JP2021532137A - 低エンドトキシンフカン組成物、システム及び方法 - Google Patents

低エンドトキシンフカン組成物、システム及び方法 Download PDF

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Abstract

フカンのミリグラム当たりのエンドトキシン単位が約０．２、０．１８、０．１、０．０１、０．００１又は０．０００５未満であり治療上有効量であり医学的に許容しうるフカンを含むフカン−低エンドトキシン組成物を開示する。また、出発フカン組成物からエンドトキシンを除去するか又はエンドトキシンの量を低減するための方法及びシステムも開示する。

Description

優先権の主張
本出願は、２０１８年７月２７日に出願された米国仮出願第６２／７１１，３６４号；２０１８年７月２７日に出願された米国仮出願第６２／７１１，３７２号；２０１８年７月２７日に出願された米国仮出願第６２／７１１，３３５号；２０１８年８月１日に出願された米国仮出願第６２／７１３，３９９号；２０１８年８月２３日に出願された米国仮出願第６２／７２２，１３５号；２０１８年１１月２日に出願された米国仮出願第６２／７５５，３１１号；２０１９年１月１７日に出願された米国仮出願第６２／７９３，５１４号；２０１９年６月１３日に出願された米国仮出願第６２／８６１，２２３号；２０１８年８月１日に出願された同時係属中の米国仮出願第６２／７１３，３９２号；２０１８年８月１日に出願された米国仮出願第６２／７１３，４１３号；２０１８年８月２３日に出願された米国仮出願第６２／７２２，１３７号；２０１８年１１月２日に出願された米国仮出願第６２／７５５，３１８号；２０１９年６月１３日に出願された米国仮出願第６２／８６１，２２８号；２０１８年１１月２日に出願された同時係属中の米国仮出願第６２／７５５，３２８号；２０１９年１月１７日に出願された米国仮出願第６２／７９３，６５４号；及び２０１９年６月１３日に出願された米国仮出願第６２／８６１，２３５号の恩恵を主張し、その内容は参照により本明細書に援用される。
フカン（フコイダンを含む）は、硫酸化多糖である。一般的に言えば、このことは、それらが多くの糖類から構成される分子であり、前記糖類に付加した硫黄原子も有することを意味する。主要糖類は、６個の炭素原子を有し且つ化学式Ｃ６Ｈ１２Ｏ５を有する糖である「フコース」と呼ばれる。「フコイダン」（又はフコイジン）は、褐藻（海草）に由来するフカンを示す。フカンは、単独で存在することが可能であり、あるいは他の糖の混合物、例えば、キシロース、ガラクトース、グルコース、グルクロン酸及び／又はマンノースなどの糖との混合物の状態で存在することも可能である。これらの他の糖は、フカンを有する海草又は他の原料から抽出され得る。フカンは現在、褐藻（海草）、ナマコなどの天然原料に由来するが、本明細書に記載される「フカン」は、フカンの（１又は複数の）究極的原料にかかわらず、本明細書で考察されるフカンの化学的モチーフ及び構造的モチーフを有するポリマー分子を含む。
フコイダンはAdenocystis utricularis、 Ascophyllum nodosum、 Chorda filum、 Cystoseirabies marina、 Durvillaea antarctica、 Ecklonia kurome、Ecklonia maxima、 Eisenia bicyclis、 Fucus evanescens、 Fucus vesiculosis、 Hizikia fusiforme、 Himanthalia Elongata、 Kjellmaniella crassifolia、 Laminaria brasiliensis、 Laminaria cichorioides、 Laminaria hyperborea、 Laminaria japonica、 Laminaria saccharina、 Lessonia trabeculata、 Macrocystis pyrifera、 Pelvetia fastigiata、 Pelvetia Canaliculata、 Saccharina japonica、 Saccharina latissima、 Sargassum stenophylum、 Sargassum thunbergii、 Sargassum confusum、 Sargassum fusiforme及びUndaria pinnatifidaを含む褐藻類の多様な種から得ることができるが、これらに限定されるものではない。これらの例示的な種は全て分類学上の褐藻綱（Phaeophyceae）から出たものであり、これらの種の大部分は、ヒバマタ科（Fucales）又はコンブ科（Laminariaceae）に入る。
フコイダンを含むフカンは、線維性癒着の形成を抑制、予防、除去、軽減、又は、それ以外の場合、処置することに供するにおいて有効であることが示されている。フカンには他の関連する疾患及び状態の処置への用途も見いだされている。
エンドトキシンとしても公知であるリポ多糖類は、細菌細胞内に維持されて細菌細胞壁の破壊の際に放出されるか又は細菌の生理的活性の一部として細菌細胞壁から分泌される、毒性分子である。対象の分子からのエンドトキシンの分離のために当該分野において多くの確立された方法が存在する。これらの方法は、大部分の用途では効率的であるが、フカンの存在下では適切に機能しない。この理由は、一部には、これらの方法の多くが、負に帯電したリン酸基を基としたエンドトキシンの単離に依存しているからである。フカンの存在下では、これらの方法は、フカン分子上に存在する硫酸基からの干渉効果を被る。化学的処理を含む他の公知の方法は、望ましくない効果であり得るフカンの分解を結果として生じさせる。本開示は、原料フカンなどのフカン組成物からのエンドトキシン及び他の不純物の分解、排除（elimination）及び／若しくは除去（removal）、並びに／又は他の利点のための、コスト効果的であり、拡大縮小可能であり、且つ／又は非破壊的な方法に取り組む。
本明細書における組成物及び方法などは、医学的用途及び外科的用途、例えば、線維性癒着の抑制、予防、除去、軽減又は他の処置に好適である、エンドトキシンのレベルの低いフカン−低エンドトキシン組成物（fucan-low endotoxin compositions having a low level of endotoxins）を含む。これらのフカン−低エンドトキシン組成物は、炎症、発熱及びエンドトキシン血症などの、エンドトキシンに起因する、フカンの医学的使用及び外科的使用の際の危険な合併症を軽減する。かかるエンドトキシンの低減は、約９５％の低減〜約９９％、９９．９％、９９．９９％、９９．９９９％、９９．９９９９％〜９９．９９９９９％の低減であり得る。ある一定の実施形態において、本明細書に提示されているフカン組成物は、前記組成物を医学的用途及び外科的用途に好適にするのに十分に低いエンドトキシンレベルを有する。
本明細書に提示されているフカン−低エンドトキシン組成物は、出発（starting）フカン組成物又は初期（initial）フカン組成物（すなわち、フカン−低エンドトキシン組成物が誘導され得るフカン組成物。かかる出発フカン組成物は、粗製であっても粗製でなくてもよく、又は予め加工若しくは精製されており、例えば、原料フカン組成物である）から得られる所望のフカン組成物からなる組成物、並びに、かかる所望のフカン−低エンドトキシン組成物を得る方法及びかかる組成物の使用方法を提供する。
いくつかの態様において、本明細書における組成物、システム、方法などは、フカンのミリグラム当たりのエンドトキシン単位が約０．２未満、約０．１８未満、約０．１６未満、約０．１未満、約０．０９未満、約０．０６未満、約０．０４未満、約０．０３未満、約０．０２未満、約０．０１未満、約０．００７未満、約０．００３未満、約０．００２未満、約０．００１未満、約０．０００６未満、又は約０．０００５未満であり得るフカン−低エンドトキシン組成物を含む。
いくつかの実施形態において、有効分子量範囲が約５０ｋＤａ〜約５，０００ｋＤａでありヒドロキシル化ポリメタクリレート系ゲルが充填されている内径が７．８ｍｍの３００ｍｍ分析ゲル浸透クロマトグラフィーカラム１つ、有効分子量範囲が約１ｋＤａ〜約６，０００ｋＤａでありヒドロキシル化ポリメタクリレート系ゲルが充填されている内径が７．８ｍｍの３００ｍｍ分析ゲル浸透クロマトグラフィーカラム１つ、及びヒドロキシル化ポリメタクリレート系ゲルが充填されている内径が６ｍｍの４０ｍｍガードカラム１つ、ここで前記２つの分析ゲル浸透クロマトグラフィーカラム及び前記１つのガードカラムは約３０℃のカラムコンパートメントに収容されている；
約３０℃の示差屈折率検出器；
０．６ｍＬ／分の０．１Ｍ硝酸ナトリウム移動相流；及び
ピーク分子量が約２，２００ｋＤａの第１デキストラン標準品、ピーク分子量が約７２０ｋＤａ〜約７６０ｋＤａの第２デキストラン標準品、ピーク分子量が約４７０ｋＤａ〜約５１０ｋＤａの第３デキストラン標準品、ピーク分子量が約３７０ｋＤａ〜約４１０ｋＤａの第４デキストラン標準品、ピーク分子量が約１８０ｋＤａ〜約２２０ｋＤａの第５デキストラン標準品、及びピーク分子量が約４０ｋＤａ〜５５ｋＤａの第６デキストラン標準品から実質的になるピーク分子量標準曲線と照らし合わせての定量（quantification）
から実質的になる水系ゲル浸透クロマトグラフィー構成を用いて測定される場合に、分布の６０％ｗ／ｗ以上が１００ｋＤａより大きい分子量分布をフカンは有しうる。
フカンは、分布の少なくとも７５％ｗ／ｗが１００ｋＤａ超となっている分子量分布を有し得；分布の少なくとも９８％ｗ／ｗが１００ｋＤａ超となっている分子量分布を有し得；分布の少なくとも８１％ｗ／ｗが２００ｋＤａ超となっている分子量分布を有し得；分布の少なくとも９２％ｗ／ｗが２００ｋＤａ超となっている分子量分布を有し得；分布の少なくとも９７％ｗ／ｗが２００ｋＤａ超となっている分子量分布を有し得；分布の少なくとも４４％ｗ／ｗが５００ｋＤａ超となっている分子量分布を有し得；分布の少なくとも６１％ｗ／ｗが５００ｋＤａ超となっている分子量分布を有し得；分布の少なくとも７０％ｗ／ｗが５００ｋＤａ超となっている分子量分布を有し得；分布の少なくとも８０％ｗ／ｗが５００ｋＤａ超となっている分子量分布を有し得；分布の少なくとも５％ｗ／ｗが１６００ｋＤａ超となっている分子量分布を有し得；分布の少なくとも１０％ｗ／ｗが１６００ｋＤａ超となっている分子量分布を有し得；分布の少なくとも２４％ｗ／ｗが１６００ｋＤａ超となっている分子量分布を有し得；布の少なくとも３１％ｗ／ｗが１６００ｋＤａ超となっている分子量分布を有し得る。さらに、フカンは、重量平均分子量が１００ｋＤａ超、２００ｋＤａ超又は５００ｋＤａ超であってよい。
フカンは、硫酸化レベルが約２０％ｗ／ｗ〜６０％ｗ／ｗ、約３０％ｗ／ｗ〜５５％ｗ／ｗ、約３２％ｗ／ｗ〜５２％ｗ／ｗであってよい。フカンは、総炭水化物含有量が２７％ｗ／ｗ〜８０％ｗ／ｗ、総フコース含有量が総炭水化物含有量に対する割合として少なくとも約３０％ｗ／ｗ、５０％ｗ／ｗ、７０％ｗ／ｗ、８０％ｗ／ｗ、９０％ｗ／ｗ、又は９５％ｗ／ｗであってよい。フカンは、総ガラクトース含有量が総炭水化物含有量に対する割合として約６０％ｗ／ｗ未満、約２％ｗ／ｗ〜２０％ｗ／ｗ、又は約１０％ｗ／ｗ未満であってよい。
前記フカン−低エンドトキシン組成物は、水に５０ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解される場合に、約４ｃＰ〜５０ｃＰ、約１０ｃＰ〜４０ｃＰ、又は約１５ｃＰ〜３０ｃＰの粘度を有してよい。前記フカン−低エンドトキシン組成物は、白色固体であってよく、水に１ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解される場合に、透明無色である溶液を形成しうる。フカンのアセチル含有量は、５％又は２％ｗ／ｗ未満でありうる。さらに、５ｍｍのコールドプローブを備えた６００ＭＨｚ分光計により、溶媒シグナルを抑制しつつ７０℃で、各回２５６〜５１２回の走査として８ずつ回数を増加させつつ、炭素次元における１０〜３０ｐｐｍの範囲で、２Ｄ １Ｈ−１３Ｃ異核多量子コヒーレンスによって測定される場合に、前記フカンの有するアセチル含有量は実質的に０％ｗ／ｗでありうる。
本明細書に記載のフカン及びフカン−低エンドトキシン組成物を製造及び使用する方法も本明細書に含まれる。当該使用は、線維性癒着を処置することを含みうる。
ある一定の態様において、本明細書における組成物、システム、方法などは、医学的に許容しうる緩衝剤又は希釈剤に、治療有効量の、本明細書に記載のフカン−低エンドトキシン組成物を含みうる、医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン組成物を含む。また、医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン組成物を含みうるフカン−低エンドトキシン投与物（dosage）であって、前記医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシンの投与物（dose）が、２５０ＥＵ、５０ＥＵ、２０ＥＵ、１０ＥＵ、２ＥＵ、１ＥＵ、０．１ＥＵ、又は０．０１ＥＵ以下のエンドトキシンレベルを有する、前記投与物（dosage）も提供される。かかる医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン組成物及び投与物（dosage）は、前記分子量分布、及び上記段落におけるような本明細書において考察されている他のパラメータを有しうる。
さらなる態様において、本明細書における組成物、システム、方法などは、動物において状態又は疾患を処置する方法であって、前記状態又は前記疾患を処置するために前記医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン組成物を選択すること、及び前記動物に約０．５ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇを含む治療上有効量の前記フカンを投与すること、を含みうる。前記量は、約０．０４ｍｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇ、約０．２ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ〜３ｍｇ／ｋｇ、又は５ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇであってもよい。
前記状態又は疾患は、前記動物における標的部位での線維性癒着であり得、前記投与は、前記標的部位に前記治療有効量を投与することを含みうる。前記医療組成物は、本明細書に記載のフカン−低エンドトキシン組成物からのフカンを約０．０２ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬ含み得、動物における疾患又は状態を処置するように構成され得且つ組成され得る。前記量はまた、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜５ｍｇ／ｍＬ、又は約２．５ｍｇ／ｍＬであってもよい。前記医療組成物は、液体の医療機器（medical device）であり得る医療機器であり得る。前記医療組成物は、液体医薬組成物を含む医薬組成物であり得る。
本明細書における方法は、動物における疾患又は状態を処置するための約０．０１ｍＬ／ｋｇ〜１５ｍＬ／ｋｇを含みうる用量範囲の前記医療組成物の使用を含む。前記量は、約０．０３ｍＬ／ｋｇ〜４ｍＬ／ｋｇ、０．０６ｍＬ／ｋｇ〜２ｍＬ／ｋｇ、又は２ｍＬ／ｋｇ〜４ｍＬ／ｋｇであってもよい。
患者において線維性癒着を処置する方法は、前記患者における標的部位に前記医療組成物を投与することを含みうる。前記標的部位は、手術部位であってよく、前記投与は、ａ）前記手術部位における手術創を開けた後、ｂ）手術中、及びｃ）手術後であるが前記手術創を閉鎖する前を含めて、前記手術創を閉じた後、のうちの少なくとも１つにおいて、実施され得る。前記投与には、３分未満、２分未満、又は１分未満かかりうる。前記標的部位は、病変、擦過傷、及び傷害部位のうちの少なくとも１つであってよい。前記標的部位は、骨盤腔、腹腔、背側腔、頭蓋腔、脊椎腔、腹側腔、胸腔、胸膜腔、心膜腔、皮膚、関節、筋肉、腱及び靱帯のうちの少なくとも１つであってよい。
他の態様において、本明細書における組成物、システム、方法などは、フカン−低エンドトキシン組成物を得るために出発フカン組成物から不純物を除去する方法を含む。かかる方法は：
不純物を含む出発フカン組成物を提供すること、
凝集助剤を前記出発フカン組成物に添加して反応混合物を生成すること、
前記反応混合物を加熱することによって前記不純物を凝集させて、凝集した不純物を生成すること、及び
前記凝集した不純物を除去すること
を含みうる。
前記出発フカン組成物を提供することは、前記出発フカン組成物を溶液として提供することを含み得、前記方法は、不純物が低減された溶液中の前記フカン−低エンドトキシン組成物を回収することをさらに含みうる。前記不純物を凝集させることは、大気圧を超える圧力において前記反応混合物を加熱することをさらに含みうる。前記凝集助剤は、アルカリ金属、アルカリ土類金属、アルミニウム及び／又はアンモニウムの塩化物、臭化物、ヨウ化物、フッ化物、硫酸塩、亜硫酸塩、炭酸塩、重炭酸塩、リン酸塩、硝酸塩、亜硝酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ケイ酸塩及び／又はシアン化物であり得る塩を含みうる。前記凝集助剤は、アルカリ金属、アルカリ土類金属、アルミニウム及び／又はアンモニウムの水酸化物及び／又は酸化物であり得る塩基を含みうる。
さらに、前記方法は：
不純物と、細胞及びエンドトキシン凝集体（aggregation）を破壊することが可能である破壊剤（disrupting agent）とを含む出発フカン組成物を溶液中に提供すること、及び
タンジェンシャルフロー濾過フィルタを通してのタンジェンシャルフロー濾過に前記溶液を供して、前記フカン−低エンドトキシン組成物及び残存する破壊剤を含む保持フカン組成物（retentate fucan composition）を生成すること
を含みうる。
前記残存破壊剤の除去は、タンジェンシャルフロー濾過フィルタを通してのタンジェンシャルフロー濾過によって前記残存する破壊剤を除去して、前記フカン−低エンドトキシン組成物を含有する第２保持フカン組成物（second retentate fucan composition）を生成することによって達成され得る。前記方法は：
前記破壊剤を沈殿させることができる沈殿剤を用いて前記保持フカン組成物を処理することによって前記残存する破壊剤を除去して、前記破壊剤の沈殿物及び上清フカン組成物を生成すること、及び
前記破壊剤の前記沈殿物を前記上清フカン組成物から分離すること
をさらに含みうる。
前記方法は、不純物が低減された溶液中の前記フカン−低エンドトキシン組成物を回収することをさらに含みうる。前記破壊剤は、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤又は非イオン性界面活性剤であり得る少なくとも１つの界面活性剤を含みうる。前記界面活性剤は、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、塩化ベンザルコニウム、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ１００、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ１１４及びデオキシコール酸ナトリウムのうちの少なくとも１つを含みうる。
前記沈殿剤は、塩化カリウム、水酸化カリウム、塩化カルシウム、塩化バリウム及び炭酸カルシウムのうちの少なくとも１つを含みうる。
さらに、方法は：
固体である出発フカン組成物と、不純物を溶解するように構成されているがフカンを溶解できない抽出媒体とを提供すること、
前記出発フカン組成物と前記抽出媒体とを混合して前記フカン−低エンドトキシン組成物と前記抽出媒体との混合物を作成すること、及び
前記抽出媒体から前記フカン−低エンドトキシン組成物を分離すること
を含みうる。
前記方法は、固体である前記フカン−低エンドトキシン組成物を回収することをさらに含みうる。前記抽出媒体は、相対極性が０．７６５未満である少なくとも１つの有機溶媒を含みうる。前記有機溶媒は、エタノール、イソプロパノール、メタノール、ベンゼン、ジエチルエーテル、デカメチルシクロ−ペンタシロキサン、酢酸エチル、ブタノール、ヘキサン、ヘプタン、ヘプタノール、オクタノール及びデカノールのうちの少なくとも１つを含みうる。前記抽出媒体は、塩基、界面活性剤及び酸化剤のうちの少なくとも１つをさらに含みうる。固体形態の前記出発フカン組成物の前記提供は、溶液から前記出発フカン組成物を沈殿させることを含みうる。前記フカン−低エンドトキシン組成物は、前記出発フカン組成物よりもエンドトキシンの含有量が少ない。
なおさらなる方法は：
懸濁不純物を含む不純物を含有する出発フカン組成物を溶液中に提供すること、
イオン性多価不純物沈殿剤を用いて前記不純物を前記溶液から沈殿させることにより、懸濁不純物と沈殿不純物と上清溶液との混合物を生成すること、及び
前記上清溶液から前記懸濁不純物及び前記沈殿不純物を分離すること
を含みうる。
前記方法は、前記フカン−低エンドトキシン組成物を含みうる前記上清溶液を回収することをさらに含みうる。前記イオン性多価不純物沈殿剤は、二価又は三価のカチオンの塩を含みうる。前記塩は、塩化物、臭化物、ヨウ化物、フッ化物、硫酸塩、亜硫酸塩、炭酸塩、重炭酸塩、リン酸塩、硝酸塩、亜硝酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ケイ酸塩及び／又はシアン化物であり得る。前記カチオンは、アルカリ土類金属、亜鉛、アルミニウム、銅及び／又は鉄であり得る。前記不純物沈殿剤は、二価又は三価のカチオンの塩基を含みうる。前記塩基は、アルカリ土類金属、亜鉛、アルミニウム、銅及び／又は鉄の、水酸化物及び／又は酸化物であり得る。前記上清溶液から前記懸濁不純物及び前記沈殿不純物を分離することは、懸濁不純物と沈殿不純物と上清溶液との前記混合物に凝集剤を添加することにより、前記懸濁不純物及び前記沈殿不純物を凝集させることを含みうる。前記凝集剤は、硫酸アルミニウムカリウム；硫酸アルミニウムナトリウム；硫酸アンモニウムアルミニウム；塩化カルシウム；リン酸ナトリウム；水酸化アルミニウム；塩化アルミニウム；塩化第二鉄；硫酸第二鉄；硫酸第一鉄；ケイ酸ナトリウム；ケイ酸カルシウム；リン酸カルシウム；塩化亜鉛；炭酸カルシウム；重炭酸カルシウム；硫酸カリウム；リン酸マグネシウム；アクリルアミド；アクリル酸；アルミニウムクロロハイドレート；ポリ塩化アルミニウム；タンニン；ホルムアルデヒド；メラミン；Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルアクリレートメチルクロライド；第４級Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルメタクリレートメチルクロライド；及びポリジアリルジメチル−アンモニウムクロライドのうちの少なくとも１つを含みうる。前記方法は、約７〜１４のｐＨを維持することをさらに含み得る。前記ｐＨを維持することは、塩基を添加することを含みうる。
他の方法は：
不純物を含む出発フカン組成物を提供すること、
前記出発フカン組成物のｐＨを約８〜１４に調整すること、
細胞成分を溶解するように構成されている細胞破壊剤を前記出発フカン組成物に添加して、前記細胞破壊剤と、生体分子溶解物と、前記出発フカン組成物とを含む反応混合物を生成すること；及び
前記細胞破壊剤及び生体分子溶解物を前記反応混合物から除去すること
を含みうる。
前記出発フカン組成物を提供することは、溶液である前記出発フカン組成物を提供することを含みうる。前記方法は、不純物が低減された溶液中の前記フカン−低エンドトキシン組成物を回収することをさらに含みうる。前記細胞破壊剤は、界面活性剤を含みうる。前記界面活性剤は、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤又は非イオン性界面活性剤であり得る。前記界面活性剤は、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、塩化ベンザルコニウム、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ１００（登録商標）、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ１１４（登録商標）、Ｂｒｉｊ（登録商標）界面活性剤、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）界面活性剤、デオキシコール酸ナトリウム、及びアルキルベンゼンスルホネートのうちの少なくとも１つを含みうる。
前記細胞破壊剤及び生体分子溶解物を除去することは、前記細胞破壊剤及び生体分子溶解物を凝集させるために構成された凝集剤を前記反応混合物に添加することを含みうる。前記細胞破壊剤を除去することは、前記細胞破壊剤を前記反応混合物に不溶にすることができる沈殿剤を前記反応混合物に添加して、沈殿物を生成することを含みうる。前記生体分子溶解物を除去することは、前記生体分子溶解物を前記反応混合物に不溶にすることができるように構成された沈殿剤を前記反応混合物に添加して、沈殿物を生成することを含みうる。前記方法は、前記沈殿物を凝集させるために構成された凝集剤を前記反応混合物に添加することをさらに含みうる。前記凝集剤は、硫酸アルミニウムカリウム；硫酸アルミニウムナトリウム；硫酸アンモニウムアルミニウム；塩化カルシウム；リン酸ナトリウム；水酸化アルミニウム；塩化アルミニウム；塩化第二鉄；硫酸第二鉄；硫酸第一鉄；ケイ酸ナトリウム；ケイ酸カルシウム；リン酸カルシウム；塩化亜鉛；炭酸カルシウム；重炭酸カルシウム；硫酸カリウム；リン酸マグネシウム；アクリルアミド；アクリル酸；アルミニウムクロロハイドレート；ポリ塩化アルミニウム；タンニン；ホルムアルデヒド；メラミン；Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルアクリレートメチルクロライド；第４級Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルメタクリレートメチルクロライド；及びポリジアリルジメチル−アンモニウムクロライドのうちの少なくとも１つを含みうる。前記アニオン性界面活性剤の除去は、アニオン吸着を含みうる。前記カチオン性界面活性剤を除去することは、カチオン吸着を含み得る。前記非イオン性界面活性剤を除去することは、ミセル相分離を含み得る。前記界面活性剤を除去することは、疎水性吸着を含みうる。
前記界面活性剤を除去することは、
前記界面活性剤の濃度が所定の濃度未満になるまで前記反応混合物を希釈すること、及び
前記界面活性剤を含む前記反応混合物を、分画分子量が前記界面活性剤の最大分子量を超えるタンジェンシャルフロー濾過フィルタによる透析濾過に供すること
を含みうる。
前記方法は、前記出発フカン組成物を提供した後且つ前記細胞破壊剤を除去する前に、キレート剤を前記反応混合物に添加することをさらに含みうる。前記キレート剤は、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、２，３−ジメルカプト−１−プロパノール、エチレンジアミン、ポルフィン及び／又はクエン酸を含みうる。前記方法はまた、前記細胞破壊剤を除去する前に酸化剤−反応制御剤（oxidant-quenching agent）を前記反応混合物に添加して、前記反応混合物中の酸化剤を反応制御（quench）することも含みうる。前記方法は、前記出発フカン組成物を提供した後且つ前記細胞破壊剤を除去する前に、静菌剤（bacteriostatic agent）を前記反応混合物に添加することをさらに含みうる。前記静菌剤は、亜硫酸ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、塩化ベンザルコニウム、エタノール、及び／又はチオ尿素を含みうる。
さらに他の方法は：
エンドトキシンを含む出発フカン組成物、及びアニオン交換マクロ多孔性樹脂を提供すること；
前記出発フカン組成物を前記アニオン交換マクロ多孔性樹脂によるアニオン交換に供して、前記フカン−低エンドトキシン組成物を生成すること
を含みうる。
前記方法は、前記エンドトキシン凝集体を破壊できる破壊剤によって前記出発フカン組成物を前処理することをさらに含み得、前記出発フカン組成物を前記アニオン交換マクロ多孔性樹脂によるアニオン交換に供する前に前記出発フカン組成物を脱塩することを含みうる。前記アニオン交換マクロ多孔性樹脂は、孔サイズが、前記出発フカン組成物中の前記エンドトキシンの平均流体力学半径を超えていてよい。前記出発フカン組成物及び前記アニオン交換マクロ多孔性樹脂を提供することは、約１：１００〜約１０：１の前記出発フカン組成物：アニオン交換マクロ多孔性樹脂の質量比で前記出発フカン組成物及び前記アニオン交換マクロ多孔性樹脂を提供することを含みうる。前記質量比は、約１：５０〜約１：１、又は約１：１０〜約１：１であってもよい。前記出発フカン組成物はアニオン交換に、約５分〜約１００時間、又は約１時間〜約３０時間の期間供され得る。前記アニオン交換マクロ多孔性樹脂は、第４級アミン基を含みうる。前記アニオン交換マクロ多孔性樹脂は、第１級アミン基、第２級アミン基及び第３級アミン基のうちの少なくとも１つを含みうる。前記アニオン交換マクロ多孔性樹脂は、スチレン、アガロース、デキストラン、アクリレート、メタクリレート、メタクリル酸メチル、メタクリル酸ブチル、ジビニルベンゼン、セルロース、シリカ、及びセラミックのうちの少なくとも１つから構成され得る。前記アニオン交換マクロ多孔性樹脂は、孔サイズが約５ｎｍ〜約１０００ｎｍ、又は約１０ｎｍ〜約１００ｎｍ、又は約１５ｎｍ〜約５０ｎｍであってよい。前記アニオン交換マクロ多孔性樹脂は、排除限界が約５ｋＤａ〜約５０，０００ｋＤａ、又は約１，０００ｋＤａ〜約９，０００ｋＤａ、又は約５ｋＤａ〜約２００ｋＤａであってよい。
さらに他のさらなる方法は：
不純物を含む出発フカン組成物を水性出発溶液中に提供すること、
前記水性出発溶液を有機溶媒と混合して、水性有機相混合物を生成すること、及び
前記水性有機相混合物を分離して水性部分及び有機部分を得ること
を含みうる。
前記水性部分を回収することは、前記フカン−低エンドトキシン組成物を含みうる。前記有機溶媒は、相対極性が０．７６５未満である有機溶媒を少なくとも１種含みうる。相対極性の値は、吸収スペクトルの溶媒シフトの測定から正規化され得る。例えば、Ｃｈｒｉｓｔｉａｎ Ｒｅｉｃｈａｒｄｔ，Ｓｏｌｖｅｎｔｓ ａｎｄ Ｓｏｌｖｅｎｔ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，３ｒｄ ｅｄ．，２００３を参照されたい。前記有機溶媒は、エタノール、イソプロパノール、メタノール、ベンゼン、デカメチルシクロ−ペンタシロキサン、酢酸エチル、ヘキサン、ヘプタノール、オクタノール、デカノール、ヘプタン、酢酸イソブチル、アニソール、酢酸イソプロピル、１−ブタノール、酢酸ブチル、メチルイソブチルケトン、ペンタン、１−ペンタノール、エチルエーテル、及び酢酸プロピルのうちの少なくとも１つを含みうる。
本明細書における処理されたフカン−低エンドトキシン組成物は、前記出発フカン組成物よりもエンドトキシンの含有量が少ない。
これら及び他の態様、特徴及び実施形態は、以下の詳細な説明及び添付の図を含めた本出願内に記載されている。別途明確に記述されていない限り、全ての実施形態、態様、特徴などが、いずれの望ましい方法で、混合及び適合され、合わされ、順番が変えられてもよい。
図１は、出発フカン組成物の、エンドトキシンを含めた不純物の低減を得るためのタンジェンシャルフロー濾過システムを模式的に示す。 図２は、アニオン吸収を使用して出発フカン組成物におけるエンドトキシンレベルの所望の低減を得るためのシステムを模式的に示す。 本明細書における方法に従って処理されたある種のフカンが構造的変化を経ることを示すＮＭＲ結果を示す。 本明細書における方法に従って処理されたたある種のフカンが構造的変化を経ることを示す二次元ＮＭＲ結果を示す。
図面は、本開示の例示的な実施形態を示している。図面は必ずしも縮尺どおりではなく、特定の特徴は、本システム、方法などの説明および説明を助けるように誇張されているか、それ以外の場合には他の方法で表されてもよい。本明細書におけるシステム、方法などの実際の実施形態は、図面に示されない異なる特徴又は工程をさらに含んでもよい。本明細書に示される例示はシステム、方法などの実施形態を１又は複数の形で示すが、かかる例示は、いかなる方法によっても開示の範囲を制限するとみなされるべきではない。本明細書における実施形態は網羅的なものではなく、開示を例えば、以下の発明を実施するための形態において開示された詳細形態へと制限するものではない。
本明細書に示されたこの組成物、システム、方法などは、精製フカン組成物、例えば、フカン−低エンドトキシン組成物を含む。本組成物は、医学的処置、手術後の処置、疾患抑制などに有効であり得る。いくつかの実施形態において、前記フカンはフコイダンである。本フカン−低エンドトキシン組成物は、それ自体が医療機器、医療材料、組み合わせ製品であり得るか、若しくは医薬的に許容し得る治療的及び／若しくは医学的に有効な組成物中にあり得るか、又は、医療機器、医療材料、組み合わせ製品の上若しくは中に含まれ得るか、若しくは医薬的に許容し得る治療的及び／若しくは医学的に有効な組成物中に含まれ得る。
以下の段落は、本明細書において考察されている方法を使用して作り出され得るものを含めた、本明細書に記載のフカン−低エンドトキシン組成物のいくつかの簡単な一般的考察に向けたものである。
組成物
本明細書において示されるこの組成物、システムなどは、ある種の実施形態において、フカン及び外科的癒着、関節炎、乾癬又は所望の他の疾患などの線維性癒着の処置のための治療上有効量のフカン−低エンドトキシンを含む医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン組成物を提供する。
本明細書に示されるフカン−低エンドトキシン組成物は、線維性癒着及び他の標的並びに他の疾患及び／又は状態の抑制、予防、除去、軽減又は他の処置を含む複数の用途のために使用され得る。処置は、前記組成物が、典型的には、外科医又は他の専門家によって、線維性癒着（又は他の疾患若しくは状態）を含むと、又は線維性癒着（又は他の疾患若しくは状態）に相当に罹患しやすいと同定された選択標的部位である標的部位における線維性癒着の形成の軽減又は予防など、標的疾患又は他の状態の発現を軽減させるか又は予防することを含み、例えばすでに存在する線維性癒着の除去を含む、存在する疾患又は他の状態の除去も含む。かかる抑制、予防、除去、軽減、又はその他の処置のために、前記フカン組成物は、典型的には、医学的に許容しうる医療機器、医療材料、組み合わせ製品、又は結合剤、アジュバント、賦形剤、並びに、所望により、二次薬物であって前記フカンに付加されないが前記組成物中に含まれるもの及び／又は前記フカンに付加され得るものなどの、追加的な医学的に有効な物質などの追加的な成分を含む医薬的に有効な組成物において、提供される。
そのため、いくつかの実施形態において、本開示は、エンドトキシンレベルの低いフカン−低エンドトキシン組成物であって、医学的用途及び外科的用途、例えば、線維性癒着の予防、抑制又は処置に好適である前記組成物を提示する。
ある一定の態様及び実施形態において、本明細書に記載の組成物は、ミリグラム（ｍｇ）当たり約０．２、０．１８、０．１２、０．１、０．０９、０．０２、０．０１、０．００７、０．００５、０．００２又は０．００１未満のエンドトキシン単位（ＥＵ）（ＥＵ／ｍｇ）を含む、治療的に有効であり医学的に許容可能であるフカンを含む。
前記フカン−低エンドトキシン組成物の分子量分布は、任意の所望の適切な測定システムを用いて測定することができる。異なるシステムは、実質的に同一構成を有する異なる組成物から、又は異なって測定される場合は同一バッチからも、異なる読取値又は結果を生じることが可能である。１つの適切な測定システムは、実質的に、有効分子量範囲が約５０ｋＤａ〜約５，０００ｋＤａの、ヒドロキシル化ポリメタクリレート系ゲルが充填された、内径が７．８ｍｍの１つの３００ｍｍ分析ゲル浸透クロマトグラフィーカラム、有効分子量範囲が約１ｋＤａ〜約６，０００ｋＤａの、ヒドロキシル化ポリメタクリレート系ゲルが充填された、内径が７．８ｍｍの１つの３００ｍｍ分析ゲル浸透クロマトグラフィーカラム、及びヒドロキシル化ポリメタクリレート系ゲルが充填された、内径が６ｍｍの１つの４０ｍｍガードカラムであって、約３０℃のカラムコンパートメントに収容されている前記２つの分析ゲル浸透クロマトグラフィーカラム及び前記１つのガードカラム、約３０℃の示差屈折率検出器、０．６ｍＬ／分の０．１Ｍ硝酸ナトリウム移動相流、並びに、実質的に、ピーク分子量が約２，２００ｋＤａの第１デキストラン標準品、ピーク分子量が約７２０ｋＤａ〜約７６０ｋＤａの第２デキストラン標準品、ピーク分子量が約４７０ｋＤａ〜約５１０ｋＤａの第３デキストラン標準品、ピーク分子量が約３７０ｋＤａ〜約４１０ｋＤａの第４デキストラン標準品、ピーク分子量が約１８０ｋＤａ〜約２２０ｋＤａの第５デキストラン標準品、及びピーク分子量が約４０ｋＤａ〜５５ｋＤａの第６デキストラン標準品からなるピーク分子量標準曲線に対する定量、からなる水系ゲル浸透クロマトグラフィー構成である。前記ピーク分子量標準曲線は、さらに、ピーク分子量が３ｋＤａ〜５ｋＤａのデキストラン標準品を含む。
本明細書に記載のフカン−低エンドトキシン組成物は、フカンにおいて、当該フカンの少なくとも約２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％及び９９％ｗ／ｗが１００ｋＤａを超える分子量を有する分子量分布を有する前記フカンをさらに含んでいてもよい。本明細書に記載のフカン−低エンドトキシン組成物は、フカンにおいて、当該フカンの少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％及び９９％ｗ／ｗが２００ｋＤａを超える分子量を有する分子量分布を有する前記フカンをさらに含んでいてもよい。本明細書に記載のフカン−低エンドトキシン組成物は、フカンにおいて、当該フカンの少なくとも約２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％ｗ／ｗが５００ｋＤａを超える分子量を有する分子量分布を有する前記フカンをさらに含んでいてもよい。本明細書に記載のフカン−低エンドトキシン組成物は、フカンにおいて、当該フカンの少なくとも約５％、１０％、２０％、３０％、又は４０％ｗ／ｗが１６００ｋＤａを超える分子量を有する分子量分布を有する前記フカンをさらに含んでいてもよい。
本明細書に記載のフカン−低エンドトキシン組成物は、重量平均分子量が約１００ｋＤａを超える、例えば、約１００ｋＤａ〜約１０，０００ｋＤａ、約２００ｋＤａ〜約８，０００ｋＤａ、約３５０ｋＤａ〜約７，０００ｋＤａ、約４５０ｋＤａ〜約６，０００ｋＤａ、約５８０ｋＤａ〜約５，０００ｋＤａ、又は５００ｋＤａ〜約２，０００ｋＤａであるフカンを含んでいてもよい。本明細書に記載のフカン−低エンドトキシン組成物は、ピーク分子量が約７０ｋＤａを超える、例えば、約７０ｋＤａ〜約１２００ｋＤａ、約１００ｋＤａ〜約１２００ｋＤａ、約２００ｋＤａ〜約１２００ｋＤａ、約４００ｋＤａ〜約１２００ｋＤａ、又は約４００ｋＤａ〜約９００ｋＤａであるフカンを含んでいてもよい。
本明細書に記載のフカン−低エンドトキシン組成物は、数平均分子量が約５０ｋＤａを超える、約５０ｋＤａ〜約１，０００ｋＤａ、約７０ｋＤａ〜約１０００ｋＤａ、約１５０ｋＤａ〜約１０００ｋＤａ、約２５０ｋＤａ〜約１０００ｋＤａ、又は約２５０ｋＤａ〜約７００ｋＤａであるフカンを含んでいてもよい。
本明細書に記載のフカン−低エンドトキシン組成物におけるフカンは、硫酸化レベルが約１０％ｗ／ｗ〜７０％ｗ／ｗ、約２０％ｗ／ｗ〜６５％ｗ／ｗ、約３０％ｗ／ｗ〜５５％ｗ／ｗ、約４０％ｗ／ｗ〜６０％ｗ／ｗ、又は約４０％ｗ／ｗ〜５０％ｗ／ｗであってよい。
本明細書に記載のフカン−低エンドトキシン組成物におけるフカンは、総フコース：総硫酸（sulfate）のモル比が約１：０．５〜１：４、約１：０．８〜１：３．５、約１：１〜１：２．５、約１：１．２〜１：２．０、又は約１：１．５〜１：３であってよい。本明細書に記載のフカン−低エンドトキシン組成物におけるフカンは、総フコース＋ガラクトース：総硫酸のモル比が約１：０．５〜１：４、約１：０．８〜１：３．５、約１：１〜１：２．５、約１：１．２〜１：２．０、又は約１：１．５〜１：３であってよい。
本明細書に記載のフカン−低エンドトキシン組成物におけるフカンは、総炭水化物含有量が約２７％ｗ／ｗ〜８０％ｗ／ｗ、３０％ｗ／ｗ〜７０％ｗ／ｗ、約４０％ｗ／ｗ〜９０％ｗ／ｗ、約４８％ｗ／ｗ、又は５０％ｗ／ｗ〜９６％ｗ／ｗであってよい。本明細書に記載のフカン−低エンドトキシン組成物におけるフカンは、フコース含有量が総炭水化物に対する割合として約３０％ｗ／ｗ〜１００％ｗ／ｗ、約４０％ｗ／ｗ〜９５％ｗ／ｗ、又は約５０％ｗ／ｗ〜９０％ｗ／ｗであってよい。
本明細書に記載のフカン−低エンドトキシン組成物におけるフカンは、ガラクトース含有量が総炭水化物に対する割合として０％ｗ／ｗ〜６０％ｗ／ｗ、０％ｗ／ｗ〜６０％ｗ／ｗ、約５％ｗ／ｗ〜３０％ｗ／ｗ、又は約０％ｗ／ｗ〜１０％ｗ／ｗ若しくは１５％ｗ／ｗであってよい。本明細書に記載のフカン−低エンドトキシン組成物におけるフカンは、グルクロン酸含有量が総炭水化物含有量に対する割合として約０％ｗ／ｗ〜１０％ｗ／ｗ、マンノース含有量が総炭水化物含有量に対する割合として約０％ｗ／ｗ〜７％ｗ／ｗ、ラムノース含有量が総炭水化物含有量に対する割合として０％ｗ／ｗ〜４％ｗ／ｗ、キシロース含有量が総炭水化物含有量に対する割合として０％ｗ／ｗ〜２０％ｗ／ｗであってよい。
いくつかの実施形態では、本明細書中のフカン−低エンドトキシン組成物は、水に５０ｍｇ／ｍｌの濃度で溶解すると、約４ｃＰ〜約５０ｃＰ、約５ｃＰ〜約４０ｃＰ、約１０ｃＰ〜約３０ｃＰ、約１５ｃＰ、約２０ｃＰ、又は約２５ｃｐの粘度を有する。ある一定の実施形態では、本明細書中のフカン−低エンドトキシン組成物は、水に１ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍｌで溶解すると、無色透明、淡黄色透明又は淡褐色透明である溶液を形成する。
ある一定の実施形態において、本明細書に記載のフカン−低エンドトキシン組成物におけるフカンは、アセチル含有量が、約５％ｗ／ｗ未満、約２％ｗ／ｗ未満、又は約０％ｗ／ｗでありうる。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のフカン−低エンドトキシン組成物におけるフカンは、５ｍｍのコールドプローブを備えた６００ＭＨｚ分光計により、溶媒シグナルを抑制しつつ７０℃で、各回２５６〜５１２回の走査として８ずつ回数を増加させつつ、炭素次元における１０〜３０ｐｐｍの範囲で、２Ｄ １Ｈ−１３Ｃ異核多量子コヒーレンスによって測定される場合に、実質的に０％ｗ／ｗのアセチル含有量を含み得る。
方法
方法、システムなどは、原料フカン組成物などの出発フカン組成物中の不純物を、精製する、パイロジェン除去する、又はさもなければその量を低減するために提供される。前記方法及び組成物などは、望ましくない量のエンドトキシン、及び、例えば生物的汚染物質、細胞成分などの他のエンドトキシン含有成分、又はこれらからの影響を排除、不活化、又はさもなければ低減して、例えば、前記フカンのミリグラム（ｍｇ）当たりエンドトキシン単位（ＥＵ）（ＥＵ／ｍｇ）が０．２、０．１８、０．１２、０．１、０．０９、０．０３、０．０２、０．０１、０．００７、０．００５、０．００２又は０．００１未満である、フカン−低エンドトキシン組成物を得ることを含む。生物的汚染物質としては、細菌、ウイルス、酵母、カビ及び寄生虫などの微生物が挙げられ、これらのいくらかは毒素を産生し、これらのいくらかは細胞成分を含む。生物的汚染物質、細胞成分、エンドトキシン及び他のエンドトキシン含有成分とは、本明細書において使用されるとき、不純物という用語に包含される。
いくつかの実施形態において、本開示は、医学的用途及び外科的用途、例えば、線維性癒着の予防に好適であるフカン−低エンドトキシン組成物を提示する。
本明細書における方法のいくつかにおいて、本開示は、タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）の使用を考察し、該ＴＦＦは、エンドトキシンを除去し得る又はその除去を補助し得る。使用されるタンジェンシャルフロー濾過装置の形式は、例えば、板枠式システム；渦巻き型カートリッジシステム；中空ファイバシステム；フローセルシステム；並びに遠心分離フィルタシステムのうちの１つであり得る。
以下の段落は、選択される方法（複数可）に応じて、溶液、懸濁液、固体、ゲル又は他の様相（modalities）などの任意の好適な反応混合物を使用して実施され得る種々の方法を介して出発フカン組成物から本明細書に記載のフカン−低エンドトキシン組成物を作り出すのに使用され得る方法のうちいくつかの簡単な一般的考察に向けたものである。
物理的に誘導される凝集（flocculation）
高レベルのエンドトキシンを含む、原料フカン組成物などの出発フカン組成物は、不純物の凝集に供されるものであり、これは物理的に誘導される凝集であり得る。上記の方法は、出発フカン組成物を提供すること；凝集助剤を前記出発フカン組成物に添加して反応混合物を生成すること；前記反応混合物を加熱することによって前記出発フカン組成物において前記不純物を凝集させること；凝集した前記不純物を前記反応混合物から分離すること；及び前記分離の後、所望の前記フカン−低エンドトキシン組成物を回収することを含みうる。
前記反応混合物を加熱することによる前記不純物の凝集は、大気圧を超える圧力に前記反応混合物を供しながら、前記反応混合物を加熱することを含んでいてもよい。好適な凝集助剤として、限定することなく、塩及び／又は塩基、例えば、アルカリ金属、アルカリ土類金属、アルミニウム及び／又はアンモニウムの塩化物、臭化物、ヨウ化物、フッ化物、硫酸塩、亜硫酸塩、炭酸塩、重炭酸塩、リン酸塩、硝酸塩、亜硝酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ケイ酸塩、酸化物、水酸化物及び／又はシアン化物、例えば、塩化ナトリウム、硫酸ナトリウム、塩化カリウム、硫酸カルシウム、リン酸ナトリウム、硝酸ナトリウム、塩化リチウム、硝酸リチウム、塩化アンモニウム、炭酸ナトリウム、水酸化ナトリウムが挙げられる。前記反応混合物から凝集した前記不純物を分離することは、前記反応混合物の遠心分離、濾過、析出又は流体力学的流動分離のうちの１又は複数を含んでいてもよい。
本明細書における方法などは、凝集助剤を添加する前に前記出発フカン組成物を脱塩することをさらに含んでいてもよい。前記脱塩は、分画分子量（ＭＷＣＯ）タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）フィルタを通して水中溶液として前記出発フカン組成物を透析濾過することを含んでいてもよい。前記透析濾過は、前記出発フカン組成物を蒸留水によって透析濾過することを含んでいてもよい。前記分画分子量ＴＦＦフィルタは、前記フカン組成物における所望の分子量分離点又はターゲットよりも小さい分画分子量、例えば、５０ｋＤａ、７０ｋＤａ、１００ｋＤａ、２００ｋＤａ、３００ｋＤａ、５００ｋＤａ又は１０００ｋＤａの分画分子量を有しうる。
前記方法は、塩基性環境又は中性環境において実施され得る。前記出発フカン組成物の凝集助剤を添加することは、そのため、前記出発フカン組成物を塩基性にして前記出発フカン組成物におけるフカンが分解するのを防止又は抑制することを含んでいてもよく、これはフカンは酸性環境において分解する傾向があるためである。他の実施形態において、前記方法は、前記反応混合物をｐＨ７以上において又はその付近で維持することによって実施され得る。
いくつかの実施形態において、前記出発フカン組成物は、溶液として提供されうる。上記の方法による処理に好適なフカンの例として、限定することなく、フコイダンが挙げられ、溶液中のフカン濃度は、０．０１％ｗ／ｖ〜５０％ｗ／ｖであってよい。上記の方法によって除去され得る不純物として、限定することなく、粒子状物、脂質、脂肪酸、フロロタンニン、ラミナリン、アルギネート、タンパク質、メイラード反応生成物、フコキサンチン、クロロフィル、遊離イオン、細菌、ウイルス、酵母、カビ、寄生虫、ＤＮＡ及びエンドトキシンが挙げられる。
ゲル浸透クロマトグラフィー
実験例について得られた分子量分布を評価するためにゲル浸透クロマトグラフィー（「ＧＰＣ」）を用いた。ゲル浸透クロマトグラフィーにおける使用のために利用可能な多数の異なるパラメータ、カラム及び標準品があり、分子量の分析に利用できる多様な計器装備構成がもたらされる。本明細書における分子量測定のために、以下のパラメータを用いてＧＰＣを行った。移動相は、０．６ｍＬ／分の０．１Ｍ硝酸ナトリウム流であった。カラムコンパートメント及び検出器は３０℃であった。検出のためにＷａｔｅｒｓ２４１４示差屈折率検出器を用いた。
適切なＧＰＣカラムとしては、水性溶媒と適合性のあるＧＰＣカラム、例えば、スルホン化スチレンジビニルベンゼン、ＮＨ官能基を有した（functionalized）アクリレートコポリマー網、変性シリカ及びヒドロキシル化ポリメタクリレート系ゲルのうち少なくとも１つが充填されたカラムが挙げられる。本明細書における分析のために、６μｍの粒径のヒドロキシル化ポリメタクリレート系ゲルが充填された内径（ＩＤ）が６ｍｍの長さ４０ｍｍの１つのガードカラム、続いて、排除限界が約７，０００ｋＤａで、有効分子量範囲が約５０ｋＤａ〜約５，０００ｋＤａの１２μｍの粒径のヒドロキシル化ポリメタクリレート系ゲルが充填されたＩＤが７．８ｍｍの第１の３００ｍｍ分析ＧＰＣカラム、続いて、排除限界が約７，０００ｋＤａで、有効分子量範囲が約１ｋＤａ〜約６，０００ｋＤａの１０μｍの粒径のヒドロキシル化ポリメタクリレート系ゲルが充填されたＩＤが７．８ｍｍの第２の３００ｍｍ分析ＧＰＣカラムを含む３つのカラムを直列で用いた。カラム構成の総有効分子量範囲は、約１ｋＤａ〜約６，０００ｋＤａであった。このカラム構成の例は、直列に接続されたＵｌｔｒａｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標）ガードカラム−Ｕｌｔｒａｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標）２０００カラム−Ｕｌｔｒａｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標）Ｌｉｎｅａｒカラムでありうる。
Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎのトレース可能な標準品、すなわち、ＤＸＴ３７５５Ｋ（ピーク分子量＝２１６４ｋＤａ）、ＤＸＴ８２０Ｋ（ピーク分子量＝７４５ｋＤａ）、ＤＸＴ７６０Ｋ（ピーク分子量＝６２１ｋＤａ）、ＤＸＴ６７０Ｋ（ピーク分子量＝４０１ｋＤａ）、ＤＸＴ５３０Ｋ（ピーク分子量＝４９０ｋＤａ）、ＤＸＴ５００Ｋ（ピーク分子量＝３９０ｋＤａ）、ＤＸＴ２７０Ｋ（ピーク分子量＝１９６ｋＤａ）、ＤＸＴ２２５Ｋ（ピーク分子量＝２１３ｋＤａ）、ＤＸＴ１５０Ｋ（ピーク分子量＝１２４ｋＤａ）、ＤＸＴ５５Ｋ（ピーク分子量＝５０ｋＤａ）、ＤＸＴ５０Ｋ（ピーク分子量＝４４ｋＤａ）及びＤＸＴ５Ｋ（ピーク分子量＝４ｋＤａ）（これらの標準品のピーク分子量は約４ｋＤａ〜約２，２００ｋＤａである）を含む標準曲線に対して試料流を定量した。用いられる標準曲線は、例えば、Ｄｅｘｔｒａｎ３７５５ｋＤａ、Ｄｅｘｔｒａｎ５０ｋＤａ及びＤｅｘｔｒａｎ５５ｋＤａのうち少なくとも１つ並びに本明細書において考察される３〜６つの追加的なトレース可能な標準品を含んでもよく、較正点は、用いられる検量体のピーク分子量である。例示的な較正曲線は、ＤＸＴ３７５５Ｋ、ＤＸＴ８２０Ｋ、ＤＸＴ５３０Ｋ、ＤＸＴ５００Ｋ、ＤＸＴ２２５Ｋ及びＤＸＴ５５Ｋからなることができる。本明細書において用いられたカラムは、フカンの定量のために用いられた標準品のピーク分子量範囲を包含し且つそれを超えて拡張された総有効分子量範囲を有するものであった。
本明細書におけるフカン／フコイダンポリマーについて述べられた分子量は、分子量が特定の分子量から離れて増加又は減少するにつれて量又は割合が増加又は減少する、より高い及びより低い分子量の分子の分布が常にある分子量の値である。前記分布は、一般的なガウス形状又は歪んだガウス形状を有してよいが、それが必要であるわけではない。
本明細書中の表の結果は、分子量分布の特定の特性について使用される略語を含む。ゲル浸透クロマトグラフィーはＧＰＣ、ピーク保持時間はＰＲＴ、ピーク分子量はＰＭＷ、重量平均分子量はＷＡＭＷ、数平均分子量はＮＡＭＷ、百分率分布は％ｄｉｓｔ、分子量はＭＷ、多分散指数はＰＤＩ、分画分子量はＭＷＣＯと表される。
以下の段落は、本明細書に記載のフカン−低エンドトキシン組成物を作り出すのに使用され得るいくつかの方法の簡単な一般的考察に向けたものである。
改変型タンジェンシャルフロー濾過
高レベルのエンドトキシンを含有する、原料フカン組成物であり得る出発フカン組成物は、改変型タンジェンシャルフロー濾過に供される。前記方法は：前記出発フカン組成物並びに細胞及びエンドトキシン凝集体を破壊する破壊剤を、第１タンジェンシャルフロー濾過フィルタを通してのタンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）に供して、第１保持フカン組成物を生成することを含みうる。前記破壊剤は、例えば、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、塩化ベンザルコニウム、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ１００、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ１１４、又はデオキシコール酸ナトリウムのうちの１又は複数であり得る。前記第１保持フカン組成物は、次いで、第２タンジェンシャルフロー濾過フィルタを通しての二次透析濾過溶液（secondary diafiltration solution）によるタンジェンシャルフロー濾過に供されて、前記保持フカン組成物から残存破壊剤を除去することにより、所望の前記フカン−低エンドトキシン組成物を含む第２保持フカン組成物を生成する。所望により、第１及び第２の両方の透析濾過プロセスにおいて同じＴＦＦフィルタが用いられてよい。
本明細書における方法、システムなどは、溶液中の前記出発フカン組成物を、プレフィルタを通して予備濾過して、望ましくない粒子状材料を除去することを含んでいてもよい。前記破壊剤は、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤及び／又は非イオン性界面活性剤、例えば、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、塩化ベンザルコニウム、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ１００、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ１１４及び／又はデオキシコール酸ナトリウムを含んでいてもよい。
さらに、実施形態は、前記第１保持フカン組成物を沈殿剤によって処理して、Ａ）前記破壊剤の沈殿物及びＢ）保持液−上清フカン組成物を生成することを含む。前記上清フカン組成物は、次いで、さらなるタンジェンシャルフロー濾過に供されて、前記残存破壊剤を前記上清フカン組成物から除去することにより、所望の前記フカン−低エンドトキシン組成物を含む第２保持フカン組成物を生成し得る。沈殿剤による前記第１保持フカン組成物の処理は、前記第１保持フカン組成物を塩及び／又は塩基によって処理することを含んでいてもよい。ある一定の実施形態において、前記塩は、アルカリ金属、アルカリ土類金属、アルミニウム及び／又はアンモニウムの塩化物、臭化物、ヨウ化物、フッ化物、硫酸塩、亜硫酸塩、炭酸塩、重炭酸塩、リン酸塩、硝酸塩、亜硝酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ケイ酸塩及び／又はシアン化物であってよい。ある一定の実施形態において、前記塩基は、アルカリ金属、アルカリ土類金属、アルミニウム及び／又はアンモニウムの水酸化物及び／又は酸化物であってよい。ある一定の実施形態において、前記塩は、塩化カリウム、水酸化カリウム、塩化カルシウム、塩化バリウム又は炭酸カルシウムのうちの１つであってよい。前記上清フカン組成物はまた、望ましくない粒子状材料を除去するために、所望により、予備濾過されてよい。
前記方法、システムなどはまた、静菌剤を、例えば、前記出発フカン組成物及び破壊剤に添加することも含みうる。前記静菌剤は、例えば、エチレンジアミン−四酢酸（ＥＤＴＡ）、２，３−ジメルカプト−１−プロパノール、エチレンジアミン、ポルフィン又はクエン酸のうちの少なくとも１つであり得る。
いくつかの実施形態において、前記出発フカン組成物は、溶液として提供されうる。前記出発フカン組成物は、溶液中のフカン濃度が０．１％ｗ／ｖ超〜３０％ｗ／ｖ未満でありうる。前記破壊剤は、溶液中における濃度が０．１％ｗ／ｖ超〜６０％ｗ／ｖ未満であってよい。上記の方法によって除去され得る不純物として、限定することなく、粒子状物、脂質、脂肪酸、フロロタンニン、ラミナリン、アルギネート、タンパク質、メイラード反応生成物、フコキサンチン、クロロフィル、遊離イオン、細菌、ウイルス、酵母、カビ、寄生虫、ＤＮＡ及びエンドトキシンが挙げられる。
図１は、出発フカン組成物の不純物レベルの低減を得るための例示的な改変型タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）システム１０００を模式的に示す。溶液中の出発フカン組成物は、流入供給ライン１００２を介してフカン容器１０１６に供給される。好適な溶媒中の前記出発フカン組成物は、例えば望ましくない粒子状物を除去するために、プレフィルタ１００４を通して予備濾過されてもよい。
ＴＦＦ流入ポンプ１０１４は、ＴＦＦ供給ライン１０１２を介してＴＦＦフィルタ１０１０に出発フカン組成物を送り込む（pump）。ＴＦＦフィルタ１０１０は、供給された流入流体をその保持液側にあるフィルタを通過させるように設計され、濾過生成物を１又は複数の流出ラインを介して出て行かせ且つ処理された流入流体を別の流出ラインを介して保持液とするカセットとして供給され得る。ＴＦＦ流入ポンプ１０１４は、その保持液側と濾過生成物側の間のＴＦＦフィルタ１０１０に所望のレベルの圧力を提供する。図１において、ＴＦＦフィルタ１０１０の保持液は、ＴＦＦ保持液戻りライン１０１８及びＴＦＦ保持液バルブ１０１７を通じてフカン容器１０１６に戻され、一方で、ＴＦＦ濾過生成物流出ライン１０１９を介して生成された濾過生成物は、改変型ＴＦＦシステム１０００の外側で使用されるか、又は廃棄されることとなる。
ＴＦＦ流入ポンプ１０１４がＴＦＦフィルタ１０１０を通して前記出発フカン組成物を再循環させる前又は間に、破壊剤、例えば、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、塩化ベンザルコニウム、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ１００、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ１１４又はデオキシコール酸ナトリウムのうちの１つが、フカン容器１０１６中の前記出発フカン組成物に、第１透析濾過溶液容器１０２０から第１透析濾過溶液供給ライン１０２５を介して添加されてもよい。前記第１透析濾過溶液である、第１破壊剤を含有する溶液は、ＴＦＦ濾過生成物流出ライン１０１９において前記濾過生成物を介して損失した溶媒を補充すること、及び／又は所定のダイアボリューム（diavolume）数の出発フカン組成物及び破壊剤をＴＦＦフィルタ１０１０を通して確実に循環させることの両方に使用される。所望により前記破壊剤は第１透析濾過溶液バルブ１０２４を制御することによりパルスプロセスで添加されてもよい。他の実施形態において、前記破壊剤は連続モードで添加されてもよい。
ＴＦＦフィルタ１０１０における処理への破壊剤のダイアボリューム数は予め決定されていてよい。前記プロセスは、所定の期間、所定のダイアボリューム数の破壊剤で、又は所定の純度レベルが達成されるまで継続されてよく、例えば、フカン容器１０１６における不純物レベルが測定され、好適に低い不純物レベルが達成されたときに前記ＴＦＦプロセスを停止してもよい。測定される前記不純物レベルは、エンドトキシンレベルでありうる。前記第１透析濾過溶液を用いた、ＴＦＦフィルタ１０１０を介する溶液中の前記出発フカン組成物の前記透析濾過は、溶液中にある低エンドトキシンである第１保持フカン組成物を提供する。
前記の低エンドトキシン第１保持フカン組成物から前記残存破壊剤を除去してもよい。このことは、第１透析濾過溶液バルブ１０２４、ＴＦＦシステム流出バルブ１００６を閉じ、また、第２透析濾過溶液容器１０３０からの適切な二次透析濾過溶液が第２透析濾過溶液供給ライン１０３５及び第２透析濾過溶液バルブ１０３４を介してフカン容器１０１６に入るようにすることで実施できる。フカン容器１０１６中の混合物は、次いで、例えば、ＴＦＦ供給ライン１０１２、ＴＦＦ流入ポンプ１０１４、ＴＦＦ保持液戻りライン１０１８、及びＴＦＦ保持液バルブ１０１７を介して、又は所望の場合には他のＴＦＦ濾過を介して、前述のようにＴＦＦフィルタ１０１０を介するＴＦＦに供され得る。
前記二次透析濾過溶液は、例えば、ＴＦＦ濾過生成物流出ライン１０１９において前記濾過生成物を介して損失した溶媒を補充すること、及び／又は、所定のダイアボリューム数の前記第１保持フカン組成物及び二次透析濾過溶液をＴＦＦフィルタ１０１０を通して確実に循環させることの両方に使用され得る。第２透析濾過溶液バルブ１０３４を制御することにより、前記二次透析濾過溶液を、例えば、パルスプロセスで及び／又は連続モードで添加することができる。ＴＦＦフィルタ１０１０にわたるプロセスへの二次透析濾過溶液のダイアボリューム数は予め決定されていてよい。前記プロセスは、所定の期間、所定のダイアボリューム数の前記二次透析濾過溶液で継続されてよく、又は、フカン容器１０１６における残存破壊剤濃度が測定され、好適に低い残存破壊剤濃度が達成されたときに前記ＴＦＦプロセスを停止してもよい。フカン容器１０１６において得られる第２保持フカン組成物は、改変型ＴＦＦシステム１０００のフカン−低エンドトキシン組成物生成物を含む。
いくつかの実施形態において、フカン容器１０１６中の前記第１保持フカン組成物は、他の中間処理のためのＴＦＦシステム流出バルブ１００６によって制御される補助ＴＦＦシステム流出ライン１００８を介して回収され、その後、当該中間処理の後に、本明細書で考察されている二次透析濾過溶液処理のためにフカン容器１０１６に戻されてもよい。中間処理の一例においては、フカン容器１０１６からの第１保持フカン組成物は沈殿剤によって処理され、得られる混合物は所望の前記上清フカン組成物を前記沈殿物から分離するために遠心分離に供されうる。例として、前記破壊剤がドデシル硫酸ナトリウムであるとき、前記沈殿剤は、例えば、塩化カリウム又は水酸化カリウムでありうる。ドデシル硫酸ナトリウムは、特に、有意な利点を有するが、フカン容器１０１６における前記低エンドトキシン第１保持フカン組成物から除去することが困難な物質であるところ、中間プロセス工程における沈殿はその除去に役立つ。前記中間工程の後、前記中間工程の上清は、既に考察されているように、フカン容器１０１６に戻されて、二次透析濾過溶液ＴＦＦ工程に供されてうる。破壊剤がドデシル硫酸ナトリウムである場合、この第２ＴＦＦ工程は、前記の中間沈殿工程及び遠心分離工程の後に前記上清フカン組成物に残存するドデシル硫酸ナトリウムの残余物を除去しようとするものである。
固相抽出
高レベルのエンドトキシンを含有する出発フカン組成物などのフカン組成物は、固相抽出に供される。前記方法は：他の不純物の中にエンドトキシンを含む固体状態の出発フカン組成物と、不純物を溶解するように構成されているがフカンを溶解できない抽出媒体とを提供すること；前記出発フカン組成物を前記抽出媒体と混合して、溶解されていない固体フカン組成物と、溶解したエンドトキシン及び場合により他の不純物を含有する前記抽出媒体と、の混合物を形成すること；他の不純物の中に溶解エンドトキシンを含有する抽出媒体から、前記フカン−低エンドトキシン組成物を非溶解固体フカン組成物として分離すること；及び、前記フカン−低エンドトキシン組成物を前記抽出媒体から除去した後、前記フカン−低エンドトキシン組成物を固体として回収することを含みうる。前記分離は、例えば、遠心分離、濾過、析出及び流体力学的流体分離のうちの１又は複数を含んでいてもよい。
前記抽出媒体は、例えば、塩基、界面活性剤及び酸化剤のうちの１又は複数を含みうる。フカンを溶解しない好適な抽出媒体として、相対極性が０．７６５未満である有機溶媒、例えば、エタノール、イソプロパノール、メタノール、ベンゼン、ジエチルエーテル、デカメチルシクロ−ペンタシロキサン、酢酸エチル、ブタノール、ヘキサン、ヘプタン、ヘプタノール、オクタノール及びデカノールが挙げられる。好適な塩基として、限定することなく、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウム、及び水酸化カルシウムが挙げられる。好適な酸化剤として、限定することなく、過酸化水素、過酸化尿素、及び次亜塩素酸ナトリウムを含む酸化漂白剤のうちの１又は複数が挙げられる。好適な界面活性剤として、限定することなく、非イオン性界面活性剤、例えば、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）、Ｂｒｉｊ（登録商標）及びＴｒｉｔｏｎ（登録商標）の範囲の界面活性剤；アニオン性界面活性剤、例えば、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、デオキシコール酸ナトリウム；並びにカチオン性界面活性剤、例えば、塩化ベンザルコニウム（ＢＡＣ）が挙げられる。本明細書における方適した特定のフカンとしては、限定されないがフコイダンが挙げられる。オリジナルの、例えば、出発フカン組成物の、前記抽出媒体による処理は、１分から１２０時間まで延長しうる。
前記方法は、出発フカン組成物を固体形態で提供する前に出発フカン組成物を脱塩することをさらに含んでいてもよい。脱塩は、分画分子量（ＭＷＣＯ）タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）フィルタを用いて水中溶液として出発フカン組成物を透析濾過することを含みうる。透析濾過は、出発フカン組成物を蒸留水によって透析濾過することを含んでいてもよい。分画分子量ＴＦＦフィルタは、フカン−低エンドトキシン組成物における所望の分子量分離点又はターゲットよりも小さい分画分子量、例えば、５０ｋＤａ、７０ｋＤａ、１００ｋＤａ、２００ｋＤａ、３００ｋＤａ、５００ｋＤａ又は１０００ｋＤａの分画分子量を有しうる。透析濾過は、好適なプレフィルタを通して出発フカン組成物を予備濾過して、粒子状物を除去することをさらに含んでいてもよい。前記方法は、出発フカン組成物を固体形態で提供する前に溶液中の適した出発フカン組成物を凍結乾燥及び／又は噴霧乾燥することをさらに含んでいてもよい。前記方法は、出発フカン組成物を固体形態で提供する前に好適な出発フカン組成物を溶液から沈殿させることをさらに含んでいてもよい。好適な沈殿剤として、限定することなく、エタノール、イソプロパノール、プロパノール、アセトン、メタノール、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、エチレングリコール、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、グライム、ジグライム、ジオキサンが挙げられ、フカンの溶解度は、沈殿させる流体の極性が減少するにつれて減少する。上記の方法によって除去され得る不純物としては、粒子状物、脂質、脂肪酸、フロロタンニン、ラミナリン、アルギネート、タンパク質、メイラード反応生成物、フコキサンチン、クロロフィル、遊離イオン、細菌、ウイルス、酵母、カビ、寄生虫、ＤＮＡ及びエンドトキシンが挙げられるが、これらに限定されない。
化学的に誘導される沈殿
高レベルのエンドトキシン及び他の不純物、例えば、懸濁した粒子状物を含有する、出発フカン組成物又は他の好適なフカン組成物は、化学的に誘導される不純物の沈殿に供される。ある一定の実施形態において、前記方法は：出発フカン組成物を出発溶液中に提供すること；イオン性多価不純物沈殿剤を用いて前記出発溶液から不純物を沈殿させて、懸濁不純物と沈殿不純物と上清との混合物を提供すること；前記上清溶液から前記懸濁不純物及び沈殿不純物を分離すること；及び前記懸濁不純物及び沈殿不純物を前記上清から分離した後に、所望の前記フカン−低エンドトキシン組成物を含有する前記上清溶液を回収することを含みうる。
好適な不純物沈殿剤として、二価カチオン及び三価カチオンのイオン性多価塩及び／又は塩基が挙げられる。かかる好適な塩の例として、限定することなく、アルカリ土類金属、亜鉛、アルミニウム、銅及び鉄の塩化物、臭化物、ヨウ化物、フッ化物、硫酸塩、亜硫酸塩、炭酸塩、重炭酸塩、リン酸塩、硝酸塩、亜硝酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ケイ酸塩及び／又はシアン化物が挙げられる。かかる好適な塩基の例として、限定することなく、アルカリ土類金属、亜鉛、アルミニウム、銅及び／又は鉄の水酸化物及び／又は酸化物が挙げられる。上清溶液からの懸濁した不純物及び沈殿した不純物の分離は、混合物中の不純物を凝集させることを含んでいてもよい。好適な凝集剤として、限定することなく、硫酸アルミニウムカリウム；硫酸アルミニウムナトリウム；硫酸アンモニウムアルミニウム；塩化カルシウム；リン酸ナトリウム；水酸化アルミニウム；塩化アルミニウム；塩化第二鉄；硫酸第二鉄；硫酸第一鉄；ケイ酸ナトリウム；ケイ酸カルシウム；リン酸カルシウム；塩化亜鉛；炭酸カルシウム；重炭酸カルシウム；硫酸カリウム；リン酸マグネシウム；アクリルアミド；アクリル酸；アルミニウムクロロハイドレート；ポリ塩化アルミニウム；タンニン；ホルムアルデヒド；メラミン；Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルアクリレートメチルクロライド；第４級Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルメタクリレートメチルクロライド；及びポリジアリルジメチル−アンモニウムクロライドが挙げられる。凝集剤の上記列挙から分かるように、いくつかの実施形態において、凝集剤は、不純物沈殿剤であってよい。上清溶液からの沈殿した、懸濁した及び／又は凝集した不純物の分離は、不純物と上清溶液との混合物の遠心分離、濾過、析出及び流体力学的流動分離のうちの少なくとも１つを含んでいてもよい。
前記方法は、前記出発フカン組成物を提供することの前に前記出発フカン組成物を脱塩することをさらに含んでいてもよい。前記脱塩は、ＴＦＦフィルタを通して水性溶液として前記出発フカン組成物を透析濾過することを含んでいてもよい。前記透析濾過は、前記出発フカン組成物を蒸留水によって透析濾過することを含んでいてもよい。前記透析濾過は、分画分子量（ＭＷＣＯ）が５ｋＤａ、１０ｋＤａ、３０ｋＤａ、５０ｋＤａ、７０ｋＤａ又は１００ｋＤａであるＴＦＦフィルタを通して前記出発フカン組成物を透析濾過することを含んでいてもよい。前記透析濾過は、好適なプレフィルタを通して前記出発フカン組成物を予備濾過して、粒子状物を除去することをさらに含んでいてもよい。
前記方法は、約７〜１４のｐＨを維持して、酸性環境におけるフカンの分解を抑制又は防止することをさらに含んでいてもよい。この約７〜１４のｐＨの維持には、好適な塩基、例えば、水酸化ナトリウムの添加を含んでいてもよい。好適な塩基は、イオン性多価不純物沈殿剤を用いて溶液から不純物を沈殿させる前に出発フカン組成物に添加されてもよい。他の実施形態においては、好適な塩基は、イオン性多価不純物沈殿剤を用いて溶液から不純物を沈殿させた後に、沈殿した不純物と上清溶液との混合物に添加されてもよい。さらに他の実施形態においては、好適な塩基は、懸濁した不純物及び沈殿した不純物を上清溶液から分離した後に上清溶液に添加されてよい。
上記の方法による処理に好適なフカンの例として、限定することなく、フコイダンが挙げられ、溶液中のフカン濃度は０．０１％ｗ／ｖ〜５０％ｗ／ｖでありうる。上記の方法によって除去され得る不純物として、限定することなく、粒子状物、脂質、脂肪酸、フロロタンニン、ラミナリン、アルギネート、タンパク質、メイラード反応生成物、フコキサンチン、クロロフィル、遊離イオン、細菌、ウイルス、酵母、カビ、寄生虫、ＤＮＡ及びエンドトキシンが挙げられる。
溶解及び凝集
高レベルのエンドトキシンを含有する、原料フカン組成物などの出発フカン組成物は、溶解及び凝集に供される。この例における前記方法は、出発フカン組成物を提供すること；前記出発フカン組成物をアルカリ性にすること；前記出発フカン組成物に細胞破壊剤を添加して、反応混合物を生成すること、ここで前記細胞破壊剤は、前記出発フカン組成物における細胞成分を溶解し、生体分子成分を含む溶解物をアルカリ性の反応混合物中に放出する；前記反応混合物から前記細胞破壊剤及び前記不純物の少なくとも一部を除去して、分解されていない所望の前記フカン−低エンドトキシン組成物を残すことを含みうる。
前記細胞破壊剤を除去することは、沈殿、凝集、タンジェンシャルフロー濾過、ミセル相分離、イオン吸着、及び疎水性吸着のうちのいずれか１又は複数を含んでいてもよい。不純物を除去することは、沈殿、凝集、タンジェンシャルフロー濾過、ミセル相分離、イオン吸着、及び疎水性吸着のうちのいずれか１又は複数を含んでいてもよい。これらの除去方法のいずれか又は除去方法の組み合わせは、固体相と液体相とのいずれかの混合物の遠心分離、濾過、析出又は流体力学的流動分離を含んでいてもよい。
好適な細胞破壊剤としては、限定することなく、アニオン性、非イオン性又はカチオン性の界面活性剤、例えば、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、塩化ベンザルコニウム、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ１００（登録商標）、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ１１４（登録商標）、Ｂｒｉｊ（登録商標）界面活性剤、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）界面活性剤、デオキシコール酸ナトリウム、及びアルキルベンゼンスルホネートが挙げられる。
前記方法の一実施形態において、細胞破壊剤は、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）であり、細胞破壊剤を除去することは、細胞破壊剤をアルカリ性反応混合物に不溶にすることにより細胞破壊剤を沈殿させるための沈殿剤を添加することを含む。この実施形態において、細胞破壊剤を除去することは、凝集剤を反応混合物に添加して、沈殿した細胞破壊剤を少なくとも一部の不純物と共に凝集させることをさらに含んでいてもよい。細胞破壊剤を除去することは、凝集後に遠心分離することをさらに含んでいてもよい。
ドデシル硫酸ナトリウム及びアルキルベンゼンスルホネートに好適な沈殿剤としては、限定することなく、水酸化カリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、炭酸カルシウム及び塩化バリウムが挙げられる。好適な凝集剤としては、限定することなく、硫酸アルミニウムカリウム；硫酸アルミニウムナトリウム；硫酸アンモニウムアルミニウム；塩化カルシウム；リン酸ナトリウム；水酸化アルミニウム；塩化アルミニウム；塩化第二鉄；硫酸第二鉄；硫酸第一鉄；ケイ酸ナトリウム；ケイ酸カルシウム；リン酸カルシウム；塩化亜鉛；炭酸カルシウム；重炭酸カルシウム；硫酸カリウム；リン酸マグネシウム；アクリルアミド；アクリル酸；アルミニウムクロロハイドレート；ポリ塩化アルミニウム；タンニン；ホルムアルデヒド；メラミン；Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルアクリレートメチルクロライド；第４級Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルメタクリレートメチルクロライド；及びポリジアリルジメチル−アンモニウムクロライドが挙げられる。
細胞破壊剤は、沈殿のプロセスにおいて変化が起こり得ることを本明細書により理解されるべきである。例えば、細胞破壊剤がドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）であるとき、沈殿剤は水酸化カリウム（ＫＯＨ）であり得、ナトリウムカチオンは沈殿プロセスの一部としてカリウムにより置き換えられ、得られるドデシル硫酸カリウムは反応混合物に不溶性であるため、沈殿する。硫酸ドデシルカチオンは、機能的にはＳＤＳの細胞破壊部分であり、このプロセスにおいてそのまま（intact）である。
前記方法のさらに他の実施形態において、細胞破壊剤は、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）及びデオキシコール酸ナトリウムのうちの１又は複数であってよく、細胞破壊剤を除去することは、アニオン吸着を含む。アニオン吸着は、好適な正に帯電した吸着剤を好適な時間量で添加すること、続いて吸着剤を除去することを含んでいてもよい。アニオン吸着は、適切な正に帯電した吸着剤で充填されたカラム又はフィルタを通して適切な流量で反応混合物を流すことをさらに含んでいてもよい。
前記方法のさらに他の実施形態において、細胞破壊剤は、塩化ベンザルコニウムであってよく、細胞破壊剤を除去することは、カチオン吸着を含む。カチオン吸着は、好適な負に帯電した吸着剤を好適な時間量で添加すること、続いて吸着剤を除去することを含んでいてもよい。カチオン吸着は、適切な負に帯電した吸着剤で充填されたカラム又はフィルタを通して適切な流量で反応混合物を流すことをさらに含んでいてもよい。
前記方法のさらに他の実施形態において、細胞破壊剤は、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ１００（登録商標）、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ１１４（登録商標）、Ｂｒｉｊ（登録商標）及びＴｗｅｅｎ（登録商標）界面活性剤のうちの１又は複数であってよく、細胞破壊剤を除去することは、ミセル相分離を含む。ミセル相分離は、反応混合物の温度が細胞破壊剤の曇り点を超えるように反応混合物の温度を変更することを含んでいてもよい。ミセル相分離は、反応混合物を遠心分離して所望の相分離を得ることを含んでいてもよい。
方法のさらなる実施形態において、細胞破壊剤は、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、塩化ベンザルコニウム、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ１００（登録商標）、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ１１４（登録商標）、Ｂｒｉｊ（登録商標）界面活性剤、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）界面活性剤、デオキシコール酸ナトリウム、及びアルキルベンゼンスルホネートのうちの１又は複数であってよく、細胞破壊剤を除去することは、疎水性吸着並びに希釈及びタンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）の組み合わせのうちの１又は複数を含む。疎水性吸着は、適切な疎水性吸着剤を適切な時間をかけて添加すること、続いて吸着剤を除去することを含んでいてもよい。疎水性吸着は、適切な疎水性吸着剤で充填されたカラム又はフィルタを通して適切な流量で反応混合物を流すことをさらに含んでいてもよい。希釈及びＴＦＦによる除去は、細胞破壊剤がその臨界ミセル濃度未満まで低下することにより、フカンを含有する保持液からの細胞破壊剤の透過を可能にする適切な分画分子量（ＭＷＣＯ）ＴＦＦフィルタを通してのタンジェンシャルフロー濾過を利用して細胞破壊剤が除去され得るように、反応混合物を希釈することを含んでいてもよい。希釈及びＴＦＦによる除去は、適切なダイアボリューム数を有するＴＦＦフィルタを通して反応混合物を透析濾過することを含んでいてもよい。
前記方法は、キレート剤を反応混合物に添加して反応混合物中の遊離多価カチオンにキレートさせることをさらに含んでいてもよい。キレート剤は、出発フカン組成物を提供した後及び細胞破壊剤を除去する前に添加されうる。前記方法は、反応混合物中の酸化剤を反応制御することをさらに含んでいてもよい。酸化剤を反応制御することは、細胞破壊剤を除去する前又は後に酸化剤−反応制御剤を反応混合物に添加することを含んでいてもよい。
前記方法は、静菌剤を反応混合物に添加することを含んでいてもよい。静菌剤は、出発フカン組成物を提供した後及び細胞破壊剤を除去する前に添加されうる。好適な静菌剤としては、限定することなく、亜硫酸ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、塩化ベンザルコニウム、エタノール、及びチオ尿素が挙げられる。
好適なキレート剤としては、限定することなく、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、２，３−ジメルカプト−１−プロパノール、エチレンジアミン、ポルフィン及びクエン酸が挙げられる。好適な酸化剤−反応制御剤としては、限定することなく、亜硫酸塩、亜硝酸塩及び亜リン酸塩が挙げられる。上記から明らかであるように、列挙されている化合物のいくつかは、前記方法において１つを超える機能を有しうる。
好適な疎水性吸着剤としては、限定することなく、活性炭、珪藻土、アクリル酸エステル非イオン性樹脂、ポリスチレン非イオン性樹脂、スチレン−ジビニルベンゼン（ＤＶＢ）非イオン性樹脂が挙げられる。好適なアニオン吸着剤としては、限定することなく：アミン官能基を有したスチレン−ＤＶＢ樹脂、アミン官能基を有したメタクリレート樹脂、アミン官能基を有したメタクリル酸メチル樹脂、アミン官能基を有したメタクリル酸ブチル樹脂、アミン官能基を有したアガロース樹脂、アミン官能基を有したデキストラン樹脂、アミン官能基を有したセラミック系樹脂、アミン官能基を有したケイ酸塩、及び脂質除去剤（ＬＲＡ）が挙げられる。
いくつかの実施形態において、前記出発フカン組成物は、溶液として提供され得る。上記の方法による処理に好適なフカンの例としては、限定することなく、フコイダンが挙げられる。出発フカン組成物は、溶液中のフカン濃度が０．１％ｗ／ｖ超〜３０％ｗ／ｖ未満であってよい。細胞破壊剤は、溶液中のフカン濃度が０．１％ｗ／ｖ超〜６０％ｗ／ｖ未満であってよい。上記の方法によって除去され得る不純物としては、限定することなく、粒子状物、脂質、脂肪酸、フロロタンニン、ラミナリン、アルギネート、タンパク質、メイラード反応生成物、フコキサンチン、クロロフィル、遊離イオン、細菌、ウイルス、酵母、カビ、寄生虫、ＤＮＡ及びエンドトキシンが挙げられる。
アニオン吸着
高レベルのエンドトキシンを含有する出発フカン組成物又は他の所望のフカン組成物は、アニオン吸着に供される。前記方法は、前記出発フカン組成物をアニオン交換システムにおけるアニオン交換マクロ多孔性樹脂によるアニオン交換に供して、前記出発フカン組成物よりもエンドトキシンレベルが実質的に低いフカン−低エンドトキシン組成物を生成すること、及び前記フカン−低エンドトキシン組成物を前記アニオン交換システムの流出物として回収することを含みうる。前記方法は、出発フカン組成物中の望ましくないエンドトキシンの平均流体力学的サイズを超えるアニオン交換マクロ多孔性樹脂によるアニオン交換に出発フカン組成物を供することを含みうる。前記方法は、出発フカン組成物を破壊剤によって前処理することを含みうる。
前記方法は、出発フカン組成物をアニオン交換に供する前に出発フカン組成物を脱塩することをさらに含んでいてもよい。脱塩は、分画分子量（ＭＷＣＯ）ＴＦＦフィルタを横切って溶液中の前記出発フカン組成物を透析濾過することを含んでいてもよい。ＭＷＣＯ ＴＦＦフィルタは、フカン−低エンドトキシン組成物における所望の分子量分離点又はターゲットよりも小さい分画分子量、例えば、５ｋＤａ、１０ｋＤａ、３０ｋＤａ、５０ｋＤａ、７０ｋＤａ、１００ｋＤａ、２００ｋＤａ、３００ｋＤａ、５００ｋＤａ又は１０００ｋＤａの分画分子量を有しうる。透析濾過は、適切なプレフィルタを通して出発フカン組成物を予備濾過して、粒子状物を除去することをさらに含んでいてもよい。
前記方法は、出発フカン組成物対マクロ多孔性アニオン交換樹脂の比を所定の比に調整することを含んでいてもよい。前記所定の比は、出発フカン組成物：マクロ多孔性アニオン交換樹脂が１：１００〜１０：１、１：９０〜１：１、１：８０〜１：５又は１：７０〜１：１０でありうる。いくつかの実施形態において、前記所定の比は、出発フカン組成物及びマクロ多孔性アニオン交換樹脂の質量を基準としうる。
前記方法、システムなどは、出発フカン組成物を、所定の期間、樹脂によるアニオン交換に供することを含んでいてもよい。前記所定の期間は、約５分〜３００時間、例えば、約１０分、３０分〜１、２、３、５、１０、３０、１００及び３００時間でありうる。
前記方法、システムなどは、出発フカン組成物を強塩基マクロ多孔性アニオン交換樹脂、弱塩基マクロ多孔性アニオン交換樹脂又はマクロ多孔性混床電荷樹脂によるアニオン交換に供することを含んでいてもよい。「強塩基」及び「弱塩基」は、通常の意味にしたがって使用され、例えば、「強塩基」は、いずれの典型的なイオン交換状況下でも電荷を失わない樹脂、例えば、第４級アミン官能基を有した樹脂であり、弱塩基は、高ｐＨ条件下で電荷を失わない樹脂、例えば、第１級、第２級又は第３級アミン官能基を有した樹脂である。
前記方法、システムなどは、出発フカン組成物を、第１級、第２級、第３級及び第４級アミノ基のうちの少なくとも１つを含むマクロ多孔性樹脂によるアニオン交換に供することを含んでいてもよい。前記第１級アミノ基は、アミン基であってよい。前記第２級アミノ基は、例えば、ベンジルアミン基及びジメチルアミノ基のうちの少なくとも１つであってよい。前記第３級アミノ基は、例えば、ジエチルアミノエチル基及びジメチルアミノエチル基のうちの少なくとも１つであってよい。前記第４級アミノ基は、例えば、トリメチルアンモニウム基及びトリエチルアンモニウム基であってよい。前記樹脂は、限定されないが、スチレン、アガロース、デキストラン、アクリレート、メタクリレート、メタクリル酸メチル、メタクリル酸ブチル、ジビニルベンゼン、セルロース、シリカ、及びセラミックのうちの１又は複数を含んでいてもよい。
前記方法、システムなどは、平均孔サイズが約５ｎｍ〜約１０００ｎｍ、例えば、約５ｎｍ、１０ｎｍ、１５ｎｍ、２０ｎｍ、２５ｎｍ、３０ｎｍ、４０ｎｍ、５０ｎｍ、６０ｎｍ、８０ｎｍ、１００ｎｍ、２００ｎｍ、３００ｎｍ、４００ｎｍ、５００ｎｍ、７５０ｎｍ又は１０００ｎｍであるイオン交換樹脂を使用することを含んでいてもよい。前記イオン交換樹脂は、排除限界が約５ｋＤａ又は５０ｋＤａ〜５０，０００ｋＤａ、例えば、約５０ｋＤａ、１００ｋＤａ、２００ｋＤａ、５００ｋＤａ、１，０００ｋＤａ、２，０００ｋＤａ、３，０００ｋＤａ、４，０００ｋＤａ、５，０００ｋＤａ、６，０００ｋＤａ、８，０００ｋＤａ、９，０００ｋＤａ、１０，０００ｋＤａ、２０，０００ｋＤａ、４０，０００ｋＤａ又は５０，０００ｋＤａであってよい。いくつかの実施形態において、前記排除限界は、球状タンパク質のサイズを基準とする。
図２におけるシステムは、出発フカン組成物からのエンドトキシンの除去のためのアニオン吸着エンドトキシン除去システム１４００の例示的な装置を示す。前記出発フカン組成物を含有する溶液は、流入供給ライン１４０１を介してタンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）サブシステムのフカン容器１４１６に供給される。適切な溶媒中の前記出発フカン組成物は、例えば、望ましくない粒子状物を除去するためにプレフィルタ１４０６を通して予備濾過されてよい。脱塩プロセスにおいて、ＴＦＦサブシステムポンプ１４１４は、ＴＦＦフィルタ供給ライン１４１２を介してＴＦＦサブシステム１４１０のＴＦＦフィルタ１４１１に前記出発フカン組成物を送り込む。
ＴＦＦフィルタ１４１１は、保持液側にあるフィルタを流入流体が通過し、濾過生成物は第１流出ラインを介して送り出され、処理された流入流体は保持液として別の流出ラインを介して送り出されるように設計されているカセットとして供給され得る。この例示的な方法において、ＴＦＦフィルタ１４１１のＭＷＣＯは、アニオン交換サブシステム１４２０における後のアニオン吸着処理のために前記保持液中のフカンを保持しながら、塩成分の透過を可能にするように選択される。ＴＦＦサブシステムポンプ１４１４は、その保持液側及び濾過生成物側の間のＴＦＦフィルタ１４１１にあるレベルの圧力を提供する。図２において、ＴＦＦフィルタ１４１１の保持液は、ＴＦＦサブシステム保持液戻りライン１４１８を介してＴＦＦサブシステムのフカン容器１４１６に戻されるが、一方で、前記出発フカン組成物の望ましくない塩成分を含有する濾過生成物が、ＴＦＦサブシステム濾過生成物流出ライン１４１９を介して生成され、アニオン吸着エンドトキシン除去システム１４００の外側において使用されるか又は廃棄されることとなる。
ＴＦＦサブシステムポンプ１４１４が出発フカン組成物及び保持液をＴＦＦフィルタ１４１１を通して再循環させる間、ＴＦＦサブシステム透析濾過溶液容器１４１７からの脱イオン水又は低導電率溶液がＴＦＦサブシステム透析濾過溶液供給ライン１４１５を介して供給されてもよい。透析濾過溶液は、ＴＦＦサブシステム濾過生成物流出ライン１４１９において濾過生成物を介して失われた保持液溶液を補充する、並びに／又は、所定のダイアボリューム数の流入出発フカン及び透析濾過溶液をＴＦＦフィルタ１４１１を通して確実に循環させるために使用される。透析濾過溶液バルブ１４１３を制御することにより、フラッシュ溶液がパルス及び／又は連続プロセスで添加されてもよい。ＴＦＦフィルタ１４１１にわたるプロセスへのフラッシュ溶液のダイアボリューム数は、予め決定されていてよい。いくつかの実施形態において、フラッシュ溶液は、脱イオン水であってよい。
容器（図示せず）内に回収されたＴＦＦサブシステム１４１０のＴＦＦフィルタ１４１１の保持液がアニオン交換サブシステム１４２０のアニオン交換サブシステムのフカン容器１４２６に供給される前、上記の処理の間、サブシステム間バルブ１４０２は、閉じられてよい。回収された保持液は、ＴＦＦサブシステム保持液流出ライン１４０３を介してアニオン交換サブシステム１４２０のアニオン交換サブシステムのフカン容器１４２６に供給されてよい。他の実施形態において、回収された保持液は、容器（示さず）において、アニオン交換サブシステムのフカン容器１４２６に移されうる。前記システムのさらに他の実施形態において、サブシステム間バルブ１４０２は、開放されたまま維持されていてよく、ＴＦＦフィルタ１４１１の保持液は、ＴＦＦサブシステム保持液流出ライン１４０３を介してアニオン交換サブシステムのフカン容器１４２６に継続的に供給されてもよい。アニオン交換サブシステム１４２０に供給された保持液は、出発フカン組成物よりも低塩含有量でありうる。出発フカン組成物の塩含有量の低減は、アニオン交換サブシステム１４２０における後続の処理に望まれうる。いくつかの実施形態においては、出発フカン組成物が脱塩された出発フカン組成物として提供され、ＴＦＦサブシステム１４１０を通した処理はバイパスされてもよい。
アニオン交換サブシステム１４２０のアニオン交換容器１４２１は、ある体積のマクロ多孔性アニオン交換樹脂１４２９を含む。マクロ多孔性アニオン交換樹脂１４２９の孔サイズは、フカン分子を残しながらエンドトキシン分子を優先的に吸着するように選択される。かかる樹脂は、ジビニルベンゼンで架橋されており第４級アンモニウム基を含む孔を有している実質的に球形のスチレン粒子を含みうる。エンドトキシンは、個々の分子、分子のクラスタ、又はミセルのいずれかとして、溶液中のエンドトキシン分子、クラスタ、又はミセルの流体力学的サイズに基づいて前記樹脂の孔に優先的に吸着され得る。アニオン交換プロセスにおいて、アニオン交換サブシステムポンプ１４２４は、アニオン交換容器の供給ライン１４２２を介してアニオン交換サブシステム１４２０のアニオン交換容器１４２１に保持フカン組成物を送り込む。
ＴＦＦサブシステム１４１０からの保持フカン組成物をアニオン交換容器１４２１において処理する間、アニオン交換サブシステムの流出バルブ１４０４は閉鎖されていてよい。アニオン交換容器１４２１を通って流れる溶液は、アニオン交換容器流出ライン１４２８を介してアニオン交換サブシステムのフカン容器１４２６に戻され、結果として溶液の再循環を生じさせる。この再循環の間、マクロ多孔性アニオン交換樹脂１４２９は、保持フカン組成物からのエンドトキシンを吸着する。
アニオン交換サブシステムのフカン容器１４２６におけるエンドトキシンレベルは、測定又はモニタリングされうる。溶液が適当な期間再循環されたとき、又は所定の所望のエンドトキシンレベルに達したとき、アニオン交換サブシステム流出バルブ１４０４は、フカン−低エンドトキシン組成物がアニオン交換サブシステム流出ライン１４０５を介して流出するように開放されうる。
図２の破壊剤容器１４２７及び破壊剤供給ライン１４２５を検討すると、かかる実施形態において、破壊剤は、破壊剤供給ライン１４２５を介して破壊剤容器１４２７から添加される。破壊剤は、エンドトキシンのクラスタ又はミセルを破壊して、得られる分子を、マクロ多孔性アニオン交換樹脂１４２９の孔内により容易に吸着できるようにしうる。ある一定の実施形態において、ＴＦＦフィルタ１４１１の保持液は、破壊剤によって処理されてよい。好適な破壊剤としては、限定されないが、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ１００、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ１１４、Ｂｒｉｊ（登録商標）３５、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０及び塩化ベンザルコニウムが挙げられる。
液液抽出
高レベルのエンドトキシンを含有する、原料フカン組成物などの出発フカン組成物は、液液抽出に供される。前記方法は、出発フカン組成物を水性出発溶液中に提供すること；前記出発溶液を有機溶媒と混合して、フカン−低エンドトキシン組成物を含む水性部分とエンドトキシンを含む疎水性不純物を含む有機部分とを有する水性有機相混合物を得ること；前記有機部分から前記水性部分を分離すること；及び前記フカン−低エンドトキシン組成物を含む前記水性部分を回収することを含みうる。
前記方法は、水性出発溶液と有機溶媒とを混合する前に出発フカン組成物を脱塩することをさらに含んでいてもよい。脱塩は、分画分子量（ＭＷＣＯ）タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）フィルタを通して水溶液である出発フカン組成物を透析濾過することを含んでいてもよい。透析濾過は、出発フカン組成物を蒸留水によって透析濾過することを含んでいてもよい。分画分子量ＴＦＦフィルタは、フカン−低エンドトキシン組成物における所望の分子量分離点又はターゲットよりも小さい分画分子量、例えば、５ｋＤａ、１０ｋＤａ、３０ｋＤａ、５０ｋＤａ、７０ｋＤａ、１００ｋＤａ、２００ｋＤａ、３００ｋＤａ、５００ｋＤａ又は１０００ｋＤａの分画分子量を有しうる。透析濾過は、好適なプレフィルタを通して出発フカン組成物を予備濾過して、粒子状物を除去することをさらに含んでいてもよい。
水性出発溶液を有機溶媒と混合することは、水性有機相混合物を振とうすること、水性有機相混合物を撹拌すること、水性有機相混合物を高剪断に曝露すること、水性部分を有機部分に再循環させること、及び有機部分を水性部分に再循環させることを含んでいてもよい。
有機部分から水性部分を分離することは、遠心分離、デカンテーション、分離漏斗分離及び流体力学的流動分離のうちの少なくとも１つを含んでいてもよい。
この方法による使用に好適な有機溶媒としては、相対極性が０．７６５未満である有機溶媒、例えば、エタノール、イソプロパノール、メタノール、ベンゼン、デカメチルシクロ−ペンタシロキサン、酢酸エチル、ヘキサン、ヘプタノール、オクタノール、デカノール、ヘプタン、酢酸イソブチル、アニソール、酢酸イソプロピル、１−ブタノール、酢酸ブチル、メチルイソブチルケトン、ペンタン、１−ペンタノール、エチルエーテル、及び酢酸プロピルが挙げられる。前記有機相は、不純物、例えば、脂質、脂肪酸、フロロタンニン、タンパク質、フコキサンチン、クロロフィル、及び／又はエンドトキシンを含有しうる。
化学構造修飾
本明細書において考察されている方法、システムなどは、前記フカン組成物、特に、前記フカン組成物中のフカンの化学構造修飾を含みうる。化学構造修飾は、フカン由来の官能基、例えば、フカン構造由来のＯ−アセチル、Ｎ−アセチル、メトキシ、ヒドロキシ、カルボン酸及び／又は硫酸官能基の除去を含みうる。前記化学構造修飾は、広範な化学試薬、例えば、酸、塩基、界面活性剤及び／又は酸化剤の使用を含みうる。
疾患及び状態
線維性癒着
線維性癒着は、通常は手術（このタイプの線維性癒着は外科的癒着と称されうる）後に、身体の２つの部分の間に形成される瘢痕のタイプである。線維性癒着は、深刻な問題を引き起こす可能性がある。例えば、雌性生殖器官（卵巣、卵管）を巻き込んだ線維性癒着は、不妊、性交疼痛症、および重度の骨盤痛を引き起こす可能性がある。腸に生じる線維性癒着は、腸の閉塞（obstruction）または閉鎖（blockage）を引き起こす可能性があり、また線維性癒着は、心臓、脊椎、および手のような他の場所でも形成されうる。手術に加えて、線維性癒着は、例えば子宮内膜症、感染、化学療法、放射線、外傷およびがんにより生じることもある。
本明細書では、様々な線維性癒着が議論されている。外科的癒着（surgical adhesion）、外科手術後癒着（post-surgical adhesion）、術後癒着（postoperative adhesions）、骨盤炎症性疾患による癒着、機械的損傷による癒着、放射線による癒着、放射線治療による癒着、外傷による癒着、異物の存在による癒着などの用語は全て、同様のメカニズムによる組織同士の相互の付着を意味し、全てが線維性癒着という用語に包含される。
線維性癒着形成は、通常は身体内で分離している組織同士が互いの組織内に侵食成長する（grow into each other）複雑なプロセスである。外科的癒着（手術後癒着としても知られている）は、外傷に対する組織の、さもなければ正常であったであろう創傷治癒反応から進展し、全腹腔部手術患者の３分の２超（over two-thirds）に生じることが報告されている（Ｅｌｌｉｓ，Ｈ．，Ｓｕｒｇ．Ｇｙｎｅｃｏｌ．Ｏｂｓｔｅｔ．１３３：４９７（１９７１））。これらの線維性癒着の転帰は多様であり、関係する手術部位や疾患部位など他の部位によって異なる。問題としては、慢性疼痛、腸の閉塞、さらに心臓手術の後の死亡のリスクの増加も挙げられうる（ｄｉＺｅｒｅｇａ，Ｇ．Ｓ．，Ｐｒｏｇ．Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｓ．３８１：１−１８（１９９３）；ｄｉＺｅｒｅｇａ，Ｇ．Ｓ．，Ｆｅｒｔｉｌ．Ｓｔｅｒｉｌ．６１：２１９−２３５（１９９４）；Ｄｏｂｅｌｌ，Ａ．Ｒ．，Ｊａｉｎ，Ａ．Ｋ．，Ａｎｎ．Ｔｈｏｒａｃ．Ｓｕｒｇ．３７：２７３−２７８（１９８４））。生殖可能年齢の女性においては、全不妊症例の約２０％は子宮、卵管又は卵巣を含む線維性癒着が原因であると推定される（Ｈｏｌｔｚ，Ｇ．，Ｆｅｒｔｉｌ．Ｓｔｅｒｉｌ．４１：４９７−５０７（１９８４）；Ｗｅｉｂｅｌ，Ｍ．Ａ．及びＭａｊｎｏ，Ｇ．Ａｍ．Ｊ．Ｓｕｒｇ．１２６：３４５−３５３（１９７３））。
線維性癒着形成のプロセスは、最初に、フィブリンフレームワークの確立及び正常組織の修復が関与する。正常修復プロセスでは中皮の修復に伴い線維素分解が起こる。しかし、線維性癒着形成においては、線維芽細胞の組織網内における増殖の際に線維素のマトリックスが成長して血管形成させ、約３〜５日間以内に組織化された線維性癒着が確立線維される（Ｂｕｃｋｍａｎ，Ｒ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｓｕｒｇ．Ｒｅｓ．２１：６７−７６（１９７６）；Ｒａｆｅｒｔｙ，Ａ．Ｔ．，Ｊ．Ａｎａｔ．１２９：６５９−６６４（１９７９））。炎症プロセスには、外傷組織内における好中球の活性化、線維素沈着及び隣接組織同士の結合、マクロファージ浸潤、前記領域内への線維芽細胞増殖、コラーゲン沈着、血管形成並びに永続的線維性癒着組織の確立が含まれる。
外科的癒着を予防するために様々な方法が試されてきた。これらには、手術性外傷を伴う生物化学及び細胞作用に影響を及ぼすことを目的とした薬理的アプローチ並びに患部組織を分離する隔壁法が含まれる。例えば、腹腔洗浄、ヘパリン化溶液、凝血原（procoagulants）の使用、例えば顕微鏡外科手技又は腹腔鏡外科手技の使用など外科手技の改変、手術用手袋からのタルクの除去、さらに細い縫合糸の使用、及び漿膜表面の付着（apposition）を最小限に抑える物理的バリア（フィルム、ゲル又は溶液）の使用が全て試みられてきた。現在のところ、予防的治療には、線維素沈着の予防、炎症の軽減（ステロイド性抗炎症薬及び非ステロイド性抗炎症薬）並びに線維素沈着物の除去も含まれている。
術後癒着の形成を予防するための介入的試みには、ハイドロフローテーション（ｈｙｄｒｏｆｌｏｔａｔｉｏｎ）手法又はバリア器具の使用が含まれてきた。ハイドロフローテーションは、関与する器官を分離状態にしておくように大量のポリマー溶液、例えばデキストラン（Ａｄｈｅｓｉｏｎ Ｓｔｕｄｙ Ｇｒｏｕｐ，Ｆｅｒｔｉｌ．Ｓｔｅｒｉｌ．４０：６１２−６１９（１９８３））又はカルボキシメチルセルロース（Ｅｌｋｉｎｓ，Ｔ．Ｅ．，ｅｔ ａｌ．，Ｆｅｒｔｉｌ．Ｓｔｅｒｉｌ．４１：９２６−９２８（１９８４））などを手術部位へ点滴注入することを含む。酸化再生セルロース（例えば、Ｉｎｔｅｒｃｅｅｄ（商標））やポリテトラフルオロエチレン（Ｇｏｒｅ−ｔｅｘ手術用膜体）から製造された合成バリア膜及び変性ヒアルロン酸／カルボキシメチルセルロース（ＨＡ／ＣＭＣ）のの組み合わせ（Ｓｅｐｒａｆｉｌｍ（商標））から製造された完全再吸収膜も、動物及びヒトの両方における術後癒着形成を軽減させるために用いられてきた（Ｂｕｒｎｓ，Ｊ．Ｗ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｓｕｒｇ．Ｓｕｐｐｌ．５７７：４０−４８（１９９７）；Ｂｕｒｎｓ，Ｊ．Ｗ．，ｅｔ ａｌ．，Ｆｅｒｔｉｌ．Ｓｔｅｒｉｌ．６６：８１４−８２１（１９９６）；Ｂｅｃｋｅｒ，Ｊ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｓｕｒｇ．１８３：２９７−３０６（１９９６））。これらＨＡ／ＣＭＣ膜の成功は、線維性癒着が形成される際の腹膜傷部修復プロセス中に組織を分離させる膜の能力によるものであろう。前記膜は適用後の３〜５日間をかけて損傷組織上に透明粘性コーティングを形成することが観察された。この修復期間は手術後の癒着形成期間と合致する（Ｅｌｌｉｓ，Ｈ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｓｕｒｇ．５０：１０−１６（１９６３））。残念なことに、これらの方法で認められる成功は限定的であった。
腹膜炎には腹膜の炎症が関与する。腹膜炎は激しい症状を引き起すことがある。例えば、腹痛、腹部圧痛及び腹壁防御などがある。腹膜炎には、特発性炎症、解剖に伴う（anatomic）炎症及び／又は腹膜透析関連に伴う炎症が関与する場合がある。腹膜炎には感染が関与する場合もあり、例えば、管腔臓器の穿孔、腹膜の破損、特発性細菌感染腹膜炎及び全身感染によって感染及び腹膜炎が生じることがある。腹膜炎には感染が関与しないこともあり、例えば、腹膜内への滅菌体液の漏出及び滅菌腹部手術によって腹膜炎が生じうる。腹膜炎の予防及び／又は処置のために、様々な試みがなされてきた。例えば、経静脈補水、抗生剤及び手術などの一般的対症療法である。腹膜炎をさらに効果的に、しかも少ない副作用で抑制又はそれ以外の場合処置及び／若しくは予防するための化合物、組成物、方法及び同種のもの（送達アプローチを含む）に対する未だ満たされない需要が存在する。
本明細書において考察されるフカン−低エンドトキシン組成物は、患者における線維性癒着を処置するために使用することができ、線維性癒着を処置するために構成され且つ組成されるフカン−低エンドトキシン医療組成物、フカン−低エンドトキシン医療機器、フカン−低エンドトキシン組み合わせ（combination）若しくはフカン−低エンドトキシン医薬品の成分として含まれるか、又は線維性癒着を処置するために構成され且つ組成されるフカン−低エンドトキシン医療組成物、フカン−低エンドトキシン医療機器、フカン−低エンドトキシン組み合わせ若しくはフカン−低エンドトキシン医薬品であり得る。例えば、生理的塩類溶液に溶解された本明細書に記載のフカン−低エンドトキシン組成物を約０．０２ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、例えば、０．１ｍｇ／ｍＬ、０．２ｍｇ／ｍＬ、０．３ｍｇ／ｍＬ、０．５ｍｇ／ｍＬ、０．９ｍｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ、又は７．５ｍｇ／ｍＬで含むフカン−低エンドトキシン組成物又はフカン−低エンドトキシン医療機器でありうる。前記生理的塩類溶液は、例えば、乳酸リンゲル液ＵＳＰ（ＬＲＳ）、生理食塩液又は生理的デキストラン溶液であってよい。
本明細書に記載のフカン−低エンドトキシン医療組成物及び医療機器は、液体医療組成物及び液体医療機器（medical compositions and devices）であってもよいものであり、医薬的に許容し得る賦形剤、例えば、緩衝剤、安定剤、保存剤、アジュバントなどを含んでもよい。かかるフカン−低エンドトキシン医療組成物及びフカン−低エンドトキシン医療機器は、前段落におけるフカン医療組成物又はフカン医療機器を約０．０１ｍＬ／ｋｇ（患者又は標的の体重１キログラム当たり）〜約１０ｍＬ／ｋｇ又は１５ｍＬ／ｋｇ投与することによって手術前、手術中又は手術後の線維性癒着を処置するために使用され得る。前記フカン−低エンドトキシン医療組成物及びフカン−低エンドトキシン医療機器の患者の手術部位への投与量としては、例えば、約０．０３ｍＬ／ｋｇ、０．１ｍＬ／ｋｇ、０．２ｍＬ／ｋｇ、０．４ｍＬ／ｋｇ、０．５ｍＬ／ｋｇ、０．６ｍＬ／ｋｇ、１ｍＬ／ｋｇ、１．２ｍＬ／ｋｇ、２ｍＬ／ｋｇ、３ｍＬ／ｋｇ、４ｍＬ／ｋｇ、５ｍＬ／ｋｇ、８ｍＬ／ｋｇ、１０ｍＬ／ｋｇ又は１５ｍＬ／ｋｇが挙げられる。さらなる実施形態において、かかるフカン−低エンドトキシン医療組成物及びフカン−低エンドトキシン医療機器は、約０．０４ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、又は５０ｍｇ／ｋｇを投与することによって、任意の選択された標的部位、例えば、病変、擦過傷、傷害部位、手術部位及び手術後の部位における線維性癒着を処置するために使用され得る。かかる投与量のいくつかの例としては、例えば、患者の手術部位への、約０．０４ｍｇ／ｋｇ、０．０７５ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１．３ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ又は５０ｍｇ／ｋｇの、例えば本明細書に記載のフカン−低エンドトキシン組成物を含む、本明細書に記載のフカンが挙げられる。前記投与は、例えば、前記標的領域の全体にわたって前記医療組成物又は液体医療機器を点滴すること；前記標的領域の中の（１又は複数の）特定位置に前記医療組成物又は前記液体医療機器を仕向けること；前記標的領域の中の全体若しくは（１又は複数の）特定位置に前記医療組成物又は液体医療機器を噴霧すること、又は、特に線維性癒着しやすい若しくは線維性癒着の発現の懸念があると外科医又は他の専門家が同定した（１又は複数の）特定位置上へ、トロカール、カテーテル、内視鏡若しくは他の侵襲性が最小限である装置を通じて噴霧塗布器であり得る塗布器を介して、前記医療組成物又は液体医療機器を噴霧する若しくはそれ以外の場合送達すること、によって達成され得る。別の態様において、前記投与は、手術創が開いた後でありかつ外科的手技の前、外科的手技の間、又は外科的手技の後でありかつ手術創が閉じる前、に為され得る。所望により、前記医療組成物又は液体医療機器を、（例えば注射器及び針によって）手術が完了した後で投与することも可能であり、また同様に非外科的標的部位に投与することも可能である。患者の手術部位は、例えば、骨盤腔、腹腔、背側腔（ｄｏｒｓａｌ ｃａｖｉｔｙ）、頭蓋腔、脊椎腔、腹部腔、胸腔、胸膜腔、心膜腔、皮膚、関節、筋肉、腱及び靱帯のうち少なくとも１つでありうる。患者の手術部位内へのフカン−低エンドトキシン組成物医療機器の投与は、約１５分未満、約１０分未満、約８分未満、約６分未満、約５分未満、約４分未満、約３分未満、約２分未満、約１分未満、約４５秒未満、約３０秒未満、約２０秒未満、約１５秒未満、約１０秒未満又は約５秒未満で達成され得る。
手術部位へのフカン−低エンドトキシン医療組成物又は医療機器での投与の例としては、手術創を開いた後、手術の間、手術創を閉じる前及び／又は手術創を閉じた後における、帝王切開外科的手技、微小血管遊離皮弁再建外科的手技、全層植皮外科的手技、Ｖ−Ｙ伸展皮弁外科的手技、筋膜回旋皮弁外科的手技、関節形成外科的手技、乳房切除外科的手技、腐骨摘出外科的手技、杯形成外科的手技、骨切断外科的手技、骨形成外科的手技、膝蓋骨切除外科的手技、滑膜切除外科的手技、被膜切除外科的手技、腱又は靭帯を修復する外科的手技、腱剥離外科的手技、外科的腱切除、筋膜切開外科的手技、半月板修復外科的手技、脊椎切除外科的手技、篩骨切除外科的手技、コールドウェル・ルック手術外科的手技、涙嚢鼻腔吻合外科的手技、溶解鼻癒着外科的手技（ｌｙｓｉｓ ｎａｓａｌ ｓｙｎｅｃｈｉａ ｓｕｒｇｉｃａｌ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ）、胸腺摘出外科的手技、肺剥離外科的手技、肺切除外科的手技、胸形成外科的手技、二肺葉切除外科的手技、門脈圧亢進手術外科的手技、脾摘出外科的手技、食道切除外科的手技、腹膜炎手術外科的手技、胃切除手術外科的手技、空腸吻合手術外科的手技、腹腔鏡下胆嚢切除手術外科的手技、腹腔鏡下総胆管検査外科的手技、胃腸吻合外科的手技、肥満手術外科的手技、腸切除及び吻合外科的手技、分節的（ｓｅｇｅｍｅｎｔａｌ）肝除去外科的手技、肺葉切除外科的手技、膵切開外科的手技、膵十二指腸切除外科的手技、腫瘍切除外科的手技、腹腔鏡下腎切除外科的手技、膀胱切除外科的手技、腹部又は骨盤の癒着溶解外科的手技、子宮卵管造瘻外科的手技、卵管形成外科的手技、子宮外妊娠腹腔鏡下手術外科的手技、関節置換外科療法外科的手技、骨折修復外科的手技、子宮摘出外科的手技、胆嚢除去外科的手技、心臓バイパス外科的手技、血管形成外科的手技、粥腫切除外科的手技、乳房生検外科的手技、頚動脈内膜切除外科的手技、白内障手術外科的手技、冠状動脈バイパス外科的手技、子宮内膜掻爬術外科的手技、ヘルニア修復外科的手技、腰痛手術外科的手技、結腸部分切除外科的手技、前立腺切除外科的手技及び扁桃摘出外科的手技の手術部位におけるフカン−低エンドトキシン医療組成物又は医療機器での投与が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
がん一般
がんは、米国における２番目に多い死因であり、全死亡者数のうち２０％超（over 20%）の原因である。がんは、増殖性疾患であり、１又は複数の腫瘍の形成につながり得るある種の細胞の無制御の分裂によって特徴づけられる。がんを処置するために、手術、放射線療法、化学療法及びそれらの併用を含む多くの方法が用いられている。手術は、いくつかの限局性腫瘍のために用いられる比較的一般的な方法であるが、腫瘍切除後の腫瘍再発の可能性は依然として顕著である。
がん及び他の増殖性疾患の処置は、非がん性健常組織に対する損傷又は毒性の可能性により制約を受けていた。放射線療法及び外科的処置において、手技は、一般的に腫瘍部位に限られ、また腫瘍部位の近位で行われてきた。しかし、がん組織の外科的除去を受ける患者には著しいリスクがありうる（例えば、前立腺腫瘍又は脳腫瘍の除去においては、例えば非腫瘍組織の切除の必要が潜在的に低いことによって、周囲の主要組織に対して修復不能な傷害を与える著しいリスクの可能性がある）。さらに、前立腺がんのための第１選択の処置として行われてきた集束放射線による処置でも同様のリスクがある。がんの化学療法による処置において、薬物は全身投与されてきたが、その結果、全身が前記薬物に曝露される。これらの薬物は、がん細胞に対して毒性があるように設計されているが、非がん性細胞に対しても（一般的には）毒性があり、その結果、患者は、がんのための薬物処置を受ける場合に非常に不調になる。経験を通して、腫瘍医は、ある程度の患者が忍容性を示しうる投与量でこれらの薬物を投与することが可能である。しかしながら、これらの投与量では、多くの場合、がんの処置に成功しない。
がんを処置するあらゆる方法に伴う１つの問題は、当該疾患の局所再発であった。例えば、毎年およそ７００，０００人のアメリカ人が限局性がんと診断され（全がん患者のおよそ６４％）、約５００，０００人が、外科的方法を用いて処置される。残念ながら、手術で処置された患者の３２％が初期処置後に再発する（およそ２１％が初期手術部位で再発し、１１％が遠隔転移部位で再発する）。毎年約１００，０００人の患者ががんの限局性再発によって死亡する。このことは、とりわけ乳がんで当てはまったが、乳腺腫瘤摘出を受ける患者の３９％が前記疾患の局所再発を経ることになる。
ステージ分類は、患者におけるがん（固形腫瘍）の進行を判断する方法である。簡略化されたアプローチによって、がんがどの程度進行したのかに基づいて、患者は３つの群又はステージに入れられる。
ステージ１：器官の一部を外科的に除去することによってがんを処置することができる。これは、切除が可能なステージとしても知られている。
ステージ２：がんは、切除が可能なポイントを過ぎて進行したが、依然として器官自体に限定される。
ステージ３：腫瘍が他の器官に広がっている。
多くのがんは、例えば、５−フルオロウラシル（Ｅｆｕｄｅｘ（登録商標））、ビンカアルカロイド（例えば、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標）））、アントラサイクリン（例えば、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）））、シスプラチン（Ｐｌａｔｉｎｏｌ−ＡＱ（登録商標））、塩酸ゲムシタビン（Ｇｅｍｚａｒ（登録商標））、メトトレキセート及びパクリタキセルを含む抗増殖剤で処置される。抗増殖剤であるメトトレキセート及びパクリタキセルに関連した毒性のいくつかの例は、本明細書において他の箇所で考察される。メトトレキセートは、例えば、膀胱がん、乳がん、子宮頸がん、頭頚部がん、肝がん、肺がん及び精巣がんを含むいくつかのがんを処置するために用いられてきた。パクリタキセルは、例えば、卵巣がん、乳がん及び非小細胞性肺がんを含むいくつかのがんを処置するために用いられてきた（Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ａｎｄ Ｓｐｅｃｉａｌｔｉｅｓ Ｔｈｉｒｔｙ−ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，２０００）。
５−フルオロウラシルによる毒性としては、心筋虚血などの心臓血管毒性；多幸感、急性小脳症候群及びおよび運動失調などの中枢神経系毒性；脱毛症及び皮膚炎などの皮膚病学的毒性；悪心、嘔吐及び口腔内潰瘍又は胃腸潰瘍などの胃腸毒性；白血球減少症、血小板減少症及び貧血などの血液学的毒性；過敏症及び接触過敏症などの過敏症毒性；流涙増加、羞明及び結膜炎などの眼毒性；並びに発熱などの他の毒性を挙げることができる。５−フルオロウラシルは、例えば、乳がん、結腸直腸がん、胃がん、肝がん、膀胱がん、頭頚部がん、非小細胞性肺がん、卵巣がん、膵がん及び前立腺がんを含む多くのがんを処置するために用いられてきた（Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ａｎｄ Ｓｐｅｃｉａｌｔｉｅｓ Ｔｈｉｒｔｙ−ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，２０００）。
ビンクリスチンによる毒性としては、子供の発作や幻覚などの中枢神経系毒性；脱毛症などの皮膚病学的毒性；発疱（ｖｅｓｉｃａｎｔ）などの血管外遊走毒性；悪心、嘔吐、便秘及び口内炎などの胃腸毒性；骨髄抑制などの血液毒性；末梢神経障害及び自律神経ニューロパシーなどの神経性毒性；複視、一過性失明及び視神経萎縮などの眼毒性；尿閉、高尿酸血症及び膀胱弛緩などの腎臓／代謝毒性；息切れなどの呼吸器毒性；並びに子供の発熱などの他の毒性が挙げられる。この抗増殖剤は、例えばホジキン病、小細胞肺がん、ウィルムス腫瘍及び精巣がんを含むいくつかのがんを処置するために用いられてきた（Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ａｎｄ Ｓｐｅｃｉａｌｔｉｅｓ Ｔｈｉｒｔｙ−ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，２０００）。
ドキソルビシンによる毒性としては、心電図異常及び心筋症などの心臓血管毒性；脱毛症や爪の変化などの皮膚病学的毒性；発疱などの血管外遊走障害毒性；悪心、嘔吐及び口内炎などの胃腸毒性；尿の赤色着色などの尿生殖器毒性；骨髄抑制などの血液毒性；過敏症及び皮膚発疹などの過敏症毒性；結膜炎などの眼毒性；不妊症などの繁殖毒性；並びに高尿酸血症などの他の毒性が挙げられる。この抗増殖剤は、例えば、乳がん、肺小細胞がん及び卵巣がんを含むいくつかのがんを処置するために用いられてきた（Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ａｎｄ Ｓｐｅｃｉａｌｔｉｅｓ Ｔｈｉｒｔｙ−ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，２０００）。
シスプラチンによる毒性としては、心電図変化などの心臓血管毒性；色素沈着過剰などの皮膚病学的毒性；刺激（ｉｒｒｉｔａｎｔ）などの血管外遊走障害毒性；悪心及び嘔吐などの胃腸毒性；骨髄抑制及び溶血性貧血などの血液学的毒性；過敏症などの過敏症毒性；末梢神経障害及び急性変性脳疾患などの神経筋毒性；球後視神経炎などの眼毒性；聴力損失及び耳鳴などの耳科学的毒性；中毒性ネフロパシー及び低カリウム血症などの腎臓／代謝毒性；並びに不妊症などの他の毒性が挙げられる。この抗増殖剤は、例えば、膀胱がん、肺小細胞がん、卵巣がん、精巣がん、脳がん、乳がん、子宮頸がん、頭頚部がん、肝芽腫及び甲状腺がんを含むいくつかのがんを処置するために用いられてきた（Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ａｎｄ Ｓｐｅｃｉａｌｔｉｅｓ Ｔｈｉｒｔｙ−ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，２０００）。塩酸ゲムシタビンによる毒性としては、例えば、骨髄抑制などの血液学的毒性；悪心、嘔吐及び口内炎などの胃腸毒性；血清トランスアミナーゼの一過性上昇などの肝毒性；蛋白尿、血尿、溶血性尿毒症症候群及び腎不全などの腎毒性；発疹及び脱毛症などの皮膚病学的毒性；浮腫及び末梢性浮腫などの浮腫毒性；並びに発熱などの他の毒性が挙げられる。この抗増殖剤は、膵がん及び非小細胞性肺がんを処置するために用いられてきた（Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ａｎｄ Ｓｐｅｃｉａｌｔｉｅｓ Ｔｈｉｒｔｙ−ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，２０００）。
本考察は、前立腺、乳房、膵臓、肝臓、腎臓、泌尿生殖器系、脳、胃腸系、呼吸器系及び頭頸部の限局性がん又は固形腫瘍など、処置することが可能な限局性がん又は固形腫瘍の予防又は処置を含む。本明細書における前記組成物等は、拡散又はさらに全身輸送により有効濃度のフカン−低エンドトキシン組成物を前記腫瘍及び／又は転移に到達させ、前記標的腫瘍からいくらか遠隔部位におけるフカン−低エンドトキシン組成物の制御放出を可能にすることによって、転移を含むがんを予防又は処置しうる。以下の段落において、これらのがんのうちいくつかをさらに考察する。
前立腺がん
前立腺がんは、前立腺を覆う細胞で起こる悪性腫瘍である。米国では、推定で２００，０００人の患者が、今年、前立腺がんを発症し、３０，０００人超が前記疾患で死亡する。前立腺がんは、新たな症例に対する死亡の比率が約１５％である。前記がんは、前立腺の中に残る可能性があるか、又はそれは、周囲組織若しくは遠隔部位（ほとんどの場合、リンパ節及び骨）に広がる。通常、前立腺がんは静かに広がり、それが前立腺を越えて進行した場合のみ症候を生じる。前立腺がんが診断されて早期ステージの間に処置された場合、いくつかの研究において、患者の５年生存率は９４％であった。
前立腺がんは、多くの場合、５０歳を過ぎた（over age 50）男性の疾患として考察される。実際、前立腺がんの男性の８０％が６０歳以上である。男性が生涯の間に前立腺がんと診断される可能性は、１０の内、約１であり、女性が乳がんになる可能性とおおむね同じである。前記疾患を、多くの場合症候が発現するずっと前に、その発現の早期に検出し得る試験の向上の結果として、新規症例が報告される数は、近年著しく上昇した。ある年に前立腺がんを発症する可能性は、年齢と共に増加するが、５０歳以降で著しく上昇する。
前立腺がんのための現行の処置の選択肢は、疾患進行の程度、患者の年齢及び全体的健康に依存する。早期ステージのがんだけに罹患しているか、又はさらなるより重篤な疾患に罹患している高齢患者は、保存的に処置され得るが、がんが進行している高齢患者は、より積極的な処置を受けうる。前立腺がんは、放射線治療（外部ビーム放射又は近接照射療法）、ホルモン消退又は去勢（外科的又は化学的）、抗増殖剤、手術、待期的治療（すなわち、「注意深い経過観察」）を含む各種方法によって処置されてきた。処置は、完治を保証するものではなく、一部にはかなりの副作用がある。
早期ステージの前立腺がん（すなわち、腫瘍が前立腺に限局性である）は、「注意深い経過観察」で扱われてもよい。前立腺がんの手術は、それ以外の面で全体的健康が良好であり、腫瘍が前立腺に限定される患者について推奨されてきた。７０歳未満の男性の前立腺の限局性がんのための一般的処置は、根治的前立腺切除（すなわち、前立腺の外科的除去）であった。
がんが前立腺領域内において限局性である患者は、一般に、外部ビーム放射（ＥＢＲ）で処置される。前記放射は、がん細胞を死滅させ、腫瘍を縮小させる。ＥＢＲは、限局性前立腺がん処置の２０％未満を占め、これらの患者のおよそ５０％が前記疾患の放射後再発を経る。早期ステージの前立腺がんの検出及び患者からの需要増大に相まって、近接照射療法（すなわち、局所放射線治療）の使用が増えることが予測されている。１９９５年には、近接照射療法を用いて処置されたのは新規に診断された患者のわずか２．５％であった。近接照射療法は、前立腺腫瘍内に放射性金属の「種」を埋め込むことを含む。
広まった前立腺がんの処置には、精巣を除去すること又はホルモン治療が含まれる。がんの増殖を引き起こしてきたテストステロンの生成を抑制又は止めるには両方が用いられる。ホルモン消退治療を受けるのは全ての前立腺がん患者のおよそ２０％である。ホルモン治療は、酢酸ゴセレリン（Ｚｏｌａｄｅｘ（登録商標））又は酢酸ロイプロリド（Ｌｕｐｒｏｎ（登録商標））を含む。前立腺がんを処置するために用いる抗増殖剤としては、５−フルオロウラシルが挙げられている。
乳がん
米国において、乳がんは、女性の間で最もよくみられるがんであり、毎年約１８０，０００件の新規症例が診断される（男性の乳がんは、全ての診断された乳がんの約５％を占める）。女性の死因として乳がんを超えるのは肺がんのみであり、乳がんは、毎年およそ５０，０００の死亡の原因となった。アメリカ人の女性において、その生涯の間に乳がんを発症する可能性があるのは８人のうち１人（又は約１３％）である。過去１０年にわたって、最も報告された乳がんは、小さい、原発性の（独立して生じる；転移によって引き起こされない）腫瘍であった。新規に診断された患者のおおむね７０％〜８０％が早期疾患（ステージ１又は２）を示し、大多数には腋窩（わきの下）リンパ節の併発がなかった。
ほとんどの乳がんは、がん腫（すなわち、上皮組織から増殖する悪性腫瘍）である。肉腫又は結合組織、骨、筋肉若しくは脂肪から生じる腫瘍は乳房がんの１％未満である。また、ほとんどの乳がん（約７５％）は、乳管を覆う組織内で生じる腺管がんである。ずっと少ない数のがん（約７％）が乳腺小葉内で認められ、小葉がんと呼ばれる。他の形態の乳がんのほとんど全ての原因はページェット病（小室及び乳首のがん）及び炎症性がんである。
乳がんの処置は、複雑になっており、多くの因子に依存する。２つの重要な因子は、腫瘍の型及び進行のステージである。腫瘍の特性は、特に、個々を、２つの群、すなわち、（１）がん再発のリスクが低い個体、及び（２）がん再発のリスクが高い個体、に分けるのに役立つ。特定の予後因子によって、患者はこれらの群のうちいずれかに入る。これらの因子としては、腫瘍の大きさ；女性ホルモンエストロゲン及びプロゲステロン（ＥＲ／ＰＲ）受容体の存在；細胞の増殖周期（腫瘍細胞が活発に分裂しているのか、又は「Ｓ期」であるのかどうか）；「ｈｅｒ−２−ｎｅｕタンパク質」として知られているタンパク質の存在；腫瘍悪性度、すなわち、腫瘍細胞の分化又は変化の指標；及び腫瘍倍数性、すなわち、腫瘍細胞内の遺伝物質の組の数、が挙げられる。
著しいリンパ節併発のない原発疾患の処置は、乳腺腫瘤摘出及び放射線治療によるものである。より著しいリンパ節併発は、乳房切除及び補助的リンパ節の除去の根拠となり得る。このステージにおいて、転移及び局所再発の可能性は高い。転移性疾患の処置は症状緩和目的であり、放射線治療及び化学療法を含むものであって、これらは免疫を抑制し、細胞を障害し白血球を減少させる。乳がんに対する使用のために、例えば、５−フルオロウラシル、ドキソルビシン、メトトレキセート及びパクリタキセルを含む抗増殖剤が承認されている。
膵がん
膵臓は、胃及び小腸の近くに位置する消化器系の器官である。それは、２つの主要な機能、すなわち、酵素及びホルモンの生成を有する。膵臓のがんは、外分泌（すなわち、酵素）膵臓内で生じ得（例えば、古典的な膵臓腺がん）、又は内分泌（すなわち、ホルモン）膵臓内で生じ得る。
外分泌膵臓のがんは、非常に重篤な健康問題である。米国において、およそ２８，０００人の患者が膵がんと診断されるが、一方でほぼ同じ数が毎年この疾患で死亡する。膵がんは、男性及び女性で同程度に生じる。診断における困難、膵がんの固有の攻撃的性質、及び利用可能な全身処置の選択肢が乏しいことのため、膵臓腺がん診断後に５年間生存するのは診断された患者のおよそ４％のみである。膵がんは、乳がん、肺がん、結腸がん及び前立腺がんに続く、がんによる死亡の５番目の原因である。
膵がんの処置の選択は、腫瘍のステージに大きく依存する。可能な処置としては、手術、抗増殖剤、放射線及び生物学的療法が挙げられる。手術は、通常、がんが切除可能であると考えられるステージ１の患者のために確保されている。場合によっては、手術の前又は後に投与される放射線及び抗増殖剤などの治療の併用によって、患者の生存可能性が増加しうる。切除不能であると考えられる膵がん（通常、ステージＩＩ以降）は、臨床試験における抗増殖剤を用いて処置されうる。例えばゲムシタビン又は５−フルオロウラシルなどの抗増殖剤は、膵がんに対して多少の効果を有し、ゲムシタビンは、症状緩和目的の剤として用いられてきた。これらの抗増殖剤による毒性は、本明細書の別の箇所において考察される。放射線治療は、化学療法と併用して用いられる場合、膵がんに対する多少の効果を有する。放射線治療単独で症候が抑えられることがある。この形態の処置は、ステージＩＩ以降の膵がんにおいても用いられている。
膀胱がん
１９９８年には、米国で膀胱がんの新規症例が５４，０００件超診断され、該疾患に起因する死亡は約１５，０００件と推定された。膀胱がんは、アメリカ人の男性の中で４番目に多いがんであり、アメリカ人の女性の中で９番目に多いがんである。膀胱がんは女性よりも男性に３倍頻繁に起こる。より高齢の男性の主要な疾患である膀胱がんは、疾病及び死亡の著しい原因である。膀胱がんのリスクは、年齢と共に急激に増加し（症例の８０％が５０歳を過ぎた人々に起こる）、膀胱がんでの全死亡の半分超が７０歳以降で起こる。６５歳を過ぎた白人において、膀胱がんの年間疾病率は、１，０００人当たりおよそ２症例であり、このことは、６５歳未満では１，０００人当たり０．１症例の割合であることと対照をなす。一人が生涯の間において膀胱がんを発症する確率は３％より高いが、膀胱がんで死亡する確率は小さい（＜１％）。膀胱がんが４０歳より若い人々に起こることは稀である。
最近の研究は、ある種の遺伝子及び遺伝性の代謝能力が膀胱がんにおいて役割を果たす可能性があることを示唆する。移行上皮がん（ＴＣＣ）は、膀胱がんの最もよくみられる形態である。ＴＣＣは、通常、茎状基部上の表在性（表面）腫瘤、乳頭状（疣状）腫瘤、外方増殖性（外側に増殖する）腫瘤として生じる。しかし、場合によっては、ＴＣＣは、広範な基部に付着する可能性があるか、又はそれは、（窪んだ病変内で）潰瘍化したようにみえる可能性がある。乳頭状ＴＣＣは、多くの場合、後に脱分化するか又は個別細胞の特性を喪失する過形成の領域として開始する。乳頭状ＴＣＣの約１０％〜３０％のみが浸潤がんに進行する。対照的に、ＴＣＣの非乳頭状形態は浸潤性になる可能性が高い。記載したように、かかるＴＣＣは、潰瘍化しているか又は平坦にみえることがある。未分化上皮から構成された平坦で非乳頭状のＴＣＣは、上皮内がん（ＣＩＳ又はＴＩＳ）として分類されている。ＣＩＳの組織は、大きく、顕著な核小体（細胞内の丸い実体；タンパク質合成に関与する）を有し、正常な極性を欠いた細胞を含んでいる。
膀胱がんの処置は、多くの因子に依存する。これらの因子で最も重要なものは、存在する腫瘍の型及びそのステージである。一般的な処置としては、経尿道的切除（ＴＵＲ）、電気外科手術、レーザー外科手術、膀胱内治療、抗増殖剤、外科的治療、膀胱切除及び放射線治療が挙げられる。膀胱がんを処置するために用いられる抗増殖剤の例としては、例えば、５−フルオロウラシル、シスプラチン及びメトトレキセートが挙げられる。延期抗増殖剤である５−フルオロウラシル、シスプラチン及びメトトレキセートによる毒性は、本明細書において他の箇所で考察される。
脳がん
脳腫瘍は、手術不能であることがしばしばであり、患者の８０％超が診断から１２ヵ月以内に死亡する。米国では原発性頭蓋内（脳）がんの新規症例が毎年およそ１８，０００件診断される。脳腫瘍は、全ての成人がんの約２パーセントを示す。脳腫瘍のうち５０パーセント超は、高悪性度神経膠腫（すなわち、多形性神経膠芽細胞腫及び退形成星細胞腫腫瘍）である。これらの腫瘍の患者は、しばしば、運動機能障害、発作及び視力障害などの重度の障害に苦しむ。
脳組織内で発生する腫瘍は、原発性脳腫瘍として知られている。原発性脳腫瘍は、それらが発生する組織の型によって分類される。最も一般的な脳腫瘍は、神経膠（支持）組織内で発生する神経膠腫である。他のものとしては、星細胞腫、脳幹部神経膠腫、上衣腫及び乏突起神経膠腫が挙げられる。
脳腫瘍の外科的除去は、ほとんどのタイプについて及びほとんどの位置において推奨されるが、神経機能の保存の制約の中でできるだけ完全であるべきである。この規則の例外は、臨床的エビデンスに基づき診断され、およそ５０％で（approximately 50% of the time）初期手術なしで処置される、脳橋神経膠腫などの深在腫瘍の場合である。しかしながら、多くの場合は、生検による診断が行われる。到達し且つ切除することが困難な病変については、定位生検を用いることができる。治癒がまれであるか又は切除不能な脳腫瘍に罹患している患者は、前記腫瘍の局所的制御を向上させるために外部ビーム放射線治療と併用して用いられる放射線増感剤、温熱療法若しくは組織内近接照射療法を評価する臨床試験又は新しい薬物及び生体応答調節剤を評価する研究のための候補と考えられるべきである。
放射線治療は、ほとんどの腫瘍タイプの処置において主要な役割を有し、治癒率を上昇させること又は無病生存期間を延長させることが可能である。放射線治療は、最初に手術単独で処置された患者における再発の処置においても有用であり得る。手術及び放射線治療の前、間又は後に、化学療法を用いてもよい。同様に、再発性腫瘍も化学療法で処置される。脳がんの処置で用いられる抗増殖剤としては、シスプラチンが挙げられる。この抗増殖剤に関連した毒性の例は、本明細書において他の箇所で考察される。
再狭窄
再狭窄は、血管壁肥厚と、血管により組織へ供給される血流の喪失とにつながる、慢性血管損傷の形態である。この炎症性疾患は、血管閉塞を軽減する任意の操作を含む血管再建手技に応答して生じることがある。したがって、再狭窄は、これらの手技の有効性を限定する主要な制限的因子である。
本考察は、例えば治療上有効量のオリゴヌクレオチド治療薬と抗炎症剤との配合物を血管に投与することによる再狭窄の予防又は処置を含む。適切な組成物は、再狭窄部位若しくは潜在的再狭窄部位で外科的に埋め込まれ得るポリマー担体を含むか、又はポリマーペースト若しくはポリマーゲルとしてカテーテルを介して注入され得る。適切な組成物は、本明細書において考察されるフカン−低エンドトキシン組成物を含んでもよい。
関節炎
関節リウマチ（ＲＡ）は、関節組織の疼痛、腫脹、滑膜細胞増殖（パンヌス形成）及び破壊を特徴とする消耗性慢性炎症性疾患である。進行期において、前記疾患はしばしば重要な器官を損傷し、致死的となり得る。前記疾患は、免疫系（マクロファージ／単球、好中球、Ｂ細胞及びＴ細胞）複合的サイトカイン相互作用並びに滑膜細胞の機能不全及び増殖の複数の要素を含む。メトトレキセートなどの疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）による早期の積極的処置が推奨されており、該薬物は、本明細書において他の箇所で考察される。
結晶誘発性関節炎は、関節内におけるマクロファージ及び好中球の結晶誘発性活性化を特徴とされてきたものであり、その後、何日間も激痛が生じる。前記疾患は、発症の間の間隔が短くなり、患者が病的状態であることが増えるように進行する。この疾患は、概して、ジクロフェナクナトリウム（Ｖｏｌｔａｒｅｎ（登録商標））などの非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）で対症的に処置されてきた。この抗炎症剤は、浮動性めまい及び頭痛などの中枢神経系毒性；発疹及びそう痒などの皮膚病学的毒性；悪化した潰瘍性大腸炎及びクローン病などの胃腸毒性；急性腎不全及び腎乳頭壊死などの尿生殖器毒性；無顆粒球症、白血球減少症及び血小板減少症などの血液学的毒性；肝トランスアミナーゼ上昇及び肝炎などの肝毒性；並びに喘息及び過敏症などの他の毒性を含む毒性を有する。
本考察は、例えば治療上有効量のオリゴヌクレオチド治療薬及び所望により抗炎症剤を患者に投与することによる、関節リウマチの予防又は処置を含む。適切な組成物は、前記抗炎症剤の制御放出担体として関節に注入され得るポリマー担体と、（前記ポリマー担体中に組み込まれた）前記オリゴヌクレオチド治療薬の制御放出担体としての微粒子とを含む。適切な組成物は、本明細書において考察されるフカン−低エンドトキシン組成物を含みうる。かかるポリマー担体は、ポリマー微小球、ペースト又はゲルの形態を取りうる。
炎症状態
本明細書に記載の前記組成物などは、例えばオリゴヌクレオチド治療薬及び抗炎症剤を含む組成物を患者に投与することを含む、好中球が関与する炎症状態の抑制又は処置を、所望により行うことができる。かかる状態の例としては、結晶誘導性関節炎、骨関節炎、非リウマチ様炎症性関節炎、混合性結合組織病、シェーグレン症候群、強直性脊椎炎、ベーチェット症候群、サルコイドーシス、乾癬、湿疹、炎症性大腸疾患、慢性炎症性肺疾患、神経障害及び多発性硬化症が挙げられる。これらの疾患の一部は、以下の段落でさらに考察される。
慢性炎症性皮膚疾患（乾癬及び湿疹を含む）
乾癬は、痒みがあり、ひりひりし、チクチクし、容易に出血する、隆起し、肥厚し、鱗片状である病変を特徴とする一般的な慢性炎症性皮膚疾患である。これらの疾患は、前記疾患の後期に細胞増殖成分及び血管形成成分を有するが、患者は、多くの場合、付随的な関節炎状態を有する。症状は、プレドニゾンなどのステロイド性抗炎症剤又はメトトレキセートなどの抗増殖剤によって処置されてもよく、それらの剤は、本明細書において他の箇所で考察される。慢性炎症性皮膚疾患、例えば、乾癬及び／もしくは湿疹の抑制又は、それ以外の場合、処置及び／もしくは予防のために、本明細書における前記組成物を用いてもよい。
以下は、本明細書において考察される組成物で処置することが可能な、例えば、動静脈奇形（血管奇形）における動脈塞栓術；月経過多；急性出血；中枢神経系障害；脾機能亢進；乾癬などの炎症性皮膚疾患；湿疹様疾患（アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹）；免疫水疱性疾患；並びに関節リウマチ、混合性結合組織病、シェーグレン症候群、強直性脊椎炎、ベーチェット症候群、サルコイドーシス、結晶誘発性関節炎及び骨関節炎（それらの全ては、顕著な症候として、炎症を起こした、痛みを伴う関節を特徴とする）を含む様々な状態を含む炎症性関節炎を含む炎症性疾患のいくつかのさらなる代表的例を提供する。
虚血
虚血（ｉｓｃｈｅｍｉａ）又は乏血（ｉｓｃｈａｅｍｉａ）には血液供給における制限が関与し、前記制限としては、適切な組織機能のために必要な酸素、グルコース及び他の成分の供給の不足が挙げられ、組織の傷害及び／又は機能障害を引き起こす。虚血は、重度の問題を引き起こす可能性がある。例えば、組織が無酸素化して壊死したりする可能性があり、血液凝固が発生する可能性がある。虚血の防止及び／又は処置を行うために各種試みが行われてきた。例えば、血流復活治療あるいは再灌流治療がある。しかし、血液復活治療には酸素の再導入が関与し、これはフリーラジカルの生成によるさらなる損傷を引き起こす可能性があり、再灌流による傷害を発生させる可能性がある。再灌流傷害は深刻な問題を引き起こす可能性がある。本明細書に記載の組成物は、虚血及び／もしくは再灌流傷害を抑制するか又は、それ以外の場合、処置及び／もしくは防止するために用いられてもよい。
内毒素血症
内毒素血症は、血液中にエンドトキシンが存在することである。内毒素血症は深刻な問題を引き起こす可能性がある。例えば、内毒素血症は敗血症性ショックにつながる可能性がある。本明細書に記載の組成物は、内毒素血症を抑制又は、それ以外の場合、処置及び／もしくは防止するために用いられてもよい。
ケロイド瘢痕
ケロイド形質は、創傷を、隆起した瘢痕を伴って治癒させる。ケロイド形質の隆起瘢痕には異常な線維性瘢痕化が含まれる。ケロイド形質は、重度の問題、例えば疼痛や外観上の問題（disfigurement）を引き起こす。本明細書に記載の組成物は、ケロイド形質及びその結果として生じる隆起瘢痕を抑制又は、それ以外の場合、処置及び／もしくは防止するために用いられてもよい。
ケロイド（ケロイド瘢痕）は、正常な皮膚の上に増殖して広がるタイプの瘢痕である。ケロイドにはＩ型及びＩＩＩ型コラーゲンの異常増殖を含む異常コラーゲン増殖が関与する。ケロイドは、重度の問題、例えば、疼痛、そう痒を引き起こし、感染した場合は潰瘍化する可能性がある。ケロイドを処置又は防止するために、外科手術、包帯、ステロイド注入及びレーザー治療の使用を含む試みが為されてきた。本明細書に記載の組成物は、ケロイドを抑制又は、それ以外の場合、処置及び／もしくは防止するために用いられてもよい。
皮膚炎
皮膚炎にはアトピー性皮膚炎及び接触性皮膚炎を含む皮膚の炎症が含まれる。例えば、接触性皮膚炎には、皮膚の異物との接触の後に発症する局所的発疹及び／又は皮膚の刺激が関与する。例えば、アトピー性皮膚炎は、慢性的に再発性である掻痒性皮膚疾患である。アトピー性皮膚炎は時にベニエー痒疹、神経皮膚炎、内在性湿疹、屈面性湿疹、乳児皮膚炎、小児期湿疹及び急性単純性痒疹（ｐｒｕｒｉｇｏ ｄｉａｔｈｓｉｑｕｅ）と称される。湿疹は、皮膚炎の形態の疾患である。他のタイプの皮膚炎としては、海綿状皮膚炎、脂漏性皮膚炎（ふけ）、汗疱状皮膚炎（汗疱）、蕁麻疹、小疱性皮膚炎（水疱性皮膚炎）及び丘疹性蕁麻疹（ｐｏｐｕｌａｒ ｕｒｔｉｃａｒｉａ）が挙げられる。皮膚炎は、重度の問題を引き起こす可能性がある。例えば、乾燥肌、皮膚発疹、皮膚浮腫、皮膚発赤、皮膚掻痒、痂皮形成、ひび割れ、水膨れ、滲出及び出血である。皮膚炎を処置又は防止するために、コルチコステロイド及びコールタールの使用を含む試みが為されてきた。本明細書に記載の組成物は、アトピー性皮膚炎、湿疹、接触性皮膚炎、海綿状皮膚炎、脂漏性皮膚炎、汗疱状皮膚炎、蕁麻疹、小疱性皮膚炎及び丘疹性蕁麻疹を含む皮膚炎を抑制又は、それ以外の場合、処置及び／もしくは防止するために用いられてもよい。
酒さ
酒さは、典型的には顔面紅斑を特徴とする慢性疾患又は慢性状態である。酒さは、重度の問題を引き起こす可能性がある。例えば、酒さは典型的には額、鼻又は頬上の発赤として発生し、頸部、耳、頭皮及び胸部上の発赤を引き起こすこともある。例えば、酒さは、毛細血管拡張、丘疹、膿疱、痛痒感を含むさらなる症候を引き起こし、進行した場合には鼻瘤（赤色の分葉状の鼻）を発症しうる。酒さのサブタイプとしては、紅斑毛細血管拡張型酒さ、丘疹膿疱性酒さ、瘤腫型酒さ（ｐｈｙｍａｔｏｕｓ ｒｏｓａｃｅａ）及び眼型酒さが挙げられる。酒さを処置又は予防するために、抗炎症剤及び抗生剤の使用を含む試みが為されてきた。本明細書に記載の組成物は、紅斑毛細血管拡張酒さ、丘疹膿疱性酒さ及び眼性酒さのサブタイプを含む酒さを抑制又は、それ以外の場合、処置及び／もしくは防止するために用いられてもよい。
医療機器、医療材料、組み合わせ及び医薬品
本明細書における考察は、医療機器、医療材料、組み合わせ生成物又は医薬的に許容し得る容器内に本明細書において考察される組成物を含む、医療機器、医療材料、組み合わせ及び医薬品も提供する。前記製品（products）は前記容器に添付された注意事項をさらに含んでもよい。注意事項は典型的には、医療機器、医療材料、組み合わせ及び医薬又は生物医薬の製造、使用又は販売を規制する所管官庁によって規定された形態であり、これによって注意書きは、例えば、フカン−低エンドトキシン組成物が、例えば、増殖性疾患又は炎症性疾患（例えば、炎症性関節炎、再狭窄、外科的癒着、乾癬及び腹膜炎など）の処置のためにヒト又は動物に投与するための抗増殖剤又は抗炎症剤として承認されている旨など、官庁による前記組成物の承認を反映するものとなる。本明細書に記載のフカン−低エンドトキシン組成物の使用のための説明書も含まれてよい。かかる説明書は、患者の投与及び投与方法に関する情報を含んでもよい。医薬品は前記医療組成物を投与又は塗布するためのデバイスやシステムなど、例えば注射器及び／又は噴霧器を含んでいてもよい。
本出願は、前記組成物自体を製造することを含む、本明細書において考察される前記フカン−低エンドトキシン組成物、システムなどの各種要素の製造方法、並びにその使用方法、例えば、本明細書に記載の状態、前記疾患などの処置をさらに対象とする。
本出願は、線維性癒着、関節炎、乾癬又は所望の他の疾患を処置するための、本明細書に示されたフカン−低エンドトキシン組成物を含む医療機器、医療材料、医薬組み合わせ製品及び医薬品を含む。前記材料などは、外科的癒着、関節炎、乾癬又は他の所望の疾患などの線維性癒着を処置するための医薬において使用することができる。医薬的に有効な量の、本明細書において考察されるフコイダンなどのフカンを医薬的に許容し得る賦形剤又は緩衝剤と併用することを含む、ヒト患者を含む患者における線維性癒着、関節炎及び乾癬のうち少なくとも１つに関連した症状を軽減させることが可能なかかる医薬の製造方法及び使用方法も提供される。
以下の実施例は、本明細書におけるある種の実施形態の例示的考察を提供するが、本開示及び請求項は、それらに限定されるものではない。
実施例１：化学的構造的変性
ラミナリア・ヒペルボレア（Ｌａｍｉｎａｒｉａ Ｈｙｐｅｒｂｏｒｅａ）から滲出物−抽出物を得た。前記滲出物−抽出物を濾過し、１００ｋＤａフィルタを用いた(over）タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）によって小分子を除去した。変性させられないかぎり未変性の試料Ａ（otherwise unmodified sample A）を得るために、得られた保持物（retentate）の試料を凍結乾燥した。得られた保持物を、１０ＭのＮａＯＨ溶液の添加によって０．２５ＭＮａＯＨとし、室温で１６時間静置した。次いで、得られた試料を５０ｋＤａのフィルタを用いて遠心濾過し、得られた保持物を回収して凍結乾燥し、塩基処理試料Ｂを得た。陽子磁気共鳴分光法（１Ｈ−ＮＭＲ）によって未変性試料Ａ及び塩基処理試料Ｂの両方を分析した。得られた１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを図３Ａに示す。
図３Ａは、前記フカンの化学的構造的変性が達成されたことを示すが、前記未変性試料Ａに存在する約２．０ｐｐｍのケミカルシフトを伴うブロードピークは、前記塩基処理試料Ｂには存在しない。
さらに、２Ｄ１Ｈ−１３Ｃ異核多重量子コヒーレンス（ＨＭＱＣ）によって未変性試料Ａ及び塩基処理／変性試料Ｂを分析した。図３Ｂに示されるＨＭＱＣスペクトルを、５ｍｍのコールドプローブを備えた６００ＭＨｚ分光計によって、溶媒シグナルを抑制しつつ７０℃で取得した。前記ＨＭＱＣスペクトルの多くの走査を、各回２５６〜５１２回の走査として８ずつ回数を増加させつつ、炭素次元における１０〜３０ｐｐｍの範囲で取得し、かかる走査を組み合わせて図３Ｂの前記スペクトルを作製した。
未変性試料Ａについての前記ＨＭＱＣスペクトルは、図３Ｂにおいて円で囲まれたシグナルによって示されるＯ−アセチル基に対応するクロスピークを有する。このクロスピークは、塩基処理試料Ｂについての前記スペクトルには存在しない。このことは、前記フカンからアセチル基が除去されたことを示しており、ひいては、前記ＮａＯＨ処置により塩基処理試料Ｂにおいて前記フカンが化学的構造変性していることを示している。
実施例２：物理的に誘導される凝集
高レベルのエンドトキシン、例えば、フコイダンのミリグラム当たり少なくとも１０００のエンドトキシン単位（ＥＵ）（ＥＵ／ｍｇ）を含有する原料フコイダン組成物を蒸留水中約１０％ｗ／ｖに調製し、出発溶液を得る。前記出発溶液に塩化ナトリウムを添加して、最終塩化ナトリウム濃度が約０．１Ｍである混合物を生成する。前記混合物を沸騰付近まで１０〜１５分間加熱する。この温度での前記混合物の処理は、溶解した不純物及び粒子状非フコイダン物質の凝集を誘導する。前記混合物を２３００重力で４０分間遠心分離して、凝集した非フコイダン成分からフコイダン含有溶液を分離する。前記フコイダン含有溶液を凍結乾燥して、含まれるフコイダンのミリグラム当たりのエンドトキシン単位（ＥＵ／ｍｇ）が有意に低減されたレベル、例えば、約１００ＥＵ／ｍｇである、フコイダン−低エンドトキシン組成物を得る。ＥＵレベルは、例えば、比濁によるリムルス変形細胞溶解物（ＬＡＬ）アッセイによって測定することができる。
実施例３：改変型タンジェンシャルフロー濾過
粗製フコイダン組成物を、まず、実施例２において考察されている物理的誘導による凝集法に供して、比濁によるリムルス変形細胞溶解物（ＬＡＬ）アッセイによって測定すれば含有量が１０９ＥＵ／ｍｇである出発フコイダン組成物を得た。この１０９ＥＵ／ｍｇ組成物を次いで脱イオン水中５０ｍｇ／ｍｌで溶解し、０．２２μｍフィルタを通して濾過して出発溶液を得た。前記出発溶液を、２ダイアボリュームの、０．０１Ｍエチレンジアミン−四酢酸（ＥＤＴＡ）と０．５％ｗ／ｖデオキシコール酸ナトリウム溶液で透析濾過して、生物的汚染物質及び生物溶解物成分、例えばエンドトキシンを消化（digest）及び除去した。得られた第１保持液フコイダン組成物を１０ダイアボリュームの０．０１Ｍ ＥＤＴＡで透析濾過して残存デオキシコール酸ナトリウムを除去し、次いで５ダイアボリュームの蒸留水によって最終ｐＨを７とした。得られた第２保持液フコイダン組成物を比濁ＬＡＬ法によってエンドトキシンについて分析し、凍結乾燥して、フコイダン含有量を求めた。溶液中の前記フコイダン−低エンドトキシン組成物のエンドトキシンレベルは、０．１５８ＥＵ／ｍｇであることが分かった。
実施例４．タンジェンシャルフロー濾過
脱イオン水に溶解した出発フコイダン組成物を、孔サイズが徐々に小さくなり最後のフィルタが２／１．２μｍフィルタである３つの異なるフィルタを通してマイクロ濾過した。得られたフコイダン溶液を比濁によるリムルス変形細胞溶解物（ＬＡＬ）アッセイによってエンドトキシンについて分析し、水分含有率（concentration of moisture）を水分分析器によって分析してフコイダン含有量を求めた。前記フコイダン溶液のフコイダンのｍｇ当たりのエンドトキシン単位（ＥＵ／ｍｇ）であるエンドトキシンレベルは、１．７ＥＵ／ｍｇであることが分かった。
前記フコイダン溶液を、次いで、単一の１００ｋＤａタンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）カセットを通して５ｍＭ ＮａＣｌで以下のようにバッチモード操作下で透析濾過した。前記フコイダン溶液をまず体積減少を通じて濃縮した。次いで、等しい体積（１ダイアボリューム）の５ｍＭ ＮａＣｌを前記フコイダン溶液に添加して、透析濾過を開始した。濃縮、次いで透析濾過を、６ダイアボリュームの５ｍＭ ＮａＣｌが前記フコイダン溶液に導入されるまで繰り返した。透析濾過した溶液を最終体積まで濃縮した。得られた保持液フコイダン組成物を比濁ＬＡＬアッセイによってエンドトキシンについて分析し、水分含有率を水分分析器によって分析してフコイダン含有量を求めた。前記エンドトキシンレベルが１．２ＥＵ／ｍｇまで低減されたことが分かった。
実施例５．タンジェンシャルフロー濾過
脱イオン水に溶解した出発フコイダン組成物を、孔サイズが徐々に小さくなり最後のフィルタが２／１．２μｍフィルタである３つの異なるフィルタを通してマイクロ濾過した。得られたフコイダン溶液を比濁によるリムルス変形細胞溶解物（ＬＡＬ）アッセイによってエンドトキシンについて分析し、水分含有率（concentration of moisture）を水分分析器によって分析してフコイダン含有量を求めた。前記フコイダン溶液のフコイダンのｍｇ当たりのエンドトキシン単位（ＥＵ／ｍｇ）であるエンドトキシンレベルは、１３，０００ＥＵ／ｍｇであることが分かった。
前記フコイダン溶液を、次いで、単一の１００ｋＤａタンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）カセットを通して５ｍＭ ＮａＣｌで以下のようにバッチモード操作下で透析濾過した。前記フコイダン溶液をまず体積減少を通じて濃縮した。次いで、等しい体積（１ダイアボリューム）の５ｍＭ ＮａＣｌを前記フコイダン溶液に添加して、透析濾過を開始した。濃縮、次いで透析濾過を、８ダイアボリュームの５ｍＭ ＮａＣｌが前記フコイダン溶液に導入されるまで繰り返した。透析濾過した溶液を最終体積まで濃縮した。得られた保持液フコイダン組成物を比濁ＬＡＬアッセイによってエンドトキシンについて分析し、水分含有率を水分分析器によって分析してフコイダン含有量を求めた。前記エンドトキシンレベルが６，１００ＥＵ／ｍｇまで低減されたことが分かった。
実施例６：改変型タンジェンシャルフロー濾過
粗製フコイダン組成物を、まず、実施例２において考察されている物理的誘導による凝集法に供して、比濁によるリムルス変形細胞溶解物（ＬＡＬ）アッセイによって測定すれば含有量が１０９ＥＵ／ｍｇである出発フコイダン組成物を得た。この１０９ＥＵ／ｍｇ組成物を次いで水中５０ｍｇ／ｍｌで溶解し、０．２２μｍフィルタを通して濾過して出発溶液を得た。前記出発溶液を、７ダイアボリュームの、０．１ＭＮａＯＨ、０．０１Ｍエチレン−ジアミン−四酢酸（ＥＤＴＡ）及び０．０１Ｍドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）溶液で透析濾過して、生物的汚染物質及び生物溶解物成分、例えばエンドトキシンを消化及び除去した。３Ｍ塩化カリウムによる沈殿、続いての遠心分離によって沈殿したドデシル硫酸カリウムを除去することにより、得られた第１保持液フコイダン組成物から補助タンジェンシャルフロー濾過システムの外部へ前記ＳＤＳを除去した。得られた上清フコイダン組成物を２ダイアボリュームの０．０１Ｍ ＥＤＴＡで再び透析濾過し、残存ＳＤＳを除去した。得られた第２級保持液フコイダン組成物を比濁ＬＡＬ法によってエンドトキシンについて分析し、凍結乾燥して、フコイダン含有量を求めた。前記フコイダン−低エンドトキシン組成物のエンドトキシンレベルは、０．０００６ＥＵ／ｍｇ未満であることが分かった。
実施例７：固相抽出
２つの並列実験において、ゲルクロットＬＡＬアッセイによって測定すればミリグラム当たりエンドトキシン単位がそれぞれ約４，０００及び８，０００（ＥＵ／ｍｇ）である２つの原料フコイダン組成物を、７０％ｖ／ｖエタノール／水中０．５Ｍ ＮａＯＨの４０℃混合物に添加する。得られた反応混合物を撹拌して４０℃で２時間維持する。前記反応混合物を次いで遠心分離して、固体であるフコイダン−低エンドトキシン組成物を、抽出された不純物を含有する７０％ｖ／ｖエタノール／水上清中０．５Ｍ ＮａＯＨから分離する。
上記のプロセスの終了後、得られたフコイダン−低エンドトキシン組成物のエンドトキシンレベルをゲルクロットＬＡＬアッセイによって測定したところ、それぞれ４ＥＵ／ｍｇ及び８ＥＵ／ｍｇであることが分かる。
実施例８：化学的に誘導される沈殿
３３，００６ＥＵ／ｍｇを含有する原料フコイダン組成物を蒸留水中１５％ｗ／ｖに調製して出発溶液を得た。前記出発溶液は、観察により、懸濁した粒子状物を含有することが分かった。塩化カルシウムを前記出発溶液に０．５Ｍのレベルまで添加して、反応混合物を生成した。１０Ｍ ＮａＯＨを前記反応混合物に滴加して、ｐＨを７〜８とした。これは前記反応混合物中でのフコイダンの分解を避けるために行われた。後のリン酸添加による前記反応混合物の酸性化を回避するために、最少量の１０Ｍ ＮａＯＨを前記反応混合物に再び添加した。前記反応混合物にリン酸を添加して０．５Ｍリン酸塩モル濃度（0.5 M phosphate）とした。これにより、前記塩化カルシウムと前記リン酸との反応によって形成されるリン酸カルシウムの作用を介して、前記の懸濁した粒子状物及び沈殿した不純物の凝集が開始された。前記反応混合物を室温で１０分間静置して前記凝集を継続させた。前記反応混合物を１７，５６８重力で１７分間遠心分離して、上清溶液中の所望のフコイダン−低エンドトキシン組成物を前記の凝集した沈殿物から分離した。上清溶液を凍結乾燥してフコイダン分を得た。比濁ＬＡＬアッセイにより、フコイダン−低エンドトキシン組成物は、フコイダンのミリグラム当たり２７．７のエンドトキシン単位（ＥＵ／ｍｇ）を含有することが分かった。
実施例９：化学的に誘導される沈殿
３３，００６ＥＵ／ｍｇを含有する原料フコイダン組成物を蒸留水中１５％ｗ／ｖに調製して出発溶液を得た。前記出発溶液は、観察により、懸濁した粒子状物を含有することが分かった。１０Ｍ ＮａＯＨを前記出発溶液に滴加して、ｐＨを７〜８とした。これは、後の硫酸アルミニウム添加が前記出発溶液を酸性とするためのものである場合における前記出発溶液中でのフコイダンの分解を避けるために行われた。前記出発溶液を０．１Ｍ硫酸アルミニウムモル濃度（0.1 M aluminum sulfate）として反応混合物を生成した。これにより、形成された水酸化アルミニウムによる前記の懸濁した粒子状物及び沈殿した不純物の凝集が開始された。前記反応混合物を室温で１０分間静置して前記凝集を継続させた。前記反応混合物を１７，５６８重力で１７分間遠心分離して、上清溶液中の所望のフコイダン−低エンドトキシン組成物を前記の凝集した沈殿物から分離した。上清溶液を凍結乾燥してフコイダン分を得た。比濁ＬＡＬアッセイにより、前記上清溶液中のフコイダン−低エンドトキシン組成物は、フコイダンのミリグラム当たり３６．３（ＥＵ／ｍｇ）のエンドトキシン単位を含有することが分かった。
実施例１０：溶解及び凝集
エンドトキシンレベルがフコイダンのミリグラム当たり２５．９のエンドトキシン単位（ＥＵ／ｍｇ）である出発フコイダン組成物を５〜１０％ｗ／ｖ含有する水性出発溶液を提供した。固体ＥＤＴＡ四ナトリウムをキレート剤として０．０１１Ｍの濃度まで添加した。１Ｍドデシル硫酸ナトリウム（「ＳＤＳ」）溶液を細胞破壊剤として０．０１１Ｍの濃度まで添加した。１０Ｍ ＮａＯＨ溶液を０．２８Ｍの濃度まで添加して、前記出発溶液を塩基性にした。得られた反応混合物を室温で約３０分間撹拌して、濁った白色混合物を得た。
約３０分後、４５％ｗ／ｖ ＫＯＨ溶液を０．０７Ｍの濃度まで添加した。かかるカリウム添加により、ＳＤＳの沈殿物、及び、前記ＳＤＳと共にエンドトキシンを含む望ましくない不純物を結果として生じさせた。４８％ｗ／ｖ硫酸アルミニウム溶液を０．１１Ｍの濃度まで添加した。水酸化アルミニウムの形成により、前記反応混合物中にエンドトキシンを含む望ましくない不純物が凝集した。亜硫酸ナトリウム固体を０．０２Ｍの濃度まで添加して、前記反応混合物中の潜在的な酸化剤を反応制御した。
得られた反応混合物を約１６時間冷蔵庫に保存し、続いて、１７，５６８重力で１７分間遠心分離して、前記の凝集した不純物から上清溶液中の所望のフコイダン−低エンドトキシン組成物を分離した。上清溶液を凍結乾燥してフコイダン内容物を得た。比濁ＬＡＬアッセイにより、前記上清溶液中のフコイダン−低エンドトキシン組成物は、フコイダンのミリグラム当たり０．０２のエンドトキシン単位（ＥＵ／ｍｇ）を含有することが分かった。
実施例１１：溶解及び凝集
エンドトキシンレベルがフコイダンのミリグラム当たり２５．９のエンドトキシン単位（ＥＵ／ｍｇ）である出発フコイダン組成物を５〜１０％ｗ／ｖ含有する水性出発溶液を提供した。固体ＥＤＴＡ四ナトリウムをキレート剤として０．０３３Ｍの濃度まで添加した。１Ｍドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）溶液を細胞破壊剤として０．０３３Ｍの濃度まで添加した。１０Ｍ ＮａＯＨ溶液を０．１２Ｍの濃度まで添加して、前記出発溶液を塩基性にした。得られた反応混合物を室温で約３０分間撹拌して、濁った白色混合物を得た。
約３０分後、４５％ｗ／ｖ ＫＯＨ溶液を０．０７Ｍの濃度まで添加した。かかるカリウム添加により、ＳＤＳの沈殿物、及び、前記ＳＤＳと共にエンドトキシンを含むその他の不純物を結果として生じさせた。４８％ｗ／ｖ硫酸アルミニウム溶液を０．１１Ｍの濃度まで添加した。水酸化アルミニウムの形成により、前記反応混合物中にエンドトキシンを含む望ましくない不純物が凝集した。亜硫酸ナトリウム固体を０．０２Ｍの濃度まで添加して、前記反応混合物中の潜在的な酸化剤を反応制御した。
得られた反応混合物を約１６時間室温で保存し、続いて、１７，５６８重力で１７分間遠心分離して、前記の凝集した不純物から上清溶液中の所望のフコイダン−低エンドトキシン組成物を分離した。上清溶液を凍結乾燥してフコイダン分を得た。比濁ＬＡＬアッセイにより、前記上清溶液中のフコイダン−低エンドトキシン組成物は、フコイダンのミリグラム当たり０．０００５のエンドトキシン単位（ＥＵ／ｍｇ）を含有することが分かった。
実施例１２：溶解及び凝集
エンドトキシンレベルが約３３，００６ＥＵ／ｍｇである原料フコイダンを沸騰０．１Ｍリン酸二ナトリウムに約１０％ｗ／ｖで溶解して、反応混合物を生成した。沸騰温度において４０分後、前記反応混合物を２３００重力で５分間遠心分離して、エンドトキシンを含む凝集した不純物の部分を除去した。得られた上清溶液を、固体トリリン酸ナトリウムを用いてトリリン酸ナトリウムモル濃度５０ｍＭ（50 mM trisodium phosphate）、１０Ｍ ＮａＯＨ溶液を用いてＮａＯＨモル濃度０．２Ｍ（0.2 M NaOH）として、前記上清溶液を塩基性にした。得られた二次反応混合物を固体メタ重亜硫酸ナトリウムの添加によりメタ重亜硫酸ナトリウムモル濃度２０ｍＭ（20 mM sodium metabisulfite）として、前記の二次反応混合物のいずれの酸化剤も反応制御した。静菌剤としての９５％ＥｔＯＨの添加によって、前記の二次反応混合物をＥｔＯＨ濃度１０％（10% EtOH）とした。約５０％ｗ／ｖ塩化ベンザルコニウム溶液の添加によって、前記二次反応混合物を塩化ベンザルコニウム濃度約０．１％ｗ／ｖ（about 0.1% w/v benzalkonium chloride）とした。前記塩化ベンザルコニウムは前記細胞破壊剤として機能するように添加された。
前記二次反応混合物を室温で１時間撹拌し、その後、６Ｍ ＨＣｌの添加によって中和した。固体塩化亜鉛の添加によって、前記二次反応混合物を塩化亜鉛モル濃度０．１５Ｍ（0.15 M zinc chloride）とした。結果としてのリン酸亜鉛形成により、前記の二次反応混合物中にエンドトキシンを含む望ましくない不純物が凝集した。凝集剤及び溶液のかかる二次反応混合物をさらに１５分間撹拌させた。この二次反応混合物を２３００重力で５分間遠心分離して、前記の凝集した不純物から、第２上清溶液中の所望のフコイダンを分離した。前記第２上清溶液中の得られた所望のフコイダン−低エンドトキシン組成物を１０Ｍ ＮａＯＨの添加によって中和した。前記第２上清溶液を凍結乾燥してフコイダン含有量を求めた。前記第２上清溶液中のフコイダン−低エンドトキシン組成物は、エンドトキシンレベルが２ＥＵ／ｍｇであることが分かった。得られた第２上清溶液を希釈し、ＴＦＦに供して、塩化ベンザルコニウムを除去した。
実施例１３：アニオン吸着
フコイダン組成物を１００ｋＤａ ＴＦＦカセットを通して脱塩して、比濁ＬＡＬ法によって測定すればエンドトキシンレベルがフコイダンのミリグラム当たり９６０のエンドトキシン単位（ＥＵ／ｍｇ）である、出発溶液中の脱塩フコイダン組成物を得た。約５００ｍｇの前記脱塩フコイダン組成物を含む前記出発溶液の部分を約２．５ｇのＡｍｂｅｒｌｙｓｔＡ２６ＯＨ樹脂と約１６時間混合した。前記混合物の液体部分を次いでデカンテーションにより前記樹脂から分離した。前記液体を凍結乾燥して得られたフコイダン−低エンドトキシン組成物は、フコイダンのミリグラム当たり１４．９のエンドトキシン単位（ＥＵ／ｍｇ）を含有することが比濁ＬＡＬアッセイにより分かるものであった。
実施例１４：アニオン吸着
フコイダン組成物を１００ｋＤａ ＴＦＦカセットを通して脱塩して、比濁ＬＡＬ法によって測定すればエンドトキシンレベルがフコイダンのミリグラム当たり９６０のエンドトキシン単位（ＥＵ／ｍｇ）である、出発溶液中の脱塩フコイダン組成物を得た。約５００ｍｇの前記脱塩フコイダン組成物を含む前記出発溶液の部分を約５．０ｇのＡｍｂｅｒｌｙｓｔＡ２６ＯＨ樹脂と約１６時間混合した。前記混合物の液体部分を次いでデカンテーションにより前記樹脂から分離した。前記液体を凍結乾燥して得られたフコイダン−低エンドトキシン組成物は、フコイダンのミリグラム当たり０．０６のエンドトキシン単位（ＥＵ／ｍｇ）を含有することが比濁ＬＡＬアッセイにより分かるものであった。
実施例１５：アニオン吸着
フコイダン組成物を１００ｋＤａ ＴＦＦカセットを通して脱塩して、比濁ＬＡＬ法によって測定すればエンドトキシンレベルがフコイダンのミリグラム当たり９６０のエンドトキシン単位（ＥＵ／ｍｇ）である、出発溶液中の脱塩フコイダン組成物を得た。約５００ｍｇの前記脱塩フコイダン組成物を含む前記出発溶液の部分をＴｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ１００と混合して最終濃度を約０．５ｍＭとした。得られた溶液を約２．５ｇのＡｍｂｅｒｌｙｓｔＡ２６ＯＨ樹脂と約１６時間混合した。前記混合物の液体部分を次いでデカンテーションにより前記樹脂から分離した。前記液体を凍結乾燥して得られたフコイダン−低エンドトキシン組成物は、フコイダンのミリグラム当たりで含有するエンドトキシン単位（ＥＵ／ｍｇ）が０．００３未満であることが比濁ＬＡＬアッセイにより分かるものであった。
実施例１６：アニオン吸着
フコイダン組成物を１００ｋＤａ ＴＦＦカセットを通して脱塩して、比濁ＬＡＬ法によって測定すればエンドトキシンレベルがフコイダンのミリグラム当たり９６０のエンドトキシン単位（ＥＵ／ｍｇ）である、出発溶液中の脱塩フコイダン組成物を得た。約５００ｍｇの前記脱塩フコイダン組成物を含む前記出発溶液の部分をｎ−ブタノールと混合して最終濃度を約５％ｖ／ｖとした。得られた溶液を約２．５ｇのＡｍｂｅｒｌｙｓｔＡ２６ＯＨ樹脂と約１６時間混合した。前記混合物の液体部分を次いでデカンテーションにより前記樹脂から分離した。前記液体を凍結乾燥して得られたフコイダン−低エンドトキシン組成物は、フコイダンのミリグラム当たり６．７のエンドトキシン単位（ＥＵ／ｍｇ）を含有することが比濁ＬＡＬアッセイにより分かるものであった。
実施例１７：アニオン吸着
フコイダン組成物を１００ｋＤａ ＴＦＦカセットを通して脱塩して、比濁ＬＡＬ法によって測定すればエンドトキシンレベルがフコイダンのミリグラム当たり９６０のエンドトキシン単位（ＥＵ／ｍｇ）である、出発溶液中の脱塩フコイダン組成物を得た。約５００ｍｇの前記脱塩フコイダン組成物を含む前記出発溶液の部分をエタノールと混合して最終濃度を約１０％ｖ／ｖとした。得られた溶液を約２．５ｇのＡｍｂｅｒｌｙｓｔＡ２６ＯＨ樹脂と約１６時間混合した。前記混合物の液体部分を次いでデカンテーションにより前記樹脂から分離した。前記液体を凍結乾燥して得られたフコイダン−低エンドトキシン組成物は、フコイダンのミリグラム当たり６．０のエンドトキシン単位（ＥＵ／ｍｇ）を含有することが比濁ＬＡＬアッセイにより分かるものであった。
実施例１８：液液抽出
約１０，０００ＥＵ／ｍｇを含有する出発フカン組成物を蒸留水中に溶解して１０ｍｇ／ｍＬの水性出発溶液を生成する。出発フコイダン組成物を含有する水性出発溶液に２０％ｖ／ｖヘプタンを添加し、有機−水性混合物を次いで高剪断にて３０分間混合する。この混合を終了させ、前記有機−水性混合物を分離漏斗に入れて有機相を水性相から分離する。所望のフカン成分を含有する、より濃厚な水性相が、前記分離漏斗の底部に沈降する一方で、望ましくない不純物を含む、濃厚さの低い有機相が、前記分離漏斗の上端に存在する。前記有機−水性混合物を前記分離漏斗において１０分間静置する。前記水性相を次いでデカントし、溶液中の所望のフカン−低エンドトキシン組成物として回収する。溶液中の前記フカン−低エンドトキシン組成物のエンドトキシン含有量は前記出発フカン組成物よりも約５０％〜約９９．９９９％少ないことが比濁ＬＡＬアッセイにより分かりうる。
実施例１９：液液抽出
約１０，０００ＥＵ／ｍｇを含有する出発フカン組成物を蒸留水中に溶解して１０ｍｇ／ｍＬの水性出発溶液を生成する。出発フコイダン組成物を含有する水性出発溶液に２０％ｖ／ｖ１−ブタノールを添加し、有機−水性混合物を次いで高剪断にて３０分間混合する。この混合を終了させ、前記有機−水性混合物を分離漏斗に入れて有機相を水性相から分離する。所望のフカン成分を含有する、より濃厚な水性相が、前記分離漏斗の底部に沈降する一方で、望ましくない不純物を含む、濃厚さの低い有機相が、前記分離漏斗の上端に存在する。前記有機−水性混合物を前記分離漏斗において１０分間静置する。前記水性相を次いでデカントし、溶液中の所望のフカン−低エンドトキシン組成物として回収する。溶液中の前記フカン−低エンドトキシン組成物のエンドトキシン含有量は前記出発フカン組成物よりも約５０％〜約９９．９９９％少ないことが比濁ＬＡＬアッセイにより分かりうる。
実施例２０：液液抽出
約１０，０００ＥＵ／ｍｇを含有する出発フカン組成物を蒸留水中に溶解して１０ｍｇ／ｍＬの水性出発溶液を生成する。出発フコイダン組成物を含有する水性出発溶液に２０％ｖ／ｖ酢酸エチルを添加し、有機−水性混合物を次いで高剪断にて３０分間混合する。この混合を終了させ、前記有機−水性混合物を分離漏斗に入れて有機相を水性相から分離する。所望のフカン成分を含有する、より濃厚な水性相が、前記分離漏斗の底部に沈降する一方で、望ましくない不純物を含む、濃厚さの低い有機相が、前記分離漏斗の上端に存在する。前記有機−水性混合物を前記分離漏斗において１０分間静置する。前記水性相を次いでデカントし、溶液中の所望のフカン−低エンドトキシン組成物として回収する。溶液中の前記フカン−低エンドトキシン組成物のエンドトキシン含有量は前記出発フカン組成物よりも約５０％〜約９９．９９９％少ないことが比濁ＬＡＬアッセイにより分かりうる。
実施例２１：以下の実施例のいくつかにおいて考察される一定のフカンを製造するために使用される粗製フカンのエンドトキシンの測定
粗製フカンを用いて、以下の実施例において考察される一定のフカンを製造した。特に、フカン２、フカン４、及びフカン７を製造するために用いられる粗製フカンを、リムルス変形細胞溶解物（ＬＡＬ）アッセイによってエンドトキシンについて分析した。「粗製フカン１」は、フカン２を製造するのに使用され且つフカン４も製造するのに使用される粗製フカンを指す。「粗製フカン２」及び「粗製フカン３」は、一緒にブレンドされ次いでフカン７を製造するのに使用される２つの粗製フカンを指す。かかる分析の結果を表１に示す。以下の表における結果は、エンドトキシンの一定の特徴に関して使用される略号を含んでいる。ミリグラム当たりのエンドトキシン単位をＥＵ／ｍｇによって表す。
Figure 2021532137
実施例２２：フカン−低エンドトキシン組成物の調製
本明細書において考察されている方法は、フカン−低エンドトキシン組成物を得るために如何様にも使用され、組み合わされ、改変され、また順番が変更されてもよい。１０種のフカン−低エンドトキシン組成物を高エンドトキシン（例えば、原料）フカン組成物から調製して、医学的用途及び外科的用途におけるフカン−低エンドトキシン組成物の効能を評価した。より詳細には、エンドトキシンレベルが１０，０００ＥＵ／ｍｇ〜６０，０００ＥＵ／ｍｇの範囲である高エンドトキシンフカン組成物を、本明細書における方法のうちの１又は複数を使用して修飾及び／又はパイロジェン除去して、前記１０種のフカン−低エンドトキシン組成物を得た。前記１０種のフカン−低エンドトキシン組成物を、以下、フカン１〜フカン１０と称する。フカン１〜フカン６、フカン８及びフカン１０は、白色固体であった。フカン９は、淡褐色固体であった。フカン７を溶液に溶解して透明無色溶液を得た。フカン１、フカン３及びフカン７の調製には、実施例８及び実施例１０に考察されている方法と、低イオン強度溶液に対するさらなる透析濾過との組み合わせを使用することが含まれた。フカン２及びフカン４の調製には、実施例７、ミセル相分離及び実施例１５に考察されている方法の組み合わせの使用が含まれた。フカン９の調製には、実施例７、ミセル相分離、及び脱イオン水に対するタンジェンシャルフロー濾過に考察されている方法の組み合わせを使用することが含まれた。フカン６、フカン８及びフカン１０の調製には、実施例９及び実施例１０に考察されている方法並びに低イオン強度溶液に対するさらなる透析濾過の組み合わせを使用することが含まれた。エンドトキシンレベル、分子量、硫酸レベル及び総炭水化物レベルを以下のように求めた。
実施例２３：所望のフカン−低エンドトキシン組成物のエンドトキシン及び分子量の測定
フカン１〜８及びフカン１０について、比濁エンドトキシン試験を、製造者の指示にしたがって、Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ｏｆ Ｃａｐｅ ＣｏｄのＰｙｒｏｔｅｌｌ（登録商標）−Ｔ溶解物を使用して実施した。濁度の測定値を、Ｂｉｏｔｅｋ Ｓｙｎｅｒｇｙ（登録商標）ＨＴＸインキュベーションプレートリーダを使用して採取した。結果を製造者のＣＳＥ（対照の標準エンドトキシン）較正曲線に対して定量した。
フカン９については、発色エンドトキシン試験を、Ｃｈａｒｌｅｓ ＲｉｖｅｒのＥｎｄｏｓａｆｅ（登録商標）カートリッジを使用してＣｈａｒｌｅｓ ＲｉｖｅｒのＮｅｘｇｅｎ（登録商標）−ＰＴＳ分光計を使用して実施した。結果を製造者のＣＳＥ（対照の標準エンドトキシン）較正曲線に対して定量した。
フカン１〜８及びフカン１０のエンドトキシン試験の結果を以下の表２に示す。
Figure 2021532137
表２は、エンドトキシンレベルが０．００１〜０．１８ＥＵ／ｍｇの範囲であるフカン−低エンドトキシン組成物が生成したことを実証している。
実施例２４：フカン−低エンドトキシン組成物の分子量分布、硫酸、総炭水化物及び単糖組成の分析
前記フカン−低エンドトキシン組成物（フカン１、フカン２、フカン４、フカン５、フカン６、フカン８及びフカン１０）について得られた分子量分布を評価するために、ゲル浸透クロマトグラフィーを用いた。ゲル浸透クロマトグラフィーにおける使用のために利用可能な異なるパラメータ、カラム及び標準物質が多数あるため、分子量の分析に利用可能な計装構成も多様となる。ここでは分子量決定のために、以下のパラメータを用いてＧＰＣを行った。移動相は、０．１Ｍの硝酸ナトリウム流を０．６ｍＬ／分とした。カラムコンパートメント及び検出器は３０℃とした。検出にはＷａｔｅｒｓ２４１４示差屈折率検出器を用いた。
適切なＧＰＣカラムとしては、水性溶媒と適合性のあるＧＰＣカラム、例えば、スルホン化スチレンジビニルベンゼン、ＮＨ官能基を有したアクリレートコポリマー網状組織、変性シリカ及びヒドロキシル化ポリメタクリレート系ゲルのうち少なくとも１つが充填されたカラムが挙げられる。ここでは分析のために、粒径６μｍのヒドロキシル化ポリメタクリレート系ゲルが充填された内径（ＩＤ）が６ｍｍであり長さ４０ｍｍであるガードカラム１つ、続いて排除限界が約７，０００ｋＤａであり有効分子量範囲が約５０ｋＤａ〜約５，０００ｋＤａである粒径１２μｍのヒドロキシル化ポリメタクリレート系ゲルが充填されたＩＤが７．８ｍｍである第１の３００ｍｍ分析ＧＰＣカラム、続いて排除限界が約７，０００ｋＤａであり有効分子量範囲が約１ｋＤａ〜約６，０００ｋＤａである粒径１０μｍのヒドロキシル化ポリメタクリレート系ゲルが充填されたＩＤが７．８ｍｍである第２の３００ｍｍ分析ＧＰＣカラム、を含む３つのカラムを直列に用いた。前記カラム設定の総有効分子量範囲は、約１ｋＤａ〜約６，０００ｋＤａであった。このカラム設定は例えば、直列に接続されたＵｌｔｒａｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標）ガード−Ｕｌｔｒａｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標）２０００−Ｕｌｔｒａｈｙｄｒｏｇｅｌ（登録商標）Ｌｉｎｅａｒカラムであってよい。
Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎのトレース可能な標準物質であるＤＸＴ３７５５Ｋ（ピーク分子量＝２１６４ｋＤａ）、ＤＸＴ８２０Ｋ（ピーク分子量＝７４５ｋＤａ）、ＤＸＴ７６０Ｋ（ピーク分子量＝６２１ｋＤａ）、ＤＸＴ６７０Ｋ（ピーク分子量＝４０１ｋＤａ）、ＤＸＴ５３０Ｋ（ピーク分子量＝４９０ｋＤａ）、ＤＸＴ５００Ｋ（ピーク分子量＝３９０ｋＤａ）、ＤＸＴ２７０Ｋ（ピーク分子量＝１９６ｋＤａ）、ＤＸＴ２２５Ｋ（ピーク分子量＝２１３ｋＤａ）、ＤＸＴ１５０Ｋ（ピーク分子量＝１２４ｋＤａ）、ＤＸＴ５５Ｋ（ピーク分子量＝５０ｋＤａ）、ＤＸＴ５０Ｋ（ピーク分子量＝４４ｋＤａ）及びＤＸＴ５Ｋ（ピーク分子量＝４ｋＤａ）（これらの標準物質のピーク分子量は約４ｋＤａ〜約２，２００ｋＤａである）を含む標準曲線に対して試料流を定量した。用いられる標準曲線は、例えば、Ｄｅｘｔｒａｎ３７５５ｋＤａ、Ｄｅｘｔｒａｎ５０ｋＤａ及びＤｅｘｔｒａｎ５５ｋＤａのうち少なくとも１つ、並びに本明細書において考察される３種〜６種のさらなるトレース可能な標準物質を含み、較正点は、用いられる較正物質のピーク分子量であってもよい。例示的な較正曲線は、ＤＸＴ３７５５Ｋ、ＤＸＴ８２０Ｋ、ＤＸＴ５３０Ｋ、ＤＸＴ５００Ｋ、ＤＸＴ２２５Ｋ及びＤＸＴ５５Ｋからなってもよい。ここで用いられたカラムは、前記フカンの定量のために用いられる前記標準物質のピーク分子量範囲を包含し且つそれを超えて拡張された総有効分子量範囲を有するものであった。
以下の表３の結果は、分子量分布のある種の特性について用いられる略語を含む。ゲル浸透クロマトグラフィーはＧＰＣと表され、ピーク分子量はＰＭＷと表され、重量平均分子量はＷＡＭＷと表され、数平均分子量はＮＡＭＷと表され、百分率分布は％ｄｉｓｔ．と表され、分子量はＭＷと表される。
Figure 2021532137
表２に示す前記フカン−低エンドトキシン組成物は、表３に示される分子量分布によってさらに特性決定することができる。ピーク分子量が約１００ｋＤａ〜約８５０ｋＤａ、重量平均分子量が約１３０ｋＤａ〜２０００ｋＤａ、数平均分子量が約８０ｋＤａ〜７５０ｋＤａ、且つ上記分布の少なくとも５０％が１００ｋＤａであるフカン−低エンドトキシン組成物を調製した。
フカン−低エンドトキシン組成物、フカン１、フカン２、フカン４、フカン５、フカン６、フカン７、フカン８及びフカン１０を脱イオン水に溶解し、酸性条件下で加水分解し、Ｂｕｒｎａｂｙ，Ｂｒｉｔｉｓｈ ＣｏｌｕｍｂｉａにおけるＡＬＳ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓによって実施されている、％ｗ／ｗ合計硫黄含有量についての誘導結合プラズマ質量分析法（ＩＣＰ−ＭＳ）によって分析した。硫黄含有量を、硫酸対硫黄のモル比と前記硫黄含有量を乗算して前記フカン組成物の硫酸含有量％ｗ／ｗを得ることによって硫酸含有量に換算した。前記フカン−低エンドトキシン組成物の硫酸含有量を以下の表４に示す。
フカン−低エンドトキシン組成物、フカン１、フカン２、フカン４、フカン５、フカン６、フカン７、フカン８及びフカン１０もまた、総炭水化物及び単糖組成について分析された。フカン−低エンドトキシン組成物を７２％ｗ／ｗ硫酸中に４０ｍｇ／ｍＬで溶解し、水浴において４５℃で３０分間インキュベートした。酸加水分解物を次いで高圧管において４％ｗ／ｗ硫酸に希釈し、１２０℃で６０分間インキュベートした。得られた第２の酸加水分解物を蒸留水によって１／３３３の濃度まで希釈し、パルスドアンペロメトリック検出による高速アニオン交換カラムクロマトグラフィセットアップにおいて起動させた。検体の分離を、イソクラティックポンプを使用して１．０ｍＬ／分で１０ｍＭ ＮａＯＨ溶出液を流すことによってＣａｒｂｏｐａｃ（登録商標）ＰＡ２０分析カラムを通して達成させた。
前記フカン−低エンドトキシン組成物は、フコース及びガラクトースを含有することが分かった。総炭水化物含有量を測定された検体の総計によって求めた。前記フカン−低エンドトキシン組成物のフコース含有量を、フコースに関する標準曲線における内挿によって求めた。前記フカン−低エンドトキシン組成物のガラクトース含有量を、標準添加の方法によって求めた。前記フカン−低エンドトキシン組成物に関する総炭水化物含有量に対する割合としての、総炭水化物含有量並びにフコース及びガラクトースの含有量を以下の表４に示す。以下の表における炭水化物は「ｃａｒｂ」と略称されている。
Figure 2021532137
実施例２５：硬膜外線維性癒着の処置
表２〜４に示されるフカン１、フカン２、フカン４及びフカン５から乳酸リンゲル液ＵＳＰ（ＬＲＳ）中の１００ｍｇ／ｍＬのフコイダン溶液を調製した。フカン８から乳酸リンゲル液ＵＳＰ（ＬＲＳ）中の５００ｍｇ／ｍＬのフコイダン溶液を調製した。スプラーグ・ドーリー・ラットにラミネクトミー手術を施した。ラットの平均体重及び１キログラム当たりのミリグラム表示の投与量を以下の表５に示す。ブピバカイン溶液を用いて腰椎に沿ったラインブロック（line block）を作製した。ラットの背部を洗浄し、次いで滅菌ドレープで覆った。正中皮膚切開によって腰筋膜を開き、腰仙筋膜を切開し、傍脊柱筋を切開して下にある椎弓板を露出させた。椎骨の中心の骨を除去した。手技の全体にわたって、乳酸リンゲル液ＵＳＰ（ＬＲＳ）の灌注及び綿棒による圧力によって止血を維持した。露出させた硬膜を、直接、１５マイクロリットルのＬＲＳ（対照）によって、又はフコイダン溶液によって処理した。筋層及び皮膚層を縫合糸で閉じ、前記ラットを１週間回復させた後、癒着の定量のために屠殺した。硬膜上の癒着の存在及び大きさを書きとめた。癒着及び露出硬膜の寸法を記録し、用いて、総露出硬膜面積に対する癒着面積の割合である癒着被覆率を算出した。
式１：癒着被覆率（％）＝１００×硬膜癒着面積（ｍｍ２）÷総露出硬膜面積（ｍｍ２）
ＬＲＳの投与を受けた対照群は、式１を用いて算定したところ癒着被覆率は６５％であった。表５に開示されるフカン−低エンドトキシン組成物であるフカン１、フカン２、フカン４及びフカン５についての癒着被覆率を以下の表５に示すが、対照群に対して癒着被覆率は低下している。
Figure 2021532137
表５で見られるように、フカン−低エンドトキシン組成物は、外科手術後癒着を、首尾よく抑制するか、予防するか、除去するか、軽減させるか、又は、それ以外の場合、処置するために使用することができる。
実施例２６：フカン７で処置された子宮角線維性癒着
外科的癒着の抑制における低エンドトキシンフカン７組成物の有効性を測定するために、合計４匹のニュージランドホワイト種ウサギの両方の子宮角に、以下の二重子宮角（ＤＵＨ）手術を行った。手術前に、前記ウサギの体重を量り、次いで、ケタミン及びキシラジンの前投薬によって、手術のために準備した。
乳酸リンゲル液ＵＳＰ（ＬＲＳ）中の０．３３ｍｇ／ｍＬのフコイダン溶液を調製し、濾過によって滅菌した。全ての器具は滅菌され、手術中は滅菌野を維持した。腹部を清潔にし、正中腹部切開によって進入した。子宮角の位置を確定し、体外に露出させ、擦過して傷害を誘導した。擦過した子宮角の近傍の腹壁も擦過した。傷害を受けた子宮角及び腹壁を互いに隣に配置し、縫合糸で固定した。切開を閉じる前に、ウサギ体重あたり約１５ｍＬ／ｋｇのフコイダン溶液を、該フコイダン溶液の約半分が左子宮角に、該フコイダン溶液の約半分が右子宮角に向かうように、腹腔に適用した。前記手術の２週後に癒着を評価した。縫合糸が外れてしまった子宮角は評価しなかった。子宮角癒着の長さを定規で測定した。総傷害子宮角長に対する癒着の長さの割合である子宮角癒着被覆率を、
式２：癒着被覆率（％）＝１００×子宮角癒着長÷総傷害子宮角長
として算出した。
４匹のニュージランドホワイト種ウサギに、同じ外科的方法を適用し、フコイダン溶液の代わりに約１５ｍＬ／ｋｇの対照乳酸リンゲル液ＵＳＰ（ＬＲＳ）を投与した。
ＬＲＳが投与された対照群は、式２を用いて算定したところ癒着被覆率は６３％であった。表６は、フカン−低エンドトキシン組成物の代表例であるフカン７組成物について、上記で考察されている方法を用いて得られた結果を示す。以下の表６における結果は、対照群に比しての癒着被覆率の低下として示される。
表６は、フカン７による６個の子宮角の処置の結果を提供する。
Figure 2021532137
表６の結果から分かるように、フカン−低エンドトキシン組成物は、手術後の子宮角癒着、首尾よく抑制するか、予防するか、除去するか、軽減させるか、又は、それ以外の場合、処置するのに使用されうる。
実施例２７：フカン８で処置された子宮角線維性癒着
外科的癒着の抑制における低エンドトキシンフカン８組成物の有効性を測定するために、合計４匹のニュージランドホワイト種ウサギの両方の子宮角に、以下の二重子宮角（ＤＵＨ）手術を行った。手術前に、前記ウサギの体重を量り、次いで、ケタミン及びキシラジンの前投薬によって、手術のために準備した。
乳酸リンゲル液ＵＳＰ（ＬＲＳ）中の３．７５ｍｇ／ｍＬのフコイダン溶液を調製し、濾過により滅菌した。全ての器具は滅菌され、手術全体を通して滅菌野を維持した。腹部を清潔にし、腹部正中切開により進入した。子宮角の位置を確定し、露出させ、擦過して損傷を誘発した。擦過した子宮角の近傍の腹壁も擦過した。４ｍＬの体積のフコイダン溶液を損傷した左側の子宮角及び側壁領域に直接適用し、４ｍＬのフコイダン溶液を損傷した右側の子宮角及び側壁領域に直接適用した。損傷を受けた子宮角及び腹壁を互いに隣に配置し、縫合糸で固定した。ドレナージ管を腹腔に配置した後、切開を閉鎖した。前記ドレナージ管を手術後４８時間で除去した。前記手術の２週後に癒着を評価した。子宮角癒着の長さを定規で測定した。子宮角癒着被覆率を、式２を使用して算出した。
３匹のニュージランドホワイト種ウサギに、同じ外科的方法を適用し、フコイダン溶液の代わりに一方あたり４ｍＬ／ｋｇ（4 mL per side）の対照乳酸リンゲル液ＵＳＰ（ＬＲＳ）を投与した。ＬＲＳが投与された対照群は、式２を用いて算定したところ癒着被覆率は７３％であった。表７は、フカン−低エンドトキシン組成物の代表例であるフカン８組成物について、上記で考察されている方法を用いて得られた結果を示す。以下の表における結果は、対照群に比しての癒着被覆率の低下として示される。
表７は、フカン８による８個の子宮角の処置の結果を提供する。
Figure 2021532137
表７の結果から分かるように、フカン−低エンドトキシン組成物は、手術後の子宮角癒着、首尾よく抑制するか、予防するか、除去するか、軽減させるか、又は、それ以外の場合、処置するのに使用されうる。
実施例２８：フカン９によって処置される子宮角線維性癒着
外科的癒着の抑制における低エンドトキシンフカン９組成物の有効性を測定するために、合計９匹のニュージランドホワイト種ウサギの両方の子宮角に、以下の二重子宮角（ＤＵＨ）手術を行った。手術前に、前記ウサギの体重を量り、次いで、ケタミン及びキシラジンの前投薬によって、手術のために準備した。
フコイダン溶液を乳酸リンゲル液ＵＳＰ（ＬＲＳ）中０．１７ｍｇ／ｍＬ、０．３３ｍｇ／ｍＬ及び０．６７ｍｇ／ｍＬで調製し、濾過により滅菌した。全ての器具は滅菌され、手術全体を通して滅菌野を維持した。腹部を清潔にし、腹部正中切開により進入した。子宮角の位置を確定し、露出させ、擦過して損傷を誘発した。擦過した子宮角の近傍の腹壁も擦過した。損傷を受けた子宮角及び腹壁を互いに隣に配置し、縫合糸で固定した。ウサギ体重当たり１５ｍＬ／ｋｇのフコイダン溶液を腹腔に適用した後、切開を閉鎖した。前記手術の２週後に癒着を評価した。調製された各フコイダン濃度で３匹のウサギを評価した。子宮角癒着の長さを定規で測定した。子宮角癒着被覆率を、式２を使用して算出した。
対照群として３匹のニュージランドホワイト種ウサギに同じ外科的方法を適用し、フコイダン溶液の代わりに約４８ｍＬ（約１５ｍＬ／ｋｇ）の対照の乳酸リンゲル液ＵＳＰ（ＬＲＳ）を投与した。ＬＲＳが投与された対照群は、式２を用いて算定したところ癒着被覆率は５４％であった。表８は、フカン−低エンドトキシン組成物の代表例であるフカン９組成物について、異なる用量で、上記に考察された方法を用いて得られた結果を示す。以下の表の結果は、対照群に比しての癒着被覆率の低下として示される。
表８は、フカン９による１８個の子宮角の処置の結果を提供する。
Figure 2021532137
表８の結果から分かるように、フカン−低エンドトキシン組成物は、手術後の子宮角癒着、首尾よく抑制するか、予防するか、除去するか、軽減させるか、又は、それ以外の場合、処置するのに使用されうる。
実施例２９：フカン８で処置された子宮角線維性癒着
外科的癒着の抑制における低エンドトキシンフカン８組成物の有効性を測定するために、合計３匹のニュージランドホワイト種ウサギの両方の子宮角に、以下の二重子宮角（ＤＵＨ）手術を行った。手術前に、前記ウサギの体重を量り、次いで、ケタミン及びキシラジンの前投薬によって手術のために準備した。
乳酸リンゲル液ＵＳＰ（ＬＲＳ）中の５ｍｇ／ｍＬのフコイダン溶液を調製し、濾過によって滅菌した。全ての器具は滅菌され、手術全体を通して滅菌野を維持した。腹部を清潔にし、腹部正中切開により進入した。子宮角の位置を確定し、露出させ、擦過して損傷を誘発した。擦過した子宮角の近傍の腹壁も擦過した。損傷を受けた子宮角及び腹壁を互いに隣に配置し、縫合糸で固定した。筋肉切開の上から１／３及び下から１／３を閉じ、ウサギ体重あたり５ｍＬ／ｋｇのフコイダン溶液を腹腔に適用した。筋肉切開を一時的に閉じ、前記フコイダン溶液を腹腔内に３０分間静置した。筋肉切開を再び開き、１０ｍＬ／ｋｇのＬＲＳで腹腔を洗浄した。切開を閉じる前に、腹腔内の大部分の液を吸引除去した。前記手術の２週後に癒着形成を評価した。子宮角癒着の長さを定規で測定した。総損傷子宮角長に対する癒着の長さの割合である子宮角癒着被覆率を、式２を用いて算出した。
表９は、フカン−低エンドトキシン組成物の代表的な例であるフカン８組成物について、上記で考察された方法を用いて得られた結果を示す。以下の表の結果は、評価された６つの子宮角にわたる平均癒着長として示される。
Figure 2021532137
表９の結果から分かるように、フカン−低エンドトキシン組成物は、手術後の子宮角癒着を、首尾よく抑制するか、予防するか、除去するか、軽減させるか、又は、それ以外の場合、処置するために使用することができる。
実施例３０：フカン−低エンドトキシン組成物によって処置される子宮角線維性癒着
外科的癒着の抑制における、合計エンドトキシンレベルが０．００３ＥＵ／ｍｇであるフカン−低エンドトキシン組成物の有効性を測定するために、合計２０匹のニュージランドホワイト種ウサギの両方の子宮角に、以下の二重子宮角（ＤＵＨ）手術を行った。手術前に、前記ウサギの体重を量り、次いで、ミダゾラム及びデクスメデトミジンの前投薬によって、手術のために準備した。
フコイダン溶液を乳酸リンゲル液ＵＳＰ（ＬＲＳ）中０．０２ｍｇ／ｍＬ、０．１ｍｇ／ｍＬ、０．５ｍｇ／ｍＬ又は２．５ｍｇ／ｍＬで調製し、濾過により滅菌した。全ての器具は滅菌され、手術全体を通して滅菌野を維持した。腹部を清潔にし、腹部正中切開により進入した。子宮角の位置を確定し、露出させ、擦過して損傷を誘発した。擦過した子宮角の近傍の腹壁も擦過した。損傷を受けた子宮角及び腹壁を互いに隣に配置し、縫合糸で固定した。ウサギ体重当たり２ｍＬ／ｋｇのフコイダン溶液を腹腔に適用した後、切開を閉鎖した。前記手術の２週後に癒着を評価した。調製された各フコイダン濃度で５匹のウサギを処置し評価した。子宮角癒着の長さを定規で測定した。子宮角癒着被覆率を、式２を使用して算出した。
対照群として５匹のニュージランドホワイト種ウサギに同じ外科的方法を適用し、それぞれにフコイダン溶液の代わりに約２ｍＬ／ｋｇの対照の乳酸リンゲル液ＵＳＰ（ＬＲＳ）を投与した。ＬＲＳが投与された対照群は、式２を用いて算定したところ癒着被覆率は１００％であった。表１０は、フカン−低エンドトキシン組成物について、異なる濃度及び用量で、上記に考察された方法を用いて得られた結果を示す（フカン−低エンドトキシン組成物の各濃度に対し１０個ずつ、計４０個の子宮角がフカン溶液で処置された）。結果は、対照群に比しての癒着被覆率の低下として示される。
Figure 2021532137
表１０の結果から分かるように、フカン−低エンドトキシン組成物は、手術後の子宮角癒着を、首尾よく抑制するか、予防するか、除去するか、軽減させるか、又は、それ以外の場合、処置するために使用することができる。
１０００ 改変型ＴＦＦシステム
１００２ 流入供給ライン
１００４ プレフィルタ
１００６ ＴＦＦシステム流出バルブ
１００８ 補助ＴＦＦシステム流出ライン
１０１０ タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）フィルタ
１０１２ ＴＦＦ供給ライン
１０１４ ＴＦＦ流入ポンプ
１０１６ フカン容器
１０１７ ＴＦＦ保持液バルブ
１０１８ ＴＦＦ保持液戻りライン
１０１９ ＴＦＦ濾過生成物流出ライン
１０２０ 第１透析濾過溶液容器
１０２４ 第１透析濾過溶液バルブ
１０２５ 第１透析濾過溶液供給ライン
１０３０ 第２透析濾過溶液容器
１０３４ 第２透析濾過溶液バルブ
１０３５ 第２透析濾過溶液供給ライン
１４００ アニオン吸着エンドトキシン除去システム
１４０１ 流入供給ライン
１４０２ サブシステム間バルブ
１４０３ ＴＦＦサブシステム保持液流出ライン
１４０４ アニオン交換サブシステムの流出バルブ
１４０５ アニオン交換サブシステム流出ライン
１４０６ プレフィルタ
１４１０ タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）サブシステム
１４１１ タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）フィルタ
１４１２ ＴＦＦフィルタ供給ライン
１４１３ 透析濾過溶液バルブ
１４１４ ＴＦＦサブシステムポンプ
１４１５ ＴＦＦサブシステム透析濾過溶液供給ライン
１４１６ ＴＦＦサブシステムフカン容器
１４１７ ＴＦＦサブシステム透析濾過溶液容器
１４１８ ＴＦＦサブシステム保持液戻りライン
１４１９ ＴＦＦサブシステム濾過生成物流出ライン
１４２０ アニオン交換サブシステム
１４２１ アニオン交換容器
１４２２ アニオン交換容器の供給ライン
１４２４ アニオン交換サブシステムポンプ
１４２５ 破壊剤供給ライン
１４２６ アニオン交換サブシステムフカン容器
１４２７ 破壊剤容器
１４２８ アニオン交換容器流出ライン
１４２９ マクロ多孔性アニオン交換樹脂
本明細書において用いられる全ての用語は、特に文脈又は定義が明確に指示しない限り、それらの通常の意味に従って用いられる。また、特に明示的に示されない限り、本開示において、「又は」の使用は「及び」を含み、且つ、逆もまた同じである。非限定的な用語は、明示的に述べられない限り、又は特に文脈が明確に指示しない限り、限定的なものとして解釈されるものではない（例えば、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」及び「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、典型的には、「含むが、これに限定されるものではない（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｗｉｔｈｏｕｔ ｌｉｍｉｔａｔｉｏｎ）」を示す）。単数形、例えば、「１つ（ａ）」、「１つ（ａｎ）」及び「前記（ｔｈｅ）」は、請求項におけるものを含め、明示的に述べられない限り、又は特に文脈で明確に別途示されない限り、複数の参照（ｐｌｕｒａｌ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ）を含む。
特に断らない限り、実施形態の１つの特徴又は複数の特徴の条件又は関係特性を修飾する「実質的に」及び「約」などの本明細書における形容詞は、前記条件又は特性が、それが意図される適用のための実施形態の実施のために許容し得る許容範囲内に規定されることを示す。
本方法、本組成物、本システムなどの範囲は、ミーンズ・プラス・ファンクション概念及びステップ・プラス・ファンクション概念の両方を含む。しかし、請求項は、「手段」という語が請求項において具体的に記載されない限り「ミーンズ・プラス・ファンクション」関係を示すと解釈されるものではなく、「手段」という語が請求項において具体的に記載される場合には「ミーンズ・プラス・ファンクション」関係を示すと解釈される。同様に、請求項は、「ステップ」という語が請求項において具体的に記載されない限り「ステップ・プラス・ファンクション」関係を示すと解釈されるものではなく、「ステップ」という語が請求項において具体的に記載される場合には「ステップ・プラス・ファンクション」関係を示すと解釈される。
上文から、具体的な実施形態が例示の目的のために本明細書において考察されたが、本明細書における考察の精神及び範囲から逸脱することなく各種修正を為してもよいことは理解されよう。したがって、前記システム及び前記方法などは、かかる修正並びに本明細書において記載される主題の全ての順列及び組み合わせを含むものであって、添付の請求項又は本明細書における考察及び図における適切な裏付けを有する他の請求項によるものを除き、限定されるものではない。
上文から、具体的な実施形態が例示の目的のために本明細書において考察されたが、本明細書における考察の精神及び範囲から逸脱することなく各種修正を為してもよいことは理解されよう。したがって、前記システム及び前記方法などは、かかる修正並びに本明細書において記載される主題の全ての順列及び組み合わせを含むものであって、添付の請求項又は本明細書における考察及び図における適切な裏付けを有する他の請求項によるものを除き、限定されるものではない。
本発明の例示的な態様を以下に記載する。
＜１＞
フカンのミリグラム当たり約０．２未満のエンドトキシン単位を含むフカン−低エンドトキシン組成物。
＜２＞
フカンのミリグラム当たり約０．１８未満のエンドトキシン単位を含むフカン−低エンドトキシン組成物。
＜３＞
フカンのミリグラム当たり約０．１６未満のエンドトキシン単位を含むフカン−低エンドトキシン組成物。
＜４＞
フカンのミリグラム当たり約０．１未満のエンドトキシン単位を含むフカン−低エンドトキシン組成物。
＜５＞
フカンのミリグラム当たり約０．０９未満のエンドトキシン単位を含むフカン−低エンドトキシン組成物。
＜６＞
フカンのミリグラム当たり約０．０６未満のエンドトキシン単位を含むフカン−低エンドトキシン組成物。
＜７＞
フカンのミリグラム当たり約０．０４未満のエンドトキシン単位を含むフカン−低エンドトキシン組成物。
＜８＞
フカンのミリグラム当たり約０．０３未満のエンドトキシン単位を含むフカン−低エンドトキシン組成物。
＜９＞
フカンのミリグラム当たり約０．０２未満のエンドトキシン単位を含むフカン−低エンドトキシン組成物。
＜１０＞
フカンのミリグラム当たり約０．０１未満のエンドトキシン単位を含むフカン−低エンドトキシン組成物。
＜１１＞
フカンのミリグラム当たり約０．００７未満のエンドトキシン単位を含むフカン−低エンドトキシン組成物。
＜１２＞
フカンのミリグラム当たり約０．００３未満のエンドトキシン単位を含むフカン−低エンドトキシン組成物。
＜１３＞
フカンのミリグラム当たり約０．００２未満のエンドトキシン単位を含むフカン−低エンドトキシン組成物。
＜１４＞
フカンのミリグラム当たり約０．００１未満のエンドトキシン単位を含むフカン−低エンドトキシン組成物。
＜１５＞
フカンのミリグラム当たり約０．０００６未満のエンドトキシン単位を含むフカン−低エンドトキシン組成物。
＜１６＞
フカンのミリグラム当たり約０．０００５未満のエンドトキシン単位を含むフカン−低エンドトキシン組成物。
＜１７＞
有効分子量範囲が約５０ｋＤａ〜約５，０００ｋＤａでありヒドロキシル化ポリメタクリレート系ゲルが充填されている内径が７．８ｍｍの３００ｍｍ分析ゲル浸透クロマトグラフィーカラム１つ、有効分子量範囲が約１ｋＤａ〜約６，０００ｋＤａでありヒドロキシル化ポリメタクリレート系ゲルが充填されている内径が７．８ｍｍの３００ｍｍ分析ゲル浸透クロマトグラフィーカラム１つ、及びヒドロキシル化ポリメタクリレート系ゲルが充填されている内径が６ｍｍの４０ｍｍガードカラム１つ、ここで前記２つの分析ゲル浸透クロマトグラフィーカラム及び前記１つのガードカラムは約３０℃のカラムコンパートメントに収容されている；
約３０℃の示差屈折率検出器；
０．６ｍＬ／分の０．１Ｍ硝酸ナトリウム移動相流；及び
ピーク分子量が約２，２００ｋＤａの第１デキストラン標準品、ピーク分子量が約７２０ｋＤａ〜約７６０ｋＤａの第２デキストラン標準品、ピーク分子量が約４７０ｋＤａ〜約５１０ｋＤａの第３デキストラン標準品、ピーク分子量が約３７０ｋＤａ〜約４１０ｋＤａの第４デキストラン標準品、ピーク分子量が約１８０ｋＤａ〜約２２０ｋＤａの第５デキストラン標準品、及びピーク分子量が約４０ｋＤａ〜５５ｋＤａの第６デキストラン標準品から実質的になるピーク分子量標準曲線と照らし合わせての定量（quantification）
から実質的になる水系ゲル浸透クロマトグラフィー構成を用いて測定される場合に、分布の６０％ｗ／ｗ以上が１００ｋＤａより大きい分子量分布を前記フカンが有する、＜１＞〜＜１６＞のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
＜１８＞
前記フカンは、分布の少なくとも７５％ｗ／ｗが１００ｋＤａ超となっている分子量分布を有する、＜１７＞に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
＜１９＞
前記フカンは、分布の少なくとも９０％ｗ／ｗが１００ｋＤａ超となっている分子量分布を有する、＜１７＞に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
＜２０＞
前記フカンは、分布の少なくとも９８％ｗ／ｗが１００ｋＤａ超となっている分子量分布を有する、＜１７＞に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
＜２１＞
前記フカンは、分布の少なくとも８１％ｗ／ｗが２００ｋＤａ超となっている分子量分布を有する、＜１７＞に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
＜２２＞
前記フカンは、分布の少なくとも９２％ｗ／ｗが２００ｋＤａ超となっている分子量分布を有する、＜１７＞に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
＜２３＞
前記フカンは、分布の少なくとも９７％ｗ／ｗが２００ｋＤａ超となっている分子量分布を有する、＜１７＞に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
＜２４＞
前記フカンは、分布の少なくとも４４％ｗ／ｗが５００ｋＤａ超となっている分子量分布を有する、＜１７＞に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
＜２５＞
前記フカンは、分布の少なくとも６１％ｗ／ｗが５００ｋＤａ超となっている分子量分布を有する、＜１７＞に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
＜２６＞
前記フカンは、分布の少なくとも７０％ｗ／ｗが５００ｋＤａ超となっている分子量分布を有する、＜１７＞に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
＜２７＞
前記フカンは、分布の少なくとも８０％ｗ／ｗが５００ｋＤａ超となっている分子量分布を有する、＜１７＞に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
＜２８＞
前記フカンは、分布の少なくとも９０％ｗ／ｗが５００ｋＤａ超となっている分子量分布を有する、＜１７＞に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
＜２９＞
前記フカンは、分布の少なくとも５％ｗ／ｗが１６００ｋＤａ超となっている分子量分布を有する、＜１７＞に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
＜３０＞
前記フカンは、分布の少なくとも１０％ｗ／ｗが１６００ｋＤａ超となっている分子量分布を有する、＜１７＞に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
＜３１＞
前記フカンは、分布の少なくとも２４％ｗ／ｗが１６００ｋＤａ超となっている分子量分布を有する、＜１７＞に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
＜３２＞
前記フカンは、分布の少なくとも３１％ｗ／ｗが１６００ｋＤａ超となっている分子量分布を有する、＜１７＞に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
＜３３＞
前記フカンが１００ｋＤａより大きい重量平均分子量を有する、＜１７＞〜＜３２＞のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
＜３４＞
前記フカンが２００ｋＤａより大きい重量平均分子量を有する、＜１７＞〜＜３２＞のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
＜３５＞
前記フカンが５００ｋＤａより大きい重量平均分子量を有する、＜１７＞〜＜３２＞のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
＜３６＞
前記フカンの硫酸化レベルが約２０％ｗ／ｗ〜６０％ｗ／ｗである、＜１＞〜＜３５＞のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
＜３７＞
前記フカンの硫酸化レベルが約３０％ｗ／ｗ〜５５％ｗ／ｗである、＜１＞〜＜３５＞のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
＜３８＞
前記フカンの硫酸化レベルが約３２％ｗ／ｗ〜５２％ｗ／ｗである、＜１＞〜＜３５＞のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
＜３９＞
前記フカンの総炭水化物含有量が２７％ｗ／ｗ〜８０％ｗ／ｗである、＜１＞〜＜３５＞のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
＜４０＞
前記フカンの総フコース含有量が前記総炭水化物含有量に対する割合として約３０％ｗ／ｗ以上である、＜３９＞に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
＜４１＞
前記フカンの総フコース含有量が前記総炭水化物含有量に対する割合として約５０％ｗ／ｗ以上である、＜３９＞に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
＜４２＞
前記フカンの総フコース含有量が前記総炭水化物含有量に対する割合として約７０％ｗ／ｗ以上である、＜３９＞に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
＜４３＞
前記フカンの総フコース含有量が前記総炭水化物含有量に対する割合として約８０％ｗ／ｗ以上である、＜３９＞に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
＜４４＞
前記フカンの総フコース含有量が前記総炭水化物含有量に対する割合として約９０％ｗ／ｗ以上である、＜３９＞に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
＜４５＞
前記フカンの総フコース含有量が前記総炭水化物含有量に対する割合として約９５％ｗ／ｗ以上である、＜３９＞に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
＜４６＞
前記フカンの、前記総炭水化物含有量に対する割合としての総ガラクトース含有量が、約６０％ｗ／ｗ未満である、＜３９＞に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
＜４７＞
前記フカンの、前記総炭水化物含有量に対する割合としての総ガラクトース含有量が、約２％ｗ／ｗ〜約２０％ｗ／ｗである、＜３９＞に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
＜４８＞
前記フカンの、前記総炭水化物含有量に対する割合としての総ガラクトース含有量が、約１０％ｗ／ｗ未満である、＜３９＞に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
＜４９＞
前記フカン−低エンドトキシン組成物が、水に５０ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解される場合に約４ｃＰ〜５０ｃＰの粘度を有する、＜１＞〜＜４８＞のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
＜５０＞
前記フカン−低エンドトキシン組成物が、水に５０ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解される場合に約１０ｃＰ〜４０ｃＰの粘度を有する、＜１＞〜＜４８＞のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
＜５１＞
前記フカン−低エンドトキシン組成物が、水に５０ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解される場合に約１５ｃＰ〜３０ｃＰの粘度を有する、＜１＞〜＜４８＞のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
＜５２＞
前記フカン−低エンドトキシン組成物が、白色固体である、＜１＞〜＜５１＞のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
＜５３＞
前記フカン−低エンドトキシン組成物が、水に１ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解される場合に透明無色である溶液を形成する、＜１＞〜＜５２＞のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
＜５４＞
前記フカンのアセチル含有量が約５％ｗ／ｗ未満である、＜１＞〜＜５３＞のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
＜５５＞
前記フカンのアセチル含有量が約２％ｗ／ｗ未満である、＜１＞〜＜５３＞のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
＜５６＞
５ｍｍのコールドプローブを備えた６００ＭＨｚ分光計により、溶媒シグナルを抑制しつつ７０℃で、各回２５６〜５１２回の走査として８ずつ回数を増加させつつ、炭素次元における１０〜３０ｐｐｍの範囲で、２Ｄ １ Ｈ− １３ Ｃ異核多量子コヒーレンスによって測定される場合に、前記フカンの有するアセチル含有量が実質的に０％ｗ／ｗである、＜１＞〜＜５３＞のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
＜５７＞
動物における線維性癒着を処置する方法であって、前記線維性癒着を阻害するために＜１＞〜＜５６＞のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物を選択すること、及び前記動物の創傷の部位に０．５ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの用量範囲を含む治療上有効量の前記フカン−低エンドトキシン組成物を投与すること、を含む方法。
＜５８＞
＜１＞〜＜５６＞のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物を選択することを含む、動物における線維性癒着の処置のための剤。
＜５９＞
線維性癒着を阻害するために＜１＞〜＜５６＞のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物を選択すること、及び動物の創傷の部位に０．５ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの用量範囲を含む治療上有効量の前記フカン−低エンドトキシン組成物を投与すること、を含む、前記動物における線維性癒着の処置のための剤。
＜６０＞
線維性癒着のための治療薬の製造のための、＜１＞〜＜５６＞のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物の使用。
＜６１＞
＜１＞〜＜５６＞のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物を作製することを含む方法。
＜６２＞
＜１＞〜＜５６＞のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物を使用することを含む方法。
＜６３＞
前記使用することが線維性癒着を処置することを含む＜６２＞に記載の方法。
＜６４＞
医学的に許容しうる緩衝剤又は希釈剤の中に治療上有効量の＜１＞〜＜５６＞のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物を含む、医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン組成物。
＜６５＞
＜６４＞に記載の医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン組成物を含み、前記医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシンの投与物（dose）が２５０ＥＵ以下のエンドトキシンレベルを有する、医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン投与物（dosage）。
＜６６＞
＜６４＞に記載の医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン組成物を含み、前記医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシンの投与物（dose）が２５０ＥＵ未満のエンドトキシンレベルを有する、医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン投与物（dosage）。
＜６７＞
＜６４＞に記載の医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン組成物を含み、前記医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシンの投与物（dose）が５０ＥＵ未満のエンドトキシンレベルを有する、医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン投与物（dosage）。
＜６８＞
＜６４＞に記載の医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン組成物を含み、前記医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシンの投与物（dose）が２０ＥＵ以下のエンドトキシンレベルを有する、医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン投与物（dosage）。
＜６９＞
＜６４＞に記載の医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン組成物を含み、前記医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシンの投与物（dose）が２０ＥＵ未満以下のエンドトキシンレベルを有する、医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン投与物（dosage）。
＜７０＞
＜６４＞に記載の医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン組成物を含み、前記医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシンの投与物（dose）が１０ＥＵ未満以下のエンドトキシンレベルを有する、医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン投与物（dosage）。
＜７１＞
＜６４＞に記載の医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン組成物を含み、前記医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシンの投与物（dose）が２ＥＵ以下のエンドトキシンレベルを有する、医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン投与物（dosage）。
＜７２＞
＜６４＞に記載の医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン組成物を含み、前記医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシンの投与物（dose）が２ＥＵ未満のエンドトキシンレベルを有する、医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン投与物（dosage）。
＜７３＞
＜６４＞に記載の医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン組成物を含み、前記医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシンの投与物（dose）が１ＥＵ未満のエンドトキシンレベルを有する、医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン投与物（dosage）。
＜７４＞
＜６４＞に記載の医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン組成物を含み、前記医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシンの投与物（dose）が０．１ＥＵ未満のエンドトキシンレベルを有する、医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン投与物（dosage）。
＜７５＞
＜６４＞に記載の医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン組成物を含み、前記医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシンの投与物（dose）が０．０１ＥＵ未満のエンドトキシンレベルを有する、医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン投与物（dosage）。
＜７６＞
フカンの少なくとも６０％ｗ／ｗが１００ｋＤａ超となっている分子量分布、３００ｋＤａ〜５，０００ｋＤａの重量平均分子量、２０％ｗ／ｗ〜６０％ｗ／ｗの硫酸化レベル、３０％ｗ／ｗ〜８０％ｗ／ｗの総炭水化物含有量、及び前記総炭水化物含有量に対する割合として３０％ｗ／ｗ〜１００％ｗ／ｗのフコース含有量を有するフカンを前記フカン−低エンドトキシン組成物が含む、＜６５＞〜＜７５＞のいずれか一項に記載の医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン投与物（dosage）。
＜７７＞
フカンの少なくとも９０％ｗ／ｗが１００ｋＤａ超となっている分子量分布、６００ｋＤａ〜１，８００ｋＤａの重量平均分子量、３５％ｗ／ｗ〜６０％ｗ／ｗの硫酸化レベル、４０％ｗ／ｗ〜６５％ｗ／ｗの総炭水化物含有量、及び前記総炭水化物含有量に対する割合として８０％ｗ／ｗ以上のフコース含有量を有するフカンを前記フカン−低エンドトキシン組成物が含む、＜６５＞〜＜７５＞のいずれか一項に記載の医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン投与物（dosage）。
＜７８＞
フカンの少なくとも９０％ｗ／ｗが１００ｋＤａ超となっている分子量分布、６００ｋＤａ〜１，８００ｋＤａの重量平均分子量、３５％ｗ／ｗ〜５２％ｗ／ｗの硫酸化レベル、４０％ｗ／ｗ〜６５％ｗ／ｗの総炭水化物含有量、及び前記総炭水化物含有量に対する割合として８０％ｗ／ｗ以上のフコース含有量を有するフカンを前記フカン−低エンドトキシン組成物が含む、＜６５＞〜＜７５＞のいずれか一項に記載の医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン投与物（dosage）。
＜７９＞
動物における状態又は疾患を処置する方法であって、前記状態又は前記疾患を処置するために＜６４＞に記載の医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン組成物を選択すること、及び前記動物に約０．５ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇを含む治療上有効量の前記フカンを投与すること、を含む方法。
＜８０＞
動物における状態又は疾患を処置する方法であって、前記状態又は前記疾患を処置するために＜６４＞に記載の医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン組成物を選択すること、及び前記動物に約０．０４ｍｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇを含む治療上有効量の前記フカンを投与すること、を含む方法。
＜８１＞
前記治療上有効量が約０．２ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇである、＜８０＞に記載の方法。
＜８２＞
前記治療上有効量が約１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇである、＜７９＞又は＜８０＞に記載の方法。
＜８３＞
前記治療上有効量が約１．５ｍｇ／ｋｇ〜３ｍｇ／ｋｇである、＜７９＞又は＜８０＞に記載の方法。
＜８４＞
前記治療上有効量が約５ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇである、＜７９＞又は＜８０＞に記載の方法。
＜８５＞
前記状態又は前記疾患が、前記動物における標的部位における線維性癒着であり、前記投与が、前記標的部位に前記治療上有効量を投与することを含む、＜７９＞〜＜８４＞のいずれか一項に記載の方法。
＜８６＞
＜１＞〜＜５６＞のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物を約０．０２ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬ含む医療組成物であって、動物における疾患又は状態を処置するために構成され且つ組成される、医療組成物。
＜８７＞
前記フカン−低エンドトキシン組成物を約０．５ｍｇ／ｍＬ〜５ｍｇ／ｍＬ含む＜８６＞に記載の医療組成物。
＜８８＞
前記フカン−低エンドトキシン組成物を約２．５ｍｇ／ｍＬ含む＜８６＞に記載の医療組成物。
＜８９＞
前記医療組成物が医療デバイスである、＜８６＞〜＜８８＞のいずれか一項に記載の医療組成物。
＜９０＞
前記医療組成物が液体医療デバイスである、＜８６＞〜＜８８＞のいずれか一項に記載の医療組成物。
＜９１＞
前記医療組成物が医薬組成物である、＜８６＞〜＜８８＞のいずれか一項に記載の医療組成物。
＜９２＞
前記医療組成物が液体医薬組成物である、＜８６＞〜＜８８＞のいずれか一項に記載の医療組成物。
＜９３＞
前記疾患又は前記状態が線維性癒着である、＜８６＞〜＜９２＞のいずれか一項に記載の医療組成物。
＜９４＞
動物における疾患又は状態を処置するための約０．０１ｍＬ／ｋｇ〜１５ｍＬ／ｋｇを含む用量範囲の＜８６＞〜＜９３＞のいずれか一項に記載の医療組成物の使用。
＜９５＞
動物における疾患又は状態を処置するための約０．０３ｍＬ／ｋｇ〜４ｍＬ／ｋｇを含む用量範囲の＜８６＞〜＜９３＞のいずれか一項に記載の医療組成物の使用。
＜９６＞
動物における疾患又は状態を処置するための約０．０６ｍＬ／ｋｇ〜２ｍＬ／ｋｇを含む用量範囲の＜８６＞〜＜９３＞のいずれか一項に記載の医療組成物の使用。
＜９７＞
動物における疾患又は状態を処置するための約２ｍＬ／ｋｇ〜４ｍＬ／ｋｇを含む用量範囲の＜８６＞〜＜９３＞のいずれか一項に記載の医療組成物の使用。
＜９８＞
患者における選択された疾患又は状態を処置するための方法であって、患者における前記選択された疾患もしくは状態を含むか又は前記選択された疾患もしくは状態に罹患しやすいといえる（reasonably susceptible）選択された標的部位を同定すること、及びその後に、前記患者における標的部位に＜８６＞〜＜９３＞のいずれか一項に記載の医療組成物を投与することを含む方法。
＜９９＞
前記疾患又は前記状態が線維性癒着である、＜９８＞に記載の方法。
＜１００＞
前記標的部位が手術部位であり、前記投与がａ）前記手術部位における手術創を開けた後、ｂ）手術中、及びｃ）前記手術創を閉じた後、のうち少なくとも１つにおいて行われる、＜９８＞又は＜９９＞に記載の方法。
＜１０１＞
前記投与が手術後且つ前記手術創を閉じる前に行われる、＜９８＞に記載の方法。
＜１０２＞
前記投与が３分間未満かかる、＜１０１＞に記載の方法。
＜１０３＞
前記投与が２分間未満かかる、＜１０１＞に記載の方法。
＜１０４＞
前記投与が１分間未満かかる、＜１０１＞に記載の方法。
＜１０５＞
前記標的部位が、病変、擦過傷及び傷害部位のうち少なくとも１つである、＜９８＞〜＜１０４＞のいずれか一項に記載の方法。
＜１０６＞
前記標的部位が、骨盤腔、腹腔、背側腔、頭蓋腔、脊椎腔、腹部腔、胸腔、胸膜腔、心膜腔、皮膚、関節、筋肉、腱及び靱帯のうち少なくとも１つである、＜９８＞〜＜１０５＞のいずれか一項に記載の方法。
＜１０７＞
フカン−低エンドトキシン組成物を得るために出発フカン組成物から不純物を除去する方法であって、
不純物を含む出発フカン組成物を提供すること、
凝集助剤を前記出発フカン組成物に添加して反応混合物を生成すること、
前記反応混合物を加熱することによって前記不純物を凝集させて、凝集した不純物を生成すること、及び
前記凝集した不純物を除去すること
を含む方法。
＜１０８＞
前記出発フカン組成物を提供することは、前記出発フカン組成物を溶液として提供することを含む、＜１０７＞に記載の方法。
＜１０９＞
不純物が低減された溶液中の前記フカン−低エンドトキシン組成物を回収することをさらに含む、＜１０７＞に記載の方法。
＜１１０＞
前記不純物を凝集させることが、大気圧を超える圧力において前記反応混合物を加熱することを含む、＜１０７＞に記載の方法。
＜１１１＞
前記凝集助剤は塩を含む、＜１０７＞に記載の方法。
＜１１２＞
前記塩は、アルカリ金属、アルカリ土類金属、アルミニウム及び／又はアンモニウムの塩化物、臭化物、ヨウ化物、フッ化物、硫酸塩、亜硫酸塩、炭酸塩、重炭酸塩、リン酸塩、硝酸塩、亜硝酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ケイ酸塩及び／又はシアン化物を含む、＜１１１＞に記載の方法。
＜１１３＞
前記凝集助剤は塩基を含む、＜１０７＞に記載の方法。
＜１１４＞
前記塩基は、アルカリ金属、アルカリ土類金属、アルミニウム及び／又はアンモニウムの水酸化物及び／又は酸化物を含む、＜１１３＞に記載の方法。
＜１１５＞
前記フカン−低エンドトキシン組成物は、前記出発フカン組成物よりもエンドトキシンの含有量が少ない、＜１０７＞に記載の方法。
＜１１６＞
フカン−低エンドトキシン組成物を得るために出発フカン組成物から不純物を除去する方法であって、
エンドトキシンを含有する不純物を含む出発フカン組成物を提供すること、及び
タンジェンシャルフロー濾過フィルタを通してのタンジェンシャルフロー濾過に前記溶液を供して、前記出発フカン組成物よりもエンドトキシンの含有量が少ないフカン−低エンドトキシン組成物を含む保持フカン組成物（retentate fucan composition）を生成すること
を含む方法。
＜１１７＞
不純物が低減された溶液中の前記フカン−低エンドトキシン組成物を回収することをさらに含む、＜１１６＞に記載の方法。
＜１１８＞
前記タンジェンシャルフロー濾過が１００ｋＤａタンジェンシャルフロー濾過フィルタを通して実施される、＜１１６＞又は＜１１７＞に記載の方法。
＜１１９＞
フカン−低エンドトキシン組成物を得るために出発フカン組成物から不純物を除去する方法であって、
不純物と、細胞及びエンドトキシン集合体（aggregation）を破壊することが可能である破壊剤とを含む出発フカン組成物を溶液中に提供すること、及び
タンジェンシャルフロー濾過フィルタを通してのタンジェンシャルフロー濾過に前記溶液を供して、前記フカン−低エンドトキシン組成物及び残存する破壊剤を含む保持フカン組成物を生成すること
を含む方法。
＜１２０＞
タンジェンシャルフロー濾過フィルタを通してのンジェンシャルフロー濾過によって前記残存する破壊剤を除去して、前記フカン−低エンドトキシン組成物を含有する第２保持フカン組成物（second retentate fucan composition）を生成することをさらに含む、＜１１９＞に記載の方法。
＜１２１＞
前記破壊剤を沈殿させることができる沈殿剤を用いて前記保持フカン組成物を処理することによって前記残存する破壊剤を除去して、前記破壊剤の沈殿物及び上清フカン組成物を生成すること、及び
前記破壊剤の前記沈殿物を前記上清フカン組成物から分離すること
をさらに含む、＜１１９＞に記載の方法。
＜１２２＞
不純物が低減された溶液中の前記フカン−低エンドトキシン組成物を回収することをさらに含む、＜１１９＞〜＜１２１＞のいずれか一項に記載の方法。
＜１２３＞
前記破壊剤は少なくとも１つの界面活性剤を含む、＜１１９＞〜＜１２２＞のいずれか一項に記載の方法。
＜１２４＞
前記界面活性剤はアニオン性界面活性剤である、＜１２３＞に記載の方法。
＜１２５＞
前記界面活性剤はカチオン性界面活性剤である、＜１２３＞に記載の方法。
＜１２６＞
前記界面活性剤は非イオン性界面活性剤である、＜１２３＞に記載の方法。
＜１２７＞
前記界面活性剤は、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、塩化ベンザルコニウム、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ１００、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ１１４及びデオキシコール酸ナトリウムのうち少なくとも１つを含む、＜１２３＞に記載の方法。
＜１２８＞
前記沈殿剤は、塩化カリウム、水酸化カリウム、塩化カルシウム、塩化バリウム及び炭酸カルシウムのうち少なくとも１つを含む、＜１２１＞〜＜１２７＞のいずれか一項に記載の方法。
＜１２９＞
前記フカン−低エンドトキシン組成物は、前記出発フカン組成物よりもエンドトキシンの含有量が少ない、＜１１９＞〜＜１２８＞のいずれか一項に記載の方法。
＜１３０＞
フカン−低エンドトキシン組成物を得るために出発フカン組成物から不純物を除去する方法であって、
固体である出発フカン組成物と、不純物を溶解するように構成されているがフカンを溶解できない抽出媒体とを提供すること、
前記出発フカン組成物と前記抽出媒体とを混合して前記フカン−低エンドトキシン組成物と前記抽出媒体との混合物を作成すること、及び
前記抽出媒体から前記フカン−低エンドトキシン組成物を分離すること
を含む方法。
＜１３１＞
固体である前記フカン−低エンドトキシン組成物を回収することをさらに含む、＜１３０＞に記載の方法。
＜１３２＞
前記抽出媒体は、相対極性が０．７６５未満である有機溶媒を少なくとも１種を含む、＜１３０＞に記載の方法。
＜１３３＞
前記有機溶媒は、エタノール、イソプロパノール、メタノール、ベンゼン、ジエチルエーテル、デカメチルシクロ−ペンタシロキサン、酢酸エチル、ブタノール、ヘキサン、ヘプタン、ヘプタノール、オクタノール及びデカノールのうち少なくとも１つを含む、＜１３２＞に記載の方法。
＜１３４＞
前記抽出媒体は、塩基、界面活性剤及び酸化剤のうち少なくとも１つをさらに含む、＜１３２＞に記載の方法。
＜１３５＞
固体である前記出発フカン組成物を提供することは、溶液から前記出発フカン組成物を沈殿させることを含む、＜１３０＞に記載の方法。
＜１３６＞
前記フカン−低エンドトキシン組成物は、前記出発フカン組成物よりもエンドトキシンの含有量が少ない、＜１３０＞に記載の方法。
＜１３７＞
フカン−低エンドトキシン組成物を得るために出発フカン組成物から不純物を除去する方法であって、
懸濁不純物を含む不純物を含有する出発フカン組成物を溶液中に提供すること、
イオン性多価不純物沈殿剤を用いて前記不純物を前記溶液から沈殿させることにより、懸濁不純物と沈殿不純物と上清溶液との混合物を生成すること、及び
前記上清溶液から前記懸濁不純物及び前記沈殿不純物を分離すること
を含む方法。
＜１３８＞
前記フカン−低エンドトキシン組成物を含有する前記上清溶液を回収することをさらに含む、＜１３７＞に記載の方法。
＜１３９＞
前記イオン性多価不純物沈殿剤は二価又は三価のカチオンの塩を含む、＜１３７＞に記載の方法。
＜１４０＞
前記塩は、塩化物、臭化物、ヨウ化物、フッ化物、硫酸塩、亜硫酸塩、炭酸塩、重炭酸塩、リン酸塩、硝酸塩、亜硝酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ケイ酸塩及び／又はシアン化物である、＜１３９＞に記載の方法。
＜１４１＞
前記カチオンは、アルカリ土類金属、亜鉛、アルミニウム、銅及び／又は鉄である、＜１３９＞に記載の方法。
＜１４２＞
前記不純物沈殿剤は、二価又は三価のカチオンの塩基を含む、＜１３７＞に記載の方法。
＜１４３＞
前記塩基は、アルカリ土類金属、亜鉛、アルミニウム、銅及び／又は鉄の、水酸化物及び／又は酸化物である、＜１４２＞に記載の方法。
＜１４４＞
前記上清溶液から前記懸濁不純物及び前記沈殿不純物を分離することは、懸濁不純物と沈殿不純物と上清溶液との前記混合物に凝集剤を添加することにより、前記懸濁不純物及び前記沈殿不純物を凝集させることを含む、＜１３７＞〜＜１４３＞のいずれか一項に記載の方法。
＜１４５＞
前記凝集剤は、硫酸アルミニウムカリウム、硫酸アルミニウムナトリウム、硫酸アンモニウムアルミニウム、塩化カルシウム、リン酸ナトリウム、水酸化アルミニウム、塩化アルミニウム、塩化第二鉄、硫酸第二鉄、硫酸第一鉄、ケイ酸ナトリウム、ケイ酸カルシウム、リン酸カルシウム、塩化亜鉛、炭酸カルシウム、重炭酸カルシウム、硫酸カリウム、リン酸マグネシウム、アクリルアミド、アクリル酸、アルミニウムクロロハイドレート、ポリ塩化アルミニウム、タンニン、ホルムアルデヒド、メラミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルアクリレートメチルクロライド、第４級Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルメタクリレートメチルクロライド及びポリジアリルジメチル−アンモニウムクロライドのうち少なくとも１つを含む、＜１４４＞に記載の方法。
＜１４６＞
約７〜１４のｐＨを維持することをさらに含む、＜１３７＞〜＜１４５＞のいずれか一項に記載の方法。
＜１４７＞
前記ｐＨを維持することは、塩基を添加することを含む、＜１４６＞に記載の方法。
＜１４８＞
前記フカン−低エンドトキシン組成物は、前記出発フカン組成物よりもエンドトキシンの含有量が少ない、＜１３７＞〜＜１４７＞のいずれか一項に記載の方法。
＜１４９＞
フカン−低エンドトキシン組成物を得るために出発フカン組成物から不純物を除去する方法であって、
不純物を含む出発フカン組成物を提供すること、
前記出発フカン組成物のｐＨを約８〜１４に調整すること、
細胞成分を溶解するように構成されている細胞破壊剤を前記出発フカン組成物に添加して、前記細胞破壊剤と、生体分子溶解物と、前記出発フカン組成物とを含む反応混合物を生成すること、及び
前記細胞破壊剤及び生体分子溶解物を前記反応混合物から除去すること
を含む方法。
＜１５０＞
前記出発フカン組成物を提供することは、溶液である前記出発フカン組成物を提供することを含む、＜１４９＞に記載の方法。
＜１５１＞
不純物が低減された溶液中の前記フカン−低エンドトキシン組成物を回収することをさらに含む、＜１４９＞に記載の方法。
＜１５２＞
前記細胞破壊剤は界面活性剤を含む、＜１４９＞に記載の方法。
＜１５３＞
前記界面活性剤はアニオン性界面活性剤である、＜１５２＞に記載の方法。
＜１５４＞
前記界面活性剤はカチオン性界面活性剤である、＜１５２＞に記載の方法。
＜１５５＞
前記界面活性剤は非イオン性界面活性剤である、＜１５２＞に記載の方法。
＜１５６＞
前記界面活性剤は、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、塩化ベンザルコニウム、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ１００、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ１１４、Ｂｒｉｊ（登録商標）界面活性剤、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）界面活性剤、デオキシコール酸ナトリウム及びアルキルベンゼンスルホネートのうち少なくとも１つを含む、＜１５２＞に記載の方法。
＜１５７＞
前記細胞破壊剤及び生体分子溶解物を除去することは、前記細胞破壊剤及び生体分子溶解物を凝集させるために構成された凝集剤を前記混合物に添加することを含む、＜１４９＞〜＜１５６＞のいずれか一項に記載の方法。
＜１５８＞
前記細胞破壊剤を除去することは、前記細胞破壊剤を前記反応混合物に不溶にすることができる沈殿剤を前記反応混合物に添加して、沈殿物を生成することを含む、＜１４９＞〜＜１５６＞のいずれか一項に記載の方法。
＜１５９＞
前記生体分子溶解物を除去することは、前記生体分子溶解物を前記反応混合物に不溶にすることができるように構成された沈殿剤を前記反応混合物に添加して、沈殿物を生成することを含む、＜１４９＞〜＜１５８＞のいずれか一項に記載の方法。
＜１６０＞
前記沈殿物を凝集させるために構成された凝集剤を前記反応混合物に添加することをさらに含む、＜１５８＞〜＜１５９＞のいずれか一項に記載の方法。
＜１６１＞
前記凝集剤は、硫酸アルミニウムカリウム、硫酸アルミニウムナトリウム、硫酸アンモニウムアルミニウム、塩化カルシウム、リン酸ナトリウム、水酸化アルミニウム、塩化アルミニウム、塩化第二鉄、硫酸第二鉄、硫酸第一鉄、ケイ酸ナトリウム、ケイ酸カルシウム、リン酸カルシウム、塩化亜鉛、炭酸カルシウム、重炭酸カルシウム、硫酸カリウム、リン酸マグネシウム、アクリルアミド、アクリル酸、アルミニウムクロロハイドレート、ポリ塩化アルミニウム、タンニン、ホルムアルデヒド、メラミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルアクリレートメチルクロライド、第４級Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルメタクリレートメチルクロライド及びポリジアリルジメチル−アンモニウムクロライドのうち少なくとも１つを含む、＜１５７＞〜＜１６０＞のいずれか一項に記載の方法。
＜１６２＞
前記アニオン性界面活性剤を除去することはアニオン吸着を含む、＜１５３＞に記載の方法。
＜１６３＞
前記カチオン性界面活性剤を除去することはカチオン吸着を含む、＜１５４＞に記載の方法。
＜１６４＞
前記非イオン性界面活性剤を除去することはミセル相分離を含む、＜１５５＞に記載の方法。
＜１６５＞
前記界面活性剤を除去することは疎水性吸着を含む、＜１５２＞に記載の方法。
＜１６６＞
前記界面活性剤を除去することは、
前記界面活性剤の濃度が所定の濃度未満になるまで前記反応混合物を希釈すること、及び
前記界面活性剤を含む前記反応混合物を、分子量カットオフが前記界面活性剤の最大分子量を超えるタンジェンシャルフロー濾過フィルタによる透析濾過に供すること
を含む、＜１５２＞に記載の方法。
＜１６７＞
前記出発フカン組成物を提供した後且つ前記細胞破壊剤を除去する前に、キレート剤を前記反応混合物に添加することをさらに含む、＜１４９＞〜＜１６６＞のいずれか一項に記載の方法。
＜１６８＞
前記キレート剤は、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、２，３−ジメルカプト−１−プロパノール、エチレンジアミン、ポルフィン及び／又はクエン酸を含む、＜１６７＞に記載の方法。
＜１６９＞
前記細胞破壊剤を除去する前に酸化剤反応制御剤（oxidant-quenching agent）を前記反応混合物に添加して、前記反応混合物中の酸化剤の反応を制御（quench）することをさらに含む、＜１４９＞〜＜１６８＞のいずれか一項に記載の方法。
＜１７０＞
前記出発フカン組成物を提供した後且つ前記細胞破壊剤を除去する前に、静菌剤（bacteriostatic agent）を前記反応混合物に添加することをさらに含む、＜１４９＞〜＜１６９＞のいずれか一項に記載の方法。
＜１７１＞
前記静菌剤は、亜硫酸ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、塩化ベンザルコニウム、エタノール及び／又はチオ尿素を含む、＜１７０＞に記載の方法。
＜１７２＞
前記フカン−低エンドトキシン組成物は、前記出発フカン組成物よりもエンドトキシンの含有量が少ない、＜１４９＞〜＜１７１＞のいずれか一項に記載の方法。
＜１７３＞
フカン−低エンドトキシン組成物を得るために出発フカン組成物からエンドトキシンを除去する方法であって、
エンドトキシンを含む出発フカン組成物及びアニオン交換マクロ多孔性樹脂を提供すること、
前記出発フカン組成物を前記アニオン交換マクロ多孔性樹脂によるアニオン交換に供して、前記フカン−低エンドトキシン組成物を生成すること
を含む方法。
＜１７４＞
前記エンドトキシン集合体を破壊できる破壊剤によって前記出発フカン組成物を前処理することをさらに含む、＜１７３＞に記載の方法。
＜１７５＞
前記出発フカン組成物を前記アニオン交換マクロ多孔性樹脂によるアニオン交換に供する前に前記出発フカン組成物を脱塩することをさらに含む、＜１７３＞に記載の方法。
＜１７６＞
前記アニオン交換マクロ多孔性樹脂は、孔サイズが、前記出発フカン組成物中の前記エンドトキシンの平均流体力学半径を超えている、＜１７３＞に記載の方法。
＜１７７＞
前記出発フカン組成物及び前記アニオン交換マクロ多孔性樹脂を提供することは、約１：１００〜約１０：１の前記出発フカン組成物：アニオン交換マクロ多孔性樹脂の質量比で前記出発フカン組成物及び前記アニオン交換マクロ多孔性樹脂を提供することを含む、＜１７３＞に記載の方法。
＜１７８＞
前記質量比は約１：５０〜約１：１である、＜１７７＞に記載の方法。
＜１７９＞
前記質量比は約１：１０〜約１：１である、＜１７７＞に記載の方法。
＜１８０＞
前記出発フカン組成物はアニオン交換に約５分〜約１００時間の期間供される、＜１７３＞〜＜１７９＞のいずれか一項に記載の方法。
＜１８１＞
前記期間が約１時間〜約３０時間である、＜１８０＞に記載の方法。
＜１８２＞
前記アニオン交換マクロ多孔性樹脂は第４級アミン基を含む、＜１７３＞〜＜１８１＞のいずれか一項に記載の方法。
＜１８３＞
前記アニオン交換マクロ多孔性樹脂は第１級アミン基、第２級アミン基及び第３級アミン基のうち少なくとも１つを含む、＜１７３＞〜＜１８１＞のいずれか一項に記載の方法。
＜１８４＞
前記アニオン交換マクロ多孔性樹脂は、スチレン、アガロース、デキストラン、アクリレート、メタクリレート、メタクリル酸メチル、メタクリル酸ブチル、ジビニルベンゼン、セルロース、シリカ及びセラミックのうち少なくとも１つから構成される、＜１７３＞〜＜１８１＞のいずれか一項に記載の方法。
＜１８５＞
前記アニオン交換マクロ多孔性樹脂は孔サイズが約５ｎｍ〜約１０００ｎｍである、＜１７３＞〜＜１８１＞のいずれか一項に記載の方法。
＜１８６＞
前記孔サイズは約１０ｎｍ〜約１００ｎｍである、＜１８５＞に記載の方法。
＜１８７＞
前記孔サイズは約１５ｎｍ〜約５０ｎｍである、＜１８５＞に記載の方法。
＜１８８＞
前記アニオン交換マクロ多孔性樹脂は排除限界が約５ｋＤａ〜約５０，０００ｋＤａである、＜１７３＞〜＜１８７＞のいずれか一項に記載の方法。
＜１８９＞
前記排除限界は約１，０００ｋＤａ〜約９，０００ｋＤａである、＜１８８＞に記載の方法。
＜１９０＞
前記排除限界は約５ｋＤａ〜約２００ｋＤａである、＜１８８＞に記載の方法。
＜１９１＞
前記フカン−低エンドトキシン組成物は、前記出発フカン組成物よりもエンドトキシンの含有量が少ない、＜１７３＞〜＜１９０＞のいずれか一項に記載の方法。
＜１９２＞
フカン−低エンドトキシン組成物を得るために出発フカン組成物から不純物を除去する方法であって、
不純物を含む出発フカン組成物を水性出発溶液中に提供すること、
前記水性出発溶液を有機溶媒と混合して、水相有機相混合物を生成すること、及び
前記水相有機相混合物を分離して水性部分及び有機部分を得ること
を含む方法。
＜１９３＞
前記フカン−低エンドトキシン組成物を含有する前記水性部分を回収することをさらに含む、＜１９２＞に記載の方法。
＜１９４＞
前記有機溶媒は、相対極性が０．７６５未満である有機溶媒を少なくとも１種を含む、＜１９２＞に記載の方法。
＜１９５＞
前記有機溶媒は、エタノール、イソプロパノール、メタノール、ベンゼン、デカメチルシクロ−ペンタシロキサン、酢酸エチル、ヘキサン、ヘプタノール、オクタノール、デカノール、ヘプタン、酢酸イソブチル、アニソール、酢酸イソプロピル、１−ブタノール、酢酸ブチル、メチルイソブチルケトン、ペンタン、１−ペンタノール、エチルエーテル及び酢酸プロピルのうち少なくとも１つを含む、＜１９２＞〜＜１９４＞のいずれか一項に記載の方法。
＜１９６＞
前記フカン−低エンドトキシン組成物は、前記出発フカン組成物よりもエンドトキシンの含有量が少ない、＜１９２＞に記載の方法。

Claims (196)

  1. フカンのミリグラム当たり約０．２未満のエンドトキシン単位を含むフカン−低エンドトキシン組成物。
  2. フカンのミリグラム当たり約０．１８未満のエンドトキシン単位を含むフカン−低エンドトキシン組成物。
  3. フカンのミリグラム当たり約０．１６未満のエンドトキシン単位を含むフカン−低エンドトキシン組成物。
  4. フカンのミリグラム当たり約０．１未満のエンドトキシン単位を含むフカン−低エンドトキシン組成物。
  5. フカンのミリグラム当たり約０．０９未満のエンドトキシン単位を含むフカン−低エンドトキシン組成物。
  6. フカンのミリグラム当たり約０．０６未満のエンドトキシン単位を含むフカン−低エンドトキシン組成物。
  7. フカンのミリグラム当たり約０．０４未満のエンドトキシン単位を含むフカン−低エンドトキシン組成物。
  8. フカンのミリグラム当たり約０．０３未満のエンドトキシン単位を含むフカン−低エンドトキシン組成物。
  9. フカンのミリグラム当たり約０．０２未満のエンドトキシン単位を含むフカン−低エンドトキシン組成物。
  10. フカンのミリグラム当たり約０．０１未満のエンドトキシン単位を含むフカン−低エンドトキシン組成物。
  11. フカンのミリグラム当たり約０．００７未満のエンドトキシン単位を含むフカン−低エンドトキシン組成物。
  12. フカンのミリグラム当たり約０．００３未満のエンドトキシン単位を含むフカン−低エンドトキシン組成物。
  13. フカンのミリグラム当たり約０．００２未満のエンドトキシン単位を含むフカン−低エンドトキシン組成物。
  14. フカンのミリグラム当たり約０．００１未満のエンドトキシン単位を含むフカン−低エンドトキシン組成物。
  15. フカンのミリグラム当たり約０．０００６未満のエンドトキシン単位を含むフカン−低エンドトキシン組成物。
  16. フカンのミリグラム当たり約０．０００５未満のエンドトキシン単位を含むフカン−低エンドトキシン組成物。
  17. 有効分子量範囲が約５０ｋＤａ〜約５，０００ｋＤａでありヒドロキシル化ポリメタクリレート系ゲルが充填されている内径が７．８ｍｍの３００ｍｍ分析ゲル浸透クロマトグラフィーカラム１つ、有効分子量範囲が約１ｋＤａ〜約６，０００ｋＤａでありヒドロキシル化ポリメタクリレート系ゲルが充填されている内径が７．８ｍｍの３００ｍｍ分析ゲル浸透クロマトグラフィーカラム１つ、及びヒドロキシル化ポリメタクリレート系ゲルが充填されている内径が６ｍｍの４０ｍｍガードカラム１つ、ここで前記２つの分析ゲル浸透クロマトグラフィーカラム及び前記１つのガードカラムは約３０℃のカラムコンパートメントに収容されている；
    約３０℃の示差屈折率検出器；
    ０．６ｍＬ／分の０．１Ｍ硝酸ナトリウム移動相流；及び
    ピーク分子量が約２，２００ｋＤａの第１デキストラン標準品、ピーク分子量が約７２０ｋＤａ〜約７６０ｋＤａの第２デキストラン標準品、ピーク分子量が約４７０ｋＤａ〜約５１０ｋＤａの第３デキストラン標準品、ピーク分子量が約３７０ｋＤａ〜約４１０ｋＤａの第４デキストラン標準品、ピーク分子量が約１８０ｋＤａ〜約２２０ｋＤａの第５デキストラン標準品、及びピーク分子量が約４０ｋＤａ〜５５ｋＤａの第６デキストラン標準品から実質的になるピーク分子量標準曲線と照らし合わせての定量（quantification）
    から実質的になる水系ゲル浸透クロマトグラフィー構成を用いて測定される場合に、分布の６０％ｗ／ｗ以上が１００ｋＤａより大きい分子量分布を前記フカンが有する、請求項１〜請求項１６のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
  18. 前記フカンは、分布の少なくとも７５％ｗ／ｗが１００ｋＤａ超となっている分子量分布を有する、請求項１７に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
  19. 前記フカンは、分布の少なくとも９０％ｗ／ｗが１００ｋＤａ超となっている分子量分布を有する、請求項１７に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
  20. 前記フカンは、分布の少なくとも９８％ｗ／ｗが１００ｋＤａ超となっている分子量分布を有する、請求項１７に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
  21. 前記フカンは、分布の少なくとも８１％ｗ／ｗが２００ｋＤａ超となっている分子量分布を有する、請求項１７に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
  22. 前記フカンは、分布の少なくとも９２％ｗ／ｗが２００ｋＤａ超となっている分子量分布を有する、請求項１７に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
  23. 前記フカンは、分布の少なくとも９７％ｗ／ｗが２００ｋＤａ超となっている分子量分布を有する、請求項１７に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
  24. 前記フカンは、分布の少なくとも４４％ｗ／ｗが５００ｋＤａ超となっている分子量分布を有する、請求項１７に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
  25. 前記フカンは、分布の少なくとも６１％ｗ／ｗが５００ｋＤａ超となっている分子量分布を有する、請求項１７に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
  26. 前記フカンは、分布の少なくとも７０％ｗ／ｗが５００ｋＤａ超となっている分子量分布を有する、請求項１７に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
  27. 前記フカンは、分布の少なくとも８０％ｗ／ｗが５００ｋＤａ超となっている分子量分布を有する、請求項１７に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
  28. 前記フカンは、分布の少なくとも９０％ｗ／ｗが５００ｋＤａ超となっている分子量分布を有する、請求項１７に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
  29. 前記フカンは、分布の少なくとも５％ｗ／ｗが１６００ｋＤａ超となっている分子量分布を有する、請求項１７に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
  30. 前記フカンは、分布の少なくとも１０％ｗ／ｗが１６００ｋＤａ超となっている分子量分布を有する、請求項１７に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
  31. 前記フカンは、分布の少なくとも２４％ｗ／ｗが１６００ｋＤａ超となっている分子量分布を有する、請求項１７に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
  32. 前記フカンは、分布の少なくとも３１％ｗ／ｗが１６００ｋＤａ超となっている分子量分布を有する、請求項１７に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
  33. 前記フカンが１００ｋＤａより大きい重量平均分子量を有する、請求項１７〜請求項３２のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
  34. 前記フカンが２００ｋＤａより大きい重量平均分子量を有する、請求項１７〜請求項３２のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
  35. 前記フカンが５００ｋＤａより大きい重量平均分子量を有する、請求項１７〜請求項３２のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
  36. 前記フカンの硫酸化レベルが約２０％ｗ／ｗ〜６０％ｗ／ｗである、請求項１〜請求項３５のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
  37. 前記フカンの硫酸化レベルが約３０％ｗ／ｗ〜５５％ｗ／ｗである、請求項１〜請求項３５のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
  38. 前記フカンの硫酸化レベルが約３２％ｗ／ｗ〜５２％ｗ／ｗである、請求項１〜請求項３５のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
  39. 前記フカンの総炭水化物含有量が２７％ｗ／ｗ〜８０％ｗ／ｗである、請求項１〜請求項３５のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
  40. 前記フカンの総フコース含有量が前記総炭水化物含有量に対する割合として約３０％ｗ／ｗ以上である、請求項３９に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
  41. 前記フカンの総フコース含有量が前記総炭水化物含有量に対する割合として約５０％ｗ／ｗ以上である、請求項３９に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
  42. 前記フカンの総フコース含有量が前記総炭水化物含有量に対する割合として約７０％ｗ／ｗ以上である、請求項３９に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
  43. 前記フカンの総フコース含有量が前記総炭水化物含有量に対する割合として約８０％ｗ／ｗ以上である、請求項３９に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
  44. 前記フカンの総フコース含有量が前記総炭水化物含有量に対する割合として約９０％ｗ／ｗ以上である、請求項３９に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
  45. 前記フカンの総フコース含有量が前記総炭水化物含有量に対する割合として約９５％ｗ／ｗ以上である、請求項３９に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
  46. 前記フカンの、前記総炭水化物含有量に対する割合としての総ガラクトース含有量が、約６０％ｗ／ｗ未満である、請求項３９に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
  47. 前記フカンの、前記総炭水化物含有量に対する割合としての総ガラクトース含有量が、約２％ｗ／ｗ〜約２０％ｗ／ｗである、請求項３９に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
  48. 前記フカンの、前記総炭水化物含有量に対する割合としての総ガラクトース含有量が、約１０％ｗ／ｗ未満である、請求項３９に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
  49. 前記フカン−低エンドトキシン組成物が、水に５０ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解される場合に約４ｃＰ〜５０ｃＰの粘度を有する、請求項１〜請求項４８のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
  50. 前記フカン−低エンドトキシン組成物が、水に５０ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解される場合に約１０ｃＰ〜４０ｃＰの粘度を有する、請求項１〜請求項４８のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
  51. 前記フカン−低エンドトキシン組成物が、水に５０ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解される場合に約１５ｃＰ〜３０ｃＰの粘度を有する、請求項１〜請求項４８のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
  52. 前記フカン−低エンドトキシン組成物が、白色固体である、請求項１〜請求項５１のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
  53. 前記フカン−低エンドトキシン組成物が、水に１ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解される場合に透明無色である溶液を形成する、請求項１〜請求項５２のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
  54. 前記フカンのアセチル含有量が約５％ｗ／ｗ未満である、請求項１〜請求項５３のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
  55. 前記フカンのアセチル含有量が約２％ｗ／ｗ未満である、請求項１〜請求項５３のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
  56. ５ｍｍのコールドプローブを備えた６００ＭＨｚ分光計により、溶媒シグナルを抑制しつつ７０℃で、各回２５６〜５１２回の走査として８ずつ回数を増加させつつ、炭素次元における１０〜３０ｐｐｍの範囲で、２Ｄ １Ｈ−１３Ｃ異核多量子コヒーレンスによって測定される場合に、前記フカンの有するアセチル含有量が実質的に０％ｗ／ｗである、請求項１〜請求項５３のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物。
  57. 動物における線維性癒着を処置する方法であって、前記線維性癒着を阻害するために請求項１〜請求項５６のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物を選択すること、及び前記動物の創傷の部位に０．５ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの用量範囲を含む治療上有効量の前記フカン−低エンドトキシン組成物を投与すること、を含む方法。
  58. 請求項１〜請求項５６のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物を選択することを含む、動物における線維性癒着の処置のための剤。
  59. 線維性癒着を阻害するために請求項１〜請求項５６のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物を選択すること、及び動物の創傷の部位に０．５ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの用量範囲を含む治療上有効量の前記フカン−低エンドトキシン組成物を投与すること、を含む、前記動物における線維性癒着の処置のための剤。
  60. 線維性癒着のための治療薬の製造のための、請求項１〜請求項５６のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物の使用。
  61. 請求項１〜請求項５６のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物を作製することを含む方法。
  62. 請求項１〜請求項５６のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物を使用することを含む方法。
  63. 前記使用することが線維性癒着を処置することを含む請求項６２に記載の方法。
  64. 医学的に許容しうる緩衝剤又は希釈剤の中に治療上有効量の請求項１〜請求項５６のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物を含む、医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン組成物。
  65. 請求項６４に記載の医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン組成物を含み、前記医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシンの投与物（dose）が２５０ＥＵ以下のエンドトキシンレベルを有する、医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン投与物（dosage）。
  66. 請求項６４に記載の医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン組成物を含み、前記医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシンの投与物（dose）が２５０ＥＵ未満のエンドトキシンレベルを有する、医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン投与物（dosage）。
  67. 請求項６４に記載の医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン組成物を含み、前記医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシンの投与物（dose）が５０ＥＵ未満のエンドトキシンレベルを有する、医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン投与物（dosage）。
  68. 請求項６４に記載の医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン組成物を含み、前記医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシンの投与物（dose）が２０ＥＵ以下のエンドトキシンレベルを有する、医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン投与物（dosage）。
  69. 請求項６４に記載の医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン組成物を含み、前記医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシンの投与物（dose）が２０ＥＵ未満以下のエンドトキシンレベルを有する、医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン投与物（dosage）。
  70. 請求項６４に記載の医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン組成物を含み、前記医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシンの投与物（dose）が１０ＥＵ未満以下のエンドトキシンレベルを有する、医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン投与物（dosage）。
  71. 請求項６４に記載の医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン組成物を含み、前記医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシンの投与物（dose）が２ＥＵ以下のエンドトキシンレベルを有する、医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン投与物（dosage）。
  72. 請求項６４に記載の医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン組成物を含み、前記医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシンの投与物（dose）が２ＥＵ未満のエンドトキシンレベルを有する、医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン投与物（dosage）。
  73. 請求項６４に記載の医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン組成物を含み、前記医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシンの投与物（dose）が１ＥＵ未満のエンドトキシンレベルを有する、医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン投与物（dosage）。
  74. 請求項６４に記載の医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン組成物を含み、前記医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシンの投与物（dose）が０．１ＥＵ未満のエンドトキシンレベルを有する、医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン投与物（dosage）。
  75. 請求項６４に記載の医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン組成物を含み、前記医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシンの投与物（dose）が０．０１ＥＵ未満のエンドトキシンレベルを有する、医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン投与物（dosage）。
  76. フカンの少なくとも６０％ｗ／ｗが１００ｋＤａ超となっている分子量分布、３００ｋＤａ〜５，０００ｋＤａの重量平均分子量、２０％ｗ／ｗ〜６０％ｗ／ｗの硫酸化レベル、３０％ｗ／ｗ〜８０％ｗ／ｗの総炭水化物含有量、及び前記総炭水化物含有量に対する割合として３０％ｗ／ｗ〜１００％ｗ／ｗのフコース含有量を有するフカンを前記フカン−低エンドトキシン組成物が含む、請求項６５〜請求項７５のいずれか一項に記載の医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン投与物（dosage）。
  77. フカンの少なくとも９０％ｗ／ｗが１００ｋＤａ超となっている分子量分布、６００ｋＤａ〜１，８００ｋＤａの重量平均分子量、３５％ｗ／ｗ〜６０％ｗ／ｗの硫酸化レベル、４０％ｗ／ｗ〜６５％ｗ／ｗの総炭水化物含有量、及び前記総炭水化物含有量に対する割合として８０％ｗ／ｗ以上のフコース含有量を有するフカンを前記フカン−低エンドトキシン組成物が含む、請求項６５〜請求項７５のいずれか一項に記載の医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン投与物（dosage）。
  78. フカンの少なくとも９０％ｗ／ｗが１００ｋＤａ超となっている分子量分布、６００ｋＤａ〜１，８００ｋＤａの重量平均分子量、３５％ｗ／ｗ〜５２％ｗ／ｗの硫酸化レベル、４０％ｗ／ｗ〜６５％ｗ／ｗの総炭水化物含有量、及び前記総炭水化物含有量に対する割合として８０％ｗ／ｗ以上のフコース含有量を有するフカンを前記フカン−低エンドトキシン組成物が含む、請求項６５〜請求項７５のいずれか一項に記載の医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン投与物（dosage）。
  79. 動物における状態又は疾患を処置する方法であって、前記状態又は前記疾患を処置するために請求項６４に記載の医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン組成物を選択すること、及び前記動物に約０．５ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇを含む治療上有効量の前記フカンを投与すること、を含む方法。
  80. 動物における状態又は疾患を処置する方法であって、前記状態又は前記疾患を処置するために請求項６４に記載の医学的に許容しうるフカン−低エンドトキシン組成物を選択すること、及び前記動物に約０．０４ｍｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇを含む治療上有効量の前記フカンを投与すること、を含む方法。
  81. 前記治療上有効量が約０．２ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇである、請求項８０に記載の方法。
  82. 前記治療上有効量が約１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇである、請求項７９又は請求項８０に記載の方法。
  83. 前記治療上有効量が約１．５ｍｇ／ｋｇ〜３ｍｇ／ｋｇである、請求項７９又は請求項８０に記載の方法。
  84. 前記治療上有効量が約５ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇである、請求項７９又は請求項８０に記載の方法。
  85. 前記状態又は前記疾患が、前記動物における標的部位における線維性癒着であり、前記投与が、前記標的部位に前記治療上有効量を投与することを含む、請求項７９〜請求項８４のいずれか一項に記載の方法。
  86. 請求項１〜請求項５６のいずれか一項に記載のフカン−低エンドトキシン組成物を約０．０２ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬ含む医療組成物であって、動物における疾患又は状態を処置するために構成され且つ組成される、医療組成物。
  87. 前記フカン−低エンドトキシン組成物を約０．５ｍｇ／ｍＬ〜５ｍｇ／ｍＬ含む請求項８６に記載の医療組成物。
  88. 前記フカン−低エンドトキシン組成物を約２．５ｍｇ／ｍＬ含む請求項８６に記載の医療組成物。
  89. 前記医療組成物が医療デバイスである、請求項８６〜請求項８８のいずれか一項に記載の医療組成物。
  90. 前記医療組成物が液体医療デバイスである、請求項８６〜請求項８８のいずれか一項に記載の医療組成物。
  91. 前記医療組成物が医薬組成物である、請求項８６〜請求項８８のいずれか一項に記載の医療組成物。
  92. 前記医療組成物が液体医薬組成物である、請求項８６〜請求項８８のいずれか一項に記載の医療組成物。
  93. 前記疾患又は前記状態が線維性癒着である、請求項８６〜請求項９２のいずれか一項に記載の医療組成物。
  94. 動物における疾患又は状態を処置するための約０．０１ｍＬ／ｋｇ〜１５ｍＬ／ｋｇを含む用量範囲の請求項８６〜請求項９３のいずれか一項に記載の医療組成物の使用。
  95. 動物における疾患又は状態を処置するための約０．０３ｍＬ／ｋｇ〜４ｍＬ／ｋｇを含む用量範囲の請求項８６〜請求項９３のいずれか一項に記載の医療組成物の使用。
  96. 動物における疾患又は状態を処置するための約０．０６ｍＬ／ｋｇ〜２ｍＬ／ｋｇを含む用量範囲の請求項８６〜請求項９３のいずれか一項に記載の医療組成物の使用。
  97. 動物における疾患又は状態を処置するための約２ｍＬ／ｋｇ〜４ｍＬ／ｋｇを含む用量範囲の請求項８６〜請求項９３のいずれか一項に記載の医療組成物の使用。
  98. 患者における選択された疾患又は状態を処置するための方法であって、患者における前記選択された疾患もしくは状態を含むか又は前記選択された疾患もしくは状態に罹患しやすいといえる（reasonably susceptible）選択された標的部位を同定すること、及びその後に、前記患者における標的部位に請求項８６〜請求項９３のいずれか一項に記載の医療組成物を投与することを含む方法。
  99. 前記疾患又は前記状態が線維性癒着である、請求項９８に記載の方法。
  100. 前記標的部位が手術部位であり、前記投与がａ）前記手術部位における手術創を開けた後、ｂ）手術中、及びｃ）前記手術創を閉じた後、のうち少なくとも１つにおいて行われる、請求項９８又は請求項９９に記載の方法。
  101. 前記投与が手術後且つ前記手術創を閉じる前に行われる、請求項９８に記載の方法。
  102. 前記投与が３分間未満かかる、請求項１０１に記載の方法。
  103. 前記投与が２分間未満かかる、請求項１０１に記載の方法。
  104. 前記投与が１分間未満かかる、請求項１０１に記載の方法。
  105. 前記標的部位が、病変、擦過傷及び傷害部位のうち少なくとも１つである、請求項９８〜請求項１０４のいずれか一項に記載の方法。
  106. 前記標的部位が、骨盤腔、腹腔、背側腔、頭蓋腔、脊椎腔、腹部腔、胸腔、胸膜腔、心膜腔、皮膚、関節、筋肉、腱及び靱帯のうち少なくとも１つである、請求項９８〜請求項１０５のいずれか一項に記載の方法。
  107. フカン−低エンドトキシン組成物を得るために出発フカン組成物から不純物を除去する方法であって、
    不純物を含む出発フカン組成物を提供すること、
    凝集助剤を前記出発フカン組成物に添加して反応混合物を生成すること、
    前記反応混合物を加熱することによって前記不純物を凝集させて、凝集した不純物を生成すること、及び
    前記凝集した不純物を除去すること
    を含む方法。
  108. 前記出発フカン組成物を提供することは、前記出発フカン組成物を溶液として提供することを含む、請求項１０７に記載の方法。
  109. 不純物が低減された溶液中の前記フカン−低エンドトキシン組成物を回収することをさらに含む、請求項１０７に記載の方法。
  110. 前記不純物を凝集させることが、大気圧を超える圧力において前記反応混合物を加熱することを含む、請求項１０７に記載の方法。
  111. 前記凝集助剤は塩を含む、請求項１０７に記載の方法。
  112. 前記塩は、アルカリ金属、アルカリ土類金属、アルミニウム及び／又はアンモニウムの塩化物、臭化物、ヨウ化物、フッ化物、硫酸塩、亜硫酸塩、炭酸塩、重炭酸塩、リン酸塩、硝酸塩、亜硝酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ケイ酸塩及び／又はシアン化物を含む、請求項１１１に記載の方法。
  113. 前記凝集助剤は塩基を含む、請求項１０７に記載の方法。
  114. 前記塩基は、アルカリ金属、アルカリ土類金属、アルミニウム及び／又はアンモニウムの水酸化物及び／又は酸化物を含む、請求項１１３に記載の方法。
  115. 前記フカン−低エンドトキシン組成物は、前記出発フカン組成物よりもエンドトキシンの含有量が少ない、請求項１０７に記載の方法。
  116. フカン−低エンドトキシン組成物を得るために出発フカン組成物から不純物を除去する方法であって、
    エンドトキシンを含有する不純物を含む出発フカン組成物を提供すること、及び
    タンジェンシャルフロー濾過フィルタを通してのタンジェンシャルフロー濾過に前記溶液を供して、前記出発フカン組成物よりもエンドトキシンの含有量が少ないフカン−低エンドトキシン組成物を含む保持フカン組成物（retentate fucan composition）を生成すること
    を含む方法。
  117. 不純物が低減された溶液中の前記フカン−低エンドトキシン組成物を回収することをさらに含む、請求項１１６に記載の方法。
  118. 前記タンジェンシャルフロー濾過が１００ｋＤａタンジェンシャルフロー濾過フィルタを通して実施される、請求項１１６又は請求項１１７に記載の方法。
  119. フカン−低エンドトキシン組成物を得るために出発フカン組成物から不純物を除去する方法であって、
    不純物と、細胞及びエンドトキシン集合体（aggregation）を破壊することが可能である破壊剤とを含む出発フカン組成物を溶液中に提供すること、及び
    タンジェンシャルフロー濾過フィルタを通してのタンジェンシャルフロー濾過に前記溶液を供して、前記フカン−低エンドトキシン組成物及び残存する破壊剤を含む保持フカン組成物を生成すること
    を含む方法。
  120. タンジェンシャルフロー濾過フィルタを通してのンジェンシャルフロー濾過によって前記残存する破壊剤を除去して、前記フカン−低エンドトキシン組成物を含有する第２保持フカン組成物（second retentate fucan composition）を生成することをさらに含む、請求項１１９に記載の方法。
  121. 前記破壊剤を沈殿させることができる沈殿剤を用いて前記保持フカン組成物を処理することによって前記残存する破壊剤を除去して、前記破壊剤の沈殿物及び上清フカン組成物を生成すること、及び
    前記破壊剤の前記沈殿物を前記上清フカン組成物から分離すること
    をさらに含む、請求項１１９に記載の方法。
  122. 不純物が低減された溶液中の前記フカン−低エンドトキシン組成物を回収することをさらに含む、請求項１１９〜請求項１２１のいずれか一項に記載の方法。
  123. 前記破壊剤は少なくとも１つの界面活性剤を含む、請求項１１９〜請求項１２２のいずれか一項に記載の方法。
  124. 前記界面活性剤はアニオン性界面活性剤である、請求項１２３に記載の方法。
  125. 前記界面活性剤はカチオン性界面活性剤である、請求項１２３に記載の方法。
  126. 前記界面活性剤は非イオン性界面活性剤である、請求項１２３に記載の方法。
  127. 前記界面活性剤は、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、塩化ベンザルコニウム、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ１００、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ１１４及びデオキシコール酸ナトリウムのうち少なくとも１つを含む、請求項１２３に記載の方法。
  128. 前記沈殿剤は、塩化カリウム、水酸化カリウム、塩化カルシウム、塩化バリウム及び炭酸カルシウムのうち少なくとも１つを含む、請求項１２１〜請求項１２７のいずれか一項に記載の方法。
  129. 前記フカン−低エンドトキシン組成物は、前記出発フカン組成物よりもエンドトキシンの含有量が少ない、請求項１１９〜請求項１２８のいずれか一項に記載の方法。
  130. フカン−低エンドトキシン組成物を得るために出発フカン組成物から不純物を除去する方法であって、
    固体である出発フカン組成物と、不純物を溶解するように構成されているがフカンを溶解できない抽出媒体とを提供すること、
    前記出発フカン組成物と前記抽出媒体とを混合して前記フカン−低エンドトキシン組成物と前記抽出媒体との混合物を作成すること、及び
    前記抽出媒体から前記フカン−低エンドトキシン組成物を分離すること
    を含む方法。
  131. 固体である前記フカン−低エンドトキシン組成物を回収することをさらに含む、請求項１３０に記載の方法。
  132. 前記抽出媒体は、相対極性が０．７６５未満である有機溶媒を少なくとも１種を含む、請求項１３０に記載の方法。
  133. 前記有機溶媒は、エタノール、イソプロパノール、メタノール、ベンゼン、ジエチルエーテル、デカメチルシクロ−ペンタシロキサン、酢酸エチル、ブタノール、ヘキサン、ヘプタン、ヘプタノール、オクタノール及びデカノールのうち少なくとも１つを含む、請求項１３２に記載の方法。
  134. 前記抽出媒体は、塩基、界面活性剤及び酸化剤のうち少なくとも１つをさらに含む、請求項１３２に記載の方法。
  135. 固体である前記出発フカン組成物を提供することは、溶液から前記出発フカン組成物を沈殿させることを含む、請求項１３０に記載の方法。
  136. 前記フカン−低エンドトキシン組成物は、前記出発フカン組成物よりもエンドトキシンの含有量が少ない、請求項１３０に記載の方法。
  137. フカン−低エンドトキシン組成物を得るために出発フカン組成物から不純物を除去する方法であって、
    懸濁不純物を含む不純物を含有する出発フカン組成物を溶液中に提供すること、
    イオン性多価不純物沈殿剤を用いて前記不純物を前記溶液から沈殿させることにより、懸濁不純物と沈殿不純物と上清溶液との混合物を生成すること、及び
    前記上清溶液から前記懸濁不純物及び前記沈殿不純物を分離すること
    を含む方法。
  138. 前記フカン−低エンドトキシン組成物を含有する前記上清溶液を回収することをさらに含む、請求項１３７に記載の方法。
  139. 前記イオン性多価不純物沈殿剤は二価又は三価のカチオンの塩を含む、請求項１３７に記載の方法。
  140. 前記塩は、塩化物、臭化物、ヨウ化物、フッ化物、硫酸塩、亜硫酸塩、炭酸塩、重炭酸塩、リン酸塩、硝酸塩、亜硝酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、ケイ酸塩及び／又はシアン化物である、請求項１３９に記載の方法。
  141. 前記カチオンは、アルカリ土類金属、亜鉛、アルミニウム、銅及び／又は鉄である、請求項１３９に記載の方法。
  142. 前記不純物沈殿剤は、二価又は三価のカチオンの塩基を含む、請求項１３７に記載の方法。
  143. 前記塩基は、アルカリ土類金属、亜鉛、アルミニウム、銅及び／又は鉄の、水酸化物及び／又は酸化物である、請求項１４２に記載の方法。
  144. 前記上清溶液から前記懸濁不純物及び前記沈殿不純物を分離することは、懸濁不純物と沈殿不純物と上清溶液との前記混合物に凝集剤を添加することにより、前記懸濁不純物及び前記沈殿不純物を凝集させることを含む、請求項１３７〜請求項１４３のいずれか一項に記載の方法。
  145. 前記凝集剤は、硫酸アルミニウムカリウム、硫酸アルミニウムナトリウム、硫酸アンモニウムアルミニウム、塩化カルシウム、リン酸ナトリウム、水酸化アルミニウム、塩化アルミニウム、塩化第二鉄、硫酸第二鉄、硫酸第一鉄、ケイ酸ナトリウム、ケイ酸カルシウム、リン酸カルシウム、塩化亜鉛、炭酸カルシウム、重炭酸カルシウム、硫酸カリウム、リン酸マグネシウム、アクリルアミド、アクリル酸、アルミニウムクロロハイドレート、ポリ塩化アルミニウム、タンニン、ホルムアルデヒド、メラミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルアクリレートメチルクロライド、第４級Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルメタクリレートメチルクロライド及びポリジアリルジメチル−アンモニウムクロライドのうち少なくとも１つを含む、請求項１４４に記載の方法。
  146. 約７〜１４のｐＨを維持することをさらに含む、請求項１３７〜請求項１４５のいずれか一項に記載の方法。
  147. 前記ｐＨを維持することは、塩基を添加することを含む、請求項１４６に記載の方法。
  148. 前記フカン−低エンドトキシン組成物は、前記出発フカン組成物よりもエンドトキシンの含有量が少ない、請求項１３７〜請求項１４７のいずれか一項に記載の方法。
  149. フカン−低エンドトキシン組成物を得るために出発フカン組成物から不純物を除去する方法であって、
    不純物を含む出発フカン組成物を提供すること、
    前記出発フカン組成物のｐＨを約８〜１４に調整すること、
    細胞成分を溶解するように構成されている細胞破壊剤を前記出発フカン組成物に添加して、前記細胞破壊剤と、生体分子溶解物と、前記出発フカン組成物とを含む反応混合物を生成すること、及び
    前記細胞破壊剤及び生体分子溶解物を前記反応混合物から除去すること
    を含む方法。
  150. 前記出発フカン組成物を提供することは、溶液である前記出発フカン組成物を提供することを含む、請求項１４９に記載の方法。
  151. 不純物が低減された溶液中の前記フカン−低エンドトキシン組成物を回収することをさらに含む、請求項１４９に記載の方法。
  152. 前記細胞破壊剤は界面活性剤を含む、請求項１４９に記載の方法。
  153. 前記界面活性剤はアニオン性界面活性剤である、請求項１５２に記載の方法。
  154. 前記界面活性剤はカチオン性界面活性剤である、請求項１５２に記載の方法。
  155. 前記界面活性剤は非イオン性界面活性剤である、請求項１５２に記載の方法。
  156. 前記界面活性剤は、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、塩化ベンザルコニウム、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ１００、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ１１４、Ｂｒｉｊ（登録商標）界面活性剤、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）界面活性剤、デオキシコール酸ナトリウム及びアルキルベンゼンスルホネートのうち少なくとも１つを含む、請求項１５２に記載の方法。
  157. 前記細胞破壊剤及び生体分子溶解物を除去することは、前記細胞破壊剤及び生体分子溶解物を凝集させるために構成された凝集剤を前記混合物に添加することを含む、請求項１４９〜請求項１５６のいずれか一項に記載の方法。
  158. 前記細胞破壊剤を除去することは、前記細胞破壊剤を前記反応混合物に不溶にすることができる沈殿剤を前記反応混合物に添加して、沈殿物を生成することを含む、請求項１４９〜請求項１５６のいずれか一項に記載の方法。
  159. 前記生体分子溶解物を除去することは、前記生体分子溶解物を前記反応混合物に不溶にすることができるように構成された沈殿剤を前記反応混合物に添加して、沈殿物を生成することを含む、請求項１４９〜請求項１５８のいずれか一項に記載の方法。
  160. 前記沈殿物を凝集させるために構成された凝集剤を前記反応混合物に添加することをさらに含む、請求項１５８〜請求項１５９のいずれか一項に記載の方法。
  161. 前記凝集剤は、硫酸アルミニウムカリウム、硫酸アルミニウムナトリウム、硫酸アンモニウムアルミニウム、塩化カルシウム、リン酸ナトリウム、水酸化アルミニウム、塩化アルミニウム、塩化第二鉄、硫酸第二鉄、硫酸第一鉄、ケイ酸ナトリウム、ケイ酸カルシウム、リン酸カルシウム、塩化亜鉛、炭酸カルシウム、重炭酸カルシウム、硫酸カリウム、リン酸マグネシウム、アクリルアミド、アクリル酸、アルミニウムクロロハイドレート、ポリ塩化アルミニウム、タンニン、ホルムアルデヒド、メラミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルアクリレートメチルクロライド、第４級Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルメタクリレートメチルクロライド及びポリジアリルジメチル−アンモニウムクロライドのうち少なくとも１つを含む、請求項１５７〜請求項１６０のいずれか一項に記載の方法。
  162. 前記アニオン性界面活性剤を除去することはアニオン吸着を含む、請求項１５３に記載の方法。
  163. 前記カチオン性界面活性剤を除去することはカチオン吸着を含む、請求項１５４に記載の方法。
  164. 前記非イオン性界面活性剤を除去することはミセル相分離を含む、請求項１５５に記載の方法。
  165. 前記界面活性剤を除去することは疎水性吸着を含む、請求項１５２に記載の方法。
  166. 前記界面活性剤を除去することは、
    前記界面活性剤の濃度が所定の濃度未満になるまで前記反応混合物を希釈すること、及び
    前記界面活性剤を含む前記反応混合物を、分子量カットオフが前記界面活性剤の最大分子量を超えるタンジェンシャルフロー濾過フィルタによる透析濾過に供すること
    を含む、請求項１５２に記載の方法。
  167. 前記出発フカン組成物を提供した後且つ前記細胞破壊剤を除去する前に、キレート剤を前記反応混合物に添加することをさらに含む、請求項１４９〜請求項１６６のいずれか一項に記載の方法。
  168. 前記キレート剤は、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、２，３−ジメルカプト−１−プロパノール、エチレンジアミン、ポルフィン及び／又はクエン酸を含む、請求項１６７に記載の方法。
  169. 前記細胞破壊剤を除去する前に酸化剤反応制御剤（oxidant-quenching agent）を前記反応混合物に添加して、前記反応混合物中の酸化剤の反応を制御（quench）することをさらに含む、請求項１４９〜請求項１６８のいずれか一項に記載の方法。
  170. 前記出発フカン組成物を提供した後且つ前記細胞破壊剤を除去する前に、静菌剤（bacteriostatic agent）を前記反応混合物に添加することをさらに含む、請求項１４９〜請求項１６９のいずれか一項に記載の方法。
  171. 前記静菌剤は、亜硫酸ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、塩化ベンザルコニウム、エタノール及び／又はチオ尿素を含む、請求項１７０に記載の方法。
  172. 前記フカン−低エンドトキシン組成物は、前記出発フカン組成物よりもエンドトキシンの含有量が少ない、請求項１４９〜請求項１７１のいずれか一項に記載の方法。
  173. フカン−低エンドトキシン組成物を得るために出発フカン組成物からエンドトキシンを除去する方法であって、
    エンドトキシンを含む出発フカン組成物及びアニオン交換マクロ多孔性樹脂を提供すること、
    前記出発フカン組成物を前記アニオン交換マクロ多孔性樹脂によるアニオン交換に供して、前記フカン−低エンドトキシン組成物を生成すること
    を含む方法。
  174. 前記エンドトキシン集合体を破壊できる破壊剤によって前記出発フカン組成物を前処理することをさらに含む、請求項１７３に記載の方法。
  175. 前記出発フカン組成物を前記アニオン交換マクロ多孔性樹脂によるアニオン交換に供する前に前記出発フカン組成物を脱塩することをさらに含む、請求項１７３に記載の方法。
  176. 前記アニオン交換マクロ多孔性樹脂は、孔サイズが、前記出発フカン組成物中の前記エンドトキシンの平均流体力学半径を超えている、請求項１７３に記載の方法。
  177. 前記出発フカン組成物及び前記アニオン交換マクロ多孔性樹脂を提供することは、約１：１００〜約１０：１の前記出発フカン組成物：アニオン交換マクロ多孔性樹脂の質量比で前記出発フカン組成物及び前記アニオン交換マクロ多孔性樹脂を提供することを含む、請求項１７３に記載の方法。
  178. 前記質量比は約１：５０〜約１：１である、請求項１７７に記載の方法。
  179. 前記質量比は約１：１０〜約１：１である、請求項１７７に記載の方法。
  180. 前記出発フカン組成物はアニオン交換に約５分〜約１００時間の期間供される、請求項１７３〜請求項１７９のいずれか一項に記載の方法。
  181. 前記期間が約１時間〜約３０時間である、請求項１８０に記載の方法。
  182. 前記アニオン交換マクロ多孔性樹脂は第４級アミン基を含む、請求項１７３〜請求項１８１のいずれか一項に記載の方法。
  183. 前記アニオン交換マクロ多孔性樹脂は第１級アミン基、第２級アミン基及び第３級アミン基のうち少なくとも１つを含む、請求項１７３〜請求項１８１のいずれか一項に記載の方法。
  184. 前記アニオン交換マクロ多孔性樹脂は、スチレン、アガロース、デキストラン、アクリレート、メタクリレート、メタクリル酸メチル、メタクリル酸ブチル、ジビニルベンゼン、セルロース、シリカ及びセラミックのうち少なくとも１つから構成される、請求項１７３〜請求項１８１のいずれか一項に記載の方法。
  185. 前記アニオン交換マクロ多孔性樹脂は孔サイズが約５ｎｍ〜約１０００ｎｍである、請求項１７３〜請求項１８１のいずれか一項に記載の方法。
  186. 前記孔サイズは約１０ｎｍ〜約１００ｎｍである、請求項１８５に記載の方法。
  187. 前記孔サイズは約１５ｎｍ〜約５０ｎｍである、請求項１８５に記載の方法。
  188. 前記アニオン交換マクロ多孔性樹脂は排除限界が約５ｋＤａ〜約５０，０００ｋＤａである、１７３〜請求項１８７のいずれか一項に記載の方法。
  189. 前記排除限界は約１，０００ｋＤａ〜約９，０００ｋＤａである、請求項１８８に記載の方法。
  190. 前記排除限界は約５ｋＤａ〜約２００ｋＤａである、請求項１８８に記載の方法。
  191. 前記フカン−低エンドトキシン組成物は、前記出発フカン組成物よりもエンドトキシンの含有量が少ない、請求項１７３〜請求項１９０のいずれか一項に記載の方法。
  192. フカン−低エンドトキシン組成物を得るために出発フカン組成物から不純物を除去する方法であって、
    不純物を含む出発フカン組成物を水性出発溶液中に提供すること、
    前記水性出発溶液を有機溶媒と混合して、水相有機相混合物を生成すること、及び
    前記水相有機相混合物を分離して水性部分及び有機部分を得ること
    を含む方法。
  193. 前記フカン−低エンドトキシン組成物を含有する前記水性部分を回収することをさらに含む、請求項１９２に記載の方法。
  194. 前記有機溶媒は、相対極性が０．７６５未満である有機溶媒を少なくとも１種を含む、請求項１９２に記載の方法。
  195. 前記有機溶媒は、エタノール、イソプロパノール、メタノール、ベンゼン、デカメチルシクロ−ペンタシロキサン、酢酸エチル、ヘキサン、ヘプタノール、オクタノール、デカノール、ヘプタン、酢酸イソブチル、アニソール、酢酸イソプロピル、１−ブタノール、酢酸ブチル、メチルイソブチルケトン、ペンタン、１−ペンタノール、エチルエーテル及び酢酸プロピルのうち少なくとも１つを含む、請求項１９２〜請求項１９４のいずれか一項に記載の方法。
  196. 前記フカン−低エンドトキシン組成物は、前記出発フカン組成物よりもエンドトキシンの含有量が少ない、請求項１９２に記載の方法。
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