CN111465611A

CN111465611A - 预防或治疗脱发的组合物

Info

Publication number: CN111465611A
Application number: CN201880077942.6A
Authority: CN
Inventors: 金范锡; 金廷镐
Original assignee: Goodall T Cell Co ltd
Current assignee: Goodall T Cell Co ltd; Good T Cells Inc
Priority date: 2017-12-01
Filing date: 2018-12-03
Publication date: 2020-07-28
Also published as: EP3719032A4; EP3719032A2; US11890364B2; KR20220099934A; US20200352839A1; KR102416354B1; KR20200131792A; WO2019108047A2; WO2019108047A3; KR20190065178A; JP2021504407A

Abstract

本发明涉及用于预防或治疗脱发的组合物。该组合物有效地递送到目标区域的脱发区域中的毛乳头细胞中，其中在脱发区域中高度表达的酶或细胞因子使药物与组合物中包含的化合物分离，从而使得该药物有效地表现出活性，最终促进头发生长和/或头发再生。

Description

预防或治疗脱发的组合物

技术领域

本发明涉及用于预防或治疗脱发的组合物。

背景技术

对于脱发，遗传因素是最重要的原因。然而，近年来，由于社会压力增加，环境污染，西餐饮食例如速食，频繁的烫发和染发以及错误的头皮护理，导致脱发的人口正在逐渐增加。

头发的维持是通过重复一个生长阶段(生长期)，消退阶段(衰退期)和休止阶段(休止期)的循环后的头发再生和脱落来进行的。具体而言，该循环可以分为头发生长的生长阶段(生长期)，头发结束生长并且毛囊收缩的消退阶段(衰退期)，毛乳头停止工作并将毛发保持在头皮上的休止阶段(休止期)，以及一个新的生长期，在此阶段毛发乳头开始工作或发育新的头发，从而导致旧发脱落。

男性的生长期持续3至5年，女性的生长期持续4至6年，其后是约30至45天的衰退期和约3至4个月的休止期。然后，头发自然脱落。在毛发休止结束时，开始一个新的生长期，在此期间将产生新的毛发。

脱发是正常现象。然而，与在毛发生长期有很多头发的正常人相比，脱发症的人通常在毛发休止期有很多头发，这使得脱发现象肉眼可见。

出现脱发的人的特征是头发的微型化。随着脱发的进行，生长期的时间缩短，因此头发变得越来越小。因此，对于脱发的治疗，重要的是要让休止期的毛囊迅速进入生长期并增加缩短的毛发生长时间。

引起男性性特征发展的雄激素性脱发是由称为睾丸激素的男性激素所表现出的现象，睾丸激素在青春期期间对肌肉的发育，男性器官的发育等起作用。当这种睾丸激素通过一种称为5-α还原酶的酶转变为更有效的激素二氢睾丸激素(DHT)时，如此转化后的激素作用在毛囊上，从而促使毛囊从毛发生长期转变为衰退期，从而导致脱发。因此，为了治疗由此引起的脱发，主要使用一种抑制由5-α还原酶引起的DHT的产生的方法。

斑秃是由自身免疫性疾病，精神压力或遗传易感性引起的。斑秃引起圆形或椭圆形的脱发，其特征为头癣或毛发性滴虫病。斑秃在原因上与雄激素性脱发有根本区别。另外，对于斑秃使用一种不同的治疗方法，诸如肾上腺皮质激素治疗方案。

对于脱发的各种各样的复杂原因，迄今为止已知的防脱发产品，含有以促进血液循环，抑制男性荷尔蒙作用，增强发根功能等作用为目的的有效成分的市售产品。但是，就有效性而言，没有任何产品具有明显的效果。而且大多数产品的副作用也很严重。

技术问题

本发明的目的是提供一种用途多样的组合物，包括预防或治疗脱发。

本发明的另一个目的是提供一种预防或治疗脱发的方法。

通过以下详细的描述，权利要求书和附图，本发明的其他目的和优点将变得更加明显。

解决问题

根据本发明的一个实施方案，提供了一种由式1表示的化合物：

[式1]

P-W-L₁-M-A

在式1中，

P是蛋白转导结构域(PTD)，

W是一个直接键或包含至少一个氨基酸，

L₁是一个连接基，

M是一个直接键或一个由式2表示的连接基，并且

A是一种预防或治疗脱发的药物，

[式2]

*-X-L₂-*

在式2中，

*是形成键的位点，

X是一个切割位点，并且

L₂是一个连接基。

在本发明中，“蛋白转导结构域(PTD)”是具有强疏水性的短肽，其由7至50个氨基酸组成，并且是指能够将分子量为120kDa或更高的蛋白质和DNA或RNA递送到细胞中的结构域。

在本发明中，对于蛋白质转导结构域(或蛋白转导结构域)，采用选自下组的任意一种：Hph-1，Mph-1，Sim-2，Tat，VP22，触足蛋白(antennapedia)(Antp)，肽-1(Pep-1)，蛋白转导结构域-5(PTD-5)，11R，7R和细胞质转导肽(CTP)，或者可以采用WO2016/028036A1或美国公开专利申请号2014-0186379中公开的大分子转导结构域。然而，本发明不限于此，并且可以不受限制地使用本领域中通常使用的或可商购的任何蛋白质转导结构域。优选地，蛋白质转导结构域可以是由SEQ ID NO：1表示的CTP，由SEQ ID NO：2表示的Hph-1，或SEQ IDNO：3表示的Tat。

本文所用的术语“11R”和“7R”分别是指由11和7个精氨酸组成的肽。

在本发明中，A是一种预防或治疗脱发的药物，并且例如可以选自下组：非那雄胺(finasteride)，度他雄胺(dutasteride)，米诺地尔(minoxidil)，爱普列特(episteride)，α雌二醇(alfatradiol)，托法替尼(tofacitinib)和鲁索替尼(ruxolitinib)，其中非那雄胺(finasteride)或度他雄胺(dutasteride)是优选的。

在本发明中，L₁用于将蛋白质转导结构域P连接至药物A(当M为直接键时)或切割位点X(当M为由式2表示的连接基时)。在本发明中，L₁的结构可以由式3或4表示，

[式3]

[式4]

在式3和式4中，*是形成键的位点。

在本发明中，连接基L₁可以与蛋白质转导结构域的C-端氨基酸残基连接。

另外，在本发明中，当连接基L₁与药物连接时，连接基L₁的羰基可与用于预防或治疗脱发的药物的胺基(-NH₂)，羟基(-OH)或氰基(-CN)连接。优选地，如图1所示，连接基L₁的羰基可与非那雄胺(finasteride)，度他雄胺(dutasteride)或米诺地尔(minoxidil)的胺基(-NH₂)连接，与爱普列特(episteride)或α雌二醇(alfatradiol)的羟基(-OH)连接，或与托法替尼(tofacitinib)或鲁索替尼(ruxolitinib)的氰基(-CN)连接。

另外，在本发明中，连接基L₁可以连接至切割位点X。这里，X是指一个体内或靶位点，例如在脱发区域的毛乳头细胞中切割的肽位点，并且可能是细胞因子，蛋白酶或肽酶识别的位点。例如，切割位点可以是被白介素-1β(白介素-1b)的前体形式识别或切割的位点，白介素-1β是一种切割细胞因子，半胱氨酸蛋白酶(例如，半胱氨酸蛋白酶1，半胱氨酸蛋白酶-4，半胱氨酸蛋白酶-5)，或基质金属蛋白酶(MMPs；例如，MMP1，MMP2，MMP3，MMP7，MMP8，MMP9，MMP10，MMP11，MMP12，MMP13，MMP14，MMP15，MMP16，MMP17，MMP18，MMP19，MM20，PMM21，PMM23A，PMM23B，MMP24，MMP25，MMP26，MMP27，MMP28等)，这些都存在体内，特别是在毛乳头细胞中。优选地，切割位点可以是由半胱氨酸蛋白酶-1或白介素-1b识别的位点，该位点在脱发区域高表达，并且更优选地可以是由SEQ ID NO：4表示的肽(YVAD)。

在本发明中，W可以是直接键或可以包括至少一个氨基酸。即，在本发明中，蛋白质转导结构域P和连接基L₁可以直接彼此连接，或者蛋白质转导结构域P和连接基L₁可以通过介于它们之间的至少一个氨基酸彼此连接。在此，氨基酸可以选自21个氨基酸，并且优选地可以包括至少一个半胱氨酸。

作为本发明的一个实例，当在蛋白质转导结构域P和连接基L₁之间包括至少一个半胱氨酸时，半胱氨酸的巯基(-SH)可以连接至连接基L₁。

在本发明中，M可以是直接键或式2表示的连接基。即，在本发明中，连接基L₁可以直接与药物A连接，或者连接基L₁和药物A可以通过式2表示的连接基相互连接。

在本发明中，当M为由式2表示的连接基时，本发明中的连接基L₂用于将切割位点X连接至药物A。在本发明中，L₂的结构可以由式5表示，

[式5]

式5中，*是形成键的位点。

在本发明中，连接基L₂可以与用于预防或治疗脱发的药物的胺基(-NH₂)，羟基(-OH)或氰基(-CN)连接。连接基L₂可以连接至非那雄胺(finasteride)，度他雄胺(dutasteride)或米诺地尔(minoxidil)的胺基(-NH₂)，连接至爱普列特(episteride)或α雌二醇(alfatradiol)的羟基(-OH)，或连接至托法替尼(tofacitinib)或鲁索替尼(ruxolitinib)的胺基(-NH₂)。

在本发明中，式1表示的化合物可以是式6或7表示的化合物，

[式6]

[式7]

在式6和7中，

P可以是选自下组的蛋白质转导结构域(PTD)：Hph-1，Mph-1，Sim-2，Tat，VP22，触足蛋白(Antp)，肽-1(Pep-1)，蛋白质转导结构域-5(PTD-5)，11R，7R和细胞质转导肽(CTP)，其中优选CTP(SEQ ID NO：1)，Hph-1(SEQ ID NO：2)或Tat(SEQ ID NO：3)。

W可以是直接键或至少一个氨基酸，优选地至少一个半胱氨酸，和

A可以选自下组：非那雄胺(finasteride)，度他雄胺(dutasteride)，米诺地尔(minoxidil)，爱普列特(episteride)，α雌二醇(alfatradiol)，托法替尼(tofacitinib)和鲁索替尼(ruxolitinib)，其中非那雄胺(finasteride)或度他雄胺(dutasteride)是优选的。

在本发明中，由式1表示的化合物可以是由式8至11中的任何一个表示的化合物，

[式8]

[式9]

[式10]

[式11]

在式8至11中，

P可以是选自下组的蛋白质转导结构域(PTD)：Hph-1，Mph-1，Sim-2，Tat，VP22，触足蛋白(Antp)，肽-1(Pep-1)，蛋白质转导结构域-5(PTD-5)，11R，7R和细胞质转导肽(CTP)，优选CTP(SEQ ID NO：1)，Hph-1(SEQ ID NO：2)或Tat(SEQ ID NO：3)，并且，

W可以是直接键或至少一个氨基酸，优选至少一个半胱氨酸。

在本发明中，由式1表示的化合物可以是由式12至15中的任何一个表示的化合物，

[式12]

[式13]

[式14]

[式15]

在式12至15中，

P是选自下组的蛋白质转导结构域(PTD)：Hph-1，Mph-1，Sim-2，Tat，VP22，触足蛋白(Antp)，肽-1(Pep-1)，蛋白质转导结构域-5(PTD-5)，11R，7R和细胞质转导肽(CTP)，优选CTP(SEQ ID NO：1)，Hph-1(SEQ ID NO：2)或Tat(SEQ ID NO：3)，和

Cys是半胱氨酸。

根据本发明的另一个实施方案，提供了一种制备由式1表示的化合物的方法，其中该方法可以包括一个用于预防或治疗脱发的药物，由式16表示的6-马来酰亚胺基己酸以及蛋白质转导结构域反应的步骤，

[式16]

在本发明中，用于预防或治疗脱发的药物可以选自下组：非那雄胺(finasteride)，度他雄胺(dutasteride)，米诺地尔(minoxidil)，爱普列特(episteride)，α雌二醇(alfatradiol)，托法替尼(tofacitinib)和鲁索替尼(ruxolitinib)，优选非那雄胺(finasteride)或度他雄胺(dutasteride)。

在本发明中，对于蛋白质转导结构域，可以使用选自下组的任何一种：Hph-1，Mph-1，Sim-2，Tat，VP22，触足蛋白(Antp)，肽-1(Pep-1)，蛋白质转导结构域-5(PTD-5)，11R，7R和细胞质转导肽(CTP)，或者可以使用WO2016/028036A1或美国公开专利申请号2014-0186379中公开的大分子转导结构域。然而，本发明不限于此，并且可以不受限制地使用本领域中通常使用的或可商购的任何蛋白质转导结构域。优选地，蛋白质转导结构域可以是由SEQ ID NO：1表示的CTP，由SEQ ID NO：2表示的Hph-1，或SEQ ID NO：3表示的Tat。

在本发明中，在引起蛋白质转导结构域应用于反应之前，可以执行用至少一个氨基酸额外地延伸蛋白质转导结构域的C端的步骤。在此，氨基酸可以选自21个氨基酸，并且优选地，蛋白质转导结构域的C端可以额外地延伸有至少一个半胱氨酸。

在本发明中，用于预防或治疗脱发的药物，由式16表示的6-马来酰亚胺基己酸和蛋白质转导结构域的反应顺序没有特别限制。该药物可以首先与6-马来酰亚胺基己酸反应，然后使所得产物与蛋白质转导结构域反应；或者可以先使蛋白质转导结构域与6-马来酰亚胺基己酸反应，然后使所得产物与药物反应。

另外，在本发明中，反应可以在进一步添加由式17表示的化合物和由SEQ ID NO：5表示的肽(YVA)的情况下进行，

[式17]

在式17中，

R₁是羟基或卤素，其中卤素可以是氟，氯，溴或碘，优选氯。

另外，在本发明中，在使式17所示的化合物用于反应之前，可以先进行使式17所示的化合物与式18所示的化合物反应的步骤，

[式18]

在式18中，

R₂可以是氢或羧基保护基，其中羧基保护基可以包括但不限于DMB，Bn，烯丙基，PfP，Me，PMB，MEM或t-Bu。

在本发明中，用于预防或治疗脱发的药物，由式16表示的化合物，由SEQ ID NO：5表示的肽(YVA)，由式17表示的化合物，由式18表示的化合物和蛋白质转导结构域起反应的顺序没有特别限制。

例如，本发明的制备方法可以包括以下步骤：

(1)使式17所示的化合物与式18所示的化合物反应；

(2)使步骤(1)中获得的化合物与预防或治疗脱发的药物反应；

(3)使SEQ ID NO：5所示的肽(YVA)与式16表示的化合物反应；

(4)使步骤(2)中得到的化合物与步骤(3)中得到的化合物反应；和

(5)使步骤(4)中获得的化合物与蛋白质转导结构域反应。

在本发明中，步骤(2)和(3)的顺序没有特别限制。可以执行步骤(2)，然后可以执行步骤(3)；可以执行步骤(3)，然后执行步骤(2)。或者步骤(2)和(3)可以同时执行。

在本发明的步骤(1)中，可以使式17表示的化合物与式18表示的化合物反应以制备式19表示的化合物，

[式19]

在式19中，

R₁是羟基或卤素，其中卤素可以是氟，氯，溴或碘，优选氯，并且

R₂是氢或羧基保护基，其中羧基保护基包括但不限于DMB，Bn，烯丙基，PfP，Me，PMB，MEM或t-Bu。

在本发明的步骤(2)中，用于预防或治疗脱发的药物优选为非那雄胺(finasteride)或度他雄胺(dutasteride)。

在本发明中，在步骤(2)中，非那雄胺(finasteride)的胺基可以与在步骤(1)中制备的式19所示的化合物的羧基反应，以形成酰胺键。

在本发明中，在步骤(3)中，由SEQ ID NO：5表示的肽(YVA)的N-端的胺基(-NH₂)与式16表示的化合物的羧基(-COOH)反应形成酰胺键。

在本发明中，步骤(4)可以在溶剂的存在下进行，其中所用的溶剂可以包括但不限于选自下组的一种或多种：六氟磷酸盐苯并三唑四甲基铀(HBTU)，N，N-二异丙基乙胺(DIEA)和二甲基甲酰胺(DMF)。

在本发明中，在步骤(4)中，步骤(2)获得的化合物的胺基(-NH₂)与步骤(3)获得的化合物的羧基(-COOH)反应形成酰胺键。

在本发明中，当式18中的R₂为羧基保护基时，在步骤(3)之后，可以另外进行去除羧基保护基的任选步骤。在此，为了去除羧基保护基，可以使用三氟乙酸(TFA)，并且可以不受限制地使用本领域中用于去除羧基保护基的任何方法。

在本发明中，在进行步骤(5)之前，蛋白质转导结构域的C端可以另外用至少一个氨基酸延伸。在此，氨基酸可以选自21个氨基酸，并且优选地，蛋白质转导结构域的C端可以额外地延伸有至少一个半胱氨酸。

在本发明的步骤(5)中，蛋白质转导结构域优选为CTP(SEQ ID NO：1)，Hph-1(SEQID NO：2)或Tat(SEQ ID NO：3)。

在本发明中，在步骤(5)中，相对于在步骤(4)中获得的化合物，可以以0.5至5，优选1至3的摩尔比添加蛋白质转导结构域。

另外，在本发明中，步骤(5)可以在溶剂的存在下进行，其中所用的溶剂可以是但不限于二甲基亚砜(DMSO)和N-甲基吗啉(NMM)中的至少一种。

另外，在本发明中，步骤(5)可以在20℃至25℃的室温进行6至48小时，优选12至24小时。

然而，本发明的制备方法不限于步骤(1)至(5)。作为另一个实例，该方法可以包括使药物与由式19表示的化合物反应，然后使所得产物与由SEQ ID NO：5表示的多肽(YVA)反应，然后使所得产物与式16所示的化合物反应，然后使所得产物与蛋白质转导结构域反应。作为又一个例子，该方法可以包括使蛋白质转导结构域与由式16表示的化合物反应，然后使所得产物与由SEQ ID NO：5表示的肽(YVA)反应，然后使所得产物与式19表示的化合物反应，然后使所得产物与药物反应。

根据本发明的另一个实施方案，提供了一种预防，改善或治疗脱发的组合物，其包含作为活性成分的本发明的式1表示的化合物。

通常，在药物与蛋白质转导结构域(PTD)共轭的情况下，药物的活性由于结构变化等而受到影响。因此，待共轭的物质和待共轭的物质中的特定共轭位点非常重要。在这方面，对于本发明提供的化合物，用于预防或治疗脱发的特定药物和蛋白质转导结构域通过连接基彼此连接，从而使药物和蛋白质转导结构域的结构变化最小化。这又可以将活性药物传递到目标部位。此外，在本发明中，切割位点可以进一步包括在蛋白质转导结构域和药物之间。因此，在通过蛋白质转导结构域将药物递送到目标脱发区域的毛乳头细胞的情况下，该药物会被半胱氨酸蛋白酶-1或在脱发区域过度活化的白介素-1β(白介素-1b)的前体形式从药物输送载体切割，因此不仅使该药物具有活性，而且还可以间接防止半胱氨酸蛋白酶-1在此过程中将白介素-1b的前体(prointerleukin-1b)转化为IL-1b，从而可以进一步压制炎症反应。

为了增加预防，改善或治疗脱发的效果，本发明的组合物除了由式1表示的化合物之外，还可以进一步包含用于预防或治疗脱发的另一种药物。在此，作为用于预防或治疗脱发的其他药物，例如，可以使用选自下组的至少一种：非那雄胺(finasteride)，度他雄胺(dutasteride)，米诺地尔(minoxidil)，爱普列特(episteride)，α雌二醇(alfatradiol)，托法替尼(tofacitinib)和鲁索替尼(ruxolitinib)，并且可以无限制地包括任何药物，只要该药物是用于预防或治疗脱发的另一种已知药物即可。

为了增加预防，改善或治疗脱发的效果，本发明的组合物除了由式1表示的化合物之外，还可以包含已知的抗炎剂。此处，抗炎剂包括类固醇药(例如泼尼松龙(prednisolone))，非类固醇药等；并且其药学上有效的量是本领域已知的，并且治疗医师可以考虑各种状况(例如症状的严重程度和与绿原酸的组合施用)来调节该量。在以这种方式将已知抗炎剂与绿原酸或其衍生物组合施用的情况下，绿原酸或其衍生物不仅可以减轻已知抗炎剂的副作用等，但也有望产生协同治疗效果。视情况而定，该已知的消炎剂可以同时给药或与本发明的绿原酸形成复合制剂的形式给药，或者可以与本发明的绿原酸间隔一定时间给药。

本发明的组合物可以用作药物组合物，化妆品组合物或食品组合物。

根据本发明的又一个实施方案，提供了一种预防，改善或治疗脱发的方法，其包括将有效量的本发明的组合物施用于目标个体的步骤。

在本发明中，“目标个体”是指具有或很有可能脱发的个体。

在本发明中，“预防”可包括但不限于使用本发明的药物组合物，阻止脱发症状或抑制或延迟症状发展的任何行为。

在本发明中，“治疗”或“改善”可以包括但不限于使用本发明的药物组合物来改善或有益地改变脱发症状的任何行为。

在本发明中，药物组合物可以以为胶囊，片剂，颗粒剂，注射剂，软膏剂，散剂或饮料的形式为特征，并且药物组合物可以以以人为靶标为特征。

根据常规方法，本发明的药物组合物可以分别制成口服制剂(例如粉剂，颗粒剂，胶囊剂，片剂和水性混悬剂，外用制剂，栓剂和无菌注射溶液)的形式使用。但是，药物组合物不限于此。本发明的药物组合物可以进一步包含药学上可接受的载体。作为药学上可接受的载体，可以将粘合剂，助流剂，崩解剂，赋形剂，增溶剂，分散剂，稳定剂，助悬剂，颜料，香料等用于口服给药；注射剂的外加剂中可以使用缓冲剂，防腐剂，止痛剂，增溶剂，等渗剂，稳定剂等；和基质，赋形剂，润滑剂，防腐剂等可以用于局部给药。本发明的药物组合物的制剂可以通过与如上所述的药学上可接受的载体混合以各种方式制备。例如，对于口服给药，可以将药物组合物制成片剂，锭剂，胶囊剂，酏剂，混悬剂，糖浆剂，干片剂(wafers)等形式。对于注射，可以将药物组合物配制成单位剂量安瓿或多种剂型的形式。或者，可以将药物组合物配制成溶液，悬浮液，片剂，胶囊，缓释制剂等。

同时，作为适合于制备制剂的载体，稀释剂或赋形剂的实例，可以使用乳糖，右旋糖，蔗糖，山梨糖醇，甘露醇，木糖醇，赤藓糖醇，麦芽糖醇，淀粉，阿拉伯胶，藻酸盐，明胶，磷酸钙，硅酸钙，纤维素，甲基纤维素，微晶纤维素，聚乙烯吡咯烷酮，水，羟基苯甲酸甲酯，羟基苯甲酸丙酯，滑石粉，硬脂酸镁，矿物油等。另外，还可以进一步包括填充剂，抗凝剂，润滑剂，润湿剂，香料，乳化剂，防腐剂等。

本发明药物组合物的给药途径包括但不限于口服，静脉内，肌肉内，动脉内，髓内，硬膜内，心内，透皮，皮下，腹膜内，鼻内，肠，局部，舌下或直肠途径。口服或肠胃外给药是优选的。

如本文所用，术语“肠胃外”包括皮下，皮内，静脉内，肌内，关节内，粘液囊内(intrabursal)，胸骨内，硬膜内，病灶内和颅内注射或输注技术。本发明的药物组合物也可以栓剂的形式用于直肠给药。

本发明的药物组合物可根据多种因素而变化，包括所用某种化合物的活性，患者的年龄，体重，总体健康状况，性别，饮食，给药时间，给药途径，排泄率，药物组合以及要预防或治疗的某些疾病的严重性。药物组合物的剂量可以根据患者的状况，体重，疾病的严重程度，药物形式，给药途径和持续时间而变化，并且可以由本领域技术人员适当地选择。药物组合物可以每天0.0001至50mg/kg或0.001至50mg/kg的量施用。给药可以一天一次或一天几次。该剂量无意以任何方式限制本发明的范围。本发明的药物组合物可以配制成丸剂，糖衣片剂，胶囊剂，液体剂，凝胶剂，糖浆剂，浆剂或混悬剂的形式。

在本发明中，化妆品组合物可以以皮肤柔软剂，营养乳液，营养精华，按摩霜，化妆品沐浴水添加剂，身体乳液，身体乳，沐浴油，婴儿油，婴儿粉，沐浴露，沐浴乳，防晒乳，防晒霜，晒黑霜(suntan creams)，护肤乳，护肤霜，防紫外线化妆品，卸妆乳，脱毛剂(用于美容目的)，脸部和身体乳液，脸部和身体乳霜，皮肤美白霜，护手霜，洗发乳，美容霜，茉莉油，沐浴皂，液体皂，美容皂，洗发水，洗手液，药用肥皂(用于非医疗目的)，皂膏，洗面奶，沐浴露，头皮清洁剂，洗发水，香皂，牙齿增白凝胶，牙膏等。为此，本发明的组合物可以进一步包含常规用于制备化妆品组合物的溶剂，或合适的载体，赋形剂或稀释剂。

对可以进一步添加到本发明的化妆品组合物中的溶剂的类型没有特别限制，并且溶剂的实例可以包括水，盐水，DMSO或其组合。另外，载体，赋形剂或稀释剂的实例包括但不限于纯净水，油，蜡，脂肪酸，脂肪酸醇，脂肪酸酯，表面活性剂，保湿剂，增稠剂，抗氧化剂，粘度稳定剂，螯合剂，缓冲剂，低级醇等。另外，如果需要，本发明的化妆品组合物可以包含增白剂，保湿剂，维生素，紫外线阻断剂，香料，染料，抗生素，抗菌剂和抗真菌剂。

油的实例可以包括氢化植物油，蓖麻油，棉籽油，橄榄油，棕榈仁油，霍霍巴油和鳄梨油，并且蜡的实例可以包括蜂蜡，鲸蜡，巴西棕榈蜡，小烛树蜡，褐煤蜡，地蜡，液体石蜡和羊毛脂。

脂肪酸的实例可以包括硬脂酸，亚油酸，亚麻酸和油酸；脂肪酸醇的实例可以包括鲸蜡醇，辛基十二烷醇，油醇，泛醇，羊毛脂醇，硬脂醇和十六醇；脂肪酸酯的实例可以包括肉豆蔻酸异丙酯，棕榈酸异丙酯和硬脂酸丁酯。表面活性剂的实例可包括本领域已知的阳离子表面活性剂，阴离子表面活性剂和非离子表面活性剂。其中，如果可能，优选天然产物衍生的表面活性剂。

另外，本发明的化妆品组合物可以包含在化妆品领域广为人知的保湿剂，增稠剂，抗氧化剂等，并且其类型和量是本领域已知的。

本发明的食品组合物可以以各种食品的形式制备，例如饮料，树胶，茶，维生素复合物，粉末，颗粒，片剂，胶囊，糖果，年糕，面包等。本发明的食品组合物由毒性和副作用小的植物提取物组成，因此，出于预防目的而长时间摄取的情况下，可以放心使用。

当本发明的miRNA，表达载体或转化体被包括在食物组合物中时，其可以以对应于总重量的0.1％至50％的比率的量添加。

在此，在以饮料形式制备食物组合物的情况下，除了饮料包含指示比例的食物组合物之外，没有特别限制，并且饮料可以包含各种调味剂，天然碳水化合物等，作为附加成分，类似于常规饮料。即，天然碳水化合物的实例可以包括单糖例如葡萄糖，二糖例如果糖，多糖例如蔗糖，常规糖例如糊精和环糊精以及糖醇例如木糖醇，山梨糖醇和赤藓糖醇。调味剂的实例可以包括天然调味剂(索马甜，甜叶菊提取物(如莱鲍迪甙A)，甘草甜素等)和合成调味剂(糖精，阿斯巴甜等)。

另外，本发明的食品组合物可以包含各种营养素，维生素，矿物质(电解质)，调味剂(例如合成调味剂和天然调味剂)，着色剂，果胶酸及其盐，藻酸及其盐，有机酸，保护性胶体增稠剂，pH调节剂，稳定剂，防腐剂，甘油，酒精，碳酸饮料中使用的碳化剂等。

这些成分可以单独使用或组合使用。这样的添加剂的比例不是很重要，并且按每100重量份本发明的组合物，通常选自0.1至约50重量份的范围。

发明的有益效果

本发明提供的组合物被递送至皮肤，特别地，该组合物被有效地递送至脱发区域即目标区域中的毛乳头细胞中，其中在脱发区域中高度表达的细胞因子或酶引起从组合物中包含的化合物中分离出一种药物，以使该药物有效地显示出活性，这最终可以促进头发的生长和/或头发的再生。

附图说明

图1示出了可用于本发明的化合物的用于预防或治疗脱发的药物的示例性结构，其中示出了可以连接至连接基(L₁或L₂)的官能团。

图2示出了在实验实施例1中，通过对实施例7中获得的化合物E7(CTP-Cas1-FINA)和非那雄胺(finasteride)进行半胱氨酸蛋白酶-1处理，然后进行HPLC分析而获得的结果。

图3示出了在实验实施例1中，通过对实施例1中获得的化合物E1(CTP-FINA)和非那雄胺(finasteride)进行半胱氨酸蛋白酶-1处理，然后进行HPLC分析而获得的结果。

图4示出了通过鉴定实验实施例2中根据实施例1、2、7和8制备的化合物对酶5-α还原酶的抑制能力而获得的结果。

图5示出了通过鉴定实验实施例2中根据实施例3、4、9和10制备的化合物对5-α还原酶的抑制能力而获得的结果。

图6说明通过鉴定实验实施例2中根据实施例5、6、11和12制备的化合物对5-α还原酶的抑制能力而获得的结果。

发明详述

本发明涉及用于预防或治疗脱发的药物组合物，其包含作为活性成分的由式6或7表示的化合物。

[式6]

[式7]

在式6和7中，

P可以是选自下组的蛋白转导结构域(PTD)：Hph-1，Mph-1，Sim-2，Tat，VP22，触足蛋白(Antp)，肽-1(Pep-1)，蛋白转导结构域-5(PTD-5)，11R，7R和细胞质转导肽(CTP)，优选地CTP(SEQ ID NO：1)，Hph-1(SEQ ID NO：2)或Tat(SEQ ID NO：3)，

W可以是直接键或至少一个氨基酸，优选至少一个半胱氨酸，和

A可以选自下组：非那雄胺(finasteride)，度他雄胺(dutasteride)，米诺地尔(minoxidil)，爱普列特(episteride)，α雌二醇(alfatradiol)，托法替尼(tofacitinib)和鲁索替尼(ruxolitinib)，优选非那雄胺(finasteride)或度他雄胺(dutasteride)。

在下文中，将通过实施例更详细地描述本发明。给出这些实施例仅仅是为了更详细地说明本发明，并且对于本领域技术人员而言显而易见的是，根据本发明的主旨，本发明的范围不受这些实施例的限制。

实施例

[制备例1]

作为蛋白转导结构域，制备由SEQ ID NO：1表示的CTP，由SEQ ID NO：2表示的Hph-1和由SEQ ID NO：3表示的Tat，然后分别用氨基酸半胱氨酸延伸其各自的C端以分别制备由SEQ ID NO：6、7和8表示的肽。

[实施例1]CTP-fina的制备

在DMSO和NMM的存在下，将含有非那雄胺(finasteride)的式A1表示的化合物按1：1的摩尔比与由SEQ ID NO：6表示的在制备实施例1中制备的肽(CTP+半胱氨酸)混合，然后使反应在室温下进行12小时，以制备由式E1表示的最终化合物。式E1中，“-Cys-S-”是指半胱氨酸(Cys)中所含的巯基与吡咯烷-2，5-二酮连接的结构。

<方案1>

[实施例2]CTP-duta的制备

在DMSO和NMM的存在下，将含有度他雄胺(dutasteride)的式A2表示的化合物以1：1的摩尔比例与在制备实施例1中制备的由SEQ ID NO：6表示的肽(CTP+半胱氨酸)混合，然后使反应在室温下进行12小时，以制备由式E2表示的最终化合物。式E2中，“-Cys-S-”是指半胱氨酸(Cys)中所含的巯基与吡咯烷-2，5-二酮连接的结构。

<方案2>

[实施例3]hph-1-fina的制备

以与实施例1相同的方法制备由式E3表示的化合物，不同之处在于，在实施例1中，使用由SEQ ID NO：7表示的肽(Hph-1+半胱氨酸)代替SEQ ID NO：6表示的肽作为蛋白转导结构域。式E3中，“-Cys-S-”是指半胱氨酸(Cys)中所含的巯基与吡咯烷-2，5-二酮连接的结构。

[实施例4]hph-1-duta的制备

以与实施例1相同的方法制备由式E4表示的化合物，不同之处在于，在实施例2中，使用由SEQ ID NO：7表示的肽(Hph-1+半胱氨酸)代替SEQ ID NO：6表示的肽，作为蛋白转导结构域。式E4中，“-Cys-S-”是指半胱氨酸(Cys)中所含的巯基与吡咯烷-2，5-二酮连接的结构。

[实施例5]Tat-fina的制备

以与实施例1相同的方法制备由式E5表示的化合物，不同之处在于，在实施例2中，使用由SEQ ID NO：8表示的肽(Tat+半胱氨酸)代替SEQ ID NO：6表示的肽，作为蛋白转导结构域。式E5中，“-Cys-S-”是指半胱氨酸(Cys)中所含的巯基与吡咯烷-2，5-二酮连接的结构。

[实施例6]Tat-duta的制备

以与实施例1相同的方法制备由式E6表示的化合物，不同之处在于，在实施例2中，使用由SEQ ID NO：8表示的肽(Tat+半胱氨酸)代替SEQ ID NO：6表示的肽，作为蛋白转导结构域。式E6中，“-Cys-S-”是指半胱氨酸(Cys)中所含的巯基与吡咯烷-2，5-二酮连接的结构。

[制备例2]

使式X1表示的(S)-2-氨基-4-(叔丁氧基)-4-氧代丁酸与式X2表示的4-氨基苄基碳酰氯反应，制备式B1表示的化合物。

<方案3>

[制备例3]

在NaH存在下，将由式B1表示的化合物与由式X3表示的非那雄胺(finasteride)反应，以制备由式M1表示的中间体化合物。

<方案4>

[制备例4]

使由式X4表示的6-马来酰亚胺基己酸与由式X5表示的化合物(由SEQ ID NO：5表示的肽)反应以制备式M2表示的中间体化合物。

<方案5>

[实施例7]CTP-cas1-fina的制备

1.步骤1

如方案6所示，在HBTU，DIEA和DMF的存在下，使由式M1表示的中间体化合物与由式M2表示的中间体化合物反应，以制备由式A3表示的化合物。

<方案6>

2.步骤2

使步骤1中获得的由式A3表示的化合物在30％TFA下反应，从而除去作为羧基保护基的叔丁基，从而获得由式A4表示的化合物。

<方案7>

3.步骤3

如方案8所示，在DMSO和NMM的存在下，将步骤2中获得的由式A4表示的化合物与在制备实施例1中获得的SEQ ID NO：6所示的肽以摩尔比为1∶1混合，然后使反应在室温下进行12小时，以制备由式E7表示的最终化合物。式E7中，“-Cys-S-”是指半胱氨酸(Cys)中所含的巯基与吡咯烷-2，5-二酮连接的结构。

<方案8>

[制备例5]

在NaH存在下，将由式B1表示的化合物与由式X4表示的度他雄胺(dutasteride)反应，以制备由式M3表示的中间体化合物。

<方案9>

[实施例8]CTP-cas1-duta的制备

以与实施例7相同的方法制备由式E8表示的最终化合物，除了在实施例7中，使用在制备实施例5中获得的由式M3表示的化合物代替由式M1表示的化合物。在式E8中，“-Cys-S-”是指半胱氨酸(Cys)中所含的巯基与吡咯烷-2，5-二酮连接的结构。

[实施例9]hph-1-cas1-fina的制备

以与实施例7相同的方法制备由式E9表示的化合物，不同之处在于，在实施例7的步骤3中，使用由SEQ ID NO：7表示的肽(Hph-1+半胱氨酸)代替SEQ ID NO：6表示的肽作为蛋白转导结构域。式E9中，“-Cys-S-”是指半胱氨酸(Cys)中所含的巯基与吡咯烷-2，5-二酮连接的结构。

[实施例10]hph-1-cas1-duta的制备

以与实施例8相同的方法制备由式E10表示的化合物，不同之处在于，在实施例8中，使用由SEQ ID NO：7表示的肽(Hph-1+半胱氨酸)代替SEQ ID NO：6表示的肽作为蛋白转导结构域。式E10中，“-Cys-S-”是指半胱氨酸(Cys)中所含的巯基与吡咯烷-2，5-二酮连接的结构。

[实施例11]Tat-cas1-fina的制备

以与实施例7相同的方法制备由式E11表示的化合物，不同之处在于在实施例7的步骤3中，使用由SEQ ID NO：8表示的肽(Tat+半胱氨酸)代替SEQ ID NO：6表示的肽作为蛋白转导结构域。式E11中，“-Cys-S-”是指半胱氨酸(Cys)中所含的巯基与吡咯烷-2，5-二酮连接的结构。

[实施例12]Tat-cas1-duta的制备

以与实施例8相同的方法制备由式E12表示的化合物，除了在实施例8中，使用由SEQ ID NO：8表示的肽(Tat+半胱氨酸)代替SEQ ID NO：6表示的肽作为蛋白转导结构域。式E12中，“-Cys-S-”是指半胱氨酸(Cys)中所含的巯基与吡咯烷-2，5-二酮连接的结构。

[实验实施例1]通过HPLC鉴定

制备实施例1中获得的化合物E1，实施例7中获得的化合物E7和非那雄胺(finasteride)。然后，将这些化合物用半胱氨酸蛋白酶-1处理，并用高效液相色谱(HPLC)分析。结果在图2和3中示出。

如图2和3所示，从HPLC分析结果可以鉴定本发明的化合物。特别地，如图2所示，发现当用半胱氨酸蛋白酶-1处理具有切割位点的化合物E7时，该化合物被切割成两个部分，即非那雄胺(finasteride)和蛋白转导结构域。

[实验例2]对脱发的治疗效果的确认

为了测试根据本发明的化合物对脱发的治疗效果，检查了其对已知诱导脱发的酶5-α还原酶的抑制能力。

具体地，将培养的LNCaP细胞(雄激素受体阳性-人癌细胞系)用胰蛋白酶消化，并以1500rpm离心2分钟以回收细胞。用PBS洗涤3次，然后用移液管将细胞均匀混合。随后，在4℃下(在冰上)超声处理3次。之后，在4℃下以3000rpm离心15分钟以去除细胞碎片。将上清液用作酶5-α还原酶。将每个样品50uL放入96孔ELISA试剂盒中。向其中加入实施例1至12中制备的化合物，并在室温下孵育30分钟。用由CUSABIO的5-α还原酶ELISA试剂盒提供的100uL缀合物或2nM睾酮进行处理，然后在37℃下孵育1小时。总共用洗涤液洗涤五次，并向其中加入由ELISA试剂盒提供的50uL底物A和50uL底物B。然后，包裹在银箔中，并在室温下孵育15分钟。然后，添加50uL的终止溶液并进行混合。此后，用酶标仪在450nm的波长下测量其光密度(O.D.)，结果示于图4至6中。图4示出使用CTP作为蛋白转导结构域获得的化合物(实施例1、2、7和8)的结果；图5示出使用Hph-1作为蛋白转导结构域获得的化合物(实施例3、4、9和10)的结果；以及图6示出使用Tat作为蛋白转导结构域获得的化合物(实施例5、6、11和12)的结果。P

如图4至图6所示，发现在用本发明的化合物治疗的情况下，已知可诱导脱发的酶5-α还原酶的活性被有效抑制。特别地，发现与不具有切割位点的化合物相比，具有包含在蛋白质转导结构域和药物之间的切割位点的化合物对酶5-α还原酶具有优异的抑制能力。

与将脱发用药物与蛋白转导结构域一起给药的情况相比，本发明中合成的化合物具P有优异的皮肤和细胞渗透性。本发明的化合物甚至可以将药物有效地递送至真皮层中的细胞。更佳地，在将化合物递送至靶组织的情况下，其中的切割位点被在脱发部位高表达的白介素-1b，为酶的半胱氨酸蛋白酶等切割，从而使得药物可以有效表现活性。

如上所述，已经详细描述了本发明的特定部分。然而，对于本领域技术人员显而易见的是，这样的具体描述仅用于示出优选实施例，并且本发明的范围不限于此。因此，本发明的实质范围将由所附权利要求及其等同物来限定。

工业适用性

本发明涉及有效预防或治疗脱发的方法。

序列表自由文本

SEQ ID NO：1:CTP顺序

YGRRARRRRRR

SEQ ID NO：2:Hph-1序列

YARVRRRGPRR

SEQ ID NO：3:Tat序列

YGRKKRRQRRR

SEQ ID NO：4:切割位点

YVAD

SEQ ID NO：5

YVA

SEQ ID NO：6:CTP序列+半胱氨酸延伸

YGRRARRRRRRC

SEQ ID NO：7:Hph-1序列+半胱氨酸延伸

YARVRRRGPRRC

SEQ ID NO：8:Tat序列+半胱氨酸延伸

YGRKKRRQRRRC

序列表

<110> 古德T细胞有限公司

<120> 预防或治疗脱发的组合物

<130> P2020-0938

<150> KR 10-2017-0164440

<151> 2017-12-01

<160> 8

<170> KoPatentIn 3.0

<210> 1

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<400> 1

Tyr Gly Arg Arg Ala Arg Arg Arg Arg Arg Arg

1 5 10

<210> 2

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<400> 2

Tyr Ala Arg Val Arg Arg Arg Gly Pro Arg Arg

1 5 10

<210> 3

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<400> 3

Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg

1 5 10

<210> 4

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<400> 4

Tyr Val Ala Asp

1

<210> 5

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<400> 5

Tyr Val Ala

1

<210> 6

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<400> 6

Tyr Gly Arg Arg Ala Arg Arg Arg Arg Arg Arg Cys

1 5 10

<210> 7

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<400> 7

Tyr Ala Arg Val Arg Arg Arg Gly Pro Arg Arg Cys

1 5 10

<210> 8

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<400> 8

Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Cys

1 5 10

Claims

1.用于预防或治疗脱发的药物组合物，包含作为活性成分的

式1表示的化合物，

[式1]

P-W-L₁-M-A

在式1中,

P是蛋白转导结构域(PTD)，

W是直接键或包含至少一个氨基酸，

L₁是一个连接基，

M是直接键或由式2表示的连接基，和

A是用于预防或治疗脱发的药物，

[式2]

*-X-L₂-*

在式2中，

*是形成键的位点，

X是一个切割位点，并且

L₂是一个连接基。

2.如权利要求1所述的药物组合物，

其中所述蛋白转导结构域选自下组：Hph-1，Mph-1，Sim-2，Tat，VP22，触足蛋白(Antp)，肽-1(Pep-1)，蛋白转导结构域-5(PTD-5)，11R，7R和细胞质转导肽(CTP)。

3.如权利要求1所述的药物组合物，

其中A选自下组：非那雄胺(finasteride)，度他雄胺(dutasteride)，米诺地尔(minoxidil)，爱普列特(episteride)，α雌二醇(alfatradiol)，托法替尼(tofacitinib)和鲁索替尼(ruxolitinib)。

4.如权利要求1所述的药物组合物，其中M是至少一个半胱氨酸。

5.如权利要求1所述的药物组合物，其中L₁由式3或4表示，

[式3]

[式4]

在式3和式4中，*是形成键的位点。

6.如权利要求3所述的药物组合物，其中，所述连接基L₁与用于预防或治疗脱发的药物的胺基(-NH₂)，羟基(-OH)或氰基(-CN)连接。

7.如权利要求6所述的药物组合物，其中，用于预防或治疗脱发的药物是非那雄胺(finasteride)或度他雄胺(dutasteride)，并且连接基L₁与非那雄胺(finasteride)或度他雄胺(dutasteride)的胺基(-NH₂)连接。

8.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述切割位点X是被白介素-1β(白介素-1b)，半胱天冬酶或基质金属蛋白酶(MMPs)的前体形式识别或切割的位点。

9.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述切割位点X是由SEQ ID NO：4表示的肽。

10.如权利要求1所述的药物组合物，其中L₂由式5表示，

[式5]

式5中，*是形成键的位点。

11.如权利要求3所述的药物组合物，其中，连接基L₂与用于预防或治疗脱发的药物的胺基(-NH₂)，羟基(-OH)或氰基(-CN)连接。

12.如权利要求11所述的药物组合物，其中，用于预防或治疗脱发的药物是非那雄胺(finasteride)或度他雄胺(dutasteride)，并且连接基L₂与非那雄胺(finasteride)或度他雄胺(dutasteride)的胺基(-NH₂)连接。

13.如权利要求1所述的药物组合物，

其中所述式1表示的化合物由式6或7表示，

[式6]

[式7]

在式6和7中，

P是选自下组的蛋白转导结构域(PTD)：Hph-1，Mph-1，Sim-2，Tat，VP22，触足蛋白(Antp)，肽-1(Pep-1)，蛋白转导结构域-5(PTD-5)，11R，7R和细胞质转导肽(CTP)，

W是直接键或至少一个氨基酸，和

A是非那雄胺(finasteride)或度他雄胺(dutasteride)。

14.如权利要求1所述的药物组合物，

其中所述式1表示的化合物由式8至式11中的任何一个表示，

[式8]

[式9]

[式10]

[式11]

在式8至11中，

P是一种选自下组的蛋白转导结构域(PTD)：Hph-1，Mph-1，Sim-2，Tat，VP22，触足蛋白(Antp)，肽-1(Pep-1)，蛋白转导结构域-5(PTD-5)，11R，7R和细胞质转导肽(CTP)，和

W是至少一个半胱氨酸。

15.如权利要求1所述的药物组合物，进一步包含选自下组的至少一个：非那雄胺，度他雄胺，米诺地尔，爱普列特，α雌二醇，托法替尼和鲁索替尼。

16.如权利要求1所述的药物组合物，进一步包含一种抗炎药。

17.一种预防或治疗脱发的方法，包括：

向目标个体施用有效量的式1表示的化合物的步骤，

[式1]

P-W-L₁-M-A

在式1中，

P是蛋白转导结构域(PTD)，

W是直接键或包含至少一个氨基酸，

L₁是一个连接基，

M是直接键或由式2表示的连接基，和

A是预防或治疗脱发的药物，

[式2]

*-X-L₂-*

在式2中，

*是形成键的位点，

X是一个切割位点，和

L₂是一个连接基。