JP5131955B2 - プロテアーゼ反応促進剤及び/又は色素の安定化剤を含む試薬 - Google Patents
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Description
さらに本発明は、シクロデキストリンを含有することを特徴とする酵素反応の検出に使用する色素の安定化剤、シクロデキストリン及び酵素反応の検出に使用する色素を含有する試薬、酵素反応の検出に使用する色素の安定化方法に関する。さらには、シクロデキストリンを用いて安定化された該色素を用いた糖化タンパク質若しくは糖化タンパク質割合測定試薬、方法に関する。
さらに本発明は、プロテアーゼ反応促進剤、及びシクロデキストリンを用いて安定化された酵素反応の検出に使用する色素を用いた糖化タンパク質若しくは糖化タンパク質割合測定試薬、方法に関し、臨床検査に有用な糖化ヘモグロビン、ヘモグロビンA1c及び糖化コアルブミンを正確、簡便、迅速に定量する試薬及び測定方法に関する。
本出願は、特願2004−229498号、及び特願2004−281226号に基づく優先権主張して出願されたものであり、これらの出願の記載内容は本出願においてそのまま引用できる。
また、ロイコ型の色素を用いて測定を行っている例としては、N−(カルボキシメチルアミノカルボニル)−4,4−ビス(ジメチルアミノ)ビフェニルアミン(以下、DA64と記載することがある)を添加したヘモグロビンA1cの測定(非特許文献2)があるが、試薬の安定性や保持に関する記載は一切ない。これまで液状で長期安定なロイコ型色素を含む試薬は知られていなかった。
さらには、該プロテアーゼ反応促進剤及び/又は該安定化剤を用いて、臨床生化学検査、特にヘモグロビンA1cや糖化アルブミンの測定に有用な試薬及びそれを用いた測定方法を提供することにある。
また、該プロテアーゼ反応促進剤及び/又は該色素の安定化剤を用いることを特徴とするヘモグロビン、糖化タンパク質及び糖化タンパク質割合測定用試薬及びそれを用いた方法、さらには、臨床生化学検査、特にヘモグロビンA1cや糖化アルブミンの測定に有用な測定用試薬及びそれを用いた測定方法について検討した。
さらに、該プロテアーゼ反応促進剤及び/又は該色素の安定化剤を用いた臨床生化学検査、特にヘモグロビンA1cや糖化アルブミンの測定に有用な試薬及びそれを用いた測定方法を見出して本発明の完成に至った。
1)酢酸基を含む化合物又はその塩、N−アシルタウリン又はその塩、若しくはポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸又はその塩のうち少なくとも1種類を含有するプロテアーゼ反応促進剤、
R1−CO−R2 (1)
[式中、R1はアルキル基、又はアルケニル基を示し、R2はアミノ酸、又はアミノ酸誘導体中のアミノ基から水素原子を除した一価基を示す。]
で示される化合物又はその塩である上記2)に記載のプロテアーゼ反応促進剤、
I)R1がCH3(CH2)n−(但し、nは10〜14の整数)であるか、もしくはヘプタデス−8−エニル基である
II)アミノ酸、又はアミノ酸誘導体がN−メチルアラニン若しくはサルコシンである、
5)アルキルエーテルカルボン酸又はその塩が下記一般式(2)
R3−O−(CH2−CH2−O)m−CH2COOM (2)
[式中、R3はアルキル基を示し、mは3〜10の整数を示し、Mは、水素原子、又はカルボン酸と塩を形成する金属を示す。]
で示される化合物である上記2)に記載のプロテアーゼ反応促進剤、
7)プロテアーゼとプロテアーゼ反応促進剤を少なくとも共存させ、反応促進されたプロテアーゼ反応の結果生じる生成物を測定する方法において、プロテアーゼ反応率を1.5倍以上早くすることを特徴とするプロテアーゼ反応促進剤、
9)下記i)〜iii)を含有することを特徴とする試薬、
i)1)〜8)いずれかに記載のプロテアーゼ反応促進剤
ii)プロテアーゼ
iii)糖化アミノ酸及び/又は糖化ペプチドに作用する酵素
10)プロテアーゼ安定化剤、及び/又は糖化アミノ酸及び/又は糖化ペプチドに作用する酵素の安定化剤を含有することを特徴とする上記8)若しくは9)に記載の試薬、
11)試薬が液状であり、冷蔵で6ヶ月以上安定であることを特徴とする上記8)〜10)いずれかに記載の試薬、
12)プロテアーゼが糖化ヘモグロビン若しくはそのフラグメントの糖化されたα鎖N末端から糖化アミノ酸及び/又は糖化ペプチドを実質的に切り出すことなく、糖化されたβ鎖N末端から糖化アミノ酸及び/又は糖化ペプチドを切り出すものである上記9)〜11)記載の試薬、
13)糖化アミノ酸及び/又は糖化ペプチドに作用する酵素が糖化バリルロイシンよりも糖化バリルヒスチジンに作用が高いことを特徴とする上記9)〜12)記載の試薬、
14)ロイコ型色素及び色素安定化剤を含むことを特徴とする上記8)〜13)に記載の試薬、
15)色素の安定化剤がシクロデキストリンである上記14)記載の試薬、
16)第一試薬にプロテアーゼ、及びヘモグロビンβ鎖N末端より生じない糖化アミノ酸及び/又は糖化ペプチドを消去する糖化アミノ酸及び/又は糖化ペプチドに作用する酵素を含み、第二試薬にヘモグロビンβ鎖N末端より生じた糖化アミノ酸及び/又は糖化ペプチドを検出する糖化アミノ酸及び/又は糖化ペプチドに作用する酵素を含むことを特徴とする上記8)〜15)に記載の試薬、
17)第一試薬に糖化アミノ酸及び/又は糖化ペプチドに作用する酵素を含み、第二試薬にプロテアーゼを含むことを特徴とする上記8)〜15)に記載の試薬、
18)第一試薬にさらにカタラーゼ及び/又はパーオキシダーゼを含むことを特徴とする上記16)又は17)に記載の試薬、
19)第一試薬と第二試薬からなるキットにおいて、プロテアーゼ及びカタラーゼを同一試薬中に含有し、かつカタラーゼの含まれていない試薬にアジ化ナトリウムを含むことを特徴とする上記8)〜18)に記載の試薬、
21)上記7)に記載のプロテアーゼ反応促進剤を用い、プロテアーゼ反応率を1.5倍以上に早くすることを特徴とする上記20)記載のプロテアーゼ反応促進方法、
23)同一反応槽中でヘモグロビンの測定及びヘモグロビンA1cの測定を連続して行うことを特徴とする上記22)記載の方法、
24)ヘモグロビンの測定及びヘモグロビンA1cの測定を同一波長で行うことを特徴とする上記23)に記載の方法、
25)副波長を設定し測定波長から差し引くことを特徴とする上記24)に記載の方法、
26)へモグロビンA1cのβ鎖N端の糖化ペプチドを特異的に測定することを特徴とする上記22)〜25)に記載の方法、
27)ヘモグロビンA1c測定時に溶血液、ヘモグロビン溶液もしくはヘモグロビンβ鎖N端の糖化ペプチドをキャリブレーターとして測定しその検量線から定量値を計算することを特徴とする上記22)〜26)記載の方法、
28)同一反応槽中でアルブミンの測定及び糖化アルブミンの測定を連続して行うことを特徴とする上記22)記載の方法、
29)アルブミンの測定及び糖化アルブミンの測定を同一波長で行うことを特徴とする上記28)に記載の方法、
に関する。
30)酵素反応の検出に使用する色素の安定化剤であって、シクロデキストリンを含有することを特徴とする色素の安定化剤、
31)シクロデキストリンが、β−シクロデキストリン類であることを特徴とする上記30)に記載の安定化剤、
32)β−シクロデキストリン類が、メチル−β−シクロデキストリンもしくは2−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンであることを特徴とする上記31)に記載の安定化剤、
33)酵素反応の検出に使用する色素が、パーオキシダーゼの作用により発色する色素であることを特徴とする上記30)から32)いずれかに記載の安定化剤、
34)パーオキシダーゼの作用により発色する色素が、ロイコ型色素であることを特徴とする上記33)に記載の安定化剤、
36)カタラーゼを含有することを特徴とする上記35)に記載の試薬、
37)測定時の緩衝剤濃度が80mM以下であることを特徴とする上記35)又は36)に記載の試薬、
38)プロテアーゼを含有することを特徴とする上記35)から37)いずれかに記載の試薬、
39)プロテアーゼ反応促進剤を含有することを特徴とする上記38)記載の試薬、
40)測定時のシクロデキストリンの濃度が0.5重量%以上であることを特徴とする上記35)から39)いずれかに記載の試薬、
41)試薬が液状であり、冷蔵で6ヶ月以上安定であることを特徴とする上記35)から40)いずれかに記載の試薬、
44)糖化タンパク質が糖化アルブミン、糖化ヘモグロビン、又はヘモグロビンA1cであり、糖化タンパク質割合が糖化アルブミン値、糖化ヘモグロビン値、又はヘモグロビンA1c値であることを特徴とする上記43)記載の方法、
45)酵素反応の検出に使用する色素を安定化させるための、シクロデキストリンの使用、
に関する。
また、酵素反応の検出に使用する色素の安定化剤を提供することで、該色素の安定化方法、該色素を含有する流通時の保存安定性に優れた試薬、さらにそれを用いた糖化タンパク質及び糖化タンパク質割合測定方法及び測定用試薬を提供する事が可能になる。
本発明のプロテアーゼ反応促進剤、及び酵素反応の検出に使用する色素の安定化剤を含む試薬は、臨床検査に有用なヘモグロビン、ヘモグロビンA1c及び糖化アルブミンを正確、簡便、迅速に定量的に測定する、流通時の保存安定性に優れた試薬を提供する事が可能になる。
本発明に使用しうるプロテアーゼ反応促進剤としてはプロテアーゼ反応を促進し、かつ還元性物質の影響を受けず、同時に使用する酵素の活性を阻害せず、ブランクの原因にならないものであればいかなるものでも使用できるが、例えばアニオン界面活性剤が好ましく、中でも酢酸基を含む化合物又はその塩、N−アシルタウリン又はその塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸又はその塩がさらに好ましい。少なくとも1種類の本発明に使用しうるプロテアーゼ反応促進剤を含有する組成物を、プロテアーゼ反応促進用試薬として用いることができる。
R1−CO−R2 (1)
[式中、R1はアルキル基、又はアルケニル基を示し、R2はアミノ酸、又はアミノ酸誘導体中のアミノ基から水素原子を除した一価基を示す。]
で示される化合物又はその塩が好ましい。
標準アミノ酸の誘導体としては、標準アミノ酸のN−アルキル置換体が好ましく、具体的には、N−メチル置換体が好ましい。また、標準アミノ酸の誘導体としては、N−メチルアラニン若しくはサルコシンが好ましく、サルコシンが特に好ましい。また、別の態様としてはN−メチルアラニンが好ましい場合もある。
一般式(1)で示される化合物は、公知の方法で合成することができ、例えば、市販で入手可能な長鎖脂肪酸R1−COOH(R1は前記と同義)と、市販で入手可能なアミノ酸R2−H(R2は前記と同義)とを公知のペプチド化条件下で反応させて得ることができる。また、一般式(1)で示される化合物は、市販品を使用することもでき、例えば、日光ケミカル社などから入手して使用することができる。これらを、必要に応じてカルボン酸フリー化、又は金属との塩化を行って使用することもできる。
R3−O−(CH2−CH2−O)m−CH2COOM (2)
[式中、R3はアルキル基を示し、mは3〜10の整数を示し、Mは、水素原子、又はカルボン酸と塩を形成する金属を示す。]
で示される化合物が好ましい。
R3としては、CH3(CH2)10−が好ましい。さらに別の態様としてはCH3(CH2)11−が好ましい場合もある。
mは3〜10の整数である。mとしては、3〜10が好ましく、3、6、10が好ましく、6、10がより好ましく、6が特に好ましい。また、別の態様としては10である場合も好ましい。
一般式(2)で示される化合物は公知の方法で合成することができ、例えば、市販で入手可能なR3−O−(CH2−CH2−O)m−1−CH2−CH2−OH(R3、mは前記と同義)と、市販で入手可能なハロ酢酸誘導体X−CH2COOM(Mは前記と同義、Xは臭素原子、又は塩素原子を示す)とを公知のエーテル化条件下で反応させて得ることができる。また、一般式(2)で示される化合物は市販品を使用することもでき、例えば、日光ケミカル社などから入手して使用することができる。これらを、必要に応じてカルボン酸フリー化、又は金属との塩化を行って使用することもできる。
本発明に使用しうるN−アシルタウリン又はその塩は公知の方法で合成することができ、例えば、市販で入手可能なタウリンを市販で入手可能なアシル化剤と反応させて得ることができる。また、本発明に使用しうるN−アシルタウリン又はその塩は市販品を使用することもでき、例えば、日光ケミカル社などから入手して使用することができる。これらを、必要に応じてカルボン酸フリー化、又は金属との塩化を行って使用することもできる。
本発明に使用しうるポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸又はその塩は市販品を使用することができ、例えば、日光ケミカル社などから入手して使用することができる。
enzymogenes YK366 FERM BP−10010)由来のプロテアーゼ等が挙げられ、サーモリシン、リゾバクターエンザイモゲネス由来のプロテアーゼが好ましく、サーモリシンが特に好ましい。また、リゾバクターエンザイモゲネス由来のプロテアーゼが特に好ましい別の態様もある。
例えばデヒドロゲナーゼを用いて糖化アミノ酸及び/又は糖化ペプチドを測定する場合には、NAD(Nicotinamide adenine dinucleotide)等の補酵素、若しくはニトロテトラゾリウムブルー、テトラゾリウムブルー、2−(4−ヨードフェニル)−3−(4−ニトロフェニル)−5−(2,4−ジスルフォフェニル)−2H−テトラゾリウム:WST-1、2−(4−ヨードフェニル)−3−(2,4−ジニトロフェニル)−5−(2,4−ジスルフォフェニル)−2H−テトラゾリウム:WST-3、2−(2−メトキシ−4−ニトロフェニル)−3−(4−ニトロフェニル)−5−(2,4−ジスルフォフェニル)−2H−テトラゾリウム:WSR-8(以上同人化学研究所社製)に代表される各種テトラゾリウム塩を用いることが出来る。
結局、シクロデキストリンとしては、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン、カルボキシメチル−γ−シクロデキストリン、カルボキシメチル−β−シクロデキストリン、ジメチル−β−シクロデキストリン、モノアミノ−β−シクロデキストリン(以上シグマ社等から入手可能)、2−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンもしくはメチル−β−シクロデキストリン(以上日本食品加工株式会社等から入手可能)が好ましく、2−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、メチル−β−シクロデキストリンがより好ましく、2−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンが特に好ましい。また、メチル−β−シクロデキストリンが大変に好ましい場合もある。
酵素反応の検出に使用する色素の使用濃度としては、試薬保存中に発色が十分に保たれる濃度であればいかなる濃度で用いても良く、特に試薬を液体の状態で冷蔵保存中に発色が十分に保たれる濃度であれば好ましい。好ましい濃度の例としては、たとえばDA67を用いた場合には1μM以上、好ましくは2μM以上であり、上限は100mM以下、好ましくは50mM以下である。
シクロデキストリンの使用濃度としては、試薬保存中に酵素反応の検出に使用する色素の劣化を抑える濃度であればいかなる濃度で用いても良く、特に試薬を液体の状態で保存中に色素の劣化を抑える濃度であれば好ましい。好ましい濃度の例としては、例えばメチル−β−シクロデキストリンを安定化剤として添加する場合には、下限濃度は0.5%以上、好ましくは1.0%以上であり上限の濃度は50%以下、好ましくは40%以下の濃度で添加すればよい。また色素とシクロデキストリンの重量比として好ましい比を示すと、下限としては、該色素:シクロデキストリン=1:0.01以上、好ましくは1:0.04以上であり、上限としては、1:500万以下、好ましくは1:3300000以下が好ましい。
さらに好ましい緩衝剤の例としては、pH中性付近に緩衝作用をもつ緩衝剤、例えばEPPS、HEPES、HEPPSO、ACES、ADA、BES、Bicine、Bis-Tris、CHES、DIPSO、MES、MOPS、MOPSO、PIPES、POPSO、TAPS、TAPSO、TES、Tricine、Tris、ACES、ADA、ホウ酸、アンモニア、グリシン、リン酸、ジエタノールアミン、p−フェノールスルホン酸、2−アミノ−2−メチルプロパン−1,3−ジオール、カコジル酸、クエン酸、マレイン酸、ベロナール及び3,3−ジメチルグルタル酸等であり、最も好ましくは3,3−ジメチルグルタル酸である。
なお、酵素反応の検出に使用する色素、及び本発明のシクロデキストリンに代表される酵素反応の検出に使用する色素の安定化剤と、カタラーゼを共存させ、パーオキシダーゼは別の試薬に添加し測定時に混合されるようにするとより好ましい。これは色素とパーオキシダーゼが共存すると、保存中に反応が進み発色してしまう可能性があるからである。
本発明に使用しうる緩衝剤としては、酵素反応の検出に使用する色素の安定性に影響を与えない緩衝剤であればいかなる緩衝剤を用いても良いが、具体例は前述した通りである。その使用濃度は、測定時の緩衝剤濃度として設定することが重要であり、測定時の緩衝剤濃度の上限が80mM以下、さらに好ましくは50mM以下であり、またその下限は0.1mM以上好ましくは1mM以上であれば良い。
例えばタンパク質がアルブミンであり測定対象が糖化アルブミンである場合において、プロテアーゼタイプXXIV(シグマ社製)を用いる場合にはpHが7〜10付近でタンパク質分解活性が強いため、反応のpHは7〜10を選択することが好ましい。
例えばタンパク質がアルブミンであり測定対象が糖化アルブミンである場合において、例えば前記のKAOD若しくはKAOD−V(旭化成ファーマ社製)を使用する場合、最大活性の50%
以上の活性を示す領域がpH6.5〜10と広いので、反応のpHは6.5〜10を選択することが好ましい。また、例えばタンパク質がヘモグロビンであり測定対象が糖化ヘモグロビンもしくはヘモグロビンA1cである場合において、例えば前記のカーブラリア・クラベータYH923由来KAODを使用する場合、最大活性の50%以上の活性を示す領域がpH6.0〜10と広いので、反応のpHは6.0〜10を選択することが好ましい。
パーオキシダーゼ使用濃度としては、測定系より生じた過酸化水素が測定できる濃度であればいかなる濃度を用いても良いが、通常下限は0.01U/ml以上、好ましくは0.1U/ml以上であり、上限は100U/ml以下、好ましくは50U/ml以下である。
糖化アミノ酸及び/又は糖化ペプチドに作用する酵素の安定化剤の使用濃度としては、液状状態の冷蔵保存で6ヶ月安定な試薬性能を示す濃度であればいかなる濃度を用いてもよいが、例えばソルビトールを用いた場合には、通常下限は0.1%以上、好ましくは1%以上であり、上限は30%以下、好ましくは20%以下である。
salt (WST−1)、2−(4−Lodophenyl)−3−(2,4−dinitrophenyl)−5−(2,4−disulfophenyl)−2H−tetrazolium, monosodium
salt (WST−3;以上同仁化学研究所社製)に代表される各種テトラゾリウム塩等の還元系発色試薬を用い間接的に定量してもよく、またこれ以外の公知の方法により直接、間接的に測定してもよい。
また例えばオキシダーゼを用いた場合には、酸素の消費量又は反応生成物の量を測定することが好ましい。反応生成物として、例えばケトアミンオキシダーゼを用いた場合には反応により過酸化水素及びグルコソンが生成し、過酸化水素及びグルコソン共に公知の方法により直接、間接的に測定する事が出来る。
さらに本発明の測定方法、試薬において、プロテアーゼを単独で使用することはもちろんであるが、加えてその反応前後若しくは同時に他のエンドプロテアーゼ、又は他のエキソプロテアーゼを作用させてもよい。
界面活性剤としてはポリオキシエチレンアルキルエーテル類、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ポリビニルアルコール、等の0.01〜10%、好適には0.05〜5%、各種金属塩類、例えば塩化リチウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化マンガン、塩化コバルト、塩化亜鉛、塩化カルシウム等の1mM〜5M、好適には10mM〜1M、各種防腐剤、例えばアジ化ナトリウムの0.01〜10%、好適には0.05〜1%を適宜添加すればよい。各種防腐剤としては、プロクリン(SUPELCO社製)の0.01〜10%、好適には0.02〜5%を適宜添加してもよい。
本発明の測定方法に使用しうるキャリブレーターとしては前記既知濃度のタンパク質のほかに既知濃度の糖化アミノ酸、又は糖化ペプチドを用いても良い。糖化アミノ酸、又は糖化ペプチドの例としては、市販の合成ペプチドを用いればよいが、ヘモグロビンA1cを測定する場合には糖化バリルヒスチジン、糖化バリルヒスチジルロイシン、糖化バリルヒスチジルロイシルスレオニン、糖化バリルヒスチジルロイシルスレオニルプロリン等を用いることが出来る。キャリブレーター中のペプチドの濃度は試料より生じるペプチドの濃度が十分に測定できる濃度であれば良い。
本発明の測定対象となる試料としては、少なくともヘモグロビン若しくは糖化タンパク質を含有する被検液であれば如何なるものを用いてもよいが、好ましい被検液としては血液成分、例えば血清、血漿、血球、全血若しくは分離された赤血球等が挙げられる。また分離された赤血球や糖化ヘモグロビンをあらかじめプロテアーゼにより断片化したプロテアーゼ処理液(溶血液)も好ましい被検液として用いることができる。尚赤血球の分離は公知の遠心分離法によって、例えば3000回転3分程度で分離することが可能である。また分離した血球の溶血方法としては蒸留水で溶血させれば十分である。
消去反応は糖化アミノ酸及び/又は糖化ペプチドに作用する酵素を用いて行えばよく、たとえば前記あらかじめ糖化アミノ酸及び/又は糖化ペプチドが含まれ測定に影響を与える場合には、第一試薬に糖化アミノ酸及び/又は糖化ペプチドに作用する酵素を含み、第二試薬に含むプロテアーゼを含む試薬を用いればよい。
また、第一試薬にプロテアーゼ、及びヘモグロビンβ鎖N末端より生じない糖化アミノ酸及び/又は糖化ペプチドを消去する糖化アミノ酸及び/又は糖化ペプチドに作用する酵素を含有し、第二試薬に第二試薬にヘモグロビンβ鎖N末端より生じた糖化アミノ酸及び/又は糖化ペプチドを検出する糖化アミノ酸及び/又は糖化ペプチドに作用する酵素を含有する試薬処方については、前記の消去反応を含まない試薬のプロテアーゼ試薬にヘモグロビンβ鎖N末端より生じない糖化アミノ酸及び/又は糖化ペプチドを消去する糖化アミノ酸及び/又は糖化ペプチドに作用する酵素を0.5〜1000U/ml、好ましくは1.0〜500U/ml添加したもの、及び糖化アミノ酸測定試薬を用いることが出来るが、第一試薬、第二試薬の混合比率が1:1ではなく、例えば1:3、1:4又は1:5などである場合は、混合時に各成分が有効に働く濃度になるように適宜調整すればよい。つまり第一試薬、第二試薬の混合比が1:4の場合、第一試薬に処方する成分は5/4の濃度範囲に、第二試薬に処方する成分は前記の濃度範囲の5倍の濃度範囲にすればよい。
[実施例1]プロテアーゼ反応促進剤のスクリーニング
<試薬>
1)R−1 タンパク質分解試薬
50mM トリス緩衝液(和光純薬社製)pH7.0
4000U/ml 中性プロテアーゼ(TOYOBO社製)
1.5mM CaCl2(和光純)
+ 試験サンプル
2)R−2 糖化アミノ酸検出試薬
50mM トリス緩衝液(和光純薬社製)pH7.5
30U/ml KAOD(カーブラリア・クラベータYH923由来;旭化成ファーマ社製、
特開2004-275013号公報に製法記載)
80U/ml パーオキシダーゼ(シグマ社製)
80μM DA−67(和光純薬社製)
試験サンプルとしては以下のものをそれぞれ独立して用いた。尚( )内の濃度はR1
中の最終濃度を示す。
acid (CHAPS;1%)、(以上日光ケミカル社製)、WST−3(2mM:同仁化学研究所社製)
<操作方法>
37度にインキュベートされたR−1;180μlにHbA1c測定用実試料標準物質(1次キャリブレーター JDS
HbA1c Lot2 福祉・医療技術振興会製、30倍希釈品)20μlを添加し、37℃で反応を開始し、正確に5分後にR−2;45μlを添加した。R−2添加前及び添加5分後の660nmの吸光度を測定した。表1に、上記試験サンプルのプロテアーゼ反応促進効果の評価結果を示した。表1中に示したAH−ALは、1次キャリブレーターのレベル4(9.88%)から得られた吸光度AHから、1次キャリブレーターのレベル2(5.38%)から得られた吸光度ALを差し引いた差である。ここでAH−ALが大きければプロテアーゼ反応促進効果があると判定できる。特に、AH−ALが20以上の場合には優れた促進効果がある。
表1に示すようにN−アシルアミノ酸であるサルコシネートCN−30、サルコシネートMN、サルコシネートPN、アラニネートLN−30、アルキルエーテルカルボン酸であるECTD−3NEX、ECTD−6NEX、AKYPO−RLM100、N−アシルタウリン酸であるLMT、SMT、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩であるSBL−2T−36、SBL−4T、SBL−203−27に効果が見られた。
N−アシルアミノ酸又はその塩としては下記一般式(1)
R1−CO−R2 (1)
[式中、R1はアルキル基、又はアルケニル基を示し、R2はアミノ酸、又はアミノ酸誘導体中のアミノ基から水素原子を除した一価基を示す。]
で示される化合物又はその塩にプロテアーゼ反応促進効果があることが明白であり、中でも、R1がCH3(CH2)n−(但し、nは10〜14の整数)もしくはヘプタデス−8−エニル基である、及び/又は、R2が標準アミノ酸、N−メチルアラニン若しくはサルコシンである、化合物が好ましいことが明らかとなった。
アルキルエーテルカルボン酸又はその塩としては下記一般式(2)
R3−O−(CH2−CH2−O)m−CH2COOM (2)
[式中、R3はアルキル基を示し、mは3〜10の整数を示し、Mは、水素原子、又はカルボン酸と塩を形成する金属を示す。]
で示される化合物にプロテアーゼ反応促進効果があることが明白であり、中でも、R3がCH3(CH2)Q−(但し、Qは10又は11)である化合物が好ましいことが明らかとなった。尚、DA67のかわりにTPM-PSを用いても結果はほぼ同じであった。また、糖の添加はプロテアーゼ反応を促進しないが、ソルビトールの添加をコントロールとするとコントロールの吸光度変化は6.5mAbsでありN−アシルアミノ酸、アルキルエーテルカルボン酸、N−アシルタウリン酸、及びポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩では約4.3倍の反応促進効果が確認された。尚10mAbs以上の吸光度変化が得られれば測定は可能であるが、その場合は反応促進効果が1.5倍と計算され、1.5倍以上の反応促進効果が得られれば良いと考えられる。
<試薬>
ヘモグロビン測定試薬
50mM トリス緩衝液(和光純薬社製)pH7.0
1% サルコシネートMN
0.05% アジ化ナトリウム
上記試薬において、サルコシネートMNを用いる代わりに、AKYPO-RLM100、SMT、又はSBL-2Z-36を用いた試薬も別途調製した。
<試薬>
1)R−1 タンパク質分解試薬
50mM トリス緩衝液(和光純薬社製)pH7.0
4000U/ml 中性プロテアーゼ(TOYOBO社製;トヨチームNEP)
1.5mM CaCl2(和光純薬社製)
1% アラニネートLN−30
0.05% アジ化ナトリウム
本試薬のプロテアーゼの特異性は糖化バリルヒスチジルロイシルスレオニルプロリン及び糖化バリルロイシルセリルプロリルアラニンを用いて確認し、ヘモグロビンβ鎖N端に特異性が高く、α鎖N端には実質的に作用しないことが明らかであった。さらにバチルス・サーモリティカス・ロッコー(Bacillus thermoproteolyticus Rokko)由来のサーモリシン、サモアーゼ(大和化成社製)、バチルス・エスピー(Bacillus
sp. ASP-842 FERM BP-08641)由来であるプロテアーゼ、リゾバクターエンザイモゲネス(Lysobacter enzymogenes YK366 FERM BP−10010)由来のプロテアーゼについても同様の基質特異性が確認され、中性プロテアーゼ(TOYOBO社製;トヨチームNEP)の代わりに処方できることが確認された。
<試薬>
1)R−1 タンパク質分解試薬
50mM トリス緩衝液(和光純薬社製)pH7.0
4000U/ml 中性プロテアーゼ(TOYOBO社製)
1.5mM CaCl2(和光純薬社製)
1% アラニネートLN−30
6% DMSO
0.05% アジ化ナトリウム
2)R−2 糖化アミノ酸検出試薬
2−1)R−2−A
50mM トリス緩衝液(和光純薬社製)pH7.5
60U/ml KAOD(カーブラリア・クラベータYH923由来;旭化成ファーマ社製、
特開2004-275013号公報に製法記載)若しくはWO 2004/104203
記載のネオコスモスポラ・バシンフェクタ(Neocosmospora
vasinfecta)474菌株由来
160U/ml パーオキシダーゼ(シグマ社製)
10% ソルビトール
0.1% アジ化ナトリウム
2−2)R−2−B
50mM トリス緩衝液(和光純薬社製)pH7.5
160μM DA−67(和光純薬社製)
<試薬>
1)R−1 タンパク質分解試薬
50mM トリス緩衝液(和光純薬社製)pH7.0
4000U/ml 中性プロテアーゼ(TOYOBO社製)
1.5mM CaCl2(和光純薬社製)
1% アラニネートLN−30
6% DMSO
0.05% アジ化ナトリウム
2)R−2 糖化アミノ酸検出試薬
50mM トリス緩衝液(和光純薬社製)pH7.5
60U/ml KAOD(カーブラリア・クラベータYH923由来;旭化成ファーマ社製、
特開2004-275013号公報に製法記載)若しくはWO 2004/104203
記載のネオコスモスポラ・バシンフェクタ(Neocosmospora
vasinfecta)474菌株由来
160U/ml パーオキシダーゼ(シグマ社製)
10% ソルビトール
0.1% アジ化ナトリウム
160μM DA−67(和光純薬社製)
2% 2−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン
(日本食品加工株式会社製)
<試薬>
1)R−1 タンパク質分解試薬
50mM トリス緩衝液(和光純薬社製)pH7.0
4000U/ml 中性プロテアーゼ(TOYOBO社製)
1.5mM CaCl2(和光純薬社製)
1% アラニネートLN−30
6% DMSO
0.05% アジ化ナトリウム
10U/ml KAOD(旭化成ファーマ社製)
2)R−2 糖化アミノ酸検出試薬
50mM トリス緩衝液(和光純薬社製)pH7.5
60U/ml KAOD(カーブラリア・クラベータYH923由来;旭化成ファーマ社製、
特開2004-275013号公報に製法記載)
160U/ml パーオキシダーゼ(シグマ社製)
10% ソルビトール
0.1% アジ化ナトリウム
160μM DA−67(和光純薬社製)
2% 2−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン
(日本食品加工株式会社製)
<試薬>
1)R−1 タンパク質分解試薬
50mM トリス緩衝液(和光純薬社製)pH7.0
12U/ml KAOD(カーブラリア・クラベータYH923由来;旭化成ファーマ社製、
特開2004-275013号公報に製法記載)
32U/ml パーオキシダーゼ(シグマ社製)
6% ソルビトール
0.05% アジ化ナトリウム
32μM DA−67(和光純薬社製)
2% 2−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン
(日本食品加工株式会社製)
1% アラニネートLN−30
2)R−2 糖化アミノ酸検出試薬
50mM トリス緩衝液(和光純薬社製)pH7.5
20000U/ml 中性プロテアーゼ(TOYOBO社製)
1.5mM CaCl2(和光純薬社製)
30% DMSO
0.05% アジ化ナトリウム
1)R−1 タンパク質分解試薬
50mM トリス緩衝液(和光純薬社製)pH7.0
8mM 4−AA
10% DMSO
10000U/ml Bacillus licheniformis由来プロテアーゼ(シグマ社製)
(DEAE−セファロース樹脂で精製、脱塩したものを使用)
0.001675% BCP(和光純薬社製)
0.05% アジ化ナトリウム
0.5% Tween20
(±1% アラニネートLN−30)
2)R−2 糖化アミノ酸検出試薬
50mM トリス緩衝液(和光純薬社製)pH7.5
5% ソルビトール
20U/ml KAOD(旭化成ファーマ社製)
5U/ml パーオキシダーゼ(シグマ社製)
10mM N−Ethyl−N−(2−hydroxy−3−sulfopropyl)−3−metylaniline.sodium
salt, dihydride (TOOS;同仁化学研究所)
0.05% アジ化ナトリウム
実施例2の試薬を用いてヘモグロビン濃度が既知の標準品を測定した。
<ヘモグロビン測定試薬の反応手順>
自動分析計(日立7170S型自動分析計;日立製作所)を用いて測定を行った。試料20μlに試薬180μlに添加して660nmの吸光度変化を測定した。対照に水をおき5分後の吸光度差を計算した。試料はヘモグロビン標準品を5段階希釈したものを用いた。
実施例4、5の試薬を用いて試料を測定した。
<試料>
1)HbA1c測定用実試料標準物質(1次キャリブレーター JDS HbA1c Lot2 福祉・医療技術振興会製)30倍希釈品
2)1次キャリブレーター JDS HbA1c Lot2 30倍希釈品 9容に 乳ビ(2000度;干渉チェック;シスメックス社製)1容を添加した乳ビ混入ヘモグロビン
<R−2試薬の調製> 実施例4の試薬はR−2−A試薬、R−2−B試薬を使用前に1:1で混合し使用した。実施例5の試薬はそのまま使用した。
<ヘモグロビンA1c測定試薬の反応手順>
自動分析計(日立7170S型自動分析計;日立製作所)を用いて測定を行った。試料20μlに試薬R−1 180μlに添加し、37℃に保温し主波長660nm、副波長700nmの吸光度変化を測定した。5分後、試薬R−2 45μlに添加し、37℃に保温し主波長660nm、副波長700nmの吸光度変化を測定した。また、測定値はHbA1c測定用実試料標準物質(1次キャリブレーター JDS
HbA1c Lot2 福祉・医療技術振興会製 レベル1;ヘモグロビン濃度135g/L、HbA1c値4.04%とレベル5;ヘモグロビン濃度132g/L、HbA1c値12.63%)をキャリブレーターとして使用し値を換算した。ヘモグロビンの定量はR2試薬添加直前の測光で行い、HbA1cの定量はR2添加後5分後の測光より計算した。
ヘモグロビン及びHbA1cの検量線を図2、及び図3に示す。HbA1c濃度はHbA1c測定用実試料標準物質のHbA1c%とHbA1c濃度より算出した。図2より明らかなように本発明におけるプロテアーゼ反応促進剤を用いてヘモグロビンA1cの定量が可能であった。また図3より明らかなようにさらにヘモグロビンの定量も同時に定量が可能であった。これらのことから本発明を用いて同一反応槽中でヘモグロビン及びHbA1cを連続して測定できることが明白であった。
vasinfecta)474菌株由来のケトアミンオキシダーゼでは同じ結果が示された。
また、実施例4、及び5の試薬はプロテアーゼとして糖化ヘモグロビン若しくはそのフラグメントの糖化されたα鎖N末端から糖化アミノ酸及び/又は糖化ペプチドを実質的に切り出すことなく、糖化されたβ鎖N末端から糖化アミノ酸及び/又は糖化ペプチドを切り出すプロテアーゼを、糖化アミノ酸及び/又は糖化ペプチドに作用する酵素として糖化バリルロイシンよりも糖化バリルヒスチジンに作用が高いことを特徴とする酵素を用いているがJDS HbA1c Lot2のレベル3の定量値が表示値と一致していることから、正確にヘモグロビンA1cを測定していることが明白である。
<試薬>
実施例6、7の試薬を用いた。
<試料>
HbA1c測定用実試料標準物質(1次キャリブレーター JDS
HbA1c Lot2 レベル3(HbA1c値7.32%)福祉・医療技術振興会製)30倍希釈品、9容に糖化アミノ酸1容を添加して試料とした。またコントロールとしては、糖化アミノ酸の代わりに蒸留水を添加したものを用いた。添加する糖化アミノ酸濃度としては、糖化−Z−リジン水溶液(FZL) 2mM、糖化−バリン水溶液(FV)2mM(糖化アミノ酸はハシバらの方法により合成、精製した。Hashiba
H、J.Agric.Food Chem.24:70、1976)を用いた。
<反応手順>
実施例10と同じ手順で試料を測定した。
測定の結果、1次キャリブレーター JDS HbA1c Lot2のレベル3(HbA1c値7.32%)ののHbA1c定量値は、実施例6の試薬を用いた場合コントロール、FZL添加、FV添加の順に7.2、7.3、7.1%であり、実施例7の試薬は7.3、7.4、7.1%であり消去反応が行われ、正確な値が測定されていることが確認された。
[実施例12]糖化アルブミンの測定、糖化アルブミン割合の計算及び試薬の安定性
<糖化アルブミン測定試薬の反応手順>
実施例5の試薬を使用した。37度にインキュベートされたR−1;240μlにコントロール血清H(株式会社BML社製;用法に基づき調製し5段階に蒸留水で希釈した。)8μlを添加し、主波長546nm(副波長700nm)の吸光度を測定した。37℃で反応を開始し、正確に5分後にR−2;80μlを添加した。R−2添加前及び添加5分後の吸光度を測定した。また基質溶液の代わりに蒸留水を用いた測定をブランクとし、コントロール基質溶液から得られた吸光度変化からブランク試料の吸光度変化を差し引いた△A0を算出した。値の換算はルシカGA用キャリブレーター(旭化成ファーマ社製)を同時に測定し吸光度を比較して行った。アルブミンの測定は試料添加直後からR−2添加直前の吸光度を引いた吸光度差より求めた。糖化アルブミンの測定はR−2添加5分後の吸光度よりR−2添加直前の吸光度を引いた吸光度差より求めた。
また、5段階希釈した管理血清の測定値を図4に示す。図4から分かるように本試薬を用いて同一反応槽中、同一波長でアルブミン、糖化アルブミンを定量し、糖化アルブミン値(%)を良好に測定することが出来た。
<試薬>
1)R−1 色素含有試薬
200mM トリス緩衝液(和光純薬社製)pH7.5
200μM DA64、DA67もしくは0.04%のMBTH(和光純薬社製)
+試験サンプル
2)R−2 パーオキシダーゼ含有試薬
200mM トリス緩衝液(和光純薬社製)pH7.5
10U/ml パーオキシダーゼ(シグマ社製)
0.04% TOOS(和光純薬社製;ただしR-1にMBTHを用いた場合にのみ添加)
試験サンプルとしては以下のものを用いた。尚( )内の濃度はR1中の最終濃度を示す。
Tween-20(1%)、Brij35(1%)、TritonX-100(1%)、デオキシコール酸(1%)、イミノ2酢酸(IDA;1mM)、ZnSO4(0.1mM)、AlCl3(0.1mM)、フェロシアン化カリウム(フェロシアン化K;0.01mM)、ソルビトール(5%)、グルコース(5%)、亜硝酸ナトリウム(2mM)、ジメチルスルホキシド(DMSO;10%) (以上和光純薬社製)、2−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン(2HPβCD;0.5%、2%、5%)、メチル−β−シクロデキストリン(MβCD;0.5%、2%、5%)(以上、日本食品加工株式会社製)
<操作方法>
37℃にインキュベートされたR-1;500μlとR-2;500μlを混合し、37℃-2分加温し吸光度を測定し(A0)、10μlの過酸化水素500μMもしくは蒸留水を添加した。37℃に加温し過酸化水素添加後正確に5分後に吸光度を測定し(A1)を測定し、吸光度変化ΔA(A1-A0)を計算した。吸光度は色素にDA64を用いた場合には750nm、DA67を用いた場合には660nm、4-AA-TOOSを用いた場合には570nmを測定した。
測定は試薬調製直後、試薬を37℃で2日、9日保存して蒸留水を測定した場合のブランク及び過酸化水素の感度を測定した。
表2−1、及び表2−2にブランクと酵素反応の検出に使用する色素の保存の関係を示す。表2−1、及び表2−2から判るように金属塩及び2−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、メチル−β−シクロデキストリンにブランクを抑える効果が確認された。また過酸化水素500μMを測定した場合の該色素と金属塩及び該色素とシクロデキストリン濃度と保存の関係を表3に示す。金属塩は表2−2よりブランク上昇は認められなかったが、表3より過酸化水素の感度そのものが出なくなっていた。また、表3よりシクロデキストリン0.5%以上の濃度で該色素の安定化効果が認められた。
<試薬>
1)R−1 色素含有試薬
200mM トリス緩衝液(和光純薬社製)pH7.5
200μM DA67(和光純薬社製)
2% 2−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン(日本食品加工株式会社製)
±500U/ml カタラーゼ(和光純薬社製)
2)R−2 パーオキシダーゼ含有試薬
200mM トリス緩衝液(和光純薬社製)pH7.5
10U/ml パーオキシダーゼ(シグマ社製)
0.05% アジ化ナトリウム(和光純薬社製)
<操作方法>
実施例13に同じ。測定は試薬調製直後、試薬を37℃で2日、9日
保存して蒸留水を測定した場合のブランク及び過酸化水素の感度を測定した。結果は表4に示す。表4から判るようにカタラーゼの添加により保存時のブランクが有意に低下し、酵素反応の検出に使用する色素の安定性も上昇した。
<試薬>
1)R−1 色素含有試薬
50mM、80mM、100mM、200mM トリス緩衝液(和光純薬社製)pH7.5
10μM DA67(和光純薬社製)
2% 2−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン(日本食品加工株式会社製)
4000U/ml トヨチームNEP(東洋紡績社製)
500U/ml カタラーゼ(和光純薬社製)
1% サルコシネートLN(日光ケミカルズ社製)
2)R−2 パーオキシダーゼ含有試薬
50mM トリス緩衝液(和光純薬社製)pH7.5
78U/ml パーオキシダーゼ(シグマ社製)
26U/ml カーブラリア・クラベータYH923由来KAOD(旭化成ファーマ社製、
特開2004-275013号公報に製法記載)
0.05% アジ化ナトリウム(和光純薬社製)
<操作方法>
自動分析計(日立7170S型自動分析計;日立製作所)を用いて測定を行った。試料20μlに試薬R-1 180μlに添加し、37℃に保温し主波長660nm、副波長700nmの吸光度変化を測定した。5分後、試薬R-2 45μlに添加し、37℃に保温し主波長660nm、副波長700nmの吸光度変化を測定した。また、試料にはHbA1c測定用実試料標準物質(1次キャリブレーター JDS
HbA1c Lot2 福祉・医療技術振興会製 レベル1;135g/L-4.04%とレベル5;132g/L-12.63%)の30倍希釈品を用いた。
測定は試薬調製直後、試薬を37℃で2日、4日、6日保存してレベル5の感度−レベル1の感度を計算した。
結果は表5に示す。表5から判るように緩衝剤の濃度80mM以下で、有意に酵素反応の検出に使用する色素の安定性が上昇した。
<試薬>
1)R−1 色素含有試薬
50mM トリス緩衝液(和光純薬社製)pH7.5
10μM DA67(和光純薬社製)
2% 2−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン(日本食品加工株式会社製)
4000U/ml トヨチームNEP(東洋紡績社製)
500U/ml カタラーゼ(和光純薬社製)
1% サルコシネートLN(日光ケミカルズ社製)
2)R−2 パーオキシダーゼ含有試薬
50mM トリス緩衝液(和光純薬社製)pH7.5
78U/ml パーオキシダーゼ(シグマ社製)
26U/ml カーブラリア・クラベータYH923由来KAOD(旭化成ファーマ社製、
特開2004-275013号公報に製法記載)
0.05% アジ化ナトリウム(和光純薬社製)
1)R−1 タンパク質分解試薬
50mM トリス緩衝液(和光純薬社製)pH7.0
10μM DA67(和光純薬社製)
2% 2−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン(日本食品加工株式会社製)
10% DMSO
10000U/ml Bacillus licheniformis由来プロテアーゼ(シグマ社製)
(DEAE-セファロース樹脂で精製、脱塩したものを使用)
500U/ml カタラーゼ(和光純薬社製)
2)R−2 糖化アミノ酸検出試薬
50mM トリス緩衝液(和光純薬社製)pH7.5
5% ソルビトール
20U/ml KAOD(旭化成ファーマ社製)
5U/ml パーオキシダーゼ(シグマ社製)
0.05% アジ化ナトリウム
<試料>
1)HbA1c測定用実試料標準物質(1次キャリブレーター JDS HbA1c Lot2 福祉・医療技術振興会製)30倍希釈品
<ヘモグロビンA1c測定試薬の反応手順>
自動分析計(日立7170S型自動分析計;日立製作所)を用いて測定を行った。試料20μlに試薬R-1 180μlに添加し、37℃に保温した。試料添加5分後、試薬R-2 45μlに添加し、37℃に5分間保温した。吸光度の測定はR-2試薬添加直前(A1)及び添加5分後(A2)に主波長660nm、副波長700nmを測定した。また、測定値はHbA1c測定用実試料標準物質(1次キャリブレーター JDS HbA1c Lot2 福祉・医療技術振興会製 レベル1;ヘモグロビン濃度135g/L、HbA1c値4.04%とレベル5;ヘモグロビン濃度132g/L、HbA1c値12.63%)をキャリブレーターとして使用し値を換算した。ヘモグロビンの定量はA1で行い、HbA1cの定量はA2-A1より計算した。
ヘモグロビン及びHbA1cの検量線を図5及び図6に示す。図5、図6より明らかなように本発明における酵素反応の検出に使用する色素の安定化方法を用いてヘモグロビンA1c、及びヘモグロビンの定量が可能であった。ヘモグロビンA1c、及びヘモグロビンの定量が可能であることからヘモグロビンA1c割合の計算が可能であることは明白である。
さらに本試薬を液体状態で37℃4日間保存した結果、1次キャリブレーター JDS HbA1c Lot2のレベル3(ヘモグロビン濃度145g/L、HbA1c値 7.32%)の30倍希釈品のヘモグロビン定量値は保存試験前(40mAbs 、4.8g/L)であり、保存試験後(38mAbs 、4.7g/L)であった。またHbA1cの計算値は保存試験前(7.2%)であり、保存試験後(7.3%)であった。また冷蔵保存3ヶ月のデータでは測定値に差は見られなかった。これらの結果より本試薬は冷蔵で6ヶ月以上安定であると推定された。
<グリコアルブミン測定試薬の反応手順>
実施例17の試薬を使用した。37度にインキュベートされたR-1;240μlにコントロール血清H(株式会社BML社製;用法に基づき調製し5段階に蒸留水で希釈した。)8μlを添加し、37℃で反応を開始し、正確に5分後にR-2;80μlを添加した。R-2添加前及び添加5分後の吸光度、主波長660nm、副波長700nmを測定した。また基質溶液の代わりに蒸留水を用いた測定をブランクとし、コントロール基質溶液から得られた吸光度変化からブランク試料の吸光度変化を差し引いた△A0を算出した。値の換算はルシカGA用キャリブレーター(旭化成ファーマ社製)を同時に測定し吸光度を比較して行った。アルブミンの測定はアクアオートカイノス ALB試薬(カイノス社製)を用いて試薬の用法容量に従い測定を行った。5段階希釈した管理血清の測定値を図7に示す。図7から分かるように本試薬を用いてアルブミン、グリコアルブミンを定量し、グリコアルブミン値(%)を良好に測定することが出来た。
さらに本試薬を液体状態で37℃4日間保存した結果、コントロール血清L(株式会社BML社製;希釈なし)を測定したところ、GA測定の感度は150mAb、GA値18.3%であり、保存後はGA測定の感度は146mAb、GA値18.2%であった。これらの結果より本試薬は冷蔵で6ヶ月以上安定であると推定された。
Claims (8)
- 下記i)、ii)を含む、ヘモグロビン、ヘモグロビンA1cまたは糖化アルブミンの測定試薬。
i)ヘモグロビン、ヘモグロビンA1c若しくは糖化アルブミンに対するプロテアーゼ、ロイコ型試薬、及びβ−シクロデキストリン類を含有する組成物
ii)糖化アミノ酸及び/又は糖化ペプチドに作用するオキシダーゼを含有する組成物 - β−シクロデキストリン類が、メチルβ−シクロデキストリン若しくは2ヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリンであることを特徴とする請求項1記載の測定試薬。
- 測定時の緩衝剤の濃度が80mM以下である請求項1または2に記載の測定試薬。
- プロテアーゼ反応促進剤をさらに含む請求項1〜3のいずれかに記載の測定試薬。
- β−シクロデキストリン類の濃度が0.5重量%以上である請求項1〜4のいずれかに記載の測定試薬。
- 試薬が液状であり、冷蔵で6ヶ月以上安定である請求項1〜5のいずれかに記載の測定試薬。
- 糖化アミノ酸及び/又は糖化ペプチドに作用するオキシダーゼがケトアミンオキシダーゼである請求項1〜6のいずれかに記載の測定試薬。
- 試料に、請求項1〜7のいずれかに記載の測定試薬を作用させて、ロイコ型色素の発色を測定することにより、ヘモグロビン、ヘモグロビンA1cまたは糖化アルブミンを測定する方法。
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GB2437545B (en) * | 2006-04-28 | 2011-07-06 | Novexin Ltd | Dextrin-containing reagents for detecting and quantifying proteins |
US8273577B2 (en) | 2007-01-30 | 2012-09-25 | Arkray, Inc. | Method for detecting phenothiazine-derivative color and color-developer reagent used therein |
JP4697809B2 (ja) * | 2007-02-22 | 2011-06-08 | 旭化成ファーマ株式会社 | ロイコ色素の安定化方法 |
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JP5870919B2 (ja) * | 2010-04-09 | 2016-03-01 | 東洋紡株式会社 | 糖化ヘモグロビンの測定方法 |
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US20130171676A1 (en) * | 2010-08-11 | 2013-07-04 | Kyowa Medex Co., Ltd. | Method for measuring glycated hemoglobin |
WO2012072682A1 (en) * | 2010-11-30 | 2012-06-07 | Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) | Method for evaluating the vital prognosis of a subject in a critical condition |
JP5274590B2 (ja) * | 2011-01-27 | 2013-08-28 | 旭化成ファーマ株式会社 | ロイコ色素の安定化方法 |
CN102565420B (zh) * | 2011-12-26 | 2013-12-04 | 宁波美康生物科技股份有限公司 | 人血清糖化白蛋白检测试剂盒 |
JP6202893B2 (ja) * | 2013-06-17 | 2017-09-27 | オリンパス株式会社 | 細胞の標的タンパク質の発現量の評価方法 |
CN103695380B (zh) * | 2013-12-27 | 2016-05-25 | 宁波美康生物科技股份有限公司 | 果糖氨基酸氧化酶、制备方法及含该酶的糖化白蛋白检测试剂盒 |
JP5735670B1 (ja) * | 2014-01-14 | 2015-06-17 | 田中貴金属工業株式会社 | 免疫クロマト分析方法、免疫クロマト分析装置および免疫クロマト分析キット |
JP5775197B1 (ja) * | 2014-04-30 | 2015-09-09 | 田中貴金属工業株式会社 | 免疫クロマト分析キット及び免疫クロマト分析方法 |
RU2683773C2 (ru) * | 2014-05-06 | 2019-04-02 | Дайасис Дайагностик Системз Гмбх | Ферментативное определение hba1c |
WO2016076408A1 (ja) * | 2014-11-14 | 2016-05-19 | パナソニックヘルスケアホールディングス株式会社 | 反応促進剤、ヘモグロビン分解用組成物、ヘモグロビンA1cの測定方法及びヘモグロビンA1cの測定キット |
CN104480095A (zh) * | 2014-11-27 | 2015-04-01 | 广西大学 | 一种酶活力稳定的液态木瓜蛋白酶制剂 |
CN107592883B (zh) * | 2015-05-08 | 2020-03-10 | 荷兰联合利华有限公司 | 洗衣洗涤剂组合物 |
CN105203472B (zh) * | 2015-06-30 | 2019-03-08 | 北京万泰德瑞诊断技术有限公司 | 一种稳定的游离脂肪酸测定试剂盒 |
CN105510308A (zh) * | 2015-12-25 | 2016-04-20 | 江苏迈源生物科技有限公司 | 二乙基对硝基苯磷酸酯酶活力测定方法及其试剂盒 |
EP3492600B1 (en) * | 2016-07-29 | 2024-04-24 | Hitachi Chemical Diagnostics Systems Co., Ltd. | Method for measuring glycated hemoglobin |
EP3492529A4 (en) * | 2016-07-29 | 2020-12-16 | Hitachi Chemical Diagnostics Systems Co., Ltd. | PROCESS FOR PRESERVING AN AQUEOUS SOLUTION CONTAINING A LEUCO-TYPE CHROMOGEN |
KR102502572B1 (ko) * | 2016-08-10 | 2023-02-22 | 세키스이 메디칼 가부시키가이샤 | HbA1c 측정법 |
KR101723025B1 (ko) * | 2016-10-12 | 2017-04-07 | 주식회사 아이센스 | 장기 안정성이 향상된 시료를 포함하는 당화혈색소 정량분석용 키트 |
CN109682796A (zh) * | 2017-10-02 | 2019-04-26 | 爱科来株式会社 | 糖化蛋白质的测定 |
CN109680036A (zh) * | 2017-10-02 | 2019-04-26 | 爱科来株式会社 | 糖化蛋白质的测定 |
US20210055250A1 (en) * | 2018-03-26 | 2021-02-25 | Phc Holdings Corporation | Biological substance detection sensor |
CN108458981A (zh) * | 2018-04-25 | 2018-08-28 | 信阳师范学院 | 一种甲基羟肟酸光度法检测水样中铁含量的方法 |
EP3923806B1 (en) * | 2019-02-15 | 2024-01-10 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc. | Calibrators and controls for the determination of the percentage of glycated hemoglobin in a patient's liquid test sample |
JP2021007341A (ja) * | 2019-07-01 | 2021-01-28 | 旭化成ファーマ株式会社 | カタラーゼ及びキレート剤を含有する糖化タンパク質測定試薬用の4−アミノアンチピリン含有部分組成物、糖化タンパク質測定試薬、糖化タンパク質の測定方法、糖化タンパク質測定試薬用の4−アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法、及び糖化タンパク質測定試薬用の4−アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法 |
US20220357334A1 (en) * | 2019-07-01 | 2022-11-10 | Asahi Kasei Pharma Corporation | Glycated protein assay reagent containing stabilizer of protease that increases oxidation-reduction potential of ferrocyanide, method for assaying glycated protein, method for preserving glycated protein assay reagent, and method for stabilizing glycated protein assay reagent |
JP2021096236A (ja) * | 2019-12-12 | 2021-06-24 | 旭化成ファーマ株式会社 | 2,5−ジヒドロキシベンゼンスルホン酸又はその塩の阻害剤、及び2,5−ジヒドロキシベンゼンスルホン酸又はその塩による測定への影響を抑制する測定用試薬組成物 |
JP2023027418A (ja) * | 2019-12-12 | 2023-03-02 | Phcホールディングス株式会社 | 糖化ヘモグロビンの電気化学測定方法およびそれに用いる測定キット |
CN112362864B (zh) * | 2021-01-12 | 2021-04-30 | 广州科方生物技术股份有限公司 | 一种降低免疫诊断试剂背景发光值的处理剂及其制备方法 |
Family Cites Families (64)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4361108A (en) | 1981-02-13 | 1982-11-30 | Robillard Jean J | Image-transferring sheet |
JPS58187858A (ja) * | 1982-04-26 | 1983-11-02 | Wako Pure Chem Ind Ltd | 被酸化性呈色試薬の安定化方法 |
JPS59219270A (ja) * | 1983-05-30 | 1984-12-10 | Wako Pure Chem Ind Ltd | テトラゾリウム塩を含有する溶液の安定化方法 |
JPS60200167A (ja) | 1984-03-24 | 1985-10-09 | Toyobo Co Ltd | 化学発光法による過酸化水素の定量法 |
JPH064037B2 (ja) * | 1986-02-18 | 1994-01-19 | 和光純薬工業株式会社 | ス−パ−オキシドジスムタ−ゼ活性測定法 |
JPH0698030B2 (ja) * | 1987-01-08 | 1994-12-07 | 東洋紡績株式会社 | Nadphの化学発光法による定量法 |
JPS63243879A (ja) | 1987-03-31 | 1988-10-11 | Nippon Koden Corp | 血球計数器校正用標準液 |
JPH01118768A (ja) * | 1987-10-31 | 1989-05-11 | Wako Pure Chem Ind Ltd | 発色試液の安定化方法 |
CA2032331A1 (en) | 1990-01-22 | 1991-07-23 | Annie L. Wu | Method and kits for detecting human leukocyte antigen dna |
US5089420A (en) | 1990-01-30 | 1992-02-18 | Miles Inc. | Composition, device and method of assaying for a peroxidatively active substance utilizing amine borate compounds |
JP3289280B2 (ja) | 1991-02-18 | 2002-06-04 | 三菱ウェルファーマ株式会社 | 基質液の安定化法及び基質液 |
GB9116315D0 (en) | 1991-07-29 | 1991-09-11 | Genzyme Ltd | Assay |
JPH07121235B2 (ja) | 1992-05-07 | 1995-12-25 | 三洋化成工業株式会社 | 過酸化物分解性物質測定用指示薬および試薬キット |
US5298410A (en) * | 1993-02-25 | 1994-03-29 | Sterling Winthrop Inc. | Lyophilized formulation of polyethylene oxide modified proteins with increased shelf-life |
JPH0776700A (ja) * | 1993-07-14 | 1995-03-20 | Senju Pharmaceut Co Ltd | コンタクトレンズ用剤の安定化方法 |
JPH0889291A (ja) | 1994-09-28 | 1996-04-09 | Sanyo Chem Ind Ltd | 過酸化物分解性物質測定用指示薬および試薬キット |
EP0729031A1 (en) | 1995-02-24 | 1996-08-28 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Set of reagents determining the content of total haemoglobin |
JP3861166B2 (ja) | 1998-01-28 | 2006-12-20 | 株式会社アルボース | 酵素含有洗浄剤組成物 |
JP4262796B2 (ja) | 1998-03-04 | 2009-05-13 | 東芝エレベータ株式会社 | エレベータのかご吊り構造 |
US5902731A (en) | 1998-09-28 | 1999-05-11 | Lifescan, Inc. | Diagnostics based on tetrazolium compounds |
US6656697B1 (en) | 1998-09-28 | 2003-12-02 | Lifescan, Inc. | Diagnostics based on tetrazolium compounds |
US6352835B1 (en) | 1998-11-17 | 2002-03-05 | Kyoto Daiichi Kagaku Co. Ltd. | Method of measuring substance in sample using a redox reaction |
JP4045322B2 (ja) | 1998-11-17 | 2008-02-13 | アークレイ株式会社 | 酸化還元反応を用いた測定方法 |
JP2000175699A (ja) | 1998-12-15 | 2000-06-27 | Fuji Photo Film Co Ltd | 一体型多層化学分析要素および測定方法 |
GB2348433B (en) * | 1999-03-31 | 2003-04-09 | Ilford Imaging Uk Ltd | Pigmented ink jet inks |
WO2001018165A1 (en) * | 1999-09-09 | 2001-03-15 | The Procter & Gamble Company | A detergent composition containing a protease |
JP3949854B2 (ja) | 1999-10-01 | 2007-07-25 | キッコーマン株式会社 | 糖化蛋白質の測定方法 |
JP4010474B2 (ja) * | 2000-01-28 | 2007-11-21 | 旭化成ファーマ株式会社 | 糖化タンパク質割合測定方法 |
USRE46130E1 (en) | 2000-07-14 | 2016-08-30 | Arkray, Inc. | Method of selectively determining glycated hemoglobin |
JP2002049161A (ja) * | 2000-08-04 | 2002-02-15 | Clariant (Japan) Kk | 被覆層現像用界面活性剤水溶液 |
AU2001282550A1 (en) | 2000-09-07 | 2002-03-22 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | Method of quantifying total hemoglobin and glycohemoglobin |
JP4803696B2 (ja) | 2000-09-28 | 2011-10-26 | アークレイ株式会社 | ヘモグロビンの測定方法及びヘモグロビン糖化率の測定方法 |
EP1329512A4 (en) | 2000-09-28 | 2004-09-01 | Arkray Inc | PROCESS FOR PRODUCING PROTEIN DEGRADATION PRODUCTS |
CN1243982C (zh) | 2000-09-28 | 2006-03-01 | 爱科来株式会社 | 利用氧化还原反应的测定方法 |
EP2248909B1 (en) | 2001-01-31 | 2016-09-28 | Asahi Kasei Pharma Corporation | Compositions for assaying glycoprotein |
JP4925384B2 (ja) | 2001-04-20 | 2012-04-25 | 旭化成ファーマ株式会社 | N末端糖化蛋白質の定量方法 |
EP1424554A4 (en) | 2001-08-02 | 2007-07-25 | Kyowa Medex Co Ltd | REAGENT FOR HYDROGEN PEROXIDE DETERMINATION |
JP4231668B2 (ja) | 2001-09-04 | 2009-03-04 | キッコーマン株式会社 | 新規なフルクトシルペプチドオキシダーゼ |
US7025734B1 (en) * | 2001-09-28 | 2006-04-11 | Advanced Cardiovascular Systmes, Inc. | Guidewire with chemical sensing capabilities |
WO2003033601A1 (fr) | 2001-10-11 | 2003-04-24 | Arkray, Inc. | Procede destine a stabiliser l'oxydation d'un chromogene |
AU2002340415A1 (en) | 2001-11-13 | 2003-05-26 | The Procter And Gamble Company | Compositions containing enzymes stabilized with certain osmo-protectants and methods for using such compositions in personal care |
US6586199B2 (en) | 2001-11-20 | 2003-07-01 | Lifescan, Inc. | Stabilized tetrazolium reagent compositions and methods for using the same |
CN100394187C (zh) | 2002-06-14 | 2008-06-11 | 爱科来株式会社 | 使用磺酸化合物和硝基化合物的测定方法 |
CN1162150C (zh) * | 2002-06-21 | 2004-08-18 | 南京师范大学 | 注射用茶多酚组合物及其制备方法 |
AU2003235975A1 (en) | 2002-07-17 | 2004-02-02 | Arkray, Inc. | Method of decomposing protein with sulfonic acid compound |
JP4227820B2 (ja) | 2003-03-12 | 2009-02-18 | 旭化成ファーマ株式会社 | 新規な酵素 |
EP1607475A4 (en) | 2003-03-20 | 2010-02-10 | Asahi Kasei Life & Living Corp | OXYGEN INDICATOR AND PACKAGED MATERIAL |
WO2004104203A1 (ja) | 2003-05-21 | 2004-12-02 | Asahi Kasei Pharma Corporation | ヘモグロビンA1c測定法およびそれに用いる酵素とその製造法 |
JP2005110657A (ja) | 2003-09-18 | 2005-04-28 | Kikkoman Corp | α−糖化ジペプチドの製造法及びα−糖化ジペプチドの測定法 |
JP4489400B2 (ja) | 2003-10-02 | 2010-06-23 | アークレイ株式会社 | 試薬の安定化方法 |
US20070154976A1 (en) | 2003-11-19 | 2007-07-05 | Daiichi Pure Chemicals Co., Ltd. | Method of determining substrate contained in hemoglobin-containing sample |
ATE509119T1 (de) | 2003-11-19 | 2011-05-15 | Sekisui Medical Co Ltd | Verfahren zum testen von glykosyliertem protein |
JPWO2005056823A1 (ja) | 2003-12-12 | 2007-07-05 | アークレイ株式会社 | 糖化アミンの測定方法 |
JP4213064B2 (ja) | 2004-03-16 | 2009-01-21 | 株式会社リコー | 画像形成方法、画像形成装置、プロセスカートリッジ |
AU2005221996A1 (en) | 2004-03-17 | 2005-09-22 | Daiichi Pure Chemicals Co., Ltd | Method of measuring glycated protein |
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