ES2430567T3 - Pirrolobenzodiacepinas y conjugados de las mismas - Google Patents

Pirrolobenzodiacepinas y conjugados de las mismas Download PDF

Info

Publication number
ES2430567T3
ES2430567T3 ES11716146T ES11716146T ES2430567T3 ES 2430567 T3 ES2430567 T3 ES 2430567T3 ES 11716146 T ES11716146 T ES 11716146T ES 11716146 T ES11716146 T ES 11716146T ES 2430567 T3 ES2430567 T3 ES 2430567T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
group
antibody
linker
groups
conjugate according
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES11716146T
Other languages
English (en)
Inventor
Philip Wilson Howard
Luke Masterson
Arnaud Tiberghien
John A. Flygare
Janet L. Gunzner
Paul Polakis
Andrew Polson
Helga E. Raab
Susan D. Spencer
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Spirogen SARL
Original Assignee
Spirogen SARL
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=44260042&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=ES2430567(T3) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from GBGB1006341.0A external-priority patent/GB201006341D0/en
Priority claimed from GBGB1016802.9A external-priority patent/GB201016802D0/en
Application filed by Spirogen SARL filed Critical Spirogen SARL
Application granted granted Critical
Publication of ES2430567T3 publication Critical patent/ES2430567T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A61K31/551—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having two nitrogen atoms, e.g. dilazep
    • A61K31/5513—1,4-Benzodiazepines, e.g. diazepam or clozapine
    • A61K31/5517—1,4-Benzodiazepines, e.g. diazepam or clozapine condensed with five-membered rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. imidazobenzodiazepines, triazolam
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6855—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from breast cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6869—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from a cell of the reproductive system: ovaria, uterus, testes, prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Abstract

Conjugado de Fórmula (AB) o (AC): y sales y solvatos del mismo, en el que: las líneas de puntos indican la presencia opcional de un doble enlace entre C1 y C2 o C2 y C3; R2 se selecciona independientemente entre H, OH, >=O, >=CH2, CN, R, OR, >=CH-RD, >=C(RD)2, O-SO2-R, CO2R y COR, y opcionalmente se selecciona adicionalmente entre halo o dihalo; en los que RD se selecciona independientemente entre R, CO2R, COR, CHO, CO2H y halo; R6 y R9 se seleccionan independientemente entre H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', NO2, Me3Sn y halo; R7 se selecciona independientemente entre H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', NO2, Me3Sn y halo; R10 es un enlazador conectado a un agente de unión a célula seleccionado entre un anticuerpo, un fragmento de un anticuerpo que contiene al menos un sitio de unión y un polipéptido cíclico; Q se selecciona independientemente entre O, S y NH; R11 es H o R o, cuando Q es O, SO3M, en el que M es un catión metálico; cada uno de R y R' se selecciona independientemente entre los grupos opcionalmente sustituidos alquilo C1-12, heterociclilo C3-20 y arilo C5-20, y opcionalmente en relación al grupo NRR', R y R' junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un anillo heterocíclico opcionalmente sustituido de 4, 5, 6 ó 7 miembros; R'' es un grupo alquileno C3-12, cuya cadena puede estar interrumpida por uno o más heteroátomos, por ejemplo, O, S, N(H), NMe y/o anillos aromáticos, por ejemplo, benceno o piridina, cuyos anillos están opcionalmente sustituidos por NH2; cada X es O, S o N(H); y en el que R2", R6", R7", R9", X", Q" y R11" son como se han definido de acuerdo con R2, R6, R7, R9, X, Q y R11 respectivamente, y RC es un grupo de terminación.

Description

Pirrolobenzodiacepinas y conjugados de las mismas
5 La presente invención se refiere a pirrolobenzodiacepinas (PBD), en concreto pirrolobenzodiacepinas que tienen un grupo protector N10, en forma de un enlazador a un agente de unión a célula.
Antecedentes de la invención
10 Pirrolobenzodiacepinas
Algunas pirrolobenzodiacepinas (PBS) tienen la capacidad de reconocer y unirse a secuencias específicas de ADN; la secuencia preferida es PuGPu. El primer antibiótico antitumoral de PBD, antramicina, se descubrió en 1965 (Leimgruber, y col., J. Am. Chem. Soc., 87, 5793-5795 (1965); Leimgruber, y col., J. Am. Chem. Soc., 87, 5791-5793 15 (1965)). Desde entonces se han comunicado numerosas PBD naturales y se han desarrollado más de 10 vías sintéticas de una serie de análogos (Thurston, y col., Chem. Rev. 1994, 433-465 (1994)). Los miembros de la familia incluyen abeimicina (Hochlowski, y col., J. Antibiotics, 40, 145-148 (1987)), quicamicina (Konishi, y col., J. Antibiotics, 37, 200-206 (1984)), DC-81 (patente japonesa 58-180 487; Thurston, y col., Chem. Brit., 26, 767-772 (1990); Bose, y col., Tetrahedron, 48, 751-758 (1992)), mazetramicina (Kuminoto, y col., J. Antibiotics, 33, 665-667 (1980)),
20 neotramicinas A y B (Takeuchi, y col., J. Antibiotics, 29, 93-96 (1976)), porotramicina (Tsunakawa, y col., J. Antibiotics, 41, 1366-1373 (1988)), protracarcina (Shimizu, y col., J. Antibiotics, 29, 2492-2503 (1982); Langley y Thurston, J. Org. Chem., 52, 91-97 (1987)), sibanomicina (DC-102) (Hara, y col., J. Antibiotics, 41, 702-704 (1988); Itoh, y col., J. Antibiotics, 41, 1281-1284 (1988)), sibiromicina (Leber, y col., J. Am. Chem. Soc., 110, 2992-2993 (1988)) y tomamicina (Arima, y col., J. Antibiotics, 25, 437-444 (1972)). Las PBD tienen la estructura general:
25 Difieren en el número, tipo y posición de los sustituyentes, en sus anillos A aromáticos y en los anillos C de pirrolo, y en el grado de saturación del anillo C. En el anillo B hay una imina (N=C), una carbinolamina (NH-CH(OH)), o un carbinolamina metiléter (NH-CH(OMe)) en la posición N10-C11, que es el centro electrófilo responsable de la alquilación del AND. Todos los productos naturales conocidos tienen una configuración (S) en la posición C11a
30 quiral que les proporciona un giro dextrógiro cuando se ve desde el anillo C hacia el anillo A. Esto les da la forma tridimensional adecuada para isohelicidad con la ranura menor del ADN de la forma B, lo que conduce a un acoplamiento preciso en el sitio de unión (Kohn, En Antibiotics III. Springer-Verlag, New York, pp. 3-11 (1975); Hurley y Needham-VanDevanter, Acc. Chem. Res., 19, 230-237 (1986)). Su capacidad para formar un aducto en el surco menor les permite interferir en el procesamiento del ADN, de ahí su uso como agentes antitumorales.
35 Los presentes inventores han divulgado anteriormente en el documento WO 2005/085251, compuestos de PBD diméricos portadores de sustituyentes de arilo C2, tales como;
N
N
O
OH H
N OMe MeO N
O O
ZC-207
MeO OMe
. Se ha demostrado que estos compuestos son muy útiles como agentes citotóxicos.
40 Un compuesto de pirrolobenzodiacepina particularmente ventajoso se describe en Gregson y col. (Chem. Commun. 1999, 797-798) como compuesto 1 y Gregson y col. (J. Med. Chem. 2001, 44, 1161-1174) como compuesto 4a. Este compuesto, también conocido como SJG-136, se muestra a continuación:
NN O OH H
N OMe MeO N
OO
SJG-136
.
Los presentes inventores han divulgado previamente que los compuestos de PBS pueden emplearse como profármacos protegiéndoles en la posición N10 con un grupo protector de nitrógeno, que se puede eliminar in vivo (documento WO 00/12507). Muchos de estos grupos protectores son carbamatos y tienen, por ejemplo, la estructura:
* En la que el asterisco (*) indica el punto de unión al átomo N10 de l PBD.
Los presentes inventores también han descrito la preparación de compuestos de PBD que tienen un grupo protector de carbamato de nitrógeno en la posición N10 (documento 2005/023814). Los grupos protectores se pueden eliminar de la posición N10 del grupo PBD para dejar un enlace imina N10-C11. Se describe una serie de grupos protectores, incluidos grupos que se pueden escindir mediante la acción de enzimas.
El documento WO 2007/085930 describe la preparación de compuestos diméricos de OBS que tienen grupos enlazadores para conectar con un agente de unión a célula, tal como un anticuerpo. El enlazador está presente en el puente que une las unidades monoméricas de PBD del dímero.
Conjugados anticuerpo-fármaco
Se ha establecido una terapia de anticuerpos para el tratamiento dirigido de pacientes con cáncer, trastornos inmunológicos y angiogénicos (Carter, P. (2006) Nature Reviews Immunology 6:343-357). El uso de conjugados de anticuerpo-fármaco (ADC), es decir inmunoconjugados, para la liberación local de agentes citotóxicos o citostáticos, es decir fármacos para matar o inhibir células tumorales en el tratamiento de cáncer, está dirigido a la liberación del grupo farmacológico a tumores, y acumulación celular en los mismos, mientras que la administración sistémica de estos fármacos no conjugados puede tener como resultado niveles inaceptables de toxicidad en las células normales así como en las células tumorales que se busca eliminar (Xie y col. (2006) Expert. Opin. Biol. Ther. 6(3):281-291; Kovtun y col. (2006) Cancer Res. 66(6):3214-3121; Law y col. (2006) Cancer Res. 66(4):2328-2337; Wu y col. (2005) Nature Biotech. 23(9):1137-1145; Lambert J. (2005) Current Opin. in Pharmacol. 5:543-549; Hamann P. (2005) Expert Opin. Ther. Patentes 15(9):1087-1103; Payne, G. (2003) Cancer Cell 3:207-212; Trail y col. (2003) Cancer Immunol. Immunother. 52:328-337; Syrigos y Epenetos (1999) Anticancer Research 19:605-614).
De este modo se busca una eficacia máxima con una toxicidad mínima. Los esfuerzos para diseñar y perfeccionar los ADC se han centrado en la selectividad de los anticuerpos monoclonales (AcMo) además de en el mecanismo de acción, la unión al fármaco y la proporción fármaco/anticuerpo (carga) y las propiedades de liberación de fármaco (Junutula, y col., 2008b Nature Biotech., 26(8):925-932; Dornan y col (2009) Blood 114(13):2721-2729; documento US 7521541; documento US 7723485; documento WO2009/052249; McDonagh (2006) Protein Eng. Design & Sel. 19(7): 299-307; Doronina y col. (2006) Bioconj. Chem. 17:114-124; Erickson y col (2006) Cancer Res. 66(8):1-8; Sanderson y col. (2005) Clin. Cancer Res. 11:843-852; Jeffrey y col. (2005) J. Med. Chem. 48:1344-1358; Hamblett y col. (2004) Clin. Cancer Res. 10:7063-7070). Los grupos farmacológicos pueden ejercer sus efectos citotóxicos y citostáticos mediante mecanismos, incluida la unión a tubulina, la unión a ADN o la inhibición de topoisomerasa. Algunos fármacos citotóxicos tienden a ser inactivos o menos activos cuando se conjugan con anticuerpos grandes
o ligandos de receptores de proteínas.
Los presentes inventores han desarrollado un nuevo enfoque para la formación de conjugados de PBD con agentes de unión a célula y, en concreto, conjugados de anticuerpos con PBD.
Descripción resumida de la invención
En un aspecto general, la presente invención proporciona un conjugado que comprende un compuesto de PBD conectado a través de la posición N10 mediante un enlazador a un agente de unión a célula. El enlazador es un enlazador lábil y puede ser un enlazador lábil a enzimas. El agente de unión a célula es, preferentemente, un anticuerpo.
En un primer aspecto, la presente invención proporciona conjugados de fórmula (AB) o (AC):
5 RC R9" R10
R11"R9 QR11
Q" N
N H
X"
X
H
R"
R7''
R7
N N
R2"
R2
R6"
R6
OO
AB
15 R9" R10
R9
QR11 N
N H
X"
X HR"
R7''
R7N N
R2"
R2
R6"
R6
OO
AC
y sales y solvatos del mismo, en el que: las líneas de puntos indican la presencia opcional de un doble enlace entre C1 y C2 o C2 y C3; R2 se selecciona independientemente entre H, OH, =O, =CH2, CN, R, OR, =CH-RD, =C(RD)2, O-SO2-R,
CO2R y COR, y opcionalmente se selecciona adicionalmente entre halo o dihalo; en los que RD se selecciona independientemente entre R, CO2R, COR, CHO, CO2H y halo; R6 y R9 se seleccionan independientemente entre H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR’, NO2, Me3Sn y
halo; R7 se selecciona independientemente entre H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR’, NO2, Me3Sn y halo;35 R10 es un enlazador conectado a un agente de unión a célula seleccionado entre un anticuerpo, un
fragmento de un anticuerpo que contiene al menos un sitio de unión y un polipéptido cíclico; Q se selecciona independientemente entre O, S y NH; R11 es H o R o, cuando Q es O, SO3M, en el que M es un catión metálico; cada uno de R y R’ se selecciona independientemente entre los grupos opcionalmente sustituidos alquilo
C1-12, heterociclilo C3-20 y arilo C5-20, y opcionalmente en relación al grupo NRR’, R y R’ junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un anillo heterocíclico opcionalmente sustituido de 4, 5, 6 ó 7 miembros; y en el que R2”, R6”, R7”,R9”, X”, Q” y R11” son como se han definido de acuerdo con R2, R6, R7, R9, X, Q y R11 respectivamente, y RC es un grupo de terminación.
45 La presente invención también proporciona compuestos de fórmula (EB) o (EC):
RCR9" R9 RL R11"
QR11 Q" N
N H
X" X
H
R"
R7''
R7
N N
R2"
R2
R6"
R6
55 OO R9" R9 RL
QR11 N
EB
N H
X" X
H
R"
R7''
R7
N N
R2"
R2
R6"
R6
OO
EC
y sales y solvatos del mismo, en el que las líneas de puntos indican la presencia opcional de a doble enlace entre C1 y C2 o C2 y C3; R2 se selecciona independientemente entre H, OH, =O, =CH2, CN, R, OR, =CH-RD, =C(RD)2, O-SO2-R,
5 CO2R y COR, y opcionalmente se selecciona adicionalmente entre halo o dihalo; en los que RD se selecciona independientemente entre R, CO2R, COR, CHO, CO2H, y halo; R6 y R9 se seleccionan independientemente entre H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR’, NO2, Me3Sn y
halo; R7 se selecciona independientemente entre H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR’, NO2, Me3Sn y halo;10 RL es un enlazador para la conexión a un agente de unión a célula seleccionado entre un anticuerpo, un
fragmento de un anticuerpo que contiene al menos un sitio de unión y un polipéptido cíclico; Q se selecciona independientemente entre O, S y NH; R11 es H, o R o, cuando Q es O, R11 es SO3M, en el que M es un catión metálico; cada uno de R y R’ se selecciona independientemente entre los grupos opcionalmente sustituidos alquilo
15 C1-12, heterociclilo C3-20 y arilo C5-20, y opcionalmente en relación al grupo NRR’, R y R’ junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un anillo heterocíclico opcionalmente sustituido de 4, 5, 6 ó 7 miembros;
R" es un grupo alquileno C3-12, cuya cadena puede estar interrumpida por uno o más heteroátomos, por ejemplo O, S, N(H), NMe y/o anillos aromáticos, por ejemplo benceno o piridina, estando dichos anillos opcionalmente sustituidos con NH2;
20 cada X es O, S o N(H); y en el que R2”, R6”, R7”,R9”, R11”, Q” y X” son como se han definido de acuerdo con R2, R6, R7, R9, R11, Q y X respectivamente, y RC es un grupo de terminación; en el que RL es diferente a RC.
25 Breve Descripción De Las Figuras
La Figura 1 muestra realizaciones particulares de la presente invención; Las Figuras 2 a 6 muestran el resultado de los ensayos biológicos en realizaciones particulares de la presente invención.
Descripción Detallada de la Invención
La presente invención proporciona un conjugado que comprende un compuesto de PBD conectado a través de la posición N10 mediante un enlazador a un agente de unión a célula. En una realización, el conjugado comprende un 35 agente de unión a célula conectado a un grupo espaciador de conexión, el espaciador conectado a un desencadenante, el desencadenante conectado a un enlazador de auto-destrucción y el enlazador de auto
en el que CBA es un agente de unión a célula y PBD es un compuesto de pirrolobenzodiazepina, como se describe 40 en el presente documento. La ilustración muestra las porciones que corresponden a R10, A, L1 y L2 en ciertas realizaciones de la invención.
La presente invención es adecuada para su uso en la prestación de un compuesto de PBD a un sitio preferido en un sujeto. En las realizaciones preferidas, el conjugado permite la liberación de un compuesto de PBD activo que no 45 retiene ninguna parte del enlazador. No hay ningún detalle presente que pueda afectar a la reactividad del compuesto de PBD.
En ciertas realizaciones, la invención proporciona conjugados que comprenden un grupo dimérico de PBD que tiene un enlazador conectado a un agente de unión a célula. Los inventores de la presente invención describen en el 50 presente documento procedimientos de síntesis que permiten que dicho dímero se conjugue para que pueda prepararse mediante el uso de nuevas técnicas de desimetrización de PBD.
Preferencias
Las siguientes preferencias pueden aplicarse a todos los aspectos de la invención como se ha descrito anteriormente o pueden referirse a un solo aspecto. Las preferencias pueden combinarse entre sí en cualquier combinación.
5 Doble enlace
En una realización, no hay doble enlace presente en C1 y C2, y C2 y C3.
En una realización, las líneas de puntos indican la presencia opcional de un doble enlace entre C2 y C3, como se 10 muestra a continuación:
. En una realización, un doble enlace está presente entre C2 y C3 cuando R2 es arilo C5-20 o alquilo C1-12.
En una realización, las líneas de puntos indican la presencia opcional de un doble enlace entre C1 y C2, como se 15 muestra a continuación:
. En una realización, un doble enlace está presente entre C1 y C2 cuando R2 es arilo C5-20 o alquilo C1-12.
R2
En una realización, R2 se selecciona independientemente entre H, OH, =O, =CH2, CN, R, OR, =CH-RD, =C(RD)2, O
SO2-R, CO2R y COR, y opcionalmente se seleccionan adicionalmente entre halo o dihalo. En una realización, R2 se
selecciona independientemente entre H, OH, =O, =CH2, CN, R, OR, =CH-RD, =C(RD)2, O-SO2-R, CO2R y COR.
25 En una realización, R2 se selecciona independientemente entre H, =O, =CH2, R, =CH-RD y =C(RD)2.
En una realización, R2 es independientemente H.
En una realización, R2 es independientemente =O. 30
En una realización, R2 es independientemente =CH2.
En una realización, R2 es independientemente =CH-RD. Dentro del compuesto PBD, el grupo =CH-RD puede tener las dos configuraciones que se muestran a continuación.
H
H NH
N RD O
O RD
H
(I) (II)
35 En una realización, la configuración es la configuración (I).
En una realización, R2 es independientemente =C(RD)2. 40 En una realización, R2 es independientemente =CF2.
En una realización, R2 es independientemente R.
En una realización, R2 es independientemente arilo C5-20 opcionalmente sustituido.
En una realización, R2 es independientemente alquilo C1-12 opcionalmente sustituido. En una realización, R2 es independientemente arilo C5-20 opcionalmente sustituido. En una realización, R2 es independientemente arilo C5-7 opcionalmente sustituido. En una realización, R2 es independientemente arilo C8-10 opcionalmente sustituido. En una realización, R2 es independientemente fenilo opcionalmente sustituido. En una realización, R2 es independientemente naftilo opcionalmente sustituido. En una realización, R2 es independientemente piridilo opcionalmente sustituido. En una realización, R2 es independientemente quinolinilo o isoquinolinilo opcionalmente sustituido. En una realización, R2 porta de uno a tres grupos sustituyentes, prefiriéndose más 1 y 2, y siendo lo más preferido
grupos sustituidos una sola vez. Los sustituyentes pueden estar en cualquier posición. Cuando R2 es un grupo arilo C5-7, un solo sustituyente está preferentemente en un átomo del anillo que no es adyacente al enlace con el grupo del compuesto, es decir, es preferentemente � o y con respecto al enlace con el
grupo del compuesto. Por lo tanto, cuando el grupo arilo C5-7 es fenilo, el sustituyente está preferentemente en las posiciones meta o para y más preferentemente está en la posición para. En una realización, R2 se selecciona entre:
* * O
O
O
O en las que los asteriscos indican el punto de unión.
Cuando R2 es un grupo arilo C8-10, por ejemplo quinolinilo o isoquinolinilo, éste puede portar cualquier número de sustituyentes en cualquier posición de los anillos de quinolina o isoquinolina. En algunas realizaciones, éste porta uno, dos o tres sustituyentes, y éstos pueden estar en los anillos proximales o distales, o en ambos (si hay más de un sustituyente).
En una realización, cuando R2 está opcionalmente sustituido, los sustituyentes se seleccionan entre los sustituyentes dados en la sección de sustituyentes posterior.
Cuando R está opcionalmente sustituido, los sustituyentes se seleccionan preferentemente entre:Halo, Hidroxilo, Éter, Formilo, Acilo, Carboxi, Ester, Aciloxi, Amino, Amido, Acilamido, Aminocarboniloxi, Ureido, Nitro, Ciano y Tioéter.
En una realización, cuando R o R2 está opcionalmente sustituido, los sustituyentes se seleccionan del grupo que consiste en R, OR, SR, NRR’, NO2, halo, CO2R, COR, CONH2, CONHR y CONRR’.
Cuando R2 es alquilo C1-12, el sustituyente opcional puede incluir adicionalmente grupos heterociclilo C3-20 y arilo C5
20. Cuando R2 es heterociclilo C3-20 , el sustituyente opcional puede incluir adicionalmente grupos alquilo C1-12 y arilo C5
20.
Cuando R2 es un grupo arilo C5-20, el sustituyente opcional puede incluir adicionalmente grupos heterociclilo C3-20 y alquilo C1-12.
Se entiende que el término "alquilo" abarca las subclases alquenilo y alquinilo, así como cicloalquilo. Por lo tanto, cuando R2 es alquilo C1-12 opcionalmente sustituido, se entiende que el grupo alquilo contiene opcionalmente uno o más dobles o triples enlaces carbono-carbono, que pueden formar parte de un sistema conjugado. En una realización, el grupo alquilo C1-12 opcionalmente sustituido contiene al menos un doble o triple enlace carbonocarbono, y este enlace está conjugado con un doble enlace presente entre C1 y C2, o C2 y C3. En una realización, el grupo alquilo C1-12 es un grupo seleccionado entre alquilo C1-12 saturado, alquenilo C2-12, alquinilo C2-12 y cicloalquilo C3-12.
Si un sustituyente en R2 es halo, éste es preferentemente F o Cl, más preferentemente Cl.
Si un sustituyente en R2 es éter, éste puede ser en algunas realizaciones un grupo alcoxi, por ejemplo, un grupo alcoxi C1-7 (por ejemplo, metoxi, etoxi) o puede ser en algunas realizaciones un grupo ariloxi C5-7 (por ejemplo, fenoxi, piridiloxi, furaniloxi).
5 Si un sustituyente en R2 es alquilo C1-7, éste puede ser preferentemente un grupo alquilo C1-4 (por ejemplo, metilo, etilo, propilo, butilo).
Si un sustituyente en R2 es heterociclilo C3-7, éste puede ser en algunas realizaciones un grupo heterociclilo C6 que
10 contiene nitrógeno, por ejemplo morfolino, tiomorfolino, piperidinilo, piperazinilo. Estos grupos pueden estar enlazados al grupo del grupo PBD mediante el átomo de nitrógeno. Estos grupos pueden estar adicionalmente sustituidos, por ejemplo, con grupos alquilo C1-4.
Si un sustituyente en R2 es bis-oxi-alquileno C1-3, éste es preferentemente bis-oxi-metileno o bis-oxi-etileno.
15 Los sustituyentes particularmente preferidos para R2 incluyen metoxi, etoxi, flúor, cloro, ciano, bis-oxi-metileno, metilpiperazinilo, morfolino y metil-tienilo.
Los grupos R2 sustituido particularmente preferidos incluyen, pero sin limitación, 4-metoxi-fenilo, 3-metoxifenilo, 4
20 etoxi-fenilo, 3-etoxi-fenilo, 4-fluoro-fenilo, 4-cloro-fenilo, 3,4-bisoximetileno-fenilo, 4-metiltienilo, 4-cianofenilo, 4fenoxifenilo, quinolin-3-ilo y quinolin-6-ilo, isoquinolin-3-ilo e isoquinolin-6-ilo, 2-tienilo, 2-furanilo, metoxinaftilo y naftilo.
En una realización, R2 es halo o dihalo. En una realización, R2 es -F o -F2, sustituyentes que se ilustran a 25 continuación como (III) y (IV) respectivamente:
(III) (IV)
.
RD
En una realización, RD se selecciona independientemente entre R, CO2R, COR, CHO, CO2H y halo. 30 En una realización, RD es independientemente R.
En una realización, RD es independientemente halo.
R6
35 En una realización, R6 se selecciona independientemente entre H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR’, NO2, Me3Sn- y Halo.
40 En una realización, R6 se selecciona independientemente entre H, OH, OR, SH, NH2, NO2 y Halo. En una realización, R6 se selecciona independientemente entre H y Halo. En una realización, R6 es independientemente H.
45 En una realización, R6 y R7 juntos forman un grupo -O-(CH2)p-O-, en el que p es 1 ó 2.
R7
R7 se selecciona independientemente entre H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR’, NO2, Me3Sn y halo. 50 En una realización, R7 es independientemente OR.
En una realización, R7 es independientemente OR7A, en el que R7A es independientemente alquilo C16 opcionalmente sustituido. 55 En una realización, R7A es opcionalmente alquilo C1-6 saturado opcionalmente sustituido.
En una realización, R7A es independientemente alquenilo C2-4 opcionalmente sustituido.
En una realización, R7A es independientemente Me. 5 En una realización, R7A es independientemente CH2Ph.
En una realización, R7A es independientemente alilo.
R9
En una realización, R9 se selecciona independientemente entre H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR’, NO2, Me3Sn- y Halo. 15 En una realización, R9 es independientemente H. En una realización, R9 es independientemente R u OR.
R10
Para evitar dudas, cuando R10 es un enlazador conectado a un agente de unión a célula, el agente de unión a célula es parte del grupo R10.
En ciertas realizaciones de la invención, cuando el conjugado es un dímero que comprende dos monómeros A, un 25 monómero tiene un grupo R10 que es un enlazador conectado a un agente de unión a célula, y el otro monómero tiene un grupo R10 que es un enlazador conectado a un grupo de terminación RC.
En una realización, el grupo R10 puede eliminarse de la posición N10 del grupo PBD para dejar un enlace imina N10-C11, una carbinolamina, una carbinolamina sustituida, en la que QR11 es OSO3M, un aducto de bisulfito, una 30 tiocarbinolamina, una tiocarbinolamina sustituida o una carbinalamina sustituida, como se ilustra a continuación:
45 en las que R y M son como se definen para los conjugados de la invención.
En una realización, el grupo R10 puede eliminarse de la posición N10 del grupo PBD para dejar un enlace imina N10-C11.
50 En algunas realizaciones, el conjugado de la invención es un compuesto dimérico que comprende un monómero de fórmula (A) y un monómero de fórmula (B). En esta realización, el grupo R10 no necesita eliminarse de la posición N10, puesto que el monómero (B) tiene una funcionalidad adecuada en las posiciones N10 y C11 para actividad biológica.
55 Sin embargo, se prefiere que el grupo R10 pueda eliminarse así para proporcionar un dímero que tenga una
funcionalidad adecuada en las posiciones N10 y C11 en ambas unidades monoméricas. Dicha funcionalidad se considera necesaria para permitir la actividad reticulante del dímero PBD.
La presente solicitud se refiere particularmente a aquellos grupos R10 que tienen una unión carbamato en la posición N10.
El enlazador une el Agente de Unión a Célula (CBA), por ejemplo un anticuerpo, al grupo D del profármaco PBD a través de un enlace o enlaces covalentes. El enlazador es un grupo bifuncional o monofuncional que pude usarse para enlazar uno o más grupos de fármaco (D) y una unidad de anticuerpo (Ab) para formar conjugados anticuerpofármaco (ADC). El enlazador (L) puede ser estable fuera de una célula, es decir extracelular, o puede escindirse por actividad enzimática, hidrólisis u otras condiciones metabólicas. Pueden prepararse convenientemente conjugados anticuerpo-fármaco (ADC) usando un enlazador que tenga una funcionalidad reactiva para unir el grupo farmacológico al anticuerpo. Un tiol de cisteína o una amina, por ejemplo extremo N-terminal o cadena lateral de aminoácido, tal como lisina, del anticuerpo (Ab) puede formar un enlace con un grupo funcional de un reactivo enlazador o espaciador, grupo farmacológico PBD (D) o reactivo de enlace a fármaco (D-L).
Muchos grupos funcionales reactivos en el enlazador unidos a la posición N10 del grupo PBD pueden ser útiles para hacerlo reaccionar con el agente de unión a célula. Por ejemplo, pueden formarse uniones éster, tioéster, amida, tioamida, carbamato, tiocarbamato, urea, tiourea, éter, tioéter o disulfuro a partir de la reacción de los intermedios enlazador-fármaco PBD y el agente de unión a célula.
Los enlazadores de los ADC previenen preferentemente la agregación de moléculas de ADC y mantienen el ADC fácilmente soluble en medios acuosos y en estado monomérico.
Los enlazadores de los ADC son preferentemente estables extracelularmente. Antes del transporte o liberación en una célula, el conjugado anticuerpo-fármaco (ADC) es preferentemente estable y permanece intacto, es decir, el anticuerpo permanece unido al grupo farmacológico. Los enlazadores son estables fuera de la célula diana y pueden escindirse con cierto grado de eficacia dentro de la célula. Un enlazador eficaz: (i) mantendrá las propiedades de enlace específicas del anticuerpo; (ii) permitirá la liberación intracelular del conjugado o grupo farmacológico; (iii) se mantendrá estable e intacto, es decir no se escindirá, hasta que el conjugado se haya liberado o transportado a su sitio elegido; y (iv) mantendrá un efecto linfocítico citotóxico o un efecto citostático del grupo farmacológico PBD. La estabilidad del ADC puede medirse por técnicas analíticas convencionales, tales como espectroscopía de masas, HPLC, y la técnica de separación/análisis LC/MS.
La unión covalente del anticuerpo y el grupo farmacológico requiere que el enlazador tenga dos grupos funcionales reactivos, es decir, bivalencia en un sentido reactivo. Los reactivos enlazadores bivalentes que son útiles para unir dos o más grupos funcionales o biológicamente reactivos, tales como péptidos, ácidos nucleicos, fármacos, toxinas, anticuerpos, haptenos grupos indicadores son conocidos, y se han descrito procedimientos para sus derivados conjugados (Hermanson, G.T. (1996) Bioconjugate Techniques; Academic Press: Nueva York, p 234-242).
En otra realización, el enlazador puede estar sustituido con grupos que modulan la agregación, solubilidad o reactividad. Por ejemplo, un sustituyente sulfonato puede aumentar la solubilidad en agua del reactivo y facilitar la reacción de acoplamiento del reactivo enlazador con el anticuerpo o el grupo farmacológico, o facilitar la reacción de acoplamiento de Ab-L con D, o D-L con Ab, dependiendo de la ruta sintética empleada para preparar el ADC.
En una realización, R10 es un grupo:
O en el que el asterisco indica el punto de unión a la posición N10, CBA es un agente de unión a célula, L1 es un enlazador, A es un grupo de conexión que conecta L1 al agente de unión a célula, L2 es un enlace covalente o junto con -OC(=O)- forman un enlazador de auto-destrucción y L1 o L2 es un enlazador escindible.
L1 es preferentemente el enlazador escindible y puede denominarse como un desencadenante de la activación para la escisión del enlazador.
La naturaleza de L1 y L2, cuando están presentes, puede variar ampliamente. Estos grupos seleccionan en base a sus características de escisión, que pueden estar dictadas por condiciones en el sitio en el que se libera el conjugado. Se prefieren aquellos enlazadores que se escinden por la acción de enzimas, aunque también pueden usarse enlazadores que puedan escindirse por cambios en el pH (por ejemplo, lábiles a ácido o base), temperatura o después de irradiación (por ejemplo, fotolábiles). También utilizarse enlazadores que puedan escindirse en condiciones de reducción u oxidación en la presente invención. L1 puede comprender una secuencia contigua de aminoácidos. La secuencia de aminoácidos puede ser el sustrato diana para la escisión enzimática, permitiendo de esta manera la escisión de R10 de la posición N10.
En una realización, L1 puede escindirse por la acción de una enzima. En una realización, la enzima es una esterasa
o una peptidasa.
5 En una realización, L2 está presente, y junto con -C(=O)O-, forma un enlazador de auto-destrucción. En una realización, L2 es un sustrato para la actividad enzimática, permitiendo de esta manera la liberación de R10 de la posición N10.
10 En una realización, en la que L1 puede escindirse por la acción de una enzima y L2 está presente, la enzima escinde el enlace entre L1 y L2.
L1 y L2, cuando están presentes, pueden estar conectados por un enlace seleccionado entre: -C(=O)NH-,
15 -C(=O)O-, -NHC(=O)-, -OC(=O)-, -OC(=O)O-, -NHC(=O)O-,
20 -OC(=O)NH- y -NHC(=O)NH-.
Un grupo amino de L1 que conecta a L2 puede ser el extremo N-terminal de un aminoácido o puede obtenerse a partir de un grupo amino de una cadena lateral de aminoácido, por ejemplo, una cadena lateral de aminoácido de
25 lisina.
Un grupo carboxilo de L1 que conecta a L2 puede ser el C-terminal de un aminoácido o puede obtenerse a partir de un grupo de una cadena lateral de aminoácido, por ejemplo, una cadena lateral de aminoácido de ácido glutámico.
30 Un grupo hidroxilo de L1 que conecta a L2 puede obtenerse a partir de un grupo hidroxilo de una cadena lateral de aminoácido, por ejemplo, una cadena lateral de aminoácido de serina.
La expresión "cadena lateral de aminoácido" aquellos grupos encontrados en: (i) aminoácidos que se encuentran en la naturaleza, tales como alanina, arginina, asparagina, ácido aspártico, cisteina, glutamina, ácido glutámico, glicina,
35 histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptófano, tirosina y valina; (ii) aminoácidos menores, tales como ornitina y citrulina; (iii) aminoácidos no naturales, beta-aminoácidos, análogos sintéticos y derivados de aminoácidos que aparecen en la naturaleza; y (iv) todos los enantiómeros, diastereómeros, enriquecidos isoméricamente, marcados isotópicamente (por ejemplo, 2H, 3H, 14C, 15N), formas protegidas y mezclas racémicas de los mismos.
40 En una realización, -C(=O)O-y L2 forman juntos el grupo:
O en el que el asterisco indica el punto de unión a la posición N10, la línea ondulada indica el punto de unión al enlazador L1, Y es -N(H)-, -O-, -C(=O)N(H)- o -C(=O)O-, y n es de 0 a 3. El anillo fenileno está opcionalmente 45 sustituido con uno, dos o tres sustituyentes como se describen en el presente documento. En una realización, el grupo fenileno está opcionalmente sustituido con halo, NO2, R u OR.
En una realización, Y es NH.
50 En una realización, n es 0 ó 1. Preferentemente, n es 0.
Cuando Y es NH y n es 0, el enlazador de auto-destrucción puede denominarse como un enlazador de p-aminobencilcarbonilo (PABC).
55 El enlazador de auto-destrucción permitirá la liberación del compuesto protegido cuando se activa un sitio remoto, realizándose según los principios que se muestran a continuación (para n = 0):
Y
Y
L*
+ L*
CO2 +
O O
*
donde L* es la forma activada de la porción restante del enlazador. Estos grupos tienen la ventaja de separar el sitio de activación del compuesto que se está protegiendo. Como se ha descrito anteriormente, el grupo fenilo puede estar opcionalmente sustituido.
En una realización descrita en el presente documento, el grupo L* es un enlazador L1 como se describe en el presente documento, que pueden incluir un grupo dipeptídico.
En otra realización, -C(=O)O-y L2 forman juntos un grupo seleccionado entre:
O
O
10 en los que el asterisco, la línea ondulada, Y y n son como se han definido anteriormente. Cada anillo fenileno está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes como se describen en el presente documento. En una realización, el anillo fenileno que tiene el sustituyente Y está opcionalmente sustituido y el anillo fenileno que no tiene el sustituyente Y está sin sustituir. En una realización, el anillo fenileno que tiene el sustituyente Y está sin 15 sustituir y el anillo fenileno que no tiene el sustituyente Y está opcionalmente sustituido.
En otra realización, -C(=O)O-y L2 forman juntos un grupo seleccionado entre:
en el que el asterisco, la línea ondulada, Y y n son como se han definido anteriormente, E es O, S o NR, D es N, CH, 20 o CR, y F es N, CH, o CR.
En una realización, D es N.
En una realización, D es CH. 25
En una realización, E es O o S.
En una realización, F es CH. 30 En una realización preferida, el enlazador es un enlazador lábil de catepsina.
En una realización, L1 comprende un dipéptido. El dipéptido puede representarse como -NH-X1-X2-CO-, en el que
-NH- y -CO- representan los N- y C-terminales de los grupos aminoacídicos X1 y X2 respectivamente. Los aminoácidos en el dipéptido pueden ser cualquier combinación de aminoácidos naturales. Cuando el enlazador es un enlazador lábil de catepsina, el dipéptido puede estar en el sitio de acción para la escisión mediante por catepsina.
Además, para aquellos grupos aminoacídicos que tienen una funcionalidad carboxilo o de cadena lateral amino, por ejemplo Glu y Lys respectivamente, CO y NH pueden representar dicha funcionalidad de cadena lateral.
En una realización, el grupo -X1-X2- en el dipéptido, -NH-X1-X2-CO-, se selecciona entre:
-Phe-Lys-, -Val-Ala-, -Val-Lys-, -Ala-Lys-, -Val-Cit-, -Phe-Cit-, -Leu-Cit-, -Ile-Cit-, -Phe-Arg-, -Trp-Cit-
en el que Cit es citrulina.
Preferentemente, el grupo -X1-X2- en el dipéptido, -NH-X1-X2-CO-, se selecciona entre:
-Phe-Lys-, -Val-Ala-, -Val-Lys-, -Ala-Lys-, -Val-Cit-.
Más preferentemente, el grupo -X1-X2- en el dipéptido, -NH-X1-X2-CO-, es -Phe-Lys- o -Val-Ala-.
Pueden usarse otras combinaciones dipeptídicas, incluyendo las descritas por Dubowchik y col., Bioconjugate Chemistry, 2002, 13,855-869.
En una realización, la cadena lateral de aminoácido se derivatiza, cuando es adecuado. Por ejemplo, un grupo amino o grupo carboxi de una cadena lateral de aminoácido puede derivatizarse. En una realización, un grupo amino NH2 de una cadena lateral de aminoácido, tal como lisina, es una forma derivatizada seleccionada del grupo que consiste en NHR y NRR’.
En una realización, un grupo carboxi COOH de un aminoácido de cadena lateral, tal como ácido aspártico, es una forma derivatizada seleccionada del grupo que consiste en COOR, CONH2, CONHR y CONRR’.
En una realización, la cadena lateral de aminoácido está químicamente protegida, cuando sea adecuado. El grupo protector de cadena lateral puede ser un grupo como se expone más adelante en relación al grupo RL. Los inventores de la presente invención han establecido que las secuencias de aminoácido protegidos pueden escindirse mediante enzimas. Por ejemplo, se ha establecido que una secuencia dipeptídica que comprende un residuo Lys de cadena lateral protegido con Boc puede escindirse con catepsina.
Los grupos protectores para las cadenas laterales de aminoácidos se conocen bien en la técnica y se describen en el Novabiochem Catalog. Se exponen estrategias adicionales de grupo protector en Protective Groups in Organic Synthesis, Greene y Wuts.
A continuación, se muestran grupos protectores posibles de cadena lateral para aquellos aminoácidos que tienen una funcionalidad reactiva de cadena lateral:
Arg: Z, Mtr, Tos; Asn: Trt, Xan; Asp: Bzl, t-Bu; Cys: Acm, Bzl, Bzl-OMe, Bzl-Me, Trt; Glu: Bzl, t-Bu; Gln: Trt, Xan; His: Boc, Dnp, Tos, Trt; Lys: Boc, Z-Cl, Fmoc, Z, Alloc; Ser: Bzl, TBDMS, TBDPS;
Thr: Bz; Trp: Boc; Tyr: Bzl, Z, Z-Br.
5 En una realización, la protección de la cadena lateral se selecciona para que sea ortogonal con respecto a un grupo proporcionado como, o como parte de, un grupo de terminación, cuando esté presente. Por lo tanto, la eliminación del grupo protector de cadena lateral no elimina el grupo de terminación, o cualquier funcionalidad del grupo protector que sea parte del grupo de terminación.
10 En otras realizaciones de la invención, los aminoácidos seleccionados son aquellos que no tienen ninguna funcionalidad de cadena lateral reactiva. Por ejemplo, los aminoácidos pueden seleccionarse entre: Ala, Gly, Ile, Leu, Met, Phe, Pro y Val.
En una realización, el dipéptido se usa junto con un enlazador de auto-destrucción. El enlazador de auto-destrucción 15 puede estar conectado a -X2-.
Cuando un enlazador de auto-destrucción está presente, -X2- está conectado directamente al enlazador de autodestrucción. Preferentemente, el grupo -X2-CO- está conectado a Y, en el que Y es NH, formando de esta manera al grupo-X2-CO-NH-.
20 -NH-X1- está conectado directamente a A. A puede comprender la funcionalidad -CO- para formar de esta manera una unión amida con -X1-.
En una realización, L1 y L2 junto con -OC(=O)- comprenden el grupo NH-X1-X2-CO-PABC-. El grupo PABC está 25 conectado directamente a la posición N10. Preferentemente, el enlazador de auto-destrucción y el dipéptido forman juntos el grupo -NH-Phe-Lys-CO-NH-PABC-, que se ilustra a continuación:
O
O * N
N
H
H
NH2
en el que el asterisco indica el punto de unión a la posición N10, y la línea ondulada indica el punto de unión a la porción restante del enlazador L1 o el punto de unión a A. Preferentemente, la línea ondulada indica el punto de
30 unión a A. La cadena lateral del aminoácido Lys puede estar protegida, por ejemplo, con Boc, Fmoc o Alloc, como se ha descrito anteriormente. Como alternativa, el enlazador de auto-destrucción y el dipéptido forman juntos el grupo -NH-Val-Ala-CO-NH-PABC-, que se ilustra a continuación: O
O en el que el asterisco y la línea ondulada son como se han definido anteriormente.
Como alternativa, el enlazador de auto-destrucción y el dipéptido forman juntos el grupo -NH-Val-Cit-CO-NH-PABC-, que se ilustra a continuación:
O
O
O*
H
N
N
N
H
H
O
NH
O
H2N
en el que el asterisco y la línea ondulada son como se han definido anteriormente.
En algunas realizaciones de la presente invención, puede preferirse que si el PBD/grupo farmacológico contiene un enlace imina sin proteger, por ejemplo si el grupo B está presente, entonces el enlazador no contenga un grupo amino libre (H2N-). Por tanto, si el enlazador tiene la estructura -A-L1-L2-, entonces este no contendría preferentemente un grupo amino libre. Esta preferencia es particularmente pertinente cuando el enlazador contiene un dipéptido, por ejemplo como L1; en esta realización, se preferiría que uno de los dos aminoácidos no se seleccione entre lisina.
Sin desear quedar ligado a teoría alguna, los inventores de la presente invención han descubierto que la combinación de un enlace de imina sin proteger en el grupo farmacológico y un grupo amino libre en el enlazador provocan la dimerización del esto fármaco-enlazador que puede interferir con la conjugación de dicho grupo fármaco-enlazador a un anticuerpo. La reacción cruzada de estos grupos puede acelerarse en caso de que el grupo amino esté presente como un ion amonio (H3N+-), tal como cuando se ha usado un ácido fuerte (por ejemplo, TFA) para desproteger el grupo amino libre.
En una realización, A es un enlace covalente. Por lo tanto, L1 y el agente de unión a célula están conectados directamente. Por ejemplo, cuando L1 comprende una secuencia de aminoácido contigua, el extremo N-terminal de esta secuencia puede conectar directamente al agente de unión a célula.
Por lo tanto, cuando A es un enlace covalente, la conexión entre el agente de unión a célula y L1 puede seleccionarse entre:
-
C(=O)NH-, -C(=O)O-, -NHC(=O)-, -OC(=O)-, -OC(=O)O-, -NHC(=O)O-, -OC(=O)NH-, -NHC(=O)NH-, -C(=O)NHC(=O)-, -S-, -S-S-, -CH2C(=O)-, y =N-NH-.
Un grupo amino de L1 que conecta al agente de unión a célula puede ser el extremo N-terminal de un aminoácido o puede obtenerse a partir de un grupo amino de una cadena lateral de aminoácido, por ejemplo, una cadena lateral de aminoácido de lisina.
Un grupo carboxilo de L1 que conecta el agente de unión a célula puede estar en el extremo C-terminal de un aminoácido o puede obtenerse a partir de un grupo carboxilo de una cadena lateral de aminoácido, por ejemplo una cadena lateral de aminoácido de ácido glutámico.
Un grupo hidroxilo de L1 que conecta al agente de unión a célula puede obtenerse a partir de un grupo hidroxilo de una cadena lateral de aminoácido, por ejemplo una cadena lateral de aminoácido de serina.
Un grupo tiol de L1 que conecta al agente de unión a célula puede obtenerse a partir de un grupo tiol de una cadena lateral de aminoácido, por ejemplo una cadena lateral de aminoácido de serina.
Los comentarios anteriores en relación a los grupos amino, carboxilo, hidroxilo y tiol de L1 también se aplican al agente de unión a célula.
En una realización, L2 junto con -OC(=O)- representa:
O Y nO
E en el que el asterisco indica el punto de unión a la posición N10, la línea ondulada indica el punto de unión a L1, n es de 0 a 3, Y es un enlace covalente o un grupo funcional, y E es un grupo activable, por ejemplo por acción enzimática o luz, para generar de esta manera una unidad de auto-destrucción. El anillo fenileno está opcionalmente sustituido adicionalmente con uno, dos o tres sustituyentes como se describen en el presente documento. En una realización, el grupo fenileno está opcionalmente sustituido adicionalmente con halo, NO2, R u OR. Preferentemente n es 0 ó 1, lo más preferido 0.
E se selecciona para el grupo sea susceptible a activación, por ejemplo, por medio de luz o por la reacción de una enzima. E puede ser -NO2 o ácido glucorónico. El primero puede ser susceptible a la acción de una nitroreductasa, el último a la acción de una β-glucoronidasa.
En esta realización, el enlazador de auto-destrucción permitirá la liberación del compuesto protegido cuando se active E, realizándose de la forma que se indica a continuación (para n = 0):
en el que el asterisco indica el punto de unión a la posición N10, E* es la forma activada de E, e Y es como se ha descrito anteriormente. Estos grupos tienen la ventaja de separar el sitio de activación del compuesto que se está protegiendo. Como se ha descrito anteriormente, el grupo fenileno puede estar opcionalmente sustituido adicionalmente.
El grupo Y puede ser un enlace covalente con L1.
El grupo Y puede ser un grupo funcional seleccionado entre:
-C(=O)- -NH- -O- -C(=O)NH-, -C(=O)O-, -NHC(=O)-, -OC(=O)-, -OC(=O)O-, -NHC(=O)O-, -OC(=O)NH-, -NHC(=O)NH-, -NHC(=O)NH, -C(=O)NHC(=O)-, y -S-.
Cuando L1 es un dipéptido, se prefiere que Y sea -NH- o -C(=O)-, para formar de esta manera un enlace de amida entre L1 e Y. En esta realización, la secuencia dipeptídica no necesita ser un sustrato para una actividad enzimática.
En otra realización, A es un grupo espaciador. Por lo tanto, L1 y el agente de unión a célula está conectados indirectamente.
L1 y A pueden estar conectados mediante un enlace seleccionado entre:
-
C(=O)NH-, -C(=O)O-, -NHC(=O)-, -OC(=O)-, -OC(=O)O-, -NHC(=O)O-, -OC(=O)NH-, y -NHC(=O)NH-.
Preferentemente, el enlazador contiene un grupo funcional electrófilo para la reacción con un grupo funcional nucleófilo en el agente de unión a célula. Los grupos nucleófilos en anticuerpos incluyen, pero sin limitación: (i) grupos de amina en el extremo N-terminal, (ii) grupos amina de cadena lateral, por ejemplo lisina, (iii) grupos tiol de cadena lateral, por ejemplo cisteina, y (iv) grupos amino o hidroxilo de azúcar cuando el anticuerpo es glucosilado. Los grupos amina, tiol e hidroxilo son nucleófilos y capaces de reaccionar para formar enlaces covalentes con grupos electrófilo en grupos de enlazador y reactivos de enlazador, incluyendo: (i) grupos maleimida (ii) disulfuros activados, (iii) ésteres activos, tales como ésteres de NHS (N-hidroxisuccinimida), ésteres de HOBt (Nhidroxibenzotriazol), haloformiatos y haluros de ácido; (iv) haluros de alquilo y bencilo, tales como haloacetamidas; y
(v) aldehídos, cetonas, carboxilo, y algunos de los mismos se ilustran de la siguiente manera:
agente reductor, tal como DTT (ditiotreitol). Por tanto, cada puente de cisteína formará, teóricamente, dos nucleófilos de tiol reactivos. Pueden introducirse grupos nucleófilos adicionales en anticuerpos a través de la reacción de lisinas con 2-iminotiolano (reactivo de Traut) dando como resultado la conversión de una amina en un tiol. Pueden introducirse grupos tiol reactivos en el anticuerpo (o fragmento del mismo) introduciendo uno, dos, tres, cuatro o más residuos de cisteina (por ejemplo, preparando anticuerpos mutantes que comprenden uno o más residuo aminoacídicos de cisteína no nativa). El documento US 7521541 enseña el diseño de anticuerpos por introducción de aminoácidos de cisteína reactivos.
En algunas realizaciones, un Enlazador tiene un grupo nucleófilo reactivo, que es reactivo con un grupo electrófilo presente en un anticuerpo. Los grupos electrófilos reactivos útiles en un anticuerpo incluyen, pero sin limitación, aldehído, cetona u grupos carbonilo. El heteroátomo de un grupo nucleófilo de un Enlazador puede reaccionar con un grupo electrófilo en un anticuerpo y formar un enlace covalente con una unidad de anticuerpo. Los grupos nucleófilos útiles en un Enlazador incluyen, pero sin limitación, hidrazida, oxima, amino, hidroxilo, hidrazina, tiosemicarbazona, carboxilato de hidrazina y arilhidrazida. El grupo electrófilo en un anticuerpo proporciona un sitio conveniente para la unión a un Enlazador. En una realización, el grupo A es:
en el que el asterisco indica el punto de unión a L1, la línea ondulada indica el punto de unión al agente de unión a célula, y n es de 0 a 6. En una realización, n es 5.
En una realización, el grupo A es:
O
en el que el asterisco indica el punto de unión a L1, la línea ondulada indica el punto de unión al agente de unión a célula, y n es de 0 a 6. En una realización, n es 5.
En una realización, el grupo A es:
O
O O
N
N
*
H
m
O en el que el asterisco indica el punto de unión a L1, la línea ondulada indica el punto de unión al agente de unión a célula, n es 0 ó 1, y m es de 0 a 30. En una realización preferida, n es 1 y m es de 0 a 10, de 1 a 8, preferentemente de 4 a 8, y lo más preferido 4 u 8. En otra realización, m es de 10 a 30, y preferentemente de 20 a 30. Como
10 alternativa, m es de 0 a 50. En esta realización, m es preferentemente 10-40 y n es 1.
n
En una realización, el grupo A es:
O
O O
*
N H N
O O en el que el asterisco indica el punto de unión a L1, la línea ondulada indica el punto de unión al agente de unión a 15 célula, n es 0 ó 1 y m es de 0 a 30. En una realización preferida, n es 1 y m es de 0 a 10, de 1 a 8, preferentemente de 4 a 8, y lo más preferidos de 4 u 8. En otra realización, m es de 10 a 30, y preferentemente de 20 a 30. Como alternativa, m es de 0 a 50. En esta realización, m es preferentemente 10-40 y n es 1.
nm
En una realización, la conexión entre el agente de unión a célula y A es a través de un residuo de tiol del agente de 20 unión a célula y un grupo maleimida de A.
En una realización, la conexión entre el agente de unión a célula y A es: O
en el que el asterisco indica el punto de unión a la porción restante de A y la línea ondulada indica el punto de unión 25 a la porción restante del agente de unión a célula. En esta realización, el átomo de S se obtiene típicamente a partir del agente de unión a célula.
En cada una de las realizaciones anteriores, puede usarse una funcionalidad alternativa en lugar del grupo derivado de maleimida que se muestra a continuación:
O
30 en el que la línea ondulada indica el punto de unión al agente de unión a célula como antes, y el asterisco indica el enlace a la porción restante del grupo A.
En una realización, el grupo derivado de maleimida está reemplazado por el grupo:
O
H en el que la línea ondulada indica el punto de unión al agente de unión a célula, y el asterisco indica el enlace a la porción restante del grupo A.
5 En una realización, el grupo derivado de maleimida está reemplazado por un grupo, que opcionalmente junto con el agente de unión a célula, se selecciona entre:
-C(=O)NH-, -C(=O)O-,
10 -NHC(=O)-, -OC(=O)-, -OC(=O)O-, -NHC(=O)O-, -OC(=O)NH-,
15 -NHC(=O)NH-, -NHC(=O)NH, -C(=O)NHC(=O)-, -S-, -S-S-,
20 -CH2C(=O)--C(=O)CH2-, =N-NH- y -NH-N=.
25 En una realización, el grupo derivado de maleimida está reemplazado por un grupo, que opcionalmente junto con el agente de unión a célula, se selecciona entre:
en los que la línea ondulada indica el punto de unión al agente de unión a célula o el enlace a la porción restante del grupo A, y el asterisco indica el otro punto de unión al agente de unión a célula o el enlace a la porción restante del 30 grupo A.
Otros grupos adecuados para conectar L1 al agente de unión a célula se describen en el documento WO 2005/082023.
35 El grupo R10 es derivable del grupo RL. El grupo RL puede convertirse en un grupo R10 por conexión de un agente de unión a célula a un grupo funcional de RL. Pueden tomarse otras etapas para convertir RL en R10. Estas etapas pueden incluir la eliminación de grupos protectores, cuando estén presentes, o a la introducción de un grupo funcional adecuado.
40 Q
En una realización, Q se selecciona entre O, S o N(H).
Preferentemente, Q es O. 45
R11
En una realización, R11 es H o R o, cuando Q es O, SO3M, en el que M es un catión metálico. 50 En una realización, R11 es H. En una realización, R11 es R.
En una realización, cuando Q es O, R11 es SO3M, en el que M es un catión metálico. El catión puede ser Na+.
RL
En una realización, RL es un enlazador para la conexión a un agente de unión a célula.
En una realización, el enlazador se proporciona con un grupo funcional para formar una conexión a un agente de unión a célula. La presente solicitud se refiere particularmente a aquellos grupos RL que tienen una unión carbamato en la posición N10. La descripción del grupo de enlazador en R10 anterior también es relevante para sus precursores inmediatos en el presente documento.
RL es diferente de RC, que no es adecuado para reacción con un agente de unión a célula. Sin embargo, en algunas realizaciones, RC puede convertirse en un grupo RL, por ejemplo mediante manipulación adecuada de los grupos protectores y otras funcionalidades que son, o forman parte de, Rc.
En una realización, RL es un grupo: L1
*
L2 O
G1
O en el que el asterisco indica el punto de unión a la posición N10, G1 es un grupo funcional para formar una conexión a un agente de unión a célula, L1 es un enlazador, L2 es un enlace covalente o junto con -OC(=O)- forma un enlazador de auto-destrucción, y L1 o L2 es un enlazador escindible.
L1 y L2 son como se han definido anteriormente en relación a R10. Las referencias a la conexión con A pueden interpretarse en el presente documento en referencia a la conexión con G1.
En una realización, cuando L1 comprende un aminoácido, la cadena lateral de dicho aminoácido puede estar protegida. Puede usarse cualquier grupo protector adecuado. En una realización, los grupos protectores de cadena lateral pueden eliminarse con otros grupos protectores en el compuesto, cuando estén presentes. En otras realizaciones, los grupos protectores pueden ser ortogonales con respecto a otros grupos protectores en la molécula, cuando estén presentes.
Los grupos protectores adecuados para las cadenas laterales de aminoácidos incluyen los grupos que se describen en Novabiochem Catalog 2006/2007. También se describen grupos protectores para su uso en un enlazador lábil de catepsina en Dubowchik y col.
En ciertas realizaciones de la invención, el grupo L1 incluye un residuo aminoacídico Lys. La cadena lateral de este aminoácido puede estar protegida con un grupo protector Boc o Alloc. Se prefiere más un grupo protector Boc.
El grupo funcional G1 forma un grupo de conexión A después de reacción un agente de unión a célula.
En una realización, el grupo funcional G1 es o comprende un grupo amino, ácido carboxílico, hidroxilo, tiol o maleimida para reacción con un grupo adecuado en el agente de unión a célula. En una realización preferida, G1 comprende un grupo maleimida.
En una realización, el grupo G1 es un grupo alquil maleimida. Este grupo es adecuado para reacción con grupos tiol, particularmente grupos tiol de cisteína, presentes en el agente de unión a célula, por ejemplo presentes en un anticuerpo.
En una realización, el grupo G1 es:
en el que el asterisco indica el punto de unión a L1 y n es de 0 a 6. En una realización, n es 5. En una realización, el grupo G1 es:
en el que el asterisco indica el punto de unión a L1 y n es de 0 a 6. En una realización, n es 5. En una realización, el grupo G1 es:
O
O O
N
N
*
H
m
O en el que el asterisco indica el punto de unión a L1, n es 0 ó 1, y m es de 0 a 30. En una realización preferida, n es 1 y m es de 0 a 10, de 1 a 2, preferentemente de 4 a 8 y lo más preferido 4 u 8. Como alternativa, m es de 0 a 50. En esta realización, m es preferentemente 10-40 y n es 1.
n
En una realización, el grupo G1 es:
O
O O
*
N
N
H
O O10 en el que el asterisco indica el punto de unión a L1, n es 0 ó 1, y m es de 0 a 30. En una realización preferida, n es 1 y m es de 0 a 10, de 1 a 8, preferentemente de 4 a 8, y lo más preferido 4 u 8. Como alternativa, m es de 0 a 50. En esta realización, m es preferentemente 10-40 y n es 1.
nm
15 En cada una de las realizaciones anteriores, puede usarse una funcionalidad alternativa en lugar del grupo maleimida que se muestra a continuación: O
en el que el asterisco indica el enlace a la porción restante del grupo G.
20 En una realización, el grupo derivado de maleimida está reemplazado por el grupo:
O en el que el asterisco indica el enlace a la porción restante del grupo G.
En una realización, el grupo maleimida está reemplazado por un grupo seleccionado entre:
25 -C(=O)OH, -OH, -NH2, -SH,
30 -C(=O)CH2D, en el que D es Cl, Br o I, -CHO, -NHNH2 -C=CH y -N3 (azida).
35 En una realización, cuando L1 está presente, G1 es -NH2, -NHMe, -COOH, -OH o -SH.
En una realización, cuando L1 está presente, G1 es -NH2 o -NHMe. Cualquiera de los grupos puede estar en el extremo N-terminal de una secuencia aminoacídica de L1.
40 En una realización, cuando L1 está presente, G1 es -NH2, y L1 es una secuencia aminoacídica -X1-X2-, como se ha definido anteriormente en relación a R10.
En una realización, cuando L1 está presente, G1 es COOH. Este grupo puede estar en el extremo C-terminal de una secuencia aminoacídica de L1.
En una realización, cuando L1 está presente, G1 es OH.
5 En una realización, cuando L1 está presente, G1 es SH.
El grupo G1 puede convertirse de un grupo funcional a otro. En una realización, cuando L1 está presente, G1 es -NH2. Este grupo puede convertirse en otro grupo G1 que comprende un grupo maleimida. Por ejemplo, el grupo -NH2 puede hacerse reaccionar con un ácido o ácido activado (por ejemplo, formas de N-succinimida) de estos grupos G1
10 que comprende la maleimida mostrada anteriormente.
Por tanto, el grupo G1 puede convertirse en un grupo funcional que sea más adecuado para reacción con un agente de unión a célula.
15 En otras realizaciones, RL es un grupo que es un precursor para el enlazador que se proporciona con un grupo funcional.
Como se ha indicado anteriormente, en una realización, cuando L1 está presente, G1 es -NH2, -NHMe, -COOH, -OH o -SH. En una realización adicional, estos grupos se proporcionan en una forma químicamente protegida. Por tanto,
20 la forma protegida químicamente es un precursor para el enlazador que se proporciona con un grupo funcional.
En una realización, G1 es -NH2 en una forma químicamente protegida. El grupo puede protegerse con un grupo protector carbamato. El grupo protector carbamato puede seleccionarse del grupo que consiste en:
25 Alloc, Fmoc, Boc, Troc, Teoc, Cbz y PNZ.
Preferentemente, cuando G1 es -NH2, está protegido con un grupo Alloc o Fmoc.
En una realización, cuando G1 es -NH2, está protegido con un grupo Fmoc.
30 En una realización, el grupo protector es igual que el grupo protector de carbamato del grupo de terminación.
En una realización, el grupo protector no es igual que el grupo protector de carbamato del grupo de terminación. En esta realización, se prefiere que el grupo protector pueda eliminarse en condiciones que no eliminen el grupo
35 protector de carbamato del grupo de terminación.
El grupo protector químico puede eliminarse para proporcionar un grupo funcional para formar una conexión a un agente de unión a célula. Opcionalmente, este grupo funcional puede después convertirse en otro grupo funcional como se ha descrito anteriormente.
40 En una realización, el grupo activo es una amina. Esta amina es preferentemente la amina N-terminal de un péptido, y puede estar en la amina N-terminal de los dipéptidos preferidos de la invención.
El grupo activo puede hacerse reaccionar para producir el grupo funcional que se pretende para formar una 45 conexión a un agente de unión a célula.
En otras realizaciones, el enlazador es un precursor para el enlazador que tiene un grupo activo. En esta realización, el enlazador comprende el grupo activo, que está protegido mediante un grupo protector. El grupo protector puede eliminarse para proporcionar el enlazador que tiene un grupo activo. Cuando el grupo activo es una amina, el grupo
50 protector puede ser un grupo protector de amina, tal como los que se describen en Green y Wuts.
El grupo protector es preferentemente ortogonal con respecto a otros grupos protectores, cuando estén presentes, en el grupo RL.
55 En una realización, el grupo protector es ortogonal con respecto al grupo de terminación. Por lo tanto, el grupo protector del grupo activo puede eliminarse mientras se conserva el grupo de terminación. En otras realizaciones, el grupo protector y el grupo de terminación pueden eliminarse en las mismas condiciones que las usadas para eliminar el grupo de terminación.
60 En una realización, RL es:
O O * N NH H
NHBoc en el que el asterisco indica el punto de unión a la posición N10, y la línea ondulada indica el punto de unión a la porción restante del enlazador L1 o el punto de unión a G1. Preferentemente, la línea ondulada indica el punto de unión a G1.
En una realización, RL es: O
O en el que el asterisco y la línea ondulada son como se han definido anteriormente.
10 En una realización, RL es: O
O
O*
H
N
N
N
H
H
O
NH
H2N
en el que el asterisco y la línea ondulada son como se han definido anteriormente.
Otros grupos funcionales adecuados para su uso en la formación de una conexión entre L1 y el agente de unión a 15 célula se describen en el documento WO 2005/082023.
Los enlazadores incluyen grupos peptídicos escindibles de proteasas que comprenden una o más unidades aminoacídicas. Pueden prepararse reactivos enlazadores a péptido por procedimientos de síntesis en fase sólida o en fase líquida (E. Schröder y K. Lübke, The Peptides, volume 1, pp 76-136 (1965) Academic Press) que se conocen
20 bien en el campo de la química de péptidos, incluyendo química de t-BOC (Geiser y col."Automation of solid-phase peptide synthesis" en Macromolecular Sequencing y Synthesis, Alan R. Liss, Inc., 1988, pp. 199-218) y química de Fmoc/HBTU (Fields, G. y Noble, R. (1990) "Solid phase peptide synthesis using 9-fluoroenylmethoxycarbonyl amino acids", Int. J. Peptide Protein Res. 35:161-214), en un sintetizador automático, tal como el Rainin Symphony Peptide Synthesizer (Protein Technologies, Inc., Tucson, AZ), o Model 433 (Applied Biosystems, Foster City, CA).
25 Los enlazadores de aminoácido de ejemplo incluyen un dipéptido, un tripéptido, un tetrapéptido o un pentapéptido. Los dipéptidos de ejemplo incluyen: valina-citrulina (vc o val-cit), alanina-fenilalanina (af o ala-phe). Los tripéptidos de ejemplo incluyen: glicina-valina-citrulina (gly-val-cit) y glicina-glicina-glicina (gly-gly-gly). Los residuos aminoacídicos que comprenden un componente de enlazador aminoacídico incluyen los de origen natural, así como
30 aminoácidos menores y análogos aminoacídicos que no son de origen natural, tales como citrulina. Pueden diseñarse y optimizarse componentes de enlazador aminoacídico en su selectividad para escisión enzimática por enzimas particulares, por ejemplo, una proteasa asociada a tumor, catepsina B, C y D, o una proteasa plasmina.
Los aminoácidos de cadena lateral incluyen aquellos que aparecen en la naturaleza, así como aminoácidos menores 35 y análogos de aminoácidos que no aparecen en la naturaleza, tales como citrulina. Las cadenas laterales de aminoácido incluyen hidrógeno, metilo, isopropilo, isobutilo, sec-butilo, bencilo, p-hidroxibencilo, -CH2OH, -CH(OH)CH3, -CH2CH2SCH3, -CH2CONH2, -CH2COOH, -CH2CH2CONH2, -CH2CH2COOH, -(CH2)3NHC(=NH)NH2,(CH2)3NH2, -(CH2)3NHCOCH3, -(CH2)3NHCHO, -(CH2)4NHC(=NH)NH2, -(CH2)4NH2, -(CH2)4NHCOCH3, (CH2)4NHCHO, -(CH2)3NHCONH2,-(CH2)4NHCONH2, -CH2CH2CH(OH)CH2NH2, 2-piridilmetil-, 3-piridilmetil-, 4piridilmetil-, fenilo, ciclohexilo, así como las siguientes estructuras:
Cuando las cadena laterales de aminoácido incluyen otras distintas de hidrógeno (glicina), el átomo de carbono al que la cadena lateral de aminoácido está unida es quiral. Cada átomo de carbono al que la cadena lateral de aminoácido está unida está independientemente en la configuración (S) o (R), o es una mezcla racémica. Los
10 reactivos de enlazador a fármaco pueden por tanto ser enantioméricamente puros, racémicos o diastereoméricos.
En realizaciones de ejemplo, las cadenas laterales de aminoácido se seleccionan entre aminoácidos naturales y no naturales, incluyendo alanina, ácido 2-amino-2-ciclohexilacético, ácido 2-amino-2-fenilacético, arginina, asparagina, ácido aspártico, cisteína, glutamina, ácido glutámico, glicina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina,
15 norleucina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptófano, tirosina, valina, ácido γ-aminobutírico, ácido α,α-dimetil γaminobutírico, ácido β,β-dimetil γ-aminobutírico, ornitina, y citrulina (Cit).
Un reactivo de enlazador dipeptídico valina-citrulina (val-cit o vc) de ejemplo, útil para la construcción de un intermedio del grupo farmacológico PBD-enlazador para conjugación a un agente de unión a célula, por ejemplo un 20 anticuerpo, que tiene un espaciador de auto-destrucción para-aminobencilcarbamoilo (PAB), tiene la estructura: O Qm
O CH3 O OH3C H
NO2N
N H
Fmoc N HO
NH
H2N en la que Q es alquilo C1-C8, -O-(alquilo C1-C8), -halógeno, -NO2 o -CN; y m es un número entero que varía de 0-4.
Un reactivo enlazador dipeptídico phe-lys (Mtr) de ejemplo que tiene un grupo p-aminobencilo puede prepararse de 25 acuerdo con Dubowchik, y col. (1997) Tetrahedron Letters, 38:5257-60, y tiene la estructura:
HN Mtr en la que Mtr es mono-4-metoxitritilo, Q es alquilo C1-C8, -O-(alquilo C1−C8), -halógeno, -NO2 o -CN; y m es un número entero que varía de 0-4.
El "enlazador de auto-destrucción" PAB (para-aminobenciloxicarbonilo), une el grupo farmacológico al anticuerpo en el conjugado de anticuerpo fármaco (Carl y col. (1981) J. Med. Chem. 24:479-480; Chakravarty y col.(1983) J. Med. Chem. 26:638-644; US 6214345; US20030130189; US20030096743; US6759509; US20040052793; US6218519; US6835807; US6268488; US20040018194; WO98/13059; US20040052793; US6677435; US5621002; US20040121940; WO2004/032828). Otros ejemplos de espaciadores de auto-destrucción además de PAB incluyen, pero sin limitación: (i) compuestos aromáticos que son similares electrónicamente al grupo PAB, tales como derivados de 2-aminoimidazol-5-metanol (Hay y col. (1999) Bioorg. Med. Chem. Lett. 9:2237), tiazoles (US 7375078), unidades de PAB múltiples y alargadas (de Groot y col.(2001) J. Org. Chem. 66:8815-8830); y orto o para-aminobencilacetales; y (ii) análogos de estiril PAB homologados (US 7223837). Pueden usarse espaciadores que experimenten ciclación después hidrólisis del enlace amida, tales como amidas de ácido 4-aminobutírico sustituidas y sin sustituir (Rodrigues y col.(1995) Chemistry Biology 2:223), sistemas de anillo biciclo[2,2,1] y biciclo[2,2,2] adecuadamente sustituidos (Storm y col.(1972) J. Amer. Chem. Soc. 94:5815) y amidas del ácido 2aminofenilpropiónico (Amsberry, y col.(1990) J. Org. Chem. 55:5867). La eliminación de fármacos que contienen amina que están sustituidos en la glicina (Kingsbury y col.(1984) J. Med. Chem. 27:1447) también son ejemplos de espaciadores de auto-destrucción útiles en ADC.
En una realización, un reactivo análogo de PAB dipeptídico de valina-citrulina tiene un grupo a 2,6-dimetilfenilo y tiene la estructura:
SMPH, sulfo-EMCS, sulfo-GMBS, sulfo-KMUS, sulfo-MBS, sulfo-SIAB, sulfo-SMCC y sulfo-SMPB, y SVSB (succinimidil-(4-vinilsulfona)benzoato) y reactivos de bis-maleimida: DTME, BMB, BMDB, BMH, BMOE, 1,8-bismaleimidodietilenglicol (BM(PEO)2) y 1,11-bis-maleimidotrietilenglicol (BM(PEO)3), que están disponibles en el mercado de Pierce Biotechnology, Inc., ThermoScientific, Rockford, IL, y otros proveedores de reactivos. Los reactivos de bis-maleimida permiten la unión del grupo tiol libre de un residuo de cisteína de un anticuerpo a un grupo, marcador o enlazador intermedio de fármaco que contiene tiol, de una manera secuencial o concurrente. Otros grupos funcionales además de maleimida, que son reactivos con un grupo tiol de un anticuerpo, grupo farmacológico PBD o intermedio de enlazador incluyen yodoacetamida, bromoacetamida, vinil piridina, disulfuro, disulfuro de piridilo, isocianato y isotiocianato.
O O
OO O
O N
ON
OO
N
N O O OO
BM(PEO)3BM(PEO)2
Otras realizaciones de reactivos enlazadores son: N-succinimidil-4-(2-piridiltio)pentanoato (SPP), propionato de Nsuccinimidil-3-(2-piridilditio) (SPDP, Carlsson y col.(1978) Biochem. J. 173:723-737), ciclohexano-1-carboxilato de succinimidil-4-(N-maleimidometilo) (SMCC), iminotiolano (IT), derivados bifuncionales de imidoésteres (tales como adipimidato de dimetilo HCl), ésteres activos (tales como suberato de disuccinimidilo), aldehídos (tales como glutaraldehído), compuestos de bis-azido (tales como bis (p-azidobenzoil) hexanodiamina), derivados de bisdiazonio (tales como bis-(p-diazoniobenzoil)-etilendiamina), diisocianatos (tales como 2,6-diisocianato de tolueno) y compuestos de flúor bis-activo (tales como 1,5-difluoro-2,4-dinitrobenceno). También pueden obtenerse reactivos de enlazador útiles mediante otras fuentes comerciales, tales como Molecular Biosciences Inc.(Boulder, CO), o
5 sintetizarse de acuerdo con procedimientos descritos en Toki y col.(2002) J. Org. Chem. 67:1866-1872; US 6214345; WO 02/088172; US 2003130189; US2003096743; WO 03/026577; WO 03/043583; y WO 04/032828.
El Enlazador puede ser un enlazador de tipo dendrítico para una unión covalente de más de un grupo farmacológico a través de un grupo enlazador ramificado multifuncional a un anticuerpo (US 2006/116422; US 2005/271615; de 10 Groot y col.(2003) Angew. Chem. Int. Ed. 42:4490-4494; Amir y col.(2003) Angew. Chem. Int. Ed. 42:4494-4499; Shamis y col.(2004) J. Am. Chem. Soc. 126:1726-1731; Sun y col.(2002) Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 12:2213-2215; Sun y col.(2003) Bioorganic & Medicinal Chemistry 11:1761-1768; King y col.(2002) Tetrahedron Letters 43:1987-1990). Los enlazadores dendríticos pueden aumentar la proporción molar del fármaco con respecto al anticuerpo, es decir la carga, que está relacionada con la potencia del ADC. Por lo tanto, cuando un anticuerpo
15 porta solo un grupo tiol de cisteína reactivo, una multitud de grupos farmacológicos pueden unirse a través de un enlazador dendrítico o ramificado.
Una realización de ejemplo de un enlazador de tipo dendrítico tiene la estructura:
20 en la que el asterisco indica el punto de unión a la posición N10 de un grupo de PBD.
Agente de unión a célula
Son posibles un conjunto de tipos de agentes de unión a célula, incluyendo péptidos y no péptidos. Estos pueden
25 incluir anticuerpos o un fragmento de un anticuerpo que contiene al menos un sitio de unión, linfoquinas, hormonas, factores de crecimiento, moléculas para transporte de nutrientes o cualquier otra molécula o sustancia de unión a célula. En la presente invención, el agente de unión a célula se selecciona entre un anticuerpo, un fragmento de un anticuerpo que contiene al menos un sitio de unión y un polipéptido cíclico.
30 El término “anticuerpo” en el presente documento se usa en el sentido más amplio y cubre específicamente anticuerpos monoclonales, anticuerpos policlonales, dímeros, multímeros, anticuerpos multiespecíficos (p. ej., anticuerpos biespecíficos) y fragmentos de anticuerpos, siempre que exhiban la actividad biológica deseada (Miller y col. (2003) Jour. of Immunology 170:4854-4861). Los anticuerpos pueden ser murinos, humanos, humanizados, quiméricos o derivados de otras especies. Un anticuerpo es una proteína generada por el sistema inmunitario que es
35 capaz de reconocer y unirse a un antígeno específico. (Janeway, C., Travers, P., Walport, M., Shlomchik (2001) Immuno Biology, 5ª Ed., Garland Publishing, New York). En general, un antígeno diana tiene numerosos sitios de unión, también denominados epítopos, reconocidos por CDR en múltiples anticuerpos. Cada anticuerpo que se une específicamente a un epítopo diferente tiene una estructura diferente. Por tanto, un antígeno puede tener más de un anticuerpo correspondiente. Un anticuerpo incluye una molécula de inmunoglobulina de longitud completa o una
40 porción inmunológicamente activa de una molécula de inmunoglobulina de longitud completa, es decir una molécula que contiene un sitio de unión a antígeno que se une inmunoespecíficamente a un antígeno de una diana de interés
o parte de la misma, incluyendo dichas dianas, pero sin limitación, células cancerosas o células que producen anticuerpos autoinmunitarios asociados con una enfermedad autoinmunitaria. La inmunoglobulina para ser de cualquier tipo (IgG, IgE, IgM, IgD e IgA), clase (p. ej., IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 y IgA2) o subclase de molécula
45 de inmunoglobulina. Las inmunoglobulinas pueden derivar de cualquier especie, incluidos los orígenes humano, murino o de conejo.
Los “fragmentos de anticuerpos” comprenden una porción de un anticuerpo de longitud completa, generalmente el fragmento de unión a antígeno o una región variable del mismo. Ejemplos de fragmentos de anticuerpo incluyen fragmentos Fab, Fab', F(ab')2 y Fv; diacuerpos; anticuerpos lineales; fragmentos producidos por una biblioteca de expresión de Fab, anticuerpos antiidiotípicos (anti-Id), CDR (región determinante de la complementariedad) y fragmentos de unión a epítopo de cualquiera de los anteriores que se unen inmunoespecíficamente a antígenos de células cancerosas, antígenos virales o antígenos microbianos, moléculas de anticuerpo de una cadena y anticuerpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticuerpo.
La expresión “anticuerpo monoclonal", como se usa en el presente documento descriptiva, se refiere a un anticuerpo obtenido de una población de anticuerpos sustancialmente homogéneos, es decir los anticuerpos individuales que comprenden la población son idénticos excepto por posibles mutaciones naturales, que pueden estar presentes en cantidades minoritarias. Los anticuerpos monoclonales son altamente específicos, estando dirigidos contra un único sitio antigénico. Además, a diferencia de las preparaciones de anticuerpos policlonales que incluyen anticuerpos diferentes dirigidos contra determinantes diferentes (epítopos), cada anticuerpo monoclonal está dirigido contra un único determinante sobre el antígeno. Además de su especificidad, los anticuerpos monoclonales son ventajosos en cuanto a que pueden sintetizarse no contaminados por otros anticuerpos. El modificador "monoclonal" indica la naturaleza del anticuerpo como obtenido de una población sustancialmente homogénea y no debe interpretarse como que requiere la producción del anticuerpo mediante cualquier procedimiento concreto. Por ejemplo, los anticuerpos monoclonales que se van a usar de acuerdo con la presente invención pueden prepararse mediante el método del hibridoma descrito por primera vez por Kohler, y col., (1975) Nature 256:495, o pueden prepararse mediante procedimientos de ADN recombinante (véase el documento US 4816567). Los anticuerpos monoclonales pueden también aislarse de bibliotecas de anticuerpos de fagos usando las técnicas descritas en Clackson, y col. (1991) Nature 352:624-628); Marks, y col., (1991) J. MoI. Biol. 222:581-597.
Los anticuerpos monoclonales del presente documento incluyen específicamente anticuerpos “quiméricos" en los que una porción de la cadena pesada y/o ligera es idéntica u homóloga a las correspondientes secuencias en los anticuerpos derivados de una especie concreta o pertenecientes a una clase o subclase de anticuerpo concreto, mientras que el grupo de la(s) cadena(s) es idéntico u homólogo a las secuencias correspondientes en los anticuerpos derivados de otra especie o pertenecientes a otra clase o subclase de anticuerpos concretos, así como fragmentos de dichos anticuerpos, siempre que exhiban la actividad biológica deseada (documento US 4816567; y Morrison, y col. (1994), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855). Los anticuerpos quiméricos incluyen anticuerpos “primatizados” que comprenden secuencias de unión a antígeno del dominio variable derivadas de un primate no humano (p. ej., mono del viejo mundo o simio) y secuencias de la región constante humana.
En el presente documento, un “anticuerpo intacto” es uno que comprende dominios VL y VH, así como un dominio constante de la cadena ligera (CL) y dominios constantes de la cadena pesada, CH1, CH2 y CH3. Los dominios constantes pueden ser dominios constantes de la secuencia nativa (p. ej., dominios constantes de la secuencia nativa humana) o una variante de la secuencia de aminoácidos de los mismos. El anticuerpo intacto puede tener una
o más “funciones efectoras”, que hacen referencia a las actividades biológicas atribuibles a la región Fc (una región Fc de la secuencia nativa o una región Fc de la variante de la secuencia de aminoácidos) de un anticuerpo. Ejemplos de las funciones efectoras del anticuerpo incluyen unión a C1q; citotoxicidad dependiente del complemento; unión al receptor de Fc; citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos (CCDA); fagocitosis; y regulación por disminución de los receptores de superficie, tal como el receptor de células B y BCR.
En función de la secuencia de aminoácidos del dominio constante de sus cadenas pesadas, los anticuerpos intactos se pueden asignar a diferentes “clases”. Hay cinco clases principales de anticuerpos intactos: IgA, IgD, IgE, IgG, e IgM, y varios de éstos pueden además dividirse en “subclases” (isotipos), por ejemplo IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA e IgA2. Los dominios constantes de la cadena pesada que corresponden a las diferentes clases de anticuerpos se denominan a, 0, E, y, y 1, respectivamente. Las estructuras de las subunidades y las configuraciones tridimensionales de diferentes clases de inmunoglobulinas son bien conocidas.
Ejemplos de agentes de unión a célula incluyen los agentes descritos para usar en el documento WO 2007/085930.
El agente de unión a célula puede ser un polipéptido cíclico. El agente de unión a célula puede ser un anticuerpo. Por tanto, en una realización, la presente invención proporciona un conjugado anticuerpo-fármaco (ADC).
Carga del fármaco
La carga de fármaco es el número promedio de fármacos PBD por anticuerpo. La carga de anticuerpo puede variar de 1 a 8 fármacos (F) por anticuerpo (Ab), es decir cuando 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 y 8 grupos farmacológicos están unidos covalentemente al anticuerpo. Las composiciones de ADC incluyen grupos de anticuerpos conjugados con un intervalo de fármacos, de 1 a 8. El número promedio de fármacos por anticuerpo en preparaciones de ADC de reacciones de conjugación se pueden caracterizar por medios convencionales, tales como espectroscopia de masas, ensayo ELISA, electroforesis y HPLC. La distribución cuantitativa de ADC en términos de p también se puede determinar. Se puede determinar mediante ELISA, el valor promedio de p en una preparación concreta de
ADC (Hamblett y col. (2004) Clin. Cancer Res. 10:7063-7070; Sanderson y col. (2005) Clin. Cancer Res. 11:843852). No obstante, la distribución de los valores p (fármaco) no se puede discernir por la unión anticuerpo-antígeno y la limitación de la detección de los ELISA. Asimismo, el ensayo ELISA para la detección de conjugados de anticuerpo-fármaco no determina donde se unen los grupos de fármaco al anticuerpo, tal como los fragmentos de la cadena pesada o de la cadena ligera, o los residuos aminoacídicos concretos. En algunos casos, se puede conseguir la separación, purificación y caracterización de ADC homogéneos en los que p es un valor cierto a partir de ADC con otras cargas de fármaco por medios tales como HPLC de fase inversa o electroforesis.
Para algunos conjugados de anticuerpo-fármaco, p puede estar limitado por el número de sitios de unión en el anticuerpo. Por ejemplo, un anticuerpo puede tener solo uno o varios grupos de cisteína tiol o puede tener solo uno
o varios grupos tiol reactivos suficientemente a través de los cuales se puede unir un enlazador. Cargas mayores de fármaco, por ejemplo p > 5, pueden producir agregación, insolubilidad, toxicidad o pérdida de permeabilidad celular de ciertos conjugados de anticuerpo-fármaco.
Normalmente, menos del máximo teórico de los grupos farmacológicos está conjugado con un anticuerpo durante una reacción de conjugación. Un anticuerpo puede contener, por ejemplo, muchos residuos de lisina que no reaccionan con el intermedio enlazador del fármaco (D-L) o reactivo enlazador. Solo los grupos de lisina más reactivos pueden reaccionar con un reactivo enlazador reactivo con amina. Asimismo, solo los grupos tiol de cisteína más reactivos pueden reaccionar con un reactivo enlazador reactivo con tiol. En general, los anticuerpos no contienen muchos, si contienen alguno, grupos tiol libres de cisteína y reactivos que pueden estar unidos a un grupo farmacológico. La mayoría de los grupos tiol de cisteína en los anticuerpos de los compuestos existen como puentes disulfuro y deben reducirse con un agente reductor tal como ditiotreitol (DTT) o TCEP, en condiciones de reducción parcial o total. La carga (proporción fármaco/anticuerpo) de un ADC puede controlarse de varios modos, incluidos: (i) limitar el exceso molar del intermedio fármaco-enlazador (D-L) o el reactivo enlazador respecto al anticuerpo, (ii) limitar el tiempo de la reacción de conjugación o la temperatura; y (iii) condiciones reductoras parciales o limitadas para la modificación de la cisteína tiol.
Los aminoácidos de cisteína se pueden diseñar en sitios reactivos en un anticuerpo y que no forman puentes disulfuro intracatenarios o intermoleculares (Junutula, y col., 2008b Nature Biotech., 26(8):925-932; Dornan y col (2009) Blood 114(13):2721-2729; documento US 7521541; documento US 7723485; documento WO2009/052249). Los tioles de cisteína diseñada pueden reaccionar con reactivos enlazadores o los reactivos enlazadores del fármaco de la presente invención que tienen grupos electrófilos reactivos con tiol, tal como maleimida o alfahaloamidas para formar ADC con anticuerpos modificados con cisteína y los grupos del fármaco PBD. Por tanto, la localización del grupo farmacológico puede diseñarse, controlarse y conocerse. La carga de fármaco se puede controlar, ya que los grupos tiol de cisteína diseñada normalmente reaccionan con reactivos enlazadores reactivos con tiol o reactivos enlazadores de fármaco con un rendimiento elevado. El diseño de un anticuerpo IgG para introducir un aminoácido de cisteína mediante sustitución en un único sitio en las cadenas pesada o ligera proporciona dos cisteínas nuevas en el anticuerpo simétrico. Se puede conseguir una carga de fármaco de casi 2 y la casi homogeneidad del producto de conjugación ADC.
Cuando más de un grupo nucleófilo o electrófilo del anticuerpo reacciona con un intermedio enlazador con fármaco,
o reactivo enlazador seguido del reactivo del grupo farmacológico, el producto resultante es una mezcla de compuestos ADC con una distribución de grupos farmacológicos unidos a un anticuerpo, por ejemplo, 1, 2 ,3 etc. Los métodos de cromatografía líquida, tales como de fase inversa polimérica (PLRP) e interacción hidrófoba (HIC) pueden separar compuestos en la mezcla por valor de carga de fármaco. Las preparaciones de ADC con un valor único de carga de fármaco (p) se pueden aislar. No obstante, estos ADC de valor de carga único pueden ser mezclas heterogéneas porque los grupos farmacológicos pueden estar unidos, mediante el enlazador, en diferentes sitios sobre el anticuerpo.
Por tanto, las composiciones de conjugado de anticuerpo-fármaco de la invención incluyen mezclas de compuestos de conjugado de anticuerpo-fármaco en los que el anticuerpo tiene uno o más grupos de fármaco de PBD y en las que los grupos farmacológicos pueden estar unidos al anticuerpo en varios residuos de aminoácidos.
En una realización, el número medio de grupos monoméricos o diméricos de pirrolobenzodiacepina por agente de unión a célula está en el intervalo de 1 a 20. En algunas realizaciones, el intervalo se selecciona de 1 a 8, de 2 a 8, de 2 a 6, de 2 a 4 y de 4 a 8.
En algunas realizaciones, hay un grupo dimérico de pirrolobenzodiacepina por agente de unión a célula.
Péptidos
En una realización, el agente de unión a célula es un péptido cíclico que comprende 4-20, preferentemente 6-20, residuos de aminoácidos contiguos. En esta realización, se prefiere que un agente de unión a célula esté unido a un compuesto dimérico de pirrolobenzodiacepina.
En una realización, el agente de unión a célula comprende un péptido que se une a integrina av 6. El péptido puede
ser selectivo para av 6 sobre XYS.
En una realización, el agente de unión a célula comprende el polipéptido A20FMDV-Cys . El A20FMDV-Cys tiene la secuencia: NAVPNLRGDLQVLAQKVARTC. Como alternativa se puede usar una variante de la secuencia A20FMDV-Cys en la que uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve o diez residuos de aminoácidos están sustituidos por otro residuo de aminoácido.
En una realización, el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal; anticuerpo quimérico; anticuerpo humanizado; anticuerpo completamente humano o un anticuerpo monocatenario. En una realización, el anticuerpo es un fragmento de uno de estos anticuerpos que tienen actividad biológica. Ejemplos de dichos fragmentos incluyen fragmentos Fab, Fab', F(ab')2 y Fv.
En estas realizaciones, cada anticuerpo puede estar unido a uno o varios grupos diméricos de pirrolobenzodiacepina. Las proporciones preferidas entre la pirrolobenzodiacepina y el agente de unión a célula se proporcionan anteriormente.
El anticuerpo puede ser un anticuerpo de dominio (DAB).
En una realización, el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal.
Los anticuerpos para usar en la presente invención incluyen los anticuerpos descritos en el documento WO 2005/082023. Particularmente preferidos son los anticuerpos para antígenos asociados a tumores. Ejemplos de los antígenos conocidos en la técnica incluyen, pero sin limitación, los antígenos asociados a tumores indicados en el documento WO 2005/082023. Véase, por ejemplo, las páginas 41-55.
Los conjugados de la invención están modificados para dirigirse a células tumorales diana a través de sus antígenos de la superficie celular. Normalmente, los antígenos son antígenos de la superficie celular normales que se sobreexpresan o expresan en momentos anormales. Idealmente, el antígeno diana solo se expresa en células proliferativas (preferentemente células tumorales), no obstante, esto rara vez se observa en la práctica. Como resultado, los antígenos diana normalmente se seleccionan en base a la expresión diferencial entre tejido proliferativo y sano.
Se han producido anticuerpos frente a antígenos relacionados con tumores específicos de la diana, que incluyen:
Cripto, CD30, CD19, CD33, Glicoproteína NMB, CanAg, Her2 (ErbB2/Neu), CD56 (NCAM), CD22 (Siglec2), CD33 (Siglec3), CD79, CD138, PSCA, PSMA (antígeno de membrana específico de la próstata), BCMA, CD20, CD70, Eselectina, EphB2, Melanotransferina, Muc16 y TMEFF2.
En la técnica se conocen antígenos asociados con tumores (AAT) y se pueden preparar para usar en la generación de anticuerpos usando procedimientos e información conocidos en la técnica. En los intentos por descubrir dianas celulares eficaces para el diagnóstico y terapia del cáncer, los investigadores han buscado identificar polipéptidos transmembrana o, de otro modo, asociados con tumores que se expresan específicamente sobre la superficie de uno o más tipos concretos de células cancerosas en comparación con una o más células no cancerosas normales. A menudo, dichos polipéptidos asociados con tumores se expresan de forma más abundante sobre la superficie de las células cancerosas en comparación con sobre la superficie de las células no cancerosas. La identificación de dichos polipéptidos antígénicos de superficie celular asociados con tumores ha dado lugar a la capacidad de dirigirse específicamente a células cancerosas para la destrucción mediante terapias basadas en anticuerpos.
Ejemplos de AAT incluyen, pero sin limitación, AAT (1)-(36) que se indican a continuación. Por comodidad, la información en relación de estos antígeno, todos ellos conocidos en la técnica, se indica a continuación e incluye nombres, nombres alternativos, números de registro en Genbank y referencia(s) primarias, siguiendo consensos de identificación de ácido nucleico y de proteínas del Centro Nacional para Información de Biotecnología (NCBI). Las secuencias de ácido nucleico y de proteínas correspondientes a los AAT (1)-(36) están disponibles en las bases de datos públicas, tales como GenBank. Los antígenos asociados a tumores a los que están dirigidos los anticuerpos incluyen variantes de secuencias de aminoácidos e isoformas que poseen una identidad de secuencia de al menos aproximadamente 70 %, 80 %, 85 %, 90 % o 95 % respecto a las secuencias identificadas en las referencias citadas
o que exhiben sustancialmente las mismas propiedades biológicas o características como un ATT que tiene una secuencia encontrada en las referencias citadas. Por ejemplo, un AAT que tiene una secuencia variante generalmente puede unirse a específicamente un anticuerpo que se une específicamente al ATT con la correspondiente secuencia indicada. Las secuencias y divulgación en la referencia citada específicamente en el presente documento se incorporan expresamente por referencia.
ANTÍGENOS ASOCIADOS CON TUMORES (1)-(36):
(1) BMPR1B (receptor de proteína morfogenética ósea de tipo IB, Nº de registro en Genbank NM_001203) ten Dijke, P., y col. Science 264 (5155):101-104 (1994), Oncogene 14 (11):1377-1382 (1997)); documento
WO2004/063362 (Reivindicación 22); documento WO2003/042661 (Reivindicación 12); documento US2003/134790-A1 (Páginas 38-39); documento WO2002/102235 (Reivindicación 13; Página 296); documento WO2003/055443 (Página 91-92); documento WO2002/99122 (Ejemplo 2; Página 528-530); documento WO2003/029421 (Reivindicación 6); documento WO2003/024392 (Reivindicación 2; Fig 112); documento WO2002/98358 (Reivindicación 1; Página 183); documento WO2002/54940 (Página 100-101); documento WO2002/59377(Página 349-350); documento WO2002/30268 (Reivindicación 27; Página 376); documento WO2001/48204 (Ejemplo; Fig 4); NP_001194 receptor de proteína morfogenética ósea de tipo IB /pid=NP_001194.1. Referencias cruzadas: MIM:603248; NP_001194.1; AY065994
(2)
E16 (LAT1, SLC7A5, nº de registro en Genbank NM_003486) Biochem. Biophys. Res. Commun. 255 (2), 283-288 (1999), Nature 395 (6699):288-291 (1998), Gaugitsch, H.W., y col. (1992) J. Biol. Chem. 267 (16):11267-11273); documento WO2004/048938 (Ejemplo 2); documento WO2004/032842 (Ejemplo IV); documento WO2003/042661 (Reivindicación 12); documento WO2003/016475 (Reivindicación 1); documento WO2002/78524 (Ejemplo 2); documento WO2002/99074 (Reivindicación 19; Página 127-129); documento WO2002/86443 (Reivindicación 27; Páginas 222, 393); documento WO2003/003906 (Reivindicación 10; Página 293); documento WO2002/64798 (Reivindicación 33; Página 93-95); documento WO2000/14228 (Reivindicación 5; Página 133-136); documento US2003/224454 (Fig 3); documento WO2003/025138 (Reivindicación 12; Página 150); NP_003477 familia del transportador de solutos 7 (transportador de aminoácidos catiónicos, sistema y+), miembro 5 /pid=NP_003477.3 - Homo sapiens; Referencias cruzadas: MIM:600182; NP_003477.3; NM_015923; NM_003486_1
(3)
STEAP1 (seis antígenos epiteliales transmembrana de la próstata, nº de registro en Genbank NM_012449); Cancer Res. 61 (15), 5857-5860 (2001), Hubert, R.S., y col. (1999) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96 (25):14523-14528); documento WO2004/065577 (Reivindicación 6); documento WO2004/027049 (Fig 1L); EP1394274 (Ejemplo 11); documento WO2004/016225 (Reivindicación 2); documento WO2003/042661 (Reivindicación 12); documento US2003/157089 (Ejemplo 5); documento US2003/185830 (Ejemplo 5); documento US2003/064397 (Fig 2); documento WO2002/89747 (Ejemplo 5; Página 618-619); documento WO2003/022995 (Ejemplo 9; Fig 13A, Ejemplo 53; Página 173, Ejemplo 2; Fig 2A); NP_036581 seis antígenos epiteliales transmembrana de la próstata; Referencias cruzadas: MIM:604415; NP_036581.1; NM_012449_1
(4)
0772P (CA125, MUC16, nº de registro en Genbank AF361486); J. Biol. Chem. 276 (29):27371-27375 (2001)); documento WO2004/045553 (Reivindicación 14); documento WO2002/92836 (Reivindicación 6; Fig 12); documento WO2002/83866 (Reivindicación 15; Página 116-121); documento US2003/124140 (Ejemplo 16); Referencias cruzadas: GI:34501467; AAK74120.3; AF361486_1
(5)
MPF (MPF, MSLN, SMR, factor potenciador de megacariocitos, mesotelina, nº de registro en Genbank NM_005823) Yamaguchi, N., y col. Biol. Chem. 269 (2), 805-808 (1994), Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96 (20):11531-11536 (1999), Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 93 (1):136-140 (1996), J. Biol. Chem. 270 (37):2198421990 (1995)); documento WO2003/101283 (Reivindicación 14); (documento WO2002/102235 (Reivindicación 13; Página 287-288); documento WO2002/101075 (Reivindicación 4; Página 308-309); documento WO2002/71928 (Página 320-321); documento WO94/10312 (Página 52-57); Referencias cruzadas: MIM:601051; NP_005814.2; NM_005823_1
(6)
Napi3b (NAPI-3B, NPTIIb, SLC34A2, familia de transportadores de soluto 34 (fosfato sódico), miembro 2, transportador 3b de fosfato dependiente de sodio de tipo II, nº de registro en Genbank NM_006424) J. Biol. Chem. 277 (22):19665-19672 (2002), Genomics 62 (2):281-284 (1999), Feild, J.A., y col. (1999) Biochem. Biophys. Res. Commun. 258 (3):578-582); documento WO2004/022778 (Reivindicación 2); documento EP1394274 (Ejemplo 11); documento WO2002/102235 (Reivindicación 13; Página 326); documento EP0875569 (Reivindicación 1; Página 17-19); documento WO2001/57188 (Reivindicación 20; Página 329); documento WO2004/032842 (Ejemplo IV); documento WO2001/75177 (Reivindicación 24; Página 139-140); Referencias cruzadas: MIM:604217; NP_006415.1; NM_006424_1
(7)
Sema 5b (FLJ10372, KIAA1445, Mm.42015, SEMA5B, SEMAG, Semaforina 5b Hlog, dominio sema, siete repeticiones de trombospondina (tipo 1 y similar al tipo 1), dominio transmembrana (TM) y dominio citoplásmico corto, (semaforina) 5B, nº de registro en Genbank AB040878); Nagase T., y col. (2000) DNA Res. 7 (2):143-150); documento WO2004/000997 (Reivindicación 1); documento WO2003/003984 (Reivindicación 1); documento WO2002/06339 (Reivindicación 1; Página 50); documento WO2001/88133 (Reivindicación 1; Página 41-43, 48-58); documento WO2003/054152 (Reivindicación 20); documento WO2003/101400 (Reivindicación 11); Registro: Q9P283; EMBL; AB040878; BAA95969.1. Genew; HGNC:10737
(8)
PSCA hlg (2700050C12Rik, C530008O16Rik, RIKEN ADNc 2700050C12, gen RIKEN ADNc 2700050C12, nº de registro en Genbank AY358628); Ross y col. (2002) Cancer Res. 62:2546-2553; documento US2003/129192 (Reivindicación 2); documento US2004/044180 (Reivindicación 12); documento US2004/044179 (Reivindicación 11); documento US2003/096961 (Reivindicación 11); documento
US2003/232056 (Ejemplo 5); documento WO2003/105758 (Reivindicación 12); documento US2003/206918 (Ejemplo 5); documento EP1347046 (Reivindicación 1); documento WO2003/025148 (Reivindicación 20); Referencias cruzadas: GI:37182378; AAQ88991.1; AY358628_1
(9) ETBR (receptor de endotelina de tipo B, Nº de registro en Genbank AY275463); Nakamuta M., y col. Biochem. Biophys. Res. Commun. 177, 34-39, 1991; Ogawa Y., y col. Biochem. Biophys. Res. Commun. 178, 248-255, 1991; Arai H., y col. Jpn. Circ. J. 56, 1303-1307, 1992; Arai H., y col. J. Biol. Chem. 268, 3463-3470, 1993; Sakamoto A., Yanagisawa M., y col. Biochem. Biophys. Res. Commun. 178, 656-663, 1991; Elshourbagy N.A., y col. J. Biol. Chem. 268, 3873-3879, 1993; Haendler B., y col. J. Cardiovasc. Pharmacol. 20, s1-S4, 1992; Tsutsumi M., y col. Gene 228, 43-49, 1999; Strausberg R.L., y col. Proc. Natl. Acad. Sci.
U.S.A. 99, 16899-16903, 2002; Bourgeois C., y col. J. Clin. Endocrinol. Metab. 82, 3116-3123, 1997; Okamoto Y., y col. Biol. Chem. 272, 21589-21596, 1997; Verheij J.B., y col. Am. J. Med. Genet. 108, 223-225, 2002; Hofstra R.M.W., y col. Eur. J. Hum. Genet. 5, 180-185, 1997; Puffenberger E.G., y col. Cell 79, 1257-1266, 1994; Attie T., y col., Hum. Mol. Genet. 4, 2407-2409, 1995; Auricchio A., y col. Hum. Mol. Genet. 5:351-354, 1996; Amiel J., y col. Hum. Mol. Genet. 5, 355-357, 1996; Hofstra R.M.W., y col. Nat. Genet. 12, 445-447, 1996; Svensson P.J., y col. Hum. Genet. 103, 145-148, 1998; Fuchs S., y col. Mol. Med. 7, 115-124, 2001; Pingault V., y col. (2002) Hum. Genet. 111, 198-206; documento WO2004/045516 (Reivindicación 1); documento WO2004/048938 (Ejemplo 2); documento WO2004/040000 (Reivindicación 151); documento WO2003/087768 (Reivindicación 1); documento WO2003/016475 (Reivindicación 1); documento WO2003/016475 (Reivindicación 1); documento WO2002/61087 (Fig 1); documento WO2003/016494 (Fig 6); documento WO2003/025138 (Reivindicación 12; Página 144); documento WO2001/98351 (Reivindicación 1; Página 124-125); documento EP0522868 (Reivindicación 8; Fig 2); documento WO2001/77172 (Reivindicación 1; Página 297-299); documento US2003/109676; documento US6518404 (Fig 3); documento US5773223 (Reivindicación 1a; Col 31-34); documento WO2004/001004
(10)
MSG783 (RNF124, proteína hipotética FLJ20315, nº de registro en Genbank NM_017763); documento WO2003/104275 (Reivindicación 1); documento WO2004/046342 (Ejemplo 2);documento WO2003/042661 (Reivindicación 12); documento WO2003/083074 (Reivindicación 14; Página 61); documento WO2003/018621 (Reivindicación 1); documento WO2003/024392 (Reivindicación 2; Fig 93); documento WO2001/66689 (Ejemplo 6); Referencias cruzadas: LocusID:54894; NP_060233.2; NM_017763_1
(11)
STEAP2 (HGNC_8639, IPCA-1, PCANAP1, STAMP1, STEAP2, STMP, gen 1 asociada con el cáncer de próstata, proteína 1 asociada con el cáncer de próstata, seis antígenos epiteliales transmembrana de próstata 2, seis proteínas prostáticas transmembrana, nº de registro en Genbank AF455138); Lab. Invest. 82 (11):1573-1582 (2002)); documento WO2003/087306; documento US2003/064397 (Reivindicación 1; Fig 1); documento WO2002/72596 (Reivindicación 13; Página 54-55); documento WO2001/72962 (Reivindicación 1; Fig 4B); documento WO2003/104270 (Reivindicación 11); documento WO2003/104270 (Reivindicación 16); documento US2004/005598 (Reivindicación 22); documento WO2003/042661 (Reivindicación 12); documento US2003/060612 (Reivindicación 12; Fig 10); documento WO2002/26822 (Reivindicación 23; Fig 2); documento WO2002/16429 (Reivindicación 12; Fig 10); Referencias cruzadas: GI:22655488; AAN04080.1; AF455138_1
(12)
TrpM4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, canal catiónico potencial receptor transitorio, subfamilia M, miembro 4, nº de registro en Genbank NM_017636); Xu, X.Z., y col. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98 (19):10692-10697 (2001), Cell 109 (3):397-407 (2002), J. Biol. Chem. 278 (33):30813-30820 (2003)); documento US2003/143557 (Reivindicación 4); documento WO2000/40614 (Reivindicación 14; Página 100103); documento WO2002/10382 (Reivindicación 1; Fig 9A); documento WO2003/042661 (Reivindicación 12); documento WO2002/30268 (Reivindicación 27; Página 391); documento US2003/219806 (Reivindicación 4); documento WO2001/62794 (Reivindicación 14; Fig 1A-D); Referencias cruzadas: MIM:606936; NP_060106.2; NM_017636_1
(13)
CRIPTO (CR, CR1, CRGF, CRIPTO, TDGF1, factor de crecimiento derivado de teratocarcinoma, Nº de registro en Genbank NP_003203 o NM_003212); Ciccodicola, A., y col. EMBO J. 8 (7):1987-1991 (1989), Am.
J.
Hum. Genet. 49 (3):555-565 (1991)); documento US2003/224411 (Reivindicación 1); documento WO2003/083041 (Ejemplo 1); documento WO2003/034984 (Reivindicación 12); documento WO2002/88170 (Reivindicación 2; Página 52-53); documento WO2003/024392 (Reivindicación 2; Fig 58); documento WO2002/16413 (Reivindicación 1; Página 94-95, 105); documento WO2002/22808 (Reivindicación 2; Fig 1); documento US5854399 (Ejemplo 2; Col 17-18); documento US5792616 (Fig 2); Referencias cruzadas: MIM:187395; NP_003203.1; NM_003212_1
(14)
CD21 (CR2 (receptor del complemento 2) o C3DR (C3d/receptor del virus de Epstein Barr) o Hs.73792 nº de registro M26004); Fujisaku y col. (1989) J. Biol. Chem. 264 (4):2118-2125); Weis J.J., y col. J. Exp. Med. 167, 1047-1066, 1988; Moore M., y col. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 84, 9194-9198, 1987; Barel M., y col. Mol. Immunol. 35, 1025-1031, 1998; Weis J.J., y col. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 83, 5639-5643, 1986; Sinha S.K., y col. (1993) J. Immunol. 150, 5311-5320; documento WO2004/045520 (Ejemplo 4); documento US2004/005538 (Ejemplo 1); documento WO2003/062401 (Reivindicación 9); documento WO2004/045520
(Ejemplo 4); documento WO91/02536 (Fig 9.1-9.9); documento WO2004/020595 (Reivindicación 1); Registro: P20023; Q13866; Q14212; EMBL; M26004; AAA35786.1.
(15)
CD79b (CD79B, CD79β, IGb (beta asociado con inmunoglobulina), B29, nº de registro en Genbank NM_000626 o 11038674); Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. (2003) 100 (7):4126-4131, Blood (2002) 100 (9):30683076, Muller y col. (1992) Eur. J. Immunol. 22 (6):1621-1625); documento WO2004/016225 (Reivindicación 2, Fig 140); documento WO2003/087768, documento US2004/101874 (Reivindicación 1, Página 102); documento WO2003/062401 (Reivindicación 9); documento WO2002/78524 (Ejemplo 2); documento US2002/150573 (Reivindicación 5, Página 15); documento US5644033; documento WO2003/048202 (Reivindicación 1, Páginas 306 y 309); documentos WO 99/58658, US6534482 (Reivindicación 13, Fig 17A/B); documento WO2000/55351 (Reivindicación 11, Páginas 1145-1146); Referencias cruzadas: MIM:147245; NP_000617.1; NM_000626_1
(16)
FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAP1A (proteína 1a de anclaje de fosfatasa que contiene el dominio SH2), SPAP1B, SPAP1C, nº de registro en Genbank NM_030764, AY358130); Genome Res. 13 (10):2265-2270 (2003), Immunogenetics 54 (2):87-95 (2002), Blood 99 (8):2662-2669 (2002), Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98 (17):9772-9777 (2001), Xu, M.J., y col. (2001) Biochem. Biophys. Res. Commun. 280 (3):768-775; documento WO2004/016225 (Reivindicación 2); documento WO2003/077836; documento WO2001/38490 (Reivindicación 5; Fig 18D-1-18D-2); documento WO2003/097803 (Reivindicación 12); documento WO2003/089624 (Reivindicación 25); Referencias cruzadas: MIM:606509; NP_110391.2; NM_030764_1
(17)
HER2 (ErbB2, nº de registro en Genbank M11730); Coussens L., y col. Science (1985) 230(4730):11321139); Yamamoto T., y col. Nature 319, 230-234, 1986; Semba K., y col. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 82, 6497-6501, 1985; Swiercz J.M., y col. J. Cell Biol. 165, 869-880, 2004; Kuhns J.J., y col. J. Biol. Chem. 274, 36422-36427, 1999; Cho H.-S., y col. Nature 421, 756-760, 2003; Ehsani A., y col. (1993) Genomics 15, 426429; documento WO2004/048938 (Ejemplo 2); documento WO2004/027049 (Fig 1I); documento WO2004/009622; documento WO2003/081210; documento WO2003/089904 (Reivindicación 9); documento WO2003/016475 (Reivindicación 1); documento US2003/118592; documento WO2003/008537 (Reivindicación 1); documento WO2003/055439 (Reivindicación 29; Fig 1A-B); documento WO2003/025228 (Reivindicación 37; Fig 5C); documento WO2002/22636 (Ejemplo 13; Página 95-107); documento WO2002/12341 (Reivindicación 68; Fig 7); documento WO2002/13847 (Página 71-74); documento WO2002/14503 (Página 114-117); documento WO2001/53463 (Reivindicación 2; Página 41-46); documento WO2001/41787 (Página 15); documento WO2000/44899 (Reivindicación 52; Fig 7); documento WO2000/20579 (Reivindicación 3; Fig 2); documento US5869445 (Reivindicación 3; Col 31-38); documento WO9630514 (Reivindicación 2; Página 56-61); documento EP1439393 (Reivindicación 7); documento WO2004/043361 (Reivindicación 7); documento WO2004/022709; documento WO2001/00244 (Ejemplo 3; Fig 4); Registro: P04626; EMBL; M11767; AAA35808.1. EMBL; M11761; AAA35808.1
(18)
NCA (CEACAM6, nº de registro Genbank M18728); Barnett T., y col. Genomics 3, 59-66, 1988; Tawaragi Y., y col. Biochem. Biophys. Res. Commun. 150, 89-96, 1988; Strausberg R.L., y col. Proc. Natl. Acad. Sci.
U.S.A. 99:16899-16903, 2002; documento WO2004/063709; documento EP1439393 (Reivindicación 7); documento WO2004/044178 (Ejemplo 4); documento WO2004/031238; documento WO2003/042661 (Reivindicación 12); documento WO2002/78524 (Ejemplo 2); documento WO2002/86443 (Reivindicación 27; Página 427); documento WO2002/60317 (Reivindicación 2); Registro: P40199; Q14920; EMBL; M29541; AAA59915.1. EMBL; M18728
(19)
MDP (DPEP1, Nº de registro en Genbank BC017023); Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99 (26):16899-16903 (2002)); documento WO2003/016475 (Reivindicación 1); documento WO2002/64798 (Reivindicación 33; Página 85-87); documento JP05003790 (Fig 6-8); documento WO99/46284 (Fig 9); Referencias cruzadas: MIM:179780; AAH17023.1; BC017023_1
(20)
IL20Rα (IL20Ra, ZCYTOR7, Nº de registro en Genbank AF184971); Clark H.F., y col. Genome Res. 13, 2265-2270, 2003; Mungall A.J., y col. Nature 425, 805-811, 2003; Blumberg H., y col. Cell 104, 9-19, 2001; Dumoutier L., y col. J. Immunol. 167, 3545-3549, 2001; Parrish-Novak J., y col. J. Biol. Chem. 277, 4751747523, 2002; Pletnev S., y col. (2003) Biochemistry 42:12617-12624; Sheikh F., y col. (2004) J. Immunol. 172, 2006-2010; documento EP1394274 (Ejemplo 11); documento US2004/005320 (Ejemplo 5); documento WO2003/029262 (Página 74-75); documento WO2003/002717 (Reivindicación 2; Página 63); documento WO2002/22153 (Página 45-47); documento US2002/042366 (Página 20-21); documento WO2001/46261 (Página 57-59); documento WO2001/46232 (Página 63-65); documento WO98/37193 (Reivindicación 1; Página 55-59); Registro: Q9UHF4; Q6UWA9; Q96SH8; EMBL; AF184971; AAF01320.1.
(21)
Brevican (BCAN, BEHAB, Nº de registro en Genbank AF229053); Gary S.C., y col. Gene 256, 139-147, 2000; Clark H.F., y col. Genome Res. 13, 2265-2270, 2003; Strausberg R.L., y col. Proc. Natl. Acad. Sci.
U.S.A. 99, 16899-16903, 2002; documento US2003/186372 (Reivindicación 11); documento US2003/186373 (Reivindicación 11); documento US2003/119131 (Reivindicación 1; Fig 52); documento US2003/119122 (Reivindicación 1; Fig 52); documento US2003/119126 (Reivindicación 1); documento US2003/119121
(Reivindicación 1; Fig 52); documento US2003/119129 (Reivindicación 1); documento US2003/119130 (Reivindicación 1); documento US2003/119128 (Reivindicación 1; Fig 52); documento US2003/119125 (Reivindicación 1); documento WO2003/016475 (Reivindicación 1); documento WO2002/02634 (Reivindicación 1)
(22)
EphB2R (DRT, ERK, Hek5, EPHT3, Tyro5, Nº de registro Genbank NM_004442); Chan,J. y Watt, V.M., Oncogene 6 (6), 1057-1061 (1991) Oncogene 10 (5):897-905 (1995), Annu. Rev. Neurosci. 21:309-345 (1998), Int. Rev. Cytol. 196:177-244 (2000)); documento WO2003042661 (Reivindicación 12); documento WO200053216 (Reivindicación 1; Página 41); documento WO2004065576 (Reivindicación 1); documento WO2004020583 (Reivindicación 9); documento WO2003004529 (Página 128-132); documento WO200053216 (Reivindicación 1; Página 42); Referencias cruzadas: MIM:600997; NP_004433.2; NM_004442_1
(23)
ASLG659 (B7h, Nº de registro Genbank AX092328); documento US2004/0101899 (Reivindicación 2); documento WO2003104399 (Reivindicación 11); documento WO2004000221 (Fig 3); documento US2003/165504 (Reivindicación 1); documento US2003/124140 (Ejemplo 2); documento US2003/065143 (Fig 60); documento WO2002/102235 (Reivindicación 13; Página 299); documento US2003/091580 (Ejemplo 2); documento WO2002/10187 (Reivindicación 6; Fig 10); documento WO2001/94641 (Reivindicación 12; Fig 7b); documento WO2002/02624 (Reivindicación 13; Fig 1A-1B); documento US2002/034749 (Reivindicación 54; Página 45-46); documento WO2002/06317 (Ejemplo 2; Página 320-321, Reivindicación 34; Página 321322); documento WO2002/71928 (Página 468-469); documento WO2002/02587 (Ejemplo 1; Fig 1); documento WO2001/40269 (Ejemplo 3; Páginas 190-192); documento WO2000/36107 (Ejemplo 2; Página 205-207); documento WO2004/053079 (Reivindicación 12); documento WO2003/004989 (Reivindicación 1); documento WO2002/71928 (Página 233-234, 452-453); documento WO 01/16318
(24)
PSCA (precursor del antígeno de células madre prostáticas, nº de registro en Genbank AJ297436); Reiter R.E., y col. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 1735-1740, 1998; Gu Z., y col. Oncogene 19, 1288-1296, 2000; Biochem. Biophys. Res. Commun. (2000) 275(3):783-788; WO2004/022709; EP1394274 (Ejemplo 11); documento US2004/018553 (Reivindicación 17);documento WO2003/008537 (Reivindicación 1);documento WO2002/81646 (Reivindicación 1; Página 164); documento WO2003/003906 (Reivindicación 10; Página 288); documento WO2001/40309 (Ejemplo 1; Fig 17); documento US2001/055751 (Ejemplo 1; Fig 1b); documento WO2000/32752 (Reivindicación 18; Fig 1); documento WO98/51805 (Reivindicación 17; Página 97); documento WO98/51824 (Reivindicación 10; Página 94); documento WO98/40403 (Reivindicación 2; Fig 1B); Registro: O43653; EMBL; AF043498; AAC39607.1
(25)
GEDA (nº de registro en Genbank AY260763); Proteína de tipo pareja de fusión de HMGIC de lipoma ); AAP14954 /pid=AAP14954.1 - Homo sapiens (humano); documento WO2003/054152 (Reivindicación 20); documento WO2003/000842 (Reivindicación 1); documento WO2003/023013 (Ejemplo 3, Reivindicación 20); documento US2003/194704 (Reivindicación 45); Referencias cruzadas: GI:30102449; AAP14954.1; AY260763_1
(26)
BAFF-R (receptor del factor de activación de células B, receptor BLyS 3, BR3, Nº de registro en Genbank AF116456); receptor BAFF /pid=NP_443177.1 - Homo sapiens: Thompson, J.S., y col. Science 293 (5537), 2108-2111 (2001); WO2004/058309; WO2004/011611; WO2003/045422 (Ejemplo; Página 32-33); WO2003/014294 (Reivindicación 35; Fig 6B); WO2003/035846 (Reivindicación 70; Página 615-616); WO2002/94852 (Col 136-137); WO2002/38766 (Reivindicación 3; Página 133); WO2002/24909 (Ejemplo 3; Fig 3); Referencias cruzadas: MIM:606269; NP_443177.1; NM_052945_1; AF132600
(27)
CD22 (receptor CD22 de células B, isoforma B, BL-CAM, Lyb-8, Lyb8, SIGLEC-2, FLJ22814, Nº de registro en Genbank AK026467); Wilson y col. (1991) J. Exp. Med. 173:137-146; documento WO2003/072036 (Reivindicación 1; Fig 1); Referencias cruzadas: MIM:107266; NP_001762.1; NM_001771_1
(28)
CD79a (CD79A, CD79α, alfa asociada con inmunoglobulina, una proteína específica de células B que interacciona covalentemente con Ig beta (CD79B) y forma un complejo sobre la superficie con moléculas de Ig M, transducir una señal implicada en la diferenciación de las células B), pI: 4,84, PM: 25028 TM: 2 [P] Cromosoma génico: 19q13.2, Nº de registro en Genbank NP_001774.10); documento WO2003/088808, documento US2003/0228319; documento WO2003/062401 (Reivindicación 9); documento US2002/150573 (Reivindicación 4, Páginas 13-14); documento WO99/58658 (Reivindicación 13, Fig 16); documento WO92/07574 (Fig 1); documento US5644033; Ha y col. (1992) J. Immunol. 148(5):1526-1531; Müller y col. (1992) Eur. J. Immunol.. 22:1621-1625; Hashimoto y col. (1994) Immunogenetics 40(4):287-295; Preud’homme y col. (1992) Clin. Exp. Immunol. 90(1):141-146; Yu y col. (1992) J. Immunol. 148(2) 633-637; Sakaguchi y col. (1988) EMBO J. 7(11):3457-3464
(29)
CXCR5 (receptor 1 del linfoma de Burkitt, un receptor acoplado a proteína G que está activado por la quimioquina CXCL13, funciona en la migración de linfocitos y la defensa humoral, desempeña un papel en la infección por VIH-2 y, quizá, el desarrollo de SIDA, linfoma, mieloma y leucemia); 372 aa, pI: 8.54 PM: 41959
TM: 7 [P] Cromosoma génico: 11q23.3, nº de registro en Genbank NP_001707.1); documento WO2004/040000; documento WO2004/015426; documento US2003/105292 (Ejemplo 2); documento US6555339 (Ejemplo 2); documento WO2002/61087 (Fig 1); documento WO2001/57188 (Reivindicación 20, Página 269); documento WO2001/72830 (Páginas 12-13); documento WO2000/22129 (Ejemplo 1, Páginas 152-153, Ejemplo 2, Páginas 254-256); documento WO99/28468 (Reivindicación 1, Página 38); documento US5440021 (Ejemplo 2, col 49-52); documento WO94/28931 (Páginas 56-58); documento WO92/17497 (Reivindicación 7, Fig 5); Dobner y col. (1992) Eur. J. Immunol. 22:2795-2799; Barella y col. (1995) Biochem.
J. 309:773-779
(30)
HLA-DOB (subunidad Beta de la molécula de clase II del MHC (antígeno Ia) que se une a los péptidos y los presenta a los linfocitos T CD4+); 273 aa, pI: 6,56, PM: 30820.TM: 1 [P] Cromosoma génico: 6p21.3, Nº de registro en Genbank NP_002111.1); Tonnelle y col. (1985) EMBO J. 4(11):2839-2847; Jonsson y col. (1989) Immunogenetics 29(6):411-413; Beck y col. (1992) J. Mol. Biol. 228:433-441; Strausberg y col. (2002) Proc. Natl. Acad. Sci USA 99:16899-16903; Servenius y col. (1987) J. Biol. Chem. 262:8759-8766; Beck y col. (1996) J. Mol. Biol. 255:1-13; Naruse y col. (2002) Tissue Antigens 59:512-519; WO99/58658 (Reivindicación 13, Fig 15); documento US6153408 (Col 35-38); documento US5976551 (col 168-170); documento US6011146 (col 145-146); Kasahara y col. (1989) Immunogenetics 30(1):66-68; Larhammar y col. (1985) J. Biol. Chem. 260(26):14111-14119
(31)
P2X5 (canal iónico 5 dependiente de ligando P2X del receptor purinérgico, un cana iónico dependiente de ATP extracelular, puede estar implicado en la transmisión sináptica y la neurogénesis, la deficiencia puede contribuir a la fisiopatología de la inestabilidad idiopática del detrusor); 422 aa), pI: 7,63, PM: 47206 TM: 1 [P] Cromosoma génico: 17p13.3, Nº d registro en Genbank NP_002552.2); Le y col. (1997) FEBS Lett. 418(12):195-199; documento WO2004/047749; documento WO2003/072035 (Reivindicación 10); Touchman y col. (2000) Genome Res. 10:165-173; documento WO2002/22660 (reivindicación 20); documento WO2003/093444 (reivindicación 1); documento WO2003/087768 (reivindicación 1); documento WO2003/029277 (página 82)
(32)
CD72 (antígeno CD72 de diferenciación de las células B CD72, Lyb-2); 359 aa, pI: 8,66, PM: 40225, TM: 1 [P] Cromosoma génico: 9p13.3, Nº de registro en Genbank NP_001773.1); documento WO2004042346 (Reivindicación 65); documento WO2003/026493 (Páginas 51-52, 57-58); documento WO2000/75655 (Páginas 105-106); Von Hoegen y col. (1990) J. Immunol. 144(12):4870-4877; Strausberg y col. (2002) Proc. Natl. Acad. Sci USA 99:16899-16903.
(33)
LY64 (antígeno 64 de linfocitos (RP105), proteína de membrana de tipo I de la familia de repeticiones ricas en leucina (LRR), regula la activación y apoptosis de células B, la pérdida de función está asociada con un incremento de la actividad de la enfermedad en pacientes con lupus eritematoso sistémico); 661 aa, pl: 6,20, PM: 74147 TM: 1 [P] Cromosoma génico: 5q12, Nº de registro en Genbank NP_005573.1); documento US2002/193567; documento WO97/07198 (Reivindicación 11, Páginas 39-42); Miura y col. (1996) Genomics 38(3):299-304; Miura y col. (1998) Blood 92:2815-2822; documento WO2003/083047; documento WO97/44452 (Reivindicación 8, Páginas 57-61); documento WO2000/12130 (Páginas 24-26)
(34)
FcRH1 (proteína 1 similar al receptor de Fc, un receptor putativo para el dominio Fc de inmunoglobulina que contiene los dominios ITAM y similar a Ig de tipo C2, pueden tener un papel en la diferenciación de linfocitos B); 429 aa, pI: 5,28, PM: 46925 TM: 1 [P] Cromosoma génico: 1q21-1q22, Nº de registro Genbank NP_443170.1); WO2003/077836; documento WO2001/38490 (Reivindicación 6, Fig 18E-1-18-E-2); Davis y col. (2001) Proc. Natl. Acad. Sci USA 98(17):9772-9777; documento WO2003/089624 (Reivindicación 8); documento EP1347046 (Reivindicación 1); documento WO2003/089624 (Reivindicación 7)
(35)
IRTA2 (receptor 2 de la superfamilia de inmunoglobulimas asociado con la translocación, un inmunoreceptor putativo con posibles papeles en el desarrollo de las células B y la linfomagénesis; en algunas neoplasias de células B se produce alteración de la regulación del gen mediante translocación); 977 aa, pI: 6,88, PM: 106468, TM: 1 [P] Cromosoma génico: 1q21, Nº de registro en Genbank Humano:AF343662, AF343663, AF343664, AF343665, AF369794, AF397453, AK090423, AK090475, AL834187, AY358085; Mouse:AK089756, AY158090, AY506558; NP_112571.1; WO2003/024392 (reivindicación 2, Fig 97); Nakayama y col. (2000) Biochem. Biophys. Res. Commun. 277(1):124-127; documento WO2003/077836; documento WO2001/38490 (reivindicación 3, Fig 18B-1-18B-2)
(36)
TENB2 (TMEFF2, tomoregulina, TPEF, HPP1, TR, proteoglicano transmembrana putativo, relacionado con la familia de EGF/heregulina de factores de crecimiento y folistatina); 374 aa, Registro en NCBI: AAD55776, AAF91397, AAG49451, NCBI RefSeq: NP_057276; NCBI Gene: 23671; OMIM: 605734; SwissProt Q9UIK5; Nº de registro en Genbank AF179274; AY358907, ADC85723, CQ782436; documento WO2004/074320; JP2004113151; documento WO2003/042661; documento WO2003/009814; documento EP1295944 (páginas 69-70); documento WO2002/30268 (página 329); documento WO2001/90304; documento US2004/249130; documento US2004/022727; documento WO2004/063355; documento US2004/197325; documento US2003/232350; documento US2004/005563; documento US2003/124579;
Horie y col. (2000) Genomics 67:146-152; Uchida y col. (1999) Biochem. Biophys. Res. Commun. 266:593602; Liang y col. (2000) Cancer Res. 60:4907-12; Glynne-Jones y col. (2001) Int J Cancer. Oct 15; 94(2):178
84.
El anticuerpo parental también puede ser una proteína de fusión que comprende una secuencia del péptido de unión a albúmina (ABP) (Dennis y col. (2002) “Albumin Binding As A General Strategy For Improving The Pharmacokinetics Of Proteins” J Biol Chem. 277:35035-35043; documento WO 01/45746). Los anticuerpos de la invención incluyen las proteínas de fusión con secuencias de ABP como se describe en: (i) Dennis y col. (2002) J Biol Chem. 277:35035-35043 en las Tablas III y IV, página 35038; (ii) documento US 2004/0001827 en [0076]; y (iii) documento WO 01/45746 en las páginas 12-13, todos los cuales se incorporan en el presente documento por referencia.
En una realización, el anticuerpo se ha producido destinado al antígeno relacionado con tumor av 6.
El agente de unión a célula está conectado al enlazador. En una realización, el agente de unión a célula está conectado con A, cuando está presente, del enlazador.
En una realización, la conexión entre el agente de unión a célula y el enlazador es a través del enlace tioéter.
En una realización, la conexión entre el agente de unión a célula y el enlazador es a través del enlace disulfuro.
En una realización, la conexión entre el agente de unión a célula y el enlazador es a través del enlace amida.
En una realización, la conexión entre el agente de unión a célula y el enlazador es a través del enlace éster.
En una realización, la conexión entre el agente de unión a célula y el enlazador se forma entre un grupo tiol de un residuo de cisteína del agente de unión a célula y un grupo maleimida del enlazador.
Los residuos de cisteína del agente de unión a célula pueden estar disponibles para la reacción con el grupo funcional de RL para formar una conexión. En otras realizaciones, por ejemplo, cuando el agente de unión a célula es un anticuerpo, los grupos tiol del anticuerpo pueden participar en los puentes disulfuro intercatenarios. Estos enlaces intercatenarios pueden convertirse en grupos tiol libres mediante, por ejemplo, tratamiento del anticuerpo con DTT antes de la reacción con el grupo funcional de RL.
El agente de unión a célula se puede marcar para, por ejemplo, ayudar a la detección o purificación del agente, antes de la incorporación como conjugado o como parte del conjugado. El marcador puede ser un marcador de biotina. En otra realización, el agente de unión a célula puede marcarse con un radioisótopo.
R y R’
En una realización, R se selecciona independientemente entre grupos alquilo C1-12 opcionalmente sustituido. grupos heterociclilo C3-20 y grupos C5-20. Estos grupos se definen cada uno en la sección de sustituyentes posterior. En una realización, R es independientemente alquilo C1-12 opcionalmente sustituido. En una realización, R es independientemente heterociclilo C3-20 opcionalmente sustituido. En una realización, R es independientemente arilo C5-20 opcionalmente sustituido. En una realización, R es independientemente alquilo C1-12 opcionalmente sustituido. Se describen anteriormente en relación a R2 diversas realizaciones relacionadas con grupos alquilo y arilo preferidos
y la identidad y número de sustituyentes opcionales. Las preferencias establecidas para R2 según se aplican a R pueden aplicarse, cuando sea adecuado, a todos los grupos R, por ejemplo, cuando R6, R7, R8 o R9 son R.
Las preferencias para R también se aplican a R’. En algunas realizaciones de la invención, se proporciona un compuesto que tiene un grupo sustituyente -NRR’. En una realización, R y R’, junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos, forman un anillo heterocíclico opcionalmente sustituido de 4, 5, 6 ó 7 miembros. El anillo puede contener un heteroátomo adicional, por ejemplo N, O o S.
En una realización, el anillo heterocíclico está sustituido en sí mismo con un grupo R. Cuando un heteroátomo N adicional está presente, el sustituyente puede estar en el heteroátomo N.
R"
R" es un grupo alquileno C3-12, pudiendo estar dicha cadena interrumpida por uno o más heteroátomos, por ejemplo O, S, N(H), NMe y/o anillos aromáticos, por ejemplo benceno o piridina, estando dichos anillos opcionalmente 5 sustituidos.
En una realización, R" es un grupo alquileno C3-12, pudiendo estar dicha cadena interrumpida por uno o más heteroátomos y/o anillos aromáticos, por ejemplo benceno o piridina.
10 En una realización, el grupo alquileno está opcionalmente interrumpido por uno o más heteroátomos seleccionados entre O, S, y NMe y/o anillos aromáticos, estando dichos anillos opcionalmente sustituidos.
En una realización, el anillo aromático es un grupo arileno C5-20, en el que el arileno se refiere a un grupo divalente obtenido por la eliminación de dos átomos de hidrógeno de dos átomos en el anillo aromático de un compuesto 15 aromático, teniendo dicho grupo de 5 a 20 átomos en el anillo.
En una realización, R" es un grupo alquileno C3-12, pudiendo estar dicha cadena interrumpida por uno o más heteroátomos, por ejemplo O, S, N(H), NMe y/o anillos aromáticos, por ejemplo benceno o piridina, cuyos anillos están opcionalmente sustituidos con NH2.
20 En una realización, R" es un grupo alquileno C3-12.
En una realización, R" se selecciona entre un grupo alquileno C3, C5, C7, C9 y C11.
25 En una realización, R" se selecciona entre un grupo alquileno C3, C5 y C7.
En una realización, R" se selecciona entre un grupo alquileno C3 y C5.
En una realización, R" es un grupo alquileno C3. 30 En una realización, R" es un grupo alquileno C5.
Los grupos alquileno indicados anteriormente pueden estar opcionalmente interrumpidos por uno o más heteroátomos y/o anillos aromáticos, por ejemplo benceno o piridina, estando dichos anillos opcionalmente 35 sustituidos.
Los grupos alquileno indicados anteriormente pueden estar opcionalmente interrumpidos por uno o más heteroátomos y/o anillos aromáticos, por ejemplo benceno o piridina.
40 Los grupos alquileno indicados anteriormente pueden ser grupos alquileno alifáticos lineales sin sustituir.
X
En una realización, X se selecciona entre O, S o N(H). 45 Preferentemente, X es O.
Conjugados
50 En una realización, el conjugado es un dímero con el compuesto que tiene la estructura que se muestra a continuación: RC R9" R9 R10
R11"
QR11
Q" N
N H
X"
X
H N
R"
R7 R7
N
R2"
R2
R6"
R6
O O
AB
en la que R2", R6", R7", R9", X", Q" y R11" son como se han definido de acuerdo con R2, R6, R7, R9, X y R11 respectivamente, y RC es un grupo de terminación. En esta realización, cada grupo R10 es un enlazador conectado a 55 un agente de unión a célula, seleccionado entre un anticuerpo, un fragmento de anticuerpo que contiene al menos un sitio de unión y un polipéptido cíclico.
En una realización, el conjugado es un dímero con el compuesto, que tiene la estructura que se muestra a continuación: R9" R10
R9
QR11 N
N H
X"
X
H
R"
R7 R7
N N
R2"
R2
R6"
R6
O O
AC
en la que R2", R6", R7", R9", X" y R11" son como se han definido de acuerdo con R2, R6, R7, R9, X, y R11 5 respectivamente.
Compuestos monoméricos
Rc, Grupo de Terminación
10 El conjugado del primer aspecto de la invención puede tener un grupo de terminación RC en la posición N10.
El grupo RC puede eliminarse de la posición N10 del grupo PBD para dejar un enlace imina N10-C11, una carbinolamina, una carbinolamina sustituida, en la que QR11 es OSO3M, un aducto de bisulfito, una tiocarbinolamina, 15 una tiocarbinolamina sustituida o una carbinalamina sustituida.
En una realización, RC, puede ser un grupo protector que puede eliminarse para dejar un enlace imina N10-C11, una carbinolamina, una carbinolamina sustituida, o, cuando QR11 es OSO3M, un aducto de bisulfito. En una realización, RC es un grupo protector que puede eliminarse para dejar un enlace imina N10-C11.
20 Se pretende que el grupo Rc puede eliminarse en las mismas condiciones que las que se necesitan para eliminar el grupo R10, por ejemplo para producir un enlace imina N10-C11, una carbinolamina y así sucesivamente. El grupo de terminación actúa como un grupo protector para la funcionalidad pretendida en la posición N10. Se pretende que el grupo de terminación no sea reactivo hacia un agente de unión a célula. RC no es lo mismo que RL.
25 Los compuestos que tienen un grupo de terminación se pueden utilizar como intermedios en la síntesis de dímeros que tengan un monómero de imina. Como alternativa, pueden usarse compuestos que tienen un grupo de terminación como conjugados, en los que el grupo de terminación se elimina en la localización diana para producir una imina, una carbinolamina, una carbinolamina sustituida y así sucesivamente. Por lo tanto, en esta realización, el
30 grupo de terminación puede denominarse como un grupo protector de nitrógeno eliminable terapéuticamente, como se define en la solicitud anterior de los inventores WO 00/12507.
En una realización, el grupo RC puede eliminarse en las condiciones que escinden el enlazador RL del grupo R10. Por lo tanto, en una realización, el grupo de terminación puede escindirse mediante la acción de una enzima.
35 En una realización alternativa, el grupo de terminación puede eliminarse antes de la conexión al enlazador RL al agente de unión a célula. En esta realización, el grupo de terminación puede eliminarse en condiciones que no escinden el enlazador RL.
40 Cuando un compuesto incluye un grupo funcional G1 para formar una conexión al agente de unión a célula, el grupo de terminación puede eliminarse antes de la adición o desenmascarado de G1.
El grupo de terminación puede usarse como parte de una estrategia de grupo protector para asegurar que sólo una de las unidades monoméricas en un dímero esté conectada a un agente de unión a célula.
45 El grupo de terminación puede usarse como una máscara para un enlace imina N10-C11. El grupo de terminación puede eliminarse en un momento tal que la funcionalidad imina se necesite en el compuesto. El grupo de terminación también es una máscara para una carbinolamina, una carbinolamina sustituida y un aducto de bisulfito, como se ha descrito anteriormente.
50 RC puede ser un grupo protector de N10, tal como los grupos descritos en la solicitud anterior de los inventores, WO 00/12507. En una realización, RC es un grupo protector de nitrógeno eliminable terapéuticamente, como se define en la solicitud anterior de los inventores, WO 00/12507.
55 En una realización, RC es un grupo protector de carbamato.
En una realización, el grupo protector de carbamato se selecciona entre:
Alloc, Fmoc, Boc, Troc, Teoc, Psec, Cbz y PNZ.
Opcionalmente, el grupo protector de carbamato se selecciona adicionalmente entre Moc.
En una realización, RC es un grupo de enlazador RL que carece del grupo funcional para la conexión al agente de
unión a célula. La presente solicitud se refiere particularmente a aquellos grupos RC que son carbamatos.
En una realización, RC es un grupo:
G2
L3 L2 O *
O
en el que el asterisco indica el punto de unión a la posición N10, G2 es un grupo de terminación, L3 es un enlace covalente o es un enlazador escindible L1, L2 es un enlace covalente o junto con OC(=O) forma un enlazador de auto-destrucción.
Cuando L3 y L2 son ambos enlaces covalente, G2 y OC(=O) forman juntos un grupo protector de carbamato como se ha definido anteriormente.
L1 es como se ha definido anteriormente en relación a R10.
L2 es como se ha definido anteriormente en relación a R10.
Diversos grupos de terminación se describen a continuación, incluyendo los basados en grupos protectores bien conocidos.
En una realización L3 es un enlazador escindible L1, y L2, junto con OC(=O), forma un enlazador de auto-destrucción. En esta realización, G2 es Ac (acetilo) o Moc, o un grupo protector de carbamato seleccionado entre:
Alloc, Fmoc, Boc, Troc, Teoc, Psec, Cbz y PNZ.
Opcionalmente, el grupo protector de carbamato se selecciona adicionalmente entre Moc.
En otra realización, G2 es un grupo acilo -C(=O)G3, en el que G3 se selecciona entre alquilo (incluyendo cicloalquilo, alquenilo y alquinilo), heteroalquilo, heterociclilo y arilo (incluyendo heteroarilo y carboarilo). Estos grupos pueden estar opcionalmente sustituidos. El grupo acilo junto con un grupo amino de L3 o L2, cuando sea adecuado, pueden formar un enlace de amida. El grupo acilo junto con un grupo hidroxi de L3 o L2, cuando sea adecuado, puede formar un enlace de éster.
En una realización, G3 es heteroalquilo. El grupo heteroalquilo puede comprender polietilenglicol. El grupo heteroalquilo puede tener un heteroátomo, tal como O o N, adyacente al grupo acilo, formando de esta manera un grupo carbamato o carbonato, cuando sea adecuado, con un heteroátomo presente en el grupo L3 o L2, cuando sea adecuado.
En una realización, G3 se selecciona entre NH2, NHR y NRR’. Preferentemente, G3 es NRR’.
En una realización G2 es el grupo:
en el que el asterisco indica el punto de unión a L3, n es de 0 a 6 y G4 se selecciona entre OH, OR, SH, SR, COOR, CONH2, CONHR, CONRR’, NH2, NHR, NRR’, NO2 y halo. Los grupos OH, SH, NH2 y NHR están protegidos. En una realización, n es de 1 a 6 y preferentemente n es 5. En una realización, G4 es OR, SR, COOR, CONH2, CONHR, CONRR’ y NRR’. En una realización, G4 es OR, SR, y NRR’. Preferentemente G4 se selecciona entre OR y NRR’, lo más preferido G4 es OR. Más preferentemente G4 es OMe.
En una realización, el grupo G2 es: en el que el asterisco indica el punto de unión a L3, y n y G4 son como se han definido anteriormente. En una realización, el grupo G2 es:
5 en el que el asterisco indica el punto de unión a L3, n es 0 ó 1, m es de 0 a 50, y G4 se selecciona entre OH, OR, SH, SR, COOR, CONH2, CONHR, CONRR’, NH2, NHR, NRR’, NO2 y halo. En una realización preferida, n es 1 y m es de 0 a 10, de 1 a 2, preferentemente de 4 a 8, y lo más preferido 4 u 8. En otra realización, n es 1 y m es de 10 a 50, preferentemente de 20 a 40. Los grupos OH, SH, NH2 y NHR están protegidos. En una realización, G4 es OR, SR, COOR, CONH2, CONHR, CONRR’ y NRR’. En una realización, G4 es OR, SR, y NRR’. Preferentemente G4 se
10 selecciona entre OR y NRR’, lo más preferido G4 es OR. Preferentemente G4 es OMe.
En una realización, el grupo G2 es:
en el que el asterisco indica el punto de unión a L3 y n, m y G4 son como se han definido anteriormente. En una realización, el grupo G2 es:
en el que n es 1-20, m es 0-6 y G4 se selecciona entre OH, OR, SH, SR, COOR, CONH2, CONHR, CONRR’, NH2, 20 NHR, NRR’, NO2 y halo. En una realización, n es 1-10. En otra realización, n es de 10 a 50, preferentemente de 20 a
40. En una realización, n es 1. En una realización, m es 1. Los grupos OH, SH, NH2 y NHR están protegidos. En una realización, G4 es OR, SR, COOR, CONH2, CONHR, CONRR’ y NRR’. En una realización, G4 es OR, SR, y NRR’. Preferentemente G4 se selecciona entre OR y NRR’, lo más preferido G4 es OR. Preferentemente G4 es OMe.
25 En una realización, el grupo G2 es:
en el que el asterisco indica el punto de unión a L3 y n, m y G4 son como se han definido anteriormente.
En cada una de las realizaciones anteriores G4 puede ser OH, SH, NH2 y NHR. Preferentemente, estos grupos están 30 protegidos.
En una realización, OH está protegido con Bzl, TBDMS o TBDPS.
En una realización, SH está protegido con Acm, Bzl, Bzl-OMe, Bzl-Me o Trt. 35 En una realización, NH2 o NHR están protegidos con Boc, Moc, Z-Cl, Fmoc, Z o Alloc.
En una realización, el grupo G2 está presente junto con un grupo L3, siendo dicho grupo un dipéptido.
40 No se pretende que el grupo de terminación se conecte al agente de unión a célula. Por lo tanto, el otro monómero presente en el dímero sirve como el punto de conexión al agente de unión a célula mediante un enlazador. Por consiguiente, se prefiere que la funcionalidad presente en el grupo de terminación no esté disponible para la reacción con un agente de unión a célula. Por lo tanto, prefieren evitarse grupos funcionales reactivos, tales como OH, SH, NH2, COOH. Sin embargo, dicha funcionalidad puede estar presente en el grupo de terminación si se
45 protege, como se ha descrito anteriormente.
En la preparación de los compuestos de la invención, el grupo de terminación puede usarse para preparar un enlazador RL.
Una realización de ejemplo de un compuesto conjugado anticuerpo-fármaco (ADC) comprende un anticuerpo (Ab), y 5 un grupo farmacológico PBD (PBD) en el que el anticuerpo está unido mediante un grupo enlazador (L) a PBD; teniendo la composición la fórmula:
Ab−(L−PBD)p en la que p es un número entero de 1 a aproximadamente 8, y representa la carga de fármaco. Si Ab es un anticuerpo manipulado con cisteína, el número de grupos farmacológicos que pueden conjugarse mediante un grupo
10 enlazador reactivo de tiol a una molécula de anticuerpo está limitado por el número de residuos de cisteína que se introducen mediante los procedimientos descritos en el presente documento. Por tanto, los ADC de ejemplo comprenden anticuerpos que tienen 1, 2, 3 ó 4 aminoácidos de cisteína manipulados.
Compuestos Preferidos
15 En una realización, el conjugado es un dímero en el que cada uno de los monómeros tiene un grupo metileno C2, es decir, cada R2 es =CH2. Se prefiere que el agente de unión a célula sea un anticuerpo.
En otra realización, el conjugado es un dímero en el que cada uno de los monómeros tiene un grupo arilo C2, es 20 decir, cada R2 es arilo C5-20 opcionalmente sustituido. Se prefiere que el agente de unión a célula sea un anticuerpo.
Alquileno C2
En una realización, el conjugado es un compuesto:
L1
L2 O N O
O n
RE"
RE
OMe MeO OO25 en el que CBA es un agente de unión a célula, tal como un anticuerpo o un péptido cíclico, y n es 0 ó 1. L1 y L2 son como se han definido anteriormente, y cada uno de RE y RE" se selecciona independientemente entre H o RD.
En una realización, el conjugado es un compuesto:
G2
L1 L1
L2
L2 O
O
O HO O
O n
RE"
RE
OMe MeO OO30 en el que CBA es un agente de unión a célula, tal como un anticuerpo o un péptido cíclico, y n es 0 ó 1. L1, L2 y G2 son como se han definido anteriormente, y cada uno de RE y RE" se selecciona independientemente entre H o RD.
En una realización, el conjugado es un compuesto: en el que CBA es un agente de unión a célula, tal como un anticuerpo o un péptido cíclico, y n es 0 ó 1. L1 es como se ha definido anteriormente, y cada uno de RE y RE" se selecciona independientemente entre H o RD.
En una realización, el conjugado es un compuesto:
S
O O
N
L1 O HN
O NO OH
n
RE"
REN OMe MeO
OO en el que CBA es un agente de unión a célula, tal como un anticuerpo o un péptido cíclico, y n es 0 ó 1. L1 es como se ha definido anteriormente, y cada uno de RE y RE" se selecciona independientemente entre H o RD.
En una realización, el conjugado es un compuesto: O
n
L1
O HN
O
H
N
OOO
NO OH
n
RE"
REN OMe MeO
OO en el que CBA es un agente de unión a célula, tal como un anticuerpo o un péptido cíclico, y n es 0 ó 1. L1 es como se ha definido anteriormente, y cada uno de RE y RE" se selecciona independientemente entre H o RD.
En una realización, el conjugado es un compuesto: O
n
L1 S O HN
O
H
NN
O
OO
NO
O
H
n
RE"
RE
N OMe MeO
OO en el que CBA es un agente de unión a célula, tal como un anticuerpo o un péptido cíclico, y n es 0 ó 1. L1 es como 5 se ha definido anteriormente, y cada uno de RE y RE" se selecciona independientemente entre H o RD.
Para cada uno de los compuestos anteriores, las siguientes preferencias pueden aplicarse, cuando sea adecuado:
n es 0;
10 n es 1; RE es H; RE es RD, en el que RD es alquilo opcionalmente sustituido; RE es RD, en el que RD es metilo; CBA es un anticuerpo;
15 CBA es un péptido cíclico; L1 es o comprende un dipéptido; L1 es (H2N)-Val-Ala-(CO) o (H2N)-Phe-Lys-(CO), en el que (H2N) y (CO) indican los terminales N y C
respectivos; L2 es p-aminobencileno; 20 G2 se selecciona entre Alloc, Fmoc, Boc, Troc, Teoc, Psec, Cbz y PNZ.
Las siguientes preferencias también pueden aplicarse, además de las preferencias anteriores:
G2 es:
O25 en el que el asterisco indica el punto de unión al extremo N-terminal de L1; A es:
en el que el asterisco indica el punto de unión al extremo N-terminal de L1, la línea ondulada indica el punto de unión 30 al agente de unión a célula y m es 4 u 8;
A es
m
OO
O
*
NN
H
O
O
S
En una realización particularmente preferida, n es 1; RE es H; CBA es un anticuerpo; L1 es (H2N)-Val-Ala-(CO) o (H2N)-Phe-Lys-(CO), en los que (H2N) y (CO) indican los extremos terminales N y C respectivos; L2 es paminobencileno; G2 es:
en el que el asterisco indica el punto de unión al extremo N-terminal de L1; y A es
8
OO
O
*
NN
H
O
O
S
en el que el asterisco indica el punto de unión al extremo N-terminal de L1, y la línea ondulada indica el punto de unión al agente de unión a célula. 10 Arilo C2 En una realización, el conjugado es un compuesto:
en el que CBA es un agente de unión a célula, tal como un anticuerpo o un péptido cíclico, L1 y L2 son como se han 15 definido anteriormente, cada uno de Ar1 y Ar2 es independientemente arilo C5-20 opcionalmente sustituido, y n es 0 ó
1. Ar1 y Ar2 pueden ser iguales o diferentes.
20 en el que CBA es un agente de unión a célula, tal como un anticuerpo o un péptido cíclico, L1, L2 y G2 son como se han definido anteriormente, cada uno de Ar1 y Ar2 es independientemente arilo C5-20 opcionalmente sustituido y n es 0 ó 1.
En una realización, el conjugado es un compuesto: en el que CBA es un agente de unión a célula, tal como un anticuerpo o un péptido cíclico, L1 es como se ha definido anteriormente, cada uno de Ar1 y Ar2 es independientemente arilo C5-20 opcionalmente sustituido y n es 0 ó 1.
En una realización, el conjugado es un compuesto:
O O S
N
L1 O HN
O N O OH
n
N OMe MeO Ar1 Ar2
OO en el que CBA es un agente de unión a célula, tal como un anticuerpo o un péptido cíclico, L1 es como se ha definido anteriormente, cada uno de Ar1 y Ar2 es independientemente arilo C5-20 opcionalmente sustituido y n es 0 ó 1.
10 En una realización, el conjugado es un compuesto: O
n L1 O HN
O
H
N O
OO NO
OH n
N OMe MeO Ar1 Ar2
OO en el que CBA es un agente de unión a célula, tal como un anticuerpo o un péptido cíclico, y n es 0 ó 1. L1 es como se ha definido anteriormente, cada uno de Ar1 y Ar2 es independientemente arilo C5-20 opcionalmente sustituido y n es 0 ó 1.
15 En una realización, el conjugado es un compuesto:
O
n
L1 S O HN
O
H
NN
O
OO
NO
O
H
n
N OMe MeO Ar1
Ar2 OO en el que CBA es un agente de unión a célula, tal como un anticuerpo o un péptido cíclico y n es 0 ó 1. L1 es como 5 se ha definido anteriormente, cada uno de Ar1 y Ar2 es independientemente arilo C5-20 opcionalmente sustituido y n es 0 ó 1.
En una realización, Ar1 y Ar2 en cada una de las realizaciones anteriores, se selecciona cada uno independientemente entre fenilo, furanilo, tiofenilo y piridilo opcionalmente sustituidos. 10 En una realización, Ar1 y Ar2 en cada una de las realizaciones anteriores es fenilo opcionalmente sustituido.
En una realización, Ar1 y Ar2 en cada una de las realizaciones anteriores es tiofen-2-ilo o tiofen-3-ilo opcionalmente sustituidos.
15 En una realización, Ar1 y Ar2 en cada una de las realizaciones anteriores es quinolinilo o isoquinolinilo opcionalmente sustituidos.
El grupo quinolinilo o isoquinolinilo puede estar enlazado al núcleo de PBD a través de cualquier posición del anillo
20 disponible. Por ejemplo, el quinolinilo puede ser quinolin-2-ilo, quinolin-3-ilo, quinolin-4ilo, quinolin-5-ilo, quinolin-6ilo, quinolin-7-ilo y quinolin-8-ilo. De estos, pueden preferirse quinolin-3-ilo y quinolin-6-ilo. El isoquinolinilo puede ser isoquinolin-1-ilo, isoquinolin-3-ilo, isoquinolin-4ilo, isoquinolin-5-ilo, isoquinolin-6-ilo, isoquinolin-7-ilo e isoquinolin-8ilo. De estos, pueden preferirse isoquinolin-3-ilo e isoquinolin-6-ilo.
25 Vinilo C2
En una realización, el conjugado es un compuesto:
en el que CBA es un agente de unión a célula, tal como un anticuerpo o un péptido cíclico, L1 y L2 son como se han
30 definido anteriormente, RV1 y RV2 se seleccionan independientemente entre H, metilo, etilo y fenilo (pudiendo estar el fenilo opcionalmente sustituido con flúor, particularmente en la posición 4) y heterociclilo C5-6, y n es 0 ó 1, RV1 y RV2 pueden ser iguales o diferentes.
En una realización, el conjugado es un compuesto: en el que CBA es un agente de unión a célula, tal como un anticuerpo o un péptido cíclico, L1, L2 y G2 son como se han definido anteriormente, RV1 y RV2 se seleccionan independientemente entre H, metilo, etilo y fenilo (pudiendo estar el fenilo opcionalmente sustituido con flúor, particularmente en la posición 4) y heterociclilo C5-6, y n es 0 ó 1, RV1 y RV2 pueden ser iguales o diferentes.
En una realización, el conjugado es un compuesto:
en el que CBA es un agente de unión a célula, tal como un anticuerpo o un péptido cíclico, L1 es como se ha definido
10 anteriormente, RV1 y RV2 se seleccionan independientemente entre H, metilo, etilo y fenilo (pudiendo estar el fenilo opcionalmente sustituido con flúor, particularmente en la posición 4) y heterociclilo C5-6, y n es 0 ó 1, RV1 y RV2 pueden ser iguales o diferentes.
En una realización, el conjugado es un compuesto:
OO15 en el que CBA es un agente de unión a célula, tal como un anticuerpo o un péptido cíclico, L1 es como se ha definido
anteriormente, RV1 y RV2 se seleccionan independientemente entre H, metilo, etilo y fenilo (pudiendo estar el fenilo opcionalmente sustituido con flúor, particularmente en la posición 4) y heterociclilo C5-6, y n es 0 ó 1, RV1 y RV2 pueden ser iguales o diferentes.
En una realización, el conjugado es un compuesto:
en el que CBA es un agente de unión a célula, tal como un anticuerpo o un péptido cíclico, y n es 0 ó 1. L1 es como se ha definido anteriormente, RV1 y RV2 se seleccionan independientemente entre H, metilo, etilo y fenilo (pudiendo estar el fenilo opcionalmente sustituido con flúor, particularmente en la posición 4) y heterociclilo C5-6 y n es 0 ó 1,
10 RV1 y RV2 pueden ser iguales o diferentes.
En una realización, el conjugado es un compuesto: O
n
L1 S O HN
O
H
NN O
OO N O
O n
RV1 RV2
OO en el que CBA es un agente de unión a célula, tal como un anticuerpo o un péptido cíclico y n es 0 ó 1. L1 es como 15 se ha definido anteriormente, RV1 y RV2 se seleccionan independientemente entre H, metilo, etilo y fenilo (pudiendo estar el fenilo opcionalmente sustituido con flúor, particularmente en la posición 4) y heterociclilo C5-6, y n es 0 ó 1, RV1 y RV2 pueden ser iguales o diferentes.
En algunas de las realizaciones anteriores, RV1 y RV2 pueden seleccionarse independientemente entre H, fenilo y 420 fluorofenilo.
OMe MeO
Intermedios Preferidos
La presente invención también proporciona intermedios para su uso en la preparación de los compuestos 25 conjugados que se describen en el presente documento.
Se describen a continuación intermedios preferidos y se corresponden estrechamente con los conjugados preferidos descritos anteriormente.
30 En una realización, el intermedio es un compuesto:
G1
L1
L2 O N O
O n
RE"
RE
OMe MeO
OO en el que n es 0 ó 1, G1, L1 y L2 son como se han definido anteriormente, y cada uno de RE y RE" se selecciona independientemente entre H o RD.
5 En una realización, el intermedio es un compuesto: G1
L1
L2 O N O
OH
n
N OMe MeO Ar1 Ar2
OO en el que G1, L1 y L2 son como se han definido anteriormente, cada uno de Ar1 y Ar2 es independientemente arilo C520 opcionalmente sustituido, y n es 0 ó 1. Ar1 y Ar2 pueden ser iguales o diferentes.
10 En una realización, el intermedio es un compuesto: G1
L1
L2 O N O
O n
RV2
OMe MeO
RV1
OO en el que G1, L1 y L2 son como se han definido anteriormente, RV1 y RV2 se seleccionan independientemente entre H, metilo, etilo y fenilo (pudiendo estar el fenilo opcionalmente sustituido con flúor, particularmente en la posición 4) y heterociclilo C5-6, y n es 0 ó 1. RV1 y RV2 pueden ser iguales o diferentes. 15 En una realización, el intermedio es un compuesto:
en el que n es 0 ó 1. L1 es como se ha definido anteriormente y cada uno de RE y RE" se selecciona independientemente entre H o RD.
5 En una realización, el intermedio es un compuesto: O O
N
L1 O HN
O N O OH
n
N OMe MeO Ar1 Ar2
OO en el que L1 es como se ha definido anteriormente, cada uno de Ar1 y Ar2 es independientemente arilo C5-20 opcionalmente sustituido, y n es 0 ó 1.
10 En una realización, el intermedio es un compuesto:
en el que L1 es como se ha definido anteriormente, y RV1 y RV2 se seleccionan independientemente entre H, metilo, etilo y fenilo (pudiendo estar el fenilo opcionalmente sustituido con flúor, particularmente en la posición 4) y heterociclilo C5-6 y n es 0 ó 1. RV1 y RV2 pueden ser iguales o diferentes.
En una realización, el intermedio es un compuesto: O
n L1 O HN
O
H
NN O
OO NO
OH
n RE"
RE
N OMe MeO
OO en el que n es 0 ó 1. L1 es como se ha definido anteriormente, y cada uno de RE y RE" se selecciona independientemente entre H o RD. 5 En una realización, el intermedio es un compuesto: O
n L1 O HN
O
H
NN O
OO NO
OH
n
N OMe MeO Ar1 Ar2
OO en el que n es 0 ó 1. L1 es como se ha definido anteriormente, cada uno de Ar1 y Ar2 es independientemente arilo C520 opcionalmente sustituido y n es 0 ó 1.
10 En una realización, el intermedio es un compuesto: O
n L1 O HN
O
H
NN O
OO N O
O n
RV2
OO en el que L1 es como se ha definido anteriormente, RV1 y RV2 se seleccionan independientemente entre H, metilo, etilo y fenilo (pudiendo estar el fenilo opcionalmente sustituido con flúor, particularmente en la posición 4) y 15 heterociclilo C5-6 y n es 0 ó 1. RV1 y RV2 pueden ser iguales o diferentes.
OMe MeO
RV1
Sustituyentes
La expresión "opcionalmente sustituido", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo precursor que puede estar sin sustituir o que puede estar sustituido.
A menos que se especifique otra cosa, el término "sustituido", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo precursor que porta uno o más sustituyentes. El término "sustituyente" se usa en el presente documento en el sentido convencional y se refiere a un grupo químico que está unido covalentemente a, o si fuera adecuado, condensado a, un grupo precursor. Se conocen bien una amplia variedad de sustituyentes y también se conocen bien procedimientos para su formación e introducción en una diversidad de grupos precursores.
En una realización preferida, los sustituyentes descritos en el presente documento (que incluyen sustituyentes opcionalmente) se limitan a aquellos grupos que no son reactivos con un agente de unión a célula. El enlazador al agente de unión a célula en el presente caso se forma a partir de la posición N10 del compuesto PBD a través de un grupo de enlazador (que comprende, por ejemplo, L1, L2 y A) al agente de unión a célula. Los grupos funcionales reactivos localizados en otras partes de la estructura de PBD pueden ser capaces de formar enlaces adicionales al agente de unión a célula (esto puede denominarse como reticulación). Estos enlaces adicionales pueden alterar el transporte y la actividad biológica del conjugado. Por lo tanto, en alguna realización, los sustituyentes adicionales se limitan a los que carecen de funcionalidad reactiva.
En una realización, los sustituyentes se seleccionan del grupo que consiste en R, OR, SR, NRR’, NO2, halo, CO2R, COR, CONH2, CONHR y CONRR’.
En una realización, los sustituyentes se seleccionan del grupo que consiste en R, OR, SR, NRR’, NO2, CO2R, COR, CONH2, CONHR y CONRR’.
En una realización, los sustituyentes se seleccionan del grupo que consiste en R, OR, SR, NRR’, NO2 y halo.
En una realización, los sustituyentes se seleccionan del grupo que consiste en R, OR, SR, NRR’ y NO2.
Una cualquiera de las realizaciones mencionadas anteriormente puede aplicarse a uno cualquiera de los sustituyentes descritos en el presente documento. Como alternativa, los sustituyentes pueden seleccionarse entre uno cualquiera o mas de los grupos enumerados a continuación.
A continuación se describen con mayor detalle ejemplos de sustituyentes.
Alquilo C1-12: La expresión "C1-12 alquilo", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo monovalente obtenido mediante la eliminación de un átomo de hidrógeno de un átomo de carbono de un compuesto hidrocarburo que tiene de 1 a 12 átomos de carbono, que puede ser alifático o alicíclico, y que puede ser saturado o insaturado (por ejemplo, parcialmente insaturado, totalmente insaturado). Por lo tanto, el término "alquilo" incluye las subclases alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, etc., expuestas a continuación.
Los ejemplos de grupos alquilo saturados incluyen, pero sin limitación, metilo (C1), etilo (C2), propilo (C3), butilo (C4), pentilo (C5), hexilo (C6) y heptilo (C7).
Los ejemplos de grupos alquilo lineales saturados incluyen, pero sin limitación, metilo (C1), etilo (C2), n-propilo (C3), n-butilo (C4), n-pentilo (amilo) (C5), n-hexilo (C6) y n-heptilo (C7).
Los ejemplos de grupos alquilo ramificados saturados incluyen iso-propilo (C3), iso-butilo (C4), sec-butilo (C4), tercbutilo (C4), iso-pentilo (C5) y neo-pentilo (C5).
Un grupo alquilo puede estar opcionalmente interrumpido por uno o más heteroátomos seleccionados entre O, N(H) y S. Dichos grupos puede denominarse como "heteroalquilo".
Heteroalquilo C2-20: La expresión "heteroalquilo C2-12 ", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo monovalente obtenido mediante la eliminación de un átomo de hidrógeno de un átomo de carbono de un compuesto hidrocarburo que tiene de 2 a 12 átomos de carbono, uno o más heteroátomos seleccionados entre O, N(H) y S, preferentemente O y S.
Los ejemplos de grupos heteroalquilo incluyen, pero sin limitación, los que comprenden una o más unidades de etilenglicol del tipo -(OCH2CH2)-. El terminal de un grupo heteroalquilo puede ser la forma primaria de un heteroátomo, por ejemplo -OH, -SH o -NH2. En una realización preferida, el terminal es -CH3.
Alquenilo C2-12: La expresión "alquenilo C2-12", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo que tiene uno o más dobles enlaces carbono-carbono.
Los ejemplos de grupos alquenilo insaturados incluyen, pero sin limitación, etenilo (vinilo, -CH=CH2), 1-propenilo (-CH=CH-CH3), 2-propenilo (alilo, -CH-CH=CH2), isopropenilo (1-metilvinilo, -C(CH3)=CH2), butenilo (C4), pentenilo
(C5) y hexenilo (C6).
Alquinilo C2-12: La expresión "alquinilo C2-12", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo que tiene uno o más triples enlaces carbono-carbono.
Los ejemplos de grupos alquinilo insaturados incluyen, pero sin limitación, etinilo (-C=CH) y 2-propinilo (propargilo, CH2-C=CH).
Cicloalquilo C3-12: La expresión "cicloalquilo C3-12 ", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo que también es un grupo ciclilo; es decir, un grupo monovalente obtenido mediante la eliminación de un átomo de hidrógeno de un átomo de anillo alicíclico de un compuesto hidrocarburo cíclico (carbocíclico), teniendo dicho grupo de 3 a 7 átomos de carbono, incluyendo de 3 a 7 átomos en el anillo.
Los ejemplos de grupos cicloalquilo incluyen, pero sin limitación, los obtenidos a partir de:
compuestos de hidrocarburo monocíclico saturado: ciclopropano (C3), ciclobutano (C4), ciclopentano (C5), ciclohexano (C6), cicloheptano (C7), metilciclopropano (C4), dimetilciclopropano (C5), metilciclobutano (C5), dimetilciclobutano (C6), metilciclopentano (C6), dimetilciclopentano (C7) y metilciclohexano (C7); compuestos de hidrocarburo monocíclco insaturado: ciclopropeno (C3), ciclobuteno (C4), ciclopenteno (C5), ciclohexeno (C6), metilciclopropeno (C4), dimetilciclopropeno (C5), metilciclobuteno (C5), dimetilciclobuteno (C6), metilciclopenteno (C6), dimetilciclopenteno (C7) y metilciclohexeno (C7); y compuestos de hidrocarburo policíclico saturado: norcarano (C7), norpinano (C7), norbornano (C7).
Heterociclilo C3-20: La expresión "Heterociclilo C3-20", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo monovalente obtenido mediante la eliminación un átomo de hidrógeno de un átomo del anillo de un compuesto heterocíclico, teniendo dicho grupo de 3 a 20 átomos en el anillo, de los que de 1 a 10 son heteroátomos en el anillo. Preferentemente, cada anillo tiene de 3 a 7 átomos en el anillo, de los que de 1 a 4 son heteroátomos en el anillo.
En este contexto, los sufijos (por ejemplo, C3-20, C3-7, C5-6, etc.) indican el número de átomos en el anillo, o intervalo de número de átomos en el anillo, tanto átomos de carbono como heteroátomos. Por ejemplo, la expresión "heterociclilo C5-6", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo heterociclilo que tiene 5 ó 6 átomos en el anillo.
Los ejemplos de grupos heterociclilo monocíclicos incluyen, pero sin limitación, los obtenidos a partir de:
N1: aziridina (C3), azetidina (C4), pirrolidina (tetrahidropirrol) (C5), pirrolina (por ejemplo, 3-pirrolina, 2,5-dihidropirrol) (C5), 2H-pirrol o 3H-pirrol (isopirrol, isoazol) (C5), piperidina (C6), dihidropiridina (C6), tetrahidropiridina (C6), azepina (C7); O1: oxirano (C3), oxetano (C4), oxolano (tetrahidrofurano) (C5), oxol (dihidrofurano) (C5), oxano (tetrahidropirano) (C6), dihidropirano (C6), pirano (C6), oxepina (C7); S1: tiirano (C3), tietano (C4), tiolano (tetrahidrotiofeno) (C5), tiano (tetrahidrotiopiran) (C6), tiepano (C7); O2: dioxolano (C5), dioxano (C6) y dioxepano (C7); O3: trioxano (C6); N2: imidazolidina (C5), pirazolidina (diazolidina) (C5), imidazolina (C5), pirazolina (dihidropirazol) (C5), piperazina (C6); N1O1: tetrahidrooxazol (C5), dihidrooxazol (C5), tetrahidroisoxazol (C5), dihidroisoxazol (C5), morfolina (C6), tetrahidrooxazina (C6), dihidrooxazina (C6), oxazina (C6); N1S1: tiazolina (C5), tiazolidina (C5), tiomorfolina (C6); N2O1: oxadiazina (C6); O1S1: oxatiol (C5) y oxatiano (tioxano) (C6); y, N1O1S1: oxatiazina (C6).
Los ejemplos de grupos heterociclilo monocíclicos sustituidos incluyen los obtenidos a partir de sacáridos, en forma cíclica, por ejemplo, furanosas (C5), tales como arabinofuranosa, lixofuranosa, ribofuranosa y xilofuransa, y piranosas (C6), tales como alopiranosa, altropiranosa, glucopiranosa, mannopiranosa, gulopiranosa, idopiranosa, galactopiranosa, y talopiranosa.
Arilo C5-20: La expresión "arilo C5-20", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo monovalente obtenido mediante la eliminación un átomo de hidrógeno de un átomo de anillo aromático de un compuesto aromático, teniendo dicho grupo de 3 a 20 átomos en el anillo. Preferentemente, cada anillo tiene de 5 a 7 átomos en el anillo.
En este contexto los sufijos (por ejemplo, C3-20, C5-7, C5-6, etc.) indican el número de átomos en el anillo, o intervalo del número de átomos en el anillo, tanto átomos de carbono como heteroátomos. Por ejemplo, la expresión "arilo C5-6 ", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo arilo que tiene 5 ó 6 átomos en el anillo.
Los átomos en el anillo pueden ser todos átomos de carbono, como en "grupos carboarilo".
Los ejemplos de grupos carboarilo incluyen, pero sin limitación, los obtenidos a partir de benceno (es decir fenilo) (C6), naftaleno (C10), azuleno (C10), antraceno (C14), fenantreno (C14), naftaceno (C18) y pireno (C16).
Los ejemplos de grupos arilo que comprenden anillos condensados, siendo al menos uno de los mismos aromático, incluyen, pero sin limitación, grupos obtenidos a partir de indano (por ejemplo, 2,3-dihidro-1H-indeno) (C9), indeno (C9), isoindeno (C9), tetralina (1,2,3,4-tetrahidronaftaleno (C10), acenafteno (C12), fluoreno (C13), fenaleno (C13), acefenantreno (C15) y aceantreno (C16).
Como alternativa, los átomos en el anillo pueden incluir uno o más heteroátomos, como en "grupos heteroarilo". Los ejemplos de grupos heteroarilo monocíclicos incluyen, pero sin limitación, los obtenidos a partir de:
N1: pirrol (azol) (C5), piridina (azina) (C6); O1: furano (oxol) (C5); S1: tiofeno (tiol) (C5); N1O1: oxazol (C5), isoxazol (C5), isoxazina (C6); N2O1: oxadiazol (furazano) (C5); N3O1: oxatriazol (C5); N1S1: tiazol (C5), isotiazol (C5); N2: imidazol (1,3-diazol) (C5), pirazol (1,2-diazol) (C5), piridazina (1,2-diazina) (C6), pirimidina (1,3-diazina) (C6) (por ejemplo, citosina, timina, uracilo), pirazina (1,4-diazina) (C6); N3: triazol (C5), triazina (C6); y N4: tetrazol (C5).
Los ejemplos de heteroarilo que comprenden anilos condensados, incluyen, pero sin limitación:
C9 (con 2 anillos condensados) obtenido a partir de benzofurano (O1), isobenzofurano (O1), indol (N1), isoindol (N1), indolizina (N1), indolina (N1), isoindolina (N1), purina (N4) (por ejemplo, adenina, guanina), benzoimidazol (N2), indazol (N2), benzoxazol (N1O1), benzoisoxazol (N1O1), benzodioxol (O2), benzofurazano (N2O1), benzotriazol (N3), benzotiofurano (S1), benzotiazol (N1S1), benzotiadiazol (N2S); C10 (con 2 anillos condensados) obtenidos a partir de cromeno (O1), isocromeno (O1), cromano (O1), isocromano (O1), benzodioxano (O2), quinolina (N1), isoquinolina (N1), quinolizina (N1), benzoxazina (N1O1), benzodiazina (N2), piridopiridina (N2), quinoxalina (N2), quinazolina (N2), cinnolina (N2), ftalazina (N2), naftiridina (N2), pteridina (N4); C11 (con 2 anillos condensados) obtenidos a partir de benzodiazepina (N2); C13 (con 3 anillos condensados) obtenidos a partir de carbazol (N1), dibenzofurano (O1), dibenzotiofeno (S1), carbolina (N2), perimidina (N2), piridoindol (N2); y, C14 (con 3 anillos condensados) obtenios a partir de acridina (N1), xanteno (O1), tioxanteno (S1), oxantreno (O2), fenoxatiina (O1S1), fenazina (N2), fenoxazina (N1O1), fenotiazina (N1S1), tiantreno (S2), fenantridina (N1), fenantrolina (N2), fenazina (N2).
Los grupos anteriores, tanto solos o como parte de otros sustituyentes, pueden estar en sí mismos sustituidos con uno o más grupos seleccionados entre ellos mismos y los sustituyentes adicionales que se enumeran a continuación.
Halo: -F, -Cl, -Br y -I.
Hidroxi: -OH.
Éter: -OR, en el que R es un sustituyente de éter, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7 (también denominado como un grupo alcoxi C1-7, descrito más adelante), un grupo heterociclilo C3-20 (también denominado como un grupo heterocicliloxi C3-20), o un grupo arilo C5-20 (también denominado como un grupo ariloxi C5-20), preferentemente un grupo alquilo C1-7.
Alcoxi: -OR, en el que R es un grupo alquilo, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos alcoxi C1-7 incluyen, pero sin limitación, -OMe (metoxi), -OEt (etoxi), -O(nPr) (n-propoxi), -O(iPr) (isopropoxi), -O(nBu) (n-butoxi), -O(sBu) (sec-butoxi), -O(iBu) (isobutoxi) y-O(tBu) (terc-butoxi).
Acetal: -CH(OR1)(OR2), en el que R1 y R2 son independientemente sustituyentes acetal, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7, o, en el caso de un grupo acetal "cíclico", R1 y R2, tomados junto con los dos átomos de oxígeno a los que están unidos, y los átomos de carbono a los que están unidos, forman un anillo heterocíclico que tiene de 4 a 8 átomos en el anillo. Los ejemplos de grupos acetal incluyen, pero sin limitación, -CH(OMe)2, -CH(OEt)2, y -CH(OMe)(OEt).
Hemiacetal: -CH(OH)(OR1), en el que R1 es un sustituyente de hemiacetal, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos
hemiacetal incluyen, pero sin limitación, -CH(OH)(OMe) y -CH(OH)(OEt).
Cetal: -CR(OR1)(OR2), en el que R1 y R2 con como se ha definido para acetales, y R es un sustituyente de cetal distinto de hidrógeno, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos cetal incluyen, pero sin limitación, -C(Me)(OMe)2, -C(Me)(OEt)2, -C(Me)(OMe)(OEt), -C(Et)(OMe)2, -C(Et)(OEt)2 y -C(Et)(OMe)(OEt).
Hemicetal: -CR(OH)(OR1), en el que R1 es como se ha definido para hemiacetales y R es un sustituyente hemicetal distinto de hidrógeno, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos hemiacetal incluyen, pero sin limitación, -C(Me)(OH)(OMe), -C(Et)(OH)(OMe), -C(Me)(OH)(OEt) y -C(Et)(OH)(OEt).
Oxo (ceto, -ona): =O.
Tiona (tiocetona): =S.
Imino (imina): =NR, en el que R es un sustituyente de imino, por ejemplo, hidrógeno, grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente hidrógeno o un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos éster incluyen, pero sin limitación, =NH, =NMe, =NEt y =NPh.
Formilo (carbaldehído, carboxaldehído): -C(=O)H.
Acilo (ceto): -C(=O)R, en el que R es un sustituyente de acil, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7 (también denominado como alquilacilo C1-7 o alcanoilo C1-7), un grupo heterociclilo C3-20 (también denominado como heterociclilacilo C3-20),
o un grupo arilo C5-20 (también denominado como arilacilo C5-20), preferentemente un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos acilo incluyen, pero sin limitación, -C(=O)CH3 (acetilo), -C(=O)CH2CH3 (propionilo), -C(=O)C(CH3)3 (t-butirilo) y -C(=O)Ph (benzoílo, fenona).
Carboxi (ácido carboxílico): -C(=O)OH.
Tiocarboxi (ácido tiocarboxílico): -C(=S)SH.
Tiolocarboxi (ácido tiolocarboxílico): -C(=O)SH.
Tionocarboxi (ácido tionocarboxílico): -C(=S)OH.
Ácido imídico: -C(=NH)OH.
Ácido hidroxámico: -C(=NOH)OH.
Éster (carboxilato, éster de ácido carboxílico, oxicarbonilo): -C(=O)OR, en el que R es un sustituyente de éster, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos éster, pero sin limitación, -C(=O)OCH3, -C(=O)OCH2CH3, -C(=O)OC(CH3)3 y -C(=O)OPh. Aciloxi (éster inverso): -OC(=O)R, en el que R es un sustituyente de aciloxi, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos aciloxi incluyen, pero sin limitación, -OC(=O)CH3 (acetoxi), -OC(=O)CH2CH3, -OC(=O)C(CH3)3, -OC(=O)Ph y -OC(=O)CH2Ph.
Oxicarboiloxi: -OC(=O)OR, en el que R es un sustituyente de éster, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7 y un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos éster incluyen, pero sin limitación, -OC(=O)OCH3, -OC(=O)OCH2CH3, -OC(=O)OC(CH3)3 y -OC(=O)OPh.
Amino: -NR1R2, en el que R1 y R2 son independientemente sustituyentes de amino, por ejemplo, hidrógeno, un grupo alquilo C1-7 (también denominado como alquilamino C1-7 o di-alquilamino C1-7), un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente H o un grupo alquilo C1-7, o, en el caso de un grupo amino "cíclico", R1 y R2, tomados junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos, forman un anillo heterocíclico que tiene de 4 a 8 átomos en el anillo. Los grupos amino pueden ser primarios (-NH2), secundarios (-NHR1) o terciarios (-NHR1R2) y e forma catiónica, pueden ser cuaternarios (-+NR1R2R3). Los ejemplos de grupos amino incluyen, pero sin limitación, -NH2, -NHCH3, -NHC(CH3)2, -N(CH3)2, -N(CH2CH3)2 y -NHPh. Los ejemplos de grupos amino cíclicos incluyen, pero sin limitación, aziridino, azetidino, pirrolidino, piperidino, piperazino, morfolino y tiomorfolino.
Amido (carbamoílo, carbamilo, aminocarbonilo, carboxamida): -C(=O)NR1R2, en el que R1 y R2 son independientemente sustituyentes de amino, como se ha definido para los grupos amino. Los ejemplos de grupos amido incluyen, pero sin limitación, -C(=O)NH2, -C(=O)NHCH3, -C(=O)N(CH3)2, -C(=O)NHCH2CH3 y -C(=O)N(CH2CH3)2, así como grupos amido en los que R1 y R2, junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos, forman una estructura heterocíclica como en, por ejemplo, piperidinocarbonilo, morfolinocarbonilo,
tiomorfolinocarbonilo y piperazinocarbonilo.
Tioamido (tiocarbamilo): -C(=S)NR1R2, en el que R1 y R2 son independientemente sustituyentes de amino, como se ha definido para grupos amino. Los ejemplos de grupos amido incluyen, pero sin limitación, -C(=S)NH2, 5 -C(=S)NHCH3, -C(=S)N(CH3)2 y -C(=S)NHCH2CH3.
Acilamido (acilamino): -NR1C(=O)R2, en el que R1 es un sustituyente de amida, por ejemplo, hidrógeno, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente hidrógeno o un grupo alquilo C1-7 y R2 es un sustituyente de acilo, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20,
10 preferentemente hidrógeno o un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos acilamida incluyen, pero sin limitación, -NHC(=O)CH3 ,
-
NHC(=O)CH2CH3 y -NHC(=O)Ph. R1 y R2 pueden formar juntos una estructura cíclica, como en, por ejemplo,
Aminocarboniloxi: -OC(=O)NR1R2, en el que R1 y R2 son independientemente sustituyentes de amino, como se ha definido para grupos amino. Los ejemplos de grupos aminocarboniloxi incluyen, pero sin limitación, -OC(=O)NH2, -OC(=O)NHMe, -OC(=O)NMe2 y -OC(=O)NEt2.
20 Ureido: -N(R1)CONR2R3, en el que R2 y R3 son independientemente sustituyentes de amino, como se ha definido para grupos amino y R1 es un sustituyente de ureido, por ejemplo, hidrógeno, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente hidrógeno o un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos ureido incluyen, pero sin limitación, -NHCONH2, -NHCONHMe, -NHCONHEt, -NHCONMe2, -NHCONEt2, -NMeCONH2, -NMeCONHMe, -NMeCONHEt, -NMeCONMe2 y -NMeCONEt2.
25 Guanidino: -NH-C(=NH)NH2.
Tetrazolilo: un anillo aromático de cinco miembros que tiene cuatro átomos de nitrógeno y un átomo de carbono, H
30 Imino: =NR, en el que R es un sustituyente de imino, por ejemplo, hidrógeno, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente H o un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos imino incluyen, pero sin limitación, =NH, =NMe y =NEt.
35 Amidina (amidino): -C(=NR)NR2, en el que cada R es un susituyente de amidina, por ejemplo, hidrógeno, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente H o un gruop alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos amidina incluyen, pero sin limitación, -C(=NH)NH2, -C(=NH)NMe2 y -C(=NMe)NMe2.
Nitro: -NO2. 40 Nitroso: -NO.
Azido: -N3.
45 Ciano (nitrilo, carbonitrilo): -CN.
Isociano: -NC.
Cianato: -OCN. 50 Isocianato: -NCO.
Tiociano (tiocianato): -SCN.
Isotiociano (isotiocianato): -NCS.
Sulfhidrilo (tiol, mercapto): -SH.
Tioéter (sulfuro): -SR, en el que R es un sustituyente tioéter, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7 (también denominado como un grupo alquiltio C1-7), un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos alquiltio C1-7 incluyen, pero sin limitación, -SCH3 y -SCH2CH3,
Disulfuro: -SS-R, en el que R es un sustituyente disulfuro, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7 (también denominado en el presente documento como disulfuro de alquilo C1-7 ). Los ejemplos de grupos disulfuro de alquilo C1-7 incluyen, pero sin limitación, -SSCH3 y -SSCH2CH3.
Sulfina (sulfinilo, sulfóxido): -S(=O)R, en el que R es un sutituyente de sulfina, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos sulfina incluyen, pero sin limitación, -S(=O)CH3 y -S(=O)CH2CH3. Sulfona (sulfonilo): -S(=O)2R, en el que R es un sustituyente de sulfona, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7, incluyendo, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7 fluorado o perfluorado. Los ejemplos de grupos sulfona incluyen, pero sin limitación, -S(=O)2CH3 (metanosulfonilo, mesilo), -S(=O)2CF3 (triflilo), -S(=O)2CH2CH3 (esilo), -S(=O)2C4F9 (nonaflilo), -S(=O)2CH2CF3 (tresilo), -S(=O)2CH2CH2NH2 (taurilo), -S(=O)2Ph (fenilsulfonilo, besilo), 4-metilfenilsulfonilo (tosilo), 4-clorofenilsulfonilo (closilo), 4-bromofenilsulfonilo (brosilo), 4-nitrofenilo (nosilo), 2-naftalenosulfonato (napsilo) y 5-dimetilamino-naftalen-1-ilsulfonato (dansilo).
Ácido sulfínico (sulfino): -S(=O)OH, -SO2H.
Ácido sulfónico (sulfo): -S(=O)2OH, -SO3H.
Sulfinato (éster de ácido sulfínico): -S(=O)OR; en el que R es un sustituyente sulfinato, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos sulfinato incluyen, pero sin limitación, -S(=O)OCH3 (metoxisulfinilo; sulfinato de metilo) y -S(=O)OCH2CH3 (etoxisulfinilo; sulfinato de etilo).
Sulfonato (éster del ácido sulfónico): -S(=O)2OR, en el que R es un sustituyente de sulfonato, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos sulfonato incluyen, pero sin limitación, -S(=O)2OCH3 (metoxisulfonilo; sulfonato de metilo) y -S(=O)2OCH2CH3 (etoxisulfonilo; sulfonato de etilo).
Sulfiniloxi: -OS(=O)R, en el que R es un sustituyente sulfiniloxi, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos sulfiniloxi incluyen, pero sin limitación, -OS(=O)CH3 y -OS(=O)CH2CH3.
Sulfoniloxi: -OS(=O)2R, en el que R es un sustituyente de sulfoniloxi, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos sulfoniloxi incluyen, pero sin limitación, -OS(=O)2CH3 (mesilato) y -OS(=O)2CH2CH3 (esilato).
Sulfato: -OS(=O)2OR; en que R es un sustituyente de sulfato, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos sulfato incluyen, pero sin limitación, -OS(=O)2OCH3 y -SO(=O)2OCH2CH3. Sulfamilo (sulfamoílo; amida del ácido sulfinico; sulfinamida): -S(=O)NR1R2, en el que R1 y R2 son independientemente sustituyentes de amino, como se ha definido para grupos amino. Los ejemplos de grupos sulfamilo incluyen, pero sin limitación, -S(=O)NH2, -S(=O)NH(CH3), -S(=O)N(CH3)2, -S(=O)NH(CH2CH3), -S(=O)N(CH2CH3)2 y -S(=O)NHPh.
Sulfonamido (sulfinamoílo; amida del ácido sulfónico; sulfonamida): -S(=O)2NR1R2, en el que R1 y R2 son independientemente sustituyentes de amino, como se ha definido para grupos amino. Los ejemplos de grupos sulfonamido incluyen, pero sin limitación, -S(=O)2NH2, -S(=O)2NH(CH3), -S(=O)2N(CH3)2, -S(=O)2NH(CH2CH3), -S(=O)2N(CH2CH3)2 y -S(=O)2NHPh.
Sulfamino: -NR1S(=O)2OH, en el que R1 es un sustituyente de amino, como se ha definido para grupos amino. Los ejemplos de grupos sulfamino incluyen, pero sin limitación, -NHS(=O)2OH y -N(CH3)S(=O)2OH.
Sulfonamino: -NR1S(=O)2R, donde R1 es un sustituyente de amino, como se ha definido para grupos amino, y R es un sustituyente de sulfonamino, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20, o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7. Ejemplos de grupos sulfonamino incluyen, pero sin limitación, -NHS(=O)2CH3 y -N(CH3)S(=O)2C6H5,
Sulfinamino: -NR1S(=O)R, en el que R1 es un sustituyente de amino, como se ha definido para grupos amino y R es
un sustituyente de sulfinamino, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7. Los ejemplos de grupos sulfinamino incluyen, pero sin limitación, -NHS(=O)CH3 y -N(CH3)S(=O)C6H5.
Fosfino (fosfina): -PR2, en el que R es un sustituyente de fosfino, por ejemplo, -H, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente -H, un grupo alquilo C1-7 o un grupo arilo C5-20. Los ejemplos de grupos fosfino incluyen, pero sin limitación, -PH2, -P(CH3)2, -P(CH2CH3)2, -P(t-Bu)2 y -P(Ph)2.
Fosfo: -P(=O)2.
Fosfinilo (óxido de fosfina): -P(=O)R2, en el que R es un sustituyente de fosfinilo, por ejemplo, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente un grupo alquilo C1-7 o un grupo arilo C5-20. Los ejemplos de grupos fosfinilo incluyen, pero sin limitación, -P(=O)(CH3)2, -P(=O)(CH2CH3)2, -P(=O)(t-Bu)2 y-P(=O)(Ph)2.
Ácido fosfónico (fosfono): -P(=O)(OH)2.
Fosfonato (éster de fosfono): -P(=O)(OR)2, en el que R es un sustituyente de fosfonato, por ejemplo, -H, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente -H, un grupo alquilo C1-7 o un grupo arilo C5-20. Los ejemplos de grupos fosfonato incluyen, pero sin limitación, -P(=O)(OCH3)2, -P(=O)(OCH2CH3)2, -P(=O)(O-t-Bu)2 y -P(=O)(OPh)2.
Ácido fosfórico (fosfonooxi): -OP(=O)(OH)2.
Fosfato (éter fosfonooxi: -OP(=O)(OR)2, en el que R es un sustituyente de fosfato, por ejemplo, -H, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente -H, un grupo alquilo C1-7 o un grupo arilo C5-20. Los ejemplos de grupos fosfato incluyen, pero sin limitación, -OP(=O)(OCH3)2, -OP(=O)(OCH2CH3)2, -OP(=O)(O-t-Bu)2 y -OP(=O)(OPh)2.
Ácido fosforoso: -OP(OH)2.
Fosfito: -OP(OR)2, en el que R es un sustituyente de fosfito, por ejemplo, -H, un grupo alquilo C1-7, un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente -H, un grupo alquilo C1-7 o un grupo arilo C5-20. Los ejemplos de grupos fosfito incluyen, pero sin limitación, -OP(OCH3)2, -OP(OCH2CH3)2, -OP(O-t-Bu)2 y -OP(OPh)2.
Fosforamidita: -OP(OR1)-NR22, en el que R1 y R2 son sustituyentes de fosforamidita, por ejemplo, -H, un grupo alquilo C1-7 (opcionalmente sustituido), un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente -H, un grupo alquilo C1-7 o un grupo arilo C5-20. Los ejemplos de grupos fosforamidita incluyen, pero sin limitación, -OP(OCH2CH3)-N(CH3)2, -OP(OCH2CH3)-N(i-Pr)2 y -OP(OCH2CH2CN)-N(i-Pr)2.
Fosforamidato: -OP(=O)(OR1)-NR22, en el que R1 y R2 son sustituyentes de fosforamidato, por ejemplo, -H, un grupo alquilo C1-7 (opcionalmente sustituido), un grupo heterociclilo C3-20 o un grupo arilo C5-20, preferentemente -H, un grupo alquilo C1-7 o un grupo arilo C5-20. Los ejemplos de grupos fosforamidato incluyen, pero sin limitación, -OP(=O)(OCH2CH3)-N(CH3)2, -OP(=O)(OCH2CH3)-N(i-Pr)2 y -OP(=O)(OCH2CH2CN)-N(i-Pr)2.
Alquileno
Alquileno C3-12: La expresión "alquileno C3-12 ", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo bidentado obtenido mediante la eliminación de dos átomos de hidrógeno, ambos del mismo átomo de carbono, o uno de cada uno de dos átomos de carbono diferentes, de un compuesto hidrocarburo que tiene de 3 a 12 átomos de carbono (a menos que se indique otra cosa), que puede ser alifático o alicíclico y que puede estar saturado, parcialmente insaturado o totalmente insaturado. Por lo tanto, el término "alquileno" incluye las subclases alquenileno, alquinileno, cicloalquileno, etc., que se describen a continuación.
Los ejemplos de grupos alquileno C3-12 saturados lineales incluyen, pero sin limitación, -(CH2)n- en las que n es un número entero de 3 a 12, por ejemplo, -CH2CH2CH2- (propileno), -CH2CH2CH2CH2- (butileno), -CH2CH2CH2CH2CH2-(pentileno) y -CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2- (heptileno).
Los ejemplos de grupos alquileno C3-12 saturados ramificados incluyen, pero sin limitación, -CH(CH3)CH2-, -CH(CH3)CH2CH2-, -CH(CH3)CH2CH2CH2-, -CH2CH(CH3)CH2-, -CH2CH(CH3)CH2CH2-, -CH(CH2CH3)-, -CH(CH2CH3)CH2- y -CH2CH(CH2CH3)CH2-.
Los ejemplos de grupos alquileno C3-12 parcialmente insaturados lineales (grupos alquenileno y alquinileno C3-12) incluyen, pero sin limitación, -CH=CH-CH2-, -CH2-CH=CH2-, -CH=CH-CH2-CH2-, -CH=CH-CH2-CH2-CH2-, -CH=CH-CH=CH-, -CH=CH-CH=CH-CH2-, -CH=CH-CH=CH-CH2-CH2-, -CH=CH-CH2-CH=CH-, -CH=CH-CH2-CH2-CH=CH- y -CH2-C=C-CH2-.
Los ejemplos de grupos alquileno C3-12 parcialmente insaturados ramificado (grupos alquenileno y alquinileno C3-12) incluyen, pero sin limitación, -C(CH3)=CH-, -C(CH3)=CH-CH2-, -CH=CH-CH(CH3)- y -C=C-CH(CH3)-.
Los ejemplos de grupos alquileno C3-12 alicíclicos saturados (cicloalquilenos C3-12) incluyen, pero sin limitación, ciclopentileno (por ejemplo, ciclopent-1,3-ileno) y ciclohexileno (por ejemplo, ciclohex-1,4-ileno).
Los ejemplos de grupos alquileno C3-12 parcialmente insaturados alicíclicos (cicloalquilenos C3-12) incluyen, pero sin limitación, ciclopentenileno (por ejemplo, 4-ciclopenten-1,3-ileno), ciclohexenileno (por ejemplo, 2-ciclohexen-1,4ileno; 3-ciclohexen-1,2-ileno; 2,5-ciclohexadien-1,4-ileno).
Incluye Otras Formas
A menos que se especifique otra cosa, se incluyen en lo anterior formas iónicas, sales, solvatos y protegidas bien conocidas de estos sustituyentes. Por ejemplo, una referencia a ácido carboxílico (-COOH) también incluye la forma aniónica (carboxilato) (-COO-), una sal o solvato del mismo, así como formas protegidas convencionales. De forma análoga, una referencia a un grupo amino incluye la forma protonada (-N+HR1R2), una sal o solvato del grupos amino, por ejemplo, una sal clorhidrato, así como formas protegidas convencionales de un grupo amino. De forma análoga, una referencia a un grupo hidroxilo también incluye la forma aniónica (-O-), una sal o solvato del mismo, así como formas protegidas convencionales.
Sales
Puede ser conveniente o deseable preparar, purificar y/o manejar una sal correspondiente del compuesto activo, por ejemplo, una sal farmacéuticamente aceptable. Se describen ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables en Berge y col., J. Pharm. Sci., 66, 1-19 (1977).
Por ejemplo, si el compuesto es aniónico o tiene un grupo funcional que pueda ser aniónico (por ejemplo, -COOH puede ser -COO-), después una sal puede formarse con un catión adecuado. Los ejemplos de cationes adecuados incluyen, pero sin limitación, iones de metal alcalino, tales como Na+ y K+, cationes alcalinotérreos, tales como Ca2+ y Mg2+, y otros cationes, tales como Al+3. Los ejemplos de cationes orgánicos adecuados incluyen, pero sin limitación, ion amonio (es decir NH4+) e iones amonio sustituidos (por ejemplo, NH3R+, NH2R2+, NHR3+, NR4+). Son ejemplos de algunos iones amonio sustituidos adecuados los que se obtienen a partir de: etilamina, dietilamina, diciclohexilamina, trietilamina, butilamina, etilendiamina, etanolamina, dietanolamina, piperazina, bencilamina, fenilbencilamina, colina, meglumina y trometamina, así como aminoácidos, tales como lisina y arginina. Un ejemplo de un ion amonio cuaternario común es N(CH3)4+.
Si el compuesto es catiónico o tiene un grupo funcional que pueda ser catiónico (por ejemplo, -NH2 puede ser -NH3+), entonces puede formarse una sal con un anión adecuado. Los ejemplos de aniones inorgánicos adecuados incluyen, pero sin limitación, los obtenidos a partir de los siguientes ácidos inorgánicos: clorhídrico, bromhídrico, yodhídrico, sulfúrico, sulfuroso, nítrico, nitroso, fosfórico y fosforoso.
Los ejemplos de aniones orgánicos adecuados incluyen, pero sin limitación, los obtenidos a partir de los siguientes ácidos orgánicos: 2-acetiloxibenzoico, acético, ascórbico, aspártico, benzoico, alcanforsulfónico, cinámico, cítrico, edético, etanodisulfónico, etanosulfónico, fumárico, gluqueptónico, glucónico, glutámico, glicólico, hidroximaleico, hidroxinaftaleno carboxílico, isetiónico, láctico, lactobiónico, laurico, maleico, málico, metanosulfónico, múcico, oleico, oxálico, palmítico, pamoico, pantoténico, fenilacético, fenilsulfónico, propiónico, pirúvico, salicílico, esteárico, succínico, sulfanílico, tartárico, toluenosulfónico, ácido trifluoroacético y valérico. Los ejemplos de aniones orgánicos poliméricos adecuados incluyen, pero sin limitación, los obtenidos a partir de los siguientes ácidos poliméricos: ácido tánico, carboximetil celulosa.
Solvatos
Puede ser conveniente o deseable preparar, purificar y/o manipular un solvato correspondiente del compuesto activo. El término "solvato" se usa en el presente documento en el sentido convencional para referirse a un complejo de un soluto (por ejemplo, compuesto activo, sal de compuesto activo) y un disolvente. Si el disolvente es agua, el solvato puede denominarse convenientemente como hidrato, por ejemplo, un mono-hidrato, un di-hidrato, un trihidrato, etc.
La invención incluye compuestos en los que el disolvente se añade a través del enlace de imina del grupo PBD, que se ilustra a continuación, en el que el disolvente es agua o un alcohol (RAOH, donde RA es C1-4 alquil):
R9H R9 R9H
ORA R8
OH N R8 NN R8
H
HH H2O RAOH
R7 R7
N
N R2
R7 N R2 R2 R6R6 R6
OO O Estas formas pueden llamarse las formas éter de carbinolamina y carbinolamina del PBD (como se describe en la sección relacionada con R10 anterior). El balance de estos equilibrios depende de las condiciones en que los compuestos se encuentren, así como de la naturaleza del grupo en sí mismo.
Estos compuestos particulares pueden aislarse en forma sólida, por ejemplo, por liofilización.
Isómeros
Ciertos compuestos de la invención pueden existir en una o más formas geométricas, ópticas, enantioméricas, diastereoméricas, epiméricas, atrópicas, estereoisoméricas, tautoméricas, conformacionales o anoméricas particulares, incluyendo, pero sin limitación, formas cis y trans; formas E y Z; formas c, t y r; formas endo y exo; formas R, S y meso; formas D y L; formas d y l; formas (+) y (-); formas ceto, enol y enolato; formas syn y anti; formas sinclinales y anticlinales; formas a y ; formas axiales y ecuatoriales; formas de bote, de silla, torcidas, cubiertas y de semisilla; y combinaciones de los mismos, en lo sucesivo denominadas en su conjunto como "isómeros" (o "formas isoméricas").
El término "quiral" se refiere a moléculas que tienen la propiedad de no superponerse al compañero de imagen especular, mientras que el término "aquiral" se refiere a moléculas que pueden superponerse sobre su compañero de imagen especular.
El término "estereoisómeros" se refiere a compuestos que tienen idéntica constitución química, pero se diferencian con respecto a la disposición de los átomos de carbono o grupos en el espacio.
"Diastereómero" se refiere a un estereoisómero con dos o más centros de quiralidad y cuyas moléculas no son imágenes especulares entre sí. Los diastereómeros tienen diferentes propiedades físicas, por ejemplo, puntos de fusión, puntos de ebullición, propiedades espectrales y reactividades. Pueden separarse mezclas de diastereómeros con procedimientos analíticos de alta resolución, tales como electroforesis y cromatografía.
"Enantiómeros" se refiere a dos estereoisómeros de un compuesto que son imágenes especulares que no pueden superponerse entre sí.
Las definiciones estereoquímicas y convenciones usadas generalmente en el presente documento se indican a continuación S. P. Parker, Ed., McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, Nueva York; y Eliel, E. y Wilen, S., "Stereochemistry of Organic Compounds", John Wiley & Sons, Inc., Nueva York, 1994. Los compuestos de la invención pueden contener centros asimétricos o quirales, y por tanto existen en formas estereoisoméricas diferentes. Se pretende que todas las formas estereoisoméricas de los compuestos de la invención, incluyendo, pero sin limitación, diastereómeros, enantiómeros y atropisómeros, así como mezclas de los mismos, tales como mezclas racémicas, formen parte de la presente invención. Muchos compuestos orgánicos existen en formas ópticamente activas, es decir, tienen la capacidad de girar el plano del plano de la luz polarizada. En la descripción de un compuesto ópticamente activo, los prefijos D y L, o R y S, se usan para indicar la configuración absoluta de la molécula entorno a su centro o centros quirales. Los prefijos d y l o (+) y (-) se emplean para designar el sentido de giro del plano de la luz polariza por el compuesto, significando con (-) o l que el compuesto es levógiro. Un compuesto con el prefijo (+) o d es dextrógiro. Para una estructura química dada, estos estereoisómeros son idénticos excepto porque son imágenes especulares entre sí. Un estereoisómero también puede denominarse como un enantiómero y una mezcla de dichos isómeros se llama comúnmente mezcla enantiomérica. Una mezcla 50:50 de enantiómeros se denomina como una mezcla racémica o un racemato, que pueden aparecer cuando no hubo estereoselección o estereospecificidad en una reacción o procedimiento químico. Las expresiones "mezcla racémica" y "racemato" se refieren a una mezcla equimolar de dos especies enantioméricas, carentes de actividad óptica.
Debe observarse que, excepto como se ha descrito anteriormente para formas tautoméricas, se excluyen específicamente del término "isómeros", como se usa en el presente documento, los isómeros estructurales (o constitucionales) (es decir isómeros que se diferencian en las conexiones entre átomos en vez de únicamente en la posición de los átomos en el espacio). Por ejemplo, una referencia a un grupo metoxi, -OCH3, no debe interpretarse como una referencia a su isómero estructural, un grupo hidroximetilo, -CH2OH. De forma análoga, una referencia a orto-clorofenilo no debe interpretarse como una referencia a su isómero estructural, meta-clorofenilo. Sin embargo, una referencia a una clase de estructuras muy bien puede incluir formas estructuralmente isoméricas que entren dentro de dicha clase (por ejemplo, alquilo C1-7 incluye n-propilo e iso-propilo; butilo incluye n-, iso-, sec- y terc-butilo; metoxifenilo incluye orto-, meta- y para-metoxifenilo).
60 La excepción anterior no se refiere a formas tautoméricas, por ejemplo, formas ceto, enol y enolato, como en, por ejemplo, los siguientes pares tautoméricos: ceto/enol (ilustrados a continuación), imina/enamina, amida/imino
El término "tautómero" o "forma tautomérica " se refiere isómeros estructurales de energías diferentes que pueden intercambiarse mediante una barrera de baja energía. Por ejemplo, los tautómero protónicos (también conocidos como tautómeros prototrópicos) incluyen interconversiones mediante migración de un protón, tal como isomerizaciones ceto-enol e imina-enamina. Los tautómeros de valencia incluyen interconversiones por reorganización de algunos de los electrones de unión.
Debe observarse que se incluyen específicamente en el término "isómero", compuestos con una o más sustituciones isotópicas. Por ejemplo, H puede estar en cualquier forma isotópica, incluyendo 1H, 2H (D) y 3H (T); C puede estar en cualquier forma isotópica, incluyendo 12C, 13C y 14C; O puede estar en cualquier forma isotópica, incluyendo 16O y18O; y similares.
Los ejemplos de isótopos que pueden incorporarse en compuestos de la invención incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, flúor y cloro, tales como, pero sin limitación, 2H (deuterio, D), 3H (tritio), 11C,13C, 14C, 15N, 18F, 31P, 32P, 35S, 36Cl y 125I. Se incorporan diversos compuestos marcados isotópicamente de la presente invención, por ejemplo aquellos en los que se incorporan isótopos radiactivos, tales como 3H, 13C y 14C. Dichos compuestos marcados isotópicamente pueden ser útiles en estudios metabólicos, estudios de cinética de reacción, técnicas de detección o formación de imágenes, tales como tomografía de emisión de positrones (PET) o tomografía computerizada de emisión de un solo fotón (SPECT), incluyendo ensayos de distribución en tejido de fármaco o sustrato, o tratamientos radioactivos de pacientes. Los compuestos de la invención marcados con deuterio o sustituidos terapéuticamente pueden tener propiedades de DMPK mejoradas (metabolismo de fármaco y farmacocinéticas), en relación a la distribución, metabolismo y excreción (ADME). La sustitución con isótopos más pesados, tales como deuterio, puede proporcionar ciertas ventajas terapéuticas resultantes de una mayor estabilidad metabólica, por ejemplo mayor semi-vida in vivo o menos requisitos de dosificación. Un compuesto marcado con 18F puede ser útil para estudios PET o SPECT. Pueden prepararse compuestos marcados isotópicamente de la presente invención y profármacos de los mismos realizando los procedimientos desvelados en los esquemas o en los ejemplos y preparaciones que se describen más adelante mediante sustitución de un reactivo marcado isotópicamente fácilmente disponible por un reactivo no marcado isotópicamente. Además, la sustitución con isótopos más pesados, particularmente deuterio (es decir, 2H o D) puede proporcionar ciertas ventajas terapéuticas resultantes de una mayor estabilidad metabólica, por ejemplo, semivida in vivo aumentada o requerimientos de dosificación reducidos, o una mejora en el índice terapéutico. Se entiende que deuterio, en este contexto, se considera un sustituyente. La concentración de dicho isótopo más pesado, específicamente deuterio, puede definirse por un factor de enriquecimiento isotópico. En los compuestos de esta invención cualquier átomo que no se designe específicamente como un isótopo en particular pretende representar cualquier isótopo estable de ese átomo.
A menos que se especifique otra cosa, una referencia a un compuesto en particular incluye todas estas formas tautoméricas, incluyendo (total o parcialmente) mezclas racémicas y otras mezclas de las mismas. Los procedimientos para la preparación (por ejemplo, síntesis asimétrica) y separación (por ejemplo, cristalización fraccionada y medios cromatográficos) de dichas formas tatutoméricas se conocen en la técnica o pueden obtenerse fácilmente adaptando los procedimientos que se enseñan en el presente documento, o procedimientos conocidos, de una manera conocida.
Actividad biológica
Ensayos de proliferación celular in vitro
En general, la actividad citotóxica o citostática de un conjugado anticuerpo-fármaco (ADC) se mide: exponiendo las células de mamífero que tienen proteínas receptoras, por ejemplo HER2, al anticuerpo del ADC en un medio de cultivo celular; cultivando las células durante un periodo de aproximadamente 6 horas a aproximadamente 5 días y midiendo la viabilidad celular. Los ensayos in vitro basados en células se usan para medir la viabilidad (proliferación), la citotoxicidad y la inducción de apoptosis (activación de la caspasa) de un ADC de la invención.
La potencia in vitro de los conjugados fármaco-anticuerpo se puede medir mediante un ensayo de proliferación celular. El ensayo de viabilidad celular luminiscente CellTiter-Glo® está disponible comercialmente (Promega Corp., Madison, WI), método de ensayo homogéneo basado en la expresión recombinante de la luciferasa de Coleoptera (patentes de EE.UU. nº 5583024; 5674713 y 5700670). Este ensayo de proliferación celular determina el número de
células viables en cultivo en base a la cuantificación del ATP presente, un indicador de células metabólicamente activas (Crouch y col. (1993) J. Immunol. Meth. 160:81-88; documento US 6602677). El ensayo CellTiter-Glo® se realiza en un formato de 96 pocillos, lo que lo hace favorable para la detección selectiva de alto rendimiento (HTS) (Cree y col. (1995) AntiCancer Drugs 6:398-404). El procedimiento de ensayo homogéneo implica añadir el único reactivo (reactivo CellTiter-Glo®) directamente a las células cultivadas en medio suplementado con suero. No se requieren etapas de lavado, eliminación del medio y múltiple pipeteo. El sistema detecta solo 15 células/pocillo en un formato de 384 pocillos en 10 minutos tras la adición del reactivo y el mezclado. Las células se pueden tratar de forma continua con ADC o se pueden tratar y separar de los ADC. En general, las células tratadas brevemente, es decir 3 horas, mostraron los mismos efectos de potencia que las células tratadas de forma continua.
El formato de “añadir-mezclar-medir” homogéneo tiene como resultado la lisis celular y la generación de una señal luminiscente proporcional a la cantidad de ATP presente. La cantidad de ATP es directamente proporcional al número de células presentes en cultivo. El ensayo CellTiter-Glo® genera una señal luminiscente de “tipo brillo” producida por la reacción de la luciferasa, que tiene una semivida generalmente superior a cinco horas, en función del tipo de célula y del medio usado. Las células viables se reflejan en unidades de luminiscencia relativa (ULR). El sustrato, la luciferina de escarabajo, se descarboxila de forma oxidativa mediante la luciferasa de luciérnaga recombinante con conversión concomitante de ATP en AMP y generación de fotones.
Eficacia in vivo
La eficacia in vivo de los conjugados fármaco-anticuerpo (ADC) de la invención se puede medir mediante estudios de xenoinjerto tumoral en ratones. Por ejemplo, la eficacia in vivo de un ADC anti-HER2 de la invención se puede medir mediante un modelo en ratón de explante transgénico de alta expresión de HER2. Un aloinjerto se propaga desde el ratón transgénico Fo5 mmtv que no responde o responde mal a la terapia con HERCEPTIN®. Los sujetos fueron tratados una vez con ADC a ciertos niveles de dosis (mg/kg) y exposición al fármaco de PBD ((µg/m2); y control con tampón placebo (vehículo) y se monitorizaron en dos semanas o más para medir el tiempo hasta la duplicación del tumor, el log de muerte celular y la disminución del tamaño del tumor.
Uso
Los conjugados de la invención se pueden usar para proporcionar un compuesto de PBD en una localización diana.
La localización diana es, preferentemente, una población de células proliferativas. El anticuerpo es un anticuerpo para un antígeno presente en una población de células proliferativas.
En una realización, el antígeno está ausente o presente a un nivel reducido en una población de células no proliferativas en comparación con la cantidad de antígeno presente en la población de células proliferativas, por ejemplo una población de células tumorales.
En la localización diana, el enlazador puede escindirse de modo que libere un compuesto de fórmula (D). Por tanto, el conjugado de la invención se pueden usar para proporcionar de forma selectiva un compuesto de fórmula (D) en la localización diana.
El enlazador se puede escindir mediante una enzima presente en la localización diana.
La localización diana puede estar in vitro, in vivo o ex vivo.
Los compuestos del conjugado anticuerpo-fármaco (ADC) de la invención incluyen aquéllos con utilidad para actividad anticancerosa. En particular, los compuestos incluyen un anticuerpo conjugado, es decir unido covalentemente a través de un enlazador, a un grupo farmacológico de PBD, es decir la toxina. Cuando el fármaco no está conjugado a un anticuerpo, el fármaco de PBD tiene un efecto citotóxico. Por tanto, la actividad biológica del grupo farmacológico de PBD se modula mediante conjugación con un anticuerpo. Los conjugados anticuerpofármaco (ADC) de la invención liberan de forma selectiva una dosis eficaz de un agente citotóxico al tejido tumoral, de modo que se puede conseguir una selectividad mayor, es decir una dosis eficaz menor.
Por tanto, en un aspecto, la presente invención proporciona un compuesto conjugado como se ha descrito en el presente documento para uso en terapia.
En un aspecto adicional se proporcionan un compuesto conjugado como se describe en el presente documento para usar en el tratamiento de enfermedades proliferativas. Un segundo aspecto de la presente invención proporciona el uso de un compuesto conjugado en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad proliferativa.
Un experto en la técnica puede determinar fácilmente si un conjugado candidato trata o no una afección proliferativa para cualquier tipo de célula concreta. Por ejemplo, en los ejemplos siguientes se describen ensayos que se pueden usar de forma conveniente para evaluar la actividad ofrecida por un compuesto concreto.
El término “enfermedad proliferativa” se refiere a una proliferación celular indeseada o no controlada de células excesivas o anormales que no se desea, tales como un crecimiento neoplásico o hiperplásico, in vitro o in vivo
Ejemplos de afecciones proliferativas incluyen, pero sin limitación, proliferación celular benigna, premaligna y maligna, incluidas, pero sin limitación, neoplasias y tumores (p. ej., histocitoma, glioma, astrocitoma, osteoma), cánceres (p. ej., cáncer de pulmón, cáncer de pulmón microcítico, cáncer gastrointestinal, cáncer intestinal, cáncer de colon, carcinoma de mama, carcinoma ovárico, cáncer de próstata, cáncer testicular, cáncer hepático, cáncer de riñón, cáncer de vejiga, cáncer de páncreas, cáncer de cerebro, sarcoma, osteosarcoma, sarcoma de Kaposi, melanoma), leucemias, psoriasis, enfermedades óseas, trastornos fibroproliferativos (p. ej., de tejidos conectivos) y aterosclerosis. Cánceres de interés concreto incluyen, pero sin limitación, leucemias y cánceres de ovarios.
Se puede tratar cualquier tipo de célula, incluyendo, pero sin limitación, de pulmón, gastrointestinal (incluidas, por ejemplo, intestinal, de colon), de mama (mamarias), de ovarios, de próstata, de hígado (hepáticas), de riñón (renal), de vejiga urinaria, de páncreas, de cerebro y de piel.
En una realización, el tratamiento es de un cáncer pancreático.
En una realización, el tratamiento es de un tumor que tiene la integrina av 6 sobre la superficie de la célula.
Se contempla que los conjugados anticuerpo-fármaco (ADC) de la presente invención pueden usarse para tratar varias enfermedades o trastornos, caracterizados, por ejemplo, por la sobreexpresión de un antígeno tumoral. Ejemplos de afecciones de trastornos hiperproliferativos incluyen tumores benignos o malignos; leucemia, neoplasias malignas hematológicas y linfoides. Otros incluyen trastornos neuronales, gliales, astrocitales, hipotalámicos, glandulares, macrofágicos, epiteliales, estromales, blastocoélicos, inflamatorios, angiogénicos e inmunológicos, incluidos trastornos autoinmunitarios. En general, la enfermedad o trastorno que se va a tratar es una enfermedad hiperproliferativa tal como cáncer. Ejemplos de cáncer que se va a tratar en el presente documento incluyen, pero sin limitación, carcinoma, linfoma, blastoma, sarcoma y leucemia o neoplasias linfoides. Ejemplos más concretos de dichos cánceres incluyen cáncer de células escamosas (p. ej., cáncer de células escamosas epiteliales), cáncer de pulmón, incluido cáncer de pulmón microcítico, cáncer de pulmón amicrocítico, adenocarcinoma del pulmón y carcinoma pulmonar escamoso, cáncer del peritoneo, cáncer hepatocelular, cáncer gástrico o de estómago, incluido cáncer gastrointestinal, cáncer pancreático, glioblastoma, cáncer cervical, cáncer de ovarios, cáncer de hígado, cáncer de vejiga urinaria, hematoma, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer rectal, cáncer colorrectal, carcinoma endometrial o de útero, carcinoma de glándulas salivales, cáncer de riñón o renal, cáncer de próstata, cáncer de vulva, cáncer de tiroides, carcinoma hepático, carcinoma anal, carcinoma peneano, así como cáncer de cabeza y cuello.
Enfermedades autoimunitarias para las que se pueden usar compuestos de ADC en el tratamiento incluyen trastornos reumatológicos (tales como, por ejemplo, artritis reumatoide, síndrome de Sjögren, esclerodermia, lupus tal como LES y nefritis lúpica, polimiositis/dermatomiositis, crioglobulinemia, síndrome del anticuerpo anti-fosfolípidos y artritis psoriásica), osteoartritis, trastornos hepáticos y gastrointestinales autoinmunitarios (tales como, por ejemplo, enfermedades intestinales inflamatorias (p. ej., colitis ulcerosa y enfermedad de Chron), gastritis autoinmunitaria y anemia perniciosa, hepatitis autoinmunitaria, cirrosis biliar primaria, colangitis esclerosante primaria y enfermedad celíaca), vasculitis (tales como, por ejemplo, vasculitis asociada con ANCA, incluida la vasculitis de Churg-Strauss, granulomatosis de Wegener y poliarteritis), trastornos neurológicos autoinmunitarios (tales como, por ejemplo, esclerosis múltiple, síndrome de mioclono opsoclono, miastenia gravis, neuromielitis óptica, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer y polineuropatías autoinmunitarias), trastornos renales (tales como, por ejemplo, glomerulonefritis, síndrome de Goodpasture y enfermedad de Berger), trastornos dermatológicos autoinmunitarios (tales como, por ejemplo, psoriasis, urticaria, habones, pénfigo vulgar, penfigoide ampolloso y lupus eritematoso cutáneo), trastornos hematológicos (tales como, por ejemplo, púrpura trombocitopénica, púrpura trombocitopénica trombótica, púrpura postransfusión y anemia hemolítica autoinmunitaria), aterosclerosis, uveítis, enfermedades autoinmunitarias de la audición (tales como, por ejemplo, enfermedad del oído interno y pérdida de la audición), enfermedad de Behcet, síndrome de Raynaud, transplante de órgano y trastornos endocrinos autoinmunitarios (tales como, por ejemplo, enfermedades autoinmunitarias relacionadas con la diabetes tales como diabetes mellitas dependiente de insulina (DMDI), enfermedad de Addison y enfermedad autoinmunitaria del tiroides
(p. ej., enfermedad de Graves y tiroiditis)). Entre estas enfermedades, las más preferidas incluyen, por ejemplo, artritis reumatoide, colitis ulcerosa, vasculitis asociada con ANCA, lupus, esclerosis múltiple, síndrome de Sjögren, enfermedad de Graves, DMDI, anemia perniciosa, tiroiditis y glomerulonefritis.
Métodos de tratamiento
Los conjugados de la presente invención se pueden usar en un método de terapia. Aunque sin formar parte de la presente invención, es posible llevar a cabo un método de tratamiento que comprende administrar a un sujeto que necesite tratamiento una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto conjugado de la invención. La expresión “cantidad terapéuticamente eficaz” es una cantidad suficiente para mostrar beneficio a un paciente. Dicho beneficio puede ser, al menos, mejora de al menos un síntoma. La cantidad real administrada y la velocidad y evolución en el tiempo de la administración dependerán de la naturaleza y gravedad de lo que se esté tratando. La prescripción del tratamiento, por ejemplo decisiones sobre la dosis, entra dentro de la responsabilidad de los profesionales generales y otros médicos.
Un compuesto de la invención se puede administrar solo o en combinación con otros tratamientos, simultánea o secuencialmente, dependiendo de la afección que se vaya a tratar. Ejemplos de tratamientos y terapias incluyen, pero sin limitación, quimioterapia (administración de agentes activos, incluidos, por ejemplo, fármacos tales como quimioterapéuticos), cirugía y radioterapia.
Un “agente quimioterapéutico” es un compuesto químico útil en el tratamiento del cáncer, con independencia del mecanismo de acción. Clases de agentes quimioterapéuticos incluyen, pero sin limitación: Agentes alquilantes, antimetabolitos, alcaloides antimitóticos de origen vegetal, antibióticos citotóxicos/antitumorales, inhibidores de la topoisomerasa, anticuerpos, fotosensibilizadores e inhibidores de la quinasa. Agentes quimioterapéuticos incluyen compuestos usados en “terapia dirigida” y quimioterapia convencional.
Ejemplos de agentes quimioterapéuticos incluyen: erlotinib (TARCEVA®, Genentech/OSI Pharm.), docetaxel (TAXOTERE®, Sanofi-Aventis), 5-FU (fluorouracilo, 5-fluorouracilo, Nº CAS 51-21-8), gemcitabina (GEMZAR®, Lilly), PD-0325901 (Nº CAS 391210-10-9, Pfizer), cisplatino (cis-diamina, dicloroplatino (II), Nº CAS 15663-27-1), carboplatino (Nº CAS 41575-94-4), paclitaxel (TAXOL®, Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.), trastuzumab (HERCEPTIN®, Genentech), temozolomida (4-metil-5-oxo- 2,3,4,6,8-pentazabiciclo [4.3.0] nona-2,7,9trieno-9-carboxamida, Nº CAS 85622-93-1, TEMODAR®, TEMODAL®, Schering Plough), tamoxifeno ((Z)-2-[4-(1,2difenilbut-1-enil)fenoxi]-N,N-dimetiletanamina, NOLVADEX®, ISTUBAL®, VALODEX®), y doxorubicina (ADRIAMYCIN®), Akti-1/2, HPPD y rapamicina.
Más ejemplos de agentes quimioterapéuticos incluyen: oxaliplatino (ELOXATIN®, Sanofi), bortezomib (VELADCE®, Millennium Pharm.), sutent (SUNITINIB®, SU11248, Pfizer), letrozol (FEMARA®, Novartis), imatinib mesilato (GLEEVEC®, Novartis), XL-518 (inhibidor de Mek, Exelixis, documento WO 2007/044515), ARRY-886 (inhibidor de Mek, AZD6244, Array BioPharma, Astra Zeneca), SF-1126 (inhibidor de PI3K, Semafore Pharmaceuticals), BEZ-235 (inhibidor de PI3K, Novartis), XL-147 (inhibidor de PI3K, Exelixis), PTK787/ZK 222584 (Novartis), fulvestrant (FASLODEX®, AstraZeneca), leucovorina (ácido folínico), rapamicina (sirolimus, RAPAMUNE®, Wyeth), lapatinib (TYKERB®, GSK572016, Glaxo Smith Kline), lonafarnib (SARASAR™, SCH 66336, Schering Plough), sorafenib (NEXAVAR®, BAY43-9006, Bayer Labs), gefitinib (IRESSA®, AstraZeneca), irinotecán (CAMPTOSAR®, CPT-11, Pfizer), tipifarnib (ZARNESTRA™, Johnson & Johnson), ABRAXANE™ (sin Cremofor), formulaciones de nanopartículas de paclitaxel con albúmina mediante ingeniería (American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Il), vandetanib (rINN, ZD6474, ZACTIMA®, AstraZeneca), clorambucilo, AG1478, AG1571 (SU 5271; Sugen), temsirolimus (TORISEL®, Wyeth), pazopanib (GlaxoSmithKline), canfosfamida (TELCYTA®, Telik), tiotepa y ciclosfosfamida (CYTOXAN®, NEOSAR®); sulfonatos de alquilo, tal como busulfán, improsulfán y piposulfán; aziridinas tales como benzodopa, carboquona, meturedopa y uredopa; etileniminas y metilamelaminas incluidas altretamina, trietilenmelamina, trietilenfosforamida, trietilentiofosforamida y trimetilomelamina; acetogeninas (especialmente bullatacina y bullatacinona); una camptotecina (incluido el análogo sintético topotecán); briostatina; callistatina; CC-1065 (incluidos sus análogos sintéticos adozelesina, carzelesina y bizelesina); criptoficinas (particularmente criptoficina 1 y criptoficina 8); dolastatina; duocarmicina (incluidos los análogos sintéticos KW-2189 y CB1-TM1); eleuterobina; pancratistatina; una sarcodictiina; espongistatina; mostazas de nitrógeno tales como clorambucilo, clornafazina, clorofosfamida, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, óxido de mecloretamina clorhidrato, melfalán, novembichina fenesterina, prednimustina, trofosfamida, mostaza de uracilo; nitrosoureas tales como carmustina, clorozotocina, fotemustina, lomustina, nimustina y ranimnustina; antibióticos tales como los antibióticos de enediina (p.ej., caliceamicina, caliceamicina gamma1I, caliceamicina omegaI1 (Angew Chem. Intl. Ed. Engl. (1994) 33:183-186); dinemicina, dinemicina A; bisfosfonatos, tales como clodronato; una esperamicina; así como cromóforo de neocarzinostatina y cromóforos de antibióticos de la cromoproteína endiina), aclacinomisinas, actinomicina, autramicina, azaserina, bleomicinas, cactinomicina, carabicina, carminomicina, carzinofilina, cromomicinas, dactinomicina, daunorubicina, detorubicina, 6-diazo-5-oxo-L-norleucina, morfolino-doxorubicina, cianomorfolino-doxorubicina, 2-pirrolino-doxorubicina y desoxidoxorubicina), epirubicina, esorubicina, idarubicina, nemorubicina, marcelomicina, mitomicinas tales como mitomicina C, ácido micofenólico, nogalamicina, olivomicinas, peplomicina, porfiromicina, puromicina, quelamicina, rodorubicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidina, ubenimex, zinostatina, zorubicina; anti-metabolitos tales como metotrexato y 5-fluorouracilo (5-FU); análogos de ácido fólico tales como denopterina, metotrexato, pteropterina, trimetrexato; análogos de purina tales como fludarabina, 6-mercaptopurina, tiamiprina, tioguanina; analogos de pirimidina tales como ancitabina, azacitidina, 6azauridina, carmofur, citarabina, didesoxiuridina, doxifluridina, enocitabina, floxuridina; andrógenos tales como calusterona, dromostanolona propionato, epitiostanol, mepitiostano, testolactona; anti-adrenales tales como aminoglutetimida, mitotano, trilostano; reponedor de ácido fólico, tal como ácido frolínico; aceglatona; aldofosfamida glicósido; ácido aminolevulínico; eniluracilo; amsacrina; bestrabucilo; bisantreno; edatraxato; defofamina; demecolcina; diaziquona; elfornitina; acetato de eliptinio; una epotilona; etoglúcido; nitrato de galio; hidroxiurea; lentinano; lonidainina; maitansinoides tales como maitansina y ansamitocinas; mitoguazona; mitoxantrona; mopidanmol; nitraerina; pentostatina; fenamet; pirarubicina; losoxantrona; ácido podofilínico; 2-etilhidrazida; procarbazina; complejo polisacárido PSK® (JHS Natural Products, Eugene, OR); razoxano; rizoxina; sizofiran; espirogermanio; ácido tenuazónico; triaziquona; 2,2’,2”-triclorotrietilamina; tricotecenos (especialmente toxina T-2, verracurina A, roridina A y anguidina); uretano; vindesina; dacarbazina; mannomustina; mitobronitol; mitolactol; pipobroman; gacitosina; arabinósido (“Ara-C”); ciclofosfamida; tiotepa; 6-tioguanina; mercaptopurina; metotrexato; análogos de platino tales como cisplatino y carboplatino; vinblastina; etopósido (VP-16); ifosfamida; mitoxantrona; vincristina; vinorelbina (NAVELBINA®); novantrona; tenipósido; edatrexato; daunomicina; aminopterina; capecitabina (XELODA®, Roche); ibandronato; CPT-11; inhibidor de la topoisomerasa RFS 2000; difluorometilornitina (DMFO); retinoides tales como ácido retinoico; y sales farmacéuticamente aceptables, ácidos y derivados de cualquiera de los anteriores.
También se incluye en la definición de “agente quimioterapéutico”: (i) agentes antihormonales que actúan para regular o inhibid la acción de las hormonas sobre tumores, tales como antiestrógenos y moduladores selectivos del receptor de estrógenos (SERM), incluidos, por ejemplo, tamoxifeno (incluido NOLVADEX®; citrato de tamoxifeno), raloxifeno, droloxifeno, 4-hidroxitamoxifeno, trioxifeno, keoxifeno, LY117018, onapristona y FAGRUPON® (citrato de toremifina); (ii) inhibidores de aromatasa que inhiben la enzima aromatasa, que regula la producción de estrógenos en las glándulas suprarrenales, tales como, por ejemplo, 4(5)-imidazoles, aminoglutetimida, MEGASE® (acetato de megestrol), AROMASIN® (exemestano; Pfizer), formestanie, fadrozol, RIVISOR® (vorozol), FEMARA® (letrozol; Novartis), y ARIMIDEX® (anastrozol; AstraZeneca); (iii) antiandrógenos tales como flutamida, nilutamida, bicalutamida, leuprólido y goserelina; así como troxacitabina (un análogo del nucleósido citosina de 1,3-dioxolano);
(iv) inhibidores de las proteína quinasas tales como inhibidores de MEK (documento WO 2007/044515); (v) inhibidores de las lípido quinasas; (vi) oligonucleótidos antisentido, particularmente los que inhiben la expresión de genes en las vías de señalzación implicadas en la proliferación celular aberrante, por ejemplo, PKC-alfa, Raf y H-Ras, tales como oblimersen (GENASENSE®, Genta Inc.); (vii) ribozimas tales como inhibidores de la expresión de VEGF (p.ej., ANGIOZYME®) inhibidores de la expresión de HER2; (viii) vacunas tales como vacunas de terapia génica, por ejemplo ALLOVECTIN®, LEUVECTIN®, y VAXID®; PROLEUKIN® rIL-2; inhibidores de la topoisomerasa 1 tales como LURTOTECAN®; ABARELIX® rmRH; (ix) agentes antigiogénicos tales como bevacizumab (AVASTIN®, Genentech); y sales, ácidos y derivados farmacéuticamente aceptables de cualquiera de los anteriores.
En la definición de “agentes quimioterapéutico” también se incluyen anticuerpos terapéuticos tales como alemtuzumab (Campath), bevacizumab (AVASTIN®, Genentech); cetuximab (ERBITUX®, Imclone); panitumumab (VECTIBIX®, Amgen), rituximab (RITUXAN®, Genentech/Biogen Idec), pertuzumab (OMNITARG™, 2C4, Genentech), trastuzumab (HERCEPTIN®, Genentech), tositumomab (Bexxar, Corixia), y el conjugado anticuerpofármaco, gemtuzumab ozogamicina (MYLOTARG®, Wyeth).
Los anticuerpos monoclonales con potencial terapéutico como agentes quimioterapéuticos en combinación con los conjugados de la invención incluyen: alemtuzumab, apolizumab, aselizumab, atlizumab, bapineuzumab, bevacizumab, bivatuzumab mertansine, cantuzumab mertansine, cedelizumab, certolizumab pegol, cidfusituzumab, cidtuzumab, daclizumab, eculizumab, efalizumab, epratuzumab, erlizumab, felvizumab, fontolizumab, gemtuzumab ozogamicin, inotuzumab ozogamicin, ipilimumab, labetuzumab, lintuzumab, matuzumab, mepolizumab, motavizumab, motovizumab, natalizumab, nimotuzumab, nolovizumab, numavizumab, ocrelizumab, omalizumab, palivizumab, pascolizumab, pecfusituzumab, pectuzumab, pertuzumab, pexelizumab, ralivizumab, ranibizumab, reslivizumab, reslizumab, resyvizumab, rovelizumab, ruplizumab, sibrotuzumab, siplizumab, sontuzumab, tacatuzumab tetraxetan, tadocizumab, talizumab, tefibazumab, tocilizumab, toralizumab, trastuzumab, tucotuzumab celmoleuquina, tucusituzumab, umavizumab, urtoxazumab y visilizumab.
Las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la presente invención y para usar de acuerdo con la presente invención pueden comprender, además del principio activo, es decir un compuesto conjugado, un excipiente, vehículo, tampón, estabilizante u otro material farmacéuticamente aceptables bien conocidos para los expertos en la técnica. Dichos materiales no deben ser tóxicos y no deben interferir en la eficacia del principio activo. La naturaleza precisa del vehículo u otro material dependerá de la vía de administración, que puede ser oral o mediante inyección, por ejemplo cutánea, subcutánea o intravenosa.
Las composiciones farmacéuticas para administración oral pueden ser en forma de comprimido, cápsula, polvo o líquido. Un comprimido puede comprender un vehículo sólido o un adyuvante. En general, las composiciones farmacéuticas líquidas pueden comprenden un vehículo líquido, tal como agua, aceites de parafina, aceites animales
o vegetales, aceite mineral o aceite sintético. Se puede incluir solución fisiológica salina, dextrosa u otra solución de sacáridos o glicoles tales como etilenglicol, propilenglicol o polietilenglicol. Una cápsula puede comprender un vehículo sólido tal como gelatina.
Para la inyección intravenosa, cutánea o subcutánea o la inyección en el punto de afección, el principio activo estará en forma de una solución acuosa parenteralmente aceptable que carece de pirógenos y tiene pH, isotonicidad y estabilidad adecuados. Los expertos en la técnica tienen la capacidad de preparar soluciones adecuadas usando, por ejemplo, vehículos isotónicos tales como inyección de cloruro sódico, inyección de Ringer, inyección de Ringer lactato. Según se requiera se pueden incluir conservantes, estabilizantes, tampones, antioxidantes y/u otros aditivos.
Formulaciones
Aunque es posible usar (p. ej., administrar) el compuesto conjugado solo, a menudo es preferible presentarlo como una composición o formulación.
En una realización, la composición es una composición farmacéutica (p. ej., formulación, preparación, medicamento) que comprende un compuesto conjugado, como se describe en el presente documento, y un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.
En una realización, la composición es una composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto conjugado, como se describe en el presente documento, junto con uno o más ingredientes farmacéuticamente aceptables bien conocidos por los expertos en la técnica, incluidos, pero sin limitación, vehículos, diluyentes, excipientes, adyuvantes, cargas, tampones, conservantes, antioxidantes, lubricantes, estabilizantes, solubilizantes, tensioactivos (p. ej., agentes humectantes), agentes de enmascaramiento, agentes colorantes, agentes aromatizantes y agentes edulcorantes farmacéuticamente aceptables.
En una realización, la composición comprende además otros agentes activos, por ejemplo otros agentes terapéuticos o profilácticos.
Los vehículos, diluyentes, excipientes etc. adecuados se pueden encontrar en textos farmacéuticos convencionales. Véase, por ejemplo, Handbook of Pharmaceutical Additives, 2ª Edición (eds. M. Ash y col. Ash), 2001 (Synapse Information Resources, Inc., Endicott, New York, USA), Remington's Pharmaceutical Sciences, 20ª edición, pub. Lippincott, Williams & Wilkins, 2000; y Handbook of Pharmaceutical Excipients, 2ª edición, 1994.
Es posible llevar a cabo un procedimiento de fabricación de una composición farmacéutica que comprende mezclar al menos un conjugado o un compuesto de tipo conjugado radiomarcado con [11C], como se define en el presente documento, junto con uno o más de los otros ingredientes farmacéuticamente aceptable bien conocidos para los expertos en la técnica, por ejemplo vehículos, diluyentes, excipientes etc. Si se formula como unidades pequeñas (p. ej., comprimidos etc.), cada unidad contiene una cantidad predeterminada (dosis) del compuesto activo.
Como se usa en el presente documento, la expresión "farmacéuticamente aceptable" se refiere a compuestos, ingredientes, materiales, composiciones, formas de dosificación etc., que son, dentro del ámbito del criterio médico, adecuados para usar en contacto con los tejidos del sujeto en cuestión (p. ej., seres humanos) sin excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica u otro problema o complicación, proporcional a una razonable proporción de beneficios/riesgos. Cada vehículo, diluyente, excipiente etc. debe ser "aceptable" en el sentido de ser compatible con los otros ingredientes de la formulación.
Las formulaciones pueden prepararse mediante cualquiera de los procedimientos bien conocidos en el sector de la farmacia. Dichos procedimientos incluyen la etapa de llevar el compuesto activo en asociación con un vehículo, que constituye uno o más ingredientes auxiliares. En general, las formulaciones se preparan poniendo en contacto de forma uniforme y estrecha el compuesto activo con vehículos (p. ej., vehículos líquidos, vehículo sólido finamente dividido etc.) y, después, en caso necesario, dando forma al producto.
La formulación puede prepararse para proporcionar una liberación rápida o lenta; una liberación inmediata, retardada, programada o prolongada; o una combinación de los mismos.
Las formulaciones adecuadas para administración parenteral (p. ej., mediante inyección) incluyen líquidos acuosos o no acuosos, isotónicos, apirógenos, estériles (p. ej., soluciones, suspensiones) en los que el principio activo se disuelve, suspende o, por el contrario, se proporciona (p. ej., en un liposoma u otra micropartícula). Dichos líquidos pueden además contener otros ingredientes farmacéuticamente aceptables, tales como antioxidantes, tampones, conservantes, estabilizantes, bacteriostáticos, agentes de suspensión, agentes espesantes y solutos que hacen que la formulación sea isotónica con la sangre (u otro fluido corporal relevante) del receptor objetivo. Ejemplos de excipientes incluyen, por ejemplo, agua, alcoholes, polioles, glicerol, aceites vegetales y similares. Ejemplos de vehículos isotónicos adecuados para usar en dichas formulaciones incluyen cloruro sódico, inyección, solución de Ringer o inyección de Ringer lactato. Normalmente, la concentración del principio activo en el líquido es de aproximadamente 1 ng/ml a aproximadamente 10 1g/ml, por ejemplo de aproximadamente 10 ng/ml a aproximadamente 1 1g/ml. Las formulaciones pueden presentarse en recipientes de dosis unitaria o de multidosis, por ejemplo ampollas y viales sellados, y pueden almacenarse en una condición secada por congelación (liofilizada) que requiere sólo la adición del transportador líquido estéril, por ejemplo agua para inyecciones, inmediatamente antes de usar. Las soluciones y suspensiones de inyección extemporáneas se pueden preparar a partir de polvos, gránulos y comprimidos estériles.
Dosificación
El experto en la técnica entenderá que las dosificaciones adecuadas del compuesto conjugado y las composiciones que comprenden el compuesto conjugado pueden variar de un paciente a otro. En general, la determinación de la dosificación óptima implicará el equilibrio del nivel del beneficio terapéutico contra cualquier riesgo o efecto secundario perjudicial. El nivel de dosificación seleccionado dependerá de diversos factores incluyendo, pero sin limitación, la actividad del compuesto concreto, la vía de administración, el momento de la administración, la tasa de excreción del compuesto, la duración del tratamiento, otros fármacos, compuestos y/o materiales usados en combinación, la gravedad de la afección y la especie, el sexo, la edad, el peso, la afección, el estado de salud general y el historial médico previo del paciente. La cantidad del compuesto y la vía de administración serán, en última instancia, a criterio del médico, veterinario o clínico, aunque, en general, la dosis se seleccionará para obtener concentraciones locales en el sitio de acción que ejerzan el efecto deseado sin producir muchos daños o efectos secundarios perjudiciales.
La administración se puede efectuar en una dosis, de forma continua o intermitente (p. ej., en dosis divididas a intervalos adecuados) a lo largo del ciclo de tratamiento. Los métodos de determinación del medio y la dosis de administración más eficaces son bien conocidos para los expertos en la técnica y variarán con la formulación usada para terapia, el objetivo de la terapia, la(s) célula(s) diana que se estén tratando y el sujeto que se esté tratando. Se pueden llevar a cabo administraciones únicas o múltiples siendo los niveles y el patrón de dosis seleccionados por el médico, veterinario o clínico encargado del tratamiento.
En general, una dosis adecuada del compuesto activo está en el intervalo de aproximadamente 100 ng a aproximadamente 25 mg (más normalmente de aproximadamente 1 1g a aproximadamente 10 mg) por kilogramo de peso corporal del sujeto al día. Cuando el compuesto activo es una sal, un éster, una amida, un profármaco o similares, la cantidad administrada se calcula en base al compuesto parental y, de este modo, el peso real que se va a usar aumenta proporcionalmente.
En una realización, el compuesto activo se administra a un paciente humano de acuerdo con el siguiente régimen de dosificación: aproximadamente 100 mg, 3 veces al día.
En una realización, el compuesto activo se administra a un paciente humano de acuerdo con el siguiente régimen de dosificación: aproximadamente 150 mg, 2 veces al día.
En una realización, el compuesto activo se administra a un paciente humano de acuerdo con el siguiente régimen de dosificación: aproximadamente 200 mg, 2 veces al día.
No obstante, en una realización, el compuesto conjugado se administra a un paciente humano de acuerdo con el siguiente régimen de dosificación: aproximadamente 50 o aproximadamente 75 mg, 3 ó 4 veces al día.
En una realización, el compuesto conjugado se administra a un paciente humano de acuerdo con el siguiente régimen de dosificación: aproximadamente 100 o aproximadamente 125 mg, 2 veces al día.
Las cantidades de dosis descritas anteriormente se pueden aplicar al conjugado (incluido el grupo de PBD y el enlazador al anticuerpo) o a la cantidad eficaz de compuesto de PBD proporcionada, por ejemplo la cantidad de compuesto que se puede liberar tras la escisión del enlazador.
Para la prevención o tratamiento de la enfermedad, la dosificación adecuada de un ADC de la invención dependerá del tipo de enfermedad que se va a tratar, como se ha definido anteriormente, la gravedad y evolución de la enfermedad, si la molécula se administra con fines preventivos o terapéuticos, terapias previas, el historial clínico del paciente y la respuesta al anticuerpo, y el criterio del médico encargado de la atención. La molécula se administra adecuadamente al paciente una vez o en una serie de tratamientos. Dependiendo del tipo y gravedad de la enfermedad, aproximadamente 1 μg/kg a 15 mg/kg (p. ej.,. 0,1-20 mg/kg) de molécula es una dosificación candidata inicia para la administración al paciente, mediante, por ejemplo, una o más administraciones distintas o mediante infusión continua. Una dosis diaria típica podría variar de aproximadamente 1 μg/kg a 100 mg/kg o más, en función de los factores mencionados anteriormente. Una dosificación de ejemplo del ADC que se va a administrar a un paciente está en el intervalo de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 10 mg/kg del peso del paciente. Para administraciones repetidas en varios días o más, según la afección, el tratamiento se mantiene hasta que se produce una supresión deseada de los síntomas de la enfermedad. Un régimen de dosificación de ejemplo comprende un ciclo de administración de una dosis de carga inicial de aproximadamente 4 mg/kg, seguido de dosis adicionales cada semana, dos semanas o tres semanas de un ADC. Pueden ser útiles otros regímenes de dosificación. El progreso de esta terapia se monitoriza fácilmente mediante técnicas y ensayos convencionales.
Tratamiento
El término “tratamiento”, como se usa en el presente documento en el contexto de tratamiento de una afección, se refiere, en general, a tratamiento y terapia, sea de un ser humano o de un animal (p. ej., en aplicaciones veterinarias), en las que se consigue algún efecto terapéutico deseado, por ejemplo la inhibición de la progresión de la afección, e incluye reducción de la velocidad de la progresión, detención en la velocidad de la progresión, regresión de la afección, mejora de la afección y cura de la afección. También se incluye el tratamiento como una medida profiláctica (es decir, profilaxis, prevención).
Como se usa en el presente documento, la expresión "cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a la cantidad de un compuesto activo o material, composición o dosis que comprende un compuesto activo que es eficaz para producir algún efecto terapéutico deseado, acorde con una proporción beneficios/riesgo razonable, cuando se administra de acuerdo con un régimen terapéutico deseado.
De un modo similar, como se usa en el presente documento, la expresión "cantidad profilácticamente eficaz" se refiere a la cantidad de un compuesto activo o material, composición o dosis que comprende un compuesto activo que es eficaz para producir algún efecto profiláctico deseado, acorde con una proporción beneficios/riesgo razonable, cuando se administra de acuerdo con un régimen terapéutico deseado.
Preparación de conjugados de anticuerpo-fármaco
Los conjugados de anticuerpo y fármaco se pueden preparar mediante varias rutas, usando reacciones de química orgánica, condiciones y reactivos conocidos por los expertos en la técnica, incluidos: (1) reacción de un grupo nucleófilo o un grupo electrófilo de un anticuerpo con un reactivo enlazador bivalente, para formar el intermedio anticuerpo-enlazador Ab-C, a través de un enlace covalente, seguida de reacción con un reactivo del grupo farmacológico activado; y (2) reacción de un reactivo del grupo farmacológico con un reactivo enlazador, para formar el reactivo fármaco-enlazador F-C, a través de un enlace covalente, seguida de reacción con el grupo nucleófilo o un grupo electrófilo de un anticuerpo. Los procedimientos de conjugación (1) y (2) se pueden usar con diversos anticuerpos y enlazadores para preparar los conjugados anticuerpo-fármaco de la invención.
Los grupos nucleófilos sobre anticuerpos incluyen, pero sin limitación: (i) grupos amina en N-terminal, (ii) grupos amina en la cadena lateral, por ejemplo lisina, (iii) grupos tiol en la cadena lateral, por ejemplo cisteína, y (iv) grupos amino o hidroxilo de azúcar en la que el anticuerpo esta glicosilado. Los grupos amina, tiol e hidroxilo son nucleófilos y capaces de reaccionar para formar enlaces covalentes con grupos electrófilos sobre grupos enlazadores y reactivos enlazadores, incluidos: (i) ésteres activos tales como ésteres NHS, ésteres HOBt, haloformiatos y haluros ácidos; (ii) haluros de alquilo y de bencilo tales como haloacetamidas; (iii) aldehídos, cetonas, carboxilo y grupos maleimida. Ciertos anticuerpos tienen disulfuros intercatenarios reducibles, es decir puentes de cisteína. Los anticuerpos pueden hacerse reactivos para la conjugación con reactivos enlazadores mediante tratamiento con un agente reductor tal como DTT (reactivo de Cleland, ditiotreitol) o TCEP clorhidrato de (tris(2-carboxietil)fosfina; Getz y col. (1999) Anal. Biochem. Vol 273:73-80; Soltec Ventures, Beverly, MA). Cada puente disulfuro de cisteína formará de este modo, en teoría, dos nucleófilos de tiol reactivo. Se pueden introducir grupos nucleófilos adicionales en antibióticos mediante la reacción de lisinas con 2-iminotiolano (reactivo de Traut) que tiene como resultado la conversión de una amina en un tiol.
También se pueden producir conjugados de anticuerpo-fármaco mediante modificación del anticuerpo para introducir grupos electrófilos que pueden reaccionar con sustituyentes nucleófilos en el reactivo enlazador. Los azúcares de los anticuerpos glicosilados se pueden oxidar, por ejemplo con reactivos de oxidación de peryodato, para formar grupos aldehído o cetona, que pueden reaccionar con el grupo amina de los reactivos enlazadores o los grupos farmacológicos. Los grupos de base de Schiff de imina pueden formar un enlazador estable o se pueden reducir mediante, por ejemplo, reactivos de borohidruro para formar enlaces amina estables. En una realización, la reacción de la porción de hidrato de carbono de un anticuerpo glicosilado con galactosa oxidasa o metaperyodato sódico puede dar grupos carbonilo (aldehído y cetona) en la proteína que pueden reaccionar con grupos adecuados sobre el fármaco (Hermanson, G.T. (1996) Bioconjugate Techniques; Academic Press: New York, p 234-242). En otra realización, las proteínas que contienen residuos de serina o treonina en N-terminal pueden reaccionar con metaperyodato sódico, lo que tiene como resultado la producción de un aldehído en lugar del primer aminoácido (Geoghegan & Stroh, (1992) Bioconjugate Chem. 3:138-146; documento US 5362852). Dicho aldehído se puede hacer reaccionar con un grupo farmacológico o enlazador nucleófilo. Asimismo, los grupos nucleófilos sobre un grupo farmacológico incluyen, pero sin limitación: Grupos amina, tiol, hidroxilo, hidrazina, oxima, hidrazina, tiosemicarbazona, hidrazina carboxilato y arilhidrazida capaces de reaccionar para formar enlaces covalentes con grupos electrófilos sobre grupos enlazadores y reactivos enlazadores, incluidos: (i) ésteres activos tales como ésteres NHS, ésteres HOBt, haloformiatos y haluros ácidos; (ii) haluros de alquilo y de bencilo tales como haloacetamidas; (iii) aldehídos, cetonas, carboxilo y grupos maleimida. Se pueden introducir grupos nucleófilos reactivos en los compuestos derivados de antraciclina mediante interconversiones del grupo funcional estándar. Por ejemplo, los grupos hidroxilo se pueden convertir en grupos tiol mediante reacciones de tipo Mitsunobu para formar compuestos de fármaco modificados con tiol.
El sujeto/paciente
El sujeto/paciente puede ser un animal, mamífero, un mamífero con placenta, un marsupial (p. ej., un canguro, un tejón australiano), un monotrema (p. ej., ornitorrinco), un roedor (p. ej., una cobaya, un hámster, una rata, un ratón), murino (p. ej., un ratón), un lagomorfo (p. ej., un conejo), un ave (p. ej., un pájaro), un canino (p. ej., un perro), un felino (p. ej., un gato), un equino (p. ej., un caballo), un porcino (p. ej., un cerdo), un ovino (p. ej., una oveja), un bovino (p. ej., una vaca), un primate, un simio (p. ej., un mono o gorila), un mono (p. ej., un tití, babuino), un simio (p. ej., gorila, chimpancé, orangután, gibón) o un ser humano.
Además, el sujeto/paciente puede estar en cualquiera de sus formas de desarrollo, por ejemplo un feto. En una realización preferida, el sujeto/paciente es un ser humano.
En una realización, el paciente es una población en la que cada paciente tiene un tumor que tiene integrina av 6 sobre la superficie de la célula. 5
Síntesis
En una realización, un conjugado dimérico de fórmula VIII puede prepararse a partir de los compuestos I y II como se muestra en el Esquema 1.
Esquema 1,
En general, pueden prepararse dímeros asimétricos tratando compuestos bis-amino de fórmula IV con un equivalente de un reactivo de cloroformiato disponible en el mercado (o que puede prepararse fácilmente) para romper la simetría de las moléculas. Después, la amina libre restante puede funcionalizarse independientemente para introducir el progrupo lábil terapéuticamente (RL). La manipulación adicional del grupo funcional para cerrar el anillo PBD B, la eliminación de los grupos de protección y la terminación e introducción del grupo funcional de unión a anticuerpo, por ejemplo G1, proporciona la molécula diana.
Los compuestos de fórmula IV se preparan típicamente acoplando un fragmento de anillo C adecuadamente funcionalizado (I) a un núcleo dimérico que contiene el anillo A de fórmula II. Pueden prepararse fragmentos del anillo C a partir de componentes básicos de 4-oxoprolinato de metilo protegidos con carbamato conocidos. Puede emplearse olefinación en condiciones de Wittig o Horner-Emmons para formar alquenos endo- o exo- insaturados. Como alternativa, pueden usarse consecutivamente reacciones de triflación y acoplamiento de Suzuki para obtener fragmentos del anillo de C 3,4 o 4,5-insaturado sustituidos con 4-arilo. Pueden acoplarse fragmentos del anillo C y del anillo A en condiciones convencionales, en presencia de trietilamina, usando derivados de cloruro de ácido de los fragmentos de anillo A para dar moléculas de fórmula III. Los compuestos de tipo III pueden reducirse, sin afectar a la insaturación del endo o exo del anillo de C, con zinc en ácido acético para proporcionar moléculas de fórmula IV.
Pueden prepararse carbamatos asimétricos de tipo VI tratando bis-aminas de tipo IV con un solo equivalente de cloroformiatos disponibles en el mercado (o que pueden prepararse facilmente), en presencia de piridina o trietilamina. Pueden seleccionarse cloroformiatos para proporcionar unidades de terminación de carbamato (RC) que son tanto ortogonales como idénticas a las usadas en el progrupo (RL). Los carbamatos idénticos permiten la eliminación simultánea de ambos grupos protectores ahorrando etapas sintéticas. Sin embargo, la eliminación de los carbamatos de terminación (RC) requiere que la adición de la funcionalidad de unión a anticuerpo tenga lugar en presencia de un grupo sensible imina o carbinolamina N10-C11. Si fuera necesario, esta situación puede evitarse mediante el uso de grupos protectores de carbamato ortogonales que permiten la adición de grupos de unión a anticuerpo mientras se mantiene el grupo carbinolamina N10-C11 protegido. En esta estrategia, el grupo N10-C11 debe desenmascararse en presencia del grupo de unión a anticuerpo y los reactivos usados deben ser compatibles con este grupo. Por ejemplo, si una imina N10-C11 debe desenmascararse en presencia de un grupo maleimida, Troc y Teoc serían grupos RC adecuados como los agentes de desprotección, la pareja Cd/Pb y TBAF, no debería afectar al grupo maleimida. Por otro lado, el grupo Alloc debería evitarse puesto que pueden añadirse neutralizadores de π-alilo, tales como de modo 1,4 al grupo maleimida. El carbamato RL puede introducirse convirtiendo el grupo amino restante en un isocianato e inactivándolo con el alcohol RL. Como alternativa, el alcohol RL puede convertirse en un cloroformiato o equivalente funcional (fluoroformiato, p-nitrocarbonato, pentafluorocarbonato o hidroxibenzotriazol carbonato). Finalmente, el grupo amino restante puede convertirse en un p-nitrocarbamato, pentafluorocarbamato o carbamato hidroxibenzotriazol reactivo, que puede desplazarse con el alcohol RL para proporcionar moléculas de fórmula VI.
Pueden prepararse moléculas fórmula VII a partir de moléculas de fórmula VI eliminando los grupos protectores de acetato, con carbonato potásico en metanol acuoso, o en presencia de un grupo Fmoc en RL con trietilborohidruro de litio. La oxidación con peryodinano de Dess-Martin (o como alternativa TPAP/NMO, PDC o en condiciones de Swern) proporciona el producto de anillo cerrado.
Pueden prepararse conjugados de fórmula V a partir de moléculas de fórmula VII mediante la eliminación del grupo de terminación RC, elaboración de RL para incluir un rento de unión a anticuerpo (por ejemplo, un grupo maleimidocaproilo) que puede conjugarse con un agente de unión celular, tal como un anticuerpo, en condiciones convencionales (véase Dubowchik y col. Bioconjugate Chemistry, 2002, 13,855-869). La elaboración de RL puede incluir la etapa de extender el grupo para que incluya un elemento espaciador, tal como un grupo G1, que después puede usarse para conectar a un agente de unión a célula (formando de esta manera el grupo A).
Pueden prepararse compuestos monoméricos y dímeros simétricos de una manera similar al dímero antisimétrico como se ha descrito anteriormente.
En otra realización, un conjugado de fórmula XVIII puede prepararse a partir del compuesto IX como se muestra en el Esquema 2.
Compuesto II
La síntesis de compuestos de fórmula (II) se describe en la solicitud anterior del solicitante, WO 2006/111759 y también se describe por Gregson y col. (J. Med. Chem. 2001, 44, 1161-1174). El compuesto (IIa) tiene un enlazador de tres carbonos. El compuesto (IIb) tiene un enlazador de cinco carbonos.
Esquema 2.
R9 R9
R8
NO2 R8
NO2
CO2Me
CO2Me
N R7R7
N R6
B R6O O OTfA
IX, A = H, B = OH XI X, A,B = =O
R9 R9
OAc R8 NO2R8 NO2 CO2Me
N R6
N R7R7 R6
R2OR2 O
XIII XII
R9 R9RL OAc
OAc
R8 R8NH2
NH
N R7
R7
N
R6
R2 R6
R2
OO
XV
XIV
R9RL R9RL
OH
OH
R8
NH
N R8
H
N R2
R7
N R7
R6 R6
R2
OO
R10 XVII XVI
R9
XVIII En este esquema, el grupo R2 es un grupo arilo C5-20. Los compuestos de fórmula IX se describen en el documento WO 2004/043963. 5 Los compuestos de fórmula X pueden sintetizarse a partir de compuestos de fórmula IX mediante oxidación, por ejemplo, usando: TCCA y TEMPO; BAIB y TEMPO; TPAP; condiciones de Dess-Martin; o condiciones de Swern.
Los compuestos de fórmula IX pueden sintetizarse acoplando compuestos adecuados de fórmulas B y C, o 10 derivados activados de los mismos: RC R8 NO2
B HN
C
OH
R7
OH
Los compuestos de fórmula XI pueden prepararse a partir de un compuesto de fórmula X en un procedimiento que comprende tratar X con el anhídrido adecuado y 2,6-lutidina anhidra o 2,6-tBu-piridina anhidra, a una temperatura de -35ºC o inferior, en un disolvente orgánico seco, en una atmósfera inerte. XI está sustancialmente libre del compuesto que tiene un doble enlace C1-C2.
Cabe indicar que la preparación de compuestos que tienen un doble enlace C1-C2 se describe por Kang y col., Chem. Commun., 2003, 1680-1689.
Los compuestos de fórmula XI pueden convertirse en compuestos de fórmula XII. La conversión (un acoplamiento de Suzuki) se realiza por acoplamiento cruzado catalizado por paladio de XI con el derivado de aril boro adecuado. El catalizador de paladio puede ser cualquier catalizador adecuado, por ejemplo Pd(PPh3)4, Pd(OCOCH3)2, PdCl2, Pd(dba)3.
Los compuestos de fórmula XII pueden convertirse en compuestos de fórmula XIV mediante el compuesto XIII. La conversión se consigue mediante la reducción en primer lugar del éster y reprotección en forma de un acetato (o silil éter en un enfoque alternativo). La reducción puede conseguirse por medios convencionales, por ejemplo con LiAlH4
o NaBH4. La reprotección en forma de un acetato puede conseguirse, por ejemplo, por reacción con cloruro de acetilo (reprotección en forma de un silil éter puede conseguirse, por ejemplo, por reacción con el cloruro de sililo adecuado). Después, la reducción del grupo se realiza usando, por ejemplo, zinc en ácido acético.
Los compuestos de fórmula XIV pueden convertirse en compuestos de fórmula XV. Esta conversión se consigue normalmente por reacción de XIV con trifosgeno para obtener el isocianato seguido de reacción con RL-OH. Este enfoque se describe en el documento WO 2005/023814. Como alternativa, también pueden introducirse grupos protectores de nitrógeno individuales como un cloroformiato, fluoroformiato o azidoformiato. Los grupos protectores de nitrógeno más complejos, así como los grupos protectores de nitrógeno simples, pueden introducirse como carbonatos de O-succinamida, carbonatos de O-pentaflurofenilo y carbonatos de O-nitrofenilo.
La conversión de XV a XVII puede conseguirse por eliminación inicial del grupo protector de acetato, con carbonato potásico, en metanol acuoso o con trietilborohidruro de litio. La oxidación con peryodinano de Dess-Martin (o como alternativa, TPAP/NMO, TFAA/DMSO, complejo SO3.Piridina /DMSO, PDC, PCC, BAIB/TEMPO o en condiciones de Swern) proporciona el producto cerrado de anillo. Si se usa un silil éter en lugar de un acetato, la conversión de XV en XVII puede conseguirse mediante la eliminación inicial del grupo protector silil éter, por ejemplo usando TBAF en THF, ácido acético en THF acuoso, CsF en DMF o HF en piridina, seguido de oxidación como se ha descrito anteriormente.
Después, el compuesto XVIII se acopla al agente de unión a célula. La secuencia de etapa o etapas de XVII a XVIII depende de la naturaleza de RL. Este grupo puede modificarse y después acoplarse al agente de unión a célula para formar un conjugado de la invención. Por ejemplo, una terminación de grupo puede eliminarse para proporcionar una funcionalidad adecuada par la reacción con un agente de unión a célula. En otras etapas, esta misma funcionalidad puede usarse para un elemento espaciador adicional, tal como un grupo G1, y después dicho elemento espaciador puede a su vez conectarse al agente de unión a célula (formando de esta manera el grupo A).
En algunas realizaciones de la invención se proporcionan compuestos de fórmula A-A y A-B. Pueden prepararse compuestos de este tipo usando procedimientos similares a los que se describen en el documento WO 2010/091150. Los compuestos intermedios descritos en el documento WO 2010/091150 también pueden emplearse en los procedimientos descritos anteriormente.
Por ejemplo, el compuesto dimérico (15) que se muestra en el párrafo [164] puede usarse como compuesto (III) en el Esquema I anterior. Se muestran compuestos monoméricos de este tipo como compuestos (3), (6) y (9). Estas y otras adaptaciones, serían evidentes para un experto en la materia.
Síntesis preferidas
En una realización, el conjugado es el compuesto 14, y se prepara como se muestra en el Esquema 3. Los dipéptidos 7a,b y 8 se preparan como se describe en la sección experimental posterior. En dicho esquema, las porciones de enlazador L1 y L2 tienen las estructuras:
NHP O
H
*
N
N NH H
LB =
O O
*
H
N
N N
HLC = H O
HN
NH2
Esquema 3.
1
O O2 N O
O NO2
OMe +
OH
OMe MeO OO NH HO
OO O 2N O
O NO2 OMe MeO NN
OMe MeO
O 4 O
OAc
AcO
H 2N O
O NH2
N
N
OMe MeO
OO
O
O AcO
OAc
HN O O NH2 NN OMe MeO
OO
LN X OH
7a, X = Fmoc, LN = LA, P = Boc 7b, X = Alloc, LN = LA, P = Boc 8, X = Alloc, LN = LB 82, X = Boc, LN = LC
X
LN
O
O
OO
OAc
AcO
NH
HN
O
O
N
N
OMe MeO OO
X
LN
O
O
OO
OH
HO
NH
HN
O
O
N
N
OMe MeO
O
O
X
LN
OO O
HO
NO
OH
N OMe MeO O
O
H
LN
O
N O
OH
N OMe MeO O
O
El compuesto 13c, cuando el dipéptido se corresponde con L2, puede prepararse a partir de 12c por un procedimiento análogo.
En una realización, el conjugado es el compuesto 16a o 16b, y el compuesto se prepara como se muestra en el Esquema 4 siguiente, en el que el compuesto 12a puede prepararse como se ha descrito anteriormente:
Esquema 4.
12a, LN = LA, P = Boc 12c, LN = LB
Esquema 9. O 2N O O NO2
OHHO OMe MeO
39a
OO
O NO2O 2N OMeO 2C CO2Me
NN
OMe MeO HO O 39b O OH
O 2N O
O NO2 CO2MeMeO 2C NN
OMe MeO OO 39c O O
O NO2
CO2Me
MeO 2C O 2N O
N
N
OMe MeO
TfOO OOTf
O NO2
O 2N O
CO2Me
MeO2C
N
N
OMe MeO
OO
F
F
OTBDMS
TBDMSO NO2
O2N O
O
N
N
OMe MeO
OO
F
F
OTBDMS
TBDMSO NH2
O
H2N O
N
N
OMe MeO
OO
F
F Alloc
OTBDMS TBDMSO
NH
OH 2N O
NN
OMe MeO OO
F Alloc F LB O
O Alloc
OTBDMS TBDMSO
NHHN
OO
NN
OMe MeO OO
FF Alloc L B
O
O Alloc
OHHO
NHHN O
O
NN
OMe MeO OO
FF
47
48
Esquema 10.
12c, LN = LB
R
O
I1, R = Bn I2, R = H
O HO O n
LB
O O
NO
O
H
N OMe MeO OO
I3, n = 5
O O
N
O O O n
LB
O O
NO
OH
N OMe MeO OO
49, n = 5
Esquema 11.
O
H O H
NN N H O
OHO O
O
O
LB
O O
O
OAc AcO
NHR HN O O
NN
OMe MeO
OO
52, R = Alloc
53, R = H
8
O
O X
LB LB
O O
OO
O RO
OR
NH HN O O
NN
OMe MeO
OO
54, R = Ac, X = Alloc
55, R = H, X = Alloc
OO
56, X = Alloc 57, X = H
O
N HO
O
N
O
O O n
LB O OLB
OO O
O
OMe MeO OO
58, n = 8 61, n = 24
60
Esquema 15.
O NO 2
O 2N O
CO2Me
MeO 2C
N
N
OMe MeO
TfO O OOTf
O NO 2
O 2N O
CO2Me
MeO2C
N
N
OMe MeO
O
O
OH
HOO 2N O
O NO 2
N
N
OMe MeO
OO
OAc AcO O NO2
O2N O N
N
OMe MeO
OO
OAc AcO
O NH 2 N
H 2N O N
OMe MeO
O O
Alloc AcO
OAc
NH N
H 2N O O
N
OMe MeO
OO
LB Alloc
OH
Alloc
LB O
O
Alloc AcO
OAc
NHHN
OO
NN
OMe MeO
OO
Alloc
LB O
O
Alloc
OHHO
NHHN OO
NN
OMe MeO
OO
Alloc
LB
O
Alloc OH
NO O H
OMe MeO N OO
A continuación, la invención se describirá adicionalmente con referencia a los siguientes Ejemplos no limitante. Otras realizaciones de la invención serán evidentes para los expertos en la materia a la luz de es éstas.
Ejemplos
Información general
El progreso de reacción se controló por cromatografía de capa fina (TLC) usando gel de sílice Merck Kieselgel 60 F254, con indicador de fluorescencia sobre placas de aluminio. La visualización de TLC se consiguió con luz UV o vapor de yodo a menos que se indique otra cosa. La cromatografía ultrarrápida se realizó usando gel de sílice Merck Kieselgel 60 F254. Los disolventes de extracción y cromatografía se adquirieron y se usaron sin purificación adicional de Fisher Scientific, U.K. Todos los productos químicos se adquirieron de Aldrich Lancaster o BDH.
Las condiciones de CL/EM fueron como se indica a continuación: La HPLC (Waters Alliance 2695) se realizó usando una fase móvil de agua (A) (ácido fórmico al 0,1%) y acetonitrilo (B) (ácido fórmico al 0,1%). Gradiente: composición inicial B al 5% durante 1,0 min, después B del 5% al 95% B en 3 min. La composición se mantuvo durante 0,5 min a B al 95% y después se devolvió a B al 5% en 0,3 minutos. Tiempo de operación de gradiente total igual a 5 min. Caudal 3,0 ml/min, se separaron 400 μl mediante una pieza con forma de T de un volumen muerto de cero que se pasó a través del espectrómetro de masas. Intervalo de longitud de onda de detección: 220 a 400 nm. Tipo de función: diodos alineados (535 exploraciones). Columna: Phenomenex® Onyx Monolithic C18 50 x 4,60 mm.
Se usó el siguiente procedimiento de HPLC semi-preparativa: se realizó cromatografía líquida de alta resolución y fase inversa (HPLC) en columnas Zorbax Eclipse XDB C-18 de las siguientes dimensiones: 150 x 4,6 mm para análisis y 250 x 9,4 mm para tranajo preparativo. Todos los experimentos de HPLC se realizaron con condiciones de gradiente: composición inicial fija de B al 0,5% a B al 50% durante 20 min, detención durante 5 min a B al 50%, después de B al 50% a B al 100% en 2 min, detención durante 3 min a B al 100%, devolución a B al 5% en 2 min y detención durante 3 min. La duración total de la operación de gradiente fue de 35 min. Los eluyentes usados fueron, disolvente A (H2O con TFA al 0,02%) y disolvente B (CH3CN con TFA al 0,02%). Los caudales que se usaron fueron 1,20 ml/min para analítica y 5,00 ml/min para HPLC preparativa.
Compuesto 2 - Cloruro de (S)-2-(metoxicarbonil)-4-metilenpirrolidinio
El compuesto 2 también se describe para su uso en el documento WO 2007/085930 en la preparación de compuestos de PBD.
El compuesto 2 puede prepararse a partir de trans-4-hidroxi-prolina como se describe en el documento
WO 2007/085930, que se incorpora por referencia por la presente. En particular, el Ejemplo 13, que describe la preparación de la sal TFA del compuesto 2, es particularmente relevante.
Como alternativa, el compuesto 2 puede prepararse a partir del compuesto 1 como se describe a continuación.
4-metilenpirrolidin-1,2-dicarboxilato de (S)-1-terc-butil-2-metilo
Se añadió carbonato potásico (19,92 g, 14 mmol, 3 equiv.) a una solución agitada del compuesto 1 (10,92 g, 48 mmol, 1 equiv.) en DMF (270 ml). La suspensión de color blanco resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 min, momento en el que se añadió yodometano (21,48 g/9,5 ml, 151 mmol, 3,15 equiv.). La mezcla de reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 3 días. La DMF se eliminó por evaporación rotatoria a presión reducida, proporcionando un residuo de color amarillo que se repartió entre acetato de etilo y agua. La fase orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua, una solución acuosa saturada de cloruro de sodio y se secaron sobre sulfato de magnesio. El acetato de etilo se eliminó por evaporación rotatoria a presión reducida, dando el producto en bruto en forma de un aceite de color amarillo. El producto en bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida [n-hexano al 85%/acetato de etilo al 15%], proporcionando el producto en forma de un aceite incoloro (véase también F Manfré y col., J. Org. Chem. 1992, 57, 2060-2065).
Cloruro de (S)-2-(metoxicarbonil)-4-metilenpirrolidinio
Se añadió una solución de ácido clorhídrico en dioxano (4 M, 63 ml, 254,4 mmol, 4,5 equiv.) a 4-metilenpirrolidin-1,2dicarboxilato de (S)-1-terc-butil 2-metilo (13,67 g, 56,6 mmol, 1 equiv.) a temperatura ambiente. Se observó la efervescencia lo que indicaba la liberación de CO2 y la eliminación del grupo Boc. El producto precipitó en forma de un sólido de color blanco, se añadió más cantidad de dioxano para facilitar la agitación, la mezcla de reacción se dejó en agitación durante un ahora y después se diluyó con éter. El producto precipitado se recogió por filtración al vacío y se lavó con más cantidad de éter. El secado al aire proporcionó el producto deseado 2 en forma de un polvo de color blanco (9,42 g, 94%) (véase también P Herdwijn y col., Canadian Journal of Chemistry. 1982, 60, 2903-7).
Compuesto 3
El compuesto 3 puede prepararse como se describe en el documento WO 2006/111759 y Gregson y col.
Compuesto 4
El compuesto 4 puede prepararse a partir del compuesto 3 y el compuesto 2.
Se añadió una cantidad catalítica de DMF anhidra (0,5 ml) a una suspensión agitada de cloruro de oxalilo (9,1 g, 6,25 ml, 71,7 mmol, 3 equiv.) y el compuesto 3 (11,82 g, 23,9 mmol, 1 equiv.) en DCM anhidro (180 ml) a temperatura ambiente. Se observó una efervescencia vigorosa después de la adición de DMF y la mezcla de reacción se dejó en agitación durante 18 h en un matraz de fondo redondo equipado con un tubo de secado de cloruro cálcico. La solución transparente resultante se evaporó a presión reducida y el sólido se trituró con éter. El producto sólido se recogió por filtración al vacío, se lavó con más cantidad de éter y se secó al vacío a 40 ºC durante 1,5 horas. Después, este sólido se añadió en porciones a una suspensión del compuesto 2 (9,35 g, 52,6 mmol, 2,2 equiv.) en TEA (12,08 g, 119,6 mmol, 5 equiv.) y DCM seco (110 ml), manteniendo la temperatura entre -40 ºC y -50 ºC con la ayuda de un baño de hielo seco/acetonitrilo. La mezcla de reacción se dejó en agitación a -40 ºC durante 1 hora y después se dejó calentar a temperatura ambiente, momento en el que el análisis por CLEM indicó el consumo completo del material de partida. La mezcla de reacción se diluyó con más cantidad de DCM, se lavó secuencialmente con ácido clorhídrico acuoso (1 M, 2 x 200 ml), bicarbonato sódico acuoso saturado (2 x 250 ml), agua (250 ml), una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (250 ml) y se secó sobre sulfato de magnesio. El DCM se eliminó por evaporación rotatoria a presión reducida, proporcionando el producto en forma de una espuma de color amarillo (13,94 g, 79%). Datos Analíticos: TR 3,95 min; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 741 ([M + 1]+., 100).
Compuesto 5
El compuesto 5 puede prepararse a partir del compuesto 4 en tres etapas a través del bis-alcohol y el bis-acetato.
bis-Alcohol
Se añadió en una porción borohidruro de litio sólido (0,093 g, 4,3 mmol, 3 equiv.) a una solución de éster 4 (1,05 g, 142 mmol, 1 equiv.) en THF seco (10 ml) en una atmósfera de nitrógeno a 0 ºC (baño de hielo). La mezcla de reacción se dejó en agitación a 0 ºC durante 30 min y después se dejó calentar hasta la temperatura ambiente, momento en el que se observó la precipitación de una goma de color naranja. La mezcla de reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 2 horas más, después se enfrió en un baño de hielo y se trató con agua (20 ml), dando una suspensión de color amarillo. Se añadió cuidadosamente ácido clorhídrico (1 M) (efervescencia vigorosa) hasta que la efervescencia se detuvo. La mezcla de reacción se extrajo con acetato de etilo (4 x 50 ml) y las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua (100 ml), una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (100 ml) y se secaron sobre sulfato de magnesio. Se eliminó el acetato de etilo por evaporación rotatoria a presión reducida, produciendo el producto de bis-alcohol en forma de una espuma de color amarillo (0,96 g, 99%). La reacción se repitió en una escala de 12,4 g, produciendo 11,06 g de producto (96%). Datos Analíticos: TR 3,37 min; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 685 ([M + 1]+., 100).
bis-Acetato
Se añadió gota a gota una solución de cloruro de acetilo (3,4 g/3,1 ml, 43,5 mmol, 2,6 equiv.) en DCM seco (100 ml) a una solución agitada del bis-alcohol (11,46 g, 16,73 mmol, 1 equiv.) y trietilamina (5,07 g, 6,98 ml, 50,2 mmol, 3 equiv.) en DCM seco (200 ml) a 0 ºC en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se dejó calentar hasta la temperatura ambiente y la agitación continuó durante una hora. El análisis por TLC y por CLEM reveló que la reacción se había completado. La mezcla de reacción se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (200 ml) y se secó sobre sulfato de magnesio. La eliminación de DCM por evaporación rotatoria a presión reducida dio el producto en bruto. El análisis por cromatografía ultrarrápida [gradiente de elución de n-hexano al 20%/acetato de etilo al 80% a n-hexano al 10%/acetato de etilo al 90%] proporcionó bis-acetato puro en forma de una espuma de color amarillo (10,8 g, 84%). Datos Analíticos: TR 3,35 min; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 769 ([M + 1]+., 100).
Compuesto 5
Se añadió polvo de zinc (14,2 g, 2,17 mmol, 30 equiv.) a una solución del bis-acetato (5,56 g, 7,24 mmol, 1 equiv.) en etanol (250 ml) y ácido acético (65 ml). La mezcla de reacción agitada se calentó a reflujo, convirtiéndose la solución de color amarillo en incolora (también se observó agregación de zinc haciendo difícil agitar la reacción). La reacción se dejó continuar durante una hora, momento en el que el análisis por CLEM indicó que la reacción se había completado. La mezcla de reacción se dejó enfriar, se filtró a través de celite y la capa de filtró se lavó con DCM. El filtrado se lavó con agua (3 x 500 ml), bicarbonato sódico acuoso saturado (2 x 250 ml), una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (500 ml) y se secó sobre sulfato de magnesio. La evaporación rotatoria a presión reducida produjo el producto 5 en forma de una espuma de color blanquecino (4,71 g, 92%). Datos Analíticos: TR 3,33 min; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 709 ([M + 1]+., 100).
Compuesto 6
El compuesto 6 puede prepararse a partir del compuesto 5 en tres etapas.
Producto mono-Alloc
Se añadió gota a gota una solución de cloroformiato de alilo (0,634 g/0,56 ml, 5,6 mmol, 0,9 equiv.) en DCM seco (150 ml) a una solución del compuesto 5 (4,145 g, 5,8 mmol, 1 equiv.) y piridina (0,106 g/0,11 ml, 11,1 mmol, 1,9 equiv.) en DCM seco (500 ml) a -78 ºC (baño de hielo seco/acetona). La mezcla de reacción se agitó a -78 ºC durante 1 hora y después se dejó que alcanzara la temperatura ambiente. La mezcla de reacción se lavó con una solución acuosa saturada de sulfato de cobre (2 x 300 ml), agua (400 ml), una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (400 ml) y se secó sobre sulfato de magnesio. La evaporación rotatoria a presión reducida proporcionó el producto en bruto en forma de una espuma de color oscuro. La purificación por cromatografía ultrarrápida [n-hexano al 40%/acetato de etilo al 60% a metanol al 5%/acetato de etilo al 95%] dio el producto bis-alloc (0,84 g), el producto mono-alloc deseado (1,94 g, 44%) y la bis-anilina recuperada (0,81 g).
Datos Analíticos: TR 3,32 min; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 793 ([M + 1]+., 100); EM (EN-) m/z (intensidad relativa) 791 ([M - 1])-., 100).
Isocianato
Se añadió trietilamina (0,018 g/25 μl, 0,18 mmol, 1,35 equiv.) a una solución agitada del producto mono-alloc (0,106 g, 0,134 mmol, 1 equiv.) y trifosgeno (0,015 g, 4,8 x 10-2 mmol, 0,36 equiv.) en tolueno seco (5 ml) en una atmósfera de nitrógeno a -10 ºC. Después de 1 hora, la espectroscopía por IR reveló un tramo de isocianato a 2268 cm -1 y la mezcla de reacción se dejó que alcanzara la temperatura ambiente.
Compuesto 6
Se añadió gota a gota una solución del alcohol 6a (0,106 g, 0,15 mmol, 1,1 equiv.) y trietilamina (0,018 g, 25 μl, 0,18 mmol, 1,35 equiv.) en THF seco (5 ml) al isocianato recién preparado. La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 4 horas, momento en el que el análisis por TLC la formación de un nuevo producto. La mezcla de reacción se evaporó a sequedad y se repartió entre DCM y agua. La fase acuosa se separó y la fase orgánica se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (100 ml) y se secó sobre sulfato de magnesio. La evaporación rotatoria a presión reducida proporcionó el producto en bruto en forma de un aceite de color amarillo que se purificó por cromatografía ultrarrápida [gradiente de elución de n-hexano al 40%/acetato de etilo al 60% a n-hexano al 20%/acetato de etilo al 80%, con aumentos del 5% en acetato de etilo], proporcionando el producto deseado en forma de una espuma de color blanco (0,092 g, rendimiento del 45%).
Datos Analíticos: TR 4,05 min; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 1540 ([M + 2]+., 30); 1557 ([M + 18])+., 50); EM (EN) m/z (intensidad relativa) 1585 ([M - +2Na])-., 50).
Compuesto 7
El compuesto 7 puede prepararse a partir del compuesto 6 en dos etapas.
Producto bis desacetilado
Se añadió gota a gota a través de una jeringa una solución de superhydride™ en THF (1 M, 0,35 ml, 0,35 mmol, 4 equiv.) a una solución agitada del acetato 6 (0,135 g, 8,8 x 10-2 mmol, 1 equiv.) en THF seco (7 ml) a -78 ºC (hielo seco/acetona). La mezcla de reacción se dejó en agitación a -78 ºC durante una hora, momento en el que el análisis por CLEM reveló la ausencia de material de partida y la formación de dos nuevos compuestos que correspondían al producto mono y bis desacetilado. A la mezcla de reacción se le añadió una alícuota más de superhydride™ (1 M, 0,35 ml, 0,35 mmol, 4 equiv.) y la agitación continuó durante una hora más. El análisis por CLEM en este momento reveló la conversión completa en el producto bis desacetilado. Se añadió ácido cítrico (1 M, 1 ml) a la mezcla de reacción (efervescencia vigorosa) que después se dejó que alcanzara la temperatura ambiente, momento en el que se añadió una alícuota más de ácido cítrico (1 M, 1 ml). El disolvente se eliminó por evaporación rotatoria a presión reducida y el residuo resultante se repartió entre acetato de etilo (25 ml) y agua (25 ml). La fase acuosa se separó y la fase de acetato de etilo se lavó con agua (25 ml), una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (25 ml) y se secó sobre sulfato de magnesio. La eliminación del disolvente por evaporación rotatoria a presión reducida proporcionó el producto en bruto en forma de un aceite de color amarillo que se sometió a cromatografía ultrarrápida [gradiente de elución de acetato de etilo - metanol al 1%/acetato de etilo al 99% a metanol al 2%/acetato de etilo al 98%], proporcionando el producto puro en forma de un vidrio incoloro (0,056 g, 44%). Datos Analíticos: TR 3,78 min; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 1456 ([M + 1]+., 75).
Compuesto 7
Se añadió en una porción peryodinano de Dess-Martin (0,026g, 6,1 x 10-5 mol, 2,1 equiv.) a una solución del producto bis desacetilado (0,042 g, 2,9 x 10-5 mol, 1 equiv.) en DCM seco (5 ml) en una atmósfera de nitrógeno. La solución se agitó a temperatura ambiente durante 4 h, momento en el que el análisis por indicó que la reacción se había completado. La suspensión turbia se filtró mediante lavado con DCM (20 ml). El filtrado se lavó con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (25 ml), agua (25 ml), una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (25 ml) y se secó sobre sulfato de magnesio. El disolvente se eliminó por evaporación rotatoria a presión reducida, dando el producto 7 en forma de una espuma de color blanquecino (0,035 g, 84%). Datos Analíticos: TR 3,70 min; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 1451 ([M + 1]+., 30).
Compuesto 14
El compuesto 14a o 14b puede prepararse a partir del compuesto 7 a través del compuesto 8. El producto protector alloc en el compuesto 7 puede eliminarse en las condiciones apropiadas, por ejemplo, tetraquis(trifenilfosfina)paladio
(0) en presencia de pirrolidina. En estas condiciones, el grupo protector Fmoc también se elimina. Como alternativa, el grupo Fmoc puede eliminarse en una etapa separada, antes o después de la eliminación del grupo Alloc, usando piperidina en DMF. El producto de la etapa de desprotección es un producto de imina-carbinolamina que tiene funcionalidad imina en la posición N10-C11 de un monómero de PBD, y una funcionalidad carbinolamina en la posición N10-C11 del otro monómero, en el que la carbinolamina tiene un enlazador -C(=O)-L1-NH2 en la posición N10.
La imina-carbinolamina puede hacerse reaccionar con MC-OSu en presencia de base para generar el compuesto 8. Véase, por ejemplo, Dubowchik y col., Bioconjugate Chem. 2002, 13, 855-869.
Después, el grupo protector de la cadena lateral aminoacídica puede eliminarse del compuesto 8, por ejemplo, en condiciones ácidas. Después, el producto resultante puede conjugarse con un anticuerpo apropiado que tiene funcionalidad tiol, dando el compuesto 9.
En un ejemplo, un anticuerpo puede tratarse con DTT para reducir los enlaces de disulfuro intercatenarios. Después, el anticuerpo resultante, que tiene grupos tiol libres, puede hacerse reaccionar con un compuesto que contiene maleimida obtenido a partir del compuesto 8 para generar el compuesto 9. El compuesto 9 puede purificarse, por ejemplo, mediante diafiltración. Véase, por ejemplo, Dubowchik y col., Bioconjugate Chem. 2002, 13, 855-869.
Compuesto 18
Se añadió diciclohexilcarbodiimida (2,46 g, 11,92 mmol, 1,05 equiv.) a una suspensión de N-hidroxisuccinimida (1,44 g, 12,5 mmol, 1,1 equiv.) y N-alloc fenilalanina (17) (2,83 g, 11,35 mmol, 1 equiv.) en DCM seco (120 ml) a 0 ºC. La mezcla se agitó a 0 ºC durante 30 min y después a temperatura ambiente durante 16 h. La mezcla de reacción se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo se disolvió de nuevo en DCM (50 ml), se dejó en reposo durante 1 h y se filtró para eliminar la diciclohexilurea precipitada. La evaporación a presión reducida dio el producto en forma de un sólido de color blanco (3,91 g, 99%). Datos Analíticos: TR 2,93 min; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 369 ([M + Na]+., 50).
Compuesto 20
Se añadió una solución de succinimida (18) (3,91 g, 11,29 mmol, 1 equiv.) en THF (50 ml) a una solución de HLys(Boc)-OH (19) (2,92 g, 11,85 mmol, 1,05 equiv.) y NaHCO3 (1,04 g, 12,42 mmol, 1,1 equiv.) en THF (50 ml) y H2O (100 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 72 h y el THF se evaporó a presión reducida. El pH se ajustó a pH 3-4 con ácido cítrico para precipitar una goma de color blanco. Esta se extrajo con acetato de etilo (2 x 250 ml) y los extractos combinados se lavaron con H2O (200 ml), una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (200 ml), se secaron (MgSO4) y se evaporaron a presión reducida, dando el producto en forma de una espuma de color blanco (4,89 g, 91%). Datos Analíticos: TR 3,03 min; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 478 ([M + 1])+., 80).
Compuesto 7b
Se añadió EEDQ (2,66 g, 10,75 mmol, 1,05 equiv.) a una solución de p-aminobencil alcohol (21) (1,32 g, 10,75 mmol, 1,05 equiv.) y Alloc-Phe-Lys(Boc)-OH (4,89 g, 10,24 mmol, 1,0 equiv.) en THF seco (75 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 18 h. El disolvente se evaporó a presión reducida, dando un sólido de color pardo pálido. El sólido se trituró con éter dietílico y se filtró mediante lavado con un exceso de éter dietílico. Esto proporcionó el producto en forma de un sólido de color blanco (4,54 g, 76%). Datos Analíticos: TR 3,08 min; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 583,8 ([M + 1]+., 100).
La síntesis de 7b se describe a continuación en el Esquema 12.
Esquema 12.
O
O
O
H
H
O
N
N
O N
O
OH
O
O
O
NH2
NHBoc
O
H
H2N
O
N
OH
N
H
OH
O
O
NHBoc
O
H
H
O N
N
N
H
O
O
OH
7b
Compuesto 9b
Se añadió trietilamina (0,18 g, 0,25 ml, 1,79 mmol, 2,3 equiv.) a una solución agitada de la bis-anilina mono-alloc
5 protegida (6) (0,608 g, 0,77 mmol, 1,06 equiv.) y trifosgeno (0,088 g, 0,3 mmol, 0,39 equiv.) en THF seco (5 ml) en una atmósfera de nitrógeno a -10 ºC. La mezcla de reacción se dejó que alcanzara la temperatura ambiente, una muestra se trató con metanol, y se analizó por CLEM como el carbamato de metilo.
Al isocianato recién preparado se le añadió gota a gota una solución del alcohol bencílico (7b) (0,422 g, 0,72 mmol,
10 1,0 equiv.) y trietilamina (0,18 g, 0,25 ml, 1,79 mmol, 2,3 equiv.) en THF seco (20 ml). La mezcla de reacción se calentó a 60-65 ºC durante 4 horas y después se dejó en agitación durante 18 horas a temperatura ambiente, momento en el que el análisis por CLEM reveló la formación de un nuevo producto. La mezcla de reacción se evaporó a sequedad, proporcionando el producto en bruto en forma de un aceite de color amarillo que se purificó por cromatografía ultrarrápida [gradiente de elución de n-hexano al 50%/acetato de etilo al 50% a n-hexano al
15 10%/acetato de etilo al 90% en aumentos del 10%], dando el producto deseado en forma de una espuma de color blanco (0,385 g, 38%). Datos Analíticos: TR 3,78 min; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 1402,8 ([M + H]+., 15).
Compuesto 10b
20 Se añadió una solución de K2CO3 (0,158 g, 1,15 mmol, 5 equiv.) en H2O (1 ml) a una solución del acetato (9b) (0,32 g, 0,23 mmol, 1 equiv.) en metanol (6 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. El metanol se evaporó a presión reducida, el residuo se diluyó con H2O (50 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 75 ml). Los extractos de acetato de etilo combinados se lavaron con H2O (100 ml), una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (100 ml), se secaron (MgSO4) y se evaporaron a presión reducida, dando el producto en forma de una espuma de color blanco (0,292 g, 97%). Datos Analíticos: TR 3,52 min; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 1318,6 ([M + 1]+., 15).
Compuesto 11b
Se añadió en una porción peryodinano de Dess-Martin (0,197 g, 0,465 mmol, 2,1 equiv.) a una solución del producto bis desacetilado (10b) (0,292 g, 0,22 mmol, 1 equiv.) en DCM seco (15 ml) en una atmósfera de nitrógeno. La solución se agitó a temperatura ambiente durante 3,5 h, momento en el que el análisis por CLEM indicó que la reacción se había completado. La mezcla de reacción se diluyó con DCM (50 ml), se lavó con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (3 x 100 ml), agua (100 ml), una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (100 ml) y se secó sobre sulfato de magnesio. El disolvente se eliminó por evaporación rotatoria a presión reducida, dando el producto en bruto. La purificación por cromatografía ultrarrápida en columna [gradiente de elución de acetato de etilo al 80%/n-hexano al 20% a acetato de etilo al 100% en aumentos del 5%] dio el producto 11b en forma de una espuma de color amarillo (0,235 g, 81%). Datos Analíticos: TR 3,42 min; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 1314,8 ([M + 1]+., 8).
Compuesto 12a
Se añadió Pd(PPh3)4 (4 mg, 3,5 x 10-6 mol 0,02 equiv.) a una solución del compuesto bis-alloc (11b) (0,230 g, 0,175 mmol, 1 equiv.) y pirrolidina (31 mg, 36 μl, 0,44 mmol, 2,5 equiv.) en DCM seco (10 ml) en una atmósfera de nitrógeno. La solución se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas, momento en el que el análisis por CLEM indicó que quedaba (11b) sin reaccionar. Se añadieron más equivalentes de pirrolidina (31 mg, 36 1l, 0,44 mmol, 2,5 equiv.) y Pd(PPh3)4 (4 mg, 3,5 x 10-6 mol, 0,02 equiv.) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 h más. El análisis por CLEM indicó que la reacción se había completado. La mezcla de reacción se diluyó con DCM (40 ml) y se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio (100 ml), agua (100 ml), una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (100 ml), se secó (MgSO4) y se evaporó a presión reducida, dando una espuma de color amarillo. Esto se trituró con éter dietílico, dando el producto (0,187 g, 95%) que se usó sin purificación adicional. Datos Analíticos: TR 2,80 min; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 1128,5 ([M + 1]+., 20).
Compuesto 23
Se añadió una solución de Alloc-Val-OSu (22) ((RT 2,67 min; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 321,4 ([M + Na]+., 57) preparada de acuerdo con el procedimiento para la preparación del compuesto (16)) (11,67 g, 39,0 mmol, 1 equiv.) en THF (50 ml) a una solución de H-Ala-OH (3,66 g, 41,08 mmol, 1,05 equiv.) y NaHCO3 (3,61 g, 43,03 mmol, 1,1 equiv.) en THF (100 ml) y H2O (100 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 72 horas y el THF se evaporó a presión reducida. El pH se ajustó a pH 3-4 con ácido cítrico para precipitar una goma de color blanco. Esta se extrajo con acetato de etilo (6 x 150 ml) y los extractos combinados se lavaron con H2O (200 ml), una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (200 ml), se secaron (MgSO4) y se evaporaron a presión reducida, dando un sólido de color blanco. La trituración con éter dietílico (exceso) proporcionó el producto puro 23 en forma de un polvo de color blanco (7,93 g, 74%).
Datos Analíticos: TR 2,17 min; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 295 ([M + Na]+., 63), 273 ([M + 1]+., 60).
Compuesto 8
Se añadió EEDQ (4,79 g, 19,3 mmol, 1,05 equiv.) a una solución de p-aminobencil alcohol (21) (2,38 g, 19,3 mmol, 1,05 equiv.) y Alloc-Val-Ala-OH (5,02 g, 18,4 mmol, 1,0 equiv.) en THF seco (100 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 72 horas. El disolvente se evaporó a presión reducida, dando un sólido de color pardo pálido. El sólido se trituró con éter dietílico y se filtró, mediante lavado con un exceso de éter dietílico. Esto proporcionó el producto en forma de un sólido de color blanco (6,2 g, 89%). Datos Analíticos: TR 2,50 min; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 400,6 ([M + Na]+., 50), 378,6 ([M + 1]+., 60).
La síntesis de 8 se muestra a continuación en el Esquema 13.
Esquema 13.
O
O
O
H
H
N
OH
O N
O
N
O
N
H
O
O
O
O
22 23
OH
O H
H
N
O
N
N
H
O
OHO
Compuesto 9c
Se añadió trietilamina (0,16 g, 0,22 ml 1,59 mmol, 2,2 equiv.) a una solución agitada de la bis-anilina mono-alloc protegida (6) (0,572 g, 0,72 mmol, 1 equiv.) y trifosgeno (0,077 g, 0,26 mmol, 0,36 equiv.) en THF seco (20 ml) en una atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se calentó a 40 ºC, una muestra se trató con metanol y se analizó por CLEM como el carbamato de metilo.
A isocianato recién preparado se le añadió gota a gota una solución del alcohol bencílico (8) (0,4 g, 1,06 mmol, 1,5 equiv.) y trietilamina (0,109 g, 0,15 ml, 1,08 mmol, 1,5 equiv.) en THF seco (20 ml). La mezcla de reacción se controló por CLEM en intervalos de 30 min. Después de 3 h, el análisis por CLEM mostró la conversión en el producto, la presencia de carbamato de metilo y bis-anilina mono-alloc protegida (6). Se añadió una porción más de trifosgeno (0,038 g, 0,128 mmol, 0,18 equiv.) y la reacción continuó a 40 ºC durante 18 h más. La mezcla de reacción se evaporó a sequedad, proporcionando el producto en bruto en forma de un aceite de color amarillo que se purificó por cromatografía ultrarrápida [gradiente de elución de cloroformo al 100% a cloroformo al 97%/metanol al 3% en aumentos del 0,5%], dando el producto deseado en forma de una espuma de color blanco (0,59 g, 69%). Datos Analíticos: TR 3,58 min; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 1197 ([M + 1]+., 60).
Compuesto 10c
Se añadió una solución de K2CO3 (0,195 g, 1,41 mmol, 5 equiv.) en H2O (1,4 ml) a una solución del acetato (9c) (0,338 g, 0,282 mmol, 1 equiv.) en metanol (8,5 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. El metanol se evaporó a presión reducida, el residuo se diluyó con H2O (50 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 75 ml). Los extractos de acetato de etilo combinados se lavaron con H2O (100 ml), una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (100 ml), se secaron (MgSO4) y se evaporaron a presión reducida, dando el producto en forma de una espuma de color blanco (0,298 g, 95%). Datos Analíticos: TR 3,28 min; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 1113 ([M + 1]+., 40).
Compuesto 11c
Se añadió en una porción peryodinano de Dess-Martin (0,312 g, 0,74 mmol, 2,1 equiv.) a una solución del producto bis desacetilado (10c) (0,39 g, 0,35 mmol 1 equiv.) en DCM seco (20 ml) en una atmósfera de nitrógeno. La solución se agitó a temperatura ambiente durante 3,5 h, momento en el que el análisis por CLEM indicó que la reacción se había completado. La mezcla de reacción se diluyó con DCM (50 ml), se lavó con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (3 x 100 ml), agua (100 ml), una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (100 ml) y se secó (MgSO4). El disolvente se eliminó por evaporación rotatoria a presión reducida, dando el producto en bruto. La purificación por cromatografía ultrarrápida en columna [gradiente de elución de cloroformo al 100% a cloroformo al 97%/metanol al 3% en aumentos del 1%] dio el producto en forma de un sólido de color blanco (0,201 g, 52%). Datos Analíticos: TR 3,15 min; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 1109 ([M + 1]+., 30), EM (EN-) m/z (intensidad relativa) 1107 ([M - 1]-., 100).
Compuesto 12c
Se añadió Pd(PPh3)4 (8 mg, 7 x 10-6 mol 0,04 equiv.) a una solución del compuesto bis-alloc (11c) (0,190 g, 0,17 mmol, 1,0 equiv.) y pirrolidina (61 mg, 71 1l, 0,86 mmol, 5,0 equiv.) en DCM seco (5 ml) en una atmósfera de nitrógeno. La solución se agitó a temperatura ambiente durante 3 h, dando una suspensión turbia. El disolvente se evaporó a presión reducida y el residuo se trituró con acetato de etilo, dando un sólido de color blanquecino que se recogió por filtración, dando el producto (0,13 g, 82%) que se usó sin purificación adicional. Datos Analíticos: TR 2,55 min; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 922 ([M + 1]+., 52).
Compuesto 13a
Se añadió EEDQ (18,4 mg, 7,45 x 10-5 mol, 2,2 equiv.) a una solución del dipéptido de amina (12a) (40 mg 3,5 x 10-5 mol, 1,0 equiv.) y ácido maleimida caproico (8,2 mg, 3,9 x 10-5 mol 1,1 equiv.) en DCM (2 ml) y metanol (1 ml). La solución se agitó a 40 ºC durante 72 h. El disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se disolvió en DCM (50 ml), se lavó con una solución acuosa saturada de NaHCO3 (2 x 50 ml), H2O (50 ml), una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (50 ml), se secó (MgSO4) y se evaporó a presión reducida, dando una espuma de color blanco. Esto se trituró con éter dietílico y se filtró mediante lavado con un exceso de éter dietílico, proporcionando el producto en forma de un sólido de color blanco (36 mg, 78%). Datos Analíticos: TR 3,27 min; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 1320 ([M + 1]+., 75).
Compuesto 13b
Se añadió ácido trifluoroacético frío (13 ml) al derivado de maleimida (13a) (65 mg, 4,9 x 10-5 mol) a 0 ºC. La solución se agitó a esta temperatura durante 30 min y el ácido trifluoroacético se evaporó a presión reducida. El residuo se disolvió de nuevo en DCM anhidro (5 ml). El disolvente se evaporó, el residuo se trituró con éter dietílico, el sólido de color amarillo resultante se recogió por filtración y se secó al vacío (64 mg, 97%). Datos Analíticos: TR 2,83 min; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 1222 ([M + 2]+., 5).
El acoplamiento de un reactivo de maleimida-PEG-succinimida con 12a o 12b proporciona los enlaces al fármaco PBD 15. La figura 1a muestra las estructuras de los enlaces al fármaco PBD MP-PEG4-Phe-Lys-PAB-PBD 15ba, MP-PEG8-Phe-Lys-PAB-PBD 15bb y MP-PEG8-Val-Ala-PAB-PBD 15d, en los que PEG es etilenoxi, y PAB es paraaminobenciloxicarbonilo.
Compuesto 15aa
El dipéptido de amina (12a) (83 mg, 7,4 x 10-5 mol, 1 equiv.) se disolvió en una mezcla de DMF seca al 10%/DCM (2 ml) y se añadió maleimida-4Peg-succinimida (353 1l de una solución 250 mmol en DCM seco) seguida de N,Ndiisopropiletilamina (8,2 mg, 11 1l, 8,1 x 10-5 mol, 1,1 equiv.). La solución se agitó a temperatura ambiente durante 72 h en una atmósfera de nitrógeno. El disolvente se evaporó a presión reducida. La purificación por cromatografía ultrarrápida en columna [gradiente de elución de cloroformo al 100% a cloroformo al 92%/metanol al 8% en aumentos del 1%] proporcionó el producto en forma de una espuma de color amarillo (85 mg, 76%). Datos Analíticos: TR 3,13 min; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 1526 ([M + 1]+., 5).
Compuesto 15ab
El dipéptido de amina (12a) (70 mg, 76,2 x 10-5 mol, 1 equiv.) se disolvió en una mezcla de DMF seca al 10%/DCM (2 ml) y se añadió maleimida-8Peg-succinimida (263 1l de una solución 250 mmol en DCM seco) seguida de NNdiisopropiletilamina (6,9 mg, 9,5 1l, 6,6 x 10-5 mol, 1,06 equiv.). La solución se agitó a temperatura ambiente durante 72 h en una atmósfera de nitrógeno. El disolvente se evaporó a presión reducida. La purificación por cromatografía ultrarrápida en columna [gradiente de elución de cloroformo al 100% a cloroformo al 92%/metanol al 8% en aumentos del 1%] proporcionó el producto en forma de una espuma de color pardo (44 mg, 41,5%). Datos Analíticos: TR 3,20 min; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 1703 ([M + 2]+., 5).
Compuesto 15ba (MP-PEG4-Phe-Lys-PAB-PBD; 11-hidroxi-7-metoxi-8-(5-((S)-7-metoxi-2-metilen-5-oxo-2,3,5,11atetrahidro-pirrolo [2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-iloxi)pentiloxi)-2-metilen-5-oxo-2,3,11,11a-tetrahidro-pirrolo[2,1c][1,4]benzodiazepin-10(5H)-carboxilato de (11S,11aS)-4-((2S,5S)-2-(4-aminobutil)-5-bencil-25-(2,5-dioxo-2,5dihidro-1H-pirrol-1-il)-4,7,23-trioxo-10,13,16,19-tetraoxa-3,6,22-triazapentacosanamido)bencilo)
Se añadió ácido trifluoroacético frío (17 ml) al derivado de maleimida (15aa) (85 mg, 5,6 x 10-5 mol) a 0 ºC. La solución se agitó a esta temperatura durante 30 min y el ácido trifluoroacético se evaporó a presión reducida. El residuo se disolvió de nuevo en DCM anhidro (5 ml). El disolvente se evaporó, el residuo se trituró con éter dietílico, el sólido de color amarillo resultante se recogió por filtración y se secó al vacío (70 mg, 81%). Datos Analíticos: TR 2,78 min; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 1444 ([M + 2]+., 1).
Compuesto 15bb (MP-PEG8-Phe-Lys-PAB-PBD; 11-hidroxi-7-metoxi-8-(5-((S)-7-metoxi-2-metilen-5-oxo-2,3,5,11atetrahidro-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-iloxi)pentiloxi)-2-metilen-5-oxo-2,3,11,11a-tetrahidro-pirrolo[2,1c][1,4]benzodiazepin-10(5H)-carboxilato de (11S,11aS)-4-((2S,5S)-2-(5-aminobutil)-5-bencil-37-(2,5-dioxo-2,5dihidro-1H-pirrol-1-il)-4,7,35-trioxo-10,13,16,19,22,25,28,31-octaoxa-3,6,34-triazaheptatriacontanamido)bencilo)
Se añadió ácido trifluoroacético frío (9 ml) al derivado de maleimida (15ab) (44 mg, 2,6 x 10-5 mol) a 0 ºC. La solución se agitó a esta temperatura durante 30 min y el ácido trifluoroacético se evaporó a presión reducida. El residuo se disolvió de nuevo en DCM anhidro (5 ml). El disolvente se evaporó, el residuo se trituró con éter dietílico, el sólido de color amarillo resultante se recogió por filtración y se secó al vacío (40 mg, 91%).
Datos Analíticos: TR 2,80 min; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 1603 ([M + 2]+., 1).
Compuesto 15d (MP-PEG8-Val-Ala-PAB-PBD; 11-hidroxi-7-metoxi-8-(5-((S)-7-metoxi-2-metilen-5-oxo-2,3,5,11atetrahidro-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-iloxi)pentiloxi)-2-metilen-5-oxo-2,3,11,11a-tetrahidro-pirrolo[2,1c][1,4]benzodiazepin-10(5H)-carboxilato de (11S,11aS)-4-((2S,5S)-37-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)-5isopropil-2-metil-4,7,35-trioxo-10,13,16,19,22,25,28,31-octaoxa-3,6,34-triazaheptatriacontanamido)bencilo)
Se añadió EEDQ (12 mg, 4,8 x 10-5 mol, 1,1 equiv.) a una suspensión del dipéptido de amina (12c) (40,3 mg 4,4 x 10-5 mol, 1,0 equiv.) y maleimida-8 Peg-ácido (28 mg, 4,8 x 10-5 mol, 1,1 equiv.) en DCM seco (5 ml). Se añadió dimetilacetamida seca (0,05 ml), dando una solución de color amarillo pálido que se agitó a temperatura ambiente durante 18 h. El disolvente se evaporó a presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico. El producto sólido resultante se purificó por cromatografía ultrarrápida en columna. Datos Analíticos: TR 2,90 min; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 1496 ([M + H]+.,40).
Compuesto 15e
Se añadió N,N-diisopropildietilamina (10,8 µl, 8 mg, 7,6 x 10-5 mol, 2,2 equiv.) a una solución del dipéptido de amina (12c) (32 mg, 3,5 x 10-5 mol, 1,0 equiv.) y maleimida-dPeg®24-NHS éster (58 mg, 4,16 x 10-5 mol, 1,2 equiv.) en DCM seco (5 ml). La solución se agitó a temperatura ambiente durante 96 h. La mezcla de reacción se diluyó con DCM (15 ml), se lavó con NaHCO3 saturado (25 ml), una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (25 ml), se secó (MgSO4) y se evaporó a presión reducida, dando un vidrio de color amarillo pálido. La purificación por cromatografía ultrarrápida en columna [gradiente de elución de cloroformo al 100% a cloroformo al 91%/metanol al 9% en aumentos del 1%] dio el producto en forma de una goma viscosa de color amarillo (17 mg, 22%).
Compuesto 16d
Se seleccionó el péptido biotina-A20FMDV-Cys (59) que es altamente selectivo para la integrina αvβ6, que se regula de forma ascendente significativamente por muchos cánceres, para la conjugación de los derivados del enlazador PBD.
Se añadió una solución del péptido (59) (11,3 mg, 4,35 µmol, 0,98 equiv.) en 1/1 de acetonitrilo/agua (2 ml) a una solución de (15d) (6,91 mg, 4,62 µmol, 1,0 equiv.) en 1/1 acetonitrilo/agua (3 ml). La solución se agitó a temperatura ambiente durante 96 h. El acetonitrilo se evaporó a presión reducida y el agua se eliminó por liofilización, dando una espuma de color blanco. La purificación por HPLC semi-preparativa seguida de liofilización dio el producto en forma de una espuma de color blanco (3,8 mg, 21%). Datos Analíticos: EM (MaldiTOF) m/z (intensidad relativa) 3991,1 ([M
+ H]+., 100).
Compuesto 39ª
El compuesto 39a y sus síntesis se desvela en los documentos WO 00/012508 y WO 2006/111759.
Compuesto 39b
Procedimiento I: Se añadió una cantidad catalítica de DMF (2 gotas) (efervescencia) a una solución agitada del nitroácido 39a (1,0 g, 2,15 mmol) y cloruro de oxalilo (0,95 ml, 1,36 g, 10,7 mmol) en THF seco (20 ml). La mezcla de reacción se dejó en agitación durante 16 horas a temperatura ambiente y el disolvente se eliminó por evaporación al vacío. El residuo resultante se disolvió de nuevo en THF seco (20 ml) y la solución de cloruro de ácido se añadió gota a gota a una mezcla agitada de clorhidrato de (2S,4R)-metil-4-hidroxipirrolidina-2-carboxilato (859 mg, 4,73 mmol) y TEA (6,6 ml, 4,79 g, 47,3 mmol) en THF (10 ml) a -30 ºC (hielo seco/etilenglicol) en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se dejó calentar hasta la temperatura ambiente y se agitó durante 3 horas más, después de lo cual el análisis por TLC (95:5 v/v de CHCl3/MeOH) y CL/EM (2,45 min (EN+) m/z (intensidad relativa) 721 ([M + H]+., 20)) revelaron la formación de producto. El exceso de THF se eliminó por evaporación rotatoria y el residuo resultante se disolvió en DCM (50 ml). La fase orgánica se lavó con HCl 1 N (2 x 15 ml), NaHCO3 saturado (2 x 15 ml), H2O (20 ml), una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (30 ml) y se secó (MgSO4). La filtración y la evaporación del disolvente dieron el producto en bruto en forma de un aceite de color oscuro. La purificación por cromatografía ultrarrápida (gradiente de elución: CHCl3 al 100% a 96:4 v/v de CHCl3/MeOH) aisló la amida pura 39b en forma de un vidrio de color naranja (840 mg, 54%).
Procedimiento II: Se añadió cloruro de oxalilo (9,75 ml, 14,2 g, 111 mmol) a una suspensión agitada del nitro-ácido 39a (17,3 g, 37,1 mmol) y DMF (2 ml) en DCM anhidro (200 ml). Tras la efervescencia inicial, la suspensión de la reacción se convirtió en una solución y la mezcla se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 16 horas. La conversión en el cloruro de ácido se confirmó tratando una muestra de la mezcla de reacción con MeOH, y el éster bis-metílico resultante se observó por CL/EM. La mayor parte del disolvente se eliminó por evaporación al vacío, la solución concentrada resultante se disolvió de nuevo en una cantidad mínima de DCM seco y se trituró con éter dietílico. El precipitado de color amarillo resultante se recogió por filtración, se lavó con éter dietílico frío y se secó durante 1 hora en una estufa de vacío a 40 ºC. El cloruro de ácido sólido se añadió en porciones durante un periodo de 25 minutos a una suspensión agitada de clorhidrato de (2S,4R)-metil-4-hidroxipirrolidin-2-carboxilato (15,2 g, 84,0 mmol) y TEA (25,7 ml, 18,7 g, 185 mmol) en DCM (150 ml) a -40 ºC (hielo seco/CH3CN). Inmediatamente, la reacción se completó según se determinó mediante el análisis por CL/EM (2,47 min (EN+) m/z (intensidad relativa) 721 ([M + H]+., 100)). La mezcla se diluyó con DCM (150 ml) y se lavó con HCl 1 N (300 ml), NaHCO3 saturado (300 ml), una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (300 ml), se filtró (a través de un separador de fase) y el disolvente se evaporó al vacío, dando el producto puro 39b en forma de un sólido de color naranja (21,8 g, 82%). Datos Analíticos: [α]22D = -46,1° (c = 0,47, CHCl3); RMN 1H (400 MHz, CDCl3) (rotámeros) δ 7,63 (s, 2H), 6,82 (s, 2H), 4,79-4,72 (m, 2H), 4,49-4,28 (m, 6H), 3,96 (s, 6H), 3,79 (s, 6H), 3,46-3,38 (m, 2H), 3,02 (d, 2H, J = 11,1 Hz), 2,48-2,30 (m, 4H), 2,29-2,04 (m, 4H); RMN 13C (100 MHz, CDCl3) (rotámeros) δ 172,4, 166,7, 154,6, 148,4, 137,2, 127,0, 109,7, 108,2, 69,7, 65,1, 57,4, 57,0, 56,7, 52,4, 37,8, 29,0; IR (ATR, CHCl3) 3410 (a), 3010, 2953, 1741, 1622, 1577, 1519, 1455, 1429, 1334, 1274, 1211, 1177, 1072, 1050, 1008, 871 cm-1; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 721 ([M + H]+., 47), 388 (80); HRMS [M + H]+. teórico C31H36N4O16 m/z 721,2199, observado (EN+) m/z 721,2227.
Compuesto 39c
Se añadió en porciones TCCA sólido (32 g, 137 mmol, 2,2 equiv.) a una solución de TEMPO (1 g, 6,4 mmol, 0, 1 equiv.) y bis-alcohol 18 ( 45 g, 62,5 mmol, 1 equiv.), en DCM normal (500 ml) a 0 ºC. Se observó una ligera exotermia. La reacción se consideró completa por TLC (acetato de etilo) y CL/EM (2,95 min (EN+) m/z (intensidad relativa) 718,10 ([M + H]+., 100)) después de 30 minutos. La suspensión se filtró a través de celite y se lavó con DCM. El filtrado se lavó con bisulfito sódico acuoso seguido de NaHCO3 saturado (precaución, efervescencia vigorosa), una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (200 ml) y se secó (MgSO4). La filtración y la evaporación del disolvente al vacío proporcionaron el producto en bruto que se purificó por cromatografía ultrarrápida en columna (elución: 20:80 v/v de n-hexano/EtOAc), proporcionando la cetona 39c en forma de un sólido de color blanco (28,23 g, 63%). Datos Analíticos: [α]21D = +18° ( c = 0,2, CHCl3); EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 718,10 ([M + H]+., 100); RMN 1H (400 MHz, CDCl3) mezcla de rotámeros δ 7,70 (m, 2H), 6,79 (m, 2H), 5,27 (m, 1H), 4,44 (m, 1H), 4,30 (m, 4H), 3,93 (m, 6H), 3,81 (s, 3H),3,75 (m, 1H), 3,63 (s, 2H), 3,58 (m, 1H), 3,09-2,89 (m, 2H), 2,74-2,53 (m, 2H), 2,40 (p, 2H, J = 5,73 Hz); RMN 13C (100 MHz, CDCl3) mezcla de rotámeros δ 206,5, 206,4, 206,0, 205,9, 171,2, 171,1, 170,6, 167,0, 166,7, 155,0, 154,5, 148,8, 137,7, 137,3, 126,4, 125,4, 109,8, 109,1, 108,6, 108,4, 108,4, 65,7, 65,6, 65,5, 60,4, 57,9, 56,7, 56,7, 55,1, 53,6, 52,9, 52,9, 51,6, 41,2, 40,1, 28,7, 28,6, 21,0, 14,1; IR (ATR, CHCl3) 1764, 1650, 1578, 1518, 1415, 1333, 1274, 1217, 1060, 870, 824 759 cm-1
Compuesto 40
Se inyectó en una porción 2,6-lutidina anhidra (4,26 ml, 3,92 g, 36,6 mmol) a una solución agitada vigorosamente de bis-cetona 39c (4,23 g, 5,90 mmol) en DCM seco (100 ml) a -45 ºC (baño de refrigeración de hielo seco/acetonitrilo) en una atmósfera de nitrógeno. Se inyectó rápidamente gota a gota anhídrido tríflico anhidro, tomado de una ampolla recién abierta (5,96 ml, 10 g, 35,4 mmol), mientras se mantuvo la temperatura a -40 ºC o inferior. La mezcla de reacción se dejó en agitación a -45 ºC durante 1 hora, momento en el que el análisis por TLC (50/50 v/v de n-hexano/EtOAc) reveló el consumo completo del material de partida. La mezcla de reacción fría se diluyó inmediatamente con DCM (200 ml) y, con agitación vigorosa, se lavó con agua (1 x 300 ml), una solución al 5% de ácido cítrico (1 x 200 ml), NaHCO3 saturado (200 ml), una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (150 ml) y se secó (MgSO4). La filtración y la evaporación del disolvente al vacío proporcionaron el producto en bruto que se purificó por cromatografía ultrarrápida en columna (gradiente de elución: 70:30 v/v de n-hexano/EtOAb a 40:60 v/v de n-hexano/EtOAc), proporcionando el bis-triflato 40 en forma de una espuma de color amarillo (1,32 g, 23%). Datos Analíticos: [α]25D = -68°( c = 0,2, CHCl3); RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,73 (s, 2H), 6,85 (s, 2H), 6,20 (t, 2H, J = 1,81 Hz), 5,13 (dd, 2H, J = 5,05, 11,93 Hz), 4,33 (t, 4H, J = 5,91 Hz), 3,95 (s, 6H), 3,84 (s, 6H), 3,43 (ddd, 2H, J = 2,28, 11,92, 16,59 Hz), 2,96 (ddd, 2H, J = 1,60, 5,05, 16,58 Hz), 2,44 (p, 2H, J = 5,79 Hz); RMN 13C (100 MHz, CDCl3) δ 169,4, 164,1, 154,7, 149,2, 138,0, 135,2, 124,4, 121,1, 120,0, 116,8, 110,0, 108,4, 65,7, 65,6, 57,0, 56,8, 53,1, 33,3, 28,6; IR (ATR, CHCl3) 1749, 1654, 1576, 1522, 1418, 1337, 1277, 1207, 1131, 1061, 1023, 910, 821, 757 cm-1; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 981,86 ([M + H]+., 100).
Compuesto 41
Se añadió Pd(PPh3)4 ( 660 mg, 571 µmol, 0,08 equiv.) a una mezcla agitada de bis enol triflato 40 (7 g, 7,13 mmol, 1 equiv.), ácido 4-fluorofenilborónico (2,6 g, 18,5 mmol, 2,6 equiv.), Na2CO3 (3,93 g, 37,0 mmol, 5,2 equiv.), EtOH (25 ml), tolueno (50 ml) y agua (25 ml). La mezcla de reacción se dejó en agitación en una atmósfera de nitrógeno durante una noche, después de lo cual se observó el consumo completo del material de partida por TLC (60/40 de EtOAc/Hexano) y CL/EM (3,68 min (EN+) m/z (intensidad relativa) 873,90 ([M + H]+., 100)). La mezcla de reacción se diluyó con EtOAb (300 ml) y se lavó con H2O (2 x 200 ml), una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (100 ml), se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó a presión reducida, proporcionando el producto en bruto. La purificación por cromatografía ultrarrápida (gradiente de elución: 50:50 v/v de Hexano/EtOAb a 80:20 v/v de Hexano/EtOAc) proporcionó el compuesto bis C2-arilo 41 en forma de un sólido de color naranja (5,46 g, 88%). Datos Analíticos:
[α]22
D = -107° (c = 0,2, CHCl3); RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,76 (s, 2H), 7,14-7,04 (m, 4H), 6,97-6,87 (m, 6H), 6,31 (s, 2H), 5,18 (dd, 2H, J = 11,68, 5,03 Hz), 4,36 (t, 4H, J = 5,87 Hz), 3,97 (s, 6H), 3,84 (s, 6H), 3,53-3,39 (m, 2H), 3,00 (ddd, 2H, J = 1,22, 5,01, 16,28 Hz), 2,46 (p, 2H, J = 5,98 Hz); RMN 13C (100 MHz, CDCl3) δ171,0, 163,3, 148,9, 138,0, 128,1, 126,3, 126,2, 125,8, 123,1, 122,6, 115,7, 115,5, 110,3, 108,5, 65,7, 58,3, 56,8, 34,7, 28,7; IR (ATR, CHCl3) 1738, 1650, 1578, 1512, 1416, 1333, 1275, 1212, 1064, 1023, 869, 808, 758, 654, 613 cm-1; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 873,90 ([M + H]+., 100)).
Compuesto 42
Se añadió en una porción LiBH4 (132 mg, 21,3 mmol, 3 equiv.) a una solución agitada del éster 41 (5,30 g, 6,07 mmol, 1 equiv.) en THF anhidro (100 ml) a 0 ºC. La mezcla de reacción se dejó calentar hasta la temperatura ambiente y en agitación durante 1 hora, después de lo cual se observó directamente la conversión completa del material de partida por CL/EM (3,42 min (EN+) m/z (intensidad relativa) 818,35 ([M + H]+., 100)). La mezcla de reacción se diluyó cuidadosamente con acetato de etilo (500 ml) y el exceso de borohidruro se destruyó con ácido cítrico acuoso frío. La fase orgánica se lavó con HCl acuoso 1 N (100 ml) seguido de NaHCO3 acuoso saturado (100 ml), una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (100 ml), se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó a presión reducida a 35 ºC, proporcionando el alcohol intermedio que se disolvió de nuevo inmediatamente en DCM anhidro (200 ml). La solución se enfrió a 0 ºC y se añadió imidazol (3,97 g, 58,0 mmol, 9,6 equiv.) seguido de TBDMS-Cl (4,390 g, 29,1 mmol, 4,8 equiv.). La mezcla de reacción se dejó calentar hasta la TA y reaccionar durante 2 horas.
La reacción completa se observó por TLC (EtOAc/hexano, 50/50) y CL/EM (4,23 min (EN+) m/z (intensidad relativa) 1045,99 ([M + H]+., 100)). La solución se lavó con ácido cítrico acuoso 2 N (50 ml), NaHCO3 acuoso saturado (50 ml), una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (50 ml), se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida (gradiente de 80/20 hasta 60/40 hexano/EtOAc), produciendo 2,45 g (38,6% en dos etapas) de producto puro en forma de un sólido de color naranja. Datos Analíticos: [α]22D = -123° (c = 0,18, CHCl3); RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 7,76 (s, 2H), 7,17-7,06 (m, 4H), 6,96-6,87 (m, 4H), 6,81 (s, 2H), 6,17 (s, 2H), 4,84-4,72 (m, 2H), 4,35 (t, 4H, J = 5,87 Hz), 3,93 (s, 6H), 3,25-3,07 (m, 2H), 3,032,91 (m, 2H) 2,45 (p, 2H, J = 5,92 Hz), 0,84 (s, 18H), 0,07 (s, 12H); RMN 13C (100 MHz, CDCl3) δ 163,2, 160,7, 154,5, 148,6, 137,9, 130,1, 130,0, 126,7, 126,3, 126,2, 124,3, 123,0, 115,6, 115,4, 110,0, 108,5, 65,7, 60,4, 59,2, 56,7, 33,2, 28,7, 25,8, 25,7, 21,0, 18,2, 14,2, -5,3; IR (ATR, CHCl3) 2953, 1742, 1650, 1576, 1512, 1417, 1334, 1274, 1214, 1063, 1023, 869, 808, 759, 654, 612 cm-1; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 1045,99 ([M + H]+., 100).
Compuesto 43
Se añadió una solución de ácido fórmico en etanol (5% v/v, 100ml) a una suspensión del compuesto bis-nitro 42 (2,35 g, 2,25 mmol, 1 equiv.) y polvo de zinc (8,82 g, 0,135 mmol, 60 equiv.) en etanol (35 ml). La mezcla de reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 25 min, momento en el que el análisis por TLC (metanol/cloroformo, 2/98) y CL/EM (4,23 min (EN+) m/z (intensidad relativa) 986,3 ([M + H]+., 10), 493,9 ([(M + 2H)/2]+., 100)) revelaron la reacción completa. La suspensión se filtró y el filtrado se repartió entre acetato de etilo (400 ml) y NaHCO3 acuoso saturado (200 ml). Los productos orgánicos se lavaron con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (100 ml), se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se evaporaron a presión reducida, produciendo bis-amina pura (2,20g, 98%) que se llevó directamente a la siguiente etapa.
Compuesto 44
Se añadió gota a gota una solución de cloroformiato de alilo (0,209 ml, 1,97 mmol, 0,9 equiv.) en DCM seco (50 ml) a una solución del compuesto bis-anilino 43 (2,15 g, 2,18 mmol, 1 equiv.) y piridina (0,335 ml, 4,14 mmol, 1,9 equiv.) en DCM seco (250 ml) a -78 ºC. La mezcla de reacción se dejó en agitación a -78 ºC durante 2 horas, y se dejó calentar hasta la temperatura ambiente. La solución se lavó con sulfato de cobre acuoso saturado (2 x 50 ml), agua (250 ml), con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (100 ml), se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida (gradiente de 70/30 hasta 30/70 de hexano/EtOAc), produciendo 668 mg (26,5%) del compuesto bis-Alloc protegido como se indicó por CL/EM (4,45 min (EN+) m/z (intensidad relativa) 1154,32 ([M + H]+., 100)) y 800 mg del compuesto mono-alloc protegido deseado ligeramente contaminado (4,32 min (EN+) m/z (intensidad relativa) 1070,58 ([M + H]+., 100)). Este compuesto se purificó adicionalmente por cromatografía ultrarrápida (gradiente de 40/60 hasta 20/80 de hexano/éter dietílico), dando 700 mg (30%) del compuesto mono-alloc puro deseado. Datos Analíticos: [α]22D = -41° (c = 0,16, CHCl3); RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 8,72 (s a, 1H), 7,88 (s, 2H), 7,25-7,18 (m, 4H), 7,02-6,93 (m, 4H), 6,93-6,83 (m, 3H), 6,80 (s, 1H), 6,36 (s, 1H), 6,00-5,84 (m, 1H), 5,32 (dd, 1H, J = 1,37, J = 17,21 Hz), 5,21 (dd, 1H, J = 0,90, J = 10,40 Hz), 4,85-4,71 (m, 2H), 4,60 (dd, 2H, J = 1,02, J = 5,62 Hz), 4,46 (s, 2H), 4,31 (t, 2H, J = 5,96 Hz), 4,25 (t, 2H, J = 6,31 Hz), 3,98 (m, 2H), 3,86 (m, 2H), 3,81 (s, 3H), 3,76 (s, 3H), 3,19-3,05 (m, 2H), 3,05-2,93 (m, 2H), 2,41 (p, 2H, J = 6,16 Hz), 0,84 (m, 18H), 0,05 (m, 12H); IR (ATR, CHCl3) 2952, 2359, 1732, 1652, 1601, 1507, 1472, 1406, 1225, 1119, 836, 777, 668 cm-1; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 1070,58 ([M + H]+., 100).
Compuesto 45
Se añadió gota a gota una solución de la amina 44 (650 mg, 0,607 mmol, 1 equiv.) y TEA (220 μl, 1,58 mmol, 2,6 equiv.) en THF seco a una solución recién preparada de trifosgeno (81 mg, 0,273 mmol, 0,45 equiv.) en THF seco (4 ml) a 0 ºC. La suspensión de color blanco se dejó en agitación a 0 ºC durante 10 min. Se añadió rápidamente una solución de alcohol (Alloc-Val-Ala-PABOH, 229 mg, 0,607 mmol, 1 equiv.) y TEA (220 μl, 1,58 mmol, 2,6 equiv.) en THF seco (30 ml). La suspensión de color blanco se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 15 minutes, después se calentó a 65 ºC durante 2 horas y después se dejó en agitación a temperatura ambiente durante una noche. Las sales TEA de color blanco se eliminaron por filtración a través de algodón hidrófilo. El filtrado se concentró y se purificó por cromatografía ultrarrápida (Gradiente, MeOH al 0% en cloroformo hasta MeOH al 3% en cloroformo), produciendo 220 mg del carbamato deseado (25%). Datos Analíticos: [α]24D = -46,1° (c = 0,13, CHCl3); RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ 8,70 (s a, 2H), 8,46 (s, 1H), 7,83 (s, 2H), 7,50 (m, 2H), 7,31 (d, 2H, J = 8,50 Hz) 7,25-7,15 (m, 4H), 7,03-6,93 (m, 4H), 6,92-6,77 (m, 4H), 6,51 (d, 1H, J = 7,48Hz), 5,99-5,81 (m, 1H), 5,385,15 (m, 5H), 5,13-5,03 (m, 2H), 4,77 (s a, 2H), 4,66-4,53 (m, 5H), 4,38-4,22 (m, 4H), 4,08-3,94 (m, 3H), 3,93-3,81 (m, 2H), 3,79 (s, 6H), 3,20-3,05 (m, 2H), 3,05-2,94 (m, 2H), 2,41 (p, 2H, J = 5,95 Hz), 2,22-2,08 (m, 1H), 1,45 (d, 3H, J = 7,03 Hz), 0,94 (dd, 6H, J = 6,81, 14,78 Hz), 0,84 (m, 18H), 0,14-0,02 (m, 12H); RMN 13C (100 MHz, CDCl3) δ 171,7, 169,8, 165,9, 163,1, 153,6, 151,0, 144,3, 137,8, 132,4, 132,3, 132,0, 130,2, 129,2, 126,2, 126,1, 125,3, 123,3, 123,2, 119,8, 118,2, 118,0, 115,7, 115,5, 112,0, 106,0, 66,5, 66,2, 65,8, 65,4, 62,5, 60,4, 59,5, 56,6, 49,6, 30,8, 28,9, 25,7, 19,2, 18,2, 18,1, 17,7, 17,3, 14,2, -5,4; IR (ATR, CHCl3) 2950, 2356, 1725, 1691, 1602, 1512, 1408, 1201, 1109, 1023, 832, 774, 668 cm-1; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 1473,43 ([M + H]+., 100).
Compuesto I2
Se hidrogenó 19-(2,5-dioxopirrolidin-1-il) 4,7,10,13,16-pentaoxanonadecano-1,19-dioato de 1-bencilo (I1) (100 mg, 0,19 mmol, 1 equiv.) en acetato de etilo seco (15 ml) a 206,84 kPa (30 psi) sobre paladio al 10% sobre carbono (10 mg, 10% en peso) durante 45 minutos. La mezcla de reacción se filtró a través de celite mediante lavado con acetato de etilo seco. La evaporación a presión reducida dio el producto I2 en forma de un aceite incoloro (74 mg, 89%). Datos Analíticos: TR (no visible por CL) EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 458 ([M + Na]+ , 55), 436 ([M + H]+., 12).
Compuesto I3
Se añadió N,N-diisopropildietilamina (8,4 µl, 6 mg, 5,97 x 10-5 mol, 1,1 equiv.) a una solución del dipéptido de amina (12c) (50 mg, 5,42 x 10-5 mol, 1,0 equiv.) y ácido-dPeg®5-NHS éster (I2) (28 mg, 6,5 x 10-5 mol, 1,2 equiv.) en DCM seco (5 ml). La solución se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas. La mezcla de reacción se evaporó a presión reducida, dando un aceite de color amarillo pálido. La purificación por cromatografía ultrarrápida en columna [gradiente de elución de cloroformo al 96%/metanol al 4% a cloroformo al 92%/metanol al 8% en aumentos del 0,5%] dio el producto I3 en forma de un vidrio de color amarillo (42 mg, 64%). Datos Analíticos: TR 2,78 min; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 1242 ([M + H]+.,40).
Compuesto 49
Se añadió 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (9,1 mg, 4,76 x 10-5 mol, 1,6 equiv.) a una solución de Nhidroxisuccinimida (5,8 mg, 5,06 x 10-5 mol, 1,7 equiv.) y un ácido (I3) en DCM seco (6 ml) en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 48 horas. La solución se filtró lavando con DCM (10 ml). La solución de DCM se lavó con agua (20 ml), una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (20 ml), se secó (MgSO4) y se evaporó a presión reducida. El producto 49 (32 mg, 80%) se usó sin purificación adicional. Datos Analíticos: TR 2,88 min; EM (EN+) m/z (intensidad relativa)1339 ([M + H]+., 100).
Compuesto 50
Se añadió Pd(PPh3)4 (61 mg, 0,053 mmol, 0,01 equiv.) a una solución del compuesto alloc (8) (2,0 g, 5,3 mmol, 1,0 equiv.) y pirrolidina (0,47 g, 0,55 ml, 6,63 mmol, 1,25 equiv.) en DCM seco en una atmósfera de nitrógeno. La solución se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. El análisis por CLEM indicó la presencia del compuesto alloc sin reaccionar. Se añadieron porciones adicionales de pirrolidina (0,38 g, 0,44 ml, 5,3 mmol, 1,0 equiv.) y Pd(PPh3)4 (61 mg, 0,053 mmol, 0,01 equiv.) y la reacción continuó durante 30 minutos. El disolvente se evaporó a presión reducida. La purificación por cromatografía ultrarrápida en columna [gradiente de elución de cloroformo al 100%, después cloroformo al 98%/metanol al 2% a cloroformo al 90%/metanol 10% en aumentos del 1%] dio el producto 50 en forma de un polvo de color blanco (1,37 g, 88%). Datos Analíticos: TR 0,33 min; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 294 ([M + H]+.,60 ), EM (EN-) m/z (intensidad relativa) 292 ([M - H]-., 100).
Compuesto 51
Se añadió EEDQ (1,22 g, 4,93 mmol, 1,05 equiv.) a una solución del dipéptido de amina (50) (1,37 g, 4,69 mmol, 1 equiv.) y m-dPeg®2 ácido (0,73 g, 4,93 mmol, 1,05 equiv.) en THF seco (60 ml). La solución se agitó a temperatura
ambiente durante 5 días. El disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida en columna [cloroformo al 100% a cloroformo al 95%/metanol al 5% en aumentos del 1%], dando el producto 51 en forma de un sólido de color blanco (1,46 g, 74%). Datos Analíticos: TR 2,22 min; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 446 ([M + Na]+.,80 ), 424 ([M + H]+.,70 ), EM (EN-) m/z (intensidad relativa) 422 ([M - H]-., 100).
La síntesis de 51 se muestra a continuación en el Esquema 14.
Esquema 14.
Compuesto 52
Se añadió trietilamina (0,47 g, 0,65 ml 4,66 mmol, 2,2 equiv.) a una solución agitada de la bis-anilina mono-alloc protegida (6) (1,68 g, 2,12 mmol, 1 equiv.) y trifosgeno (0,226 g, 0,76 mmol, 0,36 equiv.) en THF seco (40 ml) en una atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se calentó a 40 ºC, una muestra se trató con metanol y se analizó por CLEM como el carbamato de metilo.
Al isocianato recién preparado se le añadió gota a gota una solución del dPeg®2-bencil-alcohol (51) (1,35 g, 3,18 mmol, 1,5 equiv.) y trietilamina (0,32 g, 0,44 ml, 3,18 mmol, 1,5 equiv.) en THF seco (60 ml). La mezcla de reacción se controló por CLEM en intervalos de 30 minutos. Después de 3 horas, el análisis por CL-EM mostró la conversión en el producto, la presencia de carbamato de metilo y bis-anilina mono-alloc protegida (9). Se añadió una porción más de trifosgeno (0,056 g, 0,19 mmol, 0,09 equiv.) y la reacción continuó a 40 ºC durante 3 horas más. La mezcla de reacción se evaporó a sequedad, proporcionando el producto en bruto en forma de un aceite de color amarillo que se purificó por cromatografía ultrarrápida [gradiente de elución de cloroformo al 100% a cloroformo al 95%/metanol al 5% en aumentos del 1%], dando el producto deseado 52 en forma de una espuma de color amarillo (1,91 g, 73%). Datos Analíticos: TR min 3,42 min EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 1243 ([M + H]+., 50), EM (EN-) m/z (intensidad relativa) 1241 ([M - H])-., 100).
Compuesto 53
Se añadió Pd(PPh3)4 (35 mg, 3,0 x 10-5 mol 0,02 equiv.) a una solución del compuesto alloc (52) (1,87 g, 1,5 mmol, 1,0 equiv.) y pirrolidina (0,27 mg, 310 1l, 3,8 mmol, 2,5 equiv.) en DCM seco (30 ml) en una atmósfera de nitrógeno. La solución se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. El disolvente se evaporó a presión reducida y el producto se purificó por cromatografía ultrarrápida en columna [gradiente de elución de cloroformo al 100% a cloroformo al 95%/metanol al 5% en aumentos del 1%], dando el producto 53 en forma de una espuma de color amarillo (1,57 g, 90%). Datos Analíticos: TR min 3,17 min EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 1159 ([M + H]+., 65).
Compuesto 54
Se añadió trietilamina (0,26 g, 0,36 ml 2,6 mmol, 2,2 equiv.) a una solución agitada de la bis-anilina mono-protegida
(53) (1,37 g, 1,18 mmol, 1 equiv.) y trifosgeno (0,126 g, 0,43 mmol, 0,36 equiv.) en THF seco (40 ml) en una atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se calentó a 40 ºC, una muestra se trató con metanol y se analizó por CL-EM según el carbamato de metilo indicó la formación completa de isocianato.
Al isocianato recién preparado se le añadió gota a gota una solución del alcohol bencílico (8) (0,67 g, 1,8 mmol, 1,5 equiv.) y trietilamina (0,18 g, 0,25 ml, 1,8 mmol, 1,5 equiv.) en THF seco (50 ml). La mezcla de reacción se controló por CLEM y se completó después de 18 horas a 40 ºC. La mezcla de reacción se evaporó a sequedad, proporcionando un aceite de color amarillo que se purificó por cromatografía ultrarrápida [gradiente de elución de acetato de etilo al 95%/metanol al 5% a acetato de etilo al 93%/metanol al 7% en aumentos del 1%], dando el producto deseado 54 en forma de una espuma de color blanco (1,21 g, 66%). Datos Analíticos: TR min 3,42 min EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 1562 ([M + H]+., 15).
Compuesto 55
Se añadió una solución de K2CO3 (0,522 g, 3,78 mmol, 5 equiv.) en H2O (5,0 ml) a una solución del acetato (54) (1,18 g, 0,756 mmol, 1 equiv.) en metanol (29 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. El metanol se evaporó a presión reducida, el residuo se diluyó con H2O (50 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 100 ml). Los extractos combinados de acetato de etilo se lavaron con H2O (200 ml), una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (200 ml), se secaron (MgSO4) y se evaporaron a presión reducida, dando el producto 55 en forma de una espuma de color blanco (1,052 g, 94%). Datos Analíticos: TR min 3,15 min EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 1478 ([M + H]+., 5), EM (EN-) m/z (intensidad relativa) 1477 ([M - H])-., 100).
Compuesto 56
Se añadió en una porción peryodinano de Dess-Martin (0,152 g, 0,36 mmol, 2,1 equiv.) a una solución del producto bis desacetilado (55) (0,252 g, 0,17 mmol 1 equiv.) en DCM seco (5 ml) en una atmósfera de nitrógeno. La solución se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, momento en el que el análisis por CLEM indicó que la reacción se había completado. La mezcla de reacción se diluyó con DCM (50 ml) y se lavó con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (3 x 100 ml), agua (100 ml), una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (100 ml) y se secó (MgSO4). El disolvente se eliminó por evaporación rotatoria a presión reducida, dando el producto en bruto. La purificación por cromatografía ultrarrápida en columna [gradiente de elución de cloroformo al 100% a cloroformo al 92%/metanol al 8% en aumentos del 1%] dio el producto 56 en forma de una espuma de color blanco (0,17 g, 68%). Datos Analíticos: TR min 6,17 min EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 1474 ([M + H]+., 5), EM (EN-) m/z (intensidad relativa) 1472 ([M - H])-., 100).
Compuesto 57
Se añadió Pd(PPh3)4 (8 mg, 6,9 µmol, 6,0 equiv.) a una solución del compuesto alloc (56) (160 mg, 0,108 mmol, 1,0 equiv.) y una solución 0,5 M de pirrolidina en DCM (0,27 ml, 0,135 mmol, 1,25 equiv.) en DCM seco (18 ml) en una atmósfera de nitrógeno. La solución se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. El disolvente se evaporó a presión reducida. La purificación por cromatografía ultrarrápida en columna [gradiente de elución de cloroformo al 100% a cloroformo al 91%/metanol al 9% en aumentos del 1%] dio el producto 57 en forma de un polvo de color blanco (0,114 g, 74%). Datos Analíticos: TR min 2,60 min EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 1390 ([M + H]+., 5).
El acoplamiento de un reactivo de maleimida-PEG-succinimida con 57 proporciona el enlazador al fármaco de PBD
58. La figura 1b muestra las estructuras del enlazador al fármaco de PBD MP-PEG8-Val-Ala-PAB-(imp)PBD 58 en el que MP es maleimidopropanamida, PEG es etilenoxi, y PAB es para-aminobenciloxicarbonilo, e imp es el grupo protector N-10 imina: 3-(2-metoxietoxi)propanoato-Val-Ala-PAB.
Compuesto 58 (MP-PEG8-Val-Ala-PAB-(imp)PBD; 11-hidroxi-8-(5-((11S,11aS)-11-hidroxi-10-((4-((10S,13S)-10isopropil-13-metil-8,11-dioxo-2,5-dioxa-9,12-diazatetradecanamido)benciloxi)carbonil)-7-metoxi-2-metilen-5-oxo2,3,5,10,11,11a-hexahidro-pirrolobenzo[2,1-c][1,4]diazepin-8-iloxi)pentiloxi)-7-metoxi-2-metilen-5-oxo-2,3,11,11atetrahidro-pirrolobenzo[2,1-c][1,4]diazepin-10(5H)-carboxilato de (11S,11aS)-4-((2S,5S)-37-(2,5-dioxo-2,5-dihidro1H-pirrol-1-il)-5-isopropil-2-metil-4,7,35-trioxo-10,13,16,19,22,25,28,31-octaoxa-3,6,34triazaheptatriacontanamido)bencilo)
Se añadió una solución 0,5 M de N,N-diisopropildietilamina en DCM seco (176 µl, 8,8 x 10-5 mol, 2,2 equiv.) a una solución del dipéptido de amina (57) (55 mg, 3,96 x 10-5 mol, 1,0 equiv.) y maleimida-dPeg®8-NHS éster (33 mg, 4,75 x 10-5 mol, 1,2 equiv.) en DCM seco (6 ml). La solución se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas. La mezcla de reacción se evaporó a presión reducida y el residuo se disolvió de nuevo en DCM (50 ml). La solución de DCM se extrajo con carbonato ácido sódico saturado (2 x 100 ml), agua (100 ml), una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (100 ml), se secó (MgSO4) y se evaporó a presión reducida, dando una goma de color amarillo. La purificación por cromatografía ultrarrápida en columna [gradiente de elución de cloroformo a cloroformo al 91%/metanol al 9% en aumentos del 1%] dio el producto 58 en forma de una espuma de color blanco (41 mg, 52%). Datos Analíticos: TR min 5,8 min. EM (MaldiTOF) m/z (intensidad relativa) 1987,9 ([M + Na]+., 100).
Conjugado 60
Se seleccionó el péptido biotina-A20FMDV-Cys (59) que es altamente selectivo para la integrina αvβ6, que se regula de forma ascendente significativamente por muchos cánceres, para la conjugación de los derivados del enlazador de PBD. Se añadió una solución del péptido (59) (7,7 mg, 3,08 µmol, 1,2 equiv.) en 1/1 de acetonitrilo/agua (1 ml) a una solución de (58) (5,05 mg, 2,57 µmol, 1,0 equiv.) en 1/1 de acetonitrilo/agua (2 ml). La solución se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas. El acetonitrilo se evaporó a presión reducida y el agua se eliminó por liofilización, dando el producto 60 en forma de una espuma de color blanco. La purificación por HPLC semipreparativa seguida de liofilización dieron el producto en forma de una espuma de color blanco (3,4 mg, 29%). Datos Analíticos: EM (MaldiTOF) m/z (intensidad relativa) 4458,3 ([M + H]+., 100).
Compuesto 61 (MP-PEG24-Val-Ala-PAB-(imp)PBD; 11-hidroxi-8-((5-(((11S,11aS)-11-hidroxi-10-(((4-((10S,13S)-10isopropil-13-metil-8,11-dioxo-2,5-dioxa-9,12-diazatetradecanamido)bencil)oxi)carbonil)-7-metoxi-2-metilen-5-oxo2,3,5,10,11,11a-hexahidro-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-il)oxi)pentil)oxi)-7-metoxi-2-metilen-5-oxo2,3,11,11a-tetrahidro-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-10(5H)-carboxilato de (11S,11aS)-4-((2S,5S)-16-(2,5dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)-5-isopropil-2-metil-4,7,14-trioxo-10-oxa-3,6,13-triazahexadecanamido)bencilo)
Se añadió NN-diisopropildietilamina (6 µl, 4,3 x 10-5 mol, 2,2 equiv.) a una solución del dipéptido de amina (57) (27 mg, 1,94 x 10-5 mol, 1 equiv.) y maleimida-dPeg®24-NHS éster (30 mg, 2,13 x 10-5 mol, 1,1 equiv.) en DCM seco (5 ml). La solución se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas. La mezcla de reacción se evaporó a presión reducida y el residuo se disolvió de nuevo en DCM (25 ml). La solución de DCM se extrajo con carbonato ácido sódico saturado (2 x 50 ml), agua (50 ml), una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (50 ml), se secó (MgSO4) y se evaporó a presión reducida, dando una goma de color amarillo. La purificación por cromatografía ultrarrápida en columna [gradiente de elución de cloroformo a cloroformo al 91%/metanol al 9% en aumentos del 1%] dio el producto en forma de una goma incolora (22 mg, 42%). Datos Analíticos: EM (MaldiTOF) m/z (intensidad relativa) 2691,8 ([M + H]+., 100).
1,1'-(4,4'-(propan-1,3-diilbis(oxi))bis(5-metoxi-2-nitrobenzoil))bis(4-((E)-prop-1-en-1-il)-2,3-dihidro-1H-pirrol-2carboxilato) de (2S,2'S,E)-dimetilo (71)
Se añadió tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0) (21,6mg) al triflato 40 (230 mg), ácido trans-propenilborónico (52,3 mg) y carbonato sódico (129 mg) en una mezcla de tolueno (5 ml), etanol (2,5 ml) y agua (2,5 ml). La mezcla de reacción se dejó en agitación durante 3 horas en una atmósfera de argón a 32 ºC. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo, se lavó con agua, una solución acuosa saturada de cloruro de sodio y se secó sobre sulfato de magnesio. Después de la filtración, el exceso de acetato de etilo se eliminó por evaporación rotatoria a presión reducida. El producto de acoplamiento en bruto se purificó por cromatografía ultrarrápida en columna (gel de sílice; gradiente de acetato de etilo/hexano al 50%/50% a acetato de etilo/hexano al 80%/20%). Las fracciones puras se combinaron y la eliminación del exceso de eluyente proporcionó el producto puro 71 en forma de un sólido de color naranja (110 mg, rendimiento del 61,4%, CL/EM 3,52 min, m/z EN+ 764,92). La reacción se repitió a una escala mayor, proporcionando 7,21 g del producto de acoplamiento de Suzuki. RMN 1H (400 MHz, CD3OD). δ 7,78 (s, 2H) 6,92 (s, 2H), 5,98 (d, 2H), 5,89 (s, 2H), 5,46-5,55 (m, 2H), 5,10 (dd, 2H), 4,37 (t, 4H), 3,93-4,00 (m, 6H), 3,86 (s, 6H), 3,19-3,26 (m,2H), 2,80 (dd, 2H), 2,45-2,51 (m, 2H), 1,77 (d, 6H OCH3).
(S,E)-((propan-1,3-diilbis(oxi))bis(5-metoxi-2-nitro-4,1-fenilen))bis(((S)-2-(hidroximetil)-4-((E)-prop-1-en-1-il)-2,3dihidro-1H-pirrol-1-il)metanona) (72)
El bis-éster 71 (7,21 g) se añadió en una porción en forma de un sólido a una solución de borohidruro de litio (622 mg) en tetrahidrofurano seco (300 ml) a 0 ºC (baño de hielo). El baño de hielo se eliminó y la mezcla de reacción se dejó que alcanzara la temperatura ambiente. Después de 1 hora, el análisis por TLC (tras un mini tratamiento con acetato de etilo y agua) reveló que las reacciones no estaban completas y por ello se añadió más cantidad de borohidruro de litio (0,75 equivalentes). La mezcla de reacción se dejó en agitación durante 2,5 horas más, momento en el que el análisis por TLC (después de un mini tratamiento) reveló que la reacción se había completado. El borohidruro de litio restante se inactivó con un gran exceso de acetato de etilo (baño de hielo) y la mezcla de reacción se dejó en agitación durante 50 min. La fase orgánica se lavó con agua, una solución acuosa saturada de cloruro de sodio y se secó sobre sulfato de magnesio. El sulfato de magnesio se eliminó por filtración al vacío y el acetato de etilo se eliminó por evaporación rotatoria a presión reducida, proporcionando el diol 72 (5,46 g, rendimiento del 82%) que se usó en la siguiente reacción sin purificación adicional (CL/EM 3,17 min, m/z EN+ 708,84). RMN 1H (400 MHz, CD3OD). 0 7,78 (s, 2H) 6,85 (s, 2H), 5,97 (d, 2H), 5,77 (s, 2H), 5,61-5,53 (m, 2H), 4,754,82 (m, 2H), 4,38 (t, 4H), 3,89-4,00 (m, 12H), 3,01-3,08 (m, 2H) 2,46-2,51 (m, 4H), 1,77 (d, 6H OCH3).
((2S,2'S,E)-1,1'-(4,4'-(propan-1,3-diilbis(oxi))bis(5-metoxi-2-nitrobenzoil))bis(4-((E)-prop-1-en-1-il)-2,3-dihidro-1Hpirrol-2,1-diil))bis(metilen)diacetato (73)
Se añadió gota a gota una solución de cloruro de acetilo (1,64 ml) en diclorometano seco (40 ml) a una solución del bis alcohol 72 (6,2 g) en diclorometano (200 ml) en presencia de trietilamina (3,68 ml) a 0 ºC. La mezcla de reacción se dejó calentar hasta la temperatura ambiente y la reacción se controló por TLC y CL/EM. Una vez que la reacción se completó, la fase orgánica se lavó secuencialmente con agua, ácido cítrico (0,5 N), bicarbonato sódico saturado y una solución acuosa saturada de cloruro de sodio. La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y el exceso de diclorometano se eliminó por evaporación rotatoria a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía en columna (gel de sílice; gradiente, acetato de etilo al 60%/hexano al 40% a acetato de etilo al 70%/hexano al 30%). Las fracciones puras se combinaron y la eliminación del exceso de eluyente proporcionó el bis-acetato 73 (2,50 g, rendimiento del 36%, CL/EM 3,60 min, m/z EN+ 792,63). RMN 1H (400 MHz, CDCl3) 0 7,77 (d, J = 3,4 Hz, 2H), 6,89 (s, 2H), 5,99 (d, J = 15,2 Hz, 2H), 5,78 (s, 2H), 5,65 – 5,45 (m, J = 15,4, 6,8 Hz, 2H), 5,02 – 4,86 (m, J = 9,7, 5,5 Hz, 2H), 4,57 (s, 2H), 4,37 (t, J = 5,9 Hz, 4H), 4,00 (s, 6H), 3,10 – 2,92 (m, J = 10,7 Hz, 2H), 2,60 (dd, J = 16,3, 3,1 Hz, 2H), 2,52 – 2,43 (m, 2H), 2,10 (s, 6H), 1,78 (d, J = 6,7 Hz, 4H).
((2S,2'S,E)-1,1'-(4,4'-(propan-1,3-diilbis(oxi))bis(2-amino-5-metoxibenzoil))bis(4-((E)-prop-1-en-1-il)-2,3-dihidro-1Hpirrol-2,1-diil))bis(metilen)diacetato (74)
Se añadió polvo de zinc (10 g) a una solución del compuesto bis-nitro 73 (2,5 g) en etanol (20 ml) y acetato de etilo (20 ml) seguido de una solución de ácido fórmico en etanol (5% v/v; 100 ml). La reacción tenía exotermia con el aumento de temperatura a 33 ºC, la temperatura se redujo a 15 ºC con un baño de hielo y la mezcla de reacción se dejó en agitación mientras se controlaba estrechamente por TLC y CL/EM. Después de 30 min, se dedujo que la reacción se había completado ya que no se detectaron trazas de material de partida ni intermedios. La mezcla se decantó y se filtró a través de algodón hidrófilo. El filtrado se repartió entre acetato de etilo (300 ml) y NaHCO3 acuoso saturado (300 ml). La fase orgánica se lavó adicionalmente con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (200 ml) y se secó sobre sulfato de magnesio. El exceso de disolventes se eliminó por evaporación rotatoria a presión reducida, proporcionando el producto 74 (2,09 g; rendimiento del 90%, CL/EM 3,35 min, m/z EN+ 732,06). RMN 1H (400 MHz, CDCl3) 0 6,76 (s, 2H), 6,45 (s, 2H), 6,33 (s, 2H), 6,12 (d, J = 15,3 Hz, 2H), 5,54 (dc, J = 13,2, 6,6 Hz, 2H), 4,90 (td, J = 9,6, 4,5 Hz, 2H), 4,48 (s, 4H), 4,42 – 4,33 (m, 4H), 4,23 (t, J = 6,1 Hz, 4H), 3,79 (s, 6H), 2,95 (dd, J = 16,0, 10,4 Hz, 2H), 2,55 (dd, J = 16,2, 3,5 Hz, 2H), 2,42 – 2,32 (m, 2H), 2,07 (s, 6H), 1,81 (d, J = 6,6 Hz, 6H).
((S)-1-(4-(3-(4-((S)-2-(acetoximetil)-4-((E)-prop-1-en-1-il)-2,3-dihidro-1H-pirrol-1-carbonil)-5-(((aliloxi)carbonil)amino)2-metoxifenoxi)propoxi)-2-amino-5-metoxibenzoil)-4-((E)-prop-1-en-1-il)-2,3-dihidro-1H-pirrol-2-il)metil (75)
Se añadió gota a gota una solución de cloroformiato de alilo en diclorometano seco a una solución de la bis-anilina 74 y piridina en diclorometano seco a -78 ºC. La mezcla de reacción se dejó en agitación a -78 ºC durante 2 horas y después se dejó que regresara a la temperatura ambiente. La mezcla de reacción se lavó secuencialmente con sulfato de cobre II acuoso, agua, bicarbonato sódico saturado y una solución acuosa saturada de cloruro de sodio. La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró al vacío y el exceso de diclorometano se eliminó por evaporación rotatoria a presión reducida. Los análisis por TLC y CL/EM revelaron la presencia de tanto el producto mono Alloc deseado 75 como el producto bis-Alloc. La mezcla del producto se sometió a cromatografía en columna (gel de sílice; gradiente de acetato de etilo al 40%/hexano al 60% a acetato de etilo al 70%/hexano al 40%). Las fracciones puras que contenían el producto mono Alloc deseado 75 se recogieron y se combinaron, y el exceso de eluyente se eliminó por evaporación rotatoria a presión reducida, proporcionando el producto (580 ml, rendimiento del 25%). CL/EM 3,58 min, EN+ 817,02 RMN 1H (400 MHz, CDCl3) 0 8,60 (s, 1H), 7,85 (s, 1H), 6,80 (s, 1H), 6,72 (s, 1H), 6,42 (s, 1H), 6,37 (s, 1H), 6,33 (s, 1H), 6,08 (dd, J = 15,4, 6,1 Hz, 2H), 6,00 – 5,87 (m, 1H), 5,62 – 5,44 (m, 2H), 5,34 (dd, J = 17,2, 1,4 Hz, 1H), 5,23 (dd, J = 10,4, 1,2 Hz, 1H), 4,88 (cd, J = 9,5, 4,5 Hz, 2H), 4,67 – 4,57 (m, 2H), 4,50 – 4,25 (m, 8H), 4,22 (t, J = 6,3 Hz, 2H), 3,82 (s, 3H), 3,76 (s, 3H), 3,00 – 2,85 (m, 2H), 2,58 – 2,47 (m, 2H), 2,37 (p, J = 6,1 Hz, 2H), 2,06 (s, 6H), 1,81 – 1,73 (m, 6H).
Acetato de ((2S)-1-(4-(3-(4-((S)-2-(acetoximetil)-4-((E)-prop-1-en-1-il)-2,3-dihidro-1H-pirrol-1-carbonil)-5-((((4-(2-(2(((aliloxi)carbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)bencil)oxi)carbonil)amino)-2-metoxifenoxi)propoxi)-2(((aliloxi)carbonil)amino)-5-metoxibenzoil)-4-((E)-prop-1-en-1-il)-2,3-dihidro-1H-pirrol-2-il)metilo (76)
Se añadió trietilamina seca (0,206 ml) a una solución agitada de la bis-anilina mono-alloc protegida 75 (560 mg) y trifosgeno (72 mg) en tetrahidrofurano seco (20 ml) en una atmósfera inerte. La mezcla de reacción se calentó a 40 ºC, y una muestra se eliminó y se trató con metanol. El análisis por CL/EM reveló la conversión completa en el carbamato de metilo indicando que el grupo de amina libre se había convertido con éxito en el intermedio de isocianato reactivo. Una solución del alloc-val-ala-PABOH (381 mg) y trietilamina (0,14 ml) en tetrahidrofurano seco (20 ml) se inyectó rápidamente en el recipiente de reacción a 40 ºC. La mezcla de reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente durante una noche, después de lo cual una muestra se eliminó y se trató con metanol. El análisis por CL/EM reveló que no había ninguna traza de carbamato de metilo, lo que indicaba que todo el isocianato se había consumido. La mezcla de reacción se evaporó a sequedad, proporcionando el producto en bruto que se purificó por cromatografía en columna (gel de sílice; gradiente de cloroformo a metanol al 2%/cloroformo al 98%). Las fracciones puras se recogieron y se combinaron, y la eliminación del exceso de eluyente por evaporación rotatoria a presión reducida proporcionó el producto puro 76 (691 mg, rendimiento del 84%). CL/EM 3,73 min, EN+1220,21.
((S,E)-(propan-1,3-diilbis(oxi))bis(2-((S)-2-(hidroximetil)-4-((E)-prop-1-en-1-il)-2,3-dihidro-1H-pirrol-1-carbonil)-4metoxi-5,1-fenilen))dicarbamato de alil 4-(2-(2-(((aliloxi)carbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)bencilo (77)
Se añadió una solución acuosa de carbonato potásico (770 mg en 4,8 ml de agua) a una solución del bis-acetato 76 (680 mg) en metanol (29 ml) a temperatura ambiente. La desacetilación se completó en 30 min según se controló por CL/EM. La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano (200 ml) y la fase orgánica se lavó secuencialmente con ácido cítrico (0,5 N, 100 ml), agua (200 ml) y una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (100 ml). La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, la suspensión se filtró (filtración al vacío) y el exceso de disolvente se eliminó por evaporación rotatoria a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía en columna (gel de sílice; gradiente de metanol al 1,5%/cloroformo al 98,5% a metanol al 3,5%/cloroformo al 96,5%). Las fracciones puras se combinaron y la eliminación del exceso de eluyente por evaporación rotatoria a presión reducida proporcionó el diol 77 (530 mg, rendimiento del 84%). CL/EM 3,40 min, EN+ 1136,49.
8-(3-(((11S,11aS)-10-(((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloxi)carbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)bencil)oxi)carbonil)11-hidroxi-7-metoxi-5-oxo-2-((E)-prop-1-en-1-il)-5,10,11,11a-tetrahidro-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8il)oxi)propoxi)-11-hidroxi-7-metoxi-5-oxo-2-((E)-prop-1-en-1-il)-11,11a-dihidro—pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin10(5H)-carboxilato de (11S,11aS)-alilo (78)
Se añadió en una porción peryodinano de Dess-Martin (373 mg, 4 equiv.) a una solución de 77 (250 mg) y piridina (0,36 ml, 20 equiv.) en diclorometano seco (10 ml) a temperatura ambiente. El control estrecho por TLC (metanol al 5%/cloroformo) reveló la desaparición del material de después de 30 minutos. La reacción se trató con una solución de metabisulfito sódico y carbonato ácido sódico seguido de una solución acuosa saturada de cloruro de sodio. La fase de diclorometano se secó sobre sulfato de magnesio y se filtró al vacío. Después, la solución de diclorometano se trató con una cantidad catalítica de DMAP (aprox. 10 mg), haciendo que la mancha de producto principal se fusionara en una como se observó por TLC/CL/EM. La solución se filtró y el diclorometano se eliminó por evaporación rotatoria a presión reducida. El residuo resultante se sometió a cromatografía en columna (gel de sílice; gradiente de metanol al 1,5%/cloroformo al 98,5% a metanol al 3%/cloroformo al 97%). Las fracciones puras se recogieron y la eliminación del eluyente por evaporación rotatoria a presión reducida proporcionó el producto ciclado deseado 78 (62 mg, rendimiento del 25%). CL/EM 3,35 min, EN+1132,19, EN-1130,25.
11-hidroxi-7-metoxi-8-(3-(((S)-7-metoxi-5-oxo-2-((E)-prop-1-en-1-il)-5,11a-dihidro-pirrolo[2,1-c][1,4]d benzoiazepin-8il)oxi)propoxi)-5-oxo-2-((E)-prop-1-en-1-il)-11,11a-dihidro-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-10(5H)-carboxilato de (11S,11aS)-4-((S)-2-((S)-2-amino-3-metilbutanamido)propanamido)bencilo (79)
Se añadió Pd(PPh3)4 (1,9 mg) a una solución del compuesto alloc (78) (62 mg) y pirrolidina (22,6 μl) en DCM seco (3 ml) en una atmósfera de argón. La solución se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 horas. El disolvente se evaporó a presión reducida. La purificación por cromatografía ultrarrápida en columna [gradiente de elución de metanol al 3%/cloroformo al 97% a cloroformo al 90%/metanol al 10%] dio el producto en forma de un polvo de color blanco (26 mg, 50%). CL/EM: TR 2,70 min EM (EN+) 946,17,
11-hidroxi-7-metoxi-8-(3-(((S)-7-metoxi-5-oxo-2-((E)-prop-1-en-1-il)-5,11a-dihidro-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8il)oxi)propoxi)-5-oxo-2-((E)-prop-1-en-1-il)-11,11a-dihidro-pirrolobenzo[2,1-c][1,4]diazepin-10(5H)-carboxilato de (11S,11aS)-4-((2S,5S)-25-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)-5-isopropil-2-metil-4,7,23-trioxo-10,13,16,19-tetraoxa3,6,22-triazapentacosanamido)bencilo (80)
Se añadió una solución de N,N-diisopropildietilamina (2,6 µl) a una solución del dipéptido de amina 79 (13 mg) y maleimida-dPeg®4-NHS éster (8,5mg) en DCM seco (4 ml) La solución se agitó a temperatura ambiente durante 24
h. La mezcla de reacción se evaporó a presión reducida y el residuo se sometió a TLC semi-preparativa (metanol al 10%/cloroformo al 90%), proporcionando una muestra pura de la 14 deseada. Tiempo de retención de CL-EM 2,87 min EN+ 1344,29.
Boc-Val-Cit-PABOH (82)
Se añadió una solución de Boc-Val-OSu (10,0 g, 31,8 mmol, 1 equiv.) en THF (50 ml) a una solución de H-Cit-OH (5,85 g, 33,4 mmol, 1,05 equiv.) y NaHCO3 (2,94 g, 34,9 mmol, 1,1 equiv.) en THF (50 ml) y H2O (100 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 72 horas y el THF se evaporó a presión reducida. El pH se ajustó a 3 con ácido cítrico para precipitar una goma de color blanco. Esta se extrajo con IPA al 10%/acetato de etilo (8 x 150 ml), los extractos combinados se lavaron con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (300 ml) y se secaron (MgSO4). La evaporación a presión reducida dio una espuma de color blanco que se secó a presión reducida durante 18 horas. La espuma se suspendió en éter con sonicación seguida de filtración, dando el producto en forma de un polvo fino de color blanco (10,6 g, 89%). Una porción de este material (7,2 g, 19,2 mmol, 1 equiv.), paminobencil alcohol (2,6 g, 21,15 mmol, 1,1 equiv.) y EEDQ (9,5 g, 38,5 mmol, 2,0 equiv.) en DCM/MeOH (100 ml/50 ml) se agitaron a temperatura ambiente durante 24 horas. El disolvente se evaporó a presión reducida, la goma residual se trituró con éter con sonicación, el producto resultante se recogió por filtración y se secó a presión reducida, dando el producto 82 en forma de un sólido de color blanco (6,6 g, 71%). Datos Analíticos: TR 2,42 min; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 479,8 ([M + 1]+., 60), EM (EN-) m/z (intensidad relativa) 477,6 ([M - H])-., 90).
La síntesis del compuesto 82 se muestra en el esquema 16 que se indica a continuación.
Esquema 16
O
NH2 O
NH2
HN
HN
O
O
O
O
H
BocNH N
BocNH
OH
BocNH
N
O
N
N
H
H
O
O
O
OH
Acetato de ((S)-1-(4-((5-(4-((S)-2-(acetoximetil)-4-metilenpirrolidin-1-carbonil)-5-((((4-((S)-2-((S)-2-((tercbutoxicarbonil)amino)-3-metilbutanamido)-5-ureidopentanamido)bencil)oxi)carbonil)amino)-2-metoxifenoxi)pentil)oxi)2-(((aliloxi)carbonil)amino)-5-metoxibenzoil)-4-metilenpirrolidin-2-il)metilo (83)
Se añadió trietilamina (0,14 g, 0,19 ml 1,4 mmol, 2,2 equiv.) a una solución agitada de la bis-anilina mono-alloc protegida (6) (0,505 g, 0,64 mmol, 1 equiv.) y trifosgeno (0,068 g, 0,23 mmol, 0,36 equiv.) en THF seco (10 ml) en una atmósfera de argón a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se calentó a 40 ºC, una muestra se trató con metanol y se analizó por CLEM como el carbamato de metilo.
Al isocianato recién preparado se le añadió gota a gota una solución del alcohol bencílico (82) (0,46 g, 0,96 mmol, 1,5 equiv.) y trietilamina (0,096 g, 0,13 ml, 0,96 mmol, 1,5 equiv.) en THF seco/DMF (20 ml/1 ml). La mezcla de reacción se controló por CL-EM y se completó después de 2 horas a 40 ºC. La mezcla de reacción se evaporó a sequedad y el residuo se repartió entre IPA al 10%/DCM y agua. La porción orgánica se separó, se lavó con agua (100 ml), una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (100 ml), se secó (MgSO4) y se evaporó a presión reducida, dando una espuma de color pardo. La purificación por cromatografía ultrarrápida en columna [gradiente de elución de cloroformo a cloroformo al 93%/metanol al 7% en aumentos del 1%] dio el producto en forma de un sólido de color blanco (0,5 g, 60%). Datos Analíticos: TR 3,42 min; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 1298 ([M + H]+., 100).
((S)-(Pentan-1,5-diilbis(oxi))bis(2-((S)-2-(hidroximetil)-4-metilenpirrolidin-1-carbonil)-4-metoxi-5,1fenilen))dicarbamato de alil 4-((S)-2-((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanamido)-5ureidopentanamido)bencilo (84)
Se añadió una solución de K2CO3 (0,28 g, 2,0 mmol, 5,4 equiv.) en H2O (2 ml) a una solución del acetato (83) (0,49 g, 0,4 mmol, 1 equiv.) en metanol (10 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. El metanol se evaporó a presión reducida, el residuo se diluyó con H2O (10 ml) y se acidificó a pH 3 con ácido cítrico 1 M. La mezcla se extrajo con DCM (4 x 50 ml) y los extractos combinados se lavaron con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (100 ml), se secaron (MgSO4) y se evaporaron a presión reducida, dando el producto en forma de una espuma de color blanco (0,43 g, 94%). Datos Analíticos: TR 3,12 min; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 1214 ([M + H]+., 100), EM (EN-) m/z (intensidad relativa) 1212 ([M - H])-., 100).
8-((5-(((11S,11aS)-10-(3-(4-((S)-2-((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanamido)-5ureidopentanamido)fenil)propanoil)-11-hidroxi-7-metoxi-2-metilen-5-oxo-2,3,5,10,11,11a-hexahidro-1H-pirrolo[2,1c][1,4]benzodiazepin-8-il)oxi)pentil)oxi)-11-hidroxi-7-metoxi-2-metilen-5-oxo-2,3,11,11a-tetrahidro-1H-pirrolo[2,1c][1,4]benzodiazepin-10(5H)-carboxilato de (11S,11aS)-alilo (85)
Se añadió en una porción ácido 2-yodoxibenzoico estabilizado al 45% en peso (IBX) (0,18 g, 0,29 mmol, 2,4 equiv.) a una solución del producto bis desacetilado (55) (0,147 g, 0,12 mmol, 1 equiv.) en DMSO seco (4 ml) en una atmósfera de nitrógeno. La solución se agitó a temperatura ambiente durante 26 horas. Se añadió una porción más de IBX (15 mg, 2,4 x 10-5, 0,2 equiv.) y la reacción continuó durante 18 horas más. La mezcla de reacción se diluyó con H2O (10 ml), se extrajo con MeOH al 10%/DCM (4 x 25 ml) y los extractos combinados se lavaron con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (2 x 100 ml), agua (100 ml), una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (100 ml) y se secaron (MgSO4). El disolvente se eliminó por evaporación rotatoria a presión reducida, dando el producto en bruto. La purificación por cromatografía ultrarrápida en columna [gradiente de elución de diclorometano al 100% a diclorometano al 94%/metanol al 6% en aumentos del 1%] dio el producto 85 en forma de un sólido de color blanco (77 mg, 53%). Datos Analíticos: TR 2,98 min; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 1210 ([M + H]+., 100), EM (EN-) m/z (intensidad relativa) 1208 ([M - H])-., 100).
8-((5-(((11S,11aS)-10-(((4-((S)-2-((S)-2-amino-3-metilbutanamido)-5-ureidopentanamido)bencil)oxi)carbonil)-11hidroxi-7-metoxi-2-metilen-5-oxo-2,3,5,10,11,11a-hexahidro-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-il)oxi)pentil)oxi)11-hidroxi-7-metoxi-2-metilen-5-oxo-2,3,11,11a-tetrahidro-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-10(5H)-carboxilato de (11S,11aS)-alilo (86)
Se añadió ácido trifluoroacético frío (3 ml) al compuesto Boc protegido (85) (72 mg, 6,0 x 10-5 mol) a 0 ºC. La solución se agitó a esta temperatura durante 15 minutos. La mezcla de reacción se vertió sobre hielo y el pH se
ajustó a pH 8 con una solución saturada de NaHCO3. La solución se extrajo con DCM (4 x 25 ml) y los extractos combinados se lavaron con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio saturada (100 ml), se secaron (MgSO4) y se evaporaron a presión reducida, dando el producto en forma de un sólido de color blanco (55 mg, 83%). Datos Analíticos: TR 2,53 min; EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 1110 ([M + H]+., 100), EM (EN-) m/z (intensidad relativa) 1108 ([M - H])-., 100).
11-hidroxi-7-metoxi-8-((5-(((S)-7-metoxi-2-metilen-5-oxo-2,3,5,11a-tetrahidro-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8il)oxi)pentil)oxi)-2-metilen-5-oxo-2,3,11,11a-tetrahidro-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-10(5H)-carboxilato de (11S,11aS)-4-((S)-2-((S)-2-amino-3-metilbutanamido)-5-ureidopentanamido)bencilo (86)
Se añadió Pd(PPh3)4 (2,7 mg, 2,3 µmol, 0,03 equiv.) a una solución del compuesto alloc (85) (80 mg, 72 µmol, 1,0 equiv.) y pirrolidina (30 µl, 26 mg, 0,36 mmol, 5 equiv.) en DCM seco (3 ml) en una atmósfera de nitrógeno. La solución se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. El disolvente se evaporó a presión reducida. La purificación por cromatografía ultrarrápida en columna [gradiente de elución de cloroformo al 90%/metanol al 10% a cloroformo al 76%/metanol al 24%] dio el producto en forma de un polvo de color blanco (62,5 g, 86%). Datos Analíticos: TR 2,45 min EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 1008 ([M + H]+., 80).
11-hidroxi-7-metoxi-8-((5-(((S)-7-metoxi-2-metilen-5-oxo-2,3,5,11a-tetrahidro-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8il)oxi)pentil)oxi)-2-metilen-5-oxo-2,3,11,11a-tetrahidro-1H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-10(5H)-carboxilato de (11S,11aS)-4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanamido)-3-metilbutanamido)-5ureidopentanamido)bencilo (87)
Se añadió N,N-diisopropildietilamina (12 µl, 7,1 x 10-5 mol, 5,0 equiv.) a una solución del dipéptido de amina (86) (14,2 mg, 1,4 x 10-5 mol, 1 equiv.) y 6-maleimida-ácido hexanoico-NHS éster (4,8 mg, 1,55 x 10-5 mol, 1,1 equiv.) en DCM seco/DMA (2 ml/0,2 ml) en una atmósfera de argón La solución se agitó a temperatura ambiente durante 72 horas. La mezcla de reacción se evaporó a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida en columna [gradiente de elución de cloroformo a cloroformo al 93%/metanol al 7% en aumentos del 1%], dando el producto en forma de una espuma de color blanquecino (5 mg, 29%). Datos Analíticos: TR 2,83 min EM (EN+) m/z (intensidad relativa) 1201 ([M + H]+., 100 ).
Reducción/Oxidación de tioAbMo para conjugación
Los anticuerpos monoclonales de longitud completa manipulados con cisteína (TioAbMo) expresados en células CHO se redujeron con un exceso de 20-40 veces de TCEP (tris(1-carboxietil)fosfina clorhidrato o DTT (ditiotreitol) en Tris 50 mM a pH 7,5 con EDTA 2 mM durante 3 horas a 37 ºC o durante la noche a temperatura ambiente (Getz y col. (1999) Anal. Biochem. Vol 273:73-80; Soltec Ventures, Beverly, MA). El TioAbMo reducido se diluyó y cargó en una columna de HiTrap en acetato sódico 10 mM, a pH 5, y se eluyó con PBS con cloruro sódico 0,3M. Como alternativa, el anticuerpo se acidificó mediante la adición de 1/20 del volumen de ácido acético al 10 % diluido con succinato 10 mM a pH 5, se cargó sobre la columna y después se lavó con 10 volúmenes de columna del tampón succinato. La columna se eluyó con tris 50 mM, a pH 7,5, EDTA 2 mM.
El TioAbMo reducido eluido se trató con sulfato de cobre acuoso (CuSO4) 200 nM o un exceso molar de 15 veces de DHAA (ácido deshidroascórbico). La oxidación de los enlaces disulfuro intercatenarios se completó en aproximadamente tres horas o más. La oxidación al aire ambiente fue también eficaz. El anticuerpo reoxidado se dializó en succinato sódico 20 mM, pH 5, NaCl 150 mM, EDTA 2 mM y se almacenó congelado a -20 ºC.
Conjugación de TioAbMo con compuestos de fármaco-enlazador para preparar conjugados de anticuerpofármaco
Los TioAbMo reoxidados como se ha descrito anteriormente se combinaron con un exceso de 2,5 a 10 veces del intermedio fármaco-enlazador (15ba, 15bb, 15d, 58) mezclado y dejado reposar durante aproximadamente una hora a temperatura ambiente para efectuar la conjugación y formar los conjugados anticuerpo-fármaco TioAbMo 101-115 en la Tabla 1. La mezcla de conjugación se purificó mediante filtración en gel, cromatografía de intercambio de cationes o diálisis para eliminar el exceso de intermedio fármaco-enlazador y otras impurezas.
Tabla 1 5
ADC
ADC (Abfármaco/enlazador) Compuesto fármacoenlazador PFA (proporción entre el fármaco y el anticuerpo) Figuras
101
Tr-MP-PEG8-Phe-Lys-PAB-PBD 15bb 1,3 2, 3, 4
102
antiCD22-MP-PEG8-Phe-Lys-PAB-PBD 15bb 1,2 2, 3
103
Tr-MP-PEG4-Phe-Lys-PAB-PBD 15ba 1,37 2, 3, 4
104
antiCD22-MP-PEG4-Phe-Lys-PAB-PBD 15ba 1,2 2, 3
105
trastuzumab-MP-PEG8-Phe-Lys-PAB-PBD 15bb 1 6
106
trastuzumab-MP-PEG4-Phe-Lys-PAB-PBD 15ba 1,1 6
107
antiSteap1-MP-PEG8-Phe-Lys-PAB-PBD 15bb 0,5 4, 6
108
antiSteap1-MP-PEG4-Phe-Lys-PAB-PBD 15ba 1,5 4, 6
109
antiSteap1-MP-PEG8-Val-Ala-PAB-(imp)PBD 58 1,75 5
110
antiCD22-MP-PEG8-Val-Ala-PAB-(imp)PBD 58 1,8 5
111
antiSteap1-MP-PEG8-Val-Ala-PAB-PBD 15d 1,8
112
gD5B60-MP-PEG8-Val-Ala-PAB-PBD 15d 1,85
113
gD5B60-MP-PEG8-Val-Ala-PAB-(imp)PBD 58 1,9
114
trastuzumab-MP-PEG8-Val-Ala-PAB-PBD 15d 1,7
115
trastuzumab-MP-PEG8-Val-Ala-PAB-(imp)PBD 58 1,8
Tr = tio trastuzumab, anti HER2, 4D5 HC A118C (numeración secuencial), A114C (numeración de Kabat) imp = N-10 imina protegida: 3-(2-metoxietoxi)propanoato-Val-Ala-PAB
En concreto, el intermedio fármaco-enlazador 15d (PM 1496,65) se solubilizó en DMA (dimetilacetamida) hasta una concentración de 20 mM. El anticuerpo trastuzumab (Tr) H118C sometido a ingeniería con cisteína y reoxidado se descongeló y se añadió un exceso molar de 3 veces de 15d. La reacción se llevó a cabo a pH después de que los experimentos mostraran un incremento de la agregación del anticuerpo a un pH mayor. La extensión de la conjugación del fármaco se monitorizó mediante análisis CL-EM. Tras 3 horas se añadió 1 equivalente adicional de 15d y se dejó proceder la reacción durante la noche a 4 ºC para dar el ADC 114 bruto.
El conjugado anticuerpo-fármaco, trastuzumab-MP-PEG8-Val-Ala-PAB-PBD 114, se aplicó después a una columna de intercambio catiónico tras dilución con succinato, se lavó con al menos 10 volúmenes de columna de succinato y se eluyó con PBS. El conjugado anticuerpo-fármaco 114 se formuló en His/acetato 20 mM a pH 5, sacarosa 240 mM usando columnas de filtración en gel. El conjugado anticuerpo-fármaco 114 se caracterizó mediante espectroscopia UV para determinar la concentración proteica, SEC analítica (cromatografía de exclusión por tamaño) para análisis de agregación y CL-EM antes y después de la reducción para determinar la carga del fármaco.
La cromatografía de exclusión por tamaño se realizó usando una columna Shodex KW802.5 en fosfato potásico 0,2M a pH 6,2 con cloruro potásico 0.25 mM e IPA al 15 % a un caudal de 0,75 ml/min. El estado de agregación del conjugado se determinó mediante integración de la absorbancia del área máxima eluida a 280 nm. El análisis mediante SEC mostró un 4,1 % mediante el área integrada del ADC agregado a 8,08 min y 95,9 % de ADC monomérico 114 a 8,99 min.
El análisis CL-EM se realizó usando un instrumento Agilent QTOF 6520 ESI. Como ejemplo, 114 trastuzumab-MPPEG8-Val-Ala-PAB-(imp)PBD se redujo con DTT (ditiotreitol) y se cargó en una columna de 1000 Å, 81m PLRP-S (Varian) calentada hasta 80 ºC y se eluyó con un gradiente del 30 % de B al 40 % de B en 5 minutos. La fase móvil A era H2O con TFA al 0,05%, la fase móvil B era acetonitrilo con TFA al 0,04%. El caudal fue de 0,5 ml/min. La elución de proteínas se monitorizó mediante detección de absorbancia UV a una A 280 nm antes del análisis de ionización por electropulverización y TOF. Se obtuvo la resolución cromatográfica basal de la cadena ligera desnuda, la cadena pesada desnuda residual y la cadena pesada con fármaco. Los espectros m/z obtenidos se aclararon usando el software Agilent Mass Hunter(TM) para calcular la masa de los fragmentos de anticuerpo reducido.
Peso molecular (PM) de MP-PEG8-Val-Ala-PAB-(imp)PBD 58 (Figura 1) = 1964 daltons. Masas aclaradas observadas:
23440 daltons corresponden al PM de la CL desnuda 50627 daltons corresponden al PM de la CH desnuda 52591 daltons corresponden al PM de la CH con fármaco
Por tanto, el pico observado a 52591 daltons corresponde al fragmento esperado de la cadena pesada (CH) (50627 daltons) portador de un grupo farmacológico, el intermedio fármaco-enlazador 58 (daltons).
Cuando el anticuerpo para conjugar a un intermedio-enlazador de PBD no es un anticuerpo sometido a ingeniería con cisteína, los puentes disulfuro intercatenarios se reducen parcialmente mediante la adición de un exceso molar de aproximadamente 2,2 veces de TCEP en fosfato a pH 7,5 durante 2 horas a 37 ºC. Cada equivalente de TCEP tiene como resultado, en teoría, 2 cisteínas reactivas. Normalmente, para una proporción de fármaco/anticuerpo (PFA) diana de aproximadamente 3,5 se añade un exceso molar de 1,8-2 veces de TCEP. Normalmente no se necesita ninguna etapa de purificación tras la reducción. Se añade un ligero exceso (1,2-1,5 X) del intermedio fármaco-enlazador a las cisteínas reactivas, aproximadamente 8 equivalentes molares de intermedio fármacoenlazador al anticuerpo y la reacción se lleva a cabo durante aproximadamente 1 hora a temperatura ambiente. La purificación se puede realizar mediante diafiltración, intercambio iónico o filtración en gel. La PAF se puede determinar mediante cromatografía de interacción hidrofóbica (HIC) o CL-EM del conjugado reducido usando una integración del área A280 UV.
Ensayos de proliferación celular in vitro
La eficacia del ADC se midió mediante un ensayo de proliferación celular usando el protocolo siguiente (ensayo de viabilidad celular luminiscente CellTiter Glo, Promega Corp. Boletín Técnico TB288; Mendoza y col. (2002) Cancer Res. 62:5485-5488):
1.
Un alícuota de 100 μl de cultivo celular que contiene aproximadamente 104 células (por ejemplo, KPL-4, una línea celular de cáncer de mama humano, Kurebayashi y col. (1999) Brit. Jour. Cancer 79(5-6):707-717), SKBR3, BT474, MCF7 o MDA-MB-468) en medio se depositó en cada pocillo de una placa de paredes opacas de 96 pocillos.
2.
Se prepararon pocillos control que contienen medio y sin células.
3.
A los pocillos experimentales se añadió ADC y se incubó durante 3-5 días.
4.
Las placas se equilibraron hasta temperatura ambiente durante aproximadamente 30 minutos.
5.
Se añadió un volumen de reactivo de CellTiter-Glo igual al volumen del medio de cultivo celular presente en cada pocillo.
6.
Los contenidos se mezclaron durante 2 minutos en un agitador orbital para inducir lisis celular.
7.
La placa se incubó a temperatura ambiente durante 10 minutos para estabilizar la señal de luminiscencia.
8.
La luminiscencia se registró e indicó en los gráficos como ULR= unidades de luminiscencia relativas.
Determinadas células se siembran a 1.000-2.000/pocillo o 2.000-3.000/pocillo en una placa de 96 pocillos, 50 ul/pocillo. Tras uno o dos días, los ADC se añaden en volúmenes de 50 μl hasta una concentración final de 9.000, 3.000, 1.000, 333, 111, 37, 12,4, 4,1 o 1,4 ng/ml, con pocillos control “sin ADC” que reciben solo medio. Las condiciones están por duplicado o por triplicado. Tras 3-5 días, se añaden 100 μl/pocillo de Cell TiterGlo II (ensayo basado en luciferasa, proliferación medida por los niveles de ATP) y los recuentos celulares se determinan usando un luminómetro. Los datos se representan como la media de la luminiscencia para cada conjunto de duplicados, con barras de error de desviación estándar. El protocolo es una modificación del ensayo de viabilidad celular luminiscente CellTiter Glo (Promega);
1.
Sembrar en placa 1.000 células/pocillo en 50 µl/pocillo de medio con FBS/glutamina. Dejar que las células se unan durante la noche.
2.
El ADC se diluye en serie a 1:3 en medio comenzando a una concentración de trabajo de 18 µg/ml (esto tiene como resultado una concentración final de 9 µg/ml). Se añaden 50 µl de ADC diluido a los 50 µl de células y el medio ya en el pocillo.
3.
Incubar 72-96 horas (lo normal es 72 horas, pero vigilar la concentración de 0 ug/ml para detener el ensayo cuando las células llegan a un 85-95 % de confluencia.
4.
Añadir 100 µl/pocillo del reactivo Promega Cell Titer Glo, agitar 3 minutos y leer en el luminómetro.
Resultados
La Figura 2 muestra un gráfico de SK-BR-3 viabilidad celular in vitro a 5 días frente a concentraciones de: Tr-MPPEG8-Phe-Lys-PAB-PBD 101 (.), antiCD22-MP-PEG8-Phe-Lys-PAB-PBD 102 (.), Tr-MP-PEG4-Phe-Lys-PAB-PBD 103 (+), y antiCD22-MP-PEG4-Phe-Lys-PAB-PBD 104, donde Tr es anti HER2 tio trastuzumab 4D5 HC A118C, los mutantes del anticuerpo sometidos a ingeniería con cisteína en la cadena pesada se numeran mediante el esquema de numeración secuencial.
La proliferación de las células SK-BR-3 que expresan HER2 es inhibida de forma selectiva por los conjugados anticuerpo-fármaco antiHER2 101 y 103, pero no por los conjugados anticuerpo-fármaco antiCD22 102 y 104. Estos resultados confirman el efecto de destrucción selectiva dependiente de la diana in vitro de los conjugados anticuerpo-fármaco de PBD.
La Figura 3 muestra un gráfico de KPL-4 viabilidad celular in vitro a 5 días frente a concentraciones de: Tr-MPPEG8-Phe-Lys-PAB-PBD 101 (.), antiCD22-MP-PEG8-Phe-Lys-PAB-PBD 102 (.), Tr-MP-PEG4-Phe-Lys-PABPBD 103 (+), y antiCD22-MP-PEG4-Phe-Lys-PAB-PBD 104 (T), donde Tr es anti HER2 tio trastuzumab 4D5 HC A118C, los mutantes de anticuerpo sometidos a ingeniería con cisteína en la cadena pesada se numeran mediante el esquema de numeración secuencial.
Los conjugados anticuerpo-fármaco, trastuzumab-MP-PEG8-Val-Ala-PAB-PBD 114 y trastuzumab-MP-PEG8-Val-Ala-PAB-(imp)PBD 115 se analizaron de nuevo contra células SK-BR-3, KPL-4 y MCF-7 (Levenson y col. (1997) Cancer Res. 57(15):3071-3078) para medir la viabilidad celular in vitro en estudios de cinco días. El valor de la CI50 (1g/ml) para 114 contra SK-BR-3 fue de 17,2 y contra KPL-4 fue de 68,1. El valor de la CI50 para 115 contra SK-BR-3 fue de 12,3 y contra KPL-4 fue de 50,7. Tanto 114 como 115 fueron inactivos de un modo eficaz contra MCF-7, que es una línea celular de adenocarcinoma de mama humano que no expresa HER2. Por tanto, los conjugados 114 y 115 demuestran potencia de destrucción celular dirigida.
Inhibición del crecimiento tumoral, eficacia in vivo en ratones transgénicos con explantes que expresan niveles altos de HER2
Se pueden obtener animales adecuados para experimentos transgénicos a partir de fuentes comerciales estándar tales como Taconic (Germantown, N.Y.). Son adecuadas muchas cepas, pero se prefieren ratones FVB hembra por su mayor susceptibilidad a la formación de tumores. Los ratones FVB macho se usaron para apareamiento y se usaron sementales CD.1 vasectomizados para estimular seudogestación. Se pueden obtener ratones vasectomizados a partir de cualquier proveedor comercial. Los animales fundadores fueron criados con ratones FVB
o con ratones heterocigotos 129/BL6 x FVB p53. Los ratones con heterocigosidad en el alelo p53 se usaron para incrementar potencialmente la formación del tumor. No obstante, esto se ha demostrado que es innecesario. Por tanto, algunos tumores F1 son ce una cepa mixta. Los tumores fundadores son solo FVB. Se obtuvieron seis fundadores con algunos tumores en desarrollo sin tener camadas.
Los animales con tumores (aloinjerto propagado de ratones transgénicos Fo5 mmtv) fueron tratados con una o múltiples dosis mediante inyección IV de ADC. El volumen tumoral se evaluó a varios puntos de tiempo tras la inyección.
Los tumores se producen fácilmente en ratones transgénicos que expresan una forma mutacionalmente activada de neu, el hómologo en rata de HER2, pero HER2 que se sobreexpresa en los cánceres de mama humanos no está mutado y la formación del tumor es mucho menos sólida en ratones transgénicos que sobreexpresan HER2 no mutada (Webster y col. (1994) Semin. Cancer Biol. 5:69-76).
Para mejorar la formación de tumor con HER2 no mutada, se produjeron ratones transgénicos usando un plásmido de ADNc de HER2 en el que se eliminó una ATG cadena arriba con el fin de prevenir el inicio de la traducción en dichos codones de ATG cadena arriba, lo que, por otro lado, reduciría la frecuencia del inicio de la traducción desde el codón de iniciación auténtico cadena debajo de HER2 (por ejemplo, véase Child y col. (1999) J. Biol. Chem. 274: 24335-24341). Adicionalmente se añadió un intrón quimérico en el extremo 5’, que debería también potenciar el nivel de expresión, como se ha indicado anteriormente (Neuberger y Williams (1988) Nucleic Acids Res. 16:6713; Buchman y Berg (1988) Mol. Cell. Biol. 8:4395; Brinster y col. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:836). El intrón quimérico derivó de un vector Promega, vector de expresión en mamíferos Pci-neo (pb 890-1022). El extremo 3’ del ADNc está flanqueado por los exones 4 y 5 de la hormona de crecimiento humana y las secuencias de poliadenilación. Además, se usaron ratones FVB porque esta cepa es más susceptible al desarrollo de tumores. El promotor de MMTV-LTR se usó para garantizar la expresión de HER2 específica de tejido en la glándula mamaria. Los animales se alimentaron con la dieta AIN 76A con el fin de aumentar la susceptibilidad de la formación de tumores (Rao y col. (1997) Breast Cancer Res. y Treatment 45:149-158).
Modelo de tumor mamario murino Fo5
El modelo Fo5 es un modelo de ratón transgénico en el que el gen HER2 humano, bajo la regulación transcripcional del promotor del virus de tumor mamario murino (MMTV-HER2), se sobreexpresa en el epitelio mamario. La sobreexpresión produce el desarrollo espontáneo de tumores mamarios que sobreexpresan el receptor HER2 humano. El tumor mamario de uno de los animales fundadores (fundador nº 5 [Fo5]) se ha propagado en generaciones posteriores de ratones FVB mediante transplante en serie de fragmentos tumorales. Antes de usarse para un estudio de eficacia in vivo, el tumor mamario transgénico MMTV-HER2 Fo5 se transplantó mediante cirugía en la almohadilla de grasa de mama nº 2/3 de ratones nu/nu (de Charles River Laboratories) en fragmentos que medían aproximadamente 2 x 2 mm. Cuando los tumores alcanzaron los volúmenes deseados, los ratones portadores del tumor fueron aleatorizados y se les administró una única dosis mediante inyección IV del ADC.
Resultados
La Figura 4 muestra un gráfico del cambio de volumen tumoral medio in vivo en el tiempo en el modelo de cáncer de mama MMTV-HER2 Fo5 de tumores de aloinjerto mamario inoculados en ratones nu/nu CRL tras una única dosis iv el día 0 con: (1) Vehículo de histidina acetato 20mM, pH 5,5, sacarosa 240mM, (2) antiSteap1-MP-PEG8-Phe-Lys-PAB-PBD 107 a 10 /mg/kg, (3) antiSteap1-MP-PEG4-Phe-Lys-PAB-PBD 108 a 10 mg/kg, (4) Tr-MP-PEG8-Phe-LysPAB-PBD 101 a 10 mg/kg y (5) Tr-MP-PEG4-Phe-Lys-PAB-PBD 103 a 10 mg/kg. Las líneas en la figura están indicadas con los símbolos siguientes:
Los conjugados anti-HER2 101 y 103 mostraron inhibición del crecimiento tumoral específica de la diana. De los 10 animales tratados con el conjugado 101, dos mostraron respuestas parciales. De los 10 animales tratados con el conjugado 103, tres mostraron respuestas parciales. Los ADC control no dirigidos 107 y 108 no tuvieron ningún efecto sobre el crecimiento del tumor.
En otro estudio de ejemplo, el cambio de volumen tumoral medio in vivo en el tiempo en el modelo de cáncer de mama MMTV-HER2 Fo5 de tumores de aloinjerto mamario inoculados en ratones nu/nu CRL se midió tras una única dosis iv el día 0 con: (1) Vehículo histidina acetato 20mM, pH 5,5, sacarosa 240mM; (2) 112 gD5B60-MP-PEG8-Val-Ala-PAB-PBD a 5 mg/kg (dosis de ADC), 300 1g/m2 (exposición al fármaco con PBD); (3) 112 gD5B60-MP-PEG8-Val-Ala-PAB-PBD a 10 mg/kg, 600 1g/m2; (4) 114 trastuzumab-MP-PEG8-Val-Ala-PAB-PBD a 5 mg/kg, 284 1g/m2;
(5) 114 trastuzumab-MP-PEG8-Val-Ala-PAB-PBD a 10 mg/kg, 569 1g/m2; (6) 113 gD5B60-MP-PEG8-Val-Ala-PAB(imp)PBD a 10 mg/kg, 807 1g/m2; y (7) 115 trastuzumab-MP-PEG8-Val-Ala-PAB-(imp)PBD a 10 mg/kg, 790 1g/m2. El tamaño del tumor se midió a los 0, 3, 7 y 10 días. Tras 10 días se administró a los animales: (1) Vehículo mostraron un incremento del tamaño del tumor y ninguna inhibición del tumor en el grupo de 10 animales; (2) 112 mostró ausencia de respuestas parciales o completas en el grupo de 10 animales; (3) 112 mostró ausencia de respuestas parciales o completas en el grupo de 10 animales; (4) 114 mostró diez respuestas parciales en el grupo de 10 animales; (6) 113 mostró ausencia de respuestas parciales o completas en el grupo de 10 animales; y (7) 115 mostró diez respuestas parciales en el grupo de 10 animales. Por tanto, los ADC antiHER2 dirigidos 114 y 115 mostraron inhibición dirigida del tumor, mientras que el vehículo control negativo y los ADC no dirigidos 112 y 113 no lo hicieron.
Modelo de tumor de próstata humano LuCap35V
LuCap35V, obtenido de la University of Washington (Seattle, WA), es una Variante independiente de andrógenos del modelo de tumor de explante de próstata humano LuCap35 (Corey E, Quinn JE, Buhler KR, y col. LuCap35: a new model of prostate cancer progression to androgen independence. The Prostate 2003;55:239−46). El tejido usado para establecer LuCap35 se aisló de la biopsia de los ganglios linfáticos inguinales que contienen cáncer de próstata metastásico y, después, se implantó en el flanco de los ratones (Corey y col. 2003). El modelo de explante LuCap35V se mantuvo mediante implantaciones en serie en ratones C.B-17 Fox Chase SCID macho castrados durante 38 pases en la University of Washington y, después, en ratones C.B-17 SCID-beige macho castrados de Charles River Laboratories para continuos pases en Genentech. Antes de usarse para un estudio de eficacia in vivo, las piezas de tumor LuCap35V (de aproximadamente 20−30 mm3) se implantaron por vía subcutánea en el flanco derecho de los ratones C.B-17 SCID-beige macho castrados. Los animales fueron castrados 2 semanas antes de la implantación del tumor para dar tiempo a que los niveles residuales de testosterona alcanzaran un valor de cero. Cuando los tumores alcanzaron los volúmenes deseados, se aleatorios a los ratones portadores del tumor y se les administró una única dosis mediante inyección IV del ADC.
Resultados
La Figura 5 muestra un gráfico del cambio del volumen del tumor medio en el tiempo en el modelo de cáncer de próstata LuCap35V de tumores xenoinjertados en ratones SCID beige macho castrados tras una única dosis iv el día 0 con (1) Vehículo acetato de histidina 20mM a pH 5,5, sacarosa 240 mM (.), (2) antiCD22-MP-PEG8-Val-Ala-PAB-(imp)PBD 110 a 5 mg/kg ( ), y (3) antiSteap1-MP-PEG8-Val-Ala-PAB-(imp)PBD 109 a 5 mg/kg (.).
La Figura 6 muestra un gráfico del cambio del volumen tumoral medio in vivo en el tiempo en el modelo de cáncer de próstata LuCap35V de tumores xenoinjertados en ratones SCID beige macho castrados tras una única dosis iv el día 0 con (1) Vehículo histidina acetato 20mM, a pH 5,5, sacarosa 240 mM (A) (2) 107 antiSteap1-MP-PEG8-Phe-Lys-PAB-PBD, 9,8 mg/kg, 60 1g/m2 (.), (3) 107 antiSteap1-MP-PEG8-Phe-Lys-PAB-PBD, 19,5 mg/kg, 120 1g/m2 (.), (4) 108 antiSteap1-MP-PEG4-Phe-Lys-PAB-PBD, 3,3 mg/kg, 60 1g/m2 (0), (5) 108 antiSteap1-MP-PEG4-Phe-Lys-PAB-PBD, 6,5 mg/kg, 120 1g/m2 (0), (6) 105 trastuzumab-MP-PEG8-Phe-Lys-PAB-PBD 9.4 mg/kg, 120 1g/m2 (+) y (7) 106 trastuzumab-MP-PEG4-Phe-Lys-PAB-PBD, 8,6 mg/kg (dosis de ADC), 120 1g/m2 (exposición al fármaco de PBD) (X).
En otro estudio de ejemplo, el cambio del volumen del tumor medio en el tiempo en el modelo de cáncer de próstata LuCap35V de tumores xenoinjertados en ratones SCID beige macho castrados se midió tras una única dosis iv el día 0 con (1) Vehículo acetato de histidina 20mM a pH 5,5, sacarosa 240 mM (.), (2) 112 gD5B60-MP-PEG8-Val-Ala-PAB-PBD, 3 mg/kg (dosis de ADC), 68.3 1g/m2 (exposición al fármaco de PBD), (3) 111 antiSteap1-MP-PEG8-Val-Ala-PAB-PBD, 1 mg/kg, 22,15 1g/m2, (4) 111 antiSteap1-MP-PEG8-Val-Ala-PAB-PBD, 3 mg/kg, 66,4 1g/m2, (5) 113 gD5B60-MP-PEG8-Val-Ala-PAB-(imp)PBD a 3 mg/kg, 70,1 1g/m2; y (6) 109 antiSteap1-MP-PEG8-Val-Ala-PAB
(imp)PBD 3 mg/kg, 64,6 1g/m2. El tamaño del tumor se midió cada 4 días. Tras 27 días se administró a los animales:
(1) Vehículo mostraron un incremento del tamaño del tumor y ninguna inhibición del tumor en el grupo de 8 animales; (2) 112 mostró una respuesta parcial del grupo de 8 animales; (3) 111 mostró cuatro respuestas parciales y cuatro respuestas completas en el grupo de 6 animales; (4) 111 mostró cinco respuestas parciales y tres respuestas completas en el grupo de 5 animales; (5) 113 mostró ausencia de respuestas parciales o completas en el grupo de 8 animales; y (6) 109 mostró siete respuestas parciales y una respuesta completa en el grupo de 7 animales. Los ADC antiSteap1 dirigidos 109 y 111 mostraron inhibición dirigida del tumor, mientras que el vehículo control negativo y los ADC no dirigidos 112 y 113 no lo hicieron.
Abreviaturas
Ac acetilo Acm acetamidometilo Alloc aliloxicarbonilo Boc dicarbonato de di-terc-butilo t-Bu terc-butilo Bzl bencilo, en el que Bzl-OMe es metoxibencilo y Bzl-Me es metilbenceno Cbz o Z benciloxi-carbonilo, en el que Z-Cl y Z-Br son cloro- y bromobenciloxi carbonilo, respectivamente DMF N,N-dimetilformamida Dnp dinitrofenilo DTT ditiotreitol Fmoc 9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilo imp grupo protector de imina N-10: 3-(2-metoxietoxi)propanoato-Val-Ala-PAB MC-OSu maleimidocaproil-O-N-succinimida Moc metoxicarbonilo MP maleimidopropanamida Mtr 4-metoxi-2,3,6-trimetilbencenosulfonilo PAB para-aminobenciloxicarbonilo PEG etilenoxi PNZ carbamato de p-nitrobencilo Psec 2-(fenilsulfonil)etoxicarbonilo TBDMS terc-butildimetilsililo TBDPS terc-butildifenilsililo Teoc 2-(trimetilsilil)etoxicarbonilo Tos tosilo Troc cloruro de 2,2,2-tricloretoxicarbonilo Trt tritilo Xan xantilo
Referencias
EP 0522868 EP 0875569 EP 1295944 EP 1347046 EP 1394274 EP 1394274 EP 1439393 JP 05003790 JP 2004113151 JP 58180487 US 2001/055751 US 2002/034749 US 2002/042366 US 2002/150573 US 2002/193567 US 2003/0228319 US 2003/060612 US 2003/064397 US 2003/065143 US 2003/091580
US 2003/096961 US 2003/105292 US 2003/109676 US 2003/118592 US 2003/119121 US 2003/119122 US 2003/119125 US 2003/119126 US 2003/119128 US 2003/119129 US 2003/119130 US 2003/119131 US 2003/124140 US 2003/124579 US 2003/129192 US 2003/134790-A1 US 2003/143557 US 2003/157089 US 2003/165504 US 2003/185830 US 2003/186372 US 2003/186373 US 2003/194704 US 2003/206918 US 2003/219806 US 2003/224411 US 2003/224454 US 2003/232056 US 2003/232350 US 20030096743 US 20030130189 US 2003096743 US 2003130189 US 2004/0001827 US 2004/005320 US 2004/005538 US 2004/005563 US 2004/005598 US 2004/0101899 US 2004/018553 US 2004/022727 US 2004/044179 US 2004/044180 US 2004/101874 US 2004/197325 US 2004/249130 US 20040018194 US 20040052793 US 20040052793 US 20040121940 US 2005/271615 US 2006/116422 US 4816567 US 5362852 US 5440021 US 5583024 US 5621002 US 5644033 US 5674713 US 5700670 US 5773223 US 5792616 US 5854399 US 5869445 US 5976551 US 6011146 US 6153408 US 6214345 US 6218519 US 6268488 US 6518404 US 6534482 US 6555339 US 6602677 US 6677435 US 6759509 US 6835807 US 7223837 US 7375078 US 7521541 US 7723485 WO 00/012508 WO 00/12507 WO 00/12508 WO 01/16318 WO 01/45746 WO 02/088172 WO 03/026577 WO 03/043583 WO 04/032828 WO 2000/12130 WO 2000/14228 WO 2000/20579 WO 2000/22129 WO 2000/32752 WO 2000/36107 WO 2000/40614 WO 2000/44899 WO 2000/55351 WO 2000/75655 WO 200053216 WO 2001/00244 WO 2001/38490 WO 2001/40269 WO 2001/40309 WO 2001/41787 WO 2001/46232 WO 2001/46261 WO 2001/48204 WO 2001/53463 WO 2001/57188 WO 2001/62794 WO 2001/66689 WO 2001/72830 WO 2001/72962 WO 2001/75177 WO 2001/77172 WO 2001/88133 WO 2001/90304 WO 2001/94641 WO 2001/98351 WO 2002/02587 WO 2002/02624 WO 2002/06317 WO 2002/06339 WO 2002/101075 WO 2002/10187 WO 2002/102235 WO 2002/10382 WO 2002/12341 WO 2002/13847 WO 2002/14503 WO 2002/16413 WO 2002/16429 WO 2002/22153 WO 2002/22636 WO 2002/22660 WO 2002/22808 WO 2002/24909 WO 2002/26822 WO 2002/30268 WO 2002/38766 WO 2002/54940 WO 2002/59377 WO 2002/60317 WO 2002/61087; WO 2002/64798 WO 2002/71928 WO 2002/72596 WO 2002/78524 WO 2002/81646 WO 2002/83866 WO 2002/86443 WO 2002/88170 WO 2002/89747 WO 2002/92836 WO 2002/94852 WO 2002/98358 WO 2002/99074 WO 2002/99122 WO 2003/000842 WO 2003/002717 WO 2003/003906 WO 2003/003984 WO 2003/004989 WO 2003/008537 WO 2003/009814 WO 2003/014294 WO 2003/016475 WO 2003/016494 WO 2003/018621 WO 2003/022995 WO 2003/023013 WO 2003/024392 WO 2003/025138 WO 2003/025148 WO 2003/025228 WO 2003/026493 WO 2003/029262 WO 2003/029277 WO 2003/029421 WO 2003/034984 WO 2003/035846 WO 2003/042661 WO 2003/045422 WO 2003/048202 WO 2003/054152 WO 2003/055439 WO 2003/055443 WO 2003/062401 WO 2003/062401 WO 2003/072035 WO 2003/072036 WO 2003/077836 WO 2003/081210 WO 2003/083041 WO 2003/083047 WO 2003/083074 WO 2003/087306 WO 2003/087768 WO 2003/088808 WO 2003/089624 WO 2003/089904 WO 2003/093444 WO 2003/097803 WO 2003/101283 WO 2003/101400 WO 2003/104270 WO 2003/104275 WO 2003/105758 WO 2003004529 WO 2003042661 WO 2003104399 WO 2004/000997 WO 2004/001004 WO 2004/009622 WO 2004/011611 WO 2004/015426 WO 2004/016225 WO 2004/020595 WO 2004/022709 WO 2004/022778 WO 2004/027049 WO 2004/031238 WO 2004/032828 WO 2004/032842 WO 2004/040000 WO 2004/043361 WO 2004/043963 WO 2004/044178 WO 2004/045516 WO 2004/045520 WO 2004/045553 WO 2004/046342 WO 2004/047749 WO 2004/048938 WO 2004/053079 WO 2004/063355 WO 2004/063362 WO 2004/063709 WO 2004/065577 WO 2004/074320 WO 2004000221 WO 2004020583 WO 2004042346 WO 2004065576 WO 2005/023814 WO 2005/082023 WO 2005/085251 WO 2006/111759 WO 2007/044515 WO 2007/085930 WO 2009/052249 WO 2010/091150 WO 91/02536 WO 92/07574 WO 92/17497 WO 94/10312 WO 94/28931 WO 9630514 WO 97/07198 WO 97/44452 WO 98/13059 WO 98/37193 WO 98/40403 WO 98/51805 WO 98/51824 WO 99/28468 WO 99/46284 WO 99/58658
Am. J. Hum. Genet. 49 (3):555-565 (1991) Amiel J., y col.Hum. Mol. Genet. 5, 355-357, 1996 Amir y col.(2003) Angew. Chem. Int. Ed. 42:4494-4499 Amsberry, y col.(1990) J. Org. Chem. 55:5867 Angew Chem. Intl. Ed. Engl. (1994) 33:183-186 Annu. Rev. Neurosci. 21:309-345 (1998) Arai H., y col.J. Biol. Chem. 268, 3463-3470, 1993 Arai H., y col.Jpn. Circ. J. 56, 1303-1307, 1992 Arima, y col., J. Antibiotics, 25, 437-444 (1972) Attie T., et al, Hum. Mol. Genet. 4, 2407-2409, 1995 Auricchio A., y col.Hum. Mol. Genet. 5:351-354, 1996 Barel M., y col.Mol. Immunol. 35, 1025-1031, 1998 Barella y col.(1995) Biochem. J. 309:773-779 Barnett T., y col.Genomics 3, 59-66, 1988 Beck y col.(1992) J. Mol. Biol. 228:433-441 Beck y col.(1996) J. Mol. Biol. 255:1-13 Berge, y col., J. Pharm. Sci., 66, 1-19 (1977) Biochem. Biophys. Res. Commun. (2000) 275(3):783-788 Biochem. Biophys. Res. Commun. 255 (2), 283-288 (1999) Blood (2002) 100 (9):3068-3076 Blood 99 (8):2662-2669 (2002) Blumberg H., y col.Cell 104, 9-19, 2001 Bose, y col., Tetrahedron, 48, 751-758 (1992)
Bourgeois C., y col.J. Clin. Endocrinol. Metab. 82, 3116-3123, 1997 Brinster y col.(1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:836 Buchman and Berg (1988) Mol. Cell. Biol. 8:4395 Cancer Res. 61 (15), 5857-5860 (2001) Carl y col.(1981) J. Med. Chem. 24:479-480 Carlsson y col.(1978) Biochem. J. 173:723-737 Carter, P. (2006) Nature Reviews Immunology 6:343-357 Cell 109 (3):397-407 (2002) CellTiter Glo Luminescent Cell Viability Assay, Promega Corp. Technical Bulletin TB288 Chakravarty y col.(1983) J. Med. Chem. 26:638-644 Chan,J. and Watt, V.M., Oncogene 6 (6), 1057-1061 (1991) Child y col.(1999) J. Biol. Chem. 274: 24335-24341 Cho H.-S., y col.Nature 421, 756-760, 2003 Ciccodicola, A., y col.EMBO J. 8(7):1987-1991 (1989) Clackson y col.(1991) Nature, 352:624-628 Clark H.F., y col.Genome Res. 13, 2265-2270, 2003
Corey E, Quinn JE, Buhler KR, y col. LuCap35: a new model of prostate cancer progression to androgen independence. The Prostate 2003;55:239-46 Coussens L., y col.Science (1985) 230(4730):1132-1139 Cree y col.(1995) AntiCancer Drugs 6:398-404 Crouch y col.(1993) J. Immunol. Meth. 160:81-88 Davis y col.(2001) Proc. Natl. Acad. Sci USA 98(17):9772-9777 de Groot y col.(2001) J. Org. Chem. 66:8815-8830 de Groot y col.(2003) Angew. Chem. Int. Ed. 42:4490-4494 Dennis y col. (2002) "Albumin Binding As A General Strategy For Improving The Pharmacokinetics Of Proteins" J Biol Chem. 277:35035-35043
Dobner y col.(1992) Eur. J. Immunol. 22:2795-2799 Dornan y col.(2009) Blood 114(13):2721-2729 Doronina y col.(2006) Bioconj. Chem. 17:114-124 Dubowchik y col. Bioconjugate Chemistry, 2002, 13,855-869 Dubowchik, y col. (1997) Tetrahedron Letters, 38:5257-60 Dumoutier L., y col.J. Immunol. 167, 3545-3549, 2001
E. Schröder and K. Lübke, The Peptides, volume 1, pp 76-136 (1965) Academic Press Ehsani A., y col.(1993) Genomics 15, 426-429
Eliel, E. and Wilen, S., "Stereochemistry of Organic Compounds", John Wiley & Sons, Inc., Nueva York, 1994 Elshourbagy N.A., y col.J. Biol. Chem. 268, 3873-3879, 1993 Erickson y col.(2006) Cancer Res. 66(8):1-8 Feild, J.A., y col.(1999) Biochem. Biophys. Res. Commun. 258 (3):578-582
Fields, G. y Noble, R. (1990) "Solid phase peptide synthesis utilizando 9-fluoroenilmetoxicarbonil aminoácidos", Int. J. Peptide Protein Res. 35:161-214 Fuchs S., y col.Mol. Med. 7, 115-124, 2001 Fujisaku y col.(1989) J. Biol. Chem. 264 (4):2118-2125)
Gary S.C., y col.Gene 256, 139-147, 2000 Gaugitsch, H.W., y col.(1992) J. Biol. Chem. 267 (16):11267-11273) Geiser y col."Automation of solid-phase peptide synthesis" en Macromolecular Sequencing y Synthesis, Alan R. Liss, Inc., 1988, pp. 199-218
Genome Res. 13 (10):2265-2270 (2003) Genomics 62 (2):281-284 (1999) Geoghegan & Stroh, (1992) Bioconjugate Chem. 3:138-146 Getz y col.(1999) Anal. Biochem. Vol 273:73-80 Glynne-Jones y col.(2001) Int J Cancer. Oct 15; 94(2):178-84 Gregson y col., Chem. Commun. 1999, 797-798 Gregson y col., J. Med. Chem. 2001, 44, 1161-1174 Gu Z., y col.Oncogene 19, 1288-1296, 2000 Ha y col.(1992) J. Immunol. 148(5):1526-1531 Haendler B., y col.J. Cardiovasc. Pharmacol. 20, s1-S4, 1992 Hamann P. (2005) Expert Opin. Ther. Patents 15(9):1087-1103 Hamblett y col.(2004) Clin. Cancer Res. 10:7063-7070
Handbook of Pharmaceutical Additives, 2nd Edition (eds. M. Ash and I. Ash), 2001 (Synapse Information Resources, Inc., Endicott, Nueva York, USA) Handbook of Pharmaceutical Excipients, 2nd edition, 1994 Hara, y col., J. Antibiotics, 41, 702-704 (1988) Hashimoto y col.(1994) Immunogenetics 40(4):287-295 Hay y col. (1999) Bioorg. Med. Chem. Lett. 9:2237 Herdwijn, P. y col., Canadian Journal of Chemistry. 1982, 60, 2903-7 Hermanson, G.T. (1996) Bioconjugate Techniques; Academic Press: Nueva York, p 234-242 Hochlowski, y col., J. Antibiotics, 40, 145-148 (1987) Hofstra R.M.W., y col.Eur. J. Hum. Genet. 5, 180-185, 1997 Hofstra R.M.W., y col.Nat. Genet. 12, 445-447, 1996 Horie y col.(2000) Genomics 67:146-152 Hubert, R.S., y col.(1999) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96 (25):14523-14528) Hurley y Needham-VanDevanter, Acc. Chem. Res., 19, 230-237 (1986) Immunogenetics 54 (2):87-95 (2002) Int. Rev. Cytol. 196:177-244 (2000) Itoh, y col., J. Antibiotics, 41, 1281-1284 (1988)
J. Biol. Chem. 270 (37):21984-21990 (1995)
J. Biol. Chem. 276 (29):27371-27375 (2001)
J. Biol. Chem. 277 (22):19665-19672 (2002)
J. Biol. Chem. 278 (33):30813-30820 (2003) Janeway, C., Travers, P., Walport, M., Shlomchik (2001) Immuno Biology, 5th Ed., Garland Publishing, Nueva York Jeffrey y col.(2005) J. Med. Chem. 48:1344-1358 Jonsson y col.(1989) Immunogenetics 29(6):411-413 Junutula, y col., 2008b Nature Biotech., 26(8):925-932 Kang, G-D., y col., Chem. Commun., 2003, 1680-1689 Kasahara y col.(1989) Immunogenetics 30(1):66-68 King y col.(2002) Tetrahedron Letters 43:1987-1990 Kingsbury y col.(1984) J. Med. Chem. 27:1447 Kohler y col.(1975) Nature 256:495 Kohn, en Antibiotics III. Springer-Verlag, Nueva York, pp. 3-11 (1975). Konishi, y col., J. Antibiotics, 37, 200-206 (1984) Kovtun y col.(2006) Cancer Res. 66(6):3214-3121 Kuhns J.J., y col.J. Biol. Chem. 274, 36422-36427, 1999 Kuminoto, y col., J. Antibiotics, 33, 665-667 (1980) Kurebayashi y col.(1999) Brit. Jour. Cancer 79(5-6):707-717 Lab. Invest. 82 (11):1573-1582 (2002) Lambert J. (2005) Current Opin. en Pharmacol. 5:543-549 Langley and Thurston, J. Org. Chem., 52, 91-97 (1987) Larhammar y col.(1985) J. Biol. Chem. 260(26):14111-14119 Law y col.(2006) Cancer Res. 66(4):2328-2337 Le y col.(1997) FEBS Lett. 418(1-2):195-199 Leber, y col., J. Am. Chem. Soc., 110, 2992-2993 (1988) Leimgruber, y col., J. Am. Chem. Soc., 87, 5791-5793 (1965) Leimgruber, y col., J. Am. Chem. Soc., 87, 5793-5795 (1965) Levenson y col.(1997) Cancer Res. 57(15):3071-3078 Liang y col.(2000) Cancer Res. 60:4907-12 Manfré, F. y col., J. Org. Chem. 1992, 57, 2060-2065 Marks y col.(1991) J. Mol. Biol., 222:581-597 McDonagh (2006) Protein Eng. Design & Sel., 19(7): 299-307 Mendoza y col.(2002) Cancer Res. 62:5485-5488 Miller y col.(2003) Jour. of Immunology 170:4854-4861 Miura y col.(1996) Genomics 38(3):299-304 Miura y col.(1998) Blood 92:2815-2822 Moore M., y col.Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 84, 9194-9198, 1987 Morrison y col.(1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 Muller y col.(1992) Eur. J. Immunol. 22 (6):1621-1625 Mungall A.J., y col.Nature 425, 805-811, 2003 Nagase T., y col.(2000) DNA Res. 7 (2):143-150) Nakamuta M., y col.Biochem. Biophys. Res. Commun. 177, 34-39, 1991 Nakayama y col.(2000) Biochem. Biophys. Res. Commun. 277(1):124-127 Naruse y col.(2002) Tissue Antigens 59:512-519 Nature 395 (6699):288-291 (1998) Neuberger and Williams (1988) Nucleic Acids Res. 16:6713 Novabiochem Catalog 2006/2007 Ogawa Y., y col.Biochem. Biophys. Res. Commun. 178, 248-255, 1991 Okamoto Y., y col.Biol. Chem. 272, 21589-21596, 1997 Oncogene 10 (5):897-905 (1995) Oncogene 14(11):1377-1382 (1997)) Parrish-Novak J., y col.J. Biol. Chem. 277, 47517-47523, 2002 Payne, G. (2003) Cancer Cell 3:207-212 Pingault V., y col.(2002) Hum. Genet. 111, 198-206 Pletnev S., y col.(2003) Biochemistry 42:12617-12624 Preud'homme y col.(1992) Clin. Exp. Immunol. 90(1):141-146 Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. (2003) 100 (7):4126-4131 Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 93 (1):136-140 (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98 (17):9772-9777 (2001) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99 (26):16899-16903 (2002) Proc.Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96 (20):11531-11536 (1999) Protective Groups in Organic Synthesis, Greene and Wuts, 3rd Edition, 1999, John Wiley & Sons Inc. Puffenberger E.G., y col.Cell 79, 1257-1266, 1994 Rao y col.(1997) Breast Cancer Res. and Treatment 45:149-158 Reiter R.E., y col.Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 1735-1740, 1998 Remington's Pharmaceutical Sciences, 20th edition, pub. Lippincott, Williams & Wilkins, 2000 Rodrigues y col.(1995) Chemistry Biology 2:223 Ross y col.(2002) Cancer Res. 62:2546-2553
S. P. Parker, Ed., McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, Nueva York Sakaguchi y col.(1988) EMBO J. 7(11):3457-3464 Sakamoto A., Yanagisawa M., y col.Biochem. Biophys. Res. Commun. 178, 656-663, 1991 Sanderson y col.(2005) Clin. Cancer Res. 11:843-852 Semba K., y col.Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 82, 6497-6501, 1985 Servenius y col.(1987) J. Biol. Chem. 262:8759-8766 Shamis y col.(2004) J. Am. Chem. Soc. 126:1726-1731 Sheikh F., y col.(2004) J. Immunol. 172, 2006-2010 Shimizu, et al, J. Antibiotics, 29, 2492-2503 (1982) Sinha S.K., y col.(1993) J. Immunol. 150, 5311-5320 Storm y col.(1972) J. Amer. Chem. Soc. 94:5815 Strausberg y col.(2002) Proc. Natl. Acad. Sci USA 99:16899-16903 Sun y col.(2002) Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 12:2213-2215 Sun y col.(2003) Bioorganic & Medicinal Chemistry 11:1761-1768 Svensson P.J., y col.Hum. Genet. 103, 145-148, 1998 Swiercz J.M., y col.J. Cell Biol. 165, 869-880, 2004 Syrigos y Epenetos (1999) Anticancer Research 19:605-614 Takeuchi, y col., J. Antibiotics, 29, 93-96 (1976) Tawaragi Y., y col.Biochem. Biophys. Res. Commun. 150, 89-96, 1988 ten Dijke,P., y col.Science 264 (5155):101-104 (1994) Thompson, J.S., y col.Science 293 (5537), 2108-2111 (2001) WO 2004/058309 Thurston, y col., Chem. Brit., 26, 767-772 (1990) Thurston, y col., Chem. Rev. 1994, 433-465 (1994) Toki y col.(2002) J. Org. Chem. 67:1866-1872 Tonnelle y col.(1985) EMBO J. 4(11):2839-2847 Touchman y col.(2000) Genome Res. 10:165-173 Trail y col.(2003) Cancer Immunol. Immunother. 52:328-337 Tsunakawa, y col., J. Antibiotics, 41, 1366-1373 (1988) Tsutsumi M., y col.Gene 228, 43-49, 1999 Uchida y col.(1999) Biochem. Biophys. Res. Commun. 266:593-602 Verheij J.B., y col.Am. J. Med. Genet. 108, 223-225, 2002 Von Hoegen y col.(1990) J. Immunol. 144(12):4870-4877 Webster y col.(1994) Semin. Cancer Biol. 5:69-76 Weis J.J., y col.J. Exp. Med. 167, 1047-1066, 1988 Weis J.J., y col.Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 83, 5639-5643, 1986 Wilson y col.(1991) J. Exp. Med. 173:137-146 Wu y col.(2005) Nature Biotech. 23(9):1137-1145 Xie y col.(2006) Expert. Opin. Biol. Ther. 6(3):281-291 Xu, M.J., y col.(2001) Biochem. Biophys. Res. Commun. 280 (3):768-775 WO 2004/016225
Xu, X.Z., y col.Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98 (19):10692-10697 (2001) Yamaguchi, N., y col.Biol. Chem. 269 (2), 805-808 (1994) Yamamoto T., y col.Nature 319, 230-234, 1986 Yu y col.(1992) J. Immunol. 148(2) 633-637

Claims (48)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Conjugado de Fórmula (AB) o (AC):
    5 RC R9" R9 R10
    R11"
    QR11
    Q" N
    N H
    X"
    X H
    R"
    R7''
    R7
    N N
    R2"
    R2
    R6"
    R6
    OO
    AB
    15 R9" R9 R10
    QR11 N
    N H
    X"
    X HR"
    R7''
    R7N N
    R2"
    R2
    R6"
    R6
    OO
    AC
    y sales y solvatos del mismo, en el que: las líneas de puntos indican la presencia opcional de un doble enlace entre C1 y C2 o C2 y C3; R2 se selecciona independientemente entre H, OH, =O, =CH2, CN, R, OR, =CH-RD, =C(RD)2, O-SO2-R,
    CO2R y COR, y opcionalmente se selecciona adicionalmente entre halo o dihalo; en los que RD se selecciona independientemente entre R, CO2R, COR, CHO, CO2H y halo; R6 y R9 se seleccionan independientemente entre H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR’, NO2, Me3Sn y
    35 halo; R7 se selecciona independientemente entre H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR’, NO2, Me3Sn y halo; R10 es un enlazador conectado a un agente de unión a célula seleccionado entre un anticuerpo, un
    fragmento de un anticuerpo que contiene al menos un sitio de unión y un polipéptido cíclico; Q se selecciona independientemente entre O, S y NH; R11 es H o R o, cuando Q es O, SO3M, en el que M es un catión metálico; cada uno de R y R’ se selecciona independientemente entre los grupos opcionalmente sustituidos alquilo
    C1-12, heterociclilo C3-20 y arilo C5-20, y opcionalmente en relación al grupo NRR’, R y R’ junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un anillo heterocíclico opcionalmente sustituido de 4, 5, 6 ó 7 miembros; R’’ es un grupo alquileno C3-12, cuya cadena puede estar interrumpida por uno o más heteroátomos, por 45 ejemplo, O, S, N(H), NMe y/o anillos aromáticos, por ejemplo, benceno o piridina, cuyos anillos están opcionalmente
    sustituidos por NH2; cada X es O, S o N(H); y en el que R2”, R6”, R7”,R9”, X”, Q” y R11” son como se han definido de acuerdo con R2, R6, R7, R9, X, Q y R11
    respectivamente, y RC es un grupo de terminación.
  2. 2. Conjugado, según la reivindicación 1, en el que R10 es un grupo:
    O
    en el que el asterisco indica el punto de unión a la posición N10, CBA es un agente de unión a célula, L1 es un 55 enlazador escindible, A es un grupo de conexión que conecta L1 al agente de unión a célula, L2 es un enlace covalente o, junto con -OC(=O)-, forma un enlazador de auto-destrucción.
  3. 3.
    Conjugado, según la reivindicación 2, en el que L1 es una enzima escindible.
  4. 4.
    Conjugado, según la reivindicación 3, en el que L1 comprende un dipéptido y el grupo -X1-X2- en el dipéptido, -NH-X1-X2-CO-, se selecciona entre:
    -Phe-Lys-, -Val-Ala-, -Val-Lys-, -Ala-Lys-,
    5 -Val-Cit-, -Phe-Cit-, -Leu-Cit-, -Ile-Cit-, -Phe-Arg-, -Trp-Cit-.
  5. 5. Conjugado, según la reivindicación 4, en el que el grupo -X1-X2- en el dipéptido, -NH-X1-X2-CO-, es -Phe-Lys-, -Val-Ala- o -Val-Cit-.
    15 6. Conjugado, según cualquiera de las reivindicaciones 4 ó 5, en el que el grupo X2-CO- está conectado a L2, y el grupo NH-X1- está conectado a A.
  6. 7.
    Conjugado, según cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6, en el que L2 junto con OC(=O) forma un enlazador de auto-destrucción.
  7. 8.
    Conjugado, según la reivindicación 7, en el que C(=O)O y L2 forman juntos el grupo:
    O en el que el asterisco indica el punto de unión a la posición N10, la línea ondulada indica el punto de unión al enlazador L1, Y es NH, O, C(=O)NH o C(=O)O, y n es de 0 a 3. 25
  8. 9.
    Conjugado, según la reivindicación 8, en el que Y es NH, y n es 0.
  9. 10.
    Conjugado, según la reivindicación 2, en el que L1 y L2 junto con -OC(=O)- comprenden un grupo seleccionado entre:
    O O *
    35 N
    NH H
    NH2 o
    O
    O en el que el asterisco indica el punto de unión a la posición N10, y la línea ondulada indica el punto de unión a A.
  10. 11. Conjugado, según cualquiera de las reivindicaciones 2 a 10, en el que A es:
    (i)
    en el que el asterisco indica el punto de unión a L1, la línea ondulada indica el punto de unión al agente de unión a célula, y n es de 0 a 6; o
    (ii)
    en el que el asterisco indica el punto de unión a L1, la línea ondulada indica el punto de unión al agente de unión a célula, n es 0 ó 1, y m es de 0 a 30.
  11. 12.
    Conjugado, según cualquiera de las reivindicaciones 2 a 11, en el que el agente de unión a célula está conectado a A a través de un enlace tioéter formado a partir de un residuo de tiol de cisteína del agente de unión a célula y un grupo malemida de A.
  12. 13.
    Conjugado, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el agente de unión a célula de R10 es un anticuerpo o un fragmento activo del mismo.
  13. 14.
    Conjugado, según la reivindicación 13, en el que el anticuerpo o fragmento de anticuerpo es un anticuerpo o fragmento de anticuerpo para un antígeno asociado a tumor.
  14. 15.
    Conjugado, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que R9 es independientemente H y R6 es independientemente H.
  15. 16.
    Conjugado, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que R7 es independientemente OMe.
  16. 17.
    Conjugado, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que X es O.
  17. 18.
    Conjugado, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que R11 es H.
  18. 19.
    Conjugado, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que las líneas de puntos indican la presencia opcional de un doble enlace entre C2 y C3.
  19. 20.
    Conjugado, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que R2 se selecciona independientemente entre H, =O, =CH2, R, =CH-RD y =C(RD)2.
  20. 21.
    Conjugado, según la reivindicación 20, en el que R2 es independientemente =CH2.
  21. 22.
    Conjugado, según la reivindicación 20, en el que R2 es independientemente arilo C5-20 opcionalmente sustituido.
  22. 23.
    Conjugado, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, en el que R" es un grupo alquileno C3 o un grupo alquileno C5.
  23. 24.
    Conjugado, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23, en el que RC puede eliminarse de la posición N10 para dejar un enlace imina N10-C11.
  24. 25.
    Conjugado, según la reivindicación 24, en el que RC es un grupo protector de carbamato seleccionado entre: Alloc Fmoc Boc Troc Teoc Psec
    Cbz PNZ.
  25. 26.
    Conjugado, según la reivindicación 24, en el que RC es un grupo: L3
    *
    L2 O
    G2
    O
    en el que el asterisco indica el punto de unión a la posición N10, G2 es un grupo de terminación, L3 es un enlace covalente o un enlazador escindible L1, L2 es un enlace covalente o, junto con OC(=O), forma un enlazador de autodestrucción.
  26. 27.
    Conjugado, según la reivindicación 26, en el que L3 es un enlazador escindible L1, y se define en una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 6.
  27. 28.
    Conjugado, según la reivindicación 26 o reivindicación 27, en el que L2 junto con OC(=O) forma un enlazador de auto-destrucción, y el enlazador de auto-destrucción es como se ha definido en una cualquiera de las reivindicaciones 8 ó 9.
  28. 29.
    Conjugado, según cualquiera de las reivindicaciones 26 a 28, en el que G2 es Ab o Moc, o es un grupo protector
    de carbamato seleccionado entre: Alloc Fmoc Boc Troc Teoc Psec Cbz PNZ.
  29. 30.
    Conjugado, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, para uso en terapia.
  30. 31.
    Conjugado, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 29, para su uso en el tratamiento de una enfermedad proliferativa en un sujeto, en el que la enfermedad es cáncer.
  31. 32.
    Conjugado que tiene la fórmula:
    Ab−(L−D)p en el que Ab es un anticuerpo unido mediante un grupo enlazador (L) al grupo farmacológico PBD (D) de fórmula (AB) o (AC), y p es un número entero de 1 a aproximadamente 8, en el que el grupo enlazador (L) y el grupo farmacológico PBD (D) de fórmula (AB) o (AC) es como se ha definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a
  32. 29.
  33. 33. Conjugado, según la reivindicación 32, en el que Ab es un anticuerpo que se une a uno o más antígenos asociados a tumores o receptores de la superficie celular seleccionados entre (1)-(36):
    (1)
    BMPR1B (receptor de la proteína morfogenética ósea de tipo IB);
    (2)
    E16 (LAT1, SLC7A5);
    (3)
    STEAP1 (seis antígenos epiteliales transmembrana de la próstata)
    (4)
    0772P (CA125, MUC16);
    (5)
    MPF (MPF, MSLN, SMR, factor potenciador de megacariocitos, mesotelina);
    (6)
    Napi3b (NAPI-3B, NPTIIb, SLC34A2, familia 34 de transportadores de soluto (fosfato sódico), miembro 2, transportador 3b de fosfato dependiente de sodio de tipo II,);
    (7)
    Sema 5b (FLJ10372, KIAA1445, Mm.42015, SEMA5B, SEMAG, Semaforina 5b Hlog, dominio sema, siete repeticiones de trombospondina (tipo 1 y similar al tipo 1), dominio transmembrana (TM) y dominio citoplasmático corto, (semaforina) 5B).
    (8)
    PSCA hlg (2700050C12Rik, C530008O16Rik, RIKEN ADNc 2700050C12, gen de RIKEN ADNc 2700050C12);
    (9)
    ETBR (receptor de tipo B de la endotelina);
    (10)
    MSG783 (RNF124, proteína hipotética FLJ20315);
    (11)
    STEAP2 (HGNC_8639, IPCA-1, PCANAP1, STAMP1, STEAP2, STMP, gen 1 asociado al cáncer de próstata, proteína 1 asociada al cáncer de próstata, seis antígenos epiteliales transmembrana de la próstata 2, seis proteínas prostáticas transmembrana);
    (12)
    TrpM4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, potencial canal catiónico del receptor transitorio, subfamilia M, miembro 4);
    (13) CRIPTO (CR, CR1, CRGF, CRIPTO, TDGF1, factor de crecimiento derivado de teratocarcinoma);
    (14)
    CD21 (CR2 (receptor 2 del complemento) o C3DR (receptor C3d/del virus de Epstein Barr) o Hs 73792);
    (15) CD79b (CD79B, CD79β, IGb (beta asociado a inmunoglobulina), B29);
    (16)
    FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAP1A (proteína 1a de anclaje de fosfatasa que contiene el dominio SH2), SPAP1B, SPAP1C);
    (17)
    HER2;
    (18)
    NCA;
    (19)
    MDP;
    (20)
    IL20Rα;
    (21)
    Brevican;
    (22)
    EphB2R;
    (23)
    ASLG659;
    (24)
    PSCA;
    (25)
    GEDA;
    (26)
    BAFF-R (receptor del factor de activación de células B, receptor BLyS 3, BR3);
    (27)
    CD22 (receptor de células B, isoforma CD22-B);
    (28)
    CD79a (CD79A, CD79α, alfa asociada con inmunoglobulina);
    (29)
    CXCR5 (receptor 1 del linfoma de Burkitt);
    (30)
    HLA-DOB (subunidad beta de la molécula de clase II del MHC (antígeno Ia));
    (31)
    P2X5 (canal iónico 5 aplicado al ligando P2X del receptor purinérgico);
    (32)
    CD72 (antígeno CD72 de diferenciación de las células B, Lyb-2);
    (33)
    LY64 (antígeno 64 de linfocitos (RP105), proteína de membrana de tipo 1 de la familia de repeticiones ricas en leucina (LRR);
    (34)
    FcRH1 (proteína 1 similar al receptor de Fc);
    (35)
    IRTA2 (receptor de la superfamilia de las inmunoglobulinas 2 asociado a la translocación); y
    (36)
    TENB2 (posible proteoglicano transmembrana).
  34. 34.
    Conjugado, según la reivindicación 42, en el que el Ab es un anticuerpo modificado con cisteína.
  35. 35.
    Conjugado, según la reivindicación 32 o la reivindicación 33, en el que el Ab es un anticuerpo que se une a un receptor ErbB.
  36. 36.
    Conjugado, según la reivindicación 35, en el que el Ab es trastuzumab.
  37. 37.
    Conjugado, según la reivindicación 32 o la reivindicación 33, en el que el Ab es un anticuerpo anti-HER2, anti-Steap 1 o anti-CD22.
  38. 38.
    Conjugado, según una cualquiera de las reivindicaciones 32 a 37, en el que p es 1, 2, 3 ó 4.
  39. 39.
    Conjugado, según una cualquiera de las reivindicaciones 32 a 38, que tiene una fórmula seleccionada entre:
    NH2
    O H
    H ON
    N N
    O
    H
    O N
    S
    O
    Ab
    O O
    OH NO O N
    H H
    N OMe MeO N
    p
    OO
    O
    H
    H
    N
    ON
    NO H
    O NS
    O
    Ab
    O
    OHO
    N
    NO
    OH H
    N OMe MeO N OO
    p
    NH2 NH
    15 O
    O
    HH
    N
    ON
    NO H
    O NS
    O
    Ab
    O OHO
    N
    NO
    OH H
    N OMe MeO N OO
    p
    p
    en el que n es un número entero de 1 a 24. 5
  40. 40.
    Conjugado, según la reivindicación 39, en el que n es un número entero de 1 a 12.
  41. 41.
    Conjugado, según la reivindicación 40, en el que n es 4 u 8.
    10 42. Composición farmacéutica que comprende el conjugado según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 29 o las reivindicaciones 32 a 41, un diluyente, vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable.
  42. 43. Composición farmacéutica, según la reivindicación 42, que comprende adicionalmente una cantidad
    terapéuticamente eficaz de un agente quimioterapéutico. 15
  43. 44. Uso de un conjugado, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 29 o las reivindicaciones 32 a 41, en la preparación de un medicamento para utilizar en el tratamiento de una enfermedad proliferativa en un sujeto.
  44. 45. Compuesto de fórmula (EB) o (EC): 20
    RCR9" R9 RL R11"
    QR11 Q" N
    N H
    X"
    X
    H 25
    R"
    R7''
    R7N N
    R2"
    R2
    R6"
    R6
    OO R9" R9 RL
    QR11 N
    EB
    N H
    X"
    X
    H
    R"
    R7''
    R7N N R2
    35 R2"
    R6"
    R6
    O O
    EC
    40 y sales y solvatos del mismo, en el que las líneas de puntos indican la presencia opcional de a doble enlace entre C1 y C2 o C2 y C3; R2 se selecciona independientemente entre H, OH, =O, =CH2, CN, R, OR, =CH-RD, =C(RD)2, O-SO2-R, CO2R y COR, y opcionalmente se selecciona adicionalmente entre halo o dihalo;
    45 en los que RD se selecciona independientemente entre R, CO2R, COR, CHO, CO2H, y halo; R6 y R9 se seleccionan independientemente entre H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR’, NO2, Me3Sn y halo; R7 se selecciona independientemente entre H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR’, NO2, Me3Sn y halo; RL es un enlazador para la conexión a un agente de unión a célula seleccionado entre un anticuerpo, un fragmento de un anticuerpo que contiene al menos un sitio de unión y un polipéptido cíclico;
    50 Q se selecciona independientemente entre O, S y NH;
    R11 es H, o R o, cuando Q es O, R11 es SO3M, en el que M es un catión metálico; cada uno de R y R’ se selecciona independientemente entre los grupos opcionalmente sustituidos alquilo C1-12, heterociclilo C3-20 y arilo C520, y opcionalmente en relación al grupo NRR’, R y R’ junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un anillo heterocíclico opcionalmente sustituido de 4, 5, 6 ó 7 miembros;
    5 R" es un grupo alquileno C3-12, cuya cadena puede estar interrumpida por uno o más heteroátomos, por ejemplo O, S, N(H), NMe y/o anillos aromáticos, por ejemplo benceno o piridina, estando dichos anillos opcionalmente sustituidos con NH2;
    cada X es O, S o N(H); y en el que R2”, R6”, R7”,R9”, R11”, Q” y X” son como se han definido de acuerdo con R2, R6, R7, R9, R11, Q y X 10 respectivamente, y RC es un grupo de terminación; en el que RL es diferente a RC.
  45. 46.
    Compuesto, según la reivindicación 45, que tiene la estructura:
  46. 47.
    Compuesto, según la reivindicación 46, en el que n es un número entero de 1 a 12.
  47. 48.
    Compuesto, según la reivindicación 47, en el que n es 4 u 8.
  48. 49.
    Compuesto, según la reivindicación 45, que se selecciona entre: NH2
    O H
    H ON
    N N
    O
    H
    O N
    O
    O O
    OH N N
    O
    OH H
    N OMe MeO N OO(i) ;
    O H
    H ON
    N N
    O
    H
    O N
    O
    O O
    OH N
    NO OH H
    N OMe MeO N
    (ii) O O; y O
    NH2 NH
    O
    H
    H
    N
    ON
    N
    O
    H
    O
    N
    O
    O
    OH
    O
    N
    NO
    O
    H
    H N OMe MeO N 10 (iii) O O .
ES11716146T 2010-04-15 2011-04-15 Pirrolobenzodiacepinas y conjugados de las mismas Active ES2430567T3 (es)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB1006341.0A GB201006341D0 (en) 2010-04-15 2010-04-15 Pyrolobenzodiazepines
GB201006341 2010-04-15
GBGB1016802.9A GB201016802D0 (en) 2010-10-06 2010-10-06 Pyrrol obenzodiazephines
GB201016802 2010-10-06
PCT/US2011/032632 WO2011130598A1 (en) 2010-04-15 2011-04-15 Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2430567T3 true ES2430567T3 (es) 2013-11-21

Family

ID=44260042

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES11716146T Active ES2430567T3 (es) 2010-04-15 2011-04-15 Pirrolobenzodiacepinas y conjugados de las mismas

Country Status (31)

Country Link
US (4) US20130028917A1 (es)
EP (2) EP2662095A1 (es)
JP (1) JP5972864B2 (es)
KR (1) KR101738203B1 (es)
CN (1) CN102933236B (es)
AU (1) AU2011239507B2 (es)
BR (1) BR112012026213B1 (es)
CA (1) CA2793890C (es)
CL (1) CL2012002880A1 (es)
CO (1) CO6630137A2 (es)
CR (1) CR20120522A (es)
CY (1) CY1114458T1 (es)
DK (1) DK2528625T3 (es)
EA (1) EA024730B1 (es)
EC (1) ECSP12012244A (es)
ES (1) ES2430567T3 (es)
HK (1) HK1174543A1 (es)
HR (1) HRP20130953T1 (es)
IL (1) IL222006A (es)
MA (1) MA34277B1 (es)
MX (1) MX2012011901A (es)
NZ (1) NZ602241A (es)
PE (1) PE20130342A1 (es)
PL (1) PL2528625T3 (es)
PT (1) PT2528625E (es)
RS (1) RS52983B (es)
SG (1) SG184859A1 (es)
SI (1) SI2528625T1 (es)
TW (1) TWI540136B (es)
WO (1) WO2011130598A1 (es)
ZA (1) ZA201206449B (es)

Families Citing this family (262)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8288557B2 (en) 2004-07-23 2012-10-16 Endocyte, Inc. Bivalent linkers and conjugates thereof
NZ580132A (en) 2007-03-14 2012-11-30 Endocyte Inc Binding ligand linked drug delivery conjugates of tubulysins to vitamins
US9877965B2 (en) 2007-06-25 2018-01-30 Endocyte, Inc. Vitamin receptor drug delivery conjugates for treating inflammation
AU2008268432B2 (en) 2007-06-25 2015-01-15 Endocyte, Inc. Conjugates containing hydrophilic spacer linkers
GB0819095D0 (en) 2008-10-17 2008-11-26 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
EP3100745B1 (en) 2009-02-05 2018-04-18 Immunogen, Inc. Novel benzodiazepine derivatives
WO2011003109A1 (en) 2009-07-02 2011-01-06 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Fluorescent silica-based nanoparticles
MX2012006072A (es) * 2009-11-30 2012-07-23 Genentech Inc Composiciones y metodos para el diagnostico y el tratamiento de tumores.
US9951324B2 (en) 2010-02-25 2018-04-24 Purdue Research Foundation PSMA binding ligand-linker conjugates and methods for using
EA024118B1 (ru) 2010-04-15 2016-08-31 Сиэтл Дженетикс, Инк. Конъюгаты пирролбензодиазепина направленного действия
AU2011239525B2 (en) 2010-04-15 2015-04-09 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines used to treat proliferative diseases
EP2655418B1 (en) 2010-12-20 2017-10-04 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-mesothelin antibodies and immunoconjugates
MY183977A (en) 2011-02-15 2021-03-17 Immunogen Inc Cytotoxic benzodiazepine derivatives
KR101972303B1 (ko) 2011-06-10 2019-04-25 메르사나 테라퓨틱스, 인코포레이티드 단백질-중합체-약물 접합체
US8815226B2 (en) 2011-06-10 2014-08-26 Mersana Therapeutics, Inc. Protein-polymer-drug conjugates
US20130058947A1 (en) 2011-09-02 2013-03-07 Stem Centrx, Inc Novel Modulators and Methods of Use
AU2012311505B2 (en) 2011-09-20 2016-09-29 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines as unsymmetrical dimeric PBD compounds for inclusion in targeted conjugates
CA2850373C (en) 2011-10-14 2019-07-16 Seattle Genetics, Inc. Pyrrolobenzodiazepines and targeted conjugates
EP2751111B1 (en) 2011-10-14 2017-04-26 MedImmune Limited Asymmetrical bis-(5H-Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-one) derivatives for the treatment of proliferative or autoimmune diseases
EP3309162A1 (en) 2011-10-14 2018-04-18 Seattle Genetics, Inc. Targeted conjugates of pyrrolobenzodiazepines
EA027386B1 (ru) 2011-10-14 2017-07-31 Медимьюн Лимитед Пирролобензодиазепины
KR101877598B1 (ko) 2011-10-14 2018-07-11 메디뮨 리미티드 피롤로벤조디아제핀 및 그의 컨주게이트
US9717803B2 (en) 2011-12-23 2017-08-01 Innate Pharma Enzymatic conjugation of polypeptides
RU2014138474A (ru) 2012-02-24 2016-04-10 СтемСентРкс, Инк. Новые модуляторы и способы применения
PE20150091A1 (es) 2012-02-24 2015-02-16 Stem Centrx Inc Anticuerpos anti-sez6 y metodos de empleo
WO2013126797A1 (en) 2012-02-24 2013-08-29 Purdue Research Foundation Cholecystokinin b receptor targeting for imaging and therapy
US20140080175A1 (en) 2012-03-29 2014-03-20 Endocyte, Inc. Processes for preparing tubulysin derivatives and conjugates thereof
AR090549A1 (es) 2012-03-30 2014-11-19 Genentech Inc Anticuerpos anti-lgr5 e inmunoconjugados
EP2844300B1 (en) 2012-05-01 2018-10-17 Genentech, Inc. Anti-pmel17 antibodies and immunoconjugates
JP6423340B2 (ja) 2012-05-15 2018-11-14 シアトル ジェネティクス，インコーポレイティド 自己安定化リンカー結合体
BR112014028366A2 (pt) * 2012-05-21 2017-06-27 Genentech Inc anticorpos anti-ly6e e imunoconjugados e métodos de uso
WO2013177481A1 (en) 2012-05-25 2013-11-28 Immunogen, Inc. Benzodiazepines and conjugates thereof
CA2873889A1 (en) 2012-07-09 2014-01-16 Genentech, Inc. Anti-cd22 antibodies and immunoconjugates
MX2015000359A (es) * 2012-07-09 2015-04-14 Genentech Inc Anticuerpos e inmunoconjugados anti-cd79b.
WO2014009426A2 (en) 2012-07-13 2014-01-16 Innate Pharma Screening of conjugated antibodies
CA2879665A1 (en) * 2012-08-02 2014-02-06 Genentech, Inc. Anti-etbr antibodies and immunoconjugates
ES2660029T3 (es) 2012-10-12 2018-03-20 Medimmune Limited Conjugados de anticuerpo-pirrolobenzodiazepinas
NZ707486A (en) 2012-10-12 2018-09-28 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepine - anti-psma antibody conjugates
CN104955485B (zh) * 2012-10-12 2018-01-30 Adc疗法责任有限公司 吡咯并苯并二氮杂卓‑抗her2抗体结合物
CA2885305C (en) 2012-10-12 2019-11-12 Spirogen Sarl Synthesis and intermediates of pyrrolobenzodiazepine derivatives for conjugation
WO2014057118A1 (en) * 2012-10-12 2014-04-17 Adc Therapeutics Sarl Pyrrolobenzodiazepine-anti-cd22 antibody conjugates
EP2906250B1 (en) 2012-10-12 2018-05-30 ADC Therapeutics SA Pyrrolobenzodiazepine-anti-psma antibody conjugates
ES2703151T3 (es) * 2012-10-12 2019-03-07 Adc Therapeutics Sa Conjugados de anticuerpos de pirrolobenzodiazepinas
HUE035694T2 (en) 2012-10-12 2018-05-28 Adc Therapeutics Sa Pirrolobenzodiazepine anti-CD22 antibody conjugates
TR201902494T4 (tr) * 2012-10-12 2019-03-21 Medimmune Ltd Pirrolobenzodiazepinler ve onların konjugatları.
PT2839860T (pt) * 2012-10-12 2019-07-29 Medimmune Ltd Pirrolobenzodiazepinas e conjugados das mesmas
SI2906296T1 (en) 2012-10-12 2018-06-29 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
JP6355641B2 (ja) * 2012-11-05 2018-07-11 ファイザー・インク スプライソスタチン類似体
WO2014072482A1 (en) 2012-11-09 2014-05-15 Innate Pharma Recognition tags for tgase-mediated conjugation
EA031585B1 (ru) * 2012-12-21 2019-01-31 Медимьюн Лимитед Пирролобензодиазепины и их конъюгаты
CN105246894A (zh) 2012-12-21 2016-01-13 斯皮罗根有限公司 用于治疗增殖性和自身免疫疾病的非对称吡咯并苯并二氮杂卓二聚物
SG11201504887TA (en) 2012-12-21 2015-07-30 Bioalliance Cv Hydrophilic self-immolative linkers and conjugates thereof
US9968687B2 (en) * 2013-02-22 2018-05-15 Abbvie Stemcentrx Llc Anti-DLL3 antibody drug conjugates
JP6444902B2 (ja) * 2013-03-13 2018-12-26 メドイミューン・リミテッドＭｅｄＩｍｍｕｎｅ Ｌｉｍｉｔｅｄ ピロロベンゾジアゼピン及びその結合体
CN105142674B (zh) 2013-03-13 2018-11-13 麦迪穆有限责任公司 吡咯并苯并二氮杂卓和其结合物
NZ710745A (en) * 2013-03-13 2019-03-29 Genentech Inc Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
EP2970474B1 (en) 2013-03-14 2017-12-20 Genentech, Inc. Anti-b7-h4 antibodies and immunoconjugates
US9562099B2 (en) 2013-03-14 2017-02-07 Genentech, Inc. Anti-B7-H4 antibodies and immunoconjugates
JP6847388B2 (ja) 2013-03-15 2021-03-31 レゲネロン ファーマシューティカルス，インコーポレーテッド 生物活性分子、そのコンジュゲート、及び治療用途
US10611824B2 (en) 2013-03-15 2020-04-07 Innate Pharma Solid phase TGase-mediated conjugation of antibodies
US20160106861A1 (en) * 2013-04-26 2016-04-21 Spirogen Sarl Axl antibody-drug conjugate and its use for the treatment of cancer
WO2014202773A1 (en) 2013-06-20 2014-12-24 Innate Pharma Enzymatic conjugation of polypeptides
WO2014202775A1 (en) 2013-06-21 2014-12-24 Innate Pharma Enzymatic conjugation of polypeptides
AR096687A1 (es) 2013-06-24 2016-01-27 Genentech Inc Anticuerpos anti-fcrh5
AU2014307080B2 (en) * 2013-08-12 2018-06-07 Genentech, Inc. 1-(chloromethyl)-2,3-dihydro-1H-benzo(E)indole dimer antibody-drug conjugate compounds, and methods of use and treatment
EP3039155B1 (en) 2013-08-26 2019-10-09 Ontera Inc. Molecule detection using boronic acid substituted probes
EP3038624A1 (en) 2013-08-26 2016-07-06 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical compositions comprising macrolide diastereomers, methods of their synthesis and therapeutic uses
US9993566B2 (en) * 2013-08-28 2018-06-12 Abbvie Stemcentrx Llc SEZ6 modulators and methods of use
KR20160044042A (ko) 2013-08-28 2016-04-22 스템센트알엑스 인코포레이티드 부위-특이적 항체 접합 방법 및 조성물
JP2016531914A (ja) * 2013-08-28 2016-10-13 ステムセントリックス， インコーポレイテッド 操作された抗ｄｌｌ３コンジュゲートおよび使用方法
CA2922889A1 (en) 2013-09-17 2015-03-26 Genentech, Inc. Methods of using anti-lgr5 antibodies
GB201317981D0 (en) 2013-10-11 2013-11-27 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
EP3054984A1 (en) * 2013-10-11 2016-08-17 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
EP3054985B1 (en) 2013-10-11 2018-12-26 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
EP3054983B1 (en) 2013-10-11 2019-03-20 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
GB201317982D0 (en) 2013-10-11 2013-11-27 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
PE20160561A1 (es) 2013-10-11 2016-06-03 Oxford Biotherapeutics Ltd Anticuerpos conjugados contra ly75 para el tratamiento de cancer
WO2015052535A1 (en) * 2013-10-11 2015-04-16 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
MX367851B (es) 2013-10-11 2019-09-09 Mersana Therapeutics Inc Conjugados de proteína-polímero-fármaco.
ES2754397T3 (es) 2013-10-11 2020-04-17 Asana Biosciences Llc Conjugados de proteína-polímero-fármaco
CA2921707C (en) 2013-10-15 2023-03-28 Seattle Genetics, Inc. Pegylated drug-linkers for improved ligand-drug conjugate pharmacokinetics
RS65324B1 (sr) 2013-10-18 2024-04-30 Novartis Ag Obeleženi inhibitori membranskog antigena specifičnog za prostatu (psma), njihova upotreba kao agenasa za snimanje i farmaceutskih agenasa za lečenje karcinoma prostate
JP6515111B2 (ja) 2013-11-06 2019-05-22 アッヴィ・ステムセントルクス・エル・エル・シー 新規の抗クローディン抗体および使用方法
AU2014361856A1 (en) * 2013-12-12 2016-06-30 Abbvie Stemcentrx Llc Novel anti-DPEP3 antibodies and methods of use
KR20160098328A (ko) 2013-12-13 2016-08-18 제넨테크, 인크. 항-cd33 항체 및 면역접합체
NZ720743A (en) * 2013-12-16 2021-12-24 Medimmune Ltd Peptidomimetic compounds and antibody-drug conjugates thereof
CA2929565A1 (en) * 2013-12-16 2015-06-25 Genentech, Inc. 1-(chloromethyl)-2,3-dihydro-1h-benzo[e]indole dimer antibody-drug conjugate compounds, and methods of use and treatment
CN110156893B (zh) 2013-12-17 2023-03-03 基因泰克公司 抗cd3抗体及使用方法
TWI777502B (zh) 2013-12-19 2022-09-11 美商西雅圖遺傳學公司 與標的-藥物結合物併用之亞甲基胺基甲酸酯連接物
KR20170008202A (ko) 2014-02-21 2017-01-23 애브비 스템센트알엑스 엘엘씨 흑색종에 사용하기 위한 항-ｄｌｌ3 항체 및 약물 접합체
BR112016020752B1 (pt) 2014-03-11 2023-11-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc Anticorpo isolado ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, composição farmacêutica, e, uso de uma composição farmacêutica
BR112016021717A2 (pt) 2014-03-21 2018-07-10 Abbvie Inc anticorpos anti-egfr e conjugados anticorpo-fármaco
GB201406767D0 (en) * 2014-04-15 2014-05-28 Cancer Rec Tech Ltd Humanized anti-Tn-MUC1 antibodies anf their conjugates
JP6835591B2 (ja) 2014-04-25 2021-02-24 ピエール、ファーブル、メディカマン Ｉｇｆ−１ｒ抗体および癌処置のためのアドレッシングビヒクルとしてのその使用
RU2685259C2 (ru) 2014-04-25 2019-04-17 Пьер Фабр Медикамент Конъюгат антитела и лекарственного средства и его применение для лечения рака
SI3134124T1 (sl) 2014-04-25 2019-06-28 Pierre Fabre Medicament Konjugat protitelesa zdravila IGF-1R in uporaba le-tega za zdravljenje raka
MX2016015162A (es) 2014-05-22 2017-03-03 Genentech Inc Anticuerpos anti - gpc3 e inmunoconjugados.
DK3148591T3 (da) * 2014-05-29 2020-04-14 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Nanopartikel-lægemiddelkonjugater
MX2016016233A (es) 2014-06-11 2017-03-31 Genentech Inc Anticuerpos anti-lgr5 y sus usos.
JP2017525755A (ja) * 2014-06-20 2017-09-07 アブジェノミクス インターナショナル インコーポレイテッド．Ａｂｇｅｎｏｍｉｃｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃ． Ｈｅｒ２抗体−薬物抱合体
MX2016016490A (es) 2014-06-20 2017-07-28 Bioalliance Cv Conjugados de farmaco-anticuerpo anti-receptor de folato alfa (fra) y metodos de uso de los mismos.
WO2016019340A1 (en) * 2014-07-31 2016-02-04 Serina Therapeutics, Inc. Polyoxazoline antibody drug conjugates
EP3186284B1 (en) 2014-08-28 2022-04-06 BioAtla, Inc. Conditionally active chimeric antigen receptors for modified t-cells
TW201617368A (zh) 2014-09-05 2016-05-16 史坦森特瑞斯公司 新穎抗ｍｆｉ２抗體及使用方法
US10188746B2 (en) 2014-09-10 2019-01-29 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
TW201625689A (zh) 2014-09-12 2016-07-16 建南德克公司 抗－ｂ７－ｈ４抗體及免疫結合物
SG10201809668TA (en) 2014-09-12 2018-11-29 Genentech Inc Anti-her2 antibodies and immunoconjugates
EP3191520B1 (en) 2014-09-12 2020-01-01 Genentech, Inc. Anti-cll-1 antibodies and immunoconjugates
GB201416112D0 (en) 2014-09-12 2014-10-29 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
US10077318B2 (en) * 2014-09-12 2018-09-18 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
CN107124870A (zh) 2014-09-17 2017-09-01 基因泰克公司 包含抗her2抗体和吡咯并苯并二氮杂*的免疫缀合物
AU2015352545B2 (en) 2014-11-25 2020-10-15 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
CN114230664A (zh) 2014-12-11 2022-03-25 皮埃尔法布雷医药公司 抗c10orf54抗体及其用途
ES2747386T3 (es) 2015-01-14 2020-03-10 Bristol Myers Squibb Co Dímeros de benzodiacepina unidos por heteroarileno, conjugados de los mismos y métodos de preparación y uso
CN107428780B (zh) 2015-01-14 2020-09-04 百时美施贵宝公司 苯并二氮杂*二聚体、其缀合物及制备和使用方法
EP3268047B9 (en) * 2015-03-09 2024-01-10 Heidelberg Pharma Research GmbH Amatoxin-antibody conjugates
CA2979527A1 (en) 2015-03-13 2016-09-22 Endocyte, Inc. Conjugates of pyrrolobenzodiazepine (pbd) prodrugs for treating disease
US9504694B2 (en) * 2015-03-19 2016-11-29 Cellerant Therapeutics, Inc. Isoquinolidinobenzodiazepines
CN107995912A (zh) 2015-03-27 2018-05-04 里珍纳龙药品有限公司 美登素类衍生物、其偶联物和使用方法
GB201506402D0 (en) * 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
GB201506411D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Bergenbio As Humanized anti-axl antibodies
GB201506389D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
KR20180012299A (ko) 2015-05-29 2018-02-05 메모리얼 슬로안-케터링 캔서 센터 초소형 나노입자를 사용하여 페로토시스를 통해 영양분-결핍 암 세포의 세포 사멸을 유도하는 치료 방법
TW201718647A (zh) 2015-06-16 2017-06-01 建南德克公司 抗-cll-1抗體及使用方法
AR105026A1 (es) 2015-06-16 2017-08-30 Genentech Inc ANTICUERPOS MADURADOS POR AFINIDAD Y HUMANIZADOS PARA FcRH5 Y MÉTODOS PARA SU USO
EP3313854A1 (en) 2015-06-23 2018-05-02 Bristol-Myers Squibb Company Macrocyclic benzodiazepine dimers, conjugates thereof, preparation and uses
MY197218A (en) 2015-07-06 2023-06-02 Regeneron Pharma Multispecific antigen-binding molecules and uses thereof
CN108026103B (zh) 2015-07-21 2021-04-16 伊缪诺金公司 制备细胞毒性苯并二氮杂䓬衍生物的方法
MA43345A (fr) 2015-10-02 2018-08-08 Hoffmann La Roche Conjugués anticorps-médicaments de pyrrolobenzodiazépine et méthodes d'utilisation
MA43354A (fr) 2015-10-16 2018-08-22 Genentech Inc Conjugués médicamenteux à pont disulfure encombré
EP3165532B1 (en) 2015-11-03 2018-12-19 Industrial Technology Research Institute Auristatin derivatives, linker-drugs and ligand-drug conjugates
KR20180078329A (ko) 2015-11-25 2018-07-09 주식회사 레고켐 바이오사이언스 분지된 링커를 포함하는 항체-약물 접합체 및 이의 제조방법
US20170189548A1 (en) 2015-11-25 2017-07-06 Immunogen, Inc. Pharmaceutical formulations and methods of use thereof
MA43416A (fr) 2015-12-11 2018-10-17 Regeneron Pharma Méthodes pour ralentir ou empêcher la croissance de tumeurs résistantes au blocage de l'egfr et/ou d'erbb3
TWI753875B (zh) 2016-01-08 2022-02-01 美商美國全心醫藥生技股份有限公司 四價抗psgl-1抗體及其用途
AU2017211120C1 (en) 2016-01-25 2021-10-07 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Maytansinoid derivatives, conjugates thereof, and methods of use
GB201601431D0 (en) 2016-01-26 2016-03-09 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines
GB201602359D0 (en) 2016-02-10 2016-03-23 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
GB201602363D0 (en) * 2016-02-10 2016-03-23 Adc Therapeutics Sa And Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine conjugates
GB201602356D0 (en) * 2016-02-10 2016-03-23 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
EP3222292A1 (en) 2016-03-03 2017-09-27 Heidelberg Pharma GmbH Amanitin conjugates
KR102413037B1 (ko) * 2016-03-15 2022-06-23 메르사나 테라퓨틱스, 인코포레이티드 Napi2b 표적화된 항체-약물 접합체 및 이의 사용 방법
SG11201807827VA (en) 2016-03-25 2018-10-30 Seattle Genetics Inc Process for the preparation of pegylated drug-linkers and intermediates thereof
KR20230162730A (ko) 2016-04-15 2023-11-28 바이오아트라, 인코퍼레이티드 항 Axl항체 및 이의 면역접합체와 이것들의 용도
AU2017254674A1 (en) 2016-04-21 2018-11-01 Abbvie Stemcentrx Llc Novel anti-BMPR1B antibodies and methods of use
EP3448891A1 (en) 2016-04-28 2019-03-06 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of making multispecific antigen-binding molecules
GB201607478D0 (en) 2016-04-29 2016-06-15 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
WO2017196847A1 (en) 2016-05-10 2017-11-16 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Variable new antigen receptor (vnar) antibodies and antibody conjugates targeting tumor and viral antigens
US11254742B2 (en) 2016-05-13 2022-02-22 Bioatla, Inc. Anti-Ror2 antibodies, antibody fragments, their immunoconjugates and uses thereof
WO2017201132A2 (en) 2016-05-18 2017-11-23 Mersana Therapeutics, Inc. Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
US20170370906A1 (en) 2016-05-27 2017-12-28 Genentech, Inc. Bioanalytical analysis of site-specific antibody drug conjugates
WO2017214182A1 (en) 2016-06-07 2017-12-14 The United States Of America. As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Fully human antibody targeting pdi for cancer immunotherapy
JP2019526529A (ja) 2016-06-08 2019-09-19 アッヴィ・インコーポレイテッド 抗ｂ７−ｈ３抗体及び抗体薬物コンジュゲート
EP3469000A1 (en) 2016-06-08 2019-04-17 AbbVie Inc. Anti-b7-h3 antibodies and antibody drug conjugates
BR112018075630A2 (pt) 2016-06-08 2019-03-19 Abbvie Inc. anticorpos anti-cd98 e conjugados de fármaco de anticorpo
DK3458479T3 (da) 2016-06-08 2021-02-08 Abbvie Inc Anti-b7-h3-antistoffer og antistof-lægemiddelkonjugater
BR112018075644A2 (pt) 2016-06-08 2019-04-09 Abbvie Inc. anticorpos anti-cd98 e conjugados de anticorpo e fármaco
JP7049276B2 (ja) 2016-06-24 2022-04-06 メルサナ セラピューティクス インコーポレイテッド ピロロベンゾジアゼピンおよびその結合体
WO2018002902A1 (en) 2016-07-01 2018-01-04 Glaxosmithkline Intellectual Property (No.2) Limited Antibody-drug conjugates and therapeutic methods using the same
US11066479B2 (en) 2016-08-02 2021-07-20 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Monoclonal antibodies targeting glypican-2 (GPC2) and use thereof
TW201808343A (zh) 2016-08-09 2018-03-16 美商西雅圖遺傳學公司 具有改善之生理化學性質之具自我穩定連接子之藥物結合物
EP3496763A1 (en) 2016-08-11 2019-06-19 Genentech, Inc. Pyrrolobenzodiazepine prodrugs and antibody conjugates thereof
IL265369B2 (en) 2016-09-23 2024-03-01 Regeneron Pharma Antibodies against (MUCIN 16) MUC16
JP7078609B2 (ja) 2016-09-23 2022-05-31 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 抗ｓｔｅａｐ２抗体、抗体－薬物複合体、およびｓｔｅａｐ２とｃｄ３を結合する二重特異性抗原結合分子、ならびにそれらの使用
GB201617466D0 (en) * 2016-10-14 2016-11-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine conjugates
WO2018089373A2 (en) 2016-11-08 2018-05-17 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Steroids and protein-conjugates thereof
TWI782930B (zh) 2016-11-16 2022-11-11 美商再生元醫藥公司 抗ｍｅｔ抗體，結合ｍｅｔ之雙特異性抗原結合分子及其使用方法
EP3468991A1 (en) 2016-11-21 2019-04-17 cureab GmbH Anti-gp73 antibodies and immunoconjugates
JP7244987B2 (ja) 2016-12-14 2023-03-23 シージェン インコーポレイテッド 多剤抗体薬物コンジュゲート
CA3045902A1 (en) 2016-12-21 2018-06-28 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Human monoclonal antibodies specific for flt3 and uses thereof
WO2018115466A1 (en) 2016-12-23 2018-06-28 Heidelberg Pharma Research Gmbh Amanitin antibody conjugates
GB201702031D0 (en) 2017-02-08 2017-03-22 Medlmmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
UA123889C2 (uk) * 2017-02-08 2021-06-16 Ейдісі Терапьютікс Са Кон'югати піролобензодіазепін-антитіло
RS61795B1 (sr) 2017-02-08 2021-06-30 Adc Therapeutics Sa Konjugati pirolobenzodiazepin antitela
IL269398B2 (en) 2017-03-24 2024-05-01 Seagen Inc A process for the preparation of glucuronide-drug binders and their intermediates
BR112019020136A2 (pt) 2017-03-29 2020-04-22 Legochem Biosciences Inc profármaco de dímero de pirrolobenzodiazepina e composto de conjugado ligando-ligante do mesmo
WO2018178277A1 (en) 2017-03-29 2018-10-04 Avicenna Oncology Gmbh New targeted cytotoxic isocombretaquinoline derivatives and conjugates thereof
TW201836647A (zh) 2017-04-06 2018-10-16 美商艾伯維有限公司 抗－ｐｒｌｒ抗體藥物軛合物（ａｄｃ）及其用途
WO2018192944A1 (en) 2017-04-18 2018-10-25 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine conjugates
EP3612234B1 (en) 2017-04-20 2024-03-13 ADC Therapeutics SA Combination therapy with an anti-axl antibody-drug conjugate
CA3063871A1 (en) 2017-05-18 2018-11-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Cyclodextrin protein drug conjugates
JP2020520926A (ja) 2017-05-18 2020-07-16 レゲネロン ファーマシューティカルス，インコーポレーテッド ビス−オクタヒドロフェナントレンカルボキサミド及びそのタンパク質コンジュゲート
US11389480B2 (en) 2017-05-19 2022-07-19 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Human monoclonal antibody targeting TNFR2 for cancer immunotherapy
JP2020520953A (ja) 2017-05-25 2020-07-16 メモリアル スローン ケタリング キャンサー センター ジルコニウム−８９で標識した超小型ナノ粒子およびその方法
MX2019015042A (es) 2017-06-14 2020-08-06 Adc Therapeutics Sa Regimen de dosificacion.
WO2019006280A1 (en) 2017-06-30 2019-01-03 Lentigen Technology, Inc. HUMAN MONOCLONAL ANTIBODIES SPECIFIC TO CD33 AND METHODS OF USE
WO2019005208A1 (en) 2017-06-30 2019-01-03 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services ANTIBODIES TO HUMAN MESOTHELIN AND USES IN ANTICANCER THERAPY
WO2019030284A1 (en) 2017-08-09 2019-02-14 Helmholtz-Zentrum für Infektionsforschung GmbH NOVEL TARGETED CYTOTOXIC RATJADONE DERIVATIVES AND CONJUGATES THEREOF
AU2018316532B2 (en) 2017-08-18 2022-11-24 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine conjugates
TWI820044B (zh) 2017-09-29 2023-11-01 日商第一三共股份有限公司 抗體－吡咯并苯二氮呯衍生物複合體
EP3706805A2 (en) 2017-11-07 2020-09-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Hydrophilic linkers for antibody drug conjugates
ES2920123T3 (es) 2017-11-14 2022-08-01 Medimmune Ltd Conjugados de pirrolobenzodiazepina
US11638760B2 (en) 2017-11-27 2023-05-02 Mersana Therapeutics, Inc. Pyrrolobenzodiazepine antibody conjugates
CN107936032A (zh) * 2017-11-29 2018-04-20 巩同庆 一种新型二氮杂卓三环类化合物及其制备方法和应用
CN111465611A (zh) * 2017-12-01 2020-07-28 古德T细胞有限公司 预防或治疗脱发的组合物
CN111757757A (zh) * 2017-12-21 2020-10-09 梅尔莎纳医疗公司 吡咯并苯并二氮呯抗体共轭物
AU2019205542A1 (en) 2018-01-08 2020-07-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Steroids and antibody-conjugates thereof
GB201803342D0 (en) 2018-03-01 2018-04-18 Medimmune Ltd Methods
GB201806022D0 (en) 2018-04-12 2018-05-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
CA3097711A1 (en) 2018-04-30 2019-11-07 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Antibodies, and bispecific antigen-binding molecules that bind her2 and/or aplp2, conjugates, and uses thereof
KR20210008008A (ko) 2018-05-09 2021-01-20 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 항-msr1 항체 및 이의 사용 방법
CA3100021A1 (en) 2018-05-17 2019-11-21 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-cd63 antibodies, conjugates, and uses thereof
US20210283141A1 (en) 2018-05-25 2021-09-16 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine conjugates
JP7459043B2 (ja) 2018-07-12 2024-04-01 ザ ユナイテッド ステイツ オブ アメリカ， アズ リプレゼンテッド バイ ザ セクレタリー， デパートメント オブ ヘルス アンド ヒューマン サービシーズ 親和性成熟ｃｄ２２特異的モノクローナル抗体およびその使用
US11857638B2 (en) 2018-07-27 2024-01-02 Promega Corporation Quinone-containing conjugates
CA3108282A1 (en) 2018-08-02 2020-02-06 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies
KR20210081324A (ko) 2018-08-02 2021-07-01 다인 세라퓨틱스, 인크. 근육 표적화 복합체 및 안면견갑상완 근육 이영양증을 치료하기 위한 그의 용도
US12018087B2 (en) 2018-08-02 2024-06-25 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle-targeting complexes comprising an anti-transferrin receptor antibody linked to an oligonucleotide and methods of delivering oligonucleotide to a subject
US12012463B2 (en) 2018-08-08 2024-06-18 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services High affinity monoclonal antibodies targeting glypican-2 and uses thereof
FR3085952B1 (fr) 2018-09-17 2020-10-30 Centre Nat Rech Scient Conjugue anticorps-medicament comprenant des derives de quinoline
CA3112977A1 (en) * 2018-10-19 2020-04-23 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine conjugates
CA3115136A1 (en) 2018-10-19 2020-04-23 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine conjugates
SG11202104993SA (en) 2018-11-14 2021-06-29 Daiichi Sankyo Co Ltd Anti-cdh6 antibody-pyrrolobenzodiazepine derivative conjugate
AU2019384136B2 (en) 2018-11-20 2024-06-06 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Bis-octahydrophenanthrene carboxamide derivatives and protein conjugates thereof for use as LXR agonists
WO2020123275A1 (en) 2018-12-10 2020-06-18 Genentech, Inc. Photocrosslinking peptides for site specific conjugation to fc-containing proteins
GB201820725D0 (en) 2018-12-19 2019-01-30 Adc Therapeutics Sarl Pyrrolobenzodiazepine resistance
US20220347309A1 (en) 2018-12-19 2022-11-03 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepine resistance
US11666658B2 (en) 2018-12-21 2023-06-06 Regeneran Pharmaceuticals, Inc. Rifamycin analogs and antibody-drug conjugates thereof
WO2020132658A2 (en) 2018-12-21 2020-06-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Tubulysins and protein-tubulysin conjugates
WO2020141923A2 (ko) 2019-01-03 2020-07-09 주식회사 레고켐 바이오사이언스 안전성이 향상된 피롤로벤조디아제핀 이량체 화합물 및 이의 용도
KR20200084802A (ko) 2019-01-03 2020-07-13 주식회사 레고켐 바이오사이언스 안전성이 향상된 피롤로벤조디아제핀 이량체 화합물 및 이의 용도
US20220064324A1 (en) 2019-01-08 2022-03-03 The U.S.A., As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Cross species single domain antibodies targeting mesothelin for treating solid tumors
CA3125998A1 (en) 2019-01-08 2020-07-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Traceless linkers and protein-conjugates thereof
CN113784987A (zh) 2019-01-22 2021-12-10 美国政府(由卫生和人类服务部的部长所代表) 靶向磷脂酰肌醇蛋白聚糖-1的高亲和力单克隆抗体和使用方法
CN113727757A (zh) 2019-02-21 2021-11-30 瑞泽恩制药公司 使用结合met的抗-met抗体和双特异性抗原结合分子治疗眼癌的方法
JP2022524880A (ja) 2019-03-15 2022-05-10 メドイミューン・リミテッド がんの治療における使用のための、アゼチドベンゾジアゼピン二量体及びこれを含む複合体
EP3949987A4 (en) 2019-03-25 2023-02-22 Daiichi Sankyo Company, Limited ANTI-HER2 ANTIBODY PYRROLOBENZODIAZEPINE DERIVATIVE CONJUGATE
JPWO2020196474A1 (es) 2019-03-25 2020-10-01
EP3949988A4 (en) 2019-03-27 2022-11-16 Daiichi Sankyo Company, Limited COMBINATION OF AN ANTIBODY-DERIVATIVE CONJUGATE OF PYRROLOBENZODIAZEPINE AND A PARP INHIBITOR
GB201908128D0 (en) 2019-06-07 2019-07-24 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
KR20210028544A (ko) 2019-09-04 2021-03-12 주식회사 레고켐 바이오사이언스 인간 ror1에 대한 항체를 포함하는 항체 약물 접합체 및 이의 용도
AU2020349462A1 (en) 2019-09-16 2022-03-03 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Radiolabeled MET binding proteins for immuno-PET imaging
US11814428B2 (en) 2019-09-19 2023-11-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-PTCRA antibody-drug conjugates and uses thereof
EP4031250A1 (en) 2019-10-22 2022-07-27 The United States of America, as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services High affinity nanobodies targeting b7h3 (cd276) for treating multiple solid tumors
US20240123081A1 (en) 2019-10-25 2024-04-18 Medimmune, Llc Branched moiety for use in conjugates
US20230032465A1 (en) 2019-12-12 2023-02-02 The U.S.A., As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Antibody-drug conjugates specific for cd276 and uses thereof
BR112022014278A2 (pt) 2020-01-24 2022-09-20 Regeneron Pharma Conjugados de composto proteico-antiviral
JP2023515941A (ja) 2020-02-28 2023-04-17 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド Ｈｅｒ２に結合する二重特異性抗原結合分子およびその使用方法
JP2020117509A (ja) * 2020-03-12 2020-08-06 エンドサイト・インコーポレイテッドＥｎｄｏｃｙｔｅ， Ｉｎｃ． 疾患を処置するためのコンジュゲート
US20230173093A1 (en) 2020-04-10 2023-06-08 Seagen Inc. Charge variant linkers
EP4135775A1 (en) 2020-04-16 2023-02-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Diels-alder conjugation methods
CN116137818A (zh) * 2020-05-19 2023-05-19 法国施维雅药厂 对-氨基-苄基接头、其制备方法及其在缀合物中的用途
MX2022015769A (es) 2020-06-24 2023-01-19 Regeneron Pharma Tubulisinas y conjugados de proteina-tubulisina.
JP2023534437A (ja) 2020-07-13 2023-08-09 リジェネロン ファーマシューティカルズ，インク． タンパク質中のグルタミン残基にコンジュゲートされたカンプトテシンアナログおよびその使用
CN116615251A (zh) 2020-09-14 2023-08-18 瑞泽恩制药公司 包含glp1肽模拟物的抗体-药物缀合物及其用途
KR20230095070A (ko) 2020-10-22 2023-06-28 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 항-fgfr2 항체 및 이의 사용 방법
WO2022093745A1 (en) 2020-10-26 2022-05-05 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Single domain antibodies targeting sars coronavirus spike protein and uses thereof
AR124681A1 (es) 2021-01-20 2023-04-26 Abbvie Inc Conjugados anticuerpo-fármaco anti-egfr
GB202105187D0 (en) 2021-04-12 2021-05-26 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine conjugates
GB202105186D0 (en) 2021-04-12 2021-05-26 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine conjugates
WO2022232612A1 (en) 2021-04-29 2022-11-03 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Lassa virus-specific nanobodies and methods of their use
CN117500831A (zh) 2021-06-09 2024-02-02 美国政府(由卫生和人类服务部的部长所代表) 用于治疗实体瘤的靶向pd-l1的跨物种单结构域抗体
US11969475B2 (en) 2021-07-09 2024-04-30 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating facioscapulohumeral muscular dystrophy
IL307947A (en) 2021-07-28 2023-12-01 Regeneron Pharma An antiviral compound of proteins
US20230414775A1 (en) 2021-12-29 2023-12-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Tubulysins and protein-tubulysin conjugates
WO2023137026A1 (en) 2022-01-12 2023-07-20 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Camptothecin analogs conjugated to a glutamine residue in a protein, and their use
WO2023137443A1 (en) 2022-01-14 2023-07-20 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Verrucarin a derivatives and antibody drug conjugates thereof
US20230330254A1 (en) 2022-03-11 2023-10-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-glp1r antibody-tethered drug conjugates comprising glp1 peptidomimetics and uses thereof
JP2024520988A (ja) 2022-03-25 2024-05-28 バイリ－バイオ（チェンドゥ）ファーマスーティカル シーオー．，エルティーディー． Ｄｎａ毒性二量体及びその複合体
TW202406934A (zh) 2022-05-03 2024-02-16 美商建南德克公司 抗Ｌｙ６Ｅ抗體、免疫結合物及其用途
WO2024020164A2 (en) 2022-07-21 2024-01-25 Firefly Bio, Inc. Glucocorticoid receptor agonists and conjugates thereof
WO2024118785A2 (en) 2022-11-30 2024-06-06 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Tlr7 agonists and antibody-drug-conjugates thereof

Family Cites Families (272)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS58180487A (ja) 1982-04-16 1983-10-21 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd 抗生物質ｄｃ−８１およびその製造法
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
JPS6098584A (ja) 1983-11-02 1985-06-01 Canon Inc カメラ―体形ｖｔｒ
US5583024A (en) 1985-12-02 1996-12-10 The Regents Of The University Of California Recombinant expression of Coleoptera luciferase
AU6355090A (en) 1989-08-23 1991-04-03 Scripps Clinic And Research Foundation Compositions and methods for detection and treatment of epstein-barr virus infection and immune disorders
US5256643A (en) 1990-05-29 1993-10-26 The Government Of The United States Human cripto protein
WO1992007574A1 (en) 1990-10-25 1992-05-14 Tanox Biosystems, Inc. Glycoproteins associated with membrane-bound immunoglobulins as antibody targets on b cells
DK0577752T4 (da) 1991-03-29 2007-10-22 Genentech Inc Human PF4A receptorer og deres anvendelse
US5543503A (en) 1991-03-29 1996-08-06 Genentech Inc. Antibodies to human IL-8 type A receptor
US5440021A (en) 1991-03-29 1995-08-08 Chuntharapai; Anan Antibodies to human IL-8 type B receptor
JP3050424B2 (ja) 1991-07-12 2000-06-12 塩野義製薬株式会社 ヒトエンドセリンリセプター
US5264557A (en) 1991-08-23 1993-11-23 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Polypeptide of a human cripto-related gene, CR-3
US5362852A (en) 1991-09-27 1994-11-08 Pfizer Inc. Modified peptide derivatives conjugated at 2-hydroxyethylamine moieties
US6153408A (en) 1991-11-15 2000-11-28 Institut Pasteur And Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale Altered major histocompatibility complex (MHC) determinant and methods of using the determinant
US5976551A (en) 1991-11-15 1999-11-02 Institut Pasteur And Institut Nationale De La Sante Et De La Recherche Medicale Altered major histocompatibility complex (MHC) determinant and method of using the determinant
IL107366A (en) 1992-10-23 2003-03-12 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Genes coding for megakaryocyte potentiator
US5644033A (en) 1992-12-22 1997-07-01 Health Research, Inc. Monoclonal antibodies that define a unique antigen of human B cell antigen receptor complex and methods of using same for diagnosis and treatment
US5869445A (en) 1993-03-17 1999-02-09 University Of Washington Methods for eliciting or enhancing reactivity to HER-2/neu protein
US5801005A (en) 1993-03-17 1998-09-01 University Of Washington Immune reactivity to HER-2/neu protein for diagnosis of malignancies in which the HER-2/neu oncogene is associated
US6214345B1 (en) 1993-05-14 2001-04-10 Bristol-Myers Squibb Co. Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
US5773223A (en) 1993-09-02 1998-06-30 Chiron Corporation Endothelin B1, (ETB1) receptor polypeptide and its encoding nucleic acid methods, and uses thereof
EP0647450A1 (en) 1993-09-09 1995-04-12 BEHRINGWERKE Aktiengesellschaft Improved prodrugs for enzyme mediated activation
US5750370A (en) 1995-06-06 1998-05-12 Human Genome Sciences, Inc. Nucleic acid encoding human endothlein-bombesin receptor and method of producing the receptor
JPH08336393A (ja) 1995-04-13 1996-12-24 Mitsubishi Chem Corp 光学活性なγ−置換−β−ヒドロキシ酪酸エステルの製造法
US5707829A (en) 1995-08-11 1998-01-13 Genetics Institute, Inc. DNA sequences and secreted proteins encoded thereby
US20020193567A1 (en) 1995-08-11 2002-12-19 Genetics Institute, Inc. Secreted proteins and polynucleotides encoding them
JP3646191B2 (ja) 1996-03-19 2005-05-11 大塚製薬株式会社 ヒト遺伝子
US6218519B1 (en) 1996-04-12 2001-04-17 Pro-Neuron, Inc. Compounds and methods for the selective treatment of cancer and bacterial infections
AU722499B2 (en) 1996-05-17 2000-08-03 Schering Corporation Human B-cell antigens, related reagents
CA2264227A1 (en) 1996-09-27 1998-04-02 Raymond A. Firestone Hydrolyzable prodrugs for delivery of anticancer drugs to metastatic cells
US6759509B1 (en) 1996-11-05 2004-07-06 Bristol-Myers Squibb Company Branched peptide linkers
US5945511A (en) 1997-02-20 1999-08-31 Zymogenetics, Inc. Class II cytokine receptor
US7033827B2 (en) 1997-02-25 2006-04-25 Corixa Corporation Prostate-specific polynucleotide compositions
US20030185830A1 (en) 1997-02-25 2003-10-02 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of prostate cancer
ES2221982T3 (es) 1997-03-10 2005-01-16 The Regents Of The University Of California Antigeno de celulas madre de la prostata (psca).
US6541212B2 (en) 1997-03-10 2003-04-01 The Regents Of The University Of California Methods for detecting prostate stem cell antigen protein
US6261791B1 (en) 1997-03-10 2001-07-17 The Regents Of The University Of California Method for diagnosing cancer using specific PSCA antibodies
US6555339B1 (en) 1997-04-14 2003-04-29 Arena Pharmaceuticals, Inc. Non-endogenous, constitutively activated human protein-coupled receptors
US6319688B1 (en) 1997-04-28 2001-11-20 Smithkline Beecham Corporation Polynucleotide encoding human sodium dependent phosphate transporter (IPT-1)
WO1998051805A1 (en) 1997-05-15 1998-11-19 Abbott Laboratories Reagents and methods useful for detecting diseases of the prostate
WO1998051824A1 (en) 1997-05-15 1998-11-19 Abbott Laboratories Reagents and methods useful for detecting disease of the urinary tract
US6602677B1 (en) 1997-09-19 2003-08-05 Promega Corporation Thermostable luciferases and methods of production
US20030060612A1 (en) 1997-10-28 2003-03-27 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
US20020034749A1 (en) 1997-11-18 2002-03-21 Billing-Medel Patricia A. Reagents and methods useful for detecting diseases of the breast
US6110695A (en) 1997-12-02 2000-08-29 The Regents Of The University Of California Modulating the interaction of the chemokine, B Lymphocyte Hemoattractant, and its Receptor, BLR1
WO2004031238A2 (en) 2002-10-03 2004-04-15 Mcgill Univeristy Antibodies and cyclic peptides which bind cea (carcinoembryonic antigen) and their use as cancer therapeutics
CA2323071C (en) 1998-03-13 2011-06-21 The Burnham Institute Molecules that home to various selected organs or tissues
US6534482B1 (en) 1998-05-13 2003-03-18 Epimmune, Inc. Expression vectors for stimulating an immune response and methods of using the same
US20030064397A1 (en) 1998-05-22 2003-04-03 Incyte Genomics, Inc. Transmembrane protein differentially expressed in prostate and lung tumors
US20020187472A1 (en) 2001-03-09 2002-12-12 Preeti Lal Steap-related protein
EA003398B1 (ru) 1998-05-22 2003-04-24 Дайити Фармасьютикал Ко., Лтд. Лекарственный комплекс c полимерным носителем
WO2002016429A2 (en) 2000-08-24 2002-02-28 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
WO2000012508A2 (en) 1998-08-27 2000-03-09 Spirogen Limited Pyrrolbenzodiazepines
GB9818731D0 (en) * 1998-08-27 1998-10-21 Univ Portsmouth Compounds
WO2000012130A1 (en) 1998-08-27 2000-03-09 Smithkline Beecham Corporation Rp105 agonists and antagonists
JP4689781B2 (ja) 1998-09-03 2011-05-25 独立行政法人科学技術振興機構 アミノ酸輸送蛋白及びその遺伝子
AU5963699A (en) 1998-10-02 2000-04-26 Mcmaster University Spliced form of (erb)b-2/neu oncogene
US20020119158A1 (en) 1998-12-17 2002-08-29 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US20030091580A1 (en) 2001-06-18 2003-05-15 Mitcham Jennifer L. Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US6962980B2 (en) 1999-09-24 2005-11-08 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US6468546B1 (en) 1998-12-17 2002-10-22 Corixa Corporation Compositions and methods for therapy and diagnosis of ovarian cancer
US6858710B2 (en) 1998-12-17 2005-02-22 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
ATE407949T1 (de) 1998-12-30 2008-09-15 Beth Israel Hospital Charakterisierung der proteinfamilie von soc/crac kalziumkanälen
CN1201004C (zh) 1999-01-29 2005-05-11 考丽克萨有限公司 HER－2/neu融合蛋白
GB9905124D0 (en) 1999-03-05 1999-04-28 Smithkline Beecham Biolog Novel compounds
US7465785B2 (en) 1999-03-08 2008-12-16 Genentech, Inc. Polypeptide encoded by a nucleic acid over-expressed in melanoma
AU3395900A (en) 1999-03-12 2000-10-04 Human Genome Sciences, Inc. Human lung cancer associated gene sequences and polypeptides
US7304126B2 (en) 1999-05-11 2007-12-04 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US6268488B1 (en) 1999-05-25 2001-07-31 Barbas, Iii Carlos F. Prodrug activation using catalytic antibodies
AU4952600A (en) 1999-06-03 2000-12-28 Takeda Chemical Industries Ltd. Screening method with the use of cd100
CN100482281C (zh) 1999-06-25 2009-04-29 基因技术股份有限公司 抗ErbB抗体-类美坦素偶联物在制备药物中的应用
US20030119113A1 (en) 1999-07-20 2003-06-26 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US7297770B2 (en) 1999-08-10 2007-11-20 Genentech, Inc. PRO6496 polypeptides
US7294696B2 (en) 1999-08-17 2007-11-13 Genentech Inc. PRO7168 polypeptides
EP1208202A2 (en) 1999-09-01 2002-05-29 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US20030129192A1 (en) 1999-09-10 2003-07-10 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US20030206918A1 (en) 1999-09-10 2003-11-06 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US20030232056A1 (en) 1999-09-10 2003-12-18 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
CN1413220A (zh) 1999-10-29 2003-04-23 杰南技术公司 抗前列腺干细胞抗原(psca)抗体组合物及其应用方法
CA2393126C (en) 1999-11-29 2016-05-24 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Isolation of five novel genes coding for new fc receptors-type melanoma involved in the pathogenesis of lymphoma/melanoma
EP1248800A2 (en) 1999-11-30 2002-10-16 Corixa Corporation Compositions and methods for therapy and diagnosis of breast cancer
EP1239866A4 (en) 1999-12-10 2005-02-09 Epimmune Inc INDUCTION OF HER2 / NEU CELLULAR IMMUNE RESPONSES USING PEPTIDE AND NUCLEIC ACID-CONTAINING COMPOSITIONS
NZ502058A (en) 1999-12-23 2003-11-28 Ovita Ltd Isolated mutated nucleic acid molecule for regulation of ovulation rate
DK1616575T3 (da) 1999-12-23 2012-09-10 Zymogenetics Inc Fremgangsmåde til behandling af inflammation
US6610286B2 (en) 1999-12-23 2003-08-26 Zymogenetics, Inc. Method for treating inflammation using soluble receptors to interleukin-20
ATE485306T1 (de) 1999-12-23 2010-11-15 Zymogenetics Inc Löslicher interleukin-20-rezeptor
US20040001827A1 (en) 2002-06-28 2004-01-01 Dennis Mark S. Serum albumin binding peptides for tumor targeting
AU784285B2 (en) 1999-12-24 2006-03-02 Genentech Inc. Methods and compositions for prolonging elimination half-times of bioactive compounds
US7297333B2 (en) 2000-01-20 2007-11-20 Genentech, Inc. Anti-PRO10268 antibodies
US20030224379A1 (en) 2000-01-21 2003-12-04 Tang Y. Tom Novel nucleic acids and polypeptides
US20020039573A1 (en) 2000-01-21 2002-04-04 Cheever Martin A. Compounds and methods for prevention and treatment of HER-2/neu associated malignancies
AU2001243142A1 (en) 2000-02-03 2001-08-14 Hyseq, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
US20030104562A1 (en) 2000-02-11 2003-06-05 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US20030219806A1 (en) 2000-02-22 2003-11-27 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Novel 18607, 15603, 69318, 12303, 48000, 52920, 5433, 38554, 57301, 58324, 55063, 52991, 59914, 59921 and 33751 molecules and uses therefor
AU2001238596A1 (en) 2000-02-22 2001-09-03 Millennium Pharmaceuticals, Inc. 18607, a novel human calcium channel
US20040052793A1 (en) 2001-02-22 2004-03-18 Carter Paul J. Caspase activivated prodrugs therapy
US20040005561A1 (en) 2000-03-01 2004-01-08 Corixa Corporation Compositions and methods for the detection, diagnosis and therapy of hematological malignancies
US20040002068A1 (en) 2000-03-01 2004-01-01 Corixa Corporation Compositions and methods for the detection, diagnosis and therapy of hematological malignancies
AU2001245280A1 (en) 2000-03-07 2001-09-17 Hyseq, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
AU4941101A (en) 2000-03-24 2001-10-08 Fahri Saatcioglu Novel prostate-specific or testis-specific nucleic acid molecules, polypeptides,and diagnostic and therapeutic methods
AU2001250412A1 (en) 2000-03-31 2001-10-08 Ipf Pharmaceuticals Gmbh Diagnostic and medicament for analysing the cell surface proteome of tumour and inflammatory cells and for treating tumorous and inflammatory diseases, preferably using specific chemokine receptor analysis and the chemokine receptor-ligand interaction
AU2001253140A1 (en) 2000-04-03 2001-10-15 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Tumor markers in ovarian cancer
EP1301594A2 (en) 2000-04-07 2003-04-16 Arena Pharmaceuticals, Inc. Non-endogenous, consstitutively activated known g protein-coupled receptors
WO2001088133A2 (en) 2000-05-18 2001-11-22 Lexicon Genetics Incorporated Human semaphorin homologs and polynucleotides encoding the same
AU2001274888A1 (en) 2000-05-19 2001-12-03 Human Genome Sciences, Inc. Nucleic acids, proteins, and antibodies
WO2001094641A2 (en) 2000-06-09 2001-12-13 Idec Pharmaceuticals Corporation Gene targets and ligands that bind thereto for treatment and diagnosis of ovarian carcinomas
EP1297130A2 (en) 2000-06-16 2003-04-02 Incyte Genomics, Inc. G-protein coupled receptors
WO2002002587A1 (en) 2000-06-30 2002-01-10 Human Genome Sciences, Inc. B7-like polynucleotides, polypeptides, and antibodies
MXPA02012749A (es) 2000-06-30 2003-10-06 Amgen Inc Moleculas semejantes a b7 y sus usos.
EP1383892A2 (en) 2000-06-30 2004-01-28 Incyte Genomics, Inc. Human extracellular matrix and cell adhesion polypeptides
WO2002006339A2 (en) 2000-07-03 2002-01-24 Curagen Corporation Proteins and nucleic acids encoding same
US20040044179A1 (en) 2000-07-25 2004-03-04 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
AU2001283507A1 (en) 2000-07-27 2002-02-13 Mayo Foundation For Medical Education And Research B7-h3 and b7-h4, novel immunoregulatory molecules
CA2417671A1 (en) 2000-07-28 2002-02-07 Ulrich Wissenbach Trp8, trp9 and trp10, novel markers for cancer
US7229623B1 (en) 2000-08-03 2007-06-12 Corixa Corporation Her-2/neu fusion proteins
CN1537164A (zh) 2000-08-14 2004-10-13 治疗和诊断Her-2/neu相关恶性肿瘤的组合物和方法
WO2002013847A2 (en) 2000-08-14 2002-02-21 Corixa Corporation Methods for diagnosis and therapy of hematological and virus-associated malignancies
GB0020953D0 (en) 2000-08-24 2000-10-11 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
AU2001290548A1 (en) 2000-09-11 2002-03-26 Hyseq, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
US20060073551A1 (en) 2000-09-15 2006-04-06 Genentech, Inc. Pro4487 polypeptides
ES2267814T3 (es) 2000-09-15 2007-03-16 Zymogenetics, Inc. Metodo para tratar la inflamacion.
US6613567B1 (en) 2000-09-15 2003-09-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense inhibition of Her-2 expression
NZ525380A (en) 2000-09-18 2008-06-30 Biogen Idec Inc Non-fucosylated forms of Cripto and their use as tumor blocking agents
UA83458C2 (uk) 2000-09-18 2008-07-25 Байоджен Айдек Ма Інк. Виділений поліпептид baff-r (рецептор фактора активації в-клітин сімейства tnf)
EP1474528A4 (en) 2000-10-13 2006-06-14 Protein Design Labs Inc METHODS FOR DIAGNOSING PROSTATE CANCER, COMPOSITIONS AND METHODS FOR SCREENING PROSTATE CANCER MODULATORS
ES2329012T3 (es) 2000-11-07 2009-11-20 Zymogenetics, Inc. Receptor del factor de necrosis tumoral humano.
US20020150573A1 (en) 2000-11-10 2002-10-17 The Rockefeller University Anti-Igalpha-Igbeta antibody for lymphoma therapy
US20040018194A1 (en) 2000-11-28 2004-01-29 Francisco Joseph A. Recombinant anti-CD30 antibodies and uses thereof
WO2002061087A2 (en) 2000-12-19 2002-08-08 Lifespan Biosciences, Inc. Antigenic peptides, such as for g protein-coupled receptors (gpcrs), antibodies thereto, and systems for identifying such antigenic peptides
EP1357828A2 (en) 2001-01-12 2003-11-05 University of Medicine and Dentistry of New Jersey Bone morphogenetic protein-2 in the treatment and diagnosis of cancer
US20030119119A1 (en) 2001-01-16 2003-06-26 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US20030119126A1 (en) 2001-01-16 2003-06-26 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US7754208B2 (en) 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
EP1425302A2 (en) 2001-01-24 2004-06-09 Protein Design Labs Methods of diagnosis of breast cancer, compositions and methods of screening for modulators of breast cancer
AU2002251841A1 (en) 2001-01-30 2002-08-12 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of pancreatic cancer
US20040170994A1 (en) 2001-02-12 2004-09-02 Callen David Frederick DNA sequences for human tumour suppressor genes
AU2002258518A1 (en) 2001-03-14 2002-09-24 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acid molecules and proteins for the identification, assessment, prevention, and therapy of ovarian cancer
EP1243276A1 (en) 2001-03-23 2002-09-25 Franciscus Marinus Hendrikus De Groot Elongated and multiple spacers containing activatible prodrugs
WO2002078524A2 (en) 2001-03-28 2002-10-10 Zycos Inc. Translational profiling
WO2003008537A2 (en) 2001-04-06 2003-01-30 Mannkind Corporation Epitope sequences
US6820011B2 (en) 2001-04-11 2004-11-16 The Regents Of The University Of Colorado Three-dimensional structure of complement receptor type 2 and uses thereof
MXPA03009510A (es) 2001-04-17 2005-04-29 Univ Arkansas Secuencias de repeticion del gen ca125 y su uso para intervenciones de diagnosticos y terapeuticas.
EP1463928A2 (en) 2001-04-18 2004-10-06 Protein Design Labs Methods of diagnosis of lung cancer, compositions and methods of screening for modulators of lung cancer
AU2002334799B2 (en) 2001-04-26 2009-05-07 Biogen Ma Inc. Cripto-specific antibodies
CA2715570A1 (en) 2001-04-26 2002-11-07 Biogen Idec Ma Inc. Cripto blocking antibodies and uses thereof
US6884869B2 (en) 2001-04-30 2005-04-26 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
EP1988097A1 (en) 2001-05-09 2008-11-05 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of prostate cancer
AU2002344326A1 (en) 2001-05-11 2002-11-25 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Nucleic acid sequence encoding ovarian antigen, ca125, and uses thereof
DK2116259T3 (da) 2001-05-24 2012-05-21 Zymogenetics Inc TACI-immunoglobulinfusionsproteiner
US7157558B2 (en) 2001-06-01 2007-01-02 Genentech, Inc. Polypeptide encoded by a polynucleotide overexpresses in tumors
WO2002098358A2 (en) 2001-06-04 2002-12-12 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis and treatment of androgen-dependent prostate cancer, prostate cancer undergoing androgen-withdrawal, and androgen-independent prostate cancer
WO2003000842A2 (en) 2001-06-04 2003-01-03 Curagen Corporation Novel proteins and nucleic acids encoding same
AU2002312241A1 (en) 2001-06-05 2002-12-16 Exelixis, Inc. B3galts as modifiers of the p53 pathway and methods of use
WO2002098356A2 (en) 2001-06-05 2002-12-12 Exelixis Inc. Ppp2cs as modifiers of the p53 pathway and methods of use
US7235358B2 (en) 2001-06-08 2007-06-26 Expression Diagnostics, Inc. Methods and compositions for diagnosing and monitoring transplant rejection
WO2002101075A2 (en) 2001-06-13 2002-12-19 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Novel genes, compositions, kits, and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of cervical cancer
US7189507B2 (en) 2001-06-18 2007-03-13 Pdl Biopharma, Inc. Methods of diagnosis of ovarian cancer, compositions and methods of screening for modulators of ovarian cancer
WO2002102235A2 (en) 2001-06-18 2002-12-27 Eos Biotechnology Inc. Methods of diagnosis of ovarian cancer, compositions and methods of screening for modulators of ovarian cancer
WO2003004989A2 (en) 2001-06-21 2003-01-16 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Compositions, kits, and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of breast cancer
US20030108958A1 (en) 2001-06-28 2003-06-12 Rene De Waal Malefyt Biological activity of AK155
WO2003004529A2 (en) 2001-07-02 2003-01-16 Licentia Ltd. Ephrin-tie receptor materials and methods
US20040076955A1 (en) 2001-07-03 2004-04-22 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of bladder cancer, compositions and methods of screening for modulators of bladder cancer
WO2003003984A2 (en) 2001-07-05 2003-01-16 Curagen Corporation Novel proteins and nucleic acids encoding same
WO2003055439A2 (en) 2001-07-18 2003-07-10 The Regents Of The University Of California Her2/neu target antigen and use of same to stimulate an immune response
US20030108963A1 (en) 2001-07-25 2003-06-12 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Novel genes, compositions, kit, and methods for identification, assessment, prevention and therapy of prostate cancer
EA007984B1 (ru) 2001-08-03 2007-02-27 Дженентек, Инк. ПОЛИПЕПТИДЫ TACIs И BR3 И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ
EP1478772A2 (en) 2001-08-14 2004-11-24 The General Hospital Corporation Nucleic acid and amino acid sequences involved in pain
US20030092013A1 (en) 2001-08-16 2003-05-15 Vitivity, Inc. Diagnosis and treatment of vascular disease
WO2003018621A2 (en) 2001-08-23 2003-03-06 Oxford Biomedica (Uk) Limited Genes
AU2002357643A1 (en) 2001-08-29 2003-04-14 Vanderbilt University The human mob-5 (il-24) receptors and uses thereof
US20030124579A1 (en) 2001-09-05 2003-07-03 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of ovarian cancer, compositions and methods of screening for modulators of ovarian cancer
JP2005505271A (ja) 2001-09-06 2005-02-24 アジェンシス， インコーポレイテッド 癌の処置および検出において有用なｓｔｅａｐ−１と名称が与えられる核酸および対応するタンパク質
WO2003025138A2 (en) 2001-09-17 2003-03-27 Protein Design Labs, Inc. Methods of diagnosis of cancer compositions and methods of screening for modulators of cancer
WO2003025228A1 (en) 2001-09-18 2003-03-27 Proteologics, Inc. Methods and compositions for treating hcap associated diseases
KR101008758B1 (ko) 2001-09-18 2011-01-14 제넨테크, 인크. 종양의 진단 및 치료를 위한 방법 및 이를 위한 조성물
WO2003025148A2 (en) 2001-09-19 2003-03-27 Nuvelo, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
US7091186B2 (en) 2001-09-24 2006-08-15 Seattle Genetics, Inc. p-Amidobenzylethers in drug delivery agents
WO2003026577A2 (en) 2001-09-24 2003-04-03 Seattle Genetics, Inc. P-amidobenzylethers in drug delivery agents
US20030077644A1 (en) 2001-09-28 2003-04-24 Bing Yang Diagnosis and treatment of diseases caused by mutations in CD72
AU2002362436A1 (en) 2001-10-03 2003-04-14 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Modulators of lymphocyte activation and migration
AU2002362454A1 (en) 2001-10-03 2003-04-14 Origene Technologies, Inc. Regulated breast cancer genes
US20050123925A1 (en) 2002-11-15 2005-06-09 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
EP1578385A4 (en) 2001-10-19 2011-11-09 Genentech Inc COMPOSITIONS AND METHODS FOR THE DIAGNOSIS AND TREATMENT OF INFLAMMATORY INTESTINAL DISEASES
WO2003035846A2 (en) 2001-10-24 2003-05-01 National Jewish Medical And Research Center Structure of tall-1 and its cognate receptor
ES2278079T3 (es) 2001-10-31 2007-08-01 Alcon, Inc. Proteinas morfogenicas oseas (bmp), receptores de bmp y proteinas de union a bmp y su utilizacion en el diagnostico y en el tratamiento del glaucoma.
WO2003042661A2 (en) 2001-11-13 2003-05-22 Protein Design Labs, Inc. Methods of diagnosis of cancer, compositions and methods of screening for modulators of cancer
US20030232350A1 (en) 2001-11-13 2003-12-18 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of cancer, compositions and methods of screening for modulators of cancer
CA2467242A1 (en) 2001-11-20 2003-05-30 Seattle Genetics, Inc. Treatment of immunological disorders using anti-cd30 antibodies
US7344843B2 (en) 2001-11-29 2008-03-18 Serono Genetics Institute S.A. Agonists and antagonists of prolixin for the treatment of metabolic disorders
AU2002349784A1 (en) 2001-12-03 2003-06-17 Asahi Kasei Pharma Corporation Nf-kappab activating genes
EP1504099A4 (en) 2001-12-10 2006-05-10 Nuvelo Inc NEW NUCLEIC ACIDS AND POLYPEPTIDES
US20030134790A1 (en) 2002-01-11 2003-07-17 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Bone Morphogenetic Protein-2 And Bone Morphogenetic Protein-4 In The Treatment And Diagnosis Of Cancer
US7452675B2 (en) 2002-01-25 2008-11-18 The Queen's Medical Center Methods of screening for TRPM4b modulators
ATE482719T1 (de) 2002-02-21 2010-10-15 Univ Duke Behandlungsverfahren unter verwendung von anti- cd22-antikörpern
CA2476518A1 (en) 2002-02-22 2003-09-04 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of immune related diseases
WO2003074674A2 (en) 2002-03-01 2003-09-12 Exelixis, Inc. MSRAs AS MODIFIERS OF THE p53 PATHWAY AND METHODS OF USE
US20050220798A1 (en) 2002-06-04 2005-10-06 Reinhard Ebner Cancer-linked gene as target for chemotherapy
EP2258712A3 (en) 2002-03-15 2011-05-04 Multicell Immunotherapeutics, Inc. Compositions and Methods to Initiate or Enhance Antibody and Major-histocompatibility Class I or Class II-restricted T Cell Responses by Using Immunomodulatory, Non-coding RNA Motifs
CA2486490A1 (en) 2002-03-19 2003-12-31 Curagen Corporation Therapeutic polypeptides, nucleic acids encoding same, and methods of use
WO2003081210A2 (en) 2002-03-21 2003-10-02 Sunesis Pharmaceuticals, Inc. Identification of kinase inhibitors
US7193069B2 (en) 2002-03-22 2007-03-20 Research Association For Biotechnology Full-length cDNA
US7317087B2 (en) 2002-03-25 2008-01-08 The Uab Research Foundation Members of the FC receptor homolog gene family (FCRH1-3, 6), related reagents, and uses thereof
WO2003083074A2 (en) 2002-03-28 2003-10-09 Idec Pharmaceuticals Corporation Novel gene targets and ligands that bind thereto for treatment and diagnosis of colon carcinomas
US20030194704A1 (en) 2002-04-03 2003-10-16 Penn Sharron Gaynor Human genome-derived single exon nucleic acid probes useful for gene expression analysis two
JP2005534287A (ja) 2002-04-05 2005-11-17 アジェンシス， インコーポレイテッド 癌の処置および検出において有用な９８ｐ４ｂ６との名称の核酸および対応するタンパク質
US20040101874A1 (en) 2002-04-12 2004-05-27 Mitokor Inc. Targets for therapeutic intervention identified in the mitochondrial proteome
MXPA04010092A (es) 2002-04-16 2004-12-13 Genentech Inc Composiciones y metodos para el diagnostico y tratamiento de tumores.
US20030224467A1 (en) 2002-04-17 2003-12-04 Osborne C. Kent AIB1 as a prognostic marker and predictor of resistance to endocrine therapy
AU2003228869A1 (en) 2002-05-03 2003-11-17 Incyte Corporation Transporters and ion channels
EP1572925A4 (en) 2002-05-15 2007-08-15 Avalon Pharmaceuticals CANCER-RELATED GENE AS A TARGET FOR CHEMOTHERAPY
WO2003101388A2 (en) 2002-05-30 2003-12-11 Bristol-Myers Squibb Company Human solute carrier family 7 member 11 (hslc7a11)
WO2003101283A2 (en) 2002-06-04 2003-12-11 Incyte Corporation Diagnostics markers for lung cancer
EP1513934B1 (en) 2002-06-06 2011-03-02 Oncotherapy Science, Inc. Genes and polypeptides relating to human colon cancers
WO2003104270A2 (en) 2002-06-06 2003-12-18 Ingenium Pharmaceuticals Ag Dudulin 2 genes, expression products, non-human animal model: uses in human hematological disease
EP1576111A4 (en) 2002-06-07 2006-10-18 Avalon Pharmaceuticals CANCER-ASSOCIATED GENE AS A TARGET FOR CHEMOTHERAPY
AU2003245441A1 (en) 2002-06-12 2003-12-31 Avalon Pharmaceuticals, Inc. Cancer-linked gene as target for chemotherapy
EP1552002A4 (en) 2002-06-18 2006-02-08 Archemix Corp APTAMER TOXIN MOLECULES AND METHOD FOR THEIR USE
US20040249130A1 (en) 2002-06-18 2004-12-09 Martin Stanton Aptamer-toxin molecules and methods for using same
CA2489803A1 (en) 2002-06-20 2003-12-31 The Regents Of The University Of California Compositions and methods for modulating lymphocyte activity
AU2003278161A1 (en) 2002-06-21 2004-01-06 Johns Hopkins University School Of Medicine Membrane associated tumor endothelium markers
WO2004009622A2 (en) 2002-07-19 2004-01-29 Cellzome Ag Protein complexes of cellular networks underlying the development of cancer and other diseases
JP2005533863A (ja) 2002-07-25 2005-11-10 ジェネンテック・インコーポレーテッド Ｔａｃｉ抗体とその用途
US20050180972A1 (en) 2002-07-31 2005-08-18 Wahl Alan F. Anti-CD20 antibody-drug conjugates for the treatment of cancer and immune disorders
JP2004121218A (ja) 2002-08-06 2004-04-22 Jenokkusu Soyaku Kenkyusho:Kk 気管支喘息または慢性閉塞性肺疾患の検査方法
WO2004015426A1 (en) 2002-08-06 2004-02-19 Bayer Healthcare Ag Diagnostics and therapeutics for diseases associated with human cxc chemokine receptor 5(cxcr5)
AU2003259913A1 (en) 2002-08-19 2004-03-03 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
AU2003278725A1 (en) 2002-08-27 2004-03-19 Bristol-Myers Squibb Company Polynucleotide predictor set for identifying protein tyrosine kinase modulators
WO2004020595A2 (en) 2002-08-29 2004-03-11 Five Prime Therapeutics, Inc. Novel human polypeptides encoded by polynucleotides
AU2003256038A1 (en) 2002-08-30 2004-03-19 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Self-immolative dendrimers releasing many active moieties upon a single activating event
AU2002951346A0 (en) 2002-09-05 2002-09-26 Garvan Institute Of Medical Research Diagnosis of ovarian cancer
EP1545610A4 (en) 2002-09-06 2006-11-08 Mannkind Corp EPITOPE SEQUENCES
CA2498264A1 (en) 2002-09-09 2004-05-13 Nura, Inc. G protein coupled receptors and uses thereof
JP2004113151A (ja) 2002-09-27 2004-04-15 Sankyo Co Ltd 癌遺伝子及びその用途
US20060183120A1 (en) 2002-10-04 2006-08-17 Teh Bin T Molecular sub-classification of kidney tumors and the discovery of new diagnostic markers
EP1581169A4 (en) 2002-11-08 2008-09-17 Genentech Inc COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING DISEASES RELATED TO NATURAL K CELLS
EP1578940A4 (en) 2002-11-13 2007-12-12 Genentech Inc METHOD AND COMPOSITIONS FOR DYSPLASED DIAGNOSIS
AU2003282624A1 (en) 2002-11-14 2004-06-03 Syntarga B.V. Prodrugs built as multiple self-elimination-release spacers
GB0226593D0 (en) 2002-11-14 2002-12-24 Consultants Ltd Compounds
JP4915980B2 (ja) 2002-11-15 2012-04-11 エムユーエスシー ファウンデーション フォー リサーチ デベロップメント 補体レセプター２標的化補体調節因子
EP1578372A4 (en) 2002-11-15 2007-10-17 Univ Arkansas CA125 GENE AND ITS USE IN DIAGNOSTIC AND THERAPEUTIC INTERVENTIONS
AU2003297300A1 (en) 2002-11-20 2004-06-15 Biogen Idec Inc. Novel gene targets and ligands that bind thereto for treatment and diagnosis of carcinomas
ATE542423T1 (de) 2002-11-21 2012-02-15 Univ Utah Res Found Purinerge geruchsmodulation
AU2003298786A1 (en) 2002-11-26 2004-06-18 Protein Design Labs, Inc. Methods of detecting soft tissue sarcoma, compositions and methods of screening for soft tissue sarcoma modulators
WO2004053079A2 (en) 2002-12-06 2004-06-24 Diadexus, Inc. Compositions, splice variants and methods relating to ovarian specific genes and proteins
US20040157278A1 (en) 2002-12-13 2004-08-12 Bayer Corporation Detection methods using TIMP 1
ES2388280T3 (es) 2002-12-20 2012-10-11 Abbott Biotherapeutics Corp. Anticuerpos que reaccionan frente a GPR64 y utilización de los mismos
US20050249671A9 (en) 2002-12-23 2005-11-10 David Parmelee Neutrokine-alpha conjugate, neutrokine-alpha complex, and uses thereof
CA2512536A1 (en) 2003-01-08 2004-07-29 Bristol-Myers Squibb Company Biomarkers and methods for determining sensitivity to epidermal growth factor receptor modulators
US20050227301A1 (en) 2003-01-10 2005-10-13 Polgen Cell cycle progression proteins
US20050181375A1 (en) 2003-01-10 2005-08-18 Natasha Aziz Novel methods of diagnosis of metastatic cancer, compositions and methods of screening for modulators of metastatic cancer
EP1583820A4 (en) 2003-01-14 2007-07-18 Bristol Myers Squibb Co ASSOCIATED POLYNUCLEOTIDES AND POLYPEPTIDES ASSOCIATED WITH THE NF-KB WAY
US7258971B2 (en) 2003-01-15 2007-08-21 Bayer Healthcare Ag Methods and compositions for treating urological disorders using carboxypeptidase Z identified as 8263
EP2196474A3 (en) 2003-02-14 2010-12-15 Sagres Discovery, Inc. Therapeutic targets in cancer
US20030224411A1 (en) 2003-03-13 2003-12-04 Stanton Lawrence W. Genes that are up- or down-regulated during differentiation of human embryonic stem cells
GB0321295D0 (en) * 2003-09-11 2003-10-15 Spirogen Ltd Synthesis of protected pyrrolobenzodiazepines
GB0416511D0 (en) * 2003-10-22 2004-08-25 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
EP1718667B1 (en) 2004-02-23 2013-01-09 Genentech, Inc. Heterocyclic self-immolative linkers and conjugates
GB0404577D0 (en) * 2004-03-01 2004-04-07 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
ES2398975T3 (es) 2004-03-01 2013-03-25 Spirogen Sàrl Derivados de 11-hidroxi-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-ona como intermedios clave para la preparación de pirrolobenzodiazepinas sustituidas en C2
CA2580141C (en) 2004-09-23 2013-12-10 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
EP1879901B1 (en) 2005-04-21 2009-12-23 Spirogen Limited Pyrrolobenzodiazepines
EA025871B9 (ru) 2005-10-07 2017-08-31 Экселиксис, Инк. Ингибиторы mek и способы их применения
EP1813614B1 (en) 2006-01-25 2011-10-05 Sanofi Cytotoxic agents comprising new tomaymycin derivatives
TWI412367B (zh) * 2006-12-28 2013-10-21 Medarex Llc 化學鏈接劑與可裂解基質以及其之綴合物
AU2008251608B2 (en) 2007-05-08 2014-03-27 Genentech, Inc. Cysteine engineered anti-MUC16 antibodies and antibody drug conjugates
ES2435779T3 (es) * 2007-07-19 2013-12-23 Sanofi Agentes citotóxicos que comprenden nuevos derivados de tomaimicina y su uso terapéutico
NZ584514A (en) 2007-10-19 2012-07-27 Genentech Inc Cysteine engineered anti-tenb2 antibodies and antibody drug conjugates
SI2281006T1 (sl) * 2008-04-30 2017-12-29 Immunogen, Inc. Premreževalci in njihova uporaba
JP2011524421A (ja) * 2008-06-16 2011-09-01 イミュノジェン・インコーポレーテッド 新規の相乗効果
EP3100745B1 (en) 2009-02-05 2018-04-18 Immunogen, Inc. Novel benzodiazepine derivatives
KR101877598B1 (ko) * 2011-10-14 2018-07-11 메디뮨 리미티드 피롤로벤조디아제핀 및 그의 컨주게이트
PT2839860T (pt) * 2012-10-12 2019-07-29 Medimmune Ltd Pirrolobenzodiazepinas e conjugados das mesmas

Also Published As

Publication number Publication date
BR112012026213A2 (pt) 2016-07-12
CL2012002880A1 (es) 2013-01-18
NZ602241A (en) 2015-03-27
HRP20130953T1 (hr) 2013-11-22
RS52983B (en) 2014-02-28
SI2528625T1 (sl) 2013-11-29
EA024730B1 (ru) 2016-10-31
WO2011130598A1 (en) 2011-10-20
PL2528625T3 (pl) 2013-12-31
SG184859A1 (en) 2012-11-29
AU2011239507A1 (en) 2012-11-01
KR20130040835A (ko) 2013-04-24
US20110256157A1 (en) 2011-10-20
KR101738203B1 (ko) 2017-05-19
US20180134717A1 (en) 2018-05-17
US20220298161A1 (en) 2022-09-22
CO6630137A2 (es) 2013-03-01
ECSP12012244A (es) 2012-11-30
EP2528625B1 (en) 2013-07-10
BR112012026213A8 (pt) 2017-12-12
TW201139443A (en) 2011-11-16
EP2528625A1 (en) 2012-12-05
CA2793890C (en) 2017-08-15
PE20130342A1 (es) 2013-04-20
US20130028917A1 (en) 2013-01-31
CN102933236B (zh) 2014-10-08
MX2012011901A (es) 2012-11-29
HK1174543A1 (en) 2013-06-14
CA2793890A1 (en) 2011-10-20
TWI540136B (zh) 2016-07-01
MA34277B1 (fr) 2013-06-01
EP2662095A1 (en) 2013-11-13
CR20120522A (es) 2013-02-13
CY1114458T1 (el) 2016-10-05
BR112012026213B1 (pt) 2021-12-28
CN102933236A (zh) 2013-02-13
JP2013523895A (ja) 2013-06-17
EA201290727A1 (ru) 2013-04-30
IL222006A (en) 2016-04-21
PT2528625E (pt) 2013-10-17
DK2528625T3 (da) 2013-10-14
ZA201206449B (en) 2014-01-29
AU2011239507B2 (en) 2015-04-09
JP5972864B2 (ja) 2016-08-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20220298161A1 (en) Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
US10576164B2 (en) Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
EP2750713B1 (en) Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
ES2731779T3 (es) Pirrolobenzodiazepinas y conjugados de las mismas
US20180362644A1 (en) Pyrrolobenzodiazepines and antibody disulfide conjugates thereof
NZ623209B2 (en) Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof