CN1675220A

CN1675220A - 埃坡霉素衍生物

Info

Publication number: CN1675220A
Application number: CNA038186446A
Authority: CN
Inventors: 名原健二; K·C·尼科拉乌; A·里森
Original assignee: Novartis AG; Scripps Research Institute
Current assignee: Novartis AG; Scripps Research Institute
Priority date: 2002-08-02
Filing date: 2003-08-01
Publication date: 2005-09-28
Anticipated expiration: 2023-08-01
Also published as: DE60318224T2; EP1546152A1; US20060293527A1; ES2297189T3; WO2004014919A1; PT1546152E; CA2494259A1; JP4276171B2; JP2006503814A; US20040072870A1; ATE381569T1; BR0313198A; EP1546152B1; CN100439374C; US7169930B2; DE60318224D1; AU2003266961A1

Abstract

本发明涉及其中符号和取代基如说明书中定义的式(I)的埃坡霉素衍生物，还涉及其制备方法、含有该衍生物的药物组合物以及该衍生物在制备尤其用于治疗增殖性疾病如肿瘤的药物组合物中的用途。

Description

埃坡霉素衍生物

技术领域

本发明涉及抗肿瘤剂。更具体地，本发明涉及作为抗肿瘤药物的埃坡霉素B类似物，即顺式和反式-12，13-环丙基埃坡霉素B和顺式和反式-12，13-环氧埃坡霉素B。

概述

本发明涉及具有有效对抗多种细胞系、包括耐-Taxol^肿瘤细胞的细胞毒活性的埃坡霉素B类似物，即顺式和反式-12，13-环丙基埃坡霉素B和顺式和反式-12，13-环氧埃坡霉素B。本发明的示范性实施方案包括如图1中显示的化合物3、6和8-14以及如图11中显示的化合物3、49和50-60。本发明的另一方面涉及该化合物作为细胞毒性剂的用途。

本发明的一个方面涉及式(I)所表示的化合物，或者当有成盐基团存在时涉及式I化合物的盐：

其中：

当式I化合物为顺式-异构体时，X为氧或CH₂，当式I化合物为反式-异构体时，X为CH₂；

当式I化合物为顺式-异构体且X为氧时，则R1为甲基且R为选自下组的基团：

其中R2为选自-Me、-Cl、-Br、-SMe和-CF₃的基团；

当式I化合物为顺式异构体且X为CH₂时，则R1为甲基且R为选自下组的基团：

其中R2为选自-Me、-Cl、-Br、-SMe和-CF₃的基团；

当式I化合物为反式异构体且X为CH₂时，则R1为甲基或氢；

其中，当R1为甲基时，R为选自下组的基团：

且当R1为氢时，R为选自下组的基团：

当使用化合物和盐等的复数形式时，这也可用于指单个化合物或盐等。

盐主要是式I化合物的可药用盐。

该盐由带有碱性氮原子的式I化合物例如以酸加成盐的形式形成，优选与有机或无机酸形成，特别是可药用盐。适宜的无机酸例如是氢卤酸如盐酸、硫酸或磷酸。适宜的有机酸例如是羧酸、膦酸、磺酸或氨基磺酸，例如乙酸、丙酸、辛酸、癸酸、正十二烷酸、乙醇酸、乳酸、2-羟基丁酸、葡萄糖酸、葡糖单羧酸(glucosemonocarboxylic acid)、富马酸、琥珀酸、己二酸、庚二酸、辛二酸、壬二酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、葡萄糖二酸、乳糖二酸、氨基酸如谷氨酸、天冬氨酸、N-甲基甘氨酸、乙酰氨基乙酸、N-乙酰基天冬酰胺或N-乙酰基半胱氨酸、丙酮酸、乙酰乙酸、磷酸丝氨酸、2-或3-甘油磷酸、马来酸、羟基马来酸、甲基马来酸、环己烷羧酸、苯甲酸、水杨酸、1-或3-羟基萘基-2-羧酸、3，4，5-三甲氧基苯甲酸、2-苯氧基苯甲酸、2-乙酰氧基苯甲酸、4-氨基水杨酸、邻苯二甲酸、苯乙酸、葡糖醛酸、半乳糖醛酸、甲磺酸或乙磺酸、2-羟基乙磺酸、乙烷-1，2-二磺酸、苯磺酸、2-萘磺酸、1，5-萘-二磺酸、N-环己基氨基磺酸、N-甲基-、N-乙基或N-丙基-氨基磺酸或其它有机质子酸如抗坏血酸。

带有成盐基团的式I化合物的盐可按照本身已知的方法制备。因此式I化合物的酸加成盐可例如通过用酸或适宜的阴离子交换剂处理得到。

通常盐可转化为游离化合物，例如通过用适宜的碱性试剂处理，例如用碱金属的碳酸盐、碳酸氢盐或氢氧化物、通常用碳酸钾或氢氧化钠处理。

为了分离或纯化的目的，也可以使用不可药用盐，例如苦味酸盐或高氯酸盐。只有可药用盐或游离化合物(当出现这种情形时，为药物制剂的形式)可用于治疗用途，因此是优选的。

鉴于新化合物的游离形式与其盐形式、包括那些例如在纯化或鉴定新化合物中用作中间体的盐形式之间的密切关系，以上和以下提到的任何游离化合物在适当和有利时应理解为还是提及相应的盐。

本发明的另一方面涉及式II所表示的化合物：

在式II中，R为选自下述结构的基团：

本发明该方面的优选实施方案包括下式表示的化合物：

和

本发明的另一方面涉及式III表示的化合物：

在式III中，R为选自下述结构的基团：

本发明该方面的优选实施方案以下式表示：

和

本发明的另一方面涉及以下结构表示的化合物：

本发明的另一方面涉及式IV表示的化合物：

其中R为选自以下结构所表示基团的基团：

本发明该方面的优选实施方案包括以下结构表示的化合物：

本发明的另一方面涉及以式V表示的化合物：

其中R为选自-Me、-Cl、-Br、-SMe和-CF₃的基团。本发明该方面的优选实施方案包括以下结构表示的化合物：

本发明的其它方面涉及以下结构表示的化合物：

本发明的另一方面是合成上述任一化合物或其中间体的方法，如说明书中所描述的，特别涉及制备式I、II、III、IV或V化合物的方法，其中，在第一步中将式VI化合物任选在催化剂条件下通过酯化反应而缩合，

其中X和R具有前述所定义的任一含义且PG为羟基官能团的保护基，和在第二步中脱去保护基，由此得到式I的内酯(lacton)。

此处所用的术语“羟基保护基”指对酸不稳定的羟基保护基，该基团是已知的那些。保护基的特性是它们本身易于除去，即没有不希望的副反应，通常通过溶剂分解、还原、光解除去，或者也可通过酶活性、例如在与生理条件相似的条件下除去，并且它们不存在于终产物中。专业人员知道或易于确定哪些保护基团适合于上下文中所提及的反应。

通过保护基对羟基进行保护、保护基本身以及它们的裂解反应例如在标准参考著作中述及，如J.F.W.McOmie，“有机化学中的保护基”，Plenum出版社，伦敦和纽约1973；T.W.Greene，“有机合成中的保护基”，Wiley，纽约1981；“肽”；第3卷(编者：E.Gross和J.Meienhofer)，Academic出版社，伦敦和纽约1981；“有机化学方法”，Houben Weyl，第4版，第15卷/I，Georg Thieme Verlag，斯图加特1974；H.-D.Jakubke和H.Jescheit，“氨基酸、肽和蛋白质”，Verlag Chemie，Weinheim，DeerfieldBeach，巴塞尔1982以及Jochen Lehmann，“碳水化合物的化学：单糖及衍生物”，Georg Thieme Verlag，斯图加特1974。

优选的保护基为对酸不稳定的甲硅烷基醚，如叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)醚、三乙基甲硅烷基(TES)醚、三异丙基甲硅烷基(TIPS)醚、二乙基异丙基甲硅烷基(DEIPS)醚、异丙基二甲基甲硅烷基(IPDMS)醚或thexyldimethylsilyl(TDS)醚。

附图简述

图1显示了所选择的天然和设计的埃坡霉素的结构。灰色部分指本研究中合成的化合物。

图2所显示的图表公开了于37℃时在微管结合位点(50nM)竞争性配体对荧光紫杉烷(taxoid)Flutax-2(50nM)的替换。

图3显示了通过Stille偶合来合成2-(甲硫基)噻唑埃坡霉素B(3)。

图4显示了反式-环丙基埃坡霉素B类似物(1-6、8、10和12-14)的反向合成分析。

图5显示了醛32的构建。

图6显示了乙烯基碘化合物20c-g的构建。

图7显示了埃坡霉素类似物8-14的合成。

图8所显示的表公开了埃坡霉素1至14以及紫杉醇对用紫杉醇或埃坡霉素A所选择的1A9人卵巢癌细胞和β-微管蛋白突变细胞系的细胞毒性。

图9所显示的表公开了埃坡霉素1-8、10-14以及紫杉醇对人表皮样癌细胞系的微管蛋白聚合潜能和细胞毒性。

图10所显示的表公开了埃坡霉素类似物与微管的紫杉烷结合位点的结合亲和性。

图11显示了各种所设计的埃坡霉素A和B类似物的一系列结构以及埃坡霉素A和B的结构。

图12的流程图显示了由乙烯基碘化合物15合成多种类似物的最后步骤。

图13的流程图显示了合成图12的流程图中所用的锡烷所需的步骤。

图14的流程图显示了用于构建埃坡霉素B的环丙基类似物的骨架的合成路线。

图15的流程图显示了在环丙基类似物48和50的合成中所用的最终步骤。

图16的表显示埃坡霉素48、50和51-60对用紫杉醇或埃坡霉素A所选择的人癌细胞和β-微管蛋白突变细胞系的细胞毒性。

图17的表显示所选择的埃坡霉素对人表皮样细胞系KB-3和KB-8511的细胞毒性(IC50，nM)。

本发明的另一方面涉及用于治疗哺乳动物中增殖性疾病的、含有治疗剂量的如上所表示的式I、II、III、IV或式V范围内的化合物的药物组合物。在特别优选的模型中，哺乳动物为人。

发明详述

本发明公开了通过化学合成和生物学评价而构建一系列具有不同侧链的环氧和环丙基埃坡霉素的有机合成构建和生物学评价。目前所关注的埃坡霉素库的设计是基于现有的构效关系(SAR)的知识，特别是基于下述事实：(1)埃坡霉素B(2)的效力比埃坡霉素A(1)强得多；(2)在噻唑部分用甲硫基替换甲基可增强效力(Nicolaou，K.C.等人，Angew.Chem.1998，110，2120-2153；Angew.Chem.Int.Ed.1998，37，2014-2045；Nicolaou，K.C.等人，Tetrahedron 2002，58，6413-6432；Nicolaou，K.C.等人，Angew.Chem.1998，110，89-92；Angew.Chem.Int.Ed.1998，37，84-87)；(3)用于替换噻唑环的杂环如吡啶(Nicolaou，K.C.等人，Chem.Biol.2000，7，593-599.)为生物学活性需要维持氮的正确位置；以及(4)环丙环可替换环氧部分而不损失活性(Nicolaou，K.C.等人，J.Am.Chem.Soc.2001，123，9313-9323；Nicolaou，K.C.等人，ChemBioChem.2001，2，69-75；Johnson，J.A.等人，Org.Lett.2000，2，1537-1540.)。由这些见解可认为，埃坡霉素3、6和8-14(图1)以及48、50和51-60(图11)是化学合成和生物学评价的主要候选者。对这些化合物进行生物学评价可确定：甲硫基噻唑侧链是改善埃坡霉素就细胞毒性和微管蛋白聚合性质而言的生物学活性的所希望的药效基团。活性增强可通过三种不同的生物学分析法来证明，在所述的分析法中在细胞和体外均确定了测试化合物的效应。

埃坡霉素类似物的设计与化学合成

作为最初的研究方向，我们决定证明：与埃坡霉素B系列上的甲基取代基相比，通过甲硫基所赋予的埃坡霉素骨架的效力增强。如图3所示，通过将锡烷16(Nicolaou，K.C.等人，Bioorg.Med.Chem.1999，7，665-697)与乙烯基碘化合物15(Nicolaou，K.C.等人，Chem.Eur.J.2000，6，2783-2800)Stille偶合(80％产率)，由此合成甲硫基噻唑埃坡霉素B(3)。所观察到的类似物3对一系列肿瘤细胞系的高效力(参见表1)鼓舞我们继续设计和合成整个甲硫基类似物家族以及多种新的含吡啶的埃坡霉素。

所设计的埃坡霉素类似物(51-60)可按照收敛(convergent)方法由乙烯基碘化合物15(Nicolaou，K.C.等人，Chem.Eur.J.2000，6，2783-2800)以及相应的芳族锡烷合成，如图12所示(试剂和保护基的缩写参见附图详述)。因此，当存在PdCl₂(MeCN)₂、CuI和AsPh₃时、在DMF中于环境温度下进行15与适宜锡烷(64a-d、66a-d、67和68)的Stille偶合，以指定的产率直接生成所预期的埃坡霉素(51-60)。所需要的芳族锡烷按照图13所概述制备。因此，对于噻唑化合物64a-64d，将商业购得的2，4-二溴噻唑(64)与相应的硫醇在NaH存在下反应，通过替换更具反应活性的2-溴取代基而首先生成中间体硫化物(63a-63d)。随后使这些物质与Me₃SnSnMe₃在Pd(PPh₃)₄存在下、在甲苯中于100℃偶合，通过第二个溴残基的发应得到所预期的产物64a-64d。吡啶基锡烷66a-66d由易于得到的2-溴吡啶65a、65b(Virgilio，N.J.Org.Chem.1973，38，2660-2664)、65c(Nicolaou，K.C.等人，Tetrahedron 2002，58，6413-6432)以及65d(Testaferri，L.等人，Tetrahedron1985，41，1373-1384)通过金属-卤素交换(nBuLi)、之后用nBu₃SnCl将所得的2-锂衍生物淬灭(Gilman，H.等人，J.Org.Chem.1951，16，1788-1791)来相似地合成。锡烷67(Dinnell，K.等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.2001，11，1237-1240)和68(Jessie，S.；Kjell，U.Tetrahedron 1994，50，275-284)可按照相应的文献方法由各自的卤化物制备。

图4以反向合成的模式概括了构建环丙基埃坡霉素B类似物所遵循的途径。基于我们以前所报道的方法，所采用的次序需要Charette环丙烷化反应(Nicolaou，K.C.等人，J.Am.Chem.Soc.2001，123，9313-9323；Charette，A.B.等人，J.Am.Chem.Soc.1998，120，11943-11952)以在合成中较早地建立12，13-环丙基位点、根据我们最优化方法的羟醛缩合反应(Nicolaou，K.C.等人，Chem.Eur.J.2000，6，2783-2800)以构建具有两个立体中心的C6-C7键、Nozaki-Hiyama-Kishi偶合(Nicolaou，K.C.等人，J.Am.Chem.Soc.2001，123，9313-9323；Takai，K.等人，Tetrahedron Lett.1983，24，5281-5284；Jin，H.等人，J.Am.Chem.Soc.1986，108，5644-5646)以引入侧链、以及Yamaguchi大环内酯化反应(Inanaga，J.等人，Bull.Chem.Soc.Jpn.1979，52，1989-1993；Mulzer，J.等人，Synthesis 1992，215-228；Nicolaou，K.C.等人，J.Am.Chem.Soc.1997，119，7974-7991)以完成大环结构。因此，关键的结构单元18或69以及19和20被定义为这些构建的起点。相应的埃坡霉素A类似物的构建预计按照与我们以前所报道的方法相同的方法进行(Nicolaou，K.C.等人，J.Am.Chem.Soc.2001，123，9313-9323)。

图5和图14概括了由易于获得的香叶醇(18或69)合成所需的醛32或82。由此，18的Charette环丙烷化(Et₂Zn-CH₂I₂，在手性配体21存在下)(Charette，A.B.等人，J.Am.Chem.Soc.1998，120，11943-11952)以87％产率和93％ee提供了环丙基醇22或以80％产率和95％ee提供了环丙基醇71。将22或71中的羟基进行保护(NaH-BnBr)(试剂和保护基的缩写参见流程图中的文字说明)、之后将余下的双键臭氧分解(O₃；NaBH₄)，分别以总产率89％或83％得到化合物23或72。醇23或72向相应的碘化物的转化(24的产率为95％或73的产率为91％)通过甲磺酰化并随后与NaI反应来完成。(-)-丙醛SAMP腙(25)(Nicolaou，K.C.等人，J.Am.Chem.Soc.1997，119，7974-7991；Enders，D.Aymmetric Synth.1984，3，275-339；Enders，D.；Klatt，M.Synthesis 1996，1403-1418)与碘化物24或73的烷基化在LDA影响下生成化合物26或75(产率分别为84％、87％)，化合物26或75裂解(MeI；HCl_aq)生成产率为86％的醛17或产率为91％的76。通过对衍生于醛17的MTPA酯进行¹H NMR分析，测得所得的C-8差向异构体的比例为约97∶3(Tsuda，M.；Endo，T.；Kobayashi，J.J.Org.Chem.2000，65，1349-1352以及其中引用的参考文献)。在以前定义的条件[LDA(2.4当量)，酮19(2.3当量)，-78至-40℃，30分钟；然后醛17或76，-78℃，5分钟](Nicolaou，K.C.等人，Chem.Eur.J.2000，6，2783-2800)下将酮19和醛17或76羟醛缩合得到羟醛产物27或78，该产物以非对映体纯的形式分离(81％产率)。随后将27或28中的仲醇以TBS醚(TBSOTf，2，6-二甲基吡啶)形式进行保护，之后将TBS伯基(HF·py)选择性裂解，生成总产率为88％的醇28或总产率为86％的醇79。将该化合物逐步氧化为羧酸(DMP；然后NaClO₂)，然后将该羧酸保护为TMSE酯29或80(TMSE-OH，EDC，4-DMAP)，总产率为75％或73％。将29或80中的二苄醚氢解，之后用DMP氧化，生成醛30或82(84％产率，87％产率)，该醛经由乙烯醚31(约1∶1 E∶Z比率)被顺利地同系化(NaHMDS-MeOCH₂PPh₃Cl；然后PPTS)为所欲得的较高级的醛32或83，总产率为82％。

侧链(流程图4中的20a-g和流程图15中的64a-d、66a-d、84a和84b)或者如以前所报道合成(20a、20b和84a)(Nicolaou，K.C.等人，J.Am.Chem.Soc.2001，123，9313-9323)、(84b)(Nicolaou，K.C.等人，J.Tetrahedron 2002，58，6413-6432)，或者如流程图4所示由相应的芳基卤化物(33(Ellingboe，J.W.等人，J.Med.Chem.1994，37，542-550)、37、38、39)合成。将4-羟甲基-2-吡啶基溴化合物33保护为三苯甲基醚(TrCl，4-DMAP，100％)，之后将所得的芳基溴化合物34与丙炔[Pd(PPh₃)₂Cl₂-CuI，96％]Sonogashira偶合(Arcadi，A.等人，Tetrahedron 1994，50，437-452)，生成炔属化合物35，该化合物作为乙烯基碘化合物20c的前体(n-BuLi；然后(n-Bu₃Sn)₂、CuCN、MeOH；然后I₂，80％产率)。将35中的三苯甲基改变为MOM基团[HCl(g)、CHCl₃；然后NaH、MOM-Cl，总产率34％](Betzer，J.-F.等人，TetrahedronLett.1997，38，2279-2282)，通过将所得中间体36暴露于上述对35转化为20c所述同样的条件下，可生成乙烯基碘化合物20d(67％产率)。相似的化学方法可分别用于由37-39构建乙烯基碘化合物20e-20g，如流程图4所示。

两个关键性的键形成和两个伴随的脱保护将关键的结构单元32(在本研究中为埃坡霉素B类似物而制备)、40(如以上对埃坡霉素A类似物所述制备)(Nicolaou，K.C.等人，J.Am.Chem.Soc.2001，123，9313-9323)和20a-g(侧链)从目标埃坡霉素类似物中分离。第一步操作是醛32和40与乙烯基碘化合物20a-g的Nozaki-Hiyama-Kishi偶合(Takai，K.等人，Tetrahedron Lett.1983，24，5281-5284；Jin，H.等人，J.Am.Chem.Soc.1986，108，5644-5646)。该碳-碳键的形成反应在这种情况下极好地进行(CrCl₂，NiCl₂，4-t-BuPy，DMSO)，在TBAF诱导形成羧酸后，得到流程图5和15中指定产率的偶合产物(41a、41b、41d-g、42c、42e、85和88)(如C-15非对映异构体的约1∶1混合物)。然后使羟酸非对映异构体的每种混合物(41a、41b、41d-g、42c、42e、85和88)进行Yamaguchi大环内酯化反应(2，4，6-三氯苯甲酰氯，4-DMAP)(Inanaga，J.等人，Bull.Chem.Soc.Jpn.1979，52，1989-1993；Mulzer，J.等人，Synthesis 1992，215-228)，得到指定(非最佳的)产率的所希望的15(S)内酯及其15(R)差向异构体。在此时分离两种差向异构体可通过其在硅胶上显著不同的R_f值而易于达到。用20％TFA/CH₂Cl₂(43a、43b、43e-g、44c、44e、86和89)或用TMSBr-4MS/CH₂Cl₂、之后用20％TFA/CH₂Cl₂(43d)使被保护的衍生物醚最终脱保护，生成指定(非最佳的)产率的埃坡霉素6、8-14(流程图5和15)。对色谱纯和光谱纯的化合物进行如下所述的生物学评价。

化学生物学：

通过细胞毒性、体外微管蛋白聚合以及微管蛋白结合分析评价了所合成的埃坡霉素的生物学活性。细胞毒性首先在一组卵巢癌细胞系、包括亲代细胞系(1A9)和三种耐药的细胞系中进行评价，所述三种耐药细胞系即耐紫杉醇细胞株(Giannakakou，P.等人，J.Biol.Chem.1997，272，17118-17125)1A9/PTX10和lA9/PTX22以及耐埃坡霉素细胞株(Giannakakou，P.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.2000，97，2904-2909)1A9/A8。这些耐药细胞系含有不同的获得性的β-微管蛋白突变，该突变可影响药物-微管蛋白相互作用并导致紫杉烷和埃坡霉素-驱使的微管蛋白聚合受损。这些生物学研究的结果在表1中进行了概括(Skehan，P.等人，J.Natl.Cancer Inst.1990，82，1107-1112)。还使用了一组人表皮样癌细胞系进行细胞毒性和体外微管蛋白聚合分析，包括亲代细胞系(KB-31)和耐紫杉醇(由于Pgp过表达)细胞系(KB-8511)。这些研究的结果在表2中进行了概括(Nicolaou，K.C.等人，Chem.Biol.2000，7，593-599；Meyer，T.等人，Int.J.Cancer 1989，43，851-856)。

一般而言，测试化合物对1A9人卵巢癌细胞和KB-31人表皮样癌细胞的体外微管蛋白聚合效力和细胞毒性性质之间存在良好的一致性。与对天然存在的埃坡霉素A和B所观察到的原始结果一致，没有一种此处所测试的埃坡霉素A或B的类似物表现出是药物-溢出泵P-糖蛋白(Pgp)的良好的底物。这一点是显然的，因为这些类似物中的每种对Pgp过表达细胞系KB-8511没有交叉耐药性，相比之下，一种已知的Pgp底物紫杉醇对KB-5811细胞的活性低224倍(参见图9和图17)。值得注意的是，与埃坡霉素A(1)和埃坡霉素B(2)相比，所有的埃坡霉素类似物表现出对β-微管蛋白突变更具活性(参见图8和图16，RR值)。与对PTX10(β270)和A8(β274)细胞的相对抵抗力(RR)值为9.4-24.9的Epo A(1)和Epo B(2)相比，这对于RR值为1.6-9.3的化合物10-14、52、54、58和60而言更加明显(图8)。另外，在本研究中，与以前的报道(Nicolaou，K.C.等人，ChemBioChem 2001，2，69-75；Giannakakou，P.等人，J.Biol.Chem.1997，272，17118-17125；Giannakakou，P.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.2000，97，2904-2909)相一致，我们发现紫杉醇-选择性突变PTX22(β364)对埃坡霉素和该报道中所测试的所有埃坡霉素类似物保留了几乎全部的敏感性(RR值3.3)。

被取代的埃坡霉素B类似物对1A9人卵巢癌细胞和KB-31人表皮样癌细胞的相对效力方面具有普遍的一致性。总体而言，这些细胞毒性分析的结果揭示了埃坡霉素家族中就构效关系而言的令人感兴趣的信息。首先，其中C12-C13环氧部分被环丙烷环替代的化合物4和6是此处所给出的所有埃坡霉素B类似物中最有效的两种化合物。这一结果再次证明，C12-C13环氧部分对如上所指出的生物学活性并不是必需的(Nicolaou，K.C.等人，J.Am.Chem.Soc.2001，123，9313-9323；Nicolaou，K.C.等人，ChemBioChem.2001，2，69-75；Johnson，J.A.等人，Org.Lett.2000，2，1537-1540)。化合物4对1A9人卵巢癌细胞的活性比母体埃坡霉素B(2)强6倍(图6)，这进一步证明用甲硫基替换噻唑侧链上的甲基使活性增加。这一结果与以前对C12-C13环氧没有被替代的埃坡霉素B做相似的替换(即化合物3)所得的数据一致(Nicolaou，K.C.等人，Tetrahedron 2002，58，6413-6432)。后一化合物(3)的活性比母体埃坡霉素B的活性高约2倍，而化合物4的活性比埃坡霉素B的活性高6倍。这一结果使对1A9细胞系更具活性的埃坡霉素B类似物化合物4得以合成，并且提示环氧被环丙烷部分替代以及噻唑部分上的甲基被甲硫基替代可起协同作用，使得观察到的生物学活性增强。有趣的是，用较大的部分取代噻唑环的甲基(化合物7-10)(发现化合物7对1A9细胞系的IC₅₀值为2.5nM)使得生物学活性与埃坡霉素B相比降低(图6和7)。

在带有吡啶环的5-位被取代的吡啶侧链的埃坡霉素B类似物(化合物55-57和59)中，甲硫基类似物(化合物57)是最有效的，其次是溴取代的衍生物(化合物55)，再次是氯取代的衍生物(化合物56)。当甲硫基由吡啶环的5位(化合物57)重新定位至6位(化合物58)时，活性降低，IC₅₀值由0.4nM(化合物57)降为3.3nM(化合物58)(图16)。另外，将吡啶环5位上的甲硫基(化合物57)用三氟甲基(化合物59)替换使得活性下降10倍。最后，所合成埃坡霉素B类似物中活性最低的是化合物60，在化合物60中用带甲硫基取代基的嘧啶侧链替换了母体化合物的噻唑侧链。

除了上述的生物学分析外，通过荧光紫杉烷替换分析法(Andreu，J.M.；Barasoain，I.Biochemistry 2001，40，11975-11984)测定了每种埃坡霉素类似物的相对效力。这些实验的目的是比较微管在其紫杉烷位点结合所研究的埃坡霉素类似物的平衡常数。于37℃测定每种埃坡霉素类似物对充分表征的荧光紫杉烷Flutax-2与微管结合的抑制(Souto，A.A.等人，Angew.Chem.Int.Ed.Engl.1995，34，2710-2712；Díaz，J.F.等人，J.Biol.Chem.2000，275，26265-26276；Abal，M.等人，Cell.Motil.Cytoskeleton 2001，49，1-15)(图2)。表3中显示的所得解离平衡常数表明，在所测试的埃坡霉素类似物中埃坡霉素A(1)的亲和性最低(Kd＝34±4)。在该分析法所测定的配体中最强的配体是化合物3，其Kd值为0.64±0.24nM，其次是化合物8、11-13，其Kd值相似，包括在1.6至1.9nM之间。可能除了化合物13外，所测试的类似物的结合亲和性反映了它们各自在细胞生长抑制和体外微管蛋白聚合分析中的活性。

从此处所采用的所有三种生物学测定的总体而言，可得出就埃坡霉素家族构效关系的结论。首先，C12甲基的加入不会增强反式环丙基系列的活性(化合物5对6、7对8、9对10)，这一点与顺式环氧系列中的结果相反，在顺式环氧系列中埃坡霉素B(2)的活性至少比埃坡霉素A(1)高10倍。这可能是由于C12甲基在顺式和反式化合物的不同取向或顺式和反式化合物之间的综合构象差异，但细节仍有待说明。第二，与天然的2-甲基噻唑侧链相比，2-甲硫基噻唑侧链的引入使活性增强(化合物2对3、5对11和6对12)。这种效果以前在埃坡霉素C和D类似物中观察到(Nicolaou，K.C.等人，Angew.Chem.1997，109，2181-2187；Angew.Chem.Int.Ed.Engl.1997，36，2097-2103；还参见Sinha，S.C.等人，ChemBioChem 2001，2，656-665)。第三，在吡啶侧链系列中用甲硫基替换甲基使效力降低(化合物8对13)，这一点与上述噻唑侧链所得的结果相反。该结论基于细胞毒性和体外微管蛋白聚合数据，而在荧光紫杉烷替换分析中，在吡啶侧链中用甲硫基替换甲基对亲和性是没有影响的。这种偏差可能仅仅反映了测试化合物的细胞吸收和渗透性的差异或者两种微管蛋白分析法的敏感性的差异。尽管存在偏差，但这些数据可清楚地看到，在噻唑侧链引入甲硫基比在吡啶侧链引入甲硫基更有利，这可能是由于两种侧链骨架不同的立体要求。与以前由顺式吡啶埃坡霉素类似物得到的数据一致(Nicolaou，K.C.等人，Chem.Biol.2000，7，593-599)，将吡啶侧链的甲硫基由5-位(化合物13)重新定位至6位(化合物14)使得活性显著降低。第四，由其中5-甲基吡啶侧链(化合物7和8)被5-羟甲基吡啶侧链(化合物9和10)取代的化合物7对9和8对10得到混合的结果。该取代在对1A9人卵巢癌细胞的细胞毒性分析法中没有显示差异(表1)，在该细胞毒性分析法中每对化合物均得到非常相似的IC₅₀值(例如化合物7和9的IC₅₀值分别为0.6和0.7nM，化合物8和10的IC₅₀值为1.7nM)。另一方面，在人表皮样癌细胞KB-31中，化合物10的活性比其对应化合物8的活性强2倍，其IC₅₀分别为0.44和0.9nM。鉴于可能解释结果差异的两种人癌细胞系的生长速率之间的差异小，我们可得出下述结论：5-羟甲基吡啶侧链的引入不大可能增强活性，至少不能增强埃坡霉素家族的反式-12，13-环丙基类似物的活性。

由于这些性质，该化合物适合用于治疗增殖性疾病、特别是肿瘤疾病、包括转移灶；例如实体瘤如肺肿瘤、乳房瘤、结肠直肠瘤、前列腺瘤、黑素瘤、脑瘤、胰腺瘤、颈瘤、膀胱瘤、成神经细胞瘤、咽喉肿瘤，而且还包括血细胞增殖性疾病如白血病；还适合用于治疗对用微管解聚抑制剂治疗有响应的其它疾病如银屑病。

式I化合物可单独或与一种或多种其它治疗剂组合施用，可能的组合疗法采取固定的组合形式或者本发明的化合物与一种或多种其它治疗剂交错施用或分别施用，或者组合施用固定组合与一种或多种其它治疗剂。此外，式I化合物还可与化学疗法、放射疗法、免疫疗法、手术介入或它们的组合联合施用用于肿瘤治疗。长期疗法与如上所述的其它治疗策略中的辅助疗法同样是可能的。其它可能的治疗是在肿瘤消退之后维持患者状态的疗法，或者甚至是例如在处危患者中的化学保护疗法。

可能用于组合的治疗剂特别是一种或多种抗增殖化、细胞生长抑制或细胞毒性化合物，例如一种或多种化学治疗剂，选自经典的化疗剂、多胺生物合成抑制剂、蛋白激酶、尤其是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶如蛋白激酶C抑制剂，或者酪氨酸蛋白激酶如表皮生长因子受体蛋白酪氨酸激酶抑制剂、细胞因子、负生长调节剂如TGF-β或IFN-β、芳香酶抑制剂和经典的细胞抑制剂。

本发明的化合物不仅用于(预防性和优选治疗性地)治疗人，而且可用于治疗其它温血动物，例如有商业用途的动物，例如啮齿类动物如小鼠、家兔或大鼠或豚鼠。它们也可在上述测试体系中作为参比标准与其它化合物进行比较。

式I化合物也可用于诊断目的，例如使用从温血动物“宿主”、特别是人中得到的肿瘤并植入小鼠以测试它们在用该化合物治疗后的生长的降低，研究它们对所述化合物的敏感性，并由此改善对在原宿主中肿瘤性疾病的可能的治疗方法的检测和确定。

立体异构混合物、例如非对映异构体的混合物可按照本身已知的方法、通过适宜的分离方法而分离成其相应的异构体。因此非对映异构混合物可通过分步结晶、色谱法、溶剂分配以及相似的操作分离成各个非对映异构体。这种分离可在起始化合物之一的阶段进行或者在式I化合物本身中进行。对映异构体可通过形成非对映异构的盐来分离，例如通过与对映体纯的手性酸形成盐，或者通过使用具有手性配体的色谱底物的色谱法、例如通过HPLC。(旋对映异构体的分离通常在中间阶段进行)。

药物制剂、方法及用途

本发明还涉及含有式I化合物作为活性成分且可特别用于治疗上述提及疾病的药物制剂。用于向温血动物、特别是人肠内施用如经鼻、口含、直肠或特别是口服施用以及胃肠外施用如静脉内、肌内或皮下施用的制剂是特别优选的。该制剂仅含有活性成分或者优选地还含有可药用载体。活性成分的剂量取决于所治疗的疾病以及种属、年龄、体重和个体状况、个体药动学数据以及施用方式。

用于抑制增殖性疾病、优选肿瘤的式I化合物的精确剂量取决于多种因素，包括宿主、所治疗病症的性质和严重程度、施用方式以及所使用的具体化合物。然而通常，当式I化合物以1-300mg/kg体重/周期(一周期＝3-6周)的单剂量或对大多数大型灵长类而言以每治疗周期50-5000mg的单剂量经胃肠外例如腹膜内、静脉内、肌内、皮下、瘤内或经直肠或经肠内施用、如口服、优选静脉内或口服、更优选静脉内施用时，可得到令人满意的对肿瘤的抑制效果。优选的每3-6周的治疗周期静脉内单剂量为1-75mg/kg体重，或者对大部分大型灵长类而言，每日剂量为50-1500mg。典型的静脉内剂量为45mg/kg，每3周一次。

通常，开始给予较小剂量，之后逐渐增加剂量，直到确定治疗宿主的最佳剂量。剂量的上限由副作用确定，并且可通过对所治疗宿主的试验来确定。

本发明还涉及用于预防性或特别是治疗性地治疗人或动物体的方法中的药物制剂、制备该药物制剂(特别是用于治疗肿瘤的组合物形式)的方法以及治疗上述疾病、主要是肿瘤性疾病、特别是上述那些肿瘤性疾病的方法。

本发明还涉及制备含有式I化合物作为活性组分(活性成分)的药物制剂的方法以及式I化合物在制备该药物制剂中的用途。

优选适于施用于患有对微管解聚抑制有响应的疾病、例如银屑病或特别是肿瘤性疾病的温血动物、特别是人或有商业用途的动物的药物组合物，该组合物含有相应有效量的式I化合物或当有成盐基团存在时其可药用盐以及至少一种可药用载体。

同样优选的是用于对需要该治疗、特别是患有肿瘤性疾病或其它增殖性疾病的温血动物、特别是人或有商业用途的哺乳动物预防性或特别是治疗性地治疗所述疾病的药物组合物，该组合物含有对所述疾病预防或特别是治疗活性量的新的式I化合物或其可药用盐作为活性成分。

药物制剂含有约0.000001％至95％的活性成分，其中单剂施用形式优选含有约0.00001％至90％，多剂施用形式当为胃肠外施用制剂时优选含有约0.0001至0.5％，或者当为肠内施用制剂时优选含有1％至20％的活性成分。单位剂型为例如包衣或未包衣的片剂、安瓿、小瓶、栓剂或胶囊。其它剂型为例如软膏、霜剂、糊剂、泡沫剂、酊剂、唇膏、滴剂、喷雾剂或分散体等。实例为含约0.0002g至约1.0g活性成分的胶囊。

本发明的药物制剂以本身已知的方法制备，例如通过常规混合、制粒、包衣、溶解或冷冻干燥法制备。

适于胃肠外施用的制剂主要是水溶形式、例如水溶性盐形式的活性成分的水溶液[例如在生理盐水中，通过将在聚乙二醇如聚乙二醇(PEG)300或PEG400中的溶液稀释获得]或者含有增粘剂如羧甲基纤维素钠、山梨醇和/或葡聚糖以及如果合适的话还含有稳定剂的水性注射混悬液。活性成分、必要时可与赋性剂一起还可以是冻干物的形式，在胃肠外施用之前通过加入适宜的溶剂而还原成溶液。

例如用于胃肠外施用的溶液也可用作输液。

类似地，本发明涉及治疗上述病理状况之一、特别是对微管解聚抑制有响应的疾病、特别是相应的肿瘤性疾病的过程或方法。式I化合物可以以本身或药物组合物的形式预防性或治疗性地优选以对所述疾病有效的量施用于需要该治疗的温血动物、例如人，所述化合物特别地以药物组合物的形式使用。当个体体重为约70kg时，所施用的本发明化合物的剂量为约0.1mg至约1g、优选约0.5m至约200mg。施用优选例如每1至4周、例如每周、每两周、每三周或每四周进行。

本发明还特别涉及式I化合物或其可药用盐、特别是作为优选化合物的式I化合物或其可药用盐本身或含至少一种可药用载体的药物制剂的形式用于治疗性和预防性治疗一种或多种上述疾病的用途。

本发明还特别涉及式I化合物或其可药用盐、特别是作为优选化合物的式I化合物或其可药用盐在制备用于治疗性或预防性治疗一种或多种上述疾病的药物制剂中的用途。

实验部分

概述

除非特别指出，所有反应在氩气气氛下、使用无水溶剂在无水条件下进行。无水溶剂通过使它们通过商业购得的活化氧化铝柱获得。所有所购试剂为最高级的商购质量，并且不需要另外纯化即可使用。反应通常通过在0.25mm E.Merck硅胶板(60F-254)上进行的薄层色谱法监测。E.Merck硅胶(60，粒径0.040-0.063mm)用于快速柱色谱法。制备级薄层色谱法(PTLC)分离在0.25、0.50或1mm E.Merck硅胶板(60F-254)上进行。熔点(mp)未经校正，用Thomas-Hoover Unimelt毛细管熔点仪记录。旋光度用Perkin-Elmer 241旋光仪记录。NMR谱图用Bruker DRX-600、DRX-500、AMX-400或AC-250仪器记录，并且使用残余的未氘化溶剂作为内部参比校准。所有标记的碳原子如C15参考埃坡霉素A(1)的标号(参见图1)。IR谱图用Perkin-Elmer 1600系列FT-IR光谱仪记录。高分辨质谱用PerSeptive Biosystems Voyager^TM IonSpec质谱仪(MALDI-FTMS)或API100 Perkin-Elmer质谱仪(ESI)记录。

埃坡霉素3的合成

乙烯基碘化合物15与锡烷16的Stille偶合

将Pd₂(dba)₃(CHCl₃(3.9mg，3.8μmol)、AsPh₃(4.6mg，15μmol)和CuI(7.2mg，38μmol)在DMF(除气，0.5mL)中的溶液于25℃加入碘化物15(10mg，19μmol)(Nicolaou，K.C.等人，Chem.Eur.J.2000，6，2783-2800)与锡烷16(11mg，38μmol)(Nicolaou，K.C.等人，Bioorg.Med.Chem.1999，7，665-697)在DMF(除气，0.5mL)中的溶液中，将所得溶液搅拌2小时。加入水(10mL)，将混合物用EtOAc(3(10mL))萃取。合并有机相并用水(30mL)和盐水(30mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)。在蒸发挥发性物质后，将残余物通过快速柱色谱法(硅胶，己烷∶EtOAc 2∶1(1∶1))纯化，得到白色固态的埃坡霉素3(7.2mg，72％)；TLC R_f＝0.29(硅胶，己烷∶EtOAc 1∶1)；[α]_D22-53(c 0.51，CH₂Cl₂)；IR(膜)ν_max 3472(br)，2967，2920，1731，1684，1461，1420，1378，1249，1143，1032，973，879，732，667cm^-1；MALDI-FTMS m/z 562.2267(MNa⁺)，C₂₇H₄₁NO₆S₂Na的计算值为562.2267。

醛32的构建

醇23：于0℃搅拌下，向环丙基醇22(4.08g，24mmol)(Charette，A.B.等人，J.Am.Chem.Soc.1998，120，11943-11952)于DMF(40mL)中的溶液中逐份加入氢化钠(1.45g，36mmol，60％，在矿物油中)。于25℃搅拌0.5小时后，将混合物冷却至0℃，将苄基溴(4.3mL，36mmol)在2分钟内加入，于25℃继续搅拌12小时。将反应用NH₄Cl(饱和，50mL)终止，混合物用EtOAc(3(50mL)萃取，合并萃取液并用盐水(2(100mL))洗涤、干燥(Na₂SO₄)并蒸发。将残余物溶于CH₂Cl₂∶MeOH 4∶1(60mL)中，并将溶液于-78℃用臭氧处理(100L/h，约5g O₃/h)21分钟。(注意：必须避免反应较长时间，以防止二苄醚氧化成相应的苯甲酸酯)。过量的臭氧通过充N₂1分钟除去，然后加入少量NaBH₄(2.75g，73mmol)(警告！放热！)，之后加入甲醇(20mL)。将混合物经1小时温热至25℃，加入NH₄Cl(饱和，20mL)终止反应。将混合物用CH₂Cl₂(2(50mL))萃取，合并萃取液并用盐水(100mL)洗涤、干燥(Na₂SO₄)并蒸发。将残余物通过快速色谱法(硅胶，己烷∶EtOAc5∶2)纯化，得到黄色油状的23(5.07g，89％)。TLC R_f＝0.20(硅胶，己烷∶EtOAc 3∶1)；[α]_D22-7.5(c 1.76，CHCl₃)；IR(膜)ν_max 3390(br)，2933，2859，1452，1070，739，698cm^-1；MALDI-FTMS m/z 257.1519(MNa⁺)，C₁₅H₂₂O₂Na的计算值为257.1512。

碘化物24：向环丙基醇23(10.08g，43.0mmol)于无水CH₂Cl₂(100mL)中的0℃溶液中加入甲磺酰氯(4.2mL，54mmol)，之后滴加三乙胺(9.0mL，65mmol)。立即开始形成白色沉淀。将混合物于25℃搅拌1小时，然后加入NH₄Cl(饱和，50mL)和水(50mL)，分离各相。水相用EtOAc(100mL)萃取，合并有机相并用盐水洗涤、干燥(Na₂SO₄)并蒸发。将残余物溶于无水丙酮(200mL)中，加入碘化钠(19.3g，129mmol)。将最初几乎澄清的溶液回流40分钟，在此期间形成白色沉淀。加入水(100mL)，将混合物用乙醚(500+250mL)萃取。合并萃取液，干燥并蒸发，将残余物通过快速色谱法(硅胶，己烷∶EtOAc 5∶1)纯化，得到无色油状的24(14.16g，95％)。TLC R_f＝0.66(硅胶，己烷∶EtOAc 5∶1)；[α]_D22-16(c 2.05，CHCl₃)；IR(膜)ν_max 2916，2848，1453，1217，1098，1073，735，697cm^-1；ESI-MS m/z 367(MNa⁺)，C₁₅H₂₁IONa的计算值为367。

腙26：将n-BuLi(13.1mL，21.0mmol，1.6M，在己烷中)于-78℃加入在THF(10mL)中的二异丙胺(2.94mL，21.0mmol)中，制得LDA溶液，然后将溶液温热至0℃，搅拌10分钟。向该LDA溶液中加入丙醛SAMP腙25(3.32g，19.5mmol)(Nicolaou，K.C.等人，J.Am.Chem.Soc.1997，119，7974-7991；Enders，D.Aymmetric Synth.1984，3，275-339和Enders，D.等人，Synthesis 1996，1403-1418)，并将混合物于0℃搅拌6小时，在此期间形成白色沉淀。将混合物冷却至-98℃(MeOH/N₂(l)浴)，于0.5小时内加入碘化物24(5.16g，15.0mmol)在THF(20mL)中的溶液。然后将反应混合物经14小时温热至-10℃，然后用NH₄Cl(饱和，10mL)终止反应。将混合物用EtOAc(100mL+2(50mL))萃取，合并萃取液、干燥(Na₂SO₄)并蒸发，将残余物通过快速色谱法(硅胶，己烷∶EtOAc 6∶1(4∶1)纯化，得到黄色油状的腙26(4.88g，84％)。TLC R_f＝0.38(硅胶，己烷∶EtOAc 5∶1)；[α]_D22-61(c 1.45，CHCl₃)；IR(膜)ν_max 2926，1454，1097，736，697cm^-1；MALDI-FTMS m/z387.3008(MH⁺)，C₂₄H₃₉N₂O₂的计算值为387.3006。

醛17：将腙26(3.82g，9.9mmol)在碘甲烷(10mL)中的溶液于60℃(回流冷凝)加热3小时，然后冷却至25℃。蒸发过量的碘甲烷，痕量通过油泵真空除去。将残余的黄色浆状物与3N HCl(190mL)和戊烷(190mL)于25℃剧烈搅拌3小时，分离各相，水相用戊烷(100mL)萃取。合并有机相、干燥(Na₂SO₄，NaHCO₃)并蒸发，得到黄色油状的醛17(2.38g，88％)。[α]_D22+2(c 1.3，CHCl₃)；IR(膜)ν_max 2931，2856，1724，1454，1095，1074，736，698cm^-1；MALDI-FTMS m/z 297.1830(MNa⁺)，C₁₈H₂₆O₂Na的计算值为297.1825。

由于C8(埃坡霉素标号)的立体构型不稳定，该醛应当立即用于下一步骤。C8的dr如下评价：将17的样品用在甲醇中的过量NaBH₄处理10分钟。反应用NH₄Cl(饱和)终止，混合物用EtOAc萃取，将萃取液干燥(Na₂SO₄)并蒸发。将残余物用(R)-(-)-MTPACl(2-3当量)、过量三乙胺和在CH₂Cl₂中的4-DMAP处理3小时。通过制备级TLC纯化，得到(S)-MTPA酯样品，其通过¹H NMR分析测得的dr＝97∶3，以C8处经校正的绝对立体构型作为主要的异构体(Tsuda，M.等人，J.Org.Chem.2000，65，1349-1352)。使用(S)-(+)-MTPACl得到类似的结果。

羟醛产物27：将n-BuLi(7.5mL，12mmol，1.6M，在己烷中)于-78℃加入在THF(12mL)中的二异丙胺(1.68mL，12mmol)中，制得LDA溶液，然后将溶液暂时温热至0℃，最终冷却至-78℃。2分钟内滴加酮19(4.63g，11.5mmol)(Nicolaou，K.C.等人，J.Am.Chem.Soc.1997，119，7974-7991)在THF(12mL)中的溶液，并将混合物于-78℃搅拌1小时，然后于-40℃搅拌0.5小时。再次将其冷却至-78℃，通过套管在1分钟内加入预冷却至-78℃的醛17(1.37g，5.0mmol)在THF(25mL)中的溶液，注意确保在转移期间保持升温最少。将混合物搅拌5分钟，然后通过快速注入AcOH(1.4mL)在THF(4.2mL)中的溶液以终止反应。于-78℃5分钟后，将混合物温热至25℃，并在NH₄Cl(饱和，50mL)与乙醚(50mL)之间分配。将水相用乙醚(2(50mL))萃取，合并萃取液、干燥(Na₂SO₄)并蒸发，将残余物通过快速色谱法(硅胶，己烷∶乙醚20∶1(6∶1))纯化，得到回收的酮19(1.71g，4.25mmol)，之后得到非对映纯形式的羟醛产物27(2.73g，81％)。TLC R_f＝0.34(硅胶，己烷∶EtOAc 5∶1)；[α]_D 22-40(c 1.0，CHCl₃)；IR(膜)ν_max 3502(br)，2954，2928，2856，1681，1472，1255，1098，836，776cm^-1；MALDI-FTMS m/z699.4796(MNa⁺)，C₃₉H₇₂O₅Si₂Na的计算值为699.4816。

醇28：将羟醛产物27(2.71g，4.0mmol)与2，6-二甲基吡啶(1.40mL，12mmol)在CH₂Cl₂(25mL)中的溶液冷却至-20℃，然后滴加TBSOTf(1.84mL，8.0mmol)。将混合物于-20℃搅拌1小时，然后加入NH₄Cl(饱和，25mL)终止反应。将混合物温热至25℃，分离各相，将水相用CH₂Cl₂(25mL)和乙醚(25mL)萃取。合并有机相、干燥(Na₂SO₄)并蒸发，将残余物通过硅胶塞、用己烷∶乙醚10∶1洗脱过滤。将滤液蒸发，将所得甲硅烷基醚粗品(3.14g，4.0mmol，99％)溶于THF(40mL)中。于0℃向其中加入HF吡啶配合物(6.4mL)与吡啶(18mL)在THF(32mL)中的冷(0℃)溶液中(该溶液通过于0℃将HF吡啶配合物缓慢加入吡啶在THF中的溶液来制备；警告！HF吡啶具有高度腐蚀性。将HF吡啶加入吡啶-THF溶液时产生大量的热，必须搅拌并在冰浴上冷却，以防止喷溅)，将所得溶液于25℃搅拌4小时。混合物用EtOAc(100mL)稀释、放置在冰浴上、小心加入NaHCO₃(饱和，100mL)以及保证完全中和所需量的固态NaHCO₃来终止反应(警告！起沫)。将混合物用EtOAc(3(100mL))萃取，合并萃取液、干燥(Na₂SO₄)并蒸发，将残余物通过快速色谱法(硅胶，己烷∶EtOAc 5∶1)纯化，得到无色油状的28(2.40g，89％)。TLC R_f＝0.39(硅胶，己烷∶EtOAc 5∶1)；[α]_D22-26(c 1.1，CHCl₃)；IR(膜)ν_max 3458(br)，2929，2856，1693，1472，1462，1255，1093，986，836，775cm^-1；MALDI-FTMS m/z 699.4807(MNa⁺)，C₃₉H₇₂O₅Si₂Na的计算值为699.4816。

酯29：将醇28(2.40g，3.5mmol)、Dess-Martin periodinane(3.75g，8.8mmol)、NaHCO₃(0.74g，8.8mmol)和水(76μL，4.2mmol)在CH₂Cl₂(80mL)中混合，所得悬浮液搅拌1小时。混合物用乙醚(200mL)、水(100mL)和NaHCO₃(饱和，100mL)稀释，然后过滤。分离各相，水相用乙醚(2(100mL))萃取。合并萃取液，干燥(Na₂SO₄)并蒸发，残余物通过硅胶塞、用己烷∶EtOAc 6∶1洗脱过滤。将滤液蒸发，所得醛粗品(2.15g，3.2mmol，90％)溶解于THF(80mL)、t-BuOH(145mL)和2-甲基-2-丁烯(25mL)的混合物中。向该溶液中加入NaH₂PO₄(0.95g，6.7mmol)和NaClO₂(1.14g，10mmol)在水(31mL)中的溶液，所得混合物剧烈搅拌1小时。通过蒸发除去挥发物，使残余物在EtOAc(100mL)和盐水(100mL)之间分配。分离各相，水相用EtOAc(3(100mL))萃取。合并萃取液、干燥(Na₂SO₄)并蒸发，将残余物溶于DMF(5mL)中，再次蒸发除去痕量的t-BuOH。将如此所得的酸粗品(2.4g，约3.2mmol＞100％)再次溶于DMF(10mL)中，向其中加入2-(三甲基甲硅烷基)乙醇(1.83mL，12.7mmol)、EDC(0.92g，4.8mmol)和4-DMAP(40mg，0.33mmol)。将所得悬浮液搅拌14小时，之后得到澄清溶液。加入水(10mL)，混合物用乙醚(3(50mL)萃取。合并萃取液，并用水-盐水混合物(100+100mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)并蒸发。将残余物通过快速色谱法(硅胶，己烷∶EtOAc 10∶1)纯化，得到粘稠浅黄色油状的29(2.08g，74％)。TLC R_f＝0.57(硅胶，己烷∶EtOAc 10∶1)；[α]_D22-33(c 1.2，CHCl₃)；IR(膜)ν_max 2954，2930，2856，1735，1695，1472，1385，1252，1090，988，836，776cm^-1；MALDI-FTMS m/z 813.5315(MNa⁺)，C₄₄H₈₂O₆Si₃Na的计算值为813.5311。

醛30：在二苄醚29(2.08g，2.63mmol)在EtOH∶EtOAc 1∶1(50mL)中的溶液中加入20％Pd(OH)₂/C(2.1g，60％湿度)，将混合物氢化1小时。然后通过硅藻土过滤以除去催化剂，将滤液蒸发，残余物与苯共蒸发以除去痕量的EtOH。将所得醇粗品(1.89g，约2.6mmol，＞100％)溶解于CH₂Cl₂(60mL)中，加入Dess-Martin periodinane(2.76g，6.5mmol)、NaHCO₃(0.55g，6.5mmol)和水(56μL，3.1mmol)，将所得悬浮液搅拌1小时。混合物用乙醚(150mL)、水(75mL)和NaHCO₃(饱和，75mL)稀释，然后过滤。分离各相，水相用乙醚(2(75mL))萃取。合并萃取液、干燥(Na₂SO₄)并蒸发，将残余物通过快速色谱法(硅胶，己烷∶EtOAc 15∶1)纯化，得到粘稠油状的醛30(1.55g，84％)。TLC R_f＝0.24(硅胶，己烷∶EtOAc 15∶1)；[α]_D22-47(c 1.3，CHCl₃)；IR(膜)ν_max 2954，2856，1734，1703，1251，1173，1084，988，837，776cm^-1；MALDI-FTMS m/z 721.4671(MNa⁺)，C₃₇H₇₄O₆Si₃Na的计算值为721.4685。

烯醇醚31：向MeOCH₂PPh₃Cl(3.09g，9.0mmol)于THF(20mL)的0℃溶液中滴加NaHMDS(8.5mL，8.5mmol，1M，在THF中)。出现红色。将混合物于0℃搅拌0.5小时，然后冷却至-40℃。加入醛30(2.12g，3.0mmol)在THF(7mL)中的溶液，将混合物在2小时内温热至-10℃。反应用NH₄Cl(饱和，15mL)终止，分离各相，水相用EtOAc(2(75mL))萃取。合并萃取液、干燥(Na₂SO₄)并蒸发，残余物通过快速色谱法(硅胶，己烷∶EtOAc30∶1)纯化，得到无色粘稠油状的烯醇醚31(1.85g，84％，通过¹H NMR测得烯烃顺式：反式约1∶1)。TLC R_f＝0.23(硅胶，己烷∶EtOAc 30∶1)；[α]_D22-36(c 1.2，CHCl₃)；IR(膜)ν_max 2954，2930，2856，1735，1695，1251，1171，1105，988，836，776cm^-1；MALDI-FTMS m/z 749.4996(MNa⁺)，C₃₉H₇₈O₆Si₃Na的计算值为749.4998。

醛32：向烯醇醚31(847mg，1.16mmol)于二噁烷∶水9∶1(12mL)的溶液中加入对-甲苯磺酸吡啶鎓(2.34g，9.31mmol)，将混合物于70℃搅拌，直到TLC表明反应完全(6-10小时)。然后用NaHCO₃(饱和，15mL)终止反应，混合物用EtOAc(3(50mL))萃取。合并萃取液、干燥(Na₂SO₄)并蒸发，将残余物通过快速色谱法(硅胶，己烷∶EtOAc 15∶1)纯化，得到无色粘稠油状的32(681mg，82％)。TLC R_f＝0.29(硅胶，己烷∶EtOAc 15∶1)；[α]_D22-34(c 1.0，CHCl₃)；IR(膜)ν_max 2954，2856，1731，1695，1251，1086，988，836，776cm^-1；MALDI-FTMS m/z 735.4823(MNa⁺)，C₃₈H₇₆O₆Si₃Na的计算值为735.4842。

乙烯基碘化合物20c-g的构建

2-溴-5-[(三苯甲基氧基)甲基]吡啶34：将三苯甲基氯(3.90g，14mmol)、4-DMAP(2.08g，17mmol)和2-溴-5-羟甲基吡啶33(1.88g，10mmol)(Ellingboe，J.W.等人，J.Med.Chem.1994，37，542-550)溶于DMF(15mL)中，并将溶液于80℃搅拌48小时。在此期间形成白色沉淀。冷却后，将混合物用NaHCO₃(饱和，25mL)稀释，并用EtOAc(3(50mL))萃取。合并萃取液，并用加有几滴NaOH(1M)的盐水(2(100mL))萃取。在干燥并蒸发后，将固态残余物通过快速色谱法(硅胶，己烷∶EtOAc 15∶1)纯化，得到白色固态34(4.46g，100％)。TLC R_f＝0.30(硅胶，己烷∶EtOAc 15∶1)；IR(膜)ν_max 3057，1448，1086，764，700，632cm^-1；MALDI-FTMS m/z 430.0792(MH⁺)，C₂₅H₂₁BrNO的计算值为430.0801。

芳基溴(34、37、38和39)与丙炔的Sonogashira偶合(通用方法)：

在Ar(g)下，向芳基溴34、37、38或39(3.5mmol)于DMF(3mL)和二异丙胺(2.5mL)中的暂时去氧(充Ar)溶液中加入Pd(PPh₃)₂Cl₂(25mg，36μmol)和CuI(13mg，70μmol)，然后用丙炔(1atm，球形瓶)替换该惰性气氛。将混合物于25℃搅拌3小时。在此期间形成沉淀，并且反应混合物转化为深棕色。加入水(15mL)，将混合物用EtOAc萃取，合并萃取液、干燥(Na₂SO₄)并蒸发。通过快速色谱法(硅胶，己烷∶EtOAc混合物)得到纯的1-芳基丙炔。

丙炔基吡啶35：褐色泡沫(96％)；TLC R_f＝0.23(硅胶，己烷∶EtOAc5∶1)；IR(膜)ν_max 3057，2229，1594，1560，1478，1448，1075，702cm^-1；MALDI-FTMS m/z 390.1851(MH⁺)，C₂₈H₂₄NO的计算值为390.1852。

吡啶36：将三苯甲基醚35(1.38g，3.54mmol)在CHCl₃(15mL)中的溶液冷却至0℃，然后用HCl(g)饱和。于0℃1小时后，加入NaHCO₃(饱和，50mL)终止反应，分离各相。水相用CH₂Cl₂(50mL)萃取，合并有机相、干燥(Na₂SO₄)并蒸发。通过快速色谱法(硅胶，己烷∶EtOAc 1∶2+5％MeOH)得到黄色粘稠油状的5-羟甲基-2-丙-1-炔基吡啶(0.36g，69％)。TLC R_f＝0.29(硅胶，己烷∶EtOAc 1∶2+5％MeOH)；IR(膜)ν_max 3262，2916，2230，1596，1561，1023，838cm^-1；MALDI-FTMS m/z 148.0754(MH⁺)，C₉H₁₀NO的计算值为148.0757。向该醇(0.40g，2.7mmol)在THF(10mL)中的0℃溶液中加入NaH(0.13g，3.3mmol，60％，在油中)。搅拌5分钟后，加入氯甲基甲醚(0.25mL，3.3mmol)，并将混合物于0℃搅拌1小时。然后用NaCl(饱和)终止反应，并加入几滴NaOH(1M)。混合物用EtOAc(3(50mL))萃取，合并萃取液、干燥(Na₂SO₄)并蒸发，将残余物通过快速色谱法(硅胶，己烷∶EtOAc 1∶1)纯化，得到浅黄色油状的36(0.26g，50％)。TLC R_f＝0.41(硅胶，己烷∶EtOAc 1∶1)；IR(膜)ν_max 2947，2230，1595，1560，1478，1149，1104，1047，919，830cm^-1；MALDI-FTMS m/z 192.1014(MH⁺)，C₁₁H₁₄NO₂的计算值为192.1019。

37的Sonogashira偶合产物：反应非常缓慢，可能由于Pd与硫醚部分配位；因此，使用10mol％Pd(PPh₃)₂Cl₂和20mol％CuI。得到棕色油状的产物(42％)。TLC R_f＝0.37(硅胶，己烷∶EtOAc 15∶1)；IR(膜)ν_max 3110，2914，2240，1493，1417，1278，1037，966，735cm^-1；MALDI-FTMS m/z170.0092(MH⁺)，C₇H₈NS₂的计算值为170.0093。

38的Sonogashira偶合产物：棕色油(97％)；TLC R_f＝0.21(硅胶，己烷∶EtOAc 5∶1)；IR(膜)ν_max 2908，2226，1567，1531，1461，1431，1361，1108，1008，832cm^-1；MALDI-FTMS m/z 164.0527(MH⁺)，C₉H₁₀NS的计算值为164.0528。

39的Sonogashira偶合产物：黄色油(70％)；TLC R_f＝0.36(硅胶，己烷∶EtOAc 20∶1)；IR(膜)ν_max 2924，2231，1566，1554，1431，1156，1140，790cm^-1；MALDI-FTMS m/z 164.0526(MH⁺)，C₉H₁₀NS的计算值为164.0528。

锡氢化(Hydrostannylation)-碘化反应(通用方法)：

这是对以前报道的方法(Betzer，J.-F.等人，Tetrahedron Lett.1997，38，2279-2282)的修改。向六丁基锡(hexabutylditin)(10.1mL，20mmol)于无水THF(40mL)的-78℃溶液中加入n-BuLi(12.9mL，20mmol，1.55M，在己烷中)，并将所得澄清溶液于-40℃搅拌30分钟。然后将其通过套管转移至CuCN(0.90g，10mmol)在THF(2mL)中的-78℃悬浮液中。形成澄清黄色溶液，该溶液于-40℃搅拌5分钟，之后重新冷却至-78℃。然后加入无水甲醇(23mL，0.57mol)，生成红色溶液，将红色溶液于-40℃搅拌15分钟，之后加入芳基丙炔(5.0mmol)在THF(5mL)中的溶液。将该桔红色溶液于-10℃搅拌过夜(沉淀出一些Cu和/或Cu²⁺盐)，然后冷却至-20℃，之后加入甲醇(10mL)。于-20℃15分钟后，加入水(10mL)，在继续搅拌15分钟，同时温热至25℃。混合物用乙醚萃取，有机相用盐水洗涤、干燥(Na₂SO₄)并蒸发，通过快速色谱法(硅胶，己烷∶EtOAc混合物)得到中间体乙烯基锡烷，将其溶解于CH₂Cl₂(5mL)中。然后于0℃将碘(1.05当量)在CH₂Cl₂(每克I₂，40mL)中的溶液滴加入该溶液中。在最后几滴之后，I₂颜色固定，使反应于0℃继续进行5分钟。接着将溶剂蒸发，残余物溶解于乙醚中。加入KF(在水中的1M溶液，3当量)和Na₂S₂O₃(饱和，每mmol底物10mL)，混合物于25℃搅拌15分钟，在此期间形成白色沉淀。混合物通过硅藻土过滤，有机相干燥(Na₂SO₄)并蒸发。将残余物通过快速色谱法(硅胶，己烷∶EtOAc混合物)纯化，得到预期的乙烯基碘化合物。

乙烯基碘化合物20c：白色浑浊薄膜(80％)。TLC R_f＝0.25(硅胶，己烷∶EtOAc 20∶1)；IR(膜)ν_max 3060，2919，1619，1596，1484，1443，1373，1214，1061，985，873，761，703，632cm^-1；MALDI-FTMS m/z 518.0990(MH⁺)，C₂₈H₂₅INO的计算值为518.0975。

乙烯基碘化合物20d.：黄色油(67％)。TLC R_f＝0.51(硅胶，己烷∶EtOAc4∶1)；IR(膜)ν_max 2924，1716，1619，1596，1481，1372，1211，1149，1102，1045，918，873，609，517cm^-1；MALDI-FTMS m/z 320.0142(MH⁺)，C₁₁H₁₅INO₂的计算值为320.0142。

乙烯基碘化合物20e：中间体乙烯基锡烷易于脱甲锡烷基(protodestannylated)；因此，该中间体的快速色谱法必须使用己烷∶EtOAc∶Et₃N 50∶1∶1作为洗脱液进行，如此所得的乙烯基锡烷含有其它丁基锡化合物。按照通用方法，混合物用足够的I₂(约2当量I₂)处理，以在加入结束后仍保留有棕色。在快速色谱法(己烷∶EtOAc 50∶1)之后，得到黄色油状的乙烯基碘化合物20e(74％)。TLC R_f＝0.41(硅胶，己烷∶EtOAc50∶1)；IR(膜)ν_max 3102，2923，1620，1423，1300，1065，1035，964，863，723，562cm^-1；MALDI-FTMS m/z 297.9215(MH⁺)，C₇H₉INS₂的计算值为297.9216。

乙烯基碘化合物20f：黄色固体(80％)。TLC R_f＝0.19(硅胶，己烷∶EtOAc 40∶1)；IR(膜)ν_max 2919，1619，1567，1467，1431，1373，1108，1067，1014，961，867，820，521cm^-1；MALDI-FTMS m/z 291.9655(MH⁺)，C₉H₁₁INS的计算值为291.9651。

乙烯基碘化合物20g：黄色油(83％)。TLC R_f＝0.28(硅胶，己烷∶EtOAc40∶1)；IR(膜)ν_max 2919，1620，1549，1425，1155，1138，1061，991，961，861，785，732，550cm^-1；MALDI-FTMS m/z 291.9653(MH⁺)，C₉H₁₁INS的计算值为291.9651。

埃坡霉素类似物8-144的合成

醛(34、40)与乙烯基锡烷(20a-g)的Nozaki-Hiyama-Kishi偶合反应(通用方法)：向醛32(107mg，0.15mmol)、必需的乙烯基碘化合物20(0.45mmol)以及4-叔丁基吡啶(665μL，4.5mmol)于DMSO(3mL)中的暂时真空除气溶液中加入无水CrCl₂(184mg，1.5mmol)和无水NiCl₂(4mg，0.03mmol)。将混合物于25℃搅拌3小时，之后加入另一份乙烯基碘化合物(0.45mmol)，继续搅拌3小时。重复该操作一次，之后搅拌过夜。然后用水(5mL)终止反应，加入吡啶(1mL)以防止Cr-产物配合物被萃取入水相，混合物用EtOAc(3(25mL)萃取。合并萃取液并用盐水(2(100mL))洗涤、干燥(Na₂SO₄)并蒸发。进行快速色谱法(硅胶，己烷∶EtOAc混合物)得到偶合产物，在大多数情形下该产物不能从过量的4-叔丁基吡啶中分离。

20a和32的产物：黄色油(85％，为C15差向异构体的约1∶1混合物)。TLC R_f＝0.26(硅胶，己烷∶EtOAc 4∶1)；[α]_D22-25(c 0.36，CH₂Cl₂)；IR(膜)ν_max 2943，2860，1731，1696，1467，1384，1290，1249，1173，1079，985，832，773cm^-1；MALDI-FTMS m/z 860.5128(MNa⁺)，C₄₄H₈₃NO₆SSi₃Na的计算值为860.5141。

20b和32的产物：该偶合产物不能从4-叔丁基吡啶中分离，以粗混合物形式进行TBAF脱保护(见下文)。

20d和32的产物：该偶合产物不能从4-叔丁基吡啶中分离，以粗混合物形式进行TBAF脱保护(见下文)。

20e和32的产物：黄色玻璃状(78％，为C15差向异构体的约1∶1混合物)。TLC R_f＝0.40(硅胶，己烷∶EtOAc 5∶1)；[α]_D22-28(c 2.0，CHCl₃)；IR(膜)ν_max 3416(br)，2929，2856，1732，1694，1472，1251，1037，988，836，776cm^-1；MALDI-FTMS m/z 906.5021(MH⁺)，计C₄₅H₈₅NO₆S₂Si₃Na的计算值为906.5018。

20f和32的产物：该偶合产物不能从4-叔丁基吡啶中分离，以粗混合物形式进行TBAF脱保护(见下文)。

20g和32的产物：该偶合产物不能从4-叔丁基吡啶中分离，以粗混合物形式进行TBAF脱保护(见下文)。

20c和40的产物：黄色玻璃状(87％，由醛40两步得到，为C15差向异构体的约1∶1混合物)。TLC R_f＝0.15(硅胶，己烷∶EtOAc 4∶1)；[α]_D22-23(c 0.19，CH₂Cl₂)；IR(膜)ν_max 2931，2861，1731，1690，1467，1384，1355，1249，1167，1061，985，832，773，703cm^-1；MALDI-FTMS m/z 1112.6634(MNa⁺)，C₆₅H₉₉NO₇Si₃Na的计算值为1112.6621。

20e和40的产物：无色玻璃状(59％，为C15差向异构体的约1∶1的混合物)。TLC R_f＝0.27(硅胶，己烷∶EtOAc 5∶1)；[α]_D22-28(c 2.0，CHCl₃)；IR(膜)ν_max 3396(br)，2928，2855，1734，1693，1472，1251，1037，988，836，775cm^-1；MALDI-FTMS m/z 892.4861(MNa⁺)，C₄₄H₈₃NO₆S2Si₃Na的计算值为892.4862。

TBAF脱保护(通用方法)：将Nozaki-Hiyama-Kishi偶合的产物混合物溶于THF(1.5mL)中，于0℃加入TBAF(1M，在THF中，0.30mL，0.30mmol)。在0℃1小时后，加入另一份TBAF(0.30mL，0.30mmol)，将混合物于25℃搅拌1小时。用NH₄Cl(饱和，5mL)终止反应，混合物用EtOAc(4(20mL))萃取。合并萃取液、干燥(Na₂SO₄)并蒸发，将残余物通过快速色谱法(硅胶，己烷∶EtOAc混合物)纯化，得到所希望的羟酸，为C15差向异构体的约1∶1混合物(在该阶段不可分开)。

羟酸41a：将脱保护的反应混合物快速通过硅胶塞过滤，将该粗产物(73％产率，由醛32得到)不经进一步纯化即进行Yamaguchi大环内酯化反应(见下文)。

羟酸41b：黄色固体(57％，为C15差向异构体的约1∶1混合物)。TLCR_f＝0.19(硅胶，己烷∶EtOAc 2∶1)；[α]_D22-6(c 1.0，CHCl₃)；IR(膜)ν_max 3369(br)，2930，2857，1783，1694，1471，1251，1085，1084，988，836，775cm^-1；MALDI-FTMS m/z 768.5028(MNa⁺)，C₄₂H₇₅NO₆Si₂Na的计算值为768.5025。

羟酸41d：黄色玻璃状(49％，由醛32两步得到，为C15差向异构体的约1∶1混合物)。TLC R_f＝0.20(硅胶，己烷∶EtOAc 1∶1)；[α]_D22+1(c 0.19，CH₂Cl₂)；IR(膜)ν_max 2933，2858，1694，1600，1563，1463，1382，1357，1251，1145，1096，1046，989，834，772，666cm^-1；MALDI-FTMS m/z 806.5437(MH⁺)，C₄₄H₈₀NO₈Si₂的计算值为806.5417。

羟酸41e：黄色固体(79％，为C15差向异构体的约1∶1混合物)。TLCR_f＝0.37(硅胶，己烷∶EtOAc 2∶1)；[α]_D22-23(c 2.3，CHCl₃)；IR(膜)ν_max3356(br)，2929，2856，1712，1472，1253，1085，1038，988，836，776cm^-1；MALDI-FTMS m/z 806.4282(MNa⁺)，C₄₀H₇₃NO₆S₂Si₂Na的计算值为806.4315。

羟酸41f：无色玻璃状(63％，为C15差向异构体的约1∶1混合物)。TLCR_f＝0.21(硅胶，己烷∶EtOAc 2∶1)；[α]_D22-3(c 0.44，CH₂Cl₂)；IR(膜)ν_max2933，2858，1693，1467，1253，1086，984，833，774cm^-1；MALDI-FTMS m/z800.4754(MNa⁺)，C₄₂H₇₅NO₆SSi₂Na的计算值为800.4746。

羟酸41g：黄色玻璃状(46％，由醛32两步得到，为C15差向异构体的约1∶1混合物)。TLC R_f＝0.46(硅胶，己烷∶EtOAc 2∶1)；[α]_D22-11(c 0.19，CH₂Cl₂)；IR(膜)ν_max 2933，2858，1706，1557，1463，1426，1364，1251，1083，989，834，772，666cm^-1；MALDI-FTMS m/z 800.4746(MNa⁺)，C₄₂H₇₅NO₆SSi₂Na的计算值为800.4746.

羟酸42c：将脱保护的反应混合物快速通过硅胶塞过滤，该粗产物(46％产率，由醛32得到)不经进一步纯化即进行Yamaguchi大环内酯化反应(见下文)。

羟酸42e：浅黄色玻璃状(66％，为C15差向异构体的约1∶1混合物)。TLC R_f＝0.39(硅胶，己烷∶EtOAc 2∶1)；[α]_D22-20(c 1.0，CHCl₃)；IR(膜)ν_max 3354(br)，2928，2856，1713，1471，1253，1087，988，836，775cm^-1；MALDI-FTMS m/z 792.4161(MNa⁺)，C₃₉H₇₁NO₆S₂Si₂Na的计算值为792.4153。

Yamaguchi大环内酯化反应(通用方法)：向羟酸(95μmol)于无水THF(8mL)中的0℃溶液中加入三乙胺(79μl，0.57mmol)和2，4，6-三氯苯甲酰氯(40μl，0.23mmol)。在0℃搅拌1小时后，于75℃将所得溶液用注射器泵在2小时内加入4-DMAP(26mg，0.21mmol)在甲苯(20mL)中的溶液中。于75℃继续搅拌1小时，之后减压蒸发甲苯。将残余物直接进行快速色谱法(硅胶，己烷∶EtOAc混合物)，得到大环内酯及其(15R)-差向异构体，易于分离。在所有情形下，所希望的(15S)-差向异构体在极性较弱的(15R)-差向异构体之后被洗脱。

大环内酯43a：无色玻璃状(28％，由醛32与乙烯基碘化合物20a的Nozaki-Hiyama-Kishi偶合产物两步得到)；TLC R_f＝0.21(硅胶，己烷∶EtOAc 20∶1)；[α]_D22-33(c 0.56，CH₂Cl₂)；IR(膜)ν_max 2932，2855，1739，1689，1465，1383，1252，1181，1153，1099，1066，1017，984，869，836，776cm^-1；MALDI-FTMS m/z 734.4639(MH⁺)，C₄₀H₇₂NO₅SSi₂的计算值为734.4664。

大环内酯43b：无色玻璃状(28％)；TLC R_f＝0.27(硅胶，己烷∶EtOAc10∶1)；[α]_D22-28(c 1.0，CHCl₃)；IR(膜)ν_max 2929，2856，1740，1695，1472，1384，1253，1100，1020，986，836，775cm^-1；MALDI-FTMS m/z 728.5109(MH⁺)，C₄₂H₇₄NO₅Si₂的计算值为728.5106。

大环内酯43d：黄色玻璃状(35％)；TLC R_f＝0.14(硅胶，己烷∶EtOAc6∶1)；[α]_D22-28(c 0.12，CH₂Cl₂)；IR(膜)ν_max 2931，2861，1737，1690，1596，1467，1378，1249，1149，1102，1049，985，832，773cm^-1；MALDI-FTMS m/z810.5116(MNa⁺)，C₄₄H₇₇NO₇Si₂Na的计算值为810.5130。

大环内酯43e：该产物以粗混合物形式分离，不经进一步纯化直接进行Global脱甲硅烷基化反应(见下文)。

大环内酯43f：无色玻璃状(45％)；TLC R_f＝0.20(硅胶，己烷∶EtOAc10∶1)；[α]_D22-0.30(c 0.10，CH₂Cl₂)；IR(膜)ν_max 2933，285，1737，1668，1463，1382，1357，1251，1102，1015，983，871，834，772cm^-1；MALDI-FTMS m/z760.4799(MH⁺)，C₄₂H₇₄NO₅SSi₂的计算值为760.4820。

大环内酯43g：黄色玻璃状(37％)；TLC R_f＝0.47(硅胶，己烷∶EtOAc10∶1)；[α]_D22-14(c 0.31，CHCl₃)；IR(膜)ν_max 2929，2856，1740，1696，1557，1461，1431，1379，1250，1099，107，979，836，774cm^-1；MALDI-FTMS m/z760.4802(MH⁺)，C₄₂H₇₄NO₅SSi₂的计算值为760.4820。

大环内酯44c：无色玻璃状(33％，由醛40与乙烯基碘化合物20c的Nozaki-Hiyama-Kishi偶合产物两步得到)；TLC R_f＝0.46(硅胶，己烷∶EtOAc 10∶1)；[α]_D22-17(c 0.56，CH₂Cl₂)；IR(膜)ν_max 2931，2861，1743，1696，1467，1378，1249，1161，1073，1020，985，873，833，773，703，579cm^-1；MALDI-FTMS m/z 972.5969(MH⁺)，C₆₀H₈₆NO₆Si₂的计算值为972.5988。

大环内酯44e：无色玻璃状(47％)；TLC R_f＝0.31(硅胶，己烷∶EtOAc15∶1)；[α]_D22-19(c 0.50，CHCl₃)；IR(膜)ν_max 2929，2855，1741，1697，1472，1254，1102，1036，986，836，775cm^-1；MALDI-FTMS m/z 774.4056(MNa⁺)，C₃₉H₆₉NO₅S₂Si₂Na的计算值为774.4048。

Global脱甲硅烷基化反应(通用方法)：将大环内酯溶于在CH₂Cl₂中的20％v/v TFA，将溶液于25℃放置3小时，之后不经加热蒸发挥发物。将残余物溶于EtOAc中，该溶液用NaHCO₃(饱和)洗涤、干燥(Na₂SO₄)并蒸发。经快速色谱法(硅胶，己烷∶EtOAc混合物)得到纯的埃坡霉素。

埃坡霉素6：无色玻璃状(73％)；TLC R_f＝0.25(硅胶，己烷∶EtOAc2∶1)；[α]_D22-34(c 0.11，CH₂Cl₂)；IR(膜)ν_max 3472(br)，2931，1732，1684，1456，1378，1258，1179，1149，1067，1043，1012，973，873，732cm^-1；MALDI-FTMS m/z 506.2931(MH⁺)，C₂₈H₄₄NO₅S的计算值为506.2935。

埃坡霉素8：无色玻璃状(48％)；TLC R_f＝0.52(硅胶，己烷∶EtOAc1∶1)；[α]_D22-54(c 0.30，CHCl3)；IR(膜)ν_max 3445(br)，2936，1732，1682，1454，1383，1259，756cm^-1；MALDI-FTMS m/z 500.3369(MH⁺)，C₃₀H₄₆NO₅的计算值为500.3376。

埃坡霉素10：通用方法不能将MOM保护基团完全裂解。因此，该基团首先使用溴三甲基甲硅烷如下除去：向被保护的埃坡霉素43d(11mg，14μmol)于无水CH₂Cl₂(0.4mL)中的溶液中加入粉末化的4MS(5mg)，并将所得混合物冷却至-30℃。滴加溴三甲基甲硅烷(18.4μL，140μmol)，将混合物于-30℃搅拌1小时，之后用NaHCO₃(饱和)终止反应，并用EtOAc萃取五次。合并萃取液、干燥并蒸发，对残余物进行常规的脱甲硅烷基操作，得到无色玻璃状的10(56％)；TLC R_f＝0.42(硅胶，己烷∶EtOAc 1∶4)；[α]_D22-52(c 0.12，CH₂Cl₂)；IR(膜)ν_max 3401(br)，2931，1731，1684，1596，1561，1461，1378，1331，1290，1255，1173，1149，1044，1008，979，879，732cm^-1；MALDI-FTMS m/z 516.3330(MH⁺)，C₃₀H₄₆NO₆的计算值为516.3319。

埃坡霉素12：粘稠油(17％，由41e得到)；TLC R_f＝0.38(硅胶，己烷∶EtOAc 2∶1)；[α]_D22-52(c 0.50，CHCl₃)；IR(膜)ν_max 3490(br)，2933，1732，1686，1255，1038，756cm^-1；MALDI-FTMS m/z 538.2666(MH⁺)，C₂₈H₄₄NO₅S₂的计算值为538.2655。

埃坡霉素13：无色玻璃状(68％)；TLC R_f＝0.57(硅胶，己烷∶EtOAc1∶1)；[α]_D22-46(c 0.34，CH₂Cl₂)；IR(膜)ν_max 3484(br)，2932，1731，1684，1469，1367，1255，1150，1044，1009，973，879，826，732cm^-1；MALDI-FTMSm/z 554.2915(MNa⁺)，C₃₀H₄₅NO₅Sna的计算值为554.2910。

埃坡霉素14：无色玻璃状(48％)；TLC R_f＝0.42(硅胶，己烷∶EtOAc2∶1)；[α]_D22-38(c 0.34，CH₂Cl₂)；IR(膜)ν_max 3478(br)，2930，1732，1682，1556，1434，1378，1257，1149，1137，1067，1044，1012，979，785，732cm^-1；MALDI-FTMS m/z 532.3078(MH⁺)，C₃₀H₄₅NO₅S的计算值为532.3091。

埃坡霉素9：无色玻璃状(54％)；TLC R_f＝0.13(硅胶，己烷∶EtOAc1∶2)；[α]_D22-24(c 0.14，CH₂Cl₂)；IR(膜)ν_max 3379，2920，2857，1725，1688，1600，1459，1370，1255，1151，1047，1010，979，880，734cm^-1；MALDI-FTMSm/z 524.3004(MNa⁺)，C₂₉H₄₃NO₆Na的计算值为524.2982。

埃坡霉素11：无色玻璃状(68％)；TLC R_f＝0.28(硅胶，己烷∶EtOAc2∶1)；[α]_D22-26(c 0.30，CHCl₃)；IR(膜)ν_max 3444(br)，2925，1731，1693，1454，1258，1037，756cm^-1；MALDI-FTMS m/z 546.2330(MNa⁺)，C₂₇H₄₁NO₅S₂Na的计算值为546.2318。

化合物48：R_f＝0.19(硅胶，乙酸乙酯/己烷＝3/7)；[α]_D ²⁰-19.3(c 0.14，CH₂Cl₂)；IR(膜)：ν_max 3484(br)，2932，1729，1459，1375，1249，1043，982，733cm^-1；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ＝6.97(s，1H)，6.47(s，1H)，5.25(dd，J＝5.7，7.1Hz，1H)，4.04(dd，J＝3.0，8.1Hz，1H)，3.91(dd，J＝4.1，4.1Hz，1H)，3.23(m，1H)，2.69(s，3H)，2.52(dd，J＝8.4，14.9Hz，1H)，2.46(dd，J＝2.6，14.9Hz，1H)，2.11(s，3H)，2.04(dd，J＝4.0，14.5Hz，1H)，1.66-1.72(m，1H)，1.44-1.62(m，4H)，1.36(s，3H)，1.22-1.35(m，2H)，1.17(d，J＝7.5Hz，3H)，1.16(s，3H)，1.04-1.15(m，1H)，0.99(d，J＝7.0Hz，3H)，0.97(s，3H)，0.48(m，1H)，0.40(dd，J＝3.9，8.8Hz，1H)，-0.11ppm(br t，J＝4.6Hz，1H)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)：δ＝221.5，171.1，165.7，152.9，138.6，120.1，116.2，82.0，73.8，73.2，52.0，42.9，39.4，36.5，35.0，33.2，31.6，24.6，23.5，22.54，22.49，21.1，20.8，19.4，17.4，16.8，15.0，13.2ppm；MALDI-FTMS：m/z538.2632(MH⁺)，C₂₈H₄₄NO₅S₂的计算值为538.2655。

化合物50：R_f＝0.27(硅胶，乙酸乙酯/己烷＝1/1)；[α]_D ²⁰-61(c 0.12，CH₂Cl₂)；MALDI-FTMS：m/z 500.3376(MH⁺)，C₃₀H₄₆NO₅的计算值为500.3370。

化合物51：R_f＝0.37(硅胶，乙酸乙酯/己烷＝1/1)；[α]_D ²⁰-44(c 0.14，CH₂Cl₂)；MALDI-FTMS：m/z 554.2604(MH⁺)，C₂₈H₄₄NO₆S₂的计算值为554.2604。

化合物52：R_f＝0.31(硅胶，乙酸乙酯/己烷＝1/1)；[α]_D ²⁰-32(c 0.33，CH₂Cl₂)；MALDI-FTMS：m/z 608.2334(MH⁺)，C₂₈H₄₁F₃NO₆S₂的计算值为608.2322。

化合物53：R_f＝0.38(硅胶，乙酸乙酯/己烷＝1/1)；[α]_D ²⁰-43(c 0.12，CH₂Cl₂)；MALDI-FTMS：m/z 568.2777(MH⁺)，C₂₉H₄₆NO₆S₂的计算值为568.2761。

化合物54：R_f＝0.27(硅胶，乙酸乙酯/己烷＝1/1)；[α]_D ²⁰-28(c 0.26，CH₂Cl₂)；MALDI-FTMS：m/z 628.2376(MH⁺)，C₃₁H₄₃NO₇S₂Na的计算值为628.2373。

化合物55：R_f＝0.24(硅胶，乙酸乙酯/己烷＝1/1)；[α]_D ²⁰-49(c 0.45，CH₂Cl₂)；MALDI-FTMS：m/z 566.2116(MH⁺)，C₂₈H₄₁BrNO₆的计算值为566.2112。

化合物56：R_f＝0.36(硅胶，乙酸乙酯/己烷＝1/1)；[α]_D ²⁰-27(c 0.15，CH₂Cl₂)；MALDI-FTMS：m/z 544.24 19(MH⁺)，C₂₈H₄₀ClNO₆Na的计算值为544.2436。

化合物57：R_f＝0.28(硅胶，乙酸乙酯/己烷＝1/1)；[α]_D ²⁰-49(c 0.45，CH₂Cl₂)；MALDI-FTMS：m/z 534.2907(MH⁺)，C₂₉H₄₄NO₆S的计算值为534.2884。

化合物58：R_f＝0.35(硅胶，乙酸乙酯/己烷＝1/1)；[α]_D ²⁰-50(c 0.62，CH₂Cl₂)；MALDI-FTMS：m/z 556.2724(MH⁺)，C₂₉H₄₃NO₆SNa的计算值为556.2703。

化合物59：R_f＝0.37(硅胶，乙酸乙酯/己烷＝1/1)；[α]_D ²⁰-34(c 0.24，CH₂Cl₂)；MALDI-FTMS：m/z 556.2891(MH⁺)，C₂₉H₄₁F₃NO₆的计算值为556.2880。

化合物60：R_f＝0.34(硅胶，乙酸乙酯/己烷＝1/1)；[α]_D ²⁰-33(c 0.80，CH₂Cl₂)；MALDI-FTMS：m/z 535.2820(MH⁺)，C₂₈H₄₃N₂O₆S的计算值为535.2836。

实施例：软胶囊

如下制备5000粒软明胶胶囊，每粒胶囊含0.05g前述实施例中定义的式I化合物、例如实施例1、2、3或4的化合物之一作为活性成分：

组成

活性成分 250g

Lauroglycol 2升

制备方法：将研细的活性成分悬浮于Lauroglycol^(丙二醇月桂酸酯，GattefosséS.A.，Saint Priest，法国)中，并在湿粉碎器中研磨成粒径为约1至3μm。然后通过胶囊填充机将每份含0.419g该混合物的部分填充入软明胶胶囊中。

实施例：输液

将实施例1、2、3或4的化合物以1mg/ml的浓度溶解于聚乙二醇300(PEG 300)中并填充入2ml小瓶。用于输注时，将该溶液用50至100ml根据美国药典的0.9％盐水稀释。

附图详述

图2的图表说明了于37℃时在微管结合位点(50nM)竞争性配体对荧光紫杉烷Flutax-2(50nM)的替换。圆点表示所获得的数据点，描绘曲线以给出每种竞争性配体的结合平衡常数的最适值，假定对同一位点一对一结合。所测定的配体为紫杉醇(Taxol^)(深蓝色)、埃坡霉素A(1)(红色)、埃坡霉素B(2)(紫色)、化合物3(黄色)、化合物4(浅棕色)和化合物8(绿色)。所选择的埃坡霉素类似物(3、4和8)的代表性曲线在该图中给出，用于举例说明如何测定表3中每种化合物的亲合性。

图3显示了通过Stille偶合来合成2-(甲硫基)噻唑埃坡霉素B(3)。试剂和条件：Pd₂(dba)₃ CHCl₃(0.2当量)、CuI(2.0当量)、AsPh₃(0.8当量)，DMF，25℃，80％。dba＝二苯亚甲基丙酮。

图5显示了醛32的构建。试剂和条件：(a)参见Nicolaou，K.C.等人，ChemBioChem 2001，2，69-75；Charette，A.B.等人，J.Am.Chem.Soc.1998，120，11943-11952；(b)NaH(1.5当量)、BnBr(1.5当量)，DMF，0→25℃，12小时；(c)O₃，CH₂Cl₂∶MeOH 4∶1，-78℃，21分钟；然后NaBH₄(3.0当量)，-78℃→25℃，1小时，两步，89％；(d)MsCl(1.3当量)，Et₃N(1.5当量)，CH₂Cl₂，25℃，1小时；(e)NaI(3.0当量)，丙酮，回流，40分钟，两步，95％；(f)LDA(1.4当量)、25(1.3当量)，THF，0℃，6小时；然后24，-98℃→-10℃，14小时，84％；(g)MeI，60℃，3小时；(h)3N HCl∶戊烷1∶1，25℃，3小时，两步，88％；(i)LDA(2.4当量)、19(2.3当量)，THF，-78℃，1小时；然后-40℃，0.5小时；然后17，于-78℃，5分钟，81％；(j)TBSOTf(2.0当量)，2，6-二甲基吡啶(3.0当量)，CH₂Cl₂，-20℃，1小时；(k)HF·py，吡啶，THF，25℃，4小时，两步，89％；(l)DMP(2.5当量)、NaHCO₃(2.5当量)、H₂O、CH₂Cl₂，25℃，1小时；(m)NaClO₂(3.1当量)，NaH₂PO₄(2.1当量)，2-甲基-2-丁烯(74当量)，t-BuOH，THF，H₂O，25℃，1小时；(n)2-(三甲基甲硅烷基)乙醇(4.0当量)、EDC(1.5当量)、4-DMAP(0.1当量)，DMF，25℃，14小时，3步，74％；(o)20％Pd(OH)₂/C、H₂(1atm)、EtOH∶EtOAc 1∶1，25℃，1小时；(p)DMP(2.5当量)、NaHCO₃(2.5当量)、H₂O、CH₂Cl₂，25℃，1小时，2步，84％；(q)MeOCH₂PPh₃Cl(3.0当量)、NaHMDS(2.8当量)，THF，-40℃→-10℃，2小时，84％；(r)PPTS(8.0当量)、二噁烷∶H₂O 9∶1，70℃，6小时，82％。4-DMAP＝4-(二甲氨基)吡啶；DME＝1，2-二甲氧基-乙烷；DMP＝Dess-Martin periodinane；EDC＝1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐；HF·py＝氟化氢吡啶配合物；NaHMDS＝六甲基二硅烷钠；PPTS＝对-甲苯磺酸吡啶鎓；TMSE＝2-三甲基甲硅烷基乙基。

图6显示了乙烯基碘化合物20c-g的构建。试剂和条件：(a)TrCl(1.4当量)、4-DMAP(1.7当量)，DMF，80℃，48小时，100％；(b)Pd(PPh₃)₂Cl₂(0.01当量)、CuI(0.02当量)、HCéCCH₃(1atm)，DMF，i-Pr₂NEt，25℃，3小时，35∶96％；(c)(i)n-BuLi(4.0当量)、(n-Bu₃Sn)₂(4.0当量)、CuCN(2.0当量)、MeOH，THF，-10℃，12小时；(ii)I₂(1.05当量)，CH₂Cl₂，0℃，5分钟，20c∶80％，由35得到；20d∶67％，由36得到；20e∶37％，由37得到；20f∶97％，由38得到；20g∶58％，由39得到；(d)(i)HCl(g)，CHCl₃，0℃，1小时，69％；(ii)MOMCl(1.2当量)、NaH(1.2当量)，THF，0℃，1小时，50％。TrCl＝三苯基甲基氯；4-DMAP＝4-(二甲氨基)吡啶；MOMCl＝氯甲基甲基醚。

图7是埃坡霉素类似物8-14的合成。试剂和条件：(a)CrCl₂(10当量)、NiCl₂(0.2当量)、4-叔丁基吡啶(30当量)、20(3.0当量)，DMSO，25℃，过夜；(b)TBAF(4.0当量)，THF，0℃，1小时，然后25℃，1小时；(c)Et₃N(6.0当量)、2，4，6-三氯苯甲酰氯(2.4当量)、41或42，THF，0℃，1小时，然后4-DMAP(2.2当量)，甲苯，75℃，3小时；(d)20 v/v％TFA/CH₂Cl₂，25℃，3小时(除43d外)；(e)通过¹H NMR测定；(f)43d的脱保护：TMSBr(10当量)、4MS，CH₂Cl₂，-30℃，1小时，然后20v/v％TFA/CH₂Cl₂，25℃，3小时。TBAF＝四丁基氟化铵；4-DMAP＝4-(二甲氨基)吡啶；TFA＝三氟乙酸；TMSBr＝三甲基甲硅烷基溴；MS＝分子筛。

图8所显示的表公开了埃坡霉素1至14以及紫杉醇对抗用紫杉醇或埃坡霉素A所选择的1A9人卵巢癌细胞和β-微管蛋白突变细胞系的细胞毒性。使用SRB(磺基罗丹明-B)分析法(Skehan，P.等人，J.Natl.Cancer Inst.1990，82，1107-1112)在72小时生长抑制分析中评价了测试化合物对亲代1A9以及紫杉醇-和埃坡霉素-所选择的耐药克隆(分别为PTX10、PTX22和A8)的抗增殖效果。每种化合物的IC₅₀值以nM给出，表示3-9次独立实验的平均值±平均值的标准误差。相对抵抗力(RR)以每种耐药亚系的IC₅₀值除以亲代细胞系(1A9)的IC₅₀值计算。CP＝环丙基；py＝5-甲基吡啶侧链；pyOH＝5-羟甲基吡啶侧链；5tmpy＝5-甲硫基吡啶侧链；6tmpy＝6-甲硫基吡啶侧链；tmt＝2-甲硫基噻唑侧链。

图9所显示的表公开了埃坡霉素1-8、10-14以及紫杉醇对人表皮样癌细胞系的微管蛋白聚合效力和细胞毒性。(a)将4μm化合物产生的猪微管蛋白聚合(TP)程度相对于25μm埃坡霉素B的作用(定义为100％)如(Nicolaou，K.C.等人，Chem.Biol.2000，7，593-599)所述进行定量。(b)在暴露于药物96小时后，通过使用所述的蛋白质染色法(Meyer，T.等人，Int.J.Cancer 1989，43，851-856)对细胞群定量以评价细胞生长最大抑制所需的药物浓度(IC₅₀值以nM给出)。KB-31：表皮样Taxol^-敏感性细胞，KB-8511：表皮样耐Taxol^-细胞(由于Pgp过表达所致)。相对抵抗力(RR)通过将耐药细胞系的IC₅₀值除以敏感性细胞系的IC₅₀值计算。(c)来自于ref.3的数据(Taxol^、Epo A和Epo B的％TP值分别为49、69和90)。CP＝环丙基；py＝5-甲基吡啶侧链；pyOH＝5-羟甲基吡啶侧链；5tmpy＝5-甲硫基吡啶侧链；6tmpy＝6-甲硫基吡啶侧链；tmt＝2-甲硫基噻唑侧链。

图10所显示的表公开了埃坡霉素类似物对微管的紫杉烷结合位点的亲和性。(a)通过从其结合位点替换荧光Taxol^衍生物(Flutax-2)测定不同配体与微管的紫杉烷位点的结合(图2)(Díaz，J.F.等人，J.Biol.Chem.2000，275，26265-26276)。按照前述报告中修改的方法(Andreu，J.M.；Barasoain，I.Biochemistry 2001，4，11975-11984)，使用荧光偏振微板读数仪测定每种配体的Flutax-2替换等温线，至少测定两次。使用已经储存在液氮中的交联稳定化的微管。在每个温度下，通过离心和荧光各向异性测定参比配体Flutax-2的结合常数(Díaz，J.F.等人，J.Biol.Chem.2000，275，26265-26276)。所得参比值于37℃时为2.2×10⁷M^-1。(b)解离平衡常数(Kd)以nM给出。(c)标准结合自由能变化(DG⁰ _app)以kJ mol^-1给出。

图11显示了各个所设计的埃坡霉素A和B类似物的一系列结构以及埃坡霉素A和B的结构。该埃坡霉素库的设计基于现有的构效关系(SAR)的知识，特别是基于下述事实：埃坡霉素B(2)的效力比埃坡霉素A(1)强得多；在噻唑部分用甲硫基替换甲基可增强效力；以及用于替换噻唑侧链的杂环如吡啶或嘧啶为了生物学活性需要维持氮的正确位置。

图12的流程图显示了由乙烯基碘化合物15以及相应的芳族锡烷合成多种类似物的最后步骤。15与适宜锡烷的Stille-型偶合于环境温度下、在DMP中的PdCl₂(MeCN)₂、CuI和AsPh₃存在下进行，直接生成指定产率的类似物。试剂和条件：a.PdCl₂(MeCN)₂(0.5当量)、CuI(2.0当量)、AsPh₃(1.0当量)、64a-64d、66a-66d、67-68(2.5当量)，DMF，25℃，1-3小时，41-80％。

图13的流程图显示了合成用于图12的流程图的锡烷所需的步骤。噻唑化合物(64a-64d)由商业购得的2，4-二溴噻唑(62)、通过将相应的硫醇与NaH在二溴噻唑存在下反应而合成。产物与Me₃SnSnMe₃在Pd(PPh₃)₄存在下、于100℃在甲苯中偶合，生成预期的产物64a-64d。试剂和条件：a)NaH(3当量)、RSH(3当量)，i-PrOH，24小时，70-81％；b)(Me₃Sn)₂(5-10当量)、Pd(PPh₃)₄(5mol％)，甲苯，100℃，1-3小时，71-88％；c)n-BuLi(1.1当量)，乙醚，-78℃，1小时，然后n-Bu₃SnCl(1.2当量)，-78℃至25℃，1小时，49-62％。

图14的流程图显示了用于构建埃坡霉素B的环丙基类似物的骨架的合成路线。试剂和条件：(a)Nicolaou，K.C.等人J.Am.Chem.Soc.2001，123，9313和Jessie，S；Kjell，U.Tetrahedron 1994，50，275；(b)NaH(1.5当量)、BnBr(1.2当量)，DMF，0℃至室温，12小时，100％；(c)O₃，CH₂Cl₂∶MeOH(4∶1)，-78℃，然后NaBH₄(3当量)，-78℃至室温，1小时，83％；(d)MsCl(1.3当量)、Et₃N(1.5当量)、DCM，室温，1小时；(e)NaI(3当量)，丙酮，室温，12小时，91％(两步)；(f)LDA(1.4当量)、25(1.3当量)，THF，0℃，6小时，然后73，-98至-10℃，14小时，87％；(g)MeI，回流，3小时；(h)3N HCl∶戊烷(1∶1)，室温，3小时，91％(两步)；(i)LDA(2.4当量)、19(2.3当量)，THF∶乙醚(1∶1)，-78℃，1小时，然后-40℃，30分钟，然后76，-78℃，5分钟，80％；(j)TBSOTf(1.5当量)、2，6-二甲基吡啶(2当量)，DCM，-20℃，1小时；(k)HF·py、吡啶，THF，0℃，8小时，86％(两步)；(l)(COCl)₂(1.2当量)、DMSO(2.0当量)，DCM，-78℃，5分钟，然后79(1当量)，20分钟，然后Et₃N(3当量)，-78℃至0℃；(m)NaClO₂(5当量)，NaH₂PO₄(3当量)、2-甲基-2-丁烯(75当量)、t-BuOH，THF，H₂O，室温，1小时；(n)2-(三甲基甲硅烷基)乙醇(4当量)、EDC(1.5当量)、DMAP(0.1当量)，DMF，室温，12小时，73％(三步)；(o)20％Pd(OH)₂/C、H₂、EtOH∶EtOAc(1∶1)，室温，2小时，89％；(p)(COCl)₂(1.2当量)、DMSO(2.0当量)、DCM，-78℃，5分钟，然后81(1当量)，20分钟，然后Et₃N(3当量)，-78至0℃，99％；(q)MeOCH₂PPh₃Cl(3当量)、n-BuLi(2.8当量)，THF，0℃，1小时，然后82，-78至0℃，2小时，79％；(r)PPTS(10当量)，二噁烷∶水(9∶1)，70℃，12小时，81％。

图15的流程图显示了用于合成环丙基类似物48和50的最终步骤。试剂和条件：(a)CrCl₂(10当量)、NiCl₂(0.2当量)、4-t-BuPy(30当量)、84a或84b(3当量)，DMSO，25℃，24小时；(b)TBAF(2当量)，THF，室温，2小时；(c)Et₃N(6当量)、2，4，6-三氯苯甲酰氯(2.4当量)、85或88，THF，0℃，1小时，然后DMAP(2.2当量)，甲苯，75℃，3小时；(d)20％v/v TFA/CH₂Cl₂，室温，3小时。

图16的表显示埃坡霉素48、50和51-60对用紫杉醇或埃坡霉素A所选择的人癌细胞和β-微管蛋白突变细胞系的细胞毒性。使用SRB(磺基罗丹明-B)分析法(Skehan，P.等人，J.Natl.Cancer Inst.1990，82，1107-1112)在72小时生长抑制分析中评价了测试化合物对亲代1A9以及紫杉醇-和埃坡霉素-所选择的耐药克隆(分别为PTX10、PTX22和A8)的抗增殖作用。每种化合物的IC₅₀值以nM给出，表示3次独立实验的平均值±平均值的标准误差。相对抵抗力(RR)以每种耐药亚系的IC₅₀值除以亲代细胞系(1A9)的IC₅₀值来计算。化合物3的结果取自Nicolaou，K.C.等人，Tetrahedron2002，58，6413-6432。

图17的表显示所选择的埃坡霉素对人表皮样细胞系KB-3和KB-8511的细胞毒性(IC50，nM)。测试化合物的抗增殖作用在两种人表皮样癌细胞系中进行了评价，包括亲代细胞系(KB-31)和耐Taxol^TM的(由于Pgp-过表达)细胞系(KB-8511)。Epo B和3的结果取自Nicolaou，K.C.等人，Tetrahedron 2002，58，6413-6432。