JPS58187858A - 被酸化性呈色試薬の安定化方法 - Google Patents
被酸化性呈色試薬の安定化方法Info
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- JPS58187858A JPS58187858A JP7013782A JP7013782A JPS58187858A JP S58187858 A JPS58187858 A JP S58187858A JP 7013782 A JP7013782 A JP 7013782A JP 7013782 A JP7013782 A JP 7013782A JP S58187858 A JPS58187858 A JP S58187858A
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- G01N31/22—Investigating or analysing non-biological materials by the use of the chemical methods specified in the subgroup; Apparatus specially adapted for such methods using chemical indicators
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- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
有機性過酸化物、無機慴過酸化物、酸化性・・（」ゲ／
、多価遷移金属イオンなどの酸化性物質の徴用を正確に
測定するために、酸化性物質により酸化を受けて鋭敏に
呈色する被酸化性呈色試薬を用いる比色定量法が広く行
われている。
、多価遷移金属イオンなどの酸化性物質の徴用を正確に
測定するために、酸化性物質により酸化を受けて鋭敏に
呈色する被酸化性呈色試薬を用いる比色定量法が広く行
われている。
例えば、臨床化学検査の分野では、体液中の化学成分（
グルコース、コレステロール、トリグリセライド、リン
脂質、遊離脂肪酸、尿酸など）に特異的に作用して過酸
化水素を定量的に生成させる酵素を用いて過酸化水素を
生成せしめ、そ７′ＩＶζパーオキシダーゼと被酸化性
呈色試薬を加えて酸化呈色させ、その呈色強度を比色す
ることにより目的成分濃度を求めることが行われている
。
グルコース、コレステロール、トリグリセライド、リン
脂質、遊離脂肪酸、尿酸など）に特異的に作用して過酸
化水素を定量的に生成させる酵素を用いて過酸化水素を
生成せしめ、そ７′ＩＶζパーオキシダーゼと被酸化性
呈色試薬を加えて酸化呈色させ、その呈色強度を比色す
ることにより目的成分濃度を求めることが行われている
。
また、酵素活性の測定にも、酵素が基質に作用して生成
する物質を先と同じく過酸化水素−ベルオキダーゼ系に
導くことにより、体液中の酵素活性を測定する方法も広
く行われている。
する物質を先と同じく過酸化水素−ベルオキダーゼ系に
導くことにより、体液中の酵素活性を測定する方法も広
く行われている。
このほかに、食用油脂や工業用油脂類の劣化を示す指標
である過酸化物価の測定や、殺菌、漂白等のだ島に用い
た過酸化水素の食品中の残留ｈ（の１１１１１定や、水
道水、プールなどの殺菌、消毒にＩＩＩいられた塩素の
残留量の測定など広い分野で被酸化性呈色試薬が用いら
れている。
である過酸化物価の測定や、殺菌、漂白等のだ島に用い
た過酸化水素の食品中の残留ｈ（の１１１１１定や、水
道水、プールなどの殺菌、消毒にＩＩＩいられた塩素の
残留量の測定など広い分野で被酸化性呈色試薬が用いら
れている。
これら被酸化性呈色試薬には種類が多く、使ＩＩ＋目的
に応じて、用途に適した感度のものが選択されている。
に応じて、用途に適した感度のものが選択されている。
例えば、通常用いられる被酸化性呈色試薬の種類として
は、４−アミノアンチピリ７・フェノール誘導体、４−
アミ／アンチビリ／・ナフトール誘導体、４−アミ／ア
ンチビリ７ Ｎ、Ｎ−ジアルキルアニリン誘導体、４
−アミ／アンチビリン・Ｎ−アルキル−Ｎ−ヒドロキン
アルギル７ ＝リン誘導体、４−アミン７ノチビＩＪ
７・Ｎ、Ｎ−ジアルキル−ｍ−アルキルアニリン誘導体
、４−アミノア／チピリハＮ−アルキル−Ｎ−ヒト【コ
キ／アルキルーｍ−アルキルアニリン誘導体、４−アミ
ノアンチピリン・Ｎ、Ｎ−ジアルキル−３゜５−ジアル
キルアニリン誘導体、４−アミ／アンチビリ／・Ｎ−ア
ルキル−Ｎ−ヒドロキ／アルギル−３，５−ジアルキル
アニリン誘導体、４−アミノアンチピリ／・Ｎ−アルキ
ル−Ｎ−（２−ヒドロキノスルホアルキル）−ｍ−）ル
イジ／またはその塩、４−アミノアフチピリン・Ｎ−ア
ルキル〔（３−アルキルフェニル）−Ｎ−アセチルアル
キレノンアミン〕、３−メチル−２−べ／ノ゛チアノ゛
リノンヒドラゾ／・Ｎ、Ｎ−ジアルキルアニリノ誘１体
、２ 、２’−アジノービス（３−エチルベ／ゾチアゾ
リンー６−ヌルホン酸またはその塩Ｐ−まだはＯ−フェ
ニレノンアミン誘導体、Ｎ−（４−アンチピリル）−ア
ニリン誘導体、ｌ−リフェニルメタン系色素のロイコ体
、フェノチアジン系色素のロイコ体など非常に多数にの
ぼっている。
は、４−アミノアンチピリ７・フェノール誘導体、４−
アミ／アンチビリ／・ナフトール誘導体、４−アミ／ア
ンチビリ７ Ｎ、Ｎ−ジアルキルアニリン誘導体、４
−アミ／アンチビリン・Ｎ−アルキル−Ｎ−ヒドロキン
アルギル７ ＝リン誘導体、４−アミン７ノチビＩＪ
７・Ｎ、Ｎ−ジアルキル−ｍ−アルキルアニリン誘導体
、４−アミノア／チピリハＮ−アルキル−Ｎ−ヒト【コ
キ／アルキルーｍ−アルキルアニリン誘導体、４−アミ
ノアンチピリン・Ｎ、Ｎ−ジアルキル−３゜５−ジアル
キルアニリン誘導体、４−アミ／アンチビリ／・Ｎ−ア
ルキル−Ｎ−ヒドロキ／アルギル−３，５−ジアルキル
アニリン誘導体、４−アミノアンチピリ／・Ｎ−アルキ
ル−Ｎ−（２−ヒドロキノスルホアルキル）−ｍ−）ル
イジ／またはその塩、４−アミノアフチピリン・Ｎ−ア
ルキル〔（３−アルキルフェニル）−Ｎ−アセチルアル
キレノンアミン〕、３−メチル−２−べ／ノ゛チアノ゛
リノンヒドラゾ／・Ｎ、Ｎ−ジアルキルアニリノ誘１体
、２ 、２’−アジノービス（３−エチルベ／ゾチアゾ
リンー６−ヌルホン酸またはその塩Ｐ−まだはＯ−フェ
ニレノンアミン誘導体、Ｎ−（４−アンチピリル）−ア
ニリン誘導体、ｌ−リフェニルメタン系色素のロイコ体
、フェノチアジン系色素のロイコ体など非常に多数にの
ぼっている。
こｔｌら被酸化性呈色試薬を微量の酸化性物質の比色測
定に用いる場合、水溶液または有機溶媒溶液あるいは水
と有機溶媒の任意の混合溶液として使用目的に応じて無
機、有機の酸、塩基捷だほこねらの塩により反応に至適
なｐＨに調整される。
定に用いる場合、水溶液または有機溶媒溶液あるいは水
と有機溶媒の任意の混合溶液として使用目的に応じて無
機、有機の酸、塩基捷だほこねらの塩により反応に至適
なｐＨに調整される。
一般に被酸化性呈色試薬は空気酸化に対して鋭敏であり
、特に溶液状態では溶存酸素による影響を受は易く、経
時的に次第に着色劣化してくる欠点がある。そのため、
使用Ｍ′ｌＴに溶液としたり、弱い還冗剤（酸化防止剤
）を添加して溶存酸素による酸化を遅延させたりしてい
るが、適当な方法がないのが実情である。従って、使用
者は使用のたびに被酸化性呈色試薬を調製したり、短期
間で再変調製し直す必要があり、これの改善が強く要望
されていた。
、特に溶液状態では溶存酸素による影響を受は易く、経
時的に次第に着色劣化してくる欠点がある。そのため、
使用Ｍ′ｌＴに溶液としたり、弱い還冗剤（酸化防止剤
）を添加して溶存酸素による酸化を遅延させたりしてい
るが、適当な方法がないのが実情である。従って、使用
者は使用のたびに被酸化性呈色試薬を調製したり、短期
間で再変調製し直す必要があり、これの改善が強く要望
されていた。
このほか、被酸化性呈色試薬と酸化性物質との反応によ
る発色が早く、呈色後の安定性が良いことが実用上要望
されている条件であるが、これら全てを満足させること
は、被酸化性呈色試薬の性質上非常に困難な問題であっ
た。即ち「酸化性物質に対して被酸化性呈色試薬の感度
を向」ニさせたり、発色反応を早めると空気酸化に対し
て鋭敏となり、その結果として使用試薬溶液が不安定に
なる１という相反する性質を両立させねばならない。
る発色が早く、呈色後の安定性が良いことが実用上要望
されている条件であるが、これら全てを満足させること
は、被酸化性呈色試薬の性質上非常に困難な問題であっ
た。即ち「酸化性物質に対して被酸化性呈色試薬の感度
を向」ニさせたり、発色反応を早めると空気酸化に対し
て鋭敏となり、その結果として使用試薬溶液が不安定に
なる１という相反する性質を両立させねばならない。
更にもう一つの問題として、臨床化学検査に於ては、疾
病の診断の基礎データとなるため、簡易性、迅速性が重
視されており、除ター／バクやカラム処理など共存物質
と目的物質との分離を行うことなく直接体液試料と試薬
を反応させる方式カモ１スわれている。この場合、目的
物質の標準液と体准試刺の被酸化性呈色試薬による呈色
安定性力声異なるという現象が生じ、測定値の誤差原因
になることが指摘されている。多くの場合標準液の呈色
安定性が悪く体液試料より早く褪色現象７５：起る。
病の診断の基礎データとなるため、簡易性、迅速性が重
視されており、除ター／バクやカラム処理など共存物質
と目的物質との分離を行うことなく直接体液試料と試薬
を反応させる方式カモ１スわれている。この場合、目的
物質の標準液と体准試刺の被酸化性呈色試薬による呈色
安定性力声異なるという現象が生じ、測定値の誤差原因
になることが指摘されている。多くの場合標準液の呈色
安定性が悪く体液試料より早く褪色現象７５：起る。
以に述べた如く、現在、被酸化性呈色試薬をＩ＋４いて
微積の酸化性物質濃度を比色定置するノｉ ｆＬにおい
て、被酸化性呈色試薬溶液の保存安定性べ・呈色安定性
を向上させることは実用上非常に７１ノットが有り、使
用者側から強く要望されていた。
微積の酸化性物質濃度を比色定置するノｉ ｆＬにおい
て、被酸化性呈色試薬溶液の保存安定性べ・呈色安定性
を向上させることは実用上非常に７１ノットが有り、使
用者側から強く要望されていた。
本発明者らはこれらの要望に応えるべく鋭、輔研究の結
果、被酸化性呈色試薬とシフロブキス） ＩＪ／とを共
存させると、その保存安定性や呈色安定性が飛躍的に向
」−することを発見し、本発明を完成するに至った。
果、被酸化性呈色試薬とシフロブキス） ＩＪ／とを共
存させると、その保存安定性や呈色安定性が飛躍的に向
」−することを発見し、本発明を完成するに至った。
即ち、本発明は被酸化性呈色試薬を７クロデキストリン
との包接化合物とすることを特徴とする被酸化性呈色試
薬の安定化方法である。
との包接化合物とすることを特徴とする被酸化性呈色試
薬の安定化方法である。
本発明を実施するには、通常の包接化合物の製造法、即
ち、飽和水溶液法、混練法、凍結乾燥法などにより単離
した被酸化性呈色試薬の７クロデキストリフ包接化合物
を用いてもよいが、通常はンクロデキストリ／を溶解し
た緩衝液、酸性溶液、アルカリ性溶液、水−有機溶媒混
合液などに、被酸化性呈色試薬を加えて溶解することに
より、簡単に安定な試薬溶液を得ることができる。
ち、飽和水溶液法、混練法、凍結乾燥法などにより単離
した被酸化性呈色試薬の７クロデキストリフ包接化合物
を用いてもよいが、通常はンクロデキストリ／を溶解し
た緩衝液、酸性溶液、アルカリ性溶液、水−有機溶媒混
合液などに、被酸化性呈色試薬を加えて溶解することに
より、簡単に安定な試薬溶液を得ることができる。
これに用いるンクロデキストリ／はα−ンクロデキス］
・リン、β−７クロデキストリン、γ−／クロデキスト
リ／、δ−７クロデキストリノのいすねでもよく、寸だ
これらの任意の割合の混合物でもよい。
・リン、β−７クロデキストリン、γ−／クロデキスト
リ／、δ−７クロデキストリノのいすねでもよく、寸だ
これらの任意の割合の混合物でもよい。
試薬溶液中のンクロデキストリン濃度は通常０１〜１．
５ Ｗ／ｖ％の範囲が好捷しく用いられるが、これより
低濃度あるいは高濃度でも何等差支えない。シクロデキ
ストリンの水に対する溶解性がαは１４．５ ｇ７１０
Ｏｍｌ、βは１．８５９ ／ １００ ｍｌ。
５ Ｗ／ｖ％の範囲が好捷しく用いられるが、これより
低濃度あるいは高濃度でも何等差支えない。シクロデキ
ストリンの水に対する溶解性がαは１４．５ ｇ７１０
Ｏｍｌ、βは１．８５９ ／ １００ ｍｌ。
γは２３．２ ｇ／ｌ ＯＯｍｌ、 δは［非常に溶
は易い」と種類によって夫々異なるので、可能な範囲内
の！ｌ変で使用すればよい。また、有機溶媒としてＶ士
、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキノドが好ま
しく用いられる。
は易い」と種類によって夫々異なるので、可能な範囲内
の！ｌ変で使用すればよい。また、有機溶媒としてＶ士
、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキノドが好ま
しく用いられる。
本発明で用いられる通常のンクロデキストリ／！１度で
は酵素的分析法で用いられる酵素、例えば体液中のトリ
グリセライド測定におけるグリセロキナーゼ、グリセ「
コール−３−リン酸オキシダーゼ、クリセロールオキン
ダーゼ、ペルオキシダーゼ、コレステロール測定におけ
るコレステロールエステルヒドロラーゼ、コレステロー
ルオキ／ダーゼ、ベルオキンダーゼ、グルコース測定に
おけるグルコースオキシダーゼ、ムタロターゼ、ペルオ
キ／ダーゼ、遊離脂肪酸測定におけるア／／ＬＣ。
は酵素的分析法で用いられる酵素、例えば体液中のトリ
グリセライド測定におけるグリセロキナーゼ、グリセ「
コール−３−リン酸オキシダーゼ、クリセロールオキン
ダーゼ、ペルオキシダーゼ、コレステロール測定におけ
るコレステロールエステルヒドロラーゼ、コレステロー
ルオキ／ダーゼ、ベルオキンダーゼ、グルコース測定に
おけるグルコースオキシダーゼ、ムタロターゼ、ペルオ
キ／ダーゼ、遊離脂肪酸測定におけるア／／ＬＣ。
Ａン／セダーゼ、アノルＣｏＡオキシダーゼ、ペルオキ
シダーゼなどは全く影響を受けない。
シダーゼなどは全く影響を受けない。
このようにして調製した試薬溶液は通常の保存条件で、
その保存有効期間を、本発明の方法によらない試薬溶液
と比較して、２倍以上延長できることが判明した。
その保存有効期間を、本発明の方法によらない試薬溶液
と比較して、２倍以上延長できることが判明した。
本発明の方法により調製された試薬溶液は、すでに述べ
た［保存安定性・呈色安定性の向上Ｊという利点のほか
に、被酸化性呈色試薬の種類によっては更に別の効果も
生ずることが判明した。
た［保存安定性・呈色安定性の向上Ｊという利点のほか
に、被酸化性呈色試薬の種類によっては更に別の効果も
生ずることが判明した。
例えば、４−アミノアンチピリン・Ｐ−ハロゲン置換フ
ェノール誘導体系の被酸化性呈色試薬においては、同一
濃度の過酸化水素に対して、本発明の方法による試薬を
用いた場合、従来の方法に比べて、その呈色度は１．１
〜１３倍に向上する。
ェノール誘導体系の被酸化性呈色試薬においては、同一
濃度の過酸化水素に対して、本発明の方法による試薬を
用いた場合、従来の方法に比べて、その呈色度は１．１
〜１３倍に向上する。
同様な現象はバラ位にハロゲンを有しないフェノールに
ついても認められる。
ついても認められる。
以千に実施例を示す。
実施例１
被酸化性呈色試薬溶液： ０．０５ Ｍ ＩＪン酸緩衝
液（ｐ Ｈ７，Ｏ） Ｉ ＯＯＯｍｌに４−７ ｉ
／ ７ ｙ ｆビリン０．４９ ｍｍｏｌ 、Ｐ−り０
０フエノール７、８ ｍｍｏｌ。
液（ｐ Ｈ７，Ｏ） Ｉ ＯＯＯｍｌに４−７ ｉ
／ ７ ｙ ｆビリン０．４９ ｍｍｏｌ 、Ｐ−り０
０フエノール７、８ ｍｍｏｌ。
β−シンクロデキストリン４４ ｍｍｏｌ ’１ ペル
オキ／ダーゼｔｏｏｏｏ単位を加えて溶解する。
オキ／ダーゼｔｏｏｏｏ単位を加えて溶解する。
保存方法：無色ガラス容器に入れ密栓して室内敗光丁、
室温に保存。
室温に保存。
過酸化水素の定量法二過酸化水素の３ｍＭ溶液ｉｏｏμ
７に被酸化性呈色試薬溶液３．０ ｍｌを加えて室温で
５分間放置後、層厚１０ｍｍのセルで水を対照モして５
０５ｎｍの吸光度を測定する。別に過酸化水素溶液の代
わりにイオン交換水１００μノを用いて同一条件で操作
し測定した吸光度を試薬ブラックとする。過酸化水素の
吸光度から試薬ブランクを差引いた値を過酸化水素呈色
とする。
７に被酸化性呈色試薬溶液３．０ ｍｌを加えて室温で
５分間放置後、層厚１０ｍｍのセルで水を対照モして５
０５ｎｍの吸光度を測定する。別に過酸化水素溶液の代
わりにイオン交換水１００μノを用いて同一条件で操作
し測定した吸光度を試薬ブラックとする。過酸化水素の
吸光度から試薬ブランクを差引いた値を過酸化水素呈色
とする。
比較例１
被酸化性呈色試薬溶液：実施例１の調製法に於て、β−
７クロデキストリンのみを除いて、池は全く同一組成の
ものを調製する。
７クロデキストリンのみを除いて、池は全く同一組成の
ものを調製する。
保存方法：実施例１に同じ
過酸化水素の定量法、：実施例１に同じ結果
表中の数値は５０５ｎｍにおける吸光度を示す。
表から明らかなように過酸化水素による呈色は比較例に
対し本発明の方法が１．１５倍高くなっている。試薬ブ
ランクは、もともと安定なため、両者に有意差はない。
対し本発明の方法が１．１５倍高くなっている。試薬ブ
ランクは、もともと安定なため、両者に有意差はない。
実施例２ トリグリセライド定量
リポプロテインリパーセ５０，０ＯＯＵ、グリセロキナ
ーゼ４０００Ｕ、グリセロール−３−リン酸オキ／ダー
ゼ１００ＯＵ、ベルオキ／ダーゼ３０００Ｕ、４−アミ
ノアンチピリン０．５０ ｍｍｏｌｓＰ−クロロフェノ
ール５．５ ｍｍｏｌ 、、Ａ Ｔ Ｐ １０１００Ｏ
，塩化マグネシウム５ｍｍｏｌ、β−／りａデキストリ
ン５ｍｍｏｌ をとり、０．０５ Ｍ ）リス緩？＃Ｉ
液（１）Ｈ７，５） ｌ ＯＯｏａｔに溶解する。こ
ｈを発色試液とする。
ーゼ４０００Ｕ、グリセロール−３−リン酸オキ／ダー
ゼ１００ＯＵ、ベルオキ／ダーゼ３０００Ｕ、４−アミ
ノアンチピリン０．５０ ｍｍｏｌｓＰ−クロロフェノ
ール５．５ ｍｍｏｌ 、、Ａ Ｔ Ｐ １０１００Ｏ
，塩化マグネシウム５ｍｍｏｌ、β−／りａデキストリ
ン５ｍｍｏｌ をとり、０．０５ Ｍ ）リス緩？＃Ｉ
液（１）Ｈ７，５） ｌ ＯＯｏａｔに溶解する。こ
ｈを発色試液とする。
人血清２０μｌをとり発色試ｆｔ ３．０ ｍｌを加え
て、３７℃恒温槽付分光光度計で５０５ｎｍにおける吸
光度を経時的に測定する（対照：水）。
て、３７℃恒温槽付分光光度計で５０５ｎｍにおける吸
光度を経時的に測定する（対照：水）。
人血清の代わりにグリセリン３１．２ ｒｒｗ７／ｄｌ
水溶液（トリオレイン３ｏｏ１ｎｇ相当）を２０ｔｔｉ
とり］と同様に吸光度を経時的に測定する。
水溶液（トリオレイン３ｏｏ１ｎｇ相当）を２０ｔｔｉ
とり］と同様に吸光度を経時的に測定する。
比較例２
実施例２の発色試液の調製法に於て、β−７クロデギス
） ｌ）ンのみ除いて、池は全く同一組成のものを調製
する。
） ｌ）ンのみ除いて、池は全く同一組成のものを調製
する。
人血清およびグリセリン水溶液の測定は実施例２と同一
操作とする。
操作とする。
結果、
表中の数値は５０５ｎｍにおける吸光度を示す。
表から明らかなように人血清では呈色度の経時変化は実
施例２、比較例２とも認められないが、グリセリン標準
液では比較例２に於て経時的低下が認められる。実施例
２では低下は僅かで実用上問題ない。また、呈色度は実
施例２が比較例２ ｔｉｃ ７１して約１１４倍高くな
っている。
施例２、比較例２とも認められないが、グリセリン標準
液では比較例２に於て経時的低下が認められる。実施例
２では低下は僅かで実用上問題ない。また、呈色度は実
施例２が比較例２ ｔｉｃ ７１して約１１４倍高くな
っている。
実施例３ コレステロール定置
コレステロールエステルヒドロラーゼ２０．０００Ｕ１
コレステロールオキンタ”−ゼ１０，０ＯＯＵ。
コレステロールオキンタ”−ゼ１０，０ＯＯＵ。
ペルオキシダーゼ５，０ＯＯＵ、３−メチル−Ｎ−エチ
ル−Ｎ −（β−ヒドロキ／エチル）−アニソ７５、５
ｍｍｏｌ 、４−アミノアフチビリ７０．５ ｍｍｏ
ｌ、トリトンＸ１００ １．５ｇ、β−７クロデキスト
リン８ｍｍｏｌ をとり、０．０５ Ｍリン酸緩衝１（
ｐ１１′′７．０） １００’Ｏｍｌに溶解する。こ
れを発色試液とする。
ル−Ｎ −（β−ヒドロキ／エチル）−アニソ７５、５
ｍｍｏｌ 、４−アミノアフチビリ７０．５ ｍｍｏ
ｌ、トリトンＸ１００ １．５ｇ、β−７クロデキスト
リン８ｍｍｏｌ をとり、０．０５ Ｍリン酸緩衝１（
ｐ１１′′７．０） １００’Ｏｍｌに溶解する。こ
れを発色試液とする。
保存方法：無色ガラス容器に入れ密栓して室内散光下、
室温に保存。
室温に保存。
コレステロール定量法：人血清２０μｌをとり発色試’
Ｄ、 ３．０ ｍｌを加え、３７て、値温槽イを分光光
度計で５５０ｎｍにおける吸光度を経時的に測定する（
対照：水）。
Ｄ、 ３．０ ｍｌを加え、３７て、値温槽イを分光光
度計で５５０ｎｍにおける吸光度を経時的に測定する（
対照：水）。
人血清の代わりにコレステロール溶液（コレステロール
２００ｍ〆１１．）を２０μでとり上と同様に吸光度を
経時的に測定する。
２００ｍ〆１１．）を２０μでとり上と同様に吸光度を
経時的に測定する。
比較例３
実施例３の発色試液の調製法に於て、β−／クロデキス
トリンのみ除いて、池は全く同一組成のものを調製する
。
トリンのみ除いて、池は全く同一組成のものを調製する
。
保存方法：実施例３に同じ。
コレステロール定苗法：実施例３に同じ。
結果
第１表 呈色液の経時変化
第２表 発色試液保存による試薬ブラ／りの経ト１変化
第１表、第２表とも表中の数値は５５０ｎｍにおける吸
光度を示す。（対照：水） 第１表から明らかなように人血清では呈色度の経時変化
は実施例３、比較例３とも認められないが、コレステロ
ール標準液では比較例３に於て経時的低下が認められる
。実施例３では殆んど変化しない。第２表から明らかな
ように、試薬ブラ／りの経口的上昇は比較例３では、２
０日間で初期の５．４５倍になっているが、実施例３で
は初期の１６３倍であり、実用上問題ない。
光度を示す。（対照：水） 第１表から明らかなように人血清では呈色度の経時変化
は実施例３、比較例３とも認められないが、コレステロ
ール標準液では比較例３に於て経時的低下が認められる
。実施例３では殆んど変化しない。第２表から明らかな
ように、試薬ブラ／りの経口的上昇は比較例３では、２
０日間で初期の５．４５倍になっているが、実施例３で
は初期の１６３倍であり、実用上問題ない。
実施例４ 尿酸定量
ウリカーゼ１５０Ｕ、ペルオキ／ダーゼ４０００Ｕ、Ｎ
−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキ／−３−スルホプロビル
）−ｍ−トルイ、ジンナトリウム１ｍｍｏｌ、４−アミ
ノアンチピリ／１ｍｍｏｌ 、α−７クロデキストリ７
５ ｍｍθＩを０．０５ Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６，５
）１０００ａｔに溶解する。これを発色試液とする。
−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキ／−３−スルホプロビル
）−ｍ−トルイ、ジンナトリウム１ｍｍｏｌ、４−アミ
ノアンチピリ／１ｍｍｏｌ 、α−７クロデキストリ７
５ ｍｍθＩを０．０５ Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６，５
）１０００ａｔに溶解する。これを発色試液とする。
保有力泳：無色ガラス容器に入れ密栓して室内散光トー
１室温に保存。
１室温に保存。
尿酸定量法
人血？＃ ５０ ｔｔｌＶＣ発色試薬３． ｇ ｍｔ
ヲ加え、３７℃恒温槽伺分光光度計で５５０ｎｍにおけ
る吸光度を経時的に測定する（χ・Ｊ照：水）。
ヲ加え、３７℃恒温槽伺分光光度計で５５０ｎｍにおけ
る吸光度を経時的に測定する（χ・Ｊ照：水）。
人血清の代わりに尿酸溶Ｈ（１０ｍｇ／ｄｌ ）を５０
１ｔｌ とり上と同様に吸光度を経時的に測定する。
１ｔｌ とり上と同様に吸光度を経時的に測定する。
比較例４
実施例４の発色試液の調製法に於て、α−７クロデキス
トリンのみ除いて、池は全く同一組成のものを調製する
。
トリンのみ除いて、池は全く同一組成のものを調製する
。
保存方法：実施例４に同じ、
尿酸定量法：実施例４に同じ、
結果
第１表 呈色液の経時変化
第２表 発色試液保存による試薬プラ／りの経口変化
反応時間：５分
第１表、第２表とも表中の数値は５５０ｎｍにおける吸
光度を示す。（対照：水） 第１表から明らかなように人血清では呈色度の経時変化
は実施例４、比較例４とも認めらねないが、尿酸標準液
では比較例４に於て経時的低１が認められるが実施例４
では認められない。壕だ、呈色度は実施例４が比較例４
に対し約１３４倍高くなっている。
光度を示す。（対照：水） 第１表から明らかなように人血清では呈色度の経時変化
は実施例４、比較例４とも認めらねないが、尿酸標準液
では比較例４に於て経時的低１が認められるが実施例４
では認められない。壕だ、呈色度は実施例４が比較例４
に対し約１３４倍高くなっている。
第２表から明らかなように試薬ブランクの経［」釣上４
１け比較例４では５日間で初期の１４．３８（Δになっ
ているが実施例４では１０．１３倍であり更に口を経る
に従って比較例４と実施例４の開きは大きくなっている
。
１け比較例４では５日間で初期の１４．３８（Δになっ
ているが実施例４では１０．１３倍であり更に口を経る
に従って比較例４と実施例４の開きは大きくなっている
。
実施例５
被酸化性呈色試薬溶液： ０．０５ Ｍ リン酸緩衛液
（ｐＨ７，０） １０００ｒｒｔに４−アミノアンチ
ピリ７０．５ｍｍｏｌ 、８−じドロキンキノリ１０．
５ｍｍｏｌ、ベルオキ／ダーゼ１００００単位、β−／
り［」ツキストリン３．０ｍｍｏｌ を溶解する。
（ｐＨ７，０） １０００ｒｒｔに４−アミノアンチ
ピリ７０．５ｍｍｏｌ 、８−じドロキンキノリ１０．
５ｍｍｏｌ、ベルオキ／ダーゼ１００００単位、β−／
り［」ツキストリン３．０ｍｍｏｌ を溶解する。
保育方法：無色ガラス容器に人ね密栓して室内散光１、
室温に保存。
室温に保存。
過酸化水素の定昂法：過酸化水素の３ｍＭ溶液１００１
ｚ／に被酸化性呈色試薬溶液３．０ ｍｌを加えて室温
で５分間放置後、層厚１ ｏｒｎｍのセルで水をχ・１
照として４９０ｎｍの吸光度を測定する。別に過酸化水
素溶液の代わりにイオン交換水１ｏｏ／１１を用いて同
一条件で操作し測定した吸光度を試薬ブランクとする。
ｚ／に被酸化性呈色試薬溶液３．０ ｍｌを加えて室温
で５分間放置後、層厚１ ｏｒｎｍのセルで水をχ・１
照として４９０ｎｍの吸光度を測定する。別に過酸化水
素溶液の代わりにイオン交換水１ｏｏ／１１を用いて同
一条件で操作し測定した吸光度を試薬ブランクとする。
過酸化水素の吸光度から試薬ブランクを差引いた値を過
酸化水素呈色とする。
酸化水素呈色とする。
比較例５
被酸化性呈色試薬溶液：実施例５の調製法に於て、β−
／クロデキストリンのみを除いて、池は全く同一組成の
ものを調製する。
／クロデキストリンのみを除いて、池は全く同一組成の
ものを調製する。
保存方法：実施例５に同じ。
過酸化水素の定量法：実□施例５に同じ。
結果
表中の数値は４９０ｎｍにおける吸光度を示す。
表かＣつ明らかなようＶＣｉｆ４酸化水素による呈色し
１比較例５に７＋ １．実施例５が１１０倍高くなって
いる。
１比較例５に７＋ １．実施例５が１１０倍高くなって
いる。
試薬フラ／りの経［コ的笈化は２０ ［１間作イｆで実
施例５ ｉｔ殆んど変化無く、比較例５では初期の約３
イ？を后ｊくなっている。
施例５ ｉｔ殆んど変化無く、比較例５では初期の約３
イ？を后ｊくなっている。
実施例６
被酸化性呈色試薬浴液： ０．０５ Ｍ ＩＪ ／酸緩
衝液（ｐ Ｈ７，０） １０００ｍｌに４−アミノア
ンチピリン０．５ ｍｍｏｌ Ｘｌ−ナフトール３ｍｍ
ｏｌｓペルＡキ／ダーゼ１００００単位、β−７クロデ
キストリン４．０ ｍｍｏｌ を溶解する。
衝液（ｐ Ｈ７，０） １０００ｍｌに４−アミノア
ンチピリン０．５ ｍｍｏｌ Ｘｌ−ナフトール３ｍｍ
ｏｌｓペルＡキ／ダーゼ１００００単位、β−７クロデ
キストリン４．０ ｍｍｏｌ を溶解する。
保存方法：無色ガラス容器に入れ密栓して室内散光ト、
室温に保イア。
室温に保イア。
過酸化水素の定１−法：過酸化水素の３ｍＭ溶液１０Ｑ
７ｚ（５に被酸化性１４色試薬溶液３．０ ｍｌを加え
τ室温で５分間放置後、層厚１０ｍｍのセルで水を７１
照として５０’ ５ ｎ ｍの吸光塵を測定する。別に
過酸化水素溶液の代わりにイオン交換水１００μｌをＪ
ｌｌいて同一条例で操作し測定した吸光度を試薬ブラン
クとする。過酸化水素の吸光度から試薬ブランクを差引
いた値を過酸化水素呈色とする。
７ｚ（５に被酸化性１４色試薬溶液３．０ ｍｌを加え
τ室温で５分間放置後、層厚１０ｍｍのセルで水を７１
照として５０’ ５ ｎ ｍの吸光塵を測定する。別に
過酸化水素溶液の代わりにイオン交換水１００μｌをＪ
ｌｌいて同一条例で操作し測定した吸光度を試薬ブラン
クとする。過酸化水素の吸光度から試薬ブランクを差引
いた値を過酸化水素呈色とする。
比較例６
被酸化性呈色試薬溶液：実施例６の調製法に於て、β−
７クロデキストリンのみを除いて、池は全く同一組成の
ものを調製する。
７クロデキストリンのみを除いて、池は全く同一組成の
ものを調製する。
保存方法：実施例６に同じ、
過酸化水素の定量法：実施例６に同じ、結果
表中の数値は５０５ｎｍにおける吸光度を示す。
表から明らかなように過酸化水素による呈色は比較例６
に対し実施例６が１．１０倍高くなっている。
に対し実施例６が１．１０倍高くなっている。
試薬ブランクの経口変化は２０１」間保存で実施例６で
は初期の約２７倍、比較例６では８５倍となっており、
実施例６て安定化効果が顕著に認めらｊ′する。
は初期の約２７倍、比較例６では８５倍となっており、
実施例６て安定化効果が顕著に認めらｊ′する。
実施例７
被酸化性呈色試薬溶液： ０．０５ Ｍ ’） ｙ酸緩
衝敲（ｐ ）１７．０） １０００ｍｌに４〜７
／ ７ ／ｆ ヒ＋）７０．４ ｍｍｏｌ ｓ ４−
クロｏ −１−ナフトール２ｍｍｏｌ 、ベルオキ／ダ
ーゼ１００００単位、β−７クロデキストリン４．０
ｍｍｏｌ を溶解する。
衝敲（ｐ ）１７．０） １０００ｍｌに４〜７
／ ７ ／ｆ ヒ＋）７０．４ ｍｍｏｌ ｓ ４−
クロｏ −１−ナフトール２ｍｍｏｌ 、ベルオキ／ダ
ーゼ１００００単位、β−７クロデキストリン４．０
ｍｍｏｌ を溶解する。
保イイ方法：無色カラス容器に入れ密栓して室内数）’
ｅｌ・、室温に保育、 過酸化水素の定量法：実施例６に同じ 比較例７ 被酸化性呈色試薬溶ｔｉ：実施例７の調製法に於て、β
−ンク、ロデキストリンのみを除いて、能は全く同一組
成のものを調製する。
ｅｌ・、室温に保育、 過酸化水素の定量法：実施例６に同じ 比較例７ 被酸化性呈色試薬溶ｔｉ：実施例７の調製法に於て、β
−ンク、ロデキストリンのみを除いて、能は全く同一組
成のものを調製する。
保イ１方法：実施例７に同じ
５ｔへ酸化水素の定ｈ１法：実施例７に同じ結果、
表中の数値は５０５ｎｍにおける吸光度を示す。
表から明らかなように試薬ブランクの経口的十ケ１は、
２０日間で実施例７は比較例７の約１／３である。過酸
化水素による呈色には差がないが、軒１」２０日では比
較例７にや一低トがみられる。
２０日間で実施例７は比較例７の約１／３である。過酸
化水素による呈色には差がないが、軒１」２０日では比
較例７にや一低トがみられる。
実施例８
Ｎ、Ｎ−ジエチル−ｍ−トルイジンとβ−／クリデキス
トリンとの包接化合物の調製：Ｎ、Ｎ−ジエチル−ｍ−
トルイソ１０１夕を０．０５ Ｍリノ酸緩衝１ｉｆｆｌ
（ｐ Ｈ７，０） １００ ｍｌＫ’Ｉｎ溶Ｎスル
。
トリンとの包接化合物の調製：Ｎ、Ｎ−ジエチル−ｍ−
トルイソ１０１夕を０．０５ Ｍリノ酸緩衝１ｉｆｆｌ
（ｐ Ｈ７，０） １００ ｍｌＫ’Ｉｎ溶Ｎスル
。
こｔｌにβ−ンクロデキストリノ０．５ ｇを加えて攪
拌溶解した後、放置すると白色沈澱が生成する。
拌溶解した後、放置すると白色沈澱が生成する。
これをｐ取乾燥する。
破酸ｒヒ性呈色試薬溶液： ０．０５ Ｍ ’） ／酸
緩衛液（ｐ Ｈ７，０）’１００ｍｌに包接化合物０．
０５ ｇ、４−アミノアンチピリン０．０１５’、ベル
オキンダーゼ１０００単位を溶解する。
緩衛液（ｐ Ｈ７，０）’１００ｍｌに包接化合物０．
０５ ｇ、４−アミノアンチピリン０．０１５’、ベル
オキンダーゼ１０００単位を溶解する。
保存方法：無色ガラス容器に入れ密栓して室内散光ト、
室温に保存、 過酸化水素の定皺法二過酸化水素の３ｍＭ溶液１００μ
ｌに被酸化性呈色試薬溶液３． Ｑ ｍｌを加えて室温
で５分間放置後、層厚１０ｍｍのセルで水をｉ１照とし
て５５０ｎ ｍの吸光度を測定する。別に過酸化水素溶
液の代わりにイオン交換水１００ｚｚｄを用いて同一条
件で操作し測定した吸光度を試薬ブランクとする。過酸
化水素の吸光度から試薬ブラ／りを差引いた値を過酸化
水素呈色とする。
室温に保存、 過酸化水素の定皺法二過酸化水素の３ｍＭ溶液１００μ
ｌに被酸化性呈色試薬溶液３． Ｑ ｍｌを加えて室温
で５分間放置後、層厚１０ｍｍのセルで水をｉ１照とし
て５５０ｎ ｍの吸光度を測定する。別に過酸化水素溶
液の代わりにイオン交換水１００ｚｚｄを用いて同一条
件で操作し測定した吸光度を試薬ブランクとする。過酸
化水素の吸光度から試薬ブラ／りを差引いた値を過酸化
水素呈色とする。
比較例８
被酸化性呈色試薬ぞ液： ０．０５ Ｍ ＩＪノ酸緩衝
液（ｐＨ７，０） １００ｍｌにＮ、Ｎ−ジエチル−
ｍ−トルイジン０．０５夕、４−アミノアンチピリン０
０１ｇ、ペルオキシダーゼ１０’ＯＯ単位を溶解する。
液（ｐＨ７，０） １００ｍｌにＮ、Ｎ−ジエチル−
ｍ−トルイジン０．０５夕、４−アミノアンチピリン０
０１ｇ、ペルオキシダーゼ１０’ＯＯ単位を溶解する。
保イ１方法：実施例８に同じ
過酸化水素の定量法：実施例８に同じ
表中の数値は５５０ｎｍにおける吸光度を示す。
表から明らかなように試薬ブランクの経日的」−列は、
２０日間で実施例８は比較例８の約ＩＡ５である。過酸
化水素による呈色には差がない。
２０日間で実施例８は比較例８の約ＩＡ５である。過酸
化水素による呈色には差がない。
実施例９
２．４−ジクロロフェノール０１ｇをイオン交換水１０
０ｍ／に溶解し、更にβ−７クロデキストリノ０．５ｇ
を加えて溶解後放置すると白色沈Ｒ（２゜４−ジクロロ
フェノール七β−７クロデキス１リンとの包接化合物）
が生成する。これｔｖ取乾燥する。
０ｍ／に溶解し、更にβ−７クロデキストリノ０．５ｇ
を加えて溶解後放置すると白色沈Ｒ（２゜４−ジクロロ
フェノール七β−７クロデキス１リンとの包接化合物）
が生成する。これｔｖ取乾燥する。
被酸化性呈色試薬溶液： ０．０５ Ｍ ＩＪ ７酸緩
衝液（ｐＨ７，０） １００ｍ１Ｋ包接化合物０．１
ｇ、４−アミノアンチビリ１００１ｇ、ベルオキ／り゛
−ゼ１０ｎ０単位を溶解する。
衝液（ｐＨ７，０） １００ｍ１Ｋ包接化合物０．１
ｇ、４−アミノアンチビリ１００１ｇ、ベルオキ／り゛
−ゼ１０ｎ０単位を溶解する。
過酸化水素の定址法：試料１０−１００μｌに被酸化性
呈色試薬溶液３． Ｑ ｍｅを加えて室温〜３７ ”Ｃ
で５分間放置後、試薬ブランクを対照として５０５ｎｍ
における吸光度を測定する。別に過酸イヒ水素標準液を
用いて同一条件で操作して作成ｌ−た検Ｉ１１線と対比
して、試料中の過酸化水素濃度を算ａｔ −ｔ−る。
呈色試薬溶液３． Ｑ ｍｅを加えて室温〜３７ ”Ｃ
で５分間放置後、試薬ブランクを対照として５０５ｎｍ
における吸光度を測定する。別に過酸イヒ水素標準液を
用いて同一条件で操作して作成ｌ−た検Ｉ１１線と対比
して、試料中の過酸化水素濃度を算ａｔ −ｔ−る。
実施例１０
被酸化性呈色試薬溶液： ０．０５ Ｍ ＩＪ ７酸緩
衝液（ｐ Ｈ７，０） ９００ｍｅにジメチルスルホ
キノドＩＱＱｍｌ！を加えて混和し、これに４−アミノ
ア／チビリン０．５ ｍｍｏｌ ｚ ジメチルアニＩＪ
ノ５ｍｍｏｌ、ベルオキンダーゼ１００００単位、β−
７クロブキストリ’／ ４． Ｏｍｍｏｌ を溶解する
。
衝液（ｐ Ｈ７，０） ９００ｍｅにジメチルスルホ
キノドＩＱＱｍｌ！を加えて混和し、これに４−アミノ
ア／チビリン０．５ ｍｍｏｌ ｚ ジメチルアニＩＪ
ノ５ｍｍｏｌ、ベルオキンダーゼ１００００単位、β−
７クロブキストリ’／ ４． Ｏｍｍｏｌ を溶解する
。
保存方法：無色ガラス容器に入れ密栓して室内敗九上、
室温に保存。
室温に保存。
過酸化水素の定量法：過酸化水素の３ ｍ Ｍ 耐液１
００μ６に被酸化性呈色試薬溶液３． Ｏｍｌを加えて
室温で５分間放置後、層厚１０ｍｍのセルで水を対照と
して５５０ｎｍの吸光度を測定する。別に過酸化水素溶
液の代わりにイオン交換水１００μｌを用いて同一条件
で操作し測定した吸光度を試薬ブランクとする。過酸化
水素の吸光度から試薬ブランクを差引いた値を過酸化水
素呈色とする。
００μ６に被酸化性呈色試薬溶液３． Ｏｍｌを加えて
室温で５分間放置後、層厚１０ｍｍのセルで水を対照と
して５５０ｎｍの吸光度を測定する。別に過酸化水素溶
液の代わりにイオン交換水１００μｌを用いて同一条件
で操作し測定した吸光度を試薬ブランクとする。過酸化
水素の吸光度から試薬ブランクを差引いた値を過酸化水
素呈色とする。
比較例９
被酸化性呈色試薬溶液：実施例１０の調製法に於て、β
−７クロデキストリンのみを除いて、曲は全く同一組成
のものを調製する。
−７クロデキストリンのみを除いて、曲は全く同一組成
のものを調製する。
保存方法：実施−例１０に同じ
過酸化水素の定量法：実施例１０に同じ結果
表中の数値は５５０ ｎ ｍにおける吸光度を示す。
表から明らかなように試薬ブラ／りの経（Ｊ的１．シ１
は、２０日間で実施例１０は比較例９の約１／３である
。過酸化水素による呈色には差がない。
は、２０日間で実施例１０は比較例９の約１／３である
。過酸化水素による呈色には差がない。
実施例１１
被酸化性呈色試薬溶液： ０．０５ Ｍ ’）ン酸緩衛
静（ｐ Ｈ７，０） ９０ Ｏｍｌ：にジメチルホル
ムアミド１００ｍ／を加えて混和し、これに４−アミノ
ア／チビリン０．５ｍｍｏｌ ＸＮ 、 Ｎ−ジエチル
−ｍ−トルイジｙ ６． Ｏｍｍｏｌ 、ベルオキ７ダ
ーゼ１００００単位、β−７クロデキストリン４ｍｍｏ
ｌ を溶解する。
静（ｐ Ｈ７，０） ９０ Ｏｍｌ：にジメチルホル
ムアミド１００ｍ／を加えて混和し、これに４−アミノ
ア／チビリン０．５ｍｍｏｌ ＸＮ 、 Ｎ−ジエチル
−ｍ−トルイジｙ ６． Ｏｍｍｏｌ 、ベルオキ７ダ
ーゼ１００００単位、β−７クロデキストリン４ｍｍｏ
ｌ を溶解する。
保存方法：実施例８に同じ、
過酸化水素の定埴法：実施例８に同じ、結果
表中の数値は５５０ｎｍにおける吸光度を／Ｉ’４す。
表から明らかなように実施例１１と実施例８は同じ結果
を示し、ジメチルホルムアミドを加えても効果は全く変
わらない。
を示し、ジメチルホルムアミドを加えても効果は全く変
わらない。
実施例１２
被酸化性呈色試薬溶液： ０．０５ Ｍ ＩＪ ７酸緩
滴沿（ｐ Ｈ７０） ｌ ＯＯＯｍｌに４−アミノア
フチピリ７０．４ ｍｍｏｌ 、３−メチル−Ｎ−エチ
ル−Ｎ −（β−ヒドロキ／エチル）−アニリン４．０
ｍｍｏｌ 、γ−７クロデキストリンｌ ５ ｍｍｏ
ｌ ％ ベルオキ／ダーゼ１００００牟位を溶解する。
滴沿（ｐ Ｈ７０） ｌ ＯＯＯｍｌに４−アミノア
フチピリ７０．４ ｍｍｏｌ 、３−メチル−Ｎ−エチ
ル−Ｎ −（β−ヒドロキ／エチル）−アニリン４．０
ｍｍｏｌ 、γ−７クロデキストリンｌ ５ ｍｍｏ
ｌ ％ ベルオキ／ダーゼ１００００牟位を溶解する。
保存方法：無色ガラス容器に入れ密栓して室内散光１１
室温に保（ｆ ノド゛４酸化水素のシミ：８ｈ１ｆｌ：実施例８に同じ
、比較例１０ 被酸化性呈色試薬溶液：実施例１２の調製法（・（於て
、γ−７クロデキストリ／のみを除いて、能ｔ１全く同
一組成のものを調製する。
室温に保（ｆ ノド゛４酸化水素のシミ：８ｈ１ｆｌ：実施例８に同じ
、比較例１０ 被酸化性呈色試薬溶液：実施例１２の調製法（・（於て
、γ−７クロデキストリ／のみを除いて、能ｔ１全く同
一組成のものを調製する。
保合方法：実施例１２に同じ
過酸化水素の定ｈ１法：実施例Ｉ２に同じ結果
表中数値は５５０ｎｍにおける吸光度を示す。
表から明らかなように試薬ブラックの経１」変化は２０
１１間保存で実施例１２は比較例１ｏの約’／４で実用
１・殆んど問題にならない値である。過酸化水素にょろ
り色（９）は有意差はない。
１１間保存で実施例１２は比較例１ｏの約’／４で実用
１・殆んど問題にならない値である。過酸化水素にょろ
り色（９）は有意差はない。
以トを１とめて表に；Ｊ、すと次表のとおりで′ある。
表 シクロデキストリフによる核酸化性呈色試薬の安定
化実施例 １’ＪＪ１ 実施例１３ 被酸化性呈色試薬的液： ０．１ Ｍ ） ＩＪス緩慟
液（ｐ Ｈ８，５） Ｉ ０００ｍ１ＫＮ −（４−
アンチピリル） −Ｎ’、Ｎ’−ジメチル−Ｐ−フェニ
レ／ジアミン０．７ ｍｍｏｌ ％ β−／クロデキス
トリ／４ｍｍｏｌを溶解する。
化実施例 １’ＪＪ１ 実施例１３ 被酸化性呈色試薬的液： ０．１ Ｍ ） ＩＪス緩慟
液（ｐ Ｈ８，５） Ｉ ０００ｍ１ＫＮ −（４−
アンチピリル） −Ｎ’、Ｎ’−ジメチル−Ｐ−フェニ
レ／ジアミン０．７ ｍｍｏｌ ％ β−／クロデキス
トリ／４ｍｍｏｌを溶解する。
保存方法：実施例８に同じ
比較例１１
被酸化性呈色試薬溶液：実施例１３の調製法に於て、β
−ンクロデキストリノのみを除いて、ｆＩ！Ｉニ全く同
一組成のものを調製する。
−ンクロデキストリノのみを除いて、ｆＩ！Ｉニ全く同
一組成のものを調製する。
保存方法：実施例１３に同じ
保存期間中における被酸化性呈色試薬溶液の着色表中の
数値は５２０ｎｍにおける吸光度を示す。
数値は５２０ｎｍにおける吸光度を示す。
表から明らかなように被酸化性呈色試薬溶液は、実施例
１３に比し比較例月では着色速度が大きく、実用的でな
い。
１３に比し比較例月では着色速度が大きく、実用的でな
い。
実施例１４
被酸化性呈色試薬溶液： ０．０５ Ｍ ＩＪ ７酸緩
衝液（ｐＨ７，０） １０００ｍｌに４−アミノアノ
チビリ１０．２５ｍｍｏｌ、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒ
ドロキ／−１３−スルホプロピル）−ｍ−）ルイジノナ
］・リウｌ、塩５．６ ｍｍｏｌ ％ ベルオキ／ダー
ゼ２５００屯位、α−／クロデキストリフ ５．１ ｍ
ｍｏｌ を溶解する。
衝液（ｐＨ７，０） １０００ｍｌに４−アミノアノ
チビリ１０．２５ｍｍｏｌ、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒ
ドロキ／−１３−スルホプロピル）−ｍ−）ルイジノナ
］・リウｌ、塩５．６ ｍｍｏｌ ％ ベルオキ／ダー
ゼ２５００屯位、α−／クロデキストリフ ５．１ ｍ
ｍｏｌ を溶解する。
保存方法：実施例８に同じ
過酸化水素の定量法：過酸化水素の３ｍＭ溶液１００μ
ｊに被酸化性呈色試薬溶液３． Ｑ ｍｌを加えて室温
で５分間放置後、層厚１０ｍｍのセルで水をχ・１照と
して５５５ｎｍの吸光度を測定する。別に過酸化水素溶
液の代わりにイオノ交換水１００１１ｅを用いて同一条
件で操作し測定した吸光度をブランクとする。過酸化水
素の吸光度から試薬ブラ７りを差引いた値を過酸化水素
呈色とする。
ｊに被酸化性呈色試薬溶液３． Ｑ ｍｌを加えて室温
で５分間放置後、層厚１０ｍｍのセルで水をχ・１照と
して５５５ｎｍの吸光度を測定する。別に過酸化水素溶
液の代わりにイオノ交換水１００１１ｅを用いて同一条
件で操作し測定した吸光度をブランクとする。過酸化水
素の吸光度から試薬ブラ７りを差引いた値を過酸化水素
呈色とする。
比較例１２
破酸化性呈色試薬溶液：実施例１４の調製法に於て、α
−／クロデキストリンのみを除いて、１１０は全く同一
組成のものを調製する。
−／クロデキストリンのみを除いて、１１０は全く同一
組成のものを調製する。
保イ１方法：実施例１・１に同じ、
過酸化水素の定置法：実施例１４に同じ、表中数値は５
５５ｎｍにおける吸光度を示す。
５５ｎｍにおける吸光度を示す。
表から明らかなように試薬ブランクの経日的上昇は２５
［」間保存で実施例１４は比較例１２の約６５％であり
シクロデキストリンの添加効果が明らかである。
［」間保存で実施例１４は比較例１２の約６５％であり
シクロデキストリンの添加効果が明らかである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 （］）］４−アミノア／チビリン０２〜２ｍとに３ （式中Ｒ１，Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５は水素、炭素数１〜５の
アルキル基、炭素数１〜５のアルコキ／ル基、炭素数１
〜５のヒトｒ」キ／“アルキル基、ハｏａｔ’ン、スル
ホ／基またはカルボキンル基を示し、Ｒ３は水素、ハロ
ケン、炭素数１〜５のフルコキ／ル基、スルポン基を示
す）で表わされるフェノール誘導体０５〜２０ｍＭとか
ら成る被酸化性呈色試薬に、７クロデキストリン０．５
〜ＩｏｏｍＭを加えることを特徴とする安定化方法。 （２）４−アミノアンチピリン０．２〜２ｍＭと一般式 （式中Ｒ１は水素、炭素数１〜５のアルキル基、炭素数
１〜５のアルコキシル基、炭素数１〜５のヒドロキンア
ルキル基、ハロゲン、スルホン基ｔ ｔｒ−はカルボキ
ンル基を示し、Ｒ２は水素、・・ロゲン、炭素数１〜５
のアルコキ／ル基、スルホン基ｆ ｚｉ３す）で表わさ
れる１−ナフトール誘導体０５〜２０ｍＭとから成る被
酸化性呈色試薬に７クロデキストリン０．５〜１００ｍ
Ｍを加えることを特徴とする安定化方法。 （３）４−アミノアンチ−ビリ７０．２ ’−２ｍ Ｍ
とれ （Ｒハ水素、ハロゲン、炭素数１〜５のアルコキ／ル基
、スルホ／基を示す）で人わさｊ＋る８−ヒじロキ／キ
ノリン誘導体０５〜２０ｍＭとから成る被酸化性呈色試
薬に／クロデキス） リフ ０．５〜１００ｍＭを加え
ることを特徴とする安定化方法。 （４）４−アミ／アンチビリン０２〜２ｍＭと一般式 （式中Ｒ，は炭素数１〜５のアルキル基、炭素数１〜５
のヒドロキンアルキル基、炭素数１〜４のスルホアルキ
ル基、炭素数１〜５のヒドロキンスルホアルキル基、炭
素数１〜５のＮ−アシル、アミノアルキル基を示し、Ｒ
２は水素、炭素数１〜５のアルキル基、炭素数１〜５の
ヒドロキンアルキル基、炭素数１〜４のスルホアルキル
基、炭素数１〜５のヒドロキンスルホアルキル基を示し
、Ｒ４は水素、ハＯケ：／、炭素数１〜５のアルコキシ
ル基、スルホン基を示し、Ｒ３，Ｒｓは水素、ハロゲン
、炭素数１〜５のアルキル基、炭素数１〜５のアルコキ
シル２０ｍＭとから成る被酸化性呈色試薬に、／クロデ
キストリン０５〜１００ｍＭを加えることを特徴とする
安定化方法。 （５）被酸化性呈色試薬として一般式 （式中Ｒ］は水酸基、アミ、７基、炭素数１〜５のアル
キル基°炭素数１〜５のヒドロキンアルギル基またはフ
ェニル基を有するモノあるいはジ置換アミノ基を、Ｒ２
は水素、炭素数１〜５のアルキル基、スルホン基または
カルボキンル基を示す）で表ゎされる Ｎ−（４−アン
チピリル）−アニリン誘４体０．１〜１０ｍＭを含む溶
液にシクロデキストリン０５〜１００ ｍ Ｍ ／ ｌ
を加えることを特徴とする安定化方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7013782A JPS58187858A (ja) | 1982-04-26 | 1982-04-26 | 被酸化性呈色試薬の安定化方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7013782A JPS58187858A (ja) | 1982-04-26 | 1982-04-26 | 被酸化性呈色試薬の安定化方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58187858A true JPS58187858A (ja) | 1983-11-02 |
Family
ID=13422875
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7013782A Pending JPS58187858A (ja) | 1982-04-26 | 1982-04-26 | 被酸化性呈色試薬の安定化方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58187858A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4647532A (en) * | 1984-03-21 | 1987-03-03 | Toyo Boseki Kabushiki Kaisha | Method for determination of hydrogen peroxide by chemiluminescence analysis |
| JPH01118768A (ja) * | 1987-10-31 | 1989-05-11 | Wako Pure Chem Ind Ltd | 発色試液の安定化方法 |
| JP2007003259A (ja) * | 2005-06-22 | 2007-01-11 | Mitsubishi Gas Chem Co Inc | 酸素検知剤組成物。 |
| US8080423B2 (en) * | 2004-08-05 | 2011-12-20 | Asahi Kasei Pharma Corporation | Reagent containing protease reaction promoter and/or colorant stabilizer |
| US8268017B2 (en) | 2007-02-22 | 2012-09-18 | Asahi Kasei Pharma Corporation | Method for stabilizing leuco-type colorant |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5443791A (en) * | 1977-09-13 | 1979-04-06 | Seishin Seiyaku Kk | Method and reagent for measuring hydrogen peroxide |
| JPS5466892A (en) * | 1977-11-07 | 1979-05-29 | Eiken Chemical | Test paper for detecting occult blood |
| JPS55101861A (en) * | 1979-01-31 | 1980-08-04 | Wako Pure Chem Ind Ltd | Novel reagent combination for determining hydrogen peroxide and method of measuring alpha-lipoprotein using the same |
| JPS5637556A (en) * | 1979-09-04 | 1981-04-11 | Eiken Kagaku Kk | Quantitative determination method of hydrogen peroxide |
-
1982
- 1982-04-26 JP JP7013782A patent/JPS58187858A/ja active Pending
Patent Citations (4)
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