CN1759115A - 埃坡霉素(epothilone),合成埃坡霉素的中间体,其类似物及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供式(I)化合物：如本文中一般所述及以类及次类形式所述。本发明另外提供包含式(I)化合物的医药组合物，并提供治疗癌症的方法，该些方法包括投予一式(I)化合物。

Description

埃坡霉素(EPOTHILONE)，合成埃坡霉素的中间体，其类似物及其 用途
技术领域
本发明提供式(I)的化合物：如本文中一般所述及以类及次类形式所述。本发明另外提供包含式(I)化合物的医药组合物，并提供治疗癌症的方法，该些方法包括投与一式(I)化合物。
背景技术
埃坡霉素(Epothilone)A及B(2a及2b，示意图1)是天然存在的细胞毒性大环内酯，其可自一纤维素降解分枝杆菌(mycobacerium)即堆囊菌(Sorangiumcellulosum)分离(Hfle等人，Angew.Chem.，Int.Ed.Engl.(1996，35，1567)及J.Antibiot.(1996，49，560)；其皆以引用的方式并入本文中)。尽管埃坡霉素A与B的结构极为不同，但其均具有与紫杉醇(Taxol)相同的作用机理，该作用机理涉及通过聚合微管蛋白及稳定微管装配来抑制肿瘤细胞的生长(Bollag等人，Cancer Res.(1995，55，2325)，以引用的方式并入本文)。尽管毫无疑问Taxol作为第一线化学治疗剂具有临床价值，但其远非一理想药物。其极低的水溶性使其需依赖于诸如氢化蓖麻油(Cremophore)等调配物媒剂，这些调配物媒剂不仅自身会带来风险且会造成管理问题(Essayan等人，J.AllergyClin.Immunol.1996，97，42；其以引用的方式并入本文中)。而且，Taxol易于因多重抗药性(MDR)而失活(Giannakakou等人，J.Biol.Chem.(1997，272，17118)；其以引用的方式并入本文中)。然而，亦已证实，埃坡霉素A及B可保持显著的抗MDR肿瘤细胞效能(Kowalski等人，Mol.Biol.Cell(1995，6，2137)；其以引用的方式并入本文中)。此外，与紫杉醇相比，埃坡霉素增加的水溶性有利于调配。尽管天然存在的化合物埃坡霉素B(2b，示意图1中的EpoB)是天然产物埃坡霉素家族的重要成员，但不幸的是，其具有窄治疗指数，至少在异种移植老鼠中如此，此令人极为烦忧(Su等人，Angew.Chem.Int.Ed.Engl.1997，36，1093；Harris等人，J.Org.Chem.(1999，64，8434)；每一皆以引用的方式并入本文)。
Figure A0382256100231
Figure A0382256100232
1a R＝ph，紫杉醇(Taxol)           2a R1＝H，R2＝CH3，埃坡霉素A(EpoA)
1b R＝t-Bu，多西他赛(Taxotere)    2b R1＝CH3，R2＝CH3，埃坡霉素B(EpoB)
                                  2c R1＝H，R2＝CH2OH，埃坡霉素E(EpoE)
                                  2d R1＝CH3，R2＝CH2OH，埃坡霉素F(EpoF)
示意图1：紫杉烷(Taxoid)及埃坡霉素
因EpoB治疗指数有限，此使得人们对其他埃坡霉素类似物(尤其是12，13-去氧埃坡霉素)的提供经改良治疗曲线的能力进行研究( 参见，美国专利第6,242,469号、第6,284,781号、第6,300,355号、第6,369,234号、第6,204,388号、第6,316,630号；每一皆以引用的方式并入本文中)。在各种小鼠模型上所实施的活体内试验证实12，13-去氧埃坡霉素B(3b，示意图2中的dEpoB)在小鼠异种移植物中具有抗各种敏感性及抗性人类肿瘤的治疗潜能(Chou等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.1998，95，9642及15798；其以引用的方式并入本文)。最近，该等去氧埃坡霉素优于其他抗癌剂的治疗优势已通过全面对比确实(Chou等人，Proc.Natl Acad.Sci.U.S.A.(2001，98，8113)；其以引用的方式并入本文)。由于dEpoB非同寻常的活体内性质，其已通过在狗中进行的毒物学评价，且现作为抗癌药用于人体试验。
                        
Figure A0382256100242
                      
Figure A0382256100243
3a R1＝H，R2＝CH3，去氧埃坡霉素A(dEpoA)        4a R1＝H，R2＝CH3，去氢-dEpoA(dEpoA)      5a R1＝H，R2＝CH3，异-dEpoA
3b R1＝CH3，R2＝CH2，去氧埃坡霉素B(dEpoB)      4b R1＝CH3，R2＝CH3，去氢-dEpoB(dEpoB)   5b R1＝CH3，R2＝CH3，异-dEpoB
3c R1＝H，R2＝CH2OH，去氧埃坡霉素E(dEpoE)     4c R1＝H，R2＝CH2OH，去氧-dEpoE(dEpoE)   5c R1＝H，R2＝CH2OH，异-dEpoE
3d R1＝CH3，R2＝CH2OH，去氧埃坡霉素F(dEpoF)   4d R1＝CH3，R2＝CH2OH，去氢-dEpoF(dEpoF)5d R1＝CH3，R3＝CH2OH，异-dEpoF(ddEpoF)
3e R1＝H，R2＝NH2，去甲基氨基-(dEpoA)          4e R1＝H，R2＝NH2，去甲基氨基-ddEpoA      5e R1＝H，R2＝NH2，去甲基氨基-异-dEpoA
3f R1＝CH3，R2＝NH2，去甲基氨基-dEpoB(dadEpoB) 4f R1＝CH3，R2＝NH2，去甲基氨基-ddEpoB   5f R1＝CH3，R2＝NH2，去甲基氨基-异-dEpoB
3g R1＝CH3，R2＝CH2，26-氟-dEpoB-(dadEpoB)     4g R1＝CH3F，R2＝CH2，26-氟-ddEpoB
3h R1＝CF3，R2＝CH2，26三氟-dEpoB-(dadEpoB)    4h R1＝CF3，R2＝CH2，26-三氟-ddEpoB
示意图2：各种去氧埃坡霉素类似物
鉴于12，13-去氧埃坡霉素有希望的治疗效用，人们期望研究其他类似物及用于合成现有埃坡霉素、去氧埃坡霉素及其类似物以及其新颖类似物的其他合成方法。更特定而言，假定人们对该类化合物的治疗效用有兴趣，人们亦期望开发出能够提供大量上述或本文所述任何埃坡霉素或去氧埃坡霉素用于临床试验及用于大规模制备的方法。
附图说明
图1是一关于埃坡霉素抗CCRF-CEM、CCRF-CEM/VBL及CCRF-CEM/紫杉醇细胞生长的IC50值的表。72小时细胞生长培养后通过XTT四唑鎓分析测量细胞生长抑制作用，如先前所阐述(Scudiero等人，Cancer Res.46：4827-4833，1988；以引用的方式并入本文)。通过使用计算机程序(Chou等人，Adv.EnzymeRegul.(22：27-55，1984)；Chou等人，CalcuSyn for Windows(Biosoft，Cambridge，UK)，1997)；每一皆以引用的方式并入本文)在每一药物的六或七个浓度处自剂量-效力关系确定IC50值，如先前所阐述(Chou等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(95：15798-15802，1998)；以引用的方式并入本文)。
图2是反-9，10-去氢-12，13-去氧EpoB的1H NMR谱。
图3是反-9，10-去氢-12，13-去氧EpoB的13C NMR谱。
图4显示利用LACDAC-闭环烯烃置换反应合成11-R和14-R埃坡霉素的示意图，并绘示经由9，10-去氢埃坡霉素的合成方法可利用的某些取代。
图5展示各种包括某些9，10-去氢化合物(例如，图5A中的化合物7及图5B中的化合物88及99)在内的埃坡霉素化合物及衍生物体外抗人类白血病细胞的相对细胞毒性数据。
图6绘示用于制备9，10-去氢埃坡霉素类似物的替代合成方法。图6A绘示一Macro-Stille法、sp3-sp3偶合法及β-Suzuki法。图6B绘示Julia烯烃合成法、Wadsworth-Emmons法及Macro-Reformatosky法。图6C绘示一McMurry偶合法及一内酰胺类似物合成法。
图7展示9，10-去氢-12，13-去氧EpoB的各种类似物。
图8展示9，10-去氢-12，13-去氧EpoB及EpoB对具有人类乳腺癌MX-1异种移植物的裸鼠的治疗效果(静脉内输注，Q2D×3)。
图9展示埃坡霉素类似物在鼠血浆中的稳定性。Epo1为12，13-去氧EpoB，Epo2为26-F3-12，13-去氧EpoB，Epo3为(E)-9，10-去氢-12，13-去氧EpoB且Epo4是26-F3-(E)-9，10-去氢-12，13-去氧EpoB。
图10绘示埃坡霉素类似物对具有HCT-116异种移植物的裸鼠的治疗效果(静脉内输注，Q2D×7，n＝3)。箭头表示投与药物。Epo3为(E)-9，10-去氢-12，13-去氧EpoB。
图11显示与紫杉醇与长春碱相比，各种埃坡霉素类似物体外抗肿瘤细胞生长的效能及治疗指数。
图12所示数据表概述dEpoB、紫杉醇及26-三氟-9，10-去氢-dEpoB抗裸鼠中MX-1异种移植物的效果。
图13展示26-三氟-9，10-去氢-dEpoB及9，10-去氢-EpoB对具有MX-1异种移植物的裸鼠中肿瘤大小的治疗效果(6小时静脉内输注，分别为Q2D×6及Q2D×9)。
图14展示具有人类乳腺癌肿瘤MX-1异种移植物的裸鼠用26-三氟-9，10-去氢-dEpoB及9，10-去氢-EpoB治疗后的体重变化(6小时输注，分别为Q2D×6及Q2D×9)。
图15显示26-三氟-9，10-去氢-dEpoB及9，10-去氢EpoB对具有MX-1异种移植物的裸鼠中肿瘤大小的治疗效果(6小时静脉内输注，分别为Q2D×6及Q2D×9)。
图16显示具有人类乳腺癌肿瘤MX-1异种移植物的裸鼠用26-三氟-9，10-去氢-dEpoB及9，10-去氢-EpoB治疗后体重变化(6小时静脉内输注，分别为Q2D×6及Q2D×9)。
图17显示9，10-去氢-dEpoB对具有HCT-116异种移植物的裸鼠中肿瘤大小的治疗效果(静脉内输注，Q2D×7)。
图18显示9，10-去氢-dEpoB对具有人类结肠癌HCT-116异种移植物的裸鼠中肿瘤大小的效果(静脉内输注，Q3D×5)。
图19显示9，10-去氢-dEpoB对具有A549/紫杉醇异种移植物的裸鼠中肿瘤大小的效果(6小时静脉内输注，Q3D×7)。
图20显示具有A549/紫杉醇异种移植物的裸鼠用26-三氟-9，10-去氢-dEpoB及9，10-去氢-dEpoB治疗后体重的变化(6小时静脉内输注，Q3D×7)。
图21显示26-三氟-9，10-去氢-dEpoB及9，10-去氢-dEpoB对具有A549/紫杉醇异种移植物的裸鼠中肿瘤大小的效果(静脉内输注，Q2D×7)。
图22显示具有A549/紫杉醇异种移植物的裸鼠用26-三氟-9，10-去氢-dEpoB及9，10-去氢-dEpoB治疗后体重的变化(6小时静脉内输注，Q2D×7)。
图23显示9，10-去氢-EpoB对具有人类结肠癌HCT-116肿瘤异种移植物的裸鼠中肿瘤大小的效果(6小时静脉内输注)。
图24显示具有人类结肠癌HCT-116肿瘤异种移植物的裸鼠用9，10-去氢-EpoB治疗后体重的变化(6小时静脉内输注)。
图25显示在37℃下在存在各种埃坡霉素类似物时自微管蛋白形成微管的情况。
图26显示在4℃下在存在各种埃坡霉素类似物时自微管蛋白形成微管的情况。
图27显示9，10-去氢-dEpoB及dEpoB对具有HCT-116异种移植物的裸鼠中肿瘤大小的效果(静脉内输注，Q2D×6)。
图28显示具有HCT-116异种移植物的裸鼠用9，10-去氢-dEpoB及dEpoB治疗后体重的变化(静脉内输注，Q2D×6)。
图29显示9，10-去氢-dEpoB对具有人类结肠癌HCT-116异种移植物的裸鼠中肿瘤大小的效果(静脉内输注，Q3D×4)。
图30显示具有人类结肠癌HCT-116异种移植物的裸鼠用9，10-去氢-dEpoB治疗后体重的变化(5mg/kg，静脉内输注，X3D×4)。
图31是一关于埃坡霉素类似物抗CCRF-CEM细胞生长的IC50值的表。
图32显示埃坡霉素类似物体外代谢稳定性。
图33所示表详述各种埃坡霉素类似物对小鼠中人类肿瘤异种移植物的治疗效果(6小时静脉内输注)。
图34显示9，10-去氢-EpoB对具有人类结肠癌HCT-116肿瘤异种移植物的裸鼠中肿瘤大小的效果(6小时静脉内输注，Q2D×7)。
图35显示具有人类结肠癌HCT-116肿瘤异种移植物的裸鼠用9，10-去氢-EpoB及唑-EpoD治疗后体重的变化(6小时输注，Q2D×7)。
图36显示26-三氟-9，10-去氢-dEpoB及9，10-去氢-dEpoB对具有A549/紫杉醇异种移植物的裸鼠中肿瘤大小的效果(6小时静脉内输注，Q2D×4)。
图37显示9，10-去氢-dEpoB对具有A549/紫杉醇异种移植物的裸鼠中肿瘤大小的效果(6小时静脉内输注，Q3D×3)。
图38显示埃坡霉素类似物在20％小鼠血浆/PBS中的稳定性。
图39显示埃坡霉素类似物在10％人肝脏S9/PBS中的稳定性。
图40显示EpoD在10％人肝脏S9/PBS中的稳定色谱图。
图41的表阐述在37℃下在无GTP存在下各种埃坡霉素类似物对体外微管聚合的效果(A)及各种埃坡霉素类似物对人类肺细胞株A549的细胞毒性(B)。
图42显示在35℃及4℃下埃坡霉素对微管形成的稳定作用。
图43展示9，10-去氢-dEpoB对具有T人类乳腺癌(MX-1)异种移植物的裸鼠的治疗效果(6小时输注，Q2D×5)。
图44展示具有人类乳腺癌(MX-1)异种移植物的裸鼠用9，10-去氢-dEpoB治疗后体重的变化(6小时输注，Q2D×8)。
图45展示具有HCT-116异种移植物的裸鼠用9，10-去氢-dEpoB治疗后体重的变化(静脉内输注，Q2D×7)。
图46展示9，10-去氢-dEpoF、dEpoB及紫杉醇对具有人类乳腺癌(MX-1)肿瘤异种移植物的裸鼠中肿瘤大小的治疗效果(6小时静脉内输注，Q2D×6)。
图47显示具有人类乳腺癌(MX-1)肿瘤异种移植物的裸鼠用9，10-去氢-dEpoF、dEpoB及紫杉醇治疗后体重的变化(6小时输注，Q2D×6)。
图48展示9，10-去氢-dEpoF及dEpoB对具有人类结肠癌HCT-116异种移植物的裸鼠的治疗效果(6小时输注，Q2D×8)。
图49显示具有HCT-116异种移植物的裸鼠用9，10-去氢-dEpoF及dEpoB治疗后体重的变化(6小时输注，Q2D×8)。
图50显示9，10-去氢-dEpoF及dEpoB在具有紫杉醇-人类肺癌(A549/紫杉醇)异种移植物的裸鼠中的治疗效果(6小时输注，Q2D×5)。
图51显示具有紫杉醇-人类肺癌(A549/紫杉醇)异种移植物的裸鼠用9，10-去氢-dEpoF及dEpoB治疗后体重的变化(6小时输注，Q2D×5)。
图52所示表比较各种埃坡霉素类似物的体外肿瘤生长抑制作用及相对治疗指数。
图53显示9，10-去氢-dEpoB在具有MX-1异种移植物的裸鼠中的治疗效果(Q3D×9，6小时静脉内输注)。
图54显示具有MX-1异种移植物的裸鼠用9，10-去氢-dEpoB治疗后体重的变化(Q3D×9，6小时静脉内输注)。
图55显示9，10-去氢-埃坡霉素B在具有MX-1异种移植物的裸鼠中的治疗效果(Q3D×9，6小时输注)。
图56显示具有MX-1异种移植物的裸鼠用9，10-去氢-埃坡霉素B治疗后体重的变化(Q3D×9，6小时静脉内输注)。
图57显示在具有MX-1异种移植物的裸鼠中低剂量26-三氟-去氢-dEpoB的治疗效果(6小时静脉内输注，Q2D×12)。
图58展示具有MX-1异种移植物的裸鼠用低剂量26-三氟-9，10-去氢-dEpoB治疗后体重的变化(6小时静脉内输注，Q2D×12)。
图59显示埃坡霉素类似物抗裸鼠中人类肿瘤异种移植物的化学治疗效果。将肿瘤组织(40-50mg)在0天时皮下植入。当肿瘤尺寸达到约100mm3或以上时开始治疗，如图所示。箭头所示的所有治疗皆经由尾部静脉用微型导管及可编程泵6小时静脉内输注实施，如先前文献所述(Su、D.-S.等人，Angew.Chem.Iht.Ed(1997，36，2093)；Chou，T.C.等人，Proc.Natl，Acad.Sci.USA.1998，95，15798；每一皆以引用的方式并入本文中)。每一剂量组由四或更多只小鼠组成。假定1mm3肿瘤等于1mg肿瘤组织，体重是指总体重减去肿瘤体重。A.与表1的剂量(20mg/Kg及30mg/Kg)相比，用低剂量25-三氟-(E)-9，10-去氢-12，13-去氧EpoB(10mg/Kg)治疗的乳腺癌MX-1异种移植物。B.用25-三氟-(E)-9，10-去氢-12，13-去氧EpoB(25mg/Kg)及dEpoB(30mg/Kg)治疗MX-1大异种移植物(50mm3)。C.用25-三氟-(E)-9，10-去氢-12，13-去氧EpoB(25mg/Kg)及dEpoB(30mg/Kg)治疗的缓慢生长的A549肺癌异种移植物。D.用25-三氟-(E)-9，10-去氢-12，13-去氧EpoB(20mg/Kg)及(E)-9，10-去氢-12，13-去氧EpoB(4mg/Kg)治疗的A549/紫杉醇(体外44-倍抗紫杉醇(paclitaxel))异种移植物。对于deH-dEpoB治疗，由于在28天体重明显快速降低，故跳过该天的治疗。
图60绘示C-21修饰9，10-(E)-去氢-埃坡霉素的合成。图60A显示26-三氟-21-甲基氨基-9，10-(E)-去氢-12，13-去氧埃坡霉素B的合成。图60B是用于制备作为合成26-三氟-21-二甲基氨基-9，10-(E)-去氢-12，13-去氧埃坡霉素B中间体的26-三氟-21-氨基-9，10-(E)-去氢-12，13-去氧埃坡霉素B的合成示意图。
图61所示表列出C-21修饰埃坡霉素抗肿瘤细胞株CCRF-CEM及其抗药性亚株的IC50值。
图62显示26-三氟-9，10-去氢-dEopB及紫杉醇在具有人类T-细胞淋巴性白血病CCRF-CEM异种移植物的裸鼠中的治疗效果(6小时静脉内输注，Q2D×8)。
图63显示具有人类T-细胞淋巴性白血病CCRF-CEM异种移植物的裸鼠用25-三氟-9，10-去氢-dEopB及紫杉醇治疗后体重的变化(6小时静脉内输注，Q2D×8)。
图64显示26-三氟-9，10-去氢-dEopB及紫杉醇在具有人类T-细胞淋巴性白血病CCRF-CEM/紫杉醇异种移植物(抗紫杉醇)的裸鼠中的治疗效果(6小时静脉内输注，Q2D×7、×5)。
图65显示具有人类T-细胞淋巴性白血病CCRF-CEM/紫杉醇异种移植物(抗紫杉醇)的裸鼠用26-三氟-9，10-去氢-dEopB及紫杉醇治疗后体重的变化(6小时静脉内输注，Q2D×7、×5)。
图66显示26-三氟-9，10-去氢-dEopB及紫杉醇在具有人类结肠癌HCT-116异种移植物的裸鼠中的治疗效果(Q2D×4、×2，6小时静脉内输注)。
图67显示具有人类结肠癌HCT-116异种移植物的裸鼠用26-三氟-9，10-去氢-dEopB及紫杉醇治疗后体重的变化(Q2D×4、×2，6小时静脉内输注)。
图68显示9，10-去氢-dEopB在具有MX-1异种移植物的裸鼠中的治疗效果(6小时静脉内输注)。
图69显示具有人类乳腺癌MX-1异种移植物的裸鼠用9，10-去氢-EopB治疗后体重的变化(6小时静脉内输注)。
图70显示9，10-去氢-EopB在具有人类T-细胞淋巴性白血病CCRF-CEM/紫杉醇异种移植物(抗紫杉醇)的裸鼠中的治疗效果(6小时静脉内输注，Q3D×5、×2)。
图71显示具有人类T-细胞淋巴性白血病CCRF-CEM/紫杉醇异种移植物(抗紫杉醇)的裸鼠用9，10-去氢-EopB治疗后体重的变化(6小时静脉内输注，Q3D×5、×2)。
图72显示26-三氟-dEopB及26-三氟-9，10-去氢-dEopF在具有乳腺癌MX-1异种移植物的裸鼠中的治疗效果(Q2D×11，静脉内输注)。
图73显示具有乳腺癌MX-1异种移植物的裸鼠用26-三氟-dEopB及26-三氟-9，10-去氢-dEopF治疗后体重的变化(Q2D×11，静脉内输注)。
图74显示9，10-去氢-dEopB在具有乳腺癌MX-1异种移植物的裸鼠中的治疗效果(Q3D×9，6小时静脉内输注)。
图75显示具有乳腺癌MX-1异种移植物的裸鼠用9，10-去氢-dEopB治疗后体重的变化(Q3D×9，6小时静脉内输注)。
图76显示26-三氟-9，10-去氢-dEopF在具有乳肺癌(MX-1)异种移植物的裸鼠中的治疗效果(6小时静脉内输注及静脉内注射)。
图77显示具有MX-1异种移植物的裸鼠用26-三氟-9，10-去氢-dEopF治疗后体重的变化(6小时静脉内输注及静脉内注射)。
定义
下文亦更详细的阐述了本发明的某些化合物及特定官能团的定义。对于本发明而言，化学元素根据元素周期表(CAS版，化学及物理手册(Handbook ofChemistry and Physics)第75版，内封面)确定，且特定官能团通常如本文所述来定义。此外，有机化学的一般原则及特定官能部分及反应性皆阐述于“有机化学(Organic Chemistry)”(Thomas Sorrell，University Science Books，Sausalito：1999，其整体内容以引用的方式并入本文中)。而且，所属领域的技术人员应了解，本文所阐述的该些合成方法可使用各种保护基团。本文所用术语“保护基团”意指暂时封阻一特定官能部分(例如，O、S或N)，以便一反应可选择性地在多官能化合物的另一反应位置处实施。在较佳实施例中，一保护基团以高效率选择性地反应，生成一对预计反应稳定的被保护基质；该保护基团必须可高效率地由不攻击其他官能团且易于获得(较佳无毒)的试剂选择性去除；该保护基团形成一易于分离的衍生物(更佳不产生新的手性中心(stereogeniccenter))；且该保护基团具有最少的附加官能度以避免其他反应位置。如本文所详述，可使用氧、硫、氮及碳保护基团。本文详细阐述了实例性保护基团，然而，应了解，本发明并非意欲限于这些保护基团；相反，多种其他等效保护基团使用上述标准可容易地识别出并用于本发明方法中。此外，多种保护基团阐述于“有机合成中的保护基团”(“Protective Groups in Organic Synthesis”第3版，Greene，T.W.及Wuts，P.G.编辑，John Wiley & Sons，New York：1999，其整体内容以引用的方式并入本文中)中。
应了解，本文所述化合物可用任何数量的取代基或官能部分取代。一般而言，术语“取代”(无论其前是否有术语“视情况”)及本发明化学式中所包含的取代基指用一规定取代基取代给定结构中的氢基。当给定结构中的一个以上位置被选自一规定群组的一个以上取代基取代时，每一位置处的取代基可相同或不同。本文所用术语“取代”意欲包括有机化合物的所有容许的取代基。广义上，该些容许的取代基包括有机化合物的非环状及环状、具支链及不具支链、碳环及杂环、芳族及非芳族取代基。对于本发明而言，诸如氮等杂原子可具有满足杂原子化合价要求的氢取代基及/或本文所述的任何容许的有机化合物取代基。而且，本发明并不意欲以任何方式受限于有机化合物的容许取代基。本发明所预期取代基及变量的组合较佳为那些可导致形成用于治疗(例如)增生型疾病(包括但不限于癌症)的稳定化合物的组合。本文所用术语“稳定”较佳以下化合物，该些化合物具有足以容许制造的稳定性并可在足够长的待检测时期内及对本文所述目的而言有用的足够长的时期内保持化合物完整性。
本文所用术语“脂肪族”包括饱和及不饱和、直链(即，不具支链)、支链、环状或多环脂肪族碳氢化合物，其可视情况用一或多个官能团取代。所属领域的技术人员应了解，“脂肪族”在本文中意欲包括(但不限于)烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基及环炔基部分。因此，本发明所用术语“烷基”包括直链、支链及环状烷基。一类似惯例可用于其他诸如“烯基”、“炔基”及类似基团等通称。而且，本文所用术语“烷基”、“烯基”、“炔基”及类似基团涵盖经取代及未经取代基团二者。在某些实施例中，本文所用术语“低碳烷基”用于指那些具有1至6个碳原子的烷基(环状、非环状、经取代、未经取代、具支链或不具支链)。
在某些实施例中，本发明所用烷基、烯基、炔基包含1至20个脂肪族碳原子。在某些其他实施例中，本发明所用烷基、烯基、炔基包含1至10个脂肪族碳原子。在另外实施例中，本发明所用烷基、烯基、炔基包含1至8个脂肪族碳原子。在另外实施例中，本发明所用烷基、烯基、炔基包含1至6个脂肪族碳原子。在另一些实施例中，本发明所用烷基、烯基、炔基包含1至4个脂肪族碳原子。因此，例示性脂肪族基团包括(但不限于)(例如)甲基、乙基、正-丙基、异丙基、环丙基、-CH2-环丙基、烯丙基、正-丁基、第二-丁基、异丁基、第三-丁基、环丁基、-CH2-环丁基、正-戊基、第二-戊基、异戊基、第三-戊基、环戊基、-CH2-环戊基、正-己基、第二-己基、环己基、-CH2-环己基部分及类似物，其又可具有一或多个取代基。烯基包括(但不限于)(例如)乙烯基、丙烯基、丁烯基、1-甲基-2-丁烯-1-基及类似物。代表性炔基包括(但不限于)乙炔基、2-丙炔基(炔丙基)、1-丙炔基及类似物。
本文所用术语“烷氧基”或“烷硫基”指通过一氧原子或通过一硫原子键结至一母体分子部分的上文所定义烷基。在某些实施例中，该烷基包含1至20个脂肪族碳原子。在某些其他实施例中该烷基包含1至10个脂肪族碳原子。在另外一些实施例中，本发明所用烷基、烯基、炔基包含1至8个脂肪族碳原子。在再一些实施例中，该烷基包含1至6个脂肪族碳原子。在另外的实施例中，该烷基包含1至4个脂肪族碳原子。烷氧基的实例包括(但不限于)甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正-丁氧基、第三-丁氧基、新戊氧基及正-己氧基。烷硫基的实例包括(但不限于)甲硫基、乙硫基、丙硫基、异丙硫基、正-丁硫基及类似基团。
术语“烷基氨基”系指具有-NHR’结构的基团，其中R’是本文所定义的烷基。在某些实施例中，该烷基包含1至20个脂肪族碳原子。在某些其他实施例中该烷基包含1至10个脂肪族碳原子。在另外一些实施例中，本发明所用烷基、烯基、炔基包含1至8个脂肪族碳原子。在另外实施例中，该烷基包含1至6个脂肪族碳原子。在再一些实施例中，该烷基包含1至4个脂肪族碳原子。烷基氨基的实例包括(但不限于)甲氨基、乙氨基、异-丙氨基及类似基团。
本发明化合物上述脂肪族(或其他)部分的取代基的某些实例包括(但不限于)：脂肪族基团；杂脂肪族基团；芳基；杂芳基；芳基烷基；杂芳基烷基；烷氧基；芳氧基；杂烷氧基；杂芳氧基；烷硫基；芳硫基；杂烷硫基；杂芳硫基；F；Cl；Br；I；-OH；-NO2；-CN；-CF3；-CH2CF3；-CHCl2；-CH2OH；-CH2CH2OH；-CH2NH2；-CH2SO2CH3；-C(O)Rx；-CO2(Rx)；-CON(RX)2；-OC(O)RX；-OCO2Rx；-OCON(RX)2；-N(RX)2；-S(O)2RX；-NRx(CO)Rx，其中所出现的Rx独立地包括(但不限于)脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基、杂芳基、芳基烷基或杂芳基烷基，其中上文及此处所阐述的任一脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基烷基或杂芳基烷基取代基皆可经取代或未经取代、具支链或不具支链、环状或非环状，且其中上文及此处所阐述的任一芳基及杂芳基取代基皆可经取代或未经取代。通常可用取代基的其他实例由本文所述实例中所示的特定实施例阐述。
一般而言，本文所用术语“芳基”及“杂芳基”指较佳具有3至14个碳原子的稳定单-或多环、杂环、多环及多杂环不饱和部分，每一部分皆可经取代或未经取代。取代基包括(但不限于)上述任一取代基，即，所述用于脂肪族部分或用于本文所述其他部分导致形成稳定化合物的取代基。在本发明的某些实施例中，“芳基”是指具有一或两个芳族环的单或二环碳环体系，其包括(但不限于)苯基、萘基、四氢萘基、二氢茚基、茚基及类似基团。在本发明某些实施例中，本文所用术语“杂芳基”系指具有5至10个环原子的环状芳基，其中一个环原子选自S、O及N；零、一或两个环原子是独立选自S、O及N的另外杂原子；且其余环原子为碳，该基团通过任一环原子结合至分子的其余部分，例如，吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、噁唑基、异噁唑基、噻二唑基、噁二唑基、噻吩基、呋喃基、喹啉基、异喹啉基及类似基团。
应了解，芳基及杂芳基(包括二环芳基)可未经取代或经取代，其中取代包括独立地用任一或多个括(但不限于)下列的以下部分替换其上的一、二或三个氢原子：脂肪族基团；杂脂肪族基团；芳基；杂芳基；芳基烷基；杂芳基烷基；烷氧基；芳氧基；杂烷氧基；杂芳氧基；烷硫基；芳硫基；杂烷硫基；杂芳硫基；F；Cl；Br；I；-OH；-NO2；-CN；-CF3；-CH2CF3；-CHCl2；-CH2OH；-CH2CH2OH；-CH2NH2；-CH2SO2CH3；-C(O)Rx；-CO2(Rx)；-CON(RX)2；-OC(O)RX；-OCO2Rx；-OCON(RX)2；-N(RX)2；-S(O)2RX；-NRx(CO)Rx，其中所出现的Rx皆独立地包括(但不限于)脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基、杂芳基、芳基烷基或杂芳基烷基，其中上文及此处所阐述的任一脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基烷基或杂芳基烷基取代基可经取代或未经取代、具支链或不具支链、环状或非环状，且其中上文及此处所阐述的任一芳基及杂芳基取代基皆可经取代或未经取代。通常可用取代基的其他实例由本文所述实例中所示的特定实施例阐述。
本文所用术语“环烷基”特定地指具有三至七个(较佳三至十个)碳原子的基团。适宜环烷基包括(但不限于)环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基及类似基团，如同在其他脂肪族、杂脂肪族或杂环部分的情况，其可视情况经取代基取代，该些取代基包括(但不限于)：脂肪族基团；杂脂肪族基团；芳基；杂芳基；芳基烷基；杂芳基烷基；烷氧基；芳氧基；杂烷氧基；杂芳氧基；烷硫基；芳硫基；杂烷硫基；杂芳硫基；F；Cl；Br；I；-OH；-NO2；-CN；-CF3；-CH2CF3；-CHCl2；-CH2OH；-CH2CH2OH；-CH2NH2；-CH2SO2CH3；-C(O)Rx；-CO2(Rx)；-CON(RX)2；-OC(O)RX；-OCO2Rx；-OCON(RX)2；-N(RX)2；-S(O)2RX；-NRx(CO)Rx，其中所出现的Rx独立包括(但不限于)脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基、杂芳基、芳基烷基或杂芳基烷基，其中上文及此处所阐述的任一脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基烷基或杂芳基烷基取代基可经取代或未经取代、具支链或不具支链、环状或非环状，且其中上文及此处所阐述的任一芳基及杂芳基取代基可经取代或未经取代。通常可用取代基的其他实例由本文所述实例中所示的特定实施例阐述。
本文所用术语“杂脂肪族”指含有一或多个(例如)代替碳原子的氧、硫、氮、磷或硅原子的脂肪族部分。杂脂肪族部分可具支链、不具支链、环状或非环状且包括饱和或不饱和杂环，例如，吗啉基、吡咯烷基等。在某些实施例中，杂脂肪族部分可通过用包括(但不限于)下列的部分独立替换其上的一或多个氢原子来取代：脂肪族基团；杂脂肪族基团；芳基；杂芳基；芳基烷基；杂芳基烷基；烷氧基；芳氧基；杂烷氧基；杂芳氧基；烷硫基；芳硫基；杂烷硫基；杂芳硫基；F；Cl；Br；I；-OH；-NO2；-CN；-CF3；-CH2CF3；-CHCl2；-CH2OH；-CH2CH2OH；-CH2NH2；-CH2SO2CH3；-C(O)Rx；-CO2(Rx)；-CON(RX)2；-OC(O)RX；-OCO2Rx；-OCON(RX)2；-N(RX)2；-S(O)2RX；-NRx(CO)Rx，其中所出现的Rx独立包括(但不限于)脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基、杂芳基、芳基烷基或杂芳基烷基，其中上文及此处所阐述的任一脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基烷基或杂芳基烷基取代基可经取代或未经取代、具支链或不具支链、环状或非环状，且其中上文及此处所阐述的任一芳基及杂芳基取代基可经取代或未经取代。通常可用取代基的其他实例由本文所述实例中所示的特定实施例阐述。
本文所用术语“卤代”及“卤素”指一选自氟、氯、溴及碘的原子。
术语“卤代烷基”指上文所定义的具有1、2或3个键结至其的卤素原子的烷基且可由诸如氯甲基、溴乙基、三氟甲基及类似基团等基团例示。
本文所用术语“杂环烷基”或“杂环”指一非芳族5-、6-或7-元环或一多环基团，其包括(但不限于)二或三环基团，该基团包含具有1至3个独立选自氧、硫及氮的杂原子的稠合六元环，其中(i)每一5元环皆具有0至1个双键且每一6元环皆具有0至2个双键，(ii)氮及硫杂原子可视情况经氧化，(iii)氮杂原子可视情况经季铵化，及(iv)任一上述杂环皆可稠合至一苯环。代表性杂环包括(但不限于)吡咯烷基、吡唑啉基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、哌啶基、哌嗪基、噁唑烷基、异噁唑烷基、吗啉基、噻唑烷基、异噻唑烷基及四氢呋喃基。在某些实施例中，使用一“经取代杂环烷基或杂环”且如本文所用指一其上1、2或3个氢原子被以下基团(但不限于这些基团)独立替换来取代的如上所定义杂环烷基或杂环基团：脂肪族基团；杂脂肪族基团；芳基；杂芳基；芳基烷基；杂芳基烷基；烷氧基；芳氧基；杂烷氧基；杂芳氧基；烷硫基；芳硫基；杂烷硫基；杂芳硫基；F；Cl；Br；I；-OH；-NO2；-CN；-CF3；-CH2CF3；-CHCl2；-CH2OH；-CH2CH2OH；-CH2NH2；-CH2SO2CH3；-C(O)Rx；-CO2(Rx)；-CON(RX)2；-OC(O)RX；-OCO2Rx；-OCON(RX)2；-N(RX)2；-S(O)2RX；-NRx(CO)Rx，其中每一存在的Rx独立包括(但不限于)脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基、杂芳基、芳基烷基或杂芳基烷基，其中上文及此处所阐述的任一脂肪族、杂脂肪族、芳基烷基或杂芳基烷基取代基可经取代或未经取代、具支链或不具支链、环状或非环状，且其中上文及此处所阐述的任一芳基及杂芳基取代基可经取代或未经取代。通常可用取代基的其他实例由本文所述实例中所示的特定实施例阐述。
“标记”：本文所用术语“标记”意欲指一化合物连接有至少一个使得能够检测该化合物的元素、同位素或化学物。一般而言，标记物分为三类：a)同位素标记物，其可为放射性或重同位素，其包括(但不限于)2H、3H、32P、35S、67Ga、99mTc(Tc-99m)、111In、123I、125I、169Yb及186Re；b)免疫标记物，其可为抗体或抗原；及c)有色或荧光染料。应了解，该些标记物可在任一不干扰正被检测化合物的生物活性或特性的位置处纳入该化合物中。在本发明的某些实施例中，光亲和性标记用于直接解释生物系统中的分子间相互作用(例如，用以探测微管蛋白二聚体中埃坡霉素结合位置)。可使用各种已知发光团，多数是依赖于重氮化合物、叠氮化物或重氮甲烷光转化为氮烯或碳烯(参见，Bayley，H.，Photogenerated Reagents in Biochemistry and Molecular Biology(1983)，Elsevier，Amsterdam.，其整体内容以引用的方式并入本文中)。在本发明的某些实施例中，所用光亲和性标记物为经一或多个卤素部分取代的邻、间及对-叠氮苯甲酰基，其包括(但不限于)4-叠氮基-2，3，5，6-四氟苯甲酸。
“聚合物”：本文所用术语“聚合物”指一包含由相同或不同重复单元(单体)构成的开放、闭合、线性、具支链或经交联的链的化合物。应了解，在某些实施例中，术语聚合物指生物聚合物，如本文所用其意欲指在自然界中发现的聚合材料或基于自然界中发现的聚合材料的聚合材料，其包括(但不限于)核酸、肽及其类似物。在某些其他实施例中，术语聚合物指合成聚合物，例如可生物降解聚合物或其他聚合材料。应了解，固态聚合载体亦涵盖于本发明聚合物的范围中。本发明化合物可键结至聚合载体，且因此可在固相上实施某些合成修饰。本文所用术语“固态载体”意欲包括(但不限于)小球、碟状物、毛细管、中空纤维、探针、定位针、实心纤维、纤维素珠、微孔-玻璃珠、硅胶、视情况与二乙烯基苯交联的聚苯乙烯珠、经接枝共聚的珠、聚丙烯酰胺珠、乳胶珠、视情况与N-N′-二-丙烯酰乙二胺交联的二甲基丙烯酰胺珠及涂覆有一疏水性聚合物的玻璃粒。所属领域的技术人员应了解，具体固态载体的选择受限于该载体与所用反应化学物质的相容性。一实例性固态载体为Tentagel氨基树脂，其为1)与二乙烯基苯交联的聚苯乙烯珠与2)PEG(聚乙二醇)的复合物。由于Tentagel可提供用于珠上或珠外分析的通用载体，且其在甲苯至水的溶剂中亦具有极佳的溶胀性，故其为一特别有用的载体。
具体实施方式
由于认识到需要开发新颖及有效癌症疗法，本发明提供能够获得具有宽广生物及药理活性范围的大环的新颖合成方法，以及具有该活性的新颖化合物、新颖治疗组合物及使用该些化合物及组合物的方法。
在某些实施例中，本发明化合物可用于治疗癌症。本发明的某些化合物对癌细胞株展示细胞毒性或生长抑制作用，显示出聚合微管蛋白及稳定微管装配的能力，及/或在癌细胞异种移植物模型中导致肿瘤收缩或消失。在某些实施例中，该些化合物的副作用降低或最小化，这些副作用其包括对重要器官的毒性、恶心、呕吐、腹泻、脱发、体重减轻、体重增加、肝脏毒性、皮肤病等等。由于该些化合物的水溶性增加、毒性降低、治疗范围扩大、疗效增加等，其亦更易于调配。
本发明化合物概述
本发明化合物包括如以下进一步定义的具通式(0)及(0’)的化合物及其医药上可接受的衍生物：
Figure A0382256100391
其中R0为一经取代或未经取代的芳基、杂芳基、芳基烷基、芳基烯基、芳基炔基、杂芳基烷基、杂芳基烯基或杂芳基炔基部分；在某些实施例中，R0为一芳基烷基、芳基烯基、杂芳基烷基或杂芳基烯基部分；在其他实施例中，R0为一杂芳基烯基部分；在某些实施例中，R0为一杂芳基烷基部分；在某些实施例中，R0为一5-至7元芳基或杂芳基部分；在另外实施例中，R0为一8至12元的二环芳基或杂芳基部分；在其他实施例中，R0为一其中一苯环稠合至一杂芳基或芳基部分的二环部分；在另外的实施例中，R0为一其中一苯环稠合至一噻唑、噁唑或咪唑部分的二环部分；在其他实施例中，R0为一经取代或未经取代的苯基部分；
R3及R4独立为氢；或经取代或未经取代、线性或具支链、环状或非环状脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基、杂芳基、芳基烷基或杂芳基烷基部分(视情况经一或多个羟基取代)、经保护的羟基、烷氧基、羧基、甲醛(carboxaldehyde)、线性或具支链烷基或环状缩醛、氟、氨基、经保护的氨基、经一或两个烷基或芳基部分取代的氨基、N-肟基或N-烷氧基亚氨基；在某些实施例中，R3及R4独立为氢、氟或低碳烷基；在某些实施例中，R3及R4独立为氢或甲基；在其他实施例中，R3为甲基且R4为氢；
R5及R6独立为氢或一保护基团；在某些实施例中，R5及R6二者为氢；
X为O、S、C(R7)2或NR7，其中所出现的R7独立为氢或低碳烷基；在某些实施例中，X为O；在某些实施例中，X为NH；
Y为O、S、NH、C(R7)2、CH2、N(R7)或NH，其中所出现的R7独立为氢或低碳烷基；在某些实施例中，Y为O；在某些实施例中，Y为NH；在另外的实施例中，Y为CH2；
每一R8独立为氢；卤素、羟基、烷氧基、氨基、二烷基氨基、烷基氨基、氟代基、氰基或经取代或未经取代、线性或具支链、环状或非环状脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基、杂芳基、芳基烷基、芳基烯基、芳基炔基或杂芳基烷基、杂芳基烯基、杂芳基炔基部分(视情况经一或多个羟基取代)、经保护的羟基、烷氧基、羧基、甲醛、线性或具支链烷基或环状缩醛、氟、氨基、经保护的氨基、经一或两个烷基或芳基部分取代的氨基、N-肟基或N-烷氧基亚氨基；在某些实施例中，R8为氢；在某些实施例中，R8为羟基；在其他实施例中，R8为氟；在另外的其他实施例中，R8为低碳烷基，例如甲基；在其他实施例中，R8为-CF3、-CF2H或-CFH2；在某些实施例中，R8为全氟代或氟代烷基；在另外的实施例中，R8为卤代或全卤代烷基；
R9及R10独立为氢；或经取代或未经取代、线性或具支链、环状或非环状脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基、杂芳基、芳基、芳基烷基、芳基烯基、芳基炔基、杂芳基烷基、杂芳基烯基或杂芳基炔基部分(视情况经一或多个羟基取代)、经保护的羟基、烷氧基、羧基、甲醛、线性或具支链烷基或环状缩醛、氟、氨基、经保护的氨基、经一或两个烷基或芳基部分取代的氨基、N-肟基或N-烷氧基亚氨基；在某些实施例中，R9及R10中之一为甲基；在某些实施例中，R9及R10为甲基；在另外的其他实施例中，R9及R10中之一为甲基，且另一个为氢；在某些实施例中，R9及R10为氢；所出现RB独立为氢；卤素；-ORB’；-SRB’；-N(RB’)2；-C(O)或B’-；-C(O)RB’；-CONHRB’；-O(C＝O)RB’-；-O(C＝O)ORB’；-NRB’(C＝O)RB’；N3；N2RB’；环状缩醛；或环状或非环状、线性或具支链脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基或杂芳基，视情况经一或多个氢取代；卤素；-ORB’-；-SRB’-；-N(RB’)2；-C(O)ORB’-；-C(O)RB’-；-CONHRB’；-O(C＝O)RB’-；-O(C＝O)ORB’-；-NRB’(C＝O)RB-；N3；N2RB’；环状缩醛；或环状或非环状、线性或具支链经取代或未经取代脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基或杂芳基部分；或为一埃坡霉素、去氧埃坡霉素或其类似物；或为一聚合物；碳水化合物；光亲和性标记物；或为放射性标记物；在某些实施例中，RB为氢、 甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、环丙基、环丁基、环戊基或环己基，每一未经取代或视情况经一或多个卤素、-OH、-或B’、NH2或N(RB’)2或其任一组合取代，其中所出现的RB’独立为氢、烷基、芳基或一保护基团，在某些实施例中，RB为氢、甲基或乙基，在其他的实施例中，RB为甲基，在某些实施例中，为-CY3、-CHY2、-CH2Y，其中Y为F、Br、Cl、I、ORB’、NHRB’、N(RB’)2或SRB’；在另外的其他实施例中，RB为-CF3、-CH2F或CHF2；在某些实施例中，RB为全氟代或氟代烷基；在其他实施例中，RB为卤代或全卤代烷基；
所出现的RB’独立为氢；一保护基团；线性或具支链、经取代或未经取代、环状或非环状脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基、杂芳基、芳基烷基、芳基烯基、芳基炔基、杂芳基烷基、杂芳基烯基或杂芳基炔基部分；
m为1、2、3或4，在某些实施例中，m为1或2，在其他实施例中，m为1。
本发明化合物包括下文进一步定义的通式(I)或(I’)的化合物及其医药上可接受的衍生物：
Figure A0382256100421
其中R1为氢或低碳烷基；在某些实施例中，R1为甲基；在某些实施例中，R1为-CF3、-CF2H或CH2F；在其他实施例中，R1为全氟代或氟代烷基；在另外的其他实施例中，R1为卤代或全卤代烷基；
R2为一经取代或未经取代的芳基、杂芳基、芳基烷基或杂芳基烷基部分；在某些实施例中，R2为经取代或未经取代的噁唑；在其他实施例中，R2为经取代或未经取代的噻唑；
R3及R4每一独立为氢；或经取代或未经取代、线性或具支链、环状或非环状脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基、杂芳基、芳基烷基或杂芳基烷基部分(视情况经一或多个羟基取代)、经保护的羟基、烷氧基、羧基、甲醛、线性或具支链烷基或环状缩醛、氟、氨基、经保护的氨基、经一或两个烷基或芳基部分取代的氨基、N-肟基或N-烷氧基亚氨基；在某些实施例中，R3及R4每一独立为氢、氟或低碳烷基；在其他实施例中，R3及R4每一独立为氢或甲基；在另外的其他实施例中，R3为甲基且R4为氢；
R5及R6每一独立为氢或保护基团；在某些实施例中，R5及R6二者为氢；
X为O、S、C(R7)2或NR7，其中所出现的R7独立为氢或低碳烷基；在某些实施例中，X为O；在其他实施例中，X为NH；所出现的RB独立为氢；卤素；-ORB’；-SRB’；-N(RB’)2；-C(O)ORB’；-C(O)RB’；-CONHRB’；-O(C＝O)RB’；-O(C＝O)ORB’；-NRB’(C＝O)RB’；N3；N2RB’；环状缩醛；或环状或非环状、线性或具支链脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基或杂芳基，视情况经一或多个氢取代；卤素；-ORB’；-SRB’；-N(RB’)2；-C(O)ORB’；-C(O)RB’；-CONHRB’；-O(C＝O)RB’；-O(C＝O)ORB’；-NRB’(C＝O)RB’；N3；N2RB’；环状缩醛；或环状或非环状、线性或具支链经取代或未经取代的脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基或杂芳基部分；或为一埃坡霉素、去氧埃坡霉素或其类似物；或为一聚合物；碳水化合物；光亲和性标记物；或放射性标记物；在某些实施例中，RB为氢、
Figure A0382256100431
甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、环丙基、环丁基、环戊基或环己基，每一未经取代或视情况经一或多个卤素、-OH、-ORB’或-N(RB’)2或其任一组合取代，其中所出现的RB’独立为氢、烷基、芳基或保护基团，在其他实施例中，RB为氢、甲基或乙基，在另外的其他实施例中，RB为甲基，在另外的其他实施例中，RB为-CF3、-CH2F或CHF2。
在某些实施例中，本发明化合物包括所示的具有所定义立体化学结构的通式(II)或(II’)化合物：
或
其中X、R1、R2、R3、R4、R5、R6、RB及X皆如上文所定义之。
在某些实施例中，X为O。在其他实施例中，X为NH。在其他实施例中，X为CH2。
在某些实施例中，R2为经取代或未经取代的噻唑。在某些实施例中，R2为2-甲基-噻唑-4-基。在其他实施例中，R2为2-羟甲基-噻唑-4-基。在另外的其他实施例中，R2为2-氨甲基-噻唑-4-基。在其他实施例中，R2为2-硫甲基-噻唑-4-基。
在某些实施例中，R2为经取代或未经取代的噁唑。在某些实施例中，R2为2-甲基-噁唑-4-基。在其他实施例中，R2为2-羟甲基-噁唑-4-基。在另外的其他实施例中，R2为2-氨甲基-噁唑-4-基。在其他实施例中，R2为2-硫甲基-噁唑-4-基。
在某些实施例中，RB为氢、甲基、乙基、-CF3、-CH2F、-CF2H。在某些实施例中，RB为甲基。在另外的其他实施例中，RB为-CF3。在某些实施例中，RB为氢。在其他实施例中，RB为乙基。
某些较佳化合物包括(例如)：
Figure A0382256100471
Figure A0382256100481
本发明化合物包括那些上文具体陈述及此处所阐述的化合物，且部分地由本文其他地方所揭示的各类、亚属及物种来加以图解说明。
所属领域的技术人员应了解，本发明的化合物中可存在不对称中心。因此，本发明化合物及其医药组合物可呈单一对映异构体、非对映体或几何异构体形式，或可呈立体异构体混合物形式。在某些实施例中，本发明化合物可为对映异构纯化合物。在某些其他实施例中，提供立体异构体或非对映体的混合物。
应了解，上述化合物的某些类及次类可存在各种同分异构形式。本发明涵盖呈实质上不含其他异构体的单一异构体形式及或者呈各种异构体的混合物形式(例如，立体异构体的外消旋混合物)的化合物。此外，除非特别说明，否则本发明涵盖(Z)及(E)两种双键异构体。因此，通常以(O)、(O’)、(I)、(I’)、(II)及(II’)结构绘示的本发明化合物涵盖彼等其中双键为(Z)或(E)的结构。在某些较佳实施例中，C12-C13位置处的双键为顺式或Z构型。在某些实施例中，C9-C10位置处的双键为反式或E构型。在另外的其他实施例中，C12-C13位置处的双键为顺式或Z构型，且C9-C10位置处的双键为反式或E构型。本发明亦涵盖上文所述特定化合物的互变异构体。
此外，本发明提供本发明化合物的医药上可接受衍生物，及使用这些化合物、其医药组合物或两者中的任一种与一或多种附加治疗剂的组合治疗一患者的方法。本文所用习语“医药上可接受衍生物”表示该化合物的任一医药上可接受盐、酯或该酯的盐，或任一投与一患者时能够提供(直接或间接)本文另外所述化合物或其代谢物或残余物的其他加合物或衍生物。因此，医药上可接受衍生物尤其包括前药。前药是一化合物的衍生物，其通常具有显著降低的药理活性，其包含一易于在体内去除从而产生作为药理活性物质的母体分子的附加部分。一前药的实例是在体内解离产生一相关化合物的酯。各种化合物的前药及用于衍生该些母体化合物以产生该些前药的材料及方法已为人熟知且适用于本发明。下文将更详细的阐述某些实例性医药组合物及医药上可接受衍生物。
尤其令人感兴趣的本发明化合物是具以下性质的化合物：
●对维持在体外的癌细胞株或在使用一科学上可接受癌细胞异种移植物模型的动物研究中展现细胞毒性或生长抑制作用；
●展示一聚合微管蛋白及稳定微管装配的能力；
●对重要器官具有最低水平的毒性；
●在科学上可接受的癌细胞异种移植物模型中导致肿瘤消失；
●在科学上可接受的癌细胞异种移植物模型中导致肿瘤收缩；
●在科学上可接受的癌细胞异种移植物模型中导致肿瘤消失且停止治疗后使肿瘤的复发延迟/或不再复发；
●在科学上可接受的癌细胞异种移植物模型中展示暂时且可逆的体重减轻并显示治疗作用；
●展示优于埃坡霉素A、B、C或D或紫杉醇的增强的水溶性，或另外或者展示足够高溶解性以致使用比例降低的chremophor即可在一水性介质中调配；及/或
●展示优于埃坡霉素B、埃坡霉素D或紫杉醇的治疗曲线(例如，最佳安全及治疗效果)。
上文所述各种埃坡霉素类似物已如本文所例示制备、表征及测试。人们发现9，10-去氢-埃坡霉素类似物可用于治疗癌症，且尤其是已制备该些化合物并发现其具有上述一或多种期望的特性。
合成方法
先前已阐述某些埃坡霉素、去氧埃坡霉素及其类似物的合成(参见，美国专利第6,242,469号、第6,284,781号、第6,300,355号、第6,204,388号、第6,316,630号及第6,369,234号；美国专利申请案第09/797,027号、第09/796,959号及第10/236,135号；及PCT公开案WO 99/01124、WO 99/43653及WO 01/64650，其整体内容以引用的方式并入本文中)。由于认识到人们需要经改良或其他合成方法以大规模且高效地产生埃坡霉素、去氧埃坡霉素及其类似物，因而本发明提供一用于合成埃坡霉素、去氧埃坡霉素及其类似物的有效且模式化途径。尽管本文的实例中阐述某些实例性化合物的合成，但应了解，该方法通常适用于产生上述本文所述每一类及次类化合物的类似物及结合物。
特别是，本发明的9，10-去氢埃坡霉素化合物可使用用于合成埃坡霉素的合成方法以各种方式来制备。在某些实施例中，该些化合物使用一汇集合成途径制备。举例而言，埃坡霉素可通过制备两个或三个可结合在一起获得预期化合物的中间体来合成。在一实施例中，该些中间体之一是一包含1至9个碳的酰基部分，且另一中间体包含10至15个碳，且亦可包含噻唑侧链。埃坡霉素的该等两个大体相等部分可首先利用C-1与脱氧C-15之间的酯化反应结合在一起。然后，该大环可利用碳-碳偶合反应(例如铃木(Suzuki)偶合)或闭环置换反应来闭环。在一实施例中，该最终闭环步骤利用闭环置换反应形成9，10-双键并关闭该大环来完成。闭环置换反应可使用一有机金属催化剂(例如下文示意图8中所示Grubbs催化剂)来完成。在某些实施例中，将该9，10-双键还原或氧化，或将9，10-双键进一步官能化以制备其他埃坡霉素衍生物。
在其他实施例中，最终的闭环步骤利用闭环置换反应形成12，13-双键并闭合该大环来实施。在某些实施例中，将12，13-双键还原或氧化。在其他实施例中，可用大环醛醇缩合反应或大环内酯化反应形成该大环。
附图及实例中提供本发明化合物的某些实例性合成方法。所属领域的技术人员应了解，可利用本文所述的合成程序制备各种类似物及衍生物。举例而言，人们可利用16元环上的不同保护基团或不同取代基完成诸多合成步骤。
医药组合物
本发明亦提供一包括上文及此处所阐述化合物中至少之一或其医药上可接受的衍生物的医药制剂，其中该些化合物能抑制癌细胞的生长或杀死癌细胞，且在某些相关实施例中能抑制多抗药性癌细胞的生长或杀死多抗药性癌细胞。在某些实施例中，该医药制剂亦包含增溶剂或乳化剂，例如氢化蓖麻油(polyoxyl35蓖麻油)或Solutol(聚乙二醇66012-羟基硬脂酸酯)。
如上所述，本发明提供具有抗肿瘤及抗增生活性的新颖化合物，且因此本发明化合物可用于治疗癌症。因此，本发明另一方面提供医药组合物，其中该些组合物包括本文所述该些化合物中任一种，且视情况包括一医药上可接受的载剂。在某些实施例中，该些组合物视情况进一步包括一或多种附加治疗剂。在某些其他实施例中，该附加治疗剂可为一抗癌剂，如下文更详细讨论。
亦应了解，本发明的某些化合物可呈游离治疗用形式或视需要呈其医药上可接受的衍生物形式。根据本发明，一医药上可接受之衍生物包括(但不限于)医药上可接受的盐、酯、此等酯的盐、或任一投与有其需要的患者时能够直接或间接提供一本文所述化合物或其代谢物或残余物的其他加合物或衍生物，例如一前药。
本文所用术语“医药上可接受之盐”指那些在合理的医学判断范围内适于接触人类及低级动物的组织而不会产生过度毒性、刺激、过敏反应及类似反应且具有合理效益/风险比的盐。此项技术中已熟知各种医药上可接受的盐。举例而言，S.M.Berge等人在J.Pharmaceutical Sciences(66：1-19(1977)，其以引用的方式并入本文)中详细阐述医药上可接受的盐。该些盐可在本发明化合物的最后分离及纯化期间就地制备，或通过游离碱官能团与适宜有机酸反应来分离。医药上可接受的无毒酸加成盐的实例为与无机酸(例如，盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸及高氯酸)或与有机酸(例如，醋酸、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸)或通过使用该项技术中所用其他方法(例如离子交换)形成的氨基盐。其他医药上可接受的盐包括己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡萄糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟碱酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对-甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐及类似的盐。代表性碱金属或碱土金属盐包括钠、锂、钾、钙、镁盐及类似物。其他医药上可接受的盐包括(如适用)使用诸如卤化物、氢氧化物、羧酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、低碳烷基磺酸盐及芳基磺酸盐等平衡离子形成的无毒铵、季铵及胺阳离子。
此外，本文所用术语“医药上可接受的酯”是指在体内水解的酯且包括那些在人体内易于分解获得母体化合物或其盐的酯。适宜的酯基包括(例如)那些衍生自医药上可接受的脂肪族羧酸的酯基，尤其是衍生自链烷酸、链烯酸、环烷酸及烯二酸，其中每一烷基或烯基部分较佳不超过6个碳原子。特定酯的实例包括甲酸酯、醋酸酯、丙酸酯、丁酸酯、丙烯酸酯及丁二酸乙酯。
而且，本文所用术语“医药上可接受的前药”指本发明化合物的那些在合理的医学判断范围内适合用于接触人类及低等动物的组织而不具有过度毒性、刺激、过敏反应等、效益/风险比合理且对其预期用途有效的前药及本发明化合物可能的两性离子形式。术语“前药”指可(例如)通过在血液中水解在体内迅速转化产生上式母体化合物的化合物。全面的讨论提供于T.Higuchi及V.Stella的Pro-drugs as Novel Delivery Systems(A.C.S.Symposium Series的第14卷)及Edward B.Roche编辑的Bioreversible Carriers in Drug Design(AmericanPharmaceutical Association and Pergamon Press，1987)中，二者皆以引用的方式并入本文中。
如上所述，本发明的医药组合物另外包含一医药上可接受的载剂，本文所用医药上可接受的载剂包括适于所期望特定剂型的任一及所有溶剂、稀释剂、或其他液体媒剂、分散或悬浮助剂、表面活性剂、等渗剂、增稠或乳化剂、防腐剂、固体粘结剂、润滑剂及类似物。Remington′s Pharmaceutical Sciences(第15版，E.W.Martin，Mack Publishing Co.，Easton，Pa.，1975)揭示各种用于调配医药组合物的载剂及用于制备其的熟知技术。任一常用载剂介质的使用皆涵盖于本发明范畴内，除非(例如)该常用载剂介质因产生任何不期望的生物效应或以有害方式与该医药组合物的任一其他组分互相作用而与本发明抗癌化合物不相容。可用作医药上可接受载剂的材料的某些实例包括(但不限于)碳水化合物，例如，乳糖、葡萄糖及蔗糖；淀粉，例如，玉米淀粉及马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，例如，羧甲基纤维素钠、乙基纤维素及醋酸纤维素；粉末状黄蓍胶；麦芽；明胶；滑石粉；氢化蓖麻油；Solutol；赋形剂，例如，可可油及栓剂蜡；油，例如，花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄欖油、玉米油及大豆油；二醇，例如，丙二醇；酯，例如，油酸乙酯及月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，例如，氢氧化镁及氢氧化铝；海藻酸；无致热原的水；等渗盐水；林格(Ringer)溶液；根据配方设计师的判断，该组合物中亦可含有乙醇及磷酸盐缓冲液及其他无毒相容润滑剂(例如，月桂基硫酸钠及硬脂酸镁)及着色剂、释放剂、涂布剂、甜味剂、矫味剂及加香剂、防腐剂及抗氧化剂。
化合物及医药组合物的用途
本发明进一步提供用于抑制肿瘤生长及/或肿瘤转移的方法。在某些相关实施例中，本发明提供一种通过抑制肿瘤多抗药性癌细胞的肿瘤生长及/或肿瘤转移治疗癌症的方法。该方法涉及将一治疗有效量的该化合物或其医药上可接受的衍生物投与一有其需要的患者(包括但不限于人类或动物)。在某些实施例中，尤其是关于治疗包括多抗药性癌细胞的癌症的实施例中，该治疗有效剂量为足以杀死多抗药性癌细胞或抑制其生长的量。在某些实施例中，本发明化合物可用于治疗实体肿瘤。
本发明化合物及医药组合物可用于治疗或预防包括增生性疾病(例如，癌症)、自身免疫性疾病(例如，类风湿性关节炎)及传染病(例如，细菌、真菌等)在内的任何疾病或状况。该些化合物及医药组合物可投予动物，较佳哺乳动物(例如，驯养家畜、猫、狗、小鼠、大鼠)，且更佳为人类。可使用任一投与方法将医药组合物的化合物投递给动物。在某些实施例中，该化合物或医药组合物可以非经肠方式投与。
另一方面，根据本发明的治疗方法，通过用本发明化合物或组合物接触肿瘤细胞可杀死肿瘤细胞或抑制其生长，如本文所阐述。因此，本发明又一方面提供一种治疗癌症的方法，该方法包括以达成期望结果所需量及时间将一治疗有效量的本发明化合物或包含一本发明化合物的医药组合物投予有其需要的患者。在本发明的某些实施例中，本发明化合物或医药组合物的“治疗有效量”是指可有效杀死肿瘤细胞或抑制其生长的量。根据本发明的方法，该些化合物及组合物可使用能有效杀死肿瘤细胞或抑制其生长的任一量及任一投与途径来投与。因此，本文所用表达法“有效杀死肿瘤细胞或抑制其生长的量”是指足以杀死肿瘤细胞或抑制其生长的药剂量。视受治疗者物种、年龄及全身状况、感染严重程度、具体抗癌剂、其投与模式及等而受治疗者与受治疗者之间所需确切量将有所不同。本发明的抗癌化合物较佳调配成易于投与且剂量一致的单位剂型形式。本文所用表达法“单位剂型”是指适用于欲治疗患者的抗癌剂的物理离散单位。然而，应了解，本发明化合物及组合物的总日用量应由主治医生在合理的医学判断范围内决定。任一具体患者或有机体的特定治疗有效剂量水平应根据各种因素而定，包括所治疗疾病及疾病严重程度；所用特定化合物的活性；所用特定组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别及饮食；所用特定化合物的投与时间、投与途径及排泄速度；治疗持续时间；与所用特定化合物组合或同时使用的药物；及医疗技术中熟知的类似因素。
此外，以期望剂量与一适宜医药上可接受的载剂调配后，根据所治疗传染病的严重程度，本发明的医药组合物可以下列方式投与人类及其他动物：经口、经直肠、非经肠、脑池内、阴道内、腹膜腔内、外敷(以粉剂、软膏或滴剂形式)、经口腔(以经口或鼻喷雾形式)或类似投与方式。在本发明的某些实施例中，本文所述的本发明化合物可通过与水溶性鳌合剂或水溶性聚合物(例如，聚乙二醇、聚(1-谷氨酸)或聚(1-天冬氨酸))结合来调配，如美国专利第5,977,163号中所阐述，其整体内容以引用的方式并入本文中。在某些实施例中，本发明化合物可以每天足以递送下列的剂量水平以经口或非经肠方式一天一次或多次投与以获得期望治疗效果：约0.001mg/Kg至约100mg/Kg受治疗者体重，自约0.01mg/kg至约50mg/kg，较佳自约0.1mg/kg至约40mg/kg，较佳自约0.5mg/kg至约30mg/kg，自约0.01mg/kg至约10mg/kg，自约0.1mg/kg至约10mg/kg，且更佳自约1mg/kg至约25mg/kg。所期望剂量可以每隔一天、每隔两天、每周、每两周、每三周或每四周递送一次来递送。在某些实施例中，所期望剂量可用多次投与(例如，两次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次或十次投与)来递送。
用于口服投与的液体剂型包括(但不限于)医药上可接受的乳液、微乳液、溶液、悬浮液、浆液及酏剂。除该些活性化合物之外，该些液体剂型可包含该项技术中常用的惰性稀释剂例如水或其他溶剂、增溶剂及乳化剂例如，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、醋酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(特别是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油及芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇及山梨糖醇酐脂肪酸酯及其混合物。除惰性稀释剂之外，该口服组合物亦可包括佐剂，例如，润湿剂、乳化及悬浮剂、甜味剂、矫味剂及加香剂。
可根据熟知技术用适宜分散或润湿剂及悬浮剂来调配可注射制剂，例如，无菌可注射水性或油性悬浮液。该无菌可注射制剂亦可为于无毒的医药上可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液、悬浮液或乳液，例如溶于1，3-丁二醇中的溶液。该些可使用的可接受媒剂及溶剂尤其为水、林格溶液、U.S.P.及等渗氯化钠溶液。此外，通常使用无菌固定油作为溶剂或悬浮媒介。为此，可使用包括合成甘油单酯或甘油二酯在内的任一温和固定油。此外，在可注射制剂中可使用诸如油酸等脂肪酸。
该些可注射调配物可(例如)通过经由细菌截留过滤器过滤或通过纳入杀菌剂来灭菌，该些杀菌剂呈可在使用前溶于或分散于无菌水或其他无菌可注射媒介中的无菌固体组合物形式。
为了延长药物的作用，通常自皮下或肌肉注射来减缓药物的吸收较为理想。此可通过使用水溶性差的晶体或无定形材料的液态悬浮液来达成。于是，药物的吸收速度取决于其溶解速度，而其溶解速度又取决于晶体大小及晶形。或者，可通过将该药物溶解或悬浮于一油媒剂中来达成非经肠投与药物的延时吸收。可通过在生物可降解聚合物(例如，聚交酯-聚乙醇酸交酯)中形成药物的微囊基质来制备可注射储积形式。根据药物与聚合物的比例及所用特定聚合物的性质，可控制药物释放的速度。其他生物可降解聚合物的实例包括聚(原酸酯)及聚酐类。亦可通过将药物截留于与身体组织相容的脂质体或微乳液中来制备储积可注射调配物。
用于直肠或阴道投与的组合物较佳为栓剂，其可通过将本发明化合物与适宜无刺激性赋形剂或载剂(例如可可油、聚乙二醇或栓剂蜡)进行混合来制备，该些赋形剂或载剂在室温下为固体但在体温下为液体，因而其可在直肠或阴道腔内融化并释放该活性化合物。
用于口服投与的固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、粉末及颗粒。在该些固体剂型中，活性化合物与至少一惰性且医药上可接受的赋形剂或载剂(例如，柠檬酸钠或磷酸氢钙)及/或以下混合：a)填充剂或扩充剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇及硅酸，b)粘合剂，例如，羧甲基酸纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖及阿拉伯胶，c)保湿剂，例如甘油，d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐及碳酸钠，e)溶液阻滞剂，例如，石蜡，f)吸收促进剂，例如，季铵化合物，g)润湿剂，例如，鲸蜡醇及甘油单硬脂酸酯，h)吸收剂，例如，高岭土及膨润土及i)润滑剂，例如，滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠，及其混合物。在为胶囊、片剂及丸剂的情况下，该剂型亦可包括缓冲剂。
在使用诸如乳糖(lactose或milk sugar)及高分子量聚乙二醇等赋形剂的软及硬质填充明胶胶囊中，亦可使用类似类型的固体成份作为填充剂。固体剂型的片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂及颗粒可用包膜及包壳制备，例如肠溶包膜及医药调配技术中熟知的其他包膜。其可视情况包括遮光剂且亦可为视情况以一延迟方式仅(或优先)在肠道的某一部分释放活性成份的组合物。可使用的包埋成份的实例包括聚合物质及蜡。在使用诸如乳糖(lactose或milk sugar)及高分子量聚乙二醇等赋形剂的软及硬质填充明胶胶囊中亦可使用类似类型的固体成份作为填充剂。
该些活性化合物亦可为含有一或多种上述赋形剂的微囊形式。固体剂型的片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂及颗粒可用包膜及包壳制备，例如肠溶包膜、释放控制包膜及医药调配技术中熟知的其他包膜。在该些固体剂型中，活性化合物可与至少一诸如蔗糖、乳糖或淀粉的惰性稀释剂混合。除惰性稀释剂之外，在正常情况下该些剂型亦可包含除惰性稀释剂以外的额外物质，例如，片剂润滑剂及其他片剂助剂(例如，硬脂酸镁及微晶纤维素)。在为胶囊、片剂及丸剂的情况下，该些剂型亦可包含缓冲剂。其可视情况包含遮光剂且亦可为视情况以一延迟方式仅(或优先)在肠道的某一部分释放该些活性成份释放的组合物。可利用的包埋成份的实例包括聚合物质及蜡。
用于外敷或经皮投与本发明化合物的剂型包括软膏、膏剂、乳霜、乳液、凝胶、粉末、溶液、喷雾剂、吸入剂或贴片。该活性组份可在无菌条件下与一医药上可接受载剂及任一所需防腐剂及所需缓冲剂混合。眼用调配物、滴耳剂及滴眼剂亦涵盖于本发明范畴内。此外，本发明涵盖使用皮肤贴片，其具有以控制方式将一化合物递送至身体的附加优点。该些剂型可通过将化合物溶解或分散于适宜媒介中来制备。亦可使用吸收促进剂来增加该化合物穿过皮肤的通量。速率可通过提供一速率控制膜或通过将该化合物分散于一聚合物基质或凝胶中来控制。
如上所述，本发明化合物可用作抗癌剂，且因此可通过使肿瘤细胞死亡或抑制肿瘤细胞的生长用于治疗癌症。一般而言，本发明抗癌剂可用于治疗癌症及其他增生性疾病，包括(但不限于)乳腺癌、脑癌、皮肤癌、子宫颈癌、结肠及直肠癌、白血病、肺癌、黑素瘤、多发性骨髓瘤、非霍杰金氏淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma)、卵巢癌、胰癌、前列腺癌及胃癌，仅列举少数例子。在某些实施例中，本发明抗癌剂可有效抵抗白血病细胞及黑素瘤细胞，且因此可用于白血病(例如，骨髓性、淋巴细胞、前髓细胞、骨髓细胞及淋巴母细胞白血病，无论为急性或为慢性形式)及恶性黑素瘤的治疗。在另外的实施例中，本发明抗癌剂可有效抗实体肿瘤并亦可杀死多抗药性细胞(MDR细胞)及/或抑制其生长。在某些实施例中，本发明抗癌剂可有效抵抗对其他熟知抗肿瘤药产生抗性或发现对其他熟知抗肿瘤药在临床上不响应的癌症。在其他实施例中，本发明抗癌剂可有效抵抗对其他熟知抗肿瘤微管稳定剂(例如，紫杉醇)具有抗性的癌症。
亦应了解，本发明化合物及医药组合物可用于组合治疗，换言之，该些化合物及医药组合物可与一或多种其他期望的疗法或医疗程序同时、先于其或在其之后实施。在一组合疗法中采用的特定疗法组合(疗法或程序)应考虑预期疗法及/或程序的相容性及欲达成的期望治疗效果。亦应了解，所用疗法对于同一疾病可达成期望效果(例如，本发明化合物可与另一抗癌剂同时投与)，或其可达成不同的效果(例如，控制任何副作用)。
举例而言，可与本发明抗癌剂组合使用的其他疗法及抗癌剂包括外科手术、放射疗法(仅举几个实例，γ-放射疗法、中子束放射疗法、电子束放射疗法、质子疗法、近距放射疗法及全身放射性同位素疗法)、内分泌疗法、生物反应调节剂(干扰素、介白素及肿瘤坏死因子(TNF)，仅举几个例子)、高温疗法及冷冻疗法、消弱任何副作用的试剂(例如，止吐药)及其他批准的化疗药物，包括(但不限于)烷基化药物(氮芥、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、美法仑(Melphalan)、异环磷酰胺)、抗代谢药物(甲氨蝶呤(Methotrexate))、嘌呤拮抗剂及嘧啶拮抗剂(6-巯基嘌呤、5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷、二氟胞嘧啶)、纺锤体毒素(长春碱(Vinblastine)、长春新碱(Vincristine)、长春瑞宾(Vinorelbine)、紫杉醇、多西他赛)、鬼臼毒素(podophyllotoxin)(表鬼臼毒素(Etoposide)、伊立替康(Irinotecan)、拓扑替康(Topotecan))、抗生素(阿霉素(Doxorubicin)、博莱霉素(Bleomycin)、)丝裂霉素(Mitomycin))、亚硝基脲(亚硝基脲氮芥(Carmustine)、罗氮芥(Lomustine))、无机离子(顺铂、卡铂)、酶(天冬酰胺酶)及激素(他莫昔芬(Tamoxifen)、亮丙瑞林(Leuprolide)、氟利坦(Flutamide)及甲地孕酮(Megestrol))，仅举几个例子。关于最新疗法的更全面讨论 参见http：//www.nci.nih.gov/、http：//www.fda.gov/cder/cancer/druglistframe.htm上的FDA认可的肿瘤药物列表及The Merck Manual(第17版，1999年)，其整体内容皆以引用的方式并入本文中。
本发明另一方面提供一药物封包或套组，其包括一或多个填充有本发明医药组合物的一或多种成份的容器，且在某些实施例中包括用作一组合疗法的额外经批准治疗剂。视情况，该(些)容器可附带有一监管药物制造、使用及销售的政府机构所规定形式的公告，该公告反映出政府机构已批准该药物的制造、使用及销售用于人类。
等效物
下文的代表性实例意欲帮助阐述本发明，而不欲且不应解释为限制本发明范畴。实际上，除那些所示及本文所阐述实施例外，所属领域的技术人员自本文献的全部内容(包括下文实例及本文所引用的科学参考文献及专利文献)可容易地看出本发明的各种修改形式及其若干其他实施例。应进一步了解，所引用参考文献的内容皆以引用的方式并入本文中以有助于阐述此项技术的状况。以下实例包含适合实践本发明各种实施例及其等效内容的重要的额外信息、范例及指导原则。
实例
实例1：合成9，10-去氢-12，13-去氧埃坡霉素
该实施例阐述反-9，10-去氢-12，13-去氧埃坡霉素B、26-三氟-反-9，10-去氢-12，13-去氧埃坡霉素B、26-三氟-12，13-去氧埃坡霉素B及12，13-去氧埃坡霉素B的合成及该些化合物的生物检验。
在已知经氟取代的其他药物的药物动力学及化疗指数增加的情况下，制备并测试埃坡霉素的氟化衍生物(Ojima，I.；Inoue，T.；Chakravarty，S.；J.FluorineChem.1999，97；Newman，R.A.；Yang，J.；Finlay，M.R.V.；Cabral，F.，Vourloumis，D.；Stephens，L.C；Troncoso，P.；Wu，X.；Logothetis，C.J.；Nicolaou，K.C；Navone，N.M.Cancer Chemother.Pharmacol.2001，48，319-326；每一皆以引用的方式并入本文中)。
Figure A0382256100611
1[16]dEpoB                            2 26-F3-[16]dEpoB
为获得化合物2，我们设法利用我们实验室最近报导的高度汇集方法通过先合成埃坡霉素490(6，去氢去氧EpoB)来合成dEpoB(1，示意图3)(Biswas，K.；Lin，H.；Njardarson，J.T；Chappell，M.D.，Chou，T.C.，Guan，Y.；Tong，W.P.，He，L.；Horwitz，S.B.，Danishefsky，S.J.J.Am.Chem.Soc 2002，124(33)；9825-9832；Rivkin，A.；Njardarson，J.T.；Biswas，K；Chou，T.C.；Danishefsky，S.J.J.Org.Chem.2002，67，7737-7740；每一皆以引用的方式并入本文中)。在此合成中，通过乙烯基碘化物前体3与三-正丁基乙烯基锡烷的Stille立体定向偶合将一侧接乙烯基引入化合物4。闭环置换后去保护，获得化合物6，然后化合物6可通过区域选择性二酰亚胺还原转变为dEpoB(I)。
示意图3.埃坡霉素490的合成
Figure A0382256100612
首先关注15的合成(示意图4)。先前报导的烯醇化锂7(Chappell，M.D.；Stachel，S.J.；Lee，C.B.；Danishefsky，S.J.Org.Lett.(2000，2(11)，1633-1636)；以引用的方式并入)与碘化物8(用在二氯甲烷中的TMSI自已知醇16合成)的烷基化反应生成9，其产率为78％且具有高非镜像立体选择性(＞25∶1de)。化合物9通过三个步骤变成所示的10。人们曾试图将甲基溴化镁加成至10的Weinreb酰胺键上，但未能成功。该反应之所以失败是由于存在亚碘烷基键。然而，可通过改变该两个C-C键形成步骤的顺序来达到我们的目标。因此，可在10与乙烯基三丁基锡在Stille条件下反应后，添加甲基格氏试剂(Grignard reagent)，获得所期望的酮11。在酮11与氧化膦12缩合后，随后将三乙基甲硅烷醚去保护，获得高产率的片段13。所获得的13与C1-C10酸片段进行酯化反应(Biswas，K.；Lin，H.；Njardarson，J.T.；Chappell，M.D.，Chou，T.C.，Guan，Y.；Tong，W.P.，He，L.；Horwitz，S.B.，Danishefsky，S.J.J.Am.Chem.Soc.2002，124(33)；9825-9832；Rivkin，A.；Njardarson，J.T.；Biswas，K；Chou，T.C.；Danishefsky，S.J.J.Org.Chem.2002，67，7737-7740；以引用的方式并入本文中)，获得期望的15，产率为75％(示意图4)。
示意图4.RCM前体15的合成
遗憾的是，当试图在二氯甲烷中用第二代Grubbs催化剂(Reviews：Grubbs，R.H.；Miller，S.J.；Fu，G.C.Acc.Chem.Res.1995，28，446；Tmka，T.M；Grubbs，R.H.Acc.Chem.Res.2001，34，18；Alkene Metathesis in Organic Chemistry(编辑：Fürstner，A.；Springer，Berlin，1998)；Fürstner，A.Angew.Chem.Int.Ed.Engl.2000，39，3012；Schrock，R.R.Top.Organomet.Chem.(1998，1，1)；每一皆以引用的方式并入本文中)实施15的闭环置换反应时，主要导致起始材料发生明显的二聚反应(方程式1)。由于已知RCM极适合5→6的相关环境，因此我们自然地将15情况下的失败归因于C12上三氟甲基的存在。
Figure A0382256100641
人们预测，所存在26-三氟取代基对期望反应的不利影响可通过在RCM反应中心与三氟甲基之间添加一个碳间隔基来缓解。因此，我们通过18的闭环置换合成19(方程式2)，此会在将该三氟甲基置于一含有一船型(1，4)-二烯的17元环环境中。
关于19的合成程序从制备化合物21开始，21对应于我们所提出RCM底物的O-烷基部分(示意图5)。从10的烯丙基化开始，这次是在所示的游离基反应条件下实施(Keck，G.E.；Yates，J.B.J.Am.Chem.Soc.1982，104，5829；review：Curran，D.P.Synthesis，1988，第1部分，第417-439页；第2部分，第489页；每一皆以引用的方式并入本文中)。在该转化后，使烷基化产物与甲基溴化镁反应，由此获得所需的酮20。使该化合物与氧化膦12缩合，随后将三乙基甲硅烷醚去保护，以高产率获得21。
示意图5.醇片段21的合成
Figure A0382256100651
(a)i)烯丙基三丁基锡AIBN，苯，80℃，3h 74％；ii)
MeMgBr，0℃，93％；(b)i)12，n-BuLi，THF，-78℃，30
min.，ii)20，-78℃ to rt.85％；iii)HOAc∶THF∶H2O(3∶1∶1)，
98％；(c)TMSI，CH2Cl2，0℃，92％
21与C1-C10酸片段14发生酯化反应，获得产率为75％的所提出RCM前体18(示意图6)。令人高兴的是，在该情况下，可使用第二代Grubbs催化剂在二氯甲烷中完成18的闭环置换反应。如同5→6的转换，该反应只提供反式异构体22，产率为57％。最后，用锌及醋酸以还原方式断开三氯乙氧羰基保护基团，随后将TES醚用HF-吡啶去保护，获得在C12上含有一个三氟甲基官能团的期望化合物19，尽管是在17元环系列的环境中。
示意图6.27-F3-ddEpoB(19)的合成
Figure A0382256100652
评价所合成19的细胞毒性活性。如下表1-1所示，先前所报导[17]ddEpoB(23)与27-F3-[17]ddEpoB(19)的直接比较表明，该新颖的全氟化化合物具有同样高的细胞毒性效能。
表1-1.对肿瘤细胞株α的体外细胞毒性(IC50)
  化合物  CCRF-CEM(IC50(μM)α)   CCRF-CEM/VBL(IC50(μM)α)
  27-F3-[17]ddEpoB(19)   0.068   0.191
  [17]ddEpoB(23)   0.040   0.126
  [16]ddEpoB(6)   0.020   0.068
72小时抑制后实施αXTT分析。CCRF-CEM是人类T-细胞急性淋巴性白血病细胞株。CCRF-CEM/VBL100、CCRF-CEM/VM1及CCRF-CEM/Taxol细胞株皆超表达P-糖蛋白并对MDR相关的抗癌剂展示一多重抗药性表现型(Ojima，I.；Inoue，T.；Chakravarty，S.；J.Fluorine Chem.1999，97；Newman，R.A.；Yang，J.；Finlay，M.R.V.；Cabral，F.，Vourloumis，D.；Stephens，L.C；Troncoso，P.；Wu，X.；Logothetis，C.J.；Nicolaou，K.C.；Navone，N.M.cancer ChemotherPharmacol.2001，48，319-326；每一皆以引用的方式并入本文中)。
尽管三氟甲基等比容取代(isosteric substitution)对总的细胞毒性活性几乎没有影响，但在小鼠血浆中的代谢性降解研究初步数据表明：19明显比母体23更稳定。将埃坡霉素19及23暴露于裸鼠及人血浆中，23在30分钟内降解，而埃坡霉素19则大部分保持完整。由于药物动力学问题可能在使用任何埃坡霉素作为药物的实际应用中皆是关键所在，因此认为该发现相当鼓舞人心。
可通过与27-F3-[17]ddEpoB(19)的合成中所用方法有关的高度汇集方法完成26-F3-dEpoB(2)的合成。因此，具类似组成的片段可作为关键的结构单元(示意图7)。预计酰基部分25可作为聚丙酸酯结构域且烷基部分21或24可如先前在开始处所述来制备。两个片段21(24)与25的结合可通过酯化反应开始并通过随后的闭环置换反应结束。最后，断开保护基团可提供所期望的类似物28及29。以化学选择性方式还原28及29的9，10-烯烃将提供dEpoB(1)及所期望的26-F3-12，13-去氧EpoB(2)。
示意图7
反-9，10-去氢-12，13-去氧EpoB(28)26-F3-  12，13-去氧EpoB(1)
反-9，10-去氢-12，13-去氧EpoB(29)          26-F3-12，13-去氧EpoB(2)
1与2的合成从制备酰基部分25开始。将先前报导的酮30与易于获得的醛3l进行醛醇缩合反应。当用31将“锂化”30去质子化并反应时，平稳的缩合反应获得5.3∶1的醛醇产物32与33的混合物。大部分非对映异构体32可容易地通过快速层析法分离并作为TBS甲硅烷醚保护起来。二异丙基缩醛基团在酸催化下水解，获得酮醛34，为第二个醛醇缩合反应创造条件。用新的醛34作为偶合配偶体实施上述“钛化”特丁酯方法后，以高非镜像立体体选择性(dr＞20∶1)及产率(86％)获得所期望的醛醇产物35。用TES甲硅烷基保护35的C3醇后，实施二苄醚的去保护。氧化产物伯羟基，获得相应的醛，然后将所得醛通过魏悌希反应(Wittig reaction)转化成端部烯烃，以高产率获得36。最后，用TEOSTf水解36的特丁基酯，获得酰基部分25(82％)及副产物37(14％)，副产物37可以高产率转化为酰基部分38。38的光谱及色谱性质与先前在Dr.Sinha的实验室(Scripps)中自其他程序所获得材料的相同。
示意图8.
Figure A0382256100681
烯丙基醇21及24与C1-C9酸片段25发生酯化反应，分别获得相应的RCM环化前体26及27(示意图9)。
示意图9.
然后，用第二代Grubbs催化剂在甲苯中对26、27及54实施闭环置换反应，如同早期研究，仅生成反式异构体39a、40a和55及相应的副产物39b、40b与56。最后，用HF-吡啶将甲硅烷基醚去保护，获得所期望的化合物28、29及57。28的光谱及色谱性质与先前在Dr.James D.White的实验室(Oregon StateUniversity)中自埃坡霉素程序所获得材料的并不相同。Dr.James D.White认为其已合成了28，然而却因疏忽而合成12，13E异构体41，此可解释为什么他观察到的生物活性较差。因此，我们首先合成28并检验该化合物的抗肿瘤活性。
已就各种细胞类型对评价全合成性28、29及2进行评价以确定其抗肿瘤效能。如表1-2中所示，三种化合物皆展示抗各种敏感性及抗性肿瘤细胞株的高细胞毒性活性。28与先前所报导dEpoB(1)的直接比较表明，该新化合物具有几乎三倍的效能。
表1-2.对肿瘤细胞株α的体外细胞毒性(IC50)
  肿瘤细胞株   IC50(μM)α
  28   29   dEpoB(1)   57
  CCRF-CEMCCRF-CEM/VBL100CCRF-CEM/紫杉醇   0.00140.00650.0017   0.00350.02100.0057   0.00360.0140.0057   0.000510.01060.00073
72小时抑制后实施αXTT分析。CCRF-CEM是人类T-细胞急性淋巴性白血病细胞株。CCRF-CEM/VBL100、CCRF-CEM/VM1及CCRF-CEM/Taxol细胞株皆超表达P-糖蛋白并对MDR相关抗癌剂展示一多重抗药性表现型(Prié，G.；Thibonnet，J.；Abarbri，M.；Duchêne，A.；Parrain，J.Synlett(1998，839)；以引用的方式并入本文中)。
为提高合成28、29及2的总产率，我们决定在不存在经噻唑取代烯烃的情况下实施RCM反应，如此以避免形成不希望的副产物39b及40b。对先前所报导42及20的甲硅烷醚实施去保护，获得羟基酮43及44。产物羟基酮43及44与C1-C9酸部分25进行酯化反应，分别获得相应的RCM环化前体45及46(示意图10)。然后，用第二代Grubbs催化剂在甲苯中实施45及46的闭环置换反应，此如同先前研究只以高产率生成反式异构体47及48。插入噻唑部分，获得高产率的39a、40a及55。用HF-吡啶将两种甲硅烷醚去保护，获得28及29。最后，选择性还原C9-C10烯烃获得相应的埃坡霉素1及2。28的结构通过其以高产率转化为1严格地证明。相对于先前实践途径，1的全合成上已相当简化。因此，相对于依靠于其合成需要手性助剂参与的(S)-2-甲基-4-戊烯醛，使用自手性源获得且易于利用的31无疑是一大改进。
示意图10
Figure A0382256100711
对于所掌握的其结构已严格证明的化合物28，我们惊奇地发现，其光谱性质与先前报导推测为相同实体的化合物的性质并不相同。然而，回顾过去很清楚先前并没有制备出28，实际上，此处所报导的(E)-9，10-去氢埃坡霉素的整个家族是一类新颖的化合物。
在细胞培养环境中对合成性类似物(2、28及29)的试验揭示，其对各种敏感性及MDR肿瘤细胞株的抑制效果比我们的临床项dEpoB(1)要强(表1-3)。注意到，Epo3(28)是首个相对于dEpoB(1)具有实质上经改良细胞毒性的12，13-去氧埃坡霉素化合物。
表1-3.对肿瘤细胞株α的体外细胞毒性(IC50)
  化合物   CCRF-CEM(C)(μM)   C/VBL100(μM)   C/紫杉醇
  (μM)
Epo1(1，dEpoB)Epo2(2)Epo3(28)Epo4(29)   0.00360.00410.00090.0035   0.0160.00800.00420.0210   0.00460.0180.00120.0057
72小时抑制后实施αXTT分析。CCRF-CEM是人类T-细胞急性淋巴性白血病细胞株。CCRF-CEM/VBL100细胞株对长春碱有抗性且CCRF-CEM/紫杉醇对紫杉醇有抗性。
埃坡霉素2、28及29(Epo2-4)所展现对多种抗药性肿瘤的明显细胞生长抑制作用促进对这些新(E)-9，10-同类物的血浆稳定性的确定。举例而言，就内酯打开而言，最近所阐述的(E)-10，11-去氢-dEpoB(1，在C-12处具有CH3基团)展示极差的血浆稳定性。该血浆不稳定性抑制对(E)-10，11-去氢-dEpoB的发展。相反，与dEpoB(1)相比，当2、28及29(Epo2-4)暴露于鼠血浆时，观察到药物降解程度降低至1/7。从药物可利用观点来看，相对于dEpoB该稳定性构成了一实质性改进(参见图9)。
细胞毒性与血浆稳定性数据的组合促使我们合成大量28(Epo3)以确定其在具有人类肿瘤异种移植物的裸鼠中的体内效能。埃坡霉素28(Epo3)相对于dEpoB在抑制移植肿瘤的生长方面具有明显改进的效能(参见图10)。该经改进的效能及血浆稳定性极大地降低了28(Epo3)在异种移植物环境下的药物剂量(一个数量级)。
我们在早期的研究中发现，埃坡霉素B(12，13-环氧化物)相比其12，13-去氧类似物(dEpoB)具有更显著的细胞毒性。无论如何，从治疗指数的观点来看，该去氧化合物更合意。最近，我们报导了用立体选择性闭环置换方法全合成(E)-9，10-去氢-12，13-去氧埃坡霉素B(28)。结果显示，在普通Z-12，13-烯烃(参见化合物1)中使E-9，10不饱和可大大增强体外效能。更确切的说，此可转移至在异种移植小鼠中的体内环境。而且，化合物28相对于dEpoB(1)具有较多的医药优点。此使得在异种移植试验中28的剂量水平相对于1可降低一个数量级。
因此，我们想知道在埃坡霉素B(51，EpoB)中纳入C9-C10烯烃是否会在相同方面改变其生物性质。
                                    (E)-9，10-去氢-dEpoB(28)             (E)-9，10-去氢EpoB(49)
用2，2’-二甲基双环氧乙烷(DMDO)以高化学选择性在较多取代的C12-C13烯烃处环氧化28，获得产率为87％的比例为1∶2.6的(E)-9，10-去氢埃坡霉素B(49)及其非对映异构体(50)。通过C9-C10双键的选择性二酰亚胺还原来确定该环氧化物的立体化学结构。该些产物的光谱性质试验揭示，次要产物(49)为dEpoB。在28中优先进行α-环氧化与dEpoB的高立体选择性环氧化形成鲜明对比，后者在β面发生，生成EpoB(Meng，D.；Bertinato，P.；Balog，A.；Su，D.-S.；Kamenecka，T.；Sorensen，E.J.；Danishefsky，S.J.J.Am.Chem.Soc.1997，119，10073；以引用的方式并入本文中)。
示意图11
评价(E)-9，10-去氢埃坡霉素B(51)抗各种类型细胞的活性以确定其抗肿瘤效能。如表1-4所示，(E)-9，10-去氢埃坡霉素B(49)展示抗各种敏感性及抗性肿瘤细胞株的高细胞毒性活性。49与EpoB(51)的直接比较表明，该新颖的类似物具有几乎3倍于EpoB(51)的效能，此使得其成为迄今为止所报导的最有效的埃坡霉素之一。令人感兴趣的是，α-环氧化物系列(50、52)展示比EpoB(51)低得多的活性。下表展示化合物49的体内研究发现。
表1-4.对肿瘤细胞株α的体外细胞毒性(IC50)
  化合物   CCRF-CEM   CCRF-CEM/VBL   CCRF-CEM/紫杉醇
  1(dEpoB)2851(EpoB)4950   0.00360.00090.000620.000230.0134   0.0160.00420.00370.000320.0959   0.00460.00120.00110.000420.0802
52     0.083     0.4519     0.1507
72小时抑制后实施αXTT分析。CCRF-CEM是人类T-细胞急性淋巴性白血病细胞株。所有CCRF-CEM/VBL及CCRF-CEM/紫杉醇细胞株皆超表达P-糖蛋白并对MDR-相关抗癌剂展示一多重抗药性表现型。
9，10-de-H-EpoB在具有MX-1异种移植物的裸鼠中的治疗效果(6小时静脉内输注，n＝4)
Figure A0382256100751
总之，上文阐述了28(Epo3)的有效立体选择性全合成，并在实施位置选择性二酰亚胺还原后合成dEpoB(1)自身。于是，本文所述方法可直接用于制备相应三氟类似物2及29(Epo4)。此外，28的环氧化可生成49及50，后者在经位置选择性二酰亚胺还原后生成埃坡霉素B(51)及52。上文所报导的数据表明出现了一种适合于经进一步的中间性评价后可能前进至人类临床环境评价的最有希望的新颖抗癌药物家族。此外，该新合成方法包括dEpoB及埃坡霉素B的全合成中的显著实用性改进。
实验
一般方法：除非另有说明，否则使用自商业供应商购得的试剂而不进一步纯化。下述溶剂自一溶剂干燥系统(通过一预填充氧化铝柱)获得且使用时未经进一步干燥：四氢呋喃、二氯甲烷、乙醚、苯及甲苯。所有对空气及水敏感的反应皆在预净化氩气的正压下在烘干的玻璃器件中进行。NMR(1H及13C)谱图如一个一个单独所注明在Broker AMX-400MHz或Bruker AdvanceDRX-500MHz上记录，参照CDCl3(1H为7.27ppm且13C为77.0ppm)。在Perkin-ElmerFT-IR型1600光谱仪上获得红外光谱图(IR)。于22±2℃下在JASCO型DIP-370数字旋光仪上获得旋光度。在E.Merck硅胶60 F254板上实施分析性薄层层析。通过将该些板浸渍于钼酸铈铵或对茴香醛溶液中并加热来显现不具有UV活性的化合物。在Davisil(等级1740，60A型，170-400网目)硅胶上用规定溶剂实施硅胶层析。
简称及缩写
TES，三乙基甲硅烷基；TBS，二甲基特丁基甲硅烷基；EDCI，1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺；HF-PY，氟化氢于吡啶中；DMAP，4-N，N-二甲氨基吡啶；DCM，二氯甲烷；DMF，N，N-二甲基甲酰胺；THF，四氢呋喃。
Figure A0382256100761
化合物32：在-78℃下向新制备的LDA(11.6mmol)溶于THF(25mmol)的溶液中滴加酮30(2.4g，10.4mmol)溶于THF(6.8mL)中的溶液。在-40℃下搅拌0.5小时后，将混合物冷却至-90℃。滴加醛31(1.38g，7.72mmol)溶于THF(6.8mL)中的溶液。在-90℃下搅拌35分钟后，用饱和NH4Cl(15mL)水溶液使反应停止并用EtOAc(50mL×3)萃取。合并的有机萃取物用Na2SO4干燥并浓缩。通过快速柱层析(SiO2，己烷/EtOAc＝15∶1至12∶1)纯化，获得32(2.09g，66％)及异构体33(0.39g，12％)，二者皆为黄色油状物。32：[α]D 2513.1(c 1.22，CHCl3)；IR(薄膜)v3494、2972、2932、1708、1454、1380、1329，1120、1038、998、734cm-1；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.98(3H，d，J＝6.9Hz)，1.06(3H，d，J＝6.9Hz)，1.10(3H，d，J＝6.1Hz)，1.14(3H，d，J＝6.9Hz)，1.15(3H，s)，1.17(3H，d，J＝6.2Hz)，1.18(3H，s)，1.20(3H，d，J＝6.2Hz)，1.81-1.92(1H，m)，3.33(1H，qd，J＝7.0，2.2.Hz)，3.51(1H，dd，J＝8.9，6.3Hz)，3.64(1H，d，J＝1.8Hz)，3.66-3.71(2H，m)，3.78-3.86(2H，m)，4.51(1H，d，J＝12.0Hz)，4.54(1H，d，J＝12.0Hz)，4.58(1H，s)，7.25-7.35(5H，m)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ10.0、14.3、20.5、21.3、21.9、22.5、23.5、23.6、36.4、42.1、54.1、69.8、71.2、72.8、73.3、73.4、103.8、127.6、127.7(2C)、128.5(2C)、138.9、221.6；C24H40O5Na的LRMS(ESI)计算值[M+Na+]431.3，实验值431.4。
Figure A0382256100771
化合物32a(未图示)：向醇32(1.01g，2.47mmol)及2，6-二甲基吡啶(691μL，5.93mmol)的冷(-40℃)溶液中添加TBSOTf(681μL，3.00mmol)，并将混合物经3.5小时加热至-20℃。用饱和NaHCO3(10mL)水溶液使反应停止。用己烷(50mL×3)萃取后，将合并的有机萃取物用Na2SO4干燥并浓缩。通过快速柱层析(SiO2，己烷/EtOAc＝50∶1)纯化，获得无色油状物32a(1.25g，2.39mmol，97％)；[α]D 25-19.7(c 0.58，CHCl3)；IR(薄膜)v2966、2931、1696、1455、1378、1320、1255、1091、1044、991、873、838、773cm-1；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.08(6H，s)，0.89(9H，s)，0.99(3H，d，J＝7.0Hz)，1.04(3H，d，J＝7.0Hz)，1.07(3H，d，J＝7.0Hz)，1.07(3H，s)，1.14(3H，d，J＝6.1Hz)，1.17(3H，s)，1.17(3H，d，J＝6.0Hz)，1.20(3H，d，J＝6.2Hz)，1.76-1.85(1H，m)，3.21(1H，dd，J＝9.2、7.3Hz)，3.32(1H，五重峰，J＝7.4Hz)，3.62(1H，dd，J＝9.2、5.7Hz)，3.78-3.85(2H，m)，3.87(1H，dd，J＝7.7、2.0Hz)，4.46(1H，d，J＝12.1Hz)，4.50(1H，d，J＝12.1Hz)，4.73(1H，s)，7.24-7.37(5H，m)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ-3.6、-3.3、15.6、16.8、18.7、18.8、21.8、22.1、22.5、23.5、23.7、26.4(3C)、39.0、46.2、54.0、69.7、70.9、72.1、73.4、76.7、103.1、127.6、127.8(2C)、128.5(2C)、139.0、218.9；C30H54O5SiNa的LRMS(ESI)计算值[M+Na+]545.4，实验值545.4。
Figure A0382256100781
化合物34：将32a(3.03g，5.79mmol)与对-TsOH·H2O(286mg)在水性THF(64mL，THF/H2O＝4∶1)中的混合物在回流下加热6.5小时。将反应混合物冷却至室温并倾倒至饱和NaHCO3(25mL)水溶液中。用EtOAc(100mL+50mL×2)萃取后，将合并的有机层用盐水洗涤、用Na2SO4干燥并浓缩。通过快速柱层析(SiO2，己烷/EtOAc＝50∶1至30∶1)纯化，获得无色油状物34(2.37g，5.64mmol，98％)：[α]D 25-25.8(c 0.515，CHCl3)；IR(薄膜)v2955、2931、1731、1696、1455、1360、1255、1091、1026、873、826、767cm-1；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.06(3H，s)，0.07(3H，s)，0.90(9H，s)，0.95(3H，d，J＝7.1Hz)，1.03(3H，d，J＝7.0Hz)，1.28(3H，s)，1.33(3H，s)，1.73-1.82(1H，m)，3.16(1H，dd，J＝9.2、6.1Hz)，3.28(1H，五重峰，J＝7.3Hz)，3.55(1H，dd，J＝9.2，6.7Hz)，3.91(1H，dd，J＝7.8、2.1Hz)，4.46(2H，s)，7.27-7.36(5H，m)，9.58(1H，s)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ-3.6、-3.5、15.7、16.3、18.6、19.8、20.1、26.3(3C)、39.1、47.0、61.1、71.9、73.4、75.8、127.7、128.0(2C)、128.5(2C)、138.6、201.3、213.3；C24H40O4SiNa的LRMS(ESI)计算值[M+Na+]443.3，实验值443.2。
Figure A0382256100782
化合物35：于-78℃下向新制备的LDA(18mL于Et2O的0.5M溶液，9.0mmol)溶于Et2O(20mL)中的溶液添加醋酸特丁酯(1.16mL，8.61mmol)。搅拌50分钟后，通过注射泵经65分钟滴加CpTiCl(OR)2(100mL于Et2O中的0.1M溶液，10.0mmol)。搅拌20分钟，将反应混合物加热至-30℃，搅拌50分钟并重新冷却至-78℃。经10分钟滴加34(2.42g，5.75mmol)溶于Et2O(9mL)中的溶液，并在-78℃下搅拌所得混合物。搅拌2小时后，用THF(5MH2O，37mL)水溶液使反应停止并于室温下搅拌2小时。添加水(40mL)后，将混合物再搅拌1小时。通过Celite(Et2O清洗)滤除所形成的沉淀物，并用水(40mL)洗涤滤液。水层用Et2O(100mL×2)萃取，将合并后的有机层用盐水(40mL)洗涤、Na2SO4干燥并浓缩。通过快速柱层析(SiO2，己烷/EtOAc＝10∶1)纯化，获得浅黄色油状物35(2.65g，4.94mmol，86％)；[α]D 25-20.3(c 1.0，CHCl3)；IR(薄膜)v3523、2957、2930、2856、1732、1700、1472、1368、1252、1152、1091、1042、986、834、774cm-1；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.07(3H，s)，0.07(3H，s)，0.90(9H，s)，0.99(3H，d，J＝7.0Hz)，1.07(3H，d，J＝7.0Hz)，1.10(3H，s)，1.14(3H，s)，1.47(9H，s)，1.77-1.83(1H，m)，2.26(1H，dd，J＝16.0，10.0Hz)，2.34(1H，dd，J＝15.9，2.7Hz)，3.23(1H，dd，J＝9.2、7.1Hz)，3.35(1H，d，J＝2.7Hz，-OH)，3.36(1H，五重峰，J＝7.0Hz)，3.61(1H，dd，J＝9.2、5.9Hz)，3.88(1H，dd，J＝7.6、2.0Hz)，4.17(1H，dt，J＝10.0，2.7Hz)，4.48(2H，s)，7.27-7.36(5H，m)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ-3.5、-3.4、16.3、16.7、18.7、20.1、21.6、26.4(3C)、28.3(3C)、38.0、39.1、45.8、51.8、72.2、72.9、73.5、76.7、81.4、127.7、128.0(2C)、128.5(2C)、138.8、172.7、219.6；C30H52O6SiNa的LRMS(ESI)计算值[M+Na+]559.3，实验值559.4。
Figure A0382256100791
化合物35a(未图示)：于0℃下向醇35(10.2g，8.9mmol)与咪唑(2.70g，39.7mmol)在DMF(25mL)中的混合物添加TESCl(3.3mL，19.8mmol)，并于室温下将混合物搅拌2小时。然后用饱和NaHCO3(50mL)水溶液使反应停止。用己烷(500mL+120mL×2)萃取后，合并的有机萃取物依次用水(30mL×2)及盐水(30mL)洗涤、Na2SO4干燥并浓缩。通过快速柱层析(SiO2，己烷/EtOAc＝40∶1)纯化，获得无色油状物35a(12.1g，18.5mmol，98％)：[α]D 25-38.0(c 0.46，CHCl3)；IR(薄膜)v2955、2877、1733、1697、1456、1367、1298、1251、1155、1099、988、835、742cm-1；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.05(6H，s)，0.57-0.68(6H，m)，0.89(9H，s)，0.95(9H，t，J＝7.9Hz)，0.99(3H，d，J＝7.0Hz)，1.02(3H，d，J＝6.8Hz)，1.04(3H，s)，1.18(3H，s)，1.45(9H，s)，1.70-1.79(1H，m)，2.16(1H，dd，J＝17.0、7.0Hz)，2.40(1H，dd，J＝17.0、3.1Hz)，3.22(1H，dd，J＝9.1、7.5Hz)，3.31(1H，五重峰，J＝6.9Hz)，3.61(1H，dd，J＝9.1、5.4Hz)，3.83(1H，dd，J＝7.3、2.3Hz)，4.30(1H，dd，J＝6.9、3.1Hz)，4.48(2H，s)，7.27-7.36(5H，m)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ-3.5、-3.4、5.3(3C)、7.3(3C)、15.3、16.9、18.7、20.1、23.4、26.4(3C)、28.3(3C)、39.1、41.1、46.2、53.4、72.2、73.4、74.3、76.7、80.6、127.6、127.9(2C)、128.5(2C)、138.9、171.5、218.4；C36H66O6Si2Na的LRMS(ESI)计算值[M+Na+]673.4，实验值673.5。
Figure A0382256100801
化合物35b(未图示)：向35a(4.37g，6.72mmol)溶于THF(67mL)中的搅动溶液中添加Pd/C(自Acros购得，10％wt，437mg)并在H2气氛下搅拌该混合物。搅拌2.2小时后，用Celite垫过滤该混合物，用THF(120mL)洗涤Celite垫。浓缩滤液并通过快速柱层析(SiO2，己烷/EtOAc＝30∶1至10∶1)纯化，获得无色油状物35b(3.53g，6.28mmol，94％)；[α]D 25-16.1(c 0.62，CHCl3)；IR(薄膜)v3543、2956、1732、1696、1472、1368、1299、1252、1155、1100、988、837、775、742cm-1；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.10(3H，s)，0.12(3H，s)，0.60-0.68(6H，m)，0.93(9H，s)，0.96(9H，t，J＝8.0Hz)，0.99(3H，d，J＝7.1Hz)，1.10(3H，d，J＝6.9Hz)，1.14(3H，s)，1.20(3H，s)，1.45(9H，s)，1.46-1.55(1H，m)，2.21(1H，dd，J＝17.2、7.1Hz)，2.39(1H，dd，J＝17.2、2.8Hz)，2.54(1H，t，J＝5.8Hz，-OH)，3.30(1H，五重峰，J＝6.9Hz)，3.58(1H，dt，J＝11.5、5.5Hz)，3.66(1H，dt，J＝11.3，5.4Hz)，3.92(1H，dd，J＝8.0，2.1Hz)，4.32(1H，dd，J＝7.1、2.9Hz)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ-3.6、-3.5、5.3(3C)、7.2(3C)、16.0、16.1、18.6、20.0、23.4、26.4(3C)、28.3(3C)、40.0、40.9、46.9、53.7、64.8、73.3、78.1、80.9、171.7、218.5；C29H60O6Si2Na的LRMS(ESI)计算值[M+Na+]583.4，实验值583.5。
Figure A0382256100811
化合物35c(未图示)：向醇35b(3.53g，6.28mmol)与粉末状MS4A(新活化的，2.50g)在CH2Cl2(32mL)的搅拌混合物中添加NMO(1.17g，10.0mmol)，随后添加TPAP(132mg，0.377mmol)。于室温下搅拌35分钟后。通过硅胶柱(己烷/Et2O＝8∶1)过滤混合物，获得无色油状物35c(3.34g，5.98mmol，95％)；[α]D 25-69.6(c 0.25，CHCl3)；IR(薄膜)v 2955、2878、1732、1696、1472、1368、1253、1155、1097、989、837cm-1；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.09(3H，s)，0.10(3H，s)，0.59-0.68(6H，m)，0.89(9H，s)，0.95(9H，t，J＝8.0Hz)，1.08(3H，s)，1.11(3H，d，J＝6.9Hz)，1.14(3H，d，J＝7.1Hz)，1.24(3H，s)，1.45(9H，s)，2.19(1H，dd，J＝17.0，6.7Hz)，2.33(1H，qt，J＝7.1、2.2Hz)，2.41(1H，dd，J＝17.0、3.3Hz)，3.28(1H，五重峰，J＝7.5Hz)，4.07(1H，dd，J＝7.9、2.2Hz)，4.32(1H，dd，J＝6.7、3.2Hz)，9.74(1H，d，J＝2.0Hz)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ-3.8、-3.5、5.3(3C)、7.2(3C)、12.6、15.6、18.5、20.5、23.3、26.2(3C)、28.3(3C)、41.1、46.9、51.1、53.5、74.0、76.5、80.7、171.1、204.3、218.0；C29H58O6Si2Na的LRMS(ESI)计算值[M+Na4]581.3，实验值581.3。
Figure A0382256100812
化合物36：于0℃下用t-BuOK(6.57mL于THF中的1.0M溶液，6.57mmol)处理THF(40.0mL)中的MePPh3I(2.56g，7.18mmol)。于0℃搅拌20分钟后，将所得悬浮液冷却至-78℃，并添加醛35c(3.34g，5.98mmol)溶于THF(14mL)中的溶液。于-78℃下搅拌15分钟后，将混合物于0℃下搅拌15分钟并于室温下搅拌15分钟。用饱和NH4Cl(20mL)水溶液使反应停止并用Et2O(120mL+50mL×2)萃取。合并后的有机萃取物用盐水(20mL)洗涤、Na2SO4干燥并浓缩。通过快速柱层析(SiO2约80g，己烷/Et2O＝40∶1)纯化残余物，获得无色油状物36(125.3mg，0.225mmol，78％)；[α]D 25-33.6(c 0.250，CHCl3)；IR(薄膜)v2956、2878、1733、1696、1472、1367、1299、1253、1156、1100、988、837、774cm-1；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.08(3H，s)，0.08(3H，s)，0.60-0.68(6H，m)，0.93(9H，s)，0.96(9H，t，J＝8.0Hz)，1.04(6H，d，J＝7.0Hz)，1.09(3H，s)，1.20(3H，s)，1.45(9H，s)，2.08-2.15(1H，m)，2.29(1H，dd，J＝17.0、7.0Hz)，2.41(1H，dd，J＝17.0、3.1Hz)，3.08(1H，五重峰，J＝7.0Hz)，3.84(1H，dd，J＝7.0、2.1Hz)，4.32(1H，dd，J＝7.0、3.1Hz)，5.02(1H，dd，J＝17.9，1.0Hz)，5.06(1H，dd，J＝10.5、1.0Hz)，5.93(1H，ddd，J＝17.9、10.5、7.7Hz)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ-3.6、-3.3、5.4(3C)、7.2(3C)、15.2、18.7、19.0、20.2、23.6、26.4(3C)、28.3(3C)、41.1、43.8、46.4、53.5、73.9、76.6、80.6、115.5、140.2、171.5、218.5；C30H60O5Si2Na的LRMS(ESI)计算值[M+Na+]579.4，实验值579.4。
化合物25：于0℃下向特丁基酯36(4.87g，8.74mmol)与2，6-二甲基吡啶(新蒸馏的，4.1mL，35.0mmol)溶于CH2Cl2(58mL)中的溶液中添加TESOTf(4.0mL，17.5mmol)。于0℃下搅拌25分钟后，将混合物于室温下搅拌3.2小时。将混合物用Et2O(600mL)稀释，依次用5％KHSO4(60mL×2)水溶液及盐水(60mL)洗涤、Na2SO4干燥并浓缩。将残余物在高真空下干燥1.5小时，获得粗产物酸25(6.30g，含有TESOH杂质)。将粗产物(6.30g)溶于水性THF(87.5mL，THF/H2O＝6∶1)中并用饱和NaHCO3(12.5mL)水溶液处理。于室温下搅拌20分钟后，所得悬浮液用Et2O(500mL)稀释并用5％KHSO4(55mL)水溶液酸化。分层后，水层用Et2O(100mL×2)萃取，且合并的有机层用盐水(50mL×2)洗涤、Na2SO4干燥并浓缩。将残余物在高真空下干燥过夜，获得无色油状粗产物酸(5.60g，含有TESOH杂质)，其可不经进一步纯化用于下一反应。通过快速柱层析(在硅胶上，用己烷/EtOAc＝4/1洗脱)纯化以进行定性。
[α]D 25-30.7(c 0.985，CHCl3)；IR(薄膜)v2956、2936、2879、1712、1472、1417、1303、1253、1107、1046、1003、988、872、837、775、741cm-1；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.08(3H，s)，0.09(3H，s)，0.59-0.67(6H，m)，0.93(9H，s)，0.96(9H，t，J＝8.1Hz)，1.05(3H，d，J＝7.0Hz)，1.05(3H，d，J＝7.0Hz)，1.20(3H，s)，1.21(3H，s)，2.06-2.13(1H，m)，2.34(1H，dd，J＝16.4、7.4Hz)，2.50(1H，dd，J＝16.4、3.0Hz)，3.06(1H，五重峰，J＝7.3Hz)，3.87(1H，dd，J＝7.5、1.8Hz)，4.40(1H，dd，J＝7.3、2.9Hz)，5.01(1H，dd，J＝18.0、0.9Hz)，5.07(1H，dd，J＝10.4、1.2Hz)，5.93(1H，ddd，J＝18.0、10.4、7.8Hz)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ-3.6、-3.3、5.3(3C)、7.1(3C)、15.6、18.7、19.1、19.2、24.1、26.4(3C)、39.8、43.6、46.4、53.5、73.7、76.6、115.6、140.0、177.9、218.7；C26H52O5Si2Na的LRMS(ESI)计算值[M+Na1]523.3，实验值522.9。
Figure A0382256100831
化合物45：将3-O-TES-6-O-TBS保护的酸25通过与苯共沸蒸馏干燥。将新干燥的醇43(200mg，1.19mmol)溶于DCM(10mL)中并冷却至0℃，此时添加固体DMAP(167mg，1.37mmol)及固体EDCI(261mg，1.37mmol)。将反应混合物于0℃搅拌15分钟后，滴加酸25(425mg，0.85mmol)溶于DCM(2mL)中的溶液。去除冷浴并继续搅拌2小时。用DCM(10mL)稀释粗反应混合物，并用10％EtOAC/己烷作为洗脱液通过硅胶层析纯化该混合物，获得澄清的油状酯45(380mg，81％产率，两步，自36开始)：[α]D-15.1(c 1.2，CDCl3)；IR(纯)2955、2932、2877、1743、1732、1694、1474、1461、1417、1380、1360、1295、1252、1169、1094、1043、988.3、912.9、871.4、836.5、774.8、741.6cm-1；1H NMR(500MHz，CDCl3)0.08(3H，s)，0.08(3H，s)，0.60-0.68(6H，m)，0.93(9H，s)，0.95(9H，t，J＝8.0Hz)，1.04(3H，d，J＝6.9Hz)，1.05(3H，d，J＝6.9Hz)，1.10(3H，s)，1.25(3H，s)，1.69(3H，s)，2.08-2.15(2H，m)，2.16(3H，s)，2.38(1H，dd，J＝17.0、7.0Hz)，2.48(2H，t，J＝6.5Hz)，2.57(1H，dd，J＝17.0、2.7Hz)，2.71-2.76(2H，m)，3.07(1H，五重峰，J＝7.0Hz)，3.83(1H，d，J＝7.2Hz)，4.36(1H，dd，J＝7.0、2.7Hz)，4.97-5.07(4H，m)，5.19(1H，t，J＝7.0)，5.73(1H，td，J＝15.4、5.9Hz)，5.92(1H，dd，J＝15.7、8.0Hz)；13C NMR(500MHz，CDCl3)δ218.4、205.4、172.1、140.1、137.4、135.4、119.1、115.8、115.6、78.7、76.5、73.9、53.3、46.3、43.7、39.6、36.6、29.2、26.7、26.4、23.8、23.7、19.9、18.9、18.7、15.4、7.06、5.30、-3.29、-3.62；C36H66O6Si2Na的LRMS(ESI)计算值[M+Na+]673.4，实验值673.5。
化合物47：于回流下向化合物45(20mg，0.031mmol)溶于干燥甲苯(60mL)的溶液中添加一份三环己基膦[1，3-双(2，4，6-三甲基苯基)-4，5-二氢咪唑-2-基亚基][亚苄基]二氯化钌(IV)(5.2mg，0.0061mmol)溶于干燥甲苯(2mL)的溶液，并将混合物加热10分钟。立即在冰浴中将反应混合物冷却，放置于二氧化硅上，用梯度为4-10％的EtOAc/戊烷作为洗脱液用硅胶层析纯化，获得油状化合物47(15mg，产率78％)：[α]-28.6(c 1.2，CHCl3)；IR(纯)2955、2933、2878、1745、1731、1695、1471、1462、1380、1361、1251、1159、1104、1080、1019、985.0、876.1、835.5、774.7、743.1、670.1cm-1；1H NMR(500MHz，CDCl3)0.07(3H，s)，0.10(3H，s)，0.59-0.68(6H，m)，0.91(9H，t，J＝8.0Hz)，0.93(9H，s)，1.04(3H，d，J＝7.0Hz)，1.10(3H，s)，1.11(3H，d，J＝7.0Hz)，1.17(3H，s)，1.71(3H，s)，2.21(3H，s)，2.27-2.32(1H)，2.38(1H，dd，J＝14.6、6.8Hz)，2.51-2.61(2H，m)，2.57(1H，dd，J＝15.5、3.3Hz)，2.93-3.1(3H，m)，3.94(1H，4J＝8.5Hz)，4.28(1H，dd，J＝8.6、3.0Hz)，5.04(1H，dd，J＝8.7、2.4)，5.16(1H，t，J＝7.5)，5.73(1H，tdd，J＝12.8、9.94、6.9Hz)，5.92(1H，ddd，J＝18.0、10.3、7.8Hz)；13C NMR(125MHz，CDCl3)δ215.9、204.8、171.3、140.0、132.7、129.2、118.6、79.1、78.2、75.4、54.0、48.2、41.7、40.3、35.0、29.2、26.6、26.5、23.5、22.8、20.6、18.8、17.5、14.3、7.19、5.53、-3.36；C34H62O6Si2的LRMS(ESI)计算值645.4，实验值645.4(M+Na+)。
Figure A0382256100851
化合物39a：于0℃下向魏悌希试剂(19.1mg，54.7μmol)的THF(0.4mL)溶液中添加KHMDS(109μL溶于甲苯中的0.5M溶液，54.7μmol)。将混合物于0℃搅拌0.5小时，然后冷却至-78℃。向该混合物滴加酮47(5.7mg，9.12μmol)的THF(0.3mL)溶液，并将所得混合物经1.5小时加热至-20℃。用饱和NH4Cl(2mL)水溶液使反应停止，并用EtOAc(7mL×3)萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥并浓缩。通过快速柱层析(SiO2，己烷/Et2O＝10∶1)纯化残余物，获得5.6mg不能分离的E/Z烯烃混合物(ElZ＝9∶1)。通过制备型TLC(己烷/Et2O＝4∶1)纯化该混合物，获得无色油状纯39a(5.0mg，6.96μmol，76％)；[α]D 25-41.5(c 0.715，CHCl3)；IR(薄膜)v2955、2884、1737、1690、1467、1378、1249、1179、1102、1014、979、879、826、773cm-1；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.08(3H，s)，0.12(3H，s)，0.57(6H，q，J＝7.8Hz)，0.89(9H，t，J＝8.0Hz)，0.93(9H，s)，1.04(3H，s)，1.06(3H，d，J＝7.1Hz)，1.12(3H，s)，1.17(3H，d，J＝7.1Hz)，1.68(3H，s)，2.15(3H，d，J＝0.8Hz)，2.14-2.27(2H，m)，2.45(1H，dd，J＝14.0、4.8Hz)，2.50(1H，dd，J＝14.9、3.2Hz)，2.64-2.74(2H，m)，2.72(3H，s)，3.02(1H，五重峰，J＝7.0Hz)，3.10(1H，dd，J＝14.4、7.3Hz)，3.96(1H，d，J＝8.7Hz)，4.43(1H，dd，J＝8.3、2.9Hz)，5.22(1H，dd，J＝9.8、5.7Hz)，5.33-5.42(2H，m)，5.69(1H，dd，J＝15.8、8.2Hz)，6.57(1H，s)，6.96(1H，s)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ-3.3、-3.2、5.6(3C)、7.1(3C)、15.0、17.2、18.8、19.4、21.4、21.7、23.8、24.3、26.5(3C)、33.2、35.6、41.3、41.8、48.2、54.0、74.4、77.4、79.3、116.4、120.5、121.0、129.3、132.1、137.8、138.0、152.7、164.8、170.7、216.8；C39H68NO5SSi2的LRMS(ESI)计算值[M+H+]718.4，实验值718.3。
Figure A0382256100861
化合物28(Epo3)：于0℃下向39a(298.8mg，0.416mmol)的THF(6.5mL)溶液中添加HF.吡啶(3.2mL)，并将该混合物于室温下搅拌3小时。于0℃下滴加TMSOMe(30mL)使反应停止。在高真空下浓缩并干燥后，通过快速柱层析(SiO2，己烷/EtOAc＝1∶1)纯化残余物，获得白色固体状28(196.6mg，0.402mmol，97％)；[α]D 25-96.6(c 0.235，CHCl3)；IR(薄膜)v3502、2970、2927、1733、1685、1506、1456、1375、1251、1152、1040、977cm-1；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.06(3H，s)，1.11(3H，d，J＝7.0Hz)，1.22(3H，d，J＝6.8Hz)，1.28(3H，s)，1.72(3H，s)，2.10(3H，s)，2.31-2.40(2H，m)，2.43(1H，dd，J＝16.0、3.7Hz)，2.49(1H，dd，J＝16.0、9.2Hz)，2.55-2.68(2H，m)，2.71(3H，s)，2.98(1H，dd，J＝14.4、6.4Hz)，3.16(1H，五重峰，J＝6.2Hz)，3.76(1H，dd，J＝5.9、3.2Hz)，4.30(1H，dd，J＝9.2、3.7Hz)，5.18(1H，brt，J＝7.3Hz)，5.32(1H，dd，J＝8.4、2.5Hz)，5.63(1H，dd，J＝15.7、6.4Hz)，5.60(1H，ddd，J＝15.7、6.9、5.1Hz)，6.60(1H，s)，6.98(1H，s)；13CNMR(100MHz，CDCl3)δ15.1、16.0、17.7、19.2、19.5、22.5、23.6、32.0、35.0、39.6、40.3、44.8、53.3、71.8、75.6、78.3、116.1、119.6、120.5、129.9、131.3、137.5、138.2、152.2、165.0、170.7、218.8；C27H40NO5S的LRMS(ESI)计算值[M+H+]490.3，实验值490.2。
Figure A0382256100871
dEpoB(1，Epo1)：于50℃下向28(1.2mg，2.5μmol)及TrisNHNH2(29.3mg，98μmol)的ClCH2CH2Cl(0.7mL)溶液中添加Et3N(13.7μL，98μmol)。由HPTLC(己烷/EtOAc/CH2Cl2＝1/1/2)监视该反应。搅拌7小时后，将该混合物冷却至室温，用EtOAc稀释并通过硅胶垫过滤，硅胶垫用EtOAc洗涤。浓缩后，用制备型TLC(己烷/EtOAc/CH2Cl2＝1/1/2)纯化残余物，获得白色固体1(1.1mg，2.2μmol，91％)。
1的光谱数据与所报导dEpoB的数据相同。
Figure A0382256100872
化合物27：在反应前将酸25及醇24与无水苯(5mL×2)共沸并在高真空下干燥。于0℃下向醇24(639mg，2.63mmol)的CH2Cl2(13mL)溶液中添加EDCI(576mg，3.09mmol)及DMAP(366mg，3.09mmol)。于0℃下经16分钟向该混合物中滴加酸25(1.11g，1.88mmol)的CH2Cl2(5mL+2mL洗涤)。于0℃下搅拌1.5小时后，将混合物于室温下搅拌3.5小时。浓缩后，残余物通过快速柱层析(SiO2，己烷/EtOAc＝30∶1至20∶1)纯化，获得无色油状27(1.20g，1.61mmol，86％，自特丁基酯开始)；[α]D 24-25.1(c 1.30，CHCl3)；IR(薄膜)v2955、2925、2872、1732、1696、1461、1378、1290、1243、1173、1091、985、873、773cm-1；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.06(3H，s)，0.06(3H，s)，0.58-0.66(6H，m)，0.92(9H，s)，0.95(9H，t，J＝8.0Hz)，1.02(3H，d，J＝6.5Hz)，1.03(3H，d，J＝6.5Hz)，1.07(3H，s)，1.21(3H，s)，1.67(3H，s)，2.07(3H，s)，2.05-2.12(1H，m)，2.30(1H，dd，J＝16.9、7.5Hz)，2.39(1H，dt，J＝14.8、6.7Hz)，2.49(1H，dd，J＝17.0、3.0Hz)，2.50(1H，dt，J＝14.8、6.7Hz)，2.70(3H，s)，2.74-2.30(2H，m)，3.07(1H，dd，J＝7.0Hz)，3.83(1H，dd，J＝7.1、2.0Hz)，4.35(1H，dd，J＝7.4、2.8Hz)，4.98-5.07(4H，m)，5.16(1H，brt，J＝7.0Hz)，5.23(1H，t，J＝6.9Hz)，5.74(1H，ddt，J＝16.7、10.2、6.5Hz)，5.91(1H，ddd，J＝17.8、10.5、7.8Hz)，6.50(1H，s)，6.95(1H，s)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ-3.7、-3.3、5.3(3C)、7.2(3C)、14.8、15.2、18.7、18.9、19.4、20.3、23.6、23.7、26.4(3C)、31.7、36.7、40.1、43.8、46.4、53.3、74.2、76.5、79.6、115.5、115.6、116.5、120.5、121.3、135.8、136.1、137.4、140.2、152.9、164.7、171.5、218.4；C41H71NO5SSi2的LRMS(ESI)计算值[M+Na+]768.5，实验值768.5。
Figure A0382256100881
化合物39a：将27(26.9mg，36.1μmol)的甲苯(70mL)溶液加热至回流并用Grubbs催化剂(3.1mg，3.61μmol)的甲苯(2mL)溶液处理。将混合物搅拌25分钟，冷却至0℃并通过硅胶垫过滤，硅胶垫用己烷/EtOAc＝2/1洗涤。将合并的滤液过滤、浓缩并通过快速柱层析(SiO2，己烷/Et2O＝40∶1至5∶1)纯化，获得无色油状39a(9.9mg，13.8μmol，38％)；[α]D 25-41.5(c 0.715，CHCl3)；IR(薄膜)v2955、2884、1737、1690、1467、1378、1249、1179、1102、1014、979、879、826、773cm-1；]H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.08(3H，s)，0.12(3H，s)，0.57(6H，q，J＝7.8Hz)，0.89(9H，t，J＝8.0Hz)，0.93(9H，s)，1.04(3H，s)，1.06(3H，d，J＝7.1Hz)，1.12(3H，s)，1.17(3H，d，J＝7.1Hz)，1.68(3H，s)，2.15(3H，d，J＝0.8Hz)，2.14-2.27(2H，m)，2.45(1H，dd，J＝14.0、4.8Hz)，2.50(1H，dd，J＝14.9、3.2Hz)，2.64-2.74(2H，m)，2.72(3H，s)，3.02(1H，五重峰，J＝7.0Hz)，3.10(1H，dd，J＝14.4、7.3Hz)，3.96(1H，d，J＝8.7Hz)，4.43(1H，dd，J＝8.3、2.9Hz)，5.22(1H，dd，J＝9.8、5.7Hz)，5.33-5.42(2H，m)，5.69(1H，dd，J＝15.8、8.2Hz)，6.57(1H，s)，6.96(1H，s)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ-3.3、-3.2、5.6(3C)、7.1(3C)、15.0、17.2、18.8、19.4、21.4、21.7、23.8、24.3、26.5(3C)、33.2、35.6、41.3、41.8、48.2、54.0、74.4、77.4、79.3、116.4、120.5、121.0、129.3、132.1、137.8、138.0、152.7、164.8、170.7、216.8；C39H68NO5SSi2的LRMS(ESI)计算值[M+H+]718.4，实验值718.3。
Figure A0382256100891
化合物28：于0℃下向39a(298.8mg，0.416mmol)的THF(6.5mL)溶液中添加HF-吡啶(3.2mL)，并于室温下将混合物搅拌3小时。于0℃下滴加TMSOMe(30mL)使反应停止并于室温下将该混合物搅拌3小时。于高真空下浓缩并干燥后，残余物通过快速柱层析(SiO2，己烷/EtOAc＝1∶1)纯化，获得白色固体28(196.6mg，0.402mmol，97％)；
[α]D 25-96.6(c 0.235，CHCl3)；IR(薄膜)v3502、2970、2927、1733、1685、1506、1456、1375、1251、1152、1040、977cm-1；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.06(3H，s)，1.11(3H，d，J＝7.0Hz)，1.22(3H，d，J＝6.8Hz)，1.28(3H，s)，1.72(3H，s)，2.10(3H，s)，2.31-2.40(2H，m)，2.43(1H，dd，J＝16.0、3.7Hz)，2.49(1H，dd，J＝16.0、9.2Hz)，2.55-2.68(2H，m)，2.71(3H，s)，2.98(1H，dd，J＝14.4、6.4Hz)，3.16(1H，五重峰，J＝6.2Hz)，3.76(1H，dd，J＝5.9、3.2Hz)，4.30(1H，dd，J＝9.2、3.7Hz)，5.18(1H，brt，J＝7.3Hz)，5.32(1H，dd，J＝8.4、2.5Hz)，5.63(1H，dd，J＝15.7、6.4Hz)，5.60(1H，ddd，J＝15.7、6.9、5.1Hz)，6.60(1H，s)，6.98(1H，s)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ15.1、16.0、17.7、19.2、19.5、22.5、23.6、32.0、35.0、39.6、40.3、44.8、53.3、71.8、75.6、78.3、116.1、119.6、120.5、129.9、131.3、137.5、138.2、152.2、165.0、170.7、218.8；C27H40NO5S的LRMS(ESI)计算值[M+H+]490.3，实验值490.2。
Figure A0382256100901
化合物26：在反应前将酸25及醇21与无水甲苯(5mL×2)共沸并于高真空下干燥。于0℃下向醇21(240mg，0.756mmol)的CH2Cl2(5mL)溶液添加EDCI(192.7mg，1.01mmol)及DMAP(122.8mg，1.01mmol)。于0℃下经15分钟向该混合物中滴加酸25(314.6mg，0.628mmol)的CH2Cl2(2mL+1mL洗涤)溶液。于0℃下搅拌2小时后，再将混合物于室温下搅拌2小时。浓缩后，残余物通过快速柱层析(SiO2，己烷/EtOAc＝20.1至15∶1)纯化，获得无色油状26(340.1mg，0.425mmol，以酸计为68％)；[α]D 24-27.5(c 0.28，CHCl3)；IR(薄膜)v2956、2878、1740、1692、1472、1378、1317、1253、1174、1118、988、915、872、837、775cm-1；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.06(6H，s)，0.57-0.65(6H，m)，0.92(9H，s)，0.94(9H，t，J＝7.9Hz)，1.02(3H，d，J＝6.9Hz)，1.03(3H，d，J＝6.8Hz)，1.07(3H，s)，1.22(3H，s)，2.07-2.10(1H，m)，2.09(3H，s)，2.31(1H，dd，J＝16.9、7.3Hz)，2.51(1H，dd，J＝16.8、3.0Hz)，2.49-2.65(2H，m)，2.71(3H，s)，2.96-2.99(2H，m)，3.06(1H，五重峰，J＝7.1Hz)，3.83(1H，dd，J＝7.3、2.1Hz)，4.35(1H，dd，J＝7.2、3.0Hz)，4.98-5.12(4H，m)，5.30(1H，t，J＝6.7Hz)，5.76(1H，ddt，J＝16.7、10.2、6.2Hz)，5.92(1H，ddd，J＝17.8、9.9、7.8Hz)，6.19(1H，t，J＝7.0Hz)，6.51(1H，s)，6.97(1H，s)；C41H68F3NO5SSi2Na的LRMS(ESI)计算值[M+Na+]822.4，实验值822.4。
化合物40a(通过26的RCM)：将26(57.6mg，72.0μmol)的甲苯(142mL)溶液加热至回流并用Grubbs催化剂(6.1mg，7.20μmol)的甲苯(2mL)溶液处理。将混合物搅拌28分钟，冷却至0℃并用硅胶垫过滤，硅胶垫用己烷/EtOAc＝2/1(300mL)冲洗。将合并的滤液浓缩并通过快速柱层析(SiO2，己烷/Et2O＝40∶1至15∶2)纯化，获得无色油状40a(12.0mg，15.5μmol，22％)；
IR(薄膜)v2955、2884、1743、1690、1472、1320、1173、1114、1038、1008、873、832、773cm-1；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.09(3H，s)，0.12(3H，s)，0.55(6H，q，J＝7.7Hz)，0.88(9H，t，J＝8.0Hz)，0.96(9H，s)，1.01(3H，s)，1.06(3H，d，J＝7.1Hz)，1.12(3H，s)，1.20(3H，d，J＝7.1Hz)，2.07-2.17(1H，m)，2.19(3H，s)，2.38(1H，dd，J＝14.3、3.5Hz)，2.39-2.49(1H，m)，2.50(1H，dd，J＝14.3、7.3Hz)，2.73(3H，s)，2.77-2.91(2H，m)，2.96-3.09(2H，m)，3.98(1H，dd，J＝8.9Hz)，4.54(1H，dd，J＝7.3、3.4Hz)，5.28-5.38(1H，m)，5.63(1H，dd，J＝9.6、2.3Hz)，5.77(1H，dd，J＝15.9、8.5Hz)，6.21-6.28(1H，m)，6.60(1H，s)，6.99(1H，s)；C39H65F3NO5SSi2的LRMS(ESI)计算值[M+H+]772.4，实验值772.4。
Figure A0382256100921
化合物29：于0℃下缓慢向40a(1.78g，2.31mmol)的THF(25mL)溶液中添加HF-吡啶(12.5mL)，并于室温下将该混合物搅拌4小时。通过于0℃下经10分钟滴加TMSOMe(80mL)使反应停止。于室温下将混合物剧烈搅拌2.5小时。于高真空下浓缩并干燥2小时后，残余物通过快速柱层析(SiO2约50g，己烷/EtOAc＝1∶1)纯化，获得无色粉末29(1.20g，2.21mmol，96％)；
[α]D 25-54.6(c 0.28，CHCl3)；IR(薄膜)v3478、2974、2929、1736、1689、1449、1381、1318、1247、1169、1113、1039、983、867、736cm-1；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.05(3H，s)，1.12(3H，d，J＝7.0Hz)，1.23(3H，d，J＝6.8Hz)，1.37(3H，s)，2.04(1H，brd，J＝3.8Hz，-OH)，2.12(3H，s)，2.25-2.33(1H，m)，2.38(1H，dd，J＝15.3、3.0Hz)，2.48(1H，dd，J＝15.4、9.8Hz)，2.54-2.61(1H，m)，2.66-2.76(1H，m)，2.71(3H，s)，2.96(1H，dd，J＝16.5、4.5Hz)，3.02(1H，dd，J＝16.3，6.5Hz)，3.11(1H，五重峰，J＝6.7Hz)，3.19(1H，brs，＝OH)，3.74(1H，brs)，4.35(1H，brd，J＝9.5Hz)，5.42(1H，dd，J＝6.2、4.1Hz)，5.60(1H，ddd，J＝15.8、5.6、4.5Hz)，5.66(1H，dd，J＝15.8、5.8Hz)，6.24(1H，t，J＝7.2Hz)，6.64(1H，s)，7.00(1H，s)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ15.1、16.1、17.7、18.5、19.3、22.5、28.8、31.1、39.6、39.7、45.0、53.7、71.4、75.3、76.8、116.7、120.2、124.3[q，1J(C，F)＝273.4Hz]、127.9、130.2[q，3J(C，F)＝6.0Hz]、130.6[q，2J(C，F)＝28.4Hz]、132.5、136.7、152.0、165.4、170.2、218.4；C27H37F3NO5S的LRMS(ESI)计算值[M+H4]544.2，实验值544.1。
化合物2：于50℃下向29(1.22mg，2.24μmol)及TrisNHNH2(26.7mg，89.6μmol)的ClCH2CH2Cl(1mL)的溶液中添加Et3N(12.5μL，89.6μmol)。通过HPTLC(己烷/EtOAc/CH2Cl2＝1/1/2)监视反应。搅拌6.5小时后，再次将TrisNHNH2(26.7mg，89.6μmol)及Et3N(12.5μL，89.6μmol)添加至该混合物。搅拌14小时后，将混合物冷却至室温，用EtOAc稀释并通过硅胶垫过滤，硅胶垫用EtOAc冲洗。浓缩后，残余物用制备型TLC(己烷/EtOAc/CH2Cl2＝1/1/2)纯化，获得白色固体2(1.16mg，2.13μmol，94％)；
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.03(3H，d，J＝7.0Hz)，1.08(3H，s)，1.19(3H，d，J＝6.8Hz)，1.25-1.35(2H，m)，1.37(3H，s)，1.42-1.55(2H，m)，1.65-1.82(2H，m)，2.10(3H，d，J＝0.8Hz)，2.21-2.47(2H，m)，2.27(1H，dd，J＝14.2、2.6Hz)，2.48(1H，dd，J＝14.3、10.8Hz)，2.70(3H，s)，2.70-2.28(1H，m)，3.02(1H，d，J＝2.0Hz，-OH)，3.19(1H，qd，J＝6.9、2.2Hz)，3.65(1H，d，J＝6.2Hz，-OH)，3.69-3.72(1H，m)，4.34(1H，ddd，J＝10.8、6.2、2.6Hz)，5.28(1H，dd，J＝10.2、2.2Hz)，6.12(1H，dd，J＝10.2、5.2Hz)，6.61(1H，s)，6.98(1H，s)；C27H39F3NO5S的LRMS(ESI)计算值[M+H+]546.3，实验值546.2。
Figure A0382256100932
化合物54：在反应前将酸25及醇53与无水甲苯(3mL×2)共沸并于高真空下干燥。于0℃下向醇53(68.0mg，0.173mmol)的CH2Cl2(1.3mL)溶液中添加EDCI(37.8mg，0.197mmol)及DMAP(24.1mg，0.197mmol)。于0℃下经5分钟向该混合物滴加酸25(72.6mg，0.123mmol)的CH2Cl2(0.7mL)溶液。于0℃下搅拌1小时后，将混合物于室温下搅拌2小时。浓缩后，残余物通过快速柱层析(SiO2，己烷/EtOAc＝30∶1)纯化，获得无色油状54(99.5mg，0.114mmol，自特丁基酯开始92％)；[α]D 25-23.4(c 0.56，CHCl3)；IR(薄膜)v2955、2931、2880、1735、1696、1506、1472、1386、1362、1294、1254、1174、1104、988、878、776、742cm-1；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.06(3H，s)，0.06(3H，s)，0.14(6H，s)，0.63(6H，q，J＝8.0Hz)，0.92(9H，s)，0.94(9H，t，J＝8.0Hz)，0.97(9H，s)，1.02(3H，d，J＝6.6Hz)，1.05(3H，d，J＝6.5Hz)，1.07(3H，s)，1.21(3H，s)，1.67(3H，s)，2.06(3H，d，J＝0.8Hz)，2.05-2.14(1H，m)，2.30(1H，dd，J＝16.9、7.5Hz)，2.33-2.53(2H，m)，2.50(1H，dd，J＝16.9、2.7Hz)，2.76-2.80(2H，m)，3.07(1H，五重峰，J＝7.0Hz)，3.83(1H，dd，J＝7.0、2.2Hz)，4.35(1H，dd，J＝7.4、2.8Hz)，4.97(2H，s)，4.97-5.07(4H，m)，5.16(1H，t，J＝7.2Hz)，5.24(1H，t，J＝6.9Hz)，5.74(1H，ddt，J＝16.6、10.0、6.5Hz)，5.91(1H，ddd，J＝17.6、9.9、7.7Hz)，6.50(1H，s)，7.06(1H，s)；13C NMR(100MHz，CDl3)δ-5.2(2C)、-3.7、-3.3、5.3(3C)、7.2(3C)、14.7、15.2、18.5、18.7、18.9、20.3、23.6、23.7、26.0(3C)、26.4(3C)、31.7、36.7、40.1、43.8、46.4、53.3、63.4、74.2、76.5、79.6、115.5、115.6、116.6、120.5、121.3、135.8、136.1、137.4、140.1、153.0、171.5、172.2、218.4；C47H86NO6SSi3的LRMS(ESI)计算值[M+H+]876.6，实验值876.5。
化合物55：将54(69.7mg，79.5μmol)的甲苯(158mL)溶液加热至回流并用Grubbs催化剂(6.7mg，7.95μmol)的甲苯(2mL)溶液处理。将混合物搅拌11分钟，冷却至0℃并用硅胶垫过滤，硅胶垫用己烷/EtOAc＝3/1(280mL)冲洗。将合并的滤液浓缩并通过快速柱层析(SiO2，己烷/Et2O＝20∶1至15∶1)纯化，获得无色油状55(18.4mg，21.7μmol，27％)；[α]D 24-40.4(c 0.26，CHCl3)；IR(薄膜)v2955、2930、2879、1740、1694、1472、1387、1362、1253、1200、1107、1007、838、776、742cm-1；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.08(3H，s)，0.12(3H，s)，0.15(6H，s)，0.57(6H，q，J＝7.9Hz)，0.88(9H，t，J＝8.0Hz)，0.95(9H，s)，0.97(9H，s)，1.04(3H，s)，1.06(3H，d，J＝7.1Hz)，1.12(3H，s)，1.17(3H，d，J＝7.0Hz)，1.69(3H，s)，2.06-2.30(2H，m)，2.14(3H，s)，2.45(1H，dd，J＝15.6、3.6Hz)，2.50(1H，dd，J＝14.9、3.1Hz)，2.63-2.75(2H，m)，2.97-3.06(1H，m)，3.10(1H，dd，J＝14.6、7.7Hz)，3.97(1H，d，J＝8.5Hz)，4.44(1H，dd，J＝8.4、2.9Hz)，4.97(2H，s)，5.22(1H，dd，J＝8.7、5.2Hz)，5.33-5.44(2H，m)，5.70(1H，dd，J＝15.6、8.1Hz)，6.57(1H，s)，7.07(1H，s)；C45H82NO6SSi3的LRMS(ESI)计算值[M+H+]848.5，实验值848.5。
Figure A0382256100952
化合物57：于0℃下向55(61.8mg，72.8μmol)的THF(2mL)溶液中添加HF-吡啶(1mL)，并于室温下将混合物搅拌3.2小时。通过于0℃下滴加TMSOMe(15mL)使反应停止。将混合物于室温下搅拌2小时。于高真空下浓缩并干燥后，残余物通过快速柱层析(SiO2，己烷/EtOAc＝1∶3)纯化，获得白色固体57(32.4mg，64.1μmol，88％)；
[α]D 25-108.4(c 0.285，CHCl3)；IR(薄膜)v3422、2968、2919、2729、1689、1449、1377、1252、1152、1064、978cm-1；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.05(3H，s)，1.12(3H，d，J＝6.9Hz)，1.22(3H，d，J＝6.8Hz)，1.32(3H，s)，1.72(3H，s)，2.08(3H，s)，2.31-2.40(3H，m)，2.43(1H，dd，J＝15.5、3.5Hz)，2.49(1H，dd，J＝15.5、9.5Hz)，2.55-2.67(2H，m)，2.95(1H，dd，J＝14.6、6.3Hz)，3.13(1H，五重峰，J＝6.6Hz)，3.34(1H，brs，-OH)，3.75(1H，dd，J＝6.6、2.4Hz)，4.06(1H，brs，-OH)，4.33(1H，dd，J＝9.4、3.0Hz)，4.92(2H，s)，5.18(1H，t，J＝6.9Hz)，5.33(1H，dd，J＝8.0、2.5Hz)，5.52(1H，dd，J＝15.8、6.4Hz)，5.59(1H，ddd，J＝15.8、6.6、5.0Hz)，6.63(1H，s)，7.13(1H，s)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ15.3、16.3、17.8、19.2、22.8、23.7、31.9、35.1、39.7、40.2、45.0、53.4、61.8、71.7、75.8、78.1、116.7、119.0、120.5、130.0、131.2、137.6、138.9、152.5、170.0、170.7、218.7；C27H39NO6SNa的LRMS(ESI)计算值[M+Na+]528.2，实验值528.0。
Figure A0382256100961
化合物46：在反应前将粗制酸25(4.65g，7.27mmol)及醇44(2.18g，9.84mmol)与无水苯共沸并于高真空下干燥。于0℃下向醇44(2.18g，9.84mmol)的CH2Cl2(65mL)溶液中添加EDCI(2.09g，10.9mmol)及DMAP(1.33g，10.9mmol)。于0℃下经20分钟向该混合物中滴加粗制酸25(4.65g，7.27mmol)的CH2Cl2(20mL+5mL冲洗)溶液。于0℃下搅拌40分钟后，再于室温下将混合物搅拌4小时。浓缩后，残余物通过快速柱层析(SiO2约160g，己烷/EtOAc＝20∶1)纯化，获得无色油状46(4.85g，6.87mmol，自特丁酯开始94％)；
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.08(3H，s)，0.08(3H，s)，0.60(6H，q，J＝7.SHz)，0.93(9H，s)，0.94(9H，t，J＝8.0Hz)，1.04(3H，d，J＝7.0Hz)，1.04(3H，d，J＝7.0Hz)，1.11(3H，s)，1.23(3H，s)，2.05-2.14(1H，m)，2.17(3H，s)，2.40(1H，dd，J＝16.9、7.0Hz)，2.59(1H，dd，J＝17.0、3.6Hz)，2.56-2.64(2H，m)，2.90-3.01(2H，m)，3.06(1H，五重峰，J＝7.0Hz)，3.85(1H，dd，J＝7.3、2.0Hz)，4.38(1H，d，J＝7.0、3.4Hz)，4.97-5.14(5H，m)，5.75(1H，ddt，J＝16.0、9.9、6.2Hz)，5.92(1H，ddd，J＝17.8、10.5、7.8Hz)，6.21(1H，td，J＝7.2、1.5Hz)；C36H63F3O6Si2Na的LRMS(ESI)计算值[M+Na+]727.4，实验值727.3。
Figure A0382256100971
化合物48：将46(510.0mg，0.723mmol)的甲苯(500mL)溶液加热至回流并用Grubbs催化剂(92.1mg，0.109mmol)的甲苯(10mL)溶液处理。在回流下将混合物搅拌17分钟并立即冷却至0℃，在用硅胶垫过滤之前保持在0℃。以同样方式同时处理第二批二烯(510.0mg，0.723mmol)。用硅胶垫(100g)过滤合并的反应混合物，硅胶垫用己烷/EtOAc＝3/1(1.4L)冲洗。将合并的滤液浓缩并通过快速柱层析(SiO2约65g，己烷/Et2O＝10∶1至5∶1)纯化，获得无色油状48(742.4mg，1.10mmol，76％)；
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.08(3H)，0.10(3H，s)，0.60(6H，q，J＝7.8Hz)，0.93(9H，s)，0.94(9H，t，J＝7.8Hz)，1.03(3H，d，J＝7.1Hz)，1.08(3H，s)，1.13(3H，d，J＝7.0Hz)，1.17(3H，s)，2.26(3H，s)，2.25-2.34(1H，m)，2.64(1H，dd，J＝15.5、5.0Hz)，2.68-2.75(2H，m)，2.76(1H，dd，J＝15.6，6.4Hz)，2.85(1H，dd，J＝15.6，5.7Hz)，2.97(1H，dq，J＝8.3、6.9Hz)，3.04(1H，dd，J＝15.6、6.3Hz)，3.92(1H，dd，J＝8.3、1.2Hz)，4.36(1H，t，J＝5.3Hz)，5.30-5.39(2H，m)，5.58(1H，dd，J＝15.5、8.0Hz)，6.13(1H，bit，J＝7.2Hz)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ-3.6、-3.6、5.4(3C)、7.0(3C)、17.5、18.5、19.0、21.6、23.5、26.3(3C)、26.5、28.6、29.1、41.0、42.3、47.3、54.1、74.2、76.8、77.7、124.0[1J(C，F)＝273.7Hz]，126.0、128.7[3J(C，F)＝5.9Hz]、132.2[2J(C，F)＝28.1Hz]、133.8、170.5、204.1、216.1；C34H59F3O6Si2Na的LRMS(ESI)计算值[M+Na+]699.4，实验值699.4。
Figure A0382256100981
化合物40a(通过酮48的魏悌希反应)：
将酮48与苯共沸，然后于高真空下干燥0.5小时。于0℃下经5分钟向魏悌希盐(907mg，2.59mmol)的THF(19mL)溶液中滴加t-BuOK(2.4mL于THF的1.0M溶液，2.43mmol)。将混合物于0℃下搅拌0.5小时，然后冷却至-78℃。经10分钟向该混合物中滴加酮48(1.10g，1.62mmol)的THF(13mL)溶液，并经2小时将混合物加热至-20℃。用饱和NH4Cl(15mL)水溶液使反应停止并用EtOAc(50mL×3)萃取。合并的有机层用盐水(20mL)洗涤、Na2SO4干燥并浓缩。残余物通过快速层析(SiO2，己烷/Et2O＝20∶1至10∶1)纯化，获得所期望的16(E)-异构体40a(940mg，1.22mmol，75％)及不希望的16(Z)-异构体40b(140.9mg，0.182mmol，11％)，二者皆为无色油状物；
Figure A0382256100991
[α]D 26-17.1(c 0.14，CHCl3)；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.09(3H，s)，0.12(3H，s)，0.55(6H，q，J＝7.7Hz)，0.88(9H，t，J＝8.0Hz)，0.96(9H，s)，1.01(3H，s)，1.06(3H，d，J＝7.1Hz)，1.12(3H，s)，1.20(3H，d，J＝7.1Hz)，2.07-2.17(1H，m)，2.19(3H，s)，2.38(1H，dd，J＝14.3、3.5Hz)，2.39-2.49(1H，m)，2.50(1H，dd，J＝14.3、7.3Hz)，2.73(3H，s)，2.77-2.91(2H，m)，2.96-3.09(2H，m)，3.98(1H，dd，J＝8.9Hz)，4.54(1H，dd，J＝7.3、3.4Hz)，5.28-5.38(1H，m)，5.63(1H，dd，J＝9.6、2.3Hz)，5.77(1H，dd，J＝15.9、8.5Hz)，6.21-6.28(1H，m)，6.60(1H，s)，6.99(1H，s)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ-3.4、-3.3、5.5(3C)、7.0(3C)、14.6、17.1、18.7、19.4、19.9、21.3、24.8、26.4(3C)、29.6、32.8、42.0、42.1、48.2、54.1、73.4、76.9、77.8、117.0、121.6、124.3[1J(C，F)＝273.5Hz]、127.2、130.6[2J(C，F)＝28.2Hz]、130.8[3J(C，F)＝6.1Hz]、133.2、136.5、152.3、165.0、170.1、217.1；C39H65F3NO5SSi2的HRMS(ESI)计算值[M+H+]772.4074，实验值772.4102。
Figure A0382256100992
[α]D 2562.7(c 0.33，CHCl3)；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.09(3H，s)，0.13(3H，s)，0.49(6H，q，J＝7.8Hz)，0.85(9H，t，J＝7.8Hz)，0.97(9H，s)，0.99(3H，s)，1.06(3H，d，J＝7.1Hz)，1.11(3H，s)，1.20(3H，d，J＝7.1Hz)，2.00(3H，s)，2.03-2.13(1H，m)，2.35(1H，dd，J＝14.3、3.0Hz)，2.46(1H，dd，J＝14.3、7.8Hz)，2.41-2.50(1H，m)，2.73(3H，s)，2.71-2.90(2H，m)，2.98-3.12(2H，m)，3.99(1H，d，J＝9.2Hz)，4.56(1H，dd，J＝7.7、2.8Hz)，5.33(1H，ddd，J＝15.6、8.9、4.1Hz)，5.82(1H，dd，J＝15.6、8.4Hz)，6.29(1H，s)，6.33-6.40(1H，m)，6.94(1H，m)，7.09(1H，brd，J＝8.4Hz)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ-3.2、-3.2、5.5(3C)、7.0(3C)、17.2、18.7、19.3、19.6、20.0、22.3、24.9、26.4(3C)、29.7、32.9、41.9、42.0、48.6、54.0、72.2、73.3、77.0、116.7、120.7、124.5[1J(C，F)＝273.3Hz]、127.9、129.7[2J(C，F)＝28.0Hz]、131.9[3J(C，F)＝6.1Hz]、132.9、136.6、152.1、165.4、170.2、217.4；C39H65F3NO5SSi2的HRMS(ESI)计算值[M+H+]772.4，实验值772.4。
Figure A0382256101001
化合物58(通过酮48的魏悌希反应)：
将酮48与苯(5mL×2)共沸，然后于高真空下干燥0.5小时。于0℃下经5分钟向魏悌希盐(1.19g，2.27mmol)的THF(18mL)溶液中滴加t-BuOK(2.2mL溶于THF的1.0M溶液，2.20mmol)。将混合物于0℃下搅拌20分钟，然后冷却至-78℃。经10分钟向该混合物中滴加酮(1.06g，1.51mmol)的THF(10mL+2mL冲洗)溶液，并经2小时将混合物加热至-20℃。用饱和NH4Cl(15mL)水溶液使反应停止并用EtOAc(50mL×3)萃取。合并的有机层用盐水(20mL)洗涤、Na2SO4干燥并浓缩。残余物通过快速柱层析(SiO2约65g，己烷/Et2O＝30∶1至20∶1)纯化，获得所期望的16(E)-异构体58(1.01g，1.11mmol，74％)及不希望的16(Z)-异构体58a(154.5mg，0.182mmol，11％)，二者皆为无色油状物；
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.09(3H，s)，0.12(3H，s)，0.15(6H，s)，0.55(6H，q，J＝7.8Hz)，0.87(9H，t，J＝8.0Hz)，0.96(9H，s)，0.97(9H，s)，1.01(3H，s)，1.06(3H，d，J＝7.1Hz)，1.12(3H，s)，1.20(3H，d，J＝7.1Hz)，2.07-2.16(1H，m)，2.18(3H，d，J＝1.0Hz)，2.38(1H，dd，J＝14.4、3.3Hz)，2.34-2.46(1H，m)，2.49(1H，dd，J＝14.4、7.4Hz)，2.78-2.90(2H，m)，2.97-3.09(2H，m)，3.98(1H，d，J＝8.9Hz)，4.54(1H，dd，J＝7.3、3.3Hz)，4.97(2H，s)，5.33(1H，ddd，J＝15.8、8.6、4.9Hz)，5.63(1H，dd，J＝9.6、2.4Hz)，5.78(1H，dd，J＝15.8、8.2Hz)，6.22-6.27(1H，m)，6.60(1H，s)，7.09(1H，s)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ-5.3(2C)、-3.4、-3.3、5.5(3C)、7.0(3C)、14.6、17.1、18.4、18.7、19.8、21.3、24.8、25.9(3C)、26.4(3C)、29.6、32.9、42.0、42.1、48.2、54.1、63.4、73.4、76.9、77.8、117.2、121.7、124.3[q，1J(C，F)＝273.6Hz]、127.2、130.7[q，2J(C，F)＝27.5Hz]、130.8[q，2J(C，F)＝6.2Hz]、133.2、136.4、152.6、170.1、172.4、217.1；C45H78F3NO6SSi3Na的LRMS(ESI)计算值[M+Na+]924.5，实验值924.5。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.07(3H，s)，0.13(3H，s)，0.16(6H，s)，0.48(6H，q，J＝7.8Hz)，0.84(9H，t，J＝7.9Hz)，0.97(18H，s)，0.98(3H，s)，1.06(3H，d，J＝7.1Hz)，1.11(3H，s)，1.20(3H，d，J＝7.2Hz)，2.00(3H，s)，2.03-2.11(1H，m)，2.33(1H，dd，J＝14.1、2.8Hz)，2.43(1H，dd，J＝14.0、7.8Hz)，2.40-2.48(1H，m)，2.76-2.89(2H，m)，2.97-3.10(2H，m)，3.99(1H，d，J＝93Hz)，4.57(1H，dd，J＝7.8、2.6Hz)，4.95(1H，d，J＝14.6Hz)，5.00(1H，d，J＝14.6Hz)，5.33(1H，ddd，J＝15.6、9.1、3.8Hz)，5.82(1H，dd，J＝15.6、8.3Hz)，6.30(1H，s)，6.32-6.38(1H，m)，7.04(1H，s)，7.11(1H，dd，J＝11.0，2.3Hz)；C45H78F3NO6SNa的LRMS(ESI)计算值[M+Na+]924.5，实验值924.5。
化合物59：
于0℃下向58(1.04g，2.25mmol)的THF(22mL)溶液中缓慢添加HF·吡啶(11mL)，并于室温下将混合物搅拌4.3小时。于0℃下经10分钟滴加TMSOMe(75mL)使反应停止。于室温下将该混合物剧烈搅拌4.2小时。于高真空下浓缩干燥1小时后，残余物通过快速柱层析(SiO2约25g，己烷/EtOAc＝3∶4至1∶2)纯化，获得无色固体59(615.7mg，1.00mmol，96％)；
[α]D 25-57.7(c 1.20，CHCl3)；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.04(3H，s)，1.12(3H，d，J＝6.9Hz)，1.25(3H，d，J＝6.8Hz)，1.36(3H，s)，1.90(1H，d，J＝6.6Hz，OH)，2.08(3H，s)，2.23-2.32(1H，m)，2.34(1H，dd，J＝15.7、2.4Hz)，2.49(1H，dd，J＝15.7、10.1Hz)，2.59-2.69(2H，m)，2.95-3.01(2H，m)，3.04(1H，五重峰，J＝6.8Hz)，3.72(1H，td，J＝7.0、3.0Hz)，3.78(1H，d，J＝5.7Hz，OH)，4.38(1H，ddd，J＝10.1、5.7、2.4Hz)，4.90(2H，d，J＝6.1Hz)，5.10(1H，t，J＝6.1Hz，OH)，5.44(1H，t，7＝4.7Hz)，5.60(1H，dd，J＝15.9、4.4Hz)，5.66(1H，dd，J＝15.9、5.0Hz)，6.28(1H，t，J＝6.7Hz)，6.73(1H，s)，7.16(1H，s)；C27H37F3NO6SNa的LRMS(ESI)计算值[M+H+]560.2，实验值560.1。
化合物49及50：将28(12.2mg，24.9μmol)的CH2Cl2(1.25mL)溶液冷却至-78℃，并用DMDO(-78℃，0.06M溶于丙酮中，914μL，54.8μmol)的冷溶液处理。将混合物加热至-50℃并于-50℃下搅拌2.7小时。通过在-50℃下添加二甲硫醚(117μL)使过量DMDO停止反应，并在该温度下将混合物搅拌0.5小时。在真空中去除溶剂。通过制备型薄层层析(己烷/EtOAc＝1/2)纯化，获得β-环氧化物49(3.0mg，5.93μmol，24％)及α-环氧化物50(7.9mg，15.6μmol，63％)，二者皆为无色固体。
化合物49：1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.03(3H，s)，1.11(3H，d，J＝7.0Hz)，1.14(3H，d，J＝6.9Hz)，1.34(3H，s)，1.36(3H，s)，2.00(1H，ddd，J＝15.1、7.3、4.0Hz)，2.14(1H，dt，J＝15.1、5.2Hz)，2.14(3H，s)，2.21(1H，dd，J＝14.6、8.0Hz)，2.33(1H，dd，J＝14.7、4.8Hz)，2.47(1H，dd，J＝13.8、3.3Hz)，2.59(1H，dd，J＝13.8、9.4Hz)，2.73(3H，s)，2.77(1H，brs，OH)，2.93(1H，dd，J＝7.3、4.8Hz)，3.34(1H，qd，J＝6.9、3.7Hz)，3.75-3.82(1H，m)，4.12-4.24(2H，m，包括OH)，5.54(1H，ddd，J＝15.7、7.4、5.0Hz)，5.54-5.60(1H，m)，5.64(1H，dd，J＝15.7、5.6Hz)，6.94(1H，s)，7.01(1H，s)；C27H40NO6S的LRMS(ESI)计算值[M+H+]506.3，实验值506.3。
化合物50：1H HMR(400MHz，CDCl3)δ1.00(3H，s)，1.04(3H，d，J＝6.9Hz)，1.12(3H，d，J＝7.0Hz)，1.35(3H，s)，1.35(3H，s)，1.87(1H，dt，J＝15.0、9.2Hz)，2.03(1H，dd，J＝13.9、9.2Hz)，2.13(3H，s)，2.13-2.19(1H，m)，2.36(1H，dd，J＝13.9、3.4Hz)，2.39(1H，dd，J＝12.2、2.1Hz)，2.42-2.51(1H，m)，2.49(1H，dd，J＝12.4、10.9Hz)，2.69(1H，d，J＝2.7Hz)，2.72(3H，s)，3.06(1H，dd，J＝9.7、3.1Hz)，3.54(1H，qd，J＝7.0、2.0Hz)，3.76-3.80(1H，m)，4.07-4.14(1H，m)，4.31(1H，d，J＝4.1Hz)，5.52(1H，dd，J＝15.5、8.7Hz)，5.60(1H，ddd，J＝15.1、9.4、3.4Hz)，5.71(1H，d，J＝8.4Hz)，6.63(1H，s)，6.99(1H，s)；C27H39NO6SNa的LRMS(ESI)计算值[M+Na+]528.2，实验值528.2。
Figure A0382256101042
化合物52：于50℃下向50(1.7mg，3.4μmol)及TrisNHNH2(40.1mg，0.134mmol)溶于ClCH2CH2Cl(0.8mL)的溶液中添加Et3N(18.7μL，0.134mmol)。通过HPTLC(己烷/EtOAc＝1/2)监测该反应。搅拌4小时后，将混合物冷却至室温，用EtOAc稀释并通过硅胶垫过滤，硅胶垫用EtOAc冲洗。浓缩后，残余物通过制备型TLC(己烷/EtOAc＝1/2)纯化，获得白色固体52(1.2mg，2.4μmol，70％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.95(3H，d，J＝7.1Hz)，1.04(3H，s)，1.11(3H，d，J＝7.0Hz)，1.28(3H，s)，1.37(3H，s)，1.35-1.44(1H，m)，1.45-1.59(4H，m)，1.71-1.82(2H，m)，1.86(1H，dt，J＝15.3、9.5Hz)，2.10(1H，dd，J＝15.3、3.6Hz)，2.13(3H，s)，2.40(1H，dd，J＝12.5、2.5Hz)，2.49(1H，dd，J＝12.5、11.0Hz)，2.74(3H，s)，2.80(1H，brs，OH)，3.07(1H，dd，J＝10.3、3.3Hz)，3.34(1H，qd，J＝7.0、1.0Hz)，3.89(1H，brs，OH)，4.03-4.09(1H，m)，4.12-4.17(1H，m)，5.69(1H，d，J＝9.1Hz)，6.63(1H，s)，7.00(1H，s)；C27H41NO6SNa的LRMS(ESI)计算值[M+Na+]530.3，实验值530.2。
化合物51：于50℃下向49(0.7mg，1.38μmol)及TrisNHNH2(20.6mg，69μmol)于ClCH2CH2Cl(0.4mL)的溶液中添加Et3N(9.6μL，69μmol)。由HPTLC(己烷/EtOAc＝1/2)监测该反应。搅拌6小时后，将混合物冷却至室温，用EtOAc稀释并通过硅胶垫过滤，硅胶垫用EtOAc冲洗。浓缩后，残余物通过制备型TLC(己烷/EtOAc＝1/2)纯化，获得白色固体51(0.5mg，0.985μmol，71％)。51的光谱数据与所报导的EpoB的数据相同。
实例2：用于合成埃坡霉素中间体的替代合成方法
以下实例提供制备在埃坡霉素类似物的合成中的各种中间体的方法。
9，10-去氢埃坡霉素合成的优化
实例1：
Figure A0382256101061
实例3：Noyori还原
Figure A0382256101071
实例4：关键二酮的替代合成
Figure A0382256101072
实例5：
方法1.甲硅烷基迁移-脱羧反应
Figure A0382256101081
方法2.脱羧-纳入甲硅烷基
Figure A0382256101082
实例6：Evans辅助方法合成2-羟基酮
Figure A0382256101083
实例7：Kowalsky-Sharpless方法合成2-羟基酮
试验
Figure A0382256101092
碳酸l-(2-苄氧基-l-甲基乙基)-5，5-二异丙氧基-2，4，4-三甲基-3-氧代戊基酯2，2，2-三氯乙酯(32a)
于0℃下向7-苄氧基-5-羟基-1，1-二异丙氧基-2，2，4，6-四甲基-庚-3-酮32(1.0g，2.4mmol)与吡啶(0.8mL，7.3mmol)溶于CH2Cl2(10.0mL)的溶液中添加氯甲酸2，2，2-三氯乙酯(668.0μL，4.9mmol)，然后将混合物加热至室温。1小时后，用盐水使反应混合物停止反应，然后用CH2Cl2萃取。合并的有机层用MgSO4干燥并于减压下浓缩。粗产物通过快速层析(梯度∶己烷至己烷/EtOAc 93∶7)纯化，获得澄清油状物32a(1.285g，92％)：1HNMR(400MHz，CDCl3)δ1.03-1.09(m，12H)，1.15(d，J＝1.8Hz，3H)，1.17(d，J＝1.9Hz，3H)，1.19-1.21(m，6H)，1.97-2.11(m，1H)，3.2(dd，J＝6.2及9.0Hz，1H)，3.54(dd，J＝4.8及9.1Hz，1H)，3.57-3.60(m，1H)，3.82(qd，J＝3.6及5.9Hz，2H)，4.47(s，2H)，4.57(s，1H)，4.72(d，J＝11.9Hz，1H)，4.81(d，J＝11.9Hz，1H)，5.08(t，J＝6.0Hz，1H)，7.29-7.35(m，5H)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ11.9、15.0、18.8、21.4、21.7、22.3、23.2、23.4、35.7、42.5、53.4、53.9、69.4、70.9、71.4、73.3、81.3、94.7、103.4、127.5、127.6、128.2、138.2、154.0、215.6；IR(薄膜，NaCl，cm-1)2966、1760、1698、1247；C27H41O7Cl3Na的LRMS(ESI)计算值[M+Na+]605.2，实验值605.2；[α]23 D＝-20.4(c＝1.0，CHCl3。
Figure A0382256101101
碳酸l-(2-苄氧基-l-甲基乙基)-2，4，4-三甲基-3，5-二氧代戊基酯2，2，2-三氯乙酯(67)
向32a(1.28g，2.25mmol)于4∶1的THF/H2O(25mL)溶液中添加p-TsOH(111.0mg，0.6mmol)。于70℃下加热5小时后，将反应混合物倾倒至冷(0℃)饱和NaHCO3水溶液(12mL)中，然后用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤、MgSO4干燥并于减压下浓缩。粗产物通过快速层析(梯度∶己烷至己烷/BtOAc84∶16)纯化，获得清澈油状物67(793.2mg，76％)：1H NMR(400MHz，CDCl3)□0.90(d，J＝5.8Hz，3H)，1.0(d，J＝6.9Hz，3H)，1.24(s，6H)，1.97-2.04(m，1H)，3.24(dd，J＝4.8及9.2Hz，1H)，3.34(m，1H)，3.42(dd，J＝5.8及9.2Hz，1H)，4.35(d，J＝11.9Hz，1H)，4.39(d，J＝11.9Hz，1H)，4.64(d，J＝11.9Hz，1H)，4.69(d，J＝11.9Hz，1H)，4.96(t，J＝6.0Hz，1H)，7.19-7.28(m，5H)，9.49(s，1H)；13C NMR(100MHz，CDCl3)-12.0、14.8、19.5、19.6、35.4、43.3、60.9、71.1、73.3、80.37、94.5、127.7、127.8、128.3、137.9、154.1、201.0、210.1；IR(薄膜，NaCl，cm-1)2973、2880、1758、1701、1453、1380、1248；C21H27O6Cl3Na的LRMS(ESI)计算值[M+Na+]503，0，实验值503.0；[α]23 D＝-18.5(c＝0.8，CHCl3)。
Figure A0382256101102
9-苄氧基-4，4，6，8-四甲基-3，5-二氧代-7-(2，2，2-三氯乙氧基甲酰氧基)-壬酸特丁基酯(69)
于-78℃下向LDA(1.17mmol，0.3M于Et2O中)的溶液中添加醋酸特丁基酯(1.0mmol，135.0μL)。30分钟后，经15分钟缓慢添加67(464.0mg，1mmol)于Et2O(2mL)的溶液。搅拌1小时后，用饱和NH4Cl水溶液使反应停止，然后用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤、MgSO4干燥并于减压下浓缩。粗产物通过快速层析(梯度∶己烷至己烷/EtOAc 86∶14)纯化，获得清澈油状68(1∶1的差向异构体混合物，461.4mg，80％)：1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.87(d，J＝5.3Hz，3H)，0.89(d，J＝5.5Hz，3H)，1.02-1.10(m，18H)，1.38(s，18H)，1.97-2.2(m，2H)，2.27-2.31(m，2H)，3.22-3.27(m，3H)，3.39-3.48(m，5H)，4.03-4.06(m，1H)，4.11-4.14(m，1H)，4.38-4.45(m，4H)，4.58-4.73(m，4H)，4.97(t，J＝5.8Hz，1H)，5.02(t，J＝5.8Hz，1H)，7.18-7.27(m，10H)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ11.9、12.7、14.9、15.2、18.7、19.3、21.4、21.6、28.0、35.6、37.4、41.7、42.0、51.8、51.9、71.3、71.3、72.5、73.0、73.3、73.3、80.6、81.2、81.3、94.6、127.5、127.7、127.8、128.3、138.0、138.1、154.0、154.1、172.3、172.4、216.0、216.3；IR(薄膜，NaCl，cm-1)3509、2975、1759、1707、1368、1248、1152；C27H39O8Cl3Na的LRMS(ESI)计算值[M+Na+]619.1，实验值619.2。
向68(350.0mg，0.6mmol)于CH2Cl2(10mL)的0℃溶液中添加Dess-Martinperiodinane(398.0mg，0.9mmol)。于室温下将混合物搅拌1小时，然后倾倒至充分搅拌的1∶1的饱和Na2S2O2/饱和NaHCO3的混合物中。30分钟后分层，水层用Et2O萃取三次，合并的有机萃取物用饱和NaHCO3、盐水洗涤、MgSO4干燥并于真空下浓缩。粗产物通过快速层析(梯度∶己烷至己烷/EtOAc 91∶9)纯化，获得澄清油状物69(258.4mg，74％)：1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.80(d，J＝6.9Hz，3H)，0.87(d，J＝6.9Hz，3H)，1.13(s，3H)，1.19(s，3H)，1.23(s，9H)，2.04-2.12(m，1H)，3.09-3.28(m，5H)，4.23(s，2H)，4.48(d，J＝11.9Hz，1H)，4.55(d，J＝11.9Hz，1H)，4.79(dd，J＝4.6及7.3Hz，1H)，7.04-7.13(m，5H)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ11.7、14.6、20.7、21.5、27.9、35.5、42.2、43.4、63.3、71.3、73.3、79.9、81.5、90.5、94.5、127.6、127.7、128.2、138.0、154.0、166.2、202.9、210.0；IR(薄膜，NaCl，cm-1)2977、1758、1697、1368、1248、1154；C27H37O8Cl3Na的LRMS(ESI)计算值[M+Na+]617.1，实验值617.1；[α]23 D＝-49.1(c＝0.9，CHCl3。
Figure A0382256101121
9-苄氧基-3-羟基-4，4，6，8-四甲基-5-氧代-7-(2，2，2-三氯乙氧基甲酰氧基)-壬酸特丁基酯(70)
向一弹形高压容器(bomb liner)加入(R)-RuBINAP催化剂(16.8mg，10.0μmol)，于其中添加HCl(555μL，0.2N于MeOH中)，然后将混合物超声波处理15秒。然后添加69(59.4mg，0.1mmol)于MeOH(555μL)中的溶液，然后将该混合物转移至一Parr装置。该容器用H2吹扫5分钟，然后加压至1200psi。17小时后，反应物恢复至大气压并倾倒至饱和NaHCO3水溶液中。水层用EtOAc萃取三次。合并的有机萃取物用MgSO4干燥并于减压下浓缩。粗产物通过快速层析(梯度∶己烷至己烷/EtOAc 88∶12)纯化，获得清澈油状物70(通过1H NMR分析判断dr＞20∶1)(47.6mg，80％)：1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.06(d，J＝6.9Hz，3H)，1.11(d，J＝6.8Hz，3H)，1.14(s，3H)，1.18(s，3H)，1.47(s，9H)，2.05-2.12(m，1H)，2.35-2.40(m，1H)，3.31-3.37(m，2H)，3.51-3.54(m，2H)，4.11-4.14(m，1H)，4.46(s，2H)，4.72(d，J＝11.9Hz，1H)，4.80(d，J＝11.9Hz，1H)，5.05(dd，J＝5.0及6.7Hz，1H)，727-7.35(m，5H)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ12.0、15.0、19.3、21.7、28.0、35.6、37.5、41.7、51.8、71.3、73.0、73.3、80.6、81.3、94.7、127.5、127.7、128.3、138.2、154.1、172.4、216；IR(薄膜，NaCl，cm-1)3849、2974、2879、1758、1701、1454、1368、1248、1152、926、734；C27H39O8Cl3Na的LRMS(ESI)计算值[M+Na+]619.1，实验值619.2；[α]23 D＝-13.0(c＝0.4，ooCHCl3)。
9-苄氧基-4，4，6，8-四甲基-5-氧代-7-(2，2，2-三氯乙氧基甲酰氧基)-3-(三乙基硅烷氧基)-壬酸特丁基酯(71)
于0℃下向70(37.6mg，6.3μmol)与咪唑(9.4mg，13.8pmol)于DMF(0.4mL)的溶液中添加TESC1(11.6μL，69.3μmol)。3小时后，混合物用饱和NaHCO3水溶液稀释。水层用己烷萃取三次。合并的有机萃取物用盐水洗涤、MgSO4干燥并于减压下浓缩。粗产物通过快速层析(梯度∶己烷至己烷/EtOAc 93∶7)纯化，根据洗脱顺序获得71(22.9mg，51％)，并回收清澈油状物70(12.9mg，34％)。7：1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.66(q，J＝7.9Hz，6H)，0.96(t，J＝7.9Hz，9H)，1.01(s，3H)，1.05(d，J＝5.2Hz，3H)，1.07(d，J＝5.3Hz，3H)，1.35(s，3H)，1.44(s，9H)，2.05-2.11(m，2H)，2.50(dd，J＝3.5及17.2Hz，1H)，3.35(dd，J＝5.9及9.0Hz，1H)，3.49(dd，J＝4.0及9.0Hz，1H)，3.53(dd，J＝3.8及6.7Hz，1H)，4.18(dd，J＝3.5及6.5Hz，1H)，4.45(s，2H)，4.65(d，J＝11.9Hz，1H)，4.79(d，J＝11.9Hz，1H)，4.97(dd，J＝3.7及8.1Hz，1H)，7.29-7.52(m，5H)；13C NMR(125MHz，CDCl3)δ5.3、7.3、10.9、14.9、21.3、22.6、28.4、35.9、41.1、42.7、53.7、71.9、73.7、75.7、80.1、80.9、95.1、127.9、128.0、128.7、138.6、154.3、171.7、215.7；IR(薄膜，NaCl，cm-1)2956、2876、1732、1694、1456、1366、1257、1154、1098、988、835、774、741；C33H53O8SiCl3Na的LRMS(ESI)计算值[M+Na+]733.2，实验值733.3。[α]23 D＝-16.1(c＝0.1，CHCl3)。
9-苄氧基-3-(二乙基甲基硅烷氧基)-7-羟基-4，4，6，8-四甲基-5-氧代-壬酸特丁基酯(71a)
向71(22.9mg，3.2μmol)于1∶1的THF/AcOH(1.4mL)的溶液中添加Zn(5.0mg，7.8μmol，纳米级)。将混合物超声波处理15分钟。再次添加Zn(5.0mg，7.8μmol，纳米级)，随后再超声波处理15分钟。悬浮液用硅藻土垫过滤，硅藻土垫用EtOAc洗涤数次。滤液用饱和NaHCO3、盐水洗涤、MgSO4干燥并于真空下浓缩。粗残余物通过一短硅胶塞用4∶1的己烷/EtOAc洗脱，获得17.1mg(99％产率)无色油状71a：1H NMR(400MHz，CDCl3)δ(m，6H)，0.96(t，J＝7.9Hz，9H)，0.97(d，J＝6.8Hz，3H)，1.05(d，J＝6.8Hz，3H)，1.11(s，3H)，1.26(s，3H)，1.44(s，9H)，1.84-1.90(m，1H)，2.21(dd，J＝6.7及17.0Hz，1H)，2.36(dd，J＝6.7及17.0Hz，1H)，3.24-3.29(m，1H)，3.44-3.52(m，2H)，3.67(dd，J＝3.9及8.9Hz，1H)，4.36(dd，J＝3.5及6.5Hz，1H)，4.50(d，J＝12.0Hz，1H)，4.54(d，J＝12.0Hz，1H)，7.32-7.36(m，5H)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ5.0、6.9、9.7、13.9、20.2、21.8、28.0、36.3、40.8、41.5、53.7、72.5、72.9、73.2、73.6、80.7、127.4、127.5、128.2、138.6、171.0、221.4；IR(薄膜，NaCl，cm-1)3502、2959、2875、1731、1683、1456、1366、1154、1098、996、739；C30H52O6SiCl3Na的LRMS(ESI)计算值[M+Na+]559.3，实验值559.3；[α]23 D＝-41.0(c＝0.4，CHCl3)。
9-苄氧基-7-(特-丁基二甲基硅烷氧基)-3-(二乙基甲基硅烷氧基)-4，4，6，8-四甲基-5-氧代-壬酸特丁基酯(36)
于-78℃下向71a(4.1mg，7.6μmol)与2，6-二甲基吡啶(10.0μL，43.5mmol)于CH2Cl2(0.2mL)的溶液中添加TBSOTf(10.0μL，85.8mmol)。2小时后，再次添加2，6-二甲基吡啶(10.0μL，43.5mmol)及TBSOTf(10.0μL，85.8mmol)。6小时后，混合物用饱和NaHCO3水溶液稀释。水层用EtOAc萃取三次。合并的有机萃取物用盐水洗涤、MgSO4干燥并于减压下浓缩。粗产物通过快速层析(梯度∶己烷至己烷/EtOAc 91∶9)纯化，获得清澈油状物36(5.4mg，82％)。光谱数据与所报导的值一致。
醇83.于室温下向4，4，4-三氟乙酰醋酸乙酯(24.0mL，0.164mol)于THF-水(3∶1＝V∶V，320mL)的溶液中添加烯丙基溴(20.0mL，1.4当量)及铟(粉末，-100网目，25g，1.3当量)，并将所得混合物于48℃下搅拌15小时。将反应混合物冷却至室温，用2N HCl(400mL)水溶液使反应停止并用CH2Cl2(400mL，2×200mL)萃取。将合并的有机物干燥(MgSO4)、过滤并于真空中浓缩。快速层析(己烷-＞己烷-乙醚为10∶1-＞8∶1-＞6∶1-＞4∶1)获得清澈油状醇83(31.64g，85％产率)：IR(薄膜)3426(br m)，2986(m)，1713(s)，1377(m)，1345(m)，1301(m)，1232(m)，1173(s)，1095(m)，1023(m)，927(m)cm-1；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.82(m，1H)，5.15(m，3H)，4.17(m，2H)，2.59(m，1H)，2.58(d，J＝3.4Hz，2H)，2.29(dd，J＝14.2、8.6Hz，1H)，1.24(t，J＝7.2Hz，3H)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ172.08、130.89、125.65(q，J＝280Hz)、120.27、73，79(q，J＝28Hz)、61.55、38.97、35.65、13.82；高分辨率质谱m/z 227.0895[(M+H)+；C9H14O3F3的计算值：227.0895]。
酯84.将醇83(16.71g，0.07386mol)与吡啶(15.0mL，2.5当量)的混合物冷却至-10℃，并经11分钟用亚硫酰氯(11.3mL，2.1当量)缓慢处理。将所得混合物加热至55℃并搅拌12小时。将反应混合物冷却至-5℃，用水(200mL)使反应停止并用CH2Cl2(2×200mL，2×150mL)萃取。合并的有机物用饱和NaHCO3(2×200mL)及盐水(200mL)洗涤、干燥(MgSO4)并在真空中浓缩。快速层析(戊烷∶乙醚为15∶1)获得黄色油状酯84(11.90g，77％产率)：IR(薄膜)2986(w)，1731(s)，1308(s)，1265(w)，1227(m)，1197(s)，1133(s)，1025(m)，920(w)，896(w)cm-1；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.36(s，1H)，5.79(ddt，J＝16.9、10.2、6.6Hz，1H)，5.15(dd，J＝17.1、1.5Hz，1H)，5.08(dd，J＝10.0、1.4Hz，1H)，4.22(q，J＝7.1Hz，2H)，3.44(d，J＝6.5Hz，2H)，1.29(t，7＝7.1Hz，3H)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ164.22、143.37(q，J＝29Hz)、132.71、12321(q，J＝274Hz)、122.60(q，J＝6Hz)、117.32、60.85、30.54、13.85；高分辨率质谱m/z 209.0788[(M+H)+；C9H12O2F3的计算值：209.0789]。
醇85.向酯84(7.12g，0.0342mol)于CH2Cl2(120mL)的冷(-75℃)溶液中添加DIBAL-H(75mL，2.2当量)于CH2Cl2(1.0M)的溶液，并将所得混合物经3小时加热至室温。将反应混合物冷却至0℃，用饱和NH4Cl(12mL)使反应停止并于室温下搅拌20分钟。反应混合物用乙醚(200mL)稀释、干燥(MgSO4)并于真空中浓缩。快速层析(戊烷∶乙醚为3∶1-＞1∶1)获得清澈油状醇85(5.68g，99％)：IR(薄膜)3331(br s)，2929(m)，1642(m)，1445(m)，1417(w)，1348(s)，1316(s)，1217(s)，1175(s)，1119(s)，1045(m)，985(s)，921(m)，831(w)cm-1；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.33(td，J＝6.1、1.6Hz，1H)，5.75(ddt，J＝17.2、10.0、6.2Hz，1H)，5.07(m，2H)，4.29(ddd，J＝6.3、4.3、2.1Hz，2H)，2.95(d，J＝6.2Hz，2H)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ134.45(q，J＝6Hz)，133.38，127.97(q，J＝29Hz)，123.76(q，J＝271Hz)，116.25，57.87，29.79。
Figure A0382256101162
碘化物86.醇85(5.97g，0.0358mol)于CH2Cl2(50mL)的冷(0℃)溶液用PPh3(11.17g，1.2当量)、咪唑(3.55g，1.5当量)及I2(9.10g，1.1当量)处理，并将所得混合物于0℃下搅拌10分钟。反应混合物用饱和Na2S2O3-饱和NaHCO3(1∶1＝V∶V，200mL)来停止反应并用戊烷(3×200mL)萃取。合并的有机物用饱和Na2S2O3-饱和NaHCO3(1∶1＝V∶V，200mL)及盐水(100mL)洗涤、干燥(MgSO4)并在真空中浓缩。快速层析(戊烷)获得浅红色油状碘化物86(6.69g，68％)：(IRI薄膜)3083(w)，2982(w)，1636(w)，1558(w)，1456(w)，1367(w)，1317(s)，1216(m)，1181(s)，1151(s)，1120(s)，989(m)，921(m)，896(m)cm-1;1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.45(td，J＝8.9、1.5Hz，1H)，5.79(ddt，J＝16.8、10.3、6.2Hz，1H)，5.12(m，2H)，3.85(ddd，J＝8.9、2.9、1.4Hz，2H)，3.00(dt，7＝6.1、1.4Hz，2H)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ132.42，131.64(q，J＝6Hz)，129.63(q，J＝29Hz)，123.64(q，J＝272Hz)，117.00，29.32，-4.27；低分辨率质谱m/z 298.7[(M+Na)+；C7H8F3INa的计算值：299.0]。
α-羟基噁唑烷酮88.经51分钟向TES保护的4-苄基-3-羟基乙酰基-噁唑烷-2-酮7(16.28g，1.92当量)于THF(160mL)的冷(-78℃)溶液中滴加LHMDS(42.0mL，1.73当量)于THF(1.0M)中的溶液，并将所得混合物于-78℃下搅拌35分钟。反应混合物用碘化物86(6.69g，24.2mmol)的THF(10mL)溶液处理并将所得混合物缓慢加热至室温过夜。反应混合物用饱和NaHCO3(200mL)来停止反应并用EtOAc(3×200mL)萃取。合并的有机物用饱和NH4Cl(150mL)、盐水(150mL)洗涤，干燥(MgSO4)，并在真空中浓缩。快速层析(己烷-EtOAc为6∶1-＞3∶1)获得一烷基化产物的混合物(13.6g)，其不经进一步纯化即可用于下一反应。将该些烷基化产物于HOAc-水-THF(3∶1∶1＝V∶V∶V，200mL)中的溶液于室温下搅拌4小时。将反应混合物在真空中浓缩以去除HOAc，用饱和NaHCO3(400mL)使反应停止并用EtOAc(3×200mL)萃取。将合并的有机物干燥(MgSO4)并在真空中浓缩。快速层析(己烷∶EtOAc为3∶1-＞2∶1)获得清澈油状α-羟基噁唑烷酮88(7.55g，两步的产率81％)：[α]D 25-48.2(c 1.08，CHCl3)；IR(薄膜)3486(br s)，3030(m)，2983(s)，2925(m)，1790(s)，1682(s)，1481(m)，1393(m)，1360(m)，1217(m)，1171(m)，1113(m)，992(m)，919(m)，847(w)cm-1；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.32(m，3H)，7.17(m，2H)，6.33(td，J＝7.2、1.5Hz，1H)，5.77(ddt，J＝16.6、10.1、6.2Hz，1H)，5.08(m，3H)，4.74(ddt，J＝4.8、3.7、4.4Hz，1H)，4.33(dd，J＝8.6、8.6Hz，1H)，4.26(dd，J＝9.2、3.4Hz，1H)，3.42(br d，J＝6.4Hz，1H)，3.24(dd，J＝13.5、3.4Hz，1H)，2.99(m，2H)，2.79(dd，J＝13.5、9.4Hz，1H)，2.70(m，1H)，2.50(m，1H)；13C NMR(125MHz，CDCl3)δ173.93、153.05、134.43、133.64、129.98(q，J＝6Hz)、129.82(q，J＝28Hz)、129.29、120.01、127.58、124.00(q，J＝272Hz)、116.34、69.60、67.31、54.95、37.78、32.29、29.84；高分辨率质谱m/z 384.1421[(M+H)+；C19H21NO4F3的计算值：384.1423]。
Figure A0382256101181
α-羟基酰胺89.下向(MeO)NHMe·HCl(10.1g，5.25当量)于THF(100mL)中的0℃溶液中滴加AlMe3(50mL，5.1当量)的甲苯(2.0M)溶液来处理，并于室温下将所得清澈溶液搅拌34分钟，然后添加至α-羟基噁唑烷酮88(7.55g，19.7mmol)于THF(70mL)中的冷(0℃)溶液中。将所得混合物加热至室温并搅拌12小时。将反应混合物冷却至0℃，通过缓慢添加1N酒石酸(100mL)水溶液来使反应停止，于室温下搅拌25分钟，并用EtOAc(3×200mL)萃取。将合并的有机物干燥(MgSO4)，并在真空中浓缩。快速层析(己烷∶EtOAc为2∶1-＞1∶1)获得清澈油状α-羟基酰胺89(5.12g，97％产率)：[α]D 25-57.2(c 1.03，CHCl3)；IR(薄膜)3432(brs)，3084(w)，2980(m)，2943(m)，1652(s)，1464(m)，1373(m)，1318(m)，1214(m)，1171(m)，1112(m)，991(m)，919(m)，818(w)cm-1；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.32(td，J＝7.3、1.5Hz，1H)，5.74(ddt，J＝16.9、10.3、6.1Hz，1H)，5.05(m，2H)，4.43(dd，J＝7.6、3.5Hz，1H)，3.70(s，3H)，3.35(br s，1H)，3.24(s，3H)，2.94(d，J＝6.1Hz，2H)，2.59(m，1H)，2.36(m，1H)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ173.43，133.68，13059(q，J＝6Hz)，129.25(q，J＝28Hz)，124.05(q，J＝271Hz)，116.17，67.57，61.44，32.56，32.38，29.75；高分辨率质谱m/z 268.1161[(M+H)+；C11H17NO3F3的计算值：268.1161]。
Figure A0382256101191
α-羟基酮90.向α-羟基酰胺89(4.87g，18.2mmol)于THF(150mL)的冷(0℃)溶液中添加MeMgBr(75mL，12当量)的乙醚(3.0M)溶液。5分钟后，将反应混合物用饱和NH4Cl(250mL)停止反应，并用EtOAc(5×200mL)萃取。将合并的有机物干燥(MgSO4)，并在真空中浓缩。快速层析(己烷∶EtOAc为4∶1-＞2∶1-＞1∶2)获得清澈油状α-羟基酮90(2.16g，53％产率，以所回收的起始材料计为73％)及起始材料α-羟基酰胺89(1.30g，27％产率)：[α]D 25+58.5(c 1.30，CHCl3)；IR(薄膜)3460(brs)，3085(w)，2984(m)，2926(m)，1716(s)，1679(m)，1641(m)，1417(m)，1361(m)，1319(s)，1247(m)，1216(s)，1172(s)，1113(s)，1020(m)，994(m)，968(w)，919(m)cm-1；1H NMR(500MHz，CDCl3)δ6.21(t，J＝7.0Hz，1H)，5.75(ddt，J＝16.7、10.4、6.2Hz，1H)，5.07(m，2H)，4.26(dt，J＝7.1，4.5Hz，1H)，3.51(d，J＝4.7Hz，1H)，2.96(d，J＝6.1Hz，2H)，2.66(m，1H)，2.42(m，1H)，2.19(s，3H)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ208.53、133.43、129.80(q，J＝28Hz)、129.76(q，J＝6Hz)、123.85(q，J＝271Hz)、116.32、75.36、31.22、29.81、25.11；高分辨率质谱m/z 223.0945[(M+H)+；C10H14NO2F3的计算值：223.0946]。
实例8：催化不对称氧化方法
实例9：合成21-氨基-26-三氟-(E)-9，10-去氢-dEpoB
Figure A0382256101202
Figure A0382256101203
化合物98：
于0℃下向59(50.4mg，90.1μmol)于THF(1mL)的溶液中添加(PhO)2PON3(27.2μL，126μmol)。于0℃下搅拌5分钟后，添加DBU(16.2μL，108μmol)。于0℃下搅拌2小时后，将混合物于室温下搅拌20.5小时。反应混合物用EtOAc稀释并添加水(2mL)来停止反应。分层后，水层用EtOAc萃取(三次)，并将合并的有机层用Na2SO4干燥。浓缩后，残余物在高真空下干燥10分钟以去除DBU。通过快速柱层析(SiO2，己烷/EtOAc＝3∶2)纯化，获得无色固体叠氮化物98(45.6mg，78.0μmol，87％)；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.05(3H，s)，1.12(3H，d，J＝7.0Hz)，1.23(3H，d，J＝6.8Hz)，1.33(3H，s)，2.01(1H，d，J＝5.5Hz，OH)，2.17(3H，s)，2.25-2.35(1H，m)，2.41(1H，dd，J＝15.5、3.2Hz)，2.49(1H，dd，J＝15.5、9.5Hz)，2.54-2.60(1H，m)，2.66(1H，d，J＝6.0Hz)，2.65-2.76(1H，m)，2.96(1H，dd，J＝16.0、4.2Hz)，3.03(1H，dd，J＝16.1、6.7Hz)，3.11(1H，五重峰，J＝6.8Hz)，3.71-3.76(1H，m)，4.31(1H，ddd，J＝9.2、5.9、3.2Hz)，4.65(2H，s)，5.43(1H，dd，J＝6.0、4.3Hz)，5.58(1H，ddd，J＝15.8、6.4、4.6Hz)，5.66(1H，dd，J＝15.8、6.1Hz)，6.23(1H，t，J＝7.3Hz)，6.63(1H，3)，7.18(1H，s)；C27H35F3N4O5SNa的LRMS(ESI)计算值[M+Na+]607.2，实验值607.2。
化合物96：
向叠氮化物98(21.0mg，35.9μmol)的THF(0.6mL)溶液中添加PMe3(1.0M于THF中，43.1μL，43.1μmol)。于室温下搅拌2分钟后，添加水(0.1mL)并将混合物于室温下搅拌3小时。添加PMe3(1.0M于THF中，7.2μL，7.2μmol)并将混合物于室温下搅拌1.5小时。向该混合物中添加28％的NH4OH(水溶液)(54.5μL)。搅拌1小时后，混合物直接通过制备型TLC(CH2Cl2/MeOH＝100∶7.5)纯化，获得无色固体状胺96(15.9mg，28.5μmol，79％)；
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.05(3H，s)，1.12(3H，d，J＝7.0Hz)，1.23(3H，d，J＝6.8Hz)，1.34(3H，s)，2.12(3H，d，J＝0.7Hz)，2.24-2.35(1H，m)，2.39(1H，dd，J＝15.4、3.0Hz)，2.49(1H，dd，J＝15.4、9.8Hz)，2.54-2.63(1H，m)，2.66-2.76(1H，m)，2.97(1H，dd，J＝16.2、4.2Hz)，3.03(1H，dd，J＝16.3、6.5Hz)，3.10(1H，五重峰，J＝6.8Hz)，3.74(1H，dd，J＝6.7、3.5Hz)，4.18(2H，s)，4.34(1H，dd，J＝9.8、2.9Hz)，5.43(1H，dd，J＝6.0、4.3Hz)，5.55-5.64(1H，m)，5.67(1H，dd，J＝15.9，5.8Hz)，6.24(1H，brt，J＝7.3Hz)，6.66(1H，s)，7.10(1H，s)；C27H38F3N2O5S的LRMS(ESI)计算值[M+H+]559.2，实验值559.2。
化合物97：
向胺96(15.9mg，28.5μmol)的CH3CN(0.78mL)溶液中添加37％的HCHO(水溶液)(31.4μL，0.143mmol)，随后添加NaBH3CN(1.0M于THF中，85.5μL，85.5μmol)，并将混合物于室温下搅拌20分钟。添加AcOH(1滴)，并将混合物于室温下搅拌40分钟。混合物直接通过制备型TLC(CH2Cl2/MeOH＝100∶8)纯化，获得无色固体状产物97(15.6mg，26.6μmol，93％)；
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.05(3H，s)，1.12(3H，d，J＝6.9Hz)，1.23(3H，d，J＝6.8Hz)，1.33(3H，s)，2.17(3H，s)，2.24-2.35(1H，m)，2.43(1H，dd，J＝15.7、3,6Hz)，2.49(1H，dd，J＝15.6、9.1Hz)，2.55-2.64(2H，m，包括OH)，2.68-2.77(1H，m)，2.80(3H，s)，2.81(3H，s)，2.92-3.06(2H，m)，3.10(1H，五重峰，J＝6.8Hz)，3.69-3.76(1H，m)，4.25-4.34(1H，m)，4.33(2H，s)，5.42(1H，t，J＝5.5Hz)，5.57(1H，dt，J＝15.8，6.3Hz)，5.66(1H，dd，J＝15.7、6.4Hz)，6.22(1H，brt，J＝7.2Hz)，6.64(1H，s)，7.30(1H，s)；C29H42F3N2O5S的LRMS(ESI)计算值[M+H+]580.2，实验值580.2。
Figure A0382256101231
化合物94及95：
于0℃下向59(18.9mg，33.8mol)与Et3N(18.8μL，0.135mmol)于CH2Cl2(1mL)的溶液中添加TsCl(12.9mg，67.5μmol)及DMAP(2.1mg，16.9μmol)。于室温下搅拌1.5小时后，混合物用EtOAc稀释并用硅胶垫过滤(EtOAc冲洗)。浓缩后，残余物通过制备型TLC(己烷/EtOAc＝1∶1)纯化，获得甲苯磺酸酯94(8.5mg，11.9μmol，35％)及氯化物95(4.3mg，7.44μmol，22％)；二者皆为无色固体；
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.06(3H，s)，1.12(3H，d，J＝7.0Hz)，1.23(3H，d，J＝6.1Hz)，1.33(3H，s)，1.99(1H，d，J＝5.5Hz)，2.10(3H，s)，2.25-2.34(1H，m)，2.41(1H，dd，J＝15.5、3.3Hz)，2.47(3H，s)，2.48(1H，dd，J＝15.7、9.4Hz)，2.51-2.63(1H，m)，2.63(1H，d，J＝6.1Hz，OH)，2.64-2.75(1H，m)，2.91-3.05(2H，m)，3.10(1H，五重峰，J＝6.8Hz)，3.70-3.75(1H，m)，4.30(1H，ddd，J＝9.3、6.1、3.2Hz)，5.32(2H，s)，5.41(1H，dd，J＝5.8、4.5Hz)，5.57(1H，ddd，J＝15.8、6.4、4.6Hz)，5.65(1H，dd，J＝15.8、6.0Hz)，6.21(1H，t，J＝7.1Hz)，6.59(1H，s)，7.18(1H，s)，7.37(2H，d，J＝8.1Hz)，7.84(2H，d，J＝8.3Hz)；C34H43F3NO8S2Na的LRMS(ESI)计算值[M+Na+]736.2，实验值736.3。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.06(3H，s)，1.12(3H，d，J＝6.9Hz)，1.23(3H，d，J＝6.7Hz)，1.34(3H，s)，2.00(1H，d，J＝5.6Hz，OH)，2.15(3H，s)，225-2.35(1H，m)，2.41(1H，dd，J＝15.5、3.2Hz)，2.49(1H，dd，J＝15.5、9.4Hz)，2.53-2.62(1H，m)，2.69(1H，d，J＝6.1Hz，OH)，2.66-2.76(1H，m)，2.92-3.05(2H，m)，3.11(1H，五重峰，J＝6.4Hz)，3.70-3.76(1H，m)，4.32(1H，ddd，J＝9.2、5.9、3.1Hz)，4.85(2H，s)，5.43(1H，dd，J＝6.0、4.4Hz)，5.59(1H，ddd，J＝15.9、6.4、4.5Hz)，5,66(1H，dd，J＝15.9、6.1Hz)，6.23(1H，t，J＝6.8Hz)，6.63(1H，s)，7.20(1H，s)；C27H35ClF3NO5SNa的LRMS(ESI)计算值[M+Na4]600.2，实验值600.2。
Figure A0382256101242
化合物99：
向59(6.9mg，12.3μmol)于CH2Cl2(0.4mL)的溶液中添加经活化的MnO2(自Acros购得，26.8mg，0.308mmol)。于室温下剧烈搅拌4小时后，混合物用硅藻土垫过滤，硅藻土垫用EtOAc冲洗。浓缩后，残余物通过制备型TLC(己烷/EtOAc＝1∶1)纯化，获得无色固体醛99(2.7mg，4.84μmol，39％)；
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1,06(3H，s)，1.13(3H，d，J＝7.2Hz)，1.24(3H，d，J＝6.9Hz)，1.35(3H，s)，1.96(1H，d，J＝5.6Hz，OH)，2.22(3H，d，J＝0.7Hz)，2.25-2.35(1H，m)，2.44(1H，dd，J＝15.4、3.5Hz)，2.46(1H，d，J＝5.9Hz，OH)，2.51(1H，dd，J＝15.7、9.3Hz)，2.57-28(1H，m)，2.68-2.79(1H，m)，2.96-3.03(2H，m)，3.10(1H，五重峰，J＝6.8Hz)，3.71-3.76(1H，m)，4.31(1H，ddd，J＝9.4、6.3、3.5Hz)，5.45(1H，t，J＝5.0Hz)，5.53-5.63(1H，m)，5.67(1H，dd，J＝15.7、6.2Hz)，6.24(1H，t，J＝6.6Hz)，6.72(1H，s)，7.57(1H，d，J＝0.9Hz)，10.01(1H，d，J＝1.2Hz)。
化合物100：
于0℃下向醛99(4.6mg，8.25μmol)于CH3CN(0.5mL)的溶液中添加MeNH2(2.0M于THF中，41.3μL，41.3μmol)。于0℃下搅拌15分钟后，添加NaBH3CN(1.0M于THF中，25μL，25μmol)。于0℃下搅拌0.5小时后，添加AcOH(3滴)。于0℃下搅拌2小时后，添加28％的NH4OH(水溶液)(40μL)，并将混合物于室温下搅拌10分钟。将混合物直接通过制备型TLC(CH2Cl2/MeOH＝100∶9)纯化两次，获得无色固体100(2.4mg，4.19μmol，51％)；
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.05(3H，s)，1.12(3H，d，J＝7.0Hz)，1.23(3H，d，J＝6.8Hz)，1.34(3H，s)，2.13(3H，s)，2.25-2.34(1H，m)，2.39(1H，dd，J＝15.3、3.0Hz)，2.49(1H，dd，J＝15.3、9.7Hz)，2.56(3H，s)，2.54-2.64(1H，m)，2.66-2.75(1H，m)，2.89(1H，d，J＝5.1Hz)，2.94-3.05(2H，m)，3.11(1H，五重峰，J＝6.8Hz)，3.74(1H，dd，J＝6.6、3.5Hz)，4.08(2H，s)，4.34(1H，dd，J＝9.6、2.9Hz)，5.43(1H，dd，J＝6.2、4.1Hz)，5.56-5.63(1H，m)，5.66(1H，dd，J＝15.9、5.7Hz)，6.24(1H，t，J＝7.3Hz)，6.66(1H，s)，7.11(1H，s)；C28H40F3N2O5S的LRMS(ESI)计算值[M+H+]573.3，实验值573.3。
实例10：将异种移植肿瘤消除至一不复发状态的埃坡霉素类似物
通过化学合成、分子模型及光谱分析的组合，我们发现，在抗药性MX-1肿瘤的异种移植物试验中，E-9，10-双键(参见下文化合物28)的引入可使药物效能提高至约10倍(A.Rivkin等人，J.Am.Chem.Soc.2003，125，2899；以引用的方式并入本文中)。根据针对MX-1肿瘤类型的体外与体内试验的相关性，可明显看出：28本质上比2b更具有细胞毒性。然而，另一影响因素在于，9，10-去氢系列中的内酯部分在小鼠及人血浆中明显比9，10-去氢同类物的稳定。该等两种互补效应的总和使得28能够以3mg/Kg(与1的30mg/Kg相比)在各种异种移植物中达成对肿瘤的完全抑制。
Figure A0382256101262
        12，13-去氧EpoB(1)          E)-9，10-去氢-12，13-去氧EpoB(28)
        6-F3-12，13-去氧EpoB(2)    26-F3-(E)-9，10-去氢-12，13-去氧
                                    EpoB(29)
暂停治疗时，动物的某些部分中重新出现可触摸的肿瘤。因此，至少在目前，全合成28还没有完全达到高度有利的有效治疗指数及消除肿瘤至一不复发状态的严格标准。
该些发现使人们将注意力集中于用三个氟原子取代28的26-甲基的三个氢上。在该位置纳入该些氟原子使12，13-双键对氧化作用的稳定性提高(Smart，B.E.J.Fluorine Chem.(2001，109，3)；以引用的方式并入本文中)。先前试验已通过在C12-C13双键区域布置极性基团来消弱部分细胞毒性(A.Rivkin等人，J.Am.Chem.Soc.(2003，125，2899)；以引用的方式并入本文中)。在本揭示内容中，我们通过9，10-去氢-26-三氟埃坡霉素的全化学合成报导了该发现，尤其集中于母体结构29的独特生物性能上。
我们仔细研究了dEpoB(30mg/Kg)、紫杉醇(20mg/Kg)及F3-deH-dEpoB(29，20及30mg/Kg)在肿瘤消除及复发方面抗人类乳腺癌MX-1异种移植物的治疗效能，且该些结果显示在表10-1中。每一剂量组由四只或以上的裸鼠组成。体重是指总体重减去肿瘤重量。所有三种化合物皆使肿瘤消失。暂停治疗后第10天，5/10(dEpoB)、2/7(紫杉醇)及0/4(化合物29)的小鼠复发。暂停用29以20mg/Kg剂量治疗后的延长观察显示，肿瘤长时间消失，直至第27天4只小鼠中有2只小鼠的肿瘤复发。非常明显，用29以30mg/Kg的剂量治疗可使肿瘤完全消失且停止治疗后两个月以上不会出现任何复发。
表10-1.dEpoB、紫杉醇与F3-deH-dEpoB抗裸鼠中MX-1异种移植物的治疗效能[a]
  药物   剂量(mg/Kg)   体重变化(％)   Q2D×66小时静脉内输注后未出现肿瘤   投与后第10天重新出现肿瘤
  停止投与后第4天   停止投与后第8天
  dEpoB(1)紫杉醇F3-deH-dEpoB(29)   30202030   -25.3±2.1-23.9±2.1-22.4±0.6-27.1±2.7   -9.1±4.1-8.7±0.7-7.3±0.7-17.4±5.5   10/107/74/44/4   5/102/70/4[b]0/4[b]
[a]在第0天皮下植入人类乳腺癌MX-1异种移植组织50mg。第8天开始Q2D×6小时静脉内输注的治疗并在第18天停止。
[b]停止治疗后在第27天观察到2/4的小鼠中到重新出现可触摸的肿瘤。停止治疗后第28天至第64天期间没有再出现肿瘤。
[c]试验结束时停止治疗后在64天期间没有再次出现肿瘤。
将药剂29的剂量降低至10mg/Kg(Q2D)亦可使MX-1肿瘤消失，但需要9次服药才能达到该结果(图57、58及59A)。作为一附加要求，需将化疗延迟至肿瘤大小达到0.5g(约体重的2.3％)为止。用25mg/Kg(Q2D×7)剂量的29治疗，使4/4小鼠的肿瘤消失。相反对于dEpoB，需要30mg/Kg(Q2D×8)剂量才能使3/4小鼠的肿瘤消失。然而，不象29的情况，用dEpoB治疗后出现的表面消失随时间流逝而复发。(图59B)。
药剂29完全抑制人类乳腺癌MX-1异种移植物生长、使肿瘤缩小并使其在长达64天的时间内消失的事实给人以深刻印象。而且，用29(20mg/kg或30mg/kg Q2D×6，6小时静脉内输注，表1，上文)治愈后，停止治疗后12至18天内异种移植物的体重恢复至预处理的对照水平。该发现表明没有损伤重要器官。在10mg/Kg Q2D×12的低治疗剂量(图59B)下，最大体重下降仅为12％，同时在最后三次给药期间体重增加6％。停止治疗后仅三天体重即恢复至预处理的对照水平。上表1显示该些动物在体重损失高达27％时仍可存活。在本文中所达成的治疗安全系数对于一有疗效的癌症治疗剂而言相当宽。
亦评价了29抗人类肺癌异种移植物(A549)及紫杉醇抗人类肺癌A549/紫杉醇异种移植物的治疗效能(图59C及59D)。用29(25mg/kg，Q2D×6，两次，间隔八天)治疗缓慢生长的肺癌异种移植物A549，此使得99.5％的肿瘤受到抑制，再给药两次后4个肿瘤最后完全根除(图59C)。令人感兴趣的是，小鼠体重减少了35％而没有任何致死现象，且停止治疗后使体重迅速恢复至接近预处理的对照水平(图59C)。相反，用dEpoB(30mg/Kg，Q2D×6)进行的平行研究可抑制97.6％的肿瘤，但不能根除肿瘤。在29(20mg/Kg剂量)抗A549/紫杉醇异种移植物的附加试验(图59D)中，肿瘤生长完全受到抑制且肿瘤最终比预处理对照组减少24.4％。在该研究中，体重最多减轻24％，然而，停止药物治疗后体重恢复至预处理对照组的90％。在(E)-9，10-去氢-dEpoB(28，每组4mg/Kg)的对比研究中，41.6％的肿瘤生长受到抑制。
表10-2中提供了用于分析赋予化合物29显著治疗指数的因素的相应数据及与密切相关的同类物有关的比较数据。可注意到，自EpoB(2b)至dEpoB(1)固有的细胞毒性降低了一个完整的数量级。对于9，10-去氢-dEpoB(28)而言，该降低约恢复60％。对于29，该固有细胞毒性部分丧失，其至少在细胞中为基准化合物dEpoB细胞毒性的约1.8倍。
我们注意到，在该些12，13-去氢埃坡霉素中，目前29在小鼠血浆中展示最佳的稳定性且在人肝脏S9血浆中亦是最稳定的。亦注意到，在12，13-去氢异构体的2-位置，其含有的26-三氟结构使亲脂性降低并使水溶性稍微增加(下表10-2)。目前看来29的巨大优点在于在血清稳定性及生物利用度方面的改进。
表10-2.dEpoB衍生物的性质
  化合物   细胞毒性功效IC50(nM)[a]   未死亡时的最大体重下降％  稳定性半衰期   在水中的溶解度(μg/mL)   亲脂性辛醇/水分配常数(POW)   Q2D 6小时静脉内注射的治疗给药方案(mg/Kg)   MTD时的相对治疗指数[b]
 小鼠血浆(min)   人肝脏S9部分(hr)
  EpoB(2b)   0.53±0.2   15   57   15.8   ND   ND   0.6-0.8   +++
  dEpoB(1)   5.6±2.8   32   46±7   1.0±0.1   9.4   4.4   25-30   ++++
  deH-dEpoB(28)   0.90±0.40   29   84±6   4.9+0.7   27   3.3   3-4   ++++
  F3-dEpoB(2)   9.3±5.2   22   66±7   1.6±0.4   8   4.1   15-20   ++
  F3-deH-dEpoB(29)   3.2±0.3  33  212±88   10.5±2.3   20   3.3   10-30   +++++
[a]IC50值是对于CCRF-CEM白血病细胞的IC50值。该些值是两次试验的范围。所有值皆自七个浓度点获得；ND＝未测定。
[b]MTD(最大容许剂量)时的相对治疗指数(TI)分类：
+              25至50％的肿瘤生长受到抑制。
++             50至100％的肿瘤生长受到抑制。
+++            肿瘤缩小但未出现肿瘤消失。
++++           在某些或所有裸鼠中肿瘤消失，停止治疗后一周内某些
               小鼠体重缓慢恢复及/或旧病复发。
+++++          所有的裸鼠中肿瘤消失，体重迅速恢复及/或没有复发。
Chou，T.C.等人(Proc.Natl.Acad Sci.USA.1998，95，15798及2001，98，8113)研究了埃坡霉素抗裸鼠中人类异种移植物(例如，MX-1)的治疗试验。
通过总合成初次发现了1-2及28-29的所有药剂。先前文献已阐述1的实际合成(Rivkin等人，J.Am.Chem.Soc.(2003，125，2899)；White等人，J.Am.Chem.Soc.(2001，123，5407)；Yoshimura等人，Angew.Chem.(2003，42，2518)；Rivkin等人，J.Org.Chem.2002，124，7737；每一皆以引用的方式并入本文中)。亦已阐述获得28及29的第一代发现级途径。选择性还原29的9，10-双键获得2。对于目前最有希望的化合物29，上述异种移植物研究获得的显著结果清楚表明，需对化合物29在更高级动物中进行更详细的毒理学及药物动力学研究，并由此适当地进一步用于人体临床试验。该些前景将合成挑战的性质完全自制备试探样品变成制备多克数量的该些新颖埃坡霉素药剂。对在发明背景中最初设想并表明的先前途径的主要修改已达成。特别是，我们的新方案在碳3及26的立体选择性设计方面实现重大简化。醇32如先前所述(Rivkin等人，J.Am.Chem.Soc.(2003，125，2899)；以引用的方式并入本文中)来制备。应注意，在该新颖合成中，立体中心6、7及8皆衍生自易于获得的酮30及醛31。在醇保护及缩醛水解后，将相应的醛与醋酸特丁基酯缩合，获得一醇醛样产物。由于该缩合反应在立体异构方面不受控制，需要并已达成一补救措施。氧化C3差向异构体的该1∶1的混合物，获得酮69。在所示条件下实施一非常成功的Noyori还原(Noyori等人，J.Am.Chem.Soc.(1987，109，5856)；以引用的方式并入本文中)之后，获得醇70。然后，如所示以几个附加简单步骤完成酸25的制备。
示意图12.合成酰基部分25
试剂及条件：(a)(i)TrocCl，吡啶，92％；(ii)p-TsOH·H2O，76％；(m)LDA，醋酸特丁基酯，THF，80％；(iv)Dess-Martin periodinane，74％；(b)Noyori催化剂(10mol％)，MeOH/HCl，H2，1200psi，80％。(c)(i)TESCl，咪唑，77％；(ii)Zn，AcOH，THF，99％；(iii)TBSOTf，2，6-二甲基吡啶，82％；其余步骤参见Rivkin等人J.Am.Chem.Soc.2003，125，2899。
亦已研究出一种新的简单且易于缩放的合成90的方法(示意图13)。该合成以市售三氟酮酯82与溴化烯丙基铟的反应开始。合成中的关键步骤是所得叔醇的位置特异性及立体选择性脱氢以生成产物84(两步的总产率为65％)。该反应的立体控制源自“偶极效应”，其中强吸电子CF3与CO2Et基团相对于形成的双键最佳以反式存在。自84以两步获得所需碘化物86。先前所报导的烯醇化锂7与碘化物86于THF中烷基化，获得88，其产率为81％且具有高非镜像立体选择性(＞25∶1de)。仲醇去保护后，自化合物88以三步获得所示90。
示意图13.合成烷基部分17
Figure A0382256101321
试剂及条件：(a)(i)烯丙基溴，In，THF-水(3∶1)48℃，85％；SOCl2，吡啶55℃，77％；(b)(i)DIBAL-H，CH2Cl2，-78℃至室温，99％；(ii)I2，PPh3，咪唑，CH2Cl2，74％；(c)(i)LHMDS，THF，-78℃至室温；(ii)HOAc-THF-H2O(3∶1∶1)，两步产率81％；(d)(i)AlMe3，MeONHMe，THF，0℃至室温，97％；(ii)MeMgBr，THF，0℃，53％(73％borsm)
在手头上有了通过易处理化学反应获得的25及90的情况下，根据先前在发现阶段开发出药物配制报告(A.Rivkin等人，J.Am.Chem.Soc.2003，125，2899；以引用的方式并入本文中)即知晓了制备29的途径。关键的25的闭环置换反应是在甲苯中用第二代Grubbs催化剂来实施(Grubbs，R.H.；Miller，S.J.；Fu，G.C.Acc.Chem.Res.1995，28，446；Trnka，T.M.；Grubbs，R.H.Acc.Chem.Res.2001，34，18；Alkene Metathesis in Organic Chemistry编辑：Fürstner，A.；Springer，Berlin，(1998))；Fürstner，A.Angew.Chem.Int.Ed.Engl.2000，39，3012；Schrock，R.R.Top.Organomet.Chem.1998，1，1；其每一皆以引用的方式并入本文中)。该反应仅获得反式异构体48，产率为71％。通过示意图14中所示方法插入噻唑部分后，用HF-吡啶去除两个甲硅烷保护基团，由此获得29，然后将29通过9，10-烯烃的还原以高产率转化为2。已通过在研究院规模的实验室环境中的总合成制得克数量级的结构新颖的埃坡霉素。
示意图14.合成26-CF3-(E)-9，10-去氢-dEpoB(29)的最后步骤
试剂及条件：(a)EDCI，DMAP，CH2Cl2，25，0℃至室温，86％，自特丁基酯开始；(b)Grubb催化剂，甲苯，110℃，20分钟，71％；(c)(i)KHMDS，101，THF，-78℃至-20℃，70％；(ii)HF-吡啶，THF，98％。
实验
一般方法：除非另有说明，否则使用自商业供应商购得的试剂而不进一步纯化。自一溶剂干燥系统(通过一预填充氧化铝柱)获得二氯甲烷且使用时未经进一步干燥。所有对空气及水敏感的反应皆在预净化氩气的正压下在烘干的玻璃器件中进行。NMR(1H及13C)谱图如一个一个单独所注明在BrokerAMX-400MHz或Bruker Advance DRX-500MHz上记录，参照CDCl3(1H为7.27ppm且13C为77.0ppm)或CD2Cl2(1H为5.32ppm且13C为53.5ppm)。在Perkin-Elmer FT-IR型1600光谱仪上获得红外光谱图(IR)。在JASCO型DIP-370数字旋光仪上获得旋光度。在E.Merck硅胶60 F254板上实施分析性薄层层析。通过将该些板浸渍于钼酸铈铵或对茴香醛溶液中并加热来显现不具有UV活性的化合物。在Whatman(LK6F硅胶60A)TLC板上用规定溶剂实施制备型薄层层析。
化学药品所有埃坡霉素皆内部合成(C.R.Harris，S.J.Danishefsky，J.Org.Chem.1999，64，8434；D.-S.Su等人，Angew.Chem.Iht.Ed.Engl.1997，36，2093；Smart，B.E.J.Fluorine Chem.2001，109，3；F.Yoshimura等人，Angew.Chem.2003，42，2518；Rivkin等人，J.Org.Chem.(2002，124，7737)每一皆以引用的方式并入本文中)。紫杉醇(Taxol)及硫酸长春碱(VBL)皆自Sigma购得。将所有该些化合物溶于二甲亚砜中用于体外分析(VBL溶于盐水中)。对于体内研究，将所有埃坡霉素及紫杉醇皆溶于氢化蓖麻油/乙醇(1∶1)媒剂中，然后用盐水稀释，使用特定设计的微型导管通过尾部静脉进行6小时静脉内输注(T.-C.Chou等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.2001，98，8113-8118；T.-C.Chou等人，Proc.Natl Acad Sci.U.S.A.1998，95，15798-15802；每一皆以引用的方式并入本文中)。
肿瘤及细胞株.自University of Illinois(Chicago)的Dr.William Beck获得CCRF-CEM人类淋巴性白血病细胞。人类乳腺癌(MX-1)及人类肺癌细胞(A549)皆自American Type Culture Collection(ATCC，Rockville，MD)获得。用上述方法形成紫杉醇-抗性A549/紫杉醇细胞(44-倍抗性)(T.-C.Chou等人，Proc.Natl AcadSci.USA.2001，98，8113-8118；以引用的方式并入本文中)。
实验动物.自NCI(Frederick，MD)获得具有nu/nu基因的无胸腺裸鼠并用于所有人类肿瘤异种移植物。使用6周龄或以上且体重20至22g或以上的雄性裸鼠。使用自制输注微型导管及贮容管(containment tube)进行6小时的尾部静脉内输注来投与药物(T.-C.Chou等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.2001，98，8113-8118；以引用的方式并入本文中)。使用多道可编程Harvard PHD2000注射泵进行静脉内输注。每一溶于氢化蓖麻油/乙醇(1∶1)中药物的典型6小时输注体积为100ml于2.0ml盐水中。通过用卡尺测量长×宽×高(或宽)估计肿瘤体积。对于试验过程期间有肿瘤的裸鼠而言，体重是指总重量减去肿瘤的重量。所有动物研究皆根据美国卫生署动物照料及使用守则(National Institute ofHealth Guide for the Care and Use of Animals)中的指导原则及由斯隆-凯特林纪念癌症中心(the Memorial Sloan-Kettering Cancer Center)的实验动物管理及使用委员会批准的协议来实施。
细胞毒性分析.在准备体外细胞毒性分析时，以2至5×104细胞/毫升的初始密度培养细胞。将该些细胞在RPMI媒介1640(GIBCO/BRL)中于37℃下在5％CO2-湿润气氛下保持，RPMI媒介1640包含青霉素(100单位/mL)、链霉素(100μg/mL，GIBCO/BRL)及5％热灭活FBS。对于以单层生长的实体肿瘤细胞(例如A549)而言，在96孔微量滴定板中通过磺酰罗丹明B(sulforhodamine B)方法测定药物的细胞毒性(P.Skehan等人，J.Natl Cancer.Inst.1990，82，1107-1112；以引用的方式并入本文中)。对于在悬浮液中生长的细胞(例如，CCRF-CEM及其亚系)，在96孔微量滴定板中用2，3-双-(2-甲氧基4-硝基-5-磺苯基)-5-苯胺基甲酰)-2H-四唑鎓氢氧化物(XTT)微量培养方法测定细胞毒性(D.A.Scudiero等人，Cancer Res.(1988，48，4827-4833)；以引用的方式并入本文中)，用同样的方法测定两次。对于两种方法，皆用微孔板阅读器(Power Wave XS，Bio-Tek，Winooski，VT)测量每一孔的吸光度。通过计算机程序利用中位数-效果曲线自每一药物6至7个浓度点分析剂量-效果关系数据(T.-C.Chou，M.Hayball.CalcuSynfor Windows，Multiple-drug dose effect analyzer and manual.Biosoft，CambridgePlace，Cambridge，UK(1997)；以引用的方式并入本文中)，用同样的方法测定两次。
埃坡霉素在小鼠及人肝脏S9部分中的稳定性.利用一全自动HPLC系统进行稳定性研究，全自动HPLC系统由Prospekt-2(Spark Holland，Netherlands)样品制备系统及一Agilent 1100 HPLC系统组成。简言之，Prospekt2选取一C8萃取管并用乙腈和水洗涤。Agilent自动取样器设定在37℃，其采集20μl的样品，将其装于该管中，用水洗涤，然后Prospekt-2将流动相流通过该萃取管引导至分析柱上(带有保护柱的Reliance Stable Bond C8，4×80mm(MacMod，Chadds Ford，PA))且监测250nm处的洗脱液。流动相由53或65％乙腈/0.1％甲酸组成，流速为0.4ml/min，因此所研究化合物的保留时间约为6分钟。样品制备涉及将等体积的血浆添加至PBS中使总体积为300-400μl，过滤并添加0.5-2μl的底物(20mM)，以在HPLC分析中在250nm处达成约30-50mAU。对于所收集的人类肝脏微粒体S9部分(Xeno Tech，Lenex，KS)，将20μl(400μg)的S9部分与280μl的PBS混合，然后如上所述继续进行研究。取样周期由自动取样器控制，并收集峰面积数据以比较母体化合物消失的速率。
辛醇-水分配常数(POW)的测定.使用HPLC方法估计辛醇-水的分配常数。使用一带有eclipse XDB C18柱(4.6×250mm)的Agilent 1100 HPLC系统，其中流动相为60％乙腈/40％的25mM磷酸钾缓冲液(pH 7.4)，其流率为0.8ml/min，在250nm处监测洗脱液。所用标准液为已知POW分别为1.1、1.7、3.2、4.2及4.8的苄醇、苯乙酮、二苯甲酮、萘、二苯醚及二苄醚。使用重铬酸钠估计时间零点，时间零点为2.5分钟，且该些标准液的保留时间分别为3.9、5.4、10.6、14.18.7及19.8分钟。通过公式k＝(trt-to)/to计算k值。log k对logPOW线性回归，获得r2＝0.966的直线。使用该曲线图估计埃坡霉素类似物的POW值。
29(26-三氟-(F)-9，10-去氢-dEpoB)的光谱数据：
[α]D 25-54.6(c 0.28，CHCl3)；IR(薄膜)v3478，2974，2929，1736，1689，1449，1381，1318，1247，1169，1113，1039，983，867，736cm-1；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.05(3H，s)，1.12(3H，d，J＝7.0Hz)，1.23(3H，d，J＝6.8Hz)，1.37(3H，s)，2.04(1H，brd，J＝3.8Hz，-OH)，2.12(3H，s)，2.25-2.33(1H，m)，2.38(1H，dd，J＝15.3及3.0Hz)，2.48(1H，dd，J＝15.4及9.8Hz)，2.54-2.61(1H，m)，2.66-2.76(1H，m)，2.71(3H，s)，2.96(1H，dd，J＝16.5及4.5Hz)，3.02(1H，dd，J＝16.3及6.5Hz)，3.11(1H，五重峰，J＝6.7Hz)，3.19(1H，brs，＝OH)，3.74(1H，brs)，4.35(1H，brd，J＝9.5Hz)，5.42(1H，dd，J＝6.2及4.1Hz)，5.60(1H，ddd，J＝15.8、5.6及4.5Hz)，5.66(1H，dd，J＝15.8及5.8Hz)，6.24(1H，t，J＝7.2Hz)，6.64(1H，s)，7.00(1H，s)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ15.1，16.1，17.7，18.5，19.3，22.5，28.8，31.1，39.6，39.7，45.0，53.7，71.4，75.3，76.8，116.7，1202，124.3[q，1J(C，F)＝273.4Hz]，127.9，130.2[q，3J(C，F)＝6.0Hz]，130.6[q，2J(C，F)＝28.4Hz]，132.5，136.7，152.0，165.4，170.2，218.4；C27H37F3NO5S的LRMS(ESI)计算值[M+H+]544.2，试验值544.1。
实例11：体外研究
典型的试验涉及以2至5×104细胞/ml的初始密度培养细胞(例如，CCRF-CEM)。该些细胞在RPMI媒介1640(GIBCO/BRL)中于37℃下在5％CO2-湿润气氛下保持，RPMI媒介1640包含青霉素(100单位/mL)、链霉素(100μg/mL，GIBCO/BRL)及5％热灭活胎牛血清。对于在悬浮液中生长的细胞(例如，CCRF-CEM及其亚系)，在96孔微量滴定板中用2，3-双-(2-甲氧基4-硝基-5-磺苯基)-5-苯胺基甲酰)-2H-四唑鎓氢氧化物(XTT)微量培养四唑鎓法测定细胞毒性，用同样的方法测定两次。对于两种方法，皆用微孔板阅读器(Power Wave XS，Bio-Tek，Winooski，VT)测量每一孔的吸光度。每一试验需要测试药物的6或7个浓度点。利用中位数-效果曲线分析剂量-效果关系数据。
CCRF-CEM人类T细胞、急性淋巴性白血病细胞、其抗替尼泊甙(teniposide)亚系(CCRF-CEM/VM1)及抗长春碱亚系(CCRF-CEM/VBL100)皆自W.T.Beck(University of Illinois，Chicago，II)获得。
在一典型试验中，如上所概述，本发明的某些化合物(例如，9，10-去氢-EpoD)在CCRF-CEM细胞株中及抗紫杉醇的CCRF-CEM细胞株中展示活性。该些化合物中的某些对CCRF-CEM细胞株展示在0.0015至约0.120范围内的IC50。某些其他化合物展示0.0015至约10.5的IC50。该些化合物中的某些亦对CCRF-CEM/紫杉醇抗性细胞株展示在0.011至约0.80范围内的IC50，且某些其他化合物展示0.011至约13.0μM范围内的IC50。在某些实施例中，26F-EpoD对CCRF-CEM细胞株展示在0.0015μM范围内的活性且对CCRF-CEM/紫杉醇抗性细胞株细胞株展示在0.011μM范围内的活性(图11)。
实例12：体内研究
通常用具有nu/nu基因的无胸腺裸鼠用于肿瘤异种移植。远系杂交瑞士小鼠自Charles River Laboratories获得。大多数试验使用8周龄或以上且体重22g或以上的雄性小鼠。通过尾部静脉6小时静脉内输注来投与药物。每一个小鼠皆限制在一个带孔的Falcon聚丙烯管限制器中投与药物。通过用卡尺测量长×宽×高(或宽)估计肿瘤体积。使用多道可编程Harvard PHD2000注射泵(HarvardApparatus)进行静脉内输注。所有动物研究皆根据美国卫生署“动物照料及使用守则”中的指导原则及由斯隆-凯特林纪念癌症中心的实验动物管理及使用委员会批准的协议来实施。为符合该委员会关于具有肿瘤的动物的人道治疗政策，当肿瘤达到小鼠总体重的≥10％时使其安乐死。
如图8中所示，在具有人类乳腺癌MX-1的裸鼠中测试9，10-去氢-EpoB。一般而言，9，10-去氢-EpoB可如下配制：将9，10-去氢-EpoB溶于乙醇中并添加浓度为20mg/ml的氢化蓖麻油(1∶1)。该溶液用盐水稀释用于静脉内输注。经稀释的溶液用于在1小时内静脉内输注。然后，经15天后用10mg/Kg、20mg/Kg及30mg/Kg的剂量测量肿瘤大小及体重。亦可用0.4mg/Kg Q3D×2、0.5mg/KgQ3D×2及0.6mg/Kg Q3D×5的给药方案来测量肿瘤大小及体重(参见图33、34、55及56)。使用每三天投与一次的给药方案以降低毒性。其他关于9，10-去氢-EpoB的疗效研究展示于图70和71(CCRF-CEM/紫杉醇Q3D×5)及图23和24(HCT-116，Q2D×7)中。
化合物9，10-去氢-12，13-去氧埃坡霉素B(异-490埃坡霉素)的效力是dEpoB的三倍。已证实，9，10-去氢-12，13-去氧埃坡霉素D以10mg/Kg或20mg/Kg两至三次输注(每种皆每隔一天投与一次)后，可抑制肿瘤生长。采用30mg/kg剂量的9，10-去氢-12，13-去氧埃坡霉素B以两次6小时静脉内输注(每隔一天一次)的方式在小鼠中获得更佳结果。以5mg/kg，Q3D×9，6小时静脉内输注投与9，10-去氢-dEpoB，亦使具有MX-1异种移植物的裸鼠中的肿瘤消失，没有小鼠死亡且体重仅适度减轻(图74与75)。这似乎已通过每隔两天投与埃坡霉素类似物以降低毒性来达成(参见图53与54)。总之，与其他埃坡霉素相比，9，10-去氢-12，13-去氧埃坡霉素B的毒性降低、更有效地抑制肿瘤生长且具有更佳的血清稳定性。其他治疗研究展示于图17及18(HCT-116，Q2D×5及Q3D×5)中；图19及20(A549/紫杉醇，Q3D×7)中；及图21和22(A549/紫杉醇，Q2D×7)中。
当将9，10-去氢-Epo B以0.4至0.6mg/Kg的剂量以每三天一次的频率投与9至11次(6小时静脉内输注)时，导致在具有经移植人类乳腺癌MX-1异种移植物的小鼠中的肿瘤收缩及消失(图68及69)。以每隔一天的频率投与8次后可抑制肿瘤生长但不缩小肿瘤。当以每隔一天的频率投与9次9，10-去氢-Epo B时，经移植的肿瘤自第二天至第8天持续适度缩小，同时体重极缓慢地自对照组的76％恢复至82％。第十天，1/4的肿瘤消失。当将9，10-去氢-EpoB以0.6mg/kg的剂量(Q2W×6，6小时输注)投与具有HCT-116异种移植物的裸鼠时，第六次给药后四只小鼠在三天内死于中毒。将9，10-去氢-EpoB以0.6mg/kg(Q3D×5、×2)的给药方案给药使抗CCRF-CEM/紫杉醇的肿瘤停止生长(图70及71)。
如图中所示，在移植有人类乳腺癌MX-1异种移植物的裸鼠模型中，将26-三氟-9，10-去氢-12，13-去氧-埃坡霉素B(F3-deH-dEpoB)以20mg/kg及30mg/kg(Q2D×6，6小时输注)给药时具有疗效。数据亦表明：30mg/kgQ2D×6是近似的最大容许剂量。以20mg/kg，Q2D×6，6小时输注26-三氟-9，10-去氢-12，13-去氧-埃坡霉素B使四只具有人类乳腺癌MX-1异种移植物的裸鼠的肿瘤皆缩小并消失。停止治疗后第20天没有再次出现肿瘤。停止治疗后第27天，2/4的小鼠再次出现肿瘤。停止治疗后第28-64天期间再没有出现更多肿瘤。相比而言，dEpoB以30mg/kg在相同的小鼠模型中可使7只小鼠的肿瘤皆消失；然而，停止治疗后第8天2/5的小鼠中再次出现肿瘤。以20mg/kg，Q2D×6，6小时静脉内输注投与26-三氟-9，10-去氢-12，13-去氧-埃坡霉素B使小鼠体重暂时下降高达26％。此体重下降并不会导致死亡，此表明没有对重要器官产生严重中毒。最后治疗后的两天，体重开始恢复。治疗后第16天，体重恢复至预处理对照组的109％，此表明毒性(若有)已完全消除。相比而言，以30mg/kg投与dEpoB导致体重下降31％，但没有致死。
当以30mg/kg，Q2D×6，6小时静脉内输注投与26-三氟-9，10-去氢-12，13-去氧-埃坡霉素B时，比以20mg/kg的剂量投与早2至3天出现肿瘤消失。在该较高剂量下体重下降27％且持续4天而没有导致死亡，此证明对重要器官没有剧烈毒性。以30mg/kg最后治疗后四天，体重开始恢复。治疗后第16天时，体重恢复至预处理对照组的98％，再次证明毒性的可逆性。用26-三氟-9，10-去氢-dEpoB以20mg/kg及30mg/kg治疗导致所有肿瘤消失，且以30mg/kg剂量治疗，62天后没有出现复发。以10mg/kg的剂量给药9次并追加给药三次后亦可实现肿瘤消失(图57)。以10mg/kg投与26-三氟-9，10-去氢-dEpoB仅观察到较少的体重损失(图58)。继续治疗没有看到进一步的体重损失。
图59概括了26-F3-9，10-deH-dEpo B(及其他埃坡霉素)抗MX-1异种移植物的效果，A.低剂量；B.抗大肿瘤；C.抗A549肺癌异种移植物；及D.抗紫杉醇抗性肺癌A549/紫杉醇异种移植物。
图61列出了C-21经修饰的埃坡霉素抗CCRF-CEM、CCRF-CEM/VBL及CCRF-CEM/紫杉醇的体外效能。
图62展示了26-F3-9，10-deH-dEpoB(15mg/kg及30mg/kg)和紫杉醇(20mg/kg)(Q2D×8，6小时静脉内输注)抗人类T-细胞淋巴性白血病CCRF-CEM异种移植物的治疗效果。在所用三组治疗中观察到类似的体重下降(图63)。
用26-F3-9，10-deH-dEpo B以15mg/kg治疗CCRF-CEM/紫杉醇异种移植物(抗紫杉醇)可达成1/3肿瘤消失，且30mg/kg达成3/4肿瘤消失。用20mg/kg紫杉醇进行相同的治疗仅部分抑制肿瘤生长且未达成肿瘤缩小(图64)。在该试验期间体重的变化显示于图65中。
用26-F3-9，10-deH-dEpo B(20mg/kg)治疗人类结肠癌HCT-116异种移植物可达成与紫杉醇(20mg/kg)类似的效果。然而，30mg/kg的F3-deH-dEpo B可获得更佳的治疗效果，5次给药后2/4肿瘤消失(图66)。该试验期间体重的变化示于图67中。
不同剂量(5至30mg/kg)的F3-9，10-去氢-dEpoF(6小时静脉内输注及静脉内注射)抗MX-1异种移植物的治疗效果展示于图76和77中。
结论.对dEpoB进行9，10-去氢修饰、26-三氟代修饰或同时进行两种修饰可导致体外细胞毒性增加至原来的1.5至5倍且在体外小鼠血浆中的半衰期增加至原来的2至5倍。通过使用裸鼠中的人类实体肿瘤异种移植物模型且以最大容许剂量通过尾部静脉使用Q2D×5～9，6小时静脉内输注技术来评价9，10-去氢-埃坡霉素的抗肿瘤效能及毒性。对达成完全的肿瘤生长抑制、肿瘤缩小及消失的能力进一步研究，以确定停止治疗后的复发率及治愈率。尽管已知在体外最有效的埃坡霉素9，10-去氢-EpoB极为有效，但其在体内展示一窄的治疗安全系数。4mg/kg的9，10-去氢-dEpoB、0.4mg/kg的9，10-去氢-EpoB及3mg/kg的21-羟基-9，10-去氢-dEpoB皆能长时间强烈抑制肿瘤生长并达成某些肿瘤的缩小，且某些达成肿瘤的消失。在所有受试小鼠中，30mg/kg的dEpoB、20mg/kg的26-三氟-9，10-去氢-dEpoB及20mg/kg的紫杉醇皆显示出对肿瘤生长的强抑制作用并实现了肿瘤缩小及消失(人类乳腺癌MX-1异种移植物)。与dEpoB或紫杉醇相比，26-三氟-9，10-去氢-dEpoB达成长期治愈而不出现肿瘤复发，且显示体重同样迅速地恢复至预处理对照水平。
实例13：合成环丙基-埃坡霉素类似物
Figure A0382256101411

Claims (58)

1、一种具有下式的化合物：
其中R1为氢或低碳烷基；
R2为一经取代或未经取代的芳基、杂芳基、芳基烷基或杂芳基烷基部分；
R5及R6皆独立为氢或一保护基团；
X为O、S、C(R7)2或NR7，其中所出现的R7皆独立为氢或低碳烷基；
各个出现的RB独立为氢；卤素；-ORB’；-SRB’；-N(RB’)2；-CY3、-CHY2、-CH2Y，其中Y为F、Br、Cl、I、ORB’、NHRB’、N(RB’)2或SRB’；-C(O)ORB’；-C(O)RB’；-CONHRB’；-O(C＝O)RB’；-O(C＝O)ORB’；-NRB’(C＝O)RB’；N3；N2RB’；环状缩醛；或环状或非环状、线性或具支链脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基或杂芳基，视情况经一或多个以下基团取代：氢；卤素；-ORB′；-SRB′；-N(RB′)2；-C(O)ORB′；-C(O)RB′；-CONHRB′；-O(C＝O)RB′；-O(C＝O)ORB′；-NRB′(C＝O)RB′；N3；N2RB′；环状缩醛；或环状或非环状、线性或具支链经取代或未经取代的脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基或杂芳基部分；或为一埃坡霉素、去氧埃坡霉素或其类似物；或为一聚合物；碳水化合物；光亲和性标记物；或放射性标记物；其中各个出现的RB′独立为氢；一保护基团；一线性或具支链、经取代或未经取代的、环状或非环状脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基、杂芳基、芳基烷基、芳基烯基、芳基炔基、杂芳基烷基、杂芳基烯基或杂芳基炔基部分；及
m为1、2、3或4。
2、一种具有下式的化合物及其医药上可接受的衍生物：
其中
X为O、S、C(R7)2或NR7，其中各个出现的R7独立为氢或低碳烷基；
R5及R6各独立为氢或一保护基团；
RB为氢；卤素；-ORB′；-SRB′；-N(RB′)2；-CY3、-CHY2、-CH2Y，其中Y为F、Br、Cl、I、ORB′、NHRB′、N(RB′)2或SRB′；-C(O)ORB′；-C(O)RB′；-CONHRB′；-O(C＝O)RB′；-O(C＝O)ORB′；-NRB′(C＝O)RB′；N3；N2RB′；环状缩醛；或环状或非环状、线性或具支链脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基或杂芳基，视情况经一或多个以下基团取代：氢；卤素；-ORB′；-SRB′；-N(RB′)2；-C(O)ORB′；-C(O)RB′；-CONHRB′；-O(C＝O)RB′；-O(C＝O)0RB′；-NRB′(C＝O)RB′；N3；N2RB′；环状缩醛；或环状或非环状、线性或具支链经取代或未经取代的脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基或杂芳基部分；或为一埃坡霉素、去氧埃坡霉素或其类似物；或为一聚合物；碳水化合物；光亲和性标记物；或放射性标记物；其中各个出现的RB′独立为氢；一保护基团；一线性或具支链、经取代或未经取代、环状或非环状脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基、杂芳基、芳基烷基、芳基烯基、芳基炔基、杂芳基烷基、杂芳基烯基或杂芳基炔基部分；
R8独立为氢、卤素、-OR9、-SR9、-N(R9)2、-CY3、-CHY2、-CH2Y，其中Y为F、Br、Cl、I、ORB′；、NHRB′、N(RB′)2或SRB′；-(CV2)nOR9、-(CV2)nN(R9)2、-(CV2)nSR9、-(C＝O)R9、-O(C＝O)R9、-(C＝O)OR9、-0(C＝0)OR9；-NH(C＝O)R9、-NH(C＝O)OR9、-(C＝O)NHR9、或环状或非环状、线性或具支链脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基、杂芳基、芳基烷基或杂芳基烷基部分，视情况经一或多个以下基团取代：卤素、-OR9、-SR9、-N(R9)2、-(CV2)nOR9、-(CV2)nN(R9)2、-(CV2)nSR9、-(C＝O)R9、-O(C＝O)R9、-(C＝O)OR9、-O(C＝O)OR9；-NH(C＝O)R9、-NH(C＝O)OR9、-(C＝O)NHR9、或环状或非环状、线性或具支链、经取代或未经取代的脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基、杂芳基、芳基烷基或杂芳基烷基部分，
其中各个出现的R9独立为氢；一保护基团；环状或非环状、线性或具支链、经取代或未经取代的脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基或杂芳基部分；或为一埃坡霉素、去氧埃坡霉素或其类似物；一聚合物；碳水化合物；光亲和性标记物；或放射性标记物；
其中各个出现的V独立为氢、卤素、羟基、硫、氨基、烷基氨基或经保护的羟基、硫或氨基；各个出现的t为0、1或2；且各个出现的n独立为0至10。
3、如权利要求2所述的化合物，其中RB为甲基。
4、如权利要求2所述的化合物，其中RB为-CF3。
5、如权利要求2、3或4所述的化合物，其中R8为甲基。
8、如权利要求2、3或4所述的化合物，其中R8为-CH2OH。
9、如权利要求2、3或4所述的化合物，其中R8为-CH2NH2。
10、一种具有下式的化合物及其医药上可接受的衍生物：
Figure A038225610004C1
其中
X为O、S、C(R7)2或NR7，其中各个出现的R7独立为氢或低碳烷基；
R5及R6各独立为氢或一保护基团；
RB为氢；卤素；-ORB′；-SRB′；-N(RB′)2；-CY3、-CHY2、-CH2Y，其中Y为F、Br、Cl、I、ORB′、NHRB′、N(RB′)2或SRB′；-C(O)ORB′；-C(O)RB′；-CONHRB′；-O(C＝O)RB′；-O(C＝O)ORB′；-NRB′(C＝O)RB′；N3；N2RB′；环状缩醛；或环状或非环状、线性或具支链脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基或杂芳基，视情况经一或多个以下基团取代：氢；卤素；-ORB′；-SRB′；-N(RB′)2；-C(O)ORB′；-C(O)RB′；-CONHRB′；-O(C＝O)RB′；-O(C＝O)ORB′；-NRB′(C＝O)RB′；N3；N2RB′；环状缩醛；或环状或非环状、线性或具支链经取代或未经取代的脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基或杂芳基部分；或为一埃坡霉素、去氧埃坡霉素或其类似物；或为一聚合物；碳水化合物；光亲和性标记物；或放射性标记物；其中各个出现的RB′独立为氢；一保护基团；一线性或具支链、经取代或未经取代、环状或非环状脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基、杂芳基、芳基烷基、芳基烯基、芳基炔基、杂芳基烷基、杂芳基烯基或杂芳基炔基部分；
R8独立为氢、卤素、-OR9、-SR9、-N(R9)2；-CY3、-CHY2、-CH2Y，其中Y为F、Br、Cl、I、ORB′、NHRB′、N(RB′)2或SRB′；-(CV2)nOR9、-(CV2)nN(R9)2、-(CV2)nSR9、-(C＝O)R9、-O(C＝O)R9、-(C＝O)OR9、-0(C＝O)OR9；-NH(C＝O)R9、-NH(C＝O)OR9、-(C＝O)NHR9、或一环状或非环状、线性或具支链脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基、杂芳基、芳基烷基或杂芳基烷基部分，视情况经一或多个以下基团取代：卤素、-OR9、-SR9、-N(R9)2、-(CV2)nOR9、-(CV2)nN(R9)2、-(CV2)nSR9、-(C＝O)R9、-O(C＝O)R9、-(C＝O)OR9、-O(C＝O)OR9；-NH(C＝O)R9、-NH(C＝O)OR9、-(C＝O)NHR9、或一环状或非环状、线性或具支链、经取代或未经取代的脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基、杂芳基、芳基烷基或杂芳基烷基部分，
其中各个出现的R9独立为氢；一保护基团；一环状或非环状、线性或具支链、经取代或未经取代的脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基或杂芳基部分；或为一埃坡霉素、去氧埃坡霉素或其类似物；一聚合物；碳水化合物；光亲和性标记物；或放射性标记物；
其中各个出现的V独立为氢、卤素、羟基、硫、氨基、烷基氨基或经保护的羟基、硫或氨基；各个出现的t为0、1或2；且各个出现的n独立为0至10。
11、如权利要求10所述的化合物，其中RB为甲基。
12、如权利要求10所述的化合物，其中RB为-CF3。
13、如权利要求10、11或12所述的化合物，其中R8为甲基。
14、如权利要求10、11或12所述的化合物，其中R8为-CH2OH。
15、如权利要求10、11或12所述的化合物，其中R8为-CH2NH2。
16、一种具有下式的化合物及其医药上可接受的衍生物：
Figure A038225610006C1
其中R5及R6独立为氢或一保护基团；
R8独立为氢、卤素、-OR9、-SR9、-N(R9)2；-CY3、-CHY2、-CH2Y，其中Y为F、Br、Cl、I、ORB′、NHRB′、N(RB′)2或SRB′；-(CV2)nOR9、-(CV2)nN(R9)2、-(CV2)nSR9、-(C＝O)R9、-O(C＝O)R9、-(C＝O)OR9、-0(C＝O)OR9；-NH(C＝O)R9、-NH(C＝O)OR9、-(C＝O)NHR9、或一环状或非环状、线性或具支链脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基、杂芳基、芳基烷基或杂芳基烷基部分，视情况经一或多个以下基团取代：卤素、-OR9、-SR9、-N(R9)2、-(CV2)nOR9、-(CV2)nN(R9)2、-(CV2)nSR9、-(C＝O)R9、-O(C＝O)R9、-(C＝O)OR9、-O(C＝O)OR9；-NH(C＝O)R9、-NH(C＝O)OR9、-(C＝O)NHR9、或一环状或非环状、线性或具支链、经取代或未经取代的脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基、杂芳基、芳基烷基或杂芳基烷基部分，视情况经一或多个以下基团取代：卤素、-OR9、-SR9、-N(R9)2、-(CV2)nOR9、-(CV2)nN(R9)2、-(CV2)nSR9、-(C＝O)R9、-O(C＝O)R9、-(C＝O)OR9、-O(C＝O)OR9；-NH(C＝O)R9、-NH(C＝O)OR9、-(C＝O)NHR9、或一环状或非环状、线性或具支链、经取代或未经取代的脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基、杂芳基、芳基烷基或杂芳基烷基部分，
其中各个出现的R9独立为氢；一保护基团；一环状或非环状、线性或具支链、经取代或未经取代的脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基或杂芳基部分；或为一埃坡霉素、去氧埃坡霉素或其类似物；一聚合物；碳水化合物；光亲和性标记物；或放射性标记物；
其中各个出现的V独立为氢、卤素、羟基、硫、氨基、烷基氨基或经保护的羟基、硫或氨基；
X为O、S、C(R7)2或NR7，其中各个出现的R7独立为氢或低碳烷基；
各个出现的RB独立为氢；卤素；-ORB′；-SRB′；-N(RB′)2；-CY3、-CHY2、-CH2Y，其中Y为F、Br、Cl、I、ORB′、NHRB′、N(RB′)2或SRB′；-C(O)ORB′；-C(O)RB′；-CONHRB′；-O(C＝O)RB′；-O(C＝O)ORB′；-NRB′(C＝O)RB′；N3；N2RB′；环状缩醛；或环状或非环状、线性或具支链脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基或杂芳基，视情况经一或多个以下基团取代：氢；卤素；-ORB′；-SRB′；-N(RB′)2；-C(O)ORB′；-C(O)RB′；-CONHRB′；-O(C＝O)RB′；-O(C＝O)ORB′；-NRB′(C＝O)RB′；N3；N2RB′；环状缩醛；或环状或非环状、线性或具支链经取代或未经取代的脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基或杂芳基部分；或为一埃坡霉素、去氧埃坡霉素或其类似物；或为一聚合物；碳水化合物；光亲和性标记物；或放射性标记物；其中各个出现的RB′独立为氢；一保护基团；一线性或具支链、经取代或未经取代、环状或非环状脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基、杂芳基、芳基烷基、芳基烯基、芳基炔基、杂芳基烷基、杂芳基烯基或杂芳基炔基部分。
17、如权利要求16所述的化合物，其中RB为甲基。
18、如权利要求16所述的化合物，其中RB为-CF3。
19、如权利要求16、17或18所述的化合物，其中R8为甲基。
20、如权利要求16、17或18所述的化合物，其中R8为-CH2OH。
21、如权利要求16、17或18所述的化合物，其中R8为-CH2NH2。
22、一种具有下式的化合物：
Figure A038225610008C1
其中R1为氢或低碳烷基；
R2为一经取代或未经取代的芳基、杂芳基、芳基烷基或杂芳基烷基部分；
R5及R6独立为氢或一保护基团；
X为O、S、C(R7)2或NR7，其中各个出现的R7独立为氢或低碳烷基；
各个出现的RB独立为氢；卤素；-ORB′；-SRB′；-N(RB′)2；-CY3、-CHY2、-CH2Y，其中Y为F、Br、Cl、I、ORB′、NHRB′、N(RB′)2或SRB′；-C(O)ORB′；-C(O)RB′；-CONHRB′；-O(C＝O)RB′；-O(C＝O)ORB′；-NRB′(C＝O)RB′；N3；N2RB′；环状缩醛；或环状或非环状、线性或具支链脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基或杂芳基，视情况经一或多个以下基团取代：氢；卤素；-ORB′；-SRB′；-N(RB′)2；-C(O)ORB′；-C(O)RB′；-CONHRB′；-O(C＝O)RB′；-O(C＝O)ORB′；-NRB′(C＝O)RB′；N3；N2RB′；环状缩醛；或环状或非环状、线性或具支链经取代或未经取代的脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基或杂芳基部分；或为一埃坡霉素、去氧埃坡霉素或其类似物；或为一聚合物；碳水化合物；光亲和性标记物；或放射性标记物；其中各个出现的RB′独立为氢；一保护基团；一线性或具支链、经取代或未经取代、环状或非环状脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基、杂芳基、芳基烷基、芳基烯基、芳基炔基、杂芳基烷基、杂芳基烯基或杂芳基炔基部分。
23、一种具有下式的化合物及其医药上可接受的衍生物：
Figure A038225610009C1
其中
RB为氢；卤素；-ORB′；-SRB′；-N(RB′)2；-CY3、-CHY2、-CH2Y，其中Y为F、Br、Cl、I、ORB′、NHRB′、N(RB′)2或SRB′；-C(O)ORB′；-C(O)RB′；-CONHRB′；-O(C＝O)RB′；-O(C＝O)ORB′；-NRB′(C＝O)RB′；N3；N2RB′；环状缩醛；或环状或非环状、线性或具支链脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基或杂芳基，视情况经一或多个以下基团取代：氢；卤素；-ORB′；-SRB′；-N(RB′)2；-C(O)ORB′；-C(O)RB′；-CONHRB′；-O(C＝O)RB′；-O(C＝O)0RB′；-NRB′(C＝O)RB′；N3；N2RB′；环状缩醛；或环状或非环状、线性或具支链经取代或未经取代的脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基或杂芳基部分；或为一埃坡霉素、去氧埃坡霉素或其类似物；或为一聚合物；碳水化合物；光亲和性标记物；或放射性标记物；其中各个出现的RB′独立为氢、烷基、芳基或一保护基团；其中各个出现的RB′独立为氢；一保护基团；一线性或具支链、经取代或未经取代、环状或非环状脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基、杂芳基、芳基烷基、芳基烯基、芳基炔基、杂芳基烷基、杂芳基烯基或杂芳基炔基部分；
R5及R6独立为氢或一保护基团；
R8独立为氢、卤素、-OR9、-SR9、-N(R9)2、-CY3、-CHY2、-CH2Y，其中Y为F、Br、Cl、I、ORB′、NHRB′、N(RB′)2或SRB′；-(CV2)nOR9、-(CV2)nN(R9)2、-(CV2)nSR9、-(C＝O)R9、-O(C＝O)R9、-(C＝O)OR9、-O(C＝O)OR9；-NH(C＝O)R9、-NH(C＝O)OR9、-(C＝O)NHR9、或一环状或非环状、线性或具支链脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基、杂芳基、芳基烷基或杂芳基烷基部分，视情况经一或多个以下所出现的基团取代：卤素、-OR9、-SR9、-N(R9)2、-(CV2)nOR9、-(CV2)nN(R9)2、-(CV2)nSR9、-(C＝O)R9、-O(C＝O)R9、-(C＝O)OR9、-O(C＝O)OR9；-NH(C＝O)R9、-NH(C＝O)OR9、-(C＝O)NHR9、或一环状或非环状、线性或具支链、经取代或未经取代的脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基、杂芳基、芳基烷基或杂芳基烷基部分，
其中各个出现的R9独立为氢；一保护基团；一环状或非环状、线性或具支链、经取代或未经取代的脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基或杂芳基部分；或为一埃坡霉素、去氧埃坡霉素或其类似物；一聚合物；碳水化合物；光亲和性标记物；或放射性标记物；
其中各个出现的V独立为氢、卤素、羟基、硫、氨基、烷基氨基或经保护的羟基、硫或氨基；各个出现的t独立为0、1或2；且各个出现的n独立为0至10。
24、如权利要求23所述的化合物，其中RB为甲基。
25、如权利要求23所述的化合物，其中RB为-CF3。
26、如权利要求23、24或25所述的化合物，其中R8为甲基。
27、如权利要求23、24或25所述的化合物，其中R8为-CH2OH。
28、如权利要求23、24或25所述的化合物，其中R8为-CH2NH2。
29、一种具有下式的化合物及其医药上可接受的衍生物：
Figure A038225610010C1
其中
RB为氢；卤素；-ORB′；-SRB′；-N(RB′)2；-CY3、-CHY2、-CH2Y，其中Y为F、Br、Cl、I、ORB′、NHRB′、N(RB′)2或SRB′；-C(O)ORB′；-C(O)RB′；-CONHRB′；-O(C＝O)RB′；-O(C＝O)ORB′；-NRB′(C＝O)RB′；N3；N2RB′；环状缩醛；或环状或非环状、线性或具支链脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基或杂芳基，视情况经一或多个以下基团取代：氢；卤素；-ORB′；-SRB′；-N(RB′)2；-C(O)ORB′；-C(O)RB′；-CONHRB′；-O(C＝O)RB′；-O(C＝O)ORB′；-NRB′(C＝O)RB′；N3；N2RB′；环状缩醛；或环状或非环状、线性或具支链经取代或未经取代的脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基或杂芳基部分；或为一埃坡霉素、去氧埃坡霉素或其类似物；或为一聚合物；碳水化合物；光亲和性标记物；或放射性标记物；其中各个出现的RB′独立为氢；一保护基团；一线性或具支链、经取代或未经取代、环状或非环状脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基、杂芳基、芳基烷基、芳基烯基、芳基炔基、杂芳基烷基、杂芳基烯基或杂芳基炔基部分；
R5及R6独立为氢或一保护基团；
R8独立为氢、卤素、-OR9、-SR9、-N(R9)2、-CY3、-CHY2、-CH2Y，其中Y为F、Br、Cl、I、ORB′、NHRB′、N(RB′)2或SRB′；-(CV2)nOR9、-(CV2)nN(R9)2、-(CV2)nSR9、-(C＝O)R9、-O(C＝O)R9、-(C＝O)OR9、-0(C＝O)OR9；-NH(C＝O)R9、-NH(C＝O)OR9、-(C＝O)NHR9、或一环状或非环状、线性或具支链脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基、杂芳基、芳基烷基或杂芳基烷基部分，视情况经一或多个以下所出现的基团取代：卤素、-OR9、-SR9、-N(R9)2、-(CV2)nOR9、-(CV2)nN(R9)2、-(CV2)nSR9、-(C＝O)R9、-O(C＝O)R9、-(C＝O)OR9、-O(C＝O)OR9；-NH(C＝O)R9、-NH(C＝O)OR9、-(C＝O)NHR9、或一环状或非环状、线性或具支链、经取代或未经取代的脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基、杂芳基、芳基烷基或杂芳基烷基部分，
其中各个出现的R9独立为氢；一保护基团；一环状或非环状、线性或具支链、经取代或未经取代的脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基或杂芳基部分；或为一埃坡霉素、去氧埃坡霉素或其类似物；一聚合物；碳水化合物；光亲和性标记物；或放射性标记物；
其中各个出现的V独立为氢、卤素、羟基、硫、氨基、烷基氨基或经保护的羟基、硫或氨基；各个出现的t独立为0、1或2；且各个出现的n独立为0至10。
30、如权利要求29所述的化合物，其中RB为甲基。
31、如权利要求29所述的化合物，其中RB为-CF3。
32、如权利要求29、30或31所述的化合物，其中R8为甲基。
33、如权利要求29、30或31所述的化合物，其中R8为-CH2OH。
34、如权利要求29、30或31所述的化合物，其中R8为-CH2NH2。
35、一种具有下式的化合物：
Figure A038225610012C1
36.一种具有下式的化合物：
Figure A038225610012C2
37.一种具有下式的化合物：
Figure A038225610013C1
38.一种具有下式的化合物：
Figure A038225610013C2
38a.一种具有下式的化合物：
Figure A038225610013C3
38b.一种具有下式的化合物：
Figure A038225610014C1
39、一种反-9，10-去氢-顺-12，13-去氧埃坡霉素类似物。
40、一种反-9，10-去氢-顺-12，13-去氢埃坡霉素类似物，其中所述类似物的特征为在一CCRF-CEM细胞株中IC50小于0.01。
41、一种反-9，10-去氢-顺-12，13-去氢埃坡霉素类似物，其中所述类似物的特征为在一CCRF-CEM细胞株中IC50小于0.05。
42、一种反-9，10-去氢-顺-12，13-去氢埃坡霉素类似物，其中所述类似物的特征为在一抗紫杉醇的CCRF-CEM细胞株中IC50小于0.01。
43、一种反-9，10-去氢-顺-12，13-去氢埃坡霉素类似物，其中所述类似物的特征为在一抗紫杉醇的CCRF-CEM细胞株中IC50小于0.05。
44、一种包含一反-9，10-去氢-顺-12，13-去氢埃坡霉素类似物及一医药上可接受赋形剂的医药组合物。
45、一种用于治疗癌症的医药组合物，其包含如权利要求1至32中任一项所述的化合物及一医药上可接受的赋形剂。
46、如权利要求44或45所述的医药组合物，其进一步包含氢化蓖麻油。
47、如权利要求44或45所述的医药组合物，其进一步包含氢化蓖麻油及乙醇。
48、如权利要求44或45所述的医药组合物，其中所述化合物悬浮于1∶1的氢化蓖麻油/EtOH中。
49、如权利要求44或45所述的医药组合物，其进一步包含一附加细胞毒性剂。
50、一种用于治疗癌症的医药组合物，其包括：
一治疗有效剂量的如权利要求1至43任一项所述的化合物或其医药上可接受的盐；及
一医药上可接受的载剂或稀释剂，
其中所述化合物的治疗有效剂量为一足以递送每Kg患者体重约0.001至约40mg化合物的量。
51、一种治疗癌症的方法，其包括：
将一治疗有效量的如权利要求1至32任一项的化合物投与一有其需要的患者。
52、如权利要求51所述的方法，其中所述化合物的治疗有效剂量为一足以递送每Kg患者体重约0.001mg至约40mg化合物的量。
53、如权利要求51所述的方法，其中所述化合物的治疗有效剂量为一足以递送每Kg患者体重约0.1mg至约25mg化合物的量。
54、一种制备一具有下式的化合物的方法：
Figure A038225610015C1
其中R1为氢或低碳烷基；
R2为一经取代或未经取代的芳基、杂芳基、芳基烷基或杂芳基烷基部分；
R5及R6独立为氢或一保护基团；
X为O、S、C(R7)2或NR7，其中各个出现的R7独立为氢或低碳烷基；
各个出现的RB独立为氢；卤素；-ORB’；-SRB’；-N(RB’)2；-CY3、-CHY2、-CH2Y，其中Y为F、Br、Cl、I、ORB’、NHRB’、N(RB’)2或SRB’；-C(O)ORB’；-C(O)RB’；-CONHRB’；-O(C＝O)RB’；-O(C＝O)ORB’；-NRB’(C＝O)RB’；N3；N2RB’；环状缩醛；或环状或非环状、线性或具支链脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基或杂芳基，视情况经一或多个以下基团取代：氢；卤素；-ORB′；-SRB′；-N(RB′)2；-C(O)ORB′；-C(O)RB′；-CONHRB′；-O(C＝O)RB′；-O(C＝O)ORB′；-NRB′(C＝O)RB′；N3；N2RB′；环状缩醛；或环状或非环状、线性或具支链经取代或未经取代的脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基或杂芳基部分；或为一埃坡霉素、去氧埃坡霉素或其类似物；或为一聚合物；碳水化合物；光亲和性标记物；或放射性标记物；其中各个出现的RB′独立为氢；一保护基团；一线性或具支链、经取代或未经取代的、环状或非环状脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基、杂芳基、芳基烷基、芳基烯基、芳基炔基、杂芳基烷基、杂芳基烯基或杂芳基炔基部分；及
m为1、2、3或4，所述方法包括以下步骤：
使具有下式的化合物经受一闭环置换反应条件：
Figure A038225610016C1
55、一种制备一具有下式的化合物的方法：
其中R1为氢或低碳烷基；
R2为一经取代或未经取代的芳基、杂芳基、芳基烷基或杂芳基烷基部分；
R5及R6独立为氢或一保护基团；
X为O、S、C(R7)2或NR7，其中各个出现的R7独立为氢或低碳烷基；
各个出现的RB独立为氢；卤素；-ORB’；-SRB’；-N(RB’)2；-CY3、-CHY2、-CH2Y，其中Y为F、Br、Cl、I、ORB’、NHRB’、N(RB’)2或SRB’；-C(O)ORB’；-C(O)RB’；-CONHRB’；-O(C＝O)RB’；-O(C＝O)ORB’；-NRB’(C＝O)RB’；N3；N2RB’；环状缩醛；或环状或非环状、线性或具支链脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基或杂芳基，视情况经一或多个以下基团取代：氢；卤素；-ORB′；-SRB′；-N(RB′)2；-C(O)ORB′；-C(O)RB′；-CONHRB′；-O(C＝O)RB′；-O(C＝O)ORB′；-NRB′(C＝O)RB′；N3；N2RB′；环状缩醛；或环状或非环状、线性或具支链经取代或未经取代的脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基或杂芳基部分；或为一埃坡霉素、去氧埃坡霉素或其类似物；或为一聚合物；碳水化合物；光亲和性标记物；或放射性标记物；其中各个出现的RB′独立为氢；一保护基团；一线性或具支链、经取代或未经取代的、环状或非环状脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基、杂芳基、芳基烷基、芳基烯基、芳基炔基、杂芳基烷基、杂芳基烯基或杂芳基炔基部分；及
m为1、2、3或4，所述方法包括以下步骤：
使具有下式的化合物经受一闭环置换反应条件：
Figure A038225610017C1
56、如权利要求54所述的方法，其中一闭环置换反应的条件包括一Grubbs催化剂。
57、如权利要求565所述的方法，其中所述Grubbs催化剂为三环己基膦[1，3-双(2，4，6-三甲基苯基)-4，5-二氢咪唑-2-基亚基][亚苄基]氯化钌(IV)。
58、一种制备一具有下式的化合物的方法：
Figure A038225610017C2
其中R1为氢或低碳烷基；
R2为一经取代或未经取代的芳基、杂芳基、芳基烷基或杂芳基烷基部分；
R5及R6独立为氢或一保护基团；
X为O、S、C(R7)2或NR7，其中各个出现的R7独立为氢或低碳烷基；
各个出现的RB独立为氢；卤素；-ORB’；-SRB’；-N(RB’)2；-CY3、-CHY2、-CH2Y，其中Y为F、Br、Cl、I、ORB’、NHRB’、N(RB’)2或SRB’；-C(O)ORB’；-C(O)RB’；-CONHRB’；-O(C＝O)RB’；-O(C＝O)ORB’；-NRB’(C＝O)RB’；N3；N2RB’；环状缩醛；或环状或非环状、线性或具支链脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基或杂芳基，视情况经一或多个以下基团取代：氢；卤素；-ORB′；-SRB′；-N(RB′)2；-C(O)ORB′；-C(O)RB′；-CONHRB′；-O(C＝O)RB′；-O(C＝O)ORB′；-NRB′(C＝O)RB′；N3；N2RB′；环状缩醛；或环状或非环状、线性或具支链经取代或未经取代的脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基或杂芳基部分；或为一埃坡霉素、去氧埃坡霉素或其类似物；或为一聚合物；碳水化合物；光亲和性标记物；或放射性标记物；其中各个出现的RB′独立为氢；一保护基团；一线性或具支链、经取代或未经取代的、环状或非环状脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基、杂芳基、芳基烷基、芳基烯基、芳基炔基、杂芳基烷基、杂芳基烯基或杂芳基炔基部分；及
m为1、2、3或4，所述方法包括以下步骤：
还原一具有下式的化合物：
59、一种制备一具有下式的化合物的方法：
其中R1为氢或低碳烷基；
R2为一经取代或未经取代的芳基、杂芳基、芳基烷基或杂芳基烷基部分；
R5及R6独立为氢或一保护基团；
X为O、S、C(R7)2或NR7，其中各个出现的R7独立为氢或低碳烷基；
各个出现的RB独立为氢；卤素；-ORB’；-SRB’；-N(RB’)2；-CY3、-CHY2、-CH2Y，其中Y为F、Br、Cl、I、ORB’、NHRB’、N(RB’)2或SRB’；-C(O)ORB’；-C(O)RB’；-CONHRB’；-O(C＝O)RB’；-O(C＝O)ORB’；-NRB’(C＝O)RB’；N3；N2RB’；环状缩醛；或环状或非环状、线性或具支链脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基或杂芳基，视情况经一或多个以下基团取代：氢；卤素；-ORB′；-SRB′；-N(RB′)2；-C(O)ORB′；-C(O)RB′；-CONHRB′；-O(C＝O)RB′；-O(C＝O)ORB′；-NRB′(C＝O)RB′；N3；N2RB′；环状缩醛；或环状或非环状、线性或具支链经取代或未经取代的脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基或杂芳基部分；或为一埃坡霉素、去氧埃坡霉素或其类似物；或为一聚合物；碳水化合物；光亲和性标记物；或放射性标记物；其中各个出现的RB′独立为氢；一保护基团；一线性或具支链、经取代或未经取代的、环状或非环状脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基、杂芳基、芳基烷基、芳基烯基、芳基炔基、杂芳基烷基、杂芳基烯基或杂芳基炔基部分；及
m为1、2、3或4，所述方法包括以下步骤：
氧化一具有下式的化合物：
Figure A038225610019C1
60、一种制备一具有下式的化合物的方法：
Figure A038225610019C2
其中R1为氢或低碳烷基；
R2为一经取代或未经取代的芳基、杂芳基、芳基烷基或杂芳基烷基部分；
R5及R6独立为氢或一保护基团；
X为O、S、C(R7)2或NR7，其中各个出现的R7独立为氢或低碳烷基；
各个出现的RB独立为氢；卤素；-ORB’；-SRB’；-N(RB’)2；-CY3、-CHY2、-CH2Y，其中Y为F、Br、Cl、I、ORB’、NHRB’、N(RB’)2或SRB’；-C(O)ORB’；-C(O)RB’；-CONHRB’；-O(C＝O)RB’；-O(C＝O)ORB’；-NRB’(C＝O)RB’；N3；N2RB’；环状缩醛；或环状或非环状、线性或具支链脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基或杂芳基，视情况经一或多个以下基团取代：氢；卤素；-ORB′；-SRB′；-N(RB′)2；-C(O)ORB′；-C(O)RB′；-CONHRB′；-O(C＝O)RB′；-O(C＝O)ORB′；-NRB′(C＝O)RB′；N3；N2RB′；环状缩醛；或环状或非环状、线性或具支链经取代或未经取代的脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基或杂芳基部分；或为一埃坡霉素、去氧埃坡霉素或其类似物；或为一聚合物；碳水化合物；光亲和性标记物；或放射性标记物；其中各个出现的RB′独立为氢；一保护基团；一线性或具支链、经取代或未经取代的、环状或非环状脂肪族基团、杂脂肪族基团、芳基、杂芳基、芳基烷基、芳基烯基、芳基炔基、杂芳基烷基、杂芳基烯基或杂芳基炔基部分；及
m为1、2、3或4，所述方法包括以下步骤：
将具有以下结构的一氧化膦或魏悌希试剂：
Figure A038225610020C1
与一具有以下结构的酮缩合：
Figure A038225610020C2
其中R′及R″独立为C1-8线性或具支链的链烷基、或一经取代或未经取代的苯基、芳基、烷氧基或芳氧基；及
X为诸如氯化物或溴化物等的平衡离子。
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