Gore-tex) e membranas totalmente reabsorvíveis feitas de uma combinação de ácido hialurônico modificado/carboximetilcelulose (HA/CMC) (Seprafilm ™) também foram usadas para reduzir a formação de aderência pós-cirúrgica em animais e humanos (Burns, JW, et al., Eur. J. Surg. Suppl. 577: 40-48 (1997); Burns, JW, et al., Fertil. Steril. 66: 814-821 (1996); Becker, JM, et al., J. Am. Coll. Surg. 183: 297-306 (1996)). O sucesso dessas membranas HA/CMC pode derivar de sua capacidade de fornecer separação de tecidos durante o processo de reparo de feridas peritoneal quando aderências fibrosas se formam. Observou-se que as membranas formavam um revestimento claro e viscoso no tecido lesionado por 3-5 dias após a aplicação, um período de tempo que é compatível com o curso de tempo de formação de aderência pós-cirúrgica (Ellis, H., Br. J. Surg. 50:10-16 (1963)). Infelizmente, o sucesso limitado foi visto com esses métodos.

[00156] A peritonite envolve inflamação do peritônio. A peritonite pode causar problemas graves. Por exemplo, dor abdominal,

sensibilidade abdominal e proteção abdominal. A peritonite pode envolver inflamação espontânea, anatômica e/ou relacionada à diálise peritoneal. A peritonite pode envolver uma infecção, por exemplo, perfuração de uma víscera oca, ruptura do peritônio, peritonite bacteriana espontânea e infecções sistêmicas podem resultar em infecção e peritonite. A peritonite também pode não envolver uma infecção, por exemplo, vazamento de fluidos corporais estéreis para o peritônio, e cirurgia abdominal estéril pode resultar em peritonite. Várias tentativas têm sido feitas para prevenir e/ou tratar a peritonite. Por exemplo, medidas gerais de suporte, como reidratação intravenosa, antibióticos e cirurgia. Existe uma necessidade não atendida de compostos, composições, métodos e similares (incluindo abordagens de entrega) para inibir, ou de outra forma tratar e/ou prevenir a peritonite, de preferência de forma mais eficaz com poucos efeitos colaterais.

[00157] Os fucanos purificados/modificados aqui discutidos podem ser usados para tratar aderências fibrosas em um paciente e podem ser incluídos como um componente de, ou ser, uma composição médica de fucano purificada/modificada, dispositivo médico, combinação ou produto farmacêutico configurado e pode ser composto por tratar aderências fibrosas. Por exemplo, uma composição médica ou dispositivo médico de fucano purificado/modificado compreendendo entre cerca de 0,02 mg/mL a cerca de 100 mg/mL, por exemplo, 0,1 mg/mL, 0,2 mg/mL, 0,3 mg/mL, 0,5 mg/mL, 0,9 mg/mL, 1 mg/mL, 2,5 mg/mL, 5 mg/mL 7,5 mg/mL, de um fucano purificado/modificado aqui dissolvido em uma solução de sal fisiológico. A solução salina fisiológica pode ser, por exemplo, Lactated Ringer’s Injection USP (LRS), soro fisiológico e solução fisiológica de Dextran.

[00158] As composições médicas de fucano purificado/modificado e dispositivos médicos, que podem ser composições e dispositivos médicos líquidos, neste documento podem conter excipientes farmaceuticamente aceitáveis, tais como tampões, estabilizadores, conservantes, adjuvantes, etc.

Tais composições médicas de fucano purificado/modificado e dispositivos médicos podem ser usado para tratar aderências fibrosas pré-, durante ou pós-cirurgia, administrando entre cerca de 0,01 mL/kg (por quilograma de peso corporal do paciente ou alvo) a cerca de 10 mL/kg ou 15 mL/kg das composições médicas ou dispositivos de fucano no parágrafo anterior.

Doses e quantidades do dispositivo incluem, por exemplo, cerca de 0,03 mL/kg, 0,1 mL/kg, 0,2 mL/kg, 0,4 mL/kg, 0,5 mL/kg, 0,6 mL/kg, 1 mL/kg, 1,2 mL/kg, 2 mL/kg, 3 mL/kg, 4 mL/kg, 5 mL/kg, 8 mL/kg, 10 mL/kg e 15 mL/kg do dispositivo médico de fucano purificado/modificado para o sítio cirúrgico de o paciente.

Em outras modalidades, tais composições médicas de fucano purificado/modificado e dispositivos médicos podem ser usados para tratar aderências fibrosas em qualquer sítio alvo selecionado, por exemplo, lesões, abrasões, sítios de lesão, sítios cirúrgicos e sítios pós-cirúrgicos por administração entre cerca de 0,04 mg/kg ou 0,1 mg/kg a cerca de 25 mg/kg ou 50 mg/kg.

Alguns exemplos de tais doses incluem, por exemplo, cerca de 0,04 mg/kg, 0,075 mg/kg, 0,1 mg/kg, 0,2 mg/kg, 0,5 mg/kg, 1 mg/kg, 1,3 mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg, 5 mg/kg, 7,5 mg/kg, 8 mg/kg, 10 mg/kg, 15 mg/kg, 20 mg/kg, 25 mg/kg e 50 mg/kg dos fucanos aqui, incluindo, por exemplo, os fucanos purificados/modificados aqui, para o sítio cirúrgico do paciente.

A administração pode ser realizada, por exemplo, instilando uma composição médica líquida ou dispositivo médico geralmente em toda a área alvo; direcionar a composição médica líquida ou dispositivo médico em um sítio específico dentro da área alvo; pulverizar a composição médica líquida ou dispositivo médico em geral ou em um sítio específico dentro da área alvo; ou pulverizar ou de outra forma distribuir a composição médica líquida ou dispositivo médico por meio de um aplicador, que pode ser um aplicador de spray através de um trocarte, cateter, endoscópio ou outro dispositivo minimamente invasivo, em um sítio específico (s) que um cirurgião ou outro médico tenha identificados como particularmente suscetíveis ou preocupantes para o desenvolvimento de aderências fibrosas. Em outro aspecto, a administração pode ser feita após a abertura da ferida cirúrgica, mas antes do procedimento cirúrgico; durante o procedimento cirúrgico ou após o procedimento cirúrgico, mas antes do fechamento da ferida cirúrgica. Se desejado, a composição médica líquida ou o dispositivo médico também podem ser administrados após a cirurgia ser concluída (por exemplo, através de uma seringa e agulha) e também podem ser administrados em sítios alvo não cirúrgicos. O sítio cirúrgico do paciente pode ser, por exemplo, pelo menos um dentre a cavidade pélvica, cavidade abdominal, cavidade dorsal, cavidade craniana, cavidade espinhal, cavidade ventral, cavidade torácica, cavidade pleural, cavidade pericárdica, pele, articulações, músculos, tendões e ligamentos. A administração do dispositivo médico de fucano purificado/modificado no sítio cirúrgico do paciente pode ser realizada em menos de cerca de 15 minutos, 10 minutos, 8 minutos, 6 minutos, 5 minutos, 4 minutos, 3 minutos, 2 minutos, 1 minuto, 45 segundos, 30 segundos, 20 segundos, 15 segundos, 10 segundos e 5 segundos.

[00159] Exemplos de administração do dispositivo médico de fucano purificado/modificado a um sítio cirúrgico incluem, sem limitação, a administração do dispositivo médico de fucano purificado/modificado no sítio cirúrgico de um procedimento cirúrgico de seção de Cesariana; um procedimento cirúrgico de reconstrução com retalho livre microvascular, um procedimento cirúrgico de enxerto de pele de espessura total, um procedimento cirúrgico de retalho de avanço V-Y, um procedimento cirúrgico de retalho de rotação fasciocutâneo, um procedimento cirúrgico de artroplastia, um procedimento cirúrgico de mastectomia, um procedimento cirúrgico de sequestrectomia, um procedimento cirúrgico de saucerização, um procedimento cirúrgico de osteotomia, um procedimento cirúrgico de osteoplastia, um procedimento cirúrgico de patelectomia, um procedimento cirúrgico de sinovectomia, um procedimento cirúrgico de capsulectomia, um procedimento cirúrgico de reparo de tendão ou ligamento, um procedimento cirúrgico de tenólise, uma cirurgia de tenotomia, um procedimento cirúrgico de fasciotomia, um procedimento cirúrgico de reparo meniscal, procedimento cirúrgico de vertebrectomia, procedimento cirúrgico de etmoidectomia, procedimento cirúrgico de operação de Caldwell Luc, procedimento cirúrgico de dacriocistorrinostomia, procedimento cirúrgico de sinéquia por lise nasal, procedimento cirúrgico de timectomia, procedimento cirúrgico de pneumonólise, procedimento cirúrgico de pneumonectomia, procedimento cirúrgico de toracoplastia, procedimento cirúrgico de bilobectomia, procedimento cirúrgico de cirurgia de hipertensão portal, procedimento cirúrgico de esplenectomia, procedimento cirúrgico de esofagectomia, procedimento cirúrgico de cirurgia de peritonite, procedimento cirúrgico de cirurgia de gastrectomia, procedimento cirúrgico de cirurgia de jejunojejunostomia, procedimento cirúrgico de colecistectomia laparoscópica, um procedimento cirúrgico de exploração laparoscópica do ducto biliar comum, um procedimento cirúrgico de gastroenterostomia, um procedimento cirúrgico de cirurgia bariátrica, um procedimento cirúrgico de ressecção e anastomose intestinal, um procedimento cirúrgico de hepatectomia segmentar, um procedimento cirúrgico de lobectomia, um procedimento cirúrgico de pancreatomia, um procedimento cirúrgico de pancreaticoduodenectomia, um procedimento cirúrgico de ressecção de tumor, um procedimento cirúrgico de nefrectomia laparoscópica, um procedimento cirúrgico de cistectomia, um procedimento cirúrgico de lise de aderência abdominal ou pélvica, um procedimento cirúrgico de histerossalpingostomia, um procedimento cirúrgico de salpingoplastia, um procedimento cirúrgico de cirurgia laparoscópica de gravidez ectópica, um procedimento cirúrgico de cirurgia de substituição de articulação, um procedimento cirúrgico de reparo de osso quebrado, um procedimento cirúrgico de histerectomia, um procedimento cirúrgico de remoção da vesícula biliar, um procedimento cirúrgico de ponte de safena, um procedimento cirúrgico de angioplastia, um procedimento cirúrgico de aterectomia, um procedimento cirúrgico de biópsia de mama, procedimento cirúrgico de endarterectomia carotídea, procedimento cirúrgico de cirurgia de catarata, um procedimento cirúrgico de desvio da artéria coronária, procedimento cirúrgico de dilatação e curetagem, procedimento cirúrgico para correção de hérnia, procedimento cirúrgico de cirurgia para dor lombar, procedimento cirúrgico de colectomia parcial, procedimento cirúrgico de prostatectomia e procedimento cirúrgico de tonsilectomia, após a abertura da ferida cirúrgica, durante a cirurgia, antes de fechar a ferida cirúrgica e/ou após o fechamento da ferida cirúrgica. Cânceres em Geral

[00160] Câncer tem sido a segunda causa de morte nos EUA e é responsável por mais de 20% de todas as mortalidades. O câncer é uma doença proliferativa caracterizada pela divisão descontrolada de certas células, que pode levar à formação de um ou mais tumores. Uma série de métodos é usada para tratar o câncer, incluindo cirurgia, radiação, quimioterapia e suas combinações. Embora a cirurgia seja um método relativamente comum usado para alguns tumores localizados, ainda há uma chance significativa de recorrência do tumor após a excisão do tumor.

[00161] O tratamento de cânceres e outras doenças proliferativas tem sido limitado pelo potencial de dano ou toxicidade a tecidos saudáveis não cancerosos. Em tratamentos de radiação e cirúrgicos, o procedimento tem sido geralmente confinado e proximal aos sítios do tumor. No entanto, pode haver risco significativo para os pacientes submetidos à remoção cirúrgica de tecidos cancerígenos (por exemplo, na remoção de tumores da próstata ou do cérebro, pode haver um risco significativo de danos não reparáveis aos tecidos vitais circundantes, por exemplo, através da redução potencial da necessidade de ressecção de tecidos não tumorais. Além disso, no tratamento de radiação focalizado, que tem sido administrado como tratamento de primeira linha para o câncer de próstata, existem riscos similares. No tratamento quimioterapêutico do câncer, a fármaco foi administrada sistemicamente, de modo que todo o corpo é exposto ao fármaco. Esses fármacos são projetados para serem tóxicos para as células cancerosas, mas também são (geralmente) tóxicos para as células não cancerosas, de modo que os pacientes ficam bastante doentes durante o tratamento com fármacos para o câncer. Por meio da experiência, os oncologistas podem dar doses desses fármacos que podem ser toleradas por alguns pacientes. No entanto, essas doses geralmente não têm sucesso no tratamento do câncer.

[00162] Um problema com qualquer método de tratamento do câncer é a recorrência do local da doença. Por exemplo, aproximadamente 700.000 americanos são diagnosticados com câncer localizado anualmente (aproximadamente 64% de todos os pacientes com câncer) e quase meio milhão são tratados com métodos cirúrgicos. Infelizmente, 32% dos pacientes tratados com cirurgia apresentam recidiva após o tratamento inicial (aproximadamente 21% recidiva no sítio cirúrgico inicial e 11% em sítios metastáticos distantes). Quase 100.000 pacientes morrem anualmente devido à recorrência localizada do câncer. Isso tem sido especialmente verdadeiro no câncer de mama, em que 39% das pacientes submetidas à mastectomia terão recorrência do local da doença.

[00163] O estadiamento é um método de avaliação do progresso do câncer (tumor sólido) em um paciente. Uma abordagem simplificada coloca os pacientes em três grupos ou estágios com base em quão longe o câncer avançou:

[00164] Estágio 1: O câncer pode ser tratado removendo cirurgicamente parte do órgão. Isso também é conhecido como estágio ressecável.

[00165] Estágio 2: O câncer já ultrapassou o ponto de ser ressecável, mas ainda está confinado ao próprio órgão.

[00166] Estágio 3: O tumor se espalhou para outros órgãos.

[00167] Muitos cânceres são tratados com agentes antiproliferativos incluindo, por exemplo, 5-fluorouracila (Efudex®), vinca alcaloides (por exemplo, vincristina (Oncovin®)), antraciclinas (por exemplo, doxorrubicina (Adriamycin®)), cisplatina (Platinol -AQ®), cloridrato de gencitabina (Gemzar®), metotrexato e paclitaxel. Alguns exemplos das toxicidades associadas aos agentes antiproliferativos, metotrexato e paclitaxel, são discutidos em outro lugar neste documento. O metotrexato tem sido usado para tratar vários cânceres, incluindo, por exemplo, câncer de bexiga, mama, cervical, cabeça e pescoço, hepático, pulmão e testicular. O paclitaxel tem sido usado para tratar vários cânceres, incluindo, por exemplo, câncer de ovário, mama e de células não pequenas de pulmão (Compendium of Pharmaceutical and Specialties Trigésima Quinta Edição, 2000).

[00168] As toxicidades devido ao 5-fluorouracila podem incluir toxicidade cardiovascular, como isquemia miocárdica; toxicidades do sistema nervoso central, como euforia, síndrome cerebelar aguda e ataxia; toxicidades dermatológicas, como alopecia e dermatite; toxicidades gastrointestinais, tais como náuseas, vômitos e ulceração oral ou gastrointestinal; toxicidades hematológicas como leucopenia, trombocitopenia e anemia; toxicidades de hipersensibilidade, como anafilaxia e hipersensibilidade de contato; toxicidades oculares como lacrimejamento aumentado, fotofobia e conjuntivite; e outras toxicidades, como febre. 5-Fluorouracila tem sido usada para tratar muitos cânceres, incluindo, por exemplo, câncer de mama, colorretal, gástrico, hepático, bexiga, cabeça e pescoço, pulmão de células não pequenas, ovário, pancreático e câncer de próstata (Compendium of Pharmaceutical and Specialties Trigésima Quinta Edição, 2000).

[00169] Toxicidades devido à vincristina incluem toxicidades do sistema nervoso central, como convulsões em crianças e alucinações; toxicidade dermatológica, como alopecia; toxicidade por extravasamento, como vesicante; toxicidades gastrointestinais, como náuseas, vômitos, constipação e estomatite; toxicidade hematológica, como mielossupressão; toxicidades neurológicas, como neuropatia periférica e neuropatia autonômica; toxicidades oculares, como visão dupla, cegueira transitória e atrofia óptica; toxicidades renais/metabólicas como retenção urinária, hiperuricemia e atonia da bexiga; toxicidade respiratória, como falta de ar; e, outra toxicidade, como febre em crianças. Este agente antiproliferativo tem sido usado para tratar vários cânceres, incluindo, por exemplo, doença de Hodgkin, de pulmão de células pequenas, tumor de Wilm e câncer testicular (Compendium of Pharmaceutical and Specialties Trigésima Quinta Edição, 2000).

[00170] As toxicidades devidas à doxorrubicina incluem toxicidades cardiovasculares, como anormalidades eletrocardiográficas e cardiomiopatia; toxicidades dermatológicas, como alopecia e alterações nas unhas; toxicidade de perigo de extravasamento, como vesicante; toxicidades gastrointestinais, tais como náuseas, vômitos e estomatite; toxicidade geniturinária, como coloração vermelha da urina; toxicidade hematológica, como mielossupressão; toxicidades de hipersensibilidade, como anafilaxia e erupção cutânea; toxicidade ocular, como conjuntivite; toxicidade reprodutiva, como infertilidade; e, outra toxicidade, como hiperuricemia. Este agente antiproliferativo tem sido usado para tratar vários cânceres incluindo, por exemplo, câncer de mama, de pulmão de pequenas células e câncer de ovário (Compendium of Pharmaceutical and Specialties Trigésima Quinta Edição, 2000).

[00171] As toxicidades devidas à cisplatina incluem toxicidade cardiovascular, como alterações eletrocardiográficas; toxicidade dermatológica, como hiperpigmentação; toxicidade de perigo de extravasamento, como irritante; toxicidades gastrointestinais, como náuseas e vômitos; toxicidades hematológicas, como mielossupressão e anemia hemolítica; toxicidade de hipersensibilidade, como anafilática; toxicidade neuromuscular, como neuropatia periférica e encefalopatia aguda; toxicidade ocular, como neurite retrobulbar; toxicidades otológicas, como perda auditiva e zumbido; toxicidades renais/metabólicas, como nefropatia tóxica e hipocalemia; e, outra toxicidade, como infertilidade. Este agente antiproliferativo tem sido usado para tratar vários tipos de câncer, incluindo, por exemplo, câncer de bexiga, de pulmão de pequenas células, de ovário, testicular, de cérebro, de mama, cervical, de cabeça e pescoço, hepatoblastoma e da tireoide (Compendium of Pharmaceutical and Specialties Trigésima Quinta Edição, 2000). As toxicidades devidas ao cloridrato de gencitabina incluem, por exemplo, toxicidades hematológicas, tais como mielossupressão; toxicidades gastrointestinais, como náuseas, vômitos e estomatite; toxicidades hepáticas, como elevações transitórias das transaminases séricas;

toxicidades renais tais como proteinúria, hematúria, síndrome hemolítico-urêmica e insuficiência renal; toxicidade dermatológica, como erupção cutânea e alopecia; toxicidades de edema, como edema e edema periférico; e, outra toxicidade, como febre. Este agente antiproliferativo tem sido usado para tratar câncer de pulmão de células não pequenas e pancreático (Compendium of Pharmaceutical and Specialties Trigésima Quinta Edição, 2000).

[00172] A presente discussão compreende a prevenção ou tratamento de cânceres localizados ou tumores sólidos que podem ser tratados incluem os da próstata, mama, pâncreas, fígado, rim, sistema geniturinário, cérebro, sistema gastrointestinal, sistema respiratório e cabeça e pescoço. As composições, etc., aqui podem prevenir ou tratar cânceres, incluindo metástases, permitindo a liberação controlada de fucano purificado/modificado em um sítio um tanto distante dos tumores alvo, permitindo que concentrações eficazes do fucano purificado/modificado atinjam os tumores e/ou metástases por difusão ou mesmo transporte sistêmico. Alguns desses cânceres são discutidos mais detalhadamente nos parágrafos seguintes. Câncer de Próstata

[00173] O câncer de próstata é um tumor maligno que surge nas células que revestem a glândula da próstata. Nos EUA, estima-se que

200.000 pacientes desenvolverão câncer de próstata este ano, e mais de 30.000 morrerão da doença. O câncer de próstata tem uma proporção de morte para novos casos de ~ 15%. O câncer pode permanecer na próstata, ou pode se espalhar para os tecidos circundantes ou para sítios distantes (na maioria das vezes nódulos linfáticos e ossos). Normalmente, o câncer de próstata se espalha silenciosamente, produzindo sintomas apenas quando progrediu para além da próstata. Se o câncer de próstata foi diagnosticado e tratado durante os estágios iniciais, em alguns estudos os pacientes tiveram uma taxa de sobrevida de 5 anos de 94%.

[00174] O câncer de próstata é frequentemente discutido como uma doença em homens com mais de 50 anos. Na verdade, 80% dos homens com câncer de próstata têm 60 anos ou mais. As chances de um homem ser diagnosticado com câncer de próstata durante sua vida são de cerca de 1 em cada 10, aproximadamente as mesmas chances de uma mulher ter câncer de mama. O número de novos casos relatados aumentou dramaticamente nos últimos anos, como resultado de testes melhorados que podem detectar a doença no início de seu desenvolvimento, geralmente muito antes do aparecimento dos sintomas. A probabilidade de desenvolver câncer de próstata em qualquer ano aumenta com a idade, mas aumenta drasticamente após os 50 anos.

[00175] As opções atuais de tratamento para o câncer de próstata dependem da extensão da progressão da doença, da idade do paciente e da saúde geral. Pacientes idosos, que têm apenas câncer em estágio inicial ou que sofrem de outras doenças mais graves, podem ser tratados de forma conservadora, enquanto aqueles cujo câncer está avançado podem ser submetidos a um tratamento mais agressivo. O câncer de próstata foi tratado por vários métodos, incluindo radioterapia (radiação de feixe externo ou braquiterapia), retirada de hormônio ou castração (cirúrgica ou química), agentes antiproliferativos, cirurgia e terapia expectante (isto é, “espera vigilante”). Nenhum tratamento garante uma cura absoluta e alguns têm efeitos colaterais consideráveis.

[00176] O câncer de próstata em estágio inicial (isto é, o tumor está localizado na próstata) pode ser tratado com “espera vigilante”. A cirurgia para câncer de próstata tem sido recomendada para pacientes cujo estado geral de saúde tem sido bom e o tumor está confinado à próstata. Um tratamento comum para o câncer localizado da próstata em homens com menos de 70 anos é a prostatectomia radical (isto é, a remoção cirúrgica da próstata).

[00177] Pacientes cujo câncer está localizado na área da próstata são comumente tratados com radiação externa (EBR). A radiação mata as células cancerosas e reduz os tumores. EBR é responsável por menos de 20% do tratamento do câncer de próstata localizado, com aproximadamente 50% desses pacientes experimentando recorrências pós-radiação da doença. Combinado com a detecção do câncer de próstata em estágio inicial e o aumento da demanda dos pacientes, espera-se que o uso de braquiterapia (ou seja, radioterapia local) cresça. Em 1995, apenas 2,5% dos pacientes recém- diagnosticados eram tratados com braquiterapia. A braquiterapia envolve a implantação de “sementes” de metal radioativo no tumor da próstata.

[00178] O tratamento do câncer de próstata que se espalhou envolve a remoção dos testículos ou terapia hormonal. Ambos são usados para inibir ou interromper a produção da testosterona que tem impulsionado o crescimento do câncer. Aproximadamente 20% de todos os pacientes com câncer de próstata são submetidos à terapia de abstinência hormonal. As terapias hormonais incluem acetato de gosserrelina (Zoladex®) ou acetato de leuprolida (Lupron®). Os agentes antiproliferativos usados para tratar o câncer de próstata incluem 5-fluorouracila. Câncer de Mama

[00179] Nos EUA, o câncer de mama tem sido o câncer mais comum entre as mulheres, com cerca de 180.000 novos casos diagnosticados a cada ano (o câncer de mama masculino é responsável por cerca de 5% de todos os cânceres de mama diagnosticados). Foi superado apenas pelo câncer de pulmão como causa de morte em mulheres, sendo responsável por aproximadamente 50.000 mortes anualmente. Uma mulher americana tem uma chance em oito (ou cerca de 13%) de desenvolver câncer de mama durante sua vida. Durante a última década, a maioria dos cânceres de mama relatados eram tumores pequenos, primários (surgindo independentemente; não causados por metástases). Aproximadamente 70% a 80% dos pacientes recém-diagnosticados exibiam doença em estágio inicial (Estágio 1 ou 2), e a maioria não tinha envolvimento dos gânglios linfáticos axilares (axilas).

[00180] A maioria dos cânceres de mama são carcinomas (ou seja, tumores malignos que crescem em tecidos epiteliais). Menos de 1% dos cânceres de mama são sarcomas ou tumores decorrentes do tecido conjuntivo, osso, músculo ou gordura. Além disso, a maioria dos cânceres de mama (cerca de 75%) são carcinomas ductais, surgindo nos tecidos que revestem os dutos de leite. Um número muito menor de cânceres (cerca de 7%) é encontrado dentro dos lóbulos da mama e são chamados de carcinomas lobulares. A doença de Paget (câncer de aréola e mamilo) e o carcinoma inflamatório são responsáveis por quase todas as outras formas de câncer de mama.

[00181] O tratamento do câncer de mama tem sido complicado e depende de muitos fatores. Dois fatores importantes são o tipo de tumor e o estágio de progressão. As características do tumor, em particular, ajudam a separar os indivíduos em dois grupos: (1) aqueles que apresentam baixo risco de recorrência do câncer e (2) aqueles que apresentam alto risco de recorrência do câncer. Fatores prognósticos específicos colocam os pacientes em qualquer um desses grupos. Esses fatores incluem o tamanho do tumor; presença de receptores de hormônio sexual feminino estrogênio e progesterona (ER/PR); fase do ciclo de crescimento celular (se as células tumorais estão se dividindo ativamente ou estão em “fase S”); presença de uma proteína conhecida como “proteína her-2-neu”; grau do tumor, um indicador de diferenciação ou alteração de células tumorais; e ploidia tumoral, o número de conjuntos de material genético dentro das células tumorais.

[00182] O tratamento da doença primária sem envolvimento significativo dos linfonodos tem sido por mastectomia e radioterapia. O envolvimento mais significativo dos linfonodos pode justificar a mastectomia e a remoção dos linfonodos auxiliares. Nesta fase, a chance de metástase e recorrência local tem sido alta. O tratamento da doença metastática tem sido paliativo, envolvendo radioterapia e quimioterapia, que são imunossupressoras, citotóxicas e leucopênicas. Agentes antiproliferativos incluindo, por exemplo, 5-fluorouracila, doxorrubicina, metotrexato e paclitaxel, foram aprovados para uso contra câncer de mama. Câncer de Pâncreas

[00183] O pâncreas é um órgão do sistema digestivo localizado próximo ao estômago e ao intestino delgado. Possui duas funções principais: a produção de enzimas e hormônios. Os cânceres do pâncreas podem ocorrer no pâncreas exócrino (isto é, enzimas) (por exemplo, adenocarcinomas pancreáticos clássicos) ou podem ocorrer no pâncreas endócrino (ou seja, hormônios).

[00184] Cânceres do pâncreas exócrino é um problema de saúde muito sério. Nos EUA, aproximadamente 28.000 pacientes são diagnosticados com câncer pancreático, enquanto cerca do mesmo número morre anualmente desta doença. O câncer de pâncreas ocorre igualmente em homens e mulheres. Devido às dificuldades no diagnóstico, a natureza agressiva intrínseca dos cânceres pancreáticos e as opções de tratamento sistêmico esparsas disponíveis, apenas aproximadamente 4% dos pacientes com diagnóstico de adenocarcinoma pancreático vivem 5 anos após o diagnóstico. O câncer de pâncreas tem sido a 5ª causa de morte por câncer, após o câncer de mama, pulmão, cólon e próstata.

[00185] A escolha do tratamento para o câncer de pâncreas depende muito do estágio do tumor. Os possíveis tratamentos incluem cirurgia, agentes antiproliferativos, radiação e terapia biológica. A cirurgia geralmente é reservada para pacientes no Estágio 1 cujo câncer é considerado ressecável. Às vezes, uma combinação de terapias, como radiação e agente antiproliferativo administrados antes ou depois da cirurgia, pode aumentar as chances de sobrevivência do paciente. O câncer de pâncreas considerado irressecável (geralmente estágio II ou posterior) pode ser tratado com agentes antiproliferativos em ensaios clínicos. Os agentes antiproliferativos, tais como, por exemplo, gencitabina ou 5-fluorouracila têm algum efeito contra o câncer pancreático e a gencitabina tem sido usada como agente paliativo. As toxicidades devido a esses agentes antiproliferativos são discutidas em outro lugar neste documento. A radioterapia tem algum efeito contra o câncer pancreático quando usada em combinação com a quimioterapia. A radioterapia por si só pode controlar os sintomas. Essa forma de tratamento também tem sido usada no estágio II ou nos cânceres pancreáticos posteriores. Câncer de Bexiga

[00186] Em 1998, estimou-se que mais de 54.000 novos casos de câncer de bexiga seriam diagnosticados nos EUA e cerca de 15.000 mortes seriam atribuídas à doença. O câncer de bexiga foi o quarto tipo de câncer mais comum entre os homens americanos e o nono câncer mais comum entre as mulheres americanas. Ocorre três vezes mais frequentemente em homens do que em mulheres. Principalmente uma doença de homens mais velhos, o câncer de bexiga tem sido uma causa significativa de doenças e morte. O risco de câncer de bexiga aumenta acentuadamente com a idade (80% dos casos ocorrem em pessoas com mais de 50 anos), com mais da metade de todas as mortes por câncer de bexiga ocorrendo após os 70 anos. Em homens brancos com mais de 65 anos, a taxa anual de doenças do câncer de bexiga tem ocorreram aproximadamente 2 casos por 1.000 pessoas; isso contrasta com uma taxa de 0,1 caso por 1.000 pessoas com menos de 65 anos. Durante a vida, a probabilidade de desenvolver câncer de bexiga tem sido superior a 3%; no entanto, a probabilidade de morrer de câncer de bexiga é pequena (<1%). O câncer de bexiga raramente ocorre em pessoas com menos de 40 anos de idade.

[00187] Estudos recentes sugerem que certos genes e habilidades metabólicas hereditárias podem desempenhar um papel no câncer de bexiga. O carcinoma de células transicionais (TCC) tem sido a forma mais comum de câncer de bexiga. O TCC geralmente ocorre como uma massa superficial (superfície), papilar (similar a uma verruga), exofítica (crescendo para fora) sobre uma base similar a um pedúnculo. Em alguns casos, porém, o TCC pode ser fixado em uma base ampla ou pode parecer ulcerado (dentro de uma lesão dentada). Os TCCs papilares geralmente começam como áreas de hiperplasia que mais tarde se desdiferenciam ou perdem as características individuais das células. Apenas cerca de 10% a 30% dos TCCs papilares evoluem para cânceres invasivos. Em contraste, as formas não papilares de TCC têm maior probabilidade de se tornarem invasivas. Como observado, esses TCCs podem parecer ulcerados ou planos. O TCC plano, não papilar, constituído por epitélio anaplásico foi classificado como carcinoma in situ (CIS ou TIS). O tecido do CIS contém células grandes, com nucléolos perceptíveis (corpo redondo dentro de uma célula; envolvido na síntese de proteínas) e sem polaridade normal.

[00188] O tratamento do câncer de bexiga depende de muitos fatores. Os mais importantes desses fatores são o tipo de tumor que está presente e seu estágio. Os tratamentos comuns incluem ressecção transuretral (RTU), eletrocirurgia, cirurgia a laser, terapia intravesical, agentes antiproliferativos, terapia cirúrgica, cistectomia e radioterapia. Exemplos de agentes antiproliferativos usados para tratar câncer de bexiga incluem, por exemplo, 5-fluorouracila, cisplatina e exate. Toxicidades devido aos agentes antiproliferativos, 5- fluorouracila, cisplatina e metotrexato, são discutidas em outro lugar neste documento. Cancer Cerebral

[00189] Os tumores cerebrais costumam ser inoperáveis e mais de 80% dos pacientes morrem em até 12 meses após o diagnóstico. Aproximadamente 18.000 novos casos de câncer primário intracraniano (cérebro) são diagnosticados a cada ano nos EUA. Isso representa cerca de 2 por cento de todos os cânceres em adultos. Mais de 50 por cento destes são gliomas de alto grau (ou seja, glioblastoma multiforme e tumores de astrocitoma anaplásico). Pacientes com esses tumores geralmente sofrem de deficiências graves, como disfunção motora, convulsões e anormalidades da visão.

[00190] Os tumores que começam no tecido cerebral são conhecidos como tumores cerebrais primários. Os tumores cerebrais primários são classificados pelo tipo de tecido em que começam. Os tumores cerebrais mais comuns são os gliomas, que começam no tecido glial (de suporte). Outros incluem astrocitomas, gliomas do tronco cerebral, ependimomas e oligodendrogliomas.

[00191] A remoção cirúrgica de tumores cerebrais tem sido recomendada para a maioria dos tipos e sítios e deve ser a mais completa possível dentro das restrições de preservação da função neurológica. Uma exceção a essa regra são os tumores profundos, como os gliomas pontinos, que são diagnosticados com base em evidências clínicas e tratados sem cirurgia inicial em aproximadamente 50% das vezes. Em muitos casos, entretanto, o diagnóstico por biópsia é realizado. A biópsia estereotáxica pode ser usada para lesões de difícil acesso e ressecção. Pacientes com tumores cerebrais que são raramente curáveis ou irressecáveis devem ser considerados candidatos para ensaios clínicos que avaliem radiossensibilizadores, hipertermia ou braquiterapia intersticial usada em conjunto com a radioterapia externa para melhorar o controle local do tumor ou para estudos que avaliem novos fármacos e modificadores da resposta biológica.

[00192] A radioterapia tem um papel importante no tratamento da maioria dos tipos de tumor e pode aumentar a taxa de cura ou prolongar a sobrevida livre de doença. A radioterapia também pode ser útil no tratamento de recorrências em pacientes tratados inicialmente apenas com cirurgia. A quimioterapia pode ser usada antes, durante ou após a cirurgia e a radioterapia. Os tumores recorrentes também são tratados com quimioterapia. Os agentes antiproliferativos usados no tratamento de cânceres cerebrais incluem cisplatina. Exemplos das toxicidades associadas a este agente antiproliferativo são discutidos em outro lugar neste documento. Reestenose

[00193] A reestenose é uma forma de lesão vascular crônica que leva ao espessamento da parede do vaso e perda de fluxo sanguíneo para o tecido fornecido pelo vaso sanguíneo. Esta doença inflamatória pode ocorrer em resposta a procedimentos de reconstrução vascular, incluindo qualquer manipulação que alivie a obstrução dos vasos. Assim, a reestenose tem sido um importante fator restritivo que limita a eficácia desses procedimentos.

[00194] A presente discussão compreende a prevenção ou tratamento da reestenose, por exemplo, pela administração a um vaso sanguíneo de uma quantidade terapeuticamente eficaz da combinação de um oligonucleotídeo terapêutico e um agente anti-inflamatório. As composições adequadas incluem um veículo polimérico que pode ser implantado cirurgicamente em um sítio de reestenose, ou local de reestenose potencial, ou pode ser injetado por meio de um cateter como uma pasta ou gel polimérico. As composições adequadas podem compreender fucanos purificados/modificados aqui discutidos. Artrite

[00195] A artrite reumatoide (AR) é uma doença inflamatória crônica debilitante caracterizada por dor, edema, proliferação de células sinoviais (formação de pannus) e destruição do tecido articular. No estágio avançado, a doença costuma causar danos a órgãos críticos e pode ser fatal. A doença envolve múltiplos membros do sistema imunológico (macrófagos/monócitos, neutrófilos, células B e células T), interações complexas de citocinas e mau funcionamento e proliferação das células sinoviais. O tratamento agressivo precoce tem sido recomendado com fármacos antirreumáticos modificadores da doença (DMARDs), como o metotrexato, fármaco que é discutido em outro lugar neste documento.

[00196] A artrite induzida por cristais foi caracterizada pela ativação induzida por cristais de macrófagos e neutrófilos nas articulações e é seguida por uma dor terrível por muitos dias. A doença progride de forma que os intervalos entre os episódios sejam menores e a morbidade para o paciente aumente. Esta doença geralmente tem sido tratada sintomaticamente com anti-inflamatórios não esteroidais (AINEs), como diclofenaco de sódio (Voltaren®). Este agente anti- inflamatório tem toxicidades que incluem toxicidades do sistema nervoso central, como tonturas e dor de cabeça; toxicidades dermatológicas, como erupção cutânea e prurido; toxicidades gastrointestinais, como colite ulcerativa exacerbada e doença de Crohn; toxicidades geniturinárias, como insuficiência renal aguda e necrose papilar renal; toxicidades hematológicas, tais como agranulocitose, leucopenia e trombocitopenia; toxicidades hepáticas, como transaminases hepáticas elevadas e hepatite ; e outras toxicidades, como asma e anafilaxia.

[00197] A presente discussão compreende a prevenção ou tratamento da artrite reumatoide, por exemplo, através da administração a um paciente de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um oligonucleotídeo terapêutico e, opcionalmente, um agente anti-inflamatório. As composições adequadas incluem um veículo polimérico que pode ser injetado em uma articulação como um veículo de liberação controlada do agente anti-inflamatório e microparticulados como veículos de liberação controlada do oligonucleotídeo terapêutico (que por sua vez foi incorporado no veículo polimérico). As composições adequadas podem compreender fucanos purificados/modificados aqui discutidos. Esses veículos poliméricos podem assumir a forma de microesferas poliméricas, pastas ou géis. Condições Inflamatórias

[00198] As composições, etc., aqui podem opcionalmente inibir ou tratar condições inflamatórias envolvendo neutrófilos, por exemplo, compreendendo a administração a um paciente de composições contendo um oligonucleotídeo terapêutico e um agente anti- inflamatório. Exemplos de tais condições incluem artrite induzida por cristal; osteoartrite; artrite inflamatória não reumatoide; doença mista do tecido conjuntivo; Síndrome de Sjogren; espondilite anquilosante; Síndrome de Behçet; sarcoidose; psoríase; eczema; doença inflamatória intestinal; doença pulmonar inflamatória crônica; problemas neurológicos; e esclerose múltipla. Algumas dessas doenças são discutidas mais detalhadamente nos parágrafos seguintes. Doenças inflamatórias crônicas da pele (incluindo psoríase e eczema)

[00199] A psoríase é uma doença inflamatória crônica da pele comum, caracterizada por lesões elevadas, espessas e escamosas que coçam, queimam, picam e sangram facilmente. Embora essas doenças tenham proliferação celular e componentes angiogênicos em estágios posteriores da doença, os pacientes frequentemente apresentam condições artríticas associadas. Os sintomas podem ser tratados com agentes anti-inflamatórios esteroides, como prednisona, ou agentes antiproliferativos, como metotrexato, agentes esses que são discutidos em outro lugar neste documento. As composições aqui também podem ser usadas para inibir ou de outra forma tratar e/ou prevenir doenças inflamatórias crônicas da pele, por exemplo, psoríase e/ou eczema.

[00200] O que se segue fornece alguns exemplos representativos adicionais de doenças inflamatórias que podem ser tratadas com composições aqui discutidas, incluem, por exemplo, embolização arterial em malformações arteriovenosas (malformações vasculares); menorragia; sangramento agudo; distúrbios do sistema nervoso central; e, hiperesplenismo; doenças inflamatórias da pele, como psoríase; doença eczematosa (dermatite atópica, dermatite de contato, eczema); doença imunobolhosa; e, artrite inflamatória que inclui uma variedade de condições, incluindo artrite reumatoide, doença mista do tecido conjuntivo, síndrome de Sjögren, espondilite anquilosante, síndrome de Behçet, sarcoidose, artrite induzida por cristal e osteoartrite (todas as quais apresentam articulações inflamadas e doloridas como um sintoma proeminente). Isquemia

[00201] A isquemia ou isquemia envolve uma restrição no fornecimento de sangue, que pode incluir uma falta de fornecimento de oxigênio, glicose e outros componentes necessários para o funcionamento adequado do tecido, resultando em danos e/ou disfunção do tecido. A isquemia pode causar problemas graves. Por exemplo, os tecidos podem se tornar anóxicos, necróticos e podem se formar coágulos. Várias tentativas têm sido feitas para prevenir e/ou tratar a isquemia. Por exemplo, restauração do fluxo sanguíneo ou reperfusão. A restauração do sangue, entretanto, envolve a reintrodução de oxigênio, que pode causar danos adicionais devido à produção de radicais livres, resultando em lesão de reperfusão. Lesões por reperfusão podem causar problemas graves. As composições aqui podem ser usadas para inibir ou de outra forma tratar e/ou prevenir isquemia e/ou lesão de reperfusão. Endotoxemia

[00202] Endotoxemia é a presença de endotoxinas no sangue. A endotoxemia pode causar problemas graves. Por exemplo, a endotoxemia pode levar ao choque séptico. As composições deste documento podem ser usadas para inibir, ou de outra forma tratar e/ou prevenir a endotoxemia. Cicatriz Queloide

[00203] O traço queloide faz com que as feridas cicatrizem com cicatrizes elevadas. As cicatrizes elevadas dos traços queloides envolvem cicatrizes fibrosas anormais. O traço queloide causa problemas graves, por exemplo, dor e desfiguração. As composições aqui podem ser usadas para inibir, ou de outra forma tratar e/ou prevenir, o traço queloide e suas cicatrizes elevadas resultantes.

[00204] Queloide (cicatriz queloide) é um tipo de cicatriz que se expande em crescimentos sobre a pele normal. Queloides envolvem crescimento anormal de colágeno, incluindo crescimento anormal de colagem tipo I e tipo III. Os queloides causam problemas graves, por exemplo, dor, coceira e, se infectados, podem ulcerar. Têm sido feitas tentativas para tratar ou prevenir queloides, incluindo o uso de cirurgia,

curativos, injeções de esteroides e terapia a laser. As composições aqui podem ser usadas para inibir, ou de outra forma tratar e/ou prevenir queloides. Dermatite

[00205] Dermatite inclui inflamação da pele, incluindo dermatite atópica e dermatite de contato. Por exemplo, a dermatite de contato envolve erupção cutânea localizada e/ou irritação da pele após o contato da pele com uma substância estranha. Por exemplo, a dermatite atópica é uma doença cutânea pruriginosa com recidiva crônica. A dermatite atópica é às vezes chamada de prurigo de Besnier, neurodermite, eczema endógeno, eczema flexural, eczema infantil, eczema infantil e prurigo diathsique. O eczema é uma doença em forma de dermatite. Outros tipos de dermatite incluem dermatite espongiótica, dermatite seborreica (caspa), dermatite disidrótica (ponfólige), urticária, dermatite vesicular (dermatite bolhosa) e urticária popular. A dermatite pode causar problemas graves. Por exemplo, pele seca, erupções cutâneas, edema da pele, vermelhidão da pele, coceira na pele, crostas na pele, fissuras, bolhas, secreção e sangramento. Têm sido feitas tentativas para tratar ou prevenir a dermatite, incluindo o uso de corticosteroides e alcatrões de carvão. As composições deste documento podem ser usadas para inibir, ou de outra forma tratar e/ou prevenir, dermatite incluindo dermatite atópica, eczema, dermatite de contato, dermatite espongiótica, dermatite seborreica, dermatite disidrótica, urticária, dermatite vesicular e urticária popular. Rosácea

[00206] Rosácea é uma doença ou condição crônica tipicamente caracterizada por eritema facial. A rosácea pode causar problemas graves. Por exemplo, a rosácea normalmente começa como vermelhidão na testa, nariz ou bochechas e também pode causar vermelhidão no pescoço, orelhas, couro cabeludo e peito. Por exemplo, a rosácea pode causar sintomas adicionais, incluindo telangiectasia, pápulas, pústulas, sensações dolorosas e, em casos avançados, rinofima (nariz lobulado vermelho). Os subtipos de rosácea incluem rosácea eritematotelangiectásica, rosácea papulopustular, rosácea fimatosa e rosácea ocular. Têm sido feitas tentativas para tratar ou prevenir a rosácea, incluindo o uso de anti-inflamatórios e antibióticos. As composições aqui podem ser usadas para inibir, ou de outra forma tratar e/ou prevenir, rosácea incluindo seus subtipos eritematotelangiectásico, papulopustular, rosácea e ocular. Dispositivo Médico, Materiais Médicos, Combinação e Produtos Farmacêuticos

[00207] A discussão neste documento também fornece dispositivos médicos, combinação e produtos farmacêuticos, compreendendo composições conforme discutido neste documento em um dispositivo médico, produto de combinação ou recipiente farmaceuticamente aceitável. Os produtos também podem incluir um aviso associado ao contêiner, normalmente em uma forma prescrita por uma agência reguladora que regula a fabricação, uso ou venda de dispositivos médicos, combinações e produtos farmacêuticos ou biofarmacêuticos, em que o aviso reflete a aprovação da agência das composições, como um aviso de que um fucano purificado/modificado foi aprovado como um agente antiproliferativo ou anti-inflamatório, por exemplo, para administração humana ou veterinária para tratar doenças proliferativas ou doenças inflamatórias (como, por exemplo, artrite inflamatória, reestenose, aderências cirúrgicas, psoríase e peritonite). As instruções para o uso do fucano purificado/modificado aqui também podem ser incluídas. Essas instruções podem incluir informações relacionadas com a dosagem de um paciente e o modo de administração.

[00208] O presente pedido é ainda direcionado a métodos de produção de vários elementos do fucano purificado/modificado, sistemas etc., discutidos neste documento, incluindo a produção das próprias composições, bem como métodos de uso das mesmas, incluindo, por exemplo, o tratamento das condições, doenças, etc., aqui.

[00209] O presente pedido compreende ainda dispositivos médicos, materiais médicos, produtos de combinação médica e produtos farmacêuticos para o tratamento de aderências fibrosas, artrite, psoríase ou outras doenças, conforme desejado, compreendendo as composições de fucano e fucano purificadas/modificadas aqui apresentadas. Os materiais, etc., podem ser usados em um medicamento para o tratamento de aderências fibrosas, tais como aderências cirúrgicas, artrite, psoríase ou outras doenças, conforme desejado. Também são fornecidos métodos de fabricação e uso de tais medicamentos capazes de reduzir os sintomas associados a pelo menos uma dentre aderências fibrosas, artrite e psoríase em um paciente, incluindo um paciente humano, compreendendo a combinação de uma quantidade farmaceuticamente eficaz de um fucano, tal como fucoidano, como aqui discutido com um excipiente ou tampão farmaceuticamente aceitável.

[00210] Os Exemplos a seguir fornecem discussões exemplares de certas modalidades neste documento, mas a descrição e as reivindicações não se limitam aos mesmos. Exemplo 1: Modificação estrutural química

[00211] Um extrato de exsudato foi obtido de Laminaria Hyperborea. O extrato de exsudado foi filtrado e pequenas moléculas foram removidas por filtração de fluxo tangencial (TFF) em um filtro de 100 kDa. Uma amostra do retentado resultante foi liofilizada para se obter a amostra A não modificada de outra forma. O retentado resultante foi levado a NaOH 0,25 M por adição de solução de NaOH 10 M e deixado à temperatura ambiente durante 16 horas. A amostra resultante foi, então, filtrada centrifugamente sobre um filtro kDa e o retentado resultante foi coletado e liofilizado para obter a amostra B tratada com base. Tanto a amostra A não modificada quanto a amostra B tratada com base foram analisadas por espectroscopia de ressonância magnética nuclear de próton (1H-NMR) e o espectro de 1 H-NMR resultante é mostrado em FIG 2A.

[00212] FIG 2A demonstra a modificação estrutural química do fucano: o pico amplo com um deslocamento químico de cerca de 2,0 ppm que está presente na amostra A não modificada não está presente na amostra B tratada com base.

[00213] A amostra A não modificada e a amostra B tratada com base/modificada foram ainda analisadas por coerência quântica múltipla heteronuclear 2D 1H-13C (HMQC). Os espectros de HMQC, mostrados na FIG. 2B, foram adquiridos a 70 °C com supressão de sinal de solvente em um espectrômetro de 600 MHz equipado com sonda fria de 5 mm. Um grande número de varreduras dos espectros de HMQC foi adquirido na faixa de 10-30 ppm na dimensão do carbono em 8 incrementos de 256-512 varreduras cada; tais varreduras foram combinadas para criar os espectros na FIG. 2B.

[00214] O espectro de HMQC para a amostra A não modificada tem um pico cruzado correspondente a grupos O-acetila, indicado pelo sinal circulado na FIG. 2B. Este pico cruzado não está presente no espectro da amostra B tratada com base. Isso demonstra a remoção de grupos acetila do fucano e, portanto, a modificação estrutural química do fucano na amostra B tratada com base pelo tratamento com NaOH. Exemplo 2: Floculação fisicamente induzida

[00215] Um fucoidano de matéria-prima em pó marrom foi dissolvido a cerca de 10% em p/v em água destilada para obter uma solução de partida. Foi adicionado cloreto de sódio à solução de partida, para produzir uma mistura com uma concentração final de cloreto de sódio de cerca de 0,1 M. A mistura foi aquecida até quase à ebulição durante entre 10-15 minutos. O tratamento da mistura a esta temperatura induziu a floculação de impurezas suspensas e matéria particulada não fucoidana. A mistura foi centrifugada a 2300 gravidades durante 40 minutos para separar a solução contendo fucoidano dos componentes não fucoidanos floculados. A solução contendo fucoidano foi inspecionada visualmente e foi observada uma diminuição visual nas partículas e na cor. Uma porção liofilizada da solução contendo fucoidano compreendia um pó esbranquiçado com significativamente menos cor do que a matéria-prima de fucoidano usada. A perda de cor pode ser quantificada e comparada, por exemplo, obtendo um espectro ultravioleta/visível (espectro de UV/Vis) do fucoidano matéria-prima a 10 mg/mL em água e um espectro de UV/Vis do fucano purificado/modificado a 10 mg/mL em água, determinando a absorvência total na região visível do espectro, que está entre cerca de 400nm e cerca de 700nm, e observando uma diminuição de cerca de pelo menos 5%, 10% ou 20% na absorvência total no fucano purificado/modificado em relação à matéria-prima fucoidano. Exemplo 3: Extração de fase sólida

[00216] Um fucoidano matéria-prima em pó marrom foi adicionado a uma mistura de 40 graus Celsius de NaOH 0,5 M em etanol/água a 70% em v/v. A mistura de reação resultante foi agitada e mantida a 40 graus Celsius durante 2 horas. A mistura de reação foi, então, centrifugada para separar o fucoidano purificado/modificado sólido do NaOH 0,5 M em sobrenadante de etanol/água a 70% em v/v contendo as impurezas extraídas.

[00217] Verificou-se que o fucoidano purificado/modificado sólido contém visivelmente menos cor para o olho humano do que o fucoidano matéria-prima quando visualizado. Essa perda de cor indicava a remoção de impurezas, como os florotaninos, pois os fucanos não contêm cromóforo e, portanto, ficarão incolores quando totalmente puros. A perda de cor pode ser quantificada e comparada, por exemplo, obtendo um espectro ultravioleta/visível (espectro de UV/Vis) do fucoidano matéria-prima a 10 mg/mL em água e um espectro de UV/Vis do fucano purificado/modificado a 10 mg/mL em água, determinando a absorvência total na região visível do espectro, que está entre cerca de 400nm e cerca de 700nm, e observando uma diminuição de cerca de pelo menos 5%, 10% ou 20% na absorvência total no fucano purificado/modificado em relação à matéria-prima fucoidano. Exemplo 4: Precipitação quimicamente induzida

[00218] Uma composição do fucoidano matéria-prima foi dissolvida a 15% em p/v em água destilada para formar uma solução de partida. Verificou-se que a solução de partida continha particulados suspensos por observação. O cloreto de cálcio foi adicionado à solução de partida a um nível de 0,5 M para produzir uma mistura de reação. Para simular impurezas conhecidas em fucoidano natural, alginato de sódio foi adicionado a uma concentração de 5% em p/p de alginato/fucoidano e amido foi adicionado a uma concentração de 5% em p/p de amido/fucoidano. O amido foi usado como mimético para a laminarina neste caso. NaOH 10 M foi adicionado gota a gota à mistura de reação para trazer o pH para entre 7 e 8. Isso foi feito para evitar a degradação do fucoidano na mistura de reação. Uma quantidade mínima de NaOH 10 M foi novamente adicionada à mistura de reação para evitar a acidificação da mistura de reação da adição subsequente de ácido fosfórico. A mistura de reação foi trazida para fosfato 0,5 M através da adição de ácido fosfórico. Isto iniciou a floculação das partículas suspensas e impurezas precipitadas por meio da ação do fosfato de cálcio formado pela reação do cloreto de cálcio com o ácido fosfórico. A mistura de reação foi deixada repousar à temperatura ambiente durante 10 minutos para permitir que a floculação continuasse. A mistura de reação foi centrifugada em 17568 gravidades durante 17 minutos para separar o fucoidano purificado desejado em uma solução de sobrenadante das impurezas floculadas. A solução de sobrenadante foi inspecionada visualmente para avaliar qualitativamente a remoção de cor e particulado. Uma alíquota da solução de sobrenadante também foi analisada por absorção de UV/Vis na região de 300-800 nm para avaliar a remoção de componentes não fucoidanos que espalham luz e/ou absorvem luz na região espectral de UV/Vis. Uma alíquota da solução de sobrenadante também foi liofilizada para se obter o teor de fucano. Uma alíquota da solução de sobrenadante também foi hidrolisada em HCl 3M a 90 graus Celsius e analisada por Permuta de Ânion de Alto Desempenho - Detecção de Amperometria Pulsada (HPAE-PAD) para a detecção de carboidratos totais e avaliação da remoção de laminarina e alginato. A quantificação das impurezas foi contra os padrões de glicose monomérica para avaliar a remoção de laminarina e ácido manurônico monomérico e ácido glicurônico monomérico para avaliar a remoção de alginatos.

[00219] Os resultados da análise do fucoidano de partida e dos fucanos purificados/modificados resultantes são apresentados na tabela 1 abaixo.

Sinal Tratamento Alginato Aparência Amido por UV/Vis de por HPAE- visual HPAE-PAD 300-800 Floculação PAD nm Sólido marrom, Fucoidano de Nenhum Nenhum marrom opaco na 670,587* partida detectado detectado solução Solução clara Fucoidano amarelo Nenhum Nenhum 9,616 tratado amarronzado detectado detectado claro *: Valores determinados por meio de um fucoidano de partida representativo Tabela 1: Resultados analíticos de fucoidano de partida e soluções tratadas Exemplo 5: Precipitação quimicamente induzida

[00220] Uma composição do fucoidano matéria-prima foi dissolvida a 15% em p/v em água destilada para formar uma solução de partida. Verificou-se que a solução de partida continha particulados suspensos por observação. Para simular impurezas conhecidas em fucoidano natural, alginato de sódio foi adicionado a uma concentração de 5% em p/p de alginato/fucoidano e amido foi adicionado a uma concentração de 5% em p/p de amido/fucoidano. O amido foi usado como mimético para a laminarina neste caso. NaOH 10 M foi adicionado gota a gota à solução de partida para trazer o pH para entre 7 e 8. Isto foi feito para evitar a degradação do fucoidano na solução no caso da adição subsequente de sulfato de alumínio tornar a solução de partida ácida. A solução de partida foi trazida para sulfato de alumínio 0,1 M para produzir uma mistura de reação. Isto iniciou a precipitação das impurezas, bem como a floculação de impurezas e particulados suspensos pelo hidróxido de alumínio formado simultaneamente. A mistura de reação foi deixada repousar à temperatura ambiente durante 10 minutos para permitir que a floculação continuasse. A mistura de reação foi centrifugada em 17568 gravidades durante 17 minutos para separar o fucoidano purificado desejado em uma solução de sobrenadante das impurezas floculadas. A solução de sobrenadante foi inspecionada visualmente para avaliar qualitativamente a remoção de cor e particulado. Uma alíquota da solução de sobrenadante também foi analisada por absorção de UV/Vis na região de 300-800 nm para avaliar a remoção de componentes não fucoidanos que espalham luz e/ou absorvem luz na região espectral de UV/Vis. Uma alíquota da solução de sobrenadante também foi liofilizada para se obter o teor de fucano. Uma alíquota da solução de sobrenadante também foi hidrolisada em HCl 3M a 90 graus Celsius e analisada por Permuta de Ânion de Alto Desempenho - Detecção de Amperometria Pulsada (HPAE-PAD) para a detecção de carboidratos totais e avaliação da remoção de laminarina e alginato. A quantificação das impurezas foi contra os padrões de glicose monomérica para avaliar a remoção de laminarina e ácido manurônico monomérico e ácido glicurônico monomérico para avaliar a remoção de alginatos.

[00221] Os resultados da análise do fucoidano de partida e dos fucanos purificados/modificados resultantes são apresentados na tabela 2 abaixo. Tratamento de Aparência visual Alginato por Amido por Sinal UV/Vis Floculação HPAE-PAD HPAE-PAD 300-800 nm Sólido marrom, Fucoidano de Nenhum Nenhum marrom opaco na 670,587* partida detectado detectado solução Fucoidano Solução clara Nenhum Nenhum 15,188 tratado amarelo claro detectado detectado

*: Valores determinados por meio de um fucoidano de partida representativo Tabela 2: Resultados analíticos de fucoidano de partida e soluções tratadas Exemplo 6: Precipitação quimicamente induzida

[00222] Uma composição de fucoidano de partida foi dissolvida a 15% em p/v em água destilada para formar uma solução de partida. Verificou-se que a solução de partida continha particulados suspensos por observação. Para simular impurezas conhecidas em fucoidano natural, alginato de sódio foi adicionado a uma concentração de 5% em p/p de alginato/fucoidano e amido foi adicionado a uma concentração de 5% em p/p de amido/fucoidano. O amido foi usado como mimético para a laminarina neste caso. O cloreto de cálcio foi adicionado à solução de partida a um nível de 0,5 M para produzir uma mistura de reação. Isto iniciou a precipitação do alginato. NaOH 10 M foi adicionado gota a gota à mistura de reação para trazer o pH para entre 7 e 8. Isso foi feito para evitar a degradação do fucoidano na mistura de reação. A mistura de reação foi ajustada a 0,5 M de sulfato de alumínio. Isto iniciou a floculação das partículas suspensas, precipitado de alginato de cálcio e outras impurezas por meio da ação do sulfato de cálcio formado pela reação do cloreto de cálcio com sulfato de alumínio e pela ação do hidróxido de alumínio formado a partir do sulfato de alumínio na mistura de reação. A mistura de reação foi deixada repousar à temperatura ambiente durante 10 minutos para permitir que a floculação continuasse. A mistura de reação foi centrifugada em 17568 g durante 17 minutos para separar o fucoidano purificado desejado em uma solução de sobrenadante das impurezas floculadas. A solução de sobrenadante foi inspecionada visualmente para avaliar qualitativamente a remoção de cor e particulado. Uma alíquota da solução de sobrenadante também foi analisada por absorção de UV/Vis na região de 300-800 nm para avaliar a remoção de componentes não fucoidanos que espalham luz e/ou absorvem luz na região espectral de UV/Vis. Uma alíquota da solução de sobrenadante também foi liofilizada para se obter o teor de fucano. Uma alíquota da solução de sobrenadante também foi hidrolisada em HCl 3M a 90 graus Celsius e analisada por Permuta de Ânion de Alto Desempenho - Detecção de Amperometria Pulsada (HPAE-PAD) para a detecção de carboidratos totais e avaliação da remoção de laminarina e alginato. A quantificação das impurezas foi contra os padrões de glicose monomérica para avaliar a remoção de laminarina e ácido manurônico monomérico e ácido glicurônico monomérico para avaliar a remoção de alginatos.

[00223] Os resultados da análise do fucoidano de partida e dos fucanos purificados/modificados resultantes são apresentados na tabela 3 abaixo. Sinal Alginato Amido por Tratamento de Aparência UV/Vis por HPAE- HPAE- Floculação visual 300-800

PAD PAD nm Sólido marrom, Nenhum Nenhum Fucoidano de partida marrom opaco 670,587* detectado detectado na solução Solução clara Nenhum Nenhum Fucoidano tratado 23,814 amarelo claro detectado detectado *: Valores determinados por meio de um fucoidano de partida representativo Tabela 3: Resultados analíticos de fucoidano de partida e soluções tratadas Exemplo 7: Extração líquido-líquido

[00224] Uma composição de fucano de partida contendo impurezas é dissolvida a 10 mg/mL em água destilada para produzir uma solução de partida aquosa. 20% em v/v de heptano é adicionado à solução de partida aquosa contendo a composição de fucoidano de partida e a mistura orgânica-aquosa é, então, misturada em alto cisalhamento durante 30 minutos. A mistura é terminada, e a mistura orgânica- aquosa é colocada em um funil de separação para a separação da fase orgânica da fase aquosa. A fase aquosa mais densa contendo o componente de fucano desejado deposita-se no fundo do funil de separação, enquanto a fase orgânica menos densa contendo impurezas está presente na extremidade superior do funil de separação. A mistura orgânico-aquosa é deixada repousar no funil de separação durante 10 minutos. A fase aquosa é, então, decantada e recolhida como o fucano purificado/modificado desejado em solução. O fucano purificado/modificado em solução pode ser encontrado para conter entre cerca de 30%, 50%, 70% a cerca de 100% menos lipídeos, ácidos graxos, florotanino, proteínas, fucoxantina e/ou clorofila do que a composição de fucano de partida. Exemplo 8: Extração líquido-líquido

[00225] Uma composição de fucano de partida contendo impurezas é dissolvida a 10 mg/mL em água destilada para produzir uma solução de partida aquosa. 20% em v/v de 1-butanol são adicionados à solução de partida aquosa contendo a composição de fucoidano de partida e a mistura orgânica-aquosa é, então, misturada em alto cisalhamento por 30 minutos. A mistura é terminada, e a mistura orgânica-aquosa é colocada em um funil de separação para a separação da fase orgânica da fase aquosa. A fase aquosa mais densa contendo o componente de fucano desejado deposita-se no fundo do funil de separação, enquanto a fase orgânica menos densa contendo impurezas está presente na extremidade superior do funil de separação. A mistura orgânico-aquosa é deixada repousar no funil de separação durante 10 minutos. A fase aquosa é, então, decantada e recolhida como o fucano purificado/modificado desejado em solução. O fucano purificado/modificado em solução pode ser encontrado para conter entre cerca de 30%, 50%, 70% a cerca de 100% menos lipídeos, ácidos graxos, florotanino, proteínas, fucoxantina e/ou clorofila do que a composição de fucano de partida. Exemplo 9: Extração líquido-líquido

[00226] Uma composição de fucano de partida contendo impurezas é dissolvida a 10 mg/mL em água destilada para produzir uma solução de partida aquosa. 20% em v/v de acetato de etila são adicionados à solução de partida aquosa contendo a composição de fucoidano de partida e a mistura orgânico-aquosa é, então, misturada em alto cisalhamento durante 30 minutos. A mistura é terminada, e a mistura orgânica-aquosa é colocada em um funil de separação para a separação da fase orgânica da fase aquosa. A fase aquosa mais densa contendo o componente de fucano desejado deposita-se no fundo do funil de separação, enquanto a fase orgânica menos densa contendo impurezas está presente na extremidade superior do funil de separação. A mistura orgânico-aquosa é deixada repousar no funil de separação durante 10 minutos. A fase aquosa é, então, decantada e recolhida como o fucano purificado/modificado desejado em solução. O fucano purificado/modificado em solução pode ser encontrado para conter entre cerca de 30%, 50%, 70% a cerca de 100% menos lipídeos, ácidos graxos, florotanino, proteínas, fucoxantina e/ou clorofila do que a composição de fucano de partida. Exemplo 10: Diafiltração

[00227] Uma solução de partida compreendendo cerca de 8% em p/v ou uma composição de fucoidano de partida foi fornecida. A solução de partida foi filtrada através de um filtro de 0,22 micron. O teor catiônico em uma alíquota da solução de partida filtrada foi determinado por espectrometria de massa de plasma acoplado indutivamente (ICP-MS) e constatado conter acima de 0,01% em p/p de alumínio/fucano, acima de 10-5% em p/p de arsênio/fucano e acima de 0,01% em p/p de cálcio/fucano, todos sendo níveis indesejáveis de cada respectivo cátion. A solução de partida foi diafiltrada para 4 diavolumes com EDTA 0,1 M, solução de NaOH 0,01 M. A solução de fucoidano do retentado resultante foi, então, diafiltrada com cerca de 2,5 diavolumes de Na2SO3 5 mM, solução de NaCl 5 mM. A solução de fucoidano do retentado secundário resultante foi testada quanto ao teor catiônico por ICP-MS. Os resultados para a composição de fucoidano de partida e o fucano purificado/modificado resultante são mostrados na Tabela 4 abaixo. % em p/p % em p/p % em p/p % em p/p Tratamento Al/ As/ Ca/ Mg/ fucoidano fucoidano fucoidano fucoidano Entrada 2,95x10-1 1,79x10-5 2,78x10-2 4,76x10-3 Fucano 3,33x10-4 <4,38x10-6 3,85x10-3 1,70x10-3 purificado/modificado Tabela 4: Resultados analíticos de fucoidano de partida e soluções tratadas Exemplo 11: Extração de fluido supercrítico

[00228] Uma composição de fucoidano de partida sólida de cerca de 100 g é fornecida. O sólido é colocado em um extrator supercrítico. O extrator é pressurizado a 407,78 Kg/cm2 (5800 psi) e aquecido a 50 graus Celsius e, em seguida, purgado com dióxido de carbono supercrítico a 100 mL/minuto durante 3 horas. O dióxido de carbono supercrítico é purgado do extrator e o fucoidano modificado/purificado sólido coletado e analisado quanto a impurezas. O fucoidano modificado/purificado sólido coletado pode ser encontrado para conter entre cerca de 30% a cerca de 100% menos lipídeos, ácidos graxos, florotaninas, laminarinas, alginatos, proteínas, produtos da reação de Maillard, fucoxantina, clorofila, íons livres, bactérias e/ou DNA do que a composição de fucoidano de partida. Exemplo 12: Precipitação quimicamente induzida, lise e floculação

[00229] Uma composição de fucoidano de partida, que continha cerca de 0,70% em p/p de nitrogênio total, foi dissolvida a 15% em p/v em água destilada para formar uma solução de partida. A presença de nitrogênio total indica a presença de impurezas indesejáveis, por exemplo, componentes celulares, DNA, proteínas e bactérias. Uma redução no nitrogênio total indica que essas impurezas contendo nitrogênio foram removidas da composição de fucoidano de partida ou dos polímeros de fucoidano, conforme o caso, porque as impurezas contendo nitrogênio podem ser quimicamente ou ionicamente ligadas a tais moléculas de fucoidano.

[00230] Verificou-se que a solução de partida continha particulados suspensos por observação. O cloreto de cálcio foi adicionado à solução de partida a um nível de 0,5 M para produzir uma mistura de reação. Isto iniciou a precipitação de uma porção sólida suspeita de conter impurezas. Cerca de 15 mL de NaOH 10 M foram adicionados gota a gota à mistura de reação para trazer o pH para entre 7 e 8. Isso foi feito para evitar a degradação do fucoidano na mistura de reação. A mistura de reação foi ajustada para fosfato 0,5 M através da adição de ácido fosfórico. Isto iniciou a floculação das partículas suspensas e impurezas precipitadas por meio da ação do fosfato de cálcio formado pela reação do cloreto de cálcio com o ácido fosfórico. A mistura de reação foi centrifugada a 33.746 gravidades durante 5 minutos para separar um primeiro fucoidano purificado/modificado em uma solução de sobrenadante das impurezas floculadas. Verificou-se que o primeiro fucoidano purificado/modificado continha cerca de 0,10% em p/p de nitrogênio total. Uma porção do primeiro fucoidano purificado/modificado na solução de sobrenadante foi ainda purificada por diafiltração em um filtro centrífugo de MWCO de 100 kDa contra 6 diavolumes de NaCl 5 mM. Verificou-se que o primeiro fucoidano purificado/modificado do retentado resultante, continha cerca de 0,08% em p/p de nitrogênio total.

[00231] Uma segunda porção do primeiro fucoidano purificado/modificado foi ainda processado pela adição de solução de dodecil sulfato de sódio 1 M como agente de ruptura celular a uma concentração de 0,010 M. Solução de NaOH 10 M foi adicionada a uma concentração de 0,26 M para tornar a mistura básica. A mistura de reação resultante foi agitada durante cerca de 30 minutos à temperatura ambiente para obter uma mistura marrom claro turva.

[00232] Após cerca de 30 minutos, foi adicionada solução de KOH a 45% em p/v a uma concentração de cerca de 0,04 M. A adição de potássio resultou na precipitação de SDS e impurezas indesejadas juntamente com o SDS. Solução de sulfato de alumínio a 48% em p/v foi adicionada a uma concentração de cerca de 0,06 M. A formação de hidróxido de alumínio floculou impurezas indesejadas na mistura de reação. Sulfito de sódio sólido foi adicionado e dissolvido a uma concentração de 0,02 M para extinguir os oxidantes potenciais na mistura de reação.

[00233] A mistura de reação resultante foi armazenada em um refrigerador por cerca de 16 horas, seguida por centrifugação a 33.746 gravidades por 5 minutos para separar um segundo fucoidano purificado/modificado em uma solução de sobrenadante das impurezas floculadas. Verificou-se que o segundo fucoidano purificado/modificado continha cerca de 0,06% em p/p de nitrogênio total. Uma porção do segundo fucoidano purificado/modificado foi ainda processado por diafiltração sobre um filtro centrífugo de MWCO de 100 kDa contra 6 diavolumes de NaCl 5 mM para fornecer um segundo fucoidano purificado/ modificado do retentado. Verificou-se que o segundo fucoidano purificado/modificado do retentado resultante, continha cerca de 0,03% em p/p de nitrogênio total. Exemplo 13: Preparação de cinco fucanos purificados/modificados

[00234] Os métodos aqui discutidos podem ser usados, combinados, modificados e permutados de qualquer maneira para obter fucanos purificados/modificados. Cinco fucanos purificados/modificados foram preparados usando uma combinação de precipitação e diafiltração quimicamente induzida discutida nos exemplos 4, 5, 6 e 10 para avaliar a eficácia de fucanos purificados/modificados em aplicações médicas e cirúrgicas. Estes 5 fucanos são referidos como fucano 1 a fucano 5 aqui. Fucano 1 e fucano 2 foram produzidos em uma escala de cerca de 2 kg usando os métodos discutidos no exemplo 4 e exemplo 10. Fucano 3 e fucano 5 foram produzidos em uma escala de cerca de 30 g usando os métodos discutidos no exemplo 4 e no exemplo 10. Fucano 4 foi produzido em uma escala de cerca de 1 kg usando os métodos discutidos no exemplo 5 e no exemplo 10. Os fucanos 1 a 5 foram convertidos em fucanos purificados/modificados sólidos por diafiltração contra uma solução de sal de baixa condutividade seguida por liofilização para obter sólidos brancos. Dois fucanos adicionais foram extraídos de algas marinhas marrons, aqui referidas como fucano 6 e fucano 7. Fucano 6 foi fornecido como uma composição sólida por FMC BioPolymer®. Nenhum dos processos discutidos acima foi usado na produção do fucano 6. Fucano 7 foi extraído de algas marinhas marrons por HCl quase fervente. Algumas impurezas foram removidas por precipitação seletiva usando etanol como precipitante. Após a precipitação seletiva, o fucano foi coletado como uma composição sólida por precipitação adicional do fucano com etanol, centrifugação e liofilização. Fucano 7 foi posteriormente tratado com o método discutido no exemplo 3, então dissolvido em água e diafiltrado contra água desionizada antes de ser liofilizado para obter o fucano 7 como uma composição sólida. Os níveis de fucose, galactose, sulfato e contraíon total de fucano 1 ao fucano 7 são determinados conforme discutido nos exemplos 14 e exemplo 15 abaixo. Estes fucanos 1-7 são discutidos mais abaixo, por exemplo, no exemplo 16 e na Tabela

6. Exemplo 14: Medição do teor de fucose corrigido e teor de galactose corrigido do fucano 1 ao fucano 7

[00235] As composições de fucano sólidas foram dissolvidas em 72% em p/p de ácido sulfúrico a 40 mg/mL e incubadas a 45⁰C em banho-maria por 30 minutos. O hidrolisado ácido foi, então, diluído a 4% em p/p de ácido sulfúrico em um tubo de alta pressão e incubado a 120⁰C por 60 minutos. O segundo hidrolisado ácido resultante foi diluído em uma concentração de 1/333 com água destilada e executado em cromatografia de coluna de permuta aniônica de alto desempenho configurada com detecção de amperometria pulsada (HPAE-PAD). A separação dos analisados foi realizada executando o eluente de NaOH 10 mM a 1,0 mL/minuto usando uma bomba isocrática.

[00236] O teor de fucose não corrigido dos fucanos foi determinado por interpolação em uma curva padrão para fucose. O teor de galactose não corrigido dos fucanos foi determinado pelo método de adição padrão. O teor de fucose corrigido foi determinado respondendo pela adição de uma molécula de água na hidrólise de uma ligação glicosídica e respondendo pela adição de dois grupos hidroxila na hidrólise de duas ligações sulfato-éster pet fucose. O teor de galactose corrigido foi determinado respondendo pela adição de uma molécula de água na hidrólise de uma ligação glicosídica.

[00237] Os resultados desta análise são mostrados na tabela 5 abaixo. Exemplo 15: Medição do teor de sulfato total, teor de contraíon total e teor de água total do fucano 1 ao fucano 7

[00238] As composições de fucano sólidas foram dissolvidas em água desionizada, hidrolisadas sob condições ácidas e analisadas por ICP-MS para% em p/p do teor de enxofre e contraíon total. O teor de enxofre foi convertido em teor de sulfato multiplicando o teor de enxofre pela relação molar de sulfato para enxofre para obter o% em p/p do teor de sulfato do fucano purificado/modificado. Os contraíons observados no fucano purificado/modificado aqui discutido incluem contraíons de potássio e sódio. Os resultados desta análise são mostrados na tabela 5 abaixo.

[00239] Os resultados do% em p/p para fucose corrigida total, galactose corrigida e sulfato também são mostrados na Tabela 5 abaixo. Os resultados para fucose, galactose e sulfato totais são determinados pela adição dos valores de fucose corrigidos, de galactose corrigidos e sulfato, um cálculo mais detalhado e completo, incluindo aspectos discutidos acima mostrados na equação 1 abaixo. O teor de contraíon total é determinado pela adição do teor de sódio e potássio total. Equação 1:

% em p/p % em p/p do de % em p/p Teor de % em % em p/p % em % em % em Fucose, do Teor de fucose, p/p de de p/p de p/p de p/p de galactose contraíon galactose, Fucose Galactose Sulfato Na K e sulfato total sulfato e total contraíon Fucano 1 34,3 2,9 44,9 82,2 11,4 0,7 11,6 94,3 Fucano 2 34,7 2,5 41,7 78,9 9,8 0,8 10,6 89,5 Fucano 3 35,3 2,3 41,7 79,2 9,4 1,6 10,9 90,2 Fucano 4 31,1 3,4 51,3 84,0 7,8 5,3 13,0 98,8 Fucano 5 32,7 3,0 40,6 76,3 11,0 1,3 12,3 88,6 Fucano 6 18,6 1,4 11,4 31,3 8,3 1,4 9,7 41,0 Fucano 7 23,3 5,9 11,4 40,6 2,6 0,9 3,5 44,1 Tabela 5: Componentes como% em p/p do fucano

[00240] A Tabela 5 demonstra que fucanos purificados/modificados com menos de cerca de 12%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3% ou 2% em p/p de impurezas podem ser preparados usando os métodos discutidos aqui.

[00241] A Tabela 5 demonstra ainda que fucanos purificados/modificados com um teor de galactose, fucose e sulfato total dentre cerca de 77% em p/p e cerca de 87% em p/p foram produzidos.

[00242] A Tabela 5 demonstra ainda fucanos purificados/modificados com um teor de contraíon total entre cerca de 9% em p/p e cerca de 14% em p/p do fucano.

[00243] O teor de água total de fucano 1, fucano 3, fucano 4 e fucano 5 foi determinado por perda na secagem (LOD) a 104 ⁰C. O teor de água total foi determinado como sendo 3,8%, 2,4%, 3,2% e 4,7% em p/p dos respectivos fucanos purificados/modificados. Exemplo 16: Medição de distribuições de peso molecular do fucano 3 e fucano 4

[00244] A cromatografia de permeação em gel (GPC) foi usada para avaliar as distribuições de peso molecular obtidas para os fucanos purificados/modificados, fucano 3 e fucano 4. Há um grande número de diferentes parâmetros, colunas e padrões disponíveis para uso em cromatografia de permeação em gel, resultando em uma variedade de configurações de instrumentação disponíveis para a análise de peso molecular. Para as determinações de peso molecular aqui, a GPC foi conduzida usando os seguintes parâmetros: A fase móvel era de nitrato de sódio 0,1 M executado a 0,6 mL/min. O compartimento da coluna e o detector estavam a 30 ⁰C. Um detector de índice de refração Waters 2414 foi usado para detecção.

[00245] Colunas de GPC adequadas incluem colunas de GPC compatíveis com solventes aquosos, por exemplo colunas acondicionadas com pelo menos um dentre estireno-divinilbenzeno sulfonado, rede de copolímero de acrilato funcionalizado com NH, sílica modificada e gel à base de polimetacrilato hidroxilado. Para as análises aqui, três colunas foram usadas em série, compreendendo uma coluna de guarda de 40 mm de comprimento com um diâmetro interno (ID) de 6 mm acondicionada com gel à base de polimetacrilato hidroxilado de tamanho de partícula de 6 μm, seguido por uma primeira coluna de GPC analítica de 300 mm com um ID de 7,8 mm acondicionada com gel à base de polimetacrilato hidroxilado de tamanho de partícula de 12 μm que tem um limite de exclusão de cerca de 7.000 kDa e uma faixa de peso molecular eficaz entre cerca de 50 kDa e cerca de 5.000 kDa, seguido por uma segunda coluna de GPC analítica de 300 mm com um ID de 7,8 mm acondicionada com gel à base de polimetacrilato hidroxilado de tamanho de partícula de 10 μm que tem um limite de exclusão de cerca de 7.000 kDa e uma faixa de peso molecular eficaz dentre cerca de 1 kDa e cerca de 6.000 kDa. A faixa de peso molecular eficaz total da coluna configurada estava entre cerca de 1 kDa e cerca de 6.000 kDa. Um exemplo dessa configuração de coluna pode ser as colunas Ultrahydrogel® guard- Ultrahydrogel® 2000-Ultrahydrogel® Linear conectadas em série.

[00246] As amostras executadas foram quantificadas contra uma curva padrão que compreende padrões rastreáveis da American Polymer Standards Corporation: DXT3755K (peso molecular máximo = 2164 kDa), DXT820K (peso molecular máximo = 745 kDa), DXT760K (peso molecular máximo = 621 kDa), DXT670K (peso molecular máximo = 401 kDa), DXT530K (peso molecular máximo = 490 kDa), DXT500K (peso molecular máximo = 390 kDa), DXT270K (peso molecular máximo = 196 kDa), DXT225K (peso molecular máximo = 213 kDa), DXT150K (peso molecular máximo = 124 kDa), DXT55K (peso molecular máximo = 50 kDa), DXT50K (peso molecular máximo = 44 kDa) e DXT5K (peso molecular máximo = 4 kDa), os picos de peso molecular destes padrões estão entre cerca de 4 kDa e cerca de

2.200 kDa. A curva padrão usada pode, por exemplo, incluir Dextran 3755 kDa, pelo menos um dentre Dextran 50 kDa e Dextran 55 kDa, e entre 3 a 6 padrões rastreáveis adicionais aqui discutidos, os pontos de calibração sendo os pesos moleculares máximos dos calibrantes usados. Um exemplo de curva de calibração pode consistir em DXT3755K, DXT 820K, DXT530K, DXT500K, DXT225K e DXT55K. As colunas usadas neste documento tinham uma faixa de peso molecular eficaz total que abrangia e se estendia além da faixa de peso molecular máximo dos padrões usados para quantificação dos fucanos.

[00247] Os resultados na tabela 6 abaixo contêm abreviaturas usadas para certas características de uma distribuição de peso molecular. A cromatografia de permeação em gel é denotada por GPC, o peso molecular máximo é denotado por PMW, o peso molecular médio ponderado é denotado por WAMW, o peso molecular médio numérico é denotado por NAMW, a distribuição percentual é denotada por% de dist. e o peso molecular é denotado por MW. % de % de % de PMW WAMW NAMW dist. dist. dist. (kDa) (kDa) (kDa) >100 >200 >500 kDa kDa kDa Fucano 3 690,98 1166,60 443,37 97,77 90,06 63,89 Fucano 4 686,21 1876,74 524,89 98,37 92,97 69,90 Tabela 6 – Características de distribuição de peso molecular de dois fucanos modificados Exemplo 17: Preparação de Composição de Fucano Altamente Purificada por Secagem

[00248] Cerca de 100 mg de Fucano 1 foram colocados em um cadinho. O cadinho contendo Fucano 1 foi colocado em um forno a 105 °C por 30 minutos para produzir uma composição de fucano purificada adicionalmente, a seguir denominada Fucano 1’. O cadinho contendo a composição de Fucano 1’ purificada posteriormente foi removido do forno e colocado em um dessecador. A composição de Fucano 1’ purificada posteriormente é analisada sob uma atmosfera livre de umidade para fucose e galactose totais por HPAE-PAD e para o teor de enxofre e contraíon total por ICP-MS, e é constatado conter um teor de fucose, galactose, sulfato e contraíon total de mais de 99,9% em p/p, em outras palavras, menos de 0,1% de impurezas. Exemplo 18: Preparação de Composição de Fucano Altamente Purificada por Secagem

[00249] Cerca de 600 mg de Fucano 1 foram colocados em uma panela de alumínio em um instrumento analisador de umidade Ohaus MB 90. O instrumento foi programado para aquecer Fucano 1 a 105 °C durante 30 minutos para produzir uma composição de Fucano 1’’ purificada posteriormente. A composição de Fucano 1’’ purificada posteriormente foi removida do instrumento e colocada em um dessecador. A amostra é analisada sob uma atmosfera livre de umidade para fucose e galactose totais por HPAE-PAD e para o teor de enxofre e contraíon total por ICP-MS, e é constatada conter um teor de fucose, galactose, sulfato e contraíon total de mais de 99,9% em p/p, menos de 0,1% de impurezas. Exemplo 19: Aderência fibrosa do corno uterino tratada com fucano 1

[00250] Para determinar a eficácia do fucano 1 purificado/modificado na inibição de aderências cirúrgicas, as seguintes cirurgias do corno uterino duplo (DUH) foram realizadas em ambos os cornos de um total de dois coelhos Brancos da Nova Zelândia. Antes da cirurgia, os coelhos foram pesados e, em seguida, preparados para cirurgia por pré-medicação com cetamina e xilazina.

[00251] A solução de fucoidano foi preparada a 0,33 mg/mL em Injeção de Ringer Lactada USP (LRS), esterilizando por filtração. Todos os instrumentos eram estéreis e um campo estéril foi mantido durante as cirurgias. O abdômen foi limpo e introduzido por meio de uma incisão abdominal na linha média. Os cornos uterinos foram localizados, exteriorizados e raspados para induzir danos. A parede abdominal próxima aos cornos uterinos raspados também foi raspada. Uma quantidade mínima de solução de fucoidano foi aplicada diretamente nos cornos uterinos lesados e nas áreas das paredes laterais. Os cornos uterinos danificados e a parede abdominal foram colocados um ao lado do outro e estabilizados com suturas. 15 mL/kg de solução de fucoidano por peso do coelho foram aplicados na cavidade abdominal antes do fechamento da incisão. A aderência foi avaliada duas semanas após a cirurgia. O comprimento da aderência do corno uterino foi medido com uma régua. A porcentagem de cobertura de aderência do corno uterino, sendo o comprimento da aderência como uma porcentagem do comprimento total do corno uterino danificado foi calculado como: Equação 2: Cobertura da aderência (%) = 100 x comprimento da aderência do corno uterino ÷ comprimento total do corno uterino danificado

[00252] O mesmo método cirúrgico foi aplicado a coelhos Brancos da Nova Zelândia, recebendo 15 mL/kg de Injeção de Ringer Lactada USP (LRS) em vez da solução de fucoidano como grupo controle. O grupo controle que recebeu LRS foi determinado como tendo uma cobertura de aderência de 63% usando a equação 2. A Tabela 7 mostra os resultados obtidos usando o método descrito acima para o fucano 2, sendo um exemplo representativo de um fucano purificado/modificado. Os resultados na tabela abaixo são mostrados como a redução na cobertura de aderência em relação ao grupo controle.

[00253] A Tabela 7 fornece os resultados do tratamento de seis cornos uterinos com fucano 1. % de Redução na cobertura de Dose Número de aderência do corno uterino vs. (mg/kg) Cornos Uterinos controle Fucano 1 5 6 100% Tabela 7: Redução da aderência do corno uterino de coelho usando fucano 1

[00254] Como pode ser visto a partir dos resultados da Tabela 7, os fucanos purificados/modificados aqui discutidos podem ser usados para tratar com sucesso aderências do corno uterino pós-cirúrgicas. Exemplo 20: Aderência fibrosa do corno uterino tratada com fucano 4

[00255] Para determinar a eficácia do fucano 4 purificado/modificado na inibição de aderências cirúrgicas, as seguintes cirurgias do corno uterino duplo (DUH) foram realizadas em ambos os cornos de um total de quatro coelhos Brancos da Nova

Zelândia. Antes da cirurgia, os coelhos foram pesados e, em seguida, preparados para cirurgia por pré-medicação com cetamina e xilazina.

[00256] A solução de fucoidano foi preparada a 3,75 mg/mL em Injeção de Ringer Lactada USP (LRS), esterilizando por filtração. Todos os instrumentos eram estéreis e um campo estéril foi mantido durante as cirurgias. O abdômen foi limpo e introduzido por meio de uma incisão abdominal na linha média. Os cornos uterinos foram localizados, exteriorizados e raspados para induzir danos. A parede abdominal próxima aos cornos uterinos raspados também foi raspada. 4 mL de solução de fucoidano foram aplicados diretamente ao corno uterino lesionado esquerdo e na área da parede lateral e 4 mL de solução de fucoidano foram aplicados diretamente ao corno uterino lesionado direito e na área da parede lateral. Os cornos uterinos danificados e a parede abdominal foram colocados um ao lado do outro e estabilizados com suturas. Um tubo de drenagem foi posicionado na cavidade peritoneal antes do fechamento da incisão. O tubo de drenagem é removido 48 horas pós-cirurgia. A aderência foi avaliada duas semanas após a cirurgia. O comprimento da aderência do corno uterino foi medido com uma régua. A cobertura de aderência do corno uterino foi calculada usando a equação 2.

[00257] O mesmo método cirúrgico foi aplicado a 3 coelhos Brancos da Nova Zelândia, recebendo 4 mL de cada lado de Solução de Ringer Lactada USP (LRS) em vez de solução de fucoidano como um grupo controle. O grupo controle recebendo LRS foi determinado como tendo uma cobertura de aderência de 73% usando a equação 2. A Tabela 8 mostra os resultados obtidos usando o método descrito acima para fucano 4, sendo um exemplo representativo de um fucano purificado/modificado. Os resultados na tabela abaixo são mostrados como a redução na cobertura de aderência em relação ao grupo controle.

[00258] A Tabela 8 fornece o resultado do tratamento de oito cornos uterinos com fucano 4. Dose Número de % de Redução na cobertura de (mg/k Cornos aderência do corno uterino vs. g) Uterinos controle 92,9% (isto é, 92,9% de redução Fucano 9,8 8 em aderências fibrosas em 4 comparação ao controle) Tabela 8: Redução na aderência do corno uterino de coelho usando fucano 4

[00259] Como pode ser visto a partir dos resultados da Tabela 8, os fucanos purificados/modificados podem ser usados para tratar com sucesso aderências do corno uterino pós-cirúrgicas. Exemplo 21: Aderência fibrosa do corno uterino tratada com fucano 6

[00260] Para determinar a eficácia do fucano 6 purificado/modificado na inibição de aderências cirúrgicas, as seguintes cirurgias do corno uterino duplo (DUH) foram realizadas em ambos os cornos de um total de quatro coelhos Brancos da Nova Zelândia. Antes da cirurgia, os coelhos foram pesados e, em seguida, preparados para cirurgia por pré-medicação com cetamina e xilazina.

[00261] A solução de fucoidano foi preparada a 0,33 mg/mL em Injeção de Ringer Lactada USP (LRS), esterilizando por filtração. Todos os instrumentos eram estéreis e um campo estéril foi mantido durante as cirurgias. O abdômen foi limpo e introduzido por meio de uma incisão abdominal na linha média. Os cornos uterinos foram localizados, exteriorizados e raspados para induzir danos. A parede abdominal próxima aos cornos uterinos raspados também foi raspada. Os cornos uterinos danificados e a parede abdominal foram colocados um ao lado do outro e estabilizados com suturas. Cerca de 15 mL/kg de solução de fucoidano por peso do coelho foram aplicados na cavidade abdominal antes do fechamento da incisão. A aderência foi avaliada duas semanas após a cirurgia. Três coelhos foram avaliados para cada concentração de fucoidano preparada. O comprimento da aderência do corno uterino foi medido com uma régua. O comprimento da aderência do corno uterino foi calculado usando a equação 2.

[00262] O mesmo método cirúrgico foi aplicado a 4 coelhos Brancos da Nova Zelândia, recebendo cerca de 15 mL/kg de Injeção de Ringer Lactada USP (LRS) controle em vez de solução de fucoidano. O grupo controle que recebeu LRS foi determinado ter uma cobertura de aderência de 71% usando a equação 2. A Tabela 9 mostra os resultados obtidos usando o método discutido acima para fucano 6. Os resultados na tabela abaixo são mostrados como a redução na cobertura de aderência em relação ao grupo controle.

[00263] A Tabela 9 fornece o resultado do tratamento de oito cornos uterinos com fucano 6. Dose Número de % de Redução na cobertura de (mg/kg Cornos aderência do corno uterino vs. ) Uterinos controle -18% (isto é, 18% de aumento em Fucano 6 5 8 aderências fibrosas em comparação ao controle) Tabela 9: Aumento na aderência do corno uterino de coelho usando fucano 9 em relação à LRS controle

[00264] Como pode ser visto a partir dos resultados da Tabela 9, o fucano 6 preparado usando métodos conhecidos e tendo um teor não fucano total superior a 50% em p/p do fucano não foi eficaz no tratamento de aderências fibrosas. Exemplo 22: Aderência fibrosa do corno uterino tratada com fucano 7

[00265] Para determinar a eficácia do fucano 7 purificado/modificado na inibição de aderências cirúrgicas, as seguintes cirurgias do corno uterino duplo (DUH) foram realizadas em ambos os cornos de um total de quatro coelhos Brancos da Nova Zelândia. Antes da cirurgia, os coelhos foram pesados e, em seguida, preparados para cirurgia por pré-medicação com cetamina e xilazina.

[00266] A solução de fucoidano foi preparada a 0,33 mg/mL em Injeção de Ringer Lactada USP (LRS), esterilizando por filtração. Todos os instrumentos eram estéreis e um campo estéril foi mantido durante as cirurgias. O abdômen foi limpo e introduzido por meio de uma incisão abdominal na linha média. Os cornos uterinos foram localizados, exteriorizados e raspados para induzir danos. A parede abdominal próxima aos cornos uterinos raspados também foi raspada. Os cornos uterinos danificados e a parede abdominal foram colocados um ao lado do outro e estabilizados com suturas. Cerca de 15 mL/kg de solução de fucoidano por peso do coelho foram aplicados na cavidade abdominal antes do fechamento da incisão. A aderência foi avaliada duas semanas após a cirurgia. Três coelhos foram avaliados para cada concentração de fucoidano preparada. O comprimento da aderência do corno uterino foi medido com uma régua. O comprimento da aderência do corno uterino foi calculado usando a equação 2.

[00267] O mesmo método cirúrgico foi aplicado a 4 coelhos Brancos da Nova Zelândia, recebendo cerca de 15 mL/kg de Injeção de Ringer Lactada USP (LRS) controle em vez de solução de fucoidano. O grupo controle que recebeu LRS foi determinado como tendo uma cobertura de aderência de 76% usando a equação 2. A Tabela 10 mostra os resultados obtidos usando o método discutido acima para fucano 7. Os resultados na tabela abaixo são mostrados como a redução na cobertura de aderência em relação ao grupo controle.

[00268] A Tabela 10 fornece o resultado do tratamento de oito cornos uterinos com fucano 7.

Dose Número de % de Redução na cobertura de (mg/kg Cornos Uterinos aderência do corno uterino vs. ) controle 3,7% (isto é, 3,7% de redução em Fucano 7 5 8 aderências fibrosas em comparação ao controle) Tabela 10: Diminuição da aderência do corno uterino de coelho usando fucano 7 em relação à LRS controle

[00269] Como pode ser visto a partir dos resultados da Tabela 10, o fucano 7 preparado usando métodos conhecidos e tendo um teor não fucano total superior a 50% em p/p do fucano não é eficaz no tratamento de aderências fibrosas. Exemplo 23: Aderência fibrosa do corno uterino tratada com fucano 4

[00270] Para determinar a eficácia do fucano 4 purificado/modificado na inibição de aderências cirúrgicas, as seguintes cirurgias do corno uterino duplo (DUH) foram realizadas em ambos os cornos de um total de três coelhos Brancos da Nova Zelândia. Antes da cirurgia, os coelhos foram pesados e, em seguida, preparados para cirurgia por pré-medicação com cetamina e xilazina.

[00271] A solução de fucoidano foi preparada a 5 mg/mL em Injeção de Ringer Lactada USP (LRS), esterilizando por filtração. Todos os instrumentos eram estéreis e um campo estéril foi mantido durante as cirurgias. O abdômen foi limpo e introduzido por meio de uma incisão abdominal na linha média. Os cornos uterinos foram localizados, exteriorizados e raspados para induzir danos. A parede abdominal próxima aos cornos uterinos raspados também foi raspada. Os cornos uterinos danificados e a parede abdominal foram colocados um ao lado do outro e estabilizados com suturas. O terço superior e o terço inferior da incisão muscular foram fechados e 5 mL/kg de solução de fucoidano por peso do coelho foram aplicados na cavidade abdominal. A incisão muscular foi fechada temporariamente e a solução de fucoidano deixada na cavidade abdominal por 30 minutos. A incisão muscular foi reaberta e a cavidade abdominal foi estimulada com 10 mL/kg de LRS. A maior parte do líquido da cavidade abdominal foi aspirada antes do fechamento da incisão. A formação da adesão foi avaliada duas semanas após a cirurgia. O comprimento da aderência do corno uterino foi medido com uma régua. A porcentagem de cobertura de aderência do corno uterino, sendo o comprimento da aderência como uma porcentagem do comprimento total do corno uterino danificado, foi calculada usando a equação 2.

[00272] A Tabela 11 mostra os resultados obtidos usando o método discutido acima para fucano 4, sendo um exemplo representativo de um fucano purificado/modificado. Os resultados na tabela abaixo são mostrados como o comprimento médio de aderência ao longo dos 6 cornos uterinos avaliados.

[00273] A Tabela 11 fornece os resultados do tratamento de seis cornos uterinos com fucano 4. Dose Número de Cornos % do comprimento da (mg/kg) Uterinos aderência médio 0% (isto é, nenhuma Fucano 25 6 aderência foi 4 encontrada) Tabela 11: Comprimento de aderência usando fucano 4

[00274] Como pode ser visto a partir dos resultados da Tabela 11, os fucanos purificados/modificados podem ser usados para inibir, prevenir, remover, reduzir ou tratar de outra forma aderências do corno uterino pós-cirúrgicas. Exemplo 24: Aderência fibrosa do corno uterino tratada com uma composição de fucano purificada/modificada

[00275] Para determinar a eficácia de uma composição de fucano purificado/modificado compreendendo uma fucose, galactose, sulfato e contraíons totais de 92% em p/p na inibição de aderências cirúrgicas, as seguintes cirurgias do corno uterino duplo (DUH) foram realizadas em ambos os cornos de um total de vinte coelhos Brancos da Nova Zelândia. Antes da cirurgia, os coelhos foram pesados e, em seguida, preparados para a cirurgia por pré-medicação com midazolam e dexmeditomidina.

[00276] A solução de fucoidano foi preparada em cada concentração de 0,02 mg/mL, 0,1 mg/mL, 0,5 mg/mL ou 2,5 mg/mL em Injeção de Ringer Lactata USP (LRS), esterilizando por filtração. Todos os instrumentos eram estéreis e um campo estéril foi mantido durante as cirurgias. O abdômen foi limpo e introduzido por meio de uma incisão abdominal na linha média. Os cornos uterinos foram localizados, exteriorizados e raspados para induzir danos. A parede abdominal próxima aos cornos uterinos raspados também foi raspada. Os cornos uterinos danificados e a parede abdominal foram colocados um ao lado do outro e estabilizados com suturas. Cerca de 2 mL/kg de solução de fucoidano por peso do coelho foram aplicados na cavidade abdominal antes do fechamento da incisão. A aderência foi avaliada duas semanas após a cirurgia. Cinco coelhos foram tratados e avaliados para cada concentração de fucoidano preparada. O comprimento da aderência do corno uterino foi medido com uma régua. O comprimento da aderência do corno uterino foi calculado usando a equação 2.

[00277] O mesmo método cirúrgico foi aplicado a 5 coelhos Brancos da Nova Zelândia adicionais para controle, cada um recebendo cerca de 2 mL/kg de Injeção de Ringer Lactada USP (LRS) controle em vez de solução de fucoidano. O grupo controle que recebeu LRS foi determinado como tendo uma cobertura de aderência de 100% usando a equação 2. A Tabela 12 mostra os resultados obtidos usando o método discutido acima para a composição de fucano purificado/modificado em diferentes concentrações e dosagens (no total, quarenta cornos uterinos foram tratados, 10 cada para cada concentração da composição de fucano purificado/modificado); os resultados são mostrados como a redução da cobertura de aderência em relação ao grupo controle. Concentração Dose Número de % de Redução na cobertura (mg/mL) (mg/kg) Cornos de aderência do corno Uterinos uterino vs. controle 0,02 0,04 10 10% (isto é, 10% de diminuição em adesões fibrosas em comparação ao controle) 0,1 0,2 10 30% (isto é, 30% de diminuição em adesões fibrosas em comparação ao controle) 0,5 1 10 71% (isto é, 71% de diminuição em adesões fibrosas em comparação ao controle) 2,5 5 10 95% (isto é, 95% de diminuição em adesões fibrosas em comparação ao controle) Tabela 12: Diminuição da aderência do corno uterino de coelho usando uma composição de fucano purificada/modificada em relação à LRS controle

[00278] Como pode ser visto a partir dos resultados da Tabela 12, as composições de fucano purificadas/modificadas podem ser usadas para inibir, prevenir, remover, reduzir ou tratar de outra forma aderências do corno uterino pós-cirúrgicas. Lista de numerais de referência 1200 Sistema de modificação do teor catiônico

1202 Linha de fornecimento de entrada 1204 Pré-filtro 1206 Válvula de saída do sistema de modificação do teor catiônico 1206 Linha de saída do sistema de modificação do teor catiônico 1210 Filtro para filtração do fluxo tangencial (TFF) 1212 Linha de fornecimento da TFF 1214 Bomba de entrada da TFF 1216 Recipiente de fucano 1217 Válvula do retentado da TFF 1218 Linha de retorno do retentado da TFF 1219 Linha de saída do permeado da TFF 1220 Primeiro recipiente de solução de diafiltração 1224 Primeira válvula de solução de diafiltração 1225 Primeira linha de fornecimento de solução de diafiltração 1230 Segundo recipiente de solução de diafiltração 1234 Segunda válvula de solução de diafiltração 1235 Segunda linha de fornecimento de solução de diafiltração

[00279] Todos os termos usados neste documento são usados de acordo com seus significados comuns, a menos que o contexto ou definição indique claramente o contrário. Além disso, a menos que expressamente indicado de outra forma, nesta descrição o uso de “ou” inclui “e” e vice-versa. Os termos não limitativos não devem ser interpretados como limitantes, a menos que expressamente declarado, ou o contexto indique claramente, de outra forma (por exemplo, “incluindo”, “tendo” e “compreendendo” normalmente indicam “incluindo, sem limitação”). Formas singulares, incluindo nas reivindicações, tais como “um”, “uma” e “o/a” incluem a referência no plural, a menos que expressamente declarado, ou o contexto indique claramente o contrário.

[00280] A menos que indicado de outra forma, os adjetivos aqui como “substancialmente” e “cerca de” que modificam uma condição ou característica de relação de um recurso ou recursos de uma modalidade, indicam que a condição ou característica é definida dentro de tolerâncias que são aceitáveis para a operação da modalidade para uma aplicação a que se destina.

[00281] O escopo dos presentes métodos, composições, sistemas, etc., inclui os conceitos de meio mais função e etapa mais função. No entanto, as reivindicações não devem ser interpretadas como indicando uma relação “meio mais função”, a menos que a palavra “meio” seja especificamente recitada em uma reivindicação, e devem ser interpretadas como indicando uma relação “meio mais função” em que a palavra “significa “é especificamente recitado em uma reivindicação. Da mesma forma, as reivindicações não devem ser interpretadas como indicando uma relação “etapa mais função”, a menos que a palavra “etapa” seja especificamente recitada em uma reivindicação, e devem ser interpretadas como indicando uma relação “etapa mais função” em que a palavra “etapa” é especificamente recitada em uma reivindicação.

[00282] Do exposto, será apreciado que, embora modalidades específicas tenham sido discutidas neste documento para fins de ilustração, várias modificações podem ser feitas sem se desviar do espírito e do escopo da discussão neste documento. Por conseguinte, os sistemas e métodos, etc., incluem tais modificações, bem como todas as permutações e combinações do assunto aqui estabelecido e não são limitados, exceto pelas reivindicações anexas ou outra reivindicação tendo suporte adequado na discussão e nas figuras aqui.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Composição de fucano consistindo em pelo menos cerca de 96% em p/p de fucanos e não mais do que cerca de 4% de componentes ou compostos ou substâncias não fucano, caracterizada pelo fato de que o fucano deve ter fucose, sulfato e contraíons, e pode ainda consistir de galactose, glicose, ramnose, manose, xilose e ácido glicurônico.

2. Composição de fucano, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o fucano compreende não mais do que cerca de 17% de contraíons, e em que um teor total de fucose, galactose, sulfato e contraíons do fucano é maior do que 96% em p/p.

3. Composição de fucano, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o fucano consiste em fucose, galactose, sulfato e contraíons.

4. Composição de fucano, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que as impurezas compreendem água.

5. Composição de fucano, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que a composição de fucano consiste em fucano e não mais do que cerca de 3% das impurezas.

6. Composição de fucano, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que a composição de fucano consiste em fucano e não mais do que cerca de 2% das impurezas.

7. Composição de fucano, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que a composição de fucano consiste em fucano e não mais do que cerca de 1% das impurezas.

8. Composição de fucano, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que a composição de fucano consiste em fucano e não mais do que cerca de 0,1% das impurezas.

9. Composição de fucano, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizada pelo fato de que o teor de fucose do fucano é maior do que 25% em p/p.

10. Composição de fucano, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizada pelo fato de que o teor de fucose do fucano é maior do que 30% em p/p.

11. Composição de fucano, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizada pelo fato de que o teor de fucose do fucano é maior do que 35% em p/p.

12. Composição de fucano, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizada pelo fato de que o teor de fucose do fucano é maior do que 40% em p/p.

13. Composição de fucano, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizada pelo fato de que o teor de galactose do fucano é menor do que 10% em p/p

14. Composição de fucano, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizada pelo fato de que o teor de galactose do fucano é menor do que 5% em p/p.

15. Composição de fucano, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizada pelo fato de que o teor de contraíon total do fucano é menor do que 17% em p/p.

16. Composição de fucano, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizada pelo fato de que o teor de contraíon total do fucano é menor do que 14% em p/p.

17. Composição de fucano, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizada pelo fato de que o teor de contraíon total do fucano é menor que 10% em p/p.

18. Composição de fucano, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizada pelo fato de que o teor de contraíon total do fucano é menor do que 7% em p/p.

19. Composição de fucano, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 18, caracterizada pelo fato de que o contraíon é um contraíon farmaceuticamente aceitável.

20. Composição de fucano, de acordo com a reivindicação 19, caracterizada pelo fato de que o contraíon farmaceuticamente aceitável compreende pelo menos um dentre alumínio, arginina, benzatina, cloroprocaína, colina, sódio, potássio, lítio, amônio, etileno diamina, dietilamina, dietanolamina, etanolamina, histidina, lisina, N- metil glicamina, meglumina, procaína, trietilamina, zinco, cálcio e magnésio.

21. Composição de fucano, de acordo com a reivindicação 19, caracterizada pelo fato de que o contraíon farmaceuticamente aceitável compreende pelo menos um dentre sódio e potássio.

22. Composição de fucano, de acordo com a reivindicação 19, caracterizada pelo fato de que o contraíon farmaceuticamente aceitável consiste essencialmente em pelo menos um dentre sódio e potássio.

23. Composição de fucano, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 22, caracterizada pelo fato de que o fucano tem uma distribuição de peso molecular em que pelo menos 60% em p/p da distribuição é maior do que 100 kDa quando medido utilizando-se uma cromatografia de permeação em gel aquosa apresentada consistindo essencialmente em: uma coluna de cromatografia de permeação em gel analítica de 300 mm com um diâmetro interno de 7,8 mm acondicionado com gel à base de polimetacrilato hidroxilado, tendo uma faixa de peso molecular eficaz entre cerca de 50 kDa e cerca de

5.000 kDa, uma coluna de cromatografia de permeação em gel analítica de 300 mm com um diâmetro interno de 7,8 mm acondicionado com gel à base de polimetacrilato hidroxilado, tendo uma faixa de peso molecular eficaz entre cerca de 1 kDa e cerca de

6.000 kDa e uma coluna de guarda de 40 mm com um diâmetro interno de 6 mm acondicionado com gel à base de polimetacrilato hidroxilado, as duas colunas de cromatografia de permeação em gel analítica e a coluna de guarda contida em um compartimento de coluna a cerca de 30°C; um detector de índice refrativo a cerca de 30°C; fase móvel de nitrato de sódio 1M conduzida a 0,6 mL/min; e a quantificação contra uma curva padrão de peso molecular máximo consistindo essencialmente em um primeiro padrão de dextrano com um peso molecular máximo de cerca de 2.200 kDa, um segundo padrão de dextrano com um peso molecular máximo entre cerca de 720 kDa e cerca de 760 kDa, um terceiro padrão de dextrano com um peso molecular máximo entre cerca de 470 kDa e cerca de 510 kDa, um quarto padrão de dextrano com um peso molecular máximo entre cerca de 370 kDa e cerca de 410 kDa, um quinto padrão de dextrano com um peso molecular máximo entre cerca de 180 kDa e cerca de 220 kDa, e um sexto padrão de dextrano com um peso molecular máximo entre cerca de 40 kDa e 55 kDa.

24. Composição de fucano, de acordo com a reivindicação 23, caracterizada pelo fato de que o fucano tem uma distribuição de peso molecular em que pelo menos 92% em p/p da distribuição é maior do que 100 kDa.

25. Composição de fucano, de acordo com a reivindicação 23, caracterizada pelo fato de que o fucano tem uma distribuição de peso molecular em que pelo menos 97% em p/p da distribuição é maior do que 100 kDa.

26. Composição de fucano, de acordo com a reivindicação 23, caracterizada pelo fato de que o fucano tem um peso molecular médio ponderado maior do que 100 kDa.

27. Composição de fucano, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 26, caracterizada pelo fato de que o fucano tem um nível de sulfatação entre cerca de 20% em p/p e 60% em p/p

28. Composição de fucano, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 26, caracterizada pelo fato de que o fucano tem um nível de sulfatação entre cerca de 30% em p/p e 55% em p/p.

29. Composição de fucano, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 26, caracterizada pelo fato de que o fucano tem um nível de sulfatação entre cerca de 35% em p/p e 52% em p/p.

30. Composição de fucano, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 26, caracterizada pelo fato de que o fucano tem um teor total de carboidrato entre 27% em p/p e 80% em p/p.

31. Composição de fucano, de acordo com a reivindicação 30, caracterizada pelo fato de que o fucano tem um total de teor de ácido glicurônico, manose, ramnose, glicose e xilose como uma percentagem do teor total de carboidrato abaixo de cerca de 12% em p/p.

32. Composição de fucano, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 31, caracterizada pelo fato de que a composição de fucano, quando dissolvida em água, em uma concentração de 50 mg/mL, tem uma viscosidade entre cerca de 4 cP e 50 cP.

33. Composição de fucano, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 31, caracterizada pelo fato de que a composição de fucano, quando dissolvida em água, em uma concentração de 50 mg/mL, tem uma viscosidade entre cerca de 15 cP e 30 cP.

34. Composição de fucano, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 33, caracterizada pelo fato de que a composição de fucano é um sólido branco.

35. Composição de fucano, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 34, caracterizada pelo fato de que a composição de fucano quando dissolvida em água a uma concentração de 1 mg/mL a 100 mg/mL forma uma solução que é transparente e incolor.

36. Composição de fucano, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 35, caracterizada pelo fato de que o fucano compreende menos do que 5% em peso de teor de acetila.

37. Composição de fucano, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 35, caracterizada pelo fato de que o fucano compreende menos do que 2% em p/p de teor de acetila.

38. Composição de fucano, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 35, caracterizada pelo fato de que o fucano compreende um teor de acetila de substancialmente 0% em p/p, quando medida por coerência quântica múltipla heteronuclear 1H-13C 2D a 70 °C com supressão de sinal de solvente em um espectrômetro de 600 MHz equipado com sonda fria de 5 mm, na faixa de 10-30 ppm na dimensão de carbono, em 8 incrementos de 256-512 varreduras cada um.

39. Método, caracterizado pelo fato de que compreende a preparação da composição de fucano, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 38.

40. Método, caracterizado pelo fato de que compreende a utilização da composição de fucano, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 38.

41. Método, de acordo com a reivindicação 40,

caracterizado pelo fato de que o uso compreende o tratamento de aderências fibrosas.

42. Composição medicamente aceitável, caracterizada pelo fato de que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz da composição de fucano, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 38 em um tampão ou diluente farmaceuticamente aceitável.

43. Método de tratamento de uma condição ou doença em um animal, caracterizado pelo fato de que compreende a seleção da composição medicamente aceitável, como definida na reivindicação 42, para o tratamento da condição ou doença e administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz que compreende entre cerca de 0,5 mg/kg e 50 mg/kg do indivíduo ao animal.

44. Método de tratamento de uma condição ou doença em um animal, caracterizado pelo fato de que compreende a seleção da composição medicamente aceitável, como definida na reivindicação 42, para tratar a condição ou a doença e a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz entre cerca de 0,04 mg/kg e 25 mg/kg do fucano para o animal.

45. Método, de acordo com a reivindicação 43 ou 44, caracterizado pelo fato de que a quantidade está entre cerca de 0,2 mg/kg e 10 mg/kg.

46. Método, de acordo com a reivindicação 43 ou 44, caracterizado pelo fato de que a quantidade está entre cerca de 1 mg/kg e 5 mg/kg.

47. Método, de acordo com a reivindicação 43 ou 44, caracterizado pelo fato de que a quantidade está entre cerca de 1,5 mg/kg e 3 mg/kg.

48. Método, de acordo com a reivindicação 43 ou 44, caracterizado pelo fato de que a quantidade está entre cerca de 5 mg/kg e 10 mg/kg.

49. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 43 a 48, caracterizado pelo fato de que a condição ou doença é uma aderência fibrosa em um sítio alvo no animal, e em que a administração compreende a administração da quantidade terapeuticamente eficaz ao sítio alvo.

50. Composição médica, caracterizada pelo fato de que compreende entre cerca de 0,02 mg/mL e 100 mg/mL da composição de fucano, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 38, em que a composição médica é configurada e composta para tratar uma doença ou condição em um animal.

51. Composição médica, de acordo com a reivindicação 50, caracterizada pelo fato de que compreende entre cerca de 0,5 mg/mL e 5 mg/mL da composição de fucano.

52. Composição médica, de acordo com a reivindicação 50, caracterizada pelo fato de que compreende cerca de 2,5 mg/mL da composição de fucano.

53. Composição médica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 50 a 52, caracterizada pelo fato de que a composição médica é um dispositivo médico.

54. Composição médica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 50 a 52, caracterizada pelo fato de que a composição médica é um dispositivo médico líquido.

55. Composição médica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 50 a 52, caracterizada pelo fato de que a composição médica é uma composição farmacêutica.

56. Composição médica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 50 a 52, caracterizada pelo fato de que a composição médica é uma composição farmacêutica líquida.

57. Composição médica, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 50 a 56, caracterizada pelo fato de que a doença ou condição é uma aderência fibrosa.

58. Uso de uma faixa de dosagem, caracterizado pelo fato de que compreende entre cerca de 0,01 mL/kg e 15 mL/kg da composição médica, como definida em qualquer uma das reivindicações 50 a 57, para tratar uma doença ou condição em um animal.

59. Uso de uma faixa de dosagem, caracterizado pelo fato de que compreende entre cerca de 0,03 mL/kg e 4 mL/kg da composição médica, como definida em qualquer uma das reivindicações 50 a 57, para tratar uma doença ou condição em um animal.

60. Uso de uma faixa de dosagem, caracterizado pelo fato de que compreende entre cerca de 0,06 mL/kg e 2 mL/kg da composição médica, como definida em qualquer uma das reivindicações 50 a 57, para tratar uma doença ou condição em um animal.

61. Uso de uma faixa de dosagem, caracterizado pelo fato de que compreende entre cerca de 2 mL/kg e 4 mL/kg da composição médica, como definida em qualquer uma das reivindicações 50 a 57, para tratar uma doença ou condição em um animal.

62. Método para o tratamento de uma doença ou condição selecionada em um paciente, caracterizado pelo fato de que compreende a identificação de um sítio alvo selecionado em um paciente, compreendendo ou razoavelmente suscetível a ter a doença ou condição selecionada e, então, a administração da composição médica, como definida em qualquer uma das reivindicações 50 a 57, ao sítio alvo selecionado no paciente.

63. Método, de acordo com a reivindicação 62, caracterizado pelo fato de que a doença ou condição são as aderências fibrosas.

64. Método, de acordo com a reivindicação 62 ou 63, caracterizado pelo fato de que o sítio alvo é um sítio cirúrgico e a administração é realizada pelo menos a) após a abertura de uma ferida cirúrgica no sítio cirúrgico, b) durante a cirurgia, e c) após o fechamento da ferida cirúrgica.

65. Método, de acordo com a reivindicação 62 ou 63, caracterizado pelo fato de que a administração é realizada após a cirurgia e antes do fechamento da ferida cirúrgica.

66. Método, de acordo com a reivindicação 62 ou 63, caracterizado pelo fato de que a administração leva menos do que 3 minutos.

67. Método, de acordo com a reivindicação 62 ou 63, caracterizado pelo fato de que a administração leva menos de 2 minutos.

68. Método, de acordo com a reivindicação 62 ou 63, caracterizado pelo fato de que a administração leva menos de 1 minuto.

69. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 62 a 68, caracterizado pelo fato de que o sítio alvo é pelo menos um dentre um sítio de lesão, abrasão e dano.

70. Método, de acordo com a reivindicação 69, caracterizado pelo fato de que o sítio alvo é pelo menos um dentre uma cavidade pélvica, uma cavidade abdominal, uma cavidade dorsal, uma cavidade craniana, uma cavidade espinal, uma cavidade ventral, uma cavidade torácica, uma cavidade pleural e uma cavidade pericardial, uma articulação, um músculo de um tendão e um ligamento.

71. Método para a remoção de impurezas de uma composição de fucano de partida para obter uma composição de fucano purificada/modificada, caracterizado pelo fato de que compreende: fornecimento de uma composição de fucano de partida compreendendo impurezas; adição de um auxiliar de floculação à composição de fucano de partida para produzir uma mistura de reação; floculação das impurezas por aquecimento da mistura de reação para produzir impurezas floculadas; e remoção das impurezas floculadas.

72. Método, de acordo com a reivindicação 71, caracterizado pelo fato de que o fornecimento da composição de fucano de partida compreende o fornecimento da composição de fucano de partida como uma solução.

73. Método, de acordo com a reivindicação 71, caracterizado pelo fato de que compreende ainda a coleta da composição de fucano purificada/modificada em uma solução de impurezas reduzidas.

74. Método, de acordo com a reivindicação 71, caracterizado pelo fato de que a floculação das impurezas compreende o aquecimento da mistura de reação em excesso de pressão atmosférica.

75. Método, de acordo com a reivindicação 71, caracterizado pelo fato de que o auxiliar de floculação compreende um sal.

76. Método, de acordo com a reivindicação 75, caracterizado pelo fato de que o sal compreende cloreto, brometo, iodeto, fluoreto, sulfato, sulfito, carbonato, bicarbonato, fosfato, nitrato, nitrito, acetato, citrato, silicato e/ou cianeto de um metal alcalino, metal alcalino terroso, alumínio e/ou amônio.

77. Método, de acordo com a reivindicação 71,

caracterizado pelo fato de que o auxiliar de floculação compreende uma base.

78. Método, de acordo com a reivindicação 77, caracterizado pelo fato de que a base compreende um hidróxido e/ou óxido de um metal alcalino, metal alcalino terroso, alumínio e/ou amônio.

79. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 71 a 78, caracterizado pelo fato de que as impurezas removidas compreendem pelo menos um dos particulados, lipídeos, ácidos graxos, fonotaninas, laminarinas, alginatos, proteínas, produtos de reação de Maillard, fucoxantina, clorofila, bactérias, componentes celulares e DNA.

80. Método para a remoção de impurezas de uma composição de fucano de partida para obter uma composição de fucano purificada/modificada, caracterizado pelo fato de que compreende: fornecer uma composição de fucano de partida como um sólido e um meio de extração incapaz de dissolver fucanos, configurado para a dissolução de impurezas; mistura da composição de fucano de partida com o meio de extração para produzir uma mistura da composição de fucano purificada/modificada e do meio de extração; e separação da composição de fucano purificada/modificada a partir do meio de extração.

81. Método, de acordo com a reivindicação 80, caracterizado pelo fato de que compreende ainda a coleta da composição de fucano purificada/modificada como um sólido.

82. Método, de acordo com a reivindicação 80, caracterizado pelo fato de que o meio de extração compreende pelo menos um solvente orgânico com polaridade relativa menor do que

0,765.

83. Método, de acordo com a reivindicação 82, caracterizado pelo fato de que o solvente orgânico compreende pelo menos um dentre etanol, isopropanol, metanol, benzeno, éter dietílico, decametilciclo-pentassiloxano, acetato de etila, butanol, hexano, heptano, heptanol, octanol e decanol.

84. Método, de acordo com a reivindicação 82, caracterizado pelo fato de que o meio de extração compreende ainda pelo menos um dentre uma base, um detergente e um agente oxidante.

85. Método, de acordo com a reivindicação 80, caracterizado pelo fato de que o fornecimento da composição de fucano de partida em uma forma sólida compreende a precipitação da composição de fucano de partida a partir de uma solução.

86. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 80 a 85, caracterizado pelo fato de que as impurezas removidas compreendem pelo menos um dos particulados, lipídeos, ácidos graxos, fonotaninas, laminarinas, alginatos, proteínas, produtos de reação de Maillard, fucoxantina, clorofila, bactérias, componentes celulares e DNA.

87. Método para a remoção de impurezas de uma composição de fucano de partida para obter uma composição de fucano purificada/modificada, caracterizado pelo fato de que compreende: fornecimento de uma composição de fucano de partida compreendendo impurezas, incluindo impurezas suspensas em uma solução; precipitação das impurezas da solução usando um precipitante de impureza iônica-multivalente, produzindo assim uma mistura de impurezas suspensas, impurezas precipitadas e uma solução de sobrenadante; e separação das impurezas suspensas e das impurezas precipitadas da solução de sobrenadante.

88. Método, de acordo com a reivindicação 87, caracterizado pelo fato de que compreende ainda a coleta da solução de sobrenadante, compreendendo a composição de fucano purificada/modificada.

89. Método, de acordo com a reivindicação 87, caracterizado pelo fato de que o precipitante de impureza iônico- multivalente compreende um sal de um cátion divalente ou trivalente.

90. Método, de acordo com a reivindicação 89, caracterizado pelo fato de que o sal é cloreto, brometo, iodeto, fluoreto, sulfato, sulfito, carbonato, bicarbonato, fosfato, nitrato, nitrito, acetato, citrato, silicato e/ou cianeto.

91. Método, de acordo com a reivindicação 89, caracterizado pelo fato de que o cátion é um metal alcalino terroso, zinco, alumínio, cobre e/ou ferro.

92. Método, de acordo com a reivindicação 87, caracterizado pelo fato de que o precipitante de impureza iônico- multivalente compreende uma base de um cátion divalente ou trivalente.

93. Método, de acordo com a reivindicação 92, caracterizado pelo fato de que a base é um hidróxido e/ou óxido de um metal alcalino terroso, zinco, alumínio, cobre e/ou ferro.

94. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 87 a 93, caracterizado pelo fato de que a separação das impurezas em suspensão e das impurezas precipitadas da solução de sobrenadante compreende a floculação das impurezas suspensas e das impurezas precipitadas pela adição de um floculante à mistura de impurezas suspensas, impurezas precipitadas e solução de sobrenadante.

95. Método, de acordo com a reivindicação 94, caracterizado pelo fato de que o floculante compreende pelo menos um dentre sulfato de potássio e alumínio; sulfato de sódio e alumínio; sulfato de amônio e alumínio; cloreto de cálcio; fosfato de sódio; hidróxido de alumínio; cloreto de alumínio; cloreto férrico; sulfato férrico; sulfato ferroso; silicato de sódio; silicato de cálcio; fosfato de cálcio; cloreto de zinco; carbonato de cálcio; bicarbonato de cálcio; sulfato de potássio; fosfato de magnésio; acrilamidas; ácido acrílico; cloridrato de alumínio; cloreto de polialumínio; taninas; formaldeído; melamina; cloreto de metila de N,N-dimetilaminoetil acrilato; quaternário de cloreto de metila de N,N-dimetilaminoetil metacrilato; e cloreto de polidialildimetil-amônio.

96. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 87 a 95, caracterizado pelo fato de que compreende ainda a manutenção de um pH entre cerca de 7 e 14.

97. Método, de acordo com a reivindicação 96, caracterizado pelo fato de que a manutenção do pH compreende a adição de base.

98. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 87 a 97, caracterizado pelo fato de que as impurezas removidas compreendem pelo menos um dos particulados, lipídeos, ácidos graxos, fonotaninas, laminarinas, alginatos, proteínas, produtos de reação de Maillard, fucoxantina, clorofila, bactérias, componentes celulares e DNA.

99. Método para a remoção de impurezas de uma composição de fucano de partida para obter uma composição de fucano purificada/modificada, caracterizado pelo fato de que compreende: fornecimento de uma composição de fucano de partida compreendendo impurezas; ajuste do pH de composição de partida para entre cerca de 8 e 14; adição à composição de fucano de partida de um agente de ruptura celular configurado para a lise de componentes celulares para produzir uma mistura de reação que compreende o agente de ruptura celular, os lisados biomoleculares e a composição de fucano de partida; e remoção do agente de ruptura celular e lisados biomoleculares da mistura de reação.

100. Método, de acordo com a reivindicação 99, caracterizado pelo fato de que o fornecimento da composição de fucano de partida compreende o fornecimento da composição de fucano de partida como uma solução.

101. Método, de acordo com a reivindicação 99, caracterizado pelo fato de que o método compreende ainda a coleta da composição de fucano purificada/modificada em uma solução de impurezas reduzidas.

102. Método, de acordo com a reivindicação 99, caracterizado pelo fato de que o agente de ruptura celular compreende um detergente.

103. Método, de acordo com a reivindicação 102, caracterizado pelo fato de que o detergente é um detergente aniônico.

104. Método, de acordo com a reivindicação 102, caracterizado pelo fato de que o detergente é um detergente catiônico.

105. Método, de acordo com a reivindicação 102, caracterizado pelo fato de que o detergente é um detergente não iônico.

106. Método, de acordo com a reivindicação 102, caracterizado pelo fato de que o detergente compreende pelo menos um dentre dodecil sulfato de sódio (SDS), cloreto de benzalcônio, Triton X 100®, Triton X 114®, detergentes Brij®, detergentes Tween®, desoxicolato de sódio e alquilbenzenossulfonatos.

107. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 99 a 106, caracterizado pelo fato de que a remoção do agente de ruptura celular e dos lisados biomoleculares compreende a adição à mistura de reação um floculante configurado para flocular o agente de ruptura celular e os lisados biomoleculares.

108. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 99 a 106, caracterizado pelo fato de que a remoção do agente de ruptura celular compreende adicionar à mistura de reação um precipitante configurado para tornar o agente de ruptura celular insolúvel na mistura de reação, produzindo precipitados.

109. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 99 a 108, caracterizado pelo fato de que a remoção dos lisados biomoleculares compreende adicionar à mistura de reação um precipitante configurado para tornar os lisados biomoleculares insolúveis na mistura de reação, produzindo precipitados.

110. Método, de acordo com a reivindicação 108 e 109, caracterizado pelo fato de que ainda compreende adicionar à mistura de reação um floculante configurado para flocular os precipitados.

111. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 107 e 110, caracterizado pelo fato de que o floculante compreende pelo menos um dentre sulfato de potássio e alumínio; sulfato de sódio e alumínio; sulfato de amônio e alumínio; cloreto de cálcio; fosfato de sódio; hidróxido de alumínio; cloreto de alumínio; cloreto férrico; sulfato férrico; sulfato ferroso; silicato de sódio; silicato de cálcio; fosfato de cálcio; cloreto de zinco; carbonato de cálcio; bicarbonato de cálcio; sulfato de potássio; fosfato de magnésio; acrilamidas; ácido acrílico; cloridrato de alumínio; cloreto de polialumínio; taninas; formaldeído; melamina; cloreto de metila de N,N- dimetilaminoetil acrilato; quaternário de cloreto de metila de N,N- dimetilaminoetil metacrilato; e cloreto de polidialildimetil-amônio.

112. Método, de acordo com a reivindicação 103, caracterizado pelo fato de que a remoção do detergente aniônico compreende adsorção aniônica.

113. Método, de acordo com a reivindicação 104, caracterizado pelo fato de que a remoção do detergente catiônico compreende adsorção catiônica.

114. Método, de acordo com a reivindicação 105, caracterizado pelo fato de que a remoção do detergente não iônico compreende a separação de fase micelar.

115. Método, de acordo com a reivindicação 102, caracterizado pelo fato de que a remoção do detergente compreende adsorção hidrofóbica.

116. Método, de acordo com a reivindicação 102, caracterizado pelo fato de que a remoção do detergente compreende: diluir a mistura de reação até que a concentração do detergente esteja abaixo de uma concentração predeterminada; e submeter a mistura de reação compreendendo o detergente à diafiltração sobre um filtro de filtração de fluxo tangencial com uma redução de peso molecular acima do maior peso molecular do detergente.

117. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 99 a 116, caracterizado pelo fato de que compreende ainda a adição de um agente quelante à mistura de reação após o fornecimento da composição de fucano de partida e antes da remoção do agente de ruptura celular.

118. Método, de acordo com a reivindicação 117, caracterizado pelo fato de que o agente quelante compreende ácido etilenodiaminatetraacético (EDTA), 2,3-dimercapto-1-propanol, etileno diamina, porfina e/ou ácido cítrico.

119. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 99 a 118, caracterizado pelo fato de que compreende ainda a adição de um agente de extinção de oxidante à mistura de reação antes de remover o agente de ruptura celular para resfriar os oxidantes na mistura de reação.

120. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 99 a 119, caracterizado pelo fato de que compreende ainda a adição de um agente bacteriostático à mistura de reação após o fornecimento da composição de fucano de partida e antes da remoção do agente de ruptura celular.

121. Método, de acordo com a reivindicação 120, caracterizado pelo fato de que o agente bacteriostático compreende sulfito de sódio, ácido etilenodiaminatetraacético (EDTA), cloreto de benzalcônio, etanol, e/ou tioureia.

122. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 99 a 121, caracterizado pelo fato de que as impurezas removidas compreendem pelo menos um dos particulados, lipídeos, ácidos graxos, fonotaninas, laminarinas, alginatos, proteínas, produtos de reação de Maillard, fucoxantina, clorofila, bactérias, componentes celulares e DNA.

123. Método para a remoção de impurezas de uma composição de fucano de partida para obter uma composição de fucano purificada/modificada, caracterizado pelo fato de que compreende: fornecer uma composição de fucano de partida compreendendo impurezas em uma solução aquosa de partida; mistura da solução aquosa de partida com um solvente orgânico para produzir uma mistura de fase aquosa-orgânica; e separar a mistura de fase aquosa-orgânica para obter uma porção aquosa e uma porção orgânica.

124. Método, de acordo com a reivindicação 123, caracterizado pelo fato de que compreende ainda a coleta da porção aquosa compreendendo a composição de fucano purificada/modificada.

125. Método, de acordo com a reivindicação 123, caracterizado pelo fato de que o solvente orgânico compreende pelo menos um solvente orgânico com polaridade relativa menor do que 0,765.

126. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 123 a 125, caracterizado pelo fato de que o solvente orgânico compreende pelo menos um dentre etanol, isopropanol, metanol, benzeno, decametilciclo-pentassiloxano, acetato de etila, hexano, heptanol, octanol, decanol, heptano, acetato de isobutila, anisol, acetato de isopropila, 1-butanol, acetato de butila, metilisobutilcetona, pentano, 1-pentanol, éter etílico e acetato de propila.

127. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 123 a 126, caracterizado pelo fato de que as impurezas removidas compreendem pelo menos um dos particulados, lipídeos, ácidos graxos, fonotaninas, laminarinas, alginatos, proteínas, produtos de reação de Maillard, fucoxantina, clorofila, bactérias, componentes celulares e DNA.

128. Método para modificar o teor catiônico de uma composição de fucano de partida, caracterizado pelo fato de que compreende: fornecer uma composição de fucano de partida em uma solução de partida; e diafiltragem da solução de partida através de um filtro de filtração de fluxo tangencial com uma solução de um agente quelante através de um filtro de filtração de fluxo tangencial para produzir um retentado com uma composição.

129. Método, de acordo com a reivindicação 128, caracterizado pelo fato de que o agente quelante compreende pelo menos um dentre ácido etilenodiamina-tetracético (EDTA), 2,3- dimercapto-1-propanol, etileno diamina, porfina ou ácido cítrico.

130. Método, de acordo com a reivindicação 128, caracterizado pelo fato de que o retentado com uma composição compreende um teor catiônico consistindo essencialmente em sódio e/ou potássio.

131. Método para a remoção de impurezas de uma composição de fucano de partida para obter uma composição de fucano purificada/modificada, caracterizado pelo fato de que compreende: fornecer uma composição de fucano de partida compreendendo impurezas; submeter a composição de fucano de partida a uma pressão adequada acima de 70 bar e uma temperatura adequada acima de 30°C em um extrator supercrítico; e preencher o extrator supercrítico com um fluido supercrítico para remover impurezas no fluido supercrítico; e remover o fluido supercrítico contendo as impurezas extraídas após um período de tempo predeterminado.

132. Método, de acordo com a reivindicação 131, caracterizado pelo fato de que compreende ainda a coleta da composição de fucano purificada/modificada que permanece no extrator supercrítico.

133. Método, de acordo com a reivindicação 131, caracterizado pelo fato de que a pressão é entre cerca de 70 bar e cerca de 2.000 bar.

134. Método, de acordo com a reivindicação 131, caracterizado pelo fato de que a temperatura está entre cerca de 30°C e cerca de 300°C

135. Método, de acordo com a reivindicação 131, caracterizado pelo fato de que a composição de fucano de partida é um líquido.

136. Método, de acordo com a reivindicação 131, caracterizado pelo fato de que a composição de fucano de partida é um sólido.

137. Método, de acordo com a reivindicação 131, caracterizado pelo fato de que o fluido supercrítico compreende pelo menos um dentre dióxido de carbono, etanol, etano, ácido clorídrico, ácido fluorídrico, ácido sulfúrico e ácido nítrico.

138. Método, de acordo com a reivindicação 131, caracterizado pelo fato de que a quantidade predeterminada de tempo está entre cerca de 5 minutos e 50 horas.

139. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 131 a 138, caracterizado pelo fato de que as impurezas removidas compreendem pelo menos um dos particulados, lipídeos, ácidos graxos, fonotaninas, laminarinas, alginatos, proteínas, produtos de reação de Maillard, fucoxantina, clorofila, bactérias, componentes celulares e DNA.