CS237311B2

CS237311B2 - Processing of carboxyalkyldipeptide

Info

Publication number: CS237311B2
Application number: CS798645A
Authority: CS
Inventors: Arthur A Patchett; Elbert E Harris; Matthew J Wyvratt; Edward W Tristram
Original assignee: Merck & Co Inc
Priority date: 1978-12-11
Filing date: 1979-12-11
Publication date: 1985-07-16
Also published as: CA1302005C; FI793799A7; IE792382L; JPH032878B2; RO85072B; BG39466A3; EP0012401B1; BG39294A3; PT70542A; NO794010L; YU256782A; ZA796688B; US4374829A; NO151622C; AR231971A1; NO1995007I1; GR72251B; NL930008I2; BG39295A3; ES8101540A1

Description

Vynález se týká způscbu přípravy karboxyalkyldipeptidů obecného vzorce I

O Ri R3

II I I

R—c—c—NH—CH—

I

R2 (I) R-1 Rs O

I I I!

__C—N—С—C—Rg

II I

O R7 kde

R a R6 jsou stejné nebo rozdílné a znamenají hydroxyskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, dialkylaminoalkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylovém zbytku, acylaminoalkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylovém zbytku a 2 až 12 atomů uhlíku v acylovém zbytku, acyloxyalkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylovém zbytku a 2 až 12 atomů uhlíku v acylovém zbytku, aryloxyskupinu s alespoň 6 atomy uhlíku, aralkyloxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylovém zbytku a alespoň 6 atomy uhlíku v arylovém zbytku, substituovanou aryloxyskupinu s alespoň 6 atomy uhlíku nebo substituovanou araloxyskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylovém zbytku a alespoň 6 atomy uhlíku v arylovém zbytku, kde substituentem je metyl, halogen nebo methoxyskupina, aminoskupina, alkylaminoskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, dialkylaminoskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, arylkylaminoskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylovém zbytku a alespoň 6 atomy uhlíku v arylovém zbytku nebo hydroxyaminoskupinu,

Ri je vodík, alkyl s 1 až 20 atomy uhlíku, který zahrnuje rozvětvené acyklické skupíny, allyl, substituovaný alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, kde substituentem je halogen, hydroxyskupina, alkoxyskupina a 1 až 3 atomy uhlíku, aryloxyskupina s alespoň 6 atomy uhlíku, aminoskupina, alkylaminoskupina, dialkylaminoskupina s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylovém zbytku, acylaminoskupina se 2 až 12 atomy uhlíku, arylaminoskupina s alespoň 6 atomy uhlíku a guanidinoskupina, imidozolyl, indolyl, merkaptoskupina, alkylthioskupina s 1 až 3 atomy uhlíku, arylthioskupina s alespoň 6 atomy uhlíku, karboxyskupina, karboxamidoskupina, karbalkoxyskupina s 1 až 3 atomy uhlíku, fenyl, substituovaný fenyl, kde substituentem je alkyl s 1 až 3 atomy uhlíku, alkoxyskupina s 1 až 3 atomy uhlíku, nebo halogen, aralkyl s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylovém zbytku a alespoň 6 atomy uhlíku v arylovém zbytku nebo indolylalkyl a 1 až 3 atomy uhlíku v alkylovém zbytku, aralkenyl s 1 až 4 atomy uhlíku v alkenylovém zbytku a alespoň 6 atomy uhlíku v arylovém zbytku, substituovaný aralkyl s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylovém zbytku a alespoň 6 atomy uhlíku v arylovém zbytku, substituovaný indolylethyl, substituovaný aralkenyl s 1 až 3 atomy uhlíku v alkenylovém zbytku a alespoň 6 atomy uhlíku v arylovém zbytku, kde substituentem je halogen nebo dihalogen, alkyl s 1 až 3 atomy uhlíku, hydroxyskupina, alkoxyskupina s 1 až 3 atomy uhlíku, ami noskupina, aminomethyl, acylaminoskupina se 2 až 12 atomy uhlíku, dialkylaminoskupina s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylovém zbytku, alkylaminoskupina s 1 až 3 atomy uhlíku, karboxyl, halogenalkyl s 1 až 3 atomy uhlíku, kyanoskupina, nebo sulfonamidoskupina, aralkyl s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylovém zbytku a alespoň 6 atomy uhlíku v arylovém zbytku nebo indolylethyl, substituovaný na alkylové části aminoskupinou nebo acylaminoskupinou se 2 až 12 atomy uhlíku,

Rz znamená vodík nebo alkyl s 1 až 6 atomy uhlíku,

R2 znamená vodík,

R3 je vodík, alkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, fenylalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, aminomethyl-fenylalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, hydroxyfenylalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, hydroxyalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, acetylaminoalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, acylaminoalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylovém zbytku a 2 až 12 atomy uhlíku v acylovém zbytku, aminoalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, dimethylaminoalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, halogenalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, guanidinoalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, imidazolylalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku; indolylalkyl s až 6 atomy uhlíku, merkaptoalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku a alkylthioalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylovém zbytku,

R-i je vodík nebo alkyl s 1 až 6 atomy uhlíku,

Rs je vodík, alkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, fenyl, fenylalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, hydroxyfenylalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, hydroxyalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, aminoalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, aminoalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, guanidinoalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, imidazolylalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, indolylalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, merkaptoalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku nebo alkylthioalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylovém zbytku,

Ri a Rs jsou popřípadě spojeny dohromady к vytvoření alkylenového můstku se až 4 atomy uhlíku, alkylenového můstku se 2 až 3 atomy uhlíku a jedním atomem síry, alkylenového můstku se 3 až 4 atomy uhlíku obsahujícího dvojnou vazbu nebo alkylenového můstku se 2 až 4 atomy uhlíku substituovaného hydroxyskupinou s 1 až 6 atomy uhlíku nebo alkylem s 1 až 6 atomy uhlíku, a jejich farmaceuticky vhodných solí a biologicky účinného isomeru.

Alkylové skupiny s 1 až 6 atomy uhlíku nebo alkenylové skupiny s 1 až 6 atomy uhlíku zahrnují například methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, terebutyl, pentyl, isopentyl, hexyl nebo· vinyl, allyl, butenyl apod. Aralkylové· skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylovém zbytku a alespoň 6 atomy uhlíku v arylovém zbytku za hrnují například benzyl, p-methoxybenzyl apod. Halogen znamená chlor, brom, jod nebo fluor. Aryl představuje fenyl nebo naftyl. Heteroarylové skupiny zahrnují například pyridyl, thienyl, furyl, indolyl, benzthienyl, imidazolyl a thiazolyl.

Substituované alkylové zbytky substituentu Rt, R3 a Rs se znázorní skupinami jako

HO—CH2—,

HS—CHz—,

NzH-fCHžJi—,

CH3—S—(CH2)2—,

HzN— (CHzj—,

NH

H2N—C—NH—(CHz)3— a podobně.

Ri a Rs, když jsou spojeny atomem uhlíku a dusíku, ke kterému jsou připojeny, tvoří 4 až 6členný kruh, který mUže obsahovat jeden atom síry nebo dvojnou vazbu. Výhodné kruhy mají obecný vzorec

COOH kde Y je CHž, S nebo CHOCH3, nebo vzorec

COOH atomy uhlíku, acylaminoalkoxyskupina s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylovém zbytku a 2 až 12 atomy uhlíku v acylovém zbytku, acyloxyskupina s 2 až 12 atomy uhlíku, alkoxyskupina s 1 až 6 atomy uhlíku, kde substituentem je methyl, halogen nebo methoxyskupina,

Re je hydroxyskupina, nebo aminoskupina,

Rž a Rz je vodík,

Rs je alkyl s 1 až 6 atomy uhlíku nebo· aminoalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku,

R4 a Rs jsou spojeny a tvoří výhodné · kruhy jak je uvedeno výše, kde Y je CHž, S nebo· CH—OCHs,

Ri má výše definovaný význam.

Výhodnější sloučeniny jsou takové výhodné sloučeniny obecného vzorce I, kde

Rl je alkyl s 1 až 8 atomy uhlíku, substituovaný alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, kde substituentem je aminoskupina, arylthioskupina s alespoň 6. atomy uhlíku, aryloxyskupina s alespoň 6 atomy uhlíku nebo arylaminoskupina s alespoň 6 atomy uhlíku, aralkyl s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylovém zbytku a alespoň 6 atomy uhlíku v arylovém zbytku nebo indolylalkyl s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylovém zbytku nebo, substituovaný aralkyl (fenylalkyl nebo naftylalkyl) s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylovém zbytku a substituovaný indolylalkyl s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylovém zbytku, kde substituentem (y) je halogen, dihalogen, aminoskupina, aminoalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, hydroxyskupina, alkoxyskupina s 1 až 6 atomy uhlíku nebo· alkyl s 1 až 6 atomy uhlíku.

Nejvýhodnější jsou sloučeniny obecného vzorce I, kde

R je hydroxyskupina nebo alkoxyskupina s 1 až 6 atomy uhlíku,

R6 je hydroxyskupina,

Rz a Rz je vodík,

R3 je methyl nebo aminoalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku,

Ri a R 5 jsou spojeny atomem uhlíku a atomem dusíku a tvoří prolin, 4-thioprolln nebo 4-methoxyprolin,

Ri je alkyl s 1 až 18 atomy uhlíku, subVýhodné jsou sloučeniny obecného vzorce I, kde

R je hydroxyskupina, alkoxyskupina s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenoxyskupina s 1 až atomy uhlíku, aralkyloxyskupina s 1 až atomy uhlíku v alkylovém zbytku a alespoň 6 atomy uhlíku v arylovém zbytku, dialkylaminoskupina s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylovém zbytku, alkoxyskupina s 1 až 6 stituovaný alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, kds substituentem je aminoskupina, arylthioskupina s alespoň 6 atomy uhlíku nebo aryloxyskupina s alespoň 6 atomy uhlíku nebo indolylalkyl s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylovém zbytku, jako indolylethyl, nebo substituovaný aralkyl (fenylalkyl nebo naftylalkyl) s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylovém zbytku a substituovaný indolylethyl, kde substituentem (y) je halogen, dihalogen, aminoskupina, aminoalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, hydroxyskupina, alkoxyskupina s 1 až 6 atomy uhlíku nebo alkyl s 1 až 6 atomy uhlíku.

Výhodné, výhodnější a nejvýhodnější sloučeniny také zahrnují farmaceuticky vhodné soli.

Sloučeniny podle vynálezu jsou použitelné jako inhibitory konvertujícího enzymu a jako antihypertensiva.

Způsob přípravy sloučenin vzorce I se vyznačuje tím, že se nechá reagovat keton obecného vzorce II

O Ri

II I

R—С—C—O (II) kde

Ri a R? mají výše uvedený význam a Ri popřípadě zahrnuje ochranu reaktivních skupin ve významu pro Ri, s dipeptidem nebo chráněným dipeptidem obecného vzorce III

Rs O Rd Rs O

II I I

H2N—chc—n—c—c—Re

I r₇ (III) kde

Rs, Rd, Rs, R6 a R7 mají výše uvedený význam a Rs a Rs popřípadě zahrnují ochranu reaktivních skupin ve významu pro R3 a Rs, za přítomnosti redukčního činidla, potom se popřípadě ochranné skupiny odstraní a získá se produkt vzorce I a popřípadě se připraví jeho sůl a popřípadě se izoluje biologicky účinnější isomer chromatografií nebo frakční destilací.

Ketokyselina (nebo ester, amid nebo hyd· roxyamová kyselina) vzorce II se kondenzuje s dipeptidem vzorce III ve vodném roztoku, s výhodou téměř neutrálním, nebo ve vhodném organickém rozpouštědle (například CHsCN) za přítomnosti kyanoborahydridu sodného a získá se sloučenina obecného vzorce I (R2 = H). Nebo se může katalyticky redukovat přechodně vytvořená Schiffova báze, enamin nebo aminol za vzniku produktu vzorce I, například vodíkem za přítomnosti 10% paladia na uhlí nebo Raneyova niklu. Poměr vytvořených diastereomerních produktů se může měnit podle výběru katalyzátoru.

Jestliže R a Re je karboxylová ochranná skupina, jako alkoxy- nebo benzyloxyskupina nebo podobně, může se přeměnit známými způsoby, jako hydrolýzou nebo hydrogenací na sloučeninu obecného vzorce I, kde R a/nebo Rs je hydroxyskupina.

Výchozí látky vzorce I а II jsou známé v literatuře nebo se mohou připravit známými způsoby ze známých materiálů.

V produktech obecného vzorce I mohou být atomy uhlíku, ke kterým jsou Ri, R3 a R5 připojeny, asymetrické. Tudíž existují sloučeniny v diastereomerních formách nebo jejich směsích. Ve výše popsané syntéze se mohou použít racemáty, enantiomery nebo jejich směsích. Ve výše popsané syntéze se získají při syntetickém postupu diastereomerní produkty, mohou se tyto dělit běžnými chromatografickými metodami nebo metodami frakční krystalizace. Obecně jsou v S-konfiguraci výhodné částečné struktury, tjO Ri II I R—С—C—NH—

I

R2

Rs

I —NH—CHCO— a

Rí Rs O

I I II —n—c—c—*

I R7 aminokyseliny vzorce I.

Sloučeniny podle vynálezu tvoří soli s různými anorganickými a organickými kyselinami a zásadami, které jsou také zahrnuty do rozsahu vynálezu. Tyto soli zahrnují amonné soli, soli alkalického kovu, jako sodné a draselné soli (které jsou výhodné), soli kovu alkalických zemin, jako vápenaté a horečnaté soli, soli s organickými zásadami, například dicyklohexylaminové soli, N-methyl D-glukamin, soli s aminokyselinami, jako arginin, lysin apod. Také se mohou připravit soli s organickým a anorganickými kyselinami, například HC1, HBr, H2SO4, HsPOd, methansulfonovou, toluensulfonovou, maleinovou, fumarovou, kafrsulfonovou kyselinou. Výhodné jsou netoxické fyziologicky vhodné soli, ačkoliv jsou použitelné také jiné soli, např. při izolaci nebo čištění produktu.

Soli se mohou vytvořit běžnými způsoby, jako reakcí volné kyseliny nebo volné báze produktu s jedním nebo více ekvivalenty vhodné báze nebo kyseliny v rozpouštědle nebo prostředí, ve kterém je sůl nerozpustná, nebo v rozpouštědle, jako vadě, které se potom odstraní ve vakuu nebo sublimačním sušení nebo výměnou kationtu přítomné soli za jiný kation na vhodném iontoměniči.

Sloučeniny podle vynálezu inhibují enzym konveríující angiotensin a tak blokují konversí dekapeptidu angiotensinu I na cingiotensin II. Angiotensin II je účinná látka zvyšující krevní tlak. Účinek snižující krevní tlak se může odvozovat od inhibice jeho bio· syntézy, obzvláště u zvířat a lidí, jejichž hypertense je ovlivněna angiotensinem II. Dále odbourává konvertující enzym vasodepresorickou látku bradykinin. Proto· inhibitory enzymu konvertujícího angiotensin mohou snižovat krevní tlak také potenciací bradykininu. Ačkoliv se musí relativní význam těchto a dalších možných mechanismů potvrdit, jsou inhibitory enzymu konvertujícího angiotensin účinné antihypertensní látky na různých modelech zvířat a jsou použitelné klinicky, například u mnohých pacientů v humánní terapii s renovaskulární, maligní a esenciální hypertensí. Viz například D. W. Cushman et al., Biochemistry 16. 5484 (1977).

Zhodnocení inhibitorů konvertujícího enzymu je provedeno· ve zkoušce in vitro inhibice enzymu. Například použitelnou metodu uvedl Y. Piquilloud, A, Reinharz a M. Roth, Biochem. Biophys. Acta, 206, 136 (1970), podle které se měří hydrolýza karbobenzyloxyfenylalanylhistidinylleucinu. Hodnocení in vivo se například provádějí u krys s normálním tlakem, kterým se podává angiotensin I, podle techniky J. R. Weeks a J. A. Jonese, proč. soc. exp. biol. med., 104, 646 (1960) nebo na kodelu krys s vysokým obsahem reninu, jak uvádí S. Koletsky et al., Proč. Soc. Exp. Biol. Med., 125, 96 (1967).

Sloučeniny podle vynálezu jsou použitelné jako antihypertensiva při léčení hypertensních savců, včetně lidí, a mohou se podávat к dosažení snížení krevního tlaku formováním do směsí jako tablet, kapslí nebo elixírů pro parenterální podání. Sloučeniny podle vynálezu se mohou podávat pacientům (zvířatům a lidem) při potřebě tohoto léčení v dávkovém rozmezí 5 až 500 mg na pacienta při podávání několikrát za den, celková denní dávka je v rozmezí 5 až 2000 miligramů. Dávka se mění v závislosti na závažnosti onemocnění, hmotnosti pacienta a dalších faktorech, které určí lékař.

Také se mohou podávat sloučeniny podle vynálezu ve směsi s dalšími diuretiky nebo antihypertensivy. Typické jsou směsi, jejichž individuální denní dávky se pohybují od jedné pětiny minimálně doporučených klinických dávek do maximálně doporučených hladin pro stav, kdy jsou podávány jednotli vě. К ilustraci těchto směsí se může jedna antihypertensní látka podle vynálezu klinicky účinná v rozmezí 15 až 200 mg na den účine smísit při hladině v rozmezí 3 až 200 miligramů na den s následujícími antihypertensivy a diuretiky v daném rozmezí dávek na den:

hydrochlorthiazid (15 až 200 mg), chlorothiazid (125 až 2000 mg), ethakrynová kyselina (15 až 200 mg), amilorid (5 až 20 mg), furosemid (5 až 80 mg), propanolol (20 až 480 mg), timolol (5 až 50 mg) a methyldopa (65 až 2000 mg).

Kromě toho jsou směsi s třemi léky, jako hydrochlorthiazid (15 až 200 mg) plus amilorid (5 až 20 mg) plus inhibitor konvertujícího enzymu podle vynálezu (3 až 200 mg) nebo hydrochlorthiazid (15 až 200 mg) plus timolol (5 až 50 mg) plus inhibitor konvertujícího enzymu podle vynálezu (3 až 200 miligramů), účinné směsi při léčení vysokého krevního tlaku u hypertenzních pacientů. Výše uvedené rozmezí dávek se adjustuje na jednotkovém základě podle potřeby к dosažení rozdělení denní dávky.

Dávka se mění v závislosti na závažnosti onemocnění, hmotnosti pacienta a dalších faktorech, které zhodnotí lékařVýše uvedené směsi se formují do· farmaceutických přípravků, jak uvedeno dále.

Asi 10 až 500 mg sloučeniny nebo směsi sloučenin vzorce I nebo fyziologicky vhodné soli se smísí s fyziologicky vhodným vehikulem, nosičem, pomocnou látkou, pojivém, konzervační látkou, stabilizátorem, aromatickou látkou, atd., v jednotkové dávkové formě podle přijaté farmaceutické praxe. Množství aktivní látky v těchto směsích nebo přípravcích je takové, aby se dosáhly vhodné dávky v daném rozmezí.

Příkladem adjuvantů, které se mohou včlenit do tablet, kapslí apod., jsou následující látky: pojivo, jako tragant, arabská guma, kukuřičný škrob nebo želatina, pomocná látka, jako mikrokrystalická celulóza, rozvolňovadlo, jako kukuřičný škrob, předem želatinovaný škrob, kyselina alginová apod., kluzná látka, jako stearan horečnatý; sladidlo, jako sacharóza, laktóza nebo sacharin, aromatická látka, jako silice z máty peprné, libavková silice nebo třešňová silice. Když se použije jako jednotková dávková forma kapsle, může obsahovat kromě výše uvedených látek tekutý nosič, jako mastný olej. Různé další materiály mohou být obsaženy jako povlak nebo jiným způsobem modifikovat fyzikální formu dávkové jednotky. Například mohou být tablety potaženy šelakem, cukrem nebo obojím. Sirup nebo elixír může obsahovat účinnou složku, sacharózu jako sladidlo, methyl- a propylparaben jako konzervační látku, barvivo a aromatickou látku, jako iřeč iíovou nebo pomerančovou silici.

Sterilní směsi pro injekce se mohou formovat podle běžné farmaceutické praxe rozpuštěním nebo suspendováním účinné látky ve vehikulu, jako vodě pro injekci, přírodně se vyskytujícím rostlinném oleji, jako sezamovém oleji, kokosovém oleji, podzemnicovém oleji, bavlníkovém oleji atd., nebo syntetickém mastném vehikulu, jako ethyloleanu nebo podobně. Podle potřeby se mohou včlenit pufry, konzervační látky, antioxidační látky apod.

Způsob podle vynálezu objasňují následující příklady. Výhodné diastereomery těchto příkladů se · izolují . sloupcovou chromatografií nebo frakční krystalizaci.

Příklad 1

N-(l-karboxy-2-fenylethyl)-L-alanyl-L-prolin

Směs fenylpyrohroznové kyseliny (753 mg] a L-alanyl-L-prolinu (171 mg] ve směsi methanol-voda se upraví na pH 6,8 a působí se na ni při teplotě místnosti kyanoborohydridem sodným (173 mg], až je reakce skončena. Produkt se absorbuje na silném katexu a eluuje se 2% pyridinem ve vodě a získá se 294 mg surového diastereomerního· produktu, N-(l-karboxy-2-fenylethyl )-L-alanyl-L-prolinu. Produkt se čistí gelovou filtrací [LH-20] pro spektrografickou analýzu. NMR spektrum ukazuje široký singlet při 7,2, komplexní absorpci od 3,0 do ' 4,6, multiplet při 2,1 a pár dubletů při 1,5 ppm.

P ř í k 1 a d 2

N- (1-karboxyethyl ] -L-alanyl-L-prolin

Roztok L-alanyl-L-prolinu (372 mg) a pyrohroznové kyseliny (881 mg] ve vodě se upraví na pH 7 a při teplotě místnosti se přidá 377 mg kyanoborohydridu sodného, až je reakce skončena. Produkt se absorbuje na silně kyselém iontoměniči a potom se eluuje 2% ¹ pyridinem ve vodě. Sublimačním . sušením se získá 472 mg N-(l-karboxyehmotové spektrum potvrzují strukturu.

NMR spektrum ukazuje multiplety centrované při 4,5, 3,7 a 2,2 ppm a pár dubletů při 1,6 ppm.

Příklad 3 thyl]-L-alanyl-L-prolinu. Po chromatografickém čištění ukazuje hmotové spektrum vrcholy při 340 (molekulový iont], 322, 277, 249 a 226.

NMR spektrum ukazuje komplexní absorpci v rozmezí 4,8 a 3,6 a vrcholy při 2,2, 1,7 a 1,2 ppm.

Příklad 4

N- (l-karboxy-5-iiietliylhe xyl 1 -L-alan.yl-L-prolin

6-methy--2-oxoheptanová kyselina (0,90 gramu) a L-alanyl-!',-prolin (0,21 g) se nechají reagovat s kyanoborohydridem sodným (0,21 g), jak popsáno výše. Získá se bílá kyprá látka, N-(l-karbo.xy-5-methylhexyl)-L-alanyl-L-prolin (0,24 g). Po chromatografickém čištění ukazuje hmotové spektrum vrchol při 472 (disilylový derivát).

NMR spektrum ukazuje absorpci centrovanou při 4,5, 3,65, 2,0, 1,6, 1,3 a 0,85 ppm.

P ř í k 1 a d 5

N- (l-kerroxy-3-methylrutyl ] -L-alanyl-L-prolln

K 4-methyl-2-oxopenta,nové kyselině (1,29 gramu) a L-alanyl-L-prolinu (0,32 g) se přidá 0,32 g kyanoborohydridu sodného, jak popsáno· výše. Získá se bílá kyprá látka, N- (l-karboxy-S-methy lbutyl ] -L-alanyl-L-prolin (0,40 g). Produkt se čistí chromatograficky. Hmotové spektrum ukazuje vrchol · při 429 (molekulový ion disilylového derivátu minus methyl, 444-15).

NMR spektrum ukazuje resonance centrované při 4,4, ' 3,6, 2,1, 1,6 a 0,95 ppm.

Příklade

N-(l-karboxylroyyl)-p-olanyI-L-prolln

K 2-oxomáselné kyselině (1,02 g] a L-alanyl-L-prolinu (0,37 g) se ·přidá 0,38 g kyanoborohydridu sodného, jak popsáno výše. Získá se ' 0,42 g surového N-(l-karboxypropyl]-L-elanyl-L-prolinu. Produkt se čistí chromatografií pro spektrální analýzu. Hmotové spektrum ukazuje výrazné vrcholy při 254 (M-18) a 210 (M-62).

NMR spektrum ukazuje komplexní absorpci v rozmezí 4,5 až 3,4, multiplet při 2,0 a methylovou resonanci při 1,55 a 0,95 ppm.

Příklad 7

N- (l-karboxy-2-methylpropyl)-L-alanyl-L-prolin

Ke směsi sodné soli 3-methyl-2-oxomáselné kyseliny (1,46 g) a L-alanyl-L-prolinu se přidá 0,41 g kyanoborohydridu sodného, jak popsáno výše. Elucí iontorněniče se zísN- (l-karboxy-2-cyklohexylethyl) -L-alanyl-L-prolin

3-cyklohexyl-2-oxopropionová kyselina (cyklohexylpyrohroznová kyselina) (0,98 g] a L-alanyl-L-prolin (0,22 g] se podrobí reakci s kyanoborohydridem sodným (0,22 g), jak popsáno výše. Získá se 0.31 g slabě zabarvené látky, N-(l-karboxy-2-cyklohexyle237311 ká 0,45 g surového· N-(l-karboxy-2-methylpropylj-L-alanyl-L-prolinu. Produkt taje při

131 až 142 °C.

NMR spektrum ukazuje komplexní absorpci v oblasti 4,6 až 3,3, široký multiplet centrovaný při 2,2 a dublety při 1,65 a 1,1 ppm.

Příklad 8

N- (1,3-dikarboxypropyl) -L-alanylL-prolin

Ke 2-oxoglutarové kyselině (1,46 g] a L-alanyl-L-prolinu (0,37 g) se přidá 0,38 g kyanoborohydridu sodného, jak popsáno výše. Získá se surový N-( 1,í^cd ikarboxypropy 1 )-L-alanyl-L-prolin (0,47 g], teplota tání 140 až . 160°C. Hmotové spektrum silylovaného· materiálu ukazuje ion při 517 m/e ekvivalentní molekulovému iontu pro trisilylovaný derivát minus methyl (532-15).

NMR spektrum souhlasí se strukturou. Methylové resonance při 1,4 ppm.

Příklad 9

N- (1,4-dikarboxybutyl) -L-alanyl-L-prolin

K 2-oxoadipové kyselině (1,74 g) a L-alanyl-L-prolinu (0,41 g) se přidá 0,42 g kyanoborohydridu sodného, jak popsáno výše. Získá se surový N-( 1,4-dikarboxybutyl )-L-alanyl-L-prolin (0,35 g), teplota tání 106 až

132 °C. Nejvyšší vrchol ve hmotovém spektru je 312 odpovídající molekulovému iontu minus voda. Methylové resonance v NMR spektru ukazují pár dubletů při 1,55 ppm.

Příklad 10

N- (lckaгboxycJcmethylbutyl )-L-alanyl-Lcisoleucin

Roztok L-alanyl-L-isoleuclnu (150 mg) a sodné soli 4-methyl-2-oxopentanové kyseliny (564 mg) ve vodě se upraví na pH 7 a přidá se 140 mg kyanoborohydridu sodného při teplotě místnosti na několik dní. Reakce se zakončí silně kyselým iontoměničem, přidá se na kolonu stejné pryskyřice a eluuje se 2°/o pyridinem ve vodě. Sublimačním sušením se získá 200 mg (84,9 %) bílé kypré látky, N- (lckarboxyc3cmeΐhylbutyl) -L-alanyl-L-isoleuclnu. Hmotové spektrum ukazuje vrcholy při 460 pro dlsilylovaný derivát a 445 pro disilylový molekulový iont minus methyl (460-15).

NMR spektrum ukazuje široký dublet centrovaný při 0,95 ppm, komplexní absorpci v rozmezí 1,2 až 1,8 ppm a široký slabý singlet při 3,7 ppm.

Příklad 11

N- (l-kaI^,boxy-3cmethylbutyl) -L-alanyl-L-fenylalanin

Roztok L-alanyl-L-fenylalanínu (150 mg) a sodná sůl kyseliny 4-methylc2-oχopentac nové (483 mg] ve vodě se upraví na pH 7 a přidá se 120 mg kyanoborohydridu sodného při teplotě místnosti na několik dní. Reakce se skončí iontoměničem Doiwex 50 (H+), přidá se na kolonu stejné pryskyřice a eluuje se 2% pyridinem ve vodě. Sublimačním sušením se získá 197 mg (88,7 .%) bílé kypré látky, N-(l-·karboxyc3cmethylbutyl )-L-alanylcL--enylalarlinu. Hmotové spektrum ukazuje vrcholy při 551 pro trisilylový derivát minus methyl (566-14), 479 pro disilylový derivát minus methyl (494-15) a. 449 pro trisilylový derivát minus-COOTMS (566-117).

NMR spektrum ukazuje široké dublety při 0,95 a 1,5 ppm, komplexny slabou absorpci v rozmezí 2,8 · až 3,4 ppm a singlet při 7,1 ppm. Integrace je shodná se strukturou udávající charakteristický poměr aromatických a alifatických protonů.

Příklad 12 ‘

N-lkarbO'xymethyi-Lcalanyl·L-proИn

--------:.....

I

V .malé baňce vybavené pH elektrodou se smísí 1,05 g L-alanyl-L-prolinu a 1,2 ml 4 ' M NaOH. Přidá se 0,53 g chloroctové kyseliny v 1,2 ml 2 M NaOH, pH se upraví na 8 až 9, zahřívá se na 85 °C a pri se udržuje 15 minut na hodnotě 8 až 9 přidáváním hydroxidu sodného podle potřeby. Přidá se dalších 0,53 g chloroctové kyseliny a . potřebné množství hydroxidu sodného během 15 minut. Přidá se potřetí 0,53 g chloroctové kyseliny, pH se udržuje 15 minut na 8 až |9, dalších 15 minut se teplota udržuje na 85 °C a ochladí se.

Reakční směs se nechá projít kolonou Dowexu 50 (H+), promyje se vodou a eluuje se 2% pyridinem ve vodě. Spojí se frakce, které ukazují pozitivní ninhydrinovou reakci, koncentruje se ve vakuu na malý objem, a lyofilizuje se.

Tento materiál se rozpustí v několika ml vody a naplní se do kolony Dowexu 50 (Na⁺). Eluuje se 0,5 M kyselinou citrónovou upravenou hydroxidem sodným na pH 3,3. Žádaný produkt vystupuje prvý (ninhydrinová zkouška), dobře odlišený od nezreagovaného aianylproiinu. Frakce produktu se koncentruje ve vakuu na hmotnost asi 300 gramů.

Tento roztok se plní do kolony Dowexu 50 . (H+). Promyje se vodou, potom se produkt eluuje 2% pyridinem ve vodě. Produktová frakce se koncentruje ve vakuu na malý objem a lyofilizuje se. Získá se 417 mg N-karboxymethyl-LcalanylcLcprolmu.

NMR spektrum (DzO, MeOH vnitřní standard ):

1,58 ppm (d, J =- 6) s malou částí při

1,53 (d, J = 6) (celkem 3H), 1,77 — 2,68 (široký m, . 4H), 3,63 (s) nad 3,28 - 3,92 (m), [celkem 4H), - 4,05 . — . 4,72 (široký m,

2H) - překrývaný vrcholem . vody při 4,68.

Příklad 13

N- (1-karboxyethyi) -L-alanyl-L-prolin

Rozpustí se 45 g benzylpyrohroznanu a 4,5 g L-alaninu ve směsi 115 ml vody a 250 mililitrů p-dioxanu a pH se upraví hydroxidem sodným na 5,5. Přidá se 9,4 g kyanoborohydridu sodného a míchá se 6 dní při teplotě místnosti. Potom se pH upraví koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou na hodnotu 1.

Tento roztok se plní do kolony Dowexu 50 [H+) připraveného v 50'% směsi dioxan-voda. Promyje se 50% roztokem dioxan-voda, potom vodou. Produkt se eluuje 2% pyridinem ve vodě; frakce produktu se spojí a koncentrují se ve vakuu do sucha. Pevný zbytek se vykrývá vodou, filtruje se a promyje se vodou. Suší se a získá se 6,8 g N- (1-karbobenzoxyethyl ] -L-alaninu jako směs diastereolsomerů. Z matečného louhu se může získat další 1 g látky.

208 mg výše uvedeného produktu a 217 miligramů benzylesterhydrochloridu L-prolinu se rozpustí v suchém dimethylformamidu. Ochladí se na 0°C. Přidá se 0,193 ml difenylfosforylazidu rozpuštěného v dimethylformamidu. Potom se přikape během 10 minut roztok 0,24 ml triethylaminu v dimethylformamidu při udržování teploty 0 °C. Míchá se 3 hodiny při 0 °C, potom přes noc při teplotě místnosti.

Směs se rozředí ethylacetátem, promyje se vodou a 5% hydrogenuhličitanem sodným. Koncentruje se ve vakuu na malý objem a chromatografuje se preparativní chromatografií v tenké vrstvě na kysličníku křemičitém a vyvíjí se ethylacetátem. Seškrabe se široký pruh při Rf = 0,5 až 0,6, eluuje se ethylacetátem a odstraní se rozpouštědlo za vzniku 212 mg směsí diastereomerů benzylesteru N- (1-karbobenzoxyethyl j -L-alanyl-L-prolinu.

Rozpustí se - 135 mg výše uvedené látky ve směsi methanolu a vody. Přidá se 50 mg 10% paládía na uhlí jako katalyzátoru a hydrogenuje se při 3,92 MPa tlaku vodíku a teplotě místnosti. Filtruje - se, koncentruje se ve vakuu a lyofilizuje se za vzniku 95 mg směsi diastereoisomerů N-(1'karboxye1:hyl)-L-alanyl-L-prolinu.

NMR spektrum je srovnatelné se spektrem v příkladu 2 a hmotové spektrum stylovaného derivátu ukazuje stejně dělené útvary.

Příklad 14

N- (1-к arbox yethyl) -L-alanyl-L-prolin

0,75 g N-(1-karbobenzoxyethyl ]-alaninu se rozpustí - v pyridinu a přidá se 7,5 ml 1 M triethylaminu v pyridinu. Ochladí se a přidá se 1,09 g L-proiinbenzylesterhydroehloridu a 0,678 g dicyklohexylkarbodiimidu. Skladuje se 20 hodin při 0 °C. Filtruje se, potom se reakční směs koncentruje ve vakuu. Zbytek se rozpustí v ethylacetátu a tento roztok se promyje nasyceným roztokem uhličitanu draselného, potom solankou. Organická fáze se suší, koncentruje ve vakuu, potom se zbytek chromatografuje na silikagelu směsí ethylacetát-hexan a izoluje se diastereoisomerní směs N-( 1-karbobenzoxyethyl ) -alanyl-L-prolinu.

Hydrogenuje se obvyklým způsobem 10% paládiem na uhlí ve vodném ethanolu a . po zpracování a lyofilizaci se získá N-( 1-karboxyethyl J-L-alanyl-L-prolln jako bílá látka.

NMR spektrum (DžO) :1.,65 ppm (d, 6H),

1,9 — 2,6 (Μ, 4H), 3,5 — 4,2 [M, 3H), 4,3 až 4,8 (Μ, 2H).

Příklad 15

N- (1-karbomethoxyethyl j -alanyl-L-prolin

Neutralizuje se roztok 1,4 g methyl-L-alaninát-hydrochloridu a 3,1 g a-brompropionové kyseliny ve směsi diozan-voda s hydrochloridem sodným na pH 9. Zahřívá se na 70 °C a udržuje se po 30 minut, pH se udržuje na hodnotě 8 až 9 přidáváním hydroxidu sodného podle potřeby. Ochladí se, aplikuje se na kolonu iontoměniče Dowexu 50 (H+), promyje se vodou a eluuje se 2% pyridinem ve vodě. Frakce produktu se spojí a lyofilizují se. surový produkt se čistí chromatografií na iontoměničové koloně Dowexu 50 -(Na+) v 0,5 M pufru citranu sodného o pH 3,3. Frakce produktu se shromáždí, koncentrují se ve vakuu na malý objem a opakuje se chromatografie na Dowexu 50 (H+). Lyofilizaci produktových frakcí se získá čistý N-(l-karmomethoxyethyl]-alanin.

Tento meziprodukt se kopuluje s L-prolin-ttrc.butylesttrem za použití difenylfosforylazidu, jak popsáno v příkladu 13, potom se odstraní ttrc.butyltsttr rozpuštěním . v kyselině trifluoroctové při teplotě místnosti po dobu 3 hodin, kyselina trifluoroctová se oddestiluje a čistí se na koloně Dowex 50 (H+)-2'% pyridin, jak popsáno- výše a získá se N-( -1-karbomethoxyethyl )-alanyl-prolin jako směs ' diastertoisomerů.

Příklad 16

N- (l-methoxykarbonyl-3-methylthiopr opyl) -alanyl-L-prolin

Roztok pyruvoyl-L-prolinu . (185 mg), methylesteru L-methioninu (600 mg), a kyanoborohydridu sodného (200 mg) ve 20 ml methanolu se upraví zředěným methanolickým roztokem hydroxidu sodného do neu237311 trální reakce. Po třídenním stání při teplotě místnosti se produkt adsorbuje na silně kyselém iontoměniči a eluuje se 2% pyridinem ve vodě a získá se 80 mg produktu.

NMR spektrum ukazuje OCH3· při 3,95 í, S-CH3 při 2,2 δ a CH-CH3· při 1,55 a 1,7 δ. Hmotový spektrogram silylového materiálu ukazuje očekávaný molekulový ion při 404 m/e.

Příklad 17

N- [ 1 (S ] -karboxy-3-methylthiopr opyl ] -alanyl-L-prolin

Roztok N-[1(S j -methoxykarbonyl-3-methylthiopropyl ] -DL-alanyl-L-prolinu (127,5 miligramu; 0,384 mMj ve 2 ml vody se upraví pod dusíkem 7,82 ml 0,100 N hydroxidu sodného* (0,782 mM) a míchá se 21/2 hodiny při teplotě místnosti. Produkt se adsorbuje z reakční směsi na 30 ml Dowexu 50 (H+) a eluuje se 4% vodným roztokem pyridinu za vzniku 73,5 mg produktu, který se dále čistí na koloně LH-20 a získá se 55,7 miligramů produktu.

NMR spektru v D2O ukazuje S-CLh při 2,1; CH-CHs při 1,5 a 1,65 a žádný methylester. Hmotový spektrogram silylového materiálu ukazuje očekávaný molekulový ion při 462 m/e.

Příklad 18

N- [ l-methoxykarbonyl-2- (3-indolyl ]ethyl ] -alanyl-L-prolin

Stejným způsobem jako v příkladu 16 se methylestertryptofanu kondenzuje s pyruvoyl-L-prolinem za přítomnosti kyanoborohydridu sodného·, ze vzniku N-[l-methoxykarbonyl-2- (3-indolyl·) -ethyl ] -alanyl-L-prolinu.

NMR spektrum' v CDCI3 ukazuje aromatictickému jádru a přilehlé k dusíku při 2,8 ké protony při 6,9 až 7,7; přilehlé k aromaaž 3,9; alifatické methylenové protony při

1,4 2,,7 а alanin-rnethyl při 1,0 — 1,4. Hmotový spektrogram silylového materiálu ukazuje ion při 516 m/e ve shodě s disilylovaným materiálem majícím ztrátu CH3 skupiny.

Příklad 19

N- [ 1 (S )-karboxy-2- () ethyl j -DL-alanyl-L-prolin

Stejným způsobem jako' v příkladu 17 se výše uvedený produkt hydrolyzuje za vzniku očekávaného derivátu.

NMR spektrum v DžO-D2Pyr. ' ukazuje 5 aromatických protonů při 6,8 — 7,7; 7 protonů přilehlých k aromatickému jádru a přilehlých k dusíku při 2,8 — 7,4 a 7 alifatických protonů při 1,0 — 2,2 5 ve shodě s 0čekávanou strukturou. Hmotový spektrogram silylového materiálu ukazuje vrchol při 431 m/e interpretovaný jako protonovaný monosilylovaný ion mající ztrátu CH. skupiny.

Příklad 20

N- (l-karboxy-3-f enylpropyl ] -L-alanyl-L-4-thiazolidinkarboxylová kyselina

V methylenchloridu se smísí terc.Boc-alanin (1,8 gj a hydrochloridbenzylesteru-L-thiazolidin-4-karboxylové kyseliny (2,6 gj. Při 0 až 5°C se přidá 1,4 ml triethylaminu, potom DCC (2,3 gj v methylenchloridu a přes noc se uskladní. Po filtraci a promytí filtrátu vodou a roztokem hydrogenuhličitanu sodného se rozpouštědlo oddestiluje a chromatografuje na kysličníku křemičitém (G-60) v ethylacetátu-hexanu. Ze spojených frakcí produktu se rozpouštědlo odstraní ve vakuu. Benzylester se hydrolyzuje ve směsi acetonitril-voda při pH 13,5 (NaOHj po 1 hodinu při teplotě místnosti. Neutralizuje se ' kyselinou chlorovodíkovou na pH 8, promyje se esterem, vodná vrstva se koncentruje ve vakuu, lyofilizuje se, terc.butyloxykarbonylová ochranná skupina se odstraní v 4 M chlorovodíku v ethylacetátu, produkt se vysráží etherem, filtruje se a suší a získá se L-alanyl-L-thiazolidin-4-karboxylová kyselina; 0,385 g této kyseliny se kondenzuje s 1.88 g 2-oxo4--enylmáselné kyseliny ve vodě za použití 0,354 g kyanoborohydridu sodného' metodou popsanou v příkladu 2 a získá se 0,53 g směsi diastereomerů N-(l-karboxy-3-f enylpropyl )-L-alanyl-L-4-thiazolidinkarboxylové kyseliny.

NMR spektrum (D2O + NaOD] obsahuje rozdělený dublet při 1,2 ppm (3H), singlet při 7,1 (5H), širokou absorpci v oblasti 1,6 až 2,0 (2H)' široké ' násobné absorpce v rozmezí 2,2 — 4,1 ' a rozsáhlý vrchol vody při

4,6 ppm ' Hmotové spektrum snýtovaného materiálu ukazuje molekulový ion disilylovaného derivátu při m/e = 556.

Příklad 21

N- (l-karboxy-3-f enylpropyl j -L-alanyl-L-pipekolinová kyselina

Náhradou hydrochloridumethylesteru L-pipekolinové kyseliny (1,8 gj za thiazolidinkarboxylový ester podle příkladu 20 se může připravit žádaná sloučenina metodou popsanou v tomto příkladu.

NMR spektrum (CDjODj ukazuje široký multiulet při 1,3 — 1,9 ppm (9H), singlet při 7,22 (5h) a sérii multipletů v rozmezí 2,0 — 4,8 ppm. Hmotové spektrum silylovaného materiálu projevuje vrchol při m/e = — 580 pro disilylovaný molekulový ion.

Příklad 22

N- [ 1- (S j -ethoxykarbonyl-3-f enylpropyl ] -L-alanyl-L-prolin

Etliyl-2-oxo-4-fenylbutyrat (1,03 g) a L-alanyl-L-prolin (0,19 g) se rozpustí ve směsi ethanol-voda v poměru 1:1. Po kapkách při teplotě místnosti během dvou hodin se přidá roztok 0,19 g kyanoborohydridu sodnéhO' ve směsi ethanol-voda. Po skončené reakci se produkt adsorbuje na silně kyselém iontoměniči a eluuje se 2% pyridinem ve vodě. Frakce bohaté na produkt se lyofilizují a získá _ se 0,25 g surového N-(l-ethoxykarbonyl^-fenylpropylj-L-alanyl-L-prolinu.

Hmotové spektrum ukazuje molekulový ion · při 448 m/e pro monosilylovaný druh. Chromatografn se získá žádaný isomer.

P ř í k 1 a d 23

N- (l-k arb oxy-3-f enylpropy 1) -L-alanyl-L-4-hydroxyprolin

Kondenzuje se 2oxo-4-fenylmáselná kyselina a L-alanyl-L-4 hyclroxyprolin za přítomnosti kyanoborohydridu sodného· za vzniku N-(l-karboxy-3-eenyipropyl)-L-alany--L-4~hydroxyprolinu.

NMR spektrum v deuteromethanolu ukazuje dublet centrovaný při 1,53 ppm (3H), singlet při 7,13 (5H), sérii multipletů v rozmezí 2.0 — 4,7 ppm. Hmotové spektrum silylového materiálu ukazuje molekulový ion trisilylovaného produktu při m/e — 580.

P ř i k 1 a d · 24

N- (l-kar h ox y-3-f enylpropyl j-L-serinyl-L-prolin

Kondenzuje se 2-oxo-4-fenylmáselná kyselina a L-serinyl-L-prolin · za přítomnosti kyanoborohydridu sodného· za · vzniku N-(.l-karboxy-3-f enylpropyl j-L-serinyl-L-prolinu.

Hmotové · spektrum · · ukazuje · molekulový iont při 580 m/e pro· trisilylovaný druh.

NMR spektrum v DzO je shodné se strukturou.

Příklad 25

N- (l-karboxy-3-f enylpropyl} -L-fenylalanyl-L-prolin

Kondenzuje 2-0X0-4-^711^361^ kyselina a L-fenylalanyl-L-prolin za přítomnosti kyanoborohydridu sodného* za vzniku N-(l-karboxy-3-eenylpropyl) -L-f enylalanyl-L-prolinu.

Hmotové spektrum ukazuje ion při 406 m/e pro molekulový ion minus voda (424 až 18).

NMR spektrum v D2O je shodné se strukturou.

Příklad 26

N- (l-karb oxy-3- (3-indolyl Jpropyl (-L-alanyl-L-prolin

Kondenzuje 4- (3-indolyl) -2-oxomááelná kyselina a L-alanyl-L-prolin za přítomnosti kyanoborohydridu sodného za vzniku N-(l-karboxy-3-l 3-indolyl (propyl) -L-alanyl-Lprolinu.

Hmotové spektrum · trisilylovaného materiálu ukazuje molekulový ion při 603 m/e a M~ + 15 vrchol při 588 m/e.

Příklad 27

Směs 3,4-dehydroprolinu (2,3 g) terc.-L-alanin N-hy<droxysukcinimlidesteru (7,2 g) a uhličitanu sodného (2,5 g) ve směsi dioxan-voda se míchá přes noc při 0 °C. Neutralizuje se kyselinou chlorovodíkovou na pil

8. Koncentruje se ve vakuu na malý objem a lyofilizuje se; terc.Boc ochranná skupina se odstraní obvyklým způsobem trifluorcctovou kyselinou a chromatografuje se na Dowexu 50 [H+), eluuje se 2% pyridinem ve vodě, jak popsáno v příkladu 2. Dipeptid se izoluje lyofilizací. Tento produkt se kopuluje s kyselinou 2-keto-4-fenylmáselnou · a získá se produkt jako* směs , , diastereoisomerů.

Hmotové spektrum ukazuje molekulový ion při 490 m/e pro · disilylovaný druh.

Výše vyrobená diastereomerní směs (140 miligramů) se dělí na složky chromatografií na pryskyřici XAD-2. Hlavní složka (70 miligramů) opouští první kolou 1d = 143 ⁰(c — 1,3 methanol). Hm.otové spektrum každé složky ukazuje molekulový iont při 480 m/e pro ditrimethylsilylovaný druh.

Příklad 28

N-· (l-ethoxykarbonyl-34enylpropyl )-L- , -alanyl-L-prolin

Roztok L-alanyl-L-prolinu (7,7 g) · a ethyl 2-O'XO-4--eny1butyrátu (42,6 g) ve 140· · ml · ethanolu se míchá s 64 g práškovitého molekulárního síta 0,5 h při teplotě místnosti. Potom· se přidá pomalu během 6 hodin · roztok kyanoborohydridu sodného· (2,6 g) ve 40 ml ethanolu. Po odfiltrování síta · z reakční směsi se koncentruje ve vakuu na malý objem. Zbytek se rozdělí mezi CHCI3 a vodu, pH se upraví na 8,5 a CHCI3 vrstva se oddělí a odstraní. Vodná vrstva se okyselí na pH 2,7 a produkt se extrahuje do chloroformu. Chloroformový extrakt se suší síranem sodným a koncentruje se ve vakuu a získá se 10,4 g směsi diastereomerů. Vysokotlaká kapalinová chromatografie (PHLC) indikuje, že hlavní produkt je žádaný N-[l- (S )-ethooykarbonyl-3-eenylpropyl ] -L-alanyl-L-prolin.

NMR spektrum aromatické absorpce při

7,1 S a diastereomerní methyly jako multiplet centrovaný při 1,3 í.

Hmotové spektrum ukazuje molekulový ion při 376 m/e a vrchol při 358 m/e (M+

HžO). \

Příklad 29

Maleinová sůl N-(l/S)-ethoxykarbonyl-3fenylpropyl )-L-alanyl-L-prolinu

Roztok N- ( l-ethoxykarbonyl-3-fenylpropyl-L-prolinu, smíšených isomerů (13,3 g) v 69 ml acetonitrilu se smíchá s 4,25 g kyseliny maleinové v 69 ml acetonitrilu. Po hodinovém míchání při teplotě místnosti se pevná látka filtruje, promyje acetonitrilem a suší na vzduchu a získá se 8,4 g maleinové soli, teplota tání 141 až 145 °C; podle vysokotlaké kapalinové chromatografie cca 96% čistota. Surová maleinová sůl se překrystaluje z acetonitrilu a získá _ se 7,1 g maleinové soli N-[l(Sj-ethoxykarbony--3-fenylpropyl]-L-alanyl-L-prolinu, teplota tání 148 až 150 °C, podle vysokotlaké kapalinové chromatografie cca 99% čistota.

Příklad 30

A.

N- (l-ethoxykarbonyl-3-f enylpropyl )-L-alanyl-L-prolin

Směs 0,814 g L-alanyl-L-prolinu, 0,206 g ethyl 2-oxo d-fenylbtityrátu a 1,6 g molekulárního síta v 10 ml ethanolu se hydrogenuje při teplotě místnosti za tlaku 1,814 MPa s 0,1 g 10% Pd na uhlí jako katalyzátoru. Po doznělé absorpci vodíku se surový produkt získaný filtrací a koncentrací absorbuje na iontoměnlči, (DOVEX 50, H+j a eluuje se 2% pyridinem ve vodě a získá se 0,224 g N- (l-ethoxykarbonyl-3-fenylpropyl-L-alan.yl-L-prolinu. HPLC indikuje poměr isomerů 55 : 45.

B.

Maleinová sůl N-[lf(S)-ethoxykarbonylf -3-fenylpropyl ]-L-alanyl-L-pr olinu

Směs 3 g L-alanyl-L-prolinu, 5 g ethyl 2-oxo-4--enylbutanoiátu, 13 g 3A molekulárního · síta a 3,6 g Raneyova niklu v 85 ml ethanolu se hydrogenuje při 25 °C a při 3,922 MPa vodíku, dokud neustane adsorpce vodíku. Pevná látka se filtruje, promyje 80 ml ethanolu, filtráty se spojí. Zkouška vysokotlaké kapalinové chromatografie ukazuje poměr diastereoisomerů 87 : 13 ve prospěch žádaného produktu. Ethanol se odstraní ve vakuu a získá se olej, který se rozpustí v 60 ml vody a 20· ml ethylacetátu. pH míchané dvojfázové směsi se· upraví 50% hydroxidem sodným na 8,6. Vrstvy se oddělí a vodná fáze se extrahuje 2krát · 20 ml ethylacetátu. Vodná fáze se upraví kyselinou chlorovodíkovou na pH 4,25, 12 g chloridu sodného se rozpustí ve vodě a produkt se extrahuje 5krát 12 ml ethylacetátu. Extrakty se spojí a suší síranem sodným. Žádaný produkt, N- [ 1- (S) -ethoxykarbonyl-3-f enylpro pyl]-L-alanyl-L-prolin, krystaluje jako· maleinová sůl přídavkem 1,86 g maleinové kyseliny. Po 4 hodinách míchání se sůl filtruje, promyje · ethylacetátem a suší se za vzniku 5,2 g čistého produktu; teplota tání 150 až 551 °C.

Příklad 31

N- (l-benzyloxykarbonyl-3-fenylpr opyl) -L-alanyl-L-prolin

Roztok L-alanylDpro-linu (167 mg) a benzyl 2-oxx-4-feeylbulyrátu (1,20 g) v 5 ml ethanolu se míchá při teplotě místnosti s 3 g práškovitého molekulárního síta, typu 4A. Potom se přidá po částech během · 3 hodin 75 miligramů kyanoborohydridu sodného. Produkt se čistí absorpcí na silném katexu a eluuje se 2% pyridinem ve vodě. Po průchodu gelovou filtrační kolonou (LH-20) se získá 220 mg N-(l-benzyloxykarbonyl-3-f enylpropyl) -L-alanyl-L-prolinu jako směs isomerů. Chromatografie na silikagelu eluovaná 1 EtOAc, 1 n-butanol, 1 HžO, 1 HOAc ukazuje jednu hlavní skvrnu, Rf = 0,71. Isomery se dělí za použití reverzní fáze vysokotlaké kapalinové chromatografie a získá se N-(l(S) -benzyloxykarbonyL3-f enylpropyl ] -L-alanyl-L-prolin.

Podobným způsobem poskytne N-acetylaгlήnoethyL2-oχo-44’euylbulyrat a L-alanyl-L-prolin redukcí kyanoborohydridem sodným N-[ 1- (2-acetylamino) -ethoxykarbonyl-3-f enylpr opyl ] -L-alanyl-L-prolin.

Podobně se získá z dimethylaminoethyl2-oxío.---fenylbLllyrátιl a L-alanybL-prolinu N- [ 1- (2-dimethylamino) ethoxykarbonyl-3f enylpropyl ] -L-alanyl-L-prolin.

Podobně poskytne benzyl 2-oxo-5-methylhexanoát a L-alaiiyLL-prolin N-(l-benzyloxykarbonylf4-methylpentyl)-L-alanyl-L-prolín.

Hmotové spektrum silylovaného. materiálu · ukazuje vrcholy při 510 (M+, velmi slabé), 495 (M-15), 464, 420, 419, 385 a 296 m/e (nízký vrchol).

NMR · spektrum potvrzuje strukturu.

P ř í k 1 a · d 32

N- (l-butoxykaibjonyLb-f enylpropyl) -L-alanyl-L-prolin

Roztok N-benzyloxykarbonyl-L-alanyl-L-prolinu 3°biutylesteru. (452 mg) v 5 ml benzenu se hydrogenuje 150 mg 10% Pd na uhlí, aby se odstranila ochranná skupina dusíku. Po· filtraci a odpaření rozpouštědla se rozpustí L-alanyl-L-prolin 3°butylester v 8 ml tetrahydrofuranu a přidá se 1,41 g butyl 2-oxo-4-:fenyl butyrátu a 3 g práškovitého molekulárního· síta. Přidá se po částech během několika hodin 150 mg kyanoborohydridu sodného a směs sa míchá přes noc při teplotě · místnosti, Po filtraci a koncentraci

3 7 31 1 ve vakuu se přidá ke zbytku při teplotě místnosti 25 ml trifluoroctové kyseliny a nechá se působit 2 hodiny. Po odstranění kyseliny se produkt čistí adsorpcí na iontoměniči a gelovou filtrací (LH-20). Koncentrací a sušením frakcí bohatých na produkt se získá 182 mg N-(l-butoxykarbonyl-3-f enylpropyl )-L-alanyl-L-prolinu jako směs isomerů. Chromatografie v tenké vrstvě (silikagel, 1 EtOAc, 1 butanol, 1 H2O, 1 HOAc) ukazuje 2 skvrny, R_ř = 0,67 a 0,72. Hmotové spektrum ukazuje vrcholy při 548 (disilylovaný molekulový ion a 476 (monosilylovaný molekulový ion].

Isomery se dělí za použití reverzní fáze vysokotlaké kapalinové chromatografie a získá se N-[ 1 (S )-butoxy-karbonyl-3-f enylpropyl ] -L-alanyl-L-prolin.

Příklad 33

N- (l-ethoxykarbonyl-3-fenylpropyl) -L-alanyl-L-prolin-ethylester

Roztok 0,63 g N-(l-karboxy-3-f enylpropyl )-L-alanyl-L-prolinu v 9,7 ml ethanolu se nasytí plynným chlorovodíkem při 0 °C. Nechá se stát přes noc při teplotě místnosti, HC1 a ethanol se odstraní ve vakuu a získá se světležlutý olej, který se čistí gelovou filtrací (LH-20 kolona). Výtěžek ethylesteru N-(l-ethoxykarbonyl-3-fenylpropyl)-L-alanyl-L-prolinu je 0,39 g, jedna skvrna při chromatografii v tenké vrstvě.

NMR spektrum indikuje dvě ethylové skupiny na aromatický kruh. Hmotové spektrum ukazuje molekulový ion při 404 m/e.

P ř í к 1 a d 34

N- (l-karboxy-3-f enylpropyl) -L-alanyl-L-4a-methoxyprolin

Hydrochlorid methyl L-4a-methoxyprolinátu se připraví z L-hydroxyprolinu podle metody E. Adams et al., J, Biol. Chem., 208, (1954), esterifikací standardním způsobem methanolickým chlorovodíkem. Kopuluje se s Boc-L-alaninem v methylenchloridu s dicyklohexylkarbodiimidem, jak dříve popsáno, meziprodukt Boc-L-Ala-L-methoxy-ProOMe se čistí chromatografii na silikagelu za použití směsi ethylacetát : hexan 1:1 jako eluens. Ester se hydrolyzuje hydroxidem sodným ve směsi acetonitril-voda, pH se upraví na 7,5 lyofilizuje se a odstraní se ochranná skupina aminu obvyklým způsobem v 4 M chlorovodíku v ethylacetátu; 0,54 g tohoto L-alanyl-L-4a-methoxyprolinu se kondenzuje s 2,0 g 2-oxo-4-fenylmáselné kyseliny v 6 ml vody za použití 0,43 g kyanoborohydridu sodného způsobem popsaným v příkladu 24. Izolací popsanou v tomto příkladě se získá 0,92 g směsi diastereomerů N- (l-karboxy-3-fenylpropyl) -L-alanyl-L-4^-methoxyprolinu.

NMR spketrum v D2O ukazuje rozdělený dublet centrovaný při 1,58 ppm (3H), singlety při 3,37 (ЗН) a 7,35 ppm (5H), komplexní absorpci v oblasti 1,9 — 3,5 a široký multiplet 1,9 — 3,5 a široký multiplet 4,0 — 4,6 ppm.

Hmotové spektrum ukazuje výrazné vrcholy při M/e — 360 (M-18) a 256 (M-122).

Příklad 35

N- (l-benzylaminokarbonyl-3-f enylpropyl) -L-alanyl-L-prolin

Připraví se benzylamid 2-oxo-4-fenylmáselné kyseliny rozpuštěním 3,0 g této kyseliny, 2,4 ml benzylaminu a 4,7 ml difenylfosforylazidu v 60 ml studeného dimethylformamidu a přidáním po kapkách 2,6 ml triethylaminu v dimethylformamidu při udržování teploty při —10°C po dobu 2,5 hodiny. Skladuje se přes noc při teplotě místnosti, dimethylformamid se odstraní ve vakuu a zbytek se rozdělí do vody a ethylacetátu. Obsah organické vrstvy se chromatografuje na silikagelu, eluuje se směsí ethylacetátu ku hexan v poměru 1 : 4. Rozpouštědlo z produktových frakcí se odpaří a získá se 2,2 g krystalického N-benzyl-2-oxo-4-fenylbutyramidu; 1,26 g této sloučeniny se kopuluje s 0,19 g L-Ala-L-Pro za použití 0,125 gramu kyanoborohydridu sodného v ethanolu způsobem popsaným v příkladu 31. Surový produkt se čistí gelovou filtrací (LH-20) a získá se směs diastereoisomerů N-(1-benzylaminokarbonyl-3-f enylpropyl) -L-alanyl-L-prolinu.

NMR spektrum (CDCI3) ukazuje dublet při 1,1 ppm (3H), úzký pár singletů při 7,3 (10H), a komplexní absorpci při 1,6 — 2,3 (6H), 2,3 — 2,9 (2H), 2,9 — 3,8 (4H) a 4,0 až 4,6 (3H).

Hmotové spektrum silylovaného materiálu ukazuje výrazné vrcholy při m/e = 509 (monosilylový derivát) a 581 (disilylový derivát).

Příklad 36

N- (l-karboxy-3-f enylpropyl) -L-alanyl-L-N-methyl-fenylalanin

Náhradou methylesteru N-methyl-L-fenylalaninu za ester kyseliny thiazolidinkarboxylové podle příkladu 20 se připraví L-alanyl-N-methyl-L-fenylalanin; 0,85 g této látky se kondenzuje s 3,02 g 2-oxo-4-fenylmáselné kyseliny za použití 0,64 g kyanoborohydridu sodného ve vodě, jak popsáno. Směs se okyselí na pH 1,5 a extrahuje se etherem. Ether se oddestiluje, zbytek se rozpustí v 70% směsi methanol-voda a chromatografuje se na DOVEXU 50 (H ^b) upraveném v tomto. rozpouštědle, eluuje se roztokem 3% pyridinu ve stejné směsi rozpouštědel. Produktové frakce se spojí, koncentrují se, lyofilizují se a čistí se na LH-20 v methanolu a

3 7 311 získá se 0,54 g směsi isomerů N-(l-karboxy-3-f enylpropyi) -L-alanyl-L-N-methylfenylalaninu.

NMR spektrum (DžO, NaOD) ukazuje dublet centrovaný při 1,18 ppm (3H), dva překrývající se singlety při 2,95 (3H) a široké násobné adsorpce v rozmezí 1,4 — 2,1 a 2,3 až 4,4. Hmotové spektrum silylovaného materiálu ukazuje molekulový ion disilylovaného materiálu při m/e = 556.

Příklad 37

N- (l-ethoxykarbonyl-3-fenylpropyl) -L-alanyl-L-prolinamid

L-alanyl-L-prolinamid se připraví kopulací terc.Boc-L-alaninu s L-prolinamidem metodou za použití dicykloheoylkarbodiimidu ve směsi methylechlorid : dimethylformamid v poměru 4 : 1. Meziprodukt terc.Boc-L-aianin-L-prolin-NH2 se čistí chromatografii na LH-20 v methanolu, polom se odstraní terc.-Boc ochranná skupina v 4 M HC1 v ethylacetátu; 0,5 g této látky L-alanin-L-prolin-NH2. LICÍ v 10 ml absolutního ethanolu neutralizovaného ekvivalentním množstvím triethylaminu se kopuluje s 2,4 g ethyl 2-oxo-4-fenylbutyrátu za použití molekulárního síta a 0,30 g kyancborohydridu sodného. Produkt je obsažen v chloroformovém extraktu při pH 8,5; koncentruje se ve vakuu, rozpustí se v 50% směsi ethanol-voda, chromatografuje se na Dovewu 50 [H+) v 50% směsi ethanol-voda a eluuje se dvouprocentním pyridinem v tamto rozpouštědle. Produktové frakce se spojí a čistí dále chromatografií na LH-20 v methanolu. Rozpouštědlo se oddestiluje ve vakuu a získá se 0,40 gramu N-(l-ethoxykarbonyl-3-f enylpropyi)-L-alanyl-L-prolinamidu jako směs diastereoisomerů.

NMR spektrum (CDClsj ukazuje triplet překrývající dublet při 1,1 — 1,5 ppm (6H), sérii 5 multipletů v rozmezí 1,5 — 4,7 ppm (15 H) a singlet při 7,17 ppm (5H). Hmotové spektrum silylovaného materiálu ukazuje výrazné vrcholy při m/e .= 477 (monosilylový derivát) a 519 (disilylový derivát).

Příklad 38

N-(l-karboxy-3-f enylpropyi )-L-alanyl-L-prolinamid

L-alanyl-L-prolinamid, připravený jako v příkladu 37, se kopuluje s 2-oxo-4-fenylmáselnou kyselinou za použití kyanoborohydridu sodného, 50% směsi ethanol-voda způsobem popsaným v příkladu 2. Po eluci z iontoměniče se koncentruje ve vakuu na malý objem, propláchne vodou a lyofilizuje se za vzniku N-(l-karboxy-3-fenylpropyi )-L-alanyl-L-prolinamidu jako směsi diastereoisomerů.

NMR spektrum ukazuje aromatickou ab sorpci při 735 $ a pár dublet pro diastereomerní methyly při 1,55 á.

Příklad 39

N- [ 1 (S) -hydroxyaminokarbonyl-3-fenylpropyl ] -L-alanyl-L-prolin

Ke studenému roztoku 0,19 g maleinové soli N-(l^-^1^t^c^x^yka^i^t^o^r^y^]^-3-fenylpropyi )-L-alanyl-L-prolinu v 1 ml ethanolu se přidá 0,85 g hydroxidu draselného v 0.57 ml ethanolu. Potom se přidá po kapkách suspenze 0,07 g hydroxylammhydгcchioridu v 0,9 ml ethanolu obsahujícím 0,060 g hydroxidu draselného, 2 hodiny se nechá na ledové lázni, potom přes noc při teplotě místnosti. Látka plovoucí na povrchu se dekantuje, zředí se 10 ml vody, pH se upraví kyselinou chlorovodíkovou na 2,5 a promyje se chloroformem. Neutralizuje se a lyofilizuje se vodná vrstva a čistí se chromatografii na pryskyřici XAD-2 ve spádu 0,1 M hydroxidem amonným. methanolem a získá se N-(l-(S)-hydroxyaminokarbonyl-3-f enylpropyi) -L-alanyl-L-prolin.

Hmotové spektrum silylovaného materiálu ukazuje ion při m/e —- 579 pro trisilylovaný derivát a NMR spektrum je shodné se strukturou.

Příklad 40

N- (1-karbo.. y-3-methylbutyl )-L-alanyl-L-tryptofan

Roztok sodné soli 4-methyl-2-oxopentanové kyseliny (414 mg) a L-alanyl-L-tryptofanu (150 mg) ve vodě se upraví hydroxidem sodným na pH 7 a nechá se působit 103 mg kyanoborohydrídu sodného při teplotě místnosti po několik dní. Produkt se adsorbuje na silně kyselém iontoměniči a eluuje sa 2% pyridinem ve vodě. Frakce bohaté na produkt se lycíilizují a získá se 189 miligramů kypré bílé látky. Hmotové spektrum ukazuje molekulový ion při 389 m/e a vrcholy při 187 m/e a 158 m/e pro tyto zbytk_y:

CHs i

CH—CHs i

CH2 СНз

I 1

HOžQ—CH—NH—CH

NMR spektrum v D2O je shodné se strukturou.

Příklad 41

N- (l-karboxy-3-methylbutyl) -L-histidyl-L-leucin

Způsobem popsaným v příkladu 40 se kondenzuje 4-:^m^'thyl-2-(^:xox^(^i^nt'anová kyselina a L-histidyl-L-leucin za přítomností kyanoborohydridu sodného a získá se N-(l-karboxy-3-methylbutyl)-L-histidyl-L-leucin. V tomto případě se produkt eluje z iontoměniče 10% amoniakem. Hmotové spektrum ukazuje molekulový ion při 408 m/e pro disilylovaný druh minus 18.

NMR spektrum souhlasí se strukturou.

Příklad 42

N- [ l-karboxy-3-met.hylb utyl) -L-fenylalanyl-L-arginin

Způsobem popsaným v příkladu 40 se kondenzuje 4-:^m^thyl-2-(^:^oip^]^Ttanová kyselina a L-fenylalanyl-L-arginin za přítomnosti kyanoborohydridu sodného a získá se N-(l-karboxy-3-methylbutyl) -L-fenylalanyl-Larginin. Produkt se eluuje z iontoměniče 10% amoniakem. NMR spektrum souhlasí se strukturou.

NMR spektrum v DzO dává singlety při 7,2 8 (-5H) , široký triplet centrovaný př i 3,0 delta (6H, široký multiplet při , 1,3 5 (6H) a široký dublet při 0,9 δ (ΘΗ).

P říklad 43

N-(kkarboxy-3-fenylpropyl] -L-3-fluoralanyl-L-prolin

K roztoku L-341uoralaninu (420 mg] ve 4 ml směsi aceton-voda (1:1) se přidá triethylamin (590 mg) a 2-terc.butoxykarbonyloximino-2-fenylaceltonitril (1,060 g). Směs se míchá 2,5 hodiny. Přidá se studený 5% vodný roztok hydrogenuhličitanu draselného a směs se extrahuje ethylacetátem. Vodná fáze se okyselí studenou 1 N chlorovodíkovou kyselinou a extrahuje se ethylacetátem. Poslední extrakt se promyje nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, suší se síranem sodným a koncentruje se do sucha a získá se ^θ^.Β0ϋ--3ί1ηΓίΓίΐ^nin (800 mg) t. t. 91 až 93 °C.

K míchanému roztoku poslední sloučeniny (800 mg) a benzylesteru prolinu (1,5 g) v methylenchloridu (8 ml) při 0°C₅ se přidá dicyklohexylkarbodiimid (845 mg) v methylenchloridu (6 mg) a směs se udržuje 2 hodiny při 0 °C a 18 hodin při 20 °C. Směs se filtruje, sraženina se promyje methylenchloridem a spojený filtrát a promývací vody se extrahují studenou 1 N chlorovodíkovou kyselinou, studeným 5% vodným roztokem hydrogenuhličitanu draselného, nasy ceným vodným roztokem chloridu ' sodného, suší se síranem sodným a koncentruje se do sucha. Suchou sloupcovou chtrmatografii na silikagelu, elucí 6% acetonem v chloroformu se získá čistý chráněný dipeptid.

Terc.boc skupina se odstraní působením 4 N chlorovodíku v ethylacetátu (8 ml) při 0 °C po 1 hodinu. Přidá se ether (~20 ml) a vysrážený L^-^-^-^f^l^t^o^alanyl-L-prolin-benz^y]^estethydtrchlrrid (450 mg), teplota ' tání 158 až 161 °C, se odfiltruje. Hydrogenací v 6 ml vody a 2 ml ethanolu na 60 mg 10% paládia na uhlí při 0,098 MPa a 20 °C po 90 minut a následující filtrací a koncentrací do sucha se získá 330 mg L^-^-^D^l^í^i^alanyl-L-prolinhydrochloridu. Hmotové spektrum ukazuje molekulový ion při 348 m/e pro ditnmethylsilylovaný druh.

Ke směsi 4-fenyl-2-oxomáselné kyseliny (375 mg) a L·-11uoгalany]-L-prolinhydrochloridu (100 mg) ve 3 ml vody (pH upravené hydroxidem sodným na 7) se přidá kyanoborohydrid sodný (80 mg). Směs se míchá 20 hodin a zpracuje se jak popsáno, v příkladu 24.

N- (l-ethoxykarbonyl-3-f enylpropyl) -L-3-fluoralanyl-L-prolin se připraví jak popsáno v příkladu 26.

Příklad 44

N ,- (1-ethoxykar bonyl-3-f eny lpropyl) -L-alanyl-L-3,4-cl ehydroprolin

Postupem podle příkladu 22 se převede L-alanyl-L-S^-dehydroprolin připravený jako v příkladu 37 na N-(l-ethoxykarbonyl-3-f enylpropyl) -L-alanyl- L-3,4-dehydropr olin jako dvousložková diasteteometní směs, podle chromatografie na tenké vrstvě na silikagelové desce, Rf = 0,82 (hlavní) a Rf = — 0,79 (menší), dva vyvíjecí systémy ' 4:1: : 1-n-butanol : voda : kyselina octová. Hmotové spektrum ukazuje molekulový ion při 518 m/e pro ditrimethylsilylovaný · druh.

Příklad 45

Ν- [ 1 (S) -methoxykarbonyl-2- (lH-imidazol-5-yl) ethyl ] -DL-alanyl-L-prolin

Způsobem popsaným v příkladu 16 se kondenzuje methylester L-histidinu s pyruvoyl-L-prolinem za přítomnosti kyanoborohydridu sodného a získá se N-[l-methoxykarbonyl-2- (lH-imidazol-4-yl) ethyl ] -DL-alanyl-L-prolin.

NMR spektrum v D2O ukazuje imidazolové protony , při 8,6 a 7,3; protony přiléhojící k imidazolu a methylesterové protony při 3,7 a alanylmethyl při 1,1 — 1,38.

Příklad 46

N- [ 1 (S) -karboxy-2- (lH-imidazol-4-yl) -ethyl ] -DL-alanyl-L-prolřn

3 7 311

Stejným způsobem jako v příkladu 18 se hydrolyzuje produkt z příkladu 43 a získá se očekávaný derivát.

NMR spektrum v DiO ukazuje imidazolové protony při 7,2 a 8,5; a alaninmetliyl při 1,25 á.

Příklad 47

N- [1(S) -ethoxykarbonyl-5-aminopenty i) -D,L-alanyl-L~prolin

Roztok hydrochloridu ε-benzyloxykarbonyl-L-lysin-ethylesteru [2,94 g) ve vodě (10 mililitrů) se zalkalizuje 15 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitauu draselného a extrahuje se CH:Ch. Estrakt se suší síranem horečnatým a koncentruje se do sucha. Zbytek, s-benzyloxybarbonyl-L-lysin-ethylester, se rozpustí v tetrahydrjfuranu (20 ml) a přidá se pyruvoylprolin (555 miligramů) a práškovité molekulární síto č. 4A (1,0 g). Směs se míchá 4 hodiny při teplotě místnosti. Během dvou hodin se přidá 630 mg kyanoborohydridu sodného v 1 mililitru СНзОН a směs se míchá přes noc. Potom se filtruje, koncentruje do sucha a zbytek se rozdělí do 10 ml vody a 15 ml CH_ÓC12 (15 ml). Vodná fáze se adsorbuje na silně kyselém iontoměniči a eluuje se 4% pyridinem ve vodě a získá se 470 mg N-[1(S)-ethoxykarbonyl’5-benzyloxykarbonylaminopentyl]-D,L-alanyl-L-prolinu. Ochranná skupina se odstraní hydrogenací ve směsi ethanol-voda v poměru 1 : 1 na 10% paládiu na uhlí jako katalyzátoru při 3,922 MPa. Směs se filtruje a filtrát se odpaří do sucha. Zbytek v methanolu se chromatografuje na koloně LH-20 a získá se žádaný N-[1(S)-ethoxykarbonyl-5-amino-ponzyl ] -D,L-alanyl-L-prolin.

NMR spektrum (DaO) a hmotové spektrum následující trimethylsilylace potvrzuje strukturu. Hmotové spektrum silylového materiálu dává vrchol při 559 m/e pro trisilylovaný derivát a vrchol při 487 m/e pro disilylovaný derivát.

Příklad 48

N- (1 (S) -karboxy-5-aminopenty 1 ] -L -alanyl-L-prolin

N-[1 (S)-ethOixykarbonyl-5~benzylO'Xykarbonylaminopentyl ] -D,L-alanyl-L-prolin, připravený jako v příkladu 47, se nechá reagovat s 0,1 M NaOH přes noc při teplotě místnosti. Po adsorpci produktu na silně kyselém iontoměniči se eluuje 4% pyridinem ve vodě a získá se N-[l(S)-karboxy-5-benzyloxykarbonylaminopentyl]-D,L-alanyl-L-prolin, podle chromátografie na tenké vrstvě jediná skvrna (R_ř = 0,4 — butanol : voda : pyridin : kyselina octová 10 : 4 : 3 : 1). Stejným způsobem jako v příkladu 47 se odstraní ochranná skupina hydrogenací a získá se N- [ 1 (S) -karboxy-5-aminopentyl ] -D,L-alanyl-L-prolin. Hmotové spektrum trimethylsilylovaného produktu je v souhlase se strukturou, vrchol při 531 m/e. ehromatografií se získá žádaný isomer.

Příklad 49

Benzy] 2-oxo-7-ftaliminoheptanoált (připraný alkylací benzyl l,3~dithian-2-karboxylátu

5-ftalimido-pentylbromíde a následující oxidační přeměnou na keton N-bromsukcinimidem), se kondenzuje s L-alanyl-L-pr slinem za přítomnosti přebytku NaBHLCN. Kondenzační produkt, N-(l-benzyloxykarbonyl-6-ftalimidohexyl)-L-alanyl-L-prolin, (390 mg), v 25 ml 50% vodného ethanolu se hydrogenuje při 3.922 MPa na 10% paládiu na uhlí. Odstraněním rozpouštědla a katalyzátoru se získá N-(14<arbc<xy-6-ftalimidohexyl)Hj-alanyl-L-prolm (320 mg] mající očekávané spektrální a chromatografické vlastnosti; 152 mg výše uvedeného meziproduktu ve 2 mililitrech ethanolu se zahřívá pod zpětným chladičem s hydrazioem (32 mg) pa 1,5 hodiny. Ftalhydrazid se odstraní filtrací, ethanol se odstraní ve vakuu a zbytek se adsorbuje na silně kyselém iontoměniči. Elucí 2% vodným pyridinem a lyofilizací se získá žádaný N-(l-karboxy-6-aminohe ,.y)-L-alanyl-L-prolin (58 mg). Spektrální údaje souhlasí se strukturou. Hmotové spektrum ukazuje vrchol při 311 pro molekulový iont minus voda (329-13).

Příklad 50

N- (l-benzyloxykarbonyl-6-aminohexyl) -L-alanyl-L-prolin

Provedením hydrazinolýzy, jak popsáno v příkladu.49, s N-(l-benzyloxykarbonyl-6-ftalimidohexyl )-L-alanyl-L~prolinem se získá směs, ze které se isoluje N-(l-benzyloxykarbonyl-6-amin.ohexyl )-L-alanyl-L-prolm.

Chromátografie na tenké vrstvě na silikagelu se směsí 50 BuOH: 11 HOAc: 30 НЮ dává skvrna R_ř = 0,32.

P ř í к 1 a d 51

N- (l-karboxy-2-f enoxyethyl) -L-alanyl-L-prolin

Kaše fenoxypyroliroznové kyseliny (1,8 g) (připravená kondenzací ethylfenoxyacetátu s dieťhyloxalátem, následující hydrolýzou katalyzovanou kyselinou a dekarboxylací) a. L-alanyl-L-prolinu (0,37 g) v 10 ml vody se upraví zředěným hydroxidem sodným na pH 7. Ke směsi se přidá 0.18 g kyanoborohydridu sodného a nechá se míchat při teplotě místnosti 5 dní. Druhý a. třetí den se přidá dalších 0,9 g ketokyseliny a 0,18 g kyanoborohydridu sodného. Produkt se adsorbuje na silně kyselém iontoměniči a eluuje se 2% pyridinem ve vodě a po lyofilizaci

7 311 se získá 0,5 g N-(l-karboxy-2-fenoxyethyl)-L-alanyl-L-prolinu.

NMR spektrum souhlasí se strukturou. Hmotové spektrum ukazuje vrchol pří 479 pro silylovaný molekulový ion minus methyl (494-15).

Příklad 52

'....... ...... ¹

N- (l-karboxy-2-fenylthioethyl )-L-alanyl-L-proHn

Směs fenylthiopyrohroznové kyseliny (1,96 gramu), (připravená kondenzací ethylfenylthioacetátu s diethyloxalátem, následující hydrolýzou katalyzovanou kyselinou a dekarboxylací] a L-alanyl-L-prolinu (0,37 g) v 10 ml vody se upraví zředěným hydroxidem sodným na pH 7,0 a přidá se 0,18 g kyanoborohydridu sodného ve 2 ml vody. Míchá se přes noc při teplotě místnosti, potom se produkt adsorbuje na silně kyselém iontoměniči a eluuje se 2% pyridinem ve vodě a získá se 0,36 g N-(i^-k^c^J^b□c^^<y^-^2-feл.yithioethy 1) -L-alanyl-L-prolinu.

NMR spektrum a hmotové a hmotové spektrum indikuje žádanou strukturu. Vrchol při 384 indikuje molekulový ion (366)-voda - (18).

Příklad 53

N- (l-karbethoxy-2-) 3-indolyl (ethyl) -L-alanyl-L-prolin

Způsobem popsaným v příkladu 22 se kondenzuje ethylester indol-3-pyrohroznové kyseliny s L-alanyl-L-prolinem v roztoku ethanolu a vody v poměru 1 : 1 pomocí kyanoborohydridu sodného. Izolací na Dowexu 50, jak popsáno, se získá směs isomerů N-[l-karbethoxy-2- :(3-in(dol) ethyl ] -L-alanyl-L-prolinu.

NMR spektrum ukazuje absorbanci při 7,0 delta (5H), 4,2 δ (5H), 3,4 δ (2H), 2,9 delta (2H), 1,9 δ (6H a 1,2 δ (6H).

Příklad 54

N- [ l-karb etliox y-2 (S ) -amino-3-f enylprop yl) -D,L-alanyl-L-prolin

1'

Ke směsi N-ftaloyl-L-2-amino-3-fenylpropionaldehydu (Peterson te al., J. Am. Chem. Soc., 79 1389 /1957/), (2,18 g) a metabisulfitu draselného (0,87 g) ve směsi vody a methanolu -1: 1 se přidá za intenzivního míchání 0,55 g kyanidu sodného. Míchá se 90 minut, zředí se ethylacetátem a filtruje se. Organická vrstva se promyje vodou a suší se síranem horečnatým. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a získá se N-ft.aioyi-3-amino-l-fenyl^-hydroxybutyronitrn, chromatografie v tenké vrstvě za použití směsi ethylacetát : hexan 1: 1, Rf = 0,5.

Roztok této látky v bezvodém ethanolu, který se nasytí amoniakem, se nechá stát 6 dní při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odstraní, zbytek se dá do směsi dioxan : koncentrovaná kyselina chlorovodíková (1 : - 1), zahřeje se na 70 °C a při této teplotě se udržuje 20 hodin. Roztok se odpaří do sucha, zbytek se rozmíchá s teplou vodou na kaši, filtruje se a čistí se obvyklým způsobem na silně kyselém katexu a získá se (2R, S; 3S)-2-ammo-4-fenyl-3-ffaaoylammobutanová kyselina. Kyselina se rozpustí v bezvodém ethanolu, uvádí se bezvodý chlorovodík do nasycení a udržuje se 16 hodin při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a získá se hydrochlorid ethylesteru aminokyseliny.

Tento ethyl 2-amino-4-fenyl-3-ftaloylaminobutanoát se kondenzuje s pyruvoyl-L-prolinem pomocí kyanoborohydridu sodného způsobem popsaným v přílkadu 16 a získá se N-(l-karbethOKy-3-fenyb2-ftaloylammopropyl)-D,L-alanyl-L-prolm, jako směs isomerů. Tato látka se zahřívá pod zpětným chladičem v ethanolu s 1 ekvivalentem hydrazinu po dobu 1,5 hodiny, ochladí se a ftalhydrazid se odfiltruje a žádaný produkt - se izoluje z výsledné směsi chromatografickými metodami a získá se N-tl-karbettioxy^- (S) -amino-3-f enylpropyl j -D,L-alanyi-L-prolin.

NMR spektrum (300 MHz) má vrcholy při 7,3 5 (5H), 3,2 až 4,4 5 (8Η)- 2,,7^5 δ (2H), 2,0 δ (4H) a 1,1 δ (6H).

Příklad 55

N- [ l-karbo.xy-2- (S) -amino-3-fenylpropyl ] -D,L-alanyl-L-proiln

2-amino-4-f enyl-3- (S) -3-f taloyiaminobutanová kyselina, připravená v příkladu 54, - se kondenzuje s - pyruvoyl-L-prollnem pomocí kyanoborohydridu sodného, způsobem popsaným v příkladu 16 a získá se - N-(l-karboxy-3-fenyl-2-fΐaloyiamino-D,L-alanyl-L-prolin, jako směs isomerů.

Tento materiál se zahřívá v ethanolu pod zpětným chladičem s jedním ekvivalentem hydrazinu po dobu 1,5 hodiny, ochladí se, ftalhydrazid se odfiltruje a žádaný produkt se izoluje chromatografickými metodami a získá se žádaná sloučenina.

Chromatografie na tenké vrstvě na silikagelu se směsí 10 EtcAc: 5 pyridin: 1 HOA: 3 HžO dává skvrnu s Rf = 0,15.

Příklad 56

N- [ l-karb oxy-2- (S )-benzoylamino-3-fenylpropyl ] -D,L-alanyl-L-prolin

Roztok N-ftaloyl-3-amino-4-fenyl-2-hydroxybutylronitriiu (připravený v příkladu 54) v ethanolu nasyceném bezvodým amoniakem se nechá stát 3 dny při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a zbytek se zahřívá 6 hodin pod zpětným chladičem v koncentrované - kyselině chlorovo237311 dikové. Odpaří se do sucha a zbytek se čistí na koloně iontoměniče Dowex 50 (H⁴ ), eluuje se postupně směsí voda-methanol 10 : : 1, voda-pyridin 50 : 1 a konečně 0,5 M roztokem hydroxidu amonného. Žádaná 2,3-diamino-4-fenylmóselná kyselina se izoluje z tohoto posledního eluentu koncentrací do sucha. Připraví se roztok komplexu mědi táto aminokyseliny a benzoyluje se 3-aminoskupina in šitu s benzoylchloridem za zásaditých podmínek, metodou, kterou popsal R. Roeske et al., J. Am. Chem. Soc., 70 5883 (1956). Komplex mědi se štěpí sirovodíkem a zpracuje se jak popsáno a získá se 2-a.mino-3-(S )-benzoylamino-4-fenylmáselná kyselina. Tento meziprodukt se kondenzuje s pyruvoyl-2-prolinem pomocí kyanoborohydridu sodného způsobem popsaným v příkladu 16 a získá se žádaný N-[l-karboxy-2-(S)benzoylamino-3-fenylpropyl]-D,L-alanyl-L-prolin, jako směs isomerů, která se může dělit popřípadě chromatickými metodami.

Hmotové spektrum ukazuje vrchol při 596 m/e pro disiiylovaný molekulový ion minus 15.

NMR spektrum ukazuje absorbanci pro dva fenyly při 7,0 — 7,5 δ a diastereomerní methyly při 1,1 δ.

Příklad 57

N-(2-amino-l-karboxy-4-methylpentyl) D,L-alanyl-L-prolin

К roztoku 0,731 g trans-3-amino-4 (2-methylpropyl )-2-azetidinonu (připravený adicí chlorsulfonylisokyanatanu na 4-methyl-l-penten; získaný β-laktam se chrání jako terc.butyldimethylsilylový derivát a potom se přidá diisopropylamid lithný, dále tosylazid a chlortrimethylsilan. Kysele se zpracuje a chromatografii na silikagelu se získá trans-3-azido-4- (2-methylpr opyl) -2-azetidinon, který se hydrogenuje [10% Pd/C ethanol) na aminoderivát a. 4,58 g benzylpyruvátu ve 20 ml absolutního ethanolu obsahujícím 10 g práškovitého 4A molekulárního síta se přidá po kapkách roztok kyanoborohydridu sodného (0,65 g] v 8 ml absolutního ethanolu, dokud není reakce skončena. Reakční směs se filtruje a filtrát se koncentruje. Zbytek se rozpustí v 50 ml vody a okyselí se 1 N HC1 na pH’ — 3. Směs se upraví 10% roztokem uhličitanu sodného na pH — 9,5. Vodný roztok se nasytí chloridem sodným a extrahuje se ethylacetátem (5 X 4.0 ml). Spojené organické vrstvy se suší síranem sodným a koncentrují se za vzniku oleje (4,94 g). Chromatografii na silikagelu (ethylacetát) se získá 1,11 g produktu.

NMR spektrum a hmotové spektrum souhlasí se strukturou benzylesteru N-[trans-4- (2-methylpropyl-2-oxo-3-azetidinyl ] -D,L-alaninu. Debenzylace se provádí katalytickou hydrogenací (10% Pd/C, 2 :1-ěthanol * ;voda). Ke studenému roztoku (0°C) kyselíny (428 mg) a terc.butylesteru L-prolinu (377 mg) v 5 ml dimethylformamidu se přidá roztok difenylfosforylazidu (605 mg) v 5 ml dimethylformamidu a potom roztok triethylaminu (223 mg v 5 mg dimethylformamidu) během 20 minut. Po 3 hodinách se ledová lázeň odstraní a reakční směs se nechá míchat přes noc při teplotě okolí. Přidá se 100 ml ethylacetátu a výsledný roztok se promyje 2krát 40 ml vody, 3krát 30 mililitry 5% roztoku uhličitanu sjdného a Ikrát 50 ml vody, načež se suší síranem sodným. Koncentrací se získá 0,78 g oleje, jehož NMR spektrum a. hmotové spektrum souhlasí se strukturou terc.butylesteru N-[ trans-4- (2-methylpropyl) -2-o=· o-3-azetidinyl]-D,L-alanyl-L-prclinu. Surový produkt se rozpustí ve 25 ml kyseliny trifluoroctové při 0 ^CC. Reakční směs se míchá 20 minut při 0 °C a potom 2,5 hodiny při teplotě místnosti. Reakční směs se koncentruje do sucha a ke zbytku se přidá při teplotě místnosti 30 ml 1 N hydroxidu sodného a nechá se působit

4,5 hodiny. Zásaditá směs se přidá pomalu к silně kyselému iontoměniči a produkt se získá 2% pyridinem ve vodě. Lyofilizací se získá 0,30 g N-(2-amino-l-karboxy-4-methylpentyl)-D,L-alanyl-L-prolinu, který obsahuje 4 diastereomery (S, S, S, S; S, S, R, S; R, R, R, S; R, R, S_; S;) oddělitelné chrematograficky.

NMR spektrum a hmotové spektrum potvrzuje strukturu.

NMR spektrum, ukazuje multiplety při 4,5, 3,85, 2,3, 1,79 a 1,16 ppm. Hmotový spektrogram ukazuje vrchol při 458 (disiiylovaný molekulový iont — 15).

Příklad 58

N- (2-benzamido-l-karboxy-4-methylpentyl)-D,L-alanyl-L-pro4in

К roztoku N-(2-amino-l-karboxy-4-methylpentyl)-D,L-alanyl-L-prolinu, (připravený jak popsáno v příkladu 57) ve vodném roztoku alkálií se přidá benzoylchlorid a získá se N-(2-benzamido-l-karbGxy~4-m.ethylpentyl)-D,L-alanyl-L-prolin.

Hmotové spektrum disilylovaného materiálu má vrcholy při 562 (M+ 15), 460, 389 (nízký vrchol), 364, 242 a 174 m/e.

Příklad 59

N-α-[ l-karboxy-3-fenylpropyl) -/2-amiuo-D,L-alanyl-L-prolin

Při zásaditých podmínkách se .nechá reagovat kyselina D.L-^/Tdiaminopropionová s přebytkem benzyloxykarbonylchloridu a při okyselení se získá D.L--a,/S-bis-(benzyloxykarbonylamino) propionová kyselina, [ teplota tání 123,5 až 124 °C). К chloroformovému roztoku obsahujícímu di-Cbz produkt se přidá chlorid fosforečný a po zpracování se získá D,L--4- benzyloxykarbonylaminomethyl)oxazolidin-2,5-dion. K N-karboxyanhydridu v tetrahydrofuranu se přidá při —60 °C roztok terc.butylesteru L-prolinu v methylenchloridu. Uskladní se přes noc v mrazicím prostoru, směs se odpaří do sucha za vzniku surového· produktu. Pomocí trifluoroctové kyseliny se účinně odštěpí během dvou hodin při teplotě místnosti terc.butylester za vzniku celkové směsi L-prolinu a /3-bbnzyloxykarbonylammo-D,L-alanyl-L-prolinu. Gelovou filtrační chromatografii (LH-20) se získá čistý dipeptid; 2-o>x-b-benylmáselná kyselina a benzyloxykarbonylamino-D,L-alanyl-L-prolin se kondenzuje za přítomnosti kyanoborohydridu sodného. Odstraněním ochranné skupiny z výsledného produktu se získá N-(l-karboxy-3-fenylpropyl)-^(^-^<^]^Í^no-D]^--^lf^]^iyl-L-^-^i'olln.

NMR spektrum (DzO ] souhlasí se strukturou.

NMR spektrum ukazuje aromatické protony při 7,4 S, methinové protony při 4,2 δ a multiplety při 3,7, 3,2, 2,9 a 2,1 δ.

Příklad 60

N-α- (l-ethoxykarbonyl-3-fenylpropyl )-N -ε-acetyl-L-lysyl-L-prolin

Způsobem popsaným v příkladu 22 se kopuluje ethyl-2-oxo-4--enylbutyrát s Ν-ε-acetyl-L-lysyl-L-prolinem v roztoku ethanol-voda za přítomnosti kyanoborohydridu sodného. Izoluje se na Dowexu 50, jak popsáno a frakce bohaté na produkt se lyofillzují a získá se směs isomerů N-(l-ethoxybarkonyl-3-f enylpropyl pN-s-acetyl-L-lysyl-L-pr olinu.

Hmotové spektrum . trisilylovaného materiálu má vrcholy při 663 (M+), 648 (M+ 15) a 546 m/e.

Příklad 61

N-« [ l-karboxy-3- (3,4-dichlorf enyl )-propyl ] -L-lysyl-L-prolin

Roztok 4- (3,4-dichlorfenyl ] -2-oxomáselné kyseliny (připravené z dichlordihydrocinnamátu kondenzací s ethyloxalátem a následující hydrolýzou katalyzovanou kyselinou .a částečnou Cekarboxylací)] ve vodě se upraví zředěným hydroxidem sodným na pH 7 a nechá se působit kyanoborohydrid sodný. Míchá se přes noc při teplotě místnosti a produkt se adsorbuje na silně kyselém iontoměniči a získá se N--a-[l-karboxy-3-(3,4-dichlorf enyl) -propyl ] -L-lysiyl-L-pr olin.

NMR spektrum v DzO ukazuje aromatický vodík při 7,30 δ, široký singlet při 4,35 δ a široké multiplety při 3,53, 3,00, 2,68, 1,98 a 1,65 δ. Hmotové spektrum ukazuje původní vrchol při 455 m/e, který odpovídal ztrátě H2O z žádané struktury při injekci. Velká Μ -I- 2 (457 m/e) isotopová kontribuce potvrdila přítomnost 2 Cl.

Příklad 62

N-«- [ 1- (S ) -karboxy-3-( 3-indolyl Jpropyl ] -L-lysyl-L-prolin

Připraví se 2-oιχo-4--3--ndolyl)máselná kyselina z homotryptofanu metodou popsanou Weygandem et al., Ann. 658, 128 (1962). Tato se kondenzuje s ε-terc.Boc-L-lysyl-L-prollnem za přítomnosti kyanoborohydridu sodného, jak popsáno v příkladu 40, a získá se surová směs diastereomerů N-a--l-karboxy-3- (3-indolyl ] propyl ] -Ν-ε-terc.Boc-L-lysyl-L-prolinu. Z lysinovéhc- postranního řetězce se odstraní ochranná skupina působením 4 N chlorovodíku v ethylacetátu a čistí se na silně kyselém iontoměniči jak popsáno v tomto příkladu a získá se žádaný produkt. Hmotové spektrum tetrasilylovaného materiálu má vrchol při 7,32 (M+), 712 (M+ 15), 615, 660 a 645 m/e. Chromatografií se získá žádaný isomer.

P ř í k 1 a d 63

N-w- [ 5 - amino-1 (S) -karboxypentyl ] -L-lysyl-L-prolin

Benzyl 2-i^.Y(^-^-^--tt^]^l^i^i(^(^lh^:^<^noiát a ε-3°-butoxykarbonyl-L-lysyl-L-prolin se kondenzuje přebytkem kyanoborohydridu sodného v ethanolovém roztoku a po odstranění benzylové skupiny hydrogenací na paládiu, odstranění terc.boc skupiny 4,5 N HCl v ethylacetátu a odstranění ftalimidoskupiny působením hydrazinu se získá N-<a-(5-amino-l-karboxylpentyl] L-lysyl-L-prolin. Cnⁱomatografií se získá žádaný isomer.

Hmotové spektrum indikuje molekulový ion pro disilylované druhy při 516 m/e M + + 15 ion při 501 m/e a vrchol při 399 m/e odpovídající ztrátě silylovaného karboxylu. příklad 64

N-a-(l-karboxy-2-f enoxyethyl )-L-lysyl-L-prolin

A.

Fenoxypyrohroznová kyselina (0,9 g) ' se rozpustí ve vodě, pH se upraví zředěným hydroxidem sodným na 7 a roztok se lyofilizuje. Zbytek se rozpustí v 10 ml ethanolu a přidá se £-3⁰-butoxykarbonyl-L-iysyl-L-prolin (0,36 - g] a práškovité (č. 4A) molekulární síto (3,0 g). Po částech se přidá kyanoborohydrid sodný (0,18 g v 3,5 ml ethanolu) a reakční směs se míchá při teplotě místnosti, dokud není reakce skončena. Produkt se izoluje adsorpcí na silně kyselém iontoměniči a eluuje se 2% pyridinem ve vodě, potom se lyofilizuje a získá se 0,25 g produktu s odstraněnou ochrannou skupinou, N-a-(l-karboxy-2-fenoxyethyl--L-lysyl-L-prolinu,

38

NMR spektrum a hmotové spektrum potvrzují strukturu.

N-a^-fvhoKykaibjonyl^-fenoxyýthyll-L-lysyl-L-prol.in

B.

Ethyl fenoxypyruvát se nechá reagovat s £-3o-butoxykarbonyl-L-lysyl-L-prolinem jak popsáno v příkladu 64 A a získá se -ethoxykarbonyl-2-f enoxyetbyl) -L-Iysyl-L-prolin

NMR spektrum ukazuje fenylovou adsorpci centrovanou při 7.3 u a široké vrcholy při 4,6 3, 4,4 cí, 4,2 <, 3,7 δ, 3,22 δ a 1,9 delta.

Příklad 65

N-«- [ 1 (S ]-karboxy-3 · p-chlorfenylpropyl ] -L-lysyl4L4 -TKeiho^ ^^ypOiivi

L··4íl-methoxyprollnáthydrrchlrrld se kopuluje s ^^α-terc.Bc)c-N-t-Cbz-L-lysinenl za použití dicyklohexylkarbodiimidu a triethylaminu v methylenchloridu, jak popsáno v příkladu 20. Čistí se chromatografií, ester se hydrolyzuje a ether.Boc-ochranná skupina se odstraní, · jak popsáno v tomto příkladu. Tento t··Cbz-L-lysyl-L-4α-methoxyprolin se reduktivně kopuluje s 2-oxo-4-p-chlorfenylmáselnou kyselinou (připravenou z ethylesteru kyseliny p-chlorhydroskořicové kondenzací s diethyloxalátem katalyzovanou zásadou, potom dekarboxylací v bezvodém chlorovodíku v kyselině octové] za přítomnosti kyanoboruhydridu sodného, zpracuje se a získá se směs isomerU N-<a-(l-karboxy-3-p-chlorfenylproiyy))-N---Cb z-L-1 ysy--L-4a-methoxyprolinu. Benzylosykarbonylová ochranná · · skupina se odstraní katalytickou hydrogenací na paládiu na uhlí jako katalyzátoru obvyklým zpUsobem. Chromatografii se získá žádaný isomer. Hmotové spektrum má vrcholy při 584 (Mk · 4-1), 567 (M+15), 466, 397, 366 a 352 (nízký vrchol] pro disilylovaný materiál.

Příklad 66

N- (lkarboxy-4-methylpentyl ] -L-alanyl-L-prolin

Roztok 5-methyl-2-oxohexanové kyseliny (1,44 g) a L-alanyl-L-prolinu (0,37 g] v 5 ml vody se upraví na pH 7 a přidá se 0,31 g kyanoborohydridu sodného. Po pětidenním míchání při teplotě místnosti se reakční produkt adsorbuje na silně kyselém iontoměniči a eluuje se 2% pyridinem ve vodě a získá se 0,6 g lyofilizované látky. Část (0,2 g) se čistí chromatografii na koloně LH · 20 a získá se 0,18 g N-(l-karbo.xy-4-methylpenty 1)-L-alanyl-L-prolinu.

NMR spektrum a hmotové spektrum jsou v souladu s označenou strukturou. Dlastereomery se · mohou izolovat chromatografií.

Při hmotovém spektru byly pozorovány vrcholy disilylovaného materiálu při 458 (M+J, 443 (M +—15), 341, 301 a 244 m/e (nízký vrchol).

Příklad 67

N-[ 1-( S ]-ethoxykarbonyl-4-nu^thylpentyl ] ·-L-alanyl-prolin

Ethyl 5-methyl-2-oxohexanoát (3.44 g) a L-alanyl-L-prolin (0,74 g) se míchá v 15 ml ethanolu s 6 g práškovitého 4A molekulárního síta. Během několika hodin se přidává po kapkách 0,23 g kyanoborohydridu sodného v ethanolu. Ethanol se potom odstraní ve vakuu, produkt se adsorbuje na silně kyselém iontoměniči a eluuje se 2% pyridinem ve vodě za vzniku 1,08 N-(l-ethoxykarbonyl-4-methylpentyl)-L-alanyl-L-prolinu. Část se čistí LH-20 chromatografii pro spektrální analýzu.

NMR spektrum souhlasí se strukturou. Hmotové spektrum ukazuje vrchol při 414 (silylovaný molekulový ion-151. Chromatografii se získá žádaný isomer.

Příklad 68

N- (l-karboxy-3-p-f enoxyfenylpropyl) -L-alanyl-L-prolin

Směs 2-OAO-4-n-fenoxyfenylmáselné kyseliny (připravené reakcí p-fenoxyfenyl Grignardova činidla a ethylenoxidem, konverzí výsledného alkoholu na bromid a kondenzací s ethyl l,3-dithla.n-2-karboxylátem. Oxidačním štěpením dithianu a následující alkalickou hydrolýzou se získá ketokyselina a L-alanyl-L-prolinu ve vodě se upraví zředěnou alkálií na pH 7 a přidá se přebytek · kyanoborohydridu sodného; Produkt, · N-(l-karbo-:y-3-p-f enoxyfenylpropyl)-L-alanyl-L-prolin, se izoluje chromatografii.

Hmotové spektrum disilylovaného materiálu obsahuje vrcholy při 584 (M+), 569 (M+ -—15), 468 a 370 m/e (nízký vrchol).

Příklad 69

Ν-α- (1 · karbo.xy-3-f enylpr opyl) -L-ornithyl-L-prolin

N-á-terc.Boc-L-ornlthyl-L-prolin a 2-oxo-4-fenylmáselná kyselina se kondenzuje za přítomnosti kyanoborohydridu sodného zpUsobem popsaným v přílkadu 40. Ochranná skupina se odstraní z produktu za použití 4 N ethylacetátu v plynném chlorovodíku. Surová dlasterermerní chlorovodíková sUl se adsorbuje na silně kyselém irntoměniči · a eluuje se 2% pyridinem · ve vodě. Hmotové spektrum ukazuje molekulový ion při 355 m/e pro produkt minus 36. Magnetické· resonanční spektrum souhlasí se strukturou.

Příklad 70

Ν-ια-[ 1 (S ) -karboxy-3-f enylpropyl j-L-l.ysyl-L-prolin

Ethyl 2-oxo-4--enylbLityrát (2,58 g) a N-ε-terc.Boc-L-lysyl-L-prolin (859 mg) se rozpustí v 50 ml absolutního ethanolu, ke kterému se přidá 2,0 g rozdrceného· 5A molekulárního· síta. Po skončené reakci se síto odstraní filtrací. Po odpaření filtrátu se zbytek rozpustí ve vodě, extrahuje se etherem a adsorbuje se na silně kyselém iontoměniči. Elucí 2% pyridinem ve vodě se získá 639 miligramů surového chráněného· produktu, N-a-(l-karbethoxy-3-f enylpropyl j-N-s-terc.Boc-L--ysyl-L-prolinu. Ochranná skupina se odstraní 4 N ethylacetátem v plynném chlorovodíku. Výsledná chlorovodíková sůl se adsorbuje na silně kyselém iontoměniči a eluuje se 2% pyridinem za vzniku 270 mg produktu. Hmotové spektrum ukazuje molekulový ion při 678 m/e a pro disilylovaný druh plus 1.

NMR spektrum potvrzuje strukturu. Chromatografií se získá žádaný isomer.

P ř í k 1 a d 71

N-α- (l-karboxy-3-f enylpropyl )-Ν-ε-Ν-ε-dimethyl-L-lysiyí-L-prolin

N-a-terc.Boc-N-s-cbz-L--ys yl-L-pr ol inbenzylester se reduktivně methyluje ve formaldehydu [10% Pd-C, při 3,922 MPa tlaku vodíku; α-terc.Boc ochranná skupina se odštěpí 4 N ethylacetátem v plynném chlorovodíku. Způsobem popsaným v příkladu 40 se kondenzuje 2-oxo-4-fenyhnáselná kyselina a Ν-ε-Ν-ε-dimethyl-L-lysyl-L-prolinhydrochlorid za přítomnosti kyanoborohydridu sodného·. Hmotové spektrum ukazuje molekulový ion při 415 pro produkt minus 18.

NMR spektrum potvrzuje strukturu.

Příklad 72

N-α- [ 1- (S) -karboxy-3-f enylpropyl ] -L-lysyl-L-prolin

N-«- (l-karboxy-3-f enylpropyl) -L-lysyl-L-prolin, (směs diastereomerů), se čistí gelovou filtrací chromatografií v methanolu (LH-20). XAD-2-koJona se uvede do rovnováhy 0,1 M hydroxidem amonným obsahujícím 4% acetonitril při 53 °C. Výše uvedená isomerická směs (250 mg) se rozpustí v 10 mililitrech stejného rozpouštědla a přidá se do kolony. Když se kolona eluuje tímto rozpouštědlem, první isomer se objeví v objemovém rozmezí 320 až 360 ml eluátu. Druhý isomer se objeví v rozmezí 450 až 540 ml eluátu. Střední frakce obsahuje směs isomerů. Když se farkce obsahující první isomer lyofilizují, získá se 72 mg kypré bílé látky. Toto je účinější isomer a je SSS konfigurace analogicky podle účinějšího· isomeru N-α- (l^-k^a^i^t^(^x^y-3-fenylp^opyl) -L-alanyl-L-prolinu, u kterého byla potvrzena rentgenovými paprsky SSS konfigurace. Při chromatografii na tenké vrstvě na silikagelu za použití směsi ethylacetát(n-butanol/voda) kyselina octová v poměru 1:1:1:1 je tato látka jedinou skvrnou s hodnotou Rf <= -= 0,43.

NMR spektrum (300 MHz) ukazuje triplet pro methinový proton γ k fenylovému substituentu při 3,40 ppm. Když se lyofilizují frakce obsahující druhý isomer získá se 72 miligramů bílé kypré látky. Tato· látka je podle chromatografie na tenké vrstvě jedinou skvrnou o hodnotě Rf — 0,39.

NMR spektrum (300 MHz) ukazuje triplet pro methinový proton γ k fenylovému substituentu při 3,61 ppm.

Příklad 73

N-α·- (l-karboxy-3-fenylpropyl) -Ν-ε-acetyI-L-lysyl-L-prolin

Způsobem popsaným v příkladu 40 se kondenzuje 2Όxo-4-fenylmáselná kyselina a N-ε-acetyl-L-lysyl-L-prolm za přítomnosti kyanoborohydridu sodného a získá se N-a-(l-karboxy-3-f enylpropyl) -Ν-ε-acetyl-L-lysyl-L-prolin.

Nmr spektrum potvrzuje strukturu. Hmotové spektrum ukazuje molekulový ion při 663 pro trisilylovaný druh.

P ř í k 1 a d 74

N-α- (l-karboxy-3-f enylpropyl) -L-arginyl-L-prolin

Potřebný dipeptid se připraví DCC kondenzací N-α-terc.Boc-N-ω-nitro-fLarginín a hydrochloridové soli benzylesteru L-prolinu α-terc.Boc-ochranná skupina se odstraní obvyklým způsobem 4 N HC1 v · ethylacetátu a výsledný N-ω-mtro-L-arglnyl-LfΓΓOlmfbenzylester se kondenzuje s 2-oxo-4-fenylmáselnou kyselinou způsobem popsaným v příkladu 40.

Reakcí se získá nízký výtěžek (25 až 33 procent) N-α- (l-karboxyf3ffenylproгyl) -N-w-nitro-L-arginyl-L-prolin-benzylesteru. Tato sloučenina (159 mg) se rozpustí ve 2,5 mililitru roztoku kyselina octová (voda/methanol) (84%, 8%, 8%) a hydrogenuje se při 3,922 MPa, teplotě místnosti, na 130 mg 10%· paládia na uhlí při současném odstranění ω-nitro a benzylesterové ochranné skupiny. Katalyzátor se odfiltruje a filtrát se odpaří (94 mg), část rozpustná ve vodě se lyofilizuje na kyprou bílou látku (90 mg). Tato látka je acetátová sůl žádaného produktu a převede se na volnou bázi adsorpcí na silně kyselém iontoměniči, promyje se vodou, potom se eluuje 2% pyridinem ve vodě. Lyofilizaci frakcí bohatých na · produkt se získá 60 mg N-a-(l-karboxy-3-fenylpropyl ) -L-arginyl-L-prolinu.

NMR spektrum souhlasí se strukturou.

Hmotové spektrum ukazuje molekulový ion při 793 pro pentasilylovaný druh.

Příklad 75

N- (l-karboxy-3-fenylpropyl) -L-histidyl-L-prolin

Způsobem popsaným v příkladu 40 se kondenzuje 2-oxo-4-fenylmáselná kyselina a L-histidyl-L-prolin za přítomnosti kyanoborohydridu sodného a získá se N-(l-karboxy-3-fenylpropyl)-L-histidyl-L-prolin. Produkt se čistí gelovou filtrační chromatografií v methanolu (LH-20).

NMR spektrum souhlasí se strukturou. Hmotové spektrum ukazuje molekulový ion při 657 pro disilylovaný druh.

Příklad 76

N-a-[l-karboxy-2-(3-indolyl)ethyl]-L-lysyl-L-prolin

Způsobem popsaným v prílkadu 40 se kondenzuje indol-3-pyrohroznová kyselina s N-ε-terc.Boc-L-lysyl-L-prolinem za přítomnosti kyanoborohydridu sodného; ε-terc. Boc-ochranná skupina se odstraní z produktu 4 N HC1 v ethylacetátu. Výsledná chlorovodíková sůl se adsorbuje na Dovewu 50 (Н‘^ь) a eluuje se 2% pyridinem ve vodě. Lyofilizací frakcí bohatých na produkt se získá volná báze jako světle hnědá kyprá látka. NMR spektrum souhlasí se strukturou. Hmotové spektrum ukazuje molekulový ion při 718 pro tetrasilylovaný druh.

Příklad 77

N-α- [ l-karbethoxy-4-methylpentyl ] -L-lysyl-L-prolin

2-oxo--4-methyl-ethylpentanoát (2,75 g) a N-s-terc.-Boc-L-lysyl-L-prolin (2,75 g) se rozpustí ve 150 ml ethanolu obsahujícím 16 g práškovitého 4A molárního síta. Hydrogenuje se při 3,922 MPa, teplotě místnosti, za použití 1 g 10% paladia na uhlí. Když se pohltí 1 mol vodíku, filtruje se přes pomocný prostředek pro filtraci, katalyzátor se promyje na filtračním koláči důkladně ethanolem. Rozpouštědlo se odpaří a získá se 5,87 gramu oleje. Olej se suspenduje ve vodě, pH se upraví na 8,5 a extrahuje se ethylacetátem (3 X 60 ml), aby se odstranily neutrální látky; pH vodné vrstvy se upraví na 7, nasytí se chloridem sodným a produkt se extrahuje ethylacetátem ( 3 x 100 ml). Roztok se suší bezvodým síranem hořečnatým. Ethylacetát se odpaří a získá se 4,38 g surového N-α- (l-karbetho.xy-4-methylpentyl) -Ν-ε-terc.-Boc-L-lysyl-L-prolinu; terc.-Bocochranná skupina se odstraní obvyklým způsobem 4 N HC1 v ethylacetátu. Výsledná chlorovodíková sůl se převede na volnou bázi silně kyselým iontoměničem (eluce 2% pyridinem ve vodě). Frakce bohatá na produkt se lyofilizuje a získá se 2,1 g hygroskopické struktury N-a-(l-karbethoxy~4-methyl-pentyl]-L-lysyí-L-prolin. Hmotové spektrum ukazuje vrchol při 472 pro monesilylovaný druh plus 1.

Příklad 78

N-a-(l-karboxy-4 methylpentyl)-L lysyl-L-proiin

N-cr (l-karbethoxy-4-methylpentyl) -L-lysyl-L-prolin se hydrolyzuje na příslušnou karboxylovou kyselinu několikadenním mícháním ve vodném roztoku hydroxidu sodného (2,5 ekvivalentu) při teplotě místnosti. Reakční směs se okyselí na pH 5, adsorbuje se na silně kyselém iontoměniči a eluuje se 2% pyridinem ve vodě. Frakce bohatá na produkt se lyofilizuje a získá se N- (l-karboxy-4-methylpentyl) -L-lysyi-L-prolin jako bílá kyprá látka. NMR spektrum potvrzuje strukturu. Hmotové spektrum ukazuje molekulový ion při 516 pro disilylovaný druh.

Příklad 79

N-α- (l-karboNy-3-f enylpropyl) -L-leucyl-L-tryptofan

Způsobem popsaným v příkladu. 49 se kondenzuje 2-oxo-4-fe.nylmáselná kyselina a L-leucyl-L tryptcfan za přítomnosti kyanoborohydridu sodného. Produkt se lyofilizuje ze směsi dioxan/voda, protože je pouze slabě rozpustný ve vodě. NMR spektrum souhlasí se strukturou. Hmotové spektrum ukazuje molekulový ion při 695 pro trisilylovaný druh.

Claims

predmet vynalezu

1. Způsob přípravy karboxyalkyldipeptidů obecného vzorce I

O Ri R3 Ri Rs O

II I I I I II

R—C—C—NH—CH—C—N—C—C—R6

Rž O Rz (I] kde

R a R6 jsou stejné nebo rozdílné a znamenají hydroxyskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, dialkylaminoalkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylovém zbytku, acylaminoalkylkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylovém zbytku a 2 až 12 atomy uhlíku v acylovém zbytku, acyloxyalkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylovém zbytku a 2 až 12 atomy uhlíku v acylovém zbytku, aryloxyskupinu s alespoň 6 atomy uhlíku, aralkyíoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylovém zbytku a alespoň 6 atomy uhlíku v arylovém zbytku, substituovanou aryloxyskupinu s alespoň 6 atomy uhlíku nebo substituovanou aralkoxyskupinu s 1 až 3 atomy . uhlíku v alkylovém zbytku a alespoň 6 atomy uhlíku v arylovém zbytku, kde substituentem je methyl, halogen nebo methoxyskupina, aminoskupinu, alkylamlnoskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, dialkylaminoskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, arylkylaminoskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylovém zbytku a alespoň 6 atomy uhlíku v arylovém zbytku nebo hydroxyaminoskupinu,

Rl je vodík, alkyl s 1 až 20 atomy uhlíku, který zahrnuje rozvětvené acyklické skupiny, allyl, substituovaný alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, kde substituentem je halogen, hydroxyskupina, alkoxyskupina s 1 až 3 atomy uhlíku, aryloxyskupina s alespoň 6 atomy uhlíku, aminoskupina, alkylaminoskupina, dialkylaminoskupina s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylovém zbytku, acylaminoskupina se 2 až 12 atomy uhlíku, arylaminoskupina s alespoň 6 atomy uhlíku a guanidinoskupina, imidazolyl, indolyl, merkaptoskupina, alkylthioskupina s 1 až 3 atomy uhlíku, arylthioskupina s alespoň 6 atomy uhlíku, karboxyskupina, karboxamidoskupina, karbalkoxyskupina s 1 až 3 atomy uhlíku, fenyl, substituovaný fenyl, kde substituentem je alkyl s 1 až 3 atomy uhlíku, alkoxyskupina s 1 až 3 atomy uhlíku nebo halogen, aralkyl s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylovém zbytku a alespoň 6 atomy uhlíku v arylovém zbytku nebo indolylalkyl s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylovém zbytku, aralkenyl s 1 až 4 atomy uhlíku v al kenylovém zbytku a alespoň 6 atomy uhlíku v arylovém zbytku, substituovaný aralkyl s 1 až 3 atomy uhlíku v alkylovém zbytku a alespoň 6 atomy uhlíku v arylovém zbytku, substituovaný indolylethyl, substituovaný aralkenyl s 1 až 3 atomy uhlíku v alkenylovém zbytku a alespoň 6 atomy uhlíku v arylovém zbytku, kde substituentem je halogen, nebo dihalogen, alkyl s 1 až. 3 atomy uhlíku, hydroxyskupina, alkoxyskupina s 1 až 3 atomy uhlíku, aminoskupina, aminomethyl, acylaminoskupina se 2 až 12 atomy uhlíku, dialkylaminoskupina s 1 až

3 atomy uhlíku v alkylovém zbytku, alkylaminoskupina s 1 až 3 atomy uhlíku, karboxyl, halogenalkyl s 1 až 3 atomy uhlíku, kyanoskupina nebo sulfonamidoskupina, aralkyl s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylovém zbytku a alespoň 6 atomy uhlíku v arylovém zbytku nebo. indolylethyl substituovaný na alkylové části aminoskupinou nebo acylaminoskupinou se 2 až 12 atomy uhlíku,

Rz znamená vodík nebo alkyl s 1 až 6 atomy uhlíku,

Rž znamená vodík,

R3 je vodík, alkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, fenylalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, aminomethyl- fenylalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, hydroxyfenylalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, hydroxyalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, aeetylaminoalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, acylaminoalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylovém zbytku a 2 až 12 atomy uhlíku v acylovém zbytku, aminoalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku dimethylaminoalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, halogenalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, guanidinoalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, imidazolylalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, indolylalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, merkaptoalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, a alkylthioalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylovém zbytku,

Rd je vodík nebo alkyl s 1 až 6 atomy uhlíku,

Rs je vodík, alkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, fenyl, fenylalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, hydroxyfenylalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, hydroxyalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, aminoalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, guanidinoalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, imidazolylalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, indolylalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku, merkaptoalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku nebo alkylthioalkyl s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylovém zbytku,

Rd a Rs jsou popřípadě spojeny dohromady k vytvoření alkylenového můstku se 2 až

4 atomy uhlíku, alkylenového můstku se 2 až 3 atomy uhlíku a jedním atomem síry, alkylenového můstku se 3 až 4 atomy uhlíku obsahujícího· dvojnou vazbu nebo alkylenového můstku se 2 až 4 atomy uhlíku substituovaného hydroxyskupinou, alkoxyskupinou s 1 až 6 atomy uhlíku nebo alkylem s 1 až 6 atomy uhlíku, a jejich farmaceuticky vhodných solí a biologicky účinného isomeru, vyznačený tím, že se nechá reagovat keton obecného vzorce II

O Ri

II I

R-C—C—o (П) kde

Rt a R mají výše uvedený význam a Ri popřípadě zahrnuje ochranu reaktivních skupin ve významu pro Ri, s dipeptidem nebo chráněným dipeptidem obecného vzorce III

R3 O Rá Rs O

I II I I II

H2N—CHC—N—C—C—R6

R7 (III) kde

Rs, Ri, Ri, Rs a R? mají výše uvedený význam a Rs a Rs popřípadě zahrnují ochranu reaktivních skupin ve významu pro Rs a Rs, za přítomnosti redukčního^ činidla, potom se popřípadě ochranné skupiny odstraní a získá se produkt vzorce I a popřípadě se připraví jeho sůl a případně se izoluje biologicky účinnější isomer chromatografii nebo frakční krystalizaci.
2. Způsob podle bodu 1 к přípravě sloučeniny vzorce vyznačený tím, že se nechá reagovat keton vzorce

CH2C6H5

I

CH₂

I

C2H5OOC—C-O s dipeptidem vzorce сл

1 ^J

H,N-CH-C-N

Z. II o

za přítomnosti redukčního činidla za vzniku produktu vzorce I a popřípadě se připraví jeho sůl a případně se izoluje biologicky účinnější isomer chromatografii nebo frakční krystalizaci.
3. Způsob podle bodu 1 к přípravě sloučeniny vzorce

O CH,CH,f*nyl

И I *· wo-c -c--—

H vyznačený tím, že se nechá reagovat keton vzorce

CFhCHzfenyl

ΗΌΟ—C=O s chráněným dipeptidem obecného (CH2J4—NH—terc.Boc

I

HžN— CH—C vzorce

COOH kde terc.Boc je terc.butyloxykarbonylová skupina, za přítomnosti redukčního činidla za vzniku chráněné formy produktu vzorce I a potom se z tohoto produktu reakcí v kyselém prostředí odstraní ochranné skupiny pro získání produktu vzorce I.
4. Způsob podle bodu 1 k přípravě sloučeniny vzorce

CHz—CeHs NH2

I I

O CH2 (CHžjtO

II I I II

C2H5OC—CH--NH—CH—C . COOH vyznačený tím, že se nechá reagovat keton vzorce

CH2—C6H5

I

O CH2

II I

C3H5O—C—C—0 s chráněným dipeptidem obecného vzorce

NH—terc.Boc

I (CHž)4

I

H2N—CH—c

II o

COOH kde terc.Boc je terc.butyloxykarbonylová ochranná skupina, za přítomnosti redukčního činidla za vzniku chráněné formy produktu vzorce I a potom se z tohoto produktu reakcí v kyselém prostředí odstraní 0chranné skupiny pro získání produktu vzorce I.
5. Způsob podle bodu 1 к přípravě sloučeniny vzorce

O ll HO-C vyznačený - tím, že se nechá reagovat keton vzorce

O CH,

II I

HO - G ~~ C = O kde

-,φ

COOH s chráněným dipeptidem obecného vzorce

NH—terc.Boc

I (CH2)4

I

HzN—CH--C

II o

terc.Boc je terc.butyloxykarbonylová ochranná skupina, za přítomnosti redukčního- činidla za vzniku chráněné formy produktu vzorce I a potom se z tohoto produktu reakcí v kyselém prostředí odstraní ochranné skupiny pro- získání produktu vzorce I.