KR20010080491A

KR20010080491A - 티로신 키나제의 비가역적 저해제인ｎ-[4-(3-클로로-4-플루오로-페닐아미노)-7-(3-모르폴린-4-일-프로폭시)-퀴나졸린-6-일]-아크릴아미드

Info

Publication number: KR20010080491A
Application number: KR1020017006276A
Authority: KR
Inventors: 알렉산더 제임스 브리지즈; 데니즈 드리스콜; 웨인 다니엘 클로스
Original assignee: 로즈 암스트롱, 크리스틴 에이. 트러트웨인; 워너-램버트 캄파니
Priority date: 1998-11-19
Filing date: 1999-09-23
Publication date: 2001-08-22
Also published as: ZA200103535B; NO20012465L; DE69904358T2; UY25809A1; WO2000031048A1; EP1131304B1; IL143089A0; BR9915487A; HUP0104211A2; BG105608A; JP2002530386A; CN1160338C; US6344455B1; EE200100271A; GEP20032997B; PT1131304E; DK1131304T3; AU6261299A; HK1041695A1; CZ20011759A3

Abstract

본 발명은 티로신 키나제의 비가역적 저해제인 N-[4-(3-클로로-4-플루오로-페닐아미노)-7-(3-모르폴린-4-일-프로폭시)-퀴나졸린-6-일]-아크릴아미드라는 화합물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 N-[4-(3-클로로-4-플루오로-페닐아미노)-7-(3-모르폴린-4-일-프로폭시)-퀴나졸린-6-일]-아크릴아미드 화합물을 사용하여 암, 재발협착증, 죽상동맥경화증, 자궁내막증 및 건선을 치료하는 방법 및 N-[4-(3-클로로-4-플루오로-페닐아미노)-7-(3-모르폴린-4-일-프로폭시)-퀴나졸린-6-일]-아크릴아미드 화합물을 함유하는 약학 조성물에 관한 것이다.

Description

티로신 키나제의 비가역적 저해제인 Ｎ-[4-(3-클로로-4-플루오로-페닐아미노)-7-(3-모르폴린-4-일-프로폭시)-퀴나졸린-6-일]-아크릴아미드 {N-[4-(3-Chloro-4-fluoro-phenylamino)-7-(3-morpholin-4-yl-propoxy)-quinazolin-6-yl]-acrylamide, an Irreversible Inhibitor of Tyrosine Kinases}

암은 세포내 신호 전달 체계 또는 신호 전달 메카니즘의 질환이라고 보여진다. 세포는 많은 세포외 원천으로부터 증식하거나 증식하지 말라는 지시를 받는다. 신호 전달 체계의 목적은 세포 표면에서 이러한 신호 및 기타 신호를 받아들이고, 이를 세포에 주고, 이어서 신호를 핵, 세포골격, 및 수송 및 단백질 합성 기관으로 넘겨주는 것이다.

암의 가장 흔한 원인은 단백질이 돌연변이되는 동안에 일련의 결함이 단백질에 존재하거나, 혹은 세포내 단백질의 양 조절에 일련의 결함이 생겨 단백질이 과잉생산되거나 저생산되는 것이다. 가장 흔하게는, 세포 핵이 실제로는 존재하지 않는 증식 신호를 받게 하는 구성적 상태를 유발시키는 중요한 장애가 세포내에 존재한다. 이는 다양한 메카니즘을 통해 일어날 수 있다. 때때로 세포는 자체의 수용체를 위한 진정한 성장 인자를 생산하지 말아야 하는 경우에도 생산하기 시작할 수도 있다(소위 오토크린 루프(autocrine loop) 메카니즘이라고 함). 통상적으로는 티로신 키나제에 의해 세포로 신호를 전달하는 세포 표면 수용체의 돌연변이로 인해, 리간드 없이 키나제가 활성화될 수 있으며 실제로 존재하지 않는 신호가 전달된다. 한편으로는, 많은 표면 키나제가 세포 표면상에서 과다발현되어 약한 신호에 대해 지나치게 강한 반응이 유도될 수 있다. 세포내에는 돌연변이 또는 과다발현이 여러 수준으로 일어나서 세포내에 가짜 신호를 발생시킬 수 있으며, 암과 연관되는 많은 다른 종류의 신호 전달 결함이 있다. 본 발명은 전술된 세가지 메카니즘에 의해 일어나고, 표피 성장 인자 수용체 티로신 키나제 군(EGFR: epidermal growth factor receptor tyrosine kinase family)의 세포 표면 수용체를 수반하는 암에 대해서 간단히 언급한다. 상기 군은 EGF 수용체(erbB1이라고도 알려져 있음), erbB2 수용체, 그의 구성적 활성 종양단백질(oncoprotein) 돌연변이체 Neu, erbB3 수용체 또는 erbB4 수용체로 이루어져 있다. 또한, 수용체의 EGF군의 구성원에 의해서 일어나는 기타 생물학적 과정도 후술될 본 발명의 화합물에 의해 치료될 수 있다.

EGFR은 그의 2가지의 가장 중요한 리간드로서 표피 성장 인자(EGF) 및 전환(transforming) 성장 인자 알파(TGF알파)를 갖는다. 이 수용체들은 성인 인간에 있어서는 단지 미미한 기능을 갖는 것으로 보여지지만, 모든 암, 특히 결장암과 유방암의 발병 과정에 많은 부분 연관되어 있다는 것은 분명하다. 밀접하게 관련되어 있는 erbB2(HER2), erbB3(HER3) 및 erbB4(HER4) 수용체들은 주요 리간드로서 헤레귤린(Heregulin) 군을 갖고, 분명히 수용체 과다발현 및 돌연변이는 예후가 나쁜 유방암에 있어서 가장 중요한 위험 요소로 보인다. 또한, 상기 수용체 군의 4가지 구성원은 모두 상기 군의 다른 구성원들과 함께 헤테로다이머 신호 전달 착체(heterodimeric signaling complex)를 형성할 수 있으며, 이로 인해 상기 군의 하나이상의 구성원이 암에서 과다발현되는 경우 시너지적 전환이 유도될 수 있다. 하나이상의 구성원의 과다발현은 인간 암에서는 비교적 흔한 것으로 보여진다.

암 외에도, 재발협착증 또한 바람직하지 못한 세포 증식이 일어나는 질환이다. 재발협착증은 혈관 평활근 세포의 증식을 수반한다. 재발협착증은 관상 혈관성형술 및 기타 의학적 과정과 연관된 중요한 임상적 문제이다. 재발협착증은 일반적으로, 폐색된 동맥으로 인한 심장 질환을 치료하기 위해 막힌 관상 동맥을 청소하기 위한 벌룬(balloon) 혈관성형술을 받은 환자들의 약 30 내지 50%에서 약 0 내지 6개월 이내에 발생된다. 이렇게 발생된 재발협착증은 이환률을 높이며 건강 관리 비용이 들게 한다.

재발협착증의 발병 과정은 동맥 및 정맥을 포함하는 혈관이 손상되어 응괴형성, 혈관작용성 및 유사분열촉진 인자가 방출됨으로써 개시된다. 내피 심부 혈관손상은 혈소판 응집, 혈전 형성, 염증, 대식세포 및 평활근 세포의 활성화를 유도시킨다. 이로써 성장 인자 및 사이토카인의 생성 및 방출이 유도되고, 이로 인해서 또한 그 자체의 합성 및 타깃(target) 세포로부터 방출이 촉진될 수 있다. 따라서, EGF, 혈소판 유래 성장 인자(PDGF) 또는 섬유아세포 성장 인자(FGF)와 같은 성장 인자를 수반하는 자가-영구화 과정(self-perpetuating process)이 개시된다. 따라서, 신호 전달 경로의 비가역적 저해제, 특히 EGF, PDGF, FGF 또는 src 티로신 키나제와 같은 티로신 키나제의 비가역적 저해제를 갖는 것이 유용하다.

증식성 피부 질환인 건선은 현재 좋은 치료법이 없다. 건선은 종종 메토트렉사트(methotrexate)와 같은 항암제로 치료되지만, 이 약은 매우 심각한 부작용을 갖고, 사용가능한 독성 제한 양을 사용해도 효과가 아주 좋지는 않다. TGF 알파는 건선에서 과잉생산되는 주요 성장 인자라고 생각되는데, 왜냐하면 TGF 알파를 과다발현시키는 유전자이식(transgenic) 마우스의 50%에서 건선이 발생되기 때문이다. 이는 EGFR 신호 전달의 우수한 저해제는 필수적이지는 않지만 바람직하게는 국소 투여에 의한 건선 치료제로서 사용될 수 있다는 것을 시사한다.

가역적 저해제에 비해 비가역적 티로신 키나제 저해제를 사용하는 것이 특히 유리한데, 왜냐하면 비가역적 저해제는 교체(turnover)라고도 불리는, 수용체 재합성의 정상 속도에 의해서만 제한되는, 티로신 키나제의 연장된 억제에 사용될 수 있기 때문이다.

암 및 재발협착증과 관련된 생물학적 과정에서의 src 티로신 키나제의 역할에 대한 정보를 하기 문헌에서 찾을 수 있는데, 이 문헌들은 모두 본원에서 참고문헌으로 인용된다.

벤자민 씨 더블유(Benjamin C.W.) 및 존스 디 에이(Jones D.A.)의 문헌[Platelet-Derived Growth Factor Stimulates Growth Factor Receptor Binding Protein-2 Association With Src In Vascular Smooth Muscle Cells, JBC, 1994; 269:30911-30916].

코발렌코 엠(Kovalenko M.) 등의 문헌[Selective Platelet-Derived Growth Factor Receptor Kinase Blockers Reverse Cis-transformation, Cancer Res, 1994; 54:6106-6114].

슈발츠 알 에스(Schwartz R.S.) 등의 문헌[The Restenosis Paradigm Revisted: An Alternative Proposal for Cellular Mechanisms, J Am Coll Cardiol, 1992;20:1284-1293].

리비 피(Libby P.) 등의 문헌[Cascade Model for Restenosis-A Special Case of Atherosclerosis Progression, Circulation, 1992;86:47-52].

암 및 재발협착증과 관련된 생물학적 과정에서의 EGF 티로신 키나제의 역할에 대한 추가적인 정보를 하기 문헌에서 찾을 수 있는데, 이 문헌은 본원에서 참고 문헌으로 인용된다.

조나단 블레이(Jonathan Blay) 및 모레이 디 홀렌버그(Morley D. Hollenberg)의 문헌[Heterologous Regulation Of EGF Receptor Function In Cultured Aortic Smooth Muscle Cells, Eur J Pharmacol, Mol Pharmacol Sect, 1989;172(1):1-7].

EGF 또는 EGFR에 대한 항체는 생체내 항종양 활성을 나타낸다는 것을 보여주는 정보를 하기 문헌에서 찾을 수 있는데, 이 문헌들은 본원에서 참고 문헌으로 인용된다.

모타헤디 에이치(Modjtahedi H.), 에클스 에스(Eccles S.), 박스 지(Box G.), 스타일스 제이(Styles J.), 딘 씨(Dean C.)의 문헌[Immunotherapy Of Human Tumour Xenografts Overexpressing The EGF Receptor With Rat Antibodies That Block Growth Factor-Receptor Interaction, Br J Cancer, 1993;67:254-261].

쿠라치 에이치(Kurachi H.), 모리시게 케이 아이(Morishige K.I.), 아메미야 케이(Amemiya K.), 아다치 에이치(Adachi H.), 히로타 케이(Hirota K.), 미야케 에이(Miyake A.), 타니자와 오(Tanizawa O.)의 문헌[Importance Of Transforming Growth Factor Alpha/Epidermal Growth Factor Receptor Autocrine Growth Mechanism In An Ovarian Cancer Cell Line In Vivo, Cancer Res, 1991;51:5956-5959].

마쓰이 에이치(Masui H.), 모로야마 티(Moroyama T.), 멘델슨 제이(Mendelsohn J.)의 문헌[Mechanism Of Antitumor Activity In Mice For Anti-Epidermal Growth Factor Receptor Monoclonal Antibodies With Different Isotypes, Cancer Res, 1986;46:5592-5598].

로덱 유(Rodeck U.), 헐린 엠(Herlyn M.), 헐린 디(Herlyn D.), 몰토프 씨(Molthoff C.), 아트킨슨 비(Atkinson B.), 바렐로 엠(Varello M.), 스텝레위스키 제트(Steplewski Z.), 코프로위스키 에이치(Koprowski H.)의 문헌[Tumor GrowthModulation By A Monoclonal Antibody To The Epidermal Growth Factor Receptor: Immunologically Mediated And Effector Cell-Independent Effects, Cancer Res, 1987;47:3692-3696].

구안 이(Guan E.), 조우 티(Zhou T.), 왕 제이(Wang J.), 후앙 피(Huang P.), 탕 더블유(Tang W.), 자오 엠(Zhao M.), 첸 와이(Chen Y.), 선 와이(Sun Y.)의 문헌[Growth Inhibition Of Human Nasopharyngeal Carcinoma In Athymic Mice By Anti-Epidermal Growth Factor Receptor Monoclonal Antibodies, Internat J Cell Clon, 1989;7:242-256].

마쓰이 에이치(Masui H.), 카와모토 티(Kawamoto T.), 사토 제이 디(Sato J.D.), 울프 비(Wolf B.), 사토 지(Sato G.), 멘델슨 제이(Mendelsohn J.)의 문헌[Growth Inhibition Of Human Tumor Cells In Athymic Mice By Anti-Epidermal Growth Factor Receptor Monoclonal Antibodies, Cancer Res, 1984;44:1002-1007].

또한, 하기 문헌은 단백질 티로신 키나제 저해제의 항종양 활성을 보여준다. 이 문헌들은 본원에서 참고 문헌으로 인용된다.

부흐둥게르 이(Buchdunger E.), 트링크스 유(Trinks U.), 메트 에이치(Mett H.), 레게나스 유(Regenass U.), 뮬러 엠(Muller M.), 메이어 티(Meyer T.), 맥글린 이(McGlynn E.), 피나 엘 에이(Pinna L.A.), 트락슬러 피(Traxler P.), 라이돈 엔 비(Lydon N.B.)의 문헌[4,5-Dianilinophthalimide: A Protein Tyrosine Kinase Inhibitor With Selectivity For The Epidermal Growth Factor Receptor Signal Transduction Pathway And Potent In Vivo Antitumor Activity, Proc Natl AcadSci USA, 1994;91:2334-2338].

부흐둥게르 이, 메트 에이치, 트링크스 유, 레게나스 유, 뮬러 엠, 메이어 티, 베일스타인 피(Beilstein P.), 비르츠 비(Wirz B.), 슈나이더 피(Schneider P.), 트락슬러 피, 라이돈 엔의 문헌[4,5-Bis(4-Fluoroanilino)Phthalimide: A Selective Inhibitor Of The Epidermal Growth Factor Receptor Signal Transduction Pathway With Potent In Vivo Mdd Antitumor Activity, Clinical Cancer Research, 1995;1:813-821].

티로신 키나제의 가역적 저해제인 화합물은 미국 특허 제 5,457,105 호, 제 5,475,001 호 및 제 5,409,930 호, 및 PCT 공개공보 제 WO 9519774 호 및 제 WO 9519970 호에 기술되어 있다. 본원에 개시된 화합물은 전술된 문헌에 기술된 티로신 키나제 저해제와는 구조적으로 상이한, 티로신 키나제의 비가역적 저해제이다.

본원에서 참고문헌으로 인용된 PCT 출원 제 PCT/US97/05778(공개공보 제 WO 97/38983 호)는 티로신 키나제의 비가역적 저해제인 화합물을 개시한다.

상기 PCT 출원에 제시된 일반식 I은 N-[4-(3-클로로-4-플루오로-페닐아미노)-7-(3-모르폴린-4-일-프로폭시)-퀴나졸린-6-일]-아크릴아미드(본원에서는 "화합물 1")를 포함하지만 화합물 1은 이 PCT 출원에 구체적으로 지명되지는 않았다.

화합물 1은 하기 화학식을 갖는다.

상기 PCT 출원은 실시예 21에서 하기 화학식을 갖는 N-[4-[(3-브로모페닐)아미노]-7-[3-(4-모르폴리노)프로폭시]퀴나졸린-6-일]아크릴아미드를 개시한다.

화합물 1은 실시예 21의 화합물과는 질소 원자를 통해 퀴놀린기에 부착된 페닐기의 치환체가 다르다. 화합물 1의 페닐기는 3번 위치에서 염소로, 4번 위치에서 불소로 치환되어 있다. 이와 달리, 상기 PCT 출원의 실시예 21의 화합물(이하 "실시예 21"이라고 칭함)의 페닐기는 3번 위치에서만 브롬으로 치환되어 있다. 이 두 화합물은 구조적으로는 유사하지만, 화합물 1은 PCT 출원의 실시예 21과 비교해 볼 때 생체내에서 놀랍고도 예상치못한 성질을 나타낸다.

더욱더 놀랍고도 예상치못한 것은 화합물 1과 실시예 21이 어떤 분석 실험에서는 시험관내 활성이 유사하지만, 너무나 다른 생체내 활성을 나타낸다는 것이다.

발명의 개요

본 발명은 N-[4-(3-클로로-4-플루오로-페닐아미노)-7-(3-모르폴린-4-일-프로폭시)-퀴나졸린-6-일]-아크릴아미드 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다.

본 발명은 N-[4-(3-클로로-4-플루오로-페닐아미노)-7-(3-모르폴린-4-일-프로폭시)-퀴나졸린-6-일]-아크릴아미드를 포함하는 약학적으로 허용되는 조성물을 또한 제공한다.

본 발명은 암에 걸린 환자에게 치료 효과량의 N-[4-(3-클로로-4-플루오로-페닐아미노)-7-(3-모르폴린-4-일-프로폭시)-퀴나졸린-6-일]-아크릴아미드를 투여함을 포함하는, 암의 치료 방법을 또한 제공한다.

암의 치료 방법의 바람직한 실시양태에서, 암은 유방암이다.

암의 치료 방법의 바람직한 실시양태에서, 암은 결장암이다.

본 발명은 재발협착증에 걸리거나 재발협착증에 걸릴 위험이 있는 환자에게 치료 효과량의 N-[4-(3-클로로-4-플루오로-페닐아미노)-7-(3-모르폴린-4-일-프로폭시)-퀴나졸린-6-일]-아크릴아미드를 투여함을 포함하는, 재발협착증의 치료 또는 예방 방법을 또한 제공한다.

본 발명은 티로신 키나제의 저해를 필요로 하는 환자에게 티로신 키나제 저해량의 N-[4-(3-클로로-4-플루오로-페닐아미노)-7-(3-모르폴린-4-일-프로폭시)-퀴나졸린-6-일]-아크릴아미드를 투여함을 포함하는, 티로신 키나제의 비가역적 저해방법을 또한 제공한다.

티로신 키나제의 비가역적 저해 방법의 바람직한 실시양태에서, 티로신 키나제는 EGFR이다.

티로신 키나제의 비가역적 저해 방법의 바람직한 실시양태에서, 티로신 키나제는 erbB2이다.

티로신 키나제의 비가역적 저해 방법의 바람직한 실시양태에서, 티로신 키나제는 erbB4이다.

본 발명은 건선에 걸린 환자에게 치료 효과량의 N-[4-(3-클로로-4-플루오로-페닐아미노)-7-(3-모르폴린-4-일-프로폭시)-퀴나졸린-6-일]-아크릴아미드를 투여함을 포함하는, 건선의 치료 방법을 또한 제공한다.

본 발명은 죽상동맥경화증에 걸리거나 죽상동맥경화증에 걸릴 위험이 있는 환자에게 치료 효과량의 N-[4-(3-클로로-4-플루오로-페닐아미노)-7-(3-모르폴린-4-일-프로폭시)-퀴나졸린-6-일]-아크릴아미드를 투여함을 포함하는, 죽상동맥경화증의 치료 또는 예방 방법을 또한 제공한다.

본 발명은 자궁내막증에 걸린 환자에게 치료 효과량의 N-[4-(3-클로로-4-플루오로-페닐아미노)-7-(3-모르폴린-4-일-프로폭시)-퀴나졸린-6-일]-아크릴아미드를 투여함을 포함하는, 자궁내막증의 치료 방법을 또한 제공한다.

본 발명은 VEGF 분비의 저해를 필요로 하는 환자에게 치료 효과량의 N-[4-(3-클로로-4-플루오로-페닐아미노)-7-(3-모르폴린-4-일-프로폭시)-퀴나졸린-6-일]-아크릴아미드를 투여함을 포함하는, VEGF 분비의 저해 방법을 또한 제공한다.

본 발명은 erbB3의 티로신 인산화의 저해를 필요로 하는 환자에게 치료 효과량의 N-[4-(3-클로로-4-플루오로-페닐아미노)-7-(3-모르폴린-4-일-프로폭시)-퀴나졸린-6-일]-아크릴아미드를 투여함을 포함하는, erbB3의 티로신 인산화의 저해 방법을 또한 제공한다.

본 발명은 티로신 키나제의 비가역적 저해제인 N-[4-(3-클로로-4-플루오로-페닐아미노)-7-(3-모르폴린-4-일-프로폭시)-퀴나졸린-6-일]-아크릴아미드라는 화합물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 N-[4-(3-클로로-4-플루오로-페닐아미노)-7-(3-모르폴린-4-일-프로폭시)-퀴나졸린-6-일]-아크릴아미드 화합물을 사용하여 암, 죽상동맥경화증, 재발협착증, 자궁내막증 및 건선을 치료하는 방법 및 N-[4-(3-클로로-4-플루오로-페닐아미노)-7-(3-모르폴린-4-일-프로폭시)-퀴나졸린-6-일]-아크릴아미드 화합물을 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다.

본 발명은 N-[4-(3-클로로-4-플루오로-페닐아미노)-7-(3-모르폴린-4-일-프로폭시)-퀴나졸린-6-일]-아크릴아미드 화합물(화합물 1) 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다.

화합물 1은 티로신 키나제, 특히 EGFR 티로신 키나제의 비가역적 저해제이다. 화합물 1에 의해 저해될 수 있는 기타 티로신 키나제에는 FGFR, PDGFR, c-src, erbB2 및 erbB4가 포함된다. 치료 효과량의 화합물 1을 암에 걸린 환자, 재발협착증에 걸리거나 재발협착증에 걸릴 위험이 있는 환자, 건선에 걸린 환자, 죽상동맥경화증에 걸리거나 죽상동맥경화증에 걸릴 위험이 있는 환자 또는 자궁내막증에 걸린 환자에게 투여할 수 있다. 당해 분야의 숙련자라면 암, 재발협착증, 건선, 죽상동맥경화증 또는 자궁내막증에 걸린 환자, 및 재발협착증 또는 죽상동맥경화증에 걸릴 위험이 있는 환자들을 용이하게 판별할 수 있을 것이다. 예를 들면 재발협착증에 걸릴 위험이 있는 환자들은 혈관성형술, 바이패스(bypass) 또는 이식 수술을 받은 환자들이다. 이와 유사하게, 죽상동맥경화증에 걸릴 위험이 있는 환자들은 비만하거나, 고지방 음식을 섭취하거나, 콜레스테롤치가 높거나, 고혈압을 갖는 환자들을 포함한다. "환자들"이란 개, 고양이, 소, 양과 같은 동물을 의미하며, 인간도 포함한다.

"암"이란 용어에는 유방암; 난소암; 경부암; 전립선암; 고환암; 식도암; 교아종; 신경아세포종; 위암; 피부암, 각화극세포종; 폐암, 유표피암, 대세포암, 선암; 골암; 결장암, 선암, 선종; 췌장암, 선암; 갑상선암, 여포암, 미분화암, 유두암; 정상피종; 흑색종; 육종; 방광암; 간암 및 담관암; 신장암; 골수양 장애; 림프구양 장애, 호지킨 병, 모양세포암; 협강 및 인두(구강)암, 구순암, 설암, 구강암, 인두암; 소장암; 결장-직장암, 대장암, 직장암; 뇌 및 중추신경계 암; 및 백혈병이 포함되지만 여기에만 국한되지는 않는다.

화합물 1을 사용하여 치료하기 바람직한 암에는 유방암, 결장암, 결장-직장암 및 난소암이 포함된다.

또한, 화합물 1을 사용하여 혈관 내피 성장 인자(VEGF)의 분비의 저해를 필요로 하는 환자를 치료할 수도 있다. VEGF 분비의 저해를 필요로 하는 환자에는 암, 당뇨성 망막증, 류마티스성 관절염, 건선, 재발협착증, 죽상동맥경화증, 골다공증, 자궁내막증에 걸린 환자, 배아 이식을 받은 환자, 또는 혈관형성 또는 신생혈관형성에 의한 기타 질병에 걸린 환자가 포함된다.

본 발명의 화합물을 사용하여 erbB3의 티로신 인산화를 저해할 수 있다. erbB3의 티로신 인산화의 저해를 필요로 하는 환자들은 EGFR의 저해 및 VEGF 분비의 저해와 관련해 본원에서 언급된 질환에 걸리거나 걸릴 위험이 있는 환자들이다.

화합물 1을 인간 및 동물에게 경구, 직장, 비경구(정맥내, 근육내 또는 피하), 조(槽)내, 질내, 복강내, 방광내, 국부적(분말, 연고 또는 적제)으로 투여하거나 협강 또는 비강 스프레이로서 투여할 수 있다. 본 발명의 화합물을 단독으로 투여하거나 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학적으로 허용되는 조성물의 일부로서 투여할 수 있다.

비경구 주사에 적합한 조성물은 생리학적으로 허용되는 무균 수성 또는 비수성 용액, 분산액, 현탁액 또는 유화액, 및 무균 주사용액 또는 분산액에 타서 사용하기 위한 무균 분말을 포함할 수 있다. 적합한 수성 및 비수성 담체, 희석제, 용매 또는 비히클의 예에는 물, 에탄올, 폴리올(프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 글리세롤 등), 그의 적합한 혼합물, 식물유(예를 들면 올리브유) 및 에틸렌 올레에이트와 같은 주사용 유기 에스테르가 포함된다. 예를 들면 레시틴과 같은 코팅을 사용하거나, 분산액의 경우 입경을 목적 수준으로 유지하거나, 계면활성제를 사용하여, 유동성을 적당하게 유지할 수 있다.

이러한 조성물은 보존제, 습윤제, 유화제 및 분산제와 같은 보조제를 함유할 수도 있다. 다양한 항균제 및 항진균제, 예를 들면 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 소르브산 등을 사용하여 미생물의 활동을 확실히 예방할 수 있다. 등장성 물질, 예를 들면 설탕, 염화나트륨 등을 포함하는 것이 바람직할 수 있다. 흡수를 지연시키는 물질, 예를 들면 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴을 사용하여 이러한 주사용 약학 제형의 흡수를 연장시킬 수 있다.

경구 투여용 고형 제형에는 캡슐, 정제, 환제, 분말 및 과립이 포함된다. 이러한 고형 제형에서, 활성 화합물은 하나이상의 통상적인 불활성 부형제(또는 담체), 예를 들면 시트르산 나트륨 또는 인산이칼슘 또는 (a) 충전제 또는 증량제,예를 들면 전분, 락토스, 수크로스, 글루코스, 만니톨 및 규산; (b) 결합제, 예를 들면 카복시메틸셀룰로스, 알진산염, 젤라틴, 폴리비닐피롤리돈, 수크로스 및 아카시아; (c) 보습제, 예를 들면 글리세롤; (d) 붕해제, 예를 들면 아가-아가, 탄산칼슘, 감자 또는 타피오카 전분, 알진산, 특정 복합 실리케이트 및 탄산나트륨; (e) 용해 지연제, 예를 들면 파라핀; (f) 흡수 촉진제, 예를 들면 4급 암모늄 화합물; (g) 습윤제, 예를 들면 세틸 알콜 및 글리세롤 모노스테아레이트; (h) 흡수제, 예를 들면 카올린 및 벤토나이트; 및 (i) 윤활제, 예를 들면 활석, 칼슘 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 고형 폴리에틸렌 글리콜, 소디움 라우릴 설페이트, 또는 그의 혼합물과 혼합된다. 캡슐, 정제 및 환제의 경우, 제형은 완충제를 포함할 수도 있다.

유사한 형태의 고형 조성물을, 락토스 또는 유당과 같은 부형제 뿐만 아니라 고분자량 폴리에틸렌 글리콜 등을 사용하여 연질 및 경질 젤라틴 캡슐에 충전시켜 사용할 수도 있다.

정제, 당의정, 캡슐, 환제 및 과립과 같은 고형 제형을, 코팅 및 셀(shell), 예를 들면 장용성 코팅 및 기타 당해 분야에 공지된 것들을 사용하여 제조할 수 있다. 이들은 유백제를 함유할 수 있고, 활성 화합물을 위장관의 특정 부분에서 지연된 방식으로 방출하는 조성물 형태일 수 있다. 매입(embedding) 조성물로 사용가능한 것의 예는 중합체성 물질 및 왁스이다. 활성 성분은 경우에 따라서는 전술된 하나이상의 부형제를 갖는 미세-캡슐화된 형태일 수 있다.

경구 투여용 액상 제형에는 약학적으로 허용되는 유화액, 용액, 현탁액, 시럽 및 엘릭서제가 포함된다. 활성 화합물 외에도, 액상 제형은 당해 분야에서 통상적으로 사용되는 불활성 희석제, 예를 들면 물 또는 기타 용매, 가용화제 및 유화제, 예를 들면 에틸 알콜, 이소프로필 알콜, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알콜, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 디메틸포름아미드, 오일, 특히 면실유, 땅콩유, 옥수수 씨눈 오일, 올리브유, 카스터유 및 참깨씨유, 글리세롤, 테트라하이드로푸르푸릴 알콜, 폴리에틸렌글리콜 및 소르비탄의 지방산 에스테르 또는 이들 물질의 혼합물 등을 함유할 수 있다.

이러한 불활성 희석제외에도, 본 발명의 조성물은 보조제, 예를 들면 습윤제, 유화제 및 현탁제, 감미제, 풍미제 및 방향제를 포함할 수 있다.

활성 화합물외에도, 현탁액은 현탁제, 예를 들면 에톡실화 이소스테아릴 알콜, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 및 소르비탄 에스테르, 미세결정질 셀룰로스, 알루미늄 메타하이드록시드, 벤토나이트, 아가-아가 및 트라가칸트, 또는 이들 물질의 혼합물 등을 함유할 수 있다.

직장 투여용 조성물은 바람직하게는, 상온에서는 고체이나 체온에서는 액체여서 직장강 또는 질강에서 녹아서 활성 성분을 방출하는 적당한 무자극성 부형제 또는 담체, 예를 들면 코코아 버터, 폴리에틸렌글리콜 또는 좌제용 왁스와 본 발명의 화합물이 혼합되어 제조된 좌제이다.

국소 투여용 제형에는 연고, 분말, 스프레이 및 흡입제가 포함된다. 활성 성분은 무균 조건하에서 생리학적으로 허용되는 담체 및 임의의 보존제, 완충제 또는, 경우에 따라서는 추진제와 혼합된다. 안약, 안 연고, 분말 및 용액 또한 본발명의 범주내에 포함되는 것으로 간주된다.

본원에서 사용된 "약학적으로 허용되는 염, 에스테르, 아미드 및 전구약물"이란, 정통한 의학적 판단의 범위내에서, 과도한 독성, 자극, 알러지 반응 등을 일으키지 않고 환자의 조직에 접촉시키기에 적합하고, 합당한 장점/위험 비율을 갖고, 의도된 목적에 대해 효과적이고, 가능하다면 본 발명의 화합물의 쯔비터 이온 형태인, 본 발명의 화합물의 카복실레이트 염, 아미노산 부가염, 에스테르, 아미드 및 전구약물을 말한다. "염"이라는 용어는 본 발명의 화합물의 비교적 무독성인 무기 및 유기 산 부가염을 말한다. 이러한 염을 화합물의 최종 단리 및 정제 과정에서 동일반응계내에서 제조하거나, 자유 염기 형태의 정제된 화합물을 적합한 유기 또는 무기 산과 개별적으로 반응시키고 이렇게 형성된 염을 단리시킴으로써 제조할 수 있다. 대표적인 염에는 하이드로브로마이드, 하이드로클로라이드, 설페이트, 비설페이트, 니트레이트, 아세테이트, 옥살레이트, 발레레이트, 올레에이트, 팔미테이트, 스테아레이트, 라우레이트, 보레이트, 벤조에이트, 락테이트, 포스페이트, 토실레이트, 시트레이트, 말레에이트, 푸마레이트, 숙시네이트, 타르트레이트, 나프틸레이트, 메실레이트, 글루코헵토네이트, 락토비오네이트 및 라우릴설포네이트 염 등이 포함된다. 여기에는 알칼리 금속 및 알칼리 토금속을 기본으로 하는 양이온, 예를 들면 나트륨, 리튬, 칼륨, 칼슘, 마그네슘 등 뿐만 아니라, 암모늄, 테트라메틸암모늄, 테트라에틸암모늄, 메틸아민, 디메틸아민, 트리메틸아민, 트리에틸아민, 에틸아민 등을 포함하지만 여기에만 국한되지는 않는 무독성 암모늄, 4급 암모늄 및 아민 양이온이 포함될 수 있다(예를 들면 본원에서 참고 문헌으로 인용된 에스 엠 버지(S.M.Berge) 등의 문헌["Pharmaceutical Salts", J.Pharm.Sci., 1977;66:1-19]을 참조하도록 한다).

본 발명의 화합물의 약학적으로 허용되는 무독성 에스테르의 예에는 알킬기가 직쇄 또는 분지쇄인 C₁-C₆알킬 에스테르가 포함된다. 적합한 에스테르에는 또한 C₅-C₇사이클로알킬 에스테르 뿐만 아니라, 벤질과 같은, 그러나 여기에만 국한되지는 않는 아릴알킬 에스테르도 포함된다. C₁-C₄알킬 에스테르가 바람직하다. 본 발명의 화합물의 에스테르는 통상적인 방법으로 제조될 수 있다.

본 발명의 화합물의 약학적으로 허용되는 무독성 아미드의 예에는 암모니아으로부터 유도된 아미드, 알킬기가 직쇄 또는 분지쇄인 1차 C₁-C₆알킬 아민 및 2차 C₁-C₆디알킬 아민이 포함된다. 2차 아민의 경우, 아민은 질소 원자를 1개 함유하는 5원 또는 6원 헤테로사이클의 형태일 수 있다. 암모니아로부터 유도된 아미드, C₁-C₃알킬 1차 아민 및 C₁-C₂디알킬 2차 아민이 바람직하다. 본 발명의 화합물의 아미드는 통상적인 방법으로 제조될 수 있다.

"전구약물"이란 예를 들면 혈액중에서 가수분해됨으로써, 생체내에서 빠르게 전환되어 전술된 화학식의 모 화합물을 생성하는 화합물을 말한다. 이에 대한 자세한 논의가, 본원에서 참고 문헌으로 인용된 티 히구치(T.Higuchi) 및 브이 스텔라(V.Stella)의 문헌["Pro-drugs as Novel Delivery Systems", Vol.14 of the A.C.S. Symposium Series] 및 문헌[Bioreversible Carriers in Drug Design, ed.Edward B. Roche, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987]에 나와 있다.

본 발명의 화합물을 환자에게 약 0.1 내지 약 1000㎎/일의 투여량으로 투여할 수 있다. 체중이 약 70㎏인 보통 성인의 경우, 1일 체중 1㎏당 약 0.01 내지 약 100㎎의 범위내의 투여량이 충분하다. 그러나 구체적인 투여량은 변할 수 있다. 예를 들면 투여량은 환자의 요구, 치료될 상태의 중증도, 사용되는 화합물의 약리학적 활성을 포함하는 많은 인자에 따라 달라질 수 있다. 특정 환자에 대한 최적 투여량의 결정 방법은 당해 분야의 숙련자들에게 공지되어 있다.

본 발명의 화합물은 가용화되지 않은 형태 뿐만 아니라 물, 에탄올 등과 같은 약학적으로 허용되는 용매로 가용화된 형태로 존재할 수 있다. 일반적으로 가용화된 형태는 본 발명의 목적에 있어, 가용화되지 않은 형태와 동등한 것으로 간주된다.

화합물 1은 합성되거나, 예를 들면 대사 과정을 통해 생물학적으로 생성된다.

하기 실시예는 본 발명의 특정 실시양태를 예시하는 것이며, 청구의 범위를 포함하여 명세서를 어떤 방식으로라도 제한하려는 것은 아니다.

화합물 1을 다음과 같이 합성할 수 있다.

N-[4-(3-클로로-4-플루오로-페닐아미노)-7-(3-모르폴린-4-일-프로폭시)-퀴나졸린-6-일]-아크릴아미드

단계 A: 4-[(3-클로로-4-플루오로페닐)아미노]-7-플루오로-6-니트로퀴나졸린

분말 4-클로로-7-플루오로-6-니트로퀴나졸린(문헌[J.Med.Chem., 1996; 39:918]을 참조)(82.77g, 363.7mmol)을 질소중에서 얼음욕에서 기계적으로 교반되는 이소프로판올(1.09ℓ)중 3-클로로-4-플루오로아닐린(53.183g, 365.3mmol)과 N,N-디메틸아닐린(88.5g, 730mmol)의 용액에 10분에 걸쳐 첨가하였다. 첨가가 끝나면 얼음욕을 제거하고 혼합물을 25℃에서 6시간동안 교반하였다. 이어서 혼합물을 얼음욕에서 다시 냉각시키고, 교반시키면서 물(200㎖)을 적가한 후 Na₂CO₃수용액(10% w/v, 200㎖)을 적가하였다. 추가로 10분이 지난 후, 혼합물을 흡인 여과시키고, 잔사 고체를 묽은 NaHCO₃용액(포화/5, 2×100㎖), 물(2×100㎖), 및 이소프로판올 (2×100㎖)로 헹구었다. 혼합물을 공기 건조시킨 후, 75℃에서 진공 오븐에서 P₂O₅상에서 12시간동안 건조시켜 4-[(3-클로로-4-플루오로페닐)아미노]-7-플루오로-6-니트로퀴나졸린(110.71g, 90.4%)을 겨잣빛 황색 고체로서 수득하였다.

¹H NMR(DMSO-d₆):δ 10.44(s, 1H, NH), 9.51(d, J=8.0Hz, 1H, H-5), 8.67(s, 1H, H-2), 8.07(dd, J=2.7, 6.8Hz, 1H, H-2'), 7.79(d, J=12.4Hz, 1H, H-8), 7.74(ddd, J=2.7, 4.2, 9.0Hz, 1H, H-6'), 7.43(t, J=9.2Hz, 1H, H-5').

단계 B: 4-[(3-클로로-4-플루오로페닐)아미노]-7-[3-(4-모르폴리노)프로폭시]-6-니트로퀴나졸린

디메틸 설폭사이드(DMSO)(150㎖)중 포타슘 트리메틸실라놀레이트(57.73g,0.45mol)의 용액을 N₂중에서 25℃ 수욕에서 격렬하게 교반되는 DMSO(250㎖)중 4-[(3-클로로-4-플루오로페닐)아미노]-7-플루오로-6-니트로퀴나졸린(50.503g, 150mmol)과 3-(4-모르폴리노)프로판-1-올(32.67g, 225mmol)의 밝은 황색 슬러리에 50분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물은 즉시 진한 적색이 되었으며, 첨가가 종결될 즈음에는 진한 적-흑색의 점성 혼합물이었다. 6시간 후, 반응 혼합물을 Na₂CO₃포화 용액(150㎖)을 함유하는, 교반되는 얼음물(4ℓ)에 천천히 부었다. 13시간동안 방치한 후, 오렌지-적색의 슬러리를 흡인 여과에 의해 수거하였다. 침전을 묽은 NaOH 용액(0.05M, 500㎖; 0.02M, 500㎖), 묽은 NaHCO₃용액(포화/5500㎖) 및 물(2×500㎖)로 헹구고, 4시간동안 공기 건조시키고, 이어서 진공 오븐에서 50℃에서 P₂O₅상에서 밤새 건조시켜 4-[(3-클로로-4-플루오로페닐)아미노]-7-[3-(4-모르폴리노)프로폭시]-6-니트로퀴나졸린(62.47g, 89% 보정)을 밝은 오렌지-황색 고체로서 수득하였다.

¹H NMR(DMSO-d₆):δ 10.11(s, 1H, NH), 9.18(s, 1H, H-5), 8.65(s, 1H, H-2), 8.15(dd, J=2.4, 6.8Hz, 1H, H-2'), 7.79(ddd, J=2.7, 4.3, 9.0Hz, 1H, H-6'), 7.45(t, J=9.0Hz, 1H, H-5'), 7.44(s, 1H, H-8), 4.32(t, J=6.1Hz, ArOCH₂), 3.57(t, J=4.5Hz, 4H, H-2 모르폴리노), 2.45(t, J=6.5Hz, 2H, NCH₂), 2.34(brs, 4H, H-3 모르폴리노), 1.93(5중선, J=6.5Hz, 2H, H-2 프로폭시).

단계 C: 6-아미노-4-[(3-클로로-4-플루오로페닐)아미노]-7-[3-(4-모르폴리노)프로폭시]퀴나졸린

테트라하이드로푸란(THF)(1200㎖)중 4-[(3-클로로-4-플루오로페닐)아미노]-7-[3-(4-모르폴리노)프로폭시]-6-니트로퀴나졸린(62.9g, 136.2mmol)의 용액을 50psi 및 23℃에서 17.67 시간동안 라니(Raney) 니켈(20g)상에서 수소화시켰다. 추가의 라니 니켈(20g)을 첨가하고, 동일한 조건에서 혼합물을 추가로 4.33시간동안 수소화시켰다. 반응 혼합물을 셀라이트로 여과시키고, 용매를 감압하에서 제거하여 6-아미노-4-[(3-클로로-4-플루오로페닐)아미노]-7-[3-(4-모르폴리노)프로폭시]퀴나졸린(57.81g, 97.6% 보정)을 연한 녹색 고체로서 수득하였다.

¹H NMR(DMSO-d₆):δ 9.40(s, 1H, NH), 8.38(s, 1H, H-2), 8.20(dd, J=2.5, 7.0Hz, 1H, H-2'), 7.79(ddd, J=2.5, 4.5, 9.0Hz, 1H, H-6'), 7.40(s, 1H, H-5), 7.40(t, J=9.1Hz, 1H, H-5'), 7.08(s, 1H, H-8), 5.38(brs, NH₂), 4.19(t, J=6.1Hz, ArOCH₂), 3.58(t, J=4.4Hz, 4H, H-2 모르폴리노), 2.49(t, J=7.0Hz, 2H, NCH₂), 2.36(brs, 4H, H-3 모르폴리노), 1.97(5중선, J=6.5Hz, 2H, H-2 프로폭시).

단계 D: N-[4-(3-클로로-4-플루오로-페닐아미노)-7-(3-모르폴린-4-일-프로폭시)-퀴나졸린-6-일]-아크릴아미드

0℃에서 질소중에서 교반되는, THF(800㎖)중 아크릴산(14.40g, 0.20mol)과 트리에틸아민(40.48g, 0.40mol)의 용액에 이소부틸 클로로포르메이트(27.2g, 0.20mol)를 10분에 걸쳐 적가하였다. 추가로 10분이 지나서, 백색 슬러리를 -25℃냉각욕으로 옮기고, 질소중에서 20분동안 교반하였다. THF(500㎖)중 6-아미노-[(3-클로로-4-플루오로페닐)아미노]-7-[3-(4-모르폴리노)프로폭시]퀴나졸린(43.19g, 0.100mol)을 1.33 시간에 걸쳐 적가하였다. 냉각욕을 -20℃로 조절하고, 추가로 2.33시간이 지난 후, 물(100㎖)을 한꺼번에 첨가함으로써 반응 혼합물을 급냉시켰다. 20분이 지난 후, 반응 혼합물을 부서진 얼음(2㎏)에 붓고, 교반시키고, 물(5ℓ)로 점진적으로 희석시켰다. 혼합물을 16시간동안 방치시키고, 이어서 흡인 여과시켰다. 침전물을 물(2×1ℓ)로 헹구고, 18시간동안 공기 건조시키고, 이어서 진공 오븐에서 60℃에서 16시간동안 P₂O₅상에서 건조시켜 조질 N-[4-[(3-클로로-4-플루오로페닐)아미노]-7-[3-(4-모르폴리노)프로폭시)퀴나졸린-6-일]아크릴아미드(35.76g, 73% 미보정)를 녹색을 띠는 황색 고체로서 수득하였다. 모액에서 추가로 고체를 침전시키고, 이를 흡인 여과시키고, 물(1ℓ)로 헹구고, 14시간동안 공기 건조시켜 추가로 조질 생성물(4.73g, 10% 미보정)을 녹색을 띠는 황색 고체로서 수득하였다. 이 물질을 DMSO로부터 재결정화시켜 그의 55%를 융점이 186.5 내지 188.5℃인 연한 황색-카키색 부분 수화물로서 수득하였다.

C₂₄H₂₅N₅O₃ClF·0.85 H₂O에 대한 계산치: C, 57.61; H, 5.37; N, 13.97%. 실측치: C, 57.51; H, 5.26; N, 13.88%.

¹H NMR(DMSO-d₆):δ 9.81(s, 1H, NH), 9.63(s, 1H, NH), 8.87(s, 1H, H-5), 8.54(s, 1H, H-2), 8.15(dd, J=2.5, 7.0Hz, 1H, H-2'), 7.81(ddd, J=2.7, 4.4, 9.0Hz, 1H, H-6'), 7.43(t, J=9.1Hz, 1H, H-5'), 7.30(s, 1H, H-8), 6.72(dd,J=10.1, 17.0Hz, 1H, H-2 아크릴로일), 6.32(dd, J=9, 17.0Hz, 1H, H-3 아크릴로일), 5.83(dd, J=1.9, 10.1Hz, 1H, H-3 아크릴로일), 4.27(t, J=6.2Hz, ArOCH₂), 3.58(t, J=4.4Hz, 4H, H-2 모르폴리노), 2.48(t, J=7.1Hz, 2H, NCH₂), 2.36(brs, 4H, H-3 모르폴리노), 2.00(5중선, J=6.5Hz, 2H, H-2 프로폭시). 질량 스펙트럼 APCI 489.2(9), 488.2(35), 487.2(26). 486.2(100).

PCT 출원 제 PCT/US97/05778 호에 실시예 21의 화합물을 다음과 같이 합성할 수 있다.

실시예 21

N-[4-[(3-브로모페닐)아미노]-7-[3-(4-모르폴리노)프로폭시]퀴나졸린-6-일]아크릴아미드

금속 나트륨(27.6mmol, 0.63g)을 N₂중에서 THF(60㎖)중 3-모르폴리노프로판-1-올(22.0mmol, 3.20g)의 용액에 첨가하였다. 이렇게 얻은 현탁액을 20℃에서 2시간동안 교반시킨 후, N₂중에서 THF(50㎖)중 4-[(3-브로모페닐)아미노]-7-플루오로-6-니트로-퀴나졸린의 용액(문헌[J.Med.Chem., 1996(39):918)]을 참조)(2.0g, 5.51mmol)내로 캐뉼러를 통해 첨가하였다(cannulated). 이어서 용액을 24시간동안 환류 가열하고 물로 희석시키고 EtOAc로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 이것을 무수 Na₂SO₄상에서 건조시키고, 감압하에서 농축시키고, 알루미나상에서 EtOAc/헥산(1:1)에 이어 MeOH/CH₂Cl₂/EtOAc(2:3:5)로 용리시킴으로써 크로마토그래피시켜4-[(3-브로모페닐)아미노]-7-[(3-모르폴리노)프로필옥시]-6-니트로퀴나졸린(1.75g, 65%)을 융점(MeOH)이 216 내지 220℃인 황색 분말로서 수득하였다.

¹H NMR[(CD₃)₂SO]:δ 10.12(s, 1H, NH), 9.24(s, 1H, 방향족), 8.69(s, 1H, 방향족), 8.19(t, J=1.8Hz, 1H, H-2'), 7.88(dt, J_d=7.8Hz, J_t=1.4Hz, 1H, H-6'), 7.49(s, 1H, 방향족), 7.38(t, J=8.0Hz, 1H, H-5'), 7.34(dt, J_d=8.1Hz, J_t=1.4Hz, 1H, H-4'), 4.35(t, J=6.2Hz, 2H, CH₂CH₂CH₂O), 3.58(t, J=4.6Hz, 4H, 모르폴리노 메틸렌), 2.45(t, J=7.0Hz, 2H, NCH₂CH₂CH₂), 2.37(brs, 4H, 모르폴리노 메틸렌), 1.94(4중선, J=6.6Hz, 2H, CH₂CH₂CH₂).

¹³C NMR: δ 157.76, 157.26, 153.76, 153.21, 140.32, 138.86, 130.37, 126.38, 124.26, 121.70, 121.13, 120.72, 110.11, 107.88, 67.87, 66.13(×2), 54.42, 53.28(×2), 25.30.

C₂₁H₂₂BrN₅O₄·0.75H₂O에 대한 분석 계산치: C, 50.3; H, 4.7; N, 14.0%. 실측치: C, 50.3; H,4.4 ;N 13.8%.

1N HCl에 이어서 증류수로 깨끗하게 세척된 철 분말(12mmol, 0.686g)을, 빙초산(2.0㎖)을 함유하는 EtOH/H₂O(2:1, 80㎖)중 상기 니트로퀴나졸린(1.50g, 3.07mmol)의 환류 용액에 여러번 나누어서 첨가하였다. 이렇게 얻은 현탁액을 20분동안 격렬하게 교반시키면서 환류 가열한 후, 냉각시키고, 진한 NH₃를 첨가함으로써 염기성화시키고, 셀라이트 패드를 통해 여과시켰다. 셀라이트 패드를 EtOH로 세척한 후, 여과액을 감압하에서 농축시키고, 물로 희석시키고, EtOAc로 추출하였다. 유기 추출물을 합한 것을 무수 Na₂SO₄상에서 건조시키고, 감압하에서 농축시키고, III 등급 알루미나상에서 CH₂Cl₂/EtOAc(1:1)에 이어 MeOH/EtOAc(2:98)로 용리시키면서 크로마토그래피시켜, 6-아미노-4-[(3-브로모페닐)-아미노]-7-[(3-모르폴리노)프로필옥시]퀴나졸린(1.08g, 77%)을 융점(EtOAc/헥산)이 158 내지 160℃인 연한 갈색 분말로서 수득하였다.

¹H NMR[(CD₃)₂SO], (400MHz):δ 9.37(s, 1H, NH), 8.40(s, 1H, 방향족), 8.24(t, J=1.9Hz, 1H, H-2'), 7.86(ddd, J=8.2, 0.8, 1.8Hz, 1H, H-6'), 7.42(s, 1H, 방향족), 7.30(t, J=8.1Hz, 1H, H-5'), 7.21(ddd, J=8.2, 1.0, 1.9Hz, 1H, H-4'), 7.09(s, 1H, 방향족), 5.36(s, 2H, NH₂), 4.20(t, J=6.2Hz, 2H, CH₂CH₂CH₂O), 3.59(t, J=4.6Hz, 4H, 모르폴리노 메틸렌), 2.50(t, J=7.3Hz, 2H, NCH₂CH₂CH₂), 2.39(brs, 4H, 모르폴리노 메틸렌), 1.99(4중선, J=6.7Hz, 2H, CH₂CH₂CH₂).

¹³C NMR: δ 154.88, 151.94, 150.19, 144.84, 141.94, 138.50, 130.16, 124.66, 123.02, 121.09, 119.65, 110.42, 106.37, 100.81, 66.45, 66.14(×2), 54.77, 53.29(×2), 25.50.

C₂₁H₂₄BrN₅O₂·0.25H₂O에 대한 분석 계산치: C, 54.5; H, 5.3; N, 15.1%. 실측치: C, 54.6; H,5.5 ;N 15.0%.

N₂중에서 DMF(20㎖)중 상기 6-아미노-퀴나졸린(0.50g, 1.09mmol), 아크릴산(6mol, 6.54mmol, 449㎕) 및 Et₃N(과량, 2.0㎖)의 용액을 교반하면서 여기에 1-(3-디메틸-아미노프로필)-3-에틸카보디이미드 하이드로클로라이드(EDCl·HCl)(3mol, 3.27mmol, 627㎎)를 첨가하였다. 반응물을 0℃에서 15분동안 교반한 후 실온으로 가온하고 추가로 2시간동안 교반하였다. 용매를 감압하에서 제거하고, 잔사를 포화 NaHCO₃로 희석시키고 EtOAc로 반복 추출하였다. 유기 추출물을 합한 것을 염수로 세척하고, 무수 Na₂SO₄상에서 건조시키고, 감압하에서 농축시켰다. III 등급 알루미나상에서 EtOAc/헥산(9:1)에 이어 MeOH/EtOAc(2:98)로 용리시키면서 크로마토그래피시켜, N-[4-[(3-브로모페닐)아미노]-7-[(3-모르폴리노)프로필옥시]-퀴나졸린-6-일]아크릴아미드(329㎎, 59%)를 융점(EtOAc/EtO₂/헥산)이 170 내지 172℃인 크림색 분말로서 수득하였다.

¹H NMR[(CD₃)₂SO]:δ 9.78(s, 1H, CONH), 9.62(s, 1H, NH), 8.89(s, 1H, 방향족), 8.56(s, 1H, 방향족), 8.18(t, J=1.9Hz, 1H, H-2'), 7.88(br d, J=8.2Hz, 1H, H-6'), 7.34(t, J=8.1Hz, 1H, H-5'), 7.30(s, 1H, 방향족), 7.27(ddd, J=7.9, 1.4, 0.8Hz, 1H, H-4'), 6.72(dd, J=17.0, 10.2Hz, 1H, CH₂CHCO), 6.33(dd, J=17.0, 1.9Hz, 1H, CH₂CHCO), 5.83(dd, J=10.2, 1.9Hz, 1H, CH₂CHCO), 4.27(t, J=6.3Hz,2H, CH₂CH₂CH₂O), 3.58(t, J=4.6Hz, 4H, 모르폴리노 메틸렌), 2.48(t, J=7.1Hz, 2H, NCH₂CH₂CH₂), 2.38(brs, 4H, 모르폴리노 메틸렌), 1.99(4중선, J=6.7Hz, 2H, CH₂CH₂CH₂).

¹³C NMR: δ 163.49, 156.68, 154.96, 153.92, 149.19, 141.20, 131.58, 130.19, 127.16, 126.95, 125.52, 123.97, 121.03, 120.52, 116.78, 108.80, 107.28, 66.96, 66.14(×2), 54.54, 53.28(×2), 25.31.

C₂₄H₂₆BrN₅O₃·0.5H₂O에 대한 분석 계산치: C, 55.3; H, 5.2; N, 13.4%. 실측치: C, 55.3; H, 4.9 ;N 13.3%.

비교 연구

조직 배양

A431 인간 유표피암 세포 및 MDA-MB-453 세포를 미국 매릴랜드주 록빌 소재의 더 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(the American Type Culture Collection)으로부터 입수하고, 10% 소 태아 혈청을 함유하는 50:50의 dMEM(듈베코(Dulbecco)의 변형 이글(eagle) 배지)/F12(미국 매릴랜드주 베데스타 소재의 지브코/비알엘(Gibco/BRL))에서 단층으로 유지하였다. 세포를 공기중 5% CO₂를 함유하는 습한 대기중에서 37℃에서 성장시켰다.

표피 성장 인자 수용체 티로신 키나제의 정제

하기 방법으로 인간 EGF 수용체 티로신 키나제(EGFR)를 A431 인간 유표피암세포로부터 단리시켰다. 회전병(roller bottle)에서 10% 소 태아 혈청을 함유하는 dMEM/F12 배지(미국 매릴랜드주 베데스타 소재의 지브코/비알엘)에서 세포를 성장시켰다. 20mM 헤페스(Hepes), pH 7.4, 5mM EGTA, 1% 트리톤(Triton) X-100, 10% 글리세롤, 0.1mM 소디움 오르토바나데이트, 5mM 소디움 플루오라이드, 4mM 피로포스페이트, 4mM 벤즈아미드, 1mM DTT, 80㎍/㎖ 아프로티닌(aprotinin), 40㎍/㎖ 루펩틴(leupeptin) 및 1mM 페닐메틸설포닐 플루오라이드(PMSF)를 함유하는 2ℓ의 완충액에 약 10⁹개의 세포를 용해시켰다. 25000×g에서 10분동안 원심분리시킨 후, 상층액을 패스트 Q 세파로즈(fast Q sepharose) 칼럼(미국 뉴저지주 피스카타웨이 소재의 파마시아 바이오테크 인코포레이티드(Pharmacia Biotech., Inc.)에 적용시키고, pH 7.4의, 10% 글리세롤 및 50mM 헤페스중 0.1M NaCl 내지 0.4M NaCl의 선형 구배를 갖는 용리액으로 용리시켰다. 효소 활성 분획을 모으고, 여러 방울로 나누고, -100℃에서 보관하였다. 섬유아세포 성장 인자 수용체(FGFR), 혈소판 유래 성장 인자(PDGF), 인슐린 및 c-src 티로신 키나제를 당해 분야의 숙련자에게 공지된 방법으로 수득하였다. 예를 들면 본원에서 참고 문헌으로 인용된 프라이(Fry) 등의 문헌["Strategies For The Discovery Of Novel Tyrosine Kinase Inhibitors With Anticancer Activity, Anticancer Drug Design, 1994;9:331-351]을 참조하도록 한다.

티로신 키나제 분석

IC₅₀결정을 위한 효소 분석을 96-웰 필터 플레이트(96-well filter plate)(미국 매사추세츠주 베드포드 소재의 밀리포어(Millipore)의 밀리포어 MADVN6550)에서 수행하였다. 총 부피는 0.1㎖로서, 여기에는 20mM 헤페스, pH 7.4, 50μM 소디움 바나데이트, 40mM 마그네슘 클로라이드, 0.5μCi의 [³²P]ATP를 함유하는 10μM ATP, 20㎍의 폴리글루탐산/티로신(미국 미주리주 세인트 루이스 소재의 시그마 케미칼 캄파니(Sigma Chemical Co.)), 10ng의 EGF 수용체 티로신 키나제, 및 저해제의 적당한 희석액이 함유되었다. ATP를 제외한 모든 성분들을 웰에 첨가하고 플레이트를 25℃에서 10분동안 교반시키면서 배양시켰다. [³²P]ATP를 첨가함으로써 반응을 개시하고, 플레이트를 25℃에서 10분동안 배양시켰다. 0.1㎖의 20% 트리클로로아세트산(TCA)을 첨가함으로써 반응을 종결시켰다. 플레이트를 4℃에서 15분 이상동안 두어 기질이 침전되게 하였다. 이어서 웰을 0.2㎖의 10% TCA로 5회 세척하고, 왈락 베타 플레이트 카운터(Wallac beta plate counter)로³²P 혼입을 결정하였다. 반응물에 10mM 망간 클로라이드를 첨가한다는 것만 제외하고는 EGF 수용체에 대해 기술된 방법과 같은 방법으로 c-src 뿐만 아니라 PDGF, FGF 및 인슐린 수용체의 세포내 키나제 도메인을 사용하여 분석을 수행하였다.

EGF- 및 헤레귤린-의존성 티로신 인산화 분석

A431 인간 유표피암 세포 또는 MDA-MB-453 세포를 6-웰 플레이트에서 칸플루언시(confluency)가 약 80%가 되게 성장시킨 후, 혈청을 포함하지 않는 배지에서 18시간동안 배양시켰다. 세포를 다양한 농도의 화합물 1 또는 실시예 21에 2시간동안 노출시킨 후 100ng/㎖의 EGF(A431) 또는 10ng/㎖의 헤레귤린(MDA-MB-453)으로5분동안 자극하였다. 세포 추출물을 만들고, 웨스턴 블롯으로 포스포티로신의 감소를 결정하였다.

웨스턴 블로팅 과정

단층을 0.2㎖의 끓는 라에믈리(Laemlli) 완충액(2% 소디움 도데실 설페이트, 5% 베타-머캅토에탄올, 10% 글리세롤 및 50mM 트리스, pH 6.8)에 용해시킴으로써 추출물을 만들고, 용해물을 5분동안 100℃로 가열하였다. 용해물내의 단백질을 폴리아크릴아미드 겔 전기영동법으로 분리하고, 니트로셀룰로스로 전기영동적 이동시켰다. 멤브레인을 [10mM 트리스, pH 7.2, 150mM NaCl, 0.01% 소디움 아지드](TNA)에서 1회 세척하고, 5% 소 혈청 알부민 및 1% 오브알부민을 함유하는 TNA에서 밤새 블로킹시켰다. 멤브레인을 항포스포티로신 항체(미국 뉴욕주 레이크 플라시드 소재의 유비아이(UBI), 블로킹 완충액중 1㎍/㎖)로 2시간동안 블로팅시킨 후, TNA에서 2회 세척하고, 0.05% 트윈-20(Tween-20) 및 0.05% 노니뎃 P-40(nonidet P-40)을 함유하는 TNA에서 1회 및 TNA에서 2회 세척하였다. 이어서 멤브레인을 0.1μCi/㎖의 [¹²⁵I] 단백질 A를 함유하는 블로킹 완충액에서 2시간동안 배양시킨 후 상기와 같이 다시 세척하였다. 블롯을 건조시킨 후, 이들을 필름 카세트에 넣고 1 내지 7일 동안 X-AR 엑스선 필름에 노출시켰다. 밴드의 강도를 레이저 농도계로 결정하였다.

하기 표 1의 데이타를 보아, 실시예 21과 화합물 1은 시험관내에서, 정제된 EGF 수용체 티로신 키나제, EGF-중개된 수용체 자가 인산화, 및 헤레귤린-중개된티로신 인산화에 대해 거의 동일한 활성을 갖는다는 것을 알 수 있다.

화합물	EGF 수용체 티로신 키나제 IC₅₀(nM)	EGF-중개된 수용체 자가 인산화 IC₅₀(nM)	헤레귤린-중개된 티로신 인산화 IC₅₀(nM)
실시예 21	3.6	5.3	6.4
화합물 1	2.0	2.9	9.0

생체내 종양 저해 분석

인간 유표피암인 A431을 순차적 이식에 의해 생체내에 증식시켰다. 본 연구를 위해 이 종양 모델을 선택한 이유는 성장에 있어서 EGF 수용체에 대한 공지된 의존성 및 생체내 단클론성 항체 요법에 대한 초기 단계 반응성 때문이다. 이 실험에서는 체중이 18 내지 22g인 누드 마우스에 실험 0일째에 오른쪽 겨드랑이 부위에 30㎎의 A431 종양 단편을 피하 이식하였다. 종양을 무게 100 내지 150㎎이 되게 성장시키고, 종양을 갖는 동물을 무작위화시키고 우리에 나누어 넣었다. 동물들에게 물에 용해된 실시예 21 및 화합물 1의 이세티오네이트 염을 연속 15일동안 경구투여하였다. 화합물 용액을 2 등가량의 이세티온산으로 적정함으로써 이세티오네이트 염을 제조할 수 있다. 처리 방법은 평균 그룹 체중을 기준으로 하였다. 대조 동물에게는 물을 주었다. 실험의 평가는 처리된 종양과 대조 종양이 평가 크기 750㎎에 도달하는데 걸리는 시간차(일)로서 정의되는 종양 성장 지연 T-C를 기준으로 하였다. 데이타를 또한 종양 성장 지연을 처리 횟수로 나눈 것에 100%를 곱한 종양 성장 저해율(%)로 나타낼 수도 있다. 종양 성장 지연 및 종양 성장 저해율 값이 클수록 보다 활성인 화합물이다. 통계적 분석을 매킨토시용 JMP(미국 노쓰 캐롤라이나주 캐리 소재의 사스 인스티튜트 인코포레이티드(SAS Institute,Inc.))를 사용하여 수행하였다.

시험 화합물	투여량(㎎/㎏)	종양 성장 지연(일)	종양 성장 저해율(%)
실시예 21	18	18.4	123
실시예 21	5	25.7	171
화합물 1	18	41.3	275
화합물 1	5	53.2	355

개개의 종양이 750㎎에 도달하기까지 소요되는 시간을 기준으로 하는, 화합물 1에 대한 값은 실시예 21에 대한 값과 매우 다르다. p<0.05, 스튜던트 티-테스트(student's t-test).

VEGF 분비 분석

혈관 투과 인자(VPF)라고도 알려져 있는 혈관 내피 성장 인자(VEGF)는 대부분의 형태의 암에 있어서 주요한 혈관형성 자극제라고 생각된다. 종양 VEGF 분비를 위한 많은 유도인자가 존재하며, 가장 유력한 것중 두가지는 표피 성장 인자(EGF) 및 전환 성장 인자 알파로서, 이들은 모두 EGF 수용체(EGFR)를 위한 리간드이다.

VEGF 분비가 저해되면 항혈관형성 효과가 나타나고 종양이 퇴행될 수 있는데, 왜냐하면 VEGF 분비가 부분적으로 저해되더라도 종양내의 새로 형성된 미성숙한 혈관이 파괴될 수 있기 때문이다(벤자민 엘 이(Benjamin L.E.) 및 케셀 이(Keshel E.)의 문헌[Conditional switching of VEGF expression in tumors: induction of endothelial cell shedding and regression of hemangioblastoma-like vessels by VEGF withdrawal. Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 1997;94:8761-8766]을 참조).

두가지의 EGFR 티로신 키나제 저해제인 화합물 1과 실시예 21의 A431 종양 세포에 대한 효과를 비교해보았다. 생체내의 A431 종양에 대해서, 화합물 1(T-C = 53일)은 실시예 21(T-C = 26일)에 비해 예상치못하게 더 우수한 항종양 반응을 나타내었다. 상기 분석을 참조하도록 한다. 이어서, 이 두 화합물의 A431의 VEGF 분비에 대한 효과를 검사하였다. 놀랍게도, 화합물 1은 시험관내에서 A431 세포로부터의 VEGF 분비를 저해하는데 있어서 실시예 21보다 우수하였다. 0.5μM의 화합물 1은 EGF- 또는 TGF-알파 자극된 VEGF 분비를 억제하였다. 이와 대조적으로, 0.5μM의 실시예 21은 0.1μM의 화합물 1과 거의 동일한 수준으로 VEGF 분비를 저해하였다. 0.1μM의 화합물 1은 EGF-자극된 VEGF 분비를 63% 저해하고, 0.5μM의 화합물 1은 86% 저해하였다. 이와 대조적으로, 0.1μM의 실시예 21은 EGF-자극된 VEGF 분비를 48% 저해하고, 0.5μM의 실시예 21은 EGF-자극된 VEGF 분비를 57% 저해하였다. EGF 대신에 TGF-알파로 VEGF 분비를 자극시키는 실험에서도 유사한 결과를 얻었다. 0.5μM의 화합물 1은 TGF-알파-자극된 VEGF 분비를 80%보다 많이 저해한 반면, 동일한 농도의 실시예 21은 VEGF 분비를 57% 저해하였다. 화합물 1은 또한 A431 세포로부터의 VEGF 분비의 기저 수준을 저해하는 것으로 나타났지만 실시예 21은 아무런 효과를 나타내지 않았다.

방법

미국 매릴랜드주 록빌 소재의 더 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션으로부터 입수된 A431 인간 유표피암 세포를 10% 소 태아 혈청으로 보충된 듈베코의 MEM/F12 배지(DMEM/F12)에서 배양시켰다. 약물을 투여하고 성장 인자 처리를 하기 전에,세포를 혈청을 함유하지 않는 DMEM/F12에서 3회 세척하였다. 세포를 지시된 농도의 화합물 1 또는 실시예 21로 2시간동안 처리한 후, 10ng/㎖의 EGF 또는 TGF-알파를 첨가하였다. 37℃에서 48시간동안 배양시킨 후, 배지를 제거하고, -70℃에서 냉동 저장하였다. 제조사의 설명서에 따라, 배지 샘플상에서 VEGF ELISA(미국 뉴욕주 퍼체즈 소재의 인터젠 캄파니(Intergen, Co.))를 수행하였다. 그 분석 결과를 다음과 같이 표로 나타내었다.

처리	VEGF 분비(pg/10⁵개 세포±SE)	저해율(%)
혈청을 함유하지 않는 배지(SF)	490±32
SF + 0.1μM 화합물 1	280±41	43
SF + 0.5μM 화합물 1	250±46	49
SF + 0.1μM 실시예 21	600±37	0
SF + 0.5μM 실시예 21	440±110	10
SF + 10ng/㎖ EGF	3980±85
SF + EGF + 0.1μM 화합물 1	1490±170	63
SF + EGF + 0.5μM 화합물 1	560±29	86
SF + EGF + 0.1μM 실시예 21	2070±160	48
SF + EGF + 0.5μM 실시예 21	1710±65	57
SF + TGF-알파	4034±190
SF + TGF + 0.1μM 화합물 1	1976±37	51
SF + TGF + 0.5μM 화합물 1	766±75	81
SF + TGF + 0.1μM 실시예 21	3065±161	24
SF + TGF + 0.5μM 실시예 21	1734±21	57

Claims

N-[4-(3-클로로-4-플루오로-페닐아미노)-7-(3-모르폴린-4-일-프로폭시)-퀴나졸린-6-일]-아크릴아미드 화합물 또는 약학적으로 허용되는 그의 염.
제 1 항의 화합물을 포함하는 약학적으로 허용되는 조성물.
암에 걸린 환자에게 치료 효과량의 제 1 항의 화합물을 투여함을 포함하는, 암의 치료 방법.
제 3 항에 있어서, 암이 유방암인 방법.
제 3 항에 있어서, 암이 결장암인 방법.
재발협착증에 걸리거나 재발협착증에 걸릴 위험이 있는 환자에게 치료 효과량의 제 1 항의 화합물을 투여함을 포함하는, 재발협착증의 치료 또는 예방 방법.
티로신 키나제의 저해를 필요로 하는 환자에게 티로신 키나제 저해량의 제 1 항의 화합물을 투여함을 포함하는, 티로신 키나제를 비가역적으로 저해하는 방법.
제 7 항에 있어서, 티로신 키나제가 표피 성장 인자 수용체 티로신 키나제(EGFR)인 방법.
제 7 항에 있어서, 티로신 키나제가 erbB2인 방법.
제 7 항에 있어서, 티로신 키나제가 erbB4인 방법.
erbB3의 티로신 인산화의 저해를 필요로 하는 환자에게 치료 효과량의 N-[4-(3-클로로-4-플루오로-페닐아미노)-7-(3-모르폴린-4-일-프로폭시)-퀴나졸린-6-일]-아크릴아미드를 투여함을 포함하는, erbB3의 티로신 인산화의 저해 방법.
건선에 걸린 환자에게 치료 효과량의 제 1 항의 화합물을 투여함을 포함하는, 건선의 치료 방법.
죽상동맥경화증에 걸리거나 죽상동맥경화증에 걸릴 위험이 있는 환자에게 치료 효과량의 제 1 항의 화합물을 투여함을 포함하는, 죽상동맥경화증의 치료 또는 예방 방법.
자궁내막증에 걸린 환자에게 치료 효과량의 제 1 항의 화합물을 투여함을 포함하는, 자궁내막증의 치료 방법.
혈관 내피 성장 인자(VEGF) 분비의 저해를 필요로 하는 환자에게 치료효과량의 제 1 항의 화합물을 투여함을 포함하는, VEGF 분비의 저해 방법.