KR101083616B1

KR101083616B1 - 고농도 항체 함유 용액 제제

Info

Publication number: KR101083616B1
Application number: KR1020107016322A
Authority: KR
Inventors: 도시유키 모리치카; 다이스케 가메오카; 요시미 이마에다; 데루토시 마에다; 올리버 보리스 슈타우흐
Original assignee: 에프. 호프만-라 로슈 아게; 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤
Priority date: 2007-12-27
Filing date: 2008-12-26
Publication date: 2011-11-16
Also published as: ECSP10010370A; US20140005367A1; DK2238985T3; HRP20120903T4; JP2019206559A; US11584798B2; TW200942259A; CO6450630A2; ES2389881T9; AU2008344292A1; IL206548A0; SI2238985T1; TWI375566B; CN101883588B; US20210246216A1; PT2238985E; JP2018076334A; RU2701181C2; US8568720B2; US20220281988A1

Abstract

장기 보존시의 2 량체 생성이나 탈아미드화가 억제된, 안정적인 피하 투여에 적합한 항체 함유 제제로서, 아르기닌 및 메티오닌을 함유하는 것을 특징으로 하는 안정적인 항체 함유 용액 제제를 제공한다.

Description

고농도 항체 함유 용액 제제{SOLUTION PREPARATION CONTAINING ANTIBODY AT HIGH CONCENTRATION}

본 발명은 항체 함유 제제에 관한 것으로서, 특히 안정적인 고농도 항체 함유 용액 제제에 관한 것이다.

최근, 여러 항체 제제가 개발되어 실용에 제공되고 있는데, 많은 항체 제제는 정맥 주사용 제제로서 사용되고 있다. 한편, 의료 현장의 요구에 의해, 항체 함유 제제를 자기 주사 가능한 피하 주사용 제제로서 개발하는 것에 대한 요망이 높아지고 있다.

피하 주사용 항체 함유 제제를 설계할 때에는, 1 회당 항체 투여량이 대량이 되는 한편 (100 ∼ 200 ㎎ - 정도), 피하 주사에서는 일반적으로 주사액량의 제한이 있다는 점에서, 투여액 중의 항체의 고농도화가 필요해진다. 그래서, 동결 건조 전보다 적은 용량의 물을 사용하여 동결 건조 제제를 재용해함으로써 고농도 용액 제제를 조제하는, 이른바 동결 건조 농축 기술을 이용한 고농도 제제가 사용되는 경우가 많다. 그러나, 재용해하는 수고를 요하지 않는 사용하기에 편리한 용액 제제에 대한 수요도 크다. 또, 동결 건조 제제의 제조에 있어서, 당 등의 동결 보호제의 첨가에 의해 제제의 점도가 증대하는 것은 피하 주사용의 제제로는 바람직하지 않지만, 용액 제제라면 이 문제를 회피할 수 있을 것으로 생각된다.

고농도의 항체 함유 용액은 단백질의 거대 분자로서의 성질 및 분자간 상호 작용에 의해 그 자체 점도가 높은 용액을 형성하는 경향이 있다. 또한, 단백질을 고농도 용액으로 보존하는 경우, 불용성 및/또는 가용성 응집체의 생성을 비롯한 열화 현상이 문제가 되어, 그것을 방지할 필요가 있다. 특히, 항체 제제에서는 용액 상태로 보존할 때에 회합체가 생성되기 쉬우며, 불용성 응집체가 생기기 쉽다. 또, 용액 제제를 장기 보존하는 경우, 아스파라긴 그 밖의 아미노산 잔기의 탈아미드화에 의해 항체 분자의 생리 활성이 상실되어 버리는 문제가 있다.

일반적으로, 단백질 제제를 장기 보존한 후에도 활성 성분의 손실이 적은, 안정화시킨 제제로 하기 위한 여러 연구가 이루어지고 있으며, 활성 성분과 여러 첨가제를 완충액에 용해하여 제조된다. 그러나, 특히 고농도의 항체 함유 용액 제제에 있어서는, 항체의 2 량체 생성이나 탈아미드화를 방지하기 위한 기술은 아직 불충분하다.

장기 보존시의 2 량체 생성이나 탈아미드화가 억제된, 안정적인 피하 투여에 적합한 고농도 항체 함유 제제에 대한 요구가 존재한다.

본 발명의 목적은 장기 보존시의 2 량체 생성이나 탈아미드화가 억제된, 안정적인 피하 투여에 적합한 고농도 항체 함유 제제를 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여 예의 연구한 결과, 본 발명자들은 안정화제로서 아미노산인 아르기닌 또는 그 염을 첨가함으로써, 고농도의 안정적인 항체 함유 용액 제제로 할 수 있는 것을 알아내어, 본 발명을 완성하였다.

즉, 본 발명은 이하의 것을 제공한다.

(1) 아르기닌 및 메티오닌을 함유하는 것을 특징으로 하는, 안정적인 항체 함유 용액 제제.

(2) 추가로 히스티딘 완충제를 함유하는, (1) 에 기재된 용액 제제.

(3) 추가로 계면 활성제를 함유하는, (1) 또는 (2) 에 기재된 용액 제제.

(4) 항체의 농도가 50 ㎎/㎖ 이상인, (1) ∼ (3) 에 기재된 용액 제제.

(5) 항체의 농도가 100 ㎎/㎖ 이상인, (1) ∼ (3) 에 기재된 용액 제제.

(6) 항체의 농도가 120 ㎎/㎖ 이상인, (1) ∼ (3) 에 기재된 용액 제제.

(7) 항체가 항인터류킨-6 리셉터 항체인, (1) ∼ (6) 에 기재된 용액 제제.

(8) 아르기닌 또는 메티오닌을 함유하는 것을 특징으로 하는, 안정적인 항인터류킨-6 리셉터 항체 함유 용액 제제.

(9) 항체가 인간화 항체 또는 인간 항체인, (1) ∼ (8) 에 기재된 용액 제제.

(10) 추가로 트립토판을 함유하는, (1) ∼ (9) 에 기재된 용액 제제.

(11) pH 가 4 ∼ 8 인, (1) ∼ (10) 에 기재된 용액 제제.

(12) 아르기닌의 함유량이 50 ∼ 1500 mM 인, (1) ∼ (11) 에 기재된 용액 제제.

(13) 점도가 2 ∼ 15 mPa·s 인, (1) ∼ (12) 에 기재된 용액 제제.

(14) 용액 제제가 22 ∼ 28 ℃ 에서 적어도 6 개월간 안정적인, (1) ∼ (13) 에 기재된 용액 제제.

(15) 항체 2 량체의 생성이 억제되는 것을 특징으로 하는, (1) ∼ (13) 에 기재된 용액 제제.

(16) 항체 분자의 탈아미드화가 억제되는 것을 특징으로 하는, (1) ∼ (13) 에 기재된 용액 제제.

(17) 피하 투여되는, (1) ∼ (13) 에 기재된 용액 제제.

(18) 용액 제제의 제조 과정에 동결 건조 공정을 포함하지 않고 제조되는, (1) ∼ (13) 에 기재된 용액 제제.

(19) 용액 중에 아르기닌을 첨가하는 것을 포함하는, 항체 함유 용액 제제의 항체 분자의 탈아미드화를 억제하는 방법.

(20) 용액 중에 아르기닌과 메티오닌을 첨가하는 것을 포함하는, 항체 함유 용액 제제의 항체 2 량체 생성을 억제하는 방법.

동결 건조 농축에 의해 재구성할 필요가 없으며, 재용해하는 수고를 요하지 않는 고농도 항체 함유 제제가 제공된다. 본 발명의 고농도 항체 함유 제제는 용액 상태로 안정적으로 장기 보존 가능하며, 제조 과정에 동결 건조 공정을 포함하지 않고 제조할 수 있기 때문에, 동결 보호제로서의 당 등의 첨가가 불필요하다.

도 1 은 실시예 1 의 전형적인 크로마토그래프이다.
도 2 는 실시예 1 의 겔 여과 크로마토그래프법 (SEC) 의 평가 결과를 나타낸다.
도 3 은 실시예 1 의 겔 여과 크로마토그래프법 (SEC) 의 평가 결과를 나타낸다.
도 4 는 실시예 2 의 전형적인 크로마토그래프이다.
도 5 는 실시예 2 의 이온 교환 크로마토그래프법 (IEC) 의 평가 결과를 나타낸다.
도 6 은 실시예 2 의 이온 교환 크로마토그래프법 (IEC) 의 평가 결과를 나타낸다.
도 7 은 실시예 3 의 겔 여과 크로마토그래프법 (SEC) 의 평가 결과를 나타낸다.
도 8 은 실시예 3 의 이온 교환 크로마토그래프법 (IEC) 의 평가 결과를 나타낸다.

이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.

본 발명에 있어서, 항체 함유 용액 제제란, 활성 성분으로서 항체를 함유하며, 인간 등의 동물에 투여할 수 있도록 조제된 용액 제제를 말하고, 바람직하게는 제조 과정에 동결 건조 공정을 포함하지 않고 제조된 용액 제제를 말한다.

본 발명의 항체 함유 용액 제제는 고농도의 항체를 함유하는 용액 제제로서, 항체 농도가 50 ㎎/㎖ 이상인 것이 바람직하고, 더욱 100 ㎎/㎖ 이상인 것이 바람직하고, 120 ㎎/㎖ 이상인 것이 더욱 바람직하며, 150 ㎎/㎖ 가 더욱 바람직하다. 특히, 지금까지 120 ㎎/㎖ 이상, 바람직하게는 150 ㎎/㎖ 이상의 항체 함유 용액 제제가 실용화된 예는 없어, 본 발명의 처방에 의해 처음으로 이러한 고농도의 항체 함유 용액 제제의 실용화가 가능해졌다.

또, 본 발명의 항체 함유 용액 제제의 항체 농도의 상한은, 제조의 관점에서, 일반적으로 300 ㎎/㎖ 이며, 바람직하게는 250 ㎎/㎖ 이며, 더욱 바람직하게는 200 ㎎/㎖ 이다. 따라서, 본 발명의 고농도 항체 용액 제제의 항체 농도는 50 ∼ 300 ㎎/㎖ 가 바람직하고, 더욱 100 ∼ 300 ㎎/㎖ 가 바람직하며, 더욱 120 ∼ 250 ㎎/㎖ 가 바람직하며, 특히 150 ∼ 200 ㎎/㎖ 가 바람직하다.

본 발명에 사용되는 항체는 원하는 항원과 결합되는 한 특별히 제한은 없으며, 폴리클로날 항체이어도 되고 모노클로날 항체이어도 되는데, 균질한 항체를 안정적으로 생산할 수 있다는 면에서 모노클로날 항체가 바람직하다.

본 발명에서 사용되는 모노클로날 항체로는, 인간, 마우스, 래트, 햄스터, 토끼, 양, 낙타, 원숭이 등의 동물 유래의 모노클로날 항체뿐만 아니라, 키메라 항체, 인간화 항체, bispecific 항체 등 인위적으로 개변한 유전자 재조합형 항체도 포함된다. 또, 항체의 면역 글로불린 클래스는 특별히 한정되는 것이 아니고, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 등의 IgG, IgA, IgD, IgE, IgM 등 어느 클래스이어도 되는데, IgG 및 IgM 이 바람직하다.

또한, 본 발명의 항체로는 whole 의 항체뿐만 아니라, Fv, Fab, F(ab)₂ 등의 항체 단편이나, 항체의 가변 영역을 펩티드 링커 등의 링커로 결합시킨 1 가 또는 2 가 이상의 1 개 사슬 Fv(scFv, sc(Fv)₂ 나 scFv 다이머 등의 Diabody 등) 등의 저분자화 항체 등도 포함된다.

상기 서술한 본 발명의 항체는 당업자에게 공지된 방법에 의해 제조할 수 있다.

모노클로날 항체를 산생하는 하이브리도마는 기본적으로는 공지 기술을 사용하고, 이하와 같이 하여 제조할 수 있다. 즉, 원하는 항원이나 원하는 항원을 발현하는 세포를 감작 항원으로서 사용하고, 이것을 통상적인 면역 방법에 따라 면역시켜, 얻어지는 면역 세포를 통상적인 세포 융합법에 의해 공지된 모세포와 융합시키고, 통상적인 스크리닝법에 의해, 모노클로날 항체 산생 세포 (하이브리도마) 를 스크리닝함으로써 제조할 수 있다. 하이브리도마의 제조는 예를 들어 밀스테인 들의 방법 (Kohler. G. and Milstein, C., Methods Enzymol. (1981) 73 : 3-46) 등에 준하여 실시할 수 있다. 항원의 면역원성이 낮은 경우에는, 알부민 등의 면역원성을 갖는 거대 분자와 결합시켜 면역시키면 된다.

또, 항체 유전자를 하이브리도마로부터 클로닝하여 적당한 벡터에 끼워 넣고, 이것을 숙주에 도입하고, 유전자 재조합 기술을 사용하여 산생시킨 유전자 재조합형 항체를 사용할 수 있다 (예를 들어, Carl, A. K. Borrebaeck, James, W. Larrick, THERAPEUTIC MONOCLONAL ANTIBODIES, Published in the United Kingdom by MACMILLAN PUBLISHERS LTD, 1990 참조). 구체적으로는, 하이브리도마의 mRNA 로부터 역전사 효소를 사용하여 항체의 가변 영역 (V 영역) 의 cDNA 를 합성한다. 목적으로 하는 항체의 V 영역을 코드하는 DNA 가 얻어지면, 이것을 원하는 항체 정상 영역 (C 영역) 을 코드하는 DNA 와 연결하고, 이것을 발현 벡터에 끼워 넣는다. 또는, 항체의 V 영역을 코드하는 DNA 를, 항체 C 영역의 DNA 를 포함하는 발현 벡터에 끼워 넣어도 된다. 발현 제어 영역, 예를 들어 인핸서, 프로모터의 제어하에서 발현하도록 발현 벡터에 끼워 넣는다. 다음으로, 이 발현 벡터에 의해 숙주 세포를 형질 전환하여 항체를 발현시킬 수 있다.

본 발명에서는, 인간에 대한 이종 항원성을 저하시키는 것 등을 목적으로 하여 인위적으로 개변한 유전자 재조합형 항체, 예를 들어 키메라 (Chimeric) 항체, 인간화 (Humanized) 항체 등을 사용할 수 있다. 이들 개변 항체는 이미 알려진 방법을 사용하여 제조할 수 있다. 키메라 항체는 인간 이외의 포유 동물, 예를 들어 마우스 항체의 중쇄, 경쇄의 가변 영역과 인간 항체의 중쇄, 경쇄의 정상 영역으로 이루어지는 항체로서, 마우스 항체의 가변 영역을 코드하는 DNA 를 인간 항체의 정상 영역을 코드하는 DNA 와 연결하고, 이것을 발현 벡터에 끼워 넣고 숙주에 도입하여 산생시킴으로써 얻을 수 있다.

인간화 항체는 재구성 (reshaped) 인간 항체로도 불리며, 인간 이외의 포유 동물, 예를 들어 마우스 항체의 상보성 결정 영역 (CDR ; complementarity determining region) 을 인간 항체의 상보성 결정 영역에 이식한 것으로서, 그 일반적인 유전자 재조합 수법도 알려져 있다. 구체적으로는, 마우스 항체의 CDR 과 인간 항체의 프레임 워크 영역 (framework region ; FR) 을 연결하도록 설계한 DNA 배열을, 말단부에 오버랩하는 부분을 갖도록 제조한 몇 개의 올리고뉴클레오티드로부터 PCR 법에 의해 합성한다. 얻어진 DNA 를 인간 항체 정상 영역을 코드하는 DNA 와 연결하고, 이어서 발현 벡터에 끼워 넣고, 이것을 숙주에 도입하여 산생시킴으로써 얻어진다 (유럽 특허 출원 공개 번호 EP 239400, 국제 특허 출원 공개 번호 WO96/02576 참조). CDR 을 개재하여 연결되는 인간 항체의 FR 은 상보성 결정 영역이 양호한 항원 결합 부위를 형성하는 것이 선택된다. 필요에 따라 재구성 인간 항체의 상보성 결정 영역이 적절한 항원 결합 부위를 형성하도록 항체의 가변 영역의 프레임 워크 영역의 아미노산을 치환해도 된다 (Sato, K.et al., Cancer Res. (1993) 53, 851-856).

또, 인간 항체의 취득 방법도 알려져 있다. 예를 들어, 인간 임파구를 in vitro 로 원하는 항원 또는 원하는 항원을 발현하는 세포로 감작하고, 감작 임파구를 인간 미엘로마 세포, 예를 들어 U266 과 융합시켜, 항원에 대한 결합 활성을 갖는 원하는 인간 항체를 얻을 수도 있다 (일본 특허공보 평1-59878 참조). 또, 인간 항체 유전자의 모든 레퍼터리를 갖는 트랜스제닉 동물을 항원으로 면역시킴으로써 원하는 인간 항체를 취득할 수 있다 (국제 특허 출원 공개 번호 WO93/12227, WO92/03918, WO94/02602, WO94/25585, WO96/34096, WO96/33735 참조). 또한 인간 항체 라이브러리를 사용하여, 패닝에 의해 인간 항체를 취득하는 기술도 알려져 있다. 예를 들어, 인간 항체의 가변 영역을 1 개 사슬 항체 (scFv) 로서 파지 디스플레이법에 의해 파지의 표면에 발현시켜, 항원에 결합되는 파지를 선택할 수 있다. 선택된 파지의 유전자를 해석하면, 항원에 결합되는 인간 항체의 가변 영역을 코드하는 DNA 배열을 결정할 수 있다. 항원에 결합되는 scFv 의 DNA 배열이 밝혀지면, 당해 배열을 포함하는 적당한 발현 벡터를 제조하여, 인간 항체를 취득할 수 있다. 이들 방법은 이미 알려진 것으로서, WO92/01047, WO92/20791, WO93/06213, WO93/11236, WO93/19172, WO95/01438, WO95/15388 을 참고로 할 수 있다.

항체 유전자를 일단 단리하고, 적당한 숙주에 도입하여 항체를 제조하는 경우에는, 적당한 숙주와 발현 벡터의 조합을 사용할 수 있다. 진핵 세포를 숙주로서 사용하는 경우, 동물 세포, 식물 세포, 진균 세포를 사용할 수 있다. 동물 세포로는 (1) 포유류 세포, 예를 들어 CHO, COS, 미엘로마, BHK (baby hamster kidney), HeLa, Vero, (2) 양서류 세포, 예를 들어 아프리카 발톱 개구리알 모세포, 혹은 (3) 곤충 세포, 예를 들어 sf9, sf21, Tn5 등이 알려져 있다. 식물 세포로는 니코티아나 (Nicotiana) 속, 예를 들어 니코티아나·타바쿰 (Nicotiana tabacum) 유래의 세포가 알려져 있으며, 이것을 캘러스 배양하면 된다. 진균 세포로는 효모, 예를 들어 사카로미세스 (Saccharomyces) 속, 예를 들어 사카로미세스·세레비시아에 (Saccharomyces cerevisiae), 사상균, 예를 들어 아스페르길루스 (Aspergillus) 속, 예를 들어 아스페르길루스·니거 (Aspergillus niger) 등이 알려져 있다. 원핵 세포를 사용하는 경우, 세균 세포를 사용하는 산생계가 있다. 세균 세포로는 대장균 (E. coli), 고초균이 알려져 있다. 이들 세포에, 목적으로 하는 항체 유전자를 형질 전환에 의해 도입하고, 형질 전환된 세포를 in vitro 로 배양함으로써 항체가 얻어진다.

또한 본 발명의 항체는 그 항체 단편이나 저분자화 항체, 그리고 항체 수식물이어도 된다. 예를 들어, 항체 단편이나 저분자화 항체로는 Fab, F(ab')2, Fv 또는 H 사슬과 L 사슬의 Fv 를 적당한 링커로 연결시킨 1 가 또는 2 가 이상의 싱글 체인 Fv(scFv, sc(Fv)₂ 등) (Huston, J. S. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. (1988) 85, 5879-5883) 을 들 수 있다. 구체적으로는, 항체를 효소, 예를 들어 파파인, 펩신으로 처리하여 항체 단편을 생성시키거나, 또는 이들 항체 단편을 코드하는 유전자를 구축하고, 이것을 발현 벡터에 도입한 후 적당한 숙주 세포로 발현시킨다 (예를 들어, Co, M. S. et al., J. Immunol. (1994) 152, 2968-2976 ; Better, M. and Horwitz, A. H., Methods Enzymol. (1989) 178, 476-496 ; Pluckthun, A. and Skerra, A., Methods Enzymol. (1989) 178, 497-515 ; Lamoyi, E., Methods Enzymol. (1986) 121, 652-663 ; Rousseaux, J. et al., Methods Enzymol. (1986) 121, 663-669 ; Bird, R. E. and Walker, B. W., Trends Biotechnol. (1991) 9, 132-137 참조).

항체 수식물로서, 폴리에틸렌글리콜 (PEG) 등의 각종 분자와 결합된 항체를 사용할 수도 있다. 본 발명의 「항체」에는 이들 항체 수식물도 포함된다. 이러한 항체 수식물을 얻기 위해서는, 얻어진 항체에 화학적인 수식을 실시함으로써 얻을 수 있다. 이들 방법은 이 분야에 있어서 이미 확립되어 있다.

본 발명의 제제에 포함되는 항체로는, 항조직 인자 항체, 항 IL-6 리셉터 항체, 항 IL-6 항체, HM1.24 항원 모노클로날 항체, 항부갑상선 호르몬 관련 펩티드 항체 (항 PTHrP 항체), 항글리피칸-3 항체, 항강글리오시드 GM3 항체, 항 TPO 수용체 아고니스트 항체, 응고 제 VIII 인자 대체 항체, 항 CD3 항체, 항 CD20 항체, 항 GPIIb/IIIa 항체, 항 TNF 항체, 항 CD25 항체, 항 EGFR 항체, 항 Her2/neu 항체, 항 RSV 항체, 항 CD33 항체, 항 CD52 항체, 항 IgE 항체, 항 CD11a 항체, 항 VEGF 항체, 항 VLA4 항체, 항 AXL 항체 등을 들 수 있는데, 이것에 한정되지 않는다.

재구성 인간화 항체로는, 인간화 항인터류킨 6 (IL-6) 리셉터 항체 (hPM-1 혹은 MRA) (국제 특허 출원 공개 번호 WO92-19759 를 참조), 인간화 항 HM1.24 항원 모노클로날 항체 (국제 특허 출원 공개 번호 WO98-14580 을 참조), 인간화 항부갑상선 호르몬 관련 펩티드 항체 (항 PTHrP 항체) (국제 특허 출원 공개 번호 WO98-13388 을 참조), 인간화 항조직 인자 항체 (국제 특허 출원 공개 번호 WO99-51743 을 참조), 항글리피칸-3 인간화 IgG1κ 항체 (국제 특허 출원 번호 PCT/JP05/013103 을 참조) 등이 본 발명에서 사용하는 바람직한 항체이다. 본 발명에서 사용하는 인간화 항체로서 특히 바람직한 것은 인간화 항 IL-6 리셉터 항체이다.

인간 IgM 항체로는, 항강글리오시드 GM3 재조합형 인간 IgM 항체 (국제 특허 출원 공개 번호 WO05-05636 을 참조) 등이 바람직하다.

저분자화 항체로는, 항 TPO 수용체 아고니스트 Diabody (국제 특허 출원 공개 번호 WO02-33072 를 참조), 항 CD47 아고니스트 Diabody (국제 특허 출원 공개 번호 WO01-66737 을 참조) 등이 바람직하다.

본 발명자들은 고농도 항체 함유 시료를 보존할 때의 안정성을 평가하기 위하여, 열가속 시험 및 광가속 시험에 의해 여러 첨가제의 효과를 검토하였다. 그 결과, 아미노산인 아르기닌을 함유하는 완충액 중에 고농도의 항체를 용해한 용액은, 아르기닌 비첨가의 용액에 비해 2 량체 생성량이 낮다는 점에서, 2 량체 생성을 억제하는 안정화제로서 아르기닌이 유효한 것을 알아내었다. 또한 아르기닌에 더하여 메티오닌을 함유하는 완충액 중에 고농도의 항체를 용해시킨 용액에 있어서, 아르기닌과 메티오닌의 합계 농도로 하여 아르기닌 단독의 경우보다 저농도에서 동일한 2 량체 생성의 억제 효과가 관찰된 점에서, 아르기닌과 메티오닌의 병용에 의한 상승 효과가 발휘되는 것을 알아내었다. 또, 아르기닌의 첨가에 의해 항체 분자의 탈아미드화가 억제되는 것을 알아내었다. 이들 검토 결과는, 본 명세서 중의 후술하는 실시예에 있어서, 180 ㎎/㎖ 의 인간화 항 IL-6 리셉터 항체를 함유하는 시료를 사용한 시험 결과로서 예시되어 있다.

즉, 안정화제로서 아르기닌을 함유함으로써, 항체의 2 량체의 생성이 적으며, 탈아미드화가 방지된 안정적인 항체 제제로 할 수 있다. 따라서, 본 발명의 제 1 양태는 용액 중에 아르기닌을 첨가하는 것을 특징으로 하고, 이로써 항체 함유 용액 제제의 항체 분자의 2 량체 생성 또는 탈아미드화를 억제하는 것에 관한 것이다. 그리고, 안정적인 항체 함유 용액 제제로서의 양태는 항체 및 아르기닌을 완충액 중에 함유하는 것을 특징으로 하는 것이다. 또, 상기 서술한 바와 같이, 본 발명의 항체 함유 용액 제제는 추가로 메티오닌을 함유함으로써, 아르기닌과 메티오닌의 병용에 의한 상승 효과가 발휘된다. 따라서, 본 발명의 제 2 양태는 용액 중에 아르기닌과 메티오닌을 첨가하는 것을 특징으로 하며, 특히 항체 함유 용액 제제의 항체 2 량체 생성을 억제하는 것에 관한 것이다. 그리고, 안정적인 항체 함유 용액 제제로서의 양태는 항체 및 아르기닌 및 메티오닌을 완충액 중에 함유하는 것을 특징으로 하는 것이다.

본 발명에서 사용하는 아르기닌으로는 단품, 그 유도체, 그 염 중 어느 것을 사용해도 되고, 특히 L-아르기닌 또는 그 염이 바람직하다. 본 발명에서 사용하는 메티오닌으로는 단품, 그 유도체, 그 염 중 어느 것을 사용해도 되고, 특히 L-메티오닌 또는 그 염이 바람직하다.

본 발명의 항체 함유 용액 제제 중에 메티오닌 비첨가로 아르기닌만이 함유될 때에는, 아르기닌의 양은 50 ∼ 1500 mM 인 것이 바람직하고, 100 ∼ 1000 mM 인 것이 보다 바람직하며, 200 ∼ 700 mM 인 것이 더욱 바람직하다. 본 발명의 항체 함유 용액 제제 중에 아르기닌 및 메티오닌이 함유될 때에는, 아르기닌과 메티오닌의 합계 농도가 50 ∼ 1200 mM 인 것, 예를 들어 아르기닌의 양이 40 ∼ 1000 mM 이며 또한 메티오닌의 양이 10 ∼ 200 mM 인 것이 바람직하고, 아르기닌의 양이 50 ∼ 700 mM 이며 또한 메티오닌의 양이 10 ∼ 100 mM 인 것이 보다 바람직하며, 아르기닌의 양이 100 ∼ 300 mM 이며 또한 메티오닌의 양이 10 ∼ 50 mM 인 것이 더욱 바람직하다.

완충액은 용액의 pH 를 유지하기 위한 물질인 완충제를 사용하여 조제한다. 본 발명의 고농도 항체 함유 용액 제제에 있어서는, 용액의 pH 가 4 ∼ 8 인 것이 바람직하고, 5.0 ∼ 7.5 인 것이 보다 바람직하며, 5.5 ∼ 7.2 인 것이 더욱 바람직하며, 6.0 ∼ 6.5 인 것이 더더욱 바람직하다. 본 발명에서 사용 가능한 완충제는 이 범위의 pH 를 조정할 수 있으며 또한 의약적으로 허용 가능한 것이다. 이러한 완충제는 용액 제제의 분야에서 당업자에게 공지된 것으로서, 예를 들어 인산염 (나트륨 또는 칼륨), 탄산 수소 나트륨 등의 무기염 ; 시트르산염 (나트륨 또는 칼륨), 아세트산 나트륨, 숙신산 나트륨 등의 유기산염 ; 또는 인산, 탄산, 시트르산, 숙신산, 말산, 글루콘산 등의 산류를 사용할 수 있다. 또한 Tris 류 및 MES, MOPS, HEPES 와 같은 굿 완충제, 히스티딘 (예를 들어 히스티딘 염산염), 글리신 등을 사용해도 된다. 본 발명의 고농도 항체 함유 용액 제제에 있어서는, 완충액이 히스티딘 완충액 또는 글리신 완충액인 것이 바람직하고, 특히 히스티딘 완충액이 바람직하다. 완충액의 농도는, 일반적으로는 1 ∼ 500 mM 이며, 바람직하게는 5 ∼ 100 mM 이며, 더욱 바람직하게는 10 ∼ 20 mM 이다. 히스티딘 완충액을 사용하는 경우, 완충액은 바람직하게는 5 ∼ 25 mM 의 히스티딘, 더욱 바람직하게는 10 ∼ 20 mM 의 히스티딘을 함유한다.

본 발명의 「안정적인」고농도 항체 함유 용액 제제는 냉장 온도 (2 ∼ 8 ℃) 에서 적어도 12 개월, 바람직하게는 2 년간, 더욱 바람직하게는 3 년간 ; 또는 실온 (22 ∼ 28 ℃) 에서 적어도 3 개월, 바람직하게는 6 개월, 더욱 바람직하게는 1 년간, 유의한 변화가 관찰되지 않는다. 예를 들어, 5 ℃ 에서 2 년간 보존한 후의 2 량체량 및 분해물량의 합계가 5.0 ％ 이하, 바람직하게는 2 ％ 이하, 더욱 바람직하게는 1.5 ％ 이하, 혹은 25 ℃ 에서 6 개월 보존한 후의 2 량체량 및 분해물량의 합계가 5.0 ％ 이하, 바람직하게는 2 ％ 이하, 더욱 바람직하게는 1.5 ％ 이하이다.

본 발명의 제제는 추가로 계면 활성제를 함유할 수 있다.

계면 활성제로는 비이온 계면 활성제, 예를 들어 소르비탄모노카프릴레이트, 소르비탄모노라우레이트, 소르비탄모노팔미테이트 등의 소르비탄 지방산 에스테르 ; 글리세린모노카프릴레이트, 글리세린모노미리스테이트, 글리세린모노스테아레이트 등의 글리세린 지방산 에스테르 ; 데카글리세릴모노스테아레이트, 데카글리세릴디스테아레이트, 데카글리세릴모노리놀레이트 등의 폴리글리세린 지방산 에스테르 ; 폴리옥시에틸렌소르비탄모노라우레이트, 폴리옥시에틸렌소르비탄모노올레에이트, 폴리옥시에틸렌소르비탄모노스테아레이트, 폴리옥시에틸렌소르비탄모노팔미테이트, 폴리옥시에틸렌소르비탄트리올레에이트, 폴리옥시에틸렌소르비탄트리스테아레이트 등의 폴리옥시에틸렌소르비탄 지방산 에스테르 ; 폴리옥시에틸렌소르비트테트라스테아레이트, 폴리옥시에틸렌소르비트테트라올레에이트 등의 폴리옥시에틸렌소르비트 지방산 에스테르 ; 폴리옥시에틸렌글리세릴모노스테아레이트 등의 폴리옥시에틸렌글리세린 지방산 에스테르 ; 폴리에틸렌글리콜디스테아레이트 등의 폴리에틸렌글리콜 지방산 에스테르 ; 폴리옥시에틸렌라우릴에테르 등의 폴리옥시에틸렌알킬에테르 ; 폴리옥시에틸렌폴리옥시프로필렌글리콜에테르, 폴리옥시에틸렌폴리옥시프로필렌프로필에테르, 폴리옥시에틸렌폴리옥시프로필렌세틸에테르 등의 폴리옥시에틸렌폴리옥시프로필렌알킬에테르 ; 폴리옥시에틸렌노닐페닐에테르 등의 폴리옥시에틸렌알킬페닐에테르 ; 폴리옥시에틸렌 피마자유, 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 (폴리옥시에틸렌 수소 피마자유) 등의 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 ; 폴리옥시에틸렌소르비트 밀랍 등의 폴리옥시에틸렌 밀랍 유도체 ; 폴리옥시에틸렌라놀린 등의 폴리옥시에틸렌라놀린 유도체 ; 폴리옥시에틸렌스테아르산 아미드 등의 폴리옥시에틸렌 지방산 아미드 등의 HLB 6 ∼ 18 을 갖는 것 ; 음이온 계면 활성제, 예를 들어 세틸 황산 나트륨, 라우릴 황산 나트륨, 올레일 황산 나트륨 등의 탄소 원자수 10 ∼ 18 의 알킬기를 갖는 알킬 황산염 ; 폴리옥시에틸렌라우릴 황산 나트륨 등의, 에틸렌옥사이드의 평균 부가 몰수가 2 ∼ 4 이고 알킬기의 탄소 원자수가 10 ∼ 18 인 폴리옥시에틸렌알킬에테르 황산염 ; 라우릴술포숙신산 에스테르나트륨 등의, 알킬기의 탄소 원자수가 8 ∼ 18 인 알킬술포숙신산 에스테르염 ; 천연계의 계면 활성제, 예를 들어 레시틴, 글리세로 인지질 ; 스핑고미엘린 등의 스핑고 인지질 ; 탄소 원자수 12 ∼ 18 의 지방산의 자당 지방산 에스테르 등을 전형적 예로서 들 수 있다. 본 발명의 제제에는, 이들 계면 활성제의 1 종 또는 2 종 이상을 조합하여 첨가할 수 있다.

바람직한 계면 활성제는 폴리옥시에틸렌소르비탄 지방산 에스테르 및 폴리옥시에틸렌폴리옥시프로필렌알킬에테르이고, 특히 바람직한 것은 폴리소르베이트 20, 21, 40, 60, 65, 80, 81, 85 그리고 플루로닉형 계면 활성제이며, 가장 바람직한 것은 폴리소르베이트 20, 80 및 플루로닉 F-68 (폴록사머 188) 이다.

본 발명의 항체 제제에 첨가하는 계면 활성제의 첨가량은 일반적으로는 0.0001 ∼ 10 ％ (w/v) 이며, 바람직하게는 0.001 ∼ 5 ％ 이고, 더욱 바람직하게는 0.005 ∼ 3 ％ 이다.

본 발명의 다른 양태로서, 본 발명의 제제는 바람직하게는 이하의 성분 :

A) 항 IL-6 리셉터 항체

B) 아르기닌 및/또는 메티오닌, 및 임의의 추가 성분으로서 또 다른 아미노산 (예를 들어 트립토판)

C) 완충제, 및

D) 계면 활성제

로 실질적으로 구성된다.

「실질적으로 구성된다」란, 후술하는 임의의 첨가 성분인 현탁제, 용해 보조제, 등장화제, 보존제, 흡착 방지제, 희석제, 부형제, pH 조정제, 무통화제, 황함유 환원제, 산화 방지제 등의 통상 제제에 첨가되는 성분 이외의 성분을 함유하지 않는 것을 의미한다.

상기 (B) 의 「아르기닌 및/또는 메티오닌, 및 임의의 추가 성분으로서 또 다른 아미노산 (예를 들어 트립토판) 」이란, 제제에 함유할 수 있는 첨가제로서의 아미노산의 종류가 (b-1) 아르기닌 ; (b-2) 아르기닌 및 메티오닌 ; (b-3) 메티오닌인 경우를 포함하며, 또 다른 아미노산을 함유하는 경우가 있는 것을 의미한다. 다른 아미노산으로서, 바람직한 예는 트립토판이고, 트립토판으로는 단품, 그 유도체, 그 염 중 어느 것을 사용해도 되며, 특히 L-트립토판 또는 그 염이 바람직하다.

본 발명의 제제에는, 필요에 따라 현탁제, 용해 보조제, 등장화제, 보존제, 흡착 방지제, 희석제, 부형제, pH 조정제, 무통화제, 황함유 환원제, 산화 방지제 등을 적절히 첨가할 수 있다.

현탁제의 예로는 메틸셀룰로오스, 폴리소르베이트 80, 하이드록시에틸셀룰로오스, 아라비아 고무, 트래거캔스말, 카르복시메틸셀룰로오스나트륨, 폴리옥시에틸렌소르비탄모노라우레이트 등을 들 수 있다.

용액 보조제로는 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유, 폴리소르베이트 80, 니코틴산 아미드, 폴리옥시에틸렌소르비탄모노라우레이트, 마크로골, 피마자유 지방산 에틸에스테르 등을 들 수 있다.

등장화제로는, 예를 들어 염화 나트륨, 염화 칼륨, 염화 칼슘 등을 들 수 있다.

보존제로는, 예를 들어 파라옥시벤조산 메틸, 파라옥시벤조산 에틸, 소르브산, 페놀, 크레졸, 클로로크레졸 등을 들 수 있다.

흡착 방지제로는, 예를 들어 인간 혈청 알부민, 레시틴, 덱스트란, 에틸렌옥사이드·프로필렌옥사이드 공중합체, 하이드록시프로필셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유, 폴리에틸렌글리콜 등을 들 수 있다.

황함유 환원제로는, 예를 들어 N-아세틸시스테인, N-아세틸호모시스테인, 티옥트산, 티오디글리콜, 티오에탄올아민, 티오글리세롤, 티오소르비톨, 티오글리콜산 및 그 염, 티오 황산 나트륨, 글루타티온, 탄소 원자수 1 ∼ 7 의 티오알칸산 등의 술프하이드릴기를 갖는 것 등을 들 수 있다.

산화 방지제로는, 예를 들어 에리소르브산, 디부틸하이드록시톨루엔, 부틸하이드록시아니솔,

-토코페롤, 아세트산 토코페롤, L-아스코르브산 및 그 염, L-아스코르브산 팔미테이트, L-아스코르브산 스테아레이트, 아황산 수소 나트륨, 아황산 나트륨, 갈산 트리아밀, 갈산 프로필 혹은 에틸렌디아민 4아세트산 2나트륨 (EDTA), 피로 인산 나트륨, 메타인산 나트륨 등의 킬레이트제를 들 수 있다.

본 발명의 항체 함유 용액 제제는 통상 비경구 투여 경로로, 예를 들어 주사제 (피하주, 정주 (靜注), 근주 등), 경피, 경점막, 경비 (經鼻), 경폐 등으로 투여되는데, 경구 투여도 가능하다. 피하 주사용으로는, 1 회당 항체 투여량이 대량이 되는 한편 (100 ∼ 200 ㎎ - 정도), 주사액량의 제한이 있기 때문에, 본 발명의 제제는 피하 주사용으로서 특히 적합하다.

바람직하게는, 본 발명의 항체 함유 용액 제제의 침투압비는 약 0.5 ∼ 4, 보다 바람직하게는 약 0.7 ∼ 2, 더욱 바람직하게는 약 1 이다.

바람직하게는, 본 발명의 항체 함유 용액 제제의 점도는 약 2 ∼ 15 mPa·s, 더욱 바람직하게는 약 4 ∼ 10 mPa·s 이다. 단, 본 발명의 점도는 콘 플레이트형 점도계를 사용한 회전 점도계법 (제 15 개정 일본 약국방 일반 시험법 2.53 점도 측정법) 으로 측정한 것이다.

본 발명에서는, 후술하는 실시예의 결과로부터, 아르기닌 단독, 또는 아르기닌과 메티오닌, 또는 메티오닌 단독을 첨가함으로써, 장기 보존시에도 항체의 2 량체 생성이나 탈아미드화가 적은 안정적인 용액 제제를 얻을 수 있다.

본 발명의 또 다른 양태로서, 용액 중에 아르기닌 또는 그 염을 첨가하는 것을 포함하는, 항체 함유 용액 제제의 탈아미드화를 억제하는 방법이 제공된다.

또 다른 양태로서, 용액 중에 아르기닌과 메티오닌을 첨가하는 것을 포함하는, 항체 함유 용액 제제의 항체 2 량체 생성을 억제하는 방법이 제공된다.

상기한 2 개의 방법에 있어서, 항체는 바람직하게는 인간화 항체 또는 인간 항체인 항인터류킨-6 리셉터 항체이다.

본 발명을 이하의 실시예에 의해 더욱 상세하게 설명하는데, 본 발명의 범위는 이들에만 한정되는 것은 아니다.

실시예

항체 시료

항 IL-6 리셉터 인간화 항체는 국제 특허 출원 공개 번호 WO92/19759호의 실시예 10 에 기재된 인간 엘롱게이션 펙터 I

프로모터를 이용하고, 일본 공개특허공보 평8-99902호의 참고예 2 에 기재된 방법에 준하여 제조한 인간화 항체이다. 또한, 실시예의 표 중에서는 MRA 라고 기재하는 경우도 있다.

실시예 1

아르기닌과 메티오닌의 조합에 의한 안정화 효과

항 IL-6 리셉터 인간화 항체를 함유하는 용액 제제에 대하여, 아르기닌과 메티오닌의 조합이 제제의 안정화에 미치는 영향을 평가하였다.

본 검토에서는, 아르기닌과 메티오닌의 조합 효과를 평가하기 위하여, 시료 No. A1 ∼ A9 의 평가 시료를 조제하였다. 각 평가 시료의 처방은 이하와 같다.

[표 1-1]

용액 제제의 안정성을 평가하기 위하여, 각 시료의 열가속 시험 (40 ℃ - 3 개월 및 25 ℃ - 6 개월 보존) 을 실시하였다. 그리고, 열가속 전후에서의 항체의 순도를 겔 여과 크로마토그래프법 (SEC) 에 의해 평가하였다. 분석 조건은 이하와 같다.

[겔 여과 크로마토그래프법]

시료를 그대로 측정 용액으로 한다.

측정 용액 1 ㎕ 에 대하여, 이하의 조건으로 액체 크로마토그래프법에 의해 시험을 실시하고, 2 량체 (Dimer), 단량체 (Monomer), 저분자량 분해물 (LMW) 의 피크 면적을 자동 분석법에 의해 측정하여, 그 양 (％) 을 구한다.

[표 1-2]

분석 조건

칼럼 : TSKgel G3000SWxl 7.8 ㎜ I.D. × 30 ㎝ (토소)

이동상 : pH 7.0 의 인산 완충액 (300 m㏖/ℓ 염화 나트륨 및 0.05 ％ 아지화 나트륨을 함유하는 pH 7.0 의 50 m㏖/ℓ 인산 완충액)

주사 주입량 : 항 IL-6 리셉터 인간형화 항체로 하여 약 180 ㎍

유량 : 1 ㎖/min

검출 파장 : 280 ㎚

[수학식 1]

계산식

각 피크의 합계 면적 ＝ 단량체 (Monomer) 의 피크 면적 ＋ 2 량체 (Dimer) 의 피크 면적 ＋ 저분자량 분해물 (LMW) 의 피크 면적

2 량체량 (Dimer) (％) ＝ (2 량체의 피크 면적/각 피크의 합계 면적) × 100

저분자량 분해물량 (LMW) (％) ＝ (저분자량 분해물의 피크 면적/각 피크의 합계 면적) × 100

전형적인 크로마토그래프를 도 1 에 나타낸다.

본 실시예에서 얻어진 겔 여과 크로마토그래프법 (SEC) 의 평가 결과를 표 1 및 도 2, 도 3 에 나타내었다. 이와 같이, 아르기닌을 첨가한 시료 (시료 No. A2 ∼ A6) 에 대하여, 40 ℃ - 3 개월간 및 25 ℃ - 6 개월간의 가속에 의한 2 량체량은 아르기닌 비첨가의 시료 (시료 No. A1) 에 비해 낮아, 아르기닌에 의한 2 량체 생성의 억제 효과를 확인할 수 있었다. 또, 아르기닌 첨가량에 비례하여 2 량체량이 낮아지는 것도 확인할 수 있었다. 한편, 아르기닌 (100 mM) 에 메티오닌을 첨가한 시료 (시료 No. A7 ∼ A9) 에 대하여, 40 ℃ - 3 개월간 및 25 ℃ - 6 개월간의 가속에 의한 2 량체량은, 전체 안정화제 농도로서 거의 동일한 아르기닌 농도가 150 mM 인 시료 (시료 No. A3, A4) 보다 낮아, 아르기닌 농도가 300 mM 인 시료 (시료 No. A6) 와 동등하였다. 이 결과는, 아르기닌과 메티오닌의 조합에 의한 상승 효과로서의 2 량체 생성 억제 효과를 나타내는 것으로 생각할 수 있다.

또, 저분자량 분해물량에 대하여, 아르기닌 및 메티오닌의 영향은 확인되지 않았다.

[표 1-3]

실시예 2

아르기닌에 의한 탈아미드화의 억제 효과

항 IL-6 리셉터 인간화 항체를 함유하는 용액 제제에 대하여, 아르기닌에 의한 탈아미드화의 억제 효과를 평가하였다.

본 검토에서는, 아르기닌 및 메티오닌에 대하여, 첨가량이 상이한 시료 No. A10 ∼ A15 및 시료 No. A16 ∼ A18 의 평가 시료를 조제하였다. 각 평가 시료의 처방은 이하와 같다.

[표 2-1]

용액 제제의 안정성을 평가하기 위하여, 각 시료의 열가속 시험 (40 ℃ - 3 개월 및 25 ℃ - 6 개월 보존) 을 실시하였다. 그리고, 열가속 전후에서의 항체의 순도를, 이온 교환 크로마토그래프법 (IEC) 에 의해 평가하였다. 분석 조건은 이하와 같다.

[이온 교환 크로마토그래프법]

시료에 정제수를 첨가하여 1 ㎖ 중에 항 IL-6 리셉터 인간화 항체를 약 1 ㎎ 상당량 함유하는 액을 조제한 것을 각 시료의 측정 용액으로 한다.

측정 용액 30 ㎕ 에 대하여, 이하의 조건으로 액체 크로마토그래프법에 의해 시험을 실시하고, 각각의 피크 면적을 자동 분석법에 의해 측정하여, 면적 백분율법에 의해 MRA Pre, MRA Main, MRA Sub-1, MRA Sub-2, MRA R-1, 1Q(H)-MRA, 2Q(H)-MRA 및 그 밖의 유연 (類緣) 물질 (Others) 의 양 (％) 을 구한다.

MRA Pre 는 주성분보다 짧은 유지 시간에 용출되는 피크의 총합으로서, 항 IL-6 리셉터 인간화 항체의 탈아미드체를 중심으로 한 복수의 분해물이 함유된다. 이 Pre 피크의 생성량이 적은 것은 본 항체의 탈아미드화가 억제되어 있는 것을 의미한다.

[표 2-2]

분석 조건

칼럼 : ProPac WCX-10 4 × 250 ㎜ (DIONEX)

이동상 : A 액 : pH 6.1 의 25 m㏖/ℓ MES 완충액

B 액 : pH 6.1 의 25 m㏖/ℓ MES 완충액 (250 m㏖/ℓ 염화 나트륨 함유)

주사 주입량 : 항 IL-6 리셉터 인간형화 항체로 하여 약 30 ㎍

유량 : 0.5 ㎖/min

검출 파장 : 280 ㎚

[수학식 2]

계산식

각 피크의 합계 면적 ＝ MRA Pre 의 피크 면적의 합계 ＋ MRA Main 의 피크 면적 ＋ MRA Sub-1 의 피크 면적 ＋ MRA Sub-2 의 피크 면적 ＋ MRA Sub-3 의 피크 면적 ＋ MRA R-1 의 피크 면적 ＋ 1Q(H)-MRA 의 피크 면적의 합계 ＋ 2Q(H)-MRA 의 피크 면적의 합계 ＋ 그 밖의 유연 물질 (Others) 의 피크 면적의 총합

MRA Pre 의 양 (％) ＝ (MRA Pre 의 피크 면적의 합계/각 피크의 합계 면적) × 100

전형적인 크로마토그래프를 도 4 에 나타낸다. MRA Pre 는 MRA Main 보다 앞에 나오는 모든 피크의 총합이다.

본 실시예에 의한 이온 교환 크로마토그래프법 (IEC) 의 평가 결과를 표 2 및 도 5, 도 6 에 나타내었다. 이와 같이, 아르기닌을 첨가한 시료 (시료 No. A11 ∼ A15) 에 대하여, 40 ℃ - 3 개월간 및 25 ℃ - 6 개월간의 가속에 의한 Pre 피크량은, 아르기닌 비첨가의 시료 (시료 No. A10) 에 비해 낮아, 아르기닌에 의한 Pre 피크 생성의 억제 효과를 확인할 수 있었다. 또, 아르기닌 첨가량에 비례하여 Pre 피크량이 낮아지는 것도 확인할 수 있었다. 한편, 메티오닌을 첨가한 시료 (시료 No. A16 ∼ A18) 에 대하여, 40 ℃ - 3 개월간 및 25 ℃ - 6 개월간의 가속에 의한 Pre 피크량은 아르기닌 비첨가의 시료 (시료 No. A10) 와 동등하여, 메티오닌 첨가의 영향은 확인되지 않았다.

[표 2-3]

실시예 3

아르기닌과 메티오닌의 조합에 의한 안정화 효과 (2)

실시예 1 과 동일하게 항 IL-6 리셉터 인간화 항체를 함유하는 용액 제제에 대하여, 아르기닌과 메티오닌의 조합이 제제의 안정화에 미치는 영향을 평가하였다.

본 검토에서는, 아르기닌과 메티오닌의 조합 효과를 평가하기 위하여, 시료 No. A19 ∼ A27 의 평가 시료를 조제하였다. 각 평가 시료의 처방은 이하와 같다.

[표 3-1]

용액 제제의 안정성을 평가하기 위하여, 각 시료의 광가속 시험 (총조도 120 만 lux 및 총근자외 조사 에너지 200 W·h/㎡) 을 실시하였다. 그리고, 광가속 전후에서의 항체의 순도를, 실시예 1, 2 와 동일한 겔 여과 크로마토그래프법 (SEC) 및 이온 교환 크로마토그래프법 (IEC) 에 의해 평가하였다.

본 실시예에 있어서의 겔 여과 크로마토그래프법 (SEC) 의 평가 결과를 표 3 및 도 7 에 나타내었다. 이와 같이, 아르기닌을 첨가한 시료 (시료 No. A20 ∼ A24) 에 대하여, 광가속에 의한 2 량체량은 아르기닌 비첨가의 시료 (시료 No. A19) 에 비해 낮아, 아르기닌에 의한 2 량체 생성의 억제 효과를 확인할 수 있었다. 또, 아르기닌 첨가량에 비례하여 2 량체량이 낮아지는 것도 확인할 수 있었다. 한편, 아르기닌 (100 mM) 에 메티오닌을 첨가한 시료 (시료 No. A25 ∼ A27) 에 대하여, 광가속에 의한 2 량체량은 전체 안정화제 농도로서 거의 동일한 아르기닌 농도가 150 mM 인 시료 (시료 No. A22) 보다 낮고, 또 아르기닌 농도가 200 mM 및 300 mM 인 시료 (시료 No. A23, A24) 보다 낮았다. 이 결과는 아르기닌과 메티오닌의 조합에 의한 상승 효과로서의 2 량체 생성의 억제 효과를 나타내는 것으로 생각할 수 있다.

저분자량 분해물량에 대하여, 아르기닌 및 메티오닌의 영향은 확인되지 않았다.

[표 3-2]

다음으로, 이온 교환 크로마토그래프법 (IEC) 의 평가 결과를 표 4 및 도 8 에 나타내었다.

이와 같이, 아르기닌을 첨가한 시료 (시료 No. A20 ∼ A24) 에 대하여, 광가속에 의한 Pre peak 량은 아르기닌 비첨가의 시료 (시료 No. A19) 에 비해 낮아, 아르기닌에 의한 Pre peak 생성의 억제 효과를 확인할 수 있었다. 또, 아르기닌 첨가량에 비례하여 Pre peak 량이 낮아지는 것도 확인할 수 있었다. 한편, 아르기닌 (100 mM) 에 메티오닌을 첨가한 시료 (시료 No. A25 ∼ A27) 에 대하여, 광가속에 의한 2 량체량은 전체 안정화제 농도로서 거의 동일한 아르기닌 농도가 150 mM 인 시료 (시료 No. A22) 보다 낮고, 또 아르기닌 농도가 200 mM 및 300 mM 인 시료 (시료 No. A23, A24) 보다 낮았다. 이 결과는 아르기닌과 메티오닌의 조합에 의한 상승 효과로서의 Pre peak 생성의 억제 효과를 나타내는 것으로 생각할 수 있다.

[표 4]

Claims

아르기닌 50 ~ 150 mM 및 메티오닌 10 ~ 50 mM 을 함유하고, pH 가 5.5 ~ 7.2 인 것을 특징으로 하는 안정적인 항체 함유 용액 제제.
제 1 항에 있어서,
추가로 히스티딘 완충제를 함유하는 용액 제제.
제 2 항에 있어서,
추가로 계면 활성제를 함유하는 용액 제제.
제 3 항에 있어서,
항체의 농도가 50 ㎎/㎖ 이상인 용액 제제.
제 3 항에 있어서,
항체의 농도가 100 ㎎/㎖ 이상인 용액 제제.
제 3 항에 있어서,
항체의 농도가 120 ㎎/㎖ 이상인 용액 제제.
제 4 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
항체가 항인터류킨-6 리셉터 항체인 용액 제제.
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제 7 항에 있어서,
항체가 인간화 항체 또는 인간 항체인 용액 제제.
제 7 항에 있어서,
추가로 트립토판을 함유하는 용액 제제.
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제 9 항에 있어서,
점도가 2 ∼ 15 mPa·s 인 용액 제제.
제 9 항에 있어서,
용액 제제가 22 ∼ 28 ℃ 에서 적어도 6 개월간 안정적인 용액 제제.
제 9 항에 있어서,
항체 2 량체의 생성이 억제되는 것을 특징으로 하는 용액 제제.
제 9 항에 있어서,
항체 분자의 탈아미드화가 억제되는 것을 특징으로 하는 용액 제제.
제 9 항에 있어서,
피하 투여되는 용액 제제.
제 9 항에 있어서,
용액 제제의 제조 과정에 동결 건조 공정을 포함하지 않고 제조되는 용액 제제.
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아르기닌 및 메티오닌으로 이루어지는 안정제의 합계 농도가 50 ~ 1200 mM 가 되도록 용액 중에 아르기닌과 메티오닌을 첨가하는 것을 포함하는 항체 함유 용액 제제의 항체 2 량체 생성을 억제하는 방법.
제 20 항에 있어서, 용액의 pH 가 5.5 ~ 7.2 인 것을 특징으로 하는 방법.
제 21 항에 있어서, 항체가 인간화 항인터류킨-6 (IL-6) 리셉터 항체인 것을 특징으로 하는 방법.
제 22 항에 있어서, 안정제의 합계 농도가 150 mM 이하인 것을 특징으로 하는 방법.
제 23 항에 있어서, 아르기닌의 농도가 100 mM 인 것을 특징으로 하는 방법.
제 9 항에 있어서, 인간화 항체가 인간화 항인터류킨-6 (IL-6) 리셉터 항체MRA 인 용액 제제.
제 9 항에 있어서, 아르기닌 및 메티오닌의 합계 농도가 150 mM 이하인 용액 제제.
제 9 항에 있어서, 아르기닌의 농도가 100 mM 인 용액 제제.
제 26 항에 있어서, 아르기닌의 농도가 100 mM 인 용액 제제.