KR20210036914A - 섬유성 유착 치료용 고순도 푸칸 - Google Patents

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이안 밀렛
세일리시 해레시 대스와니
해성 선
에일린 샤오 팅 양
호이 팅 웡
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Abstract

섬유성 유착을 억제하는 푸칸과 푸칸-함유 조성물을 위한 조성물, 방법, 시스템 등이 제공된다. 본원의 푸칸과 푸칸 조성물은 소정 수준의 원하는 소정 푸칸 성분을 갖는 정제/개질된 푸칸을 포함한다. 청구범위를 제외하고 또는 문맥으로부터 정제/개질된 푸칸이나 푸칸 조성물로 명확하게 제한되지 않는한 본원의 모든 푸칸/푸칸 조성물은 정제/개질된 것을 포함한다. 일부 실시예의 푸칸과 이를 함유한 조성물은 의료와 수술 용도에 적합하다. 푸칸과 푸칸 조성물은 공급원료 푸칸 조성물에서 발견되는 것과 같은 낮은 수준의 비-푸칸 성분이나 불순물을 갖는다. 이런 바람직하지 않은 성분이나 불순물은 예를 들어 푸칸에 결합된 원치않는 성분(예:이온, 공유결합, 수소결합 등) 및 화학적으로 및/또는 이온적으로 결합되지 않은 조성물내 화합물을 포함한다. 원치않는 푸칸 성분은 푸칸과 비교해 정량화될 수 있다(예, w/w). 비-푸칸 화합물 및 원치않는 푸칸 성분은 이후 본원에서 푸칸의 조성물 및/또는 푸칸을 포함한 조성물의 불순물로 총칭될 수 있다. 예를 들어, 이런 정제/개질된 푸칸은 불순물로 인한 푸칸의 의료적, 외과적 사용중의 위험한 합병증을 줄일 수 있다.

Description

섬유성 유착 치료용 고순도 푸칸
본원은 공동계류중인 미국 가특허출원 62,711,364(2018년 7 월 27 일 출원); 미국 가특허출원. 62,711,372(2018년 7월 27일 출원); 미국 가특허출원 62/711,335(2018년 7월 27일 출원); 미국 가특허출원 62/713,399(2018년 8월 1일 출원); 미국 가특허출원 62/722,135(2018 년 8 월 23 일 출원); 미국 가특허출원 62/755,311(2018년 11월 2일 출원); 미국 가특허출원 62/793,514(2019년 1월 17일 출원); 미국 가특허출원 62/861,223(2019년 6월 13일 출원); 공동 계류중인 미국 가특허출원62/713,392(2018년 8월 1일 출원); 미국 가특허출원 62/713,413(2018년 8월 1일 출원); 미국 가특허출원 62/722,137(2018년 8월 23일 출원); 미국 가특허출원 62/755,318(2018년 11월 2일 출원); 미국 가특허출원 62/861,228(2019년 6월 13일 출원); 공동 계류중인 미국 가특허출원 62/755,328(2018 년 11월 2일 출원); 미국 가특허출원 62/793,654(2019년 1월 17일 출원); 및 미국 가특허출원 62/861,235(2019년 6월 13일 출원)의 이익을 주장하고, 모든 출원은 전체가 참조로 본 명세서에 포함된다.
(후코이단을포함한) 푸칸은 황산화 다당류로, 일반적으로 많은 당기로 구성된 분자이며 당기에 부착된 황 원자를 갖고 있음을 의미한다. 주요 당기는 "푸코스"라 하는데, 이것은 6 개의 탄소 원자를 갖는 화학식 C6H12O5를 갖는 당이다. "후코이단"(또는 후코이딘)은 갈조류(해초)에서 유도된 푸칸을 나타낸다. 푸칸은 단독으로나 다른 당의 혼합물로, 예를 들어 자일로스, 갈락토스, 글루코스, 글루쿠론산 및/또는 만노스와 같은 당의 혼합물로 존재할 수 있다. 이런 다른 당은 푸칸과 함께 해조류나 기타 공급원에서 추출할 수 있다. 푸칸은 현재 본 명세서에서 언급된 갈조류(해조류), 해삼 등과 같은 천연 공급원으로부터 유래되지만, "푸칸"은 최종 공급원에 관계없이 본원에서 논의된 푸칸의 화학적 및 구조적 모티프를 갖는 중합체 분자를 포함한다.
후코이단은 Hizikia fusiforme, Himanthalia Elongata, Kjellmaniella crassifolia, Laminaria brasiliensis, Laminaria cichorioides, Laminaria hyperborea, Laminaria japonica, Laminaria saccharina, Lessonia trabeculata, Macrocystis pyrifera, Saccharina laponica, Saccharina laponica, Saccharina, Saccharina, confusum, Sargassum fusiforme 및 Undaria pinnatifida을 포함한 다양한 종의 갈조류로부터 얻을 수 있지만, 이에 한정되지도 않는다. 예로 든 종들은 모두 Phaeophyceae의 분류학적인 분류에 속하며 이들 종의 대부분은 Fucales 및 Laminariaceae 계통에 속한다.
후코이단을 포함한 푸칸은 섬유성 유착의 형성을 방지, 억제 및 치료하는 장벽 장치로서의 역할에 효과적인 것으로 나타났다. 푸칸은 다른 관련 질병 및 상태의 치료에도 효과적임이 밝혀졌다. 따라서, 원하는 분자량 분포 및/또는 황산화 수준을 갖도록 개질되는 푸칸을 포함한 전제된 푸칸의 제조에 대한 요구가 여전히 충족되지 않았다. 본원의 조성물, 시스템 및 방법 등은 이런저런 장점들을 제공한다.
섬유성 유착을 억제하는 푸칸과 푸칸-함유 조성물을 위한 조성물, 방법, 시스템 등이 제공된다. 본원의 푸칸과 푸칸 조성물은 소정 수준의 원하는 소정 푸칸 성분을 갖는 정제/개질된 푸칸을 포함한다. 청구범위를 제외하고 또는 문맥으로부터 정제/개질된 푸칸이나 푸칸 조성물로 명확하게 제한되지 않는한 본원의 모든 푸칸/푸칸 조성물은 정제/개질된 것을 포함한다. 일부 실시예의 푸칸과 이를 함유한 조성물은 의료와 수술 용도에 적합하다. 푸칸과 푸칸 조성물은 공급원료 푸칸 조성물에서 발견되는 것과 같은 낮은 수준의 비-푸칸 성분이나 불순물을 갖는다. 이런 바람직하지 않은 성분이나 불순물은 예를 들어 푸칸에 결합된 원치않는 성분(예:이온, 공유결합, 수소결합 등) 및 화학적으로 및/또는 이온적으로 결합되지 않은 조성물내 화합물을 포함한다. 원치않는 푸칸 성분은 푸칸과 비교해 정량화될 수 있다(예, w/w). 비-푸칸 화합물 및 원치않는 푸칸 성분은 이후 본원에서 푸칸의 조성물 및/또는 푸칸을 포함한 조성물의 불순물로 총칭될 수 있다. 예를 들어, 이런 정제/개질된 푸칸은 불순물로 인한 푸칸의 의료적, 외과적 사용중의 위험한 합병증을 줄일 수 있다.
본원의 조성물, 시스템, 방법 등은 푸칸 중합체 구조과 반대이온을 포함한 푸칸을 가질 수 있으며, 푸칸 중합체 구조는 본질적으로 푸코스, 갈락토스 및 설페이트를 포함하고, 푸칸은 약 17% 이상의 반대이온을 가지며, 푸칸의 푸코스, 갈락토스, 설페이트 및 반대이온의 총 함량은 90% w/w, 94% w/w, 95% w/w, 97% w/w, 99% w/w 또는 99.9% w/w 를 초과할 수 있다. 또는, 푸코스 함량이 25% w/w, 30% w/w, 35% w/w 초과하고, 갈락토스 함량은 10% w/w 또는 5% w/w 미만이며, 총 반대이온 함량은 17% w/w, 14% w/w, 10% w/w 또는 7% w/w 미만일 수도 있다.
반대이온은 알루미늄, 아르기닌, 벤자틴, 클로로프로카인, 콜린, 나트륨, 칼륨, 리튬, 암모늄, 에틸렌디아민, 디에틸아민, 디에탄올아민, 에탄올아민, 히스티딘, 라이신, N-메틸 글루카민, 메글루민, 프로카인, 트리에틸아민, 아연, 칼슘 및 마그네슘 중의 적어도 하나와 같은 약제학적으로 허용되는 반대이온일 수 있다. 약제학적으로 허용되는 반대이온은 기본적으로 나트륨과 칼륨 중 적어도 하나를 포함하거나, 구성될 수 있다.
푸칸은 본질적으로 다음으로 구성된 수성 겔투과 크로마토그래피 셋업을 사용해 측정할 때 분자량 분포의 적어도 60% w/w가 100kDa를 초과할 수 있다 :
유효 분자량 범위가 약 50kDa ~ 5,000kDa인 히드록실화 폴리메타크릴레이트 기반 겔로 충전된 7.8mm 내경의 300mm 분석 겔투과 크로마토그래피 컬럼 1개, 유효 분자량 범위가 약 1kDa ~ 6,000kDa인 하이드록실화 폴리메타크릴레이트 기반 겔로 충전된 내경7.8mm의 300mm 분석 겔투과 크로마토그래피 컬럼 1 개, 및 수산화 폴리메타크릴레이트 기반 젤로 충전된 내경 6mm의 40mm 가드 컬럼 1개로서, 약 30℃의 컬럼 구획에 들어있는 2개의 겔투과 크로마토그래피 컬럼과 1개의 가드 컬럼;
30℃의 굴절률 검출기;
0.6mL/min으로 실행되는 0.1M 질산나트륨 이동상; 및
피크 분자량이 약 2,200kDa인 첫 번째 덱스트란 표준, 약 720kDa 내지 760kDa의 피크 분자량을 갖는 두 번째 덱스트란 표준, 약 470kDa 내지 510kDa의 피크 분자량을 갖는 세 번째 덱스트란 표준, 약 370kDa 내지 410kDa의 피크 분자량을 갖는 네번째 덱스트란 표준, 약 180kDa 내지 220kDa의 피크 분자량을 갖는 다섯번째 덱스트란 표준, 및 피크 분자량이 약 40kDa 내지 55kDa인 여섯 번째 덱스트란 표준으로 구성된 피크 분자량 표준 곡선에 대한 정량화.
푸칸은 분자량 분포의 92% 또는 97%w/w 이상이 100kDa를 초과할 수 있다. 푸칸은 100kDa 초과의 중량 평균 분자량을 가질 수 있고 약 20%w/w 내지 60%w/w, 약 30%w/w 내지 55%w/w, 또는 약 35%w/w 내지 52%w/w의 황화 수준을 가질 수 있다. 총 탄수화물 함량은 27%w/w ~ 80%w/w 일 수 있다. 총 탄수화물 함량의 백분율로서 글루쿠론산, 포도당, 만노스, 람노스 및 자일로스 함량의 총량은 약 12%w/w 미만일 수 있다. 50mg/mL의 농도로 물에 용해되었을 때 푸칸은 약 4cP내지 50cP, 약 10cP내지 40cP, 또는 약 15cP내지 30cP의 점도를 가질 수 있다. 푸칸은 흰색 고체 일 수 있으며, 1mg/mL내지 1001mg/mL의 농도로 물에 용해되면 투명한 무색의 용액을 형성한다. 푸칸은 5%w/w 또는 2%w/w 미만의 아세틸 함량을 포함할 수 있다. 푸칸은 탄소 차원의 10-30ppm 범위에서, 256-512 스캔 마다 8증분으로, 5mm 콜드 프로브가 장착된 600MHz 분광기에서 용매 신호 억제를 사용하여 70℃에서 2D 1H-13C 이종핵 다중 양자 일관성으로 측정했을 때 실질적으로 0%w/w의 아세틸 함량을 포함할 수 있다.
푸칸을 제조하거나 사용하는 방법도 본원에 포함된다. 이 방법은 푸칸을 사용하여 섬유성 유착을 치료하는 것을 포함한다.
또, 의학적으로 허용되는 완충액이나 희석제에 치료학적 유효량의 푸칸을 포함한 의학적으로 허용되는 조성물뿐만 아니라 동물의 상태나 질병을 치료하기 위해 의학적으로 허용되는 조성물을 선택하고, 치료적 유효량의 푸칸을 동물에게 투여하는 것을 포함해 동물의 상태나 질병을 치료하는 방법이 본원에서 제공된다. 이런 투여는 약 0.5mg/kg 내지 50mg/kg 또는 약 0.04mg/kg 내지 25mg/kg의 푸칸을 동물에게 투여하는 것을 포함할 수 있다. 치료적 유효량이 약 0.2mg/kg 내지 10mg/kg, 1mg/kg 내지 5mg/kg, 1.5mg/kg 내지 3mg/kg, 또는 5mg/kg 내지 10mg/kg 일 수도 있다.
상태나 질병이 동물의 표적 부위의 섬유성 유착일 수 있고, 투여는 표적 부위에 치료적 유효량을 투여하는 것일 수 있다. 또한 약 0.02mg/mL 내지 100mg/mL의 푸칸을 포함한 의료 조성물도 동물의 질병이나 상태를 치료하도록 구성된다. 이런 의료 조성물은 약 0.5mg/mL 내지 5mg/mL의 푸칸이나 약 2.5mg/mL의 푸칸을 포함할 수 있다. 의료 조성물이 액체 의료기기, 액체 제약 조성물일 수도 있다. 질병이나 상태는 섬유성유착일 수 있다.
또한 동물의 질병이나 상태를 치료하는데, 제 49 항 내지 제 56 항 중 어느한 항의 의학적 조성물의 약 0.01 mL/kg 내지 15 mL/kg, 0.03 mL/kg 내지 4 mL/kg, 0.06 mL/kg 내지 2 mL/kg 또는 약 2 mL/kg내지 4mL/kg을 포함한 투여량 범위의 사용이 제시된다. 이 방법은 또한 환자의 표적 부위에 의료 조성물을 투여하는 것을 포함해 환자의 섬유성 유착을 치료하는 것을 포함한다. 표적 부위는 수술 부위 일 수 있고, 투여는 a) 수술 부위에서 수술 상처를 개봉한 후, b) 수술 중, c) 수술 상처를 닫은 후 중 적어도 하나에서할 수 있다. 투여는 수술 후 수술 상처를 닫기 전에할 수도 있으며 3 분, 2 분 또는 1 분 미만이 소요될 수 있다. 표적 부위는 병변, 마모 및 손상 부위 중 적어도 하나 일 수 있다. 표적 부위는 골반강, 복강, 등강, 두개강, 척추강, 복강, 흉강과 심낭강, 관절, 근육, 힘줄과 인대 중 적어도 하나에 위치할 수 있다.
또, 아래 단계들을 포함한 정제/개질된 푸칸을 얻기 위해 출발 푸칸 조성물로부터 불순물을 제거하는 방법이 본원에 포함된다:
불순물을 포함한 출발 푸칸 조성물을 제공하는 단계;
응집보조제를 출발 푸칸 조성물에 첨가하여 반응혼합물을 생성하는 단계;
반응혼합물을 가열해 불순물을 응집해 응집된 불순물을 생성하는 단계; 및
응집된 불순물을 제거하는 단계.
출발 푸칸 조성물을 제공하는 것은 용액으로서 출발 푸칸 조성물을 제공하는 것을 포함할 수 있고, 이 방법은 불순물이 감소된 용액에서 정제/개질된 푸칸을 수집하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 불순물을 응집시키는 것은 대기압을 초과하여 반응혼합물을 가열하는 것을 포함할 수 있으며, 응집보조제는 염화물, 브롬화물, 요오드화물, 불화물, 황산염, 아황산염, 탄산염, 중탄산염, 인산염, 질산염, 아질산염, 아세테이트, 구연산염, 규산염 및/또는 알칼리 금속, 알칼리 토금속, 알루미늄 및/또는 암모늄의 시안화물과 같은 염을 포함할 수 있다. 응집보조제는 알칼리 금속, 알칼리토 금속, 알루미늄 및/또는 암모늄의 수산화물 및/또는 산화물을 포함한 염기를 포함할 수 있다. 제거된 불순물은 입자, 지질, 지방산, 플로로타닌, 라미나린, 알기네이트, 단백질, 마이야르 반응생성물, 푸코잔틴, 엽록소, 박테리아, 세포 성분 및 DNA 중 적어도 하나를 포함할 수 있다.
정제/개질된 푸칸을 얻기 위해 출발 푸칸 조성물로부터 불순물을 제거하는 추가 방법은 다음을 포함할 수 있다:
고체로서의 출발 푸칸 조성물과, 불순물을 용해하는 푸칸을 용해할 수 없는 추출 매질을 제공하는 단계;
출발 푸칸 조성물을 추출 매질과 혼합하여 정제/개질된 푸칸과 추출 매질의 혼합물을 생성하는 단계; 및
추출 매체에서 정제/개질된 푸칸을 분리하는 단계.
이 방법은 정제/개질 푸칸을 고체로서 수집하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 추출 매질은 상대 극성이 0.765 미만인 하나 이상의 유기 용매를 포함할 수 있다. 상대 극성 값은 흡수 스펙트럼의 용매 이동을 측정하여 일반화할 수 있다(Christian Reichardt, Solvents and Solvent Effects in Organic Chemistry, Wiley-VCH Publishers, 3rd ed., 2003 참조). 유기 용매는 에탄올, 이소프로판올, 메탄올, 벤젠, 디에틸 에테르, 데카메틸시클로-펜타실록산, 에틸, 아세테이트, 부탄올, 헥산, 헵탄, 헵탄올, 옥탄올 및 데칸올 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 추출 매질은 염기, 세제 및 산화제 중 하나 이상을 추가로 포함할 수 있다. 고체 형태로 출발 푸칸 조성물을 제공하는 것은 용액으로부터 출발 푸칸 조성물을 침전시키는 것을 포함할 수 있다. 제거된 불순물은 입자, 지질, 지방산, 플로로타닌, 라미나린, 알기네이트, 단백질, 마이야르 반응생성물, 푸코잔틴, 엽록소, 박테리아, 세포 성분 및 DNA 중 적어도 하나를 포함할 수 있다.
정제/개질된 푸칸을 얻기 위해 출발 푸칸 조성물로부터 불순물을 제거하는 추가 방법은 다음을 포함할 수 있다 :
용액에 현탁된 불순물을 포함해, 불순물을 포함한 출발 푸칸 조성물을 제공하는 단계;
이온 다가 불순물 침전제를 사용하여 용액으로부터 불순물을 침전시켜 부유 불순물, 침전된 불순물 및 상청액의 혼합물을 생성하는 단계; 및
부유 불순물과 침전된 불순물을 상청액에서 분리하는 단계.
이 방법은 정제/개질된 푸칸을 포함한 상청액을 수집하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 이온 다가 불순물 침전제는 2가 또는 3가 양이온의 염을 포함할 수 있다. 염은 염화물, 브롬화물, 요오드화물, 불화물, 황산염, 아황산염, 탄산염, 중탄산염, 인산염, 질산염, 아질산염, 아세테이트, 구연산염, 규산염 및/또는 시안화물 일 수 있다. 양이온은 알칼리토 금속, 아연, 알루미늄, 구리 및/또는 철일 수 있다. 이온 다가 불순물 침전제는 2가 또는 3가 양이온의 염기를 포함할 수 있다. 염기는 알칼리 토금속, 아연, 알루미늄, 구리 및/또는 철의 수산화물 및/또는 산화물일 수 있다. 부유 불순물 및 침전된 불순물을 상청액으로부터 분리하는 것은 부유 불순물, 침전된 불순물 및 상청액의 혼합물에 응집제를 첨가해 부유 불순물과 침전된 불순물을 응집시키는 것을 포함할 수 있다. 응집제는 황산 알루미늄 칼륨; 황산 알루미늄 나트륨; 황산 알루미늄 암모늄; 염화칼슘; 인산 나트륨; 수산화 알루미늄; 염화 알루미늄; 염화 제 2 철; 황산 제 2 철; 황산 제1 철; 규산 나트륨; 규산 칼슘; 인산 칼슘; 염화 아연; 탄산 칼슘; 중탄산 칼슘; 황산 칼륨; 인산 마그네슘; 아크릴아미드; 아크릴산; 알루미늄 클로로하이드레이트; 폴리알루미늄 클로라이드; 타닌; 포름알데히드; 멜라민; N,N-디메틸아미노에틸 아크릴레이트 메틸 클로라이드; N,N-디메틸아미노에틸 메타크릴레이트 메틸 클로라이드 4 급; 및 폴리디알릴디메틸-암모늄 클로라이드 중의 하나 이상을 포함할 수 있다. 이 방법이 약 7 내지 14의 pH를 유지하는 것을 추가로 포함할 수 있다. pH를 유지하는 단계에서 염기의 첨가를 할 수 있다. 제거된 불순물은 입자, 지질, 지방산, 플로로탄닌, 라미나린, 알기네이트, 단백질, 마이야르 반응생성물, 푸코잔틴, 클로로필, 박테리아, 세포 성분 및 DNA 중 하나 이상을 포함할 수 있다.
정제/개질된 푸칸을 얻기 위해 출발 푸칸 조성물로부터 불순물을 제거하는 방법은 다음을 포함할 수 있다 :
불순물을 포함한 출발 푸칸 조성물을 제공하고;
출발 푸칸 조성물 pH를 약 8 내지 14로 조정하는 단계;
세포파괴제, 생체분자 용해물 및 출발 푸칸 조성물을 포함한 반응혼합물을 생성하기 위해 세포 성분을 용해하는 세포파괴제를 출발 푸칸 조성물에 첨가하는 단계; 및
반응혼합물에서 세포파괴제 및 생체분자 용해물을 제거하는 단계.
출발 푸칸 조성물을 제공하는 것은 용액으로서 출발 푸칸 조성물을 제공하는 것을 포함할 수 있고, 이 방법이 불순물이 감소된 용액에서 정제/개질된 푸칸을 수집하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 세포파괴제는 음이온 세제, 양이온 세제 또는 비이온 세제일 수 있는 세제를 포함할 수 있다. 세제는 나트륨 도데실 설페이트(SDS), 벤잘코늄 클로라이드, Triton X 100®, Triton X 114®, Brij® 세제, Tween® 세제, 나트륨 데옥시콜레이트 및 알킬벤젠설포네이트 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 세포파괴제와 생체분자 용해물을 제거하는 단계에서 세포파괴제와 생체분자 용해물을 응집하는 응집제를 반응혼합물에 첨가하는 것을 포함할 수 있다. 세포파괴제를 제거하는 단계에서 반응혼합물에 세포파괴제를 불용성으로 하여 침전물을 생성하는 침전제를 반응혼합물에 첨가할 수 있다. 생체분자 용해물을 제거하는 단계에서 반응혼합물에 생체분자 용해물을 불용성으로 하여 침전물을 생성하는 침전제를 반응혼합물에 첨가할 수도 있다. 이 방법이 침전물을 응집시키는 응집제를 반응혼합물에 첨가하는 단계를 더 포함할 수 있다. 응집제는 황산 알루미늄 칼륨; 황산 알루미늄 나트륨; 황산 알루미늄 암모늄; 염화칼슘; 인산 나트륨; 수산화 알루미늄; 염화 알루미늄; 염화 제 2 철; 황산 제 2 철; 황산 제1 철; 규산 나트륨; 규산 칼슘; 인산 칼슘; 염화 아연; 탄산 칼슘; 중탄산 칼슘; 황산 칼륨; 인산 마그네슘; 아크릴 아미드; 아크릴산; 알루미늄 클로로 하이드레이트; 폴리 알루미늄 클로라이드; 타닌; 포름 알데히드; 멜라민; N,N-디메틸 아미노 에틸 아크릴레이트 메틸 클로라이드; N,N-디메틸 아미노 에틸 메타 크릴 레이트 메틸 클로라이드 4 급; 및 폴리디알릴디메틸-암모늄 클로라이드 중의 하나 이상을 포함할 수 있다.
음이온 세제를 제거하는 단계에서 음이온 흡착을 할 수 있고; 양이온 세제를 제거하는 단계에서 양이온 흡착을 할 수 있으며; 비이온 세제를 제거하는 단계에서 미셀 상분리를 할 수 있고; 세제를 제거하는 단계에서 소수성 흡착을 할 수 있다. 세제를 제거하는 단계에서 다음을 포함할 수도 있다:
세제의 농도가 소정의 농도 이하가될 때까지 반응혼합물을 희석하는 단계; 및
세제를 포함한 반응혼합물을 세제의 최대 분자량을 초과하는 분자량 컷오프를 갖는 접선유동여과 필터를 통해 투석여과하는 단계.
이 방법은 또한 출발 푸칸 조성물을 제공한 후 세포파괴제를 제거하기 전에 반응혼합물에 킬레이트제를 첨가하는 단계를 더 포함할 수 있다. 킬레이트제는 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA), 2,3-디머캅토-1-프로판올, 에틸렌디아민, 포르핀 및/또는 시트르산을 포함할 수 있으며, 이 방법이 반응혼합물내 산화제를 급냉하도록 세포파괴제를 제거하기 전에 산화제-급냉제를 반응혼합물에 첨가하는 단계; 또는 출발 푸칸 조성물을 제공한 후 세포파괴제를 제거하기 전에 반응혼합물에 정균제를 첨가하는 단계를 더 포함할 수 있다. 정균제는 아황산나트륨, 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA), 염화 벤잘코늄, 에탄올 및/또는 티오우레아를 포함할 수 있다. 제거된 불순물은 입자, 지질, 지방산, 플로로타닌, 라미나린, 알기네이트, 단백질, 마이야르 반응생성물, 푸코잔틴, 엽록소, 박테리아, 세포 성분 및 DNA 중 적어도 하나를 포함할 수 있다.
정제/개질된 푸칸을 얻기 위해 출발 푸칸 조성물로부터 불순물을 제거하는 방법은 또한 다음을 포함할 수 있다 :
수성 출발 용액에 불순물을 포함하는 출발 푸칸 조성물을 제공하는 단계;
수성 출발 용액을 유기 용매와 혼합하여 수성-유기상 혼합물을 생성하는 단계; 및
수성-유기상 혼합물을 분리하여 수성 부분과 유기 부분을 구하는 단계.
이 방법이 정제/개질된 푸칸을 포함하는 수성 부분을 수집하는 것을 더 포함할 수 있다. 유기 용매는 0.765 미만의 상대 극성을 갖는 하나 이상의 유기 용매를 포함할 수 있으며, 이는 에탄올, 이소프로판올, 메탄올, 벤젠, 데카메틸시클로-펜타실록산, 에틸 아세테이트, 헥산, 헵탄올, 옥탄올, 데칸올, 헵탄, 이소부틸 아세테이트, 아니솔, 이소프로필 아세테이트, 1-부탄올, 부틸 아세테이트, 메틸이소부틸케톤, 펜탄, 1-펜탄올, 에틸 에테르 및 프로필 아세테이트 중 하나 이상일 수 있다. 제거된 불순물은 입자, 지질, 지방산, 플로로타닌, 라미나린, 알기네이트, 단백질, 마이야르 반응생성물, 푸코잔틴, 엽록소, 박테리아, 세포 성분 및 DNA 중 하나 이상을 포함할 수 있다.
출발 푸칸 조성물의 양이온 함량을 변경하는 방법은 다음을 포함할 수 있다 :
출발 용액에 출발 푸칸 조성물을 제공하는 단계; 및
잔류물 푸칸 조성물을 생성하기 위해 접선유동여과 필터를 통해 킬레이트제 용액으로 접선유동여과 필터를 통한 출발 용액을 투석여과하는 단계.
킬레이트제는 에틸렌디아민-테트라아세트산(EDTA), 2,3-디머캅토-1-프로판올, 에틸렌디아민, 포르핀 또는 시트르산 중 적어도 하나를 포함할 수 있다. 잔류물 푸칸 조성물은 본질적으로 나트륨 및/또는 칼륨으로 구성된 양이온 함량을 포함할 수 있다.
정제/개질된 푸칸을 얻기 위해 출발 푸칸 조성물로부터 불순물을 제거하는 방법은 다음을 추가로 포함할 수 있다:
불순물을 포함하는 출발 푸칸 조성물을 제공하는 단계;
초임계추출기에 출발 푸칸 조성물을 70bar 이상의 압력과 30℃ 이상의 온도로 두는 단계;
초임계 유체로 불순물을 제거하기 위해 초임계추출기에 초임계 유체를 채우는 단계; 및
일정 시간 후 추출된 불순물을 포함하는 초임계 유체를 제거하는 단계.
이 방법은 초임계추출기에 남아있는 정제/개질된 푸칸을 수집하는 단계를 더 포함할 수 있는데; 압력은 약 70bar내지 2000bar이고 온도는 약 30C내지 300C이다. 출발 푸칸 조성물은 액체나 고체일 수 있다. 초임계 유체는 이산화탄소, 에탄올, 에탄, 염산, 불화 수소산, 황산 및 질산 중 적어도 하나를 포함할 수 있다. 소정의 시간이 약 5분 내지 50시간일 수 있다. 제거된 불순물은 입자, 지질, 지방산, 플로로타닌, 라미나린, 알기네이트, 단백질, 마이야르 반응생성물, 푸코잔틴, 엽록소, 박테리아, 세포 성분 및 DNA 중 적어도 하나를 포함할 수 있다.
이하 첨부 도면을 참조하여 본 발명에 대해 자세히 설명하겠지만, 이런 설명은 어디까지나 예를 든 것일 뿐이다.
도 1은 접선유동여과에서 킬레이트제를 사용하여 출발 푸칸 조성물의 양이온 함량을 변경하고 저분자량 비-푸칸 성분을 제거하기위한 예시적인 시스템을 개략적으로 도시한다.
도 2A는 본원의 방법에 따라 처리된 특정 푸칸이 푸칸에 대한 구조적 변화를 겪는다는 것을 입증하는 NMR 결과를 보여한다.
도 2B는 본원의 방법에 따라 처리된 특정 푸칸이 푸칸에 대한 구조적 변화를 겪는다는 것을 입증하는 2-D NMR 결과를 보여준다.
도면은 본원의 조성물과 방법 등의 일 실시예를 보여준다. 본원의 시스템, 방법 등의 실시예는 다른 특징이나 단계를 가질 수도 있지만, 도면에는 표시되지 않는다. 본 명세서에 제시된 예시는 하나 이상의 형태로 시스템, 방법 등의 실시예를 예시하고, 이런 예시는 어떠한 방식으로든 본 발명의 내용의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다. 본 명세서의 실시예는 완전하지 않으며 예를 든 것일 뿐이고, 다음의 상세한 설명에 개시된 정확한 형태로 제한되지 않는다.
상세한 설명
본원에 제시된 현재의 조성물, 시스템, 방법 등은 정제/개질된 푸칸을 포함한다. 본 조성물은 의학적 치료, 수술 후 치료, 질병 억제 등에 효과적일 수 있다. 일부 구체예에서, 푸칸은 후코이단이다. 본 발명의 정제/개질질 푸칸은 그 자체가 의료기기, 의료 물질, 조합 제품 또는 제약상 허용되는, 치료학적 및/또는 의학적으로 유효한 조성물일 수 있거나 포함될 수 있다.
이하, 본원에서 논의된 방법론을 사용해 생성될 수 있는 것들을 포함하여, 정제/개질 푸칸을 포함한 조성물 중 일부에 대한 설명한다.
조성물
본원에 제시된 현재의 조성물, 시스템 등은 특정 실시예에서 외과적 유착과 같은 섬유성 유착, 관절염, 건선 또는 기타 원하는 질병의 치료를 위한 치료 유효량의 정제/개질 푸칸을 포함한 푸칸과 의학적으로 허용되는 정제/개질 푸칸 조성물을 제공한다. 정제/개질된 푸칸은 총 푸코스, 갈락토스 및 설페이트를 약 75% w/w 초과, 예를 들어 80% w/w나 84% w/w 초과하게 포함할 수 있다. 또, 정제/개질된 푸칸이 약 5%, 7%, 9%, 10% 또는 11% w/w 이상의 적어도 하나의 반대이온을 더 포함할 수 있다. 반대이온은 약제학적으로 허용되는 반대이온이다. 반대이온은 푸칸에 존재하는 설페이트기에 이온결합될 수 있다. 약제학적으로 허용되는 반대이온은 알루미늄, 아르기닌, 벤자틴, 클로로프로카인, 콜린, 나트륨, 칼륨, 리튬, 암모늄, 에틸렌디아민, 디에틸 아민, 디에탄올 아민, 에탄올 아민, 히스티딘, 라이신, N-메틸글루카민, 메글루민, 프로카인, 트리에틸 아민, 아연, 칼슘 및 마그네슘 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 푸칸의 황 함유 성분은 C-O-S 연결을 통해 결합된다. 이런 연결의 산소는 다양한 요인에 따라 주로 탄소나 황에 결합된 것으로 볼 수 있다. 본원에 사용된 "설페이트"는 두 실시예 모두 지칭한다.
또는, 정제/개질된 푸칸이 적어도 약 85% w/w, 90% w/w, 94% w/w, 97% w/w 또는 98% w/w 푸코스, 갈락토스, 황산염 및 반대이온을 포함할 수도 있다. 반대이온은 최대 약 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14% 또는 15% w/w 칼슘, 마그네슘, 칼륨 및/또는 나트륨을 포함한다. 정제/개질된 푸칸이 적어도 약 25%, 30% 또는 35% w/w 푸코스를 포함할 수도 있다. 정제/개질된 푸칸이 약 10%, 5% 또는 4% w/w 미만의 갈락토스를 포함할 수도 있다. 정제/개질된 푸칸이 이런 총 푸코스, 갈락토스, 설페이트 및 반대이온분으로 본질적으로 구성될 수도 있다. 본원의 푸칸은 푸코스 및 갈락토스를 제외한 모든 당 성분이 실질적으로나 완전히 결여될 수 있다. 또는, 푸칸에 글루쿠론산, 만노스, 람노스, 자일로스, 갈락토스 또는 글루코스 중 하나 이상이 실질적으로나 완전히 결여될 수도 있는데, "실질적으로 결여"란 이런 당 성분이 존재한다 해도 그 존재량이 약제학적으로나 의학적으로 중요하지 않을만큼 충분히 낮음을 의미한다.
본원의 정제/개질된 푸칸을 섬유성 유착과 다른 표적과 다른 질병 및/또는 상태의 억제, 예방, 제거, 감소 또는 치료를 포함해 여러가지로 사용할 수 있다. 치료는 조성물이 표적 질환이나 다른 상태의 발병을 감소나 예방하는 것을 포함하며, 예를 들어 표적 부위에서 섬유성 유착의 형성을 감소 또는 예방하고, 이는 전형적으로 외과 의사나 다른 개업의가 섬유성 유착(또는 다른 질병이나 상태)을 갖거나 합리적으로 의심하는 것으로 확인한 선택된 표적 부위이고, 또한 예를 들어 이미 존재하는 섬유성 유착의 제거를 포함하여 기존 질병이나 다른 상태의 제거를 하는 것을 포함한다. 이런 억제, 예방, 제거, 감소 또는 기타 치료를 위해 푸칸 조성물은 의학적으로 허용되는 의료기기, 의료 재료, 조합 제품 또는 결합제, 보조제, 부형제 등과 같은 추가 성분을 포함하는 약제 학적으로 유효한 조성물로는 물론, 원하는 경우, 조성물내에 포함되지만 푸칸에 부착되지 않고 및/또는 푸칸에 부착될 수 있는 2 차 약물과 같은 다른 의학적 활성물질로도 제공될 수 있다.
본원의 정제/개질된 푸칸을 포함하는 조성물이 고체, 예를 들어 약 7% w/w 미만, 약 6%, 5% w./w, 4% w/w, 3% w/w 또는 2% w/w 미만의 수분 함량을 포함하는 고체 조성물일 수도 있다.
정제/개질 푸칸의 분자량 분포는 임의의 원하는 적절한 측정 시스템을 사용해 측정될 수 있다. 서로 다른 시스템은 본질적으로 동일한 구성을 갖는 서로 다른 구성에서나 다르게 측정할 때 동일한 배치에서 서로 다른 판독값이나 결과를 산출할 수 있다. 적합한 측정 시스템으로, 유효 분자량 범위가 약 50~5,000kDa인 히드록실화 폴리메타크릴레이트-기반 겔로 채워진 7.8mm 내경의 300mm 분석 겔투과 크로마토그래피 컬럼 1 개, 유효 분자량 범위가 약 1~6,000kDa인 하이드록실화 폴리메타크릴레이트-기반 겔로 채워진 7.8m내경의 300mm 분석 겔투과 크로마토그래피 컬럼 1개, 히드록실화 폴리메타크릴레이트-기반 겔로 채워진 6mm 내경의 40mm 가드 컬럼 1개, 2개의 분석 겔투과 크로마토그래피 컬럼, 및 약 30℃의 컬럼구획에 들어있는 1개의 가드 컬럼, 약 30℃의 굴절률 검출기, 0.6mL/min으로 실행되는 0.1M 질산나트륨 이동상, 및 피크 분자량이 약 2,200kDa인 제1 덱스트란 표준, 피크분자량이 약 720~760kDa인 제2 덱스트란 표준, 피크분자량이 약 470~ 510kDa인 제3 덱스트란 표준, 피크분자량이 약 370~ 410kDa인 제 4 덱스트란 표준, 피크분자량이 약 180~ 220kDa인 제 5 덱스트란 표준, 및 피크 분자량이 약 40~55kDa인 제6 덱스트란 표준으로 이루어지는 피크분자량 표준곡선에 대한 정량화로 이루어지는 수성 겔투과 크로마토그래피 셋업이 있다. 피크분자량 표준곡선이 3~5kDa의 피크분자량을 갖는 덱스트란 표준을 더 가질 수도 있다.
본원에서 정제/개질된 푸칸의 분자량 분포의 약 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 90%, 92%, 97% 또는 98% w/w가 100kDa보다 클 수 있다. 정제/개질된 푸칸이 분자량 분포의 적어도 약 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90% w/w가 200kDa를 초과하는 푸칸을 포함할 수도 있다. 또는 정제/개질된 푸칸이 분자량 분포의 적어도 약 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% 또는 75% w/w가 500kDa를 초과하거나, 적어도 약 5%, 10%, 20%, 30% 또는 40% w/w가 1600kDa를 초과할 수도 있다.
정제/개질된 푸칸이 약 100kDa 초과, 예를 들어 약 100kDa 내지 10,000kDa, 약 200kDa 내지 8,000kDa, 약 350kDa 내지 8,000kDa, 약 450kDa 내지 8,000kDa, 약 580kDa 내지 8,000kDa, 또는 약 800kDa 내지 2,000kDa의 중량 평균 분자량을 가질 수 있다. 정제/개질된 푸칸이 약 70kDa 초과, 예를 들어 약 70kDa 내지 1200kDa, 약 100kDa 내지 1200kDa, 약 200kDa 내지 1200kDa, 약 400kDa 내지 1200kDa, 또는 400kDa 내지 900kDa의 피크 분자량을 가질 수도 있다.
정제/개질된 푸칸이 약 50kDa 초과, 약 50kDa 내지 1,000kDa, 약 70kDa 내지 1000kDa, 약 150kDa 내지 1000kDa, 약 250kDa 내지 1000kDa, 또는 약 250kDa 내지 700kDa의 수평균분자량을 가질 수도 있다.
정제/개질된 푸칸이 약 10% w/w 내지 70% w/w, 약 20% w/w 내지 65% w/w, 약 30% w/w 내지 60% w/w, 또는 약 40% w/w 내지 60% w/w 의 황화 수준을 가질 수 있다.
정제/개질된 푸칸은 약 1:0.5 내지 1:4, 약 1:0.8 내지 1:3.5, 약 1:1 내지 1:2.5, 약 1:1.2내지 1:2.0, 또는 약 1:1.5내지 1:3 의 총 푸코스:총 설페이트의 몰비를 가질 수 있다. 또, 정제/개질된 푸칸이 약 1:0.5 내지 1:4, 약 1:0.8 내지 1:3.5, 약 1:1 내지 1:2.5, 약 1:1.2내지 1:2.0, 또는 약 1:1.5내지 1:3의 총 푸코스+갈락토스:총 설페이트의 몰비를 가질 수도 있다.
정제/개질된 푸칸이 약 27% w/w 내지 70% w/w, 약 30% w/w 내지 80% w/w, 약 40% w/w 내지 90% w/w, 또는 약 50% w/w 내지 100% w/w 의 총 탄수화물 함량을 가질 수 있다. 또는, 정제/개질된 푸칸이 총 탄수화물의 백분율 기준으로 약 30% w/w 내지 100% w/w, 약 40% w/w 내지 95% w/w, 또는 약 50% w/w 내지 90% w/w의 푸코스 함량을 가질 수 있다. 또는, 푸칸이 총 탄수화물의 백분율 기준으로 0% w/w 내지 60% w/w, 약 5% w/w 내지 30% w/w, 또는 약 8% w/w 내지 10% w/w의 갈락토스 함량을 가질 수 있다. 또는, 푸칸이 총 탄수화물 함량의 백분율 기준으로 약 0% w/w 내지 10% w/w의 글루쿠론산, 약 0% w/w 내지 7%의 만노스, 약 0% w/w 내지 4% w/w의 람노스, 및 0% w/w내지 20% w/w의 자일로스 함량을 가질 수 있다. 또, 푸칸이 약 30% w/w나 12 % w/w 미만의 총 글루쿠론산, 만노스, 람노스, 글루코스 및 자일로스 함량을 가질 수도 있다.
일부 실시예에서, 본원의 정제/개질 푸칸은 물에 50mg/mL의 농도로 용해될 때 약 4cP 내지 50cP, 약 5cP 내지 40cP, 약 10cP 내지 30cP, 약 15cP, 약 20cP 내지 25cP 의 점도를 가질 수 있다. 또는, 정제/개질 푸칸이 1mg/mL 내지 100mg/mL의 물에 용해되었을 때 투명하고 무색, 투명하고 밝은 노란색 또는 투명하고 밝은 갈색 중 하나의 용액을 형성한다.
본원에서 정제/개질된 푸칸은 페이스트, 겔, 패치, 필름, 스프레이, 액체, 로션, 크림, 용액, 현탁액, 고체, 임플란트, 미소구 또는 기타 원하는 형태로 제공될 수 있다.
본원에 제시된 조성물은 본질적으로 정제/개질된 푸칸으로 구성된 고체일 수 있다. 정제/개질된 푸칸은 본질적으로 푸코스, 갈락토스, 설페이트 및 반대이온으로 구성될 수 있다.
정제/개질된 푸칸이 약 0.01mg/mL 내지 300mg/mL의 푸칸, 예를 들어 약 0.1mg/mL 내지 100mg/mL, 약 1mg/mL 내지 50mg/mL 및 약 20mg/mL 내지 80mg/mL 를 포함하는 푸칸이 용액에 있을 수 있다. 푸칸은 본질적으로 푸코스, 갈락토스, 황산염 및 반대이온으로 구성될 수 있다.
정제/개질된 푸칸이 약 100mg/mL 내지 1000mg/mL의 푸칸, 예를 들어 약 100mg/mL 내지 500mg/mL및 약 300mg/mL 내지 800mg/mL의 푸칸을 포함하는 겔에 있을 수 있다. 푸칸은 본질적으로 푸코스, 갈락토스, 황산염 및 반대이온으로 구성될 수 있다.
정제/개질된 푸칸이 약 100mg/mL 내지 1000mg/mL의 푸칸, 예를 들어 약 100mg/mL 내지 500mg/mL 및 약 300mg/mL 내지 800mg/mL의 푸칸을 포함하는 필름에 있을 수도 있다. 푸칸은 본질적으로 푸코스, 갈락토스, 황산염 및 반대이온으로 구성될 수 있다.
정제/개질된 푸칸이 임의의 수의 제약상 허용되는 부형제, 예를 들어 젤라틴, 히프로멜로스, 락토스, 주사 USP용 물, 나트륨, 염화물, 인산 나트륨, 구연산 나트륨, 아스코르브산 나트륨, 인산 완충제, 구연산 완충제, 인산-구연산 완충제, 플루로닉, 셀룰로스, 알긴산, 아크릴레이트, 히알루론산, 폴리에틸렌 글리콜, 키토산, 주 사용 부형제 및 젖산 링거 주사 USP을 포함하는 의료기기, 조합 제품 및/또는 제약 조성물의 성분으로서 투여될 수도 있다.
정제/개질된 푸칸이 페이스트, 겔, 패치, 필름, 스프레이, 액체, 로션, 크림, 용액, 현탁액, 고체, 임플란트, 미소구 또는 기타 원하는 형태로 투여될 수 있다.
정제/개질된 푸칸이 정맥내, 관절내, 병변내, 질내, 직장, 근육내, 복강내, 피하, 국소, 비내, 안내 또는 경구 투여 경로를 통해 투여될 수 있다. 정제/개질된 푸칸이 질병 부위로 직접 전달될 수도 있다. 정제/개질된 푸칸이 중합체 투여 형태로부터 제어 방출을 통해 질병 부위에 지속적으로 방출될 수도 있다.
정제/개질된 푸칸이 적어도 하나의 다른 약물을 포함한 약제학적 조성물의 성분으로서 투여될 수도 있다. 약물은 파클리탁셀, 독소루비신, 캄프토테신, 에토포사이드, 미톡산트론, 메토트렉세이트, 메나디온, 플럼바긴, 주글론, 베타-라퍼콘 사이클로스포린, 설파살라진, 스테로이드, 라파마이신, 레티노이드, 도세탁셀, 콜히친, 안티센스 올리고뉴클레오티드 및 리보자임 중 하나 이상일 수 있다.
어떤 실시예에서는, 정제/개질 푸칸이 약 5% w/w 미만, 약 2% w/w 미만 및 약 0% w/w 의 아세틸 함량을 가질 수 있다. 또는 정제/개질 푸칸이 탄소 차원내 10-30ppm범위에서 각각 256-512 스캔마다 8 증분으로, 5 mm 콜드 프로브를 갖춘 600MHz 분광계에서 용매 신호 억제와 함께 70℃에서 2D 1H-13C 이종핵 다중 양자 일관성으로 측정했을 때 실질적으로 0% w/w 아세틸 함량을 포함할 수 있다.
방법
푸칸을 포함하는 출발 푸칸 조성물, 예를 들어 공급원료 푸칸 조성물이나 다른 푸칸-함유 조성물로부터 푸칸을 정제 및/또는 개질하기위한 방법, 시스템 등이 제공된다. "불순물"은 푸코스, 갈락토스, 설페이트 또는 반대이온이 아닌 푸칸의 임의의 성분 및 푸칸을 포함하는 조성물에 존재하는 임의의 비-푸칸 성분이나 화합물이나 물질을 말한다. 불순물은 푸칸에 결합될 수 있으며, 예를 들어 푸칸에 이온적으로 및/또는 화학적으로 결합된 단백질, 푸칸 중합체 구조의 일부인 푸코스 및 갈락토오스 이외의 당 잔기, 푸칸에 화학적으로 결합된 다른 당류 및 비-푸칸, 푸칸에 결합되지 않지만 공급원료 푸칸 조성물과 같은 출발 푸칸 조성물에 존재하는 불순물을 포함한다. 이런 불순물의 예로는 입자, 지질, 지방산, 플로로탄닌, 라미나린, 알기네이트, 단백질, 마이야르 반응생성물, 푸코잔틴, 클로로필, 박테리아, 세포 성분 및 DNA가 포함되나 이에 제한되지 않으며, 이들 중 일부는 발색단을 포함하고 기존 출발 푸칸 조성물에서 갈색, 노란색 및 녹색 색상으로 구성되며, 이들 중 몇몇은 출발 푸칸 조성물내 푸칸이나 그 일부에 이온적으로 및/또는 화학적으로 결합될 수 있다. 본원의 방법 등은 적어도 약 88%w/w, 89%w/w, 90%w/w, 91%w/w, 92%w/w, 93%w/w, 94%w/w, 95%w/w, 96%w/w, 97%w/w, 97.1%w/w, 98%w/w, 98.8%w/w, 99%w/w, 99.5%w/w, 또는 99.9%w/w의 푸코스, 갈락토스, 설페이트 및 반대이온을 포함하는 정제/개질된 푸칸을 제조하는데 사용될 수 있다. 정제/개질된 푸칸이 적어도 약 75%, 78%, 80%, 82% 또는 84%w/w 푸코스, 갈락토스 및 설페이트를 포함하거나, 약 0.1%, 0.5%, 1%, 2.9%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11% 또는 12%w/w 불순물을 포함할 수도 있다. 이런 불순물 중 일부는 푸칸을 의료 및/또는 외과적으로 사용할 때 위험한 합병증을 유발할 수 있다.
본 발명은 섬유성 유착의 예방과 같은 의료외과적 사용에 적합한 낮은 수준의 불순물을 갖는 정제/개질된 푸칸을 제공하기도 한다.
이제 정제/개질된 푸칸을 생성하는 방법에 대해 설명한다.
물리적으로 유도된 응집
높은 수준의 불순물을 포함한 공급원료 푸칸 조성물과 같은 출발 푸칸 조성물은 물리적으로 유도된 응집일 수 있는 불순물의 응집을 겪는다. 이 방법은 아래 단계들을 포함할 수 있다: 출발 푸칸 조성물을 제공하는 단계; 응집보조제를 출발 푸칸 조성물에 첨가하여 반응혼합물을 생성하는 단계; 반응혼합물을 가열하여 출발 푸칸 조성물의 불순물을 응집하는 단계; 응집된 불순물을 반응혼합물로부터 분리하는 단계; 및 분리 후 원하는 정제/개질 푸칸을 수집하는 단계.
반응혼합물을 가열하여 불순물을 응집할 때, 반응혼합물에 대기압을 초과하는 압력을 가하는 동안 반응혼합물을 가열할 수 있다. 적합한 응집보조제로는 염 및/또는 염기, 예를 들어 염화물, 브롬화물, 요오드화물, 불화물, 황산염, 아황산염, 탄산염, 중탄산염, 인산염, 질산염, 아질산염, 아세테이트, 구연산염, 규산염, 산화물, 알칼리 금속, 알칼리토금속, 알루미늄 및/또는 암모늄의 수산화물 및/또는 시안화물, 예를 들어 염화나트륨, 황산나트륨, 염화칼륨, 황산칼슘, 인산나트륨, 질산나트륨, 염화리튬, 질산리튬, 염화암모늄, 탄산나트륨, 수산화나트륨을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 반응혼합물로부터 응집된 불순물을 분리할 때, 반응혼합물의 원심분리, 여과, 침강 또는 유체 역학적 유동분리 중 하나 이상을 할 수 있다.
본원의 방법 등은 응집보조제를 첨가하기 전에 출발 푸칸 조성물을 탈염하는 단계를 더 포함할 수 있다. 탈염은 분자량 컷오프(MWCO) 접선유동여과(TFF) 필터를 통해 물 중의 용액으로서 출발 푸칸 조성물을 투석여과하는 것을 포함할 수 있다. 투석여과는 출발 푸칸 조성물을 증류수로 투석여과하는 것을 포함할 수 있다. 분자량 컷오프 TFF 필터는 푸칸 조성물에 대한 원하는 분자량 분리 지점이나 표적보다 작은 분자량 컷오프, 예를 들어 50kDa, 70kDa, 100kDa, 200kDa, 300kDa, 500kDa 또는 1000kDa 분자량 컷오프를 가질 수 있다.
이 방법은 기초나 중립 환경에서 수행될 수 있다. 따라서, 응집보조제를 출발 푸칸 조성물에 첨가하는 것은 푸칸이 산성 환경에서 분해되기 쉽기 때문에 출발 푸칸 조성물의 푸칸이 분해되는 것을 방지하거나 억제하기 위해 출발 푸칸 조성물을 염기성으로 만드는 것을 포함할 수 있다. 다른 실시예에서, 이 방법은 반응혼합물을 7 이상의 pH 근처로 유지해 수행될 수 있다.
일부 실시예에서, 출발 푸칸 조성물은 용액으로 제공될 수 있다. 이 방법에 의한 치료에 적합한 푸칸의 예는 제한없이 후코이단을 포함하고, 용액내 푸칸의 농도는 0.01%w/v 내지 50%w/v일 수 있다. 이 방법으로 제거될 수 있는 불순물은 입자, 지질, 지방산, 플로로탄닌, 라미나린, 알기네이트, 단백질, 마이야르 반응생성물, 푸코잔틴, 클로로필, 유리 이온, 박테리아, 바이러스, 효모, 곰팡이, 기생충, DNA 및 엔도톡신을 포함하되, 이에 한정되지 않는다.
고체상 추출
원료 조성물처럼 아주 높은 수준의 불순물을 함유해 불순물이 원치않는 수준으로 함유된 원료 푸칸 조성물과 같은 출발 푸칸 조성물내 푸칸은 고체상 추출을 받는다. 이 방법은 아래 단계들을 포함할 수 있다: 불순물을 포함한 출발 푸칸 조성물과, 불순물은 용해하되 푸칸은 용해할 수 없는 추출 매질을 고체 형태로 제공하는 단계; 출발 푸칸 조성물을 추출 매질과 혼합하여, 용해되지 않은 고체 푸칸 조성물과 용해되지 않은 불순물을 함유한 추출 매질의 혼합물을 형성하는 단계; 용해되지 않은 불순물을 함유한 추출 매질로부터, 용해되지 않고 정제된 고체 푸칸을 분리하는 단계; 및 추출 매질로부터 정제/개질 푸칸을 수집하는 단계. 분리는 예를 들어 원심분리, 여과, 침강 및 유체역학적 유체 분리 중 하나 이상을 포함할 수 있다.
추출 매질은 예를 들어 염기, 세제 및 산화제 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 푸칸을 용해하지 않는 적절한 추출 매질에는 0.765 미만의 상대 극성을 가진 유기 용매, 예를 들어 에탄올, 이소프로판올, 메탄올, 벤젠, 디에틸 에테르, 데카메틸시클로-펜타 실록산, 에틸 아세테이트, 부탄올, 헥산, 헵탄, 헵탄올, 옥탄올 및 데칸올이 포함된다. 적합한 염기는 수산화나트륨, 수산화칼륨, 수산화리튬 및 수산화칼슘을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 적합한 산화제는 과산화수소, 과산화요소, 및 차아염소산 나트륨을 포함한 산화 표백제 중 하나 이상을 제한없이 포함한다. 적합한 세제는 비이온 계면활성제, 예를 들어 Tween®, Brij® 및 Triton® 범위의 세제; 음이온 계면활성제, 예를 들어 나트륨 도데실 설페이트(SDS), 나트륨 데옥시 콜레이트; 및 양이온 계면활성제, 예를 들어 벤즈알코미움 클로라이드(BAC)를 포함하되, 이에 한정되지도 않는다. 본원의 방법에 이용되는 특정 푸칸은 후코이단을 포함하되 이에 제한되지 않는다. 예를 들어, 출발 푸칸 조성물을 추출 매질로 처리하는 것이 1 분에서 120 시간까지 연장될 수 있다.
이 방법은 출발 푸칸 조성물을 고체 형태로 제공하기 전에 출발 푸칸 조성물을 탈염하는 단계를 더 포함할 수 있다. 탈염은 분자량 컷오프(MWCO) 접선유동여과(TFF) 필터를 통해 물 중의 용액으로서 출발 푸칸 조성물을 투석여과하는 것을 포함할 수 있다. 투석여과는 출발 푸칸 조성물을 증류수로 투석여과하는 것을 포함할 수 있다. 분자량 컷오프 TFF 필터는 정제/개질 푸칸 또는 이에 대한 원하는 분자량 분리 지점이나 표적보다 작은 분자량 컷오프, 예를 들어 50kDa, 70kDa, 100kDa, 200kDa, 300kDa, 500kDa 또는 1000kDa 분자량 컷오프를 가질 수 있다. 투석여과는 입자상 물질을 제거하기 위해 적절한 사전 필터를 통해 출발 푸칸 조성물을 사전 여과하는 것을 더 포함할 수 있다. 이 방법은 고체 형태로 출발 푸칸 조성물을 제공하기 전에 용액에서 적합한 출발 푸칸 조성물을 동결건조 및/또는 분무-건조하는 것을 더 포함할 수 있다. 이 방법이 고체 형태로 출발 푸칸 조성물을 제공하기 전에 적합한 출발 푸칸 조성물을 용액으로부터 침전시키는 것을 더 포함할 수도 있다. 적합한 침전제는 에탄올, 이소프로판올, 프로판올, 아세톤, 메탄올, 디메틸 설폭사이드, 디메틸 포름아미드, 에틸렌 글리콜, 테트라하이드로푸란, 아세토니트릴, 글라임, 디글림, 디옥산, 침전 유체의 극성이 감소함에 따라 감소하는 푸칸의 용해도를 제한없이 포함한다. 상기 방법에 의해 제거될 수 있은 불순물은 입자, 지질, 지방산, 플로로탄닌, 라미나린, 알기네이트, 단백질, 마이야르 반응생성물, 푸코잔틴, 클로로필, 박테리아, 세포성분 및 DNA를 포함한다.
화학적으로 유도된 침전
높은 수준의 불순물, 예를 들어 현탁 입자를 함유한 출발 푸칸 조성물이나 다른 적합한 푸칸 조성물은 화학적으로 유도된 불순물의 침전을 겪는다. 특정 실시예에서, 이 방법은 출발 용액에 출발 푸칸 조성물을 제공하는 단계; 이온 다가 불순물 침전제에 의해 출발 용액으로부터 불순물을 침전시켜 현탁된 불순물, 침전된 불순물 및 상등액의 혼합물을 제공하는 단계; 부유 불순물 및 침전된 불순물을 상청액으로부터 분리하는 단계; 및 상기 상청액으로부터 현탁된 불순물 및 침전된 불순물을 분리한 후 원하는 정제/개질 푸칸을 포함한 상청액을 수집하는 단계를 포함한다.
적합한 불순물 침전제는 이온-다가 염 및/또는 2가 및 3가 양이온의 염기를 포함한다. 이런 적합한 염의 예에는 염화물, 브롬화물, 요오드화물, 불화물, 황산염, 아황산염, 탄산염, 중탄산염, 인산염, 질산염, 아질산염, 아세테이트, 구연산염, 규산염 및/또는 시안화물일 수 있다. 양이온은 알칼리토금속, 아연, 알루미늄, 구리 및/또는 철을 포함한다. 염기는 알칼리토금속, 아연, 알루미늄, 구리 및/또는 철일 수 있다. 부유 불순물과 침전된 불순물을 상청액으로부터 분리하는 것은 혼합물에서 불순물을 응집시키는 것을 포함할 수 있다. 적합한 응집제는 황산알루미늄칼륨; 황산알루미늄 나트륨; 황산알루미늄 암모늄; 염화칼슘; 인산나트륨; 수산화알루미늄; 염화알루미늄; 염화제 2 철; 황산제 2 철; 황산제1 철; 규산나트륨; 규산칼슘; 인산칼슘; 염화아연; 탄산칼슘; 중탄산칼슘; 황산칼륨; 인산마그네슘; 아크릴아미드; 아크릴산; 알루미늄 클로로하이드레이트; 폴리알루미늄 클로라이드; 타닌; 포름알데히드; 멜라민; N,N-디메틸아미노에틸 아크릴레이트 메틸 클로라이드; N,N-디메틸아미노에틸 메타크릴레이트 메틸 클로라이드 4 급; 및 폴리디알릴디메틸-암모늄 클로라이드를 포함한다. 전술한 응집제 목록에서 알 수 있듯이, 일부 실시예에서 응집제는 불순물 침전 제일 수 있다. 침전, 현탁 및/또는 응집된 불순물을 상청액으로부터 분리하는 것은 불순물과 상청액의 혼합물의 원심분리, 여과, 침강 및 유체역학적 유동분리 중 적어도 하나를 포함할 수 있다.
이 방법은 출발 푸칸 조성물을 제공하기 전에 출발 푸칸 조성물을 탈염하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 탈염은 TFF 필터를 통해 수용액으로서 출발 푸칸 조성물을 투석여과하는 것을 포함할 수 있다. 투석여과는 출발 푸칸 조성물을 증류수로 투석여과하는 것을 포함할 수 있다. 투석여과는 5kDa, 10kDa, 30kDa, 50kDa, 70kDa 또는 100kDa의 분자량 컷오프(MWCO)로 TFF 필터를 통해 출발 푸칸 조성물을 투석여과하는 것을 포함할 수 있다. 투석여과는 입자상 물질을 제거하는데 적절한 예비필터를 통해 출발 푸칸 조성물을 예비여과하는 것을 더 포함할 수 있다.
이 방법은 산성 환경에서 푸칸의 분해를 억제하거나 방지하기 위해 약 7 내지 14의 pH를 유지하는 것을 더 포함할 수 있다. pH를 약 7 내지 14로 유지하는 것은 적절한 염기, 예를 들어 수산화나트륨의 첨가로 이루어질 수 있다. 이온-다가 불순물 침전제를 사용해 용액으로부터 불순물을 침전시키기 전에 적절한 염기를 출발 푸칸 조성물에 첨가할 수 있다. 다른 예로, 적절한 염기는 이온-다가 불순물 침전제로 용액으로부터 불순물을 침전시킨 후 침전된 불순물과 상청액의 혼합물에 첨가될 수 있다. 또는, 적절한 염기가 상청액으로부터 현탁된 불순물과 침전된 불순물을 분리한 후 상청액에 첨가될 수도 있다.
상기 방법에 의한 치료에 적합한 푸칸의 예로 후코이단이 있고, 용액내 푸칸의 농도는 0.01% w/v 내지 50% w/v 일 수 있다. 이 방법으로 제거될 수 있는 불순물은 입자, 지질, 지방산, 플로로탄닌, 라미나린, 알기네이트, 단백질, 마이야르 반응생성물, 푸코잔틴, 클로로필, 박테리아, 세포성분 및 DNA를 포함한다.
용해와 응집
높은 수준의 불순물을 함유한 원료 푸칸 조성물과 같은 출발 푸칸 조성물은 용해 및 응집을 겪는다. 이 실시예의 방법은 다음을 포함할 수 있다: 출발 푸칸 조성물을 제공하는 단계; 출발 푸칸 조성물을 알칼리성으로 하는 단계; 출발 푸칸 조성물에 세포파괴제를 첨가하여 반응혼합물을 생성하고, 세포파괴제는 출발 푸칸 조성물에서 세포 성분을 용해시키고 생체분자 성분을 포함한 알칼리 반응혼합물 용해물로 방출하는 단계; 반응혼합물로부터 세포파괴제 및 불순물의 적어도 일부를 제거하여 원하는 정제된 푸칸을 분해되지 않게 하는 단계.
세포파괴제의 제거는 침전, 응집, 접선유동여과, 미셀 상분리, 이온흡착 및 소수성 흡착 중 어느 하나 이상을 포함할 수 있다. 불순물의 제거는 침전, 응집, 접선유동여과, 미셀 상분리, 이온흡착 및 소수성 흡착 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 임의의 이런 제거 방법 또는 제거 방법들의 조합은 고체 및 액체상의 임의 혼합물의 원심분리, 여과, 침강 또는 유체역학적 유동분리를 포함할 수 있다.
적절한 세포파괴제는 음이온, 비이온 세제, 예컨대 나트륨 도데실 설페이트(SDS), 벤잘코늄 클로라이드, Triton® X 100, Triton® X 114 및 나트륨 데옥시콜레이트 중 하나 이상을 포함할 수 있다.
이 방법의 일례에서, 세포파괴제는 나트륨 도데실 설페이트(SDS)이고, 세포파괴제의 제거는 세포파괴제를 알칼리성 반응혼합물에 불용성으로 만드는 침전제를 첨가하여 세포파괴제를 침전시키는 것을 포함한다. 이때, 세포파괴제의 제거는 침전된 세포파괴제를 응집하도록 응집제를 불순물의 적어도 일부와 함께 반응혼합물에 첨가하는 것을 더 포함할 수 있다. 세포파괴제의 제거는 응집 후의 원심분리를 더 포함할 수 있다.
나트륨 도데실 설페이트 및 알킬벤젠설포네이트에 적합한 침전제는 수산화 칼륨, 염화칼륨, 염화칼슘, 탄산칼슘 및 염화바륨을 포함한다. 응집제는 황산알루미늄 칼륨; 황산알루미늄 나트륨; 황산알루미늄 암모늄; 염화칼슘; 인산나트륨; 수산화알루미늄; 염화알루미늄; 염화제 2 철; 황산제 2 철; 황산제1 철; 규산나트륨; 규산칼슘; 인산칼슘; 염화아연; 탄산칼슘; 중탄산칼슘; 황산칼륨; 인산마그네슘; 아크릴 아미드; 아크릴산; 알루미늄 클로로하이드레이트; 폴리알루미늄 클로라이드; 타닌; 포름알데히드; 멜라민; N,N-디메틸아미노에틸 아크릴레이트 메틸 클로라이드; N,N-디메틸아미노에틸 메타크릴레이트 메틸 클로라이드 4 급; 및 폴리디알릴디메틸-암모늄 클로라이드를 포함한다.
세포파괴제가 침전 과정에서 변화를 겪을 수 있음을 알아야한다. 예를 들어, 세포파괴제가 나트륨 도데실 설페이트(SDS)인 경우 침전제는 수산화칼륨(KOH) 일 수 있고 나트륨 양이온은 침전 과정의 일부로 칼륨으로 대체될 수 있으며, 생성된 칼륨 도데실 설페이트는 반응혼합물에 의해 침전된다. 기능적으로 SDS의 세포 파괴 부분인 도데실 설페이트 양이온은 이 과정에서 그대로 유지된다.
또, 세포파괴제가 나트륨 도데실 설페이트(SDS) 및 나트륨 데옥시콜레이트 중 하나 이상일 수도 있고 세포파괴제의 제거는 음이온 흡착을 포함한다. 음이온 흡착은 적절한 양으로 하전된 흡착제를 적절한 시간 동안 첨가한 후 흡착제를 제거하는 것을 포함할 수 있다. 음이온 흡착은 반응혼합물을 적당한 유속과 양으로 하전된 흡착제로 충전된 컬럼이나 필터를 통해 유동시키는 것을 더 포함할 수 있다.
또, 세포파괴제가 염화 벤잘코늄이고 세포파괴제의 제거는 양이온 흡착을 포함할 수도 있다. 양이온 흡착은 적당한 시간 동안 적당한 음으로 하전된 흡착제를 첨가한 다음 흡착제의 제거를 포함할 수 있다. 양이온 흡착은 반응혼합물을 적당한 유속과 적당히 음으로 하전된 흡착제로 충전된 컬럼이나 필터를 통해 유동시키는 것을 추가로 포함할 수 있다.
또, 세포파괴제가 Triton X 100®, Triton X 114®, Brij® 및 Tween® 세제 중 하나 이상이고, 세포파괴제의 제거가 미셀 상분리를 포함할 수도 있다. 미셀 상분리는 반응혼합물의 온도가 세포파괴제의 운점을 초과하도록 반응혼합물의 온도를 바꾸는 것을 포함할 수 있다. 미셀 상분리는 원하는 상분리를 얻기 위해 반응혼합물을 원심분리하는 것을 포함할 수 있다.
또, 세포파괴제가 나트륨 도데실 설페이트(SDS), 벤잘코늄 클로라이드, Triton X 100®, Triton X 114®, Brij® 세제, Tween® 세제, 나트륨 데옥시콜레이트 및 알킬벤젠설포네이트 중 어느 하나 이고, 세포파괴제의 제거가 하나 이상의 소수성 흡착, 희석 및 접선흐름여과(TFF) 중의 하나 이상을 포함할 수도 있다. 소수성 흡착은 적당한 시간 동안 적당한 소수성 흡착제를 첨가한 다음 흡착제의 제거를 포함할 수 있다. 소수성 흡착은 적당한 유속으로 적당한 소수성 흡착제로 채워진 컬럼이나 필터를 통해 반응혼합물을 유동시키는 것을 포함할 수 있다. 희석과 TFF에 의한 제거는 세포파괴제가 임계 미셀 농도 아래로 떨어지도록 반응혼합물을 희석하는 것을 포함할 수 있으며, 따라서 잔류물을 함유한 푸칸으로부터 세포파괴제의 침투를 하는 적절한 분자량 컷오프(MWCO) TFF 필터를 통한 접선유동여과로 제거될 수 있다. 희석 및 TFF에 의한 제거는 반응혼합물을 적절한 수의 분량으로 TFF 필터를 통해 투석여과하는 것을 포함할 수 있다.
이 방법은 킬레이트제를 반응혼합물에 첨가하여 반응혼합물에서 유리 다가 양이온을 킬레이트화하는 것을 더 포함할 수 있다. 킬레이트제는 출발 푸칸 조성물을 제공하기 전후에 첨가될 수 있다. 이 방법이 반응혼합물에서 산화제를 급냉시키는 것을 더 포함할 수도 있다. 산화제의 급냉은 세포파괴제의 제거 전후에 산화제 급랭제를 반응혼합물에 첨가하는 것을 포함할 수 있다.
이 방법이 정균제를 반응혼합물에 첨가하는 것을 포함할 수도 있다. 정균제는 출발 푸칸 조성물을 제공한 후 세포파괴제의 제거 전에 첨가될 수 있다. 적합한 정균제는 아황산나트륨, 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA), 염화 벤잘코늄, 에탄올 및 티오우레아를 포함한다.
적합한 킬레이트제는 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA), 2,3-디머캅토-1-프로판올, 에틸렌디아민, 포르핀 및 시트르산을 포함한다. 적합한 산화제 급냉제는 아황산염, 아질산염 및 포스파이트 염을 포함한다. 나열된 화합물 중 몇몇은 이 방법에서 하나 이상의 기능을 가질 수 있다.
소수성 흡착제는 활성탄, 규조토, 아크릴 에스테르 비이온 수지, 폴리스티렌 비이온 수지, 스티렌-디비닐벤젠(DVB) 비이온 수지를 포함한다. 음이온 흡착제는 다음을 포함한다: 아민 관능화 스티렌-DVB 수지, 아민 관능화 메타크릴레이트 수지, 아민 관능화 메틸 메타크릴레이트 수지, 아민 관능화 부틸 메타크릴레이트 수지, 아민 관능화 아가로스 수지, 아민 관능화 덱스트란 수지, 아민 관능화 세라믹 기반 수지, 아민 관능화된 실리케이트 , 지질 제거제(LRA; lipid removal agent).
또, 출발 푸칸 조성물이 용액으로 제공될 수도 있다. 상기 방법에 의한 치료에 적합한 푸칸의 예는 후코이단을 포함한다. 출발 푸칸 조성물은 용액에서 0.1% w/v 초과 및 30% w/v 미만의 푸칸 농도를 가질 수 있다. 세포파괴제는 용액에서 0.1% w/v 초과 및 60% w/v 미만의 농도를 가질 수 있다. 상기 방법으로 제거될 수 있은 불순물은 입자, 지질, 지방산, 플로로탄닌, 라미나린, 알기네이트, 단백질, 마이야르 반응생성물, 푸코잔틴, 클로로필, 박테리아, 세포성분 및 DNA를 포함한다.
액체-액체 추출
원치않는 수준의 불순물을 함유한 원료 푸칸 조성물과 같은 출발 푸칸 조성물내 푸칸은 액체-액체 추출을 거친다. 이 방법은 다음을 포함할 수 있다: 수성 출발 용액에 출발 푸칸 조성물을 제공하는 단계; 출발 용액을 유기 용매와 혼합하여 정제/개질 푸칸을 포함한 수성 부분 및 소수성 불순물을 포함한 유기 부분을 갖는 수성-유기상 혼합물을 수득하는 단계; 수성 부분을 유기 부분으로부터 분리하는 단계; 및 정제/개질 푸칸을 포함한 수성 부분을 수집하는 단계.
이 방법은 유기 용매를 수성 출발 용액과 혼합하기 전에 출발 푸칸 조성물을 탈염하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 탈염은 분자량 컷오프(MWCO) 접선유동여과(TFF) 필터를 통해 물 중의 용액으로서 출발 푸칸 조성물을 투석여과하는 것을 포함할 수 있다. 투석여과는 출발 푸칸 조성물을 증류수로 투석여과하는 것을 포함할 수 있다. 분자량 컷오프 TFF 필터는 정제/개질 푸칸에서 또는 이에 대한 원하는 분자량 분리 지점이나 표적보다 작은 분자량 컷오프, 예를 들어 5kDa, 10kDa, 30kDa, 50kDa, 70kDa, 100kDa, 200kDa, 300kDa, 500kDa 또는 1000kDa 분자량 컷오프를 가질 수 있다. 투석여과가 입자상 물질을 제거하기 위해 적절한 예비필터를 통해 출발 푸칸 조성물을 예비여과하는 것을 추가로 포함할 수도 있다.
수성 출발 용액을 유기 용매와 혼합하는 것은 수성-유기상 혼합물을 흔들고, 교반하고, 고전단력에 노출시키고, 수성 부분을 유기 부분으로 재순환시키고, 유기 부분을 수성 부분으로 재순환시키는 것을 포함할 수 있다.
유기 부분으로부터 수성 부분을 분리하는 것은 원심분리, 디캔팅, 깔때기 분리 및 유체역학적 유동분리 중 적어도 하나를 포함할 수 있다.
이 방법에 사용하기에 적합한 유기 용매는 0.765 미만의 상대 극성을 갖는 유기 용매, 예를 들어 에탄올, 이소프로판올, 메탄올, 벤젠, 데카메틸시클로-펜타실록산, 에틸 아세테이트, 헥산, 헵탄올, 옥탄올, 데칸올, 헵탄, 이소 부틸 아세테이트, 아니 솔, 이소 프로필 아세테이트, 1-부탄올, 부틸 아세테이트, 메틸 이소부틸 케톤, 펜탄, 1-펜탄올, 에틸 에테르 및 프로필 아세테이트 독소를 포함할 수 있다. 유기상은 불순물, 예를 들어 지질, 지방산, 플로로탄닌, 단백질, 푸코잔틴 및/또는 클로로필을 포함할 수 있다.
투석여과
바람직하지 않은 수준의 불순물을 함유한 공급원료 푸칸 조성물과 같은 출발 푸칸 조성물의 푸칸을 투석여과한다. 이 방법은 다음을 포함할 수 있다 : 출발 용액 중의 출발 푸칸 조성물을 제1 접선유동여과 필터에서 킬레이트제 용액으로 투석여과하여 제1 잔류물 푸칸 조성물과 킬레이트 양이온분의 투과 용액을 생성하는 단계; 및 제1 잔류물 푸칸 조성물을 제 2 접선유동여과 필터에서 2 차 투석여과액으로 투석여과하여 제1 잔류물 푸칸 조성물로부터 잔류 킬레이트제를 분리하고, 원하는 정제/개질된 푸칸을 포함하는 제 2 잔류물 푸칸 조성물을 생성하는 단계. 제1 잔류물 푸칸 조성물을 제 2 접선유동여과 필터에서 투석여과하는 것은 제1 잔류물 푸칸 조성물을 제1 접선유동여과 필터에서 투석여과하는 것을 포함할 수 있다. 즉, 동일한 필터를 두 투석여과 여과 공정에 사용할 수 있다.
출발 푸칸 조성물을 투석여과하는 것은 바람직하지 않은 입자 물질을 제거하기 위해 예비필터에서 출발 푸칸 조성물을 예비여과하는 것을 포함할 수 있다. 킬레이트제로 출발 푸칸 조성물을 투석여과하는 것은 에틸렌디아민-테트라아세트산(EDTA), 2,3-디머캅토-1-프로판올, 에틸렌디아민, 포르핀 또는 시트르산 중 하나를 사용하여 출발 푸칸 조성물을 투석여과하는 것을 포함할 수 있다.
출발 푸칸 조성물은 용액에서 0.1% w/v 초과 30% w/v 미만의 푸칸 농도를 가질 수 있다. 킬레이트제는 용액에서 0.1% w/v 초과 60% w/v 미만의 농도를 가질 수 있다. 생성된 제1 및/또는 제 2 잔류물 조성물은 본질적으로 나트륨 및/또는 칼륨으로 구성된 양이온 함량을 포함할 수 있다.
도 1은 양이온함량 및/또는 출발 푸칸 조성물 수준의 개질을 위한 양이온함량 변경시스템(1200)의 개략도를 도시한다. 용액내의 출발 푸칸 조성물은 입력 공급라인(1202)을 통해 푸칸 용기(1216)에 공급된다. 적합한 용매 내의 출발 후코이단은 임의의 바람직하지 않은 입자상 물질을 제거하기 위해 예비필터(1204)를 통해 예비여과될 수 있다. 예비필터의 게이지는 일반적으로 양이온함량 변경시스템(1200)에서 분리되는 가장 큰 폴리머 분자보다 클 것이다.
TFF 입력펌프(1214)는 TFF 공급라인(1212)을 통해 TFF 필터(1210)로 출발 푸칸 조성물을 펌핑한다. 투과액이 하나의 출력 라인을 통해 빠져 나가고 처리된 입력 유체가 다른 출력 라인을 통해 잔류물로 남는 동안 TFF 필터(1210)는 일반적으로 공급된 입력 유체가 잔류물 측의 필터를 통과할 수 있도록 설계된 카세트로 공급된다. TFF 입력펌프(1214)는 잔류물과 투과물 양쪽 사이의 압력을 TFF 필터(1210)에 가한다. 도 1에 도시된 바와 같이, TFF 필터(1210)의 잔류물은 TFF 잔류물 복귀라인(1218)과 TFF 잔류물 밸브(1217)를 통해 푸칸 용기(1216)로 복귀되는 반면, 투과물은 양이온함량 변경시스템(1200) 외부에서 사용하도록 TFF 투과물 출력라인(1219)을 통해 생성되거나, 폐기된다.
TFF 입력펌프(1214)가 예피여과된 후코이단과 잔류물을 TFF 필터(1210)를 통해 순환시키는 동안, 킬레이트제, 예컨대 에틸렌디아민-테트라아세트산(EDTA), 2,3-디머캅토-1-프로판올, 에틸렌디아민, 포르핀 또는 시트르산 중의 하나를 제1 투석여과액 용기(1220)으로부터 제1 투석여과액 공급라인(1225)를 통해 푸칸 용기(1216)내 출발 푸칸 조성물에 첨가할 수 있다. 킬레이트제는 TFF 투과물 출력라인(1219)상의 투과물을 통해 손실된 용매를 보충 및/또는 소정의 수의 통과부피의 입력 푸칸과 킬레이트제가 TFF 필터(1210)를 통해 순환되도록 하는데 사용된다. 킬레이트제는 출발 푸칸 조성물내 양이온, 특히 다가 양이온은 킬레이트로서 격리한 다음, TFF 필터(1210)를 통해 투과물로 보낸다. 제 1 투석여과액 밸브(1224)를 제어하여, 킬레이트제가 펄스 공정으로 첨가될 수 있다. 한편, 킬레이트제가 연속 모드로 첨가될 수도 있다. TFF 필터(1210)를 통해 처리할 킬레이트제의 통과부피의 수가 예정될 수 있다. 이 공정은 소정의 시간 동안, 예를 들어 약 1 내지 6 시간, 약 3 내지 12 시간 및 약 10 내지 24 시간 동안 계속될 수 있다. 이 공정은 킬레이트제의 소정의 수의 통과부피, 예를 들어 약 1 내지 4, 약 3 내지 6, 약 5 내지 10 및 약 7 내지 20회의 통과부피 동안 계속될 수 있다. 공정이 계속되면서 푸칸 용기(1216)의 양이온 함량을 측정할 수 있으며, 원하는 양이온 함량, 예를 들어 10ppm 미만, 1ppm 미만, 0.1ppm 미만 및 0.01ppm 미만의 다가 양이온으로된 양이온 함량에 도달하면 TFF 공정이 종료된다. 제 1 투석여과액으로 TFF 필터(1210)를 통한 용액내 출발 푸칸 조성물을 투석여과하면 제 1 잔류물 푸칸 조성물의 양이온 함량이 바뀐다.
다음 단계로 푸칸 용기(1216)의 제 1 잔류물 푸칸 조성물로부터 남아있는 킬레이트제를 제거한다. 이 단계는 제 1 투석여과액 밸브(1224), 양이온함량 변경시스템 출력밸브(1206)를 차단하고, 제 2 투석여과액 용기(1230)로부터의 2차 투석여과액을 제 2 투석여과액 공급라인(1235)과 제 2 투석여과액 밸브(1234)를 통해 푸칸 용기(1216)로 보내 이루어진다. 푸칸 용기(1216) 내의 혼합물은 이전과 같이 TFF 공급라인(1212), TFF 입력펌프(1214), TFF 잔류물 복귀라인(1218) 및 TFF 잔류물 밸브(1217)을 통해 TFF 필터(1210)로 간다. 2차 투석여과액은 예를 들어 탈이온수, 정균제 용액 및 염 중 어느 하나 이상을 제한없이 포함할 수 있다. 정균제가 아황산나트륨, EDTA, 염화 벤잘코늄, 에탄올, 티오우레아일 수도 있다. 염은 염화나트륨, 염화칼륨, 인산 나트륨, 중탄산 암모늄, 인산염 완충 식염수를 포함할 수 있다.
2차 투석여과액은 TFF 투과물 출력라인(1219)상의 투과물을 통해 손실된 용매를 보충 및/또는 제 1 잔류물 푸칸 조성물과 2 차 투석여과액의 소정의 횟수의 통과부피가 TFF 필터(1210)를 통해 순환되도록 하는데 사용된다. 제 2 투석여과액 밸브(1234)를 제어하여, 이차 투석여과액이 펄스 공정으로 첨가될 수 있다. 한편, 2 차 투석여과액이 연속 모드로 첨가될 수도 있다. TFF 필터(1210)를 통해 처리할 2 차 투석여과액의 통과부피의 수는 미리 결정될 수 있다. 이 공정이 소정의 기간 동안, 예를 들어 약 1 내지 6 시간, 약 3 내지 12 시간 및 약 10 내지 24 시간 계속될 수 있다. 이 공정이 킬레이트제의 소정의 수의 통과부피, 예를 들어 약 1 내지 4, 약 3 내지 6, 약 5 내지 10 및 약 7 내지 20 통과부피 동안 계속될 수 있다. 또, 10ppm 미만, 1ppm 미만, 0.1ppm 미만 및 0.01ppm 미만의 다가 양이온의 양이온 함량을 가질 수도 있다. 이 공정을 계속하면서, 푸칸 용기(1216)의 잔류 킬레이트제 농도를 측정하고, 잔류 킬레이트제 농도가 10ppm 미만, 1ppm 미만, 0.1 ppm 미만 및 0.01 ppm 미만 정도로 낮아지면 TFF 공정을 종료할 수 있다. 푸칸 용기(1216) 내의 생성된 제 2 잔류물 푸칸 조성물은 양이온함량 변경시스템(1200) 공정의 정제/개질된 푸칸 생성물을 포함한다. 원하는대로, 푸칸 용기(1216)내의 최종 제 2 잔류물 푸칸 조성물은 양이온함량 변경시스템출력라인(1208)을 통해 푸칸 용기(1216)에서 제거될 수 있다.
초임계유체 추출
바람직하지 않은 수준의 불순물을 함유한 출발 푸칸 조성물의 푸칸은 초임계유체 추출을 겪는다. 이 방법은 다음을 포함할 수 있다 : 출발 푸칸 조성물을 고체로 제공하는 단계; 초임계추출기에 출발 푸칸 조성물을 배치하는 단계; 초임계추출기에서 출발 푸칸 조성물에 70bar 이상의 압력을 가하는 단계; 초임계추출기에서 출발 푸칸 조성물을 30℃ 이상의 온도로 가열하는 단계; 초임계추출기에 초임계유체를 충전하여 정제/개질된 푸칸과 추출된 불순물을 포함하는 초임계유체를 생성하는 단계; 추출된 불순물을 포함한 초임계유체를 일정 시간 후에 초임계추출기에서 제거하는 단계; 및 정제/개질된 푸칸을 회수하는 단계.
초임계추출기를 초임계유체로 채우는 것은 초임계추출기를 이산화탄소로 채우는 것을 포함할 수 있다. 초임계 이산화탄소는 2% v/v ~ 10% v/v 에탄올로 보충되거나, 보조 용매로서 약 5%v/v 에탄올로 보충될 수 있다. 이 방법에 사용할 이산화탄소에 대한 대체 초임계유체는 에탄올, 에탄, 염산, 불화 수소산, 황산 및 질산을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
출발 푸칸에 적절한 압력을 가하는 것은 출발 푸칸 조성물에 약 70bar 내지 2000bar의 압력을 가하는 것을 포함할 수 있다. 출발 푸칸 조성물을 적절한 온도에 적용하는 것은 출발 푸칸 조성물을 약 30℃ 내지 300℃의 온도에 적용하는 것을 포함할 수 있다.
소정 시간 후에 추출된 불순물을 포함한 초임계유체를 제거하는 것은 약 5분 내지 50시간, 예를 들어 약 10분 내지 1시간, 약 30분 내지 5 시간, 약 1 시간 내지 24시간 및 약 5 시간 내지 48 시간 후 초임계유체를 제거하는 것을 포함할 수 있다.
이 방법은 초임계추출기에 출발 푸칸 조성물을 배치하기 전에 출발 푸칸 조성물을 탈염하는 단계를 더 포함할 수 있다. 탈염은 분자량 컷오프(MWCO) 접선유동여과 (TFF)필터를 통해 물 중의 용액으로서 출발 푸칸 조성물을 투석여과하는 것을 포함할 수 있다. 투석여과는 출발 푸칸 조성물을 증류수로 투석여과하는 것을 포함할 수 있다. 분자량 컷오프 TFF 필터는 정제/개질된 푸칸에서 또는 이에 대한 목적하는 분자량 분리 지점이나 표적보다 작은 분자량 컷오프, 예를 들어 50kDa, 70kDa, 100kDa, 200kDa, 300kDa, 500kDa 또는 1000kDa 분자량 컷오프를 가질 수 있다. 투석여과는 입자상 물질을 제거하기 위해 적절한 예비필터로 출발 푸칸 조성물을 예비여과하는 것을 더 포함할 수 있다.
화학구조 변경
본원에서 논의된 방법, 시스템 등은 푸칸 조성물의 푸칸의 화학구조 변경을 포함할 수 있다. 화학구조 변경은 푸칸으로부터 관능기, 예를 들어, 푸칸 구조로부터 O-아세틸, N-아세틸, 메톡시, 하이드록실, 카르복실산 및/또는 설페이트 관능기의 제거를 포함할 수 있다. 화학구조 변경은 예를 들어 산, 염기, 세제 및/또는 산화제와 같은 다양한 화학 시약의 사용을 포함할 수 있다.
접선유동여과
본원의 일부 방법은 접선유동여과(TFF)를 이용한다. 주어진 TFF 필터에 대한 공칭 분자량 컷오프(MWCO; nominal molecular weight cut-off) 값은 필터 장벽을 통과하지 않은 분자를 포함한 용액을 잔류물 측에 선택적으로 유지하여, 일반적으로 투과면에 대한 장벽을 교차/투과하는 분자의 분자량보다 큰 분자량 및/또는 크기를 갖는다. 따라서 TFF 필터의 분자량 컷오프 값은 일반적으로 주어진 폴리머나 공칭 컷오프 값에 대해 절대적이지 않다. 주어진 TFF 필터는 공칭 분자량 컷오프 위아래 양쪽에서 일부 분자를 통과하거나 유지한다. 특정 폴리머에 대한 공칭 TFF 필터의 실제 컷오프 값과 효과는 특정 폴리머에 대해 루틴하게 결정될 수 있다.
다수의 인자가 TFF 필터의 투과 거동에 영향을 미칠 수 있다. 이런 인자는 TFF 필터 자체나 표적 중합체의 속성에 의존할 수 있다. 예를 들어 표적 중합체의 접힘 거동과 접힌 구조는 TFF 필터의 MWCO장벽을 교차/비교차할 때 표적 중합체의 거동에 영향을 미칠 수 있다. 주지하는 바와 같이, 여러 요인이 TFF 필터의 투과 거동에 영향을 미칠 수 있다. 예를 들어, 제조 방법이 특정 TFF 필터의 구멍 크기를 다양하게할 수 있으며, 이런 다양성은 공칭 MWCO보다 크고 작은 구멍들을 모두 포함할 수 있다. 따라서, 공칭 분자량 컷오프 값을 갖는 TFF 필터는 공칭 분자량 컷오프 값에서 분자를 실질적으로 통과/유지할 수 있지만, 이런 값 위아래의 일부 분자를 통과/유지할 수도 있다.
겔투과 크로마토그래피
겔투과 크로마토그래피("GPC")를 사용해 실험예에 대해 수득된 분자량 분포를 평가했다. 겔투과 크로마토그래피에 사용할 수 있는 다양한 매개변수, 컬럼 및 표준이 있어 분자량 분석에 사용할 수 있는 다양한 기기 설정이 가능하다. 본원의 분자량 측정을 위해 GPC는 다음 매개변수를 사용해 수행했다: 이동상은 0.6mL/min로 운용된 0.1M 질산나트륨이었고, 컬럼구획과 검출기는 30도 였다. Waters 2414 굴절률 검출기를 검출에 사용했다.
적당한 GPC 컬럼은 수성 용매와 호환되는 GPC 컬럼, 예를 들어 설폰화 스티렌-디 비닐 벤젠, NH-관능화 아크릴레이트 공중합체 네트워크, 개질 실리카 및 하이드록실화 폴리메타크릴레이트 기반 겔 중 하나 이상으로 채워진 컬럼을 포함한다. 본 분석을 위해, 6μm 입경 하이드록실화 폴리메타크릴레이트 기반 겔로 채워진 내경(ID) 6mm의 40mm 길이 가드 컬럼 1 개, 제외한계가 약 7,000kDa이고 유효 분자량 범위가 약 50kDa~5,000kDa인 12 μm 입경 하이드록실화 폴리메타크릴레이트 기반 겔로 채워진 7.8 mm ID의 제1 300mm 분석 GPC 컬럼, 및 제외한계가 약 7,000kDa이고 유효 분자량 범위가 약 1kDa~6,000kDa인 10 μm 입경 히드록실화 폴리메타크릴레이트 기반 겔로 채워진 7.8mm ID의 제2 300 mm 분석 GPC 컬럼의 3개의 컬럼이 직렬로 사용되었다. 이 컬럼 셋업의 총 유효 분자량 범위는 약 1kDa~6,000kDa 였다. 이런 컬럼 셋업 예로는 직렬로 연결된 Ultrahydrogel® guard-Ultrahydrogel® 2000-Ultrahydrogel® Linear 컬럼이 있다.
American Polymer Standards Corporation의 추적 가능한 표준들로 구성된 표준 곡선에 대해 실행된 샘플들을 정량화했다: DXT670K(피크 분자량 = 401kDa), DXT530K(피크 분자량 = 490kDa), DXT500K(피크 분자량 = 390kDa), DXT270K(피크 분자량 = 196kDa), DXT225K(피크 분자량 = 213kDa ), DXT150K(피크 분자량 = 124kDa), DXT55K(피크 분자량 = 50kDa), DXT50K(피크 분자량 = 44kDa) 및 DXT5K(피크 분자량 = 4kDa), 이들 표준의 피크 분자량은 약 4kDa 내지 2,200kDa이다. 사용된 표준 곡선은 예를 들어 Dextran 3755kDa, Dextran 50kDa 및 Dextran 55kDa 그리고 여기서 논의된 3 내지 6 개의 추가 추적가능 표준들중 적어도 하나를 포함 할 수 있으며, 수정 포인트는 사용된 수정 제의 피크 분자량이다. 예제 교정 곡선은 DXT3755K, DXT 820K, DXT530K, DXT500K, DXT225K 및 DXT55K로 구성될 수 있다. 여기 사용된 컬럼은 푸칸의 정량화에 사용된 표준의 피크 분자량 범위와 그 이상으로 확장된 총 유효 분자량 범위를 가졌다.
여기서 푸칸/후코이단 중합체에 대해 언급된 분자량은 특정 분자량으로부터 분자량이 증감함에 따라 양이나 백분율로 증감하는 더 높거나 낮은 분자량의 분자 분포가 항상 존재하는 분자량의 값이다. 이 분포는 일반적으로 가우스나 왜곡된 가우스 모양을 가질 수 있지만 반드시 그런 것도 아니다.
표의 결과는 분자량 분포의 특정 특성에 사용되는 약어를 포함한다. 겔투과 크로마토그래피는 GPC, 피크 머무름 시간은 PRT, 피크분자량은 PMW, 중량평균분자량은 WAMW, 수평균분자량은 NAMW로, 백분율 분포는% dist, 분자량은 MW, 다분산지수는 PDI, 분자량 컷오프는 MWCO로 표시한다.
질환과 상태
섬유성 유착
섬유성 유착은 일반적으로 수술 후 신체의 두 부분 사이에 형성되는 일종의 흉터이다(이런 섬유성 유착을 수술 유착이라고도 함). 섬유성 유착은 심각한 문제를 일으킬 수 있다. 예를 들어, 여성 생식기관(난소, 나팔관)과 관련된 섬유성 유착은 불임, 성교통 및 심한 골반 통증을 유발하고, 장에서 발생하는 섬유성 유착은 장폐쇄나 막힘을 유발하며, 섬유성 유착은 심장, 척추 및 손 주변과 같은 다른 위치에서도 형성될 수 있다. 수술 외에도 자궁 내막증, 감염, 화학요법, 방사선, 외상 및 암에 의해 섬유성 유착이 생길 수도 있다.
다양한 섬유성 유착이 여기서 논의된다. 수술 유착, 수술 후 유착, 골반 염증성 질환으로 인한 유착, 기계적 손상으로 인한 유착, 방사선에 의한 유착, 방사선 치료로 인한 유착, 외상으로 인한 유착, 이물질 존재로 인한 유착과 같은 용어는 모두 유사한 메커니즘으로 인해 조직이 서로 유착되는 것을 말하며 모두 섬유성 유착이라는 용어에 포함된다.
섬유성 유착 형성은 신체에서 정상적으로 분리된 조직이 서로 성장하는 복잡한 과정이다. 외과적 유착(수술 후 유착이라고도 함)은 외상에 대한 조직의 정상적인 상처 치유반응에서 발생하며 모든 복부 수술 환자의 2/3 이상에서 발생하는 것으로 보고되었다(Ellis, H., Surg. Gynecol. Obstet.133:497(1971)). 이런 섬유성 유착의 결과는 다양하며 수술 부위나 관련된 질병 부위와 같은 부위에 따라 다르다. 문제는 만성통증, 장폐색, 심장수술 후 사망위험 증가 등이 포함될 수 있다는 것이다(diZerega, GS, Prog. Clin. Biol. Res. 381:1-18(1993); diZerega, GS, Fertil. Steril. 61:219-235(1994); Dobell, AR, Jain, AK, Ann. Thorac. Surg. 37:273-278(1984)). 생식 연령대의 여성에서 자궁, 나팔관 또는 난소와 관련된 섬유성 유착은 모든 불임 사례의 약 20%를 차지하는 것으로 추정된다(Holtz, G., Fertil. Steril. 41:497-507(1984); Weibel, MA 및 Majno, G. Am. J. Surg. 126:345-353(1973)).
섬유성 유착 형성 과정은 처음에 섬유소 프레임웍의 형성과 정상적인 조직 복구를 포함한다. 정상적인 복구 과정은 중피 복구와 함께 섬유소용해를 허용한다. 그러나, 섬유성 유착 형성에서 섬유 아세포가 네트워크로 증식하고 혈관신생이 일어나 약 3 ~ 5 일 이내에 조직화된 섬유성 유착이 확립됨에 따라 섬유소 기질이 성숙해진다(Buckman, RF, et al., J. Surg. Res. 21:67-76(1976); Raferty, AT, J. Anat. 129:659-664(1979)). 염증 과정에는 외상 조직에서 호중구 활성화, 인접 조직의 섬유소 침착 및 결합, 대식세포 침습, 해당 부위로의 섬유 아세포 증식, 콜라겐 침착, 혈관신생 및 영구 섬유성 유착 조직의 형성이 포함된다.
외과적 유착을 방지하기 위한 다양한 시도가 있었다. 여기에는 외과적 외상을 수반하는 생화학적 및 세포적 이벤트에 영향을주는 것을 목표로하는 약리학적 접근법과 영향을 받은 조직의 분리를 위한 장벽 방법이 포함된다. 예를 들어, 복막 세척, 헤파린 용액, 응고촉진제 사용, 현미경이나 복강경 수술법 사용과 같은 수술법 수정, 수술 장갑에서 활석 제거, 장막 표면의 부착을 최소화하기위한 더 작은 봉합사 사용과 물리적 장벽(필름, 겔 또는 용액) 시도가 모두 시도되었다. 현재 예방 요법에는 섬유소침착 예방, 염증 감소(스테로이드 및 비스테로이드 항염증제) 및 섬유소 침착 제거가 포함된다.
수술 후 유착의 형성을 방지하기위한 중재적 시도에는 하이드로플로테이션 기술 또는 장벽 장치의 사용이 포함되었다. 하이드로플로테이션은 덱스트란(Adhesion Study Group, Fertil. Steril. 40:612-619(1983)) 또는 카르복시메틸셀룰로오스(Elkins, TE, et al., Fertil. Steril. 41: 926-928(1984))와 같은 다량의 폴리머 용액을 장기를 분리하기위한 시도로 수술 공간으로 주입하는 것을 포함한다. 산화된 재생 셀룰로오스(예:Interceed ™), 폴리테트라플루오로에틸렌(Gore-tex 수술용 멤브레인) 및 개질된 히알루론산/카르복시메틸셀룰로오스(HA/CMC) 조합으로된 완전 재흡수성 멤브레인(Seprafilm ™)으로 만든 합성 차단막도 동물과 인간 모두에서 수술 후 유착 형성 감소에 사용되었다(Burns, JW, et al., Eur. J. Surg. Suppl. 577:40-48(1997); Burns, JW, et al., Fertil. Steril. 66:814-821(1996); Becker, JM, et al., J. Am. Coll. Surg.183:297-306(1996)). 이런 HA/CMC 막의 성공은 섬유성 유착이 형성될 때 복막상처 복구 과정 동안 조직 분리를 제공하는 능력에서 비롯될 수 있다. 막은 적용 후 3-5일 동안 손상된 조직에 투명한 점성 코팅을 형성하는 것으로 관찰되었으며, 이 기간은 수술 후 유착 형성의 시간 경과와 일치한다(Ellis, H., Br. J. Surg. 50:10-16(1963)). 안타깝게도 이 방법은 제한적으로만 성공했다.
복막염은 복막의 염증을 수반한다. 복막염은 복통, 복부 압통 및 복부 보호와 같은 심각한 문제를 일으킬 수 있다. 복막염은 자발적, 해부학적 및/또는 복막 투석여과 관련 염증을 수반할 수 있다. 복막염은 감염, 예를 들어 속이 빈 점막 천공, 복막 파괴, 자연 세균성 복막염, 전신 감염으로 인한 감염 및 복막염이 발생할 수 있다. 복막염이 복막으로의 멸균체액의 누출과 같은 감염을 수반하지 않을 수도 있고, 멸균 복부 수술이 복막염을 유발할 수 있다. 복막염을 예방 및/또는 치료하기위한 다양한 시도가 있었다. 예를 들어, 정맥 재수화, 항생제 및 수술과 같은 일반적인 지원 조치. 바람직하게는 부작용이 거의없이 복막염을 억제하거나 달리 치료 및/또는 예방하기위한 화합물, 조성물, 방법 등(전달 접근법 포함)에 대한 충족되지 않은 요구가 있다.
본원에 논의된 정제/개질 푸칸은 환자의 섬유성 유착을 치료하는데 사용될 수 있으며, 정제/개질 푸칸 의료 조성물, 의료기기, 조합 또는 제약 제품의 구성 요소에 포함되거나 구성될 수 있고, 섬유성 유착을 치료하도록 구성될 수 있다. 예컨대 정제/개질 푸칸 의료 조성물이나 의료기기가 생리학적 염 용액에 용해된 정제/개질 푸칸의 약 0.02mg/mL 내지 100mg/mL, 예를 들어 0.1mg/mL, 0.2mg/mL, 0.3mg/mL, 0.5mg/mL, 0.9mg/mL, 1mg/mL, 2.5mg/mL, 5mg/mL 7.5mg/mL를 포함할 수 있다. 생리학적 염 용액은 예를 들어 Lactated Ringer 's Injection USP(LRS), 생리 식염수 및 생리학적 덱스트란 용액일 수 있다.
본원에서 액체일 수 있는 정제/개질 푸칸 의료 조성물과 의료기기는 완충제, 안정화제, 보존제, 보조제 등과 같은 제약상 허용되는 부형제를 함유할 수 있다. 이런 정제/개질 푸칸 의료 조성물과 의료 조성물 장치는 약 0.01 mL/kg(환자 또는 표적의 체중 킬로그램 당) 내지 10 mL/kg 또는 15 mL/kg의 푸칸 의료 조성물이나 장치를 투여하여 수술 전, 수술 중 또는 수술 후 섬유성 유착을 치료하는데 사용할 수 있다. 투여량과 장치 양에는 예를 들어 약 0.03 mL/kg, 0.1 mL/kg, 0.2 mL/kg, 0.4 mL/kg, 0.5 mL/kg, 0.6 mL/kg, 1 mL/kg, 1.2 mL/kg, 2 mL/kg, 3 mL/kg, 4 mL/kg, 5 mL/kg, 8 mL/kg, 10 mL/kg 및 15 mL/kg의 정제/개질 푸칸 의료 조성물이나 의료기기를 환자의 수술 부위에 사용한다. 한편, 이런 정제/개질 푸칸 의료 조성물과 의료기기는 임의의 선택된 표적 부위, 예를 들어 병변, 찰과상, 손상 부위, 수술 부위 및 수술 후 부위에 약 0.04mg/kg 또는 0.1mg/kg 내지 25mg/kg 또는 50mg/kg을 투여함으로써 섬유성 유착을 치료하는데 사용될 수도 있다. 이런 용량의 예를 들면 본원의 정제/개질 푸칸을 포함한 본원의 푸칸의 약 0.04mg/kg, 0.075mg/kg, 0.1mg/kg, 0.2mg/kg, 0.5mg/kg, 1mg/kg, 1.3mg/kg, 1.5mg/kg, 2mg/kg, 3mg/kg, 4mg/kg, 5mg/kg, 7.5mg/kg, 8mg/kg, 10mg/kg, 15mg/kg, 20mg/kg, 25mg/kg 및 50mg/kg을 환자의 수술 부위에 전달한다. 투여는 예를 들어 일반적으로 표적 영역 전체에 액체 의료 조성물이나 의료기기를 주입하고; 액체 의료 조성물이나 의료기기를 표적 영역내의 특정 위치(들)로 향하게하고; 액체 의료 조성물이나 의료기기를 표적 영역내의 특정 위치(들)에 분무하며; 또는 외과의나 다른 개업의가 섬유성 유착의 발달에 특히 민감하거나 관련이 있는 것으로 확인한 특정 위치(들)에 트로카, 카테터, 내시경 또는 기타 최소 침습성 장치를 통해 스프레이 어플리케이터가될 수 있은 어플리케이터로 액체 의료 조성물이나 의료기기를 분무하거나 전달하여 이루어질 수 있다. 또 다른 면에서, 투여는 수술 상처를 개봉하고 수술 전에; 수술 중; 또는 수술 후 수술 상처가 닫히기 전에할 수도 있다. 원한다면, 액체 의료 조성물이나 의료기기가 수술이 완료된 후에도(예를 들어 주사기 및 바늘을 통해) 투여될 수도 있고 비수술 표적 부위에도 투여될 수 있다. 환자의 수술 부위는 예를 들어 골반강, 복강, 등강, 두개강, 척추, 복강, 흉강, 심낭강, 피부, 관절, 근육, 힘줄 또는 인대 중 적어도 하나 일 수 있다. 정제/개질 푸칸 의료 조성물이나 의료기기를 환자의 수술 부위에 투여하는 것은 약 15 분, 10 분, 8 분, 6 분, 5 분, 4 분, 3 분, 2 분, 1 분, 45 초, 30 초, 20 초, 15 초, 10 초 및 5 초 이내에 완료될 수 있다.
정제/개질 푸칸 의료 조성물이나 의료기기를 수술 부위에 투여하는 예는 정제/개질 푸칸 의료 조성물이나 의료기기를 제왕절개 수술 부위에 투여; 미세 혈관 자유 플랩 재건수술, 전체 두께 피부이식 수술, VY 전진 플랩 수술, 근막 회전 피판 수술, 관절 성형수술, 유방절제술 수술, 격리 절제술 수술, 받침 접시 수술, 절골 수술, 골성형 수술, 슬개 절제 수술, 활막 절제 수술, 캡슐 절제 수술, 힘줄이나 인대 수리 수술, 건용해 수술, 건절개 수술, 근막절개 수술, 반월판 수리 수술, 척추 절제술 수술, 사골절제술 수술, Caldwell Luc 수술, 누낭 비강 절제술 수술, 용해 코공막 수술, 흉선 절제술 수술, 공압 용해 수술, 폐렴 절제술 수술, 흉강 성형 수술, 담즙 절제술 수술, 문맥 고혈압 수술, 비장 절제술 수술, 식도 절제술 수술 , 복막염 수술, 위 절제술 수술, 공장간연결 수술, 복강경 담낭 절제 수술, 복강경 총 담관 탐사 수술, 위장관 절제 수술, 비만 수술, 장절제 및 문합 수술, 퇴적 간절제 수술, 엽절제 수술, 췌장 수술, 췌장 십이지장 절제 수술, 종양 절제 수술, 복강경 신장 절제 수술, 방광 절제 수술, 복부 또는 골반 유착 용해 수술, 자궁 경부 절개 수술, 난관 성형 수술, 자궁외 임신 복강경 수술, 관절 대체 수술, 골절 복구 수술, 자궁 적출 수술, 담낭 제거 수술, 심장 우회 수술, 혈관 성형 수술, 죽종 절제 수술, 유방 생검 수술, 경동맥 내막 절제 수술, 백내장 수술, 관상 동맥 우회 수술, 확장 및 소파술 수술, 탈장 수술, 요통 수술, 부분 대장 절제 수술, 전립선 절제 수술, 편도선 절제 수술, 수술 상처 개봉 후, 수술 중, 수술 상처 봉합 전 및/또는 폐쇄 후 외과 상처 등이 있다.
일반 암
암은 미국에서 두 번째 주요 사망 원인이며 모든 사망자의 20% 이상을 차지한다. 암은 증식성 질환이며 특정 세포의 통제되지 않은 분열로 하나 이상의 종양이 형성될 수 있다. 암을 치료하기 위해 수술, 방사선, 화학요법 및 이들의 조합을 포함해 많은 방법이 사용된다. 수술은 일부 국소 종양에 사용되는 비교적 일반적인 방법이지만 종양 절제 후 종양이 재발할 가능성이 여전히 높다.
암과 기타 증식성 질환의 치료는 비암성 건강한 조직에 대한 손상이나 독성 가능성 때문에 제한적이다. 방사선 및 외과적 치료과정은 일반적으로 종양 부위에 국한된다. 그러나 암조직을 외과적으로 제거하는 환자에게는 상당한 위험이 있을 수 있다(예:전립선이나 뇌종양 제거시, 예를 들어 절제 필요성 감소를 통해 주변 생명 조직에 수리 불가능한 손상을 입힐 위험이 있을 수 있다). 또, 전립선 암의 1차 치료로 시행되고있는 집중 방사선 치료에서도 비슷한 위험이 있다. 암의 화학 치료에서는 약물이 전신 투여되고, 이런 약물은 암세포에 독성이 있도록 설계되었지만(일반적으로) 비 암성 세포에도 독성이 있어 환자가 암에 대한 약물치료를받을 때 상당히 아플 수 있다. 경험적으로, 종양 전문의는 환자가 견딜 수 있은 약물의 용량을 투여하지만, 이런 용량도 암 치료에 성공적이지 않을 때가 많다.
암 치료법의한 가지 문제는 질병의 국소 재발이었다. 예를 들어, 약 70 만 명의 미국인이 매년 국소암 진단을 받고(전체 암 환자의 약 64%) 거의 50 만명이 외과적 치료를 받는다. 안타깝게도 초기 치료 후 재발로 치료받은 환자의 32%(초기 수술 부위에서 약 21% 재발, 먼 전이 부위에서 11% 재발), 매년 약 100,000명의 환자가 국소적 암 재발로 사망한다. 이것은 유방절제술을 받은 환자의 39%가 질병의 국소 재발을 경험하는 유방암에서 특히 사실이다.
단계법은 환자의 암(고형 종양)의 진행을 판단하는 방법이다. 단순하게 암이 얼마나 진행되었는지에 따라 환자를 세 그룹 또는 단계로 분류한다:
1기: 장기의 일부를 외과적으로 제거하여 암을 치료할 수 있다. 절제 가능 단계라고도한다.
2기: 암이 절제가능한 지점을 지나 진행되었지만 여전히 장기 자체에 국한되어 있다.
3기: 종양이 다른 기관으로 퍼졌다.
많은 암은 예를 들어 5-플루오로우라실(Efudex), 빈카 알칼로이드(예, 빈크리스틴(Oncovin)), 안트라사이클린(예, 독소루비신(Adriamycin)), 시스플라틴(Platinol-AQ), 젬시타빈 염산염(Gemzar), 메토트렉세이트 및 파클리탁셀을 포함한 항증식제로 치료된다. 항증식제, 메토트렉세이트 및 파클리탁셀과 관련된 독성의 일부 예는 본원의 다른 곳에서 논의된다. 메토트렉세이트는 예를 들어 방광암, 유방암, 자궁경부암, 두경부암, 간암, 폐암 및 고환암을 포함한 여러 암을 치료하는 데 사용된다. Paclitaxel은 예를 들어 난소암, 유방암 및 비-소세포 폐암을 포함한 여러 암을 치료하는 데 사용된다(Compendium of Pharmaceutical and Specialties Thirty-fifth Edition, 2000).
5-플루오로우라실로 인한 독성은 심근 허혈과 같은 심혈관 독성; 행복감, 급성 소뇌 증후군 및 운동 실조와 같은 중추 신경계 독성; 탈모증 및 피부염과 같은 피부 독성; 메스꺼움, 구토 및 구강 또는 위장 궤양과 같은 위장 독성; 백혈구 감소증, 혈소판 감소증 및 빈혈과 같은 혈액학적 독성; 아나필락시스 및 접촉 과민증과 같은 과민성 독성; 눈물샘 증가, 광 공포증 및 결막염과 같은 안과 독성; 그리고 열과 같은 다른 독성을 포함한다. 5-플루오로우라실은 유방암, 결장 직장암, 위암, 간암, 방광암, 두경부암, 비-소세포 폐암, 난소암, 췌장암, 전립선암 등 많은 암을 치료하는 데 사용되었다(Compendium of Pharmaceutical and Specialties Thirty-fifth Edition, 2000).
빈크리스틴으로 인한 독성에는 소아 발작 및 환각과 같은 중추 신경계 독성; 탈모증과 같은 피부 독성; 베시컨트와 같은 유출 독성; 메스꺼움, 구토, 변비 및 구내염과 같은 위장 독성; 골수 억제와 같은 혈액학적 독성; 말초신경 병증 및 자율신경 병증과 같은 신경학적 독성; 이중 시력, 일시적 실명 및 시신경 위축과 같은 안과 독성; 소변 정체, 고요산혈증 및 방광 무력증과 같은 신장/대사 독성; 숨가쁨과 같은 호흡기 독성; 및 어린이의 발열과 같은 기타 독성이 있다. 이런 항증식제는 호지킨 병, 소세포 폐, 윌름 종양, 고환암 등 여러 암을 치료하는 데 사용되었다(Compendium of Pharmaceutical and Specialties Thirty-fifth Edition, 2000).
독소루비신으로 인한 독성은 심전도 이상, 심근 병증과 같은 심혈관 독성; 탈모증, 손발톱 변화와 같은 피부 독성; 베시컨트와 같은 유출 위험 독성; 메스꺼움, 구토, 구내염과 같은 위장 독성; 붉은색 소변과 같은 비뇨생식기 독성; 골수 억제와 같은 혈액학적 독성; 아나필락시스, 피부 발진과 같은 과민성 독성; 결막염과 같은 안구 독성; 불임과 같은 생식 독성; 및 고요산혈증과 같은 기타 독성이 있다. 이 항증식제는 유방암, 소세포 폐암, 난소암 등 여러 암 치료에 사용되고 있다(Compendium of Pharmaceutical and Specialties Thirty-fifth Edition, 2000).
시스플라틴으로 인한 독성에는 심전도 변화와 같은 심혈관 독성; 및다색소 침착과 같은 피부 독성; 자극제와 같은 유출 위험 독성; 메스꺼움 및 구토와 같은 위장 독성; 골수억제 및 용혈성 빈혈과 같은 혈액학적 독성; 아나필락시스와 같은 과민성 독성; 말초신경 병증 및 급성 뇌병증과 같은 신경근 독성; 구후신경염과 같은 안구 독성; 청력상실 및 이명과 같은 이과 독성; 독성신병증 및 저칼륨 혈증과 같은 신장/대사 독성; 및 불임과 같은 기타 독성이 있다. 이 항증식제는 방광암, 소세포 폐암, 난소암, 고환암, 뇌암, 유방암, 자궁경부암, 두경부암, 간 모세포종 암, 갑상선암 등 여러 암을 치료하는데 사용된다(Compendium of Pharmaceutical and Specialties Thirty-fifth Edition, 2000). 젬시타빈 염산염으로 인한 독성은 예를 들어 골수억제와 같은 혈액학적 독성; 메스꺼움, 구토 및 구내염과 같은 위장 독성; 혈청트랜스 아미나 제의 일시적인 상승과 같은 간 독성; 단백뇨, 혈뇨, 용혈성 요독 증후군 및 신부전과 같은 신장 독성; 발진 및 탈모증과 같은 피부 독성; 부종 및 말초 부종과 같은 부종 독성; 및 발열과 같은 기타 독성이 있다. 이 항증식제는 췌장암 및 비소세포성 폐암 치료에 사용된다(Compendium of Pharmaceutical and Specialties Thirty-fifth Edition, 2000).
본 논의는 전립선암, 유방암, 췌장암, 간암, 신장암, 비뇨생식기계, 뇌, 위장관계, 호흡기, 두경부 등의 국소암이나 고형암의 예방이나 치료를 포함한다. 본원의 조성물 등은 확산이나 전신 수송에 의해 유효 농도의 정제/개질 푸칸이 종양 및/또는 전이부에 도달하도록 하여 표적 종양으로부터 다소 떨어진 부위로의 정제/개질 푸칸의 제어 방출을 함으로써 전이를 비롯한 암을 예방이나 치료할 수 있다. 이런 암 중 일부는 다음 단락에서 자세히 설명한다.
전립선암
전립선암은 전립선을 감싸는 세포에서 발생하는 악성 종양으로, 미국에서 올해 약 200,000명의 전립선암 환자가 생기고 30,000명 이상이 사망할 것으로 예상된다. 전립선암의 사망률은 약 15%이다. 암은 전립선 내에 남아있거나 주변 조직이나 먼 부위(대부분 림프절 및 뼈)로 퍼질수 있다. 일반적으로 전립선암은 조용히 퍼져 전립선을 넘어 진행된 경우에만 증상을 보인다. 일부 연구에 의하면, 전립선암이 초기 단계에서 진단 및 치료된 경우 5 년 생존율이 94%이다.
전립선암은 종종 50세 이상 남성의 질병으로 논의되곤한다. 실제로 전립선암 남성의 80%는 60 세 이상이다. 남성이 일생 동안 전립선암 진단을 받을 확률은 약 10분의 1로 여성이 유방암에 걸릴 확률과 거의 같다. 새로 보고된 사례의 수는 종종 증상이 나타나기 훨씬 전의 발병 초기에 질병을 발견할 수 있는 개선된 검사로 인해 최근 몇년 동안 급격히 증가했다. 특정 해에 전립선암에 걸릴 가능성은 나이가 들면서 증가하지만 50 세 이후에는 급격히 증가한다.
전립선암에 대한 현재의 치료 옵션은 질병 진행 정도, 환자의 연령 및 전반적인 건강 상태에 따라 달라진다. 초기 단계의 암만 앓고 있거나 다른 심각한 질병을 앓고있는 노인 환자는 보수적으로 치료할 수 있는 반면 암이 진행된 환자는 더 공격적인 치료를 받을 수 있다. 전립선암은 방사선 요법(외부 빔 방사선 또는 근접 요법), 호르몬 금단 또는 거세(수술 또는 화학적), 항증식제, 수술, 기대 요법(즉, "감시대기") 등 다양한 방법으로 치료되었다. 어떤 치료도 절대적인 치료를 보장하지 않으며 일부는 상당한 부작용이 있다.
초기 단계 전립선암(즉, 종양이 전립선에 국한 됨)은 "감시대기"로 치료할 수 있다. 전반적인 건강 상태가 양호하고 종양이 전립선에 국한된 환자에게는 전립선암 수술이 권장된다. 70세 미만 남성의 국소 전립선암에 대한 일반적인 치료법은 근치적 전립선 절제술(즉, 전립선의 외과적 제거)이다.
암이 전립선 부위에 국한된 환자는 일반적으로 외부 빔 방사선(EBR)으로 치료된다. 방사선은 암세포를 죽이고 종양을 축소시킨다. EBR은 국소 전립선암 치료의 20% 미만을 차지하며 이들 환자의 약 50%가 방사선 치료 후 재발을 겪는다. 초기 단계의 전립선암 발견과 환자의 수요 증가와 함께 근접 치료(즉, 국소 방사선 요법) 사용이 증가할 것으로 예상된다. 1995년에는 새로 진단된 환자의 2.5%만이 근접 치료를 받았다. 근접 치료는 전립선 종양에 방사성 금속“씨앗”을 이식하는 것을 포함한다.
확산된 전립선암에 대한 치료는 고환제거나 호르몬요법을 포함한다. 둘다 암 성장을 주도하는 테스토스테론의 생성을 억제하거나 중지하는데 사용된다. 모든 전립선암 환자의 20% 정도는 호르몬요법을 받는다. 호르몬요법에는 고세렐린 아세테이트(Zoladex)나 류프로렐린드 아세테이트(Lupron)가 포함된다. 전립선암 치료에 사용되는 항증식제는 5-플루오로우라실을 포함한다.
유방암
미국에서 유방암은 여성에게 가장 흔한 암으로 매년 약 180,000건의 새로운 사례가 진단되고 있다(남성 유방암은 유방암의 5% 정도를 차지). 여성의 사망 원인으로 폐암을 능가했으며 연간 약 50,000명의 사망자가 발생하고 있다. 미국 여성이 일생 동안 유방암에 걸릴 확률이 8분의 1(약 13%)이다. 지난 10년간 대부분의 보고된 유방암은 작고 원발성(독립적으로 발생하며 전이로 인한것이 아님) 종양이었다. 새로 진단받은 환자의 약 70~80%가 초기 질환(1기나 2기)을 보였으며, 대다수는 겨드랑이 림프절이 관여하지 않았다.
대부분의 유방암은 암종(즉, 상피 조직에서 자라는 악성 종양)이다. 유방암의 1% 미만은 육종이거나 결합조직, 뼈, 근육 또는 지방에서 발생하는 종양이다. 또한 대부분의 유방암(약 75%)은 유관을 둘러싸는 조직에서 발생하는 유관 암종이다. 훨씬 적은 수의 암(약 7%)이 유방 소엽내에서 발견되며 소엽 암종이라 한다. 파제트 병(유륜암 및 유두암)과 염증성 암종이 거의 모든 다른 형태의 유방암을 차지한다.
유방암 치료는 복잡하고 많은 요인에 따라 달라진다. 두 가지 중요한 요소는 종양의 유형과 진행 단계이다. 특히 종양 특성은 개인을(1) 암 재발 위험이 낮은 사람과(2) 암 재발 위험이 높은 사람의 두 그룹으로 구분하는 데 도움이 된다. 특정 예후 요인은 환자를 이 그룹 중 하나에 둔다. 이런 요인으로 종양 크기; 여성 호르몬 에스트로겐과 프로게스테론(ER/PR) 수용체의 존재; 세포 성장주기 단계(종양 세포가 활발하게 분열하고 있는지 또는 "S 기"인지 여부); "her-2-neu 단백질"로 알려진 단백질의 존재; 종양 등급, 종양 세포 분화 또는 변화의 지표; 및 종양 배수성, 종양 세포 내의 유전 물질 세트의 수가 있다.
림프절 침범없는 원발성 질환의 치료는 종괴절제술과 방사선요법에 의한다. 더 중요한 림프절 침범은 유방절제술과 보조림프절 제거를 요할 수 있다. 이 단계에서 전이 및 국소 재발 가능성이 높다. 전이성 질환의 치료는 완화적인 방법으로, 면역억제, 세포 독성 및 백혈구 감소증인 방사선요법과 화학요법을 포함한다. 예를 들어 5-플루오로우라실, 독소루비신, 메토트렉세이트 및 파클리탁셀을 포함한 항증식제의 유방암에 대한 사용이 승인되었다.
췌장암
췌장은 위와 소장 근처에 위치한 소화기관으로, 효소와 호르몬의 생산이라는 두 가지 주요 기능을 가지고 있다. 췌장암은 외분비(즉, 효소) 췌장(예: 전형적인 췌장선암)에서 발생하거나 내분비(즉, 호르몬) 췌장에서 발생할 수 있다.
외분비 췌장의 암은 매우 심각한 건강 문제를 일으킨다. 미국에서는 매년 약 28,000명이 췌장암 진단을 받으면서 매년 거의 같은 수가 이 질병으로 사망한다. 췌장암은 남성과 여성에서 똑같이 발생한다. 진단의 어려움, 췌장암의 본질적인 공격적 특성 및 사용가능한 드문 전신치료 옵션으로 인해 췌장선암으로 진단된 환자의 약 4%만이 진단 후 5년 동안 생존한다. 췌장암은 유방암, 폐암, 결장암 및 전립선암에 이어 암 사망의 5 번째 주요 원인이 된다.
췌장암에 대한 치료의 선택은 주로 종양의 단계에 달려 있다. 가능한 치료에는 수술, 증식방지제, 방사선 및 생물학적 요법이 포함된다. 수술은 일반적으로 암이 절제 가능한 것으로 간주되는 1기 환자를 위한 것이다. 때때로 방사선 및 수술 전후에 투여되는 항증식제와 같은 요법의 조합은 환자의 생존 가능성을 높일 수 있다. 절제 불가능한 것으로 간주되는 췌장암(일반적으로 2 기 이상)은 임상 시험에서 항증식제를 사용해 치료할 수 있다. 예를 들어, 젬시타빈이나 5-플루오로우라실과 같은 항증식제는 췌장암에 대해 어느 정도 효과가 있었고 젬시타빈은 완화제로 사용되었다. 이런 항증식제로 인한 독성은 본원의 다른 곳에서 설명한다. 방사선 요법은 화학 요법과 함께 사용하면 췌장암에 어느정도 효과가 있다. 방사선 요법만으로도 증상을 완화할 수 있다. 이 치료법은 2기 이후의 췌장암에서도 사용된다.
방광암
1998년에 미국에서 54,000건 이상의 새로운 방광암 사례가 진단되고 이 질병으로 약 15,000명이 사망한 것으로 추정되었다. 방광암은 미국 남성에서 4번째로 가장 흔한 암이며 미국 여성에서 9번째로 흔한 암이다. 여성보다 남성에서 3배 더 자주 발생한다. 주로 노인질환인 방광암은 질병과 사망의 중요한 원인이다. 방광암의 위험은 나이가 들어감에 따라 급격히 증가한다(50 세 이상에서 발생하는 경우의 80%). 모든 방광암 사망의 절반 이상이 70세 이후에 발생한다. 65 세 이상의 백인 남성에서 방광암의 연간 질병률은 다음과 같다: 1,000 명당 약 2 건; 이는 65세 미만 1,000명당 0.1건의 비율과 대조된다. 일생 동안 방광암 발병 확률은 3% 이상이다. 그러나 방광암으로 인한 사망률은 낮다(<1%). 방광암은 40 세 미만의 사람들에게서는 거의 발생하지 않는다.
최근 연구는 특정 유전자와 유전된 대사 능력이 방광암에서 역할을할 수 있음을 시사한다. 과도 세포암(TCC; transitional cell carcinoma)은 방광암의 가장 흔한 형태이다. TCC는 일반적으로 줄기와 같은 기저부에서 표피(표면), 유두(사마귀 모양), 외생성(외부 성장) 덩어리로 발생한다. 그러나 어떤 경우에는 TC가 넓은 기저에 부착되거나 움푹 들어간 병변내에서 궤양으로 보일 수도 있다. 유두 TCC는 종종 나중에 개별 세포 특성을 탈분화시키거나 상실하는 과형성 영역으로 시작된다. 유두 TCC의 약 10~30%만이 침습성 암으로 발전한다. 대조적으로, 비유두 형태의 TCC는 침습적이될 가능성이 더 높다. 언급했듯이 이런 TCC는 궤양이 있거나 평평하게 보일 수 있다. 역형성 상피로 구성된 편평한 비유두성 TCC는 상피내 암종(CIS 또는 TIS)으로 분류된다. CIS의 조직은 크고, 눈에 띄는 핵소체(세포내 원형체, 단백질 합성에 관여함)를 가지고 있으며 정상적인 극성이없는 세포를 포함한다.
방광암의 치료는 많은 요인에 따라 달라진다. 이런 요인 중 가장 중요한 것은 현재 존재하는 종양의 유형과 그 단계이다. 일반적인 치료에는 경요도 절제술(TUR), 전기 수술, 레이저 수술, 방광내 치료, 항증식제, 수술 요법, 방광 절제술 및 방사선 치료가 포함된다. 방광암 치료에 사용되는 항증식제의 예는 5-플루오로우라실, 시스플라틴 및 메토트렉세이트를 포함한다. 항증식제, 5-플루오로우라실, 시스플라틴 및 메토트렉세이트로 인한 독성은 본원의 다른 곳에서 설명한다.
뇌암
뇌종양은 종종 수술이 불가능하며 환자의 80% 이상이 진단 후 12 개월 이내에 사망한다. 미국에서 매년 약 18,000건의 새로운 원발성 두개내(뇌)암이 진단되며 이는 전체 성인암의 약 2%를 차지한다. 이들 중 50% 이상이 고등급 교종(즉, 다형성아교모세포종 및 역형성 성상세포종 종양)이다. 이런 종양이 있는 환자는 종종 운동 기능 장애, 발작 및 시력이상과 같은 심각한 장애를 겪는다.
뇌조직에서 시작되는 종양은 원발성 뇌종양으로 알려져 있다. 원발성 뇌종양은 시작되는 조직의 유형에 따라 분류된다. 가장 흔한 뇌종양은 신경아교(지지) 조직에서 시작되는 신경교종이다. 다른 뇌종양으로 성상세포종, 뇌간교종, 뇌반종 및 희돌기교종이 있다.
뇌종양의 외과적 제거는 대부분의 유형 및 대부분의 위치에서 권장되었으며 신경기능 보존의 제약 내에서 가능한한 완전해야한다. 이 규칙의 예외는 임상 증거로 진단되고 약 50%는 초기수술없이 치료되는 교두교종과 같은 심부종양이 있다. 그러나 많은 경우 생검으로 진단이 수행된다. 정위 생검은 접근과 절제가 어려운 병변에 사용할 수 있다. 드물게 치료할 수 없거나 절제할 수 없는 뇌종양이 있는 환자는 종양의 국소 조절을 개선하기 위해 외부 방사선 요법과 함께 사용되는 방사선민감제, 고열 또는 조직내근접치료를 평가하거나 새로운 약물과 생물학적 반응개질제를 평가하는 연구를 위한 임상시험 후보로 보아야한다.
방사선 요법은 대부분의 종양 유형의 치료에 중요한 역할을 하며 치료율을 높이거나 무병생존을 연장할 수 있다. 방사선 요법은 또한 처음에 수술만으로 치료받은 환자의 재발 치료에 유용할 수 있다. 화학 요법은 수술 및 방사선 요법 전, 중, 후에 사용할 수 있다. 재발 종양도 화학 요법으로 치료한다. 뇌암 치료에 사용되는 항증식제는 시스플라틴을 포함한다. 이 항증식제와 관련된 독성의 예는 본원의 다른 곳에서 설명한다.
재발협착증
재발협착증은 혈관벽이 두꺼워지고 혈관에 의해 공급되는 조직으로의 혈류 손실을 초래하는 만성 혈관손상의 일종이다. 이 염증성 질환은 혈관폐쇄를 완화하는 모든 조작을 포함한 혈관재건 절차에 대한 반응으로 발생할 수 있다. 따라서 재발협착증은 이런 절차의 효과를 제한하는 주요 제한 요인이다.
본 논의는 예를 들어 올리고뉴클레오티드 치료제와 항염증제의 조합물의 치료적 유효량을 혈관에 투여함으로써 재발협착증의 예방이나 치료를 포함한다. 적합한 조성물은 재발협착증 부위나 잠재적 재발협착증 부위에 외과적으로 이식될 수 있거나 중합체 페이스트나 겔로서 카테터를 통해 주입될 수 있는 중합체 담체를 포함한다. 이런 조성물은 전술한 정제/개질 푸칸을 포함할 수 있다.
관절염
류마티스 관절염(RA; Rheumatoid arthritis)은 통증, 부기, 활액 세포 증식(판누스 형성) 및 관절조직 파괴를 특징으로하는 쇠약성 만성 염증질환이다. 진행 단계에서 이 질환은 종종 중요한 장기를 손상시키고 치명적일 수 있다. 이 질병은 면역계의 여러 구성원(대식세포/단핵구, 호중구, B 세포 및 T 세포) 복잡한 사이토카인 상호작용과 활액 세포 기능 장애 및 증식을 포함한다. 메토트렉세이트(methotrexate)와 같은 질병 수정 항류마티스 약물(DMARD)로의 조기 공격적 치료가 권장되었으며, 이 약물은 여기서 논의된다.
결정 유도성 관절염은 관절에서 대식세포와 호중구의 결정 유도 활성화 이후 수일 동안 극심한 통증이 뒤따르는 특징이 있다. 질병이 진행되어 에피소드 간격이 짧아지고 환자의 사망률이 증가한다. 이 질환은 증상에 따라 일반적으로 디클로페낙나트륨(Voltaren)과 같은 비스테로이드성 항염증제(NSAID)로 치료된다. 이 항염증제는 어지러움, 두통과 같은 중추신경계 독성; 발진 및 가려움증과 같은 피부 독성; 악화된 궤양 성 대장염 및 크론 병과 같은 위장 독성; 급성 신부전 및 신장 유두 괴사와 같은 비뇨 생식기 독성; 무과립구증, 백혈구 감소증 및 혈소판 감소증과 같은 혈액 학적 독성; 상승된 간 트랜스 아미나 제 및 간염과 같은 간 독성; 및 천식 및 아나필락시스와 같은 기타 독성을 포함한 독성을 갖는다.
본 논의는 예를 들어 치료 유효량의 올리고뉴클레오티드 치료제 및 선택적으로 항염증제를 환자에게 투여함으로써 류마티스 관절염의 예방하거나 치료하는 것에 관한 것이다. 적합한 조성물은 항염증제의 제어 방출 담체로서 관절에 주입될 수 있는 중합체 담체 및 올리고뉴클레오티드 치료제(이는 중합체 담체에 혼입됨)의 제어 방출 담체로서 미세 입자를 포함한다. 적합한 조성물은 본원에서 논의된 정제/개질 푸칸을 포함할 수 있다. 이런 중합체 담체는 중합체 미소 구체, 페이스트 또는 겔 형태를 취할 수 있다.
염증 상태
본원의 조성물 등은 예를 들어 올리고뉴클레오티드 치료제와 항염증제를 함유한 조성물을 환자에게 투여하는 것을 포함한 호중구를 포함한 염증 상태를 임의로 억제하거나 치료할 수 있다. 이런 상태의 예로는 결정성 관절염; 골관절염; 비류마티스성 염증성 관절염; 혼합 결합 조직 질환; 쇼그렌 증후군; 강직성 척추염; 베체트 증후군; 유육종증; 건선; 습진; 염증성 장질환; 만성 염증성 폐질환; 신경계 장애; 및 다발성 경화증이 있다. 이런 질병 중 일부는 뒤에 자세히 설명한다.
만성 염증성 피부질환(건선 및 습진 포함)
건선은 가려움증, 화상, 따끔거림 및 쉽게 출혈하는 융기되고 두꺼워진 비늘 모양의 병변을 특징으로하는 일반적인 만성 염증성 피부질환이다. 이런 질병은 질병의 후기 단계에서 세포증식과 혈관신생 성분을 갖지만 환자는 종종 관절염 상태를 동반한다. 이 증상은 프레드니손과 같은 스테로이드성 항염증제나 메토트렉세이트와 같은 항증식제로 치료할 수 있다. 본원의 조성물은 만성 염증성 피부질환, 예를 들어 건선 및/또는 습진을 억제하거나 달리 치료 및/또는 예방하는데에도 사용될 수 있다.
다음은 본원의 조성물로 치료될 수 있는 염증성 질환의 다른 예이다: 동정맥 기형(혈관 기형); 월경 과다; 급성 출혈; 중추신경계 장애; 비기능항진증; 건선과 같은 염증성 피부질환; 습진성 질환(아토피성 피부염, 접촉성 피부염, 습진); 면역 수포성 질환; 및 류마티스 성 관절염, 혼합 결합 조직 질환, 쇼그렌 증후군, 강직성 척추염, 베체트 증후군, 유육종증, 결정성 관절염 및 골관절염을 포함한 다양한 질환을 포함한 염증성 관절염(모두 두드러진 증상으로 염증이 있는 관절염을 특징으로 함).
빈혈
빈혈은 혈액공급의 제한을 수반하며, 이는 적절한 조직기능에 필요한 산소, 포도당 및 기타 성분의 공급 부족을 포함해 조직의 손상 및/또는 기능장애를 초래할 수 있다. 빈혈은 심각한 문제를 일으킬 수 있다. 예를 들어, 조직이 산소결핍이나 괴사되고 혈전이 형성될 수 있다. 빈혈을 예방 및/또는 치료하기 위한 다양한 시도가 있었다. 예를 들어, 혈류복원이나 재관류가 있지만, 혈액복원에는 산소의 재도입이 수반되며, 이는 자유 라디칼 생성으로 인한 추가 손상을 유발하여 재관류 손상을 초래할 수 있다. 재관류 손상은 심각한 문제를 일으킬 수 있다. 본원의 조성물은 빈혈 및/또는 재관류 손상을 억제하거나 달리 치료 및/또는 예방하는데 사용될 수 있다.
내독소혈증
내독소혈증은 혈액에 엔도톡신(내독소)이 있는 것이다. 내독소혈증은 심각한 문제를 일으킬 수 있다. 예를 들어, 내독소혈증은 패혈성 쇼크를 유발할 수 있다. 본원의 조성물은 내독소혈증을 억제하거나 달리 치료 및/또는 예방하는데 사용될 수 있다.
켈로이드 흉터
켈로이드 형질은 상처를 솟아오른 흉터로 치유한다. 켈로이드 형질의 융기된 흉터에는 비정상적인 섬유성 흉터가 있다. 켈로이드 특성은 예를 들어 통증 및 외형과 같은 심각한 문제를 유발한다. 본 발명의 조성물은 켈로이드 형질 및 그로인해 생긴 흉터를 억제하거나, 달리 치료 및/또는 예방하는데 사용될 수 있다.
켈로이드(켈로이드 흉터)는 정상 피부에 비해 성장이 확장되는 흉터 유형이다. 켈로이드는 I 형 및 III 형 콜라주 비정상 성장을 포함하여 비정상적인 콜라겐 성장을 포함한다. 켈로이드는 통증, 가려움증과 같은 심각한 문제를 일으키며 감염되면 궤양을 일으킬 수도 있다. 수술, 드레싱, 스테로이드 주사 및 레이저요법의 사용을 포함해 켈로이드를 치료하거나 예방하려는 시도가 있었다. 본원의 조성물은 켈로이드를 억제하거나, 달리 치료 및/또는 예방하는데 사용될 수 있다.
피부염
피부염은 아토피성 피부염과 접촉성 피부염을 포함해 피부의 염증을 말한다. 예를 들어, 접촉성 피부염은 피부가 이물질과 접촉한 후 국소발진 및/또는 피부자극을 일으킨다. 아토피 피부염은 만성적으로 재발하는 소양성 피부질환으로, 때때로 prurigo Besnier, 신경 피부염, 내인성 습진, 굴곡성 습진, 유아성 습진, 아동기 습진 및 prurigo diathsique라고도 한다. 습진은 피부염의 한 형태이다. 다른 유형의 피부염에는 해면성 피부염, 지루성 피부염(비듬), 이염성 피부염(폼폴릭스), 수포성 피부염 및 두드러기가 있다. 피부염은 건성피부, 피부발진, 피부부종, 피부발적, 피부가려움, 피부딱지, 갈라짐, 물집, 분비물 및 출혈과 같은 심각한 문제를 일으킬 수 있다. 코르티코 스테로이드와 콜타르의 사용을 포함해 피부염을 치료/예방하기 위한 시도가 있었다. 본원의 조성물은 아토피성 피부염, 습진, 접촉성 피부염, 해면성 피부염, 지루성 피부염, 이염성 피부염, 수포성 피부염 및 두드러기를 포함한 피부염을 억제하거나 달리 치료 및/또는 예방하는데 사용될 수 있다.
딸기코
딸기코는 전형적으로 안면홍반을 특징으로하는 만성 질환/상태로서, 이마, 코 또는 뺨의 발적으로 시작해 목, 귀, 두피 및 가슴에도 발적을 일으키는 심각한 문제를 일으킬 수 있다. 예를 들어 딸기코는 모세혈관 확장증, 구진, 농포, 고통스러운 감각 등의 다른 증상을 일으킬 수 있으며, 진행된 경우에는 코뿔소(붉은 엽상코)가 발생할 수 있다. 딸기코 아형에는 홍반 모세혈관 확장성 주사, 구진주사, 식물성 주사 및 안구주사가 포함된다. 항염증제와 항생제의 사용을 포함해 딸기코를 치료하거나 예방하려는 시도가 있었다. 본원의 조성물은 홍반 모세혈관 확장성, 구진, 딸기코 및 안구아형을 포함한 딸기코를 억제하거나, 달리 치료 및/또는 예방하는데 사용될 수 있다.
의료기기, 의료 재료, 조합품 및 의약품
본원은 의료기기, 의료 재료, 조합품 또는 제약상 허용되는 용기에 본원의 조성물을 포함한 의료기기, 의료 재료, 조합품 및 제약 제품을 제공하기도한다. 이런 제품은 일반적으로 의료기기, 의료 재료, 조합품, 의약품 또는 바이오 의약품의 제조, 사용 또는 판매를 규제하는 관리 기관에서 규정한 형식으로 용기와 관련된 통지를 포함할 수 있으며, 이에 따라 이 통지는 예를 들어 증식성 질환이나 염증성 질환(염증성 관절염, 재협착, 외과적 유착, 건선 및 복막염 등)을 치료하기위한 인간이나 동물 투여용으로 정제/개질 푸칸이 항증식제나 항염증제로 승인되었다는 통지와 같은 조성물의 기관에 의한 승인을 반영한다. 정제/개질 푸칸의 사용에 대한 지침이 포함될 수도 있다. 이런 지침에는 환자의 투여 및 투여방식과 관련된 정보가 포함될 수 있다. 이런 제품은 또한 예를 들어 주사기 및/또는 스프레이 어플리케이터와 같은 의료 재료를 투여하거나 적용하기위한 기기, 시스템 등을 포함할 수도 있다.
본원은 조성물 자체의 제조를 포함해, 전술한 정제/개질 푸칸, 시스템 등의 다양한 요소를 제조하는 방법은 물론, 상태, 질병 등의 치료를 포함한 이를 사용하는 방법에 관한 것이기도 하다.
본원은 전술한 정제/개질 푸칸을 포함한 섬유성 유착, 관절염, 건선 또는 기타 질병의 치료를 위한 의료기기, 의료 재료, 의료 조합품 및 제약품을 포함하기도한다. 재료 등은 원하는대로 외과적 유착, 관절염, 건선 또는 기타 질병과 같은 섬유성 유착을 치료하기위한 의약에 사용될 수 있다. 또, 약제학적으로 허용되는 부형제나 완충액과 함께 전술한 후코이단과 같은 약제학적 유효량의 푸칸을 조합하는 것을 포함해, 인간 환자를 포함한 환자에서 섬유성 유착, 관절염 및 건선 중 적어도 하나와 관련된 증상을 감소시킬 수 있는 약제를 제조 및 사용하는 방법이 제공된다.
다음 실시예들은 본원의 특정 실시양태의 일례일 뿐이고, 개시내용과 청구 범위를 제한하지 않는다.
실시예 1: 화학구조 변경
Laminaria hyperborea로부터 삼출-추출물을 얻었다. 삼출-추출물을 여과하고 100kDa 필터를 통해 접선유동여과(TFF)로 작은 분자들을 제거했다. 생성된 잔류물 샘플을 동결건조하여 변경되지 않은 샘플 A를 얻었다. 생성된 잔류물을 10M NaOH 용액을 첨가하여 0.25M NaOH로 만들고 실온에 16시간 두었다. 이어서 생성된 샘플을 50kDa 필터를 통해 원심분리 여과하고 생성된 잔류물을 수집해 동결건조하여 염기처리된 샘플 B를 얻었다. 변경되지 않은 샘플 A와 염기처리된 샘플 B 모두 양성자 핵자기공명 분광법(1H-NMR)으로 분석하고, 그 결과 1H-NMR 스펙트럼이 도 2A에 도시되어 있다.
도 2A는 구해진 푸칸의 화학구조 개질을 입증하며, 개질되지 않은 샘플 A에 존재하는 약 2.0ppm의 화학적 이동을 갖는 넓은 피크는 염기처리된 샘플 B에는 존재하지 않는다.
개질되지 않은 샘플 A와 염기처리/개질된 샘플 B는 2D 1H-13C 이종핵 다중 양자 일관성(HMQC) 방법으로 더 분석되었다. 도 2B 에 도시된 HMQC 스펙트럼은 5mm 콜드 프로브를 갖춘 600MHz 분광기에서 용매신호 억제를 통해 70℃에서 얻었다. HMQC 스펙트럼의 많은 수의 스캔은 각각 256~512 스캔의 8증분으로 탄소 차원의 10-30 ppm 범위에서 구했고; 이런 스캔들을 결합하여 도 2B의 스펙트럼을 만들었다.
개질되지 않은 샘플 A에 대한 HMQC 스펙트럼은 O-아세틸기에 해당하는 교차-피크를 가지며, 이를 도 2B에 원형 신호로 표시했다. 이런 교차-피크는 염기처리된 샘플 B의 스펙트럼에는 존재하지 않는다. 이는 푸칸에서 아세틸기가 제거되어 NaOH 처리로 염기처리된 샘플 B에서 푸칸의 화학구조 개질을 보여준다.
실시예 2: 물리적으로 유도된 응집
갈색 분말 공급원료 후코이단을 증류수에 약 10% w/v로 용해시켜 출발 용액을 얻었다. 염화나트륨을 출발 용액에 첨가하여 최종 염화나트륨 농도가 약 0.1M 인 혼합물을 생성했다. 혼합물을 10-15 분간 거의 비등할 때까지 가열했다. 이 온도에서 혼합물을 처리하면 부유 불순물과 입자성 비-후코이단 물질이 응집되었다. 혼합물을 40분간 2300 중력에서 원심분리하여 응집된 비-후코이단 성분으로부터 후코이단 함유 용액을 분리했다. 후코이단 함유 용액을 육안으로 검사하고 입자상 물질 및 색상의 시각적 감소가 관찰되었다. 후코이단 함유 용액의 동결건조된 부분은 사용된 공급원료 후코이단보다 훨씬 더 적은 색을 갖는 회백색 분말을 포함했다. 예를 들어, 물내의 10mg/mL의 공급원료 후코이단의 자외선/가시광선(UV/V) 스펙트럼과 물내의 10mg/mL의 정제/개질된 푸칸의 UV/V스펙트럼을 구하고, 약 400nm 내지 700nm인 가시영역의 총 흡광도를 측정하며, 공급원료 후코이단에 비해 총 흡광도가 약 5%, 10% 또는 20% 감소하는 것을 관찰하여, 색상 손실을 정량화하고 비교할 수 있다.
실시예 3: 고체상 추출
갈색 분말-공급원료 후코이단을 70% v/v 에탄올/물 중의 0.5M NaOH의 40℃ 혼합물에 첨가했다. 생성된 반응혼합물을 교반하고 섭씨 40도로 2시간 유지했다. 이어서 반응혼합물을 원심분리하여 추출된 불순물을 함유한 70%v/v 에탄올/물 상청액 중의 0.5 M NaOH로부터 고체 정제/개질 후코이단을 분리했다.
고체 정제/개질 후코이단은 가시화되었을 때 공급원료 후코이단보다 눈에 띄게 적은 색을 함유한 것으로 밝혀졌다. 이런 색상 손실은 플로로탄닌과 같은 불순물이 제거되었음을 나타낸다. 푸칸에는 발색단이 포함되어 있지 않기 때문에 완전히 순수하면 무색이 된다. 예를 들어, 물중의 10mg/mL의 공급원료 후코이단의 자외선/가시광선(UV/V) 스펙트럼과 물중의 10mg/m의 정제/개질된 푸칸의 UV/V스펙트럼을 구하고, 약 400nm 내지 700nm인 스펙트럼의 가시영역의 총 흡광도를 측정하며, 공급원료 후코이단에 비해 정제/개질된 푸칸의 총 흡광도가 약 5%, 10% 또는 20% 감소하는 것을 관찰하여, 색상 손실을 정량화하고 비교할 수 있다.
실시예 4: 화학적으로 유도된 침전
공급원료 후코이단 조성물을 증류수에 15% w/v로 용해시켜 출발 용액을 형성했다. 출발 용액은 관찰에 의해 부유입자를 포함하는 것으로 밝혀졌다. 염화칼슘을 0.5M 수준으로 출발 용액에 첨가하여 반응혼합물을 생성했다. 천연 후코이단의 알려진 불순물을 시뮬레이션하기 위해 알긴산나트륨을 5% w/w 농도의 알기네이트/후코이단에 첨가하고 전분을 5%w/w 농도의 전분/후코이단에 첨가했다. 이 경우 전분은 라미나린의 모방체로 사용되었다. 반응혼합물에서 후코이단의 분해를 피하기 위해 10 M NaOH를 반응혼합물에 점적 첨가하여 pH를 7과 8 사이로 만들었다. 인산의 후속 첨가로부터의 반응혼합물의 산성화를 피하기 위해 최소량의 10M NaOH를 다시 반응혼합물에 첨가했다. 인산을 첨가하여 반응혼합물을 0.5M 인산염으로 만들었다. 이로인해 염화칼슘과 인산의 반응으로 형성된 인산칼슘의 작용을 통한 부유입자와 침전된 불순물의 응집이 시작했다. 반응혼합물을 실온에서 10분간 방치하여 응집이 계속되도록 했다. 반응혼합물을 17568 중력에서 17 분간 원심분리하여 응집된 불순물로부터 상청액 중의 원하는 정제 후코이단을 분리했다. 상청액을 육안으로 검사하여 색과 입자의 제거를 정성적으로 평가했다. UV/V 스펙트럼 영역에서 빛을 산란 및/또는 흡수하는 비-후코이단 성분의 제거를 평가하기 위해 300-800 nm 영역에서의 UV/V 흡수로 상청액의 부분표본을 분석했다. 상청액의 부분표본을 동결건조하여 푸칸 함량을 얻었다. 상청액의 부분표본은 섭씨 90도의 3M HCl에서 가수분해되었고, 총 탄수화물 검출 및 라미나린과 알기네이트 제거 평가를 위해 고성능 음이온교환-펄스 전류측정 검출법(HPAE-PAD)으로 분석되었다. 불순물의 정량화는 라미나린과 단량체 만누론산과 단량체 굴루론산의 제거를 평가해 알기네이트의 제거를 평가하도록 단량체 글루코스의 표준들에 대한 것이었다.
출발 후코이단과 생성된 정제/개질 푸칸의 분석 결과는 아래 표 1과 같다.
응집처리 외관 HPAE-PAD에 의한 알긴네이트 HPAE-PAD에 의한 전분 UV/V 신호 300-800 nm
출발
후코이단 		갈색 고체, 불투명 갈색 용액 검출안됨 검출안됨 670.587*
처리된후코이단 밝은황갈색
투명용액ight brownish yellow clear solution		 검출안됨 검출안됨 9.616
*: 대표적 출발 푸칸을 통해 결정된 값
표 1: 출발 후코이단과 처리된 용액들의 분석결과
실시예 5: 화학적으로 유도된 침전
공급원료 후코이단 조성물을 증류수에 15% w/v로 용해시켜 출발 용액을 형성했다. 출발 용액은 관찰에 의해 부유입자를 포함하는 것으로 밝혀졌다. 천연 후코이단의 알려진 불순물을 시뮬레이션하기 위해 알긴산나트륨을 5%w/w 농도의 알기네이트/후코이단에 첨가하고 전분을 5%w/w농도의 전분/후코이단에 첨가했다. 이 경우 전분은 라미나린의 모방체로 사용되었다. 10M NaOH를 출발 용액에 점적 첨가하여 pH를 7과 8 사이로 만들었다. 이것은 황산알루미늄의 후속 첨가로 출발 용액이 산성화할 경우 용액에서 후코이단의 분해를 피하기 위한 것이다. 출발 용액을 0.1 M 황산알루미늄에 적용해 반응혼합물을 생성했다. 이로 인해 동시에 형성된 수산화알루미늄에 의해 불순물과 부유입자의 응집과, 불순물의 침전이 시작했다. 반응혼합물을 실온에서 10분간 방치하여 응집이 계속되도록 했다. 반응혼합물을 17568 중력에서 17 분간 원심분리하여 응집된 불순물로부터 상청액내의 원하는 정제 후코이단을 분리했다. 상청액을 육안으로 검사하여 색상과 입자 제거를 정성적으로 평가했다. UV/V 스펙트럼 영역에서 빛을 산란 및/또는 흡수하는 비-후코이단 성분의 제거를 평가하기 위해 300-800 영역에서의 UV/V 흡수로 상청액의 부분표본을 분석했다. 상청액의 부분표본을 동결건조하여 푸칸 함량을 얻었다. 상청액의 부분표본은 섭씨 90도의 3M HCl에서 가수분해되었고, 총 탄수화물 검출 및 라미나린과 알기네이트 제거 평가를 위해 고성능 음이온교환-펄스 전류측정 검출법(HPAE-PAD)으로 분석되었다. 불순물의 정량화는 라미나린과 단량체 만누론산과 단량체 굴루론산의 제거를 평가해 알기네이트의 제거를 평가하도록 단량체 글루코스의 표준들에 대한 것이었다.
출발 후코이단과 생성된 정제/개질 푸칸으로부터의 분석 결과는 아래 표 2와 같다.
응집처리 외관 HPAE-PAD에 의한 알기네이트 HPAE-PAD에 의한 전분 UV/V 신호 300-800 nm
출발
후코이단 		갈색고체
불투명한 갈색 용액		 검출안됨 검출안됨 670.587*
처리된후코이단 밝은황색 투명 용액 검출안됨 검출안됨 15.188
*: 대표적 출발 푸칸을 통해 결정된 값
표 2: 출발 후코이단과 처리된 용액들의 분석결과
실시예 6: 화학적으로 유도된 침전
출발 후코이단 조성물을 증류수에 15%w/v로 용해시켜 출발 용액을 형성했다. 출발 용액은 관찰에 의해 부유입자를 포함하는 것으로 밝혀졌다. 천연 후코이단의 알려진 불순물을 시뮬레이션하기 위해 알긴산나트륨을 5%w/w 농도의 알기네이트/후코이단에 첨가하고 전분을 5%w/w 농도의 전분/후코이단에 첨가했다. 이 경우 전분은 라미나린의 모방체로 사용되었다. 염화칼슘을 0.5M 수준으로 출발 용액에 첨가하여 반응혼합물을 생성했다. 이로인해 알긴산 염의 침전이 시작되었다. 10M NaOH를 반응혼합물에 적가하여 pH를 7내지 8로 만들었다. 이는 반응혼합물에서 후코이단의 분해를 피하기 위한 것이다. 반응혼합물을 0.5M 황산알루미늄으로 만들었다. 이로인해, 염화칼슘과 황산알루미늄의 반응으로 형성된 황산칼슘의 작용 및 반응혼합물에서 황산알루미늄으로부터 형성된 수산화알루미늄의 작용으로 현탁된 입자, 칼슘알긴산 침전물과 기타 불순물의 응집이 시작되었다. 반응혼합물을 실온에서 10분간 방치하여 응집이 계속되도록 했다. 반응혼합물을 17568g로 17분간 원심분리하여 응집된 불순물로부터 상청액내의 원하는 정제 후코이단을 분리했다. 상청액을 육안으로 검사하여 색과 입자 제거를 정성적으로 평가했다. UV/V 스펙트럼 영역에서 빛을 산란 및/또는 흡수하는 비-후코이단 성분의 제거를 평가하기 위해 300-800 영역에서의 UV/V 흡수로 상청액의 부분표본을 분석했다. 상청액의 부분표본을 동결건조하여 푸칸 함량을 얻었다. 상청액의 부분표본은 섭씨 90도의 3M HCl에서 가수분해되었고, 총 탄수화물 검출 및 라미나린과 알기네이트 제거 평가를 위해 고성능 음이온교환-펄스 전류측정 검출법(HPAE-PAD)으로 분석되었다. 불순물의 정량화는 라미나린과 단량체 만누론산과 단량체 굴루론산의 제거를 평가해 알기네이트의 제거를 평가하도록 단량체 글루코스의 표준들에 대한 것이었다.
출발 후코이단과 최종 정제/개질된 푸칸의 분석 결과는 아래 표 3과 같다.
응집처리 외관 HPAE-PAD에 의한 알기네이트 HPAE-PAD에 의한 전분 UV/V 신호 300-800 nm
출발
후코이단 		갈색고체
불투명한 갈색 용액		 검출안됨 검출안됨 670.587*
처리된후코이단 밝은황색 투명 용액 검출안됨 검출안됨 23.814
*: 대표적 출발 푸칸을 통해 결정된 값
표 3: 출발 후코이단과 처리된 용액들의 분석결과
실시예7: 액체-액체 추출
불순물을 함유한 출발 푸칸 조성물을 증류수에 10mg/mL로 용해시켜 수성 출발 용액을 생성한다. 20% v/v 헵탄을 출발 후코이단 조성물을 함유한 수성 출발 용액에 첨가하고 유기-수성 혼합물을 30 분간 고전단으로 혼합한다. 혼합이 종료되고, 수성상에서 유기상을 분리하기 위해 유기-수성 혼합물을 분리깔때기에 놓는다. 원하는 푸칸 성분을 포함하는 더 조밀한 수성상은 분별깔때기의 바닥에 가라앉는 반면 불순물을 포함하는 덜 조밀한 유기상은 분별깔때기의 상단에 있다. 유기-수성 혼합물을 10 분간 분별깔때기에 놓아 두었다. 그 다음 수성상을 따라내고 용액에서 원하는 정제/개질 푸칸으로서 수집한다. 용액내 정제/개질된 푸칸은 출발 푸칸 조성물보다 지질, 지방산, 플로로탄닌, 단백질, 푸코잔틴 및/또는 엽록소를 약 30%, 50%, 70% 내지 100% 더 적게 함유한 것으로 밝혀졌다.
실시예 8 : 액체-액체 추출
불순물을 함유한 출발 푸칸 조성물이 증류수에 10mg/mL로 용해되어 출발 수용액을 생성한다. 20% v/v 1-부탄올을 출발 후코이단 조성물을 함유한 수성 출발 용액에 첨가하고 유기-수성 혼합물을 30분간 고전단으로 혼합한다. 혼합이 종료되고, 수성상에서 유기상을 분리하기 위해 유기-수성 혼합물을 분리깔때기에 둔다. 원하는 푸칸 성분을 함유한 더 조밀한 수성상은 분별깔때기의 바닥에 가라앉는 반면 불순물을 함유한 덜 조밀한 유기상은 분별깔때기의 상단에 있다. 유기-수성 혼합물을 10 분간 분별깔때기에 놓아두었다. 그 다음 수성상을 따라내고 용액에서 원하는 정제/개질 푸칸으로서 수집한다. 용액내 정제/개질된 푸칸은 출발 푸칸 조성물보다 지질, 지방산, 플로로탄닌, 단백질, 푸코잔틴 및/또는 엽록소를 약 30%, 50%, 70% 내지 100% 적게 함유한 것으로 밝혀졌다.
실시예 9 : 액체-액체 추출
불순물을 함유한 출발 푸칸 조성물을 증류수에 10mg/mL로 용해시켜 출발 수용액을 생성한다. 20% v/v 에틸 아세테이트를 출발 후코이단 조성물을 함유한 수성 출발 용액에 첨가하고 유기-수성 혼합물을 30 분간 고전단으로 혼합한다. 혼합이 종료되고, 수성상에서 유기상을 분리하기 위해 유기-수성 혼합물을 분리깔때기에 둔다. 원하는 푸칸 성분을 함유한 더 조밀한 수성상은 분별깔때기의 바닥에 가라앉는 반면 불순물을 함유한 덜 조밀한 유기상은 분별깔때기의 상단에 있다. 유기-수성 혼합물을 10 분간 분별깔때기에 놓아두었다. 그 다음 수성상을 따라내고 용액에서 원하는 정제/개질된 푸칸으로서 수집한다. 용액내 정제/개질된 푸칸은 출발 푸칸 조성물보다 지질, 지방산, 플로로탄닌, 단백질, 푸코잔틴 및/또는 엽록소를 약 30%, 50%, 70% 내지 100% 적게 함유한 것으로 밝혀졌다.
실시예 10 : 투석여과
약 8% w/v 또는 출발 후코이단 조성물을 함유한 출발 용액이 제공되었다. 출발 용액은 0.22 마이크론 필터로 여과되었다. 여과된 출발 용액의 부분표본에 포함된 양이온 함량을 유도결합 플라즈마 질량분석법(ICP-MS)으로 측정했더니, 0.01% w/w 이상의 알루미늄/푸칸, 10-5% w/w 이상의 비소/푸칸 및 0.01% w/w 이상의 칼슘/푸칸을 함유하는 것으로 밝혀졌고, 이들 모두 바람직하지 않은 수준의 양이온이다. 출발 용액을 0.1M EDTA, 0.01M NaOH 용액으로 4회 통과부피로 투석여과했다. 생성된 잔류물 후코이단 용액을 약 2.5 통과부피의5mM Na2SO3, 5mM NaCl 용액으로 투석여과했다. 생성된 2차 잔류물 후코이단 용액을 ICP-MS로 양이온 함량에 대해 분석했다. 출발 후코이단 조성물과 생성된 정제/개질된 푸칸에 대한 결과는 하기 표 4와 같다.
처리 % w/w
Al/후코이단 		% w/w As/후코이단 % w/w
Ca/후코이단 		%w/w
mg/후코이단
입력 2.95x10-1 1.79x10-5 2.78x10-2 4.76x10-3
정제/개질푸칸 3.33x10-4 <4.38x10-6 3.85x10-3 1.70x10-3
표 4: 출발 후코이단과 처리된 용액의 분석결과
실시예 11: 초임계유체 추출
약 100g의 고체 출발 후코이단 조성물이 제공된다. 고체는 초임계추출기에 배치된다. 추출기를 5800psi로 가압하고 섭씨 50도로 가열한 다음 초임계 이산화탄소로 100mL/min로 3 시간 씻어낸다. 초임계 이산화탄소를 추출기에서 씻어내고 고체 개질/정제 후코이단을 수집하여 불순물을 분석한다. 수집된 고체 개질/정제 후코이단은 지질, 지방산, 플로로타닌, 라미나린, 알기네이트, 단백질, 마이야르 반응생성물, 푸코잔틴, 클로로필, 유리 이온, 박테리아 및/또는 DNA를 출발 후코이단보다 약 30% 내지 100% 적게 함유하는 것으로 밝혀졌다.
실시예 12 : 화학적으로 유도된 침전, 용해 및 응집
약 0.70% w/w의 총 질소를 함유하는 것으로 밝혀진 출발 후코이단 조성물을 증류수에 15% w/v로 용해시켜 출발 용액을 형성했다. 총 질소의 존재는 원치 않는 불순물(예 : 세포 성분, DNA, 단백질 및 박테리아)이 있음을 나타낸다. 질소 함유 불순물이 후코이단 분자에 화학적으로나 이온적으로 결합될 수 있기 때문에, 총 질소의 감소는 경우에 따라 출발 후코이단 조성물이나 후코이단 중합체로부터 질소 함유 불순물이 제거되었음을 나타낸다.
출발 용액은 관찰에 의해 부유입자를 함유하는 것으로 밝혀졌다. 염화칼슘을 0.5M 수준으로 출발 용액에 첨가하여 반응혼합물을 생성했다. 이로인해 불순물이 포함된 것으로 의심되는 고체 부분의 침전이 시작되었다. 약 15 mL의 10M NaOH를 반응혼합물에 적가하여 pH를 7내지 8로 했다. 이는 반응혼합물에서 후코이단의 분해를 피하기 위한 것이다. 인산을 첨가하여 반응혼합물을 0.5M 인산염으로 만들었다. 이로인해 염화칼슘과 인산의 반응으로 형성된 인산칼슘의 작용으로 부유입자와 침전된 불순물의 응집이 시작했다. 반응혼합물을 33,746 중력에서 5 분간 원심분리하여 응집된 불순물로부터 상청액내 제 1 정제/개질 후코이단을 분리했다. 제1 정제/개질 후코이단은 약 0.10% w/w 총 질소를 함유하는 것으로 밝혀졌다. 상청액내 제1 정제/개질 후코이단의 일부를 5mM NaCl의 6회의 통과부피에 대해 100kDa MWCO 원심분리 필터를 통해 투석여과를 하여 더 정제했다. 생성된 제 1 잔류물 정제/개질 후코이단은 약 0.08% w/w 총 질소를 함유하는 것으로 밝혀졌다.
세포파괴제로서 1M 나트륨 도데실 설페이트 용액을 0.010M의 농도로 첨가하여 제 1 정제/개질 후코이단의 제 2 부분을 더 처리했다. 10M NaOH 용액을 0.26M의 농도로 첨가하여 혼합물 기초로 했다. 생성된 반응혼합물을 실온에서 약 30 분간 교반하여 흐린 밝은 갈색 혼합물을 얻었다.
약 30 분 후, 45% w/v KOH 용액을 약 0.04 M의 농도로 첨가했다. 칼륨을 첨가하면 SDS와 함께 원치않는 불순물이 침전되었다. 48% w/v 황산 알루미늄 용액을 약 0.06M의 농도로 첨가했다. 수산화알루미늄의 형성으로 반응혼합물에서 원치않는 불순물이 응집되었다. 아황산나트륨 고체를 첨가하고 0.02M 농도로 용해시켜 반응혼합물내 잠재적인 산화제를 급냉시켰다.
생성된 반응혼합물을 약 16 시간 냉장고에 보관한 다음, 33,746 중력에서 5 분간 원심분리하여 응집된 불순물로부터 상청액내 제2 정제/개질 후코이단을 분리했다. 제2 정제/개질 후코이단은 약 0.06% w/w의 총 질소를 함유하는 것으로 밝혀졌다. 제 2 정제/개질 후코이단의 일부를 5mM NaCl의 6회 통과부피에 대해 100kDa MWCO 원심분리 필터로 투석여과로 더 처리하여 제 2 잔류물 정제/개질 후코이단을 제공했다. 생성된 제2 잔류물 정제/개질 후코이단은 약 0.03% w/w의 총 질소를 함유하는 것으로 밝혀졌다.
실시예 13 : 5 개의 정제/개질 푸칸의 제조
본원의 방법은 정제/개질된 푸칸을 얻기 위해 임의의 방식으로 사용, 조합, 변형 및 치환 될 수 있다. 실시예 4, 5, 6 및 10의 화학적으로 유도된 침전과 투석여과를 조합하여 5 개의 정제/개질된 푸칸을 제조하고 의료 외과적으로 적용해 정제/개질된 푸칸의 효능을 평가했다. 이들 5 개의 푸칸을 푸칸 1 내지 5라 하고, 푸칸 1과 2는 실시예 4 와 10의 방법을 이용해 약 2kg 규모로, 푸칸 3과 5는 실시예 4 와 10의 방법으로 약 30g 규모, 푸칸 4는 실시예 5와 10의 방법으로 약 1kg 규모로 생산되었다. 푸칸 1 내지 5는 저전도도 염 용액에 대한 투석여과 후 동결건조에 의해 고체 정제/개질 푸칸으로 전환되어 백색 고체를 얻는다. 두 개의 추가 푸칸을 갈조류에서 추출해, 푸칸 6과 7이라한다. 푸칸 6은 FMC BioPolymer®로 고체 조성물로 제공되었다. 푸칸 6의 생산에는 전술한 어떤 공정도 사용되지 않았다. 푸칸 7은 거의 끓는 HCl로 갈조류에서 추출되었다. 침전제로 에탄올을 이용한 선택적 침전으로 일부 불순물을 제거했다. 선택적 침전 후, 푸칸을 에탄올로 추가 침전, 원심분리 및 동결건조하여 고체 조성물로 수집했다. 푸칸 7을 실시예 3의 방법으로 더 처리한 다음, 물에 용해시키고, 동결건조 전에 탈이온수에 대해 투석여과하여 고체 조성물로서 푸칸 7을 얻었다. 푸칸 1 내지 7의 푸코스, 갈락토스, 설페이트 및 총 반대이온 수준은 아래 실시예 14~15와 같이 결정된다. 이들 푸칸 1-7에 대해 실시예 16과 표 6에서 더 설명한다.
실시예 14 : 푸칸 1 내지 7의 수정된 푸코스 함량과 갈락토스 함량 측정
고체 푸칸 조성물을 40mg/ mL의 72% w/ w 황산에 용해시키고 수조에서 30 분간 45℃로 배양했다. 산 가수분해물을 고압 튜브에서 4% w/ w 황산으로 희석하고 120℃로 60 분간 배양했다. 생성된 두 번째 산 가수분해물을 증류수로 1/333 농도로 희석하고 고성능 음이온교환 컬럼 크로마토그래피 셋업에서 펄스 전류측정 검출법(HPAE-PAD)을 했다. 등용매 펌프를 사용하여 1.0 mL/min으로 10mM NaOH 용리액을 돌려 분석물을 분리했다.
푸칸의 미수정 푸코스 함량은 푸코스의 표준 곡선에 대한 보간법으로 결정되었다. 푸칸의 미수정 갈락토스 함량은 표준 첨가법으로 결정되었다. 수정된 푸코스 함량은 글리코시드 결합의 가수분해시 물 1분자의 첨가와, 2 개의 설페이트-에스테르 결합의 가수분해시 2 개의 히드록실기의 첨가를 고려해 결정되었다. 수정된 갈락토스 함량은 글리코시드 결합의 가수분해시 물 1분자의 첨가를 고려해 결정되었다.
이 분석결과는 아래 표 5와 같다.
실시예 15 : 푸칸 1 내지 7의 총 황산염, 반대이온 및 수분 함량 측정
고체 푸칸 조성물을 탈이온수에 용해시키고, 산성 조건하에 가수분해하고,% w/ w 총 황과 반대이온 함량에 대해 ICP-MS로 분석했다. 황 함량에 황산염 대 황의 몰비를 곱하여 정제/개질된 푸칸의% w/w 황산염 함량을 구해 황 함량을 황산염 함량으로 변환했다. 이런 정제/개질 푸칸에서 관찰된 반대이온은 칼륨과 나트륨 반대이온을 포함한다. 이 분석 결과는 아래 표 5와 같다.
총 수정된 푸코스, 갈락토오스 및 황산염에 대한%w/w 결과가 표 5에 제시되어있다. 총 푸코스, 갈락토오스 및 황산염에 대한 결과는 수정된 푸코스, 갈락토오스 및 황산염 값을 함께 더하여 결정되며, 아래 식 1에 표시된 전술한 특징들을 포함한 보다 상세하고 완전한 계산으로 결정된다. 총 반대이온 함량은 총 나트륨과 칼륨 함량을 더하여 결정된다.
식 1:
Figure pct00001
Figure pct00002
　 푸코스% w/w 갈락토스% w/w 황산염% w/w 총 푸코스, 갈락토스 및 황산염
% w/w 		Na% w/w K% w/w 총 반대이온 함량% w/w 총 푸코스, 갈락토스, 황산염 및 반대이온 함량% w/w
푸칸 1 34.3 2.9 44.9 82.2 11.4 0.7 11.6 94.3
푸칸 2 34.7 2.5 41.7 78.9 9.8 0.8 10.6 89.5
푸칸 3 35.3 2.3 41.7 79.2 9.4 1.6 10.9 90.2
푸칸 4 31.1 3.4 51.3 84.0 7.8 5.3 13.0 98.8
푸칸 5 32.7 3.0 40.6 76.3 11.0 1.3 12.3 88.6
푸칸 6 18.6 1.4 11.4 31.3 8.3 1.4 9.7 41.0
푸칸 7 23.3 5.9 11.4 40.6 2.6 0.9 3.5 44.1
표 5: 푸칸의% w/w로서의 성분
표 5는 불순물이 약 12 %, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3% 또는 2% w/ w 미만인 정제/개질된 푸칸이 본원의 방법으로 제조될 수 있음을 보여준다.
표 5는 총 갈락토스, 푸코스 및 황산염 함량이 약 77% w/ w 내지 약 87%w/w인 정제/개질된 푸칸이 생성되었음을 더 보여준다.
표 5는 푸칸의 약 9% w/ w 내지 약 14% w/ w의 총 반대이온 함량을 갖는 정제/개질된 푸칸을 더 보여준다.
푸칸 1, 3, 4 및 5의 총 수분 함량은 104℃에서 건조감량법(LOD)으로 결정되었다. 총 수분 함량은 각각의 정제/개질 푸칸의 3.8%, 2.4%, 3.2% 및 4.7% w/w로 결정되었다.
실시예 16 : 푸칸 3과 4의 분자량 분포 측정
겔투과 크로마토그래피(GPC)를 사용해 정제/개질된 푸칸 3과 4에 대해 구한 분자량 분포를 평가했다. 겔투과 크로마토그래피에 사용할 수 있는 다양한 매개 변수, 컬럼 및 표준이 존재한다. 그 결과 분자량 분석에 사용할 수 있는 다양한 기기 셋업이 가능하다. 본원의 분자량 측정을 위해 다음 매개 변수를 사용해 GPC를 했다. 이동상은 0.6 mL/min로 실행된 0.1M 질산나트륨이었다. 컬럼구획 및 검출기는 30℃였고, Waters 2414 굴절률 검출기를 사용했다.
적합한 GPC 컬럼은 수성 용매에 어울리는 GPC 컬럼, 예를 들어 설폰화 스티렌-디비닐벤젠, NH-관능화 아크릴레이트 공중합체 네트워크, 개질된 실리카 및 하이드록실화 폴리메타크릴레이트 기반 겔 중 하나 이상으로 채워진 컬럼을 포함한다. 분석을 위해, 6μm 입경 하이드록실화 폴리메타크릴레이트 기반 겔로 채워진 내경(ID) 6mm의 40mm 길이 가드 컬럼 1 개, 제외한계가 약 7,000 kDa이고 유효 분자량 범위가 약 50 kDa~5,000 kDa인 12 μm 입경 하이드록실화 폴리메타크릴레이트 기반 겔로 채워진 7.8 mm ID의 제1 300mm 분석 GPC 컬럼, 및 제외한계가 약 7,000 kDa이고 유효 분자량 범위가 약 1kDa~6,000kDa인 10 μm 입경 히드록실화 폴리메타크릴레이트 기반 겔로 채워진 7.8mm ID의 제2 300 mm 분석 GPC 컬럼의 3개의 컬럼이 직렬로 사용되었다. 이 컬럼 셋업의 총 유효 분자량 범위는 약 1kDa~6,000kDa 였다. 이런 컬럼 셋업 예로는 직렬로 연결된 Ultrahydrogel® guard-Ultrahydrogel® 2000-Ultrahydrogel® Linear 컬럼이 있다.
American Polymer Standards Corporation의 추적 가능한 표준들로 구성된 표준 곡선에 대해 실행된 샘플들을 정량화했다: DXT3755K (피크 분자량 = 2164kDa), DXT820K (피크 분자량 = 745kDa), DXT760K (피크 분자량 = 621kDa), DXT670K (피크 분자량 = 401kDa), DXT530K (피크 분자량 = 490kDa), DXT500K (피크 분자량 = 390kDa), DXT270K (피크 분자량 = 196kDa), DXT225K (피크 분자량 = 213kDa), DXT150K (피크 분자량 = 124kDa), DXT55K (피크 분자량 = 50kDa), DXT50K (피크 분자량 = 44kDa) 및 DXT5K (피크 분자량 = 4kDa), 이들 표준의 피크 분자량은 약 4kDa 내지 2,200kDa이다. 사용된 표준 곡선은 예를 들어 Dextran 3755 kDa, Dextran 50 kDa 및 Dextran 55 kDa 그리고 여기서 논의된 3 내지 6 개의 추가 추적가능 표준들중 적어도 하나를 포함 할 수 있으며, 보정 포인트는 사용된 보정 제의 피크 분자량이다. 예제 교정 곡선은 DXT3755K, DXT 820K, DXT530K, DXT500K, DXT225K 및 DXT55K로 구성될 수 있다. 여기 사용된 컬럼은 푸칸의 정량화에 사용된 표준의 피크 분자량 범위와 그 이상으로 확장된 총 유효 분자량 범위를 가졌다.
아래 표 6의 결과는 분자량 분포의 특성들에 관한 약어를 사용한다. 겔투과 크로마토그래피는 GPC, 피크 머무름 시간은 PRT, 피크분자량은 PMW, 중량평균분자량은 WAMW, 수평균분자량은 NAMW, 백분율 분포는% dist, 분자량은 MW로 표시한다.
PMW(kDa) WAMW(kDa) NAMW(kDa) % dist.
>100kDa 		% dist.
>200kDa 		% dist.
>500kDa
푸칸 3 690.98 1166.60 443.37 97.77 90.06 63.89
푸칸 4 686.21 1876.74 524.89 98.37 92.97 69.90
표 6 - 2개의 개질 푸칸들의 분자량분포 특성
실시예 17 : 건조에 의한 고순도 푸칸 조성물의 제조
약 100mg의 푸칸 1을 도가니에 넣었다. 푸칸 1이 들어있는 도가니를 105℃의 오븐에 30분간 두어 더 정제된 푸칸 조성물(이하 푸칸 1'이라 함)을 생성했다. 추가로 정제된 푸칸 1’조성물이 들어있는 도가니를 오븐에서 꺼내 데시케이터에 넣었다. 더 정제된 푸칸 1’조성물을 총 푸코스와 갈락토스에 대해 HPAE-PAD로, 총 황과 반대이온 함량에 대해 ICP-MS로 수분이 없는 대기에서 분석했더니, 총 푸코스, 갈락토스, 황산염 및 반대이온을 99.9%w/w 이상 함유하여, 불순물이 0.1% 미만인 것으로 밝혀졌다.
실시예 18 : 건조에 의한 고순도 푸칸 조성물의 제조
약 600mg의 푸칸 1을 Ohaus MB 90 수분 분석기의 알루미늄 팬 위에 놓았다. 이 기기는 푸칸 1을 105℃로 30분간 가열하도록 프로그래밍되어 더 정제된 푸칸 1”조성물을 생성했다. 더 정제된 푸칸 1” 조성물을 기기에서 꺼내 데시케이터에 넣었다. 이 샘플을 총 푸코스와 갈락토스에 대해 HPAE-PAD로, 총 황과 반대이온 함량에 대해 ICP-MS로 수분이 없는 대기에서 분석했더니, 99.9%w/w 이상의 총 푸코스, 갈락토스, 황산염 및 반대이온 함량을 포함해, 불순물이0.1% 미만임이 밝혀졌다.
실시예 19 : 푸칸 1로 치료된 자궁뿔 섬유성 유착
외과적 유착 억제에 대한 정제/개질된 푸칸 1의 효능을 결정하기 위해, 총 2 마리의 뉴질랜드 흰토끼의 양쪽 뿔에 다음의 이중 자궁뿔(DUH) 수술을 했다. 수술 전에 토끼의 체중을 측정한 다음 케타민과 자일라진을 사전 투약하여 수술을 준비했다.
후코이단 용액을 Lactated Ringers Injection USP(LRS) 0.33mg/mL로 준비하고 여과로 살균했다. 모든기구는 무균 상태였으며 수술 내내 무균 영역이 유지되었다. 복부를 세척하고 정중선 복부 절개를 통해 들어갔다. 자궁뿔을 노출시키고 긁어 손상시켰고, 근처의 복벽도 긁었다. 최소한의 후코이단 용액을 손상된 자궁뿔과 측벽 부위에 직접 도포했다. 손상된 자궁뿔과 복벽을 나란히 놓고 봉합사로 고정했다. 15 mL/kg 후코이단 용액을 절개를 닫기 전에 복강에 발랐다. 수술 2 주 후 유착을 평가했다. 자로 자궁뿔 유착 길이를 측정 했다. 총 손상된 자궁뿔 길이의 백분율로서의 유착길이인 자궁뿔 유착범위 백분율은 아래 식으로 계산된다.
식 2 :
유착범위(%) = 100 x 자궁뿔 유착길이 ÷ 총 손상된 자궁뿔 길이
뉴질랜드 흰토끼에 같은 수술을 하되, 대조를 위해 후코이단 용액 대신 15mL/kg의 Lactated Ringer's Injection USP(LRS)를 투여했다. LRS를 투여받은 대조군은 식 2를 사용해 63% 유착범위를 갖는 것으로 결정되었다. 표 7은 정제/개질 푸칸의 대표적인 예인 푸칸 2에 대해 위 방법으로 얻은 결과를 보여준다. 아래 표의 결과는 대조군에 비해 유착범위가 감소된 것을 보여준다.
표 7은 6 개의 자궁뿔을 푸칸 1로 치료한 결과를 제공한다.
투여량(mg/kg) 자궁뿔 수 % 대조군에 대한 자궁뿔 유착범위 감소율
푸칸 1 5 6 100%
표 7: 푸칸 1을 사용한 자궁뿔 유착의 감소
표 7에서알 수 있듯이, 정제/개질 푸칸을 사용해 수술후 자궁뿔 유착을 성공적으로 치료할 수 있다.
실시예 20: 푸칸 4로 치료한 자궁뿔 섬유성 유착
외과적 유착 억제에 대한 정제/개질된 푸칸 4의 효능을 결정하기 위해, 총 4 마리의 뉴질랜드 흰토끼의 양쪽 뿔에 이중 자궁뿔(DUH) 수술을 했다. 수술 전에 토끼의 체중을 측정한 다음 케타민과 자일라진을 사전 투약하여 수술을 준비했다.
후코이단 용액을 Lactated Ringers Injection USP(LRS) 3.75mg/mL로 준비하고 여과로 살균했다. 모든기구는 무균 상태였으며 수술 내내 무균 영역이 유지되었다. 복부를 세척하고 정중선 복부 절개를 통해 들어갔다. 자궁뿔을 노출시키고 긁어 손상시켰으며, 근처의 복벽도 긁었다. 4mL의 후코이단 용액을 왼쪽 부상당한 자궁뿔과 측벽 부위에 직접 도포하고 4mL의 후코이단 용액을 부상당한 오른쪽 자궁뿔과 측벽 부위에 직접 도포했다. 손상된 자궁뿔과 복벽을 나란히 놓고 봉합사로 고정했다. 절개가 닫히기 전에 배액관을 복강에 넣고, 수술 후 48시간에 배액관을 제거했니다. 수술 2 주 후 유착을 평가했다. 자로 자궁뿔 유착길이를 측정했다. 자궁뿔 유착범위는 식 2로 계산했다.
대조군으로 후코이단 용액 대신 Lactated Ringer's Injection USP(LRS 4mL를 투여받은 3 마리의 뉴질랜드 흰토끼에 같은 수술을 했다. LRS를 투여받은 대조군은 식 2로부터 73%의 유착범위를 갖는 것으로 결정되었다. 표 8은 정제/개질 푸칸의 대표적인 예인 푸칸 4에 대해 위 방법을 사용해 구한 결과를 보여준다. 아래 표의 결과는 대조군에 비해 유착범위가 감소한 것을 보여준다.
표 8은 푸칸4로 8개 자궁뿔을 치료한 결과를 제공한다.
　 투여량 (mg/kg) 자궁뿔 수 % 대조군에 대한 자궁뿔 유착범위 감소율
푸칸 4 9.8 8 92.9%(즉, 대조군에 대한 섬유성유착의 감소율 92.9%)
표 8: 푸칸 4를 이용한 자궁뿔 유착의 감소
표 8에서 보듯이, 정제/개질된 푸칸을 사용해 수술후 자궁뿔 유착을 성공적으로 치료할 수 있다.
실시예 21: 푸칸 6으로 치료한 자궁뿔 섬유성 유착
외과적 유착 억제에 대한 정제/개질된 푸칸 6의 효능을 결정하기 위해, 총 4 마리의 뉴질랜드 흰토끼의 양쪽 뿔에 이중 자궁뿔(DUH) 수술을 했다. 수술 전에 토끼의 체중을 측정한 다음 케타민과 자일라진을 사전 투약하여 수술을 준비했다.
후코이단 용액을 Lactated Ringers Injection USP (LRS) 0.33mg/mL로 준비하고 여과로 살균했다. 모든기구는 무균 상태였으며 수술 내내 무균 영역이 유지되었다. 복부를 세척하고 정중선 복부 절개를 통해 들어갔다. 자궁뿔을 노출시키고 긁어 손상시켰고, 근처의 복벽도 긁었다. 손상된 자궁뿔과 복벽을 나란히 놓고 봉합사로 고정했다. 약 15 mL/kg의 후코이단 용액을 절개를 닫기 전에 복강에 도포했다. 수술 2 주 후 유착을 평가했다. 준비된 후코이단 농도별로 3 마리의 토끼를 평가했다. 자로 자궁뿔 유착 길이를 측정했다. 자궁뿔 유착길이는 식 2로 계산했다.
4 마리의 뉴질랜드 흰토끼에 같은 수술을 하되, 후코이단 용액 대신 약 15mL/kg의 Lactated Ringer's Injection USP(LRS)를 대조군에 투여했다. LRS를 투여받은 대조군은 식 2로 71% 유착범위를 갖는 것으로 결정되었다. 표 9는 푸칸 6에 대해 위 방법으로 구한 결과를 보여준다. 아래 표의 결과는 대조군에 비해 유착범위가 감소한 것을 보여준다.
표 9는 푸칸 6으로 8개 자궁뿔을 치료한 결과를 제공한다.
투여량 (mg/kg) 자궁뿔 수 % 대조군에 대한 자궁뿔 유착범위 감소율
푸칸 6 5 8 -18%(즉, 대조군에 대한 섬유성유착 증가율 18%)
표 9: 대조군 LRS에 대한 푸칸9을 사용한 자궁뿔 유착의 증가
표 9에서 알 수 있듯이, 총 비-푸칸 함량이 푸칸의 50%w/w 보다 크고 기존의 방법으로 제조된 푸칸 6은 섬유성유착의 치료에 효과적이지 않았다.
실시예 22: 푸칸 7로 치료한 자궁뿔 섬유성 유착
외과적 유착 억제에 대한 정제/개질된 푸칸 7의 효능을 결정하기 위해, 총 4 마리의 뉴질랜드 흰토끼의 양쪽 뿔에 이중 자궁(DUH) 수술을 했다. 수술 전에 토끼의 체중을 측정한 다음 케타민과 자일라진을 사전 투약하여 수술을 준비했다
후코이단 용액을 Lactated Ringers Injection USP(LRS) 0.33mg/mL로 준비하고 여과로 살균했다. 모든기구는 무균 상태였으며 수술 내내 무균 영역이 유지되었다. 복부를 세척하고 정중선 복부 절개를 통해 들어갔다. 자궁뿔을 노출시키고 긁어 손상했고 근처의 복벽도 긁었다. 손상된 자궁뿔과 복벽을 나란히 놓고 봉합사로 고정했다. 약 15mL/kg의 후코이단 용액을 절개를 닫기 전에 복강에 도포했다. 수술 2 주 후 유착을 평가했다. 준비된 후코이단 농도별로 3 마리의 토끼를 평가했다. 자로 자궁뿔 유착길이를 측정했다. 자궁뿔 유착길이는 식 2로 계산했다.
4 마리의 뉴질랜드 흰토끼에 같은 수술을 하되, 후코이단 용액 대신 약 15mL/kg의 대조군 Lactated Ringer 's Injection USP (LRS)를 투여받았다. LRS를 투여받은 대조군은 식 2에서 76% 유착범위를 갖는 것으로 결정되었다. 표 10은 푸칸 7에 대해 위 방법으로 구한 결과를 보여준다. 아래 표의 결과는 대조군에 비해 유착범위가 감소된 것을 보여준다.
표 10은 푸칸 7로 8개 자궁뿔을 치료한 결과를 제공한다.
투여량 (mg/kg) 자궁뿔 수 % 대조군에 대한 자궁뿔 유착범위 감소율
푸칸 7 5 8 3.7%(즉, 대조군에비한 섬유성유착 감소율 3.7%)
표 10: 대조군 LRS에 대한 푸칸7을 사용한 자궁뿔 유착 감소
표 10에서 알 수 있듯이, 총 비-푸칸 함량이 푸칸의 50%w/w 보다 크고 기존의 방법으로 제조된 푸칸 7은 섬유성유착의 치료에 효과적이지 않았다.
실시예 23: 푸칸 4로 치료한 자궁뿔 섬유성 유착
외과적 유착 억제에 대한 정제/개질된 푸칸 4의 효능을 결정하기 위해, 총 3 마리의 뉴질랜드 흰토끼의 양쪽 뿔에 이중 자궁뿔(DUH) 수술을 했다. 수술 전에 토끼의 체중을 측정한 다음 케타민과 자일라진을 사전 투약하여 수술을 준비했다.
후코이단 용액을 Lactated Ringers Injection USP (LRS) 5mg/mL로 준비하고 여과로 살균했다. 모든기구는 무균 상태였으며 수술 내내 무균 영역이 유지되었다. 복부를 세척하고 정중선 복부 절개를 통해 들어갔다. 자궁뿔을 손상을 위해 노출시키고 긁었으며, 근처의 복벽도 긁었다. 손상된 자궁뿔과 복벽을 나란히 놓고 봉합사로 고정했다. 근육 절개부의 상단 1/3과 하단 1/3을 닫고 5mL/kg 후코이단 용액을 복강에 도포했다. 근육 절개를 일시적으로 닫고 후코이단 용액을 복강에 30분간 두었다. 근육 절개를 재개하고 복강을 10 mL/kg LRS로 씻어냈다. 절개가 닫히기 전에 복강에 있는 대부분의 체액을 흡입했다. 수술 2 주 후 유착을 평가했다. 자로 자궁뿔 유착길이를 측정했다. 전체 손상된 자궁뿔 길이의 백분율로서의 유착길이 인 자궁뿔 유착범위 백분율을 식 2로 계산했다.
표 11은 정제/개질 푸칸의 하나인 푸칸 4에 위 방법을 이용해 구한 결과들을 보여준다. 이 결과는 채첨된 6개 자궁뿔에 대한 평균 유착길이이다.
표 11은 푸칸 4로 6개 자궁뿔을 치료한 결과를 제공한다.
투여량(mg/kg) 자궁뿔 수 평균 유착길이%
푸칸 4 25 6 0%(즉, 유착이 없음)
표 11: 푸칸 4를 이용한 유착길이
표 11에서 보듯이, 정제/개질 푸칸을 이용해 수술후 자궁뿔 유착을 성공적으로 억제, 방지, 제거, 감소 또는 치료할 수 있다.
실시예24: 정제/개질된 푸칸 조성물로 치료한 자궁뿔 섬유성유착
총 푸코스, 갈락토스, 설페이트 및 반대이온을 92% w/w 포함하는 정제/개질된 푸칸 조성물의 외과적 유착 억제 효능을 결정하기 위해, 총 20 마리의 뉴질랜드 흰토끼의 양쪽 뿔에 이중 자궁뿔(DUH) 수술을 했다. 수술 전에 토끼의 체중을 측정한 다음 미다졸람과 덱스메디토미딘을 사전 투약하여 수술을 준비했다.
후코이단 용액을 Lactated Ringers Injection USP(LRS)에서 0.02mg/mL, 0.1mg/mL, 0.5mg/mL 또는 2.5mg/mL의 각 농도로 준비하고 여과로 살균했다. 모든기구는 무균 상태였으며 수술 내내 무균 영역이 유지되었다. 복부를 세척하고 정중선 복부 절개를 통해 들어갔다. 자궁뿔을 손상시키기 위해 노출시키고 긁었으며, 근처의 복벽도 긁었다. 손상된 자궁뿔과 복벽을 나란히 놓고 봉합사로 고정했다. 약 2mL/kg의 후코이단 용액을 절개를 닫기 전에 복강에 도포했다. 수술 2 주 후 유착을 평가했다. 각 후코이단 농도에 대해 토끼 5마리씩 치료하고 평가했다. 자로 자궁뿔 유착길이를 측정했다. 자궁뿔 유착 길이를 식 2로 계산했다.
대조군을 위해 5 마리의 다른 뉴질랜드 흰토끼에 같은 수술을 하되, 각각 후코이단 용액 대신 약 2mL/kg의 대조군 Lactated Ringer 's Injection USP(LRS)를 투여했다. LRS를 투여받은 대조군은 식 2로부터 100% 유착범위를 갖는 것으로 결정되었다. 표 12는 다양한 농도와 투여량에서 정제/개질된 푸칸 조성물에 대해 위 방법으로 구한 결과를 보여준다(정제/개질된 푸칸 조성물의 농도당 10개씩 총 40개 자궁뿔 치료); 그 결과 대조군에 비해 유착범위가 감소된 것을 보여준다.
농도(mg/mL) 투여량(mg/kg) 자궁뿔 수 % 대조군에 대한 자궁뿔 유착범위 감소
0.02 0.04 10 10%(대조군에 비해 섬유성유착 10% 감소)
0.1 0.2 10 30%(대조군에 비해 섬유성유착 30% 감소)
0.5 1 10 71%(대조군에 비해 섬유성유착 71% 감소)
2.5 5 10 95%(대조군에 비해 섬유성유착 95% 감소)
표 12: 대조군 LRS에 대한 정제/개질 푸칸 조성물을 이용한 자궁뿔 유착 감소
표 12에서 보듯이, 정제/개질 푸칸을 이용해 수술후 자궁뿔 유착을 성공적으로 억제, 방지, 제거, 감소 또는 치료할 수 있다.
본 명세서에서 사용된 모든 용어는 문맥이나 정의가 달리 명시하지 않는한 일반적인 의미로 사용된다. 또, 달리 명시적으로 표시되지 않는한, 본 명세서에서 "또는"의 사용은 "및"을 포함하고 그 반대의 경우도 마찬가지다. 비제한적인 용어는 명시 적으로 언급되지 않는한 제한적인 것으로 해석되어서는 안되며, 문맥이 달리 명시하지 않는한 명확하게 나타내지 않는다(예를 들어, "포함하는", "갖는"은 일반적으로 "제한없이 포함하는"을 나타냄). "a", "an"및 "the"와 같은 청구 범위를 포함하는 단수 형태는 명시 적으로 언급되지 않는한 복수 참조를 포함하거나 문맥이 달리 명시적으로 표시하지 않는다.
달리 표시되지 않는한, 실시예의 특징, 특징의 조건 또는 관계 특성을 수정하는 "실질적으로" 및 "약"과 같은 본원의 형용사는 이런 조건이나 특성이 의도된 적용례에 대한 실시예의 작동에 허용되는 허용한계내에서 정의됨을 나타낸다.
본 방법, 구성, 시스템 등의 범위는 수단 플러스 기능 및 단계 플러스 기능 개념을 모두 포함한다. 그러나, "수단"이란 단어가 청구범위에서 구체적으로 언급되지 않는한, 청구범위는 "수단 플러스 기능"관계를 나타내는 것으로 해석되어서는 안되며, 이 단어가 청구범위에 구체적으로 언급되었으면 "수단 플러스 기능"관계를 나타내는 것으로 해석되어야 한다. 마찬가지로, "단계"라는 단어가 청구범위에 구체적으로 언급되지 않는 한, 청구범위는 "단계 플러스 기능"관계를 나타내는 것으로 해석되어서는 안되며, 청구범위에 구체적으로 언급되어 있으면 "단계 플러스 기능"관계를 나타내는 것으로 해석되어야 한다.
전술한 바로부터, 특정 실시예가 예시의 목적으로 본 명세서에서 논의되었지만, 본 명세서에서의 논의의 정신 및 범위를 벗어나지 않고 다양한 수정이 이루어질 수 있음을 이해할 것이다. 따라서, 시스템 및 방법 등은 여기에 설명된 주제의 모든 순열 및 조합뿐만 아니라 그러한 수정을 포함하고 첨부된 청구항이나 설명이나 도면에서 적절한 지원을 갖는 다른 청구항에 의한 경우를 제외하고는 제한되지 않는다.
1200 양이온함량 변경시스템
1202 입력 공급라인
1204 예비필터
1206 양이온함량 변경시스템 출력밸브
1208 양이온함량 변경시스템 출력라인
1210 접선유동여과(TFF) 필터
1212 TFF 공급라인
1214 TFF 입력 펌프
1216 푸칸 용기
1217 TFF 잔류물 밸브
1218 TFF 잔류물 복귀라인
1219 TFF 투과물 출력라인
1220 제1 투석여과액 용기
1224 제1투석여과액 밸브
1225 제1 투석여과액 공급라인
1230 제2 투석여과액 용기
1234 제2 투석여과액 밸브
1235 제2 투석여과액 공급라인

Claims (138)

  1. 푸칸 중합체 구조과 반대이온을 포함하는 푸칸에 있어서:
    푸칸 중합체 구조가 푸코스, 갈락토스 및 설페이트로 이루어지고, 푸칸이 17% 이상의 반대이온을 가지며, 푸칸의 푸코스, 갈락토스, 설페이트 및 반대이온의 총 함량이 90% w/w보다 큰 푸칸.
  2. 제1항에 있어서, 상기 푸칸의 푸코스, 갈락토스, 설페이트 및 반대이온의 총 함량이 94% w/w보다 큰 정제/개질된 푸칸인 푸칸.
  3. 제1항에 있어서, 푸칸의 푸코스, 갈락토스, 설페이트 및 반대이온의 총 함량이 94% w/w보다 큰 푸칸.
  4. 제1항 내지 제3항 중의 어느 하나에 있어서, 푸칸의 푸코스, 갈락토스, 설페이트 및 반대이온의 총 함량이 95% w/w보다 큰 푸칸.
  5. 제1항 내지 제3항 중의 어느 하나에 있어서, 푸칸의 푸코스, 갈락토스, 설페이트 및 반대이온의 총 함량이 97% w/w보다 큰 푸칸.
  6. 제1항 내지 제3항 중의 어느 하나에 있어서, 푸칸의 푸코스, 갈락토스, 설페이트 및 반대이온의 총 함량이 99% w/w보다 큰 푸칸.
  7. 제1항 내지 제3항 중의 어느 하나에 있어서, 푸칸의 푸코스, 갈락토스, 설페이트 및 반대이온의 총 함량이 99.9% w/w보다 큰 푸칸.
  8. 제1항 내지 제7항 중의 어느 하나에 있어서, 푸코스 함량이 25% w/w보다 큰 푸칸.
  9. 제1항 내지 제7항 중의 어느 하나에 있어서, 푸코스 함량이 30% w/w보다 큰 푸칸.
  10. 제1항 내지 제7항 중의 어느 하나에 있어서, 푸코스 함량이 35% w/w보다 큰 푸칸.
  11. 제1항 내지 제7항 중의 어느 하나에 있어서, 갈락토스 함량이 10% w/w미만인 푸칸.
  12. 제1항 내지 제7항 중의 어느 하나에 있어서, 갈락토스 함량이 5% w/w미만인 푸칸.
  13. 제1항 내지 제7항 중의 어느 하나에 있어서, 총 반대이온 함량이 17% w/w 미만인 푸칸.
  14. 제1항 내지 제7항 중의 어느 하나에 있어서, 총 반대이온 함량이 14% w/w 미만인 푸칸.
  15. 제1항 내지 제7항 중의 어느 하나에 있어서, 총 반대이온 함량이 10% w/w 미만인 푸칸.
  16. 제1항 내지 제7항 중의 어느 하나에 있어서, 총 반대이온 함량이 7% w/w 미만인 푸칸.
  17. 제1항 내지 제16항 중의 어느 하나에 있어서, 반대이온이 약학적으로 허용되는 반대이온인 푸칸.
  18. 제17항에 있어서, 약학적으로 허용되는 반대이온이 반대이온이 알루미늄, 아르기닌, 벤자틴, 클로로프로카인, 콜린, 나트륨, 칼륨, 리튬, 암모늄, 에틸렌디아민, 디에틸아민, 디에탄올아민, 에탄올아민, 히스티딘, 라이신, N-메틸 글루카민, 메글루민, 프로카인, 트리에틸아민, 아연, 칼슘 및 마그네슘 중의 적어도 하나를 포함하는 푸칸.
  19. 제17항에 있어서, 약학적으로 허용되는 반대이온이 나트륨과 칼륨 중의 적어도 하나를 포함하는 푸칸.
  20. 제17항에 있어서, 약학적으로 허용되는 반대이온이 나트륨과 칼륨 중의 적어도 하나로 구성되는 푸칸.
  21. 제1항 내지 제20항 중의 어느 하나에 있어서, 수성 겔투과 크로마토그래피 셋업을 사용해 측정할 때 분자량 분포의 적어도 60% w/w가 100kDa를 초과하는 푸칸에 있어서: 상기 수성 겔투과 크로마토그래피 셋업이,
    유효 분자량 범위가 약 50kDa ~ 5,000kDa인 히드록실화 폴리메타크릴레이트 기반 겔로 충전된 7.8mm 내경의 300mm 분석 겔투과 크로마토그래피 컬럼 1개, 유효 분자량 범위가 약 1kDa ~ 6,000kDa인 하이드록실화 폴리메타크릴레이트 기반 겔로 충전된 내경7.8mm의 300mm 분석 겔투과 크로마토그래피 컬럼 1 개, 및 수산화 폴리메타크릴레이트 기반 젤로 충전된 내경 6mm의 40mm 가드 컬럼 1개로서, 약 30℃의 컬럼 구획에 들어있는 2개의 겔투과 크로마토그래피 컬럼과 1개의 가드 컬럼;
    30℃의 굴절률 검출기;
    0.6mL/min으로 실행되는 0.1M 질산나트륨 이동상; 및
    피크 분자량이 약 2,200kDa인 첫 번째 덱스트란 표준, 약 720kDa 내지 760kDa의 피크 분자량을 갖는 두 번째 덱스트란 표준, 약 470kDa 내지 510kDa의 피크 분자량을 갖는 세 번째 덱스트란 표준, 약 370kDa 내지 410kDa의 피크 분자량을 갖는 네번째 덱스트란 표준, 약 180kDa 내지 220kDa의 피크 분자량을 갖는 다섯번째 덱스트란 표준, 및 피크 분자량이 약 40kDa 내지 55kDa인 여섯 번째 덱스트란 표준으로 구성된 피크 분자량 표준 곡선에 대한 정량화로 이루어지는 푸칸.
  22. 제21항에 있어서, 분자량분포의 92% 이상이 100kDa를 초과하는 분자량분포를 갖는 푸칸.
    The fucan of claim 21 , wherein the fucan has a molecular weight distribution wherein at least 92% w/w of the distribution is greater than 100 kDa.
  23. 제21항에 있어서, 분자량분포의 97% 이상이 100kDa를 초과하는 분자량분포를 갖는 푸칸.
  24. 제21항에 있어서, 100 kDa를 넘는 중량평균분자량을 갖는 푸칸.
  25. 제1항 내지 제24항 중의 어느 하나에 있어서, 황화 수준이 20% w/w 내지 60% w/w인 푸칸.
  26. 제21항 내지 제24항 중의 어느 하나에 있어서, 황화 수준이 30% w/w 내지 55% w/w인 푸칸.
  27. 제1항 내지 제24항 중의 어느 하나에 있어서, 황화 수준이 35% w/w 내지 52% w/w인 푸칸.
  28. 제1항 내지 제24항 중의 어느 하나에 있어서, 총 탄수화물 함량이 27% w/w 내지 80% w/w인 푸칸.
  29. 제28항에 있어서, 총 탄수화물 함량의 백분율로서의 글루쿠론산, 포도당, 만노스, 람노스 및 자일로스 함량의 총량이 12 %w/w 미만인 푸칸.
  30. 제1항 내지 제29항 중의 어느 하나에 있어서, 50mg/mL의 농도로 물에 용해되었을 때 푸칸이 4cP내지 50cP의 점도를 갖는 푸칸.
  31. 제1항 내지 제29항 중의 어느 하나에 있어서, 50mg/mL의 농도로 물에 용해되었을 때 푸칸이 10cP내지 40cP의 점도를 갖는 푸칸.
  32. 제1항 내지 제29항 중의 어느 하나에 있어서, 50mg/mL의 농도로 물에 용해되었을 때 푸칸이 15cP내지 30cP의 점도를 갖는 푸칸.
  33. 제1항 내지 제32항 중의 어느 하나에 있어서, 흰색 고체인 푸칸.
  34. 제1항 내지 제33항 중의 어느 하나에 있어서, 1mg/mL내지 1001mg/mL의 농도로 물에 용해되었을 때 투명무색인 푸칸.
  35. 제1항 내지 제34항 중의 어느 하나에 있어서, 5% w/w 미만의 아세틸 함량을 포함하는 푸칸.
  36. 제1항 내지 제34항 중의 어느 하나에 있어서, 2% w/w 미만의 아세틸 함량을 포함하는 푸칸.
  37. 제1항 내지 제34항 중의 어느 하나에 있어서, 탄소 차원의 10-30ppm 범위에서, 8증분의 256-512 스캔 각각에서, 5mm 콜드 프로브가 장착된 600MHz 분광기에서 용매 신호 억제로 70℃에서 2D 1H-13C 이종핵 다중 양자 일관성으로 측정했을 때 푸칸이 0%w/w의 아세틸 함량을 포함하는 푸칸.
  38. 제1항 내지 제37항 중의 어느 하나의 푸칸을 제조하는 단계를 포함하는 방법.
  39. 제1항 내지 제37항 중의 어느 하나의 푸칸을 이용하는 단계를 포함하는 방법.
  40. 제39항에 있어서, 상기 이용하는 단계에서 섬유성 유착을 치료하는 방법.
  41. 의학적으로 허용되는 완충액이나 희석제에 제1항 내지 제37항 중의 어느 하나의 푸칸의 치료학적 유효량을 포함하는 의학적으로 허용되는 조성물.
  42. 동물의 상태나 질병을 치료하기 위해 제41항의 의학적으로 허용되는 조성물을 선택하는 단계와, 치료학적 유효량의 푸칸 0.5 mg/kg 내지 50 mg/kg을 동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 동물의 상태나 질병을 치료하는 방법.
  43. 동물의 상태나 질병을 치료하기 위해 제41항의 의학적으로 허용되는 조성물을 선택하는 단계와, 치료학적 유효량의 푸칸 0.04 mg/kg 내지 25 mg/kg을 동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 동물의 상태나 질병을 치료하는 방법.
  44. 제43항에 있어서, 치료학적 유효량이 0.2 mg/kg 내지 10 mg/kg인, 동물의 상태나 질병을 치료하는 방법.
  45. 제43항에 있어서, 치료학적 유효량이 1 mg/kg 내지 5 mg/kg인, 동물의 상태나 질병을 치료하는 방법.
  46. 제43항에 있어서, 치료학적 유효량이 1.5 mg/kg 내지 3 mg/kg인, 동물의 상태나 질병을 치료하는 방법.
  47. 제43항에 있어서, 치료학적 유효량이 5 mg/kg 내지 10 mg/kg인, 동물의 상태나 질병을 치료하는 방법.
  48. 제42항 내지 제47항 중의 어느 하나에 있어서, 상태나 질병이 동물의 표적부의 섬유성 유착이고, 투여하는 단계에서 표적부에 치료학적 유효량을 투여하는 방법.
  49. 제1항 내지 제37항 중의 어느 하나의 푸칸 0.02 mg/mL 내지 100 mg/mL을 포함하는 의학적 조성물에 있어서, 동물의 질병이나 상태를 치료하도록 구성된 의학적 조성물.
  50. 제49항에 있어서, 푸칸 0.5 mg/mL 내지 5 mg/mL을 포함하는 의학적 조성물.
  51. 제49항에 있어서, 푸칸 2.5 mg/mL을 포함하는 의학적 조성물.
  52. 제49항 내지 제51항 중의 어느 하나에 있어서, 의학적 조성물이 의료기기인 의학적 조성물.
  53. 제49항 내지 제51항 중의 어느 하나에 있어서, 의학적 조성물이 액체 의료기기인 의학적 조성물.
  54. 제49항 내지 제51항 중의 어느 하나에 있어서, 의학적 조성물이 약학적 조성물인 의학적 조성물.
  55. 제49항 내지 제51항 중의 어느 하나에 있어서, 의학적 조성물이 액체 약학적 조성물인 의학적 조성물.
  56. 제49항 내지 제55항 중의 어느 하나에 있어서, 질병이나 상태가 섬유성 유착인 의학적 조성물.
  57. 동물의 상태나 질병 치료를 위해 제49항 내지 제56항 중의 어느 하나의 의학적 조성물을 0.01 mg/kg 내지 15 mg/kg을 포함하는 용량범위의 용도.
  58. 동물의 상태나 질병 치료를 위해 제49항 내지 제56항 중의 어느 하나의 의학적 조성물을 0.03 mg/kg 내지 4 mg/kg을 포함하는 용량범위의 용도.
  59. 동물의 상태나 질병 치료를 위해 제49항 내지 제56항 중의 어느 하나의 의학적 조성물을 0.06 mg/kg 내지 2 mg/kg을 포함하는 용량범위의 용도.
  60. 동물의 상태나 질병 치료를 위해 제49항 내지 제56항 중의 어느 하나의 의학적 조성물을 2 mg/kg 내지 4 mg/kg을 포함하는 용량범위의 용도.
  61. 소정의 질병이나 상태를 갖거나 갖고 있다고 의심되는 환자의 선택된 표적부를 확인하는 단계와, 제49항 내지 제56항 중의 어느 하나의 의학적 조성물을 환자의 표적부에 투여하는 단계를 포함하는, 환자의 질병이나 상태의 치료방법.
  62. 제61항에 있어서, 질병이나 상태가 섬유성 유착인, 환자의 질병이나 상태의 치료방법.
  63. 제61항 또는 제62항에 있어서, 표적부가 수술부위이고, 상기 투여가 a) 수술부위의 수술상처를 개봉한 뒤, b) 수술중, 및 c) 수술상처를 닫은 뒤 중의 적어도 하나에서 실행되는, 환자의 질병이나 상태의 치료방법.
  64. 제61항 또는 제62항에 있어서, 상기 투여가 수술뒤 수술상처를 닫기 전에 실행되는, 환자의 질병이나 상태의 치료방법.
  65. 제61항 또는 제62항에 있어서, 상기 투여가 3분 미만 이루어지는, 환자의 질병이나 상태의 치료방법.
  66. 제61항 또는 제62항에 있어서, 상기 투여가 2분 미만 이루어지는, 환자의 질병이나 상태의 치료방법.
  67. 제61항 또는 제62항에 있어서, 상기 투여가 1분 미만 이루어지는, 환자의 질병이나 상태의 치료방법.
  68. 제61항 또는 제62항에 있어서, 표적부가 병변, 찰과상, 손상 부위 중의 적어도 하나인, 환자의 질병이나 상태의 치료방법.
  69. 제61항 내지 제68항 중의 어느 하나에 있어서, 표적부가 골반강, 복강, 등강, 두개강, 척수강, 흉강, 심낭강, 피부, 관절, 근육, 힘줄 및 인대 중의 적어도 하나인, 환자의 질병이나 상태의 치료방법.
  70. 정제/개질된 푸칸을 얻기위해 출발 푸칸 조성물의 불순물을 제거하는 방법에 있어서:
    불순물을 포함한 출발 푸칸 조성물을 제공하는 단계;
    응집 보조제를 출발 푸칸 조성물에 첨가하여 반응혼합물을 생성하는 단계;
    반응혼합물을 가열해 불순물을 응집해 응집된 불순물을 생성하는 단계; 및
    응집된 불순물을 제거하는 단계;를 포함하는 방법.
  71. 제70항에 있어서, 출발 푸칸 조성물을 용액으로 제공하는 단계를 더 포함하는 방법.
  72. 제70항에 있어서, 불순물이 감소된 용액내 정제/개질된 푸칸을 수집하는 단계를 더 포함하는 방법.
  73. 제70항에 있어서, 불순물을 응집하는 단계에서 대기압 이상에서 반응혼합물을 가열하는 방법.
  74. 제70항에 있어서, 응집보조제가 염을 포함하는 방법.
  75. 제74항에 있어서, 염이 염화물, 브롬화물, 요오드화물, 불화물, 황산염, 아황산염, 탄산염, 중탄산염, 인산염, 질산염, 아질산염, 아세테이트, 구연산염, 규산염 및/또는 알칼리 금속, 알칼리 토금속, 알루미늄 및/또는 암모늄의 시안화물과 같은 포함하는 방법.
  76. 제70항에 있어서, 응집보조제가 염기를 포함하는 방법.
  77. 제76항에 있어서, 염기가 알칼리 금속, 알칼리토 금속, 알루미늄 및/또는 암모늄의 수산화물 및/또는 산화물을 포함하는 방법.
  78. 제70항 내지 제77항 중의 어느 하나에 있어서, 제거된 불순물이 입자, 지질, 지방산, 플로로타닌, 라미나린, 알기네이트, 단백질, 마이야르 반응생성물, 푸코잔틴, 엽록소, 박테리아, 세포 성분 및 DNA 중의 적어도 하나를 포함하는 방법.
  79. 정제/개질된 푸칸을 얻기 위해 출발 푸칸 조성물로부터 불순물을 제거하는 방법에 있어서:
    고체로서의 출발 푸칸 조성물과, 불순물을 용해하는 푸칸을 용해할 수 없는 추출 매질을 제공하는 단계;
    출발 푸칸 조성물을 추출 매질과 혼합하여 정제/개질된 푸칸과 추출 매질의 혼합물을 생성하는 단계; 및
    추출 매체에서 정제/개질된 푸칸을 분리하는 단계;를 포함하는 방법.
  80. 제79항에 있어서, 정제/개질된 푸칸을 고체로 수집하는 단계를 더 포함하는 방법.
  81. 제79항에 있어서, 추출 매질이 상대 극성이 0.765 미만인 적어도 하나의 유기 용매를 포함하는 방법.
  82. 제81항에 있어서, 유기 용매가 에탄올, 이소프로판올, 메탄올, 벤젠, 디에틸 에테르, 데카메틸시클로-펜타실록산, 에틸, 아세테이트, 부탄올, 헥산, 헵탄, 헵탄올, 옥탄올 및 데칸올 중의 적어도 하나를 포함하는 방법.
  83. 제81항에 있어서, 추출 매질이 염기, 세제 및 산화제 중의 적어도 하나를 더 포함하는 방법.
  84. 제79항에 있어서, 고체 형태로 출발 푸칸 조성물을 제공하는 단계에서 출발 푸칸 조성물을 침전시키는 방법.
  85. 제79항 내지 제84항 중의 어느 하나에 있어서, 제거된 불순물이 입자, 지질, 지방산, 플로로타닌, 라미나린, 알기네이트, 단백질, 마이야르 반응생성물, 푸코잔틴, 엽록소, 박테리아, 세포 성분 및 DNA 중의 적어도 하나를 포함하는 방법.
  86. 정제/개질된 푸칸을 얻기 위해 출발 푸칸 조성물로부터 불순물을 제거하는 방법에 있어서:
    용액에 현탁된 불순물을 포함해, 불순물을 포함한 출발 푸칸 조성물을 제공하는 단계;
    이온-다가 불순물 침전제를 사용해 용액으로부터 불순물을 침전시켜 부유 불순물, 침전된 불순물 및 상청액의 혼합물을 생성하는 단계; 및
    부유 불순물과 침전된 불순물을 상청액에서 분리하는 단계;를 포함하는 방법.
  87. 제86항에 있어서, 정제/개질된 푸칸을 포함한 상청액을 수집하는 단계를 더 포함하는 방법.
  88. 제86항에 있어서, 이온-다가 불순물 침전제가 2가나 3가 양이온의 염을 포함하는 방법.
  89. 제88항에 있어서, 염이 염화물, 브롬화물, 요오드화물, 불화물, 황산염, 아황산염, 탄산염, 중탄산염, 인산염, 질산염, 아질산염, 아세테이트, 구연산염, 규산염 및/또는 시안화물인 방법.
  90. 제88항에 있어서, 양이온이 알칼리토 금속, 아연, 알루미늄, 구리 및/또는 철인 방법.
  91. 제86항에 있어서, 이온-다가 불순물 침전제가 2가나 3가 양이온의 염기를 포함하는 방법.
  92. 제91항에 있어서, 염기가 알칼리 토금속, 아연, 알루미늄, 구리 및/또는 철의 수산화물 및/또는 산화물인 방법.
  93. 제86항 내지 제92항 중의 어느 하나에 있어서, 부유 불순물과 침전된 불순물을 상청액으로부터 분리하는 단계에서, 부유 불순물, 침전된 불순물 및 상청액의 혼합물에 응집제를 첨가해 부유 불순물과 침전된 불순물을 응집하는 방법.
  94. 제93항에 있어서, 응집제가 황산 알루미늄 칼륨; 황산 알루미늄 나트륨; 황산 알루미늄 암모늄; 염화칼슘; 인산 나트륨; 수산화 알루미늄; 염화 알루미늄; 염화 제 2 철; 황산 제 2 철; 황산 제1 철; 규산 나트륨; 규산 칼슘; 인산 칼슘; 염화 아연; 탄산 칼슘; 중탄산 칼슘; 황산 칼륨; 인산 마그네슘; 아크릴아미드; 아크릴산; 알루미늄 클로로하이드레이트; 폴리알루미늄 클로라이드; 타닌; 포름알데히드; 멜라민; N,N-디메틸아미노에틸 아크릴레이트 메틸 클로라이드; N,N-디메틸아미노에틸 메타크릴레이트 메틸 클로라이드 4 급; 및 폴리디알릴디메틸-암모늄 클로라이드 중의 적어도 하나를 포함하는 방법.
  95. 제86항 내지 제94항 중의 어느 하나에 있어서, 7 내지 14의 pH를 유지하는 단계를 더 포함하는 방법.
  96. 제95항에 있어서, pH를 유지하는 단계에서 염기의 첨가를 하는 방법.
  97. 제86항 내지 제96항 중의 어느 하나에 있어서, 제거된 불순물이 입자, 지질, 지방산, 플로로탄닌, 라미나린, 알기네이트, 단백질, 마이야르 반응생성물, 푸코잔틴, 클로로필, 박테리아, 세포 성분 및 DNA 중의 적어도 하나를 포함하는 방법.
  98. 정제/개질된 푸칸을 얻기 위해 출발 푸칸 조성물로부터 불순물을 제거하는 방법에 있어서:
    불순물을 포함한 출발 푸칸 조성물을 제공하는 단계;
    출발 푸칸 조성물 pH를 8 내지 14로 조정하는 단계;
    세포파괴제, 생체분자 용해물 및 출발 푸칸 조성물을 포함한 반응혼합물을 생성하기 위해 세포 성분을 용해하는 세포파괴제를 출발 푸칸 조성물에 첨가하는 단계; 및
    반응혼합물에서 세포파괴제와 생체분자 용해물을 제거하는 단계;를 포함하는 방법.
  99. 제98항에 있어서, 출발 푸칸 조성물을 제공하는 단계에서 출발 푸칸 조성물을 용액으로 제공하는 방법.
  100. 제98항에 있어서, 불순물이 감소된 용액에서 정제/개질된 푸칸을 수집하는 단계를 더 포함하는 방법.
  101. 제98항에 있어서, 세포파괴제가 세제를 포함하는 방법.
  102. 제101항에 있어서, 세제가 음이온 세제인 방법.
  103. 제101항에 있어서, 세제가 양이온 세제인 방법.
  104. 제101항에 있어서, 세제가 비이온 세제인 방법.
  105. 제101항에 있어서, 세제가 나트륨 도데실 설페이트(SDS), 벤잘코늄 클로라이드, Triton X 100®, Triton X 114®, Brij® 세제, Tween® 세제, 나트륨 데옥시콜레이트 및 알킬벤젠설포네이트 중의 적어도 하나를 포함하는 방법.
  106. 제98항 내지 제105항 중의 어느 하나에 있어서, 세포파괴제와 생체분자 용해물을 제거하는 단계에서 세포파괴제와 생체분자 용해물을 응집하는 응집제를 반응혼합물에 첨가하는 방법.
  107. 제98항 내지 제105항 중의 어느 하나에 있어서, 세포파괴제를 제거하는 단계에서 반응혼합물에 세포파괴제를 불용성으로 하여 침전물을 생성하는 침전제를 반응혼합물에 첨가하는 방법.
  108. 제98항 내지 제107항 중의 어느 하나에 있어서, 생체분자 용해물을 제거하는 단계에서 반응혼합물에 생체분자 용해물을 불용성으로 하여 침전물을 생성하는 침전제를 반응혼합물에 첨가하는 방법.
  109. 제107항 또는 제108항에 있어서, 침전물을 응집시키는 응집제를 반응혼합물에 첨가하는 단계를 더 포함하는 방법.
  110. 제106항 내지 제109항 중의 어느 하나에 있어서, 응집제가 황산 알루미늄 칼륨; 황산 알루미늄 나트륨; 황산 알루미늄 암모늄; 염화칼슘; 인산 나트륨; 수산화 알루미늄; 염화 알루미늄; 염화 제 2 철; 황산 제 2 철; 황산 제1 철; 규산 나트륨; 규산 칼슘; 인산 칼슘; 염화 아연; 탄산 칼슘; 중탄산 칼슘; 황산 칼륨; 인산 마그네슘; 아크릴 아미드; 아크릴산; 알루미늄 클로로 하이드레이트; 폴리 알루미늄 클로라이드; 타닌; 포름 알데히드; 멜라민; N,N-디메틸 아미노 에틸 아크릴레이트 메틸 클로라이드; N,N-디메틸 아미노 에틸 메타 크릴 레이트 메틸 클로라이드 4 급; 및 폴리디알릴디메틸-암모늄 클로라이드 중의 적어도 하나를 포함하는 방법.
  111. 제102항에 있어서, 음이온 세제를 제거하는 단계에서 음이온 흡착을 하는 방법.
  112. 제103항에 있어서, 양이온 세제를 제거하는 단계에서 양이온 흡착을 하는 방법.
  113. 제104항에 있어서, 비이온 세제를 제거하는 단계에서 미셀 상분리를 하는 방법.
  114. 제101항에 있어서, 세제를 제거하는 단계에서 소수성 흡착을 하는 방법.
  115. 제101항에 있어서, 세제를 제거하는 단계가,
    세제의 농도가 소정의 농도 이하가될 때까지 반응혼합물을 희석하는 단계; 및
    세제를 포함한 반응혼합물을 세제의 최대 분자량을 초과하는 분자량 컷오프를 갖는 접선유동여과 필터를 통해 투석여과하는 단계;를 포함하는 방법.
  116. 제98항 내지 제115항 중의 어느 하나에 있어서, 출발 푸칸 조성물을 제공한 후 세포파괴제를 제거하기 전에 반응혼합물에 킬레이트제를 첨가하는 단계를 더 포함하는 방법.
  117. 제116항에 있어서, 킬레이트제가 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA), 2,3-디머캅토-1-프로판올, 에틸렌디아민, 포르핀 및/또는 시트르산을 포함하는 방법.
  118. 제98항 내지 제117항 중의 어느 하나에 있어서, 반응혼합물내 산화제를 급냉하도록 세포파괴제를 제거하기 전에 산화제-급냉제를 반응혼합물에 첨가하는 단계를 더 포함하는 방법.
  119. 제98항 내지 제118항 중의 어느 하나에 있어서, 출발 푸칸 조성물을 제공한 뒤 세포파괴제를 제거하기 전에 정균제를 반응혼합물에 첨가하는 단계를 더 포함하는 방법.
  120. 제119항에 있어서, 정균제가 아황산나트륨, 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA), 염화 벤잘코늄, 에탄올 및/또는 티오우레아를 포함하는 방법.
  121. 제98항 내지 제120항 중의 어느 하나에 있어서, 제거된 불순물이 입자, 지질, 지방산, 플로로타닌, 라미나린, 알기네이트, 단백질, 마이야르 반응생성물, 푸코잔틴, 엽록소, 박테리아, 세포 성분 및 DNA 중의 적어도 하나를 포함하는 방법.
  122. 정제/개질된 푸칸을 얻기 위해 출발 푸칸 조성물로부터 불순물을 제거하는 방법에 있어서:
    수성 출발 용액에 불순물을 포함하는 출발 푸칸 조성물을 제공하는 단계;
    수성 출발 용액을 유기 용매와 혼합하여 수성-유기상 혼합물을 생성하는 단계; 및
    수성-유기상 혼합물을 분리하여 수성 부분과 유기 부분을 구하는 단계;를 포함하는 방법.
  123. 제122항에 있어서, 정제/개질된 푸칸을 포함한 수성 부분을 수집하는 단계를 더 포함하는 방법.
  124. 제122항에 있어서, 유기 용매가 0.765 미만의 상대 극성을 갖는 하나 이상의 유기 용매를 포함하는 방법.
  125. 제122항 내지 제124항 중의 어느 하나에 있어서, 유기 용매가 에탄올, 이소프로판올, 메탄올, 벤젠, 데카메틸시클로-펜타실록산, 에틸 아세테이트, 헥산, 헵탄올, 옥탄올, 데칸올, 헵탄, 이소부틸 아세테이트, 아니솔, 이소프로필 아세테이트, 1-부탄올, 부틸 아세테이트, 메틸이소부틸케톤, 펜탄, 1-펜탄올, 에틸 에테르 및 프로필 아세테이트 중의 적어도 하나를 포함하는 방법.
  126. 제122항 내지 제125항 중의 어느 하나에 있어서, 제거된 불순물이 입자, 지질, 지방산, 플로로타닌, 라미나린, 알기네이트, 단백질, 마이야르 반응생성물, 푸코잔틴, 엽록소, 박테리아, 세포 성분 및 DNA 중의 적어도 하나를 포함하는 방법.
  127. 정제/개질된 푸칸을 얻기 위해 출발 푸칸 조성물로부터 불순물을 제거하는 방법에 있어서:
    출발 용액에 출발 푸칸 조성물을 제공하는 단계; 및
    잔류물 푸칸 조성물을 생성하기 위해 접선유동여과 필터를 통해 킬레이트제 용액으로 접선유동여과 필터를 통한 출발 용액을 투석여과하는 단계;를 포함하는 방법.
  128. 제127항에 있어서, 킬레이트제기 에틸렌디아민-테트라아세트산(EDTA), 2,3-디머캅토-1-프로판올, 에틸렌디아민, 포르핀 또는 시트르산 중의 적어도 하나를 포함하는 방법.
  129. 제127항 또는 제128항에 있어서, 잔류물 푸칸 조성물이 나트륨 및/또는 칼륨으로 구성된 양이온 함량을 포함하는 방법.
  130. 정제/개질된 푸칸을 얻기 위해 출발 푸칸 조성물로부터 불순물을 제거하는 방법에 있어서:
    불순물을 포함하는 출발 푸칸 조성물을 제공하는 단계;
    초임계추출기에 출발 푸칸 조성물을 70bar 이상의 압력과 30℃ 이상의 온도로 두는 단계;
    초임계 유체로 불순물을 제거하기 위해 초임계추출기에 초임계 유체를 채우는 단계; 및
    일정 시간 후 추출된 불순물을 포함한 초임계 유체를 제거하는 단계;를 포함하는 방법.
  131. 제130항에 있어서, 초임계 추출기에 남아있는 정제/개질된 푸칸을 수집하는 단계를 더 포함하는 방법.
  132. 제130항에 있어서, 압력이 70bar내지 2000bar인 방법.
  133. 제130항에 있어서, 온도가 30℃ 내지 300℃인 방법.
  134. 제130항에 있어서, 출발 푸칸 조성물이 액체인 방법.
  135. 제130항에 있어서, 출발 푸칸 조성물이 고체인 방법.
  136. 제130항에 있어서, 초임계 유체가 이산화탄소, 에탄올, 에탄, 염산, 불화 수소산, 황산 및 질산 중의 적어도 하나를 포함하는 방법.
  137. 제130항에 있어서, 소정의 시간이 5분 내지 50시간인 방법.
  138. 제130항 내지 제137항 중의 어느 하나에 있어서, 제거된 불순물이 입자, 지질, 지방산, 플로로타닌, 라미나린, 알기네이트, 단백질, 마이야르 반응생성물, 푸코잔틴, 엽록소, 박테리아, 세포 성분 및 DNA 중의 적어도 하나를 포함하는 방법.
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Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3829600A4 (en) 2018-07-27 2022-06-15 Arc Medical Devices, Inc. LOW ENDOTOXIN FUCCO COMPOSITIONS, SYSTEMS AND METHODS
WO2023019360A1 (en) * 2021-08-20 2023-02-23 ARC Medical Devices Fucan and modified fucan compositions for the treatment of conditions related to capsular contracture and to inhibiting fibrous growth around or on transplants
TWI829020B (zh) * 2021-10-08 2024-01-11 中華海洋生技股份有限公司 小分子褐藻醣膠用於製備子宮內膜異位症藥物和保健食品之用途
CN114392399B (zh) * 2022-01-26 2022-09-02 青岛琛蓝海洋生物工程有限公司 一种木葡聚糖防粘连膜及其制备方法

Family Cites Families (69)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4461873A (en) 1982-06-22 1984-07-24 Phillips Petroleum Company Ethylene polymer blends
JPH0491027A (ja) * 1990-08-02 1992-03-24 Taiho Yakuhin Kogyo Kk 抗ヒト免疫不全症ウィルス剤
DE4213963A1 (de) 1992-04-28 1993-11-04 Seitz Filter Werke Verfahren und vorrichtung zur reinigung von abwasser
DE69531044T2 (de) * 1994-03-16 2003-12-04 Univ California Alameda Behandlung von entzündung durch die gabe von spezifischen sulfatase-enzymen und/oder inhibitoren der sulfatierung
WO1995035261A1 (fr) 1994-06-22 1995-12-28 Noritake Co., Limited Procede de regeneration des fluides d'usinage et appareil associe
US5616595A (en) 1995-06-07 1997-04-01 Abbott Laboratories Process for recovering water insoluble compounds from a fermentation broth
IT1288713B1 (it) 1996-12-18 1998-09-23 Crinos Industria Farmaco Fucani a basso peso molecolare aventi attivita' anticoagulante antitrombinica e antitrombotica
JPH10195106A (ja) * 1997-01-13 1998-07-28 Masakuni Tako 養殖イトモズクからの純度の高いフコイダンの製造法
JP4331912B2 (ja) * 2000-04-21 2009-09-16 タカラバイオ株式会社 硫酸化グルクロノフカン
US6868715B1 (en) 2000-09-20 2005-03-22 General Electric Company Method and apparatus for rapid determination of polymer molecular weight
US6812220B2 (en) * 2001-08-29 2004-11-02 University Of British Columbia Pharmaceutical compositions and methods relating to fucans
JPWO2003023036A1 (ja) * 2001-09-05 2004-12-24 タカラバイオ株式会社 硫酸化フコガラクタン分解酵素遺伝子
AU2002348395A1 (en) 2001-10-23 2003-05-06 Waters Investments Limited System and method for determining radius of gyration, molecular weight, and intrinsic viscosity of a polymeric distribution using gel permeation chromatography and light-scattering detection
SE0200507D0 (sv) 2002-02-21 2002-02-21 Biovitrum Ab Chromatographic method
WO2004001031A1 (ja) 2002-06-20 2003-12-31 Takara Bio Inc. ナマコ由来硫酸化フカン分解酵素
US20040014179A1 (en) * 2002-06-20 2004-01-22 Novozymes A/S Flocculation with divalent salt
RU2247574C2 (ru) 2002-12-26 2005-03-10 Тихоокеанский институт биоорганической химии Дальневосточного отделения РАН Средство, обладающее антикоагулянтным и иммунотропным действием
BRPI0418384A (pt) * 2003-05-30 2007-06-26 Arc Pharmaceuticals Inc composições farmacêuticas e métodos referentes à inibição de adesões fibrosas utilizando diversos agentes
KR100695779B1 (ko) * 2004-09-20 2007-03-19 배태진 푸코이단을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 푸코이단의생산 방법
WO2006032144A1 (en) * 2004-09-23 2006-03-30 Arc Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical compositions and methods relating to inhibiting fibrous adhesions or inflammatory disease using fucans from various echinoderm sources
KR100623001B1 (ko) * 2004-10-11 2006-09-19 한국식품연구원 갈조류로 부터 항암 및 항고지혈 활성을 갖는 식품소재용 라미나란과 휴코이단의 일괄 분리 정제방법
CN1305885C (zh) * 2004-12-31 2007-03-21 中国科学院海洋研究所 海带中l－褐藻糖的制备方法
US20090105190A1 (en) * 2005-03-01 2009-04-23 Koji Hatano Method for Producing Fucoidan, Fucoidan, and Fucoidan-Containing Composition
US8426381B2 (en) 2005-09-09 2013-04-23 Lucas Meyer Cosmetics Canada Inc. Polysaccharides compositions comprising fucans and galactans and their use to reduce extravasation and inflammation
US8598337B2 (en) * 2006-01-13 2013-12-03 Baxter International Inc. Method for purifying polysaccharides
US7803629B2 (en) 2006-06-27 2010-09-28 Chevron Phillips Chemical Company, Lp Method for employing SEC-FTIR data to predict mechanical properties of polyethylene
CN1985846B (zh) 2006-09-04 2011-08-31 北京世纪博康医药科技有限公司 褐藻多糖硫酸酯在制备治疗心脑血管疾病的药物中的用途
CN1985847B (zh) * 2006-09-04 2011-10-05 北京世纪博康医药科技有限公司 低分子量褐藻多糖硫酸酯在制备治疗心脑血管疾病的药物中的用途
KR100705975B1 (ko) 2006-10-02 2007-04-10 이엔지바이오 주식회사 생체이용성 후코이단 및 그의 제조방법
CN101011411A (zh) 2006-12-08 2007-08-08 北京世纪博康医药科技有限公司 褐藻多糖硫酸酯在制备治疗肝脏疾病的药物中的用途
WO2008103324A1 (en) * 2007-02-19 2008-08-28 Wms Gaming Inc. Network diagnostics in a wagering game system
WO2008103234A1 (en) 2007-02-23 2008-08-28 Baxter, International Inc. Process methods for fucoidan purification from seaweed extracts
CN100540568C (zh) 2007-04-20 2009-09-16 中国科学院海洋研究所 一种提取褐藻多糖硫酸酯的方法
US7818109B2 (en) 2007-10-23 2010-10-19 Bose Corporation Methods and apparatus for securing an active vehicle seat
CN101156664B (zh) 2007-11-21 2010-08-11 上海理工大学 从海带提碘碱炼液中提取岩藻多糖的方法
CN101959868A (zh) 2008-02-28 2011-01-26 日本新药株式会社 纤维化抑制剂
WO2010110223A1 (ja) 2009-03-23 2010-09-30 国立大学法人鳥取大学 抗腫瘍作用を有するフコイダン
KR20100138440A (ko) * 2009-06-25 2010-12-31 주식회사 한립생명공학 푸코이단 분해 효소 및 이의 제조방법
JO3676B1 (ar) * 2009-07-27 2020-08-27 Arc Medical Devices Inc مركبات صيدلانية تضم فوكانات معدلة وطرق تتعلق بها
CN101659709B (zh) 2009-09-18 2011-09-07 集美大学 岩藻聚糖的制备方法
AU2011205271B2 (en) 2010-01-14 2014-01-30 Baxalta GmbH Methods and compositions for treating bleeding disorders
CN102821770A (zh) * 2010-02-22 2012-12-12 玛丽诺瓦股份有限公司 抗病毒制剂
PT2595722E (pt) 2010-07-22 2015-03-02 Heineken Supply Chain Bv Método para estabilização de bebidas fermentadas com levedura campo técnico da invenção
JP6363017B2 (ja) 2011-09-01 2018-07-25 中外製薬株式会社 限外ろ過によって高度に濃縮された抗体を含む組成物を調製するための方法
JP2013180994A (ja) 2012-03-02 2013-09-12 Kokando:Kk 単純ヘルペスウイルス２型感染予防剤およびインフルエンザウイルス感染治療剤
EP2838643B1 (en) 2012-04-20 2021-06-16 Vlaamse Instelling voor Technologisch Onderzoek (VITO) Improved dilute chemical reaction process with membrane separation step
KR20140033692A (ko) * 2012-09-10 2014-03-19 차의과학대학교 산학협력단 고분자량의 푸코이단을 포함하는 미백용 조성물
CN202778304U (zh) 2012-09-11 2013-03-13 湖南金能机械制造有限公司 一种循环泵分流搅拌装置
JP2014124579A (ja) 2012-12-26 2014-07-07 Sekisui Chem Co Ltd 有機排水の処理装置
JP6336487B2 (ja) 2013-01-25 2018-06-06 マリノヴァ プロプライエタリー リミテッド 処理方法
FR3020570B1 (fr) * 2014-04-30 2017-07-21 Pierre Fabre Dermo-Cosmetique Association d'un acide hyaluronique et d'un polysaccharide sulfate
KR101635268B1 (ko) * 2014-07-23 2016-06-30 제주대학교 산학협력단 후코이단을 함유하는 비장세포의 생존 및 기능 증진 효과를 가진 면역증강용 조성물
KR101531479B1 (ko) 2014-11-21 2015-06-26 세원셀론텍(주) 의료용 재료로 사용하기 위한 고농도 콜라겐 제조방법
CN105732834A (zh) * 2014-12-10 2016-07-06 黑龙江众生生物工程有限公司 一种褐藻岩藻聚糖硫酸酯提取纯化方法
CN104586878A (zh) 2015-01-14 2015-05-06 青岛海洋生物医药研究院股份有限公司 岩藻聚糖硫酸酯及低分子量岩藻聚糖硫酸酯在制备抗代谢综合症的药物和保健品中的应用
WO2016117024A1 (ja) 2015-01-20 2016-07-28 三菱化学エンジニアリング株式会社 酸素を含有するマイクロナノバブル及び殺菌性を有する気体を含有するマイクロナノバブルの供給装置を備えた生物反応装置
SG10201909456TA (en) 2015-04-24 2019-11-28 Univ Nanyang Tech Method and apparatus for assessing a state of fouling of a reverse osmosis system
WO2017042603A1 (en) 2015-09-07 2017-03-16 Total Sa Method for determining the weight-average molecular weight of a water-soluble high molecular weight polymer
CN105399848B (zh) 2015-11-20 2017-11-17 中国科学院上海药物研究所 一种岩藻聚糖硫酸酯、其制备方法和用途
CN106832022A (zh) 2015-12-04 2017-06-13 威海市宇王集团有限公司 一种提取岩藻聚糖硫酸酯的方法
CN106957374A (zh) * 2016-01-12 2017-07-18 中国科学院过程工程研究所 一种从藻类中提取褐藻糖胶和褐藻胶的方法
WO2017160739A1 (en) 2016-03-14 2017-09-21 Pendo TECH Processing system for multiple tangential flow filtration stations in bioprocessing applications
CN107382660A (zh) 2016-05-14 2017-11-24 江西理文化工有限公司 一种二氟一氯甲烷生产中气相除酸方法
US10139378B2 (en) 2016-05-16 2018-11-27 Exxonmobil Chemical Patents Inc. Methods of determining molecular weight and comonomer characteristics of a copolymer in polymer blends
KR101950246B1 (ko) 2017-02-14 2019-02-22 (주)필로스 비상용 이동식 막여과 정수 장치
CN107382666A (zh) * 2017-07-26 2017-11-24 中国水产科学研究院黄海水产研究所 一种海带漂烫水中可溶性有机物的节能高效提取方法
EP3829600A4 (en) 2018-07-27 2022-06-15 Arc Medical Devices, Inc. LOW ENDOTOXIN FUCCO COMPOSITIONS, SYSTEMS AND METHODS
CN112512667B (zh) 2019-03-05 2022-12-06 Arc医疗器械股份有限公司 用于粘性组合物的切向流过滤的系统和方法
JP7227346B2 (ja) 2019-03-05 2023-02-21 エーアールシー メディカル デバイス，インク． 生体ポリマー混合物の分子量分布を予測する方法

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WO2020019081A1 (en) 2020-01-30
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