UA123889C2 - Кон'югати піролобензодіазепін-антитіло - Google Patents

Кон'югати піролобензодіазепін-антитіло Download PDF

Info

Publication number
UA123889C2
UA123889C2 UAA202004636A UAA202004636A UA123889C2 UA 123889 C2 UA123889 C2 UA 123889C2 UA A202004636 A UAA202004636 A UA A202004636A UA A202004636 A UAA202004636 A UA A202004636A UA 123889 C2 UA123889 C2 UA 123889C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
antibody
zeo
group
amino acid
paragraphs
Prior art date
Application number
UAA202004636A
Other languages
English (en)
Inventor
Беркель Патріціус Хендрікус Корнеліс ван
Беркель Патрициус Хендрикус Корнелис ван
Original Assignee
Ейдісі Терапьютікс Са
Ейдиси Терапьютикс Са
Медіммуне Лімітед
Медиммуне Лимитед
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GBGB1702031.4A external-priority patent/GB201702031D0/en
Priority claimed from GBGB1719391.3A external-priority patent/GB201719391D0/en
Priority claimed from GBGB1719398.8A external-priority patent/GB201719398D0/en
Priority claimed from GBGB1719393.9A external-priority patent/GB201719393D0/en
Application filed by Ейдісі Терапьютікс Са, Ейдиси Терапьютикс Са, Медіммуне Лімітед, Медиммуне Лимитед filed Critical Ейдісі Терапьютікс Са
Publication of UA123889C2 publication Critical patent/UA123889C2/uk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68035—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a pyrrolobenzodiazepine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6861—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from kidney or bladder cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]

Abstract

Даний винахід стосується кон'югату формули (I): Ab-(DL)p, (I) у якому: Ab являє собою антитіло, яке зв'язується з DLK1, KAAG1 або мезотеліном; DL являє собою .

Description

Еж-е й й : Її» ри Н її н
З-о пилованої 9 0АА (в) о о я о. Де о Хо що що т А ме (ві о От
Перехресне посилання на споріднені заявки
Дана заявка претендує на пріоритет згідно з 5В1702031.4, поданого 8 лютого 2017 р.,
ОВ1719391.3, поданої 22 листопада 2017 р., 5В81719398.8, поданої 22 листопада 2017 р.,|і
ОВ1719393.9, поданої 22 листопада 2017 р.
Область техніки
Даний винахід відноситься до піролобензодіазепінів (РВО), що містять лабільну захисну групу у формі лінкера до антитіла.
Рівень техніки
Піролобензодіазепіни
Деякі піролобензодіазепіни (ПБД) мають здатність розпізнавати і зв'язуватися з конкретними послідовностями ДНК; переважна послідовність являє собою РисСРи. Перший протипухлинний антибіотик на основі ПЕД, антраміцин, був відкритий в 1965 р. (І еітогибег, еї аї., У. Ат. Спет.
Зос., 87, 5793-5795 (1965); І еітдгибег, еї а!., У. Ат. Спет. 5ос., 87, 5791-5793 (1965)). Потім повідомлялося про ряд природних ПБД і було розроблено більше 10 шляхів синтезу різних аналогів |Ппигеїоп, еїаі!., Спет. ВНеу. 1994, 433-465 (1994); Апіопому, О. апа Тпит5юп, О.Е., Спет.
Веху. 2011 111 (4), 2815-2864)|. Члени сімейства включають абейміцин ІНоспіомувкі, еї аї., 9.
Апііріоїїсв5, 40, 145-148 (1987))|, чікаміцин І(Копівпі, еї аї., у. Апіібіоїіс5, 37, 200-206 (1984)|Ї), 00-81
Іпатент Японії 58-180 487; Триг5іоп, єї а). Спет. Вій, 26, 767-772 (1990); Возе, єї аї.,
Темганеагтоп, 48, 751-758 (1992)|, мазетраміцин (Китіпого, еї аї., У. Апігріоїіс5, 33, 665-667 (1980)|, неотраміцини А і В |Такенисні, еї аї., у. Апібріоїіс5, 29, 93-96 (1976)), поротраміцин |(Тзипакама, еї а!., У. Апііріоїіс5, 41, 1366-1373 (1988)|, протракарцин |Зпіті?и, еї аї., У. Апібіоїіс5, 29, 2492-2503 (1982); І апаієу апа Тпигтеіоп, У. Огу. Спет., 52, 91-97 (1987)), сибаноміцин (ОС-102) ІНага, евї аї.,
У. Апіібіоїісв, 41, 702-704 (1988); ПОН, еї аї., у. Апііріоїісв, 41, 1281-1284 (1988)), сибіроміцин
І ебет, єї а!., У. Ат. Спет. 5ос., 110, 2992-2993 (1988)) і томаміцин (Агіта, еї аї., У. Апіїріоїісв, 25, 437-444 (1972)). ПБД мають загальну структуру: 10
З 11 8 Мет Н
В па -1 7 ще
А 22 (Ф) З
Вони відрізняються за числом, типом і положенням замісників в обох своїх ароматичних кільцях А та піролокільцях С, а також за ступенем насичення кільця С. У кільці В присутній або імін (М-С), або карбіноламін (МН-СН(ОН)), або простий метиловий ефір карбіноламіну (МН-
Зо СН(ОМе)) у положенні М10-С11, яке є електрофільним центром, відповідальним за алкілування
ДНК. Всі з відомих природних продуктів мають (5)-конфігурацію у хіральному положенні С11а, що обумовлює правобічну "твіст"--конформацію при розгляді від кільця С до кільця А. Це надає їм підходящу тривимірну форму для ізоспіральності з малою борозенкою В-форми ДНК, що призводить до щільного прилягання в сайті зв'язування (Копп, в Апіїібіоїіс5 ПП. Зргіпдег-Мепаа,
Мем Мо, рр. 3-11 (1975); Нитеу апа Меєднат-МапОемапівг, Асс. Спет. ВНез., 19, 230-237 (1986)). Їх здатність утворювати адукт у малій борозенці дозволяє їм перешкоджати процесингу
ДНК, тому їх застосовують в якості протипухлинних агентів.
Одна сполука піролобензодіазепіну описана в роботі Сгедзоп еї аї. (Спет. Соттип. 1999, 797-798) як сполука 1 і сгедзоп еї аїІ. (У. Мей. Спет. 2001, 44, 1161-1174) як сполука 4а. Ця сполука, також відома як 552000, показана нижче:
Н, -" о. диню Ме Н о (в) 502000 І
У УМО 2007/085930 описане одержання димерних сполук ПБД, що містять лінкерні групи для з'єднання з агентом, що зв'язує клітини, таким як антитіло. Лінкер присутній у містку, що з'єднує мономерні блоки ПБД димеру.
Димерні сполуки ПБД, що містять лінкерні групи для з'єднання з агентом, що зв'язує клітини, таким як антитіло, були описані у М/О 2011/130613 і МО 2011/130616. Лінкер у цих сполуках приєднаний до центральної частини ПБД у положенні С2 і зазвичай розщеплюється при дії ферменту на лінкерну групу. У УМО 2011/130598 лінкер у цих сполуках приєднаний до одного з доступних положень М10 на центральній частині ПБД і зазвичай розщеплюється при дії ферменту на лінкерну групу.
Кон'югати антитіло-лікарський засіб
Терапія антитілами була розроблена для націленого (таргетного) лікування пацієнтів з раком, імунологічними й ангіогенними порушеннями (Сагпег, Р. (2006) Маїшйиге Кемієм/5
Іттипоіоду 6:343-357). Застосування кон'югатів антитіло-лікарський засіб (АОС), тобто імунокон'югатів, для локальної доставки цитотоксичних або цитостатичних агентів, тобто лікарських засобів для знищення або інгібування пухлинних клітин у лікуванні раку, націлює доставку фрагмента лікарського засобу до пухлин і внутрішньоклітинне накопичення в них, у той час як системне введення цих лікарських засобів у некон'югованій формі може призвести до неприйнятних рівнів токсичності для нормальних клітин |Хіє єї а!. (2006) Ехретп. Оріп. Віої!. Тег. 6(3):281-291; Комішп еї аї. (2006) Сапсег Вев. 66(6):3214-3121; І ам/ єї аї. (2006) Сапсег Вев. 66(4):2328-2337; Ми єї а. (2005) Маїшге Віоїесп. 23(9):1137-1145; | атреп 4). (2005) Ситепі Оріп. іп РНаптасої. 5:543-549; Натапп Р. (2005) Ехреп Оріп. Тнег. Раїепів 15(9):1087-1103; Раупе, а. (2003) Сапсег Сеї! 3:207-212; Тгаї єї аї. (2003) Сапсег Іттипої. Іттипоїпег. 52:328-337; Зугідов апа Ерепеїоз (1999) Апіїсапсег Незеагсп 19:605-614).
Таким чином, потрібна максимальна ефективність при мінімальній токсичності. Зусилля з розробки і поліпшення АОС були зосереджені на селективності моноклональних антитіл (МАТ), а також на механізмі дії лікарського засобу, приєднанні лікарського засобу, співвідношенні лікарський засіб/антитіло (навантаження) та властивостях вивільнення лікарського засобу
Їипшшіа, еї аіІ., 20086 Маїшйге Віоїесн., 26(8):925-932; Ротап еї аї. (2009) Віоса 114(13):2721- 2729; 05 7521541; 005 7723485; МО2009/052249; Мебопадн (2006) Ргоївіп Епд. ЮОезідп 5 56. 19(7у: 299-307; Оогопіпа еї а!. (2006) Віосопі. Спет. 17:114-124; ЕпскКвоп еї а! (2006) Сапсег Вез. 66(8):1-8; Запаегзоп єї аї (2005) Сііп. Сапсег Вев. 11:843-852; дейНтеу єї аї. (2005) У. Мед. Спет. 48:1344-1358; Натбрієй єї аІ. (2004) Сіп. Сапсег Вев. 10:7063-7070|. Фрагменти лікарського
Зо засобу можуть виявляти свої цитотоксичні та цитостатичні ефекти за допомогою механізмів, що включають зв'язування тубуліну, зв'язування ДНК, інгібування протеасоми і/або топоізомерази.
Деякі цитотоксичні лікарські засоби, як правило, неактивні або менше активні, коли вони кон'юговані з великими антитілами або білковими лігандами рецепторів.
Автори даного винаходу розробили конкретні кон'югати димерного ПЕД й антитіла.
Сутність винаходу
Згідно з першим аспектом даного винаходу запропонований кон'югат формули (1):
АР-(ОО р (І) у якій:
АБ являє собою антитіло, яке зв'язується з 0І К1; рі. являє собою що паля 2 є ї. ба й НК Я. Д Ї Я. ре
Оп ран Оп свкя бо к а Я і вл
М. м вана меш мае ак Й а
ІЙ І: ще ран и ЗО ЧИЯ 1 дин у й й кеш де:
Х вибраний з групи, що включає одинарний зв'язок, -СНе- і -С2НаА-; п становить від 1 до 8; т дорівнює 0 або 1;
В" являє собою метил або феніл; якщо між С2 і СЗ присутній подвійний зв'язок, 2 вибраний групи, що складається з: (а) С5ло арильної групи, необов'язково заміщеної одним або більше замісниками, вибраними з групи, що включає: галоген, нітро, ціано, простий ефір, карбокси, складний ефір,
Сі-7 алкіл, Сз-7 гетероцикліл і біс-оксі-С:-з алкілен; (б) Сі насиченого аліфатичного алкілу; (іс) Сз-є насиченого циклоалкілу; в
КА
Ї в У! 21 22 раг3 У! П (іа) ,де кожний з К-", 22 ї КЗ незалежно вибраний з Н, Сі-з насиченого алкілу,
Сг-з алкенілу, Сг-з алкінілу та циклопропілу, при цьому загальне число атомів вуглецю в групі 2 становить не більше 5; десь
А АК ов (іє) , де один із Коза і Бе» являє собою Н, а інший вибраний з: фенілу, причому зазначений феніл необов'язково заміщений групою, вибраною з галогену, метилу, метокси; піридилу; та тіофенілу; і бо ! 4 . . . .. (І в , де К2? вибраний з: Н; С.:-з насиченого алкілу; С2-з алкенілу; Сг-з алкінілу; циклопропілу; фенілу, причому зазначений феніл необов'язково заміщений групою, вибраною з галогену, метилу, метокси; піридилу; та тіофенілу; жа . . о л, 2 доб 2ва : Югбвь якщо між С2 ії СЗ присутній одинарний зв'язок, К2 являє собою ;, де Кгба і Є незалежно вибрані з Н, Е, С.-4 насиченого алкілу, Сг-з алкенілу, при цьому алкільна й алкенільна групи необов'язково заміщені групою, вибраною з Сі-4 алкіламідо й С:і.4 алкілового складного ефіру; або, якщо один із Б2ба і 265 являє собою Н, інший вибраний з нітрилу й С.-4 алкілового складного ефіру; якщо між С2' і С3! присутній подвійний зв'язок, КЕ? вибраний з групи, що складається з: (а) С5ло арильної групи, необов'язково заміщеної одним або більше замісниками, вибраними з групи, що включає: галоген, нітро, ціано, простий ефір, карбокси, складний ефір,
Сі-; алкіл, Сз-7 гетероцикліл і біс-оксі-С.1-з алкілен; (б) Сі насиченого аліфатичного алкілу; (іс) Сзє насиченого циклоалкілу; ві
КА
! в . . . (ід) ,де кожний з КЗ, НВ ії КЗЗ незалежно вибраний з Н, С: насиченого алкілу, Сг-з алкенілу, Сг-з алкінілу та циклопропілу, при цьому загальне число атомів вуглецю в групі К!2 становить не більше 5; до
КАК вне (іє) ,де один із З5а і ЕЗ56 являє собою Н, а інший вибраний з: фенілу, причому зазначений феніл необов'язково заміщений групою, вибраною з галогену, метилу, метокси; піридилу; та тіофенілу; і бо ! за . . . .. (І КК, де В3« вибраний з: Н; С:і-з насиченого алкілу; Сгз алкенілу; Сг-з алкінілу; циклопропілу; фенілу, причому зазначений феніл необов'язково заміщений групою, вибраною з галогену, метилу, метокси; піридилу; та тіофенілу;
а й . . о . ЗбЬ . якщо між С2' ї С3' присутній одинарний зв'язок, Кг являє собою Кк , де ВЗба | дзбь незалежно вибрані з Н, Е, С:-4 насиченого алкілу, С2з алкенілу, причому алкільна й алкенільна групи необов'язково заміщені групою, вибраною з Сі-4 алкіламідо й С:і.4 алкілового складного ефіру; або, якщо один із БЗба і ВЗбь являє собою Н, інший вибраний з нітрилу й С:-4 алкілового складного ефіру; і р становить від 1 до 8.
Згідно з другим аспектом даного винаходу запропонований кон'югат формули (1):
АР-(ОО р (І) у якій:
АБ являє собою антитіло, яке зв'язується з КААС1; і
Ор. визначений для першого аспекту вище.
Згідно з третім аспектом даного винаходу запропонований кон'югат формули (1):
АР-(ОО р (І) у якій:
АБ являє собою антитіло, яке зв'язується з мезотеліном; і
Ор. визначений для першого аспекту вище.
Було встановлено, що ці кон'югати проявляють гарну активність та несподівану переносимість у порівнянні з аналогічними кон'югатами, що не містять сульфонамідну групу.
Короткий опис креслень
На Фігурі 1 показана цитотоксичність кон'югата відповідно до першого аспекту даного винаходу іп міїго.
На Фігурі 2 показана ефективність кон'югата відповідно до першого аспекту даного винаходу іп мімо.
На Фігурі З показана цитотоксичність кон'югата відповідно до першого аспекту даного винаходу в клітинах А204 і НерзВ у двовимірній та тривимірній клітинних культурах іп міїго.
На Фігурі 4 показана цитотоксичність кон'югата відповідно до другого аспекту даного винаходу іп міїго.
На Фігурі 5 показана ефективність кон'югата відповідно до другого аспекту даного винаходу іп мімо.
Зо На Фігурі 6 показана протипухлинна активність кон'югата відповідно до другого аспекту даного винаходу в ксенотрансплантатній моделі 5М12С іп мімо.
Докладний опис винаходу
Згідно з даним винаходом запропонований димер ПБД з лінкером, приєднаним за положенням М10 на одному з фрагментів ПЕД, кон'югованих з антитілом, як визначено нижче.
Даний винахід підходить для застосування при забезпеченні сполуки ПБД у переважний сайт в організмі суб'єкта. Кон'югат дозволяє вивільняти активну сполуку ПЕД, яка не зберігає ніякої частини лінкера. Відсутній виступ, який може вплинути на реакційну здатність сполуки
ПБД. Таким чином, кон'югат формули (І) буде вивільняти сполуку КеїА:
Н - Дня Му ВН т т 7 7 в'я дов о Ве Ф)
Зазначений зв'язок між димером ПБД й антитілом у даному винаході переважно є стабільним поза клітинами. Перед транспортуванням або доставкою в клітину кон'югат антитіло-лікарський засіб (АОС) переважно є стабільним і залишається інтактним, тобто антитіло залишається приєднаним до фрагмента лікарського засобу. Лінкери стабільні поза клітиною-мішенню та можуть розщеплюватися з деяким ступенем ефективності всередині клітини. Ефективний лінкер буде: (ї) підтримувати властивості специфічного зв'язування антитіла; (ії) забезпечувати внутрішньоклітинну доставку кон'югата або фрагмента лікарського засобу; (ії) залишатися стабільним й інтактним, тобто нерозщепленим, до тих пір, поки кон'югат не буде доставлений або транспортований у свій цільовий сайт; і (ім) підтримувати цитотоксичний, цитолітичний ефект або цитостатичний ефект фрагмента лікарського засобу
ПБД. Стабільність АОС може бути виміряна за допомогою стандартних аналітичних методик, таких як мас-спектроскопія, ВЕРХ і методика поділу/аналізу РХ/МС.
Доставка сполук формул КеїА досягається в цільовому сайті активації кон'югата формули (І) в результаті впливу ферменту, такого як катепсин, на з'єднуючу групу та, зокрема, на дипептидний Фрагмент валін-аланін.
Визначення
Замісники
У даній заявці вираження "необов'язково заміщений" відноситься до вихідної групи, яка може бути незаміщеною або яка може бути заміщеною.
Якщо не зазначено інше, у даній заявці термін "заміщений" відноситься до вихідної групи, яка несе один або більше замісників. Термін "замісник" використовується у даній заявці в загальноприйнятому змісті та відноситься до хімічного фрагмента, який ковалентно приєднаний або, якщо необхідно, конденсований з вихідною групою. Широке коло замісників добре відоме, і способи їх утворення та введення в різні вихідні групи також добре відомі.
Приклади замісників більше докладно описані нижче.
Сі-2 алкіл: у даній заявці термін "С:1-ї2 алкіл" відноситься до одновалентного фрагмента, отриманого видаленням атома водню від атома вуглецю вуглеводневої сполуки, що містить від 1 до 12 атомів вуглецю, яка може бути аліфатичною або аліциклічною й яка може бути насиченою або ненасиченою (наприклад, частково ненасиченою, повністю ненасиченою). У даній заявці термін "Сі-4 алкіл" відноситься до одновалентного фрагмента, отриманого видаленням атома водню від атома вуглецю вуглеводневої сполуки, що містить від 1 до 4 атомів вуглецю, яка може бути аліфатичною або аліциклічною й яка може бути насиченою або ненасиченою (наприклад, частково ненасиченою, повністю ненасиченою). Таким чином, термін "алкіл" включає підкласи алкеніл, алкініл, циклоалкіл і т. д., обговорювані нижче.
Приклади насичених алкільних груп включають, але не обмежуються ними, метил (Сі), етил (Сг), пропіл (Сз), бутил (Са), пентил (Св), гексил (Св) і гептил (Ст).
Приклади насичених лінійних алкільних груп включають, але не обмежуються ними, метил (Сі), етил (Сг), н-пропіл (Сз), н-бутил (Са), н-пентил (аміл) (Св), н-гексил (Св) і н-гептил (Ст).
Приклади насичених розгалужених алкільних груп включають ізопропіл (Сз), ізобутил (Са), втор-бутил (Са), трет-бутил (Са), ізопентил (Св) і неопентил (Сб).
Сг-1і2 алкеніл: у даній заявці термін "С»-і2 алкеніл" відноситься до алкільної групи, що містить один або більше подвійних зв'язків вуглець-вуглець.
Приклади ненасичених алкенільних груп включають, але не обмежуються ними, етеніл (вініл, -«СН-СН»г), 1-пропеніл. (-СН-СН-СНз), 2-пропеніл (аліл, -«СН-СН-СН»), ізопропеніл (1- метилвініл, -С(СНз)-СнНае), бутеніл (Са), пентеніл (Св) і гексеніл (Св).
Сг-1і2 алкініл: у даній заявці термін "С2г-1і2 алкініл" відноситься до алкільної групи, що містить один або більше потрійних зв'язків вуглець-вуглець.
Приклади ненасичених алкінільних груп включають, але не обмежуються ними, етиніл (-
СЕСН) і 2-пропініл (пропаргіл, -СНг-СЕСН).
Сз-і2 циклоалкіл: у даній заявці термін "Сз-я2 циклоалкіл" відноситься до алкільної групи, яка також являє собою циклільну групу; тобто одновалентний фрагмент, отриманий видаленням атома водню від атома аліциклічного кільця циклічної вуглеводневої (карбоциклічної) сполуки, причому фрагмент містить від З до 7 атомів вуглецю, включаючи від З до 7 кільцевих атомів.
Приклади циклоалкільних груп включають, але не обмежуються ними, групи, що походять з: насичених моноциклічних вуглеводневих сполук: циклопропану (Сз), циклобутану (Са), циклопентану (Со), циклогексану (Св), циклогептану (С7), метилциклопропану (С), диметилциклопропану (Св), метилциклобутану (Св), диметилциклобутану (Сє), метилциклопентану (Сє), диметилциклопентану (С7) та метилциклогексану (С); ненасичених моноциклічних вуглеводневих сполук: циклопропену (Сз), циклобутену (С), циклопентену (С5), циклогексену (Св), метилциклопропену (Са), диметилциклопропену (Св), метилциклобутену (Св), диметилциклобутену (Сє), метилциклопентену (Сє), диметилциклопентену (С7) та диметилциклогексену (С); і насичених поліциклічних вуглеводневих сполук: норкарану (С7), норпінану (С7), норборнану (С).
Сз-го гетероцикліл: у даній заявці термін "Сз-го гетероцикліл" відноситься до одновалентного фрагмента, отриманого видаленням атома водню від кільцевого атома гетероциклічної сполуки, причому фрагмент містить від З до 20 кільцевих атомів, з яких від 1 до 10 являють собою кільцеві гетероатоми. Переважно кожне кільце містить від З до 7 кільцевих атомів, з яких від 1 до 4 являють собою кільцеві гетероатоми.
У цьому випадку префікси (наприклад, Сз-го, Сз-7, Св-в і т. д.) означають кількість кільцевих атомів або діапазон кількості кільцевих атомів, будь то атоми вуглецю або гетероатоми.
Наприклад, у даній заявці термін "Св-є гетероцикліл" відноситься до гетероциклільної групи, що містить 5 або 6 кільцевих атомів.
Приклади моноциклічних гетероциклільних груп включають, але не обмежуються ними, групи, що походять 3:
Мі: азиридину (Сз), азетидину (Са), піролідину (тетрагідропіролу) (Св), піроліну (наприклад, 3- піроліну, 2,5-дигідропіролу) (Св), 2Н-піролу або ЗН-піролу (ізопіролу, ізоазолу) (С), піперидину (Св), дигідропіридину (Св), тетрагідропіридину (Св), азепіну (Ст);
О:: оксирану (Сз), оксетану (Са), оксолану (тетрагідрофурану) (С), оксолу (дигідрофурану) (С), оксану (тетрагідропірану) (Св), дигідропірану (Св), пірану (Св), оксепіну (Ст);
Зі: тиїтрану (С3), тієтану (Са), тіолану (тетрагідротіофену) (Св), тіану (тетрагідротіопірану) (Св), тієпану (Су);
О»: діоксолану (Св), діоксану (Св) та діоксепану (Ст);
Оз: триоксану (Св);
М2: імідазолідину (С5), піразолідину (діазолідину) (С5), імідазоліну (С5), піразоліну (дигідропіразолу) (Св), піперазину (Св);
МіО:ї: тетрагідрооксазолу (С5), дигідрооксазолу (Св), тетрагідроїзоксазолу (Св), дигідроіїзоксазолу (Св), морфоліну (Св), тетрагідрооксазину (Св), дигідрооксазину (Св), оксазину (Св);
М:5ч: тіазоліну (Св), тіазолідину (Св5), тіоморфоліну (Св);
МгО!: оксадіазину (Св); 0:51: оксатіолу (Св) й оксатіану (тіоксану) (Св); і,
М:О:5:: оксатіазину (Св).
Приклади заміщених моноциклічних гетероциклільних груп включають групи, що походять з сахаридів, у циклічній формі, наприклад, фураноз (Св), такі як арабінофураноза, ліксофураноза, рибофураноза та ксилофураноза, і піраноз (Свє), такі як алопіраноза, альтропіраноза,
Зо глюкопіраноза, манопіраноза, гулопіраноза, ідопіраноза, галактопіраноза та талопіраноза.
Св5-го арил: у даній заявці термін "Свго арил" відноситься до одновалентного фрагмента, отриманого шляхом видалення атома водню від атома ароматичного кільця ароматичної сполуки, причому зазначений фрагмент містить від З до 20 кільцевих атомів. У даній заявці термін "С57 арил" відноситься до одновалентного фрагмента, отриманого видаленням атома водню від атома ароматичного кільця ароматичної сполуки, причому зазначений фрагмент містить від 5 до 7 кільцевих атомів, й у даній заявці термін "Св-о арил" відноситься до одновалентного фрагмента, отриманого видаленням атома водню від атома ароматичного кільця ароматичної сполуки, причому зазначений фрагмент містить від 5 до 10 кільцевих атомів.
Переважно кожне кільце містить від 5 до 7 кільцевих атомів.
У цьому випадку префікси (наприклад, Сз-го, Св-7, Свв, Свло і т. д.) означають кількість кільцевих атомів або діапазон кількості кільцевих атомів, будь то атоми вуглецю або гетероатоми. Наприклад, у даній заявці термін "Своє арил" відноситься до арильної групи, що містить 5 або 6 кільцевих атомів.
Всі кільцеві атоми можуть являти собою атоми вуглецю, як в "карбоарильних групах".
Приклади карбоарильних груп включають, але не обмежуються ними, групи, що походять з бензолу (тобто фенілу) (Св), нафталіну (Со), азулену (Со), антрацену (С:4), фенантрену (Са), нафтацену (Св) та пірену (Св).
Приклади арильних груп, які містять конденсовані кільця, щонайменше одне з яких являє собою ароматичне кільце, включають, але не обмежуються ними, групи, що походять з індану (наприклад, 2,3-дигідро-1Н-індену) (Се), індену (Се), ізоїндену (Со), тетраліну (1,2,3,4- тетрагідронафталіну (Со), аценафтену (Сіг2), флуорену (Сіз), феналену (Сіз), адефенантрену (Сі) й ацеантрену (Св).
Згідно з іншим варіантом кільцеві атоми можуть включати один або більше гетероатомів, як в "гетероарильних групах". Приклади моноциклічних гетероарильних груп включають, але не обмежуються ними, групи, що походять 3:
Ми: піролу (азолу) (Со), піридину (азину) (Св);
О:: фурану (оксолу) (Св);
Зі: тіофену (тіолу) (Св);
М:О!ч: оксазолу (Св), ізоксазолу (Св), ізоксазину (Св); бо МгО!: оксадіазолу (фуразану) (Св);
МзО!: оксатриазолу (Св);
Мі: тіазолу (Св), ізотіазолу (Св);
Ме: імідазолу (1,3-діазолу) (Св), піразолу (1,2-діазолу) (С5), піридазину (1,2-діазину) (Св), піримідину (1,3-діазину) (Св) (наприклад, цитозину, тиміну, урацилу), піразину (1,4-діазину) (Св);
Мз: триазолу (Св), триазину (Св); і,
Ма: тетразолу (Св).
Приклади гетероарилу, який містить конденсовані кільця, включають, але не обмежуються ними:
Со (з 2 конденсованими кільцями), що походить з бензофурану (0), ізобензофурану (О|), індолу (Мі), ізоїндолу (Мі), індолізину (Мі), індоліну (Мі), ізоіндоліну (М), пурину (Ма) (наприклад, аденіну, гуаніну), бензімідазолу (М»г), індазолу (М2), бензоксазолу (МіО), бензизоксазолу (МіО), бензодіоксолу (02), бензофуразану (М2Ої), бензотриазолу (Мз), бензотіофурану (51), бензотіазолу (М151), бензотіадіазолу (М2е5);
Со (з 2 конденсованими кільцями), що походить з хромену (0), ізохромену (01), хроману (01), ізохроману (01), бензодіоксану (02), хіноліну (Мі), ізохіноліну (Мі), хінолізину (Мі), бензоксазину (МіО), бензодіазину (М2), піридопіридину (Мг), хіноксаліну (М2), хіназоліну (Мг), циноліну (М2г), фталазину (Мг), нафтиридину (М2г), птгеридину (Ме);
Сі (з 2 конденсованими кільцями), що походить з бензодіазепіну (Мг);
Сіз (з З конденсованими кільцями), що походить з карбазолу (Мі), дибензофурану (СО), дибензотіофену (51), карболіну (Мг), перимідину (М»2), піридоїндолу (Ме»); і,
Са (з З конденсованими кільцями), що походить з акридину (Мі), ксантену (О.), тіоксантену (51), оксантрену (02), феноксатиїну (0151), феназину (М2г), феноксазину (МіО), фенотіазину (М1і51), тіантрену (52), фенантридину (Мі), фенантроліну (Мг), феназину (Ме).
Вищевказані групи, незалежно від того, чи є вони окремими або частиною іншого замісника, самі по собі необов'язково можуть бути заміщені однією або більше групами, вибраними з них самих і додаткових замісників, перерахованих нижче.
Галоген: -Е, -СІ, -Вг і -І.
Гідрокси: -ОН.
Простий ефір: -ОК, де К являє собою простий ефірний замісник, наприклад, С:-7 алкільну
Ко) групу (також називану С1-7 алкоксигрупою, яка обговорюється нижче), Сз-го гетероциклільну групу (також називану Сз-го гетероциклілоксигрупою) або С52о арильну групу (також називану С5- го арилоксигрупою), переважно Сз-7 алкільну групу.
Алкокси: -ОК, де Е. являє собою алкільну групу, наприклад, С.-7 алкільну групу. Приклади Сч- 7 алкоксигруп включають, але не обмежуються ними, -ОМе (метокси), -ОЕЇ (етокси), -Ф(пРг) (н- пропокси), -Ф(ІРг) (ізопропокси), -«О(пВи) (н-бутокси), -О(5Ви) (втор-бутокси), -О(іВи) (ізобутокси) і -О(ІВи) (трет-бутокси).
Карбокси (карбонова кислота): -С(/-О)ОН.
Складний ефір (карбоксилат, складний ефір карбонової кислоти, оксикарбоніл): -С(-0О)ОВ, де ЖК являє собою складноефірний замісник, наприклад, Сі-7 алкільну групу, Сз-го гетероциклільну групу або С5го арильну групу, переважно С:1-7 алкільну групу. Приклади складноефірних груп включають, але не обмежуються ними, -С(-0)ОСНз, -0(-0)ОСНеСН», -ФЩ-Ф0ОФ(СНЗ)з і -С(-ФО)ОРН.
Аміно: -МВА'Н2, де К" і К2 незалежно являють собою аміно замісники, наприклад, водень, С1-7 алкільну групу (також називану С.і-7 алкіламіно або ді-С1-7 алкіламіно), Сз-го гетероциклільну групу або Свого арильну групу, переважно Н або С.-7 алкільну групу, або, у випадку "циклічної" аміногрупи, ЕК! і Кг, разом з атомом азоту, до якого вони приєднані, утворюють гетероциклічне кільце, що містить від 4 до 8 кільцевих атомів. Аміногрупи можуть бути первинними (-МНг»г), вторинними (-МНЕ') або третинними (-МНА"' В), а у катіонній формі можуть бути четвертинними (ї-МА'В2АЗ). Приклади аміногруп включають, але не обмежуються ними, -МН2е, -МНеСН», 00 -МНО(СнНз)», -Щ(СНз)г, -«Щ(СНеСНвЗз)» ї -МНРН. Приклади циклічних аміногруп включають, але не обмежуються ними, азиридино, азетидино, піролідино, піперидино, піперазино, морфоліно та тіоморфоліно.
Амідо (карбамоїл, карбаміл, амінокарбоніл, карбоксамід): -«С(-О)МА' НВ, де КЕ" і В? незалежно являють собою аміно замісники, визначені для аміногруп. Приклади амідогруп включають, але не обмежуються ними, -С(-О0)МН:, -С(-О0)МНОН»з, -С(-О)М(СНз)г», -С(-0)МНОНоСН: і -С(-О)М(СНоСН»з)2, а також амідогрупи, в яких К' і К7, разом з атомом азоту, до якого вони приєднані, утворюють гетероциклічну структуру, наприклад, як у піперидинокарбонілі, морфолінокарбонілі, тіоморфолінокарбонілі та піперазинокарбонілі.
Нітро: -МО». (510) Азидо: -Мз.
Ціано (нітрил, карбонітрил): -СМ.
Антитіло
Антитіло до ОЇ К1
Відповідно до одного аспекту антитіло являє собою антитіло, яке зв'язується з 0 К1.
Гомологічний ліганду дельта білок 1 (01 К-1) являє собою ЕСЕ-подібний мембранозв'язаний білок, що складається з шести тандемних ЕсСЕ-подібних повторів, білялмембранної області з сайтом розщеплення, опосередкованого ТАСЕ (АБАМ17), трансмембранного домену та короткого внутрішньоклітинного хвоста. ОІ К-1 активно експресується під час розвитку плода, але його експресія знижена та сильно обмежена в дорослих. Напроти, БІ К-1 повторно експресується у декількох пухлинах, таких як нейробластома, гепатоцелюлярна карцинома (ГЦК), рабдоміосаркома, дрібноклітинний рак легенів, мієлодиспластичний синдром і гострий мієлолейкоз. Цікаво відзначити, що при ГЦК 0 К-1, як було показано, є маркером стовбурових ракових клітин, субпопуляції клітин, відповідальних за ініціацію, зростання, метастазування та рецидування пухлини.
В цілому, БІ К-1 являє собою перспективну мішень для підходу на основі кон'югата антитіло- лікарський засіб (АОС), внаслідок його селективної експресії в широкому діапазоні злоякісних новоутворень й обмеженої експресії в здорових органах, а також його експресії на стовбурових ракових клітинах ГЦК.
НиВа-1-за
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить домен МН, що містить СОКЗ МН з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮО МО. 7. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу домен МН додатково містить СОК2 МН з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 6 і/або СОК1 МН з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 5.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить домен УН, що містить
СОКІ МН з амінокислотною послідовністю ЗЕО 10 МО. 5, СОК2 МН з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 6 і СОКЗ МН з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 7. Згідно з переважними варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить домен МН, що містить послідовність відповідно до 5ЕО ІЮО МО. 1.
Антитіло може також містити домен МІ. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить домен Мі, що містить СОКЗ МІ. з амінокислотною послідовністю БЕО
ІО МО. 10. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу домен Мі. додатково містить
СОВ2 МІ з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 9 (або СОБІ МІ з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 8. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить домен МІ, що містить СОК'1 МІ. з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 8, СОК2 МІ з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 9 ії СОКЗ МІ. з амінокислотною послідовністю 5ЕО
ІО МО. 10. Згідно з переважними варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить домен
МІ, що містить послідовність відповідно до 5ЕО ІЮ МО. 2.
Згідно з переважними варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить домен МН і домен МІ. Переважно МН містить послідовність зЕО ІО МО. 1 їі домен МГ. містить послідовність
ЗЕО ІЮ МО. 2.
Домен(и) МН ї М. може (можуть) спаровуватися з утворенням антигензв'язуючого сайту антитіла, який зв'язує І К1.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло являє собою інтактне антитіло, що містить домен МН, спарений з доменом МІ, при цьому домени МН і Мі. містять послідовність зЕО ІЮ МО. 1, спарену з БЕО ІЮ МО. 2.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить важкий ланцюг, що містить послідовність зЕО ІЮО МО. 3, спарену з легким ланцюгом, що містить послідовність БЗЕО
ІО МО. 4. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло являє собою інтактне антитіло, що містить два важкі ланцюги, які містять послідовність 5ЕО ІЮО МО. 3, кожна з яких спарена з легким ланцюгом, що містить послідовність 5ЕО ІЮ МО. 4.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить важкий ланцюг, що містить послідовність 5ЕО ІЮ МО. 11, спарену з легким ланцюгом, що містить послідовність БЗЕО
ІО МО. 4. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло являє собою інтактне антитіло, що містить два важкі ланцюги, які містять послідовність 5ЕО ІЮ МО. 11, кожна з яких спарена з легким ланцюгом, що містить послідовність 5ЕО ІЮ МО. 4.
Відповідно до одного аспекту антитіло являє собою антитіло, описане у даній заявці, яке було модифіковане (або додатково модифіковане), як описано нижче. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло являє собою гуманізований варіант, деімунізований варіант або варіант зі зміненою поверхнею антитіла, розкритого у даній заявці. 60 Антитіло до КААС1
Відповідно до одного аспекту антитіло являє собою антитіло, яке зв'язується з КААС1.
Антитіло ЗА4
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить домен МН, що містить СОКЗ МН з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 107. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу домен МН додатково містить СОК2 МН з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 106 і/або СОК1 МН з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 105.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить домен УН, що містить
СОКІ МН з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 105, СОК2 МН з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 106 ії СОКЗ МН з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 107.
Згідно з переважними варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить домен МН, що містить послідовність відповідно до 5ХЕО ІЮ МО. 101.
Антитіло може також містити домен МІ. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить домен Мі, що містить СОКЗ МІ. з амінокислотною послідовністю БЕО
І МО. 110. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу домен Мі додатково містить СОМК2 МІ з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 109 і/або СОРБ1 МІ з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 108. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить домен Мі, що містить СОК1 МІ. з амінокислотною послідовністю ЗЕ
ІЮ МО. 108, СОБК2 МІ з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 109 їі СОКЗ МІ. з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 110. Згідно з переважними варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить домен МІ., що містить послідовність відповідно до 5ЕО ІЮ МО. 102, ЗЕО ІО МО. 113 або 5ЕО ІЮО МО. 115.
Згідно з переважними варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить домен МН і домен МІ. Переважно МН містить послідовність ЗЕБО ІО МО. 101 ї домен Мі містить послідовність БЕО ІЮ МО. 102, 5ЕО ІЮ МО. 113 або 5ЕО ІО МО. 115.
Домен(и) МН ії Мі. може (можуть) спаровуватися з утворенням антигензв'язуючого сайту антитіла, який зв'язує КААСІ1.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло являє собою інтактне антитіло, що містить домен МН, спарений з доменом МІ, при цьому домени МН і Мі. містять послідовність БЕО ІЮ МО. 101, спарену з ЗЕО ІЮО МО. 102, 5ЕО ІЮО МО. 113 або 5ЕО ІО МО. 115.
Зо Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить важкий ланцюг, що містить послідовність зЕО ІЮО МО. 103, спарену з легким ланцюгом, що містить послідовність
ЗЕО ІЮО МО. 104, 5ЕО ІЮ МО. 114 або 5ЕО ІЮО МО. 116. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло являє собою інтактне антитіло, що містить два важкі ланцюги, які містять послідовність зЕО ІЮ МО. 103, кожна з яких спарена з легким ланцюгом, що містить послідовність БЕО ІЮ МО. 104, 5ЕО ІЮ МО. 114 або 5ЕО І МО. 116.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить важкий ланцюг, що містить послідовність ЕС ІЮО МО. 111, спарену з легким ланцюгом, що містить послідовність
ЗЕО ІЮО МО. 104, 5ЕО ІЮ МО. 114 або 5ЕО ІЮО МО. 116. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло являє собою інтактне антитіло, що містить два важкі ланцюги, які містять послідовність зЕО ІЮ МО. 111, кожна з яких спарена з легким ланцюгом, що містить послідовність БЕО ІЮ МО. 104, 5ЕО ІЮ МО. 114 або 5ЕО І МО. 116.
Відповідно до одного аспекту антитіло являє собою антитіло, описане у даній заявці, яке було модифіковане (або додатково модифіковане), як описано нижче. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло являє собою гуманізований варіант, деімунізований варіант або варіант зі зміненою поверхнею антитіла, розкритого у даній заявці.
Антитіло до мезотеліну
Відповідно до одного аспекту антитіло являє собою антитіло, яке зв'язується з мезотеліном.
АОСТ-ХА4
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить домен МН, що
БО містить СОКЗ МН з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 207. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу домен МН додатково містить СОК2 МН з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 206 і/або СОК1 МН з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 205.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить домен УН, що містить
СОКІ МН з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 205, СОК2 МН з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 206 ії СОКЗ МН з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 207.
Згідно з переважними варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить домен МН, що містить послідовність відповідно до 5ЕО ІЮ МО. 201.
Антитіло може також містити домен МІ. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить домен Мі, що містить СОКЗ МІ. з амінокислотною послідовністю ЗЕ 60 І МО. 210. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу домен МІ додатково містить СОК2 Мі з амінокислотною послідовністю 5ЕО І МО. 209 і/або СОБ1 МІ з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 208. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить домен Мі, що містить СОК1 МІ. з амінокислотною послідовністю БЕО
ІЮ МО. 208, СОБК2 МІ з амінокислотною послідовністю ЗЕО І МО. 209 і СОКЗ МІ. з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 210. Згідно з переважними варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить домен МІ., що містить послідовність відповідно до 5Е0 ІЮ МО. 202.
Згідно з переважними варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить домен МН і домен МІ. Переважно МН містить послідовність ЗЕБЕО ІО МО. 201 і домен Мі містить послідовність ЗЕО ІЮ МО. 202.
Домен(и) МН ї М. може (можуть) спаровуватися з утворенням антигензв'язуючого сайту антитіла, який зв'язує мезотелін.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло являє собою інтактне антитіло, що містить домен МН, спарений з доменом МІ, при цьому домени МН і Мі. містять послідовність зЕО ІЮ МО. 201, спарену з БЕО ІО МО. 202.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить важкий ланцюг, що містить послідовність зЕО ІЮО МО. 203, спарену з легким ланцюгом, що містить послідовність
ЗЕО ІЮ МО. 204. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло являє собою інтактне антитіло, що містить два важкі ланцюги, які містять послідовність 5ЕО ІЮО МО. 203, кожна з яких спарена з легким ланцюгом, що містить послідовність зЕО ІЮ МО. 204.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить важкий ланцюг, що містить послідовність зЕО ІЮО МО. 211, спарену з легким ланцюгом, що містить послідовність
ЗЕО ІЮ МО. 204. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло являє собою інтактне антитіло, що містить два важкі ланцюги, які містять послідовність 5ЕО ІЮО МО. 211, кожна з яких спарена з легким ланцюгом, що містить послідовність зЕО ІЮ МО. 204.
АОСТ-ХЕТ
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить домен МН, що містить СОКЗ МН з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 218. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу домен МН додатково містить СОК2 МН з амінокислотною
Ко) послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 217 і/або СОК1 МН з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 216.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить домен УН, що містить
СОКІ МН з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 216, СОК2 МН з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 217 ї СОКЗ МН з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 218.
Згідно з переважними варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить домен МН, що містить послідовність відповідно до 5ЕО ІЮ МО. 212.
Антитіло може також містити домен МІ. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить домен Мі, що містить СОКЗ МІ. з амінокислотною послідовністю БЕО
ІЮО МО. 221. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу домен МІ додатково містить СОК2 Мі з амінокислотною послідовністю 5ЕО І МО. 220 і/або СОБ1 МІ з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 219. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить домен Мі, що містить СОК1 МІ. з амінокислотною послідовністю БЕО
ІЮ МО. 219, СОБК2 МІ з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 220 і СОКЗ МІ. з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 221. Згідно з переважними варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить домен МІ., що містить послідовність відповідно до 5Е0 ІЮ МО. 213.
Згідно з переважними варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить домен МН і домен МІ. Переважно МН містить послідовність ЗЕБО ІО МО. 212 ії домен Мі містить послідовність ЗЕО ІЮ МО. 213.
Домен(и) МН ії М. може (можуть) спаровуватися з утворенням антигензв'язуючого сайту антитіла, який зв'язує мезотелін.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло являє собою інтактне антитіло, що містить домен МН, спарений з доменом МІ, при цьому домени МН і Мі. містять послідовність зЕО ІЮ МО. 212, спарену з БЕО ІО МО. 213.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить важкий ланцюг, що містить послідовність зЕО ІЮ МО. 214, спарену з легким ланцюгом, що містить послідовність
ЗЕО ІЮ МО. 215. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло являє собою інтактне антитіло, що містить два важкі ланцюги, які містять послідовність 5ЕО ІЮО МО. 214, кожна з яких спарена з легким ланцюгом, що містить послідовність зЕО ІЮ МО. 215.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить важкий ланцюг, що 60 містить послідовність зЕО ІЮ МО. 222, спарену з легким ланцюгом, що містить послідовність
ЗЕО ІЮ МО. 215. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло являє собою інтактне антитіло, що містить два важкі ланцюги, які містять послідовність 5ЕО ІЮО МО. 222, кожна з яких спарена з легким ланцюгом, що містить послідовність зЕО ІЮ МО. 215.
АОСТ-ХО09
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить домен МН, що містить СОКЗ МН з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 229. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу домен МН додатково містить СОК2 МН з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 228 і/або СОК1 МН з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 227.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить домен МН, що містить
СОКІ МН з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 227, СОК2 МН з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 228 ії СОКЗ МН з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 229.
Згідно з переважними варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить домен МН, що містить послідовність відповідно до 5ЕО ІЮ МО. 223.
Антитіло може також містити домен МІ. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить домен МІ, що містить СОКЗ МІ. з амінокислотною послідовністю ЗЕ
І МО. 232. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу домен МІ додатково містить СОК2 Мі з амінокислотною послідовністю 5ЕО І МО. 231 і/або СОБ1 МІ з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 230. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить домен Мі, що містить СОК1 МІ. з амінокислотною послідовністю БЕО
ІЮ МО. 230, СОК2 М з амінокислотною послідовністю 5ЕБО ІО МО. 231 і СОКЗ Мі. з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 232. Згідно з переважними варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить домен МІ., що містить послідовність відповідно до 5Е0 ІЮ МО. 224.
Згідно з переважними варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить домен МН і домен МІ. Переважно МН містить послідовність ЗЕБЕО ІО МО. 223 і домен Мі містить послідовність ЗЕО ІЮ МО. 224.
Домен(и) МН ї М. може (можуть) спаровуватися з утворенням антигензв'язуючого сайту антитіла, який зв'язує мезотелін.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло являє собою інтактне антитіло, що містить домен МН, спарений з доменом МІ, при цьому домени МН і Мі. містять послідовність зЕО ІЮ МО. 223, спарену з БЕО ІЮО МО. 224.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить важкий ланцюг, що містить послідовність зЕО ІЮО МО. 225, спарену з легким ланцюгом, що містить послідовність
ЗЕО ІЮ МО. 226. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло являє собою інтактне антитіло, що містить два важкі ланцюги, які містять послідовність 5ЕО ІЮО МО. 225, кожна з яких спарена з легким ланцюгом, що містить послідовність зЕО ІЮ МО. 226.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить важкий ланцюг, що містить послідовність зЕО ІЮО МО. 233, спарену з легким ланцюгом, що містить послідовність
ЗЕО ІЮ МО. 226. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло являє собою інтактне антитіло, що містить два важкі ланцюги, які містять послідовність 5ЕО ІЮО МО. 233, кожна з яких спарена з легким ланцюгом, що містить послідовність ЗЕО ІЮ МО. 226.
АОСТ-ХО09.2
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить домен МН, що містить СОКЗ МН з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 240. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу домен МН додатково містить СОК2 МН з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 239 і/або СОК1 МН з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 238.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить домен УН, що містить
СОКІ МН з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 238, СОК2 МН з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 239 ії СОКЗ МН з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 240.
Згідно з переважними варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить домен МН, що містить послідовність відповідно до ЗЕО ІЮ МО. 234.
Антитіло може також містити домен МІ. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить домен Мі, що містить СОКЗ МІ. з амінокислотною послідовністю БЕО
І МО. 243. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу домен Мі додатково містить СОК2 Мі з амінокислотною послідовністю 5ЕО І МО. 242 іабо СОБ1 МІ з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 241. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить домен Мі, що містить СОКІ МІ. з амінокислотною послідовністю ЕС
ІЮ МО. 241, СОБК2 МІ з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 242 і СОКЗ МІ. з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 243. Згідно з переважними варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить домен МІ., що містить послідовність відповідно до 5ЕО ІЮ МО.
Згідно з переважними варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить домен МН і домен МІ. Переважно МН містить послідовність ЗЕБЕО ІО МО. 234 і домен Мі містить послідовність ЗЕО ІЮ МО. 235.
Домен(и) МН ії МІ може (можуть) спаровуватися з утворенням антигензв'язуючого сайту антитіла, який зв'язує мезотелін.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло являє собою інтактне антитіло, що містить домен МН, спарений з доменом МІ, при цьому домени МН і МГ. містять послідовність зЕО ІЮ МО. 234, спарену з БЕО ІО МО. 235.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить важкий ланцюг, що містить послідовність зЕО ІЮО МО. 236, спарену з легким ланцюгом, що містить послідовність
ЗЕО ІЮ МО. 237. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло являє собою інтактне антитіло, що містить два важкі ланцюги, які містять послідовність 5ЕО ІЮО МО. 236, кожна з яких спарена з легким ланцюгом, що містить послідовність ЗЕО ІО МО. 237.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло містить важкий ланцюг, що містить послідовність зЕО ІЮ МО. 244, спарену з легким ланцюгом, що містить послідовність
ЗЕО ІЮ МО. 237. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло являє собою інтактне антитіло, що містить два важкі ланцюги, які містять послідовність 5ЕО ІЮО МО. 244, кожна з яких спарена з легким ланцюгом, що містить послідовність зЕО ІЮ МО. 237.
Термінологія
У даній заявці термін "антитіло" використовується в самому широкому змісті та включає, зокрема, моноклональні антитіла, поліклональні антитіла, димери, мультимери, поліспецифічні антитіла (наприклад, біспецифічні антитіла), інтактні антитіла та фрагменти антитіл, за умови, що вони проявляють цільову біологічну активність, наприклад, здатність зв'язувати ОК,
КАдДОСІ1 або мезотелін. Антитіла можуть бути мишачими, людськими, гуманізованими, химерними або походять з інших видів. Антитіло являє собою білок, вироблюваний імунною системою, який здатний розпізнавати та зв'язуватися з конкретним антигеном |(Чапемжау, С.,
Тгамегв, Р., Маїроп, М., ЗПпІотенік (2001) Іттипо Віоіоду, 5 вид., Сапапа Рибіїбпіпу, Мем Могкі.
Антиген-мішень зазвичай має множину сайтів зв'язування, також називаних епітопами, розпізнаваних СОК на множині антитіл. Кожне антитіло, яке специфічно зв'язується з епітопом, що відрізняється, має структуру, що відрізняється. Таким чином, один антиген може мати більше одного відповідного антитіла. Антитіло включає повнорозмірну молекулу імуноглобуліну або імунологічно активну частину повнорозмірної молекули імуноглобуліну, тобто молекулу, яка містить антигензв'язуючий сайт, який імуноспецифічно зв'язує антиген мішені, що представляє інтерес, або його частину, причому такі мішені включають, але не обмежуються ними, ракову клітину або клітини, які виробляють аутоїмунні антитіла, асоційовані з аутоїмунним захворюванням. Імуноглобулін може бути будь-якого типу (наприклад, Ідс, ІДЕ, ІМ, ІдО і ІдА), класу (наприклад, Ідс1, дае, Ідс3, Ідс4, ІдА!1 ї ІдДА2) або підкласу або алотипу (наприклад,
Сіті, біт2, Сб1т3, не-б1т1 людини |гобто будь-який алотип, крім С1іт!1|, й1т17, Сегтеа3,
СЗтаг21, СЗта28, сЗті11, сЗт5, СЗті13, Зт14, йЗт10, йЗт15, СЗті16, СЗтб, сЗт24, сЗта26, сСЗт27, Агдті, А2т2, Кт!, Кт2 і Кт3) молекули імуноглобуліну. Імуноглобуліни можуть походити з будь-яких видів, включаючи людину, мишу або кролика.
У даній заявці термін "зв'язує ОСІ К1" означає, що антитіло зв'язує ОІЇКІ з більш високою афінністю, ніж неспецифічний партнер, такий як бичачий сироватковий альбумін (БСА, номер доступу в Сепрапк САА76847, варіант Мо САА76847.1 01:3336842, дата відновлення запису: 7 січня 2011, 14 год. 30 хв). Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло зв'язує ОЇ К1 з константою асоціацію (Ка), яка щонайменше в 2, 3, 4, 5,10, 20, 50, 100, 200, 500, 1000, 2000, 5000, 107, 105 або 105 разів вище, ніж константа асоціації антитіла для БСА, при вимірюванні у фізіологічних умовах. Антитіла згідно з даним винаходом можуть зв'язувати 0І К1 з високою афінністю. Наприклад, згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло може зв'язувати 0 КІ з Ко, яка дорівнює або менше приблизно 105 М, такій як 1х105, 10-, 108, 109, 1070, 1071, 1072, 1073 або 1075, рік є членом ЕсСЕ-подібного сімейства гомеозисних білків. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу поліпептид 0 К1 відповідає номеру доступу в Сепрапк САА78163, варіант Мо САА78163.1, дата відновлення запису: 2 лютого 2011 р., 10 год. 34 хв (ЗЕО ІЮ МО. 12). Відповідно до одного варіанта реалізації даного винаходу нуклеїнова кислота, що кодує поліпептид ОЇ К1, відповідає номеру доступу в Сепрапк 212172, варіант Мо 2712172.1, дата відновлення запису: 2 лютого 2011 р., 10 год. 34 хв. Згідно з деякими варіантами реалізації 60 даного винаходу 01 К1 містить послідовність ЗЕО ІЮ МО. 13.
У даній заявці термін "зв'язує КААСІ1" означає, що антитіло зв'язує КААСІЇ з більше високою афінністю, ніж неспецифічний партнер, такий як бичачий сироватковий альбумін (БСА, номер доступу в Сепрапк САА76847, варіант Мо САА76847.1 01:3336842, дата відновлення запису: 7 січня 2011 р., 14 год. 30 хв). Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло зв'язує КААСІ1 з константою асоціації (Ка), яка щонайменше в 2, 3, 4, 5, 10, 20, 50, 100, 200, 500, 1000, 2000, 5000, 107, 105 або 105 разів вище, ніж константа асоціації антитіла для БСА, при вимірюванні у фізіологічних умовах. Антитіла згідно з даним винаходом можуть зв'язувати
КААдДО1 з високою афінністю. Наприклад, згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло може зв'язувати КААСІ1 з Ко, яка дорівнює або менше приблизно 105 М, такій як 1х105, 107, 108, 109, 1079, 10-11, 1072, 1073 або 10714,
КААСІ1 (асоційований з нирками антиген 1) експресується в яєчках і нирках і, на більше низьких рівнях, у сечовому міхурі та печінці. Він експресується більшою кількістю пухлин різного гістологічного походження, включаючи меланоми, саркоми та колоректальні карциноми. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу поліпептид КААСІ1 відповідає номеру доступу в
Сепрапк ААБ23613, варіант Мо ДАЕ23613.1. Відповідно до одного варіанта реалізації даного винаходу нуклеїнова кислота, що кодує поліпептид КААС1, відповідає номеру доступу в
Сепрапк АЕ181722, варіант Мо АЕ181722.1. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу поліпептид КААСІ містить послідовність 5ЕО ІЮ МО. 112.
У даній заявці термін "зв'язує мезотелін" означає, що антитіло зв'язує мезотелін з більше високою афінністю, ніж неспецифічний партнер, такий як бичачий сироватковий альбумін (БСА, номер доступу в сепрапк САА76847, варіант Мо САА7б6847.1 (1:3336842, дата відновлення запису: 7 січня 2011 р., 14 год. 30 хв). Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло зв'язує мезотелін з константою асоціації (Ка), яка щонайменше в 2, 3,4,5,10, 20, 50, 100, 200, 500, 1000, 2000, 5000, 102, 105 або 105 разів вище, ніж константа асоціації антитіла для
БСА, при вимірюванні у фізіологічних умовах. Антитіла згідно з даним винаходом можуть зв'язувати мезотелін з високою афінністю. Наприклад, згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу антитіло може зв'язувати мезотелін з Ко, яка дорівнює або менше приблизно 106 М, такій як 1х106, 107, 1058, 109, 1079, 1071, 1072, 1073 або 10714,
Мезотелін являє собою білок масою 40 кДа, присутній на нормальних мезотеліальних
Зо клітинах. Ген мезотеліну кодує білок-попередник, який зазнає процесингу з утворенням мезотеліну, який приєднаний до клітинної мембрани за допомогою глікофосфатидилінозитольного зв'язку, а також відщепленого фрагмента масою 31 кдДа, називаного фактором, що стимулює мегакаріоцити (МРЕ). Було висловлено припущення, що мезотелін може брати участь в адгезії клітин. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу поліпептид мезотеліну відповідає номеру доступу в сепрапк ААС50348, варіант Мо
ААС50348.1, дата відновлення запису: 23 червня 2010 р., 9 год. 12 хв. Відповідно до одного варіанта реалізації даного винаходу нуклеїнова кислота, що кодує поліпептид мезотеліну, відповідає номеру доступу в зепрапк 040434, варіант Мо Ш40434.1, дата відновлення запису: 23 червня 2010 р., 9 год. 12 хв. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу поліпептид мезотеліну містить послідовність 5ЕО І МО. 245. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу поліпептид мезотеліну містить послідовність ЗЕО ІО МО. 246. "Фрагменти антитіла" містять частину повнорозмірного антитіла, зазвичай його антигензв'язуючу або варіабельну область. Приклади фрагментів антитіла включають фрагменти Раб, Рар', (аб) і 5сЕм; діатіла; лінійні антитіла; фрагменти, вироблювані бібліотекою експресії Раб, антиїдіотипові (анти-І4) антитіла, СОМ (область, що визначає комплементарність) й епітопзв'язуючі фрагменти будь-якого 3 вищевказаних, які імуноспецифічно зв'язуються з антигенами ракових клітин, вірусними антигенами або мікробними антигенами, одноланцюгові молекули антитіл; і поліспецифічні антитіла, утворені з фрагментів антитіл.
У даній заявці термін "моноклональне антитіло" відноситься до антитіла, отриманого з популяції по суті гомогенних антитіл, тобто окремі антитіла, що становлять популяцію, є ідентичними, за винятком можливих природних мутацій, які можуть бути присутніми в незначних кількостях. Моноклональні антитіла є високоспецифічними та спрямовані проти одного антигенного сайту. Крім того, на відміну від препаратів поліклональних антитіл, які включають різні антитіла, спрямовані проти різних детермінант (епітопів), кожне моноклональне антитіло спрямоване проти однієї детермінанти на антигені. На додаток до їх специфічності перевага моноклональних антитіл полягає в тому, що їх можна синтезувати без забруднення іншими антитілами. Обставина "моноклональний" вказує на характеристику антитіла, як отриманого з по суті гомогенної популяції антитіл, і воно не повинно бути витлумачене як потребуюче 60 одержання антитіла яким-небудь конкретним способом. Наприклад, моноклональні антитіла для застосування відповідно до даного винаходу можуть бути отримані методом гібридоми, вперше описаним Койіег еї аї. (1975) Маїшге 256:495, або можуть бути отримані методами рекомбінантної ДНК (див. 05 4816567). Моноклональні антитіла також можуть бути виділені з фагових бібліотек антитіл із застосуванням методик, описаних в Сіаскзхоп еї аї. (1991) Маїшге, 352:624-628; МагкКкз вї аї. (1991) 9. Мої. Віої!., 222:581-597, або з трансгенних мишей, що несуть повністю людську імуноглобулінову систему (І опбрегу (2008) Сит. Оріпіоп 20(4):450-459).
Моноклональні антитіла у даній заявці, зокрема, включають "химерні" антитіла, в яких частина важкого та/або легкого ланцюгів ідентична або гомологічна відповідним послідовностям в антитілах, що походять з конкретного виду або належать до конкретного класу або підкласу антитіл, тоді як інша частина ланцюга(ів) ідентична або гомологічна відповідним послідовностям в антитілах, що походять з іншого виду або належать до іншого класу або підкласу антитіл, а також фрагментів таких антитіл, за умови, що вони проявляють цільову біологічну активність (5 4816567; і Моїтізоп еї аї. (1984) Ргос. Май). Асай. 5сі. ОБА, 81:6851-6855). Химерні антитіла включають "приматизовані" антитіла, що містять антигензв'язуючі послідовності варіабельного домену, що походять з примату, відмінного від людини (наприклад, мавпи Старого світу або людиноподібної мавпи), і послідовності константних областей людини.
У даній заявці "інтактне антитіло" являє собою антитіло, що містить домени МІ. і УН, а також константний домен легкого ланцюга (СІ) та константні домени важкого ланцюга, СНІ, СН? і
СНЗ. Константні домени можуть являти собою константні домени з нативною послідовністю (наприклад, константні домени людини з нативною послідовністю) або з варіантом їх амінокислотної послідовності. Інтактне антитіло може мати одну або більше "ефекторних функцій", які відносяться до тих видів біологічної активності, які пов'язані з областю Ес (областю
Ес з нативною послідовністю або областю Ес з варіантом амінокислотної послідовності) антитіла. Приклади ефекторних функцій антитіла включають зв'язування Са; комплементзалежну цитотоксичність; зв'язування з рецептором Ес; антитілозалежну клітинну цитотоксичність (АЗКЦ); фагоцитоз; і пригнічення рецепторів клітинної поверхні, таких як В- клітинний рецептор і ВСЕ.
Залежно від амінокислотної послідовності константного домену їх важких ланцюгів інтактні антитіла можна віднести до різних "класів". Існує п'ять основних класів інтактних антитіл: ІдА, 90, ЮЕ, да і ІОМ, і деякі з них можуть бути далі розділені на "підкласи" (ізотипи), наприклад, яса, дс2, Ідс3, Ід4с4, ІдА і ІдА2. Константні домени важкого ланцюга, які відповідають різним класам антитіл, називаються а, б, є, у і М, відповідно. Структури субодиниць та тривимірні конфігурації різних класів імуноглобулінів добре відомі.
Модифікація антитіл
Антитіла, розкриті у даній заявці, можуть бути модифіковані. Наприклад, для того, щоб зробити їх менше імуногенними для суб'єкта-людини. Це можна здійснити із застосуванням будь-якої з ряду методик, відомих фахівцю в даній області техніки. Деякі з цих методик більше докладно описані нижче.
Гуманізація
Методики зниження імуногенності антитіла, що не відноситься до людини, або фрагмента антитіла іп мімо включають методики, названі "гуманізація". "Гуманізоване антитіло" відноситься до поліпептиду, що містить щонайменше частину модифікованої варіабельної області антитіла людини, причому частина варіабельної області, переважно частина по суті менша, ніж інтактний варіабельний домен людини, була замінена відповідною послідовністю з виду, відмінного від людини, і при цьому модифікована варіабельна область з'єднана з щонайменше іншою частиною іншого білка, переважно з константною областю антитіла людини. Вираз "гуманізовані антитіла" включає антитіла людини, в яких один або більше залишків амінокислот області, що визначає комплементарність (СОК"), й/або один або більше залишків амінокислот каркасної ділянки ("ЕМ/" або "ЕК") замінені залишками амінокислот з аналогічних сайтів в антитілах гризунів або інших видів, відмінних від людини. Вираження "гуманізоване антитіло" також включає варіант амінокислотної послідовності імуноглобуліну або її фрагмент, який містить ЕК, що містить по суті амінокислотну послідовність імуноглобуліну людини, і СОК, що містить по суті амінокислотну послідовність імуноглобуліну, що не відноситься до людини. "Гуманізовані" форми антитіл, що не відносяться до людини (наприклад, мишачих), являють собою химерні антитіла, які містять мінімальну послідовність, що походить з імуноглобуліну, що не відноситься до людини. Або, з іншого боку, гуманізоване антитіло являє собою антитіло людини, яке також містить вибіркові послідовності антитіл, що не відносяться до людини (наприклад, мишачих), замість послідовностей людини. Гуманізоване антитіло може включати бо консервативні заміни амінокислот або неприродні залишки з того самого або різних видів, які суттєво не змінюють його зв'язуючу та/або біологічну активність. Такі антитіла являють собою химерні антитіла, які містять мінімальну послідовність, що походить з імуноглобулінів, що не відносяться до людини.
Існує ряд методик гуманізації включаючи "щеплення СОМ", "направлений відбір", "деімунізацію", "зміну поверхні" (також відоме як "рекомбінація поверхневих залишків"), "складені антитіла", "оптимізацію вмісту ділянок послідовності людини" і перестановку каркасних ділянок.
Щеплення СОК
У цій методиці гуманізовані антитіла являють собою імуноглобуліни людини (реципієнтне антитіло), в яких залишки з області, що визначає комплементарність (СОК), реципієнтного антитіла замінені залишками СОК з виду, відмінного від людини (донорне антитіло), такого як миша, пацюк, верблюд, велика рогата худоба, коза або кролик, що має цільові властивості (по суті СОК, що не відноситься до людини, "прищеплюють" на каркас людини). У деяких випадках залишки каркасної ділянки (ЕК) імуноглобуліну людини заміняють відповідними залишками, що не відноситься до людини (це може відбуватися, наприклад, якщо конкретний залишок ЕК значно впливає на зв'язування антигена).
Крім того, гуманізовані антитіла можуть містити залишки, які не виявлені ні в реципієнтному антитілі, ні в імпортованих СОК або каркасних послідовностях. Ці модифікації вносять для подальшого поліпшення та максимального підвищення ефективності антитіл. Таким чином, в цілому гуманізоване антитіло буде містити всі з щонайменше одного та в одному аспекті двох варіабельних доменів, у яких всі або всі з гіперваріабельних петель відповідають таким в імуноглобуліні, що не відноситься до людини, і всі або по суті всі з ділянок ЕК являють собою послідовності імуноглобуліну людини. Гуманізоване антитіло необов'язково також буде містити щонайменше частину константної області імуноглобуліну (Ес) або таку з імуноглобуліну людини.
Направлений відбір
Спосіб полягає в комбінуванні домену Мн або Мі конкретного антитіла, що не відноситься до людини, специфічного для конкретного епітопу, з бібліотекою Мн або Мі людини, і конкретні М- домени людини відбирають проти антигена, що представляє інтерес. Відібраний МН людини потім комбінують з бібліотекою Мі. для створення повністю людської комбінації МНхХМІ.. Спосіб
Зо описаний в Маїиге ВіоїесппоІоду (М.У.) 12, (1994) 899-903.
Складені антитіла
В цьому способі два або більше сегментів амінокислотної послідовності з антитіла людини комбінують всередині готової молекули антитіла. Їх конструюють шляхом комбінування декількох сегментів послідовностей МН і Мі людини в комбінаціях, які обмежують або дозволяють уникнути Т-клітинних епітопів людини в М-областях готового складеного антитіла.
При необхідності Т-клітинні епітопи обмежують або їх усувають шляхом заміни сегментів М- області, що вносять вклад або кодують Т-клітинний епітоп, альтернативними сегментами, які дозволяють уникнути Т-клітинних епітопів. Цей спосіб описаний в 05 2008/0206239 А1.
Деїмунізація
Цей спосіб включає видалення Т-клітинних епітопів людини (або іншого другого виду) з М- областей терапевтичного антитіла (або іншої молекули). Послідовність М-області терапевтичних антитіл аналізують на присутність мотивів, що зв'язують ГКГС класу ІІ, наприклад, шляхом порівняння з базами даних мотивів, що зв'язують ГКГС (такими як база даних "мотивів", розміщена на сайті м/умлу.мепі.еди.ац). Згідно з іншим варіантом мотиви, що зв'язують ГКГС класу Ії, можуть бути ідентифіковані з застосуванням обчислювальних способів "протягування", таких як способи, розроблені Айиміа еї аї. (У. Мої. ВіоІ. 249 244-250 (1995)); у цих способах послідовні пептиди, що перекриваються з послідовностей М-області тестують для визначення їх енергії зв'язування з білками ГКГС класу ІІ. Ці дані потім можуть бути об'єднані з інформацією про інші ознаки послідовності, які відносяться до успішно презентованих пептидів, таких як амфіпатичність, мотиви Ротбарда та сайти розщеплення для катепсину В й інших ферментів процесингу.
Після виявлення потенційних Т-клітинних епітопів другого виду (наприклад, людини) їх усувають шляхом зміни однієї або більше амінокислот. Модифіковані амінокислоти зазвичай перебувають всередині самого Т-клітинного епітопу, але також можуть бути суміжними з епітопом з погляду первинної або вторинної структури білка (та, отже, можуть не бути суміжними у первинній структурі). Найчастіше зміна відбувається шляхом заміни, але у деяких випадках більше підходящим буде додавання або видалення амінокислоти.
Всі зміни можна здійснювати за допомогою технології рекомбінантних ДНК так, що готова молекула може бути отримана шляхом експресії в рекомбінантному хазяїні з застосуванням добре відомих способів, таких як сайт-направлений мутагенез. Однак також можливе застосування білкової хімії або будь-яких інших засобів молекулярної зміни.
Зміна поверхні
Цей спосіб включає: (а) визначення конформаційної структури варіабельної області антитіла (або його фрагмента), що не відноситься до людини (наприклад, гризуна), шляхом побудови тривимірної моделі варіабельної області антитіла, що не відноситься до людини; (б) одержання вирівнювань послідовностей із застосуванням розподілів відносної доступності з рентгенівських кристалографічних структур достатньої кількості варіабельних областей важкого та легкого ланцюгів антитіла, що не відноситься до людини, й антитіла людини, щоб одержати групу положень каркаса важкого та легкого ланцюгів, де положення вирівнювання ідентичні в 98 95 від достатньої кількості важких і легких ланцюгів антитіла, що не відноситься до людини; (с) визначення для антитіла, що не відноситься до людини, яке підлягає гуманізації, групи амінокислотних залишків, експонованих на поверхні важкого та легкого ланцюгів, із застосуванням групи положень каркаса, отриманої на етапі (Б); (4) виявлення в амінокислотних послідовностях антитіла людини групи амінокислотних залишків, експонованих на поверхні важкого та легкого ланцюгів, яка найбільше ідентична групі амінокислотних залишків, експонованих на поверхні, визначеної на етапі (с), при цьому важкий та легкий ланцюги з антитіла людини спарені або не спарені природним чином; (є) заміну групи амінокислотних залишків, експонованих на поверхні важкого та легкого ланцюгів, визначеної на етапі (с), в амінокислотній послідовності антитіла, що не відноситься до людини, яке підлягає гуманізації, групою амінокислотних залишків, експонованих на поверхні важкого та легкого ланцюгів, виявленої на етапі (а); (д побудова тривимірної моделі варіабельної області антитіла, що не відноситься до людини, отриманої в результаті заміни, зазначеної на етапі (є); (4) виявлення шляхом порівняння тривимірних моделей, побудованих на етапах (а) і (0, будь-яких амінокислотних залишків з груп, виявлених на етапах (с) або (а), які перебувають в межах 5 Ангстрем від будь-якого атома будь-якого залишку з областей, що визначають комплементарність, антитіла, що не відноситься до людини, яке повинно бути гуманізовано; та (п) заміну будь-яких залишків людини, виявлених на етапі (9), вихідним амінокислотним залишком, що не відноситься до людини, щоб визначити гуманізуючу групу амінокислотних залишків, експонованих на поверхні, антитіла, що не відноситься до людини; за умови, що етап (а) не обов'язково повинен проводитися першим, а повинен бути проведений перед етапом (9).
Супергуманізація
Спосіб дозволяє порівнювати послідовність, що не відноситься до людини, з функціональним репертуаром генів зародкової лінії людини. Відбирають гени людини, що кодують канонічні структури, ідентичні або тісно пов'язані з послідовностями, що не відносяться до людини. Відібрані гени людини з найвищою гомологією в межах СОК вибирають в якості донорів ЕК. Нарешті, СОК, що не відноситься до людини, прищеплюють на ці ЕК людини. Цей спосіб описаний у патенті УМО 2005/079479 А2.
Оптимізація складу ділянок послідовності людини
Цей спосіб дозволяє зрівняти послідовність, що не є людською (наприклад, мишачу), з репертуаром генів зародкових ліній людини, і відмінності оцінюють як вміст ділянок послідовності людини (НЗС), який кількісно визначає послідовність на рівні потенційних ГКГС/1- клітинних епітопів. Послідовність-мішень потім гуманізують шляхом максимального збільшення її НС замість застосування заходу загальної ідентичності для одержання множини різноманітних гуманізованих варіантів (описано в МоїІесшіаг Іпптипоїоду, 44, (2007) 1986-1998).
Перестановка каркасних ділянок
СОК антитіла, що не відноситься до людини, гібридизують в межах рамки зчитування з пулами кКДНК, що охоплюють всі відомі гени каркасних ділянок важкого та легкого ланцюгів зародкової лінії людини. Потім гуманізовані антитіла відбирають, наприклад, шляхом пенінгу бібліотеки фагового дисплея антитіл. Це описано в Меїпоаз 36, 43-60 (2005).
Модифікація антитіла із застосуванням азиду
Антитіло може бути отримане для кон'югації з лінкером лікарського засобу за допомогою трьохетапного способу: (1) Експресія антитіла (АБ), що несе центральний М-глікан, у підходящій системі експресії (наприклад, клітинній лінії СНО). Центральний М-глікан, як правило, кон'юЮгований з А5п297 важкого ланцюга відповідно до системи нумерації Кабас
(2) Обрізка всіх гліканових ізоформ (складного, гібридного, з високим вмістом манози) ендоглікозидазою для вивільнення центрального СісМАСс; і (3) Ферментативний перенос до центрального СІСМАс залишку М-ацетилгалактози, що несе азидну групу, для кон'югації з лінкером лікарського засобу.
Огляд вищезгаданого способу викладений у мап Сееїі, К., еї аІ., Віосопідасе Спетівігу, 2015, 26, 2233-2242; БО: 10.1021/ас5.ріосоп|іспет.5рО0224. В якості альтернативи можна використовувати однореакторний спосіб - див. приклади.
Варіанти реалізації
Хх
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу Х являє собою одинарний зв'язок.
Згідно з іншими варіантами реалізації даного винаходу Х являє собою -СНе-.
Згідно з додатковими варіантами реалізації даного винаходу Х являє собою -С2На-.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу п становить від 1 до 4.
Згідно з деякими з цих варіантів реалізації даного винаходу п дорівнює 1.
Згідно з іншими з цих варіантів реалізації даного винаходу п дорівнює 2.
Згідно з іншими з цих варіантів реалізації даного винаходу п дорівнює 4. д'
Відповідно до одного варіанта реалізації даного винаходу К" являє собою метил.
Згідно з іншим варіантом реалізації даного винаходу К" являє собою феніл. в
Якщо між С2 і СЗ присутній подвійний зв'язок, К2? вибраний з: (а) С5-о арильної групи, необов'язково заміщеної одним або більше замісниками, вибраними з групи, що включає: галоген, нітро, ціано, простий ефір, С:-7 алкіл, Сз-7 гетероцикліл і біс-оксі-
С.і-з алкілен; (5) Сі-5 насиченого аліфатичного алкілу; (с) Сзє насиченого циклоалкілу; в
КА в У! 21 221 раг3 У! П (а) ,де кожний з К-", ІД22 ії КЗ незалежно вибраний з Н, Сі-з насиченого алкілу,
Сг-з алкенілу, Сг-з алкінілу та циклопропілу, причому загальне число атомів вуглецю в групі К2 становить не більше 5; ось
КА АХ ою
Зо (є) ,де один із К2за і 25 являє собою Н, а інший вибраний з: фенілу, причому феніл необов'язково заміщений групою, вибраною з галогену, метилу, метокси; піридилу; та тіофенілу; і тя що що що шо (5 ,де К2" вибраний з: Н; С.:-з насиченого алкілу; Со-з алкенілу; Сг-з алкінілу; циклопропілу; фенілу, причому феніл необов'язково заміщений групою, вибраною з галогену, метилу, метокси; піридилу; та тіофенілу.
Якщо В: являє собою С5-о арильну групу, то вона може являти собою С5-7 арильну групу. С5- 7 арильна група може являти собою фенільну групу або С5; гетероарильну групу, наприклад, фураніл, тіофеніл і піридил. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу В? переважно являє собою феніл. Згідно з іншими варіантами реалізації даного винаходу КК? переважно являє собою тіофеніл, наприклад, тіофен-2-іл і тіофен-З-іл.
Якщо КЗ: являє собою С5-іо арильну групу, то вона може являти собою Св-іо арил, наприклад, хінолінільну або ізохінолінільну групу. Хінолінільна або ізохінолінільна група може бути пов'язана з центральною частиною ПЕД за рахунок будь-якого доступного положення кільця.
Наприклад, хінолініл може являти собою хінолін-2-іл, хінолін-3-іл, хінолін-4-іл, хінолін-5-іл, хінолін-б-іл, хінолін-7-іл і хінолін-в-іл. З них переважними можуть бути хінолін-З-іл і хінолін-б-іл.
Ізохінолініл може являти собою |ізохінолін-1-іл, ізохінолін-З-іл, ізохінолін-4-іл, ізохінолін-5-іл, ізохінолін-6б-іл, ізохінолін-7-іл й ізохінолін-8-іл. З них переважними можуть бути ізохінолін-З-іл й ізохінолін-б-іл.
Якщо В? являє собою Св5-ло арильну групу, то вона може нести будь-яку кількість груп- замісників. Вона переважно несе від 1 до З груп-замісників, причому 71 ії 2 є більше переважними, а найбільше переважними є однократно заміщені групи. Замісники можуть перебувати у будь-якому положенні.
Якщо В? являє собою С5-7 арильну групу, то одиночний замісник переважно перебуває на кільцевому атомі, який не є суміжним зі зв'язком з іншою частиною сполуки, тобто переважно це
В або у стосовно іншої частини сполуки. Отже, якщо С5-7 арильна група являє собою феніл, замісник переважно перебуває в мета- або пара-положеннях і більше переважно перебуває у пара-положенні.
Якщо КК? являє собою Св-о арильну групу, наприклад, хінолініл або ізохінолініл, то вона може нести будь-яку кількість замісників у будь-якому положенні хінолінового або ізохінолінового кілець. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу вона несе один, два або три замісники, і вони можуть перебувати або на проксимальному та дистальному кільцях, або на обох (якщо присутні більше ніж один замісник).
Замісники К2, якщо К2 являє собою Св5-іо арильну групу
Якщо замісник на К-, коли К? являє собою Св-о арильну групу, являє собою галоген, то це переважно Е або СІ, більше переважно СІ.
Якщо замісник на Кг, коли К2 являє собою Св-іо арильну групу, являє собою простий ефір, то він може, згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу, являти собою алкоксигрупу, наприклад, С:і-7 алкоксигрупу (наприклад, метокси, етокси), або він може, згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу, являти собою С5-7 арилоксигрупу (наприклад, фенокси, піридилокси, фуранілокси). Сама алкоксигрупа може бути додатково заміщена, наприклад, аміногрупою (наприклад, диметиламіно).
Якщо замісник на К-, коли К? являє собою Св-іо арильну групу, являє собою Сі-7 алкіл, то він переважно може являти собою Сі. алкільну групу (наприклад, метил, етил, пропіл, бутил).
Якщо замісник на К?, коли К? являє собою Св5ло арильну групу, являє собою Сз.7 гетероцикліл, то він може, згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу, являти собою Св азотвмісну гетероциклільну групу, наприклад, морфоліно, тіоморфоліно, піперидиніл, піперазиніл. Ці групи можуть бути пов'язані з іншою частиною фрагмента ПЕД за рахунок атома азоту. Ці групи можуть бути додатково заміщені, наприклад, С:-4 алкільними групами. Якщо Св азотвмісна гетероциклільна група являє собою піперазиніл, то зазначений додатковий замісник
Зо може перебувати на другому кільцевому атомі азоту.
Якщо замісник на К-, коли В? являє собою Св5-о арильну групу, являє собою біс-оксі-С1-з алкілен, то це переважно біс-оксиметилен або біс-оксіетилен.
Якщо замісник на К-, коли К2? являє собою Св-о арильну групу, являє собою складний ефір, то це переважно складний метиловий ефір або складний етиловий ефір.
Особливо переважні замісники, коли К2г являє собою Св5-ло арильну групу, включають метокси, етокси, фтор, хлор, ціано, біс-оксиметилен, метилпіперазиніл, морфоліно та метилтіофеніл. Іншими особливо переважними замісниками для К2 є диметиламінопропілокси та карбокси.
Особливо переважні заміщені групи БК, коли БК? являє собою С5-ло арильну групу, включають, але не обмежуються ними, 4-метоксифеніл, З-метоксифеніл, 4-етоксифеніл, 3- етоксифеніл, 4-фторфеніл, 4-хлорфеніл, 3,4-бісоксиметиленфеніл, 4-метилтіофеніл, 4- ціанофеніл, 4-феноксифеніл, хінолін-З-іл і хінолін-6-іл, ізохінолін-З3-іл й іхохінолін-б-іл, 2-тієніл, 2- фураніл, метоксинафтил і нафтил. Іншою можливою заміщеною групою КЗ? є 4-нітрофеніл.
Групи К-, що представляють особливий інтерес, включають 4-(4-метилпіперазин-1-іл)феніл і 3,4-бісоксиметиленфеніл.
Якщо Кг являє собою С.і-5 насичений аліфатичний алкіл, то він може являти собою метил, етил, пропіл, бутил або пентил. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу він може являти собою метил, етил або пропіл (н-пентил або ізопропіл). Згідно з деякими з цих варіантів реалізації він може являти собою метил. Згідно з іншими варіантами реалізації даного винаходу він може являти собою бутил або пентил, який може бути лінійним або розгалуженим.
Якщо К2? являє собою Сз-є насичений циклоалкіл, то він може являти собою циклопропіл, циклобутил, циклопентил або циклогексил. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу він може являти собою циклопропіл. в?
КА в . . .
Якщо В? являє собою ,то кожний з ВК", Д2 і КЗ незалежно вибраний з Н, Сі-з насиченого алкілу, Сг-з алкенілу, Сг-з алкінілу та циклопропілу, причому загальне число атомів вуглецю в групі К2 становить не більше 5. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу загальне число атомів вуглецю в групі К2 становить не більше 4 або не більше 3.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу один із К2", ЩВг2 і КЗ являє собою Н, при цьому дві інші групи вибрані з Н, Сі-з насиченого алкілу, Соз алкенілу, Сг-з алкінілу та циклопропілу.
Згідно з іншими варіантами реалізації даного винаходу два з ВК", Вг2 і В являють собою Н, при цьому інша група вибрана з Н, Сі-з насиченого алкілу, Сгоз алкенілу, Сг-з алкінілу та циклопропілу.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу групи, які не є Н, вибрані з метилу й етилу. У деяких з цих варіантів реалізації групи, які не є Н, являють собою метил.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу К-' являє собою Н.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу К-2 являє собою Н.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу КЗ являє собою Н.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу К- і К22 являють собою Н.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу К-' і КЗ являють собою Н.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу Кг і КЗ являють собою Н.
Кор,
Група К-, що представляє особливий інтерес, являє собою: . доб
КА ет
Якщо ЕК? являє собою , один із К2за і Вб являє собою Н, а інший вибраний з: фенілу, причому феніл необов'язково заміщений групою, вибраною з галогену, метилу, метокси; піридилу; та тіофенілу. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу група, яка не є
Н, являє собою необов'язково заміщений феніл. Якщо необов'язковий замісник фенілу являє собою галоген, то він переважно являє собою фтор. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу фенільна група є незаміщеною. а м
Якщо К? являє собою КО, то Ве вибраний з: Н; Сі-з насиченого алкілу; Сг2з алкенілу; Сг-з алкінілу; циклопропілу; фенілу, причому феніл необов'язково заміщений групою, вибраною з галогену, метилу, метокси; піридилу; та тіофенілу. Якщо необов'язковий замісник фенілу являє собою галоген, то він переважно являє собою фтор. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу фенільна група є незаміщеною.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу К-" вибраний з Н, метилу, етилу, етенілу й етинілу. Згідно з деякими з цих варіантів реалізації К2" вибраний з Н і метилу.
Якщо між С2 і СЗ присутній одинарний зв'язок, то
Кит десь . . .
Ко) В2 являє собою , де В2ба | 26» незалежно вибрані з Н, Е, С:.4 насиченого алкілу,
Сг-з алкенілу, причому алкільна й алкенільна групи необов'язково заміщені групою, вибраною з
Сі.« алкіламідо й С.-4 алкілового складного ефіру; або, якщо один із К2ба і Кг являє собою Н, інший вибраний з нітрилу й С.-4 алкілового складного ефіру.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу переважно К2ба і Веб обидва являють собою Н.
Згідно з іншими варіантами реалізації даного винаходу переважно К2ба і Вб обидва являють собою метил.
Згідно з іншими варіантами реалізації даного винаходу переважно один із К2ба і 265 являє собою Н, а інший вибраний з С:і-4 насиченого алкілу, Соз алкенілу, причому алкільна й алкенільна групи необов'язково заміщені. У цих додаткових варіантах реалізації ще більше переважна група, яка не є Н, вибрана з метилу й етилу.
Вд!'2
Вищевказані переваги для КЗ: рівною мірою застосовні до Кг.
Відповідно до одного варіанта реалізації даного винаходу ОЇ. являє собою
Ен і Е і» о, ,0 но 7 Н
Е хе мив очаної н н І Н в) у в) в) (9) ва он
Но о. ит то М Н рей 07 то я -й в) в)
Навантаження лікарським засобом
Навантаження лікарським засобом являє собою середню кількість лікарських засобів ПБД на антитіло, наприклад, антитіло.
Середня кількість лікарських засобів на антитіло у препаратах АОС з реакцій кон'югації може бути охарактеризоване звичайними засобами, такими як УФ, ВЕРХ зі зворотньою фазою, НІС, мас-спектроскопія, ІФА й електрофорез. Також може бути визначений кількісний розподіл АОС у відношенні р. За допомогою ІФА можна визначити усереднене значення р у конкретному препараті АОС |Натрьіеїй єї аї!. (2004) Сііп. Сапсег Вев. 10:7063-7070; Запаегзоп еї аї!. (2005) Сііп.
Сапсег Вез. 11:843-852)|. Однак розподіл значень р (лікарський засіб) не помітний на основі зв'язування антитіло-антиген і через обмеження виявлення ІФА. Крім того, аналіз методом ІФА для виявлення кон'югатів антитіло-лікарський засіб не дозволяє визначити, де фрагменти лікарського засобу приєднані до антитіла, наприклад, фрагменти важкого ланцюга або легкого ланцюга, або конкретні амінокислотні залишки. У деяких випадках поділ, очищення та характеристику гомогенного АЮС, де р являє собою деяке значення з АВС з іншими показниками навантаження лікарським засобом, можна здійснювати за допомогою таких засобів, як ВЕРХ зі зворотньою фазою або електрофорез. Такі методики також застосовні до інших типів кон'югатів.
Для кон'югатів антитіло-лікарський засіб згідно з даним винаходом р обмежене кількістю сайтів приєднання на антитілі, тобто кількістю азидних груп. Наприклад, антитіло може мати тільки одну або дві азидні групи, до яких може бути приєднаний лінкер лікарського засобу.
Як правило, під час реакції кон'югації з антитілом кон'югується менше, ніж теоретичний максимум, кількість фрагментів лікарського засобу. Навантаження (співвідношення лікарський засіб/антитіло) АЮС можна контролювати декількома різними способами, включаючи: (Її) обмеження молярного надлишку інтермедіата лікарський засіб-лінкер, (0О-Ї) або лінкерного реагенту стосовно антитіла, й (і) обмеження часу реакції кон'югації або температури.
Якщо з інтермедіатом лікарський засіб-лінкер або лінкерним реагентом, а потім фрагментом лікарського засобу, реагує більше ніж одна нуклеофільна або електрофільна група антитіла, то
Зо отриманий продукт являє собою суміш кон'югатів антитіло-лікарський засіб з розподілом фрагментів лікарського засобу, приєднаних до антитіла, наприклад, 1, 2, З і т. д. Методи рідинної хроматографії, такі як полімерна обернена фаза (РІ КР) та гідрофобна взаємодія (НІС), можуть дозволити розділити сполуки в суміші за величиною навантаження лікарським засобом.
Можуть бути виділені препарати АОС з одним значенням навантаження лікарським засобом (р), однак ці АОС з одним значенням навантаження все ще можуть являти собою гетерогенні суміші, оскільки фрагменти лікарського засобу можуть бути приєднані за рахунок лінкера в різних місцях антитіла.
Таким чином, композиції кон'югата антитіло-лікарський засіб згідно з даним винаходом включають суміші кон'югатів антитіло-лікарський засіб, у яких антитіло містить один або більше фрагментів лікарського засобу ПБД і в яких фрагменти лікарського засобу можуть бути приєднані до антитіла у різних амінокислотних залишків.
Відповідно до одного варіанта реалізації даного винаходу середня кількість димерних піролобензодіазепінових груп на антитіло перебуває в діапазоні від 1 до 8. Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу діапазон вибраний з 1-4, 1-4, 2-4 і 1-3.
Згідно з деякими варіантами реалізації даного винаходу на антитіло доводиться одна або дві димерні піролобензодіазепінові групи.
Включення інших форм
Якщо не зазначено інше, у вищезгадане включені добре відомі іонні, сольові, сольватні та захищені форми цих замісників. Наприклад, посилання на карбонову кислоту (СООН) також включає аніонну (карбоксилатну) форму (-СОО-), її сіль або сольват, а також стандартні захищені форми. Аналогічним чином, посилання на аміногрупу включає протоновану форму (-МУНЕА' ВУ), сіль або сольват аміногрупи, наприклад, гідрохлоридну сіль, а також звичайні захищені форми аміногрупи. Аналогічним чином, посилання на гідроксильну групу також включає аніонну форму (-О-), її сіль або сольват, а також звичайні захищені форми.
Солі
Зручним або бажаним може бути одержання, очищення й/або обробка відповідної солі активної сполуки, наприклад, фармацевтично прийнятної солі. Приклади фармацевтично прийнятних солей обговорюються у Вегоде, еї аї., У. Рпапт. зЗсі., 66, 1-19 (1977).
Наприклад, якщо сполука є аніонною або містить функціональну групу, яка може бути аніонною (наприклад, -СООН може являти собою -С00-), тоді сіль може бути утворена з підходящим катіоном. Приклади підходящих неорганічних катіонів включають, але не обмежуються ними, іони лужних металів, такі як Ма: і КУ, катіони лужноземельних металів, такі як Саг: і Мд2», й інші катіони, такі як Аз. Приклади підходящих органічних катіонів включають, але не обмежуються ними, іон амонію (тобто МН.) та заміщені іони амонію (наприклад, МНзВ",
МНгВ::, МНАз", МА). Приклади деяких підходящих заміщених іонів амонію включають ті, які отримані 3: етиламіну, діетиламіну, дициклогексиламіну, триетиламіну, бутиламіну, етилендіаміну, етаноламіну, діетаноламіну, піперазину, бензиламіну, фенілбензиламіну, холіну, меглуміну та трометаміну, а також амінокислот, таких як лізин й аргінін. Приклад звичайного іона четвертинного амонію являє собою М(СНз)г.
Якщо сполука є катіонною або містить функціональну групу, яка може бути катіонною
Зо (наприклад, -МН? може являти собою -МНз"), тоді сіль може бути утворена з підходящим аніоном. Приклади підходящих неорганічних аніонів включають, але не обмежуються ними, ті, які отримані з наступних неорганічних кислот: хлористоводневої, бромистоводневої, йодистоводневої, сірчаної, сірчистої, азотної, азотистої, фосфорної та фосфористої.
Приклади підходящих органічних аніонів включають, але не обмежуються ними, ті, які отримані з наступних органічних кислот: 2-ацетоксибензойної, оцтової, аскорбінової, аспарагінової, бензойної, камфорсульфонової, коричної, лимонної, едетичної, етандисульфонової, етансульфонової, фумарової, глюкогептонової, глюконової, глутамінової, гліколевої, гідроксималеїнової, гідроксинафталінкарбонової, ізетіонової, молочної, лактобіонової, лауринової, малеїнової, яблучної, метансульфонової, муцинової, олеїнової, щавлевої, пальмітинової, памоєвої, пантотенової, фенілоцтової, фенілсульфонової, пропіонової, піровиноградної, саліцилової, стеаринової, бурштинової, сульфанілової, винної, толуолсульфонової, трифтороцтової кислоти та валеріанової кислоти. Приклади підходящих полімерних органічних аніонів включають, але не обмежуються ними, ті, які отримані з наступних полімерних кислот: дубильної кислоти, карбоксиметилцелюлози.
Сольвати
Зручним або бажаним може бути одержання, очищення й/або обробка відповідного сольвату активної сполуки. У даній заявці термін "сольват" використовується в загальноприйнятому змісті для позначення комплексу розчиненої речовини (наприклад, активної сполуки, солі активної сполуки) та розчинника. Якщо розчинник являє собою воду, сольват зручно називати гідратом, наприклад, моногідратом, дигідратом, тригідратом і т. д.
Даний винахід включає сполуки, в яких розчинник приєднаний за рахунок імінного зв'язку фрагмента ПЕД, як проілюстровано нижче, де розчинник являє собою воду або спирт (Е"ОН, де
В" являє собою С алкіл):
ОН он ши ще ОТ 7. Й 7, ; 7, 2 в й М. в? в й М. ві в й М. в: по по о
Ці форми можуть називатися карбіноламінною формою та формою простого карбіноламінного ефіру ПБД (як описано в розділі, що стосується КО вище). Баланс цих рівноваг залежить від умов, у яких перебувають сполуки, а також від структури самого фрагмента.
Ці конкретні сполуки можуть бути виділені у твердій формі, наприклад, за допомогою ліофілізації.
Ізомери
Деякі сполуки згідно з даним винаходом можуть існувати в одній або більше конкретних геометричних, оптичних, енантіомерних, діастеріомерних, епімерних, атропічних, стереоізомерних, таутомерних, конформаційних або аномерних формах, включаючи, але не обмежуючись ними, цис- і транс-форми; Е- і 2-форми; с-, Ї- і г- форми; ендо- й екзоформи; К-, 5- і мезоформи; О- і І -форми; а- і І-форми; (5) і (-)у форми; кето, енол- й енолят-форми; син- й анти- форми; синклінальні й антиклінальні форми; са- і ВД-форми; аксіальні й екваторіальні форми; форми "ванни", "крісла", "твіст", "конверта" та "напів-крісла"; й їх комбінації, далі в сукупності називані "ізомерами" (або "ізомерними формами").
Термін "хіральний" відноситься до молекул, дзеркальні відображення яких не здатні накладатися один на одного, у той час як термін "ахіральний" відноситься до молекул, дзеркальні відображення яких накладаються один на одного.
Термін "стереоіїзомери" відноситься до сполук, які мають ідентичну хімічну будову, але відрізняються відносно розташування атомів або груп у просторі. "Діастереомер" відноситься до стереоїзомера з двома або більше центрами хіральності, молекули якого не є дзеркальним відображенням один одного. Діастереомери мають різні фізичні властивості, наприклад, точки плавлення, точки кипіння, спектральні властивості та реакційну здатність. Суміші діастереомерів можуть розділятися при аналітичних процедурах високого дозволу, таких як електрофорез і хроматографія. "Енантіомери" відносяться до двох стереоізомерів сполуки, які не є накладеними один на одного дзеркальними відображеннями.
У даній заявці стереохімічні визначення та правила, як правило, відповідають 5.Р. Раїкег,
Еа., Мсастгам-НІЇЇ Оісіопагу ої Спетіса! Тептв (1984) Мсатгам-Нії ВоокК Сотрапу, Мем Мої; і Бїїеї,
ЕЕ. апа УМіеп, 5., "ЗІегеоспетівігу ої Огдапіс Сотроцйипав", дойп УМПеу б Бопв5, Іпс., Мем/ Могк, 1994. Сполуки згідно з даним винаходом можуть містити асиметричні або хіральні центри й, отже, існувати в різних стереоїзомерних формах. Передбачено, що всі стереоіїзомерні форми сполук згідно з даним винаходом, включаючи, але не обмежуючись ними, діастереомери, енантіомери й атропоіїзомери, а також їх суміші, такі як рацемічні суміші, складають частину даного винаходу. Багато органічних сполук існують в оптично активних формах, тобто вони мають здатність обертати площину плоскополяризованого світла. При описі оптично активної сполуки префікси О і Ї або К і 5 використовуються для позначення абсолютної конфігурації молекули відносно її хірального(их) центра(ів). Префікси а і І або (кю) ї (-) використовуються для позначення знаку обертання сполукою плоскополяризованого світла, при цьому (-) або означають, що сполука є лівообертальною. Сполука з префіксом (ж) або й є правообертальною.
Для конкретної хімічної структури ці стереоїзомери ідентичні, за винятком того, що вони є дзеркальним відображенням один одного. Конкретний стереоїзомер також може називатися енантіомером, і суміш таких ізомерів часто називають енантіомерною сумішшю. Суміш енантіомерів у співвідношенні 50:50 називається рацемічною сумішшю або рацематом, що може мати місце у тих випадках, коли у хімічній реакції або процесі був відсутній стереовідбір або стереоспецифічність. Терміни "рацемічна суміш" ії "рацемат" відносяться до еквімолярної суміші двох енантіомерних молекул, позбавленої оптичної активності.
Слід зазначити, що за винятком того, що обговорюється нижче для таутомерних форм, навмисно виключених з терміну "ізомери", використовуваного у даній заявці, це структурні (або що відносяться до будови) ізомери (тобто ізомери, які відрізняються за зв'язками між атомами, а не просто за положенням атомів у просторі). Наприклад, посилання на метоксигрупу, -ОСНз, не повинно розглядатися як посилання на її структурний ізомер, гідроксиметильну групу, -СН»ОН. Аналогічним чином, посилання на орто-хлорфеніл не повинно розглядатися як посилання на його структурний ізомер, мета-хлорфеніл. Однак посилання на клас структур цілююм може включати структурно ізомерні форми, що попадають у цей клас (наприклад, С1-7 алкіл включає н-пропіл й ізопропіл; бутил включає н-, ізо-, втор- і трет-бутил; метоксифеніл включає орто-, мета- і пара-метоксифеніл).
Вищезгадане виключення не відноситься до таутомерних форм, наприклад, кето-, енол- й енолят-форм, наприклад, як у наступних таутомерних парах: кето/енол (проілюстрована нижче),
імін/«енамін, амід/іміноспирт, амідин/амідин, нітрозо/оксим, тіокетон/енетіол, М- нітрозо/гідроксіазо та нітро/аци-нітро. т рч
І ре; К юн Н а де, -02-с дит Сто пт сптс
Кч Ж вч щ" ра М кто енОол сенолат
Термін "таутомер" або "таутомерна форма" відноситься до структурних ізомерів з різними енергіями, які здатні до взаємоперетворень через низькоенергетичний бар'єр. Наприклад, протонні таутомери (також відомі як прототропні таутомери) включають взаємоперетворення за рахунок міграції протона, такі як ізомеризація кето-енол й імін-енамін. Валентні таутомери включають взаємоперетворення шляхом перегрупування деяких сполучних електронів.
Слід зазначити, що в термін "ізомер" включені конкретні сполуки з одним або більше ізотопними заміщеннями. Наприклад, Н може бути у будь-якій ізотопній формі, включаючи Н',
Н (0) і НУ (Т); С може бути у будь-якій ізотопній формі, включаючи С", С13 Її С О може бути у будь-якій ізотопній формі, включаючи 05 і О"8; і таке інше.
Приклади ізотопів, які можуть бути вбудовані в сполуки згідно з даним винаходом, включають ізотопи водню, вуглецю, азоту, кисню, фосфору, фтору та хлору, такі як, але не обмежуючись ними, Н2 (дейтерій, ОБ), НУ (тритій), С", С, 14, М», 8 раї рзаг, 535, (196 | 125,
Включені різні мічені ізотопами сполуки згідно з даним винаходом, наприклад, ті, в які вбудовані радіоактивні ізотопи, такі як НУ, С7з ї Ся, Такі мічені ізотопами сполуки можна застосовувати в метаболічних дослідженнях, дослідженнях кінетики реакцій, методиках виявлення або візуалізації, таких як позитронно-емісійна томографія (ПЕТ) або однофотонна емісійна комп'ютерна томографія (ОФЕКТ), включаючи аналізи розподілу лікарського засобу або субстрату в тканині, або при радіоактивному лікуванні пацієнтів. Мічені або заміщені дейтерієм терапевтичні сполуки згідно з даним винаходом можуть мати поліпшені властивості ОМРК (метаболізм і фармакокінетика лікарського засобу), пов'язані з розподілом, метаболізмом і виділенням (АЮМЕ). Заміщення більше важкими ізотопами, такими як дейтерій, може забезпечити певні терапевтичні переваги, обумовлені більшою метаболічною стабільністю, наприклад, збільшенням періоду напіввиведення іп мімо або зниженням потреб у дозуванні. Е"8- мічену сполуку можна застосовувати для досліджень ПЕТ або ОФЕКТ. Мічені ізотопами сполуки згідно з даним винаходом й їх проліки зазвичай можна одержати шляхом виконання процедур, розкритих у схемах або у прикладах і препаратах, описаних нижче, замінивши немічений ізотопом реагент легкодоступним міченим ізотопом реагентом. Крім того, заміщення більше важкими ізотопами, зокрема, дейтерієм (тобто Н- або 0), може забезпечити певні терапевтичні переваги, обумовлені більшою метаболічною стабільністю, наприклад, збільшеним періодом напіввиведення іп мімо або зниженими потребами в дозуванні або поліпшенням терапевтичного індексу. Слід розуміти, що у цьому випадку дейтерій розглядається як замісник. Концентрація такого більше важкого ізотопу, зокрема, дейтерію, може визначатися коефіцієнтом ізотопного збагачення. У сполуках згідно з даним винаходом будь-який атом, намірено не позначений як конкретний ізотоп, призначений для представлення будь-якого стабільного ізотопу цього атома.
Якщо не зазначено інше, посилання на конкретну сполуку включає всі такі ізомерні форми, включаючи (повністю або частково) рацемічні й інші їх суміші. Способи одержання (наприклад, асиметричного синтезу) та поділу (наприклад, Ффракційної кристалізації та хроматографічні засоби) таких ізомерних форм або відомі в даній області технікию, або можуть бути легко отримані відомим чином шляхом адаптації способів, викладених у даній заявці, або відомих способів.
Біологічна активність
Аналізи проліферації клітин іп міго
Зазвичай цитотоксичну або цитостатичну активність кон'югата антитіло-лікарський засіб (АРС) вимірюють шляхом: впливу на клітини ссавців, що мають рецепторні білки, антитіла з
АОС в середовищі для культивування клітин; культивування клітин протягом періоду від приблизно 6 годин до приблизно 5 днів; і вимірювання життєздатності клітин. Клітинні аналізи іп міго застосовують для вимірювання життєздатності (проліферації), цитотоксичності й індукції апоптозу (активації каспази) АОС згідно з даним винаходом.
Ефективність кон'югатів антитіло-лікарський засіб іп міго можна виміряти за допомогою аналізу проліферації клітин. Люмінесцентний аналіз життєздатності клітин СеїТйег-Сіо? являє собою комерційно доступний (Рготеда Согр., Медісон, Вісконсін, США) спосіб гомогенного аналізу, заснований на рекомбінантній експресії люциферази СоіІеоріега (патенти США Мо 5583024; 5674713 і 5700670). Цей аналіз проліферації клітин дозволяє визначити кількість життєздатних клітин в культурі на підставі кількісного визначення присутнього АТФ, індикатора метаболічно активних клітин (Стоисп еї аїЇ. (1993) у). Іттипої. Меїн. 160:81-88; 005 6602677).
Аналіз СейПТйег-Сіо? проводять в 9б-ямковому форматі, що робить його придатним для автоматичного високопродуктивного скринінгу (НТ) (Стее еї аї. (1995) АпіїСапсег Огид5 6:398- 404). Процедура гомогенного аналізу включає додавання одного реагенту (реагент СеПТег-
Спіо?) безпосередньо до клітин, що культивуються в середовищі, доповненому сироваткою.
Промивання клітин, видалення середовища та декілька етапів піпетування не потрібні. Система дозволяє виявляти тільки 15 клітин на ямку в 384-ямковому форматі через 10 хвилин після додавання реагенту та перемішування. Клітини можна обробляти безупинно із застосуванням
АОС, або їх можна обробляти та відокремлювати від АОС. Зазвичай клітини, оброблені короткочасно, тобто З години, проявляли ефективність, аналогічну таким клітинам, які обробляли безупинно.
Гомогенний формат "додати-змішати-виміряти" призводить до лізису клітин і виникненню люмінесцентного сигналу, пропорційного кількості присутнього АТФ. Кількість АТФ прямо пропорційно кількості клітин, що присутні в культурі. В аналізі СеїІГіег/-Сіо? генерується люмінесцентний сигнал "типу світіння", що виникає в результаті реакції люциферази, період напівжиття якого зазвичай перевищує п'ять годин, залежно від типу клітин і використовуваного середовища. Життєздатні клітини відображають у відносних одиницях світіння (КІ). Субстрат, люциферин жука, окислювально декарбоксилюється рекомбінантною люциферазою світлячка з супутнім перетворенням АТФ в АМФ і випущенням фотонів.
Ефективність кон'югатів антитіло-лікарський засіб іп мйго також може бути виміряна за допомогою аналізу цитотоксичності. Культивовані прикріплені клітини промивають ФСБ, відокремлюють із застосуванням трипсину, розбавляють у повному середовищі, що містить 1095 ФСТ, центрифугують, повторно суспендують у свіжому середовищі та підраховують за допомогою гемоцитометра. Суспензійні культури підраховують безпосередньо. Підходящі для підрахунку монодисперсні клітинні суспензії можуть зажадати перемішування суспензії шляхом
Зо повторної аспірації для руйнування скупчень клітин.
Суспензію клітин розбавляють до цільової щільності посіву та розподіляють (по 100 мкл на ямку) у чорні 96-ямкові планшети. Планшети з прикріпленими клітинними лініями інкубують протягом ночі, щоб забезпечити прикріплення. Суспензію клітинних культур можна використовувати в день посіву.
Вихідний розчин (1 мл) АБС (20 мкг/мл) одержують у відповідному середовищі для культивування клітин. Послідовні 10-кратні розведення маткового АОС одержують у центрифужних пробірках об'ємом 15 мл шляхом послідовного переносу 100 мкл в 900 мкл середовища для культивування клітин.
Ямки з чотирма повторами кожного розведення АОС (100 мкл) розподіляють в 96-ямкових чорних планшетах, у які попередньо висіяна суспензія клітин (100 мкл) з одержанням кінцевого об'єму 200 мкл. В контрольні ямки вносять середовище для культивування клітин (100 мкл).
Якщо час подвоєння клітинної лінії перевищує 30 годин, інкубація АОС триває 5 днів, в іншому випадку проводять чотириденну інкубацію.
Наприкінці інкубаційного періоду життєздатність клітин оцінюють за допомогою аналізу
АІіатаг ріше. Аіатаг!Віне (Іпмігодеп) розподіляють за всім планшетом (по 20 мкл на ямку) й інкубують протягом 4 годин. Флуоресценцію Аіатаг Біше вимірюють при порушенні 570 нм і випущенні 585 нм на зчитувальному пристрої для планшетів МагіозКап РіІа5п. Відсоток виживання клітин розраховують на основі середньої інтенсивності флуоресценції в оброблених
АС ямках у порівнянні з середньою інтенсивністю флуоресценції в контрольних ямках.
Застосування
Кон'югати згідно з даним винаходом можна застосовувати, щоб забезпечити сполуку ПЕД в цільовому місці розташування.
Цільове місце розташування переважно являє собою популяцію проліферативних клітин.
Антитіло являє собою антитіло до антигену, що присутній у популяції проліферативних клітин.
Відповідно до одного варіанта реалізації даного винаходу антиген відсутній або присутній на зниженому рівні у популяції непроліферативних клітин у порівнянні з кількістю антигену, що присутній у популяції проліферативних клітин, наприклад, популяції пухлинних клітин.
В цільовому місці розташування лінкер може бути розщеплений для вивільнення сполуки
КейА. Таким чином, кон'югат можна застосовувати для селективного забезпечення сполуки КеІА бо в цільовому місці розташування.
Лінкер може бути розщеплений ферментом, що присутній в цільовому місці розташування.
Цільове місце розташування може бути іп міїго, іп мімо або ех мімо.
Сполуки кон'югата антитіло-лікарський засіб (АОС) згідно з даним винаходом включають сполуки, які можна застосовувати для протиракової активності. Зокрема, сполуки (кон'югати) включають антитіло, кон'юЮптоване, тобто ковалентно приєднане за допомогою лінкера, з фрагментом лікарського засобу ПБД, тобто токсином. Якщо лікарський засіб не кон'югований з антитілом, лікарський засіб ПБД виявляє цитотоксичну дію. Таким чином, біологічну активність фрагмента лікарського засобу ПБД модулюють шляхом кон'югації з антитілом. Кон'югати антитіло-лікарський засіб (АОС) згідно з даним винаходом селективно доставляють ефективну дозу цитотоксичного агента у пухлинну тканину, в результаті чого може бути досягнута більше висока селективність, тобто більше низька ефективна доза.
Таким чином, в одному аспекті, згідно з даним винаходом запропонована сполука-кон'югат, описана у даній заявці, для застосування в терапії.
В додатковому аспекті також запропонована сполука-кон'югат, описана у даній заявці, для застосування в лікуванні проліферативного захворювання. Згідно з другим аспектом даного винаходу запропоноване застосування сполуки кон'югата при виготовленні лікарського засобу для лікування проліферативного захворювання.
Фахівець в даній області техніки може легко визначити, чи має кон'югат-кандидат лікувальну дію у відношенні проліферативного стану для будь-якого конкретного типу клітин. Наприклад, аналізи, які можна зручно застосовувати для оцінки активності, забезпеченої конкретною сполукою, описані у прикладах нижче.
Термін "проліферативне захворювання" відноситься до несприятливої або неконтрольованої клітинної проліферації надлишкових або патологічних клітин, яка є небажаною, такою як неопластичне або гіперпластичне розмноження, будь то іп міїго або іп мімо.
Кон'югати, спрямовані проти ОК-1
Приклади проліферативних станів включають, але не обмежуються ними, доброякісну, передзлоякісну та злоякісну клітинну проліферацію, включаючи, але не обмежуючись ними, новоутворення та пухлини (наприклад, гістіоцитому, гліому, астроцитому, остеому), різні види раку (наприклад, рак легенів, дрібноклітинний рак легенів, рак шлунково-кишкового тракту, рак
Зо кишечнику, рак товстої кишки, карциному молочної залози, карциному яєчників, рак простати, рак яєчка, рак печінки, рак нирок, рак сечового міхура, рак підшлункової залози, рак мозку, саркому, остеосаркому, саркому Капоші, меланому), лімфоми, лейкози, псоріаз, захворювання кісток, фібропроліферативні порушення (наприклад, сполучних тканин) й атеросклероз. Різні види раку, що представляють особливий інтерес, включають, але не обмежуються ними, лейкози та різні види раку яєчників.
Лікувати можна будь-який тип клітин, включаючи, але не обмежуючись ними, легенів, шлунково-кишкового тракту (включаючи, наприклад, кишечник, товсту кишку), грудей (молочної залози), яєчника, простати, печінки (печінковий), нирки (нирковий), сечового міхура, підшлункової залози, мозку та шкіри.
Порушення, що представляють особливий інтерес, включають, але не обмежуються ними, різні види раку, включаючи різні види метастатичного раку та метастатичні ракові клітини, такі як циркулюючі пухлинні клітини, які можуть виявлятися циркулюючими в рідинах організму, таких як кров або лімфа. Різні види раку, що представляють особливий інтерес, включають: гепатоцелюлярну карциному, гепатобластому, недрібноклітинний рак легенів, дрібноклітинний рак легенів, рак товстої кишки, рак молочної залози, рак шлунку, рак підшлункової залози, нейробластому, рак надниркової залози, феохромоцитому, парагангліому, медулярну карциному щитовидної залози, рак кістякових м'язів, ліпосаркому, гліому, пухлину Вільмса, нейроендокринні пухлини, гострий мієлолейкоз і мієлодиспластичний синдром.
Інші порушення, що представляють інтерес, включають будь-який стан, при якому ОІК1 надекспресується або при якому антагонізм ОБІК! забезпечить клінічну користь. Вони включають імунні порушення, серцево-судинні порушення, тромбоз, діабет, порушення контрольної точки імунної відповіді, фіброзні порушення (фіброз) або проліферативні захворювання, такі як рак, зокрема, метастатичний рак.
Кон'югати, спрямовані проти КААДО1
Приклади проліферативних станів включають, але не обмежуються ними, доброякісну, передзлоякісну та злоякісну клітинну проліферацію, включаючи, але не обмежуючись ними, новоутворення та пухлини (наприклад, гістіоцитому, гліому, астроцитому, остеому), різні види раку (наприклад, рак легенів, дрібноклітинний рак легенів, рак шлунково-кишкового тракту, рак кишечнику, рак товстої кишки, карциному молочної залози, карциному яєчників, рак простати, бо рак яєчка, рак печінки, рак нирок, рак сечового міхура, рак підшлункової залози, рак мозку,
саркому, остеосаркому, саркому Капоші, меланому), лімфоми, лейкози, псоріаз, захворювання кісток, фібропроліферативні порушення (наприклад, сполучних тканин) й атеросклероз.
Лікувати можна будь-який тип клітин, включаючи, але не обмежуючись ними, легенів, шлунково-кишкового тракту (включаючи, наприклад, кишечник, товсту кишку), грудей (молочної залози), яєчника, простати, печінки (печінковий), нирок (нирковий), сечового міхура, підшлункової залози, мозку та шкіри.
Порушення, що представляють особливий інтерес, включають, але не обмежуються ними, різні види раку, включаючи різні види метастатичного раку та метастатичні ракові клітини, такі як циркулюючі пухлинні клітини, які можуть виявлятися циркулюючими в рідинах організму, таких як кров або лімфа. Різні види раку, що представляють особливий інтерес, включають рак яєчників, рак молочної залози, рак простати та рак нирок.
Інші порушення, що представляють інтерес, включають будь-який стан, при якому КААС1 надекспресується або при якому антагонізм КААСІ забезпечить клінічну користь. Вони включають імунні порушення, серцево-судинні порушення, тромбоз, діабет, порушення контрольної точки імунної відповіді, фіброзні порушення (фіброз) або проліферативні захворювання, такі як рак, зокрема, метастатичний рак.
Кон'югати, спрямовані проти мезотеліну
Приклади проліферативних станів включають, але не обмежуються ними, доброякісну, передзлоякісну та злоякісну клітинну проліферацію, включаючи, але не обмежуючись ними, новоутворення та пухлини (наприклад, гістіоцитому, гліому, астроцитому, остеому), різні види раку (наприклад, рак легенів, дрібноклітинний рак легенів, рак шлунково-кишкового тракту, рак кишечнику, рак товстої кишки, карциному молочної залози, карциному яєчників, рак простати, рак яєчка, рак печінки, рак нирок, рак сечового міхура, рак підшлункової залози, рак мозку, саркому, остеосаркому, саркому Капоші, меланому), лімфоми, лейкози, псоріаз, захворювання кісток, фібропроліферативні порушення (наприклад, сполучних тканин) й атеросклероз.
Лікувати можна будь-який тип клітин, включаючи, але не обмежуючись ними, легенів, шлунково-кишкового тракту (включаючи, наприклад, кишечник, товсту кишку), грудей (молочної залози), яєчника, простати, печінки (печінковий), нирок (нирковий), сечового міхура, підшлункової залози, мозку та шкіри.
Зо Порушення, що представляють особливий інтерес, включають, але не обмежуються ними, різні види раку, включаючи різні види метастатичного раку та метастатичні ракові клітини, такі як циркулюючі пухлинні клітини, які можуть виявлятися циркулюючими в рідинах організму, таких як кров або лімфа. Різні види раку, що представляють особливий інтерес, включають мезотеліому, рак легенів, рак яєчників і рак підшлункової залози.
Інші порушення, що представляють інтерес, включають будь-який стан, при якому мезотелін надекспресується або при якому антагонізм мезотеліну забезпечить клінічну користь. Вони включають імунні порушення, серцево-судинні порушення, тромбоз, діабет, порушення контрольної точки імунної відповіді, фіброзні порушення (фіброз) або проліферативні захворювання, такі як рак, зокрема, метастатичний рак.
Передбачено, що кон'югати антитіло-лікарський засіб (АОС) згідно з даним винаходом можна застосовувати для лікування різних захворювань або порушень, наприклад, що характеризуються надекспресією пухлинного антигена. Зразкові стани або гіперпроліферативні порушення включають доброякісні або злоякісні пухлини; лейкоз, гематологічні та лімфоїдні злоякісні новоутворення. Інші приклади включають нейрональні, гліальні, астроцитарні, гіпоталамічні, залозні, макрофагальні, епітеліальні, стромальні, бластоцільні, запальні, ангіогенні й імунологічні, включаючи аутоімунні, порушення.
Зазвичай захворювання або порушення, що підлягає лікуванню, являє собою гіперпроліферативне захворювання, таке як рак. Приклади раку, що підлягають лікуванню, включають, але не обмежуються ними, карциному, лімфому, бластому, саркому та лейкоз або лімфоїдні злоякісні новоутворення. Більше конкретні приклади таких видів раку включають плоскоклітинний рак (наприклад, епітеліальний плоскоклітинний рак), рак легенів, включаючи дрібноклітинний рак легенів, недрібноклітинний рак легенів, аденокарциному легенів і плоскоклітинну карциному легенів, рак очеревини, гепатоцелюлярний рак, рак ШКТ або рак шлунка, включаючи рак шлунково-кишкового тракту, рак підшлункової залози, гліобластому, рак шийки матки, рак яєчників, рак печінки, рак сечового міхура, гепатому, рак молочної залози, рак товстої кишки, рак прямої кишки, колоректальний рак, карциному ендометрію або карциному матки, карциному слинних залоз, рак нирок або нирковий рак, рак простати, рак піхви, рак щитовидної залози, карциному печінки, карциному анального каналу, карциному статевого члена, а також рак голови і шиї.
Аутоїмунні захворювання, для лікування яких можна застосовувати сполуки АОС, включають ревматологічні порушення (такі як, наприклад, ревматоїдний артрит, синдром Шегрена, склеродермію, вовчанку, таку як ВКВ і вовчанковий нефрит, поліміозит/дерматоміозит, кріоглобулінемію, синдром антитіл до фосфоліпідів і псоріатичний артрит), остеоартрит, аутоїмунні порушення шлунково-кишкового тракту та печінки (такі як, наприклад, запальні захворювання кишечнику (наприклад, виразковий коліт і хвороба Крона), аутоїмунний гастрит і перніціозна анемія, аутоїмунний гепатит, первинний біліарний цироз печінки, первинний склерозуючий холангіт і целіакія), васкуліт (такий як, наприклад, АМСА-асоційований васкуліт, включаючи васкуліт Чарга-Строса, гранулематоз Вегенера та поліартеріїт), аутоімунні неврологічні порушення (такі як, наприклад, розсіяний склероз, опсо-міоклональний синдром, міастенія гравіс, нейромієліт зорового нерва, хвороба Паркінсона, хвороба Альцгеймера й аутоїмунні полінейропатії), ниркові порушення (такі як, наприклад, гломерулонефрит, синдром
Гудпасчера та хвороба Бергера), аутоіїмунні дерматологічні порушення (такі як, наприклад, псоріаз, кропивниця, алергійний висип, звичайна пузирчатка, бульозний пемфігоїд і шкірна червона вовчанка), гематологічні порушення (такі як, наприклад, тромбоцитопенічна пурпура, тромботична тромбоцитопенічна пурпура, посттрансфузійна пурпура й аутоїмунна гемолітична анемія), атеросклероз, увеїт, аутоїмунні захворювання слуху (такі як, наприклад, хвороба внутрішнього вуха та втрата слуху), хвороба Бехчета, синдром Рейно, трансплантацію органа й аутоїмунні ендокринні порушення (такі як, наприклад, пов'язані з діабетом аутоімунні захворювання, такі як інсулінозалежний цукровий діабет (ІМ), хвороба Адісона й аутоімунне захворювання щитовидної залози (наприклад, хвороба Грейвса та тиреоїдит). Більше переважно такі захворювання включають, наприклад, ревматоїдний артрит, виразковий коліт,
АМСА-асоційований васкуліт, вовчанку, розсіяний склероз, синдром Шегрена, хворобу Грейвса,
ІООМ, перніційну анемію, тиреоїдит і гломерулонефрит.
Способи лікування
Кон'югати згідно з даним винаходом можна застосовувати в способі терапії. Також запропонований спосіб лікування, який включає введення суб'єкту, що потребує лікування, терапевтично ефективної кількості сполуки-кон'югата згідно з даним винаходом. Термін "герапевтично ефективна кількість" являє собою кількість, достатню для того, щоб
Зо продемонструвати користь для пацієнта. Така користь може являти собою щонайменше поліпшення щонайменше одного симптому. Фактична введена кількість, а також швидкість та тимчасова динаміка введення будуть залежати від характеру та ступеня важкості того, що лікують. Призначення лікування, наприклад, прийняття рішення про дозування, перебуває в межах відповідальності лікарів загальної практики й інших лікарів.
Сполуку згідно з даним винаходом можна вводити окремо або в комбінації з іншими способами лікування, або одночасно, або послідовно, залежно від стану, що підлягає лікуванню. Приклади способів лікування та способів терапії включають, але не обмежуються ними, хіміотерапію (введення активних агентів, включаючи, наприклад, лікарські засоби, такі як хіміотерапевтичні засоби); хірургічне втручання; та променеву терапію. "Хіміотерапевтичний агент" являє собою хімічну сполуку, яку можна застосовувати для лікування раку, незалежно від механізму дії. Класи хіміотерапевтичних агентів включають, але не обмежуються ними: алкілуючі агенти, антиметаболіти, рослинні алкалоїди, що блокують мітотичне веретено, цитотоксичні/протипухлинні антибіотики, інгібітори топоізомерази, антитіла, фотосенсибілізатори й інгібітори кінази. Хіміотерапевтичні агенти включають сполуки, використовувані в "націленій терапії" та звичайній хіміотерапії.
Приклади хіміотерапевтичних агентів включають: ерлотиніб (тарцева?, Сепепіесн/о5і
Ріагт.), доцетаксел (таксотер?7, Запоїі-Амепіїв), 5-ФУ (фторурацил, 5-фторурацил, СА Мо 51- 21-68), гемцитабін (гемзаре, Шу), РО-0325901 (САБ Мо 391210-10-9, Ріїгег), цисплатин (цис- діамін, дихлорплатину(І!), САБ Мо 15663-27-1), карбоплатин (САБ Мо 41575-94-4), паклітаксел (таксоле, ВгізіоІ-Муеєетв бацірр Опсоіоду, Принстон, Нью-Джерсі, США), трастузумаб (герцептине,
Сепепіесі), темозоломід (4-метил-5-оксо-2,3,4,6, 8-пентазабіцикло-(4.3.0|-нона-2,7,9-триєн-9- карбоксамід, СА5 Мо 85622-93-1, темодар-, темодалеУ, Зспегіпд Ріоцді), тамоксифен ((2)-2-|4- (1,2-дифенілбут-1-енілуфенокси|-М, М-диметилетанамін, нолвадекс-, істубалеУ, валодекс-) і доксорубіцин (адріаміцин?), АКІі-1/2, НРРО і рапаміцин.
Інші приклади хіміотерапевтичних агентів включають: оксаліплатин (елоксатин?У, 5Запоїї), бортезоміб (велкейд?, МіПеппішт РНагт.), сутент (сунітиніб, 5О11248, Ріїгег), летрозол (фемара?, Момапів), іматиніб мезилат (глівек?, Момапйів), ХІ-518 (інгібітор МекК, Ехеїїхі5, УМО 2007/044515), АВНУ-886 (інгібітор Мек, А2О6244, Агтау ВіоРпагта, Авіга 7епеса), ЗЕ-1126 (інгібітор РІЗК, бетаїгоге Рпаптасешіса!в), ВЕ2-235 (інгібітор РІЗК, Момагіі5), ХІ-147 (інгібітор бо РІЗК, Ехеїїхіб), РТК787/2ИК 222584 (Момагпіів), фулвестрант (фазлодекс?, Авіга/епеса),
лейковорин (фолінова кислота), рапаміцин (сиролімус, рапамун-, Уумуеїй), лапатиніб (тайкерб? а5К5Ь72016, Сіахо Зтійй Кіїпе), лонафарніб (сарасар "м, СН 66336, 5спегіпд Ріошдп), сорафеніб (нексаварУ, ВАУ43-9006, Вауег І арх), гефітиніб (іресса?, Азіга7епеса), іринотекан (камптосаре,
СРТ-11 Рійгег), типіфарніб (зарнестра"м, Оопп5опауопп5оп), абраксан'м (без кремофора), сполуки альбумін-модифікованих наночастинок паклітакселу (Атегісап Рпагтасеціїса! Рагіпегв,
Зспаштбего, І), вандетаніб (гіпп, 206474, зактіма?, Авіга7епеса), хлоранмбуцил, АС1478,
Ас1571 (50 5271; Зидеп), темсиролімус (торизеле, Умуеїй), пазопаніб (СіахобтінКІіЇїпе), канфосфамід (телцита?, Тек), тіотепа та циклосфосфамід (цитоксан?, неосарге); алкілсульфонати, такі як бусульфан, імпросульфан і піпосульфан; азиридини, такі як бензодопа, карбоквон, метуредопа й уредопа; етиленіміни та метиламеламіни, включаючи алтретамін, триетиленмеламін, триетиленфосфамід, триєтилентіофосфамід і триметиломеламін; ацетогеніни (зокрема, булатацин і булатацинон); камптотецин (включаючи синтетичний аналог топотекан); бріостатин; калістатин; СС-1065 (включаючи його синтетичні аналоги адозелезин, карзелезин і бізелезин); криптофіцини (зокрема, криптофіцин 1 і криптофіцин 8); доластатин; дуокарміцин (включаючи синтетичні аналоги КУУ-2189 і СВ1-ТМ1); елейтеробін; панкратистатин; саркодиктин; спонгістатин; азотні іприти, такі як хлорамбуцил, хлорнафазин, хлорфосфамід, естрамустин, іфосфамід, мехлоретамін, гідрохлорид оксиду мехлоретаміну, мелфалан, новембіхін, фенестерин, преднімустин, трофосфамід, урамустин; нітрозосечовини, такі як кармустин, хлорозотоцин, фотемустин, ломустин, німустин і ранімнустин; антибіотики, такі як енедиїнові антибіотики (наприклад, каліхеаміцин, каліхеаміцин гамма-1І, каліхеаміцин-омега 1 (Апдемж Спет. Іпі!. Ед. Епаї. (1994) 33:183-186); динеміцин, динеміцин А; бісфосфонати, такі як клодронат; еспераміцин; а також хромофорну частину неокарциностатину та споріднені хромофори хромопротеїнових енедиїнових антибіотиків), аклациномізини, актиноміцин, аутраміцин, азасерин, блеоміцини, кактиноміцин, карабіцин, карміноміцин, карзинофілін, хромоміцини, дактиноміцин, даунорубіцин, деторубіцин, б-діазо-5-оксо-І -сорлейцин, морфоліно-доксорубіцин, ціаноморфоліно-доксорубіцин, 2-піролінодоксорубіцин і дезоксидоксорубіцин), епірубіцин, есорубіцин, ідарубіцин, неморубіцин, марцеломіцин, мітоміцини, такі як мітоміцин С, мікофенолова кислота, ногаламіцин, оливоміцини, пепломіцин, порфіроміцин, пуроміцин, келаміцин, родорубіцин, стрептонігрин, стрептозоцин, туберцидин,
Зо убенімекс, зиностатин, зорубіцин; антиметаболіти, такі як метотрексат і 5-фторурацил (5-Е)); аналоги фолієвої кислоти, такі як деноптерин, метотрексат, птероптерин, триметрексат; аналоги пурину, такі як флударабін, б-меркаптопурин, тіаміприн, тіогуанін; аналоги піримідину, такі як анцитабін, азацитидин, б-азауридин, кармофур, цитарабін, дидезоксіуридин, доксифлуридин, еноцитабін, флоксуридин; андрогени, такі як калустерон, дромостанолон пропіонат, епітіостанол, мепітіостан, тестолактон; засоби, що пригнічують функцію надниркової залози, такі як аміноглутетимід, мітотан, трилостан; додавач фолієвої кислоти, такий як фролінова кислота; ацеглатон; глікозид альдофосфаміду; амінолевулінова кислота; енілурацил; амсакрин; бестрабуцил; бісантрен; едатраксат; дефофамін; демеколцин; діазиквон; елфорнітин; ацетат еліптинію; епотилон; етоглуцид; нітрат галію; гідроксисечовина; лентинан; лонідайнін; майтанзиноїди, такі як майтанзин й ансамітоцини; мітогуазон; мітоксантрон; мопіданмол; нітраерин; пентостатин; фенамет; пірарубіцин; лосоксантрон; подофілінова кислота; 2- етилгідразид; прокарбазин; полісахаридний комплекс РОКФ (УН5 Майшга! Ргодисіє5, Юджин,
Орегон, США); разоксан; ризоксин; сизофіран; спірогерманій; тенуазонова кислота; триазиквон; 2,2 2"-трихлортриетиламін; трихотецени (зокрема, токсин Т-2, веракурин А, роридин А й ангідин); уретан; віндезин; дакарбазин; маномустин; мітобронітол; мітолактол; піпоброман; гацитозин; арабінозид ("Ара-С"); циклофосфамід; тіотепа; б-тіогуанін; меркаптопурин; метотрексат; аналоги платини, такі як цисплатин і карбоплатин; вінбластин; етопозид (МР-16); іфосфамід; мітоксантрон; вінкристин; вінорелбін (навельбін?"); новантрон; теніпозид; едатрексат; дауноміцин; аміноптерин; капецитабін (кселода?, Коспе); ібандронат; СРТ-11; інгібітор топоїзомерази КЕ5 2000; дифторметилорнітин (ОМЕО); ретиноїди, такі як ретиноєва кислота; і фармацевтично прийнятні солі, кислоти та похідні будь-якого з вищезгаданих.
У визначення "хіміотерапевтичний агент" також включені: (і) протигормональні агенти, функція яких полягає в регуляції або інгібуванні дії гормону на пухлини, такі як антиестрогени та селективні модулятори рецепторів естрогену (ЗЕКМ), включаючи, наприклад, тамоксифен (включаючи нолвадексе; цитрат тамоксифену), ралоксифен, дролоксифен, 4- гідрокситамоксифен, триоксифен, кеоксифен, І М117018, онапристон і фарестон? (цитрат тореміфіну); (ії) інгібітори ароматази, які інгібують фермент ароматазу, яка регулює вироблення естрогену в наднирковій залозі, такі як, наприклад, 4(5)-імідазоли, аміноглутетимід, мегасе? (ацетат мегестролу), аромазин? (екземестан; Ріїгег), форместаніє, фадрозол, ривісор? бо (ворозол)у, фемара? (летрозол; Момапіз) й аримідекс? (анастрозол; Абвіга/епеса); (її)
антиандрогени, такі як флутамід, нілутамід, бікалутамід, лейпролід і гозерелін; а також троксацитабін (1,3-діоксолан-нуклеозидний аналог цитозину); (ім) інгібітори протеїнкінази, такі як інгібітори МЕК (МО 2007/044515); (м) інгібітори ліпідкінази; (мі) антизмістовні олігонуклеотиди, зокрема, ті, які інгібують експресію генів у сигнальних шляхах, що брали участь в аберантній проліферації клітин, наприклад, РКО-альфа, Раї і Н-Кав, такі як облімерсен (генасенс-, Сепіа
Іпс.); (мі) рибозими, такі як інгібітори експресії МЕСЕ (наприклад, ангіозим) й інгібітори експресії
НЕК2; (мії) вакцини, такі як вакцини для генної терапії, наприклад, аловектин-, лейвектин? і ваксиде; пролейкін? п -2; інгібітори топоізомерази 1, такі як люртотекане; абарелікс? "тВН; (їх) антиангіогенні агенти, такі як бевацизумаб (авастин"У, Сепепіесі)); і фармацевтично прийнятні солі, кислоти і похідні будь-якого з вищезгаданих.
У визначення "хіміотерапевтичний агент" також включені терапевтичні антитіла, такі як алемтузумаб (кампат), бевацизумаб (авастин?, Сепепіесі); цетуксимаб (ербітукс?, Ітсіопе); панітумумаб (вектибікс?, Атдеп), ритуксимаб (ритуксан-, Сепепіесп/Віодеп Ідес), офатумумаб (арзерра?, С5К), пертузумаб (перджета"М, омнітарг"М, 204, Сепепіесі), трастузумаб (герцептин?У, Сепепіесі), тозитумомаб (бексар, Согіхіа) і кон'югат антитіло-лікарський засіб, гемтузумаб озогаміцин (мілотарге, УуУуеєїн).
Гуманізовані моноклональні антитіла з терапевтичним потенціалом в якості хіміотерапевтичних агентів у комбінації з кон'югатами згідно з даним винаходом включають: алемтузумаб, аполізумаб, азелізумаб, атлізумаб, бапінейзумаб, бевацизумаб, біватузумаб мертанзин, кантузумаб мертанзин, цеделізумаб, цертолізумаб пегол, цидфузитузумаб, цидтузумаб, даклізумаб, екулізумаб, ефалізумаб, епратузумаб, ерлізумаб, фелвізумаб, фонтолізумаб, гемтузумаб озогаміцин, інотузумаб озогаміцин, іпілімумаб, лабетузумаб, лінтузумаб, матузумаб, меполізумаб, мотавізумаб, мотовізумаб, наталізумаб, німотузумаб, ноловізумаб, нумавізумаб, окрелізумаб, омалізумаб, палівізумаб, пасколізумаб, пекфуситузумаб, пектузумаб, пертузумаб, пекселізумаб, ралівізумаб, ранібізумаб, реслівізумаб, реслізумаб, ресивізумаб, ровелізумаб, руплізумаб, сибротузумаб, сиплізумаб, сонтузумаб, такатузумаб тетраксетан, тадоцизумаб, талізумаб, тефібазумаб, тоцилізумаб, торалізумаб, трастузумаб, тукотузумаб целмолейкін, тукузитузумаб, умавізумаб, уртоксазумаб і візилізумаб.
Фармацевтичні композиції відповідно до даного винаходу та для застосування відповідно до даного винаходу можуть містити, крім активного інгредієнта, тобто сполуки-кон'югата, фармацевтично прийнятну допоміжну речовину, носій, буфер, стабілізатор або інші матеріали, добре відомі фахівцям в даній області техніки. Такі матеріали повинні бути нетоксичними та не повинні створювати перешкоди для ефективності активного інгредієнта. Точний характер носія або іншого матеріалу буде залежати від шляху введення, який може бути пероральним або за допомогою ін'єкції, наприклад, шкірної, підшкірної або внутрішньовенної.
Фармацевтичні композиції для перорального введення можуть бути у формі таблетки, капсули, порошку або рідини. Таблетка може містити твердий носій або ад'ювант. Рідкі фармацевтичні композиції зазвичай містять рідкий носій, такий як вода, нафтові, тваринні або рослинні олії, мінеральну олію або синтетичну олію. Може бути включений фізіологічний сольовий розчин, розчин декстрози або іншого сахарида або гліколі, такі як етиленгліколь, пропіленгліколь або поліетиленгліколь. Капсула може містити твердий носій, такий як желатин.
Для внутрішньовенної, шкірної або підшкірної ін'єкції або ін'єкції в місце ураження активний інгредієнт буде у формі парентерально прийнятного водного розчину, який не містить пірогени та має підходящий рн, ізотонічність та стабільність. Фахівці з відповідними навичками в даній області техніки здатні приготувати підходящі розчини, застосовуючи, наприклад, ізотонічні носії, такі як ін'єкція хлориду натрію, ін'єкція розчину Рінгера, ін'єкція розчину Рінгера з лактозою. При необхідності можуть бути включені консерванти, стабілізатори, буфери, антиоксиданти й/або інші добавки.
Склади
Незважаючи на те, що сполуку-кон'югат можна застосовувати (наприклад, вводити) окремо, часто переважно представити її у вигляді композиції або складу.
Відповідно до одного варіанта реалізації даного винаходу композиція являє собою фармацевтичну композицію (наприклад, склад, препарат, лікарський засіб), що містить сполуку- кон'югат, описану в даній заявці, і фармацевтично прийнятний носій, розріджувач або допоміжну речовину.
Відповідно до одного варіанта реалізації даного винаходу композиція являє собою фармацевтичну композицію, що містить щонайменше одну сполуку-кон'югат, описану в даній заявці, разом з одним або більше іншими фармацевтично прийнятними інгредієнтами, добре відомими фахівцям в даній області технікию, включаючи, але не обмежуючись ними, 60 фармацевтично прийнятні носії, розріджувачі, допоміжні речовини, ад'юванти, наповнювачі,
буфери, консерванти, антиоксиданти, змазуючі агенти, стабілізатори, солюбілізатори, сурфактанти (наприклад, змочуючі агенти), маскуючі агенти, офарблюючі агенти, ароматизуючі агенти та підсолоджуючі агенти.
Відповідно до одного варіанта реалізації даного винаходу композиція додатково містить інші активні агенти, наприклад, інші терапевтичні або профілактичні агенти.
Підходящі носії, розріджувачі, допоміжні речовини і т. д. можна знайти в стандартних фармацевтичних керівництвах. Див., наприклад, НапароокК ої Рпагтасешііса! Адайімев5, 2 вид. (ред. М. Ав і Ї. А5йп), 2001 (Зупарзе Іптогтайоп Кезоигсев5, Іпс., Епаісой, Мем мок, ОА),
Ветіпдіюоп'5 Рпаптасецшіїса! 5сіепсев, 20 вид., рив. Гірріпсой, УМіПатв»е 8 УМіІКіп5, 2000; ії Напароок ої Рпаптасеціїса! Ехсірієпів, 2 вид., 1994.
Інший аспект даного винаходу відноситься до способів одержання фармацевтичної композиції, які включають змішування щонайменше одного ІС" |-радіоміченого кон'югата або сполуки, подібного кон'югату, визначених у даній заявці з одним або більше іншими фармацевтично прийнятними інгредієнтами, добре відомими фахівцям в даній області техніки, наприклад, носіями, розріджувачами, допоміжними речовинами і т. д. При виготовленні у вигляді дискретних одиниць (наприклад, таблеток і т. д-) кожна одиниця містить заздалегідь визначену кількість (дозування) активної сполуки.
У даній заявці термін "Фармацевтично прийнятний" відноситься до сполук, інгредієнтів, матеріалів, композицій, лікарських форм і т. д., які, в рамках здорового медичного висновку, підходять для застосування при контакті з тканинами розглянутого суб'єкта (наприклад, людини) без надмірної токсичності, роздратування, алергійної відповіді або іншої проблеми або ускладнення, відповідно до розумного співвідношення користь/ризик. Кожний носій, розріджувач, допоміжна речовина і т. д. також повинен бути "прийнятним" відносно сумісності з іншими інгредієнтами складу.
Склади можуть бути отримані за допомогою будь-яких способів, добре відомих в області фармацевтики. Такі способи включають етап об'єднання активної сполуки з носієм, який становить один або більше додаткових інгредієнтів. Зазвичай склади одержують шляхом рівномірного та тісного об'єднання активної сполуки з носіями (наприклад, рідкими носіями, дрібнодисперсним твердим носієм і т. д.), а потім формування продукту, якщо необхідно.
Склад може бути отриманий для забезпечення швидкого або повільного вивільнення; негайного, відстроченого, контрольованого за часом або пролонгованого вивільнення; або їх комбінації.
Склади, що підходять для парентерального введення (наприклад, шляхом ін'єкції), включають водні або неводні, ізотонічні, апірогенні, стерильні рідини (наприклад, розчини, суспензії), в яких активний інгредієнт розчинений, суспендований або забезпечений іншим способом (наприклад, в ліпосомі або іншій мікрочастинці). Такі рідини можуть додатково містити інші фармацевтично прийнятні інгредієнти, такі як антиоксиданти, буфери, консерванти, стабілізатори, бактеріостатичні агенти, суспендуючі агенти, згущуючі агенти та розчинені речовини, які роблять склад ізотонічним з кров'ю (або іншою відповідною рідиною організму) передбачуваного реципієнта. Приклади допоміжних речовин включають, наприклад, воду, спирти, поліоли, гліцерин, рослинні олії та таке інше. Приклади ізотонічних носіїв, що підходять для застосування в таких складах, включають ін'єкцію хлориду натрію, розчин Рінгера або ін'єкцію розчину Рінгера з лактозою. Як правило, концентрація активного інгредієнта в рідині становить від приблизно 1 нг/мл до приблизно 10 мкг/мл, наприклад, від приблизно 10 нг/мл до приблизно 1 мкг/мл. Склади можуть бути представлені в герметичних контейнерах, що містять одну дозу або декілька доз, наприклад, в ампулах і флаконах, і можуть зберігатися в сублімованому (ліофілізованому) стані, що потребує тільки додавання стерильного рідкого носія, наприклад, води для ін'єкцій, безпосередньо перед застосуванням. Ін'єкційні розчини та суспензії для негайного введення можуть бути приготовлені зі стерильних порошків, гранул і таблеток.
Дозування
Фахівець в даній області техніки зрозуміє, що підходящі дозування сполуки-кон'югата та композицій, що містять сполуку-кон'югат, можуть варіюватися у різних пацієнтів. Визначення оптимального дозування зазвичай буде включати компенсацію рівня терапевтичної користі з будь-яким ризиком або шкідливими побічними ефектами. Вибраний рівень дозування буде залежати від множини факторів, включаючи, але не обмежуючись ними, активність конкретної сполуки, шляху введення, часу введення, швидкості виведення сполуки, тривалість лікування, інших лікарських засобів, сполук і/або матеріалів, застосовувані в комбінації, ступінь важкості стану, а також виду, статі, віку, маси, стану, загального стану здоров'я й анамнезу пацієнта. бо Кількість сполуки та шлях її введення будуть, в остаточному підсумку, залишені на розсуд
Зо лікаря, ветеринара або клініциста, незважаючи на те, що зазвичай дозування буде вибране для досягнення локальних концентрацій в місці дії, які дозволяють досягти цільового ефекту, не викликаючи істотних небезпечних або шкідливих побічних ефектів.
Введення можна здійснювати в одній дозі, безупинно або періодично (наприклад, у вигляді розділених доз з відповідними інтервалами) протягом курсу лікування. Способи визначення найбільш ефективних засобів і дозування для введення добре відомі фахівцям в даній області техніки і будуть варіюватися залежно від складу, застосовуваного для терапії, мети терапії, клітини (клітин)-мішені(ей), яку(их) лікують, і суб'єкта, якого лікують. Одноразове або багаторазове введення може бути виконане із застосуванням рівня дози та схеми, вибраної лікарем, ветеринаром або клініцистом.
Зазвичай підходяща доза активної сполуки перебуває в межах діапазону від приблизно 100 нг до приблизно 25 мг (більше типово від приблизно 1 мкг до приблизно 10 мг) на кілограм маси тіла суб'єкта на добу. Якщо активна сполука являє собою сіль, складний ефір, амід, проліки або тому подібне, кількість, що вводиться, розраховують на основі вихідної сполуки, і, таким чином, фактична маса, яка повинна бути застосована, пропорційно збільшується.
Відповідно до одного варіанта реалізації даного винаходу активну сполуку вводять пацієнту- людині у відповідності з наступною схемою дозування: приблизно 100 мг, З рази на добу.
Відповідно до одного варіанта реалізації даного винаходу активну сполуку вводять у відповідності з наступною схемою дозування: приблизно 150 мг, 2 рази на добу.
Відповідно до одного варіанта реалізації даного винаходу активну сполуку вводять пацієнту- людині у відповідності з наступною схемою дозування: приблизно 200 мг, 2 рази на добу.
Однак відповідно до одного варіанта реалізації даного винаходу сполуку-кон'югат вводять пацієнту-людині у відповідності з наступною схемою дозування: приблизно 50 або приблизно 75 мг, З або 4 рази на добу.
Відповідно до одного варіанта реалізації даного винаходу сполуку-кон'югат вводять пацієнту-людині у відповідності з наступною схемою дозування: приблизно 100 або приблизно 125 мг, 2 рази на добу.
Дозування, описані вище, можна застосовувати до кон'югата (включаючи фрагмент ПЕД і лінкер до антитіла) або до ефективної кількості забезпеченої сполуки ПБД, наприклад, кількості
Зо сполуки, яка може бути вивільнена після розщеплення лінкера.
Для запобігання або лікування захворювання відповідне дозування АЮС згідно з даним винаходом буде залежати від типу захворювання, яке підлягає лікуванню, визначеного вище, ступеня важкості та перебігу захворювання, від того, чи вводиться молекула у профілактичних або терапевтичних цілях, попередньої терапії, клінічного анамнезу пацієнта та відповіді на антитіло, а також на розсуд лікаря. Молекулу вводять підходящим способом пацієнту за один раз або протягом декількох обробок. Залежно від типу та ступеня важкості захворювання приблизно від 1 мкг/кг до 15 мг/кг (наприклад, 0,1-20 мг/кг) молекули складають початкове передбачуване дозування для введення пацієнту, наприклад, будь то за допомогою одного або декількох окремих введень або шляхом безперервної інфузії. Типове добове дозування може варіюватися від приблизно 1 мкг/кг до 100 мг/кг або більше, залежно від факторів, згаданих вище. Приблизне дозування АЮС для введення пацієнту перебуває в межах діапазону від приблизно 0,1 до приблизно 10 мг/кг маси пацієнта. Для повторних введень протягом декількох днів або довше, залежно від стану, лікування продовжують до тих пір, поки не відбудеться цільове пригнічення симптомів захворювання. Приблизна схема дозування включає курс введення початкової навантажувальної дози приблизно 4 мг/кг з наступним введенням додаткових доз АОС щотижня, кожні два тижні або кожні три тижні. Можна застосовувати інші схеми дозування. Прогрес цієї терапії легко контролювати за допомогою звичайних методик й аналізів.
Лікування
У даній заявці термін "лікування", стосовно до лікування стану, зазвичай відноситься до лікування та терапії, будь то людини або тварини (наприклад, у варіантах застосування у ветеринарії), при яких досягається деякий цільовий терапевтичний ефект, наприклад, інгібування прогресування стану, і включає зниження швидкості прогресування, затримку швидкості прогресування, регрес стану, поліпшення стану та лікування стану. Також включено лікування як профілактичний захід (тобто профілактика, запобігання).
У даній заявці термін ""-ерапевтично ефективна кількість" відноситься до такої кількості активної сполуки або матеріалу, композиції або лікарської форми, що містить активну сполуку, яка є ефективною для здійснення деякої цільової терапевтичної дії, відповідно до розумного співвідношення користь/ризик, при введенні відповідно до цільової схеми лікування.
Аналогічним чином, у даній заявці термін "профілактично ефективна кількість" відноситься до такої кількості активної сполуки або матеріалу, композиції або лікарської форми, що містить активну сполуку, яка є ефективною для досягнення деякого бажаного профілактичного ефекту, відповідно до розумного співвідношення користь/ризик, при введенні відповідно до цільової схеми лікування.
Одержання кон'югатів лікарського засобу
Кон'югати антитіло-лікарський засіб згідно з даним винаходом можуть бути отримані шляхом кон'югування наступного лінкера лікарського засобу: аа о
СО, ух ВО в и в и ци нн м М ак ги ше м ши
Ой Ка ка,
Я пог З й и пен нн о ше а нн со НИ Це -к, Ї щ Ї Ще ї | ї Ж.
Комо жито бо М я ду ін Щі удт ---ї г о з азидовмісним антитілом за допомогою способів, описаних, наприклад, у мап сСееї, Е., еї аї.,
Віосопіндаїе Спетівігу, 2015, 26, 2233-2242; БОЇ: 10.1021/ас5.Біосопіспет.5500224. Підходящі способи включають, але не обмежуються цим, кон'югацію без міді, наприклад, у водних умовах з необов'язковим співрозчинником, вибраним із ДМФА, ДМСО та ДМАА.
Лінкер лікарського засобу може бути синтезований відповідно до прикладів, з відповідними модифікаціями, наприклад, з посиланням на УМО 2016/053107 для синтезу лінкера, та на наступні документи для димеру ПБД, наприклад: УМО 2011/130598, УМ/02013/055987,
МО2014/057074.
Суб'єкт/пацієнт
Суб'єкт/лпацієнт може являти собою тварину, ссавця, плацентарного ссавця, сумчастого (наприклад, кенгуру, вомбата), однопрохідну тварину (наприклад, качкодзьоба), гризуна (наприклад, морську свинку, хом'яка, пацюка, мишу), представника мишачих (наприклад, мишу), зайцеподібного (наприклад, кролика), пернатого (наприклад, птаха), представника собачих (наприклад, собаку), представника котячих (наприклад, кішку), представника кінських (наприклад, коня), свиноподібного (наприклад, свиню), представника овечих (наприклад, вівцю), представника бичачих (наприклад, корову), примату, мавпоподібного (наприклад, мавпу або людиноподібну мавпу), мавпу (наприклад, мартишку, павіана), людиноподібну мавпу (наприклад, горилу, шимпанзе, орангутана, гібона) або людину.
Зо Крім того, суб'єкт/лацієнт може мати будь-яку з його форм розвитку, наприклад, плід.
Відповідно до одного переважного варіанта реалізації даного винаходу суб'єкт/пацієнт являє собою людину.
Виклад сутності винаходу
Наступні пронумеровані твердження описують деякі конкретно передбачені комбінації даного винаходу.
Кон'югати, спрямовані проти 0І К1 1. Кон'югат формули (1):
АР-(ОО р (І) у якій:
АБ являє собою антитіло, яке зв'язується з 0І К1; рі. являє собою
Ем х в 8. і КЕ ай Кооенко КМ КЕ ГТ Ж
З ну Св джин т Он
М рей ве яд тя яки є А
ГУ ши ща А яд А У чи
З ра Зх Й зд -де ра 9 де:
Х вибраний з групи, що включає: одинарний зв'язок, -СНе- і -С2НаА-; п становить від 1 до 8; т дорівнює 0 або 1;
В' являє собою метил або феніл; якщо між С2 і СЗ присутній подвійний зв'язок, Е? вибраний з групи, що складається 3: (а) С5ло арильної групи, необов'язково заміщеної одним або більше замісниками, вибраними з групи, що включає: галоген, нітро, ціано, простий ефір, карбокси, складний ефір,
Сі-; алкіл, Сз-7 гетероцикліл і біс-оксі-С.1-з алкілен; (б) Сі насиченого аліфатичного алкілу; (іс) Сзє насиченого циклоалкілу; в
КА
! в . . . . (іа) ,де кожний з К-", І22 ії КЗ незалежно вибраний з Н, С.:-з насиченого алкілу,
Сг-з алкенілу, Сг-з алкінілу та циклопропілу, причому зазначене загальне число атомів вуглецю в групі К2 становить не більше 5; десь
АК АХ оте (іє) ,де один із Кеза і 25» являє собою Н, а інший вибраний з: фенілу, причому феніл необов'язково заміщений групою, вибраною з галогену, метилу, метокси; піридилу; та тіофенілу; і б, м (І) КО, де 22" вибраний з: Н; Сіз насиченого алкілу; Сгз алкенілу; Сгз алкінілу; циклопропілу; фенілу, причому феніл необов'язково заміщений групою, вибраною з галогену, метилу, метокси; піридилу; та тіофенілу;
Кр 265 якщо між С2 і СЗ присутній одинарний зв'язок, то В? являє собою Кк , де Беба і ребь незалежно вибрані з Н, Е, С:-4 насиченого алкілу, С2з алкенілу, причому алкільна й алкенільна групи необов'язково заміщені групою, вибраною з Сі-4 алкіламідо й С:і.4 алкілового складного ефіру; або, якщо один із Б2ба і В2б5 являє собою Н, інший вибраний з нітрилу й С:-4 алкілового складного ефіру; якщо між С2' і С3! присутній подвійний зв'язок, то КЕ? вибраний з групи, що складається з: (йа) Свло арильної групи, необов'язково заміщеної одним або більше замісниками,
Зо вибраними з групи, що включає: галоген, нітро, ціано, простий ефір, карбокси, складний ефір,
Сі-; алкіл, Сз-7 гетероцикліл і біс-оксі-С.1-з алкілен; (іїр) Сі-5 насиченого аліфатичного алкілу; (іс) Сзє насиченого циклоалкілу;
ві
КА
31 (ід) Кк , де кожний з КЗ, НЗег Її КЗЗ незалежно вибраний з Н, С:-з насиченого алкілу, Сг-з алкенілу, Сг-з алкінілу та циклопропілу, причому зазначене загальне число атомів вуглецю в групі ВК? становить не більше 5; до
А АК ве (іїє) ,де один із БКЗза і Б3зь являє собою Н, а інший вибраний з: фенілу, причому феніл необов'язково заміщений групою, вибраною з галогену, метилу, метокси; піридилу; та тіофенілу; і жк, м (іх КК, де За вибраний з: Н; Сіз насиченого алкілу; Сгз алкенілу; Сгз алкінілу; циклопропілу; фенілу, причому феніл необов'язково заміщений групою, вибраною з галогену, метилу, метокси; піридилу; та тіофенілу; ай - - У У ЗбЬ . якщо між С2' і С3! присутній одинарний зв'язок, то К'2 являє собою Кк ,де ВБЗба | Збь незалежно вибрані з Н, Е, С:-4 насиченого алкілу, С2з алкенілу, причому алкільна й алкенільна групи необов'язково заміщені групою, вибраною з Сі-4 алкіламідо й Сі.4 алкілового складного ефіру; або, якщо один із БЗба і ВЗбь являє собою Н, інший вибраний з нітрилу й С:-4 алкілового складного ефіру; і р становить від 1 до 8. 2. Кон'югат за твердженням 1, у якому Х являє собою одинарний зв'язок. 3. Кон'югат за твердженням 1, у якому Х являє собою -СНе-. 4. Кон'югат за твердженням 1, у якому Х являє собою -С2На-. 5. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-4, у якому п становить 1-4. 6. Кон'югат за твердженням 5, у якому п дорівнює 1. 7. Кон'югат за твердженням 5, у якому п дорівнює 2. 8. Кон'югат за твердженням 5, у якому п дорівнює 4. 9. Сполука за будь-яким із пп. 1-8, в якій між С2 і СЗ присутній подвійний зв'язок, і К? являє собою Св; арильну групу. 10. Сполука за твердженням 9, в якій К? являє собою феніл. 11. Сполука за будь-яким із пп. 1-8, в якій між С2 і СЗ присутній подвійний зв'язок, і К2 являє собою Св-іо арильну групу. 12. Сполука за будь-яким із пп. 9-11, в якій К2 несе від однієї до трьох груп-замісників. 13. Сполука за будь-яким із пп. 9-12, в якій зазначені замісники вибрані з метокси, етокси,
Зо фтору, хлору, ціано, біс-оксиметилену, метилпіперазинілу, морфоліно та метилтіофенілу. 14. Сполука за будь-яким із пп. 1-8, в якій між С2 і СЗ присутній подвійний зв'язок, і 22 являє собою С..-5 насичену аліфатичну алкільну групу. 15. Сполука за твердженням 14, в якій КЕ? являє собою метил, етил або пропіл. 16. Сполука за будь-яким із пп. 1-8, в якій між С2 і СЗ присутній подвійний зв'язок, і 22 являє собою С В: насичену циклоалкільну групу. 17. Сполука за твердженням 16, в якій ЕК? являє собою циклопропіл. 18. Сполука за будь-яким із пп. 1-8, в якій між С2 і СЗ присутній подвійний зв'язок, і К2 являє собою групу формули: в:
КА
В
19. Сполука за твердженням 18, в якій зазначене загальне число атомів вуглецю в групі К2 становить не більше 4. 20. Сполука за твердженням 19, в якій зазначене загальне число атомів вуглецю в групі К2 становить не більше 3.
21. Сполука за будь-яким із пп. 18-20, в якій один із К-", ІЗ22 і КЗ являє собою Н, при цьому дві інші групи вибрані з Н, С.-з насиченого алкілу, С2-з алкенілу, Сг-з алкінілу та циклопропілу. 22. Сполука за будь-яким із пп. 18-20, в якій два з К-, В: і В являють собою Н, при цьому інша група вибрана з Н, С.і-з насиченого алкілу, Сг-з алкенілу, Сг-з алкінілу та циклопропілу. 23. Сполука за будь-яким із пп. 1-8, в якій між С2 і СЗ присутній подвійний зв'язок, і 22 являє собою групу формули: робь
АК АК ов 24. Сполука за твердженням 23, в якій В? являє собою групу: сто 25. Сполука за будь-яким із пп. 1-8, в якій між С2 і СЗ присутній подвійний зв'язок, і 22 являє собою групу формули:
С ля 26. Сполука за твердженням 25, в якій В" вибраний з Н, метилу, етилу, етенілу й етинілу. 27. Сполука за твердженням 26, в якій КЕ?" вибраний з Н і метилу. 28. Сполука за будь-яким із пп. 1-8, в якій між С2 і СЗ присутній одинарний зв'язок, В? являє й добь й собою , а в2ба | В265 обидва являють собою Н. 29. Сполука за будь-яким із пп. 1-8, в якій між С2 і СЗ присутній одинарний зв'язок, В? являє
Ко 265 й собою Кк ,а Б2ба і 265 обидва являють собою метил. 30. Сполука за будь-яким із пп. 1-8, в якій між С2 і СЗ присутній одинарний зв'язок, К? являє
Ки робь І , й й - : собою ;, один із Б2ба і В2бЬ являє собою Н, а інший вибраний з С.-4 насиченого алкілу,
Сг-з алкенілу, причому алкільна й алкенільна групи необов'язково заміщені. 31. Сполука за будь-яким із пп. 1-30, в якій між С2' і С3' присутній подвійний зв'язок, і Б/2 являє собою Св7 арильну групу. 32. Сполука за твердженням 31, в якій Кг являє собою феніл. 33. Сполука за будь-яким із пп. 1-30, в якій між С2' і С3' присутній подвійний зв'язок, і Б/2 являє собою Св-1іо арильну групу. 34. Сполука за будь-яким із пп. 31-33, в якій Кг несе від однієї до трьох груп-замісників. 35. Сполука за будь-яким із пп. 31-34, в якій зазначені замісники вибрані з метокси, етокси, фтору, хлору, ціано, біс-оксиметилену, метилпіперазинілу, морфоліно та метилтіофенілу.
Ко) 36. Сполука за будь-яким із пп. 1-30, в якій між С2' і С3' присутній подвійний зв'язок, і Кг являє собою Сі. насичену аліфатичну алкільну групу. 37. Сполука за твердженням 36, в якій ЕК? являє собою метил, етил або пропіл. 38. Сполука за будь-яким із пп. 1-30, в якій між С2' і С3' присутній подвійний зв'язок, і Кг являє собою Сз.-є насичену циклоалкільну групу. 39. Сполука за твердженням 38, в якій К'? являє собою циклопропіл. 40. Сполука за будь-яким із пп. 1-30, в якій між С2' ії С3' присутній подвійний зв'язок, і БК: являє собою групу формули: ві
КА
З!
41. Сполука за твердженням 40, в якій зазначене загальне число атомів вуглецю в групі К"2 становить не більше 4. 42. Сполука за твердженням 41, в якій зазначене загальне число атомів вуглецю в групі К/2 становить не більше 3. 43. Сполука за будь-яким із пп. 40-42, в якій один із БУ", ІВЗ2 і ЕЗЗ являє собою Н, при цьому дві інші групи вибрані з Н, С.-з насиченого алкілу, С2-з алкенілу, Сг-з алкінілу та циклопропілу. 44. Сполука за будь-яким із пп. 40-42, в якій два з КУ", ІВз2 і З являють собою Н, при цьому інша група вибрана з Н, С.-з насиченого алкілу, Сг-з алкенілу, Сг-з алкінілу та циклопропілу. 45. Сполука за будь-яким із пп. 1-30, в якій між С2' і С3' присутній подвійний зв'язок, і Б: являє собою групу формули:
ЗБЬ
Кк ря ЗБа
КАК, 46. Сполука за твердженням 45, в якій К/2 являє собою групу: сто 47. Сполука за будь-яким із пп. 1-30, в якій між С2' ії С3' присутній подвійний зв'язок, і БК: являє собою групу формули: і Я
Кк . 48. Сполука за твердженням 47, в якій КЗ" вибраний з Н, метилу, етилу, етенілу й етинілу. 49. Сполука за твердженням 48, в якій КУ" вибраний з Н і метилу. 50. Сполука за будь-яким із пп. 1-30, в якій між С2' і С3' присутній одинарний зв'язок, В? й руб . ь являє собою ;,а ВЗба і ВЗ обидва являють собою Н. 51. Сполука за будь-яким із пп. 1-30, в якій між С2' і С3' присутній одинарний зв'язок, В? й руб . ь являє собою ,а БЗба і ВЗ обидва являють собою метил. 52. Сполука за будь-яким із пп. 1-30, в якій між С2' ії С3' присутній одинарний зв'язок, К/2 й г ші - - - У У являє собою , один із КЗба | ДЗбЬ являє собою Н, а інший вибраний з С.і-4 насиченого алкілу, Сгз алкенілу, причому алкільна й алкенільна групи необов'язково заміщені. 53. Кон'югат за твердженням 1, у якому ОЇ. являє собою:
Гая дев ик | я ту 2 ях я ак бе о дит сх рова й м. о я В кт ка о раз - о у І Х я
ВА
, Е р я. дет я рана на они - г ва чик Ї. . А К Глшк мак я жи теру у т дв
Зб
54. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-53, у якому зазначене антитіло містить домен МН, що містить СОКЗ МН з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 7. 55. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-54, у якому зазначене антитіло містить домен МН, що містить СОК2 МН з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІО МО. б і/або СОБІ МН з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮО МО. 5. 56. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-55, у якому зазначене антитіло містить домен МН, що містить СОКЗ МН з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 7, СОК2 МН з амінокислотною послідовністю ЗЕО І МО. 6 і СОК1 МН з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 5. 57. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-56, у якому зазначене антитіло містить домен МН, що містить послідовність ЗЕО ІЮ МО. 1. 58. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-57, у якому зазначене антитіло містить домен Мі, що містить СОКЗ МІ. з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 10. 59. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-58, у якому зазначене антитіло містить домен Мі, що містить СОК2 МІ з амінокислотною послідовністю ЗЕО І МО. 9 і/або СОБІ Мі з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮО МО. 8. 60. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-59, у якому зазначене антитіло містить домен Мі, що містить СОКЗ МІ. з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 10, СОКІ2 МІ. з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 9 ії СОКІ1 МІ. з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 8. 61. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-60, у якому зазначене антитіло містить домен Мі, що містить послідовність ЗЕО ІЮ МО. 2. 62. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-61, у якому зазначене антитіло являє собою інтактне антитіло. 63. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-62, у якому зазначене антитіло містить важкий ланцюг, що містить послідовність 5ЕО ІЮ МО. 3, або важкий ланцюг, що містить послідовність ЗЕО ІЮ МО. 11. 64. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-63, у якому зазначене антитіло містить легкий ланцюг, що містить послідовність ХЕО ІЮ МО. 4. 65. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-64, у якому зазначене антитіло є гуманізованим, деімунізованим або антитілом зі зміненою поверхнею.
Зо 66. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-65, у якому на зазначеному антитілі відсутні некон'юговані азидні групи. 67. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-66, у якому р дорівнює 1, 2, З або 4. 68. Композиція, яка містить суміш кон'югатів антитіло-лікарський засіб за будь-яким із пп. 1- 67, причому зазначене середнє навантаження лікарським засобом на антитіло в зазначеній суміші кон'югатів антитіло-лікарський засіб становить від приблизно 1 до приблизно 4. 69. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-67 для застосування в терапії. 70. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-67 для застосування в лікуванні проліферативного захворювання в суб'єкта. 71. Кон'югат за твердженням 70, у якому зазначене захворювання являє собою рак. 72. Кон'югат за твердженням 71, у якому зазначений рак являє собою рак, вибраний з групи, що включає: гепатоцелюлярну карциному, гепатобластому, недрібноклітинний рак легенів, дрібноклітинний рак легенів, рак товстої кишки, рак молочної залози, рак шлунку, рак підшлункової залози, нейробластому, рак надниркової залози, феохромоцитому, парагангліому, медулярну карциному щитовидної залози, рак кістякових м'язів, ліпосаркому, гліому, пухлину
Вільмса, нейроендокринні пухлини, гострий мієлолейкоз і мієлодиспластичний синдром. 73. Фармацевтична композиція, яка містить кон'югат за будь-яким із пп. 1-67 і фармацевтично прийнятний розріджувач, носій або допоміжну речовину. 74. Фармацевтична композиція за твердженням 73, яка додатково містить терапевтично ефективну кількість хіміотерапевтичного агента. 75. Застосування кон'югата за будь-яким із пп. 1-67 в одержанні лікарського засобу для застосування в лікуванні проліферативного захворювання в суб'єкта. 76. Спосіб лікування раку, який включає введення пацієнту фармацевтичної композиції за твердженням 74. 77. Спосіб за твердженням 76, у якому зазначеному пацієнту вводять хіміотерапевтичний агент в комбінації з зазначеним кон'югатом.
Кон'югати, спрямовані проти КААДО1 1. Кон'югат формули (1):
АВБ-(0О р (І) у якій: 60 АБ являє собою антитіло, яке зв'язується з КААС 1;
рі. являє собою
М.
Б ху мч Н
БО бий 7 1 в с Г Ба й мк, я у 1 ГУД шуй з Ж ї вч | зн ж вай з й Бе н е п Н Н НУ |Ї Е п сжх, НІ ин, т я и й зр , й АН
М. ее чи им 2 Я ша нн с - ні ен нал он и я ! і реч ра о я. ра - М. 7 і дяк ще о с ди Го Го; хе я хидй, я:
В У де:
Х вибраний з групи, що включає: одинарний зв'язок, -СНе- і -С2НаА-; п становить від 1 до 8; т дорівнює 0 або 1;
В' являє собою метил або феніл; якщо між С2 і СЗ присутній подвійний зв'язок, 2? вибраний з групи, що складається з: (а) С5ло арильної групи, необов'язково заміщеної одним або більше замісниками, вибраними з групи, що включає: галоген, нітро, ціано, простий ефір, карбокси, складний ефір,
Сі-; алкіл, Сз-7 гетероцикліл і біс-оксі-С.1-з алкілен; (б) Сі насиченого аліфатичного алкілу; (іс) Сз-є насиченого циклоалкілу; 2
КА
Ї В У! 21 221 раг3 У! П (іа) ,де кожний з К-", ІЗ22 ії КЗ незалежно вибраний з Н, С.:-з насиченого алкілу,
Сг-з алкенілу, Сг-з алкінілу та циклопропілу, причому зазначене загальне число атомів вуглецю в групі К2 становить не більше 5; до
АК АХ оте (іє) ,де один із Кеза і 25» являє собою Н, а інший вибраний з: фенілу, причому феніл необов'язково заміщений групою, вибраною з галогену, метилу, метокси; піридилу; та тіофенілу; і (І , де КК" вибраний з: Н; Сі-з насиченого алкілу; Сгз алкенілу; Сг-з алкінілу; циклопропілу; фенілу, причому феніл необов'язково заміщений групою, вибраною з галогену, метилу, метокси; піридилу; та тіофенілу; й ї і 1 у ' 2 доб 2гба ї ргбЬ якщо між С2 і СЗ3 присутній одинарний зв'язок, то К? являє собою ;, де Кеда | Є незалежно вибрані з Н, Е, С:-4 насиченого алкілу, С2з алкенілу, причому алкільна й алкенільна групи необов'язково заміщені групою, вибраною з Сі-4 алкіламідо й Сі.4 алкілового складного ефіру; або, якщо один із Б2ба і В2б5 являє собою Н, інший вибраний з нітрилу й С:-4 алкілового складного ефіру;
Зо якщо між С2' і С3! присутній подвійний зв'язок, то К!? вибраний з групи, що складається з: (йа) Свло арильної групи, необов'язково заміщеної одним або більше замісниками, вибраними з групи, що включає: галоген, нітро, ціано, простий ефір, карбокси, складний ефір,
Сі-7 алкіл, Сз-7 гетероцикліл і біс-оксі-С:-з алкілен; (іїр) Сі-5 насиченого аліфатичного алкілу;
(іс) Сзє насиченого циклоалкілу; ні
КА
31 (ід) Кк ,де кожний з КЗ!', ІВз2 і КЗЗ незалежно вибраний з Н, С.-з насиченого алкілу,
Сг-з алкенілу, Сг-з алкінілу та циклопропілу, причому зазначене загальне число атомів вуглецю в групі ЕК? становить не більше 5; де
АК АК ве (іїє) , де один із БЗза | ВЗзЬ являє собою Н, а інший вибраний з: фенілу, причому феніл необов'язково заміщений групою, вибраною з галогену, метилу, метокси; піридилу; та тіофенілу; і жк, м (іх КК, де За вибраний з: Н; Сіз насиченого алкілу; Сгз алкенілу; Сгз алкінілу; циклопропілу; фенілу, причому феніл необов'язково заміщений групою, вибраною з галогену, метилу, метокси; піридилу; та тіофенілу; й - - г - зб й якщо між С2" і С3! присутній одинарний зв'язок, то В? являє собою Кк ,;де БЗба | Дб незалежно вибрані з Н, Е, С:-4 насиченого алкілу, С2з алкенілу, причому алкільна й алкенільна групи необов'язково заміщені групою, вибраною з Сі-4 алкіламідо й Сі.4 алкілового складного ефіру; або, якщо один із БЗба і ВЗ» являє собою Н, інший вибраний з нітрилу й С.:-4 алкілового складного ефіру; і р становить від 1 до 8. 2. Кон'югат за твердженням 1, у якому Х являє собою одинарний зв'язок. 3. Кон'югат за твердженням 1, у якому Х являє собою -СНе-. 4. Кон'югат за твердженням 1, у якому Х являє собою -С2На-. 5. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-4, у якому п становить 1-4. 6. Кон'югат за твердженням 5, у якому п дорівнює 1. 7. Кон'югат за твердженням 5, у якому п дорівнює 2. 8. Кон'югат за твердженням 5, у якому п дорівнює 4. 9. Сполука за будь-яким із пп. 1-8, в якій між С2 і СЗ присутній подвійний зв'язок, і К? являє собою Св; арильну групу. 10. Сполука за твердженням 9, в якій К2 являє собою феніл. 11. Сполука за будь-яким із пп. 1-8, в якій між С2 і СЗ присутній подвійний зв'язок, і К2 являє собою Св-іо арильну групу. 12. Сполука за будь-яким із пп. 9-11, в якій К2 несе від однієї до трьох груп-замісників. 13. Сполука за будь-яким із пп. 9-12, в якій зазначені замісники вибрані з метокси, етокси, фтору, хлору, ціано, біс-оксиметилену, метилпіперазинілу, морфоліно та метилтіофенілу. 14. Сполука за будь-яким із пп. 1-8, в якій між С2 і СЗ присутній подвійний зв'язок, і 22 являє собою С..-5 насичену аліфатичну алкільну групу. 15. Сполука за твердженням 14, в якій КЕ? являє собою метил, етил або пропіл. 16. Сполука за будь-яким із пп. 1-8, в якій між С2 і СЗ присутній подвійний зв'язок, і 22 являє собою Сз-є насичену циклоалкільну групу. 17. Сполука за твердженням 16, в якій К2 являє собою циклопропіл. 18. Сполука за будь-яким із пп. 1-8, в якій між С2 і СЗ присутній подвійний зв'язок, і К2 являє собою групу формули: в:
КА я . 19. Сполука за твердженням 18, в якій зазначене загальне число атомів вуглецю в групі К2 становить не більше 4. 20. Сполука за твердженням 19, в якій зазначене загальне число атомів вуглецю в групі К2 становить не більше 3.
21. Сполука за будь-яким із пп. 18-20, в якій один із К-", ІЗ22 і КЗ являє собою Н, при цьому дві інші групи вибрані з Н, С.-з насиченого алкілу, С2-з алкенілу, Сг-з алкінілу та циклопропілу. 22. Сполука за будь-яким із пп. 18-20, в якій два з К-, В: і В являють собою Н, при цьому інша група вибрана з Н, С.-з насиченого алкілу, Сг-з алкенілу, Сг-з алкінілу та циклопропілу. 23. Сполука за будь-яким із пп. 1-8, в якій між С2 і СЗ присутній подвійний зв'язок, і 22 являє собою групу формули: робь
АК АК ов 24. Сполука за твердженням 23, в якій КЕ? являє собою групу: сто 25. Сполука за будь-яким із пп. 1-8, в якій між С2 і СЗ присутній подвійний зв'язок, і 22 являє собою групу формули:
С ля 26. Сполука за твердженням 25, в якій ЕЕ" вибраний з Н, метилу, етилу, етенілу й етинілу. 27. Сполука за твердженням 26, в якій КЕ?" вибраний з Н і метилу. 28. Сполука за будь-яким із пп. 1-8, в якій між С2 і СЗ присутній одинарний зв'язок, В? являє
Кр добь й собою , а в2ба | В265 обидва являють собою Н. 29. Сполука за будь-яким із пп. 1-8, в якій між С2 і СЗ присутній одинарний зв'язок, В? являє
Кр добь й собою , а в2ба | В265 обидва являють собою метил. 30. Сполука за будь-яким із пп. 1-8, в якій між С2 і СЗ присутній одинарний зв'язок, К2 являє й десь . . нин - . собою ;, один із К2ба і 265 являє собою Н, а інший вибраний з С.-4 насиченого алкілу,
Сг-з алкенілу, причому алкільна й алкенільна групи необов'язково заміщені. 31. Сполука за будь-яким із пп. 1-30, в якій між С2' і С3' присутній подвійний зв'язок, і Б/2 являє собою Св7 арильну групу. 32. Сполука за твердженням 31, в якій Кг являє собою феніл. 33. Сполука за будь-яким із пп. 1-30, в якій між С2' і С3' присутній подвійний зв'язок, і Б/2 являє собою Св-1іо арильну групу. 34. Сполука за будь-яким із пп. 31-33, в якій Кг несе від однієї до трьох груп-замісників. 35. Сполука за будь-яким із пп. 31-34, в якій зазначені замісники вибрані з метокси, етокси, фтору, хлору, ціано, біс-оксиметилену, метилпіперазинілу, морфоліно та метилтіофенілу.
Ко) 36. Сполука за будь-яким із пп. 1-30, в якій між С2' і С3' присутній подвійний зв'язок, і Кг являє собою Сі. насичену аліфатичну алкільну групу. 37. Сполука за твердженням 36, в якій 22 являє собою метил, етил або пропіл. 38. Сполука за будь-яким із пп. 1-30, в якій між С2' ії С3' присутній подвійний зв'язок, і БК: являє собою Сз.-є насичену циклоалкільну групу. 39. Сполука за твердженням 38, в якій К'? являє собою циклопропіл. 40. Сполука за будь-яким із пп. 1-30, в якій між С2' ії С3' присутній подвійний зв'язок, і БК: являє собою групу формули: в в
41. Сполука за твердженням 40, в якій зазначене загальне число атомів вуглецю в групі К"2 становить не більше 4. 42. Сполука за твердженням 41, в якій зазначене загальне число атомів вуглецю в групі Б'2 становить не більше 3. 43. Сполука за будь-яким із пп. 40-42, в якій один із БУ", ІВЗ2 і ЕЗЗ являє собою Н, при цьому дві інші групи вибрані з Н, С.-з насиченого алкілу, С2-з алкенілу, Сг-з алкінілу та циклопропілу. 44. Сполука за будь-яким із пп. 40-42, в якій два з КУ", ІВз2 і З являють собою Н, при цьому інша група вибрана з Н, С.-з насиченого алкілу, Сг-з алкенілу, Сг-з алкінілу та циклопропілу. 45. Сполука за будь-яким із пп. 1-30, в якій між С2' і С3' присутній подвійний зв'язок, і Б: являє собою групу формули:
ЗБЬ
Кк ря ЗБа
КАК, 46. Сполука за твердженням 45, в якій К/2 являє собою групу: сто 47. Сполука за будь-яким із пп. 1-30, в якій між С2' ії С3' присутній подвійний зв'язок, і БК: являє собою групу формули: і Я
Кк . 48. Сполука за твердженням 47, в якій КЗ" вибраний з Н, метилу, етилу, етенілу й етинілу. 49. Сполука за твердженням 48, в якій КЗ" вибраний з Н і метилу. 50. Сполука за будь-яким із пп. 1-30, в якій між С2' і С3' присутній одинарний зв'язок, В? й руб . ь являє собою , а КЗба | ВЗ обидва являють собою Н. 51. Сполука за будь-яким із пп. 1-30, в якій між С2' і С3' присутній одинарний зв'язок, В? й руб . ь являє собою ,а БЗба і ВЗ обидва являють собою метил. 52. Сполука за будь-яким із пп. 1-30, в якій між С2' ії С3' присутній одинарний зв'язок, К/2 й г ші - - - У У являє собою , один із КЗба | ДЗбЬ являє собою Н, а інший вибраний з С.і-4 насиченого алкілу, Сгз алкенілу, причому алкільна й алкенільна групи необов'язково заміщені. 53. Кон'югат за твердженням 1, у якому ОЇ являє собою:
Бу рон ву, й : НАДАЄ: , ї Е ;
ОО Кох : «ДИ: Ну
Ше "ух УК шт "м ре я а ни їх як, з що р! -о й я Ох
Я Ін м ни ше що, пий о КК, ре я - й т
Б ШК
Й Н он
М. ран о аея пана жо и я Ї Ї ; соло КА ее є притч ди о дн вк
54. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-53, у якому зазначене антитіло містить домен МН, що містить СОЕЗ МН з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 107. 55. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-54, у якому зазначене антитіло містить домен МН, що містить СОК2 МН з амінокислотною послідовністю ЗЕО І МО. 106 і/або СОБ1 МН з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 105. 56. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-55, у якому зазначене антитіло містить домен МН, що містить СОКЗ МН з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 107, СОК2 МН з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 106 ї СОК1 МН з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 105. 57. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-56, у якому зазначене антитіло містить домен МН, що містить послідовність зЕО ІЮ МО. 101. 58. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-57, у якому зазначене антитіло містить домен Мі, що містить СОКЗ МІ. з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 110. 59. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-58, у якому зазначене антитіло містить домен Мі, що містить СОК2 Мі з амінокислотною послідовністю ЕС І МО. 109 і/або СОБ1 Мі з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 108. 60. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-59, у якому зазначене антитіло містить домен Мі, що містить СОКЗ МІ. з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 110, СОК2 МІ. з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 109 ії СОКІ1 МІ. з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 108. 61. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-60, у якому зазначене антитіло містить домен Мі, що містить послідовність зЕО ІЮ МО. 102. 62. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-60, у якому зазначене антитіло містить домен Мі, що містить послідовність 5ЕО ІЮ МО. 113. 63. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-60, у якому зазначене антитіло містить домен Мі, що містить послідовність 5ЕО ІЮ МО. 115. 64. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-63, у якому зазначене антитіло являє собою інтактне антитіло. 65. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-64, у якому зазначене антитіло містить важкий ланцюг, що містить послідовність ЗЕО ІЮ МО. 103, або важкий ланцюг, що містить послідовність ХЕО ІЮ МО. 111.
Зо 66. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-65, у якому зазначене антитіло містить легкий ланцюг, що містить послідовність 5ЕО ІЮ МО. 104. 67. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-65, у якому зазначене антитіло містить легкий ланцюг, що містить послідовність 5ЕО ІЮ МО. 114. 68. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-65, у якому зазначене антитіло містить легкий ланцюг, що містить послідовність 5ЕО ІЮ МО. 116. 69. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-68, у якому зазначене антитіло є гуманізованим, деімунізованим або антитілом зі зміненою поверхнею. 70. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-69, у якому на зазначеному антитілі відсутні некон'юговані азидні групи. 71. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-70, у якому р дорівнює 1, 2, З або 4. 72. Композиція, яка містить суміш кон'югатів антитіло-лікарський засіб за будь-яким із пп. 1- 71, причому зазначене середнє навантаження лікарським засобом на антитіло в зазначеній суміші кон'югатів антитіло-лікарський засіб становить від приблизно 1 до приблизно 4. 73. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-71 для застосування в терапії. 74. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-71 для застосування в лікуванні проліферативного захворювання в суб'єкта. 75. Кон'югат за твердженням 74, у якому зазначене захворювання являє собою рак. 76. Кон'югат за твердженням 75, у якому зазначений рак являє собою рак, вибраний з групи, що складається з: раку яєчників, раку молочної залози, раку простати та раку нирок. 77. Фармацевтична композиція, яка містить кон'югат за будь-яким із пп. 1-71 і фармацевтично прийнятний розріджувач, носій або допоміжну речовину. 78. Фармацевтична композиція за твердженням 77, яка додатково містить терапевтично ефективну кількість хіміотерапевтичного агента. 79. Застосування кон'югата за будь-яким із пп. 1-71 в одержанні лікарського засобу для застосування в лікуванні проліферативного захворювання в суб'єкта. 80. Спосіб лікування раку, який включає введення пацієнту фармацевтичної композиції за твердженням 78. 81. Спосіб за твердженням 80, у якому зазначеному пацієнту вводять хіміотерапевтичний агент в комбінації з зазначеним кон'югатом. бо Кон'югати, спрямовані проти мезотеліну
1. Кон'югат формули (1):
АРБ-(О р (І) у якій:
Ар являє собою антитіло, яке зв'язується з мезотеліном; рі. являє собою
Ї М ди: - в
Н п. ух Гі вх ЇЇ в й на ран ше ние Я ра не вона чу ни миши і, Ії ва ти що В з
Я с еле пл; каш
М г ; в и вх Бої у ої ц НЕ й їй ша вин Шай й й. . вити у йо
Га с де:
Х вибраний з групи, що включає: одинарний зв'язок, -СНе- і -С2НаА-; п становить від 1 до 8; т дорівнює 0 або 1;
В' являє собою метил або феніл; якщо між С2 і СЗ присутній подвійний зв'язок, то КЕ? вибраний з групи, що складається з: (а) С5ло арильної групи, необов'язково заміщеної одним або більше замісниками, вибраними з групи, що включає: галоген, нітро, ціано, простий ефір, карбокси, складний ефір,
Сі-; алкіл, Сз-7 гетероцикліл і біс-оксі-С.1-з алкілен; (б) Сі насиченого аліфатичного алкілу; (іс) Сзє насиченого циклоалкілу; 2
КА
! в . . . . (іа) ,де кожний з К-", І22 ії КЗ незалежно вибраний з Н, С.:-з насиченого алкілу,
Сг-з алкенілу, Сг-з алкінілу та циклопропілу, причому зазначене загальне число атомів вуглецю в групі К2 становить не більше 5; до
КА я оте (іє) ,де один із Кеза і 25» являє собою Н, а інший вибраний з: фенілу, причому феніл необов'язково заміщений групою, вибраною з галогену, метилу, метокси; піридилу; та тіофенілу; і
Сх . ля . . . с. (І , де КК" вибраний з: Н; Сі-з насиченого алкілу; Сгз алкенілу; Сг-з алкінілу; циклопропілу; фенілу, причому феніл необов'язково заміщений групою, вибраною з галогену, метилу, метокси; піридилу; та тіофенілу;
Й
. . що і десь . якщо між С2 і СЗ присутній одинарний зв'язок, то В? являє собою , де Б2ба | роб
Зо незалежно вибрані з Н, Е, С:-4 насиченого алкілу, С2з алкенілу, причому алкільна й алкенільна групи необов'язково заміщені групою, вибраною з Сі-4 алкіламідо й С:і.4 алкілового складного ефіру; або, якщо один із Б2ба і В2б5 являє собою Н, інший вибраний з нітрилу й С:-4 алкілового складного ефіру;
якщо між С2' і С3! присутній подвійний зв'язок, то КЕ? вибраний з групи, що складається з: (йа) Свло арильної групи, необов'язково заміщеної одним або більше замісниками, вибраними з групи, що включає: галоген, нітро, ціано, простий ефір, карбокси, складний ефір,
Сі-; алкіл, Сз-7 гетероцикліл і біс-оксі-С.1-з алкілен; (іїр) Сі-5 насиченого аліфатичного алкілу; (іс) Сзє насиченого циклоалкілу; ві
КА
31 (ід) Кк ,де кожний з КЗ! ВЗ? і КЗ незалежно вибраний з Н, Сі-з насиченого алкілу, Сг-з алкенілу, Сг-з алкінілу та циклопропілу, причому зазначене загальне число атомів вуглецю в групі Кг становить не більше 5; до
КА А зве (іє) ,де один із БЗза і ВЗ» являє собою Н, а інший вибраний з: фенілу, причому феніл необов'язково заміщений групою, вибраною з галогену, метилу, метокси; піридилу; та тіофенілу; і жк, м (іх КК, де За вибраний з: Н; Сіз насиченого алкілу; Сгз алкенілу; Сгз алкінілу; циклопропілу; фенілу, причому феніл необов'язково заміщений групою, вибраною з галогену, метилу, метокси; піридилу; та тіофенілу; й - - г - зб й якщо між С2" і С3! присутній одинарний зв'язок, то КК? являє собою Кк ,;де БЗба | Дб незалежно вибрані з Н, Е, С:-4 насиченого алкілу, С2з алкенілу, причому алкільна й алкенільна групи необов'язково заміщені групою, вибраною з Сі-4 алкіламідо й С:і.4 алкілового складного ефіру; або, якщо один із БЗба і ВЗ» являє собою Н, інший вибраний з нітрилу й С.:-4 алкілового складного ефіру; і р становить від 1 до 8. 2. Кон'югат за твердженням 1, у якому Х являє собою одинарний зв'язок. 3. Кон'югат за твердженням 1, у якому Х являє собою -СНе-. 4. Кон'югат за твердженням 1, у якому Х являє собою -С2На-. 5. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-4, у якому п становить 1-4. 6. Кон'югат за твердженням 5, у якому п дорівнює 1. 7. Кон'югат за твердженням 5, у якому п дорівнює 2. 8. Кон'югат за твердженням 5, у якому п дорівнює 4. 9. Сполука за будь-яким із пп. 1-8, в якій між С2 і СЗ присутній подвійний зв'язок, і К2 являє
Зо собою Св; арильну групу. 10. Сполука за твердженням 9, в якій К2 являє собою феніл. 11. Сполука за будь-яким із пп. 1-8, в якій між С2 і СЗ присутній подвійний зв'язок, і К2 являє собою Св-іо арильну групу. 12. Сполука за будь-яким із пп. 9-11, в якій Р? несе від однієї до трьох груп-замісників. 13. Сполука за будь-яким із пп. 9-12, в якій зазначені замісники вибрані з метокси, етокси, фтору, хлору, ціано, біс-оксиметилену, метилпіперазинілу, морфоліно та метилтіофенілу. 14. Сполука за будь-яким із пп. 1-8, в якій між С2 і СЗ присутній подвійний зв'язок, і 22 являє собою С..-5 насичену аліфатичну алкільну групу. 15. Сполука за твердженням 14, в якій К2 являє собою метил, етил або пропіл. 16. Сполука за будь-яким із пп. 1-8, в якій між С2 і СЗ присутній подвійний зв'язок, і К2 являє собою Сз-є насичену циклоалкільну групу. 17. Сполука за твердженням 16, в якій К2 являє собою циклопропіл. 18. Сполука за будь-яким із пп. 1-8, в якій між С2 і СЗ присутній подвійний зв'язок, і К2 являє собою групу формули:
в:
КА в" 19. Сполука за твердженням 18, в якій зазначене загальне число атомів вуглецю в групі К? становить не більше 4. 20. Сполука за твердженням 19, в якій зазначене загальне число атомів вуглецю в групі К2 становить не більше 3. 21. Сполука за будь-яким із пп. 18-20, в якій один із К-", ІЗ22 і КЗ являє собою Н, при цьому дві інші групи вибрані з Н, С.-з насиченого алкілу, С2-з алкенілу, Сг-з алкінілу та циклопропілу. 22. Сполука за будь-яким із пп. 18-20, в якій два з К-, В: і В являють собою Н, при цьому інша група вибрана з Н, С.-з насиченого алкілу, Сг-з алкенілу, Сг-з алкінілу та циклопропілу. 23. Сполука за будь-яким із пп. 1-8, в якій між С2 і СЗ присутній подвійний зв'язок, і 22 являє собою групу формули: вдобь
АК я оте 24. Сполука за твердженням 23, в якій КЕ? являє собою групу: сто 25. Сполука за будь-яким із пп. 1-8, в якій між С2 і СЗ присутній подвійний зв'язок, і 22 являє собою групу формули:
Ж ля 26. Сполука за твердженням 25, в якій ЕЕ" вибраний з Н, метилу, етилу, етенілу й етинілу. 27. Сполука за твердженням 26, в якій КЕ?" вибраний з Н і метилу. 28. Сполука за будь-яким із пп. 1-8, в якій між С2 і СЗ присутній одинарний зв'язок, К? являє й добь . собою , а в2ба | В265 обидва являють собою Н. 29. Сполука за будь-яким із пп. 1-8, в якій між С2 і СЗ присутній одинарний зв'язок, В? являє й добь . собою , а в2ба | В265 обидва являють собою метил. 30. Сполука за будь-яким із пп. 1-8, в якій між С2 і СЗ присутній одинарний зв'язок, К? являє й роб . . - У щ - собою ;, один із К2ба і 265 являє собою Н, а інший вибраний з С.-4 насиченого алкілу,
Сг-з алкенілу, причому алкільна й алкенільна групи необов'язково заміщені. 31. Сполука за будь-яким із пп. 1-30, в якій між С2' і С3' присутній подвійний зв'язок, і Б/2 являє собою Св7 арильну групу. 32. Сполука за твердженням 31, в якій Кг являє собою феніл. 33. Сполука за будь-яким із пп. 1-30, в якій між С2' і С3' присутній подвійний зв'язок, і Б/2 являє собою Св-1іо арильну групу. 34. Сполука за будь-яким із пп. 31-33, в якій Кг несе від однієї до трьох груп-замісників. 35. Сполука за будь-яким із пп. 31-34, в якій зазначені замісники вибрані з метокси, етокси, фтору, хлору, ціано, біс-оксиметилену, метилпіперазинілу, морфоліно та метилтіофенілу. 36. Сполука за будь-яким із пп. 1-30, в якій між С2' і С3' присутній подвійний зв'язок, і Б/2 являє собою Сі. насичену аліфатичну алкільну групу. 37. Сполука за твердженням 36, в якій В'? являє собою метил, етил або пропіл. 38. Сполука за будь-яким із пп. 1-30, в якій між С2' і С3' присутній подвійний зв'язок, і Кг являє собою Сз-є насичену циклоалкільну групу.
39. Сполука за твердженням 38, в якій Кг являє собою циклопропіл. 40. Сполука за будь-яким із пп. 1-30, в якій між С2' і С3' присутній подвійний зв'язок, і Б: являє собою групу формули: ві
КА в 41. Сполука за твердженням 40, в якій зазначене загальне число атомів вуглецю в групі К"2 становить не більше 4. 42. Сполука за твердженням 41, в якій зазначене загальне число атомів вуглецю в групі К/2 становить не більше 3. 43. Сполука за будь-яким із пп. 40-42, в якій один із КУ", І8з2 і КЗЗ являє собою Н, при цьому дві інші групи вибрані з Н, С:-з насиченого алкілу, Сг-з алкенілу, Сг-з алкінілу та циклопропілу. 44. Сполука за будь-яким із пп. 40-42, в якій два з КЗ, ІВз2 і КЗЗ являють собою Н, при цьому інша група вибрана з Н, С.-з насиченого алкілу, Сг-з алкенілу, Сг-з алкінілу та циклопропілу. 45. Сполука за будь-яким із пп. 1-30, в якій між С2' і С3' присутній подвійний зв'язок, і Б: являє собою групу формули: дубь ча ЗБа в . 46. Сполука за твердженням 45, в якій ЕК? являє собою групу: сто 47. Сполука за будь-яким із пп. 1-30, в якій між С2' ії С3' присутній подвійний зв'язок, і БК: являє собою групу формули: а з
КО. 48. Сполука за твердженням 47, в якій КЕ" вибраний з Н, метилу, етилу, етенілу й етинілу. 49. Сполука за твердженням 48, в якій КЗ" вибраний з Н і метилу. 50. Сполука за будь-яким із пп. 1-30, в якій між С2' ії С3' присутній одинарний зв'язок, В: й
ЗбЬ . являє собою Кк ,а БЗба і ВЗ65 обидва являють собою Н. 51. Сполука за будь-яким із пп. 1-30, в якій між С2' ї С3' присутній одинарний зв'язок, В? й
ЗбЬ являє собою Кк ,а БЗба і ВЗ обидва являють собою метил. 52. Сполука за будь-яким із пп. 1-30, в якій між С2' і С3' присутній одинарний зв'язок, В? й
Зб являє собою Кк ;, один із КЗба | ЕЗб5 являє собою Н, а інший вибраний з С.і.4 насиченого алкілу, Сгз алкенілу, причому алкільна й алкенільна групи необов'язково заміщені.
Зо 53. Кон'югат за твердженням 1, у якому 0. являє собою:
Бу
Коли мук, !
М сн з Кт ти і ня дні Й
У г І 54. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-53, у якому зазначене антитіло містить домен МН, що містить СОЕЗ МН з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 207. 55. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-54, у якому зазначене антитіло містить домен МН, що містить СОК2 МН з амінокислотною послідовністю ЗЕО І МО. 206 і/або СОБІ МН з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 205. 56. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-55, у якому зазначене антитіло містить домен МН, що містить СОКЗ МН з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 207, СОК2 МН з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 206 ії СОК1 МН з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 205. 57. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-56, у якому зазначене антитіло містить домен МН, що містить послідовність 5ЕО ІЮ МО. 201. 58. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-57, у якому зазначене антитіло містить домен Мі, що містить СОКЗ МІ. з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 210. 59. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-58, у якому зазначене антитіло містить домен Мі, що містить СОК2 Мі з амінокислотною послідовністю 5ЕО І МО. 209 і/або СОБ1 МІ з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 208. 60. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-59, у якому зазначене антитіло містить домен Мі, що містить СОКЗ МІ. з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 210, СОК2 МІ. з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 209 ї СОКІ1 МІ. з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 208. 61. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-60, у якому зазначене антитіло містить домен Мі, що містить послідовність 5ЕО ІЮ МО. 202. 62. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-61, у якому зазначене антитіло являє собою інтактне антитіло. 63. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-62, у якому зазначене антитіло містить важкий ланцюг, що містить послідовність ЗЕО ІЮ МО. 203, або важкий ланцюг, що містить послідовність ХЕО ІЮ МО. 211. 64. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-63, у якому зазначене антитіло містить легкий ланцюг, що містить послідовність 5ЕО ІЮ МО. 204. 65. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-53, у якому зазначене антитіло містить домен МН, що містить СОЕЗ МН з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 218. 66. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-53 або 65, у якому зазначене антитіло містить домен УН, що містить СОМК2 МН з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 217 і/або СОКІ МН з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 216. 67. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-53 або 65-66, у якому зазначене антитіло містить домен
МН, що містить СОКЗ МН з амінокислотною послідовністю ЗЕ ІЮ МО. 218, СОК2 МН з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 217 ії СОКІ1 МН з амінокислотною послідовністю ЗЕ
ІО МО. 216. 68. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-53 або 65-67, у якому зазначене антитіло містить домен
МН, що містить послідовність ЗЕО ІЮ МО. 212. 69. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-53 або 65-68, у якому зазначене антитіло містить домен
МІ, що містить СОКЗ МІ. з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 221. 70. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-53 або 65-69, у якому зазначене антитіло містить домен
МІ, що містить СОК2 МІ. з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 220 і/або СОКІ1 МІ з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮО МО. 219. 71. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-53 або 65-70, у якому зазначене антитіло містить домен
МІ, що містить СОКЗ МІ з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 221, СОМ2 МІ з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 220 ії СОКІ1 МІ. з амінокислотною послідовністю ЗЕ
ІО МО. 219.
72. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-53 або 65-71, у якому зазначене антитіло містить домен
МІ, що містить послідовність 5ЕО ІЮ МО. 213. 73. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-53 або 65-72, у якому зазначене антитіло являє собою інтактне антитіло. 74. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-53 або 65-73, у якому зазначене антитіло містить важкий ланцюг, що містить послідовність хЕО ІЮ МО. 214, або важкий ланцюг, що містить послідовність
ЗЕО ІЮ МО. 222. 75. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-53 або 65-74, у якому зазначене антитіло містить легкий ланцюг, що містить послідовність ЗЕО ІЮ МО. 215. 76. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-53, у якому зазначене антитіло містить домен МН, що містить СОЕЗ МН з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 229. 71. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-53 або 76, у якому зазначене антитіло містить домен МН, що містить СОМК2 МН з амінокислотною послідовністю ЗЕО І МО. 228 (або СОК1 МН з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮО МО. 227. 78. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-53 або 76-77, у якому зазначене антитіло містить домен
МН, що містить СОКЗ МН з амінокислотною послідовністю ЗЕ ІЮ МО. 228, СОК2 МН з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 227 ї СОКІ1 МН з амінокислотною послідовністю ЗЕ
ІО МО. 226. 79. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-53 або 76-78, у якому зазначене антитіло містить домен
МН, що містить послідовність ЗЕО ІЮ МО. 223. 80. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-53 або 76-79, у якому зазначене антитіло містить домен
МІ, що містить СОКЗ МІ. з амінокислотною послідовністю 5ЕО І МО. 232. 81. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-53 або 76-80, у якому зазначене антитіло містить домен
М, що містить СОК2 МІ. з амінокислотною послідовністю ЗЕ ІЮ МО. 231 і/або СОКІ1 МІ. з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 230. 82. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-53 або 76-81, у якому зазначене антитіло містить домен
МІ, що містить СОКЗ МІ з амінокислотною послідовністю 5ЕО І МО. 232, СОК2 Мі з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 231 ії СОКІ1 МІ з амінокислотною послідовністю ЗЕ
ІО МО. 230. 83. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-53 або 76-82, у якому зазначене антитіло містить домен
МІ, що містить послідовність 5ЕО ІЮ МО. 224. 84. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-53 або 76-83, у якому зазначене антитіло являє собою інтактне антитіло. 85. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-53 або 76-84, у якому зазначене антитіло містить важкий ланцюг, що містить послідовність хЕО ІЮО МО. 225, або важкий ланцюг, що містить послідовність
ЗЕО ІЮ МО. 233. 86. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-53 або 76-85, у якому зазначене антитіло містить легкий ланцюг, що містить послідовність ЗЕО ІЮ МО. 226. 87. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-53, у якому зазначене антитіло містить домен МН, що містить СОЕЗ МН з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 240. 88. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-53 або 87, у якому зазначене антитіло містить домен МН, що містить СОМК2 МН з амінокислотною послідовністю ЗЕО І МО. 239 і/або СОКІ МН з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІО МО. 238. 89. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-53 або 87-88, у якому зазначене антитіло містить домен
МН, що містить СОКЗ МН з амінокислотною послідовністю ЗЕ ІЮ МО. 240, СОК2 МН з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО. 239 ії СОКІ1 МН з амінокислотною послідовністю 5ЕО
ІО МО. 238. 90. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-53 або 87-89, у якому зазначене антитіло містить домен
МН, що містить послідовність 5ЕО ІЮ МО. 234. 91. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-53 або 87-90, у якому зазначене антитіло містить домен
МІ, що містить СОКЗ МІ. з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 243. 92. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-53 або 87-91, у якому зазначене антитіло містить домен
МІ, що містить СОК2 МІ. з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 242 і/або СОМІ1 МІ з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 241. 93. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-53 або 87-92, у якому зазначене антитіло містить домен
МІ, що містить СОКЗ МІ з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 243, СОК2 Мі з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО. 242 ії СОКІ1 МІ з амінокислотною послідовністю 5ЕО
ІО МО. 241. 94. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-53 або 87-93, у якому зазначене антитіло містить домен 60 МІ, що містить послідовність 5ЕО ІЮ МО. 235.
95. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-53 або 87-94, у якому зазначене антитіло являє собою інтактне антитіло. 96. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-53 або 87-95, у якому зазначене антитіло містить важкий ланцюг, що містить послідовність хЕО ІЮ МО. 236, або важкий ланцюг, що містить послідовність
ЗЕОПЮО МО. 244. 97. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-53 або 87-96, у якому зазначене антитіло містить легкий ланцюг, що містить послідовність ЗЕО ІЮ МО. 237. 98. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-97, у якому зазначене антитіло є гуманізованим, деімунізованим або антитілом зі зміненою поверхнею. 99. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-98, у якому на зазначеному антитілі відсутні некон'юговані азидні групи. 100. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-99, у якому р дорівнює 1, 2, З або 4. 101. Композиція, яка містить суміш кон'югатів антитіло-лікарський засіб за будь-яким із пп. 1- 100, причому зазначене середнє навантаження лікарським засобом на антитіло в зазначеній суміші кон'югатів антитіло-лікарський засіб становить від приблизно 1 до приблизно 4. 102. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-100 для застосування в терапії. 103. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-100 для застосування в лікуванні проліферативного захворювання в суб'єкта. 104. Кон'югат за твердженням 103, у якому зазначене захворювання являє собою рак. 105. Кон'югат за твердженням 104, у якому зазначений рак являє собою рак, вибраний з групи, що складається з: мезотеліоми, раку легенів, раку яєчників або раку підшлункової залози. 106. Фармацевтична композиція, яка містить кон'югат за будь-яким із пп. 1-100 і фармацевтично прийнятний розріджувач, носій або допоміжну речовину. 107. Фармацевтична композиція за твердженням 106, яка додатково містить терапевтично ефективну кількість хіміотерапевтичного агента. 108. Застосування кон'югата за будь-яким із пп. 1-100 в одержанні лікарського засобу для застосування в лікуванні проліферативного захворювання в суб'єкта. 109. Спосіб лікування раку, який включає введення пацієнту фармацевтичної композиції за твердженням 101.
Зо 110. Спосіб за твердженням 109, у якому зазначеному пацієнту вводять хіміотерапевтичний агент в комбінації з зазначеним кон'югатом.
Приклади
Огляд
АБС, розкриті у даній заявці, синтезують за допомогою двоетапного способу. Перший етап являє собою ремоделювання глікану, на якому відбувається обрізка нативного М-з'єднаного глікану до центрального СіІсСМАс, а потім додавання азидо-модифікованого сСаІМАс з утворенням проміжної сполуки антитіло-(заїМАс-Мз. Цю сполуку очищають за допомогою хроматографії на білку А та потім кон'югують з лінкером лікарського засобу на другому етапі.
Ці етапи описані нижче в наступному описі синтезу лікарський засіб-лінкер.
Синтез проміжної сполуки З шо уч ко 1. св, ЕБМ, СМ -БЕ ОА дич яти
МВ-686-є. ! МІЖ и Май їх т вт Куди І
Е І бх є ще п й їй пи бут з т вача ча бр що 3
Розчин ВСМ-спирту (0,384 г, 2,55 ммоль) в МесСМ (25 мл) в атмосфері М2 охолоджували до 0 "С ії по краплях додавали хлорсульфонілізоціанат (С51) (0,255 мл, 415 мг, 2,93 ммоль, 1,15 екв.).
Після перемішування протягом 15 хвилин по краплях додавали ЕїзМ (1,42 мл, 1,03 г, 10,2 ммоль, 4 екв.) і перемішування продовжували протягом ще 10 хвилин. Потім додавали розчин 2-(2-(2-аміноетоксі)етоксі)оцтової кислоти (1,0 г, 6,1 ммоль, 2,4 екв.) в НгО (5 мл) і реакційну суміш перемішували до кімнатної температури протягом 2 год. Після закінчення цього часу додавали СНеЇіз (50 мл) і НгО (100 мл) і розділяли шари. До водного шару в ділильній лійці додавали СНеСі» (100 мл) і рН доводили до 4 за допомогою 1 н НСІ перед поділом шарів.
Водний шар двічі екстрагували із застосуванням СНеосСі» (2х100 мл), органічні шари поєднували, висушували (Маг5О:), фільтрували та концентрували. Залишок очищали за допомогою хроматографії в резервуарній колонці на силікагелі, елюювали із застосуванням СНесСі» до 20 95
МеонН в СНесСі». Вихід склав 0,42 г (1,0 ммоль, 39 9б5) З у вигляді безбарвного липкого воску.
Синтез лінкера лікарського засобу о со ЕЕ ЇЇ в ок зро кх ша: я : В и НЕ Н
Я о ра їх ше
ОО Ото но. |і Ї сн н рен ве она чан Я ж -е М щ- : ПИ і ра: а М рин с ЇХ 1 є и 7 м к7 - и сх
АТО Кк т в - з о. шо он
ЕМ ин ик Й мл а аа не а КУ тА Ак, Ей їй со З оку ще Щ о о т рі кт о о 2 рес я
Б виь о о х НЯ т й й - ти зале щини хр ай н он а з
ИЙ ; нику а
Сл "ув шани шин пит - з чі
Я ч 0 А. н о Е ше з оо
Т он н, М джут. я тА, й й -- за С С у Шк бут Шо о ми син
Сполука 1 може бути синтезована, як описано у ММО2014/057074 - див. сполуку 22. (а) Тетракістрифенілфосфін паладію (РЯ(РРН»з)х, 4,8 мг, 4,15 мкмоль) зважують та поміщають в інертну атмосферу. Розчин піролідину (5,0 мкл, 4,3 мг, 60 мкмоль) у ДХМ (1 мл) дегазують шляхом барботування М2 через розчин. Розчин 1 (27 мг, 24 мкмоль) у ДХМ (6 мл) дегазують шляхом барботування Мо через розчин. Під час барботування розчину із застосуванням Ма додають дегазований розчин піролідину. Зважений Ра(РРН:»)4« розчиняють у
ДХМ 1 мл) і додають 0,9 мл цього розчину. Через 50 хвилин барботування із застосуванням М2 додають ДХМ (25 мл) і суміш промивають водним насиченим МНАСІ (25 мл). Після поділу водний шар екстрагують із застосуванням ДХМ (2х25 мл). Об'єднані органічні шари висушують (Ма»5О4) та концентрують. Залишок очищають методом ОФ-ВЕРХ (30-90 95 Месм (0,1 95 мурашиної кислоти) в Н2гО (0,1 95 мурашиної кислоти)). Об'єднані фракції пропускають через колонки 5РЕ (НСО»хз) та концентрують. Після додавання МесмМм (50 мл) суміш знову концентрують. Отриманий залишок 2 використовують на наступному етапі.
Перетворення реакції можна контролювати за допомогою аналізу методом РХ/МС. Колонка: колонка ХВгідде ВЕН С18 Іпіеїйдепі Зрееа (15), 130 А, 3,5 мкм (4,6 ммх20 мм). Рухома фаза А: вода (0,1 965 мурашиної кислоти), рухома фаза В (0,195 мурашиної кислоти). Виявлення із застосуванням РОА і Е5Іж. Зразки можуть бути отримані шляхом розведення реакційної суміші месм. (Б) До розчину вищевказаного залишку 2 в СНСІ"»з (5 мл) додають розчин З (15 мг, 36 мкмоль, мол. маса 418 г/моль) в СНСІіз (0,8 мл). Отриману суміш додають до твердої речовини ЕОС.НСЇІ (4,7 мг, 25 мкмоль), додавали СНеІі»з (5 мл) і суміш перемішували протягом 30 хвилин. Додають
ДХМ (30 мл) й отриману суміш промивають водою (30 мл). Після розділення водну фазу екстрагують із застосуванням ДХМ (30 мл). Об'єднані органічні шари висушують (Маг5О54) та концентрують. Залишок очищають за допомогою ОФ-ВЕРХ (30-90 95 МесмМ (без кислоти) в НгО (0,01 95 мурашиної кислоти)). Перед збором пробірки для елюції після ВЕРХ заповнюють 5 95 водним (МНа)НСОз. Об'єднані фракції ВЕРХ екстрагують із застосуванням ДХМ (3х20 мл).
Об'єднані органічні шари висушують (Маг5054) та концентрують. Продукт 4 одержують у вигляді ясно-жовтого/білого масла (21 мг, 16 мкмоль, мол. маса 1323 г/моль, 67 95 після двох етапів).
Перетворення реакції можна контролювати за допомогою аналізу методом РХ/МС. Колонка: колонка ХВгідде ВЕН С18 Іпіеїйдепі Зрееа (15), 130 А, 3,5 мкм (4,6 ммх20 мм). Рухома фаза А: вода (0,1 965 мурашиної кислоти), рухома фаза В (0,195 мурашиної кислоти). Виявлення із застосуванням РОА і ЕІ.
Ремоделювання глікану (АОС, спрямований проти І КІ, СопіАт)
Одержання антитіла
Зо Буфер у приблизно 60 мг антитіла до І К1 заміняли 25 мМ тріс/СІ, 150 мМ масі, рнН-8,0 за допомогою колонки для знесолення (325; 4х2,5 мл при 6 мг/мл, завантажених на 4х колонці для знесолення РОТО (ЗЕ 17085101). Потім антитіло із заміненим буфером концентрували до щонайменше 25 мг/мл з використанням відцентрового концентратора Мімазріп 20 (Зідта 2614637). За допомогою УфФ-аналізу при А280-320 нм, використовуючи коефіцієнт екстинкції 1,5, було підтверджено, що концентрація білка становить 28,4 мг/мл.
Реакція ремоделювання
Ремоделювання глікану виконували в однореакторній реакції протягом ночі (16 годин) при кімнатній температурі. Наступну реакційну суміш одержували з додаванням розчинів/реагентів у порядку, докладно представленому нижче: 0,1 Ме-МзбамАс-ООРуводіМО 77777177 96 | 25екв-відносно МАТ З
Процедура очищення на білку А
Зв'язування з білком А й елюювання виконували на колонку НіТгар Марзеїесії Зиге 5 мл (СЕ 11-0034-94). Всі хроматографічні етапи виконували при швидкості потоку 240 см/год., використовуючи систему АКТА Ргіте ріиз. Колонку підготовляли та використовували у такий спосіб:
Етап ендотоксинів
Етап 25 ММ тріс/СІ, 25 мМ Масі, рн-8,0 20 промивання/видалення тритону опт. од.
Після афінного очищення на білку А невеликий зразок продукту може бути відновлений із застосуванням ЮТТ і згодом піддадуть аналізу методом МС. Типовий мас-спектр успішної реакції переносу показує утворення одного основного продукту (90 95 від загального важкого ланцюга) переносу, що виникає в результаті, модифікованої галактози до антитіла із заміщеним центральним сСІСМАс(Рис), і мінорного продукту (4-10 95 від загального важкого ланцюга), отриманого в результаті переносу модифікованої галактози до антитіла із заміщеним центральним сСІСМАс (без фукози).
Заміна буфера після очищення на білку А
Далі, буфер у ремодельованому й очищеному СаїЇМас-Мз-антитілі до ОІК1 заміняли фосфатно-сольовим буфером (ФСБ) і концентрували до приблизно 16,6 мг/мл з використанням віддентрового концентратора Мімазріп 20 (Зідта 2614637). Елюат після очищення на білку А розбавляли ФСБ у співвідношенні 1:1, потім повторно концентрували до первісного об'єму та повторювали це 6 разів. Нарешті, об'єм зменшували до цільового значення 16-17 мг/мл, і зразок витягали з пристрою. За допомогою УФ-аналізу при А280-320 нм, використовуючи коефіцієнт екстинкції 1,5, було підтверджено, що концентрація білка становить 16,4 мг/мл, і всього було виділено 2,7 мл.
Кон'югація 4 з модифікованим антитілом для одержання СопіА1
Умови реакції 2,71 мл 16,4 мг/мл азидо-модифікованого антитіла до І К1 (у цьому прикладі НиВа-1-3а, описане у даній заявці) 0,3 мл 10 мМ 4 у диметилацетаміді
Реакційну суміш ретельно перемішували та залишали для протікання кон'югації протягом ночі (16 годин) при кімнатній температурі. Кон'югаційну суміш фільтрували через РМОБ-фільтр з розміром пор 0,2 мкм (МіПроге 5 ЗУ033К5) перед остаточним очищенням і виготовленням складу.
Очищення Соп|А1
Профільтровану кон'югаційну суміш очищали з використанням відцентрового концентратора
Зо Мімазріп 20 (Зідта 2614637). Кон'югаційну суміш розбавляли 30 мМ гістидину НСІ, 200 мМ сорбіту, рН-б,0 у співвідношенні 1:11 і повторно концентрували до первісного об'єму. Це повторювали 12 разів перед витягом очищеної маси АОС з центрифужного пристрою.
Концентрацію білка визначали за допомогою кількісного аналізу методом гель-проникаючої хроматографії (ЗЕС), використовуючи калібровану криву антитіла та кон'югат, розведений до приблизно 5 мг/мл додатковими 30 мМ гістидину НОСІ, 200 мМ сорбіту, рнН-6,0. Твін 20 додавали до 0,02 95 мас./об. з 1 95 маткового розчину в 30 мМ гістидину НСІ, 200 мМ сорбіту, рН-б,0, і концентрацію повторно тестували за допомогою кількісного аналізу методом 5ЕС. Відбирали зразок для тестування, а залишок розділяли на аліквоти по 1 мл і заморожували при -80 "С.
Аналіз продукту показав наступні властивості:
Прозорий, безбарвний, без частинок 5,17 |білок| за даними ЗЕС
Середній ВАК 1,87 (за даними хроматографії зі зворотньою фазою) 0,09 ЕЄЕ/мг ендотоксину «4,5 95 вільної сполуки лікарський засіб-лінкер рн-б,о6
Ремоделювання глікану (АОС, спрямований проти КААСІ1, Сопід2)
Одержання антитіла
Буфер у приблизно 150 мг антитіла до КААСІ1 (приблизно 25 мл при 6,13 мг/мл у ФСБ, рН-7,4) заміняли 25 мМ тріс/СІ, 150 мм Масі, рН-8,0 і концентрували до 225 мг/мл з використанням відцентрових концентраторів Мімазріп 20 (5ідта 24614637). Спочатку антитіло концентрували до 12 мл, після цього розбавляли 25 мМ тріс/СІ, 150 мМ масі, рн-8,0 у співвідношенні 1:1, потім повторно концентрували до 12 мл, і цей спосіб повторювали 6 разів.
Нарешті, матковий розчин із заміненим буфером додатково концентрували до б мл.
Концентрацію білка визначали за допомогою УфФф-аналізу при А280-320 нм, використовуючи коефіцієнт екстинкції 1,5, а потім розбавляли до 25 мг/мл із застосуванням 25 мМ тріс/сСіІ, 150
ММ масі, рн-8,0.
Реакція ремоделювання
Ремоделювання глікану виконували в однореакторній реакції протягом ночі (16 годин) при кімнатній температурі. Наступну реакційну суміш одержували, додаючи розчини/реагенти у порядку, докладно представленому нижче:
Процедура очищення на білку А
Зв'язування з білком А й елюювання виконували на колонці Нізсгееп Марзеїесі Зиге 4,7 мл (СЕ 28-9269-77). Всі хроматографічні етапи виконували при швидкості потоку 240 см/год., використовуючи систему АКТА Ріїте ріи5. Колонку підготовляли та використовували у такий спосіб: їнюнатняи | нфШбн яння ск
Зразок антитіла . - |Завантаження необхідності й о Ш Етап промивання/видалення тритону ' необхідності ' ' ШИ
Після афінного очищення на білку А невеликий зразок продукту може бути відновлений із застосуванням ОТТ їі згодом піддадуть аналізу методом МС. Типовий мас-спектр успішної реакції переносу показує утворення одного основного продукту (90 95 від загального важкого ланцюга), отриманого в результаті переносу модифікованої галактози до антитіла із заміщеним центральним сСІСМАс(Рис), і мінорного продукту (410 95 від загального важкого ланцюга), отриманого в результаті переносу модифікованої галактози до антитіла із заміщеним центральним сіІсМАс (без фукози).
Зо Заміна буфера після очищення на білку А рН елюату з білка А, що містить ремодельоване/лючищене АБ-СаІМАс-Мз, коректували шляхом додавання 1,5 М тріс-основи при 3,295 об./0б., потім буфер заміняли ФСБ і концентрували до «17 мг/мл, використовуючи відцентрові концентратори Мімазріп 20 (Зідта 2614637). Спочатку об'єднаний продукт зі скоректованим рН розбавляли ФСБ у співвідношенні 171, потім повторно концентрували до первісного об'єму та цей спосіб повторювали 6 разів.
Нарешті, матковий розчин із заміненим буфером додатково концентрували до цільового значення «17 мг/мл. За допомогою УФ-аналізу при А280-320 нм, використовуючи коефіцієнт екстинкції 1,5, було підтверджено, що концентрація білка становить 16,5 мг/мл; усього було виділено 7,9 мл з виходом 88 95.
Кон'югація 4 з модифікованим антитілом з одержанням Сопід2
До 7,9 мл 16,5 мг/мл АрБ-СаІМАс-Мз (АБ-ЗА4, описане у даній заявці) додавали 0,788 мл 10
ММ РІ-1601 у ДМФА (10 95 кінцевий об./0б6. ДМФА). Реакційну суміш ретельно перемішували та залишали для протікання кон'югації протягом ночі (16 годин) при кімнатній температурі.
Кон'югаційну суміш фільтрували через РЕБЗ-фільтр з розміром пор 0,22 мкм (Мійіроге
ЗІ ОМОЗЗК5) перед остаточним очищенням і виготовленням складу.
Очищення Сопід2
Профільтровану кон'югаційну суміш очищали шляхом діафільтрації у постійному об'ємі з використанням мембрани Реїїсоп З 30 кДа при площі мембрани 250 г/м-, поперечному потоці 5,0-0,25 л/хв/ме, ТМР 1,0:20,2 бар і в цілому 12 діаоб'ємах обміну буфера на ФСБ з рн-7,4.
Діафільтрований об'єднаний продукт витягали з ОРОЕ і фільтрували через мембранний РЕ5- фільтр з розміром пор 0,22 мкм (Мійроге 5 -МО335) у стерильні пробірки, виробництва
Еррепдоп. Концентрацію білка визначали за допомогою Уф-аналізу при А280-320 нм з використанням коефіцієнта екстинкції 1,5, вона склала 4,9 мг/мл. Відбирали зразок для тестування, а залишок зберігали при 4 "С.
Аналіз продукту показав наступні властивості:
Прозорий, безбарвний, без частинок 4,9 мг/мл білок) за даними спектроскопії при А280/330 нм
Середній БАК 1,9 (за даними хроматографії зі зворотньою фазою) 0,07 ЕЕ/мг ендотоксину
З 95 вільної сполуки лікарський засіб-лінкер 98,3 96 мономера за даними гель-проникаючої хроматографії
Ремоделювання глікану (АОС, спрямований проти мезотеліну, СопіАЗ)
Одержання антитіла
Буфер у приблизно 60 мг антитіла до мезотеліну заміняють 25 мМ тріс/СІ, 150 мМ масі, рн-в8,0 за допомогою колонки для знесолення (25; 4х2,5 мл при 6 мг/мл, завантажених на 4х колонці для знесолення РОТО (ЗЕ 17085101). Потім антитіло із заміненим буфером концентрують до щонайменше 25 мг/мл з використанням відцентрового концентратора Мімазріп 20 (Зідта 7614637). Концентрацію білка підтверджують за допомогою Уф-аналізу при А280-320 нм з використанням коефіцієнта екстинкції 1,5.
Зо Реакція ремоделювання
Ремоделювання глікану виконують в однореакторній реакції протягом ночі (16 годин) при кімнатній температурі. Наступну реакційну суміш одержують, додаючи розчини/реагенти у порядку, докладно представленому нижче:
Антитіло до мезотеліну в 25 мМ тріс/СІ, 150 мМ (0,1 Ме-МзбамАс-ООРуводіМО 7777/1771 96 | о5екв.відносно МАТ
Процедура очищення на білку А
Зв'язування з білком А й елюювання виконують на колонці НіТтар Марзеїесі бите об'ємом 5 мл (СЕ 11-0034-94). Всі хроматографічні етапи виконують при швидкості потоку 240 см/год. з використанням системи АКТА Р'гїте ріи5. Колонку підготовляють та використовують у такий спосіб:
Етап ендотоксинів
Етап 25 ММ тріс/СІ, 25 мМ Масі, рн-8,0 20 промивання/видалення тритону опт. од.
Після афінного очищення на білку А невеликий зразок продукту може бути відновлений із застосуванням ЮТТ і згодом піддадуть аналізу методом МС. Типовий мас-спектр успішної реакції переносу показує утворення одного основного продукту (90 95 від загального важкого ланцюга), отриманого в результаті переносу модифікованої галактози до антитіла із заміщеним центральним сСІСМАс(Рис), і мінорного продукту (410 95 від загального важкого ланцюга), отриманого в результаті переносу модифікованої галактози до антитіла із заміщеним центральним сСІСМАс (без фукози).
Заміна буфера після очищення на білку А
Далі, буфер у ремодельованому й очищеному Са!МАс-Мз-антитілі до мезотеліну заміняють фосфатно-сольовим буфером (ФСБ) і концентрують до приблизно 16,6 мг/мл з використанням відцентрового концентратора Мімавріп 20 (Зідта 2614637). Елюат з білка А розбавляють ФСБ у співвідношенні 1:1, потім повторно концентрують до первісного об'єму та це повторюють 6 разів. Нарешті, об'єм зменшують до цільового значення 16-17 мг/мл, і зразок витягають з пристрою. Концентрацію білка підтверджують за допомогою УФ-аналізу при А280-320 нм з використанням коефіцієнта екстинкції 1,5.
Кон'югація 4 з модифікованим антитілом для одержання Соп)|іАЗ
Умови реакції 2,7 мл 15 мг/мл азидо-модифікованого антитіла до мезотеліну 0,3 мл 10 мм 4 у диметилацетаміді
Реакційну суміш ретельно перемішують та залишають для протікання кон'югації протягом ночі (16 годин) при кімнатній температурі. Кон'югаційну суміш фільтрують через РМОЕ-фільтр з розміром пор 0,2 мкм (МіПроге 5 ЗУ033К5) перед остаточним очищенням і виготовленням складу.
Очищення СопіАЗ
Профільтровану кон'югаційну суміш очищають з використанням відцентрового концентратора Мімавріп 20 (Зідта 2614637). Кон'югаційну суміш розбавляють 30 мМ гістидину
НСЇІ, 200 мМ сорбіту, рН-б6,0 у співвідношенні 1:1, а потім повторно концентрують до первісного
Зо об'єму. Це повторюють 12 разів перед витягом очищеної маси АОС з центрифужного пристрою.
Концентрацію білка визначають за допомогою кількісного аналізу методом 5ЕС з використанням каліброваної кривої антитіла та кон'югата, розведеного до приблизно 5 мг/мл додатковими 30 мМ гістидину НСІ, 200 мМ сорбіту, рН.-6,0. Твін 20 додають до 0,02 95 мас./об. з 1 95 маткового розчину в 30 мМ гістидину НСІ, 200 мМ сорбіту, рН-6,0, і концентрацію повторно тестують за допомогою кількісного аналізу методом 5ЕС. Відбирають зразок для тестування, а частину, що залишилася, розподіляють на аліквоти по 1 мл і заморожують при -80 70.
Цитотоксичність СопіА!т іп міго
Колби з клітинами І 0135 або клітинами З5К-М-РІ обробляли трипсином, і вивільнені клітини промивали та ресуспендували у свіжому середовищі. Щільність клітин визначали шляхом змішування з трипановим синім (0,4 95 (мас./об.) Зідта ТВ154) у співвідношенні 1:1 і підрахунку прозорих/синіх (живих/мертвих) клітин за допомогою автоматичного лічильника клітин Гипа ЇЇ (Годо5 Віозузіет5). Суспензію клітин розбавляли до потрібної щільності посіву (20х107/мл), розподіляли у білі 96-ямкові мікропланшети з плоским дном (50 мкл/ямку) й інкубували протягом ночі.
Матковий розчин (1 мл) Сопі41ї7 (20 мкг/мл) одержували шляхом розведення СопіА1, стерилізованого шляхом фільтрації, у тому ж середовищі для культивування клітин. Набір з 8х10-кратних розведень маткового розчину СопіА! одержували в стерильному 24-ямковому планшеті шляхом послідовного переносу 100 мкл в 900 мкл середовища для культивування клітин. Кожне розведення СопіА! розподіляли, 50 мкл/ямку, в ямки з 4 повторами 96-ямкового планшета, що містить суспензію клітин. В контрольні ямки вносили аналогічний об'єм тільки культурального середовища.
Після періоду впливу СопіАї життєздатність клітин вимірювали за допомогою Рготеда
СеПТпег-Сіо, додаючи 100 мкл/ямку, перемішуючи протягом 2 хвилин і зчитуючи сигнал на
Епмізіоп з використанням протоколу люмінесценції. Дані аналізували з використанням програмного забезпечення огарпраай Ргіхт.
Було встановлено, що ЕКво СопіА! проти клітин Ги-135 становить 0,01765 мкг/мл. ЕКво контролю АОС становила 0,5326 мкг/мл (див. Фігуру 1АУ).
Було встановлено, що ЕКво СопіА! проти клітин 5К-М-РІ становить 0,1565 мкг/мл. ЕКво контролю АОС становила 5х10» мкг/мл (див. Фігуру 187). "На обох фігурах 1А "18 У являє собою СопіА!1 і е являє собою контроль АОС, ідентичний в інших відношеннях, що містить антитіло В12, неспецифічне у відношенні СІ КІ.
Дослідження ефективності іп мімо із застосуванням Соп|А1
Протипухлинна активність у ксенотрансплантатній моделі І 11097, що походить від пацієнта з раком печінки (РОХ), іп мімо
Затравочні пухлини ГІ1097 приживляли підшкірно у мишей МОБ/5СІЮО ії підтримували підшкірно у голих мишей ВАГ В/с перед імплантацією. Коли об'єми пухлин досягали 700-1500 мм, пухлини збирали та розрізали на шматочки діаметром приблизно 2-3 мм3. Пухлини або шматочки пухлини промивали крижаними середовищами КРМІ1640 (без сироватки) і потім поміщали в крижані середовища для використання.
Перед імплантацією пухлини шкіру самок голих мишей ВАГ В/с у віці від п'яти до шести тижнів дезінфікували йодофором на правому боці. Кожній миші інокулювали без анестезії, підшкірно, у верхню частину правого боку один фрагмент первинної пухлини печінки людини
МІ1097 для розвитку пухлини.
Після інокуляції пухлини щодня перевіряли захворюваність та смертність тварин. Розмір пухлини вимірювали штангенциркулем два рази на тиждень у двох вимірах. Об'єм пухлини виражали в мм3 з використанням формули: ТУ-0,5ахр2, де а і Б являють собою довгий та короткий діаметри пухлини, відповідно.
На 12 день дослідження мишей рандомізували на 5 груп по 8 мишей в кожній; середній об'єм пухлини становив «170 мм? в когорті. Мишам вводили дози тестованих агентів на 13 день дослідження (1 день, зазначений вертикальною пунктирною лінією на графіку). Тестовані миші в цьому дослідженні одержували в 1 день однократну дозу призначеного їм тестованого виробу та рівня дози, після чого ріст пухлини контролювали до 51 дня.
Результати показані на Фігурі 2А, на якій: о носій, дах1 о є контроль АОС з використанням антитіла В12, неспецифічного у відношенні ОІ Кл, 1 мг/кг, дах о х СопіАт, 0,1 мг/кг, дах1
А - СопіАт, 0,3 мг/кг, дах1 т СопіАт, 1,0 мг/кг, дах1
Як випливає з Фігури 2А, СопіА! при 1,0 мг/кг призвів до найбільшого вповільнення росту пухлини, за ним слідував СопіА!7 при 0,3 мг/кг. Крім того, при найвищій протестованій дозі
СопіА1 призвів до 3/8 часткових відповідей (РК) і 2/8 повних відповідей (СК), тоді як жодна з мишей, що одержували носій або АОС для контролю ізотипу (1 мг/кг, однократна доза), не мала
РЕ, СК або не вижила без пухлини (ТЕ5).
Протипухлинна активність у ксенотрансплантатній моделі нейробластоми ЗК-М-РІ іп мімо
Самки мишей МОЮ-5СІЮО були у віці шести тижнів в день імплантації. Клітини 5К-М-РЇ збирали під час логарифмічної фази розмноження та ресуспендували у фосфатно-сольовому буфері з 50 95 матригеля. По 100 мкл (3х105 клітин) суміші клітинної суспензії вводили підшкірно за допомогою шприца калібром 26 С у правий бік кожної миші. Тварин обстежили два рази на тиждень для оцінки маси тіла та розміру пухлини. Розмір пухлини вимірювали з використанням цифрових штангенциркулів і розраховували у відповідності з наступним вираженням:
Об'єм пухлини (мм) - (мала вісь)2х(велика вісь) х п/б
Через вісімнадцять днів після трансплантації ракових клітин 50 мишей, в яких об'єм пухлини склав від 99,0 мм3 до 155,2 мм3 (в середньому 116,2 мм3), розподіляли на 5 груп (М-10 в кожній груп). В день дозування випробовуваним суб'єктам здійснювали введення шляхом внутрішньовенної ін'єкції у хвостову вену. Кінцева точка дослідження була встановлена як досягнення кожною пухлиною кінцевої точки об'єму 1000 мм? або кінець дослідження (через 60 60 днів після введення дози), залежно від того, що настало раніше.
Результати показані на Фігурі 28, на якій: о носій, дах1 о ж контроль АОС з використанням антитіла В12, неспецифічного у відношенні ОІ-К1, 0,5 мг/кг, Зах1 о є контроль АОС з використанням антитіла В12, неспецифічного у відношенні ОІ-Кт, 1 мг/кг, дах1
А - СопіАт, 0,5 мг/кг, дах1 т СопіАт, 1,0 мг/кг, дах1
Як випливає з Фігури 2В, СопіА! при 1,0 мг/кг призвів до найбільшого вповільнення росту пухлини, за ним слідував СопіАт при 0,5 мг/кг.
У ксенотрансплантатній моделі 5К-М-РІ, що походить з нейробластоми людини, однократна доза СопіА! при 0,5 або 1 мг/кг показала дозозалежну протипухлинну активність у порівнянні з мишами, обробленими носієм й АОС для контролю ізотипу.
У найвищій протестованій дозі Соп|іАт призвів до 1/9 тварин з частковою відповіддю (РЕ) і 4/9 тварин з повною відповіддю (СК), одна з яких вижила без пухлини (ТЕ5) наприкінці дослідження на 60 день (одна тварина з 10 первісних тварин у цій групі було виключено з остаточних фігур з причин, не пов'язаних з лікуванням).
Токсикологічне дослідження у пацюків
Токсикологічне дослідження у пацюків (оцінка нецільової токсичності, протестований АОС не зв'язує БІК-1 пацюка)
Метод бопіА! оцінювали в дослідженні переносимості однократної внутрішньовенної дози у пацюків. Самцям пацюків Зргадие-Оаулеу (п-З/групу) вводили дозу 5 мг/кг в 1 день та проводили розкриття на 21 день після введення дози. Масу тіла та споживання їжі часто контролювали за допомогою відбору зразків протягом життя для визначення клінічної патології (кров на 8 ї 21 дні) та повторного відбору зразків для визначення фармакокінетики. При розкритті проводили макроскопічні спостереження, при цьому вибіркові органі зважували та зберігали для можливого гістопатологічного дослідження.
Результати
Зо СопіА! клінічно добре переносився при 5 мг/кг без яких-небудь виражених небажаних клінічних ознак. Збільшення маси тіла було знижено, при цьому тварини були приблизно на 15 95 легше, ніж контрольна група наприкінці дослідження. Кількість лейкоцитів знизилася на 8 день (кількість нейтрофілів знизилася на приблизно 95 95 у порівнянні з одночасним контролем), при цьому були ознаки відновлення до 22 дня.
Загальний висновок
Сопій! мав гарну стабільність добре переносився та показав сприятливий фармакокінетичний профіль у пацюків з періодом напівжиття 9 днів при 5 мг/кг. Це свідчить про те, що МПД у пацюків становить щонайменше 5 мг/кг або вище.
Цитотоксичність в клітинах А204 і НерзВ в 20- і З О-культурах клітин іп міго
Матеріали та методи
Клітини висіювали в онко-середовища (КРМІ, 5 95 ФБС, 2 мМ І -аланіл-! -глутамін, 1 мМ пірувату натрію та 1 95 пеніциліну/стрептоміцину) в 384-ямкові планшети ЕІріазіа, попередньо покриті РНЕМА.
Сполуки АОС, СопіАт, і В12-1601 додавали через 24 години після посіву клітин, з початковою концентрацією 10 мг/мл, 10-кратне послідовне розведення для 9 концентрацій з чотирма повторами. Періоди інкубації зі сполуками АОС становили 5 днів в 20- і 7 днів в З О- культурах, при цьому середовища заміняли кожні З дні в цілому протягом 14 днів.
В кінці періоду інкубації клітини лізували й аналізували для визначення життєздатності клітин. Кінцеву точку проліферації клітин аналізували як відсоток від контролю (РОС), використовуючи наступну формулу:
РОсСз-відносна кількість клітин (ямки зі сполукою)/відносна кількість клітин (контрольні ямки з носієм)х 100 9
Дані аналізували з використанням програмного забезпечення сгарпраай Ргізт.
Результати
На Фігурі З представлені дані про цитотоксичність в клітинах А204 і НерзВ в 3О-культурі клітин іп міїго: - На Фігурі ЗА показані дані для клітин А204 (Чо ЗО АОС-0,001460 мкг/мл, ІЧео ЗО В12-
РІ 1601-0,7662 мкг/мл, ІЧео 20 АОС-0,006399 мкг/мл, ІЧео ЗО В12-РІ 1601-0,4059 мкг/мі; - На фігурі ЗВ показані дані для клітин НерзВ (Кео ЗО АОС-0,2271 мкг/мл, ІЧео ЗО В12- 60 РІ/1601 - «432,6 мкг/мл, ІЧео 20 АОС - -59,29 мкг/мл, ІЧео 20 В12-РІ 1601 - 3,957 мкг/млі.
Цитотоксичність СопіА2г іп міго
Колби з клітинами 5М12С або клітинами МОА-МВ-231РІ обробляли трипсином, і вивільнені клітини промивали та ресуспендували в свіжому середовищі. Щільність клітин визначали шляхом змішування з трипановим синім (0,4 95 (мас./0б.) Бідта ТВ154) у співвідношенні 1:1 і підрахунку прозорих/синіх (живих/мертвих) клітин за допомогою автоматичного лічильника клітин Гипа Ії (Годо5 Віозузіет5). Суспензію клітин розбавляли до потрібної щільності посіву (20х107/мл), розподіляли у білі 9б-ямкові мікропланшети з плоским дном (50 мкл/ямку) й інкубували протягом ночі.
Матковий розчин (1 мл) Сопі42 (20 мкг/мл) одержували шляхом розведення СопіА?2, стерилізованого шляхом фільтрації, в тому самому середовищі для культивування клітин. Набір з 8х10-кратних розведень маткового розчину СопіА2 одержували в стерильному 24-ямковому планшеті шляхом послідовного переносу 100 мкл в 900 мкл середовища для культивування клітин. Кожне розведення СопіА2 розподіляли, 50 мкл/ямку, в ямки з 4 повторами 96-ямкового планшета, що містить суспензію клітин. В контрольні ямки вносили аналогічний об'єм тільки культурального середовища.
Після періоду впливу Соп|А2 життєздатність клітин вимірювали за допомогою Рготеда
СейПТег-Сіо, додаючи 100 мкл/ямку, перемішуючи протягом 2 хвилин і зчитуючи сигнал на
Епмізіоп з використанням протоколу люмінесценції. Дані аналізували з використанням програмного забезпечення огарпраай Ргіхт.
Було встановлено, що ЕКво СопіА2 проти клітин 5М12С становить 0,0663 мкг/мл. ЕКбво контролю АОС не піддавалася виявленню (див. Фігуру 4А").
Було встановлено, що ЕКво СопіА2 проти клітин МОА-МВ-231 становить 0,226 мкг/мл. ЕКво контролю АОС не піддавалася виявленню (див. Фігуру 487). "На обох фігурах 4А і 48 » являє собою Сопіда2 і е являє собою контроль АОС, ідентичний в інших відношеннях, що містить антитіло В12, неспецифічне у відношенні КААСІ1.
Дослідження ефективності Соп|Аг іп мімо
Самки голих бестимусних мишей (Сті:МуЦ(Мсг)-Бохпіпи, Спагіе5 Кімег) були у віці восьми тижнів з діапазоном маси тіла (ВУМ) від 20,7 до 31,2 г у 1 день дослідження.
В день імплантації пухлинні клітини МОА-МВ-231, використовувані для імплантації, збирали
Зо у логарифмічній фазі розмноження та ресуспендували у фосфатно-сольовому буфері (ФСБ) при 5х107 клітин/мл. Кожній миші вводили шляхом підшкірної (п/ш) ін'єкції у правий бік 5х106 клітин (0,1 мл клітинної суспензії), і пухлини контролювали, коли їх об'єми наближалися до цільового діапазону від 100 до 150 мм3. Пухлини вимірювали за допомогою штангенциркулів у двох вимірах, й об'єм розраховували з використанням формули:
Об'єм пухлини (мм) - м2х/2 де м/ - ширина та І - довжина в мм пухлини. Масу пухлини можна оцінити з допущенням, що 1 мг еквівалентний 1 мм3 об'єму пухлини.
Через шістнадцять днів після імплантації пухлини, позначено як 1 день дослідження, тварин сортували за групами, кожна з яких складалася з 8 мишей з індивідуальними об'ємами пухлин від 108 до 144 мм" і груповими середніми об'ємами пухлин 112,5-123,8 мм. У 1 день дослідження всі засоби лікування вводили внутрішньовенно (в/в) у вигляді однократної ін'єкції (дах1) шляхом ін'єкції у хвостову вену в об'ємі дозування 0,2 мл на 20 г маси тіла (10 мл/кг), переліченому відповідно до маси тіла кожної окремої тварини. Пухлини вимірювали за допомогою штангенциркулів два рази на тиждень, і кожну тварину піддавали евтаназії, коли об'єм пухлини в неї досягав кінцевої точки 1500 мм" або наприкінці дослідження, залежно від того, що настало раніше. Дослідження закінчилося на 59 день.
Результати показані на Фігурі 5, на якій: о носій, дах1 (верхня лінія) о х контроль АОС з використанням антитіла В12, неспецифічного у відношенні КААСТ, 0,6 мг/кг, зах! о х СопіАг, 0,6 мг/кг, Зах1 (нижня лінія)
Як випливає з Фігури 5, СопіА2 при 0,6 мг/кг призвів до значного вповільнення росту пухлини.
Протипухлинна активність СопіА2 у ксенотрансплантатній моделі 5М12С іп мімо
Самки мишей з важким комбінованим імунодефіцитом (Бох Спазе ЗСІЮОФ, СВ17Лог-
РгкасзсіалЛегісості, Спагіеєз Кімег) були у віці дев'яти тижнів з діапазоном маси тіла (ВУМ) від 15,4 до 22,2 г у 1 день дослідження.
В день імплантації пухлини кожна тестована миша одержувала 5х105 клітин 5М12С (0,1 мл суспензії клітин в 5095 матриксі Матригель? (СогпіпуФ) у фосфатно-сольовому буфері),
імплантованих підшкірно у правий бік. Ріст пухлини контролювали, коли середній розмір наближався до цільового діапазону від 100 до 150 мм3.
Пухлини вимірювали за допомогою штангенциркулів у двох вимірах, й об'єм розраховували з використанням формули:
Об'єм пухлини (мм) - м/гх|/2 де м/ - ширина та І - довжина в мм пухлини. Масу пухлини можна оцінити з допущенням, що 1 мг еквівалентний 1 мм" об'єму пухлини.
Через двадцять три дні після імплантації пухлини, позначено як 1 день дослідження, тварин сортували за дев'ятьма групами (п-8) з індивідуальними об'ємами пухлин від 108 до 172 мм" і груповими середніми об'ємами пухлин 129 мм3.
У 1 день дослідження всі засоби лікування вводили внутрішньовенно (в/в) у вигляді однократної ін'єкції (дах1) шляхом ін'єкції у хвостову вену в об'ємі дозування 0,2 мл на 20 г маси тіла (10 мл/кг), переліченому відповідно до маси тіла кожної окремої тварини. Пухлини вимірювали за допомогою штангенциркулів два рази на тиждень, і кожну тварину піддавали евтаназії, коли об'єм пухлини в неї досягав кінцевої точки 1000 мм?" або наприкінці дослідження, залежно від того, що настало раніше. Дослідження закінчилося на 60 день.
Дані показані на Фігурі 6, на якій можна бачити, що введення АОС (Сопіа2) зменшувало ріст пухлини дозозалежним чином.
Цитотоксичність іп міго
Колби з клітинами ОМСАКЗ, САРАМ-2 або НРАС обробляють трипсином, і вивільнені клітини промивають та ресуспендують в свіжому середовищі. Щільність клітин визначають шляхом змішування з трипановим синім (0,4 95 (мас./об.) Зідта ТВ154) у співвідношенні 1:1 і підрахунку прозорих/синіх (живих/мертвих) клітин за допомогою автоматичного лічильника клітин Гипа ЇЇ (Годо Віозузіет5). Суспензію клітин розбавляють до потрібної щільності посіву (20х107/мл), розподіляють у білі 9б-ямкові мікропланшети з плоским дном (50 мкл/ямку) й інкубують протягом ночі.
Матковий розчин (1 мл) Сопій3 (20 мкг/мл) одержують шляхом розведення СопіАЗ, стерилізованого шляхом фільтрації, в тому самому середовищі для культивування клітин. Набір з 8х10-кратних розведень маткового розчину СопіА3 одержують в стерильному 24-ямковому
Зо планшеті шляхом послідовного переносу 100 мкл в 900 мкл середовища для культивування клітин. Кожне розведення Соп|іАЗ розподіляють, 50 мкл/ямку, в ямки з 4 повторами 96-ямкового планшета, що містить суспензію клітин. В контрольні ямки вносять аналогічний об'єм тільки культурального середовища.
Після періоду впливу СопіАЗ3 життєздатність клітин вимірюють за допомогою Рготеда
СейПТег-Сіо, додаючи 100 мкл/ямку, перемішуючи протягом 2 хвилин і зчитуючи сигнал на
Епмізіоп з використанням протоколу люмінесценції. Дані аналізують з використанням програмного забезпечення огарпраай Ргіхт.
Дослідження ефективності СопіАЗ іп мімо
Протипухлинна активність в моделі ОМСАКЗ іп мімо
Затравочні пухлини приживляють підшкірно в мишей МОБ/ЗСІЮ і підтримують підшкірно в голих мишей ВАГ В/с перед імплантацією. Коли об'єми пухлин досягали 700-1500 мму, пухлини збирають та розріжуть на шматочки діаметром приблизно 2-3 мм?. Пухлини або шматочки пухлини промивають крижаними середовищами КРМІ1640 (без сироватки) і потім поміщають у крижані середовища для використання.
Перед імплантацією пухлини шкіру самок голих мишей ВАГ В/с у віці від п'яти до шести тижнів дезінфікують йодофором на правому боці. Кожній миші інокулюють без анестезії, підшкірно, у верхню частину правого боку один фрагмент пухлини для розвитку пухлини.
Після інокуляції пухлини щодня перевіряють захворюваність та смертність тварин. Розмір пухлини вимірюють штангенциркулем два рази на тиждень у двох вимірах. Об'єм пухлини виражають у мм? з використанням формули: ТУ-0,5ахр2, де а і Б являють собою довгий та короткий діаметри пухлини, відповідно.
На 12 день дослідження мишей рандомізують на 5 груп по 8 мишей в кожній; середній об'єм пухлини становить -170 мм в когорті. Мишам вводять дози тестованих агентів на 13 день дослідження. Тестовані миші в цьому дослідженні одержують в 1 день однократну дозу призначеного їм тестованого виробу та рівня дози, після чого ріст пухлини контролюють до 51 дня.
ПОСЛІДОВНОСТІ
ЗЕО І МО. 1 (МН НиВа-1-за, СОЕ. підкреслений) (510) ОМОЇ МОБОАЕУККРОАБУКУВСКОазам ТЕТОМАМНУУВОАРОСаГ ЕМІаМмІЗ ТУМОМТМУМОК
ЕКОКАТМТМОК5ОТ5ОТАУМЕЇ В5І А5ООТАУУУСАвасі ВЕМУМАМОМУСОЮСТМУТУ5
ЗЕО О МО. 2 МІ. НиВа-1-3а, СОЕ підкреслений
РІММТО5РОБІ АМ5І ЧЕВАТІМСКОЗЗОБІ І М55МОКММІ А МООКРООРРКІИЇ ММЕАЗТВЕЗОМ
РОВЕЗаБабвато ТІ ТІВ ОАДЕОМАУУУСООНУЗТРРТЕРСОСТКІ БІК
ЗЕО ІЮ МО. З |важкий ланцюг НиВа-1-за
ОМОЇ МОБОАЕУККРИаАБУКУЗСКИаИТваИамТЕтОМАМНУМАОАРИаОСаЇ ЕУЛОаМІБТУМаМТМУМОК
ЕКОКАТМТМОКОТ5ОТАМУМЕЇ В5І В5ОЮТАУУУСАВИСІ ВЕУУМАМОУМУ ОСТ МУТУ55АЗТКаРБ
МЕРІ АРОБКОТ5ЗОСТААІ аСІ МКОМЕРЕРУТУМБМУМЗОаАІ ТЗаМНТЕРАМІ О55121І 51 55 МУРББ
ЗІ атТОТМІСМУМНКРУОМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРОСРАРЕЇГ ЇЇ ааРБЗМУБІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМ
ТСМММОУ5НЕОРЕМКЕМУ УМО МЕМНМАКТКРАЕЕОММ'ЗТУВУМБМІ ТМ НОМ МОКЕМУКСКУ5
МКАЇ РАРІЕКТІЗКАКИОРВЕРОМУТІ РРОВЕЕМТКМОМ5І ТС УКОЕМРОВІАМЕМЖМ ЕБМ3ОРЕММУК
ТТРРМІ'ГО5БОСО5ЕРІ У5КІ ТМОКЗВУМОСаММЕ5СЗУМНЕАЇ НМНУТОКОБІ 5І Ра
М" означає Азп297
ЗЕО ІЮ МО. 4 (легкий ланцюг НиВа-1-3а)
РІММТО5РОБІ АМ5І ЧЕВАТІМСК5ОБОВІ І М5ЗМОКММІ АМ МООКРИООРРКІ І МУМЕАЗТВЕЗОМ
РОВЕЗа5абБатТОЕТІ ТІЗБІ ОАЛЕОМАМУМСООНУЗТРРТЕСОСТКІ ЕІКАТМААРБМЕРІЕРРБОЕОЇІ К
ЗаТАБММУСІ І ММЕМРАЕАКМОМКМОМА! О5ИМ5ОЕВМТЕООЗКОБТМУБІ 551ТтІ ТІ БКАОМЕКНКМУ
АСЕМТНОСІ 55РУТКО5ЕМАВИЕС
ЗЕО І МО. 5|СОВІ МН НивВа-1-з3а
ОХАМН
ЗЕО Ір МО. 6 (СОВ2 МН НивВа-1-з3а
МІБТУУаМтТМУМОКЕКИ
ЗЕО І МО. 7 |(СОВЗ МН НивВа-1-з3а са ВЕМУМАМОУ
ЗЕО І МО. 8 |ІСОВІ1 МІ НиВа-1-3а кББОБІЇ МЗ5МОКММІ А
ЗЕО Ір МО. 9 |(ІСОВ2 МІ НиВа-1-3а
ЕАБТВЕ5
ЗЕО ІЮ МО. 10 |(СОВЗ МІ НиВа-1-3а
Ко) ООНУ5ТРРТ
ЗЕО ІО МО. 11 |важкий ланцюг НиВа- 1-34, кінцевий КІ
ОМОЇ МОБОАЕУККРИаАБУКУЗСКИаИаваТамТЕТОМАМНУМАОАРИаОСаї ЕУЛОМІБТ УМА; МТ МУМОК
ЕКОКАТМТМОКОТ5ОТАММЕЇ А5І А5ООТАУМУСАВИ,І ВЕУУМАМОУМУ СТ МУТУ5БАЗБТКОаРБ
МЕРІ АРОБКОТ5ЗОСТААІ аСІ МКОМЕРЕРУТУМБМУМЗОаАІ ТЗаМНТЕРАМІ О55121І 51 55 МУРББ
ЗІ атТОТМІСМУМНКРУОМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРОСРАРЕЇГ ЇЇ ааРБЗМУБІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМ
ТСМММОУ5НЕОРЕМКЕМУ УМО МЕМНМАКТКРАЕЕОММ'ЗТУВУМБМІ ТМ НОМ МОКЕУКСКУ5
МКАЇ РАРІЕКТІЗКАКОИОРВЕРОМУТІ РРОВЕЕМТКМОМ5І ТС УКОЕМРОВІАМЕМЖМ ЕБМ3ОРЕММУК
ТТРРМ'О5БОСО5ЕРІ ЗК ТМОКЗВУМОСОаММЕЗСОММНЕАЇ НМНУТОКОБІ 5І РОК
М" означає Азп297
ЗЕО ІЮ МО. 12 (0 К1 людини, варіант 11
МТАТЕАГ ВМІЛІ АГЕНЗТУСАЕСЕРАСМРОМОаЄСЕВОММСВСНУСУМОСРІ СВРОСМУТ5РОС
І На СФОЕРООСІСТОСУраєІ СОКОУМААСЗЗАРСАММИТСМ5І ОСІ МЕСВСАРОУБИКОСОККО
СРСМІМО5РСОНИИТСМОРЕСВА5ЗНА5БСІ СРРОЕЗОМЕСЕІМАМЗСТРУМРСЕМОСУСТОІСИОЕВС
ВСРАСРІОКТОЗАРУТМСАБОРСОМИаСсТОСГ ОНТОМ5МЕСІ СКРЕЕЄЕТОЇ ТСУМККААЇ 5РООМТВІ РБ5
СУС АУВІ ТРаМНЕЇ РУМООРЕННІЇ КМО5МКЕЇ МККТРІ І ТЕСОАІСЕТІ СМ ТІ ММ атуаИмМгІ МКо
ЕТМ/УМ5МІ КУМНМІ АЯКККМИ ОМ Має АММІЕРЕКІОМТТЕЗКЕАСОЕЕЇ
ЗЕО ІЮ МО. 13 (0 К1 людини, варіант 21
МТАТЕАГ ВМІЛІ АГЕНЗТУСАЕСЕРАСМРОМОЕСЕВОММСВСОРОМОСРІ СВОСУТ5РОаС
І На СФОЕРООСІСТОСУраєІ СОКОУМААСЗЗАРСАММАТСМУВІ Юра МЕСЗСАРОУЗОИКОСОККО
БО аРСМІМО5РСОНОИТСМОРЕСВА5ЗНА5БСІ СРРОЕЗОМЕСЕІМАМЗСТРУМРСЕМОСМСТОІСИОЕВС
ВСРАСРІОКТОЗАРУТМСАБОРСОМИаСсТОСГ ОНТОМ5МЕСІ СКРЕЕЄЕТОЇ ТСУМККААЇ 5РООМТВІ РБ5
СУС АУВІ ТРаМНЕЇ РУМООРЕННІЇ КМО5МКЕЇ МККТРІ І ТЕСОАІСЕТИ аМІ Т5І УМ аТМаїімвІі МКко
ЕТМ/УМ5МІ КУМНМІ АЯКККМИ ОМ Має АММІЕРЕКІОМТТЕЗКЕАСОЕЕЇ
ЗЕ ИЮО МО. 101 (МН ЗА4, СОЕ підкреслений
ОІОЇ МОБОАЕУМККРаАБУКУЗСКАЗаИМТЕТООУМЗУУКОАРИООаТТ ЕМЛОаВІМРУМИаЮТМУМоОК
ЕКОКАТІ ТМОКЗТ5О5ТАУМЕЇ 551 ВБЕОТАУУУСАВО РОАМО УМ С ОСТІ МТ У55 5ЕО ІЮ МО. 102 МІ. ЗА4, СОК підкреслений
РІММТОТРІ 5І РУИТРаЕРАБІЗСА5ЗБОБИ І НОМаТмМтТмМІ ЕМУМ ОКРИОБРО ІМ ТМЗМАЕЗаМРО
ВЕБаБОабатоОЕТІ КІЗВМЕАЕОМаУМУСЕОСЗНМУРІ ТЕаОСТКІ БІК 60 ЗЕО ІЮ МО. 103 |важкий ланцюг ЗАЗ) бо
ОІОЇ МОБОАЕУМККРаАБУКУЗСКАБЗОУТЕТООУМЗУМУУКОАРИааОаТТ ЕМ БІМР УМИаОТМММОК
ЕКОКАТІ ТМОКЗТ5О5ТАУМЕЇ 551 ВБЕОТАУУУСАВОРаАМО УМ ПОСТІ МТГМЗ55АВБТКОаРОМЕРІ АР
ЗЗКОТ5аатТААЇасі МКОМЕРЕРУТУЗБУУМ5ООАЇ ТЗаУНТЕРАМІ 055021 У5І 55БМУТУРБББІ ИаТОТ
МІСМУМНКРОЬМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРОСРАРЕЇ І ааРБУБІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСУУМЮ
М5НЕОРЕМКЕМУ МУ РаМЕМНМАКТКРАЕЄОУМ'ЗТМАММУБМІ ТМІ НОМ МЕОКЕУКСКУ5МКАЇ РА
РІЕКТІЗКАКООРРЕЕРОМУМТІ РРОНОЕЇ ТКМОМ5І ТС УК ЕМРБОВІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ. рБравЕРІМКкІ ТМОКБАМОССММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОКОІ 5І ЗРО
М" означає Азп297
ЗЕО ІЮ МО. 104 |легкий ланцюг ЗА4
РІММТОТРІ 5І РУИТРаЕРАБІЗБСНОУВОБІ І НОМОаМТМІ ЕМ МГ ОКРИОБРОЦП ІМ ТУ5МАЕЗамМРО
ВЕЗаБОаБаИатОЕТІ КІЗВАМЕАЕОМаМУМСгОСЗНУРІ ТЕСОСТКІ ЕІКАТМААРБЗУРІЕРРБОЕОЇ КИ
ТАБУМСІ І ММЕМРВЕАКМОМ КМОМАГОБаМБОЕВМТЕОО5КОБТУБІ 55ТІ ТІ ЗКАОМЕКНКУММАСЕ
МТНОІ 55РУТКОЕМНАОЕС
ЗЕО І МО. 105 (СОВІ1 УНЗАЗ) аМтТЕТООУМ5
ЗЕО І МО. 106 (СОВ2 УНЗАЗ)
РІМРУМОаОТМ
ЗЕО І МО. 107 (СОВЗ УНЗАЗ)
ОРПАМОУ
ЗЕО ІЮ МО. 108 (СОВІ1 МІ ЗА4І
В5БЗОБИЇ НОМамМТмІ Е
ЗЕО І МО. 109 (СОВ2 МІ ЗА
ТУБМАЕ5
ЗЕО ІЮ МО. 110 (СОВЗ МІ ЗА4І
ЕОСО5НУРІ Т
ЗЕО ІЮ МО. 111 |важкий ланцюг ЗА4, кінцевий КІ
ОІОЇ МОБОАЕУМККРаАБУКУЗСКАБЗОУТЕТООУМЗУМУУКОАРИааОаТТ ЕМ БІМР УМИаОТМММОК
ЕКОКАТІ ТМОКЗТ5О5ТАУМЕЇ 551 ВБЕОТАУУУСАВОРаАМО УМ ПОСТІ МТГМЗ55АВБТКОаРОМЕРІ АР
ЗЗКОТ5аатТААЇасі МКОМЕРЕРУТУЗБУУМ5ООАЇ ТЗаМНТЕРАМІ 055021 51 55УМТУРБЗББІ аТОТ
МІСМУМНКРОЬМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРОСРАРЕЇ І ааРБУБІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСУУМЮ
М5НЕОРЕМКЕМУ МУ РаМЕМНМАКТКРАЕЄОУМ'ЗТМАММУБМІ ТМІ НОМ МЕОКЕУКСКУ5МКАЇ РА
РІЕКТІЗКАКООРРЕЕРОМУМТІ РРОНОЕЇ ТКМОМ5І ТС УК ЕМРБОВІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ. реравЕРІ Мк ТМОКБАМООССММЕЗСОУМНЕАЇІ НМНУТОКОБІ 5І РОК
М" означає Азп297
ЗЕО ІЮ МО. 112 |КААСІ1 людини)
МООБААРАМЕСУРМАМНКНАЇІ НОСІ ВОМАСРИОАДАААНІ РАМ/РРРОЇ ААЗАВЕАРРІ БОВРНА
ТОВАаЗРРЕТМЕКІ ТМРОМКЕК
ЗЕ ЮО МО. 113 МІ ЗА4-І12, СОВ підкреслений
ОМУМТОТРІ 5І РУТРОЕРАБІЗСНОЗЗОБІ І НОМОаТмМТмМІ ЕМ/МІ ОКРИОЗБРКИ ІМ ТМЗМАВЕЗаМРО
ВЕБаБОабатоОЕТІ КІЗВМЕАЕОМаУММСЕОСсЗНМУРІ ТЕаОСТКІ БІК
ЗЕО ІЮ МО. 114 |легкий ланцюг ЗА4-Ї 2
ОМУМТОТРІ 5І РУТРОЕРАБІЗСНОЗОЗБІ І НОЕМОМТМІ ЕМУМІ ОКРООБРКИ ІМ ТУ5МАЕБамМРО
ВЕЗаБОаБаИатОЕТІ КІЗВАМЕАЕОМаМУМСгОСЗНУРІ ТЕСОСТКІ ЕІКАТМААРБЗУРІЕРРБОЕОЇ КИ
ТАБУМСІ І ММЕМРВЕАКМОМ КМОМАГОБаМБОЕВМТЕОО5КОБТУБІ 55ТІ ТІ ЄКАОМЕКНКМУММАСЕ
МТНОІ 55РУТКОЕМНАОЕС
ЗЕ Ю МО. 115 (МІ ЗА4-К4, СОК підкреслений)
РІММТО5РОБІ АМ5І ЧСЕВАТІМСНОЗЗОВІ І НЗМаТамМт М ЕМУМООКРООРРКІ ПИТУ5МАЕЗамМРО
ВЕБаБОабБатоЕТІ ТІЗ5І ОАДЕОМАМУУСЕОСЗНУРІ ТЕЯОСТКМБІК
ЗЕО ІЮ МО. 116 |легкий ланцюг ЗА4-КА
БО РІММТО5РОБІ АМ5І ЧСЕВАТІМСН5ОУЗОЗВІ І НОМаМТ М ЕМУМООКРООРРКИ ІМ ТУ5МАЕБамМРо
ВЕБИаБОаЗБатоЕТІ ТІЗ5І ОАЕОМАМУУСЕОСЗНУРІ ТЕБОСТКУБІКАВТМААРЗМУБІЕРРБОЕОЇ Ка
ТАБУМСІ ММЕМРВЕАКМОМКМОМАГОБаМБОЕВМТЕОО5КОБТУБІ 55ТІ ТІ ЄКАОМЕКНКУМАСЕ
МТНОІ 55РУТКОЕМНАОЕС 5ЕО ІЮ МО. 201 (МН ХА4, СОК підкреслений
ОМНІ МЕЗИЧ,УМОРОН5ЗБІ ВІ 5СМАБа!тТЕНІМаХМНУУВОАРИаКаИЇ ЕММАМІ МУУравнЕММАр
УКОВЕТІЗБАОМ5КМТІ МІ ОММ5І ВАЕОТАІМСАнраеарумОоБавРІ ОМУСОСТІ МТУ55 5ЕО ІЮ МО. 202 МІ ХА4, СО підкреслений)
ЕІМІ ТО5РАТІ 5І 5РаЕВАТІ БСВАБОЗУ55МУІ АМУМООКРИаОАРА ПП ІМОАЗМААТИаРАНЕЗИа5 аБатТоОеТтТІЗ5 ЕРЕОЕАМУУСООВОММУ РІ ТЕИСИТКкМЕїК 60 ЗЕО ІО МО. 203 |важкий ланцюг ХА4
ОМНІ МЕЗИЧИУМОРОН5БІ ВІ 5СМАБИИТЕВІМаМНУУВОАРИаКаї ЕУМАМІ ММрОаЗНЕММАОВ
УКанвВЕТІЗВОМ5КМТІ МІ ОММ5І ВАЕОТАІМУСАНОС,СОЮУМОБав5РІ ОМ ,ОСТІ МТУ55АЗБТКаРБУ
ЕР АРОЗ5КОТ5ИаСсСТААІ аСІ МКОМЕРЕРУТУБМ МЗИ,аАІ ТО МНТЕРАМІ 0550 М5І 55 ТУРБО
І атоТгМміСМУМНнКкРОЬМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРОРАРЕЇТЇ ас РБМУРІЇ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТ
СУМУМОМ5НЕОРЕМКЕМУМУУраМЕМНМАКТКРАЕЄОММ'ЗТУВМУМУ5МІ ТМ НОСУ/ЛІ МОКЕУКСКУВМ
КАЇ РАРІЕКТІЗКАКООРРЕЕРОМУМТІ РРОВЕЕМТКМОМ5І ТОЇ МКОЕМРБЗОІАМЕМЖМЕЗМООРЕММУКТ
ТРРМ'Ю5БравЕРІ КІ ТМОКЗАУМОСОММЕ5СВМУМНЕАЇ НМНУТОКОІ 5І ЗРО
М" означає Азп297
ЗЕО ІЮ МО. 204 |легкий ланцюг ХА4
ЕІМІ ТО5РАТІ 5І 5РаЕВАТІ БСААБОБМУМ5ОУЇ АММООКРИаОАРАВИП ІМОАЗМААТОаІРАНЕбИа5 аБатТОе ТІ ЕРЕОЕАМУУСООВОММ РІ ТЕС, ТКМЕІКАТМААРБЗМУРБІЕРРБОЕОЇ КЗИатАБУМ
СГЕММЕМРАЕАКМОМКМОМАЇ ОБаМЗОЕЗМТЕОО5КОБТУБІ 557 ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕМТНО
СІ 55РУМТКОЕМВОЕС
ЗЕО Ір МО. 205 ІСОВІ УН ХАІ
ІМамн
ЗЕО Ір МО. 206 (СОВ2 УН ХАЗІ
М МУравнНЕУМАОВУКа
ЗЕО Ір МО. 207 (ІСОВЗ МН ХАЗІ рармУрвБаврРІ ВУ
ЗЕО Ір МО. 208 (СОВІ1 МІ. ХАЗІ
ВАБОБУБОМІ А
ЗЕО Ір МО. 209 (СОВ2 МІ. ХАаІ рАБМВАВАТ
ЗЕО І МО. 210 (СОВЗ МІ. ХАЗІ
ОСООВ5ММРІ Т
ЗЕО ІЮ МО. 211 |важкий ланцюг ХАА4, кінцевий КІ
ОМНІ МЕЗИЧИУМОРОН5БІ ВІ 5СМАБИИТЕВІМаМНУУВОАРИаКаї ЕУМАМІ ММрОаЗНЕММАОВ
УКанвВЕТІЗВОМ5КМТІ МІ ОММ5І ВАЕОТАІМУСАНОС,СОЮУМОБав5РІ ОМ ,ОСТІ МТУ55АЗБТКаРБУ
ЕР АРОЗ5КОТ5ИаСсСТААІ аСІ МКОМЕРЕРУТУБМ МЗИ,аАІ ТО МНТЕРАМІ 0550 М5І 55 ТУРБО
Ко) І атоТгМміСМУМНнКкРОЬМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРОРАРЕЇ ЇЇ ЧСОРОМРЕЇ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТ
СУМУМОМ5НЕОРЕМКЕМУМУУраМЕМНМАКТКРАЕЄОММ'ЗТУВМУМУ5МІ ТМ НОСУ/ЛІ МОКЕУКСКУВМ
КАЇ РАРІЕКТІЗКАКООРРЕЕРОМУМТІ РРОВЕЕМТКМОМ5І ТОЇ МКОЕМРБЗОІАМЕМЖМЕЗМООРЕММУКТ
ТРРМ' Ю5равеЕРІ кі ТМОКЗАМОСОММЕ5СВУМНЕАІ НМНУТОКОІ 5І РОК
М" означає Азп297
ЗЕ Ю МО. 212 (МН ХЕТ, СОК підкреслений
ОМЕГ МОБСАМУККРОЕБІ КІЗСКаАБаМЗЕТЗУУМЛОИМУВОАРОаКаї ЕМ МОПОРСОЗАТАМОРОБО
СОМТІБАОК5БІЗТАМІ ОМ/55І КАБОТАМУУСАНООСЇ ХУСТ УМОСМУсОаИтІ МТУ55 5ЕО ІЮ МО. 213 МІ. ХЕТ, СО підкреслений)
ПІАГТОРАБУБОБРООЗБІТЗСТОИТ55ВСИаММОУБУМУМООНРОаКАРКІ МІМЕМММАРЗСУ5МАВЕБ
СБК5ОИМТтАБІ ТІБаг: ОАЕОЕАОУУС55ХО1ЕБАТРУБГССИТКІ ЕК
ЗЕО ІЮ МО. 214 |важкий ланцюг ХЕТ|І
ОМЕГ МОБСАМУККРОЕБІ КІЗСКаБИа МЕТУ УАОАРОаКаИТг ЕУМСИПОРИОЗАТАХОРОЕБО
СОМТІБАОКБІЗТАМІ ОМУ55І КАБОТАМУУСАНОСОЇ МОСТУМОСХЙМСИДОСТІ МТМ55АЗБТКОаРОМЕРІ.
АРББОКОТЗИаатТАА асІ МКОМЕРЕРУТУБМУ Мала ТЗаМНТЕРАМІ О55(2І У5І 55ММТУРБІББІ ИаТ
ОТМІСМММНКРУьЬМТКМОККУЕРКЗСОКТНТСРРОСОРАРЕЇЇ Са РБМУНРІ ЕРРКРКОТІ МІЗВАВТРЕМТСМУМ
МОМ5НЕОРЕУКЕМУ УМИМЕУМНМАКТКРАЕЄЕОММ'ЗТУВУМ5МІ ТМ НОБУУМІ МОКЕМКСКМУ5МКАЇ.
РАРІЕКТІЗКАКАОРАЕРОМУТІ РРОВЕЕМТКМОМ5І ТС МКИЕМРБОТІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРР
МІ О5РОБЕБ УК ТМОКЗАМОСамММЕЗСЗУМНЕАЇ НМНУТОКОІ 5І ЗРО
М" означає Азп297
ЗЕО ІЮ МО. 215 |легкий ланцюг ХЕТ|І
ПІАГТОРАБУБаВБРООБІТІЬСТОаТ550ІССУМОУВУММООНРИОаКАРКІ МІМЕУММА!АРЗОМОМАЕ5
С5К5ОаМТтАБІ ТІБОЇ ОАДЕОЕАОУМСЗ5МУО1ТЕЗБАТРУРОСИТКІ ЕІКАТМААРОМЕБІЕРРБОЕОЇ КБИатА
ЗУМСІИГ ММЕМРАЕАКМОМКМОМАЇ О5БаМ5ОЕВМТЕООЗКОБТУБІ 551ТІ ТІ БКАОМЕКНКУУАСЕМТ
НОСІ 55РУТКОЕМАОЕС
ЗЕО ІЮ МО. 216 (ХЕТ СОВІ1 УНІ
СУБЕТЗУУЛИ
ЗЕО ІЮ МО. 217 ІСОВ2 УНХЕП
ММапОоРаОЗАТАМОРОБОС
ЗЕО ІЮ МО. 218 (СОВЗ МН. ХЕП 60 со УмааТтУМра
ЗЕО ІЮ МО. 219 (СОВІ МІ ХЕТІ тато5вБрІДОММоМ5
ЗЕО І МО. 220 (СОВ2 МІ. ХЕТІ
І МІМАМММА Ро
ЗЕО І МО. 221 |(СОВЗ МІ. ХЕТІ
З5УОІЕБАТР
ЗЕО ІЮ МО. 222 |важкий ланцюг ХЕТ, кінцевий КІ
ОМЕГ МОБСАМУККРОЕБІ КІЗСКаБИа МЕТУ УАОАРОаКаИТг ЕУМСИПОРИОЗАТАХОРОЕБО
СОМТІБАОКБІЗТАМІ ОМУ55І КАБОТАМУУСАНОСОЇ МОСТУМОСХЙМСИДОСТІ МТМ55АЗБТКОаРОМЕРІ.
АРББКОТЗИасатТААГаИсі МКОМЕРЕРУТУ5БУУМ5ОАЇ ТЗаУНТЕРАМІ О55(2І М5І 55ММТУРБББІИТ
ОТМІСМММНКРУьЬМТКМОККУЕРКЗСОКТНТСРРОСОРАРЕЇЇ Са РБМУНРІ ЕРРКРКОТІ МІЗВАВТРЕМТСМУМ
МОМ5НЕОРЕУКЕМУ УМИМЕУМНМАКТКРАЕЄЕОММ'ЗТУВУМ5МІ ТМ НОБУУМІ МОКЕМКСКМУ5МКАЇ.
РАРІЕКТІЗКАКАОРАЕРОМУТІ РРОВЕЕМТКМОМ5І ТС МКИЕМРБОТІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРР
МІ О5рО5БЕБР УК ТМОКЗАМОСаММЕЗСОУМНЕАЇ НМНУТОКОБІ 5І РОК
М" означає Азп297
ЗЕО І МО. 223 МН ХО09, СОК підкреслений
ОМО! ОО5О РЕ ЕКРОАЗУКІЗСКАЗаМЗЕТаУ ТММ УКОВНОаТКВІ ЕУЛаИагсштТРУМаАВОУМОКЕ
ВОКАТІ ТМОК5О55ТАМУМО І ЗІ Т5ЕОБАУУЕСАВСсаУрсваєгрумаватРУТУВ5
ЗЕО І МО. 224 МІ ХО9, СОК підкреслений)
ПІЕСТО5РАІМ5АЗБРИЕКУТМТС5АБЗОЗУЗУМНИМООКаИтТЗРКАУМУОТОКІ АБСМРаВЕ5Оа5 аБОМ5ОМБ5І ТІЗОЄМЕАЕОВАТУМСООМЗКНРІ ТЕЯО5аИТКМЕїК
ЗЕО ІЮ МО. 225 |важкий ланцюг ХО
ОМО! ОО5Оа РЕ ЕКРОАБУКІЗСКАБИа У БЕТОаМ ТММ УКОВНаИкві ЕМО ІТРИМИАБОЗУМОКЕ
ВОКАТІ ТМОКО55ТАММОГІ 5І Т5ЕО5БАМУЕСАВааМравагОомМмаваТРИТУ5БАВБТКОаРОМЕРІ.
АРББКОТЗИасатТААГаИсі МКОМЕРЕРУТУ5УМУМ5ОАЇ Та МНТЕРАМІ О55(1І М5І 55ММТМРБЗББІИТ
ОТМІСМММНКРУьЬМТКМОККУЕРКЗСОКТНТСРРОСОРАРЕЇЇ Са РБМУНРІ ЕРРКРКОТІ МІЗВАВТРЕМТСМУМ
МОМ5НЕОРЕУКЕМУ УМИМЕУМНМАКТКРАЕЄЕОММ'ЗТУВУМ5МІ ТМ НОБУУМІ МОКЕМКСКМУ5МКАЇ.
РАРІЕКТІЗКАКСООРАЕРОМУТІ РРОВОЕЇ ТКМОМ5БІ ТОЇ МКОЕМРБОІАМЕМ ЕЄМСОРЕММУКТТРР
МІ О5РОБЕБР УК ТМОКЗАМОСамММЕЗСЗУМНЕАЇ НМНУТОКОБІ 5І ЗРО
Зо М" означає Азп297
ЗЕО І МО. 226 |легкий ланцюг ХО
ІЕСТО5РАІМ5АЗБРИЕКУТМТС5АЗОЗУЗУМНИУМООКБаИтОРКРЕУЛУОТОКІ АБСМРОаВЕЗОа5 аБОМ5ОМУБІ ТІЗОМЕАЕОВАТУМСООСОМ КНР ТЕЯ5аИтКкКУєІКАТМААРЗМЕЇЕРРБОЕОЇ КЗатАБУМ
СГЕММЕМРАЕАКМОМКМОМАГ ОБаМООЕВМТЕОО5КО5ТУ5І 5571 ТІ 5КАОМЕКНКУМАСЕМТНО
СІ 55РУМТКОЕМВОЕС
ЗЕО Ір МО. 227 СОВІ1 УНІХОЗІ
СЕТ
ЗЕО Ір МО. 228 |(СОВ2 УН ХО)
ПТРУМОАБОЗММОКЕНИ
ЗЕО Ір МО. 229 (СОВЗ УН ХО) саеУраваБрУ
ЗЕО І МО. 230 (СОВІ МІ. ХО)
БАБООУЗУМН
ЗЕО І МО. 231 ІСОВ2 МІ. ХО)
ОТ5КІ А5
ЗЕО Ір МО. 232 |(СОВЗ МІ. ХО9І
ООМ5КНРІ Т
ЗЕО ІЮ МО. 233 |важкий ланцюг ХО9, кінцевий КІ
ОМО! ОО5Оа РЕ ЕКРОАБУКІЗСКАБИа У БЕТОаМ ТММ УКОВНаИкві ЕМО ІТРИМИАБОЗУМОКЕ
БО ВОКАТІ ТМОКО55ТАММОГІ 5І Т5ЕО5БАМУЕСАВааМравагОомМмаваТРИТУ5БАВБТКОаРОМЕРІ.
АРББОКОТЗИаатТААГ асІі МКОМЕРЕРУТУБМУМЗИаАаІ Та МуНТЕРАМІ О55(02І І 55ММТУРБББІ ат
ОТМІСМММНКРУьЬМТКМОККУЕРКЗСОКТНТСРРОСОРАРЕЇЇ Са РБМУНРІ ЕРРКРКОТІ МІЗВАВТРЕМТСМУМ
МОМ5НЕОРЕУКЕМУ УМИМЕУМНМАКТКРАЕЄЕОММ'ЗТУВУМ5МІ ТМ НОБУУМІ МОКЕМКСКМУ5МКАЇ.
РАРІЕКТІЗКАКООРАЕРОМУТІ РРОВОЕЇ ТКМОМ5БІ ТОЇ МКОЕМРБОІАМЕЖМ ЕЄМСОРЕММУКТТРР
МІ О5рОБЕБ УК ТМОКБАМОССММЕЗС5УМНЕАЇІ НМНУТОКОІ 5І РОК
М" означає Азп297
ЗЕО ІС МО. 234 (МН ХО09.2, СОЕ підкреслений
ОМО! ОО5О РЕ ЕКРОАЗУКІЗСКАЗИамМБЕТахуМММУкОвНаТквІ ЕМЛас штТРУМаАВОУМОКЕ
ВОКАТІ ТМОКО55О5ТАУМО І І Т5ЕОБАУУЕСсАВнСссаУрсваєгрумаоаттУтУ5 60 ЗЕО І МО. 235 МІ ХО0О9.2, СОК підкреслений
ПІЕ ТОЗРАІМБАЗРОЕКУТМТСЗАЗОЗОУЗУМНУ ХООКЗаИТтЗРКАУІМОТОКІ АБИОМРОВЕбИа5 аБОМ5МУ5І ТІЗОЄМЕАЕОВАТУМСООМУБОИМРІ ТЕСАСТКІ БІК
ЗЕО ІЮ МО. 236 |важкий ланцюг ХО9.2
ОМОЇ! ООБОаРЕЇ ЕКРаАБУКІЗСКАЗОУЗЕТаМ ТММ УКОЗНаТквІ ЕЛ ІТРИМаАБОУМОКЕ
ВОКАТІ ТМОКО5ЗЗТАММОГІ 5І Т2ЕОБАМУУЕСАнОаУраваБОоММмаватРУТУВБАЗТКОаРБОМЕРІ
АРББОКОТЗИаатТААГ асІі МКОМЕРЕРУТУЗМУ Мала ТЗаМНТЕРАМІ О55(2І У5І 55УМТУРБББІ СТ
ОТМІСМММНКРУьЬМТКМОККУЕРКЗСОКТНТСРРОСОРАРЕЇЇ Са РБМУНРІ ЕРРКРКОТІ МІЗВАВТРЕМТСМУМ
МОМ5НЕОРЕУКЕМУ УМИМЕУМНМАКТКРАЕЄЕОММ'ЗТУВУМ5МІ ТМ НОБУУМІ МОКЕМКСКМУ5МКАЇ.
РАРІЕКТІЗКАКАОРАЕРОМУТІ РРОВОЕЇ ТКМОМ5І ТОЇ МКИЕМРБОІАМЕМ ЕЄМСОРЕММУКТТР Р
МІ О5РОБЕБР УК ТМОКЗАМОСамММЕЗСЗУМНЕАЇ НМНУТОКОБІ 5І ЗРО
М" означає Азп297
ЗЕО ІЮ МО. 237 (легкий ланцюг ХО9.21
ПІЕ ТОЗБРАІМБАЗРОЕКУТМТС5АБООУЗУМНИУУООКЗаИтЗРКАУЛМОТОКІ АБСММРОаВЕЗИа5 абБОаМ5ЗУБбІ ТІЗБЄМЕАЕОВАТУУСООМЗКНРІ ТЕЯБИаТКУЕгІКАТМААРОЗМЕІЕРРБЗОЕОЇ КатТАБУМ
СГЕММЕМРАЕАКМОМКМОМАЇ ОБаМЗОЕЗМТЕОО5КОБТУБІ 557 ТІ ЗКАОМЕКНКУМАСЕМТНО
СІ 55РУМТКОЕМВОЕС
ЗЕО Ір МО. 238 (СОВІ1 УН ХО9 21 атм
ЗЕО Ір МО. 239 (СОВ2 УН ХО9.21
ПТРУМОАБОЗММОКЕНИ
ЗЕО Ір МО. 240 (СОВЗ УН ХО9 21 саеУраваБрУ
ЗЕО І МО. 241 ІСОВІ МІ ХО9 2
БАБООУЗУМН
ЗЕО Ір МО. 242 |СОВ2 М. ХО9 2)
ОТ5КІ АБ
ЗЕО Ір МО. 243 (СОВЗ МІ. ХО9 2)
ООМУБахРІТ
ЗЕО ІЮ МО. 244 |важкий ланцюг ХО9.2, кінцевий КІ
Ко) ОМОЇ! ООБОаРЕЇ ЕКРаАБУКІЗСКАЗОУЗЕТаМ ТММ УКОЗНаТквІ ЕЛ ІТРИМаАБОУМОКЕ
ВОКАТІ ТМОКО5ЗЗТАММОГІ 5І Т2ЕОБАМУУЕСАнОаУраваБриМмаТаватРтуБАЗТКОаРБМЕРІ
АРББОКОТЗИаатТААГ асІі МКОМЕРЕРУТУЗМУ Мала ТЗаМНТЕРАМІ О55(2І У5І 55УМТУРБББІ СТ
ОТМІСМММНКРУьЬМТКМОККУЕРКЗСОКТНТСРРОСОРАРЕЇЇ Са РБМУНРІ ЕРРКРКОТІ МІЗВАВТРЕМТСМУМ
МОМ5НЕОРЕУКЕМУ УМИМЕУМНМАКТКРАЕЄЕОММ'ЗТУВУМ5МІ ТМ НОБУУМІ МОКЕМКСКМУ5МКАЇ.
РАРІЕКТІЗКАКСООРАЕРОМУТІ РРОВОЕЇ ТКМОМБІ ТОЇ МКИЕМРБОІАМЕЖМ ЕБМСОРЕММУКТТРР
МІ О5рО5БЕБР УК ТМОКЗАМОСамММЕЗСОУМНЕАЇ НМНУТОКОБІ 5І РОК
М" означає Азп297
ЗЕО ІЮ МО. 245 |мезотелін людини, варіант 11
МАГ РТАВРІ ГЯ5БСИаТРАГОаБИ Р БІ СМ МОРЗВТІ АСЕТООЕААРІ ССМІ АМРРМІЗ5І 5РВО
Г'аЕРСАЕМ5БИЇ 5ТЕНМВЕЇГ АМАГАОКМУКІ 5ТЕОЇ ВСІ АНВІ ЗЕРРЕПІ ВАГ РІ ОЇ ГІ ГІ МРОАЕЗОа
РОАСТАЕГЕ5БВІТКАММОЇ І РАСАРЕВОВІ ЇЇ РААІ АСМ/СУВОБ5БІ І ЗЕАОСМНАЇ СС АСОЇ РОВЕМАЕ5
АЕМІИ РАІ МЕЄСРОРІ ООРООБЕААНААІ ОСИаРРУСРРОТМУЗУЗТМОАЇ ВИ РМ аОРІЇАБІРОСІМ
ААМВОНЗЗНАОРБМВОРЕВТІЇ АРАЕВКЕМЕКТАСРЗОаКкККАНЕЇІОЕ5І ІЕМККМ/ЕІЇ ЕАСУМБААІ І АТО
МОНММАЇІРЕТМЕОЇ ОМІ КНКГОБЇ МРОСМРЕБМІОНІ МІ Р 'КМ5РЕОІАКУМ/ММУТОГЕТІ КАПГЕММК
СНЕМ5РОАРАВРІ РОМАТ ІЮВЕМКИанаИаоІ ОКОТтІ Оті ТАЕМРОаМмІ С5І 5РЕЕІЇ 55МРРОБІМАМА Р
ООГОТСОРАОЇ ОМІ МРКАВІ АЄОМММОа5ЕМЕМКІОБРЕІ аСАРТЕОІ КА БООММ5МОІ АТЕМКІ АТО
АМІ РІ ТМАЕМОКІ І аРНУЕСІ КАЕЕЕНАРУАВУЛІ НОВОЮ ОТ СИ СІ ОСС РМИМІ МІ ОЇ ЗМОЕА
ІЗБаТРСІЇ ЯОРОРМІ ТМ АП А5ТІ А
ЗЕО ІЮ МО. 246 |мезотелін людини, варіант 21
БО МАГ РТАВРІ ГЯ5БСИаТРАГОаБИ Р БІ СМ МОРЗВТІ АСЕТООЕААРІ ССМІ АМРРМІЗ5І 5РВО
Г'аЕРСАЕМ5БИЇ 5ТЕНМУВЕЇГ АМАЇАОКМУМКІ ЗТЕОЇ ВСІ АНВІ ЗЕРРЕОІ САРІ ОГП РІ МРОАБЕба
РОАСТАЕГЕ5БВІТКАММОЇ І РАСАРЕВОВІ ЇЇ РААІ АСМ/СУВОБ5БІ І ЗЕАОСМНАЇ СС АСОЇ РОВЕМАЕ5
АЕМІИ РАІ МЕЄСРОРІ ООРООБЕААНААІ ОСИаРРУСРРОТМУЗУЗТМОАЇ ВИ РМ аОРІЇАБІРОСІМ
ААМВОНЗЗНАОРБМВОРЕВТІЇ АРАЕВКЕМЕКТАСРЗОаКкККАНЕЇІОЕ5І ІЕМККМ/ЕІЇ ЕАСУМБААІ І АТО
МОНММАЇІРЕТМЕОЇ ОМІ КНКГОБЇ МРОСМРЕБМІОНІ СМІ ГІ КМ5РЕОІТАКУМ/ММТ5І ЕТІ КА ГЕММК
СНЕМ5РОМАТИ ІЮВЕУКаИ СОЇ ОКОТІ ОТІ ТАЕМРИМмІ С5І 5РЕЕЇ 55УРРОБІМАМАРОЮІ ОТСОР
ВО ОМІ МРКАНВІ АЄОМММОаЗЕМЕМКІОЗРЕЇ аСАРТЕОІ КАЇ БООММУ5МОЇ АТЕМКІ ВТОАМІ РІ ТМА
ЕМОКІ Г ЯаРНМУМЕСІ КАЕЕННАРУНАВУМІ НОНКОЮОІ ОТІ ага одатгємМамі МІ ОЇ ЗМОЕАІ ЗатРИІ.
СРОРМІТМ АНІ АТ А
Гс10)
Перелік послідовностей «1125 АС Тіетарвгціісв шА
Месйтяютаіте БІтіЩваі «1хйа» КОБ'ЮГАТИ ПІБОЛСБЕНЗОПТАЗЕНЦТН- АНТИТІЛ «і8-5пз вВхВ/Бра3а8А7а2 «151» БВ І17З195581.3 «15Бі» дб17-1-45 «іа б 'іт195395.3 «іі 2317-11-52 «іа» БВ 17319355. 5 «151» 8317-11-52 «150» БВ 1709031. «151 8щІ-й8-055 кіш» ха к1іт» Басепсі:, вепсія 3.5 «Вій» Її кді11» 151 «Вів» БІЛОК «ВіЗ3» Штучна послідоввість «Ва «ев Ми НоаВе-ї1-34 «оз її іп Уві зЗіп Ббец Уві зЗіп дет Зі Алла Зі Уві був ГУв РІ 51 Дід ії 5 їй 15 чеж Уві їв о бві Бек о сСув Був 5іуУу бах 5іУ туш Тв РББе тп Аве тут 23 25 зо вів Мет пів тк оЗаї зАкКоа бів бів рго біу іп бтіу ГаноБзти ТК о ліє
ЗБ 4 45
Зіч Уві ї1123 Бех Тв отТух ТУїх З1іч Авп о тТвгЕ зо ТУЇ Азпозіп Буз ЕВе а 85 ей їітуа біт За Атв о тпк Мет тп Заї др ма Бек тп век ТП вдта тук та та 85
Мет бін їєц вгщ цдежЖ 1ец др дет Ар Аве о ІВІ Аіїа зві ТУуюк ТУК Сув 5 КН 5 вів Акц Зі ЗіУу їви дЕЗ бів ТУхХ Тех ЇЖ А18 Мет дер ТУуюх Тгр о пі1У іо 135 іа ів ші тТБЕ Мет Уді Ту Уві пет пе:
115 120 «дій х чаї 13 «іст БІЛОК «візи Штучна послідовність «Во «ваз МЕ НивВа-1-3 чай» й
Вввротіє хХаі Кес їтвБЕ біп шех ко Ав обеї сел Ата Уві бех Бей пі 1 5 18 ів зі Акта вАта Тпт о ТІзЗ ВвпосСтва Був дех гех іп вех іеп іви Авп о дет ди 25 дО ак АВвпобій Гув дви ТУук Мем Ала ТІВ ТК біп Зі о Буз Ртз о З1іУу СІВ з5 25 25 жо Рко Ов їецй о бец уві ТУЖ ТБ А1а дех Тк одко ЗІ шех Біу Уді зи зе Бо
Ес двр ока ББпе о дех б1іУу дЕхХ бО1Уу дех Б1Уу ТпЕ Авкр орпе ТБ їТеи ТБ та ти що т112е2 Бех даег їец зіп Аля сій вро Уді Ав Уві ЖК ТУК Ствосіп бів 5 80 з
Ків Тух деї Тпт Бо РІО ТВ Рв щіу зіп Ш1Уу ТВБЕ Був ви зЗій Ті ісп Асп5 її
ТУв «вій» 8 «ії» 450 «вій» БІЛОВ «дія» Штучна послідовність «ВИТ «ВЗ: Бажкий ланцнют НиВа-1і-34 «ше «шві» юю ЕЕ «382» (3011..501 «233» Хава являє собою Авпоа97 «апп З піп уУаї піп о їец Чаї біл шех сту Аіва тіц Уві Був Був Еко зЗіу Аза 1 Ко 5 15 ак Уді ув Уді Шеї Смиз Буд ослу Бех зі ТК ЖБК Бае ТБВІ Аво отТУх те те ли
Кл Когеу Гея
А1їа Мес нів Тер о та1їі Аква бів вів бжхо біу шіп 53Уу Гей БІ ТЕр її8
ЗЕ я 35 сіу Уві Іі бет ТБ Тут ТУЇГг сжіу лап оїТВЕ Аввотук Аапосіп К1чв о вКе ва в 5 пУув зі ув А18в8 ТБх Меї Тпх Маїі Аз о Був бек ТЬБг дес тп вів То «5 та 75 ВИ
Мет о зій їв; Акц о Бет їз деко бек лпвр дво їпт Аза Уві ТУшї ТУК Суд ви я дів Ака о біУу 1 Беп йту бій Тужх ТТ Тук дів Мес дво» тТух ТК щу 1по 105 її іп ші ТЕ Мет Уві тат Заї бек дех Аїд дет ІБт о Тув осі кто дех 115 1285 125
Уві Бне Рео 0ез» дів Кто Шеї бпяжш БДув Бек Тпкобдек ЗіУу бі ТптІ діа із 135 150
Віа їемн пі симво пцЕц Уві Був вро їх Баг о Бто сій го УаАї Тато Хаї 145 ї5а і55 і5о пет тКкр о Авп обет бі від Бей Трт о бех зіМ Уві пів о тТаг ББе кЕКо Аза їв ї7О 175 чЧві їєец; піп ет йеї Зі іа); Тукє Бех во беїг бек Заїі Уві Твт худі іо іївЕ ї55 вЕко Бех дк Яежтх Бей бБЗіУу тїпїІ іп ТО ТуКк 112 Сув о дзп Заї пвоп нія і-5 оп 5
Ту Бкго дек вп о ТвБЕ ічУув Уві вв їв о Був Чаї піц ЕКО Був бет Суд іє гі5 2585 вАвроО»Уув ТВ Кіз ТБІ Суз Ркгса Бгто Сув Бко Аїв Рго Бій цеб іївнозі гл 235 завд зіУу Бро дек Заї КБ ТГеа ЕБЕпе Рко Бко Був Рез Був Аво тп Пса Мет а5 Би ва т11: Бех дкУу ТІ Еко Зі МвІ тТБкоСбув ві аз Заї Ав Ууді ек пів во де то зЗіш Аз БО б1б Маї КУуз ЕБЕпе вд ТгротТук Хаї Аврозіу Уаї Зі Уді те 25 25
Чіз АБЗ о Ата був ТВБЕ Туя Рко дк бій спім бів їх Хад дет Тк отТУух 235 2З5 305
Зка Хаї Уаії бек аі їви тБлотаї їйеи пів жів Ав ТЕб їеб вапосі зо5 Зі1о 315 2
ІУув Бій жук Бу Суд Ку Уді дах Авп Гув 815 Гец РЕСсС Ата БКс І1г 8-5 ЗО 335
Зі БУВ ТВБЕ Ії1е Беж Був дід ів осі цяамй жо Ажкяа Сай БЕО бій Уві
З4о З45 ЗВО тк тва Тем ла те. до В чн тік - тв те й а: то
ТЕ ТВХх Би Ето Бжо беж о дже хі сі: Ме ТЕ їв два обів Уваї Бех з55 зей ЗБ 1 Спбіауато ктх т т т-ї х лях - дл - о - ре ш-Я щу М Ко
Іви тах був гей Уді Був о зіУу Раз туї Рхо беї Аа їз Аза Уді Іі то зт яр
Тр о йі: дес бвпозвіу біп Бхо ЗІ бяп о Аяп Тут Був Тат тТБІ БгЗ Бка 355 зв. зва о
Уві Бей; дво пеї двюр о Бі бехшх ББзе БЕпе їви ТїТУЖ бек їв Бей ТВ Уві зп Я ІБ
За дув бек дк ТІбйбсіпозій б5ІіУ АвпотУді Бе бек Су Бек Уві мех щи 425 32
Вів 15 віз іео; пів Зап онів ТУК ТЇПІ зЗіп сПув бек і1еб деї із; 5вЕ 435 Те 455 вхо і «відж 4 «211 по «і» БІЛОК «чаї» Штучна послідовність «ай» «аа» десгский ланцюг НиВа-ї-34 «ап а
Ав тч11е Уві Кв тТБЕ біб беж РЕо Аввобдек о їеб) біз Уві бек із щі 1 2 їв 15 біб Акхо діа Тк о хтІі28 ВапосСув Був пех дак біп дек Гей Бе Вбдпобех 23 да Зо ттеІ дп озіп ї1уз Ав о Тух івий діа ТІ Тук щЗіптп Бі Був Ехо обіу іп
ЕНН Б вхо Его Був їезл Бе) Уві ТУх БПпе Аіа беж Тпх о АгкУу 51 бек сіУу ді
БО аь КУ
Еко АБроАкКа БПе дер З1у Веї сЗіу Бех 51іУу їПпк о двроБбйе ТБ їй ТВх шЕ 70 та в хт12 йесг ВЗекр гец Зіп Віз Зій Анрі Атїава Заї ТУКЕ Тук Шев Зіп о щшіБ
З зо За
Нів Тухкх Бек Тпжх Рус РЕо тІБІ Раз бі бЗіп бі ївБЕ їма Бей сії тТІє їло іп ЕФ їчаА дк ТБЕ ві Атз Аа РІ дет Уді Рв 112 РБе РтІб Рхо Беї Аве 115 120 їв
Зі бій їши Був ББек 51 ТпІ від бек Мві ді Сув ї1зп Бей Авв о два 155 155 155 вре Тухкх Рко два сій діа ітв уві шів Тр лув Чаї Ав йвп Атд Бей т45 158 455 ів жЗіп шет зі» авп обек бЗіп зі бек Уді їв зЗізЗ біп Аво деї їз Аео 155 ІТ 175 шек о тТпх тТУК бек їгвги бек йех Таг оїеви Тпг оїен Зег Гу діа бвф ТУ: 180 185 Ії580
Зі їв пів Був Ма1ї ТУух дів сСУув о З1іс;п Маї Так Нів БіпоБіУ Бей 5вЕ їз1а5 ВВ ОБ в-вї Ето Маії ТП Буг бдеїх ЕБбе дв олкп зі іп Сув гі гів 22 «За» В «Вії» 5 «вірз БІЛОК «ій» Штучна поасліпсовність «вих «па» Сі УББ неВа-1-55 чацпаз 5 аворотТух піз Мех пі і В «вій» й чиї 17
«війз КІЛИОК «вії» штучна послідовність «в «ваз» СІКи МБ опиВБа-1-3а «апа Кк
Уві їІ1е Бек Тпг о ТХУукю ТУкоБІіУ АвпотТах Ап оїУї Ап о бів їв ББпе гу 1 З їй 15 -щіу «війх 7 «811 1ї17 «вів» БІЛОК «вії» Штучна послідовнкість» «ДУ «аа» сгва У опиБа-1-з3а «Важ т біт сім їец бу бій ТУК ТУухХ Тук діа Мет Аве отУЮ 1 Кс 15 «війх в «811 ї7 «вів» БІЛОК «віз» Штучна посліпсвність «пе «ваз сві МІ НиБВа-1-ї0 «пом 5
Був о'вех бек біп век Ге; Бе вбдп дек БЕет Аввопіп уз авзп о тк їв 1 Кс 15 15
Віа «віп» 8 «віть т «під» БІЛОК «піз» штучна посвіпсвність «ВО «ваз» сгвЕ МІ нНиаБа-1-20 «асар о з
Рпш2 81а бек Тпт дДкзЗ сід; ех 1 В свід» о «віївм 85 «спід» БЕЛОИОК «Віз» Штучна посліпосвність «ЕЛ
«поз» СшИва УХї пнВа-і1-3а4 капарР 10 сіп ій бів тТУук йеЕї ТВі рт Бко тпгЕ чвійшж 11 «віт 45 чів БІЛОК «413» Штучна послідовність «ай» «2232 Бажкий ланнюІ Нива-і-34, кінцевий К «ай каІйів МО БЕЗ кв» (3011...) «23» Хаа являє собаю двпозї «а» І піп Уві сзіп іїєй Уві іп деї 51 Аїа Бін Узі був Бу Ехо Зіу Ата ї 2 10 15
Бех Уві Га Ха! дах Су Був віч Бех Зі Тут їйЕ вве тТпжх АвротТук на 25 Зо зів Мет пів тко Уві ака Ззіл Азія Бко Біу шБіпв бБІМу їец о зіч Тко її п 5
Зі Уаї Ії пйеї їй Тук ТУЇ 51 Звп о ТБЕ о АвпотТУІ Авпозіп Був Бпе
БО зе Бо
ТїТуа ші ев Аїд те Мет твБІ ві З35Бр Був пет їлк бек ТВП АТа тут 5 та т5 во
Мат сіс Пен вк Бек ів Джо дек АБв о Аво отптІ АтТа Уві Тук ТУТ СУ 5 зо 55 вів Ато зі Бі Гей лка сій тух ТуУж ЇТУКЕ Ат Ме Авр оОТУую ТЕр ОСІ їпа 125 до б-іп о шіуУу ТтвЕ Меб Заї Тйт Заї БВек бет Ата бБеї Так о їУу Біт Рро бЕх 115 ї2о 125 ві Бпе Реібс із Ата бро бех век ув веж ТїпІ Бекосіу БІ ТП діа 135 ї35 140
Віз еп обі Сув Бей о Уді їв Авр о ТтТух Ба Рко бій вто Уаї ТП Хаї 145 і-Щй іваЕ 1655 аж ТЕр днини бек Зіу вів Печб ТБІ пек зі ві Пів ТТ Бл Бго Аїа їББ ІТ 175
Ууаі пес сіп дет бек оЗіу беб Тир обех еп дет ек Уві Зді ТК о Уві іа 185 ї155
БЕс йех Бет Век їви па!» У Тв бЗіп тах тут 11 Сув дап Уаї вап о НІВ ї155 о во їв Еко Бек азп оїпк Муз Уаї дяр о губ Був чаї Бій Бко їГу5 бак Су іо -хі5 Бо ази Був ТК о Ніз ТБІ Шузв Бко вро Сбув Рео Вів Ріо бів рей пе пі шва 25 238 вах щ-іуУу БкЕо дек Уві РБв Іва) РБе о вБкОо Рг Був Різ Му Аво отБбБЕІ ївБи мет ті5 ВО ВЕ тів Бех АкУ ТпПт Ро 51: чаї ТЕ Сув Уаї Уві Уаі Ав» Чаї Бек Нів ва 5 275 їй йвр о РІс сіз Уаі Ув пе Авп тТгротуг Заї Аво БЗіУу Уаї пла Уді
ВИ ВЕ
Ніз Азп діа був Тйк Був РЕ Аку 15 сх1іц бів Тук Хад Бех ТК отТУух 250 за зго вк о Заї Уві дек Уві її; Та Уві цей нів 'їзіп Адр ТЕр іївип вВапоцізш 3605 зі 515 г ів біз ТК оБуз сСув Гуз чаї дек Авп ота віз рей Рко Ата Рго тів 83 35
Сі Був ТК Ії Шеї Гуз діа пев бі бзіп Реп Ака бів ко біп еї за аЕ БУ
ТУЖЕ ТЕ бецп Різ Ртхос дет вхо шій 1; Мес Тато БУВ Авпозійп Маї бБех
Б в-й ЗБ5 іїза тпт о сСув їва Заії Був бі Бе тТух Еко дет Авр оті Ата Хаі бін 37» зо
Ткр о ші: Вес ко біт Зіп вто пла АвпоАвап Тут Був ТпІ ТпЕ Бко рІо 85 Зо за5 о
Чаї цес дв о Век Акросоу дех ЗБ Бпе їн Тут Бех Ту їй Тк Уві зо З15 зІ5 вва ЗУ Бет ага тТІгтвробіп лій 01 Ап оУві ББбе дек Суб щех Уві МЕ ада 45 з
Нів ій Аїа без Нів зЗвп Пів ТУЮ ТБ бйій Ду Шек Тез бег Гез Бех 35 ЕН за
Рко Б1у Був ча чаїй?» її «чені» За «Чаї» БЕДОВ «їі» Ношо вврієдв «а00» І
Ме тв Ата Тпко5зіп вів Бес Гей; Аха Уві їез їв Гео Гес гви від 1 5 її 15
Ре біУу нів дек ТБЕ Тук 5І1У Аза Бій СУув ББпе Рго вдів Суд Авп о вхо а 25 Зо зЗіп Аап біу Бе Сууз хін Адр обЗвп одвп о а Суз дя сСУз Нів'Маї бі 85 40 45
Ткд віп зі РЕ Без Сув Авробів Су Уві ТЕ о Заг РІЗ Зіу Св Ге
БО ВЕ до
Нів зіУу їн о Сув зім шій БКо сі іп СУув 112е Сув ТТ Арі ТЕр то 75 З
Авоюр с іу б5іцй без Ств аво Ако Аво Уві АкУ Аів Сув дек бег пів Его я во ЗЕ
Сув вів АвпоАвгп Зі" Тк оСуз Уаії Бех Би АвевоБіє З1іУу Бе Тук сій іо 105 хів
Сув век Сув Атїд Рхо бі Тух пек бі Був Авр оСув Зіп Був Був Авр ї15 150 125 щ-1і1У Ека Сув Уві Ії11828 вбап біу ЩеЖ БКо Сбувошіп мів о Біу Біу ТП о Сув 155 135 150 утаї зви Ав ів зі Ат Аха дек нія Аїва бек Сув гей о суив БЕ Его т145 іа ї15Б5 150 сСіуУу пе о Бек о 5іУ Авип РБе Сув с51з 112 Уві Ав дво бек осСув о тТпЕ ро їЇ70 ї78 вва Бко був обі аАвполаво зіУу ді СуУув ТЕ Аве тів 51У зі Ан Бе іо і55 їза вгпосСУув вка Сув Бо піз сіуУу ВБпе ті дво о їт5 тп був дех АкЯа вто їіз5 по п
Уаїі ТтТпх Авп о Сув ДІВ дек Бех ко Сув бій о АдвЕпозіт пім ТпжЖж був Бей ід гі де: т-іп Нів ТК Зіп Уваїі бжеї їх Бій Св їм Сув Був ВЕкОо тів Рв о тах пав езО 255 5ЗО -1іу їец ЖПк Сув Уаї Ів Гуз Акоа Азія геви бек Ртгс о біп озЗіп о Уві ТЕ аБО 255 вАкос о їез; Рекс Зетг сі Тут ЗІУ їз Аза ТУК Ата БГецпй ТЕ Еко 51 Маї вва ЕВ 27
Нік бій: бецй Біб Маї сіп опіп бко 51: Пів АкуУу ТІ Ге Буя Уаї дек тв БО аа
Ме пу« Зіцй Гей Ав їв о гСув ТБк Рг їез Бех ТБк ій ЗіУу зіп Аїд пай ЗЕ 5 тів Сув Ріпа Тпх тів Теза біУ Заії Пес так о йет Бей хаі чЗаї Гелі сіу зах з13 515 Зо жпЕ Хі Сі т11е о Уді вве во вАвпоїбув о Сув біз їли ТІб Уаі дЕКк лап за5 ее 335 іви Акоа тТУук Авпонів Ме гвеип дк був їГУув Му АвЗпоїви Бец ізо бів за За зво
ТУЕ Авп о дек Б5і1У ЗІ дО гео вів УВІ Авп о т1е ТІ Бпе Рео біз ів
ЗБ Зп ЗБ т12з Авр Мет ТвІ їпжЖ Бпе Бвтї Був ші; вів 51 Аво іп зі: Тіє
З За зад «5105 юЗ «дії» зв «312» БІЛОК «ів» пом вврівпа «аа» ІЗ
Ме тах вла тп цій бів Гей їни дко Заі еп Бей ізп БеБ ГПЗ ДІВ 1 В їй 15
Епа біУу пів жеї ІЇВБЕж Тук ШІіУу Бта Бі: Сув ЕПе Бха Ат СУЯ Авоп о РІО
Кл. З о
Зіп ввап зі пе о Сув 51 АвровАвнр о Авпбо оЗаї Сув вт Сув бів РЕ ощіУ 58 Кі 8
ТЕр біп ці Бо Бе Сев дер о сої1п Сув Уаї Твк о пек вхо бі був цей що 55 бо
Нів 51Уу їв ув зім під РІ бі Біб Суз ті СбУув ТагоАвио5іх їїр
Б 7 75 во
Авр обі їйтї3 Без сту дер Ахлойва Уві Аа Аїз Св о его Бег Ата Бтго ак зо а сув'аїа Ап Ав о Ага ІВІ Сув чаї Зех Гей Аа ввроспіу без Туш ПІБ їпа іп 113 ув ' бах Сув вів Ресо бЗіу Тут бек Бі Був Аве осСУув бСіп їуво ів Аве 115 155 155 -іч Ето Сув Уві жів Азпозіу Бек Еха Сув о хіп пів січ іч ТЕЖ Суд і35 135 145 "ві взвзр ав Бій БЗіч Ага Атїа дер Ці Аїв бзеї Сув івч Сув РЕ вто 145 5 їБЕ їжо
СЗіУу Бай бек Біб Двп Бме сСув бІ13 І112е Зі Аів Азвпобек Су ТБЕ рто ї55 Ії7О 175
АзпоБЕко Св сі; Ахп оЗ5зов о бпіу тТаі Сув ТБпЕ Ав Ті сіу бі вдо ББе 1650 1855 ї55 е»Ец Су Ага Сув Ро Віа пітУу вп о тТіє дДвю Був ТК о сСувз Зех Ака Бо їа5 20 апа
УаАі ТІ дна пу Аза дет Вес Рко Сув хіп Авпобзіу діУу ТБ о сСув Бец іо І по бУ5іп пів тпр обів Уа деї Тух сій Сув Гм о сСув БУВ БЕбО сі; Бе їБЕ 32 -З5 о
Зіч їй тваг оСув та: уз Був Агу дів Бец дет Бо сін зіБв бді їБЕ зав 5 а5а
ВкЕЧчЧ Бен о РЕсо дет мі тухкх о зіу їв дів тТУукК Атч Бей Так о бжо собу Уді
Нів хів ви РЕ ЗУаї іп обБіБб вКгоОо 01; пів Акту ТІ іенпобув Уві Бек 275 ВИ 25
Мет іув Бі їей деп БУу5 Був ТБЕ РБко Ббец зей тлпк осів б5Біу піп дтад
У У У зай ав Зоо 11 Сув Ре ТВІ Тї18 іс бзіу маі Бей ТпК дек цей Мві хХві Бе о зіУ
Зв КУЗНЯ ЗІ5 зп
ТЕ Уві піуУу ті Уаі Ре Пес Ава ШУув ПВ о Бі тТвпЕ тТІБбБ Ма1ї БбЕеї Авт
Зав З За35 іви Адкоа Тук Авп пів Меї ес вкзч їУув Був Їм5З Ап ої Пес фе бів зай за5 за
Тек Авпо дак біу БІ АЕВв оївц А1із Уді ап Ті Ії Бе Бха З1а Був
У У Е У зЕ5 Зо ле5 1128 Ар Меж Тпт так пев одех Та ій діа бі вер сіла бій Т1є зте зт о чат» 14 «лап» 13 пово «дій» 5 лай» 5 ппо «іп» Ії6 ча?» Ек по «вій ІЗ «Файл І17 поп «Вій» ї8 «ап» і8 под «пійт» ІЗ «апп» ІВ ово «вій» 5 «апа де по с«шій» БЕ сля» 1 по
«вій» 2 «епох 5 ово «вій» па «епо» да ооо «війт да «Ви 24 поп «тій» 5 «Оп» сь пов «хі» як «апа» й ооо «щійх шт «апа» 27 ооо «вій» 25 «чо» да ваоб «війн 25 «Ой» пе
Спб «Вій» Зб «Оля ЗО проб «ій» зї «апп» 31 воБ «Вій» Зх «ав» 5: соо «Вій» за «авро» 3 сво «піп» 38 «ох 53 апп єаісп» 35 чапох ах оо «віп» аа «400» 36 проб «810» 427 чай» 87
ЗО
«210» 35 «поз за апп «Вісоз за «ай» 35 пой «10 45 «ап а пой «іст» І «пом чі
Зо «вій» зо «аз зх пОб «810» З чай» 43
НН
«віп» З «по» ча апп «Вісо» ч5 «ай» З5
НАННЯ
«ді» ЗЕ «аг» 5 ой «12 047
«поз 47 по «віз 3 «ар» 58 по «вій З чтабот» ав по «вій 55 «ап» во пов «чіт зі «апйх ві пов «віссю Зо «апп» 5 по свій» а «апо» 51 заб «Війз ж «по» 54 по «віз 55 «ар» 55
«вій» 556 «ро БЕ по «відпо 57 «ап» вт паб «дій» 58 «ап» За пов «вію ва «апй»х 5 пор «вій» ва
«апОз Бо опо «Вій» єї «апп в по «Ві1пз 82 «апп» жо по «10» ах чай» Б д0о «тп» ов «поп» Ба
Зоо
Чвіс» 65 «40п» а по «віп» вк «апп» яв до «10» я7 чай» 7 дОо «й1п» е5 «пп» Б8 опо віп» ва «Оп» во опо «ч«війз ле чай» па
НИ
«а1ійл ТІ чапоаз зі обо «піп» 77 «апп» 75 опо
«вій» па «ап» 73 проб «Ві» 74 «апа» та опо «дій» 75 «Яд» 5 по «125 7е «аа» 75 щоб «дій» 77 «чада» 77
ЗО
«31п5 т «400» ув пОоб «ій» 75 «пл» 78 по «війвз о «ап» 5о проб «віз» ві «ай» ві во «е«війз З «яп» 82 па «чв1із» 5 «айв аз во «віз Б «да» 84
ЗО
«свій» 5Е «апа» в попа
«810» ВЕ «005 ВЕ про «8105 87 «4005 87 ово «гій» 88 «4005 88 воо «810» 89 «2005 8 дво «гій з «доз за ооо «2105 зі «адоз і воо «лід 95 «ад 83 воо «гійз з3 кадо» 93 ооо «2105 84 «поз 84 воо «гій» зв «400» за вод «810» 96 «поз а5 во «зій» 87 «ад 87 во «8105 З8 «400» зе по «аї1Пйз» аз «поп» аз во «ві1йз І50 «яп І50 ва «102 ІІ «в1ї» 116 «вір» БІЛОК «13» Штучна послідовність
НН: «а83» чи зда «апп» ІБ іп Ізє біп оцей У«їі б5іп о бек пБіу Аїв бій Уві Був ГУув рко бі Ала ї Ви 16 15 бшк Уві ув 'таї шеї Су Був вів Шеї сіУу Тут тїБпт о вп о ТВвх вдвОЗ ввр зп 25 за по Ж шо тТУуК Меб Бак Тхр Уаї ГУ бі Ав Бгто щіу бів бі Бей о йій ТЕО тів 25
З ЗіУ Ав Тіз Ави Рто ТУук двпозіу АБр оївйЕ Авп о ТУЄ Ап оЗій ГПуг БЕпе 5О 5 о іза слу Був дів ТВБЕ Те тет тар АвБр ог бек тТвЕ о бетг ТЖВж д1З тує
Я та 75 во
Мес піс бша дет дек Тецй бо дек сій Ар о ТБІ АтТа Маї Тух ТУГІ СуУуВ а зо з5
Віа Ап дво БЕЗ БІ діа Мет Авротух тТжрозіУу зіп сі ТБЕ їй уві ісп 105 о так Заї пек дет 115 «Вій» їде «21ї» Ії18 «вір» БІЛОК «13» Штучна послідовність «а» «а» зда «апп» 105 авроІ1в Уві Меї тїпх біп тпІ Рко іївБ дек їец Рто тТаї тв бко Бі 1 5 16 15 с-іц бко Ата бек тїіз бек Сук Аку дет Бек бйіп дек Те Бе: Ні веїх ди 25 Зо
Ввп обіу дшп о ТЕ о тук Пец бі: ТЕ отТУужх Бец о біп Був РІб о піу сЗіп дех «о 35 пко бБіп зи їн о тТіє Тух Твх тУді Бех Азп Ак Баг о Бат Сіу Маі Рта ви а5 во
Авр оАко РБе бек зіу Шет піу Бек о стіу ТБЕ АвроРБЕ Тахо бе їв 12 5 то 78 85 пвх дкЗа Заї 51 вів сій йо Маї слу Уві тУюК ЖУК Су ЕБе о біп бі а5 що 5
Ббет Нів Заі Бко Бец ТІ Ре обі Сів ці Тв Був Те біс т18в5 БВ оп 1п5 ії18 «вій» 153 «дії» 4335 «вір» БІЛОК «313» Штучна послідовність «кави» «8232 Важким ланцюг ЗАЗ «аа» «вої» Мой БЕХ «лави ї8аБ1.,. 25 «223» Хаа являє сойою АвпІа97 «аПпо» їо3 біп тів о зЗіай ївеч Уві сів бек зі Ата біц Узі Був Іуз Ртго 5-1 Ата 1 8 10 15 ек Уді Був тТтві дек сжев Був діа Бех б51Уу ТК ТБЕ РП Тпжх АвО о Аве аа 25 зо тТУШХ Мер баг ТІб Уаї ГУуво'сіп Аа Ето птіу бЗіп 5ЗІіУ Гей піц; Тер о тТІє 5 «о 35 сі Ава тт АвпоБжхо ТУуї Авп обіу Авротвпх Авп о ТтТуУук Авпоій ув Бе й за ко
ІТчв'хіу їмв віта їБЕ Ї1еїзї ЇБї ЧУаі АБр о бУвобет їБЕ дек твБІ Вів тУЄ 5 та тв а
Мет осій їєц Зек дек І1еїзї Ахо баг о СІ Авротпт віта Уа1 тТУуїх ТУБК Сув
85 зо 55
Аа вка вва Рто Бім Аза Меб АвроТук Ткр біу біп Зіу ТБ Теп Заї їпо 155 115
Тк ві Шек бет АтІз Щеїг ТБІ Був Біу Рко бек аіїі Рпе Рус Із) Ат
Аї5 150 125
Вкго Вех Зер о був Ве Тахо дех 51 бі ТБ Ата Ата ге бБіУу Сув Гва ізо 135 145
Чаї був Аве їУК Бе РБго Зі вКко Увазі ТБр охМатї Бек ТІр АвоП оБех бі 155 ї5и 155 150
Аїа ге; тр оБевг 5і Уві пів ТБЕ вЕпе БЕКко віз Уаі їей бів дет бе 165 Ето 175 жі ей о їУук шек ів дет вет Уві УХді ТБк оЗбвїі Ртго Шек Шетх дет Бек 180 15 їЗзб зіМм ТбЕк іп тт тїук Іт18 Сув Авп ої Ап пів був Рко беїг лЗавп ота іїз5 по 5 іа Уаї ав о був Був ві бі: Рез Був шШек Сув др опув ТВпжх о Нів ТБУ гі пі БО сСув 'вта РБго Сув Ехо А1а РІ сій ій Бема об5іу щпіУу РЕЗз деїх Уа БпеЕ я ен 235 га іа овпЕ Рко Ето Буз РЕбо Гуз Авро тт пе; Мет ї1128 беї Ага тІпг Бо 245 25 255 бід Уві Твйк о Сув о Уаїі ді ЧМаї Авр Уді Век Бів 315 Аво» Его Зіб Уві
Би ге ато ічУчав ББбе Вап о тк о їук таіїі ав озЗіУ Уві бтіч Уві Нів Ап Аза Тв ТБЕ
Вт5 дао 5 ів Ріс Вк сій Зій іп ТУХ Хва вет Тк Тук Ах Маї Уві Бек Уві чо шзЗ5 Зоо їви тт Уаї їеиш пів с5іп о АвБр о Тр ій Ап ошіУ пу Січ тТУЇХ ГУ Суд зоа5 зій і5 зда іча Уві баг о азп о Був дід їво:с РІЗ діа Еко 112 біб 15 ТпПх І1з бех за5 30 335 ів 818 Був сіу Зій Рго Ах Зій Ртго іп Уві ТУК ТайКк оївги Бро Ртй
40 345 зЗ5О
ЕІ Агро Авр осі Га ТБх Був Авпобіп Уві дет їєс ТПпІ сСув гви Уді з55 зби ЗЕ5
Був сіу РП Тут Рко беї Ар Тіз ліва Уві бій їїтр обі ВЗеїх Авпобпіу зт 875 за
Зі БкЕо бій дяп о Аяп о ТУКХ Буд ТЕ тТнНуІ Его Рто Маї ів2 дкр дет Азр з85 зас за зо сжіу шеї Ба пе ГПезп Тут Бех Ппув о їеБ ТпПг о Уді Ап оїув Беї Адкоа Тер
Зо я 315 зі 512 51 Азп о Маї ББе деї Сув деї Уві Кеї піз зір дів за пів а 425 55
Авап о Пів ТК Тот о біп оПув беї їел вет їв деїг Бгто 531Уу 35 4 4345 «дій» 134 «щіїх дів «вішх БІЛОК «8і35: Штучна послідовність «чай» «883» Легкий лачнцювт ЗАЗ «Ой Ії54
Авр тів Уві Мах тк о бБіп Тбт РІО Гбес; бер їецй Ето Узі ІБХ ро У 1 5 і 11 сій Его дів дет хів о дет Сув Бк о Вех век о біп дек Гей; цес Нія дех та 25 Зо
Ава о5іУу Авп о їпІ жїУК Гей о зіб5 Ттр туї іга бів БУВ ВЕоО ЗіУу біп 5ех 35 40 45 вхо хіп Бей о бви Ії1е Тут ТБх Уді Бех Ахлп о Аку Рпе беК хіу уаї Ето -а ве о вВвр оАтха Ре Зекг ізіу леї зіу шеБК сЗіу Тпк Аве Рпе ТпПкКобБев їв 1Т1е ти та зо
БеІ Дко Уві пі діа Бі двроуві зі Зваві туї ТУБ Сув ББе зіп Щі1Уу 5 п -Е
БетІ Нів Узі Бгто їв Тпт Рпе бі бів бі тат БУВ Гей зібд 1Т1е Її 1250 125 БІЕб
Акоа ТІ Маї 818 Аза Рко бет Уві Рпє 116 Рне Его Рто Шеї лдвр о зі 115 ідо 175
Зіп бен був Зехк Бі Тнт Аза дет Уві Уві Сув їв Тец Ав оАвгпо Бпе 139 135 ї4й
Тут РБРго Акз бій Ата Із Чаї Зіп Ттб Був Уаї Аво Азп Ата Гса бів 145 155 155 165 ет біУу Азип о дет Зіп бі Шеї Уаіїі Тпг обі піп Аво о дет Був Аво Бех 165 ї70 175 тах Тух бек бецй бек Бек ТБт ем тп би бех Був Аів Авр о Тук 515 1859 185 185
Ів Ніз їв Хаїі ТУБ Аїа Сув бій Уві ТНІ Кіз Бі біу Пе бек беї
ІБ оо аа
ВЕб УВІ ТпкК о Буз беж Ене АзподекЧ Зі бі Сув 210 гті5 «дій» Ії65 «дії» ї5 «віз БІЛОК «Віз» Штучна послідовність «Ах «дов» СВві УК ЗАЗ «вп» І05 зі тТух ТБІ ЕпПе ТтТВЕ лдзр о двр Тутс Меб ех 1 не їй кій» їде «2115 Ії «під» БІЛОК «213» Штучна послідовність «вах киева» пПва чно зЗА4 «пах ї10о5
Авр оті авп о БЕо Тур двп бБ51і1У Авроїпх Авп 1 5 їй «війз ї07 «Вії 7 «від» ВІЛОК «2132 Штучна послідовність «ду «вай» СІВ по ЗзА4 чсара» їа7 вЗаврорха 51у Ала Мет Аво отук 1 ВЕ сллійх Бб8 чліїз Ї6б «дії» БІЛОК «пі» штучна послідсовнкість «дах «ейЗ» СВІ ХІІ ЗА «апа» ха8
ВкЗ Бек Бек 5іп Бак тей пев НізЗз деїх Авпопіу Авп о ТБе Тут Іва біб 1 5 іо 15 «дій» жа «дії» 7 «дій» НІПОК «13» Шчтучна послідовність «вах «ва3» СРО МІ ЗА «оп дав
ТпПтІ Узі дег АБп о Аха Рпе Зех і - «дій ЇВ чліїМм а «дій» БІЛОК «815» Ктучнав псосвідовнаєть «ч«авах «ев» СЕЗ ХО ЗАЯ «аа» 30
Рпе о сіпобжіу щек Нів Уаії Ретс ївц Тпх 1 В кій ЕІ чліїз зас «Ві2» БІЛОК «щі3» Штучна послідовність «ад» «223» НЗажкий ланцюг ЗАЗ, кінцевим КЕ «дах ч«аді» МО ВЕ чейот із... Ба «283» ЖХаа являє собою Азпо97 чапом її сіп т1е бЗіп їн За1і біг беї Бі Аза Зі Уві ГУ Був Рко сіу Аїд 1 Е хо 15
Щек Уві Буг Уві дек ств Ба Атїа беж іїйзтіу Тут ТБ Ре ТБІ Аво Азр й 25 Зо
Тук Мет Зак ТІрвр Уві Гув5 о 3зіп Ата Ето 51 їіп 5іМУ Тейозій ТЕб Іїе
ЗЕ ЕТ а 51 АВвр ті Азп РКО Тук Анпобі Аве о тТпЕ Авзпоттх Авзпобзів Гув Бе
В 55 бо ів біт ітд Аза твБЕ Ге тїБтх Заїр їмд дет їБЕ бет ТБжх від тук та та во
Мат ій бач беї дес їй Атоа дак Бі: Ар о таж Віа Уві Тух ТУухк Суд зо 25
Віа по АвБроБбто Зі Аїа Меєб Вар отух ТІрозіу зЗіп сіу ТВлх ївцп чаї ня я У У ідо 125 115
Тпжх Уві Бег ЯЗег Ата дек ту Га біт Рго Заг о Заї Ре Рко Геп Ала т15 їй 125
Еко бетг БЕЖ Був беї Тато беїг 5іУ бі ТБ Алла Ата ТІецоійзіу Су Бев їі58 155 1935
Ууаї їв Ар Тут Рпе Рко бі: Вко Уві ТБ Уві бек Ткто двп о дег У 145 155 155 їйОо
Віа бек тТпт о бетг зі Уді нів ТБЕ БЕпе РкЕо Ата Уві Гезрозів дет дЕш ї1Б5 ї7о їт5
Зі Бек тТУК Бек ви дек шеї їві Уа1ї1 Тпк Уві Ркго бек шеї бек фе: їй 185 135 -іу ТВжХ сіп Тпт о тУуж 118 Суд два о Уді Авп оБівз БУ РІО Беї бап ТЕ їЗ5 и 2п5 ів Уві Авробув Був Уві бі БкЕо Гу о дет Суз др Був ТБІ Нів ТБЕ
Ві іх 2 був Еко Ріс Сув ВІЗ Аза Бгто бій пе; вм осіу Бі Бко дех Уді ЕБбе 225 3 235 45 ізва БОе Рко Різ їув Его Був йво о тТпг о їє-а Месс Ті Бек бВкс тк Бо 25) 455 ш-хіцй хаї ТЕ Суз Маї ді Уді АЗво ді Ббет Нів зЗіс Аве Бхо За ді паї шле їв Бпв оди ТІЮ Тук Мді Аваи обі Уві Зі ві нів Ап діа Був Тпе
ТЕ Ве 285 їв Еко Ах бій бів бів ТУух хХаа дех ТК їУК дит Уві Уві двк Уаї
ЗУ хв ВІ їви тпт Ма) їецп пів біп Аза Тер без днпопіУу Був о зій тую Був Сув зоп5 зіа 315 ЗВО їв Хаї ВВЕ звпобув Аіз їй Его діа Бго 118 51ц Був тТБвІ 1128 дек
За зо за5 іуУув Авіа Був біУ Зіп Ехо дДЕцпосій Бто бйіп Уді ТУук ТЕ Бе Бко Рез
З4о за5 5 щежЖ лАкоа дор о біц їеа о тйпт Був о дзп обіп Уві 5Зек лец ТІ Суд Глви Уві 355 Ей зв іуУув Зі Рпш Тут Ріс пет Даю Ті Аіїіа Маї 510 Тїтр з1б; дек Авп обі 375 75 зо
Зіп БкОо бів б5зповвап о тут БУВ Тк тТвнжх Бко Бко Маї їзи дв двке ав за5 зва 3За5 ов зЗіу век Рі Ре Геи Тут дЕх їв о бец ТБк о Уаі Ар їв дек Акч ТЕ 4055 Зо 515
Зіп іп о Зі АвпоЗві ББпе дех Св Зеї Маї Ме: нів о З1іб Ата Тел Нів ди за 55 вАзп о Ні тТУук ТпІ Біп бу5 дЕх їши ех Тец Бек рРЕз б0і1іУ Буд ча 4 «1025 15 «пії» 5 «пір» БІЛОК «кі» пцто зарієпв «апа» 15
Мет ази Ав Ав Аїва Аа Бо Ака Чаї бій Б5іУу ді Бко ді вів ві ї 5 іо іх
Нів пув піз 818 їви Ні даю бБіу бен ака ціп ді пів БІУу Рко біт а 25 а вів віз А1з віз нів Гц БжшоО АтЗз ТтІр БЕ Ехо Різ сіп о ів Аа дів о 45 дек Акч Ак сій Аїва Ріо Рко Гео о бех біп Бтп Рхо Нів АхЯ ТБго бів ви 55 во -1Уу За зі пек РІЗ БКоа зів Тпх АвБ обі СУБ їй ТП о АвворКа бій 5 та 75 ІЗ чаї ОбБув зі. Був «81Ч4- 113 «11 115 «2172» БІЛОК «13» Дітучна послідовність «ай» «ваз т ЗА4-3 «4Пп05 13 ав омМаї Уаі Ме Тк о швіп ТвюЕ РБкз бен дек цей Бгто Уві тТБЕ РКО БіУ 1 5 їб 15
Зіц рко Ата бдеї Тїіз бдеї Сув дк беїт бек сіп Бек ви Бей Нів пав и В Зо
Вап біт ап ТБВІ ТУ Бїеви 5Зіб ТЕЖр о тТУх Ген о бБіп Був РЕбО зіу біт павЕ
З5 я «в тЕЗ був Бей; пев ЇЇїеє Тк ТБЕт Уві бек Авподкоа ББе бек о сіу Таї Его ви 5 ва
Вар о АкОа Ре беї Бі беї бБіУу Беї бі ТБЕ дво РОе Тато Бей Гуз її то Тв ВУ ак ака Маї бій Аза бій вяр Маі біт Уві ТУж ТУук Сув Роае о біп білу ве за зв їдвс Ніз Уві Рез їеи Так ББе зі зів о зі» Тк о їУув ет з5ї5 ІТ1е СУ їа тїа5 ЗІ «ій 18 «11 щІЗ «вів БІЛОК ча13» Штучна послідовність «ших «23» Легкий ланнюю 3ЗА4-БХ «ЗО» 115 вАвр о Уві Заі КБес ТтТБЕ 5Зіп тТБЕ о РЕс їе бек бе; Рус Уві тТБкЕк РІО щіУ 1 ж їв 15 ті ба Ата дек їз бет бух Ак пет дек ошісб Бек їТей обеє Нів бек да З 35
Ашп щі АвпотТпІ ТУК Ген обі Тед Тухк їєц бій Був БК шіУ бЗіповеї
КІ 45
Бо Був Гей о їез Ізї2 Тук ТБх Уві бет Ап Ако РББе пет піч ді Рига -й 55 Ба авр ово Ре бек о зіУу бек іїзіу Бетг бі ТпК о Азев РББе ТІ Бей: Гув І3е 5 та 75 о веї ака Заїі Б5ІіЗ АтА бін авзроуваі БіУ а1 ТУуї туї Сув ЕБе Зі обі в зо З дак Нів чаї гкКо Бе Тк Бе ші Бі Біу тах Був Ген іх ІТ1Зз їУв 1па 1п5 31 дсз тво Маі Аїд Аза Бго бдех Уві Рпбе 118 Епе Ртго Рко беї Авр о ців 115 1250 125 -іп Гей Був дет 5іу Тк Аза дек Уві Уаї Сув Бей о Гез Авп о Ав о БбБае 150 135 140 тут Ета Акочз біз Атя Був Уаї с іп ТЕтроїМма Уві Ап оЗвоп о дта їз бій 145 і5а і155 іб5 жЖ-к о біу двподек зіп Бій Бех Уві ТП обій іп Авродеї в Аве Бех їЕ5 їто іт
ТЕ Ії ВаЕ інв шет щЕжїх ТБх їзи Тпсх їй дек БУВ Аїв дер тук ціз ва інь 155
Іув Ні їв Маї ТУук Алла Сув зіц; ві ТБІ НБів бБіп с21іу їв Ябет Зех ї1з5 о ап
Бко Уві ТБЕ Гуз Бек РБпе Ада» вк сі бій Суз 215 ів «віх ЗІБ «ії» ЗЕ «ій» БІЛОК «Віз» Жтучна послідовність каш чаша ч 3АЗ-Ка «апп 35 ввр оті Уві Мет ЖБпЕ обіп щех вРкБо Авр о век іеї Аїа Увл бдех їви 515 їі 5 16 15 с іч ака Ата ТБ Ії дзп сСуз аруа беїх Шшеї біп Бек Гей Бес; Нів дех жо 23 з авп БіУу два Тк ТтТук Тєм бій Тед Тух біп піп Ба рко піУу біп гго «п Б
Бйко був 'їви Без тів тук їВвХх Уві Ббет Авап одку Риг бек обіу Уві РІЗ 5О ва о вар БвтІч Рпе дет йіу дек шіу Щеї Сі ТП Аво Ре ТБгоїес ТІ їле 5 та та во детїх бетг їв Б5ібв дія біз аАвр Уві вла Уві ТК ТУК Сув Ре бБіп о о СІ 85 зи 5
Бек Нів Мма1і РІЗ ї-е ТІ Рпе спі зіп пБіу ТБг о їв таз Біб; ч118е8 Ду їба і1п5 115 «Віз» 118 «Вії» ЗІЗ «від» БІЛОК «Віз» Штучна послідовність «вай» «Вв3з Легкий ланцют ЗДа-КЯ «зсаз її дар Т1е Уві Ме ТБросбСіп шЖежк Бко вАвробехк Без Аїа Мді бек пед спі 1 щ я 15
Січ дко віз ТБ Ії о Аяп о Сув вроса беї Бег щіп ЖеК о Тей іїеб Нів бех до 28 зи авпо-зіУу Авп ТБт о ТтТУК Тїєш ЗІіб Тед ТУух піп піп Був РКО Зі біп Ето 0 5
Ева був їво їз ІЗ Тут ТІ Уві бдеїх Авп Ат РБе лет йіу ві Его ва 85 Би
Вар вжц Рпе Бех Бі дек шіу щех бі Тк Азо Бе Тк оБес ІВптх їІ1в
В та ть во щеї пег іви зіп дів біз Авр Уві влада Заіїі ТУТ ТУЇ ув ЕБе біп пі 85 Во ав бек пів чЗаі Рез їГец; тр РБпе обі іп о піу ТБгоБбув Хаі 516 т11е уд ї0а 125 115
АкЕЧ тТВпгоЗМаїі Атїа Аза то дех Уві Бпе Г1е Бпе рго рЕо БбБеїх Ав 15 ї118 180 155 хіп іец Був бет мзніУу Тпт діа бек Уві Заі Суз Гбви їТейп Ап оАвп о Бе 135 іх 140
ТуУук Еко Аква біб АТЗа їв Уві бЗлп о ТтТкКр о Був Уві Авкр Ап оАіа Тец 5іп 155 152 155 НЕ пек зі Ав бек обБіп сСіз дех Уві Тахо 51 біп двр дек Був Яво Бех ії25 іти ї175
ТПт о Тук пек ївца бдеї Шек Тпх Гео Таг о феи о бет ЕУув зАід Ар Тут хі: 150 ї85 їз3
Ппув Нів хв Уві ТУк Аїва Св о ої Заї ТЕ Нів біп 51 Бец вет деїш і155 во ваш
Бко Уаі тар їв Бек Бе вВнпоавра іу Бі Суд 215 Ті «Вій» 117 «о» 1.7 пос «вій» 18 «пах 118 пов «віл» 115 «ап» ї18
НН
«514» 50 «зоп» ї20
Спо «Вій І «зо» 21 оо «віп» їх ч«еоа» їд поп «вій» Ії183 «по» ї153 оп
«10» 124 «ап» ї54 вп «іп» 125 ка» ї25 поп «дій» 126 «по» 26 опо «шій» 157 «апо» 127 по «іо» І125 «пз І58 об «і» іїі55 «поз Ід опо «вій» Ії30 «Я» Ії50 пово «гій» І51 «нах І31 по «шіпз їж9 «002 152 по «гій» Ії5З «чо юї53 по «ло» ІШЯ «Зо» 54 поп «ій» ї55 «Ос» ІБ по «г1й» Іде «ап» Ії ро
«війз 127 чао»ж 87 пов «шій» ї88 капи» Ії58
Ос «1» Ії85 «ап» Ії58 вс «вЕійз 14 «чада 145 по «чаїйв 41 «Ваз 141 пропо «Еїйп 145 «ап» 155
Пе «іп» 153 «а» 153 пок каїйв 145 «чад» ста48 їв «дій» 145 «ап 145 пп «ві» 1556 «Я» 3546 по «вій 147 «Я» 157 вп «вій» 158 чай» 48 пов «вій» 158 ч«адйз 1489
Ін чім Ії150 «ап» 15 пп «вій» І151 «апа» І15і
Ос «5105 155 «вро» 155
НН
«ей» 153 «405 153 зоб «вій» 154 «4п0з» І54 пе «віх 155 «ас» 155 чо «вій» І5Е «оп» 155 за «ій» 157 «ап 157 пп вій 158 «ап» 15З ло «ВРаз 158 «ща» 158 об «ій» 150 чароОм ії18у попб «свій» 61
«400» їі62 бо «вій» 53 «або» їі63 осо «2102 164 «або» 164 бо «вій» 55 «по» і65 осо «3109 іБЄ «або» і66 пов «ві0» 57 «400» ї67 бо «вій» Ба «або» їі68 ооо «вій» 365 «00» 163 бо «вій» то «по» їто оо «віз ті «капо» шт пов «ві» 172 «400» і78 осо «піб» 173 «ап» 37 ооо «пі» 174 «по» 178 осо «тібх 1758
«4роз ї75 сро «31025 ії76 капоз ї76 про «2105 ї77 «ава» іт? соо «віпз і78 «400» ї78 поз «віпх іт «арох іт оро «310» і80 «4роз ї80 сро «310» Іі81 «апп» Іі81 поз «віп і88 «4009 ЕВ оо «ві0з І83 «4рох і83 про «вій» і84 «4рох І84 пра «310» і85 «4поз 185 соо «210 ІБЕ «по» і86 поз «2105 і87 «400 ї57 пра
«діб» ї88 чай» Ії88 00 «2ійз Ії885 чсапо» ї183 оо чвізз Ії59 «па» ї188 по «810» 181 «апп» Ії
ПОВ
«8їі2» Ії82 «зп» ї85 по «ій» Ії193 ч-а0паз 153 пп «ій» 155 «до» 135
Зо «2ібм ії85 «паз 185 200 «2іо» їз «ад» І85
ОО
«дій» ї97 «по» 187 ао «21б» ї88 «400» ї98 по «810» ї85 «400» ї1З5 о «2ібз с2о0 «40п» до пай
«віп» дові «ії» їд «вій» БІДОК «Віз» Штучна послідовність «ах «25» УН ХА «апп» 501
Зіп Уві нів бйей оУді бій Бех Пйіу біу бі хХві Уві бЗіп БкОо сі дЕс 1 З їй 15 б5ЕК їес дка бе бек сСув Уві дід бек біу т1іе ТП Бпе Аа т1ї1Зз Ту о 25 о
Зі Ме піз їкр оУаї Вт обіп Аза Еко піу Б осїу Гез бБіс Тро Уві 35 й 45 дід Уві іїви ТЕ ТК Аве обі деї Ні бід ТК тТук 818 Аз одек Уді во Б о
Був''зіУу АБО ЕЛе ТВ ІлЛе деЕхХ АЕС дя АвпоЗек Був Авоп о ТкпІ Га ТУ та та 85 іч Сів Меж азподег із дтп дів б1і5 Др отТвнк бія І12 Тут ТБ Суд
ВЕ 20 5
Віва до во біу авзе тТУук ТУХ Ав овеїг піУу Зак Бо їец дя Тук їїр іп іпЕ 115 щ-щ1іУу бій біб Тпж гей уаї ТБбх Уві дех дек ї115 її «Вп» во «атіїів ї07 «вій: БІЛОК їз» Штучна послідовність «ва «ваз» МЕ ХА «апп» ЗО віч ІТї1е щі їес; ТЕ обівп беї РкО іа ТЕ їз Бех ій Бех БкЕб щІ1ІУ 1 В 10 15 зЗій ака діз тТпІ ївеяа бек осСув АкКа бід Бек біп беї Уді деї дек туш до 25 зо
Ім Аїд ТЕр отТук о йілд бів Був Бко біб зЗіп Алла Ехо Яка Бе їв тів 30 5 тУук вдвр о Аїа дек Авп ло діа Так оЗіУу т118 Рко вів дк о бБе бек п1У ва в о -вт БЗіУу век сім ЇІВЕк АБО Бпе ТпкК їв; так тів Щек дет Бебосохій; вип «5 то тя о -1ц пвр Бе бід Чаї Тут ТУїЇ Сув 'їзіїіп Біб Аку дег дяв тгр вхо їй
ВЕ 25 25 твЕ БавопіуУу сіУу ціУ Так Був ді Бім тів гу 1по 155 «вій» Бо «811з 451 «від БІЛОК «8139 Птучна послідовність «вп» «23 Важкий ланиют Ха ч«авах «ді» МОЛ БЕ «пса» 8053. .1:305) «аЗх Хаа яБЛЕвЕш собсю Авлос7 «апо» доз ліп Мі нів їв Уаї Зі бетх щі Ш1Уу Зі Уві Чаї сбіп Еко зіу дж ' є в і:
А 2 їй 5
БЕЖ Пес дк дей Ббег був Уві Віва пет біУу Т1е ТвЕ о ББпЕ Ахо І1Єє ТУух о 5 за біч Мес Нів ТІ Уаі Атоа біп біа Ріо біМм пув бі Тв бій ТкЕр о чаї 35 4 5 вала ХМаї би тТІбБ Тук Аве» сі Бек Нія бі Тук ТУухїх дів двр БІ Заї -а ве 5о
Ічв бБіу Ако РБе ІБг 112 леї дка4р Авр АвБлобет був Авп о Тпх Бей тут ти тв о
Іівиа іп Мест деп бек їй Ахо віз ін АБ оїпт вла 118 тТух Тут ув
БЕ 25 25 аіа бЕх вве ос1Уу Адер о Тук тТух вве о дех біу ек рЕжо Гей Авр Тут ТХхб 03 іп їІЗ щіу шіп о ліу ТВБІ Го Уаї ТБІ маї Бет дек А1їа Бек тТпт о Мувозіх Ед 115 159 ї255 ех Уві Рипзе ЕтЗз Бей дів Бжко пет дежх Бо дек тпЕ дек бі сі ТВБЕ їі58 135 140 аів авіа еп обі Сув Бей Уаї ча двроТтТчУк Бе Ріс сіб Різ Уві ТІ 1215 ів 155 їБ5
Уві Беж ТЕр Авп бек Зі Атхта ї8-ч ТБ Швк о БіУу Уді Нів Тит Ре ГЕО жлЕ5 ї7й ї75
Вів Заї беч о біп бек о бет осіУу Іво Тух Ваг осей дет беїг Заї Заві ТВвЕ 155 155 185
Уаї Еко Бек Зетї бйЕК ївгц щіУ ТБЕ біб ТЕ ТУї ТІЇ Сув дап о Уві дви 155 ОВ во
Кі їув Рко бБетх два Тато Був отаі АвБробув був Уаіїі сій Риб Її Еш і ІВ дай
У Ав ої ТБк пів Так осСув РЕ Ріо Сув РІ Ата Бко Бі і-й їви па за ваш іє
Зіу бі Рко Бек Заї пе ї2вч Бйпе РІб Рез Був Во уз дер ТЕ їви тав 50 258
Мет тІ1 дег АкшП о ТтТБЕ РЕЗ ЗІ Уваї Тах Сзв Зеі Уаї Уві двроуаі бех
Б вв 57 нів Біб Аво о БЕ б5іб Таї Гуд БЕБзе о АвБпо ТК отут Чаї ЗвБО пі чаі БІ зл ап 25 чаї Ні АвпоАтв Був ТпІ Буд бро пт Пій іп сів Тут Хаа дет ТБЕ же ВВ Зо
Тук вАтЧ Уді Уа! бек Уаз Бей Тк Зві ї-б5 Бі озІіп Авб Тр о Гвп о вай 305 12 515 385 зЗіч був 951ів Тут Був сСув МУ хват дех АвБпоїбУув Ата Тїецй Роб 5ід РІ 235 ії12з БР Буг Тахо Її пет Був о Зіз ув озі Біп Рхо вку бій ркКО сід
За зав о
Уві туї ТВЕ Бей БкоО Еко дек вкЕЧ бін Біб Жво тпЕ їм о йапосіпвп УдІ зЗ5 зо ЗБ пеї Гек ТЕ ССуз Бе Уві Був жі ББе ТУК РІЗ Бек бво тІі12е Атд Уді зт В зо зіш Ттр 51 бХеї Авпосіу Бі Еко Сі; дво оАвв о їТУК ГУв ТБпІ ТЕЖ бо зн аз 385 зп йжко Уві ан зво бек йо бі беж РББе Ба іевз тТУБ Беж Ш0уз ГИ ТИ:
Зз95 Зї16 15 уві Авр їв щек Ака ТЕб о біп зіп БІ Авп отаі Рле дек Сув дек Уві
ЕТ. ад зо
Меї Нів 515 дід їецй Нівз Аво о Нів Тух ТБІ сіб Був беї Пе Шеї ї8-е5 ай хаб авг ЕТО БІ а «піп» 504 -ії» да «іш» БІЛОК «вії» штучна поспліпосвність «ВПУ каш» Леркий ланнюгв ХА4 «пох 254 зі тів Уді Зец тБЕк осів бек вко Ала тТвах їв Бек Ге деї Бк бі 1 Е 15 15 жхій дкс діа ТЕ їв ц о бет сСуз ВкЗч вдів Бех біп дет Уві дет дек тує а 28 Зо іївза діа Тр ТУук озіп о біз Уа РЕ біу Зіп Аїів БЕїгЗз дкчз бен Тед ІТіє
ЕЕ «о 55
ТУ Авр о Аза бек Авп ка вйіа Тк обі тів РБго Втв Агу бпе дек іє за 25 о пак Б1іУу йШек обБіУу ЖБВЕ во о ББе ТБт о Бер Тпт ї11-е Бех дек вип сій Бшо 5 та же -О -ій даю Ре Ат Заї Тут ТУїх Пув''хїпвп б5Зіп йку пех АвпоТІвЮ БЕо ів: нед ва з5
Тр оБне бі ші БІ ТвВх Був тат бів ТТ Був во То Хаї Зі Ата 1по ісо5 115 тТжЖо Бех уві ЕБЕце 115 Ре Рух Рко бег Ар біб ій Іо уз дек Бі ї15х 1205 їЕ
Так дід бек Уві Уві Сувг іви їла а5о Азп о Епе Тук Рко АтхЗз сій Аза 135 135 140
Буг хаї бЗіп о Ттр огув Уві Авр о Авп о діз гео Зійп бек о сіУу Аво век Бій 145 150 155 іо піц дех Заі тах бі; Зі) Авр о бЯех ГБув Аво бдех ТБг о Тух бВет І-й цех ї155 170 175 ях ТВКк ої тТВЕ пйЦец дет Буг Аа Аве ТУ 515 ув Бів Без Уві Туш їв 155 їз аіа Сув бі Узі тБЕ ніз бів піу їй Бек о бех Риб уві ТБпЕх КУБ дех ї155 206 255
РЕБе АвпоАку ЗзіУу їі сСуз 215 «щ1ійз 205 «21ї1з ї «від» БІЛОК «2135 Штучна послідовність чаша» «вай» СсІВві УН ХАЄ ча 805
І18: Тух бі Меї пів ї З «свій» до «Вії вт «вії» БІЛОК «вій» Штучна послідовність «до» «ВЕ СІВ уп хАЯ «а» до йві Бе ТЕЮ тТУук Авр обі дес Нів бі ТУЮ ТК Ата др обдеїг Уві Був і я їі 15 51іт «в1аз слот «вії» ІЗ «гід» БІЛОК «гій» Штучна послідовність «ВХ чвваз сІна УЗ ХА «3поМ 207
Ар бі Во тух ТУук дво Зв З1іу бдех Бко іїви дер о ТУг ії В 15
«вій» 258 «дії 11 «-812-» БІЛОК «813» Штучна послідовність «ви «ваша сРКІ МО ХАЗ «апа» 208 дАка Аїа дек о Сіп бег уаї бек бек тус їв о Ата ї є ИН ї 5 10 «ій» во «вії» 7 «від» БІЛОК «вії» Штучна посдлідоввість «ВВ» чівашв» Ср МО ХхАЗ «30» де
Ап овів Щек АБзпобкЯ дів ТБЕ ї Ес «вій» 30 «е1ї9 5 «Вії» БІЛОК «153» Штучна посліповність «ав «вва» СЕЗ Уї ХА чадо» ві ів Сів вка беж Авп о ТІВ Рхо ї1еч о твЕ ї 5 «вій» БІ «вії» ал «ій» БІЛОК «Вії» Птучна паослідоввість «ад» «283» Важкий ланпют ХАЗ, кінцевий К чЕши» ч«вЕії1» МОП ВЕБ «всш» і3053..1365І «вай» Хда являє собою зва 87 «ад. 51ї
Зіп Маі пів ем Маї зЗій Бек Зі сйпліУу ш5іу Уві Уді сіп Ржко Зі дго і 5 10 15 вак Бек: АкЕч їецш дек сСсув Уаї Аіа бетх біу т11е Тпр овРпе Ах 112 Тух ши па 35
З-іу Мет нії Ткр о Зді Ат сів Аіа Ртоа 5Зіу Буд о ійім БГец біб Ткр о Уві
З чо 45 віа Уві їеБц ТІВ Ії Ар обіу дек Пів Зій ТУї Тут Вл до бвЕжх Уві
За ВЕ ва
КУув Бі дкоО ББе тТБЕ оте бдвет Аку Ав о двпобдеЕт Був двпп Тпх гГви тут «Б ти ТЕ ва іївиї зів Мес Ап одек їз АкЗ Аа сіб АвротТвБк Аза Т18 тУух ТК о Сув
ВЕ зо 25 віз вк Азр о с1іУу вяр Тук ТУшх Авродех зі Зеї Рто Пен дер тТчЕ її іп ї1а5 115 сЗіу шіп 51 ТВі їв ві тїБу Уві бет Шех Аза бег ТІ Був біу Ехо 115 150 1525 щеЕї Уві Ра ко Геї Аїд Ріо дек йппеїг Був овек ТЕ дет бі бі їВЕ 155 135 145 віа віа ївц о СіУу Сув із Уві Му Авр о тТук Бпде Рто Зів Рко чаї ТБЕ 145 іа 155 165
Уаї Бех ТтТгр двп шШек 51у вАта Гги тат дШех 51Уу Маї нів Тпх тре вхо 155 ї7О 175
А1а8 Уві Бен біп дек дек ійзіу Гей ТУкК шет ї1се3; дек дет Зді Уві ТВвК 152 їв їі59
УаАі Бжка Бет Бех йШек Тез бі ТпкК 015 ТБЕ Тут І18 Сув дна Уаі деп 135 ай апа
Нів Був Різ беї Авп оТпг о Був Уаі Авр о Був їв Маї сій Бгто їв Бех 257515 хі5 ка сСуУув Ав Був ТБт Нів Тс оСУув Бк Бкоа Сув РКО Ата Рко бі Тв 1їец 225 аа 235 газ
З1іУу Бі РЕО Беї Уаї Впе пео ре РБго рБхо їув РЕо Туз дню тпЕ ЦеЕБб ва 25 25а
Мет ліе БЕ дк тпк о бІб біб Уві тат Сув Уа1ї Маї Уві Ав о Уві Бех о 255 ати
Нів біб Ар орто Бі Уві Був РП АвзпотТгро тут ЗУаї Авоозіу Маі 5ІіБ5 ат 2вО ЕВ тУаАї нів зап А1в Був ТпІ ГУБ о БкКо Ака біб бів сій ТУук Хава БІ ТЕ ге шо КЕ
ТУК Ажцп Заї Чаї Бех Уві ек ТБг оУаї Бей Нів біп Ббвб о тжхр о їв АзБ за5 З15 зіб5 зво -іу Був біц Тух Був сСув Був Уаї Бех Авпоїув вВІіа Гец Рхсо лід РІ за З 315 тів бів Був так ІїІе8 дет Був Айтя Був бі бів Рто бта бій Бго бів зай 245 авБо чаї Тух Тпг оБбеп Ртс вБко Бек Бкпожіб; бій Мес Тв Був Зяп о сіп Уді з55 зей 355
БшЕ Бей ТжТпІ Сув Бецп Уві Буд обіу РБпе Тук Бто Бет Авоб о І1і1е вів Уді
Зо 375 ке
З-із тТтр о Бій бек Авп 5ім о1п бБкЕо сій Авп оАвп ТУужЖ Був ТБ Так рт аб за збе
РБЕсС Уві їв Аве: Бек др о ліу БК Бе РпеЕ бецш ТУук Бек о Був ва Так 395 310 15
Чі Авв їв Век Ата Тк о біп оЗзілй лі1Уу Азп оЗМаіїі РБе бек Сув дек Уаї
У 325 аз
Меж нів Бі АтТа бен чів Азп Нівз Тут тТпкх пів Був бек їей дет їм 1335 4 а вВавк оЕта віт Був 455 «вій пі к«аїі» 313 «аїй» БЕЛОК «Віз» Штучна послідовність «аиОІ «виз Ми МЕТ кам 5і8 зіп Уві Бій їес Чаї зЗіп дек сзіу Ала Чаї їв Був Бко ЗіУу 013 деї 1 я Іо 15 ї2еза Буш ті Зек сув ітв пі Шев БіУу Тук дек РБе ТБг о деїх Тук ТІб па 23 Зо ті БіУу тЕр оУді Ажтор зів Ата Бл Зі Був 515 Беп озій тТІр о меб 51
ЗЕ о 45 112 ІзЕє дярд Еко б5Іу бно: дет дкт ТБХх Аг о тТук шехжх РБго бет Ей зЗіп
Бо 5 Бо зімМм щ5іпт Маї Тпт ч1ї18в бехтг Аїд АвБробуд бек ті бет їМк о Атд ТУїХ іво ве то т 5 жіп Ткр о Бяж Баг Бей Був Ата дек Авр о тТпт Аз Мет Тут туї Сук дід зо 5 пка щі Зіп Сей тухк п1іУу зі ТВх Тух Мвт дверозіу ТЕб ЗІ іп 5ІіУ 1209 іп5 її
ТвЕ о без Маї ТБт о Уді бек Бех 118 «шій» 213 «вії» 111 «Бій» БІЛОК «віз» ЩштУчЧцеа послідовність «вах «Ваз» Мі ХЕтТ ча 818 дво 11 діа пед тТБЕ біп бхо дів Бех Маї бег сзіу Бек Рхй ЗіУу бі 1 2 їй 15 шЕт ті ТвБЕк ІТ бет СувБ ТБ б5іУ Тв о дет дет Адр оті о сіу ті тут 28 25 а
Авип щех Уві Беї ТЕр Тух 5Біжй бЗіп Ні Різ біс був Аза РЕ Тв Бе зе ШО 5
Мая 11 тТук о 5іу Уаї Авп одвп о дка РЕко бек обзіу Заї Бек двпоЗкО Бпе во за во шЕт о іїхіУ дек їПув дет сжіу Дал о Тпт Аза дет їеїй ТБт Іч11е деЕхХ ім Гец 5 та т5 о лхіп діа бій дер ліц Віа Аво ТУуїх Тут Сув Беї йеї Тух зв 118 с5іс не зо 85 д-к Аіа тТБЕ о Бко Ушді Рипе БІіУу 51іУу 51У ТБк ї1ув Гей щі тї1е їв іпа і2п5 115 чиї» гі14 «вії» 445
«віп БІЛОК «віз» Штучна послідовність «вай» «ЧІВ» Важкий ланцюг ХЕТ чашйх «вів МОВ БК «Вл» (25583..(2595 «Ії» Хава являє собою дБада7? «ой 514 5-іп Уді жін Бей Уві піп о брег ЗіуУу Ата Уві Буз Був БКо шіУу сід щдЕх і 5 їй 15 їви їУуз Іі Бек о Сбув фіузвз б5іу Ввк осі ТУЮ Бек РБж Так Бех тут Тир а Зо 115 51у Ткр Уві Аха щіп АтТа ко бат фУв о зі Бей сій Тхр Ме сі ап 5
І18 118 Авр орто 5іУу АБбодеї ЗкЗ ІЇІМх Ако тТУук шек Ро деї БПе о бів 5 за во бпіу іп Уві тІпк тхіз бдех Аіа вбзр цуз БЕК Іле бдег тТвЕ Аза туш їЕб «З та 75 ва обпоТтТЕроБЕах Бек Бей ів Аїа век Авр о тп Алла Мет Тук Тух Сув Аїа 5 5 ав
ВІ обіУу іп їви ТтТук піу сіу ТЕ тІУух Мво АБО ЗІ тТЕбФ біу хіп 5іуУ 120 125 1:15
ТпЕ іевец Чаї Тну Уді дет деЕх Зіз бБет ТК ГцуУув о ЗіУ Рго деї Уві Бле 115 їй 1725 вко іп Аів Еко дЕхХ Бех Був о вет тлу бах Слу зу ТЕ Аза Алла беЕю 150 155 135
Зі був Ге и Уді Буг бер ЖХУХ РЕпе Рто 510 Его Уді тат о Заї дяк ТІр 1455 155 ї55 їБо вВвт о Зет зіу лів Бей тїпІ бйеїх сі Уді пів ТЕ Ббе біб діа Уаї 1285
Ії 5 ІТ7б 175
Зіп Бех век пі Гви тух вес Бей бех Бех Зві Заї тн Уді Бко БЕХ - - ї1во 1855 ї95
ЯХеїх Бех Ген о біу ЖВІхІ біп о тБпс ТУг л1е Св дДяп о Заї Авполів Тв Ехо їі55 во 225
Век аап Твх ЗуУуз Маї в5о Був Тув Уаї сіб ко Був бвт Сув вдо Був 210 В о
ТпЕ Бів ТБх Сув Ро Бко був Бко Ата Рко піп Бей Бер; оці бБіу Еко ваБ 230 23 шо вак Уді Бе Пен Епе Рко Ето ГУ РІС Був дар Тпг о Тєц МеЕб тів бдех 245 25 55 вкч ТБІх Ре Бій ді Так обу чаї Уві Уві Азо Мді бек Нів 51 Авр зви ев ало
Еко сій Мві ЗМув Бе деп о ттр тТУук Уді Ави піу Зваі б5Зіц Заї Нів Авп 275 тд 25
Віа був Тр Гув Ржо Бк пів 51 51 ТУук Хада бек ТБ тТУг Вт УВІ
Уві бЗет Уві бен ТБр о Уві їес: Нів б1іп Аво Ттб оїец о Авпобтіу Гтв сії
З5 іс Зій зво
ІТК ув СУув Гуз Уаї ет Ав БУВ Атїа їБЦ РКО Ата РІО 112 51 їУВ
ЗЕ 30 335 так 112 бек Був Атвя Був о зІіУу біл РІС дк піц Бо бій Уаї тУхК ТЕ
КН за зви
Те Бо Еко Бех Ат 1 Зін Мес Таг о їв Авпоспій Маї бек Тен от: зе ЗБ ЗБ пйУуа без Ма Мувозіу Ре тТУх Бво Бех дво т1е діа Уві БІС ТЕ СІВ 375 35 8
БхКает дяпозіу 51п Ето 51 дак одап Ту їв тах Тв Рго Рус Маї Те зав зви 585 ОО аАвр о дех дйвв обі бек вве ББе Тейп Тухк ВЕК був гей ТБІчІ Чаї зво їв 3055 Зі із
БкаВЕ дкоп тТкр зів сСсіпоБ51Уу дзвк о маії Епйгвг Беї Суз Бек Уві Ме Нів Бі 450 агБ за
Віа ївц пів два о пів Туї ТЬьБх біл Був Бек ТїТец дек їси бйеїх Бко біУ зї5 ЕНН 45 «вій» 2І5 «іі» гів «ій» ВІЛОК чіЗ» Штучна послідовність «вах «аВ3» Пегний ланцют ХЕТ «апп. 215 вве о тіє Атїя баб Тйкобіп Рето Ата бех Заї дек о5І1у Шеїг Рхоо1У бІ ії 5 їй 15 «ее Т1е ТБ тІ1є бек Суз ТВХх Б5Ру тпт ШБер бек дер от1є Зі щ51У ТУук й пе За
Бо 5 5
БАвтлп Бех Чаї пет тТІр Тук ізі1п осліп Нів РЕ бБіУ Був Ала Рух Був ей 35 о 45 ме тіе Тук Зіу Маі Авп Але» вка РБрго БЕК піс Уаї дег Авп о Ак вве ва з5 во «ве з зі Бек уз век Зі Азвп о тТБт Аза Хек о без ток о тї1іє дет Зі Пеи то 75 85 зіп авіа бій дБЮ бій ВЗід Авр отТук туї Су Бет Вет тус Ар 112 сі: ве 85 ЗЕ ек віа ТІ Еко Заї ра о лзіт БЗіФ йіУу Так Був ел сій ГІ Без дко іпп 1п5 її тТаЕ Уаї Атїа пів Рис бет Уві Вб ї1зе Бпе ко Ржхоз Шек Ав оз1й Ії 115 іш 185
Тез був о вех зі ТпкоВЗід меї Уаф Заї був Кей ей АБв о Аки пе тух 155 і35 ї45
ВЕС Ага Зі Атд Був Заї лбіп ТїІр Був ЗМаіїі Аз Ах Алла їви сіл дех 145 і55 155 155 -іУу Авпофек шіп сіб Вет Маї ББ пли бБіп АзеБ5 ощМек їв Авоа о йет ТЕ ї790 175 тТУг дет їен о дек дек Тчт ей ТБЕ беп о шек їв Ата Аву Тут Бій Буг 182 155 135
Вів ув о чаї Тут Ата сСуз біб Уаі ТІ нів бів бі ГеМ Бех дек БЕо
І 55 по хо таії ТІ Буд бетх ББе дбав ву оту бли Су 5-41 яче шАЛА ша -іахУ діє
«вії 15 «ві» БІЛОК «віз» Штучна послідовність «ап «ваз» СПКі УНН ОХ ка» 16
Зі Тут Бак РпПе тТпи бдех Тук ТЕБ 112 ціу ї 5 їй «йій» іт «іі» до «вір БІЛОК чві3» Штучна послідовність «22йх -а03з СЕЗ УНП ОХЕТ «Ва» 517
ТкЕр Мет біУ І1е Ії Аве о Бго бі Авзр БЕК АкЧа ЇБІ Ако ТУуї лег Яка ї з їй 15 вк вве бів 01Уу по «дій» ІВ «-«йії1з 11 «вій» БІЛОК чвіЗзз Штучна послідовність «вий» «д2їз СРКЗ УНН ОХЕТ «Зїна- пів
Зі бів Бей тут біУу зЗ1Уу ТпЕ ТУук Ке5 Авро5іу ї В їй «Віа» 218 «ії» І14 «812 БІЛОК «13» Етучнав послідовність «вай ч«аВЗ» СТКі УМ ОХЕТ чай» гі тпЕ біу ТПт Бет Бек АБО Ії 5іу 51У ТМ Аза дек хМаї дек ї З ї6 «вій» до «511» Ії «вій» БІЛОК чиіЗз Штучна поспідовність
«ах «ааЗ- ПЕНА УХ КЕТ «аа» о
І-а Бе чів Тук б5БІіуУу Уді АЗпоАЗп Ага Рро бек і 5 їй «війз дві квіїМ Ії: «Бій» БІЛОК «Віз» Штучна послідсвніств «вх «Вази СТЕ У: ХЕТ «аа» всі
Беж йеї ТЕ впзвЮ тів сСіа щЩех Вів Тпх БЕо і 5 їй «дійз А «свіїх ч43 «Вій» БІЛОК «вії» Штучна послідовність ча «дз» Нажкий лачиюІ ХЕТ, хічцЕвини ХК «вдих «впіх МО БЕ5 «Вайт (дез, ОВ «Есї: Хавд являє собою двпІ97 «апа па піп Хві бій Депп Заї біл бет сі діа Заії їув був вхо бБіу бЗіц бе: і Ес ІЗ 15
І-ті був ІТів о бек о Сув Гу бІіу Бек С1У Тук бек ЕБпе Тк дет Тук Тр 2 25 зо 115 біу ТК бі Ахц іп о віа БЕсС їі БУВ озіУ Бецп осіб їх Мес о зі 35 25 45
Ітї15- ті дврогто бі дз Беїг АкуУу ТІ Ака Туш Шев Бк Шеї Ре бій ви БЕ во зіч 512 чаї Так тів дек Ата Ав Був дек 11 дек Так Аза Тук во то те о піп їкр баг Зекг бен їуз Віа дег дзр тпг бід Мес ТУуї ТУГг Св Аїд 5 3 5 ак 5іУу зЗіп йдем ТУук ЗіУу БіУу Тпк Тух Мет Аве обБіУ ТЕ бБіУ ЗіпосСіУ
Зі їіпа5 хі іп НІ її
ТБЕ Тез отуаії ТЕ Уві дет бек діва Ббеї ТЕ бЛув ЗІ Бжо бЕї Ува3а це 115 120 125
Еко івбсх Віа Різ бек беї ї1Мя Бек їПлобег осзіу шіу ТТН Алла від Пес 135 135 130 ві Сув їви о Хаї був Ав; Тук Ва Рка піц РІз Уві ТІ Заї Бех ТІВ 145 15О 155 ї855
Ави Бет пі від ге) тп бек пеау Маї Нів тТБт о РБе вхо дід Уаї Пец
Б ї70 ї75 поп о дех бек ос3Уу Без Тут ех Пи бет ет хаї УР тп о Уді БкоО бЕї іа 155 їі5а ек одеї їй о с5і3Уу ТБвЕК осіб ТВвЕ ТУК Іле Сув бзпоУзі вп онпів ГМув Бтха і о еще тїхшК Аза» їВпБЕ о ОЗувз Уаї ЗвО пу Гу Уві сій Ріо Був деї суд Авр огбуг пай 18 дп
ТВкК оНів тк оСув Вхо вЕжо Суд РКО Алла Рко їхій; Гецп о Тем бЗ1у бі та па Зо ша ВЗ йек Уві РБпе іейп РББе вто Бо ГУз Різ Був Ар отак івий Ме 115 ех
ШО 55
ВЗЕЧ твпж РБЕсС осій Узі Тв Су Уді Уаї Уві вБ5е Мді бек нів о сій АБ ша ше 5
Бкз Бій Уді Зуз ВБие Ап ТІ Тук Уві Авор осіу Удь БІ: хМаї Ніз дви 275 сво 285 від їЇча ТВпЕ ПДув РЕсо Бус піц бій сій їУкК ХхХав шеї ТІ їж Ака УВі ва ЗБ ОВ
Уві Беїт Маї бей тер Уві Пец Нів о біп Ар отТІЮ Бей двзпосіуУ БВ ід з05 зі1й ЗІ Зо
ТтТУуК Гув Сув Зув Заї йеї АзвпоПув Алла їац Его Аїв Ріс І1І1е бі; ДУв за 30 ззЗа тТВпк тів бак гув діа був йіу бій Рко дЕЗ бі рЕо сій Уді їух ІВКг 4 з415 ВвО
Іва РЕц о Бко Жак Ага бір пБіс Ме ТБ бе бвпобіп тУаї Бех Гм Тип
ЗБЕ КО ве ев оБецп ові Був'зіу Бе ТУух РК леї дво ті1іе Ата Уві Бі: Ткрозій вх 35 зр пшаеЕ Ази ойіу іп Рхс Зі д5б о Авп Ту уз Так тТБІ РБкОо Рто Уві Пе зв5 заа за5 ап аво Зеїг Авробі Шетх РБе пе Ген Тут Бек Був Гей Тк оЗаї Ави о Був
ЗУБ 19 515
БшВЕ Ак ТЕр обСіпт біп б51у деп оУві Бе бек Сув бек Уві Мет Ніз ' Біб зда 185 335
Віз цей Бів Авпопів ТуУук Ту бйіп гуд Бек бе); Бет фе); Бех ко бі з55 4 945 га «віп вах «пІїх ЗІ5 «під» БІЛЮВ «213» Штучна послідовність «вай «вав» УМ ХО «апп» ПЕ іп Уді жЗіп іехмш осіп бів беї Зі Буо щшій Без осшій Був Ето ві А18 1 ко їв 15 -2вЕ Зеаї Пув тТіе Бех Сув їГуз Атїв дек ТУ ТУук БВет Бе тТБпх пі Тух ка Б за
ТтТвпк о Мес Аха о ТІб Заїі Був о сіп дек НЦів зіУу Був БЖ Без ожІіс: ТІб Їїї12 88 40 5 бі Бей ті ТВЕ РуЗз Тук вва о БЗіу іа баг о Бек тег За бік ГУ РпеЕ 5 во ка бі їв зів ТБВЕх зв тїйпІ Уві бер був бетг йдех бет їБх зів Туш 5 те 75 кО
Ме Авробец іеи Вес іа їйг оШеї 535 Аво оБек Аза Уві тус РБе Сув 85 5 55 вдіз Аа бі бі Туш Авобофіу АкппобБіуУу Епе Аве о тУЖ ТТІб б5іу Бек о 5іу їпа їп5 413
ТЕ БЕбо Уаіїі тїпт о Уві дет беЕї
«вій» да «пії1з їпбЕ «від» БІЛОК «шій Штучна послідовність «ЕЕ «ва ЖЕ копа «Вп» г
Авр о тчІ1є ж5ій бецд б7ВБІ бЗіп Беж БкКо Аза 118 Ме бек лід Бех гКко бі
І 2 їй ї5 зі ба Маії ТВт Месо Тато Сув бек Атїа дех дет бек Уві йех Тук Ме ди 25 о
Нів тТЕвБ ТУук бБіпобзів їз дек о жіу Тйг бЕеї Ето Був Ак тТхбБ оті тТУї т5 «і 35
Авр о тпх шеї Був о Гей від беж сліу Уді Еко б 1іУу АюкЯд о ве Бех ЗіМм 82 во Бе ве з1іУ йеїх Б1У АБО дек Тут бехшх Гвєї Ту 1125 дет бек Уві їЗій біз сі: та те о
Ави дно вів ТВі тує Тут гув Зіп Біл ТКр обет Був Нів ко Гей ТНх
Зо з пе зіу щшеї 51Уу ТЗІ пуз чаї сій 118 МУ іп ісх «віп БІЕй «шіїм З «стій» БІЛОК сії» штучна послідовність «дО «аз» Важекня ланшиют жа «айви «вві» ВИ БЕ сш? їжа... Кп «ВВЯї» Хаа являє собою двоплалт «ап» сдЕ5 сліпо Мві зіп бе сіб бсіп Ветг осі ко зії Оеа ЗІ пу Ро сі Ата 1 5 ї0 ІБ аавак чаї ШпуУув І1е йеїх Сув іт дів дет зіу Тут Бех ве ТптІ зЗіу ТУух тп те Кк яти ож я
ТЕ Мес дяп ТІ: Уаї Був їсзіп бег Ців бЗ1іу Су йЕЇ БПепшосвій ТКбр о її 25 25 ціу Бей ї1-: ТпЕ РІЗ ТЕЖ дяп Бі Аїд дек веж тТУуК бзп осів їз БВ зо з5 ее
Вк бі БУВ Ата ТБЕ ІБ ТпПх о Уві Аве Був дет дек пдеК ЇБІ 513 Тух в та те ка
Мес Ава їез їв бек Гей) їБпх бек озіс дво Бек віз Уві Тут Рів Сув в 50 25
Віз Ак піт б1У ЕУК Аворосіу дкоз біУу Раш АБО ТУую ТІр об5іУу бат 51У і10а іс 115
ТБЕ Ржха Уві Тпх Уві дек Бех 81із дех ТБЕ Був бі Рко Щеїх Уді гпе х15 120 155
РІ іесй дів Еко бег дет їйув беж ТВБт Заг о біу сі ТВпЕ бла ВІЗ Геш 135 135 1345 пу Сув БГви Уві буз Азоб отТуїх РБЕе Рко піц Бтхос Уді ТБт о уаї дек їТхв 155 152 іа її зЗдвпошеїх пу від Гей Тит ех БіУу Уді йів ТПх Бе РІб Ві ді їй іє5 їто 175 їхіп бЗеї ВЗвВкЕ 515 бви Тк Беїх Іво дех бек Уді Уаї ТБт уаї врІо 5еїг 150 185 155 бек о йеїх їви піУу ЖХВвкобБій тах Тук 118 Сув дво Чаї деп Пів Ку ЕКО і1Б5 Ой 205 ежЖ Авпотак їув Чаї до БУВ Був Уві піч БЖжоО Був дет сСув Аво Гуд 212 гі здо
ТпЕ Ніз ТЬБг оСуз Рій Бко Сув Бо Аїв РЕс Бій Бе) Іво 515 51У БЕ зав 30 235 зай дек Уді Ре їй Ре РІб Ртс о їчв Еко Був Аво ТВк о Тей Меє 11 бек
ОБО 258 дЕЗ Тпх Бго біз Уді ТВх Сув Уві Уді Заі Ав Чаї бек пів 513 Ано ва 25 та
Вт бі Заі Був Риз АвпоТЕв о Тек Маїі Брю Бі Заї Зі) Уві Нів Авп пт тай пава
Зіз був ТЕ Гуз РЕо Ака піц біз ІБ ТУ Хза шщек ТЕ о тТУЇ Ак о Уді 585 55 за тУві Бетх Уві їеви ТБр о Уві Бе: Нів бій вро Тецв о їез дви о зі Гув бів 205 зі ЗіБ За
ТУБ Був сУув їв Маї Хек зАвпБоЇуУув Аза гео РІбо дів Рто їІіе сліз їв
За З За
Тис тів дер їв вів Був озі біп Его Ако біб Рез б5іп Заї Тукю ТВ: 3ао зав За іга БЕоО РБкЕо бет Ах Бзрозіс їТец о тТйх їха Авп осів Маї дет Гвьв о Тве зей 355
Су їв; Чаї уз і3У ЕБе ТхюЖ БЕро дех Аво 112 Аїа Зві Зі ТЕр сіє: 375 75 з5О ївІ БвпосСпіу Сів Рхо із дво; Авп о Тух БУВ Таж тТБЕ РкЕбо РіІбй ві ї-вК аЕ зза за ог
Авродех АвкробБіу бек вве Рпа їеп її дек Був Бей ТВт Уві Авр о їх
Зза5 Зо 215 щвІ втш ТКЮр о Сів бопосім дво; Узі Бе шек Сув Бек ді Бет Нів бі ий 4 з35 аід беБ піз йвп піз Тут ТВ бів БУВ їх їесб бек із Бек Рез бі 435 а 15 чаї пише чаї» 533 «ій? БІЛОК чаї» штучна послідовність «ат» «ваз» Дегкий ланцюг ХВ «ап де
АвЕ о тіе Біб їв ТВБЕ 5іп бек РЕс Атднд Ії11з Шает дек дід дех Бко бі і 8 її 15 міц Бу Зал Тк Ме Так СУув о'дек Аіїв бер о Беї бех Уві Зег Тукх Мех и 25 За нів о тгЕвБ Тур іп біп Був бех біУу ТБх дек ЕБкго їв вра ТюІБ о Т1е Тут
У ї їх Вч - 2
ЗЕ ЕН 5 вАвротвпх бек о їв їв а1із бек січ Уві Бо іу дя Ре о бех сіу Зех піу БЖеїг зі деп одек Туш ВЗет Бей Їй Ії118 бе Беж Заі бі: Від 5Іі1 се 7 У а
Авр о а5о 81З ТАКЕ ТУуК Тут був обіп С1Б5 ТЕв обех Був дія Рто Бе; ТЕ з5 20 за
Ейв осіу дер зіу тТБроТїув Заї 51 ї11є Муз Агу Тпк Уві Аза Аїд вто іп 105 115
Бяї Уві Рпе їі Ейс Бко рел о деїг вперолжіц Зіп Бей Буш бетх бі їх ї115 180 155
Вів бетх Узі Уві Сув Їїви беб двп двповгБЕш Тук хо Ака бін Ата їв їі50 і35 135
Уві 01й тТЕвбБ Гуз Узі Аве о Авпоб1А ме осіп Заекосі Авп обВекх 01ь 615 145 15 155 185 вх хві тйк біб біп Аво Бех ГПа йвр о БеЕїг тТБІ Тур беїг їез щег озет іє5 ї170 їте
Тк бе: так о бе дек Гуз Ата Авротух 510 пДув нів ів Заї Тк дід іо ії5 іо суд осіб; чаї Тпгопів осів бі їви Бех пвх РІЗ Уві ТУ БГуя бат Бе
Ів апп 225
Авп ато о зіу сій був її «еп 87 «ії» 5 «війв БІЛОК «213» штучна поспідсвністьв чо «аа» СВІ УНН охо «ап» пет схіу ТУук дек ЕВе ТЕ 1 ке «210» В «115 ї7 «вів» БІЛЮК тез: Штучна послідовність «ве» «ВЕа» сна УНН хо «пп» 523
Іва тіе Тк оБко ТУг Ява ші Вів дек о йЖекг туго Авпосаіп їма ББе лдЕФ
ВУ х Ж я - і 5 її 15 щі «дій» див є-віїзх їх «від» БІЛОК «213» Штучна послідсвність «Вп» «вил» срАЗ УНН хо «ал» пд с5-іу пі ХЕЕ дво озіу ВЖК ціу БПев о дзротхЕ 1 5 ї16 «-«212» дай «аї11» 430 -в18з БІЛОВ «вів» Штучна попсліповність «ВИХ «два» СТІ Уї ЖО5 «ва» а бек діа Бек Бех Бек Уді Бех тк Кеб Пі і 5 ї6 «вій» ПЗ «а1» 7 «піз» БІК «а» Штучна послідсвнаість «ай» «ВшвЗ» сСІКаА УЮ, о хоЗ «апп» 1 зЗвр ТВПЕ дек був бе Зтід Бех: 1 5 «дій» ад «вії» З «від» БІЛОК «пів» Штучна посліповність «ВЛ «ап» СсБАЗ У: хо «апа» 238 чЗіп бшіп ТлТррочек Бад Нів Бо Іва отТвЕ і 2 ч«піп» 253 «вії ча
«від БІЛОК «Віз» Шеучна послідовність «вих «двЗ» Бажкми ланцюг ХОЗ, хінцевий Кк «кевийх ««впі М ВЕБ част» (дачі... «823» Хаа являє собою Веапдот «що» да3 віп Уві бЗіп ія б5іп сбіп овЕхХ 5іу Его зіц Гей щіц Гуз Ехо сіу ЛІВ 1 ге їв 15
Жаг оЗаї їв ї1і1е бек Сув Був вла Зет пі Тук дек пе тт пу тує 29 25 35
Так оМеб дяп Тк о Уді їз біб дек Пів пі їз дет Тева бів ТЕро її щ-і їеви Хі ТЕ Бо ТУукх АВпошіу пів бшх деїг ТУхК АБпозЗіп ГУ ЕВпе ви за ве дка Бі їв дід тТпкоїец тт о УМаї дар о Був бек дек Бек тт вла Тук «5 то ть 35
Место йвр бе їец бет Тез ТБтІ дек біц АЗр дет Аіа Уві Тух Ре Сув ве во 5
Віа дгоЯ 5БіУ Бі ТК Аво»озіу впро БіУу Бпе дБор ТУук Ттрозіу БЕК 5БіУ із 125 115
ТЕ Еко Уві Так Уаї дек Бех Віа леї ТВ їУув5 йіу Ето леї тТаї Епе ії5 во ї25
БЕсС Бе о Аїа Бко бевт дет Був бек їТйлх о бвт о біУу бі ТБт вла вла їв 155 із 140 5-19 Су Бала Уві Був АБО ТУХх Епе вБго Зіц Ето Уві ТтТпт Уаї бех тгр 135 ї155 155 155
Ави дек Біу дід ї2ецп ТаЕ Лех З51у 821 Ні ТЕ ББбе РБтз дів тУваі Бе їі їіто 175 піп бБет век бі ей тут бек ІТейп Бех вет Уді Уді ТпПт Хві РЕс б5ех 1852 155 і158
Век беж їз бі Твк біб тТБЕ ТУук Т1е Сов даап о Мді дво пів Був Рго їі55 ЗО 805 пек Ав ТБк о ЗБуз Уаї ВЗво їв Був Уді Зі Его їв дет Сув о бвоа Буд гі ІБ Ей
ТигЕ Нів ТБ Св Рко о вБтІос був Бко Алла Рео бій Беб Ппей о йі 51іу Реоб
АБ ло 235 т4Ай швк Уді Ре Ббец Бпе Рхо Рго Був Рта Буд АворотТпх їва Мев т11е де: 35 во 255 ака Тк РЕІз бів Заі ТІ Св Уві Уві Зді дер За1ї бет пів Бій двв 85 сх дО
ТЕкшосійш Щі га Епе Вяготїтвр о туг Маї двробіу Уді Біб Заї ців Ап 28 га вла був тах Муз Бкго вхцд Бін біо їіп ТУук Мад беж ТБт отож дДко Уаї вах па зой туУаї цех Уві їесо тпкК Уаї ПЕ: Нів бі» вв оТко Беп дзпобіуУу Ге сі: зи ій 315 зо
ТУк Бжв сСув їуз Уві бет Аве Мув Аза їеа РКО Ата Рга ті 16 Вуд за5 30 За5 так о ї1 Бех їз Аїта їв ЗіУу бБіп Рта Акоа Біц Рхо Зіп Уді Тук ТЕ ща за: з-О ів Еко Рко бек Ак Ав оізіб Тез Тпх ув Азпосіп Уві щБеї Гц їх 355 КЕН зЕВ стУув цей Уві ге БІ БЕ Тут Риз беї Авр о ІІ1е діа Уві біб Тк 5І1ц
Вт ВЕ ЗИ вяк Авпозі біп Бкз 514 авоп АвпотТУух був ТАК ІІ вБЕО РІО Уві ее з25 за 335 азЗе во Беїг Авр Бі дек Бе пе Тез туї БЕЖ ЛДУуЗ Без ТптК оЗаї дво БУВ ч25 чів 515 вк о Акоа тТкКр ошжіп зіп зі Ах Хаії ББбе дек Сув дек Уві Мер Ні пі 4зо 25 ашо
Віа їевцп пів ап о нів ТУуї ТвІ бій був двжЖ Бей бек їй деЕх РКО 0ї1У за5 «зп «45 їУув «кліп» 235
«ії 115 «ті» БІЛОК. ч«аій» Штучна послідовність «авт «ав» Мп ожОоВ.й «апа» 34
Зіп Маї зЗіп їевнозіп Зігп о вет піУу БІспс піц їевз ЗзІій Був ко з1Уу Ата і 5 і 15 -евВг охаї їв 11ле джек Сув Оуд АРа бдех 5іу тУук дек вЕПе ткх пі ТУХ 2 25 85
ТЕ КЖеє дви пк Уві Був бій Беш Кіз бі уз Беї Герб о5ій ТЕ її зо ен зЗін Без Ії пк Рхс ТУуї Або зі дта дек о деїг туї вАвпосіп іа ББпе ва за во ака шіУу Був А1ї1а тп Те; тах Уві дво Ба Бек беї дет тБІ від Тух 5 ти те 85
Мет дав Бе бен о бег Гей ТрБІ беЖ пли ввродек бів Уаі Тух Раз Сув ще ІН з5
Вів дко зі ші ІУБГ Ав: біуУу дкщ ші Бпз Ав о Тук ТкрозіУу іп 5ї1у та іп 115
ТЕ Тпх Уді тїтпт Заї деї Бех 415 «війу 35 «вії» Ії «іш» БІЛОК чіЗз Штучна послідовність «ЕД «паж МЕ кКпа. чапо» о 55
Аве от11е сій 1ез Тк зіп о Бетї вхо вла 115 Мет Бех вів пех РЕ ЗІ і 5 Ід 15 ліц ув ЧУаі тк мекв Тпг о Сув его діа дек Бек беї Уві бет Тк Мах да 2 35
Нів Тк ТУук о біп о 5Ііп Був беї 51Уу Ту Шак РБко Був Ак тЕр Ії ТУух о 45
АвротБбІ Бек о 0уз фей АіЗ беї зі Уві БЕЗ 51Уу Ахс вПпе бетх сліу сеї ви за ва ші пех бі дпепобБех тТУук шеїх Ти тТву І18е бет дЕЇг Мал озіс дів зі та що 25 аАвВап обр овАта тах тут Тут був о зіп Бі ткрробБет ЗІУ Тут РІО Бе ТТН 85 зо 25
Епе шіу вїа спі ТВвЕ Гуз вс; оБіц ті в іп 125 «дій» аз «211 543 «ві» БІЛОК «їз Штучна послідовність «вай» «223» Вджекий ланкют ХОЗ.2 «ах «віз Мо оВЕБ «Вас» (дві... 258 «883» Хаа являє собою депоч7 «й» пІє сій беї біл о Беч о ліп Зіп бех сц1іУу Етопоівій Мей йій їу5 Рхоа 1і1у від ії 5 Іб 15 дет УВІ був їі дет Сув ув Ала вет 51 тут дек РПпе ТпЕх ЗіУу Тут ва 28 зо
ТЕ Же Ава Тер оУаї Іа піп дек Нія сту БУуБ ЖЕК о Їїео сіб Тк о тів яп 45 спі Без її їпг о РЕ тїУК дак ові дія бак о бет Тук Аво зів Був РПе -Й ав ву
ВвЕЗ Бі ів під їТвБЕ Га ТвВІ Зеї двр їв Шев йеК беї ЇІвБї діа ТУ 5 та та 83
Мет Авр опе їел дет Гей ТБ дет бій др о бБет АтТа Уві ТУх РБе сСуз 5 ІВ з5 вів діб бі і Тук Аворозіу Аа 5іу ББш Ар о ТУК Тир ошіу ШЕ 5ІіЄ іо 125 15
Тпк о вБко Маї Так ЗУаї бет Бех Аа Бех ТБ Був бі Рко Бех Уві Бпе ії1ї15 120 125
Его ївп о Ата Еко Бех БЕК Буд Бех тТау веж о шіУу зІУу ТВІ Ата 81 ТЕС ізо 135 1460
Зі був ївип уві ув дер о тУШГ вав Бо Зіц Еко чаї ТВБЕ ЗМаї дек о ттр 145 15: 155 145 ввпоБаеВХ БІ Ала Гей Тит дек сі Уаї нів ТВі ББж сто дів Маї їв і25 ї70 175 б5Зіп Бех дяк Бім Геч о тТухк Зех ген бах Зак Уві Узі Так Маї РЕЗ бех 152 185 185 -2еІ БЕВжІ Її2еи Бі ТБпросапоїБЕ Тук І1е сСув двп оЧЗаї Ап о нів їв Ехо і155 по доб
Бек Азп отак о пу Уаї Азо Був Був Заї 510 РІО був дек був Авро Був 215 ЗІ ли
ТВпЕ нів ТЕ Сув Ро БЕО Суд БЕо Ата БЕ бі Бец о їГецозіу сіу Еко 225 пи 25 23 деї чаї Рпе Пец Бе Рго РтІсо Був РІС Був АвротТйпк Тез Мес ІКІ1в декг 245 БО два
Ак Тих Бго 51 Уаї Тахо Сув Маві Уві Узі Ав: Уді сет пів 'з1ін Авр ге а што
БКо Бій Уві Гу Бе АвпотТІЮ Тух Ууді двори піУ Уві 1 Маї Нів дв 2775 а вай
Віа гу ТЕ Туз Ртго вру піц; ій сіл Тук Хва век ТпПт о Тут БІЧ ХАІ вай 28 зп чат Бех ЧЗаї їевзя їнк ді їй о Нів біп о Авор о тТІб Бей депобі бук о шІів за5 ій 315х З2о
ТУжх Гуз Ств Туз Уаї дек АвлоБувз АтТа пи РІЗ Аза ІЗ ті 0164 Тїув за Зо за
ТвпЕ тТіе Шер МДУз Ата Ів озіу біп Бко Ако сій Рхто бів о Уаї ТУТ ТВЕ зай 34: 35 іа то Бго бек Аку Аеоосбій Бей ТБх Був АБво5ів Уві дет їею їх за Зеб ЗВ лев бен Уві БУув'ізіУу Бпе Туш Рко деїх Авр т11і2е Ата Уві Зі: ТЕв БІ
Зо ЗВ 350
Беї взпосліУу Зіп Бко 51 АБа Авп оТух Муз ТБ о ЇІБК РІЗ Різ Уді ї8ви чаБ зо зва зба ввробБет Авообсіу Шек Бе Рое Гм Тут бек Був цей ТБВтІ Уві вдо Був ас5 4310 чі15 йек АкЯ тТкробіз біп п1у двп оУаї ря Бек пув бек Уді Мет Нів сі: й 425 435
Віа їн; ніз АвпоНівз Туї ТБжх 01З Був дек їв Шех Бей бех Рко Б1У 35 4 45 «вій» Ва «БВІ1ї» ЗІЗ «дішз БІЛОК «із» шШЕкучна послідовність «Еш «232 Легкий лакцюр ХО. «пох 887
Аве отіє зій іїез тБтІ піп обеї Ето діа Ії Мет дет біз деЕїЇ БтІбз 5іу 1 2 13 і5 зіш Був Чаї ТЕ Мес ТІ Сув дек Аза дек пеїг Шех їаві Бех тТУук Ме: и 25 35 ів ТЕ отТук біп о зіп Був Бех 51 ТБ бек РІЗ уз дкУ ТтТхр т1е ТУух
Я 45
Авр отпт БбБеї Був пем віз деїг жіу Уві Рко 51 Ага БЕ сеї сі щЕш зи -8 БИ зі Бежї пКіу Ав хек ТуУуї шеї ГПям ТБж хі Зек шжек чзаі біс дів іч що та КБ вк
Авр Аз бів тпг отТУуЄ ТУуї Сув зіп біп о Тр осдег був піз Ето Га тТНх зп як
ВБпж о Біу шет сіУ ТВЕК о Був Маї бЗійп тів їв Ака вк Уді Ата вла яко ї1па іп і1о вт Узі ЕБЕВйз ті ЕБа Рг РІгбос дар одер осіб сід о пе; Був дех 51і1Уу ТП 115 150 155
Аіа дех Уві Уві був їй ПЕС АвВп оАвБп о РБпе ТУК Рис дез біб Лід 1ув і55 135 145
Чаї бій ЖїКр із Уді Вар; о Ава Алла беє сіп Жет шжіУу ВвІ Беж біт їзіє 1:5 і5о 13 155
-вїІ Уві тТпЕ осі зіп Авр о деї Був Азр дет ТІпт Тук бек Бе: ШЕ пеЕї 155 іо 175
ТБЕ фбєсш ТпЕ їецп бег Був дід Ав ТУух бій Дув пів Був Уві Тую вла 189 135 ї8о св хі): чаї Так пів о бів 5іУу Ба бех БК то чаї ТАК Був беж РЕ ї135 200 25 двподтоа 5Зіу б5БіЗз був їй «шо» ЗВ сені В «18» ВІЛОК «ії» Штучна послідовність «ей «ВІЗ?» спві У о хов, 5 «чо» ЗЕ
ЗіУ тУшЖ ТпЕ Мет двп 1 а «е1пй» са «5115 17 к«війМ БІЛОК дев штучна посглідсзвЕність «вш «вої» СТІНА УНохоа. «сей» а їж оїІ1е тТпЕ о РЕоО Тук двпопіУу А13 Бех БЗ-ет тут Ахип сбіп Пух Бе дІЗ 1 Ес їі 15 зі «ев дай «вів ї5 «від» БІЛОК «дії» Штучна послідовність «ти «ВЕ» Св УВП ОХоВ, 5 «чпйз Зп
Зі сі ТУБ Авоозіт Авц сіУу Ре АзротуУвк і В ІС «ей» 431 «5115 15 «шійдз БІЛОК тера Штучна послідовність
ДНЯ
Бек; «вав СЕК У Хоб, чо» дЯ1 -2вк Аїд Бах Бек Беж Зві ВЗек ТУук Мет ніг 1 - їй «вій» вЗа «Віїх т «віз» БІЛОК «д15- БШтучна посліДдОдНнНіСстеа «ВИ «ваша» СТИ У охо. чай» щ-д ави тїаг ошеї Мув Пен Аїв дех і 8 «вій» ща «ії» 5 «Вів» БЕЛОК «ві» Штучна послідовність «до «а53З- пра М хо. чо» дя піп осів ТКкробБек о йіУу Тут РІз Твиа ТвБх «Вій» 5-4 сії 445 «лвіш» БІЛОК «15» БЕтучна послідовність «ВО «ва3» Важими ланиюг ХОаЗ.2, нінцевни Є чад» «віз» Мой ока «чвавт пе, шкі ках Хаа являє собою АвпоІв7У «айс» 545 -іп Уві зіп іа біп Зіп ех біу Ето Бій їей сій Був Рхб сіу Аіїа
А а 10 15 век Уві Був І1і1е дЕк Сувз ув Ата бет піу Тух Вет Ве тах Бі ТУ зп пе пе рол. га як так оМест зви оте Маї БУВ біІіп Жак Бів Бі Був Бет Беб Бій ТКЕр о її 26 зе
-іу йвиотіе ТБПт Рус Тут авБпозіу піз бек бет тТУуг Ап осіп Га Ре ва ва о
Атоа зіу їв Аза ТВЕЖ їв Тпхї Узі Ар оїсв Бет бек бек їІйг Ата ТУух та та щи
МЕЖ Авзробеп їей щдеЕжЖ Тей тїпПхх бет бін дар о йет Ата Узі Ту ЗБе був 5 БИ а
Віа вкц ості шіу Тук Зв» озЗіУ вкц Бі вп Ар отТУук ТкробБіУу дет їі1у 12по 10 118
ТрБЕ Рго Уві ТБпПт о Заї бдеї беї дід беїх Тк був віч РКО бЕЇ Маї РБе ї15 158 125
Ехо Гео о Біа РІЗ бег леї Гуз Беж Тпх дек слу біт ТОЇ ЗІЗ дів їв: і1х5 135 145 зЗ1У Са їв Уві Був взе ТУух РБе Бко бій Бго ді Тпк Уді шек Ттр 125 іа 155 155
ВапоБет сіу аїів ів Тпх Бех спі Уві пів ТБІ ЕБа РКО Аза Маї їн
Іо 175
Зіп вет дек 5Зіу їец Тух Бех Тези беїх дхеї Хаї Заї Ту Маї РЕЗз Зеї: 180 іп5 ї58 дяк о Бех Гви біУу ТБ обзіп ТБ ТУБг їі був пев оУаі Двп оНів Гевз го ї155 - ПВ Об дяк о Азп отак Буг Хаі Аво о пУув ПУ Уді 51 РкЕо Був беї Сув дво Буд 21 ЗІБ зай
ТвВж Ніяк тпк Сув Руб БкЕО СУув вто Аід Рке5 зів пей Гей ссіу сшіу Рко ва вай 258 240 8вЕ Маї БП спец о веБа РкО РБто Був Бко їв Аво тВЕ Тв Ме т11в Беш ц35 350 Ба
Вт тат о Бко бій Уві Тпх Сув Уді Уві За)ї дво Тді Бех пів о бій дер
Рко Бій Маіїі Був пе Звп о тро Тут Уді Авпошжіу Маї зЗій Уві БКів Ав 215 25в ав
Віа бтв так ьув Бхо Аку Бій бін бів Тук Мав шег Тбх ТУїх вра Худі 230 255 Во чаї век Уві їеви ІБК оа1і Мйесб Нів бів Ар отбтоб Гей двз о іу їв шій зої зії 5І5 зо
ТУК Гу Сув їув стаї дек ввпоїУв Аїв їз РтІй Аїа рРто іє бів ГУБ зо з55
ТвпЕ тчІ1і2 БбБяжжтх Був діа Ів о зЗІіУу Зіп Рто Аку сіз РЕСО сів Заї ТУТ ТБЕ зо вача во їви шко Рко Бек Атс ав озісй Ген тах їмв о АБо о біп Уві ех іа ТНК 55 Зап ЗЕ ства Без Мві їУув зіМ БмМе Туїг Рко Беї АВОо 112 Аїв Уві біб ТЕр сій 379 зт зай дек одвпоБ1і Зіп Рго бі; Авк о бвп о тух Був Тпк ота Рсо Рго уві бе: зо ак еВ
Авролех Авробіу Вег Ре Ре Гецп тує шШек Був Бо Тс оУаї ВввроБув авдЕ їй 15 -вт о дІЯ Тр о зіп 5ів іу Авпотаї РпЕ дек сСуз Бек Уві Мес пів сіц
Бо 5 аз
Віа рез Ньів о Авп о пів Тук ТеБІ Зіп о гДув дек цей Щек іп дек ко Бі 335 тб 745 їУув «гай» аб «Вії» 536 «ві» БІЛОК «ВІЗ пою варів кап» 245 їв дід їец РЕоО тп дід Ако Рез Бен їв ЗіУу вдвк Сув о бБіу ТБЕ РЕ 1 - Ід 15 діва гей біт ет Бей Ії РОе Гей пДейп Рпеє бег їв 51 ТІВ Уві Біп
МН 25 а ах 23 Зо
Еко бек Ак тІпПІ їви діа Зі Бій тТпх бі Сіп Біб дів БвІіа РЕЗ їй 35 9 й
Аврпозіу чаї їв діва двп Рко РЕЗз Авзпотівз бет вк о ї2еа ех РКО Аг
Й Ба БО
Зіп Бей їшц С51У Роде Бко сСув діа бін Уві бет бі ї2ез Щшеї ТІ січ
Б та та БІ вхо Уаї дк Біб Беб; бід Уві А1з Бе Атїа біз Мув вп о Уаї ГБУув це 5 5 шЕшш Тпжх сій хіп Гей Ак СУ ТЕ Алла пів пт їй дет ві Бгто РЕЗ їпо 105 115 спі: пер ін Азр о діа Гей Ріо Гей Авроївги без Бо Бе ївип бяп о Ета ї115 185 1275
Авр оЗід Ре обБек пі Ртб осіб вйіз Сув їТпк о АгкЩ Рпв Бйе ех дра 112 135 135 149
ТБ ГУв Аза Авпоаї бзо о Беб о БГвгай Рго Ак сй1у Ата Рго біб Аве бій 155 їБ5а 155 і55х деп бе Ген Еко Ата А1а ген вів Сув тро йплу ЗУаї айва бі дек Бей їЖ5 ї173 174
Бен опех зЗій А1а дво тазі Ака діа Ббебозіу зі ге від Суз дво без 150 185 ів
Рко 51іУ Ака Епе Уді А1а пів ек Алла біо Хаї їз їевз Рка Акоа Бей ї25 200 па чвАі Бех був Еко сЗзіу РКО Бен о Аврошіп дво Сіп оі5їіп ЗІЗ Аза Ала ак 718 158 225
Азїа від їм біпобЕУ 51 ЗІ Рвоа Бта тую ЗіУ Рес Бгто щшег ТБжЕ ТЕБ 225 239 ж 235
Звк Маі деї Твх Мек аб АтТа Гм Акоа біу бей бе бкз Хаї Ішла 15 245 -5О 235
Зіп Еко 115: 118 дк3 дех 118 Бко іп бі 112 Зві дів Віа ТЕ; дк: ав во5 шо
Зіп АДкЯа шШеїт Бек Аха Авар оБго дек їтр Акч сів Рго спіл дк Такт 11 ат 28о Во
Іви ка Бо лу РБе Ак до сій Уві пі уз ТїТпк вл був вро чех 285 ав Зоо біу йУув Був дід дкт іп її Ар обБій В-шк Бемв Тіз вЕБе Тут Був був зп Зі ЗІ зо
Тер Бій вн біс діа Суз Уві Ар Аза біз без бео дів Тпх о біз Мес ва5 з33й 355 двр о вжкц Уві лвп о йта 11 Ехо Бпе ТВуІ тТух біц зіп Тїев АвроУді їв
Зап за5 5О іт пів Був без АвроБібв їБей о тук Еко бБіп оЗзіх Тук Ето зії пдеї Уді 55 зв з55 тів зів нів ец зі Тут ів: Ра ів гу Ме Бек Ето Зі Аво її
КВ 35 зво вка гув Ткр АБп оМаі1їі ТП о деї Ггш2ч БІС Тпх їй був А1т3 Бей о гей піц
За зва ЗБ ах чаї Аве їв СіУу НІВ бід Мес дек ка ціп Аід вто Ако Ак бхо їв: за чі 45
РЕ о шіп Маі АтТв ТБ Тей ХТіє Авр озбтІЯ Баг о УВї Був 51Уу Ахп сіУ пів
ОСІ 45 55 їви 3вроБувг зво Те Тв Аза о тТпх без тах Аза бае тух вхо бі тТух 335 240 «45 іп оСув дек їекь дек РІЗ БІ щ-ій їесб бах бек чаї Рго БхбО пет Еш абБе о збо е-е Ттрвр зів утаї1 Ара ру ій Ащроїіви АБ Тпу Сув зво РІС Акту Бі 118 Ттр зіз Узі Ага БЕ аг ази Тпж Сув зве Ру Ед ть аа ать о
Ів авроУВі їей Тук РЕо дув о А1в АтІзч ївц піз РП о біп АвпоМЕБ лав ав З «ав піу пет піц Тут БбБав ові Був ті біп дЕх Епе о беп біу сіУ БІВ вхо вп зп5 БІ
ТЕ Сл Авроїей Був віа Бей бек Бій біп Авзп о Уді дек Мек Аве Тест 5іб5 БЕ 25
Віа тТпІ Ріе Мет їуз їеи дкЕЗ тТвкх Ав о дія аз Бей Ето бе ТЕ Уві 530 535 ай
Віва ві: маф Бі пуш Тез пе зЗіУу Ехо Ніз Уді сій с1іУу Ей пу Ат
Бі Ба зна -БХ бСсіц бін вкл. Дів Ахоп РІЗ Заї АгУЯ Аваю Тр оті бе Аущ сій Ах щшіп ав5 БТ 515 вВврЯроавр оби дар о тпк їєцй зі ци шіУу їви іп о зіу шіу 118 РЕгОо дзв 5650 вав 5 п«ау Тух еп уві Бей ввоО Ббеб пек Меп ожхій 51. АтаА зо дех от ТВБЕ 55 еВ вав
БІз був гам їєц бліх Бко о сдліу Бжко Уві во тпЕх Уаї ей діа їз їТевБ 5іб ІБ ЕН їєц Аза деш ТЕ їв діа
ЗО
«віп дав «вії» БЕ «вів» БІЛОК чвій» пово варієпв «па» ще
Мат дів бами Бко тп дів дЕц о Бко їм о 0во 5іУу Век Суз Зі Так РЕ 1 Ко 16 15 зів ї-е Біу Беж їй ї1ви Бпе ги Бей БвБе Бек їезп піу ТтхроУді Бі ви 25 зе
Рхс; Бех Ака тт во Вів 5іУу сій ТвК о5тіу іп 51 АТ дід РЕ ех 35 5 вво озіуУу Уві їєй вів деп Ртоа БкКо Авпої1е бек бек Ів Бет РКго лдхз - ве во ж-іп бе; їеий 01у Бле Кс оСув Атїва зхій Чаї деїх 51іУ тей бБажх Тк осів 5 7 75 5
Ака Уві дк біб їй Аз Уаї Аїва їєй ліз Бій їУуз деп оУді уз Пес а за 25 авЕ ТП бБіц бів ви ВЗкч Суд Гш2и Аза Ніз Акз Бей; дек сій РЕЗз Бо їпа іп Іс тій Аво Гм дер діва Тец вжЗ їевц о двев О0воу їей бе Епе Бею Авп РЕ 115 150 155 вв: дів Бпе Беї щі РКО ців Ав Сув Так АкУ Рпе о Бпе Бет Ак 11 135 і35 190
Тех їув о Аїа дво оЗаі Авр обеб ГПви Бо Ага Біу Аіа ко зЗій дкФф о зіп 155 і5й 155 їж
ВАкто їени би БЕЗ дія діа Беб діа Сув Тр: біу Уві Бк о сіУу баг їв й ів Її 175
Кп бек піц Аза Аяо хаі АхЗ Ав Гей З1б ті БГец АТЗ Суд Авроївс; іка ї85 так
БЕЗ бі Аку Ре Заї Аа бін дек Аіа бін аз! Бей Тез Рко Ах їй 185 РІ 25
УаАі дек Ста РЕОЗ о б5іу Ркго Беб АвробБів дерозів біп зі) АІа Аза ЯКО зіз Зі 229 вів Аза ва озіп бі жі Зі БЕВЗ о БкОо ТК сіу РЕ Рго беї ТБІт ТІВ вав и 255 23 шеїх Уді пек ТптІ Мебс Аво о Аїа їецп Ат зіМ Бей іец о РкКо Уаі Ківги зі 235 25 2ЕВ сіп Ето 118 112 дку дет Ті Рко біп шіу 112 Хві лід Ата ТЕр АкФ пе ЕЕ 27 іп вка ВЗвгодег Ату Авб Бо Бек Тр Ага бів Бхо 5іп Аха ТІ Ії1є 275 дя 285
Ти яко РЕ дк вне Ат ко бій Заї б5іч був так А1а був рко Бех шо 2285 зо
Зі Був Ба віз джу 511 Т1е двр обі: дев бе 115 Бе Тужх Був ув зо ЗІ 15 хо
ТЕрЯосзхі:й г Бій діа Су аї Аврв о Аза Аа їви Бес лід ІБІ іп Ме 3 За аАвр о Ак чаї АБ Ач 1128 Руб Ба ТПУ туп ій зЗіп Із дер ові їз аа жаб а5и
ГУ Нів їв їецш дяр о сій бен ТУК вто біп озіє ТУЮ БЕ сій йвт таї ав зо З5 ті::Б5і1п пів Пец Біу тук бен Рпз ї-еї Був Мет дек БТ бі: Ав тів ато ЗЕ зо вк о БбУа тТЕр оАвпоУді Тагобех Геп піц ТпжЖ Бей Був А1а Бе ів сії 335 зва зва зп
Уаі дз був о 5іУ пів сій Ме дек Ето З1іп Заї Аїя тТпжх о бес І18 А 05 зі 415 дАкц Бе Уві БувБ'біУу дву біс бів їеб Авроїув два Так о їеб др тах ща іде о дош тво Хлощо бю тіж ух Фут пк т товщі с Шо Тоді шви Лек, ст утіх їв тїйЕк Олі вЕМме Тут РгЗ зі її баец о Сув Жеїх Бей дет Бкхо сім іс 335 45 ах тов дю дю 3гвдмт дуть пою В т т кл ть оте тк, т пк іт-о век шЕш зді БгїЇ(З БІО пвІ Беж 18 її бів Зі АЖщш БЖО бів одер 355 че ЗЕ т - хщуУ тку сч хт Х ТП Брехт Тоші:з й лк Ту я Бек, то ол іч ззи ЇвЕІ Сув дво о РІО вІшШ біл Бей; дар Уві Бей ТтУХ Бхо ов дів жа НК о НО тя тл Теоерю Ми: бор пи Шен (71 5я СбППахує Дт ло тлу т вшш лей вв бле са;п ша мет дВг оСіУ шк о йіМ ЇТух БйЕ Уві Був ' тів
ЇЩ у дію ту ІВ х плат Вл жін Фе ла дують т т Тл лик кт -
З5іп Зешх Ба Бей Зі пі1іУу діа КЕСЗ Тв осій Аве ої їіхв о Аїв Гвв дег
Бо -п5 шій піп осів дво оУуУві дек Меї даю Гб Алла твБк Бпбе Мет Гев Бей БЕ отТвх щІБ адр БІВ що Вл що ток нут То тю ху що ст ле см тях ту т одшу а зви Ві Ві Шев гІш ів спи ові відо зів щі запо сек оц ДУ 35 ЗЕ ВЗЯ паче я шо що (21 х4 зх Тк тт п що Ус 073 30 Ху Що луженє т зр т
Ес пі Уві і лі іеБосУув від шій бі БЕЦЧ пів в БО хо вис хт іКш т та 5 ак Ше нн З -шко Вч лоно щу Ти тет 0 кто в» ІЕШ Ії. Еш са НЕ сб п НАХ хіп ЗО вБЕЮ ШЕМ дІЦД Твпжхоіви іч їх
БЕ Ето ЕТ ж тод ж їх зх пт кн ті такт В щік о у тен тн йду Тов ою с-іу се о зІіп о Оз3У оду їв о ргж вп іїхіУ ІЩЕ ШЕМ о сФВА ішб даю ївщ ме
СУ -к по
БАЗ 5 ща зд пт слі В т-ва й Тв ти; /тлвщо Ловхя Тов Лі) Ват бі ле
Мет бій освіцй діа ізвц дехто пі ТпЕ РіО Су їШей пей сп3іу Руб обі Бшо хч ла -
За п 5 -аі їец ЇВЕ Уві іп бів їевип їз і1-ес 81івз деїг ТвЕ їв) Аїа
І ІБ ші 1. Кон'югат формули (1):
АБр-(О р, (І) і І РІК, КАДС1 аб і ;
АБ являє собою антитіло, яке зв'язується з ; або мезотеліном;
у ем со
КЕ ЛД се о|рх тв А о М шия 7 в т М ва (г) фа (в) (в) (в) ва он у дй о Атнято " А би, т в'г Я п в (в) се) де:
Х вибраний з групи, що включає: одинарний зв'язок, -СНе- і -С2НаА-; п становить від 1 до 8; т дорівнює 0 або 1;
В" являє собою метил або феніл; якщо між С2 і СЗ присутній подвійний зв'язок, то К2 вибраний з групи, що складається з: (іа) Се-сарильної групи, необов'язково заміщеної одним або більше замісниками, вибраними з групи, що включає: галоген, нітро, ціано, алкокси, карбокси, С:-7алкіл, Сзгетероцикліл, біс-оксі-
Сі-залкілен і -С/-О)ОВ, де К являє собою Сі-7алкільну групу, Сзгогетероциклільну групу або Св. гоарильну групу; (б) Сі насиченого аліфатичного алкілу; (іс) Сзє насиченого циклоалкілу; в
КА
Ї я ії 21 221 23 ії П (іа) ,де кожний з К-", ІД22 ії КЗ незалежно вибраний з Н, Сі-з насиченого алкілу, Со- залкенілу, Сг-залкінілу та циклопропілу, причому зазначена загальна кількість атомів вуглецю в групі КЕ? становить не більше 5; ось
КА АХ не (іє) ,де один із К2за і В2зь являє собою Н, а інший вибраний з: фенілу, причому зазначений феніл необов'язково заміщений групою, вибраною з галогену, метилу, метокси; піридилу; та тіофенілу; і жк, м (І КО, де 822 вибраний з: Н; Сіз насиченого алкілу; Сгзалкенілу; Сгзалкінілу; циклопропілу; фенілу, причому феніл необов'язково заміщений групою, вибраною з галогену, метилу, метокси; піридилу; та тіофенілу;
Кри . . що м десь . якщо між С2 і С3 присутній одинарний зв'язок, то Б? являє собою , де Воба і роб незалежно вибрані з Н, Е, С:-4 насиченого алкілу, Сгозалкенілу, причому алкільна й алкенільна групи необов'язково заміщені групою, вибраною з Сі-залкіламідо й Сі-алкілового складного ефіру; або, якщо один із К2ба і Вб» являє собою Н, інший вибраний з нітрилу й С.:-залкілового складного ефіру; якщо між С2' і С3"' присутній подвійний зв'язок, то К'? вибраний з групи, що складається 3:
Зо (іа) С5лосарильної групи, необов'язково заміщеної одним або більше замісниками, вибраними з групи, що включає: галоген, нітро, ціано, алкокси, карбокси, С:-7алкіл, Сзгетероцикліл, біс-оксі-
Сі-залкілен і -С/-О)ОВ, де К являє собою Сі-7алкільну групу, Сзгогетероциклільну групу або Св. гоарильну групу;
(іїр) Сі-5 насиченого аліфатичного алкілу; (іс) Сзє насиченого циклоалкілу; ві
КА е в - - - - (ід) , де кожний з В", ВЗ: і ЕЗЗ незалежно вибраний з Н, С.-з насиченого алкілу, Со- залкенілу, Сг-залкінілу та циклопропілу, причому зазначена загальна кількість атомів вуглецю в групі К!? становить не більше 5; до
А АХ зн (іє) ,де один із КЗза ії ВЗ5Ь являє собою Н, а інший вибраний з: фенілу, причому феніл необов'язково заміщений групою, вибраною з галогену, метилу, метокси; піридилу; та тіофенілу; і о Ля і - ! ! Ще (іх , де КЗ" вибраний з: Н; Сіз насиченого алкілу; Сгзалкенілу; Сегзалкінілу; циклопропілу; фенілу, причому феніл необов'язково заміщений групою, вибраною з галогену, метилу, метокси; піридилу; та тіофенілу; й ї "її ' 1 її ' 12 робь Зба ії З6р якщо між С2' і С3" присутній одинарний зв'язок, то КК? являє собою ;, де Кб і Кк незалежно вибрані з Н, Е, С:-4 насиченого алкілу, Сгозалкенілу, причому алкільна й алкенільна групи необов'язково заміщені групою, вибраною з Сі-залкіламідо й Сі-алкілового складного ефіру; або, якщо один із зба і ВЗ являє собою Н, то інший вибраний з нітрилу й С.і-4алкілового складного ефіру; і р становить від 1 до 8. 2. Кон'югат за п. 1, який відрізняється тим, що Х являє собою -СНе-. 3. Кон'югат за п. 1 або 2, який відрізняється тим, що п становить від 1 до 4. 4. Кон'югат за п. 3, який відрізняється тим, що п дорівнює 2. 5. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-4, який відрізняється тим, що між С2 і СЗ присутній подвійний зв'язок і К? являє собою С..-5 насичену аліфатичну алкільну групу. 6. Кон'югат за п. 5, який відрізняється тим, що К? являє собою метил, етил або пропіл. 7. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-4, який відрізняється тим, що між С2 і СЗ присутній подвійний зв'язок і К2 являє собою: (а) феніл, який несе від однієї до трьох груп-замісників, причому зазначені замісники можуть бути вибрані з метокси, етокси, фтору, хлору, ціано, біс-оксиметилену, метилпіперазинілу, морфоліно та метилтіофенілу; або (5) циклопропіл; або
Зо (с) групу формули: в:
КА
В при цьому зазначена загальна кількість атомів вуглецю в групі К2 становить не більше 3; або (а) групу то ; або (є) групу формули
С я у якій 22" вибраний з Н і метилу. 8. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-4, який відрізняється тим, що між С2 і СЗ присутній одинарний а: Й й десь й зв'язок, 2 являє собою і (а) Вгба і Вгбь обидва являють собою Н; або (р) вгба і Вгбь обидва являють собою метил; або (с) один із Б2ба і Щ2бо являє собою Н, а інший вибраний з С.-4 насиченого алкілу, Сгезалкенілу, причому алкільна й алкенільна групи необов'язково заміщені. 9. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-8, який відрізняється тим, що між С2' і СУ" присутній подвійний зв'язок і ЕК"? являє собою Сі. насичену аліфатичну алкільну групу. 10. Кон'югат за п. 9, який відрізняється тим, що К!? являє собою метил, етил або пропіл. 11. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-8, який відрізняється тим, що між С2' і С3' присутній подвійний зв'язок і 22 являє собою: (а) феніл, який несе від однієї до трьох груп-замісників, причому зазначені замісники вибрані з метокси, етокси, фтору, хлору, ціано, біс-оксиметилену, метилпіперазинілу, морфоліно та метилтіофенілу; або (5) циклопропіл; або (с) групу формули ві
КА в! при цьому зазначена загальна кількість атомів вуглецю в групі КК"? становить не більше 3; або (а) групу сто ; або (є) групу формули б Я
Кк у якій 237 вибраний з Н і метилу. 12. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-8, який відрізняється тим, що між С2' і С3' присутній й й ад' 12 ось ї одинарний зв'язок, К'? являє собою і (а) Взба і Взбь обидва являють собою Н; або (р) вва і взбь обидва являють собою метил; або (с) один із БЗба | ЕЗ66 являє собою Н, а інший вибраний з С..4 насиченого алкілу, Сгзалкенілу, причому алкільна й алкенільна групи необов'язково заміщені. 13. Кон'югат за п. 1, який відрізняється тим, що ОЇ. являє собою
Зо
Аж зм " Н "е осо о жи али: о
АК (в) (в) (9) ва он ну и ол " А (Ф) (Ф) 14. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-13, який відрізняється тим, що, якщо зазначене антитіло зв'язується з І К1: зазначене антитіло містить домен МН, що містить СОКЗ МН з амінокислотною послідовністю
ЗЕБЕО ІЮ МО: 7, СОК2 МН з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮО МО: б і СОК1 МН з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮО МО: 5; і зазначене антитіло містить домен Мі, що містить СОКЗ МІ з амінокислотною послідовністю
ЗЕО ІО МО: 10, СОК2 МІ з амінокислотною послідовністю 5ЕО І МО: 9 і СОК1 М. з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮО МО: 8. 15. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-14, який відрізняється тим, що, якщо зазначене антитіло зв'язується з І К1: зазначене антитіло містить домен УН, що має послідовність ЗЕО ІЮО МО: 1; і зазначене антитіло містить домен Мі, що має послідовність зЕО ІЮ МО: 2. 16. Кон'югат за будь-яким із пп. 1-15, який відрізняється тим, що, якщо зазначене антитіло зв'язується з І К1: зазначене антитіло містить важкий ланцюг, що має послідовність ЗЕО ІЮ МО: 3, або важкий ланцюг, що має послідовність 5ЕО ІЮ МО: 11; і зазначене антитіло містить легкий ланцюг, що має послідовність зЕО ІЮ МО: 4. 17. Композиція, яка містить суміш кон'югатів антитіло-лікарський засіб за будь-яким із пп. 1-16, причому зазначене середнє навантаження лікарським засобом на антитіло в зазначеній суміші кон'югатів антитіло-лікарський засіб становить від приблизно 1 до приблизно 4. 18. Застосування кон'югата за будь-яким із пп. 1-16 у виробництві лікарського засобу для лікування проліферативного захворювання. 19. Спосіб лікування проліферативного захворювання у суб'єкта, який включає введення суб'єкту кон'югата за будь-яким із пп. 1-16. 20. Спосіб за п. 19, який відрізняється тим, що зазначене захворювання являє собою рак. 21. Спосіб за п. 20, який відрізняється тим, що, якщо зазначене антитіло зв'язується з ОІ КІ, то зазначений рак являє собою рак, вибраний з групи, що складається з: гепатоцелюлярної
Зо карциноми, гепатобластоми, недрібноклітинного раку легенів, дрібноклітинного раку легенів, раку товстої кишки, раку молочної залози, раку шлунка, раку підшлункової залози, нейробластоми, раку надниркових залоз, феохромоцитоми, парагангліоми, медулярної карциноми щитовидної залози, раку кістякових м'язів, ліпосаркоми, гліоми, пухлини Вільмса, нейроендокринних пухлин, гострого мієлолейкозу та мієлодиспластичного синдрому. 22. Спосіб за п. 20, який відрізняється тим, що, якщо зазначене антитіло зв'язується з КААСІ1, то зазначений рак являє собою рак, вибраний з групи, що складається з: раку яєчників, раку молочної залози, раку простати та раку нирок. 23. Спосіб за п. 20, який відрізняється тим, що, якщо зазначене антитіло зв'язується з мезотеліном, то зазначений рак являє собою рак, вибраний з групи, що складається з: мезотеліоми, раку легенів, раку яєчників і раку підшлункової залози. 24. Фармацевтична композиція, яка містить кон'югат за будь-яким із пп. 1-16 і фармацевтично прийнятний розріджувач, носій або допоміжну речовину. 25. Фармацевтична композиція за п. 24, яка додатково містить терапевтично ефективну кількість хіміотерапевтичного агента.
26. Спосіб лікування раку у суб'єкта який включає введення суб'єкту фармацевтичної композиції за п. 25.
ОЗ г ж: ШЕ і ш : Й ер ;
Б 5 ї
Е ; Х ь 8 В -й "а ) ії совіАВО іме я | ря і; що 8Вя у ш ; Я ж ! ї щ і; ж ій
В «В й «Е 0
ГевоАвс (мкг/мл
Фіг. 1 з500ч: я с: ТА от д З00бх: и
Ж І: зе ШИ ек Її:
Ж шия: шик вид. ов: а А : І: Ж м з ЩЕ ДВ
Ж «ї Кх Гу зу В й
Е З і: й: у. 4
Ж 5 20004: Ж г я й в 15004: М то їм х ЩІ ЖК Р» Я до З Ух ви І: Да й. зі в Ж І. й в ЦИ: З Ж
В 309065: Д Кз ж ШИ ай жо І: жк ке: МЕ
Е г нн В ТЕ Ши
Б: с Й (й ій о зо 40 50 що дн
В 00 м і
Е В''ШЮ Ї й - 1 їм с ; НЕ Ж ШЕ. мак у і: ! і іа и зе Й Я поні й
Е 1» св Дер Е- ІА г вЕ К і х - ЗЕ у Я вь о
Ф З вва. з ЗЕ! 5 Р В ге ш ЗМ у вся о що Ж ЕІ |: мя ж я КО шиї св зи т 5 І
Е з зі - Й ШЕ Шк її: Ї дей Пс и - а ММ - я Кт дон ВО а ж оон, КЕ ще Кк й
ІЗ! мфреесосессососсссссерососессесососсесоеооссососесосоососоуресосососсосососософеососооесосососоофосососоососвсосоо
Го 18 а ТВ й 5 50
Дні після лікування
Фіг. 2 а 34 ху чзкх з І нн рн шк т АЖ й соня В, ШЕ що мк ЕК й в Фо до ВЕ
Ж зва Кто й у х ям З вена
КУ І ї "Я о Ж і ї , жо кох х Я х
К Щ к. : ; в У - йкоо о. я Е ан нн нн нн зонної
Є «й «Е а І й й «й Її х гадеррс мем фор реа фіг. З но й шо що 0804 у ж ! '
В в й «В ЕВ 2 опо А ро імлі
Яна
Бе
Е г-Я Я а
Е ню нини М -« ї Ше
Ж х і х що. ч
НУ й : 5 с «В В - -2 ЕН 2 іон АОС Ні мМкоУМмА
Фіг. 4
1506. й
Х п 43що5 «й 58 ! В хо і М
В ! й ) х Ф юю ! чи хе Ї ке й ко т г т з
Ен МО. щих яна
З і НЯ ї ШЕ ШЕ
Я жо яке 1 ко у ДА ве де З ї са вн щ оон ож а 10 20 Кт 0 хо Ба дніпеЕшля лікування
Фіг. 5 з ще що: зе
З й зе. ; Я
Си. ;
Б'є ї ке ой - ви ї ДЕ вай «ж Й
З кві З я з я й ЕЙ Й ку с й
Ба ГО КН и Зо 85 що ща
Дні «ве Но. щік чн АК, МЕ Кт, АК ей АВС Ба мож. ЗИ «ОВО, анікк, фхя
Фіг. 6
Комп'ютерна верстка С. Чулій
ДП "Український інститут інтелектуальної власності", вул. Глазунова, 1, м. Київ - 42, 01601
UAA202004636A 2017-02-08 2018-02-08 Кон'югати піролобензодіазепін-антитіло UA123889C2 (uk)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB1702031.4A GB201702031D0 (en) 2017-02-08 2017-02-08 Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
GBGB1719391.3A GB201719391D0 (en) 2017-11-22 2017-11-22 Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
GBGB1719398.8A GB201719398D0 (en) 2017-11-22 2017-11-22 Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
GBGB1719393.9A GB201719393D0 (en) 2017-11-22 2017-11-22 Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
PCT/EP2018/053188 WO2018146199A1 (en) 2017-02-08 2018-02-08 Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA123889C2 true UA123889C2 (uk) 2021-06-16

Family

ID=61256913

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA202004636A UA123889C2 (uk) 2017-02-08 2018-02-08 Кон'югати піролобензодіазепін-антитіло

Country Status (23)

Country Link
US (2) US11384098B2 (uk)
EP (2) EP3939616A1 (uk)
JP (1) JP6704532B1 (uk)
KR (1) KR102153642B1 (uk)
CN (1) CN110300601B (uk)
AU (1) AU2018219654B2 (uk)
BR (1) BR112019016420A2 (uk)
CA (1) CA3047686C (uk)
CY (1) CY1124714T1 (uk)
DK (1) DK3579883T3 (uk)
ES (1) ES2890934T3 (uk)
HR (1) HRP20211640T1 (uk)
HU (1) HUE056289T2 (uk)
LT (1) LT3579883T (uk)
MX (1) MX2019009427A (uk)
NZ (1) NZ754811A (uk)
PL (1) PL3579883T3 (uk)
PT (1) PT3579883T (uk)
RS (1) RS62343B1 (uk)
SI (1) SI3579883T1 (uk)
UA (1) UA123889C2 (uk)
WO (1) WO2018146199A1 (uk)
ZA (1) ZA201904269B (uk)

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB201702031D0 (en) * 2017-02-08 2017-03-22 Medlmmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
US11654197B2 (en) 2017-03-29 2023-05-23 Legochem Biosciences, Inc. Pyrrolobenzodiazepine dimer prodrug and ligand-linker conjugate compound of the same
BR112020022299A2 (pt) 2018-05-09 2021-02-23 Legochem Biosciences, Inc. composições e métodos relacionados a conjugados de anticorpo-fármaco anti-cd19
US20220347309A1 (en) 2018-12-19 2022-11-03 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepine resistance
GB201820725D0 (en) 2018-12-19 2019-01-30 Adc Therapeutics Sarl Pyrrolobenzodiazepine resistance
EP3936150A4 (en) * 2019-03-06 2023-03-29 LegoChem Biosciences, Inc. ANTIBODY-DRUG CONJUGATES COMPRISING ANTIBODY AGAINST HUMAN DLK1 AND USE THEREOF
KR102503143B1 (ko) * 2019-03-06 2023-02-24 주식회사 레고켐 바이오사이언스 인간 dlk1에 대한 항체를 포함하는 항체 약물 접합체 및 이의 용도
KR20210144767A (ko) * 2019-04-01 2021-11-30 치오메 바이오사이언스 가부시키가이샤 암 치료용 의약
GB201908128D0 (en) * 2019-06-07 2019-07-24 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
KR20210028544A (ko) 2019-09-04 2021-03-12 주식회사 레고켐 바이오사이언스 인간 ror1에 대한 항체를 포함하는 항체 약물 접합체 및 이의 용도
EP4041313A4 (en) * 2019-10-10 2024-01-10 Univ Yale ANTIBODIES DESIGNED AS MOLECULAR DEGRADATION AGENTS VIA CELLULAR RECEPTORS
JP2023508508A (ja) 2019-12-31 2023-03-02 レゴケム バイオサイエンシズ， インク． ピロロベンゾジアゼピン誘導体及びそのリガンド－リンカー接合体
GB202012161D0 (en) * 2020-08-05 2020-09-16 Adc Therapeutics Sa Combination therapy
GB202107713D0 (en) 2021-05-28 2021-07-14 Medimmune Ltd Combination therapy
GB202107709D0 (en) 2021-05-28 2021-07-14 Adc Therapeutics S A Combination therapy
GB202107706D0 (en) 2021-05-28 2021-07-14 Adc Therapeutics S A Combination therapy
WO2022248268A1 (en) 2021-05-28 2022-12-01 Adc Therapeutics Sa Combination therapy
EP4279090A1 (en) * 2022-05-20 2023-11-22 ADC Therapeutics SA Composition comprising a pyrrolobenzodiazepine-based antibody drug conjugate

Family Cites Families (52)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS58180487A (ja) 1982-04-16 1983-10-21 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd 抗生物質ｄｃ−８１およびその製造法
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5583024A (en) 1985-12-02 1996-12-10 The Regents Of The University Of California Recombinant expression of Coleoptera luciferase
JPH08336393A (ja) 1995-04-13 1996-12-24 Mitsubishi Chem Corp 光学活性なγ−置換−β−ヒドロキシ酪酸エステルの製造法
US6602677B1 (en) 1997-09-19 2003-08-05 Promega Corporation Thermostable luciferases and methods of production
EP1720908A2 (en) 2004-02-17 2006-11-15 Absalus, Inc. Super-humanized antibodies against respiratory syncytial virus
CN101065151B (zh) 2004-09-23 2014-12-10 健泰科生物技术公司 半胱氨酸改造的抗体和偶联物
EP1844074B1 (en) 2005-02-03 2013-04-24 Antitope Limited Human antibodies and proteins
CA3052368A1 (en) 2005-10-07 2007-04-19 Exelixis, Inc. Azetidines as mek inhibitors
PT1813614E (pt) 2006-01-25 2012-01-09 Sanofi Sa Agentes citotóxicos compreendendo novos derivados de tomaimicina
EP2144628B1 (en) 2007-05-08 2012-10-17 Genentech, Inc. Cysteine engineered anti-muc16 antibodies and antibody drug conjugates
EP2195017B1 (en) 2007-10-01 2014-10-22 Bristol-Myers Squibb Company Human antibodies that bind mesothelin, and uses thereof
RU2505544C2 (ru) 2007-10-19 2014-01-27 Дженентек, Инк. Антитела против tenb2, сконструированные с цистеином, и конъюгаты антитело - лекарственное средство
TW201208643A (en) 2010-04-11 2012-03-01 Proteus Biomedical Inc Apparatus, system and method for detection and delivery of a medicinal dose
CN103068405A (zh) 2010-04-15 2013-04-24 西雅图基因公司 靶向吡咯并苯并二氮杂卓结合物
EA024730B1 (ru) 2010-04-15 2016-10-31 Медимьюн Лимитед Пирролбензодиазепиновые соединения, их конъюгаты, фармацевтические композиции, содержащие указанные конъюгаты, и применение указанных конъюгатов
CN102971329B (zh) 2010-04-15 2016-06-29 麦迪穆有限责任公司 用于治疗增殖性疾病的吡咯并苯并二氮杂卓
ES2743913T3 (es) 2011-03-31 2020-02-21 Adc Therapeutics Sa Anticuerpos contra el antígeno 1 asociado al riñón y fragmentos de unión al antígeno de los mismos
KR101877598B1 (ko) 2011-10-14 2018-07-11 메디뮨 리미티드 피롤로벤조디아제핀 및 그의 컨주게이트
TR201908872T4 (tr) 2012-01-09 2019-07-22 Adc Therapeutics Sa Üçlü negatif meme kanserini tedavi etmek için ajanlar.
CA2886772C (en) 2012-10-03 2021-01-12 Livtech, Inc. Anti-hdlk-1 antibody having an anti-tumor activity in vivo
HUE042731T2 (hu) 2012-10-12 2019-07-29 Adc Therapeutics Sa Pirrolobenzodiazepin-antitest konjugátumok
WO2014057118A1 (en) 2012-10-12 2014-04-17 Adc Therapeutics Sarl Pyrrolobenzodiazepine-anti-cd22 antibody conjugates
ES2680153T3 (es) 2012-10-12 2018-09-04 Adc Therapeutics Sa Conjugados de anticuerpos anti-PSMA-pirrolobenzodiazepinas
EP2906296B1 (en) 2012-10-12 2018-03-21 ADC Therapeutics SA Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
MX2015004423A (es) 2012-10-12 2015-10-29 Adc Therapeutics Sàrl Conjugados del anticuerpo pirrolobenzodiazepina - anti-her2.
EP2906251B1 (en) 2012-10-12 2017-09-27 ADC Therapeutics SA Pyrrolobenzodiazepine-anti-cd22 antibody conjugates
US10695433B2 (en) 2012-10-12 2020-06-30 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
TR201815418T4 (tr) 2012-10-12 2018-11-21 Adc Therapeutics Sa Pirrolobenzodiazepin -anti-psma antikor konjugatları.
LT2839860T (lt) 2012-10-12 2019-07-10 Medimmune Limited Pirolobenzodiazepinai ir jų konjugatai
WO2014174111A1 (en) * 2013-04-26 2014-10-30 Pierre Fabre Medicament Axl antibody-drug conjugate and its use for the treatment of cancer
WO2015052534A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
WO2015052532A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
WO2015052535A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
US20160256561A1 (en) 2013-10-11 2016-09-08 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
GB201406767D0 (en) 2014-04-15 2014-05-28 Cancer Rec Tech Ltd Humanized anti-Tn-MUC1 antibodies anf their conjugates
US20170304460A1 (en) 2014-10-01 2017-10-26 Medimmune, Llc Method of conjugating a polypeptide
EP3134128B1 (en) * 2014-10-03 2019-06-05 Synaffix B.V. Sulfamide linker, conjugates thereof, and methods of preparation
AU2015352545B2 (en) 2014-11-25 2020-10-15 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
GB201506388D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Cancer Res Technology Ltd And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
GB201506389D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
GB201506402D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
GB201506393D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
GB201506409D0 (en) * 2015-04-15 2015-05-27 Williams David G And Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Humanized anti-axl antibodies and their conjugates
GB201506394D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
GB201506407D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
GB201506399D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
GB201506405D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
GB201507827D0 (en) 2015-05-07 2015-06-17 Adc Therapeutics Sarl Diagnostic test
WO2017137458A1 (en) 2016-02-08 2017-08-17 Synaffix B.V. Antibody-conjugates with improved therapeutic index for targeting cd30 tumours and method for improving therapeutic index of antibody-conjugates
WO2017137457A1 (en) 2016-02-08 2017-08-17 Synaffix B.V. Antibody-conjugates with improved therapeutic index for targeting cd30 tumours and method for improving therapeutic index of antibody-conjugates
CN109152844B (zh) 2016-02-08 2022-11-22 西纳福克斯股份有限公司 用于治疗的含有磺酰胺接头的生物缀合物

Also Published As

Publication number Publication date
AU2018219654A1 (en) 2019-07-18
PT3579883T (pt) 2021-09-28
NZ754811A (en) 2023-06-30
HUE056289T2 (hu) 2022-02-28
MX2019009427A (es) 2019-10-07
CY1124714T1 (el) 2022-07-22
PL3579883T3 (pl) 2022-01-24
LT3579883T (lt) 2021-10-25
ZA201904269B (en) 2022-12-21
EP3939616A1 (en) 2022-01-19
DK3579883T3 (da) 2021-09-06
RS62343B1 (sr) 2021-10-29
HRP20211640T1 (hr) 2022-02-04
AU2018219654B2 (en) 2019-10-10
EP3579883A1 (en) 2019-12-18
BR112019016420A2 (pt) 2020-04-07
US11384098B2 (en) 2022-07-12
JP2020518551A (ja) 2020-06-25
EP3579883B1 (en) 2021-08-11
CN110300601A (zh) 2019-10-01
JP6704532B1 (ja) 2020-06-03
ES2890934T3 (es) 2022-01-25
KR102153642B1 (ko) 2020-09-09
CA3047686A1 (en) 2018-08-16
KR20190100413A (ko) 2019-08-28
CA3047686C (en) 2020-07-07
US20210079020A1 (en) 2021-03-18
CN110300601B (zh) 2024-01-05
US20230053603A1 (en) 2023-02-23
SI3579883T1 (sl) 2021-12-31
WO2018146199A1 (en) 2018-08-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA123889C2 (uk) Кон'югати піролобензодіазепін-антитіло
UA125198C2 (uk) Кон'югати піролобензодіазепін-антитіло
JP6878287B2 (ja) ピロロベンゾジアゼピン−抗体コンジュゲート
JP7408396B2 (ja) 併用療法
JP6440212B2 (ja) メトホルミン及びジヒドロケルセチンを含む組み合わせ医薬、及びがんの治療のための使用
JP2022527398A (ja) ２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－４－（（２－フルオロ－４－（（３－モルホリノアゼチジン－１－イル）メチル）ベンジル）アミノ）イソインドリン－１，３－ジオンを使用する非ホジキンリンパ腫の処置方法
JP2020517652A5 (uk)
US20210154186A1 (en) Compositions and methods for inhibiting dihydroorotate dehydrogenase
US11471456B2 (en) Formulations comprising heterocyclic protein kinase inhibitors
JP2020526492A (ja) Ｇ１ｔ３８の形態及びその製造方法
US20210290651A1 (en) Methods of treating viral infections using inhibitors of nucleotide synthesis pathways
AU2019242626A1 (en) Methods of determining dosing of a therapeutic agent based on measured levels of a metabolite
US20220177435A1 (en) Compositions and methods for inhibiting dihydroorotate dehydrogenase
EA040749B1 (ru) Конъюгаты пирролобензодиазепин-антитело
EA039826B1 (ru) Конъюгаты пирролобензодиазепин-антитело
EA045355B1 (ru) Комбинированная терапия конъюгатом анти-axl антитело-лекарственное средство