CN114728936A - 用于治疗癌症的双功能化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了式(I)的双功能化合物
Figure DDA0003621438320000011
或其药用盐。式(I)。所述化合物导致SMARCA2通过SMARCA2蛋白的靶向泛素化而降解和随后的蛋白酶体降解，因此可用于治疗癌症。所述靶向配体具有式(TL)。

Description

用于治疗癌症的双功能化合物
技术领域
本发明涉及新型双功能化合物，其作用是将靶向蛋白质募集到E3泛素连接酶以进行降解，及其制备方法和用途。更具体地，本发明的化合物经由SMARCA2蛋白的靶向泛素化和随后的蛋白酶体降解引起SMARCA2的降解。本发明化合物因此可用于治疗或预防异常细胞增殖，包括肿瘤和癌症。
背景技术
大多数小分子药物将酶或受体结合在紧密而明确定义的口袋中。另一方面，众所周知，蛋白质-蛋白质相互作用难以使用小分子靶向，因为它们的接触面大，且涉及的浅槽或平面接触面。E3泛素连接酶(其中数百种在人类中已知)赋予泛素化底物特异性，因此，由于它们对某些蛋白质底物的特异性，它们比一般蛋白酶体抑制剂更具吸引力。E3连接酶配体的开发已被证明具有挑战性，部分原因是它们必须破坏蛋白质-蛋白质相互作用。然而，最近的发展已经提供了与这些连接酶结合的特定配体。例如，自从发现第一个小分子E3连接酶小鼠双微粒体2同源物(MDM2)抑制剂nutlins以来，已经报道了靶向MDM2(即人双微粒体2或HDM2)E3连接酶的另外的化合物(J.Di,等人Current Cancer Drug Targets(2011),11(8),987-994)。
一种具有令人兴奋的治疗潜力的E3连接酶是cereblon(CRBN)。CRBN已知是抗癌沙利度胺类似物的主要靶标。CRBN的较高表达与沙利度胺类似物在癌症治疗中的效率有关。
在过去几年中，小分子促进的靶向蛋白质降解领域得到了深入研究(例如，Collins等人.,Biochem J,2017,474(7),1127-47)。双功能化合物，例如在美国专利申请公开2016-0235730中描述的那些，用于将内源性蛋白质募集到E3泛素连接酶以进行降解。
Switch/Sucrose Non Fermentable(SWI/SNF)是一种多亚基复合物，其通过以下两种相互排斥的解旋酶/ATP酶催化亚基的活性来调节染色质结构：SWI/SNF相关、基质相关、肌动蛋白依赖性染色质调节因子、亚家族A成员2(SMARCA2、BRAHMA或BRM)和SWI/SNF相关、基质相关、肌动蛋白依赖性染色质调节因子、亚家族A成员4(SMARCA4或BRG1)。核心和调节亚基将ATP水解与组蛋白-DNA接触的扰动结合起来，从而为促进基因激活和抑制的转录因子和同源DNA元件提供接入点。
在近20％的所有癌症中观察到编码20个典型SWI/SNF亚基的基因突变，在横纹肌瘤、女性癌症(包括卵巢癌、子宫癌、宫颈癌和子宫内膜癌)、肺腺癌、胃腺癌、黑素瘤、食管癌和肾透明细胞癌中观察到的突变频率最高。尽管具有高度的同源性，并且假定它们具有重叠功能，但据报道SMARCA2和SMARCA4在癌症中具有不同的作用。例如，SMARCA4在原发性肿瘤中经常发生突变，而SMARCA2失活在肿瘤发展中并不常见。事实上，许多类型的癌症已被证明与SMARCA4相关(例如，具有SMARCA4突变或SMARCA4缺陷的癌症，例如缺乏表达)，包括例如肺癌(例如非小细胞肺癌)。
SMARCA2已被证明是SMARCA4相关或突变癌细胞系中最重要的基因之一。这是因为SMARCA4缺陷的患者群体或细胞完全依赖于SMARCA2活性——即，SMARCA2更多地掺入复合物中以补偿SMARCA4缺陷。因此，SMARCA2可以靶向SMARCA4相关/缺陷型癌症。导致细胞死亡的两个(或多个)基因表达不足的共同发生被称为合成致死率。因此，合成致死性可用于治疗某些SMARCA2/SMARCA4相关癌症。
对可通过抑制或降解SMARCA2(即BRAHMA或BRM)治疗的疾病的有效治疗的需求一直存在。然而，非特异性作用以及无法靶向和调节SMARCA2仍然是开发有效治疗方法的障碍。因此，靶向SMARCA2并利用或增强CRBN底物特异性的小分子治疗剂将非常有用。
发明内容
本发明提供了式(I)的双功能化合物
Figure BDA0003621438310000031
或其药用盐，其中所述靶向配体、接头和降解决定子如本文所述。
在另一方面，本发明提供了如本文定义的式(I)化合物或其药用盐，其用作治疗活性物质。
在另一方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含如本文定义的式(I)化合物或其药用盐，以及治疗惰性载体。
在另一方面，本发明提供了如本文定义的式(I)化合物或其药用盐，其用于治疗SMARCA2介导的疾病，特别是癌症。
具体实施方式
本发明提供式I化合物及其药用盐、上述化合物的制备、含有其的药品和其制备以及上述化合物在癌症中的治疗性和/或预防性治疗中的用途。
定义
本说明书中使用的一般术语的下列定义，其应用与所讨论的术语是否单独出现或与其他群体组合出现无关。
除非另外指明，否则本申请书(包括说明书和权利要求书)中使用的下列术语具有下文给出的定义。必须注意的是，如在本说明书和所附权利要求中所用，单数形式“一个”、“一种”、“该”和“所述”包括复数指代物，除非上下文另外明确规定。
如本文所用的，术语“靶向配体”(或靶蛋白部分或靶蛋白配体或配体)是指如本文定义的式(TL)的小分子，其能够结合或结合感兴趣的靶蛋白，例如SMARCA2。
如本文所用的，术语“接头”是指选自如本文定义的式L-1至L-23的化学部分，其用于连接靶向配体与降解决定子。
降解决定子是一种可通过接头和靶向配体将靶向蛋白质连接到泛素连接酶以进行蛋白酶体降解的化合物。在某些实施例中，降解决定子是能够结合或结合泛素连接酶的化合物。在进一步的实施例中，降解决定子是能够结合或结合E3泛素连接酶的化合物。在进一步的实施例中，降解决定子是能够结合或结合cereblon的化合物。在进一步的实施例中，降解决定子是沙利度胺或其衍生物或类似物。
如本文所用的，术语“cereblon”或“CRBN”是指普遍表达的E3连接酶蛋白cereblon。Cereblon是一种形成E3泛素连接酶复合物的蛋白质，该复合物将各种其他蛋白质泛素化。Cereblon已知是抗癌沙利度胺类似物的主要靶标。Cereblon的较高表达与沙利度胺类似物在癌症治疗中的效率有关。
术语“烷基”，单独使用或与其他基团组合使用，代表烃基，其可以是直链的或支链的，具有一个或多个分支，其中烷基基团通常包含1至6个碳原子(C1-6-烷基)，例如，甲基(Me)、乙基(Et)、丙基、异丙基(i-丙基)、正丁基、异丁基(异丁基)、2-丁基(仲丁基)、叔丁基(叔丁基)、异戊基、2-乙基-丙基(2-甲基-丙基)、1,2-二甲基-丙基等。具体的基团是甲基。
如本文所用，术语“烷基二基”是指具有一至六个碳原子(C1-C6)的饱和直链或支链二价烃基。烷基二基的实例包括但不限于亚甲基(-CH2-)、亚乙基(-CH2CH2-)、亚丙基(-CH2CH2CH2-)等。烷基二基也可以称为“亚烷基”基团。
术语“卤代烷基”，单独使用或与其他基团组合使用，是指如本文定义的烷基，其经一个或多个卤素特别是1至5个卤素，更特别地是1至3个卤素取代。特别的卤素是氟。实例包括2,2,2-三氟乙基、三氟甲基、二氟甲基、氟甲基等。
术语“卤代烷氧基”，单独使用或与其他基团组合使用，是指如本文定义的烷氧基，其经一个或多个卤素特别是1至5个卤素，更特别地是1至3个卤素取代。特别的卤素是氟。实例包括2,2,2-三氟乙氧基、三氟甲氧基、二氟甲氧基、氟甲氧基等。
术语“氨基烷基”，单独使用或与其他基团组合使用，是指如本文定义的烷基，其经一个或多个氨基基团特别是1至5个氨基基团，更特别地是1至3个氨基基团取代。实例包括2-氨基乙基、氨基甲基等。
术语“环烷基”表示3至10个环碳原子的一价饱和单环或双环烃基，特别是3至8个环碳原子的一价饱和单环烃基。双环意指由两个具有一个或多个共同碳原子的碳环组成，其中一个碳环是饱和的，而另一个碳环可以是芳族的。特别的环烷基基团是单环。单环环烷基的实例是“C3-7环烷基”，例如环丙基、环丁烷基、环戊基、环己基或环庚基。饱和双环环烷基的实例是双环[2.2.1]庚烷基或双环[2.2.2]辛烷基。其中一个环是芳族的双环环烷基的实例是1H-茚基或1,2,3,4-四氢萘基。
术语“羟基”，单独使用或与其他基团组合使用，是指OH。
术语“氨基”，单独使用或与其他基团组合使用，是指NH2。
术语“氰基”，单独使用或与其他基团组合使用，是指CN(即腈)。
术语“羰基”，单独使用或与其他基团组合使用，是指C(＝O)。
术语“卤素”，单独使用或与其他基团组合使用，表示氯(Cl)、碘(I)、氟(F)和溴(Br)。具体的基团是F。
术语“杂芳基”表示具有5个至14个环原子的单价杂环的单环或双环体系，其包含1、2、3或4个选自N、O和S的杂原子，剩余的环原子是碳，并且其中至少一个环是芳族。杂芳基部分的实例包括吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噁唑基、噻唑基、三唑基、噁二唑基、噻二唑基、四唑基、吡啶基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、嘧啶基、三嗪基、氮呯基、二氮呯基、异噁唑基、苯并呋喃基、异噻唑基、苯并噻吩基、吲哚基、异吲哚基、异苯并呋喃基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并噻唑基、苯并异噻唑基、苯并噁二唑基、苯并噻二唑基、苯并三唑基、嘌呤基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、喹噁啉基或2,3-二氢吡咯并[2,3-b]吡啶基。具体实例包括苯并咪唑基、吡啶基、噻唑基、吲哚啉基、1,2,3,4-四氢喹啉基、3,4-二氢喹啉基、苯并呋喃基、呋喃基、咪唑基、异吲哚基和喹啉基。
术语“杂环基”表示3至14个环原子的单价饱和或部分不饱和的单环或双环体系，其包含1、2或3个选自N、O和S的杂原子，剩余的环原子是碳。单环饱和杂环基的实例包括氮杂环丁烷基、吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、吡唑啶基、咪唑啶基、噁唑烷基、异噁唑烷基、四氢噻唑基、哌啶基、四氢哌喃基、四氢硫吡喃基、哌嗪基、吗福林基、硫代吗啉基、1,1-二氧代-硫代吗啉-4-基、氮杂环庚烷基、二氮杂环庚烷基、高哌啶基或氧杂氮杂环庚烷基。双环饱和杂环基的实例包括8-氮杂-双环[3.2.1]辛基、喹咛环基、8-氧杂-3-氮杂-双环[3.2.1]辛基、9-氮杂-双环[3.3.1]壬基、3-氧杂-9-氮杂-双环[3.3.1]壬基或3-硫-9-氮杂-双环[3.3.1]壬基。部分不饱和杂环基的实例包括二氢呋喃基、咪唑啉基、二氢噁唑基、四氢吡啶基或二氢吡喃基。具体实例包括哌嗪基、哌啶基、吡咯烷基和3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷基。
术语“杂环氧基”，单独使用或与其他基团组合使用，代表-O-杂环基，例如吡咯烷基氧基、哌啶基氧基、吗啉基氧基等。
术语“烷氧基”，单独使用或与其他基团组合使用，代表-O-C1-6-烷基基团，其可以是直链的或支链的，具有一个或多个分支，其中烷基基团通常包含1至6个碳原子(C1-6-烷氧基)，例如，甲氧基(OMe、MeO)、乙氧基(OEt)、丙氧基、异丙氧基(异丙氧基)、正丁氧基、异丁氧基(异丁氧基)、2-丁氧基(仲丁氧基)、叔丁氧基(叔丁氧基)、异戊氧基(异戊氧基)等。特别的“C1-6-烷氧基”是具有1至4个碳原子的基团。具体的基团是甲氧基。
术语“芳基”表示包含6至10个碳环原子的单价芳族碳环单环体系或双环体系。芳基部分的实例包括苯基(Ph)和萘基。具体的“芳基”是苯基。
术语“药用的”表示材料的属性，其可用于制备药物组合物，通常是安全无毒的，既不是生物学上不可接受的也不是其他层面上不可接受的，并且是兽医以及人类药物用途可接受的。
术语“药用盐”是指适用于与人类和动物组织接触的盐。合适的盐的无机酸和有机酸的示例是但不限于，醋酸、柠檬酸、甲酸、富马酸、盐酸、乳酸、马来酸、苹果酸、甲磺酸、柠檬酸、磷酸、对甲苯磺酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、三氟乙酸等。特别的酸是甲酸、三氟乙酸和盐酸。具体的酸是盐酸、三氟乙酸和富马酸。
当术语“如本文中定义”和“如本文所述”指变量时，该变量通过引用该变量的最广泛定义以及(若有)特别的定义、更特别的定义和最特别的定义而并入。
当术语“治疗”、“接触”和“反应”指化学反应时，意为在适宜条件下加入或混合两种或更多种反应剂以产生所指示的和/或所希望的产物。应认识到，产生所指示的和/或所希望的产物的反应可能不是将最初加入的两种反应剂组合的直接必然结果，即，混合物中可能产生一种或多种中间体，而该中间体最终导致所指示的和/或所希望的产物的形成。
术语“芳族的”表示如文献中定义的芳族的常规概念，特别是在IUPAC-Compendiumof Chemical Terminology，第2版，A.D.McNaught&A.Wilkinson(编辑)中。BlackwellScientific Publications,Oxford(1997)。
术语“治疗惰性载体”表示配制药物产品时使用的不具治疗活性且无毒的任何成分，诸如崩解剂、粘合剂、填充剂、溶剂、缓冲剂、张度剂、稳定剂、抗氧化剂、表面活性剂或润滑剂。
当化学结构中存在手性碳时，意指与该手性碳相关联的所有立体异构体都涵盖于作为纯立体异构体以及其混合物的结构中。
所有独立的实施例均可组合。
如本文所用的术语“治疗”包括：(1)抑制疾病的至少一种临床或亚临床症状的状态、病症或病情(例如，在维持治疗的情况下，阻止、减轻或延迟疾病的发展或其复发)；和/或(2)缓解病情(即，使疾病的状态、病症或病情或者至少一种临床或亚临床症状消退)。对待治疗患者的益处在统计学上是显著的或者至少是患者或医师可察觉的。然而，应当理解，当向患者施用药物以治疗疾病时，结果可能并不总是有效的治疗。
如本文所用，术语“癌症”是指特征在于因异常失控的细胞(此类细胞为“癌细胞”)的生长而导致赘生物或肿瘤存在的疾病。如本文所用的，术语癌症明确包括但不限于肝细胞癌、恶性肿瘤和结肠过度增殖性疾病(结肠癌)、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、黑素瘤和卵巢癌。
本发明的化合物
在第一方面(A1)，本发明提供式(I)化合物
Figure BDA0003621438310000071
或其药用盐，其中：
所述靶向配体具有式(TL)：
Figure BDA0003621438310000072
其中：
R1和R2各自独立地选自由以下项组成的组：氢和卤素；
R3选自由以下项组成的组：氨基和羟基；
Z1为：
(i)不存在；
(ii)–O–；或
(iii)–O-C1-C6-烷基二基-CH(C6-C10-芳基)-C1-C6-烷基二基-NHC(O)–；
Cy1为任选地被1-3个取代基R4取代的3-14元杂环基；
Z2为：
(i)不存在；
(ii)羰基；
(iii)–NH–；
(iv)-C1-C6-烷基二基-；
(v)-C1-C6-烷基二基-NH-；
(vi)–O(CH2)a–；
(vii)–C(O)NH(CH2)b–；
(viii)–(CH2)cNHC(O)(CH2)dX1–；
(ix)–O-C1-C6-烷基二基-C(O)–；
(x)–O-C1-C6-烷基二基-C(O)NH–；或
(xi)–CH2N(C1-C6-烷基)CH2–；
Cy2为：
(i)不存在；
(ii)任选地被1-3个取代基R5取代的C6-C10-芳基；
(iii)任选地被1-3个取代基R6取代的C3-C10-环烷基；
(iv)任选地被1-3个取代基R7取代的3-14元杂环基；或
(v)任选地被1-3个取代基R8取代的5-14元杂芳基；
Z3为：
(i)不存在；
(ii)–X2(CH2)e–；或
(iii)–(CH2)eX2–；
Cy3为：
(i)不存在；
(ii)任选地被1-3个取代基R9取代的C6-C10-芳基；
(iii)任选地被1-3个取代基R10取代的C3-C10-环烷基；或
(iv)任选地被1-3个取代基R11取代的3-14元杂环基；
a、b、c、d和e各自独立地为选自0、1、2、3、4、5和6的整数；
X1为：
(i)不存在；
(ii)–NH–；或
(iii)-O-；
X2为：
(i)不存在；
(ii)羰基；
(iii)–O–；或
(iv)–NHC(O)–；
R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10和R11各自独立地选自由以下项组成的组：羟基、氨基、氰基、卤素、C1-C6-烷基、C1-C6-烷氧基、卤代-C1-C6-烷基、卤代-C1-C6-烷氧基、氨基-C1-C6-烷基、(C1-C6-烷基)2N-C1-C6-烷基–、(C1-C6-烷基)2N-C1-C6-烷氧基–、C1-C6-烷基-NH-C1-C6-烷基–、C1-C6-烷基-NH-C(O)–、C1-C6-烷基-C(O)-NH–、3-14元杂环基、3-14元杂环基氧基、3-14元杂环基-C1-C6-烷基、3-14元杂环基-C1-C6-烷氧基和C6-C10-芳基；并且
波形线指示与接头的连接点；
所述接头为共价键或选自由以下项组成的组：式L-1至L-23；
Figure BDA0003621438310000091
Figure BDA0003621438310000101
Figure BDA0003621438310000111
其中：
X3和X4独立地选自由以下项组成的组：CH和N；
R12和R13独立地选自由以下项组成的组：氢和C1-C6-烷基；或
R12和R13与它们所连接的碳原子一起形成C3-C10-环烷基环；
R14、R15、R16和R17独立地选自由以下项组成的组：氢和C1-C6-烷基；
RL1a和RL1b各自独立地选自由以下项组成的组：氢、C1-C6-烷基、卤代-C1-C6-烷基、C1-C6-烷氧基、卤代-C1-C6-烷氧基、C3-C10-环烷基、3-14元杂环基、C6-C10-芳基和5-14元杂芳基；
f、g、h、i、k、m、n、p、q、r、s、t、u、v、w、x、y、z和aa各自独立地为选自0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13和14的整数；
Y1、Y2、Y3、Y4、Y5、Y6、Y7、Y8和Y9各自独立地为不存在或选自由以下项组成的组：–O–、–NH–、–N(C1-C6-烷基)–、–C1-C6-烷基二基–、–NH-C1-C6-烷基二基–、–O-C1-C6-烷基二基–、羰基、–NHC(O)–、–N(C1-C6-烷基)-C(O)–、–C(O)-N(C1-C6-烷基)–和–C(O)NH–；
波形线的每次出现指示接头与靶向配体或降解决定子的连接点；并且所述降解决定子选自由以下项组成的组：式(DG-1)、(DG-2)、(DG-3)
和(DG-4)：
Figure BDA0003621438310000121
其中：
X5为CH或N；
X6为CH2或C(O)；
每个R18独立地选自由以下项组成的组：氢、卤素和C1-C6-烷基；
R19选自由以下项组成的组：氢和C1-C6-烷基；
Y10为共价键、-O-或-NR-，其中R选自由以下项组成的组：氢、C1-C6-烷基、卤代-C1-C6-烷基、C3-C10-环烷基、3-14元杂环基、C6-C10-芳基和5-14元杂芳基；并且
波形线指示与接头的连接点。
在一个实施例中，本发明提供了如本文所述的式(I)化合物或其药用盐，其中所述靶向配体具有式(TL)，其中：
R1和R2各自独立地选自由以下项组成的组：氢和卤素；
R3选自由以下项组成的组：氨基和羟基；
Z1为：
(i)不存在；
(ii)–O–；或
(iii)–O-C1-C6-烷基二基-CH(C6-C10-芳基)-C1-C6-烷基二基-NHC(O)–；
Cy1为任选地被R4取代的3-14元杂环基；
Z2为：
(i)不存在；
(ii)羰基；
(iii)–O(CH2)a–；
(iv)–C(O)NH(CH2)b–；
(v)–(CH2)cNHC(O)(CH2)dX1–；
(vi)–O-C1-C6-烷基二基-C(O)NH–；或
(vii)–CH2N(C1-C6-烷基)CH2–；
Cy2为：
(i)不存在；
(ii)任选地被R5取代的C6-C10-芳基；
(iii)C3-C10-环烷基；
(iv)3-14元杂环基；或
(v)5-14元杂芳基；
Z3为：
(i)不存在；
(ii)–X2(CH2)e–；或
(iii)–(CH2)eX2–；
Cy3为：
(i)不存在；
(ii)C6-C10-芳基；
(iii)C3-C10-环烷基；或
(iv)3-14元杂环基；
a为0、1或2；
b为0或1；
c、d和e各自独立地为选自0、1、2和3的整数；
X1为：
(i)不存在；
(ii)–NH–；或
(iii)-O-；
X2为：
(i)不存在；
(ii)羰基；
(iii)–O–；或
(iv)–NHC(O)–；
R4为C6-C10-芳基；
R5选自由以下项组成的组：卤素、C1-C6-烷基和卤代-C1-C6-烷基；并且
波形线指示与接头的连接点。
在一个优选的实施例中，本发明提供了如本文所述的式(I)化合物或其药用盐，其中所述靶向配体具有式(TL)，其中：
R1选自由以下项组成的组：氢和卤素；
R2为氢；
R3为羟基；
Z1为不存在；
Cy1为任选地被R4取代的3-14元杂环基；
Z2为：
(i)不存在；
(ii)羰基；或
(iii)–C(O)NHCH2–；
Cy2为：
(i)C6-C10-芳基；
(ii)3-14元杂环基；或
(iii)5-14元杂芳基；
Z3为–X2(CH2)e–；
Cy3为3-14元杂环基；
e为选自0、1和2的整数；
X2为：
(i)不存在；或
(ii)-O-；
R4为C6-C10-芳基；并且
波形线指示与接头的连接点。
在一个特别优选的实施例中，本发明提供了如本文所述的式(I)化合物或其药用盐，其中所述靶向配体具有式(TL)，其中：
R1选自由以下项组成的组：氢和氟；
R2为氢；
R3为羟基；
Z1为不存在；
Cy1选自由以下项组成的组：
Figure BDA0003621438310000151
其任选地被R4取代；
其中每条波形线指示与Z2或与式(TL)的剩余部分的连接点；
Z2为：
(i)不存在；
(ii)羰基；或
(iii)–C(O)NHCH2–；
Cy2为
(i)苯基；
(ii)3-14元杂环基，选自：
Figure BDA0003621438310000152
其中每条波形线指示与Z2或Z3的连接点；或
(iii)嘧啶基；
Z3为–X2(CH2)e–；
Cy3为3-14元杂环基，选自：
Figure BDA0003621438310000153
其中每条波形线指示与Z3或接头的连接点；
e为选自0、1和2的整数；
X2为：
(i)不存在；或
(ii)-O-；
R4为苯基；并且
波形线指示与接头的连接点。
在一个实施例中，本发明提供了如本文所述的式(I)化合物或其药用盐，其中所述接头为共价键或选自由以下项组成的组：式L-1或L-23，其中：
X3和X4独立地选自由以下项组成的组：CH和N；
R12和R13独立地选自由以下项组成的组：氢和C1-C6-烷基；或
R12和R13与它们所连接的碳原子一起形成C3-C10-环烷基环；
R14为氢或C1-C6-烷基；
R15为氢；
R16为C1-C6-烷基；
R17为氢；
f为选自1、2、5、6、7、8、9的整数；
g为选自3、6、8、9、10、11、14的整数；
h为2，
i为选自0、1、2、3的整数；
k为3；
m为1；
n为选自8和12的整数；
p为选自0、1和8的整数；
q为7；
r为选自0和1的整数；
s为4；
t为9；
u为4；
v为1；
w为4；
x为选自2和4的整数；
y为选自1和3的整数；
z为1；
aa为选自0、1和8的整数；
Y1为–O–或–NH–；
Y2为–O–、–NH–、–C1-C6-烷基二基–或–NH-C1-C6-烷基二基–；
Y3为不存在、–O-C1-C6-烷基二基–或羰基；
Y4为–O–、–NH–、–N(C1-C6-烷基)–或–C1-C6-烷基二基–；
Y5为不存在或羰基；
Y6为不存在、羰基、–O–、–NHC(O)–、–C(O)-N(C1-C6-烷基)–或–C(O)NH–；
Y7为不存在或–C1-C6-烷基二基–；
Y8为不存在或–O–；
Y9为–NH–；并且
波形线的每次出现指示接头与靶向配体或与降解决定子的连接点。
在优选实施例中，本发明提供了如本文所述的式(I)化合物或其药用盐，其中所述接头为共价键或选自由以下项组成的组：式L-4、L-8、L-13和L-23，其中：
i为选自0、2和3的整数；
p为选自0和1的整数；
aa为0；
Y5为不存在；
Y6为不存在、羰基、–O–或–C(O)-N(C1-C6-烷基)–；
Y8为不存在或–O–；并且
波形线的每次出现指示接头与靶向配体或与降解决定子的连接点。
在特别优选实施例中，本发明提供了如本文所述的式(I)化合物或其药用盐，其中所述接头为共价键或选自由以下项组成的组：式L-4、L-8、L-13和L-23，其中：
i为选自0、2和3的整数；
p为选自0和1的整数；
aa为0；
Y5为不存在；
Y6为不存在、羰基、–O–或–C(O)-NCH3–；
Y8为不存在或–O–；并且
波形线的每次出现指示接头与靶向配体或与降解决定子的连接点。
在一个实施例中，本发明提供了如本文所述的式(I)化合物或其药用盐，其中所述降解决定子选自由以下项组成的组：式(DG-1)和(DG-2)，其中：
X5为CH或N；
X6为CH2或C(O)；
R18为氢；
Y10为共价键、–O–或–NH–；并且
波形线指示与接头的连接点。
在优选实施例中，本发明提供了如本文所述的式(I)化合物或其药用盐，其中所述降解决定子选自由以下项组成的组：式(DG-1)和(DG-2)，其中：
X5为CH；
X6为C(O)；
R18为氢；
Y10为–NH–；并且
波形线指示与接头的连接点。
在一个实施例中，本发明提供了如本文所述的式(I)化合物或其药用盐，其中所述靶向配体具有式(TL)，其中：
R1和R2各自独立地选自由以下项组成的组：氢和卤素；
R3选自由以下项组成的组：氨基和羟基；
Z1为：
(i)不存在；
(ii)–O–；或
(iii)–O-C1-C6-烷基二基-CH(C6-C10-芳基)-C1-C6-烷基二基-NHC(O)–；
Cy1为任选地被R4取代的3-14元杂环基；
Z2为：
(i)不存在；
(ii)羰基；
(iii)–O(CH2)a–；
(iv)–C(O)NH(CH2)b–；
(v)–(CH2)cNHC(O)(CH2)dX1–；
(vi)–O-C1-C6-烷基二基-C(O)NH–；或
(vii)–CH2N(C1-C6-烷基)CH2–；
Cy2为：
(i)不存在；
(ii)任选地被R5取代的C6-C10-芳基；
(iii)C3-C10-环烷基；
(iv)3-14元杂环基；或
(v)5-14元杂芳基；
Z3为：
(i)不存在；
(ii)–X2(CH2)e–；或
(iii)–(CH2)eX2–；
Cy3为：
(i)不存在；
(ii)C6-C10-芳基；
(iii)C3-C10-环烷基；或
(iv)3-14元杂环基；
a为0、1或2；
b为0或1；
c、d和e各自独立地为选自0、1、2和3的整数；
X1为：
(i)不存在；
(ii)–NH–；或
(iii)-O-；
X2为：
(i)不存在；
(ii)羰基；
(iii)–O–；或
(iv)–NHC(O)–；
R4为C6-C10-芳基；
R5选自由以下项组成的组：卤素、C1-C6-烷基和卤代-C1-C6-烷基；
并且
波形线指示与接头的连接点；
其中所述接头为共价键或选自由以下项组成的组：式L-1至L-23，其中：
X3和X4独立地选自由以下项组成的组：CH和N；
R12和R13独立地选自由以下项组成的组：氢和C1-C6-烷基；或
R12和R13与它们所连接的碳原子一起形成C3-C10-环烷基环；
R14为氢或C1-C6-烷基；
R15为氢；
R16为C1-C6-烷基；
R17为氢；
f为选自1、2、5、6、7、8、9的整数；
g为选自3、6、8、9、10、11、14的整数；
h为2，
i为选自0、1、2、3的整数；
k为3；
m为1；
n为选自8和12的整数；
p为选自0、1和8的整数；
q为7；
r为选自0和1的整数；
s为4；
t为9；
u为4；
v为1；
w为4；
x为选自2和4的整数；
y为选自1和3的整数；
z为1；
aa为选自0、1和8的整数；
Y1为–O–或–NH–；
Y2为–O–、–NH–、–C1-C6-烷基二基–或–NH-C1-C6-烷基二基–；
Y3为不存在、–O-C1-C6-烷基二基–或羰基；
Y4为–O–、–NH–、–N(C1-C6-烷基)–或–C1-C6-烷基二基–；
Y5为不存在或羰基；
Y6为不存在、羰基、–O–、–NHC(O)–、–C(O)-N(C1-C6-烷基)–或–C(O)NH–；
Y7为不存在或–C1-C6-烷基二基–；
Y8为不存在或–O–；
Y9为–NH–；并且
波形线的每次出现指示所述接头与所述靶向配体或与所述降解决定子的连接点；并且
其中所述降解决定子选自由以下项组成的组：式(DG-1)和(DG-2)，
其中：
X5为CH或N；
X6为CH2或C(O)；
R18为氢；
Y10为共价键、–O–或–NH–；并且
波形线指示与接头的连接点。
在一个优选的实施例中，本发明提供了如本文所述的式(I)化合物或其药用盐，其中所述靶向配体具有式(TL)，其中：
R1选自由以下项组成的组：氢和卤素；
R2为氢；
R3为羟基；
Z1为不存在；
Cy1为任选地被R4取代的3-14元杂环基；
Z2为：
(i)不存在；
(ii)羰基；或
(iii)–C(O)NHCH2–；
Cy2为：
(i)C6-C10-芳基；
(ii)3-14元杂环基；或
(iii)5-14元杂芳基；
Z3为–X2(CH2)e–；
Cy3为3-14元杂环基；
e为选自0、1和2的整数；
X2为：
(i)不存在；或
(ii)-O-；
R4为C6-C10-芳基；并且
波形线指示与接头的连接点；
其中所述接头为共价键或选自由以下项组成的组：式L-4、L-8、L-13和L-23，其中：
i为选自0、2和3的整数；
p为选自0和1的整数；
aa为0；
Y5为不存在；
Y6为不存在、羰基、–O–或–C(O)-N(C1-C6-烷基)–；
Y8为不存在或–O–；并且
波形线的每次出现指示接头与靶向配体或降解决定子的连接点；并且
其中所述降解决定子选自由以下项组成的组：式(DG-1)和(DG-2)，
其中：
X5为CH；
X6为C(O)；
R18为氢；
Y10为–NH–；并且
波形线指示与接头的连接点。
在一个特别优选的实施例中，本发明提供了如本文所述的式(I)化合物或其药用盐，其中所述靶向配体具有式(TL)，其中：
R1选自由以下项组成的组：氢和氟；
R2为氢；
R3为羟基；
Z1为不存在；
Cy1选自由以下项组成的组：
Figure BDA0003621438310000231
其任选地被R4取代；
其中每条波形线指示与Z2或与式(TL)的剩余部分的连接点；
Z2为：
(i)不存在；
(ii)羰基；或
(iii)–C(O)NHCH2–；
Cy2为
(i)苯基；
(ii)3-14元杂环基，选自：
Figure BDA0003621438310000232
其中每条波形线指示与Z2或Z3的连接点；或
(iii)嘧啶基；
Z3为–X2(CH2)e–；
Cy3为3-14元杂环基，选自：
Figure BDA0003621438310000233
其中每条波形线指示与Z3或接头的连接点；
e为选自0、1和2的整数；
X2为：
(i)不存在；或
(ii)-O-；
R4为苯基；并且
波形线指示与接头的连接点；
其中所述接头为共价键或选自由以下项组成的组：式L-4、L-8、L-13和L-23，其中：
i为选自0、2和3的整数；
p为选自0和1的整数；
aa为0；
Y5为不存在；
Y6为不存在、羰基、–O–或–C(O)-NCH3–；
Y8为不存在或–O–；并且
波形线的每次出现指示接头与靶向配体或降解决定子的连接点；并且
其中所述降解决定子选自由以下项组成的组：式(DG-1)和(DG-2)，
其中：
X5为CH；
X6为C(O)；
R18为氢；
Y10为–NH–；并且
波形线指示与接头的连接点。
在一个实施例中，本发明提供了如本文所述的式(I)化合物或其药用盐，其中R1和R2各自独立地选自由以下项组成的组：氢和卤素。
在优选的实施例中，本发明提供了一种如本文所述的式(I)的化合物或其药用盐，其中：
R1选自由以下项组成的组：氢和卤素；并且
R2为氢。
在特别优选的实施例中，本发明提供了一种如本文所述的式(I)的化合物或其药用盐，其中：
R1选自由以下项组成的组：氢和氟；并且
R2为氢。
在一个实施例中，本发明提供了如本文所述的式(I)化合物或其药用盐，其中R3选自由以下项组成的组：氨基和羟基。
在优选的实施例中，本发明提供了如本文所述的式(I)化合物或其药用盐，其中R3为羟基。
在一个实施例中，本发明提供了如本文所述的式(I)化合物或其药用盐，其中Z1为：
(i)不存在；
(ii)–O–；或
(iii)–O-C1-C6-烷基二基-CH(C6-C10-芳基)-C1-C6-烷基二基-NHC(O)–。
在一个优选实施例中，本发明提供一种如本文所述的式(I)化合物或其药用盐，其中Z1为不存在。
在一个实施例中，本发明提供了如本文所述的式(I)化合物或其药用盐，其中Cy1为任选地被R4取代的3-14元杂环基；并且其中R4为C6-C10-芳基。
在一个优选实施例中，本发明提供了如本文所述的式(I)化合物或其药用盐，其中Cy1选自由以下项组成的组：
Figure BDA0003621438310000251
其任选地被R4取代；其中每条波形线指示与Z2或式(TL)的剩余部分的连接点；并且其中R4为苯基。
在一个实施例中，本发明提供了如本文所述的式(I)化合物或其药用盐，其中Z2为：
(i)不存在；
(ii)羰基；
(iii)–O(CH2)a–；
(iv)–C(O)NH(CH2)b–；
(v)–(CH2)cNHC(O)(CH2)dX1–；
(vi)–O-C1-C6-烷基二基-C(O)NH–；或
(vii)–CH2N(C1-C6-烷基)CH2–；其中
a为0、1或2；
b为0或1；
c和d各自独立地为选自0、1、2和3的整数；并且
X1为：
(i)不存在；
(ii)–NH–；或
(iii)-O-。
在优选实施例中，本发明提供如本文所述的式(I)化合物或其药用盐，其中Z2为：
(i)不存在；
(ii)羰基；或
(iii)–C(O)NHCH2–。
在一个实施例中，本发明提供了如本文所述的式(I)化合物或其药用盐，其中Cy2为：
(i)不存在；
(ii)任选地被R5取代的C6-C10-芳基；
(iii)C3-C10-环烷基；
(iv)3-14元杂环基；或
(v)5-14元杂芳基；其中
R5选自由以下项组成的组：卤素、C1-C6-烷基和卤代-C1-C6-烷基。
在优选实施例中，本发明提供如本文所述的式(I)化合物或其药用盐，其中Cy2为：
(i)C6-C10-芳基；
(ii)3-14元杂环基；或
(iii)5-14元杂芳基。
在特别优选实施例中，本发明提供如本文所述的式(I)化合物或其药用盐，其中Cy2为：
(i)苯基；
(ii)3-14元杂环基，选自：
Figure BDA0003621438310000261
其中每条波形线指示与Z2或Z3的连接点；或
(iii)嘧啶基。
在一个实施例中，本发明提供了如本文所述的式(I)化合物或其药用盐，其中Z3为：
(i)不存在；
(ii)X2(CH2)e–；或
(iii)–(CH2)eX2–；其中
X2为：
(i)不存在；
(ii)羰基；
(iii)–O–；或
(iv)–NHC(O)–；并且
每个e独立地为选自0、1、2和3的整数。
在优选实施例中，本发明提供如本文所述的式(I)化合物或其药用盐，其中Z3为–X2(CH2)e–，其中：
X2为：
(i)不存在；或
(ii)–O–；并且
e为选自0、1和2的整数。
在一个实施例中，本发明提供了如本文所述的式(I)化合物或其药用盐，其中Cy3为：
(i)不存在；
(ii)C6-C10-芳基；
(iii)C3-C10-环烷基；或
(iv)3-14元杂环基。
在优选实施例中，本发明提供了如本文所述的式(I)化合物或其药用盐，其中Cy3为3-14元杂环基，其选自：
Figure BDA0003621438310000271
其中每条波形线指示与Z3或接头的连接点。
在一个实施例中，本发明提供了如本文所述的式(I)化合物或其药用盐，其中所述式(I)化合物选自实例1至204。
在一个实施例中，本发明提供了如本文所述的式(I)化合物或其药用盐，其中所述式(I)化合物选自实例34、35、36、46、55、84、95、96、100、113、113、114、118、127、142、143、149、149、158、159、161、170、190和191。
在一个实施例中，本发明提供了如本文所述的式(I)化合物的药用盐或酯。在一个特定实施例中，本发明提供了如本文所述的根据式(I)化合物的药用盐。在另一个特定实施例中，本发明提供了如本文所述的式(I)化合物的药用的酯。在又一个特定实施例中，本发明提供了如本文所述的式(I)化合物。
此外，本发明包括式I化合物的全部光学异构体，即，非对映异构体、非对映异构混合物、外消旋混合物、它们的全部相应对映异构体和/或互变异构体以及其溶剂化物。
式I化合物可能含有一个或多个不对称中心，并可因此作为外消旋体、外消旋混合物、单一对映异构体、非对映异构混合物和个体非对映异构体出现。根据分子上各种取代基的性质，可以存在另外的不对称中心。每个此类不对称中心将独立地产生两种光学异构体，并且意图是呈混合物形式和作为纯化合物或部分纯化的化合物的所有可能的光学异构体和非对映异构体都包括在本发明内。本发明意在涵盖这些化合物的所有此类异构形式。这些非对映异构体的独立合成或它们的色谱分离可以如本领域已知的那样通过对本文公开的方法的适当修改来实现。它们的绝对立体化学可以通过结晶产物或结晶中间体的x-射线晶体学测定，如果需要，所述结晶产物或结晶中间体用含有已知绝对构型的不对称中心的试剂衍生化。如果需要，可以分离化合物的外消旋混合物，从而分离单独的对映异构体。分离可以通过本领域熟知的方法进行，诸如将化合物的外消旋混合物偶联至对映异构体纯的化合物以形成非对映异构体混合物，接着通过标准方法诸如分级结晶或色谱法分离单独的非对映异构体。
在提供光学纯对映异构体的实施例中，光学纯对映异构体意指化合物含有>处90重量％的所需异构体，特别是>95重量％的所需异构体，或更特别是>99重量％的所需异构体，所述重量百分比基于化合物的异构体的总重量计。手性纯或手性富集的化合物可以通过手性选择性合成或通过对映异构体的分离来制备。可以对终产物，或者可替代地对合适的中间体进行对映异构体的分离。
在一些实施例中，式(I)的化合物通过其中一个或多个原子被具有不同原子质量或质量数的原子代替而被同位素标记。此类同位素标记(即，放射性标记)的式(I)的化合物被认为在本公开的范围内。可以掺入式(I)的化合物中的同位素的实例分别包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯和碘的同位素，诸如但不限于2H、3H、11C、13C、14C、13N、15N、15O、17O、18O、31P、32P、35S、18F、36Cl、123I和125I。某些同位素标记的式(I)的化合物(例如，包含放射性同位素的那些)可用于药物和/或基体组织分布研究。放射性同位素氚(即3H)和碳-14(即14C)对此特别有用，因为它们容易掺入并且检测手段是现成的。例如，式(I)的化合物可以富含1、2、5、10、25、50、75、90、95或99％的给定同位素。
用较重同位素(诸如氘，即2H)取代可提供由于更高的代谢稳定性带来的某些治疗优势，例如，体内半衰期增加或剂量要求减少。
用正电子发射同位素(诸如11C、18F、15O和13N)取代可以用于检查底物受体占用的正电子发射断层扫描(PET)研究。同位素标记的式(I)的化合物通常可以通过本领域技术人员已知的常规技术或通过类似于如下所陈述的实施例中描述的那些过程使用适当的同位素标记的试剂代替之前使用的非标记的试剂来制备。
生产方法
本发明的式(I)化合物的制备可按照顺序或并发合成路线进行。本发明的合成如以下总体方案所示。执行反应和纯化所得产物所需的技能对于本领域的技术人员是已知的。除非指明是相反情况，否则以下方法说明中所用的取代基和指数具有本文所提供的含义。
如果起始物质、中间体或式(I)化合物之一含有一种或多种在一个或多个反应步骤的反应条件下不稳定或具有反应性的官能团，则可以在关键步骤之前应用本领域中众所周知的方法引入适当的保护基(如以下文献所述：T.W.Greene和P.G.M.Wutts，“ProtectiveGroups in Organic Chemistry”，第5版，2014年，John Wiley&Sons,N.Y.)。此类保护基可在合成的后期使用文献中所述的标准方法去除。
如果起始物质或中间体含有立体中心，则可以获得作为非对映异构体或对映异构体的混合物的式(I)化合物，其可以通过本领域中众所周知的方法(例如，手性HPLC、手性SFC或手性结晶)进行分离。外消旋化合物可例如通过非对映体盐分离为相应的对应体，其通过用光学纯的酸进行结晶，或通过使用手性吸附剂或手性洗脱剂的特定色谱法分离对映体。同样可分离含有立体异构中心的起始物质和中间体，以提供非对映异构体/对映异构体富集的起始物质和中间体。在式(I)化合物的合成中使用此类非对映异构体/对映异构体富集的起始物质和中间体通常将得到相应的非对映异构体/对映异构体富集的式(I)化合物。
本领域的技术人员将认识到，在式(I)化合物的合成中(如果不希望如此)将应用“正交保护基策略”，其允许每次裂解多个保护基而不影响分子中的其他保护基。正交保护的原理是本领域中众所周知的，并且也已经见诸文献报道(例如，Barany和R.B.Merrifield，J.Am.Chem.Soc.1977，99，7363；H.Waldmann等人，Angew.Chem.Int.Ed.Engl.1996，35，2056)。
本领域的技术人员将认识到，反应顺序可根据中间体的反应性和性质而变化。
更详细地，式(I)化合物可以通过下面给出的方法、通过实例中给出的方法或通过类似方法来制备。各个反应步骤的适当反应条件是本领域技术人员已知的。同样，有关文献中报道的影响所述反应的反应条件，参见例如：Comprehensive OrganicTransformations:A Guide to Functional Group Preparations,第2版,RichardC.Larock.John Wiley&Sons,New York,NY.1999。在存在或不存在溶剂的情况下进行反应都很方便。对所用溶剂的性质没有特别的限制，只要它对反应或所涉及的试剂没有不利影响并且至少在一定程度上可以溶解试剂即可。所描述的反应可以在很宽的温度范围内发生，并且精确的反应温度对于本发明不是关键的。可以方便地在-78℃至回流的温度范围内执行上述反应。反应所需的时间还可在很大范围内变化，这取决于许多因素，特别是反应温度和试剂的性质。但是，通常需要0.5小时至几天的时间以得到所述的中间体和化合物。反应顺序不限于方案中显示的顺序，但是，根据起始物质及其相应的反应性不同，可自由改变反应步骤的顺序。
如果起始原料或中间体无法商购获得，或者其合成未见诸文献报道，则可以采用类似于接近的类似物的现有制备方法或按照实验部分的概述进行制备。
式(I)的双功能蛋白质降解分子，或其药用盐、多晶型物、前药、溶剂化物形式和含有同位素的其衍生物，可以通过下文描述的一般方法(方案1、方案2和方案3)连同本领域已知的合成方法、或本领域普通技术人员熟悉的修饰和衍方法制备。
方案1：
Figure BDA0003621438310000311
用于制备双功能蛋白质降解分子的反应顺序可以如下所示地修改(方案2和方案3)。
方案2：
Figure BDA0003621438310000312
方案3：
Figure BDA0003621438310000321
降解决定子为如本文所述的式(DG-1)、(DG-2)、(DG-3)或(DG-4)的部分。
在方案1、2和3中，起始物质1是可市售的。例如，起始物质1是4-溴-6-氯哒嗪-3-胺。
在方案1、2和3中，反应物2是可市售的或者可以如现有技术所述制备(参见WO2016138114)或与实例中所述的程序类似地制备。
W1为如本文所述的式
Figure BDA0003621438310000322
的部分。
在方案1、2和3中，反应物4是可市售的。例如，反应物4为适当取代的邻苯酚硼酸。
在方案1、2和3中，反应物6是可市售的或者可以与文献中程序或实例中所述的程序类似地制备。
通常，方案1和2中的化合物5或方案3中的化合物7可由4-溴-6-氯哒嗪-3-胺制备。可以通过钯催化的交叉偶联或亲核芳族取代在C-4处引入取代基，然后在C-6处进行适当取代的邻苯酚硼酸或硼酸酯的钯催化的交叉偶联。
带有胺的SNAr
在某些实例中，对于方案1、2和3中描述的化学反应，RG2是卤素，优选溴化物，RG3是合适的亲核试剂，例如–NH2或–NH-。在典型的程序中，含有RG2的中间体与含有RG3的中间体在合适的溶剂中反应。合适的溶剂包括但不限于水、醚类，诸如THF、甘醇二甲醚等；氯化溶剂，诸如DCM、1,2-二氯乙烷(DCE)或CHCl3等；甲苯、苯等；DMF、NMP、DMSO、MeCN。如果需要，可以使用这些溶剂的混合物。为了促进反应，可以添加碱。合适的碱包括但不限于Cs2CO3、K2CO3等；TEA、DIPEA等。上述过程可以在约20℃和约200℃之间的温度下进行。优选地，该反应在约50℃和约130℃之间进行。
Buchwald偶联
在某些实例中，对于方案1、2和3中描述的化学反应，RG2是卤素，例如氯或溴，优选溴化物，RG3是亲核试剂，例如–NH2、–NH-或-OH。在典型的程序中，含有RG2的中间体与含有RG5的中间体在合适的溶剂中在合适的催化剂和碱的存在下反应。合适的溶剂包括但不限于水、醚类，诸如THF、甘醇二甲醚、二噁烷等；氯化溶剂，诸如DCM、1,2-二氯乙烷(DCE)或CHCl3等；甲苯、苯等；醇类，诸如甲醇、乙醇、异丙醇、叔丁醇等；DMF、NMP、DMSO、MeCN。如果需要，可以使用这些溶剂的混合物。优选使用二噁烷或异丙醇。合适的催化剂包括但不限于四(三苯基膦)Pd、RuPhosPd G3、双(二苯基膦基)二茂铁]二氯Pd(II)、BrettPhosPd G3。合适的碱包括但不限于Na2CO3、K2CO3、Cs2CO3、K2PO4、Na2PO4。上述过程可以在20℃和约150℃之间的温度下进行。优选地，该反应在60℃和120℃之间进行。
包含-NH2或-NH-作为RG3的市售结构单元的实例在方案4中进行了描述，但不限于这些实例：
Figure BDA0003621438310000331
方案4：
例如，应用方案5a-k中概述的合成路线，可以获得含有-NH2或-NH-作为RG3的非市售结构单元，其中PG是合适的保护基团。
Figure BDA0003621438310000332
方案5a:
Figure BDA0003621438310000341
方案5b：
Figure BDA0003621438310000342
方案5c：
Figure BDA0003621438310000343
方案5d：
Figure BDA0003621438310000344
方案5e：
Figure BDA0003621438310000345
方案5f：
Figure BDA0003621438310000351
方案5g：
Figure BDA0003621438310000352
方案5h：
Figure BDA0003621438310000353
方案5i：
Figure BDA0003621438310000354
方案5j：
Figure BDA0003621438310000355
方案5k：
带有OH的SNAr
在某些实例中，对于方案1、2和3中描述的化学反应，RG2是卤素，优选溴化物，RG3是羟基–OH。在典型的程序中，含有RG2的中间体与含有RG3的中间体在合适的溶剂中反应。合适的溶剂包括但不限于醚类，诸如THF、甘醇二甲醚等；氯化溶剂，诸如DCM、1,2-二氯乙烷(DCE)或CHCl3等；甲苯、苯等；DMF、NMP、DMSO MeCN。如果需要，可以使用这些溶剂的混合物。为了促进反应，可以添加碱。合适的碱包括但不限于NaH、Cs2CO3、K2CO3等；TEA、DIPEA等。优选地，添加的碱是NaH。上述过程可以在约20℃和约200℃之间的温度下进行。优选地，该反应在约50℃和约130℃之间进行。
可以使用方案6中描述的标准化学方法获得含有-OH作为RG3的非市售结构单元。PG为合适的保护基团。
Figure BDA0003621438310000361
方案6：含有-OH作为RG3的非市售结构单元的合成
Suzuki偶联
在某些实例中，对于方案1、2和3中描述的化学反应，RG1是卤素，例如氯或溴，优选氯化物，并且RG5是含硼部分，优选硼酸或硼酸酯。在典型的程序中，含有RG1的中间体与含有RG5的中间体在合适的溶剂中在合适的催化剂和碱的存在下反应。合适的溶剂包括但不限于水、醚类，诸如THF、甘醇二甲醚、二噁烷等；氯化溶剂，诸如DCM、1,2-二氯乙烷(DCE)或CHCl3等；甲苯、苯等；醇类，诸如甲醇、乙醇、异丙醇、叔丁醇等；DMF、NMP、DMSO、MeCN。如果需要，可以使用这些溶剂的混合物。优选使用二噁烷或异丙醇。合适的催化剂包括但不限于四(三苯基膦)Pd、RuPhosPd G3、双(二苯基膦基)二茂铁]二氯Pd(II)、BrettPhosPd G3。合适的碱包括但不限于Na2CO3、K2CO3、Cs2CO3、K2PO4、Na2PO4。上述过程可以在20℃和约150℃之间的温度下进行。优选地，该反应在60℃和120℃之间进行。
通常，方案1中的化合物7和8或方案2中的化合物10和9或方案3中的化合物11和9可以通过酰胺偶联反应、还原胺化、烷基化反应、脲形成来制备。
酰胺形成
在某些实例中，对于方案1、2和3中描述的化学反应，RG4是含有-COOH基团的部分，并且RG6是含有合适的胺基团的部分。在典型的程序中，含有RG4的中间体与含有RG6的中间体在合适的溶剂中在合适的酰胺偶联试剂的存在下反应。合适的溶剂包括但不限于水、醚类，诸如THF、甘醇二甲醚等；氯化溶剂，诸如DCM、1,2-二氯乙烷(DCE)或CHCl3等；甲苯、苯等；DMF、NMP、DMSO MeCN。如果需要，可以使用这些溶剂的混合物。优选地使用DMF或DCM。合适的酰胺偶联试剂包括但不限于DCC、EDC、HATU、HBTU、PyBOP等。常将碱添加至该反应。合适的碱包括但不限于TEA、DIPEA等。上述过程可以在-78℃和约150℃之间的温度下进行。优选地，该反应在0℃和50℃之间进行。
替代地，RG4是含有-NH2或-NH-基团的部分，RG6是含有-COOH基团的部分。
相同的考虑适用于部分RG7和RG8的偶联。
烷基化
在某些实例中，对于方案1、2和3中描述的化学反应，RG4是含有-NH2或-NH-基团的部分，并且RG6是含有离去基团如卤素或甲磺酸酯的部分。在典型的程序中，含有RG4的中间体与含有RG6的中间体在合适的溶剂中反应。合适的溶剂包括但不限于水、醚类，诸如THF、甘醇二甲醚等；氯化溶剂，诸如DCM、1,2-二氯乙烷(DCE)或CHCl3等；甲苯、苯等；DMF、NMP、DMSO MeCN。如果需要，可以使用这些溶剂的混合物。优选地使用DMSO或DMF。可将碱添加至该反应。合适的碱包括但不限于Na2CO3、K2CO3等；或TEA、DIPEA等。上述过程可以在-10℃和约150℃之间的温度下进行。优选地，该反应在0℃和50℃之间进行。
替代地，RG4是含有离去基团如卤素或甲磺酸酯的部分，并且RG6是含有-NH2或-NH-基团的部分。
相同的考虑适用于部分RG7和RG8的偶联。
还原胺化1
在某些实例中，对于方案1、2和3中描述的化学反应，RG4是含有-CHO或–CO-基团的部分，并且RG6是含有合适的胺基团的部分。在典型的程序中，含有RG4的中间体与含有RG6的中间体在合适的溶剂中在合适的还原试剂的存在下反应。合适的溶剂包括但不限于水、醚类，诸如THF、DME、甘醇二甲醚等；氯化溶剂，诸如DCM、1,2-二氯乙烷(DCE)或CHCl3等；甲苯、苯等；醇类，诸如甲醇、乙醇、异丙醇、叔丁醇等；甲苯、苯等。如果需要，可以使用这些溶剂的混合物。优选地使用DMF或DCM。合适的还原试剂包括但不限于硼氢化钠、三乙酰氧基硼氢化钠、氰基硼氢化钠等；二丁基二氯化锡和三甲基(苯基)硅烷等的混合物。将酸添加至该反应。合适的酸包括但不限于乙酸或甲酸等。上述过程可以在-78℃和约150℃之间的温度下进行。优选地，该反应在0℃和50℃之间进行。
替代地，RG4是含有-NH2或-NH-基团的部分，并且RG6是含有-CHO或–CO-基团的部分。
相同的考虑适用于部分RG7和RG8的偶联。
脲形成
在某些实例中，对于方案1、2和3中描述的化学反应，RG4是含有活性氨基甲酸酯或羧基叠氮基团或异氰酸酯的部分，并且RG6是含有合适的胺基团的部分。活化的氨基甲酸酯基团包括但不限于(4-硝基苯基)氨基甲酸酯、(五氟苯基)氨基甲酸酯。在典型的程序中，含有RG4的中间体与含有RG6的中间体在合适的溶剂中反应。合适的溶剂包括但不限于水、醚类，诸如THF、甘醇二甲醚等；氯化溶剂，诸如DCM、1,2-二氯乙烷(DCE)或CHCl3等；甲苯、苯等；DMF、NMP、DMSO MeCN。如果需要，可以使用这些溶剂的混合物。优选地使用DMF或DCM。合适的还原试剂包括但不限于硼氢化钠、三乙酰氧基硼氢化钠、氰基硼氢化钠等；二丁基二氯化锡和三甲基(苯基)硅烷等的混合物。将酸添加至该反应。合适的酸包括但不限于乙酸或甲酸等。上述过程可以在-78℃和约150℃之间的温度下进行。优选地，该反应在0℃和50℃之间进行。
替代地，RG4是含有-NH2或-NH-基团的部分，并且RG6是含有活性氨基甲酸酯或羧基叠氮基团或异氰酸酯的部分。
相同的考虑适用于部分RG7和RG8的偶联。
化合物的离析和纯化
如果需要，本文所述的化合物和中间体的离析和纯化可以通过任何合适的分离或纯化程序来进行，例如过滤、萃取、结晶、柱色谱、薄层色谱、厚层色谱、制备型低压或高压液相色谱或这些程序的组合。可以通过参考下文的制备和实例来获得合适的分离和离析程序的具体说明。然而，当然也可以使用其他等效的分离或离析程序。式I的手性化合物的外消旋混合物可以使用手性HPLC分离。手性合成中间体的外消旋混合物也可以使用手性HPLC分离。
在式I化合物是碱性的情况下，它们可以转化为相应的酸加成盐。通过用至少化学计量量的适当酸处理来完成转化，诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等和有机酸诸如乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲基磺酸、乙基磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等。通常，将游离碱溶解在惰性有机溶剂如乙醚、乙酸乙酯、氯仿、乙醇或甲醇等中，并将酸加入类似溶剂中。温度保持在0℃和50℃之间。生成的盐会自发沉淀，或者可以用极性较小的溶剂从溶液中析出。
应当理解，本发明中的通式I的化合物可在官能团处衍生化以提供能够在体内转化回母体化合物的衍生物。
使用本发明的化合物
式I化合物可以有效量用于治疗受SMARCA2介导的疾病影响的宿主，包括人类。更特别地，式I化合物可以以有效量用于治疗受癌症影响的受试者，特别是人类。
在一个方面，本发明提供了如本文所述的式(I)化合物或其药用盐，其用作治疗活性物质。
在另一方面，本发明提供了如本文所述的式(I)化合物或其药用盐，其用于治疗SMARCA2介导的疾病。
在另一方面，本发明提供了一种治疗受试者中SMARCA2介导的疾病的方法，该方法包括向受试者施用如本文所述的式(I)化合物或其药用盐。
在另一方面，本发明提供了如本文所述的式(I)化合物或其药用盐用于治疗受试者中SMARCA2介导的疾病的方法。
在另一方面，本发明提供了如本文所述的式(I)化合物或其药用盐在制备用于治疗受试者中SMARCA2介导的疾病的药物中的用途。
术语“SMARCA2介导的疾病”的特征在于SMARCA2蛋白参与一种或多种症状或疾病标志物的开始、表现、疾病的严重性或进展。
SMARCA2介导的疾病包括癌症，其包括但不限于听觉神经瘤，急性白血病，急性淋巴细胞性白血病，急性骨髓性白血病(单核细胞性，粒细胞性，腺癌，血管肉瘤，星形细胞瘤，髓单核细胞和早幼粒细胞性)，急性T细胞白血病，基底细胞癌，胆管癌，膀胱癌，脑癌，乳腺癌，支气管癌，宫颈癌，软骨肉瘤，脊索瘤，绒毛膜癌，慢性白血病，慢性淋巴细胞性白血病，慢性骨髓细胞性(粒细胞性)白血病，慢性粒细胞性白血病，结肠癌，结直肠癌，颅咽管瘤，囊腺癌，弥漫性大B细胞淋巴瘤，不良增殖变化(发育异常和化生)，胚胎性癌，子宫内膜癌，内皮肉瘤，室管膜瘤，上皮癌，红白血病，食道癌，雌激素受体阳性乳腺癌，原发性血小板增多症，尤因氏肿瘤，纤维肉瘤，滤泡性淋巴瘤，生殖细胞睾丸癌，胶质瘤，成胶质细胞瘤，胶质肉瘤，重链疾病，血管母细胞瘤，肝癌，肝细胞癌，激素不敏感性前列腺癌，平滑肌肉瘤，白血病，脂肪肉瘤，肝癌，肺癌，淋巴管内皮肉瘤，淋巴管肉瘤，淋巴母细胞白血病，淋巴瘤(霍奇金氏和非霍奇金氏病；伯基特淋巴瘤)，膀胱、乳腺、结肠、肺、卵巢、胰腺、前列腺、皮肤和子宫的恶性肿瘤和过度增殖性疾病，T细胞或B细胞起源的淋巴样恶性肿瘤，髓样癌，髓母细胞瘤，黑素瘤，脑膜瘤，间皮瘤，多发性骨髓瘤，骨髓性白血病，骨髓瘤，粘液肉瘤，神经母细胞瘤，NUT中线癌(NMC)，非小细胞肺癌，少突胶质细胞瘤，口腔癌，成骨肉瘤，卵巢癌，胰腺癌，乳头状腺癌，乳头状癌，松果体瘤，真性红细胞增多症，前列腺癌，直肠癌，肾细胞癌，视网膜母细胞瘤，恶性横纹肌样瘤(MRT)，横纹肌肉瘤，肉瘤，皮脂腺癌，精原细胞瘤，皮肤癌，小细胞肺癌，实体瘤(癌和肉瘤)，小细胞肺癌，胃癌，鳞状细胞癌，滑膜瘤，汗腺癌，甲状腺癌、华氏巨球蛋白血症，睾丸肿瘤，子宫癌和威尔姆斯瘤。
式(I)化合物与其他药剂的共同施用
式(I)化合物或其盐，或本文所公开的化合物或其药用盐，可以单独使用或与其他药剂组合使用以用于治疗。例如，药物组合制剂或给药方案的第二药剂可以具有与式(I)化合物互补的活性，使得它们不会彼此产生不良影响。化合物可以在单一药物组合物中一起施用或分开施用。在一个实施例中，化合物或药用盐可以与细胞毒性剂共同施用以治疗增殖性疾病和癌症。
术语“共同施用”是指式(I)化合物或其盐或本文所公开的化合物或其药用盐与其他一种或多种活性药物成分(包括细胞毒性剂和放疗)的同时施用或以任何方式分别依次施用。如果施用不是同时进行的，则化合物应在彼此接近的时间内施用。此外，化合物是否以相同的剂型施用是无关紧要的，例如一种化合物可以局部施用，而另一种化合物可以口服施用。
通常，可以共同施用对被治疗的SMARCA2介导的疾病或病症具有活性的任何药剂。此类药物的实例可见于Cancer Principles and Practice of Oncology(V.T.Devita和S.Heilman编辑)，第6版(2001年2月15日),Lippincott Williams&Wilkins Publishers。基于所涉及的药物和疾病的特定特征，本领域普通技术人员将能够辨别哪种药剂组合将是有用的。
在一个方面，本发明提供了本文描述的药物组合物，该药物组合物进一步包含另外的治疗剂。
在一个实施例中，所述另外的治疗剂为化学治疗剂。
在一个实施例中，所述另外的治疗剂为细胞毒性剂。
如本文所用，术语“细胞毒性剂”是指抑制或阻止细胞功能和/或导致细胞死亡或破坏的物质。细胞毒性剂包括但不限于放射性同位素(At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212和Lu的放射性同位素)；化疗剂；生长抑制剂；酶及其片段，诸如溶核酶；以及毒素，诸如细菌、真菌、植物或动物来源的小分子毒素或酶活性毒素，包括其片段和/或变体。
示例性细胞毒性剂可以选自抗微管剂、铂配位络合物、烷基化剂、抗生素剂、拓扑异构酶II抑制剂、抗代谢物、拓扑异构酶I抑制剂、激素和激素类似物、信号转导通路抑制剂、非受体酪氨酸激酶血管生成抑制剂、免疫治疗剂、促凋亡剂、LDH-A抑制剂；脂肪酸生物合成抑制剂；细胞周期信号传导抑制剂；HDAC抑制剂、蛋白酶体抑制剂；和癌症代谢抑制剂。
“化疗剂”包括可用于治疗癌症的化学化合物。化疗剂的实例包括厄洛替尼(
Figure BDA0003621438310000411
Genentech/OSI Pharm.)、硼替佐米(
Figure BDA0003621438310000412
Millennium Pharm.)、双硫仑、表没食子儿茶素没食子酸酯、盐孢子酰胺A、卡非佐米、17-AAG(格尔德霉素)、根赤壳菌素、乳酸脱氢酶A(LDH-A)、氟维司群(
Figure BDA0003621438310000421
阿斯利康(AstraZeneca))、舒尼替布(
Figure BDA0003621438310000422
辉瑞(Pfizer)/Sugen)、来曲唑(
Figure BDA0003621438310000423
诺华(Novartis))、甲磺酸伊马替尼(
Figure BDA0003621438310000424
诺华)、非那沙酯(
Figure BDA0003621438310000425
诺华)、奥沙利铂(
Figure BDA0003621438310000426
赛诺菲(Sanofi))、5-FU(5-氟尿嘧啶)、亚叶酸、雷帕霉素(西罗莫司，
Figure BDA0003621438310000427
惠氏(Wyeth))、拉帕替尼(
Figure BDA0003621438310000428
GSK572016，葛兰素史克(GlaxoSmith Kline))、罗纳法米(SCH 66336)、索拉非尼(
Figure BDA0003621438310000429
拜耳实验室(BayerLabs))、吉非替尼(
Figure BDA00036214383100004210
阿斯利康)、AG1478；烷基化剂诸如噻替派和
Figure BDA00036214383100004211
环磷酰胺；烷基磺酸盐，诸如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮杂环丙烷类，诸如苯佐替派(benzodopa)、卡波醌、美妥替哌(meturedopa)和乌瑞替哌(uredopa)；乙亚胺类和甲基蜜胺类，包括六甲蜜胺、三亚乙基蜜胺、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和三羟甲基蜜胺；番荔枝内酯类(尤其是布拉他辛(bullatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone))；喜树碱(包括拓扑替康和伊立替康)；苔藓抑素；卡利他汀(callystatin)；CC-1065(包括其阿多来新(adozelesin)、卡折来新(carzelesin)和比折来新(bizelesin)合成类似物)；念珠藻素(cryptophycin)(特别是念珠藻素I和念珠藻素8)；肾上腺皮质类固醇(包括泼尼松和泼尼松龙)；醋酸环丙孕酮；5a-还原酶(包括非那雄胺和度他雄胺)；伏立诺他、罗米地辛、泛比司他、丙戊酸、莫西司他(mocetinostat)、多拉他汀(dolastatin)；阿地白介素、滑石、杜卡霉素(包括合成类似KW-2189和CBI-TM I)；五加苷素(eleutherobin)；水鬼蕉碱；匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)；海绵抑素；氮芥类，诸如苯丁酸氮芥、氯苯哌嗪、氯磷酰胺、雌莫司汀、异环磷酰胺、甲氮芥、盐酸甲氧氮芥、美法仑、新氮芥(novembichin)、苯芥胆甾醇、泼尼氮芥、曲洛磷胺(trofosfamide)、乌拉莫司汀(uracilmustard)；亚硝基脲，诸如卡莫司汀、氯脲霉素、福莫司汀、洛莫斯汀、尼莫斯汀和拉尼莫斯汀；抗生素，诸如烯二炔抗生素(例如加利车霉素(calicheamicin)，尤其是加利车霉素
Figure BDA00036214383100004212
和加利车霉素coll(Angew Chem.Inti.Ed.Engl.1994 33:183-186)；达内霉素(dynemicin)，包括达内霉素A；双膦酸盐，诸如氯膦酸盐；埃斯佩拉霉素(esperamicin)；以及新制癌菌素发色团和相关色蛋白烯二炔类抗生素发色团、阿克拉霉素(aclacinomysins)、放线菌素、安曲霉素(authramycin)、重氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素(cactinomycin)、卡拉比星(carabicin)、洋红霉素、嗜癌菌素(carzinophilin)、色霉素、更生霉素、道诺霉素、地托比星、6-重氮基-5-氧代-L-正亮氨酸、
Figure BDA0003621438310000431
(多柔比星)(吗啉代-多柔比星、氰基吗啉代-多柔比星、2-吡咯啉代-多柔比星和去氧多柔比星)、表柔比星、依索比星、伊达比星、麻西罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素类诸如丝裂霉素C、霉酚酸、诺加霉素、橄榄霉素类、培洛霉素、紫菜霉素(potfiromycin)、嘌呤霉素、三铁阿霉素(quelamycin)、罗多比星、链黑菌素、链脲菌素、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星；抗代谢物类，诸如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物类，诸如二甲叶酸(denopterin)、甲氨蝶呤、蝶罗呤、三甲曲沙；嘌呤类似物，诸如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，诸如安西他滨(ancitabine)、阿扎胞苷、6-氮杂尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、二去氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他滨、氟尿苷；雄激素类，诸如卡鲁睾酮、丙酸屈他雄酮、环硫雄醇、美雄烷、睾内酯；抗肾上腺类，诸如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦；叶酸补充剂，诸如亚叶酸(frolinic acid)；醋葡醛内酯；醛磷酰胺糖苷；氨基乙酰丙酸；恩尿嘧啶；安吖啶；贝斯布西(bestrabucil)；比生群；依达曲沙(edatraxate)；得弗伐胺(defofamine)；秋水仙胺；地吖醌(diaziquone)；依氟鸟氨酸(elfornithine)；依利醋铵；埃博霉素；乙环氧啶(etoglucid)；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明(lonidainine)；美登木素生物碱类(maytansinoids)，诸如美登素(maytansine)和安丝菌素(ansamitocin)；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇(mopidanmol)；尼曲吖啶(nitraerine)；喷司他丁；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星；洛索蒽醌；鬼臼酸；2-乙基酰胼；甲基苄肼；
Figure BDA0003621438310000432
多糖复合物(JHS NaturalProducts,Eugene,Oreg.)；雷佐生；利索新(rhizoxin)；西佐喃；锗螺胺；细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亚胺醌；2,2',2"-三氯三乙胺；单端孢霉烯类(尤其是T-2毒素、疣孢菌素(verracurin)A、杆孢菌素A和蛇形菌素(anguidine))；乌拉坦；长春地辛；达卡巴嗪；甘露醇氮芥；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；加西托星(gacytosine)；阿拉伯糖苷(“Ara-C”)；环磷酰胺；噻替哌；紫杉烷类(taxoids)，例如，TAXOL(紫杉醇；Bristol-Myers SquibbOncology,Princeton,N.J.)、
Figure BDA0003621438310000433
(不含Cremophor)、经白蛋白工程化的紫杉醇纳米颗粒制剂(American Pharmaceutical Partners,Schaumberg,111.)和
Figure BDA0003621438310000441
(多西紫杉醇、多西他赛；赛诺菲-安万特(Sanofi-Aventis))；苯丁酸氮芥(chloranbucil)；
Figure BDA0003621438310000442
(吉西他滨)；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；铂类似物，诸如顺铂和卡铂；长春碱；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱；
Figure BDA0003621438310000443
(长春瑞滨)；诺万隆(novantrone)；替尼泊苷；依达曲塞；道诺霉素；氨基蝶呤；卡培他滨
Figure BDA0003621438310000444
伊班膦酸盐；CPT-I I；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；维甲酸类，诸如视黄酸；以及以上任一项的药用盐、酸和衍生物。
化疗剂还包括：(i)起到调节或抑制激素对肿瘤的作用的抗激素剂，例如抗雌激素和选择性雌激素受体调节剂(SERM)，包括诸如他莫昔芬(包括
Figure BDA0003621438310000445
枸橼酸他莫昔芬)、雷洛昔芬、屈洛昔芬(droloxifene)、iodoxyfene、4-羟基他莫昔芬、曲奥昔芬(trioxifene)、雷洛昔芬盐酸盐(keoxifene)、LYl 17018、奥那司酮(onapristone)和
Figure BDA0003621438310000446
(枸橼酸托米芬(toremifine citrate))；(ii)抑制芳香化酶的芳香化酶抑制剂，该酶可调节肾上腺的雌激素产生，例如4(5)-咪唑、氨鲁米特(aminoglutethimide)、
Figure BDA0003621438310000447
(醋酸甲地孕酮)、
Figure BDA0003621438310000448
(依西美坦；Pfizer)、福美司坦(formestanie)、法屈唑(fadrozole)、
Figure BDA0003621438310000449
(伏洛唑(vorozole))、
Figure BDA00036214383100004410
(来曲唑；Novartis)和
Figure BDA00036214383100004411
(阿那曲唑；AstraZeneca)；(iii)抗雄激素，例如氟他胺(flutamide)，尼鲁米特(nilutamide)、比卡鲁胺(bicalutamide)、亮丙瑞林(leuprolide)和戈舍瑞林(goserelin)；布舍瑞林(buserelin)、曲普瑞林(tripterelin)、醋酸甲羟孕酮、己烯雌酚、倍美力、氟甲睾酮、所有反式视黄酸、维甲酰酚胺(fenretinide)以及曲沙他滨(1,3-二氧戊环核苷胞嘧啶类似物)；(iv)蛋白激酶抑制剂；(v)脂质激酶抑制剂；(vi)反义寡核苷酸，特别是那些抑制与异常细胞增殖有关的信号传导途径中的基因表达的寡核苷酸，例如PKC-α、Ralf和H-Ras；(vii)核酶，例如VEGF表达抑制剂(如
Figure BDA00036214383100004412
)和HER2表达抑制剂；(viii)疫苗，例如基因治疗疫苗，诸如
Figure BDA00036214383100004413
和
Figure BDA00036214383100004414
Figure BDA0003621438310000451
rIL-2；拓扑异构酶I抑制剂，例如
Figure BDA0003621438310000452
Figure BDA0003621438310000453
rmRH；以及(ix)任何上述的药用盐、酸和衍生物。
化疗剂还包括抗体，例如阿仑单抗(Campath)、贝伐单抗(
Figure BDA0003621438310000454
Genentech)；西妥昔单抗(
Figure BDA0003621438310000455
Imclone)；帕尼单抗(
Figure BDA0003621438310000456
Amgen)、利妥昔单抗(rituximab)(
Figure BDA0003621438310000457
Genentech/Biogen Idee)、帕妥珠单抗(
Figure BDA0003621438310000458
2C4，Genentech)、曲妥珠单抗(trastuzumab)(
Figure BDA0003621438310000459
Genentech)、托西莫单抗(tositumomab)(Bexxar，Corixia)和抗体药物缀合物、吉妥珠单抗奥佐米星(
Figure BDA00036214383100004510
Wyeth)。与本发明的化合物联用作为试剂具有治疗潜力的另外的人源化单克隆抗体包括：阿泊珠单抗(apolizumab)、阿塞珠单抗(aselizumab)、阿替珠单抗(atlizumab)、巴匹珠单抗(bapineuzumab)、莫比伐珠单抗(bivatuzumabmertansine)、莫坎妥珠单抗(cantuzumab mertansine)、西地珠单抗(cedelizumab)、聚乙二醇结合赛妥珠单抗(certolizumab pegol)、cidfusituzumab、cidtuzumab、达利珠单抗(daclizumab)、依库珠单抗(eculizumab)、依法珠单抗(efalizumab)、依帕珠单抗(epratuzumab)、厄立珠单抗(erlizumab)、泛维珠单抗(felvizumab)、芳妥珠单抗(fontolizumab)、吉妥珠单抗奥佐米星(gemtuzumab ozogamicin)、奥英妥珠单抗奥佐米星(inotuzumab ozogamicin)、伊匹单抗(ipilimumab)、拉贝珠单抗(labetuzumab)、林妥珠单抗(lintuzumab)、马妥珠单抗(matuzumab)、美泊利单抗(mepolizumab)、莫维珠单抗(motavizumab)、motovizumab、那他珠单抗、尼妥珠单抗、nolovizumab、numavizumab、ocrelizumab、奥马珠单抗、帕利珠单抗、帕考珠单抗、pecfusituzumab、帕妥珠单抗(pectuzumab)、培克珠单抗(pexelizumab)、ralivizumab、兰尼单抗(ranibizumab)、reslivizumab、瑞利珠单抗(reslizumab)、resyvizumab、罗维珠单抗(rovelizumab)、卢利珠单抗(ruplizumab)、西罗珠单抗(sibrotuzumab)、西利珠单抗(siplizumab)、索土珠单抗(sontuzumab)、tacatuzumab tetraxetan、他度珠单抗(tadocizumab)、他利珠单抗(talizumab)、替非珠单抗(tefibazumab)、托珠单抗(tocilizumab)、托利珠单抗(toralizumab)、西莫白介素单抗(tucotuzumab celmoleukin)、tucusituzumab、乌玛珠单抗(umavizumab)、乌珠单抗(urtoxazumab)、优特克单抗(ustekinumab)、维西珠单抗(visilizumab)和抗白介素12(ABT-874/J695，Wyeth Research and AbbottLaboratories)，这是一种经基因修饰以识别白介素12p40蛋白的重组的专门用于人类序列的全长IgGiλ抗体。
化疗剂还包括“EGFR抑制剂”，是指与EGFR结合或直接相互作用并且阻止或降低其信号传导活性的化合物，并且替代地称为“EGFR拮抗剂”。此类试剂的实例包括与EGFR结合的抗体和小分子。与EGFR结合的抗体的示例包括MAb 579(ATCC CRL HB 8506)、MAb 455(ATCC CRL HB8507)、MAb 225(ATCC CRL 8508)、MAb 528(ATCC CRL 8509)(参见，美国专利号4,943,533，Mendelsohn等人)及其变体，例如嵌合的225(C225或西妥昔单抗；
Figure BDA0003621438310000461
)和重塑的人225(H225)(参见，WO 96/40210，Imclone Systems Inc.)；IMC-11F8，一种靶向EGFR的完全人抗体(Imclone)；结合II型突变EGFR的抗体(美国专利号5,212,290)；如美国专利号5,891,996中所述结合EGFR的人源化和嵌合抗体；以及结合EGFR的人抗体，卡诸如ABX-EGF或帕尼单抗(参见WO98/50433，安尼克斯(Abgenix)/Amgen)；EMD55900(Stragliotto等人Eur.J.Cancer 32A:636-640(1996))；EMD7200(马妥珠单抗)，一种针对EGFR的人源化EGFR抗体，与EGF和TGF-α竞争而与EGFR结合(EMD/默克公司(Merck))；人EGFR抗体，HuMax-EGFR(GenMab)；完全人抗体，称为El.l、E2.4、E2.5、E6.2、E6.4、E2.ll、E6。3和E7.6.3，并在US 6,235,883中进行了描述；MDX-447(梅达雷克斯公司(Medarex Inc))；以及mAb 806或人源化mAb 806(Johns等人,J.Biol.Chem.279(29):30375-30384(2004))。可以将抗EGFR抗体与细胞毒性剂缀合，从而生成免疫缀合物(参见，例如，EP659,439A2，默克专利公司(Merck Patent GmbH))。EGFR拮抗剂包括小分子，例如美国专利号5,616,582、5,457,105、5,475,001、5,654,307、5,679,683、6,084,095、6,265,410、6,455,534、6,521,620、6,596,726、6,713,484、5,770,599、6,140,332、5,866,572、6,399,602、6,344,459、6,602,863、6,391,874、6,344,455、5,760,041、6,002,008和5,747,498，以及以下PCT出版物：W098/14451、W098/50038、W099/09016和WO99/24037中所述描述的化合物。特定的小分子EGFR拮抗剂包括OSI-774(CP-358774，厄洛替尼，
Figure BDA0003621438310000471
Genentech/OSIPharmaceuticals)；PD 183805(Cl 1033，2-丙烯酰胺，N-[4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-7-[3-(4-吗啉基)丙氧基]-6-喹唑啉基]-，二盐酸盐，辉瑞公司)；ZD1839，吉非替尼
Figure BDA0003621438310000472
4-(3'-氯-4'-氟苯胺基)-7-甲氧基-6-(3-吗啉代丙氧基)喹唑啉，阿斯利康)；ZM 105180(6-氨基-4-(3-甲基苯基-氨基)-喹唑啉，捷利康公司(Zeneca))；BIBX-1382(N8-(3-氯-4-氟-苯基)-N2-(l-甲基-哌啶-4-基)-嘧啶并[5,4-d]嘧啶-2,8-二胺，勃林格殷格翰(Boehringer Ingelheim))；PKI-166((R)-4-[4-[(I-苯乙基)氨基]-1H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基]-苯酚)；(R)-6-(4-羟苯基)-4-[(l-苯乙基)氨基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶)；CL-387785(N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰胺)；EKB-569(N-[4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]-4-(二甲基氨基)-2-丁烯酰胺)(惠氏)；AG1478(辉瑞)；AG1571(SU 5271；辉瑞)；双重EGFR/HER2酪氨酸激酶抑制剂，诸如拉帕替尼(
Figure BDA0003621438310000473
GSK572016或N-[3-氯-4-[(3氟苯基)甲氧基]苯基]-6[5[[[(2甲基磺酰基)乙基]氨基]甲基]-2-呋喃基]-4-喹唑啉胺)。
化疗剂还包括“酪氨酸激酶抑制剂”，包括上段所述的EGFR靶向药物；小分子FIER2酪氨酸激酶抑制剂，诸如可从武田制药公司(Takeda)获得的TAK165；CP-724,714，一种ErbB2受体酪氨酸激酶的口服选择性抑制剂(辉瑞和OSI)；双重HER抑制剂，诸如EKB-569(可从惠氏获得)，其可优先结合EGFR但同时抑制过表达HER2和EGFR的细胞；拉帕替尼(GSK572016；可从葛兰素史克公司获得)，一种口服HER2和EGFR酪氨酸激酶抑制剂；PKI-166(可从诺华公司获得)；泛HER抑制剂，诸如卡那替尼(CI-1033；法玛西亚公司(Pharmacia))；Raf-I抑制剂，诸如可从ISIS制药公司获得的抑制Raf-I信号传导的反义剂ISIS-5132；非HER靶向的TK抑制剂，诸如甲磺酸伊马替尼(
Figure BDA0003621438310000474
可从葛兰素史克公司获得)；多靶向酪氨酸激酶抑制剂，诸如舒尼替尼(
Figure BDA0003621438310000475
可从辉瑞获得)；VEGF受体酪氨酸激酶抑制剂，诸如瓦他拉尼(PTK787/ZK222584，可从诺华/先灵公司(Schering AG)获得)；MAPK细胞外调节的激酶I抑制剂Cl-1040(可从法玛西亚公司获得)；喹唑啉类，诸如PD153035、4-(3-氯苯胺基)喹唑啉；吡啶并嘧啶类；嘧啶并嘧啶类；吡咯并嘧啶类，诸如CGP59326、CGP 60261和CGP 62706；吡唑并嘧啶类，4-(苯氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶；姜黄素(二氟甲酰甲烷，4,5-双(4-氟苯胺基)邻苯二甲酰亚胺)；含有硝基噻吩部分的酪氨酸；PD-0183805(华纳-兰伯特公司(Wamer-Lamber))；反义分子(例如与HER编码核酸结合的分子)；喹噁啉类(美国专利号5,804,396)；酪氨酸磷酸化抑制剂(美国专利号5,804,396)；ZD6474(阿斯利康)；PTK-787(诺华/先灵公司)；泛HER抑制剂，诸如CI-1033(辉瑞)；Affinitac(ISIS 3521；Isis/礼来制药公司(Lilly))；甲磺酸伊马替尼
Figure BDA0003621438310000482
PKI 166(诺华公司)；GW2016(葛兰素史克公司)；CI-1033(辉瑞)；EKB-569(惠氏)；塞马替尼(辉瑞)；ZD6474(阿斯利康)；PTK-787(诺华/先灵公司)；INC-ICl I(Imclone)，雷帕霉素(西罗莫司，
Figure BDA0003621438310000481
)；或以下任何专利出版物中所述：美国专利号5,804,396、WO1999/09016(American Cyanamid)、WO 1998/43960(American Cyanamid)、WO 1997/38983(Warner Lambert)、WO 1999/06378(Warner Lambert)、WO 1999/06396(Warner Lambert)、WO 1996/30347(Pfizer,Inc)、WO 1996/33978(Zeneca)、WO 1996/3397(Zeneca)和WO1996/33980(Zeneca)。
化疗剂还包括地塞米松、干扰素、秋水仙碱、氯苯氨啶(metoprine)、环孢菌素、两性霉素、甲硝唑、阿仑单抗(alemtuzumab)、阿利维甲酸(alitretinoin)、别嘌醇(allopurinol)、氨磷汀(amifostine)、三氧化二砷、天冬酰胺酶、活BCG、贝伐珠单抗、贝沙罗汀(bexarotene)、克拉屈滨(cladribine)、克罗拉滨(clofarabine)、达依泊汀α(darbepoetin alfa)、地尼白介素(denileukin)、右雷佐生(dexrazoxane)、依泊汀α(epoetin alfa)、厄洛替尼(elotinib)、非格司亭(filgrastim)、醋酸组氨瑞林(histrelinacetate)、替伊莫单抗(ibritumomab)、干扰素α-2a、干扰素α-2b、来那度胺(lenalidomide)、左旋咪唑、美司钠(mesna)、甲氧沙林、诺龙(nandrolone)、奈拉滨(nelarabine)、诺非妥莫单抗(nofetumomab)、奥普瑞白介素(oprelvekin)、帕利夫明(palifermin)、帕米膦酸钠(pamidronate)、培加酶(pegademase)、培门冬酶(pegaspargase)、培非格司亭(pegfilgrastim)、培美曲塞二钠(pemetrexed disodium)、光辉霉素(plicamycin)、卟吩姆钠(porfimer sodium)、奎纳克林(quinacrine)、拉布立酶(rasburicase)、沙格司亭(sargramostim)、替莫唑胺(temozolomide)、VM-26、6-TG、托瑞米芬(toremifene)、维甲酸(tretinoin)、ATRA、戊柔比星(valrubicin)、唑来膦酸盐(zoledronate)和唑来膦酸(zoledronic acid)及其药用盐。
化疗剂还包括氢化可的松、醋酸氢化可的松、醋酸可的松、特戊酸硫氢可的松、曲安奈德、曲安奈德醇、莫米松、安西奈德、布地奈德、地奈德、醋酸氟氢松、肤轻松、倍他米松、磷酸倍他米松钠、地塞米松、磷酸地塞米松钠、氟可龙、氢化可的松-17-丁酸酯、氢化可的松-17-戊酸酯、二丙酸阿氯米松(aclometasone dipropionate)、戊酸倍他米松、二丙酸倍他米松、泼尼卡酯、氯倍他松-17-丁酸酯、氯倍他索-17-丙酸酯、氟可龙己酸酯、氟可龙戊酸酯和醋酸氟泼尼定；免疫选择性抗炎肽(ImSAID)，诸如苯丙氨酸-谷氨酰胺-甘氨酸(PEG)及其D-异构体形式(feG)(伊姆兰生物治疗剂有限公司(IMULAN BioTherapeutics，LLC))；抗风湿药物，诸如硫唑嘌呤、环孢素(环孢霉素A)、D-青霉胺、金盐、羟氯喹、来氟米特、米诺环素、柳氮磺吡啶；肿瘤坏死因子α(TNFa)阻断剂，诸如依那西普(Enbrel)、英夫利昔单抗(Remicade)、阿达木单抗(Humira)、赛妥珠单抗(Cimzia)、戈利木单抗(Simponi)；白介素I(IL-I)阻断剂，诸如阿那白滞素(Kineret)；T细胞共刺激阻断剂，诸如阿巴西普(Orencia)；白介素6(IL-6)阻断剂，诸如托珠单抗
Figure BDA0003621438310000491
白介素13(IL-13)阻断剂，诸如来瑞珠单抗(lebrikizumab)；干扰素α(IFN)阻断剂，诸如罗那珠单抗；β7整联蛋白阻断剂，诸如rhuMAbβ7；IgE通路阻断剂，诸如抗Ml引物；分泌的同源三聚体LTa3和膜结合异源三聚体LTa I/β2阻断剂，诸如抗淋巴毒素α(LTa)；放射性同位素(例如At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212和Lu的放射性同位素)；各种各样的试验药剂，诸如硫铂、PS-341、苯基丁酸酯、ET-18-OCH3或法呢基转移酶抑制剂(L-739749,L-744832)；多酚类物质，诸如槲皮素、白藜芦醇、苦味酚、表没食子儿茶素没食子酸酯、茶黄素、黄烷醇、原花青素、桦木酸及其衍生物；自噬抑制剂，诸如氯喹；δ-9-四氢大麻酚(屈大麻酚，
Figure BDA0003621438310000492
)；β-拉帕酮；拉帕酚；秋水仙碱；桦木酸；乙酰喜树碱、莨菪亭(scopolectin)和9-氨基喜树碱)；鬼臼毒素；替加氟
Figure BDA0003621438310000493
贝沙罗汀
Figure BDA0003621438310000494
双膦酸盐，诸如氯膦酸盐(例如，
Figure BDA0003621438310000495
或
Figure BDA0003621438310000496
)、依替膦酸盐
Figure BDA0003621438310000497
NE-58095、唑来膦酸/唑来膦酸盐
Figure BDA0003621438310000501
阿仑膦酸盐
Figure BDA0003621438310000502
帕米膦酸盐
Figure BDA0003621438310000503
替罗膦酸盐
Figure BDA0003621438310000504
或利塞膦酸盐
Figure BDA0003621438310000505
和表皮生长因子受体(EGF-R)；疫苗，诸如
Figure BDA0003621438310000506
疫苗；哌立福辛；COX-2抑制剂(例如，塞来昔布或依托昔布)；蛋白体抑制剂(例如，PS341)；CCI-779；替吡法尼(R11577)；奥拉非尼，ABT510；Bcl-2抑制剂，诸如奥利美森钠(oblimersen sodium)
Figure BDA0003621438310000507
匹杉琼(pixantrone)；法呢基转移酶抑制剂，诸如洛那法尼(lonafamib)(SCH 6636,SARASARTM)；以及以上任一项的药用盐、酸或衍生物；以及上述两种或多种的组合，诸如CHOP(环磷酰胺、阿霉素、长春新碱和泼尼松龙的组合疗法的缩写)；以及FOLFOX(奥沙利铂(ELOXATINTM)与5-FU和亚叶酸钙组合治疗方案的缩写)。
药物组合物和施用
式I化合物及药用盐可用作治疗活性物质，例如，以药物制剂的形式。药物制剂可例如以片剂、包衣片剂、糖衣丸、硬和软明胶胶囊、溶液、乳剂或混悬剂的形式口服施用。然而，施用也可例如以栓剂的形式通过直肠进行，或例如以注射溶液的形式通过胃肠外进行。
式I化合物及其药用盐可与药学上惰性的无机或有机载体一起加工，以用于生产药物制剂。例如，乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石粉、硬脂酸或其盐等可作为此类载体用于片剂、包衣片剂、糖衣丸和硬明胶胶囊。用于软明胶胶囊的合适的载体为，例如，植物油、蜡、脂肪、半固体和液体多元醇等。然而，依据活性物质的特性，在软明胶胶囊的情况中经常不需要载体。用于生产溶液和糖浆剂的合适的载体为，例如，水、多元醇、甘油、植物油等。用于栓剂的合适的载体为，例如，天然或硬化油、蜡、脂肪、半液体或液体多元醇等。
此外，药物制剂可包含药用佐剂物质，诸如防腐剂、增溶剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、甜味剂、着色剂、调味剂、用于改变渗透压的盐、缓冲剂、掩蔽剂或抗氧化剂。它们还可以含有其他有治疗价值的物质。
本发明也提供包含式I化合物或其药用盐以及治疗惰性载体的药物及其生产方法，该方法包括使一种或多种式I化合物和/或其药用盐以及(若需要)一种或多种其他治疗上有价值的物质与一种或多种治疗上惰性的载体一起形成盖伦制剂施用形式。
剂量可以在很宽的限值内变化，当然，必须根据每种特定情况下的个体需要进行调整。在口服施用的情况下，用于成年人的剂量可从每天约0.01mg至约1000mg的通式I化合物或相应量的其药用盐改变。日剂量可作为单一剂量施用或以多个分割剂量施用，此外，当发现有指示可超过上限时，也可超过上限。
以下实例例证而不限制本发明，而仅作为本发明的代表。药物制剂便利地包含约1-500mg，特别是1-100mg的式I化合物。根据本发明的组合物的实例是：
实例A
以下组合物的片剂按常规方式进行生产：
Figure BDA0003621438310000511
表2：可能的片剂组成
生产程序
1.将成分1、2、3和4混合并用纯净水制粒。
2.在50℃下干燥颗粒。
3.让颗粒通过合适的研磨设备。
4.添加成分5并混合三分钟；在合适的压机上压制。
实例B-1
生产以下组合物的胶囊：
Figure BDA0003621438310000512
Figure BDA0003621438310000521
表3：可能的胶囊成分组成
生产程序
1.将成分1、2和3在合适的混合器中混合30分钟。
2.添加成分4和5并混合3分钟。
3.填充到合适的胶囊中。
首先在混合器中将式I化合物与乳糖和玉米淀粉混合，然后在粉碎机中混合。使混合物返回混合器；向其中加入滑石粉，并且混合充分。利用机器将混合物装填到合适的胶囊中，例如硬明胶胶囊。
实例B-2
制造具有以下组成的软明胶胶囊：
成分 mg/胶囊
式I化合物 5
黄蜡 8
氢化大豆油 8
部分氢化的植物油 34
大豆油 110
总计 165
表4：可能的软明胶胶囊成分组成
成分 mg/胶囊
明胶 75
甘油85％ 32
Karion 83 8(干物质)
二氧化钛 0.4
氧化铁黄 1.1
总计 116.5
表5：可能的软明胶胶囊组成
生产程序
将式I化合物溶解在其他成分的温热熔体中，并将混合物填充到适宜尺寸的软明胶胶囊中。根据一般程序处理填充的软明胶胶囊。
实例C
制造具有以下组成的栓剂：
成分 mg/栓
式I化合物 15
栓基质 1285
总计 1300
表6：可能的栓剂组成
生产程序
在玻璃或钢容器中将栓基质熔融，混合充分并冷却至45℃。此时，向其中加入式I化合物的细粉末并搅拌，直到该化合物完全分散为止。将混合物倒入合适尺寸的栓模具内，静置冷却；然后从模具中移除栓剂并独立包装在蜡纸或金属箔中。
实例D
生产以下组合物的注射液：
成分 mg/注射溶液
式I化合物 3
聚乙二醇400 150
乙酸 适量添加至pH为5.0
注射溶液用水 添加至1.0ml
表7：可能的注射溶液组成
生产程序
将式I化合物溶解在聚乙二醇400和注射用水(部分)的混合物中。用乙酸将pH调节至5.0。通过加入剩余量的水将体积调节至1.0ml。过滤溶液，使用适当的过量投料(overage)将其填充到小瓶中并灭菌。
实例E
制造具有以下组成的袋剂：
Figure BDA0003621438310000531
Figure BDA0003621438310000541
表8：可能的袋剂组成
生产程序
将式I化合物与乳糖、微晶纤维素和羧甲基纤维素钠混合，并与聚乙烯基吡咯烷酮在水中的混合物一起造粒。将颗粒与硬脂酸镁和调味添加剂混合并填充到袋内。
实例
通过参考以下实例将更全面地理解本发明。然而，权利要求不应被解释为限于实施例的范围。
在作为对映体的混合物获得制备实施例的情况下，可以通过本文所述的方法或通过本领域技术人员已知的方法(诸如手性色谱(例如，手性SFC或手性HPLC)或结晶)分离纯对映体。
如果没有另外说明，所有反应实例和中间体在氮气气氛下制备。
SMARCA2 HiBiT和SMARCA4降解测定(细胞)
稳定表达SMARCA2 HiBiT或SMARC4 HiBiT的HT1080细胞系的产生
对于此处描述的双功能降解分子介导的靶蛋白降解的定量细胞降解，HiBiT是使用通过Promega描述的CRISPR介导的HiBiT标记技术在HT1080亲本细胞系中附加到靶向蛋白质SMARCA2或SMARCA4的基因序列。
RNP复合物装配和递送。如前所述，将RNA复合物装配并通过电穿孔递送到细胞中。简而言之，将16g(100pmol)Cas9和10.8g sgRNA在室温下孵育10-15分钟。将细胞重新悬浮在20L SF 4D-nucleofector溶液(Amaxa SF细胞系4D Nucleofector X试剂盒(Lonza，V4XC-2032)中。使用FF-113程序(Amaxa 4D Nucleofector)将RNP复合物和16.6pmol DNA寡核苷酸电穿孔到细胞中。电穿孔后，将细胞在室温下孵育5分钟，然后转移到六孔板中进行培养。在电穿孔后24-48小时，使用
Figure BDA0003621438310000551
HiBiT裂解检测系统分析细胞的插入情况。
裂解HiBiT检测。
Figure BDA0003621438310000552
HiBiT裂解检测系统用于评估每个测试的指导RNA的发光(ACS Chem.Biol.2018,13,467-474)。未经编辑的细胞用作背景的阴性对照。在池中成功检测到HiBiT发光信号后，对细胞池进行单细胞分选(SH800S细胞分选仪，SonyBiotechnology)。仅在细胞培养中进一步扩增产生最高HiBiT发光信号的克隆，并用于SMARCA2 HiBiT和SMARCA4 HiBiT降解测定(细胞)。
1.1材料
SMARCA2 HiBiT和SMARCA4 HiBiT HT1080细胞系如本文所述在内部产生。HT1080亲代细胞系，以及SMARCA2 HiBiT HT1080和SMARCA4 HiBiT HT1080细胞系在以下培养基中常规培养：Earle`s MEM(Gibco,#41090)含有10％的血清(VWR,#97068-085)，并且只能传到第20代。对于该测定，将SMARCA2 HiBiT HT1080和SMARCA4 HiBiT HT1080细胞铺板在含有10％血清(VWR,#97068-085)和1x Glutamax(Gibco,#35050-038)的Earle`s MEM(Gibco,#51200)中进行处理。使用的测定板是
Figure BDA0003621438310000553
384孔平底透明白色聚苯乙烯TC处理的微孔板(Corning#3765)。用于裂解的细胞在
Figure BDA0003621438310000554
HiBiT裂解试剂,
Figure BDA0003621438310000555
Figure BDA0003621438310000556
HiBiT Lytic Detection System,Promega,(#N3050)中。
1.3 SMARCA2 HiBiT和SMARCA4 HiBiT降解测定(细胞)
简而言之，在化合物处理前一天，将细胞以1500个细胞/孔的密度接种到含有10％血清(VWR,#97068-085)和1x Glutamax(Gibco,#35050-038)的Earle`s MEM(Gibco,#51200)的384孔板上。次日，将测试化合物从10μM的最高浓度添加至384孔板，11个点，一式两份半对数滴定。此外，阴性对照细胞仅用媒介物处理。在测定期间(6小时或16小时)将板在37℃和5％CO2下孵育。在所需的孵育时间后，通过添加
Figure BDA0003621438310000557
HiBiT LyticReagent(根据制造商的建议制备并以1:1(v/v)的比例添加到细胞中)裂解细胞。将微孔板在板振荡器上以400rpm的速度摇动2分钟，然后在黑暗中在室温下再孵育10分钟。读数前将白色反光膜贴在384孔板的底部。最后，使用
Figure BDA0003621438310000561
FSX读板器(BMG Labtech，德国)获取发光信号。
在化合物存在下测量的发光响应的量化被标准化为高信号/无降解对照(未经处理的细胞+裂解检测试剂)和低信号/完全降解对照(未经处理的细胞，无裂解检测试剂)。使用4参数逻辑拟合分析数据以生成S型剂量反应曲线。DC50是总细胞SMARCA2或SMARCA4正好有50％被降解时的化合物浓度。Emax，或每种化合物的最大作用，代表化合物处理后残留在细胞中的残余蛋白质的量。
表1
Figure BDA0003621438310000562
Figure BDA0003621438310000571
Figure BDA0003621438310000581
Figure BDA0003621438310000591
Figure BDA0003621438310000601
*用不同的克隆测量的
连接酶1：7-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]庚酸
2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(100mg,0.36mmol,1.0eq)、7-氨基庚酸(79mg,0.54mmol,1.5eq)和N,N-二异丙基乙胺(93mg，0.72mmol，2.0eq)在DMF(10mL)中的混合物在80℃搅拌12h。将混合物真空浓缩，然后在硅胶柱上纯化(庚烷/EtOAc0-100％)(DCM/MeOH 0-100％)，以得到标题化合物(10mg，0.02mmol，4％产率)，为黄色油。MS(ESI)：402.4([M+H]+)。
连接酶2：3-[1-[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚-4-基]哌啶-4-基]丙酸
3-(4-哌啶基)丙酸盐酸盐(2524mg,13mmol,1.2eq)、2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(3000mg,10.8mmol,1eq)、DIPEA(5.68mL,32mmol,3eq)在DMSO(50mL)中的混合物在100℃搅拌16h。将反应混合物倒入水(500mL)中，混合物用EtOAc(200.0mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(250.0mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，并浓缩。将残余物溶解在CAN(30mL)中并搅拌5分钟，然后沉淀出黄色固体，将其过滤并将滤饼在高真空下干燥，以得到标题化合物(2300mg，5.56mmol，49％产率)，为黄色固体。MS(ESI):414.1([M+H+]+)。
连接酶3：9-[4-[[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]甲基]三唑-1-基]壬酸
a)2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(丙-2-炔-1-基氨基)异吲哚啉-1,3-二酮
在密封管中向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(2.5g,9.05mmol)在DMSO(20mL)中的搅拌溶液加入丙-2-炔-1-胺(747mg,13.5mmol,869uL)和DIPEA(5.85g,45.2mmol,7.88mL)。将混合物加热至90℃持续48h。然后将反应冷却至室温并向反应混合物加入冰水，产生固体沉淀。收集黄色固体并在二氧化硅上纯化(己烷/EtOAc6:4)，以得到标题化合物(1.75g，5.5mmol，60％产率，97％纯度)，为亮黄色固体。
b)9-[4-[[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]甲基] 三唑-1-基]壬酸
2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(丙-2-炔-1-基氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.5g,1.53mmol)和9-叠氮基壬酸(384mg,1.83mmol)溶解在DMSO(5mL)中并脱气30分钟。加入五水硫酸铜(II)(388mg,1.53mmol)和抗坏血酸钠(305mg,1.53mmol)并将反应混合物在室温搅拌2小时，用EtOAc和盐水稀释。分离有机层并经硫酸钠干燥，在减压下浓缩。将粗混合物在二氧化硅上纯化(DCM/MeOH 1-10％)，以得到标题化合物(0.22g，409umol，26％产率，95％纯度)，为黄色粘性固体。MS(ESI)：511.40([M+H]+)。
连接酶4：12-[4-[[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]甲基]三唑-1-基]十二烷酸
向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(丙-2-炔-1-基氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(3g,9.64mmol)在THF(60mL)/水(15mL)中的搅拌混合物加入12-叠氮基十二烷酸(2.33g,9.64mmol)、五水硫酸铜(2.41g,9.64mmol)和L-抗坏血酸钠盐(1.91g,9.64mmol)。将混合物在室温搅拌2h，用水(50ml)淬灭并用乙酸乙酯(250ml×2)萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。通过制备型HPLC(FA)纯化粗产物，以得到标题化合物(2.35g，4.20mmol，43％产率，98％纯度)，为黄色固体。MS(ESI)：553.40([M+H]+)。
连接酶5:9-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2,3-二氢-1,3-二氧代-1H-异吲哚-4-基]氨基]-壬酸(CAS:2305936-70-1)
连接酶6：15-[4-[[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]甲基]三唑-1-基]十五烷酸
向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-(丙-2-炔基氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(2.6g,8.35mmol)和15-叠氮基十五烷酸(2.37g,8.35mmol)在THF(50mL)和水(12.5mL)中的搅拌溶液加入(L)-抗坏血酸钠(1.65g,8.35mmol)和五水硫酸铜(2.09g,8.35mmol)。允许混合物在室温搅拌4h。将水加入到反应混合物。将产物用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。通过制备型HPLC(基础)纯化粗材料，以得到标题化合物(3.0g，4.94mmol，59％产率，98％纯度)，为黄色固体。MS(ESI)：595.51([M+H]+)。
连接酶7：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(哌啶-4-基氧基)异吲哚啉-1,3-二酮
a)4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)哌啶-1-甲 酸叔丁酯
于0℃向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(500mg,1.81mmol,Eq:1)和4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(364mg,1.81mmol,Eq:1)在DMSO(4.5ml)中的溶液加入氢化钠(181mg,4.53mmol,Eq:2.5)。然后移除冰浴并将反应在90℃搅拌过夜。将反应倒入20mL 0.5M柠檬酸中，产生带有深灰色沉淀的黑色溶液。将溶液过滤两次，将黑色固体干燥并用于下一步而无需进一步纯化(279mg,34％)。
b)2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(哌啶-4-基氧基)异吲哚啉-1,3-二酮向4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(279.2mg,610μmol,Eq:1)在DCM(4.07ml)中的搅拌溶液加入在二噁烷中的4M HCl(1.53ml,6.1mmol,Eq:10)，并将混合物在室温搅拌过夜。将反应混合物用9:1DCM:MeOH稀释并用饱和NaHCO3洗涤，经Na2SO4干燥，真空浓缩，以得到游离碱，为棕色固体。粗产物在胺改性的硅胶(DCM/DCM:MeOH 4:1 0-70)上纯化，以得到标题化合物，为浅绿色固体(37mg，17％产率)。
连接酶8：2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-(4-哌啶基氧基)-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮(CAS:2222116-10-9)
连接酶9:8-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2,3-二氢-1,3-二氧代-1H-异吲哚-4-基]氨基]-辛酸(CAS:2225940-51-0)
连接酶10:6-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2,3-二氢-1,3-二氧代-1H-异吲哚-4-基]氨基]-己酸(CAS:2225940-49-6)
连接酶11：1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]哌啶-4-甲酸
异烟酸(1683mg,13.0mmol,1.2eq)、2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(3000mg,10.8mmol,1eq)、DIPEA(5.68mL,32.5mmol,3eq)在DMSO(50mL)中的混合物在100℃搅拌16h。添加水，将混合物用EtOAc萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。在硅胶(PE/EtOAc 10-100％)上纯化残余物，以得到标题化合物(560mg，1.4mmol，12％产率)，为橙色固体。
连接酶12：3-[1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]-4-哌啶基]丙酸
类似于连接酶11，使用3-(4-哌啶基)丙酸盐酸盐(2.52g,13.03mmol,1.2eq)制备标题化合物。通过研磨(CH3CN,60mL)纯化产物，以得到黄色固体(82％产率)。
连接酶13：2-[1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]-4-哌啶基]乙酸
类似于连接酶11，使用2-(4-哌啶基)乙酸盐酸盐(2.34g,13.03mmol,1.2eq)制备标题化合物。通过研磨(CH3CN,60mL)纯化产物，以得到黄色固体(52％产率)。
连接酶14：4-[[2-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2,3-二氢-1,3-二氧代-1H-异吲哚-4-基]氧基]乙酰基]氨基]-丁酸(CAS:2308035-51-8)
连接酶15：1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]哌啶-4-甲酸
类似于连接酶11，使用2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(3.0g,10.86mmol,1eq)和异烟酸(1.68g,13.03mmol,1.2eq)制备标题化合物。通过研磨(CH3CN,60mL)纯化产物，以得到绿色固体(67％产率)。
连接酶16：2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-(4-哌啶基氨基)-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮(CAS:2154357-05-6)
连接酶17：2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-(甲基-4-哌啶基氨基)-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮(CAS:2154357-11-4)
连接酶18：2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-(哌嗪-1-基甲基)异吲哚啉-1,3-二酮盐酸盐
a)3-(溴甲基)苯-1,2-二甲酸二甲酯
向3-甲基苯-1,2-二甲酸二甲酯(6.04g,29.01mmol,1eq)和N-溴代琥珀酰亚胺(5.42g,30.46mmol,1.05eq)在乙腈(50mL)中的溶液加入2,2'-偶氮二(2-甲基丙腈)(0.95g,5.8mmol,0.200eq)，然后将混合物于80℃在氮气下搅拌12h。加入EtOAc，并将反应用水洗涤。将有机相在真空下浓缩并在硅胶(PE/EtOAc 20-50％)上纯化，以产生标题化合物(10.6g，36.9mmol，114％产率)，为黄色固体。
b)3-[(4-叔丁氧基羰基哌嗪-1-基)甲基]苯-1,2-二甲酸二甲酯
向1-Boc-哌嗪(7.14g,38.31mmol,1.1eq)在DMSO(100mL)中的溶液先后加入DIPEA(18.2mL,104mmol,3eq)和3-(溴甲基)苯-1,2-二甲酸二甲酯(10.0g,34mmol,1eq)。将混合物在90℃搅拌3h，真空浓缩。加入EtOAc，并将反应用水洗涤。将有机相在真空下浓缩成标题化合物(10g，25.4mmol，73％产率)，为黄色油。
c)3-[(4-叔丁氧基羰基哌嗪-1-基)甲基]邻苯二甲酸
向3-[(4-叔丁氧基羰基哌嗪-1-基)甲基]苯-1,2-二甲酸二甲酯(10.0g,25.48mmol,1eq)在THF(80mL)中的溶液加入氢氧化钠(10.19g,254.8mmol,10eq)和水(20mL)。将混合物在50℃搅拌3h。用0.5M HCl将pH调节至4-5，并将混合物真空浓缩，以得到标题化合物(9g，24.7mmol，91％产率)，为白色固体。
d)4-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]甲基]哌嗪-1-甲 酸叔丁酯
向3-[(4-叔丁氧基羰基哌嗪-1-基)甲基]邻苯二甲酸盐酸盐(4.5g,11.2mmol,1eq)在吡啶(45mL)中的溶液加入3-氨基哌啶-2,6-二酮(1.86g,11.2mmol,1eq)。将混合物在80℃搅拌2h。将反应混合物在真空下浓缩。通过制备型-HPLC(FA)纯化残余物，以产生标题化合物(1.3g，2.85mmol，24％产率)，为灰色固体。
e)2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-(哌嗪-1-基甲基)异吲哚啉-1,3-二酮盐酸盐
于0℃向4-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]甲基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.2g,2.63mmol,1eq)在DCM(30mL)中的溶液加入在EtOAc中的4N HCl(30mL,2.63mmol,1eq)。将混合物于0℃搅拌2h，于10℃在真空下浓缩，以产生标题化合物(970mg，2.47mmol，93％产率)，为灰色固体。
连接酶19：14-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]哌嗪-1-基]-14-氧代-十四烷酸
a)4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
将4-(4-氨基苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(2.5g,9.0mmol)和3-溴哌啶-2,6-二酮(2.94g,15.3mmol)溶于DMF(20mL)中。在室温向其中加入碳酸氢钠(2.27g,27.04mmol,1.05mL)。将所得混合物在80℃搅拌24h。然后将反应混合物冷却至室温并用水(80mL)稀释并搅拌半小时。沉淀形成并通过过滤收集。粗材料在二氧化硅(PE/EtOAc 0-100)上纯化，以产生标题化合物(2.1g，4.8mmol，53％产率，89％纯度)，为灰色固体。MS(ESI)：389.0([M+H]+)。
b)3-((4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮
将4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(4.2g,10.8mmol)溶解在DCM(15mL)中。于0℃向其中加入在1,4-二噁烷(10.8mmol,15mL)中的4.5MHCl，并将所得混合物在室温搅拌1h。将反应混合物在减压下浓缩，以得到标题化合物(3.8g，8.70mmol，80％产率)，为灰色固体。MS(ESI)：289.0([M+H]+)。
c)14-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-14-氧代十四烷酸 叔丁酯
向3-(4-哌嗪-1-基苯胺基)哌啶-2,6-二酮(1.0g,1.59mmol)和14-叔丁氧基-14-氧代-十四烷酸(498mg,1.59mmol)在DMF(15mL)中的搅拌溶液加入DIPEA(1.23g,9.52mmol,1.66mL)。将反应混合物在室温搅拌5分钟。添加PyBOP(990mg,1.90mmol)并将反应混合物搅拌16h。使用Genevac蒸发DMF，并且粗残余物通过制备型HPLC纯化，以得到标题化合物(0.7g，849umol，54％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：585.3([M+H]+)。
d)14-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)-14-氧代十四烷 酸,2,2,2-三氟乙酸盐
于室温向14-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]哌嗪-1-基]-14-氧代十四烷酸叔丁酯(0.25g,427umol)在DCM(10mL)中的搅拌溶液添加三氟乙酸(974mg,8.55mmol,658uL)。将混合物在室温搅拌3h，在减压下浓缩。将粗化合物与乙醚一起研磨成标题化合物(200mg，253umol，59％产率，96％纯度)，为灰色固体。MS(ESI)：527.3([M-H]-)。
连接酶20：9-[4-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]哌嗪-1-基]壬酸
a)4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-甲酸叔丁 酯
于室温在氮气气氛下向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(0.1g,362umol)在二甲基乙酰胺(1.0mL)中的溶液先后加入哌嗪-1-甲酸叔丁酯(67mg,362umol)和DIPEA(116mg,905umol,157uL)。将反应混合物在90℃下加热12h。将反应混合物冷却至室温，加入水中，过滤所得固体并干燥，以得到标题化合物(25.0mg，56.5umol，15％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：386.9([M-57+H]+)。
b)2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮
于0℃向4-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(25.0mg,56.5umol)在1,4-二噁烷(0.25mL)中的溶液加入在二噁烷中的4M HCl(0.25g,56.5umol)。将反应混合物升温至室温并搅拌2h。将反应混合物在减压下浓缩，并与二氯甲烷共蒸馏，以得到标题化合物(20.0mg，58umol，103％产率)，为浅棕色半固体HCl盐。MS(ESI)：343.4([M+H]+)。
c)9-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)壬 酸甲酯
于室温在氮气气氛下向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-哌嗪-1-基-异吲哚啉-1,3-二酮(0.27g,788umol)在二甲基甲酰胺(3mL)中的溶液先后加入三乙胺(399mg,3.94mmol,549uL)和9-溴壬酸甲酯(217mg,867umol)。将反应混合物在80℃加热16h。将反应混合物冷却至室温，加入水中并用EtOAc萃取。将有机层用水、盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。在二氧化硅(PE/EtOAc 0-60％)上纯化粗残余物，以得到标题化合物(0.11g，214umol，27％产率)，为棕色液体。MS(ESI)：513.8([M+H]+)。
d)9-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)壬 酸
于室温向9-[4-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]哌嗪-1-基]壬酸甲酯(0.11g,214umol)在DCM(1.1mL)中的溶液添加三甲基氢氧化锡(193mg,1.07mmol)。将反应混合物在80℃加热16h。将反应混合物混合物冷却至室温，在减压条件下浓缩。通过制备型-HPLC纯化粗残余物，以得到标题化合物(0.04g，80umol，37％产率)，为黄色半固体。MS(ESI)：499.3([M+H]+)。
连接酶21：10-[4-[[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]甲基]三唑-1-基]癸酸
于室温向10-叠氮基十二烷酸(110mg,515umol)和2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-(丙-2-炔基氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(160mg,515umol)在THF(3mL)和水(0.3mL)中的混合物先后加入抗坏血酸钠(102mg,515umol)和硫酸铜(138mg,515umol)。将所得混合物在室温搅拌16h，用水稀释并用EtOAc萃取。将有机层用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。在二氧化硅(DCM/MeOH 0-15％)上纯化粗残余物，以得到标题化合物(65mg，123umol，24％产率)，为浅黄色固体。MS(ESI)：525.2([M+H]+)。
连接酶22：11-[4-[[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]甲基]三唑-1-基]十一酸
于室温向11-叠氮基十一烷酸(95.0mg,417umol)和2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-(丙-2-炔基氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(130mg,417umol)在THF(3mL)和水(0.3mL)中的混合物先后加入抗坏血酸钠(165mg,835umol)和硫酸铜(223mg,835umol)。将反应混合物在室温搅拌16h，用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机层用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。在二氧化硅(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗残余物，以得到标题化合物(60mg，111umol，26％产率)，为浅黄色固体。MS(ESI)：539.2([M+H]+)。
连接酶23:10-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2,3-二氢-1,3-二氧代-1H-异吲哚-4-基]氨基]-癸酸(CAS:2243000-24-8)
连接酶24：2-[1-[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚-5-基]哌啶-4-基]乙酸
类似于连接酶11，使用2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-氟-异吲哚啉-1,3-二酮和2-(4-哌啶基)乙酸盐酸盐制备标题化合物。通过研磨(CH3CN,60mL)纯化产物，以得到黄色固体(47％产率)。MS ESI:400.3([M+H+]+)。
连接酶25：5-[4-(2-溴乙基)-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
a)2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-[4-(2-羟乙基)-1-哌啶基]异吲哚啉-1,3-二酮
类似于连接酶11，使用2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(3.0g,10.86mmol,1eq)和4-哌啶乙醇(1.68g,13.03mmol,1.2eq)制备标题化合物。在胺改性的硅胶上纯化产物，以得到黄色油(39％产率)。
b)5-[4-(2-溴乙基)-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-[4-(2-羟乙基)-1-哌啶基]异吲哚啉-1,3-二酮(1600mg,4.15mmol,1eq)在THF(1mL)中的混合物加入四溴化碳(2753mg,8.3mmol,2eq)、三苯膦(2177mg,8.3mmol,2eq)。将混合物在25℃搅拌12h。将混合物浓缩，通过制备型-HPLC纯化，以得到标题化合物(600mg，1.34mmol，58％产率)，为黄色固体。
连接酶26：5-[4-(2-溴乙氧基)-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
a)2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-[4-(2-羟基乙氧基)-1-哌啶基]异吲哚啉-1,3- 二酮
类似于连接酶11，使用2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-氟-异吲哚啉-1,3-二酮和2-(4-哌啶基氧基)乙醇制备标题化合物。在胺改性的硅胶上纯化产物，以得到黄色固体(38％产率)。
b)5-[4-(2-溴乙氧基)-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二 酮
于25℃向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-[4-(2-羟基乙氧基)-1-哌啶基]异吲哚啉-1,3-二酮(1.0g,2.49mmol,1eq)在DCM(20mL)中的溶液加入四溴化碳(1.65g,4.98mmol,2eq)，在加入三苯膦(1.31g,4.98mmol,2eq)后于25℃搅拌3h。将溶液浓缩并在硅胶(PE/EtOAc 1:1)、制备型-HPLC(中性)上纯化，以得到标题化合物(503mg，1.08mmol，40％产率)，为黄色固体。
连接酶27：5-[4-(3-溴丙氧基)-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
a)2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-[4-(3-羟基丙氧基)-1-哌啶基]异吲哚啉-1,3- 二酮
类似于连接酶11，使用2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-氟-异吲哚啉-1,3-二酮和3-(4-哌啶基氧基)丙-1-醇制备标题化合物。在胺改性的硅胶上纯化产物，以得到黄色油(61％产率)。
b)5-[4-(3-溴丙氧基)-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二 酮
向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-[4-(3-羟基丙氧基)-1-哌啶基]异吲哚啉-1,3-二酮(2.1g,5.05mmol,1eq)在DCM(30mL)中的溶液加入四溴化碳(3.35g,10.11mmol,2eq)，在向该溶液加入三苯膦(2.65g,10.11mmol,2eq)后于25℃搅拌2h。将溶液浓缩，并通过制备型-HPLC(中性)纯化，以得到标题化合物(659mg，1.38mmol，26％产率)，为黄色固体。
连接酶28：9-[4-[[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]甲基]三唑-1-基]壬醛
a)2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(((1-(9-羟基壬基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲 基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮
于室温向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-(丙-2-炔基氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(800mg,2.57mmol)和9-叠氮基壬-1-醇(476mg,2.57mmol)在THF(8mL)和水(1.5mL)中的混合物先后加入硫酸铜(820mg,5.14mmol,227uL)和抗坏血酸钠(1.02g,5.14mmol)。将所得混合物在室温搅拌16h，用水稀释并用EtOAc萃取。将有机层用盐水溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。粗残余物在二氧化硅(DCM/MeOH 0-15％)上，以得到标题化合物(390mg，785umol，30％产率)，为浅黄色固体。MS(ESI)：497.0([M+H]+)。
b)9-[4-[[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]甲基] 三唑-1-基]壬醛
于0℃在氮气气氛下向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-[[1-(9-羟基壬基)三唑-4-基]甲基氨基]异吲哚啉-1,3-二酮(390mg,785umol)在DCM(6mL)中的溶液加入戴斯-马丁试剂(499mg,1.18mmol)。将反应混合物升温至室温并搅拌3h，通过硅藻土垫过滤并用二氯甲烷洗涤。所得滤液用盐水溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，以得到标题化合物(350mg，636umol，81％产率)，为灰白色半固体。MS(ESI)：494.9([M+H]+)。
连接酶29：9-[4-[1-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]-1-甲基-乙基]三唑-1基]壬醛
a)2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((2-甲基丁-3-炔-2-基)氨基)异吲哚啉-1,3-二 酮
于室温在氮气气氛下向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(0.5g,1.81mmol)在DMSO(5mL)中的溶液先后加入DIPEA(701mg,5.43mmol,945uL)和2-甲基丁-3-炔-2-胺(376mg，4.53mmol,476uL)。将反应混合物在80℃加热16h。将反应混合物冷却至室温，加入水中。过滤所得固体，用水洗涤并干燥，以得到标题化合物(0.22g,36％)，为灰白色固体。MS(ESI)：339.9([M+H]+)。
b)2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((2-(1-(9-羟基壬基)-1H-1,2,3-三唑-4-基) 丙-2-基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮
于室温向4-(1,1-二甲基丙-2-炔基氨基)-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.22g,648umol)和9-叠氮基壬-1-醇(120mg,648umol)在THF(6mL)和水(1.5mL)中的溶液先后加入硫酸铜(206mg,1.30mmol,57uL)和抗坏血酸钠(256mg,1.30mmol)。将反应混合物在室温搅拌16h，用EtOAc稀释，用水和盐水溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，以得到标题化合物(0.12g，228umol，35％产率)，为淡黄色固体。MS(ESI)：522.69([M-H]-)。
c)9-[4-[1-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]-1- 甲基-乙基]三唑-1基]壬醛
于0℃在氮气气氛下向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-[[1-[1-(9-羟基壬基)三唑-4-基]-1-甲基-乙基]氨基]异吲哚啉-1,3-二酮(0.12g,228umol)在DCM(5mL)中的溶液加入戴斯-马丁试剂(145mg,343umol)。将反应混合物加热至室温，并且搅拌1小时。通过硅藻土垫过滤反应混合物，并用二氯甲烷洗涤。将所得滤液用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。在二氧化硅(DCM/MeOH 0-5％)上纯化粗残余物，以得到标题化合物(0.06g，114umol，50％产率)，为浅黄色固体。MS(ESI)：521.3([M-H]-)。
连接酶30：9-[4-[1-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]乙基]三唑-1-基]壬醛
a)4-(丁-3-炔-2-基氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
于室温在氮气气氛下向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(1.50g,5.43mmol)在DMSO(15.0mL)中的溶液加入DIPEA(1.75g,13.5mmol,2.36mL)和丁-3-炔-2-胺(562mg，8.15mmol,521uL)。将反应混合物在80℃加热24h。将反应混合物冷却至室温，加入水中，过滤所得固体，用水洗涤并干燥，以得到标题化合物(880mg，2.71mmol，49％产率)，为浅黄色固体。MS(ESI)：326.3([M+H]+)。
b)2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((1-(1-(9-羟基壬基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)乙 基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮
于室温向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-(1-甲基丙-2-炔氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(880mg,2.71mmol)和9-叠氮基壬-1-醇(501mg,2.71mmol)在DMSO(3.0mL)中的混合物加入在水(0.3mL)中的抗坏血酸钠(32.15mg,162umol)和硫酸铜(8.64mg,54.1umol)。将反应混合物在室温搅拌3h。将反应混合物加入水中并用含5％甲醇的二氯甲烷萃取。将有机层用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。在二氧化硅(DCM/MeOH 0-15％)上纯化粗残余物，以得到标题化合物(780mg，1.53mmol，56％产率)，为浅黄色半固体。MS(ESI)：511.1([M+H]+)。
c)9-[4-[1-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]乙 基]三唑-1-基]壬醛
于0℃在氮气气氛下向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-[1-[1-(9-羟基壬基)三唑-4-基]乙基氨基]异吲哚啉-1,3-二酮(300mg,587umol)在DCM(6.0mL)中的溶液加入氯铬酸吡啶鎓(189mg,881umol)。将反应混合物升温至室温并搅拌3h。通过硅藻土床过滤反应混合物，并用DCM洗涤。所得滤液用水、盐水溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，以得到标题化合物(190mg，272umol，46％产率)，为浅黄色半固体。MS(ESI)：509.3([M+H]+)。
连接酶31：9-[4-[1-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]环丙基]三唑-1-基]壬醛
a)2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((1-乙炔基环丙基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮
于室温在氮气气氛下向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(600mg,2.17mmol)和1-乙炔基环丙胺(306mg，2.61mmol，HCl-盐)在N-甲基-2-吡咯烷酮(5.0mL)中的混合物加入DIPEA(1.40g,10.86mmol,1.89mL)。将反应混合物在80℃加热24h。将反应混合物冷却至室温，加入水中，过滤所得固体，用乙醚洗涤并干燥，以得到标题化合物(680mg，201umol，9％产率)，为浅黄色固体。MS(ESI)：338.3([M+H]+)。
b)2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((1-(1-(9-羟基壬基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)环 丙基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮
于室温向9-叠氮基壬-1-醇(37.0mg,199umol)和2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-[(1-乙炔基环丙基)氨基]异吲哚啉-1,3-二酮(673mg,199umol)在THF(4.0mL)和水(0.6mL)中的混合物先后加入抗坏血酸钠(79.13mg,399umol)和硫酸铜(106mg,399umol)。将反应混合物在室温搅拌16h。用水稀释反应混合物，用乙酸乙酯萃取。将有机层用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。在二氧化硅(DCM/MeOH 0-15％)上纯化粗残余物，以得到标题化合物(220mg，101umol，50％产率)，为淡黄色固体。MS(ESI)：522.9([M+H]+)。
c)9-[4-[1-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]环 丙基]三唑-1-基]壬醛
于0℃在氮气气氛下向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-[[1-[1-(9-羟基壬基)三唑-4-基]环丙基]氨基]异吲哚啉-1,3-二酮(220mg,101umol)在DCM(5.0mL)中的溶液加入戴斯-马丁试剂(64mg,151umol)。将所得混合物升温至室温并搅拌3h。反应混合物通过硅藻土床过滤，用DCM洗涤，将所得滤液用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。在二氧化硅(DCM/MeOH 0-15％)上纯化粗残余物，以得到标题化合物(120mg，87umol，86％产率)，为淡黄色固体。MS(ESI)：521.0([M+H]+)。
连接酶32：9-[4-[1-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]丙基]三唑-1-基]壬醛
a)2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(戊-1-炔-3-基氨基)异吲哚啉-1,3-二酮
于室温在氮气气氛下向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(500mg,1.81mmol)在DMSO(5.0mL)中的溶液先后加入DIPEA(701mg,5.43mmol,945uL)和戊-1-炔-3-胺(300mg,3.62mmol)。将反应混合物在80℃加热16h。将反应混合物冷却至室温，加入水中，过滤所得固体并干燥，以得到标题化合物(210mg，446umol，24％产率)，为淡黄色固体。MS(ESI)：340.0([M+H]+)。
b)2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((1-(1-(9-羟基壬基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)丙 基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮
于室温向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-(1-乙基丙-2-炔氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.21g,618umol)和9-叠氮基壬-1-醇(114mg,618umol)在DMSO(2.0mL)中的混合物加入在水(0.5mL)中的硫酸铜(29.6mg,185umol,8.23uL)和抗坏血酸钠(12.2mg,61.8umol)。将反应混合物在室温搅拌2h。用水稀释反应混合物并用乙酸乙酯萃取。将有机层用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。在二氧化硅(PE/EtOAc 0-100％)上纯化粗残余物，以得到标题化合物(0.18g，328umol，53％产率)，为浅黄色固体。MS(ESI)：525.2([M+H]+)。
c)9-[4-[1-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]丙 基]三唑-1-基]壬醛
于0℃在氮气气氛下向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-[1-[1-(9-羟基壬基)三唑-4-基]丙基氨基]异吲哚啉-1,3-二酮(0.18g,343umol)在DCM(5.0mL)中的溶液加入戴斯-马丁试剂(218mg,514umol)。将反应混合物在室温搅拌16h。通过硅藻土床过滤反应混合物，用二氯甲烷洗涤。所得滤液用水、盐水溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，以得到标题化合物(80mg，56.9umol，37％产率)，为浅黄色固体。MS(ESI)：523.1([M+H]+)。
连接酶33：5-[4-(溴乙基)-1-哌啶基]-2-[(3RS)-2,6-二氧代-3-哌啶基]异吲哚啉-1,3-二酮
向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-[4-(羟甲基)-1-哌啶基]异吲哚啉-1,3-二酮(1.97g,5.31mmol,1eq,CAS:2229717-49-9)在THF(20mL)中的混合物加入四溴化碳(3.52g,10.62mmol,2eq)、三苯膦(2.79g,10.62mmol,2eq)。将混合物在25℃搅拌12h。将混合物真空浓缩。通过制备型-HPLC纯化粗产物，以得到标题化合物(853mg，1.96mmol，36％产率)，为黄色固体。
连接酶34：9-[4-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]氧基-1-哌啶基]壬酸
a)4-((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)氧基)邻苯二甲酸
于0℃向5-氟异苯并呋喃-1,3-二酮(500mg,3.01mmol)和4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(666mg,3.31mmol)在DMSO(9.0mL)中的混合物按部分加入氢化钠(在油分散体中60％)(138.4mg,6.02mmol)，随后加入DIPEA(778mg,6.02mmol,1.05mL)。将反应混合物在90℃下加热2h。将反应混合物冷却至室温，用氯化铵水溶液淬灭并用EtOAc萃取。有机层用水、盐水溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，以得到标题化合物(300mg，683umol，22％产率)，为灰白色固体，MS(ESI):364.0([M-H]-)。
b)4-((1,3-二氧代-1,3-二氢氟异苯并呋喃-5-基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将4-[(1-叔丁氧基羰基-4-哌啶基)氧基]邻苯二甲酸(300mg,821umol)和乙酰乙酸(83.8mg,821umol,77uL)在DCM(5.0mL)中的混合物于50℃加热4h。将反应混合物混合物冷却至室温并在减压条件下浓缩。在二氧化硅(PE/EtOAc 0-100％)上纯化粗残余物，以得到标题化合物(55.0mg，142umol，17％产率)，为灰白色固体。MS(ESI)：525.2([M+H]+)。
c)2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(哌啶-4-基氧基)异吲哚啉-1,3-二酮
将4-(1,3-二氧代异苯并呋喃-5-基)氧基哌啶-1-甲酸叔丁酯(50.14mg,144umol)、3-氨基哌啶-2,6-二酮(23.76mg，144umol，HCl-盐)和乙酸钠(29.6mg,360umol,19.35uL)在乙酸(0.5mL)中的混合物于100℃的密封管中加热16h。将反应混合物混合物冷却至室温并在减压条件下浓缩。将粗化合物溶解在乙酸乙酯中并用碳酸氢钠水溶液洗涤。将有机层用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。在二氧化硅(PE/EtOAc 0-100％)上纯化粗残余物，以得到标题化合物(43.0mg，120umol，83％产率)，为灰白色半固体。MS(ESI)：358.1([M+H]+)。
d)9-[4-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]氧基-1-哌啶 基]壬酸
于室温在氮气气氛下向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-(4-哌啶基氧基)异吲哚啉-1,3-二酮(43.0mg,120umol)和9-溴壬酸(31.39mg,132umol)在DMF(0.8mL)中的混合物加入DIPEA(46.6mg,360umol,62.8uL)。将反应混合物在80℃加热16h。将反应混合物冷却至室温，用水稀释，并用乙酸乙酯萃取。将有机层用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。在二氧化硅(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗残余物，以得到标题化合物(19.0mg，37umol，30％产率)，为灰白色固体。MS(ESI)：514.2([M+H]+)。
连接酶35：2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氧基]苯基]-1-哌啶基]乙酸盐酸盐
a)2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氧基)苯基)哌啶-1-基)乙酸叔丁酯
向在DMF(5.13ml)中的连接酶38(500mg,1.54mmol,Eq:1)加入2-溴乙酸叔丁酯(300mg,1.54mmol,Eq:1)和DIPEA(796mg,1.08ml,6.16mmol,Eq:4)。将反应在60℃加热1h，在水和EtOAc之间分配。用EtOAc萃取水层。将有机层合并，用饱和NaCl洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，以得到标题化合物(699mg,90％)，为黄色固体。
b)2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氧基]苯基]-1-哌啶基]乙酸盐酸盐
向在EtOAc(6.95ml)中的2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氧基)苯基)哌啶-1-基)乙酸叔丁酯(699mg,1.39mmol,Eq:1)加入在二噁烷中的4M HCl(6.95ml,27.8mmol,Eq:20)，并RM在RT搅拌过夜。通过蒸发除去挥发物。产物已沉淀，因此其通过玻璃纤维纸过滤，用冷的EtOA洗涤并在HV下干燥，以得到标题化合物(532.2mg,96％)，为黄色固体。
连接酶36：9-[(3S)-3-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]吡咯烷-1-基]-9-氧代-壬酸
连接酶36的制备与连接酶11类似。
连接酶37：2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-(1-哌嗪基)-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮(CAS:2154342-61-5)
连接酶38：3-(4-(哌啶-4-基)苯氧基)哌啶-2,6-二酮盐酸盐
a)4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氧基]苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯
向1-BOC-4-p-羟苯基哌啶(5300mg,19.1mmol,1eq)在DMF(150mL)中的溶液加入NaH(1910mg,47.7mmol,2.5eq)，然后加入3-溴哌啶-2,6-二酮(4769mg,24.8mmol,1.3eq)，将混合物在90℃搅拌12小时。将其过滤并浓缩。通过制备型-HPLC(FA)纯化残余物，以得到标题化合物(4500mg，11.5mmol，60％产率)，为浅黄色固体。
b)3-(4-(哌啶-4-基)苯氧基)哌啶-2,6-二酮盐酸盐
向4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氧基]苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(4000mg,10.3mmol,1eq)在EtOAc(89mL)中的溶液加入在EtOAc中的HCl(2.57mL,10.3mmol,1eq)，将混合物在25℃搅拌1h。将其过滤，并且滤饼通过制备型-HPLC(HCl)纯化，以得到标题化合物(1626mg，5.64mmol，47％产率)，为白色固体。
连接酶39：4-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氧基)苯基)哌啶-1-基)丁酸盐酸盐
a)4-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氧基)苯基)哌啶-1-基)丁酸叔丁酯
连接酶38(75mg,231μmol,Eq:1)与DMF(770μl)和4-溴丁酸叔丁酯(77.3mg,61.4μl,346μmol,Eq:1.5)合并。依次加入DIPEA(119mg,161μl,924μmol,Eq:4)并将反应混合物搅拌2h。加入碘化钾(38.3mg,231μmol,Eq:1)，并且将反应搅拌16小时。将反应混合物在水和EtOAc之间分配。用EtOAc萃取水层。将有机层合并，用饱和NaCl洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。粗产物在硅胶(DCM/MeOH 0-15％)上纯化，以产生标题化合物，为浅红色固体(43mg,42％)。
b)4-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氧基)苯基)哌啶-1-基)丁酸盐酸盐
将4-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氧基)苯基)哌啶-1-基)丁酸叔丁酯(40mg,92.9μmol,Eq:1)溶解在EtOAc(1.5ml)中。加入在二噁烷中的4N HCl(465μl,1.86mmol,Eq:20)并将反应混合物搅拌16h。将反应真空浓缩，以产生标题化合物(33.3g,93％)，为灰白色粉末。
连接酶40：3-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氧基)苯基)哌啶-1-基)丙酸
a)3-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氧基)苯基)哌啶-1-基)丙酸叔丁酯
连接酶38(151mg,465μmol,Eq:1)悬浮于DMF(1.55ml)中。依次加入DIPEA(300mg,406μl,2.32mmol,Eq:5)和3-溴丙酸叔丁酯(117mg，93.1μl,558μmol，Eq：1.2)，并且将反应在80℃搅拌24小时。加入额外的3-溴丙酸叔丁酯(19.4mg,15.5μl,93μmol,Eq：0.2)，并且将反应在80℃搅拌7小时。加入水，并通过过滤收集沉淀，用水和少量乙醚洗涤，然后真空干燥。分离有机滤液和水性滤液，并将水层用EtOAc(3x 20mL)萃取。合并的醚和EtOAc层用盐水(50mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并真空浓缩成80mg棕色固体。合并的有机萃取物在硅胶(DCM/MeOH0-7％)上纯化，以得到标题化合物，为浅棕色固体(131mg)。
b)3-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氧基)苯基)哌啶-1-基)丙酸
将3-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氧基)苯基)哌啶-1-基)丙酸叔丁酯(120mg,288μmol,Eq:1)溶解在DCM(1ml)中，并加入三氟乙酸(1.48g,1mL,13mmol,Eq:45.1)。将反应在室温搅拌4小时，蒸发溶剂并通过制备型HPLC纯化，以得到标题化合物，为无色固体(46mg，96％纯度，32％产率)。
连接酶41：3-[4-(1-哌嗪基)苯氧基]-2,6-哌啶二酮(CAS:2259852-17-8)
连接酶42：2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氧基]苯基]哌嗪-1-基]乙酸；2,2,2-三氟乙酸
a)2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙酸叔丁酯
连接酶41(150mg,460μmol,Eq:1)、2-溴乙酸叔丁酯(180mg,136μl,921μmol,Eq:2)和DIPEA(357mg,482μl,2.76mmol,Eq:6)在DMF(2.5ml)中的混合物在室温搅拌2h。将反应混合物直接在isolute上蒸发。在硅胶(DCM/MeOH 0-7％)上纯化粗材料，以产生标题化合物(138mg，342μmol，74％产率)，为浅黄色油。
b)与2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙酸化合的2,2, 2-三氟乙酸
将2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙酸叔丁酯(138mg,342μmol,Eq:1)溶解在DCM(3ml)中，并加入TFA(780mg,527μl,6.84mmol,Eq:20)。将rm在室温搅拌过夜。将粗反应混合物真空浓缩并在hv上干燥过夜，以产生标题化合物(215mg，340μmol，99％产率)，为浅黄色油。
连接酶43：3-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]丙酸(CAS:2225940-46-3)
连接酶44：1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]氮杂环丁烷-3-甲酸
于室温向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(30mg,109μmol,1.0eq,CAS:835616-61-0)在DMSO(0.5mL)中的搅拌溶液加入氮杂环丁烷-3-甲酸(11mg,109μmol,1.0eq)和DIPEA(28.1mg,37.9μL,217μmol,2.0eq)。将反应混合物在90℃搅拌过夜并直接用于下一步。
连接酶45：9-[4-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氧基甲基]三唑-1-基]壬醛
a)2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(((1-(9-羟基壬基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲 基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮
于室温向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-丙-2-炔基氧基-异吲哚啉-1,3-二酮(0.2g,640umol)和9-叠氮基壬-1-醇(142mg,768umol)在THF(4.0mL)和水(1.0mL)中的混合物先后加入抗坏血酸钠(253mg,1.28mmol)和硫酸铜(204mg,1.28mmol,56uL)。将反应混合物在室温搅拌3h。将反应混合物加入水中并在二氯甲烷中用5％甲醇萃取。将有机层用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。在二氧化硅(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗残余物，以得到标题化合物(0.18g，320umol，50％产率)，为灰白色固体。MS(ESI)：498.1([M+H]+)。
b)9-[4-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氧基甲基]三 唑-1-基]壬醛
于0℃在氮气气氛下向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-[[1-(9-羟基壬基)三唑-4-基]甲氧基]异吲哚啉-1,3-二酮(120mg,241umol)在DCM(4.0mL)中的溶液加入戴斯-马丁试剂(204mg,482umol)。将反应混合物升温至室温并搅拌2h。通过硅藻土床过滤反应混合物并用DCM洗涤。将所得滤液用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。在二氧化硅(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗残余物，以得到标题化合物(55.0mg，96umol，39％产率)，为灰白色固体。MS(ESI)：496.3([M+H]+)。
连接酶46：5-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基)-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮(CAS:2226301-50-2)
连接酶47:2-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2,3-二氢-1,3-二氧代-1H-异吲哚-4-基]氧基]乙酸(CAS:1061605-21-7)
连接酶48：2-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]氧乙酸
a)4-羟基苯-1,2-二甲酸二甲酯
向4-羟基邻苯二甲酸(20.0g,109mmol,1eq)在甲醇(500mL)中的冰冷溶液历经5min逐滴加入亚硫酰氯(39g,329mmol,3eq)。将混合物在60℃加热5h。将反应混合物在高真空下蒸发，将残余物吸收在EtOAc(300mL)中并浓缩，以得到标题化合物(19.5g，92mmol，84％产率)，为浅黄色固体。
b)4-(2-甲氧基-2-氧代-乙氧基)苯-1,2-二甲酸二甲酯
将4-羟基苯-1,2-二甲酸二甲酯(19.0g,90.4mmol,1eq)、溴乙酸甲酯(15.2g,99mmol,1.1eq)和碳酸钾(37g,271mmol,3eq)在乙腈(300mL)中的混合物于80℃加热2h。将反应混合物过滤，在高真空下蒸发以得到标题化合物(25g，88mmol，92％产率)，为黄色油。
c)4-(羧甲氧基)邻苯二甲酸
向4-(2-甲氧基-2-氧代-乙氧基)苯-1,2-二甲酸二甲酯(25.0g,88mmol,1eq)在乙醇(300mL)中的溶液一次性加入氢氧化钠(300mL,900mmol,10.1eq)。将该混合物在80℃加热12h。浓缩反应混合物并用HCl酸化剩余的水相直到PH≈1。用EtOAc/THF(1/1,300mL*3)萃取悬浮物。合并的有机物用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并蒸发过滤物，以得到标题化合物(12.4g，51mmol，58％产率)，为浅黄色固体。
d)2-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]氧乙酸
将4-(羧甲氧基)邻苯二甲酸(6.0g,24mmol,1eq)和3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(4.5g,27mmol,1.1eq)在吡啶(120mL)中的混合物于100℃搅拌16h。将混合物浓缩并将残余物在MeCN/EtOAc(1/1,200mL)的混合溶剂中研磨并过滤，将过滤物浓缩。然后将残余物在MeOH/EtOAc(1/10,30mL)的混合溶剂中研磨10min。过滤悬浮物，并用EtOAc和PE洗涤滤饼。收集并干燥固体，以得到标题化合物(1500mg，4.51mmol，17％产率)，为浅灰色固体。
连接酶49：N-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-2,3-二氢-1,3-二氧代-1H-异吲哚-4-基]甘氨酸(CAS:927670-97-1)
连接酶50：3-[[4-(4-哌啶基)苯基]氨基]-2,6-哌啶二酮(CAS:2259851-37-9)
连接酶51：2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酸
a)2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酸叔丁酯
连接酶50盐酸盐(200mg,618μmol,Eq:1)、2-溴乙酸叔丁酯(157mg,119μl,803μmol,Eq:1.3)和N,N-二异丙基乙胺(399mg,539μl,3.09mmol,Eq:5)在DMF(4ml)中的混合物在室温搅拌2hr。将反应混合物倒入水中并用AcOEt(2X)萃取。合并有机层，经Na2SO4干燥并且真空浓缩。在硅胶(庚烷/EtOAc 50-100％)上纯化粗材料，以产生标题化合物(164mg,66％)，为白色固体。
b)2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酸
将2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酸叔丁酯(164mg,408μmol,Eq:1)与DCM(3ml)合并以得到无色溶液。于0℃加入2,2,2-三氟乙酸(1.48g,1mL,13mmol,Eq:32)，然后在室温搅拌反应混合物。将粗反应混合物真空浓缩并干燥，以产生标题化合物(264mg，141％产率)，为浅蓝色固体。
连接酶52：4-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)丁酸盐酸盐
a)4-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]丁酸苄酯
连接酶50(1100mg,3.4mmol,1eq)、4-溴丁酸苄酯(1746mg,6.8mmol,2eq)和DIPEA(3.25mL,18.6mmol,5.5eq)在DMF(30mL)中的混合物在25℃搅拌48h。将反应用EtOAc(120mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经(Na2SO4)干燥，真空浓缩。在硅胶(EtOAc:EtOH 2-10％)上纯化残余物，以得到标题化合物(1.5g，3.2mmol，95％产率)，为灰色固体。
b)4-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)丁酸盐酸盐
在氢气气氛(15.0psi)下将4-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]丁酸苄酯(1.4g,3.0mmol,1eq)和碳载钯(700mg,0.66mmol,0.22eq)在2-丙醇(40mL)中的混合物在60℃搅拌20h。将该混合物过滤、在真空下浓缩，以得到粗制标题化合物(960mg，2.3mmol，68％产率)，为棕色固体。
连接酶53：3-(4-哌嗪-1-基苯胺基)哌啶-2,6-二酮盐酸盐(CAS:2259851-44-8)
连接酶54：2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]哌嗪-1-基]乙酸盐酸盐
a)2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]哌嗪-1-基]乙酸叔丁酯
连接酶53(1500mg,4.6mmol,1eq)、溴乙酸叔丁酯(1801mg,9.2mmol,2eq)和DIPEA(2.41mL,13.8mmol,3eq)在乙腈(40mL)中的混合物在25℃搅拌15h。将混合物倒入水(150.0mL)中，并用EtOAc(120.0mL×2)萃取。将合并的有机层用盐水(80.0mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩。通过在混合溶剂(石油醚:乙酸乙酯＝1:1，25mL)中研磨进一步纯化残余物，以得到标题化合物(1.25g，3.1mmol，67％产率)，为深红色固体。
b)2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]哌嗪-1-基]乙酸盐酸盐
将2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]哌嗪-1-基]乙酸叔丁酯(1100mg,2.7mmol,1eq)于在EtOAc中的HCl(25.0mL,100mmol,36eq)中的混合物在25℃搅拌12h。过滤混合物，并将滤饼用EtOAc(15.0mL×3)洗涤，溶解在水(30mL)中并通过冻干浓缩，以得到标题化合物(1029mg，2.69mmol，92％产率)，为黑色固体。
连接酶55：5-(4-氨基-1-哌啶基)-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
a)N-[1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]-4-哌啶基]氨 基甲酸叔丁酯
于室温向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(CAS 835616-61-0,200mg,724μmol,1.0eq)和哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(145mg,724μmol,1.0eq)在DMSO(1.5mL)中的搅拌溶液加入DIPEA(187mg,253μL,1.45mmol,2.0eq)。将反应混合物在90℃下搅拌过夜。将反应混合物倒入EtOAc/THF(1:1)中并顺序地用水和盐水萃取。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(315mg，690μmol，95％产率)，为黄色无定型固体。MS(ESI)：457.4([M+H]+)。
b)5-(4-氨基-1-哌啶基)-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
向N-[1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]-4-哌啶基]氨基甲酸叔丁酯(315mg,690μmol,1.0eq)在二噁烷(6mL)中的搅拌溶液加入六氟丙烷-2-醇(116mg,3.5mL,690μmol,1.0eq)，并将反应混合物在密封的微波管中在微波辐照下在130℃加热15min。真空浓缩反应混合物，以得到标题化合物(109mg，306μmol，44％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：357.2([M+H]+)。
连接酶56：2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-[4-(甲基氨基)-1-哌啶基]异吲哚啉-1,3-二酮
a)N-[1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]-4-哌啶基]- N-甲基-氨基甲酸叔丁酯
于室温向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(200mg,724μmol,1.0eq)和甲基(哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(155mg,724μmol,1.0eq)在DMSO(1.5mL)中的搅拌溶液加入DIPEA(187mg,253μL,1.45mmol,2.0eq)。将反应混合物在90℃下搅拌过夜。将反应混合物倒入EtOAc/THF(1:1)中并顺序地用水和盐水萃取。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(0.234g，472μmol，64％产率)，为黄色油。MS(ESI)：471.3([M+H]+)。
b)2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-[4-(甲基氨基)-1-哌啶基]异吲哚啉-1,3-二酮
向5ml微波小瓶加入N-[1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]-4-哌啶基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(234mg,497μmol,1.0eq)和六氟丙烷-2-醇(83.6mg,2mL,497μmol,1.0eq)。将小瓶加盖，并且在微波中在130℃加热3h。真空混合物，以得到标题化合物(110mg，267μmol，53％产率)。MS(ESI)：371.2([M+H]+)。
连接酶57：9-[4-[3-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]丙基]三唑-1-基]壬醛
a)2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(戊-4-炔-1-基氨基)异吲哚啉-1,3-二酮
于室温在氮气气氛下向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(0.5g,1.81mmol)在DMSO(5mL)中的溶液先后加入戊-4-炔-1-胺盐酸盐(541mg,4.52mmol)和DIPEA(701mg,5.43mmol)。将反应混合物在80℃加热16h。将反应混合物冷却至室温，加入水中，过滤所得固体，用水洗涤并干燥，以得到标题化合物(0.18g，450umol，24％产率)，为浅黄色固体。MS(ESI)：339.9([M+H]+)。
b)2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((3-(1-(9-羟基壬基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)丙 基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮
于室温向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-(戊-4-炔基氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.18g,530umol)和9-叠氮基壬-1-醇(98.2mg,530umol)在THF(7.0mL)和水(1.5mL)中的混合物先后加入硫酸铜(169mg,1.06mmol)和抗坏血酸钠(210mg,1.06mmol)。将反应混合物在室温搅拌16h。反应混合物用乙酸乙酯稀释并用水、盐水溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。在二氧化硅(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗残余物，以得到标题化合物(0.13g，235umol，44％产率)，为浅黄色固体。MS(ESI)：525.0([M+H]+)。
c)9-[4-[3-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]丙 基]三唑-1-基]壬醛
于0℃在氮气气氛下向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-[3-[1-(9-羟基壬基)三唑-4-基]丙基氨基]异吲哚啉-1,3-二酮(0.13g,247umol)在DCM(5.0mL)中的溶液加入戴斯-马丁试剂(157mg,371umol)。将反应混合物加热至室温，并且搅拌1小时。通过硅藻土床过滤反应混合物，并用二氯甲烷洗涤。将所得滤液用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。在二氧化硅(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗残余物，以得到标题化合物(60mg，62umol，25％产率)，为淡黄色半固体。MS(ESI)：523.0([M+H]+)。
连接酶58：9-[4-[2-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]乙基]三唑-1-基]壬醛
a)4-(丁-3-炔-1-基氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
于室温在氮气气氛下向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(0.5g,1.81mmol)在DMSO(5.0mL)中的溶液先后加入丁-3-炔-1-胺(312mg,4.53mmol)和DIPEA(701mg,5.43mmol,945uL)。将反应混合物在80℃加热16h。将反应混合物冷却至室温，用水稀释，过滤所得固体，用水洗涤并干燥，以得到标题化合物(0.19g，495umol，27％产率)，为浅黄色固体。MS(ESI)：325.9([M+H]+)。
b)2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((2-(1-(9-羟基壬基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)乙 基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮
于室温向4-(丁-3-炔基氨基)-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.19g,584umol)和9-叠氮基壬-1-醇(108mg,584umol)在THF(7.5mL)和水(1.5mL)中的混合物先后加入硫酸铜(186mg,1.17mmol)和抗坏血酸钠(231mg,1.17mmol)。将反应混合物在室温搅拌16h。反应混合物用水稀释，并且用EtOAc萃取。将有机层用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。在二氧化硅(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗残余物，以得到标题化合物(0.13g，239umol，40％产率)，为浅黄色固体。MS(ESI)：511.0([M+H]+)。
c)9-[4-[2-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]乙 基]三唑-1-基]壬醛
于0℃在氮气气氛下向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-[2-[1-(9-羟基壬基)三唑-4-基]乙基氨基]异吲哚啉-1,3-二酮(0.13g,254umol)在DCM(5.0mL)中的溶液加入戴斯-马丁试剂(161mg,381umol)。将反应混合物加热至室温，并且搅拌1小时。通过硅藻土床过滤反应混合物，并用二氯甲烷洗涤。将所得滤液用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。在二氧化硅(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗残余物，以得到标题化合物(0.06g，68umol，26％产率)，为淡黄色半固体。MS(ESI)：509.4([M+H]+)。
连接酶59：5-(3-氨基氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
a)N-[1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]氮杂环丁烷- 3-基]氨基甲酸叔丁酯
于室温向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(200mg,724μmol,1.0eq)和氮杂环丁烷-3-基氨基甲酸叔丁酯(125mg,724μmol,1.0eq)在DMSO(1.5mL)中的搅拌溶液加入DIPEA(187mg,253μL,1.45mmol,2.0eq)。将反应混合物在90℃下搅拌过夜。将反应混合物倒入EtOAc/THF(1:1)中并顺序地用水和盐水萃取。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(170mg，377μmol，52％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：429.3([M+H]+)。
b)5-(3-氨基氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
向5mL微波小瓶加入N-[1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]氮杂环丁烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯(170mg,397μmol,1.0eq)和1,1,1,3,3,3-六氟丙烷-2-醇(66.7mg,2mL,397μmol,1.0eq)。将小瓶加盖，并且在微波中在135℃加热25min。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(72mg，219μmol，55％产率)，为黄色固体。MS(ESI):329.2([M+H])+。
连接酶60：2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-[3-(甲基氨基)氮杂环丁烷-1-基]异吲哚啉-1,3-二酮
a)N-[1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]氮杂环丁烷- 3-基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯
于室温向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(CAS835616-61-0,200mg,724μmol,1.0eq)和氮杂环丁烷-3-基(甲基)氨基甲酸叔丁酯(CAS 577777-20-9,135mg,724μmol,1.0eq)在DMSO(1.5mL)中的搅拌溶液加入DIPEA(187mg,253μL,1.45mmol,2.0eq)。将反应混合物在90℃下搅拌过夜。将反应混合物冷却至室温，并倒入EtOAc/THF(1:1)中，然后顺序地用水和盐水萃取。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(420mg，712μmol，98％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：443.3([M+H]+)。
b)2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-[3-(甲基氨基)氮杂环丁烷-1-基]异吲哚啉-1, 3-二酮
向5ml微波小瓶加入N-[1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]氮杂环丁烷-3-基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(170mg,384μmol,1.0eq)和六氟丙烷-2-醇(64.6mg,2ml,384μmol,1.0eq)。将小瓶加盖，并且在微波中在135℃加热30min。将小瓶再次加盖，并且在微波中在135℃加热2h。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(170mg，382μmol，100％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：343.2([M+H]+)。
连接酶61：2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-[[1-(4-哌啶基甲基)三唑-4-基]甲氧基]异吲哚啉-1,3-二酮
a)4-((4-(((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)甲 基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
于室温向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-丙-2-炔基氧基-异吲哚啉-1,3-二酮(500mg,1.6mmol)和4-(叠氮基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(384mg,1.6mmol)在THF(10mL)中的混合物加入抗坏血酸钠(634mg,3.2mmol)和硫酸铜(857mg,3.2mmol)在水(1.5mL)中的混合物。将反应混合物在室温搅拌12h。反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机层用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗残余物，以得到标题化合物(625mg，1.11mmol，69％产率)，为灰白色固体。MS(ESI)：551.3([M-H]-)。
b)2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-[[1-(4-哌啶基甲基)三唑-4-基]甲氧基]异吲哚 啉-1,3-二酮
于0℃在氮气气氛下向4-[[4-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氧基甲基]三唑-1-基]甲基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(625mg,1.13mmol)在DCM(6.0mL)中的溶液加入三氟乙酸(644mg,5.66mmol,435uL)。将反应混合物加热至室温，并且搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩并干燥，以得到标题化合物(750mg，1.06mmol，93％产率)，为浅棕色油(TFA盐)。
连接酶62：9-[6-[[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]甲基]-3-吡啶基]壬醛
a)((5-(9-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)壬-1-炔-1-基)吡啶-2-基)甲基)氨基 甲酸苄酯
于室温将N-[(5-溴-2-吡啶基)甲基]氨基甲酸苄酯(1.2g,3.73mmol)在哌啶(15.0mL)中的溶液用氮气吹扫20分钟，然后加入四(三苯基膦)钯(0)(570mg,373umol)和碘化铜(I)(71mg,373umol)。将反应混合物在50℃加热20分钟并加入叔丁基-二甲基-壬-8-炔基氧基-硅烷(0.95g,3.73mmol)。将反应混合物在80℃加热2h。将反应混合物冷却至室温，通过硅藻土垫过滤并用乙酸乙酯洗涤。将所得滤液用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。在二氧化硅(PE/EtOAc 0-100％)上纯化粗残余物，以得到标题化合物(1.0g，1.79mmol，47％产率)，为浅棕色半固体。MS(ESI)：495.3([M+H]+)。
b)((5-(9-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)壬基)吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸苄酯
将N-[[5-[9-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基壬-1-炔基]-2-吡啶基]甲基]氨基甲酸苄酯(1.0g,2.02mmol)和湿10％碳载钯(860mg,8.09mmol)在甲醇(20mL)中的混合物于室温和氢气压力(1atm)下搅拌16h。将反应混合物通过硅藻土垫过滤，用甲醇洗涤，并在减压下浓缩，以得到标题化合物(500mg，374umol，18％产率)，为浅棕色固体。MS(ESI)：365.5([M+H]+)。
c)4-(((5-(9-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)壬基)吡啶-2-基)甲基)氨基)-2- (2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
于室温在氮气气氛下向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(153mg,556umol)和[5-[9-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基壬基]-2-吡啶基]甲胺(506mg,1.39mmol)在DMSO(5.0mL)中的混合物加入DIPEA(215mg,1.67mmol,290uL)。将反应混合物在80℃加热16h。将反应混合物冷却至室温，加入水中，并用乙酸乙酯萃取。将有机层用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。在二氧化硅(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗残余物，以得到标题化合物(0.24g，141umol，25％产率)，为灰白色半固体。MS(ESI)：621.3([M+H]+)。
d)2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(((5-(9-羟基壬基)吡啶-2-基)甲基)氨基)异吲 哚啉-1,3-
于室温向4-[[5-[9-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基壬基]-2-吡啶基]甲基氨基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(150mg,241umol)在甲醇(2.0mL)中的溶液加入对甲苯磺酸(41.6mg,241umol)。将反应混合物在室温搅拌3h。减压浓缩反应混合物，并在二氧化硅(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗残余物，以得到标题化合物(80.0mg，112umol，46％产率)，为灰白色固体。MS(ESI)：507.3([M+H]+)。
e)连接酶62：9-[6-[[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基] 氨基]甲基]-3-吡啶基]壬醛
于0℃在氮气气氛下向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-[[5-(9-羟基壬基)-2-吡啶基]甲基氨基]异吲哚啉-1,3-二酮(70mg,138umol)在二氯甲烷(2.5mL)中的溶液加入戴斯-马丁试剂(117mg,276umol)。将反应混合物升温至室温并搅拌2h。通过硅藻土床过滤反应混合物，并用二氯甲烷洗涤。将所得滤液用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。在二氧化硅(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗残余物，以得到标题化合物(25.0mg，25umol，18％产率)，为灰白色半固体。MS(ESI)：505.4([M+H]+)。
连接酶63：5-[4-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氧基甲基]三唑-1-基]戊酸
a)5-(4-(((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)甲基)- 1H-1,2,3-三唑-1-基)戊酸叔丁酯
于室温向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-丙-2-炔基氧基-异吲哚啉-1,3-二酮(100mg,320umol)和5-叠氮基戊酸叔丁酯(127mg,640umol)在THF(5.0mL)和水(2.5mL)中的混合物加入抗坏血酸钠(126mg,640umol)和硫酸铜(171mg,640umol)。将反应混合物在室温搅拌12h。反应混合物用水稀释，用EtOAc萃取。将有机层用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。在二氧化硅(PE/EtOAc 0-80％)上纯化粗残余物，以得到标题化合物(35.0mg，58umol，18％产率)，为灰白色固体。MS(ESI)：512.2([M+H]+)。
b)5-[4-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氧基甲基]三 唑-1-基]戊酸
于0℃在氮气气氛下向5-[4-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氧基甲基]三唑-1-基]戊酸叔丁酯(35.0mg,68.42umol)在二氯甲烷(1.0mL)中的溶液加入三氟乙酸(78.0mg,684umol,52uL)。将反应混合物加热至室温，并且搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩并干燥，以得到标题化合物(35.0mg，粗)，为棕色半固体(TFA盐)。MS(ESI)：456.2([M+H]+)。
连接酶64：2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-[[1-(4-哌啶基)三唑-4-基]甲氧基]异吲哚啉-1,3-二酮
a)2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(丙-2-炔-1-基氧基)异吲哚啉-1,3-二酮
于室温在氮气气氛下向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-羟基-异吲哚啉-1,3-二酮(5.0g,18.2mmol)在DMF(50mL)中的溶液先后加入碳酸钠(1.93g,18.2mmol)和3-溴丙-1-炔(2.17g,18.2mmol)。将反应混合物在60℃加热24h。将反应混合物冷却至室温，加入水中，并用乙酸乙酯萃取。将有机层用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。在二氧化硅(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗残余物，以得到标题化合物(4.40g，14.0mmol，77％产率)，为灰白色固体，MS(ESI):313.1([M+H]+)。
b)4-(4-(((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)甲基)- 1H-1,2,3-三唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
于室温向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-丙-2-炔基氧基-异吲哚啉-1,3-二酮(0.1g,320umol)和4-叠氮基哌啶-1-甲酸酯(144mg,640umol)在四氢呋喃(5.0mL)和水(2.5mL)中的混合物加入抗坏血酸钠(126mg,640umol)和硫酸铜(102mg,640umol,28.4uL)。将反应混合物在室温搅拌12h。用水稀释反应混合物并用乙酸乙酯萃取。将有机层用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。在二氧化硅(PE/EtOAc 0-80％)上纯化粗残余物，以得到标题化合物(35.0mg，57.3umol，17％产率)，为灰白色固体。MS(ESI)：537.0([M-H]-)。
c)2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-[[1-(4-哌啶基)三唑-4-基]甲氧基]异吲哚啉- 1,3-二酮
于0℃在氮气气氛下向4-[4-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氧基甲基]三唑-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(35.0mg,64umol)在DCM(1.0mL)中的溶液加入三氟乙酸(74.1mg,649umol,50uL)。将反应混合物加热至室温，并且搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩并干燥，以得到标题化合物(35.0mg，粗)，为棕色半固体(TFA盐)。MS(ESI)：439.0([M+H]+)。
连接酶65：9-[2-[[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]甲基]-4-吡啶基]壬醛
a)((4-(9-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)壬-1-炔-1-基)吡啶-2-基)甲基)氨基 甲酸苄酯
于室温将N-[(4-溴-2-吡啶基)甲基]氨基甲酸苄酯(1.30g,4.05mmol)在哌啶(15.0mL)中的溶液用氮气吹扫20分钟，然后加入四(三苯基膦)钯(0)(618mg,404umol)和碘化铜(I)(77mg,404umol,13.7uL)。将反应混合物在50℃加热20分钟并加入叔丁基-二甲基-壬-8-炔基氧基-硅烷(1.03g,4.05mmol)。将反应混合物加热至80℃持续2h。将反应混合物冷却至室温，通过硅藻土垫过滤并用乙酸乙酯洗涤。将所得滤液用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。在二氧化硅(PE/EtOAc 0-100％)上纯化粗残余物，以得到标题化合物(1.40g，2.38mmol，58％产率)，为浅棕色半固体。MS(ESI)：495.4([M+H]+)。
b)(4-(9-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)壬基)吡啶-2-基)甲胺
将N-[[4-[9-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基壬-1-炔基]-2-吡啶基]甲基]氨基甲酸苄酯(1.40g,2.83mmol)和湿10％碳载钯(602mg,5.66mmol)在甲醇(20mL)中的混合物于室温和氢气压力(1atm)下搅拌16h。将反应混合物通过硅藻土垫过滤，用甲醇洗涤，并在减压下浓缩，以得到标题化合物(0.72g，631umol，22％产率)，为棕色固体。MS(ESI)：365.4([M+H]+)。
c)4-(((4-(9-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)壬基)吡啶-2-基)甲基)氨基)-2- (2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
于室温在氮气气氛下向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(217.6mg,788umol)和[4-[9-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基壬基]-2-吡啶基]甲胺(718ug,1.97umol)在DMSO(8.0mL)中的混合物加入DIPEA(101.8mg,788umol,137uL)。将反应混合物在80℃加热16h。将反应混合物冷却至室温，加入水中，并用乙酸乙酯萃取。将有机层用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。在二氧化硅(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗残余物，以得到标题化合物(0.4g，244umol，30％产率)，为灰白色半固体。MS(ESI)：621.3([M+H]+)。
d)2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(((4-(9-羟基壬基)吡啶-2-基)甲基)氨基)异吲 哚啉-1,3-二酮
于室温向4-[[4-[9-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基壬基]-2-吡啶基]甲基氨基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(130mg,209umol)在甲醇(4.0mL)中的溶液加入对甲苯磺酸(36.0mg,209umol)。将反应混合物在室温搅拌3h。减压浓缩反应混合物，并在二氧化硅(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗残余物，以得到标题化合物(80.0mg，98umol，46％产率)，为灰白色半固体。MS(ESI)：507.3([M+H]+)。
e)9-(2-(((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)甲基) 吡啶-4-基)壬醛
于0℃在氮气气氛下向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-[[4-(9-羟基壬基)-2-吡啶基]甲基氨基]异吲哚啉-1,3-二酮(80.0mg,157umol)在DCM(2.0mL)中的溶液加入戴斯-马丁试剂(100mg,236umol)。将反应混合物升温至室温并搅拌2h。通过硅藻土床过滤反应混合物，并用二氯甲烷洗涤。将所得滤液用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。在二氧化硅(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗残余物，以得到标题化合物(30.0mg，25umol，16％产率)，为灰白色固体。MS(ESI)：505.2([M+H]+)。
连接酶66：5-[4-(3-溴丙基)-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
a)2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-[4-(3-羟基丙基)-1-哌啶基]异吲哚啉-1,3-二 酮
向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(3.0g,10.8mmol,1eq)在DMSO(30mL)中的混合物加入3-(4-哌啶基)丙-1-醇(1.87g,13.0mmol,1.2eq)、DIPEA(5.68mL,32mmol,3eq)。将混合物在100℃搅拌12h。加入水并用EtOAc(200mL*4)萃取。将有机相真空浓缩。在硅胶(PE:EtOAc 10-50％)上纯化残余物，以得到标题化合物(2g，5mmol，46％产率)，为黄色油。
b)5-[4-(3-溴丙基)-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-[4-(3-羟丙基)-1-哌啶基]异吲哚啉-1,3-二酮(2000mg,5mmol,1eq)在THF(1mL)中的混合物加入四溴化碳(3320mg,10mmol,2eq)、三苯膦(2626mg,10mmol,2eq)。将混合物在25℃搅拌12h。将混合物在真空浓缩。通过制备型-HPLC(中性)纯化粗产物，以得到标题化合物(1532mg，3.3mmol，60％产率)，为黄色固体。
连接酶67:2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-[rel-(3aS,6aR)-2,3,3a,4,6,6a-六氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡咯-5-基]异吲哚啉-1,3-二酮盐酸盐(CAS 2229723-90-2)
连接酶68：2-(2,6-二氧代-哌啶-3基)-5-(哌嗪-1-基甲基)异吲哚啉-1,3-二酮盐酸盐
a)4-(溴甲基)苯-1,2-二甲酸二甲酯
向4-甲基苯-1,2-二甲酸二甲酯(6.0g,28.8mmol,1eq)和N-溴代琥珀酰亚胺(5.39g,30.2mmol,1.05eq)在乙腈(50mL)中的溶液加入2,2'-偶氮二(2-甲基丙腈)(0.95g,5.7mmol,0.2eq)，然后将混合物于80℃在氮气下搅拌12h。将反应混合物在真空下浓缩。在硅胶(PE/EtOAc 20-50％)上纯化残余物，以得到标题化合物(8g，27.8mmol，82％产率)，为黄色油。
b)4-[(4-叔丁氧基羰基哌嗪-1-基)甲基]苯-1,2-二甲酸二甲酯
向1-BOC-哌嗪(5.71g,30.65mmol,1.1eq)在DMSO(50mL)中的溶液先后加入DIPEA(14.5mL,83.5mmol,3eq)和4-(溴甲基)苯-1,2-二甲酸二甲酯(8.0g,27.8mmol,1eq)。将混合物在90℃搅拌12h。加入乙酸乙酯(300mL)。用水(50mL*3)洗涤反应。有机相在真空下浓缩。在硅胶(PE/EtOAc 10-50％)上纯化残余物，以得到标题化合物(8.8g，22.4mmol，45％产率)，为黄色油。
c)4-[(4-叔丁氧基羰基哌嗪-1-基)甲基]邻苯二甲酸
向4-[(4-叔丁氧基羰基哌嗪-1-基)甲基]苯-1,2-二甲酸二甲酯(8.8g,22.4mmol,1eq)在THF(65mL)中的溶液加入氢氧化钠(8.97g,224mmol,10eq)和水(15mL)。将混合物在50℃搅拌12h。加入水(200mL)然后用EtOAc(150mL*2)萃取。将水相在真空下浓缩，以产生标题化合物(8g，21.9mmol，91％产率)，为白色固体。
d)4-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]甲基]哌嗪-1-甲 酸叔丁酯
向4-[(4-叔丁氧基羰基哌嗪-1-基)甲基]邻苯二甲酸盐酸盐(1.5g,4.12mmol,1eq)在吡啶(15mL)中的溶液加入3-氨基哌啶-2,6-二酮(0.68g,4.12mmol,1eq)。将混合物在80℃搅拌20h。加入水(150mL)然后用EtOAc(100mL*3)萃取。用盐水(50mL)洗涤合并的萃取液，经硫酸钠干燥，过滤，然后在真空下浓缩。通过制备型-HPLC纯化残余物，以得到标题化合物(500mg，1.1mmol，25％产率)，为灰色固体。
e)2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-(哌嗪-1-基甲基)异吲哚啉-1,3-二酮盐酸盐
于0℃向4-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]甲基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(450mg,0.99mmol,1eq)在DCM(20mL)中的溶液加入在EtOAc中的4N HCl(25mL,100mmol,101eq)。将混合物在0℃搅拌2h。将反应在真空下浓缩。向残余物加入水(20mL)并冻干，以得到标题化合物(400mg，1.02mmol，101％产率)，为浅棕色固体。
连接酶69：3-[4-(4-哌啶基)苯基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐
a)4-(4-溴苯基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯
于95℃在N2气氛下将1-N-BOC-4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-3,6-二氢-2H-吡啶(18g,58.3mmol,1.1eq)、1-溴-4-碘苯(15g,53mmol,1eq)、四(三苯基膦)钯(0)(3.06g,2.65mmol,0.05eq)和磷酸钾盐(13g,159mmol,3eq)在1,4-二噁烷(150mL)和水(50mL)中的混合物搅拌10h。将其过滤并浓缩，残余物通过制备型-HPLC(FA)纯化，以得到标题化合物(14g，41.3mmol，78％产率)，为黄色油。
b)4-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基]-3,6-二氢-2H-吡 啶-1-甲酸叔丁酯
向4-(4-溴苯基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(14.0g,41.3mmol,1eq)、双(频哪醇)二硼(12612mg,49.6mmol,1.2eq)、KOAc(12186mg,124.1mmol,3eq)在1,4-二噁烷(304mL)中的溶液加入Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2(3377mg,4.14mmol,0.1eq)，并将混合物用N2吹扫3次并于100℃在N2气氛下搅拌16小时。将其过滤并浓缩。在硅胶(PE:EtOAc 1-5％)上纯化残余物，以得到标题化合物(8500mg，22mmol，53％产率)，为白色固体。
c)2,6-二苄氧基-3-溴-吡啶
向2,6-二苄氧基吡啶(20g,68.6mmol,1eq)在MeCN(300mL)中的溶液加入N-溴代琥珀酰亚胺(9.7g,54.9mmol,0.8eq)，将混合物在90℃搅拌16小时。将其浓缩。通过色谱法在硅胶(PE:EtOAc 1-10％)上纯化残余物，以得到标题化合物(19g，51mmol，74％产率)，为白色固体。
d)4-[4-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)苯基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯
将4-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(5000mg,12.9mmol,1eq)、2,6-二苄氧基-3-溴-吡啶(3843mg,10.3mmol,0.8eq)、Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2(10582mg,1.3mmol,0.1eq)、Na2CO3(3438mg,32.4mmol,2.5eq)在DMF(100mL)和水(20mL)中的溶液用N2吹扫并将混合物在100℃搅拌12小时。将其过滤并浓缩。通过制备型-HPLC(FA)纯化残余物，以得到标题化合物(4050mg，7.38mmol，56％产率)，为黄色油。
e)4-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯
向4-[4-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)苯基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(4000mg,7.29mmol,1eq)在乙醇(120mL)中的溶液加入Pd/C(mg,0.73mmol,0.1eq)、PtO2(mg,0.360mmol,0.050eq)和AcOH(0.5mL,7.29mmol,1eq)，并将混合物用H2吹扫3次并于30℃在H2气氛下搅拌3小时。将其过滤并浓缩。通过制备型-HPLC(FA)纯化残余物，以得到标题化合物(1510mg，4.0mmol，54％产率)，为白色固体。
f)3-[4-(4-哌啶基)苯基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐
向4-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(1000mg,2.68mmol,1eq)在EtOAc(10mL)中的溶液加入在二噁烷中的4M HCl(10mL,40mmol,14.9eq)。在25℃将混合物搅拌2小时。将其过滤，并且滤饼用EtOAc(5mL*1)洗涤，将滤饼溶于水(40mL)并冻干，以得到标题化合物(758mg，2.46mmol，91％产率)，为白色固体。
连接酶70：3-(4-哌嗪-1-基苯基)哌啶-2,6-二酮；盐酸盐
a)4-(4-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯向4-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(2g,5.15mmol)溶于DMF(4mL)和水(0.5mL)中的搅拌溶液加入碳酸钠(1.09g,10.3mmol)。所得溶液用氮气脱气15分钟。然后加入[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷(420mg,515umol)的络合物，并将混合物在密封管中加热至100℃。5h后，判断反应完成，并将混合物通过硅藻土过滤。将滤液用冰水稀释，并且用乙酸乙酯(3x 50mL)萃取产物。合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并在真空下浓缩，粗残余物通过柱色谱纯化，以得到标题化合物(1.4g，2.28mmol，44％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：552.5([M+H]+)。
b)4-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
将4-[4-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)苯基]哌嗪-1-酸叔丁酯(22g,39.8mmol)溶于乙酸乙酯(120mL)和乙醇(120mL)中的搅拌溶液用氩气脱气20分钟。将碳载钯(8.49g,7.98mmol)加入反应混合物。在向溶液中通入氢气的情况下将其在室温搅拌16h。16h后，将反应混合物通过硅藻土过滤，减压浓缩并通过柱色谱洗脱(DCM/MeOH 98:2)来纯化，以得到标题化合物(13.2g,33.5mmol,84％yield)，为灰白色固体。MS(ESI)：374.2([M+H]+)。
c)3-(4-(哌嗪-1-基)苯基)哌啶-2,6-二酮盐酸盐
于0℃向4-[4-(2,6-二氧代-3-哌啶基)苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(13.1g,35.0mmol)在DCM(50mL)中的搅拌溶液加入在二噁烷中的4M HCl(35.0mmol)。然后将混合物在室温搅拌1h。将其在减压下浓缩并冻干，以得到标题化合物(10.8g，34.3mmol，98％产率，99％纯度)，为灰白色固体。MS(ESI)：274.4([M+H]+)。
连接酶71：3-((6-(哌啶-4-基)吡啶-3-基)氨基)哌啶-2,6-二酮盐酸盐
a)4-(5-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)吡啶-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将4-(5-氨基吡啶-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1g,3.61mmol,Eq:0.36)溶于DMF(13ml)中。加入碳酸氢钠(3.33g,39.7mmol,Eq:4)和3-溴哌啶-2,6-二酮(1.9g,9.92mmol,Eq:1)。将反应混合物在90℃搅拌过夜。粗残余物在硅胶(EtOAc)上纯化为标题化合物和苯胺起始材料的1:1混合物(2.17g，1.51mmol，15％产率)，为紫色油。该材料不经进一步纯化而用于下一步。
b)3-((6-(哌啶-4-基)吡啶-3-基)氨基)哌啶-2,6-二酮盐酸盐
将4-(5-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)吡啶-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1g,2.57mmol,Eq:1)与在二噁烷中的4M HCl(10ml,40mmol,Eq:15.5)一起在二噁烷(35ml)中在室温搅拌过夜。滤出沉淀的固体，用醚洗涤并在高真空下干燥，得到作为与苯胺的1:1混合物的标题化合物(554mg，1.71mmol，66％产率)，为浅棕色固体。其无需纯化即可用于下一步。
连接酶72：2-(4-(5-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)乙酸盐酸盐
a)2-(4-(5-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)乙酸叔丁酯
向3-((6-(哌啶-4-基)吡啶-3-基)氧基)哌啶-2,6-二酮盐酸盐(216mg,663μmol,Eq:1)、2-溴乙酸叔丁酯(129mg,97.9μl,663μmol,Eq:1)和DIPEA(257mg,347μl,1.99mmol,Eq:3)在DMF(2.21ml)中的溶液中加入碘化钾(110mg,663μmol,Eq:1)并将反应混合物在60℃加热4h。将反应混合物在乙酸乙酯(40ml)和1M碳酸氢钠溶液(40ml)之间分配。分离各层。将水层用三个30-ml部分的乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用一个40-ml部分的水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，以得到标题化合物(233mg,87％)，为浅黄色固体。
b)2-(4-(5-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)乙酸盐酸盐
于RT向2-(4-(5-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)乙酸叔丁酯(0.233g,577μmol,Eq:1)在乙酸乙酯(2.89ml)中的溶液加入在1,4-二噁烷中的4M盐酸溶液(2.89ml,11.5mmol,Eq:20)，并且连续搅拌16h。产物通过过滤收集，用乙酸乙酯洗涤并真空干燥，以得到标题化合物(151mg，68％产率)，为浅黄色固体。
连接酶73：4-[1-[1-(氮杂环丁烷-3-基)三唑-4-基]乙氧基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
a)3-(4-(1-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙 基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
于室温向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-(1-甲基丙-2-炔基氧基)异吲哚啉-1,3-二酮(150mg,459umol)和3-叠氮基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(91mg,459umol)在THF(6.0mL)和水(1.0mL)中的混合物先后加入抗坏血酸钠(182mg,919umol)和硫酸铜(146mg,919umol)。将反应混合物在室温搅拌16h。将反应混合物加入水中并用乙酸乙酯萃取。将有机层用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。在二氧化硅(DCM/MeOH 0-15％)上纯化粗残余物，以得到标题化合物(75.0mg，142umol，31％产率)，为灰白色固体。MS(ESI)：525.3([M+H]+)。
b)4-[1-[1-(氮杂环丁烷-3-基)三唑-4-基]乙氧基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基) 异吲哚啉-1,3-二酮
于0℃在氮气气氛下向3-[4-[1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氧基乙基]三唑-1-基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(75.0mg,142umol)在DCM(1.0mL)中的溶液加入三氟乙酸(163mg,1.4mmol,110uL)。将反应混合物加热至室温，并且搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩并干燥，以得到标题化合物(68.0mg，85umol，59％产率)，为浅棕色半固体(TFA盐)。MS(ESI)：425.0([M+H]+)。
连接酶74：2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-[1-[1-(3-哌嗪-1-基丙基)三唑-4-基]乙氧基]异吲哚啉-1,3-二酮
a)4-(3-(4-(1-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基) 乙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
于室温向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-(1-甲基丙-2-炔基氧基)异吲哚啉-1,3-二酮(500mg,1.53mmol)和4-(3-叠氮基丙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(412mg,1.53mmol)在DMSO(5.0mL)和水(0.2mL)中的混合物先后加入抗坏血酸钠(91mg,459umol)和硫酸铜(24mg,153umol)。将反应混合物在室温搅拌16h。将反应混合物用水稀释，并且用DCM萃取。将有机层用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。在二氧化硅(DCM/MeOH 0-15％)上纯化粗残余物，以得到标题化合物(660mg，1.0mmol，65％产率)，为灰白色固体。MS(ESI)：596.1([M+H]+)。
b)2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-[1-[1-(3-哌嗪-1-基丙基)三唑-4-基]乙氧基] 异吲哚啉-1,3-二酮
于0℃在氮气气氛下向4-[3-[4-[1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氧基乙基]三唑-1-基]丙基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(100mg,167umol)在DCM(3.0mL)中的溶液加入三氟乙酸(1.34g,11mmol,905uL)。将反应混合物升温至室温并搅拌3h。将反应混合物在减压下浓缩并干燥，以得到标题化合物(110mg，166umol，98％产率)，为浅棕色固体(TFA盐)。MS(ESI)：496.3([M+H]+)。
连接酶75：3-[4-[1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氧基乙基]三唑-1-基]丙酸
a)3-(4-(1-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙 基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丙酸叔丁酯
于室温向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-(1-甲基丙-2-炔基氧基)异吲哚啉-1,3-二酮(230mg,704umol)和3-叠氮基丙酸叔丁酯(120mg,704umol)在DMSO(3.0mL)和水(0.5mL)中的混合物先后加入抗坏血酸钠(41mg,211umol)和硫酸铜(11.2mg,70umol)。将反应混合物在室温搅拌16h。将反应混合物用水稀释并用含5％甲醇的二氯甲烷萃取。将有机层用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。在二氧化硅(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗残余物，以得到标题化合物(250mg，492umol，69％产率)，为灰白色固体。MS(ESI)：498.3([M+H]+)。
类似于连接酶74步骤b)制备标题化合物。
连接酶76：2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-(1-甲基丙-2-炔基氧基)异吲哚啉-1,3-二酮
在室温在氮气气氛下向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-羟基-异吲哚啉-1,3-二酮(5.0g,18.2mmol)和1-甲基丙-2-炔基4-甲基苯磺酸盐(4.91g,21.8mmol)在DMF(50mL)中的混合物加入碳酸钠(2.90g,27.3mmol)。将反应混合物在80℃加热24h。将反应混合物冷却至室温，用水稀释，并用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。在二氧化硅(PE/EtOAc 0-100％)上纯化粗残余物，以得到标题化合物(3.7g，11mmol，60％产率)，为灰白色固体。MS(ESI)：327.2([M+H]+)。
连接酶77：5-(3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
a)9-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]-3,9-二氮杂螺 [5.5]十一烷-3-甲酸叔丁酯
于室温向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(200mg,724μmol,1.0eq)和3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸叔丁酯(184mg,724μmol,1.0eq)在DMSO(1.5mL)中的搅拌溶液加入DIPEA(187mg,253μL,1.45mmol,2.0eq)。将反应混合物在90℃下搅拌过夜。然后将反应混合物倒入EtOAc/THF(1:1)中并顺序地用水和用盐水萃取。有机相经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-100％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(334mg，654μmol，90％产率)，为绿色固体。MS(ESI):455.4([M+H-C4H8]+)。
b)5-(3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1, 3-二酮
于室温向9-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸叔丁酯(334mg,654μmol,1.0eq)在二噁烷(6mL)中的搅拌溶液加入在二噁烷中的4M HCl(477mg,454μL,13.1mmol,20.0eq)。将反应混合物在室温搅拌2h。产物通过过滤收集，用乙醚洗涤并真空干燥，以得到标题化合物(336mg，752μmol，100％产率)，为白色固体，盐酸盐。MS(ESI)：411.4([M+H]+)。
实例1
4-[[7-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-7-氧代-庚基]氨基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001001
a)4-[2-(3-溴苯氧基)乙基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯
于0℃向3-溴苯酚(7.51g,43.4mmol,1.0eq)、4-(2-羟乙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(10g,43.4mmol,1.0eq)和三苯膦(17.0g,65.1mmol,1.5eq)在THF(100mL)中的溶液加入偶氮二甲酸二乙酯(9.07g,52.1mmol,1.2eq)。将反应混合物在25℃搅拌2h。混合物用水稀释，并用EtOAc萃取。将合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并且在减压下浓缩。通过制备型-HPLC(FA)纯化残余物，以得到标题化合物(16g，41.5mmol，96％产率)，为浅黄色油。MS(ESI)：385.1/387.1([M+H]+)。
b)1-[2-(3-溴苯氧基)乙基]哌嗪
将4-[2-(3-溴苯氧基)乙基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(16g,41.5mmol,1.0eq)于在二噁烷中的0.83M HCl(50mL,41.5mmol,1.0eq)中的溶液在25℃搅拌2h。将反应混合物浓缩。将粗产物用NaHCO3溶液碱化至pH＝7，用EtOAc萃取，并将合并的有机层用盐水洗涤。将合并的有机层经硫酸钠干燥，浓缩以得到标题化合物(11g，38.5mmol，93％产率)，为浅黄色油。MS(ESI)：286.8([M+H]+)。
c)4-[2-(3-溴苯氧基)乙基]哌嗪-1-甲酸苄酯
向1-[2-(3-溴苯氧基)乙基]哌嗪(11g,38.5mmol,1.0eq)、三乙胺(16.1mL,115mmol,3.0eq)在DCM(200mL)中的溶液中添加氯甲酸苄酯(7.9g,46.2mmol,1.2eq)。将反应在25℃搅拌15h。混合物用水稀释，并用EtOAc萃取。将合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并且在减压下浓缩。通过制备型HPLC(FA)纯化残余物，以得到标题化合物(13.3g，31.7mmol，产率82％)，其为黄色油状物。MS(ESI)：418.0/420.0([M+H]+)。
d)8-[3-[2-(4-苄基氧基羰基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1] 辛烷-3-甲酸叔丁酯
将3-Boc-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷(11695mg,55.0mmol,1.1eq)、BrettphosPd G3(2147mg,2.5mmol,0.05eq)、4-[2-(3-溴苯氧基)乙基]哌嗪-1-甲酸苄酯(21g,50mmol,1.0eq)和碳酸钾(13843mg,100mmol,2.0eq)在叔丁醇(100mL)中的混合物在N2于85℃加热16h。将混合物过滤，然后通过制备型-HPLC(碱)纯化，以得到标题化合物(12g，21.7mmol，33％产率)，为黄色油。MS(ESI)：551.6([M+H]+)。
e)4-[2-[3-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)苯氧基]乙基]哌嗪-1-甲酸苄酯
将8-[3-[2-(4-苄基氧基羰基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯(3000mg,5.45mmol,1.0eq)和在二噁烷中的4M HCl(20mL,5.45mmol,1.0eq)在甲醇(100mL)中的混合物在N2于85℃加热16h。将混合物过滤，然后通过制备型-HPLC(碱)纯化，以得到标题化合物(2.5g，5.55mmol，101％产率)，为黄色油。
f)4-[2-[3-[3-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基] 苯氧基]乙基]哌嗪-1-甲酸苄酯
将4-溴-6-氯-哒嗪-3-胺(1279mg,6.1mmol,1.3eq)、4-[2-[3-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)苯氧基]乙基]哌嗪-1-甲酸苄酯盐酸盐(2.3g,4.7mmol,1.0eq)和三乙胺(1.32mL,9.4mmol,2.0eq)在DMF(10mL)中的混合物在85℃加热16h。将混合物倒入水中，用EtOAc萃取，用盐水洗涤，真空浓缩，并将残余物在硅胶柱(DCM/EtOAc＝2:1)上纯化，以得到标题化合物(2g，3.4mmol，69％产率)，为淡黄色固体。MS(ESI)：578.3([M+H]+)。
g)4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛 烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-甲酸苄酯
将2-羟基苯基硼酸(35.7mg,0.26mmol,1.5eq)、Brettphos Pd G3(14.8mg,0.02mmol,0.1eq)、碳酸钠(36.6mg,0.35mmol,2.0eq)和4-[2-[3-[3-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-甲酸苄酯(0.1g,0.17mmol,1.0eq)在叔丁醇(3mL)中的混合物在氮气下在90℃搅拌16h。在硅胶柱上纯化混合物以得到标题化合物(60mg，0.09mmol，54％产率)，为黄色油。MS(ESI)：636.5([M+H]+)。
h)2-[6-氨基-5-[8-[3-(2-哌嗪-1-基乙氧基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛 烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚
将4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-甲酸苄酯(400mg,0.63mmol,1.0eq)和碳载钯(0.07mL,0.06mmol,0.1eq)在甲醇(10mL)中的混合物在H2下于20℃搅拌16h。将混合物过滤、浓缩并在硅胶柱(TFA)上纯化，以得到标题化合物(316mg，0.51mmol，82％产率)，为黄色固体，2,2,2-三氟乙酸盐。MS(ESI)：387.3([M+H]+)。
i)4-[[7-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环 [3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-7-氧代-庚基]氨基]-2-(2,6-二氧代-3-哌 啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
将连接酶1(10mg,0.02mmol,1.0eq)、2-[6-氨基-5-[8-[3-(2-哌嗪-1-基乙氧基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚(12.5mg,0.02mmol,1.0eq)、HATU(14mg,0.04mmol,1.5eq)和DIPEA(6.5mg,0.05mmol,2.0eq)在DMF(5mL)中的混合物在25℃搅拌2h。将混合物真空浓缩，然后通过制备型-HPLC纯化，以得到标题化合物(4.4mg，0.005mmol，18％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：885.6([M+H]+)。
实例2
4-[4-[3-[9-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-基]-3-氧代-丙基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001021
a)9-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-甲酸叔丁 酯
向4-溴-6-氯哒嗪-3-胺(600mg,2.88mmol,1.0eq)和1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-甲酸叔丁酯(812mg,3.17mmol,1.1eq)在DMA(8mL)中的搅拌溶液中添加碳酸钾(1.19g,8.64mmol,3.0eq)。将反应混合物加热至110℃并搅拌20h。将反应混合物倒入水中，并且用EtOAc萃取。合并有机层，用饱和NaHCO3、水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-100％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(1.02g，2.66mmol，92％产率)，为浅棕色固体。MS(ESI)：384.2([M+H]+)。
b)9-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷- 4-甲酸叔丁酯
将9-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-甲酸叔丁酯(1.02g,2.66mmol,1.0eq)、(2-羟基苯基)硼酸(733mg,5.31mmol,2.0eq)、K2CO3(1.1g,7.97mmol,3.0eq)和Ruphos Pd G3(111mg,133μmol,0.05eq)在脱气的二噁烷(10mL)和水(1mL)的混合物中的悬浮液在氩气下于120℃搅拌16h。将反应混合物倒入饱和NaHCO3，并且用EtOAc萃取。将有机层合并，用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-100％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(860mg，1.95mmol，73％产率)，为浅棕色固体。MS(ESI)：442.4([M+H]+)。
c)2-[6-氨基-5-(1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)哒嗪-3-基]苯酚
向9-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-甲酸叔丁酯(330mg,747μmol,1.0eq)在DCM(4mL)中的冷却(0℃)溶液加入在二噁烷中的4M HCl(934μL,3.74mmol,5.0eq)。允许反应混合物达到室温并搅拌16h。将反应混合物在真空中浓缩以得到标题化合物(303mg，732μmol，97％产率)，为白色固体，盐酸盐。MS(ESI)：342.3([M+H]+)。
d)4-[4-[3-[9-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-1-氧杂-4,9-二氮杂螺 [5.5]十一烷-4-基]-3-氧代-丙基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3- 二酮
将连接酶2(16mg,38.7μmol,1.0eq)、HATU(18.4mg,48.4μmol,1.25eq)和DIPEA(40mg,54.1μL,310μmol,8.0eq)与DMF(1mL)合并。然后加入2-(6-氨基-5-(1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)哒嗪-3-基)苯酚盐酸盐(15.4mg,40.6μmol,1.05eq)。将反应混合物在室温搅拌2h，真空浓缩并且通过制备型-HPLC纯化，以得到标题化合物(16mg，21.7μmol，56％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：737.5([M+H]+)。
实例3
4-[[1-[9-[4-[4-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯基]哌嗪-1-基]-9-氧代-壬基]三唑-4-基]甲基氨基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001041
a)4-(4-(3-羟基哌啶-1-基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
向密封管中装入4-(4-碘苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(2.5g,6.44mmol)、哌啶-3-醇(1.63g,16.1mmol)、无水磷酸三钾(4.1g,19.3mmol)和L-脯氨酸99％(370mg,3.22mmol)和DMF(30mL)。将反应混合物用氮气吹扫15min并添加碘化铜(I)(613mg,3.22mmol)，再继续吹扫5min并将反应混合物加热至100℃持续16h。将反应冷却至室温，通过硅藻土床，用EtOAc洗涤并在减压下浓缩。在硅胶柱(PE/EtOAc 0-90％)上纯化粗残余物，以得到标题化合物(1.3g，3.60mmol，55％产率)，为灰白色固体。MS(ESI)：362.3([M+H]+)。
b)4-(4-(3-((3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)氧基)哌啶-1-基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁 酯
于0℃向4-[4-(3-羟基-1-哌啶基)苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.2g,3.32mmol)在二甲基甲酰胺(20mL)中的溶液加入氢化钠60％矿物油分散液(229mg,9.96mmol)并将反应混合物加热至55℃持续1h。将反应混合物冷却至室温并加入在二甲基甲酰胺(10mL)中的4-溴-6-氯哒嗪-3-胺(1.73g,8.3mmol)并在80℃加热4h。反应混合物用饱和氯化铵溶液淬灭并用EtOAc萃取。将有机层用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。在硅胶柱(PE/EtOAc 20-80％)上纯化粗残余物，以得到标题化合物(0.6g，1.2mmol，36％产率)，为浅棕色固体。MS(ESI)：489.2([M+H]+)。
c)4-(4-(3-((3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)氧基)哌啶-1-基)苯基)哌嗪- 1-甲酸叔丁酯
在密封管中，加入4-[4-[3-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)氧基-1-哌啶基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.0g,2.04mmol)、(2-羟基苯基)硼酸(338mg,2.45mmol)、[1,1′-双(二苯基膦)二茂铁]二氯钯(II)与DCM的络合物(167mg,204.5μmol)和碳酸钾(847.87mg,6.13mmol)，随后加入1,4-二噁烷(14mL)和水(2mL)，并将反应混合物用氮气脱气10min。将反应混合物加热至120℃持续12h。将反应冷却至环境温度，通过硅藻土床，用EtOAc洗涤并在减压下浓缩。在硅胶柱(PE/EtOAc 10-80％)上纯化粗残余物，以得到标题化合物(0.52g，951μmol，46％产率)，为棕色固体。MS(ESI)：547.3([M+H]+)。
d)2-(6-氨基-5-((1-(4-(哌嗪-1-基)苯基)哌啶-3-基)氧基)哒嗪-3-基)苯酚
于0℃向4-[4-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(125mg,228μmol)在DCM(2mL)中的溶液加入三氟乙酸(260mg,2.29mmol,176.16μL)并将其在室温搅拌3h。将反应混合物在减压下浓缩，并与DCM共蒸馏，以得到标题化合物(100mg，223μmol，97％产率)，为棕色半固体。MS(ESI)：447.5([M+H]+)。
e)4-[[1-[9-[4-[4-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯 基]哌嗪-1-基]-9-氧代-壬基]三唑-4-基]甲基氨基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚 啉-1,3-二酮
向螺旋盖小瓶(8mL)装入2-[6-氨基-5-[[1-(4-哌嗪-1-基苯基)-3-哌啶基]氧基]哒嗪-3-基]苯酚(60mg,134umol)、连接酶3(68.6mg,134umol)、DMF(1.0mL)，并在室温向该反应混合物先后加入DIPEA(86.8mg,117uL,671umol)和HATU(76.6mg,201umol)，并将反应混合物在定轨振荡器上保持16小时。将反应混合物用水稀释，并且用EtOAc萃取。于50℃在Genevac下除去挥发物。通过制备型-HPLC纯化粗残余物，以得到标题化合物(13.0mg，13.8μmol，10％产率)，为浅黄色固体，三氟乙酸盐。MS(ESI)：940.0([M+H]+)。
实例4
4-[[1-[12-[4-[4-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯基]哌嗪-1-基]-12-氧代-十二烷基]三唑-4-基]甲基氨基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001061
标题化合物(15.1mg，15.4μmol，11％产率)以类似于实例3步骤e的方式使用连接酶4制备为黄色固体，三氟乙酸盐。MS(ESI)：982.0([M+H]+)。
实例5
4-[[7-[4-[2-[3-[7-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-7-氧代-庚基]氨基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001062
a)4-[3-[2-(4-叔丁氧羰基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷- 7-甲酸苄酯
4-(2-(3-溴苯氧基)乙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(188mg,487μmol,1.0eq)、4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-7-甲酸苄酯(120mg,487μmol,1.0eq)、叔丁醇钠(60.9mg,633μmol,1.3eq)、乙酸钯(II)(5.47mg,24.4μmol,0.05eq)和Ruphos(22.7mg,48.7μmol,0.1eq)在脱气的二噁烷(5mL)中的悬浮液于100℃在氩气下搅拌20h。将反应混合物倒入饱和NaHCO3，并且用EtOAc萃取。将有机层合并，并用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0至100％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(80mg，145μmol，26％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：551.4([M+H]+)。
b)4-[2-[3-(4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-基)苯氧基]乙基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯
向4-(3-(2-(4-(叔丁氧羰基)哌嗪-1-基)乙氧基)苯基)-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-7-甲酸苄酯(140mg,254μmol,1.0eq)在甲醇(2mL)中的溶液加入10％钯/碳(27.1mg,25.4μmol,0.10eq)。在H2(气球)下，将反应混合物在回流温度下搅拌2h。通过过滤收集催化剂，用甲醇洗涤。浓缩滤液，以得到标题化合物(105mg，252μmol，产率99％)，其为浅棕色油状物。MS(ESI)：417.4([M+H]+)。
c)4-[2-[3-[7-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-基]苯氧 基]乙基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯
向4-溴-6-氯哒嗪-3-胺(25mg,120μmol,1.0eq)和4-(2-(3-(4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-基)苯氧基)乙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(50mg,120μmol,1.0eq)在DMA(2mL)中的搅拌溶液中添加碳酸钾(33.2mg,240μmol,2.0eq)。将反应混合物加热至110℃并搅拌20h。将反应混合物倒入水中，并且用EtOAc萃取。合并有机层，用饱和NaHCO3、水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(20mg，37μmol，31％产率)，为棕色油。MS(ESI)：544.3([M+H]+)。
d)4-[2-[3-[7-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷- 4-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯
将4-(2-(3-(7-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-基)苯氧基)乙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(30mg,55.1μmol,1.0eq)、(2-羟基苯基)硼酸(19mg,138μmol,2.5eq)和碳酸钾(22.9mg,165μmol,3.0eq)和随后的RuPhos Pd G3(1.38mg,1.65μmol,0.03eq)在脱气的二噁烷(10mL)和水(1mL)的混合物中的悬浮液在120℃搅拌16h。将反应混合物倒入饱和NaHCO3，并且用EtOAc萃取。将有机层合并，用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-5％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(15mg，22μmol，41％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：602.5([M+H]+)。
e)2-[6-氨基-5-[4-[3-(2-哌嗪-1-基乙氧基)苯基]-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-7- 基]哒嗪-3-基]苯酚盐酸盐
向4-(2-(3-(7-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-基)苯氧基)乙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(7mg,11.6μmol,1.0eq)在DCM(0.5mL)中的冷却(0℃)溶液加入在二噁烷中的4M HCl(8.72μL,34.9μmol,3.0eq)。允许反应混合物达到室温并搅拌20h。将反应混合物在真空中浓缩以得到标题化合物(5mg，10.0μmolμmol，86％产率)，为白色固体，盐酸盐。MS(ESI)：502.4([M+H]+)。
f)4-[[7-[4-[2-[3-[7-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-4,7-二氮杂螺 [2.5]辛烷-4-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-7-氧代-庚基]氨基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶 基)异吲哚啉-1,3-二酮
将连接酶1(3.92mg,9.76μmol,1.05eq)、HATU(5.3mg,13.9μmol,1.5eq)和DIPEA(12mg,16.2μL,92.9μmol,10.0eq)与DMF(0.5mL)合并。加入2-(6-氨基-5-(4-(3-(2-(哌嗪-1-基)乙氧基)苯基)-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-7-基)哒嗪-3-基)苯酚盐酸盐(5mg,9.29μmol,1.0eq)。将反应混合物在22℃搅拌2h。将粗反应混合物真空浓缩，并直接通过制备型-HPLC纯化，以得到标题化合物(2mg，2.2μmol，22％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：885.5([M+H]+)。
实例6
4-[[9-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-9-氧代-壬基]氨基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001091
a)9-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]壬酸
2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(160mg,0.58mmol,1.0eq)、9-氨基壬酸(110mg,0.64mmol,1.1eq)和DIPEA(225mg，1.74mmol，3.0eq)在DMSO(5mL)中的混合物在80℃搅拌12小时。将混合物在硅胶柱上纯化，以得到标题化合物(40mg，0.09mmol，16％产率)，为白色固体。MS(ESI)：430.3([M+H]+)。
b)4-[[9-[4-[2-[3-[(1R,5S)-3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮 杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-9-氧代-壬基]氨基]-2-(2,6-二氧 代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
将2-[6-氨基-5-[(1R,5S)-8-[3-(2-哌嗪-1-基乙氧基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚(30mg,0.06mmol,1.0eq)、连接酶5(33mg,0.08mmol,1.3eq)、HATU(34mg,0.09mmol,1.5eq)和DIPEA(0.03mL,0.18mmol,3.0eq)在DMF(5mL)中的混合物在25℃搅拌2h。将混合物真空浓缩，然后通过制备型-HPLC(FA)纯化，以得到标题化合物(3.2mg，0.003mmol，5％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：913.5([M+H]+)。
实例7
4-[[1-[12-[9-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-基]-12-氧代-十二烷基]三唑-4-基]甲基氨基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001092
向螺旋盖小瓶(8mL)装入2-(6-氨基-5-(1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)哒嗪-3-基)苯酚(20mg,0.053mmol)、连接酶4(29mg,0.053mmol)、DMF(0.5mL)。先后加入DIPEA(34.20mg,0.046mL,0.264mmol)和HATU(30.1mg,0.079mmol)，并将反应混合物在室温搅拌16h。将其用水稀释，并用EtOAc萃取。除去挥发物。通过制备型-HPLC纯化粗残余物，以得到标题化合物化合物(11.2mg，11.7μmol，22％产率)，为灰白色固体，三氟乙酸盐。MS(ESI)：876([M+H]+)。
实例8
4-[[1-[15-[4-[4-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯基]哌嗪-1-基]-15-氧代-十五烷基]三唑-4-基]甲基氨基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001101
标题化合物(7.3mg，6.24μmol，13％产率)以类似于实例3步骤e的方式使用连接酶6制备为浅黄色固体，三氟乙酸盐。MS(ESI)：1023.9([M+H]+)。
实例9
外消旋-4-[[1-[4-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-4-氧代-丁酰基]-4-哌啶基]氧基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001111
a)4-(2-羟乙基)哌嗪-1-甲酸苄酯
在0℃-5℃向2-(哌嗪-1-基)乙烷-1-醇(4.5g,4.24ml,34.6mmol,1.0eq)和Et3N(3.5g,4.82ml,34.6mmol,1.0eq)在THF(150mL)中的搅拌溶液历经15min逐滴加入氯甲酸苄酯(5.9g,4.87ml,34.6mmol,1.0eq)。将反应混合物在0℃-5℃搅拌35min并然后允许温热至室温。然后将反应混合物再搅拌5小时。产生白色悬浮液。将反应混合物在EtOAc和水之间分配。分离各层。将有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，并且在真空中浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-5％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(3.04g，11.5mmol，33％产率)，为无色油。MS(ESI)：265.0([M+H]+)。
b)8-(3-苄氧基苯基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯
向1-(苄氧基)-3-溴苯(2g,7.6mmol,1.0eq)和3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯(1.69g,7.98mmol,1.05eq)在t-BuOH(12.3mL)中的搅拌悬浮液加入K2CO3(2.1g,15.2mmol,2.0eq)。将反应用氩气脱气5min。然后添加RuPhos Pd G3(636mg,760μmol,0.1eq)。然后将反应混合物在120℃搅拌过夜，倒入EtOAc/THF(2:1)中并顺序地用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-15％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(2.54g，6.4mmol，85％产率)，为黄色油。MS(ESI)：395.4([M+H]+)。
c)8-(3-羟基苯基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯
向250ml双颈圆底烧瓶装入8-(3-苄氧基苯基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯(2.54g,6.44mmol,1.0eq)、甲酸铵(8.12g,129mmol,20eq)和甲醇(150mL)。将烧瓶用氩气脱气。加入催化剂10％钯/碳(685mg,644μmol,0.1eq)。将反应混合物在70℃加热15h。通过过滤除去催化剂并用甲醇洗涤。在真空中浓缩滤液。将残余物分配在EtOAc/THF(1:1)和水之间。分离各层。有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，并真空浓缩，以得到标题化合物(1.89g，6.2mmol，96％产率)，为白色固体。MS(ESI)：305.3([M+H]+)。
d)8-[3-[2-(4-苄基氧基羰基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1] 辛烷-3-甲酸叔丁酯
于室温向8-(3-羟基苯基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯(1.892g,6.22mmol,1.0eq)、4-(2-羟乙基)哌嗪-1-甲酸苄酯(1.81g,6.84mmol,1.1eq)和偶氮二甲酸二叔丁酯(1.57g,6.84mmol,1.1eq)在THF(27mL)中的搅拌溶液加入三苯膦(1.79g,6.84mmol,1.1eq)。将反应混合物搅拌过周末，在EtOAc/THF(1:1)和0.5M氢氧化钠水溶液之间分配。用EtOAc萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并且在真空中浓缩。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-100％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(3.81g，5.5mmol，89％产率)，为白色固体。MS(ESI)：551.5([M+H]+)。
e)4-[2-[3-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)苯氧基]乙基]哌嗪-1-甲酸苄酯
于室温向8-[3-[2-(4-苄氧基羰基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯(3.81g,4.84mmol,1.0eq)在DCM(10mL)中的搅拌溶液加入TFA(3.7ml,48.4mmol,10eq)。将反应混合物搅拌3h。将溶剂真空浓缩。将残余物在EtOAc和1M盐酸水溶液之间分配。用EtOAc萃取水层。将水层的pH调节至14，然后将其用EtOAc/THF(1:1)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，并真空浓缩，以得到标题化合物(1.92g，4.26mmol，88％产率)，为浅棕色油。MS(ESI)：451.4([M+H]+)。
f)4-[2-[3-[3-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基] 苯氧基]乙基]哌嗪-1-甲酸苄酯
于室温向4-[2-[3-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)苯氧基]乙基]哌嗪-1-甲酸苄酯(1.92g,4.2mmol,1.0eq)和4-溴-6-氯哒嗪-3-胺(1.15g,5.5mmol,1.3eq)在DMSO(10.7mL)中的搅拌悬浮液加入K2CO3(3.53g,25.6mmol,6.0eq)。将反应混合物搅拌15h。将溶剂在真空浓缩。将残余物在EtOAc和1M盐酸水溶液之间分配。将水层用EtOAc萃取，通过加入40mL 2M氢氧化钠水溶液碱化并用EtOAc/THF(1:1)萃取。合并的有机层经硫酸钠干燥，并且在真空中浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-5％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(1.92g，3.3mmol，78％产率)，为棕色固体。MS(ESI):578.4(35Cl[M+H]+)。
g)4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛 烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-甲酸苄酯
于室温向4-[2-[3-[3-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-甲酸苄酯(1.925g,3.33mmol,1.0eq)和(2-羟基苯基)硼酸(1.15g,8.32mmol,2.5eq)在1,4-二噁烷(75.2mL)和(7.5mL)中的搅拌悬浮液加入K2CO3(1.61g,11.7mmol,3.5eq)。将反应混合物用氩气脱气10min。加入RuPhos Pd G3(278mg,333μmol,0.1eq)。将反应混合物在90℃加热2h。然后将反应混合物分配在EtOAc/THF(1:1)和水之间。用EtOAc萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并且在真空中浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-10％)和胺改性的硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-60％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(1.02g，1.6mmol，48％产率)，为浅黄色固体。MS(ESI)：636.5([M+H]+)。
h)2-[6-氨基-5-[8-[3-(2-哌嗪-1-基乙氧基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛 烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚
于室温将4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-甲酸苄酯(0.98g,1.54mmol,1.0eq)在甲醇(100mL)和THF(20mL)中的搅拌溶液用氩气脱气10min。加入10％钯/碳(328mg,308μmol,0.2eq)。将反应混合物用H2脱气5min。然后将反应混合物在H2气球下于室温搅拌过夜。过滤反应混合物，并将滤液真空浓缩，以得到标题化合物(697mg，1.39mmol，90％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：500.3([M-H]-)。
i)4-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环 [3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-4-氧代-丁酸叔丁酯
于室温向2-[6-氨基-5-[8-[3-(2-哌嗪-1-基乙氧基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚(170mg,339μmol,1.0eq)、4-(叔丁氧基)-4-氧代丁酸(59mg,339μmol,1.0eq)和DIPEA(131mg,178μL,1.02mmol,3.0eq)在DMF(1mL)中的搅拌溶液加入HATU(258mg,678μmol,2.0eq)。将反应混合物搅拌4h。将反应混合物在EtOAc/THF(1:1)和饱和碳酸氢盐水溶液之间分配。用EtOAc萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并且在真空中浓缩。在胺改性的硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-60％)上(DCM/MeOH 0-10％)纯化粗材料，以得到标题化合物(79mg，120μmol，35％产率)，为白色固体。MS(ESI)：658.4([M+H]+)。
j)4-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环 [3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-4-氧代-丁酸三盐酸盐
于室温向4-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-4-氧代-丁酸叔丁酯(79mg,120μmol,1.0eq)在1,4-二噁烷(0.5mL)中的搅拌溶液加入在1,4-二噁烷中的4M盐酸溶液(3.15g,3mL,12mmol,99.9eq)。将反应混合物搅拌15h。将溶剂真空浓缩，以得到标题化合物(102mg，122μmol，102％产率)，为黄色固体，三盐酸盐。MS(ESI)：602.3([M+H]+)。
k)外消旋-4-[[1-[4-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二 氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-4-氧代-丁酰基]-4-哌啶基]氧 基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
于室温向4-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-4-氧代-丁酸三盐酸盐(30mg,34.1μmol,1.0eq)、连接酶7(13.4mg,34.1μmol,1.0eq,HCl盐)和DIPEA(35.3mg,47.7μL,273μmol,8.0eq)在DMF(1mL)中的搅拌溶液加入HATU(25.9mg,68.2μmol,2.0eq)。将反应混合物在室温搅拌2h。通过制备型-HPLC纯化粗材料，以得到标题化合物(12mg，10.3μmol，30％产率)，为黄色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：939.4([M-H]-)。
实例10
外消旋-5-[[1-[4-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-4-氧代-丁酰基]-4-哌啶基]氧基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001151
向4-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-4-氧代-丁酸三盐酸盐(30mg,34.1μmol,1.0eq)、连接酶8(13.4mg,34.1μmol,1.0eq,HCl盐)和DIPEA(35.3mg,47.7μL,273μmol,8.0eq)在DMF(1mL)中的搅拌溶液加入HATU(25.9mg,68.2μmol,2.0eq)。将反应混合物在室温下搅拌2h。通过制备型-HPLC纯化粗材料，以得到标题化合物(12mg，10.3μmol，30％产率)，为黄色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：939.4([M-H]-)。
实例11
外消旋-4-[[8-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-8-氧代-辛基]氨基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001152
于室温向2-[6-氨基-5-[8-[3-(2-哌嗪-1-基乙氧基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚(25mg,49.8μmol,1.0eq)、连接酶9(0.7mg,49.8μmol,1.0eq)和DIPEA(19.3mg,26.1μL,150μmol,3.0eq)在DMF(0.5mL)中的搅拌溶液加入HATU(28.4mg,74.8μmol,1.5eq)。将反应混合物在室温搅拌5h。通过制备型-HPLC纯化粗材料，以得到标题化合物(23mg，20.4μmol，41％产率)，为黄色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：897.4([M-H]-)。
实例12
外消旋-4-[[6-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-6-氧代-己基]氨基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001161
于室温向2-[6-氨基-5-[8-[3-(2-哌嗪-1-基乙氧基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚(25mg,49.8μmol,1.0eq)、连接酶10(19.3mg,49.8μmol,1.0eq)和DIPEA(16.1mg,21.8μL,125μmol,2.5eq)在DMF(0.5mL)中的搅拌溶液加入HATU(28.4mg,74.8μmol,1.5eq)。将反应混合物在室温搅拌2h。通过制备型-HPLC纯化粗材料，以得到标题化合物(26mg，23.7μmol，48％产率)，为黄色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：869.4([M-H]-)。
实例13
外消旋-4-[4-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-羰基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
于室温向2-[6-氨基-5-[8-[3-(2-哌嗪-1-基乙氧基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚(28mg,55.8μmol,1.0eq)、连接酶11(21.5mg,55.8μmol,1.0eq)和DIPEA(18mg,24.4μL,140μmol,2.5eq)在DMF(0.5mL)中的搅拌溶液加入HATU(31.8mg,83.7μmol,1.5eq)。将反应混合物在室温搅拌2h。通过制备型-HPLC纯化粗材料，以得到标题化合物(35mg，31.9μmol，57％产率)，为黄色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：869.4([M+H]+)。
实例14
外消旋-5-[4-[3-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-3-氧代-丙基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001171
于室温向2-[6-氨基-5-[8-[3-(2-哌嗪-1-基乙氧基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚(28mg,55.8μmol,1.0eq)、连接酶12(23.1mg,55.8μmol,1.0eq)和DIPEA(18mg,24.4μL,140μmol,2.5eq)在DMF(0.5mL)中的搅拌溶液加入HATU(31.8mg,83.7μmol,1.5eq)。将反应混合物在室温搅拌2h。通过制备型-HPLC纯化粗材料，以得到标题化合物(23mg，20.4μmol，37％产率)，为黄色盐，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：897.4([M+H]+)。
实例15
外消旋-4-[4-[2-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001172
于室温向2-[6-氨基-5-[8-[3-(2-哌嗪-1-基乙氧基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚(28mg,55.8μmol,1.0eq)、连接酶13(22.3mg,55.8μmol,1.0eq)和DIPEA(18mg,24.4μL,140μmol,2.5eq)在DMF(0.5mL)中的搅拌溶液加入HATU(31.8mg,83.7μmol,1.5eq)。将反应混合物在室温搅拌2h。通过制备型-HPLC纯化粗材料，以得到标题化合物(27mg，24.3μmol，44％产率)，为黄色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：883.4([M+H]+)。
实例16
外消旋-4-[4-[3-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-3-氧代-丙基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001181
于室温向2-[6-氨基-5-[8-[3-(2-哌嗪-1-基乙氧基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚(28mg,55.8μmol,1.0eq)、连接酶2(23.1mg,55.8μmol,1.0eq)和DIPEA(18mg,24.4μL,140μmol,2.5eq)在DMF(0.5mL)中的搅拌溶液加入HATU(31.8mg,83.7μmol,1.5eq)。将反应混合物在室温搅拌2h。粗材料通过制备型-HPLC纯化并冻干，以得到标题化合物(30mg，26.7μmol，48％产率)，为黄色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：897.4([M+H]+)。
实例17
外消旋-N-[4-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-4-氧代-丁基]-2-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氧基-乙酰胺
Figure BDA0003621438310001191
a)N-[4-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环 [3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-4-氧代-丁基]氨基甲酸叔丁酯
于室温向2-[6-氨基-5-[8-[3-(2-哌嗪-1-基乙氧基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚(120mg,239μmol,1.0eq)、DIPEA(92.8mg,125μL,718μmol,3.0eq)和4-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸(48.6mg,239μmol,1.0eq)在DMF(1mL)中的搅拌溶液加入HATU(191mg,502μmol,2.1eq)。将反应混合物搅拌4h。将反应混合物在EtOAc/THF(1:1)和饱和碳酸氢盐水溶液之间分配。用EtOAc萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并且在真空中浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(82mg，95.5μmol，40％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：687.4([M+H]+)。
b)4-氨基-1-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双 环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]丁-1-酮
于室温向N-[4-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-4-氧代-丁基]氨基甲酸叔丁酯(82mg,119μmol,1.0eq)在1,4-二噁烷(1mL)中的搅拌溶液加入在1,4-二噁烷中的4M盐酸溶液(1.05g,1mL,4mmol,33.5eq)。将反应混合物搅拌3h。沉淀物通过过滤收集，用EtOAc洗涤并真空干燥，以得到标题化合物(83mg，141μmol，118％产率)，为浅黄色固体，三盐酸盐。MS(ESI)：587.3([M+H]+)。
c)外消旋-N-[4-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂 双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-4-氧代-丁基]-2-[2-(2,6-二氧代-3- 哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氧基-乙酰胺
于室温向4-氨基-1-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]丁-1-酮三盐酸盐(41mg,58.9μmol,1.0eq)、连接酶14(19.6mg,58.9μmol,1.0eq)和DIPEA(38.1mg,51.4μL,294μmol,5.0eq)在DMF中的搅拌溶液加入HATU(44.8mg,118μmol,2.0eq)。将反应混合物搅拌2h。通过制备型-HPLC纯化粗材料，以得到标题化合物(10.5mg，9.3μmol，16％产率)，为黄色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：901.4([M+H]+)。
实例18
外消旋-N-[2-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基]-1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]哌啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003621438310001201
a)N-[2-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环 [3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯
于室温向2-[6-氨基-5-[8-[3-(2-哌嗪-1-基乙氧基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚(120mg,239μmol,1.0eq)、(叔丁氧羰基)甘氨酸(41.9mg,239μmol,1.0eq)和DIPEA(92.8mg,125μL,718μmol,3.0eq)在DMF(1mL)中的搅拌溶液加入HATU(182mg,478μmol,2.0eq)。将反应混合物搅拌4h。将反应混合物在EtOAc/THF(1:1)和饱和碳酸氢盐溶液之间分配。用EtOAc萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并且在真空中浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(142mg，172μmol，72％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：659.4([M+H]+)。
b)2-氨基-1-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双 环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]乙酮
于室温向N-[2-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(142mg,216μmol,1.0eq)在1,4-二噁烷(1mL)中的搅拌溶液加入在1,4-二噁烷中的4M盐酸溶液(1.05g,1mL,4mmol,18.6eq)。将反应混合物搅拌3h。沉淀物通过过滤收集，用EtOAc洗涤并真空干燥，以得到标题化合物(111mg，166μmol，77％产率)，为浅黄色固体，三盐酸盐。MS(ESI)：559.3([M+H]+)。
c)外消旋-N-[2-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂 双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基]-1-[2-(2,6-二氧代-3- 哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]哌啶-4-甲酰胺
于室温向2-氨基-1-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]乙酮三盐酸盐(40mg,59.9μmol,1.0eq)、连接酶11(23.1mg,59.9μmol,1.0eq)和DIPEA(38.7mg,52.3μL,299μmol,5.0eq)在DMF(0.7mL)中的搅拌溶液加入HATU(50.1mg,132μmol,2.2eq)。将反应混合物搅拌2h。通过制备型-HPLC纯化粗材料，以得到标题化合物(10.4mg，9.01μmol，15％产率)，为黄色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：926.4([M+H]+)。
实例19
外消旋-N-[2-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基]-1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]哌啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003621438310001211
于室温向2-氨基-1-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]乙酮三盐酸盐(40mg,59.9μmol,1.0eq)、连接酶15(23.1mg,59.9μmol,1.0eq)和DIPEA(38.7mg,52.3μL,299μmol,5.0eq)在DMF(0.7mL)中的搅拌溶液加入HATU(50.1mg,132μmol,2.2eq)。将反应混合物搅拌2h。通过制备型-HPLC纯化粗材料，以得到标题化合物(8.5mg，7.37μmol，12％产率)，为黄色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：926.4([M+H]+)。
实例20
外消旋-4-[[1-[4-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-4-氧代-丁酰基]-4-哌啶基]氨基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001221
a)4-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环 [3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-4-氧代-丁酸叔丁酯
于室温向2-[6-氨基-5-[8-[3-(2-哌嗪-1-基乙氧基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚(170mg,339μmol,1.0eq)、4-(叔丁氧基)-4-氧代丁酸(59mg,339μmol,1.0eq)和DIPEA(131mg,178μL,1.02mmol,3.0eq)在DMF(1mL)中的搅拌溶液加入HATU(258mg,678μmol,2.0eq)。将反应混合物搅拌4h。将反应混合物在EtOAc/THF(1:1)和饱和碳酸氢盐水溶液之间分配。用EtOAc萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并且在真空中浓缩。先在硅胶柱(DCM/MeOH 0-10％)上后在胺改性的硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-40％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(79mg，120μmol，35％产率)，为白色固体。MS(ESI)：658.4([M+H]+)。
b)4-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环 [3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-4-氧代-丁酸三盐酸盐
于室温向4-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-4-氧代-丁酸叔丁酯(79mg,120μmol,1.0eq)在1,4-二噁烷(0.5mL)中的搅拌溶液加入在1,4-二噁烷中的4M盐酸溶液(3.15g,3mL,12mmol,99.9eq)。将反应混合物搅拌15h。将溶剂真空浓缩，以得到标题化合物(102mg，122μmol，102％产率)，为黄色固体，三盐酸盐。MS(ESI)：602.3([M+H]+)。
c)外消旋-4-[[1-[4-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二 氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-4-氧代-丁酰基]-4-哌啶基]氨 基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
于室温向4-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-4-氧代-丁酸三盐酸盐(30mg,42.2μmol,1.0eq)、DIPEA(27.3mg,36.8μL,211μmol,5.0eq)和连接酶16(16.6mg,42.2μmol,1.0eq,HCl盐)在DMF(0.7mL)中的搅拌溶液加入HATU(35.3mg,92.8μmol,2.2eq)。将反应混合物搅拌3h。通过制备型-HPLC纯化粗材料，以得到标题化合物(13.8mg，11.8μmol，28％产率)，为黄色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：940.4([M+H]+)。
实例21
外消旋-4-[[1-[4-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-4-氧代-丁酰基]-4-哌啶基]-甲基-氨基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001231
于室温向4-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-4-氧代-丁酸三盐酸盐(30mg,42.2μmol,1.0eq)、DIPEA(27.3mg,36.8μL,211μmol,5.0eq)和连接酶17(17.2mg,42.2μmol,1.0eq,HCl盐)在DMF(0.7mL)中的搅拌溶液加入HATU(35.3mg,92.8μmol,2.2eq)。将反应混合物搅拌3h。通过制备型-HPLC纯化粗材料，以得到标题化合物(17.5mg，14.8μmol，35％产率)，为黄色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：954.5([M+H]+)。
实例22
外消旋-4-[[4-[4-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-4-氧代-丁酰基]哌嗪-1-基]甲基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001241
于室温向4-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-4-氧代-丁酸三盐酸盐(30mg,42.2μmol,1.0eq)、DIPEA(27.3mg,36.8μL,211μmol,5.0eq)和连接酶18(16.6mg,42.2μmol,1.0eq)在DMF(0.7mL)中的搅拌溶液加入HATU(35.3mg,92.8μmol,2.2eq)。将反应混合物搅拌3h。通过制备型-HPLC纯化粗材料，以得到标题化合物(13.2mg，11.3μmol，27％产率)，为灰白色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：940.4([M+H]+)。
实例23
4-[[1-[12-[4-[2-[4-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-12-氧代-十二烷基]三唑-4-基]甲基氨基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001251
a)4-(2-(4-碘苯氧基)乙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
向密封管装入4-碘苯酚(6g,27.2mmol)、4-(2-溴乙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(8g,27.2mmol)、碳酸钾(7.5g,54.2mmol)和丙酮(60mL)。将反应混合物加热至60℃持续16h。将反应混合物冷却至室温，在硅藻土床上过滤并用EtOAc洗涤并减压浓缩。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-50％)上纯化粗残余物，以得到标题化合物(9.5g，21.9mmol，80％产率)，为灰白色固体。MS(ESI)：433.0([M+H]+)。
b)4-(2-(4-(3-羟基哌啶-1-基)苯氧基)乙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
向密封管中装入4-[2-(4-碘苯氧基)乙基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(9.5g,21.9mmol)、哌啶-3-醇(5.56g,54.9mmol)、无水磷酸三钾(4g,65.9mmol)和L-脯氨酸(1.27g,10.9mmol,930μL)和DMF(95mL)。将反应混合物用氮气吹扫15min并添加碘化铜(I)(2.1g,10.9mmol)并将反应混合物加热至100℃持续16h。将反应冷却至室温，通过硅藻土床，用EtOAc洗涤并在减压下浓缩。在硅胶柱(PE/EtOAc 0-90％)上作为洗脱液纯化粗残余物，以得到标题化合物(4.5g，11.10mmol，50％产率)，为浅棕色半固体。MS(ESI)：406.0([M+H]+)。
c)4-(2-(4-(3-((3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)氧基)哌啶-1-基)苯氧基)乙基)哌嗪- 1-甲酸叔丁酯
于0℃向4-[2-[4-(3-羟基-1-哌啶基)苯氧基]乙基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(4.5g,11.1mmol)在DMF(60mL)中的溶液加入氢化钠60％矿物油分散液(765mg,33.3mmol)。将反应混合物升温至60℃并搅拌1h。将反应混合物冷却至0℃并逐滴加入在DMF(30mL)中的4-溴-6-氯-哒嗪-3-胺(5.78g,27.7mmol)。将反应混合物加热至90℃持续3h。反应混合物用饱和氯化铵溶液淬灭、用水稀释并用EtOAc萃取。将有机层用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。在硅胶柱(PE/EtOAc 50-90％)上作为洗脱液纯化粗残余物，以得到标题化合物(1.7g，2.92mmol，26％产率)，为浅棕色半固体。MS(ESI)：533.2([M+H]+)。
d)4-(2-(4-(3-((3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)氧基)哌啶-1-基)苯氧基) 乙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
在密封管中，将4-[2-[4-[3-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)氧基-1-哌啶基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.7g,3.19mmol)、(2-羟基苯基)硼酸(484mg,3.51mmol)和碳酸钾(1.32g,9.57mmol)的混合物在1,4-二噁烷(35mL)和水(7mL)中稀释，并将反应混合物用氮气脱气10min。向所得混合物加入双(二苯基膦)二茂铁]二氯钯(II)与DCM的络合物(260mg,318μmol)、再次脱气10分钟，并加热至100℃持续16h。将反应冷却至室温，通过硅藻土床，用EtOAc洗涤并在减压下浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-3％)上纯化粗残余物，以得到标题化合物(1.1g，1.64mmol，51.38％产率)，为浅棕色半固体。MS(ESI)：590.0([M+H]+)。
e)2-(6-氨基-5-((1-(4-(2-(哌嗪-1-基)乙氧基)苯基)哌啶-3-基)氧基)哒嗪-3- 基)苯酚
于0℃向4-[2-[4-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(460mg,778μmol)在DCM(6mL)中的溶液加入三氟乙酸(444mg,3.89mmol,299μL)。将反应混合物升温至室温并搅拌3h。将反应混合物在减压下浓缩，用氯仿蒸馏(2x 20mL)，以得到标题化合物(375mg，764μmol，98％产率)，为浅棕色半固体。MS(ESI)：491.2([M+H]+)。
f)4-[[1-[12-[4-[2-[4-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶 基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-12-氧代-十二烷基]三唑-4-基]甲基氨基]-2-(2,6-二氧代- 3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
向螺旋盖小瓶(8mL)装入2-[6-氨基-5-[[1-[4-(2-哌嗪-1-基乙氧基)苯基]-3-哌啶基]氧基]哒嗪-3-基]苯酚(25mg,0.041mmol)、连接酶4(0.041mmol)、DMF(0.5mL)，并向该反应混合物先后加入DIPEA(28mg,0.038mL,0.22mmol)和HATU(24mg,0.062mmol)。将反应混合物在室温搅拌16h，用水稀释并用EtOAc萃取。除去挥发物。通过制备型-HPLC纯化粗残余物，以得到标题化合物(13.2mg，12.2μmol，29％产率)，为灰白色固体，三氟乙酸盐。MS(ESI)：1026.1([M+H]+)。
实例24
4-[[1-[15-[4-[2-[4-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-15-氧代-十五烷基]三唑-4-基]甲基氨基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001271
标题化合物以类似于实例23步骤f的方式使用连接酶6制备为灰白色固体(22.0mg，20μmol，48％产率)，三氟乙酸盐。MS(ESI)：1068.1([M+H]+)。
实例25
3-[4-[4-[14-[4-[2-[4-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-14-氧代-十四烷酰基]哌嗪-1-基]苯氨基]哌啶-2,6-二酮
Figure BDA0003621438310001281
标题化合物以类似于实例23步骤f的方式使用连接酶19制备为灰白色固体(21.0mg，18.53μmol，44％产率)，三氟乙酸盐。MS(ESI)：1002.1([M+H]+)。
实例26
5-[4-[9-[4-[4-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯基]哌嗪-1-基]-9-氧代-壬基]哌嗪-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001282
向2-[6-氨基-5-[[1-(4-哌嗪-1-基苯基)-3-哌啶基]氧基]哒嗪-3-基]苯酚(40mg,0.089mmol)和连接酶20(44mg,0.089mmol)在DMF(0.4mL)中的溶液先后加入HATU(51mg,0.134mmol)和DIPEA(57mg,0.447mmol,0.078mL)并将反应混合物在室温搅拌16h。将反应混合物用水稀释，并且用EtOAc萃取。除去挥发物。通过制备型-HPLC纯化粗残余物，以得到标题化合物(4.53mg，4.89μmol，5.4％产率)，为灰白色固体，三氟乙酸盐。MS(ESI)：927.4([M+H]+)。
实例27
4-[[1-[9-[4-[2-[4-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-9-氧代-壬基]三唑-4-基]甲基氨基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001291
标题化合物(1.80mg，1.69μmol，4％产率)以类似于实例23步骤f的方式使用连接酶3制备为灰白色固体，三氟乙酸盐。MS(ESI)：984.0([M+H]+)。
实例28
4-[[1-[10-[4-[4-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯基]哌嗪-1-基]-10-氧代-癸基]三唑-4-基]甲基氨基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001292
向2-[6-氨基-5-[[1-(4-哌嗪-1-基苯基)-3-哌啶基]氧基]哒嗪-3-基]苯酚(40mg,71.4μmol,TFA盐)和连接酶21(37mg,71.48μmol)在DMF(1mL)中的溶液先后加入HATU(40mg,107.23μmol)和DIPEA(46mg,357.42umol,62μL)并将反应混合物在室温搅拌16h。将反应混合物用水稀释，并且用EtOAc萃取。除去挥发物。利用制备型-HPLC纯化粗残余物，以得到标题化合物(18.8mg，18μmol，26％产率)，为浅绿色固体。MS(ESI)：954.1([M+H]+)。
实例29
4-[[1-[11-[4-[4-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯基]哌嗪-1-基]-11-氧代-十一烷基]三唑-4-基]甲基氨基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001301
向2-[6-氨基-5-[[1-(4-哌嗪-1-基苯基)-3-哌啶基]氧基]哒嗪-3-基]苯酚(40mg,71.48μmol,TFA盐)和连接酶22(38mg,71.48μmol)在DMF(1mL)中的溶液先后加入HATU(40mg,107.23μmol)和DIPEA(46mg,357.42μmol,62.26μL)。将反应混合物在室温搅拌16h。将反应混合物用水稀释，并且用EtOAc萃取。除去挥发物。利用制备型-HPLC纯化粗残余物，以得到标题化合物(6.9mg，7.0μmol，9％产率)，为浅绿色固体。MS(ESI)：968.1([M+H]+)。
实例30
4-[[7-[4-[[3-[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氮杂环丁烷-3-基]氧基苯基]甲基]哌嗪-1-基]-7-氧代-庚基]氨基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001302
a)3-(3-甲酰基苯氧基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
将1-boc-3-碘氮杂环丁烷(6.03g,21.29mmol,1.3eq)、3-羟基苯甲醛(2g,16.38mmol,1.0eq)和碳酸铯(9.6g,29.48mmol,1.8eq)在DMF(15mL)中的混合物在微波条件下于150℃搅拌1h。将反应混合物倒入水中，用EtOAc萃取，经Na2SO4干燥并真空浓缩以得到标题化合物(2g，7.2mmol，44％产率)，为黄色油。
b)4-(3-((1-(叔丁氧羰基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)苄基)哌嗪-1-甲酸苄酯
将1-Cbz-哌嗪(1.9g,8.65mmol,1.2eq)、3-(3-甲酰基苯氧基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(2g,7.21mmol,1.0eq)和乙酸(0.5mL,7.21mmol,1.0eq)在DME(50mL)中的混合物在25℃搅拌1h。添加氰基硼氢化钠(906mg,14.4mmol,2.0eq)，将反应混合物在25℃搅拌12h。将反应混合物真空浓缩并且通过制备型-HPLC纯化，以得到标题化合物(2g，4.1mmol，57％产率)，为黄色油。MS(ESI)：482.4([M+H]+)。
c)4-(3-(氮杂环丁烷-3-基氧基)苄基)哌嗪-1-甲酸苄酯
将4-[[3-(1-叔丁氧基羰基氮杂环丁烷-3-基)氧基苯基]甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯(2g,4.15mmol,1.0eq)在三氟乙酸(5.0mL,44.85mmol,11.0eq)和DCM(20mL)中的混合物在25℃搅拌2h。真空浓缩反应混合物，以得到标题化合物(1.5g，3.9mmol，94％产率)，为黄色油。MS(ESI)：382.3([M+H]+)。
d)4-(3-((1-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)苄基)哌嗪-1-甲 酸苄酯
将4-[[3-(氮杂环丁烷-3-基氧基)苯基]甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯(1.5g,3.9mmol,1.0eq)、4-溴-6-氯-哒嗪-3-胺(820mg,3.9mmol,1.0eq)和三乙胺(1.2g，11.8mmol，3.0eq)在DMF(10mL)中的混合物在100℃搅拌12h。将反应混合物通过制备型-HPLC纯化，以得到标题化合物(1.5g，2.95mmol，54％产率)，为黄色油。MS(ESI)：509.3([M+H]+)。
e)4-(3-((1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)苄基) 哌嗪-1-甲酸苄酯
将RuPhos-Pd-G3(30mg,0.020mmol,0.05eq)、碳酸钾(285mg,2.06mmol,3.5eq)、4-[[3-[1-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)氮杂环丁烷-3-基]氧基苯基]甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯(300mg,0.59mmol,1.0eq)和2-羟基苯基硼酸(203mg,1.47mmol,2.5eq)在1,4-二噁烷(18mL)和水(1.8mL)中的混合物在N2气氛下于90℃搅拌2h。将反应混合物通过制备型-HPLC纯化，以得到标题化合物(300mg，0.53mmol，89％产率)，为黄色油。MS(ESI)：567.4([M+H]+)。
f)2-(6-氨基-5-(3-(3-(哌嗪-1-基甲基)苯氧基)氮杂环丁烷-1-基)哒嗪-3-基) 苯酚
将4-[[3-[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氮杂环丁烷-3-基]氧基苯基]甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯(300mg,0.53mmol)和10％活性炭载钯(100mg)在甲醇(10mL)中的混合物在H2气氛(15psi)下于25℃搅拌12h。将反应混合物过滤并将滤液通过制备型-HPLC纯化，以得到标题化合物(150mg，0.35mmol，65％产率)，为白色固体。MS(ESI)：433.3([M+H]+)。
g)4-[[7-[4-[[3-[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氮杂环丁烷-3-基]氧 基苯基]甲基]哌嗪-1-基]-7-氧代-庚基]氨基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3- 二酮
将连接酶1(33mg,0.080mmol,1.1eq)、Et3N(0.5mL,0.210mmol,3.0eq)、T3P(36mg,0.080mmol,1.1eq)和2-[6-氨基-5-[3-[3-(哌嗪-1-基甲基)苯氧基]氮杂环丁烷-1-基]哒嗪-3-基]苯酚(30mg,0.070mmol,1.0eq)在DMF(3mL)中的混合物于25℃搅拌1h。将反应混合物通过制备型-HPLC纯化，以得到标题化合物(3.2mg，5.5％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：816.6([M+H]+)。
实例31
外消旋-5-[4-[6-[2-[4-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]环己基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-羰基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001321
a)8-(3-苄氧基苯基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯
向1-(苄氧基)-3-溴苯(3g,11.4mmol,1.0eq)和3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯(2.54g,12mmol,1.05eq)在t-BuOH(18.5mL)中的搅拌悬浮液加入K2CO3(3.15g,22.8mmol,2.0eq)。将反应用氩气脱气5min。添加RuPhos Pd G3(954mg,1.14mmol,0.1eq)。将反应混合物在120℃下搅拌过夜。将反应混合物倒入EtOAc/THF(2:1)中并用盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-30％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(1.94g，4.9mmol，43％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：395.3([M+H]+)。
b)8-(3-羟基苯基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯
向8-(3-苄氧基苯基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯(1.94g,4.92mmol,1.0eq)在甲醇(150mL)中的搅拌溶液加入甲酸铵(6.2g,98.3mmol,20eq)。将反应混合物用氩气脱气10min。加入10％钯/碳(523mg,492μmol,0.1eq)。然后将反应混合物在70℃搅拌2h。过滤反应混合物，并且将滤液真空浓缩。将残余物溶于EtOAc/THF(1:1)并随后用水和盐水洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，并真空浓缩，以得到标题化合物(1.64g，4.9mmol，100％产率)，为灰白色固体。MS(ESI)：305.1([M+H]+)。
c)8-[3-[4-(2-甲氧基-2-氧代-乙基)环己氧基]苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1] 辛烷-3-甲酸叔丁酯
于室温向8-(3-羟基苯基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯(300mg,897μmol,1.0eq)、2-((1r,4r)-4-羟基环己基)乙酸甲酯(CAS 1124174-16-8,309mg,1.79mmol,2.0eq)和三苯膦(588mg,2.24mmol,2.5eq)在THF(3mL)中的搅拌溶液加入偶氮二甲酸二叔丁酯(454mg,1.97mmol,2.2eq)。将反应混合物在室温搅拌6h。然后将反应混合物倒入EtOAc中并顺序地用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-50％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(637mg，1.39mmol，定量产率)，为浅黄色蜡状固体。MS(ESI)：459.3([M+H]+)。
d)2-[4-[3-(3-叔丁氧基羰基-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)苯氧基]环己 基]乙酸
于室温向8-[3-[4-(2-甲氧基-2-氧代-乙基)环己氧基]苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯(400mg,872μmol,1.0eq)在THF(4mL)中的搅拌溶液加入1MLiOH水溶液(2.62mL,2.62mmol,3.0eq)。将反应混合物在室温搅拌过夜。然后滴加5N HCl水溶液(以得到pH＝1)。真空浓缩反应混合物。将产物溶解在乙腈/水(1:3)中并冻干，以得到标题化合物(560mg，869μmol，100％产率)。MS(ESI)：445.3([M+H]+)。
e)8-[3-[4-[2-(2-苄氧基羰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)-2-氧代-乙基]环 己氧基]苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯
于室温向2-[4-[3-(3-叔丁氧基羰基-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)苯氧基]环己基]乙酸(560mg,869μmol,1.0eq)、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸苄酯(CAS1211517-23-5,222mg,956μmol,1.1eq)和DIPEA(225mg,304μL,1.74mmol,2.0eq)在DMF(2.5mL)中的搅拌悬浮液加入HATU(496mg,1.3mmol,1.5eq)。将反应混合物在室温搅拌5h。通过制备型-HPLC纯化产物，以得到标题化合物(100mg，152μmol，18％产率)，为白色固体。MS(ESI)：659.7([M+H]+)。
f)6-[2-[4-[3-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)苯氧基]环己基]乙酰基]-2, 6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸苄酯
于室温向8-[3-[4-[2-(2-苄氧基羰基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)-2-氧代-乙基]环己氧基]苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯(98mg,149μmol,1.0eq)在CH2Cl2(2mL)中的搅拌溶液加入TFA(509mg,344μL,4.46mmol,30.0eq)。将反应混合物在室温搅拌2h。将反应混合物真空浓缩，然后倒入EtOAc/THF(1:3)中并用0.5N NaOH水溶液/盐水(1:1)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥并真空浓缩，以得到标题化合物(177mg，149μmol，100％产率)，为黄色油。MS(ESI)：559.5([M+H]+)。
g)6-[2-[4-[3-[3-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8- 基]苯氧基]环己基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸苄酯
向6-[2-[4-[3-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)苯氧基]环己基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸苄酯(177mg,149μmol,1.0eq)和4-溴-6-氯哒嗪-3-胺(40.3mg,194μmol,1.3eq)在DMSO(0.4mL)中的搅拌溶液加入K2CO3(123mg,893μmol,6.0eq)。将反应混合物在110℃搅拌15h。将反应混合物倒入EtOAc/THF(1:3)中并顺序地用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。粗材料在硅胶柱(DCM/MeOH 0-10％)上，以得到标题化合物(75mg，109μmol，73％产率)，为棕色油。MS(ESI):686.3(35Cl[M+H]+)。
h)6-[2-[4-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环 [3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]环己基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸苄酯
向6-[2-[4-[3-[3-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]环己基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸苄酯(92mg,134μmol,1.0eq)和(2-羟基苯基)硼酸(46.2mg,335μmol,2.5eq)在二噁烷(3.5mL)和(0.35mL)中的搅拌溶液加入K2CO3(64.8mg,469μmol,3.5eq)。将反应混合物用氩气脱气5min。加入RuPhos Pd G3(11.2mg,13.4μmol,0.1eq)。然后将反应混合物在90℃搅拌2h。将反应混合物倒入EtOAc/THF(1:1)中并顺序地用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-5％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(38mg，51.1μmol，38％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：744.6([M+H]+)。
i)2-[4-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛 烷-8-基]苯氧基]环己基]-1-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)乙酮
将6-[2-[4-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]环己基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸苄酯(38mg,51.1μmol,1.0eq)在甲醇(5mL)、THF(2.5mL)中的溶液用氩气脱气10min。加入10％钯/碳(10.9mg,10.2μmol,0.2eq)。将反应混合物用H2脱气10min。然后将反应混合物在H2气氛下于室温搅拌过夜。过滤反应混合物，并将滤液真空浓缩，以得到标题化合物(36mg，50.8μmol，99％产率)，为棕色固体。MS(ESI)：610.5([M+H]+)。
j)外消旋-5-[4-[6-[2-[4-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二 氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]环己基]乙酰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-羰基]- 1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
于室温向2-[4-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]环己基]-1-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)乙酮(35mg,57.4μmol,1.0eq)、连接酶15(24.3mg,63.1μmol,1.1eq)和DIPEA(18.5mg,25.1μL,143μmol,2.5eq)在DMF(0.5mL)中的搅拌溶液加入HATU(32.7mg,86.1μmol,1.5eq)。将反应混合物在室温搅拌3h。通过制备型-HPLC纯化粗材料，以得到标题化合物(8mg，8.2μmol，14％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：977.5([M+H]+)。
实例32
4-[[10-[4-[[3-[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氮杂环丁烷-3-基]氧基苯基]甲基]哌嗪-1-基]-10-氧代-癸基]氨基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001361
将2-[6-氨基-5-[3-[3-(哌嗪-1-基甲基)苯氧基]氮杂环丁烷-1-基]哒嗪-3-基]苯酚(30mg,0.05mmol,1.0eq)、连接酶23(27mg,0.06mmol,1.2eq)、Et3N(0.5mL,0.15mmol,3.0eq)和T3P(25mg,0.06mmol,1.2eq)在DMF(3mL)中的混合物在25℃搅拌1h。将反应混合物通过制备型-HPLC纯化，以得到标题化合物(14.5mg，16.9mmol，32％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：858.4([M+H]+)。
实例33
外消旋-5-[4-[2-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001362
于室温向2-[6-氨基-5-[8-[3-(2-哌嗪-1-基乙氧基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚(25mg,49.8μmol,1.0eq)、连接酶24(19.9mg,49.8μmol,1.0eq)和HATU(41.7mg,110μmol,2.2eq)在DMF(0.5mL)中的搅拌溶液加入DIPEA(19.3mg,26.1μL,150μmol,3.0eq)。将反应混合物搅拌2h。通过制备型-HPLC纯化粗材料，以得到标题化合物(15.9mg，14.3mmol，29％产率)，为黄色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：883.4([M+H]+)。
实例34
外消旋-5-[4-[2-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]乙基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001371
于室温向2-[6-氨基-5-[8-[3-(2-哌嗪-1-基乙氧基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚(30mg,59.8μmol,1.0eq)和连接酶25(26.8mg,59.8μmol,1.0eq)在DMF(0.5mL)中的搅拌溶液加入碘化钠(896μg,5.98μmol,0.1eq)。将反应混合物在60℃加热20h。通过制备型-HPLC纯化粗材料，以得到标题化合物(28.2mg，25.7μmol，43％产率)，为黄色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：869.4([M+H]+)。
实例35
外消旋-5-[4-[2-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]乙氧基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001381
于室温向2-[6-氨基-5-[8-[3-(2-哌嗪-1-基乙氧基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚(30mg,59.8μmol,1.0eq)和连接酶26(27.8mg,59.8μmol,1.0eq)在DMF(0.5mL)中的搅拌溶液加入碘化钠(896μg,5.98μmol,0.1eq)。将反应混合物在60℃加热20h。通过制备型-HPLC纯化粗材料，以得到标题化合物(24.9mg，22.4μmol，37％产率)，为黄色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：885.4([M+H]+)。
实例36
外消旋-5-[4-[3-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]丙氧基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001382
于室温向2-[6-氨基-5-[8-[3-(2-哌嗪-1-基乙氧基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚(30mg,59.8μmol,1.0eq)和连接酶27(28.6mg,59.8μmol,1.0eq)在DMF(0.5mL)中的搅拌溶液加入碘化钠(896μg,5.98μmol,0.1eq)。将反应混合物在60℃加热20h。通过制备型-HPLC纯化粗材料，以得到标题化合物(24.7mg，21.9μmol，37％产率)，为黄色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：899.5([M+H]+)。
实例37
4-[[1-[9-[4-[4-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯基]哌嗪-1-基]壬基]三唑-4-基]甲基氨基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001391
将连接酶28(20mg,40.44μmol)和2-[6-氨基-5-[[1-(4-哌嗪-1-基苯基)-3-哌啶基]氧基]哒嗪-3-基]苯酚(18mg,40.44μmol)在甲醇(5mL)中的溶液加入乙酸(243μg,4.04μmol,2.31e-1μL)和
Figure BDA0003621438310001392
MP-氰基硼氢化物(50mg,40.44μmol)。将其在80℃搅拌16h。将反应混合物冷却至室温，过滤并用甲醇洗涤。在减压条件下浓缩有机层。通过制备型-HPLC纯化粗残余物，以得到标题化合物(10mg，10.6μmol，26％产率)，为淡黄色固体。MS(ESI):925.4([M+H]+)。
实例38
外消旋-5-[4-[[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]甲基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001401
于室温向2-[6-氨基-5-[8-[3-(2-哌嗪-1-基乙氧基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚(30mg,59.8μmol,1.0eq)和连接酶33(26mg,59.8μmol,1.0eq)在DMF(0.5mL)中的搅拌溶液加入碘化钠(896μg,5.98μmol,0.1eq)。将反应混合物在60℃加热20h。通过制备型-HPLC纯化粗材料，以得到标题化合物(26.2mg，24.2μmol，40％产率)，为黄色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：855.4([M+H]+)。
实例39
4-[[10-[4-[3-[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氮杂环丁烷-3-基]氧基苯基]哌嗪-1-基]-10-氧代-癸基]氨基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001402
a)4-(3-羟基苯基)哌嗪-1-甲酸苄酯
于0℃向1-(3-羟苯基)哌嗪(5g,28.05mmol,1.0eq)、碳酸氢钾(4.5g,44.89mmol,1.6eq)在乙酮(50mL)和水(50mL)中的溶液加入氯甲酸苄酯(7.18g,42.08mmol,1.5eq)，将混合物在0℃搅拌2h。将反应混合物倒入水中，用EtOAc萃取，经硫酸钠干燥并真空浓缩。通过制备型-HPLC纯化粗产物，以得到标题化合物(4g，12.8mmol，45％产率)，为黄色油。MS(ESI)：313.2([M+H]+)。
b)4-(3-((1-(叔丁氧羰基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)苯基)哌嗪-1-甲酸苄酯
将1-boc-3-碘氮杂环丁烷(4.7g,16.65mmol,1.3eq)、4-(3-羟基苯基)哌嗪-1-甲酸苄酯(4g,12.81mmol,1.0eq)、碳酸铯(7.5g,23.05mmol,2.0eq)在DMF(80mL)中的混合物在80℃搅拌12h。将反应混合物倒入水中，用EtOAc萃取，经Na2SO4干燥并真空浓缩以得到标题化合物(4g，8.56mmol，66％产率)，为黄色油。MS(ESI)：468.2([M+H]+)。
c)4-(3-(氮杂环丁烷-3-基氧基)苯基)哌嗪-1-甲酸苄酯
将4-[3-(1-叔丁氧基羰基氮杂环丁烷-3-基)氧基苯基]哌嗪-1-甲酸苄酯(4g,8.56mmol,1.0eq)在TFA(10mL,89.7mmol,10eq)和DCM(50mL)中的混合物在25℃搅拌2h。浓缩反应混合物，以得到标题化合物(3g，8.17mmol，95％产率)，为黄色油。MS(ESI):368.2([M+H]+)。
d)4-(3-((1-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)苯基)哌嗪-1-甲 酸苄酯
将4-[3-(氮杂环丁烷-3-基氧基)苯基]哌嗪-1-甲酸苄酯(3g,8.16mmol,1.0eq)、4-溴-6-氯-哒嗪-3-胺(2.04g,9.8mmol,1.2eq)、Et3N(3.3g，32.66mmol，4.0eq)在DMF(50mL)中的混合物在100℃搅拌12h。将反应混合物通过制备型-HPLC纯化，以得到标题化合物(2g，4.05mmol，49％产率)，为黄色油。MS(ESI)：495.2([M+H]+)。
e)4-(3-((1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)苯基) 哌嗪-1-甲酸苄酯
将Ruphos-Pd-G3(50mg,0.030mmol,0.03eq)、K2CO3(489mg,3.54mmol,3.0eq)、4-[3-[1-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)氮杂环丁烷-3-基]氧基苯基]哌嗪-1-甲酸苄酯(500mg,1.01mmol,1.0eq)、2-羟基苯基硼酸(348mg,2.53mmol,2.5eq)在1,4-二噁烷(10mL)和水(1mL)中的混合物在N2气氛下于90℃搅拌2h。通过制备型-HPLC纯化反应混合物，以得到标题化合物(300mg，0.54mmol，52％产率)，为白色固体。MS(ESI)：553.3([M+H]+)。
f)2-(6-氨基-5-(3-(3-(哌嗪-1-基)苯氧基)氮杂环丁烷-1-基)哒嗪-3-基)苯酚
将4-[3-[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氮杂环丁烷-3-基]氧基苯基]哌嗪-1-甲酸苄酯(250mg,0.45mmol,1.0eq)和10％活性炭酸盐载钯(100mg)的混合物在H2气氛(15psi)下在甲醇(10mL)中搅拌过夜。将反应混合物过滤并将滤液通过制备型-HPLC纯化，以得到标题化合物(120mg，0.28mmol，62％产率)，为白色固体。MS(ESI)：419.3([M+H]+)。
g)4-((10-(4-(3-((1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)氮杂环丁烷-3-基)氧 基)苯基)哌嗪-1-基)-10-氧代癸基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
将连接酶23(25mg,0.06mmol,1.2eq)、2-[6-氨基-5-[3-(3-哌嗪-1-基苯氧基)氮杂环丁烷-1-基]哒嗪-3-基]苯酚(20mg,0.05mmol,1.0eq)、Et3N(0.5mL,0.14mmol,3.0eq)和T3P(27mg,0.06mmol,1.2eq)在DMF(2mL)中的混合物在25℃搅拌1h。将反应混合物通过制备型-HPLC纯化，以得到标题化合物(3.2mg，3.79μmol，7.8％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：844.5([M+H]+)。
实例40
外消旋-5-[[1-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-羰基]-4-哌啶基]氧基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001421
a)4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛 烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-甲酸(4-硝基苯基)酯
将2-[6-氨基-5-[8-[3-(2-哌嗪-1-基乙氧基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚(100mg,199μmol,1.0eq)在DCM(8mL)中的搅拌溶液冷却至0℃。加入4-硝基苯甲酰氯(40.2mg,199μmol,1.0eq)。将反应混合物在室温搅拌30min。然后将反应混合物倒入EtOAc/THF(2:1)中并顺序地用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-5％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(64mg，96μmol，48％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：667.3([M+H]+)。
b)外消旋-5-[[1-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮 杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-羰基]-4-哌啶基]氧基]-2-(2,6-二氧代- 3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
向4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-甲酸(4-硝基苯基)酯(30mg,45μmol,1.0eq)和连接酶8(19.5mg,49.5μmol,1.1eq,HCl盐)在乙腈(0.5mL)中的搅拌悬浮液加入DIPEA(14.5mg,19.6μL,112μmol,2.5eq)和DMSO(0.5mL)，以得到黄色溶液。将反应混合物在100℃搅拌过夜，然后在110℃搅拌24h。粗材料通过制备型-HPLC纯化，随后在硅胶柱(DCM/MeOH 0-5％)上纯化，以得到标题化合物(7mg，7.9μmol，18％产率)，为白色固体。MS(ESI)：885.4([M+H]+)。
实例41
外消旋-4-[[1-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-羰基]-4-哌啶基]氧基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001431
向4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-甲酸(4-硝基苯基)酯(29mg,43.5μmol,1.0eq)和连接酶7(18.8mg,47.8μmol,1.1eq,HCl盐)在DMSO(0.5mL)中的搅拌溶液加入DIPEA(14.1mg,19μL,109μmol,2.5eq)。将反应混合物在110℃搅拌24h。通过制备型-HPLC纯化粗材料，以得到标题化合物(13mg，11.7μmol，27％产率)，为浅黄色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：885.4([M+H]+)。
实例42
外消旋-N-[3-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-3-氧代-丙基]-1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]哌啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003621438310001441
a)N-[3-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环 [3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-3-氧代-丙基]氨基甲酸叔丁酯
于室温向2-[6-氨基-5-[8-[3-(2-哌嗪-1-基乙氧基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚(50mg,99.7μmol,1.0eq)、3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸(20.7mg,110μmol,1.1eq)和DIPEA(38.6mg,52.2μL,299μmol,3.0eq)在DMF(0.6mL)中的搅拌悬浮液加入HATU(75.8mg,199μmol,2.0eq)。将反应混合物在室温搅拌3h。将反应混合物倒入EtOAc/THF(1:2)中并顺序地用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-10％)上纯化材料，以得到标题化合物(9mg，13.4μmol，13％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：671.7([M-H]-)。
b)3-氨基-1-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双 环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]丙-1-酮
于室温向N-[3-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-3-氧代-丙基]氨基甲酸叔丁酯(44mg,65.4μmol,Eq:1)在二噁烷(2mL)中的搅拌混合物加入在二噁烷中的4M HCl(490μL,1.96mmol,30.0eq)。将反应混合物在室温搅拌3h。将反应混合物通过烧结玻璃过滤，并且滤饼用Et2O洗涤两次，然后真空干燥，以得到标题化合物(36mg，52.8μmol，81％产率)，为黄色固体，三盐酸盐。MS(ESI)：571.6([M-H]-)。
c)外消旋-N-[3-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂 双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-3-氧代-丙基]-1-[2-(2,6-二氧代-3- 哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]哌啶-4-甲酰胺
于室温向3-氨基-1-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]丙-1-酮三盐酸盐(36mg,52.8μmol,1.0eq)、连接酶15(22.4mg,58.1μmol,1.1eq)和DIPEA(40.9mg,55.3μL,317μmol,6.0eq)在DMF(0.6mL)中的搅拌溶液加入HATU(40.1mg,106μmol,2.0eq)。将反应混合物在室温搅拌1h。通过制备型-HPLC纯化粗材料，以得到标题化合物(20mg，17.1μmol，32％产率)，为黄色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：940.4([M+H]+)。
实例43
外消旋-3-[4-[1-[2-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基]-4-哌啶基]苯氧基]哌啶-2,6-二酮
Figure BDA0003621438310001451
于室温向2-[6-氨基-5-[8-[3-(2-哌嗪-1-基乙氧基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚(30mg,59.8μmol,1.0eq)、连接酶35(25.2mg,65.8μmol,1.1eq)和DIPEA(38.6mg,52.2μL,299μmol,5.0eq)在DMF(0.5mL)中的搅拌悬浮液加入HATU(45.5mg,120μmol,2.0eq)。将反应混合物在室温搅拌1h。粗材料通过制备型-HPLC纯化。将产物冻干以得到标题化合物(30mg，28.4μmol，47％产率)，为浅黄色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：830.4([M+H]+)。
实例44
5-[[1-[9-[4-[4-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯基]哌嗪-1-基]-9-氧代-壬基]-4-哌啶基]氧基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001461
向连接酶34(19.0mg,37.0μmol)和2-[6-氨基-5-[[1-(4-哌嗪-1-基苯基)-3-哌啶基]氧基]哒嗪-3-基]苯酚(20mg,37.0μmol,TFA盐)在DMF(0.5mL)中的搅拌溶液先后加入HATU(21mg,55.5μmol)和DIPEA(24mg,185μmol,32.22μL)并将反应混合物在室温搅拌16h。将反应混合物用水稀释，并且用EtOAc萃取。除去挥发物。通过制备型-HPLC纯化粗残余物，以得到标题化合物(7.7mg，7.3μmol，19％产率)，为灰白色固体。MS(ESI)：942.3([M+H]+)。
实例45
2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-[[外消旋-(3S)-1-[9-[4-[4-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯基]哌嗪-1-基]-9-氧代-壬酰基]吡咯烷-3-基]氨基]异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001462
标题化合物以类似于实例3步骤e的方式使用连接酶36(7.4mg，7.3μmol，19％产率)制备为浅黄色固体，三氟乙酸盐。MS(ESI)：941.3([M+H]+)。
实例46
外消旋-5-[4-[4-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]哌嗪-1-羰基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001471
a)4-[(3-溴苯基)甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯
向1-溴-3-(溴甲基)苯(2g,8mmol,1.0eq)和三乙胺(1.21g,1.67mL,12mmol,1.5eq)在THF(40mL)中的溶液加入哌嗪-1-甲酸苄酯(2.12g,1.85mL,9.6mmol,1.2eq)，并将反应混合物在环境温度搅拌16h。将粗反应混合物真空浓缩并将粗产物在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-100％)上纯化，以得到标题化合物(3.1g，7.9mmol，99％产率)，为无色胶状物。MS(ESI)：391.1([M+H]+)。
b)8-[3-[(4-苄基氧基羰基哌嗪-1-基)甲基]苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛 烷-3-甲酸叔丁酯
将在甲苯(5mL)中的Pd(OAc)2(57.7mg,257μmol,0.1eq)和2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基联苯(Ruphos)(240mg,514μmol,0.2eq)通过用氩气吹扫来脱气，随后将溶液加热至50℃持续20min。在单独的器皿中，将3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯(654mg,3.08mmol,1.2eq)、4-[(3-溴苯基)甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯(1g,2.57mmol,1.0eq)和叔丁醇钠(370mg,3.85mmol,1.5eq)溶解在甲苯(5mL)中并通过用氩气吹扫来脱气。将催化剂溶液添加到反应容器中并将所得混合物加热至110℃持续16h。将反应混合物通过硅藻土过滤，真空浓缩，并且使用DCM(+0.5％TEA)/MeOH(0-10％)作为洗脱液通过硅胶快速色谱法纯化粗材料，以得到标题化合物(936mg，1.79mmol，70％产率)，为棕色油。MS(ESI)：521.3143([M+H]+)。
c)4-[[3-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)苯基]甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯
将8-[3-[(4-苄基氧基羰基哌嗪-1-基)甲基]苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯(860mg,1.65mmol,1.0eq)溶于DCM(10mL)中并缓慢加入TFA(7.4g,5mL,64.9mmol,39.3eq)。将反应混合物在环境温度搅拌16h。将反应混合物真空浓缩，以得到标题化合物(1.4g，3.33mmol，131％产率)，为棕色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：421.3([M+H]+)。
d)4-[[3-[3-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯 基]甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯
向4-[[3-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)苯基]甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯；双-(2,2,2-三氟乙酸)(1.4g,2.7mmol,1.0eq)在DMSO(6mL)中的溶液加入4-溴-6-氯哒嗪-3-胺(619mg,2.97mmol,1.1eq)和碳酸钾(1.87g,13.5mmol,5.0eq)。将反应混合物加热至100℃持续48h。将反应混合物倒入水中，用EtOAc萃取，用盐水洗涤，并且有机层用Na2SO4干燥并真空浓缩。在硅胶柱(DCM+0.5％TEA/MeOH 0-10％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(550mg，1.0mmol，37％产率)，为棕色油。MS(ESI)：548.3([M+H]+)。
e)4-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛 烷-8-基]苯基]甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯
向4-[[3-[3-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯(388mg,708μmol,1.0eq)在二噁烷(3mL)、DMA(0.15mL)和水(0.3mL)的混合物中的溶液加入(2-羟基苯基)硼酸(244mg,1.77mmol,2.5eq)和碳酸钾(294mg,2.12mmol,3.0eq)。通过用氩气吹扫将溶液脱气，并且在加入RuPhos Pd G3(29.6mg,35.4μmol,0.05eq)后将反应混合物在90℃搅拌5h。将反应混合物倒入饱和NH4Cl溶液中，用EtOAc萃取，用盐水洗涤，并且有机层用Na2SO4干燥并真空浓缩。在硅胶柱(DCM+0.5％TEA/MeOH 0-10％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(420mg，693μmol，76％产率)，为棕色胶状物。MS(ESI)：606.5([M+H]+)。
f)2-[6-氨基-5-[8-[3-(哌嗪-1-基甲基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3- 基]哒嗪-3-基]苯酚
向4-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯(16mg,26.4μmol,1.0eq)在DCM(1mL)中的溶液小心地加入HBr(64.8mg,43.5μL,264μmol,10eq；在乙酸中33％)并将反应混合物在环境温度下搅拌2h。真空浓缩反应混合物，以得到标题化合物(14mg，29.8μmol，96％产率)，为浅棕色固体，氢溴酸盐。MS(ESI)：470.4([M+H]+)。
g)外消旋-5-[4-[4-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双 环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]哌嗪-1-羰基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异 吲哚啉-1,3-二酮
将2-[6-氨基-5-[8-[3-(哌嗪-1-基甲基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚；氢溴酸盐(35mg,63.3μmol,1.0eq)与连接酶15(26.9mg,69.7μmol,1.1eq)、HATU(36.1mg,95μmol,1.5eq)和DIPEA(40.9mg,55μL,317μmol,5.0eq)在DMF(350μL)中合并。将深橙色溶液在环境温度搅拌8h，然后进行制备型-HPLC纯化，以得到标题化合物(14mg，16.7μmol，23％产率)，为浅黄色固体，2,2,2-三氟乙酸盐。MS(ESI)：839.4([M+H]+)。
实例47
外消旋-5-[4-[3-[4-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]哌嗪-1-基]-3-氧代-丙基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001491
将2-[6-氨基-5-[8-[3-(哌嗪-1-基甲基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚；氢溴酸盐(35mg,63.3μmol,1.0eq；实例46，步骤f)与连接酶12(28.8mg,69.7μmol,1.1eq)、HATU(36.1mg,95μmol,1.5eq)和DIPEA(40.9mg,55μL,317μmol,5.0eq)在DMF(350μL)中合并。将深橙色溶液在环境温度搅拌8h，然后通过制备型-HPLC纯化，以得到标题化合物(11mg，12.7μmol，17％产率)，为浅黄色固体，2,2,2-三氟乙酸盐。MS(ESI)：868.4([M+H]+)。
实例48
外消旋-5-[4-[2-[4-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001501
将2-[6-氨基-5-[8-[3-(哌嗪-1-基甲基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚；氢溴酸盐(35mg,63.3μmol,1.0eq；实例46，步骤f)与连接酶24(27.8mg,69.7μmol,1.1eq)、HATU(36.1mg,95μmol,1.5eq)和DIPEA(40.9mg,55μL,317μmol,5.0eq)在DMF(350μL)中合并。将深橙色溶液在环境温度搅拌8h，然后通过制备型-HPLC纯化，以得到标题化合物(14mg，16.4μmol，23％产率)，为浅黄色固体，2,2,2-三氟乙酸盐。MS(ESI)：851.9([M+H]+)。
实例49
外消旋-5-[4-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-羰基]哌嗪-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001511
于室温向4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-甲酸(4-硝基苯基)酯(34mg,51μmol,1.0eq)和连接酶37(21.2mg,56.1μmol,1.1eq)在DMSO(0.6mL)中的搅拌溶液加入DIPEA(16.5mg,22.3μL,127μmol,2.5eq)。将反应混合物在115℃搅拌24h。通过制备型-HPLC纯化粗材料，以得到标题化合物(19mg，17.3μmol，34％产率)，为黄色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：870.4([M+H]+)。
实例50
外消旋-3-[4-[1-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-羰基]-4-哌啶基]苯氧基]哌啶-2,6-二酮
Figure BDA0003621438310001512
于室温向4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-甲酸(4-硝基苯基)酯(34mg,51μmol,1.0eq)和连接酶38(18.2mg,56.1μmol,1.1eq)在DMSO(0.6mL)中的搅拌溶液加入DIPEA(16.5mg,22.3μL,127μmol,2.5eq)。将反应混合物在115℃搅拌24h。粗材料通过制备型-HPLC纯化，然后在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-100％)(DCM/MeOH 0-100％)(硅胶，4g，在DCM中的0％to5％MeOH)上纯化。将产物溶解在乙腈/水中并冻干，以得到标题化合物(12mg，14.7μmol，29％产率)，为灰白色固体。MS(ESI)：816.4([M+H]+)。
实例51
外消旋-3-[4-[4-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-羰基]哌嗪-1-基]苯氧基]哌啶-2,6-二酮
Figure BDA0003621438310001521
于室温向4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-甲酸(4-硝基苯基)酯(34mg,51μmol,1.0eq)和连接酶41(18.3mg,56.1μmol,1.1eq)在DMSO(0.6mL)中的搅拌溶液加入DIPEA(16.5mg,22.3μL,127μmol,2.5eq)。将反应混合物在115℃搅拌24h。粗材料通过制备型-HPLC纯化。将产物冻干以得到标题化合物(11mg，48.2μmol，95％产率)，为浅黄色双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：817.4([M+H]+)。
实例52
外消旋-5-[3-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-羰基]-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001522
于室温向4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-甲酸(4-硝基苯基)酯(34mg,51μmol,1.0eq)和连接酶77(25.1mg,56.1μmol,1.1eq)在DMSO(0.6mL)中的搅拌溶液加入DIPEA(16.5mg,22.3μL,127μmol,2.5eq)。将反应混合物在115℃搅拌16h。将反应混合物倒入EtOAc/THF(1:2)中并顺序地用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH0-5％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(12mg，12.8μmol，25％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：938.5([M+H]+)。
实例53
4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-N-[1-[2-[1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]-4-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]-1-苯基-哌嗪-2-甲酰胺
Figure BDA0003621438310001531
a)3-[(1-苄氧基羰基-4-哌啶基)氨基甲酰基]-4-苯基-哌嗪-1-甲酸叔丁酯
向4-(叔丁氧基羰基)-1-苯基哌嗪-2-甲酸(750mg,1.84mmol,1.0eq)、HATU(1.05g,2.75mmol,1.5eq)和DIPEA(1.42g,1.92mL,11mmol,6.0eq)在DMF(6mL)中的溶液加入4-氨基哌啶-1-甲酸苄酯(645mg,2.75mmol,1.5eq)。将反应混合物在室温搅拌2h。真空浓缩反应混合物。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-100％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(680mg，1.30mmol，71％产率)，为灰白色泡沫。MS(ESI)：523.4([M+H]+)。
b)4-[(1-苯基哌嗪-2-羰基)氨基]哌啶-1-甲酸苄酯
向3-((1-((苄氧基)羰基)哌啶-4-基)氨基甲酰基)-4-苯基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(680mg,1.3mmol,1.0eq)在DCM(6mL)中的冷却(0℃)溶液加入在二噁烷中的4M HCl(1.3mL,5.2mmol,4.0eq)。允许反应混合物达到室温并搅拌20h。将反应混合物在真空中浓缩以得到标题化合物(550mg，1.3mmol，产率99％)，其为白色盐酸盐。MS(ESI)：423.3([M+H]+)。
c)4-[[4-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-1-苯基-哌嗪-2-羰基]氨基]哌啶-1-甲酸苄 酯
向4-溴-6-氯哒嗪-3-胺(350mg,1.68mmol,1.0eq)和4-(1-苯基哌嗪-2-甲酰胺基)哌啶-1-甲酸苄酯盐酸盐(730mg,1.68mmol,1.0eq)在DMA(6mL)中的搅拌溶液加入碳酸钾(580mg,4.2mmol,2.5eq)。将反应混合物加热至110℃并搅拌16h。将反应混合物倒入水中，并且用EtOAc萃取。合并有机层，用饱和NaHCO3、水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-100％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(275mg，501μmol，30％产率)，为棕色油。MS(ESI)：550.3([M+H]+)。
d)4-[[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-1-苯基-哌嗪-2-羰基]氨基]哌 啶-1-甲酸苄酯
将4-(4-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)-1-苯基哌嗪-2-甲酰胺基)哌啶-1-甲酸苄酯(275mg,500μmol,1.0eq)、(2-羟基苯基)硼酸(138mg,1000μmol,2.0eq)、碳酸钾(207mg,1.5mmol,3.0eq)和RuPhos Pd G3(20.9mg,25μmol,0.05eq)在脱气的二噁烷(6mL)和水(0.6mL)的混合物中的悬浮液在氩气下于120℃搅拌16h。将反应混合物倒入饱和NaHCO3，并且用EtOAc萃取。将有机层合并，用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-5％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(170mg，280μmol，56％产率)，为棕色泡沫。MS(ESI)：608.4([M+H]+)。
e)4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-1-苯基-N-(4-哌啶基)哌嗪-2-甲酰胺
向4-(4-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-1-苯基哌嗪-2-甲酰胺基)哌啶-1-甲酸苄酯(140mg,230μmol,1.0eq)在甲醇(4mL)中的溶液加入10％钯/碳(24.5mg,23μmol,0.1eq)。在H2(气球)下，将反应混合物在回流温度下搅拌5h。通过过滤收集催化剂，用甲醇洗涤。将滤液浓缩并在硅胶柱(DCM/MeOH 0-5％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(85mg，180μmol，78％产率)，为浅棕色油。MS(ESI)：474.4([M+H]+)。
f)4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-N-[1-[2-[1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶 基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]-4-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]-1-苯基-哌嗪-2-甲酰胺
将连接酶24(12.9mg,32.4μmol,1.1eq)溶解在无水DMF(200μL)中。加入DIPEA(9.5mg,12.8μL,73.5μmol,2.5eq)和HATU(13.4mg,35.3μmol,1.2eq)并将混合物在室温搅拌10min。加入4-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-1-苯基-N-(哌啶-4-基)哌嗪-2-甲酰胺，盐酸盐(15mg,29.4μmol,1.0eq)并将混合物在室温搅拌2h。直接通过制备型-HPLC纯化反应混合物，以得到标题化合物(18mg，17.6μmol，60％产率)，为黄色固体，(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：855.7([M+H]+)。
实例54
4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-N-[1-[3-[1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]-4-哌啶基]丙酰基]-4-哌啶基]-1-苯基-哌嗪-2-甲酰胺
Figure BDA0003621438310001551
标题化合物以类似于实例53步骤f的方式使用连接酶12制备为黄色固体(19mg，19.3μmol，62％产率)，(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：869.6([M+H]+)。
实例55
外消旋-5-[4-[2-[4-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]哌嗪-1-基]乙氧基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001561
将2-[6-氨基-5-[8-[3-(哌嗪-1-基甲基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚；氢溴酸盐(35mg,63.3μmol,1.0eq；实例46，步骤f)与连接酶26(32.4mg,69.7μmol,1.1eq)和DIPEA(40.9mg,55μL,317μmol,5.0eq)在DMF(350μL)中合并。将深橙色溶液在60℃搅拌16h，然后通过制备型-HPLC纯化，以得到标题化合物(26mg，30.4μmol，41％产率)，为浅黄色固体，2,2,2-三氟乙酸盐。MS(ESI)：854.8([M+H]+)。
实例56
外消旋-5-[4-[3-[4-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]哌嗪-1-基]丙氧基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001562
将2-[6-氨基-5-[8-[3-(哌嗪-1-基甲基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚；氢溴酸盐(35mg,63.3μmol,1.0eq；实例46，步骤f)与连接酶27(33.3mg,69.7μmol,1.1eq)和DIPEA(40.9mg,55μL,317μmol,5.0eq)在DMF(350μL)中合并。将深橙色溶液在60℃搅拌16h，然后通过制备型-HPLC纯化，以得到标题化合物(25mg，28.8μmol，40％产率)，为浅黄色固体，2,2,2-三氟乙酸盐。MS(ESI)：867.9([M+H]+)。
实例57
5-[4-[[4-[2-[3-[8-[3-氨基-6-(5-氟-2-羟基-苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]甲基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001571
a)3-(3-苄氧基苯基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯
向1-(苄基氧基)-3-溴苯(5g,19mmol,1.0eq)和3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(4.24g,20mmol,1.05eq)在t-BuOH(30mL)中的悬浮液加入K2CO3(5.25g,38mmol,2.0eq)。将反应用氩气脱气5min。添加RuPhos Pd G3(1.34g,1.6mmol,0.0843eq)。将反应混合物在120℃下搅拌过夜。通过过滤除去催化剂并用EtOAc洗涤。将残余物倒入EtOAc/THF2:1并用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-18)上纯化粗材料，以得到标题化合物(3.4g，8.62mmol，45％产率)，为黄色油。MS(ESI):395.2358([M+H]+)。
b)3-(3-羟基苯基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯
向3-(3-苄氧基苯基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(3.4g,8.62mmol,1.0eq)在甲醇(200mL)中的溶液加入甲酸铵(10.9g,172mmol,20eq)。将反应混合物用氩气脱气10min。添加Pd-C 10％(917mg,862μmol,0.1eq)。将反应混合物在70℃搅拌2h。将反应混合物过滤，真空浓缩。将反应混合物倒入AcOEt/THF 1:1中并用水和盐水洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，并在真空中浓缩以得到标题化合物(2.57g，8.44mmol，98％产率)，为灰白色固体。MS(ESI):305.1893([M+H]+)。
c)3-[3-[2-(4-苄基氧基羰基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1] 辛烷-8-甲酸叔丁酯
向3-(3-羟基苯基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(2.56g,8.41mmol,1.0eq)和4-(2-羟乙基)哌嗪-1-甲酸苄酯(2.38g,9mmol,1.07eq)在THF(20mL)中的溶液中添加4-(2-羟乙基)哌嗪-1-甲酸苄酯(2.38g,9mmol,1.07eq)。在70℃，将反应混合物搅拌2h过夜。加入在THF中的2-(三甲基膦亚基)乙腈0.5M(20mL,10mmol,1.19eq)。在70℃，将反应混合物搅拌2h。将反应混合物倒入THF/AcOEt 3:1中并用水/盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-100％)(DCM/MeOH 0-100％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(3.66g，6.65mmol，79％产率)，为棕色油。MS(ESI):551.3228([M+H]+)。
d)4-[2-[3-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)苯氧基]乙基]哌嗪-1-甲酸苄酯
向3-[3-[2-(4-苄氧基羰基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(3.6g,6.54mmol,1.0eq)在CH2Cl2(25mL)中的溶液加入TFA(14.8g,10mL,130mmol,1.0eq)。将反应混合物在室温下搅拌2h。将反应混合物在真空中浓缩，倒入AcOEt/THF 1:2中并用NaOH 1N/盐水1:1洗涤。将有机层经Na2SO4干燥并真空浓缩，以得到标题化合物(3.77g，8.37mmol，128％产率)，为棕色油，三氟乙酸盐。MS(ESI)：451.2742([M+H]+)。
e)4-[2-[3-[8-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基] 苯氧基]乙基]哌嗪-1-甲酸苄酯
向4-[2-[3-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)苯氧基]乙基]哌嗪-1-甲酸苄酯(3.773g,6.78mmol,1.0eq)和4-溴-6-氯哒嗪-3-胺(1.7g,8.14mmol,1.2eq)在DMSO(12mL)中的溶液加入K2CO3(4.69g,33.9mmol,5.0eq)。在110℃，将反应混合物搅拌16h。将反应混合物倒入THF/AcOEt 2:1中并用水/盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-5％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(2.74g，4.55mmol，67％产率)，为棕色泡沫。MS(ESI):578.2665([M+H]+)。
f)4-[2-[3-[8-[3-氨基-6-(5-氟-2-羟基-苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环 [3.2.1]辛烷-3-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-甲酸苄酯
将4-[2-[3-[8-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-甲酸苄酯(400mg,692μmol,1.0eq)与(5-氟-2-羟基苯基)硼酸(216mg,1.38mmol,2.0eq)和碳酸钾(239mg,1.73mmol,2.5eq)在二噁烷(3mL)、DMA(600μL)和水(200μL)中搅拌。向反应中通入氩气2分钟。然后添加RuPhos Pd G3(28.9mg,34.6μmol,0.05eq)。将反应混合物在密封容器中在130℃搅拌过夜。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-10％)上作为洗脱液纯化粗材料，以得到标题化合物(231mg，339μmol，49％产率)，为棕色泡沫。MS(ESI):654.3228([M+H]+)。
g)2-[6-氨基-5-[3-[3-(2-哌嗪-1-基乙氧基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛 烷-8-基]哒嗪-3-基]-4-氟-苯酚
在氢气气氛下于室温将4-[2-[3-[8-[3-氨基-6-(5-氟-2-羟基-苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-甲酸苄酯(225mg,344μmol,1.0eq)与钯(36.6mg,34.4μmol,0.1eq)在甲醇(10mL)和THF(2mL)中搅拌过夜。将催化剂滤出并将溶剂在减压下蒸发然后在高真空下干燥，以得到标题化合物(166mg，300μmol，87.3％产率)，为灰白色固体。MS(ESI):518.2676([M-H]-)。
h)5-[4-[[4-[2-[3-[8-[3-氨基-6-(5-氟-2-羟基-苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂 双环[3.2.1]辛烷-3-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]甲基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌 啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
在封闭器皿中的将2-[6-氨基-5-[3-[3-(2-哌嗪-1-基乙氧基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]哒嗪-3-基]-4-氟-苯酚(35mg,67.4μmol,1.0eq)与连接酶33(29.3mg,67.4μmol,1.0eq)和三乙胺(13.6mg,18.8μL,135μmol,2.0eq)在乙腈(250μL)和DMF(200μL)中于110℃搅拌1h。通过制备型-HPLC纯化粗混合物，以得到标题化合物(29mg，25.8μmol，38.3％产率)，为黄色双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI):873.4212([M+H]+)。
实例58
外消旋-4-[[3-[4-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]-1-哌啶基]-3-氧代-丙基]氨基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001601
于室温向2-[6-氨基-5-[8-[3-(4-吡啶基甲基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚(25mg,53.1μmol,1.0eq)、连接酶43(20.2mg,58.4μmol,1.1eq)和DIPEA(34.3mg,46.4μL,266μmol,5.0eq)在DMF(0.5mL)中的搅拌悬浮液加入HATU(40.4mg,106μmol,2.0eq)。将反应混合物在室温搅拌1h。粗材料通过制备型-HPLC纯化并将产物冻干，以得到标题化合物(12mg，13.2μmol，25％产率)，为黄色固体，2,2,2-三氟乙酸盐。MS(ESI)：798.4([M+H]+)。
实例59
外消旋-5-[4-[3-[4-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]-1-哌啶基]-3-氧代-丙基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001602
于室温向2-[6-氨基-5-[8-[3-(4-吡啶基甲基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚(25mg,53.1μmol,1.0eq)、连接酶12(24.2mg,58.4μmol,1.1eq)和DIPEA(34.3mg,46.4μL,266μmol,5.0eq)在DMF(0.5mL)中的搅拌溶液加入HATU(40.4mg,106μmol,2.0eq)。将反应混合物在室温搅拌1h。通过制备型-HPLC纯化粗材料并将产物冻干，以得到标题化合物(15mg，15.3μmol，29％产率)，为黄色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：866.4([M+H]+)。
实例60
外消旋-5-[3-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-羰基]氮杂环丁烷-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001611
于室温向连接酶44(109μmol)在DMSO中的粗溶液加入2-[6-氨基-5-[8-[3-(2-哌嗪-1-基乙氧基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚(60.2mg,120μmol,1.1eq)、DIPEA(14.1mg,19.1μL,109μmol,1.0eq)和HATU(83mg,218μmol,2.0eq)。将反应混合物在室温搅拌2h，倒入EtOAc/THF(1:1)中并用水和盐水洗涤。在硅胶柱(DCM/MeOH0-10％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(43mg，51.1μmol，47％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：841.4([M+H]+)。
实例61
外消旋-5-[6-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-羰基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001621
a)6-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环 [3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-羰基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯
于室温向2-[6-氨基-5-[8-[3-(2-哌嗪-1-基乙氧基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚(125mg,249μmol,1.0eq)、2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-甲酸(62mg,249μmol,1.0eq)和DIPEA(96.6mg,131μL,748μmol,3.0eq)在DMF中的搅拌溶液加入HATU(208mg,548μmol,2.2eq)。将反应混合物搅拌3h。将反应混合物在EtOAc/THF(1:1)和水之间分配。分离各层。将水层用EtOAc/THF萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并且在真空中浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-10％)和胺改性的硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-100％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(69.7mg，96μmol，39％产率)，为白色固体。MS(ESI)：725.7([M+H]+)。
b)[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1] 辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-(2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)甲酮
于室温向6-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-羰基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(69mg,95.2μmol,1.0eq)在DCM(2mL)中的搅拌溶液加入TFA(1.48g,1mL,13mmol,136eq)。将反应混合物搅拌2h。将反应混合物在室温用饱和碳酸氢盐溶液淬灭并搅拌10min。将混合物在EtOAc/THF(1:1)和饱和碳酸氢钠水溶液之间分配。分离各层。用THF萃取水层。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，并真空浓缩，以得到标题化合物(821mg，92μmol，97％产率)，为灰白色固体。MS(ESI)：625.5([M+H]+)。
c)外消旋-5-[6-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂 双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-羰基]-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基]-2-(2,6- 二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
将[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-(2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)甲酮(821mg,92μmol,1.0eq)和2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(25.4mg,92μmol,1.0eq)在DMSO(1mL)中的溶液在95℃搅拌25h。将反应混合物冷却至室温，然后在EtOAc/THF和水之间分配。将水层用EtOAc/THF(1:1)萃取。合并的有机层经硫酸钠干燥，并且在真空中浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-8％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(10.2mg，11.6μmol，13％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：881.4([M+H]+)。
实例62
2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-[[1-[9-氧代-9-[4-[4-[外消旋-(3R)-3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯基]哌嗪-1-基]壬基]三唑-4-基]甲基氨基]异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001631
向2-[6-氨基-5-[[(3S)-1-(4-哌嗪-1-基苯基)-3-哌啶基]氧基]哒嗪-3-基]苯酚(40.0mg,71.48μmol,TFA盐)和连接酶3(36mg,71.48μmol)在DMF(0.8mL)中的溶液先后加入HATU(40mg,107μmol)和DIPEA(46mg,357.42μmol,62μL)并将反应混合物在室温搅拌16h。将反应混合物用水稀释，并且用EtOAc萃取。除去挥发物。利用制备型-HPLC纯化粗残余物，以得到标题化合物(31.5mg，32.18μmol，45％产率)，为浅绿色固体。MS(ESI)：939.4([M+H]+)。
实例63
4-[[1-[9-[4-[4-[(3R)-3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯基]哌嗪-1-基]壬基]三唑-4-基]甲基氨基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001641
向2-[6-氨基-5-[[(3S)-1-(4-哌嗪-1-基苯基)-3-哌啶基]氧基]哒嗪-3-基]苯酚(40.0mg,71.48μmol,TFA盐)和连接酶28(42mg,85.78μmol)在THF(2.0mL)中的溶液先后加入三甲基(苯基)硅烷(9mg,85μmol)和二丁基二氯化锡(21mg,71.48μmol)并将反应混合物加热至80℃持续16h。将反应混合物冷却至室温，用水稀释，并用EtOAc萃取。将有机层用水、盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。利用制备型-HPLC纯化粗残余物，以得到标题化合物(7.6mg，7.7μmol，10％产率)，为灰白色固体。MS(ESI):925.3([M+H]+)。
实例64
4-[[1-[9-[4-[4-[3-[3-氨基-6-(5-氟-2-羟基-苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯基]哌嗪-1-基]-9-氧代-壬基]三唑-4-基]甲基氨基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001651
标题化合物(4.66mg，4.56μmol，7％产率)以类似于实例3步骤e的方式使用连接酶3制备为浅黄色固体，三氟乙酸盐。(MS(ESI):957.9([M+H]+)。
实例65
4-[[1-[9-[4-[4-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯基]哌嗪-1-基]壬基]三唑-4-基]甲氧基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001652
向2-[6-氨基-5-[[1-(4-哌嗪-1-基苯基)-3-哌啶基]氧基]哒嗪-3-基]苯酚(50mg,89μmol,TFA盐)和连接酶45(44.28mg,89μmol)在THF(3mL)中的溶液先后加入三甲基(苯基)硅烷(20mg,178μmol)和二丁基二氯化锡(54mg,178μmol)并将反应混合物加热至80℃持续16h。将反应混合物冷却至室温，用水稀释，并用EtOAc萃取。将有机层用水、盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。利用制备型-HPLC纯化粗残余物，以得到标题化合物(5.0mg，4.95μmol，5％产率)，为灰白色固体。MS(ESI)：926.3([M+H]+)。
实例66
2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-[[1-[9-[4-[4-[外消旋-(3S)-3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯基]哌嗪-1-基]壬基]三唑-4-基]甲基氨基]异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001661
向2-[6-氨基-5-[[(3S)-1-(4-哌嗪-1-基苯基)-3-哌啶基]氧基]哒嗪-3-基]苯酚(40mg,71μmol,TFA盐)和连接酶28(35mg,71μmol)在THF(2mL)中的溶液先后加入三甲基(苯基)硅烷(8mg,71μmol)和二丁基二氯化锡(26mg,85.78μmol)并将反应混合物加热至80℃持续16h。将反应混合物冷却至室温，用水稀释，并用EtOAc萃取。将有机层用水、盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。利用制备型-HPLC纯化粗残余物，以得到标题化合物(3.4mg，3.5μmol，5％产率)，为淡黄色固体。MS(ESI):925.4([M+H]+)。
实例67
4-[[7-[4-[[4-[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氮杂环丁烷-3-基]氧基苯基]甲基]哌嗪-1-基]-7-氧代-庚基]氨基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001662
a)3-(4-甲酰基苯氧基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
将1-Boc-3-碘氮杂环丁烷(15g,53.2mmol,1.3eq)、4-羟基苯甲醛(5g,40.94mmol,1.0eq)、碳酸铯(20g,61.4mmol,1.5eq)在DMF(50mL)中的混合物在80℃搅拌1h.将反应混合物倒入水中，用EtOAc萃取，经Na2SO4干燥并真空浓缩以得到标题化合物(10g，88％产率)，为黄色固体。
b)4-(4-((1-(叔丁氧羰基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)苄基)哌嗪-1-甲酸苄酯
将1-Cbz-哌嗪(6.35g,28.85mmol,2.0eq)、3-(4-甲酰基苯氧基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(4g,14.4mmol,1.0eq)和乙酸(0.5mL,14.4mmol,1.0eq)在DME(100mL)中的混合物在25℃搅拌1h。然后加入NaBH3CN(1.8g,28.8mmol,2.0eq)。将反应混合物在25℃搅拌11h。将反应混合物真空浓缩，并且粗产物通过硅胶柱纯化，以得到标题化合物(5g，10.3mmol，72％产率)，为黄色油。MS(ESI)：482.3([M+H]+)。
c)4-(4-(氮杂环丁烷-3-基氧基)苄基)哌嗪-1-甲酸苄酯
将4-[[4-(1-叔丁氧基羰基氮杂环丁烷-3-基)氧基苯基]甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯(5g,10.38mmol,1.0eq)在TFA(10mL,89mmol,8.0eq)和DCM(60mL)中的混合物在25℃搅拌2h。真空浓缩反应混合物，以得到标题化合物(3.5g，9.18mmol，88％产率)，为黄色油，三氟乙酸盐。MS(ESI):382.2([M+H]+)。
d)4-(4-((1-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)苄基)哌嗪-1-甲 酸苄酯
将4-[[4-(氮杂环丁烷-3-基氧基)苯基]甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯(3g,7.86mmol,1.0eq)、4-溴-6-氯-哒嗪-3-胺(1.64g,7.86mmol,1.0eq)和Et3N(3.18g，31.46mmol，4.0eq)在DMF(50mL)中的混合物在100℃搅拌2h。将反应混合物真空浓缩并且通过制备型-HPLC纯化，以得到标题化合物(2g，3.93mmol，49％产率)，为黄色油。MS(ESI)：509.2([M+H]+)。
f)4-(4-((1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)苄基) 哌嗪-1-甲酸苄酯
将Ruphos-Pd-G3(50mg,0.030mmol,0.015eq)、K2CO3(815mg,5.89mmol,3.0eq)、4-[[4-[1-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)氮杂环丁烷-3-基]氧基苯基]甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯(1g,1.96mmol,1.0eq)、2-羟基苯基硼酸(542mg,3.93mmol,2.0eq)在1,4-二噁烷(9mL)和水(1mL)中的混合物在微波条件下于90℃搅拌2h。将反应混合物真空浓缩并且通过制备型-HPLC纯化，以得到标题化合物(1g，1.76mmol，89％产率)，为黄色油。MS(ESI)：567.3([M+H]+)。
g)2-(6-氨基-5-(3-(4-(哌嗪-1-基甲基)苯氧基)氮杂环丁烷-1-基)哒嗪-3-基) 苯酚
将4-[[4-[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氮杂环丁烷-3-基]氧基苯基]甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯(500mg,0.88mmol,1.0eq)、10％Pd/C(100mg)在甲醇(20mL)中的混合物在H2气氛(15psi)下于25℃搅拌24h。将反应混合物过滤并将滤液通过制备型HPLC纯化，以得到标题化合物(100mg，0.23mmol，25％产率)，为灰色固体。MS(ESI)：433.8([M+H]+)。
h)4-((7-(4-(4-((1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)氮杂环丁烷-3-基)氧 基)苄基)哌嗪-1-基)-7-氧代庚基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
于25℃向连接酶1(22mg,0.06mmol,1.2eq)、Et3N(0.5mL,0.14mmol,3.0eq)、2-[6-氨基-5-[3-[4-(哌嗪-1-基甲基)苯氧基]氮杂环丁烷-1-基]哒嗪-3-基]苯酚(20mg,0.05mmol,1.0eq)在DMF(2mL)中的混合物加入T3P(25mg,0.06mmol,1.0eq)。将反应混合物在25℃搅拌1h，并且通过制备型-HPLC纯化，以得到标题化合物(3.2mg，3.92μmol，8％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：816.2([M+H]+)。
实例68
4-[[10-[4-[[4-[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氮杂环丁烷-3-基]氧基苯基]甲基]哌嗪-1-基]-10-氧代-癸基]氨基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001681
于25℃向连接酶23(25mg,0.06mmol,1.2eq)、2-[6-氨基-5-[3-[4-(哌嗪-1-基甲基)苯氧基]氮杂环丁烷-1-基]哒嗪-3-基]苯酚(20mg,0.05mmol,1.0eq)、Et3N(0.5mL,0.14mmol,3.0eq)在DMF(2mL)中的混合物加入T3P(26mg,0.06mmol,1.2eq)。将反应混合物在25℃搅拌1h，并且通过制备型-HPLC纯化，以得到标题化合物(4.7mg，5.48μmol，11％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：858.2([M+H]+)。
实例69
外消旋-5-[2-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-羰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001691
a)6-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]-2,6-二氮杂螺 [3.3]庚烷-2-甲酸苄酯
于室温向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(200mg,724μmol,1.0eq)和2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸苄酯(168mg,724μmol,1.0eq)在DMSO(1.5mL)中的搅拌溶液加入DIPEA(187mg,253μL,1.45mmol,2.0eq)。将反应混合物在90℃下搅拌过夜。然后将反应混合物倒入EtOAc/THF(1:1)中并顺序地用水和盐水萃取。在硅胶柱(DCM/MeOH0-10％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(83mg，170μmol，24％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：489.3([M+H]+)。
b)5-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3- 二酮
将6-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸苄酯(83mg,170μmol,1.0eq)在甲醇(20mL)中的溶液用氩气脱气10min。加入10％钯/碳(21.7mg,20.4μmol,0.12eq)。将反应混合物用H2脱气10min。然后将反应混合物在H2气球下搅拌4h。过滤反应混合物，并将滤液真空浓缩，以得到标题化合物(75mg，106μmol，62％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：355.2([M+H]+)。
c)外消旋-5-[2-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂 双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-羰基]-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-6-基]-2- (2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
于室温向4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-甲酸(4-硝基苯基)酯(35mg,52.5μmol,1.0eq)和连接酶46(37.2mg,105μmol,2.0eq)在DMSO(0.6mL)中的搅拌溶液加入DIPEA(17mg,22.9μL,131μmol,2.5eq)。将反应混合物在115℃搅拌20h。将反应混合物倒入THF/EtOAc(1:1)中并顺序地用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH0-5％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(3mg，3.4μmol，6％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：882.4([M+H]+)。
实例70
外消旋-5-[4-[4-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]哌啶-1-羰基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001701
于室温向2-[6-氨基-5-[8-[3-(4-吡啶基甲基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚(14mg,29.7μmol,1.0eq)、连接酶15(12.6mg,32.7μmol,1.1eq)和DIPEA(15.4mg,20.8μL,119μmol,4.0eq)在DMSO(0.5mL)中的搅拌溶液加入HATU(22.6mg,59.5μmol,2.0eq)。将反应混合物在室温搅拌1h。将反应混合物倒入THF/EtOAc(1:1)中并顺序地用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH0-5％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(13mg，15.5μmol，52％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：838.4([M+H]+)。
实例71
N-[[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-4-苯基-4-哌啶基]甲基]-1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]哌啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003621438310001711
a)N-[[1-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-4-苯基-4-哌啶基]甲基]氨基甲酸叔丁酯
向4-溴-6-氯哒嗪-3-胺(1.0g,4.80mmol,1.0eq)和((4-苯基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(1.46g,5.04mmol,1.05eq)在DMSO(15mL)中的溶液加入碳酸钾(3.98g,28.8mmol,6.0eq)，并将反应混合物在100℃搅拌20h。将反应混合物冷却至室温并在搅拌下缓慢加入水(50ml)中。通过玻璃纤维纸过滤沉淀，并且收集固体并真空干燥，以得到标题化合物(1.9g，4.56mmol，95％产率)，为棕色固体。MS(ESI)：418.3([M+H]+)。
b)N-[[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-4-苯基-4-哌啶基]甲基]氨基甲 酸叔丁酯
将((1-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(285mg,682μmol,1.0eq)、(2-羟基苯基)硼酸(235mg,1.7mmol,2.5eq)、碳酸钾(283mg,2.05mmol,3.0eq)和RuPhos Pd G3(17.1mg,20.5μmol,0.03eq)在脱气的二噁烷(10mL)和水(1mL)的混合物中的悬浮液在氩气下于110℃搅拌2h。将反应混合物倒入饱和NaHCO3，并且用EtOAc萃取。将有机层合并，用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-100％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(230mg，484μmol，71％产率)，为棕色泡沫。MS(ESI)：476.4([M+H]+)。
c)2-[6-氨基-5-[4-(氨基甲基)-4-苯基-1-哌啶基]哒嗪-3-基]苯酚
向((1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(225mg,473μmol,1.0eq)在DCM(5mL)中的冷却(0℃)溶液加入在二噁烷中的4M HCl(473μL,1.89mmol,4.0eq)。使反应混合物升达到室温并搅拌20h。过滤反应混合物，并将固体真空干燥，以得到标题化合物(175mg，424μmol，90％产率)，为白色固体，盐酸盐。MS(ESI)：376.3([M+H]+)。
d)N-[[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-4-苯基-4-哌啶基]甲基]-1-[2- (2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]哌啶-4-甲酰胺
将连接酶11(15.4mg,40.1μmol,1.1eq)溶解在无水DMF(200μL)中。加入DIPEA(11.8mg,15.9μL,91μmol,2.5eq)和HATU(16.6mg,43.7μmol,1.2eq)并将混合物在室温搅拌10min。加入2-(6-氨基-5-(4-(氨基甲基)-4-苯基哌啶-1-基)哒嗪-3-基)苯酚，盐酸盐(15mg,36.4μmol,1.0eq)并将混合物在室温搅拌2h。直接通过制备型-HPLC纯化反应混合物，以得到标题化合物(24mg，28μmol，76％产率)，为黄色固体，2,2,2-三氟乙酸盐。MS(ESI)：743.4([M+H]+)。
实例72
N-[[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-4-苯基-4-哌啶基]甲基]-2-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氧基-乙酰胺
Figure BDA0003621438310001721
标题化合物以类似于实例71步骤d的方式使用连接酶47制备为浅棕色固体(11mg，13.7μmol，37％产率)，2,2,2-三氟乙酸盐。MS(ESI)：690.6([M+H]+)。
实例73
N-((1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)甲基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)乙酰胺
Figure BDA0003621438310001722
标题化合物以类似于实例71步骤d的方式使用连接酶48制备为浅黄色固体(11mg，13.7μmol，37％产率)，2,2,2-三氟乙酸盐。MS(ESI)：690.5([M+H]+)。
实例74
N-((1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)甲基)-1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003621438310001731
标题化合物以类似于实例71步骤d的方式使用连接酶15制备为浅棕色固体15(12mg，13.3μmol，36％产率)，2,2,2-三氟乙酸盐。MS(ESI)：743.5([M+H]+)。
实例75
N-((1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)甲基)-3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)
Figure BDA0003621438310001732
标题化合物以类似于实例71步骤d的方式使用连接酶43制备为浅棕色固体(14mg，16.3μmol，44％产率)，2,2,2-三氟乙酸盐。MS(ESI)：703.4([M+H]+)。
实例76
N-((1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)甲基)-2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙酰胺
Figure BDA0003621438310001733
标题化合物以类似于实例71步骤d的方式使用连接酶49制备为浅棕色固体(15mg，17.8μmol，48％产率)，2,2,2-三氟乙酸盐。MS(ESI)：689.5([M+H]+)。
实例77
N-((1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)甲基)-2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)乙酰胺
Figure BDA0003621438310001741
标题化合物以类似于实例71步骤d的方式使用连接酶24制备为浅棕色固体(15mg，16.4μmol，44％产率)，2,2,2-三氟乙酸盐。MS(ESI)：757.6([M+H]+)。
实例78
N-((1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)甲基)-4-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氧基)苯基)哌啶-1-基)丁酰胺
Figure BDA0003621438310001742
标题化合物以类似于实例71步骤d的方式使用连接酶39制备为浅棕色固体(14mg，15.7μmol，43％产率)，2,2,2-三氟乙酸盐。MS(ESI)：732.6([M+H]+)。
实例79
外消旋-3-[4-[1-[2-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基]-4-哌啶基]苯胺基]哌啶-2,6-二酮
Figure BDA0003621438310001751
于室温向2-[6-氨基-5-[8-[3-(2-哌嗪-1-基乙氧基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚(50mg,99.7μmol,1.0eq)、连接酶51(38.1mg,99.7μmol,1.0eq)和HATU(79.6mg,209μmol,2.1eq)在DMSO(1mL)中的搅拌溶液加入DIPEA(38.6mg,52.2μL,299μmol,3.0eq)。将反应混合物搅拌3h。将反应混合物在EtOAc/THF(1:1)和水之间分配。分离各层。将水层用EtOAc/THF萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并且在真空中浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(38.7mg，46.7μmol，47％产率)，为灰白色固体。MS(ESI)：828.1([M-H]-)。
实例80
外消旋-3-[4-[1-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-羰基]-4-哌啶基]苯胺基]哌啶-2,6-二酮
Figure BDA0003621438310001752
于室温向4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-甲酸(4-硝基苯基)酯(35mg,52.5μmol,1.0eq)和连接酶50(18.7mg,57.7μmol,1.1eq)在DMSO(0.6mL)中的搅拌溶液加入DIPEA(17mg,22.9μL,131μmol,2.5eq)。将反应混合物在115℃搅拌24h。粗材料通过制备型-HPLC纯化，然后在硅胶柱(DCM/MeOH 0-5％)上纯化，以得到标题化合物(11mg，10.5μmol，20％产率)，为灰白色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：815.4([M+H]+)。
实例81
外消旋-3-[4-[4-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-羰基]哌嗪-1-基]苯胺基]哌啶-2,6-二酮
Figure BDA0003621438310001761
于室温向4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-甲酸(4-硝基苯基)酯(35mg,52.5μmol,1.0eq)和连接酶53(18.8mg,57.7μmol,1.1eq)在DMSO(0.6mL)中的搅拌溶液加入DIPEA(17mg,22.9μL,131μmol,2.5eq)。将反应混合物在115℃搅拌24h。粗材料通过制备型-HPLC纯化，然后在硅胶柱(DCM/MeOH 0-5％)上纯化，以得到标题化合物(7mg，6.7μmol，13％产率)，为灰白色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸))盐。MS(ESI)：816.4([M+H]+)。
实例82
4-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-N-((1-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-羰基)哌啶-4-基)甲基)-1-苯基哌嗪-2-甲酰胺
Figure BDA0003621438310001771
a)4-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-1-苯基-哌嗪-2-甲酸钾
向1-苯基哌嗪-2-甲酸二盐酸盐(590mg,2.12mmol,1.1eq)和4-溴-6-氯哒嗪-3-胺(400mg,1.92mmol,1.0eq)在DMA(6mL)中的混合物加入K2CO3(530mg,3.84mmol,2.0eq)。将反应混合物在120℃搅拌20h。浓缩反应混合物，以得到标题化合物(600mg，1.80mmol，94％产率)，为棕色油。MS(ESI)：334.2([M+H]+)。
b)4-[[[4-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-1-苯基-哌嗪-2-羰基]氨基]甲基]哌啶-1- 甲酸叔丁酯
向4-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-1-苯基-哌嗪-2-甲酸钾(400mg,1.2mmol,1.0eq)、HATU(684mg,1.8mmol,1.5eq)和DIPEA(774mg,1.05mL,5.99mmol,5.0eq)在DMF(5mL)中的溶液加入4-(氨基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(385mg,1.8mmol,1.5eq)。将反应混合物在室温下搅拌5h。真空浓缩反应混合物。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-100％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(500mg，945μmol，79％产率)，为棕色固体。MS(ESI)：530.0([M+H]+)。
c)4-[[[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-1-苯基-哌嗪-2-羰基]氨基]甲 基]哌啶-1-甲酸叔丁酯
将4-((4-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)-1-苯基哌嗪-2-甲酰胺基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(60mg,113μmol,1.0eq)、(2-羟基苯基)硼酸(31.2mg,226μmol,2.0eq)、K2CO3(46.9mg,340μmol,3.0eq)和RuPhos Pd G3(4.73mg,5.66μmol,0.05eq)在脱气的二噁烷(3mL)和水(0.3mL)的混合物中的悬浮液在氩气下于110℃搅拌2h。将反应混合物倒入饱和NaHCO3，并且用EtOAc萃取。将有机层合并，用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-100％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(35mg，60μmol，53％产率)，为棕色泡沫。MS(ESI)：588.5([M+H]+)。
d)4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-1-苯基-N-(4-哌啶基甲基)哌嗪-2-甲 酰胺
向4-((4-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-1-苯基哌嗪-2-甲酰胺基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(80mg,136μmol,1.0eq)在DCM(3mL)中的冷却(0℃)溶液加入在二噁烷中的4M HCl(102μL,408μmol,3.0eq)。允许反应混合物达到室温并搅拌20h。将反应混合物过滤并将固体在真空中干燥以得到标题化合物(70mg,133μmol,100％产率)，为白色固体，盐酸盐。MS(ESI)：488.4([M+H]+)。
e)4-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-N-((1-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3- 基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-羰基)哌啶-4-基)甲基)-1-苯基哌嗪-2-甲酰胺
将连接酶15(10mg,25.9μmol,1.0eq)溶解在无水DMF(200μL)中。加入DIPEA(8.38mg,11.3μL,64.9μmol,2.5eq)和HATU(11.8mg,31.1μmol,1.2eq)并将混合物在室温搅拌10min。加入4-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-1-苯基-N-(哌啶-4-基甲基)哌嗪-2-甲酰胺，盐酸盐(13.6mg,25.9μmol,1.0eq)并将混合物在室温搅拌2h。直接通过制备型-HPLC纯化反应混合物，以得到标题化合物(7.5mg，7.74μmol，29％产率)，为浅黄色固体，2,2,2-三氟乙酸盐。MS(ESI)：855.7([M+H]+)。
实例83
5-(4-(4-(2-(3-(9-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-基)苯氧基)乙基)哌嗪-1-羰基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001781
a)4-[2-(3-溴苯氧基)乙基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯
向3-溴苯酚(1.5g,8.67mmol,1.0eq)、4-(2-羟乙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(2.2g,9.54mmol,1.1eq)和三苯基膦(2.5g,9.54mmol,1.1eq)在THF(25mL)中的溶液中添加偶氮二甲酸二叔丁酯(2.2g,9.54mmol,1.1eq)。将反应混合物在室温下搅拌2h。将反应混合物倒入EtOAc中并用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥并浓缩。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-50％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(2.93g，7.6mmol，88％产率)，为无色油。MS(ESI)：387.1([M+H]+)。
b)4-[3-[2-(4-叔丁氧羰基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-1-氧杂-4,9-二氮杂螺 [5.5]十一烷-9-甲酸苄酯
将乙酸钯(II)(33mg,147μmol,0.2eq)和Ruphos(34.3mg,73.4μmol,0.10eq)在氩气下在脱气甲苯(4mL)中合并。将反应混合物加热至50℃并搅拌20min。在用氩气冲洗的单独烧瓶中，将4-(2-(3-溴苯氧基)乙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(283mg,734μmol,Eq:1.00)、1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-甲酸苄酯盐酸盐(300mg,734μmol,Eq:1)和叔丁醇钠(212mg,2.2mmol,3.0eq)在氩气下在脱气甲苯(4mL)中合并。将反应混合物加热至50℃并经由注射器添加催化剂反应混合物。将反应混合物在100℃下搅拌16h。将反应混合物倒入饱和NaHCO3中，并且用EtOAc萃取。将有机层合并，并用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-100％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(330mg，555μmol，68％产率)，为浅棕色油。MS(ESI)：595.4([M+H]+)。
c)4-[2-[3-(1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-基)苯氧基]乙基]哌嗪-1-甲 酸叔丁酯
4-(3-(2-(4-(叔丁氧羰基)哌嗪-1-基)乙氧基)苯基)-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-甲酸苄酯(500mg,841μmol,1.0eq)在甲醇(5mL)中的溶液加入10％钯/碳(89.5mg,84.1μmol,0.1eq)。在H2(气球)下，将反应混合物在回流温度下搅拌3h。通过过滤收集催化剂，用甲醇洗涤。浓缩滤液，以得到标题化合物(390mg，840μmol，产率100％)，其为浅棕色油状物。MS(ESI)：461.4([M+H]+)。
d)4-[2-[3-[9-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷- 4-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯
向4-溴-6-氯哒嗪-3-胺(180mg,864μmol,1.0eq)和4-(2-(3-(1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-基)苯氧基)乙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(398mg,864μmol,1.0eq)在DMA(6mL)中的搅拌溶液中添加碳酸钾(239mg,1.73mmol,2.0eq)。将反应混合物加热至110℃并搅拌16h。将反应混合物倒入水中，并且用EtOAc萃取。合并有机层，用饱和NaHCO3、水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(340mg，578μmol，57％产率)，为棕色油。MS(ESI)：588.4([M+H]+)。
e)4-[2-[3-[9-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-1-氧杂-4,9-二氮杂螺 [5.5]十一烷-4-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯
将4-(2-(3-(9-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-基)苯氧基)乙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(340mg,578μmol,1.0eq)、(2-羟基苯基)硼酸(199mg,1.45mmol,2.5eq)和碳酸钾(240mg,1.73mmol,3.0eq)和RuPhos Pd G3(24.2mg,28.9μmol,0.05eq)在脱气的二噁烷(10mL)和水(1mL)的混合物中的悬浮液在120℃搅拌16h。将反应混合物倒入饱和NaHCO3，并且用EtOAc萃取。将有机层合并，用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-5％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(120mg，186μmol，29％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：646.5([M+H]+)。
f)2-[6-氨基-5-[4-[3-(2-哌嗪-1-基乙氧基)苯基]-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5] 十一烷-9-基]哒嗪-3-基]苯酚
向4-(2-(3-(9-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-基)苯氧基)乙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(120mg,186μmol,1.0eq)在DCM(3mL)中的冷却(0℃)溶液加入在二噁烷中的4M HCl(139μL,557μmol,3.0eq)。允许反应混合物达到室温并搅拌20h。将反应混合物在真空中浓缩以得到标题化合物(100mg，183μmol，95％产率)，为白色固体，盐酸盐。MS(ESI)：546.4([M+H]+)。
g)5-(4-(4-(2-(3-(9-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-1-氧杂-4,9-二氮杂 螺[5.5]十一烷-4-基)苯氧基)乙基)哌嗪-1-羰基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基) 异吲哚啉-1,3-二酮
将连接酶15(10mg,25.9μmol,1.0eq)溶解在无水DMF(200μL)中。加入DIPEA(8.38mg,11.3μL,64.9μmol,2.5eq)和HATU(11.8mg,31.1μmol,1.2eq)并将混合物在室温搅拌10min。加入2-(6-氨基-5-(4-(3-(2-(哌嗪-1-基)乙氧基)苯基)-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)哒嗪-3-基)苯酚盐酸盐(15.1mg,25.9μmol,1.0eq)并将混合物在室温搅拌2h。将反应混合物直接通过制备型-HPLC(碱性)纯化，以得到标题化合物(6.7mg，7.34μmol，28％产率)，为浅黄色固体。MS(ESI)：913.7([M+H]+)。
实例84
5-(4-(4-(2-(3-(7-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-基)苯氧基)乙基)哌嗪-1-羰基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001811
标题化合物以类似于实例5步骤f的方式使用连接酶15制备为浅黄色固体(5.9mg，6.79μmol，26％产率)。MS(ESI)：869.6([M+H]+)。
实例85
4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-N-[[4-[[1-[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚-5-基]哌啶-4-羰基]氨基]环己基]甲基]-1-苯基哌嗪-2-甲酰胺
Figure BDA0003621438310001812
a)3-[[4-(叔丁氧基羰基氨基)环己基]甲基氨基甲酰基]-4-苯基-哌嗪-1-甲酸苄 酯
向4-((苄氧基)羰基)-1-苯基哌嗪-2-甲酸(700mg,2.06mmol,1.0eq)、HATU(977mg,2.57mmol,1.25eq)和DIPEA(1.33g,1.80mL,10.3mmol,5.0eq)在DMF(8mL)中的溶液加入外消旋(-4-(氨基甲基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(517mg,2.26mmol,1.1eq)。将反应混合物在室温搅拌2h。将反应混合物在真空浓缩。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-100％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(435mg，790μmol，38％产率)，为白色泡沫。MS(ESI)：551.4([M+H]+)。
b)N-[4-[[(1-苯基哌嗪-2-羰基)氨基]甲基]环己基]氨基甲酸叔丁酯
向3-(((-4-((叔丁氧基羰基)氨基)环己基)甲基)氨基甲酰基)-4-苯基哌嗪-1-甲酸苄酯(435mg,790μmol,1.0eq)在甲醇(10mL)中的溶液加入10％钯/碳(84.1mg,79μmol,0.1eq)。在H2(气球)下，将反应混合物在回流温度下搅拌24h。通过过滤来收集催化剂并用甲醇洗涤。浓缩滤液，以得到标题化合物(320mg，769μmol，97％产率)，为灰色泡沫。MS(ESI)：417.4([M+H]+)。
c)N-[4-[[[4-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-1-苯基-哌嗪-2-羰基]氨基]甲基]环己 基]氨基甲酸叔丁酯
向4-溴-6-氯哒嗪-3-胺(173mg,832μmol,1.0eq)和外消旋-((1r,4r)-4-((1-苯基哌嗪-2-甲酰胺基)甲基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(315mg,756μmol,1.0eq)在DMA(4mL)中的搅拌溶液加入碳酸钾(523mg,3.78mmol,5.0eq)。将反应混合物加热至110℃并搅拌20h。将反应混合物倒入水中，并且用EtOAc萃取。合并有机层，用饱和NaHCO3、水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-100％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(85mg，156μmol，19％产率)，为浅棕色固体。MS(ESI)：544.4([M+H]+)。
d)N-[4-[[[4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-1-苯基-哌嗪-2-羰基]氨基] 甲基]环己基]氨基甲酸叔丁酯
将N-[4-[[[4-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-1-苯基-哌嗪-2-羰基]氨基]甲基]环己基]氨基甲酸叔丁酯(85mg,156μmol,1.0eq)、(2-羟基苯基)硼酸(53.9mg,391μmol,2.5eq)、碳酸钾(64.8mg,469μmol,3.0eq)和RuPhos Pd G3(6.53mg,7.81μmol,0.05eq)在脱气的二噁烷(8mL)和水(0.8mL)的混合物中的悬浮液在氩气下于110℃搅拌2h。将反应混合物倒入饱和NaHCO3，并且用EtOAc萃取。将有机层合并，用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-100％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(55mg，91μmol，58％产率)，为灰白色固体。MS(ESI)：602.5([M+H]+)。
e)N-[(4-氨基环已基)甲基]-4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-1-苯基-哌 嗪-2-甲酰胺
向(-4-((4-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-1-苯基哌嗪-2-甲酰胺基)甲基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(50mg,83.1μmol,1.0eq)在DCM(2mL)中的冷却(0℃)溶液加入在二噁烷中的4M HCl(104μL,415μmol,5.0eq)。允许反应混合物达到室温并搅拌16h。将反应混合物在真空中浓缩以得到标题化合物(40mg，74μmol，89％产率)，为白色固体，盐酸盐。MS(ESI)：502.4([M+H]+)。
f)4-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-N-[[4-[[1-[2-(2,6-二氧代哌啶-3- 基)-1,3-二氧代异吲哚-5-基]哌啶-4-羰基]氨基]环己基]甲基]-1-苯基哌嗪
将连接酶15(10mg,25.9μmol,1.0eq)溶解在无水DMF(200μL)中。加入DIPEA(8.38mg,11.3μL,64.9μmol,2.5eq)和HATU(11.8mg,31.1μmol,1.2eq)并将混合物在室温搅拌10min。加入4-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-N-((4-氨基环己基)甲基)-1-苯基哌嗪-2-甲酰胺，盐酸盐(14mg,25.9μmol,1.0eq)并将混合物在室温搅拌2h。将反应混合物通过制备型-HPLC纯化，以得到标题化合物(9.6mg，11μmol，42％产率)，为浅黄色固体。MS(ESI)：869.4([M+H]+)。
实例86
1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-N-[[1-[1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]哌啶-4-羰基]-4-哌啶基]甲基]-4-苯基-哌啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003621438310001831
a)4-[(1-叔丁氧羰基-4-哌啶基)甲基氨基甲酰基]-4-苯基-哌啶-1-甲酸苄酯
向1-((苄基氧基)羰基)-4-苯基哌啶-4-甲酸(300mg,884μmol,1.0eq)、HATU(420mg,1.1mmol,1.25eq)和DIPEA(571mg,772μL,4.42mmol,5.0eq)在DMF(3mL)中的溶液加入4-(氨基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(227mg,224μL,1.06mmol,1.2eq)。将反应混合物在室温搅拌2h。真空浓缩反应混合物。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-100％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(450mg，841μmol，95％产率)，为黄色油。MS(ESI)：536.5([M+H]+)。
b)4-[[(4-苯基哌啶-4-羰基)氨基]甲基]哌啶-1-甲酸叔丁酯
向4-(((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)甲基)氨基甲酰基)-4-苯基哌啶-1-甲酸苄酯(580mg,1.08mmol,1.0eq)在甲醇(6mL)中的溶液加入10％钯/碳(115mg,108μmol,0.1eq)。在H2(气球)下，将反应混合物在回流温度下搅拌24h。通过过滤收集催化剂，用甲醇洗涤。浓缩滤液，以得到标题化合物(95mg，180μmol，产率91％)，其为白色固体。MS(ESI)：402.4([M+H]+)。
c)4-[[[1-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-4-苯基-哌啶-4-羰基]氨基]甲基]哌啶-1- 甲酸叔丁酯
向4-溴-6-氯哒嗪-3-胺(226mg,1.08mmol,1.1eq)和4-((4-苯基哌啶-4-甲酰胺基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(395mg,984μmol,1.0eq)在DMSO(4mL)中的溶液加入碳酸钾(680mg,4.92mmol,5.0eq)，并将反应混合物在110℃搅拌16h。将反应混合物冷却至室温，倒入饱和NaHCO3，并且用EtOAc萃取。将合并的有机层用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并且浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(365mg，691μmol，70％产率)，为棕色固体。MS(ESI)：529.4([M+H]+)。
d)4-[[[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-4-苯基-哌啶-4-羰基]氨基]甲 基]哌啶-1-甲酸叔丁酯
将4-((1-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-甲酰胺基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(360mg,680μmol,1.0eq)、(2-羟基苯基)硼酸(235mg,1.7mmol,2.5eq)、K2CO3(282mg,2.04mmol,3.0eq)和RuPhos Pd G3(28.5mg,34μmol,0.05eq)在脱气的二噁烷(6mL)和水(0.6ml)的混合物中的悬浮液在氩气下于110℃搅拌3h。将反应混合物倒入饱和NaHCO3，并且用EtOAc萃取。将有机层合并，用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-5％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(300mg，512μmol，75％产率)，为棕色泡沫。MS(ESI)：476.4([M+H]+)。
e)1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-4-苯基-N-(4-哌啶基甲基)哌啶-4-甲 酰胺
向4-((1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-甲酰胺基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(300mg,511μmol,1.0eq)在DCM(5mL)中的冷却(0℃)溶液加入在二噁烷中的4M HCl(511μL,2.05mmol,4.0eq)。使反应混合物升达到室温并搅拌16h。过滤反应混合物，并将固体真空干燥，以得到标题化合物(200mg，383μmol，75％产率)，为白色固体，盐酸盐。MS(ESI)：487.4([M+H]+)。
f)1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-N-[[1-[1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶 基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]哌啶-4-羰基]-4-哌啶基]甲基]-4-苯基-哌啶-4-甲酰胺
将连接酶15(10mg,25.9μmol,1.0eq)溶解在无水DMF(200μL)中。加入DIPEA(8.38mg,11.3μL,64.9μmol,2.5eq)和HATU(11.8mg,31.1μmol,1.2eq)并将混合物在室温搅拌10min。加入1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基-N-(哌啶-4-基甲基)哌啶-4-甲酰胺，盐酸盐(13.6mg,25.9μmol,1.0eq)并将混合物在室温搅拌2h。直接通过制备型-HPLC纯化反应混合物，以得到标题化合物(19.6mg，20.2μmol，78％产率)，为浅黄色固体，2,2,2-三氟乙酸盐。MS(ESI)：854.6([M+H]+)。
实例87
4-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-N-(1-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-羰基)哌啶-4-基)-1-苯基哌嗪-2-甲酰胺
Figure BDA0003621438310001851
标题化合物以类似于实例53步骤f的方式使用配体15制备为黄色固体(11.8mg，12.4μmol，47％产率)，(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：841.7([M+H]+)。
实例88
4-[[1-[1-[9-[4-[4-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯基]哌嗪-1-基]壬基]三唑-4-基]-1-甲基-乙基]氨基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001861
向2-[6-氨基-5-[[1-(4-哌嗪-1-基苯基)-3-哌啶基]氧基]哒嗪-3-基]苯酚(50mg,111μmol)在THF(6mL)中的溶液加入连接酶29(58mg,111μmol)、三甲基(苯基)硅烷(15mg,134μmol)和随后的二丁基二氯化锡(34mg,111μmol,25μL)，并将反应混合物加热至80℃持续16h。将反应混合物冷却至室温，用水稀释，并用EtOAc萃取。将有机层用水、盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。通过制备型-HPLC纯化粗残余物，以得到标题化合物(13.9mg，14.2μmol，12％产率)，为浅黄色固体，三氟乙酸盐。MS(ESI)：952.8([M+H]+)。
实例89
4-[1-[1-[9-[4-[4-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯基]哌嗪-1-基]壬基]三唑-4-基]乙基氨基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001862
向2-[6-氨基-5-[[1-(4-哌嗪-1-基苯基)-3-哌啶基]氧基]哒嗪-3-基]苯酚(40mg,89μmol)在THF(6mL)中的溶液加入连接酶30(45mg,89μmol)、三甲基(苯基)硅烷(12mg,107μmol)和随后的二丁基二氯化锡(27mg,90μmol,20μL)，并将反应混合物加热至80℃持续16h。将反应混合物冷却至室温，用水稀释，并用EtOAc萃取。将有机层用水、盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。通过制备型-HPLC纯化粗残余物，以得到标题化合物(16.8mg，17μmol，19％产率)，为浅黄色固体，三氟乙酸盐。MS(ESI)：938.8([M+H]+)。
实例90
4-[[1-[1-[9-[4-[4-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯基]哌嗪-1-基]壬基]三唑-4-基]环丙基]氨基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001871
向2-[6-氨基-5-[[1-(4-哌嗪-1-基苯基)-3-哌啶基]氧基]哒嗪-3-基]苯酚(50mg,89μmol,TFA盐)和连接酶31(122mg,89μmol)在THF(5mL)中的溶液先后加入二丁基二氯化锡(27mg,89μmol,19μL)和三甲基(苯基)硅烷(12mg,107.23μmol)并将反应混合物加热至80℃持续16h。将反应混合物冷却至室温，用水稀释，并用EtOAc萃取。将有机层用水、盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。通过制备型-HPLC纯化粗残余物，以得到标题化合物(4.42mg，4.4μmol，5％产率)，为浅绿色固体，三氟乙酸盐。MS(ESI)：951.3([M+H]+)。
实例91
N-[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-4-苯基-4-哌啶基]-4-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]丁酰胺
Figure BDA0003621438310001872
a)(1-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
在密封管中将4-溴-6-氯哒嗪-3-胺(870mg,4.17mmol,1.0eq)与(4-苯基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1.38g,5.01mmol,1.2eq)和K2CO3(1.44g,10.4mmol,2.5eq)在DMA(9mL)中合并。将反应加热至120℃并搅拌2h。蒸发溶剂。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-20％)上作为洗脱液纯化粗残余物，以得到标题化合物(1.34g，3.33mmol，79％产率)，为灰白色固体。MS(ESI)：404.4([M+H]+)。
b)(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
将(1-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1.34g,3.32mmol,1.0eq)与(2-羟基苯基)硼酸(915mg,6.64mmol,2.0eq)、RuPhos Pd G3(139mg,166μmol,0.05eq)和碳酸钾(1.15g,8.29mmol,2.5eq)在1,4-二噁烷(12mL)和水(1.2mL)中合并。将反应用氩气吹扫，加热至120℃并搅拌2h。加入EtOAc，并将混合物用水萃取。在有机层中形成淡黄色沉淀。除去水层并将DCM/甲醇(9:1)加入有机层直至沉淀溶解。然后有机层经硫酸镁干燥，过滤并蒸发。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-10％)上作为洗脱液纯化粗残余物，以得到标题化合物(1.32g，2.8mmol，86％产率)，为橙色固体。MS(ESI)：462.4([M+H]+)。
c)2-(6-氨基-5-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)哒嗪-3-基)苯酚
于室温将在二噁烷中的4M HCl(3.57mL,14.3mmol,5.0eq)加入(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1.32g,2.86mmol,1.0eq)在DCM(13mL)中的紫色溶液。在添加过程中，溶液慢慢变成橙色，然后变成黄色，直到最后形成黄色沉淀。继续搅拌过夜。加入饱和NaHCO3水溶液直至pH＝8，并将混合物用EtOAc萃取。将有机层经硫酸镁干燥，过滤并且蒸发，以得到标题化合物(1.02g，2.8mmol，99％产率)，为橙色固体。MS(ESI)：363.4([M+H]+)。
d)N-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)-4-(4-(4-((2, 6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)丁酰胺
将2-(6-氨基-5-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)哒嗪-3-基)苯酚(60mg,166μmol,1.0eq)与连接酶52(74.8mg,183μmol,1.1eq)、HATU(126mg,332μmol,2.0eq)和DIPEA(107mg,145μL,830μmol,5.0eq)在DMF(600μL)中合并。将棕色溶液在室温搅拌2h，然后通过制备型-HPLC纯化，以得到标题化合物(40.2mg，42.5μmol，25％产率)，为白色盐，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：717.3866([M+H]+)。
实例92
外消旋-3-[4-[1-[1-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]哌啶-4-羰基]-4-哌啶基]苯氧基]哌啶-2,6-二酮
Figure BDA0003621438310001891
a)8-[3-[(4-甲氧基羰基-1-哌啶基)甲基]苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷- 3-甲酸叔丁酯
向3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯(CAS 201162-53-0,785mg,3.7mmol,1.1eq)和1-(3-溴苄基)哌啶-4-甲酸甲酯(CAS 1057273-30-9,1.05g,3.36mmol,1.0eq)在t-BuOH(8mL)中的搅拌悬浮液加入K2CO3(930mg,6.73mmol,2.0eq)。将反应混合物用氩气脱气10min。加入RuPhos Pd G3(281mg,336μmol,0.1eq)。将反应混合物在115℃搅拌7h。然后将反应混合物冷却至室温，倒入EtOAc/THF(2:1)中，并顺序地用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-80％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(1.04g，2.34mmol，70％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：444.4([M+H]+)。
b)1-[[3-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)苯基]甲基]哌啶-4-甲酸甲酯
于室温向8-[3-[(4-甲氧基羰基-1-哌啶基)甲基]苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯(1.04g,2.34mmol,1.0eq)在DCM(8mL)中的搅拌溶液加入TFA(5.35g,3.61ml,46.9mmol,20.0eq)。将反应混合物在室温搅拌2h。将反应混合物倒入EtOAc/THF(2:1)中并用0.5N NaOH水溶液和盐水洗涤。将有机层经Na2SO4干燥并在真空中浓缩，以得到标题化合物(0.96g，2.35mmol，100％产率)。MS(ESI)：344.3([M+H]+)。
c)1-[[3-[3-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯 基]甲基]哌啶-4-甲酸甲酯
于室温向1-[[3-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)苯基]甲基]哌啶-4-甲酸甲酯(0.96g,2.35mmol,1.0eq)和4-溴-6-氯哒嗪-3-胺(587mg,2.82mmol,1.2eq)在DMSO(4mL)中的搅拌悬浮液加入K2CO3(1.62g,11.7mmol,5.0eq)。将反应混合物在110℃搅拌2.5h。将反应混合物倒入EtOAc/THF(2:1)中并顺序地用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(819mg，1.74mmol，74％产率)，为浅棕色泡沫。MS(ESI):471.4(35Cl[M+H]+)。
d)1-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛 烷-8-基]苯基]甲基]哌啶-4-甲酸甲酯
向1-[[3-[3-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]哌啶-4-甲酸甲酯(0.81g,1.72mmol,1.0eq)和(2-羟基苯基)硼酸(593mg,4.3mmol,2.5eq)在二噁烷(30mL)和(3mL)中的搅拌浆液混合物加入K2CO3(832mg,6.02mmol,3.5eq)。将反应混合物用氩气脱气10min。加入RuPhos Pd G3(144mg,172μmol,0.1eq)。将反应混合物在90℃搅拌2h。将反应混合物倒入EtOAc/THF(1:1)中并顺序地用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-5％)上并随后在胺改性的硅胶柱(DCM/MeOH 0-5％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(646mg，1.22mmol，71％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：529.5([M+H]+)。
e)1-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛 烷-8-基]苯基]甲基]哌啶-4-甲酸
向1-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]哌啶-4-甲酸甲酯(0.64g,1.21mmol,1.0eq)在甲醇(12mL)和THF(6mL)中的搅拌溶液加入1M NaOH水溶液(3.63mL,3.63mmol,3.0eq)。将反应混合物在40℃搅拌2h。逐滴加入2M HCl水溶液直至混合物的pH＝3。然后真空浓缩反应混合物。将反应混合物溶解在水/乙腈中并冻干，以得到标题化合物(0.94g，1.21mmol，100％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：515.4([M+H]+)。
f)外消旋-3-[4-[1-[1-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮 杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]哌啶-4-羰基]-4-哌啶基]苯氧基]哌啶-2,6-二酮
于室温向1-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]哌啶-4-甲酸(60mg,76.9μmol,1.0eq)、连接酶38(25mg,76.9μmol,1.0eq)和DIPEA(49.7mg,67.2μL,385μmol,5.0eq)在DMSO(0.6mL)中的搅拌溶液加入HATU(58.5mg,154μmol,2.0eq)。将反应混合物在室温搅拌1h。将粗制材料通过制备型-HPLC纯化。将产物冻干以得到标题化合物(29mg，28.6μmol，37％产率)，为黄色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：785.4([M+H]+)。
实例93
外消旋-3-[4-[1-[1-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]哌啶-4-羰基]-4-哌啶基]苯胺基]哌啶-2,6-二酮
Figure BDA0003621438310001911
于室温向1-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]哌啶-4-甲酸(55mg,70.5μmol,1.0eq)、连接酶50(22.8mg,70.5μmol,1.0eq)和DIPEA(45.6mg,61.6μL,353μmol,5.0eq)在DMSO中的搅拌溶液加入HATU(53.6mg,141μmol,2.0eq)。将反应混合物在室温下搅拌1h。通过制备型-HPLC纯化粗材料，以得到标题化合物(30mg，29.6μmol，42％产率)，为黄色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：784.4([M+H]+)。
实例94
外消旋-3-[4-[4-[1-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]哌啶-4-羰基]哌嗪-1-基]苯氧基]哌啶-2,6-二酮
Figure BDA0003621438310001921
于室温向1-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]哌啶-4-甲酸(60mg,76.9μmol,1.0eq)、连接酶41(25.1mg,76.9μmol,1.0eq)和DIPEA(49.7mg,67.2μL,385μmol,5.0eq)在DMSO(0.6mL)中的搅拌溶液加入HATU(58.5mg,154μmol,2.0eq)。将反应混合物在室温搅拌1h。将粗制材料通过制备型-HPLC纯化。将产物冻干以得到标题化合物(16mg，15.8μmol，21％产率)，为黄色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：786.4([M+H]+)。
实例95
外消旋-5-[4-[1-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]哌啶-4-羰基]哌嗪-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001922
于室温向1-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]哌啶-4-甲酸(60mg,76.9μmol,1.0eq)、连接酶37(29.1mg,76.9μmol,1.0eq)和DIPEA(49.7mg,67.2μL,385μmol,5.0eq)在DMSO(0.6mL)中的搅拌溶液加入HATU(58.5mg,154μmol,2.0eq)。将反应混合物在室温搅拌1h。通过制备型-HPLC纯化粗材料，以得到标题化合物(36mg，33.7μmol，44％产率)，为黄色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：839.4([M+H]+)。
实例96
外消旋-5-[[1-[1-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]哌啶-4-羰基]-4-哌啶基]氧基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001931
于室温向1-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]哌啶-4-甲酸(60mg,76.9μmol,1.0eq)、连接酶8(30.3mg,76.9μmol,1.0eq,HCl盐)和DIPEA(49.7mg,67.2μL,385μmol,5.0eq)在DMSO(0.6mL)中的搅拌溶液加入HATU(58.5mg,154μmol,2.0eq)。将反应混合物在室温搅拌1h。通过制备型-HPLC纯化粗材料，以得到标题化合物(49mg，45.3μmol，59％产率)，为黄色盐，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：854.4([M+H]+)。
实例97
N-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-2-苯基-丙基]-1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]哌啶-4-甲酰胺(非对映体的外消旋混合物)
Figure BDA0003621438310001941
于室温向2-[6-氨基-5-(3-氨基-2-苯基-丙氧基)哒嗪-3-基]苯酚盐酸盐(30mg,80.5μmol,1.0eq)、连接酶15(31mg,80.5μmol,1.0eq)和HATU(61.2mg,161μmol,2.0eq)在DMSO(0.8mL)中的搅拌溶液加入DIPEA(31.2mg,42.2μL,241μmol,3.0eq)。将反应混合物搅拌3h。通过制备型-HPLC完成纯化，以得到标题化合物(23.6mg，28.9μmol，36％产率)，为黄色固体，2,2,2-三氟乙酸盐。MS(ESI)：704.5([M+H]+)。
实例98
N-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-2-苯基-丙基]-2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氧基]苯基]-1-哌啶基]乙酰胺；2,2,2-三氟乙酸(非对映体的外消旋混合物)
Figure BDA0003621438310001942
于室温向2-[6-氨基-5-(3-氨基-2-苯基-丙氧基)哒嗪-3-基]苯酚盐酸盐(30mg,80.5μmol,1.0eq)、连接酶35(30.8mg,80.5μmol,1.0eq)和HATU(61.2mg,161μmol,2.0eq)在二甲基亚砜(0.8mL)中的搅拌溶液加入DIPEA(41.6mg,56.2μL,322μmol,4.0eq)。将反应混合物搅拌3h。通过制备型-HPLC完成纯化，以得到标题化合物(非对映体的外消旋混合物)(11.5mg，14.8μmol，18％产率)，为白色固体，2,2,2-三氟乙酸盐。MS(ESI)：665.5([M+H]+)。
实例99
外消旋-5-[2-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-2-氧代-乙氧基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001951
于室温向2-[6-氨基-5-[8-[3-(2-哌嗪-1-基乙氧基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚(44.4mg,88.5μmol,1.0eq)、连接酶48(29.4mg,88.5μmol,1.0eq)和DIPEA(34.3mg,46.4μL,265μmol,3.0eq)在DMSO(0.5mL)中的搅拌溶液加入HATU(67.3mg,177μmol,2.0eq)。将反应混合物搅拌3h。将反应混合物在EtOAc/THF(1:1)和饱和碳酸氢盐水溶液之间分配。分离各层。用EtOAc萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并且在真空中浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(35.6mg，43.6μmol，49％产率)，为灰白色固体。MS(ESI)：816.7([M+H]+)。
实例100
1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-N-((1-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)甲基)哌啶-4-基)甲基)-4-苯基哌啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003621438310001952
将1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基-N-(哌啶-4-基甲基)哌啶-4-甲酰胺，盐酸盐(9mg,18.5μmol,1.0eq)和连接酶33(8.03mg,18.5μmol,1.0eq)在DMSO(400μL)中搅拌72h。直接通过制备型-HPLC纯化反应混合物，以得到标题化合物(8.1mg，8.49μmol，45％产率)，为浅棕色固体，(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：840.7([M+H]+)。
实例101
1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-N-((1-(2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氧基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)甲基)-4-苯基哌啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003621438310001961
标题化合物以类似于实例86步骤f的方式使用连接酶35制备为浅黄色固体(25.9mg，27.9μmol，72％产率)，(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：815.6([M+H]+)。
实例102
1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-N-[[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]苯基]哌啶-1-基]乙酰基]哌啶-4-基]甲基]-4-苯基哌啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003621438310001962
标题化合物以类似于实例86步骤f的方式使用连接酶51制备为浅黄色固体(25mg，25.6μmol，66％产率)，(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：814.7([M+H]+)。
实例103
1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-N-((1-(2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)乙酰基)哌啶-4-基)甲基)-4-苯基哌啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003621438310001971
标题化合物以类似于实例86步骤f的方式使用连接酶24制备为浅黄色固体(19.4mg，18.8μmol，49％产率)，(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：868.7([M+H]+)。
实例104
1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-N-((1-(4-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氧基)苯基)哌啶-1-基)丁酰基)哌啶-4-基)甲基)-4-苯基哌啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003621438310001972
标题化合物以类似于实例86步骤f的方式使用连接酶39制备为浅黄色固体(18.9mg，18.8μmol，49％产率)，(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：843.7([M+H]+)。
实例105
1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-N-((1-(4-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)丁酰基)哌啶-4-基)甲基)-4-苯基哌啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003621438310001981
标题化合物以类似于实例86步骤f的方式使用连接酶52制备为浅黄色固体52(15mg，14.9μmol，39％产率)，(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：842.8([M+H]+)。
实例106
外消旋-1-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]-N-[1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]-4-哌啶基]哌啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003621438310001982
于室温向1-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]哌啶-4-甲酸(60mg,76.9μmol,1.0eq)、连接酶55(27.4mg,76.9μmol,1.0eq)和DIPEA(49.7mg,67.2μL,385μmol,5.0eq)在DMSO(0.6mL)中的搅拌溶液加入HATU(58.5mg,154μmol,2.0eq)。将反应混合物在室温搅拌1h。将粗制材料通过制备型-HPLC纯化。将产物冻干以得到标题化合物(15mg，13.9μmol，18％产率)，为黄色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：853.4([M+H]+)。
实例107
外消旋-5-[4-[4-[5-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]-2-(三氟甲基)苯甲酰基]哌嗪-1-羰基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310001991
a)4-[5-氟-2-(三氟甲基)苯甲酰基]哌嗪-1-甲酸苄酯
于室温向5-氟-2-(三氟甲基)苯甲酸(500mg,2.4mmol,1.0eq)、哌嗪-1-甲酸苄酯(688mg,602μL,3.12mmol,1.3eq)和HATU(1.92g,5.05mmol,2.1eq)在二甲基亚砜(3mL)中的搅拌溶液加入DIPEA(683mg,923μl,5.29mmol,2.2eq)。将反应混合物搅拌4h。将反应混合物在EtOAc和水之间分配。分离各层。用EtOAc萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并且在真空中浓缩。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-60％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(964mg，2.35mmol，98％产率)，为无色油。MS(ESI)：411.3([M+H]+)。
b)8-[3-(4-苄氧基羰基哌啶-1-羰基)-4-(三氟甲基)苯基]-3,8-二氮杂双环 [3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯
将4-[5-氟-2-(三氟甲基)苯甲酰基]哌嗪-1-甲酸苄酯(911mg,2.22mmol,1.0eq)、3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯(566mg,2.66mmol,1.2eq)和DIPEA(574mg,775μL,4.44mmol,2.0eq)在DMSO(11.1mL)中的溶液在90℃加热并搅拌15h.将反应混合物在EtOAc和水之间分配。分离各层。用EtOAc萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并且在真空中浓缩。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-70％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(574mg，952μmol，43％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：603.5([M+H]+)。
c)4-[5-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-2-(三氟甲基)苯甲酰基]哌嗪-1- 甲酸苄酯
于室温向8-[3-(4-苄氧基羰基哌啶-1-羰基)-4-(三氟甲基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯(409mg,679μmol,1.0eq)在DCM(5mL)中的搅拌溶液加入TFA(1.55g,1.05mL,13.6mmol,20eq)。将反应混合物搅拌20h。将反应混合物在EtOAc和2M氢氧化钠水溶液之间分配。分离各层。用EtOAc萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，并真空浓缩，以得到标题化合物(311mg，619μmol，91％产率)，为浅棕色固体。MS(ESI)：503.4([M+H]+)。
d)4-[5-[3-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]-2- (三氟甲基)苯甲酰基]哌嗪-1-甲酸苄酯
于室温向4-[5-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-2-(三氟甲基)苯甲酰基]哌嗪-1-甲酸苄酯(311mg,619μmol,1.0eq)和4-溴-6-氯哒嗪-3-胺(168mg,805μmol,1.3eq)在DMSO(1.38mL)中的悬浮液加入K2CO3(428mg,3.09mmol,5.0eq)。将反应混合物在110℃加热15h。将反应混合物在EtOAc和水之间分配。分离各层。用EtOAc萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并且在真空中浓缩。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-100％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(231mg，367μmol，59％产率)，为浅棕色固体。MS(ESI):630.5(35Cl[M+H]+)。
e)4-[5-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷- 8-基]-2-(三氟甲基)苯甲酰基]哌嗪-1-甲酸苄酯
于室温向4-[5-[3-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]-2-(三氟甲基)苯甲酰基]哌嗪-1-甲酸苄酯(231mg,367μmol,1.0eq)和(2-羟基苯基)硼酸(126mg,917μmol,2.5eq)在1,4-二噁烷(9mL)和(0.9mL)中的搅拌悬浮液加入K2CO3(177mg,1.28mmol,3.5eq)。将反应混合物用氩气脱气10min。加入RuPhos Pd G3(30.7mg,36.7μmol,0.1eq)。将反应混合物在90℃加热2h。将反应混合物在EtOAc/THF和水之间分配。分离各层。将水层用EtOAc/THF萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并且在真空中浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(67mg，97.4μmol，27％产率)，为浅棕色固体。MS(ESI)：688.7([M+H]+)。
f)[5-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8- 基]-2-(三氟甲基)苯基]-哌嗪-1-基-甲酮
向25ml双颈圆底烧瓶中装入4-[5-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]-2-(三氟甲基)苯甲酰基]哌嗪-1-甲酸苄酯(67mg,97.4μmol,1.0eq)、MeOH(1mL)和THF(1mL)中。将烧瓶用氩气脱气。在加入催化剂10％钯/碳(10.4mg,9.74μmol,0.1eq)后，向烧瓶中充入氢气并在氢气气氛下搅拌15h。通过过滤除去催化剂并用甲醇洗涤。真空浓缩滤液，以得到标题化合物(48mg，86.7μmol，89％产率)，为浅棕色固体。MS(ESI)：554.5([M+H]+)。
g)外消旋-5-[4-[4-[5-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双 环[3.2.1]辛烷-8-基]-2-(三氟甲基)苯甲酰基]哌嗪-1-羰基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧 代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
于室温向[5-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]-2-(三氟甲基)苯基]-哌嗪-1-基-甲酮(48mg,86.7μmol,1.0eq)、连接酶15(33.4mg,86.7μmol,1.0eq)和HATU(72.5mg,191μmol,2.2eq)在DMSO中的搅拌溶液加入DIPEA(33.6mg,45.4μL,260μmol,3.0eq)。将反应混合物搅拌2h。通过制备型-HPLC完成纯化，以得到标题化合物(36.9mg，35.7μmol，41％产率)，为黄色固体，2,2,2-三氟乙酸盐。MS(ESI)：921.4([M+H]+)。
实例108
N-[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-4-苯基-4-哌啶基]-2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氧基]苯基]-1-哌啶基]乙酰胺
Figure BDA0003621438310002011
将2-(6-氨基-5-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)哒嗪-3-基)苯酚(40mg,111μmol,1.0eq)与连接酶35(46.6mg,122μmol,1.1eq)、HATU(84.2mg,221μmol,2.0eq)和DIPEA(71.5mg,96.6μL,553μmol,5.0eq)在DMF(400μL)中合并。将棕色溶液在室温搅拌2h，然后进行制备型-HPLC纯化，以得到标题化合物(10mg，10.9μmol，9％产率)，为白色固体，双(2,2,2-三氟乙酸盐)。MS(ESI)：690.3401([M+H]+)。
实例109
4-[3-[1-[9-[4-[4-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯基]哌嗪-1-基]壬基]三唑-4-基]丙基氨基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002021
向2-[6-氨基-5-[[1-(4-哌嗪-1-基苯基)-3-哌啶基]氧基]哒嗪-3-基]苯酚(40mg,89μmol)和连接酶57(47mg,89μmol)在THF(5mL)中的溶液先后加入二丁基二氯化锡(27mg,89μmol,19μL)和三甲基(苯基)硅烷(12mg,107μmol)并将反应混合物加热至80℃持续16h。将反应混合物冷却至室温，用水稀释，并用EtOAc萃取。将有机层用水、盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。利用制备型-HPLC纯化粗残余物，以得到标题化合物(9.37mg，9.8μmol，10％产率)，为浅黄色固体。MS(ESI)：953.4([M+H]+)。
实例110
4-[2-[1-[9-[4-[4-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯基]哌嗪-1-基]壬基]三唑-4-基]乙基氨基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002031
向2-[6-氨基-5-[[1-(4-哌嗪-1-基苯基)-3-哌啶基]氧基]哒嗪-3-基]苯酚(40mg,89μmol)和连接酶58(45mg,89μmol)在THF(5mL)中的溶液先后加入二丁基二氯化锡(27mg,89μmol,19μL)和三甲基(苯基)硅烷(12mg,107μmol)并将反应混合物加热至80℃持续16h。将反应混合物冷却至室温，用水稀释，并用EtOAc萃取。将有机层用水、盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。利用制备型-HPLC纯化粗残余物，以得到标题化合物(15.7mg，16.7μmol，18％产率)，为浅黄色固体。MS(ESI)：939.4([M+H]+)。
实例111
3-[7-[[1-[9-[4-[4-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯基]哌嗪-1-基]-9-氧代-壬基]三唑-4-基]甲基氨基]-1-氧代-异吲哚啉-2-基]哌啶-2,6-二酮
Figure BDA0003621438310002032
向连接酶3(14mg,22.9μmol,TFA盐)和2-[6-氨基-5-[[1-(4-哌嗪-1-基苯基)-3-哌啶基]氧基]哒嗪-3-基]苯酚(13mg,22.9μmol,TFA)在二甲基甲酰胺(0.4mL)中的溶液先后加入HATU(13mg,34.4μmol)和DIPEA(9mg,68.9μmol,12μL)并将反应混合物在室温搅拌16h。将反应混合物用水稀释，并且用EtOAc萃取。除去挥发物。通过制备型-HPLC纯化粗残余物，以得到标题化合物(2.65mg，2.66μmol，11％产率)，为灰白色固体，三氟乙酸盐。MS(ESI)：925.3([M+H]+)。
实例112
外消旋-3-[4-[1-[2-[4-[3-[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氮杂环丁烷-3-基]氧基苯基]哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基]-4-哌啶基]苯胺基]哌啶-2,6-二酮
Figure BDA0003621438310002041
于室温向2-[6-氨基-5-[3-(3-哌嗪-1-基苯氧基)氮杂环丁烷-1-基]哒嗪-3-基]苯酚(30mg,71.7μmol,1.0eq)、连接酶51(30.1mg,78.9μmol,1.1eq)和DIPEA(46.3mg,62.6μL,358μmol,5.0eq)在DMSO(300μL)中的搅拌溶液加入HATU(54.5mg,143μmol,2.0eq)。将反应混合物在室温搅拌1h。将粗制材料通过制备型-HPLC纯化。然后将粗产物溶解在CH2Cl2中，加入几滴Et3N，并将混合物真空浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-5％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(11mg，9.44μmol，13％产率)，为白色固体。MS(ESI)：746.4([M+H]+)。
实例113
外消旋-5-[4-[4-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]哌啶-1-羰基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002042
a)4-(3-溴苯氧基)哌啶-1-甲酸苄酯
于室温向4-(3-溴苯氧基)哌啶盐酸盐(2g,6.84mmol,1.0eq)在DCM(60mL)中的搅拌悬浮液加入Et3N(2.08g,2.86mL,20.5mmol,3.0eq)。将反应混合物冷却至0-5℃，然后加入氯甲酸苄酯(1.28g,1.07mL,7.52mmol,1.1eq)。将反应混合物在室温搅拌3h。将反应混合物真空浓缩，然后吸收在EtOAc和水中。混合物依次用0.5N NaOH水溶液、0.5N HCl水溶液和盐水洗涤。将有机层经Na2SO4干燥并真空浓缩，以得到标题化合物(2.9g，6.84mmol，100％产率)，为无色油。MS(ESI)：392.1([M+H]+)。
b)8-[3-[(1-苄氧基羰基-4-哌啶基)氧基]苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷- 3-甲酸叔丁酯
反应在密封管中进行。向4-(3-溴苯氧基)哌啶-1-甲酸苄酯(2.9g,6.84mmol,1.0eq)和(1R，5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯(1.6g,7.52mmol,1.1eq)在t-BuOH(22mL)中的搅拌悬浮液加入K2CO3(1.89g,13.7mmol,2.0eq)。将反应混合物用氩气脱气10min。加入RuPhos Pd G3(572mg,684μmol,0.1eq)。将反应混合物在115℃搅拌16h。将反应混合物冷却至室温，倒入EtOAc/THF(2:1)中，并顺序地用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-50％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(1.33g，2.42mmol，35％产率)，为无色油。MS(ESI)：522.5([M+H]+)。
c)4-[3-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)苯氧基]哌啶-1-甲酸苄酯
向8-[3-[(1-苄氧基羰基-4-哌啶基)氧基]苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯(1.33g,2.55mmol,1.0eq)在CH2Cl2(10mL)中的搅拌溶液加入TFA(5.81g,3.93mL,51mmol,20eq)。将反应混合物搅拌1h。将反应混合物倒入EtOAc/THF(2:1)中并用0.5N NaOH水溶液和盐水洗涤。将有机层经Na2SO4干燥并真空浓缩，以得到标题化合物(1.22g，2.55mmol，100％产率)，为黄色油。MS(ESI)：422.4([M+H]+)。
d)4-[3-[3-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧 基]哌啶-1-甲酸苄酯
于室温向4-[3-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)苯氧基]哌啶-1-甲酸苄酯(1.22g,2.55mmol,1.0eq)和4-溴-6-氯哒嗪-3-胺(637mg,3.06mmol,1.2eq)在DMSO(5mL)中的搅拌溶液加入K2CO3(1.76g,12.7mmol,5.0eq)。将反应混合物在110℃搅拌3h。将反应混合物倒入EtOAc/THF(2:1)中并顺序地用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-5％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(1.18g，2.04mmol，80％产率)，为浅棕色泡沫。MS(ESI):549.5(35Cl[M+H]+)。
e)4-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷- 8-基]苯氧基]哌啶-1-甲酸苄酯
于室温向4-[3-[3-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]哌啶-1-甲酸苄酯(0.98g,1.78mmol,1.0eq)和(2-羟基苯基)硼酸(615mg,4.46mmol,2.5eq)在二噁烷(50mL)和(5mL)中的搅拌溶液加入K2CO3(863mg,6.25mmol,3.5eq)。将反应混合物用氩气脱气10min。加入RuPhos Pd G3(149mg,178μmol,0.1eq)。将反应混合物在90℃搅拌1.5h。将反应混合物倒入EtOAc/THF(1:1)中并顺序地用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-5％)上并随后在氨基改性的硅胶柱(DCM/MeOH 0-5％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(0.54g，801μmol，45％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：607.5([M+H]+)。
f)2-[6-氨基-5-[8-[3-(4-哌啶基氧基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3- 基]哒嗪-3-基]苯酚
于室温将4-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]哌啶-1-甲酸苄酯(0.54g,890μmol,1.0eq)在甲醇(120mL)和THF(40mL)中的溶液用氩气脱气5min。加入10％钯/碳(189mg,178μmol,0.2eq)。将反应混合物用H2脱气10min。然后于室温将反应混合物在H2气球下搅拌1.5h。将反应混合物通过Sartorius漏斗过滤，然后真空浓缩，以得到标题化合物(453mg，863μmol，97％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：473.5([M+H]+)。
g)外消旋-5-[4-[4-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双 环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]哌啶-1-羰基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲 哚啉-1,3-二酮
于室温向2-[6-氨基-5-[8-[3-(4-吡啶基氧基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚(60mg,127μmol,1.0eq)、连接酶15(48.9mg,127μmol,1.0eq)和DIPEA(65.6mg,88.7μL,508μmol,4.0eq)在DMSO(1mL)中的搅拌溶液加入HATU(96.5mg,254μmol,2.0eq)。将反应混合物在室温搅拌2h。通过制备型-HPLC纯化粗材料，以得到标题化合物(37mg，32.9μmol，26％产率)，为黄色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：840.4([M+H]+)。
实例114
外消旋-3-[4-[1-[2-[4-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]-1-哌啶基]-2-氧代-乙基]-4-哌啶基]苯胺基]哌啶-2,6-二酮
Figure BDA0003621438310002071
于室温向2-[6-氨基-5-[8-[3-(4-吡啶基氧基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚(60mg,127μmol,1.0eq)、连接酶51(48.5mg,127μmol,1.0eq)和DIPEA(82mg,111μL,635μmol,5.0eq)在DMSO(1mL)中的搅拌溶液加入HATU(96.5mg,254μmol,2.0eq)。将反应混合物在室温搅拌2h。将粗制材料通过制备型-HPLC纯化。将产物冻干以得到标题化合物(40mg，35μmol，28％产率)，为黄色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：800.4([M+H]+)。
实例115
N-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)-3-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氧基)苯基)哌啶-1-基)丙酰胺二甲酸
Figure BDA0003621438310002072
将2-(6-氨基-5-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)哒嗪-3-基)苯酚(20mg,55.3μmol,1.0eq)与连接酶40(19.9mg,55.3μmol,1.0eq)、HATU(42.1mg,111μmol,2.0eq)和DIPEA(21.5mg,29μL,166μmol,3.0eq)在DMF(200μL)中合并。将棕色溶液在室温搅拌2h。通过制备型-HPLC纯化反应，以得到标题化合物(5.4mg，5.25μmol，9％产率)，为白色固体。MS(ESI)：704.3555([M+H]+)。
实例116
外消旋-5-[4-[4-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环
[3.2.1]辛烷-8-基]-2-甲基-苯甲酰基]哌嗪-1-羰基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002081
a)4-(3-溴-2-甲基-苯甲酰基)哌嗪-1-甲酸苄酯
于室温向3-溴-2-甲基苯甲酸(1.5g,6.98mmol,1.0eq)、哌嗪-1-甲酸苄酯(2g,1.75mL,9.07mmol,1.3eq)和HATU(5.57g,14.6mmol,2.1eq)在DMSO(5.63mL)中的搅拌溶液加入DIPEA(1.98g,2.68mL,15.3mmol,2.2eq)。将反应混合物搅拌15h。将反应混合物在EtOAc和水之间分配。分离各层。用EtOAc萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并且在真空中浓缩。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-50％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(3.016g，7.23mmol，100％产率)，为无色油。MS(ESI)：419.1([M+H]+)。
b)8-[3-(4-苄氧基羰基哌啶-1-羰基)-2-甲基-苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛 烷-3-甲酸叔丁酯
向4-(3-溴-2-甲基-苯甲酰基)哌嗪-1-甲酸苄酯(1g,2.4mmol,1.0eq)和3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯(534mg,2.52mmol,1.05eq)在t-BuOH(12.3mL)中的搅拌悬浮液加入K2CO3(662mg,4.79mmol,2.0eq)。将反应用氩气脱气5min。添加RuPhos Pd G3(200mg,240μmol,0.1eq)。将反应混合物在回流下搅拌2天。将反应混合物转移到小瓶中并用盖子密封小瓶。将反应混合物加热至120℃并搅拌2天。将反应混合物倒入EtOAc中并顺序地用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-50％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(378mg，517μmol，22％产率)，为黄色油。MS(ESI)：549([M+H]+)。
c)4-[3-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-2-甲基-苯甲酰基]哌嗪-1-甲酸苄 酯
于室温向8-[3-(4-苄氧基羰基哌啶-1-羰基)-2-甲基-苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯(378mg,689μmol,1.0eq)在DCM(5mL)中的搅拌溶液加入三氟乙酸(1.48g,1mL,13mmol,18.8eq)。将反应混合物搅拌3d。将反应混合物在EtOAc/THF(1:1)和2M氢氧化钠水溶液之间分配。分离各层。用EtOAc萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，并真空浓缩，以得到标题化合物(278mg，620μmol，90％产率)，为灰白色固体。MS(ESI)：449.5([M+H]+)。
d)4-[3-[3-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]-2- 甲基-苯甲酰基]哌嗪-1-甲酸苄酯
于室温向4-[3-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-2-甲基-苯甲酰基]哌嗪-1-甲酸苄酯(278mg,620μmol,1.0eq)和4-溴-6-氯哒嗪-3-胺(168mg,806μmol,1.3eq)在DMSO(1.38mL)中的搅拌悬浮液加入K2CO3(428mg,3.1mmol,5.0eq)。将反应混合物在110℃加热15h。将反应混合物在EtOAc和水之间分配。分离各层。用EtOAc萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并且在真空中浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(149.5mg，260μmol，42％产率)，为浅棕色固体。MS(ESI):576.5(35Cl[M+H]+)。
e)4-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷- 8-基]-2-甲基-苯甲酰基]哌嗪-1-甲酸苄酯和[3-[3-[3-年纪-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4- 基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]-2-甲基-苯基]-哌嗪-1-基-甲酮
于室温向4-[3-[3-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]-2-甲基-苯甲酰基]哌嗪-1-甲酸苄酯(149.5mg,260μmol,1.0eq)和(2-羟基苯基)硼酸(89.5mg,649μmol,2.5eq)在1,4-二噁烷(5.82mL)和(0.9mL)中的搅拌悬浮液加入K2CO3(126mg,908μmol,3.5eq)。将反应混合物用氩气脱气10min。加入RuPhos Pd G3(21.7mg,26μmol,0.1eq)。将反应混合物在90℃加热2h。将反应混合物在EtOAc/THF和水之间分配。分离各层。将水层用EtOAc/THF萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并且在真空中浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗材料，以得到标题化合物1(23.5mg，37.1μmol，14％产率)，为浅棕色固体。MS(ESI):634.6([M+H]+)，并且标题化合物2(71mg，142μmol，55％产率)作为浅棕色固体。MS(ESI)：500.4([M+H]+)。
f)外消旋-5-[4-[4-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双 环[3.2.1]辛烷-8-基]-2-甲基-苯甲酰基]哌嗪-1-羰基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌 啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
于室温向[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]-2-甲基-苯基]-哌嗪-1-基-甲酮(30mg,60μmol,1.0eq)、连接酶15(23.1mg,60μmol,1.0eq)和HATU(50.2mg,132μmol,2.2eq)在DMSO中的搅拌溶液加入DIPEA(23.3mg,31.5μL,180μmol,3.0eq)。将反应混合物搅拌2h。通过制备型-HPLC完成纯化，以得到标题化合物(9.9mg，8.86μmol，15％产率)，为黄色固体，双(2,2,2-三氟乙酸盐)。MS(ESI)：867.6([M+H]+)。
实例117
外消旋-5-[4-[3-[4-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]-2-甲基-苯甲酰基]哌嗪-1-基]-3-氧代-丙基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002101
于室温向[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]-2-甲基-苯基]-哌嗪-1-基-甲酮(30mg,60μmol,1.0eq)、连接酶12酸(24.8mg,60μmol,1.0eq)和HATU(50.2mg,132μmol,2.2eq)在DMSO中的溶液加入DIPEA(23.3mg,31.5μL,180μmol,3.0eq)。将反应混合物搅拌2h。通过制备型-HPLC完成纯化，以得到标题化合物(29mg，23.8μmol，40％产率)，为黄色固体，双(2,2,2-三氟乙酸盐)。MS(ESI)：895.6([M+H]+)。
实例118
外消旋-1-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]-N-[1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]-4-哌啶基]-N-甲基-哌啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003621438310002111
于室温向1-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]哌啶-4-甲酸(60mg,117μmol,1.0eq)、连接酶56(43.2mg,117μmol,1.0eq)和DIPEA(75.3mg,102μL,583μmol,5.0eq)在DMSO(0.6mL)中的搅拌溶液加入HATU(88.7mg,233μmol,2.0eq)。将反应混合物在室温搅拌3h。将反应混合物倒入THF/EtOAc(2:1)中并顺序地用水和盐水洗涤。通过制备型-HPLC纯化粗材料，以得到标题化合物(20mg，18.3μmol，16％产率)，为黄色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：867.4([M+H]+)。
实例119
N-(1-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)哌啶-4-基)-1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003621438310002121
a)N-[1-[1-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-4-苯基-哌啶-4-羰基]-4-哌啶基]氨基甲 酸叔丁酯
向4-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-1-苯基-哌嗪-2-甲酸钾(59mg,158μmol,1.0eq)、HATU(56.8mg,149μmol,1.2eq)和DIPEA(161mg,218μL,1.25mmol,10.0eq)在DMF(2mL)中的溶液加入4-(氨基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(385mg,1.8mmol,1.5eq)。将反应混合物在室温搅拌1h。真空浓缩反应混合物。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-100％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(65mg，126μmol，80％产率)，为棕色固体。MS(ESI)：515.4([M+H]+)。
b)N-[1-[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-4-苯基-哌啶-4-羰基]-4-哌啶 基]氨基甲酸叔丁酯
将(1-(1-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(65mg,126μmol,1.0eq)、(2-羟基苯基)硼酸(43.5mg,316μmol,2.5eq)、碳酸钾(52.3mg,379μmol,3.0eq)和RuPhos Pd G3(5.28mg,6.31μmol,0.05eq)在脱气的二噁烷(3mL)和水(0.3mL)的混合物中的悬浮液在氩气下于110℃搅拌2h。将反应混合物倒入饱和NaHCO3，并且用EtOAc萃取。将有机层合并，用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-100％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(45mg，79μmol，62％产率)，为棕色泡沫。MS(ESI)：573.5([M+H]+)。
c)[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-4-苯基-4-哌啶基]-(4-氨基-1-哌啶 基)甲酮
向(1-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(40mg,70μmol,1.0eq)在DCM(2mL)中的冷却(0℃)溶液加入在二噁烷中的4M HCl(52.4μL,210μmol,3.0eq)。允许反应混合物达到室温并搅拌16h。将反应混合物过滤并将固体在真空中干燥以得到标题化合物(22mg,4μmol,62％)，为白色固体，盐酸盐。MS(ESI)：473.5([M+H]+)。
d)N-(1-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)哌啶-4- 基)-1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-甲酰胺
将连接酶15(10.9mg,28.3μmol,1.2eq)溶解在无水DMF(400μL)中。加入DIPEA(7.62mg,10.3μL,58.9μmol,2.5eq)和HATU(9.86mg,25.9μmol,1.1eq)并将混合物在室温搅拌10min。加入(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)(4-氨基哌啶-1-基)甲酮，盐酸盐(12mg,23.6μmol,1.0eq)并将混合物在室温搅拌2h。直接通过制备型-HPLC纯化反应混合物，以得到标题化合物(17.4mg，18.2μmol，77％产率)，为黄色固体，2,2,2-三氟乙酸盐。MS(ESI)：840.6([M+H]+)。
实例120
5-(4-(4-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)哌嗪-1-羰基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002131
a)4-[1-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-4-苯基-哌啶-4-羰基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯
向4-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-1-苯基-哌嗪-2-甲酸钾(46mg,125μmol,1.0eq)、HATU(56.8mg,149μmol,1.2eq)和DIPEA(161mg,218μL,1.25mmol,10.0eq)在DMF(2mL)中的溶液加入哌嗪-1-甲酸叔丁酯(34.8mg,187μmol,1.5eq)。将反应混合物在室温搅拌16h。真空浓缩反应混合物。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-100％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(60mg，120μmol，96％产率)，为浅棕色固体。MS(ESI)：501.4([M+H]+)。
b)4-[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-4-苯基-哌啶-4-羰基]哌嗪-1-甲 酸叔丁酯
将4-(1-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(60mg,120μmol,1.0eq)、(2-羟基苯基)硼酸(41.3mg,299μmol,2.5eq)、碳酸钾(49.7mg,359μmol,3.0eq)和RuPhos Pd G3(5.01mg,5.99μmol,0.05eq)在脱气的二噁烷(3mL)和水(0.3mL)的混合物中的悬浮液在氩气下于110℃搅拌2h。将反应混合物倒入饱和NaHCO3，并且用EtOAc萃取。将有机层合并，用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-100％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(25mg，45μmol，37％产率)，为浅棕色固体。MS(ESI)：559.4([M+H]+)。
c)[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-4-苯基-4-哌啶基]-哌嗪-1-基-甲酮
向4-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(20mg,35.8μmol,1.0eq)在DCM(1mL)中的冷却(0℃)溶液加入在二噁烷中的4M HCl(26.8μL,107μmol,3.0eq)。允许反应混合物达到室温并搅拌16h。将反应混合物过滤并将固体在真空中干燥以得到标题化合物(12mg,24μmol,68％产率)，为白色盐酸盐。MS(ESI)：459.4([M+H]+)。
d)5-(4-(4-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)哌嗪- 1-羰基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
将连接酶15(5.61mg,14.5μmol,1.2eq)溶解在无水DMF(400μL)中。加入DIPEA(3.92mg,5.29μL,30.3μmol,2.5eq)和HATU(5.07mg,13.3μmol,1.1eq)并将混合物在室温搅拌10min。加入(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)(哌嗪-1-基)甲酮盐酸盐(6mg,12.1μmol,1.0eq)并将混合物在室温搅拌2h。直接通过制备型-HPLC纯化反应混合物，以得到标题化合物(3.6mg，3.83μmol，31％产率)，为黄色固体，2,2,2-三氟乙酸盐。MS(ESI)：826.6([M+H]+)。
实例121
5-(4-(6-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-羰基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002151
a)6-[1-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-4-苯基-哌啶-4-羰基]-2,6-二氮杂螺[3.3] 庚烷-2-甲酸叔丁酯
向4-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-1-苯基-哌嗪-2-甲酸钾(445mg,1.2mmol,1.0eq)、HATU(548mg,1.44mmol,1.2eq)和DIPEA(932mg,1.26mL,7.21mmol,6.0eq)在DMF(5mL)中的溶液加入哌嗪-1-甲酸叔丁酯(34.8mg,187μmol,1.5eq)。将反应混合物在室温搅拌16h。真空浓缩反应混合物。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-100％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(643mg,1.32mmol,1.1eq)，为浅棕色固体。MS(ESI)：513.4([M+H]+)。
b)6-[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-4-苯基-哌啶-4-羰基]-2,6-二氮 杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯
将6-(1-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(600mg,1.17mmol,1.0eq)、(2-羟基苯基)硼酸(403mg,2.92mmol,2.5eq)、碳酸钾(485mg,3.51mmol,3.0eq)和RuPhos Pd G3(48.9mg,58.5μmol,0.05eq)在脱气的二噁烷(3mL)和水(0.3mL)的混合物中的悬浮液在氩气下于110℃搅拌2h。将反应混合物倒入饱和NaHCO3，并且用EtOAc萃取。将有机层合并，用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(225mg，395μmol，33％产率)，为浅棕色固体。MS(ESI)：571.4([M+H]+)。
c)[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-4-苯基-4-哌啶基]-(2,6-二氮杂螺 [3.3]庚烷-2-基)甲酮
将密封管中的6-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(225mg,394μmol,1.0eq)在1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇(3.31g,2.07mL,19.7mmol,50.0eq)中的溶液在120℃搅拌48h。将反应混合物冷却至室温并真空浓缩，以得到标题化合物(110mg，234μmol，59％产率)，为浅棕色固体。MS(ESI)：471.4([M+H]+)。
d)5-(4-(6-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)-2,6- 二氮杂螺[3.3]庚烷-2-羰基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
将连接酶15(16.7mg,43.4μmol,1.2eq)溶解在无水DMF(400μL)中。加入DIPEA(11.7mg,15.8μL,90.3μmol,2.5eq)和HATU(17.9mg,47μmol,1.3eq)并将混合物在室温搅拌10min。加入(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲酮(17mg,36.1μmol,1.0eq)并将混合物在室温搅拌2h。直接通过制备型-HPLC纯化反应混合物，以得到标题化合物(21.6mg，24.4μmol，67.6％产率)，为黄色固体，甲酸盐。MS(ESI)：838.6([M+H]+)。
实例122
5-(4-(2-(6-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-2-氧代乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002161
标题化合物以类似于实例121步骤d的方式使用连接酶24制备为黄色固体(18.5mg，20.6μmol，57％产率)，甲酸盐。MS(ESI)：852.7([M+H]+)。
实例123
3-(4-(1-(4-(6-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-4-氧代丁基)哌啶-4-基)苯氧基)哌啶-2,6-二酮
Figure BDA0003621438310002171
标题化合物以类似于实例121步骤d的方式使用连接酶39制备为黄色固体(9.5mg，9.79μmol，27.1％产率)，甲酸盐。MS(ESI)：827.7([M+H]+)。
实例124
1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-N-[[1-[[1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]-4-哌啶基]甲基]-4-哌啶基]甲基]-3-苯基-吡咯烷-3-甲酰胺
Figure BDA0003621438310002172
a)4-(氨基甲基)哌啶-1-甲酸苄酯
向4-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸苄酯(3.45g,9.9mmol,1.0eq)在DCM(10mL)中的冷却(0℃)溶液加入在二噁烷中的4M HCl(7.43ml,29.7mmol,3.0eq)。使反应混合物升达到室温并搅拌4h。过滤反应混合物，并将固体真空干燥，以得到标题化合物(2.77g，9.7mmol，98％产率)，为白色固体，盐酸盐。MS(ESI)：249.3([M+H]+)。
b)4-[[(1-叔丁氧基羰基-3-苯基-吡咯烷-3-羰基)氨基]甲基]哌啶-1-甲酸苄酯
向1-(叔丁氧基羰基)-3-苯基吡咯烷-3-甲酸(300mg,1.03mmol,1.0eq)、HATU(470mg,1.24mmol,1.2eq)和DIPEA(665mg,899μL,5.15mmol,5.0eq)在DMF(4mL)中的溶液加入4-(氨基甲基)哌啶-1-甲酸苄酯盐酸盐(323mg,1.13mmol,1.1eq)。将反应混合物在室温下搅拌4h。将反应混合物真空浓缩。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-100％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(460mg，886μmol，86％产率)，为浅棕色固体。MS(ESI):422.4([M+H-Boc]+)。
c)4-[[(3-苯基吡咯烷-3-羰基)氨基]甲基]哌啶-1-甲酸苄酯
向4-((1-(叔丁氧基羰基)-3-苯基吡咯烷-3-甲酰胺基)甲基)哌啶-1-甲酸苄酯(460mg,882μmol,1.0eq)在DCM(6mL)中的冷却(0℃)溶液加入在二噁烷中的4M HCl(661μL,2.65mmol,3.0eq)。允许反应混合物达到室温并搅拌16h。将反应混合物在真空中浓缩以得到标题化合物(385mg，840μmol，95％产率)，为白色固体，盐酸盐。MS(ESI)：422.4([M+H]+)。
d)4-[[[1-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-3-苯基-吡咯烷-3-羰基]氨基]甲基]哌啶- 1-甲酸苄酯
向4-溴-6-氯哒嗪-3-胺(238mg,1.14mmol,1.1eq)和4-((3-苯基吡咯烷-3-甲酰胺基)甲基)哌啶-1-甲酸苄酯盐酸盐(475mg,1.04mmol,1.0eq)在DMSO(5mL)中的溶液加入碳酸钾(717mg,5.19mmol,5.0eq)，并将反应混合物在110℃搅拌16h。将反应混合物冷却至室温，倒入饱和NaHCO3，并且用EtOAc萃取。将有机合并的有机层用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并且浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(360mg，655μmol，63％产率)，为棕色固体。MS(ESI)：549.4([M+H]+)。
e)4-[[[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3-苯基-吡咯烷-3-羰基]氨基] 甲基]哌啶-1-甲酸苄酯
将4-((1-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)-3-苯基吡咯烷-3-甲酰胺基)甲基)哌啶-1-甲酸苄酯(360mg,656μmol,1.0eq)、(2-羟基苯基)硼酸(226mg,1.64mmol,2.5eq)、碳酸钾(272mg,1.97mmol,3.0eq)和RuPhos Pd G3(27.4mg,32.8μmol,0.05eq)在脱气的二噁烷(3mL)和水(0.3mL)的混合物中的悬浮液在氩气下于110℃搅拌4h。将反应混合物倒入饱和NaHCO3，并且用EtOAc萃取。将有机层合并，用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(295mg，485μmol，74％产率)，为浅棕色固体。MS(ESI)：607.5([M+H]+)。
f)1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3-苯基-N-(4-哌啶基甲基)吡咯烷-3- 甲酰胺
向4-((1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-3-苯基吡咯烷-3-甲酰胺基)甲基)哌啶-1-甲酸苄酯(200mg,330μmol,1.0eq)在甲醇(4mL)中的溶液加入10％钯/碳(35.1mg,33μmol,0.1eq)。在H2(气球)下，将反应混合物在回流温度下搅拌5h。通过过滤来收集催化剂并用甲醇洗涤。浓缩滤液，以得到标题化合物(140mg，297μmol，90％产率)，为白色固体。MS(ESI)：473.4([M+H]+)。
g)1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-N-[[1-[[1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶 基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]-4-哌啶基]甲基]-4-哌啶基]甲基]-3-苯基-吡咯烷-3- 甲酰胺
标题化合物以类似于实例100的方式使用连接酶33制备为黄色固体(5.5mg，6.31μmol，14％产率)，甲酸盐。MS(ESI)：826.7([M+H]+)。
实例125
外消旋-5-[4-[4-[4-[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氮杂环丁烷-3-基]氧基-2-氯-苯甲酰基]哌嗪-1-羰基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002191
于室温向[4-[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氮杂环丁烷-3-基]氧基-2-氯-苯基]-哌嗪-1-基-甲酮(30mg,62.4μmol,1.0eq)在DMSO(0.5mL)中的搅拌溶液加入连接酶15(24mg,62.4μmol,1.0eq)。将反应混合物在室温搅拌1h。通过制备型-HPLC完成粗材料的纯化，以得到标题化合物(19.5mg，21.1μmol，34％产率)，为黄色盐，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI):848.6(35Cl[M+H]+)。
实例126
2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-[1-[1-[9-[4-[4-[外消旋-(3S)-3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯基]哌嗪-1-基]壬基]三唑-4-基]乙氧基]异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002201
向(S)-2-[6-氨基-5-[[1-(4-哌嗪-1-基苯基)-3-哌啶基]氧基]哒嗪-3-基]苯酚(40.0mg,88μmol)和连接酶45(45mg,88μmol)在THF(5mL)中的溶液先后加入二丁基二氯化锡(27mg,89μmol,19μL)和三甲基(苯基)硅烷(12mg,107μmol)并将反应混合物加热至80℃持续16h。将反应混合物冷却至室温，用水稀释，并用EtOAc萃取。将有机层用水、盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。利用制备型-HPLC纯化粗残余物，以得到标题化合物(6.2mg，6.25μmol，7％产率)，为灰白色固体。MS(ESI):940.3([M+H]+)。
实例127
5-(4-(4-(3-(7-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-基)苄基)哌嗪-1-羰基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002211
a)4-[(3-溴苯基)甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯
于25℃向3-溴苯甲醛(6.3mL,54mmol,1eq)、1-Cbz-哌嗪(17857mg,81mmol,1.5eq)、AcOH(1621mg,27mmol,0.5eq)在甲醇(100mL)中的溶液加入NaBH3CN(6792mg,108mmol,2eq)，将反应混合物在25℃搅拌12h。将反应混合物浓缩，通过制备型-HPLC(FA)纯化，以得到标题化合物(15000mg，38mmol，71％产率)，为无色油。
b)4-[3-[(4-苄基氧基羰基哌嗪-1-基)甲基]苯基]-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-7- 甲酸叔丁酯
将4-[(3-溴苯基)甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯(2000mg,5.14mmol,1eq)、4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-7-甲酸叔丁酯(1308mg,6.17mmol,1.2eq)、t-BuONa(740mg,7.71mmol,1.5eq)、Pd(OAc)2(57.6mg,0.26mmol,0.05eq)、RuPhos(239mg,0.51mmol,0.1eq)在1,4-二噁烷(50mL)中的混合物在N2气氛下于100℃搅拌12h。将反应混合物在硅胶柱(庚烷/EtOAc 20-50％)上浓缩纯化，以得到标题化合物(1000mg，1.92mmol，37％产率)，为黄色油。
c)4-[[3-(4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-基)苯基]甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯
将4-[3-[(4-苄基氧基羰基哌嗪-1-基)甲基]苯基]-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-7-甲酸叔丁酯(1000mg,1.92mmol,1eq)在TFA(5.0mL,1.92mmol,1eq)和DCM(20mL)中的混合物在25℃搅拌1h。浓缩反应混合物，以得到标题化合物(800mg，1.9mmol，99％产率)，为黄色油。
d)4-[[3-[7-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-基]苯基]甲 基]哌嗪-1-甲酸苄酯
将4-[[3-(4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-基)苯基]甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯(800mg,1.9mmol,1eq)、4-溴-6-氯-哒嗪-3-胺(475mg,2.28mmol,1.2eq)、Et3N(962mg，9.51mmol，5eq)在DMF(20mL)中的混合物在100℃搅拌12h。将反应混合物通过制备型-HPLC(FA)纯化，以得到标题化合物(600mg，1.09mmol，57％产率)，为黄色油。
e)4-[[3-[7-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4- 基]苯基]甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯
将4-[[3-[7-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-基]苯基]甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯(600mg,1.09mmol,1eq)、2-羟基苯基硼酸(377mg,2.74mmol,2.5eq)、K2CO3(529mg,3.83mmol,3.5eq)、Ruphos Pd G3(94.5mg,0.11mmol,0.1eq)在1,4-二噁烷(10mL)和水(1mL)中的混合物在N2气氛下于90℃搅拌2h。将反应混合物过滤并将滤液浓缩并通过制备型-HPLC(FA)纯化，以得到(500mg，0.83mmol，75％产率)黄色油。
f)2-[6-氨基-5-[4-[3-(哌嗪-1-基甲基)苯基]-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-7-基] 哒嗪-3-基]苯酚
将4-[[3-[7-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-基]苯基]甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯(500mg,0.83mmol,1eq)、Pd/C(175mg,1.65mmol,2eq)在甲醇(5mL)和DCM(3mL)中的混合物在H2气氛下于25℃搅拌12h。将反应混合物过滤并将滤液浓缩并通过制备型-HPLC(TFA)纯化，以得到标题化合物(131.1mg，0.28mmol，31％产率)，为黄色固体。
g)5-(4-(4-(3-(7-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4,7-二氮杂螺[2.5]辛 烷-4-基)苄基)哌嗪-1-羰基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
将连接酶15(14.7mg,38.2μmol,1.2eq)溶解在无水DMF(400μL)中。加入DIPEA(10.3mg,13.9μL,79.5μmol,2.5eq)和HATU(15.7mg,41.3μmol,1.3eq)并将混合物在室温搅拌10min。加入2-(6-氨基-5-(4-(3-(哌嗪-1-基甲基)苯基)-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-7-基)哒嗪-3-基)苯酚(15mg,31.8μmol,1.0eq)并将混合物在室温搅拌2h.通过制备型-HPLC纯化反应混合物，以得到标题化合物(6.7mg，7.04μmol，22％产率)，为黄色盐，甲酸盐。MS(ESI)：839.6([M+H]+)。
实例128
5-(4-(3-(4-(3-(7-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-基)苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002231
标题化合物以类似于实例127步骤g的方式使用连接酶12制备为黄色固体(8mg，7.89μmol，24％产率)，甲酸盐。MS(ESI)：867.7([M+H]+)。
实例129
5-(2-(4-(3-(7-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-基)苄基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002232
标题化合物以类似于实例127步骤g的方式使用连接酶48制备为黄色固体(6.6mg，7.7μmol，24％产率)，甲酸盐。MS(ESI)：786.6([M+H]+)。
实例130
5-(4-(2-(4-(3-(7-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-基)苄基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002233
标题化合物以类似于实例127步骤g的方式使用连接酶24制备为黄色固体(7.4mg，7.9μmol，24％产率)，甲酸盐。MS(ESI)：853.7([M+H]+)。
实例131
外消旋-5-[4-[4-[[6-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]-2-吡啶基]甲基]哌嗪-1-羰基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002241
a)4-[(6-溴-2-吡啶基)甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯
将2-溴-6-(溴甲基)吡啶(1.32g,5.26mmol,1.0eq)和苄基哌嗪-1-甲酸盐(2.32g,10.5mmol,2.0eq)在THF(10mL)中的溶液搅拌20h。得到白色溶液。将反应混合物在EtOAc和0.5M氢氧化钠水溶液之间分配。分离各层。用EtOAc萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并且在真空中浓缩。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-50％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(1.72g，4.19mmol，80％产率)，为无色油。MS(ESI)：391.5([M+H]+)。
b)8-[6-[(4-苄基氧基羰基哌嗪-1-基)甲基]-2-吡啶基]-3,8-二氮杂双环 [3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯
向4-[(6-溴-2-吡啶基)甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯(241mg,618μmol,1.0eq)和3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯(138mg,648μmol,1.05eq)在叔-BuOH(3mL)中的搅拌悬浮液加入K2CO3(171mg,1.24mmol,2.0eq)。将反应用氩气脱气5min。然后添加RuPhos PdG3(51.6mg,61.8μmol,0.1eq)。将反应混合物在120℃搅拌5h。将反应混合物倒入EtOAc中并顺序地用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-60％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(143mg，195μmol，32％产率)，为灰白色固体。MS(ESI)：522.5([M+H]+)。
c)4-[[6-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-2-吡啶基]甲基]哌嗪-1-甲酸苄 酯
于室温向8-[6-[(4-苄基氧基羰基哌嗪-1-基)甲基]-2-吡啶基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯(1.513g,2.03mmol,1.0eq)在1,4-二噁烷(6.77mL)中的搅拌溶液加入在1,4-二噁烷中的4M盐酸溶液(5.08mL,20.3mmol,10.0eq)。将反应混合物搅拌15h。将反应混合物在EtOAc和0.5M盐酸水溶液之间分配。将水层用EtOAc洗涤。分离各层。通过加入5N NaOH水溶液将水层的pH值设置为14，并用EtOAc/THF(1:1)萃取混合物。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，并真空浓缩，以得到标题化合物(1.097g，1.98mmol，97％产率)，为黄色油。MS(ESI)：422.4([M+H]+)。
d)4-[[6-[3-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]-2- 吡啶基]甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯
于室温向4-[[6-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-2-吡啶基]甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯(1.076g,2.55mmol,1.0eq)和4-溴-6-氯哒嗪-3-胺(692mg,3.32mmol,1.3eq)在DMSO(6.38mL)中的搅拌悬浮液加入K2CO3(1.76g,12.8mmol,5.0eq)。将反应混合物在110℃加热15h。将反应混合物在EtOAc和水之间分配。分离各层。用EtOAc萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并且在真空中浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-10％)上并随后在胺改性的硅胶柱(DCM/MeOH 0-5％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(895mg，1.45mmol，57％产率)，为黄色油。MS(ESI):549.5(35Cl[M+H]+)。
e)4-[[6-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛 烷-8-基]-2-吡啶基]甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯和2-[6-氨基-5-[8-[6-(哌嗪-1-基甲基)-2- 吡啶基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚
于室温向4-[[6-[3-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]-2-吡啶基]甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯(895mg,1.63mmol,1.0eq)和(2-羟基苯基)硼酸(562mg,4.08mmol,2.5eq)在1,4-二噁烷(36mL)和(0.9mL)中的搅拌悬浮液加入K2CO3(788mg,5.71mmol,3.5eq)。将反应混合物用氩气脱气10min。加入RuPhos Pd G3(136mg,163μmol,0.1eq)。将反应混合物在90℃加热2天。将反应混合物在EtOAc/THF和水之间分配。分离各层。将水层用EtOAc/THF萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并且在真空中浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗材料，以得到标题化合物1(235mg，387μmol，24％产率)，为橙色固体，MS(ESI):607.5([M+H]+)，以及标题化合物2(648mg，1.37mmol，84％产率)，为浅棕色固体。MS(ESI)：500.4([M+H]+)。
f)外消旋-5-[4-[4-[[6-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双 环[3.2.1]辛烷-8-基]-2-吡啶基]甲基]哌嗪-1-羰基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶 基)异吲哚啉-1,3-二酮；2,2,2-三乙酸
于室温向2-[6-氨基-5-[8-[6-(哌嗪-1-基甲基)-2-吡啶基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚(30mg,63.5μmol,1.0eq)、连接酶15(24.5mg,63.5μmol,1.0eq)和HATU(53.1mg,140μmol,2.2eq)在DMSO(0.5mL)中的搅拌溶液加入DIPEA(24.6mg,33.3μL,190μmol,3.0eq)。将反应混合物搅拌2h。通过制备型-HPLC完成纯化，以得到标题化合物(21.5mg，20.1μmol，32％产率)，为黄色固体，双(2,2,2-三氟乙酸盐)。MS(ESI)：840.7([M+H]+)。
实例132
外消旋-5-[4-[4-[4-[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氮杂环丁烷-3-基]氧基-2-(三氟甲基)苯甲酰基]哌嗪-1-羰基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002261
向[4-[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氮杂环丁烷-3-基]氧基-2-(三氟甲基)苯基]-哌嗪-1-基-甲酮(30mg,58.3μmol,1.0eq)、连接酶15(22.5mg,58.3μmol,1.0eq)和HATU(44.3mg,117μmol,2.0eq)在DMSO(0.5mL)中的搅拌溶液加入DIPEA(22.6mg,30.6μL,175μmol,3.0eq)。将反应混合物在室温搅拌2h。将反应混合物分配在EtOAc/THF(1:1)和水之间。分离各层。用EtOAc萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并且在真空中浓缩。通过制备型-RP-HPLC纯化粗材料，以得到标题化合物(7.1mg，7.09μmol，12％产率)，为黄色固体，2,2,2-三氟乙酸盐。MS(ESI)：882.7([M+H]+)。
实例133
外消旋-5-[4-[3-[4-[[6-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]-2-吡啶基]甲基]哌嗪-1-基]-3-氧代-丙基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002271
于室温向2-[6-氨基-5-[8-[6-(哌嗪-1-基甲基)-2-吡啶基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚(30mg,63.5μmol,1.0eq)、连接酶12(26.2mg,63.5μmol,1.0eq)和HATU(53.1mg,140μmol,2.2eq)在DMSO(0.5mL)中的搅拌溶液加入DIPEA(24.6mg,33.3μL,190μmol,3.0eq)。将反应混合物搅拌2h，并通过制备型-HPLC纯化，以得到标题化合物(8.1mg，7.17μmol，11％产率)，为黄色固体，双(2,2,2-三氟乙酸盐)。MS：869.6([M+H]+)。
实例134
外消旋-1-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]-N-[1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]氮杂环丁烷-3-基]哌啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003621438310002281
于室温向1-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]哌啶-4-甲酸(60mg,76.9μmol,1.0eq)、连接酶59(25.3mg,76.9μmol,1.0eq)和DIPEA(49.7mg,67.2μL,385μmol,5.0eq)在DMSO(0.6mL)中的搅拌溶液加入HATU(58.5mg,154μmol,2.0eq)。将反应混合物在室温搅拌1h。通过制备型-HPLC纯化粗材料，以得到标题化合物(24mg，21.7μmol，24％产率)，为黄色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：825.4([M+H]+)。
实例135
2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-[[1-[[1-[5-[4-[4-[外消旋-(3S)-3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯基]哌嗪-1-基]戊酰基]-4-哌啶基]甲基]三唑-4-基]甲氧基]异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002282
向5-[4-[4-[(3S)-3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯基]哌嗪-1-基]戊酸(40mg,73μmol)和连接酶61(33mg,58μmol,TFA)在二甲基甲酰胺(0.4mL)中的溶液先后加入HATU(41mg,109μmol)和DIPEA(28mg,219μmol,38μL)，并将反应混合物在室温搅拌16h。将反应混合物用水稀释，并且用EtOAc萃取。除去挥发物。利用制备型-HPLC纯化粗残余物，以得到标题化合物(3.5mg，3.51μmol，5％产率)，为灰白色固体。MS(ESI)：981.1([M+H]+)。
实例136
4-[[5-[9-[4-[4-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯基]哌嗪-1-基]壬基]-2-吡啶基]甲基氨基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002291
向2-[6-氨基-5-[[1-(4-哌嗪-1-基苯基)-3-哌啶基]氧基]哒嗪-3-基]苯酚(25mg,56μmol)和连接酶62(28mg,56μmol)在THF(5mL)中的溶液先后加入二丁基二氯化锡(17mg,55.99μmol,12μL)和三甲基(苯基)硅烷(7mg,67μmol)并将反应混合物加热至80℃持续16h。将反应混合物冷却至室温，用水稀释，并用EtOAc萃取。将有机层用水、盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。利用制备型-HPLC纯化粗残余物，以得到标题化合物(2.33mg，2.23μmol，4％产率)。MS(ESI)：935.1([M+H]+)。
实例137
2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-[[1-[5-氧代-5-[3-[[4-[4-[外消旋-(3S)-3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯基]哌嗪-1-基]甲基]氮杂环丁烷-1-基]戊基]三唑-4-基]甲氧基]异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002301
向连接酶63(35mg,61μmol,TFA)和2-[6-氨基-5-[[(3S)-1-[4-[4-(氮杂环丁烷-3-基甲基)哌嗪-1-基]苯基]-3-哌啶基]氧基]哒嗪-3-基]苯酚(38mg,61μmol,TFA盐)在DMF(1mL)中的溶液先后加入HATU(41mg,109μmol)和DIPEA(40mg,307μmol,53μL)并将反应混合物在室温搅拌16h。将反应混合物用水稀释，并且用EtOAc萃取。除去挥发物。利用制备型-HPLC纯化粗残余物，以得到标题化合物(4mg，3.89μmol，6％产率)，为灰白色固体。MS(ESI)：953.3([M+H]+)。
实例138
2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-[[1-[1-[5-[4-[4-[外消旋-(3S)-3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯基]哌嗪-1-基]戊酰基]-4-哌啶基]三唑-4-基]甲氧基]异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002302
向5-[4-[4-[(3S)-3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯基]哌嗪-1-基]戊酸(20mg,0.036mmol)和连接酶64(16.04mg,0.036mmol)在DMF(1mL)中的溶液先后加入HATU(21mg,0.054mmol)和DIPEA(24mg,0.183mmol,0.031mL)并将反应混合物在室温搅拌16h。将反应混合物用水稀释，并且用EtOAc萃取。除去挥发物。通过制备型-HPLC纯化粗残余物，以得到标题化合物(1.84mg，1.86μmol，5％产率)，为灰白色固体，三氟乙酸盐。MS(ESI)：967.3([M+H]+)。
实例139
4-[[4-[9-[4-[4-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯基]哌嗪-1-基]壬基]-2-吡啶基]甲基氨基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002311
向2-[6-氨基-5-[[1-(4-哌嗪-1-基苯基)-3-哌啶基]氧基]哒嗪-3-基]苯酚(25mg,56μmol)和连接酶65(28mg,55μmol)在THF(5mL)中的溶液先后加入二丁基二氯化锡(17mg,55μmol,12.5μL)和三甲基(苯基)硅烷(7mg,67μmol)并将反应混合物加热至80℃持续16h。将反应混合物冷却至室温，用水稀释，并用EtOAc萃取。将有机层用水、盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。通过制备型-HPLC纯化粗残余物，以得到标题化合物(1.3mg，1.31μmol，2％产率)，为灰白色固体，三氟乙酸盐。MS(ESI)：935.3([M+H]+)。
实例140
2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-[[1-[5-氧代-5-[4-[[4-[4-[外消旋-(3S)-3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯基]哌嗪-1-基]甲基]-1-哌啶基]戊基]三唑-4-基]甲氧基]异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002321
向2-[6-氨基-5-[[(3S)-1-[4-[4-(4-哌啶基甲基)哌嗪-1-基]苯基]-3-哌啶基]氧基]哒嗪-3-基]苯酚(30mg,0.055mmol)和连接酶63(25.1mg,0.055mmol)在二甲基甲酰胺(1mL)中的溶液先后加入HATU(25mg,0.055mmol)和DIPEA(35mg,0.27mmol,0.048mL)并将反应混合物在室温搅拌16h。将反应混合物用水稀释，并且用EtOAc萃取。除去挥发物。通过制备型-HPLC纯化粗残余物，以得到标题化合物(2.13mg，1.99μmol，3％产率)，灰白色固体，三氟乙酸盐。MS(ESI)：982.3([M+H]+)。
实例141
外消旋-N-[2-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基]-1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]哌啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003621438310002322
于室温向2-氨基-1-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]乙酮三盐酸盐(100mg,150μmol,1.0eq)、连接酶15(57.7mg,150μmol,1.0eq)和DIPEA(96.7mg,131μL,748μmol,5.0eq)在DMF(0.7mL)中的搅拌溶液加入HATU(125mg,329μmol,2.2eq)。将反应混合物搅拌2h。将反应混合物在EtOAc/THF(1:1)和饱和碳酸氢盐水溶液之间分配。分离各层。将水层用EtOAc/THF(1:1)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并且在真空中浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-10％)和胺改性的硅胶柱(DCM/MeOH 0-5％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(32.4mg，35μmol，23％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：464.1([M+2H]2+)。
实例142
外消旋-5-[4-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-羰基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002331
于室温向2-[6-氨基-5-[8-[3-(2-哌嗪-1-基乙氧基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚(25mg,49.8μmol,1.0eq)、连接酶15(19.2mg,49.8μmol,1.0eq)和DIPEA(19.3mg,26.1μL,150μmol,3.0eq)在DMF(0.5mL)中的搅拌溶液加入HATU(41.7mg,110μmol,2.2eq)。将反应混合物搅拌3h。通过制备型-HPLC纯化粗材料，以得到标题化合物(14.2mg，12.9μmol，26％产率)，为黄色固体，双(2,2,2-三氟乙酸盐)。MS(ESI)：867.6([M-H]-)。
实例143
外消旋-5-[4-[3-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]丙基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002341
于室温向2-[6-氨基-5-[8-[3-(2-哌嗪-1-基乙氧基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚(30mg,59.8μmol,1.0eq)和连接酶66(27.7mg,59.8μmol,1.0eq)在DMF(0.5mL)中的搅拌溶液加入碘化钠(896μg,5.98μmol,0.1eq)。将反应混合物在60℃加热20h。通过制备型-HPLC完成粗材料的纯化，以得到标题化合物(27.4mg，24.7μmol，41％产率)，为黄色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：883.4([M+H]+)。
实例144
外消旋-5-[4-[2-[2-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002342
a)4-[2-(2-溴苯氧基)乙基]哌嗪-1-甲酸苄酯
于室温向2-溴苯酚(1.44g,965μL,8.32mmol,1.1eq)、4-(2-羟乙基)哌嗪-1-甲酸苄酯(CAS 14000-67-0,2g,7.57mmol,1.0eq)和三苯基膦(2.18g,8.32mmol,1.1eq)在THF(25.2mL)中的搅拌溶液加入偶氮二甲酸二叔丁酯(1.92g,8.32mmol,1.1eq)。将反应混合物搅拌4h。将反应混合物在EtOAc和水/盐水(1:1)之间分配。分离各层。用EtOAc萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并且在真空中浓缩。粗材料在二氧化硅柱上纯化(庚烷/EtOAc 0-60％)。加入20ml乙醚和20ml戊烷。通过过滤去除固体。用一半量的溶剂重复该过程。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-5％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(2.28g，5.44mmol，72％产率)，为无色油。MS(ESI)：420.9([M+H]+)。
b)8-[2-[2-(4-苄基氧基羰基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1] 辛烷-3-甲酸叔丁酯
于室温将Pd(OAc)2(5.64mg,23.8μmol,0.2eq)和2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基联苯(RuPhos)(5.86mg,11.9μmol,0.1eq)在甲苯(1mL)中的混合物脱气，用氮气吹扫，然后在50℃搅拌20min。在单独的器皿中，于室温将4-[2-(2-溴苯氧基)乙基]哌嗪-1-甲酸苄酯(50mg,119μmol,1.0eq)、3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯(25.3mg,119μmol,1.0eq)和叔丁醇钠(17.2mg,179μmol,1.5eq)在甲苯(1mL)中的搅拌悬浮液脱气、用氮气吹扫，然后在50℃搅拌。加入催化剂溶液并将所得混合物在100℃搅拌过夜。将反应混合物在EtOAc和水/盐水(1:1)之间分配。分离各层。用EtOAc萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并且在真空中浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-5％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(33mg，59.9μmol，50％产率)，为黄色油。MS(ESI)：551.4([M+H]+)。
c)4-[2-[2-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)苯氧基]乙基]哌嗪-1-甲酸苄酯
于室温向8-[2-[2-(4-苄氧基羰基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯(1.1g,2mmol,1.0eq)在1,4-二噁烷(5mL)中的搅拌溶液加入在1,4-二噁烷中的4M盐酸溶液(4.99mL,20mmol,10.0eq)。将反应混合物搅拌15h。得到浅红色悬浮液。沉淀物通过过滤收集，用1,4-二噁烷洗涤并真空干燥，以得到标题化合物(1.00g，1.79mmol，89％产率)，为白色固体，三盐酸盐。MS(ESI)：451.2([M+H]+)。
d)4-[2-[2-[3-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基] 苯氧基]乙基]哌嗪-1-甲酸苄酯
于室温向4-[2-[2-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)苯氧基]乙基]哌嗪-1-甲酸苄酯三盐酸盐(300mg,536μmol,1.0eq)和K2CO3(370mg,2.68mmol,5.0eq)在DMSO(3mL)中的搅拌溶液加入4-溴-6-氯哒嗪-3-胺(123mg,589μmol,1.1eq)。将反应混合物在110℃搅拌30h。将反应混合物在EtOAc/THF(1:2)和水/盐水(1:1)之间分配。分离各层。将水层用EtOAc/THF(1:1)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，然后经无水硫酸钠干燥并且真空浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(285.8mg，494μmol，92％产率)，为橙色油。MS(ESI):578.3(35Cl[M+H]+)。
e)4-[2-[2-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛 烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-甲酸苄酯
于室温向4-[2-[2-[3-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-甲酸苄酯(784.3mg,1.36mmol,1.0eq)和(2-羟基苯基)硼酸(468mg,3.39mmol,2.5eq)在1,4-二噁烷(35mL)和(0.1mL)中的搅拌溶液加入碳酸钾(656mg,4.75mmol,3.5eq)。将反应混合物用氩气脱气5min。加入RuPhos Pd G3(113mg,136μmol,0.1eq)。将反应混合物在90℃加热2h。通过过滤除去催化剂并用EtOAc和THF洗涤。将滤液在EtOAc/THF和水之间分配。分离各层。将水层用EtOAc/THF(1:1)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并且在真空中浓缩。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-65％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(287mg，451μmol，33％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：636.4([M+H]+)。
f)2-[6-氨基-5-[8-[2-(2-哌嗪-1-基乙氧基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛 烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚
向100ml双颈圆底烧瓶中装入4-[2-[2-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-甲酸苄酯(287mg,451μmol,1.0eq)、甲醇(30mL)和THF(15mL)中。将烧瓶抽真空至大约120mbar，直到溶剂开始轻轻起泡，然后在60秒后用氩气回填。该过程重复两次。添加催化剂10％钯活性炭(48mg,45.1μmol,0.1eq)后，将烧瓶抽真空至120mbar，然后用氢气回填并在约1bar的氢气的气氛下搅拌15h。催化剂经Sartorius过滤器通过过滤来除去，并用甲醇洗涤。真空浓缩滤液，以得到标题化合物(202mg，403μmol，89％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：502.3([M+H]+)。
g)外消旋-5-[4-[2-[2-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双 环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1, 3-二酮
将2-[6-氨基-5-[8-[2-(2-哌嗪-1-基乙氧基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚(30mg,59.8μmol,1.0eq)和2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(CAS 835616-61-0,16.5mg,59.8μmol,1.0eq)溶于DMSO(0.6mL)中。将反应混合物在90℃搅拌6h。然后将反应混合物冷却至室温，倒入THF/EtOAc(1:1)中，并顺序地用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-5％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(7mg，9.24μmol，15％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：758.3([M+H]+)。
实例145
4-[[7-[4-[3-[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氮杂环丁烷-3-基]氧基苯甲酰基]哌嗪-1-基]-7-氧代-庚基]氨基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002371
a)4-(3-羟基苯甲酰基)哌嗪-1-甲酸苄酯
在25℃，向1-Cbz-哌嗪(7.97g,36.2mmol,1.0eq)和3-羟基苯甲酸(5g,36.2mmol,1.0eq)在DCM(50mL)中的混合物加入HATU(16.52g,43.44mmol,1.2eq)和三乙胺(6.05mL,43.4mmol,1.2eq)。然后将混合物在25℃搅拌15h。将混合物用水稀释并用DCM萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并在真空中浓缩。在硅胶柱(PE/EtOAc 0-50％)上纯化残余物，以得到标题化合物(8g，23.5mmol，65％产率)，为白色固体。MS(ESI)：341.1([M+H]+)。
b)4-[3-(1-叔丁氧羰基氮杂环丁烷-3-基)氧基苯甲酰基]哌嗪-1-甲酸苄酯
于25℃向4-(3-羟基苯甲酰基)哌嗪-1-甲酸苄酯(8g,23.5mmol,1.0eq)和1-Boc-3-碘氮杂环丁烷(8g,28.2mmol,1.2eq)在DMF(30mL)中的混合物加入碳酸铯(9.19g,28.2mmol,1.2eq)。将混合物在80℃搅拌4h。向混合物中添加水并将其用乙酸乙酯萃取。合并有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤并且在真空中浓缩。在硅胶柱(PE/EtOAc 0-50％)上纯化残余物，以得到标题化合物(6g，12.11mmol，26％产率)，为棕色油。MS(ESI)：496.3([M+H]+)。
c)4-[3-(氮杂环丁烷-3-基氧基)苯甲酰基]哌嗪-1-甲酸苄酯
于25℃向4-[3-(1-叔丁氧基羰基氮杂环丁烷-3-基)氧基苯甲酰基]哌嗪-1-甲酸苄酯(6.0g,6.05mmol,1.0eq)在DCM(20mL)中的混合物加入三氟乙酸(10.0mL,129.8mmol,21eq)。将混合物在25℃搅拌4h，然后真空浓缩，以得到标题化合物(4g，7.85mmol，66％产率)，为棕色粘稠油，2,2,2-三氟乙酸盐。MS(ESI)：396.1([M+H]+)。
d)4-[4-[1-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)氮杂环丁烷-3-基]氧基苯甲酰基]哌嗪-1- 甲酸苄酯
于25℃向4-[4-(氮杂环丁烷-3-基氧基)苯甲酰基]哌嗪-1-甲酸苄酯，2,2,2-三氟乙酸盐(4.0g,4mmol,1.0eq)和4-溴-6-氯-哒嗪-3-胺(0.92g,4.4mmol,1.1eq)在DMF(50mL)中的混合物加入三乙胺(1.4mL,10.0mmol,2.5eq)。将混合物在100℃搅拌15h。将混合物真空浓缩，并通过制备型-HPLC(NH3)纯化，以得到标题化合物(800mg，1.53mmol，38％产率)，为棕色固体。MS(ESI):523.1,525.1([M+H]+)。
e)[3-[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氮杂环丁烷-3-基]氧基苯基]-哌 嗪-1-基-甲酮
于25℃向4-[3-[1-(3-氨基-6-率-哒嗪-4-基)氮杂环丁烷-3-基]氧基苯甲酰基]哌嗪-1-甲酸苄酯(800mg,1.53mmol,1.0eq)和2-羟基苯基硼酸(422mg,3.06mmol,2.0eq)在1,4-二噁烷(15mL)和水(1.5mL)中的混合物加入碳酸钾(0.4mL,4.59mmol,3.0eq)和Ruphos-Pd-G3(64mg,0.080mmol,0.05eq)。将混合物在100℃搅拌15h。向混合物中加入水并用乙酸乙酯萃取。合并有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤并且在真空中浓缩。利用制备型-HPLC(NH3)纯化残余物，以得到标题化合物(350mg，0.780mmol，50％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：447.1([M+H]+)。
f)4-[[7-[4-[3-[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氮杂环丁烷-3-基]氧基 苯甲酰基]哌嗪-1-基]-7-氧代-庚基]氨基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二 酮
于25℃向连接酶1(32.3mg,0.08mmol,1.2eq)、Et3N(0.5mL,0.2mmol,3eq)、[3-[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氮杂环丁烷-3-基]氧基苯基]-哌嗪-1-基-甲酮(30.0mg,0.07mmol,1eq)在DMF(3mL)中的混合物加入T3P(0.3mL,0.13mmol,2eq)，将反应混合物在25℃搅拌15h。将反应混合物通过制备型-HPLC(TFA)纯化，以产生标题化合物(4mg，6％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：830.3([M+H]+)。
实例146
4-[[10-[4-[3-[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氮杂环丁烷-3-基]氧基苯甲酰基]哌嗪-1-基]-10-氧代-癸基]氨基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002391
于25℃向连接酶23(35.7mg,0.08mmol,1.2eq)、[3-[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氮杂环丁烷-3-基]氧基苯基]-哌嗪-1-基-甲酮(30mg,0.07mmol,1eq)、Et3N(26.0mg,0.2mmol,3eq)在DMF(3mL)中的混合物加入T3P(0.3mL,0.13mmol,2eq)，将反应混合物在25℃搅拌15h。将反应混合物通过制备型-HPLC(TFA)纯化，以产生标题化合物(6.2mg，0.01mmol，10％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：872.4([M+H]+)。
实例147
5-[4-[4-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-氨基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]哌嗪-1-羰基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002401
a)4-(3-羟基苄基)哌嗪-1-甲酸苄酯
在100mL圆底烧瓶中，将1-溴-3-(溴甲基)苯(6g,24mmol,1.0eq)与THF(120mL)合并。然后添加三乙胺(3.64g,5.02mL,36mmol,1.5eq)，随后添加哌嗪-1-甲酸苄酯(6.35g,5.56mL,28.8mmol,1.2eq)。将反应混合物在室温搅拌过夜。将溶剂蒸发并将残余物在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-100％)上纯化，以得到标题化合物(9.26g，23.8mmol，99％产率)，为无色油。MS(ESI):391.0874([M+H]+)。
b)8-(3-((4-((苄基氧基)羰基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1] 辛烷-3-甲酸叔丁酯
将4-(3-溴苄基)哌嗪-1-甲酸苄酯(3g,7.71mmol,1.0eq)、3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯(2.45g,11.6mmol,1.5eq)和叔丁醇钠(1.11g,11.6mmol,1.5eq)与甲苯(30mL)合并。通过用氩气吹扫使反应容器脱气。添加RuPhos Pd G3 95％(173mg,771μmol,0.1eq)。将反应混合物加热至110℃并搅拌16h。将反应混合物通过硅藻土过滤。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-100％)上作为洗脱液纯化粗材料，以得到标题化合物(3g，5.76mmol，74％产率)，为无色油。MS(ESI):391.0874([M+H]+)。
c)4-[[3-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)苯基]甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯
将8-(3-((4-((苄基氧基)羰基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯(3g,5.76mmol,1.0eq)溶于二噁烷(20mL)中并加入HCl(20mL,80mmol,13.9eq)。将反应混合物在室温搅拌2小时。过滤混合物，用母液洗涤固体沉淀物并用乙醚洗涤一次。将沉淀干燥，以得到标题化合物(2.96g，6.48mmol，112％产率)，为白色固体，盐酸盐。MS(ESI)：421.2615([M+H]+)。
d)4-[[3-[3-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯 基]甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯
向4-[[3-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)苯基]甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯(2.95g,7.01mmol,1.0eq)和4-溴-6-氯哒嗪-3-胺(1.75g,8.42mmol,1.2eq)在DMSO(10mL)中的溶液加入K2CO3(4.85g,35.1mmol,5.0eq)。在110℃，将反应混合物搅拌16h。将反应混合物倒入THF/AcOEt 2:1中并用水/盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(1.9g，3.29mmol，46％产率)，为浅棕色泡沫。MS(ESI):548.2542([M+H]+)。
e)4-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-氨基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛 烷-8-基]苯基]甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯
向RuPhos Pd G3(76.3mg,91.2μmol,0.1eq)和4-[[3-[3-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯(0.5g,912μmol,1.0eq)在二噁烷(15mL)和水(1.5mL)中的溶液加入(2-氨基苯基)硼酸(312mg,2.28mmol,2.5eq)。将反应混合物用氩气脱气10min。加入K2CO3(441mg,3.19mmol,3.5eq)。将反应混合物在90℃搅拌2h。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(427mg，706μmol，77.4％产率)，为灰白色固体。MS(ESI):605.3353([M+H]+)。
f)6-(2-氨基苯基)-4-[8-[3-(哌嗪-1-基甲基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛 烷-3-基]哒嗪-3-胺
在氢气气氛下于室温将4-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-氨基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯(422mg,698μmol,1.0eq)与Pd-C(74.3mg,698μmol,1.0eq)在甲醇(12mL)和THF(2.4mL)中搅拌过夜。将催化剂滤出并将溶剂在减压下蒸发，然后在高真空下干燥，以得到标题化合物(330mg，701μmol，100％产率)，为灰白色泡沫。MS(ESI):471.2990([M+H]+)。
g)5-[4-[4-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-氨基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环 [3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]哌嗪-1-羰基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲 哚啉-1,3-二酮
于室温将6-(2-氨基苯基)-4-[8-[3-(哌嗪-1-基甲基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-胺(40mg,85μmol,1.0eq)与连接酶15(32.8mg,85μmol,1.0eq)、HATU(38.8mg,102μmol,1.2eq)和DIPEA(33mg,44.5μL,255μmol,3.0eq)在DMF(500μL)中合并。将反应在室温搅拌过夜。对反应混合物进行制备型-HPLC纯化，以得到标题化合物(16mg，15μmol，17.7％产率)，为黄色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：838.4153([M+H]+)。
实例148
外消旋-3-[4-[1-[2-[4-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基]-4-哌啶基]苯氧基]哌啶-2,6-二酮
Figure BDA0003621438310002421
将2-[6-氨基-5-[8-[3-(哌嗪-1-基甲基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚；氢溴酸盐(30mg,59μmol,1.0eq；实例46，步骤f)与连接酶35(22.6mg,59μmol,1.0eq)、HATU(44.9mg,118μmol,2.0eq)和DIPEA(38.2mg,52μL,295μmol,5.0eq)在DMF(650μL)中合并。将反应混合物在环境温度搅拌8h，并通过制备型-HPLC纯化，以得到标题化合物(18.2mg，0.023mmol，32％产率)，为浅黄色固体，2,2,2-三氟乙酸盐。MS(ESI)：800.4245([M+H]+)。
实例149
外消旋-3-[4-[1-[2-[4-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基]-4-哌啶基]苯胺基]哌啶-2,6-二酮
Figure BDA0003621438310002431
将2-[6-氨基-5-[8-[3-(哌嗪-1-基甲基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚；氢溴酸盐(30mg,59μmol,1.0eq；实例46，步骤f)与连接酶51(22.5mg,59μmol,1.0eq)、HATU(44.9mg,118μmol,2.0eq)和DIPEA(38.2mg,52μL,295μmol,5.0eq)在DMF(650μL)中合并。将反应混合物在环境温度搅拌8h，然后通过制备型-HPLC纯化，以得到标题化合物(24mg，0.030mmol，44％产率)，为浅黄色固体，2,2,2-三氟乙酸盐。MS(ESI)：799.8([M+H]+)。
实例150
4-[[10-[4-[4-[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氮杂环丁烷-3-基]氧基苯甲酰基]哌嗪-1-基]-10-氧代-癸基]氨基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002432
a)4-(4-羟基苯甲酰基)哌嗪-1-甲酸苄酯
向4-羟基苯甲酸(10g,72.4mmol,1.0eq)在DMF(140mL)中的溶液加入1-Cbz-哌嗪(16g,72.4mmol,1.0eq)、HATU(31g,79.64mmol,1.1eq)和三乙胺(20mL,144.8mmol,2.0eq)，并且然后将反应在25℃搅拌2h。将混合物用水(120mL)稀释并用EtOAc萃取。将合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并且在减压下浓缩。在硅胶柱(庚烷/EtOAc25-50％)上纯化粗残余物，以得到标题化合物(18g，52mmol，73％产率)，为棕色液体。MS(ESI)：341.1([M+H]+)。
b)4-[4-(1-叔丁氧羰基氮杂环丁烷-3-基)氧基苯甲酰基]哌嗪-1-甲酸苄酯
向4-(4-羟基苯甲酰基)哌嗪-1-甲酸苄酯(12g,35.2mmol,1.0eq)在DMF(140mL)中的溶液中添加1-Boc-3-碘氮杂环丁烷(12g,42.3mmol,1.2eq)和碳酸铯(14g,42.3mmol,1.2eq)并将反应在80℃搅拌12h。将残余物用水稀释并用EtOAc萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 25-50％)上纯化粗残余物，以得到标题化合物(10g，20.1mmol，57％产率)，为黄色液体。MS(ESI)：440.1([M-56+H]+)。
c)4-[4-(氮杂环丁烷-3-基氧基)苯甲酰基]哌嗪-1-甲酸苄酯
向4-[4-(1-叔丁氧基羰基氮杂环丁烷-3-基)氧基苯甲酰基]哌嗪-1-甲酸苄酯(10g,20.1mmol,1.0eq)在DCM(50mL)中的溶液加入三氟乙酸(50.0mL,648mmol,32eq)并将反应在25℃搅拌1h。浓缩反应溶液，以得到标题化合物(7g，17.7mmol，87％产率)，为黄色液体，三氟乙酸盐。MS(ESI)：396.1([M+H]+)。
d)4-[4-[1-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)氮杂环丁烷-3-基]氧基苯甲酰基]哌嗪-1- 甲酸苄酯
向4-[4-(氮杂环丁烷-3-基氧基)苯甲酰基]哌嗪-1-甲酸苄酯，TFA盐(7.0g,17.7mmol,1.0eq)在DMF(70mL)中的溶液加入4-溴-6-氯-哒嗪-3-胺(3.7g,17.7mmol,1.0eq)和三乙胺(10mL,70.8mmol,4.0eq)，并且将反应在100℃搅拌12h。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取。将合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并且在减压下浓缩。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 67-100％)上纯化粗残余物，以得到标题化合物(4g，7.6mmol，43％产率)，为棕色胶状物。MS(ESI)：523.2([M+H]+)。
e)[4-[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氮杂环丁烷-3-基]氧基苯基]-哌 嗪-1-基-甲酮
将2-羟基苯基硼酸(263mg,1.91mmol,2.0eq)、4-[4-[1-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)氮杂环丁烷-3-基]氧基苯甲酰基]哌嗪-1-甲酸苄酯(500mg,0.960mmol,1.0eq)、Ruphos-Pd-G3(75mg,0.050mmol,0.05eq)和K2CO3(400mg,2.87mmol,3.0eq)在1,4-二噁烷(5mL)和水(0.5mL)中的溶液在90℃搅拌2h。过滤反应溶液，然后进行制备型-HPLC纯化，以得到标题化合物(60mg，0.130mmol，14％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：447.2([M+H]+)。
f)4-[[10-[4-[4-[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氮杂环丁烷-3-基]氧 基苯甲酰基]哌嗪-1-基]-10-氧代-癸基]氨基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3- 二酮
于25℃向[4-[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氮杂环丁烷-3-基]氧基苯基]-哌嗪-1-基-甲酮(25.0mg,0.06mmol,1eq)、连接酶23(29.8mg,0.07mmol,1.2eq)、Et3N(21.7mg,0.17mmol,3eq)在DMF(3mL)中的混合物加入T3P(0.3mL,0.110mmol,2eq)，将反应混合物在25℃搅拌1h。将反应混合物通过制备型-HPLC(TFA)纯化，以产生标题化合物(2.1mg，4％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：872.5([M+H]+)。
实例151
N-[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-4-苯基-4-哌啶基]-4-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氧基]苯基]-1-哌啶基]丁酰胺
Figure BDA0003621438310002451
将2-(6-氨基-5-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)哒嗪-3-基)苯酚(40mg,111μmol,1.0eq)与连接酶39(50mg,122μmol,1.1eq)、HATU(84.2mg,221μmol,2.0eq)和DIPEA(71.5mg,96.6μL,553μmol,5.0eq)在DMF(400μL)中合并。将棕色溶液在室温搅拌2h，然后进行制备型-HPLC纯化，以得到标题化合物(7mg，7.4μmol，6％产率)，为白色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：718.3715([M+H]+)。
实例152
外消旋-5-[4-[4-[3-[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氮杂环丁烷-3-基]氧基苯基]哌嗪-1-羰基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002461
于室温向2-[6-氨基-5-[3-(3-哌嗪-1-基苯氧基)氮杂环丁烷-1-基]哒嗪-3-基]苯酚(30mg,71.7μmol,1.0eq)、连接酶15(30.4mg,78.9μmol,1.1eq)和DIPEA(46.3mg,62.6μL,358μmol,5.0eq)在DMSO(0.5mL)中的搅拌溶液加入HATU(54.5mg,143μmol,2.0eq)。将反应混合物在室温搅拌2h。通过制备型-HPLC纯化粗材料，以得到标题化合物(8mg，7.8μmol，11％产率)，为黄色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：784.3([M-H]-)。
实例153
外消旋-5-[4-[3-[4-[3-[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氮杂环丁烷-3-基]氧基苯基]哌嗪-1-基]-3-氧代-丙基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002462
于室温向2-[6-氨基-5-[3-(3-哌嗪-1-基苯氧基)氮杂环丁烷-1-基]哒嗪-3-基]苯酚(30mg,71.7μmol,1.0eq)、连接酶12(32.6mg,78.9μmol,1.1eq)和DIPEA(46.3mg,62.6μL,358μmol,5.0eq)在DMSO(0.5mL)中的搅拌溶液加入HATU(54.5mg,143μmol,2.0eq)。将反应混合物在室温搅拌2h。通过制备型-HPLC纯化粗材料，以得到标题化合物(15mg，14.4μmol，20％产率)，为黄色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：812.4([M-H]-)。
实例154
外消旋-5-[4-[3-[4-[[3-[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氮杂环丁烷-3-基]氧基苯基]甲基]哌嗪-1-基]-3-氧代-丙基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002471
于室温向2-[6-氨基-5-[3-[3-(哌嗪-1-基甲基)苯氧基]氮杂环丁烷-1-基]哒嗪-3-基]苯酚(30mg,69.4μmol,1.0eq)、连接酶12(28.7mg,69.4μmol,1.0eq)和HATU(52.7mg,139μmol,2.0eq)在DMSO(0.8mL)中的搅拌溶液加入DIPEA(26.9mg,36.3μL,208μmol,3.0eq)。将反应混合物搅拌3h，并通过制备型-HPLC纯化，以得到标题化合物(25.4mg，24.1μmol，35％产率)，为黄色固体，双(2,2,2-三氟乙酸盐)。MS(ESI)：826.4([M-H]-)。
实例155
外消旋-5-[4-[4-[[3-[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氮杂环丁烷-3-基]氧基苯基]甲基]哌嗪-1-羰基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002481
于室温向2-[6-氨基-5-[3-[3-(哌嗪-1-基甲基)苯氧基]氮杂环丁烷-1-基]哒嗪-3-基]苯酚(30mg,69.4μmol,1.0eq)、连接酶15(30mg,77.8μmol,1.12eq)和HATU(52.7mg,139μmol,2.0eq)在DMSO(0.8mL)中的搅拌溶液加入DIPEA(26.9mg,36.3μL,208μmol,3.0eq)。将反应混合物搅拌3h，并通过制备型-HPLC纯化，以得到标题化合物(24.7mg，24μmol，35％产率)，为黄色固体，双(2,2,2-三氟乙酸盐)。MS(ESI)：798.3([M-H]-)。
实例156
外消旋-3-[4-[1-[2-[4-[[3-[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氮杂环丁烷-3-基]氧基苯基]甲基]哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基]-4-哌啶基]苯胺基]哌啶-2,6-二酮
Figure BDA0003621438310002491
于室温向2-[6-氨基-5-[3-[3-(哌嗪-1-基甲基)苯氧基]氮杂环丁烷-1-基]哒嗪-3-基]苯酚(30mg,69.4μmol,1.0eq)、连接酶51(26.5mg,69.4μmol,1.0eq)和HATU(52.7mg,139μmol,2.0eq)在DMSO(0.8mL)中的搅拌溶液加入DIPEA(26.9mg,36.3μL,208μmol,3.0eq)。将反应混合物搅拌3h，并通过制备型-HPLC纯化，以得到标题化合物(14.8mg，15μmol，22％产率)，为灰白色固体，双(2,2,2-三氟乙酸盐)。MS(ESI)：758.4([M-H]-)。
实例157
外消旋-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-[rel-(3aS,6aR)-5-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-羰基]-1,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2-基]异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002492
于室温向4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-甲酸(4-硝基苯基)酯(35mg,52.5μmol,1.0eq)和连接酶67(23.4mg,57.7μmol,1.1eq)在DMSO(0.6mL)中的搅拌溶液加入DIPEA(17mg,22.9μL,131μmol,2.5eq)。将反应混合物在115℃搅拌20h。粗材料在硅胶柱(DCM/MeOH 0-5％)上纯化并随后通过制备型-HPLC纯化，以得到标题化合物(7mg，6.2μmol，10％产率)，为黄色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：896.4([M+H]+)。
实例158
5-[4-[4-[[3-[3-[3-氨基-6-(5-氟-2-羟基-苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]哌嗪-1-羰基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002501
a)4-(3-羟基苄基)哌嗪-1-甲酸苄酯
将1-溴-3-(溴甲基)苯(6g,24mmol,1.0eq)与THF(120mL)合并。然后添加三乙胺(3.64g,5.02mL,36mmol,1.5eq)，随后添加哌嗪-1-甲酸苄酯(6.35g,5.56mL,28.8mmol,1.2eq)。将反应混合物在室温搅拌过夜。将溶剂蒸发并将残余物在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-100％)上纯化，以得到标题化合物(9.26g，23.8mmol，99％产率)，为无色油。MS(ESI):391.0874([M+H]+)。
b)8-(3-((4-((苄基氧基)羰基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1] 辛烷-3-甲酸叔丁酯
将4-(3-溴苄基)哌嗪-1-甲酸苄酯(3g,7.71mmol,1.0eq)、3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯(2.45g,11.6mmol,1.5eq)和叔丁醇钠(1.11g,11.6mmol,1.5eq)与甲苯(30mL)合并。通过用氩气吹扫使反应容器脱气。添加RuPhos Pd G3 95％(173mg,771μmol,0.1eq)。将反应混合物加热至110℃并搅拌16h。将反应混合物通过硅藻土过滤。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-100％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(3g，5.76mmol，74％产率)，为无色油。MS(ESI):391.0874([M+H]+)。
c)4-[[3-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)苯基]甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯
将8-(3-((4-((苄基氧基)羰基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯(3g,5.76mmol,1.0eq)溶于二噁烷(20mL)中并加入HCl(20mL,80mmol,13.9eq)。将反应混合物在室温搅拌2小时。过滤混合物，用母液洗涤固体沉淀物并用乙醚洗涤一次。将沉淀干燥，以得到标题化合物(2.96g，6.48mmol，112％产率)，为白色固体，盐酸盐。MS(ESI)：421.2615([M+H]+)。
d)4-[[3-[3-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯 基]甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯
向4-[[3-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)苯基]甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯(2.95g,7.01mmol,1.0eq)和4-溴-6-氯哒嗪-3-胺(1.75g,8.42mmol,1.2eq)在DMSO(10mL)中的溶液加入K2CO3(4.85g,35.1mmol,5.0eq)。在110℃，将反应混合物搅拌16h。将反应混合物倒入THF/AcOEt 2:1中并用水/盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(1.9g，3.29mmol，46％产率)，为浅棕色泡沫。MS(ESI):548.2542([M+H]+)。
e)4-[[3-[3-[3-氨基-6-(5-氟-2-羟基-苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环 [3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯
在密封管中将4-[[3-[3-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯(1g,1.82mmol,1.0eq)与(5-氟-2-羟基苯基)硼酸(284mg,1.82mmol,1.0eq)、碳酸钾(883mg,6.39mmol,3.5eq)和RuPhos Pd G3(153mg,182μmol,0.1eq)在二噁烷(10mL)和水(1mL)中于120℃搅拌2h。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 50-100％)和(EtOAc/MeOH 0-10％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(827mg，1.33mmol，72％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：624.309([M+H]+)。
f)2-[6-氨基-5-[8-[3-(哌嗪-1-基甲基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3- 基]哒嗪-3-基]-4-氟-苯酚
将4-[[3-[3-[3-氨基-6-(5-氟-2-羟基-苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯(820mg,1.31mmol,1.0eq)悬浮在甲醇(20mL)和THF(4mL)中。加入Pd-C(140mg,131μmol,0.1eq)，将反应脱气并先后用氩气和氢气吹扫三次，并在氢气气氛下搅拌过夜。将反应混合物用decalite过滤，用DCM/甲醇(9:1)洗涤并蒸发，以得到标题化合物(323mg，485μmol，36％产率)，为浅棕色固体。MS(ESI)：490.2712([M+H]+)。
g)5-[4-[4-[[3-[3-[3-氨基-6-(5-氟-2-羟基-苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双 环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]哌嗪-1-羰基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异 吲哚啉-1,3-二酮
将2-[6-氨基-5-[8-[3-(哌嗪-1-基甲基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]-4-氟-苯酚(50mg,102μmol,1.0eq)与连接酶15(39.4mg,102μmol,1.0eq)、HATU(48.5mg,128μmol,1.25eq)和DIPEA(39.6mg,53.5μL,306μmol,3.0eq)在DMF(500μL)中合并。将反应在室温搅拌2h。通过制备型-HPLC纯化反应混合物，以得到标题化合物(12.4mg，9.14μmol，8％产率)，为黄色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：857.3899([M+H]+)。
实例159
5-(4-((6-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002521
将(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)甲酮(17mg,36.1μmol,1.0eq)和连接酶33(18.8mg,43.4μmol,1.2eq)溶解于DMSO(400μL)中。加入碘化钾(600μg,3.61μmol,0.1eq)并将混合物在室温搅拌16h。直接通过制备型-HPLC纯化反应混合物，以得到标题化合物(3.8mg，3.71μmol，10％产率)，为黄色固体，甲酸盐。MS(ESI):824.7([M+H]+)。
实例160
5-[4-[4-[2-[3-[8-[3-氨基-6-(5-氟-2-羟基-苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-羰基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002531
于室温将2-[6-氨基-5-[3-[3-(2-哌嗪-1-基乙氧基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-8-基]-4-氟-苯酚(40mg,77μmol,1.0eq)与连接酶15(29.7mg,77μmol,1.0eq)、HATU(35.1mg,92.4μmol,1.2eq)和DIPEA(29.8mg,40.3μL,231μmol,3.0eq)在DMF(500μL)中合并。将反应在室温搅拌过夜。通过制备型-HPLC纯化反应混合物，以得到标题化合物(42mg，36.2μmol，47％产率)，为黄色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：887.4002([M+H]+)。
实例161
外消旋-5-[4-[3-[4-[2-[2-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]嘧啶-4-基]氧基乙基]哌嗪-1-基]丙氧基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002532
a)4-[2-(2-氯嘧啶-4-基)氧基乙基]哌嗪-1-甲酸苄酯
向4-(2-羟乙基)哌嗪-1-甲酸苄酯(0.89g,3.36mmol,1.0eq)在DMA(10mL)中的溶液分批加入氢化钠(0.2g,5.0mmol,1.5eq)并将反应混合物在环境温度搅拌0.5h。然后逐滴加入2,4-二氯嘧啶(0.50g,3.36mmol,1.0eq)在DMA(5mL)中的溶液，并将反应混合物在环境温度搅拌8h。添加另一份氢化钠(0.2g,5.0mmol,1.5eq)并在环境温度继续搅拌另外2h。将反应混合物倒在冰水上，加入饱和NH4Cl溶液并用EtOAc萃取混合物。合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，并真空浓缩。在硅胶柱(庚烷/EtOAc0-100％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(0.41g，1.09mmol，32％产率)，为无色油。MS(ESI)：377.3([M+H]+)。
b)8-[4-[2-(4-苄基氧基羰基哌嗪-1-基)乙氧基]嘧啶-2-基]-3,8-二氮杂双环 [3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯
向4-[2-(2-氯嘧啶-4-基)氧乙基]哌嗪-1-甲酸苄酯(0.35g,0.93mmol,1.0eq)在DMA(6.3mL)中的溶液加入3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯(0.21g,0.98mmol,1.05eq)和碳酸钾(0.26g,1.86mmol,2.0eq)。将反应混合物加热至100℃持续16h。将反应混合物倒入饱和NaHCO3溶液中，并且用EtOAc萃取。将合并的有机层经MgSO4干燥并真空浓缩。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-100％)上作为洗脱液纯化粗材料，以得到标题化合物(0.46g，0.83mmol，88％产率)，为无色油。MS(ESI)：553.5([M+H]+)。
c)4-[2-[2-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)嘧啶-4-基]氧基乙基]哌嗪-1- 甲酸苄酯
将8-[4-[2-(4-苄基氧基羰基哌嗪-1-基)乙氧基]嘧啶-2-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯(150mg,271μmol,1.0eq)溶于DCM(1.5mL)中并缓慢加入HCl(0.68mL，2.71mmol，10.0eq；在二噁烷中的4M溶液)。将反应混合物在环境温度下搅拌4h。将反应混合物真空浓缩，以得到标题化合物(166g，367μmol，125％产率)，为灰白色固体，盐酸盐。MS(ESI)：453.5([M+H]+)。
d)4-[2-[2-[3-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基] 嘧啶-4-基]氧基乙基]哌嗪-1-甲酸苄酯
向4-[2-[2-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)嘧啶-4-基]氧基乙基]哌嗪-1-甲酸苄酯；盐酸盐(163mg,334μmol,1.0eq)在DMSO(0.5mL)中的溶液加入4-溴-6-氯哒嗪-3-胺(77mg,367μmol,1.1eq)和DIPEA(108mg,146μL,835μmol,3.0eq)。将反应混合物加热至100℃持续48h。将反应混合物倒入饱和NH4Cl溶液中，用EtOAc萃取，用盐水洗涤，并且有机层用MgSO4干燥并真空浓缩。使用DCM/MeOH(0-10％)作为洗脱液通过硅胶快速色谱法纯化粗材料，以得到标题化合物(60mg，103μmol，31％产率)，为橙色泡沫。MS(ESI)：580.2542([M+H]+)。
e)4-[2-[2-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛 烷-8-基]嘧啶-4-基]氧基乙基]哌嗪-1-甲酸苄酯
向4-[2-[2-[3-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]嘧啶-4-基]氧基乙基]哌嗪-1-甲酸苄酯(55mg,95μmol,1.0eq)在二噁烷(2.5mL)和水(0.25mL)的混合物中的溶液加入(2-羟基苯基)硼酸(32.7mg,237μmol,2.5eq)和碳酸钾(45.9mg,332μmol,3.5eq)。通过用氩气吹扫使溶液脱气，加入RuPhos Pd G3(7.9g,9.5μmol,0.1eq)后将反应混合物在90℃搅拌2h。将反应混合物倒入饱和NH4Cl溶液，用EtOAc萃取，用盐水洗涤并将有机层经Na2SO4干燥并在真空中浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(26mg，40.8μmol，43％产率)，为黄色油。MS(ESI)：638.6([M+H]+)。
f)2-[6-氨基-5-[8-[4-(2-哌嗪-1-基乙氧基)嘧啶-2-基]-3,8-二氮杂双环 [3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚
将4-[2-[2-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]嘧啶-4-基]氧基乙基]哌嗪-1-甲酸苄酯(25mg,39μmol,1.0eq)溶解在甲醇(0.5mL)和THF(0.1mL)的混合物中。通过用氩气吹扫使溶液脱气，加入Pd/C 10％(0.63mg,5.9μmol,0.15eq)并将反应混合物在环境温度和氢气气氛(1bar)下搅拌8h。将反应混合物经硅藻土过滤并真空浓缩，以得到标题化合物(18mg，35.7μmol，93％产率)，为黄色油。MS(ESI)：504.4([M+H]+)。
g)外消旋-5-[4-[3-[4-[2-[2-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二 氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]嘧啶-4-基]氧基乙基]哌嗪-1-基]丙氧基]-1-哌啶基]-2-(2, 6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
将2-[6-氨基-5-[8-[4-(2-哌嗪-1-基乙氧基)嘧啶-2-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚(15.5mg,30.7μmol,1.0eq)与连接酶27(14.7mg,30.7μmol,1.0eq)和DIPEA(19.8mg,27μL,153μmol,5.0eq)在DMF(250μL)中合并。将黄色溶液在60℃搅拌16h，然后通过制备型-HPLC纯化，以得到标题化合物(15mg，33.3μmol，54％产率)，为浅黄色固体。MS(ESI)：451.2272([M+2H]2+)。
实例162
5-(2-(2-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)-2-氧代乙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002561
a)2-[1-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-4-苯基-哌啶-4-羰基]-2,7-二氮杂螺[3.5] 壬烷-7-甲酸叔丁酯
向4-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-1-苯基-哌嗪-2-甲酸钾(195mg,526μmol,1.0eq)、HATU(240mg,380μmol,1.2eq)和DIPEA(340mg,459μL,2.63mmol,5.0eq)在DMF(2mL)中的溶液加入2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(179mg,789μmol,1.5eq)。将反应混合物在室温搅拌1h。真空浓缩反应混合物。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(280mg，518μmol，98％产率)，为浅棕色固体。MS(ESI)：541.3([M+H]+)。
b)2-[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-4-苯基-哌啶-4-羰基]-2,7-二氮 杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯
将2-(1-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(330mg,610μmol,1.0eq)、(2-羟基苯基)硼酸(210mg,1.52mmol,2.5eq)、碳酸钾(253mg,1.83mmol,3.0eq)和RuPhos Pd G3(25.5mg,30.5μmol,0.05eq)在脱气的二噁烷(8mL)和水(0.8mL)的混合物中的悬浮液在氩气下于110℃搅拌2h。将反应混合物倒入饱和NaHCO3，并且用EtOAc萃取。将有机层合并，用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(215mg，360μmol，59％产率)，为浅棕色固体。MS(ESI)：599.5([M+H]+)。
c)[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-4-苯基-4-哌啶基]-(2,7-二氮杂螺 [3.5]壬烷-2-基)甲酮
将密封管中的2-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(200mg,334μmol,1.0eq)在1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇(2.81g,1.75ml,16.7mmol,50eq)中的溶液在120℃搅拌72h。将反应混合物冷却至室温并真空浓缩，以得到标题化合物(150mg，300μmol，90％产率)，为浅棕色固体。MS(ESI)：499.4([M+H]+)。
d)5-(2-(2-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)-2,7- 二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)-2-氧代乙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二 酮
将连接酶48(12mg,36.1μmol,1.2eq)溶解在无水DMF(400μL)中。加入DIPEA(9.72mg,13.1μL,75.2μmol,2.5eq)和HATU(14.9mg,39.1μmol,1.3eq)并将混合物在室温搅拌10min。加入(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)甲酮(15mg,30.1μmol,1.0eq)并将混合物在室温搅拌2h。通过制备型-HPLC纯化反应混合物，以得到标题化合物(12.7mg，14μmol，46％产率)，为黄色固体，甲酸盐。MS(ESI)：813.6([M+H]+)。
实例163
5-(4-(2-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羰基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002571
标题化合物以类似于实例162步骤d的方式使用连接酶15制备为黄色固体(11.8mg，11.6μmol，38％产率)，甲酸盐。MS(ESI)：866.6([M+H]+)。
实例164
5-(4-(2-(2-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)-2-氧代乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002581
标题化合物以类似于实例162步骤d的方式使用连接酶24制备为黄色固体(14.2mg，14.6μmol，48％产率)，甲酸盐。MS(ESI)：880.7([M+H]+)。
实例165
3-((4-(1-(2-(2-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮
Figure BDA0003621438310002582
标题化合物以类似于实例162步骤d的方式使用连接酶51制备为黄色固体(10.3mg，10.6μmol，35％产率)，甲酸盐。MS(ESI)：826.5([M+H]+)。
实例166
5-(2-(9-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-基)-2-氧代乙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002591
a)9-[1-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-4-苯基-哌啶-4-羰基]-1-氧杂-4,9-二氮杂 螺[5.5]十一烷-4-甲酸叔丁酯
向4-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-1-苯基-哌嗪-2-甲酸钾(190mg,511μmol,1.0eq)、HATU(233mg,613μmol,1.2eq)和DIPEA(330mg,446μL,2.55mmol,5.0eq)在DMF(3mL)中的溶液加入1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-甲酸叔丁酯(196mg,766μmol,1.5eq)。将反应混合物在室温搅拌1h。将反应混合物真空浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(250mg，439μmol，86％产率)，为浅棕色固体。MS(ESI)：571.4([M+H]+)。
b)9-[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-4-苯基-哌啶-4-羰基]-1-氧杂-4, 9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-甲酸叔丁酯
将9-(1-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-甲酸叔丁酯(330mg,578μmol,1.0eq)、(2-羟基苯基)硼酸(199mg,1.44mmol,2.5eq)、碳酸钾(240mg,1.73mmol,3.0eq)和RuPhos Pd G3(24.2mg,28.9μmol,0.05eq)在脱气的二噁烷(8mL)和水(0.8mL)的混合物中的悬浮液在氩气下于110℃搅拌2h。将反应混合物倒入饱和NaHCO3，并且用EtOAc萃取。将有机层合并，用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-100％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(275mg，437μmol，76％产率)，为灰白色固体。MS(ESI)：629.5([M+H]+)。
c)[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-4-苯基-4-哌啶基]-(1-氧杂-4,9-二 氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲酮
向9-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-甲酸叔丁酯(260mg,414μmol,1.0eq)在DCM(4mL)中的冷却(0℃)溶液加入在二噁烷中的4M HCl(310μL,1.24mmol,3.0eq)。允许反应混合物达到室温并搅拌16h。将反应混合物在真空中浓缩以得到标题化合物(230mg，407μmol，98％产率)，为白色固体，盐酸盐。MS(ESI)：529.4([M+H]+)。
d)5-(2-(9-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)-1-氧 杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-基)-2-氧代乙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚 啉-1,3-二酮
将连接酶48(10.6mg,31.9μmol,1.2eq)溶解在无水DMF(400μL)中。加入DIPEA(8.58mg,11.6μL,66.4μmol,2.5eq)和HATU(13.1mg,34.5μmol,1.3eq)并将混合物在室温搅拌10min。加入(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)(1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)甲酮，盐酸盐(15mg,26.5μmol,1.0eq)并将混合物在室温搅拌2h。直接通过制备型-HPLC纯化反应混合物，以得到标题化合物(11.3mg，11.4μmol，43％产率)，为黄色固体，甲酸盐。MS(ESI)：843.5([M+H]+)。
实例167
5-(4-(9-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-羰基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002601
标题化合物以类似于实例166步骤d的方式使用连接酶15制备为黄色固体(19.8mg，18.9μmol，71％产率)，甲酸盐。MS(ESI)：896.6([M+H]+)。
实例168
5-(4-(9-(2-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-基)-2-氧代乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002611
标题化合物以类似于实例166步骤d的方式使用连接酶24制备为黄色固体(17.1mg，17μmol，64％产率)，甲酸盐。MS(ESI)：910.3([M+H]+)。
实例169
3-((4-(1-(2-(9-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮
Figure BDA0003621438310002612
标题化合物以类似于实例166步骤d的方式使用连接酶51制备为黄色固体(5.8mg，6.11μmol，23％产率)，甲酸盐。MS(ESI)：856.7([M+H]+)。
实例170
外消旋-1-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]-N-[1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]氮杂环丁烷-3-基]-N-甲基-哌啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003621438310002621
于室温向1-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]哌啶-4-甲酸(60mg,117μmol,1.0eq)、连接酶60(39.9mg,117μmol,1.0eq)和DIPEA(75.3mg,102μL,583μmol,5.0eq)在DMSO(0.6mL)中的搅拌溶液加入HATU(88.7mg,233μmol,2.0eq)。将反应混合物在室温搅拌1h。将粗制材料通过制备型-HPLC纯化，以得到标题化合物(20mg，23.8μmol，20％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：837.6([M-H]-)。
实例171
外消旋-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-[rel-(3aR,6aS)-5-[1-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]哌啶-4-羰基]-1,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2-基]异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002622
于室温向1-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]哌啶-4-甲酸(25mg,48.6μmol,1.0eq)、连接酶67(28mg,34.6μmol,0.712eq)和DIPEA(37.7mg,50.9μL,291μmol,6.0eq)在DMSO(0.4mL)中的搅拌溶液加入HATU(36.9mg,97.2μmol,2.0eq)。将反应混合物在室温搅拌1h。通过制备型-HPLC纯化粗材料，以得到标题化合物(7mg，5.76μmol，12％产率)，为黄色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS：865.7([M+H]+)。
实例172
3-(4-(1-(4-(2-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)-4-氧代丁基)哌啶-4-基)苯氧基)哌啶-2,6-二酮
Figure BDA0003621438310002631
标题化合物以类似于实例162步骤d的方式使用连接酶39制备为黄色固体(3.6mg，3.8μmol，12％产率)，甲酸盐。MS(ESI)：853.8([M+H]+)。
实例173
3-((4-(4-(2-(9-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮
Figure BDA0003621438310002632
标题化合物以类似于实例166步骤d的方式使用连接酶54制备为黄色固体(3.8mg，3.96μmol，14％产率)，甲酸盐。MS(ESI)：855.8([M+H]+)。
实例174
5-((4-(1-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)哌啶-4-羰基)哌嗪-1-基)甲基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002641
a)4-(4-乙氧基羰基哌啶-1-羰基)-4-苯基-哌啶-1-甲酸苄酯
向1-((苄基氧基)羰基)-4-苯基哌啶-4-甲酸(500mg,1.47mmol,1.0eq)、HATU(672mg,1.77mmol,1.2eq)和DIPEA(1.90g,2.57mL,14.7mmol,10.0eq)在DMF(8mL)中的溶液加入哌啶-4-碳酸乙酯(347mg,341uL,2.21mmol,1.5eq)。将反应混合物在室温搅拌16h。将反应混合物倒入NH4Cl中，并且用EtOAc萃取。将合并的有机层用水、盐水洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-80％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(621mg，1.30mmol，88％产率)，为白色粉末。MS(ESI)：479.4([M+H]+)。
b)1-(4-苯基哌啶-4-羰基)哌啶-4-甲酸乙酯
向4-(4-(乙氧基羰基)哌啶-1-羰基)-4-苯基哌啶-1-甲酸苄酯(620mg,1.3mmol,1.0eq)在甲醇(8mL)中的溶液加入10％钯/碳(138mg,130μmol,0.1eq)。在H2(气球)下，将反应混合物在回流温度下搅拌3h。通过过滤收集催化剂，用甲醇洗涤。浓缩滤液，以得到标题化合物(421mg，1.22mmol，94％产率)，为浅棕色固体。MS(ESI)：345.3([M+H]+)。
c)1-[1-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-4-苯基-哌啶-4-羰基]哌啶-4-甲酸乙酯
向4-溴-6-氯哒嗪-3-胺(266mg,1.28mmol,1.0eq)和1-(4-苯基哌啶-4-羰基)哌啶-4-甲酸乙酯(0.44g,1.28mmol,1.0eq)在DMA(7mL)中的搅拌溶液中添加碳酸钾(1.06g,7.66mmol,6.0eq)。将反应混合物加热至110℃并搅拌20h。将反应混合物倒入水中，并且用EtOAc萃取。合并有机层，用饱和NaHCO3、水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-100％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(550mg，1.17mmol，91％产率)，为深棕色固体。MS(ESI)：472.4([M+H]+)。
d)1-[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-4-苯基-哌啶-4-羰基]哌啶-4-甲 酸乙酯
将1-(1-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)哌啶-4-甲酸乙酯(500mg,1.06mmol,1.0eq)、(2-羟基苯基)硼酸(365mg,2.65mmol,2.5eq)、碳酸钾(512mg,3.71mmol,3.5eq)和RuPhos Pd G3(88.6mg,106μmol,0.05eq)在脱气的二噁烷(5mL)和水(0.5mL)的混合物中的悬浮液在氩气下于110℃搅拌3h。将反应混合物倒入饱和NaHCO3，并且用EtOAc萃取。将有机层合并，用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(531mg，1.0mmol，94％产率)，为深棕色固体。MS(ESI)：530.4([M+H]+)。
e)1-[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-4-苯基-哌啶-4-羰基]哌啶-4-甲 酸
向1-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)哌啶-4-甲酸乙酯(520mg,982μmol,1.0eq)在THF(2.5mL)和水(2.5mL)的混合物中的溶液加入氢氧化锂(150mg,3.54mmol,3.6eq)，于室温搅拌24h。将反应混合物倒入NH4Cl中，并且用EtOAc萃取。有机层用水、盐水洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩，以得到标题化合物(389mg，776μmol，79％产率)，为棕色固体。MS(ESI)：502.4([M+H]+)。
f)5-((4-(1-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)哌 啶-4-羰基)哌嗪-1-基)甲基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
将1-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)哌啶-4-甲酸(20mg,39.9μmol,1.0eq)溶解在无水DMF(400μL)中。加入DIPEA(12.9mg,17.4μL,99.7μmol,2.5eq)和HATU(19.7mg,51.8μmol,1.3eq)并将混合物在室温搅拌10min。连接酶68(18.8mg,47.8μmol,1.2eq)并将混合物在室温搅拌2h。直接通过制备型-HPLC纯化反应混合物，以得到标题化合物(3mg，3.32μmol，8％产率)，为黄色固体，甲酸盐。MS(ESI)：838.7([M+H]+)。
实例175
3-(4-(1-(1-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)哌啶-4-羰基)哌啶-4-基)苯基)哌啶-2,6-二酮
Figure BDA0003621438310002661
标题化合物以类似于实例174步骤f的方式使用连接酶69制备为黄色固体(2.3mg，2.72μmol，6％产率)，甲酸盐。MS(ESI)：756.6([M+H]+)。
实例176
3-(4-(4-(1-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)哌啶-4-羰基)哌嗪-1-基)苯基)哌啶-2,6-二酮
Figure BDA0003621438310002662
标题化合物以类似于实例174步骤f的方式使用连接酶70制备为黄色固体(1.5mg，1.77μmol，4％产率)，甲酸盐。MS(ESI)：757.6([M+H]+)。
实例177
3-((6-(1-(1-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)哌啶-4-羰基)哌啶-4-基)吡啶-3-基)氨基)哌啶-2,6-二酮
Figure BDA0003621438310002663
标题化合物以类似于实例174步骤f的方式使用连接酶71制备为黄色固体(2mg，2.27μmol，5％产率)，甲酸盐。MS(ESI)：772.5([M+H]+)。
实例178
5-(4-(1-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)哌啶-4-羰基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002671
标题化合物以类似于实例174步骤f的方式使用连接酶37制备为黄色固体(4mg，4.13μmol，10％产率)，甲酸盐。MS(ESI)：826.6([M+H]+)。
实例179
外消旋-5-[3-[4-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]哌嗪-1-羰基]氮杂环丁烷-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002672
向连接酶44(112μmol)在DMSO中的粗溶液加入2-[6-氨基-5-[8-[3-(哌嗪-1-基甲基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚氢溴酸盐(81.5mg,112μmol,1.0eq)、DIPEA(72.5mg,98μL,561μmol,5.0eq)和HATU(85.3mg,224μmol,2.0eq)。将反应混合物在室温搅拌30min。粗材料通过制备型-HPLC纯化。将产物冻干并且在硅胶柱(DCM/MeOH 0-5％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(11mg，12.9μmol，12％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：811.7([M+H]+)。
实例180
5-[4-[2-[4-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002681
将2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3--二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)乙酸(29.3mg,73.5μmol,1.0eq)与DMF(0.8mL)合并。加入HATU(55.9mg,147μmol,2.0)和DIPEA(38mg,51.3μL,294μmol,4.0eq)并将反应混合物在室温搅拌30min。加入2-(6-氨基-5-(8-(3-(哌嗪-1-基甲基)苯基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)哒嗪-3-基)苯酚氢溴酸盐(40mg,73.5μmol,1.0eq)并将反应混合物在室温搅拌过夜。通过制备型-HPLC纯化粗材料，以得到标题化合物(28.4mg，33.3μmol，45％产率)，为浅黄色冻干固体。MS(ESI)：853.41([M+H]+)。
实例181
3-(4-(1-(4-(9-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-基)-4-氧代丁基)哌啶-4-基)苯氧基)哌啶-2,6-二酮
Figure BDA0003621438310002682
标题化合物以类似于实例166步骤d的方式使用连接酶39制备为黄色固体(15.2mg，14.6μmol，55％产率)，甲酸盐。MS(ESI)：885.7([M+H]+)。
实例182
N-[[1-[3-氨基-6-(3,5-二氟-2-羟基-苯基)哒嗪-4-基]-4-苯基-4-哌啶基]甲基]-4-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氧基]苯基]-1-哌啶基]丁酰胺
Figure BDA0003621438310002691
a)((1-(3-氨基-6-(3.5-二氟-2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)甲基) 氨基甲酸叔丁酯
在用氩气冲洗的10mL三颈烧瓶中，将((1-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(140mg,335μmol,1.0eq)、(3,5-二氟-2-羟基苯基)硼酸(58.3mg,335μmol,1.0eq)和K2CO3(139mg,1mmol,3.0eq)，随后的甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(RuPhos Pd G3)(8.41mg,10μmol,0.06eq)与脱气的二噁烷(3mL)/水(0.3mL)合并。将反应混合物加热至110℃并搅拌40h。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-100％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(95mg，186μmol，55％产率)，为浅棕色无定形固体。MS(ESI):512.2457([M+H]+)。
b)2-(6-氨基-5-(4-(氨基甲基)-4-苯基哌啶-1-基)哒嗪-3-基)-4.6-二氟苯酚
将((1-(3-氨基-6-(3.5-二氟-2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(90mg,176μmol,1.0eq)和在二噁烷中的4N盐酸(300μL,1.2mmol,6.82eq)与二噁烷(1mL)合并。将反应搅拌20h。滤出沉淀的固体并用醚洗涤，并在高度真空下干燥，以得到标题化合物(85mg，186μmol，106％产率)，为浅黄色盐酸盐。MS(ESI):412.1936([M+H]+)。
c)N-((1-(3-氨基-6-(3.5-二氟-2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)甲 基)-4-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氧基)苯基)哌啶-1-基)丁酰胺2,2,2-三氟乙酸盐
将2-(6-氨基-5-(4-(氨基甲基)-4-苯基哌啶-1-基)哒嗪-3-基)-4.6-二氟苯盐酸盐(12mg,26.8μmol,1.0eq)和连接酶39(11mg,26.8μmol,1.0eq)与DIPEA(10.4mg,14μL,80.4μmol,3.0eq)在DMF(120μL)中搅拌。加入HATU(12.2mg,32.1μmol,1.2eq)并将混合物在室温搅拌过夜。通过制备型-HPLC纯化粗材料，以得到标题化合物(7mg，7.94μmol，29％产率)，为白色固体，2,2,2-三氟乙酸盐。MS(ESI):768.3677([M+H]+)。
实例183
N-[[1-[3-氨基-6-(5-氟-2-羟基-苯基)哒嗪-4-基]-4-苯基-4-哌啶基]甲基]-4-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氧基]苯基]-1-哌啶基]丁酰胺
Figure BDA0003621438310002701
a)((1-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
将4-溴-6-氯哒嗪-3-胺(718mg,3.44mmol,1.0eq)与DMSO(6mL)合并。加入((4-苯基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(1g,3.44mmol,1.0eq)和碳酸钾(2.86g,20.7mmol,6.0eq)。将反应混合物加热至100℃并在氩气搅拌20h。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-100％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(1.4g，3.18mmol，92％产率)，为灰色固体。MS(ESI):418.2011([M+H]+)。
b)((1-(3-氨基-6-(5-氟-2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)甲基)氨基 甲酸叔丁酯
将((1-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(300mg,718μmol,1.0eq)、(5-氟-2-羟基苯基)硼酸(280mg,1.79mmol,2.5eq)和K2CO3(298mg,2.15mmol,3.0eq)，随后的甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(RuPhos Pd G3)(18mg,21.5μmol,0.03eq)与脱气的二噁烷(10mL)/水(1mL)合并。将反应混合物加热至110℃并搅拌过夜。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-100％)上作为洗脱液纯化粗材料，以得到标题化合物(120mg，224μmol，31％产率)，为灰白色固体。MS(ESI):494.2551([M+H]+)。
c)2-(6-氨基-5-(4-(氨基甲基)-4-苯基哌啶-1-基)哒嗪-3-基)-4-氟苯酚
将((1-(3-氨基-6-(5-氟-2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(115mg,233μmol,1.0eq)和在二噁烷中的4N盐酸(300μL,1.2mmol,5.15eq)与二噁烷(1mL)合并。将反应搅拌20h。滤出沉淀的固体并在高度真空下干燥，以得到标题化合物(75mg，167μmol，71％产率)，为灰白色固体，盐酸盐。MS(ESI):394.2027([M+H]+)。
d)N-((1-(3-氨基-6-(5-氟-2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)甲基)- 4-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氧基)苯基)哌啶-1-基)丁酰胺2,2,2-三氟乙酸盐
将2-(6-氨基-5-(4-(氨基甲基)-4-苯基哌啶-1-基)哒嗪-3-基)-4-氟苯盐酸盐(20mg,46.5μmol,1.0eq)和连接酶39(19.1mg,46.5μmol,1.0eq)与DIPEA(15mg,20.3μL,116μmol,2.5eq)在DMF(200μL)中搅拌。加入HATU(21.2mg,55.8μmol,1.2eq)并将混合物在室温搅拌过夜。通过制备型-HPLC纯化粗材料，以得到标题化合物(4mg，4.63μmol，9％产率)，为白色固体，2,2,2-三氟乙酸盐。MS(ESI)：750.3761([M+H]+)。
实例184
N-[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-4-苯基-4-哌啶基]-2-[1-[1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]哌啶-4-羰基]-4-哌啶基]乙酰胺
Figure BDA0003621438310002711
a)4-(2-((1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)氨基)-2- 氧代乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将2-(6-氨基-5-(4-氨基-4-苯基哌啶-1-基)哒嗪-3-基)苯酚(400mg,1.11mmol,1.0eq)与2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)乙酸(296mg,1.22mmol,1.1eq)、HATU(505mg,1.33mmol,1.2eq)和DIPEA(358mg,483μL,2.77mmol,2.5eq)在DMF(4mL)中合并。反应用氩气吹扫并搅拌过夜。蒸发溶剂。将混合物用EtOAc萃取。有机层用水和盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 50-100％)洗脱液上纯化粗残余物，以得到标题化合物(571mg，934μmol，84％产率)，为橙色固体。MS(ESI)：587.3335([M+H]+)。
b)N-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)-2-(哌啶-4- 基)乙酰胺
于室温将4-(2-((1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)氨基)-2-氧代乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(565mg,963μmol,1.0eq)溶于DCM(5.6mL)中。将在二噁烷中的4M HCl(1.2ml,4.81mmol,5.0eq)加入橙色溶液中。溶液变黄并形成黄色胶状物。加入饱和NaHCO3水溶液直至pH＝10。将混合物用DCM和EtOAc萃取。将有机层合并，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发，以得到标题化合物(270mg，411μmol，42％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：487.5([M+H]+)。
c)N-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)-2-(1-(1-(2- (2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-羰基)哌啶-4-基)乙酰胺二 甲酸盐
在微波烧瓶中将N-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)-2-(哌啶-4-基)乙酰胺(25mg,51.4μmol,1.0eq)与连接酶15(19.8mg,51.4μmol,1.0eq)、HATU(23.4mg,61.6μmol,1.2eq)和DIPEA(16.6mg,22.4μL,128μmol,2.5eq)在DMF(250μL)中合并。将反应混合物在室温下搅拌2h。通过制备型-HPLC纯化粗材料，以得到标题化合物(24mg，20.3μmol，39％产率)，为黄色固体，二甲酸盐。MS(ESI)：854.3983([M+H]+)。
实例185
N-[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-4-苯基-4-哌啶基]-2-[1-[4-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]苯基]-1-哌啶基]丁酰基]-4-哌啶基]乙酰胺
Figure BDA0003621438310002731
在微波烧瓶中将N-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)-2-(哌啶-4-基)乙酰胺(25mg,51.4μmol,1.0eq)与连接酶52(21.1mg,51.4μmol,1.0eq)、HATU(23.4mg,61.6μmol,1.2eq)和DIPEA(16.6mg,22.4μL,128μmol,2.5eq)在DMF(250μL)中合并。将反应在室温搅拌2h。通过制备型-HPLC纯化粗材料，以得到标题化合物(25mg，26μmol，50.5％产率)，为白色固体，二甲酸盐。MS(ESI)：840.4566([M+H]+)。
实例186
5-(4-(2-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-6-羰基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002732
a)2-[1-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-4-苯基-哌啶-4-羰基]-2,7-二氮杂螺[3.4] 辛烷-7-甲酸叔丁酯
向4-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-1-苯基-哌嗪-2-甲酸钾(190mg,512μmol,1.0eq)、HATU(233mg,613μmol,1.2eq)和DIPEA(330mg,446μL,2.55mmol,5.0eq)在DMF(3mL)中的溶液加入1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-甲酸叔丁酯(196mg,766μmol,1.5eq)。将反应混合物在室温搅拌1h。将反应混合物在真空浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-00％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(221mg，420μmol，82％产率)，为浅棕色固体。MS(ESI)：527.3([M+H]+)。
b)2-[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-4-苯基-哌啶-4-羰基]-2,7-二氮 杂螺[3.4]辛烷-7-甲酸叔丁酯
将2-(1-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-6-甲酸叔丁酯(290mg,550μmol,1.0eq)、(2-羟基苯基)硼酸(190mg,1.38mmol,2.5eq)、碳酸钾(228mg,1.65mmol,3.0eq)和RuPhos Pd G3(23.0mg,27.5μmol,0.05eq)在脱气的二噁烷(6mL)和水(0.6mL)的混合物中的悬浮液在氩气下于110℃搅拌2h。将反应混合物倒入饱和NaHCO3，并且用EtOAc萃取。将有机层合并，用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-100％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(280mg，479μmol，87％产率)，为棕色泡沫。MS(ESI)：585.4([M+H]+)。
c)[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-4-苯基-4-哌啶基]-(2,7-二氮杂螺 [3.4]辛烷-2-基)甲酮
将密封管中的2-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-6-甲酸叔丁酯(280mg,479μmol,1.0eq)在1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇(4.02g,2.51mL,23.9mmol,50eq)中的溶液在120℃搅拌72h。将反应混合物冷却至室温并真空浓缩，以得到标题化合物(160mg，330μmol，69％产率)，为浅棕色固体。MS(ESI)：485.3([M+H]+)。
d)5-(4-(2-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)-2,6- 二氮杂螺[3.4]辛烷-6-羰基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
将连接酶15(19.1mg,49.5μmol,1.2eq)溶解在无水DMF(400μL)中。加入DIPEA(13.3mg,18μL,103μmol,2.5eq)和HATU(20.4mg,53.7μmol,1.3eq)并将混合物在室温搅拌10min。加入(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)(2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-基)甲酮(20mg,41.3μmol,1.0eq)并将混合物在室温搅拌2h。直接通过制备型-HPLC纯化反应混合物，以得到标题化合物(12.2mg，13.6μmol，32％产率)，为黄色固体，甲酸盐。MS(ESI)：852.6([M+H]+)。
实例187
5-(4-(2-(2-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-6-基)-2-氧代乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002751
标题化合物以类似于实例186步骤d的方式使用连接酶24制备为黄色固体(14.8mg，16.2μmol，39％产率)，甲酸盐。MS(ESI)：866.7([M+H]+)。
实例188
5-(4-(3-(2-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-6-基)-3-氧代丙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002752
标题化合物以类似于实例186步骤d的方式使用连接酶12制备为黄色固体(13.6mg，14.7μmol，35％产率)，甲酸盐。MS(ESI)：880.7([M+H]+)。
实例189
5-(2-(2-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-6-基)-2-氧代乙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002761
标题化合物以类似于实例186步骤d的方式使用连接酶48制备为黄色固体(10.5mg，12.4μmol，30％产率)，甲酸盐。MS(ESI)：799.5([M+H]+)。
实例190
5-(4-((2-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-6-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002762
将(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)(2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-基)甲酮(20mg,41.3μmol,1.0eq)、连接酶33(35.8mg,82.5μmol,2.0eq)和碘化钾(6.85mg,41.3μmol,1.0eq)在DMSO(400μL)中于70℃搅拌16h。通过制备型-HPLC纯化反应混合物，以得到标题化合物(6.5mg，7.35μmol，17％产率)，为黄色固体，甲酸盐。MS(ESI)：838.5([M+H]+)。
实例191
5-(4-(2-(2-(1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-羰基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-6-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002771
标题化合物以类似于实例190的方式使用连接酶25制备为黄色固体(9.6mg，10.7μmol，25％产率)，甲酸盐。MS(ESI)：852.6([M+H]+)。
实例192
5-[4-[2-[2-[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-4-苯基-哌啶-4-羰基]-2,7-二氮杂螺[3.4]辛烷-7-基]乙氧基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002772
标题化合物以类似于实例190的方式使用连接酶26制备为黄色固体(9.2mg，9.86μmol，23％产率)，甲酸盐。MS(ESI)：868.6([M+H]+)。
实例193
外消旋-5-[4-[4-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]-5-氟-苯基]甲基]哌嗪-1-羰基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002773
a)4-[(3-溴-5-氟-苯基)甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯
向1-溴-3-(溴甲基)-5-氟-苯(0.4g,1.5mmol,1.0eq)和三乙胺(0.23g,0.31mL,2.2mmol,1.5eq)在THF(40mL)中的溶液加入苄基哌嗪-1-甲酸盐(0.40g,0.35mL,1.8mmol,1.2eq)，并将反应混合物在环境温度搅拌16h。将反应混合物真空浓缩，倒入水中，用EtOAc萃取并用盐水洗涤。将合并的有机层经Na2SO4干燥并真空浓缩，以得到标题化合物(0.63g，1.54mmol，99％产率)，为黄色油。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ＝7.41-7.30(m,6H),7.25-7.18(m,2H),5.12(s,2H),3.71(br s,6H),2.84-2.39(m,4H)。13C NMR(100MHz,CDCl3):δ＝164.0,161.5,155.0,136.3,128.6,128.2,128.0,122.9,120.5,120.0,67.5,52.3,52.2。
b)8-[3-[(4-苄基氧基羰基哌嗪-1-基)甲基]-5-氟-苯基]-3,8-二氮杂双环 [3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯
将4-[(3-溴-5-氟-苯基)甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯(610mg,1.50mmol,1.0eq)、3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯(350mg,1.65mmol,1.1eq)、Pd(dba)2(86.1mg,150μmol,0.1eq)、2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基联苯(69.9mg,150μmol,0.1eq；RuPhos)和叔丁醇钠(360mg,3.74mmol,2.5eq)在二噁烷(10mL)中的溶液通过用氩气吹扫来脱气。将反应混合物通过微波照射加热至100℃持续2h。将反应混合物通过硅藻土过滤，真空浓缩，并且粗材料使用庚烷/EtOAc(1:1)作为洗脱液通过硅胶快速色谱法纯化，以得到标题化合物(680mg，1.26mmol，84％产率)，为黄色油。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ＝7.39-7.28(m,5H),6.51(s,1H),6.45-6.41(m,1H),6.36(td,J＝2.2,11.8Hz,1H),5.13(s,2H),4.21-4.05(m,2H),3.80-3.56(m,2H),3.54-3.48(m,4H),3.41(s,2H),3.32-3.13(m,2H),2.40(br s,4H),2.04-1.98(m,2H),1.84(br dd,J＝7.4,14.7Hz,2H),1.46-1.43(m,9H)。13C NMR(100MHz,CDCl3):δ＝164.2(d,JCF＝242.75Hz),156.1,155.2,147.8(d,JCF＝10.40Hz),141.5(d,JCF＝9.54Hz),136.7,128.5,128.0,127.9,111.3,105.0(d,JCF＝21.67Hz),101.2(d,JCF＝26.01Hz),79.8,67.1,62.9,54.8-54.2,52.8,46.5(br s),45.3(br s),43.8(br s),28.4,27.0(m)。
c)4-[[3-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-5-氟-苯基]甲基]哌嗪-1-甲酸苄 酯
将8-[3-[(4-苄基氧基羰基哌嗪-1-基)甲基]-5-氟-苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸叔丁酯(650mg,1.21mmol,1.0eq)溶于DCM(10mL)中并缓慢加入TFA(5.4g,3.7mL,47.6mmol,39.3eq)。将反应混合物在环境温度搅拌16h。将反应混合物真空浓缩，以得到标题化合物(903mg，1.35mmol，112％产率)，为棕色固体，双-(2,2,2-三氟乙酸)盐。MS(ESI)：439.4([M+H]+)。
d)4-[[3-[3-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]-5- 氟-苯基]甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯
向4-[[3-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-5-氟-苯基]甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯；双-(2,2,2-三氟乙酸)盐(772mg,1.76mmol,1.0eq)在DMSO(10mL)中的溶液加入4-溴-6-氯哒嗪-3-胺(404mg,1.94mmol,1.1eq)和碳酸钾(1.22g,8.8mmol,5.0eq)。将反应混合物加热至110℃持续18h。将反应混合物倒入水中，用EtOAc萃取，用盐水洗涤，并且有机层用MgSO4干燥并真空浓缩。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-10％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(493mg，0.87mmol，50％产率)，为棕色固体。MS(ESI)：566.3([M+H]+)。
e)4-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛 烷-8-基]-5-氟-苯基]甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯
向4-[[3-[3-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]-5-氟-苯基]甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯(422mg,745μmol,1.0eq)在二噁烷(5mL)、DMA(0.25mL)和水(0.5mL)的混合物中的溶液加入(2-羟基苯基)硼酸(257mg,1.86mmol,2.5eq)和碳酸钾(309mg,2.24mmol,3.0eq)。通过用氩气吹扫使溶液脱气，加入RuPhos Pd G3(31.1mg,37.3μmol,0.05eq)后将反应混合物在90℃搅拌5h。将反应混合物倒入饱和NH4Cl溶液，用EtOAc萃取，用盐水洗涤并将有机层经MgSO4干燥并在真空中浓缩。在硅胶柱(EtOAc/iPrOH 0-50％)上作为洗脱液纯化粗材料，以得到标题化合物(338mg，0.54mmol，73％产率)，为深红色固体。MS(ESI)：624.3085([M+H]+)。
f)2-[6-氨基-5-[8-[3-氟-5-(哌嗪-1-基甲基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛 烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚
向4-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]-5-氟-苯基]甲基]哌嗪-1-甲酸苄酯(100mg,160μmol,1.0eq)在DCM(2mL)中的溶液小心地加入HBr(393mg,264μL,1.6mmol,10.0eq；在乙酸中33％)并将反应混合物在环境温度下搅拌2h。真空浓缩反应混合物，以得到标题化合物(75mg，131μmol，96％产率)，为黄色固体，氢溴酸盐。MS(ESI)：490.4([M+H]+)。
g)外消旋-5-[4-[4-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双 环[3.2.1]辛烷-8-基]-5-氟-苯基]甲基]哌嗪-1-羰基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌 啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
将2-[6-氨基-5-[8-[3-氟-5-(哌嗪-1-基甲基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚；氢溴酸盐(30mg,61.3μmol,1.0eq)与连接酶15(28.3mg,73.5μmol,1.2eq)、HATU(34.9mg,95μmol,1.5eq)和DIPEA(39.6mg,54μL,306μmol,5.0eq)在DMF(650μL)中合并。将反应混合物在环境温度搅拌8h，然后通过制备型-HPLC纯化，以得到标题化合物(5mg，5.15μmol，8％产率)，为浅黄色固体，2,2,2-三氟乙酸盐。MS(ESI)：857.5([M+H]+)。
实例194
2-[[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-4-苯基-4-哌啶基]氧基]-N-[1-[2-[4-[4-[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氧基]苯基]-1-哌啶基]乙酰基]-4-哌啶基]乙酰胺
Figure BDA0003621438310002801
a)2-((1-(叔丁氧基羰基)-4-苯基哌啶-4-基)氧基)乙酸
于室温将氢化钠(865mg,21.6mmol,6.0eq)悬浮在THF(2mL)中。加入4-羟基-4-苯基哌啶-1-甲酸叔丁酯(1g,3.61mmol,1.0eq)在THF(5mL)中的澄清溶液并将灰色悬浮液搅拌1h。然后小心地加入2-溴乙酸(1g,7.21mmol,2.0eq)在THF(2mL)中的澄清溶液并将反应搅拌过夜。加入水以淬灭反应，随后加入1N HCl水溶液直至pH＝4，并将其用EtOAc萃取。有机层经硫酸镁干燥，过滤并蒸发。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-20％)上作为洗脱液纯化粗残余物，以得到标题化合物(126mg，376μmol，10％产率)，为白色固体。MS(ESI)：334.3([M+H]+)。
b)4-(2-((1-苄基哌啶-4-基)氨基)-2-氧代乙氧基)-4-苯基哌啶-1-甲酸叔丁酯
于室温将2-((1-(叔丁氧基羰基)-4-苯基哌啶-4-基)氧基)乙酸(160mg,477μmol,1.0eq)与1-苄基哌啶-4-胺(99.9mg,99.1μL,525μmol,1.1eq)、HATU(218mg,572μmol,1.2eq)和DIPEA(154mg,208μL,1.19mmol,2.5eq)在DMF(2.6mL)中合并。将反应混合物搅拌1h。将反应用水和EtOAc萃取。有机层用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发。将粗残余物施加在硅胶上并在硅胶柱(庚烷/EtOAc 70-100％)上纯化，以得到标题化合物(290mg，286μmol，59％产率)，为无色油。MS(ESI)：508.9([M+H]+)。
c)N-(1-苄基哌啶-4-基)-2-((4-苯基哌啶-4-基)氧基)乙酰胺
于室温将TFA(651mg,440μL,5.71mmol,10.0eq)加入4-(2-((1-苄基哌啶-4-基)氨基)-2-氧代乙氧基)-4-苯基哌啶-1-甲酸叔丁酯(290mg,571μmol,1.0eq)在DCM(3mL)中的溶液。将反应在搅拌过夜。缓慢加入饱和NaHCO3水溶液直至pH＝8，并将混合物用二氯甲烷萃取。将有机层经硫酸镁干燥，过滤并且蒸发，以得到标题化合物(157mg，385μmol，67％产率)，为浅黄色油。MS(ESI)：408.4([M+H]+)。
d)2-((1-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)氧基)-N-(1-苄基哌啶-4- 基)乙酰胺
将N-(1-苄基哌啶-4-基)-2-((4-苯基哌啶-4-基)氧基)乙酰胺(155mg,380μmol,1.0eq)与4-溴-6-氯哒嗪-3-胺(87.2mg,418μmol,1.1eq)和K2CO3(131mg,951μmol,2.5eq)在DMA(1.5mL)中合并。将反应混合物加热至120℃并搅拌2h。蒸发溶剂。在硅胶柱(DCM/MeOH0-10％)上作为洗脱液纯化粗残余物，以得到标题化合物(88mg，163μmol，42％产率)，为浅黄色固体。MS(ESI)：535.5([M+H]+)。
e)2-((1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)氧基)-N-(1- 苄基哌啶-4-基)乙酰胺
将2-((1-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)氧基)-N-(1-苄基哌啶-4-基)乙酰胺(85mg,159μmol,1.0eq)与(2-羟基苯基)硼酸(43.8mg,318μmol,2.0eq)、RuPhosPd G3(6.64mg,7.94μmol,0.05eq)和K2CO3(54.9mg,397μmol,2.5eq)在1,4-二噁烷(1mL)和水(100μL)中合并。将反应加热至120℃并搅拌2h。蒸发溶剂。在硅胶柱(DCM/MeOH 0-10％)上作为洗脱液纯化粗残余物，以得到标题化合物(82mg，131μmol，82％产率)，为黄色油。MS(ESI)：593.3233([M+H]+)。
f)2-((1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)氧基)-N-(哌 啶-4-基)乙酰胺
于室温将Pd-C(14.4mg,13.5μmol,0.1eq)加入2-((1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)氧基)-N-(1-苄基哌啶-4-基)乙酰胺(80mg,135μmol,1.0eq)在MeOH(3.5mL)中的溶液。将反应混合物用氩气吹扫，然后在氢气气氛下搅拌过夜。将反应通过过滤器过滤，用DCM/甲醇9:1洗涤并蒸发，以得到标题化合物(76mg，133μmol，98％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：503.5([M+H]+)。
g)2-((1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)氧基)-N-(1- (2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氧基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)乙酰胺二 甲酸盐
将2-((1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)氧基)-N-(哌啶-4-基)乙酰胺(35mg,61.3μmol,1.0eq)与连接酶35(23.5mg,61.3μmol,1.0eq)、HATU(28mg,73.5μmol,1.2eq)和DIPEA(19.8mg,26.8μL,153μmol,2.5eq)在DMF(350μL)中合并。将反应在室温搅拌2h。通过制备型-HPLC纯化反应混合物，以得到标题化合物(11mg，11.4μmol，18％产率)，为白色固体，二甲酸盐。MS(ESI)：831.4174([M+H]+)。
实例195
外消旋-3-[4-[4-[2-[4-[[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯基]甲基]哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基]哌嗪-1-基]苯氧基]哌啶-2,6-二酮
Figure BDA0003621438310002831
将2-[6-氨基-5-[8-[3-(哌嗪-1-基甲基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚；氢溴酸盐(30.0mg,59μmol,1.0eq；实例46，步骤f)与连接酶42(27.2mg,59μmol,1.0eq)、HATU(44.9mg,118μmol,2.0eq)和DIPEA(38.2mg,52μL,295μmol,5.0eq)在DMF(650μL)中合并。将反应混合物在环境温度搅拌8h，然后通过制备型-HPLC纯化，以得到标题化合物(8.7mg，21.8μmol，16％产率)，为浅黄色固体，2,2,2-三氟乙酸盐。MS(ESI)：401.4([M+2H]2+)。
实例196
2-[[1-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-4-苯基-4-哌啶基]氧基]-N-[1-[1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]哌啶-4-羰基]-4-哌啶基]乙酰胺
Figure BDA0003621438310002832
将2-((1-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-4-苯基哌啶-4-基)氧基)-N-(哌啶-4-基)乙酰胺(35mg,61.3μmol,1.0eq)与连接酶15(23.6mg,61.3μmol,1.0eq)、HATU(28mg,73.5μmol,1.2eq)和DIPEA(19.8mg,26.8μL,153μmol,2.5eq)在DMF(350μL)中合并。将反应在室温搅拌2h。通过制备型-HPLC纯化反应混合物，以得到标题化合物(3mg，2.53μmol，4％产率)，为黄色固体，二甲酸盐。MS(ESI)：870.3921([M+H]+)。
实例197
5-[4-[4-[2-[3-[8-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-5,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-5-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-羰基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002841
a)5-(3-(苄氧基)苯基)-5,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-8-甲酸叔丁基
向1-(苄基氧基)-3-溴苯(1.2g,4.56mmol,1.0eq)和5,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-8-甲酸叔丁酯(1.08g,4.79mmol,1.05eq)在t-BuOH(6.5mL)中的悬浮液加入K2CO3(1.26g,9.12mmol,2.0eq)。将反应用氩气脱气5min。添加RuPhos Pd G3(160mg,191μmol,0.0419eq)。将反应混合物在120℃下搅拌过夜。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-50％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(321mg，581μmol，12％产率)，为浅黄色油。MS(ESI):409.2482([M+H]+)。
b)5-(3-羟基苯基)-5,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-8-甲酸叔丁酯
向5-(3-(苄氧基)苯基)-5,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-8-甲酸叔丁基(321mg,786μmol,1.0eq)在甲醇(10mL)中的溶液加入甲酸铵(991mg,15.7mmol,20eq)。将反应混合物用氩气脱气10min。添加Pd-C 10％(83.6mg,78.6μmol,0.1eq)。将反应混合物在70℃搅拌2h。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-60％)上纯化粗反应混合物，以得到标题化合物(200mg，628μmol，79％产率)，为灰白色固体。MS(ESI):317.1871([M-H]-)。
c)5-(3-(2-(4-((苄基氧基)羰基)哌嗪-1-基)乙氧基)苯基)-5,8-二氮杂螺[3.5] 壬烷-8-甲酸叔丁酯
向5-(3-羟基苯基)-5,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-8-甲酸叔丁酯(195mg,612μmol,1.0eq)和4-(2-羟乙基)哌嗪-1-甲酸苄酯(CAS:14000-67-0,173mg,655μmol,1.07eq)在THF(1.5mL)中的溶液中添加4-(2-羟乙基)哌嗪-1-甲酸苄酯(173mg,655μmol,1.07eq)。将反应混合物在70℃搅拌2.5h。加入在THF中的0.5M 2-(三甲基膦亚基)乙腈(0.75mL,375μmol,0.612eq)。将反应混合物搅拌1.5h。仍剩下一些起始材料，因此再次加入在THF中的0.5M 2-(三甲基膦亚基)乙腈(0.75mL,375μmol,0.612eq)并于70℃连续搅拌过夜。在硅胶柱上纯化粗材料，以得到标题化合物(277mg，491μmol，80％产率)，为棕色油。MS(ESI):565.3376([M+H]+)。
d)4-(2-(3-(5,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-5-基)苯氧基)乙基)哌嗪-1-甲酸苄酯
向5-(3-(2-(4-((苄基氧基)羰基)哌嗪-1-基)乙氧基)苯基)-5,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-8-甲酸叔丁酯(270mg,478μmol,1.0eq)在二噁烷(1mL)中的溶液加入在二噁烷中的4M盐酸(500μL,2mmol,4.18eq)。将反应混合物在室温搅拌过夜。滤出沉淀的材料并用乙醚洗涤，并在高度真空下干燥，以得到标题化合物(240mg，465μmol，97％产率)，为白色固体，盐酸盐。MS(ESI)：465.2851([M+H]+)。
e)4-(2-(3-(8-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)-5,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-5-基)苯氧 基)乙基)哌嗪-1-甲酸苄酯
向4-(2-(3-(5,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-5-基)苯氧基)乙基)哌嗪-1-甲酸苄酯盐酸盐(235mg,469μmol,1.0eq)和4-溴-6-氯哒嗪-3-胺(117mg,563μmol,1.2eq)在DMSO(0.8mL)中的溶液加入K2CO3(324mg,2.34mmol,5.0eq)。在110℃，将反应混合物搅拌16h。将反应混合物倒入THF/AcOEt2:1中并用水/盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。在硅胶柱(EtOAc/MeOH 0-5％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(333mg，557μmol，119％产率)，为棕色泡沫。MS(ESI):592.2793([M+H]+)。
f)4-(2-(3-(8-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-5,8-二氮杂螺[3.5]壬烷- 5-基)苯氧基)乙基)哌嗪-1-甲酸苄酯
于室温向4-(2-(3-(8-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)-5,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-5-基)苯氧基)乙基)哌嗪-1-甲酸苄酯(330mg,446μmol,1.0eq)和(2-羟基苯基)硼酸(92.2mg,669μmol,1.5eq)在1,4-二噁烷(2mL)和(0.2mL)中的悬浮液加入K2CO3(216mg,1.56mmol,3.5eq)。将反应混合物用氩气脱气10min。加入RuPhos Pd G3(37.3mg,44.6μmol,0.1eq)。将反应混合物在90℃加热2h。在硅胶柱(庚烷/EtOAc 0-100％)上纯化粗材料，以得到标题化合物(152mg，229μmol，51％产率)，为浅黄色油。MS(ESI):650.3442([M+H]+)。
g)2-(6-氨基-5-(5-(3-(2-(哌嗪-1-基)乙氧基)苯基)-5,8-二氮杂螺[3.5]壬烷- 8-基)哒嗪-3-基)苯酚
在氢气气氛下于室温将4-(2-(3-(8-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-5,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-5-基)苯氧基)乙基)哌嗪-1-甲酸苄酯(138mg,212μmol,1.0eq)与钯(22.6mg,21.2μmol,0.1eq)在甲醇(4mL)和THF(2mL)中搅拌过夜。将催化剂滤出，用乙醚洗涤并将溶剂在减压下蒸发，然后在高真空下干燥，以得到标题化合物(120mg，221μmol，104％产率)，为浅黄色无定型物。MS(ESI):516.3072([M+H]+)。
h)5-(4-(4-(2-(3-(8-(3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基)-5,8-二氮杂螺[3.5] 壬烷-5-基)苯氧基)乙基)哌嗪-1-羰基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉- 1,3-二酮二甲酸盐
于室温将2-(6-氨基-5-(5-(3-(2-(哌嗪-1-基)乙氧基)苯基)-5,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-8-基)哒嗪-3-基)苯酚(25mg,48.5μmol,1.0eq)与连接酶15(18.7mg,48.5μmol,1.0eq)、HATU(22.1mg,58.2μmol,1.2eq)和DIPEA(18.8mg,25.4μL,145μmol,3.0eq)在DMF(300μL)中合并。将反应在室温搅拌过夜。通过制备型-HPLC纯化反应混合物，以得到标题化合物(21mg，21.5μmol，44％产率)，为黄色盐，二甲酸盐。MS(ESI)：881.4127([M-H]-)。
实例198
3-[[6-[1-[2-[4-[2-[3-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]苯氧基]乙基]哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基]-4-哌啶基]-3-吡啶基]氧基]哌啶-2,6-二酮
Figure BDA0003621438310002871
于室温将2-[6-氨基-5-[8-[3-(2-哌嗪-1-基乙氧基)苯基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]-苯酚(20mg,39.9μmol,1.0eq)与连接酶72(15.3mg,39.9μmol,1.0eq)、HATU(18.9mg,49.8μmol,1.25eq)和DIPEA(15.5mg,20.9μL,120μmol,3.0eq)在DMF(200μL)中合并。将反应在室温搅拌过夜。通过制备型-HPLC纯化粗物质，以得到标题化合物(15mg，16.9μmol，42％产率)，为灰白色固体，甲酸盐。MS(ESI)：831.4294([M+H]+)。
实例199
2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-[1-[1-[1-[5-[4-[4-[外消旋-(3S)-3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯基]哌嗪-1-基]戊酰基]氮杂环丁烷-3-基]三唑-4-基]乙氧基]异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002872
在氮气气氛下于室温向5-[4-[4-[(3S)-3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯基]哌嗪-1-基]戊酸(60.0mg,90.9umol,TFA盐)和连接酶73(48.8mg,90.9umol,TFA)在DMF(2.0mL)中的溶液先后加入(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)二甲基氨基-吗啉代-碳六氟磷酸盐(COMU)(58.4mg,136.4umol)和DIPEA(94.0mg,727umol,126uL)，并将反应混合物在室温搅拌3h。用水稀释反应混合物，过滤沉淀出的固体，用水和乙醚洗涤。通过制备型-HPLC纯化粗残余物，以标题化合物(31.0mg，31.2umol，34％产率)，为灰白色固体，三氟乙酸盐。MS(ESI)：954.3([M+H]+)。
实例200
2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-[1-[1-[3-[4-[3-[4-[4-[外消旋-(3S)-3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯基]哌嗪-1-基]丙酰基]哌嗪-1-基]丙基]三唑-4-基]乙氧基]异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002881
在氮气气氛下于室温向3-[4-[4-[(3S)-3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯基]哌嗪-1-基]丙酸(51.9mg,82.1umol,TFA盐)和连接酶74(50.0mg,82.1umol,TFA盐)在DMF(0.8mL)中的溶液先后加入(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)二甲基氨基-吗啉代-碳六氟磷酸盐(COMU)(52.7mg,123umol)和DIPEA(84.9mg,657umol,114uL)，并将反应混合物在室温搅拌16h。用水稀释反应混合物，过滤沉淀出的固体，用水和乙醚洗涤。通过制备型-HPLC纯化粗残余物，以得到标题化合物(6.3mg，5.55umol，6％产率)，为浅棕色固体，三氟乙酸盐。MS(ESI)：996.3([M+H]+)。
实例201
2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-[1-[1-[9-[4-[4-[外消旋-(3S)-3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯基]哌嗪-1-基]壬基]三唑-4-基]乙基氨基]异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002891
在氮气气氛下于室温向连接酶30(50.0mg,98.3umol)和2-[6-氨基-5-[[(3S)-1-(4-哌嗪-1-基苯基)-3-哌啶基]氧基]哒嗪-3-基]苯酚(55.0mg,98.3umol,TFA盐)在四氢呋喃(2.0mL)中的溶液先后加入二丁基二氯化锡(29.8mg,98.3umol,21.9uL)和苯基硅烷(12.7mg,117umol)，并将反应混合物在80℃加热16h。将反应混合物冷却至室温，用水稀释，并用乙酸乙酯萃取。将有机层用水、盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。通过制备型-HPLC纯化粗残余物，以得到标题化合物(8.7mg，8.70umol，8％产率)，为浅黄色固体，三氟乙酸盐。MS(ESI)：939.3([M+H]+)。
实例202
2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-[1-[1-[6-[2-[4-[4-[外消旋-(3S)-3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯基]哌嗪-1-基]乙氧基]己基]三唑-4-基]乙氧基]异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002901
于室温向连接酶76(15.90mg,48.7umol)和2-[6-氨基-5-[[(3S)-1-[4-[4-[2-(6-叠氮基己氧基)乙基]哌嗪-1-基]苯基]-3-哌啶基]氧基]哒嗪-3-基]苯酚(30mg,48.7umol)在二甲基亚砜(1mL)/水(0.5mL)中的溶液先后加入抗坏血酸钠(2.90mg,14.6umol)和硫酸铜(777.6ug,4.87umol,2.16e-1uL)，并将反应混合物在室温搅拌5h。将反应混合物用水稀释，并且用二氯甲烷萃取。将有机层用水、盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。通过制备型-HPLC纯化粗残余物，以得到标题化合物(4.72mg，4.69umol，9％产率)，为灰白色固体，三氟乙酸盐。MS(ESI)：942.3([M+H]+)。
实例203
2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-[1-[1-[9-[4-[4-[外消旋-(3S)-3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯基]哌嗪-1-基]壬基]三唑-4-基]丙基氨基]异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002911
在氮气气氛下于室温向连接酶32(46.8mg,89.5umol)和2-[6-氨基-5-[[(3S)-1-(4-哌嗪-1-基苯基)-3-哌啶基]氧基]哒嗪-3-基]苯酚(0.04g,89.5umol)在四氢呋喃(4mL)中的溶液先后加入二丁基二氯化锡(27.2mg,89.5umol,20.0uL)和苯基硅烷(11.6mg,107umol)，并将反应混合物在80℃加热16h。将反应混合物冷却至室温，用水稀释，并用乙酸乙酯萃取。将有机层用水、盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。通过制备型-HPLC纯化粗残余物，以得到标题化合物(2.6mg，2.40umol，2％产率)，为浅黄色固体，三氟乙酸盐。MS(ESI)：953.6([M+H]+)。
实例204
2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-[1-[1-[3-氧代-3-[4-[3-[4-[4-[外消旋-(3S)-3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]氧基-1-哌啶基]苯基]哌嗪-1-基]丙基]哌嗪-1-基]丙基]三唑-4-基]乙氧基]异吲哚啉-1,3-二酮
Figure BDA0003621438310002912
在氮气气氛下于室温向2-[6-氨基-5-[[(3S)-1-[4-[4-(3-哌嗪-1-基丙基)哌嗪-1-基]苯基]-3-哌啶基]氧基]哒嗪-3-基]苯酚(55mg,96.0umol)和连接酶75(42.39mg,96.0umol)在DMF(1.5mL)中的溶液先后加入(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)二甲基氨基-吗啉代-碳六氟磷酸盐(COMU)(61.6mg,144umol)和DIPEA(62.0mg,480umol,83.6uL)，并将反应混合物在室温搅拌16h。将反应混合物用水稀释，并且用二氯甲烷萃取。将有机层用水、盐水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。通过制备型-HPLC纯化粗残余物，以得到标题化合物(9.28mg，8.09umol，8％产率)，为灰白色固体，三氟乙酸盐。MS(ESI)：996.3([M+H]+)。

Claims (26)

1.一种式(I)化合物
Figure FDA0003621438300000011
或其药用盐，其中：
所述靶向配体具有式(TL)：
Figure FDA0003621438300000012
其中：
R1和R2各自独立地选自由以下项组成的组：氢和卤素；
R3选自由以下项组成的组：氨基和羟基；
Z1为：
(i)不存在；
(ii)–O–；或
(iii)–O-C1-C6-烷基二基-CH(C6-C10-芳基)-C1-C6-烷基二基-NHC(O)–；
Cy1为任选地被1-3个取代基R4取代的3-14元杂环基；
Z2为：
(i)不存在；
(ii)羰基；
(iii)–NH–；
(iv)-C1-C6-烷基二基-；
(v)-C1-C6-烷基二基-NH-；
(vi)–O(CH2)a–；
(vii)–C(O)NH(CH2)b–；
(viii)–(CH2)cNHC(O)(CH2)dX1–；
(ix)–O-C1-C6-烷基二基–C(O)–；
(x)–O-C1-C6-烷基二基-C(O)NH–；或
(xi)–CH2N(C1-C6-烷基)CH2–；
Cy2为：
(i)不存在；
(ii)任选地被1-3个取代基R5取代的C6-C10-芳基；
(iii)任选地被1-3个取代基R6取代的C3-C10-环烷基；
(iv)任选地被1-3个取代基R7取代的3-14元杂环基；或
(v)任选地被1-3个取代基R8取代的5-14元杂芳基；
Z3为：
(i)不存在；
(ii)–X2(CH2)e–；或
(iii)–(CH2)eX2–；
Cy3为：
(i)不存在；
(ii)任选地被1-3个取代基R9取代的C6-C10-芳基；
(iii)任选地被1-3个取代基R10取代的C3-C10-环烷基；或
(iv)任选地被1-3个取代基R11取代的3-14元杂环基；
a、b、c、d和e各自独立地为选自0、1、2、3、4、5和6的整数；
X1为：
(i)不存在；
(ii)–NH–；或
(iii)-O-；
X2为：
(i)不存在；
(ii)羰基；
(iii)–O–；或
(iv)–NHC(O)–；
R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10和R11各自独立地选自由以下项组成的组：羟基、氨基、氰基、卤素、C1-C6-烷基、C1-C6-烷氧基、卤代-C1-C6-烷基、卤代-C1-C6-烷氧基、氨基-C1-C6-烷基、(C1-C6-烷基)2N-C1-C6-烷基–、(C1-C6-烷基)2N-C1-C6-烷氧基–、C1-C6-烷基-NH-C1-C6-烷基–、C1-C6-烷基-NH-C(O)–、C1-C6-烷基-C(O)-NH–、3-14元杂环基、3-14元杂环基氧基、3-14元杂环基-C1-C6-烷基、3-14元杂环基-C1-C6-烷氧基和C6-C10-芳基；并且
波形线指示与接头的连接点；
所述接头为共价键或选自由以下项组成的组：式L-1至L-23；
Figure FDA0003621438300000031
Figure FDA0003621438300000041
其中：
X3和X4独立地选自由以下项组成的组：CH和N；
R12和R13独立地选自由以下项组成的组：氢和C1-C6-烷基；或
R12和R13与它们所连接的碳原子一起形成C3-C10-环烷基环；
R14、R15、R16和R17独立地选自由以下项组成的组：氢和C1-C6-烷基；
RL1a和RL1b各自独立地选自由以下项组成的组：氢、C1-C6-烷基、卤代-C1-C6-烷基、C1-C6-烷氧基、卤代-C1-C6-烷氧基、C3-C10-环烷基、3-14元杂环基、C6-C10-芳基和5-14元杂芳基；
f、g、h、i、k、m、n、p、q、r、s、t、u、v、w、x、y、z和aa各自独立地为选自0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13和14的整数；
Y1、Y2、Y3、Y4、Y5、Y6、Y7、Y8和Y9各自独立地为不存在或选自由以下项组成的组：–O–、–NH–、–N(C1-C6-烷基)–、–C1-C6-烷基二基–、–NH-C1-C6-烷基二基–、–O-C1-C6-烷基二基–、羰基、–NHC(O)–、–N(C1-C6-烷基)-C(O)–、–C(O)-N(C1-C6-烷基)–和–C(O)NH–；
波形线的每次出现指示所述接头与所述靶向配体或与降解决定子的连接点；并且
所述降解决定子选自由以下项组成的组：式(DG-1)、(DG-2)、(DG-3)和(DG-4)：
Figure FDA0003621438300000051
其中：
X5为CH或N；
X6为CH2或C(O)；
每个R18独立地选自由以下项组成的组：氢、卤素和C1-C6-烷基；
R19选自由以下项组成的组：氢和C1-C6-烷基；
Y10为共价键、-O-或-NR-，其中R选自由以下项组成的组：氢、C1-C6-烷基、卤代-C1-C6-烷基、C3-C10-环烷基、3-14元杂环基、C6-C10-芳基和5-14元杂芳基；并且
波形线指示与所述接头的连接点。
2.根据权利要求1所述的式(I)化合物或其药用盐，其中所述靶向配体具有式(TL)，其中：
R1和R2各自独立地选自由以下项组成的组：氢和卤素；
R3选自由以下项组成的组：氨基和羟基；
Z1为：
(i)不存在；
(ii)–O–；或
(iii)–O-C1-C6-烷基二基-CH(C6-C10-芳基)-C1-C6-烷基二基-NHC(O)–；
Cy1为任选地被R4取代的3-14元杂环基；
Z2为：
(i)不存在；
(ii)羰基；
(iii)–O(CH2)a–；
(iv)–C(O)NH(CH2)b–；
(v)–(CH2)cNHC(O)(CH2)dX1–；
(vi)–O-C1-C6-烷基二基-C(O)NH–；或
(vii)–CH2N(C1-C6-烷基)CH2–；
Cy2为：
(i)不存在；
(ii)任选地被R5取代的C6-C10-芳基；
(iii)C3-C10-环烷基；
(iv)3-14元杂环基；或
(v)5-14元杂芳基；
Z3为：
(i)不存在；
(ii)–X2(CH2)e–；或
(iii)–(CH2)eX2–；
Cy3为：
(i)不存在；
(ii)C6-C10-芳基；
(iii)C3-C10-环烷基；或
(iv)3-14元杂环基；
a为0、1或2；
b为0或1；
c、d和e各自独立地为选自0、1、2和3的整数；
X1为：
(i)不存在；
(ii)–NH–；或
(iii)-O-；
X2为：
(i)不存在；
(ii)羰基；
(iii)–O–；或
(iv)–NHC(O)–；
R4为C6-C10-芳基；
R5选自由以下项组成的组：卤素、C1-C6-烷基和卤代-C1-C6-烷基；并且
波形线指示与所述接头的连接点。
3.根据权利要求1所述的式(I)化合物或其药用盐，其中所述靶向配体具有式(TL)，其中：
R1选自由以下项组成的组：氢和卤素；
R2为氢；
R3为羟基；
Z1为不存在；
Cy1为任选地被R4取代的3-14元杂环基；
Z2为：
(i)不存在；
(ii)羰基；或
(iii)–C(O)NHCH2–；
Cy2为：
(i)C6-C10-芳基；
(ii)3-14元杂环基；或
(iii)5-14元杂芳基；
Z3为–X2(CH2)e–；
Cy3为3-14元杂环基；
e为选自0、1和2的整数；
X2为：
(i)不存在；或
(ii)-O-；
R4为C6-C10-芳基；并且
波形线指示与所述接头的连接点。
4.根据权利要求1所述的式(I)化合物或其药用盐，其中所述靶向配体具有式(TL)，其中：
R1选自由以下项组成的组：氢和氟；
R2为氢；
R3为羟基；
Z1为不存在；
Cy1选自由以下项组成的组：
Figure FDA0003621438300000081
其任选地被R4取代；其中每条波形线指示与Z2或与式(TL)的剩余部分的连接点；
Z2为：
(i)不存在；
(ii)羰基；或
(iii)–C(O)NHCH2–；
Cy2为
(i)苯基；
(ii)3-14元杂环基，选自：
Figure FDA0003621438300000082
其中每条波形线指示与Z2或Z3的连接点；或
(iii)嘧啶基；
Z3为–X2(CH2)e–；
Cy3为3-14元杂环基，选自：
Figure FDA0003621438300000091
其中每条波形线指示与Z3或所述接头的连接点；
e为选自0、1和2的整数；
X2为：
(i)不存在；或
(ii)-O-；
R4为苯基；并且
波形线指示与所述接头的连接点。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的式(I)化合物或其药用盐，其中所述接头为共价键或选自由以下项组成的组：式L-1至L-23，其中：
X3和X4独立地选自由以下项组成的组：CH和N；
R12和R13独立地选自由以下项组成的组：氢和C1-C6-烷基；或
R12和R13与它们所连接的碳原子一起形成C3-C10-环烷基环；
R14为氢或C1-C6-烷基；
R15为氢；
R16为C1-C6-烷基；
R17为氢；
f为选自1、2、5、6、7、8、9的整数；
g为选自3、6、8、9、10、11、14的整数；
h为2，
i为选自0、1、2、3的整数；
k为3；
m为1；
n为选自8和12的整数；
p为选自0、1和8的整数；
q为7；
r为选自0和1的整数；
s为4；
t为9；
u为4；
v为1；
w为4；
x为选自2和4的整数；
y为选自1和3的整数；
z为1；
aa为选自0、1和8的整数；
Y1为–O–或–NH–；
Y2为–O–、–NH–、–C1-C6-烷基二基–或–NH-C1-C6-烷基二基–；
Y3为不存在、–O-C1-C6-烷基二基–或羰基；
Y4为–O–、–NH–、–N(C1-C6-烷基)–或–C1-C6-烷基二基–；
Y5为不存在或羰基；
Y6为不存在、羰基、–O–、–NHC(O)–、–C(O)-N(C1-C6-烷基)–或–C(O)NH–；
Y7为不存在或–C1-C6-烷基二基–；
Y8为不存在或–O–；
Y9为–NH–；并且
波形线的每次出现指示所述接头与所述靶向配体或与所述降解决定子的连接点。
6.根据权利要求1至4中任一项所述的式(I)化合物或其药用盐，其中所述接头为共价键或选自由以下项组成的组：式L-4、L-8、L-13和L-23，其中：
i为选自0、2和3的整数；
p为选自0和1的整数；
aa为0；
Y5为不存在；
Y6为不存在、羰基、–O–或–C(O)-N(C1-C6-烷基)–；
Y8为不存在或–O–；并且
波形线的每次出现指示所述接头与所述靶向配体或与所述降解决定子的连接点。
7.根据权利要求1至4中任一项所述的式(I)化合物或其药用盐，其中所述接头为共价键或选自由以下项组成的组：式L-4、L-8、L-13和L-23，其中：
i为选自0、2和3的整数；
p为选自0和1的整数；
aa为0；
Y5为不存在；
Y6为不存在、羰基、–O–或–C(O)-NCH3–；
Y8为不存在或–O–；并且
波形线的每次出现指示所述接头与所述靶向配体或与所述降解决定子的连接点。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的式(I)化合物或其药用盐，其中所述降解决定子选自由以下项组成的组：式(DG-1)和(DG-2)，其中：
X5为CH或N；
X6为CH2或C(O)；
R18为氢；
Y10为共价键、–O–或–NH–；并且
波形线指示与所述接头的连接点。
9.根据权利要求1至7中任一项所述的式(I)化合物或其药用盐，其中所述降解决定子选自由以下项组成的组：式(DG-1)和(DG-2)，其中：
X5为CH；
X6为C(O)；
R18为氢；
Y10为–NH–；并且
波形线指示与所述接头的连接点。
10.根据权利要求1所述的式(I)化合物或其药用盐，其中所述靶向配体具有式(TL)，其中：
R1和R2各自独立地选自由以下项组成的组：氢和卤素；
R3选自由以下项组成的组：氨基和羟基；
Z1为：
(i)不存在；
(ii)–O–；或
(iii)–O-C1-C6-烷基二基-CH(C6-C10-芳基)-C1-C6-烷基二基-NHC(O)–；
Cy1为任选地被R4取代的3-14元杂环基；
Z2为：
(i)不存在；
(ii)羰基；
(iii)–O(CH2)a–；
(iv)–C(O)NH(CH2)b–；
(v)–(CH2)cNHC(O)(CH2)dX1–；
(vi)–O-C1-C6-烷基二基-C(O)NH–；或
(vii)–CH2N(C1-C6-烷基)CH2–；
Cy2为：
(i)不存在；
(ii)任选地被R5取代的C6-C10-芳基；
(iii)C3-C10-环烷基；
(iv)3-14元杂环基；或
(v)5-14元杂芳基；
Z3为：
(i)不存在；
(ii)–X2(CH2)e–；或
(iii)–(CH2)eX2–；
Cy3为：
(i)不存在；
(ii)C6-C10-芳基；
(iii)C3-C10-环烷基；或
(iv)3-14元杂环基；
a为0、1或2；
b为0或1；
c、d和e各自独立地为选自0、1、2和3的整数；
X1为：
(i)不存在；
(ii)–NH–；或
(iii)-O-；
X2为：
(i)不存在；
(ii)羰基；
(iii)–O–；或
(iv)–NHC(O)–；
R4为C6-C10-芳基；
R5选自由以下项组成的组：卤素、C1-C6-烷基和卤代-C1-C6-烷基；并且
波形线指示与所述接头的连接点；
其中所述接头为共价键或选自由以下项组成的组：式L-1至L-23，其中：
X3和X4独立地选自由以下项组成的组：CH和N；
R12和R13独立地选自由以下项组成的组：氢和C1-C6-烷基；或
R12和R13与它们所连接的碳原子一起形成C3-C10-环烷基环；
R14为氢或C1-C6-烷基；
R15为氢；
R16为C1-C6-烷基；
R17为氢；
f为选自1、2、5、6、7、8、9的整数；
g为选自3、6、8、9、10、11、14的整数；
h为2，
i为选自0、1、2、3的整数；
k为3；
m为1；
n为选自8和12的整数；
p为选自0、1和8的整数；
q为7；
r为选自0和1的整数；
s为4；
t为9；
u为4；
v为1；
w为4；
x为选自2和4的整数；
y为选自1和3的整数；
z为1；
aa为选自0、1和8的整数；
Y1为–O–或–NH–；
Y2为–O–、–NH–、–C1-C6-烷基二基–或–NH-C1-C6-烷基二基–；
Y3为不存在、–O-C1-C6-烷基二基–或羰基；
Y4为–O–、–NH–、–N(C1-C6-烷基)–或–C1-C6-烷基二基–；
Y5为不存在或羰基；
Y6为不存在、羰基、–O–、–NHC(O)–、–C(O)-N(C1-C6-烷基)–或–C(O)NH–；
Y7为不存在或–C1-C6-烷基二基–；
Y8为不存在或–O–；
Y9为–NH–；并且
波形线的每次出现指示所述接头与所述靶向配体或与所述降解决定子的连接点；并且
其中所述降解决定子选自由以下项组成的组：式(DG-1)和(DG-2)，其中：
X5为CH或N；
X6为CH2或C(O)；
R18为氢；
Y10为共价键、–O–或–NH–；并且
波形线指示与所述接头的连接点。
11.根据权利要求1所述的式(I)化合物或其药用盐，其中所述靶向配体具有式(TL)，其中：
R1选自由以下项组成的组：氢和卤素；
R2为氢；
R3为羟基；
Z1为不存在；
Cy1为任选地被R4取代的3-14元杂环基；
Z2为：
(i)不存在；
(ii)羰基；或
(iii)–C(O)NHCH2–；
Cy2为：
(i)C6-C10-芳基；
(ii)3-14元杂环基；或
(iii)5-14元杂芳基；
Z3为–X2(CH2)e–；
Cy3为3-14元杂环基；
e为选自0、1和2的整数；
X2为：
(i)不存在；或
(ii)-O-；
R4为C6-C10-芳基；并且
波形线指示与所述接头的连接点；
其中所述接头为共价键或选自由以下项组成的组：式L-4、L-8、L-13和L-23，其中：
i为选自0、2和3的整数；
p为选自0和1的整数；
aa为0；
Y5为不存在；
Y6为不存在、羰基、–O–或–C(O)-N(C1-C6-烷基)–；
Y8为不存在或–O–；并且
波形线的每次出现指示所述接头与所述靶向配体或与所述降解决定子的连接点；并且
其中所述降解决定子选自由以下项组成的组：式(DG-1)和(DG-2)，其中：
X5为CH；
X6为C(O)；
R18为氢；
Y10为–NH–；并且
波形线指示与所述接头的连接点。
12.根据权利要求1所述的式(I)化合物或其药用盐，其中所述靶向配体具有式(TL)，其中：
R1选自由以下项组成的组：氢和氟；
R2为氢；
R3为羟基；
Z1为不存在；
Cy1选自由以下项组成的组：
Figure FDA0003621438300000161
其任选地被R4取代；其中每条波形线指示与Z2或与式(TL)的剩余部分的连接点；
Z2为：
(i)不存在；
(ii)羰基；或
(iii)–C(O)NHCH2–；
Cy2为
(i)苯基；
(ii)3-14元杂环基，选自：
Figure FDA0003621438300000171
其中每条波形线指示与Z2或Z3的连接点；或
(iii)嘧啶基；
Z3为–X2(CH2)e–；
Cy3为3-14元杂环基，选自：
Figure FDA0003621438300000172
其中每条波形线指示与Z3或所述接头的连接点；
e为选自0、1和2的整数；
X2为：
(i)不存在；或
(ii)-O-；
R4为苯基；并且
波形线指示与所述接头的连接点；
其中所述接头为共价键或选自由以下项组成的组：式L-4、L-8、L-13和L-23，其中：
i为选自0、2和3的整数；
p为选自0和1的整数；
aa为0；
Y5为不存在；
Y6为不存在、羰基、–O–或–C(O)-NCH3–；
Y8为不存在或–O–；并且
波形线的每次出现指示所述接头与所述靶向配体或与所述降解决定子的连接点；并且
其中所述降解决定子选自由以下项组成的组：式(DG-1)和(DG-2)，其中：
X5为CH；
X6为C(O)；
R18为氢；
Y10为–NH–；并且
波形线指示与所述接头的连接点。
13.根据权利要求1所述的式(I)化合物或其药用盐，其中所述式(I)化合物选自实例1至204。
14.根据权利要求1所述的式(I)化合物或其药用盐，其中所述式(I)化合物选自实例34、35、36、46、55、84、95、96、100、113、113、114、118、127、142、143、149、149、158、159、161、170、190和191。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的式(I)化合物或其药用盐，其用作治疗活性物质。
16.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至14中任一项所述的式(I)化合物或其药用盐，以及治疗惰性载体。
17.根据权利要求16所述的组合物，其进一步包含另外的治疗剂。
18.根据权利要求16所述的组合物，其中所述另外的治疗剂为化疗剂。
19.根据权利要求1至14中任一项所述的式(I)化合物或其药用盐，其用于治疗SMARCA2介导的疾病。
20.根据权利要求19所使用的化合物，其中所述SMARCA2介导的疾病为癌症。
21.根据权利要求20所使用的化合物，其中所述癌症选自由以下项组成的组：听觉神经瘤，急性白血病，急性淋巴细胞性白血病，急性髓细胞性白血病(单核细胞性，成髓细胞性，腺癌，血管肉瘤，星形细胞瘤，髓单核细胞性和早幼粒细胞性)，急性T细胞白血病，基底细胞癌，胆管癌，膀胱癌，脑癌，乳腺癌，支气管癌，宫颈癌，软骨肉瘤，脊索瘤，绒毛膜癌，慢性白血病，慢性淋巴细胞性白血病，慢性髓细胞性(粒细胞性)白血病，慢性髓细胞性白血病，结肠癌，结直肠癌，颅咽管瘤，囊腺癌，弥漫性大B细胞淋巴瘤，不良增殖变化(发育异常和化生)，胚胎性癌，子宫内膜癌，内皮肉瘤，室管膜瘤，上皮癌，红白血病，食道癌，雌激素受体阳性乳腺癌，原发性血小板增多症，尤因氏肿瘤，纤维肉瘤，滤泡性淋巴瘤，生殖细胞睾丸癌，胶质瘤，成胶质细胞瘤，胶质肉瘤，重链疾病，血管母细胞瘤，肝癌，肝细胞癌，激素不敏感性前列腺癌，平滑肌肉瘤，白血病，脂肪肉瘤，肝癌，肺癌，淋巴管内皮肉瘤，淋巴管肉瘤，淋巴母细胞白血病，淋巴瘤(霍奇金氏和非霍奇金氏淋巴瘤；伯基特淋巴瘤)，膀胱、乳腺、结肠、肺、卵巢、胰腺、前列腺、皮肤和子宫的恶性肿瘤和过度增殖性疾病，T细胞或B细胞起源的淋巴样恶性肿瘤，髓样癌，髓母细胞瘤，黑素瘤，脑膜瘤，间皮瘤，多发性骨髓瘤，髓细胞性白血病，骨髓瘤，粘液肉瘤，神经母细胞瘤，NUT中线癌(NMC)，非小细胞肺癌，少突胶质细胞瘤，口腔癌，成骨肉瘤，卵巢癌，胰腺癌，乳头状腺癌，乳头状癌，松果体瘤，真性红细胞增多症，前列腺癌，直肠癌，肾细胞癌，视网膜母细胞瘤，恶性横纹肌样瘤(MRT)，横纹肌肉瘤，肉瘤，皮脂腺癌，精原细胞瘤，皮肤癌，小细胞肺癌，实体瘤(癌和肉瘤)，小细胞肺癌，胃癌，鳞状细胞癌，滑膜瘤，汗腺癌，甲状腺癌、华氏巨球蛋白血症，睾丸肿瘤，子宫癌和威尔姆斯瘤。
22.根据权利要求20所使用的化合物，其中所述癌症选自由以下项组成的组：肝细胞癌、结肠的恶性肿瘤和过度增殖性疾病(例如结肠癌)、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、黑素瘤和卵巢癌。
23.一种治疗受试者中SMARCA2介导的疾病的方法，其包括向所述受试者施用根据权利要求1至14中任一项所述的式(I)化合物或其药用盐。
24.根据权利要求1至14中任一项所述的式(I)化合物或其药用盐在根据权利要求22所述的方法中的用途。
25.根据权利要求1至14中任一项所述的式(I)化合物或其药用盐在制备用于治疗受试者中SMARCA2介导的疾病的药物中的用途。
26.如前所述的本发明。
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