CN112770763A - 低内毒素褐藻糖胶组合物、系统和方法 - Google Patents

Abstract

公开了低内毒素褐藻糖胶组合物，其在组合物中包含治疗有效的、医学上可接受的褐藻糖胶，所述组合物包含每毫克褐藻糖胶少于约0.2、0.18、0.1、0.01、0.001或0.0005内毒素单位(EU)。还公开了用于从起始褐藻糖胶组合物中去除或减少内毒素的量的方法和系统。

Description

低内毒素褐藻糖胶组合物、系统和方法

要求优先权

本申请要求共同审查中的于2018年7月27日提交的美国临时专利申请号62,711,364；于2018年7月27日提交的美国临时专利申请号62,711,372；于2018年7月27日提交的美国临时专利申请号62/711,335；于2018年8月1日提交的美国临时专利申请序列号62/713,399；于2018年8月23日提交的美国临时专利申请号62/722,135；于2018年11月2日提交的美国临时专利申请号62/755,311；于2019年1月17日提交的美国临时专利申请号62/793,514；于2019年6月13日提交的美国临时专利申请号62/861,223；共同审查中的于2018年8月1日提交的美国临时专利申请序列号62/713,392；于2018年8月1日提交的美国临时专利申请号62/713,413；于2018年8月23日提交的美国临时专利申请号62/722,137；于2018年11月2日提交的美国临时专利申请号62/755,318；于2019年6月13日提交的美国临时专利申请号62/861,228；共同审查中的于2018年11月2日提交的美国临时专利申请序列号62/755,328；于2019年1月17日提交的美国临时专利申请号62/793,654；以及于2019年6月13日提交的美国临时专利申请号62/861,235，上述专利申请的内容通过引用整体并入本文。

背景技术

褐藻糖胶(包括岩藻多糖)是硫酸酯化的多糖。一般而言，这意味着褐藻糖胶是由许多糖基团组成的分子，并且还具有附接到糖基团上的硫原子。主要的糖基团称为“岩藻糖”，它是具有6个碳原子并且具有化学式C₆H₁₂O₅的糖。“岩藻多糖”(或墨角藻多糖)指示衍生自褐藻(海藻)的褐藻糖胶。褐藻糖胶可以单独存在，或者存在于其他糖的混合物中，例如存在于诸如木糖、半乳糖、葡萄糖、葡糖醛酸和/或甘露糖之类的糖的混合物中。这些其他糖可以与褐藻糖胶一起提取自海藻或其他来源。尽管褐藻糖胶目前衍生自天然来源诸如本文提及的褐藻(海藻)、海参等，但“褐藻糖胶”包括具有如本文所讨论的褐藻糖胶的化学和结构基序的聚合物分子，而与褐藻糖胶的一种或多种最终来源无关。

岩藻多糖可获自多种褐藻物种，包括但不限于：小腺囊藻(Adenocystisutricularis)、泡叶藻(Ascophyllum nodosum)、绳藻(Chorda filum)、Cystoseirabies marina、南极公牛藻(Durvillaea antarctica)、褐藻门昆布(Eckloniakurome)、极大昆布(Ecklonia maxima)、爱森藻(Eisenia bicyclis)、岩藻(Fucusevanescens)、墨角藻(Fucus vesiculosis)、羊栖菜(Hizikia fusiforme)、伸长海条藻(Himanthalia Elongata)、笼目海带(Kjellmaniella crassifolia)、Laminariabrasiliensis、拟菊苣海带(Laminaria cichorioides)、极北海带(Laminariahyperborea)、日本真海带(Laminaria japonica)、糖海带(Laminaria saccharina)、Lessonia trabeculata、巨藻(Macrocystis pyrifera)、Pelvetia fastigiata、沟鹿角菜(Pelvetia Canaliculata)、Saccharina japonica、糖海带(Saccharina latissima)、Sargassum stenophylum、鼠尾藻(Sargassum thunbergii)、海嵩子(Sargassumconfusum)、马尾藻科植物羊栖菜(Sargassum fusiforme)及裙带菜(Undariapinnatifida)。这些示例性物种均来自分类纲褐藻纲(Phaeophyceae)且这些物种中的大部分属于以下科：墨角藻目(Fucales)及海带科(Laminariaceae)。

包括岩藻多糖的褐藻糖胶已示出有效用于抑制、预防、去除、减少或以其他方式治疗纤维性粘连的形成。还发现其用于治疗其他相关疾病及病症。

脂多糖，也称为内毒素，是保留在细菌细胞内的有毒分子，并在破坏细菌细胞壁释放或从细菌细胞壁分泌，作为细菌生理活性的一部分。本领域中有许多成熟的方法用于从感兴趣的分子中分离出内毒素。这些方法虽然对大多数应用有效，但在存在褐藻糖胶的情况下无法充分发挥作用。造成这种情况的部分原因是，其中许多方法都依赖于基于带负电荷的磷酸根基团的内毒素的分离。在存在褐藻糖胶的情况下，这些方法受到褐藻糖胶分子上存在的硫酸酯基团的干扰作用。其他涉及化学处理的已知方法导致褐藻糖胶降解，这可能是不希望有的影响。本公开解决了用于从褐藻糖胶组合物(诸如原料褐藻糖胶)中降解、消除和/或去除内毒素和其他杂质的成本有效的、可扩展的和/或非破坏性的方法和/或其他优点。

发明内容

本文的组合物和方法等包括具有低水平内毒素的褐藻糖胶低内毒素组合物，其适用于医疗和外科手术应用，例如，抑制、预防、去除、减少或以其他方式处理纤维性粘连。这些褐藻糖胶低内毒素组合物减少了在褐藻糖胶的医疗和外科手术使用期间因内毒素引起的危险并发症，如炎症、发烧和内毒素血症。内毒素的这种减少可以减少约95％至减少约99％、99.9％、99.99％、99.999％、99.9999％至99.99999％。在某些实施方式中，本文提出的褐藻糖胶组合物具有足够低的内毒素水平，以使得所述组合物适用于医疗和外科手术应用。

本文提出的褐藻糖胶低内毒素组合物提供了从起始或初始褐藻糖胶组合物获得的所需褐藻糖胶组合物的组合物(即，可以衍生出褐藻糖胶低内毒素组合物的褐藻糖胶组合物；此类起始褐藻糖胶组合物可以是或可以不是粗制的，或者已被预先处理或纯化，诸如原料褐藻糖胶组合物)，以及获得此类所需褐藻糖胶低内毒素组合物的方法及使用此类组合物的方法。

在一些方面，本文包含褐藻糖胶低内毒素组合物的组合物、系统、方法等可以包含每毫克褐藻糖胶小于约0.2、0.18、0.16、0.1、0.09、0.06、0.04、0.03、0.02、0.01、0.007、0.003、0.002、0.001、0.0006或0.0005内毒素单位。

在一些实施方式中，所述褐藻糖胶具有分子量分布，其中，当使用水性凝胶渗透色谱法装置测量时，所述分布的至少60％w/w大于100kDa，所述水性凝胶渗透色谱法装置基本上由以下组成：

一根内径为7.8mm的300mm分析型凝胶渗透色谱柱，其装填有羟基化聚甲基丙烯酸酯基凝胶，具有的有效分子量范围为约50kDa至约5,000kDa；一根内径为7.8mm的300mm分析型凝胶渗透色谱柱，其装填有羟基化聚甲基丙烯酸酯基凝胶，具有的有效分子量范围为约1kDa至约6,000kDa；以及一根内径为6mm的40mm保护柱，其装填有羟基化聚甲基丙烯酸酯基凝胶，所述两根分析型凝胶渗透色谱柱和所述一根保护柱被容纳在处于约30℃的柱室中；

处于约30℃的折射率检测器；

以0.6mL/min运行的0.1M硝酸钠流动相；以及

相对于峰分子量标准曲线进行量化，所述峰分子量标准曲线基本上由以下组成：第一右旋糖酐标准物，具有的峰分子量为约2,200kDa；第二右旋糖酐标准物，具有的峰分子量为约720kDa至约760kDa；第三右旋糖酐标准物，具有的峰分子量为约470kDa至约510kDa；第四右旋糖酐标准物，具有的峰分子量为约370kDa至约410kDa；第五右旋糖酐标准物，具有的峰分子量为约180kDa至约220kDa；以及第六右旋糖酐标准物，具有的峰分子量为约40kDa至55kDa。

所述褐藻糖胶可以具有分子量分布，其中：所述分布的至少75％w/w可大于100kDa；所述分布的至少98％w/w可大于100kDa；所述分布的至少81％w/w可大于200kDa；所述分布的至少92％w/w可大于200kDa；所述分布的至少97％w/w可大于200kDa；所述分布的至少44％w/w可大于500kDa；所述分布的至少61％w/w可大于500kDa；所述分布的至少70％w/w可大于500kDa；所述分布的至少80％w/w可大于500kDa；所述分布的至少5％w/w可大于1600kDa；所述分布的至少10％w/w可大于1600kDa；所述分布的至少24％w/w可大于1600kDa；所述分布的至少31％w/w可大于1600kDa。此外，所述褐藻糖胶可以具有的重均分子量大于100kDa；大于200kDa或大于500kDa。

所述褐藻糖胶可具有的硫酸酯化水平为约20％w/w至60％w/w，约30％w/w至55％w/w，约32％w/w至52％w/w。所述褐藻糖胶可具有的总碳水化合物含量为27％w/w至80％w/w，并且总岩藻糖含量占所述总碳水化合物含量的百分比为至少约30％w/w、50％w/w、70％w/w、80％w/w、90％w/w或95％w/w。所述褐藻糖胶可具有的总半乳糖含量占所述总碳水化合物含量的百分比低于约60％w/w、约2％w/w至20％w/w、或低于约10％w/w。

当以50mg/mL的浓度溶于水中时，所述褐藻糖胶低内毒素组合物的粘度可为约4cP至50cP、约10cP至40cP、或约15cP至30cP。所述褐藻糖胶低内毒素组合物可为白色固体，并且当以1mg/mL至100mg/mL的浓度溶于水中时，所述褐藻糖胶低内毒素组合物可形成一种澄清无色的溶液。所述褐藻糖胶可包含少于5％或2％w/w的乙酰基含量。另外，当在70℃下伴随溶剂信号抑制在配备有5-mm冷探针的600MHz光谱仪上在碳尺寸10-30ppm范围内以256-512的8次增量扫描每次通过2D ¹H-¹³C异核多量子相干测量时，所述褐藻糖胶包含的乙酰基含量基本为0％w/w。

本文还包括用于制备和使用褐藻糖胶和褐藻糖胶低内毒素组合物的方法。所述使用可包括治疗纤维性粘连。

在某些方面，本文包含医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素组合物的组合物、系统、方法等可包括本文中的医疗上可接受的缓冲剂或稀释剂中的治疗有效量的褐藻糖胶低内毒素组合物。还提供了这样的褐藻糖胶低内毒素剂量，其包含本文中的医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素剂量具有的内毒素水平等于或低于250EU、50EU、20EU、10EU、2EU、1EU、0.1EU或0.01EU。这样的医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素组合物和剂量可具有本文讨论的诸如上文段落中的分子量分布和其他参数。

在进一步的方面，本文包含治疗动物的病症或疾病的方法的组合物、系统、方法等可包括：选择医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素组合物以治疗所述病症或疾病，以及向所述动物给药可包含0.5mg/kg至50mg/kg的治疗有效量的所述褐藻糖胶。所述量可以为约0.04mg/kg至25mg/kg、约0.2mg/kg至10mg/kg、约1mg/kg至5mg/kg、约0.5mg/kg至3mg/kg、或5mg/kg至10mg/kg。

所述病症或疾病可以是所述动物的目标部位处的纤维性粘连，并且其中，所述给药可包括：向所述目标部位给药所述治疗有效量。医疗组合物可包含来自本文的褐藻糖胶低内毒素组合物的约0.02mg/mL至100mg/mL的褐藻糖胶，并且所述医疗组合物可被配置和构成为治疗动物的疾病或病症。所述量可以为约0.5mg/mL至5mg/mL、或约2.5mg/mL。所述医疗组合物可以是医疗器械，其可以是液体医疗器械。所述医疗组合物可以是药物组合物，包括液体药物组合物。

本文的方法包括可以包含约0.01mL/kg至15mL/kg的药物组合物的剂量范围用于治疗动物的疾病或病症的用途。所述量也可以为约0.03mL/kg至4mL/kg、0.06mL/kg至2mL/kg、或2mL/kg至4mL/kg。

用于治疗患者的纤维性粘连的方法可以包括：将医疗组合物给药于患者的目标部位。所述目标部位可以是外科手术部位，并且所述给药可以在以下情况中的至少一种情况下进行：a)在所述外科手术部位处打开外科手术伤口后，b)在手术期间，以及c)在闭合所述外科手术伤口之后，包括在外科手术之后但在闭合所述外科手术伤口之前。所述给药可以耗时少于3分钟、2分钟或1分钟。所述目标部位可以是病变部位、擦伤部位和损伤部位中的至少一种。所述目标部位可以是骨盆腔、腹腔、背侧腔、颅腔、脊髓腔、腹侧腔、胸腔、胸膜腔、心包腔、皮肤、关节、肌肉、肌腱和韧带。

在其他方面，本文的组合物、系统、方法等包括用于从起始褐藻糖胶组合物中去除杂质以获得褐藻糖胶低内毒素组合物的方法。这些方法可以包括：

提供包含杂质的起始褐藻糖胶组合物；

向所述起始褐藻糖胶组合物中添加絮凝助剂以产生反应混合物；

通过加热所述反应混合物来絮凝所述杂质以产生絮凝杂质；以及去除所述絮凝杂质。

提供所述起始褐藻糖胶组合物可以包括：提供溶液形式的所述起始褐藻糖胶组合物，并且所述方法还可以包括：在杂质减少的溶液中收集所述褐藻糖胶低内毒素组合物。所述方法还可以包括：通过在超过大气压压力下加热所述反应混合物来絮凝所述杂质。所述絮凝助剂可以包括盐，所述盐可以是碱金属、碱土金属、铝和/或铵的氯化物、溴化物、碘化物、氟化物、硫酸盐、亚硫酸盐、碳酸盐、碳酸氢盐、磷酸盐、硝酸盐、亚硝酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、硅酸盐和/或氰化物。所述絮凝助剂可以包括碱，所述碱可以是碱金属、碱土金属、铝和/或铵的氢氧化物和/或氧化物。

进一步的方法可以包括：

提供包含杂质和干扰剂的起始褐藻糖胶组合物，所述干扰剂能干扰溶液中细胞和内毒素聚集；以及

使所述溶液在切向流过滤过滤器上进行切向流过滤，以产生渗余褐藻糖胶组合物，所述渗余褐藻糖胶组合物可以包含所述褐藻糖胶低内毒素组合物和残留干扰剂。

去除所述残留干扰剂可以通过以下操作来实现：通过切向流过滤过滤器进行切向流过滤，以产生第二渗余褐藻糖胶组合物，所述第二渗余褐藻糖胶组合物可以包含所述褐藻糖胶低内毒素组合物。所述方法还可以包括：

通过用沉淀剂处理所述渗余褐藻糖胶组合物来去除所述残留干扰剂，所述沉淀剂能够使所述干扰剂沉淀以产生所述干扰剂的沉淀物和上清液褐藻糖胶组合物；以及

将所述干扰剂的沉淀物与所述上清液褐藻糖胶组合物分离。

所述方法还可以包括：在杂质减少的溶液中收集所述褐藻糖胶低内毒素组合物。所述干扰剂可以包括至少一种去污剂，所述去污剂可以是阴离子去污剂、阳离子去污剂或非离子去污剂。所述去污剂可包括十二烷基硫酸钠(SDS)、苯扎氯铵、

X 100，

X 114和脱氧胆酸钠中的至少一种。

所述沉淀剂可包括氯化钾、氢氧化钾、氯化钙、氯化钡和碳酸钙中的至少一种。

进一步的方法可以包括：

提供固体形式的起始褐藻糖胶组合物和不能溶解褐藻糖胶的提取介质，所述提取介质被配置用于溶解杂质；

将所述起始褐藻糖胶组合物与所述提取介质混合，以产生所述褐藻糖胶低内毒素组合物和所述提取介质的混合物；以及

将所述褐藻糖胶低内毒素组合物与所述提取介质分离。

所述方法还可以包括：收集固体形式的所述褐藻糖胶低内毒素组合物。所述提取介质可以包含相对极性小于0.765的至少一种有机溶剂。所述有机溶剂可包括乙醇、异丙醇、甲醇、苯、二乙醚、十甲基环五硅氧烷、乙酸乙酯、丁醇、己烷、庚烷、庚醇、辛醇和癸醇中的至少一种。所述提取介质还可包括碱、去污剂和氧化剂中的至少一种。所述提供固体形式的所述起始褐藻糖胶组合物可以包括：从溶液中沉淀出所述起始褐藻糖胶组合物。所述褐藻糖胶低内毒素组合物包含比所述起始褐藻糖胶组合物少的内毒素。

进一步的方法可以包括：

提供包含杂质的起始褐藻糖胶组合物，所述杂质包括溶液中的悬浮杂质；

使用离子多价杂质沉淀剂从所述溶液中沉淀所述杂质，从而产生悬浮杂质、沉淀杂质和上清液溶液的混合物；以及

将所述悬浮杂质和沉淀杂质与所述上清液溶液分离。

所述方法还可以包括：收集可以包含所述褐藻糖胶低内毒素组合物的所述上清液溶液。所述离子多价杂质沉淀剂可包括二价或三价阳离子的盐。所述盐可以是氯化物、溴化物、碘化物、氟化物、硫酸盐、亚硫酸盐、碳酸盐、碳酸氢盐、磷酸盐、硝酸盐、亚硝酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、硅酸盐和/或氰化物。所述阳离子可以是碱土金属、锌、铝、铜和/或铁。所述杂质沉淀剂可包含二价或三价阳离子的碱。所述碱可以是碱土金属、锌、铝、铜和/或铁的氢氧化物和/或氧化物。将所述悬浮杂质和沉淀杂质与所述上清液溶液分离可以包括：通过向所述悬浮杂质、沉淀杂质和上清液溶液的混合物中添加絮凝剂来絮凝所述悬浮杂质和沉淀杂质。所述絮凝剂可包括以下中的至少一项：硫酸铝钾；硫酸铝钠；硫酸铝铵；氯化钙；磷酸钠；氢氧化铝；氯化铝；氯化铁；硫酸铁；硫酸亚铁；硅酸钠；硅酸钙；磷酸钙；氯化锌；碳酸钙；碳酸氢钙；硫酸钾；磷酸镁；丙烯酰胺；丙烯酸；氯酸铝；聚氯化铝；单宁；甲醛；三聚氰胺；丙烯酸N,N-二甲基氨基乙酯甲基氯化物；甲基丙烯酸N,N-二甲基氨基乙酯甲基氯化物季铵盐；和聚二烯丙基二甲基氯化铵。所述方法还可以包括将pH维持在约7至14；优选地，维持pH可以包括添加碱。

其他方法可以包括：

提供包含杂质的起始褐藻糖胶组合物；

将所述起始褐藻糖胶组合物的pH调节至约8至14；

向所述起始褐藻糖胶组合物中添加细胞裂解剂，所述细胞裂解剂被配置用于裂解细胞组分以产生反应混合物，所述反应混合物可以包含所述细胞裂解剂、生物分子裂解物和所述起始褐藻糖胶组合物；以及

从所述反应混合物中去除所述细胞干扰剂和生物分子裂解物。

提供所述起始褐藻糖胶组合物可以包括：提供溶液形式的所述起始褐藻糖胶组合物。所述方法还可以包括：在杂质减少的溶液中收集所述褐藻糖胶低内毒素组合物。所述细胞干扰剂可包括去污剂。所述去污剂可以是阴离子去污剂、阳离子去污剂或非离子去污剂。所述去污剂可包括十二烷基硫酸钠(SDS)、苯扎氯铵、Triton X

Triton X

去污剂、

去污剂、脱氧胆酸钠和烷基苯磺酸盐中的至少一种。

去除所述细胞干扰剂和生物分子裂解物可以包括：向所述反应混合物中添加絮凝剂，所述絮凝剂被配置用于絮凝所述细胞干扰剂和生物分子裂解物。所述去除所述细胞干扰剂可包括：向所述反应混合物中添加沉淀剂，所述沉淀剂能够使所述细胞干扰剂不溶于所述反应混合物，从而产生沉淀物。所述去除所述生物分子裂解物可包括：向所述反应混合物中添加沉淀剂，所述沉淀剂被配置用于使所述生物分子裂解物不溶于所述反应混合物，从而产生沉淀物。所述方法还可以包括：向所述反应混合物中添加絮凝剂，所述絮凝剂被配置用于絮凝所述沉淀物。所述絮凝剂可包括以下中的至少一项：硫酸铝钾；硫酸铝钠；硫酸铝铵；氯化钙；磷酸钠；氢氧化铝；氯化铝；氯化铁；硫酸铁；硫酸亚铁；硅酸钠；硅酸钙；磷酸钙；氯化锌；碳酸钙；碳酸氢钙；硫酸钾；磷酸镁；丙烯酰胺；丙烯酸；氯酸铝；聚氯化铝；单宁；甲醛；三聚氰胺；丙烯酸N,N-二甲基氨基乙酯甲基氯化物；甲基丙烯酸N,N-二甲基氨基乙酯甲基氯化物季铵盐；和聚二烯丙基二甲基氯化铵。去除所述阴离子去污剂可包括阴离子吸附。去除所述阳离子去污剂可包括阳离子吸附；去除所述非离子去污剂可包括胶束相分离；去除所述去污剂可包括疏水吸附。

去除所述去污剂可包括：

稀释所述反应混合物直至所述去污剂的浓度低于预定浓度；以及

使包含所述去污剂的所述反应混合物通过切向流过滤过滤器进行渗滤，所述切向流过滤过滤器的截留分子量高于所述去污剂的最大分子量。

所述方法还可以包括：在提供所述起始褐藻糖胶组合物之后并且在去除所述细胞干扰剂之前将螯合剂添加到所述反应混合物中。所述螯合剂可包括乙二胺四乙酸(EDTA)、2,3-二巯基-1-丙醇、乙二胺、卟吩和/或柠檬酸。所述方法还可以包括：在去除所述细胞干扰剂之前，向所述反应混合物中添加氧化剂猝灭剂以淬灭所述反应混合物中的氧化剂。所述方法还可以包括：在提供所述起始褐藻糖胶组合物之后并且在去除所述细胞干扰剂之前将抑菌剂添加到所述反应混合物中。所述抑菌剂可包括亚硫酸钠、乙二胺四乙酸(EDTA)、苯扎氯铵、乙醇和/或硫脲。

其他方法可以包括：

提供包含内毒素和阴离子交换大孔树脂的起始褐藻糖胶组合物；

使所述起始褐藻糖胶组合物与所述阴离子交换大孔树脂进行阴离子交换，以产生所述褐藻糖胶低内毒素组合物。

所述方法还可以包括：用能够干扰所述内毒素聚集的干扰剂预处理所述起始褐藻糖胶组合物，并且可以包括：在使所述起始褐藻糖胶组合物与所述阴离子交换大孔树脂进行阴离子交换之前，使所述起始褐藻糖胶组合物脱盐。所述阴离子交换大孔树脂的孔径可以大于所述起始褐藻糖胶组合物中的所述内毒素的平均流体动力半径。所述提供所述起始褐藻糖胶组合物和所述阴离子交换大孔树脂可以包括：以所述起始褐藻糖胶组合物:所述阴离子交换大孔树脂的质量比为约1:100至10:1来提供所述起始褐藻糖胶组合物和所述阴离子交换大孔树脂。所述质量比也可以为约1:50至约1:1、或约1:10至约1:1。可以使所述起始褐藻糖胶组合物进行阴离子交换约5分钟至约100小时、或约1小时至约30小时的时间段。所述阴离子交换大孔树脂可包含季胺基。所述阴离子交换大孔树脂可包含伯、仲和叔胺基中的至少一种。所述阴离子交换大孔树脂可以由以下中的至少一项组成：苯乙烯、琼脂糖、右旋糖酐、丙烯酸酯、甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸丁酯、二乙烯基苯、纤维素、二氧化硅和陶瓷。所述阴离子交换大孔树脂可具有约5nm至约1000nm、或约10nm至约100nm、或约15nm至约50nm的孔径。所述阴离子交换大孔树脂的排阻极限可为约5kDa至约50,000kDa、或在约1,000kDa至约9,000kDa、或约5kDa至约200kDa。

其他进一步的方法可包括：

提供在起始水溶液中包含杂质的起始褐藻糖胶组合物；

将所述起始水溶液与有机溶剂混合以产生水-有机相混合物；以及

分离所述水-有机相混合物以获得水性部分和有机部分。

收集的所述水性部分可以包括所述褐藻糖胶低内毒素组合物。所述有机溶剂可以包括相对极性小于0.765的至少一种有机溶剂。相对极性的值可以通过吸收光谱的溶剂位移的测量值来归一化。参见例如Christian Reichardt,Solvents and Solvent Effectsin Organic Chemistry(《有机化学中的溶剂和溶剂作用》),Wiley-VCH Publishers,第3版,2003年。有机溶剂可以包括以下中的至少一项：乙醇、异丙醇、甲醇、苯、十甲基环五硅氧烷、乙酸乙酯、己烷、庚醇、辛醇、癸醇、庚烷、乙酸异丁酯、苯甲醚、乙酸异丙酯、1-丁醇、乙酸丁酯、甲基异丁基酮、戊烷、1-戊醇、乙醚和乙酸丙酯。

本文的经处理的褐藻糖胶低内毒素组合物包含比起始褐藻糖胶组合物少的内毒素。

在本申请中阐述了这些和其他方面、特征和实施方式，包括以下具体实施方式和附图。除非另有明确说明，否则所有实施方式、方面、特征等都可以以任何期望的方式混合和匹配、组合和置换。

附图说明

图1示意性地描绘了切向流过滤系统，其用于减少起始褐藻糖胶组合物的杂质(包括内毒素)。

图2示意性地描绘了用于使用阴离子吸收来获得起始褐藻糖胶组合物中的内毒素水平的期望降低的系统。

图3A描绘了NMR结果，其证明了根据本文的方法处理的某些褐藻糖胶经历褐藻糖胶的化学结构变化。

图3B描绘了2-D NMR结果，其证明了根据本文的方法处理的某些褐藻糖胶经历褐藻糖胶的化学结构变化。

附图呈现了本公开的示例性实施方式。附图不一定按比例，并且某些特征可以以有助于例示和解释本发明系统、方法等的方式被放大或以其他方式表示。本文的系统、方法等的实际实施方式可以包括附图中未示出的另外的特征或步骤。本文陈述的范例以一种或多种形式例示了系统、方法等的实施方式，并且这样的范例不应被解释为以任何方式限制本公开的范围。本文的实施方式不是穷举性的，并且不将本公开限制为例如在以下详细描述中公开的精确形式。

具体实施方式

本文呈现的当前组合物、系统、方法等包括修饰的褐藻糖胶组合物，例如褐藻糖胶低内毒素组合物。本发明组合物可对医疗治疗、术后治疗、疾病抑制等有效。在一些实施方式中，褐藻糖胶为岩藻多糖。本发明的褐藻糖胶低内毒素组合物可自身为医疗器械、医疗材料、组合产品，或可包括于医疗器械、医疗材料、组合产品之上或之中，或可包括于药物学上可接受的、治疗上和/或医疗上有效的组合物中。

以下段落转向对本文的一些褐藻糖胶低内毒素组合物的简要一般性讨论，包括可以使用本文讨论的方法学产生的那些。

组合物

在某些实施方式中，本文呈现的当前组合物、系统等提供褐藻糖胶及医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素组合物，其包括治疗有效量的褐藻糖胶低内毒素组合物，以用于治疗纤维性粘连(诸如外科手术粘连)、关节炎、牛皮癣或视需要的其他疾病。

本文呈现的褐藻糖胶低内毒素组合物可用于多种应用，包括抑制、预防、去除、减少或以其他方式治疗纤维性粘连及其他目标、疾病和/或病症。治疗包括所述组合物减小或预防目标疾病或其他病症的发展，诸如减小或预防目标部位处形成纤维性粘连，该目标部位通常为由外科医生或其他从业者确认为包括或相当易患纤维性粘连(或者其他疾病或病症)的选定目标部位，并且还包括消除现有疾病或其他病症，包括(例如)消除已存在的纤维性粘连。对于这样的抑制、预防、去除、减少或其他方式的处理，褐藻糖胶组合物可以以医疗上可接受的医疗器械、医疗材料、组合产品或药物学上有效的组合物来提供，其包含附加组分，诸如粘结剂、佐剂、赋形剂等，以及(视需要)附加的医疗上的活性物质，诸如包含于该组合物中但不附接至褐藻糖胶和/或可附接至褐藻糖胶的次要药品。

因此，在一些实施方式中，本公开提供了具有低水平内毒素的褐藻糖胶低内毒素组合物，所述组合物适用于医疗和外科手术应用，例如，预防、抑制或治疗纤维性粘连。

在某些方面和实施方式中，本文的组合物包含治疗有效的、医疗上可接受的褐藻糖胶，其包含每毫克(mg)褐藻糖胶少于约0.2、0.18、0.12、0.1、0.09、0.02、0.01、0.007、0.005、0.002或0.001的内毒素单元(EU)(EU/mg)。

褐藻糖胶低内毒素组合物的分子量分布可使用任何所需的、适当的测量系统来测量。不同系统当以不同方式测量时可由具有基本上相同构成的不同组合物或甚至由同一批产生不同读数或结果。一种合适的测量系统为水性凝胶渗透色谱法装置，其基本上由以下组成：具有7.8mm内径的一个300mm分析型凝胶渗透色谱柱，装填有羟基化聚甲基丙烯酸酯基凝胶，具有约50kDa至约5,000kDa的有效分子量范围；具有7.8mm内径的一个300mm分析型凝胶渗透色谱柱，装填有羟基化聚甲基丙烯酸酯基凝胶，具有约1kDa至约6,000kDa的有效分子量范围；以及具有6mm内径的一个40mm保护柱，装填有羟基化聚甲基丙烯酸酯基凝胶，所述两个分析型凝胶渗透色谱柱和所述一个保护柱被容纳在约30℃下的柱室中；折射率检测器，在约30℃下；0.1M硝酸钠流动相，以0.6mL/min运行；以及相对于峰分子量标准曲线进行量化，该峰分子量标准曲线基本上由以下组成：第一右旋糖酐标准物，峰分子量为约2,200kDa；第二右旋糖酐标准物，峰分子量为约720kDa至约760kDa；第三右旋糖酐标准物，峰分子量为约470kDa至约510kDa；第四右旋糖酐标准物，峰分子量为约370kDa至约410kDa；第五右旋糖酐标准物，峰分子量为约180kDa至约220kDa；以及第六右旋糖酐标准物，峰分子量为约40kDa至55kDa。峰分子量标准曲线还可以包括峰分子量为3kDa至5kDa的右旋糖酐标准物。

本文的褐藻糖胶低内毒素组合物还可以包含具有分子量分布的褐藻糖胶，其中至少约25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％和99％w/w的褐藻糖胶具有大于100kDa的分子量。本文的褐藻糖胶低内毒素组合物可以包含具有分子量分布的褐藻糖胶，其中至少约50％、60％、70％、80％、90％、95％和99％w/w的褐藻糖胶具有大于200kDa的分子量。本文的褐藻糖胶低内毒素组合物可包含具有分子量分布的褐藻糖胶，其中，至少约25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％w/w的褐藻糖胶的分子量大于500kDa。本文的褐藻糖胶低内毒素组合物可以包含具有分子量分布的褐藻糖胶，其中至少约5％、10％、20％、30％或40％w/w的褐藻糖胶的分子量大于1600kDa。

本文的褐藻糖胶低内毒素组合物可以包含具有这样的重均分子量的褐藻糖胶：大于约100kDa，例如约100kDa至约10,000kDa、约200kDa至约8,000kDa、约350kDa至约7,000kDa、约450kDa至约6,000kDa、约580kDa至约5,000kDa、或500kDa至约2,000kDa。本文的褐藻糖胶低内毒素组合物可包含具有这样的峰分子量的褐藻糖胶：大于约70kDa，例如约70kDa至约1200kDa、约100kDa至约1200kDa、约200kDa至约1200kDa、约400kDa至约1200kDa、或约400kDa至约900kDa。

本文的褐藻糖胶低内毒素组合物可包含具有作用的数均分子量的褐藻糖胶：大于约50kDa、约50kDa至约1,000kDa、约70kDa至约1000kDa、约150kDa至约1000kDa、约250kDa至约1000kDa、或约250kDa至约700kDa。

本文的褐藻糖胶低内毒素组合物中的褐藻糖胶可具有这样的硫酸酯化水平：约10％w/w至70％w/w、约20％w/w至65％w/w、约30％w/w至55％w/w、约40％w/w至60％w/w、或约40％w/w至50％w/w。

本文的褐藻糖胶低内毒素组合物中的褐藻糖胶具有的总岩藻糖:总硫酸酯的摩尔比为约1:0.5至1:4、约1:0.8至1:3.5、约1:1至1:2.5、约1:1.2至1:2.0、或约1:1.5至1:3。本文的褐藻糖胶低内毒素组合物中的褐藻糖胶可具有的总岩藻糖加上半乳糖:总硫酸酯的摩尔比为约1:0.5至1:4、约1:0.8至1:3.5、约1:1至1:2.5、约1:1.2至1:2.0、或约1:1.5至1:3。

本文的褐藻糖胶低内毒素组合物中的褐藻糖胶可具有的总碳水化合物含量为约27％w/w至80％w/w、30％w/w至70％w/w、约40％w/w至90％w/w、约48％w/w、或50％w/w至96％w/w。本文的褐藻糖胶低内毒素组合物中的褐藻糖胶可具有的岩藻糖含量占总碳水化合物的百分比为约30％w/w至100％w/w、约40％w/w至95％w/w、或约50％w/w至90％w/w。

本文的褐藻糖胶低内毒素组合物中的褐藻糖胶可具有的半乳糖含量占总碳水化合物的百分比为0％w/w至60％w/w、0％w/w至60％w/w、约5％w/w至30％w/w、或约0％w/w至10％w/w、或15％w/w。本文的褐藻糖胶低内毒素组合物中的褐藻糖胶可具有的葡糖醛酸含量占总碳水化合物含量的百分比为约0％w/w至10％w/w，甘露糖含量占总碳水化合物含量的百分比为约0％w/w至7％w/w，鼠李糖含量占总碳水化合物含量的百分比为0％w/w至4％w/w，并且木糖含量占总碳水化合物含量的百分比为0％w/w至20％w/w。

在一些实施方式中，当以50mg/mL浓度溶解于水中时，本文的褐藻糖胶低内毒素组合物具有以下粘度：约4cP至约50cP、约5cP至约40cP、约10cP至约30cP、约15cP、约20cP及约25cP。在某些实施方式中，当以1mg/mL至100mg/mL溶解于水中时，本文的褐藻糖胶低内毒素组合物形成为一种澄清且无色、或透明且淡黄色、或澄清且浅棕色的溶液。

在某些实施方式中，本文的褐藻糖胶低内毒素组合物中的褐藻糖胶可具有小于约5％w/w、小于约2％w/w和约0％w/w的乙酰基含量。在一些实施方式中，当在70℃下伴随溶剂信号抑制在配备有5-mm冷探针的600MHz光谱仪上在碳尺寸10-30ppm范围内以256-512的8次增量扫描每次通过2D¹H-¹³C异核多量子相干测量时，本文的褐藻糖胶低内毒素组合物中的褐藻糖胶包含的乙酰基含量基本为0％w/w。

方法

提供了用于纯化、去热原或以其他方式减少起始褐藻糖胶组合物例如原料褐藻糖胶组合物中的杂质负荷的方法、系统等。所述方法和组合物等包括消除、失活或以其他方式减少内毒素和其他含内毒素的组分(例如生物污染物、细胞组分等)的不希望有的量或作用，以获得褐藻糖胶低内毒素组合物，其包括例如每毫克(mg)褐藻糖胶的内毒素单位(EU)(EU/mg)少于0.2、0.18、0.12、0.1、0.09、0.03、0.02、0.01、0.007、0.005、0.002或0.001。生物污染物包括诸如细菌、病毒、酵母菌、霉菌和寄生虫之类的微生物，其中一些产生毒素，并且其中一些包括细胞组分。本文所用的术语“杂质”包括生物污染物、细胞组分、内毒素和其他含内毒素的组分。

在一些实施方式中，本公开呈现了褐藻糖胶低内毒素组合物，其适用于医疗和外科手术应用，例如预防纤维性粘连。

在本文的一些方法中，本公开讨论了切向流过滤(TFF)的使用，该TFF可以去除或辅助去除内毒素。所使用的切向流过滤设备的形式可以是例如以下中的一种：板框系统；螺旋伤口药筒系统；中空纤维系统；流通池系统；和离心过滤系统。

以下段落转向对一些方法学的简要讨论，这些方法学可用于通过各种方法从起始褐藻糖胶组合物产生本文的褐藻糖胶低内毒素组合物，所述各种方法可以任何合适的反应混合物(例如溶液、悬浮液、固体、凝胶或其他形态，具体取决于所选择的方法)来执行。

物理诱导絮凝

包括高水平内毒素的起始褐藻糖胶组合物(例如原料褐藻糖胶组合物)经历杂质的絮凝，其可以是物理诱导的絮凝。所述方法可以包括：提供起始褐藻糖胶组合物；将絮凝助剂添加到起始褐藻糖胶组合物中以产生反应混合物；通过加热反应混合物，使起始褐藻糖胶组合物中的杂质絮凝；从反应混合物中分离出絮凝杂质；以及在分离后收集所需的褐藻聚糖低内毒素组合物。

通过加热反应混合物来絮凝杂质可以包括：加热反应混合物，同时使反应混合物经历超过大气压压力的压力。合适的絮凝助剂包括但不限于盐和/或碱，例如碱金属、碱土金属、铝和/或铵的氯化物、溴化物、碘化物、氟化物、硫酸盐、亚硫酸盐、碳酸盐、碳酸氢盐、磷酸盐、硝酸盐、亚硝酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、硅酸盐、氧化物、氢氧化物和/或氰化物，例如氯化钠、硫酸钠、氯化钾、硫酸钙、磷酸钠、硝酸钠、氯化锂、硝酸锂、氯化铵、碳酸钠、氢氧化钠。从反应混合物中分离出絮凝杂质可以包括对反应混合物进行离心、过滤、沉降或流体动力流分离中的一种或多种。

本文中的方法等还可以包括：在添加絮凝助剂之前使起始褐藻糖胶组合物脱盐。脱盐可以包括：对通过截留分子量(MWCO)切向流过滤(TFF)过滤器的水溶液形式的起始褐藻糖胶组合物进行渗滤。渗滤可以包括：用蒸馏水渗滤起始褐藻糖胶组合物。截留分子量TFF过滤器的截留分子量可以小于褐藻糖胶组合物中的或针对褐藻糖胶组合物的所需分子量分离点或目标，例如50kDa、70kDa、100kDa、200kDa、300kDa、500kDa或1000kDa截留分子量。

可以在碱性和中性环境中执行所述方法。因此，将絮凝助剂添加到起始褐藻糖胶组合物中可以包括：使起始褐藻糖胶组合物呈碱性，以预防或抑制起始褐藻糖胶组合物中的褐藻糖胶降解，因为褐藻糖胶在酸性环境中易于降解。在其他实施方式中，该方法可以通过将反应混合物维持在等于或大于7的pH或其附近来进行。

在一些实施方式中，起始褐藻糖胶组合物可以以溶液形式提供。适用于通过上述方法处理的褐藻糖胶的实例包括但不限于岩藻多糖，并且溶液中褐藻糖胶的浓度可以为0.01％w/v至50％w/v。可以通过上述方法去除的杂质包括但不限于微粒、脂质、脂肪酸、褐藻多酚、海带多糖、藻酸盐、蛋白质、美拉德反应产物、岩藻黄质、叶绿素、游离离子、细菌、病毒、酵母菌、霉菌、寄生虫、DNA和内毒素。

凝胶渗透色谱法

凝胶渗透色谱法(“GPC”)用于评估实验实施例获得的分子量分布。存在大量可用于凝胶渗透色谱法的不同参数、色谱柱及标准物，引起多种仪器装置可用于分子量的分析。对于本文的分子量测定，使用以下参数进行GPC：流动相为以0.6mL/min运行的0.1M硝酸钠。柱室及检测器处于30℃。Waters 2414折射率检测器用于检测。

合适的GPC柱包括与水性溶剂兼容的GPC柱，例如装填有以下中的至少一种的色谱柱：磺化苯乙烯-二乙烯基苯、NH官能化的丙烯酸酯共聚物网络、修饰的二氧化硅及羟基化聚甲基丙烯酸酯基凝胶。对于本文的分析，串联使用三个色谱柱，包括具有6mm内径(ID)的一个40mm长的保护柱，装填有6μm粒度的羟基化聚甲基丙烯酸酯基凝胶；接着是具有7.8mmID的第一300mm分析型GPC柱，装填有12μm粒度的羟基化聚甲基丙烯酸酯基凝胶，其具有约7,000kDa的排阻极限以及约50kDa至约5,000kDa的有效分子量范围；接着是具有7.8mm ID的第二300mm分析型GPC柱，装填有10μm粒度的羟基化聚甲基丙烯酸酯基凝胶，其具有约7,000kDa的排阻极限以及约1kDa至约6,000kDa的有效分子量范围。色谱柱装置的总有效分子量范围为约1kDa至约6,000kDa。此色谱柱装置的实例可为串联连接的

保护柱-

2000-

线性柱。

相对于包括来自American Polymer Standards Corporation的可追踪标准物的标准曲线来量化样品运行：DXT3755K(峰分子量＝2164kDa)、DXT820K(峰分子量＝745kDa)、DXT760K(峰分子量＝621kDa)、DXT670K(峰分子量＝401kDa)、DXT530K(峰分子量＝490kDa)、DXT500K(峰分子量＝390kDa)、DXT270K(峰分子量＝196kDa)、DXT225K(峰分子量＝213kDa)、DXT150K(峰分子量＝124kDa)、DXT55K(峰分子量＝50kDa)、DXT50K(峰分子量＝44kDa)和DXT5K(峰分子量＝4kDa)，这些标准物的峰分子量为约4kDa至约2,200kDa。所使用标准曲线可例如包括Dextran 3755kDa，Dextran 50kDa及Dextran 55kDa中的至少一种及在3至6个之间的本文所论述的附加可追踪标准物，校正点为所使用校正物的峰分子量。示例性校正曲线可由以下组成：DXT3755K、DXT820K、DXT530K、DXT500K、DXT225K及DXT55K。本文中所使用的色谱柱具有涵盖且延伸超出用于褐藻糖胶的量化的标准物的峰分子量范围的总有效分子量范围。

规定用于本文的褐藻糖胶/岩藻多糖聚合物的分子量为这样的分子量值，在该分子量值附近将始终存在较高及较低分子量的分子分布，随着分子量远离指定分子量增大或减小而在数量或百分比上增大或减小。分布可以(但并非必需)具有通常的高斯或失真(distorted)高斯形状。

本文的表格中的结果包含用于分子量分布的某些特征的缩写。凝胶渗透色谱法由GPC表示，峰截留时间由PRT表示，峰分子量由PMW表示，重均分子量由WAMW表示，数均分子量由NAMW表示，分布百分比由％分布(％dist.)表示，分子量由MW表示，多分散性指数由PDI表示，并且截留分子量由MWCO表示。

以下段落转向对一些方法学的简要一般性讨论，所述方法学可以用于产生本文的褐藻糖胶低内毒素组合物。

修改的切向流过滤

包含高水平内毒素的起始褐藻糖胶组合物(其可以是原料褐藻糖胶组合物)经历修改的切向流过滤。所述方法可以包括：使起始褐藻糖胶组合物加上干扰细胞和内毒素聚集的干扰剂通过第一切向流过滤过滤器进行切向流过滤(TFF)，以产生第一渗余褐藻糖胶组合物。干扰剂可以是例如十二烷基硫酸钠(SDS)、苯扎氯铵、

X 100、

X 114或脱氧胆酸钠中的一种或多种。然后利用第二渗滤溶液使第一渗余褐藻糖胶组合物通过第二切向流过滤过滤器进行切向流过滤，以从渗余褐藻糖胶组合物中去除残留的干扰剂，从而产生包括所需褐藻糖胶低内毒素组合物的第二渗余褐藻糖胶组合物。如果需要，在第一和第二渗滤过程中都可以使用相同的TFF过滤器。

本文中的方法、系统等可以包括：使溶液形式的起始褐藻糖胶组合物通过预过滤器，以去除不希望有的颗粒物质。干扰剂可以包括阴离子去污剂、阳离子去污剂和/或非离子去污剂，例如十二烷基硫酸钠(SDS)、苯扎氯铵、

X 100、

X 114和/或脱氧胆酸钠。

进一步的实施方式包括：用沉淀剂处理第一渗余褐藻糖胶组合物，以产生A)干扰剂的沉淀物和B)截留上清液褐藻糖胶组合物。然后可以使上清液褐藻糖胶组合物进行附加的切向流过滤，以从上清液褐藻糖胶组合物中去除残留的干扰剂，从而产生包括所需褐藻糖胶低内毒素组合物的第二渗余褐藻糖胶组合物。用沉淀剂处理第一渗余褐藻糖胶组合物可以包括：用盐和/或碱处理第一渗余褐藻糖胶组合物。在某些实施方式中，盐可以是碱金属、碱土金属、铝和/或铵的氯化物、溴化物、碘化物、氟化物、硫酸盐、亚硫酸盐、碳酸盐、碳酸氢盐、磷酸盐、硝酸盐、亚硝酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、硅酸盐和/或氰化物。在某些实施方式中，碱可以是碱金属、碱土金属、铝和/或铵的氢氧化物和/或氧化物。在某些实施方式中，盐可以是氯化钾、氢氧化钾、氯化钙、氯化钡或碳酸钙中的一种。如果需要，也可以将上清液褐藻糖胶组合物预过滤以去除不希望有的颗粒物质。

方法、系统等还可以包括：例如向起始褐藻糖胶组合物加干扰剂中添加抑菌剂。抑菌剂可以是例如乙二胺-四乙酸(EDTA)、2,3-二巯基-1-丙醇、乙二胺、卟吩或柠檬酸中的至少一种。

在一些实施方式中，起始褐藻糖胶组合物可以溶液形式提供。起始褐藻糖胶组合物在溶液中的褐藻糖胶浓度可以大于0.1％w/v且小于30％w/v。干扰剂在溶液中的浓度可以大于0.1％w/v且小于60％w/v。可以通过上述方法去除的杂质包括但不限于颗粒、脂质、脂肪酸、褐藻多酚、海带多糖、藻酸盐、蛋白质、美拉德反应产物、岩藻黄质、叶绿素、游离离子、细菌、病毒、酵母菌、霉菌、寄生虫、DNA和内毒素。

图1示意性地示出了示例性的修改的切向流过滤(TFF)系统1000，该系统用于降低起始褐藻糖胶组合物的杂质水平。溶液形式的起始褐藻糖胶组合物通过输入供应管线1002供应到褐藻糖胶容器1016。可以通过预过滤器1004对合适溶剂中的起始褐藻糖胶组合物进行预过滤，例如以去除不希望有的颗粒物质。

TFF输入泵1014通过TFF供应管线1012将起始褐藻糖胶组合物泵送至TFF过滤器1010。TFF过滤器1010可以作为盒体被供应，该盒体被设计成允许供应给它的输入流体在其截留侧通过其过滤器，同时允许渗透物通过一个或多个输出管线排出，并且经处理的输入流体作为截留物通过另一输出管线离开。TFF输入泵1014在其截留侧和渗透侧之间在TFF过滤器1010上提供期望的压力水平。在图1中，TFF过滤器1010的截留物通过TFF截留物返回管线1018和TFF截留阀1017返回到褐藻糖胶容器1016，同时渗透物通过TFF渗透物输出管线1019产生，以用于在修改的TFF系统1000的外部使用或被丢弃。

在TFF输入泵1014在TFF过滤器1010上再循环起始褐藻糖胶组合物之前或同时，干扰剂(例如十二烷基硫酸钠(SDS)、苯扎氯铵、

X100、

X 114或脱氧胆酸钠中的一种)可以通过第一渗滤溶液供应管线1025在褐藻糖胶容器1016中被添加到来自第一渗滤溶液容器1020的起始褐藻糖胶组合物中。包含第一干扰剂的溶液，即第一渗滤溶液，用于补充通过TFF渗透物输出管线1019上的渗透物损失的溶剂和/或确保预定的透析体积(diavolumes)量的起始褐藻糖胶组合物和干扰剂在TFF过滤器1010上循环。如果需要，通过控制第一渗滤溶液阀1024，可以在脉冲过程中添加干扰剂。在其他实施方式中，可以以连续模式添加干扰剂。

可以预先确定要在TFF过滤器1010上处理的干扰剂的透析体积量。该过程可以持续预定的时间段、预定的透析体积量的干扰剂、或者直到达到预定的纯度水平，例如可以测量褐藻糖胶容器1016中的杂质水平，并且当达到适当低的杂质水平时终止TFF过程。所测量的杂质水平可以是内毒素水平。利用第一渗滤溶液使溶液形式的起始褐藻糖胶组合物通过TFF过滤器1010进行渗滤，这提供了溶液形式的低内毒素第一渗余褐藻糖胶组合物。

残留的干扰剂可以从低内毒素第一渗余褐藻糖胶组合物中去除。这可以通过以下操作来完成：关闭第一渗滤溶液阀1024、TFF系统输出阀1006，并且允许合适的第二渗滤溶液从第二渗滤溶液容器1030通过第二渗滤溶液供应管线1035和第二渗滤溶液阀1034进入褐藻糖胶容器1016。然后可以像之前那样，使褐藻糖胶容器1016中的混合物通过TFF过滤器1010进行TFF，例如，可以如所期望的，通过TFF供应管线1012、TFF输入泵1014、TFF截留物返回管线1018、和TFF截留阀1017，或通过其他TFF过滤。

第二渗滤溶液可以用于例如补充通过TFF渗透物输出管线1019上的渗透物损失的溶剂和/或确保预定的透析体积量的第一渗余褐藻糖胶组合物和第二渗滤溶液在TFF过滤器1010上循环。通过控制第二渗滤溶液阀1034，可以例如在脉冲过程中和/或以连续模式添加第二渗滤溶液。可以预先确定要在TFF过滤器1010上处理的第二渗滤溶液的透析体积量。该过程可以持续预定的时间段、预定的透析体积量的第二渗滤溶液、或者可以测量褐藻糖胶容器1016中的残留干扰剂浓度，并且当达到适当低的残留干扰剂浓度时终止TFF过程。褐藻糖胶容器1016中的所得第二渗余褐藻糖胶组合物包括修改的TFF系统1000的褐藻糖胶低内毒素组合物产物。

在一些实施方式中，可以通过由TFF系统输出阀1006控制的辅助TFF系统输出管线1008收集褐藻糖胶容器1016中的第一渗余褐藻糖胶组合物，以用于中间处理，然后在中间处理之后返回到褐藻糖胶容器1016中进行本文所述的第二渗滤溶液处理。在中间处理的一个实施例中，可以用沉淀剂处理来自褐藻糖胶容器1016的第一渗余褐藻糖胶组合物，并将所得混合物进行离心，以便将所需的上清液褐藻糖胶组合物与沉淀物分离。举例来说，如果干扰剂是十二烷基硫酸钠，则沉淀剂可以是例如氯化钾和氢氧化钾。特别地，十二烷基硫酸钠虽然具有显著的益处，然而是一种难以从褐藻糖胶容器1016中的低内毒素第一渗余褐藻糖胶组合物中去除的物质，而中间过程步骤中的沉淀有助于这种去除。在中间步骤之后，可以将中间步骤的上清液返回到褐藻糖胶容器1016中，并使其经受如本文已讨论的第二渗滤溶液TFF步骤。在干扰剂是十二烷基硫酸钠的情况下，该第二TFF步骤力图去除在中间沉淀和离心步骤之后保留在上清液褐藻糖胶组合物中的十二烷基硫酸钠的残余物。

固相提取

对褐藻糖胶组合物(例如包含高水平内毒素的起始褐藻糖胶组合物)进行固相提取。所述方法可以包括：以固体形式提供起始褐藻糖胶组合物，除其他杂质外，所述组合物包括内毒素和不能溶解褐藻糖胶的提取介质，所述提取介质被配置用于溶解杂质；将起始褐藻糖胶组合物与提取介质混合以形成未溶解的固体褐藻糖胶组合物和提取介质的混合物，该提取介质包含溶解的内毒素和可能存在的其他杂质；将呈未溶解的固体褐藻糖胶组合物形式的褐藻糖胶低内毒素组合物与包含溶解的内毒素和其他杂质的提取介质分离；以及在从提取介质中去除褐藻糖胶低内毒素组合物后，收集呈固体形式的褐藻糖胶低内毒素组合物。分离可以包括例如离心、过滤、沉降和流体动力流分离中的一种或多种。

提取介质可以包括例如碱、去污剂和氧化剂中的一种或多种。不溶解褐藻糖胶的合适的提取介质包括相对极性小于0.765的有机溶剂，例如乙醇、异丙醇、甲醇、苯、乙醚、十甲基环五硅氧烷、乙酸乙酯、丁醇、己烷、庚烷、庚醇、辛醇和癸醇。合适的碱包括但不限于氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂和氢氧化钙。合适的氧化剂包括但不限于过氧化氢、过氧化脲和氧化性漂白剂中的一种或多种，包括次氯酸钠。合适的去污剂包括但不限于非离子表面活性剂，例如

和

系列去污剂；阴离子表面活性剂，例如十二烷基硫酸钠(SDS)、脱氧胆酸钠；和阳离子表面活性剂，例如苯扎氯铵(BAC)。适用于本文方法的特定褐藻糖胶包括但不限于岩藻多糖。用提取介质处理原始褐藻糖胶组合物(例如起始褐藻糖胶组合物)的时间可以从一分钟延长至120小时。

该方法还可以包括：在以固体形式提供起始褐藻糖胶组合物之前使该起始褐藻糖胶组合物脱盐。脱盐可以包括：使水溶液形式的起始褐藻糖胶组合物通过截留分子量(MWCO)切向流过滤(TFF)过滤器进行渗滤。渗滤可以包括：用蒸馏水渗滤起始褐藻糖胶组合物。截留分子量TFF过滤器的截留分子量可以小于褐藻糖胶低内毒素组合物中的或针对褐藻糖胶低内毒素组合物的所需分子量分离点或目标，例如50kDa、70kDa、100kDa、200kDa、300kDa、500kDa或1000kDa截留分子量。渗滤还可以包括：通过合适的预过滤器对起始褐藻糖胶组合物进行预过滤以去除颗粒物质。所述方法还可以包括：在以固体形式提供起始褐藻糖胶组合物之前，冻干和/或喷雾干燥合适的溶液形式的起始褐藻糖胶组合物。所述方法还可以包括：在以固体形式提供起始褐藻糖胶组合物之前，从溶液中沉淀出合适的起始褐藻糖胶组合物。合适的沉淀剂包括但不限于乙醇、异丙醇、丙醇、丙酮、甲醇、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺、乙二醇、四氢呋喃、乙腈、甘醇二甲醚、二甘醇二甲醚、二恶烷，褐藻糖胶的溶解度随沉淀流体极性的降低而降低。可以通过上述方法去除的杂质包括但不限于微粒、脂质、脂肪酸、褐藻多酚、海带多糖、藻酸盐、蛋白质、美拉德反应产物、岩藻黄质、叶绿素、游离离子、细菌、病毒、酵母菌、霉菌、寄生虫、DNA和内毒素。

化学诱导沉淀

包含高水平内毒素和其他杂质(例如悬浮颗粒)的起始褐藻糖胶组合物或其他合适的褐藻糖胶组合物经历化学诱导的杂质沉淀。在某些实施方式中，所述方法可以包括：提供起始溶液形式的起始褐藻糖胶组合物；通过离子多价杂质沉淀剂从起始溶液中沉淀出杂质，以提供悬浮杂质、沉淀杂质和上清液的混合物；将悬浮杂质和沉淀杂质与上清液溶液分离；以及在将悬浮杂质和沉淀杂质与上清液分离之后，收集包括所需褐藻糖胶低内毒素组合物的上清液溶液。

合适的杂质沉淀剂包括离子多价盐和/或二价和三价阳离子的碱。此类合适的盐的实例包括但不限于碱土金属、锌、铝、铜和铁的氯化物、溴化物、碘化物、氟化物、硫酸盐、亚硫酸盐、碳酸盐、碳酸氢盐、磷酸盐、硝酸盐、亚硝酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、硅酸盐和/或氰化物。这种合适的碱的实例包括但不限于碱土金属、锌、铝、铜和/或铁的氢氧化物和/或氧化物。将悬浮杂质和沉淀杂质与上清液溶液分离可以包括：使混合物中的杂质絮凝。合适的絮凝剂包括但不限于硫酸铝钾；硫酸铝钠；硫酸铝铵；氯化钙；磷酸钠；氢氧化铝；氯化铝；氯化铁；硫酸铁；硫酸亚铁；硅酸钠；硅酸钙；磷酸钙；氯化锌；碳酸钙；碳酸氢钙；硫酸钾；磷酸镁；丙烯酰胺；丙烯酸；氯酸铝；聚氯化铝；单宁；甲醛；三聚氰胺；丙烯酸N,N-二甲基氨基乙酯甲基氯化物；甲基丙烯酸N,N-二甲基氨基乙酯甲基氯化物季铵盐；和聚二烯丙基二甲基氯化铵。从前述絮凝剂列表可以看出，在一些实施方式中，絮凝剂可以是杂质沉淀剂。将沉淀的、悬浮的和/或絮凝的杂质与上清液溶液分离可以包括杂质和上清液溶液的混合物的离心、过滤、沉降和流体动力流分离中的至少一种。

所述方法还可以包括：在提供起始褐藻糖胶组合物之前使起始褐藻糖胶组合物脱盐。脱盐可以包括：使水溶液形式的起始褐藻糖胶组合物通过TFF过滤器进行渗滤。渗滤可以包括：用蒸馏水渗滤起始褐藻糖胶组合物。渗滤可以包括：使起始褐藻糖胶组合物通过截留分子量(MWCO)为5kDa、10kDa、30kDa、50kDa、70kDa或100kDa的TFF过滤器进行渗滤。渗滤还可以包括：使起始褐藻糖胶组合物通过合适的预过滤器进行预过滤以去除颗粒物质。

所述方法还可以包括：将pH维持在约7至14，以抑制或预防褐藻糖胶在酸性环境中降解。将pH维持在约7至14可以包括：添加合适的碱，例如氢氧化钠。可以在通过离子多价杂质沉淀剂从溶液中沉淀出杂质之前，将合适的碱添加到起始褐藻糖胶组合物中。在其他实施方式中，可以在通过离子多价杂质沉淀剂从溶液中沉淀出杂质之后，将合适的碱添加到沉淀杂质和上清液溶液的混合物中。在其他实施方式中，可以在将悬浮杂质和沉淀杂质与上清液溶液分离之后，将合适的碱添加到上清液溶液中。

适用于通过上述方法处理的褐藻糖胶的实例包括但不限于岩藻多糖，并且褐藻糖胶在溶液中的浓度可以为0.01％w/v至50％w/v。可以通过上述方法去除的杂质包括但不限于微粒、脂质、脂肪酸、褐藻多酚、海带多糖、藻酸盐、蛋白质、美拉德反应产物、岩藻黄质、叶绿素、游离离子、细菌、病毒、酵母菌、霉菌、寄生虫、DNA和内毒素。

裂解和絮凝

包含高水平内毒素的起始褐藻糖胶组合物(例如原料褐藻糖胶组合物)经历裂解和絮凝。该实施例中的方法可以包括：提供起始褐藻糖胶组合物；使起始褐藻糖胶组合物呈碱性；向起始褐藻糖胶组合物中添加细胞干扰剂以产生反应混合物，细胞干扰剂裂解起始褐藻糖胶组合物中的细胞组分，并将包括生物分子组分的裂解物释放到碱性反应混合物中；从反应混合物中去除细胞干扰剂和至少一部分杂质，留下未降解的所需褐藻糖胶低内毒素组合物。

去除细胞干扰剂可以包括沉淀、絮凝、切向流过滤、胶束相分离、离子吸附和疏水吸附中的任何一种或多种。去除杂质可以包括沉淀、絮凝、切向流过滤、胶束相分离、离子吸附和疏水吸附中的任何一种或多种。这些去除方法中的任何一种或去除方法的组合中的任何一种可以包括对任何固相和液相混合物进行离心、过滤、沉降或流体动力流分离。

合适的细胞干扰剂包括但不限于阴离子去污剂、非离子去污剂和阳离子去污剂，例如十二烷基硫酸钠(SDS)、苯扎氯铵、Triton X

Triton X

去污剂、

去污剂、脱氧胆酸钠和烷基苯磺酸盐。

在所述方法的一个实施方式中，细胞干扰剂是十二烷基硫酸钠(SDS)，并且细胞干扰剂的去除包括：添加沉淀剂，以使细胞干扰剂不溶于碱性反应混合物中，从而沉淀出细胞干扰剂。在该实施方式中，除去细胞干扰剂还可以包括：将絮凝剂添加到反应混合物中，以使沉淀的细胞干扰剂以及至少一部分杂质絮凝。去除细胞干扰剂还可以包括：在絮凝之后离心。

十二烷基硫酸钠和烷基苯磺酸盐的合适的沉淀剂包括但不限于氢氧化钾、氯化钾、氯化钙、碳酸钙和氯化钡。合适的絮凝剂包括但不限于硫酸铝钾；硫酸铝钠；硫酸铝铵；氯化钙；磷酸钠；氢氧化铝；氯化铝；氯化铁；硫酸铁；硫酸亚铁；硅酸钠；硅酸钙；磷酸钙；氯化锌；碳酸钙；碳酸氢钙；硫酸钾；磷酸镁；丙烯酰胺；丙烯酸；氯酸铝；聚氯化铝；单宁；甲醛；三聚氰胺；丙烯酸N,N-二甲基氨基乙酯甲基氯化物；甲基丙烯酸N,N-二甲基氨基乙酯甲基氯化物季铵盐；和聚二烯丙基二甲基氯化铵。

据此应理解，细胞干扰剂可以在沉淀过程中发生变化。例如，如果细胞干扰剂是十二烷基硫酸钠(SDS)，则沉淀剂可以是氢氧化钾(KOH)，并且钠离子可以作为沉淀过程的一部分被钾替代，所得十二烷基硫酸钾不溶于反应混合物从而沉淀。在功能上是SDS的细胞干扰部分的十二烷基硫酸盐阳离子在此过程中保持完好无损。

在所述方法的其他实施方式中，细胞干扰剂可以是十二烷基硫酸钠(SDS)和脱氧胆酸钠中的一种或多种，并且去除细胞干扰剂包括阴离子吸附。阴离子吸附可以包括：在合适的时间内添加合适的带正电的吸附剂，然后去除吸附剂。阴离子吸附还可以包括：使反应混合物以合适的流速流过装填有合适的带正电的吸附剂的色谱柱或过滤器。

在所述方法的其他实施方式中，细胞干扰剂可以是苯扎氯铵，并且去除细胞干扰剂包括阳离子吸附。阳离子吸附可以包括：在合适的时间内添加合适的带负电的吸附剂，然后去除吸附剂。阳离子吸附还可以包括：使反应混合物以合适的流速流过装填有合适的带负电的吸附剂的色谱柱或过滤器。

在所述方法的其他实施方式中，细胞干扰剂可以是Triton X

Triton X

和

去污剂中的一种或多种，并且去除细胞干扰剂包括胶束相分离。胶束相分离可以包括：改变反应混合物的温度，使得反应混合物的温度超过细胞干扰剂的浊点。胶束相分离可以包括：离心反应混合物以获得所需的相分离。

在所述方法的其他实施方式中，细胞干扰剂可以是十二烷基硫酸钠(SDS)、苯扎氯铵、Triton X

Triton X

去污剂、

去污剂、脱氧胆酸钠和烷基苯磺酸盐中的任何一种或多种，并且去除细胞干扰剂包括以下中的一种或多种：疏水吸附；以及稀释和切向流过滤(TFF)的组合。疏水吸附可以包括：在合适的时间内添加合适的疏水吸附剂，然后去除吸附剂。疏水吸附可以包括：使反应混合物以合适的流速流过装填有合适的疏水吸附剂的色谱柱或过滤器。通过稀释和TFF去除可以包括：稀释反应混合物，使得细胞干扰剂降至其临界胶束浓度以下，并且因此可以在合适的截留分子量(MWCO)TFF过滤器上通过切向流过滤被去除，该过滤器允许从包含褐藻糖胶的截留物中渗透细胞干扰剂。通过稀释和TFF去除可以涉及：在TFF过滤器上以合适的透析体积量渗滤反应混合物。

所述方法还可以包括：将螯合剂添加到反应混合物中以螯合反应混合物中的游离多价阳离子。可以在提供起始褐藻糖胶组合物之后并且在去除细胞干扰剂之前添加螯合剂。所述方法还可以包括：淬灭反应混合物中的氧化剂。淬灭氧化剂可以包括：在去除细胞干扰剂之前或之后向反应混合物中添加氧化剂猝灭剂。

所述方法可以包括：将抑菌剂添加到反应混合物中。可以在提供起始褐藻糖胶组合物之后并且在去除细胞干扰剂之前添加抑菌剂。合适的抑菌剂包括但不限于亚硫酸钠、乙二胺四乙酸(EDTA)、苯扎氯铵、乙醇和硫脲。

合适的螯合剂包括但不限于乙二胺四乙酸(EDTA)、2,3-二巯基-1-丙醇、乙二胺、卟吩和柠檬酸。合适的氧化剂猝灭剂包括但不限于亚硫酸盐、亚硝酸盐和亚磷酸盐。根据上文显而易见的是，列出的若干种化合物在所述方法中可能具有多于一种的功能。

合适的疏水吸附剂包括但不限于活性炭、硅藻土、丙烯酸酯非离子树脂、聚苯乙烯非离子树脂、苯乙烯-二乙烯基苯(DVB)非离子树脂。合适的阴离子吸附剂包括但不限于：胺官能化的苯乙烯-DVB树脂、胺官能化的甲基丙烯酸酯树脂、胺官能化的甲基丙烯酸甲酯树脂、胺官能化的甲基丙烯酸丁酯树脂、胺官能化的琼脂糖树脂、胺官能化的右旋糖酐树脂、胺官能化的陶瓷基树脂、胺官能化的硅酸盐、以及脂质去除剂(LRA)。

在一些实施方式中，起始褐藻糖胶组合物可以以溶液形式提供。适用于通过上述方法处理的褐藻糖胶的实例包括但不限于岩藻多糖。起始褐藻糖胶组合物在溶液中的褐藻糖胶浓度可以大于0.1％w/v且小于30％w/v。细胞干扰剂在溶液中的浓度可以大于0.1％w/v且小于60％w/v。可以通过上述方法去除的杂质包括但不限于微粒、脂质、脂肪酸、褐藻多酚、海带多糖、藻酸盐、蛋白质、美拉德反应产物、岩藻黄质、叶绿素、游离离子、细菌、病毒、酵母菌、霉菌、寄生虫、DNA和内毒素。

阴离子吸附

包含高水平内毒素的起始褐藻糖胶组合物或其他所需褐藻糖胶组合物经历阴离子吸附。所述方法可以包括：在阴离子交换体系中使起始褐藻糖胶组合物与阴离子交换大孔树脂进行阴离子交换，以产生内毒素水平比起始褐藻糖胶组合物低得多的褐藻糖胶低内毒素组合物；以及收集褐藻糖胶低内毒素组合物作为阴离子交换系统的输出。所述方法可以包括：使起始褐藻糖胶组合物与阴离子交换大孔树脂进行阴离子交换，所述阴离子交换大孔树脂的孔径大于起始褐藻糖胶组合物中不期望有的内毒素的平均流体动力尺寸。所述方法可以包括：用干扰剂预处理起始褐藻糖胶组合物。

所述方法还可以包括：在使起始褐藻糖胶组合物进行阴离子交换之前使起始褐藻糖胶组合物脱盐。脱盐可以包括：使溶液形式的起始褐藻糖胶组合物通过截留分子量(MWCO)TFF过滤器进行渗滤。MWCO TFF过滤器的截留分子量可以小于褐藻糖胶低内毒素组合物中的或针对褐藻糖胶低内毒素组合物的所需分子量分离点或目标，例如5kDa、10kDa、30kDa、50kDa、70kDa、100kDa、200kDa、300kDa、500kDa或1000kDa截留分子量。渗滤还可以包括：使起始褐藻糖胶组合物通过合适的预过滤器进行预过滤以去除颗粒物质。

所述方法可以包括：将起始褐藻糖胶组合物与大孔阴离子交换树脂的比例调节至预定比例。起始褐藻糖胶组合物:大孔阴离子交换树脂的预定比例可以为1:100至10:1、1:90至1:1、1:80至1:5、或1:70至1:10。在一些实施方式中，所述预定比例可以基于起始褐藻糖胶组合物和大孔阴离子交换树脂的质量。

所述方法、系统等可以包括：使起始褐藻糖胶组合物与树脂进行阴离子交换达预定时间段。所述预定时间段可以为约5分钟至300小时，例如约10分钟、30分钟至1、2、3、5、10、30、100和300小时。

所述方法、系统等可以包括：使起始褐藻糖胶组合物与强碱大孔阴离子交换树脂、弱碱大孔阴离子交换树脂或大孔混合电荷树脂进行阴离子交换。“强碱”和“弱碱”根据其通常含义使用，例如“强碱”是在任何典型的离子交换环境下都不会失去电荷的树脂，例如季胺官能化树脂，而“弱碱”是在高pH条件下会失去电荷的树脂，例如伯、仲或叔胺官能化树脂。

所述方法、系统等可以包括：使起始褐藻糖胶组合物与包括伯、仲、叔和季氨基中的至少一种的大孔树脂进行阴离子交换。伯氨基可以是胺基。仲氨基可以是例如苄胺基和二甲基氨基中的至少一种。叔氨基可以是例如二乙基氨基乙基和二甲基氨基乙基中的至少一种。季氨基可以是例如三甲基铵基和三乙基铵基。树脂可以包括但不限于苯乙烯、琼脂糖、右旋糖酐、丙烯酸酯、甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸丁酯、二乙烯基苯、纤维素、二氧化硅和陶瓷中的一种或多种。

所述方法、系统等可以包括：使用平均孔径为约5nm至约1000nm的离子交换树脂，例如约5nm、10nm、15nm、20nm、25nm、30nm、40nm、50nm、60nm、80nm、100nm、200nm、300nm、400nm、500nm、750nm或1000nm。离子交换树脂的排阻极限为约5kDa或50kDa和50,000kDa，例如约50kDa、100kDa、200kDa、500kDa、1,000kDa、2,000kDa、3,000kDa、4,000kDa、5,000kDa、6,000kDa、8,000kDa、9,000kDa、10,000kDa、20,000kDa、40,000kDa或50,000kDa。在一些实施方式中，排阻极限基于球状蛋白质的大小。

图2描绘了用于阴离子吸附内毒素去除系统1400的示例性设备，该系统用于从起始褐藻糖胶组合物中去除内毒素。通过输入供应管线1401将包含起始褐藻糖胶组合物的溶液供应至切向流过滤(TFF)子系统褐藻糖胶容器1416。可以使合适的溶剂中的起始褐藻糖胶组合物通过预过滤器1406进行预过滤以去除不希望有的颗粒物质。在脱盐过程中，TFF子系统泵1414通过TFF过滤器供应管线1412将起始褐藻糖胶组合物泵送到TFF子系统1410的TFF过滤器1411。

TFF过滤器1411可以作为盒体被供应，该盒体被设计成允许供应给它的输入流体在其截留侧通过其过滤器，同时允许渗透物通过第一输出管线排出，并且经处理的输入流体作为截留物通过另一输出管线离开。对于本发明的示例性方法，选择TFF过滤器1411的MWCO以允许盐组分渗透，同时将褐藻糖胶保留在截留物中以用于随后在阴离子交换子系统1420中进行阴离子吸附处理。TFF子系统泵1414在其截留侧和渗透侧之间在TFF过滤器1411上提供压力水平。在图2中，TFF过滤器1411的截留物通过TFF子系统截留物返回管线1418返回到TFF子系统褐藻糖胶容器1416，同时包含起始褐藻糖胶组合物的不想要的盐组分的渗透物通过TFF子系统渗透物输出管线1419产生，以用于在阴离子吸附内毒素去除系统1400的外部使用或被丢弃。

当TFF子系统泵1414在TFF过滤器1411上再循环起始褐藻糖胶组合物和截留物时，可以通过TFF子系统渗滤溶液供应管线1415从TFF子系统渗滤溶液容器1417供应去离子水或低电导率溶液。渗滤溶液用于补充通过TFF子系统渗透物输出管路1419上的渗透物损失的截留物溶液和/或确保预定的透析体积量的输入起始褐藻糖胶和渗滤溶液在TFF过滤器1411上循环。通过控制渗滤溶液阀1413，可以在脉冲和/或连续过程中添加冲洗溶液。可以预先确定要在TFF过滤器1411上处理的冲洗溶液的透析体积量。在一些实施方式中，冲洗溶液可以是去离子水。

子系统间阀1402可以在上述处理期间关闭，并且在将TFF子系统1410的TFF过滤器1411的截留物收集到容器(未显示)中，然后再供应给阴离子交换子系统1420的阴离子交换子系统褐藻糖胶容器1426。收集的截留物可以通过TFF子系统截留物输出管线1403供应给阴离子交换子系统1420的阴离子交换子系统褐藻糖胶容器1426。在其他实施方式中，收集的截留物可以在容器(未示出)中转移至阴离子交换子系统褐藻糖胶容器1426。在该系统的其他实施方式中，子系统间阀1402可以维持打开，并且TFF过滤器1411的截留物可以连续地通过TFF子系统截留物输出管线1403供应给阴离子交换子系统褐藻糖胶容器1426。供应给阴离子交换子系统1420的截留物可以具有比起始褐藻糖胶组合物低的盐含量。对于在阴离子交换子系统1420中的后续处理，可能希望降低起始褐藻糖胶组合物的盐含量。在一些实施方式中，可以将起始褐藻糖胶组合物提供为脱盐的起始褐藻糖胶组合物，并且可以绕过通过TFF子系统1410进行的处理。

阴离子交换子系统1420的阴离子交换容器1421包含一定体积的大孔阴离子交换树脂1429。选择大孔阴离子交换树脂1429的孔径以优先吸附内毒素分子，同时留下褐藻糖胶分子。这样的树脂可以包括与二乙烯基苯交联的苯乙烯的基本上球形的颗粒，并且具有包含季铵基的孔。基于溶液中内毒素分子、簇或胶束的流体动力尺寸，内毒素(无论是作为单个分子、分子簇还是胶束)可以优先吸附到树脂的孔中。在阴离子交换过程中，阴离子交换子系统泵1424将渗余褐藻糖胶组合物通过阴离子交换容器供应管线1422泵送到阴离子交换子系统1420的阴离子交换容器1421。

在阴离子交换容器1421中处理来自TFF子系统1410的渗余褐藻糖胶组合物的过程中，阴离子交换子系统输出阀1404可以关闭。流过阴离子交换容器1421的溶液通过阴离子交换容器输出管线1428返回到阴离子交换子系统容器1426，引起溶液再循环。在再循环期间，大孔阴离子交换树脂1429从渗余褐藻糖胶组合物中吸附内毒素。

可以测量或监测阴离子交换子系统褐藻糖胶容器1426中的内毒素水平。当溶液已经再循环合适的时间段时，或者当溶液已经达到预定的所需内毒素水平时，可以打开阴离子交换子系统输出阀1404，以通过阴离子交换子系统输出管线1405输出褐藻糖胶低内毒素组合物。

转向图2的干扰剂容器1427和干扰剂供应管线1425，在这样的实施方式中，通过干扰剂供应管线1425从干扰剂容器1427中添加干扰剂。干扰剂可以干扰内毒素的簇或胶束，使得所得分子更易于吸附在大孔阴离子交换树脂1429的孔内。在某些实施方式中，可以用干扰剂处理TFF过滤器1411的截留物。合适的干扰剂包括但不限于

X 100、

X 114、

35、

20和苯扎氯铵。

液液提取

包含高水平内毒素的起始褐藻糖胶组合物(例如原料褐藻糖胶组合物)经历液-液提取。所述方法可以包括：提供起始水溶液形式的起始褐藻糖胶组合物；将起始溶液与有机溶剂混合以获得水-有机相混合物，其水性部分包括褐藻糖胶低内毒素组合物，而有机物部分包括疏水杂质，所述杂质包括内毒素；将水性部分与有机部分分离；以及收集包括褐藻糖胶低内毒素组合物的水性部分。

所述方法还可以包括：在将有机溶剂与起始水溶液混合之前使起始褐藻糖胶组合物脱盐。脱盐可以包括：使水溶液形式的起始褐藻糖胶组合物通过截留分子量(MWCO)切向流过滤(TFF)过滤器进行渗滤。渗滤可以包括：用蒸馏水渗滤起始褐藻糖胶组合物。截留分子量TFF过滤器的截留分子量可以小于褐藻糖胶低内毒素组合物中的或针对褐藻糖胶低内毒素组合物的所需分子量分离点或目标，例如截留分子量为5kDa、10kDa、30kDa、50kDa、70kDa、100kDa、200kDa、300kDa、500kDa或1000kDa。渗滤还可以包括：通过合适的预过滤器将起始褐藻糖胶组合物预过滤以去除颗粒物质。

将起始水溶液与有机溶剂混合可以包括：摇动水-有机相混合物，搅拌水-有机相混合物，将水-有机相混合物暴露于高剪切，将水性部分再循环到有机部分中，以及将有机部分再循环到水性部分中。

将水性部分与有机部分分离可以包括离心、倾析、分液漏斗分离和流体动力流分离中的至少一种。

适用于该方法的有机溶剂包括相对极性小于0.765的有机溶剂，例如乙醇、异丙醇、甲醇、苯、十甲基环五硅氧烷、乙酸乙酯、己烷、庚醇、辛醇、癸醇、庚烷、乙酸异丁酯、苯甲醚、乙酸异丙酯、1-丁醇、乙酸丁酯、甲基异丁酮、戊烷、1-戊醇、乙醚和乙酸丙酯。有机相可以包含杂质，例如脂质、脂肪酸、褐藻多酚、蛋白质、岩藻黄质、叶绿素和/或内毒素。

化学结构修饰

本文讨论的方法、系统等可以包括对褐藻糖胶组合物，特别是褐藻糖胶组合物中的褐藻糖胶进行化学结构修饰。化学结构修饰可以涉及：从褐藻糖胶中去除官能团，例如，从褐藻糖胶结构中去除O-乙酰基、N-乙酰基、甲氧基、羟基、羧基和/或硫酸酯官能团。化学结构修饰可以涉及多种化学试剂的使用，例如酸、碱、去污剂和/或氧化剂。

疾病和病症

纤维性粘连

纤维性粘连通常是在外科手术后在身体的两个部位之间形成的一种疤痕类型(这种类型的纤维性粘连也称为外科手术粘连)。纤维性粘连可能导致严重问题。例如，涉及女性生殖器官(卵巢、输卵管)的纤维性粘连可能导致不育、性交困难及严重的骨盆疼痛。在肠中出现的纤维性粘连可能导致肠梗阻或阻塞，且纤维性粘连还可能在其他位置，诸如心脏周围、脊椎及手部形成。除外科手术之外，纤维性粘连可能例如由子宫内膜异位症、感染、化疗、放射、创伤及癌症引起。

在本文档中，论述了各种纤维性粘连。诸如外科手术粘连、外科手术后粘连(post-surgical adhesion)、术后粘连(postoperative adhesion)、因盆腔炎所致的粘连、因机械性损伤所致的粘连、因放射所致的粘连、因放射治疗所致的粘连、因创伤所致的粘连以及因外来材料的存在所致的粘连等术语均是指因类似机制所致的组织间彼此粘连并且均包括在术语“纤维性粘连”中。

纤维性粘连形成是复杂的过程，其中体内正常分离的组织生长至彼此中。外科手术粘连(也称为外科手术后粘连)是由组织对创伤的正常伤口愈合反应以外的反应发展而来的并且已被报导在超过三分的二的全部腹部外科手术患者中出现(Ellis,H.,Surg.Gynecol.Obstet.133:497(1971))。这些纤维性粘连的后果是变化的且取决于所涉及的外科手术部位或其他部位，诸如疾病部位。面临的问题可能包括慢性疼痛、肠梗阻及甚至心脏外科手术后的死亡风险增大(diZerega,G.S.,Prog.Clin.Biol.Res.381:1-18(1993)；diZerega,G.S.,Fertil.Steril.61:219-235(1994)；Dobell,A.R.,Jain,A.K.,Ann.Thorac.Surg.37:273-278(1984))。据估计，在生殖期女性中，涉及子宫、输卵管或卵巢的纤维性粘连占全部不育情况的大约20％(Holtz,G.,Fertil.Steril.41:497-507(1984)；Weibel,M.A.and Majno,G.Am.J.Surg.126:345-353(1973))。

纤维性粘连形成过程最初涉及建立纤维蛋白框架及正常组织修复。正常修复过程允许沿间皮修复的纤维蛋白溶解。然而，在纤维性粘连形成中，纤维蛋白基质随着成纤维细胞增殖成熟为网络且发生血管新生，使得在约3至5天内建立经组织化的纤维性粘连(Buckman,R.F.,et al.,J.Surg.Res.21:67-76(1976)；Raferty,A.T.,J.Anat.129:659-664(1979))。炎性过程包括创伤组织中的中性粒细胞活化、纤维蛋白沉淀及邻接组织结合、巨噬细胞侵袭、成纤维细胞增殖至区域中、胶原沉淀、血管新生及建立永久纤维性粘连组织。

已作出各种尝试以防止外科手术粘连。这些尝试涉及针对影响伴随外科手术创伤的生物化学及细胞事件的药理学方法以及用于分离受影响的组织的屏障方法。例如，使用腹腔灌洗、肝素化溶液、促凝剂、诸如使用显微术或腹腔术外科手术技术的修饰外科技术、消除来自外科手术用手套的滑石、使用更小的缝合线以及使用旨在最小化浆膜表面的并置的物理屏障(膜、凝胶或溶液)均已尝试。当前，预防性疗法还包括预防纤维蛋白沉淀、减少炎性(类固醇及非类固醇抗炎药)及除去纤维蛋白沉淀物。

防止形成外科手术后粘连的介入尝试已包括使用水浮选(hydroflotation)技术或屏障器械。水浮选涉及将较大体积的聚合物溶液，诸如右旋糖酐(Adhesion StudyGroup,Fertil.Steril.40:612-619(1983))或羧甲基纤维素(Elkins,T.E.,et al.,Fertil.Steril.41:926-928(1984))灌注至外科手术间隙中以尝试保持器官分开。由经氧化再生纤维素制成的合成屏障膜(例如，Interceed^TM)、聚四氟乙烯(戈尔-特克斯手术膜)及由经修饰的透明质酸/羧甲基纤维素(HA/CMC)组合制成的可完全再吸收的膜(Seprafilm^TM)也已用于减少动物及人类两者体内的外科手术后粘连形成(Burns,J.W.,et al.,Eur.J.Surg.Suppl.577:40-48(1997)；Burns,J.W.,et al.,Fertil.Steril.66:814-821(1996)；Becker,J.M.,et al.,J.Am.Coll.Surg.183:297-306(1996))。这些HA/CMC膜的成功可能源自其能够在纤维性粘连形成时在腹膜伤口修复过程期间提供组织分离。据观察，在应用后3-5天(与外科手术后粘连形成的时程兼容的时间段)，膜在受伤组织上形成清楚的粘性涂层(Ellis,H.,Br.J.Surg.50:10-16(1963))。不幸地，利用这些方法取得的成功有限。

腹膜炎涉及腹膜的炎症。腹膜炎可能导致严重的问题。例如，腹痛、腹部压痛及腹部防护。腹膜炎可能涉及自发性、解剖和/或腹膜透析相关的炎症。腹膜炎可能涉及感染，例如，空腔脏器穿孔、腹膜破裂、自发性细菌腹膜炎以及全身性感染可能引起感染及腹膜炎。腹膜炎还可能不涉及感染，例如，无菌体液渗漏至腹膜中，以及无菌腹部外科手术可能引起腹膜炎。已作出各种尝试以预防和/或治疗腹膜炎。例如，通用支持性测量诸如静脉内补液、抗生素及外科手术。未能满足对抑制或以其他方式治疗和/或预防腹膜炎，优选更有效的且副作用小的化合物、组合物和方法等(包括递送方法)的需求。

本文中所论述的褐藻糖胶低内毒素组合物可以用于治疗患者体内的纤维性粘连，且可以被包括作为经配置及构成以治疗纤维性粘连的褐藻糖胶低内毒素组合物医疗组合物、医疗器械、组合或药物产品的组分，或为作为经配置及构成以治疗纤维性粘连的褐藻糖胶低内毒素组合物医疗组合物、医疗器械、组合或药物产品。例如，褐藻糖胶低内毒素医疗组合物或医疗器械包括溶解于生理盐溶液中的约0.02mg/mL至约100mg/mL，例如0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.3mg/mL、0.5mg/mL、0.9mg/mL、1mg/mL、2.5mg/mL、5mg/mL、7.5mg/mL的本文中的褐藻糖胶低内毒素组合物。生理盐溶液可以是例如乳酸钠林格注射液USP(LRS)、生理盐水及生理学右旋糖酐溶液。

本文中可以作为液体医疗组合物和医疗器械的褐藻糖胶低内毒素组合物和医疗器械可以包括药物学上可接受的赋形剂，诸如缓冲剂、稳定剂、防腐剂、佐剂等。此类褐藻糖胶低内毒素医疗组合物和医疗器械可用于通过给药约0.01mL/kg(根据患者或目标的每公斤体重)至约10mL/kg或15mL/kg的先前段落中的褐藻糖胶医疗组合物或器械来治疗外科手术前、外科手术期间或外科手术后的纤维性粘连。剂量和器械量包括例如到达患者的手术部位的约0.03mL/kg、0.1mL/kg、0.2mL/kg、0.4mL/kg、0.5mL/kg、0.6mL/kg、1mL/kg、1.2mL/kg、2mL/kg、3mL/kg、4mL/kg、5mL/kg、8mL/kg、10mL/kg及15mL/kg的褐藻糖胶低内毒素医疗组合物或医疗器械。在进一步的实施方式中，此类褐藻糖胶低内毒素医疗组合物或医疗器械可用于通过给药约0.04mg/kg或0.1mg/kg至约25mg/kg或50mg/kg来治疗任何所选目标部位(例如病变、擦伤、损伤部位、外科手术部位及外科手术后部位)处的纤维性粘连。此类剂量的一些实例包括例如到达患者的外科手术部位的约0.04mg/kg、0.075mg/kg、0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.5mg/kg、1mg/kg、1.3mg/kg、1.5mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、7.5mg/kg、8mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg及50mg/kg的本文中的褐藻糖胶，其包括例如本文中的褐藻糖胶低内毒素组合物。给药可以例如通过以下操作来完成：将液体医疗组合物或医疗器械灌注在大致整个目标区域内；将液体医疗组合物或医疗器械引导至目标区域内的特定位置处；将液体医疗组合物或医疗器械喷涂在整个目标区域内或目标区域内的特定位置处；或者通过施料器喷涂或以其他方式将液体医疗组合物或医疗器械递送至已被外科医生或其他从业者确认为尤其疑似或担心发生纤维性粘连的特定位置上，该施料器可以是通过套管针、导管、内视镜或其他极小侵入性器械的喷涂施料器。在另一方面，可以在打开外科手术伤口后但在外科手术程序之前；在外科手术程序期间；或在外科手术程序后但在关闭手术伤口之前进行给药。若需要，液体医疗组合物或医疗器械还可以在外科手术完成后(例如，通过注射器及针头)给药且还可以向非手术目标部位给药。患者的手术部位可以是例如以下中的至少一种：骨盆腔、腹腔、背腔、颅腔、脊髓腔、腹侧腔、胸腔、胸膜腔、心包腔、皮肤、关节、肌肉、肌腱或韧带。将褐藻糖胶低内毒素医疗组合物或医疗器械给药至患者的手术部位中可以在小于约15分钟、10分钟、8分钟、6分钟、5分钟、4分钟、3分钟、2分钟、1分钟、45秒、30秒、20秒、15秒、10秒及5秒内完成。

在打开外科手术伤口后、在外科手术期间、在关闭手术伤口之前和/或关闭手术伤口之后，向手术部位给药褐藻糖胶低内毒素医疗组合物或医疗器械的实例包括但不限于在以下外科手术程序的外科手术部位处给药褐藻糖胶低内毒素医疗组合物或医疗器械：剖宫产外科手术程序、微血管游离皮瓣重建外科手术程序、全厚皮片外科手术程序、V-Y推进皮瓣外科手术程序、筋膜旋转皮瓣外科手术程序、关节成形术外科手术程序、乳房切除术外科手术程序、死骨摘除术(sequestrectomy)外科手术程序、碟形术(saucerization)外科手术程序、截骨术(osteotomy)外科手术程序、骨整形术(osteoplasty)外科手术程序、髌骨切除术(patellectomy)外科手术程序、滑膜切除术(synovectomy)外科手术程序、关节囊切除术(capsulectomy)外科手术程序、肌腱或韧带修复外科手术程序、肌腱松解术(tenolysis)外科手术程序、肌腱切断术外科手术、筋膜切开术(fasciotomy)外科手术程序、半月板修复外科手术程序、椎骨切除术(vertebrectomy)外科手术程序、筛窦切除术(ethmoidectomy)外科手术程序、柯一陆氏手术(Caldwell Luc′s)外科手术程序、泪囊鼻腔吻合术(dacryocystorhinostomy)外科手术程序、溶菌鼻粘连分离术(lysis nasal synechia)外科手术程序、胸腺切除术(thymectomy)外科手术程序、肺松解术(pneumonolysis)外科手术程序、全肺切除术(pneumonectomy)外科手术程序、胸廓成形术(thoracoplasty)外科手术程序、双肺叶切除术(bilobectomy)外科手术程序、门静脉高血压外科手术(portalhypertension surgery)外科手术程序、脾切除术(splenectomy)外科手术程序、食管切除术(esophagectomy)外科手术程序、腹膜炎外科手术(peritonitis surgery)外科手术程序、胃切除术外科手术(gastrectomy surgery)外科手术程序、空肠空肠吻合术外科手术(jejunojejunostomy surgery)外科手术程序、腹腔镜胆囊切除术外科手术(laparoscopiccholecystectomy surgery)外科手术程序、腹腔镜胆管总探查(laparoscopic commonbile duct exploration)外科手术程序、胃肠吻合术(gastroenterostomy)外科手术程序、减重外科手术外科手术程序、肠切除及吻合术(bowel resection&anastomosis)外科手术程序、肝段切除术(segemental hepatectomy)外科手术程序、叶切除术(lobectomy)外科手术程序、胰切除术(pancreatomy)外科手术程序、胰十二指肠切除术(pancreaticoduodenectomy)外科手术程序、肿瘤切除术(tumor resection)外科手术程序、腹腔镜肾切除术(laparoscopic nephrectomy)外科手术程序、膀胱切除术(cystectomy)外科手术程序、腹部或骨盆粘连分离外科手术程序、子宫输卵管造口术(hysterosalpingostomy)外科手术程序、输卵管成形术(salpingoplasty)外科手术程序、子宫外孕腹腔镜外科手术(ectopic pregnancy surgery)外科手术程序、关节置换外科手术手术程序、骨折修复外科手术程序、子宫切除术(hysterectomy)外科手术程序、胆囊除去外科手术程序、心脏搭桥(heart bypass)外科手术程序、血管成形术(angioplasty)外科手术程序、粥样斑切除术(atherectomy)外科手术程序、乳房活组织检查外科手术程序、颈动脉内膜切除术(carotid endarterectomy)手术程序、白内障外科手术(cataract surgery)外科手术程序、冠状动脉旁路(coronary artery bypass)外科手术程序、刮宫术(dilationand curettage)外科手术程序、疝修复(hernia repair)外科手术程序、下背痛外科手术外科(lower back pain surgery)手术程序、部分结肠切除术(partial colectomy)外科手术程序、前列腺切除术(prostatectomy)外科手术程序及扁桃体切除术(tonsillectomy)手术程序。

一般癌症

癌症已成为美国死亡的第二主要原因且占全部死亡率的20％以上。癌症为增殖性疾病且其特征为某些细胞的不可控分裂，其可导致形成一种或多种肿瘤。大量方法用于治疗癌症，包括外科手术、放射、化疗及其组合。尽管外科手术是用于一些局部肿瘤的相对普遍的方法，但在肿瘤切除后仍存在明显肿瘤复发机率。

治疗癌症及其他增殖性疾病受对非癌性、健康组织的潜在损伤或毒性限制。在放射及外科手术治疗中，手术总体上受限于肿瘤部位且靠近肿瘤部位。然而，对于经历手术除去癌性组织的患者来说，可能存在明显的风险(例如，在除去前列腺或脑瘤中，可能存在对于周围重要组织的明显的不可修复损伤风险，例如经由潜在地减小对切除非肿瘤组织的需求。另外，在作为前列腺癌的一线治疗的集中放射治疗中，存在类似风险。在癌症的化学治疗性治疗中，药物全身性给药，使得整个身体暴露于药物。这些药物经设计对癌细胞是有毒的，但其对非癌细胞(通常)也是有毒的，使得患者在经历用于癌症的药物治疗时变得非常虚弱。经由试验，肿瘤学家能够给予对一些患者耐受的这些药物的剂量。然而，这些剂量通常不能成功治疗癌症。

任何治疗癌症的方法都存在的一个问题是疾病的局部复发。例如，每年大约700,000名美国人经诊断患有局部癌症(大约64％的全部癌症患者)且近似五十万患者使用外科手术方法进行治疗。不幸地，经手术治疗的32％患者在初始治疗后复发(大约21％在初始手术部位处复发及11％在远处转移性部位处复发)。每年接近100,000名患者死于癌症的局部复发。这在乳腺癌中更是如此，其中经历乳房肿瘤切除术的39％的患者将经受疾病的局部复发。

分期为判定患者体内的癌症(实体肿瘤)的进展的方法。简化方法基于癌症已进展程度将患者分成三组或三期：

1期：可以通过手术除去器官的部分来治疗癌症。这还称为可切除期。

2期：癌症已进展超过可切除点但仍受限于器官本身。

3期：肿瘤已扩散至其他器官。

许多癌症采用抗增殖剂，包括例如，5-氟尿嘧啶

长春花生物碱(vincaalkaloid)(例如，长春新碱(vincristine)

)、蒽环素(anthracycline)(例如，阿霉素

)、顺铂

盐酸吉西他滨(gemcitabinehydrochloride)

甲胺喋呤及紫杉醇治疗。与抗增殖剂、甲胺喋呤及紫杉醇相关联的毒性的一些实例在本文中的其他地方论述。甲胺喋呤已用于治疗几种癌症，包括例如，膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、头部及颈部癌、肝癌、肺癌及睾丸癌。紫杉醇已用于治疗几种癌症，包括例如，卵巢癌、乳腺癌及非小细胞肺癌(Compendium of Pharmaceutical andSpecialties Thirty-fifth Edition,2000)。

因5-氟尿嘧啶所致的毒性可以包括心脏血管毒性，诸如心肌缺血；中枢神经系统毒性，诸如欣快症、急性小脑综合征及共济失调；皮肤病学毒性，诸如秃发症及皮炎；胃肠毒性，诸如恶心、呕吐及口腔或胃肠溃烂；血液毒性，诸如白细胞减少症、血小板减少及贫血症；超敏感性毒性，诸如全身性过敏反应及接触过敏；眼部毒性，诸如增加流泪、畏光及结膜炎；及其他毒性，诸如发热。5-氟尿嘧啶已用于治疗多种癌症，包括例如，乳腺癌、结肠直肠癌、胃癌、肝脏癌、膀胱癌、头部及颈部癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、胰腺癌及前列腺癌(Compendium of Pharmaceutical and Specialties Thirty-fifth Edition,2000)。

因长春新碱所致的毒性包括中枢神经系统毒性，诸如儿童癫痫及幻觉；皮肤病学毒性，诸如秃发症；外渗毒性，诸如水疱；胃肠毒性，诸如恶心、呕吐、便秘及口炎；血液毒性，诸如骨髓抑制；神经毒性，诸如周围神经病变及自主神经病；眼部毒性，诸如复视、瞬时目盲及视神经萎缩；肾/代谢毒性，诸如尿潴留、高尿酸血症及膀胱乏力；呼吸毒性，诸如呼吸短促；及其他毒性，诸如儿童发热。这种抗增殖剂已用于治疗几种癌症，包括例如，霍奇金病、小细胞肺癌、威尔姆肿瘤及睾丸癌(Compendium of Pharmaceutical and SpecialtiesThirty-fifth Edition,2000)。

因阿霉素所致的毒性包括心脏血管毒性，诸如心电图异常及心肌病；皮肤病学毒性，诸如秃发症及指甲变化；外渗危害毒性，诸如水疱；胃肠毒性，诸如恶心、呕吐及口炎；泌尿生殖系统毒性，诸如尿液红色；血液毒性，诸如骨髓抑制；超敏感性毒性，诸如过敏反应及皮疹；眼部毒性，诸如结膜炎；生殖毒性，诸如不孕症；及其他毒性，诸如高尿酸血症。这种抗增殖剂已用于治疗几种癌症，包括例如，乳腺癌、小细胞肺癌及卵巢癌(Compendium ofPharmaceutical and Specialties Thirty-fifth Edition,2000)。

因顺铂所致的毒性包括心脏血管毒性，诸如心电图变化；皮肤病学毒性，诸如色素沉着；外渗危害毒性，诸如刺激性；胃肠毒性，诸如恶心及呕吐；血液毒性，诸如骨髓抑制及溶血性贫血；超敏感性毒性，诸如过敏反应；神经肌肉毒性，诸如周围神经病及急性脑病；眼部毒性，诸如球后神经炎；耳科毒性，诸如听觉损失及耳鸣；肾/代谢毒性，诸如中毒性肾病及低钾血症；及其他毒性，诸如不育。这种抗增殖剂已用于治疗几种癌症，包括例如，膀胱癌、小细胞肺癌、卵巢癌、睾丸癌、脑癌、乳腺癌、宫颈癌、头部及颈部癌、肝母细胞瘤癌及甲状腺癌(Compendium of Pharmaceutical and Specialties Thirty-fifth Edition,2000)。因盐酸吉西他滨所致的毒性包括例如血液毒性，诸如骨髓抑制；胃肠毒性，诸如恶心、呕吐及口炎；肝毒性，诸如血清转胺酶的瞬时升高；肾毒性，诸如蛋白尿、血尿、溶血性尿毒症综合征及肾衰竭；皮肤病学毒性，诸如皮疹及秃发症；水肿毒性，诸如水肿及周围水肿；及其他毒性，诸如发热。这种抗增殖剂已用于治疗胰腺癌及非小细胞肺癌(Compendium ofPharmaceutical and Specialties Thirty-fifth Edition,2000)。

本发明论述包括预防或治疗可治疗的局部癌症或实体肿瘤，包括前列腺、乳腺、胰腺、肝、肾、泌尿生殖系统、脑、胃肠系统、呼吸系统及头部及颈部的局部癌症或实体肿瘤。本文中的组合物等可以通过允许在距目标肿瘤远处的部位处控制释放褐藻糖胶低内毒素组合物，通过允许有效浓度的褐藻糖胶低内毒素组合物利用扩散或甚至全身性输送达至肿瘤和/或转移瘤来预防或治疗癌症，包括转移瘤。在以下段落中进一步论述这些癌症中的一些。

前列腺癌

前列腺癌为在衬在前列腺腺体的细胞中产生的恶性肿瘤。在美国，今年估计200,000名患者将罹患前列腺癌，且超过30,000名患者将死于该疾病。前列腺癌的新发病例死亡率为约15％。癌症可能保持在前列腺内，或其可能扩散至周围组织或远部位(最经常淋巴结及骨骼)。通常前列腺癌无症状地扩散，仅在其已进展超出前列腺时才产生症状。在一些研究中，若前列腺癌已在早期期间经诊断且经治疗，患者的5年存活率为94％。

前列腺癌经常论述为超过50岁的男性疾病。实际上，患有前列腺癌的80％男性为60岁且更年长。男性在其寿命期间诊断患有前列腺癌的机率为约1/10，与女性患乳腺癌的机率大致相同。近年来，由于可以在疾病出现早期(经常在症状呈现的前很久)检测到疾病的改良测试，经报导的新病例的数目显著地上升。任一给定年份中罹患前列腺癌的可能性随着年龄增加，但在50岁后显著地上升。

用于前列腺癌的当前治疗选项取决于疾病进展程度、患者的年龄及总体健康状况。仅患有早期癌症或受额外更严重疾病影响的老年患者可以保守治疗，然而癌症为晚期的老年患者可能经历更具侵袭性的治疗。前列腺癌已通过各种方法治疗，包括放射疗法(外部辐射束放射或近距离放射疗法)、激素戒断或去势(外科手术或化学品)、抗增殖剂、外科手术及期望治疗(即，“观察等待”)。没有任何治疗保证绝对治愈，且一些具有相当大的副作用。

早期前列腺癌(即，肿瘤在前列腺局部)可以“观察等待”治疗。前列腺癌的外科手术经推荐用于总体健康状况在其他方面良好且肿瘤受限于前列腺腺体的患者。针对70岁以下的男性前列腺的局部癌症的普遍治疗为根治性前列腺切除术(即，外科手术除去前列腺)。

其癌症为前列腺区域局部的患者通常以外部辐射束放射(EBR)治疗。放射杀灭癌细胞且缩小肿瘤。EBR占局部前列腺癌治疗的小于20％，其中这些患者中大约50％经历放射后疾病复发。与早期前列腺癌检测及来自患者的增加的需求组合，近距离放射疗法(即，局部放射疗法)的使用预期将会增加。在1995年，仅2.5％的新诊断患者使用近距离放射疗法治疗。近距离放射疗法涉及将放射性金属“种”植入前列腺肿瘤中。

用于已扩散的前列腺癌的治疗涉及除去睾或激素疗法。两种皆用于抑制或终止驱动癌症生长的睾固酮的产生。大约20％的全部前列腺癌患者经历激素戒断疗法。激素疗法包括醋酸戈舍瑞林乙(goserelin acetate)

或醋酸亮丙瑞林(leuprolideacetate)

用于治疗前列腺癌的抗增殖剂包括5-氟尿嘧啶。

乳腺癌

在美国，乳腺癌已成为女性当中最常见的癌症，其中每年诊断约180,000个新病例(男性乳腺癌占全部经诊断乳腺癌的约5％)。乳腺癌已成为女性的仅次于肺癌的致死原因，且其已引起每年大约50,000起死亡。美国女人在其寿命期间具有1/8(或约13％)的罹患乳癌机率。在过去十年间，报导最多的乳腺癌为小、原发性(独立地产生；并非由转移瘤所引起)肿瘤。大致70％至80％的新诊断患者展现早期疾病(1期或2期)，且大部分尚未涉及腋下(手臂下方)淋巴结。

大部分乳腺癌为癌(即，从上皮组织中生长出的恶性肿瘤)。小于1％的乳腺癌为肉瘤或由结缔组织、骨骼、肌肉或脂肪产生的肿瘤。此外，大部分乳腺癌(约75％)为导管癌，在与乳导管并排的组织中产生。更小量的癌症(约7％)在乳小叶内发现且被称作小叶癌。佩吉特病(Paget's disease)(乳晕及乳头癌)及炎性瘤占几乎全部其他形式的乳癌。

乳腺癌治疗为复杂的且取决于多种因素。两个重要因素为肿瘤类型和进展阶段。尤其，肿瘤特征帮助将个体分为两个组：(1)处于癌症复发低风险的个体及(2)处于癌症复发高风险的个体。特定预后因素将患者置放在这些组中的任一者中。这些因素包括肿瘤大小；女性性激素雌激素及孕酮(ER/PR)受体的存在；细胞生长周期阶段(肿瘤细胞是否有效地分裂或处于“S阶段”)；被称为“her-2-neu”蛋白」的蛋白的存在；肿瘤级别、肿瘤细胞分化或改变的指示物；及肿瘤倍性，肿瘤细胞内的基因物质的集合数目。

已通过肿块切除术及放射疗法来治疗无明显淋巴结涉及的原发性疾病。更明显的淋巴结涉及可保证乳房切除术及除去辅助淋巴结。在此阶段，癌转移及局部复发的机率已经较高。涉及放射疗法及化疗的转移性疾病的治疗只是缓解性的，其为免疫抑止、细胞毒性及白血球减少。包括例如，5-氟尿嘧啶、阿霉素、甲胺喋呤及紫杉醇的抗增殖剂已被批准用于抗乳腺癌。

胰腺癌

胰腺为位于接近胃及小肠的消化系统的器官。其具有两个主要功能：产生酶和激素。胰腺癌可能出现在外分泌(即，酶)胰腺(例如，典型胰腺腺癌)中或可能出现在内分泌(即，激素)胰腺中。

外分泌胰腺癌是极严重的健康问题。在美国，大约28,000名患者经诊断患有胰腺癌，同时每年约相同数目死于该疾病。胰腺癌同等地出现在男性及女性中。由于诊断困难、胰腺癌的固有侵袭性本质及稀少的可用全身性治疗选项，在诊断后，仅大约4％的经诊断患有胰腺癌的患者存活5年。胰腺癌已成为继乳腺癌、肺癌、结肠癌及前列腺癌之后的第5个癌症死亡的主要原因。

对于胰腺癌的治疗选择很大程度上取决于肿瘤阶段。可能的治疗包括外科手术、抗增殖剂、放射及生物疗法。外科手术已通常保留用于其癌症视为可切除的1期患者。有时，在手术之前或之后给予疗法(诸如放射及抗增殖剂)的组合可以增大患者的存活机率。可以在临床试验中使用抗增殖剂治疗被视为不可切除的胰腺癌(通常II期或晚期)。诸如例如，吉西他滨或5-氟尿嘧啶的抗增殖剂对胰腺癌具有一些效果且吉西他滨已用作姑息性药剂。本文中其他地方论述因这些抗增殖剂所致的毒性。放射疗法在与化疗组合使用时对胰腺癌具有一些效果。仅放射疗法可以抑制症状。这种治疗形式也已经用于II期或晚期胰腺癌。

膀胱癌

在1998年，在美国估计将诊断出超过54,000个新的膀胱癌病例且约15,000例死亡将归因于该疾病。膀胱癌已成为美国男性中第四种最常见癌症且在美国女性中为第九种最常见癌症。膀胱癌在男性中出现的频率为女性的三倍。主要地，年长男性疾病中，膀胱癌已成为显著疾病及死亡原因。膀胱癌风险随着年龄增长而大幅度增加(80％病例在大于50岁的人群中出现)，其中超过二分的一的全部膀胱癌死亡在70岁后出现。在超过65岁的白人男性中，膀胱癌的年疾病率已为每1,000个人中有大约2个病例；这与65岁以下的每1,000个人中有0.1个病例的比率形成对比。在个人寿命期间，罹患膀胱癌的机率已大于3％；然而，膀胱癌的死亡机率较小(＜1％)。膀胱癌罕见地出现在小于40岁的人群中。

近期研究表明某些基因及遗传性代谢能力可能在膀胱癌中起作用。移行细胞癌(TCC)已为膀胱癌的最常见形式。TCC通常以浅表(表面)、乳头状(疣状)、茎状基底上的外生性(向外成长)块的形式出现。但在一些情况下，TCC可附接于宽广基底上或其可呈现溃疡(在凹痕式病变内)。乳头状TCC通常从增殖区域开始，随后去分化或失去个别细胞特征。仅约10％至30％的乳头状TCC发展成浸润性癌症。相比之下，非乳头状形式的TCC更可能变成浸润性的。如所述，此类TCC可能呈现溃疡或平整的。由退行性上皮组成的平整、非乳头状TCC已经被分类为原位癌(CIS或TIS)。CIS的组织包含大的具有明显核仁(细胞内的圆形体；涉及蛋白质合成)且缺少正常极性的细胞。

膀胱癌的治疗取决于多种因素。这些因素中最重要的是呈现的肿瘤类型及其阶段。普遍治疗包括经尿道切除术(TUR)、电外科手术、激光手术、膀胱内治疗、抗增殖剂、外科手术疗法、膀胱切除术及放射疗法。用于治疗膀胱癌的抗增殖剂的实例包括例如5-氟尿嘧啶、顺铂及甲胺喋呤。因抗增殖剂、5-氟尿嘧啶、顺铂及甲胺喋呤所致的毒性在本文中其他地方论述。

脑癌

脑瘤经常为不可手术的且多于80％的患者在诊断后12个月内死亡。在美国，每年诊断出大约18,000例原发性颅内(脑)癌新病例。这相当于全部成年人癌症的2％。多于50％的这些癌症为高度神经胶质瘤(即，多形性胶质母细胞瘤及间变性星形细胞瘤肿瘤)。患有这些肿瘤的患者通常遭受严重残疾，诸如运动障碍、癫痫及视觉异常。

在脑组织中开始的肿瘤被称为原发性脑瘤。原发性脑瘤通过其开始的组织类型进行分类。最常见脑瘤为开始于胶质(支持性)组织中的神经胶质瘤。其他的脑瘤包括星形细胞瘤、脑干神经胶质瘤、室管膜瘤及少突神经胶质瘤。

已针对大部分类型及大部分位置建议外科手术除去脑瘤且应尽可能在保留神经功能的限制内完成。此规则的例外为深部肿瘤，诸如桥脑胶质瘤，其根据临床证据诊断且大约有50％的时间无需进行初次外科手术即可接受治疗。然而，在许多情况下，执行活组织检查诊断。立体定向的活组织检查可用于难以到达及切除的病变。患有脑瘤的罕见地可治愈或不可切除的患者应被视为用于评估辐射增敏剂、热疗或间质性近距离放射治疗结合外部辐射束放射疗法使用以改善肿瘤的局部控制的临床试验或用于评估新药物及生物反应调节剂的研究的候选者。

放射疗法在治疗大部分肿瘤类型中具有主要作用且可增大治愈率或延长无病生存期。放射疗法还可以适用于治疗最初仅通过外科手术治疗的患者的复发。可以在外科手术及放射疗法之前、期间或之后使用化疗。还通过化疗来治疗复发性肿瘤。用于治疗脑癌的抗增殖剂包括顺铂。与这种抗增殖剂相关联的毒性的实例在本文中其他地方论述。

再狭窄

再狭窄为引起血管壁增厚和丧失由血管供应至组织的血流的慢性血管损伤形式。此炎性疾病可以响应于包括减轻血管梗阻的任何手术的血管重建手术而出现。因此，再狭窄已成为限制这些手术的有效性的主要限定性因素。

本发明论述包括例如通过向血管给药治疗有效量的寡核苷酸治疗剂与抗炎剂的组合来预防或治疗再狭窄。适合的组合物包括可以以外科手术方式植入再狭窄部位或潜在再狭窄部位处或可以以聚合性糊剂或凝胶形式经由导管注射的聚合性载体。适合的组合物可以包括本文中所论述的褐藻糖胶低内毒素组合物。

关节炎

类风湿性关节炎(RA)为衰弱的慢性炎性疾病，其特征为关节组织的疼痛、肿胀、滑膜细胞增殖(血管翳形成)及干扰。在晚期，该疾病经常损害关键器官且可致命。该疾病涉及免疫系统(巨噬细胞/单核细胞、中性粒细胞、B细胞及T细胞)复杂的细胞介素相互作用及滑膜细胞功能失常及增殖的多个成员。已推荐用疾病修饰抗风湿药物(DMARD)，诸如甲胺喋呤用于早期侵袭性治疗，该药物在本文中其他地方论述。

结晶诱发的关节炎的特征为关节中结晶诱发的巨噬细胞及中性粒细胞活化且之后许多天伴随剧烈疼痛。疾病进展使得发作间隔变得更短且患者的发病率增加。此疾病总体上已通过非类固醇抗炎药(NSAID)，诸如双氯芬酸钠

对症治疗。此抗炎剂具有毒性，包括中枢神经系统毒性，诸如眩晕及头痛；皮肤病学毒性，诸如皮疹及瘙痒；胃肠毒性，诸如加重的溃疡性结肠炎及克罗恩病；泌尿生殖毒性，诸如急性肾衰竭及肾乳头坏死；血液毒性，诸如粒细胞缺乏、白血球减少及血小板减少；肝毒性，诸如升高的肝转胺酶及肝炎；及其他毒性，诸如哮喘及过敏反应。

本发明论述包括例如经由向患者给药治疗有效量的寡核苷酸治疗剂及可选的抗炎剂来预防或治疗类风湿性关节炎。适合的组合物包括聚合性载体，其可以以抗炎剂及微颗粒的受控释放载体形式以寡核苷酸治疗剂的受控释放载体形式(其反过来已经并入于聚合性载体中)注射至关节中。适合的组合物可以包括本文中所论述的褐藻糖胶低内毒素组合物。所述聚合性载体可以采取聚合物微球体、糊剂或凝胶的形式。

炎性病症

本文中的组合物等可选地抑制或治疗涉及嗜中性白细胞的炎性病症，例如包含向患者给药包括寡核苷酸治疗剂及抗炎剂的组合物。所述病症的实例包括结晶诱发的关节炎；骨关节炎；非类风湿性炎性关节炎；混合结缔组织疾病；干燥综合征；强直性脊柱炎；贝赫切特综合征；结节病；银屑病；湿疹；炎性肠病；慢性炎性肺病；神经障碍及多发性硬化。在以下段落中进一步论述这些疾病中的一些。

慢性炎性皮肤病(包括银屑病及湿疹)

牛皮癣为常见的慢性炎性皮肤病，其特征为发痒、灼热、蜇伤且易于出血的突起的、增厚的及鳞片状病变。当这些疾病在疾病的晚期具有细胞增殖及血管生成组分时，患者通常具有伴随的关节炎病症。症状可以通过诸如泼尼松的类固醇抗炎剂或诸如甲胺喋呤的抗增殖剂来治疗，这些药剂在本文的其他地方论述。本文中的组合物还可以用于抑制或以其他方式治疗和/或预防慢性炎性皮肤病，例如银屑病和/或湿疹。

以下提供可以通过本文中所论述的组合物治疗的炎性疾病的一些额外代表性实例，包括例如动静脉畸形(血管畸形)的动脉栓塞；月经过多；急性出血；中枢神经系统障碍及脾功能亢进；炎性皮肤病，诸如银屑病；湿疹疾病(异位性皮炎、接触性皮炎、湿疹)；免疫大疱疾病；及包括各种病症的炎性关节炎，所述病症包括类风湿性关节炎、混合结缔组织疾病、干燥综合征、强直性脊柱炎、贝赫切特综合征、结节病、结晶诱发的关节炎及骨关节炎(以上所有特征以发炎的疼痛关节为重要症状)。

缺血

缺血或局部缺血涉及血液供应限制，可以包括恰当组织功能所需的氧、葡萄糖及其他组分供应不足，使得组织损坏和/或功能不全。缺血可能导致严重问题。例如，组织可能变得缺氧、坏死且可形成结块。已作出各种尝试以预防和/或治疗缺血。例如，复原血流或再灌注。然而，复原血液涉及再引入氧，其可能导致因产生自由基所致的额外损坏，进而导致再灌注损伤。再灌注损伤可能导致严重问题。本文的组合物可以用于抑制或以其他方式治疗和/或预防缺血和/或再灌注损伤。

内毒素血症

内毒素血症是在血液中存在内毒素。内毒素血症可能导致严重问题。例如，内毒素血症可能引起败血症休克。本文中的组合物可以用于抑制或以其他方式治疗和/或预防内毒素血症。

瘢痕疙瘩瘢痕

瘢痕疙瘩特质致使伤口通过突起的瘢痕愈合。瘢痕疙瘩特质的突起瘢痕涉及异常纤维性瘢痕。瘢痕疙瘩特质导致严重问题，例如疼痛及外形损伤。本文中的组合物可用于抑制或以其他方式治疗和/或预防瘢痕疙瘩特质及其引起的突起的瘢痕。

瘢痕疙瘩(瘢痕疙瘩瘢痕)是生长扩增超过正常皮肤的瘢痕类型。瘢痕疙瘩涉及异常胶原生长，包括I型及III型胶原异常生长。瘢痕疙瘩导致严重问题，例如疼痛、瘙痒，并且若经感染，则可能溃烂。已作出尝试以治疗或预防瘢痕疙瘩，包括使用外科手术、敷料、类固醇注射及激光疗法。本文中的组合物可以用于抑制或以其他方式治疗和/或预防瘢痕疙瘩。

皮炎

皮炎包括皮肤炎症，所属皮肤炎症包括特应性皮炎及接触性皮炎。例如，接触性皮炎涉及在皮肤与外来物质接触的后皮肤的局部皮疹和/或刺激。例如，特应性皮炎为长期复发性、瘙痒皮肤病。特应皮炎有时被称作贝尼埃氏痒疹(prurigo Besnier)、神经性皮炎、内源性湿疹、曲湿疹、婴儿湿疹、儿童湿疹及痒疹病(prurigo diathsique)。湿疹为呈皮炎形式的疾病。其他类型的皮炎包括海绵性皮炎、脂溢性皮炎(皮屑)、出汗障碍性皮炎(汗疱疹)、荨麻疹、泡状皮炎(大疱性皮炎)及流行性风疹。皮炎可能导致严重问题。例如，干燥皮肤、皮肤皮疹、皮肤水肿、皮肤发红、皮肤瘙痒、皮肤结痂、开裂、起泡、渗泌及出血。已作出尝试以治疗或预防皮炎，包括使用皮质类固醇及煤焦油。本文中的组合物可以用于抑制或以其他方式治疗和/或预防皮炎，包括特应性皮炎、湿疹、接触性皮炎、海绵性皮炎、脂溢性皮炎、出汗障碍性皮炎、荨麻疹、泡状皮炎及流行性荨麻疹。

红斑痤疮

红斑痤疮为典型地特征化为面部红斑的慢性疾病或病症。红斑痤疮可能导致严重问题。例如，红斑痤疮通常从额头、鼻子或脸颊发红开始，还可能导致脖子、耳朵、头皮和胸部发红。红斑痤疮可能导致包括毛细管扩张、丘疹、脓包、疼痛感觉的额外症状，且在晚期病例中，可能产生肥大性酒渣鼻(红色分叶鼻)。红斑痤疮亚型包括红斑狼疮样红斑痤疮、脓包性丘疹样红斑痤疮、结块性红斑痤疮及眼部红斑痤疮。已作出尝试以治疗或预防红斑痤疮，包括使用非类固醇抗炎药及抗生素。本文中的组合物可以用于抑制或以其他方式治疗和/或预防红斑痤疮，包括其红斑狼疮、脓包性丘疹、红斑痤疮及眼部亚型。

医疗器械、医疗材料、组合及药物产品

本文的论述还提供医疗器械、医疗材料、组合及药物产品，其包括在医疗器械、医疗材料、组合产品或药学上可接受的容器中的如本文所论述的组合物。该产品还可包括与容器相关联的注意事项，典型地以由监察医疗器械、医疗材料、组合及药剂或生物药剂的制造、使用或销售的管理机构规定的形式，从而该注意事项反映该组合物经该机构批准，诸如褐藻糖胶低内毒素组合物已经批准作为例如用于人类或兽医给药以治疗增殖性疾病或炎性疾病(例如炎性关节炎、再狭窄、外科手术粘连、银屑病及腹膜炎)的抗增殖剂或抗炎剂的注意事项。还可以包括使用本文中的褐藻糖胶低内毒素组合物的说明书。所述说明书可以包括关于患者的给药及投药模式的信息。产品还可以包括给药或施加医疗材料器械、系统等，例如注射器和/或喷雾施料器。

本申请进一步针对制造本文中所论述的褐藻糖胶低内毒素组合物、系统等的各种组件，包括制造组合物本身的方法及其使用方法，包括例如，治疗本文中的病症、疾病等。

本申请进一步包括用于治疗纤维性粘连、关节炎、银屑病或视需要的其他疾病的医疗器械、医疗材料、药物组合产品及药物产品，其包括本文中呈现的褐藻糖胶低内毒素组合物。所述材料等可以用于治疗纤维性粘连，诸如外科手术粘连、关节炎、银屑病或视需要的其他疾病的药物品中。还提供制造且使用能够减少与患者，包括人类患者体内的纤维性粘连、关节炎及银屑病中的至少一种相关联的症状的所述药物的方法，所述方法包括将药物学上有效量的褐藻糖胶，诸如如本文所论述的岩藻多糖与药物学上可接受的赋形剂或缓冲剂组合。

以下实施例提供了本文中的某些实施方式的示例性论述，但本公开和权利要求不限于此。

实施例1：化学结构修饰

渗出物-提取物获自极北海带(Laminaria Hyperborea)。渗出物-提取物通过切向流过滤(TFF)通过100kDa过滤器来过滤并除去小分子。将所得截留物的样品冻干以获得以其他方式未修饰的样品A。通过添加10M NaOH溶液且在室温下静置16小时使所得截留物达至0.25M NaOH。然后将所得样品通过50kDa过滤器离心过滤且收集所得截留物并冻干以获得经碱处理的样品B。通过质子核磁共振光谱法(¹H-NMR)分析未修饰的样品A及经碱处理的样品B两者且图3A中示出所得¹H-NMR光谱。

图3A证明了已完成的褐藻糖胶的化学结构修饰：存在于未修饰的样品A中的具有约2.0ppm化学位移的较宽峰并不存在于经碱处理的样品B中。

通过2D¹H-¹³C异核多量子相干(HMQC)进一步分析未修饰的样品A及经碱处理/修饰的样品B。在70℃下伴随溶剂信号抑制在配备有5-mm冷探针的600MHz光谱仪上获得图3B中示出的HMQC谱。在碳尺寸10-30ppm范围内以256-512的8次增量的扫描每次获得HMQC谱的大量扫描；这样的扫描经组合以产生图3B中的光谱。

未修饰的样品A的HMQC谱具有对应于O-乙酰基的交叉峰，由图3B中的带圆圈信号指示。此交叉峰不存在于经碱处理的样品B的光谱中。这证明了从褐藻糖胶中除去乙酰基，且因此通过NaOH处理来对经碱处理的样品B中的褐藻糖胶进行化学结构修饰。

实施例2：物理诱导絮凝

在蒸馏水中以约10％w/v制备包含高水平内毒素，例如每毫克岩藻多糖至少1000个内毒素单位(EU/mg)的原料岩藻多糖组合物，以得到起始溶液。将氯化钠添加到起始溶液中，以产生最终氯化钠浓度为约0.1M的混合物。将混合物加热至沸腾约10-15分钟。在该温度下处理混合物会引起溶解的杂质和颗粒状非岩藻多糖物质的絮凝。将该混合物在2300重力下离心40分钟，以将含有岩藻多糖的溶液与絮凝的非岩藻多糖组分分离。将含有岩藻多糖的溶液冻干，以获得岩藻多糖低内毒素组合物，其每毫克岩藻多糖的内毒素单位(EU/mg)水平显著降低，例如约100EU/mg。EU水平可以例如通过浊度鲎变形细胞溶解物(LAL)测定法来测量。

实施例3：修改的切向流过滤

首先对粗制岩藻多糖组合物进行实施例2中讨论的物理诱导絮凝方法，以提供通过浊度鲎变形细胞溶解物(LAL)测定法测定的含有109EU/mg的起始岩藻多糖组合物。然后将该109EU/mg的组合物以50mg/mL的浓度溶解在去离子水中，并通过0.22μm的过滤器过滤，以获得起始溶液。将起始溶液用0.01M乙二胺四乙酸(EDTA)和0.5％w/v脱氧胆酸钠溶液渗滤2透析体积，以消化和去除生物污染物和生物裂解物组分，例如内毒素。用0.01M EDTA对所得的第一截留岩藻多糖组合物渗滤10透析体积，以去除残留的脱氧胆酸钠，然后用5透析体积的蒸馏水渗滤至最终pH值为7。用浊度LAL法和冻干法测定岩藻多糖含量，以对所得第二截留岩藻多糖组合物分析内毒素。发现溶液形式的岩藻多糖低内毒素组合物的内毒素水平为0.158EU/mg。

实施例4.切向流过滤。

将溶解在去离子水中的起始岩藻多糖组合物通过具有逐渐减小的孔径的三个不同的过滤器进行微过滤，最后一个过滤器为2/1.2μm过滤器。通过浊度鲎变形细胞溶解物(LAL)测定法来分析所得岩藻多糖溶液中的内毒素，并用水分分析仪分析水分浓度以确定岩藻多糖含量。发现岩藻多糖溶液中每mg岩藻多糖的内毒素单位(EU/mg)的内毒素水平为1.7EU/mg。

然后在批量模式操作下，在单个100kDa切向流过滤(TFF)盒上用5mM NaCl对岩藻多糖溶液进行渗滤，如下：首先通过减小体积来浓缩岩藻多糖溶液。然后将等体积(1透析体积)的5mM NaCl添加到岩藻多糖溶液中以开始渗滤。重复浓缩，然后再进行渗滤，直到向岩藻多糖溶液中引入了6透析体积的5mM NaCl。将渗滤的溶液浓缩至最终体积。通过浊度LAL测定法分析所得的截留岩藻多糖组合物的内毒素；并用水分分析仪分析水分浓度以确定岩藻多糖的含量。发现内毒素水平降低到1.2EU/mg。

实施例5.切向流过滤。

将溶解在去离子水中的起始岩藻多糖组合物通过具有逐渐减小的孔径的三个不同的过滤器进行微过滤，最后一个过滤器为2/1.2μm过滤器。通过浊度鲎变形细胞溶解物(LAL)测定法来分析所得岩藻多糖溶液中的内毒素，并用水分分析仪分析水分浓度以确定岩藻多糖含量。发现岩藻多糖溶液中每mg岩藻多糖的内毒素单位(EU/mg)的内毒素水平为13,000EU/mg。

然后在批量模式操作下，在单个100kDa切向流过滤(TFF)盒上用5mM NaCl对岩藻多糖溶液进行渗滤，如下：首先通过减小体积来浓缩岩藻多糖溶液。然后将等体积(1透析体积)的5mM NaCl添加到岩藻多糖溶液中以开始渗滤。重复浓缩，然后再进行渗滤，直到向岩藻多糖溶液中引入了8透析体积的5mM NaCl。将渗滤的溶液浓缩至最终体积。通过浊度LAL测定法分析所得的截留岩藻多糖组合物的内毒素；并用水分分析仪分析水分浓度以确定岩藻多糖的含量。发现内毒素水平降低到6,100EU/mg。

实施例6：修改的切向流过滤

首先对粗制岩藻多糖组合物进行实施例2中讨论的物理诱导絮凝方法，以提供通过浊度鲎变形细胞溶解物(LAL)测定法测定的含有109EU/mg的起始岩藻多糖组合物。然后将该109EU/mg的组合物以50mg/mL的浓度溶解在去离子水中，并通过0.22μm的过滤器过滤，以获得起始溶液。将起始溶液用0.1M NaOH、0.01M乙二胺四乙酸(EDTA)和0.01M十二烷基硫酸钠(SDS)的溶液渗滤7透析体积，以消化和去除生物污染物和生物裂解物组分，例如内毒素。通过用3M氯化钾沉淀，然后离心，从辅助切向流过滤系统之外的所得的第一截留岩藻多糖组合物中去除SDS，以去除沉淀的十二烷基磺酸钾。再次用2透析体积的0.01M EDTA渗滤所得的上清液岩藻多糖组合物，以去除残留的SDS。用浊度LAL法和冻干法测定岩藻多糖含量，以对所得第二截留岩藻多糖组合物分析内毒素。发现岩藻多糖低内毒素组合物的内毒素水平小于0.0006EU/mg。

实施例7：固相提取

在两个平行实验中，将两种原料岩藻多糖组合物(通过凝胶LAL测定法测量，分别包含每毫克约4,000和8,000内毒素单位(EU/mg))添加到70％v/v乙醇/水中的0.5M NaOH的40℃混合物中。将所得反应混合物搅拌并在40℃下保持2小时。然后将反应混合物离心，以从包含提取杂质的70％v/v乙醇/水上清液中的0.5M NaOH中分离出固体岩藻多糖低内毒素组合物。

完成上述过程后，通过凝胶LAL测定法测量所得岩藻多糖低内毒素组合物的内毒素水平，发现分别为4EU/mg和8EU/mg。

实施例8：化学诱导沉淀

以15％w/v在蒸馏水中制备包含33,006EU/mg的原料岩藻多糖组合物，以获得起始溶液。通过观察发现起始溶液含有悬浮颗粒。将氯化钙以0.5M的水平添加到起始溶液中以产生反应混合物。将10M NaOH逐滴添加至反应混合物中以使pH达到7至8。这样做是为了避免岩藻多糖在反应混合物中降解。再次向反应混合物中添加最少量的10M NaOH，以避免随后添加磷酸使反应混合物酸化。通过添加磷酸使反应混合物产生0.5M磷酸盐。这通过氯化钙与磷酸反应形成的磷酸钙的作用开始使悬浮颗粒和沉淀杂质絮凝。使反应混合物在室温下静置10分钟以使絮凝继续。将反应混合物在17,568重力下离心17分钟，以将上清液溶液与絮凝的沉淀物分离的所需岩藻多糖低内毒素组合物。将上清液溶液冻干以获得岩藻多糖含量，并且通过浊度LAL测定法发现，岩藻多糖低内毒素组合物包含每毫克岩藻多糖27.7内毒素单位(EU/mg)。

实施例9：化学诱导沉淀

以15％w/v在蒸馏水中制备包含33,006EU/mg的原料岩藻多糖组合物，以获得起始溶液。通过观察发现起始溶液含有悬浮颗粒。将10M NaOH逐滴添加至起始溶液中以使pH达到7至8。这样做是为了避免岩藻多糖在随后添加硫酸铝致使起始溶液呈酸性的情况下在起始溶液中降解。将起始溶液加入0.1M硫酸铝以产生反应混合物。这通过形成的氢氧化铝开始使悬浮颗粒和沉淀杂质絮凝。使反应混合物在室温下静置10分钟以使絮凝继续。将反应混合物在17,568重力下离心17分钟，以将上清液溶液与絮凝的沉淀物分离的所需岩藻多糖低内毒素组合物。将上清液溶液冻干以获得岩藻多糖含量，并且通过浊度LAL测定法发现，上清液溶液中的岩藻多糖低内毒素组合物包含每毫克岩藻多糖36.3内毒素单位(EU/mg)。

实施例10：裂解和絮凝

提供了包含5至10％w/v的起始岩藻多糖组合物的起始水溶液，其内毒素水平为每毫克岩藻多糖25.9内毒素单位(EU/mg)。添加固体四钠EDTA作为螯合剂至浓度为0.011M。添加1M十二烷基硫酸钠(“SDS”)溶液作为细胞干扰剂至浓度为0.011M。添加10M NaOH溶液至浓度为0.28M，以使起始溶液呈碱性。将所得反应混合物在室温下搅拌约30分钟，得到浑浊的白色混合物。

约30分钟后，添加45％w/v KOH溶液至0.07M的浓度。钾的添加引起SDS和不希望有的包括内毒素的杂质与SDS一起沉淀。添加48％w/v硫酸铝溶液至浓度为0.11M。在反应混合物中氢氧化铝的形成使不希望有的包括内毒素的杂质絮凝。添加亚硫酸钠固体至浓度为0.02M，以淬灭反应混合物中的潜在氧化剂。

将所得反应混合物在冰箱中储存约16小时，然后在17,568重力下离心17分钟，以将上清液溶液与絮凝杂质分离的所需岩藻多糖低内毒素组合物。将上清液溶液冻干以获得岩藻多糖含量，并且通过浊度LAL测定法发现上清液溶液中的岩藻多糖低内毒素组合物包含每毫克岩藻多糖0.02内毒素单位(EU/mg)。

实施例11：裂解和絮凝

提供了包含5至10％w/v的起始岩藻多糖组合物的起始水溶液，其内毒素水平为每毫克岩藻多糖25.9内毒素单位(EU/mg)。添加固体四钠EDTA作为螯合剂至浓度为0.033M。添加1M十二烷基硫酸钠(SDS)溶液作为细胞干扰剂至浓度为0.033M。添加10M NaOH溶液至浓度为0.12M，以使起始溶液呈碱性。将所得反应混合物在室温下搅拌约30分钟，得到浑浊的白色混合物。

约30分钟后，添加45％w/v KOH溶液至0.07M的浓度。钾的添加引起SDS和其他包括内毒素的杂质与SDS一起沉淀。添加48％w/v硫酸铝溶液至浓度为0.11M。在反应混合物中氢氧化铝的形成使不希望有的包括内毒素的杂质絮凝。添加亚硫酸钠固体至浓度为0.02M，以淬灭反应混合物中的潜在氧化剂。

将所得反应混合物在室温下储存约16小时，然后在17,568重力下离心17分钟，以将上清液溶液与絮凝杂质分离的所需岩藻多糖低内毒素组合物。将上清液溶液冻干以获得白色固体，并且通过浊度LAL测定法发现上清液溶液中的岩藻多糖含量和岩藻多糖低内毒素组合物包含每毫克岩藻多糖少于0.0005内毒素单位(EU/mg)。

实施例12：裂解和絮凝

将内毒素水平为约33,006EU/mg的原料岩藻多糖以约10％w/v溶解在沸腾的0.1M磷酸二钠中以产生反应混合物。在沸腾温度下40分钟后，将反应混合物在2300重力下离心5分钟以去除一部分包括内毒素的絮凝杂质。将所得的上清液溶液与固体磷酸三钠一起加入50mM磷酸三钠中，并与10M NaOH溶液一起加入0.2M NaOH中以使上清液溶液呈碱性。通过添加固体偏亚硫酸氢钠以淬灭第二反应混合物中的任何氧化剂，使所得第二反应混合物达到20mM焦亚硫酸钠。通过添加95％的EtOH作为抑菌剂使第二反应混合物达到10％的EtOH。通过添加约50％w/v的苯扎氯铵的溶液使第二反应混合物达到约0.1％w/v的苯扎氯铵。添加苯扎氯铵作为细胞干扰剂。

将第二反应混合物在室温下搅拌1小时，然后通过添加6M HCl中和。通过添加固体氯化锌使第二反应混合物达到0.15M氯化锌。继而在包括内毒素的第二反应混合物中形成磷酸锌絮凝的不希望有的杂质。将絮凝剂和溶液的第二反应混合物再搅拌15分钟。将第二反应混合物在2300重力下离心5分钟，以将第二上清液溶液与絮凝杂质分离中的所需岩藻多糖。通过添加10M NaOH中和第二上清液溶液中的所得的所需岩藻多糖低内毒素组合物。将第二上清液溶液冻干以确定岩藻多糖含量，并且发现第二上清液溶液中岩藻多糖低内毒素组合物的内毒素水平为2EU/mg。将所得的第二上清液溶液稀释并进行TFF以去除苯扎氯铵。

实施例13：阴离子吸附

将岩藻多糖组合物在100kDa TFF盒上脱盐以获得起始溶液形式的脱盐岩藻多糖组合物，通过浊度LAL法测量，其内毒素水平为每毫克岩藻多糖960内毒素单位(EU/mg)。将一部分包括约500mg脱盐岩藻多糖组合物的起始溶液与约2.5g Amberlyst A26 OH树脂混合约16小时。然后通过倾析将混合物的液体部分与树脂分离。将液体冻干以获得岩藻多糖低内毒素组合物，通过浊度LAL测定法发现，该岩藻多糖低内毒素组合物包含每毫克岩藻多糖14.9内毒素单位(EU/mg)。

实施例14：阴离子吸附

将岩藻多糖组合物在100kDa TFF盒上脱盐以获得起始溶液形式的脱盐岩藻多糖组合物，通过浊度LAL法测量，其内毒素水平为每毫克岩藻多糖960内毒素单位(EU/mg)。将一部分包括约500mg脱盐岩藻多糖组合物的起始溶液与约5.0g Amberlyst A26 OH树脂混合约16小时。然后通过倾析将混合物的液体部分与树脂分离。将液体冻干以获得岩藻多糖低内毒素组合物，通过浊度LAL测定法发现，该岩藻多糖低内毒素组合物包含每毫克岩藻多糖0.06内毒素单位(EU/mg)。

实施例15：阴离子吸附

将岩藻多糖组合物在100kDa TFF盒上脱盐以获得起始溶液形式的脱盐岩藻多糖组合物，通过浊度LAL法测量，其内毒素水平为每毫克岩藻多糖960内毒素单位(EU/mg)。将一部分包括约500mg脱盐岩藻多糖组合物的起始溶液与

X 100混合至最终浓度为约0.5mM。将所得溶液与约2.5g Amberlyst A26 OH树脂混合约16小时。然后通过倾析将混合物的液体部分与树脂分离。将液体冻干以获得岩藻多糖低内毒素组合物，通过浊度LAL测定法发现，该岩藻多糖低内毒素组合物包含每毫克岩藻多糖少于0.003内毒素单位(EU/mg)。

实施例16：阴离子吸附

将岩藻多糖组合物在100kDa TFF盒上脱盐以获得起始溶液形式的脱盐岩藻多糖组合物，通过浊度LAL法测量，其内毒素水平为每毫克岩藻多糖960内毒素单位(EU/mg)。将一部分包括约500mg脱盐岩藻多糖组合物的起始溶液与正丁醇混合至最终浓度为约5％v/v。将所得溶液与约2.5g Amberlyst A26 OH树脂混合约16小时。然后通过倾析将混合物的液体部分与树脂分离。将液体冻干以获得岩藻多糖低内毒素组合物，通过浊度LAL测定法发现，该岩藻多糖低内毒素组合物包含每毫克岩藻多糖6.7内毒素单位(EU/mg)。

实施例17：阴离子吸附

将岩藻多糖组合物在100kDa TFF盒上脱盐以获得起始溶液形式的脱盐岩藻多糖组合物，通过浊度LAL法测量，其内毒素水平为每毫克岩藻多糖960内毒素单位(EU/mg)。将一部分包括约500mg脱盐岩藻多糖组合物的起始溶液与乙醇混合至最终浓度为约10％v/v。将所得溶液与约2.5g Amberlyst A26 OH树脂混合约16小时。然后通过倾析将混合物的液体部分与树脂分离。将液体冻干以获得岩藻多糖低内毒素组合物，通过浊度LAL测定法发现，该岩藻多糖低内毒素组合物包含每毫克岩藻多糖6.0内毒素单位(EU/mg)。

实施例18：液液提取

将包含约10,000EU/mg的起始褐藻糖胶组合物以10mg/mL的浓度溶于蒸馏水中，以产生起始水溶液。将20％v/v庚烷添加到包含起始岩藻多糖组合物的起始水溶液中，然后将有机-水混合物在高剪切下混合30分钟。终止混合，并将有机-水混合物置于分液漏斗中以将有机相与水相分离。包含所需褐藻糖胶组分的较稠的水相沉降到分液漏斗的底部，而包含不希望有的杂质的较不稠密的有机相则存在于分液漏斗的上端。将有机-水混合物在分液漏斗中放置10分钟。然后倾析水相并收集为溶液形式的所需褐藻糖胶低内毒素组合物。通过浊度LAL法，可以发现溶液形式的褐藻糖胶低内毒素组合物所含的内毒素比起始褐藻糖胶组合物少约50％至约99.999％。

实施例19：液液提取

将包含约10,000EU/mg的起始褐藻糖胶组合物以10mg/mL的浓度溶于蒸馏水中，以产生起始水溶液。将20％v/v正丁醇添加到包含起始岩藻多糖组合物的起始水溶液中，然后将有机-水混合物在高剪切下混合30分钟。终止混合，并将有机-水混合物置于分液漏斗中以将有机相与水相分离。包含所需褐藻糖胶组分的较稠的水相沉降到分液漏斗的底部，而包含不希望有的杂质的较不稠密的有机相则存在于分液漏斗的上端。将有机-水混合物在分液漏斗中放置10分钟。然后倾析水相并收集为溶液形式的所需褐藻糖胶低内毒素组合物。通过浊度LAL法，可以发现溶液形式的褐藻糖胶低内毒素组合物所含的内毒素比起始褐藻糖胶组合物少约50％至约99.999％。

实施例20：液液提取

将包含约10,000EU/mg的起始褐藻糖胶组合物以10mg/mL的浓度溶于蒸馏水中，以产生起始水溶液。将20％v/v乙酸乙酯添加到包含起始岩藻多糖组合物的起始水溶液中，然后将有机-水混合物在高剪切下混合30分钟。终止混合，并将有机-水混合物置于分液漏斗中以将有机相与水相分离。包含所需褐藻糖胶组分的较稠的水相沉降到分液漏斗的底部，而包含不希望有的杂质的较不稠密的有机相则存在于分液漏斗的上端。将有机-水混合物在分液漏斗中放置10分钟。然后倾析水相并收集为溶液形式的所需褐藻糖胶低内毒素组合物。通过浊度LAL法，可以发现溶液形式的褐藻糖胶低内毒素组合物所含的内毒素比起始褐藻糖胶组合物少约50％至约99.999％。

实施例21：在以下一些实施例中讨论的用于制备某些褐藻糖胶的粗制褐藻糖胶的内毒素测量

粗制褐藻糖胶用来制备以下实施例中讨论的某些褐藻糖胶。特别地，通过鲎变形细胞溶解物(LAL)测定法针对内毒素分析了用于制备褐藻糖胶2、褐藻糖胶4和褐藻糖胶7的粗制褐藻糖胶。“粗制褐藻糖胶1”是指用于制备褐藻糖胶2并且还用于制备褐藻糖胶4的粗制褐藻糖胶。“粗制褐藻糖胶2”和“粗制褐藻糖胶3”是指被混合在一起然后用于制备褐藻糖胶7的两种粗制褐藻糖胶。此类分析的结果显示在表1中。下表中的结果包含用于某些内毒素特征的缩写。每毫克内毒素单位用EU/mg表示。

	内毒素分析结果(EU/mg)
		粗制褐藻糖胶1	6,627
粗制褐藻糖胶2	31,712
		粗制褐藻糖胶3	33,006

表1

实施例22：褐藻糖胶低内毒素组合物的制备

本文讨论的方法可以以任何方式使用、组合、修改和置换以获得褐藻糖胶低内毒素组合物。由高内毒素(例如，原料)褐藻糖胶组合物制备十种褐藻糖胶低内毒素组合物，以评估褐藻糖胶低内毒素组合物在医疗和外科手术应用中的功效。更特别地，使用本文中的一种或多种方法对内毒素水平范围为10,000EU/mg至60,000EU/mg的高内毒素褐藻糖胶组合物进行修饰和/或去热原，以获得十种褐藻糖胶低内毒素组合物。在下文中将这十种褐藻糖胶低内毒素组合物称为褐藻糖胶1至褐藻糖胶10。褐藻糖胶1至褐藻糖胶6、褐藻糖胶8和褐藻糖胶10为白色固体。褐藻糖胶9是浅棕色固体。将褐藻糖胶7溶解在溶液中以获得澄清无色溶液。褐藻糖胶1、褐藻糖胶3和褐藻糖胶7的制备涉及使用实施例8和实施例10中讨论的方法加上针对低离子强度溶液的进一步渗滤的组合。褐藻糖胶2和褐藻糖胶4的制备涉及使用实施例7、胶束相分离和实施例15中讨论的方法的组合。褐藻糖胶9的制备涉及使用实施例7中讨论的方法、胶束相分离和针对去离子水的切向流过滤的组合。褐藻糖胶6、褐藻糖胶8和褐藻糖胶10的制备涉及使用实施例9和实施例10中讨论的方法加上针对低离子强度溶液的进一步渗滤的组合。内毒素水平、分子量、硫酸酯水平和总碳水化合物水平确定如下。

实施例23：所需褐藻糖胶低内毒素组合物的内毒素和分子量的测量

对于褐藻糖胶1至8和褐藻糖胶10，根据制造商的说明使用Associates of CapeCod

-T裂解物进行浊度内毒素测试。浊度测量是使用Biotek

HTX温育板读数器进行的。根据制造商CSE(对照标准内毒素)校准曲线对结果进行量化。

对于褐藻糖胶9，使用Charles River

盒使用Charles River

-PTS分光光度计进行发色内毒素测试。根据制造商CSE(对照标准内毒素)校准曲线对结果进行量化。

将褐藻糖胶1至褐藻糖胶10的内毒素测试的结果显示在下表2中。

	内毒素(EU/mg)
		褐藻糖胶1	0.180
褐藻糖胶2	0.044
		褐藻糖胶3	0.090
褐藻糖胶4	0.020
		褐藻糖胶5	0.007
褐藻糖胶6	0.007
		褐藻糖胶7	0.002
褐藻糖胶8	0.030
		褐藻糖胶9	0.180
褐藻糖胶10	0.001

表2：10种不同的褐藻糖胶的内毒素结果

表2证明已经产生了褐藻糖胶低内毒素组合物，其内毒素水平范围为0.001至0.18EU/mg。

实施例24：褐藻糖胶低内毒素组合物的分子量分布、硫酸酯、总碳水化合物和单糖组成分析

凝胶渗透色谱法(GPC)用于测量褐藻糖胶低内毒素组合物褐藻糖胶1、褐藻糖胶2、褐藻糖胶4、褐藻糖胶5、褐藻糖胶6、褐藻糖胶8和褐藻糖胶10的分子量分布。存在可用于凝胶渗透色谱法的许多不同参数、色谱柱和标准物，从而存在许多可用于分子量分析的各种仪器装置。对于本文的分子量测量，使用以下参数进行GPC：流动相是以0.6mL/min运行的0.1M硝酸钠。柱室和检测器处于30℃。使用Waters 2414折射率检测器进行检测。

合适的GPC柱包括与水性溶剂兼容的GPC柱，例如装填有以下中的至少一种的色谱柱：磺化苯乙烯-二乙烯基苯、NH官能化的丙烯酸酯共聚物网络、修饰的二氧化硅及羟基化聚甲基丙烯酸酯基凝胶。对于本文的分析，串联使用三个柱，包括具有6mm内径(ID)的一个40mm长的保护柱，装填有6μm粒度的羟基化聚甲基丙烯酸酯基凝胶；接着是具有7.8mm ID的第一300mm分析型GPC柱，装填有12μm粒度的羟基化聚甲基丙烯酸酯基凝胶，其具有约7,000kDa的排阻极限以及约50kDa至约5,000kDa的有效分子量范围；接着是具有7.8mm ID的第二300mm分析型GPC柱，装填有10μm粒度的羟基化聚甲基丙烯酸酯基凝胶，其具有约7,000kDa的排阻极限以及约1kDa至约6,000kDa的有效分子量范围。色谱柱装置的总有效分子量范围为约1kDa至约6,000kDa。此色谱柱装置的实例可为串联连接的

保护柱-

2000-

线性柱。

相对于包括来自American Polymer Standards Corporation的可追踪标准物的标准曲线来量化样品运行：DXT3755K(峰分子量＝2164kDa)、DXT820K(峰分子量＝745kDa)、DXT760K(峰分子量＝621kDa)、DXT670K(峰分子量＝401kDa)、DXT530K(峰分子量＝490kDa)、DXT500K(峰分子量＝390kDa)、DXT270K(峰分子量＝196kDa)、DXT225K(峰分子量＝213kDa)、DXT150K(峰分子量＝124kDa)、DXT55K(峰分子量＝50kDa)、DXT50K(峰分子量＝44kDa)和DXT5K(峰分子量＝4kDa)，这些标准物的峰分子量为约4kDa至约2,200kDa。所使用的标准曲线可例如包括Dextran 3755kDa，Dextran 50kDa及Dextran 55kDa中的至少一种及在3至6个之间的本文所论述的附加可追踪标准物，校正点为所使用校正物的峰分子量。示例性校正曲线可由以下组成：DXT3755K、DXT820K、DXT530K、DXT500K、DXT225K及DXT55K。本文中所使用的色谱柱具有涵盖且延伸超出用于褐藻糖胶的量化的标准物的峰分子量范围的总有效分子量范围。

下文表3中的结果包含用于分子量分布的某些特征的缩写。凝胶渗透色谱法由GPC表示，峰分子量由PMW表示，重均分子量由WAMW表示，数均分子量由NAMW表示，百分比分布由％分布表示，并且分子量由MW表示。

表3：七种褐藻糖胶低内毒素组合物的分子量和内毒素特征

表2所示的褐藻糖胶低内毒素组合物还可以通过其分子量分布来表征，如表3所示。已经制备了这样的褐藻糖胶低内毒素组合物：其峰分子量为约100kDa至约850kDa，重均分子量为约130kDa至2000kDa，数均分子量为约80kDa至750kDa，并且至少50％的分布大于100kDa。

将褐藻糖胶低内毒素组合物褐藻糖胶1、褐藻糖胶2、褐藻糖胶4、褐藻糖胶5、褐藻糖胶6、褐藻糖胶7、褐藻糖胶8和褐藻糖胶10溶于去离子水中，在酸性条件下水解，并通过电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)对％w/w总硫含量进行分析(由不列颠哥伦比亚省本那比市的ALS环境实验室执行)。通过将硫含量乘以硫酸酯与硫的摩尔比而将硫含量转化为硫酸酯含量，以获得褐藻糖胶组合物的％w/w硫酸酯含量。褐藻糖胶低内毒素组合物的硫酸酯含量示于下表4中。

还对褐藻糖胶低内毒素组合物褐藻糖胶1、褐藻糖胶2、褐藻糖胶4、褐藻糖胶5、褐藻糖胶6、褐藻糖胶7、褐藻糖胶8和褐藻糖胶10的总碳水化合物和单糖组成进行了分析。褐藻糖胶低内毒素组合物以40mg/mL溶解于72％w/w硫酸中且在45℃下在水浴中温育30分钟。然后在高压管中将酸水解产物稀释至4％w/w硫酸且在120℃下温育60分钟。用蒸馏水将所得第二酸水解产物稀释至1/333浓度且在具有脉冲安培滴定法检测的高性能阴离子交换柱色谱法装置上运行。通过使用等度泵以1.0mL/分钟在

PA20分析柱上运行10mMNaOH洗脱液来实现分析物的分离。

发现褐藻糖胶低内毒素组合物包含岩藻糖和半乳糖。总碳水化合物含量由所测分析物的总量确定。通过在岩藻糖的标准曲线上内插来确定褐藻糖胶低内毒素组合物的岩藻糖含量。通过标准添加的方法确定褐藻糖胶低内毒素组合物的半乳糖含量。褐藻糖胶低内毒素组合物的总碳水化合物含量以及岩藻糖和半乳糖含量占总碳水化合物含量的百分比示于下表4中。下表中的碳水化合物缩写为“carb(碳水化合物)”。

表4–褐藻糖胶低内毒素组合物的硫酸酯含量、碳水化合物含量和单糖组成

实施例25：硬膜外纤维性粘连治疗

在乳酸钠林格注射液USP(LRS)中，以表2至4所示的褐藻糖胶低内毒素组合物褐藻糖胶1、褐藻糖胶2、褐藻糖胶4和褐藻糖胶5制备浓度为100mg/mL的岩藻多糖溶液。在乳酸钠林格注射液USP(LRS)中制备浓度为500mg/mL的褐藻糖胶8。对Sprague Dawley大鼠进行了椎板切除术外科手术，大鼠的平均体重和以毫克每千克计的剂量示于下表5中。用布比卡因溶液沿着腰椎创建一个线段。对大鼠的背部进行清洁，然后盖上无菌帘。经由中线皮肤切口打开腰椎筋膜，切开腰骶筋膜并且直至解剖腰旁肌以暴露下面的椎板。去除椎骨中央的骨头。在整个过程中，通过使用乳酸钠林格注射液USP(LRS)冲洗和棉签加压来维持止血。暴露的硬膜直接用15微升LRS(对照)或岩藻多糖溶液处理。肌肉和皮肤层用缝合线闭合，使大鼠恢复一周，然后处死以对粘连进行量化。记录硬膜上粘连的存在和大小。记录粘连的尺寸和暴露的硬膜，并且用于计算粘连覆盖率，即粘连面积占总暴露硬膜面积的百分比：

等式1：粘连覆盖率(％)＝100x硬膜粘连面积(mm²)÷总暴露硬膜面积(mm²)

使用等式1确定接受LRS的对照组具有65％的粘连覆盖率。下表5中示出了褐藻糖胶低内毒素组合物褐藻糖胶1、褐藻糖胶2、褐藻糖胶4和褐藻糖胶5的粘连覆盖率，其中相对于对照组，粘连覆盖率降低。

表5：使用五种不同的褐藻糖胶相对于对照LRS的大鼠硬膜外粘连降低

如表5所示，褐藻糖胶低内毒素组合物可用于成功抑制、预防、去除、减少或以其他方式治疗手术后的粘连。

实施例26：用褐藻糖胶7治疗子宫角纤维性粘连

为了确定低内毒素褐藻糖胶7组合物在抑制手术粘连中的功效，对总共四只新西兰白色兔的两个角执行以下双子宫角(DUH)外科手术。在手术之前，兔经称重且接着通过术前用药氯胺酮(ketamine)及甲苯噻嗪(xylazine)来准备外科手术。

在乳酸钠林格注射液USP(LRS)中制备0.33mg/mL的岩藻多糖溶液，通过过滤杀菌。所有仪器为无菌的且在整个手术中维持无菌现场。清洁腹部且经由正中腹部切口进入。子宫角经定位、由腹取出且刮擦以诱发损伤。还刮擦经刮擦的子宫角附近的腹壁。将损伤的子宫角及腹壁相互紧靠地放置且通过缝合线稳定。将每兔子重量15mL/kg的岩藻多糖溶液施加至腹腔，将岩藻多糖溶液的约一半引导朝向左角，并将岩藻多糖溶液的约一半引导朝向右角，随后闭合切口。在手术后两周对粘连形成进行评估。未评估未拆缝合线的角。通过尺子测量子宫角粘连的长度。计算子宫角粘连覆盖率，即粘连长度占总损伤子宫角长度的百分比，如下：

等式2：粘连覆盖率(％)＝100x子宫角粘连长度÷总损伤子宫角长度

将相同的外科手术方法应用于四只新西兰白色兔，接受15mL/kg乳酸钠林格注射液USP(LRS)代替岩藻多糖溶液作为对照。

使用等式2确定接受LRS的对照组具有63％粘连覆盖率。表6示出了针对褐藻糖胶7组合物(其是褐藻糖胶低内毒素组合物的代表性实例)使用上文所述的方法获得的结果。下表6中的结果显示为相对于对照组的粘连覆盖率降低。

表6提供了用褐藻糖胶7治疗六个子宫角的结果。

表6：相对于对照LRS，使用褐藻糖胶7降低了兔子子宫角粘连

从表6的结果可以看出，褐藻糖胶低内毒素组合物可以用于成功抑制、预防、去除、减少或以其他方式治疗手术后的子宫角粘连。

实施例27：用褐藻糖胶8治疗子宫角纤维性粘连

为了确定低内毒素褐藻糖胶8组合物在抑制手术粘连中的功效，对总共四只新西兰白色兔的两个角执行以下双子宫角(DUH)外科手术。在手术之前，兔经称重且接着通过术前用药氯胺酮及甲苯噻嗪来准备外科手术。

在乳酸钠林格注射液USP(LRS)中制备3.75mg/mL的岩藻多糖溶液，通过过滤杀菌。所有仪器为无菌的且在整个手术中维持无菌现场。清洁腹部且经由正中腹部切口进入。子宫角经定位、由腹取出且刮擦以诱发损伤。还刮擦经刮擦的子宫角附近的腹壁。将体积为4mL的岩藻多糖溶液直接施加到左受伤子宫角和侧壁区域，并将4mL的岩藻多糖溶液直接施加到右受伤子宫角和侧壁区域。将损伤的子宫角及腹壁相互紧靠地放置且通过缝合线稳定。将引流管放置在腹膜腔中，然后闭合切口。术后48h去除引流管。术后两周评估粘连。通过尺子测量子宫角粘连的长度。使用等式2计算子宫角粘连覆盖率。

将相同的手术方法应用于3只新西兰白色兔，每侧接受4mL对照乳酸钠林格注射液USP(LRS)代替岩藻多糖溶液。使用公式2确定接受LRS的对照组具有73％的粘连覆盖率。表7显示了使用以上讨论的针对褐藻糖胶8组合物(其是褐藻糖胶低内毒素组合物的代表性实例)的方法所获得的结果。下表中的结果显示为相对于对照组粘连覆盖率降低。

表7提供了用褐藻糖胶8治疗八个子宫角的结果。

表7：相对于对照LRS，使用褐藻糖胶8降低了兔子子宫角粘连

从表7的结果可以看出，褐藻糖胶低内毒素组合物可以用于成功抑制、预防、去除、减少或以其他方式治疗手术后子宫角粘连。

实施例28：用褐藻糖胶9治疗子宫角纤维性粘连

为了确定低内毒素褐藻糖胶9组合物在抑制手术粘连中的功效，对总共九只新西兰白色兔的两个角执行以下双子宫角(DUH)外科手术。在手术之前，兔经称重且接着通过术前用药氯胺酮及甲苯噻嗪来准备外科手术。

在乳酸钠林格注射液USP(LRS)中制备0.17mg/mL、0.33mg/mL和0.67mg/mL的岩藻多糖溶液，通过过滤杀菌。所有仪器为无菌的且在整个手术中维持无菌现场。清洁腹部且经由正中腹部切口进入。子宫角经定位、由腹取出且刮擦以诱发损伤。还刮擦经刮擦的子宫角附近的腹壁。将损伤的子宫角及腹壁相互紧靠地放置且通过缝合线稳定。将每兔子重量15mL/kg的岩藻多糖溶液给药于腹腔，然后闭合切口。术后两周评估粘连。在每种制备的岩藻多糖浓度下评估三只兔子。通过尺子测量子宫角粘连的长度。使用等式2计算子宫角粘连长度。

将相同的手术方法应用于3只新西兰白色兔，接受约48mL(约15mL/kg)对照乳酸钠林格注射液USP(LRS)代替岩藻多糖溶液。使用公式2确定接受LRS的对照组具有54％的粘连覆盖率。表8显示了在不同剂量下使用以上讨论的针对褐藻糖胶9组合物(其是褐藻糖胶低内毒素组合物的代表性实例)的方法所获得的结果。下表中的结果显示为相对于对照组粘连覆盖率降低。

表8提供了用褐藻糖胶9治疗十八个子宫角的结果。

表8：相对于对照LRS，使用褐藻糖胶9降低了兔子子宫角粘连

从表8的结果可以看出，褐藻糖胶低内毒素组合物可用于成功抑制、预防、去除、减少或以其他方式治疗手术后的子宫角粘连。

实施例29：用褐藻糖胶8治疗子宫角粘连

为了确定低内毒素褐藻糖胶8组合物在抑制手术粘连中的功效，对总共三只新西兰白色兔的两个角执行以下双子宫角(DUH)外科手术。在手术之前，兔经称重且接着通过术前用药氯胺酮及甲苯噻嗪来准备外科手术。

在乳酸钠林格注射液USP(LRS)中制备5mg/mL的岩藻多糖溶液，通过过滤杀菌。所有仪器为无菌的且在整个手术中维持无菌现场。清洁腹部且经由正中腹部切口进入。子宫角经定位、由腹取出且刮擦以诱发损伤。还刮擦经刮擦的子宫角附近的腹壁。将损伤的子宫角及腹壁相互紧靠地放置且通过缝合线稳定。闭合肌肉切口的顶部三分之一和底部三分之一，并将每兔子重量5mL/kg的岩藻多糖溶液给药于腹腔。暂时闭合肌肉切口，并将岩藻多糖溶液留在腹腔中30分钟。重新打开肌肉切口，并用10mL/kg LRS冲洗腹腔。将腹腔中的大部分液体吸出，然后闭合切口。术后两周评估粘连形成。通过尺子测量子宫角粘连的长度。使用等式2计算子宫角粘连覆盖率，即粘连长度占损伤子宫角总长度的百分比。

表9显示了使用以上讨论的针对褐藻糖胶8组合物(其是褐藻糖胶低内毒素组合物的代表性实例)的方法获得的结果。下表中的结果显示为在所评分的6个子宫角上的平均粘连长度。

表9：使用褐藻糖胶8的粘连长度

从表9的结果可以看出，褐藻糖胶低内毒素组合物可以用于成功抑制、预防、去除、减少或以其他方式治疗手术后的子宫角粘连。

实施例30：用褐藻糖胶低内毒素组合物治疗子宫角纤维性粘连

为了确定包括0.003EU/mg总内毒素水平的褐藻糖胶低内毒素组合物在抑制手术粘连中的功效，对总共二十只新西兰白色兔的两个角执行以下双子宫角(DUH)外科手术。在手术之前，兔经称重且接着通过术前用药咪达唑仑及右美托咪定(dexmeditomidine)来准备外科手术。

在乳酸钠林格注射液USP(LRS)中制备0.02mg/mL、0.1mg/mL、0.5mg/mL或2.5mg/mL中的每个浓度下的岩藻多糖溶液，通过过滤杀菌。所有仪器为无菌的且在整个手术中维持无菌现场。清洁腹部且经由正中腹部切口进入。子宫角经定位、由腹取出且刮擦以诱发损伤。还刮擦经刮擦的子宫角附近的腹壁。将损伤的子宫角及腹壁相互紧靠地放置且通过缝合线稳定。将每兔子重量约2mL/kg的岩藻多糖溶液给药于腹腔，然后闭合切口。术后两周评估粘连。在每种制备的岩藻多糖浓度下治疗和评估五只兔子。通过尺子测量子宫角粘连的长度。使用等式2计算子宫角粘连长度。

将相同的外科手术方法应用于另外5只新西兰白色兔作为对照，每只兔子接受约2mL/kg的对照乳酸钠林格注射液USP(LRS)代替岩藻多糖溶液。使用公式2确定接受LRS的对照组具有100％的粘连覆盖率。表10显示了使用上述方法对不同浓度和剂量的褐藻糖胶低内毒素组合物所获得的结果(用褐藻糖胶溶液治疗总共四十个子宫角，每种浓度的褐藻糖胶低内毒素组合物各10个)；结果显示为相对于对照组粘连覆盖率降低。

表10：相对于对照LRS，使用褐藻糖胶低内毒素组合物降低了兔子子宫角粘连

如从表10的结果可见，褐藻糖胶低内毒素组合物可用于成功抑制、预防、去除、减少或以其他方式治疗手术后的子宫角粘连。

附图标记列表：

1000 修改的TFF系统

1002 输入供应管线

1004 预过滤器

1006 TFF系统输出阀

1008 辅助TFF系统输出管线

1010 切向流过滤(TFF)过滤器

1012 TFF供应管线

1014 TFF输入泵

1016 褐藻糖胶容器

1017 TFF截留阀

1018 TFF截留物返回管线

1019 TFF渗透物输出管线

1020 第一渗滤溶液容器

1024 第一渗滤溶液阀

1025 第一渗滤溶液供应管线

1030 第二渗滤溶液容器

1034 第二渗滤溶液阀

1035 第二渗滤溶液供应管线

1400 阴离子吸附内毒素去除系统

1401 输入供应管线

1402 子系统间阀

1403 TFF子系统截留物输出管线

1404 阴离子交换子系统输出阀

1405 阴离子交换子系统输出管线

1406 预过滤器

1410 切向流过滤(TFF)子系统

1411 切向流过滤(TFF)过滤器

1412 TFF过滤器供应管线

1413 渗滤溶液阀

1414 TFF子系统泵

1415 TFF子系统渗滤溶液供应管线

1416 TFF子系统褐藻糖胶容器

1417 TFF子系统渗滤溶液容器

1418 TFF子系统截留物返回管线

1419 TFF子系统渗透物输出管线

1420 阴离子交换子系统

1421 阴离子交换容器

1422 阴离子交换容器供应管线

1424 阴离子交换子系统泵

1425 干扰剂供应管线

1426 阴离子交换子系统褐藻糖胶容器

1427 干扰剂容器

1428 阴离子交换容器输出管线

1429 大孔阴离子交换树脂

除非上下文或定义另有清楚说明，否则本文中使用的所有术语均按照其普通含义使用。另外，除非另有明确说明，否则在说明书中使用的“或”包括“和”，反之亦然。除非另有明确指出或上下文另有清楚说明，否则非限制性术语不应解释为限制性的(例如，“包括(including)”、“具有”和“包含(comprising)”通常表示“包括但不限于”)。除非另有明确指出或上下文另有清楚说明，否则单数形式(包括在权利要求书中，诸如“一(a)”、“一(an)”和“该(the)”)包括复数引用。

除非另有指出，否则本文中对实施方式的一个或多个特征的条件或关系特征进行修饰的形容词(诸如“基本上”和“约”)表示，该条件或特征被定义为，对于该实施方式针对预期应用的操作而言，处于可接受的允许范围内。

本发明的方法、组合物、系统等的范围包括装置(means)加功能以及步骤加功能这两种概念。然而，除非在权利要求中具体地陈述词语“装置”，否则权利要求不应被解释为表示“装置加功能”的关系，而在权利要求中具体地陈述词语“装置”的情况下，权利要求应解释为表示“装置加功能”的关系。类似地，除非在权利要求中具体地陈述词语“步骤”，否则权利要求不应解释为表示“步骤加功能”的关系，而在权利要求中具体地陈述词语“步骤”的情况下，权利要求应解释为表示“步骤加功能”的关系。

根据以上所述，应当理解，尽管出于说明的目的已经在本文中讨论了具体的实施方式，但是可以在不背离本文所讨论的精神和范围的情况下进行各种修改。因此，系统和方法等包括对本文提出的主题所做的这样的修改以及所有排列和组合，并且仅受所附权利要求或在本文的讨论和附图中具有足够支持的其他权利要求的限制。

Claims (195)

1.一种褐藻糖胶低内毒素组合物，其包含每毫克褐藻糖胶少于约0.2内毒素单位。

2.一种褐藻糖胶低内毒素组合物，其包含每毫克褐藻糖胶少于约0.18内毒素单位。

3.一种褐藻糖胶低内毒素组合物，其包含每毫克褐藻糖胶少于约0.16内毒素单位。

4.一种褐藻糖胶低内毒素组合物，其包含每毫克褐藻糖胶少于约0.1内毒素单位。

5.一种褐藻糖胶低内毒素组合物，其包含每毫克褐藻糖胶少于约0.09内毒素单位。

6.一种褐藻糖胶低内毒素组合物，其包含每毫克褐藻糖胶少于约0.06内毒素单位。

7.一种褐藻糖胶低内毒素组合物，其包含每毫克褐藻糖胶少于约0.04内毒素单位。

8.一种褐藻糖胶低内毒素组合物，其包含每毫克褐藻糖胶少于约0.03内毒素单位。

9.一种褐藻糖胶低内毒素组合物，其包含每毫克褐藻糖胶少于约0.02内毒素单位。

10.一种褐藻糖胶低内毒素组合物，其包含每毫克褐藻糖胶少于约0.01内毒素单位。

11.一种褐藻糖胶低内毒素组合物，其包含每毫克褐藻糖胶少于约0.007内毒素单位。

12.一种褐藻糖胶低内毒素组合物，其包含每毫克褐藻糖胶少于约0.003内毒素单位。

13.一种褐藻糖胶低内毒素组合物，其包含每毫克褐藻糖胶少于约0.002内毒素单位。

14.一种褐藻糖胶低内毒素组合物，其包含每毫克褐藻糖胶少于约0.001内毒素单位。

15.一种褐藻糖胶低内毒素组合物，其包含每毫克褐藻糖胶少于约0.0006内毒素单位。

16.一种褐藻糖胶低内毒素组合物，其包含每毫克褐藻糖胶少于约0.0005内毒素单位。

17.根据权利要求1至16中任一项所述的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述褐藻糖胶具有分子量分布，其中，当使用水性凝胶渗透色谱法装置测量时，所述分布的至少60％w/w大于100kDa，所述水性凝胶渗透色谱法装置基本上由以下组成：

一根内径为7.8mm的300mm分析型凝胶渗透色谱柱，其装填有羟基化聚甲基丙烯酸酯基凝胶，具有的有效分子量范围为约50kDa至约5,000kDa；一根内径为7.8mm的300mm分析型凝胶渗透色谱柱，其装填有羟基化聚甲基丙烯酸酯基凝胶，具有的有效分子量范围为约1kDa至约6,000kDa；以及一根内径为6mm的40mm保护柱，其装填有羟基化聚甲基丙烯酸酯基凝胶，所述两根分析型凝胶渗透色谱柱和所述一根保护柱被容纳在处于约30℃的柱室中；

处于约30℃的折射率检测器；

以0.6mL/min运行的0.1M硝酸钠流动相；以及

相对于峰分子量标准曲线进行量化，所述峰分子量标准曲线基本上由以下组成：第一右旋糖酐标准物，具有的峰分子量为约2,200kDa；第二右旋糖酐标准物，具有的峰分子量为约720kDa至约760kDa；第三右旋糖酐标准物，具有的峰分子量为约470kDa至约510kDa；第四右旋糖酐标准物，具有的峰分子量为约370kDa至约410kDa；第五右旋糖酐标准物，具有的峰分子量为约180kDa至约220kDa；以及第六右旋糖酐标准物，具有的峰分子量为约40kDa至55kDa。

18.根据权利要求17所述的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述褐藻糖胶具有分子量分布，其中，所述分布的至少75％w/w大于100kDa。

19.根据权利要求17所述的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述褐藻糖胶具有分子量分布，其中，所述分布的至少90％w/w大于100kDa。

20.根据权利要求17所述的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述褐藻糖胶具有分子量分布，其中，所述分布的至少98％w/w大于100kDa。

21.根据权利要求17所述的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述褐藻糖胶具有分子量分布，其中，所述分布的至少81％w/w大于200kDa。

22.根据权利要求17所述的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述褐藻糖胶具有分子量分布，其中，所述分布的至少92％w/w大于200kDa。

23.根据权利要求17所述的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述褐藻糖胶具有分子量分布，其中，所述分布的至少97％w/w大于200kDa。

24.根据权利要求17所述的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述褐藻糖胶具有分子量分布，其中，所述分布的至少44％w/w大于500kDa。

25.根据权利要求17所述的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述褐藻糖胶具有分子量分布，其中，所述分布的至少61％w/w大于500kDa。

26.根据权利要求17所述的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述褐藻糖胶具有分子量分布，其中，所述分布的至少70％w/w大于500kDa。

27.根据权利要求17所述的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述褐藻糖胶具有分子量分布，其中，所述分布的至少80％w/w大于500kDa。

28.根据权利要求17所述的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述褐藻糖胶具有分子量分布，其中，所述分布的至少90％w/w大于500kDa。

29.根据权利要求17所述的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述褐藻糖胶具有分子量分布，其中，所述分布的至少5％w/w大于1600kDa。

30.根据权利要求17所述的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述褐藻糖胶具有分子量分布，其中，所述分布的至少10％w/w大于1600kDa。

31.根据权利要求17所述的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述褐藻糖胶具有分子量分布，其中，所述分布的至少24％w/w大于1600kDa。

32.根据权利要求17所述的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述褐藻糖胶具有分子量分布，其中，所述分布的至少31％w/w大于1600kDa。

33.根据权利要求17至32中任一项所述的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述褐藻糖胶具有大于100kDa的重均分子量。

34.根据权利要求17至32中任一项所述的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述褐藻糖胶具有大于200kDa的重均分子量。

35.根据权利要求17至32中任一项所述的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述褐藻糖胶具有大于500kDa的重均分子量。

36.根据权利要求1至35中任一项所述的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述褐藻糖胶具有的硫酸酯化水平为约20％w/w至60％w/w。

37.根据权利要求1至35中任一项所述的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述褐藻糖胶具有的硫酸酯化水平为约30％w/w至55％w/w。

38.根据权利要求1至35中任一项所述的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述褐藻糖胶具有的硫酸酯化水平为约32％w/w至52％w/w。

39.根据权利要求1至35中任一项所述的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述褐藻糖胶具有的总碳水化合物含量为27％w/w至80％w/w。

40.根据权利要求39所述的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述褐藻糖胶具有的总岩藻糖含量占所述总碳水化合物含量的百分比为至少约30％w/w。

41.根据权利要求39所述的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述褐藻糖胶具有的总岩藻糖含量占所述总碳水化合物含量的百分比为至少约50％w/w。

42.根据权利要求39所述的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述褐藻糖胶具有的总岩藻糖含量占所述总碳水化合物含量的百分比为至少约70％w/w。

43.根据权利要求39所述的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述褐藻糖胶具有的总岩藻糖含量占所述总碳水化合物含量的百分比为至少约80％w/w。

44.根据权利要求39所述的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述褐藻糖胶具有的总岩藻糖含量占所述总碳水化合物含量的百分比为至少约90％w/w。

45.根据权利要求39所述的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述褐藻糖胶具有的总岩藻糖含量占所述总碳水化合物含量的百分比为至少约95％w/w。

46.根据权利要求39所述的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述褐藻糖胶具有的总半乳糖含量占所述总碳水化合物含量的百分比低于约60％w/w。

47.根据权利要求39所述的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述褐藻糖胶具有的总半乳糖含量占所述总碳水化合物含量的百分比为约2％w/w至20％w/w。

48.根据权利要求39所述的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述褐藻糖胶具有的总半乳糖含量占所述总碳水化合物含量的百分比低于约10％w/w。

49.根据权利要求1至48中任一项所述的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，当以50mg/mL的浓度溶于水中时，所述褐藻糖胶低内毒素组合物具有的粘度为约4cP至50cP。

50.根据权利要求1至48中任一项所述的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，当以50mg/mL的浓度溶于水中时，所述褐藻糖胶低内毒素组合物具有的粘度为约10cP至40cP。

51.根据权利要求1至48中任一项所述的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，当以50mg/mL的浓度溶于水中时，所述褐藻糖胶低内毒素组合物具有的粘度为约15cP至30cP。

52.根据权利要求1至51中任一项所述的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述褐藻糖胶低内毒素组合物为白色固体。

53.根据权利要求1至52中任一项所述的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，当以1mg/mL至100mg/mL的浓度溶于水中时，所述褐藻糖胶低内毒素组合物形成一种澄清无色的溶液。

54.根据权利要求1至53中任一项所述的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述褐藻糖胶包含少于5％w/w的乙酰基含量。

55.根据权利要求1至53中任一项所述的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述褐藻糖胶包含少于2％w/w的乙酰基含量。

56.根据权利要求1至53中任一项所述的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，当在70℃下伴随溶剂信号抑制在配备有5-mm冷探针的600MHz光谱仪上在碳尺寸10-30ppm范围内以256-512的8次增量扫描每次通过2D ¹H-¹³C异核多量子相干测量时，所述褐藻糖胶包含的乙酰基含量基本为0％w/w。

57.一种治疗动物的纤维性粘连的方法，所述方法包括：选择权利要求1至56中任一项所述的褐藻糖胶低内毒素组合物以抑制所述纤维性粘连，以及向所述动物的伤口部位给药包含剂量范围为0.5mg/kg至50mg/kg的治疗有效量的所述褐藻糖胶低内毒素组合物。

58.一种用于治疗动物的纤维性粘连的药剂，所述药剂包括：选择权利要求1至56中任一项所述的褐藻糖胶低内毒素组合物。

59.一种用于治疗动物的纤维性粘连的药剂，所述药剂包括：选择权利要求1至56中任一项所述的褐藻糖胶低内毒素组合物以抑制所述纤维性粘连，以及向所述动物的伤口部位给药包含剂量范围为0.5mg/kg至50mg/kg的治疗有效量的所述褐藻糖胶低内毒素组合物。

60.权利要求1至56中任一项所述的褐藻糖胶低内毒素组合物用于制造用于纤维性粘连的救治剂的用途。

61.一种包括制备权利要求1至56中任一项所述的褐藻糖胶低内毒素组合物的方法。

62.一种包括使用权利要求1至56中任一项所述的褐藻糖胶低内毒素组合物的方法。

63.根据权利要求62所述的方法，其中，所述使用包括：治疗纤维性粘连。

64.一种医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素组合物，所述褐藻糖胶低内毒素组合物包含医疗上可接受的缓冲剂或稀释剂中的治疗有效量的根据权利要求1至56中任一项所述的褐藻糖胶低内毒素组合物。

65.一种医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素剂量，其包含权利要求64所述的医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素剂量具有的内毒素水平等于或低于250EU。

66.一种医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素剂量，其包含权利要求64所述的医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素剂量具有的内毒素水平低于250EU。

67.一种医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素剂量，其包含权利要求64所述的医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素剂量具有的内毒素水平低于50EU。

68.一种医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素剂量，其包含权利要求64所述的医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素剂量具有的内毒素水平等于或低于20EU。

69.一种医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素剂量，其包含权利要求64所述的医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素剂量具有的内毒素水平低于20EU。

70.一种医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素剂量，其包含权利要求64所述的医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素剂量具有的内毒素水平低于10EU。

71.一种医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素剂量，其包含权利要求64所述的医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素剂量具有的内毒素水平等于或低于2EU。

72.一种医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素剂量，其包含权利要求64所述的医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素剂量具有的内毒素水平低于2EU。

73.一种医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素剂量，其包含权利要求64所述的医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素剂量具有的内毒素水平低于1EU。

74.一种医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素剂量，其包含权利要求64所述的医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素剂量具有的内毒素水平低于0.1EU。

75.一种医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素剂量，其包含权利要求64所述的医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素剂量具有的内毒素水平低于0.01EU。

76.根据权利要求65至75中任一项所述的医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素剂量，其中，所述褐藻糖胶低内毒素组合物包含具有分子量分布的褐藻糖胶，其中，所述褐藻糖胶的至少60％w/w具有的分子量大于100kDa，重均分子量为300kDa至5,000kDa，硫酸酯化水平为20％w/w至60％w/w，碳水化合物含量为30％w/w至80％w/w，以及岩藻糖含量占总碳水化合物含量的百分比为30％w/w至100％w/w。

77.根据权利要求65至75中任一项所述的医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素剂量，其中，所述褐藻糖胶低内毒素组合物包含具有分子量分布的褐藻糖胶，其中，所述褐藻糖胶的至少90％w/w具有的分子量大于100kDa，重

78.一种治疗动物的病症或疾病的方法，所述方法包括：选择权利要求64所述的医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素组合物以治疗所述病症或疾病，以及向所述动物给药包含约0.5mg/kg至50mg/kg的治疗有效量的所述褐藻糖胶。

79.一种治疗动物的病症或疾病的方法，所述方法包括：选择权利要求64所述的医疗上可接受的褐藻糖胶低内毒素组合物以治疗所述病症或疾病，以及向所述动物给药约0.04mg/kg至25mg/kg的治疗有效量的所述褐藻糖胶。

80.根据权利要求80所述的方法，其中，所述治疗有效量为约0.2mg/kg至10mg/kg。

81.根据权利要求79或80所述的方法，其中，所述治疗有效量为约1mg/kg至5mg/kg。

82.根据权利要求79或80所述的方法，其中，所述治疗有效量为约1.5mg/kg至3mg/kg。

83.根据权利要求79或80所述的方法，其中，所述治疗有效量为约5mg/kg至10mg/kg。

84.根据权利要求79至84中任一项所述的方法，其中，所述病症或疾病是所述动物的目标部位处的纤维性粘连，并且其中，所述给药包括：向所述目标部位给药所述治疗有效量。

85.一种医疗组合物，其包含约0.02mg/mL至100mg/mL的权利要求1至56中任一项所述的褐藻糖胶低内毒素组合物，其中，所述医疗组合物被配置和构成为治疗动物的疾病或病症。

86.根据权利要求86所述的医疗组合物，其包含约0.5mg/mL至5mg/mL的所述褐藻糖胶低内毒素组合物。

87.根据权利要求86所述的医疗组合物，其包含约2.5mg/mL的所述褐藻糖胶低内毒素组合物。

88.根据权利要求86至88中任一项所述的医疗组合物，其中，所述医疗组合物是医疗器械。

89.根据权利要求86至88中任一项所述的医疗组合物，其中，所述医疗组合物是液体医疗器械。

90.根据权利要求86至88中任一项所述的医疗组合物，其中，所述医疗组合物是药物组合物。

91.根据权利要求86至88中任一项所述的医疗组合物，其中，所述医疗组合物是液体药物组合物。

92.根据权利要求86至92中任一项所述的医疗组合物，其中，所述疾病或病症是纤维性粘连。

93.包含约0.01mL/kg至15mL/kg的剂量范围的权利要求86至93中任一项所述的医疗组合物用于治疗动物的疾病或病症的用途。

94.包含约0.03mL/kg至4mL/kg的剂量范围的权利要求86至93中任一项所述的医疗组合物用于治疗动物的疾病或病症的用途。

95.包含约0.06mL/kg至2mL/kg的剂量范围的权利要求86至93中任一项所述的医疗组合物用于治疗动物的疾病或病症的用途。

96.包含约2mL/kg至4mL/kg的剂量范围的权利要求86至93中任一项所述的医疗组合物用于治疗动物的疾病或病症的用途。

97.一种用于治疗患者的选择的疾病或病症的方法，所述方法包括：确认患者的包括或相当容易患有所述选择的疾病或病症的选择的目标部位，以及然后向所述患者的目标部位给药权利要求86至93中任一项所述的医疗组合物。

98.根据权利要求98所述的方法，其中，所述疾病或病症是纤维性粘连。

99.根据权利要求98或99所述的方法，其中，所述目标部位是外科手术部位，并且所述给药是在以下情况中的至少一种情况下进行的：a)在所述外科手术部位处打开外科手术伤口之后，b)在外科手术期间，以及c)在闭合所述外科手术伤口之后。

100.根据权利要求98所述的方法，其中，所述给药在外科手术之后并且在闭合所述外科手术伤口之前进行。

101.根据权利要求101所述的方法，其中，所述给药耗时少于3分钟。

102.根据权利要求101所述的方法，其中，所述给药耗时少于2分钟。

103.根据权利要求101所述的方法，其中，所述给药耗时少于1分钟。

104.根据权利要求98至104中任一项所述的方法，其中，所述目标部位是病变、擦伤和损伤部位中的至少一种。

105.根据权利要求所述的方法，其中，所述目标部位是以下中的至少一项：骨盆腔、腹腔、背侧腔、颅腔、脊髓腔、腹侧腔、胸腔、胸膜腔、心包腔、皮肤、关节、肌肉、肌腱和韧带。

106.一种用于从起始褐藻糖胶组合物中去除杂质以获得褐藻糖胶低内毒素组合物的方法，所述方法包括：

提供包含杂质的起始褐藻糖胶组合物；

将絮凝助剂添加到所述起始褐藻糖胶组合物中以产生反应混合物；

通过加热所述反应混合物来使所述杂质絮凝以产生絮凝杂质；以及

去除所述絮凝杂质。

107.根据权利要求107所述的方法，其中，提供所述起始褐藻糖胶组合物包括：提供溶液形式的所述起始褐藻糖胶组合物。

108.根据权利要求107所述的方法，其中，所述方法还包括：在杂质减少的溶液中收集所述褐藻糖胶低内毒素组合物。

109.根据权利要求107所述的方法，其中，使所述杂质絮凝包括：在超过大气压压力下加热所述反应混合物。

110.根据权利要求107所述的方法，其中，所述絮凝助剂包括盐。

111.根据权利要求111所述的方法，其中，所述盐包括：碱金属、碱土金属、铝和/或铵的氯化物、溴化物、碘化物、氟化物、硫酸盐、亚硫酸盐、碳酸盐、碳酸氢盐、磷酸盐、硝酸盐、亚硝酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、硅酸盐和/或氰化物。

112.根据权利要求107所述的方法，其中，所述絮凝助剂包括碱。

113.根据权利要求113所述的方法，其中，所述碱包括碱金属、碱土金属、铝和/或铵的氢氧化物和/或氧化物。

114.根据权利要求107所述的方法，其中，所述褐藻糖胶低内毒素组合物所含的内毒素比所述起始褐藻糖胶组合物少。

115.一种用于从起始褐藻糖胶组合物中去除杂质以获得褐藻糖胶低内毒素组合物的方法，所述方法包括：

提供包含具有内毒素的杂质的起始褐藻糖胶组合物；以及

使溶液通过切向流过滤过滤器进行切向流过滤，以产生渗余褐藻糖胶组合物，所述渗余褐藻糖胶组合物包含具有比所述起始褐藻糖胶组合物少的内毒素的褐藻糖胶低内毒素组合物。

116.根据权利要求116所述的方法，其中，所述方法还包括：在杂质减少的溶液中收集所述褐藻糖胶低内毒素组合物。

117.根据权利要求116或117所述的方法，其中，所述切向流过滤是在100kDa的切向流过滤过滤器上进行的。

118.一种用于从起始褐藻糖胶组合物中去除杂质以获得褐藻糖胶低内毒素组合物的方法，所述方法包括：

提供起始褐藻糖胶组合物，所述起始褐藻糖胶组合物包含杂质和干扰剂，所述干扰剂能够干扰溶液中细胞和内毒素聚集；以及

使所述溶液通过切向流过滤过滤器进行切向流过滤，以产生包含所述褐藻糖胶低内毒素组合物和残留干扰剂的渗余褐藻糖胶组合物。

119.根据权利要求116所述的方法，还包括：通过在切向流过滤过滤器上进行切向流过滤来去除所述残留干扰剂，以产生包含所述褐藻糖胶低内毒素组合物的第二渗余褐藻糖胶组合物。

120.根据权利要求116所述的方法，还包括：

通过用沉淀剂处理所述渗余褐藻糖胶组合物来去除所述残留干扰剂，所述沉淀剂能够使所述干扰剂沉淀以产生所述干扰剂的沉淀物和上清液褐藻糖胶组合物；以及

将所述干扰剂的沉淀物与所述上清液褐藻糖胶组合物分离。

121.根据权利要求116至121中任一项所述的方法，其中，所述方法还包括：在杂质减少的溶液中收集所述褐藻糖胶低内毒素组合物。

122.根据权利要求116至122中任一项所述的方法，其中，所述干扰剂包含至少一种去污剂。

123.根据权利要求123所述的方法，其中，所述去污剂是阴离子去污剂。

124.根据权利要求123所述的方法，其中，所述去污剂是阳离子去污剂。

125.根据权利要求123所述的方法，其中，所述去污剂是非离子去污剂。

126.根据权利要求123所述的方法，其中，所述去污剂包括以下中的至少一项：十二烷基硫酸钠(SDS)、苯扎氯铵、

X 100、

X 114和脱氧胆酸钠。

127.根据权利要求121至127中任一项所述的方法，其中，所述沉淀剂包括以下中的至少一项：氯化钾、氢氧化钾、氯化钙、氯化钡和碳酸钙。

128.根据权利要求116至128中任一项所述的方法，其中，所述褐藻糖胶低内毒素组合物包含比所述起始褐藻糖胶组合物少的内毒素。

129.一种用于从起始褐藻糖胶组合物中去除杂质以获得褐藻糖胶低内毒素组合物的方法，所述方法包括：

提供固体形式的起始褐藻糖胶组合物和不能溶解褐藻糖胶的提取介质，所述提取介质被配置用于溶解杂质；

将所述起始褐藻糖胶组合物与所述提取介质混合，以产生所述褐藻糖胶低内毒素组合物和所述提取介质的混合物；以及

将所述褐藻糖胶低内毒素组合物与所述提取介质分离。

130.根据权利要求130所述的方法，其中，所述方法还包括：收集固体形式的所述褐藻糖胶低内毒素组合物。

131.根据权利要求130所述的方法，其中，所述提取介质包括相对极性小于0.765的至少一种有机溶剂。

132.根据权利要求132所述的方法，其中，所述有机溶剂包括以下中的至少一项：乙醇、异丙醇、甲醇、苯、二乙醚、十甲基环五硅氧烷、乙酸乙酯、丁醇、己烷、庚烷、庚醇、辛醇和癸醇。

133.根据权利要求132所述的方法，其中，所述提取介质还包括碱、去污剂和氧化剂中的至少一种。

134.根据权利要求130所述的方法，其中，提供固体形式的所述起始褐藻糖胶组合物包括：从溶液中沉淀所述起始褐藻糖胶组合物。

135.根据权利要求130所述的方法，其中，所述褐藻糖胶低内毒素组合物所含的内毒素比所述起始褐藻糖胶组合物少。

136.一种用于从起始褐藻糖胶组合物中去除杂质以获得褐藻糖胶低内毒素组合物的方法，所述方法包括：

提供包含杂质的起始褐藻糖胶组合物，所述杂质包括溶液中的悬浮杂质；

使用离子多价杂质沉淀剂从所述溶液中沉淀所述杂质，从而产生悬浮杂质、沉淀杂质和上清液溶液的混合物；以及

将所述悬浮杂质和沉淀杂质与所述上清液溶液分离。

137.根据权利要求137所述的方法，其中，所述方法还包括：收集包含所述褐藻糖胶低内毒素组合物的所述上清液溶液。

138.根据权利要求137所述的方法，其中，所述离子多价杂质沉淀剂包括二价或三价阳离子的盐。

139.根据权利要求139所述的方法，其中，所述盐是氯化物、溴化物、碘化物、氟化物、硫酸盐、亚硫酸盐、碳酸盐、碳酸氢盐、磷酸盐、硝酸盐、亚硝酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、硅酸盐和/或氰化物。

140.根据权利要求139所述的方法，其中，所述阳离子是碱土金属、锌、铝、铜和/或铁。

141.根据权利要求137所述的方法，其中，所述杂质沉淀物包括二价或三价阳离子的碱。

142.根据权利要求142所述的方法，其中，所述碱是碱土金属、锌、铝、铜和/或铁的氢氧化物和/或氧化物。

143.根据权利要求137至143中任一项所述的方法，其中，将所述悬浮杂质和沉淀杂质与所述上清液溶液分离包括：通过向所述悬浮杂质、沉淀杂质和上清液溶液的混合物中添加絮凝剂来使所述悬浮杂质和沉淀杂质絮凝。

144.根据权利要求144所述的方法，其中，所述絮凝剂包括以下中的至少一项：硫酸铝钾；硫酸铝钠；硫酸铝铵；氯化钙；磷酸钠；氢氧化铝；氯化铝；氯化铁；硫酸铁；硫酸亚铁；硅酸钠；硅酸钙；磷酸钙；氯化锌；碳酸钙；碳酸氢钙；硫酸钾；磷酸镁；丙烯酰胺；丙烯酸；氯酸铝；聚氯化铝；单宁；甲醛；三聚氰胺；丙烯酸N,N-二甲基氨基乙酯甲基氯化物；甲基丙烯酸N,N-二甲基氨基乙酯甲基氯化物季铵盐；和聚二烯丙基二甲基氯化铵。

145.根据权利要求137至145中任一项所述的方法，其中，所述方法还包括：将pH维持在约7至14。

146.根据权利要求146所述的方法，其中，维持pH包括添加碱。

147.根据权利要求137至147中任一项所述的方法，其中，所述褐藻糖胶低内毒素组合物所含的内毒素比所述起始褐藻糖胶组合物少。

148.一种用于从起始褐藻糖胶组合物中去除杂质以获得褐藻糖胶低内毒素组合物的方法，所述方法包括：

提供包含杂质的起始褐藻糖胶组合物；

将所述起始褐藻糖胶组合物的pH调节至约8至14；

向所述起始褐藻糖胶组合物中添加细胞干扰剂，所述细胞干扰剂被配置用于裂解细胞组分以产生包含所述细胞干扰剂、生物分子裂解物和所述起始褐藻糖胶组合物的反应混合物；以及

从所述反应混合物中去除所述细胞干扰剂和生物分子裂解物。

149.根据权利要求149所述的方法，其中，提供所述起始褐藻糖胶组合物包括：提供溶液形式的所述起始褐藻糖胶组合物。

150.根据权利要求149所述的方法，其中，所述方法还包括：在杂质减少的溶液中收集所述褐藻糖胶低内毒素组合物。

151.根据权利要求149所述的方法，其中，所述细胞干扰剂包括去污剂。

152.根据权利要求152所述的方法，其中，所述去污剂是阴离子去污剂。

153.根据权利要求152所述的方法，其中，所述去污剂是阳离子去污剂。

154.根据权利要求152所述的方法，其中，所述去污剂是非离子去污剂。

155.根据权利要求152所述的方法，其中，所述去污剂包括以下中的至少一项：十二烷基硫酸钠(SDS)、苯扎氯铵、Triton X

Triton X

去污剂、

去污剂、脱氧胆酸钠和烷基苯磺酸盐。

156.根据权利要求149至156中任一项所述的方法，其中，去除所述细胞干扰剂和生物分子裂解物包括：向所述反应混合物中添加絮凝剂，所述絮凝剂被配置用于使所述细胞干扰剂和生物分子裂解物絮凝。

157.根据权利要求149至156中任一项所述的方法，其中，去除所述细胞干扰剂包括：向所述反应混合物中添加沉淀剂，所述沉淀剂能够使所述细胞干扰剂不溶于所述反应混合物，从而产生沉淀物。

158.根据权利要求149至158中任一项所述的方法，其中，去除所述生物分子裂解物包括：向所述反应混合物中添加沉淀剂，所述沉淀剂被配置用于使所述生物分子裂解物不溶于所述反应混合物，从而产生沉淀物。

159.根据权利要求158和159中任一项所述的方法，还包括：向所述反应混合物中添加絮凝剂，所述絮凝剂被配置用于使所述沉淀物絮凝。

160.根据权利要求157和160中任一项所述的方法，其中，所述絮凝剂包括以下中的至少一项：硫酸铝钾；硫酸铝钠；硫酸铝铵；氯化钙；磷酸钠；氢氧化铝；氯化铝；氯化铁；硫酸铁；硫酸亚铁；硅酸钠；硅酸钙；磷酸钙；氯化锌；碳酸钙；碳酸氢钙；硫酸钾；磷酸镁；丙烯酰胺；丙烯酸；氯酸铝；聚氯化铝；单宁；甲醛；三聚氰胺；丙烯酸N,N-二甲基氨基乙酯甲基氯化物；甲基丙烯酸N,N-二甲基氨基乙酯甲基氯化物季铵盐；和聚二烯丙基二甲基氯化铵。

161.根据权利要求153所述的方法，其中，去除所述阴离子去污剂包括阴离子吸附。

162.根据权利要求154的方法，其中，去除所述阳离子去污剂包括阳离子吸附。

163.根据权利要求155所述的方法，其中，去除所述非离子去污剂包括胶束相分离。

164.根据权利要求152所述的方法，其中，去除所述去污剂包括疏水吸附。

165.根据权利要求152所述的方法，其中，去除所述去污剂包括：

稀释所述反应混合物直至所述去污剂的浓度低于预定浓度；以及

使包含所述去污剂的所述反应混合物在切向流过滤过滤器上渗滤，所述切向流过滤过滤器的截留分子量高于所述去污剂的最大分子量。

166.根据权利要求149至166中任一项所述的方法，还包括：在提供所述起始褐藻糖胶组合物之后并且在去除所述细胞干扰剂之前，向所述反应混合物中添加螯合剂。

167.根据权利要求167的方法，其中，所述螯合剂包括：乙二胺四乙酸(EDTA)、2,3-二巯基-1-丙醇、乙二胺、卟吩和/或柠檬酸。

168.根据权利要求149至168中任一项所述的方法，还包括：在去除所述细胞干扰剂之前向所述反应混合物中添加氧化剂猝灭剂，以淬灭所述反应混合物中的氧化剂。

169.根据权利要求149至169中任一项所述的方法，还包括：在提供所述起始褐藻糖胶组合物之后并且在去除所述细胞干扰剂之前，向所述反应混合物中添加抑菌剂。

170.根据权利要求170所述的方法，其中，所述抑菌剂包括：亚硫酸钠、乙二胺四乙酸(EDTA)、苯扎氯铵、乙醇和/或硫脲。

171.根据权利要求149至171中任一项所述的方法，其中，所述褐藻糖胶低内毒素组合物包含比所述起始褐藻糖胶组合物少的内毒素。

172.一种用于从起始褐藻糖胶组合物中去除内毒素以获得褐藻糖胶低内毒素组合物的方法，所述方法包括：

提供包含内毒素和阴离子交换大孔树脂的起始褐藻糖胶组合物；

使所述起始褐藻糖胶组合物与所述阴离子交换大孔树脂进行阴离子交换，以产生所述褐藻糖胶低内毒素组合物。

173.根据权利要求173的方法，还包括：用能够干扰所述内毒素聚集的干扰剂预处理所述起始褐藻糖胶组合物。

174.根据权利要求173所述的方法，还包括：在使所述起始褐藻糖胶组合物与所述阴离子交换大孔树脂进行阴离子交换之前，使所述起始褐藻糖胶组合物脱盐。

175.根据权利要求173所述的方法，其中，所述阴离子交换大孔树脂的孔径大于所述起始褐藻糖胶组合物中的所述内毒素的平均流体动力半径。

176.根据权利要求173所述的方法，其中，提供所述起始褐藻糖胶组合物和所述阴离子交换大孔树脂包括：以所述起始褐藻糖胶组合物:阴离子交换大孔树脂的质量比为约1:100至约10:1来提供所述起始褐藻糖胶组合物和所述阴离子交换大孔树脂。

177.根据权利要求177所述的方法，其中，所述质量比为约1:50至约1:1。

178.根据权利要求177所述的方法，其中，所述质量比为约1:10至约1:1。

179.根据权利要求173至179中任一项所述的方法，其中，使所述起始褐藻糖胶组合物进行阴离子交换持续约5分钟至约100小时的时间段。

180.根据权利要求180所述的方法，其中，所述时间段为约1小时至约30小时。

181.根据权利要求173至181中任一项所述的方法，其中，所述阴离子交换大孔树脂包含季胺基。

182.根据权利要求173至181中任一项所述的方法，其中，所述阴离子交换大孔树脂包含伯、仲和叔胺基中的至少一种。

183.根据权利要求173至181中任一项所述的方法，其中，所述阴离子交换大孔树脂由以下中的至少一项组成：苯乙烯、琼脂糖、右旋糖酐、丙烯酸酯、甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸丁酯、二乙烯基苯、纤维素、二氧化硅和陶瓷。

184.根据权利要求173至181中任一项所述的方法，其中，所述阴离子交换大孔树脂的孔径为约5nm至约1000nm。

185.根据权利要求185所述的方法，其中，所述孔径为约10nm至约100nm。

186.根据权利要求185所述的方法，其中，所述孔径为约15nm至约50nm。

187.根据权利要求173至187中任一项所述的方法，其中，所述阴离子交换大孔树脂的排阻极限为约5kDa至约50,000kDa。

188.根据权利要求188所述的方法，其中，所述排阻极限为约1,000kDa至约9,000kDa。

189.根据权利要求188所述的方法，其中，所述排阻极限为约5kDa至约200kDa。

190.根据权利要求173至190中任一项所述的方法，其中，所述褐藻糖胶低内毒素组合物包含比所述起始褐藻糖胶组合物少的内毒素。

191.一种用于从起始褐藻糖胶组合物中去除杂质以获得褐藻糖胶低内毒素组合物的方法，所述方法包括：

提供起始水溶液形式的包含杂质的起始褐藻糖胶组合物；

将所述起始水溶液与有机溶剂混合以产生水-有机相混合物；以及

分离所述水-有机相混合物以获得水性部分和有机部分。

192.根据权利要求192所述的方法，其中，所述方法还包括：收集包含所述褐藻糖胶低内毒素组合物的所述水性部分。

193.根据权利要求192所述的方法，其中，所述有机溶剂包含相对极性小于0.765的至少一种有机溶剂。

194.根据权利要求192至194中任一项所述的方法，其中，所述有机溶剂包括以下中的至少一项：乙醇、异丙醇、甲醇、苯、十甲基环五硅氧烷、乙酸乙酯、己烷、庚醇、辛醇、癸醇、庚烷、乙酸异丁酯、苯甲醚、乙酸异丙酯、1-丁醇、乙酸丁酯、甲基异丁基酮、戊烷、1-戊醇、乙醚和乙酸丙酯。

195.根据权利要求192所述的方法，其中，所述褐藻糖胶低内毒素组合物所含的内毒素比所述起始褐藻糖胶组合物少。

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