KR102032400B1

KR102032400B1 - 퇴행성 관절 질환의 치료

Info

Publication number: KR102032400B1
Application number: KR1020147011704A
Authority: KR
Inventors: 데이비드 바-오르; 제임스 브이. 빈클러
Original assignee: 앰피오 파마슈티컬스 인코퍼레이티드
Priority date: 2011-10-10
Filing date: 2012-10-10
Publication date: 2019-10-15
Also published as: US20140256642A1; ZA201403350B; US8980834B2; IL231121A0; HK1198431A1; EP2766029B1; AU2012323305A1; CA2846598C; US20170274039A1; US9623072B2; EP3721884A1; MX362164B; CA2846598A1; EA028343B1; EP2766029A4; AU2017245341B2; US20150352175A1; US20210100873A1; US20190314448A1; CN104958752A

Abstract

본 발명은 퇴행성 관절 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 아스파라긴산과 알라닌(DA-DKP)의 아미노산 곁사슬(side chain)과 다이케토피페라진(diketopiperazine)을 포함하는 제약 조성물의 유효량을 투여하는 것을 포함한다. 본 발명은 또한 의약품뿐만 아니라 DA-DKP를 포함하는 키트를 제공한다.

Description

퇴행성 관절 질환의 치료 {TREATMENT OF DEGENERATIVE JOINT DISEASE}

관련 출원에 대한 상호 참조

본 출원은 35 U.S.C.§119(e) 하에서 2011년 10월 10일 출원된 가출원 제 61/545,474호 및 2011년 11월 17일 출원된 제 61/561,221호에 대한 우선권의 이익을 주장한다. 각각의 미국 가출원 제 61/545,474호 및 제 61/561,221호의 전체 개시내용은 참조로서 본 명세서에 인용된다.

본 발명은 퇴행성 관절 질환의 치료 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 아스파트산(aspartic acid) 및 알라닌(alanine)의 아미노산 곁사슬(side chain)을 가진 다이케토피페라진(diketopiperazine)(DA-DKP)을 포함하는 약학적 제품의 유효량의 투여를 포함한다.

퇴행성 관절염은 관절염의 가장 일반적인 형태로, 미국 내에서 2,500만명 내지 3,500만명에 영향을 미친다. 퇴행성 관절염의 만성 통증 및 장애는 시간이 지남에 따라 점차적으로 악화되는 관절 연골 및 뼈의 염증 반응에 의해 발생한다. 무릎의 증상성 골관절염(Symptomatic osteoarthritis)은 60세 이상인 사람들의 10% 내지 13%의 사람들에서 발생한다. 무릎 관절염은 걷거나 계단을 오르는데에 도움을 필요로 하는 것과 같이 다른 어떤 질병보다 65세 이상인 사람들의 이동성의 손실 위험을 증가시킨다.

현재 무릎 관절염에 대한 약물 치료는 진통제, 비스테로이드성 항 염증성 약물(non-steroidal anti-inflammatory drugs, NSAIDs) 및 관절 내 스테로이드 주사에 한정되어 있으며, 상기 모든 방법은 부작용으로 인해 상당한 제한을 가진다. 이러한 치료법에도 불구하고 만성 무릎 관절염은 종종 총 관절 치환술을 필요로 하는 점진적인 장애의 원인이 된다. 노인 및 비만인구로 인한 무릎 관절염 보급의 증가는, 광범위한 수술 치료의 필요성을 미루고 점진적으로 제거할 수 있는 안전하고 효과적인 무릎부분의 치료의 성장을 제안한다.

발명의 요약

본 발명의 실시예는 DA-DKP를 포함하는 약학적 조성물의 유효량을 이를 필요로 하는 동물에 투여함으로써 퇴행성 관절 질환을 치료하는 방법에 관한 것이다. 한 측면에서, 상기 퇴행정 관절 질환은 관절염이다.

다른 측면에서, 상기 조성물은 6개월마다 한번, 5개월마다 한번, 4개월마다 한번, 3개월마다 한번, 또는 2개월마다 한번보다 더 자주 투여되지 않는다.

또 다른 측면에서, 상기 조성물은 다양한 투여 경로에 의해 투여될수 있다. 예를 들면, 상기 투여 경로는 국부 투여(local administration), 국소 투여(topical administration), 또는 주사(injection)일 수 있다. 한 측면에서, 주사에 의한 투여는 관절 내 주사이다. 또 다른 측면에서, 관절 내 주사된 조성물은 약 50μM 내지 약 350μM 농도의 DA-DKP를 가진 조성물이다.

또 다른 측면에서, 상기 조성물은 N-아세틸-트립토판(N-acetyl-tryptophan, NAT), 카프릴산(caprylic acid), 카프릴레이트(caprylate), 또는 이것들의 조합을 더 포함한다. 또 다른 측면에서, 상기 조성물 내의 NAT, 카프릴산(caprylic acid), 카프릴레이트(caprylate) 또는 이것들의 조합의 농도는 약 4mM 내지 약 20mM 일 수 있다.

상기 방법의 또 다른 측면에서, 조성물 내의 상기 DA-DKP는 인간 혈청 알부민 조성물의 용액으로부터 알부민을 제거하는 것으로 제조된 것이다. 예를 들면, 상기 제거 단계는 인간 혈청 알부민의 분리 방법에 의한 처리에 의한 것일 수 있다. 이와 같은 분리 방법은 한외여과(ultrafiltration), 설탕 밀도구배 원심분리(sucrose gradient centrifugation), 크로마토그래피(chromatography), 염 침전(salt precipitation) 및 초음파 분리(sonication)를 포함할 수 있다. 게다가, 상기 제거 단계는 인간 혈청 알부민 조성물을 알부민을 얻을 수 있는 분자량 컷 오프(cut off)와 함께 한외여과(ultrafiltration) 막을 통해 통과시킴으로써 수행될 수 있으며, 그 여과액은 상기 DA-DKP를 포함한다. 한 측면에서, 상기 한외여과(ultrafiltration) 막은 50kDa 미만의 분자량 컷 오프를 가진다. 또 다른 측면에서, 상기 한외여과(ultrafiltration) 막은 40kDa 미만, 30kDa 미만, 20kDa 미만, 10kDa 미만, 5kDa 미만, 또는 3kDa 미만의 분자량 컷 오프를 가진다. 또 다른 측면에서, 이 조성물은 NAT, 카프릴산(caprylic acid), 카프릴레이트(caprylate) 또는 이것들의 조합을 더 포함한다. 또 다른 측면에서, 상기 NAT, 카프릴산(caprylic acid), 카프릴레이트(caprylate) 또는 이것들의 조합의 농도는 약 4mM 내지 약 20mM 일 수 있다.

다른 측면에서, 본 발명의 방법은 두번째 약물을 투여하는 것을 더 포함할 수 있다. 예를 들면, 상기 두번째 약물은 진통제, 항-염증 약물, 또는 이들의 조합일 수 있다.

본 발명의 또다른 실시예는 주사에 의한 투여용으로 제작된 DA-DKP를 포함하는 조성물을 포함하는 약학적 제품이다. 한 측면에서, 상기 제품은 관절 내 주사를 위해 제작된다. 또 다른 측면에서, 상기 DA-DKP는 인간 혈청 알부민 조성물 용액으로부터 알부민을 제거함으로써 제조된다. 한 측면에서, 상기 제거 단계는 인간 혈청 알부민의 분리 방법에 의한 처리에 의한 것일 수 있다. 예를 들면, 상기 분리 방법은 한외여과(ultrafiltration), 설탕 밀도구배 원심분리(sucrose gradient centrifugation), 크로마토그래피(chromatography), 염 침전(salt precipitation) 및 초음파 분리(sonication)를 포함할 수 있다. 게다가, 상기 제거 단계는 인간 혈청 알부민 조성물을 알부민을 얻을 수 있는 분자량 컷 오프(cut off)와 함께 한외여과(ultrafiltration) 막을 통해 통과시킴으로써 수행될 수 있으며, 그 여과액은 상기 DA-DKP를 포함한다. 한 측면에서, 상기 한외여과(ultrafiltration) 막은 50kDa 미만의 분자량 컷 오프를 가진다. 또 다른 측면에서, 상기 한외여과(ultrafiltration) 막은 40kDa 미만, 30kDa 미만, 20kDa 미만, 10kDa 미만, 5kDa 미만, 또는 3kDa 미만의 분자량 컷 오프를 가진다.

한 측면에서, 상기 주사에 의한 관절 내 투여되는 약학적 제품의 DA-DKP는 약 50μM 내지 약 350μM 농도의 DA-DKP를 가진 조성물이다.

또 다른 측면에서, 상기 제품은 NAT, 카프릴산(caprylic acid), 카프릴레이트(caprylate) 또는 이것들의 조합을 더 포함하는 DA-DKP 조성물을 포함한다. 또 다른 측면에서, 상기 제품의 NAT, 카프릴산(caprylic acid), 카프릴레이트(caprylate) 또는 이것들의 조합의 농도는 약 4mM 내지 약 20mM 일 수 있다.

또 다른 측면에서, 약학적 제품은 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함한다. 본 발명의 또 다른 실시예는 약학적 제품을 포함하는 키트에 관한 것이다. 한 측면에서 상기 제품은 주사에 의한 투여용으로 제조된 DA-DKP-함유 조성물을 포함한다. 또 다른 측면에서, 상기 키트 내의 DA-DKP는 인간 혈청 알부민 조성물 용액으로부터 알부민을 제거함으로써 제조된다.

도 1은, 한쪽 무릎에 스테로이드(베타메타손, betamethasone)/ 리도카인 현탁액(lidocaine suspension)과 결합된 Ampion™(<5000MW 분획) 10ml의 단일 주사 처리된 피험자 또는 스테로이드(베타메타손, betamethasone)/ 리도카인 현탁액(lidocaine suspension)과 결합된 식염수 위약(saline placebo)이 주사된 피험자를 위한 통증 점수식 평가 척도(pain numerical rating scale, pain NRS)내의 평균 변화를 보여준다. 상기 점수는 첫째날 투여 후 6시간, 둘째날 투여 후 24시간, 넷째날 투여 후 72시간째에 완성되었다.
도 2는 도 1에서 나타난 바와 같이 통증 점수식 평가 척도의 평균 변화를 나타내고, 반복 측정 분산분석(repeated measures analysis of variance(ANOVA))도 포함한다.
도 3A는 도 1에서 설명한 치료를 위한 24시간에서 WOMAC(Western Ontario McMaster University Osteoarthritis Index 3.1) 통증 영역점수의 절대차를 나타낸다.
도 3B는 도 1에서 설명한 치료를 위한 72시간에서 WOMAC(Western Ontario McMaster University Osteoarthritis Index 3.1) 통증 영역점수의 절대차를 나타낸다.
도 4A는 도 1에서 설명한 치료를 위한 24시간에서 WOMAC(Western Ontario McMaster University Osteoarthritis Index 3.1) 강성(stiffness) 영역점수의 절대차를 나타낸다.
도 4B는 도 1에서 설명한 치료를 위한 72시간에서 WOMAC(Western Ontario McMaster University Osteoarthritis Index 3.1) 강성(stiffness) 영역점수의 절대차를 나타낸다.
도 5A는 도 1에서 설명한 치료를 위한 24시간에서 WOMAC(Western Ontario McMaster University Osteoarthritis Index 3.1) 기능(function) 영역점수의 절대차를 나타낸다.
도 5B는 도 1에서 설명한 치료를 위한 72시간에서 WOMAC(Western Ontario McMaster University Osteoarthritis Index 3.1) 기능(function) 영역점수영역점수를 나타낸다.
도 6은 가능한 스테로이드 시간적 처리(time course)를 나타낸다.
도 7은 모든 피험자 visits에 걸쳐 기준선으로부터의 평균 변화를 나타낸다. ("LS" 는 최소 제곱(least square)의 약자)

본 발명은 퇴행성 관절 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 그 처리는 그것을 필요로 하는 개인에게 아스파틸-알라닐 다이케토피페라진(aspartyl-alanyl-diketopiperazine, DA-DKP)을 포함하는 약학적 조성물의 유효량을 투여하는 것을 포함한다. DA-DKP는 전사(transcription) 수준에서의 여러 염증 전(pro-inflammatory) 사이토카인(cytokine), 케모카인(chemokine) 및 신호전달 물질(signaling molecule)의 억제, T-세포 및 단핵구(monocyte)의 이동 및 부착 억제, G-연결 단백질 수용체(G-coupled protein receptor) 수준의 활성, 액틴-의존성세포골격 이벤트(event)상의 활성, 혈관 투과성(vascular permeability)의 감소 및 혈소판 활성인자(platelet activating factor)에 의해 유발되는 염증의 억제를 포함한 여러 항-염증(anti-inflammatory) 및 면역 조절 효과를 가진다. 하기에서 보다 상세히 설명한 바와 같이, 퇴행성 관절 질환에 대한 DA-DKP의 효과는 예상치 못하게 오래 지속되는 것으로 밝혀졌고 일부 연구에서는 스테로이드 사용시와 비교하여 시간이 증가하는 것으로 확인되었다.

또한 본 발명은 DA-DKP 조성물을 포함하는 약학적 제품을 제공한다. 상기 제품의 DA-DKP는 인간 혈청 알부민 용액으로부터 알부민을 제거함으로써 제조될 수 있다.

또한 본 발명은 주사에 의한 투여용으로 제형된 DA-DKP 조성물을 포함하는 키트를 제공한다.

퇴행성 관절 질환은 관절을 덮고 있는 관절 연골의 점진적인 악화이다. 퇴행성 관절 질환(관절염)은 체중부하 관절의 비 감염성 질병이다. 정상적인 관절 연골(articular joint cartilage)은 매끈하고, 하얗고, 투명하다. 이는 콜라겐, 단백질 다당류(protein polysaccharide), 및 물로 만들어진 스폰지-유사 기질(sponge-like matrix)내에 삽입되어 있는 연골 세포(cartilage cell, chondrocyte)로 구성된다. 초기 기본 관절염(primary arthritis)과 함께, 연골은 국소적 부분의 연화(softening), 표면의 거칠어짐(roughening)과 함께 노랗고 불투명하게 된다. 변성이 진행되면서, 상기 연화된 부분은 갈라지고 닳아서, 연골 아래의 뼈가 노출된다. 남은 연골들이 닳으면서, 상기 뼈는 재구성(remodel) 되고 밀도가 증가하기 시작한다. 결국 연골에 덮인 골극(osteophyte, 새로운 뼈의 돌기(spurs of new bone))이 관절의 가장자리(edge)에서 형성된다. 기계적 마모가 증가함에 따라, 연골은 수리를 필요로 한다. 상기의 연골세포는 충분한 스폰지-유사 기질을 생산할수 없으며 그러므로 손상된 연골은 스스로 복구할 수 없다. 상기 연골은 치유를 강화하는 혈액공급이 없다. 퇴행성 관절 질환의 대부분이 기계적인 불안정성 또는 관절 내의 노화에 따른 변화의 결과이다. 이것은 노인(old age) 퇴행성 관절염을 포함하고, ?은 개인들도, 예를들면, 부상, 타박상, 비정상적 관절 구성(i.e. 고관절 이형성증(hip dysplasia)), 또는 전방십자인대 파열(anterior cruciate ligament rupture), 슬개골 탈구(patellar luxation), 또는 이단성골연골염(osteochondritis dissecans)으로부터의 기계적인 마모의 결과 일 수 있다. 퇴행성 관절 질환은, 무릎, 엉덩이, 어깨, 손 및 척추를 포함하여 제한 없이, 신체의 모든 관절에서 발생할 수 있다.

기존의 퇴행성 관절 질환에 대한 약물 치료는 아세트아미노펜(acetaminophen), 비 스테로이드성(nonsteroidal) 항-염증 약물, 마약(narcotics), 코르티코스테로이드(corticosteroid)를 포함한다.

본 명세서에 사용된 "치료(treat)"는 증상, 기간, 질병의 중증도를 감소(전체적으로 또는 부분적으로)시키는 것을 의미한다.

본 발명의 DA-DKP를 포함하는 약학적 조성물은 치료를 필요로 하는 동물에게 투여된다. 바람직하게는, 상기 동물은 토끼, 염소, 개, 고양이, 말 또는 인간과 같은 포유류이다. 효과적인 투여량은 질병 또는 상태의 정도, 투여 경로, 치료 기간, 동물에게 투여된 다른 약물의 식별, 나이, 크기 및 동물의 종, 및 의료 및 수의학계에 알려진 다른 요인 등에 따라 변할 수 있다.

본 발명의 치료는 퇴행성 관절 질환의 증상에 오래 지속되는(long-lasting) 효과를 제공하기 때문에, 본 발명의 한 측면은 DA-DKP를 포함하는 조성물은 다른 기존의 치료에 대해 예상되는 것보다 더 긴 시간 간격으로 동물에게 투여될 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 조성물은 매 6개월 마다, 매 5개월마다, 매 4개월마다, 매 3개월마다, 매 2개월마다, 매 1개월마다, 매 4주마다, 매 3주마다, 매 2주마다 또는 매 1주마다 한번 이상 자주 투여되지 않을 수 있다.

DA-DKP를 포함하는 본 발명의 조성물은 국부적(locally), 비경구적 (e.g., 주사, 관절 내 주사, 정맥 내, 척수 내, 복강 내, 피하 또는 근육 내), 경피적, 및 국소적(topically) 투여를 포함하여 임의의 적절한 경로에 의해 치료를 위한 동물 환자에게 투여 될 수있다. 투여의 바람직한 경로는 관절 내 투여이다.

본 발명의 조성물은 약 10 μM , 약 20 μM , 약 30 μM , 약 40 μM , 약 50 μM , 약 60 μM , 약 70 μM, 약 80 μM , 약 90 μM , 약 100 μM , 약 110 μM , 약 120 μM , 약 130 μM , 약 140 μM , 약 150 μM , 약 160 μM , 약 170 μM , 약 180 μM , 약 190 μM , 약 200 μM , 약 210 μM , 약 220 μM , 약 230 μM , 약 240 μM , 약 240 , 약 250 μM , 약 260 μM , 약 270 μM , 약 280 μM , 약 290 μM , 약 300 μM , 약 310μM , 약 320 μM , 약 330 μM , 약 340 μM , 약 350 μM , 약 360 μM , 약 370 μM , 약 380 μM , 약 390 μM , 또는 약 400 μM의 낮은 종점(lower endpoint)의 DA-DKP 농도 범위를 가지는 약학적 용액일 수 있다. 본 발명의 조성물은 약 600 μM, 약 580 μM, 약 570 μM, 약 560 μM, 약 550 μM, 약 540 μM, 약 530 μM, 약 520 μM, 약 510 μM, 약 500 μM, 약 490 μM, 약 480 μM, 약 470 μM, 약 460 μM, 약 450 μM, 약 440 μM, 약 430 μM, 약 420 μM, 약 410 μM, 약 400 μM, 약 390 μM, 약 380 μM, 약 370 μM, 약 360 μM, 약 350, 약 340 μM, 약 330 μM, 약 320 μM, 약 310 μM, 약 300 μM, 약 290 μM, 약 280, 약 270 μM, 약 260 μM, 약 250 μM, 약 240 μM, 약 230 μM, 약 220 μM, 약 210 μM, 또는 약 200 μM의 높은 종점(upper endpoint)의 DA-DKP 농도 범위를 가지는 약학적 용액일 수 있다.

퇴행성 관절 질환 또는 증상을 치료하기 위한 본 발명의 조성물 내의 DA-DKP의 유효량은 약 10 μg, 약 15 μg, 약 20 μg, 약 25 μg, 약 30 μg, 약 35 μg, 약 40 μg, 약 45 μg, 약 50 μg, 약 55 μg, 약 60 μg, 약 65 μg, 약 70 μg, 약 75 μg, 약 80 μg, 약 85 μg, 약 90 μg, 약 95 μg, 약 100 μg, 약 110 μg, 약 120 μg, 약 130 μg, 약 140 μg, 약 150 μg, 약 160 μg, 약 170 μg, 약 180 μg, 약 190 μg, 약 200 μg, 약 210 μg, 약 220 μg, 약 230 μg, 약 240 μg, 약 250 μg, 약 260 μg, 약 270 μg, 약 280 μg, 약 290 μg, 약 300 μg, 약 310 μg, 약 320 μg, 약 330 μg, 약 340 μg, 약 350 μg, 약 360 μg, 약 370 μg, 약 380 μg, 약 390 μg, 약 400 μg, 약 425 μg, 약 450 μg, 약 475 μg 또는 약 500 μg의 낮은 종점(lower endpoint)을 가지는 범위일 수 있다. 또한, 퇴행성 관절 질환 또는 증상을 치료하기 위한 본 발명의 조성물 내의 DA-DKP의 유효량은 약 500 μg, 약 490 μg, 약 480 μg, 약 470 μg, 약 460 μg, 약 450 μg, 약 440 μg, 약 430 μg, 약 420 μg, 약 410 μg, 약 400 μg, 약 390 μg, 약 380 μg, 약 370 μg, 약 360 μg, 약 350 μg, 약 340 μg, 약 330 μg, 약 320 μg, 약 310 μg, 약 300 μg, 약 290 μg, 약 280 μg, 약 270 μg, 약 260 μg, 약 250 μg, 약 240 μg, 약 230 μg, 약 220 μg, 약 210 μg, 약 200 μg, 약 190 μg, 약 180 μg, 약 170 μg, 약 160 μg, 약 150 μg, 약 140 μg, 약 130 μg, 약 120 μg, 약 110 μg, 약 100 μg, 약 90 μg, 약 80 μg, 약 70 μg, 약 60 μg, 약 50 μg, 약 40 μg, 약 30 μg, or 약 20 μg의 높은 종점(upper endpoint)을 가지는 범위일 수 있다.

본 발명의 화합물의 국소(topical) 또는 경피(transdermal) 투여용 제형(dosage form)은 분말(powder), 스프레이(spray), 연고(ointment), 반죽(paste), 크림(cream), 로션(lotion), 젤(gel), 액제(solution), 패치(patch), 및 방울(drop)을 포함한다. 활성 성분(active ingredient)은 무균 조건하에서 약학적으로 허용 가능한 담체(carrier), 요구될 수 있는 버퍼(buffer), 또는 추진제(propellant)와 함께 혼합 될 수 있다.

연고(ointment), 반죽(paste), 크림(cream), 로션(lotion), 젤(gel)은, 활성 성분(active ingredient) 에 더하여, 동물성 및 식물성 지방, 기름(oil), 왁스(wax), 파라핀(paraffine), 전분(starch), 트래거캔스(tragacanth), 셀룰로오즈 유도체(cellulose derivative), 폴리에틸렌 그릴콜(polyethylene glycol), 실리콘(silicone), 벤토나이트(bentonite), 규산(silicic acid), 활석(talc) 및 산화 아연(zinc oxide), 또는 이들의 혼합물과 같은 부형제(excipient)를 포함할 수 있다.

분말(powder), 스프레이(spray)는 활성 성분(active ingredient) 에 더하여, 락토오즈(lactose), 활석(talc), 규산(silicic acid), 수산화 알루미늄(aluminum hydroxide), 칼슘 실리케이트(calcium silicate) 및 폴리아마이드 분말(polyamide powder) 또는 이와같은 물질들의 혼합물과 같은 부형제(excipient)를 포함할 수 있다. 스프레이(spray)는 또한 클로로플루오로하이드로카본(chlorofluorohydrocarbon), 및 부탄 및 프로판 같은 휘발성 미치환 탄화수소와 같은 관습적인(customary) 추진체를 포함할 수 있다.

경피적 패치(transdermal patch)는 신체에 본 발명의 화합물을 제어된 전달을 제공하는 추가적인 이점을 가지고 있다. 이러한 제형(dosage form)은 용해(dissolving), 분산(dispersing), 또는 그렇지 않으면 탄성 중합체 기질 물질(elastomeric matrix material)과 같은 적절한 배지에서 본 발명의 하나 또는 그이상의 화합물을 결합함으로써 제조될 수 있다. 흡수 향상제(absorption enhancer)는 또한 피부를 통한 화합물의 유동을 증가시키기 위해 사용될 수 있다. 이러한 유속(rate of flux)의 비율은 속도-제어 막(rate-controlling membrane) 또는 중합체 기질(polymer matrix) 또는 젤(gel)에 화합물을 분산시키는 것으로 제어될 수 있다.

비경구 투여에 적합한 본 발명의 약학적 조성물은, 하나 이상의 약학적으로 허용되는(pharmaceutically-acceptable) 멸균(sterile) 등장성(isotonic) 수성 또는 비수성 용액, 분산액(dispersion), 현탁액(suspension), 에멀젼(emulsion), 또는 사용에 앞서 멸균 주사 용액 또는 분산액으로 재구성 될 수 있고 항산화제(antioxidant), 버퍼, 제제(formulatioin)를 의도된 피투여자(recipient)의 피와 등장(isotonic)이 되도록 만드는 용질, 현탄제, 또는 증점제를 포함할 수 있는 멸균 분말(sterile powder)과 결합한 본 발명의 하나 이상의 화합물을 포함한다.

본 발명의 약학 조성물에 사용될 수 있는 적합한 수성(aqueous) 및 비수성(nonaqueous) 담체의 예로는 물, 에탄올, 폴리올(글리세롤, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 및 이와 유사한 것들), 및 이것들의 적합한 혼합물, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸 올레이트(ethyl oleate)와 같은 주사 가능한 유기 에스테르(organic ester)를 포함한다. 적절한 유동성은 유지될수 있으며, 그 예를들면, 레시틴(lecithin)과 같은 코팅 물질의 사용에 의하고, 분산액의 경우에는 요구되는 입자 크기의 유지에 의하고, 계면활성제(surfactant)의 사용에 의할 수 있다.

이러한 조성물은 또한 습윤제(wetting agents), 유화제(emulsifying agent), 분산제(dispersing agent)와 같은 보조제(adjuvant)를 포함할 수 있다. 또한 설탕, 염화 나트륨, 및 이와 비슷한 것같은 등장성 시제(isotonic agent)들을 화합물 내에 포함하는 것이 바람직 할 수 있다. 또한, 주사 가능한 약학적 형태의 연장된 흡수는 알루미늄 모노스테레이트(aluminum monosterate) 및 젤라틴(gelatin)과 같이 흡수를 지연시키는 시제(agent)의 포함에 의해 초래될 수 있다.

일부 경우에서, 약물의 효과를 연장시키기 위해, 피하 또는 근육 내 주사로부터 약물의 흡수를 느리게 하는 것이 바람직하다. 이것은 낮은 수용성을 가진 결정성 또는 무정형 물질의 액체 현탁액의 사용에 의해 달성될 수 있다. 이 후 약물의 흡수 속도는 이것의 용해속도, 다음으로 결정 크기 및 결정 형태에 의존한다. 또는, 비경구 투여 약물의 지연흡수는 오일 용제(oil vehicle)내에서 약물을 용해 또는 현탁하여 수행된다.

주사가능한 저장 형태(depot form)는 폴리락타이드-폴리클리콜라이드(polylactide-polyglycolide)와 같은 생분해성 중합체(biodegradable polymer)내에서 약물의 마이크로인캡슐 기질(microencapsule matrix) 형성으로 만들어진다. 약물 대 중합체의 비율 및 사용되는 특정 중합체의 특성에 따라, 약물 방출 속도는 조절될 수 있다. 다른 생분해성 중합체(biodegradable polymer)의 예시로는 폴리(오르르토에스테르(orthoester)) 및 폴리(무수물(anhydride))를 포함한다. 주사가능한 저장 제형(depot injectable formulation)은 또한 신체 조직과 호환되는 리포좀(liposome) 또는 마이크로에멀젼(microemulsion)에 약물을 포획시켜 제조된다. 주사 가능한 물질은, 예를들면 세균-고정 필터(bacterial-retaining filter)를 통해 여과됨으로써, 멸균될 수 있다.

제형은, 예를 들면 앰플 및 바이알(vial) 같은 단일-투여(unit-dose) 또는 다중 투여(multi-dose) 밀봉 용기로 제시될 수 있고, 사용 직전에 오로지 주사를 위한, 예를들면 물과 같은, 멸균 액체 담체의 첨가만을 필요로 하는 동결 건조 상태로 보관될 수도 있다. 즉석(extemporaneous) 주사 용액 및 현탁액은 상기 묘사된 형태의 멸균 분말, 과립(granule) 및 정제로부터 제조될 수 있다.

본 발명의 의약품을 포함하는 키트가 또한 제공된다. 키트는 주사에 의한 투여용으로 제형된 DA-DKP 조성물을 포함할 수 있다. 상기 DA-DKP는 인간 알부민 조성물 용액에서 알부민을 제거하는 것과 같이, 본 명세서에서 설명된 방법에 의해 제조될 수 있다. 상기 키트는, 예를 들면 앰플 및 바이알(vial) 같은 단일-투여(unit-dose) 또는 다중 투여(multi-dose) 밀봉 용기를 포함할 수 있고, 사용 직전에 오로지 주사를 위한, 예를들면 물과 같은, 멸균 액체 담체의 첨가만을 필요로 하는 동결 건조 상태로 보관될 수도 있다. 상기 키트는 또한, 내용물이 직접적인 사용 또는 주사를 위한 준비가 되어있는 상태로 저장될 수 있다.

본 발명의 화합물이 단독으로 투여되는 것은 가능하지만, 상기 화합물은 약학적 제제(조성물)로서 투여하는 것이 바람직하다. 본 발명의 약학적 조성물은 본 발명의 화합물 또는 하나 또는 그 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체 및, 추가적으로, 하나 또는 그 이상의 다른 화합물, 약물, 또는 다른 물질과 함께 혼합물의 형태인 유효성분(active ingredient)으로서의 화합물들을 포함한다. 각각의 담체는 제제의 다른 성분과 양립가능하고 동물에게 유해하지 않아야 한다는 의미에서 "허용 가능한" 것이어야 한다. 약학적으로 허용가능한 담체는 당업계에 공지되어 있다. 선택된 투여 경로에 관계없이, 본 발명의 화합물은 당업자에 알려진 통상적인 방법에 의해 약학적으로 허용가능한 제형으로 제조되어야 한다. 예를 들어, Remington’s Pharmaceutical Sciences 를 참조한다.

본 발명의 조성물은 N-아세틸-트립토판(N-acetyl-tryptophan, NAT), 카프릴산(caprylic acid), 카프릴레이트(caprylate) 또는 이것들의 조합을 포함할 수 있다. 바람직하게는, 상기 조성물은 NAT를 포함할 수 있다. NAT, 카프릴산(caprylic acid), 카프릴레이트(caprylate) 또는 이들의 조합을 포함하는 본 발명의 조성물은, NAT, 카프릴산(caprylic acid), 카프릴레이트(caprylate) 또는 이들의 조합의 농도 범위가 약 1 mM, 약 2 mM, 약 3 mM, 약 4 mM, 약 5 mM, 약 6 mM, 약 7 mM, 약 8 mM, 약 9 mM, 약 10 mM, 약 11 mM, 약 12 mM, 약 13 mM, 약 14 mM, 약 15 mM, 약 16 mM, 약 17 mM, 약 18 mM, 약 19 mM, 또는 약 20 mM의 낮은 종점(low endpoint)을 가지는 약학적 조성물일 수 있다. 또한, NAT, 카프릴산(caprylic acid), 카프릴레이트(caprylate) 또는 이들의 조합을 포함하는 본 발명의 조성물은, NAT, 카프릴산(caprylic acid), 카프릴레이트(caprylate) 또는 이들의 조합의 농도 범위가 약 40 mM, 약 39 mM, 약 38 mM, 약 37 mM, 약 36 mM, 약 35 mM, 약 34 mM, 약 33 mM, 약 32 mM, 약 31 mM, 약 30 mM, 약 29 mM, 약 28 mM, 약 27 mM, 약 26 mM, 약 25 mM, 약 24 mM, 약 23 mM, 약 22, 또는 약 21 mM의 높은 종점(upper endpoint)을 가지는 약학적 조성물일 수 있다. 바람직하게는, 상기 농도 범위는 약 4 mM 내지 약 20 mM이다.

또한, 본 발명의 조성물은 진통제(lidocaine 또는 paracetoamol 등), 항-염증(anti-inflammatory, 예를들면, 베타메타손(bethamethasone), 비스테로이드 항-염증 약물(NSAID), 아세트아미노펜(acetaminophen), 이부프로펜(ibuprofen), 나프록센(naproxen) 등), 및/또는 다른 적절한 약물과 같은 두번째 약물(second drug)을 포함할 수 있다.

DA-DKP와 같은 다이케토피페라진(diketopiperazine)의 제조방법은 당업계에 잘 알려져 있으며, 이들 방법은 본 발명의 다이케토피페라진(diketopiperazine)을 합성하는데 이용될 수 있다. 예를 들면, 미국 특허 제 4,694,081호, 제 5,817,751로, 제5,990,112호, 제 5,932,579호 및 제 6,555,543호, 미국 특허 출원공개번호 제 2004/0024180호, PCT 출원 WO 96/00391 및 WO 97/48685, 및 Smith et al., Bioorg. Med. Chem. Letters, 8, 2369-2374 (1998)의 전체 내용은 본원에 참고로서 인용된다.

예를 들면, DA-DKP와 같은 다이케토피페라진(diketopiperazine)은 첫번째 다이펩타이드(dipeptide) 합성에 의해 제조될 수 있다. 상기 다이이펩타이드는 using L-아미노산, D-아미노산 또는 L-아미노산 및 D-아미노산의 조합을 사용하여 당업계에 공지된 방법에 의해 합성할 수 있다. 고체상(solid-phase) 펩타이드 합성방법이 바람직하다. 물론, 다이펩타이드는 DMI Synthesis Ltd., Cardiff, UK (custom synthesis), Sigma-Aldrich, St. Louis, MO (primarily custom synthesis), Phoenix Pharmaceuticals, Inc., Belmont, CA (custom synthesis), Fisher Scientific (custom synthesis) and Advanced ChemTech, Louisville, KY 를 포함하여 다수의 소스로부터 상업적으로 이용 가능하다. 일단 다이펩타이드가 합성되거나 구매되면, 다이케토피페라진(diketopiperazine)을 형성하기 위해 고리화(cyclized)된다. 이것은 다양한 기술들에 의해 달성될 수 있다. 예를 들면, 미국 특허 출원 공개번호 제 2004/0024180은 다이펩타이드의 고리화 반응의 방법을 설명한다. 요악하면, 유기 용매 내의 다이펩타이드는 증류에 의해 물을 제거하면서 가열된다. 바람직하게는, 상기 유기 용매는 아세토니트릴(acetonitrile), 알릴 알콜(allyl alcohol), 벤젠(benzene), 벤질 알콜(benzyl alcohol), n-부탄올(n-butanol), 2-부탄올(2-butanol), t-부탄올(t-butanol), 아세트산 부틸에스테르(acetic acid butylester), 사염화탄소(carbon tetrachloride), 클로로벤젠(chlorobenzene), 클로로폼(chloroform), 사이클로헥산(cyclohexane), 1,2 다이클로르에탄(1,2-dichlorethane), 다이에틸아세탈(diethylacetal), 다이메틸아세탈(dimethylacetal), 아세트산 에틸에스터(acetic acid ethylester), 헵탄(heptane), 메틸아이소부틸케톤(methylisobutylketone), 3-펜탄올(3-pentanol), 톨루엔(toluene) 및 자일린(xylene) 등의 물과 저-비점 공비혼합물(low-boiling azeotrope)이다. 온도는 고리화가 수행되는 반응 속도 및 사용 공비제(azeotroping agent)의 종류에 따라 달라진다. 상기 반응은 바람직하게는 50-200℃, 더 바람직하게는 80-150℃에서 수행된다. 고리화 반응이 수행되는 pH범위는 당업자에 의해 쉽게 판단될 수 있다. 이것은 2-9에서 유리할 것이고, 바람직하게는 3-7일 것이다.

다이펩타이드의 하나 또는 두개 아미노산 모두가 곁사슬(side chain)에 카르복실기(e.g., 아스파트산 또는 글루탐산)를 가졌거나, 가지도록 유도체화 되었을때, 상기 다이펩타이드는 미국 특허 제 6,555,543호에서 묘사된 바와 같이 가급적 고리화 된다.

특허 제 제 6,555,543호. 간단히, 여전히 보호된 카복실기의 곁사슬(side chain)을 가진 상기 다이펩타이드는 중성 조건하에서 가열된다. 전형적으로 상기 다이펩타이드는 약 80℃ 내지 180℃, 바람직하게는 약 120℃에서 가열될 것이다. 용매는 중성 용매일 것이다. 예를 들면, 상기 용매는 알콜(페놀을 제외하고, 부탄올, 메탄올, 에탄올 및 고급 알콜 등) 및 공비 조용매(azeotropic co-solvent, 톨루엔, 벤젠, 크실렌 등)를 포함할 수 있다. 바람직하게는, 상기 알콜은 부탄-2-올이고, 상기 공비 조용매(azeotropic co-solvent)는 톨루엔이다. 가열은 반응이 완료될 때까지 계속 되며, 이러한 시간은 경험적으로 결정될 수 있다. 전형적으로, 다이펩타이드는 약 8-24시간 동안의 환류(refluxing)을 통해 고리화 될 것이고, 바람직하게는 약 18시간이다. 마지막으로, 보호 그룹(protecting group)은 다이케토피페라진(diketopiperazine) 으로부터 제거된다. 이렇게 하면서, 강산(무기산, 황산 또는 염산 등과 같은), 강염기(알칼리성 염기(alkaline base, 수산화 칼륨 또는 수산화 나트륨 등과 같은), 및 강한 환원제(e.g., 리튬 알루미늄 하이드라이드(lithium aluminum hydride))의 사용은 피해야 하는데, 최종 화합물의 키랄성(chirality)를 유지하기 위함이다.

고상 수지(solid phase resin)에서 만들어진 다이펩타이드는 한단계 내에 고리화 되고 수지로부터 방출될 수 있다. 예시로, 미국 특허 제 5,817,751호를 참조한다. 예를 들면, N-알킬화 다이펩타이드(N-alkylated dipeptide)가 부착된 수지는 아세트산(e.g., 1%) 또는 트리에틸아민(triethylamine, e.g., 4%)이 존재하는 톨루엔 또는 톨루엔/에탄올 내에서 현탁된다. 일반적으로, 염기성 고리화 조건들이 그들의 빠른 고리화 시간을 위해 바람직하다.

다이펩타이드 고리화 및 다이케토피페라진(diketopiperazine)을 만드는 다른 방법들은 당업게에 공지되어 있으며 본 발명의 실시에 유용한 다이케토피페라진(diketopiperazine)의 제조에 사용될 수 있다. 예를 들어, 상기 나열된 예시들을 참조한다. 게다가, 본 발명에 사용하기에 적합한 많은 다이케토피페라진(diketopiperazine)이 후술하는 바와 같이 단백질 및 펩타이드로부터 제조될 수 있다. 더욱이, 본 발명의 실시에 사용되는 다이케토피페라진(diketopiperazine)은 상업적으로 얻을수 있으며, 예를들면 DMI Synthesis Ltd., Cardiff, UK(custom synthesis)이다.

DA-DKP조성물 및/또는 본 발명의 산물은, DA-DKP를 포함하는 용액, 예컨대 인간 혈청 알부민과 같은 알부민을 포함하는 상업적으로 사용가능한 약학적 조성물로부터 제조되는 것을 포함하여, 한외여과(ultrafiltration), 크로마토그래피(크기-배제 크로마토그래피(size-exclusion chromatography, e.g., Centricon filtration), 친화성 크로마토그래피(affinity chromatography, 예를 들어, 원하는 다이케토피페라진(diketopiperazine)에 대한 항체 또는 항체들 또는 절단된 단백질 또는 펩타이드에 대한 항체 또는 항체들이 부착된 비드의 칼럼을 사용), 음이온 교환(anion exchange) 또는 양이온 교환(cation exchange)), 설탕 밀도구배 원심분리(sucrose gradient centrifugation), 크로마토그래피, 염 침전(salt precipitation), 또는 초음파 분리(sonication) 등과 같이, 용액 내 알부민의 전부 또는 일부를 제거할 수 있는 잘 알려진 방법에 의해서 제조될 수 있다. 그 결과적인 DA-DKP-함유 조성물 및/또는 산물은 상술한 바와 같은 약학적 조성물에 혼입될 수 있다.

한외여과(ultrafiltration) 분리방법을 사용하여, DA-DKP가 여과액(resulting filtrate) 또는 분획으로 전달되는 동안 인간 혈청 알부민 조성물은 알부민을 얻는 분자량 컷-오프(cut-off)를 가진 한외여과(ultrafiltration) 막을 통과할수 있다. 상기 여과액은 약 50 kDA 미만, 약 40 kDa, 30 kDa 미만, 약 20 kDa 미만, 약 10 kDa 미만, 약 5 kDa 미만, 약 3 kDa 미만의 분자량을 갖는 성분을 포함할 수 있다. 바람직하게는, 상기 여과액은 약 5 kDa 미만(또한 "<5000MW"로 언급)의 분자량을 갖는 성분을 포함할 수 있다. 상기 <5000MW 분획 또는 여과액은 알부민으로부터 다이펩타이드 아스파테이트-알라닌(aspartate-alanine)이 절단된 후 그 다음 다이케토피페라진(diketopiperazine)으로 고리화 됨으로써 형성된 DA-DKP를 포함한다. 상기 DA-DKP는 여과액 또는 분획으로 전달된다.

본발명의 DA-DKP의 생리학적으로 허용가능한 염은 또한 본 발명의 실시에 사용될 수 있다. 생리학적으로 허용가능함 염은, 무기산(염산(hydrochloric), 브롬화 수소산(hydrobromic), 황산(sulfuric), 인산(phosphoric), 질산(nitric), 및 등), 유기산(아세트산(acetic), 프로피온산(propionic), 석신산(succinic), 글리콜산(glycolic), 스테아르산(stearic), 락산(lactic), 말산(malic), 타르타르산(tartaric), 시트르산(citric), 글루탐산(glutamic), 아스파트산(aspartic), 벤조산(benzoic), 살리실산(salicylic), 옥살산(oxalic), 아스코브산(ascorbic acid), 및 등) 또는 염기(N,N-다이벤질에틸엔다이아민(N,N-dibenzylethylenediamine), D-글루코사민(D-glucosamine), 또는 에틸렌다이아민(ethylenediamine)으로부터 유래된 약학적으로 허용가능한 금속양이온 또는 유기 양이온의 수산화물(hydroxide), 탄산염(carbonate) 또는 중탄산염(bicarbonate) 등)로부터 유도된 염들과 같은, 통상적인 비-독성 염들을 포함한다. 상기 염은, 예를 들면, 산과 함께 화합물의 유리 염기(free base)를 중화함으로써, 통상적인 방식으로 제조된다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, "하나(a)" 또는 "한(an)"은 하나 또는 그 이상을 의미한다.

본 명세서에서 사용하는 바와 같이, "포함" 및 "포함하는"은, 본 명세서에서 "포함" 및 "포함하는"에 의해 특정지어지는 본 발명의 다른 예들로서 "본질적으로 구성되는" 및 "구성되는" 등과 같은 뜻의, 해당 범위내의 모든 좁은 용어를 포함한다. "필수적으로 구성되는"의 사용과 관련하여, 이 문구는 특정 단계 및 물질 및 본 명세서에 개시된 발명의 기본적이고 신규한 특성에 실질적으로 영향을 주지 않는 것들로 청구항의 범위를 한정한다.

본 발명의 추가적인 목적, 장점 및 신규한 특징들은 다음의 비 제한적인 실시예를 고려하여 당업자에게 명백해질 것이다. 다음의 실험 결과들은 예시의 목적으로 제공되는 것이며, 본 발명의 범위를 한정하려는 것은 아니다.

<실시예1>

인간 혈청 알부민(또한 본 명세서에서 Ampion™으로 언급됨) <5000MW 분획의 관절 내 무릎 주입의 관절 기능을 향상시키고 무릎의 골관절염의 통증을 줄이는 효과를 조사하기 위한 임상시험이 수행되었다. 60명의 평가 가능한 피험자들과 함께, 무작위, 위약 대조(placebo-controlled), 이중 맹검(doumle-blind), 병행 연구(parallel study)는 연구대상 무릎에 <5000MW 분획이 주입되었을때의 치료 효과 및 안정성을 측정하기 위한 적절한 디자인으로 선택되었다.

주요 목적

무릎 골관절염을 가진 피험자의, 10ml <5000MW 분획이 리도카인(lidocaine)/베타메타손(betamethasone) 현탁액(suspension)과 결합한 경우, <5000MW 분획이 베타메타손(betamethasone) 현탁액과 결합한 경우, 또는 식염수 위약(saline placebo)이 리도카인(lidocaine)/베타메타손(betamethasone) 현탁액과 결합한 경우를 비교하여 관절 내 주사의 통증 감소를 조사.

부가 목적

무릎 골관절염을 가진 피험자의, <5000MW 분획이 리도카인/베타메타손 현탁액(lidocaine/betamethasone suspension)과 결합한 경우, <5000MW 분획이 베타메타손(betamethasone) 현탁액과 결합한 경우, 또는 식염수 위약(saline placebo)이 리도카인(lidocaine)/베타메타손(betamethasone) 현탁액과 결합한 경우의 단일(single) 관절 내 주사의 웨스턴 온타리오 맥마스터 대학 골관절염(WOMAC) 지수(Western Ontario McMaster University Osteoarthritis (WOMAC) Index, Bellamy et al., "Validation study of WOMAC: a health status instrument for measuring clinically important patient relevant outcomes to antirheumatic drug therapy in patients with osteoarthritis of the hip or knee." J Rheumatology 1988;15:1833-1840)에 의한 측정으로서 관절 기능 및 통증을 조사.

무릎 골관절염을 가진 피험자의, <5000MW 분획이 리도카인/베타메타손 현탁액(lidocaine/betamethasone suspension)과 결합한 경우, <5000MW 분획이 베타메타손(betamethasone) 현탁액과 결합한 경우, 또는 식염수 위약(saline placebo)이 리도카인(lidocaine)/베타메타손(betamethasone) 현탁액과 결합한 경우의 단일(single) 관절 내 주사 후 응급 약물(rescue medication)에 대한 필요를 조사.

무릎 골관절염을 가진 피험자의, <5000MW 분획이 리도카인/베타메타손 현탁액(lidocaine/betamethasone suspension)과 결합한 경우, <5000MW 분획이 베타메타손(betamethasone) 현탁액과 결합한 경우, 또는 식염수 위약(saline placebo)이 리도카인(lidocaine)/베타메타손(betamethasone) 현탁액과 결합한 경우의 단일(single) 관절 내 주사 후, 관절가동범위에 대한 영향 및 통증 및 염증으로 인한 연구 무릎의 제한된 관절가동범위 조사.

연구 집단에서 보고된 부작용(adverse event)에 의한 평가로써 치료간의 안정성과 내약성 비교.

실험 계획 설명

본 연구는 최근 6개월의 검사기간 동안 슬관절 골관절염 증세를 가진 40세 이상 남성 또는 여성 피험자 내에 <5000MW 분획이 주입되었을때 치료 효과 및 안정성을 측정하기 위한 무작위, 위약 대조(placebo-controlled), 이중 맹검(doumle-blind), 병행 연구(parallel study)였다. 본 연구는 3주간의 검사(screening) 기간 및 4일간의 연구 참여기간(study participation period)으로 구성되었다. 각 피험자는 무작위적으로 다음 중 하나를 10mL 단일(single) 무릎 주사를 받았다:

리도카인/베타메타손 현탁액(lidocaine/betamethasone suspension)과 결합된 <5000MW 분획

베타메타손(betamethasone) 현탁액과 결합된 <5000MW 분획

리도카인(lidocaine)/베타메타손(betamethasone) 현탁액과 결합된 식염수 위약(saline placebo)

피험자는 연구자에 의한 만족적인 투여 후 검토(post-dose review) 후 병원을 떠날 수 있었다. 후속 평가(follow-up assessment)는 주사 후 6시간, 24시간(2일) 및 72시간(4일)에 수행되었다. 이러한 평가는 연구자의 판단에 따라, 병원 또는 외부(e.g. 가정방문)에서 실시되었다.

연구 참여 기간

검사(screening) : 21일차 및 1일차 사이

치료 기간 : 1일차의 투여 및 2일차 및 4일차 후속방문을 포함하여, 72시간동안의 임상 추적 관찰과 함께 연구 무릎 내 단일 주사.

연구 참여의 총 기간은 최대 21일 검사 간격으로, 각 주제에 대해 약 72시간이었다.

연구 치료(study treatment)

각 피험자들은 다음 치료들 중 하나의 한 무릎 내 10mL 단일 주사를 받았다:

베타메타손(betamethasone) 현탁액과 결합된 <5000MW 분획

연구 집단(study population)

연구 집단은 60명의 환자였으며, 남자 또는 여자, 40-85세, Kellgren Lawrence Grade II 또는 III으로 검사에 앞서 6개월 이상 슬개골(primary knee) 골관절염 증상을 가진, 완전히 걸을 수 있었던(ambulatory) 환자였다.

임상시험적 결과에 대한 설명(Description of Investigational Product)

Sypharma Pty Ltd., Dandenong, Victoria, Australia에 의해 고무마개 저장 바이알(vial) 내 멸균 2mL <5000MW 분획이 준비되었다. 상기 <5000MW 분획은, 주사에 앞서 블라인드 방식(blinded fashion)으로 리도카인(lidocaine)/베타메타손(betamethasone) 현탁액 또는 베타메타손(betamethasone) 현탁액 중 하나와 결합되었다. 리도카인(lidocaine)/베타메타손(betamethasone) 현탁액과 결합된 식염수 위약은 세번째 치료로서 투여되었다. 표 1 참조

임상시험적 결과 구성

	<5000MW 분획	베타메타손	리도카인	식염수
치료 A	4 mL	2 mL	4 mL	Nil
치료 B	4 mL	2 mL	Nil	4 mL
치료 C	Nil	2 mL	4 mL	4 mL

리도카인(lidocaine)/베타메타손(betamethasone) 현탁액 또는 베타메타손(betamethasone) 현탁액과 결합된 연구 약물의 10mL 단일 주사는 사전 멸균 조건하에서 18-21게이지 바늘을 사용하여 무릎 관절강 내로 주입하였다.

연구 약물은 접근이 제한된 보안영역 내에서 상온(59℉-77℉ 또는 15℃-25℃)에서 보관하였다.

연구 치료의 무작위화 및 할당(Randomization and Allocation to Study Treatment)

피험자들은 투여 전 자격 확인에 뒤따른 무작위화 일정에 따라서 순차적으로 번호가 붙은 치료에 할당되었다. 각 피험자는 세가지 치료, 즉 활성 <5000MW 분획(리도카인(lidocaine)/베타메타손(betamethasone) 또는 베타메타손(betamethasone) 현탁액과 결합된) 또는 리도카인(lidocaine)/베타메타손(betamethasone)과 결합된 식염수 위약중 하나에 할당되었다. 상기 치료의 할당은 블록 랜덤화 알고리즘(block randomization algorithm)을 사용하여 수행되었다.

만일 두 무릎이 골관절염인 경우, 검사에서, 조사자는 연구를 위한 요구조건을 가장 잘 만족시키는 무릎을 연구 무릎으로 선택하였다. 투여시, 연구 무릎은 무작위화 일정에 따른 임상시험적 결과를 받았다. 다른 무릎은 일반적인 표준 치료를 받았다.

효능 측정

조사자 또는 지정자(nominee)에 의해, 통증 및 염증으로 인한 제한된 관절가동범위를 가진 피험자의 투여 전, 투여 후 24시간 및 투여 후 72시간의 연구 무릎의 관절가동범위가 조사되었고, 전반적인 통증평가 (global pain assessment, 통증 점수식 평가 척도(pain numerical rating scale))가 투여 전, 투여 후 6시간, 24시간 및 72시간에 수행되었으며, 웨스턴 온타리오 맥마스터 대학 골관절염 (WOMAC) 지수(index) 3.1이 피험자들에 의해 투여전, 투여 후 24시간 및 72시간에 수행되었다.

연구 무릎 내의 통증 점수식 평가 척도(numerical rating scale, NRS)는 1일차의 투여전, 투여 후 6시간, 2일차의 투여 후 24시간 및 4일차의 투여 후 72시간에 수행되었다. 통증 규모(pain scale) 및 WOMAC가 같은 시간에 발생한 경우, 통증 점수식 평가 척도가 WOMAC에 앞서 수행되었다. 통증 점수식 평가 척도는 0-10의 숫자 평가이고, 0이면 통증이 없는것, 5는 중간정도의 통증, 10이 가능한 최악의 통증이다.

연구 무릎의 관절가동범위는 골극 성장에 의한것이 아닌, 통증 및 염증으로 인하여 제한된 관절가동범위를 가진 피험자들을 위해 조사자 또는 지정자(nominee)에 의해 기준(baseline), 2일차의 투여후 24시간, 4일차의 투여후 72시간에 조사된다.

WOMAC 지수 3.1은 주사에 1시간 앞서 피험자들에 의해 수행되고, 2일차 투여후 24시간, 4일차 투여 후 72시간에 수행된다.

WOMAC 지수는 고관절 또는 무릎 골관절염 피험자의 관절 기능 및 통증에 대하여 평가한다. 24개의 변수(질문)가 있고, 각각의 질문은 1-10범위에서 피험자에 의해 점수가 매겨진다. 세 개의 영역점수가 있다 : 통증(5 질문); 강성(2 질문); 및 기능(17 질문).

데이터는 스튜던트 티검정(student's t-test)를 이용하여 분석되었다: 다음은 치료 그룹 A 및 C 사이의 평균(SD) 차이

6시간, 24시간, 72시간째에 통증NRS의 평균 변화(도 1);

24시간, 72시간째에 WOMAC 통증 영역점수 평균 변화(도 3A, 3B)

24시간, 72시간째에 WOMAC 기능 영역점수 평균 변화(도 5A, 5B)

24시간, 72시간째에 WOMAC 강성 영역점수 평균 변화(도 4A, 4B)

또한, 반복측정 변량분석(repeated measures ANOVA)이 계산되었다 :

치료 그룹 A 및 C 사이의 시간에 따른 통증 NRS의 평균(SD) 차이(도 2)

결과

결과는 도 1-6, 표 2 및 3에 제시되어 있으며, 여기에 요약되어 있다.

<5000MW 분획(Ampion™)과 함께한 통증 NRS 에서 개선된 경향이 관찰되었다. 이러한 경향은 스테로이드에 비해서 시간에 따라 증가하고 <5000MW 분획의 효과가 오래 지속됨을 증명한다.

WOMAC - 분석된 세 영역점수에서 차이가 관찰되지 않았다.

<5000MW 분획은 부작용(adverse event)을 증가시키지 않는다.

응급 약물 및 관절가동범위에 대한 데이터는 오로지 적은 비율의 환자들에게서만 수집되었고 분석되지 않았다.

스테로이드 잠재적 시간 경과(steroid potential time course)는 도 6에 나타난다. 스테로이드 효능의 시작은 급격하다 : 12-24시간의 최대효과가 1주내의 도달되고 4주간 지속된다 (Ann Rheum Dis 2004; 63:478-482). 단기간의 통증이 기준(baseline)으로부터 3일차에 걸쳐 증가하고 그 후 감소한다 (Am J Orthop. 2007 Mar; 36(3): 128-31).

초기 효능 변수, 평균(SD)

효능 변수	Ampion™+ 스테로이드 + 리도카인	스테로이드 + 리도카인	T-테스트 p value
통증 NRS	4.29 (2.28)	3.61 (1.69)	0.32
WOMAC 통증	4.09 (1.95)	3.99 (2.07)	0.91
WOMAC 강성	3.86 (1.78)	3.93 (2.05)	0.54
WOMAC 기능	5.15 (2.10)	4.69 (2.26)	0.89

Ampion+스테로이드+리도카인 : n=20, 안정성 집단(safety population); n=17, 효율 분석 개체군(efficacy analysis population), 스테로이드+리도카인 : n=20, 안정성 집단(safety population); n=18, 효율 분석 집단(efficacy analysis population)

통증 NRS에서의 평균 변화, 평균(SD)

시간	Ampion™+ 스테로이드 + 리도카인	스테로이드 + 리도카인	T-검정 p value
6 시간	-2.31 (2.36)	-2.06 (1.86)	0.73
24 시간	-2.12 (1.58)	-1.61 (2.15)	0.43
72 시간	-2.50 (1.83)	-1.82 (1.74)	0.30

<실시예 2>

<5000MW(명세서에서 또한 Ampion™으로 언급) 분획의, 즐개골 골관절염 증상을 보이는 성인의 무릎의 관절 기능을 향상시키고 골관절염의 통증을 줄이기 위한관절 내 무릎 주입의 효과를 조사하기 위하여 임상시험이 수행되었다. 43 평가 가능한 피험자들과 함께, 무작위, 위약 대조(placebo-controlled), 이중 맹검(doumle-blind), 병행 연구(parallel study)는 연구대상 무릎에 <5000MW 분획이 주입되었을때의 치료 효과 및 안정성을 측정하기 위한 적절한 디자인으로 선택되었다.

연구 약물

두개의 가지(arm); 각 피험자는 한 무릎에 Ampion™ 또는 식염수중 하나의 단일 4ml 주사를 받았다.

연구 집단

연구 집단은 43명의 환자였고, 남자 또는 여자 40-83세(평균 63.0세, 표준편차(SD) 9.6) 28명의 남자 및 15명의 여자였다. 모든 피험자들은 백인이었다. 피험자 키는 162 내지 192cm(평균 175.3, SD 8.1) 이고 무게는 조사에서 56 내지 117kg(평균 88.8, SD 13.89)였다. 피험자들은 Kellgren Lawrence Grade II 또는 III(약하거나 중간 관절염을 나타내는)으로 검사에 앞서 6개월 이상 슬개골(primary knee) 골관절염 증상을 가진, 완전히 걸을 수 있었던(ambulatory) 환자였다. grade II 6 피험자 및 III 36 피험자였다. 한 피험자는 grade IV 였다. 만약 피험자의 두 무릎이 모두 골관절염인 경우, 한쪽 무릎이 연구를 위해 선택되고 다른 무릎은 표준적인 치료를 받았다.

제외 기준

다음은 연구대상의 제외 기준이다.

1. 의료 평가 및 선별조사 결과 부적합

2. 알부민에 대한 알러지 반응 이력

3. 5% 알부민 부형제에 대한 알러지 반응 이력

4. 모든 관절 내 또는 국부적 관절주위 주사, 인덱스(index) 무릎에 대한 주사 또는 수술(지난 6개월)

5. 수술적 관절경 검사(operative arthroscopy) (지난 3개월내)

6. 관절경 검사외에 인덱스(index) 무릎에 대한 수술절차(지난 12 개월내)

7. 모든 임상시험적 무릎 산물(지난 12개월내)

8. Kellgren Lawrence Grade I 또는 IV (의심스럽거나 또는 심각한) 무릎의 골관절염

9. 염증성 또는 결정성 관절병, 급성 골절, 심각한 골밀도 감소, 뼈 괴사

10. 슬개골 대퇴 증후군 또는 골 연화증

11. 모든 인덱스(index) 무릎의 자유로운 사용과 평가를 방해하는 다른 질병 또는 상태

12. 인덱스(index)에 대한 주요 상해(지난 12개월내)

13. 심한 인덱스(index) 무릎에 대한 고관절 동측성 골관절염(hip osteoarthritis ipsilateral)

14. 인덱스(index) 무릎의 평가를 방해할 수 있는 모든 통증

15. 모든 약학적 또는 비 약학적 치료 시작 또는 변경(지난 4주내)

16. 다음의 사용. a. 모든 국소치료제(topical treatment, 지난 48시간내), b. 파라세타몰(paracetamol)을 제외한 모든 진통제 및 NSAID, c. 항 응고치료제(지난 48시간내), d. 모든 순환계(systemic) 스테로이드 치료제(지난 14일내), e. 무작위화에 앞서, 해당 약물 반감기의 5배내의 모든 면역 억제제, f. 하루 마다 코르티코스테로이드 >10mg 프레드니솔론 등가물(prednisolone equivalent) (지난 30일내), g. 모든 알부민 치료제(지난 3개월내)

17. 임신 또는 수유중인 여성 피험자

18. 치료 전 1일차 임신테스트에서 양성이 나온 출산 가능성 있는 여성 피험자

연구 평가

본 연구는 세 주간의 검사기간(screening period) 및 84일간의 연구 참여기간으로 구성되었다. 후속 평가(follow-up assessment)는 주사 후 6시간째, 24시간째, 72시간째에 실시되었다. 피험자는 8일차, 30일차 및 84일차에 전반적인 통증 및 이동성 및 부작용을 모니터링하기 위해 전화로 연락하였다. 조사자에 의한 평가에 의해 필요하다고 인정되는 경우, 피험자는 8일차 후에도 통증 경감을 위한 임상시험적 무릎 관절 내 베타메타손(betamethasone) 주사의 선택사항을 제공 받았다.

주요결과

연구 무릎의 통증 점수식 평가 척도(NRS)는 투여 전(주사 전 초기), 1일차 투여 후 1시간째, 2일차 투여 후 24시간째, 4일차 투여 후 72시간째, 및 8일차, 30일차, 및 투여 후 84일차(EOS or End-of-study)에 수행되었다. 통증 점수식 평가 척도는 0-10의 숫자 평가이고, 0이면 통증이 없는것, 5는 중간정도의 통증, 10이 가능한 최악의 통증이다.

안전 종점(safety endpoint)

연구의 안전 종점은 부작용의 발생, 투여 전 및 연구 4일차 활력 징후(vital sign), 조사 및 투여 후 24시간째 열두개 리드 ECG 측정(lead reading) 값 ,조사 및 투여 후 24시간째 측정된 임상 혈액 안전 테스트(clinical blood safety test)(생화학적 및 혈액학적)였다.

이차 종점(secondary endpoint)

연구의 이차 종점은 30일차 및 84일차의 반응자(responder) 비율이었고, 통증 NRS에서 2점 또는 그 이상의 개선으로 정의되며, 주사 전 초기로부터 WOMAC 골관절염 색인 3.1(전체규모, 통증 영역점수, 강성 영역점수 및 기능 영역점수)의 관절 내 주사 후 24시간 및 72시간째의 변화이고, 주사 전 초기로부터 응급약물(해열진통제, paracetamol)에 대한 필요의 관절 내 주사 후 24시간 및 72시간째의 변화 및 시간경과에 따른 투여 후 8일차, 30일차, 84일차의 투여 전 및 투여 직후 기간과 비교한 이동성의 변화였다.

치료 의도(intent to treat, ITT) 및 안전성 집단(Safety Population)

무작위화되고 적어도 한 회의 연구 약물 투여를 받은 연구 참여자. ITT는 포함/제외 기준을 충족한 피험자들을 의미한다.

per 프로토콜 집단(per protocol population)

ITT 집합 내 투여 전 통증 점수가 포함/제외 기준을 위반하지 않은 연구 참여자.

효능 집단(efficacy population)

8일차 및 30일차 사이에 응급 약물을 받지 않은 사전 프로토콜 집단(pre-protocol population)내의 연구 참여자.

통계 분석(statistical analyses)

주요 : 평균 변화를 위한 치료 집단사이의 통증 NRS를 위해 수정된 기준(baseline)인 30일차 및 84일차(EOS)에서 평균(SD) 차이를 조사하기 위한 NRS공변량분석(Analysis of covariance, ANCOVA) 모델.

추가 : 반응자(responder) 비율의 차이를 위한 X2 테스트. 임상적으로 유의미한 개선의 차이를 위한 코크란-아미티지 추세 테스트(Cochran-armitage trend test). 스튜던트 티검정(Student’s t-test): 30일차 통증 NRS에서의 평균(SD) 차이

안전 분석(safety analysis)

부작용 및 심각한 부작용이 주제별로 나열됐다. 전반적 발생률에 대한 MedDRA System Organ Class and Preferred Term, 심각도, 연구 약물에 대한 관계에 따라서 분류된 부작용의 치료에 의한 요약이 제시되었다. 치료-응급(treatment-emergent) 부작용(adverse event)의 발생은 치료 그룹 사이에서 비교되었다. 모든 임상적 안전성과 내약성 데이터는 각각의 주제에 대해 열거되었고 치료에 의해 요약되었다. 활력징후 및 ECG 파라미터는 표로 만들어지고 치료에 의해 요약되었다. 실험실 값(laboratory value)은, 실험실의 정상 범위를 벗어난 값에 대한 임상적 의의와 함께 나열되었다. 검사(screening)로부터의 변화들은 임상적 의의를 위해 평가되었다.

결과

집단

분석 세트	연구 규모(n)	Ampion™(n)	식염수 (n)
안전 세트	43	22	21
ITT 세트	43	22	21
Per-프로토콜 세트^a	41	20	21
효능 측정가능(efficacy evaluable) 세트^b	32	17	15

a : Ampion™ 그룹의 2 피험자는 통증 NRS < 4점 기준(baseline)을 가졌다.

b : Ampion™ 그룹의 5 피험자 및 식염수 그룹의 6피험자는 응급 약물을 필요로 했다.

응급약물의 사용

베타메타손(betamethasone) 주입 : Ampion™을 받은 피험자(22중 5 피험자, 23%)는 식염수를 받은 피험자(21중 6 피험자, 29%)와 비교하여 베타메타손(betamethasone) 주사의 사용시 명백한 차이가 없었다.

응급 약물(해열진통제, paracetamol) : 주사 후 24시간 이내에 연구 무릎의 통증을 완화하기 위한 응급 치료는, Ampion™을 받은 피험자(22 중 6 피험자)는 식염수를 받은 피험자(21 중 6 피험자)와 비교하여 유사한 숫자에서 발병하였고, 각 치료 그룹에 사용된 paracetamol 평균 투여량은 유사하였다.

효능 결과(efficacy result)

치료에 의한 통증 NRS, 평균(SD) 사전 프로토콜(pre-protocol) 집단

치료	투여 전	투여 후 6h	투여 후 24 h	투여 후 72 h	투여 후 8일차	투여 후 30일차	투여 후 84일차
Ampion™	4.70 (0.7)	2.00 (1.3)	3.20 (1.5)	2.60 (2.1)	2.90 (2.1)	2.90 (1.8)	3.21 (1.8)
식염수	5.29 (1.4)	2.67 (1.9)	3.00 (1.7)	2.86 (2.1)	3.33 (1.9)	3.86 (2.2)	4.81 (2.3)

통증 NRS에서 최소 자승(least square, LS) 평균 변화 : per-프로토콜 집단

치료	투여 후 6시간	투여 후 24시간	투여 후 72시간	투여 후 8일차	투여 후 30일차	투여 후 84일차
D (Ampion™)	-3.06	-1.69	-2.31	-2.00	-2.16	-1.60
E (식염수)	-2.28	-2.11	-2.22	-1.76	-1.09	-0.36
P value	0.15	0.42	0.89	0.71	0.12	0.07

규모 : -10 = 통증에서 기준으로부터 가능한 가장 큰 개선, 10 = 기준으로부터 가능한 가장 작은 개선(가장 큰 증가).

1일차 : 투여 후 6시간

*통증 NRS 기준을 조정

통증 NRS에서 LS 평균 변화 : 효능 측정 가능 집단(efficacy evaluable population)

치료	투여 후 6h	투여 후 24 h	투여 후 72 h	투여 후 8일차	투여 후 30일차	투여 후 84일차
D (Ampion™)	-2.91	-1.99	-2.94	-2.45	-2.29	-2.22
E (식염수)	-2.62	-2.61	-2.79	-2.22	-1.17	-0.46
P value	0.62	0.19	0.79	0.71	0.19	0.04

규모 : -10 = 통증에서 기준으로부터 가능한 가장 큰 개선, 10 = 통증에서 기준으로부터 가능한 가장 작은 개선(가장 큰 증가).

1일차 : 투여 후 6시간

*통증 NRS 기준을 조정

84일차(EOS)의 반응자(responder) 비율 : per-프로토콜 집단 (표 8 참조)

반응자(responder) : 84일차에서 통증 NRS의 -2점에서 -10점으로의 감소(-10점이 되는 것은 통증에서 가능한 가장 큰 향상)

비 반응자(non-responder) : 84일차에서 통증의 -1점에서 10점으로 감소(10점이 되는것은 통증에서 가능한 가장 큰 증가)

통증에서 30일차에 기준으로부터의 치료그룹별 경향

치료	비 반응자	반응자	P value
Ampion™	47.4%	52.6%	0.06
식염수	76.2%	23.8%	0.06

84일차(EOS)의 반응자(responder) 비율 : 효능 측정 가능 집단(efficacy evaluable population) (표 9 참조)

통증에서 30일차에 기준으로부터의 치료그룹별 경향

치료	비 반응자	반응자	P value
Ampion™	35.7%	64.3%	0.10
식염수	66.7%	33.3%	0.10

연구결과의 요약 : 효능

84일차에 전체적인 통증(통증 점수식 평가 척도(numerical rating scale)에 의한 평가) 및 WOMAC 점수는 투약 후 위약을 제외한 각 치료 그룹에서 연구 기간동안 줄어들었다(p<0.05). 또한, 식염수 위약을 받은 피험자에 비하여 Ampion™을 받은 피험자의 30일차, 84일차에 기준으로부터 변화에 상당한 차이가 있는 경향이 있었다 (30일차 : p = 0.12, 84일차 : p = 0.07). 이러한 경향은 응급 약물을 받지 않은 피험자에서 통계학적으로 유의했다 (p = 0.04). 위약에 비하여 Ampion™을 받는 피험자에 대해 연구의 끝(EOS, 84일차)에서 높은 반응자 비율을 향하는 경향이 있었다. 치료 E 그룹(식염수)에서 투여 후 72시간까지 파라세타몰(paracetamol) 응급 약물의 사용이 가장 높았다. 도 7 참조.

부작용(adverse event, AE)

치료-응급(treatment-emergent) AE가 약물 투여 후, 총 27 AE와 함께 40 피험자 중 20피험자에게서 보고되었다. 일반적으로 발생하는 AE는 두통, 관절 종창(joint swelling) 및 무릎의 강성이었다. 가장 많은 피험자(43 피험자중 16, 37%)가 가벼움(mild)으로서 분류 되는 AE를 보고하였다. 오로지 4 피험자(9%)가 중간 정도의 부작용을 보고하였다 :

- Ampion™ : 관절 부상(injury) 및 고혈압(hypertension)

- 식염수 : 허리 통증 및 혈관 천공 부분 혈종(vessel puncture site haematoma)

Ampion™을 받은 피험자(2 피험자, 9%)는 식염수를 받은 피험자(2 피험자, 10%)에 비하여 중간정도의 AE 발병에서 명백한 차이가 없었다. 이러한 AE는 아마도 또는 확실히 연구 약물과 관련이 없는 것으로 여겨졌다.

심각한 수준으로 분류되는 AE는 없었다.

연구 약물 투여와 관련이 있을것으로 여겨지는 AE는 43중 3명의 피험자(7%)에게서 보고되었다. Ampion™을 받은 피험자(1 피험자, 5%)와 식염수를 받은 피험자(2 피험자, 10%)사이에서 관련된 AE 발병에서 명백한 차이가 없었다.

a. 약물 투여 후 5분 후에 시작되고 1.8시간 후에 해결된 가벼운 정도의 두통(Ampion™)

b. 약물 투여 후 5시간 후에 시작되고 0.5시간 후에 해결된 가벼운 정도의 두통(식염수)

c. 약물 투여 후 2.4일 후에 시작되고 21시간 후에 해결된 오른쪽 무릎(연구 무릎)의 가벼운 정도의 관절 종창(joint swelling) (식염수)

전반적으로, 치료-응급(treatment-emergent) AE의 높은 비율은 Ampion™을 받은 피험자(8 피험자, 36%)에 비하여 식염수를 받은 피험자(12 피험자, 57%)에게서 보고되었다. (아마도) 연구 약물 투여와 관련되었다고 보여지는 AE는 43 중 3 피험자(7%)에게서 보고되었고 두통 및 무릎의 관절 종창을 포함하였다. 사망자나 다른 심각한 부작용은 없었다. 생화학적 임상 실험실 검사, 활력 징후, 및 치료사이의 ECG 평가에 의해 평가된 안전에 명확한 차이가 없었다.

연구의 결론

84일차에 전체적인 통증(통증 점수식 평가 척도(numerical rating scale)에 의한 평가) 및 WOMAC 점수는 투약 후 위약을 제외한 각 치료 그룹에서 연구 기간동안 줄어들었고, 치료 그룹간의 큰 차이는 없었다. Ampion™ 그룹에 비해 높은 식염수 그룹의 통증 NRS 기준에도 불구하고, 84일차에 식염수에 비해 Ampion™ 에 반응한 피험자의 높은 비율과 함께, 연구 약물의 장기 효과를 향한 경향이 있었다. Ampion™을 받은 피험자에서, 전반적인 통증은 투여 후에 연구 기간동안 줄어들었고, 반면 식염수를 받은 피험자들은 84일차에 투여 후 통증 감소가 없었다. 투여 후 72시간까지의 파라세타몰 응급 약물의 사용은 치료 E 그룹(식염수)에서 가장 높았다. Ampion™은 안전하다고 여겨지고 연구내에서 사용된 용량으로 잘 용납되었다.

<실시예 3>

본 연구는 5% HAS의 <5kDa 분획의 DA-DKP 및 N-아세틸 트립토판(NAT)이 콜라겐에 결합함을 증명한다. 특히, 몰 농도에서(equimolar concentration), NAT 는 DA-DKP보다 더 산화된 콜라겐 IV에 결합한다.

방법

콜라겐 출처 : 0.25% 아세트산 (Sigma™)내의 1mg/ml 콜라겐 IV 가 인간의 태반 형성. 상기 콜라겐은 37℃에서 1시간동안 1XPBS 500μM의 H2O2와 산화되었다. 산화된 콜라겐 Ⅵ(최종 = 0.2mg/ml)는 이후 PBS에서 37℃에서 1시간동안 2μM DA-DKP 또는 2μM NAT와 함께 배양되었다. 배양의 끝에서, <5kDa 분획은 분자량 컷오프(molecular weight cutoff) 5000을 가지는 Vivaspin 2 microcentrifugal filter에 의해 분리되었다. 상기 <5kDa 분획은 DA-DKP 분석을 위한 액체 크로마토그래피-질량 스펙트로메트리(liquid chromatograph-mass spectrometery, LCMS) 방법을 사용하여 DA-DKP 및/또는 NAT 함량에 대해 분석되었다.

분석 결과는 표 10에 나타난다.

NAT 및 DA-DKP의 H2O2 처리된 인간 콜라겐에 대한 잠재적 결합

시료	평균 감소%	표준 편차
2 μM DA-DKP + 콜라겐 IV	26.0%	4.2%
2 μM DA-DKP + 콜라겐 IV w/ 2 μM NAT	25.6%	5.7%
2 μM NAT + 콜라겐 IV	48.9%	1.3%
2 μM NAT + 콜라겐 IV w/ 2 μM DA-DKP	28.7%	9.4%

표 10에서 제공하는 결과는 DA-DKP 및 NAT가 산화된 콜라겐에 결합하고 따라서 면역 세포 활성의 트리거로부터 산화된 부위를 차단하는 것을 증명한다.

본 발명의 다양한 실시예들이 상세히 설명되었지만, 그 실시예들의 변형 및 개조가 당업자에게 발생할 수 있음이 명백하다. 그러나, 그러한 변형 및 개조가 본 발명의 범위내에 있다는 것이 명백히 이해될것이다.

Claims

DA-DKP(aspartyl-alanyl-diketopiperazine)를 포함하는 퇴행성 관절 질환(degenerative joint disease)의 치료용 약학적 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 퇴행성 관절 질환은 골관절염(osteoarthritis)인 약학적 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 조성물은 매 6개월마다 한번, 매 5개월마다 한번, 매 4개월마다 한번, 매 3개월마다 한번, 또는 매 2개월마다 한번보다 더 자주 투여되지 않는 약학적 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 조성물은 국부 투여(local administration), 국소 투여(topical administration), 및 주사로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나의 방법으로 투여되는 약학적 조성물.
제 4항에 있어서, 상기 주사에 의한 투여는 관절 내 주사에 의한 약학적 조성물.
제 5항에 있어서, 상기 관절 내 주사로 투여되는 조성물은 DA-DKP 농도가 50μM 내지 350μM인 약학적 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 조성물은 N-아세틸-트립토판(N-acetyl-tryptophan, NAT), 카프릴산(caprylic acid), 카프릴레이트(caprylate) 또는 이들의 조합을 더 포함하는 약학적 조성물.
제 7항에 있어서, 상기 조성물은 NAT, 카프릴산(caprylic acid), 카프릴레이트(caprylate) 또는 이들의 조합의 농도가 4mM 내지 20mM 인 약학적 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 DA-DKP는 인간 혈청 알부민 조성물의 용액으로부터 알부민을 제거하여 제조된 조성물 내에 있는 약학적 조성물.
제 9항에 있어서, 상기 알부민을 제거하는 단계는 한외여과(ultrafiltration), 설탕 밀도구배 원심분리(sucrose gradien centrifugation), 크로마토그래피, 염 침전(salt precipitation), 및 초음파 분리(sonication)로 이루어진 군으로부터 선택된 분리 방법에 의해 인간 혈청 알부민 조성물을 처리하는 것을 포함하는 약학적 조성물.
제 10항에 있어서, 상기 제거 단계는 인간 혈청 알부민 조성물을 알부민을 얻을 수 있는 분자량 컷 오프(cut off)를 가진 한외여과(ultrafiltration) 막 상으로 통과시키는 것을 포함하고, 그것의 여과액이 DA-DKP를 포함하는 약학적 조성물.
제 11항에 있어서, 상기 한외여과(ultrafiltration) 막은 50 kDA 미만, 40 kDa 미만, 30 kDa 미만, 20 kDa 미만, 10 kDa 미만, 5 kDa 미만 또는 3 kDa 미만의 분자량 컷오프(cutoff)를 가진 약학적 조성물.
제 9항에 있어서, 상기 조성물은 NAT, 카프릴산(caprylic acid), 카프릴레이트(caprylate) 또는 이들의 조합을 더 포함하는 약학적 조성물.
제 13항에 있어서, 상기 조성물은 NAT, 카프릴산(caprylic acid), 카프릴레이트(caprylate) 또는 이들의 조합의 농도가 4mM 내지 20mM 인 조성물인 약학적 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 약학적 조성물은 진통제, 항-염증 약물, 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된 두번째 약물을 더 포함하는 약학적 조성물.
DA-DKP 함유 조성물을 포함하는, 주사에 의한 투여용으로 제형된 퇴행성 관절 질환(degenerative joint disease)의 치료용 약학적 제품.
제 16항에 있어서, 상기 제품은 관절 내 주사에 의한 투여용으로 제형된 약학적 제품.
제 16항에 있어서, 상기 DA-DKP는 인간 혈청 알부민 조성물의 용액으로부터 알부민을 제거하여 제조된 약학적 제품.
제 18항에 있어서, 상기 알부민 제거 단계는 한외여과(ultrafiltration), 설탕 밀도 구배 원심분리(sucrose gradient centrifugation), 크로마토그래피, 염 침전(salt precipitation), 및 초음파 분리(sonication)로 이루어진 군으로부터 선택된 분리 방법에 의해 인간 혈청 알부민 조성물을 처리하는 것을 포함하는 약학적 제품.
제 19항에 있어서, 상기 제거 단계는 인간 혈청 알부민 조성물을 알부민을 얻을 수 있는 분자량 컷 오프(cut off)를 가진 한외여과(ultrafiltration) 막 상으로 통과시키는 것을 포함하고, 그 것의 여과액이 DA-DKP를 포함하는 약학적 제품.
제 20항에 있어서, 상기 한외여과(ultrafiltration) 막은 50 kDA 미만, 40 kDa 미만, 30 kDa 미만, 20 kDa 미만, 10 kDa 미만, 5 kDa 미만 또는 3 kDa 미만의 분자량 컷오프(cutoff)를 가진 약학적 제품.
제 17항에 있어서, 상기 관절 내 주사로 투여되는 DA-DKP는 농도가 50μM 내지 350μM인 조성물인 약학적 제품.
제 16항에 있어서, 상기 DA-DKP 함유 조성물은 NAT, 카프릴산(caprylic acid), 카프릴레이트(caprylate) 또는 이들의 조합을 더 포함하는 약학적 제품.
제 23항에 있어서, 상기 조성물은 NAT, 카프릴산(caprylic acid), 카프릴레이트(caprylate) 또는 이들의 조합의 농도가 4mM 내지 20mM 인 조성물인 약학적 제품.
제 16항에 있어서, 약학적으로 허용가능한 담체를 더 포함하는 약학적 제품.
DA-DKP 함유 조성물을 포함하는, 주사에 의한 투여용으로 제형된 약학적 제품을 포함하는 퇴행성 관절 질환(degenerative joint disease)의 치료용 키트.
제 26항에 있어서, 상기 DA-DKP는 인간 혈청 알부민 조성물의 용액으로부터 알부민을 제거하여 제조된 키트.