JP2547375B2 - ３，３′，５，５′−テトラアルキルベンチジンのスルホアルキル誘導体 - Google Patents
３，３′，５，５′−テトラアルキルベンチジンのスルホアルキル誘導体Info
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- JP2547375B2 JP2547375B2 JP6109073A JP10907394A JP2547375B2 JP 2547375 B2 JP2547375 B2 JP 2547375B2 JP 6109073 A JP6109073 A JP 6109073A JP 10907394 A JP10907394 A JP 10907394A JP 2547375 B2 JP2547375 B2 JP 2547375B2
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、新規な３，３′，５，
５′−テトラアルキルベンチジンのスルホアルキル誘導
体又はその塩、更に詳しくは、液体特に体液中の過酸化
水素を測定するための試薬組成物における色原体として
有用な新規な３，３′，５，５′−テトラアルキルベン
チジンのスルホアルキル誘導体又はその塩に関するもの
である。
５′−テトラアルキルベンチジンのスルホアルキル誘導
体又はその塩、更に詳しくは、液体特に体液中の過酸化
水素を測定するための試薬組成物における色原体として
有用な新規な３，３′，５，５′−テトラアルキルベン
チジンのスルホアルキル誘導体又はその塩に関するもの
である。
【０００２】
【従来の技術】今日、過酸化水素の測定は医療分野にお
ける臨床検査をはじめとして、化学産業、食品産業、公
衆衛生等の各分野で非常に広い範囲で実施されている。
特に臨床検査においては酵素を利用する体液成分の分析
法が急速に普及しており、その中でも、過酸化水素の測
定は重要な位置を占めている。それというのも、成分に
酸化酵素を作用させて過酸化水素を生成させ、この過酸
化水素を測定するというような比較的簡単な方法で分析
可能な体液中の成分が非常に多いからである。代表的な
成分／酸化酵素の組み合わせとしてはグルコース／グル
コースオキシダーゼ、コレステロール／コレステロール
オキシダーゼ、尿酸／ウリカーゼ、アミノ酸／アミノ酸
オキシダーゼ、ピルビン酸／ピルビン酸オキシダーゼ等
があげられる。
ける臨床検査をはじめとして、化学産業、食品産業、公
衆衛生等の各分野で非常に広い範囲で実施されている。
特に臨床検査においては酵素を利用する体液成分の分析
法が急速に普及しており、その中でも、過酸化水素の測
定は重要な位置を占めている。それというのも、成分に
酸化酵素を作用させて過酸化水素を生成させ、この過酸
化水素を測定するというような比較的簡単な方法で分析
可能な体液中の成分が非常に多いからである。代表的な
成分／酸化酵素の組み合わせとしてはグルコース／グル
コースオキシダーゼ、コレステロール／コレステロール
オキシダーゼ、尿酸／ウリカーゼ、アミノ酸／アミノ酸
オキシダーゼ、ピルビン酸／ピルビン酸オキシダーゼ等
があげられる。
【０００３】さて、生じた過酸化水素は種々の方法で測
定されるが、パーオキシダーゼの存在下、色原体を酸化
させることにより色素を形成させ比色定量する方法が最
も一般的に行なわれている。このような色原体は一般に
分子中にアミノ基、水酸基を有しており、安定で色素形
成能力の大きい色原体が選択される。最も多用される色
原体はトラインダー（Trinder ）試薬として知られる４
−アミノアンチピリンとフェノールの組み合わせである
が、近年、その変形も多数報告されている。
定されるが、パーオキシダーゼの存在下、色原体を酸化
させることにより色素を形成させ比色定量する方法が最
も一般的に行なわれている。このような色原体は一般に
分子中にアミノ基、水酸基を有しており、安定で色素形
成能力の大きい色原体が選択される。最も多用される色
原体はトラインダー（Trinder ）試薬として知られる４
−アミノアンチピリンとフェノールの組み合わせである
が、近年、その変形も多数報告されている。
【０００４】一方、体液中の成分を測定するための試薬
組成物を担体に固着させるいわゆるドライケミストリー
の分野では、色原体としてベンチジン誘導体、特にｏ−
トリジンが好んで使用されてきた。というのは、この物
質を色原体として使用した場合、非常に鋭敏な感度が得
られ、可視光線領域の長波長側に極大吸収を有する色素
を生成するため、共存する種々の着色成分の影響を受け
にくいなどのいくつかの利点が存在するからである。し
かしながらｏ−トリジンは発癌性を有しているとみなさ
れており、この物質を使用する試験用具の製造に際して
は特別の注意を払わなければならないという問題があ
る。
組成物を担体に固着させるいわゆるドライケミストリー
の分野では、色原体としてベンチジン誘導体、特にｏ−
トリジンが好んで使用されてきた。というのは、この物
質を色原体として使用した場合、非常に鋭敏な感度が得
られ、可視光線領域の長波長側に極大吸収を有する色素
を生成するため、共存する種々の着色成分の影響を受け
にくいなどのいくつかの利点が存在するからである。し
かしながらｏ−トリジンは発癌性を有しているとみなさ
れており、この物質を使用する試験用具の製造に際して
は特別の注意を払わなければならないという問題があ
る。
【０００５】近年、ｏ−トリジンの特性を生かしつつ、
発癌性を有していないとみなされる色原体が開発され
た。これは、ベンチジンの３，３′，５，５′位がそれ
ぞれメチル基で置換された化合物である〔ブイ．アー
ル．ホランド（V. R. Holland ）ら、テトラヘドロン
（Tetrahedron ），第３０巻，第３２９９頁〜第３３０
２頁（１９７４年）参照〕。又、西独国特許第２４６０
９０３号には、３，３′，５，５′位がメチル基以外の
アルキル基で置換されたベンチジンも同様に色原体とし
て使用可能であることが記述されている。
発癌性を有していないとみなされる色原体が開発され
た。これは、ベンチジンの３，３′，５，５′位がそれ
ぞれメチル基で置換された化合物である〔ブイ．アー
ル．ホランド（V. R. Holland ）ら、テトラヘドロン
（Tetrahedron ），第３０巻，第３２９９頁〜第３３０
２頁（１９７４年）参照〕。又、西独国特許第２４６０
９０３号には、３，３′，５，５′位がメチル基以外の
アルキル基で置換されたベンチジンも同様に色原体とし
て使用可能であることが記述されている。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、これら
ベンチジン誘導体は、いずれも水に対する溶解性が極め
て悪く、このため、酸性ｐＨ領域において、限られた濃
度範囲で使用可能であるにすぎない。これは、酵素を利
用する体液中成分の分析がほとんど中性付近で実施され
ることから考えて、重大な欠点といってよい。これらベ
ンチジン誘導体が主として試験片に用いられているの
も、上述の欠点を考慮してのことである。但し、これら
のベンチジン誘導体を使用した試験片においても、上述
の欠点にもとづく不利益は解消されず、過酸化水素の生
成量が非常に少ない場合にのみ使用可能であるにすぎな
い。
ベンチジン誘導体は、いずれも水に対する溶解性が極め
て悪く、このため、酸性ｐＨ領域において、限られた濃
度範囲で使用可能であるにすぎない。これは、酵素を利
用する体液中成分の分析がほとんど中性付近で実施され
ることから考えて、重大な欠点といってよい。これらベ
ンチジン誘導体が主として試験片に用いられているの
も、上述の欠点を考慮してのことである。但し、これら
のベンチジン誘導体を使用した試験片においても、上述
の欠点にもとづく不利益は解消されず、過酸化水素の生
成量が非常に少ない場合にのみ使用可能であるにすぎな
い。
【０００７】このため、測定可能な過酸化水素の濃度範
囲を拡大するための工夫が試みられており、他の色原体
と混合して用いる方法が報告されている（特公昭５７−
５５２０号公報）。
囲を拡大するための工夫が試みられており、他の色原体
と混合して用いる方法が報告されている（特公昭５７−
５５２０号公報）。
【０００８】又、３，３′，５，５′−テトラアルキル
ベンチジンが水に対して難溶性であることの別の不利益
は、試験片の製造時にももたらされる。例えば、体液中
のグルコースを測定するための試験片を製造する場合、
一般に、酵素、緩衝物質、色原体からなる含浸水溶液が
調製されるが、３，３′，５，５′−テトラアルキルベ
ンチジンを色原体として選択した時、単一の含浸水溶液
を得ることは非常に難しい。このため、酵素、緩衝物質
を含浸する工程と色原体を含浸する工程とにわけたり
（特公昭５７−２９１６０号公報）、色原体含浸水溶液
に媒染剤を加えたり（アメリカ合衆国特許第４３６１６
４８号）するなどの対策が考えられている。
ベンチジンが水に対して難溶性であることの別の不利益
は、試験片の製造時にももたらされる。例えば、体液中
のグルコースを測定するための試験片を製造する場合、
一般に、酵素、緩衝物質、色原体からなる含浸水溶液が
調製されるが、３，３′，５，５′−テトラアルキルベ
ンチジンを色原体として選択した時、単一の含浸水溶液
を得ることは非常に難しい。このため、酵素、緩衝物質
を含浸する工程と色原体を含浸する工程とにわけたり
（特公昭５７−２９１６０号公報）、色原体含浸水溶液
に媒染剤を加えたり（アメリカ合衆国特許第４３６１６
４８号）するなどの対策が考えられている。
【０００９】本発明者らは上述の欠点を考慮しつつ、鋭
意研究し、本発明を完成させた。
意研究し、本発明を完成させた。
【００１０】本発明は上記従来技術における問題点を解
決するためのものであり、その目的とするところは、
３，３′，５，５′−テトラアルキルベンチジンの特性
を生かしつつ、水に対する溶解性にすぐれ、幅広いｐＨ
領域で使用可能であり且つ試験溶液および試験片の両方
に使用可能である、過酸化水素の測定における色原体と
して有用な３，３′，５，５′−テトラアルキルベンチ
ジンのスルホアルキル誘導体又はその塩を提供すること
にある。
決するためのものであり、その目的とするところは、
３，３′，５，５′−テトラアルキルベンチジンの特性
を生かしつつ、水に対する溶解性にすぐれ、幅広いｐＨ
領域で使用可能であり且つ試験溶液および試験片の両方
に使用可能である、過酸化水素の測定における色原体と
して有用な３，３′，５，５′−テトラアルキルベンチ
ジンのスルホアルキル誘導体又はその塩を提供すること
にある。
【００１１】
【課題を解決するための手段】すなわち本発明は、一般
式Ｉ：
式Ｉ：
【化２】 〔式中、Ｒ1 ，Ｒ2 ，Ｒ3 およびＲ4 は同一又は異な
り、各々炭素原子数１ないし６の直鎖アルキル基を表わ
し、Ｒ5 およびＲ6 は水素原子又は次式II： −（ＣＨ2 ）n ＳＯ3 Ｈ (II) （式中、ｎは１ないし６の整数を表わす。）で表わされ
るスルホアルキル基を表わし、且つ少なくともＲ5 およ
びＲ6 のいずれか一方は該スルホアルキル基を表わすも
のであり、更に該スルホアルキル基はヒドロキシル基の
少なくとも１個により置換されていてもよい。〕で表わ
されることを特徴とする３，３′，５，５′−テトラア
ルキルベンチジンのスルホアルキル誘導体又はその塩に
関するものである。
り、各々炭素原子数１ないし６の直鎖アルキル基を表わ
し、Ｒ5 およびＲ6 は水素原子又は次式II： −（ＣＨ2 ）n ＳＯ3 Ｈ (II) （式中、ｎは１ないし６の整数を表わす。）で表わされ
るスルホアルキル基を表わし、且つ少なくともＲ5 およ
びＲ6 のいずれか一方は該スルホアルキル基を表わすも
のであり、更に該スルホアルキル基はヒドロキシル基の
少なくとも１個により置換されていてもよい。〕で表わ
されることを特徴とする３，３′，５，５′−テトラア
ルキルベンチジンのスルホアルキル誘導体又はその塩に
関するものである。
【００１２】本発明者らは、色原体として上記一般式Ｉ
で表わされる化合物又はその塩を使用すると感度が良
く、且つ高濃度の過酸化水素も定量的に測定し得ること
を見出した。
で表わされる化合物又はその塩を使用すると感度が良
く、且つ高濃度の過酸化水素も定量的に測定し得ること
を見出した。
【００１３】それ故、上記一般式Ｉで表わされる本発明
化合物又はその塩は、過酸化水素測定用組成物における
色原体として有用である。前記過酸化水素測定用組成物
は、色原体としての上記一般式Ｉで表わされる本発明化
合物又はその塩のほかに、パーオキシダーゼ若しくは体
液中の成分と反応して過酸化水素を生成する酵素とパー
オキシダーゼとの組み合わせより成る酵素、緩衝物質を
含んで成る。
化合物又はその塩は、過酸化水素測定用組成物における
色原体として有用である。前記過酸化水素測定用組成物
は、色原体としての上記一般式Ｉで表わされる本発明化
合物又はその塩のほかに、パーオキシダーゼ若しくは体
液中の成分と反応して過酸化水素を生成する酵素とパー
オキシダーゼとの組み合わせより成る酵素、緩衝物質を
含んで成る。
【００１４】上記一般式Ｉで表わされる化合物のうち特
に好ましくは化合物を以下に記載するが、上記一般式Ｉ
で表わされる化合物はもちろん、これらに限定されるも
のではない：Ｎ−（２−スルホエチル）−３，３′，
５，５′−テトラメチルベンチジン、Ｎ−（３−スルホ
プロピル）−３，３′，５，５′−テトラメチルベンチ
ジン、Ｎ−（３−スルホブチル）−３，３′，５，５′
−テトラメチルベンチジン、Ｎ−（３−スルホプロピ
ル）−３，３′，５，５′−テトラエチルベンチジン、
Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３，
３′，５，５′−テトラメチルベンチジン、Ｎ，Ｎ′−
ビス（２−スルホエチル）−３，３′，５，５′−テト
ラメチルベンチジン、Ｎ，Ｎ′−ビス（３−スルホプロ
ピル）−３，３′，５，５′−テトラメチルベンチジ
ン、Ｎ，Ｎ′−ビス（４−スルホブチル）−３，３′，
５，５′−テトラメチルベンチジン、Ｎ，Ｎ′−ビス
（３−スルホプロピル）−３，３′，５，５′−テトラ
エチルベンチジン、Ｎ，Ｎ′−ビス（２−ヒドロキシ−
２−スルホエチル）−３，３′，５，５′−テトラメチ
ルベンチジン、およびＮ，Ｎ′−ビス（２−ヒドロキシ
−３−スルホプロピル）−３，３′，５，５′−テトラ
メチルベンチジン。
に好ましくは化合物を以下に記載するが、上記一般式Ｉ
で表わされる化合物はもちろん、これらに限定されるも
のではない：Ｎ−（２−スルホエチル）−３，３′，
５，５′−テトラメチルベンチジン、Ｎ−（３−スルホ
プロピル）−３，３′，５，５′−テトラメチルベンチ
ジン、Ｎ−（３−スルホブチル）−３，３′，５，５′
−テトラメチルベンチジン、Ｎ−（３−スルホプロピ
ル）−３，３′，５，５′−テトラエチルベンチジン、
Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３，
３′，５，５′−テトラメチルベンチジン、Ｎ，Ｎ′−
ビス（２−スルホエチル）−３，３′，５，５′−テト
ラメチルベンチジン、Ｎ，Ｎ′−ビス（３−スルホプロ
ピル）−３，３′，５，５′−テトラメチルベンチジ
ン、Ｎ，Ｎ′−ビス（４−スルホブチル）−３，３′，
５，５′−テトラメチルベンチジン、Ｎ，Ｎ′−ビス
（３−スルホプロピル）−３，３′，５，５′−テトラ
エチルベンチジン、Ｎ，Ｎ′−ビス（２−ヒドロキシ−
２−スルホエチル）−３，３′，５，５′−テトラメチ
ルベンチジン、およびＮ，Ｎ′−ビス（２−ヒドロキシ
−３−スルホプロピル）−３，３′，５，５′−テトラ
メチルベンチジン。
【００１５】上記の化合物を色原体として使用する場合
には、一種類のみで使用してもよいし、又、数種類を併
用してもよく、更に、他の色原体と組み合わせて使用す
ることも可能である。これらの化合物は新規化合物であ
るが、公知方法により容易に製造することができる。
には、一種類のみで使用してもよいし、又、数種類を併
用してもよく、更に、他の色原体と組み合わせて使用す
ることも可能である。これらの化合物は新規化合物であ
るが、公知方法により容易に製造することができる。
【００１６】製造方法としては、例えば、３，３′，
５，５′−テトラアルキルベンチジンに相当するサルト
ンを反応させる方法〔小田ら、工業化学雑誌，第５９巻
第９号，第１０２８頁〜第１０３０頁（１９５９年）参
照〕や、３，３′，５，５′−テトラアルキルベンチジ
ンと分子末端にハロゲン原子を有するアルキルスルホン
酸又はヒドロキシアルキルスルホン酸とを反応させる方
法〔エヌ．イー．グッド（N. E. Good）ら、アナリティ
カル バイオケミストリー（Analytical Biochemistry
），第１０４巻，第３００頁〜第３１０頁（１９８０
年）参照〕などがあげられる。
５，５′−テトラアルキルベンチジンに相当するサルト
ンを反応させる方法〔小田ら、工業化学雑誌，第５９巻
第９号，第１０２８頁〜第１０３０頁（１９５９年）参
照〕や、３，３′，５，５′−テトラアルキルベンチジ
ンと分子末端にハロゲン原子を有するアルキルスルホン
酸又はヒドロキシアルキルスルホン酸とを反応させる方
法〔エヌ．イー．グッド（N. E. Good）ら、アナリティ
カル バイオケミストリー（Analytical Biochemistry
），第１０４巻，第３００頁〜第３１０頁（１９８０
年）参照〕などがあげられる。
【００１７】過酸化水素測定用組成物に使用する本発明
の３，３′，５，５′−テトラアルキルベンチジンのス
ルホアルキル誘導体又はその塩は、従来、過酸化水素の
測定に使用されてきたすべての色原体のかわりに使用す
ることができる。とりわけ、分析工程の中間に過酸化水
素を発生させる方法にもとづく液体成分の酵素的測定に
使用するのが有利である。それというのも、本発明の化
合物は、特に水に対して優れた溶解性を示すため、緩衝
物質、パーオキシダーゼ若しくは体液中の成分と反応し
て過酸化水素を生成する酵素とパーオキシダーゼとの組
み合わせからなる酵素と混合して安定な単一の試験溶液
とすることができると同時に、高濃度の過酸化水素まで
感度良く定量可能で、共存する着色成分の影響を受けに
くい等、数々の利点を併せ持つからである。
の３，３′，５，５′−テトラアルキルベンチジンのス
ルホアルキル誘導体又はその塩は、従来、過酸化水素の
測定に使用されてきたすべての色原体のかわりに使用す
ることができる。とりわけ、分析工程の中間に過酸化水
素を発生させる方法にもとづく液体成分の酵素的測定に
使用するのが有利である。それというのも、本発明の化
合物は、特に水に対して優れた溶解性を示すため、緩衝
物質、パーオキシダーゼ若しくは体液中の成分と反応し
て過酸化水素を生成する酵素とパーオキシダーゼとの組
み合わせからなる酵素と混合して安定な単一の試験溶液
とすることができると同時に、高濃度の過酸化水素まで
感度良く定量可能で、共存する着色成分の影響を受けに
くい等、数々の利点を併せ持つからである。
【００１８】更に、本発明の色原体化合物又はその塩を
パーオキシダーゼ若しくは体液中の成分と反応して過酸
化水素を生成する酵素とパーオキシダーゼとの組み合わ
せからなる酵素、緩衝物質とともに吸収性担体に包含さ
せ、使用の際便利なように該担体をプラスチック等の支
持体に貼付せしめて試験片とした場合に、特に簡便で貯
蔵安定性に優れた試験用具を得ることができる。最も多
用される吸収性担体は濾紙であるが、不織布、綿、木片
等も使用可能である。又、試験用試薬組成物を所望によ
り適当な接着剤例えばゼラチン、合成樹脂等とともに上
記プラスチックシート等の支持体に塗布、乾燥すること
により固着させることも可能であり、更に種々変形が容
易になし得ることは明らかである。
パーオキシダーゼ若しくは体液中の成分と反応して過酸
化水素を生成する酵素とパーオキシダーゼとの組み合わ
せからなる酵素、緩衝物質とともに吸収性担体に包含さ
せ、使用の際便利なように該担体をプラスチック等の支
持体に貼付せしめて試験片とした場合に、特に簡便で貯
蔵安定性に優れた試験用具を得ることができる。最も多
用される吸収性担体は濾紙であるが、不織布、綿、木片
等も使用可能である。又、試験用試薬組成物を所望によ
り適当な接着剤例えばゼラチン、合成樹脂等とともに上
記プラスチックシート等の支持体に塗布、乾燥すること
により固着させることも可能であり、更に種々変形が容
易になし得ることは明らかである。
【００１９】
【実施例】以下の実施例において本発明を更に詳細に説
明する。なお、下記実施例は単に説明のためのものであ
り、本発明を何ら限定するものではない。
明する。なお、下記実施例は単に説明のためのものであ
り、本発明を何ら限定するものではない。
【００２０】色原体化合物の製造： 実施例１ Ｎ−（３−スルホプロピル）−３，３′，５，５′−テ
トラメチルベンチジンナトリウム塩の合成 ３，３′，５，５′−テトラメチルベンチジン２４．０
ｇを１−プロパノール１００ｍｌに溶解する。１，３−
プロパンサルトン２４．４ｇをメタノール１００ｍｌに
溶解して前記溶液に加え、約３時間加熱還流する。室温
まで冷却し、１ＮＮａＯＨ水溶液を加えて中和した後、
溶媒を蒸発乾固する。メタノール／アセトンで再結晶
し、白色結晶２０ｇを得た（収率５３％）。 薄層クロマトグラフィー〔シリカゲルプレート（メルク
社製），展開溶媒；２−プロパノール：酢酸：水＝５
０：１５：２０〕 ＵＶ吸収あり ニンヒドリン反応（＋） Ｒｆ＝０．２５ 赤外線スペクトル：νＮＨ ３４００ｃｍ-1 νＣ＝Ｃ １６２０ｃｍ-1 νＣＮ １２６０ｃｍ-1 νＳＯ3 １２００，１０５０ｃｍ-1
トラメチルベンチジンナトリウム塩の合成 ３，３′，５，５′−テトラメチルベンチジン２４．０
ｇを１−プロパノール１００ｍｌに溶解する。１，３−
プロパンサルトン２４．４ｇをメタノール１００ｍｌに
溶解して前記溶液に加え、約３時間加熱還流する。室温
まで冷却し、１ＮＮａＯＨ水溶液を加えて中和した後、
溶媒を蒸発乾固する。メタノール／アセトンで再結晶
し、白色結晶２０ｇを得た（収率５３％）。 薄層クロマトグラフィー〔シリカゲルプレート（メルク
社製），展開溶媒；２−プロパノール：酢酸：水＝５
０：１５：２０〕 ＵＶ吸収あり ニンヒドリン反応（＋） Ｒｆ＝０．２５ 赤外線スペクトル：νＮＨ ３４００ｃｍ-1 νＣ＝Ｃ １６２０ｃｍ-1 νＣＮ １２６０ｃｍ-1 νＳＯ3 １２００，１０５０ｃｍ-1
【００２１】実施例２ Ｎ，Ｎ′−ビス（２−ヒドロキシ−２−スルホエチル）
−３，３′，５，５′−テトラメチルベンチジンナトリ
ウム塩の合成 ３，３′，５，５′−テトラメチルベンチジン１２．０
２ｇを２−プロパノール５００ｍｌに溶解する。２−ク
ロロ−１−ヒドロキシエタンスルホン酸ナトリウム５２
ｇを水３００ｍｌに溶解して前記溶液に加える。次いで
ＮａＯＨ４ｇを加え、約１６時間加熱還流する。室温ま
で冷却し、溶媒を蒸発乾固する。残部をメタノールに溶
解し、シリカゲル（カラムクロマト用シリカゲルＮｏ．
１；半井化学社製）を充填したカラムを用いてクロマト
グラフィーにかけ傾斜溶離する（溶媒；クロロホルム／
メタノール）。各溶離液について薄層クロマトグラフィ
ー〔シリカゲルプレート（メルク社製），展開溶媒；２
−プロパノール：酢酸：水＝５０：１５：２０〕を行
い、Ｒｆ＝０．０７にＵＶ吸収を有するフラクションを
集めた後溶媒を除去し、白色結晶５．３ｇを得た（収率
２０％）。 赤外線スペクトル：νＯＨ ３５００ｃｍ-1 νＮＨ ３４００ｃｍ-1 νＣ＝Ｃ １６２０ｃｍ-1 νＣＮ １２６０ｃｍ-1 νＳＯ3 １２００，１０５０ｃｍ-1
−３，３′，５，５′−テトラメチルベンチジンナトリ
ウム塩の合成 ３，３′，５，５′−テトラメチルベンチジン１２．０
２ｇを２−プロパノール５００ｍｌに溶解する。２−ク
ロロ−１−ヒドロキシエタンスルホン酸ナトリウム５２
ｇを水３００ｍｌに溶解して前記溶液に加える。次いで
ＮａＯＨ４ｇを加え、約１６時間加熱還流する。室温ま
で冷却し、溶媒を蒸発乾固する。残部をメタノールに溶
解し、シリカゲル（カラムクロマト用シリカゲルＮｏ．
１；半井化学社製）を充填したカラムを用いてクロマト
グラフィーにかけ傾斜溶離する（溶媒；クロロホルム／
メタノール）。各溶離液について薄層クロマトグラフィ
ー〔シリカゲルプレート（メルク社製），展開溶媒；２
−プロパノール：酢酸：水＝５０：１５：２０〕を行
い、Ｒｆ＝０．０７にＵＶ吸収を有するフラクションを
集めた後溶媒を除去し、白色結晶５．３ｇを得た（収率
２０％）。 赤外線スペクトル：νＯＨ ３５００ｃｍ-1 νＮＨ ３４００ｃｍ-1 νＣ＝Ｃ １６２０ｃｍ-1 νＣＮ １２６０ｃｍ-1 νＳＯ3 １２００，１０５０ｃｍ-1
【００２２】過酸化水素測定用組成物の調製： 調製例１ Ｎ，Ｎ′−ビス（３−スルホプロピル）−３，３′，
５，５′−テトラメチルベンチジンナトリウム塩２００
ｍｇ、パーオキシダーゼ（１００ ＩＵ／ｍｇ）１０ｍ
ｇ、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン１．２１
ｇ、クエン酸（１水和物）２１０ｇおよび水酸化ナトリ
ウム０．８５ｇを精製水に溶解して全量１００ｍｌと
し、反応液とする。
５，５′−テトラメチルベンチジンナトリウム塩２００
ｍｇ、パーオキシダーゼ（１００ ＩＵ／ｍｇ）１０ｍ
ｇ、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン１．２１
ｇ、クエン酸（１水和物）２１０ｇおよび水酸化ナトリ
ウム０．８５ｇを精製水に溶解して全量１００ｍｌと
し、反応液とする。
【００２３】調製例２ グルコースオキシダーゼ（１２００ ＩＵ／ｇ）０．９
６ｇ、パーオキシダーゼ（１００ ＩＵ／ｇ）０．１５
ｇ、ポリビニルピロリドン（ＭＷ４００００）５．０
ｇ、Ｎ−（３−スルホプロピル）−３，３′，５，５′
−テトラメチルベンチジンナトリウム塩０．８ｇ、クエ
ン酸三ナトリウム（２水和物）１０．４４ｇおよびＥＤ
ＴＡ・２Ｎａ０．１ｇを精製水に溶解して全量１００ｍ
ｌとし、反応液とする。
６ｇ、パーオキシダーゼ（１００ ＩＵ／ｇ）０．１５
ｇ、ポリビニルピロリドン（ＭＷ４００００）５．０
ｇ、Ｎ−（３−スルホプロピル）−３，３′，５，５′
−テトラメチルベンチジンナトリウム塩０．８ｇ、クエ
ン酸三ナトリウム（２水和物）１０．４４ｇおよびＥＤ
ＴＡ・２Ｎａ０．１ｇを精製水に溶解して全量１００ｍ
ｌとし、反応液とする。
【００２４】過酸化水素測定用検量線の作製 ０，１０，２０，３０および４０ｍＭ／ｌに調製した過
酸化水素水溶液各々１０μｌに調製例１で調製した反応
液３．０ｍｌを加え、３７℃恒温槽に５分間浸漬し、発
色させる。２５℃まで冷却後、波長６６５ｎｍで吸光度
（又は光学密度；optical density ，Ｏ．Ｄ．）を測定
する。ブランクの吸光度を差し引くことにより、ΔＯ．
Ｄ．を求め、横軸に過酸化水素濃度（ｍＭ／ｌ）、縦軸
に吸光度（ΔＯ．Ｄ．）をとり、検量線を作製した。図
１に示す如く、検量線は過酸化水素濃度４０ｍＭ／ｌま
で原点を通る直線特になった。したがって、比色分析に
より過酸化水素濃度を正確に定量できることが判る。
酸化水素水溶液各々１０μｌに調製例１で調製した反応
液３．０ｍｌを加え、３７℃恒温槽に５分間浸漬し、発
色させる。２５℃まで冷却後、波長６６５ｎｍで吸光度
（又は光学密度；optical density ，Ｏ．Ｄ．）を測定
する。ブランクの吸光度を差し引くことにより、ΔＯ．
Ｄ．を求め、横軸に過酸化水素濃度（ｍＭ／ｌ）、縦軸
に吸光度（ΔＯ．Ｄ．）をとり、検量線を作製した。図
１に示す如く、検量線は過酸化水素濃度４０ｍＭ／ｌま
で原点を通る直線特になった。したがって、比色分析に
より過酸化水素濃度を正確に定量できることが判る。
【００２５】尿中グルコース測定用試験片の製造：調製
例２で調製した反応液にシュライヒァ・ウント・シュル
（Schleicher & Schull ）社製Ｎｏ．２３１６の濾紙を
浸し、６０℃で３０分間乾燥した。得られた試験紙を５
ｍｍ×５ｍｍに切断し、接着テープを用いて５ｍｍ×６
０ｍｍのポリスチレンシートに貼り付けて尿中グルコー
ス測定用試験片を製造した。図２に試験片を示す。図
中、１は試験紙、２はポリスチレンシートである。
例２で調製した反応液にシュライヒァ・ウント・シュル
（Schleicher & Schull ）社製Ｎｏ．２３１６の濾紙を
浸し、６０℃で３０分間乾燥した。得られた試験紙を５
ｍｍ×５ｍｍに切断し、接着テープを用いて５ｍｍ×６
０ｍｍのポリスチレンシートに貼り付けて尿中グルコー
ス測定用試験片を製造した。図２に試験片を示す。図
中、１は試験紙、２はポリスチレンシートである。
【００２６】比較試験片の製造：上記試験片の製造に使
用した反応液からＮ−（３−スルホプロピル）−３，
３′，５，５′−テトラメチルベンチジンナトリウム塩
を除いた溶液に上記と同じ濾紙を浸して６０℃で３０分
間乾燥した後、０．５％３，３′，５，５′−テトラメ
チルベンチジン−アセトン溶液に再び浸して真空乾燥す
る。得られた試験紙を上記と同様の操作で試験片とし
た。
用した反応液からＮ−（３−スルホプロピル）−３，
３′，５，５′−テトラメチルベンチジンナトリウム塩
を除いた溶液に上記と同じ濾紙を浸して６０℃で３０分
間乾燥した後、０．５％３，３′，５，５′−テトラメ
チルベンチジン−アセトン溶液に再び浸して真空乾燥す
る。得られた試験紙を上記と同様の操作で試験片とし
た。
【００２７】グルコース濃度の測定：濃度の異なるグル
コース標準液に調製例２で調製した反応液を使用して製
造した試験片および比較試験片を各々瞬時浸し、過剰の
液を除去した後、正確に２０秒間反応させ、次いで色差
計（カラー ディファレンス コンピューター 日本電
色 ＮＤ−５０４ＤＥ）を用いて、６６０ｎｍの波長で
反射率を測定した。横軸をグルコース濃度（ｍｇ／ｄ
ｌ）、縦軸を反射率（％）とすると、図３に示すような
検量線が得られる。図から判るように、３，３′，５，
５′−テトラメチルベンチジンを色原体として使用した
比較試験片は、調製例２で調製した反応液を使用して製
造した試験片に比べてグルコース濃度が低い領域では感
度が低く、又、５０ｍｇ／ｄｌ以上のグルコース濃度で
は反射率の変化が小さい。そして２５０ｍｇ／ｄｌ以上
のグルコース濃度ではほぼ一定の反射率を示すことか
ら、この試験片の測定可能なグルコース濃度範囲は０〜
２５０ｍｇ／ｄｌである。これに対して、調製例２で調
製した反応液を使用して製造した試験片は比較試験片よ
りも感度が高く、又、２０００ｍｇ／ｄｌ以上のグルコ
ース濃度まで明瞭な反射率の変化が認められる。したが
って、この試験片の測定可能なグルコース濃度範囲は０
〜２０００ｍｇ／ｄｌであり、調製例２で調製した反応
液を使用して製造した試験片は従来の過酸化水素測定用
組成物を使用して製造した比較試験片に比べて広いグル
コース濃度範囲に適用可能であることが判る。又、グル
コース以外に、適する酵素および緩衝物質を用いること
により、本発明の化合物又はその塩或いは本発明の化合
物又はその塩を含む組成物を使用して製造した試験片
は、体液中に含まれる種々の成分の定量に用いることが
できることは勿論である。
コース標準液に調製例２で調製した反応液を使用して製
造した試験片および比較試験片を各々瞬時浸し、過剰の
液を除去した後、正確に２０秒間反応させ、次いで色差
計（カラー ディファレンス コンピューター 日本電
色 ＮＤ−５０４ＤＥ）を用いて、６６０ｎｍの波長で
反射率を測定した。横軸をグルコース濃度（ｍｇ／ｄ
ｌ）、縦軸を反射率（％）とすると、図３に示すような
検量線が得られる。図から判るように、３，３′，５，
５′−テトラメチルベンチジンを色原体として使用した
比較試験片は、調製例２で調製した反応液を使用して製
造した試験片に比べてグルコース濃度が低い領域では感
度が低く、又、５０ｍｇ／ｄｌ以上のグルコース濃度で
は反射率の変化が小さい。そして２５０ｍｇ／ｄｌ以上
のグルコース濃度ではほぼ一定の反射率を示すことか
ら、この試験片の測定可能なグルコース濃度範囲は０〜
２５０ｍｇ／ｄｌである。これに対して、調製例２で調
製した反応液を使用して製造した試験片は比較試験片よ
りも感度が高く、又、２０００ｍｇ／ｄｌ以上のグルコ
ース濃度まで明瞭な反射率の変化が認められる。したが
って、この試験片の測定可能なグルコース濃度範囲は０
〜２０００ｍｇ／ｄｌであり、調製例２で調製した反応
液を使用して製造した試験片は従来の過酸化水素測定用
組成物を使用して製造した比較試験片に比べて広いグル
コース濃度範囲に適用可能であることが判る。又、グル
コース以外に、適する酵素および緩衝物質を用いること
により、本発明の化合物又はその塩或いは本発明の化合
物又はその塩を含む組成物を使用して製造した試験片
は、体液中に含まれる種々の成分の定量に用いることが
できることは勿論である。
【００２８】
【発明の効果】上述のように、本発明の３，３′，５，
５′−テトラアルキルベンチジンのスルホアルキル誘導
体又はその塩を色原体として使用すると、従来の３，
３′，５，５′−テトラアルキルベンチジンを色原体と
して使用する場合に比べて過酸化水素測定用組成物の水
に対する溶解性が著しく向上するとともに、より幅広い
ｐＨ領域で使用可能となった。
５′−テトラアルキルベンチジンのスルホアルキル誘導
体又はその塩を色原体として使用すると、従来の３，
３′，５，５′−テトラアルキルベンチジンを色原体と
して使用する場合に比べて過酸化水素測定用組成物の水
に対する溶解性が著しく向上するとともに、より幅広い
ｐＨ領域で使用可能となった。
【００２９】又、本発明の色原体化合物又はその塩は水
に対する溶解性が優れているため、従来の色原体化合物
を使用する場合に比べて水溶液中の成分のより高感度で
より広い濃度範囲にわたる定量分析が可能となった。
に対する溶解性が優れているため、従来の色原体化合物
を使用する場合に比べて水溶液中の成分のより高感度で
より広い濃度範囲にわたる定量分析が可能となった。
【００３０】更に、体液中の各種成分測定用の試験片の
製造時においても、水溶液から本発明の色原体化合物又
はその塩を含む過酸化水素測定用組成物を担体に一工程
で担持できるため、試験片の製造工程を簡略化でき且つ
従来の過酸化水素測定用組成物を使用した試験片に比べ
てより高感度でより広い濃度範囲にわたって使用可能な
試験片を得ることができる。
製造時においても、水溶液から本発明の色原体化合物又
はその塩を含む過酸化水素測定用組成物を担体に一工程
で担持できるため、試験片の製造工程を簡略化でき且つ
従来の過酸化水素測定用組成物を使用した試験片に比べ
てより高感度でより広い濃度範囲にわたって使用可能な
試験片を得ることができる。
【００３１】このように、本発明の化合物又はその塩を
色原体として使用した過酸化水素測定用組成物は、水溶
液の形態でも試験片の形態でも使用することができ且つ
種々の変形も可能であるため、体液中の各種成分の正確
で簡便迅速な定量分析に優れた効果を奏する。
色原体として使用した過酸化水素測定用組成物は、水溶
液の形態でも試験片の形態でも使用することができ且つ
種々の変形も可能であるため、体液中の各種成分の正確
で簡便迅速な定量分析に優れた効果を奏する。
【図１】本発明の化合物の塩を色原体として含む過酸化
水素測定用組成物を使用して作製した検量線を示すグラ
フである。
水素測定用組成物を使用して作製した検量線を示すグラ
フである。
【図２】本発明の化合物の塩を色原体として含む過酸化
水素測定用組成物を使用して製造した尿中グルコース測
定用試験片の一実施例の斜視図である。
水素測定用組成物を使用して製造した尿中グルコース測
定用試験片の一実施例の斜視図である。
【図３】本発明の化合物の塩を色原体として含む過酸化
水素測定用組成物を使用した試験片と比較試験片を用い
て測定したグルコース濃度と、色差計から読み取った試
験紙表面の一定波長での反射率との関係を示すグラフで
ある。
水素測定用組成物を使用した試験片と比較試験片を用い
て測定したグルコース濃度と、色差計から読み取った試
験紙表面の一定波長での反射率との関係を示すグラフで
ある。
１ 試験紙 ２ ポリエチレンシート
Claims (1)
- 【請求項１】 一般式Ｉ： 【化１】 〔式中、Ｒ1 ，Ｒ2 ，Ｒ3 およびＲ4 は同一又は異な
り、各々炭素原子数１ないし６の直鎖アルキル基を表わ
し、 Ｒ5 およびＲ6 は水素原子又は次式II： −（ＣＨ2 ）n ＳＯ3 Ｈ (II) （式中、ｎは１ないし６の整数を表わす。）で表わされ
るスルホアルキル基を表わし、且つ少なくともＲ5 およ
びＲ6 のいずれか一方は該スルホアルキル基を表わすも
のであり、更に該スルホアルキル基はヒドロキシル基の
少なくとも１個により置換されていてもよい。〕で表わ
されることを特徴とする３，３′，５，５′−テトラア
ルキルベンチジンのスルホアルキル誘導体又はその塩。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6109073A JP2547375B2 (ja) | 1994-04-25 | 1994-04-25 | ３，３′，５，５′−テトラアルキルベンチジンのスルホアルキル誘導体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6109073A JP2547375B2 (ja) | 1994-04-25 | 1994-04-25 | ３，３′，５，５′−テトラアルキルベンチジンのスルホアルキル誘導体 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59174630A Division JPS6152300A (ja) | 1984-08-22 | 1984-08-22 | 過酸化水素測定用組成物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0753502A JPH0753502A (ja) | 1995-02-28 |
| JP2547375B2 true JP2547375B2 (ja) | 1996-10-23 |
Family
ID=14500925
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6109073A Expired - Fee Related JP2547375B2 (ja) | 1994-04-25 | 1994-04-25 | ３，３′，５，５′−テトラアルキルベンチジンのスルホアルキル誘導体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2547375B2 (ja) |
-
1994
- 1994-04-25 JP JP6109073A patent/JP2547375B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0753502A (ja) | 1995-02-28 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |