CN112513103B - 用于治疗纤维性粘连的高纯褐藻糖胶 - Google Patents

Abstract

本发明提供了用于修饰和/或纯化的褐藻糖胶和相应的含褐藻糖胶的组合物的组合物、方法、系统等，其抑制纤维性粘连并具有其他优点。纯化/修饰的褐藻糖胶和褐藻糖胶组合物具有降低水平的非褐藻糖胶组分或杂质，例如在起始褐藻糖胶组合物中发现的那些。这种减少的不希望有的组分或杂质包括，例如，结合至褐藻糖胶的不希望有的组分和组合物中不属于褐藻糖胶的部分或不结合至褐藻糖胶的化合物。

Description

用于治疗纤维性粘连的高纯褐藻糖胶

要求优先权

本申请要求共同审查中的于2018年7月27日提交的美国临时专利申请号62,711,364；于2018年7月27日提交的美国临时专利申请号62,711,372；于2018年7月27日提交的美国临时专利申请号62/711,335；于2018年8月1日提交的美国临时专利申请序列号62/713,399；于2018年8月23日提交的美国临时专利申请号62/722,135；于2018年11月2日提交的美国临时专利申请号62/755,311；于2019年1月17日提交的美国临时专利申请号62/793,514；于2019年6月13日提交的美国临时专利申请号62/861,223；共同审查中的于2018年8月1日提交的美国临时专利申请序列号62/713,392；于2018年8月1日提交的美国临时专利申请号62/713,413；于2018年8月23日提交的美国临时专利申请号62/722,137；于2018年11月2日提交的美国临时专利申请号62/755,318；于2019年6月13日提交的美国临时专利申请号62/861,228；共同审查中的于2018年11月2日提交的美国临时专利申请序列号62/755,328；于2019年1月17日提交的美国临时专利申请号62/793,654；以及于2019年6月13日提交的美国临时专利申请号62/861,235，上述专利申请的内容通过引用整体并入本文。

背景技术

褐藻糖胶(包括岩藻多糖)是硫酸酯化的多糖。一般而言，这意味着褐藻糖胶是由许多糖基团组成的分子，并且还具有附接到糖基团上的硫原子。主要的糖基团称为“岩藻糖”，它是具有6个碳原子并且具有化学式C₆H₁₂O₅的糖。“岩藻多糖”(或墨角藻多糖)指示衍生自褐藻(海藻)的褐藻糖胶。褐藻糖胶可以单独存在，或者存在于其他糖的混合物中，例如存在于诸如木糖、半乳糖、葡萄糖、葡糖醛酸和/或甘露糖之类的糖的混合物中。这些其他糖可以与褐藻糖胶一起提取自海藻或其他来源。尽管褐藻糖胶目前衍生自天然来源诸如本文提及的褐藻(海藻)、海参等，但“褐藻糖胶”包括具有如本文所讨论的褐藻糖胶的化学和结构基序的聚合物分子，而与褐藻糖胶的一种或多种最终来源无关。

岩藻多糖可获自多种褐藻物种，包括但不限于：小腺囊藻(Adenocystisutricularis)、泡叶藻(Ascophyllum nodosum)、绳藻(Chorda filum)、Cystoseirabiesmarina、南极公牛藻(Durvillaea antarctica)、褐藻门昆布(Eckloniakurome)、极大昆布(Ecklonia maxima)、爱森藻(Eisenia bicyclis)、岩藻(Fucus evanescens)、墨角藻(Fucus vesiculosis)、羊栖菜(Hizikiafusiforme)、伸长海条藻(HimanthaliaElongata)、笼目海带(Kjellmaniellacrassifolia)、Laminaria brasiliensis、拟菊苣海带(Laminaria cichorioides)、极北海带(Laminaria hyperborea)、日本真海带(Laminariajaponica)、糖海带(Laminaria saccharina)、Lessonia trabeculata、巨藻(Macrocystispyrifera)、Pelvetiafastigiata、沟鹿角菜(PelvetiaCanaliculata)、Saccharina japonica、糖海带(Saccharina latissima)、Sargassum stenophylum、鼠尾藻(Sargassum thunbergii)、海嵩子(Sargassum confusum)、马尾藻科植物羊栖菜(Sargassum fusiforme)及裙带菜(Undaria pinnatifida)。这些示例性物种均来自分类纲褐藻纲(Phaeophyceae)且这些物种中的大部分属于以下科：墨角藻目(Fucales)及海带科(Laminariaceae)。

包括岩藻多糖的褐藻糖胶已示出有效用作预防、抑制和治疗纤维性粘连的形成的屏障物。还发现其用于治疗其他相关疾病及病症。

因此，对包括具有所需高分子量的褐藻糖胶的组合物的需求尚未得到满足，在一些实施方式中，包括将此类组合物修饰以具有所需的硫酸酯化水平和/或医疗上可行的低内毒素水平。本发明的组合物、系统和方法等提供了这些和/或其他优点。

发明内容

除了其他优点之外，还提供了用于褐藻糖胶和包括褐藻糖胶的组合物的组合物、方法、系统等，所述组合物抑制纤维性粘连。本发明的褐藻糖胶和褐藻糖胶组合物包括具有特定含量的所需特定褐藻糖胶组分的褐藻糖胶，包括纯化/修饰的褐藻糖胶。本申请的主体总体上是指纯化/修饰的褐藻糖胶和纯化/修饰的褐藻糖胶组合物；这样的表述包括本文中的所有褐藻糖胶/褐藻糖胶组合物，除非在权利要求中或除非从上下文中明确地限于纯化/修饰的褐藻糖胶/纯化/修饰的褐藻糖胶组合物。在一些实施方式中，所述褐藻糖胶和包括它们的组合物适用于医疗和外科手术应用。所述褐藻糖胶和褐藻糖胶组合物具有降低水平的非褐藻糖胶组分或杂质，例如在原料褐藻糖胶组合物中发现的那些。此类不希望有的组分或杂质包括，例如，与褐藻糖胶结合的不希望有的组分(例如，离子、共价、氢键等)和组合物中的不是褐藻糖胶一部分的化合物或不与褐藻糖胶化学键合和/或离子结合的化合物。不需要的褐藻糖胶组分可量化为与褐藻糖胶比较(例如，w/w)。在下文中，非褐藻糖胶化合物和不希望的褐藻糖胶组合物可以统称为褐藻糖胶和/或本文中包括褐藻糖胶的组合物的杂质。这些纯化的/修饰的褐藻糖胶可以例如减少由于杂质在褐藻糖胶的医疗和外科手术使用期间的危险并发症。

在一些方面，本文的组合物、系统、方法等可以包括具有褐藻糖胶聚合物结构和反荷离子的褐藻糖胶，其中，所述褐藻糖胶聚合物结构基本上由岩藻糖、半乳糖和硫酸酯组成，并且其中，所述褐藻糖胶可以包括不大于约17％的反荷离子，并且其中，褐藻糖胶的岩藻糖、半乳糖、硫酸酯和反荷离子的总含量可大于90％w/w、94％w/w、95％w/w、97％w/w、99％w/w或99.9％w/w。在一些实施方式中，岩藻糖含量可以大于25％w/w、30％w/w、35％w/w。半乳糖含量可以小于10％w/w或5％w/w。总反荷离子含量可以小于17％w/w、14％w/w、10％w/w或7％w/w。

反荷离子可以是药学上可接受的反荷离子，例如铝、精氨酸、苄星、氯普鲁卡因、胆碱、钠、钾、锂、铵、乙二胺、二乙胺、二乙醇胺、乙醇胺、组氨酸、赖氨酸、N-甲基葡糖胺、葡甲胺、普鲁卡因、三乙胺、锌、钙和镁中的至少一种。药学上可接受的反荷离子可以包括钠和钾中的至少一种，由其组成或基本上由其组成。

所述褐藻糖胶可具有分子量分布，其中当使用基本上由以下组成的水性凝胶渗透色谱装置测量时，所述分布的至少60％w/w可大于100kDa：

具有7.8mm内径的一个300mm分析型凝胶渗透色谱柱，装填有羟基化聚甲基丙烯酸酯基凝胶，具有在约50kDa与约5,000kDa之间的有效分子量范围；具有7.8mm内径的一个300mm分析型凝胶渗透色谱柱，装填有羟基化聚甲基丙烯酸酯基凝胶，具有在约1kDa与约6,000kDa之间的有效分子量范围；以及具有6mm内径的一个40mm保护柱，装填有羟基化聚甲基丙烯酸酯基凝胶，所述两个分析型凝胶渗透色谱柱及所述一个保护柱包括于约30℃下的柱室中；

折射率检测器，处于约30℃；

0.1M硝酸钠流动相，以0.6mL/min运行；以及

相对于峰分子量标准曲线进行量化，所述峰分子量标准曲线基本上由以下组成：第一右旋糖酐标准物，具有的峰分子量为约2,200kDa；第二右旋糖酐标准物，具有的峰分子量在约720kDa与约760kDa之间；第三右旋糖酐标准物，具有的峰分子量在约470kDa与约510kDa之间；第四右旋糖酐标准物，具有的峰分子量在约370kDa与约410kDa之间；第五右旋糖酐标准物，具有的峰分子量在约180kDa与约220kDa之间；以及第六右旋糖酐标准物，具有的峰分子量在约40kDa与55kDa之间。

所述褐藻糖胶可具有分子量分布，其中，所述分布的至少92％或97％w/w可大于100kDa。所述褐藻糖胶可以具有大于100kDa的重均分子量，并且可以具有约20％w/w至60％w/w、约30％w/w至55％w/w或约35％w/w和52％w/w之间的硫酸酯化水平。总碳水化合物含量可以在27％w/w至80％w/w之间。葡萄糖醛酸、葡萄糖、甘露糖、鼠李糖和木糖的总含量相对于总碳水化合物含量的百分比可以低于约12％w/w。当以50mg/mL的浓度溶解在水中时，所述褐藻糖胶可以具有约4cP至50cP、约10cP至40cP或约15cP至30cP的粘度。所述褐藻糖胶可以是白色固体，并且当以1mg/mL至100mg/mL的浓度溶于水中时，形成的溶液可以是澄清无色的。所述褐藻糖胶可以包括小于约5％w/w或约2％w/w的乙酰基含量。当在70℃下伴随溶剂信号抑制在配备有5-mm冷探针的600MHz光谱仪上在碳尺寸10-30ppm范围内以8次增量每次256-512次扫描通过2D ¹H-¹³C异核多量子相干测量时，所述褐藻糖胶可以包括的乙酰基含量基本为0％w/w。

本文还包括包括制备或使用本文的褐藻糖胶的方法。该方法包括使用褐藻糖胶治疗纤维性粘连。

本文还提供了在医疗上可接受的缓冲剂或稀释剂中包括治疗有效量的本文褐藻糖胶的医疗上可接受的组合物，以及治疗动物的病症或疾病的方法，包括选择专门用于治疗动物的医疗上可接受的组合物病或疾病，并向动物给药治疗有效量的褐藻糖胶。这种给药可包括向动物给药约0.5mg/kg至50mg/kg或约0.04mg/kg至25mg/kg的褐藻糖胶。治疗有效量也可以在约0.2mg/kg至10mg/kg、1mg/kg至5mg/kg、1.5mg/kg至3mg/kg或5mg/kg至10mg/kg之间。

所述病症或疾病可以是动物中目标部位处的纤维性粘连，并且所述给药可以包括向所述目标部位给药治疗有效量。还包括的是包括约0.02mg/mL至100mg/mL的褐藻糖胶的药物组合物，其中，所述药物组合物被配置和组成为治疗动物的疾病或病症。这样的药物组合物可以包括约0.5mg/mL至5mg/mL的褐藻糖胶，或约2.5mg/mL的褐藻糖胶。所述医疗组合物可以是医疗器械，其可以是液体医疗器械。所述药物组合物可以是药物组合物，其可以是液体药物组合物。该疾病或病症可以是纤维性粘连。

还提供了包括约0.01mL/kg至15mL/kg、0.03mL/kg至4mL/kg、0.06mL/kg至2mL/kg或约2mL/kg至4mL/kg的剂量范围的根据权利要求0至0中任一项所述的用于治疗动物的疾病或病症的医疗组合物的用途。该方法还包括在患者中治疗纤维性粘连，包括将药物组合物给药于患者中的目标部位。目标部位可以是手术部位，并且可以在以下的至少一项中进行给药：a)在手术部位处打开手术伤口之后，b)手术期间，以及c)闭合手术伤口之后。给药可以在手术后并且在闭合手术伤口之前进行，并且可以花费少于3分钟、2分钟或1分钟。目标部位可以是病变部位、擦伤部位和损伤部位中的至少一个。目标部位可以位于骨盆腔、腹腔、背侧腔、颅腔、脊柱腔、腹侧腔、胸腔、胸膜腔和心包腔、关节、肌肉、肌腱和韧带中的至少一种。

本文还包括从起始褐藻糖胶组合物中除去杂质以获得纯化/修饰的褐藻糖胶的方法，其包括：

提供包括杂质的起始褐藻糖胶组合物；

将絮凝助剂添加到起始褐藻糖胶组合物中以产生反应混合物；

通过加热反应混合物来絮凝杂质以产生絮凝的杂质；以及

除去絮凝的杂质。

提供起始褐藻糖胶组合物可以包括提供溶液形式的起始褐藻糖胶组合物，并且所述方法可以进一步包括在减少杂质的溶液中收集纯化/修饰的褐藻糖胶。絮凝杂质可包括在超过大气压压力下加热反应混合物，并且絮凝助剂可包括盐，例如碱金属、碱土金属、铝和/或铵的氯化物、溴化物、碘化物、氟化物、硫酸盐、亚硫酸盐、碳酸盐、碳酸氢盐、磷酸盐、硝酸盐、亚硝酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、硅酸盐和/或氰化物。絮凝助剂可包括碱，其可包括碱金属、碱土金属、铝和/或铵的氢氧化物和/或氧化物。除去的杂质可以包括微粒、脂质、脂肪酸、褐藻多酚、海带多糖、藻酸盐、蛋白质、美拉德反应产物、岩藻黄质、叶绿素、细菌、细胞组分和DNA中的至少一种。

用于从起始褐藻糖胶组合物中除去杂质以获得纯化/修饰的褐藻糖胶的其他方法包括：

提供固体形式的起始褐藻糖胶组合物和不能溶解褐藻糖胶的提取介质，其配置用于溶解杂质；

将起始褐藻糖胶组合物与提取介质混合，以产生纯化/修饰褐藻糖胶与提取介质的混合物；以及

将纯化/修饰的褐藻糖胶与提取介质分离。

该方法可以进一步包括以固体形式收集纯化/修饰的褐藻糖胶。提取介质可以包括相对极性小于0.765的至少一种有机溶剂。相对极性的值可以通过吸收光谱的溶剂位移的测量来归一化。参见例如《有机化学中的溶剂和溶剂作用》(Christian Reichardt,Solvents and Solvent Effects in Organic Chemistry),Wiley-VCH Publishers,第3版,2003年。有机溶剂可包括乙醇、异丙醇、甲醇、苯、二乙醚、十甲基环五硅氧烷、乙酸乙酯、丁醇、己烷、庚烷、庚醇、辛醇和癸醇中的至少一种。提取介质还可包括碱、去污剂和氧化剂中的至少一种。提供固体形式的起始褐藻糖胶组合物可以包括从溶液中沉淀起始褐藻糖胶组合物。除去的杂质可以包括微粒、脂质、脂肪酸、褐藻多酚、海带多糖、藻酸盐、蛋白质、美拉德反应产物、岩藻黄质、叶绿素、细菌、细胞组分和DNA中的至少一种。

用于从原料褐藻糖胶组合物中除去杂质以获得纯化/修饰的褐藻糖胶的其他方法可以包括：

提供包括杂质的起始褐藻糖胶组合物，所述杂质包括溶液中的悬浮杂质；使用离子多价杂质沉淀剂从溶液中沉淀出杂质，从而产生悬浮杂质，沉淀杂质和上清液的混合物；以及

将悬浮杂质和沉淀杂质与上清液分离。

该方法可以进一步包括收集包括纯化/修饰的褐藻糖胶的上清液。离子多价杂质沉淀剂可包括二价或三价阳离子的盐。该盐可以是氯化物、溴化物、碘化物、氟化物、硫酸盐、亚硫酸盐、碳酸盐、碳酸氢盐、磷酸盐、硝酸盐、亚硝酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、硅酸盐和/或氰化物。阳离子可以是碱土金属、锌、铝、铜和/或铁。离子多价杂质沉淀剂可包括二价或三价阳离子的碱。碱可以是碱土金属、锌、铝、铜和/或铁的氢氧化物和/或氧化物。将悬浮杂质和沉淀杂质与上清液分离可以包括通过向悬浮杂质，沉淀杂质和上清液的混合物中添加絮凝剂来絮凝悬浮杂质和沉淀杂质。絮凝剂可包括以下各项中的至少一种：硫酸铝钾；硫酸铝钠；硫酸铝铵；氯化钙；磷酸钠；氢氧化铝；氯化铝；氯化铁；硫酸铁；硫酸亚铁；硅酸钠；硅酸钙；磷酸钙；氯化锌；碳酸钙；碳酸氢钙；硫酸钾；磷酸镁；丙烯酰胺；丙烯酸；氯酸铝；聚氯化铝；单宁；甲醛；三聚氰胺；丙烯酸N,N-二甲基氨基乙酯甲基氯化物；甲基丙烯酸N,N-二甲基氨基乙酯甲基氯化物季铵盐；和聚二烯丙基二甲基氯化铵。该方法可以进一步包括将pH保持在约7至14之间。保持该pH可以包括添加碱。除去的杂质可以包括微粒、脂质、脂肪酸、褐藻多酚、海带多糖、藻酸盐、蛋白质、美拉德反应产物、岩藻黄质、叶绿素、细菌、细胞组分和DNA中的至少一种。

用于从起始褐藻糖胶组合物中除去杂质以获得纯化/修饰的褐藻糖胶的方法可以包括：

提供包括杂质的起始褐藻糖胶组合物；

将起始褐藻糖胶组合物的pH调节至约8-14；

向起始褐藻糖胶组合物添加细胞干扰剂，该干扰剂被配置为裂解细胞组分以产生反应混合物，该反应混合物包括细胞干扰剂，生物分子裂解物和起始褐藻糖胶组合物；以及

从反应混合物中除去细胞干扰剂和生物分子裂解物。

提供起始褐藻糖胶组合物可以包括提供溶液形式的起始褐藻糖胶组合物，并且所述方法还可以包括在减少杂质的溶液中收集纯化/修饰的褐藻糖胶。所述细胞干扰剂可包括去污剂，其可以是阴离子去污剂、阳离子去污剂或非离子去污剂。去污剂可包括十二烷基硫酸钠(SDS)、苯扎氯铵、Triton

Triton

去污剂、

去污剂、脱氧胆酸钠和烷基苯磺酸盐中的至少一种。除去细胞干扰剂和生物分子裂解物可包括向反应混合物中添加被配置用于絮凝细胞干扰剂和生物分子裂解物的絮凝剂。除去细胞干扰剂可以包括向反应混合物中添加沉淀剂，该沉淀剂被配置为使细胞干扰剂不溶于反应混合物中，产生沉淀。除去生物分子裂解物可以包括向反应混合物中加入沉淀剂，该沉淀剂被配置为使生物分子裂解物不溶于反应混合物中，从而产生沉淀。该方法可以进一步包括向反应混合物中添加被配置用于絮凝沉淀的絮凝剂。絮凝剂可包括以下各项中的至少一种：硫酸铝钾；硫酸铝钠；硫酸铝铵；氯化钙；磷酸钠；氢氧化铝；氯化铝；氯化铁；硫酸铁；硫酸亚铁；硅酸钠；硅酸钙；磷酸钙；氯化锌；碳酸钙；碳酸氢钙；硫酸钾；磷酸镁；丙烯酰胺；丙烯酸；氯酸铝；聚氯化铝；单宁；甲醛；三聚氰胺；丙烯酸N,N-二甲基氨基乙酯甲基氯化物；甲基丙烯酸N,N-二甲基氨基乙酯甲基氯化物季铵盐；和聚二烯丙基二甲基氯化铵。

除去阴离子去污剂可包括阴离子吸附；除去阳离子去污剂可包括阳离子吸附；除去非离子型去污剂可包括胶束相分离；并且，除去洗涤剂可以包括疏水吸附。除去洗涤剂可以包括：

稀释反应混合物直至去污剂的浓度可以低于预定浓度；以及

使包括去污剂的反应混合物通过切向流过滤器进行渗滤，其截留分子量高于去污剂的最大分子量。

该方法还可以包括在提供起始褐藻糖胶组合物之后并且在除去细胞干扰剂之前，将螯合剂添加到反应混合物中。螯合剂可以包括乙二胺四乙酸(EDTA)、2,3-二巯基-1-丙醇、乙二胺、卟吩和/或柠檬酸，并且该方法还可以包括在除去细胞干扰剂之前向反应混合物中加入氧化剂-猝灭剂，以淬灭反应混合物中的氧化剂，或在提供起始褐藻糖胶组合物之后和除去细胞干扰剂之前，向反应混合物中添加抑菌剂。抑菌剂可包括亚硫酸钠、乙二胺四乙酸(EDTA)、苯扎氯铵、乙醇和/或硫脲。除去的杂质可以包括微粒、脂质、脂肪酸、褐藻多酚、海带多糖、藻酸盐、蛋白质、美拉德反应产物、岩藻黄质、叶绿素、细菌、细胞组分和DNA中的至少一种。

用于从起始褐藻糖胶组合物中除去杂质以获得纯化/修饰的褐藻糖胶的方法还可以包括：

提供水性起始溶液形式的包括杂质的起始褐藻糖胶组合物；

将水性起始溶液与有机溶剂混合以产生水-有机相混合物；以及

分离水-有机相混合物以获得水性部分和有机部分。

该方法还可以包括收集包括纯化的/修饰的褐藻糖胶的水性部分。所述有机溶剂可以包括相对极性小于0.765的至少一种有机溶剂，其可以是乙醇、异丙醇、甲醇、苯、十甲基环五硅氧烷、乙酸乙酯、己烷、庚醇、辛醇、癸醇、庚烷、乙酸异丁酯、茴香醚、乙酸异丙酯、1-丁醇、乙酸丁酯、甲基异丁酮、戊烷、1-戊醇、乙醚和乙酸丙酯。除去的杂质可以包括微粒、脂质、脂肪酸、褐藻多酚、海带多糖、藻酸盐、蛋白质、美拉德反应产物、岩藻黄质、叶绿素、细菌、细胞组分和DNA中的至少一种。

改变起始褐藻糖胶组合物的阳离子含量的方法可包括：

以起始溶液形式提供起始褐藻糖胶组合物；以及

用螯合剂溶液跨切向流过滤器对起始溶液进行渗滤，从而产生渗余褐藻糖胶组合物。

螯合剂可包括乙二胺四乙酸(EDTA)、2,3-二巯基-1-丙醇、乙二胺、卟吩或柠檬酸中的至少一种。渗余褐藻糖胶组合物可以包括基本上由钠和/或钾组成的阳离子含量。

用于从起始褐藻糖胶组合物中除去杂质以获得纯化/修饰的褐藻糖胶的方法可以进一步包括：

提供包括杂质的起始褐藻糖胶组合物；

在超临界提取器中使起始褐藻糖胶组合物经受高于70巴的合适压力和高于30℃的合适温度；以及

用超临界流体填充超临界提取器，以将杂质除去到超临界流体中；以及在预定的时间之后，除去包括提取的杂质的超临界流体。

该方法还可以包括收集保留在超临界提取器中的纯化/修饰的岩藻糖；压力可以在约70巴至约2000巴之间，温度可以在约30℃至约300℃之间。起始褐藻糖胶组合物可以是液体或固体。超临界流体可包括二氧化碳、乙醇、乙烷、盐酸、氢氟酸、硫酸和硝酸中的至少一种。预定时间量可以在约5分钟至50小时之间。除去的杂质可以包括微粒、脂质、脂肪酸、褐藻多酚、海带多糖、藻酸盐、蛋白质、美拉德反应产物、岩藻黄质、叶绿素、细菌、细胞组分和DNA中的至少一种。

在本申请中阐述了这些和其他方面、特征和实施例，包括以下详细描述和附图。除非另有明确说明，否则所有实施例、方面、特征等都可以以任何期望的方式混合和匹配、组合和置换。

附图说明

图1示意性地描绘了示例性系统，其用于在切向流过滤中使用螯合剂来改变起始褐藻糖胶组合物的阳离子含量并除去低分子量非褐藻糖胶组合物。

图2A描绘了NMR结果，其表明根据本文的方法处理的某些褐藻糖胶经历了褐藻糖胶的结构变化。

图2B描绘了2-D NMR结果，表明根据本文的方法处理的某些褐藻糖胶经历了褐藻糖胶的结构变化。

附图呈现了本发明的组合物，方法等的一些方面的示例性实施例。本文中的系统，方法等的实施例可以包括附图中未示出的其他特征或步骤。此外，本文阐述的示例以一种或多种形式示出了系统、方法等的实施例，并且这些示例不应被解释为以任何方式限制本公开的范围。本文的实施例不是穷举的，并且不将本公开限制为例如在以下详细描述中公开的精确形式。

具体实施方式

本文提出的当前组合物、系统、方法等包括纯化/修饰的褐藻糖胶。本发明的组合物可有效用于药物治疗、手术后治疗、疾病抑制等。在一些实施方式中，褐藻糖胶为岩藻多糖。本发明的纯化/修饰的褐藻糖胶本身可以是或可以包括在医疗器械、医疗材料、组合产品中或之中，或者可以包括在药学上可接受的、治疗和/或医疗有效的组合物中。

以下段落转向对本文中包括纯化/修饰的褐藻糖胶的一些组合物的简要一般性讨论，包括可以使用本文中讨论的方法从通过任何方法可以使用任何合适的反应进行的褐藻糖胶组合物开始制备褐藻糖胶组合物而产生的那些混合物，例如溶液、悬浮液、固体、凝胶或其他形式，具体取决于所选择的方法。

组合物

在某些实施方式中，本文提出的当前组合物、系统等提供了褐藻糖胶和医疗上可接受的纯化/修饰的褐藻糖胶，以及包括治疗有效量的纯化/修饰的褐藻糖胶和组合物，用于治疗纤维性粘连，例如外科手术粘连、关节炎、牛皮癣或其他所需疾病。纯化/修饰的褐藻糖胶可包括大于约75％w/w的总岩藻糖、半乳糖和硫酸酯，例如大于约80％w/w和大于84％w/w的总岩藻糖、半乳糖和硫酸酯。在一些实施方式中，纯化/修饰的褐藻糖胶可进一步包括至多约至少5％、7％、9％、10％或11％w/w的至少一种反荷离子。在一些实施方式中，反荷离子是药学上可接受的反荷离子。在一些实施方式中，反荷离子与褐藻糖胶上存在的硫酸酯离子键合。药学上可接受的反荷离子可包括铝、精氨酸、苄星、氯普鲁卡因、胆碱、钠、钾、锂、铵、乙二胺、二乙胺、二乙醇胺、乙醇胺、组氨酸、赖氨酸、N-甲基葡糖胺、葡甲胺、普鲁卡因、三乙胺、锌、钙和镁中的至少一种。褐藻糖胶的含硫组合物通过C-O-S键结合。根据各种因素，可以认为这种键合中的氧主要与碳或硫键合。本文所用的术语“硫酸酯”是指两个实施方式。

在某些实施方式中，本文的纯化/修饰的褐藻糖胶包括至少约85％w/w、90％w/w、94％w/w、97％w/w或98％w/w岩藻糖、半乳糖、硫酸酯和反荷离子。示例性的反荷离子包括至多约7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％或15％w/w的钙、镁、钾和/或钠。在一些实施方式中，纯化/修饰的褐藻糖胶包括至少约25％、30％或35％w/w岩藻糖。在一些实施方式中，纯化/修饰的褐藻糖胶包括小于约10％、5％或4％w/w的半乳糖。在一些实施方式中，纯化/修饰的褐藻糖胶基本上由岩藻糖、半乳糖、硫酸酯和反荷离子组合物的总和组成。在一些实施方式中，本文中的褐藻糖胶基本上或完全缺乏除岩藻糖和半乳糖之外的所有糖组合物。在一些实施方式中，本文中的褐藻糖胶基本上或完全缺乏葡糖醛酸、甘露糖、鼠李糖、木糖、半乳糖或葡萄糖中的一种或多种；或其中的一种或多种缺乏。如该句子中所使用的，“基本上缺乏”表示这种糖组分的存在(如果有的话)足够低，以至于该存在在药学和医疗上都不重要。

在一些另外的实施方式中，本文的纯化/修饰的褐藻糖胶可用于多种应用，包括抑制、预防、除去、减少或其他治疗纤维性粘连和其他目标以及其他疾病和/或病症。治疗包括褐藻糖胶减少或预防目标疾病或其他病症的发展，例如减少或防止在目标部位形成纤维状粘连，该目标部位通常是由外科医生或其他从业者确定为包括或包括在内的选定目标部位。合理地易于具有纤维性粘连(或其他疾病或病症)，并且还包括消除现有疾病或其他病症，包括例如消除已经存在的纤维性粘连。为了进行这样的抑制、预防、除去、减少或其他处理，通常在医疗上可接受的医疗器械，组合产品或药学上有效的组合物中提供褐藻糖胶，其还包括诸如粘合剂、佐剂、赋形剂等的附加组分，以及如需要的话，它们可以包括在组合物中但不与褐藻糖胶结合的和/或可以与褐藻糖胶结合的另外的医疗活性物质，例如第二种药物。

在另外的实施方式中，包括本文中的纯化/修饰的褐藻糖胶的组合物可以是固体，例如，含水量小于约7％w/w，例如小于约6％、5％w/w、4％w/w、3％w/w或2％w/w的固体组合物。

可以使用任何期望的合适的测量系统来测量纯化/修饰的褐藻糖胶的分子量分布。不同的系统可以从组成基本相同的不同组分，甚至在测量方法不同时甚至从同一批次中得到不同的读数或结果。一种合适的测量系统为水性凝胶渗透色谱装置，其基本上由以下组成：具有7.8mm内径的一个300mm分析型凝胶渗透色谱柱，装填有羟基化聚甲基丙烯酸酯基凝胶，具有在约50kDa与约5,000kDa之间的有效分子量范围；具有7.8mm内径的一个300mm分析型凝胶渗透色谱柱，装填有羟基化聚甲基丙烯酸酯基凝胶，具有在约1kDa与约6,000kDa之间的有效分子量范围；以及具有6mm内径的一个40mm保护柱，装填有羟基化聚甲基丙烯酸酯基凝胶，两个分析型凝胶渗透色谱柱及一个保护柱包含于约30℃下的柱室中；折射率检测器，在约30℃下；0.1M硝酸钠流动相，以0.6mL/min运行；以及相对于峰分子量标准曲线进行量化，该峰分子量标准曲线基本上由以下组成：第一右旋糖酐标准物，峰分子量为约2,200kDa；第二右旋糖酐标准物，峰分子量在约720kDa与约760kDa之间；第三右旋糖酐标准物，峰分子量在约470kDa与约510kDa之间；第四右旋糖酐标准物，峰分子量在约370kDa与约410kDa之间；第五右旋糖酐标准物，峰分子量在约180kDa与约220kDa之间；以及第六右旋糖酐标准物，峰分子量在约40kDa与55kDa之间。峰分子量标准曲线可进一步包括峰分子量在3kDa与5kDa之间的右旋糖酐标准物。

本文中的纯化/修饰的褐藻糖胶可以具有分子量分布，其中至少约25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、90％、92％、97％或98％w/w的分布大于100kDa。本文中的纯化/修饰的褐藻糖胶可包括具有分子量分布的褐藻糖胶，其中至少约50％、60％、70％、80％或90％w/w的分布大于200kDa。本文中的纯化/修饰的褐藻糖胶可具有分子量分布，其中至少约25％、30％、40％、50％、60％、70％或75％w/w的分布大于500kDa。本文中的纯化/修饰的褐藻糖胶可具有分子量分布，其中至少约5％、10％、20％、30％或40％w/w的分布大于1600kDa。

本文的纯化/修饰的褐藻糖胶可具有大于约100kDa的重均分子量，例如约100kDa至约10,000kDa，约200kDa至约8,000kDa，约350kDa至约8,000kDa，在约450kDa与约8,000kDa之间，在约580kDa与约8,000kDa之间，或在约800kDa与约2,000kDa之间。本文的纯化/修饰的褐藻糖胶的峰分子量可以大于约70kDa，例如在约70kDa与约1200kDa之间，在约100kDa与约1200kDa之间，在约200kDa与约1200kDa之间，在约400kDa与约1200kDa之间，或约400kDa和约900kDa之间。

本文的纯化/修饰的褐藻糖胶的数均分子量可大于约50kDa，在约50kDa至约1,000kDa之间，在约70kDa至约1000kDa之间，在约150kDa至约1000kDa之间，约250kDa至约1000kDa，或约250kDa至约700kDa。

本文的纯化/修饰的褐藻糖胶可具有的硫酸酯化水平约10％w/w至70％w/w，约20％w/w至65％w/w，约30％w/w和60％w/w，或介于40％w/w和60％w/w之间。

本文的纯化/修饰的褐藻糖胶可具有的总岩藻糖：总硫酸酯的摩尔比为约1：0.5至1：4，约1：0.8至1：3.5，约1：1至1：2.5，介于约1：1.2和1：2.0之间，或介于约1：1.5和1：3之间。本文的纯化/修饰的褐藻糖胶可具有的总岩藻糖与半乳糖：总硫酸酯的摩尔比为约1：0.5至1：4，约1：0.8至1：3.5，约1：1至1：2.5，大约在1：1.2和1：2.0之间，或在大约1：1.5和1：3之间。

本文的纯化/修饰的褐藻糖胶可具有的总碳水化合物含量约27％w/w至70％w/w，约30％w/w至80％w/w，约40％w/w至90％w/w，或约50％w/w和100％w/w之间。本文的纯化/修饰的褐藻糖胶可具有的岩藻糖含量占总碳水化合物的百分比为约30％w/w至100％w/w，介于约40％w/w至95％w/w之间，或介于约50％之间w/w和90％w/w。本文中的褐藻糖胶可以具有的半乳糖含量占总碳水化合物的百分比为0％w/w和60％w/w，在约5％w/w和30％w/w之间，或在约8％w/w之间和10％w/w。本文中的褐藻糖胶可以具有的葡萄糖醛酸含量占总碳水化合物含量的百分比在约0％w/w至10％w/w之间，甘露糖含量占总碳水化合物含量的百分比在约0％w/w至7％w/w，鼠李糖含量占总碳水化合物含量的百分比介于0％w/w和4％w/w之间，木糖含量占总碳水化合物含量的百分比介于0％w/w和20％w/w之间。本文中的褐藻糖胶可具有的总葡糖醛酸、甘露糖、鼠李糖、葡萄糖和木糖含量小于约30％w/w，或小于约12％w/w。

在一些实施方式中，当以50mg/mL的浓度溶解在水中时，本文中的纯化/修饰的褐藻糖胶具有约4cP至约50cP，约5cP至约40cP，大约10cP和大约30cP，大约15cP，大约20cP和大约25cP。在某些实施方式中，当以1mg/mL至100mg/mL的浓度溶于水中时，本文的纯化/修饰的褐藻糖胶形成溶液，其为澄清且无色、澄清且浅黄色、或澄清且浅棕色中的一种。

本文的纯化/修饰的褐藻糖胶可以糊剂、凝胶剂、贴剂、薄膜、喷雾剂、液体、洗剂、霜剂、溶液、悬浮液、固体、植入物、微球或其他所需形式提供。

本文提出的组合物可以是基本上由纯化/修饰的褐藻糖胶组成的固体。纯化/修饰的褐藻糖胶可以基本上由岩藻糖、半乳糖、硫酸酯和反荷离子组成。

本文的纯化/修饰的褐藻糖胶可以在溶液中包括约0.01mg/mL至约300mg/mL的褐藻糖胶，例如约0.1mg/mL至约100mg/mL，约1mg/mL至约50mg/mL，约20mg/mL至约80mg/mL。褐藻糖胶可以基本上由岩藻糖、半乳糖、硫酸酯和反荷离子组成。

纯化/修饰的褐藻糖胶可在凝胶中包括约100mg/mL至约1000mg/mL的褐藻糖胶，例如约100mg/mL至约500mg/mL和约300mg/mL至约800mg/mL。褐藻糖胶可以基本上由岩藻糖、半乳糖、硫酸酯和反荷离子组成。

纯化/修饰的褐藻糖胶可以在薄膜中包括约100mg/mL至约1000mg/mL的褐藻糖胶，例如约100mg/mL至约500mg/mL和约300mg/mL至约800mg/mL。褐藻糖胶可以基本上由岩藻糖、半乳糖、硫酸酯和反荷离子组成。

本文的纯化/修饰的褐藻糖胶可以作为医疗器械、组合产品和/或药物组合物的组合物给药，所述药物组合物和/或药物组合物包括许多药学上可接受的赋形剂，例如明胶、羟丙甲纤维素、乳糖、注射用水USP、氯化钠、磷酸钠、柠檬酸钠、抗坏血酸钠、磷酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、磷酸盐柠檬酸盐缓冲液、普朗尼克、纤维素、藻酸盐、丙烯酸酯、透明质酸、聚乙二醇、壳聚糖、可注射赋形剂和乳酸钠林格注射液。

本文的纯化/修饰的褐藻糖胶可以糊剂、凝胶剂、贴剂、薄膜、喷雾剂、液体、洗剂、霜剂、溶液、悬浮液、固体、植入物、微球或其他所需形式给药。

可以通过静脉内、关节内、病灶内、阴道内、直肠、肌内、腹膜内、皮下、局部、鼻内、眼内或口服给药途径给予纯化/修饰的褐藻糖胶。纯化/修饰的褐藻糖胶可以直接递送至疾病部位。纯化/修饰的褐藻糖胶可以通过从聚合物剂型中的受控释放而连续释放到疾病部位。

本文的纯化/修饰的褐藻糖胶可以作为包括纯化/修饰的褐藻糖胶和至少一种其他药物的药物组合物的组合物给药。该药物可以是紫杉醇、阿霉素、喜树碱、依托泊苷、米托蒽醌、甲氨蝶呤、甲萘醌、西洋甘菊、胡桃酮、β-拉帕酮环孢菌素、柳氮磺吡啶、类固醇、雷帕霉素、维甲酸、多西他赛、秋水仙碱、反义寡核苷酸和核酶中的至少一种。

在某些实施方式中，本文的纯化/修饰的褐藻糖胶可具有的乙酰基含量小于约5％w/w，小于约2％w/w和约0％w/w。在一些实施方式中，当在70℃下伴随溶剂信号抑制在配备有5-mm冷探针的600MHz光谱仪上在碳尺寸10-30ppm范围内以256-512的8次增量扫描每次通过2D ¹H-¹³C异核多量子相干测量时，本文的纯化/修饰的褐藻糖胶包含基本上0％w/w的乙酰基含量。

方法

提供了用于纯化和/或修饰褐藻糖胶例如，从包括褐藻糖胶的起始褐藻糖胶组合物，例如原料褐藻糖胶组合物，或其他含褐藻糖胶的组合物的方法，系统等。如本文所用，“杂质”是指非岩藻糖、半乳糖、硫酸酯或反荷离子的褐藻糖胶的任何组合物，并且是指存在于包括褐藻糖胶的组合物中的任何非褐藻糖胶组合物或化合物或物质。杂质可以与褐藻糖胶结合，例如，与褐藻糖胶离子结合和/或化学结合的蛋白质，褐藻糖胶聚合物结构一部分的岩藻糖和半乳糖以外的糖残基，与褐藻糖胶化学结合的其他糖类以及非褐藻糖胶不与所述褐藻糖胶结合但存在于起始褐藻糖胶组合物中的杂质，例如原料褐藻糖胶组合物。此类杂质的例子包括但不限于微粒、脂质、脂肪酸、褐藻多酚、海带多糖、藻酸盐、蛋白质、美拉德反应产物、岩藻黄质、叶绿素、细菌、细胞组分和DNA，其中一些含有发色团并存在。在起始褐藻糖胶组合物中具有棕色，黄色和绿色，并且其中一些可以离子和/或化学结合到起始褐藻糖胶组合物中的或其一部分。在某些实施方式中，本文的方法等可用于制备包括至少约88％w/w、89％w/w、90％w/w、91％w/w、92％w/w、93％w/w、94％w/w、95％w/w、96％w/w、97％w/w、97.1％w/w、98％w/w、98.8％w/w、99％w/w、99.5％w/w或99.9％w/w的岩藻糖、半乳糖、硫酸酯和反荷离子的纯化/修饰的褐藻糖胶。在一些实施方式中，纯化/修饰的褐藻糖胶包括至少约75％、78％、80％、82％或84％w/w的岩藻糖、半乳糖和硫酸酯。在一些实施方式中，纯化/修饰的褐藻糖胶包括小于约0.1％、0.5％、1％、2.9％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％或12％w/w的杂质。这些杂质中的一些可能会在医疗上和/或在外科手术上使用褐藻糖胶时引起危险的并发症。

在一些实施方式中，本公开内容提供了具有低含量的杂质的纯化的/修饰的褐藻糖胶，其适合于医疗和外科手术应用，例如，防止纤维性粘连。

以下段落转向可用于产生本文中的纯化/修饰的褐藻糖胶的一些方法的简要一般讨论。

物理絮凝

包括高含量杂质的原料褐藻糖胶组合物，例如原料褐藻糖胶组合物经历杂质的絮凝，其可以是物理诱导的絮凝。该方法可以包括：提供起始褐藻糖胶组合物；和将絮凝助剂加入到起始褐藻糖胶组合物中以产生反应混合物；通过加热反应混合物，使起始褐藻糖胶组合物中的杂质絮凝；从反应混合物中分离出絮凝杂质；分离后收集所需的纯化/修饰的褐藻糖胶。

通过加热反应混合物来絮凝杂质可以包括加热反应混合物，同时使反应混合物经受超过大气压的压力。合适的絮凝助剂包括但不限于盐和/或碱，例如碱金属、碱土金属、铝和/或铵的氯化物、溴化物、碘化物、氟化物、硫酸盐、亚硫酸盐、碳酸盐、碳酸氢盐、磷酸盐、硝酸盐、亚硝酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、硅酸盐、氧化物、氢氧化物和/或氰化物，例如氯化钠、硫酸钠、氯化钾、硫酸钙、磷酸钠、硝酸钠、氯化锂、硝酸锂、氯化铵、碳酸钠、氢氧化钠。从反应混合物中分离出絮凝的杂质可包括对反应混合物进行离心、过滤、沉降或流体动力分离中的一种或多种。

本文中的方法等可以进一步包括在添加絮凝助剂之前脱盐起始褐藻糖胶组合物。脱盐可包括将水溶液形式的初始褐藻糖胶组合物通过分子量截留(MWCO)切向流过滤(TFF)过滤器渗滤。渗滤可包括用蒸馏水渗滤起始褐藻糖胶组合物。分子量截留TFF过滤器的分子量截留可以小于或大于或等于纯化的/修饰的褐藻糖胶中的所需分子量分离点或目标，例如50kDa、70kDa、100kDa、200kDa、300kDa、500kDa或1000kDa截留分子量。

该方法可以在基本和中性环境中执行。因此，将絮凝助剂添加到起始褐藻糖胶组合物中可包括使起始褐藻糖胶组合物呈碱性以防止或抑制起始褐藻糖胶组合物中的褐藻糖胶降解，因为褐藻糖胶在酸性环境中易于降解。在其他实施方式中，该方法可以通过将反应混合物保持在pH等于或大于7或更高来进行。

在一些实施方式中，起始褐藻糖胶组合物可以溶液形式提供。适用于通过上述方法处理的褐藻糖胶的实例包括但不限于岩藻多糖，并且溶液中褐藻糖胶的浓度可以在0.01％w/v与50％w/v之间。可以通过上述方法除去的杂质包括但不限于微粒、脂质、脂肪酸、褐藻多酚、海带多糖、藻酸盐、蛋白质、美拉德反应产物、岩藻黄质、叶绿素、细菌、细胞组分和DNA。

固相提取

对诸如在原料褐藻糖胶组合物中的包括不期望含量的杂质(包括非常高含量的杂质)的原料褐藻糖胶组合物(例如原料褐藻糖胶组合物)中的褐藻糖胶进行固相提取。所述方法可以包括：以固体形式提供包括杂质和构造成用于溶解杂质的不能溶解褐藻糖胶的提取介质的起始褐藻糖胶组合物；和将起始褐藻糖胶组合物与提取介质混合以形成不溶解的固体褐藻糖胶组合物和提取介质的混合物，提取介质包括溶解的杂质；将纯化的未溶解的固态褐藻糖胶与含有溶解杂质的提取介质分离；从提取介质中除去纯化/修饰的褐藻糖胶后，以固体形式收集纯化/修饰的褐藻糖胶。分离可包括例如离心、过滤、沉降和流体动力流体分离中的一种或多种。

提取介质可包括例如碱、去污剂和氧化剂中的一种或多种。不溶解褐藻糖胶的合适的提取介质包括相对极性小于0.765的有机溶剂，例如乙醇、异丙醇、甲醇、苯、乙醚、十甲基环五硅氧烷、乙酸乙酯、丁醇、己烷、庚烷、庚醇、辛醇和癸醇。合适的碱包括但不限于氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂和氢氧化钙。合适的氧化剂包括但不限于过氧化氢、过氧化脲和氧化性漂白剂中的一种或多种，包括次氯酸钠。合适的去污剂包括但不限于非离子表面活性剂，例如

和

系列去污剂；阴离子表面活性剂，例如十二烷基硫酸钠(SDS)、脱氧胆酸钠；阳离子表面活性剂，例如苯扎氯铵(BAC)。适用于本文方法的特定褐藻糖胶包括但不限于岩藻多糖。原始的例如褐藻糖胶组合物与提取介质的混合可以从一分钟延长至120小时。

所述方法可以进一步包括在以固体形式提供所述起始褐藻糖胶组合物之前使所述起始褐藻糖胶组合物脱盐。脱盐可包括将起始褐藻糖胶组合物以水溶液形式通过分子量截留(MWCO)切向流过滤(TFF)过滤器渗滤。渗滤可包括用蒸馏水渗滤起始褐藻糖胶组合物。截留分子量TFF过滤器的截留分子量可以小于或大于或等于纯化的/修饰的褐藻糖胶中的所需分子量分离点或目标，例如50kDa、70kDa、100kDa、200kDa、300kDa、500kDa或1000kDa截留分子量。渗滤可进一步包括通过合适的预过滤器将起始褐藻糖胶组合物预过滤以除去颗粒物质。该方法可以进一步包括在以固体形式提供起始褐藻糖胶组合物之前，将合适的起始褐藻糖胶组合物在溶液中冻干。该方法可以进一步包括在以固体形式提供起始褐藻糖胶组合物之前，从溶液中沉淀合适的起始褐藻糖胶组合物。合适的沉淀剂包括但不限于乙醇、异丙醇、丙醇、丙酮、甲醇、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺、乙二醇、四氢呋喃、乙腈、甘醇二甲醚、二甘醇二甲醚、二恶烷、褐藻糖胶的溶解度随沉淀液极性的降低而降低。可以通过上述方法除去的杂质包括但不限于微粒、脂质、脂肪酸、褐藻多酚、海带多糖、藻酸盐、蛋白质、美拉德反应产物、岩藻黄质、叶绿素、细菌、细胞组分和DNA。

化学诱导沉淀

包括高水平杂质(例如，包括悬浮颗粒)的起始褐藻糖胶组合物，例如原料褐藻糖胶组合物经历了化学诱导的杂质沉淀。在某些实施方式中，所述方法可包括：以起始溶液形式提供起始褐藻糖胶组合物；和通过离子多价杂质沉淀剂从起始溶液中沉淀出杂质，以提供悬浮杂质，沉淀杂质和上清液的混合物；将悬浮杂质和沉淀杂质与上清液分离；将悬浮杂质和沉淀杂质与上清液分离之后，收集包括所需的纯化/修饰的褐藻糖胶的上清液。

合适的杂质沉淀剂包括离子多价盐和/或二价和三价阳离子的碱。此类合适的盐的实例包括但不限于碱土金属、锌、铝、铜和铁的氯化物、溴化物、碘化物、氟化物、硫酸盐、亚硫酸盐、碳酸盐、碳酸氢盐、磷酸盐、硝酸盐、亚硝酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、硅酸盐和/或氰化物。这种合适的碱的实例包括但不限于碱土金属、锌、铝、铜和/或铁的氢氧化物和/或氧化物。将悬浮杂质和沉淀杂质与上清液分离可包括使混合物中的杂质絮凝。合适的絮凝剂包括但不限于硫酸铝钾；硫酸铝钠；硫酸铝铵；氯化钙；磷酸钠；氢氧化铝；氯化铝；氯化铁；硫酸铁；硫酸亚铁；硅酸钠；硅酸钙；磷酸钙；氯化锌；碳酸钙；碳酸氢钙；硫酸钾；磷酸镁；丙烯酰胺；丙烯酸；氯酸铝；聚氯化铝；单宁；甲醛；三聚氰胺；丙烯酸N,N-二甲基氨基乙酯甲基氯化物；甲基丙烯酸N,N-二甲基氨基乙酯甲基氯化物季铵盐；和聚二烯丙基二甲基氯化铵。从前述絮凝剂列表可以看出，在一些实施方式中，该絮凝剂可以是杂质沉淀剂。将悬浮杂质和沉淀杂质与上清液分离可以包括离心、分离、过滤、沉降和杂质与上清液的混合物的流体动力学分离中的至少一种。

该方法可以进一步包括在提供起始褐藻糖胶组合物之前使该起始褐藻糖胶组合物脱盐。脱盐可以包括将水溶液形式的起始褐藻糖胶组合物通过TFF过滤器渗滤。渗滤可包括用蒸馏水渗滤起始褐藻糖胶组合物。渗滤可包括通过具有5kDa、10kDa、30kDa、50kDa、70kDa或100kDa的MWCO的TFF过滤器渗滤起始褐藻糖胶组合物。渗滤可进一步包括通过合适的预过滤器将起始褐藻糖胶组合物预过滤以除去颗粒物质。

该方法可以进一步包括保持pH在约7和14之间以抑制或防止在酸性环境中的褐藻糖胶降解。保持pH在约7至14之间可以包括添加合适的碱，例如氢氧化钠。可以在通过离子-多价杂质沉淀剂从溶液中沉淀出杂质之前，将合适的碱加入到起始褐藻糖胶组合物中。在其他实施方式中，可以在通过离子-多价杂质沉淀剂从溶液中沉淀出杂质之后，将合适的碱加入沉淀杂质和上清液的混合物中。在其他实施方式中，可以将悬浮杂质和沉淀杂质与上清液分离之后，将合适的碱加入到上清液中。

适用于通过上述方法处理的褐藻糖胶的实例包括但不限于岩藻多糖，并且褐藻糖胶在溶液中的浓度可以在0.01％w/v至50％w/v之间。可以通过上述方法除去的杂质包括但不限于微粒、脂质、脂肪酸、褐藻多酚、海带多糖、藻酸盐、蛋白质、美拉德反应产物、岩藻黄质、叶绿素、细菌、细胞组分和DNA。

裂解和絮凝

包括高含量杂质的起始褐藻糖胶组合物，例如原料褐藻糖胶组合物进行裂解和絮凝。该实施例中的方法可以包括：提供起始褐藻糖胶组合物；和使起始褐藻糖胶组合物呈碱性；向所述起始褐藻糖胶组合物中添加细胞干扰剂以产生反应混合物，所述细胞干扰剂裂解所述褐藻糖胶起始组合物中的细胞组分，并将包括生物分子组合物的裂解物释放到碱性反应混合物中；从反应混合物中除去细胞干扰剂和至少一部分杂质，剩下的未降解的所需的纯化的褐藻糖胶。

除去细胞干扰剂可包括沉淀、絮凝、切向流过滤、胶束相分离、离子吸附和疏水吸附中的任何一种或多种。杂质的除去可以包括沉淀、絮凝、切向流过滤、胶束相分离、离子吸附和疏水吸附中的任何一种或多种。这些除去方法中的任何一种或除去方法的组合中的任何一种都可以包括对固相和液相的任何混合物进行离心、过滤、沉降或流体动力分离。

合适的细胞干扰剂包括但不限于阴离子、非离子和阳离子去污剂，例如十二烷基硫酸钠(SDS)、苯扎氯铵、Triton

Triton

去污剂、

去污剂、钠脱氧胆酸盐和烷基苯磺酸盐。

在方法的一个实施方式中，细胞干扰剂是十二烷基硫酸钠(SDS)，并且除去细胞干扰剂包括添加沉淀剂，以使细胞干扰剂不溶于碱性反应混合物中并由此沉淀细胞。在该实施方式中，除去细胞干扰剂可以进一步包括将絮凝剂添加到反应混合物中以使沉淀的细胞干扰剂以及至少一部分杂质凝聚。除去细胞干扰剂可进一步包括在絮凝之后离心。

十二烷基硫酸钠和烷基苯磺酸钠的合适的沉淀剂包括但不限于氢氧化钾、氯化钾、氯化钙、碳酸钙和氯化钡。合适的絮凝剂包括但不限于硫酸铝钾；硫酸铝钠；硫酸铝铵；氯化钙；磷酸钠；氢氧化铝；氯化铝；氯化铁；硫酸铁；硫酸亚铁；硅酸钠；硅酸钙；磷酸钙；氯化锌；碳酸钙；碳酸氢钙；硫酸钾；磷酸镁；丙烯酰胺；丙烯酸；氯酸铝；聚氯化铝；单宁；甲醛；三聚氰胺；丙烯酸N,N-二甲基氨基乙酯甲基氯化物；甲基丙烯酸N,N-二甲基氨基乙酯甲基氯化物季铵盐；和聚二烯丙基二甲基氯化铵。

由此应理解，细胞干扰剂可在沉淀过程中发生变化。例如但不限于，如果细胞干扰剂是十二烷基硫酸钠(SDS)，则沉淀剂可以是氢氧化钾(KOH)，并且钠阳离子可以作为沉淀过程的一部分被钾取代，所得十二烷基硫酸钾是不溶的。在反应混合物中并由此沉淀。十二烷基硫酸盐阳离子在功能上是SDS的细胞干扰部分，在此过程中保持完整。

在该方法的其他实施方式中，细胞干扰剂可以是十二烷基硫酸钠(SDS)和脱氧胆酸钠中的一种或多种，并且除去细胞干扰剂包括阴离子吸附。阴离子吸附可包括在合适的时间内加入合适的带正电的吸附剂，然后除去吸附剂。阴离子吸附可进一步包括使反应混合物以合适的流速流过装有合适的带正电荷的吸附剂的柱或过滤器。

在方法的其他实施方式中，细胞干扰剂可以是苯扎氯铵，细胞干扰剂的除去包括阳离子吸附。阳离子吸附可包括在合适的时间段内添加合适的带负电荷的吸附剂，然后除去吸附剂。阳离子吸附可进一步包括使反应混合物以合适的流速流过装有合适的带负电荷的吸附剂的柱或过滤器。

在方法的其他实施方式中，细胞干扰剂可以是Triton

Triton

和

去污剂中的一种或多种，并且除去细胞干扰剂包括胶束相分离。胶束相分离可包括改变反应混合物的温度，使得反应混合物的温度超过细胞干扰剂的浊点。胶束相分离可包括离心反应混合物以获得所需的相分离。

在方法的其他实施方式中，细胞干扰剂可以是十二烷基硫酸钠(SDS)、苯扎氯铵、Triton

Triton

洗涤剂、

洗涤剂、脱氧胆酸钠中的任何一种或多种，和烷基苯磺酸盐的除去以及细胞干扰剂的除去包括疏水性吸附以及稀释和切向流过滤(TFF)的一种或多种。疏水吸附可包括在合适的时间段内添加合适的疏水吸附剂，然后除去吸附剂。疏水吸附可包括使反应混合物以合适的流速流过填充有合适的疏水吸附剂的柱或过滤器。通过稀释和TFF除去可包括稀释反应混合物，使得细胞干扰剂降至其临界胶束浓度以下，因此可通过切向流过滤在合适的分子量截留(MWCO)TFF过滤器上除去。用于从含有褐藻糖胶的截留渗透细胞干扰剂。通过稀释和TFF除去可包括在反应容器上用合适数量的重质渗滤反应混合物。

该方法可以进一步包括将螯合剂添加到反应混合物中以螯合反应混合物中的游离多价阳离子。螯合剂可以在提供起始褐藻糖胶组合物之后并且在除去细胞干扰剂之前添加。该方法可以进一步包括猝灭反应混合物中的氧化剂。氧化剂的淬灭可以包括在除去细胞干扰剂之前或之后向反应混合物中加入氧化剂猝灭剂。

该方法可以包括将抑菌剂添加到反应混合物中。可以在提供起始褐藻糖胶组合物之后并且在除去细胞干扰剂之前添加抑菌剂。合适的抑菌剂包括但不限于亚硫酸钠、乙二胺四乙酸(EDTA)、苯扎氯铵、乙醇和硫脲。

合适的螯合剂包括但不限于乙二胺四乙酸(EDTA)、2,3-二巯基-1-丙醇、乙二胺、卟吩和柠檬酸。合适的氧化剂猝灭剂包括但不限于亚硫酸盐、亚硝酸盐和亚磷酸盐。从上面显而易见的是，列出的几种化合物在该方法中可能具有一种以上的功能。

合适的疏水性吸附剂包括但不限于活性炭、硅藻土、丙烯酸酯非离子树脂、聚苯乙烯非离子树脂、苯乙烯-二乙烯基苯(DVB)非离子树脂。合适的阴离子吸附剂包括但不限于：胺官能化的苯乙烯-DVB树脂、胺官能化的甲基丙烯酸酯树脂、胺官能化的甲基丙烯酸甲酯树脂、胺官能化的甲基丙烯酸丁酯树脂、胺官能化的琼脂糖树脂、胺官能化的葡聚糖树脂、胺官能化的陶瓷基树脂、胺官能化的硅酸盐以及脂质除去剂(LRA)。

在一些实施方式中，起始褐藻糖胶组合物可以溶液形式提供。适用于通过上述方法处理的示例褐藻糖胶包括但不限于岩藻多糖。起始褐藻糖胶组合物在溶液中的褐藻糖胶浓度可大于0.1％w/v且小于30％w/v。细胞干扰剂在溶液中的浓度可以大于0.1％w/v且小于60％w/v。可以通过上述方法除去的杂质包括但不限于微粒、脂质、脂肪酸、褐藻多酚、海带多糖、藻酸盐、蛋白质、美拉德反应产物、岩藻黄质、叶绿素、细菌、细胞组分和DNA。

液液提取

起始褐藻糖胶组合物(例如含有不期望水平的杂质的原料褐藻糖胶组合物)中的褐藻糖胶经历液液提取。该方法可以包括：以水性起始溶液形式提供起始褐藻糖胶组合物；和将起始溶液与有机溶剂混合以获得水-有机相混合物，该混合物具有包括纯化/修饰的褐藻糖胶的水性部分和包括疏水性杂质的有机部分；将水性部分与有机部分分离；收集包括纯化/修饰的褐藻糖胶的水性部分。

该方法可以进一步包括在与水性起始溶液混合有机溶剂之前使该起始褐藻糖胶组合物脱盐。脱盐可包括将起始褐藻糖胶组合物以水溶液形式通过分子量截留(MWCO)切向流过滤(TFF)过滤器渗滤。渗滤可包括用蒸馏水渗滤起始褐藻糖胶组合物。截留分子量TFF过滤器的截留分子量可以小于或大于或等于纯化的/修饰的褐藻糖胶中的所需分子量分离点或目标，例如5kDa、10kDa、30kDa、50kDa、70kDa、100kDa、200kDa、300kDa、500kDa或1000kDa截留分子量。渗滤可进一步包括通过合适的预过滤器将起始褐藻糖胶组合物预过滤以除去颗粒物质。

将水性起始溶液与有机溶剂混合可包括摇动有机溶剂混合物，搅拌有机溶剂混合物，使有机溶剂混合物经受高剪切，将水相再循环至有机相中。并将有机相再循环到水相中。

将水性部分与有机部分分离可以包括离心、倾析、分液漏斗分离和流体动力流分离中的至少一种。

适用于该方法的有机溶剂包括相对极性小于0.765的有机溶剂，例如庚烷、乙酸异丁酯、茴香醚、乙酸异丙酯、1-丁醇、乙酸丁酯、甲基异丁基酮、戊烷、1-戊醇、乙酸乙酯、乙醚和乙酸丙酯。有机相可以包括杂质，例如但不限于脂质、脂肪酸、褐藻多酚、蛋白质、岩藻黄质和/或叶绿素。

渗滤

起始褐藻糖胶组合物(例如包括不期望水平的杂质的原料褐藻糖胶组合物)中的褐藻糖胶进行渗滤。该方法可以包括：跨第一切向流过滤过滤器，用螯合剂溶液对起始溶液形式的起始褐藻糖胶组合物进行渗滤，以产生第一渗余褐藻糖胶组合物和螯合的阳离子组合物的渗透溶液；跨第二切向流过滤过滤器，用第二渗滤溶液对第一渗余组合物进行渗滤，以将残留的螯合剂与第一渗余组合物分离，从而产生包括所需的纯化/修饰的褐藻糖胶液的第二渗余组合物。使第一渗余褐藻糖胶组合物经过第二切向流过滤器进行渗滤可以包括使第一渗余褐藻糖胶组合物经过第一流过滤器进行渗滤。即，在两个渗滤过程中可以使用相同的过滤器。

使起始褐藻糖胶组合物进行渗滤可以包括通过预滤器对起始褐藻糖胶组合物进行预过滤以除去不期望的颗粒物质。使所述初始褐藻糖胶组合物用螯合剂渗滤可以包括使所述初始褐藻糖胶组合物用乙二胺四乙酸(EDTA)、2,3-二巯基-1-丙醇、乙二胺、卟吩或柠檬酸中的一种渗滤。

起始褐藻糖胶组合物在溶液中的褐藻糖胶浓度可以大于0.1％w/v且小于30％w/v。螯合剂在溶液中的浓度可大于0.1％w/v且小于60％w/v。所得的第一和/或第二渗余组合物可包括基本上由钠和/或钾组成的阳离子含量。

图1示出了用于获得起始褐藻糖胶组合物的阳离子含量和/或水平的修饰的阳离子含量修饰系统1200的示意图。溶液中的起始褐藻糖胶组分通过输入供应管线1202供应至褐藻糖胶容器1216。可以通过预过滤器1204对在合适溶剂中的岩藻多糖起始溶液进行预过滤，以除去任何不希望的颗粒物质。预过滤器的规格通常大于要通过阳离子含量修饰系统1200分离的最大聚合物分子。

TFF输入泵1214经由TFF供应管线1212将起始褐藻糖胶组分泵送至TFF过滤器1210。TFF过滤器1210通常作为盒被供应，该盒被设计成允许供应给它的输入流体在其渗余侧通过其过滤器，同时允许渗透物通过一个输出管线排出，而处理后的输入流体则作为渗余物通过另一输出管线离开。TFF输入泵1214在其渗余侧和渗透侧之间在TFF过滤器1210上提供一定水平的压力。在图1中，TFF过滤器1210的渗余物通过TFF渗余物返回管线1218和TFF渗余物阀1217返回到褐藻糖胶容器1216，而渗透物通过TFF渗出物输出管线1219产生，以用于阳离子含量改变系统1200外部使用或将其用于丢弃。

当TFF输入泵1214在TFF过滤器1210上再循环预过滤的岩藻多糖和渗余物时，螯合剂，例如但不限于乙二胺四乙酸(EDTA)、2,3-二巯基-1-丙醇、乙二胺，可以通过第一渗滤溶液供应管线1225将卟吩或柠檬酸从第一渗滤溶液容器1220添加到褐藻糖胶容器1216中的起始褐藻糖胶组合物中。螯合剂用于补充经由TFF渗透物输出管线1219上的渗透物损失的溶剂。和/或确保预定数量的输入褐藻糖胶和螯合剂的重沸物在TFF过滤器1210上循环。该螯合剂螯合起始褐藻糖胶组合物中的阳离子，特别是多价阳离子，然后通过TFF螯合。过滤器1210进入渗透液。通过控制第一渗滤溶液阀1224，可以以脉冲过程添加螯合剂。在其他实施方式中，螯合剂可以以连续方式添加。可以预先确定要在TFF过滤器1210上处理的螯合剂的硬脂酸的数量。该过程可以持续预定的时间，例如约1至约6小时，约3至约12小时以及约10至约24小时。可以针对预定数量的螯合剂继续进行该过程，例如，在约1至约4个透析体积(diavolumes)之间，在约3至约6个透析体积之间，在约5至约10个透析体积之间以及在约7至约20个透析体积之间。当已经达到所需的阳离子含量，例如阳离子含量低于百万分之10(ppm)、低于百万分之1ppm、低于0.1ppm和低于0.01ppm的多价阳离子时，该过程可以继续进行，并且可以测量褐藻糖胶容器1216中的阳离子含量并且终止TFF过程。用第一渗滤溶液对穿过溶液TFF过滤器1210的溶液中的起始褐藻糖胶组合物进行渗滤，得到具有修饰的阳离子含量的第一渗余褐藻糖胶组合物。

该过程的下一步是从褐藻糖胶容器1216中的第一渗余褐藻糖胶组合物中除去残留的螯合剂。这可以通过关闭第一渗滤溶液阀1224，阳离子含量改变系统输出阀1206并允许第二渗滤溶液从第二渗滤溶液容器1230经由第二渗滤溶液供应管线1235和第二渗滤溶液阀1234进入褐藻糖胶容器1216。然后，与之前一样，通过TFF进料管线1212，将褐藻糖胶容器1216中的混合物通过TFF过滤器1210进行TFF处理，TFF输入泵1214，TFF渗余物回流管线1218和TFF渗余物阀1217。第二渗滤溶液可包括例如但不限于去离子水、抑菌剂溶液和盐中的任何一种或多种。抑菌剂可以是例如但不限于亚硫酸钠、EDTA、苯扎氯铵、乙醇、硫脲。合适的盐包括但不限于氯化钠、氯化钾、磷酸钠、碳酸氢铵、磷酸盐缓冲盐水。

第二渗滤溶液既用于补充经由TFF渗透液输出管线1219上的渗透液损失的溶剂，和/或用于确保预定数量的第一渗余褐藻糖胶组合物和第二渗滤溶液在TFF过滤器上循环1210。通过控制第二渗滤溶液阀1234，可以以脉冲过程添加第二渗滤溶液。在其他实施方式中，第二渗滤溶液可以以连续模式添加。可以预先确定要在TFF过滤器1210上处理的第二渗滤溶液的容积。该过程可以持续预定的时间，例如约1至约6小时，约3至约12小时以及约10至约24小时。可以针对预定数量的螯合剂继续进行该过程，例如，在约1至约4个透析体积之间，在约3至约6个透析体积之间，在约5至约10个透析体积之间以及在约7至约20个透析体积之间。当已经达到适当低的残留螯合剂浓度，例如，残留螯合剂水平低于百万分之10(ppm)、低于1ppm、低于0.1ppm和低于0.01ppm时，该过程可以继续进行，并且可以测量褐藻糖胶容器1216中的残留螯合剂浓度并且终止TFF过程。褐藻糖胶容器1216中所得的第二渗余褐藻糖胶组合物包括阳离子含量修饰系统1200的纯化/修饰的褐藻糖胶产物。根据需要，可以通过阳离子含量修饰系统输出管线1208将褐藻糖胶容器1216中所得的第二渗余褐藻糖胶组合物从褐藻糖胶容器1216中移出。

超临界流体提取

褐藻糖胶组合物例如含有不希望水平的杂质的起始褐藻糖胶组合物中的褐藻糖胶进行超临界流体提取。该方法可以包括：提供固体形式的起始褐藻糖胶组合物；和将起始褐藻糖胶组合物置于超临界提取器中；使超临界提取器中的起始褐藻糖胶组合物经受高于70巴的合适压力；将超临界提取器中的起始褐藻糖胶组合物加热至高于30℃的合适温度；用超临界流体填充超临界提取器，以产生纯化/修饰的褐藻糖胶和含有提取杂质的超临界流体；在预定的时间之后，从超临界提取器中除去含有提取杂质的超临界流体；并回收纯化/修饰的褐藻糖胶。

用超临界流体填充超临界提取器可以包括用二氧化碳填充超临界提取器。可以在2％v/v和10％v/v的乙醇之间补充超临界二氧化碳。在一些实施方式中，超临界二氧化碳可以补充有约5％v/v的乙醇作为助溶剂。用于该方法的二氧化碳的替代超临界流体包括但不限于乙醇、乙烷、盐酸、氢氟酸、硫酸和硝酸。

使起始褐藻糖胶经受合适的压力可包括使起始褐藻糖胶组合物经受约70巴至约2000巴的压力。使起始褐藻糖胶组合物经受合适的温度可包括使起始褐藻糖胶组合物经受约30℃至约300℃的温度。

在预定量的时间之后除去包括提取的杂质的超临界流体可以包括在约5分钟至约50小时之间，例如在约10分钟至约1小时之间，在约30分钟至5小时，约1小时至约24小时以及约5小时至约48小时之间除去超临界流体。

该方法可以进一步包括在将起始褐藻糖胶组合物置于超临界提取器中之前脱盐起始褐藻糖胶组合物。脱盐可包括将起始褐藻糖胶组合物以水溶液形式通过分子量截留(MWCO)切向流过滤(TFF)过滤器渗滤。渗滤可包括用蒸馏水渗滤起始褐藻糖胶组合物。截留分子量TFF过滤器的截留分子量可以小于或大于或等于纯化的/修饰的褐藻糖胶中的所需分子量分离点或目标，例如50kDa、70kDa、100kDa、200kDa、300kDa、500kDa或1000kDa截留分子量。渗滤可进一步包括通过合适的预过滤器将起始褐藻糖胶组合物预过滤以除去颗粒物质。

化学结构修饰

本文讨论的方法，系统等可以包括对褐藻糖胶的化学结构修饰，包括在褐藻糖胶组合物中的褐藻糖胶。化学结构修饰可涉及从褐藻糖胶结构中除去官能团，例如，从褐藻糖胶结构中除去O-乙酰基、N-乙酰基、甲氧基、羟基、羧基和/或硫酸酯官能团。化学结构修饰可涉及多种化学试剂的使用，例如酸、碱、去污剂和/或氧化剂。

切向流过滤

本文所论述的方法中的一些利用切向流过滤(TFF)。与切向流过滤(TFF)过滤器的典型识别一致，给定TFF过滤器的标称截留分子量(MWCO)值将在其渗余物侧上选择性地保留包含未穿过过滤器屏障的分子的溶液，且因此通常具有大于穿过/渗透屏障至渗透物侧的分子的分子量的分子量和/或大小。因此，TFF过滤器的截留分子量值典型地对于任何给定聚合物或标称截留值并不绝对：给定TFF过滤器将通过或保留高于及低于标称截留分子量两者的一些分子。用于具体聚合物的标称TFF过滤器的实际截留/选择性值及影响可针对具体聚合物来常规地决定。

许多因素可以影响TFF过滤器的渗透行为。这些因素可能取决于TFF过滤器本身或取决于目标聚合物的属性，例如目标聚合物的折叠行为和折叠结构会影响目标聚合物在与TFF过滤器屏障的MWCO交叉/不交叉时的行为。关于TFF过滤器本身，众所周知，许多因素会影响TFF过滤器的渗透性能。例如，制造方法可能会在特定的TFF过滤器内造成各种孔径，这些孔径可能包括大于和小于标称MWCO的孔。因此，具有标称分子量截留的TFF过滤器将使标称分子量截留基本上通过/保留分子，但是也可以使某些分子通过和保留低于和/或高于该值。

凝胶渗透色谱

凝胶渗透色谱法用于评估实验实施例获得的分子量分布。存在大量用于凝胶渗透色谱法中可获得的不同参数、柱及标准物，导致多种仪器设置可用于分子量的分析。对于本文的分子量测定，使用以下参数进行GPC：流动相为以0.6mL/min运行的0.1M硝酸钠。柱室及检测器在30℃下。Waters 2414折射率检测器用于检测。

合适的GPC柱包括与水性溶剂兼容的GPC柱，例如装填有以下中的至少一种的柱：磺化苯乙烯-二乙烯基苯、NH官能化的丙烯酸酯共聚物网络、修饰的二氧化硅及羟基化聚甲基丙烯酸酯基凝胶。对于本文的分析，串联使用三个柱，包括具有6mm内径(ID)的一个40mm长的保护柱，装填有6μm粒度的羟基化聚甲基丙烯酸酯基凝胶；接着是为具有7.8mm ID的第一300mm分析型GPC柱，装填有12μm粒度的羟基化聚甲基丙烯酸酯基凝胶，其具有约7,000kDa的排阻极限及在约50kDa与约5,000kDa之间的有效分子量范围；接着是具有7.8mmID的第二300mm分析型GPC柱，装填有10μm粒度的羟基化聚甲基丙烯酸酯基凝胶，其具有约7,000kDa的排阻极限及在约1kDa与约6,000kDa之间的有效分子量范围。柱装置的总有效分子量范围在约1kDa与约6,000kDa之间。此柱装置的实例可为串联连接的

保护柱

线性柱。

相对于包括来自American Polymer Standards Corporation的可追踪标准物的标准曲线来量化样品运行：DXT3755K(峰分子量＝2164kDa)、DXT820K(峰分子量＝745kDa)、DXT760K(峰分子量＝621kDa)、DXT670K(峰分子量＝401kDa)、DXT530K(峰分子量＝490kDa)、DXT500K(峰分子量＝390kDa)、DXT270K(峰分子量＝196kDa)、DXT225K(峰分子量＝213kDa)、DXT150K(峰分子量＝124kDa)、DXT55K(峰分子量＝50kDa)、DXT50K(峰分子量＝44kDa)和DXT5K(峰分子量＝4kDa)，这些标准物的峰分子量在约4kDa与约2,200kDa之间。所使用标准曲线可例如包括Dextran 3755kDa，Dextran 50kDa及Dextran 55kDa中的至少一种及在3至6个之间的本文所论述的附加可追踪标准物，校正点为所使用校正物的峰分子量。示例性校正曲线可由以下组成：DXT3755K、DXT 820K、DXT530K、DXT500K、DXT225K及DXT55K。本文中所使用的柱具有涵盖且延伸超出用于褐藻糖胶的量化的标准物的峰分子量范围的总有效分子量范围。

规定用于本文的褐藻糖胶/岩藻多糖聚合物的分子量为将始终存在更高及更低分子量的分子分布的大约分子量值，随着分子量远离指定分子量增大或减小而在数量或百分比上增大或减小。分布可(但并非必需)具有通常的高斯或失真(distorted)高斯形状。

本文的表中的结果包含用于分子量分布的某些特征的缩写。凝胶渗透色谱法由GPC表示，峰保留时间由PRT表示，峰分子量由PMW表示，重均分子量由WAMW表示，数均分子量由NAMW表示，分布百分比由％分布表示，分子量由MW表示，多分散性指数由PDI表示并且截留分子量由MWCO表示。

疾病和病症

纤维性粘连

纤维性粘连通常是在外科手术后在身体的两个部位之间形成的一种疤痕类型(外科手术粘连)。纤维性粘连可能导致严重问题。例如，涉及女性生殖器官(卵巢、输卵管)的纤维性粘连可能导致不育、性交困难及严重的骨盆疼痛。在肠中出现的纤维性粘连可能导致肠梗阻或阻塞，且纤维性粘连还可能在其他位置，诸如心脏周围、脊椎及手部形成。除外科手术之外，纤维性粘连可能例如由子宫内膜异位症、感染、化疗、放射、创伤及癌症引起。

在本文档中，论述了各种纤维性粘连。诸如外科手术粘连、外科手术后粘连(post-surgical adhesion)、术后粘连(postoperative adhesion)、因盆腔炎所致的粘连、因机械性损伤所致的粘连、因放射所致的粘连、因放射治疗所致的粘连、因创伤所致的粘连以及因外来材料的存在所致的粘连等术语均是指因类似机制所致的组织间彼此粘连并且均包括在术语纤维性粘连中。

纤维性粘连形成是复杂的过程，其中体内正常分离的组织生长至彼此中。外科手术粘连(也称为外科手术后粘连)是由组织对创伤的正常伤口愈合反应以外的反应发展而来的并且已被报导在超过三分的二的全部腹部外科手术患者中出现(Ellis,H.,Surg.Gynecol.Obstet.133:497(1971))。这些纤维性粘连的后果是变化的且取决于所涉及的外科手术部位或其他部位，诸如疾病部位。面临的问题可能包括慢性疼痛、肠梗阻及甚至心脏外科手术后的死亡风险增大(diZerega,G.S.,Prog.Clin.Biol.Res.381:1-18(1993)；diZerega,G.S.,Fertil.Steril.61:219-235(1994)；Dobell,A.R.,Jain,A.K.,Ann.Thorac.Surg.37:273-278(1984))。据估计，在生殖期女性中，涉及子宫、输卵管或卵巢的纤维性粘连占全部不育情况的大约20％(Holtz,G.,Fertil.Steril.41:497-507(1984)；Weibel,M.A.和Majno,G.Am.J.Surg.126:345-353(1973))。

纤维性粘连形成过程最初涉及建立纤维蛋白框架及正常组织修复。正常修复过程允许沿间皮修复的纤维蛋白溶解。然而，在纤维性粘连形成中，纤维蛋白基质随着成纤维细胞增殖成熟为网络且发生血管新生，使得在约3至5天内建立经组织化的纤维性粘连(Buckman,R.F.,等人,J.Surg.Res.21:67-76(1976)；Raferty,A.T.,J.Anat.129:659-664(1979))。炎性过程包括创伤组织中的中性粒细胞活化、纤维蛋白沉淀及邻接组织结合、巨噬细胞侵袭、成纤维细胞增殖至区域中、胶原沉淀、血管新生及建立永久纤维性粘连组织。

已作出各种尝试以防止外科手术粘连。这些尝试涉及针对影响伴随外科手术创伤的生物化学及细胞事件的药理学方法以及用于分离受影响的组织的屏障方法。例如，使用腹腔灌洗、肝素化溶液、促凝剂、诸如使用显微术或腹腔术外科手术技术的修饰外科技术、消除来自外科手术用手套的滑石、使用更小的缝合线以及使用旨在最小化浆膜表面的并置的物理屏障(膜、凝胶或溶液)均已尝试。当前，预防性疗法还包括预防纤维蛋白沉淀、减少炎性(类固醇及非类固醇抗炎药)及去除纤维蛋白沉淀。

防止形成外科手术后粘连的介入尝试已包括使用水浮选(hydroflotation)技术或屏障器械。水浮选涉及将较大体积的聚合物溶液，诸如右旋糖酐(Adhesion StudyGroup,Fertil.Steril.40:612-619(1983))或羧甲基纤维素(Elkins,T.E.,等人,Fertil.Steril.41:926-928(1984))灌注至外科手术间隙中以尝试保持器官分开。由经氧化再生纤维素制成的合成屏障膜(例如，InterceedTM)、聚四氟乙烯(戈尔-特克斯手术膜)及由经修饰的透明质酸/羧甲基纤维素(HA/CMC)组合制成的可完全再吸收的膜(SeprafilmTM)也已用于减少动物及人类两者体内的外科手术后粘连形成(Burns,J.W.,等人,Eur.J.Surg.Suppl.577:40-48(1997)；Burns,J.W.,等人,Fertil.Steril.66:814-821(1996)；Becker,J.M.,等人,J.Am.Coll.Surg.183:297-306(1996))。这些HA/CMC膜的成功可能源自其能够在纤维性粘连形成时在腹膜伤口修复过程期间提供组织分离。据观察，在应用后3-5天(与外科手术后粘连形成的时程兼容的时间段)，膜在受伤组织上形成清楚的粘性涂层(Ellis,H.,Br.J.Surg.50:10-16(1963))。不幸地，利用这些方法取得的成功有限。

腹膜炎涉及腹膜的炎症。腹膜炎可能导致严重的问题。例如，腹痛、腹部压痛及腹部防护。腹膜炎可能涉及自发性、解剖和/或腹膜透析相关的炎症。腹膜炎可能涉及感染，例如，空腔脏器穿孔、腹膜破裂、自发性细菌腹膜炎以及全身性感染可能引起感染及腹膜炎。腹膜炎还可能不涉及感染，例如，无菌体液渗漏至腹膜中，以及无菌腹部外科手术可能引起腹膜炎。已作出各种尝试以预防和/或治疗腹膜炎。例如，通用支持性测量诸如静脉内补液、抗生素及外科手术。未能满足对抑制或以其他方式治疗和/或预防腹膜炎，优选更有效的且副作用小的化合物、组合物和方法等(包括递送方法)的需求。

本文讨论的纯化/修饰的褐藻糖胶可用于治疗患者中的纤维性粘连，并且可以作为纯化/修饰的褐藻糖胶医疗组合物、医疗器械，组合物或药物产品的组成部分或可以构造为和用于治疗纤维性粘连。例如，一种纯化/修饰的褐藻糖胶医疗组合物、医疗器械，其包含约0.02mg/mL至约100mg/mL，例如0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.3mg/mL、0.5mg/mL、0.9mg/mL、1mg/mL、2.5mg/mL、5mg/mL、7.5mg/mL的本文中溶解在生理盐溶液中的纯化/修饰的褐藻糖胶。生理盐溶液可以是例如乳酸林格氏注射液USP(LRS)、生理盐水和生理右旋糖酐溶液。

纯化/修饰的褐藻糖胶医疗组合物和医疗器械，其可以是液体医疗组合物和器械，在本文中可以包括药学上可接受的赋形剂，例如缓冲剂、稳定剂、防腐剂，佐剂等。此类纯化/修饰的褐藻糖胶医疗组合物和医疗器械可以用于治疗纤维性粘连在手术前，手术中或手术后，通过在前段中服用约0.01mL/kg(每公斤患者或目标体重)至约10mL/kg或15mL/kg的褐藻糖胶医疗组合物或医疗器械。剂量和器械量包括例如约0.03mL/kg、0.1mL/kg、0.2mL/kg、0.4mL/kg、0.5mL/kg、0.6mL/kg、1mL/kg、1.2mL/kg、2mL/kg、3mL/kg、4mL/kg、5mL/kg、8mL/kg、10mL/kg和15mL/kg的纯化/修饰的褐藻糖胶医疗组合物或医疗器械到达患者的手术部位。在一些实施方式中，这样的纯化/修饰的褐藻糖胶医疗组合物和医疗器械可以用于通过给药约0.04mg/kg或0.1mg/kg至约25mg/kg或50mg/kg来治疗任何选定目标部位的纤维性粘连，例如损伤、擦伤、损伤部位、手术部位和手术后部位。这样的剂量的一些实例包括例如约0.04mg/kg、0.075mg/kg、0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.5mg/kg、1mg/kg、1.3mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、7.5mg/kg、8mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg和50mg/kg，可以例如通过在整个目标区域中一般注入液体医疗组合物或医疗器械来完成给药；例如，将本文所述的褐藻糖胶，包括例如本文的纯化/修饰的褐藻糖胶，给药至患者的手术部位。将液体医疗组合物或医疗器械引导到目标区域内的特定位置；一般或在目标区域内的特定位置喷涂液体医疗器械；或者，通过施加器将液体医疗组合物或医疗器械喷雾或以其他方式递送，该施加器可以是通过套管针、导管、内窥镜或其他微创器械通过喷雾器施加到外科医生或其他从业者特别确定的特定位置容易产生纤维粘附或与之相关。在另一方面，可以在手术伤口张开之后但在手术程序之前进行给药。在手术过程中，或在手术过程之后但在手术伤口闭合之前。如果需要，也可以在手术完成后(例如通过注射器和针头)给药液体医疗组合物或医疗器械，也可以将其给药到非手术目标部位。患者的手术部位可以是例如骨盆腔、腹腔、背侧腔、颅腔、脊髓腔、腹侧腔、胸腔、胸膜腔、心包腔、皮肤、关节或肌肉中的至少之一。可以在不到约15分钟、10分钟、8分钟、6分钟、5分钟、4分钟、3分钟、2分钟、1分钟、45秒、30秒、20秒、15秒、10秒和5秒的时间内完成将纯化/修饰的褐藻糖胶医疗组合物或医疗器械给药于患者手术部位的操作。

将纯化/修饰的褐藻糖胶医疗组合物或医疗器械给药于手术部位的实例包括但不限于在剖宫产手术方法的手术部位施予纯化/修饰的褐藻糖胶医疗组合物或医疗器械；无血管皮瓣再造外科手术、全层皮瓣移植手术、VY推进皮瓣外科手术、筋膜皮肤旋转皮瓣外科手术、人工关节置换外科手术、乳腺切除术外科手术、死骨切除术外科手术、椎间盘摘除术外科手术、截骨术外科手术、整形外科手术、髌骨切除术手术、滑膜切除术外科手术、囊膜切开术外科手术、腱或韧带修复外科手术、腱切术外科手术、腱切断术、筋膜切开术外科手术、半月板修复外科手术、椎骨切除外科手术、筛窦切除外科手术、Caldwell Luc氏手术外科手术、泪囊鼻腔吻合术、溶胞鼻粘连外科手术、胸腺切除外科手术、肺气溶解手术、肺切除术、胸腔镜整形外科手术、双叶切除外科手术、门静脉高压手术外科手术、脾切除外科手术、食管切除外科手术、腹膜炎外科手术、胃切除外科手术、空肠空肠造口外科手术、腹腔镜胆囊切除外科总手术、腹腔镜手术外科手术、胃肠造口外科手术、减肥手术外科手术、肠切除和吻合外科手术手术、节段性肝切除外科手术手术、肺叶切除外科手术手术、胰腺外科手术、胰十二指肠切除外科手术手术、肿瘤切除外科手术、腹腔镜肾手术外科手术、腹部或骨盆粘连溶解手术、子宫输卵管造口术、输卵管成形术、异位妊娠腹腔镜外科手术、关节置换外科手术、断骨修复外科手术、子宫切除术外科手术、胆囊摘除外科手术、心脏搭桥外科手术、血管成形术外科手术、旋磨术外科手术、乳腺穿刺活检外科手术、颈动脉内膜切除术手术、白内障手术、冠状动脉搭桥手术、扩张刮宫手术、疝气修复手术、下背痛手术、局部结肠切除术、前列腺切除术和扁桃体切除术手术过程：在打开手术伤口后，在手术过程中，在关闭手术伤口之前和/或在关闭手术伤口之后。

一般癌症

癌症已成为美国死亡的第二主要原因且占全部死亡率的20％以上。癌症为增殖性疾病且其特征为某些细胞的不可控分裂，其可导致形成一种或多种肿瘤。大量方法用于治疗癌症，包括外科手术、放射、化疗及其组合。尽管外科手术是用于一些局部肿瘤的相对普遍的方法，但在肿瘤切除后仍存在明显肿瘤复发机率。

治疗癌症及其他增殖性疾病受对非癌性、健康组织的潜在损伤或毒性限制。在放射及外科手术治疗中，手术总体上受限于肿瘤部位且靠近肿瘤部位。然而，对于经历手术除去癌性组织的患者来说，可能存在明显的风险(例如，在除去前列腺或脑瘤中，可能存在对于周围重要组织的明显的不可修复损伤风险，例如经由潜在地减小对切除非肿瘤组织的需求。另外，在作为前列腺癌的一线治疗的集中放射治疗中，存在类似风险。在癌症的化学治疗性治疗中，药物全身性给药，使得整个身体暴露于药物。这些药物经设计对癌细胞是有毒的，但其对非癌细胞(通常)也是有毒的，使得患者在经历用于癌症的药物治疗时变得非常虚弱。经由试验，肿瘤学家能够给予对一些患者耐受的这些药物的剂量。然而，这些剂量通常不能成功治疗癌症。

任何治疗癌症的方法都存在的一个问题是疾病的局部复发。例如，每年大约700,000名美国人经诊断患有局部癌症(大约64％的全部癌症患者)且近似五十万患者使用外科手术方法进行治疗。不幸地，经手术治疗的32％患者在初始治疗后复发(大约21％在初始手术部位处复发及11％在远处转移性部位处复发)。每年接近100,000名患者死于癌症的局部复发。这在乳腺癌中更是如此，其中经历乳房肿瘤切除术的39％的患者将经受疾病的局部复发。

分期为判定患者体内的癌症(实体肿瘤)的进展的方法。简化方法基于癌症已进展程度将患者分成三组或三期：

1期：可以通过手术除去器官的部分来治疗癌症。这还称为可切除期。

2期：癌症已进展超过可切除点但仍受限于器官本身。

3期：肿瘤已扩散至其他器官。

许多癌症采用抗增殖剂，包括例如，5-氟尿嘧啶

长春花生物碱(vincaalkaloid)(例如，长春新碱(vincristine)

)、蒽环素(anthracycline)(例如，阿霉素

)、顺铂

盐酸吉西他滨(gemcitabine hydrochloride)

甲胺喋呤及紫杉醇治疗。与抗增殖剂、甲胺喋呤及紫杉醇相关联的毒性的一些实例在本文中的其他地方论述。甲胺喋呤已用于治疗几种癌症，包括例如，膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、头部及颈部癌、肝癌、肺癌及睾丸癌。紫杉醇已用于治疗几种癌症，包括例如，卵巢癌、乳腺癌及非小细胞肺癌(Compendium of Pharmaceutical and Specialties Thirty-fifth Edition,2000)。

因5-氟尿嘧啶所致的毒性可以包括心脏血管毒性，诸如心肌缺血；中枢神经系统毒性，诸如欣快症、急性小脑综合征及共济失调；皮肤病学毒性，诸如秃发症及皮炎；胃肠毒性，诸如恶心、呕吐及口腔或胃肠溃烂；血液毒性，诸如白细胞减少症、血小板减少及贫血症；超敏感性毒性，诸如全身性过敏反应及接触过敏；眼部毒性，诸如增加流泪、畏光及结膜炎；及其他毒性，诸如发热。5-氟尿嘧啶已用于治疗多种癌症，包括例如，乳腺癌、结肠直肠癌、胃癌、肝脏癌、膀胱癌、头部及颈部癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、胰腺癌及前列腺癌(Compendium of Pharmaceutical and Specialties Thirty-fifth Edition,2000)。

因长春新碱所致的毒性包括中枢神经系统毒性，诸如儿童癫痫及幻觉；皮肤病学毒性，诸如秃发症；外渗毒性，诸如水疱；胃肠毒性，诸如恶心、呕吐、便秘及口炎；血液毒性，诸如骨髓抑制；神经毒性，诸如周围神经病变及自主神经病；眼部毒性，诸如复视、瞬时目盲及视神经萎缩；肾/代谢毒性，诸如尿潴留、高尿酸血症及膀胱乏力；呼吸毒性，诸如呼吸短促；及其他毒性，诸如儿童发热。这种抗增殖剂已用于治疗几种癌症，包括例如，霍奇金病、小细胞肺癌、威尔姆肿瘤及睾丸癌(Compendium of Pharmaceutical and SpecialtiesThirty-fifth Edition,2000)。

因阿霉素所致的毒性包括心脏血管毒性，诸如心电图异常及心肌病；皮肤病学毒性，诸如秃发症及指甲变化；外渗危害毒性，诸如水疱；胃肠毒性，诸如恶心、呕吐及口炎；泌尿生殖系统毒性，诸如尿液红色；血液毒性，诸如骨髓抑制；超敏感性毒性，诸如过敏反应及皮疹；眼部毒性，诸如结膜炎；生殖毒性，诸如不孕症；及其他毒性，诸如高尿酸血症。这种抗增殖剂已用于治疗几种癌症，包括例如，乳腺癌、小细胞肺癌及卵巢癌(Compendium ofPharmaceutical and Specialties Thirty-fifth Edition,2000)。

因顺铂所致的毒性包括心脏血管毒性，诸如心电图变化；皮肤病学毒性，诸如色素沉着；外渗危害毒性，诸如刺激性；胃肠毒性，诸如恶心及呕吐；血液毒性，诸如骨髓抑制及溶血性贫血；超敏感性毒性，诸如过敏反应；神经肌肉毒性，诸如周围神经病及急性脑病；眼部毒性，诸如球后神经炎；耳科毒性，诸如听觉损失及耳鸣；肾/代谢毒性，诸如中毒性肾病及低钾血症；及其他毒性，诸如不育。这种抗增殖剂已用于治疗几种癌症，包括例如，膀胱癌、小细胞肺癌、卵巢癌、睾丸癌、脑癌、乳腺癌、宫颈癌、头部及颈部癌、肝母细胞瘤癌及甲状腺癌(Compendium of Pharmaceutical and Specialties Thirty-fifth Edition,2000)。因盐酸吉西他滨所致的毒性包括例如血液毒性，诸如骨髓抑制；胃肠毒性，诸如恶心、呕吐及口炎；肝毒性，诸如血清转胺酶的瞬时升高；肾毒性，诸如蛋白尿、血尿、溶血性尿毒症综合征及肾衰竭；皮肤病学毒性，诸如皮疹及秃发症；水肿毒性，诸如水肿及周围水肿；及其他毒性，诸如发热。这种抗增殖剂已用于治疗胰腺癌及非小细胞肺癌(Compendium ofPharmaceutical and Specialties Thirty-fifth Edition,2000)。

本发明论述包括预防或治疗可治疗的局部癌症或实体肿瘤，包括前列腺、乳腺、胰腺、肝、肾、泌尿生殖系统、脑、胃肠系统、呼吸系统及头部及颈部的局部癌症或实体肿瘤。本文中的组合物等可以通过允许在距目标肿瘤远处的部位处控制释放纯化/修饰的褐藻糖胶，通过允许有效浓度的纯化/修饰的褐藻糖胶利用扩散或甚至全身性输送达至肿瘤和/或转移瘤来预防或治疗癌症，包括转移瘤。在以下段落中进一步论述这些癌症中的一些。

前列腺癌

前列腺癌为在衬在前列腺腺体的细胞中产生的恶性肿瘤。在美国，今年估计200,000名患者将罹患前列腺癌，且超过30,000名患者将死于该疾病。

前列腺癌的新发病例死亡率为15％。癌症可能保持在前列腺内，或其可能扩散至周围组织或远部位(最经常淋巴结及骨骼)。通常前列腺癌无症状地扩散，仅在其已进展超出前列腺时才产生症状。在一些研究中，若前列腺癌已在早期期间经诊断且经治疗，患者的5年存活率为94％。

前列腺癌经常论述为超过50岁的男性疾病。实际上，患有前列腺癌的80％男性为60岁且更年长。男性在其寿命期间诊断患有前列腺癌的机率为约1/10，与女性患乳腺癌的机率大致相同。近年来，由于可以在疾病出现早期(经常在症状呈现的前很久)检测到疾病的改良测试，经报导的新病例的数目显著地上升。任一给定年份中罹患前列腺癌的可能性随着年龄增加，但在50岁后显著地上升。

用于前列腺癌的当前治疗选项取决于疾病进展程度、患者的年龄及总体健康。仅患有早期癌症或受额外更严重疾病影响的老年患者可以保守治疗，然而癌症为晚期的老年患者可能经历更具侵袭性的治疗。前列腺癌已通过各种方法治疗，包括放射疗法(外部辐射束放射或近距离放射疗法)、激素戒断或去势(外科手术或化学品)、抗增殖剂、外科手术及期望治疗(即，“观察等待”)。没有任何治疗保证绝对治愈，且一些具有相当大的副作用。

早期前列腺癌(即，肿瘤在前列腺局部)可以“观察等待”治疗。前列腺癌的外科手术经推荐用于总体健康病症在其他方面良好且肿瘤受限于前列腺腺体的患者。针对70岁以下的男性前列腺的局部癌症的普遍治疗为根治性前列腺切除术(即，外科手术除去前列腺)。

其癌症为前列腺区域局部的患者通常以外部辐射束放射(EBR)治疗。放射杀灭癌细胞且缩小肿瘤。EBR占局部前列腺癌治疗的小于20％，其中这些患者中大约50％经历放射后疾病复发。与早期前列腺癌检测及来自患者的增加的需求组合，近距离放射疗法(即，局部放射疗法)的使用预期将会增加。在1995年，仅2.5％的新诊断患者使用近距离放射疗法治疗。近距离放射疗法涉及将放射性金属“种”植入前列腺肿瘤中。

用于已扩散的前列腺癌的治疗涉及除去睾或激素疗法。两种皆用于抑制或终止驱动癌症生长的睾固酮的产生。大约20％的全部前列腺癌患者经历激素戒断疗法。激素疗法包括醋酸戈舍瑞林乙(goserelin acetate)

或醋酸亮丙瑞林(leuprolideacetate)

用于治疗前列腺癌的抗增殖剂包括5-氟尿嘧啶。

乳腺癌

在美国，乳腺癌已成为女性当中最常见的癌症，其中每年诊断约180,000个新病例(男性乳腺癌占全部经诊断乳腺癌的约5％)。乳腺癌已成为女性的仅次于肺癌的致死原因，且其已引起每年大约50,000起死亡。美国女人在其寿命期间具有1/8(或约13％)的罹患乳癌机率。在过去十年间，报导最多的乳腺癌为小、原发性(独立地产生；并非由转移瘤所引起)肿瘤。大致70％至80％的新诊断患者展现早期疾病(1期或2期)，且大部分尚未涉及腋下(手臂下方)淋巴结。

大部分乳腺癌为癌(即，从上皮组织中生长出的恶性肿瘤)。小于1％的乳腺癌为肉瘤或由结缔组织、骨骼、肌肉或脂肪产生的肿瘤。此外，大部分乳腺癌(约75％)为导管癌，在与乳导管并排的组织中产生。更小量的癌症(约7％)在乳小叶内发现且被称作小叶癌。佩吉特病(Paget's disease)(乳晕及乳头癌)及炎性瘤占几乎全部其他形式的乳癌。

乳腺癌治疗为复杂的且取决于多种因素。两个重要因素为肿瘤类型和进展阶段。尤其，肿瘤特征帮助将个体分为两个组：(1)处于癌症复发低风险的个体及(2)处于癌症复发高风险的个体。特定预后因素将患者置放在这些组中的任一者中。这些因素包括肿瘤大小；女性性激素雌激素及孕酮(ER/PR)受体的存在；细胞生长周期阶段(肿瘤细胞是否有效地分裂或处于“S阶段”)；被称为“her-2-neu”蛋白的蛋白的存在；肿瘤级别、肿瘤细胞分化或改变的指示物；及肿瘤倍性，肿瘤细胞内的基因物质的集合数目。

已通过肿块切除术及放射疗法来治疗无明显淋巴结涉及的原发性疾病。更明显的淋巴结涉及可保证乳房切除术及除去辅助淋巴结。在此阶段，癌转移及局部复发的机率已经较高。涉及放射疗法及化疗的转移性疾病的治疗只是缓解性的，其为免疫抑止、细胞毒性及白血球减少。包括例如，5-氟尿嘧啶、阿霉素、甲胺喋呤及紫杉醇的抗增殖剂已被批准用于抗乳腺癌。

胰腺癌

胰腺为位于接近胃及小肠的消化系统的器官。其具有两个主要功能：产生酶和激素。胰腺癌可能出现在外分泌(即，酶)胰腺(例如，典型胰腺腺癌)中或可能出现在内分泌(即，激素)胰腺中。

外分泌胰腺癌是极严重的健康问题。在美国，大约28,000名患者经诊断患有胰腺癌，同时每年约相同数目死于该疾病。胰腺癌同等地出现在男性及女性中。由于诊断困难、胰腺癌的固有侵袭性本质及稀少的可用全身性治疗选项，在诊断后，仅大约4％的经诊断患有胰腺癌的患者存活5年。胰腺癌已成为继乳腺癌、肺癌、结肠癌及前列腺癌之后的第5个癌症死亡的主要原因。

对于胰腺癌的治疗选择很大程度上取决于肿瘤阶段。可能的治疗包括外科手术、抗增殖剂、放射及生物疗法。外科手术已通常保留用于其癌症视为可切除的1期患者。有时，在手术之前或之后给予疗法(诸如放射及抗增殖剂)的组合可以增大患者的存活机率。可以在临床试验中使用抗增殖剂治疗被视为不可切除的胰腺癌(通常II期或晚期)。诸如例如，吉西他滨或5-氟尿嘧啶的抗增殖剂对胰腺癌具有一些效果且吉西他滨已用作姑息性药剂。本文中其他地方论述因这些抗增殖剂所致的毒性。放射疗法在与化疗组合使用时对胰腺癌具有一些效果。仅放射疗法可以抑制症状。这种治疗形式也已经用于II期或晚期胰腺癌。

膀胱癌

在1998年，在美国估计将诊断出超过54,000个新的膀胱癌病例且约15,000例死亡将归因于该疾病。膀胱癌已成为美国男性中第四种最常见癌症且在美国女性中为第九种最常见癌症。膀胱癌在男性中出现的频率为女性的三倍。主要地，年长男性疾病中，膀胱癌已成为显著疾病及死亡原因。膀胱癌风险随着年龄增长而大幅度增加(80％病例在大于50岁的人群中出现)，其中超过二分的一的全部膀胱癌死亡在70岁后出现。在超过65岁的白人男性中，膀胱癌的年疾病率已为每1,000个人中有大约2个病例；这与65岁以下的每1,000个人中有0.1个病例的比率形成对比。在个人寿命期间，罹患膀胱癌的机率已大于3％；然而，膀胱癌的死亡机率较小(＜1％)。膀胱癌罕见地出现在小于40岁的人群中。

近期研究表明某些基因及遗传性代谢能力可能在膀胱癌中起作用。移行细胞癌(TCC)已为膀胱癌的最常见形式。TCC通常以浅表(表面)、乳头状(疣状)、茎状基底上的外生性(向外成长)块的形式出现。但在一些情况下，TCC可附接于宽广基底上或其可呈现溃疡(在凹痕式病变内)。乳头状TCC通常从增殖区域开始，随后去分化或失去个别细胞特征。仅约10％至30％的乳头状TCC发展成浸润性癌症。相比之下，非乳头状形式的TCC更可能变成浸润性的。如所述，此类TCC可能呈现溃疡或平整的。由退行性上皮组成的平整、非乳头状TCC已经被分类为原位癌(CIS或TIS)。CIS的组织包括大的具有明显核仁(细胞内的圆形体；涉及蛋白质合成)且缺少正常极性的细胞。

膀胱癌的治疗取决于多种因素。这些因素中最重要的是呈现的肿瘤类型及其阶段。普遍治疗包括经尿道切除术(TUR)、电外科手术、激光手术、膀胱内治疗、抗增殖剂、外科手术疗法、膀胱切除术及放射疗法。用于治疗膀胱癌的抗增殖剂的实例包括例如5-氟尿嘧啶、顺铂及甲胺喋呤。因抗增殖剂、5-氟尿嘧啶、顺铂及甲胺喋呤所致的毒性在本文中其他地方论述。

脑癌

脑瘤经常为不可手术的且多于80％的患者在诊断后12个月内死亡。在美国，每年诊断出大约18,000例原发性颅内(脑)癌新病例。这相当于全部成年人癌症的2％。多于50％的这些癌症为高度神经胶质瘤(即，多形性胶质母细胞瘤及间变性星形细胞瘤肿瘤)。患有这些肿瘤的患者通常遭受严重残疾，诸如运动屏障、癫痫及视觉异常。

在脑组织中开始的肿瘤被称为原发性脑瘤。原发性脑瘤通过其开始的组织类型进行分类。最常见脑瘤为开始于胶质(支持性)组织中的神经胶质瘤。其他的脑瘤包括星形细胞瘤、脑干神经胶质瘤、室管膜瘤及少突神经胶质瘤。

已针对大部分类型及大部分位置建议外科手术除去脑瘤且应尽可能在保留神经功能的限制内完成。此规则的例外为深部肿瘤，诸如桥脑胶质瘤，其根据临床证据诊断且大约有50％的时间无需进行初次外科手术即可接受治疗。然而，在许多情况下，执行活组织检查诊断。立体定向的活组织检查可用于难以到达及切除的病变。患有脑瘤的罕见地可治愈或不可切除的患者应被视为用于评估辐射增敏剂、热疗或间质性近距离放射治疗结合外部辐射束放射疗法使用以改善肿瘤的局部控制的临床试验或用于评估新药物及生物反应调节剂的研究的候选者。

放射疗法在治疗大部分肿瘤类型中具有主要作用且可增大治愈率或延长无病生存期。放射疗法还可以适用于治疗最初仅通过外科手术治疗的患者的复发。可以在外科手术及放射疗法之前、期间或之后使用化疗。还通过化疗来治疗复发性肿瘤。用于治疗脑癌的抗增殖剂包括顺铂。与这种抗增殖剂相关联的毒性的实例在本文中其他地方论述。

再狭窄

再狭窄为引起血管壁增厚和丧失由血管供应至组织的血流的慢性血管损伤形式。此炎性疾病可以响应于包括减轻血管梗阻的任何手术的血管重建手术而出现。因此，再狭窄已成为限制这些手术的有效性的主要限定性因素。

本发明论述包括例如通过向血管给药治疗有效量的寡核苷酸治疗剂与抗炎剂的组合来预防或治疗再狭窄。适合的组合物包括可以以外科手术方式植入再狭窄部位或潜在再狭窄部位处或可以以聚合性糊剂或凝胶形式经由导管注射的聚合性载体。适合的组合物可以包括本文中所论述的纯化/修饰的褐藻糖胶。

关节炎

类风湿性关节炎(RA)为衰弱的慢性炎性疾病，其特征为关节组织的疼痛、肿胀、滑膜细胞增殖(血管翳形成)及干扰。在晚期，该疾病经常损害关键器官且可致命。该疾病涉及免疫系统(巨噬细胞/单核细胞、中性粒细胞、B细胞及T细胞)复杂的细胞介素相互作用及滑膜细胞功能失常及增殖的多个成员。已推荐用疾病修饰抗风湿药物(DMARD)，诸如甲胺喋呤用于早期侵袭性治疗，该药物在本文中其他地方论述。

结晶诱发的关节炎的特征为关节中结晶诱发的巨噬细胞及中性粒细胞活化且之后许多天伴随剧烈疼痛。疾病进展使得发作间隔变得更短且患者的发病率增加。此疾病总体上已通过非类固醇抗炎药(NSAID)，诸如双氯芬酸钠

对症治疗。此抗炎剂具有毒性，包括中枢神经系统毒性，诸如眩晕及头痛；皮肤病学毒性，诸如皮疹及瘙痒；胃肠毒性，诸如加重的溃疡性结肠炎及克罗恩病；泌尿生殖毒性，诸如急性肾衰竭及肾乳头坏死；血液毒性，诸如粒细胞缺乏、白血球减少及血小板减少；肝毒性，诸如升高的肝转胺酶及肝炎；及其他毒性，诸如哮喘及过敏反应。

本发明论述包括例如经由向患者给药治疗有效量的寡核苷酸治疗剂及可选的抗炎剂来预防或治疗类风湿性关节炎。适合的组合物包括聚合性载体，其可以以抗炎剂及微颗粒的受控释放载体形式以寡核苷酸治疗剂的受控释放载体形式(其反过来已经并入于聚合性载体中)注射至关节中。适合的组合物可以包括本文中所论述的纯化/修饰的褐藻糖胶。所述聚合性载体可以采取聚合物微球体、糊剂或凝胶的形式。

炎症病症

本文中的组合物等可选地抑制或治疗涉及嗜中性白细胞的炎性病症，例如包括向患者给药包括寡核苷酸治疗剂及抗炎剂的组合物。所述病症的实例包括结晶诱发的关节炎；骨关节炎；非类风湿性炎性关节炎；混合结缔组织疾病；干燥综合征；强直性脊柱炎；贝赫切特综合征；结节病；银屑病；湿疹；炎性肠病；慢性炎性肺病；神经屏障及多发性硬化。在以下段落中进一步论述这些疾病中的一些。

慢性炎性皮肤病(包括牛皮癣和湿疹)

牛皮癣为常见的慢性炎性皮肤病，其特征为发痒、灼热、蜇伤且易于出血的突起的、增厚的及鳞片状病变。当这些疾病在疾病的晚期具有细胞增殖及血管生成组合物时，患者通常具有伴随的关节炎病症。症状可以通过诸如泼尼松的类固醇抗炎剂或诸如甲胺喋呤的抗增殖剂来治疗，这些药剂在本文的其他地方论述。本文中的组合物还可以用于抑制或以其他方式治疗和/或预防慢性炎性皮肤病，例如银屑病和/或湿疹。

以下提供可以通过本文中所论述的组合物治疗的炎性疾病的一些额外代表性实例，包括例如动静脉畸形(血管畸形)的动脉栓塞；月经过多；急性出血；中枢神经系统屏障及脾功能亢进；炎性皮肤病，诸如银屑病；湿疹疾病(异位性皮炎、接触性皮炎、湿疹)；免疫大疱疾病；及包括各种病症的炎性关节炎，所述病症包括类风湿性关节炎、混合结缔组织疾病、干燥综合征、强直性脊柱炎、贝赫切特综合征、结节病、结晶诱发的关节炎及骨关节炎(以上所有特征以发炎的疼痛关节为重要症状)。

缺血

缺血或局部缺血涉及血液供应限制，可以包括恰当组织功能所需的氧、葡萄糖及其他组合物供应不足，使得组织损坏和/或功能不全。缺血可能导致严重问题。例如，组织可能变得缺氧、坏死且可形成结块。已作出各种尝试以预防和/或治疗缺血。例如，复原血流或再灌注。然而，复原血液涉及再引入氧，其可能导致因产生自由基所致的额外损坏，进而导致再灌注损伤。再灌注损伤可能导致严重问题。本文的组合物可以用于抑制或以其他方式治疗和/或预防缺血和/或再灌注损伤。

内毒素血症

内毒素血症是在血液中存在内毒素。内毒素血症可能导致严重问题。例如，内毒素血症可能引起败血症休克。本文中的组合物可以用于抑制或以其他方式治疗和/或预防内毒素血症。

瘢痕疙瘩瘢痕

瘢痕疙瘩特质致使伤口通过突起的瘢痕愈合。瘢痕疙瘩特质的突起瘢痕涉及异常纤维性瘢痕。瘢痕疙瘩特质导致严重问题，例如疼痛及外形损伤。本文中的组合物可用于抑制或以其他方式治疗和/或预防瘢痕疙瘩特质及其引起的突起的瘢痕。

瘢痕疙瘩(瘢痕疙瘩瘢痕)是生长扩增超过正常皮肤的瘢痕类型。瘢痕疙瘩涉及异常胶原生长，包括I型及III型胶原异常生长。瘢痕疙瘩导致严重问题，例如疼痛、瘙痒，并且若经感染，则可能溃烂。已作出尝试以治疗或预防瘢痕疙瘩，包括使用外科手术、敷料、类固醇注射及激光疗法。本文中的组合物可以用于抑制或以其他方式治疗和/或预防瘢痕疙瘩。

皮炎

皮炎包括皮肤炎症，所属皮肤炎症包括特应性皮炎及接触性皮炎。例如，接触性皮炎涉及在皮肤与外来物质接触的后皮肤的局部皮疹和/或刺激。例如，特应性皮炎为长期复发性、瘙痒皮肤病。特应皮炎有时被称作贝尼埃氏痒疹(prurigo Besnier)、神经性皮炎、内源性湿疹、曲湿疹、婴儿湿疹、儿童湿疹及痒疹病(prurigo diathsique)。湿疹为呈皮炎形式的疾病。其他类型的皮炎包括海绵性皮炎、脂溢性皮炎(皮屑)、出汗屏障性皮炎(汗疱疹)、荨麻疹、泡状皮炎(大疱性皮炎)及流行性风疹。皮炎可能导致严重问题。例如，干燥皮肤、皮肤皮疹、皮肤水肿、皮肤发红、皮肤瘙痒、皮肤结痂、开裂、起泡、渗泌及出血。已作出尝试以治疗或预防皮炎，包括使用皮质类固醇及煤焦油。本文中的组合物可以用于抑制或以其他方式治疗和/或预防皮炎，包括特应性皮炎、湿疹、接触性皮炎、海绵性皮炎、脂溢性皮炎、出汗屏障性皮炎、荨麻疹、泡状皮炎及流行性荨麻疹。

红斑痤疮

红斑痤疮为典型地特征化为面部红斑的慢性疾病或病症。红斑痤疮可能导致严重问题。例如，红斑痤疮通常从额头、鼻子或脸颊发红开始，还可能导致脖子、耳朵、头皮和胸部发红。红斑痤疮可能导致包括毛细管扩张、丘疹、脓包、疼痛感觉的额外症状，且在晚期病例中，可能产生肥大性酒渣鼻(红色分叶鼻)。红斑痤疮亚型包括红斑狼疮样红斑痤疮、脓包性丘疹样红斑痤疮、结块性红斑痤疮及眼部红斑痤疮。已作出尝试以治疗或预防红斑痤疮，包括使用非类固醇抗炎药及抗生素。本文中的组合物可以用于抑制或以其他方式治疗和/或预防红斑痤疮，包括其红斑狼疮、脓包性丘疹、红斑痤疮及眼部亚型。

医疗器械、医疗材料、组合和药物产品

本文的论述还提供医疗器械、医疗材料、组合及药物产品，其包括在医疗器械、医疗材料、组合产品或药学上可接受的容器中的如本文所论述的组合物。该产品还可包括与容器相关联的注意事项，典型地以由监察医疗器械、医疗材料、组合及药剂或生物药剂的制造、使用或销售的管理机构规定的形式，从而该注意事项反映该组合物经该机构批准，诸如纯化/修饰的褐藻糖胶已经批准作为例如用于人类或兽医给药以治疗增殖性疾病或炎性疾病(例如炎性关节炎、再狭窄、外科手术粘连、银屑病及腹膜炎)的抗增殖剂或抗炎剂的注意事项。还可以包括使用本文中的纯化/修饰的褐藻糖胶的说明书。所述说明书可以包括关于患者的给药及投药模式的信息。

本申请进一步涉及制备本文讨论的纯化/修饰的褐藻糖胶，系统等的各种元件的方法，包括制备组合物本身，以及使用该组合物的方法，包括本文中对病症，疾病等的示例性治疗。

本申请进一步包括用于治疗纤维性粘连、关节炎、银屑病或视需要的其他疾病的医疗器械、医疗材料、药物组合产品及药物产品，其包括本文中呈现的纯化/修饰的褐藻糖胶及纯化/修饰的褐藻糖胶组合物。所述材料等可以用于治疗纤维性粘连，诸如外科手术粘连、关节炎、银屑病或视需要的其他疾病的药物品中。还提供制造且使用能够减少与患者，包括人类患者体内的纤维性粘连、关节炎及银屑病中的至少一种相关联的症状的所述药物的方法，所述方法包括将药学上有效量的褐藻糖胶，诸如如本文所论述的岩藻多糖与药学上可接受的赋形剂或缓冲剂组合。

以下实施例提供了本文中某些实施方式的示例性讨论，但是本公开和权利要求书不限于此。

实施例1：化学结构修饰

渗出物-提取物获自极北海带(Laminaria Hyperborea)。渗出物-提取物通过切向流过滤(TFF)通过100kDa过滤器来过滤并除去小分子。将所得渗余物的样品冻干以获得未以其他方式修饰的样品A。通过添加10M NaOH溶液使所得渗余物达至0.25M NaOH且在室温下静置16小时。然后将所得样品通过50kDa过滤器离心过滤且收集所得渗余物并冻干以获得经碱处理的样品B。通过质子核磁共振光谱法(¹H-NMR)分析未修饰的样品A及经碱处理的样品B两者且图2A中示出所得¹H-NMR光谱。

图2A证明了已完成的褐藻糖胶的化学结构修饰：存在于未修饰的样品A中的具有约2.0ppm化学位移的较宽峰并不存在于经碱处理的样品B中。

通过2D¹H-¹³C异核多量子相干(HMQC)进一步分析未修饰的样品A及经碱处理/修饰的样品B。在70℃下伴随溶剂信号抑制在配备有5-mm冷探针的600MHz光谱仪上获得图2B中示出的HMQC谱。在碳尺寸10-30ppm范围内以256-512的8次增量的扫描每次获得HMQC谱的大量扫描；这样的扫描经组合以产生图2B中的谱。

未修饰的样品A的HMQC谱具有对应于O-乙酰基的交叉峰，由图2B中的带圆圈信号指示。此交叉峰不存在于经碱处理的样品B的谱中。这证明了从褐藻糖胶中除去乙酰基，且因此通过NaOH处理来对经碱处理的样品B中的褐藻糖胶进行化学结构修饰。

实施例2：物理诱导的絮凝

将棕色粉末原料岩藻多糖以约10％w/v溶解在蒸馏水中，以获得起始溶液。将氯化钠添加到起始溶液中，以产生最终氯化钠浓度为约0.1M的混合物。将混合物加热至接近沸腾10-15分钟。在该温度下处理混合物会引起悬浮杂质和颗粒非褐藻糖胶物质的絮凝。将该混合物在2300重力下离心40分钟，以将含有岩藻多糖的溶液与絮凝的非岩藻多糖组合物分离。视觉检查含岩藻多糖的溶液，并观察到颗粒物质和颜色的视觉减少。含有岩藻多糖的溶液的冻干部分包括灰白色粉末，其颜色显着小于所使用的原料岩藻多糖的颜色。可以例如通过获得原料岩藻多糖在水中的10mg/mL的紫外/可见光(UV/Vis光谱)和在10的纯化/修饰的褐藻糖胶的UV/Vis光谱来定量和比较颜色损失毫克/毫升水溶液，确定光谱可见区域(在约400nm至约700nm之间)的总吸光度，并观察到纯化后的样品的总吸光度降低至少约5％，10％或20％。相对于岩藻多糖的原料而言，纯化/修饰的褐藻糖胶的含量更高。

实施例3：固相提取

将棕色粉末-原料岩藻多糖加入到70℃v/v乙醇/水中的0.5M NaOH的40摄氏度混合物中。搅拌所得的反应混合物，并在40摄氏度下保持2小时。然后将反应混合物离心，以在含提取杂质的70％v/v乙醇/水上清液中，将固体纯化/修饰的岩藻多糖与0.5M NaOH分离。

发现可视化时，固体纯化/修饰的岩藻多糖对人眼的颜色明显小于原料岩藻多糖。这种颜色的损失表明已除去了诸如芦丁单宁之类的杂质，因为褐藻糖胶不含发色团，因此在完全纯净时将是无色的。可以例如通过获得原料岩藻多糖在水中的10mg/mL的紫外/可见光(UV/Vis光谱)和在10的纯化/修饰的褐藻糖胶的UV/Vis光谱来定量和比较颜色损失毫克/毫升水溶液，确定光谱可见区的总吸光度(大约在400nm至700nm之间)，并观察到纯化后的相对于岩藻多糖的原料而言，修饰褐藻糖胶的含量更高。

实施例4：化学诱导的沉淀

将原料岩藻多糖组合物以15％w/v溶解在蒸馏水中以形成起始溶液。通过观察发现起始溶液含有悬浮颗粒。将氯化钙以0.5M的水平添加到起始溶液中以产生反应混合物。为了模拟天然岩藻多糖中的已知杂质，以5％w/w藻酸钠/岩藻多糖的浓度添加藻酸钠，以5％w/w淀粉/岩藻多糖的浓度添加淀粉。在这种情况下，淀粉被用作模拟海带多糖。将10MNaOH滴加到反应混合物中以使pH达到7至8。这样做是为了避免岩藻多糖在反应混合物中降解。再次向反应混合物中加入最少量的10M NaOH，以避免随后添加磷酸使反应混合物酸化。通过添加磷酸将反应混合物加入0.5M磷酸盐。通过氯化钙与磷酸反应形成的磷酸钙的作用，这开始悬浮颗粒和沉淀杂质的絮凝。使反应混合物在室温下静置10分钟以使絮凝继续。将反应混合物在17568重力下离心17分钟，以将所需的上清液中的岩藻多糖与絮凝杂质分离。目视检查上清液，以定性评估颜色和颗粒的除去。还通过在300-800nm区域中的UV/Vis吸收来分析上清液的等分试样，以评估除去在UV/Vis光谱区域中散射光和/或吸收光的非岩藻多糖组分。也将上清液的等分试样冻干以获得褐藻糖胶含量。也将上清液的等分试样在90摄氏度的3M HCl中水解，并通过高效阴离子交换-脉冲安培检测(HPAE-PAD)进行分析，以检测总碳水化合物并评估海带多糖和藻酸盐的除去率。杂质的定量违反单体葡萄糖的标准，以评估海带多糖和单体甘露糖醛酸的含量，以及单体古罗糖醛酸评估藻酸盐的除去量。

来自起始岩藻多糖和所得纯化/修饰的褐藻糖胶的分析结果示于下表1中。

*:通过代表性的岩藻多糖确定的值

表1：起始岩藻多糖和处理过的溶液的分析结果

实施例5：化学诱导的沉淀

将原料岩藻多糖组合物以15％w/v溶解在蒸馏水中以形成起始溶液。通过观察发现起始溶液含有悬浮颗粒。为了模拟天然岩藻多糖中的已知杂质，以5％w/w藻酸钠/岩藻多糖的浓度添加藻酸钠，以5％w/w淀粉/岩藻多糖的浓度添加淀粉。在这种情况下，淀粉被用作模拟海带多糖。滴加10M NaOH到起始溶液中，使pH值在7到8之间。这样做是为了避免溶液中岩藻多糖的降解，以防随后添加硫酸铝使起始溶液呈酸性。将起始溶液加入0.1M硫酸铝中以产生反应混合物。通过同时形成的氢氧化铝引发杂质的沉淀以及杂质和悬浮颗粒的絮凝。使反应混合物在室温下静置10分钟以使絮凝继续。将反应混合物在17568重力下离心17分钟，将所需的上清液中的岩藻多糖与絮凝杂质分离。目视检查上清液，以定性评估颜色和颗粒的除去。还通过在300-800nm区域中的UV/Vis吸收来分析上清液的等分试样，以评估除去在UV/Vis光谱区域中散射光和/或吸收光的非岩藻多糖组分。也将上清液的等分试样冻干以获得褐藻糖胶含量。也将上清液的等分试样在90摄氏度的3M HCl中水解，并通过高效阴离子交换-脉冲安培检测(HPAE-PAD)进行分析，以检测总碳水化合物并评估海带多糖和藻酸盐的除去率。杂质的定量违反单体葡萄糖的标准，以评估海带多糖和单体甘露糖醛酸的含量，以及单体古罗糖醛酸评估藻酸盐的除去量。

来自起始岩藻多糖和所得纯化/修饰的褐藻糖胶的分析结果示于下表2中。

*:通过代表性的岩藻多糖确定的值

表2：起始岩藻多糖和处理过的溶液的分析结果

实施例6：化学诱导的沉淀

起始岩藻多糖组合物以15％w/v溶解在蒸馏水中以形成起始溶液。通过观察发现起始溶液含有悬浮颗粒。为了模拟天然岩藻多糖中的已知杂质，以5％w/w藻酸钠/岩藻多糖的浓度添加藻酸钠，以5％w/w淀粉/岩藻多糖的浓度添加淀粉。在这种情况下，淀粉被用作模拟海带多糖。将氯化钙以0.5M的水平添加到起始溶液中以产生反应混合物。这引发了藻酸盐的沉淀。将10M NaOH滴加到反应混合物中以使pH达到7至8。这样做是为了避免岩藻多糖在反应混合物中降解。将反应混合物加入0.5M硫酸铝。通过氯化钙与硫酸铝反应形成的硫酸钙的作用以及反应混合物中由硫酸铝形成的氢氧化铝的作用，这开始悬浮颗粒，藻酸钙沉淀和其他杂质的絮凝。使反应混合物在室温下静置10分钟以使絮凝继续。将反应混合物以17568g离心17分钟，以使所需的上清液中的岩藻多糖与絮凝杂质分离。目视检查上清液，以定性评估颜色和颗粒的除去。还通过在300-800nm区域中的UV/Vis吸收来分析上清液的等分试样，以评估除去在UV/Vis光谱区域中散射光和/或吸收光的非岩藻多糖组分。也将上清液的等分试样冻干以获得褐藻糖胶含量。也将上清液的等分试样在90摄氏度的3M HCl中水解，并通过高效阴离子交换-脉冲安培检测(HPAE-PAD)进行分析，以检测总碳水化合物并评估海带多糖和藻酸盐的除去率。杂质的定量违反单体葡萄糖的标准，以评估海带多糖和单体甘露糖醛酸的含量，以及单体古罗糖醛酸评估藻酸盐的除去量。

来自起始岩藻多糖和所得纯化/修饰的褐藻糖胶的分析结果在下表3中给出。

*:通过代表性的岩藻多糖确定的值

表3：起始岩藻多糖和处理过的溶液的分析结果

实施例7：液-液提取

将包括杂质的起始褐藻糖胶组合物以10mg/mL溶解在蒸馏水中以产生水性起始溶液。将20％v/v庚烷加入到含有起始岩藻多糖组合物的水性起始溶液中，然后将有机-水性混合物在高剪切下混合30分钟。终止混合，并将有机-水混合物置于分液漏斗中以将有机相与水相分离。含有所需褐藻糖胶组分的较稠的水相沉降到分液漏斗的底部，而含有杂质的较不稠密的有机相则存在于分液漏斗的上端。将有机-水性混合物在分液漏斗中放置10分钟。然后倒出水相，并以溶液中所需的纯化/修饰的褐藻糖胶形式收集。可以发现溶液中的纯化的/修饰的褐藻糖胶比起始褐藻糖胶组合物少约30％、50％、70％至约100％的脂质、脂肪酸、叶绿素、蛋白质、岩藻黄质和/或叶绿素。

实施例8：液-液提取

将含有杂质的起始褐藻糖胶组合物以10mg/mL溶解在蒸馏水中以产生水性起始溶液。将20％v/v的1-丁醇加入到含有起始岩藻多糖组合物的水性起始溶液中，然后将有机-水性混合物在高剪切下混合30分钟。终止混合，并将有机-水混合物置于分液漏斗中以将有机相与水相分离。含有所需褐藻糖胶组分的较稠的水相沉降到分液漏斗的底部，而含有杂质的较不稠密的有机相则存在于分液漏斗的上端。将有机-水性混合物在分液漏斗中放置10分钟。然后倒出水相，并以溶液中所需的纯化/修饰的褐藻糖胶形式收集。可以发现溶液中的纯化的/修饰的褐藻糖胶比起始褐藻糖胶组合物少包括约30％、50％、70％至约100％的脂质、脂肪酸、褐藻多酚、蛋白质、岩藻黄质和/或叶绿素。

实施例9：液-液提取

以10mg/mL将含有杂质的起始褐藻糖胶组合物溶解于蒸馏水中以产生水性起始溶液。将20％v/v乙酸乙酯加入到含有起始岩藻多糖组合物的水性起始溶液中，然后将有机-水性混合物在高剪切下混合30分钟。终止混合，并将有机-水混合物置于分液漏斗中以将有机相与水相分离。含有所需褐藻糖胶组分的较稠的水相沉降到分液漏斗的底部，而含有杂质的较不稠密的有机相则存在于分液漏斗的上端。将有机-水性混合物在分液漏斗中放置10分钟。然后倒出水相，并以溶液中所需的纯化/修饰的褐藻糖胶形式收集。可以发现溶液中的纯化的/修饰的褐藻糖胶比起始褐藻糖胶组合物少约30％、50％、70％至约100％的脂质、脂肪酸、叶绿素、蛋白质、岩藻黄质和/或叶绿素。

实施例10：渗滤

提供了包括约8％w/v的起始溶液或起始岩藻多糖组合物。起始溶液通过0.22微米的过滤器过滤。通过电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)测定了过滤后的起始溶液的等分试样中的阳离子含量，发现其中铝/褐藻糖胶的含量超过0.01％w/w，砷/褐藻糖胶的含量超过10-5％w/w，钙/褐藻糖胶的含量高于0.01％w/w，所有的阳离子都是不希望的水平。将起始溶液用0.1M EDTA，0.01M NaOH溶液渗滤4次。然后将所得的渗余岩藻多糖溶液用约2.5毫微伏的5mM Na₂SO₃、5mM NaCl溶液渗滤。通过ICP-MS测定所得的第二渗余岩藻多糖溶液的阳离子含量。起始岩藻多糖组合物和所得纯化/修饰的褐藻糖胶的结果示于下表4中。

表4：岩藻多糖和处理过的溶液的分析结果

实施例11：超临界流体提取

提供了约100g的固体起始岩藻多糖组合物。将固体置于超临界提取器中。将提取器加压至5800psi，加热至50摄氏度，然后以100mL/min的超临界二氧化碳吹扫3小时。从提取器中清除超临界二氧化碳，并收集固体修饰/纯化岩藻多糖并分析杂质。可以发现收集的固体修饰/纯化的岩藻多糖包含比起始岩藻多糖组合物少约30％至约100％的脂质，脂肪酸，褐藻多酚，海带多糖，藻酸盐，蛋白质，美拉德反应产物，岩藻黄质，叶绿素，游离离子，细菌和/或DNA。

实施例12：化学诱导的沉淀、裂解和絮凝

将发现的岩藻多糖组合物(其发现包括约0.70％w/w的总氮)以15％w/v的量溶解在蒸馏水中以形成起始溶液。总氮的存在表明存在不希望的杂质，例如细胞组分，DNA，蛋白质和细菌。总氮的减少表明，视情况而定，已经从起始岩藻多糖组合物或岩藻多糖聚合物中除去了这些含氮杂质，因为含氮杂质可以化学或离子键合到这种岩藻多糖分子上。

通过观察发现起始溶液含有悬浮颗粒。将氯化钙以0.5M的水平添加到起始溶液中以产生反应混合物。这开始沉淀出怀疑含有杂质的固体部分。将约15mL的10M NaOH逐滴添加至反应混合物中以使pH达到7至8。这样做是为了避免岩藻多糖在反应混合物中降解。通过添加磷酸将反应混合物加入0.5M磷酸盐。通过氯化钙与磷酸反应形成的磷酸钙的作用，这开始悬浮颗粒和沉淀杂质的絮凝。将反应混合物在33,746重力下离心5分钟，以将上清液中的第一纯化/修饰的岩藻多糖与絮凝的杂质分离。发现第一纯化/修饰的岩藻多糖含有约0.10％w/w的总氮。通过在100kDa MWCO离心过滤器上针对6个5mM NaCl的渗滤膜进行渗滤，进一步纯化上清液中的一部分第一纯化/修饰的岩藻多糖。发现所得的第一渗余纯化/修饰的岩藻多糖含有约0.08％w/w的总氮。

通过添加1M十二烷基硫酸钠溶液作为细胞干扰剂至浓度为0.010M，进一步处理第一纯化/修饰的岩藻多糖的第二部分。添加10M NaOH溶液至浓度为0.26M以使混合基本。将得到的反应混合物在室温下搅拌约30分钟以获得浑浊的浅棕色混合物。

约30分钟后，加入45％w/v KOH溶液至约0.04M的浓度。钾的添加导致SDS和不希望的杂质与SDS一起沉淀。加入48％w/v的硫酸铝溶液至约0.06M的浓度。氢氧化铝的形成使反应混合物中的不希望的杂质絮凝。加入亚硫酸钠固体并溶解至0.02M的浓度以淬灭反应混合物中的潜在氧化剂。

将所得反应混合物在冰箱中储存约16小时，然后在33,746重力下离心5分钟，以将上清液中的第二纯化/修饰的岩藻多糖与絮凝的杂质分离。发现第二种纯化/修饰的岩藻多糖含有约0.06％w/w的总氮。通过在100kDa MWCO离心过滤器上针对6个5mM NaCl的渗滤液进行渗滤，进一步处理一部分第二纯化/修饰的岩藻多糖，以提供第二渗余纯化/修饰的岩藻多糖。发现所得的第二渗余物纯化/修饰的岩藻多糖含有约0.03％w/w的总氮。

实施例13：制备五种纯化/修饰的褐藻糖胶

可以以任何方式使用，组合，修饰和置换本文讨论的方法以获得纯化/修饰的褐藻糖胶。使用实施例4、5、6和10中讨论的化学诱导的沉淀和渗滤的组合来制备五种纯化/修饰的褐藻糖胶，以评估纯化/修饰的褐藻糖胶在医疗和外科手术应用中的功效。这5种褐藻糖胶在本文中称为褐藻糖胶1至褐藻糖胶5。使用实施例4和实施例10中讨论的方法，以约2kg的规模生产了褐藻糖胶1和褐藻糖胶2。使用实施例4和实施例10中讨论的方法，以约30g的规模生产了褐藻糖胶3和褐藻糖胶5。使用实施例5和实施例10中讨论的方法以约1kg的规模生产出约1kg的褐藻糖胶粗产物。通过对低电导率的盐溶液渗滤，然后冻干，将褐藻糖胶1至5转化为固体纯化/修饰的褐藻糖胶，得到白色固体。从褐藻中提取了另外两种褐藻糖胶，在本文中称为褐藻糖胶6和褐藻糖胶7。褐藻糖胶6由FMC

提供为固体组合物。上面讨论的方法均未用于生产褐藻糖胶6。褐藻糖胶7是通过近沸腾的HCl从褐藻中提取的。通过使用乙醇作为沉淀剂进行选择性沉淀，除去了一些杂质。选择性沉淀后，通过用乙醇进一步沉淀褐藻糖胶，离心和冻干，将褐藻糖胶以固体组合物的形式收集。用实施例3中讨论的方法进一步处理褐藻糖胶7，然后将其溶解在水中并用去离子水渗滤，然后冻干，以获得呈固体组合物的褐藻糖胶7。如以下实施例14和实施例15中所述确定褐藻糖胶1至褐藻糖胶7的岩藻糖、半乳糖、硫酸酯和总反荷离子水平。下面例如在实施例16和表6中进一步讨论了这些褐藻糖胶1-7。

实施例14：褐藻糖胶1至褐藻糖胶7的校正的岩藻糖含量和校正的半乳糖含量的测量

将固体褐藻糖胶组合物以40mg/mL溶于72％w/w的硫酸中，并在45℃的水浴中温育30分钟。然后将酸水解产物在高压管中稀释至4％w/w硫酸，并在120℃孵育60分钟。用蒸馏水将所得的第二酸水解产物稀释至1/333的浓度，并在设置有脉冲安培检测法(HPAE-PAD)的高效阴离子交换柱色谱上运行。通过使用等度泵以10mL/min的速度运行10mM NaOH洗脱液来完组分析物的分离。

通过在岩藻糖的标准曲线上插值来确定褐藻糖胶的未校正岩藻糖含量。褐藻糖胶的未校正半乳糖含量通过标准添加方法确定。通过考虑在糖苷键水解时添加一分子水，以及在水解两个硫酸酯键pet岩藻糖时添加两个羟基来确定校正的岩藻糖含量。通过考虑糖苷键水解后添加一分子水来确定校正的半乳糖含量。

该分析的结果显示在下表5中。

实施例15：测量褐藻糖胶1至褐藻糖胶7的总硫酸酯含量、总反荷离子含量和总水含量

将固体褐藻糖胶组合物溶解在去离子水中，在酸性条件下水解，并通过ICP-MS分析总硫和反荷离子含量的％w/w。通过将硫含量乘以硫酸酯与硫的摩尔比，将硫含量转化为硫酸酯含量，以获得纯化/修饰的褐藻糖胶的％w/w硫酸酯含量。本文讨论的纯化/修饰的褐藻糖胶中观察到的反荷离子包括钾和钠反荷离子。该分析的结果显示在下表5中。

总校正的岩藻糖，校正的半乳糖和硫酸酯的％w/w结果也显示在下表5中。通过将校正后的岩藻糖，校正后的半乳糖和硫酸酯值加在一起来确定总岩藻糖，半乳糖和硫酸酯的结果，这是更详细，更完整的计算，其中包括以下等式1所示的方面。总反荷离子含量是通过将总钠和总钾含量加在一起确定的。

等式1:

表5:褐藻糖胶的组分％w/w

表5证明了具有少于约12％，10％，9％，8％，7％，6％，5％，4％，3％或2％w/w杂质的纯化/修饰的褐藻糖胶可以是使用本文讨论的方法制备。

表5进一步证明已经生产了总半乳糖、岩藻糖和硫酸酯含量为约77％w/w至约87％w/w的纯化/修饰的褐藻糖胶。

表5进一步证明了纯化/修饰的褐藻糖胶，其总反荷离子含量为褐藻糖胶的约9％w/w至约14％w/w。

通过在104℃下的失重(LOD)来确定褐藻糖胶1、褐藻糖胶3、褐藻糖胶4和褐藻糖胶5的总水含量。经测定，总水含量为各自纯化/修饰的褐藻糖胶的3.8％，2.4％，3.2％和4.7％w/w。

实施例16：测量褐藻糖胶3和褐藻糖胶4的分子量分布

凝胶渗透色谱法(GPC)用于评估纯化/修饰的褐藻糖胶3和褐藻糖胶4的分子量分布。有许多不同的参数，色谱柱和标准品可用于凝胶渗透色谱法，从而产生了许多可用于分子量分析的仪器设置。对于本文中的分子量测定，使用以下参数进行GPC：流动相是0.1M硝酸钠，流速为0.6mL/min。柱温箱和检测器的温度为30℃。使用Waters 2414折射率检测器进行检测。

合适的GPC柱包括与水性溶剂相容的GPC柱，例如填充有磺化苯乙烯-二乙烯基苯，NH-官能化的丙烯酸酯共聚物网络，修饰的二氧化硅和羟基化聚甲基丙烯酸酯基凝胶中的至少一种的柱。为了进行本文的分析，使用了三列色谱柱，包括一个内径(ID)为6mm的40mm长的保护柱，其中装有6μm粒径的羟基化聚甲基丙烯酸酯基凝胶，然后是第一个300mm分析GPC柱7.8毫米内径填充12微米粒径的羟基化聚甲基丙烯酸酯基凝胶，其排阻极限为约7,000kDa，有效分子量范围在约50kDa到约5,000kDa之间，随后是第二个300mm分析GPC色谱柱具有填充有10μm粒径的羟基化聚甲基丙烯酸酯基凝胶的7.8mm内径，其排斥极限约为7,000kDa，有效分子量范围介于1kDa和6,000kDa之间。柱装置的总有效分子量范围为约1kDa至约6,000kDa。此色谱柱装置的一个示例可以是串联的

保护

线性色谱柱。

相对于包括美国聚合物标准公司的可追溯标准物的标准曲线对运行的样品进行定量：DXT3755K(峰分子量＝2164kDa)，DXT820K(峰分子量＝745kDa)，DXT760K(峰分子量＝621kDa)，DXT670K(峰分子量＝401kDa)，DXT530K(峰分子量＝490kDa)，DXT500K(峰分子量＝390kDa)，DXT270K(峰分子量＝196kDa)，DXT225K(峰分子量＝213kDa)，DXT150K(峰分子量＝124kDa)，DXT55K(峰分子量＝50kDa)，DXT50K(峰分子量＝44kDa)和DXT5K(峰分子量＝4kDa)，这些标准物的峰分子量为在约4kDa至约2,200kDa之间。所使用的标准曲线可以例如包括：右旋糖酐3755kDa，右旋糖酐50kDa和右旋糖酐55kDa中的至少一种，以及本文所讨论的3至6个另外的可追踪标准，校准点是所使用的校准物的峰分子量。示例校准曲线可以由DXT3755K，DXT 820K，DXT530K，DXT500K，DXT225K和DXT55K组成。本文所用的色谱柱的总有效分子量范围涵盖并扩展到用于褐藻糖胶定量的标准品的峰分子量范围之外。

下表6中的结果包括用于分子量分布的某些特征的缩写。凝胶渗透色谱法用GPC表示，峰分子量用PMW表示，重均分子量用WAMW表示，数均分子量用NAMW表示，百分比分布用％分布表示。分子量用MW表示。

表6–两种修饰的褐藻糖胶的分子量分布特征

实施例17：通过干燥制备高纯度的褐藻糖胶组合物

将约100mg的褐藻糖胶1置于坩埚中。将含有褐藻糖胶1的坩埚在105℃的烘箱中放置30分钟以产生进一步纯化的褐藻糖胶组合物，以下称为褐藻糖胶1'。将含有进一步纯化的褐藻糖胶1'组合物的坩埚从烘箱中移出并放置在干燥器中。进一步纯化的褐藻糖胶1'组合物在无水气氛下通过HPAE-PAD分析总岩藻糖和半乳糖，并通过ICP-MS分析总硫和反离子含量，发现其中含有总岩藻糖、半乳糖、硫酸酯和反荷离子含量超过99.9％w/w，换句话说，杂质含量少于0.1％。

实施例18：通过干燥制备高纯度的褐藻糖胶组合物

将约600mg的褐藻糖胶1置于Ohaus MB 90水分分析仪中的铝盘上。将该仪器编程为在105℃下加热褐藻糖胶1 30分钟，以生产进一步纯化的褐藻糖胶1”组合物。从仪器中取出进一步纯化的褐藻糖胶1”组合物，并将其置于干燥器中。在无水气氛下通过HPAE-PAD分析样品中的总岩藻糖和半乳糖，并通过ICP-MS分析其总硫和反荷离子含量，发现总岩藻糖、半乳糖、硫酸酯和反荷离子的含量超过99.9％w/w，少于0.1％的杂质。

实施例19：用褐藻糖胶1处理的子宫角纤维性粘连

为了确定纯化/修饰的褐藻糖胶1在抑制外科手术粘连中的功效，对总共两只新西兰白兔的两只角进行了以下双子宫角(DUH)手术。在手术之前，将兔子称重，然后通过氯胺酮和甲苯噻嗪的预用药准备进行手术。

在乳酸钠林格注射液USP(LRS)中以0.33mg/mL制备岩藻多糖溶液，通过过滤灭菌。所有器械都是无菌的，并且在整个手术过程中都保持无菌区域。清洁腹部并通过中线腹部切口进入。子宫角被定位，外部化和刮擦以引起损伤。刮除子宫角附近的腹壁也被刮除。将少量岩藻多糖溶液直接应用于受伤的子宫角和侧壁区域。受损的子宫角和腹壁彼此相邻放置，并用缝合线固定。在切开切口之前，将每只兔子体重15mL/kg的岩藻多糖溶液给药于腹腔。术后两周评估粘连。用直尺测量子宫角粘连的长度。子宫角粘连覆盖率，即粘连长度占总受损子宫角长度的百分比，计算如下：

等式2:

粘连覆盖率(％)＝100x子宫角粘连长度÷子宫角受损总长度

将相同的手术方法应用于新西兰白兔，以15mL/kg的乳酸钠林格注射液USP(LRS)代替岩藻多糖溶液作为对照组。使用等式2确定接受LRS的对照组具有63％的粘连覆盖率。表7显示了使用上述针对褐藻糖胶2所述的方法获得的结果，所述方法是纯化/修饰的褐藻糖胶的代表性实例。下表中的结果显示为相对于对照组的粘连覆盖率降低。

表7提供了用褐藻糖胶1治疗六个子宫角的结果。

表7：使用褐藻糖胶1减少兔子宫角粘连

从表7的结果可以看出，本文讨论的纯化的/修饰的褐藻糖胶可用于成功治疗手术后子宫角粘连。

实施例20：用褐藻糖胶4处理的子宫角纤维性粘连

为了确定纯化/修饰的褐藻糖胶4在抑制手术粘连中的功效，在总共四只新西兰白兔的两个角上进行了以下双子宫角(DUH)手术。在手术之前，将兔子称重，然后通过氯胺酮和甲苯噻嗪的预用药准备进行手术。

在乳酸钠林格注射液USP(LRS)中制备3.75mg/mL的岩藻多糖溶液，通过过滤灭菌。所有器械都是无菌的，并且在整个手术过程中都保持无菌区域。清洁腹部并通过中线腹部切口进入。子宫角被定位，外部化和刮擦以引起损伤。刮除子宫角附近的腹壁也被刮除。将4mL岩藻多糖溶液直接应用于左侧受伤的子宫角和侧壁区域，将4mL岩藻多糖溶液直接应用于右侧受伤的子宫角和侧壁区域。受损的子宫角和腹壁彼此相邻放置，并用缝合线固定。在关闭切口之前，将引流管放置在腹膜腔中。手术后48小时拔下引流管。术后两周评估粘连。用直尺测量子宫角粘连的长度。使用公式2计算子宫角粘连覆盖率。

将相同的手术方法应用于3只新西兰白兔，每侧接受4mL乳酸钠林格注射液USP(LRS)代替岩藻多糖溶液作为对照组。使用方程式2确定接受LRS的对照组具有73％的粘连覆盖率。表8显示了使用上述针对褐藻糖胶4的方法获得的结果，所述褐藻糖胶4是纯化/修饰的褐藻糖胶的代表性实例。下表中的结果显示为相对于对照组的粘连覆盖率降低。

表8提供了用褐藻糖胶4治疗八个子宫角的结果。

表8：使用褐藻糖胶4减少兔子宫角粘连

从表8的结果可以看出，纯化的/修饰的褐藻糖胶可用于成功治疗手术后子宫角粘连。

实施例21：用褐藻糖胶6处理的子宫角纤维性粘连

为了确定纯化/修饰的褐藻糖胶6在抑制手术粘连中的功效，对总共四只新西兰白兔的两个角进行了以下双子宫角(DUH)手术。在手术之前，将兔子称重，然后通过氯胺酮和甲苯噻嗪的预用药准备进行手术。

在乳酸钠林格注射液USP(LRS)中制备0.33mg/mL的褐藻糖胶溶液，通过过滤灭菌。所有器械都是无菌的，并且在整个手术过程中都保持无菌区域。清洁腹部并通过中线腹部切口进入。子宫角被定位，外部化和刮擦以引起损伤。刮除子宫角附近的腹壁也被刮除。受损的子宫角和腹壁彼此相邻放置，并用缝合线固定。在切开切口之前，将每只兔子体重约15mL/kg的岩藻多糖溶液给药于腹腔。术后两周评估粘连。在每种制备的岩藻多糖浓度下评估三只兔子。用直尺测量子宫角粘连的长度。使用等式2计算子宫角粘连长度。

将相同的外科手术方法应用于4只新西兰白兔，接受约15mL/kg的对照乳酸钠林格注射液USP(LRS)代替岩藻多糖溶液。使用等式2确定接受LRS的对照组具有71％的粘连覆盖率。表9显示了使用上述针对褐藻糖胶6讨论的方法获得的结果。下表中的结果显示为相对于褐藻糖胶6的粘连覆盖率降低。

表9提供了用褐藻糖胶6治疗八个子宫角的结果。

表9：相对于对照LRS，使用褐藻糖胶9可使兔子宫角粘连增加

从表9的结果可以看出，使用已知方法制备的并且总非褐藻糖胶含量大于褐藻糖胶的50％w/w的褐藻糖胶6在治疗纤维性粘连中无效。

实施例22：用褐藻糖胶7处理的子宫角纤维性粘连

为了确定纯化/修饰的褐藻糖胶7在抑制手术粘连中的功效，对总共四只新西兰白兔的两个角进行了以下双子宫角(DUH)手术。在手术之前，将兔子称重，然后通过氯胺酮和甲苯噻嗪的预用药准备进行手术。

在乳酸钠林格注射液USP(LRS)中以0.33mg/mL的浓度制备岩藻多糖溶液，并通过过滤灭菌。所有器械都是无菌的，并且在整个手术过程中都保持无菌区域。清洁腹部并通过中线腹部切口进入。子宫角被定位，外部化和刮擦以引起损伤。刮除子宫角附近的腹壁也被刮除。受损的子宫角和腹壁彼此相邻放置，并用缝合线固定。在切开切口之前，将每只兔子体重约15mL/kg的岩藻多糖溶液给药于腹腔。术后两周评估粘连。在每种制备的岩藻多糖浓度下评估三只兔子。用直尺测量子宫角粘连的长度。使用等式2计算子宫角粘连长度。

将相同的手术方法应用于4只新西兰白兔，接受约15mL/kg的对照乳酸钠林格注射液USP(LRS)代替岩藻多糖溶液。使用等式2确定接受LRS的对照组具有76％的粘连覆盖率。表10显示了使用上述针对褐藻糖胶7讨论的方法获得的结果。下表中的结果显示为相对于对照组的粘连覆盖率降低。

表10提供了用褐藻糖胶7治疗八个子宫角的结果。

表10：相对于对照LRS，使用褐藻糖胶7降低兔子宫角粘连

从表10的结果可以看出，使用已知方法制备的并且总非岩藻糖含量大于岩藻糖的50％w/w的褐藻糖胶7在治疗纤维性粘连中无效。

实施例23：用褐藻糖胶4处理的子宫角纤维性粘连

为了确定纯化/修饰的褐藻糖胶4在抑制外科手术粘连中的功效，对总共三只新西兰白兔的两个角进行了以下双子宫角(DUH)手术。在手术之前，将兔子称重，然后通过氯胺酮和甲苯噻嗪的预用药准备进行手术。

在乳酸钠林格注射液USP(LRS)中以5mg/mL制备岩藻多糖溶液，通过过滤灭菌。所有器械都是无菌的，并且在整个手术过程中都保持无菌区域。清洁腹部并通过中线腹部切口进入。子宫角被定位，外部化和刮擦以引起损伤。刮除子宫角附近的腹壁也被刮除。受损的子宫角和腹壁彼此相邻放置，并用缝合线固定。闭合肌肉切口的顶部三分之一和底部三分之一，并将每只兔子体重5mL/kg岩藻多糖溶液给药于腹腔。暂时关闭肌肉切口，将岩藻多糖溶液留在腹腔中30分钟。重新打开肌肉切口，并用10mL/kg LRS冲洗腹腔。在关闭切口之前，将腹腔中的大部分液体吸出。术后两周评估粘连形成。用直尺测量子宫角粘连的长度。使用公式2计算子宫角粘连覆盖率，即粘连长度占受损子宫角总长度的百分比。

表11示出了使用以上针对褐藻糖胶4讨论的方法获得的结果，所述方法是纯化/修饰的褐藻糖胶的代表性实例。下表中的结果显示为在所评分的6个子宫角上的平均粘连长度。

表11提供了用褐藻糖胶4治疗六个子宫角的结果。

表11：使用褐藻糖胶4的粘连长度

从表11的结果可以看出，纯化/修饰的褐藻糖胶可用于成功抑制，预防，除去，减少或以其他方式治疗手术后子宫角粘连。

实施例24：用纯化/修饰的褐藻糖胶组合物处理的子宫角纤维性粘连

为了确定包括92％w/w的总岩藻糖、半乳糖、硫酸酯和反荷离子的纯化/修饰的褐藻糖胶组合物在抑制外科手术粘连中的功效，在以下两个双子宫角(DUH)手术中进行了手术：总共二十只新西兰白兔。在手术之前，将兔子称重，然后通过用咪达唑仑和右美托咪定的处方药进行手术准备。

在乳酸钠林格注射液USP(LRS)中以0.02mg/mL，0.1mg/mL，0.5mg/mL或2.5mg/mL的每种浓度制备岩藻多糖溶液，通过过滤灭菌。所有器械都是无菌的，并且在整个手术过程中都保持无菌区域。清洁腹部并通过中线腹部切口进入。子宫角被定位，外部化和刮擦以引起损伤。刮除子宫角附近的腹壁也被刮除。受损的子宫角和腹壁彼此相邻放置，并用缝合线固定。在切开切口之前，将每只兔子体重约2mL/kg的岩藻多糖溶液给药于腹腔。术后两周评估粘连。治疗五只兔子并评估每个岩藻多糖的浓度。用直尺测量子宫角粘连的长度。使用等式2计算子宫角粘连长度。

将相同的手术方法应用于另外5只新西兰白兔作为对照，每只兔子接受约2mL/kg的对照乳酸钠林格注射液USP(LRS)代替岩藻多糖溶液。使用方程式2确定接受LRS的对照组的粘连覆盖率为100％。表12显示了使用上述方法对不同浓度和剂量的纯化/修饰的褐藻糖胶组合物进行的处理所获得的结果(总共治疗了40个子宫角，每种浓度的纯化/修饰的褐藻糖胶组合物各为10)；结果显示为相对于对照组的粘连覆盖率降低。

表12：相对于对照LRS，使用纯化/修饰的褐藻糖胶组合物降低了兔子宫角的粘连

从表12的结果可以看出，纯化/修饰的褐藻糖胶组合物可用于成功抑制，预防，除去，减少或以其他方式治疗手术后子宫角粘连。

附图标记列表

1200 阳离子含量修改系统

1202 输入供应管线

1204 预过滤器

1206 阳离子含量修改系统输出阀

1208 阳离子含量修改系统输出管线

1210 切向流过滤(TFF)过滤器

1212 TFF供应管线

1214 TFF输入泵

1216 褐藻糖胶容器

1217 TFF渗余物阀

1218 TFF渗余物返回管线

1219 TFF渗透物输出管线

1220 第一渗滤溶液容器

1224 第一渗滤溶液阀

1225 第一渗滤溶液供应管线

1230 第二渗滤溶液容器

1234 第二渗滤溶液阀

1235 第二渗滤溶液供应管线

除非上下文或定义另有清楚说明，否则本文中使用的所有术语均按照其普通含义使用。另外，除非另有明确说明，否则在说明书中使用的“或”包括“和”，反之亦然。除非另有明确指出或上下文另有清楚说明，否则非限制性术语不应解释为限制性的(例如，“包括(including)”、“具有”和“包括(comprising)”通常表示“包括但不限于”)。除非另有明确指出或上下文另有清楚说明，否则单数形式(包括在权利要求书中，诸如“一(a)”、“一(an)”和“该(the)”)包括复数引用。

除非另有指出，否则本文中对实施方式的一个或多个特征的条件或关系特征进行修饰的形容词(诸如“基本上”和“约”)表示，该条件或特征被定义为，对于该实施方式针对预期应用的操作而言，处于可接受的允许范围内。

本发明的方法、组合物、系统等的范围包括装置(means)加功能以及步骤加功能这两种概念。然而，除非在权利要求中具体地陈述词语“装置(means)”，否则权利要求不应被解释为表示“装置(means)加功能”的关系，而在权利要求中具体地陈述词语“装置(means)”的情况下，权利要求应解释为表示“装置(means)加功能”的关系。类似地，除非在权利要求中具体地陈述词语“步骤”，否则权利要求不应解释为表示“步骤加功能”的关系，而在权利要求中具体地陈述词语“步骤”的情况下，权利要求应解释为表示“步骤加功能”的关系。

根据以上所述，应当理解，尽管出于说明的目的已经在本文中讨论了具体的实施方式，但是可以在不背离本文所讨论的精神和范围的情况下进行各种修改。因此，系统和方法等包括对本文提出的主题所做的这样的修改以及所有排列和组合，并且仅受所附权利要求或在本文的讨论和附图中具有足够支持的其他权利要求的限制。

Claims (20)

1.一种包括纯化/修饰的褐藻糖胶聚合物结构和反荷离子的纯化/修饰的褐藻糖胶，其中，

(i)所述纯化/修饰的褐藻糖胶聚合物结构基本上由岩藻糖、半乳糖和硫酸酯组成；

(ii)所述纯化/修饰的褐藻糖胶包括不超过17％的反荷离子；

(iii)所述纯化/修饰的褐藻糖胶的岩藻糖、半乳糖、硫酸酯和反荷离子的总含量大于97％w/w；

(iv)所述纯化/修饰的褐藻糖胶的所述岩藻糖含量大于25％w/w；且

(v)所述纯化/修饰的岩藻糖具有20％w/w至60％w/w的硫酸酯化水平。

2.根据权利要求1所述的纯化/修饰的褐藻糖胶，其中，岩藻糖、半乳糖、硫酸酯和反荷离子的总含量大于99％w/w。

3.根据权利要求1所述的纯化/修饰的褐藻糖胶，其中，岩藻糖、半乳糖、硫酸酯和反荷离子的总含量大于99.9％w/w。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的纯化/修饰的褐藻糖胶，其中，所述半乳糖含量小于10％w/w。

5.根据权利要求1至3中任一项所述的纯化/修饰的褐藻糖胶，其中，总反荷离子含量小于10％w/w。

6.根据权利要求1至3中任一项所述的纯化/修饰的褐藻糖胶，其中，所述反荷离子是药学上可接受的反荷离子。

7.根据权利要求6所述的纯化/修饰的褐藻糖胶，其中，所述药学上可接受的反荷离子基本上由钠和钾中的至少一种组成。

8.根据权利要求1至3和7中任一项所述的纯化/修饰的褐藻糖胶，其中，所述纯化/修饰的褐藻糖胶具有分子量分布，其中，当使用水性凝胶渗透色谱法装置测量时，所述分布的至少60％w/w大于100kDa，所述水性凝胶渗透色谱法装置基本上由以下组成：

具有7.8mm内径的一个300mm分析型凝胶渗透色谱柱，装填有羟基化聚甲基丙烯酸酯基凝胶，具有50kDa至5,000kDa的有效分子量范围；具有7.8mm内径的一个300mm分析型凝胶渗透色谱柱，装填有羟基化聚甲基丙烯酸酯基凝胶，具有1kDa至6,000kDa的有效分子量范围；以及具有6mm内径的一个40mm保护柱，装填有羟基化聚甲基丙烯酸酯基凝胶，所述两个分析型凝胶渗透色谱柱及所述一个保护柱被容纳在处于30℃的柱室中；

折射率检测器，处于30℃；

0.1M硝酸钠流动相，以0.6mL/min运行；以及

相对于峰分子量标准曲线进行量化，所述峰分子量标准曲线基本上由以下组成：第一右旋糖酐标准物，具有的峰分子量为2,200kDa；第二右旋糖酐标准物，具有的峰分子量为720kDa至760kDa；第三右旋糖酐标准物，具有的峰分子量为470kDa至510kDa；第四右旋糖酐标准物，具有的峰分子量为370kDa至410kDa；第五右旋糖酐标准物，具有的峰分子量为180kDa至220kDa；以及第六右旋糖酐标准物，具有的峰分子量为40kDa至55kDa。

9.根据权利要求8所述的纯化/修饰的褐藻糖胶，其中，所述纯化/修饰的褐藻糖胶具有分子量分布，其中，所述分布的至少92％w/w大于100kDa。

10.根据权利要求8所述的纯化/修饰的褐藻糖胶，其中，所述纯化/修饰的褐藻糖胶具有大于100kDa的重均分子量。

11.根据权利要求1至3、7和9至10中任一项所述的纯化/修饰的褐藻糖胶，其中，总碳水化合物含量为27％w/w至80％w/w。

12.根据权利要求11所述的纯化/修饰的褐藻糖胶，其中，以总碳水化合物含量的百分比计，葡糖醛酸、葡萄糖、甘露糖、鼠李糖和木糖的总量低于12％w/w。

13.根据权利要求1至3、7、9至10和12中任一项所述的纯化/修饰的褐藻糖胶，其中，所述纯化/修饰的褐藻糖胶当以50mg/mL的浓度溶解于水中时具有4cP至50cP的粘度。

14.根据权利要求1至3、7、9至10和12中任一项所述的纯化/修饰的褐藻糖胶，其中，所述纯化/修饰的褐藻糖胶是白色固体。

15.根据权利要求1至3、7、9至10和12中任一项所述的纯化/修饰的褐藻糖胶，其中，所述纯化/修饰的褐藻糖胶当以1mg/mL至100mg/mL的浓度溶于水中时形成澄清且无色的溶液。

16.根据权利要求1至3、7、9至10和12中任一项所述的纯化/修饰的褐藻糖胶，其中，所述纯化/修饰的褐藻糖胶包括小于5％w/w的乙酰基含量。

17.根据权利要求1至3、7、9至10和12中任一项所述的纯化/修饰的褐藻糖胶，其中，当在70℃下伴随溶剂信号抑制在配备有5mm冷探针的600MHz光谱仪上在碳尺寸10-30ppm范围内以8次增量每次256-512次扫描通过2D 1H-13C异核多量子相干测量时，所述纯化/修饰的褐藻糖胶包括的乙酰基含量基本为0％w/w。

18.一种医疗上可接受的组合物，其包括在医疗上可接受的缓冲剂或稀释剂中的治疗有效量的根据权利要求1至17中任一项所述的纯化/修饰的褐藻糖胶。

19.一种医疗组合物，其包括0.02mg/mL至100mg/mL的根据权利要求1至17中任一项所述的纯化/修饰的褐藻糖胶，其中，所述医疗组合物被配置和构成为治疗动物的疾病或病症。

20.根据权利要求19所述的医疗组合物，其中，所述疾病或病症是纤维性粘连。

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