DE22190069T1 - Verfahren zur herstellung und reinigung von rna mit mindestens einem schritt mit einer tangentialen flussfiltration - Google Patents

Verfahren zur herstellung und reinigung von rna mit mindestens einem schritt mit einer tangentialen flussfiltration Download PDF

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Abstract

Verfahren zur Herstellung und Reinigung von RNA umfassend die SchritteA) Bereitstellung von DNA, die für die RNA kodiert;B) In-Vitro-Transkription der DNA, um eine Lösung zu erhalten, die transkribierte RNA umfasst; undC) Diafiltration und/oder Konzentration und/oder Reinigung der Lösung, die transkribierte RNA umfasst, durch einen oder mehrere Tangentialflussfiltrations-(TFF-)Schritte, wobei der mindestens eine oder die mehreren TFF-Schritte die Verwendung einer TFF-Membrankassette umfassend eine Membran auf Zellulosebasis umfasst.

Claims (15)

  1. Verfahren zur Herstellung und Reinigung von RNA umfassend die Schritte A) Bereitstellung von DNA, die für die RNA kodiert; B) In-Vitro-Transkription der DNA, um eine Lösung zu erhalten, die transkribierte RNA umfasst; und C) Diafiltration und/oder Konzentration und/oder Reinigung der Lösung, die transkribierte RNA umfasst, durch einen oder mehrere Tangentialflussfiltrations-(TFF-)Schritte, wobei der mindestens eine oder die mehreren TFF-Schritte die Verwendung einer TFF-Membrankassette umfassend eine Membran auf Zellulosebasis umfasst.
  2. Verfahren nach Anspruch 1, wobei die Membran eine Zellulosederivatmembran ist.
  3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, wobei die Membran eine Molekulargewichtsausschlussgrenze von ≤ 500 kDa aufweist.
  4. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3, wobei Schritt C) mindestens einen Diafiltrationsschritt unter Verwendung von TFF umfasst.
  5. Verfahren nach Anspruch 4, wobei der mindestens eine Diafiltrationsschritt unter Verwendung von TFF von Schritt C) die Diafiltration mit Wasser oder einer wässrigen Salzlösung umfasst.
  6. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 5, wobei die RNA eine Größe von 500 bis 5000 Nukleotiden oder Basenpaaren aufweist.
  7. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 6, wobei die RNA-Membranbeladung der TFF-Membran etwa 1 bis etwa 10 mg/cm2 beträgt.
  8. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 7, wobei die In-Vitro-Transkription in Gegenwart eines In-Vitro-Transkriptionsmixes durchgeführt wird und wobei der In-Vitro-Transkriptionsmix Spermidin umfasst.
  9. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 8, wobei die In-Vitro-Transkription in Gegenwart von natürlich vorkommenden Nukleotiden und/oder modifizierten Nukleotiden durchgeführt wird.
  10. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 9, wobei die In-Vitro-Transkription in Gegenwart eines Cap-Analogs durchgeführt wird.
  11. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 10, wobei die In-Vitro-Transkription in Gegenwart eines linearisierten Plasmid-DNA-Templates durchgeführt wird.
  12. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 11, wobei die transkribierte RNA eine mRNA ist.
  13. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 12, wobei das Verfahren in Schritt C) mindestens ein weiteres Reinigungsverfahren vor oder nach dem einen oder mehreren TFF-Schritten umfasst.
  14. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 13, wobei das Verfahren ferner mindestens einen zusätzlichen Formulierungsschritt D) umfasst.
  15. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 14, wobei das Verfahren ferner die Schritte E) Abfüllung und/oder F) Lyophilisierung umfasst.
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