ES2281692T3

ES2281692T3 - Sintesis de epotilones, sus intermediarios, sus analogos y sus usos.

Info

Publication number: ES2281692T3
Application number: ES03793304T
Authority: ES
Inventors: Samuel J. Danishefsky; Alexey Rivkin; Fumihiko Yoshimura; Ana Esther Gabarda Ortega; Young Shin Cho; Ting-Chao Chou; Huajin Dong
Original assignee: Sloan Kettering Institute for Cancer Research
Current assignee: Memorial Sloan Kettering Cancer Center
Priority date: 2002-08-23
Filing date: 2003-08-22
Publication date: 2007-10-01
Anticipated expiration: 2023-08-22
Also published as: DK1506203T3; EP1506203B1; ATE450534T1; DE60310916D1; PT1767535E; ES2336937T3; WO2004018478A2; PT1506203E; IL167046A; US7875638B2; US20090149516A1; EP1506203A2; AU2003260002B2; AU2003260002A1; MXPA05002113A; PH12012501351A1; KR20050083652A; JP4791183B2; JP2011195589A; ATE350383T1

Abstract

Un compuesto de fórmula: (Ver fórmula) en donde R1 es un hidrógeno o alquilo C1 - 6 inferior; R2 es un arilo C3 - 14 sustituido o no sustituido, heteroarilo C3 - 14, arilo C3 - 14 alquilo C1 - 20, o una fracción heteroarilo C3 - 14 alquilo C1 - 20; R5 y R6 son cada uno independientemente un hidrógeno o un grupo protector; X es O, S, C (R7)2, o NR7, en donde cada ocurrencia de R7 es independientemente un hidrógeno o un alquilo C1 - 6 inferior; RB es, independientemente para cada ocurrencia, un hidrógeno; halógeno; -ORB 0 ; -SRB 0 ; -N(RB 0 )2; -CY3, -CHY2, -CH2Y, donde Y es F, Br, Cl, I, ORB 0 , NBRB 0 , N(RB 0 )2, o SRB 0 ; -C(O)ORB 0 ; -C(O)RB 0 ; -CONHRB 0 ; -O(C=O)RB 0 ; -O (C=O) ORB 0 ;-NRB 0 (C=O)RB 0 ; N3; N2RB 0 ; un acetal cíclico; o cíclico o acíclico, alifático C1 - 20 lineal o ramificado, heteroalifático C1 - 20, arilo C3 - 14, o heteroarilo C3 - 14, opcionalmente sustituido con uno o más de hidrógeno; halógeno; -ORB¿; -SRB¿; -N(RB¿)2; -C(O)ORB¿; -C(O)RB¿; -CONHRB¿; -O(C=O)RB¿; -O(C=O)ORB¿; -NRB¿(C=O)RB¿; N3; N2RB¿; acetal cíclico; o alifático C1 - 20 cíclico o acíclico, lineal o ramificado sustituido o no sustituido, heteroalifático C1 - 20, arilo C3 - 14, o una fracción heteroarilo C3 - 14; en donde cada ocurrencia de RB 0 es independientemente un hidrógeno; un grupo protector; un lineal o ramificado, sustituido o no sustituido, cíclico o acíclico, alifático C1 - 20, heteroalifático C1 - 20, arilo C3 - 14, heteroarilo C3 - 14, arilo C3 - 14 alquilo C1 - 20, arilo C3 - 14 alquenilo C1 - 20, arilo C3 - 14 alquinilo C1 - 20, heteroarilo C3 - 14 alquilo C1 - 20, heteroarilo C3 - 14 alquenilo C1 - 20, o una fracción heteroarilo C3 - 14 alquinilo C1 - 20, en donde, el arilo, heteroarilo, arilalquilo, heteroarilalquilo, alifático, heteroalifático, arilalquenil, arilalquinil, heteroarilalquenil o heteroarilalquinil puede ser sustituido por uno o más de alifático C1 - 20, heteroalifático C1 - 20, arilo C3 - 14, heteroarilo C3 - 14, arilo C3 - 14 alquilo C1 - 20, heteroarilo C3 - 14 alquilo C1 - 20, alcoxi C1-20, ariloxi C3 - 14, heteroalcoxi C1 - 20, heteroariloxi C3 - 14, alquiltio C1 - 20, ariltio C3 - 14, heteroalquiltio C1 - 20, heteroariltio C3 - 14, F, Cl, Br, I, -OH, -NO2, -CN, -CF3, -CH2CF3, -CHCl2, -CH2OH, -CH2CH2OH, -CH2NH2, -CH2SO2CH3, -C(O)Rx, -CO2(Rx), -CON (Rx)2, -OC(O)Rx, -OCO2Rx, -OCON(Rx)2, -N(Rx)2, -S(O)2Rx, -NRx(CO)Rx en donde cada ocurrencia de Rx es independientemente alifático C1 - 20, heteroalifático C1 - 20, arilo C3 - 14, heteroarilo C3 - 14, arilo C3 - 14 alquilo C1 - 20, heteroarilo C3 - 14 alquilo C1 - 20.

Description

Síntesis de epotilones, sus intermediarios, sus análogos y sus usos.

Antecedentes de la invención

Los epotilones A y B (2a y 2b, Esquema 1) son macrólidos citotóxicos presentes naturalmente que se aislaron a partir de una micobacteria que degrada la celulosa, Sorangium cellulosum (Höfle et al. Angew. Chem., Int. Ed Engl. 1996, 35, 1567 y J. Antibiot. 1996, 49, 560, A pesar de sus estructuras diferentes ampliamente, los epotilones A y B comparten el mismo mecanismo de acción que el paclitaxel (Taxol®) el cual involucra la inhibición del crecimiento de células tumorales mediante la polimerización de la tubulina y la estabilización de los ensambles del microtúbulo (Bollag et al. Cancer Res. 1995, 55, 2325. A pesar de su incuestionable valor clínico como un agente quimioterapéutico de primera línea, Taxol® está lejos de ser un fármaco ideal. Su marginal solubilidad en agua precisa del recurso de vehículos para formulación tales como Cremophores que poseen sus propios riesgos y tópicos de administración (Essayan et al. J. Allergy Clin. Immunol. 1996, 97, 42. Por otra parte, Taxol® es vulnerable a la desactivación a través de la resistencia a múltiples fármacos (MDR) (Giannakakou et al. J. Biol. Chem. 1997, 272, 17118. sin embargo, se ha demostrado que los epotilones A y B guardan una notable potencia contra las células tumorales MDR (Kowalski et al. Mol. Biol. Cell. 1995, 6, 2137. Adicionalmente, el incremento de solubilidad en agua en comparación con el paclitaxel puede ser útil para la capacidad de formulación de los epotilones. Mientras que el compuesto presente naturalmente, el epotilone B (2b, EpoB, en el Esquema 1), es un miembro potente de la familia epotilone de productos naturales, desafortunadamente posee, al menos en ratones de xenoinjerto, un índice terapéutico estrecho de manera preocupante (Su et al. Angew. Chem. Int. Ed Engl. 1997, 36, 1093; Harris et al. J. Org. Chem. 1999, 64,
8434.

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Esquema 1

Taxoides y Epotilones

1

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Dado el limitado índice terapéutico del EpoB, otros análogos del epotilone, en particular los 12,13-desoxiepotilones, se investigaron por su capacidad de proporcionar un perfil terapéutico mejorado (ver, Patente U.S. No.: 6,242,469, 6,284,781, 6,300,355, 6,369,234, 6,204,388, 6,316,630.

Los experimentos in vivo conducidos sobre varios modelos de ratón demostraron que el 12,13-desoxiepotilone B (3b, dEpoB en el Esquema 2) posee potencial terapéutico contra varios tumores humanos sensibles y resistentes en xenoinjertos en ratones (Chou et al. Proc. Natl. Acad Sci. U S.A. 1998, 95, 9642 y 15798.

Recientemente, la superioridad terapéutica de estos desoxiepotilones sobre otros agentes anticáncer se ha demostrado concluyentemente mediante estudios comparativos minuciosos (Chou et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 2001, 98, 8113.

Debido a su impresionante perfil in vivo, el dEpoB se ha desarrollado en evaluaciones toxicológicas en perros, y actualmente está en pruebas en humanos como un fármaco anticáncer.

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Esquema 2

Varios Análogos de los Desoxiepotilones

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A la luz de la prometedora utilidad terapéutica de los 12,13-desoxiepotilones, sería deseable investigar los análogos adicionales así como las metodologías sintéticas adicionales para la síntesis de los epotilones, desoxiepotilones existentes, y sus análogos, así como los novedosos análogos de estos. En particular, dado el interés en la utilidad terapéutica de esta clase de compuestos, también sería deseable desarrollar metodologías capaces de proporcionar cantidades significantes de cualquiera de los epotilones o los desoxiepotilones previamente descritos, o aquellos descritos en esta, para pruebas clínicas y para la preparación a gran escala.

Descripción de los dibujos

Figura 1 es una tabla de los valores de IC_{50} de los epotilones contra CCRF-CEM, CCRF-CEM/VBL, y el crecimiento celular CCRF-CEM/Taxol. La inhibición del crecimiento celular se midió mediante el ensayo con tetrazonio XTT después de 72-horas de incubación para el crecimiento celular, según lo descrito previamente (Scudiero et al. Cancer Res. 46:4827-4833, 1988; incluido en esta por referencia). Los valores de IC_{50} se determinaron a partir de la relación dosis-efecto a seis o siete concentraciones de cada fármaco, utilizando un programa de ordenador (Chou et al. Adv. Enzyme Regul. 22:27-55, 1984; Chou et al. CalcuSyn para Windows (Biosoft, Cambridge, UK), 1997; cada uno de los cuales se anexa en esta por referencia) según lo descrito primero (Chou et al. Proc. Natl. Acad Sci. USA 95:15798-15802, 1998; incluido en esta por referencia).

Figura 2 es un espectro ^{1}H NMR del trans-9,10-dihidro-12,13-desoxiEpoB.

Figura 3 es un espectro ^{13}C NMR del trans-9,10-dihidro-12,13-desoxiEpoB.

Figura 4 muestra un esquema para la síntesis de los epotilones 11-R y 14-R utilizando la metátesis de la olefina del cierre del LACDAC-anillo, e ilustra ciertas sustituciones disponibles con estrategias sintéticas que pasan a través de un 9,10-dihidro epotilone.

Figura 5 presenta los datos de citotoxicidad relativa contra células leucémicas humanas in vitro para una variedad de compuestos de epotilone y derivados que incluyen ciertos compuestos 9,10-dihidro (por ejemplo, el compuesto 7 en la Figura 5A y los compuestos 88 y 89 en la Figura 5B).

Figura 6 representa las estrategias sintéticas alternativas para la preparación de los análogos 9,10-dihidro epotilone. Figura 6A ilustra un método Macro-Stille, un método de acoplamiento sp3-sp3, y el método \beta-Suzuld. Figura 6B ilustra un método de olefinación Julia, un método Wadsworth-Emmons, y un método Macro-Reformatosky. Figura 6C ilustra un método de acoplamiento McMurry y una síntesis de una lactama análoga.

Figura 7 muestra varios análogos de 9,10-dihidro-12,13-desoxi EpoB.

Figura 8 muestra el efecto terapéutico del 9,10-dihidro-dEpoB y del dEpoB en ratones desnudos que llevan el xenoinjerto MX-1 carcinoma mamario humano (infusión i.v., 2Dx3).

Figura 9 muestra la estabilidad de los análogos del epotilone en plasma de murina. Epo 1 es 12,13-desoxiEpoB, Epo 2 es 26-F_{3}-12,13-desoxiEpoB, Epo 3 es (E)-9,10-dihidro-12,13-desoxiEpoB, y Epo 4 es 26-F_{3}-(E)-9,10-dihidro-12,13-desoxiEpoB.

Figura 10 representa el efecto terapéutico de los análogos del epotilone en ratones desnudos que llevan un xenoinjerto HCT-116 (infusión i.v., Q2Dx7, n = 3). Las flechas indican la administración del fármaco. Epo 3 es (E)-9,10-dihidro-12,13-desoxiEpoB.

Figura 11 muestra las potencias de varios análogos del epotilone contra el crecimiento del tumor celular in vitro e índice terapéutico, con respecto a paclitaxel y vinblastina.

Figura 12 es una tabla que resume el efecto de dEpoB, Taxol, y 26-triF-9,10-deH-dEpoB contra el xenoinjerto MX-1 en ratones desnudos.

Figura 13 muestra el efecto terapéutico de 26-trifluoro-9,10-dihidro-dEpoB y 9,10-dihidro-EpoB sobre el tamaño del tumor en ratones desnudos que llevan xenoinjertos MX-1 (infusión i.v. 6 horas, Q2Dx6 & Q2Dx9, respectivamente).

Figura 14 muestra los cambios en peso corporal de los ratones desnudos que llevan xenoinjerto MX-1 del tumor de carcinoma mamario humano siguiendo el tratamiento con 26-trifluoro-9,10-dihidro-dEpoB y 9,10-dihidro-EpoB (infusión 6 horas, Q2Dx6 & Q2Dx9, respectivamente).

Figura 15 muestra el efecto terapéutico del 26-trifluoro-9,10-dihidro-dEpoB y 9,10-dihidroEpoB sobre el tamaño del tumor en ratones desnudos que llevan xenoinjertos MX-1 (infusión i.v. 6 horas, Q2Dx6 & Q2Dx9, respectivamente).

Figura 16 muestra los cambios de peso corporal de ratones desnudos que llevan xenoinjerto MX-1 del tumor de carcinoma mamario humano siguiendo el tratamiento con 26-trifluoro-9,10-dihidro-dEpoB y 9,10-dihidro-EpoB (infusión i.v. 6 hora, Q2Dx6 & Q2Dx9, respectivamente).

Figura 17 muestra el efecto terapéutico del 9,10-dihidro-dEpoB sobre el tamaño del tumor en ratones desnudos que llevan xenoinjertos HCT-116 (infusión i.v., Q2Dx7).

Figura 18 muestra el efecto del 9,10-dihidro-dEpoB sobre el tamaño del tumor en ratones desnudos que llevan xenoinjertos HCT-116 de carcinoma de colon humano (infusión i.v., Q3Dx5).

Figura 19 muestra el efecto del 9,10-dihidro-dEpoB sobre el tamaño del tumor en ratones desnudos que llevan xenoinjertos A549/Taxol (infusión i.v. 6 horas, Q3Dx7).

Figura 20 muestra los cambios en peso corporal de ratones desnudos que llevan el xenoinjerto A549/Taxol tratado con 26-trifluoro-9,10-dihidro-dEpoB y 9,10-dihidro-dEpoB (infusión i.v. 6 horas, Q3Dx7).

Figura 21 muestra el efecto del 26-trifluoro-9,10-dihidro-dEpoB y 9,10-dihidro-dEpoB sobre el tamaño del tumor en ratones desnudos que llevan los xenoinjertos A549/Taxol (infusión i.v. 6 horas, Q2Dx7).

Figura 22 muestra los cambios en peso corporal de ratones desnudos que llevan los xenoinjertos A549/Taxol tratados con 26-trifluoro-9,10-dihidro-dEpoB y 9,10-dihidro-dEpoB (infusión i.v. 6 horas, Q2Dx7).

Figura 23 muestra el efecto del 9,10-dihidro-EpoB sobre el tamaño del tumor en ratones desnudos que llevan los xenoinjertos de tumor en carcinoma de colon humano HCT-116 (infusión i.v. 6 horas).

Figura 24 muestra los cambios en peso corporal de ratones desnudos que llevan el xenoinjerto de tumor HCT-116 carcinoma de colon humano siguiendo el tratamiento con el 9,10-dihidro-EpoB (infusión i.v. 6 horas).

Figura 25 muestra la formación del microtúbulo a partir de tubulina en la presencia de varios análogos del epotilone a 37ºC.

Figura 26 muestra la formación del microtúbulo a partir de la tubulina en la presencia de varios análogos de epotilone a 4ºC.

Figura 27 muestra el efecto del 9,10-dihidro-dEpoB y dEpoB sobre el tamaño del tumor en ratones desnudos que llevan los xenoinjertos HCT-116 (infusión i.v., Q2Dx6).

Figura 28 muestra cambios en peso corporal de ratones desnudos que llevan los xenoinjertos HCT-116 después del tratamiento con el 9,10-dihidro-dEpoB y dEpoB (infusión i.v., Q2Dx6).

Figura 29 muestra el efecto del 9,10-dihidro-dEpoB sobre el tamaño del tumor en ratones desnudos que llevan xenoinjertos HCT-116 carcinoma de colon humano (infusión i.v., Q3Dx4).

Figura 30 muestra cambios en el peso corporal de ratones desnudos que llevan los xenoinjertos HCT-116 del tumor de carcinoma de colon humano siguiendo el tratamiento con 9,10-dihidro-dEpoB (5 mg/kg, infusión i.v., X3Dx4).

Figura 31 es una tabla con los valores de IC_{50} para los análogos del epotilone contra el crecimiento celular CCRF-CEM.

Figura 32 muestra la estabilidad metabólica de los análogos del epotilone in vitro.

Figura 33 es una tabla detallada de los efectos terapéuticos de varios análogos del epotilone contra los xenoinjertos de tumor humano en ratones con infusión i.v. 6 horas.

Figura 34 muestra el efecto del 9,10-dihidro-EpoB sobre el tamaño del tumor en ratones desnudos que llevan el xenoinjerto del tumor HCT-116 del carcinoma de colon humano (infusión i.v. 6 horas, Q2Dx7).

Figura 35 muestra cambios en el peso corporal de ratones desnudos que llevan xenoinjertos del tumor HCT-116 de carcinoma de colon humano siguiendo el tratamiento con el 9,10-dihidro-EpoB y oxazol-EpoD (infusión 6 horas, Q2Dx7).

Figura 36 muestra el efecto del 26-trifluoro-9,10-dihidro-dEpoB y el 9,10-dihidro-dEpoB sobre el tamaño del tumor en ratones desnudos que llevan xenoinjertos A549/Taxol (infusión i.v. 6 horas, Q2Dx4).

Figura 37 muestra el efecto del 9,10-dihidro-dEpoB sobre el tamaño del tumor en ratones desnudos que llevan xenoinjertos A549/Taxol (infusión i.v. 6 horas, Q3Dx3).

Figura 38 muestra la estabilidad de los análogos del epotilone en 20% plasma de ratón/PBS.

Figura 39 muestra la estabilidad de los análogos del epotilone en 10% Men Liver S9/PBS.

Figura 40 muestra el cromatograma de la estabilidad del EpoD en 10% Men Liver S9/PBS.

Figura 41 son tablas que describen el efecto de varios análogos de epotilone sobre la polimerización del microtúbulo in vitro a 37ºC en la ausencia de GTP (A) y la citotoxicidad de varios análogos del epotilone en la línea celular de pulmón humano A549 (B).

Figura 42 muestra la estabilización de la formación del microtúbulo por los epotilones a 35ºC y 4ºC.

Figura 43 muestra el efecto terapéutico del 9,10-dihidro-dEpoB en ratones desnudos que llevan el xenoinjerto (MX-1) del carcinoma mamario humano T (infusión 6 horas, Q2Dx5).

Figura 44 muestra el cambio en peso corporal de ratones desnudos que llevan xenoinjerto (MX-1) del carcinoma mamario humano siguiendo el tratamiento con el 9,10-dihidro-dEpoB (infusión 6 horas, Q2Dx8).

Figura 45 muestra el cambio en peso corporal de ratones desnudos que llevan xenoinjerto HCT-116 siguiendo el tratamiento con el 9,10-dihidro-dEpoB (infusión i.v., Q2Dx7).

Figura 46 muestra el efecto terapéutico de 9,10-dihidro-dEpoF, dEpoB, y Taxol sobre el tamaño del tumor en ratones desnudos que llevan xenoinjerto del tumor de carcinoma mamario humano (MX-1) (infusión i.v. 6 horas, Q2Dx6).

Figura 47 muestra los cambios en peso corporal de ratones desnudos que llevan xenoinjerto del tumor del carcinoma mamario humano (MX-1) siguiendo el tratamiento con 9,10-dihidro-dEpoF, dEpoB, y Taxol (infusión 6 horas, Q2Dx6).

Figura 48 muestra el efecto terapéutico del 9,10-dihidro-dEpoF y dEpoB en ratones desnudos que llevan xenoinjerto del carcinoma de colon humano HCT-116 (infusión 6 horas, Q2Dx8).

Figura 49 muestra los cambios en peso corporal de ratones desnudos que llevan el xenoinjerto HCT-116 siguiendo el tratamiento con el 9,10-dihidro-dEpoF y dEpoB (infusión 6 horas, Q2Dx8).

Figura 50 muestra el efecto terapéutico de 9,10-dihidro-dEpoF y dEpoB en ratones desnudos que llevan xenoinjerto del carcinoma pulmonar humano Taxol-resistente (A549/Taxol) (infusión 6 horas, Q2Dx5).

Figura 51 muestra los cambios en peso corporal de ratones desnudos que llevan xenoinjerto del carcinoma pulmonar humano Taxol-resistente (A549/Taxol) siguiendo el tratamiento con el 9,10-dihidro-dEpoF y dEpoB (infusión 6 horas, Q2Dx5).

Figura 52 es una tabla que compara la potencia de varios análogos del epotilone con respecto a la inhibición de crecimiento del tumor in vitro y el índice terapéutico relativo.

Figura 53 muestra el efecto terapéutico del 9,10-dihidro-dEpoB en ratones desnudos que llevan xenoinjerto MX-1 (Q3Dx9, 6 horas-infusión i.v.).

Figura 54 muestra los cambios en peso corporal de ratones desnudos que llevan un xenoinjerto MX-1 siguiendo el tratamiento con 9,10-dihidro-dEpoB (Q3Dx9, 6 horas-infusión i.v.).

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Figura 55 muestra el efecto terapéutico del 9,10-dihidro-epotilone B en ratones desnudos que llevan el xenoinjerto MX-1 (Q3Dx9, infusión 6 horas).

Figura 56 muestra los cambios en peso corporal de ratones desnudos que llevan el xenoinjerto MX-1 siguiendo el tratamiento con 9,10-dihidroepotilone B (Q3Dx9, 6 horas-infusión i.v.).

Figura 57 muestra el efecto terapéutico a dosis bajas del 26-trifluoro-9,10-dihidro-dEpoB en ratones desnudos que llevan xenoinjerto MX-1 (6 horas-i.v. infusión, Q2Dx12).

Figura 58 muestra los cambios en peso corporal de ratones desnudos que llevan un xenoinjerto MX-1 siguiendo el tratamiento con dosis bajas de 26-trifluoro-9,10-dihidro-dEpoB (6 horas-i.v. infusión, Q2Dx12).

Figura 59 muestra el efecto quimioterapéutico de los análogos del epotilone contra xenoinjertos de tumor humano en ratones desnudos. El tejido tumoral (40-50 mg) se implantó s.c. en el Día 0. El tratamiento se inició cuando el tamaño del tumor alcanzó aproximadamente 100 mm^{3} o más grande según se indica. Todos los tratamientos como se indica por las flechas se llevaron a cabo con infusión i.v.-6 horas vía vena de la cola utilizando un mini-catéter y una bomba programable según lo descrito primero (Su, D.-S. et al, Angew. Chem. Int. Ed. 1997, 36, 2093; Chou, T. C. et al. Proc. Natl. Acad Sci. USA. 1998, 95, 15798. Cada grupo de dosis consiste de cuatro o más ratones. El peso corporal se refiere como el peso corporal total menos el peso del tumor que asume 1 mm^{3} del tumor igual a 1 mg del tejido tumoral. A. Xenoinjerto MX-1 del carcinoma mamario tratado con una dosis baja de 25-trifluoro-(E)-9,10-dihidro-12,13-desoxiEpoB (10 mg/kg) cuando se compara con aquellos en la Tabla 1 (20 mg/kg y 30 mg/kg). B. xenoinjertos grandes MX-1 (500 mm^{3}) se trataron con el 25-trifluoro-(E)-9,10-dihidro-12,13-desoxiEpoB (25 mg/kg) y el dEpoB (30 mg/kg). C. Xenoinjerto del carcinoma pulmonar A549 de crecimiento lento tratado con 25-trifluoro-(E)-9,10-dihidro-12,13-desoxiEpoB (25 mg/kg) y dEpoB (30 mg/kg). D. Xenoinjerto A549/Taxol (resistencia de 44-veces al paclitaxel in vitro) tratado con el 25-trifluoro-(E)-9,10-dihidro-12,13-desoxiEpoB (20 mg/kg) y (E)-9,10-dihidro-12,13-desoxiEpoB (4 mg/kg). El tratamiento para deH-dEpoB en el día 28 se saltó debido a la marcada y rápida pérdida de peso corporal.

Figura 60 representa la síntesis del 9,10-(E)-dihidro-epotilones C-21 modificados. Figura 60A muestra la síntesis del 26-trifluoro-21-metilamino-9,10-(E)-dihidro-12,13-desoxiepotilone B. Figura 60B es un esquema sintético para la preparación del 26-trifluoro-21-amino-9,10-(E)-dihidro-12,13-desoxiepotilone B como un intermediario en la síntesis del 26-trifluoro-21-dimetilamino-9,10-(E)-dihidro-12,13-desoxiepotilone B.

Figura 61 es la tabla con los valores de IC_{50} para los epotilones C-21 modificados contra la línea celular del tumor CCRF-CEM y sus sublíneas resistentes al fármaco.

Figura 62 muestra el efecto terapéutico del 26-trifluoro-9,10-dihidro-dEpoB y Taxol en ratones desnudos que llevan xenoinjerto CCRF-CEM de leucemia linfoblástica célula-T humana (infusión i.v. 6 horas, Q2Dx8).

Figura 63 muestra las variaciones en los cambios de peso corporal de ratones desnudos que llevan xenoinjerto CCRF-CEM de leucemia linfoblástica célula-T humana siguiendo el tratamiento con 25-trifluoro-9,10-dihidro-dEpoB y Taxol (infusión i.v. 6 horas, Q2Dx8).

Figura 64 muestra el efecto terapéutico del 26-trifluoro-9,10-dihidro-dEpoB y Taxol en ratones desnudos que llevan xenoinjerto CCRF-CEM/Taxol (Taxol resistente) de leucemia linfoblástica célula-T humana (infusión i.v. 6 horas, Q2Dx7, x5).

Figura 65 muestra las variaciones en los cambios de peso corporal de ratones desnudos que llevan xenoinjerto CCRF-CEM/Taxol (Taxol resistente) de leucemia linfoblástica célula-T humana siguiendo el tratamiento con 26-trifluoro-9,10-dihidro-dEpoB y Taxol (infusión i.v. 6 horas, Q2Dx7, x5).

Figura 66 muestra el efecto terapéutico del 26-trifluoro-9,10-dihidro-dEpoB y Taxol en ratones desnudos que llevan xenoinjerto HCT-116 del carcinoma de colon humano (Q2Dx4, x2, infusión i.v. 6 horas).

Figura 67 muestra los cambios en peso corporal, de ratones desnudos que llevan xenoinjerto HCT-116 del carcinoma de colon humano siguiendo el tratamiento con 26-trifluoro-9,10-dihidro-dEpoB y Taxol (Q2Dx4, x2, infusión i.v. 6 horas).

Figura 68 muestra el efecto terapéutico de 9,10-dihidro-EpoB en ratones desnudos que llevan el xenoinjerto MX-1 (infusión i.v. 6 horas).

Figura 69 muestra los cambios en peso corporal de ratones desnudos que llevan xenoinjerto MX-1 de carcinoma mamario humano siguiendo el tratamiento con 9,10-dihidro-EpoB (infusión i.v. 6 horas).

Figura 70 muestra el efecto terapéutico del 9,10-dihidro-EpoB en ratones desnudos que llevan xenoinjerto CCRF-CEM/Taxol (Taxol resistente) de leucemia linfoblástica célula-T humana (infusión i.v. 6 horas, Q3Dx5, x2).

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Figura 71 muestra los cambios en peso corporal de ratones desnudos que llevan xenoinjerto CCRFCEM/Taxol (Taxol resistente) de leucemia linfoblástica célula-T humana siguiendo el tratamiento con 9,10-dihidro-EpoB (infusión i.v. 6 horas, Q3Dx5, x2).

Figura 72 muestra el efecto terapéutico del 26-trifluoro-dEpoB y 26-trifluoro-9,10-dihidro-dEpoF en ratones desnudos que llevan xenoinjerto MX-1 de carcinoma mamario humano (Q2Dx11, inyección i.v.).

Figura 73 muestra los cambios en peso corporal de ratones desnudos que llevan xenoinjerto MX-1 de carcinoma mamario humano siguiendo el tratamiento con 26-trifluoro-dEpoB y 26-trifluoro-9,10-dihidro-dEpoF (Q2Dx11, inyección i.v.).

Figura 74 muestra el efecto terapéutico del 9,10-dihidro-dEpoB en ratones desnudos que llevan el xenoinjerto MX-1 de carcinoma mamario humano (Q3Dx9, infusión i.v. 6 horas).

Figura 75 muestra los cambios en peso corporal de ratones desnudos que llevan xenoinjerto MX-1 de carcinoma mamario humano siguiendo el tratamiento con el 9,10-dihidro-dEpoB (Q3DX9, infusión i.v. 6 horas).

Figura 76 muestra el efecto terapéutico del 26-trifluoro-9,10-dihidro-dEpoF en ratones desnudos que llevan xenoinjerto (MX-1) de carcinoma pulmonar humano (infusión i.v. 6 horas e inyección i.v.).

Figura 77 muestra los cambios en peso corporal de ratones desnudos que llevan xenoinjerto MX-1 siguiendo el tratamiento con 26-trifluoro-9,10-dihidro-dEpoF (infusión i.v. 6 horas e inyección i.v.).

Definiciones

Ciertos compuestos de la presente invención, y definiciones de los grupos funcionales específicos también se describen con más detalle abajo. Para los propósitos de esta invención, los elementos químicos se identifican de acuerdo con la Tabla Periódica de los Elementos, versión CAS, Handbook of Chemistry y Physics, 75^{th} Ed., inside cover, y los grupos funcionales específicos generalmente se definen según lo descrito en esta. Adicionalmente, los principios generales de la química orgánica, así como las fracciones y reactividad funcionales específicas, se describen en "Organic Chemistry", Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito: 1999.

Adicionalmente, se valorará por alguien de ordinaria habilidad en el oficio que los métodos sintéticos, como se describen aquí, utilicen una variedad de grupos protectores. Por el término "grupo protector", como se utiliza aquí, se entiende que una fracción funcional particular, por ejemplo, O, S, o N, temporalmente se bloquea así que una reacción se puede realizar selectivamente en otro sitio reactivo en un compuesto multifuncional. En modalidades preferidas, un grupo protector reacciona selectivamente con un buen rendimiento para dar un sustrato protegido que es estable para las reacciones proyectadas; el grupo protector debe ser selectivamente extraído en buena producción mediante reactivos fácilmente disponibles, preferiblemente no tóxicos que no atacan los otros grupos funcionales; el grupo protector forma un derivado separable fácilmente (más preferiblemente sin la generación de nuevos centros estereogénicos); y el grupo protector tiene un mínimo de funcionalidad adicional para evitar sitios de reacción adicionales. Como se detalla en esta, los grupos protectores oxígeno, azufre, nitrógeno y carbono pueden ser utilizados. Grupos protectores ejemplares se detallan en esta, sin embargo, se valorará que la presente invención no pretende ser limitada a estos grupos protectores; más bien, una variedad de grupos protectores equivalentes adicionales se pueden identificar fácilmente utilizando el criterio citado anteriormente y utilizado en el método de la presente invención. Adicionalmente, una variedad de grupos protectores se describen en "Protective Groups in Organic Synthesis" Third Ed. Greene, T.W. y Wuts, P.G., Eds., John Wiley & Sons, New York: 1999.

Se apreciará que los compuestos, como se describen aquí, puedan ser sustituidos con cualquier número de sustituyentes o fracciones funcionales. En general, el término "sustituido" tanto si se precede por el término "opcionalmente" o no, y los sustituyentes contenidos en las fórmulas de esta invención, refiriéndose a la reposición de los radicales de hidrógeno en una estructura dada con el radical de un sustituyente especificado. Cuando más de una posición en cualquier estructura dada puede ser sustituida con más de un sustituyente seleccionado de un grupo especifico, el sustituyente puede ser tanto el mismo como diferente en cada posición.

Las combinaciones de los sustituyentes y las variables visualizados por esta invención preferiblemente son aquellos que resultan en la formación de compuestos estables útiles en el tratamiento, por ejemplo de desórdenes proliferativos, que incluyen, pero no limitan a cáncer. El término "estable", como se utiliza aquí, preferiblemente se refiere a los compuestos que poseen estabilidad suficiente para permitir la fabricación y que mantienen la integridad del compuesto durante un periodo de tiempo suficiente para ser detectado y preferiblemente por un periodo de tiempo suficiente para ser útil para los propósitos detallados en esta.

El término "alifático", como se utiliza aquí, incluye hidrocarburos alifáticos de cadena saturada e insaturada, lineal (i.e., no ramificada), ramificado, cíclico, o policíclicos, que son opcionalmente sustituidos con uno o más grupos funcionales. Como será apreciado por alguien de ordinaria habilidad en el oficio, "alifático" se propone aquí para incluir, pero no se limita a, fracciones alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, y cicloalquinilo. Así, como se utiliza aquí, el término "alquilo" incluye grupos alquilo lineales, ramificados y cíclicos. Una convención análoga aplica a otros términos genéricos tal como "alquenilo", "alquinilo" y similares. Adicionalmente, como se utiliza aquí, los términos "alquilo", "alquenilo", "alquinilo" y similares abarcan grupos sustituidos y no sustituidos. En ciertas modalidades, como se utiliza aquí, "alquilo inferior" se utiliza para indicar aquellos grupos alquilo (cíclico, acíclico, sustituido, no sustituido, ramificado o no ramificado) que tiene de 1-6 átomos de carbono.

En ciertas modalidades, los grupos alquilo, alquenilo y alquinilo empleados en la invención contienen de 1-20 átomos de carbono alifático. En otras ciertas modalidades, los grupos alquilo, alquenilo, y alquinilo empleados en la invención contienen alifáticos de 1-10 átomos de carbono. En aún otras modalidades, los grupos alquilo, alquenilo, y alquinilo empleados en la invención contienen alifáticos de 1-8 átomos de carbono. En otras modalidades, los grupos alquilo, alquenilo, y alquinilo empleados en la invención contiene alifáticos de 1-6 átomos de carbono. En otras modalidades, los grupos alquilo, alquenilo, y alquinilo empleados en la invención contienen de 1-4 átomos de carbono. Los grupos alifáticos ilustrativos de esta manera incluyen, pero no se limitan a, por ejemplo, fracciones metilo, etilo, n-propil, isopropil, ciclopropil, -CH_{2}-ciclopropil, alilo, n-butil, sec-butil, isobutil, ter-butil, ciclobutil, -CH_{2}-ciclobutil, n-pentil, sec-pentil, isopentil, ter-pentil, ciclopentil, -CH_{2}-ciclopentil, n-hexil, sec-hexil, ciclohexil, -CH_{2}-ciclohexil y similares, que también, puede soportar uno o más sustituyentes. Los grupos alquenilo incluyen, pero no se limitan a, por ejemplo, etenilo, propenilo, butenilo, 1-metilo-2-buten-1-il, y similares. Representativos grupos alquinilo incluyen, pero no se limitan a, etinilo, 2-propinilo (propargil), 1-propinilo y similares.

El término "alcoxi", o "tioalquilo" como se utiliza aquí se refiere a un grupo alquilo, como previamente se define, adherido a la fracción molecular principal a través de un átomo de oxígeno o a través de un átomo de azufre. En ciertas modalidades, el grupo alquilo contiene de 1-20 átomos de carbono alifático. En ciertas otras modalidades, el grupo alquilo contiene de 1-10 átomos de carbono alifático. En aún otras modalidades, los grupos alquilo, alquenilo, y alquinilo empleados en la invención contienen de 1-8 átomos de carbono alifático. En otras modalidades, el grupo alquilo contiene de 1-6 átomos de carbono alifático. En otras modalidades, el grupo alquilo contiene de 1-4 átomos de carbono alifático. Ejemplos de alcoxi, incluyen, pero no se limitan a, metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, n-butoxi, ter-butoxi, neopentoxi y n-hexoxi. Ejemplos de tioalquilo incluyen, pero no se limitan a, metiltio, etiltio, propyltio, isopropiltio, n-butiltio, y similares.

El término "alquiloamino" se refiere a un grupo que tiene la estructura -NHR' en donde R' es alquilo, según se define en esta. En ciertas modalidades, el grupo alquilo contiene de 1-20 átomos de carbono alifático. En ciertas otras modalidades, el grupo alquilo contiene de 1-10 átomos de carbono alifático. En aún otras modalidades, los grupos alquilo, alquenilo, y alquinilo empleados en la invención contienen de 1-8 átomos de carbono alifático. En aún otras modalidades, el grupo alquilo contiene de 1-6 átomos de carbono alifático. En otras modalidades, el grupo alquilo contiene de 1-4 átomos de carbono alifático. Ejemplos de alquiloamino incluyen, pero no se limitan a, metilamino, etilamino, iso-propilamino y similares.

Algunos ejemplos de sustituyentes de las fracciones alifáticas arriba-descritas (y otros) de los compuestos de la invención incluyen, pero no se limitan a, alifático; heteroalifático; arilo; heteroarilo; arilalquilo; heteroarilalquilo; alcoxi; ariloxi; heteroalcoxi; heteroariloxi; alquiltio; ariltio; heteroalquiltio; heteroariltio; F; Cl; Br; I; -OH; -NO_{2}; -CN; -CF_{3}; -CH_{2}CF_{3}; -CHCl_{2}; -CH_{2}OH; -CH_{2}CH_{2}OH; -CH_{2}NH_{2}; -CH_{2}SO_{2}CH_{3}; -C(O)Rx; -CO_{2}(Rx); -CON(Rx)_{2}; -OC(O)Rx; -OCO_{2}Rx; -OCON (Rx)_{2}; -N(Rx)_{2}; -S(O)_{2}Rx; -NRx(CO)Rx en donde cada ocurrencia de Rx independientemente incluye, pero no se limita a, alifático, heteroalifático, arilo, heteroarilo, arilalquilo, o heteroarilalquilo, en donde cualquiera de los sustituyentes alifático, heteroalifático, arilalquilo, o heteroarilalquilo descritos arriba y aquí pueden ser sustituidos o no sustituidos, ramificados o no ramificados, cíclicos o acíclicos, y en donde cualquiera de los sustituyentes arilo o heteroarilo descritos arriba y en esta pueden ser sustituidos o no sustituidos. Los ejemplos adicionales de sustituyentes generalmente aplicables se ilustran por las modalidades específicas mostradas en los Ejemplos que se describen en esta.

En general, los términos "arilo" y "heteroarilo", como se utiliza aquí, se refirieren a fracciones estables mono- o policíclicas, heterocíclicas, policíclicas, y poliheterocíclicas insaturadas que tienen preferiblemente de 3-14 átomos de carbono, cada una de las cuales puede ser sustituida o no sustituida. Los sustituyentes incluyen, pero no se limitan a, cualquiera de los sustituyentes mencionados previamente, i.e., los sustituyentes enumerados paras las fracciones alifáticas, o para otras fracciones según se revela en esta, resultando en la formación de un compuesto estable. En ciertas modalidades de la presente invención, "arilo" se refiere a un sistema de anillo carbocíclico mono- o bicíclico que tiene uno o dos anillos aromáticos que incluyen, pero no limitan a, fenil, naftil, tetrahidronaftil, indanil, indenil y similares. En ciertas modalidades de la presente invención, el término "heteroarilo", como se utiliza aquí, se refiere a un radical aromático cíclico que tiene de cinco a diez átomos en el anillo del cual un átomo en el anillo se selecciona de S, O y N; cero, uno o dos átomos en el anillo son heteroátomos adicionales independientemente seleccionados de S, O y N; y los átomos en el anillo remanente son carbonos, el radical que está unido al resto de la molécula a través de cualquiera de los átomos en el anillo, tal como, por ejemplo, piridil, pirazinil, pirimidinil, pirrolil, pirazolil, imidazolil, tiazolil, oxazolil, isooxazolil, tiadiazolil, oxadiazolil, tiofenil, furanil, quinolinil, isoquinolinil, y similares.

Se apreciará que los grupos arilo y heteroarilo (que incluyen los grupos arilo bicíclicos) puedan ser no sustituidos o sustituidos, en donde la sustitución incluye reposición de uno, dos o tres de los átomos de hidrógeno aquí independientemente con cualquiera de una o más de las siguientes fracciones que incluyen, pero no limitan a: alifático; heteroalifático; arilo; heteroarilo; arilalquilo; heteroarilalquilo; alcoxi; ariloxi; heteroalcoxi; heteroariloxi; alquiltio; ariltio; heteroalquiltio; heteroariltio; F; Cl; Br; I; -OH; -NO_{2}; -CN; -CF_{3}; -CH_{2}CF_{3}; -CHCl_{2}; -CH_{2}OH; -CH_{2}CH_{2}OH; -CH_{2}NH_{2}; -CH_{2}SO_{2}CH_{3}; -C(O)Rx; -CO_{2}(Rx); -CON(Rx)_{2}; -OC(O)Rx; -OCO_{2}Rx; -OCON(Rx)_{2}; -N(Rx)_{2}; -S(O)_{2}Rx; -NRx(CO)Rx en donde cada ocurrencia de Rx independientemente incluye, pero no se limita a, alifático, heteroalifático, arilo, heteroarilo, arilalquilo, o heteroarilalquilo, en donde cualquiera de los sustituyentes alifático, heteroalifático, arilalquilo, o heteroarilalquilo descritos arriba y en esta puede ser sustituido o no sustituido, ramificado o no ramificado, cíclico o acíclico, y en donde cualquiera de los sustituyentes arilo o heteroarilo descritos arriba y en esta puede ser sustituido o no sustituido. Ejemplos adicionales de los sustituyentes generalmente aplicables se ilustran por las modalidades específicas mostradas en los Ejemplos que se describen en esta.

El término "cicloalquilo", como se utiliza aquí, se refiere específicamente a grupos que tienen de tres a siete, preferiblemente de tres a diez átomos de carbono. Apropiados cicloalquilos incluyen, pero no se limitan a ciclopropil, ciclobutil, ciclopentil, ciclohexil, cicloheptil y similares, que, como en el caso de otras fracciones alifáticas, heteroalifáticas o heterocíclicas, pueden ser opcionalmente sustituidas con sustituyentes que incluyen, pero no limitan a alifático; heteroalifático; arilo; heteroarilo; arilalquilo; heteroarilalquilo; alcoxi; ariloxi; heteroalcoxi; heteroariloxi; alquiltio; ariltio; heteroalquiltio; heteroariltio; F; Cl; Br, I; -OH; -NO_{2}; -CN; -CF_{3}; -CH_{2}CF_{3}; -CHCl_{2}; -CH_{2}OH; -CH_{2}CH_{2}OH; -CH_{2}NH_{2}; -CH_{2}SO_{2}CH_{3}; -C(O)Rx; -CO_{2}(Rx); -CON (Rx)_{2}; -OC(O)Rx; -OCO_{2}Rx; -OCON(Rx)_{2}; -N(Rx)_{2}; -S(O)_{2}Rx; NRx(CO)Rx en donde cada ocurrencia de Rx independientemente incluye, pero no se limita a, alifático, heteroalifático, arilo, heteroarilo, arilalquilo, o heteroarilalquilo, en donde cualquiera de los sustituyentes alifático, heteroalifático, arilalquilo, o heteroarilalquilo descritos arriba y en esta puede ser sustituido o no sustituido, ramificado o no ramificado, cíclico o acíclico, y en donde cualquiera de los sustituyentes arilo o heteroarilo descritos arriba y en esta puede ser sustituido o no sustituido. Ejemplos adicionales de sustituyentes aplicables generalmente se ilustran por las modalidades específicas mostradas en los Ejemplos que se describen en esta.

El término "heteroalifático", como se utiliza aquí, se refiere a las fracciones alifáticas que contienen uno o más átomos de oxígeno, azufre, nitrógeno, fósforo o silicio, por ejemplo, en lugar de átomos de carbono. Las fracciones heteroalifáticas pueden ser ramificadas, no ramificadas, cíclicas o acíclicas e incluyen heterociclos saturados e insaturados tal como morfolino, pirrolidinil, etc. En ciertas modalidades, las heterofracciones alifáticas se sustituyen por reposición independiente de uno o más de los átomos de hidrógeno en esta con una o más fracciones que incluyen, pero no limitan a alifático; heteroalifático; arilo; heteroarilo; arilalquilo; heteroarilalquilo; alcoxi; ariloxi; heteroalcoxi; heteroariloxi; alquiltio; ariltio; heteroalquiltio; heteroariltio; F; Cl; Br; I; -OH; -NO_{2}; -CN; -CF_{3}; -CH_{2}CF_{3}; -CHCl_{2}; -CH_{2}OH; -CH_{2}CH_{2}OH; -CH_{2}NH_{2}; -CH_{2}SO_{2}CH_{3}; -C(O)Rx; -CO_{2}(Rx); -CON (Rx)_{2}; -OC(O)Rx; -OCO_{2}Rx; -OCON(Rx)_{2}; -N(Rx)_{2}; -S(O)_{2}Rx; -NRx(CO)Rx en donde cada ocurrencia de Rx independientemente incluye, pero no se limita a, alifático, heteroalifático, arilo, heteroarilo, arilalquilo, o heteroarilalquilo, en donde cualquiera de los sustituyentes alifático, heteroalifático, arilalquilo, o heteroarilalquilo descritos arriba y en esta pueden ser sustituidos o no sustituidos, ramificados o no ramificados, cíclicos o acíclicos, y en donde cualquiera de los sustituyentes arilo o heteroarilo descritos arriba y en esta pueden ser sustituidos o no sustituidos. Ejemplos adicionales de sustituyentes aplicables generalmente se ilustran por las modalidades específicas mostradas en los Ejemplos que se describen en esta.

Los términos "halo" y "halógeno" como se utiliza aquí refiriéndose a un átomo seleccionado de flúor, cloro, bromo y yodo.

El término "haloalquilo" indica un grupo alquilo, como se define arriba, que tiene uno, dos, o tres átomos de halógeno adherido a este y se ilustra por dichos grupos como clorometil, bromoetil, trifluorometil, y similares.

El término "heterocicloalquilo" o "heterociclo", como se utiliza aquí, se refiere a un anillo no-aromático de 5-, 6-, o 7- miembros o un grupo policíclico, que incluye, pero no limita a un grupo bi- o tri-cíclico que comprende anillos fundidos de seis-miembros que tiene entre uno y tres heteroátomos independientemente seleccionados del oxígeno, azufre y nitrógeno, en donde (i) cada anillo de 5-miembros tiene 0 a 1 doble enlaces y cada anillo de 6-miembros tiene de 0 a 2 dobles enlaces, (ii) los heteroátomos de nitrógeno y azufre pueden ser opcionalmente oxidados, (iii) el heteroátomo de nitrógeno opcionalmente puede ser cuaternizado, y (i.v.) cualquiera de los anillos heterocíclicos citados anteriormente pueden estar fundidos a un anillo bencénico. Los heterociclos representativos incluyen, pero no se limitan a, pirrolidinil, pirazolinil, pirazolidinil, imidazolinil, imidazolidinil, piperidinil, piperazinil, oxazolidinil, isoxazolidinil, morfolinil, tiazolidinil, isotiazolidinil, y tetrahidrofuril. En ciertas modalidades, un grupo "heterocicloalquilo o heterociclo sustituido" se utiliza y como se usa aquí, se refiere a un grupo heterocicloalquilo o heterociclo, como se define arriba, sustituido mediante la reposición independiente de uno, dos o tres de los átomos de hidrógeno en esta con, pero no se limitan, un alifático; heteroalifático; arilo; heteroarilo; arilalquilo; heteroarilalquilo; alcoxi; ariloxi; heteroalcoxi; heteroariloxi; alquiltio; ariltio; heteroalquiltio; heteroariltio; F; Cl; Br; I; -OH; -NO_{2}; -CN; -CF_{3}; -CH_{2}CF_{3}; -CHCl_{2}; -CH_{2}OH; -CH_{2}CH_{2}OH; -CH_{2}NH_{2}; -CH_{2}SO_{2}CH_{3}; -C(O)R_{x}; -CO_{2}(R_{x}); -CON(R_{x})_{2}; -OC(O)R_{x}; OCO_{2}R_{x}; -OCON
(R_{x})_{2}; N(R_{x})_{2}; -S(O)_{2}R_{x}; -NR_{x}(CO)R_{x} en donde cada ocurrencia de Rx independientemente incluye, pero no se limita a, alifático, heteroalifático, arilo, heteroarilo, arilalquilo, o heteroarilalquilo, en donde cualquier de los sustituyentes alifático, heteroalifático, arilalquilo, o heteroarilalquilo descritos arriba y en esta pueden ser sustituidos o no sustituidos, ramificados o no ramificados, cíclicos o acíclicos, y en donde cualquiera de los sustituyentes arilo o heteroarilo descritos arriba y en esta pueden ser sustituidos o no sustituidos. Adicionales ejemplos de sustituyentes aplicables generalmente se ilustran mediante las modalidades específicas mostradas en los Ejemplos que se describen en esta.

"Marcado": Como se utiliza en esta, el término "marcado" se propone para significar que un compuesto tiene al menos un elemento, isótopo o compuesto químico adherido para permitir la detección del compuesto. En general, los marcadores caen en tres clases: a) marcadores isotópicos, que pueden ser isótopos radioactivos o pesados, que incluyen, pero no limitan a, ^{2}H, ^{3}H, ^{32}P, ^{35}S, ^{67}Ga, ^{99m}Tc (Tc-99m), ^{111}In, ^{123}I, ^{125}I, ^{169}Yb y ^{186}Re; b) marcadores inmunes, que puede ser anticuerpos o antígenos; y c) tintas coloreadas o fluorescentes. Se apreciará que los marcadores puedan ser incorporados dentro del compuesto en cualquier posición que no interfiera con la actividad biológica o características del compuesto que esta siendo detectado. En ciertas modalidades de la invención, la marcación por fotoafinidad se utiliza para la elucidación directa de interacciones intermoleculares interinolecular en sistemas biológicos (por ejemplo, para probar el sitio de enlace del epotilone en un dímero de tubulina). Una variedad de fotófobos conocidos pueden ser empleados, confiando en la fotoconversión de los compuestos diazo, azidas, o diazirinas a nitrenos o carbenos (Ver, Bayley, H., Photogenerated Reagents in Biochemistry y Molecular Biology (1983), Elsevier, Amsterdam.).

En ciertas modalidades de la invención, los marcadores de fotoafinidad empleados son o-, m- y p-azidobenzoils, sustituidos con una o más fracciones de halógeno, que incluyen, pero no limitan a ácido 4-azido-2,3,5,6-tetrafluorobenzoico.

"Polímero": El término "polímero", como se utiliza aquí, se refiere a una composición que comprende cadenas que pueden ser abiertas, cerradas, lineales, ramificadas o ligadas en cruz de unidades repetidoras (monómeros) que pueden ser iguales o diferentes. Se apreciará que en ciertas modalidades el término polímero se refiere a biopolímeros, que, como se utiliza aquí, se proponen para referirse a materiales poliméricos presentes naturalmente o basados en aquellos materiales encontrados en la naturaleza, que incluyen, pero no limitan a ácidos nucleicos, péptidos, y miméticos de estos. En ciertas otras modalidades, el término polímero se refiere a polímeros sintéticos, tal como polímeros biodegradables u otros materiales poliméricos. Se apreciará que los soportes poliméricos sólidos también comprenden por los polímeros de la presente invención. Los compuestos inventivos pueden ser adheridos a soportes poliméricos y de esta manera ciertas modificaciones sintéticas se pueden conducir sobra la fase sólida. Como se utiliza en esta, el término "soporte sólido" se entiende para incluir, pero no se limita a, gránulos, discos, capilares, fibras huecas, agujas, alfileres, fibras sólidas, perlas de celulosa, perlas de cristal poroso, silica gel, perlas de poliestireno opcionalmente ligadas en cruz con divinilbenceno, perlas de co-poli injerto, perlas de poli-acrilamida, perlas de látex, perlas de dimetilacrilamida opcionalmente ligadas en cruz con N-N'-bis-acriloiletilenediamina, y partículas de vidrio cubiertas con un polímero hidrofóbico. Alguien de ordinaria habilidad en el oficio se dará cuenta que el cambio del soporte sólido particular será limitado por la compatibilidad del soporte con la reacción química que se utilice. Un soporte sólido ejemplar es una resina amino Tentagel, una mezcla de 1) un glóbulo de poliestireno ligado en cruz con divinilbenceno y 2) PEG (polietilenglicol). El Tentagel es un soporte sólido útil particularmente porque proporciona un soporte versátil para usar en ensayos on-bead u off-bead, y también experimentan excelente hinchazón en solventes que oscilan entre tolueno y agua.

Descripción de ciertas modalidades de la invención

En el reconocimiento de la necesidad de desarrollar terapias para el cáncer novedosas y eficaces, la presente invención proporciona metodologías sintéticas novedosas permitiendo el acceso a los macrociclos que tienen un amplio rango de actividad biológica y farmacológica, así como los compuestos novedosos con dicha actividad, las composiciones terapéuticas novedosas, y los métodos para utilizar estos compuestos y composiciones.

En ciertas modalidades, los compuestos inventivos son útiles en el tratamiento de cáncer. Ciertos compuestos de la invención muestran efectos inhibitorios de crecimiento o citotóxicos en líneas celulares de cáncer, muestran una habilidad para polimerizar la tubulina y estabilizar los ensambles del microtúbulo, y/o conducir a la disminución o desvanecimiento de los tumores en modelos de xenoinjerto en célula cancerígena. En ciertas modalidades, los compuestos pueden tener efectos secundarios reducidos o mínimos que incluyen toxicidad a órganos vitales, nausea, vómito, diarrea, alopecia, pérdida de peso, ganancia de peso, toxicidad del hígado, desórdenes de la piel, etc. Los compuestos también pueden ser más fáciles de formular debido al incremento de su solubilidad en agua, disminución de la toxicidad, incremento del rango terapéutico, incremento de la eficacia, etc.

Descripción General de los Compuestos de la Invención

Los compuestos de la invención incluyen compuestos de la fórmula general según se define más abajo:

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en donde R_{1} es un hidrógeno o alquilo inferior; en ciertas modalidades, R_{1} es un metilo; en ciertas modalidades, R_{1} es -CF_{3}, -CF_{2}H, o CH_{2}F; en otras modalidades, R_{1} es grupo alquilo perfluorinado o fluorinado; en aún otras modalidades, R_{1} es un grupo alquilo halogenado o perhalogenado;

R_{2} es un arilo, heteroarilo, arilalquilo sustituido o no sustituido, o una fracción heteroarilalquilo; en ciertas modalidades, R_{2} es un oxazol sustituido o no sustituido; en otras modalidades, R_{2} es un sustituido o tiazol no sustituido;

R_{5} y R_{6} son cada uno independientemente un hidrógeno o un grupo protector; en ciertas modalidades, R_{5} y R_{6} ambos son hidrógeno;

X es O, S, C (R_{7})_{2}, o NR_{7}, en donde cada ocurrencia de R_{7} es independientemente un hidrógeno o alquilo inferior; en ciertas modalidades, X es O; en otras modalidades, X es NH;

R_{B} es, independientemente para cada ocurrencia, hidrógeno; halógeno; -OR_{B'}; -SR_{B'}; -N(R_{B'})_{2}; -C(O)OR_{B'}; -C(O)R_{B'}; -CONHR_{B'}; -O(C=O)R_{B'}; -O(C=O)OR_{B'}; -NR_{B'}(C=O)R_{B'}; N_{3}; N_{2}R_{B'}; acetal cíclico; o cíclico o acíclico, lineal o ramificado, alifático, heteroalifático, arilo o heteroarilo, opcionalmente sustituido con uno o más de hidrógeno; halógeno; -OR_{B'}; -SR_{B'}; -N(R_{B'})_{2}; -C(O)OR_{B'}; -C(O)R_{B'}; -CONHR_{B'}; -O(C=O)R_{B'}; -O(C=O)OR_{B'}; -NR_{B'}(C=O)R_{B'}; N_{3}; N_{2}R_{B'}; acetal cíclico; o cíclico o acíclico, alifático lineal o ramificado sustituido o no sustituido, heteroalifático, arilo, o una fracción heteroarilo; o es un epotilone, desoxiepotilone, o sus análogos; o es un polímero; carbohidrato; marcador de fotoafinidad; o radiomarcador; en ciertas modalidades, R_{B} es un hidrógeno,

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metilo, etilo, propil, butil, pentil, hexil, ciclopropil, ciclobutil, ciclopentil, o ciclohexil, cada uno no sustituido u opcionalmente sustituido con una o más ocurrencias de halógeno, -OH, -OR_{B'}, NH_{2}, o N(R_{B'})_{2}, o cualquiera de sus combinaciones, en donde cada ocurrencia de R_{B'} es independientemente un hidrógeno, alquilo, arilo, o un grupo protector, en otras modalidades, R_{B} es un hidrógeno, metilo, o etilo, en aún otras modalidades, R_{B} es un metilo, en aún otras modalidades, R_{B} es -CF_{3}, -CH_{2}F, o CHF_{2}; y

sus derivados farmacéuticamente aceptables.

En ciertas modalidades, X es O. En otras modalidades, X es NH. En otras modalidades, X es CH_{2}.

En algunas modalidades, R_{2} es un tiazol sustituido o no sustituido. En ciertas modalidades, R_{2} es 2-metiltiazo-4-il. En otras modalidades, R_{2} es 2-hidroxilmetil-tiazo-4-il. En aún otras modalidades, R_{2} es 2-aminometiltiazo-4-il. En otras modalidades, R_{2} es 2-tiolmetil-tiazo-4-il.

En ciertas modalidades R_{2} es un oxazol sustituido o no sustituido. En ciertas modalidades, R_{2} es 2-metiloxazo-4-il. En otras modalidades, R_{2} es 2-hidroxilmetil-oxazo-4-il. En aún otras modalidades, R_{2} es 2-aminometiloxazo-4-il. En otras modalidades, R_{2} es 2-tiolmetil-oxazo-4-il.

En ciertas modalidades, R_{B} es un hidrógeno, metilo, etilo, -CF_{3}, -CH_{2}F, -CF_{2}H. En ciertas modalidades, R_{B} es un metilo. En aún otras modalidades, R_{B} es -CF_{3}. En ciertas modalidades, R_{B} es un hidrógeno. En otras modalidades, R_{B} es un etilo.

Ciertos compuestos preferidos incluye, por ejemplo:

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Los compuestos de esta invención incluyen específicamente aquellos publicados arriba y descritos en esta, y se ilustran en parte mediante las varias clases, subgéneros y especies revelados en otra parte en esta.

Se apreciará por alguien de ordinaria habilidad en el oficio que los centros asimétricos pueden existir en los compuestos de la presente invención. Así, los compuestos inventivos y las composiciones farmacéuticas de estos puede estar en la forma de un enatiómero, diastereómero o isómero geométrico individual, o pueden estar en la forma de una mezcla de estereoisómeros. En ciertas modalidades, los compuestos de la invención son compuestos enatiopuros. En ciertas otras modalidades, unas mezclas de estereoisómeros o diastereómeros se proporcionan.

Se apreciará que alguna de las clases precedentes y las subclases de los compuestos puedan existir en varias formas isométricas. La invención abarca los compuestos como isómeros individuales sustancialmente libres de otros isómeros y alternativamente, como mezclas de varios isómeros, por ejemplo, mezclas racémicas de estereoisómeros. Adicionalmente, la invención abarca isómeros de doble enlace (Z) y (E) a menos que de otra manera específicamente designada.

En ciertas modalidades preferidas, el doble enlace en la posición C12-C13 esta en la configuración cis o Z. En algunas modalidades, el doble enlace en la posición C9-C10 está en la configuración trans o E. En aún otras modalidades, el doble enlace en la posición C12-C13 está en la configuración cis o Z, y el doble enlace en la posición C9-C10 está en la configuración trans o E. La invención también abarca los tautómeros de los compuestos específicos como se describe arriba.

Adicionalmente, la presente invención proporciona derivados de los compuestos inventivos farmacéuticamente aceptables, y los métodos del tratamiento a un sujeto utilizando estos compuestos, las composiciones farmacéuticas de estos, o en combinación tanto de estos con uno o más agentes terapéuticos adicionales. La frase, "derivado farmacéuticamente aceptable", como se utiliza aquí, indica cualquier sal farmacéuticamente aceptable, éster, o sal de dicho éster, de tal compuesto, o cualquier otro producto de adición o derivado que, bajo la administración a un paciente, es capaz de proporcionar (directamente o indirectamente) un compuesto según se describen de otra manera en esta, o un metabolito o residuo de estos. Derivados farmacéuticamente aceptables de esta manera incluyen entre otros pro-medicamentos. Un pro-medicamento es un derivado de un compuesto, usualmente con actividad farmacológica reducida significantemente, que contiene una fracción adicional que es susceptible para retirar in vivo la producción de la molécula original como las especies activas farmacológicamente. Un ejemplo de un pro-fármaco es un éster que se divide in vivo para producir un compuesto de interés. Los pro-medicamentos de una variedad de compuestos, y los materiales y los métodos para derivatizar los compuestos originales para crear los pro-medicamentos, se conocen y pueden ser adaptados a la presente invención. Ciertas composiciones farmacéuticas ejemplares y los derivados farmacéuticamente aceptables serán discutidos con más detalle en esta abajo.

Los compuestos de esta invención que son de particular interés incluyen aquellos que:

\bullet muestran efecto inhibitorio de crecimiento o citotóxico sobre líneas celulares cancerígenas mantenidas in vitro o en estudios de animales utilizando un modelo de xenoinjerto de célula cancerígena científicamente aceptable;

\bullet muestran una habilidad para polimerizar la tubulina y estabilizar los ensambles del microtúbulo;

\bullet muestran niveles mínimos de toxicidad para órganos vitales;

\bullet conducir al desvanecimiento del tumor en modelos de xenoinjerto de célula cancerígena científicamente aceptables;

\bullet conducir a la disminución del tumor en modelos de xenoinjerto de célula cancerígena científicamente aceptables;

\bullet conducir al desvanecimiento del tumor en modelos de xenoinjerto de célula cancerígena científicamente aceptables y retardando/o no recurrencia del tumor después de detener el tratamiento;

\bullet mostrar disminución transitoria y reversible del peso corporal y mostrar efectos terapéuticos en modelos de xenoinjerto de célula cancerígena científicamente aceptables;

\bullet mostrar solubilidad mejorada en agua sobre los epotilones A, B, C o D, o paclitaxel, o adicionalmente o alternativamente mostrar suficiente solubilidad para ser formulados en un medio acuoso utilizando una proporción reducida del chremophor; y/o

\bullet mostrar un perfil terapéutico (por ejemplo, efecto curativo y seguridad óptima) que es superior a aquella del epotilone B, epotilone D, o paclitaxel.

Una variedad de análogos del epotilone como los descritos arriba han sido preparados, caracterizados, y probados según se ilustra en esta. Los análogos del 9,10-dihidro-epotilone se han encontrado por ser útiles en el tratamiento de cáncer, y particularmente los compuestos han sido preparados y se ha encontrado que poseen una o más de las características deseada enumeradas arriba.

Metodología Sintética

La síntesis de ciertos epotilones, desoxiepotilones y sus análogos ha sido descrita previamente (ver, Patentes U.S. 6,242,469, 6,284,781, 6,300,355, 6,204,388, 6,316,630, y 6,369,234; Patente U.S. Aplicaciones 09/797,027, 09/796,959, y 10/236,135; y PCT Publicación Nos. WO 99/01124, WO 99/43653, y WO 01/64650). En reconocimiento a la necesidad de metodologías sintéticas mejoradas o adicionales para generar eficientemente los epotilones, desoxiepotilones y sus análogos en grandes cantidades, la presente invención proporciona una ruta eficiente y modular para la síntesis de los epotilones, desoxiepotilones y los análogos de estos. A pesar de que la síntesis de ciertos compuestos ejemplar se describe en la Ejemplificación en esta, se valorará que esta metodología generalmente sea aplicable a la generación de los análogos y los conjugados según se discute arriba para cada una de las clases y subclases descritas en esta.

En particular, los compuestos 9,10-dihidroepotilone de la presente invención pueden ser preparados por una variedad de medios utilizando metodologías sintéticas útiles en la síntesis de epotilones. En ciertas modalidades, los compuestos se preparan utilizando una ruta sintética convergente. Por ejemplo, el epotilone puede ser sintetizado mediante la preparación de dos o tres intermediarios que se reúnen para producir el compuesto deseado. En una modalidad, uno de los intermediarios es una porción acilo que contiene 1-9 carbonos, y otro intermediario que contiene 10-15 carbonos y también pueden contener la cadena lateral tiazol. Estas dos porciones iguales en líneas generales del epotilone pueden ser reunidas primero utilizando una reacción de esterificación entre C-1 y un oxígeno fuera de sitio C-15. El macrociclo luego puede estar cerrado utilizando una reacción de acoplamiento carbono-carbono tal como un acoplamiento Suzuki o una reacción de metátesis de cierre del anillo. En una modalidad, la etapa final de cierre del anillo se logra utilizando una reacción de metátesis de cierre del anillo para formar el doble enlace 9,10- y cerrar el macrociclo. La reacción de metátesis de cierre del anillo se logra utilizando un catalizador organometálico tal como el catalizador Grubbs como se muestra en el Esquema 8 abajo. En ciertas modalidades, el doble enlace 9,10- es reducido u oxidado, o el doble enlace 9,10- puede ser además funcionalizado para preparar derivados adicionales del epotilone.

En otras modalidades, la etapa final de cierre del anillo se logra utilizando una reacción de metátesis de cierre del anillo para formar el doble enlace 12,13- y cerrar el macrociclo. En ciertas modalidades, el doble enlace 12,13- se reduce u oxida. En otras modalidades, una reacción de macroaldolización o macrolactonización se utiliza para formar el macrociclo.

Ciertas síntesis ejemplares de los compuestos de la invención se proporcionan en las Figuras y en los Ejemplos. Como sería apreciado por alguien de ordinaria habilidad en el oficio, una variedad de análogos y sus derivados pueden ser preparados utilizando el procedimiento sintético descrito en esta. Por ejemplo, uno podría lograr muchas de las etapas sintéticas con diferentes grupos protectores o diferentes sustituyentes sobre el anillo de 16-miembros.

Composiciones Farmacéuticas

Esta invención también proporciona una preparación farmacéutica que comprende al menos uno de los compuestos como se describe arriba y en esta, o un derivado de estos farmacéuticamente aceptable, compuestos que son capaces de inhibir el crecimiento de o matar las células cancerígenas, y, en ciertas modalidades de especial interés son capaces de inhibir el crecimiento de o matar las células cancerígenas resistentes a multifármacos. En ciertas modalidades, la preparación farmacéutica también comprende como agente de solubilización o de emulsión tal como Cremophor (aceite de castor polioxil 35) o Solutol (polietilenglicol 660 12-hidroxiestearato hydroxystreaiate).

Como se discute arriba, la presente invención proporciona compuestos novedosos que tienen actividad antitumor y antiproliferativa, y de esta manera los compuestos inventivos son útiles para el tratamiento del cáncer. Por consiguiente, en otro aspecto de la presente invención, se proporcionan composiciones farmacéuticas, en donde estas composiciones comprenden cualquiera de los compuestos como se describen aquí, y opcionalmente comprenden un excipiente farmacéuticamente aceptable. En ciertas modalidades, estas composiciones opcionalmente comprenden uno o más agentes terapéuticos adicionales. En otras ciertas modalidades, el agente terapéutico adicional es un agente anticáncer, como se discute con más detalle en esta.

También será apreciado que ciertos de los compuestos de presente invención puedan existir en forma libre para el tratamiento, o cuando sea apropiado, como uno de sus derivados farmacéuticamente aceptable. De acuerdo con la presente invención, un derivado farmacéuticamente aceptable incluye, pero no se limita a, sales farmacéuticamente aceptables, ésteres, sales de tales ésteres, o cualquier otro producto de adición o derivado el cual bajo la administración a un paciente con necesidad sea capaz de proporcionar, directamente o indirectamente, un compuesto según lo descrito de otra manera en esta, o un metabolito o residuo de estos, por ejemplo, un promedicamento.

Como se utiliza en esta, el término "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a aquellas sales que están, dentro del alcance de estimación médica acertada, apropiadas para usar en contacto con los tejidos de humanos y animales inferiores sin indebida toxicidad, irritación, respuestas alérgicas y similares, y son proporcionados con una relación razonable riesgo/beneficio. Las sales farmacéuticamente aceptables son bien conocidas en el oficio. Por ejemplo, S. M. Berge, et al. describe las sales farmacéuticamente aceptables en detalle en J. Pharmaceutical Sciences, 66: 1-19 (1977), incluido en esta por referencia. Las sales se pueden preparar in situ durante el aislamiento y la purificación final de los compuestos de la invención, o individualmente por la reacción de la función de base libre con un apropiado ácido orgánico. Ejemplos de sales de adición de ácidos farmacéuticamente aceptables, no-tóxicas son sales de un grupo amino formadas con ácidos inorgánicos tal como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico y ácido perclórico o con ácidos orgánicos tales como ácido acético, ácido oxálico, ácido maléico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido succínico o ácido malónico o utilizando otros métodos utilizados en el oficio tal como intercambio iónico. Otras sales farmacéuticamente aceptables incluyen adipato, alginato, ascorbato, aspartato, bencenosulfonato, benzoato, bisulfato, borato, butirato, camforato, camforsulfonato, citrato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanosulfonato, formato, fumarato, glucoheptonato, glicerofosfato, gluconato, hernisulfato, heptanoato, hexanoato, hidroyoduro, 2-hidroxietanosulfonato, lactobionato, lactato, laurato, lauril sulfato, malato, maleato, malonato, metanosulfonato, 2-naftalenosulfonato, nicotinato, nitrato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, fosfato, picrato, pivalato, propionato, estearato, succinato, sulfato, tartrato, tiocianato, p-toluenosulfonato, undecanoato, sales de valerato, y similares. Representativas sales álcali o de metal alcalinotérreo incluyen sodio, litio, potasio, calcio, magnesio, y similares. Adicionalmente las sales farmacéuticamente aceptables incluyen, cuando sea apropiado, amonio no tóxico, amonio cuaternario, y cationes de amina formados utilizando contraiones tal como haluro, hidroxido, carboxilato, sulfato, fosfato, nitrato, sulfonato alquilo inferior y aril sulfonato.

Adicionalmente, como se utiliza aquí, el término "éster farmacéuticamente aceptable" se refiere a los ésteres que hidrolizan in vivo e incluyen aquellos que se rompen fácilmente en el cuerpo humano para dejar el compuesto principal o una sal de estos. Los grupos éster apropiados incluyen, por ejemplo, aquellos derivados a partir de los ácidos carboxílicos alifáticos farmacéuticamente aceptables, particularmente ácidos alcanoico, alquenoico, cicloalcanoico y alcanodioico, en los cuales cada fracción alquilo o alquenilo favorablemente tiene más de 6 átomos de carbono. Ejemplos de ésteres particulares incluyen formatos, acetatos, propionatos, butiratos, acrilatos y etilsuccinatos.

Adicionalmente, el término "promedicamentos farmacéuticamente aceptables" como se utiliza aquí se refiere a aquellos promedicamentos de los compuestos de la presente invención que están, dentro del alcance de la estimación médica acertada, apropiados para utilizar en contacto con los tejidos de humanos y de animales inferiores con indebida toxicidad, irritación, respuesta alérgica, y similares, proporcionados con una relación riesgo/beneficio razonable, y eficaces para su pretendido uso, así como las formas zwitteriónicas, cuando es posible, de los compuestos de la invención. El término "promedicamento" se refiere a los compuestos que son rápidamente transformados in vivo para producir el compuesto principal de la fórmula de arriba, por ejemplo por hidrólisis en sangre. Una discusión minuciosa se proporciona en T. Higuchi y V. Stella, Pro-drugs as Novel Delivery Systems, Vol. 14 of the A.C.S. Symposium Series, y in Edward B. Roche, ed., Bioreversible Carriers in Drug Design, American Pharmaceutical Association y Pergamon Press, 1987, los cuales se incorporan en esta por referencia.

Como se describe arriba, las composiciones farmacéuticas de la presente invención adicionalmente comprende un excipiente farmacéuticamente aceptable, que, como se utiliza aquí, incluye cualquiera y todos los solventes, diluentes, u otros vehículos líquidos, de dispersión o ayudantes de suspensión, agentes activos superficiales, agentes isotónicos, agentes de engrosamiento o emulsificantes, preservativos, ligantes sólidos, lubricantes y similares, como corresponde a la dosificación particular de deseada. Remington's Pharmaceutical Sciences, Fifteenth Edition, E. W. Martin (Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1975) revela varios excipientes utilizados en la formulación de composiciones farmacéuticas y técnicas conocidas para la preparación de estas. Excepto a tal grado como cualquier vehículo excipiente convencional es incompatible con los compuestos anti-cáncer de la invención, tal como por la producción de cualquier efecto biológico indeseable o de otra manera que interactúa de una manera nociva con cualquier otro(s) componente(s) de la composición farmacéutica, su uso se contempla para estar dentro del alcance de esta invención. Algunos ejemplos de materiales que pueden servir como excipientes farmacéuticamente aceptables incluyen, pero no se limitan a, azúcares tal como lactosa, glucosa y sacarosa; almidones tal como almidón de maíz y almidón de patata; celulosa y sus derivados tal como carboximetil celulosa de sodio, etil celulosa y acetato de celulosa; tragacanto en polvo; malta; gelatina; talco; Cremophor; Solutol; excipientes tal como manteca de cacao y ceras de supositorio; aceites tal como aceite de maní, aceite de semilla de algodón; aceite de cártamo; aceite de ajonjolí; aceite de oliva; aceite de maíz y aceite de soja; glicoles; tal como propilen glicol; ésteres tal como etil oleato y etilo laurato; agar; agentes reguladores tal como hidroxido de magnesio y hidroxido de aluminio; ácido de algínico; agua libre de pirógenos; salina isotónica; solución de Ringer; alcohol etílico, y soluciones reguladoras de fosfato, así como otros lubricantes compatibles no-tóxico tal como sodio lauril sulfato y magnesio estearato, así como agentes de coloración, agentes de liberación, agentes de recubrimiento, agentes edulcorantes, aromatizantes y de aroma, preservativos y antioxidantes también pueden estar presentes en la composición, de acuerdo con el juicio del formulador.

Usos de los compuestos y las Composiciones Farmacéuticas

La invención además proporciona un método para inhibir el crecimiento del tumor y/o la metástasis del tumor. En ciertas modalidades de especial interés, la invención proporciona un compuesto de la invención para el tratamiento de cánceres por la inhibición del crecimiento del tumor y/o de la metástasis del tumor para tumores de células cancerígenas con resistencia a multifármacos. El compuesto o un derivado de este farmacéuticamente aceptable se administra a un sujeto en una cantidad efectiva terapéuticamente (que incluyen, pero no limitan a humano o animal) con necesidad de este. En ciertas modalidades, específicamente para el tratamiento cánceres que comprenden células cancerígenas con resistencia a multifármacos, la cantidad efectiva terapéuticamente es una cantidad suficiente para matar o inhibir el crecimiento de líneas celulares cancerígenas con resistencia a multifármacos. En ciertas modalidades, los compuestos inventivos son útiles para el tratamiento de tumores sólidos.

Los compuestos y las composiciones farmacéuticas de la presente invención se pueden utilizar en el tratamiento o la prevención de cualquier enfermedad o condiciones que incluyen enfermedades proliferativas (por ejemplo, cáncer), enfermedades autoinmunes (por ejemplo, artritis reumatoide), y infecciones (por ejemplo, bacteriana, por hongos, etc.). Los compuestos y las composiciones farmacéuticas pueden ser administrados a animales, preferiblemente mamíferos (por ejemplo, animales domésticos, gatos, perros, ratones, ratas), y más preferiblemente humanos. Cualquier método de administración puede ser utilizado para entregar el compuesto de las composiciones farmacéuticas al animal. En ciertas modalidades, el compuesto o la composición farmacéutica se administran vía parenteral.

En aún otro aspecto, de acuerdo con la presente invención, las células tumorales se matan, o su crecimiento se inhibe por el contacto de las células tumorales con el compuesto o la composición inventivos, según lo descrito aquí. Así, en aún otro aspecto de la invención, una cantidad efectiva terapéuticamente de un compuesto inventivo, o una composición farmacéutica que contiene un compuesto inventivo se puede administrar a un sujeto con necesidad de este, en tales cantidades y para tal tiempo como sea necesario para lograr el resultado deseado. En ciertas modalidades de la presente invención una "cantidad efectiva terapéuticamente" del compuesto inventivo o una composición farmacéutica es aquella cantidad eficaz para matar o inhibir el crecimiento de células tumorales. Los compuestos y las composiciones, de acuerdo con el método de la presente invención, puede ser administrados utilizando cualquier cantidad y cualquier ruta de administración eficaces para matar o inhibir el crecimiento de las células tumorales. De esta manera, la expresión "cantidad eficaz para matar o inhibir el crecimiento de las células tumorales", como se utiliza aquí, se refiere a una cantidad suficiente del agente para matar o inhibir el crecimiento de las células tumorales. La cantidad exacta requerida variará de un sujeto a otro sujeto, dependiendo de las especies, edad, y condición general del sujeto, la severidad de la infección, el agente anticáncer particular, su modo de administración, y similares. Los compuestos anticáncer de la invención preferiblemente se formulan en la forma de dosificación por unidad para la comodidad de la administración y uniformidad de dosificación. La expresión "forma de dosificación por unidad" como se utiliza aquí se refiere a una unidad discreta físicamente del agente anticáncer apropiado para el paciente a ser tratado. Será entendido, sin embargo, que el consumo diario total de los compuestos y las composiciones de la presente invención será decidido por el médico que atiende dentro del alcance de la estimación médica acertada. El nivel de dosis eficaz terapéuticamente específico para cualquier paciente u organismo particular dependerá de una variedad de factores que incluyen el desorden que es tratado y la severidad del desorden; la actividad de compuesto específico empleado; la composición específica empleada; la edad, el peso corporal, salud general, sexo y dieta del paciente; el tiempo de administración, ruta de administración, y el índice de excreción del compuesto específico empleado; la duración del tratamiento; los fármacos utilizados en combinación o coincidentes con el compuesto específico empleado; y como los factores bien conocidos en los oficios de la medicina.

Adicionalmente, después de la formulación con un apropiado excipiente farmacéuticamente aceptable en una dosificación deseada, las composiciones farmacéuticas de esta invención se puede administrar a humanos y otros animales vía oral, vía rectal, vía parenteral, intracisternal, intravaginal, intraperitoneal, tópica (como mediante polvos, ungüentos, o gotas), vía bucal, como un aerosol oral o nasal, o similares, que dependen de la severidad de la infección que es tratada. En ciertas modalidades de la invención, los compuestos inventivos como se describen aquí se formulan por conjugación con quelantes solubles en agua, o polímeros solubles en agua tal como polietilenglicol como poli (1-ácido glutámico), o poli (1-ácido aspártico), como se describe en la Patente U.S. 5,977,163.

En ciertas modalidades, los compuestos de la invención pueden ser administrados vía oral o vía parenteral en niveles de dosificación suficientes para entregar desde aproximadamente 0.001 mg/Kg. a aproximadamente 100 mg/Kg., desde aproximadamente 0.01 mg/Kg. a aproximadamente 50 mg/Kg., preferiblemente desde aproximadamente 0.1 mg/Kg. a aproximadamente 40 mg/Kg., preferiblemente desde aproximadamente 0.5 mg/Kg. a aproximadamente 30 mg/Kg., desde aproximadamente 0.01 mg/Kg. a aproximadamente 10 mg/Kg., desde aproximadamente 0.1 mg/Kg. a aproximadamente 10 mg/Kg., y más preferiblemente desde aproximadamente 1 mg/Kg. a aproximadamente 25 mg/Kg., de peso corporal del sujeto por día, una o más veces al día, para obtener el efecto terapéutico deseado. La dosificación deseada puede ser entregada como entrega cada otro día, cada tercer día, cada semana, cada dos semanas, cada tres semanas, o cada cuatro semanas. En ciertas modalidades, la dosificación deseada puede ser entregada utilizando administraciones múltiples (por ejemplo, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, o diez administraciones).

Las formas de dosificación liquidas para administración oral incluyen, pero no se limitan a, emulsiones, microemulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes y elixires farmacéuticamente aceptables. Adicionalmente a los compuestos activos, las formas de dosificación líquidas pueden contener diluentes inertes comúnmente utilizados en el oficio tal como, por ejemplo, agua u otros solventes, agentes de solubilización y emulsificadores tal como alcohol etílico, alcohol isopropílico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bencílico, benzil benzoato, propilen glicol, 1,3-butilen glicol, dimetilformamida, aceites (en particular, aceites de semilla de algodón, cacahuete, maíz, germen, oliva, castor, y ajonjolí), glicerol, tetrahidrofurfuril alcohol, polietilenglicoles y ésteres de ácidos grasos del sorbitan, y mezclas de estos. Además de los diluentes inertes, las composiciones orales también pueden incluir adyuvantes tal como agentes de humectación, agentes emulsificantes y de suspensión, edulcorantes, saborizantes, y agentes de
aroma.

Las preparaciones inyectables, por ejemplo, suspensiones acuosas u oleaginosas inyectables estériles se pueden formular de acuerdo con el oficio conocido utilizando apropiados agentes de dispersión o de humectación y agentes de suspensión. La preparación inyectable estéril también puede ser una solución, suspensión o emulsión estéril inyectable en un diluente o solvente no-tóxico aceptable vía parenteral, por ejemplo, como una solución en 1,3-butanediol. Entre los vehículos y solventes aceptables que pueden ser empleados están el agua, solución de Ringer, U.S.P. y solución de cloruro de sodio isotónico. Además, aceites estériles, fijos se emplean convencionalmente como un solvente o medio de suspensión. Para este propósito cualquier aceite fijo blando puede ser empleado incluyendo mono- o diglicéridos sintéticos. Además, ácidos grasos tal como ácido oleico se utilizan en la preparación de inyectables.

Las formulaciones inyectables se pueden esterilizar, por ejemplo, por filtración a través de un filtro que retiene las bacterias, o por los agentes de esterilización que se incorporan en la forma de composiciones sólidas estériles que se pueden disolver o dispersar en agua estéril u otro medio inyectable estéril antes de utilizar.

Con el fin de prolongar el efecto de un fármaco, con frecuencia es deseable reducir la absorción del fármaco a partir de una inyección subcutánea o intramuscular. Esto se puede lograr por el uso de una suspensión líquida de material cristalino o amorfo con solubilidad pobre en agua. El índice de absorción del fármaco entonces depende de su índice de disolución que, a su vez, puede depender del tamaño del cristal y la forma cristalina. Alternativamente, la absorción retardada de una forma de fármaco administrado vía parenteral se logra disolviendo o suspendiendo el fármaco en un vehículo oleoso. Las formas de depósito inyectables se hacen formando matrices microencapsuladas del fármaco en polímeros biodegradables tal como polilactido-poliglicolido. Dependiendo de la relación del fármaco al polímero y la naturaleza del polímero particular empleado, el índice del fármaco liberado puede ser controlado. Ejemplos de otros polímeros biodegradables incluyen poli (ortoésteres) y poli (anhídridos). Las formulaciones inyectables de depósito también se preparan entrapando el fármaco en liposomas o microemulsiones que son compatibles con tejidos corporales.

Las composiciones para administración rectal o vaginal preferiblemente son supositorios que pueden ser preparadas mezclando los compuestos de esta invención con excipientes que no irritan apropiados o excipientes tal como manteca de cacao, polietilenglicol o una cera de supositorio que es sólida a temperatura ambiente pero líquida a temperatura corporal y por consiguiente se funde en la cavidad vaginal o rectal y liberando el compuesto acti-
vo.

Las formas de dosificación sólidas para la administración oral incluyen cápsulas, tabletas, píldoras, polvos, y gránulos. En tales formas de dosificación sólidas, el compuesto activo se mezcla con al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable, inerte o un excipiente tal como citrato de sodio o fosfato dicalcio y/o a) rellenos o extendedores tal como almidones, lactosa, sacarosa, glucosa, manitol, y ácido silícico, b) aglutinantes tal como, por ejemplo, carboximetilcelulosa, alginatos, gelatina, polivinilpirolidinona, sacarosa, y acacia, c) humectantes tal como glicerol, d) agentes desintegrantes tal como agar-agar, carbonato de calcio, almidón de patata o tapioca, ácido de algínico, ciertos silicatos, y carbonato de sodio, e) agentes retardantes en solución tal como parafina, f) aceleradores de absorción tal como compuestos de amonio cuaternario, g) agentes de humectación tal como, por ejemplo, alcohol cetílico y glicerol monostearato, h) absorbentes tal como caolín y arcilla bentonita, y i) lubricantes tal como talco, calcio estearato, magnesio estearato, polietilenglicoles sólidos, sodio lauril sulfato, y mezclas de estos. En el caso de las cápsulas, tabletas y píldoras, la forma de dosificación también puede contener agentes reguladores.

Las composiciones sólidas de un tipo similar también pueden ser empleadas como rellenos en cápsulas de gelatinas duras y blandas utilizando tales excipientes como lactosa o azúcar de la leche así como polietilenglicoles de pesos moleculares altos y similares. Las formas de dosificación sólidas de tabletas, grajeas, cápsulas, píldoras, y gránulos pueden ser preparadas con cubiertas y corazas tal como cubiertas entéricas y otras cubiertas bien conocidas en el oficio de formulación farmacéutica. Opcionalmente pueden contener agentes opacificantes y también pueden ser de una composición que libera el(los) ingrediente(s) activo(s) solamente, o preferencialmente, en cierta parte del tracto intestinal, opcionalmente, en una forma retardada. Ejemplos de composiciones de imbibición que pueden ser utilizadas incluyen sustancias poliméricas y ceras. Las composiciones sólidas de un tipo similar también pueden ser empleadas como rellenos en cápsulas de gelatina duras y blandas utilizando dichos excipientes como lactosa o azúcar de la leche así como poletilenglicoles de peso molecular alto y similares.

Los compuestos activos también pueden estar en forma micro-encapsulada con uno o más excipientes como se registra arriba. Las formas de dosificación sólidas de tabletas, grajeas, cápsulas, píldoras, y gránulos pueden ser preparadas con cubiertas y corazas tal como cubiertas entéricas, cubiertas de liberación controlada y otras cubiertas bien conocidas en el oficio de formulación farmacéutica. En tales formas sólidas de dosificación el compuesto activo puede ser mezclado con al menos un diluente inerte tal como sacarosa, lactosa o almidón. Tales formas de dosificación también pueden comprender, como en la práctica normal, sustancias adicionales con excepción de diluentes inertes, por ejemplo, lubricantes de tableteado y otros ayudantes de tableteado tales como magnesio estearato y celulosa microcristalina. En el caso de las cápsulas, tabletas y píldoras, las formas de dosificación también pueden contener agentes reguladores. Opcionalmente pueden contener agentes opacificantes y también pueden ser de una composición que libera solamente el(los) ingrediente(s), activo(s) o preferencialmente, en cierta parte del tracto intestinal, opcionalmente, en una forma retardada. Ejemplos de composiciones de imbibición que pueden ser utilizadas incluyen sustancias poliméricas y ceras.

Las formas de dosificación para administración tópica o transdérmica de un compuesto de esta invención incluyen ungüentos, pastas, cremas, lociones, geles, polvos, soluciones, vaporizadores, inhalantes o parches. El componente activo se mezcla bajo condiciones estériles con un excipiente farmacéuticamente aceptable y cualquiera de los preservativos o soluciones reguladoras necesarias como puedan ser requeridas. La formulación oftálmica, gotas para oídos, y gotas para ojos también se contemplan como parte del alcance de esta invención. Adicionalmente, la presente invención contempla el uso de los parches transdérmicos, que tienen la ventaja adicional de proporcionar la liberación controlada de un compuesto en el cuerpo. Tales formas de dosificación pueden ser hechas disolviendo o dispensando el compuesto en el medio apropiado. Los mejoradores de absorción también se pueden utilizar para incrementar el flujo del compuesto a través de la piel. El índice puede ser controlado proporcionando una membrana que controla el índice o dispersando el compuesto en una matriz de polímero o gel.

Como se discute arriba, los compuestos de la presente invención son útiles como agentes anticáncer, y de esta manera pueden ser útiles en el tratamiento de cáncer, ocasionando muerte de células tumorales o la inhibición del crecimiento de células tumorales. En general, los agentes anticáncer inventivos son útiles en el tratamiento de cánceres y otros desórdenes proliferativos, que incluyen, pero no limitan a cáncer de mama, cáncer de cerebro, cáncer de piel, cáncer cervical, cáncer del recto y de colon, leucemia, cáncer de pulmón, melanoma, mieloma múltiple, linfoma distinto al de Hodgkin, cáncer ovárico, cáncer pancreático, cáncer de próstata, y cáncer gástrico, para nombrar pocos. En ciertas modalidades, los agentes anticáncer inventivos son activos contra las células de leucemia y células del melanoma, y de esta manera son útiles para el tratamiento de leucemias (por ejemplo, leucemia mieloide, linfocítica, promielocítica, mielocítica y linfoblástica, tanto en formas agudas o crónicas) y melanomas malignos. En aún otras modalidades, los agentes anticáncer inventivos son activos contra tumores sólidos y también matan y/o inhiben el crecimiento de células con resistencia multifármaco (MDR células). En ciertas modalidades, los agentes anticáncer inventivos son activos contra cánceres que son resistentes a otros agentes anti-neoplásticos conocidos o que han sido encontrados que no responden clínicamente a otros agentes anti-neoplásticos conocidos. En otras modalidades, los agentes anticáncer inventivos son activos contra el cáncer los cuales son resistentes a otros agentes anti-neoplásticos que estabilizan el microtúbulo (por ejemplo, el paclitaxel).

También será apreciado que los compuestos y las composiciones farmacéuticas de la presente invención puedan ser empleados en terapias de combinación, es decir, los compuestos y las composiciones farmacéuticas se puedan administrar al mismo tiempo con, anteriormente a, o subsiguiente a, uno o más otros procedimientos terapéuticos o médicos deseados. La combinación particular de terapias (terapéuticos o procedimientos) para emplear en un régimen de combinación tomarán en cuenta la compatibilidad de los terapéuticos y/o procedimientos deseados y el efecto terapéutico deseado para ser conseguido. También será apreciado que las terapias empleadas puedan lograr un efecto deseado para el mismo desorden (por ejemplo, un compuesto inventivo puede ser administrado al mismo tiempo con otro agente anticáncer), o pueden lograr diferentes efectos (por ejemplo, control de cualquiera de los efectos
adversos).

Por ejemplo, otras terapias o agentes anticáncer que pueden ser utilizados en combinación con los agentes anticáncer inventivos de la presente invención incluyen cirugía, radioterapia (en solamente unos pocos ejemplos, \gamma-radiación, radioterapia con haz de neutrones, radioterapia con haz de electrones, terapia con protones, braquiterapia, y Isótopos radioactivos sistémicos, para nombrar algunos), terapia endocrina, modificadores de respuesta biológica (interferones, interleucinas, y factor de necrosis tumoral (TNF) para nombrar algunos), hipertermia y crioterapia, agentes para atenuar cualquiera de los efectos adversos (por ejemplo, antieméticos), y otros fármacos quimioterapéuticos aprobados, que incluyen, pero no limitan a, fármacos alquilantes (mecloretamina, clorambucil, Ciclofosfamida, Melfalan, Ifosfamida), antimetabolitos (Metotrexato), antagonistas de la purina y antagonistas de la pirimidina (6-Mercaptopurine, 5-Fluorouracil, Cytarabile, Gemcitabine), toxicidad spindle o de la célula husiforme spindle poisons (Vinblastine, Vincristine, Vinorelbine, Paclitaxel, Docetaxel), podofilotoxinas (Etoposide, Irinotecan, Topotecan), antibióticos (Doxorubicin, Bleomycin, Mitomycin), nitrosoureas (Carmustine, Lomustine), iones inorgánicos (Cisplatin, Carboplatin), enzimas (Asparaginase), y hormonas (Tamoxifen, Leuprolide, Flutamide, y Megestrol); para nombrar algunos. Para una discusión más comprensiva de las terapias contra el cáncer actualizadas ver, http://www.aci.uih.gov/, una lista de la FDA de los fármacos en oncología aprobados en http://www.fda.gov/cder/cáncer/druglistframe.htm, y The Merck Manual, Seventeenth Ed. 1999.

También se ha proporcionado un paquete o kit farmacéutico que comprende uno o más recipientes rellenos con uno o más de los ingredientes de las composiciones farmacéuticas de la invención, puede, incluir un agente terapéutico aprobado adicional para usar como terapia de combinación. Opcionalmente asociado con tal recipiente(s) puede estar una información en la forma prescrita por una agencia del gobierno regulando la fabricación, uso o venta de los productos farmacéuticos, información que refleja la aprobación por la agencia de la fabricación, el uso o venta para la administración humana.

Equivalentes

Los ejemplos representativos que siguen tienen la intención de ayudar a ilustrar la invención, y no tienen la intención, ni deben ser interpretados para, limitar el alcance de la invención. De hecho, varias modificaciones de la invención y muchas otras modalidades de esta, además de aquellas mostradas y descritas en esta, serán evidentes para aquellos de habilidad en el oficio a partir del contenido completo de este documento, incluyendo los ejemplos que siguen y las referencias a la literatura científica y de la patente citada aquí.

Los siguientes ejemplos contienen información adicional importante, la ejemplificación y la dirección que pueden ser adaptadas a la práctica de esta invención en sus varias modalidades y equivalentes de esta.

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Ejemplificación Ejemplo 1 Síntesis de 9,10-dihidro-12,13-desoxi-epotilones

Este Ejemplo describe la síntesis del trans-9,10-dihidro-12,13-desoxiepotilone B, 26-trifluoro-trans-9,10-dihidro-12,13-desoxiepotilone B, 26-trifluoro-12,13-desoxiepotilone B, y 12,13-desoxiepotilone B y la experimentación biológica de estos compuestos.

Los derivados fluorinados de los epotilones se prepararon y probaron dando la farmacocinética mejorada y el índice quimioterapéutico de otros agentes medicinales con sustituciones de flúor (Ojima, I.; Inoue, T.; Chakravarty, S.; J. Fluorine Chem. 1999, 97; Newman, R. A.; Yang, J.; Finlay, M. R. V.; Cabral, F., Vourloumis, D.; Stephens, L. C.; Troncoso, P.; Wu, X.; Logothetis, C. J.; Nicolaou, K. C.; Navone, N. M. Cancer Chemother. Pharmacol. 2001, 48, 319-326).

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12

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Para alcanzar el compuesto 2, intentamos tomar ventaja de una ruta altamente convergente reportada recientemente de nuestro laboratorio para la síntesis del epotilone 490 (6, dihidrodeoxi Epo B) en la ruta al dEpoB (1, Esquema 3) (Biswas, K.; Lin, H.; Njardarson, J. T.; Chappell, M.D., Chou, T.C., Guan, Y.; Tong, W. P., He, L.; Horwitz, S.B., Danishefsky, S. J. J. Am. Chem. Soc. 2002, 124 (33); 9825-9832; Rivkin, A.; Njardarson, J. T.; Biswas, K; Chou, T.C.; Danishefsky, S. J. J. Org. Chem. 2002, 67, 7737-7740). En esa síntesis, introdujimos un grupo vinilo de flanqueo en el compuesto 4 vía un acoplamiento estereoespecífico Stille de un precursor de yoduro de vinilo 3 con hidruro de estaño tri-n-butylvinilstannane. La metátesis con cierre del anillo seguido por la desprotección dirigida a 6, que luego se transforma en dEpoB (1) vía una reducción con diimida regioselectiva.

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Esquema 3

Síntesis del Epotilone 490

13

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La atención primero fue dirigida a la síntesis de 15 (Esquema 4). La alquilación del enolato de litio de 7 reportado previamente (Chappell, M. D.; Stachel, S. J.; Lee, C. B.; Danishefsky, S. J. Org. Lett. 2000, 2(11), 1633-1636) con yoduro 8 (sintetizado a partir del conocido alcohol 16 utilizando TMSI en cloruro de metileno) proporciona 9 en una producción del 78% y diastereoselectividad alta (>25:1 de). El compuesto 9 fue propuesto en tres etapas para 10 como se muestra. Los ensayos para lograr la adición de bromuro de metilmagnesio al enlace de la amida de Weinreb de 10 fallaron. El fracaso de esta reacción se atribuyó a la presencia del enlace yodoalqueno. Sin embargo podríamos lograr nuestro objetivo cambiando el orden de estas dos etapas que forman el enlace CC. Así, la reacción de 10 con el viniltributyltin bajo las condiciones de Stille entonces podría ser seguida por la adición del reactivo de Grignard metil para dar la deseada cetona 11. La condensación de la cetona 11 con óxido de fosfina 12, seguido por la desprotección del trietilsilil éter, proporciona el fragmento 13 en buena producción. La esterificación del 13 resultante con un fragmento ácido C1-C10 14 (Biswas, K.; Lin, H.; Njardarson, J. T.; Chappell, M.D., Chou, T.C., Guan, Y.; Tong, W. P., He, L.; Horwitz, S.B., Danishefsky, S. J. J. Am. Chem. Soc. 2002, 124 (33); 9825-9832; Rivkin, A.; Njardarson, J. T.; Biswas, K; Chou, T.C.; Danishefsky, S. J. J. Org. Chem. 2002, 67, 7737-7740) proporcionando el deseado 15, en una producción del 75% (Esquema 4).

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Esquema 4

Síntesis del precursor RCM 15

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14

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Desafortunadamente, los ensayos para realizar la reacción de metátesis del cierre del anillo de 15 utilizando el catalizador de Grubbs de segunda generación (Revisión: Grubbs, R. H.; Miller, S. J.; Fu, G. C. Acc. Chem. Res. 1995, 28, 446; Trnka, T. M.; Grubbs, R. H. Acc. Chem. Res. 2001, 34, 18; Alkene Metathesis in Organic Chemistry Ed.: Fürstner, A.; Springer, Berlin, 1998; Fürstner, A. Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 2000, 39, 3012; Schrock, R. R. Top. Organomet. Chem. 1998, 1, 1) en cloruro de metileno dirigido primariamente a la dimerización aparente del material inicial (Ecuación 1). Dado el hecho de que la RCM trabaja bastante bien en la fijación relacionada de 5 \rightarrow 6, naturalmente atribuimos la falla en el caso de 15 a la presencia del grupo trifluorometil en el C12.

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15

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Fue supuesto que el impacto perjudicial del sustituyente 26-trifluoro residente en la reacción deseada, pudo ser aliviado adicionando un espaciador de carbono entre el centro de la reacción del RCM y el grupo trifluorometil. Por consiguiente, emprendimos la síntesis de 19 (Ecuación 2) vía la metátesis del cierre del anillo de 18, que plantearía el grupo trifluorometil en el contexto de un anillo de 17-miembros que contiene un (1,4)-dieno enviado.

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16

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El programa de síntesis se dirigió a 19 comenzando con la preparación del compuesto 21, que corresponde al sector O-alquilo de nuestro sustrato RCM propuesto (Esquema 5). Comenzamos con la allilación de 10, esta vez bajo las condiciones de la reacción del radical como se muestra (Keck, G. E.; Yates, J. B. J. Am. Chem. Soc. 1982, 104, 5829; revisión: Curran, D. P. Synthesis 1988, Part 1, pp 417-439; Part 2, pp. 489).

Esta conversión fue seguida por la reacción del producto alquilado con bromuro de metil magnesio, de esta manera se proporciona la requerida cetona 20. La condensación de este compuesto con el óxido de fosfina 12, seguido por la desprotección de la función trietilsilil éter proporciona el 21 en una buena producción.

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Esquema 5

Síntesis del fragmento de alcohol 21

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17

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La esterificación de 21 con el fragmento ácido C1-C10 de 14, proporciona el precursor RCM propuesto 18 con una producción del 75% (Esquema 6). Felizmente en este caso, la reacción de metátesis del cierre del anillo de 18 podría lograrse utilizando el catalizador de Grubbs de segunda generación en cloruro de metileno. Como en el caso de la conversión de 5 \rightarrow 6, la reacción proporciona exclusivamente el isómero trans 22 con una producción del 57%. ^{6} Finalmente, la división reductiva del grupo protector tricloro etoxicarbonil con zinc y ácido acético, seguido por la desprotección del éter TES con HF-piridina, proporcionando el deseado 19 que contiene una función trifluorometil en el C12, a pesar del contexto de las series de un anillo de 17-miembros.

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(Esquema pasa a página siguiente)

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Esquema 6

Síntesis del 27-F_{3}-ddEpoB (19)

18

El sintético 19 se evaluó según su actividad citotóxica. Como se muestra en la Tabla 1-1 abajo, la comparación directa de el [17] dEpoB previamente reportada (23) con el 27-F_{3}-[17] ddEpoB (19) indicó que el nuevo compuesto perflorinado posee una comparablemente potencia citotóxica alta.

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TABLA 1-1 Citotóxicidad in vitro (IC_{50}) con líneas celulares^{a} tumorales

19

Sin embargo la sustitución isotérica del trifluorometil tuvo un pequeño efecto en la actividad citotóxica gruesa, los datos preliminares de los estudios de degradación metabólica en plasma de ratón mostraron que 19 es notablemente más estable que el 23 primario. La exposición de los epotilones 19 y 23 al plasma de ratón desnudo y humano conduce a la degradación de 23 dentro de 30 minutos, mientras que el epotilone 19 permanece intacto en su mayor parte. Dado que los puntos farmacocinéticos son probablemente críticos en el uso actual de cualquier agente del epotilone como fármaco, tomamos que este hallazgo es bastante alentador.

La síntesis del 26-F_{3}-dEpoB (2) podría lograrse por medio de un método altamente convergente, a fin de que sea empleado en la síntesis del 27-F_{3}-[17] ddEpoB (19). Por consiguiente, los fragmentos de similar complejidad servirán como clave en los bloques de construcción (Esquema 7). Visualizamos que el sector acil 25, podría servir como el dominio polipropionato y el sector alquilo 21 o 24 sería preparado según lo descrito previamente en la introducción. La unión de los dos fragmentos 21 (24) y 25 sería iniciada a través de una esterificación y cumplida vía una subsiguiente metátesis de cierre del anillo. Finalmente, la división de los grupos protectores proporcionaría los deseados análogos 28 y 29. La reducción quimioselectiva de la 9,10-olefina de 28 y 29 proporcionaría el dEpoB (1) y el deseado 26-F_{3}-12,13-desoxiEpoB (2).

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Esquema 7

20

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La síntesis de 1 y 2 se inicia con la preparación del sector acil de 25. La cetona 30, previamente reportada, se sometió a una reacción aldol con el aldehído fácilmente disponible 31. Bajo la desprotonación y la reacción del "litio" de 30 con 31, la condensación suave dio origen a una mezcla 5.3:1 de los productos aldol 32 y 33. El principal diastereoisómero 32 fácilmente se separó por cromatografía instantánea y se protegió como un silil éter TBS. La hidrólisis del grupo diisopropil acetal bajo catálisis ácida dio el aldehído ceto 34, la fijación de la etapa para la segunda reacción aldol. Siguiendo el método ter-butil éster "titano" practicado previamente, con el nuevo aldehído 34 como el acoplamiento asociado, el deseado producto aldol 35 se obtuvo de una diastereoselectividad alta (dr > 20: 1) y una producción de (86%). La protección del alcohol del C3 de 35 con un grupo silil TES fue seguido por la desprotección del benzil éter. La oxidación del hidroxi primario resultante proporciona el aldehído correspondiente, que luego fue convertido a una olefina terminal vía una reacción de Wittig para proporcionar 36 con una alta producción. Finalmente, la hidrólisis del t-butil éster de 36 con TESOTf proporciona el sector acil 25 (82%) junto con un producto-secundario 37 (14%), que fue convertido en el sector acil 38 con una alta producción. Las propiedades espectrales y cromatográficas de 38 fueron idénticas al material obtenido previamente de otros programas en Dr. Sinha's laboratories (Scripps).

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Esquema 8

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21

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La esterificación de los alcoholes alílicos 21 y 24 con el fragmento ácido C1-C9 25 proporciona los correspondiente precursores de ciclización de RCM 26 y 27, respectivamente (Esquema 9).

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(Esquema pasa a página siguiente)

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Esquema 9

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22

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Las reacciones de metátesis del cierre del anillo 26, 27 y 54 luego se realizaron utilizando el catalizador de Grubbs de segunda generación en tolueno, que proporciona, como en nuestro estudio previo, exclusivamente el isómero trans 39a, 40a, y 55 junto con los correspondientes productos secundarios 39b, 40b, y 56. Finalmente, la desprotección de silil éteres con HF-piridina dirigido a los compuestos deseados 28, 29, y 57. Las propiedades espectrales y cromatográficas de 28 no fueron idénticas al material obtenido previamente del programa epotilone en Dr. James D. White's laboratories (Oregon State University). El Dr. James D. White pensaba que había sintetizado el compuesto 28, sin embargo inadvertidamente el fabricó en lugar de este el 12,13E isómero 41, lo que podría explicar la pobre actividad biológica que el observó. Por consiguiente, fuimos los primeros en haber sintetizado el compuesto 28 y en probar su actividad antitumor.

Los completamente sintéticos 28, 29, y 2 han sido evaluados contra una variedad de tipos de células para determinar su potencial antitumor. Como se muestra en la Tabla 1-2, los tres compuestos muestran una alta actividad citotóxica contra una variedad de líneas celulares tumorales sensitivas y resistentes. La comparación directa de 28 con el dEpoB previamente reportada (1) indica que el nuevo compuesto posee aproximadamente tres veces más potencia.

TABLA 1-2 Citotóxicidad in vitro (IC_{50}) con líneas celulares tumorales^{a}

23

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Para mejorar la producción total de nuestra síntesis de 28, 29, y 2, decidimos realizar la reacción RCM en la ausencia de la olefina sustituida de tiazol y al actuar así evitamos la formación de lo indeseados productos secundarios 39b y 40b. La desprotección del silil éter del previamente reportado 42 y 20 proporciona las hidroxicetonas 43 y 44. La esterificación de las hidroxicetonas resultantes 43 y 44 con fragmento ácido C1-C9 25 proporciona los precursores RCM correspondientes de ciclización 45 y 46, respectivamente (Esquema 10). La reacción de metátesis del cierre del anillo de 45 y 46 luego se realizó utilizando el catalizador de Grubbs de segunda generación en tolueno, lo cual proporciona, como en nuestro estudio previo, exclusivamente el isómero trans 47 y 48 con una alta producción. La instalación de la fracción tiazol dio el 39a, 40a, y 55 con una alta producción. La desprotección de los dos silil éteres con HF-piridina conduce a 28 y 29. Finalmente, la reducción selectiva de la olefina C9-C10 proporciona los epotilones correspondientes 1 y 2. La estructura de 28 fue rigurosamente corroborada por su alta producción de conversión a 1. La síntesis total de 1 ha sido simplificada muy sustancialmente relativa a las rutas practicadas previamente. Así el uso del fácilmente disponible 31, obtenido de la mezcla quiral, es ciertamente una gran mejora relativa a la confianza sobre el (S)-2-metilo-4-pentenal cuya síntesis requiere que intervengan auxiliares quirales.

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Esquema 10

24

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Con el compuesto 28 de la estructura probada rigurosamente a mano, nos sorprendimos al encontrar que sus propiedades espectrales no fueron congruentes con aquellas previamente reportadas para un compuesto presumido para ser la misma entidad. Sin embargo es claro en retrospectiva que el 28 no ha sido previamente preparado y, de hecho la familia entera de los (E)-9,10-dihidroepothilones reportada aquí es una nueva clase de compuestos.

Los análisis de los análogos sintéticos (2, 28, y 29), en entornos de cultivo celular, revelan efectos inhibitorios fuertes sobre varias líneas celulares tumorales MDR y sensibles que se muestran por nuestra entrada clínica dEpoB (1) (Tabla 1-3). Observamos que el Epo 3 (28) es el primer compuesto 12,13-desoxiepotilone que posee sustancialmente citotoxicidad mejorada relativa a aquella del dEpoB (1).

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TABLA 1-3 Citotóxicidad in vitro (IC_{50}) con líneas Celulares Tumorales^{a}

25

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La impresionante inhibición del crecimiento celular mostrada por los epotilones 2, 28 y 29 (Epo 2-4) a través de un rango de varios tumores fármaco-resistentes impulsó a la determinación de la estabilidad del plasma sanguíneo de estos nuevos (E)-9,10 congéneres. Por ejemplo el recientemente descrito (E)-10,11-dihidro-dEpoB (del caso 1 con un grupo CH_{3} en el C-12) muestra muy pobre estabilidad del plasma con respecto a la abertura de la lactona. Es esta inestabilidad del plasma la que ha reprimido el avance de (E)-10,11-dihidro-dEpoB. Por el contrario, bajo la exposición de 2, 28 y 29 (Epo 2-4) al plasma de murina, observamos una degradación mucho más lenta del fármaco con respecto al dEpoB (1) por un factor de siete. Esta estabilidad constituye un avance sustancial de una perspectiva de la disponibilidad fármaco relativo al dEpoB (ver Figura 9).

La combinación de los datos de citotoxicidad y estabilidad del plasma nos animaron a sintetizar cantidades sustanciales de 28 (Epo 3) para determinar su eficacia in vivo, en ratones desnudos que llevan xenoinjertos de tumor humano. El epotilone 28 (Epo 3) demostró una marcada potencia mejorada en la inhibición sobre el crecimiento de tumores implantados, relativo a dEpoB (ver Figura 10). La mejorada potencia y estabilidad del plasma permite una reducción muy sustancial de la dosificación del fármaco (una orden de magnitud) en el contexto de xenoinjertos de 28
(Epo 3).

En nuestros primeros estudios habíamos encontrado que el epotilone B, por medio del 12,13 epóxido, es significantemente más citotóxico que su análogo 12,13-desoxi (dEpoB). Sin embargo, a partir de la perspectiva del índice terapéutico, el compuesto desoxi parece para nosotros que es mucho más prometedor. Más recientemente, reportamos la síntesis total del (E)-9,10-dihidro-12,13-desoxiepotilone B (28) utilizando una metátesis de cierre del anillo estereoselectiva. Mostramos que la incorporación de la instauración E-9,10 en el contexto de la usual Z-12,13 olefina (ver compuesto 1) resulta en un gran incremento de la potencia in vitro. Más en el punto, esto es traducible a una fijación in vivo en ratones con xenoinjertos. Por otra parte, el compuesto 28 goza de ventajas farmacéuticas principales relativas a dEpoB (1). Esto permitió la reducción de los niveles dosificación para 28 relativo a 1 en los experimentos de xenoinjerto para ser reducido en una orden de magnitud.

Por consiguiente, nos preguntábamos si la incorporación de la olefina C9-C10 en el epotilone B (51, EpoB) alteraría su perfil biológico en la misma dirección.

Producción comparativa del Compuesto 51

26

La epoxidación de 28 con 2,2'-dimetildioxirano (DMDO) prosigue con alta quimioselectividad en la olefina C12-C13 más sustituido para dar una producción del 87% de una relación 1:2.6 del (E)-9,10-dihidroepotilone B (49) y su diastereómero (50). La estereoquímica de los epóxidos se determinó por reducción diimida selectiva de los dobles enlaces C9-C10. El análisis de las propiedades espectrales de estos productos reveló el producto menor (49) para ser dEpoB. La preferencia para la \alpha-epoxidación en el caso de 28 radica en el notable contraste a la epoxidación altamente estereoselectiva del dEpoB, que ocurre a partir de la cara \beta conduciendo a EpoB (Meng, D.; Bertinato, P.; Balog, A.; Su, D.-S.; Kamenecka, T.; Sorensen, E. J.; Danishefsky, S. J. J. Am. Chem. Soc. 1997, 119, 10073).

Esquema 11

27

El (E)-9,10-dihidroepotilone B (51) se evaluó contra una variedad de tipos de células para determinar su potencial antitumor. Según se muestra en la Tabla 1-4, (E)-9,10-dihidroepothiloneB (49) exhibe alta actividad citotóxica contra una variedad de líneas celulares tumorales sensitivas y resistentes. La comparación directa de 49 y el EpoB (51) indica que este nuevo análogo posee aproximadamente 3-veces más potencia que el EpoB (51) haciendo de este uno de los más potentes análogos del epotilone reportados hasta la fecha. Interesantemente, las series \alpha-epóxido (50, 52) mostraron una actividad mucho menor que el EpoB (51). La gráfica abajo muestra los hallazgos para estudios in vivo del compuesto 49.

TABLA 1-4 Citotoxicidades in vitro (IC_{50}) con líneas celulares tumorales^{a}

28

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El efecto terapéutico del 9,10-de-H-EpoB en ratones desnudos que llevan xenoinjerto MX-1 (6 horas-infusión i.v., n = 4).

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En resumen, lo delineado arriba es una síntesis total estereoselectiva de gran alcance del 28 (Epo 3) y, siguiendo la reducción dimida sitio-selectiva, el dEpoB (1) por si mismo. El método descrito aquí entonces se aplico explícitamente a la preparación de los análogos trifluoro correspondientes 2 y 29 (Epo 4). Adicionalmente, la epoxidación del 28 proporcionó 49 y 50, que bajo la reducción diimida sitio-selectiva dio el Epotilone B (51) y 52. Los datos reportados arriba apuntan hacia el surgimiento de una familia nueva más prometedora de los fármacos anticáncer apropiados para una evaluación adicional en el camino al avance entonces posible a un ajuste clínico humano. Adicionalmente el nuevo método de síntesis comprende una mejora práctica significante en la síntesis total del dEpoB y del Epotilone B.

Parte Experimental Métodos Generales

Los reactivos obtenidos a partir de proveedores comerciales se utilizaron sin purificación adicional a menos que de otra manera se indique. Los siguientes solventes se obtuvieron a partir de un sistema de secado de solvente (pasado a través de una columna pre-empacada de alúmina) y utilizados sin un secado adicional: tetrahidrofurano, cloruro de metileno, dietil éter, benceno, y tolueno. Todas las reacciones sensibles al aire y el agua se realizaron en vidrio secado en llama bajo una presión positiva de gas de argón prepurificado. El espectro NMR (^{1}H y ^{13}C) se registró en un instrumento Bruker AMX-400 MHz o Bruker Advance DRX-500 MHz según se registra individualmente, referido a CDCl_{3} (7.27 ppm para ^{1}H y 77.0 ppm para ^{13}C). Los espectros infrarrojo (IR) se obtuvieron en un espectrómetro Perkin-Elmer FT-IR modelo 1600. La rotaciones ópticas se obtuvieron en un polarímetro digital JASCO modelo DIP-370 a 22 \pm 2ºC. La cromatografía analítica de capa delgada se realizó sobre placas E. Merck de silica gel 60 F254. Los compuestos que no fueron activos a UV se visualizaron sumergiendo las placas en una solución de molibdato de amonio cérico o para-anisaldehído y calentándolas. La cromatografía de silica gel se realizó utilizando el solvente indicado sobre silica gel Davisil® (grado 1740, tipo 60A, malla 170-400).

Siglas y Abreviaturas

TES, trietilsilil; TBS, Dimetilterbutilsilil; EDCI, 1-etilo-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida; HF-PY, ácido
fluorhídrico en piridina; DMAP, 4-N,N-dimetilaminopiridina; DCM, diclorometano; DMF, N,N-dimetilformamida; THF, tetrahidrofurano.

31

Compuesto 32

A una solución de LDA preparada recientemente (11.6 mmol) en THF (25 mmol) se le adicionó gota a gota una solución de cetona 30 (2.40 g, 10.4 mmol) en THF (6.8 mL) a -78ºC. Después de la agitación a -40ºC por 0.5 h, la mezcla se enfrió a -90ºC. Se adicionó una solución del aldehído 31 (1.38 g, 7.72 mmol) en THF (6.8 mL) gota a gota. Después de la agitación a -90ºC por 35 min., la reacción se apagó con NH_{4}Cl saturado acuoso (15 mL) y se extrajo con EtOAc (50 mL x 3). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se concentraron. La purificación por cromatografía de columna instantánea (SiO_{2}, hexano/EtOAc = 15:1 a 12:1) proporcionó el 32 (2.09 g, 66%) y el isómero 33 (0.39 g, 12%) ambos como aceites de color amarillo. 32: [\alpha]_{D}^{25} 13.1 (c 1.22, CHCl_{3}); IR (film) \nu 3494, 2972, 2932, 1708, 1454, 1380, 1329, 1120, 1038, 998, 734 cm^{-1}; ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 0.98 (3H, d, J = 6.9 Hz), 1:06 (3H, d, J = 6.9 Hz), 1.10 (3H, d, J = 6.1 Hz), 1.14 (3H, d, J = 6.9 Hz), 1.15 (3H, s), 1.17 (3H, d, J = 6.2 Hz), 1.18 (3H, s), 1.20 (3H, d, J = 6.2 Hz), 1.81-1.92 (1H, m), 3.33 (1H, qd, J = 7.0, 2.2. Hz), 3.51 (1H, dd, J = 8.9, 6.3 Hz), 3.64 (1H, d, J = 1.8 Hz), 3.66-3.71 (2H, m), 3.78-3.86 (2H, m), 4.51. (1H, d, J = 12.0 Hz), 4.54 (1H, d, J = 12.0 Hz), 4.58 (1H, s), 7.25-7.35 (5H, m); ^{13}C NMR (100 MHz, CDCl_{3}) \delta 10.0, 14.3, 20.5, 21.3, 21.9, 22.5, 23.5, 23.6, 36.4, 42.1, 54.1, 69.8, 71.2, 72.8, 73.3, 73.4, 103.8, 127.6, 127.7 (2C), 128.5 (2C), 138.9,221.6; LRMS (ESI) calc. para C_{24}H_{40}O_{5}Na [M+Na+] 431.3, encontrado 431.4.

32

Compuesto 32a (no mostrado)

A una solución de alcohol 32 fría (-40ºC) (1.01 g, 2.47 mmol) y 2,6-lutidina (691 \muL, 5.93 mmol) se le adicionó TBSOTf (681 \muL, 3.00 mmol), y la mezcla se calentó a -20ºC durante 3.5 h. La reacción se apagó con NaHCO_{3} acuoso saturado (10 mL). Después de la extracción con hexano (50 mL x 3), los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se concentraron. La purificación por cromatografía de columna instantánea (SiO_{2}, hexano/EtOAc = 50:1) proporcionó el 32a (1.25 g, 2.39 mmol, 97%) como un aceite incoloro; [\alpha]_{D}^{25} -19.7 (c 0.58, CHCl_{3}); IR (film) \nu 2966, 2931,1696, 1455, 1378, 1320, 1255, 1091, 1044, 991, 873, 838, 773 cm^{-1}; ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 0.08 (6H, s), 0.89 (9H, s), 0.99 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.04 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.07 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.07 (3H, s), 1.14 (3H, d, J = 6.1 Hz), 1.17 (3H, s), 1.17 (3H, d, J = 6.0 Hz), 1.20 (3H, d, J = 6.2 Hz), 1.76-1.85 (1H, m), 3.21 (1H, dd, J = 9.2, 7.3 Hz), 3.32 (1H, quint, J = 7.4 Hz), 3.62 (1H, dd, J = 9.2, 5.7 Hz), 3.78-3.85 (2H, m), 3.87 (1H, dd, J = 7.7,2.0 Hz), 4.46 (1H, d, J = 12.1 Hz), 4.50 (1H, d, J = 12.1 Hz), 4.73 (1H, s), 7.24-7.37 (5H, m); ^{13}C NMR (100 MHz, CDCl_{3}) \delta-3.6, -3.3, 15.6, 16.8, 18.7, 18.8, 21.8, 22.1, 22.5, 23.5, 23.7, 26.4 (3C), 39.0, 46.2, 54.0, 69.7, 70.9, 72.1, 73.4, 76.7, 103.1, 127.6, 127.8 (2C), 128.5 (2C), 139.0, 218.9; LRMS (ESI) calc. para C_{30}H_{54}O_{5}SiNa [M+Na+] 545.4, encontrado 545.4.

33

Compuesto 34

La mezcla de 32a (3.03 g, 5.79 mmol) y p-TsOH·H_{2}O (286 mg) en THF acuoso (64 mL, THF/H_{2}O = 4:1) se calentó bajo reflujo por 6.5 h. La mezcla de reacción se enfrió a rt y se vertió en NaHCO_{3} acuoso saturado (25 mL). Después de la extracción con EtOAc (100 mL + 50 mL x 2), las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se concentraron. La purificación por cromatografía de columna instantánea (SiO_{2}, hexano/EtOAc = 50:1 a 30:1) proporcionó el 34 (2.37 g, 5.64 mmol, 98%) como un aceite incoloro: [\alpha]_{D}^{25} -25.8 (c 0.515, CHCl_{3}); IR (film) \nu 2955, 2931, 1731, 1696, 1455, 1360, 1255, 1091, 1026, 873, 826, 767 cm^{-1}; ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 0.06 (3H, s), 0.07 (3H, s), 0.90 (9H, s), 0.95 (3H, d, J = 7.1 Hz), 1.03 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.28 (3H, s), 1.33 (3H, s), 1.73-1.82 (1H, m), 3.16 (1H, dd, J = 9.2, 6.1 Hz), 3.28 (1H, quint, J = 7.3 Hz), 3.55 (1H, dd, J = 9:2, 6.7 Hz), 3.91 (1H, dd, J = 7.8, 2.1 Hz), 4.46 (2H, s), 7.27-7.36 (5H, m), 9.58 (1H, s); ^{13}C NMR (100 MHz, CDCl_{3}) \delta -3.6, -3.5, 15.7, 16.3, 18.6, 19.8, 20.1, 26.3 (3C), 39.1, 47.0, 61.1, 71.9, 73.4, 75.8, 127.7, 128.0 (2C), 128.5 (2C), 138.6, 201.3, 213.3; LRMS (ESI) calc. para C_{24}H_{40}O_{4}SiNa [M+Na+] 443.3, encontrado 443.2.

34

Compuesto 35

A una solución de LDA preparada recientemente (18 mL de una solución 0.5 M en Et_{2}O, 9.0 mmol) en Et_{2}O (20 mL) se le adicionó t-butil acetato (1.16 mL, 8.61 mmol) a -78ºC. Después de la agitación por 50 min., se le adicionó gota a gota CpTiCl (OR)_{2} (100 mL de una solución 0.1 M en Et_{2}O, 10.0 mmol) durante 65 min. por medio de una bomba de inyección. Después de la agitación por 20 min., la mezcla de reacción se calentó a -30ºC, se agitó por 50 min., y re-enfrío a -78ºC. Una solución de 34 (2.42 g, 5.75 mmol) en Et2O (9 mL) se adicionó gota a gota durante 10 min., y la mezcla resultante se agitó a -78ºC. Después de la agitación por 2 h, la reacción se apagó con THF acuoso (5 M H_{2}O, 37 mL) y se agitó a rt por 2 h. Después de la adición de agua (40 mL), la mezcla se agitó por 1 h más. El precipitado formado se filtró completamente por Celite (enjuagar con Et_{2}O), y el filtrado se lavó con agua (40 mL). La capa acuosa se extrajo con Et_{2}O (100 mL x 2) y las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (40 mL), se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se concentraron. La purificación por cromatografía de columna instantánea (SiO_{2}, hexano/EtOAc = 10:1) proporcionó el 35 (2.65 g, 4.94 mmol, 86%) como un aceite de color amarillo pálido; [\alpha]_{D}^{25}-20.3 (c 1.0, CHCl_{3}); IR (film) \nu 3523, 2957, 2930, 2856, 1732, 1700, 1472, 1368, 1252, 1152, 1091, 1042, 986, 834, 774 cm^{-1}; ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 0.07 (3H, s), 0.07 (3H, s), 0.90 (9H, s), 0.99 (3H, d, J = 7.0 Hz),1.07 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.10 (3H, s), 1.14 (3H, s), 1.47 (9H, s), 1.77-1.83 (1H, m), 2.26 (1H, dd, J = 16.0, 10.0 Hz), 2.34 (1H, dd, J = 15.9, 2.7 Hz), 3.23 (1H, dd, J = 9.2, 7:1 Hz); 3.35 (1H, d, J = 2.7 Hz, -OH), 3.36 (1H, quint, J = 7.0 Hz), 3.61 (1H, dd, J = 9.2, 5.9 Hz), 3.88 (1H, dd, J = 7.6, 2.0 Hz), 4.17 (1H, dt, J = 10.0, 2.7 Hz), 4.48 (2H, s), 7.27-7.36 (5H, m); ^{13}C NMR (100 MHz, CDCl_{3}) \delta -3.5, -3.4, 16.3, 16.7, 18.7, 20.1, 21.6, 26.4 (3C), 28.3 (3C), 38.0, 39.1, 45.8, 51.8, 72.2, 72.9, 73.5, 76.7, 81.4, 127.7, 128.0 (2C), 128.5 (2C), 138.8, 172.7, 219.6; LRMS (ESI) calc. para C_{30}H_{52}O_{6}SiNa [M+Na+] 559.3, encontrado 559.4.

35

Compuesto 35a (No mostrado)

A una mezcla del alcohol 35 (10.2 g, 18.9 mmol) e imidazol (2.70 g, 39.7 mmol) en DMF (25 mL) se le adicionó TESC1 (3.3 mL, 19.8 mmol) a 0ºC, y la mezcla se agitó a rt por 2 h. La reacción se apagó con NaHCO_{3} acuoso saturado (50 mL). Después de la extracción con hexano (500 mL + 120 mL x 2), los extractos orgánicos combinados se lavaron sucesivamente con agua (30 mL x 2) y salmuera (30 mL), se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se concentraron. La purificación por cromatografía de columna instantánea (SiO_{2}, hexano/EtOAc = 40:1) proporcionó el 35a (12.1 g, 18.5 mmol, 98%) como un aceite incoloro: [\alpha]_{D}^{25} -38.0 (c 0.46, CHCl_{3}); IR (film) \nu 2955, 2877, 1733, 1697, 1456, 1367, 1298, 1251, 1155, 1099, 988, 835, 742 cm^{-1}; ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 0.05 (6H, s), 0.57-0.68 (6H, m), 0.89 (9H, s), 0.95 (9H, t, J = 7.9 Hz), 0.99 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.02 (3H, d, J = 6.8 Hz), 1.04 (3H, s), 1.18 (3H, s), 1.45 (9H, s), 1.70-1.79 (1H, m), 2.16 (1H, dd, J = 17.0, 7.0 Hz), 2.40 (1H, dd, J = 17.0, 3.1 Hz), 3.22 (1H, dd, J = 9.1, 7.5 Hz), 3.31 (1H, quint, J = 6.9 Hz), 3.61 (1H, dd, J = 9.1, 5.4 Hz), 3.83 (1H, dd, J = 7.3, 2.3 Hz), 4.30 (1H, dd, J = 6.9, 3.1 Hz), 4.48 (2H, s), 7.27-7.36 (5H, m); ^{13}C NMR (100 MHz, CDCl_{3}) \delta -3.5, -3.4, 5.3 (3C), 7.3 (3C), 15.3, 16.9, 18.7, 20.1, 23.4, 26.4 (3C), 28.3 (3C), 39.1, 41.1, 46.2, 53.4, 72.2, 73.4, 74.3, 76.7, 80.6, 127.6, 127.9 (2C), 128.5 (2C), 138.9, 171.5, 218.4; LRMS (ESI) calc. para C_{36}H_{66}O_{6}Si_{2}Na [M+Na+] 673.4, encontrado 673.5.

36

Compuesto 35b (No mostrado)

A una solución agitada de 35a (4.37 g, 6.72 mmol) en THF (67 mL) se le adicionó Pd/C (adquirida de Acros, 10% en peso, 437 mg) y la mezcla se agitó bajo una atmósfera de H_{2}. Después de la agitación por 2.2 h, la mezcla se filtró a través de una almohadilla de Celite, que se enjuagó con THF (120 mL). El filtrado se concentró y purificó por cromatografía de columna instantánea (SiO_{2}, hexano/EtOAc = 30:1 a 10:1) para dar el 35b (3.53 g, 6.28 mmol, 94%) como un aceite incoloro; [\alpha]_{D}^{25}-16.1 (c 0:62, CHCl3); IR (film) \nu 3543, 2956, 1732, 1696, 1472, 1368, 1299, 1252, 1155, 1100, 988, 837, 775, 742 cm^{-1}; ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 0.10 (3H, s), 0.12 (3H, s), 0.60-0.68 (6H, m), 0.93 (9H, s), 0.96 (9H, t, J = 8:0 Hz), 0.99 (3H, d, J = 7.1 Hz), 1.10 (3H, d, J = 6.9.Hz), 1.14 (3H, s), 1.20 (3H, s), 1.45 (9H, s), 1.46-1.55 (1H, m), 2.21 (1H, dd, J = 17.2, 7.1 Hz), 2.39 (1H, dd, J = 17.2, 2.8 Hz), 2.54 (1H, t, J = 5.8 Hz, -OH), 3.30 (1H, quint, J = 6.9 Hz), 3.58 (1H, dt, J = 11.5, 5.5 Hz), 3.66 (1H, dt, J = 11.3, 5.4 Hz), 3.92 (1H, dd, J = 8.0, 2.1 Hz), 4.32 (1H, dd, J = 7.1, 2.9 Hz); ^{13}C NMR (100 MHz, CDCl_{3}) \delta -3.6, -3.5, 5.3 (3C), 7.2 (3C), 16.0, 16.1, 18.6, 20.0, 23.4, 26.4 (3C), 28.3 (3C), 40.0, 40.9, 46.9, 53.7, 64.8, 73.3, 78.1, 80.9, 171.7, 218.5; LRMS (ESI) calc. para C_{29}H_{60}O_{6}Si_{2}Na [M+Na+] 583.4, encontrado 583.5.

37

Compuesto 35c (No mostrado)

A una mezcla agitada de alcohol 35b (3.53 g, 6.28 mmol) y MS4A (activado recientemente, 2.50 g) pulverizado en CH_{2}Cl_{2} (32 mL) se le adicionaron NMO (1.17 g, 10.0 mmol) seguido por TPAP (132 mg, 0.377 mmol). Después de la agitación a rt por 35 min., la mezcla se filtró a través de una columna de silica gel (hexano/Et_{2}O = 8:1) para dar el 35c (3.34 g, 5.98 mmol, 95%) como un aceite incoloro; [\alpha]_{D}^{25} -69.6 (c 0.25, CHCl_{3}); IR (film) \nu 2955, 2878, 1732, 1696, 1472, 1368, 1253, 1155, 1097, 989, 837 cm^{-1}; ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 0.09 (3H, s), 0.10 (3H, s), 0.59-0.68 (6H, m), 0.89 (9H, s), 0.95 (9H, t, J = 8.0 Hz), 1.08 (3H, s), 1.11 (3H, d, J = 6.9 Hz), 1.14 (3H, d, J = 7.1 Hz), 1.24 (3H, s), 1.45 (9H, s), 2.19 (1H, dd, J = 17.0, 6.7 Hz), 2.33 (1H, qt, J = 7.1, 2.2 Hz), 2.41 (1H, dd, J = 17.0, 3.3 Hz), 3.28 (1H, quint, J = 7.5 Hz), 4.07 (1H, dd, J = 7.9, 2.2 Hz), 4.32 (1H, dd, J = 6.7, 3.2 Hz), 9.74 (1H, d, J = 2.0 Hz); ^{13}C NMR (100 MHz, CDCl_{3}) \delta -3.8, -3.5, 5.3 (3C), 7.2 (3C), 12.6, 15.6, 18.5, 20.5, 23.3, 26.2 (3C), 28.3 (3C), 41.1, 46.9, 51.1, 53.5, 74.0, 76.5, 80.7, 171.1, 204.3, 218.0; LRMS (ESI) calc. para C_{29}H_{58}O_{6}Si_{2}Na [M+Na+] 581.3, encontrado 581.3.

38

Compuesto 36

MePPh3I (2.56 g, 7.18 mmol) en THF (40.0 mL) se trató con t-BuOK (6.57 mL de una solución 1.0 M en THF, 6.57 mmol) a 0ºC. Después de la agitación a 0ºC por 20 min., la suspensión resultante se enfrió a -78ºC y se le adicionó una solución de aldehído 35c (3.34 g, 5.98 mmol) en THF (14 mL). Después de la agitación a -78ºC por 15 min., la mezcla se agitó a 0ºC por 15 min. y a rt por 15 min. La reacción se apagó con NH_{4}Cl saturado acuoso (20 mL) y se extrajo con Et_{2}O (120 mL + 50 mL x 2). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (20 mL), se secaron sobre Na_{2}SO_{4}, y se concentraron. El residuo se purificó por cromatografía de columna instantánea (SiO_{2}\sim80 g, hexano/Et_{2}O = 40:1) para dar el 36 (125.3 mg, 0.225 mmol, 78%) como un aceite incoloro; [\alpha]_{D}^{25} -33.6 (c 0.250, CHCl_{3}); IR (film) \nu 2956, 2878, 1733, 1696, 1472, 1367, 1299, 1253, 1156, 1100, 988, 837, 774 cm^{-1}; ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 0.08 (3H, s), 0.08 (3H, s), 0.60-0.68 (6H, m), 0.93 (9H, s), 0.96 (9H, t, J = 8.0 Hz), 1.04 (6H, d, J = 7.0 Hz), 1.09 (3H, s), 1.20 (3H, s), 1.45 (9H, s), 2.08-2.15 (1H, m), 2.29 (1H, dd, J = 17.0, 7.0 Hz), 2.41 (1H, dd, J = 17.0, 3.1 Hz), 3.08 (1H, quint, J = 7.0 Hz), 3.84 (1H, dd, J = 7.0,2.1 Hz), 4.32 (1H, dd, J = 7.0, 3.1 Hz), 5.02 (1H, dd, J = 17.9, 1.0 Hz), 5.06 (1H, dd, J = 10.5, 1.0 Hz),5.93 (1H, ddd, J = 17.9, 10.5, 7.7 Hz); ^{13}C NMR (100 MHz, CDCl_{3}) \delta -3.6, -3.3,5.4 (3C), 7.2 (3C), 15.2, 18.7, 19.0, 20.2, 23.6, 26.4 (3C), 28.3 (3C), 41.1, 43.8, 46.4, 53.5, 73.9, 76.6, 80.6, 115.5, 140.2, 171.5, 218.5; LRMS (ESI) calc. para C_{30}H_{60}O_{5}Si_{2}Na [M+Na+] 579.4, encontrado 579.4.

39

Compuesto 25

A una solución de t-butil éster 36 (4.87 g, 8.74 mmol) y 2,6-lutidina (destilada recientemente, 4.1 mL, 35.0 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (58 mL) se le adicionó TESOTf (4.0 mL, 17.5 mmol) a 0ºC: Después de la agitación a 0ºC por 25 min., la mezcla se agitó a rt por 3.2 h. La mezcla se diluyó con Et_{2}O (600 mL), se lavo sucesivamente con KHSO4 acuoso al 5% (60 mL x 2) y salmuera (60 mL), se secó sobre Na_{2}SO_{4}, y se concentró. El residuo se secó bajo alto vacío por 1.5 h para dar el ácido crudo 25 (6.30 g, contaminado con TESOH). El producto crudo (6.30 g) se disolvió en THF acuoso (87.5 mL, THF/H_{2}O = 6:1) y se trató con NaHCO_{3} acuoso saturado (12.5 mL). Después de la agitación a rt por 20 min., la suspensión resultante se diluyó con Et_{2}O (500 mL) y se acidificó con KHSO_{4} 5% acuoso (55 mL). Después las capas se separaron, la capa acuosa se extrajo con Et_{2}O (100 mL x 2) y las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (50 mL x 2), se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se concentraron. El residuo se secó bajo alto vacío durante la noche para dar el ácido crudo (5.60 g, contaminado con TESOH) como un aceite incoloro, que fue utilizado para una próxima reacción sin purificación adicional. Purificado por caracterización por cromatografía de columna instantánea sobre silica gel eluyendo con hexano/EtOAc = 4/1. [\alpha]_{D}^{25} -30.7 (c 0.985, CHCl_{3}); IR (film) \nu 2956, 2936, 2879, 1712, 1472, 1417, 1303, 1253, 1107, 1046, 1003, 988, 872, 837, 775, 741 cm^{-1}; ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 0.08 (3H, s), 0.09 (3H, s), 0.59-0.67 (6H, m), 0.93 (9H, s), 0.96 (9H, t, J = 8.1 Hz), 1.05 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.05 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.20 (3H, s), 1.21 (3H, s), 2.06-2.13 (1H, m), 2.34 (1H, dd, J = 16.4, 7.4 Hz), 2.50 (1H, dd, J = 16.4, 3.0 Hz), 3.06 (1H, quint, J = 7.3 Hz), 3.87 (1H, dd, J = 7.5, 1.8 Hz), 4.40 (1H, dd, J = 7.3, 2.9 Hz); 5.01 (1H, dd, J = 18.0, 0.9 Hz), 5.07 (1H, dd, J = 10.4, 1.2 Hz), 5.93 (1H, ddd, J = 18.0, 10.4, 7.8 Hz); ^{13}C NMR (100 MHz, CDCl_{3}) \delta -3.6, -3.3, 5.3 (3C), 7.1 (3C), 15.6, 18.7, 19.1, 19.2, 24.1, 26.4 (3C), 39.8, 43.6, 46.4, 53.5, 73.7, 76.6, 115.6, 140.0, 177.9, 218.7; LRMS (ESI) calc. para C_{26}H_{52}O_{5}Si_{2}Na [M+Na+] 523.3, encontrado 522.9.

40

Compuesto 45

El 3-O-TES-6-O-TBS ácido protegido 25 se secó a través de destilación azeotrópica a partir del benceno. El alcohol seco recientemente 43 (200 mg, 1.19 mmol) se disuelve en DCM (10 mL) y se enfría a 0ºC, en este punto se adicionan DMAP sólido (167 mg, 1.37 mmol) y EDCI sólido (261 mg, 1.37 mmol). Después de la agitación de la mezcla de reacción a 0ºC por 15 min., se le adiciona una solución del ácido 25 (425 mg, 0.85 mmol) en DCM (2 mL) gota a gota. El baño de enfriamiento se retira y la agitación continúa por otras 2 horas. La mezcla de reacción cruda se diluye con DCM (10 mL) y se purifica por cromatografía de silica gel empleando 10% EtOAC/Hexanos como el eluente para dar el éster 45 (380 mg, una producción de 81%, dos etapas, iniciando a partir de 36) como un aceite libre de impurezas: [\alpha]_{D} -15.1 (c 1,2, CDCl_{3}); IR (neat) 2955, 2932, 2877, 1743, 1732, 1694, 1474, 1461, 1417, 1380, 1360, 1295, 1252, 1169, 1094, 1043, 988.3, 912.9, 871.4, 836.5, 774.8, 741.6 cm^{-1}; ^{1}H NMR (500 MHz, CDCl_{3}) 0.08 (3H, s), 0.08 (3H, s), 0.60-0.68 (6H, m), 0.93 (9H, s), 0.95 (9H, t, J = 8.0 Hz), 1.04 (3H, d, J = 6.9 Hz), 1.05 (3H, d, J = 6.9 Hz), 1.10 (3H, s), 1.25 (3H, s), 1.69 (3H, s), 2.08-2.15 (2H, m), 2.16 (3H, s), 2.38 (1H, dd, J = 17.0, 7.0 Hz), 2.48 (2H, t, J = 6.5 Hz), 2.57 (1H, dd, J = 17.0,2.7 Hz), 2.71-2.76 (2H, m), 3.07 (1H, quint, J = 7.0 Hz), 3.83 (1H, d, J = 7.2 Hz), 4.36 (1H, dd, J = 7.0, 2.7 Hz), 4.97-5.07 (4H, m), 5.19 (1H, t, J = 7.0), 5.73 (1H; td, J = 15.4, 5.9 Hz), 5.92 (1H, dd, J = 15.7, 8.0 Hz); ^{13}C NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 218.4, 205.4, 172.1, 140.1, 137.4, 135.4, 119.1, 115.8, 115.6, 78.7, 76.5, 73.9, 53.3, 46.3, 43.7, 39.6, 36.6, 29.2, 26.7, 26.4, 23.8, 23.7, 19.9, 18.9, 18.7, 15.4, 7.06, 5.30, -3.29, -3.62; LRMS (ESI) calc. para C_{36}H_{66}O_{6}Si_{2}Na [M+Na+] 673.4, encontrado 673.5

41

Compuesto 47

A una solución del compuesto 45 (20 mg, 0.031 mmol) en tolueno seco (60 mL) a reflujo se le adicionó en una porción una solución de triciclohexilfosfina [1,3-bis (2, 4,6-trimetilfenil)-4,5-dihidroimidazol-2-ilideno][benzilideno] mthenium (IV) dichloride (5.2 mg, 0.0061 mmol) en tolueno seco (2 mL) y la mezcla se calentó por 10 minutos. La mezcla de reacción se enfrió inmediatamente en un baño de hielo y se colocó sobre silica y se purificó utilizando cromatografía de silica gel empleando un gradiente de 4-10% EtOAc/pentano como el eluente para proveer el compuesto 47 (15 mg, una producción del 78%) como un aceite: [\alpha] -28.6 (c 1.2, CHCl_{3}); IR (neat) 2955, 2933, 2878, 1745, 1731,1695, 1471, 1462, 1380, 1361, 125-1, 1159, 1104, 1080, 1019, 985.0, 876.1, 835.5, 774.7, 743.1, 670.1 cm^{-1}; ^{1}H NMR (500 MHz, CDCl_{3}) 0.07 (3H, s), 0.10 (3H, s), 0.59-0.68 (6H, m), 0.91 (9H, t, J = 8.0 Hz), 0.93 (9H, s), 1.04 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.10 (3H, s), 1.11 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.17 (3H, s), 1.71 (3H, s), 2.21 (3H, s), 2.27-2.32 (1H), 2.38 (1H, dd, J = 14.6, 6.8 Hz), 2.51-2.61 (2H, m), 2.57 (1H, dd,J = 15.5, 3.3 Hz), 2.93-3.1 (3H, m), 3.94 (1H, d, J = 8.5 Hz), 4.28 (1H, dd, J = 8.6, 3.0 Hz), 5.04 (1H, dd, J = 8.7,2.4), 5.16 (1H, t, J = 7.5), 5.73 (1H, tdd, J = 12.8, 9.94, 6.9 Hz), 5.92 (1H, ddd, J = 18.0, 10.3, 7.8 Hz); ^{13}C NMR (125 MHz, CDCl_{3}) \delta 215.9, 204.8, 171.3, 140.0, 132.7, 129.2, 118.6, 79.1, 78.2, 75.4, 54.0, 48.2, 41.7, 40.3, 35.0, 29.2, 26.6, 26.5, 23.5, 22.8, 20.6, 18.8, 17.5, 14.3, 7.19, 5.53, -3.36; LRMS (ESI) calc. para C_{34}H_{62}O_{6}Si_{2} 645.4, encontrado 645.4 (M+Na+).

42

Compuesto 39a

A una solución de reactivo de Wittig (19.1 mg, 54.7 \mumol) en THF (0.4 mL) se le adicionó KHMDS (109 \muL de una solución 0.5 M en tolueno, 54.7 \mumol) a 0ºC. La mezcla se agitó a 0ºC por 0.5 h y luego se enfrío a -78ºC. A la mezcla se le adicionó gota a gota una solución de cetona 47 (5.7 mg, 9.12 \mumol) en THF (0.3 mL), y la mezcla resultante se dejó calentar a -20ºC durante 1.5 h. La reacción se apagó con NH_{4}Cl saturado acuoso (2 mL) y se extrajo con EtOAc (7 mL x 3). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se concentraron. El residuo se purificó por cromatografía de columna instantánea (SiO_{2}, hexano/Et_{2}O = 10:1) para dar 5.6 mg de una mezcla inseparable de olefinas E/Z (E/Z = 9:1). La mezcla se purificó por TLC preparativa (hexano/Et_{2}0 = 4:1) para dar el 39a puro (5.0 mg, 6.96 \mumol, 76%) como un aceite incoloro; [\alpha]_{D}^{25} -41.5 (c 0.715, CHCl_{3}); IR (film) \nu 2955, 2884, 1737, 1690, 1467, 1378, 1249, 1179, 1102, 1014, 979, 879, 826, 773 cm^{-1}; ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 0.08 (3H, s), 0.12 (3H, s), 0.57 (6H, q, J = 7.8 Hz), 0.89 (9H, t, J = 8.0 Hz), 0.93 (9H, s), 1.04 (3H, s), 1.06 (3H, d, J = 7.1 Hz), 1.12 (3H, s), 1.17 (3H, d, J = 7.1 Hz), 1.68 (3H, s), 2.15 (3H, d, J = 0.8 Hz), 2.14-2.27 (2H, m), 2.45 (1H, dd, J = 14.0, 4.8 Hz), 2.50 (1H, dd, J = 14.9, 3.2 Hz), 2.64-2.74 (2H, m), 2.72 (3H, s), 3.02 (1H, quint, J = 7.0 Hz), 3.10 (1H, dd, J = 14.4, 7.3 Hz), 3.96 (1H, d, J = 8.7 Hz), 4.43 (1H, dd, J = 8.3,2.9 Hz), 5.22 (1H, dd, J = 9.8, 5.7 Hz), 5.33-5.42 (2H, m), 5.69 (1H, dd, J = 15.8, 8.2 Hz), 6.57 (1H, s), 6.96 (1H, s); ^{13}C NMR (100 MHz, CDCl_{3}) \delta -3.3, -3.2, 5.6 (3C), 7.1 (3C), 15.0, 17.2, 18.8, 19.4, 21.4, 21.7, 23.8, 24.3, 26.5 (3C), 33.2, 35.6, 41.3, 41.8, 48.2, 54.0, 74.4, 77.4, 79.3, 116.4, 120.5, 121.0, 129.3, 132.1, 137.8, 138.0, 152.7, 164.8, 170.7, 216.8; LRMS (ESI) calc. para C_{39}H_{68}NO_{5}SSi_{2} [M+H+] 718.4, encontrado 718.3.

43

Compuesto 28 (Epo 3)

A una solución de 39a (298.8 mg, 0.416 mmol) en THF (6.5 mL) se le adicionó HF-piridina (3.2 mL) a 0ºC, y la mezcla se agitó a rt por 3 h. La reacción se apagó mediante la adición gota a gota de TMSOMe (30 mL) a 0ºC. Después se concentró y seco bajo alto vacío, el residuo se purificó por cromatografía de columna instantánea (SiO_{2}, hexano/EtOAc = 1:1) para dar 28 (196.6 mg, 0.402 mmol, 97%) como un sólido de color blanco; [\alpha]_{D}^{25} -96.6 (c 0.235, CHCl_{3}); IR (film) \nu 3502, 29.70, 2927, 1733, 1685, 1506, 1456, 1375, 1251, 1152, 1040, 977 cm^{-1}; ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 1:06 (3H, s), 1.11 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.22 (3H, d, J = 6.8 Hz), 1.28 (3H, s), 1.72 (3H, s), 2.10 (3H, s), 2.31-2.40 (2H, m), 2.43 (1H, dd, J = 16.0, 3.7 Hz), 2.49 (1H, dd, J = 16.0, 9.2 Hz), 2.55-2.68 (2H, m), 2.71 (3H, s), 2.98 (1H, dd, J = 14.4, 6.4 Hz), 3.16 (1H, quint, J = 6.2 Hz), 3.76 (1H, dd, J = 5.9, 3.2 Hz), 4.30 (1H, dd, J = 9.2, 3.7 Hz), 5.18 (1H, brt, J = 7.3 Hz), 5.32 (1H, dd, J = 8.4, 2.5 Hz), 5.63 (1H, dd, J = 15.7, 6.4 Hz), 5.60 (1H, ddd, J = 15.7, 6.9, 5.1 Hz), 6.60 (1H, s), 6.98 (1H, s); ^{13}C NMR (100 MHz, CDCl_{3}) \delta 15.1,16.0, 17.7, 19.2, 19.5, 22.5, 23.6, 32.0, 35.0, 39.6, 40.3, 44.8, 53.3, 71.8, 75.6, 78.3, 116.1, 119.6, 120.5, 129.9, 131.3, 137.5, 138.2, 152.2, 165.0, 170.7,218.8; LRMS (ESI) calc. para C_{27}H_{40}NO_{5}S [M+H+] 490.3, encontrado 490.2.

44

dEpoB (1, Epo 1)

A una solución de 28 (1.2 mg, 2.5 \mumol) y Tris NHNH_{2} (29.3 mg, 98 \mumol) en ClCH_{2}CH_{2}Cl (0.7 mL) a 50ºC se le adicionó Et_{3}N (13.7 \muL, 98 \mumol). La reacción se monitoreo por HPTLC (hexano/EtOAc/CH_{2}Cl_{2} = 1/1/2). Después de la agitación por 7 h, la mezcla se enfrió a rt, se diluyó con EtOAc y filtró a través de una almohadilla de silica gel, que se enjuagó con EtOAc. Después de la concentración, el residuo se purificó por TLC preparativa (hexano/EtOAc/CH_{2}Cl_{2} = 1/1/2) para dar 1 (1.1 mg, 2.2 \mumol, 91%) como un sólido de color blanco.

Los datos espectrales de 1 fueron idénticos a aquellos reportados de dEpoB.

45

Compuesto 27

Se forma el azeótropo del ácido 25 y alcohol 24 con benceno seco (5 mL x 2) y se secan bajo alto vacío antes de la reacción. A una solución del alcohol 24 (639 mg, 2.63 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (13 mL) se le adicionaron EDCI (576 mg, 3.09 mmol) y DMAP (366 mg, 3.09 mmol) a 0ºC. A la mezcla se le adicionó una solución del ácido 25 (1.11 g, como 1.88 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (enjuagar con 5 mL + 2 mL) gota a gota durante 16 min. a 0ºC. Después de la agitación a 0ºC por 1.5 h, la mezcla se agitó a rt por 3.5 h. Después de la concentración, el residuo se purificó por cromatografía de columna instantánea (SiO_{2}, hexano/EtOAc = 30: 1 a 20:1) para dar el 27 (1.20 g, 1.61 mmol, 86% a partir del t-butil éster) como un aceite incoloro; [\alpha]D^{24} -25.1 (c 1.30, CHCl_{3}); IR (film) \nu 2955, 2925, 2872, 1732, 1696, 1461, 1378, 1290, 1243, 1173, 1091, 985, 873, 773 cm^{-1}; ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 0.06 (3H, s), 0.06 (3H, s), 0.58-0.66 (6H, m), 0.92 (9H, s), 0.95 (9H, t, J = 8.0 Hz), 1.02 (3H, d, J = 6.5 Hz), 1.03 (3H, d, J = 6.5 Hz), 1.07 (3H, s), 1.21 (3H, s), 1.67 (3H, s), 2.07 (3H, s), 2.05-2.12 (1H, m), 2.30 (1H, dd, J = 16.9, 7.5 Hz), 2.39 (1H, dt, J = 14.8, 6.7 Hz), 2.49 (1H, dd, J = 17.0, 3.0 Hz), 2.50 (1H, dt, J = 14.8, 6.7 Hz), 2.70 (3H, s), 2.74-2.30 (2H, m), 3.07 (1H, dd, J = 7.0 Hz), 3.83 (1H, dd, J = 7.1, 2.0 Hz), 4.35 (1H, dd, J = 7.4, 2.8 Hz), 4.98-5.07 (4H, m), 5.16 (1H, brt, J = 7.0 Hz), 5.23 (1H, t, J = 6.9 Hz), 5.74 (1H, ddt, J = 16.7, 10.2, 6.5 Hz), 5.91 (1H, ddd, J = 17.8, 10.5, 7.8 Hz), 6.50 (1H, s), 6.95 (1H, s); ^{13}C NMR (100 MHz, CDCl_{3}) \delta -3.7, -3.3, 5.3 (3C), 7.2 (3C), 14.8, 15.2, 18.7, 18.9, 19.4, 20.3, 23.6, 23.7, 26.4 (3C), 31.7, 36.7, 40.1, 43.8, 46.4, 53.3, 74.2, 76.5, 79.6, 115.5,115.6, 116.5, 120.5, 121.3, 135.8, 136.1, 137.4, 140.2, 152.9, 164.7, 171.5, 218.4; LRMS (ESI) calc. para C_{41}H_{71}NO_{5}SSi_{2} [M+Na+] 768.5, encontrado 768.5.

46

Compuesto 39a

Una solución de 27 (26.9 mg, 36.1 \mumol) en tolueno (70 mL) se calentó a reflujo y se trato con una solución del catalizador de Grubbs (3.1 mg, 3.61 \mumol) en tolueno (2 mL). La mezcla se agitó por 25 min., se enfrío a 0ºC y se filtró a través de una almohadilla de silica gel, la cual se enjuagó con hexano/EtOAc = 2/1. Los filtrados combinados se concentraron y purificaron por cromatografía de columna instantánea (SiO_{2}, hexano/Et_{2}O = 40:1 a 5:1) para dar el 39a (9.9 mg, 13.8 \mumol, 38%) como un aceite incoloro; [\alpha]_{D}^{25} -41.5 (c 0.715, CHCl_{3}); IR (film) \nu 2955, 2884, 1737, 1690, 1467, 1378, 1249, 1179, 1102, 1014, 979, 879, 826, 773 cm^{-1}; ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 0.08 (3H, s), 0.12 (3H, s), 0.57 (6H, q, J = 7.8 Hz), 0.89 (9H, t, J = 8.0 Hz), 0.93 (9H, s), 1.04 (3H, s), 1.06 (3H, d, J = 7.1 Hz), 1.12 (3H, s), 1.17 (3H, d, J = 7.1 Hz), 1.68 (3H, s), 2.15 (3H, d, J = 0.8 Hz), 2.14-2.27 (2H, m), 2.45 (1H, dd, J = 14.0,4.8 Hz), 2.50 (1H, dd, J = 14.9, 3.2 Hz), 2.64-2.74 (2H, m), 2.72 (3H, s), 3.02 (1H, quint, J = 7.0 Hz), 3.10 (1H, dd, J = 14.4,7.3 Hz), 3.96 (1H, d, J = 8.7 Hz), 4.43 (1H, dd, J = 8.3, 2.9 Hz), 5.22 (1H, dd, J = 9.8, 5.7 Hz), 5.33-5.42 (2H, m), 5.69 (1H, dd, J = 15.8, 8.2 Hz), 6.57 (1H, s), 6.96 (1H, s); ^{13}C NMR (100 MHz, CDCl_{3}) \delta -3.3, -3.2, 5.6 (3C), 7.1 (3C), 15.0, 17.2, 18.8, 19.4, 21.4, 21.7, 23.8, 24.3, 26.5 (3C), 33.2, 35.6, 41.3, 41.8, 48.2, 54.0, 74.4, 77.4, 79.3, 116.4, 1 20.5, 121.0, 129.3, 132.1, 137.8, 138.0, 152.7, 164.8, 170.7, 216.8; LRMS (ESI) calc. para C_{39}H_{68}NO_{5}SSi_{2} [M+H+] 718.4, encontrado 718.3.

47

Compuesto 28

A una solución de 39a (298.8 mg, 0.416 mmol) en THF (6.5 mL) se le adicionó HF-piridina (3.2 mL) a 0ºC, y la mezcla se agitó a rt por 3 h. La reacción se apagó con la adición gota a gota de TMSOMe (30 mL) a 0ºC y la mezcla se agitó a rt por 3 h. Después de la concentración y el secado bajo alto vacío, el residuo se purificó por cromatografía de columna instantánea (SiO_{2}, hexano/EtOAc = 1:1) para dar el 28 (196.6 mg, 0.402 mmol, 97%) como un sólido de color blanco; [\alpha]_{D}^{25} -96.6 (c 0.235, CHCl_{3}); IR (film) \nu 3502, 2970, 2927, 1733, 1685, 1506, 1456, 1375, 1251, 1152, 1040, 977 cm^{-1}; ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 1.06 (3H, s), 1.11 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.22 (3H, d, J = 6.8 Hz), 1.28 (3H, s), 1.72 (3H, s), 2.10 (3H, s), 2.31-2.40 (2H, m), 2.43 (1H, dd, J = 16.0, 3.7 Hz), 2.49 (1H, dd, J = 16.0, 9.2 Hz), 2.55-2.68 (2H, m), 2.71 (3H, s), 2.98 (1H, dd, J = 14.4, 6.4 Hz), 3.16 (1H, quint, J = 6.2 Hz), 3.76 (1H, dd, J = 5.9, 3.2 Hz), 4.30 (1H, dd, J = 9.2, 3.7 Hz), 5.18 (1H, brt, J = 7.3 Hz), 5.32 (1H, dd, J = 8.4, 2.5 Hz), 5.63 (1H, dd, J = 15.7, 6.4 Hz), 5.60 (1H, ddd, J = 15.7, 6.9, 5.1 Hz), 6.60 (1H, s), 6.98 (1H, s); ^{13}C NMR (100 MHz, CDCl_{3}) \delta 15.1, 16.0, 17.7, 19.2, 19.5, 22.5, 23.6, 32.0, 35.0, 39.6, 40.3, 44.8, 53.3, 71.8, 75.6, 78.3, 116.1, 119.6, 120.5, 129.9, 131.3, 137.5, 13 8.2, 152.2, 165.0, 170.7, 218.8; LRMS (ESI) calc. para C_{27}R_{40}NO_{5}S [M+H+] 490.3, encontrado 490.2.

48

Compuesto 26

Se forma el azeótropo del ácido 25 y el alcohol 21 con benceno seco (5 mL x 2) y se secan bajo alto vacío antes de la reacción. A una solución del alcohol 21 (240 mg, 0.756 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (5 mL) se le adicionaron EDCI (192.7 mg, 1.01 mmol) y DMAP (122.8 mg, 1.01 mmol) a 0ºC. A la mezcla se le adicionó una solución del ácido 25 (314.6 mg, 0.628 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (enjuagar con 2 mL + 1 mL) gota a gota sobre 15 min. a 0ºC. Después de la agitación a 0ºC por 2 h, la mezcla se agitó a rt por 2 h. Después de la concentración, el residuo se purificó por cromatografía de columna instantánea (SiO_{2}, hexano/EtOAc = 20:1 a 15:1) para dar el 26 (340.1 mg, 0.425 mmol, 68% basado en el ácido) como un aceite incoloro; [\alpha]_{D}^{24} -27.5 (c 0.28, CHCl_{3}); IR (film) \nu 2956, 2878, 1740, 1692, 1472, 1378, 1317, 1253,1174, 1118, 988, 915, 872, 837, 775 cm^{-1}; ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 0.06 (6H, s), 0.57-0.65 (6H, m), 0.92 (9H, s), 0.94 (9H, t, J = 7.9 Hz), 1.02 (3H, d, J = 6.9 Hz), 1.03 (3H, d, J = 6.8 Hz), 1.07 (3H, s), 1.22 (3H, s), 2.07-2.10 (1H, m), 2.09 (3H, s), 2.31 (1H, dd, J = 16.9,7.3 Hz), 2.51 (1H, dd, J = 16.8, 3.0 Hz), 2.49-2.65 (2H, m), 2.71 (3H, s), 2.96-2.99 (2H, m), 3.06 (1H, quint, J = 7.1 Hz), 3.83 (1H, dd, J = 7.3, 2.1 Hz), 4.35 (1H, dd, J = 7.2,3.0 Hz), 4.98-5.12 (4H, m), 5.30 (1H, t, J = 6.7 Hz), 5.76 (1H, ddt, J = 16.7, 10.2, 6.2 Hz), 5.92 (1H, ddd, J = 17.8, 9.9, 7.8 Hz), 6.19 (1H, t, J = 7.0 Hz), 6.51 (1H, s), 6.97 (1H, s); LRMS (ESI) calc. para C_{41}H_{68}F_{3}NO_{5}SSi_{2}Na [M+Na+] 822.4, encontrado 822.4.

49

Compuesto 40a (vía RCM del 26)

Una solución de 26 (57.6 mg, 72.0 \mumol) en tolueno (142 mL) se calentó a reflujo y se trató con una solución del catalizador de Grubbs (6.1 mg, 7.20 \mumol) en tolueno (2 mL). La mezcla se agitó por 28 min., se enfrío a 0ºC y se filtró a través de una almohadilla de silica gel, la cual se enjuagó con hexano/EtOAc = 2/1 (300 mL). Los filtrados combinados se concentraron y purificaron por cromatografía de columna instantánea (SiO_{2}, hexano/Et_{2}O = 40:1 a 15:2) para dar el 40a (12.0 mg, 15.5 \mumol, 22%) como un aceite incoloro; IR (film) \nu 2955, 2884, 1743, 1690, 1472, 1320, 1173, 1114, 1038, 1008, 873, 832, 773 cm^{-1}; ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 0.09 (3H, s), 0.12 (3H, s), 0.55 (6H, q, J = 7.7 Hz), 0.88 (9H, t, J = 8.0 Hz), 0.96 (9H, s), 1.01 (3H, s), 1.06 (3H, d, J = 7.1 Hz), 1.12 (3H, s), 1.20 (3H, d, J = 7.1 Hz); 2.07-2.17 (1H, m), 2.19 (3H, s), 2.38 (1H, dd, J = 14.3, 3.5 Hz), 2.39-2.49 (1H, m), 2.50 (1H, dd, J = 14.3, 7.3 Hz), 2.73 (3H, s), 2.77-2.91 (2H, m), 2.96-3.09 (2H, m), 3.98 (1H, dd, J = 8.9 Hz), 4.54 (1H, dd, J = 7.3, 3.4 Hz), 5.28-5.38 (1H, m), 5.63 (1H, dd, J = 9.6, 2.3 Hz), 5.77 (1H, dd, J = 15.9, 8.5 Hz), 6.21-6.28 (1H, m), 6.60 (1H, s), 6.99 (1H, s); LRMS (ESI) calc. para C_{39}H_{65}F_{3}NO_{5}SSi_{2} [M+H+] 772.4, encontrado 772.4.

50

Compuesto 29

A una solución de 40a (1.78 g, 2.31 mmol) en THF (25 mL) se le adicionó lentamente HF-piridina (12.5 mL) a 0ºC, y la mezcla se agitó a rt por 4 h. La reacción se apagó con adición gota a gota de TMSOMe (80 mL) durante 10 min. a 0ºC. La mezcla se agitó vigorosamente a rt por 2.5 h. Después de la concentración y el secado bajo alto vacío por 2 h, el residuo se purificó por cromatografía de columna instantánea (SiO_{2}\sim5.0 g, hexano/EtOAc = 1:1) para dar el 29 (1.20 g, 2.21 mmol, 96%) como un polvo incoloro; [\alpha]_{D}^{25} -54.6 (c 0.28, CHCl_{3}); IR (film) \nu 3478, 2974, 2929,1736, 1689, 1449, 1381, 1318, 1247, 1169, 1113, 1039, 983, 867, 736 cm^{-1}; ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 1.05 (3H, s), 1.12 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.23 (3H, d, J = 6.8 Hz), 1.37 (3H, s), 2.04 (1H, brd, J = 3.8 Hz, -OH), 2.12 (3H, s), 2.25-2.33 (1H, m), 2.38 (1H, dd, J = 15.3, 3.0 Hz), 2.48 (1H, dd, J = 15.4, 9.8 Hz), 2. 54-2.61 (1H, m), 2.66-2.76 (1H, m), 2.71 (3H, s), 2.96 (1H, dd, J = 16.5, 4.5 Hz), 3.02 (1H, dd, J = 16.3, 6.5 Hz), 3.11 (1H, quint, J = 6.7 Hz), 3.19 (1H, brs, =OH), 3.74 (1H, brs), 4.35 (1H, brd, J = 9.5 Hz), 5.42 (1H, dd, J = 6.2, 4.1 Hz), 5.60 (1H, ddd, J = 15.8, 5.6, 4.5 Hz), 5.66 (1H, dd, J = 15.8, 5.8 Hz), 6.24 (1H, t, J = 7.2 Hz), 6.64 (1H, s), 7.00 (1H, s); ^{13}C NMR (100 MHz, CDCl_{3}) \delta 15.1, 16.1, 17.7, 18.5, 19.3, 22.5, 28.8, 31.1, 39.6, 39.7, 45.0, 53.7, 71.4, 75.3, 76.8, 116.7, 120.2, 124.3 [q, 1J(C,F) = 273.4 Hz], 127.9, 130.2 [q, 3J(C,F) = 6.0 Hz], 130.6 [q, 2J(C,F) = 28.4 Hz], 132.5, 136.7, 152.0, 165.4, 170.2, 218.4; LRMS (ESI) calc. para C_{27}H_{37}F_{3}NO_{5}S [M+H+] 544.2, encontrado 544.1.

51

Compuesto 2

A una solución de 29 (1.22 mg, 2.24 \mumol) y TtisNHNH_{2} (26.7 mg, 89.6 \mumol) en ClCH_{2}CH_{2}Cl (1 mL) a 50ºC se le adicionó Et_{3}N (12.5 \muL, 89.6 \mumol). La reacción se monitoreo por HPTLC (hexano/EtOAc/CH_{2}Cl_{2} = 1/1/2). Después de la agitación por 6.5 h, adicionalmente se le adicionaron a la mezcla TrisNHNH2 (26.7 mg, 89.6 \mumol) y Et_{3}N (12.5 \muL, 89.6 \mumol). Después de la agitación por 14 h, la mezcla se enfrió a rt, se diluyó con EtOAc y se filtró a través de una almohadilla de silica gel, la cual se enjuagó con EtOAc. Después de la concentración, el residuo se purificó por TLC preparativa (hexano/EtOAc/CH_{2}Cl_{2} = 1/1/2) para dar 2 (1.16 mg, 2.13 \mumol, 94%) como un sólido de color blanco; ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 1.03 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.08 (3H, s), 1.19 (3H, d, J = 6.8 Hz), 1.25-1.35 (2H, m), 1.37 (3H, s), 1.42-1.55 (2H, m), 1.65-1.82 (2H, m), 2.10 (3H, d, J = 0.8 Hz), 2.21-2.47 (2H, m), 2.27 (1H, dd, J = 14.2, 2.6 Hz), 2.48 (1H, dd, J = 14.3, 10.8 Hz), 2.70 (3H, s), 2.70-2.28 (1H, m), 3.02 (1H, d, J = 2.0 Hz, -OH), 3.19 (1H, qd, J = 6.9, 2.2 Hz), 3.65 (1H, d, J = 6.2 Hz, -OH), 3.69-3.72 (1H, m), 4.34 (1H, ddd, J = 10.8, 6.2, 2.6 Hz), 5.28 (1H, dd, J = 10.2,2.2 Hz), 6.12 (1H, dd, J = 10.2,5.2 Hz), 6.61 (1H, s), 6.98 (1H, s); LRMS (ESI) calc. para C_{27}H_{39}F_{3}NO_{5}S [M+H+] 546.3, encontrado 546.2.

52

Compuesto 54

Se forma el azeótropo del ácido 25 y alcohol 53 con benceno seco (3 mL x 2) y se secaron bajo alto vacío antes de la reacción. A una solución del alcohol 53 (68.0 mg, 0.173 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (1.3 mL) se le adicionaron EDCI (37.8 mg, 0.197 mmol) y DMAP (24.1 mg, 0.197 mmol) a 0ºC. A la mezcla se le adicionó una solución de ácido 25 (72.6 mg, como 0.123 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (0.7 mL) gota a gota durante 5 min. a 0ºC. Después de la agitación a 0ºC por 1 h, la mezcla se agitó a rt por 2.5 h. Después de la concentración, el residuo se purificó por cromatografía de columna instantánea (SiO_{2}, hexano/EtOAc = 30: 1) para dar el 54 (99.5 mg, 0.114 mmol, 92% de t-butil éster) como un aceite incoloro; [\alpha]_{D}^{25} -23.4 (c 0.56, CHCl_{3}); IR (film) \nu 2955, 2931, 2880, 1735, 1696, 1506, 1472, 1386, 1362, 1294, 1254, 1174, 1104, 988, 878, 776, 742 cm^{-1}; ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 0.06 (3H, s), 0.06 (3H, s), 0.14 (6H, s), 0.63 (6H, q, J = 8.0 Hz), 0.92 (9H, s), 0.94 (9H, t, J = 8.0 Hz), 0.97 (9H, s), 1.02 (3H, d, J = 6.6 Hz), 1.05 (3H, d, J = 6.5 Hz), 1.07 (3H, s), 1.21 (3H, s), 1.67 (3H, s), 2.06 (3H, d, J = 0.8 Hz), 2.05-2.14 (1H, m), 2.30 (1H, dd, J = 16.9, 7.5 Hz), 2.33-2.53 (2H, m), 2.50 (1H, dd, J = 16.9, 2.7 Hz), 2.76-2.80 (2H, m), 3.07 (1H, quint, J = 7.0 Hz), 3.83 (1H, dd, J = 7.0, 2.2 Hz), 4.35 (1H, dd, J = 7.4, 2.8 Hz), 4.97 (2H, s), 4.97-5.07 (4H, m), 5.16 (1H, t, J = 7.2 Hz), 5.24 (1H, t, J = 6.9 Hz), 5.74 (1H, ddt, J = 16.6, 10.0, 6.5 Hz), 5.91 (1H, ddd, J = 17.6, 9.9, 7.7 Hz), 6.50 (1H, s), 7.06 (1H, s);^{13}C NMR (100 MHz, CDCl_{3}) \delta -5.2 (2C), -3.7, -3.3, 5.3 (3C), 7.2 (3C), 14.7, 15.2, 18.5, 18.7, 18.9, 20.3, 23.6, 23.7, 26.0 (3C), 26.4 (3C), 31.7, 36.7, 40.1, 43.8, 46.4, 53.3, 63.4, 74.2, 76.5, 79.6, 115.5, 115.6, 116.6, 120.5, 121.3, 135.8, 136.1, 137.4, 140.1, 153.0, 171.5, 172.2, 218.4; LRMS (ESI) calc. para C_{47}H_{86}NO_{6}SSi_{3} [M+H+] 876.6, encontrado 876.5.

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53

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Compuesto 55

Una solución de 54 (69.7 mg, 79.5 \mumol) en tolueno (158 mL) se calentó a reflujo y se trató con una solución del catalizador de Grubbs (6.7 mg, 7.95 \mumol) en tolueno (2 mL). La mezcla se agitó por 11 min., se enfría a 0ºC y se filtró a través de una almohadilla de silica gel, la cual se enjuagó con hexano/EtOAc = 3/1 (280 mL). Los filtrados combinados se concentraron y purificaron por cromatografía de columna instantánea (SiO_{2}, hexano/Et_{2}O = 20:1 a 15:1) para dar el 55 (18.4 mg, 21.7 \mumol, 27%) como un aceite incoloro; [\alpha]_{D}^{24} -40.4 (c 0.26, CHCl_{3}); IR (film) \nu 2955, 2930, 2879, 1740, 1694, 1472, 1387, 1362, 1253, 1200, 1107, 1007, 838, 776, 742 cm^{-1}; ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 0.08 (3H, s), 0.12 (3H, s), 0.15 (6H, s), 0.57 (6H, q, J = 7.9 Hz), 0.88 (9H, t, J = 8.0 Hz), 0.95 (9H, s), 0.97 (9H, s), 1.04 (3H, s), 1.06 (3H, d, J = 7.1 Hz), 1.12 (3H, s), 1.17 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.69 (3H, s), 2.06-2.30 (2H, m), 2.14 (3H, s), 2.45 (1H, dd, J = 15.6, 3.6 Hz), 2.50 (1H, dd, J = 14.9, 3.1 Hz), 2.63-2.75 (2H, m), 2.97-3.06 (1H, m), 3.10 (1H, dd, J = 14.6, 7.7 Hz), 3.97 (1H, d, J = 8.5 Hz), 4.44 (1H, dd, J = 8.4, 2.9 Hz), 4.97 (2H, s), 5.22 (1H, dd, J = 8.7, 5.2 Hz), 5.33-5.44 (2H, m), 5.70 (1H, dd, J = 15.6, 8.1 Hz), 6.57 (1H, s), 7.07 (1H, s); LRMS (ESI) calc. para C_{45}H_{82}NO_{6}SSi_{3} [M+H+] 848.5, encontrado 848.5.

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54

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Compuesto 57

A una solución de 55 (61.8 mg, 72.8 \mumol) en TBF (2 mL) se le adicionó HF·piridina (1 mL) a 0ºC, y la mezcla se agitó a rt por 3.2 h. La reacción se apagó con la adición gota a gota de TMSOMe (15 mL) a 0ºC. La mezcla se agitó a rt por 2 h. Después de la concentración y el secado bajo alto vacío, el residuo se purificó por cromatografía de columna instantánea (SiO_{2}, hexano/EtOAc = 1:3) para dar el 57 (32.4 mg, 64.1 \mumol, 88%) como un sólido de color blanco; [\alpha]_{D}^{25} -108.4 (c 0.285, CHCl_{3}); IR (film) \nu 3422, 2968, 2919, 2729, 1689, 1449, 1377, 1252, 1152, 1064, 978 cm^{-1}; ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 1.05 (3H, s), 1.12 (3H, d, J = 6.9 Hz), 1.22 (3H, d, J = 6.8 Hz), 1.32 (3H, s), 1.72 (3H, s), 2.08 (3H, s), 2.31-2.40 (3H, m), 2.43 (1H, dd, J = 15.5, 3.5 Hz), 2.49 (1H, dd, J = 15.5, 9.5 Hz), 2.55-2.67 (2H, m), 2.95 (1H, dd, J = 14.6, 6.3 Hz), 3.13 (1H, quint, J = 6.6 Hz), 3.34 (1H, brs, -OH), 3.75 (1H, dd, J = 6.6, 2.4 Hz), 4.06 (1H, brs, -OH), 4.33 (1H, dd, J = 9.4, 3.0 Hz), 4.92 (2H, s), 5.18 (1H, t, J = 6.9 Hz), 5.33 (1H, dd, J = 8.0,2.5 Hz), 5.52 (1H, dd, J = 15.8, 6.4 Hz), 5.59 (1H, ddd, J = 15.8, 6.6, 5.0 Hz), 6.63 (1H, s), 7.13 (1H, s); ^{13}C NMR (100 MHz, CDCl_{3}) \delta 15.3, 16.3, 17.8, 19.2, 22.8, 23.7, 31.9, 35.1, 39.7, 40.2, 45.0, 53.4, 61.8, 71.7, 75.8, 78.1, 116.7, 119.0, 120.5, 130.0, 131.2, 137.6, 138.9,152.5, 170.0, 170.7, 218.7; LRMS (ESI) calc. para C_{27}H_{39}NO_{6}SNa [M+Na+] 528.2, encontrado 528.0.

55

Compuesto 46

Se forma el azeótropo del ácido crudo 25 (4.65 g, como 7.27 mmol) y el alcohol 44 (2.18 g, 9.84 mmol) con benceno seco y se secaron bajo alto vacío antes de la reacción. A una solución de alcohol 44 (2.18 g, 9.84 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (65 mL) se le adicionaron EDCI (2.09 g, 10.9 mmol) y DMAP (1.33 g, 10.9 mmol) a 0ºC. A la mezcla se le adicionó una solución de ácido crudo 25 (4.65 g, as 7.27 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (enjuagar con 20 mL + 5 mL) gota a gota durante 20 min. a 0ºC. Después de la agitación a 0ºC por 40 min., la mezcla se agitó a rt por 4 h. Después de la concentración, el residuo se purificó por cromatografía de columna instantánea (SiO_{2}\sim160 g, hexano/EtOAc = 20:1) para dar el 46 (4.85 g, 6.87 mmol, 94% de t-butil éster) como un aceite incoloro;

^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 0.08 (3H, s), 0.08 (3H, s), 0.60 (6H, q, J = 7.8 Hz), 0.93 (9H, s), 0.94 (9H, t, J = 8.0 Hz), 1.04 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.04 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.11 (3H, s), 1.23 (3H, s), 2.05-2.14 (1H, m), 2.17 (3H, s), 2.40 (1H, dd, J = 16.9, 7.0 Hz), 2.59 (1H, dd, J = 17.0, 3.6 Hz), 2.56-2.64 (2H, m), 2.90-3.01 (2H, m), 3.06 (1H, quint, J = 7.0 Hz), 3.85 (1H, dd, J = 7.3, 2.0 Hz), 4.38 (1H, d, J = 7.0, 3.4 Hz), 4.97-5.14 (5H, m), 5.75 (1H, ddt, J = 16.0,9.9,6.2 Hz), 5.92 (1H, ddd, J = 17.8,10.5,7.8 Hz), 6.21 (1H, td, J = 7.2, 1.5 Hz); LRMS (ESI) calc. para C_{36}H_{63}F_{3}O_{6}Si_{2}Na [M+Na+] 727.4, encontrado 727.3.

56

Compuesto 48

Una solución de 46 (510.0 mg, 0.723 mmol) en tolueno (500 mL) se calentó a reflujo y se trató con una solución del catalizador de Grubbs (92.1 mg, 0.109 mmol) en tolueno (10 mL). La mezcla se agitó por 17 min. bajo reflujo e inmediatamente se enfrío a 0ºC y se conservó a 0ºC antes de la filtración a través de una almohadilla de silica gel. Una segunda cantidad de dieno (510.0 mg, 0.723 mmol) se procesó idéntica y simultáneamente. Las mezclas de reacción se filtraron a través de una almohadilla de silica gel (100 g), que se enjuagó con hexano/EtOAc = 3/1 (1.4 L). Los filtrados combinados se concentraron y purificaron por cromatografía de columna instantánea (SiO_{2}\sim65 g, hexano/Et_{2}O = 10:1 a 5:1) para dar el 48 (742.4 mg, 1.10 mmol, 76%) como un aceite incoloro;

^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 0.08 (3H), 0.10 (3H, s), 0.60 (6H, q, J = 7.8 Hz), 0.93 (9H, s), 0.94 (9H, t, J = 7.8 Hz), 1.03 (3H, d, J = 7.1 Hz), 1.08 (3H, s), 1.13 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.17 (3H, s), 2.26 (3H, s), 2.25-2.34 (1H, m), 2.64 (1H, dd, J = 15.5, 5.0 Hz), 2.68-2.75 (2H, m), 2.76 (1 H, dd, J = 15.6, 6.4 Hz), 2.85 (1 H, dd, J = 15.6, 5.7 Hz), 2.97 (1H, dq, J = 8.3, 6.9 Hz), 3.04 (1H, dd, J = 15.6, 6.3 Hz), 3.92 (1H, dd, J = 8.3, 1.2 Hz), 4.36 (1H, t, J = 5.3 Hz), 5.30-5.39 (2H, m), 5.58 (1H, dd, J = 15.5, 8.0 Hz), 6.13 (1H, brt, J = 7.2 Hz); ^{13}C NMR (100 MHz, CDCl_{3}) \delta -3.6, -3.6, 5.4 (3C), 7.0 (3C), 17.5, 18.5, 19.0, 21.6, 23.5, 26.3 (3C), 26.5, 28.6, 29.1, 41.0, 42.3, 47.3, 54.1, 74.2, 76.8, 77.7, 124.0 [1J(C,F) = 273.7 Hz], 126.0, 128.7 [3J(C,F) = 5.9 Hz], 132.2 [2J(C,F) = 28.1 Hz], 133.8, 170.5, 204.1, 216.1; LRMS (ESI) calc. para C_{34}H_{59}F_{3}O_{6}Si_{2}Na [M+Na+] 699.4, encontrado 699.4.

57

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Compuesto 40a (vía reacción Wittig de la cetona 48)

La cetona 48 fue sometida a un proceso de azeotropía con benceno (5 mL x 2) y luego se seca bajo alto vacío por 0.5 h. A una solución de la sal de Wittig (907 mg, 2.59 mmol) en THF (19 mL) se le adicionó t-BuOK (2.4 mL de una solución 1.0 M en THF, 2.43 mmol) gota a gota durante 5 min. a 0ºC. La mezcla se agitó a 0ºC por 0.5 h y luego se enfrío a -78ºC. A la mezcla se le adicionó gota a gota una solución de cetona 48 (1.10 g, 1.62 mmol) en THF (13 mL) durante 10 min., y la mezcla resultante se dejó calentar a -20ºC durante 2 h. La reacción se apagó con NH_{4}Cl saturado acuoso (15 mL) y se extrajo con EtOAc (50 mL x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (20 mL), se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se concentraron. El residuo se purificó por cromatografía instantánea (SiO_{2}, hexano/Et_{2}O = 20:1 a 10:1) para dar el deseado 16(E)-isómero 40a (940 mg, 1.22 mmol, 75%) junto con el indeseado 16(Z)-isómero 40b (140.9 mg, 0.182 mmol, 11%), ambos como aceites incoloros;

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58

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[\alpha]_{D}^{26} -17.1 (c 0.14, CHCl_{3}); ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 0.09 (3H, s), 0.12 (3H, s), 0.55 (6H, q, J = 7.7 Hz), 0.88 (9H, t, J = 8.0 Hz), 0.96 (9H, s), 1.01 (3H, s), 1.06 (3H, d, J = 7.1 Hz), 1.12 (3H, s), 1.20 (3H, d, J = 7.1 Hz), 2.07-2.17 (1H, m), 2.19 (3H, s), 2.38 (1H, dd, J = 14.3, 3.5 Hz), 2.39-2.49 (1H, m), 2.50 (1H, dd J = 14.3, 7.3 Hz), 2.73 (3H, s), 2.77-2.91 (2H, m), 2.96-3.09 (2H, m), 3.98 (1H, dd, J = 8.9 Hz), 4.54 (1H, dd, J = 7.3, 3.4 Hz), 5.28-5.38 (1H, m), 5.63 (1H, dd, J = 9.6, 2.3 Hz), 5.77 (1H, dd, J = 15.9, 8.5 Hz), 6.21-6.28 (1H, m), 6.60 (1H, s), 6.99 (1H, s); ^{13}C NMR (100 MHz, CDCl_{3}) \delta -3.4,.-3.3,5.5 (3C), 7.0 (3C),14.6, 17.1, 18.7, 19.4,19.9, 21.3, 24.8, 26.4 (3C), 29.6, 32.8, 42.0, 42.1, 48.2, 54.1, 73.4, 76.9, 77.8, 117.0, 121.6, 124.3 [1J(C,F) = 273.5 Hz], 127.2,130.6 [2J(C,F) = 28.2 Hz], 130.8 [3J(C,F) = 6.1 Hz], 133.2, 136.5, 152.3, 165.0, 170.1, 217.1; HRMS (ESI) calc. para C_{39}H_{65}F_{3}NO_{5}SSi_{2} [M+H+] 772.4074, encontrado 772.4102.

59

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[\alpha]_{D}^{25} 62.7 (c 0.33, CHCl_{3}); ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 0.09 (3H, s), 0.13 (3H, s), 0.49 (6H, q, J = 7.8 Hz), 0.85 (9H, t, J = 7.8 Hz), 0.97 (9H, s), 0.99 (3H, s), 1.06 (3H, d, J = 7.1 Hz), 1.11 (3H, s), 1.20 (3H, d, J = 7.1 Hz), 2.00 (3H, s), 2.03-2.13 (1H, m), 2.35 (1H; dd, J = 14.3, 3.0 Hz), 2.46 (1H, dd, J = 14.3, 7.8 Hz), 2.41-2.50 (1H, m), 2.73 (3H, s), 2.71-2.90 (2H, m) 2.98-3.12 (2H, m), 3.99 (1H, d, J = 9.2 Hz), 4.56 (1H, dd, J = 7.7, 2.8 Hz), 5.33 (1H, ddd, J = 15.6, 8.9, 4.1 Hz), 5.82 (1H, dd, J = 15.6, 8.4 Hz), 6.29 (1H, s), 6.33-6.40 (1H, m), 6.94 (1H, en), 7.09 (1H, brd; J = 8.4 Hz); ^{13}C NMR (100 MHz, CDCl_{3}) \delta -3.2, -3.2, 5.5 (3C), 7.0 (3C), 1.7.2, 18.7; 19.3, 19.6, 20.0, 22.3, 24.9, 26.4 (3C), 29.7, 32.9, 41.9, 42.0, 48.6, 54.0, 72.2, 73.3, 77.0, 116.7, 120.7, 124.5 [1J(C,F) = 273.3 Hz], 127.9, 129.7 [2J(C,F) = 28.0 Hz], 131.9 [3J(C,F) = 6.1 Hz], 132.9, 136.6, 152.1, 165.4, 170.2, 217.4; LRMS (ESI) calc. para C_{39}H_{65}F_{3}NO_{5}SSi_{2} [M+H+] 772.4, encontrado 772.4

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60

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Compuesto 58 (vía reacción Wittig de la cetona 48)

La cetona 48 fue sometida a un proceso de azeotropía con benceno (5 mL x 2) y luego se secaron bajo alto vacío por 0.5 h. A una solución de la sal Wittig (1.19 g, 2.27 mmol) en THF (18 mL) se le adicionó t-BuOK (2.2 mL de una solución 1.0 M en THF, 2.20 mmol) gota a gota durante 5 min. a 0ºC. La mezcla se agitó a 0ºC por 20 min. y luego se enfrío a -78ºC. A la mezcla se le adicionó gota a gota una solución de cetona (1.06 g, 1.51 mmol) en THF (enjuagar con 10 mL + 2 mL) durante 10 min., y la mezcla resultante se dejó calentar a -20ºC durante 2 h. La reacción se apagó con NH_{4}Cl saturado acuoso (15 mL) y se extrajo con EtOAc (50 mL x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (20 mL), se secaron sobre Na_{2}SO_{4} y se concentraron. El residuo se purificó por cromatografía de columna instantánea (SiO_{2}\sim 65 g, hexano/Et_{2}O = 30:1 a 20:1) para dar el deseado 16(E)-isómero 58 (1.01 g, 1.11 mmol, 74%) junto con el indeseado 16(Z)-isómero 58a (154.5 mg, 0.182 mmol, 11%) ambos como aceites
incoloros;

61

^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 0.09 (3H, s), 0.12 (3H, s), 0.15 (6H, s), 0.55 (6H, q, J = 7.8 Hz), 0.87 (9H, t, J = 8.0 Hz), 0.96 (9H, s), 0.97 (9H, s), 1.01 (3H, s), 1.06 (3H, d, J = 7.1 Hz), 1.12 (3H, s), 1.20 (3H, d, J = 7.1 Hz), 2.07-2.16 (1H, m), 2.18 (3H, d, J = 1.0 Hz), 2.38 (1H, dd, J = 14.4, 3.3 Hz), 2.34-2.46 (1H, m), 2.49 (1H, dd, J = 14.4,7.4 Hz), 2.78-2.90 (2H, m), 2.97-3.09 (2H, m), 3.98 (1H, d, J = 8.9 Hz), 4.54 (1H, dd, J = 7.3, 3.3 Hz), 4.97 (2H, s), 5.33 (1H, ddd, J = 15.8, 8.6, 4.9 Hz), 5.63 (1H, dd, J = 9.6, 2.4 Hz), 5.78 (1H, dd, J = 15.8, 8.2 Hz), 6.22-6.27 (1H, m), 6.60 (1H, s), 7.09 (1H, s); ^{13}C NMR (100 MHz, CDCl_{3}) \delta -5.3 (2C), -3.4, -3.3, 5.5 (3C), 7.0 (3C), 14.6, 17.1, 18.4, 18.7, 19.8, 21.3, 24.8, 25.9 (3C), 26.4 (3C), 29.6, 32.9, 42.0, 42.1, 48.2, 54.1, 63.4, 73.4, 76.9, 77.8, 117.2, 121.7; 124.3 [q, 1J(C,F) = 273.6 Hz], 127.2, 130.7 [q, 2J(C,F) = 27.5 Hz], 130.8 [q, 3J(C,F) = 6.2 Hz], 133.2, 136.4, 152.6, 170.1, 172.4, 217.1; LRMS (ESI) calc. para C_{45}H_{78}F_{3}NO_{6}SSi_{3}Na [M+Na+] 924.5, encontrado 924.5.

62

^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 0.07 (3H, s), 0.13 (3H, s), 0.16 (6H, s), 0.48 (6H, q, J = 7.8 Hz), 0.84 (9H, t, J = 7.9 Hz), 0.97 (18H, s), 0.98 (3H, s), 1.06 (3H, d, J = 7.1 Hz), 1.11 (3H, s), 1.20 (3H, d, J = 7.2 Hz), 2.00 (3H, s), 2.03-2.11 (1H, m), 2.33 (1H, dd, J = 14.1,2.8 Hz), 2.43 (1H, dd, J = 14.0, 7.8 Hz), 2.40-2.48 (1H, m), 2.76-2.89 (2H, m), 2.97-3.10 (2H, m), 3.99 (1H, d, J = 9.3 Hz), 4.57 (1H, dd, J = 7.8, 2.6 Hz), 4.95 (1H, d, J = 14.6 Hz), 5.00 (1H, d, J = 14.6 Hz), 5.33 (1H, ddd, J = 15.6,9.1,3.8 Hz), 5.82 (1H, dd, J = 15.6, 8.3 Hz), 6.30 (1H, s), 6.32-6.38 (1H, m), 7.04 (1H, s), 7.11 (1H, dd, J = 11.0, 2.3 Hz); LRMS (ESI) calc. para C_{45}H_{78}F_{3}NO_{6}SNa [M+Na+] 924.5, encontrado 924.5.

63

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Compuesto 59

A una solución de 58 (1.04 g, 2.25 mmol) en THF (22 mL) se le adicionó lentamente HF-piridina (11 mL) a 0ºC, y la mezcla se agitó a rt por 4.3 h. La reacción se apagó con la adición gota a gota de TMSOMe (75 mL) durante 10 min. a 0ºC. La mezcla se agitó vigorosamente a rt por 4.2 h. Después de la concentración y el secado bajo alto vacío por 1 h, el residuo se purificó por cromatografía de columna instantánea (SiO_{2}\sim25 g, hexano/EtOAc = 3:4 a 1:2) para dar el 59 (615.7 mg, 1.00 mmol, 96%) como un polvo incoloro; [\alpha]_{D}^{25} -57.7 (c 1.20, CHCl_{3}); ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 1.04 (3H, s), 1.12 (3H, d, J = 6.9 Hz), 1.25 (3H, d, J = 6.8 Hz), 1.36 (3H, s), 1.90 (1H, d, J = 6.6 Hz, OH), 2.08 (3H, s), 2.23-2.32 (1H, m), 2.34 (1H, dd, J = 15.7, 2.4 Hz), 2.49 (1H, dd, J = 15.7, 10.1 Hz), 2.59-2.69 (2H, m), 2.95-3.01 (2H, m), 3.04 (1H, quintet, J = 6.8 Hz), 3.72 (1H, td, J = 7.0, 3.0 Hz), 3.78 (1H, d, J = 5.7 Hz, OH), 4.38 (1H, ddd, J = 10.1,5.7,2.4 Hz), 4.90 (2H, d, J = 6.1 Hz), 5.10 (1H, t, J = 6.1 Hz, OH), 5.44 (1H, t, J = 4.7 Hz), 5.60 (1H, dd, J = 15.9, 4.4 Hz), 5.66 (1H, dd, J = 15.9, 5.0 Hz), 6.28 (1H, t, J = 6.7 Hz), 6.73 (1H, s), 7.16 (1H, s); LRMS (ESI) calc. para C_{27}H_{37}F_{3}NO_{6}SNa [M+H+] 560.2, encontrado 560.1.

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64

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Los compuestos comparativos 49 y 50

Una solución de 28 (12.2 mg, 24.9 \mumol) en CH_{2}Cl_{2} (1.25 mL) se enfrió a -78ºC y se trató con una solución fría de DMDO (-78ºC, 0.06 M en acetona, 914 \muL, 54.8 \mumol). La mezcla se dejó calentar a -50ºC y se agitó a -50ºC por 2.7 h. El exceso de DMDO se eliminó a -50ºC por la adición de dimetilsulfido (117 \muL) y la mezcla se agitó a esta temperatura por 0.5 h. El solvente se retiro con vacío. La purificación por cromatografía de capa delgada preparativa (hexano/EtOAc = 1/2) proporcionó el \beta-epóxido 49 (3.0 mg, 5.93 \mumol, 24%) y \alpha-epóxido 50 (7.9 mg, 15.6 \mumol, 63%) ambos como sólidos incoloros.

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65

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Compuesto comparativo 49

^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 1.03 (3H, s), 1.11 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.14 (3H, d, J = 6.9 Hz), 1.34 (3H, s), 1.36 (3H, s), 2.00 (1H, ddd, J = 15.1, 7.3, 4.0 Hz), 2.14 (1H, dt, J = 15.1, 5.2 Hz), 2.14 (3H, s), 2.21 (1H, dd, J = 14.6, 8.0 Hz), 2.33 (1H, dd, J = 14.7, 4.8 Hz), 2.47 (1H, dd, J = 13.8, 3.3 Hz), 2.59 (1H, dd, J = 13.8, 9.4 Hz), 2.73 (3H, s), 2.77 (1H, brs, OH), 2.93 (1H, dd, J = 7.3, 4.8 Hz), 3.34 (1H, qd, J = 6.9, 3.7 Hz), 3.75-3.82 (1H, m), 4.12-4.24 (2H, m, incluyendo OH), 5.54 (1H, ddd, J = 15.7, 7.4, 5.0 Hz), 5.54-5.60 (1H, m), 5.64 (1H, dd, J = 15.7, 5.6 Hz), 6.94 (1H, s), 7.01 (1H, s); LRMS (ESI) calc. para C_{27}H_{40}NO_{6}S [M+H+] 506.3, encontrado 506.3.

66

Compuesto comparativo 50

^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 1.00 (3H, s), 1.04 (3H, d, J = 6.9 Hz), 1.12 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.35 (3H, s), 1.35 (3H, s), 1.87 (1H, dt, J = 15.0, 9.2 Hz), 2.03 (1H, dd, J = 13.9, 9.2 Hz), 2.13 (3H, s), 2.13-2.19 (1H, m), 2.36 (1H, dd, J = 13.9, 3.4 Hz), 2.39 (1H, dd, J = 12.2, 2.1 Hz), 2.42-2.51 (1H, m), 2.49 (1H, dd, J = 12.4,10.9 Hz), 2.69 (1H, d, J = 2.7 Hz), 2.72 (3H, s), 3.06 (1H, dd, J = 9.7, 3.1 Hz), 3.54 (1H, qd, J = 7.0, 2.0 Hz), 3.76-3.80 (1H, m), 4.07-4.14 (1H, m), 4.31 (1H, d, J = 4.1 Hz), 5.52 (1H, dd, J = 15.5, 8.7 Hz), 5.60 (1H, ddd, J = 15.1, 9.4, 3.4 Hz), 5.71 (1H, d, J = 8.4 Hz), 6.63 (1H, s), 6.99 (1H, s); LRMS (ESI) calc. para C_{27}H_{39}NO_{6}SNa [M+Na+] 528.2, encontrado 528.2.

67

Compuesto comparativo 52

A una solución de 50 (1.7 mg, 3.4 \mumol) y TrisNHNH_{2} (40.1 mg, 0.134 mmol) en ClCH_{2}CH_{2}Cl (0.8 mL) a 50ºC se le adicionó Et_{3}N (18.7 \muL, 0.134 mmol). La reacción se monitoreo por HPTLC (hexano/EtOAc = 1/2). Después de la agitación por 4 h, la mezcla se enfrió a rt, se diluyó con EtOAc y se filtró a través de una almohadilla de silica gel, que se enjuagó con EtOAc. Después de la concentración, el residuo se purificó por TLC preparativa (hexano/EtOAc= 1/2) para dar el 52 (1.2 ing, 2.4 \mumol, 70%) como un sólido de color blanco. ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 0.95 (3H, d, J = 7.1 Hz); 1.04 (3H, s), 1.11 (3H, d, J = 7.0 Hz); 1.28 (3H, s), 1.37 (3H, s), 1.35-1.44 (1H, m), 1.45-1.59 (4H, m), 1.71-1.82 (2H, m), 1.86 (1H, dt, J = 15.3, 9.5 Hz), 2.10 (1H, dd, J = 15.3, 3.6 Hz), 2.13 (3H, s), 2.40 (1H, dd, J = 12.5, 2.5 Hz), 2.49 (1H, dd, J = 12.5, 11.0 Hz), 2.74 (3H, s), 2.80 (1H, brs, OH), 3.07 (1H, dd, J = 10.3, 3.3 Hz), 3.34 (1H, qd, J = 7.0, 1.0 Hz), 3.89 (1H, brs, OH), 4.03-4.09 (1H, m), 4.12-4.17 (1H, m), 5.69 (1H, d, J = 9.1 Hz); 6.63 (1H, s), 7.00 (1H, s); LRMS (ESI) calc. para C_{27}H_{41}NO_{6}SNa [M+Na+] 530.3, encontrado 530.2.

68

Compuesto comparativo 51

A una solución de 49 (0.7 mg, 1.38 \mumol) y TrisNHNH_{2} (20.6 mg, 69 \mumol) en ClCH_{2}CH_{2}Cl (0.4 mL) a 50ºC se le adicionó Et_{3}N (9.6 \muL, 69 \mumol). La reacción se monitoreo por HPTLC (hexano/EtOAc = 1/2). Después de la agitación por 6 h, la mezcla se enfrió a rt, se diluyó con EtOAc y se filtró a través de una almohadilla de silica gel, que se enjuagó con EtOAc. Después de la concentración, el residuo se purificó por TLC preparativa (hexano/EtOAc= 1/2) proporcionó el 51 (0.5 mg, 0.985 \mumol, 71%) como un sólido de color blanco. Los datos espectrales de 51 fueron idénticos a aquellos reportados de EpoB.

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Ejemplo 2 Estrategias sintéticas alternativas para sintetizar los intermediarios de los epotilones

Los siguientes ejemplos ofrecen métodos de preparación de los varios intermediarios en la síntesis de análogos del epotilone.

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Optimización de la Síntesis de 9,10-dihidroepotilones Ejemplo 1

69

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Ejemplo 2 Reducciones Noyori

70

Ejemplo 3 Reducciones Noyori

71

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Ejemplo 4 Síntesis alternativas de la Dicetona Clave

72

Ejemplo 5 Estrategia 1. Migración del Grupo Silil - Descarboxilación

73

Estrategia 2. Descarboxilación - Incorporación del Grupo Silil

74

Ejemplo 6 Auxiliar Evans Estrategia para la Síntesis de 2-Hidroxicetona

75

Ejemplo 7 Estrategia Kowalsky - Sharpless para la Síntesis de 2-Hidroxicetona

76

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Parte Experimental

77

Ácido Carbónico 1-(2-benziloxi-1-metiletil)-5,5-diisopropoxi-2,4,4-trimetil-3-oxopentil éster 2,2,2-tricloroetil éster (32a)

A una solución de 7-Benziloxi-5-hidroxi-1,1-diisopropoxi-2,2,4,6-tetrametil-heptan-3-ona 32 (1.0 g, 2.4 mmol) y piridina (0.8 mL, 7.3 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (10.0 mL) a 0ºC se le adicionó 2, 2,2-tricloroetil cloroformato (668.0 \muL, 4.9 mmol) y la mezcla después se dejo calentar a rt. Después de 1 h, la mezcla de reacción se apagó con salmuera y luego se extrajo con CH_{2}Cl_{2}. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron bajo presión reducida. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea (gradiente hexano a hexano/EtOAc 93:7) para dar el 32a (1.285 g, 92%) como un aceite libre de impurezas: ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 1.03-1.09 (m, 12H), 1.15 (d, J = 1.8 Hz, 3H), 1.17 (d, J = 1.9 Hz, 3H), 1.19-1.21 (m, 6H), 1.97-2.11 (m, 1H), 3.2 (dd, J = 6.2 y 9.0 Hz, 1H), 3.54 (dd, J = 4.8 y 9.1 Hz, 1H), 3.57-3.60 (m, 1H), 3.82 (qd, J = 3.6 y 5.9 Hz, 2H), 4.47 (s, 2H), 4.57 (s, 1H), 4.72 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 4.81 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 5.08 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 7.29-7.3 5 (m, 5H); 13C NMR (100 MHz, CDCl_{3}) \delta 11.9, 15.0, 18.8, 21.4, 21.7, 22.3, 23.2, 23.4, 35.7, 42.5, 53.4, 53.9, 69.4, 70.9, 71.4, 73.3, 81.3, 94.7, 103.4, 127.5, 127.6, 128.2, 138.2, 154.0, 215.6; IR (film, NaCl, cm^{-1}) 2966, 1760, 1698, 1247; LRMS (ESI) calc. para C_{27}H_{4}O_{7}Cl_{3}Na [M+Na+] 605.2, encontrado 605.2; [\alpha]^{23}_{D} = -20.4 (c = 1.0, CHCl_{3}).

78

Ácido carbónico 1-(2-benziloxi-1-metiletil)-2,4,4-trimetil-3,5-dioxopentil éster 2,2,2-tricloroetil éster (67)

A una solución de 32a (1.28 g, 2.25 mmol) en 4:1 THF/H_{2}O (25 mL) se le adicionó p-TsOH (111.0 mg, 0.6 mmol). Después del calentamiento a 70ºC. 5 h, la mezcla de reacción se vertió en una solución NaHCO_{3} acuosa saturada fría (0ºC) (12 mL) y luego se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron bajo presión reducida. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea (gradiente de hexano a hexano/EtOAc 84:16) para dar el 67 (793.2 mg, 76%) como un aceite libre de impurezas: ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) K 0.90 (d, J = 5.8 Hz, 3H), 1.0 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 1.24 (s, 6H), 1.97-2.04 (m, 1H), 3.24 (dd, J = 4.8 y 9.2 Hz, 1H), 3.34 (m, 1H), 3.42 (dd, J = 5.8 y 9.2 Hz, 1H), 4.35 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 4.39 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 4.64 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 4.69 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 4.96 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 7.19-7.28 (m, 5H), 9.49 (s,1H); ^{13}C NMR (100 MHz, CDCl_{3}) -12.0,14.8, 19.5,19.6, 35.4, 43.3, 60.9, 71.1, 73.3,80.37,94.5,127.7,127.8,128.3,137.9,154.1,201.0,210.1; IR (film, NaCl, cm^{-1}) 2973, 2880, 1758, 1701; 1453,1380, 1248; LRMS (ESI) calc. para C_{21}H_{27}O_{6}Cl_{3}Na [M+Na+] 503.0, encontrado 503.0; [\alpha]^{23}_{D} = -18.5 (c = 0.8, CHCl_{3}).

79

9-Benziloxi-4,4,6,8-tetrametil-3,5-dioxo-7-(2,2,2-tricloroetoxicarboniloxi)-ácido nonanoico tert-butil éster (69)

A una solución de LDA (1.17 mmol, 0.3 M en Et_{2}O) a -78ºC se le adicionó t-butil acetato (1.0 mmol, 135.0 \muL). Después de 30 min., una solución de 67 (464.0 mg, 1 mmol) en Et_{2}O (2 mL) se adicionó lentamente durante 15 min. Después de la agitación por 1 h, la reacción se apagó con una solución de NH_{4}Cl acuoso saturado y luego se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron bajo presión reducida. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea (gradiente hexano a hexano/EtOAc 86:14) para dar el 68 (1:1 mezcla epimérica, 461.4 mg, 80%) como un aceite libre de impurezas: ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 0.87 (d, J = 5.3 Hz, 3H), 0.89 (d, J = 5.5 Hz, 3H), 1.02-1.10 (m, 18H), 1.38 (s, 18H), 1.97-2.2 (m, 2H), 2.27-2.31 (m, 2H), 3.22-3.27 (m, 3H), 3.39-3.48 (m, 5H), 4.03-4.06 (m, 1H), 4.11-4.14 (m, 1H), 4.38-4.45 (m, 4H), 4.58-4.73 (m, 4H), 4.97 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 5.02 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 7.18-7.27 (m, 10H); ^{13}C NMR (100 MHz, CDCl_{3}) \delta 11.9, 12.7, 14.9, 15.2, 18.7, 19.3, 21.4., 21.6, 28.0, 35.6, 37.4, 41.7, 42.0, 51.8, 51.9, 71.3, 71.3, 72.5, 73.0, 73.3, 73.3, 80.6, 81.2, 81.3, 94.6, 127.5, 127.7, 127.8, 128.3, 138.0,138.1, 154.0,154.1, 172.3, 172.4, 216.0, 216.3; IR (film, NaCl, cm^{-1}) 3509, 2975, 1759, 1707, 1368, 1248,1152; LRMS (ESI) calc. para C_{27}H_{39}O_{8}Cl_{3}Na [M+Na+] 619.1, encontrado 619.2.

A una solución 0ºC de 68 (350.0 mg, 0.6 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (10 mL) se le adicionó Dess-Martin periodinano (398.0 mg, 0.9 mmol). La mezcla se agitó a rt por 1 h y luego se vertió en una mezcla bien-agitada de Na_{2}S_{2}O_{3} sat./NaHCO_{3} sat.:1. Las capas se separaron después de 30 min. La capa acuosa se extrajo tres veces con Et_{2}O. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con NaHCO_{3} sat., salmuera, se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron bajo vacío. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea (gradiente hexano a hexano/EtOAc 91:9) para dar el 69 (258.4 mg, 74%) como un aceite libre de impurezas: ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 0.80 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 0.87 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 1.13 (s, 3H), 1.19 (s, 3H), 1.23 (s, 9H), 2.04-2.12 (m, 1H), 3.09-3.28 (m, 5H), 4.23 (s, 2H), 4.48 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 4.55 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 4.79 (dd, J = 4.6 y 7.3 Hz, 1H), 7.04-7.13 (m, 5H); ^{13}C NMR (100 MHz, CDCl_{3}) \delta 11.7,14.6, 20.7, 21.5, 27.9, 35.5, 42.2, 43.4, 63.3, 71.3, 73.3, 79.9, 81.5, 90.5, 94.5, 127.6, 127.7, 128.2, 138.0, 154,0, 166.2, 202.9, 210.0; IR (film, NaCl, cm^{-1}) 2977, 1758, 1697,1368, 1248, 1154; LRMS (ESI) calc. para C_{27}H_{37}O_{8}Cl_{3}Na [M+Na+] 617.1, encontrado 617.1; [\alpha]^{23} _{D}= 49.1 (c = 0.9, CHCl_{3}).

80

9-Benziloxi-3-hidroxi-4,4,6,8-tetrametil-5-oxo-7-(2,2,2-tricloroetoxicarboniloxi)-ácido nonanoico tert-butil éster (70)

Una línea de la bomba se cargó con un catalizador (R)-RuBINAP (16.8 mg, 10.0 \mumol). Se le adicionó HCl (555 \muL, 0.2N en MeOH) y la mezcla luego se sonico por 15 seg. Luego una solución de 69 (59.4 mg, 0.1 mmol) en MeOH (555 \muL) se le adicionó y la mezcla transferida a un aparato de Parr. El recipiente se purgó con H_{2} por 5 min y luego se presurizó a 1200 psi. Después de 17 h, la reacción se regresa a la presión atmosférica y se vertió en una solución de NaHCO_{3} acuosa saturada. La capa acuosa se extrajo tres veces con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se secaron durante MgSO_{4} y se concentraron bajo presión reducida. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea (gradiente hexano a hexano/EtOAc 88:12) para dar el 70 (dr >20:1 como se discrimina por el análisis ^{1}H NMR) (47.6 mg, 80%) como un aceite libre de impurezas: ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 1.06 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 1.11 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.14 (s, 3H), 1.18 (s, 3H), 1.47 (s, 9H), 2.05-2.12 (m, 1H), 2.35-2.40 (m, 1H), 3.31-3.37 (m, 2H), 3.51-3.54 (m, 2H), 4.11-4.14 (m, 1H), 4.46 (s, 2H), 4.72 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 4.80 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 5.05 (dd, J = 5.0 y 6.7 Hz, 1H), 7.27-7.35 (m, 5H); ^{13}C NMR (100 MHz, CDCl_{3}) \delta 12.0, 15.0, 19.3, 21.7, 28.0, 35.6, 37.5, 41.7, 51.8, 71.3, 73.0, 73.3, 80.6, 81.3, 94.7, 127.5, 127.7, 128.3, 138.2, 154.1, 172.4, 216; IR (film, NaCl, cm-1) 3849, 2974, 2879, 1758, 1701, 1454, 1368, 1248, 1152, 926, 734; LRMS (ESI) calc. para C_{27}H_{39}O_{8}Cl_{3}Na [M+Na+] 619.1, encontrado 619.2; [\alpha]^{23}_{D} = -13.0 (c = 0.4, CHCl_{3}).

81

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9-Benziloxi-4,4,6,8-tetrametil-5-oxo-7-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilozi)-3-trietilsilaniloxi)-ácido nonanoico ter-butil éster (71)

A una solución de 70 (37.6 mg, 6.3 \mumol) e imidazol (9.4 mg, 13.8 \mumol) en DMF (0.4 mL) a 0ºC se le adicionó TESC1 (11.6 \muL, 69.3 \mumol). Después de 3 h, la mezcla se diluyó con NaHCO_{3} saturado acuoso. La capa acuosa se extrajo tres veces con hexanos. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron bajo presión reducida. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea (gradiente hexano a hexano/EtOAc 93:7) para producir, en orden de elución, 71 (22.9 mg, 51%), y recuperado 70 (12.9 mg, 34%) como aceite libre de impurezas. 7: ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 0.66 (q, J = 7.9 Hz, 6H), 0.96 (t, J = 7.9 Hz, 9H), 1.01 (s, 3H), 1.05 (d, J = 5.2 Hz, 3H), 1.07 (d, J = 5.3 Hz, 3H), 1.35 (s, 3H). 1.44 (s, 9H), 2.05-2.11 (m, 2H), 2.50 (dd, J = 3.5 y 17.2 Hz, 1H), 3.35 (dd, J = 5.9 y 9.0 Hz, 1H), 3.49 (dd, J = 4.0 y 9.0 Hz, 1H), 3.53 (dd, J = 3.8 y 6.7 Hz, 1H), 4.18 (dd, J = 3.5 y 6.5 Hz, 1H), 4.45 (s, 2H), 4.65 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 4.79 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 4.97 (dd, J = 3.7 y 8.1 Hz, 1H), 7.29-7.52 (m, 5H); ^{13}C NMR (125 MHz, CDCl_{3}) \delta 5.3, 7.3, 10.9, 14.9, 21.3, 22.6, 28.4, 35.9, 41.1, 42.7, 53.7, 71.9, 73.7, 75.7, 80.1, 80.9, 95.1, 127.9, 129.0, 128.7, 138.6, 154.3, 171.7, 215.7; IR (film, NaCl, cm^{-1}) 2956, 2876, 1732, 1694, 1456, 1366, 1257, 1154, 1098, 988, 835, 774, 741; LRMS (ESI) calc. para C_{33}H_{53}O_{8}SiCl_{3}Na [M+Na+] 733.2, encontrado 733.3. [\alpha]^{23}_{D} = -16.1 (c = 0.1, CHCl_{3}).

82

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9-Benziloxi-3-(dietilmetilsilanilozi)-7-hidrozi-4,4,6,8-tetrametil-5-oxo-ácido nonanoico tert-butil éster (71a)

A una solución de 71 (22.9 mg, 3.2 \mumol) en 1:1 THF/AcOH (1.4 mL) se le adicionó Zn (5.0 mg, 7.8 \mumol, nanotamaño). La mezcla se sonicó por 15 min. Adicionalmente se le adicionó Zn (5.0 mg, 7.8 \mumol, nanotamaño), seguido por la sonicación durante 15 min. más. La suspensión se filtró a través de una almohadilla de celite, se lavo varias veces con EtOAc. Los filtrados se lavaron con NaHCO_{3} saturado, salmuera, se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron bajo vacío. El residuo crudo se pasó a través de un pequeño tapón de silica gel eluyendo con hexano/EtOAc 4:1 para dar 17.1 mg (una producción del 99%) de 71a como un aceite incoloro: ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta (m, 6H), 0.96 (t, J = 7.9 Hz, 9H), 0.97 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.05 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.11 (s, 3H), 1.26 (s, 3H), 1.44 (s, 9H), 1.84-1.90 (m, 1H), 2.21 (dd, J = 6.7 y 17.0 Hz, 1H), 2.36 (dd, J = 6.7 y 17.0 Hz, 1H), 3.24-3.29 (m, 1H), 3.44-3.52 (m, 2H), 3.67 (dd, J = 3.9 y 8.9 Hz, 1 H), 4.3 6 (dd, J = 3.5 y 6.5 Hz, 1H), 4.50 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 4.54 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 7.32-7.36 (m, 5H); ^{13}C NMR (100 MHz, CDCl_{3}) \delta 5.0, 6.9, 9.7, 13.9, 20.2, 21.8, 28.0, 36.3, 40.8, 41.5, 53.7, 72.5, 72.9, 73.2, 73.6, 80.7, 127.4, 127.5, 128.2, 138.6, 171.0, 221.4; IR (film, NaCl, cm^{-1}) 3502, 2959, 2875, 1731, 1683, 1456, 1366, 1154, 1098, 996, 739; LRMS (ESI) calc. para C_{30}H_{52}O_{6}SiCl_{3}Na [M+Na+] 559.3, encontrado 559.3; [\alpha]^{23}_{D}=-41.0 (c = 0.4, CHCl_{3}).

83

9-Benziloxi-7-(ter-butildimetilsilaniloxi)-3-(dietilmetilsilaniloxi)-4,4,6,8-tetrametil-5-oxo-ácido nonanoico ter-butil éster (36)

A una solución del 71a (4.1 mg, 7.6 \mumol) y 2,6-lutidina (10.0 \muL, 43.5 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (0.2 mL) a -78ºC se le adicionó TBSOTf (10.0 \muL, 85.8 mmol). Después de 2 h, además, se le adicionaron 6-lutidina (10.0 \muL, 43.5 mmol) y TBSOTf (10.0 \muL, 85.8 mmol). Después de 6 h, la mezcla se diluyó con NaHCO_{3} acuoso saturado. La capa acuosa se extrajo tres veces con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron bajo presión reducida. El producto crudo se purificó por cromatografía instantánea (gradiente hexano a hexano/EtOAc 91:9) para dar el 36 (5.4 mg, 82%) como un aceite libre de impurezas. Los datos espectroscópicos coincidieron bien con los valores reportados.

84

Alcohol 83

A una solución de 4,4,4-trifluoroacetoacetato de etilo (24.0 mL, 0.164 mol) en THF-agua (3:1 = V:V, 320 mL) a temperatura ambiente se le adicionaron bromuro de alilo (20.0 mL, 1.4 equiv) e indio (polvo, -100 malla, 25 g, 1.3 equiv) y la mezcla resultante se agitó a 48ºC por 15 h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se apagó con HCl 2 N acuoso (400 mL) y se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (400 mL, 2 x 200 mL). Las capas orgánicas combinadas se secaron (MgSO_{4}), se filtraron, y se concentraron in vacuo. La cromatografía instantánea (hexanos \rightarrow hexanos-éter 10:1 \rightarrow 8:1 \rightarrow 6:1 \rightarrow 4:1) proporcionó el alcohol 83 como un aceite libre de impurezas (31.64 g, una producción del 85%): IR (film) 3426 (br m), 2986 (m), 1713 (s), 1377 (m), 1345 (m), 1301 (m), 1232 (m), 1173 (s), 1095 (m), 1023 (m), 927 (m) cm^{-1}; ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 5.82 (m, 1 H), 5.15 (m, 3 H), 4.17 (m, 2 H), 2.59 (m, 1 H), 2.58 (d, J = 3.4 Hz, 2 H), 2.29 (dd, J = 14.2, 8.6 Hz, 1 H), 1.24 (t, J = 7.2 Hz, 3 H); ^{13}C NMR (100 MHz, CDCl_{3}) \delta 172.08, 130.89, 125.65 (q, J = 280 Hz), 120.27,73.79 (q, J = 28 Hz), 61.55, 38.97, 35.65, 13.82; espectro de masas de alta resolución m/z 227.0895 [(M+H)+; calc. para C_{9}H_{14}O_{3}F_{3}: 227.0895].

85

Éster 84

Una mezcla de alcohol 83 (16.71 g, 0.07386 mol) y piridina (15.0 mL, 2.5 equiv) se enfrió a -10ºC y se trató con cloruro de tionil (11.3 mL, 2.1 equiv) lentamente durante 11 min. La mezcla resultante se calentó a 55ºC y se agitó por 12 h. La mezcla de reacción se enfrió a -5ºC, se apagó con agua (200 mL) y se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (2 x 200 mL, 2 x 150 mL). Las capas orgánicas se lavaron con NaHCO_{3} saturado (2 x 200 mL), y salmuera (200 mL), se secaron (MgSO4), y se concentraron in vacuo. La cromatografía instantánea (pentano:éter 15:1) proporciona el éster 84 (11.90 g, una producción del 77%) como un aceite amarillo: IR (film) 2986 (w), 1731 (s), 1308 (s), 1265 (w), 1227 (m), 1197 (s), 1133 (s), 1025 (m), 920 (w), 896 (w) cm^{-1}; ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 6.36 (s, 1 H), 5.79 (ddt, J = 16.9, 10.2, 6.6 Hz, 1 H), 5.15 (dd, J = 17.1, 1.5 Hz, 1 H), 5.08 (dd, J = 10.0, 1.4 Hz, 1 H), 4.22 (q, J = 7.1 Hz, 2 H), 3.44 (d, J = 6.5 Hz, 2 H), 1.29 (t, J = 7.1 Hz, 3 H); ^{13}C NNM (100 MHz, CDCl_{3}) \delta 164.22,143.37 (q, J = 29 Hz), 132.71, 123.21 (q, J = 274 Hz), 122.60 (q, J = 6 Hz), 117.32, 60.85, 30.54, 13.85; espectro de masas de alta resolución m/z 209.0788 [(M+H)+; calc. para C_{9}H_{12}O_{2}F_{3}: 209.0789].

86

Alcohol 85

A una solución del éster 84 fría (-75ºC) (7.12 g, 0.0342 mol) en CH_{2}Cl_{2} (120 mL) se le adicionó una solución de DIBAL-H (75 mL, 2.2 equiv) en CH_{2}Cl_{2} (1.0 M) y la mezcla resultante se calentó a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla de reacción se enfrió a 0ºC, se apagó con NH_{4}Cl saturado (12 mL) y se agitó a temperatura ambiente por 20 min. La mezcla de reacción se diluyó con éter (200 mL), se secó (MgSO_{4}), y se concentró in vacuo. La cromatografía instantánea (pentano:éter 3:1 \rightarrow 1:1) proporciona el alcohol 85 (5.68 g, 99%) como un aceite libre de impurezas: IR (film) 3331 (br s), 2929 (m), 1642 (m), 1445 (m), 1417 (w), 1348 (s), 1316 (s), 1217 (s), 1175 (s), 1119 (s), 1045 (m), 985 (s), 921 (m), 831 (w) cm^{-1}; ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 6.33 (td, J = 6.1, 1.6 Hz, 1 H), 5.75 (ddt, J = 17.2, 10.0, 6.2 Hz, 1 H), 5.07 (m, 2 H), 4.29 (ddd, J = 6.3, 4.3, 2.1 Hz, 2 H), 2.95 (d, J = 6.2 Hz, 2 H); ^{13}C NMR (100 MHz, CDCl_{3}) \delta 134.45 (q, J = 6 Hz), 133.38, 127.97 (q, J = 29 Hz), 123.76 (q, J = 271 Hz), 116.25, 57.87, 29.79.

87

Yoduro 86

Una solución del alcohol 85 fría (0ºC) (5.97 g, 0.0358 mol) en CH_{2}Cl_{2} (50 mL) se trató con PPh_{3} (11.17 g, 1.2 equiv), imidazol (3.55 g, 1.5 equiv) e I2 (9.10 g, 1.1 equiv) y la mezcla resultante se agitó a 0ºC por 10 min. La mezcla de reacción se apagó con Na_{2}S_{2}O_{3} saturado -NaHCO_{3} saturado (1:1 = V:V, 200 mL) y se extrajo con pentano (3 x 200 mL). Las capas orgánicas se lavaron con Na_{2}S_{2}O_{3} saturado -NaHCO_{3} saturado (1: 1= V:V, 200 mL), y salmuera (100 mL), se secaron (MgSO_{4}), y se concentraron in vacuo. La cromatografía instantánea (pentano) proporcionó el yoduro 86 (6.69 g, 68%) como un aceite de color rojo pálido: (IR Ifilm) 3083 (w), 2982 (w), 1636 (w), 1558 (w), 1456 (w), 1367 (w), 1317 (s), 1216 (m), 1181 (s), 1151 (s), 1120 (s), 989 (m), 921 (m), 896 (m) cm^{-1}; ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 6.45 (td, J = 8.9, 1.5 Hz, 1 H), 5.79 (ddt, J = 16.8, 10.3, 6.2 Hz, 1 H), 5.12 (m, 2 H), 3.85 (ddd, J = 8.9, 2.9, 1.4 Hz, 2 H), 3.00 (dt, J = 6.1, 1.4 Hz, 2H); ^{13}C NMR (100 MHz, CDCl_{3}) \delta 132.42, 131.64 (q, J = 6 Hz), 129.63 (q, J = 29 Hz), 123.64 (q, J = 272 Hz), 117.00, 29.32, -4.27; espectro de masas de baja resolución m/z 298.7 [(M+Na)+; calc. para C_{7}H_{8}F_{3}INa: 299.0].

88

\alpha-Hidroxioxazolidinona 88

A una solución fría (-78ºC) de TES protegido 4-Benzil-3-hidroxi acetil-oxazolidin-2-ona 7 (16.28 g, 1.92 equiv) en THF (160 mL) se le adicionó gota a gota una solución de LHMDS (42.0 mL, 1.73 equiv) en THF (1.0 M) durante 51 min. y la mezcla resultante se agitó a -78ºC por 35 min. La mezcla de reacción se trató con una solución de yoduro 86 (6.69 g, 24.2 mmol) en THF (10 mL) y la mezcla resultante se dejó calentar a temperatura ambiente lentamente durante la noche. La mezcla de reacción se apagó con NaHCO_{3} saturado (200 mL) y se extrajo con EtOAc (3 x 200 mL). Las capas orgánicas se lavaron con NH_{4}Cl saturado (150 mL), salmuera (150 mL), se secaron (MgSO_{4}), y se concentraron in vacuo. La cromatografía instantánea (hexanos-EtOAc 6:1 \rightarrow 3:1) proporciona una mezcla de productos de alquilación (13.6 g) que se utilizaran para la próxima reacción sin purificación adicional. Una solución de los productos de alquilación en HOAcagua-THF (3:1:1 = V:V:V, 200 mL) se agitó a temperatura ambiente por 4 h. La mezcla de reacción se concentró in vacuo para retirar el HOAc, se apagó con NaHCO_{3} saturado (400 mL), y se extrajo con EtOAc (3 x 200 mL). Las capas orgánicas se secaron (MgSO_{4}), y se concentraron in vacuo. La cromatografía instantánea (hexanos:EtOAc 3:1 \rightarrow 2:1) proporciona el \alpha-hidroxioxazolidinona 88 (7.55 g, una producción del 81% por dos etapas) como un aceite libre de impurezas: [\alpha]_{D}^{25} -48.2 (c 1.08, CHCl_{3}); IR (film) 3486 (br s), 3030 (m), 2983 (s), 2925 (m), 1790 (s), 1682 (s), 1481 (m), 1393 (m), 1360 (m), 1217 (m), 1171 (m), 1113 (m), 992 (m), 919 (m), 847 (w) cm^{-1}; ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 7.32 (m, 3 H), 7.17 (m, 2 H), 6.33 (td, J = 7.2, 1.5 Hz, 1 H), 5.77 (ddt, J = 16.6, 10.1, 6.2 Hz, 1 H), 5.08 (m, 3 H), 4.74 (ddt, J = 4.8, 3.7, 4.4 Hz, 1 H), 4.33 (dd, J = 8.6, 8.6 Hz, 1 H), 4.26 (dd, J = 9.2, 3.4 Hz, 1 H), 3.42 (br d, J = 6.4 Hz, 1 H), 3.24 (dd, J = 13.5, 3.4 Hz, 1 H), 2.99 (m, 2 H), 2.79 (dd, J = 13.5, 9.4 Hz, 1 H), 2.70 (m, 1 H), 2.50 (m, 1 H); ^{13}C NMR (125 MHz, CDCl_{3}) \delta 173.93, 153.05, 134.43, 133.64, 129.98 (q, J = 6 Hz), 129.82 (q, J = 28 Hz), 129.29, 120.01, 127.58, 124.00 (q, J = 272 Hz), 116.34, 69.60, 67.31, 54.95, 37.78, 32.29, 29.84; espectro de masas de alta resolución m/z 384.1421 [(M+H)+; calc. para C_{19}H_{21}NO_{4}F_{3}:
384.1423].

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89

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\alpha-Hidroxiamida 89

Una suspensión de (MeO) NHMe\cdotHCl (10.1 g, 5.25 equiv) en THF (100 mL) a 0ºC se trató con una solución de AlMe_{3} (50 mL, 5.1 equiv) en tolueno (2.0 M) gota a gota y la solución clara resultante se agitó a temperatura ambiente por 34 min., luego se adicionó a una solución fría (0ºC) de \alpha-hidroxioxazolidinona 88 (7.55 g, 19.7 mmol) en THF (70 mL). La mezcla resultante se calentó a temperatura ambiente y se agitó por 12 h. La mezcla de reacción se enfrió a 0ºC, se apagó mediante la adición lenta de ácido tartárico 1N acuoso (100 mL), se agitó a temperatura ambiente por 25 min., y se extrajo con EtOAc (3 x 200 mL). Las capas orgánicas se secaron (MgSO_{4}), y se concentraron in vacuo. La cromatografía instantánea (hexanos:EtOAc 2:1 \rightarrow 1:1) proporcionó la \alpha-hidroxiamida 89 (5.12 g, una producción del 97%) como un aceite libre de impurezas: [\alpha]_{D}^{25} -57.2 (c 1.03, CHCl_{3}); IR (film) 3432 (br s), 3084 (w), 2980 (m), 2943 (m), 1652 (s), 1464 (m), 1373 (m), 1318 (m), 1214 (m), 1171 (m), 1112 (m), 991 (m), 919 (m), 818 (w) cm^{-1}; ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 6.32 (td, J = 7.3, 1.5 Hz, 1 H), 5.74 (ddt, J = 16.9, 10.3, 6.1 Hz, 1 H), 5.05 (m, 2 H), 4.43 (dd, J = 7.6, 3.5 Hz, 1 H), 3.70 (s, 3 H), 3.35 (br s, 1 H), 3.24 (s, 3 H), 2.94 (d, J = 6.1 Hz, 2 H), 2.59 (m, 1 H), 2.36 (m, 1 H); ^{13}C NMR (100 MHz, CDCl_{3}) \delta 173.43, 133.68, 130 59 (q, J = 6 Hz), 129.25 (q, J = 28 Hz), 124.05 (q, J = 271 Hz), 116.17, 67.57, 61.44, 32.56, 32.38; 29.75; espectro de masas de alta resolución m/z 268.1161 [(M+H)+; calc. para C_{11}H_{17}NO_{3}F_{3}: 268.1161].

90

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\alpha-Hidroxicetona 90

A una solución fría (0ºC) de \alpha-hidroxiamida 89 (4.87 g, 18.2 mmol) en THF (150 mL) se le adicionó una solución de MeMgBr (75 mL, 12 equiv) en éter (3.0 M). Después de 5 min., la mezcla de reacción se apagó con NH_{4}Cl saturado (250 mL), y se extrajo con EtOAc (5 x 200 mL). Las capas orgánicas se secaron (MgSO_{4}), y se concentraron in vacuo. La cromatografía instantánea (hexanos:EtOAc 4:1 \rightarrow 2:1 \rightarrow 1:2) proporciona el \alpha-hidroxicetona 90 (2.16 g, una producción del 53%, una producción del 73% basada en el material inicial recuperado) como un aceite libre de impurezas y el material inicial \alpha-hidroxiamida 89 (1.30 g, una producción 27%): [\alpha]_{D}^{25} + 58.5 (c 1.30, CHCl_{3}); IR (film) 3460 (br s), 3085 (w), 2984 (m), 2926 (m), 1716 (s), 1679 (m), 1641 (m), 1417 (m), 1361 (m), 1319 (s), 1247 (m), 1216 (s), 1172 (s), 1113 (s), 1020 (m), 994 (m), 968 (w), 919 (m) cm^{-1}; ^{1}H NMR (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 6.21 (t, J = 7.0 Hz, 1 H), 5.75 (ddt, J = 16.7, 10.4, 6.2 Hz, 1 H), 5.07 (m, 2 H), 4.26 (dt, J = 7.1, 4.5 Hz, 1 H), 3.51 (d, J = 4.7 Hz, 1 H), 2.96 (d, J = 6.1 Hz, 2 H), 2.66 (m, 1 H), 2.42 (m, 1 H), 2.19 (s, 3 H); ^{13}C NMR (100 MHz, CDCl_{3}) \delta 208.53, 133.43, 129.80 (q, J = 28 Hz), 129.76 (q, J = 6 Hz), 123.85 (q, J = 271 Hz), 116.32, 75.36, 31.22, 29.81, 25.11; espectro de masas de alta resolución m/z 223.0945 [(M+H)+; calc. para C_{10}H_{14}NO_{2}F_{3}: 223.0946].

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Ejemplo 8 Estrategia de oxidación Asimétrica Catalítica

91

Ejemplo 9 Síntesis del 21-amino-26-trifluoro-(E)-9,10-dihidro-dEnoB

92

Compuesto 98

A una solución de 59 (50.4 mg, 90.1 \mumol) en THF (1 mL) se le adicionó (PhO)_{2} PON_{3} (27.2 PL, 126 \mumol) a 0ºC. Después de la agitación a 0ºC por 5 min., DBU (16.2 \muL, 108 \mumol). Después de la agitación a 0ºC por 2 h, la mezcla se agitó a rt por 20.5 h. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y se apagó mediante la adición de agua (2 mL). Después las capas se separaron, la capa acuosa se extrajo con EtOAc (tres veces), y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na_{2}SO_{4}. Después de la concentración, el residuo se secó bajo alto vacío por 10 min. para retirar el DBU. La purificación por cromatografía de columna instantánea (SiO_{2}, hexano/EtOAc = 3:2) proporcionó el azida 98 (45.6 mg, 78.0 \mumol, 87%) como un sólido incoloro; ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 1.05 (3H, s), 1.12 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.23 (3H, d, J = 6.8 Hz), 1.33 (3H, s), 2.01 (1H, d, J = 5.5 Hz, OH), 2.17 (3H, s), 2.25-2.35 (1H, m), 2.41 (1H, dd, J = 15.5,3.2 Hz), 2.49 (1H, dd, J = 15.5, 9.5 Hz), 2.54-2.60 (1H, m), 2.66 (1H, d, J = 6.0 Hz), 2.65-2.76 (1H, m), 2.96 (1H, dd, J = 16.0, 4.2 Hz), 3.03 (1H, dd, J = 16.1,6.7 Hz), 3.11 (1H, quintet, J = 6.8 Hz), 3.71-3.76 (1H, m), 4.31 (1H, ddd, J = 9.2,5.9,3.2 Hz), 4.65 (2H, s), 5.43 (1H, dd, J = 6.0, 4.3 Hz), 5.58 (1H, ddd, J = 15.8,6.4,4.6 Hz), 5.66 (1H, dd, J = 15.8, 6.1 Hz), 6.23 (1H, t, J = 7.3 Hz), 6.63 (1H, s), 7.18 (1H, s); LRMS (ESI) calc. para C_{27}H_{35}F_{3}N_{4}O_{5}SNa [M+Na+] 607.2, encontrado 607.2.

93

Compuesto 96

A una solución de azida 98 (21.0 mg, 35.9 \mumol) en THF (0.6 mL) se le adicionó PMe_{3} (1.0 M en THF, 43.1 \muL, 43.1 \mumol). Después de la agitación a rt por 2 min., agua (0.1 mL) se le adicionó y la mezcla se agitó a rt por 3 h. PMe_{3} (1.0 M en THF, 7.2 \muL, 7.2 \mumol) se le adicionó y la mezcla se agitó a rt por 1.5 h. A la mezcla se le adicionó NH_{4}OH al 28% (acuoso) (54.5 \muL). Después de la agitación por 1 h, la mezcla se purificó directamente por TLC preparativa (CH_{2}Cl_{2}/MeOH = 100:7.5) para dar la amina 96 (15.9 mg, 28.5 \mumol, 79%) como un sólido incoloro; ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 1.05 (3H, s), 1.12 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.23 (3H, d, J = 6.8 Hz), 1.34 (3H, s), 2.12 (3H, d, J = 0.7 Hz), 2.24-2.35 (1H, m), 2.39 (1H, dd, J = 15.4, 3.0 Hz), 2.49 (1H, dd, J = 15.4, 9.8 Hz), 2.54-2.63 (1H, m), 2.66-2.76 (1H, m), 2.97 (1H, dd, J = 16.2, 4.2 Hz), 3.03 (1H, dd, J = 16.3, 6.5 Hz), 3.10 (1H, quintet, J = 6.8 Hz), 3.74 (1H, dd, J = 6.7, 3.5 Hz), 4.18 (2H, s), 4.34 (1H, dd, J = 9.8, 2.9 Hz), 5.43 (1H, dd, J = 6.0, 4.3 Hz), 5.55-5.64 (1H, m), 5.67 (1H, dd, J = 15.9, 5.8 Hz), 6.24 (1H, brt, J = 7.3 Hz), 6.66 (1H, s), 7.10 (1H, s); LRMS (ESI) calc. para C_{27}H_{38}F_{3}N_{2}O_{5}S [M+H+] 559.2, encontrado 559.2.

94

Compuesto 97

A una solución de amina 96 (15.9 mg, 28.5 \mumol) en CH_{3}CN (0.78 mL) se le adicionó HCHO 37% (acuoso) (31.4 \muL, 0.143 mmol) seguido por NaBH_{3}CN (1.0 M en THF, 85.5 \muL, 85.5 \mumol), y la mezcla se agitó a rt por 20 min. Se le adicionó AcOH (1 gota), y la mezcla se agitó a rt por 40 min. La mezcla se purificó directamente por TLC preparativa (CH_{2}Cl_{2}/MeOH = 100:8) para dar el producto 97 (15.6 mg, 26.6 \mumol, 93%) como un sólido incoloro; ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 1.05 (3H, s),1.12 (3H, d, J = 6.9 Hz), 1.23 (3H, d, J = 6.8 Hz), 1.33 (3H, s), 2.17 (3H, s), 2.24-2.35 (1H, m), 2.43 (1H, dd, J = 15.7, 3.6 Hz), 2.49 (1H, dd, J = 15.6, 9.1 Hz), 2.55-2.64 (2H, m, incluyendo OH), 2.68-2.77 (1H, m), 2.80 (3H, s), 2.81 (3H, s), 2.92-3.06 (2H, m), 3.10 (1H, quintet, J = 6.8 Hz), 3.69-3.76 (1H, m), 4.25-4.34 (1H, m), 4.33 (2H, s), 5.42 (1H, t, J = 5.5 Hz), 5.57 (1H, dt, J = 15.8, 6.3 Hz), 5.66 (1H, dd, J = 15.7, 6.4 Hz), 6.22 (1H, brt, J = 7.2 Hz), 6.64 (1H, s), 7.30 (1H, s); LRMS (ESI) calc. para C_{29}H_{42}F_{3}N_{2}O_{5}S [M+H+] 580.2, encontrado 580.2.

95

Los compuestos 94 y 95

A una mezcla de 59 (18.9 mg, 33.8 \mumol) y Et_{3}N (18.8 \muL, 0.135 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (1 mL) se le adicionó TsCl (12.9 mg, 67.5 \mumol) y DMAP (2.1 mg, 16.9 \mumol) a 0ºC. Después de la agitación a rt por 1.5 h, la mezcla se diluyó con EtOAc y se filtró a través de una almohadilla de silica gel (enjuagar con EtOAc). Después de la concentración, el residuo se purificó por TLC preparativa (hexano/EtOAc = 1:1) para dar el tosilato 94 (8.5 mg, 11.9 \mumol, 35%) y cloruro 95 (4.3 mg, 7.44 \mumol, 22%); ambos como sólidos incoloros;

96

^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 1.06 (3H, s), 1.12 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.23 (3H, d, J = 6.7 Hz), 1.33 (3H; s), 1.99 (1H, d, J = 5.5 Hz), 2.10 (3H, s), 2.25-2.34 (1H, m) 2.41 (1H, dd, J = 15.5,3.3 Hz), 2.47 (3H, s), 2.48 (1H, dd, J = 15.7, 9.4 Hz),2.51-2.63 (1H, m), 2.63 (1H, d, J = 6.1 Hz, OH), 2.64-2.75 (1H, m), 2.91-3.05 (2H, m), 3.10 (1H, quintet, J = 6.8 Hz), 3.70-3.75 (1H, m), 4.30 (1H, ddd, J = 9.3, 6.1, 3.2 Hz), 5.3 2 (2H, s), 5.41 (1H, dd, J = 5.8, 4.5 Hz), 5.57 (1H, ddd, J = 15.8, 6.4, 4.6 Hz), 5.65 (1H, dd, J = 15.8, 6.0 Hz), 6.21 (1H, t, J = 7.1 Hz), 6.59 (1H, s), 7.18 (1H, s), 7.37 (2H, d, J = 8.1 Hz); 7.84 (2H, d, J = 8.3 Hz); LRMS (ESI) calc. para C_{34}H_{42}F_{3}Nd_{8}S_{2}Na [M+Na+] 736.2, encontrado 736.3.

97

^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 1.06 (3H, s), 1.12. (3H, d, J = 6.9 Hz), 1.23 (3H, d, J = 6.7 Hz), 1.34 (3H, s), 2.00 (1H, d, J = 5:6 Hz, OH), 2.15 (3H, s), 2.25-2.35 (1H, m), 2.41 (1H, dd, J = 15.5, 3.2 Hz), 2.49 (1H, dd, J = 15.5,9.4 Hz), 2.53-2.62 (1H, m), 2.69 (1H, d, J = 6.1 Hz, OH), 2.66-2.76 (1H, m), 2.92-3.05 (2H, m), 3.11 (1H, quintet, J = 6.4 Hz), 3.70-3.76 (1H, m), 4.32 (1H, ddd, J = 9.2,5.9, 3.1 Hz), 4.85 (2H, s), 5.43 (1H, dd, J = 6.0, 4.4 Hz), 5.59 (1H, ddd, J = 15.9, 6.4, 4.5 Hz), 5.66 (1H, dd, J = 15.9, 6.1 Hz), 6.23 (1H, t, J = 6.8 Hz), 6.63 (1H, s), 7.20 (1H, s); LRMS (ESI) calc. para C_{27}H_{35}ClF_{3}NO_{5}SNa [M+Na+] 600.2, encontrado 600.2.

98

Compuesto 99

A una solución de 59 (6.9 mg, 12.3 \mumol) en CH_{2}Cl_{2} (0.4 mL) se le adicionó MnO_{2} activo (adquirido de Acros, 26.8 mg, 0.308 mmol). Después de la agitación vigorosamente a rt por 4 h, la mezcla se filtró a través de una almohadilla de Celite, que se enjuagó con EtOAc. Después de la concentración, el residuo se purificó por TLC preparativa (hexano/EtOAc = 1:1) para dar el aldehído 99 (2.7 mg, 4.84 \mumol, 39%) como un sólido incoloro; ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 1.06 (3H, s), 1.13 (3H, d, J = 7.2 Hz), 1.24 (3H, d, J = 6.9 Hz),1.35 (3H, s),1.96 (1H, d, J = 5.6 Hz, OH), 2.22 (3H, d, J = 0.7 Hz), 2.25-2.35 (1H, m), 2.44 (1H, dd, J = 15.4, 3.5 Hz), 2.46 (1H, d, J = 5.9 Hz, OH), 2.51 (1H, dd, J = 15.7, 9.3 Hz), 2.57-28 (1H, m), 2.68-2.79 (1H, m), 2.96-3.03 (2H, m), 3.10 (1H, quintet, J = 6.8 Hz), 3.71-3.76 (1H, m), 4.31 (1H, ddd, J = 9.4,6.3,3.5 Hz), 5.45 (1H, t, J = 5.0 Hz), 5.53-5.63 (1H, m), 5.67 (1H, dd, J = 15.7, 6.2 Hz), 6.24 (1H, t,J = 6.6 Hz), 6.72 (1H, s), 7.57 (1H, d, J = 0.9 Hz),10.01 (1H, d, J = 1.2 Hz).

99

Compuesto 100

A una solución del aldehído 99 (4.6 mg, 8.25 \mumol) en CH_{3}CN (0.5 mL) a 0ºC se le adicionó MeNH_{2} (2.0 M en THF, 41.3 \muL, 41.3 \mumol). Después de la agitación a 0ºC por 15 min., se le adicionó NaBH_{3}CN (1.0 M en THF, 25 \muL, 25 \mumol). Después de la agitación a 0ºC por 0.5 h, se le adicionó AcOH (3 gotas). Después de la agitación a 0ºC por 2 h, se le adicionó NH_{4}OH 28% (acuoso) (40 \muL), y la mezcla se agitó a rt por 10 min. La mezcla se purificó directamente dos veces por TLC preparativa (CH_{2}Cl_{2}/MeOH = 100: 9) para dar 100 (2.4 mg, 4.19 \mumol, 51%) como un sólido incoloro; ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 1.05 (3H, s), 1.12 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.23 (3H, d, J = 6.8 Hz), 1.34 (3H, s), 2.13 (3H, s), 2.25-2.34 (1H, m), 2.39 (1H, dd, J = 15.3, 3.0 Hz), 2.49 (1H, dd, J = 15.3, 9.7 Hz), 2.56 (3H, s), 2.54-2.64 (1H, m), 2.66-2.75 (1H, m), 2.89 (1H, d, J = 5.1 Hz), 2.94-3.05 (2H, m), 3.11 (1H, quintet, J = 6.8 Hz), 3.74 (1 H, dd, J = 6.6, 3.5 Hz), 4.08 (2H, s), 4.34 (1H, dd, J = 9.6, 2.9 Hz), 5.43 (1H, dd, J = 6.2, 4.1 Hz), 5.56-5.63 (1H, m), 5.66 (1H, dd, J = 15.9, 5.7 Hz), 6.24 (1H, t, J = 7.3 Hz), 6.66 (1H, s), 7.11 (1H, s); LRMS (ESI) calc. para C_{28}H_{40}F_{3}N_{2}O_{5}S [M+H+] 573.3, encontrado 573.3.

Ejemplo 10 Análogos del Epotilone que permiten eliminar Tumores de Xenoinjertos a un estado No Reincidente

Mediante una combinación de sustancias químicas, modelos moleculares y análisis espectroscópicos, hemos descubierto que la introducción de un doble enlace E-9,10 (ver compuesto 28 parte inferior) logra ca. mejoras de 10 veces la potencia del fármaco en experimentos de xenoinjerto con tumores MX-1 resistentes a medicamentos (A. Rivkin et al. J. Am. Chem. Soc. 2003, 125, 2899; incluido en esta por referencia). Continuando la correlación de los experimentos in vitro e in vivo, dirigidos a los tipos de tumores MX-1, era evidente que 28 es inherentemente más citotóxico que 2b. sin embargo, otro factor que contribuye, es que la fracción lactona de la serie 9,10-dihidro es significativamente más estable en plasma de ratones y humano, el cual es el caso de los congéneres de la serie 9,10-dihidro. La suma de estos dos efectos complementarios, permitió que el compuesto 28 fuese capaz de lograr una completa supresión del tumor en una variedad de xenoinjertos de 3 mg/kg opuesto a los 30 mg/kg reglamentados para 1.

100

Bajo la suspensión del tratamiento, reaparecen los tumores palpables en algunas fracciones de los animales. Por consiguiente, al menos actualmente, por lo menos el compuesto 28 completamente sintético no ha resuelto totalmente los estándares rigurosos del índice terapéutico eficaz y de la eliminación de tumores a estados no reincidentes altamente favorables

Estos hallazgos dirigen nuestra atención a las consecuencias de la sustitución de tres hidrógenos del grupo 26-metilo de 28 con tres átomos de flúor. La incorporación de los átomos de flúor en este sitio llevo a mejorar la estabilidad del doble enlace en las posiciones 12,13- frente a una oxidación (Smart, B. E. J. Fluorine Chem. 2001, 109, 3; incluido aquí por referencia). Previas experiencias, han señalado hacia alguna atenuación de la citotoxicidad, por la colocación de los grupos polares en el área del doble enlace de C12-C13 (A. Rivkin et al. J. Am. Chem. Soc. 2003, 125, 2899; incluidos aquí por referencia). Con esta divulgación, reportamos el descubrimiento, a través de la síntesis química total, de los 9,10-dihidro-26-trifluoroepotilones, enfocando particularmente en el desempeño biológico exclusivo de la estructura primaria 29.

La eficacia terapéutica de dEpoB (30 mg/kg), paclitaxel (20 mg/kg) y F_{3}-deH-dEpoB (29, 20 y 30 mg/kg) contra los xenoinjertos MX-1 de carcinoma mamario humano, en términos del desvanecimiento del tumor y la reincidencia del mismo, fueron estudiadas de cerca, y los resultados se muestran en la Tabla 10-1. Cada grupo de dosis consistió de cuatro o más ratones desnudos. El peso corporal referido, corresponde al peso corporal total menos el peso del tumor. Todos los tres compuestos lograron el desvanecimiento del tumor. En el día 10 después de la suspensión del tratamiento, 5/10 (dEpoB), 2/7 (Paclitaxel); y 0/4 (compuesto 29) los ratones reincidieron. Prolongadas observaciones seguidas a la suspensión del tratamiento con dosificaciones de 20 mg/kg de 29 mostraron a largo plazo, ausencia de tumores hasta el día 27, en el cual 2 de los 4 ratones reincidieron con tumores. Notablemente, el tratamiento con dosificaciones de 30 mg/kg de 29, dieron como resultado el desvanecimiento completo del tumor y la ausencia de cualquier reincidencia después de dos meses de suspensión del tratamiento.

TABLA 10-1 Efecto terapéutico de dEpoB, Paclitaxel y F_{3}-deH-dEpoB contra xenoinjerto MX-1 en ratón desnudo^{[a]}

101

Disminuyendo la dosis del agente 29 a 10 mg/kg (Q2D), también se condujo al desvanecimiento del tumor MX-1, pero fueron necesarias nueve dosis para lograr este resultado (Figuras 57, 58 y 59A). Como un desafío agregado, el tratamiento quimioterapéutico se retardo hasta que el tamaño del tumor alcanzó 0.5 g (\sim2.3% de peso corporal). El tratamiento con dosificaciones de 29, 25 mg/kg (Q2Dx7), ocasionó la desaparición en 4/4 de los tumores de los ratones. En contraste, para dEpoB, dosificaciones de 30 mg/kg (Q2Dx8) fueron necesarias para inducir el desvanecimiento de los tumores en 3 de 4 ratones. Sin embargo, a diferencia del caso con el compuesto 29, las desapariciones aparentes que ocurrieron siguiendo el tratamiento con dEpoB estuvieron sujetas a reincidencias con el tiempo. (Figura
59B).

El hecho de que el agente 29 suprime completamente el crecimiento de los xenoinjertos MX-1 de carcinoma mamario humano, reduciendo los tumores y luego impresionantemente haciéndolos desaparecer a lo largo de 64 días. Por otra parte, continuando las curaciones logradas por 29, (20 mg/kg o 30 mg/kg Q2Dx6, infusión i.v.-6 horas, Tabla 1, citada anteriormente) el peso corporal de los xenoinjertos retornó a el nivel de control pre-tratamiento dentro de los 12-18 días después de la suspensión del tratamiento. Este hallazgo, sugiere que carece de daño en órganos vitales. En una dosificación baja curativa de 10 mg/kg, Q2DX12 (Figura 59B), el peso corporal máximo disminuyó solamente en un 12%, con una ganancia de peso corporal del 6% durante las tres últimas dosis. El peso corporal, a nivel de control de pre-tratamiento, fue recuperado solamente tres días después del cese del tratamiento. La Tabla 1, mostrada anteriormente muestra que los animales deberían sobrevivir a las perdidas de peso corporal tanto como en un 27%. El margen de seguridad terapéutica realizado aquí es notablemente amplio para un agente terapéutico curativo del
cáncer.

La eficacia terapéutica de 29 contra el xenoinjerto (A549) de carcinoma pulmonar humano y los xenoinjertos A549/Taxol del carcinoma pulmonar humano resistente al paclitaxel, también fueron evaluados (Figuras 59C y 59D). Los xenoinjertos A549 del carcinoma pulmonar de lento crecimiento se trataron con 29 (25 mg/kg, Q2DX6, dos veces, ocho días aparte), lo cual resulto en un 99.5% de supresión del tumor con la erradicación completa eventual de 4 de los 4 tumores después de dos dosis más (Figura 59C). Interesantemente, la disminución del peso corporal de los ratones tanto como en un 35% sin alguna letalidad y la suspensión del tratamiento condujo a una rápida recuperación del peso corporal cercano al peso obtenido en el nivel control del pre-tratamiento (Figura 59C). En contraste, un estudio paralelo con el compuesto dEpoB (30 mg/kg; Q2Dx6), resultó en un 97.6% de supresión del tumor, pero no llevo a la erradicación del tumor. En un estudio adicional de 29 (dosificación de 20 mg/kg) contra xenoinjerto resistente al A549/Taxol (Figura 59D), el crecimiento del tumor fue totalmente suprimido y el tumor eventualmente reducido en un 24.4% del control de pre-tratamiento. Durante este estudio, el peso corporal máximo disminuyó hasta un 24%; sin embargo, en la suspensión del tratamiento con el fármaco, el peso corporal se recuperó hasta un 90% con respecto al valor del control del pre-tratamiento. En un estudio comparativo de (E)-9,10-dihidro-dEpoB (grupo 28, 4 mg/kg), el crecimiento del tumor fue suprimido en un 41.6%.

Los datos pertinentes para analizar que factores dotaban al compuesto 29 con su notable índice terapéutico conjuntamente con los datos comparables pertinentes a los congéneres relacionados de cerca se proporcionan en la Tabla 10-2. Se puede observar que en términos de citotoxicidad inherente en movimiento desde EpoB (2b) hasta dEpoB (1) se pierde la totalidad del orden de magnitud. Cerca del 60% de estas pérdidas se restablece en el caso del 9,10-dihidro-dEpoB (28): Alguna de esta citotoxicidad inherente se pierde a medida que se avanza a 29, la cual al menos en la célula es \sim1.8 veces tan citotóxico como el compuesto de referencia dEpoB.

Observamos que entre los 12,13-dihidroepotilones, 29 muestra diferencias con mucho la mejor estabilidad en plasma de ratón y también es el más estable en plasma S9 de hígado humano. También anotamos que, en las 2-sistemas de 12,13-dihidro isómeros, el patrón 26-trifluoro lleva con este una disminución de lipofilicidad y algo de incremento de su solubilidad en agua (Tabla 10-2, parte inferior). Por el momento debería parecer que la gran ventaja de 29 proviene de su mejoramiento en la estabilidad y biodisponibilidad del suero.

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(Tabla pasa a página siguiente)

TABLA 10-2 Perfil de los derivados de dEpoB

103

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Todos los agentes, 1-2 y 28-29, fueron inicialmente descubiertos a través de la síntesis total. Una síntesis práctica del compuesto 1 se ha descrito previamente (Rivkin et al. J. Am. Chem. Soc. 2003, 125, 2899; White et al. J. Am. Chem. Soc. 2001, 123, 5407; Yoshimura et al, Angew. Chem. 2003, 42, 2518; Rivkin et al. J. Org. Chem. 2002, 124, 7737; cada uno de los cuales ha sido incluido en esta por referencia). La primera generación descubre las rutas de 28 y 29 también han sido descritas. La reducción selectiva del doble enlace en 9,10 de 29 proporciona a 2. Los notables resultados obtenidos de los estudios con xenoinjertos descritos anteriormente, por lo cual es actualmente el compuesto 29 el más prometedor, claramente nombrado, por sus ventajas tanto para estudios toxicológicos detallados como para estudios farmacocinéticos en animales superiores y de ahí adecuadas, ventajas para pruebas clínicas en humanos. Tales prospectos, totalmente alterados por la naturaleza de la síntesis desafían desde la preparación de las muestras de prueba hasta la producción de cantidades de multigramos de estos nuevos agentes de epotilone. Se ha logrado, una mayor modernización de nuestras rutas previas, inicialmente concebidas y demostradas en una fijación del descubrimiento. En particular, nuestros nuevos protocolos logran simplificaciones principales en las elaboraciones estereoespecíficas de los carbonos 3 y 26. El Alcohol 32 se prepara según lo descrito inicialmente (Rivkin et al. J. Am. Chem. Soc. 2003, 125, 2899; incluido en esta por referencia). Deberá ser anotado que en las nuevas síntesis, los estéreocentros 6, 7, y 8 son derivados de la disponible trivialmente cetona 30 y del aldehído 31. Bajo la protección del alcohol y la hidrólisis del acetal, el aldehído correspondiente se condensó con acetato de t-butilo para proporcionar un aldol como producto. Puesto que esta condensación no es diastereoméricamente controlada, fue necesario y se logró tener una medida correctiva. La oxidación de esta mezcla 1:1 de efímeros, proporciona la cetona 69. Siguiendo una altamente exitosa reducción de Noyori (Noyori et al. J. Am. Chem. Soc. 1987, 109, 5856; incluido en esta por referencia) bajo las condiciones mostradas, se obtuvo el alcohol 70. La preparación del ácido 25 posteriormente se realizó en algunas etapas simples adicionales como se muestra.

Esquema 12

Síntesis del sector Acil 25

105

Reactivos y condiciones: (a) (i) TrocCl, pir., 92%; (ii) p-TsOH\bulletH_{2}O, 76%; (iii) LDA, acetato de t-butilo, THF, 80%; (i.v.) Dess-Martin periodinano, 74%; (b) Catalizador Noyori (10 mol%), MeOH/HCl, H_{2}, 1200psi, 80%. (c) (i) TESCl, imidazol, 77%; (ii) Zn, AcOH, THF, 99%; (iii) TBSOTf, 2,6-lutidina, 82%; para las etapas restantes ver Rivkin et al. J. Am. Chem. Soc. 2003, 125, 2899.

Una nueva, directa y escalable síntesis también ha sido desarrollada para desarrollar el 90 (Esquema 13). La síntesis inicia con reacciones comercialmente disponibles de trifluoro cetoéster 82 con bromuro de alilo indio. La etapa clave en la síntesis es la posicionalidad específica y deshidratación estereoespecífica del alcohol terciario resultante para producir el 84 (en una producción del 65% total en dos etapas). El estereocontrol de esta reacción obedece a un "efecto dipolar" en donde el fuerte retiro del electrón de CF_{3} y los grupos CO_{2}Et se presentan mejor como trans con respecto al doble enlace emergente. El yoduro 86 requerido se obtuvo en dos etapas a partir del 84. La alquilación del enolato de litio de 7 previamente reportado con yoduro 86 en THF proporciona el 88 con una producción del 81% y una alta diastereoselectividad (>25:1 de). Continuando la desprotección del alcohol secundario, el compuesto 88 fue propuesto en tres etapas para 90 como se muestra

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Esquema 13

Síntesis del sector Acil 17

106

Reactivos y condiciones: (a) (i) Bromuro de Alilo In, THF-agua (3:1) 48ºC, 85%; SOCl_{2}, pir 55ºC, 77%; (b) (i) DIBAL-H, CH_{2}Cl_{2}, -78ºC a r.t. 99%; (ii) I2, PPh_{3}, imidazol, CH_{2}Cl_{2}, 74%; (c) (i) LHMDS, THF,-78ºC a r.t.; (ii) HOAc-THF-H_{2}O (3:1:1), 81% por dos etapa; (d) (i) AlMe_{3}, MeONHMe, THF, 0ºC a r.t., 97%; (ii) MeMgBr, THF, 0ºC, 53% (73% borsm).

Con 25 y 90 a disposición por química procesable sencillamente, la ruta para 29 fue clara siguiendo los primeros protocolos desarrollados en nuestra fase de descubrimiento (A. Rivkin et al. J. Am. Chem. Soc. 2003, 125, 2899; incluido en esta por referencia). La reacción clave de metátesis de cierre del anillo de 25 se llevó acabo en tolueno usando el catalizador de Grubbs de segunda generación (Grubbs, R. H.; Miller, S. J.; Fu, G. C. Acc. Chem. Res. 1995, 28, 446; Trnka, T. M.; Grubbs, R. H. Acc. Chem. Res. 2001, 34, 18; Alkene Metathesis in Organic Chemistry Ed..: Fürstner, A.; Springer, Berlin, (1998); Fürstner, A. Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 2000, 39, 3012; Schrock, R. R. Top. Organomet. Chem. 1998, 1, 1; cada uno de los cuales es incluido en esta por referencia). La reacción proporciona, exclusivamente el isómero trans de 48 con una producción del 71%: La instalación de la fracción del tiazol de acuerdo con el protocolo mostrado en el Esquema 14 se siguió por el retiro de los dos protectores del grupo silil con HF-piridina y de esta manera conduciendo al 29, el cual luego se convirtió vía reducción de la 9,10-olefina en el compuesto 2 con una alta producción. Cantidades del orden de gramos de epotilones novedosos estructuralmente han sido preparadas por la síntesis total en el ajuste a una escala de de un laboratorio académico

Esquema 14

Etapas finales de la síntesis del 26-CF_{3}-(E)-9,10-dihidro-dEpoB (29)

107

Reactivos y condiciones: (a) EDCI, DMAP, CH_{2}Cl_{2}, 25, 0ºC a rt, 86% de éster t-butílico; (b) catalizador de Grubb, tolueno, 110ºC, 20 min, 71%; (c) (i) KHMDS, 101, THF, -78ºC a -20ºC, 70%; (ii) HF-piridina, THF, 98%.

Parte experimental Métodos Generales

Los reactivos obtenidos de proveedores comerciales se utilizaron, sin purificación adicional a menos que se indique de otra manera. El cloruro de metileno se obtuvo a partir de un sistema de secado de solvente (pasándolo a través de una columna pre-empacada de alúmina) y usándolo sin un secado adicional. Todas las reacciones sensibles al aire y agua fueron llevadas a cabo en material de vidrio secado a la llama bajo una presión positiva de gas argón pre-purificado. Los espectros NMR (^{1}H y ^{13}C) se registraron en un Bruker AMX-400 MHz y Bruker Advance DRX-500 MHz como se registre individualmente, referido a CDCl_{3} (7.27 ppm para ^{1}H y 77.0 ppm para ^{13}C) y CD_{2}Cl_{2} (5.32 ppm para ^{1}H y 53.5 ppm para ^{13}C). Los espectros Infrarrojos (IR) se obtuvieron en un espectrómetro Perkin-Elmer FT-IR modelo 1600. Las rotaciones ópticas se obtuvieron en un polarímetro digital JASCO modelo DIP-370. La cromatografía analítica en capa delgada fue desarrollada sobre placas de silica gel 60 F254, referencia E. Merck. Los compuestos que no fueron activos al UV, se visualizaron sumergimiento las placas en solución de para-anisaldehído y posterior calentamiento. La cromatografía preparativa en capa delgada fue desarrollada utilizando el solvente indicado sobre placas TLC Whatman® (LK6F Silica gel 60A)

Químicos. Todos los epotilones se sintetizaron dentro de la organización (C. R. Harris, S. J: Danishefsky, J. Org. Chem. 1999, 64, 8434; D.-S. Su et al. Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 1997, 36, 2093; Smart, B. E. J. Fluorine Chem. 2001, 109, 3; F. Yoshimura, et al. Angew. Chem. 2003, 42, 2518; Rivkin et al. J. Org. Chem. 2002, 124, 7737)

El Paclitaxel (Taxol®) y el sulfato de vinblastina (VBL), fueron adquiridos de Sigma. Estos compuestos se disolvieron en dimetilsulfoxido para los ensayos in vitro, (excepto el VBL en solución salina). Para los estudios in vivo, tanto los epotilones como el paclitaxel, se disolvieron en el vehículo Cremophor/etanol (1:1) y posteriormente se diluyeron en solución salina para la infusión i.v. para 6 horas vía la vena de la cola utilizando un mini-catéter diseñado a medida (T.-C. Chou et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2001, 98, 8113-8118; T.-C. Chou et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1998, 95, 15798-15802).

(T.-C. Chou et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2001, 98, 8113-8118; T.-C. Chou et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1998, 95, 15798-15802).

Líneas tumorales y celulares. Las células de leucemia linfoblástica humanas CCRF-CEM, fueron obtenidas del Dr. William Beck of the University of Illinois, Chicago. El carcinoma mamario humano (MX-1) y las células de carcinoma pulmonar humano (A549) fueron obtenidas de American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD). Las células resistentes al paclitaxel A549/taxol (Resistencia de 44 veces) fueron desarrolladas con el método descrito anteriormente (T.-C. Chou et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2001, 98, 8113-8118).

Animales. Los ratones desnudos atímicos, que llevan el gen nu/nu se obtuvieron de NCI, Frederick, MD y se utilizaron para todos los xenoinjertos de tumor humano. Se utilizaron, ratones machos desnudos de 6 semanas o mayores con pesos aproximados de 20-22 g. Los medicamentos se administraron vía vena de la cola por 6 horas mediante infusión i.v. usando un mini-catéter de infusión hecho internamente y un tubo de contención (T.-C. Chou et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2001, 98, 8113-8118).

Una bomba de inyección Harvard PHD2000 programable con multitrack se utilizó para la infusión i.v. Un volumen de infusión típico de 6 horas por cada fármaco en Cremophor/etanol (1:1) fue de 100 ml en 2.0 ml de solución salina. El volumen del tumor fue evaluado por la medición de la longitud x ancho x altura (o amplitud), utilizando un calibrador. Para los ratones desnudos que llevan el tumor, durante el curso del experimento, el peso corporal hace referencia al peso total menos el peso del tumor. Todos los estudios de animales fueron conducidos en conformidad con las directrices por el National Institute de Health Guide for the Care y Use of Animals y el protocolo aprobado por el Memorial Sloan-Kettering Cancer Center's Institutional Animal Care y Use Committee.

Ensayos de Citotoxicidad. En la preparación de los ensayos de citotoxicidad in vitro, las células fueron cultivadas con una densidad inicial de 2-5 x 10^{4} células por mililitro. Se mantuvieron en una atmósfera humidificada con 5% de CO_{2} a 37ºC, en medio RPMI 1640 (GIBCO/BRL), conteniendo penicilina (100 unidades/mL), estreptomicina (100 \mug/mL, GIBCO/BRL), y FBS al 5% de inactivado al calor. Para el crecimiento de células tumorales sólidas en una monocapa (tal como la A549), la citotoxicidad del fármaco fue determinada en placas microtitulación de 96-pozos utilizando el método sulforhodamina B (P. Skehan et al. J. Natl. Cancer. Inst. 1990, 82, 1107-1112).

Para el crecimiento de células en suspensión (tales como CCRF-CEM y sus sublíneas), la citotoxicidad fue medida, por duplicado, utilizando el método de microcultivo y empleando el 2,3-bis-(2-metoxi-4-nitro-5-sulfofenil)-5-carboxanilida)-2H-terazodium hidróxido (XTT) (D. A. Scudiero et al. Cancer Res. 1988, 48, 4827-4833).

Placas de microtitulación de 96-pozos. Para ambos métodos, la absorbancia de cada pozo se medió con un lector de microplaca (Power Wave XS, Bio-Tek, Winooski, VT). Los datos obtenidos de la relación dosis-efecto de 6 a 7 concentraciones de cada fármaco, por duplicado, fueron analizados con el registro del efecto-medio, utilizando un programa de ordenador (T.-C. Chou, M. Hayball. CalcuSym for Windows, Multiple-drug dose effect analyzer and manual. Biosoft, Cambridge Place, Cambridge, UK (1997).

Estabilidad de los epotilones en ratón y en la fracción S9 de hígado humano. El estudio de la estabilidad se realizó con un sistema HPLC automatizado, el cual consiste de un sistema de preparación de muestra Prospekt-2 (Spark Holland, Holanda) y un sistema cromatográfico HPLC Agilent 1100. Brevemente, el sistema Prospekt 2 recogía un cartucho de extracción C8 y lo lavaba con acetonitrilo y agua. El automuestreador Agilent, se colocó a 37ºC, tomaba 20 \mul de la muestra, lo cargaba en el cartucho, lavaba este con agua, y luego el Prospekt-2 desviaba la corriente de la fase móvil dejándola correr a través del cartucho de extracción sobre la columna analítica, Reliance Stable Bond, C8 4 x 80 mm con una pre columna (MacMod, Chadds Ford, PA) y el eluente se monitoreó a 250 nm. La fase móvil consistió de una mezcla 53 a 65% acetonitrilo/0.1% ácido fórmico a un flujo de 0.4 ml/min., de esta manera el tiempo de retención del compuesto de interés fue aproximadamente 6 minutos. La preparación de la muestra comprendió la adición de volúmenes de plasma iguales a PBS para asegurar un volumen total de 300-400 \mul, se filtra, y se le adiciona de 0.5-2 \mul del sustrato (20 mM) para lograr aproximadamente 30 - 50 mAU a 250 nm en el análisis por HPLC. Para la fracción S9 del microsoma de hígado humano combinada (Xeno Tech, Lenex, KS), 20 \mul (400 \mug) o la fracción S9, se mezcló con 280 \mul de PBS y luego se procedió como se indicó anteriormente. El periodo de muestreo fue controlado por el automuestreador y los datos de las áreas de los picos se reunieron para comparar la velocidad de desaparición del compuesto principal.

Determinación del número de partición de octanol-agua (POW). Un método HPLC fue empleado para estimar el número de partición del octanol-agua. Un sistema cromatográfico HPLC Agilent 1100, se utilizó con una columna eclipse XDB C18, 4.6 x 250 mm y con una fase móvil de acetonitrilo 60%/40% solución reguladora de fosfato de potasio 25 mM a pH 7.4, con una velocidad de flujo de 0.8 ml por min., siendo el eluente monitoreado a 250 nm. Los estándares utilizados fueron alcohol bencílico, acetofenona, benzofenona, naftaleno, difenil éter y dibenzilo con valores POW conocidos de 1.1, 1.7, 3.2, 4.2, y 4.8 respectivamente. El dicromato de sodio fue utilizado para evaluar el tiempo cero, cuyo valor correspondió a 2.5 min. y los tiempos de retención para los estándares son 3.9, 5.4, 10.6, 14. 18.7 y 19.8 min., respectivamente. El valor k se calculó mediante la formula, k = (t_{rt}-t_{0})/t_{0}. La regresión Lineal de log k vs. log POW dio una línea recta con r^{2} = 0.966. Esta grafica se utiliza para evaluar el valor de POW de los análogos de los epotilones.

Datos espectroscópicos para 29 (26-trifluoro-(E)-9,10-dihidro-dEpoB)

[\alpha]_{D}^{25} -54.6 (c 0.28, CHCl_{3}); IR (film) \nu 3478, 2974, 2929, 1736, 1689; 1449, 1381, 1318, 1247, 1169, 1113, 1039, 983, 867, 736 cm^{-1}; ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 1.05 (3H, s), 1.12 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.23 (3H, d, J = 6.8 Hz), 1.37 (3H, s), 2.04 (1H, brd, J = 3.8 Hz, -OH), 2.12 (3H, s), 2.25-2.33 (1H, m), 2.38 (1H, dd, J = 15.3 y 3.0 Hz), 2.48 (1H, dd, J = 15.4 y 9.8 Hz), 2.54-2.61 (1H, m), 2.66-2.76 (1H, m), 2.71 (3H, s), 2.96 (1H, dd, J = 16.5 y 4.5 Hz), 3.02 (1H, dd, J = 16.3 y 6.5 Hz), 3.11 (1H, quintet, J = 6.7 Hz), 3.19 (1H, brs, = OH), 3.74 (1H, brs), 4.35 (1H, brd, J = 9.5 Hz), 5.42 (1H, dd, J = 6.2 y 4.1 Hz), 5.60 (1H, ddd, J = 15.8, 5.6, y 4.5 Hz), 5.66 (1H, dd, J = 15.8 y 5.8 Hz), 6.24. (1H, t, J = 7.2 Hz), 6.64 (1H, s), 7.00 (1H, s); ^{13}C NMR (100 MHz, CDCl_{3}) \delta 15.1, 16.1, 17.7, 18.5, 19.3, 22.5, 28.8, 31.1, 39.6, 39.7, 45.0, 53.7, 71.4, 75.3, 76.8, 116.7, 120.2, 124.3 [q, 1J(C,F) = 273.4 Hz], 127.9, 130.2 [q, 3J(C,F) = 6.0 Hz], 130.6 [q, 2J(C,F) = 28.4 Hz], 132.5, 136.7, 152.0, 165.4, 170.2, 218.4; LRMS (ESI) calc. para C_{27}H_{37}F_{3}NO_{5}S [M+H+] 544.2, encontrado 544.1.

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Ejemplo 11 Estudios in vitro

Un experimento típico involucra células de cultivo (por ejemplo, CCRF-CEM) a una densidad inicial de 2-5 x 10^{4} células por ml. Estas fueron mantenidas en una atmósfera humidificada con 5% de CO_{2} a 37ºC, en medio RPMI 1640 (GIBCO/BRL) que contiene penicilina (100 unidades/mL), estreptomicina (100 \mug/mL, GIBCO/BRL), y 5% de suero fetal bovino inactivado al calor. Para las células que presentaron crecimiento en suspensión (tales como CCRF-CEM y sus sublíneas), la citotoxicidad se midió empleando el método de microcultivo terazodium (XTT)-2,-3-bis (2-metoxi-4-nitro-5-sulfofenil)-5 carboxanilida)-2H terazodium hidróxido, por duplicado en placas microtitulación de 96-pozos. Para ambos métodos, la absorbancia de cada pozo se mide con un lector de microplaca (EL-340, Bio-Tek, Burlington, VT). Cada corrida implico seis o siete concentraciones de los fármacos evaluados. Los datos de relación dosis-efecto fueron analizados con el registro del efecto-medio.

Las células T humanas CCRF-CEM, las células leucémicas linfoblásticas agudas y sus sublíneas teniposide-resistentes (CCRFCEM/VM1) y las sublíneas resistentes a la vinblastine (CCRF-CEM/VBL_{100}) fueron obtenidas de W.T. Beck (University of Illinois, Chicago, II)

En un experimento típico, como se ha descrito anteriormente, ciertos de los compuestos inventivos (por ejemplo, el 9,10-dihidro-EpoD), demostraron actividad en las líneas celulares CCRF-CEM y las líneas celulares resistentes a Taxol CCRF-CEM. Algunos de estos compuestos exhibieron IC_{50s}, para las líneas celulares CCRF-CEM, en el rango de 0.0015 a 0.120. Otros ciertos compuestos mostraron IC_{50}s en el rango de 0.0015 a aproximadamente 10.5. Algunos de estos compuestos también mostraron IC_{50}s en el rango de 0.011 a aproximadamente 0.80 para las líneas celulares resistentes a CCRF-CEM/Taxol, y ciertos otros compuestos exhibieron IC_{50}s en el rango de aproximadamente 0.011 a aproximadamente 13.0 \muM. En ciertas modalidades, el 26F-EpoD exhibe actividad en el rango de 0.0015 \muM para las líneas celulares CCRF-CEM, y en el rango de 0.011 \muM para líneas celulares resistentes a CCRF-CEM/Taxol (Figura 11).

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Ejemplo 12 Estudios in vivo

Los ratones desnudos atímicos, que llevan el gen nu/nu se utilizan típicamente para xenoinjertos de tumor. Outbred, Criados mediante cruces de razas, los ratones de origen suizo se obtuvieron de Charles River Laboratories. Los ratones machos de 8 semanas o mayores, con pesos de 22 g o superiores, se utilizaron para más experimentos. Los fármacos se administraron vía vena de la cola por infusión i.v.-6 h. Cada ratón individual fue confinado en un tubo de polipropileno perforado Falcon para la administración del medicamento. El volumen de tumor fue evaluado midiendo la longitud x ancho x altura (o amplitud) usando un calibrador. La bomba de inyección Harvard PHD2000 programable (Aparato Harvard) con multi-track se utilizó para infusión i.v. Todos los estudios de animales fueron conducidos de acuerdo con las directrices del National Institute of Health "Guide for the Care and Use of Animals" y el protocolo aprobado por el Memorial Sloan-Kettering Cancer Center's Institutional Animal Care y Use Committee. En cumplimiento con las políticas de este comité para el tratamiento humano de animales que llevan tumores, los ratones se sometieron a eutanasia cuando los tumores alcanzaron un valor \leq10% de su peso corporal total.

Como se describe en la Figura 8, el 9,10-dihidro-EpoB se evaluó en ratones desnudos que presentaban el carcinoma mamario humano MX-1. En general, el 9,10-dihidro-EpoB fue formulado como sigue: el 9,10-dihidro-EpoB se disolvió en etanol y Cremophor (1:1) en una concentración de 20 mg/ml. Esta solución se diluyó con solución salina para infusión i.v. La solución diluida fue utilizada para la infusión i.v. dentro de una hora. El tamaño del tumor y peso corporal luego se medio utilizando una dosificación de 10 mg/kg, 20 mg/kg, y 30 mg/kg por más de 15 días. El tamaño del tumor y peso corporal también se midieron utilizando un régimen de dosificación de 0.4 mg/kg Q3Dx2, 0.5 mg/kg Q3Dx2, y 0.6 mg/kg Q3Dx5 (ver Figuras 33, 34, 55 y 56). El régimen de dosificación cada tercer día se utilizó para reducir la toxicidad. Otros estudios terapéuticos en 9,10-dihidro-Epo B son mostrados en las Figuras 70 y 71 (CCRF-CEM/Taxol Q3Dx5) y en las Figuras 23 y 24 (HCT-116, Q2Dx7).

El compuesto 9,10-dihidro-12,13-desoxiepotilone B (iso-490 epotilone), es tres veces más eficaz que el dEpoB. El 9,10-dihidro-12,13-desoxiepotilone D ha demostrado detener el crecimiento de tumores, después de dos o tres infusiones de 10 mg/kg o 20 mg/kg, cada una de las cuales fue administrada cada día. Se obtuvieron mejores resultados en ratones utilizando una dosis de 30 mg/kg del 9,10-dihidro-12,13-desoxiepotilone B utilizando dos infusiones i.v. cada 6 horas durante cada día. El 9,10-dihidrodEpoB en 5 mg/kg, Q3Dx9, infusión i.v.-6 horas, también demostró que logra el desvanecimiento el tumor en ratones desnudos que llevan el xenoinjerto MX-1, sin la muerte del ratón y con solo una moderada perdida de peso corporal (Figuras 74 y 75). Esto pareciese haber sido logrado por la administración de análogos del epotilone cada tercer día para reducir la toxicidad (ver Figuras 53 y 54). En resumen, 9,10-dihidro-12,13-desoxiepotilone B muestra una disminución de toxicidad con respecto a otros epotilones, mayor potencia en detener el crecimiento tumoral y gran estabilidad del suero. Otros estudios terapéuticos son mostrados en las Figuras 17 y 18 (HCT-116, Q2Dx5 y Q3Dx5); en las Figuras 19 y 20 (A549/Taxol, Q3Dx7); y en las Figuras 21 y 22 (A549/Taxol, Q2Dx7).

El 9,10-dihidro-Epo B cuando se administra cada tres días, 9 a 11 veces, infusión i.v.-6 horas a 0.4-0.6 mg/kg, condujo a la disminución y el desvanecimiento del tumor en ratones desnudos con implante de xenoinjerto MX-1 de carcinoma mamario humano, (Figuras 68 y 69). La administración de 8 dosis cada día condujo a una supresión del crecimiento, pero no a la reducción del tumor. Cuando el 9,10-dihidro-Epo B se administró durante cada día por 9 dosis, el tumor implantado continuo contrayéndose moderadamente desde el segundo hasta el octavo día, pero el peso corporal se recupero muy lentamente desde el 76% al 82% del control durante el mismo periodo. En el décimo día, un cuarto del tumor había desaparecido. Cuando una dosificación de 0.6 mg/kg de 9,10-dihidro-EpoB fue administrada Q2Wx6, infusión cada 6 horas, a ratones desnudos con xenoinjertos HCT-116, cuatro de cada cuatro ratones murieron de toxicidad dentro de los tres días después de la sexta dosificación. El 9,10-dihidro-EpoB suprimió el crecimiento del tumor contra CCRF-CEM/Taxol usando 0.6 mg/kg, Q3Dx5, x 2 programado (Figuras 70 y 71).

El 26-trifluoro-9,10-dihidro-12,13-desoxi-epotilone B (F3-deH-dEpoB) como se muestra en las Figuras es curativo a 20 mg/kg y 30 mg/kg, Q2Dx6, infusiones de 6 horas, en un modelo de ratón desnudo implantado con un xenoinjerto MX-1 de carcinoma mamario humano,. Los datos también sugieren que 30 mg/kg Q2Dx6 es aproximadamente la dosis máxima tolerada. Con 20 mg/kg, Q2Dx6, infusión de 6 horas, el 26-trifluoro-9,10-dihidro-12,13-dexoxi-epotilone B llevó a una reducción y desaparición del tumor en cuatro de cuatro ratones desnudos con xenoinjertos MX-1 de carcinoma mamario humano. No hubo reaparición del tumor en el 20avo día después de haber detenido el tratamiento. Al día 27avo después de haber detenido el tratamiento, en 2/4 reapareció. Ninguna otra reaparición del tumor se presentó durante los días 28avo y 64avos después de detener el tratamiento. Por comparación, dEpoB a 30 mg/kg logró el desvanecimiento del tumor en el mismo modelo de ratón en siete de siete ratones; sin embargo, el tumor reapareció en dos de los cinco ratones al octavo día después de detener el tratamiento. La administración del 26-trifluoro-9,10-dihidro-12,13-desoxi-epotilone B a 20 mg/kg, Q2Dx6, infusión i.v. 6 horas, condujo a una transitoria caída en el peso corporal de los ratones hasta el 26%. Este descenso en el peso corporal, no condujo a la muerte sugiriendo ninguna toxicidad severa hacia los órganos vitales. Dos días después del último tratamiento, el peso corporal comenzó a recuperarse. En el día 16 después del tratamiento el peso corporal regreso al 109% del control de pre-tratamiento sugiriendo que la toxicidad, si la hay, es completamente reversible. En comparación, el dEpoB administrado a 30 mg/kg condujo a un 31% de disminución en el peso corporal sin letalidad.

Cuando el 26-trifluoro-9,10-dihidro-12,13-desoxi-epotilone B se administró a 30 mg/kg, Q2Dx6, infusión i.v. 6 horas, el desvanecimiento del tumor fue 2-3 días más rápido que con la dosis de 20 mg/kg. El peso corporal disminuyó al 27% en su más alta dosis y persistió 4 días sin llevar a la letalidad y sin provocar severa toxicidad en los órganos vitales. Cuatro días después del último tratamiento a 30 mg/kg, comenzó a recuperar el peso corporal. En el día 16avo después del tratamiento, el peso corporal retorno al 98% del control de pre-tratamiento confirmando también la reversibilidad de la toxicidad. El tratamiento con 26-trifluoro-9,10-dihidro-dEpoB a 20 mg/kg y 30 mg/kg condujo a la desaparición total del tumor, y no reincidió hasta después de 62 días lo que se vio con la dosis de 30 mg/kg. La desaparición del tumor también se logro a 10 mg/kg administrando 9 dosis con tres dosis adicionales dadas (Figura 57). Solamente, menores pérdidas de peso corporal se observaron a 10 mg/kg del 26-trifluor6-9,10-dihidro-dEpoB (Figura 58). Sin posteriores pérdidas de peso corporal, se vieron con el tratamiento continuado.

La figura 59 resume el efecto del 26-F_{3}-9,10-deH-dEpo B (y otros epotilones) contra el xenoinjerto MX-1, A. a una dosis baja; B. contra grandes tumores; contra xenoinjerto A549 del carcinoma pulmonar, C; y contra xenoinjerto A549/Taxol de carcinoma de pulmonar resistente al Taxol, D.

La figura 61 enumera las potencias in vitro de los epotilones modificados C-21 contra CCRF-CEM, CCRF-CEM/VBL y CCRFCEM/Taxol.

La figura 62 muestra el efecto terapéutico del 26-F_{3}-9,10-deH-dEpoB (15 mg/kg y 30 mg/kg) y Taxol (20 mg/kg) Q2Dx8, infusión i.v. 6 horas, contra xenoinjerto CCRF-CEM de leucemia de célula-T humana. Similares disminuciones del peso corporal sen observaron en los tres grupos de tratamiento (Figura 63).

El tratamiento del xenoinjerto CCRF-CEM/Taxol (Resistente al Taxol) con 26-F3-9,10-deH-dEpo B, 15 mg/kg logró 1/3 de desvanecimiento del tumor y 30 mg/kg logró 3/4 de desvanecimiento del tumor. El mismo tratamiento con Taxol, 20 mg/kg presentó solamente una supresión parcial del crecimiento del tumor y fracasó con el objetivo de reducción del tumor (Figura 64). Los cambios de peso corporal, durante este experimento se muestran en la figura 65.

El tratamiento del xenoinjerto HCT-116 de carcinoma de colon humano, con 26-F_{3}-9,10-deH-dEpo B (20 mg/kg) logró una eficacia similar a la del Taxol (20 mg/kg). Sin embargo, F_{3}-deH-dEpo B a 30 mg/kg produjo un mejor efecto terapéutico con un desvanecimiento de 2/4 del tumor, seguido de 5 dosis (Figura 66). Los cambios del peso corporal durante este experimento se muestran en la figura 67.

Los efectos terapéuticos de F_{3}-9,10-dihidro-dEpoF contra xenoinjertos MX-1 en diferentes dosis (5-30 mg/kg) con infusión i.v. por 6 horas e inyección i.v. se muestran en las Figuras 76 y 77.

Conclusión. El 9,10-dihidro, 26-trifluoro trifuoro, o ambas modificaciones para dEpoB resultaron en un incremento de 1.5- a 5- veces en la citotoxicidad in vitro y un incremento de 2- a 5- veces de la vida media del plasma de ratón in vitro. Utilizando modelos de xenoinjerto de tumores sólidos humanos en ratones desnudos y utilizando el Q2Dx5-9, infusión i.v.-6 horas usando la técnica de la vía vena de la cola en dosis máximas toleradas, fueron evaluadas la eficacia antitumor y toxicidad del 9,10-dihidro-epotilones. La capacidad para lograr una supresión del crecimiento del tumor, la disminución del tumor, y la desaparición seguida de posteriores investigaciones para determinar el índice de reincidencia y el índice de cura después de detener el tratamiento. El 9,10-dihidro-EpoB, el más potente epotilone conocido in vitro, aunque altamente eficaz, mostró un estrecho margen de seguridad terapéutica in vivo. El 9,10-dihidro-dEpoB a 4 mg/kg, 9,10-dihidro-EpoB a 0.4 mg/kg, y 21-hidroxi-9,10-dihidro-dEpoB a 3 mg/kg todos fuertemente supresores del crecimiento de tumores por un periodo sostenido de tiempo y logrando en algunos casos la reducción del tumor, y en otros casos el desvanecimiento del mismo. El dEpoB a 30 mg/kg, el 26-trifluoro-9,10-dihidro-dEpoB a 20 mg/kg, y el paclitaxel a 20 mg/kg mostraron una fuerte supresión del crecimiento del tumor y lograron la reducción del tumor y el desvanecimiento de los xenoinjertos MX-1 de carcinoma mamario humano en todos los ratones evaluados. El 26-trifluoro-9,10-dihidro-dEpoB, cuando se comparó con el dEpoB o el paclitaxel, logró una cura a largo plazo sin reincidencia tumoral y mostró una recuperación igualmente rápida del peso corporal para el nivel del control de pre-tratamiento.

Ejemplo Comparativo 13

Síntesis de los Análogos de Ciclopropil-Epotilone

108

Claims

1. Un compuesto de fórmula:

109

en donde R_{1} es un hidrógeno o alquilo C_{1-6} inferior;

R_{2} es un arilo C_{3-14} sustituido o no sustituido, heteroarilo C_{3-14}, arilo C_{3-14} alquilo C_{1-20}, o una fracción heteroarilo C_{3-14} alquilo C_{1-20};

R_{5} y R_{6} son cada uno independientemente un hidrógeno o un grupo protector;

X es O, S, C (R_{7})_{2}, o NR_{7}, en donde cada ocurrencia de R_{7} es independientemente un hidrógeno o un alquilo C_{1-6} inferior;

R_{B} es, independientemente para cada ocurrencia, un hidrógeno; halógeno; -OR_{B'}; -SR_{B'}; -N(R_{B'})_{2}; -CY_{3}, -CHY_{2}, -CH_{2}Y, donde Y es F, Br, Cl, I, OR_{B'}, N_{B}R_{B'}, N(R_{B'})_{2}, o SR_{B'}; -C(O)OR_{B'}; -C(O)R_{B'}; -CONHR_{B'}; -O(C=O)R_{B'}; -O(C=O) OR_{B'};-NR_{B'}(C=O)R_{B'}; N_{3}; N_{2}R_{B'}; un acetal cíclico; o cíclico o acíclico, alifático C_{1-20} lineal o ramificado, heteroalifático C_{1-20}, arilo C_{3-14}, o heteroarilo C_{3-14}, opcionalmente sustituido con uno o más de hidrógeno; halógeno; -ORB'; -SRB'; -N(RB')_{2}; -C(O)ORB'; -C(O)RB'; -CONHRB'; -O(C=O)RB'; -O(C=O)ORB'; -NRB'(C=O)RB'; N_{3}; N_{2}RB'; acetal cíclico; o alifático C_{1-20} cíclico o acíclico, lineal o ramificado sustituido o no sustituido, heteroalifático C_{1-20}, arilo C_{3-14}, o una fracción heteroarilo C_{3-14}; en donde cada ocurrencia de R_{B'} es independientemente un hidrógeno; un grupo protector; un lineal o ramificado, sustituido o no sustituido, cíclico o acíclico, alifático C_{1-20}, heteroalifático C_{1-20}, arilo C_{3-14}, heteroarilo C_{3-14}, arilo C_{3-14} alquilo C_{1-20}, arilo C_{3-14} alquenilo C_{1-20}, arilo C_{3-14} alquinilo C_{1-20}, heteroarilo C_{3-14} alquilo C_{1-20}, heteroarilo C_{3-14} alquenilo C_{1-20}, o una fracción heteroarilo C_{3-14} alquinilo C_{1-20},

en donde, el arilo, heteroarilo, arilalquilo, heteroarilalquilo, alifático, heteroalifático, arilalquenil, arilalquinil, heteroarilalquenil o heteroarilalquinil puede ser sustituido por uno o más de alifático C_{1-20}, heteroalifático C_{1-20}, arilo C_{3-14}, heteroarilo C_{3-14}, arilo C_{3-14} alquilo C_{1-20}, heteroarilo C_{3-14} alquilo C_{1-20}, alcoxi C1-20, ariloxi C_{3-14}, heteroalcoxi C_{1-20}, heteroariloxi C_{3-14}, alquiltio C_{1-20}, ariltio C_{3-14}, heteroalquiltio C_{1-20}, heteroariltio C_{3-14}, F, Cl, Br, I, -OH, -NO_{2}, -CN, -CF_{3}, -CH_{2}CF_{3}, -CHCl_{2}, -CH_{2}OH, -CH_{2}CH_{2}OH, -CH_{2}NH_{2}, -CH_{2}SO_{2}CH_{3}, -C(O)Rx, -CO_{2}(Rx), -CON(Rx)_{2}, -OC(O)Rx, -OCO_{2}Rx, -OCON(Rx)_{2}, -N(Rx)_{2}, -S(O)_{2}Rx, -NRx(CO)Rx en donde cada ocurrencia de Rx es independientemente alifático C_{1-20}, heteroalifático C_{1-20}, arilo C_{3-14}, heteroarilo C_{3-14}, arilo C_{3-14} alquilo C_{1-20}, heteroarilo C_{3-14} alquilo C_{1-20}.

2. El compuesto como se reivindica en la reivindicación 1, en donde R_{5} es un hidrógeno; y R_{6} es un hidrógeno.

3. El compuesto como se reivindica en la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde R_{B} es un metilo.

4. El compuesto como se reivindica en la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde R_{B} es un hidrógeno.

5. El compuesto como se reivindica en la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde R_{B} es -CF_{3}.

6. El compuesto como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde R_{1} es un metilo.

7. El compuesto como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde R_{2} es

110

en donde R_{8} es independientemente hidrógeno, halógeno, -OR_{9}, -SR_{9}, -N(R_{9})_{2}, -CY_{3}, -CHY_{2}, -CH_{2}Y, donde Y es F, Br, Cl, I, OR_{B'}, NHR_{B'}, N(R_{B'})_{2}, o SR_{B'}; -(CV_{2})_{n}OR_{9}, -(CV_{2})_{n}N(R_{9})_{2}, -(CV_{2})_{n}SR_{9}, -(C=O)R_{9}, -O(C=O)R_{9}, -(C=O)OR_{9}, -O (C=O)OR_{9};-NH(C=O)R_{9}, -NH(C=O)OR_{9}, -(C=O)NHR_{9}, o un alifático C_{1-20} cíclico o acíclico, lineal o ramificado, heteroalifático C_{1-20}, arilo C_{3-14}, heteroarilo C_{3-14}, arilo C_{3-14} alquilo C_{1-20}, o fracción heteroarilo C_{3-14} alquilo C_{1-20} opcionalmente sustituido por una o más ocurrencias de halógeno, -OR_{9}, -SR_{9}, -N(R_{9})_{2}, -(CV_{2})_{n}OR_{9}, -(CV_{2})_{n}N(R_{9})_{2}, -(CV_{2})_{n}SR_{9}, -(C=O)R_{9}, -O(C=O)R_{9}, -(C=O)OR_{9}, -O(C=O)OR_{9};-NH(C=O)R_{9}, -NH(C=O)OR_{9}, -(C=O)NHR_{9}, o un alifático C_{1-20} cíclico o acíclico, lineal o ramificado, sustituido o no sustituido, heteroalifático C_{1-20}, arilo C_{3-14}, heteroarilo C_{3-14}, arilo C_{3-14} alquilo C_{1-20}, o fracción heteroarilo C_{3-14} alquilo C_{1-20},

en donde cada ocurrencia de R_{9} es independientemente un hidrógeno; un grupo protector; un alifático C_{1-20} cíclico o acíclico, lineal o ramificado, sustituido o no sustituido, heteroalifático C_{1-20}, arilo C_{3-14}, o fracción heteroarilo C_{3-14};

en donde cada ocurrencia de V es independientemente un hidrógeno, halógeno, hidroxilo, tio, amino, alquiloamino C_{1-20}, o hidroxilo protegido, tio o amino; cada ocurrencia de t es independientemente 0, 1 o 2; y cada ocurrencia de n es independientemente 0-10; y sus derivados farmacéuticamente aceptables.

8. El compuesto como se reivindica en la reivindicación 7, en donde R_{2} es

111

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9. El compuesto como se reivindica en la reivindicación 7, en donde R_{2} es

112

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10. El compuesto como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 7 a 9, en donde R_{8} es un metilo.

11. El compuesto como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 7 a 9, en donde R_{8} es -CH_{2}OH.

12. El compuesto como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en donde X es O.

13. El compuesto como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en donde X es NH.

14. Un compuesto aislado como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13.

15. Un compuesto como se reivindica en la reivindicación 1 de fórmula:

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16. Un compuesto aislado como se reivindica en la reivindicación 15.

17. Un compuesto como se reivindica en la reivindicación 1 de fórmula:

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18. Un compuesto aislado como se reivindica en la reivindicación 17.

19. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, y un excipiente farmacéuticamente aceptable.

20. La composición farmacéutica de la reivindicación 19 que comprende además CREMOPHOR.

21. La composición farmacéutica de la reivindicación 19 o la reivindicación 20 que comprende además del etanol.

22. Un compuesto como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18 o una composición farmacéutica como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 19 a 21 para utilizar en un medicamento.

23. Un compuesto o una composición farmacéutica como se reivindica en la reivindicación 22 para utilizar en la prevención y/o el tratamiento del cáncer.

24. Uso de un compuesto como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, en la fabricación de un medicamento para la prevención y/o el tratamiento del cáncer.

25. El uso como se reivindica en la reivindicación 24 para la inhibición del crecimiento de un tumor y/o la metástasis del tumor.

26. El uso como se reivindica en la reivindicación 24 o 25 para tratar el cáncer que comprende células cancerígenas con resistencia a multifármacos.