KR20240047986A - 가공을 위한 디바이스, 시스템 및 방법 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 (c) 필터에 의해 분리된 (a) 여액 챔버 및 (b) 폐기물 수집 챔버를 포함하는 저장소를 포함하는 가압 디바이스로서, 저장소는 압력 유입 포트와 접촉되는 (d) 제거 가능한 캡을 추가로 포함하고; 디바이스는 양압 공급부와 유체 소통하는, 디바이스의 사용을 포함하는, 원형 폴리리보뉴클레오티드의 제조 및 가공을 위한 디바이스, 시스템, 및 방법에 관한 것이다.
Description
원형 폴리리보뉴클레오티드의 생산 및 가공을 위한 방법이 필요하다.
본 발명은 일반적으로 원형 폴리리보뉴클레오티드의 제조 및 가공을 위한 디바이스, 시스템, 및 방법에 관한 것이다.
일 양태에서, 본 발명은 원형 폴리리보뉴클레오티드를 가공하는 방법을 특징으로 한다. 이 방법은 (a) 여액 챔버 (ii)와 폐기물 수집 챔버 (iii) 사이에 배치된 필터 (i)를 갖는 저장소를 포함하는 디바이스를 제공하는 단계로서, 저장소는 압력 유입 포트를 갖는 제거 가능한 캡을 추가로 포함하고; 디바이스는 압력 유입 포트를 통해 양압 공급부와 유체 소통하는, 단계; (b) 여액 챔버에서 제1 유체에 원형 폴리리보뉴클레오티드를 제공하는 단계; (c) 제1 유체가 필터를 통과하고 원형 폴리리보뉴클레오티드가 필터를 통과하지 않도록 저장소를 양압 공급부로 가압하는 단계; (d) 저장소에 제2 유체를 적용하는 단계; 및 (e) 제2 완충제가 필터를 통과하고 원형 폴리리보뉴클레오티드가 필터를 통과하지 않도록 저장소를 양압 공급부로 가압하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 방법은 단계 (d) 및 단계 (e)를 1 회 내지 5 회 반복하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 (f) 단계 (e) 후에 필터로부터 원형 폴리뉴클레오티드를 흡인하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 1 mg 내지 1000 mg의 원형 폴리리보뉴클레오티드가 필터로부터 흡인된다. 일부 구현예에서, 50 mg 내지 150 mg의 원형 폴리리보뉴클레오티드가 필터로부터 흡인된다. 일부 구현예에서, 약 100 mg의 원형 폴리리보뉴클레오티드가 필터로부터 흡인된다.
일부 구현예에서, 제2 유체는 캡에서 유체 유입 포트를 통해 적용된다. 일부 구현예에서, 유체 유입 포트는 유체 공급부와 유체 소통한다. 일부 구현예에서, 제1 유체 및/또는 제2 유체는 액체이다. 일부 구현예에서, 액체는 용액이다. 일부 구현예에서, 용액은 완충제이다. 일부 구현예에서, 완충제는 제형화 완충제, 저장 완충제, 또는 정제 완충제이다.
일부 구현예에서, 가압 단계 (c) 및 단계 (d)는 저장소를 10 PSI 내지 100 PSI로 가압하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 적용 단계 (d)는 5 mL 내지 15 mL의 유체를 저장소에 적용하는 것을 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 디바이스가 필터에 의해 분리된 여액 챔버 및 폐기물 수집 챔버, 및 압력 유입 포트와 접촉하는 제거 가능한 캡을 갖는 저장소를 포함하는 것을 특징으로 하고; 여기서, 디바이스는 양압 공급부와 유체 소통한다.
일부 구현예에서, 저장소는 튜브이다. 일부 구현예에서, 튜브는 원심분리 튜브이다. 일부 구현예에서, 여액 챔버는 펀넬형이다. 일부 구현예에서, 캡은 유체 유입 포트를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 저장소의 부피는 5 mL 내지 100 mL이다. 일부 구현예에서, 여액 챔버의 부피는 5 mL 내지 15 mL이다. 일부 구현예에서, 필터는 2 kDa 내지 200 kDa이다. 일부 구현예에서, 여액 챔버 및 필터는 저장소 상에 적층되거나, 이에 나사로 고정되거나, 끼워진다. 일부 구현예에서, 압력 유입 포트는 밀봉된다.
일부 구현예에서, 디바이스는 센서(예를 들어, 액체 감지 센서)를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 액체 감지 센서는 광학 센서, 진동 센서, 초음파 센서, 플로트 센서, 커패시턴스 센서, 레이더 센서, 전도도 센서, 또는 저항 센서로 구성된 목록으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 센서는 광학 센서이다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 (i) 필터를 갖는 여액 챔버를 포함하는 샘플 저장소를 갖는 필터 트레이를 포함하는 시스템을 특징으로 하고, 필터 트레이는 (ii) 압력 유입 포트를 갖는 뚜껑과 (iii) 폐기물 저장소 사이에 배치되고; 여기서, 압력 유입 포트는 (iv) 양압 공급부와 유체 소통한다.
일부 구현예에서, 여액 챔버는 펀넬형이다. 일부 구현예에서, 여액 챔버의 부피는 5 mL 내지 15 mL이다. 일부 구현예에서, 폐기물 저장소는 중력 또는 진공 배수구를 포함한다. 일부 구현예에서, 시스템은 액체 감지 센서를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 시스템은 환기구를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 필터 트레이, 뚜껑, 및 폐기물 저장소는 함께 밀봉 가능하게 연결된다. 일부 구현예에서, 여액 챔버는 샘플 저장소 상에 적층되거나, 이에 나사로 고정되거나, 끼워진다. 일부 구현예에서, 뚜껑은 유체 유입 포트를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 필터 트레이는 복수의 샘플 저장소를 포함한다.
정의
본 발명은 특정 구현예와 관련하여, 그리고 특정 도면을 참조하여 설명될 것이지만, 본 발명은 이에 제한되는 것이 아니라 청구범위에 의해서만 제한된다. 하기 기재된 바와 같은 용어는 달리 지시되지 않는 한 일반적으로 이들의 일반적인 의미(common sense)로 이해되어야 한다.
본원에서 사용되는 "원형 폴리리보뉴클레오티드" 또는 "circRNA" 또는 "원형 RNA"라는 용어는 상호교환적으로 사용되며, 자유 말단이 없는(즉, 자유 3' 말단 및/또는 5' 말단이 없는) 구조를 갖는 폴리리보뉴클레오티드 분자, 예를 들어, 공유 또는 비공유 결합을 통해 원형 또는 순환 구조를 형성하는 폴리리보뉴클레오티드 분자를 의미한다. 일부 구현예에서, 원형 폴리리보뉴클레오티드는 공유 결합을 통해 원형 또는 순환 구조를 형성한 "공유적으로 폐쇄된 폴리리보뉴클레오티드"이다.
본원에서 사용되는 "원형 폴리리보뉴클레오티드 샘플", "circRNA 샘플", 및 "원형 RNA 샘플"이라는 용어는 상호교환적으로 사용되며, circRNA 분자 및 용액을 포함하는 조성물을 의미한다.
본원에서 사용되는 "발현 서열"이라는 용어는 산물, 예를 들어, 펩티드 또는 폴리펩티드, 또는 조절 핵산을 인코딩하는 핵산 서열을 지칭한다.
"폴리펩티드" 및 "단백질"은 상호교환적으로 사용되며, 공유 결합(예를 들어, 아미드 결합)에 의해 연결된 2 개 이상의 아미노산의 폴리머를 지칭한다. 본원에 기재된 바와 같은 폴리펩티드는 전장 단백질(예를 들어, 완전히 가공된 단백질)뿐만 아니라 더 짧은 아미노산 서열(예를 들어, 천연-발생 단백질의 단편 또는 합성 폴리펩티드 단편)을 포함할 수 있다. 폴리펩티드는 천연 발생 아미노산(예를 들어, 자연에서 합성된 펩티드에서 일반적으로 발견되고 1 문자 약어 A, R, N, C, D, Q, E, G, H, I, L, K, M, F, P, S, T, W, Y 및 V로 공지된 20 개 아미노산 중 하나) 및 비-천연 발생 아미노산(예를 들어, 합성 아미노산, 아미노산 유사체, 및 아미노산 모방체를 포함하여, 자연에서 합성된 펩티드에서 일반적으로 발견되는 20 개 아미노산 중 하나가 아닌 아미노산)을 포함할 수 있다.
본원에서 사용되는 "압타머 서열" 또는 "압타머"라는 용어는 표적 분자에 특이적으로 결합하는 비-천연 발생 또는 합성 올리고뉴클레오티드를 지칭한다. 전형적으로, 압타머는 20 개 내지 250 개의 뉴클레오티드이다. 전형적으로, 압타머는 서열 상동성보다는 이차 구조를 통해 이의 표적에 결합한다.
본원에서 사용되는 "결합 부위"라는 용어는 또 다른 엔티티, 예를 들어, 화합물, 단백질, 핵산 등과 상호작용하는 원형 폴리리보뉴클레오티드의 영역을 지칭한다. 결합 부위는 압타머 서열을 포함할 수 있다.
본원에서 사용되는 "완충제"는 산성 또는 염기성 구성요소의 첨가 시 pH 변화에 저항할 수 있는 용액이다. "완충제"의 예는 조성물의 제형화에 사용하기 위한 "제형화 완충제", 조성물의 저장에 사용하기 위한 "저장 완충제", 정제에 사용하기 위한 "정제 완충제" 등을 포함한다.
본원에서 사용되는 "완충제 교환"이라는 용어는 제2 완충제에 혼입시키기 위해 제1 완충제로부터 폴리리보뉴클레오티드와 같은 분자 또는 입자를 제거하는 프로세스를 지칭한다.
본원에서 사용되는 "유체 소통"이라는 용어는 유체가 하나 이상의 개재 디바이스 부재를 통과하면서 또는 통과하지 않으면서 그러한 디바이스 부재들 사이에서 이동하도록 하는 적어도 2 개의 디바이스 부재, 예를 들어, 저장소, 압력 공급부 등 사이의 연결을 지칭한다.
본원에서 사용되는 "용액"은 용매 및 용질을 포함하는 둘 이상의 물질의 균질한 혼합물이다.
인용에 의한 포함
본 명세서에서 언급되는 모든 간행물, 특허, 및 특허 출원은 각각의 개별 간행물, 특허, 또는 특허 출원이 인용에 의해 포함되는 것으로 구체적이고 개별적으로 지시된 것과 같이 동일한 정도로 본원에 인용에 의해 포함된다.
원형 폴리리보뉴클레오티드는, 예를 들어, 본원에 인용에 의해 포함되는 미국 특허 공개 제US2020/0306286호, 및 PCT 특허 공개 제WO2020/181013호 및 제WO2020/023655호에 기재되어 있다.
본 발명의 구현예의 하기의 상세한 설명은 첨부된 도면과 함께 읽는 경우 더 잘 이해될 것이다. 본 발명의 예시의 목적 상, 본원에 예시된 구현예가 도면에 나타나 있다. 그러나, 본 발명이 도면에 나타낸 구현예의 정확한 배열 및 수단으로 제한되지 않음을 이해해야 한다.
도 1은 여액 챔버와 폐기물 수집 챔버 사이에 배치된 필터를 갖는 저장소, 뿐만 아니라 압력 유입 포트를 갖는 캡을 포함하는 가압 디바이스를 보여주며, 여기서 가압 디바이스는 양압 하에 있고, 압력은 양압 포트를 통해 가해진다.
도 2는 여액 챔버와 폐기물 수집 챔버 사이에 배치된 필터를 갖는 저장소, 뿐만 아니라 압력 유입 포트와 유체 유입 포트 둘 모두를 갖는 캡을 포함하는 가압 디바이스를 보여주며, 여기서 가압 디바이스는 양압 하에 있고, 압력은 압력 유입 포트를 통해 가해지고, 새로운 유체가 유체 유입 포트를 통해 여액 챔버에 적용될 수 있다.
도 3a 내지 도 3c는 적어도 하나의 포트를 갖는 뚜껑, 필터를 갖는 복수의 샘플 저장소를 갖는 필터 트레이, 및 폐기물 저장소를 포함하는 가압 시스템 또는 가압 로봇 조립체를 보여준다.
도 1은 여액 챔버와 폐기물 수집 챔버 사이에 배치된 필터를 갖는 저장소, 뿐만 아니라 압력 유입 포트를 갖는 캡을 포함하는 가압 디바이스를 보여주며, 여기서 가압 디바이스는 양압 하에 있고, 압력은 양압 포트를 통해 가해진다.
도 2는 여액 챔버와 폐기물 수집 챔버 사이에 배치된 필터를 갖는 저장소, 뿐만 아니라 압력 유입 포트와 유체 유입 포트 둘 모두를 갖는 캡을 포함하는 가압 디바이스를 보여주며, 여기서 가압 디바이스는 양압 하에 있고, 압력은 압력 유입 포트를 통해 가해지고, 새로운 유체가 유체 유입 포트를 통해 여액 챔버에 적용될 수 있다.
도 3a 내지 도 3c는 적어도 하나의 포트를 갖는 뚜껑, 필터를 갖는 복수의 샘플 저장소를 갖는 필터 트레이, 및 폐기물 저장소를 포함하는 가압 시스템 또는 가압 로봇 조립체를 보여준다.
본 발명은 일반적으로, 예를 들어, 이러한 샘플의 완충제 교환을 위한 원형 폴리리보뉴클레오티드 샘플의 가공을 위한 디바이스, 시스템, 및 방법에 관한 것이다. 본 발명자들은 원형 폴리뉴클레오티드를 포함하는 용액(예를 들어, 완충제)과 같은 유체의 가압이 단순화되고 신속한 액체 교환을 야기한다는 것을 발견하였다. 본 발명의 일 구현예는 가압, 예를 들어, 가압과 여과의 조합을 이용하여 제1 유체로부터 제2 유체로 원형 폴리리보뉴클레오티드를 전달하도록 구성된 디바이스이다.
일부 구현예에서, 원형 폴리리보뉴클레오티드는 원형인 폴리리보뉴클레오티드, 즉, 자유 말단이 없는 폴리리보뉴클레오티드이다. 원형 폴리리보뉴클레오티드는, 예를 들어, 본원에 인용에 의해 포함되는 미국 특허 공개 제US2020/0306286호, 및 PCT 특허 공개 제WO2020/181013호 및 제WO2020/023655호에 기재되어 있다. 원형 폴리리보뉴클레오티드는 또한, 본원에 인용에 의해 포함되는, 예를 들어, 제WO2015/034925호, 제WO2016/011222호, 제US10407683호, 제WO2017/222911호, 제WO2021/041541호, 제WO2019/236673호, 제WO2020/237227호, 제WO2016/197121호, 제WO2018/191722호, 및 제WO2020/023595호에 기재되어 있다. 일부 구현예에서, 원형 폴리리보뉴클레오티드는 상응하는 선형 폴리리보뉴클레오티드와 비교하여 개선된 안정성, 증가된 반감기, 감소된 면역원성, 및/또는 개선된 기능성(예를 들어, 본원에 기재된 기능의)을 갖는다.
일부 구현예에서, 원형 폴리리보뉴클레오티드는 적어도 약 20 개 염기쌍, 적어도 약 30 개 염기쌍, 적어도 약 40 개 염기쌍, 적어도 약 50 개 염기쌍, 적어도 약 75 개 염기쌍, 적어도 약 100 개 염기쌍, 적어도 약 200 개 염기쌍, 적어도 약 300 개 염기쌍, 적어도 약 400 개 염기쌍, 적어도 약 500 개 염기쌍, 또는 적어도 약 1,000 개 염기쌍이다.
일부 구현예에서, 적어도 100 개 뉴클레오티드, 적어도 200 개 뉴클레오티드, 적어도 300 개 뉴클레오티드, 적어도 400 개 뉴클레오티드, 적어도 500 개 뉴클레오티드, 적어도 1,000 개 뉴클레오티드, 적어도 2,000 개 뉴클레오티드, 적어도 3,000 개 뉴클레오티드, 적어도 4,000 개 뉴클레오티드, 적어도 5,000 개 뉴클레오티드, 적어도 7,500 개 뉴클레오티드, 적어도 10,000 개 뉴클레오티드, 적어도 15,000 개 뉴클레오티드, 적어도 20,000 개 뉴클레오티드의 길이를 갖는 원형 폴리리보뉴클레오티드가 유용할 수 있다.
일부 구현예에서, 원형 폴리리보뉴클레오티드는, 예를 들어, 폴리펩티드를 인코딩하는 적어도 하나의 발현 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 발현 서열은 펩티드 또는 폴리뉴클레오티드를 인코딩한다. 일부 구현예에서, 원형 폴리리보뉴클레오티드는 동일하거나 상이한 복수의 발현 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 발현 서열은 5000 bps 미만(예를 들어, 약 5000 bps 미만, 4000 bps, 3000 bps, 2000 bps, 1000 bps, 900 bps, 800 bps, 700 bps, 600 bps, 500 bps, 400 bps, 300 bps, 200 bps, 100 bps, 50 bps, 40 bps, 30 bps, 20 bps, 10 bps 또는 이하)의 길이를 갖는다. 일부 구현예에서, 발현 서열은 독립적으로 또는 이에 더하여 10 bps 초과(예를 들어, 적어도 약 10 bps, 20 bps, 30 bps, 40 bps, 50 bps, 60 bps, 70 bps, 80 bps, 90 bps, 100 bps, 200 bps, 300 bps, 400 bps, 500 bps, 600 bps, 700 bps, 800 bps, 900 bps, 1000 kb, 1.1 kb, 1.2 kb, 1.3 kb, 1.4 kb, 1.5 kb, 1.6 kb, 1.7 kb, 1.8 kb, 1.9 kb, 2 kb, 2.1 kb, 2.2 kb, 2.3 kb, 2.4 kb, 2.5 kb, 2.6 kb, 2.7 kb, 2.8 kb, 2.9 kb, 3 kb, 3.1 kb, 3.2 kb, 3.3 kb, 3.4 kb, 3.5 kb, 3.6 kb, 3.7 kb, 3.8 kb, 3.9 kb, 4 kb, 4.1 kb, 4.2 kb, 4.3 kb, 4.4 kb, 4.5 kb, 4.6 kb, 4.7 kb, 4.8 kb, 4.9 kb, 5 kb 또는 이상)의 길이를 갖는다.
일부 구현예에서, 원형 폴리리보뉴클레오티드는 발현 서열과 같은 하나 이상의 요소를 포함하고, 이들 하나 이상의 요소는 스페이서 서열 또는 링커에 의해 서로 분리될 수 있다. 일부 구현예에서, 요소는 1 개 뉴클레오티드, 2 개 뉴클레오티드, 약 5 개 뉴클레오티드, 약 10 개 뉴클레오티드, 약 15 개 뉴클레오티드, 약 20 개 뉴클레오티드, 약 30 개 뉴클레오티드, 약 40 개 뉴클레오티드, 약 50 개 뉴클레오티드, 약 60 개 뉴클레오티드, 약 80 개 뉴클레오티드, 약 100 개 뉴클레오티드, 약 150 개 뉴클레오티드, 약 200 개 뉴클레오티드, 약 250 개 뉴클레오티드, 약 300 개 뉴클레오티드, 약 400 개 뉴클레오티드, 약 500 개 뉴클레오티드, 약 600 개 뉴클레오티드, 약 700 개 뉴클레오티드, 약 800 개 뉴클레오티드, 약 900 개 뉴클레오티드, 또는 약 1000 개 뉴클레오티드만큼 서로 분리될 수 있다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 요소는 서로 인접하며, 예를 들어, 스페이서 요소가 결여되어 있다. 일 구현예에서, 원형 폴리리보뉴클레오티드, 예를 들어, 발현 서열의 스페이서 서열 대 비-스페이서 서열의 비는 약 0.05: 1, 약 0.06:1, 약 0.07:1,약 0.08:1, 약 0.09:1, 약 0.1:1, 약 0.12:1, 약 0.125:1, 약 0.15:1, 약 0.175:1, 약 0.2:1, 약 0.225:1, 약 0.25:1, 약 0.3:1, 약 0.35:1, 약 0.4:1, 약 0.45:1, 약 0.5:1, 약 0.55:1, 약 0.6:1, 약 0.65:1, 약 0.7:1, 약 0.75:1, 약 0.8:1, 약 0.85:1, 약 0.9:1, 약 0.95:1, 약 0.98:1, 약 1:1, 약 1.02:1, 약 1.05:1, 약 1.1:1, 약 1.15:1, 약 1.2:1, 약 1.25:1, 약 1.3:1, 약 1.35:1, 약 1.4:1, 약 1.45:1, 약 1.5:1, 약 1.55:1, 약 1.6:1, 약 1.65:1, 약 1.7:1, 약 1.75:1, 약 1.8:1, 약 1.85:1, 약 1.9:1, 약 1.95:1, 약 1.975:1, 약 1.98:1, 또는 약 2:1이다. 일 구현예에서, 스페이서 서열은 스페이서 서열의 양측에 있는 원형 폴리리보뉴클레오티드의 요소들 사이에 입체형태적 유연성을 제공하도록 구성된다.
일부 구현예에서, 원형 폴리리보뉴클레오티드는 하나 이상의 반복 요소를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 원형 폴리리보뉴클레오티드는 하나 이상의 변형을 포함한다. 일부 구현예에서, 원형 폴리리보뉴클레오티드는 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 또는 80%의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다.
원형 폴리리보뉴클레오티드는 표적, 예를 들어, 표적의 결합 모이어티에 대한 적어도 하나의 결합 부위를 포함할 수 있다. 원형 폴리리보뉴클레오티드는 표적에 결합하는 적어도 하나의 압타머 서열을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 원형 폴리리보뉴클레오티드는 하나 이상의 표적에 대한 하나 이상의 결합 부위를 포함한다. 표적은 핵산(예를 들어, RNA, DNA, RNA-DNA 하이브리드), 소분자(예를 들어, 약물, 형광단, 대사산물), 압타머, 폴리펩티드, 단백질, 지질, 탄수화물, 항체, 바이러스, 바이러스 입자, 막, 다성분 복합체(multi-component complex), 소기관, 세포, 다른 세포 모이어티, 이의 임의의 단편, 및 이들의 임의의 조합을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 원형 폴리리보뉴클레오티드는 단일 표적 또는 복수(예를 들어, 2 개 이상)의 표적에 대한 결합 부위를 포함한다. 일 구현예에서, 단일 원형 폴리리보뉴클레오티드는 단일 표적에 대해 2 개, 3 개, 4 개, 5 개, 6 개, 7 개, 8 개, 9 개, 10 개 이상의 상이한 결합 부위를 포함한다. 일 구현예에서, 단일 원형 폴리리보뉴클레오티드는 단일 표적에 대해 2 개, 3 개, 4 개, 5 개, 6 개, 7 개, 8 개, 9 개, 10 개 이상의 동일한 결합 부위를 포함한다. 일 구현예에서, 단일 원형 폴리리보뉴클레오티드는 하나 이상의 상이한 표적에 대해 2 개, 3 개, 4 개, 5 개, 6 개, 7 개, 8 개, 9 개, 10 개 이상의 상이한 결합 부위를 포함한다. 일 구현예에서, 2 개 이상의 표적은 표적의 혼합물 또는 라이브러리와 같은 샘플에 있고, 샘플은 2 개 이상의 표적에 결합하는 2 개 이상의 결합 부위를 포함하는 원형 폴리리보뉴클레오티드를 포함한다.
원형 리보뉴클레오티드 샘플의 가공에서, 제1 유체로부터 제2 유체로 원형 리보뉴클레오티드를 전달하는 것이 필요할 수 있으며, 여기서 제2 유체는 추가 가공, 제형화, 저장, 정제 등에 더 적합하다. 본 발명의 유체 교환은 원형 폴리리보뉴클레오티드를 갖는 필터를 포함하는 저장소를 비우지 않으면서 수행되어, 보다 손이 덜 가고 강력한 방법론을 제공할 수 있다. 일 구현예에서, 프로세스는 필터 자체의 과건조를 회피하기 위해 제어된 프로세스를 제공하기 위해 유체 감지 센서로 추가로 향상될 수 있다. 원형 폴리리보뉴클레오티드 샘플은 유체에 분포될 수 있다. 일 구현예에서, 유체는 액체 또는 기체이다. 일 구현예에서, 유체는 용액이다. 일 구현예에서, 용액은 완충제이다. 본 발명에서 사용되는 완충제는 안정한 pH 및/또는 안정한 구조에서 원형 폴리리보뉴클레오티드를 유지하는 임의의 수용액을 포함한다. 완충제는 조성물의 제형화에서의 용도를 위한 제형화 완충제, 조성물의 저장에서의 용도를 위한 저장 완충제, 및 정제의 용도를 위한 정제 완충제 등을 포함할 수 있다. 완충제는 소듐 시트레이트 완충제, 인산염-완충 염수(PBS), Tris-기반 완충제, 소듐 포스페이트, 물 등을 포함할 수 있다. 본 발명은 직렬로(예를 들어, 차례로 사용됨) 또는 병렬로(예를 들어, 함께 사용됨) 복수의 유체와 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 기성품 필터가 본 발명의 디바이스 및 시스템과 사용될 수 있다. 필터는 Amicon® Ultra Filters, Pierce™ Protein Concentrator PES 필터 등을 포함한다. 2 kDa 미만, 3 kDa, 20 kDa, 30 kDa, 50 kDa, 100 kDa, 200 kDa 등을 포함하지만, 이로 제한되지 않는 다양한 필터 공극 크기가 구상된다. 10 MWCO, 30 MWCO, 및 100 MWCO를 포함하지만, 이로 제한되지 않는 다양한 분자량 컷오프(MWCO)를 갖는 필터가 구상된다.
0.5 mg/mL 내지 2.0 mg/mL를 포함하지만, 이로 제한되지 않는 다양한 원형 폴리리보뉴클레오티드 농도가 구상된다.
1 mg 내지 200 mg, 예를 들어, 1 mg, 2 mg, 3 mg, 4 mg, 5 mg, 10 mg, 20 mg, 30 mg, 40 mg, 50 mg, 60 mg, 70 mg, 80 mg, 90 mg, 100 mg, 150 mg, 또는 200 mg을 포함하는, 제2 유체, 예컨대, 완충제로의 혼입을 위한 다양한 생성된 원형 폴리리보뉴클레오티드 중량이 구상된다.
도 1은 여액 챔버(104)와 폐기물 수집 챔버(105) 사이에 배치된 필터(102)를 갖는 저장소(103), 뿐만 아니라 압력 유입 포트(108)를 갖는 캡(106)을 포함하는 가압 디바이스(101)를 보여주며, 여기서 가압 디바이스는 양압 하에 있고, 압력은 압력 유입 포트(108)를 통해 가해진다. 가압 디바이스(101)는 저장소를 압력 공급부와 유체 소통하게 배치할 수 있는 유체 연결 구성요소(107)를 추가로 포함할 수 있다.
도 2는 여액 챔버(204)와 폐기물 수집 챔버(205) 사이에 배치된 필터(202)를 갖는 저장소(203), 뿐만 아니라 압력 유입 포트(208) 및 유체 유입 포트(209)를 갖는 캡(206)을 포함하는 가압 디바이스(201)의 교번 구현예를 보여주며, 여기서 가압 디바이스(201)는 양압 하에 있고, 압력은 압력 유입 포트(208)를 통해 가해지고; 새로운 유체가 여액 챔버(204)에 유체 유입 포트(209)를 통해 적용될 수 있다. 가압 디바이스(201)는 저장소를 압력 공급부와 유체 소통하게 배치할 수 있는 유체 연결 구성요소(207)를 추가로 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 캡은 압력 유입 포트를 포함한다. 압력 유입 포트는 유체 연결 구성요소에 의해 압력 공급부에 연결될 수 있다. 본원에 기재된 특정 디바이스, 방법, 및 시스템에서, 필터를 통해 유체를 강제하도록 압력 유입 포트를 통해 양압 공급부에 의해 양압이 가해질 수 있다. 원형 폴리리보뉴클레오티드의 유체 교환을 위해 10 PSI 내지 100 PSI, 예를 들어, 10 PSI 내지 20 PSI, 10 PSI 내지 25 PSI, 10 PSI 내지 30 PSI, 10 PSI 내지 40 PSI, 10 PSI 내지 50 PSI, 10 PSI 내지 60 PSI, 10 PSI 내지 70 PSI, 10 PSI 내지 80 PSI, 10 PSI 내지 90 PSI, 20 PSI 내지 25 PSI, 20 PSI 내지 30 PSI, 20 PSI 내지 40 PSI, 20 PSI 내지 50 PSI, 20 PSI 내지 60 PSI, 20 PSI 내지 70 PSI, 20 PSI 내지 75 PSI, 20 PSI 내지 80 PSI, 20 PSI 내지 90 PSI, 20 PSI 내지 100 PSI, 30 PSI 내지 40 PSI, 30 PSI 내지 50 PSI, 30 PSI 내지 60 PSI, 30 PSI 내지 70 PSI, 30 PSI 내지 75 PSI, 30 PSI 내지 80 PSI, 30 PSI 내지 90 PSI, 30 PSI 내지 100 PSI, 40 PSI 내지 50 PSI, 40 PSI 내지 60 PSI, 40 PSI 내지 70 PSI, 40 PSI 내지 75 PSI, 40 PSI 내지 80 PSI, 40 PSI 내지 90 PSI, 40 PSI 내지 100 PSI, 50 PSI 내지 60 PSI, 50 PSI 내지 70 PSI, 50 PSI 내지 75 PSI, 50 PSI 내지 80 PSI, 50 PSI 내지 90 PSI, 50 PSI 내지 100 PSI, 60 PSI 내지 70 PSI, 60 PSI 내지 75 PSI, 60 PSI 내지 80 PSI, 60 PSI 내지 90 PSI, 60 PSI 내지 100 PSI, 70 PSI 내지 75 PSI, 70 PSI 내지 80 PSI, 70 PSI 내지 90 PSI, 70 PSI 내지 100 PSI, 80 PSI 내지 90 PSI, 80 PSI 내지 100 PSI, 90 PSI 내지 100 PSI, 또는 약 10 PSI, 20 PSI, 30 PSI, 40 PSI, 50 PSI, 60 PSI, 65 PSI, 70 PSI, 80 PSI, 90 PSI, 또는 100 PSI를 포함하는 다양한 압력이 구상된다. 일 구현예에서, 압력 유입 포트(들) 및/또는 유체 유입 포트(들)를 갖는 캡은 가압을 견디기 위해 밀봉될 수 있다. 일 구현예에서, 본 발명의 저장소, 필터, 캡, 및 관련 유체 연결부는 가압을 견디기 위해 함께 연결되고, 예를 들어, 클램핑된다. 일 구현예에서, 금속 클램프는 본 발명의 디바이스 및 시스템을 함께 클램핑하는 데 사용될 수 있다.
양압은 일정 기간 동안 저장소에 걸쳐 유지될 수 있다. 저장소는 1 분 내지 수 시간 가압될 수 있다. 일 구현예에서, 저장소는 3 시간 미만 동안, 더욱 바람직하게는 1 시간 미만 동안 가압된다. 일 구현예에서, 저장소는 초기 유체 세척을 위해 10 분 미만 동안 가압되고, 이어지는 유체 세척을 위해 10 분 내지 55 분 동안 가압된다. 5 분 미만, 10 분, 15 분, 20 분, 30 분, 40 분, 45 분, 1 시간, 90 분, 2 시간, 3 시간, 10 분 내지 40 분, 20 분 내지 40 분, 30 분 내지 60 분 등을 포함하는 다양한 가압 여과 시간이 구상된다.
일부 구현예에서, 캡은 압력 유입 포트 이외에 유체 유입 포트를 포함한다. 일부 구현예에서, 캡은 복수의 유체 유입 포트, 예를 들어, 1 개 내지 3 개의 포트, 1 개 내지 5 개의 포트, 2 개 내지 5 개의 포트, 또는 1 개, 2 개, 3 개, 4 개, 5 개 등의 포트를 포함한다. 일부 구현예에서, 유체 유입 포트는 유체 공급부와 유체 소통할 수 있다. 일부 구현예에서, 다수의 유체가 동일한 유체 유입 포트 또는 상이한 유체 유입 포트를 통해 저장소에 첨가될 수 있다. 일부 구현예에서, 유체 유입 포트 이전에 유체 접합부가 있을 수 있고, 여기서 유체 접합부의 각각의 분지는 별도의 유체 공급부에 유체 연결된다. 일부 구현예에서, 유체 유입 포트 및 완충제 유입 포트는 동일한 포트이다. 유체 유입 포트는 연결 구성요소를 통해 유체 공급부에 연결될 수 있다. 일부 구현예에서, 연결 구성요소는 튜브일 수 있다. 일부 구현예에서, 튜빙은 일회용이어서, 유체의 멸균 전달 및 각각의 저장소로의 용리를 가능하게 한다.
폴리리보뉴클레오티드는 가압 후 필터로부터 제거될 수 있다. 폴리리보뉴클레오티드는 흡인을 통해 제거될 수 있고, 예를 들어, 필터 표면으로부터 흡인될 수 있다. 일부 구현예에서, 1 mg 내지 1000 mg, 예를 들어, 1 mg 내지 5 mg, 1 mg 내지 10 mg, 1 mg 내지 25 mg, 1 mg 내지 50 mg, 1 mg 내지 75 mg, 1 mg 내지 100 mg, 1 mg 내지 125 mg, 1 mg 내지 150 mg, 1 mg 내지 200 mg, 5 mg 내지 25 mg, 5 mg 내지 50 mg, 10 mg 내지 50 mg, 25 mg 내지 50 mg, 25 mg 내지 50 mg, 25 mg 내지 75 mg, 25 mg 내지 100 mg, 25 mg 내지 125 mg, 25 mg 내지 150 mg, 50 mg 내지 75 mg, 50 mg 내지 100 mg, 50 mg 내지 150 mg, 50 mg 내지 200 mg, 50 mg 내지 250 mg, 75 mg 내지 125 mg, 75 mg 내지 150 mg, 75 mg 내지 200 mg, 80 mg 내지 120 mg, 90 mg 내지 110 mg, 100 mg 내지 150 mg, 100 mg 내지 200 mg, 100 mg 내지 250 mg, 125 mg 내지 175 mg, 150 mg 내지 250 mg, 250 mg 내지 500 mg, 250 mg 내지 750 mg, 또는 500 mg 내지 1000 mg의 원형 폴리리보뉴클레오티드가 필터로부터 흡인된다.
본 발명의 일 구현예는 도 3a 내지 도 3c에서 확인되는 바와 같이, 적어도 하나의 포트(303)를 갖는 뚜껑(302), 필터를 갖는 복수의 샘플 저장소(305)를 갖는 필터 트레이(304), 및 폐기물 저장소(306)를 포함하는, 가압 시스템(301) 또는 가압 로봇 조립체이다. 일부 구현예에서, 가압 시스템은 병렬의 복수의 저장소, 예컨대, 2 개의 저장소 내지 24 개의 저장소, 바람직하게는 8 개의 저장소 내지 12 개의 저장소, 예를 들어, 8 개의 저장소 내지 10 개의 저장소, 10 개의 저장소 내지 12 개의 저장소, 또는 2 개, 3 개, 4 개, 5 개, 6 개, 7 개, 8 개, 9 개, 10 개, 11 개, 12 개, 13 개, 14 개, 15 개, 16 개, 17 개, 18 개, 19 개, 20 개 등의 저장소를 가공할 수 있다. 가압 시스템은 다양한 저장소 부피, 예를 들어, 50 mL 저장소와 15 mL 저장소 둘 모두로 구성된다. 일부 구현예에서, 가압 시스템은 로봇형 아암을 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 디바이스, 시스템, 및 방법은 복수의, 예컨대, 10 개 이상, 20 개 이상, 30 개 이상, 40 개 이상, 50 개 이상, 60 개 이상, 70 개 이상, 80 개 이상, 90 개 이상, 또는 100 개 이상의 원형 폴리리보뉴클레오티드 샘플을 가공하는 데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 복수의 가압 시스템, 예를 들어, 10 개 내지 12 개의 가압 시스템이 함께 사용된다.
일부 구현예에서, 본 발명의 디바이스 및 시스템은 센서를 포함한다. 센서는 액체 수준이 저장소에서 특정 수준으로 떨어질 때 가압을 중지시키기 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 액체 감지 센서는 광학 센서, 진동 센서, 초음파 센서, 플로트 센서, 커패시턴스 센서, 레이더 센서, 전도도 센서, 및 저항 센서로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 센서는 광학 센서이다.
일부 구현예에서, 본 발명의 디바이스 및 시스템은 가압으로 인한 저장소 크래킹과 같은 작업자 부상을 회피하기 위해 적어도 하나의 안전 구성요소 또는 적어도 하나의 안전 특징부를 포함한다. 예를 들어, 고압 구성요소, 예컨대, 고압을 견딜 수 있는 저장소 및 연결부, 또는 고정 구성요소, 예컨대, 클램프가 포함될 수 있다.
실시예
하기 실시예는 본 발명의 일부 구현예를 추가로 예시하기 위해 제공되지만, 본 발명의 범위를 제한하려는 것은 아니며; 당업자에게 공지된 다른 절차, 방법론, 또는 기술이 대안적으로 사용될 수 있음이 이들의 예시적인 성질에 의해 이해될 것이다.
실시예 1
이 실시예는 가압 디바이스의 용도를 입증하는 것이다.
도 2에 나타낸 바와 같이, 10 kDa의 필터 공극률을 갖는 Amicon® Ultra-15 필터가 양압을 이용한 완충제 교환을 위해 구성되었다. 도 1에 나타낸 바와 같이, Amicon® Ultra-15 필터와 사용하기 위한 압력 유입 포트를 갖는 캡이 제작되었다. 캡은 시스템이 더 높은 압력, 예를 들어, 15 PSI 초과를 견디는 것을 돕기 위해 밀봉 구성요소를 포함하였다. 양압 공급부에 연결하기 위한 구성요소의 시스템은 새로 장착된 캡을 갖는 Amicon® Ultra-15 필터를 포함하는 완충제 교환 디바이스를 가압하는 데 사용하기 위해 설계되었다.
원형 폴리리보뉴클레오티드의 완충제 교환을 위해, 먼저 압력 유입 포트를 갖는 캡을 제거하고, 100 mM TEAA 중 초기 완충제 5% 내지 10% 아세토니트릴의 용액에서 5 mL의 원형 폴리리보뉴클레오티드를 필터 위의 디바이스의 저장소 내에 분배한 후, 캡을 교체하였다. 15 PSI의 압력을 압축 공기를 사용하여 압력 유입 포트를 통해 저장소에 적용하여, 제1 완충제가 필터를 통해 폐기물 수집 영역으로 강제되고, 원형 폴리리보뉴클레오티드가 필터 상에 남아 있도록 하였다. 제1 가압에는 대략 4 분이 소요되었다. 이후 압축 공기를 끄고 캡을 서서히 열었다. 다음으로, 5 mL의 물을 필터 위의 저장소에 분배하고, 캡을 교체하고, 압력을 회복시켰다. 압력을 일시 중지하고, 캡을 제거하고, 제2 완충제를 첨가하고, 캡을 교체하고, 압력을 재개하는 프로세스를 제2 완충제를 이용한 총 6 회의 완충제 세척 동안 5 회 반복하였다. 후속 가압 여과는 5 분 내지 40 분이 소요되었다. 이어서, 캡을 열고, 하류 가공으로의 혼입을 위해 200 μL의 원형 폴리리보뉴클레오티드를 필터로부터 흡인하였다.
실시예 2
이 실시예는 가압 디바이스의 용도를 입증하는 것이다.
10 kDa의 필터 공극률을 갖는 Amicon® Ultra-30 필터 유닛은 원심분리와 대조적으로 가압을 사용하여 완충제 교환을 위해 구성되었다. Amicon® Ultra-30 필터 유닛과 사용하기 위한 압력 유입 포트를 갖는 캡이 제작되었다. 캡은 시스템이 더 높은 압력, 예를 들어, 65 PSI 초과를 견디는 것을 돕기 위해 밀봉 구성요소를 포함하였다. 양압 공급부에 연결하기 위한 구성요소의 시스템은 새로 장착된 캡을 갖는 Amicon® Ultra-30 필터 유닛을 포함하는 디바이스를 가압하는 데 사용하기 위해 설계되었다.
원형 폴리리보뉴클레오티드의 완충제 교환을 위해, 먼저 압력 유입 포트를 갖는 캡을 제거하고, 100 mM TEAA 중 5% 내지 10% 아세토니트릴의 용액에서 3.1 mg의 원형 폴리리보뉴클레오티드를 갖는 45 mL를 필터 위의 디바이스의 저장소에 분배한 후, 캡을 교체하였다. 65 PSI의 압력을 압력 유입 포트를 통해 저장소 내에 적용하여, 제1 완충제가 필터를 통해 폐기물 수집 영역으로 강제되고, 원형 폴리리보뉴클레오티드가 필터 상에 남아 있도록 하였다. 제1 가압 여과는 대략 4 분이 소요되었다. 이후 압력을 끄고 캡을 열었다. 다음으로, 10 mL의 소듐 시트레이트를 필터 위의 저장소에 첨가하고, 캡을 교체하고, 압력을 회복시켰다. 압력을 일시 중지하고, 캡을 제거하고, 제2 완충제를 첨가하고, 캡을 교체하고, 압력을 재개하는 프로세스를 제2 완충제를 이용한 총 6 회의 완충제 세척 동안 5 회 반복하였다. 후속 가압 여과는 35 분 내지 50 분이 소요되었다. 이어서, 캡을 열고, 하류 가공으로의 혼입을 위해 2 mg(1335 ng/μL)의 원형 폴리리보뉴클레오티드를 필터로부터 흡인하였다.
실시예 3
이 실시예는 가압 디바이스의 용도를 입증하는 것이다.
10 kDa의 필터 공극률을 갖는 Amicon® Ultra-15 필터가 원심분리와 대조적으로 가압을 사용하여 완충제 교환을 위해 구성되었다. 도 1에 나타낸 바와 같이, Amicon® Ultra-15 필터와 사용하기 위한 압력 유입 포트 및 완충제 유입 포트를 갖는 캡이 제작되었다. 캡은 시스템이 더 높은 압력, 예를 들어, 65 PSI 초과를 견디는 것을 돕기 위해 밀봉 구성요소를 포함하였다. 양압 공급부 및 완충제 공급부에 연결하기 위한 구성요소의 시스템은 완충제 교환 디바이스를 가압하고 새로운 완충제로 완충제 교환을 공급하는 데 사용하기 위해 설계되었다.
원형 폴리리보뉴클레오티드의 완충제 교환을 위해, 먼저 디바이스의 캡을 제거하고, 100 mM TEAA 중 5% 내지 10% 아세토니트릴에서 4 mg의 원형 폴리리보뉴클레오티드를 필터 위의 디바이스의 저장소에 분배한 후, 캡을 교체하였다. 65 PSI의 압력을 압력 유입 포트를 통해 저장소 내에 적용하여, 제1 완충제가 필터를 통해 폐기물 수집 영역으로 강제되고, 원형 폴리리보뉴클레오티드가 필터 상에 남아 있도록 하였다. 제1 가압 여과는 대략 12 분이 소요되었다. 이어서, 압력을 일시 중지한 후 15 mL의 소듐 시트레이트를 완충제 유입 포트를 통해 필터 위의 저장소에 첨가하고, 압력을 회복시켰다. 압력을 일시 중지하고, 완충제 유입 포트를 통해 제2 완충제를 첨가하고, 압력을 재개하는 프로세스를 제2 완충제를 이용한 총 6 회의 완충제 세척 동안 5 회 반복하였다. 후속 가압에는 18 분 내지 50 분이 소요되었다. 이어서, 캡을 열고, 하류 가공으로의 혼입을 위해 3.42 mg(1898.1 ng/μL)의 원형 폴리리보뉴클레오티드를 필터로부터 흡인하였다.
실시예 4
이 실시예는 자동 가압 디바이스의 용도를 입증하는 것이다.
10 kDa의 필터 공극률을 갖는 Amicon® Ultra-15 필터는 원심분리와 대조적으로 가압을 사용하여 자동 완충제 교환을 위해 구성될 수 있다. 도 1에 나타낸 바와 같이, Amicon® Ultra-15 필터와 사용하기 위한 압력 유입 포트 및 완충제 유입 포트를 갖는 캡이 제작되었다. 캡은 시스템이 더 높은 압력, 예를 들어, 60 PSI 초과를 견디는 것을 돕기 위해 밀봉 구성요소를 포함하였다. 양압 공급부 및 완충제 공급부에 연결하기 위한 구성요소의 시스템은 완충제 교환 디바이스를 가압하고 새로운 완충제로 완충제 교환을 공급하는 데 사용하도록 설계되었다. 디바이스는 추가로 유체 감지 센서를 포함하도록 구성될 수 있다.
완충제 교환은 프로세스가 액체 감지 센서의 사용을 통해 자동화되는 것을 제외하고는 실시예 1 또는 실시예 2의 프로세스를 따를 수 있다. 액체 감지 센서는 결정된 부피의 제1 또는 제2 완충제 또는 임의의 후속 완충제가 필터를 통해 폐기물 수집 영역으로 강제된 때를 감지한다. 필터 영역 위의 저장소에서 액체의 수준이 목표 수준에 도달하면, 압력이 일시 중지될 것이고, 사전결정된 부피의 제2 완충제가 필터 위의 저장소에 첨가될 수 있다. 이후 압력이 회복될 수 있다. 감지되는 목표 액체 수준에 대한 압력의 일시 중지, 제2 완충제의 첨가, 및 압력의 회복은 캡이 제거되고 필터 상의 원형 폴리뉴클레오티드가 제2 완충제 용액으로, 또는 제3 완충제 용액으로의 혼입을 위해 흡인되기 되기 전에, 제2 완충제를 이용한 총 6 회의 완충제 세척 동안 5 회 반복될 수 있다.
Claims (34)
- 원형 폴리리보뉴클레오티드를 가공하는 방법으로서, 방법은
(a) 여액 챔버와 폐기물 수집 챔버 사이에 배치된 필터를 포함하는 저장소를 포함하는 디바이스를 제공하는 단계로서, 저장소는 압력 유입 포트를 갖는 제거 가능한 캡을 추가로 포함하고; 디바이스는 압력 유입 포트를 통해 양압 공급부와 유체 소통하는, 단계;
(b) 여액 챔버에서 제1 유체 중의 원형 폴리보뉴클레오티드를 제공하는 단계;
(c) 저장소를 양압 공급부로 가압하는 단계로서, 제1 유체는 필터를 통과하고 원형 폴리리보뉴클레오티드는 필터를 통과하지 않는, 단계;
(d) 저장소에 제2 유체를 적용하는 단계; 및
(e) 저장소를 양압 공급부로 가압하는 단계로서, 제2 완충제는 필터를 통과하고 원형 폴리리보뉴클레오티드는 필터를 통과하지 않는, 단계
를 포함하는, 방법. - 제1항에 있어서, 단계 (d) 및 단계 (e)를 1 회 내지 5 회 반복하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, (f) 단계 (e) 후에 필터로부터 원형 폴리뉴클레오티드를 흡인하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
- 제3항에 있어서, 50 mg 내지 150 mg의 원형 폴리리보뉴클레오티드가 필터로부터 흡인되는, 방법.
- 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 유체는 캡에서 유체 유입 포트를 통해 적용되는, 방법.
- 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 유체 유입 포트는 유체 공급부와 유체 소통하는, 방법.
- 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 가압 단계 (c) 및 단계 (d)는 저장소를 10 PSI 내지 100 PSI로 가압하는 것을 포함하는, 방법.
- 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 적용 단계 (d)는 5 mL 내지 15 mL의 유체를 저장소에 적용하는 것을 포함하는, 방법.
- 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 유체 및/또는 제2 유체는 액체인, 방법.
- 제9항에 있어서, 액체는 용액인, 방법.
- 제10항에 있어서, 용액은 완충제인, 방법.
- 제11항에 있어서, 완충제는 제형화 완충제, 저장 완충제, 또는 정제 완충제인, 방법.
- 필터에 의해 분리된 여액 챔버 및 폐기물 수집 챔버를 포함하는 저장소를 포함하는 디바이스로서, 저장소는 압력 유입 포트와 접촉하는 제거 가능한 캡을 추가로 포함하고; 디바이스는 양압 공급부와 유체 소통하는, 디바이스.
- 제13항에 있어서, 저장소는 튜브인, 디바이스.
- 제14항에 있어서, 튜브는 원심분리 튜브인, 디바이스.
- 제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 여액 챔버는 펀넬형인, 디바이스.
- 제13항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 디바이스는 센서를 추가로 포함하는, 디바이스.
- 제17항에 있어서, 센서는 액체 감지 센서인, 디바이스.
- 제13항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 캡은 유체 유입 포트를 추가로 포함하는, 디바이스.
- 제13항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 저장소의 부피는 5 mL 내지 100 mL인, 디바이스.
- 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 여액 챔버의 부피는 5 mL 내지 15 mL인, 디바이스.
- 제13항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 필터는 2 kDa 내지 200 kDa인, 디바이스.
- 제13항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 여액 챔버 및 필터는 저장소 상에 적층되거나, 이에 나사로 고정되거나, 끼워지는, 디바이스.
- 제13항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 압력 유입 포트는 밀봉되는, 디바이스.
- 필터를 갖는 여액 챔버를 포함하는 샘플 저장소를 갖는 필터 트레이를 포함하는 시스템으로서, 필터 트레이는 압력 유입 포트를 갖는 뚜껑과 폐기물 저장소 사이에 배치되고, 압력 유입 포트는 양압 공급부와 유체 소통하는, 시스템.
- 제25항에 있어서, 여액 챔버는 펀넬형인, 시스템.
- 제25항 또는 제26항에 있어서, 여액 챔버의 부피는 5 mL 내지 15 mL인, 시스템.
- 제25항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 폐기물 저장소는 중력 또는 진공 배수구를 포함하는, 시스템.
- 제25항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 액체 감지 센서를 추가로 포함하는, 시스템.
- 제25항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 환기구를 추가로 포함하는, 시스템.
- 제25항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 필터 트레이, 뚜껑, 및 폐기물 저장소는 함께 밀봉 가능하게 연결되는, 시스템.
- 제25항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 여액 챔버는 샘플 저장소 상에 적층되거나, 이에 나사로 고정되거나, 끼워지는, 시스템.
- 제25항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 뚜껑은 유체 유입 포트를 추가로 포함하는, 시스템.
- 제25항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 필터 트레이는 복수의 샘플 저장소를 포함하는, 시스템.
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