JPH08507523A - 脂質−ポリマー結合体およびリポソーム - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 長循環性リポソームを形成することに用いられる脂質−ポリマー結合体を開示する。結合体は、極性の頭部に以下のポリマーの１つ：ポリビニルピロリドン、ポリビニルメチルエーテル、ポリヒドロキシプロピルメタクリレート、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド、ポリヒドロキシエチルアクリレート、ポリメタクリルアミド、ポリジメチルアクリルアミド、ポリメチルオキサゾリン、ポリエチルオキサゾリン、ポリヒドロキシエチルオキサゾリン、ポリヒドロキシプロピルオキサゾリン、またはポリアスパラギン酸アミド、を共有結合した小胞形成脂質を含む。脂質−ポリマー結合体を含有するリポソームを調製する方法も開示する。

Description

【発明の詳細な説明】 脂質−ポリマー結合体およびリポソーム 発明の分野 本発明は、脂質−ポリマー結合体、およびリポソーム中でそれらの使用に関す る。参考文献 発明の背景 リポソームは、血流中で用途の広い薬剤キャリアーとしての可能性を有する。 これらは内部水溶性区画および外部親油性殻の両方を有するため、リポソームに 水溶性または脂質溶解性薬剤の両方を導入し得る。リポソームはリン脂質および コレステロールのような天然の生化学的脂質から形成され得るので、これらは毒 性のある副作用なしに体で分解され得る（poznansky）。 最近まで、薬剤キャリアーとしてのリポソームの可能性は、血流からのリポソ ームの急速な除去によって制限されていた。例えば、従来のリポソームは、静脈 投与後１〜２時間以内に血流から大量に取り除かれ得る（Saba）。 リポソームの循環時間を延長するための種々のアプローチが提案されてきた。 これらうちの２つは、40〜50時間までの期間まで血流でリポソームの半減期を延 長することに成功してきた。共有の特許番号第4,837,028号に記載された１つの アプローチにおいて、リポソームはガングリオシドＧ_M1および主に堅い脂質を用 いて調剤される。共有の特許番号第5,013,556号に開示された他の一般的なアプ ローチにおいては、リポソームはポリエチレングリコール（PEG）鎖の層でコー トされる。発明の要旨 本発明の１つの全般的な目的は、血流中で長い循環時間を有するリポソームを 調製するために用いられる新規な脂質− ポリマー結合体を提供することである。 本発明の他の目的は、このような長く循環するリポソームを提供することであ る。 １つの局面において、本発明はリポソーム中に取り込まれ得る脂質−ポリマー 結合体を包含する。結合体は、（i）極性の頭部（polar head group）を有する 小胞形成脂質、および（ii）頭部に共有結合した、ポリビニルピロリドン、ポリ ビニルメチルエーテル、ポリヒドロキシプロピルメタクリレート、ポリヒドロキ シプロピルメタクリルアミド、ポリヒドロキシエチルアクリレート、ポリメタク リルアミド、ポリジメチルアクリルアミド、ポリメチルオキサゾリン、ポリエチ ルオキサゾリン、ポリヒドロキシエチルオキサゾリン、ポリヒドロキシプロピル オキサゾリン、またはポリアスパラギン酸アミド（polyaspartamide）ポリマー を包含するポリマー鎖あるいはポリマー領域を含む。ポリマー鎖は、自由な形態 において、室温で水に少なくとも5%（w/v）、クロロホルム、アセトニトリル、 ジメチルホルムアミド、および／または塩化メチレンには少なくとも約0.5%（w/ v）の溶解することに特徴がある。 １つの好ましい実施態様においては、ポリマー鎖は特定のポリマーのうち１つ のホモポリマー、さらに好ましくは、ポリビニルピロリドン、ポリメチルオキサ ゾリン、ポリエチルオキサゾリン、またはポリヒドロキシプロピルメタクリルア ミドのホモポリマーである。 他の実施態様においては、ポリマーは特定のポリマーのう ち１つとポリエチレングリコール（PEG）とのブロックコポリマーである。 さらなる実施態様においては、ボリマーは、ビニルピロリドン、および酢酸ビ ニルまたはアクリルアミドのような他のモノマーから形成されるランダムコポリ マーである。 上記に挙げた脂質−ポリマー結合体は、治療学的活性化合物を結合体に結合し 得るように、末端に官能基を付与され得る。 他の局面においては、本発明は、延長された血液循環時間によって特徴付けら れるリポソームを調製する方法を包含する。この方法は、小胞形成脂質に、１〜 30モルパーセントの間の脂質−ポリマー結合体および薬剤化合物を添加して、小 胞形成脂質、脂質−ポリマー結合体および薬剤化合物を取り込んだ形状で含有す るリポソームを形成すること、ならびにリポソームを約0.05〜0.2ミクロンの間 のサイズの範囲で選択された大きさにすることを包含する。 本発明に従って調製されるリポソームは、特徴的な表面性質を有する。例えば 、リポソーム表面電荷は遮蔽される。電荷の遮蔽は、リポソームの電気泳動移動 度の減少によって測定される。減少した移動度はリポソームのゼータ電位の減少 に反映する。 脂質−ポリマー結合体を含有するリポソームの電気泳動移動度は、ホスファチ ジルグリセロールが脂質−ポリマー結合体の代わりに用いられる同じリポソーム と比較される。脂質 −ポリマー結合体およびホスファチジルグリセロールの両方が負電荷をリポソー ム表面に与えるので、両方のリポソーム調製物は同じ実効表面電荷を有する。し かし、脂質−ポリマー結合体を含有するリポソームの電気泳動移動度は、ホスフ ァチジルグリセロールを含有するリポソームより減少する。 これらおよび他の目的ならびに本発明の特徴は、以下の発明の詳細な説明を添 付の図面と共に読むと、さらに充分に明らかとなる。図面の簡単な説明 図１は、ビニルピロリドンを重合するための合成反応スキームを示す。 図２は、2-メチルオキサゾリンを重合するための合成反応スキームを示す。 図３は、ポリアスパラギン酸アミド合成のための合成反応スキームを示す。 図４は、ビニルピロリドンとメチルアクリレートモノマーとのランダム共重合 のための合成反応スキームを示す。 図５は、ポリビニルピロリドンとポリエチレングリコールセグメントとを用い るブロックコポリマーのための合成反応スキームを示す。 図６は、N-ヒドロキシコハク酸イミドの使用によるポリビニルピロリドンのリ ン脂質へのカップリングを示す。 図７は、ポリメチルオキサゾリンの末端水酸基のカルボン 酸基への転化、およびこのカルボキシル基を介するポリマーのリン脂質へのカッ プリングを示す。発明の詳細な説明 Ｉ．定義 別に示さなければ、以下の用語は次の定義を有する。 「ホモポリマー」は、その組成において１種のモノマーを有するポリマーであ る。 「コポリマー」は、その組成において１種以上のタイプのモノマーを有するポ リマーである。コポリマーは、ブロックコポリマーまたはランダムコポリマーで あり得る。ブロックコポリマーは、異なるホモポリマーの交互ブロック（セグメ ント）を含む。ランダムコポリマーは、２種またはそれ以上のモノマーのランダ ム配列を含む。 用語「小胞形成脂質」は、疎水性部分（moiety）および極性の頭部を有するあ らゆる両親媒性脂質を含むことを意図し、そしてリン脂質によって例示されるよ うに、その疎水性部分は、内部（二重層膜の疎水性領域）と接触し、そしてその 極性の頭部部分は外部（膜の極性表面）に向かって配向した状態で、（a）水中 で自発的に二層小胞を形成するか、または（b）脂質二重層中に安定に取り込ま れる。 ポリマーが水に「可溶」とは、ポリマー（ホモポリマーまたはコポリマーのい ずれか）が、約20〜150サブユニットの間のポリマーのサイズであり、室温で少 なくとも５重量％可溶 である場合のことをいう。 ポリマーが極性有機溶媒（クロロホルム、アセトニトリル、ジメチルホルムア ミド、および／または塩化メチレンであり得る）に「可溶」とは、ポリマー（ホ モポリマーまたはコポリマーのいずれか）が、約20〜150サブユニットの間のポ リマーのサイズであり、室温で少なくとも0.5重量％可溶である場合のことをい う。 II．ポリマー−脂質結合体の調製 本発明の脂質−ポリマー結合体は、（i）極性の頭部を有する小胞形成脂質、 および（ii）頭部に共有結合した、以下に述べるような溶解性を有するポリマー 鎖を包含する。このセクションは結合体の調製を述べる。 Ａ．小胞形成脂質 本発明のリポソームを形成するための脂質−ポリマー結合体で用いられる小胞 形成脂質は、種々の合成小胞形成脂質または天然に存在する小胞形成脂質から選 択され得る。代表的に、これらの脂質はリン脂質、スフィンゴ脂質およびステロ ールを包含し得る。 脂質−ポリマー結合体で用いられる小胞形成脂質の重要な特徴は、脂質がその 極性の頭部に、ポリマー鎖の共有結合に適切な化学的基を有していることである 。極性の頭部は、例えば、アミノ基、水酸基、アルデヒド基またはカルボン酸基 を含み得る。 さらに、脂質−ポリマー結合体の小胞形成脂質は、血清中のリポソームの安定 性を制御し、そして血流中てリポソームから取り込まれた薬剤の放出の速度を制 御するために、特定の流動度または剛性を達成するように選択される。これらの 脂質はまた、脂質水素化特性において所望のリポソーム調製特性を達成するため に選択され得る。例えば、より流動性の脂質は、より剛直な脂質成分よりも押出 しによって調整および大きさを整えやすいことが一般的である。 脂質−ポリマー結合体の小胞形成脂質のより好ましい実施態様は、２つの炭化 水素鎖、代表的にはアシル鎖、および化学的基を含有する極性の頭部を有する脂 質である。このクラスで含まれるのは、リン脂質であり、例えば、ホスファチジ ルコリン（PC）、ホスファチジルエタノールアミン（PE）、ホスファチジルグリ セロール（PG）、ホスファチジル酸（PA）、ホスファチジルイノシトール（PI） 、およびスフィンゴミエリン（SM）のようなリン脂質がこのクラスに含まれ、２ つの炭化水素鎖は、代表的に約14〜22個の炭素原子長であり、そして種々の不飽 和度を有する。 ホスファチジルエタノールアミン（PE）は、本発明にとって好ましいリン脂質 の例である。なぜならば、ポリマーにカップリングする脂質に都合の良い反応性 アミノ基を含むからである。実施例で例示される１つの好ましいPEは、ジステア リルPE（DSPE）である。 Ｂ．ポリマー 結合体のポリマー鎖は、ポリビニルピロリドン、ポリビニルメチルエーテル、 ポリヒドロキシプロピルメタクリレート、ポリヒドロキシエチルアクリレート、 ポリメタクリルアミド、ポリジメチルアクリルアミド、ポリメチルオキサゾリン 、ポリエチルオキサゾリン、またはポリアスパラギン酸アミドから形成される。 ポリマー鎖は、好ましくは20と150との間のモノマーサブユニット、さらに好ま しくは40と100との間のモノマーサブユニットを含む。 この鎖は、選択されたポリマーのホモポリマーあるいはランダムコポリマー、 あるいは第２のポリマーのブロックまたは単一のサブユニットで隔てられた１種 またはそれ以上の選択されたポリマーを含むブロックコポリマーである得る。第 ２のポリマーは、上記で特定されたポリマーとは別のポリマー、またはランダム またはブロックコポリマーが以下に述べられるようなリポソームにおける脂質− ポリマー結合体の性質に重要である以下の溶解度の制約を満たす限定を有する別 のポリマーのタイプであり得る。特に、コポリマー組成物は、例えば、ポリマー がフリーな形態（脂質部分に結合されていない）において、室温で少なくとも5% （w/v）の水への溶解度、および室温で少なくとも約0.5%（w/v）のクロロホルム 、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、および／または塩化メチレンへの溶 解度によって特徴付けられるようなコポリマー組成物である。 好ましいホモポリマーおよびコポリマー、ならびにこれら の合成方法をここで説明する。 １．ホモポリマーの溶解性 本発明の好ましいホモポリマーは、ポリビニルピロリドン（PVP）である。こ のポリマーは、以下の表１に示されるように冷水に容易に溶解する（少なくとも ５重量％）（Molyneux）。このポリマーはまた、１種またはそれ以上の極性溶媒 クロロホルム、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、および／または塩化メ チレンにも可溶である（少なくとも０．５重量％）。表１に示されるPVPポリマ ーは、約60（PVP7000）から3500（PVP400,000）までの範囲のサブユニット数を 有する。ここで定義されるように、水および極性有機溶媒中の特定の溶解度は、 約20〜150サブユニットの間の所望のポリマーサイズを有するポリマーについて 測定される。従って、表１に記載の3,500サブユニットを有するPVP鎖のようなよ り大きなサイズのポリマーについての溶解度は、約20〜150サブユニットを有す るPVP鎖のようなより小さなサイズのポリマーについての最小溶解度値を反映す るようである。 上記の他のホモポリマーの溶解性を考慮すれば、ポリ（ジメチルアクリルアミ ド）は、水ならびにメタノール、エタノール、およびジオキサンのような有機溶 媒に可溶である。ポリメタクリルアミドは、水、メタノール、エチレングリコー ル、およびアセトンに可溶であるが、炭化水素およびジエチルエーテルには不溶 である（Molyneux）。 ポリエチル−およびポリメチルオキサゾリンは水に可溶であり、アセトニトリ ル、クロロホルム、およびジメチルホルムアミドに可溶である（Molyneux）。 ポリビニルメチルエーテルは水に可溶であり、そしてアルコール、アミン、エ ステル、芳香族炭化水素、および塩素化炭化水素にも可溶である（Molyneux）。 ポリアスパラギン酸アミドは、アスパラギン酸から誘導されるポリマーであり 、そしてポリマー鎖に沿って水酸基を生成させるエタノールアミンとの反応によ って水に可溶になる。このポリマーは水およびジメチルホルムアミドに可溶であ る（Neri）。 ポリヒドロキシプロピルメタクリレートおよびポリヒドロキシエチルアクリレ ートもまた、水および１種またはそれ以上の特定の極性有機溶媒に可溶である。 さらに、ホモポリマーは、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピル セルロース、またはヒドロキシエチルセルロースのような誘導体化セルロースで あり得る。非誘導体化セルロースにおいては、分子間水素結合が水中でのセルロ ースの溶解度を減少させる。セルロース水酸基を誘導体化することは水素結合を 減少させ、その結果、水中でのセルロースの溶解度を増加させる。セルロースの 誘導体は、C-2、C-3、およびC-6の水酸基での置換の程度を変化させることで通 常形成される。 好ましい誘導体化セルロースは以下の溶解度を示す。例えば、ヒドロキシプロ ピルセルロースおよびヒドロキシエチルセルロースは、水、クロロホルム、アセ トン、ピリジン、シクロヘキサノンに可溶であり、そしてエタノール、ジエチル エーテルおよび脂肪族炭化水素には不溶である。セルロースアセテートは、水、 塩化メチレン、クロロホルム、テトラヒドロフランに特に可溶である。脂肪族炭 化水素、エタノール、およびべンゼンには不溶である（Fuchs）。 表２は、４種のポリマー：ポリエチレングリコール（PEG）、ポリメチルオキ サゾリン（poly（MeOz））、ポリエチルオキサゾリン（poly（EtOz））、および ポリビニルピロリドン（PVP）の溶解度の比較テストを示す。極性指数において0 .1から10.2までの範囲の10種の溶媒における各々のポリマーの溶解度を、室温、 すなわち約24℃で目視により決定した。 ポリマーが室温で完全に溶解した場合、ポリマーを特定の溶媒に可溶と評価し た。室温で完全に溶解しなかったポリマー／溶媒の組合せをわずかに暖め、ポリ マーが溶解した場合、加熱可溶と評価した。加熱しても特定の溶媒に完全に溶解 しないポリマーを不溶と評価した。 表２に見られるように、どのポリマーも、ベンゼン中のPEGを除いては、室温 で2.8未満の極性指数を有する溶媒に不溶である。しかし、全てのポリマーは、5 .8以上の極性指数を有する溶媒に可溶である。 本発明の重要な特徴は、脂質−ポリマー結合体のために選択されたポリマーが 室温で水媒体に可溶であり、そして表２の４種のポリマーについて示されるよう に、種々の有機溶媒にも可溶であることである。同様の方法を用いて、本発明に 有用な他のポリマーの溶解特性を変化させ得る。 あるいは、本発明のポリマーは、ブロックまたはランダムコポリマーのいずれ かのような、上記に指定されたモノマーを組み込むコポリマーであり得る。例え ば、高いパーセンテージのビニルピロリドンおよび他のサブユニット、例えば、 ビニルメチルエーテル、メチルアクリレート、ヒドロキシプロピルメタクリレー ト、ヒドロキシエチルアクリレート、メタクリルアミド、およびジメチルアクリ ルアミドを含有するポリマーは、PVP合成に用いられるラジカル重合法によって 調製され得る。 必要な溶解特性を有する好ましいブロックコポリマーは、PEGと上記に開示さ れた１つのホモポリマーとの１つまたはそれ以上の交互ブロックを含んで形成さ れる。好ましい実施態様において、ヘテロポリマーはPVPとPEGとの交互ブロック 、または各々の単一ブロックからなるブロックコポリマーである。 ２．ホモポリマーの合成 N-ビニルアミドポリマーの一例であるポリビニルピロリドン（PVP）は、本発 明のこの局面の好ましい実施態様として詳細に説明される。PVPは、ビニルピロ リドン（VP）モノマーのフリーラジカル、アニオン、またはカチオン重合によっ て合成され得る。好ましくは、モノマーは、過酸化水素またはアゾビスイソブチ ロニトリル（AIBN）のようなフリーラジカル開始剤の存在下でフリーラジカル経 路によって重合される。 実施例１に記載され、図１に示されるように、分子量約6,000のPVPを合成する には、VPモノマーをメルカプト酢酸（MACA）およびAIBNと共にインキュベートす る。ポリマーの遊離末端で小胞形成脂質にカップリングするための化学的基（カ ルボキシル基）を生成させるために、MACAを重合反応に用いる。さらに、所望の 長さのポリマーを合成するために、MACA濃度を変える。例えば、分子量約6,000 ダルトンのPVPポリマーを合成するためには、0.2Ｍ MACA濃度を用いる。MACAは また、生成物の不均一性を減少させ、そして生成物はさらにサイズ分別によるさ らなる精製を必要とし得ない（Andreani、Veronese）。あるいは、メルカプトエ タノール（ME）またはメルカプトプロパン酸（MPA）のような他のメルカプタン は、適切な末端基を生成させるために重合反応においてMACAと置き換え得る。 同様のフリーラジカル重合方法は、本発明に適切なポリマーを生成するための ポリビニルメチルエーテル、ポリヒドロキシプロピルメタクリレート、ポリヒド ロキシエチルアクリレート、ポリジメチルアクリルアミド、またはポリメタクリ ルアミドの合成に適切である。 図２は、2-メチル-オキサゾリン（MOZ）の重合についての合成反応スキームを 示している。この反応において、MOZ重合はカチオン重合機構によって起こる。M OZ重合は、2-メチルオキサゾリンの開環反応を触媒するメチルトシレートによっ て開始される。さらに2-メチルオキサゾリンの開環反応を起こし得るポリマーの 「リビング末端（live end）」によって重合反 応が進行する。重合反応の後、水の後処理は、ポリマー末端でトシル基の置換に より水酸基を生成させる（Saegusa）。この水酸基は、ポリマーが小胞形成脂質 に結合するために用いられる。反応条件を実施例２で述べる。 水とは他の求核試薬を用いて、ポリマー末端に他の官能基を付与し得る。例え ば、ジアミンの使用は遊離末端にアミノ基を生成させる。同様の手順が、ポリ（ 2-エチル-オキサゾリン）の合成に用いられる。 図３は、ポリアスパラギン酸アミドの形成についての合成反応スキームを示し ている。アスパラギン酸を200℃で２〜４時間加熱により重合して、平均分子量1 1,000を有するポリコハク酸イミドを生成させる（Vegotski）。ポリコハク酸イ ミドをエタノールアミンと反応させる。これにより、ポリマー鎖のコハク酸イミ ド基の開環を起こし、ポリ（ヒドロキシエチル-（D、L-アスパラギン酸アミド） を生成させる。１つのポリマー末端で２つのカルボン酸基のいずれかまたは両方 を活性化した後、末端カルボン酸基を小胞形成脂質にカップリングする。 他のホモポリマー候補を以下のように合成し得る。セルロース誘導体を生成す るために、セルロースをクロロ酢酸と反応させてカルボキシメチルセルロースを 生成するか、またはエチレンオキシドと反応させてヒドロキシエチルセルロース を生成する。水への誘導体化セルロースの溶解度を最大にするために、完全に誘 導体化したセルロースを部分的に加水分 解することが必要である（Kawaguchi、McCormick）。この方法て、40と100との 間の糖ユニットを含有するポリマーを生成し得る。これは本発明の目的のために 望ましい長さである。 ３．ランダムコポリマーの合成 図４は、VPおよびアクリルアミド（AA）モノマーのランダムコポリマーの形成 を示す。VPモノマーの重合について記載されているように、MACAのようなフリー ラジカル開始剤および停止剤存在下で共重合反応を行い、末端官能基を導入し、 そして生成物の不均一性を減少させる。合成反応混合物中の個々のモノマーの比 は、各モノマーのフリーラジカル重合への反応性、および重合生成物中の所望さ れるモノマー比に依存する（Barabas）。 VPは、例えば、エチルアクリレート、メチルアクリレート、メチルメタクリレ ート、無水マレイン酸、ジメチルアミノエチルメタクリレート、アクリルアミド 、メタクリルアミド、エチレン、ビニルプロピオネート、ビニルカプロラクタム 、およびメチルビニルケトンのような広い種類の他のモノマーと容易に共重合す る。VPと共重合されるモノマーは、好ましくは、メタクリルアミドモノマーのよ うに、VPと同様の溶解度特性を有する。 あるいは、VPと共重合されるモノマーは、メチルメタクリレートモノマーのよ うに異なる溶解度特性を有し得る。ランダムコポリマーのメチルメタクリレート モノマー含量は、ポ リマー生成物がPVPと同様の溶解度特性を有するように、選択される。 ４．ブロックコポリマーの合成 図５は、PVPおよびPEGブロックを含有するブロックコポリマーの合成を示す。 上記のように調製される短いPVPポリマー鎖を、末端アミンおよびカルボキシル 基を含有する二官能化PEGポリマー鎖に、アミド結合を生成させる標準的なカッ プリング方法によってカップリングする（Zalipsky、1986）。 PEGのブロックおよび必要な溶解性を有することが開示されている他の任意の ホモポリマーのブロックを含有する他のブロックコポリマーを、同様の方法で、 末端の１つに化学的基を含有するホモポリマーを二官能化ポリマー鎖と反応させ ることによって形成し得る。 PEGと任意の開示されるホモポリマーとの交互ブロックを１つ以上含有するヘ テロポリマーを、ジイソシアネートのような連結試薬の存在下で二官能化PEG鎖 を二官能化ホモポリマーと反応させることによって形成し得る。ヘテロポリマー 生成物は必要な溶解性を有しなければならない。好ましい実施態様において、ヘ テロポリマーは、いくつかのPVPとPEGとの交互ブロックを有する。 Ｃ．カップリング方法 一般に、ポリマーの小胞形成脂質への共有結合は、小胞形 成脂質との反応の前に、１つのポリマー末端で化学的基を活性化することによっ て達成される。末端水酸基、アミンまたはカルボキシル基を、例えば、特に、N- ヒドロキシコハク酸イミド、クロロギ酸エチル、DCCD、Woodward試薬Ｋ、シアヌ ル酸およびトリフルオロメタンスルホニルクロライドのような単官能性活性化試 薬によって脂質にカップリングするために活性化し得る。いくらかのジイソシア ネートのような異なる反応性を有する基を含む多くの二官能性架橋試薬もまた用 いられ、脂質成分にカップリングする前に、ポリマーを活性化し得る。 リン脂質に結合するためにPVPポリマーを活性化する好ましい方法を図６に示 す。この反応において、ポリマーの末端カルボキシ基は、N-ヒドロキシコハク酸 イミドとの反応によって活性化される。この活性化工程の後、ホスファチジルエ タノールアミンのようなアミノ基含有リン脂質とポリマーとを反応させて、本発 明の成分の一部であるポリマー誘導体化小胞形成脂質を生成する。 当業者に公知の方法を末端水酸基の活性化に利用し得る（Zalipsky、1992）。 このような方法の１つにおいて、図７に示されるような、ポリメチルオキサゾリ ンを無水コハク酸と反応させて、ポリマー末端にカルボキシル基を生成させる。 ポリマーの末端カルボキシル基をN-ヒドロキシコハク酸イミドとの反応によって 活性化させる。この活性化工程の後、ホスファチジルエタノールアミンのような アミノ基含有脂質とポ リマーとを反応させて、所望の生成物を形成させる。 本発明に記載のほとんどのポリマーは、上記のカップリング方法のいずれかに よってカップリングされ得る。誘導体化セルロースのカップリングについては、 どのような先行活性化工程もなしにアミノ基含有脂質の存在下でポリマーをイン キュベートする。カップリングは、還元的アミノ化によって多糖類鎖の還元末端 で起こり得る。 III．リポソーム組成物 本発明のポリマー脂質結合体は、血流を経て薬剤を送達するための使用に設計 されたリポソーム組成物を調製するために用いられる。１つの実施態様において 、ポリマー脂質結合体は、リポソームの外部脂質層に好ましくは１〜30モルパー セントのモル比で取り込まれる場合、ポリマー脂質結合体のないリポソームより 数倍リポソームの血液循環時間を延長するのに効果的であるポリマー層を形成す る。 Ａ．脂質成分 リポソームは、非誘導体化小胞形成脂質および上述したポリマー−脂質結合体 からなる。非誘導体化小胞形成脂質は、リポソーム中の小胞構造のかたまりを形 成する。 一般的に、これらの小胞形成脂質は、疎水性および極性の頭部部分を有するあ らゆる両親媒性脂質を含み、そしてリン脂質によって例示されるように、その疎 水性部分は、内部（二重層膜の疎水性領域）と接触し、そしてその極性の頭部 部分は外部（膜の極性表面）に向かって配向した状態で、（a）水中で自発的に 二層小胞を形成するか、または（b）脂質二重層中に安定に取り込まれる。 このタイプの小胞形成脂質は、好ましくは、２つの炭化水素鎖（代表的には、 アシル鎖）および極性の頭部を有するものである。このクラスには、例えば、ホ スファチジルコリン（PC）、PE、ホスファチジン酸（PA）、ホスファチジルイノ シトール（PI）、およびスフィンゴミエリン（SM）のようなリン脂質が含まれ、 その２つの炭化水素鎖は代表的に約14〜22炭素原子長の間にあり、そして種々の 不飽和度を有する。 アシル鎖が種々の飽和度を有する上記の脂質およびリン脂質は、市販で入手し 得るか、または公表された方法に従って調製し得る。本発明に包含され得る他の 脂質は、糖脂質、およびコレステロールのようなステロールである。 リポソーム組成物中のリン脂質の第２のタイプは、セクションIIAに記載され たポリマー脂質結合体である。このポリマー脂質結合体は、ポリマー脂質結合体 のないリポソームより数倍以上リポソームの血液循環時間を延長するに充分なモ ル濃度で含まれる。脂質結合体は、代表的には３〜10モルパーセント、好ましく は約５モルパーセントで含まれる。 ポリマー−脂質結合体の１つの好ましい実施態様は、PVPポリマー誘導体化ジ ステアリルホスファチジルエタノールアミン（PVP-DSPE）である。PVP鎖は、好 ましくは分子量2,000〜17,000ダルトン、より好ましくは4,500〜11,000ダルトン を有す るPVP鎖である。この脂質は、好ましくは、DSPEのようなPEである。 ポリマー−脂質結合体の他の好ましい実施態様は、ポリメチルオキサゾリン誘 導体化ジステアリルホスファチジルエタノールアミン（PMOZ-DSPE）である。ポ リメチルオキサゾリン鎖は、好ましくは分子量2,000〜16,000ダルトン、より好 ましくは4,000〜11,000ダルトンを有する鎖である。 Ｂ．リポソームの調製 リポソームは、Szokaら、1980年に詳細されているように種々の技術によって 調製され得る。薬剤含有リポソームを調製する１つの方法は、Szokaらおよび米 国特許番号第4,235,871号に記載される逆相蒸発法である。この方法においては 、リポソーム形成脂質の有機溶媒溶液をより少量の水媒質と混合し、そして混合 物を分散して、好ましくは発熱しない成分を用いて油中水滴型エマルジョンを形 成する。送達される薬剤または他の薬学的試薬を、親油性薬剤の場合には脂質溶 液、または水溶性薬剤の場合には水媒体のいずれかに添加する。 エバポレーションにより脂質の溶媒を除去した後、得られたゲルを、水溶性薬 剤について50%までのカプセル化効率でリポソームに転化する。逆相蒸発小胞（R EVs）は、約0.2〜0.4ミクロンの代表平均サイズを有し、そして主として多重層 （oligolamellar）、すなわち１つまたは少数の脂質二重層殻を有する。REVsは 、以下に述べるように押出しによって容易に大きさを決められて、好ましくは約 0.05〜0.2ミクロンの間の最大 選択サイズを有する多重層小胞を提供し得る。 MLVsを形成するために、上記のタイプのリポソーム形成脂質を適切な溶媒に溶 解した混合物を、薄膜を形成する容器で蒸発させ、次いで水媒体で覆う。脂質フ ィルムは水和して、代表的に約0.1〜10ミクロンの間のサイズを有するMLVsを形 成する。代表的には、MLVsは、押出しによって、0.5ミクロンまたはそれ未満、 好ましくは約0.05と0.2ミクロンとの間の範囲の所望のサイズに小さくされる。 REVsおよびMLVsの大きさを調整する１つの効果的な方法は、選択された均一な 細孔径、代表的には0.05、0.08、0.1、0.2、または0.4ミクロンを有するポリカ ーボネート膜を介してリポソームの水懸濁液を押し出すことを包含する（Szoka ）。膜の細孔径は、その膜を介して押出しによって調製されるリポソームの最大 のサイズにおおよそ対応する。特にここで調製物は同じ膜を介して２回またはそ れ以上押し出される。 あるいは、REVまたはMLV調製物を処理して、0.04〜0.08ミクロン範囲のサイズ によって特徴付けられる小さな単一層小胞（SUNs）を調製し得る。SUVsは、例え ば、小粒子を選択的に通過させる腫瘍組織を標的として、代表的には約0.1ミク ロン未満の粒子を毛細管を介して腫瘍に供給する場合に有用であり得る。上記の ように、SUNsは流動性小胞形成脂質から容易に形成され得る。 最終分粒の後、リポソームを処理し、必要ならば、フリーの（取り込まれてい ない）薬剤を除去し得る。遠心分離、ダ イアフィルトレーション、モレキュラーシーブクロマトグラフィーのような通常 の分離技術が適切である。組成物を通常の0.45ミクロン深のフィルターを介する 濾過によって減菌し得る。 本発明のポリマー−脂質結合体は、好ましくはリポソームを形成するために用 いられる脂質成分に含まれるが、別に結合体は、予め形成されたリポソームへの 拡散によって外部リポソーム層に取り込まれ得る。代表的には、これは、結合体 （これはミセル形態で溶液に存在し得る）の存在下で、リポソーム中の結合体が 所望の濃度になるまで、予め形成されたリポソームをインキュベートすることに よって行われる。懸濁液は、結合体のリポソームへの拡散を容易するためデオキ シコレートのような界面活性剤をさらに含み得る。界面活性剤をその後、例えば 透析によって除去し得る。 このリポソームは、抗体のような表面結合リガンド分子を含むように調製され 得る。このリガンド分子は、標的細胞に特異的に局在している抗原のようなリガ ンド結合分子に特異的にそして高親和性をもって効果的に結合する。リガンド分 子の一例は、腫瘍細胞上の腫瘍特異的抗原に結合する腫瘍特異性抗体であり得る 。 リガンドをリポソームの表面にカップリングする種々の方法が知られている。 １つの方法は、予め形成されたリガンド誘導体化脂質成分のリポソームへの取込 みを包含する。あるいは、リガンドを、予め形成されたリポソーム中のポリマー 鎖の活性化末端にカップリングし得る。 Ｃ．表面遮蔽性 上記のように調製される誘導体化脂質−ポリマー結合体は、リポソームの表面 電荷を遮蔽する能力についてさらに選択され得る。表面電荷の遮蔽を、例えば、 以下に述べる方法に従って、負に荷電したリポソームの電気泳動移動度における 変化によって測定し得る。 表３は表面電荷、ゼータ電位および表の左に３モルパーセントの脂質成分を含 有するリポソームについての単核食細胞系（MPS）と血液との間の分配比を示す 。ここで、PCはホスファチジルコリンを表し、PSはホスファチジルセリンを表し 、PGはホスファチジルグリセロールを表し、Ｇ_Ti、Ｇ_D1a、およびＧ_M1は異なる ガングリオシドを表し、そしてPEG-DSPEはPEGによって誘導体化されたジステア リルホスファチジル−エタノールアミンを表す。 単核食細胞系（MPS）中と血液中とのリポソームの比は、インビボのリポソー ムの血液循環寿命の評価の基準として用いられ、ここで低い比はMPSによる取込 みがより少ないことおよび血流中の循環がより長いことを示す。表に示される比 を、静脈投与後24時間のリポソーム分布について、例えば米国特許番号第4,920, 016号に記載の方法によって測定した。見てのとおり、PEG-DSPEを含有するもの 以外の全ての処方物は、明らかに１以上のMPS／血液比を示した。 表に示される表面電荷値は、McDanielらに記載されるような標準的方法によっ て計算され、そしてリポソーム上の負の電荷密度を反映する。表面電荷は、荷電 した脂質成分のモル含量に加えて選択されたイオン強度およびリポソームのpHに 関して決定されることに注意する。 表のゼータ電位値は、リポソームの外部表面の見掛け電荷の評価の基準を提供 する。これらの値は、公知の方法に従って、リポソームの電気泳動移動度から決 定される（Woodle）。従って、ゼータ電位値は、電気泳動の間の電場によって見 られるリポソームの電荷を反映する。より少ない負のゼータ電位は、電場中の減 少した泳動速度から測定されるように、リポソームがより小さな見掛け表面電荷 を有することを意味する。 ゼータ電位値があらゆるリポソーム処方物についての表面電荷値よりも小さい 場合、減少したゼータ電位は表面電荷の遮蔽を示しているようである。PS、PG、 Ｇ_T1、またはＧ_D1aを 含有するリポソームにおいては観察される電荷遮蔽効果はない。しかし、PEG-DS PEを含有するリポソーム処方物は電荷遮蔽を示す。PEG-DSPEリポソーム（Woodle ）における-1.3mVのゼータ電位は、負の電荷においてホスファチジルグリセロー ル（PG）を含有するリポソーム（-8mVのゼータ電位）より数倍の降下を表してい る。PGまたはDSPEのいずれかを含有するリポソームは、PEG-DSPEリポソームと同 じ表面電荷密度を有するが、電荷は遮蔽されていない。この電荷遮蔽効果は、こ の処方物について観測される低いMPS／血液比と関連する。 Ｇ_M1を含有するリポソームもまた電荷遮蔽を示すが、PEG-DSPEリポソームと同 じ程度ではない。Ｇ_M1は、リポソーム表面から水相に拡がる負に荷電したシアル 酸基を含む。シアル基がリポソーム表面にあった場合、表面電荷は、PGまたはPE G-DSPEリポソーム（-6mV）に匹敵すると予測される。しかし、表面電荷値は、負 電荷の局在から予測されるより低い（-3.4mV）。 それゆえ、真のリポソーム電荷である-6mVの値と比較すると、Ｇ_M1のゼータ電 位は減少している（-5mV）。また、ゼータ電位は、たとえ負電荷がゼータ電位測 定水準により近くても、PGリポソームについてよりも低い（Mclaughin、McDanie l）。Ｇ_M1についてのMPS／血液比は、PGまたはPSリポソームと比較して減少して いるが、PEG-DSPEリポソームについてと同じ低さではない。 より一般的には、本発明の１つの局面に従って、本発明の 脂質組成物に用いられる脂質−ポリマー結合体は、好ましくは、添加された結合 体の代わりにホスファチジルグリセロールをもつような脂質が用いられる同じリ ポソームに関して、リポソームの電気泳動移動度を減少させるのに効果的な程度 までリポソーム電荷を遮蔽するのに効果的であるものである。脂質−ポリマー結 合体およびホスファチジルグリセロールの両方は、脂質の極性の頭部に単一負電 荷を含み、そしてリポソームの表面電荷に寄与する。 IV．利用性 上記のように、脂質−ポリマー結合体によってリポソーム上または他のコロイ ド状薬剤送達系上に形成されるポリマー層は、リポソームの血液循環時間を数倍 延長するように機能する。次に、高められた血液循環時間は、従来の急速に取り 除かれるリポソームでは効果がなかった種々の治療的使用をに可能にする。いく つかのこれらの新しい治療的使用は、以下を含む： １．長時間にわたって血流中を循環するので、粒子からの放出による薬剤の送 達を長くする。 ２．固形（solid）腫瘍の治療。長い循環時間は、粒子が血流を介して腫瘍標 的部位に到達することおよび腫瘍領域に溢出することを可能にする。 ３．感染または炎症の治療。上記のように長い循環時間は、粒子が血流を介し て感染または炎症部位に到達することおよ び感染の領域に溢出することを可能にする。 上記のように、リポソーム上のポリマー層の重大な特徴は、層を形成するポリ マーが水媒体に可溶であり、１種またはそれ以上の種々の極性有機溶媒にも可溶 であることである。水へのポリマーの溶解度は、ポリマー鎖がリポソーム表面か らリポソームを囲む水性殻にまで広がること、および効果的に水性殻を「満たす 」ことを可能にする。種々の有機溶媒および水へのポリマーの溶解度は、ポリマ ー鎖がコンホメーション的に柔軟であり、それ故、リポソームの外表面周囲にポ リマー鎖の均一な局所濃縮を創生し、それによりリポソーム表面と血液からのリ ポソーム捕集にかかわる血液成分との間の相互作用に対して効果的なバリアーを 形成する。 以下の実施例は、血流中のリポソーム循環時間を高めるためにリポソーム組成 物に取り込まれ得る脂質−ポリマー結合体を調製する方法を例示する。実施例は 、特定の脂質−ポリマー結合体調製物を例示するように意図されるが、決してそ の範囲を限定するようには意図されない。 実施例１ PVP-DSPE結合体の調製 本実施例に記載されるPVPの重合、およびPVPのDSPEへの結合を図１に例示する 。 Ａ．PVPの重合 25g（0.23mol）のN-ビニル-2-ピロリドンと、0.7ml（10mmol） メルカプト酢酸（70%水溶液中）および125mg（0.76mmol）のAIBNの混合物をメタ ノールで50mlに希釈し、そして窒素雰囲気下で撹拌しながら60℃で保持する。24 時間後、100mlの塩化メチレンを加える。溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、 濾過し、そして撹拌しながら過剰の乾燥エーテルに注ぐ。ポリマーを、塩化メチ レンに溶解し、そして過剰の乾燥エーテルで再沈澱することによって精製する。 生成物をBio Gel P60カラム（5×50cm）および移動相として水を用いるサイズ 分別によってさらに精製する。分子量約6,000ダルトン（約53モノマーユニット ）を有するPVPポリマーを単離する。 Ｂ．PVPのDSPEへの結合 DSPEのアミノ基にカップリングするためのPVPのカルボン酸の活性化に、以下 の手順を用いる。10℃に冷却したPVP6000（10g、1.7mmol）の50mlのN,N-ジメチ ルホルムアミド（DMF）溶液に、N-ヒドロキシコハク酸イミド（0.575g）5mmol） のDMF液およびジシクロヘキシルカルボジイミド（1.032g、4.6mmol）のDMF液を 添加する。溶液を一晩撹拌し、そして温度を室温まで上げる。沈澱したジクロヘ キシル尿素を濾過によって除去した後、溶液を高減圧下で乾燥するまで濃縮する 。残渣を50mlの塩化メチレンに取り出し、そして撹拌しているジエチルエーテル （500ml）に滴下する。白色沈澱を濾過によって回収し、そして塩化メチレン／ ジエチルエーテルで２回再沈澱する。 PVP6000をDSPEの極性の頭部に結合するために、N-ヒドロキ シコハク酸イミド−エステルPVP（0.8mmol）のクロロホルム溶液（10ml）にDSPE （0.52g、0.7Ommol）TEA（0.2ml、1.4mmol）を反応混合物に添加する。混合物を オイルバスに２時間40〜45℃に加熱して保持する。生成物の形成をシリカプレー トのTLC（クロロホルム／メタノール／水／濃水酸化アンモニウム、（21.5/70/8 /0.5））によって確認する。 実施例２ ポリメチルオキサゾリン−DSPE結合体の調製 本実施例に記載される2-メチル-2-オキサゾリンの重合、およびポリマーのDSP Eへの結合を図２に例示する。 Ａ．2-メチル-2-オキサゾリンの重合 2-メチル-2-オキサゾリン（MOZ）のカチオン重合を開始剤としてメチルトシレ ート（MET）を用いて行う。１mlアセトニトリル中でMOZ（3.2mmol）にMET（0.07 mmol）を添加する。反応を80℃で５時間行う。重合生成物を２回ジエチルエーテ ルで沈澱させる。重合生成物をサイズクロマトグラフィーによって精製して、約 30〜60モノマーユニットを有するポリマー種を単離する。これは分子量約2000〜 4000に相当する。 生成物を水に溶解して、ポリマー末端の１つからトシル基をはずす。 Ｂ．ポリメチルオキサゾリンのDSPEへの結合 DSPEへのポリメチルオキサゾリン結合の前に、末端水酸基を無水コハク酸との 反応によってカルボキシル基に転化し得 る。ポリメチルオキサゾリン（10mmol）および無水コハク酸（11mmol）をピリジ ン（10mmol）を含有する1,2-ジクロロエタンに混合する。この混合物を窒素下で ４時間還流する。濾過および溶媒の蒸発の後、残渣を塩化メチレンに溶解し、そ してジエチルエーテルの添加によって沈澱させる。DSPEへのポリマーの結合をPV Pについて記載したように行う。 実施例３ ポリアスパラギン酸アミド合成 アスパラギン酸（100g）を開放チューブ中で200℃で２時間加熱によって重合 する。この重合反応は11,000ダルトンのポリマーを生成する。ポリマーをN,N-ジ メチルホルムアミドに溶解し、そして溶液を１リッターの水を含有するビーカー に注ぐ。薄片状沈澱物が形成され、これを濾過し、中性まで水洗いし、そして11 0℃で24時間オーブンで乾燥する。 ポリ（D,L-コハク酸イミド）（30g）をジメチルホルムアミドに溶解する。エ タノールアミン（45ml）を滴下し、そして溶液を氷浴で冷却して、温度を25〜30 ℃に保持する。混合物を２時間撹拌し、次いで氷酢酸で中和し、水で希釈して、 透析および凍結乾燥する（Neri）。 ポリマーの１つのアミノ基は、脂質誘導体を有する選択された結合体のために 用いられる。例えば、過ヨウ素酸酸化ホスファチジルグリセロールまたはホスフ ァチジルイノシトールを用いる還元的アミノ化によってである。 実施例４ VP／アクリルアミド-DSPE結合体の調製 Ａ．アクリルアミドモノマーを用いたVPの重合 VP／アクリルアミドコポリマーをPVPホモポリマーについての記載と同様の方 法で調製する。N-ビニルピロリドン（60mmol）および酢酸ビニル（67mmol）を0. 7ml（10mmol）のメルカプト酢酸（70％水溶液で）および125mg（0.76mmol）のAI BNと共にメタノールで50mlに希釈し、そして窒素雰囲気下撹拌しながら60℃に保 持する。24時間後、100mlの塩化メチレンを添加する。溶液を無水硫酸ナトリウ ムによって乾燥し、濾過し、そして撹拌しながら過剰の乾燥エーテルに注ぐ。ポ リマーを塩化メチレンに溶解し、そして過剰の乾燥エーテルに再沈澱させことに よって精製する。 生成物をBio Gel P60カラム（5×50cm）および移動相として水を用いるサイズ 分別によってさらに精製する。分子量約6,000ダルトン（約53モノマーユニット ）を有するPVP/AAコポリマーが単離される。 Ｂ．PVP/AAポリマー生成物のDSPEへの結合 実施例１について記載したようにDSPEの添加の前に、N-ヒドロキシコハク酸イ ミドを有するポリマーのカルボキシル基を活性化することによってポリマーを小 胞形成脂質にカップリングする。 実施例５ PEG/PVPブロックコポリマー−DSPE結合体の調製 Ａ．PEG/PVPブロックコポリマーの調製 末端カルボキシル基を含有するPVP鎖は実施例１に記載されている。所望のPVP 生成物は平均分子量約6,000の代わりに約3,000を有することなので、MACAの濃度 を0.2Mから0.4Mに増加する。各々１つの末端アミンおよびカルボキシル基を有し 、平均分子量2,000のPEG鎖が合成され得る（Zalipsky）。次いで、２つのポリマ ーセグメントを、最初にN-ヒドロキシコハク酸イミドエステルでPVPカルボキシ ル基を活性化し、次に活性化したカルボキシル基をPEGのアミノ基と反応させる ことによってカップリングする。 PEGのアミノ基にカップリングするためにPVPのカルボキシル基を活性化するこ とについては以下の手順を用いる。10℃に冷却したPVP3000、１gの10mlのN,N-ジ メチルホルムアミド（DMF）溶液に、等モルのN-ヒドロキシコハク酸イミドDMF液 およびジシクロヘキシルカルボジイミドDMF液を滴下する。溶液を一晩撹拌し、 そして温度を室温に上げる。沈澱ジシクロヘキシル尿素を濾過により除去した後 、溶液を高減圧下で乾燥するまで濃縮する。残渣を5mlの塩化メチレンに溶かし 、そして撹拌されているジエチルエーテル（100ml）に滴下する。白色沈澱を濾 過によって除去し、そして塩化メチレン／ジエチルエーテルで２回再沈澱する。 PVP3000のPEGへの結合のために、N-ヒドロキシコハク酸イ ミドエステル末端化PVP（2.1g、0.70mmol）の塩化メチレン溶液に、PEGのオメガ アミノ酸誘導体（1.4g、0.70mmol）の5ml塩化メチレン液を添加し、その後TEA（ 0.2ml、1.4mmol）を添加する。反応混合物を25℃で22時間撹拌する。生成物を、 塩化メチレン溶液からジエチルエーテルの添加によって沈澱させる。この工程を 数回繰り返す。 Ｂ．DSPEへのPVP-PEGブロックコポリマーの結合 DSPEのアミノ基にカップリングするためにPVP-PEGコポリマーのカルボキシル 基を活性化することについては、以下の手順を用いる。10℃に冷却したPVP-PEG （MW=5000、１g、0.2mmol）の4ml N,N-ジメチルホルムアミド（DMF）溶液に、N- ヒドロキシコハク酸イミド（30mg、0.26mmol）DMF（１ml）液、およびジシクロ ヘキシルカルボジイミド（59mg、0.26mmol）DMF（１ml）液を添加する。溶液を 一晩撹拌し、そして温度を室温まで上げる。沈澱したジシクロヘキシル尿素を濾 過により除去した後、溶液を高減圧下で濃縮する。残渣を5mlの塩化メチレンに 溶かし、そして溶液を撹拌されているジエチルエーテル（100ml）に滴下する。 白色沈殿物を濾過によって回収し、そして塩化メチレン／ジエチルエーテルで２ 回再沈澱する。 PVP-PEG（MW=5000）をDSPEの極性の頭部に結合するために、N-ヒドロキシコハ ク酸イミドエステル末端化PVP-PEGコポリマー（3.5g、0.70mmol）の塩化メチレ ン溶液に、DSPE（0.70mmol）の2mlのクロロホルム液を添加し、そしてTEA（0.2m l、1.4mmol）を反応混合物に添加する。反応混合物を、オイルバスで70 〜75℃、２時間保持した。生成物の形成をシリカプレートTLC（クロロホルム／ メタノール／水／濃水酸化アンモニウム、（21.5/70/8/0.5））によって確認す る。 本発明は特定の誘導体化脂質組成物に関して記載および例示されているが、種 々の修飾および変化が本発明を逸脱することなしになされ得ることは明らかであ る。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ Ｃ０８Ｇ 73/02 ＮＴＣ 9285−4Ｊ (72)発明者 レイジック，ダニロ ディー. アメリカ合衆国 カリフォルニア 94560, ニューアーク，バークデイル ドライブ 7512 (72)発明者 マーティン，フランシス ジェイ. アメリカ合衆国 カリフォルニア 94127, サン フランシスコ，ウエスト ポータル アベニュー 415

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．脂質−ポリマー結合体であって、疎水性部分および極性の頭部を有する小胞 形成脂質、ならびに 頭部に共有結合したポリマー鎖を含み、該ポリマー鎖は、ポリビニルピロリド ン、ポリビニルメチルエーテル、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド、ポ リヒドロキシプロピルメタクリレート、ポリヒドロキシエチルアクリレート、ポ リメタクリルアミド、ポリジメチルアクリルアミド、ポリメチルオキサゾリン、 ポリエチルオキサゾリン、ポリヒドロキシエチルオキサゾリン、ポリヒドロキシ プロピルオキサゾリン、およびポリアスパラギン酸アミドからなる群から選択さ れるポリマーを含み、そして 自由な形態においては、室温で少なくとも5%の水への溶解度、および室温で少 なくとも約0.5%のクロロホルム、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、およ び塩化メチレンからなる群から選択される有機溶媒への溶解度によって特徴付け られる、脂質−ポリマー結合体。 ２．前記ポリマー鎖が、ポリビニルピロリドン、ポリビニルメチルエーテル、ポ リヒドロキシプロピルメタクリルアミド、ポリヒドロキシプロピルメタクリレー ト、ポリヒドロキシエチルアクリレート、ポリメタクリルアミド、ポリジメチル アクリルアミド、ポリメチルオキサゾリン、ポリエチルオキサ ゾリン、ポリヒドロキシエチルオキサゾリン、ポリヒドロキシプロピルオキサゾ リン、およびポリアスパラギン酸アミドからなる群のなかの１つのホモポリマー である、請求項１に記載の結合体。 ３．前記ポリマー鎖が、ポリビニルピロリドン、ポリビニルメチルエーテル、ポ リヒドロキシプロピルメタクリレート、ポリヒドロキシエチルアクリレート、ポ リメタクリルアミド、およびポリジメチルアクリルアミドからなる群から選択さ れるポリマーのブロックまたはランダムコポリマーである、請求項１に記載の結 合体。 ４．前記ポリマー鎖が、ポリメチルオキサゾリン、ポリエチルオキサゾリン、ポ リヒドロキシエチルオキサゾリン、およびポリヒドロキシプロピルオキサゾリン からなる群から選択されるポリマーのブロックまたはランダムコポリマーである 、請求項１に記載の結合体。 ５．前記ポリマー鎖が、ポリビニルピロリドン、ポリビニルメチルエーテル、ポ リメタクリルアミド、ポリジメチルアクリルアミド、ポリメチルオキサゾリン、 およびポリエチルオキサゾリンからなる群から選択されるポリマーをポリエチレ ングリコールと組み合わせたブロックコポリマーである、請求項１に記載の結合 体。 ６．前記ポリマーがポリビニルピロリドンのホモポリマーである、請求項１に記 載の結合体。 ７．前記ポリマーがポリメチルオキサゾリンおよびポリエチルオキサゾリンから なる群から選択されるホモポリマーである、請求項１に記載の結合体。 ８．前記ポリマーが約20〜150の間の重合度を有する、請求項１に記載の結合体 。 ９．前記小胞形成脂質がリン脂質である、請求項１に記載の結合体。 １０．前記小胞形成脂質がホスファチジルエタノールアミンである、請求項９に 記載の結合体。 １１．延長された血液循環時間によって特徴付けられるリポソームを調製する方 法であって、以下の工程： 疎水性部分および極性の頭部、ならびに頭部に共有結合したポリマー鎖を有す る１〜30モルパーセントの間の脂質−ポリマー結合体を小胞形成脂質に添加する 工程、ここで該ポリマー鎖は、ポリビニルピロリドン、ポリビニルメチルエーテ ル、ポリヒドロキシプロピルメタクリレート、ポリヒドロキ シプロピルメタクリルアミド、ポリヒドロキシエチルアクリレート、ポリメタク リルアミド、ポリジメチルアクリルアミド、ポリメチルオキサゾリン、ポリエチ ルオキサゾリン、ポリヒドロキシエチルオキサゾリン、ポリヒドロキシプロピル オキサゾリン、およびポリアスパラギン酸アミドからなる群の１つのポリマーを 含み； 該小胞形成脂質および脂質−ポリマー結合体ならびに取り込まれた形態で薬学 的化合物を含むリポソームを形成する工程；および 約0.05〜0.5ミクロンの間の範囲の選択されたサイズにリポソームの大きさを 調整する工程、 ここで、該添加された結合体は、該結合体の非存在下で調製される同じリポソ ームより数倍以上リポソームの循環時間を伸ばすに効果的である；を包含する、 方法。 １２．前記添加された脂質−ポリマー結合体が、添加された結合体の代わりにホ スファチジルグリセロールが用いられる同じリポソームに関して、リポソームの 電気泳動移動度を効果的に減少させる、請求項１１に記載の方法。