CN1242813C - 骨质疏松症的联合疗法 - Google Patents

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Abstract

包括某种雌激素激动剂/拮抗剂和前列腺素或前列腺素激动剂/拮抗剂的药物联合组合物。该组合物用于治疗骨疾病包括骨质疏松。

Description

骨质疏松症的联合疗法
                          发明背景
本发明涉及雌激素激动剂/拮抗剂和能促进骨骼形成并增加骨质的制剂的药物组合物，含有这种组合物的试剂盒以及这种组合物治疗哺乳动物包括人中存在的低骨质疾病的用途。
骨质疏松症是一种全身性骨骼疾病，特征为骨密度低和骨组织退化，结果使骨的脆性增加而易发生骨折。在美国，受此疾病影响的人超过25百万，每年会有1.3百万以上的人发生骨折，其中包括500,000人是脊柱骨折，250,000人是髋部骨折，240,000人是腕部骨折。髋部骨折是最严重的，一年中有5-20％的患者死亡，有50％以上的幸存者丧失劳动能力。
老年人发生骨质疏松的危险最大，因此预计随着人口老龄化这一问题将显著增加。预计全世界骨折的发生率在未来60年内将增加三倍，一项研究估计到2050年全世界将有4.5百万髋部骨折患者。
妇女比男子发生骨质疏松的危险更大。妇女在绝经后骨损失立即急剧加速。其他增加骨损失而导致骨质疏松的因素包括吸烟，酗酒，久坐型生活方式和低钙摄取。
雌激素是在预防妇女发生骨质疏松或绝经后骨损失中选用的制剂。另外，Black等人在EP 0605193A中报道：雌激素，特别是当口服时，降低了LDL的血浆浓度而升高了有益的高密度脂蛋白(HDL)的血浆浓度。然而，长期雌激素治疗已牵连出多种疾病，包括子宫癌、子宫内膜癌和可能的乳腺癌的危险增加，使得许多妇女或者要避免这种治疗或仅能短期用药。尽管认为通过同时使用孕酮可减少子宫内膜癌的危险，但仍担心使用雌激素有可能增加乳腺癌的危险。近期为了减小癌症危险而提出的治疗方案如孕酮和雌激素联合给药使患者出现了难以承受的出血。另外，孕酮与雌激素联合似乎会钝化雌激素降低血清胆固醇的作用。与雌激素疗法相关的显著的不良副作用而提出需要研制另外的治疗骨质疏松症方法，这些方法对血清LDL应具有所期望的有益作用而不会导致不期望的副作用。
最近，已提出用一些雌激素激动剂/拮抗剂来治疗骨质疏松。已报道(骨质疏松症会议记要No.1812/13，4月16/20，1993，p.29)：雷洛昔芬，6-羟基-2-(4-羟苯基)-3-[4-(2-哌啶乙氧基)苯甲酰基]苯并(b)噻吩，它模拟了雌激素对骨和脂质的有利作用，但却不象雌激素，对子宫的刺激作用很小。〔Black，L.J.等人，雷洛昔芬(LY139481 Hcl)在卵巢切除的大鼠中防止了骨损失并降低了血清胆固醇而没有引起子宫肥大，临床研究杂志，1994，93：63-69〕。
另外，他莫昔芬，1-(4-β-二甲氨基乙氧苯基)-1，2-二苯基-丁-1-烯，是抗雌激素剂，提出用它作为对乳腺癌具有缓解作用的骨质疏松药，但据报道其在子宫中有一些雌激素活性。Gill-sharma等人在 生殖与生育力杂志(1993) 99，395中公开了200和400mg/kg/天的他莫昔芬使雄性大鼠的体重和第二性器官重量减轻。
另外，美国专利No.5,254,594(其公开内容结合在此作为参考)公开了屈洛昔芬治疗骨疾病包括骨质疏松的用途。
象屈洛昔芬这样的制剂防止了骨损失并由此降低了发生骨折的危险而没有雌激素的副作用。然而，单独的雌激素和雌激素激动剂仅能减少约50％的骨折危险，而剩下的约50％的骨质稀少的妇女仍有骨质疏松性骨折的危险。
还提出用非雌激素激动剂/拮抗剂如双磷酸酯来治疗骨质疏松。例如，Fosamax是目前市售用于治疗骨质疏松的一种双磷酸酯。目前经过管理部门审查的其他双磷酸酯包括：risedronate，tiludronate和ibandronate。
Frost等人在“通过控制粘着骨细胞群来治疗骨质疏松” 临床矫形外科学 及相关研究143，227(1979)中公开了一种理论模型，提出通过先使用骨细胞活化剂，接着再用骨吸收抑制剂而使骨细胞的活化和代谢同步化，由此形成正常骨骼应该是可能的。
Tang等人在成 骨的雌性大鼠骨骼的骨质恢复和维持：1.骨质和结构的 变化，骨矿物研究杂志7(9)，P.1093-1104，1992中公开了关于损失、恢复和维持(LRM)原理的信息，骨质疏松逆转的实施方法。LRM原理是利用合成代谢剂来修复骨质和结构(+期)，然后转换为能维持骨质产生能力的试剂以保持新骨(+/-期)。利用PGE2和risedronate(一种双磷酸酯)研究大鼠，结果表明：由PGE2诱导的大多数新的网状骨质的和皮质的骨在使用risedronate而中止PGE2后可维持至少60天。
联合使用双磷酸酯和前列腺素来治疗骨质疏松也有报导。EP申请No.0381296提出使用一种试剂盒，其中在骨活化期或治疗阶段后再接着进行骨吸收抑制方案。在该参考文献中提到的骨活化化合物的实例包括甲状旁腺激素(PTH)，无机磷酸盐，生长激素，氟化物，甲状腺激素(例如甲状腺素)，某种维生素D代谢物和前列腺素(PGE2的给药方案为10mg/kg/天)。公开了多磷酸酯作为骨吸收抑制剂。
PCT/US93/08529公开了与骨吸收抑制剂化合物化学偶合的骨活化剂(如前列腺素)的同时释放，将骨活化剂选择性地释放到靶区域。随着新化合物的逐渐水解，水解产物能提供骨吸收抑制活性(经双磷酸酯)和骨生长或刺激活性(经PGE2)。
Lin等人研究了前列腺素E2和risedronate(一种双磷酸酯)的联合作用，见 前列腺素E2和risedronate使用在老龄雌性大鼠的网状骨质上的作用，骨15(5)，P489-496，1994。
Qiu等人在 PGE2与维生素E和雌二醇结合进行抗动脉粥样硬化治疗的实验研究，中国医学杂志，108(1)，P33-36，1995中公开了PGE2与维生素E结合以及与雌二醇结合，其比PGE2单剂能更协同地抑制主动脉与冠状动脉粥样硬化损害，以及血小板凝集，平滑肌细胞增殖和类脂的过氧化作用。
“治疗患乳腺癌的年轻妇女的早期绝经的非激素替代法”，国立癌症研究所专论(16)，161-167，1994，摘要中陈述：“已有希望用几种非雌激素方法来预防和治疗骨质疏松。传统的保持骨骼完整(如承重锻炼；富含钙的饮食和限制咖啡因、酒精和蛋白质；避免吸烟；和减少创伤)的方法现已发展到包括药物的使用或研究(单独或结合)。这些药物包括孕酮、维生素D代谢物、可注射和鼻内给药的合成鲑降钙素、双磷酸酯、氟化钠、甲状旁腺激素、生长因子、他莫昔芬等。”
因此尽管已有各种骨质疏松疗法，但由于目前的方法在降低骨质疏松性骨折方面的成功率有限，所以在该技术领域中仍然需要并在继续研究另外的疗法。
                          发明概述
本发明涉及包括雌激素激动剂/拮抗剂和合成代谢剂的药物组合物以及这种组合物用于治疗低骨质症状，包括哺乳动物(例如人，特别是妇女)骨质疏松的用途。
该组合物包含治疗有效量的第一种化合物，所述第一种化合物是雌激素激动剂/拮抗剂；和治疗有效量的第二种化合物，所述第二种化合物是前列腺素或前列腺素激动剂/拮抗剂。
优选的雌激素激动剂/拮抗剂包括屈洛昔芬，雷洛昔芬，他莫昔芬，4-羟基-他莫昔芬，
顺式-6-(4-氟-苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
(-)- 顺式-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
顺式-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
顺式-1-[6′-吡咯烷基乙氧基-3′-吡啶基]-2-苯基-6-羟基-1，2，3，4-四氢化萘；
1-(4′-吡咯烷基乙氧基苯基)-2-(4″-氟苯基)-6-羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉；
顺式-6-(4-羟基苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；和
1-(4′-吡咯烷基乙氧基苯基)-2-苯基-6-羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉。
优选的合成代谢剂包括PGD1，PGD2，PGE2，PGE1，PGF2，PGF2α和3S-(3-羟基-4-苯基-丁基)-2R-[6-(1H-四唑-5-基)-己基]-环戊酮。
本发明的另一方面是治疗哺乳动物低骨质的方法，包含给有低骨质病症的哺乳动物使用：
a.治疗有效量的第一种化合物，所述第一种化合物是雌激素激动剂/拮抗剂；和
b.治疗有效量的第二种化合物，所述第二种化合物是前列腺素或前列腺素激动剂/拮抗剂。
在该方法中优选的雌激素激动剂/拮抗剂包括屈洛昔芬，雷洛昔芬，他莫昔芬，4-羟基-他莫昔芬，
顺式-6-(4-氟-苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
(-)- 顺式-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
顺式-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
顺式-1-[6′-吡咯烷基乙氧基-3′-吡啶基]-2-苯基-6-羟基-1，2，3，4-四氢化萘；
1-(4′-吡咯烷基乙氧基苯基)-2-(4″-氟苯基)-6-羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉；
顺式-6-(4-羟基苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；和
1-(4′-吡咯烷基乙氧基苯基)-2-苯基-6-羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉。
在该方法中优选的合成代谢剂包括PGD1，PGD2，PGE2，PGE1，PGF2，PGF2α和3S-(3-羟基-4-苯基-丁基)-2R-[6-(1H-四唑-5-基)-己基]-环戊酮。
该方法的优选情况是其中所患低骨质病为骨质疏松。
该方法的另一种优选情况是其中第一种化合物和第二种化合物是同时给药的。
也可以在第二种化合物给药之后接着在约3个月到约3年时间内给予第一种化合物，在这约3个月到约3年期间不给第二种化合物。
该方法的另一种优选情况是其中第二种化合物给药时间为约3个月到约3年。
或者，第二种化合物给药后接着在约3年以上的时间内给予第一种化合物，在这约3年以上的期间不给第二种化合物。
本发明的另一方面是有协同作用的药物组合物，它包含以下a、b化合物和药学上可接受的稀释剂或载体，
a.适量的第一种化合物，所述第一种化合物是雌激素激动剂/拮抗剂；和
b.适量的第二种化合物，所述第二种化合物是前列腺素和前列腺素激动剂/拮抗剂
如果同时给药则其中单独的第一种化合物的量和单独的第二种化合物的量是不足以达到增加骨形成和减少骨吸收的治疗作用的，且其中适量的第一种和第二种化合物的联合作用大于单独第一种和第二种化合物的量可达到的治疗作用之和。
本发明的另一方面是治疗哺乳动物低骨质症的有协同作用的方法，包含给予有低骨质症的哺乳动物以下a、b化合物和药学上可接受的稀释剂或载体，
a.适量的第一种化合物，所述第一种化合物是雌激素激动剂/拮抗剂；和
b.适量的第二种化合物，所述第二种化合物是前列腺素和前列腺素激动剂/拮抗剂
如果同时给药则其中单独的第一种化合物的量和单独的第二种化合物的量是不足以达到增加骨形成和减少骨吸收的治疗作用的，且其中适量的第一种和第二种化合物的结合作用大于单独第一种和第二种化合物的量可达到的治疗作用之和。
本发明的另一方面是含有治疗低骨质症用的试剂盒，它包含：
a.在第一种单位剂型中的治疗有效量的雌激素激动剂/拮抗剂和药学上可接受的载体；
b.在第二种单位剂型中的治疗有效量的前列腺素或前列腺素激动剂/拮抗剂和药学上可接受的载体；和
c.用于包含所述第一种和第二种剂型的容器。
本发明的另一方面涉及药物组合物，它包含：
a.治疗有效量的第一种化合物，所述第一种化合物是屈洛昔芬，雷洛昔芬，他莫昔芬或碘昔芬(idoxifene)；和
b.治疗有效量的第二种化合物，所述第二种化合物是氟化钠或N-[1(R)-[1，2-二氢-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺：MK-677。
优选的该组合物是其中第一种化合物为屈洛昔芬。
本发明的另一方面涉及治疗哺乳动物低骨质症的的方法，包含给予有低骨质状况的哺乳动物以下a、b化合物：
a.治疗有效量的第一种化合物，所述第一种化合物是屈洛昔芬，雷洛昔芬，他莫昔芬或碘昔芬(idoxifene)；和
b.治疗有效量的第二种化合物，所述第二种化合物是氟化钠或N-[1(R)-[1，2-二氢-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺：MK-677。
优选的该方法是其中第一种化合物为屈洛昔芬。
该方法的另一种优选情况是其中低骨质症状是骨质疏松。
该方法的另一种优选情况是其中第一种化合物和第二种化合物是同时给药的。
该方法的另一种优选情况是其中第二种化合物给药期约3个月到约3年。
也可以是第二种化合物给药后接着用第一种化合物约3个月到约3年，而在这约3个月到约3年的期间内不用第二种化合物。
另外，第二种化合物给药后接着用第一种化合物约3年以上，而在这约3年以上的期间内不用第二种化合物。
本发明的另一方面是有协同作用的药物组合物，它包含以下a、b化合物和药学上可接受的稀释剂或载体，
a.适量的第一种化合物，所述第一种化合物是屈洛昔芬，雷洛昔芬，他莫昔芬或碘昔芬；和
b.适量的第二种化合物，所述第二种化合物是氟化钠或N-[1(R)-[1，2-二氢-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺：MK-677
如果同时给药则其中单独第一种化合物的量和单独第二种化合物的量是不足以达到增加骨形成和减少骨吸收的治疗作用的，且其中适量的第一种和第二种化合物的联合作用大于单独量的第一种和第二种化合物可达到的治疗作用之和。
该协同组合物的优选情况是其中第一种化合物为屈洛昔芬。
本发明的另一方面是治疗哺乳动物低骨质症的有协同作用的方法，包含给予有低骨质症的哺乳动物以下a、b化合物和药学上可接受的稀释剂和载体，
a.适量的第一种化合物，所述第一种化合物是屈洛昔芬，雷洛昔芬，他莫昔芬或碘昔芬；和
b.适量的第二种化合物，所述第二种化合物是氟化钠或N-[1(R)-[1，2-二氢-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺：MK-677
如果同时给药则其中单独的第一种化合物的量和单独的第二种化合物的量是不足以达到增加骨形成和减少骨吸收的治疗作用的，且其中适量的第一种和第二种化合物的联合作用大于单独量的第一种和第二种化合物可达到的治疗作用之和。
该协同方法的优选情况是其中第一种化合物是屈洛昔芬。
本发明的另一方面是合有治疗低骨质症的试剂盒，它包含：
a.在第一种单位剂型中的治疗有效量的屈洛昔芬，雷洛昔芬，他莫昔芬或碘昔芬和药学上可接受的载体；
b.在第二种单位剂型中的治疗有效量的氟化钠或N-[1(R)-[1，2-二氢-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺：MK-677和药学上可接受的载体；和
c.用于包含所述第一种和第二种剂型的容器。
该试剂盒的优选情况是其中第一种化合物为屈洛昔芬。
本发明的另一方面是药物组合物，它包含：
a.治疗有效量的第一种化合物，所述第一种化合物为
顺式-6-(4-氟-苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
(-)- 顺式-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
顺式-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
顺式-1-[6′-吡咯烷基乙氧基-3′-吡啶基]-2-苯基-6-羟基-1，2，3，4-四氢化萘；
1-(4′-吡咯烷基乙氧基苯基)-2-(4″-氟苯基)-6-羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉；
顺式-6-(4-羟基苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；或
1-(4′-吡咯烷基乙氧基苯基)-2-苯基-6-羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉；和
b.治疗有效量的第二种化合物，所述第二种化合物是氟化钠，甲状旁腺激素，生长激素或生长激素促分泌素。
本发明的另一方面是治疗哺乳动物低骨质症的方法，包含给予有低骨质症的哺乳动物
a.治疗有效量的第一种化合物，所述第一种化合物为
顺式-6(4-氟-苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
(-)- 顺式-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
顺式-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
顺式-1-[6′-吡咯烷基乙氧基-3′-吡啶基]-2-苯基-6-羟基-1，2，3，4-四氢化萘；
1-(4′-吡咯烷基乙氧基苯基)-2-(4″-氟苯基)-6-羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉；
顺式-6-(4-羟基苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；或
1-(4′-吡咯烷基乙氧基苯基)-2-苯基-6-羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉；和
b.治疗有效量的第二种化合物，所述第二种化合物是氟化钠，甲状旁腺激素，生长激素或生长激素促分泌素。
该方法的优选情况是其中低骨质症是骨质疏松。
该方法的另一种优选情况是其中第一种化合物和第二种化合物是同时给药的。
该方法的另一种优选情况是其中第二种化合物给药时间约3个月到约3年。
也可以在第二种化合物给药后接着给予第一种化合物约3个月到约3年，而在这约3个月到约3年的期间不给予第二种化合物。
或者，第二种化合物给药后接着给予第一种化合物约3年以上，而在约3年以上的期间不给予第二种化合物。
本发明的另一方面是有协同作用的药物组合物，它包含以下a、b化合物和药学上可接受的稀释剂和载体，
a.适量的第一种化合物，所述第一种化合物是
顺式-6(4-氟-苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
(-)- 顺式-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
顺式-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
顺式-1-[6′-吡咯烷基乙氧基-3′-吡啶基]-2-苯基-6-羟基-1，2，3，4-四氢化萘；
1-(4′-吡咯烷基乙氧基苯基)-2-(4″-氟苯基)-6-羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉；
顺式-6-(4-羟基苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；或
1-(4′-吡咯烷基乙氧基苯基)-2-苯基-6-羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉；和
b.适量的第二种化合物，所述第二种化合物是氟化钠，甲状旁腺激素，生长激素或生长激素促分泌素
如果同时给药则其中单独的第一种化合物的量和单独的第二种化合物的量是不足以达到增加骨形成和减少骨吸收的治疗作用的，且其中适量的第一种和第二种化合物的联合作用大于单独量的第一种和第二种化合物可达到的治疗作用之和。
本发明的另一方面是治疗哺乳动物低骨质症的的有协同作用的方法，包含给予有低骨质的哺乳动物以下a、b化合物和药学上可接受的稀释剂或载体，
a.适量的第一种化合物，所述第一种化合物是
顺式-6(4-氟-苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
(-)- 顺式-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
顺式-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
顺式-1-[6′-吡咯烷基乙氧基-3′-吡啶基]-2-苯基-6-羟基-1，2，3，4-四氢化萘；
1-(4′-吡咯烷基乙氧基苯基)-2-(4″-氟苯基)-6-羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉；
顺式-6-(4-羟基苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；或
1-(4′-吡咯烷基乙氧基苯基)-2-苯基-6-羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉；和
b.适量的第二种化合物，所述第二种化合物是氟化钠，甲状旁腺激素，生长激素或生长激素促分泌素
如果同时给药则其中单独的第一种化合物的量和单独的第二种化合物的量是不足以达到增加骨形成和减少骨吸收的治疗作用的，且其中适量的第一种和第二种化合物的联合作用大于单独量的第一种和第二种化合物可达到的治疗作用之和。
本发明的另一方面是含有治疗低骨质症的试剂盒，它包含：
a.在第一种单位剂型中的治疗有效量的
顺式-6-(4-氟-苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
(-)-顺式-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
顺式-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
顺式-1-[6′-吡咯烷基乙氧基-3′-吡啶基]-2-苯基-6-羟基-1，2，3，4-四氢化萘；
1-(4′-吡咯烷基乙氧基苯基)-2-(4″-氟苯基)-6-羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉；
顺式-6-(4-羟基苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；或
1-(4′-吡咯烷基乙氧基苯基)-2-苯基-6-羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉和药学上可接受的载体；
b.在第二种单位剂型中的治疗有效量的氟化钠，甲状旁腺激素，生长激素或生长激素促分泌素和药学上可接受的载体；和
c.用于包含所述第一种和第二种剂型的容器。
本发明的另一方面是药物组合物，它包含
a.治疗有效量的第一种化合物，所述第一种化合物是雷洛昔芬，他莫昔芬或碘昔芬，和
b.治疗有效量的第二种化合物，所述第二种化合物是甲状旁腺激素，生长激素或生长激素促分泌素。
本发明的另一方面是有协同作用的组合物和即时进行组合的试剂盒的处理方法。
本领域技术人员将认识到，在本发明中以类似的方式，其他抗吸收剂(双磷酸酯，雌激素，雌二醇，结合雌激素，雌酮，雌三醇或17α-或17β-乙炔基雌二醇)和其他骨合成代谢剂(雄激素，雄激素激动剂/拮抗剂)可以一起使用或与本文中描述的任何试剂一起使用。
例如，抗吸收剂屈洛昔芬可以与单独的骨合成代谢剂如甲状旁腺激素，生长激素或生长激素促分泌素联合。
词组“低骨质症”是指某种疾病，其中骨质的密度低于世界卫生组织“骨折危险的评定及其在绝经后骨质疏松的普查中的应用(1994)，世界卫生组织研究组报告，世界卫生组织技术系列843”中定义的特定年龄正常标准值。还包括儿童期自发的和初期骨质疏松。包括在骨质疏松治疗中的是预防或减弱长期并发症如脊柱弯曲、高度降低，修复外科，和预防前列腺功能障碍。还包括增加骨折愈合速率和提高骨移植的成功率。还包括牙周疾病和牙槽骨损失。
词组“低骨质症”还指哺乳动物中已知发生如上所述的疾病(包括骨质疏松)的机会要显著高于平均值的情况(例如，绝经后的妇女，60岁以上的男子，和用已知会导致骨质疏松副作用的药物(如糖皮质激素)进行治疗的人)。
本领域技术人员将认识到：术语骨质实际上是指每单位面积的骨质，它有时(尽管并不精确)指的是骨矿物质密度。
本文中所用的术语“治疗”包括防止(例如预防)和缓解性治疗。
卤素是指氯、溴、碘或氟。
烷基是指直链或支链饱和烃。这样的烷基的实例(假定指明的长度包括特定实例)是甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，仲丁基，叔丁基，戊基，异戊基，己基和异己基。
烷氧基是指通过氧键合的直链或支链饱和烷基。这样的烷氧基的实例(假定指明的长度包括特定实例)是甲氧基，乙氧基，丙氧基，异丙氧基，丁氧基，异丁氧基，叔丁氧基，戊氧基，异戊氧基，己氧基和异己氧基。
词组“药学上可接受的阴离子盐”是指含有阴离子的无毒的阴离子盐，例如(但不限于)氯化物，溴化物，碘化物，硫酸盐，硫酸氢盐，磷酸盐，乙酸盐，马来酸盐，富马酸盐，草酸盐，乳酸盐，酒石酸盐，柠檬酸盐，葡糖酸盐，甲磺酸盐和4-甲苯-磺酸盐。
词组“药学上可接受的阳离子盐”是指无毒的阳离子盐如(但不限于)钠，钾，钙，镁，铵或质子化苄星(N，N′二苄基-1，2-乙二胺)，胆碱，乙醇胺，二乙醇胺，1，2-乙二胺，meglamine(N-甲基-葡糖胺)，苄胺(N-苄基苯乙胺)，哌嗪或氨丁三醇(2-氨基-2-羟甲基-1，3-丙二醇)。
本文在命名中所用的括号中的负号或正号代表平面方向的极化光是通过特定立体异构体旋转的。
本文中所用的术语“反应惰性溶剂”和“惰性溶剂”是指该溶剂不会与起始物，试剂，中间体或产物以对产物的收率起负作用的方式相互作用。
本领域普通技术人员将认识到：本发明的某些化合物将含有一个或多个原子可以是特定立体化学的或几何构型，从而产生立体异构体和构型异构体。本发明包括所有的这些异构体及其混合物，还包括本发明化合物的水合物
本领域普通技术人员将认识到：本发明中列出的含有杂原子取代基的结合物决定了该化合物在生理学条件下将是不稳定的(例如含有醛或胺键的那些)。因此，这样的化合物不是优选的。
本发明的药物组合物与上述的单独的相同剂量的雌激素激动剂/拮抗剂或上述的单独的刺激骨矿质密度增加的试剂相比，可以更迅速且更高幅度地增加骨质。因此，这些联合药物具有协同作用，可以比单独使用任何一种药剂更大程度地增加骨质和降低骨折率。本发明通过提供能增加和维持骨质的组合物及方法而预防、抑制和/或消退了骨质疏松和相关的骨疾病从而对该领域作出了显著的贡献。
从描述本发明的说明书和权利要求书中将清楚地看出本发明的其他特性及优点。
                          发明详述
本发明的第一种化合物是哺乳动物雌激素激动剂/拮抗剂。任何雌激素激动剂/拮抗剂都可用作本发明的第一种化合物。术语雌激素激动剂/拮抗剂是指与雌激素受体结合、抑制骨转化和阻止骨损失的化合物。这样的活性可由本领域技术人员按照标准测定法包括雌激素受体结合测定法(参见下文中的体外雌激素受体结合测定法)、标准骨组织形态测定法和密度计法(参见下文中的雌激素激动剂/拮抗剂草案，和Eriksen E.F.等人，骨组织形态测定法，Raven Press，纽约，1994，1-74页；Grier S.J.等人，双能X线吸光测定法在动物上的应用，放射学研究，1996，31(1)：50-62；Wahner H.W.和Fogeiman I.，骨质疏松的评定：双能X线吸光测定法的临床实践，MartinDunitz Ltd.，伦敦1994，1-296页)而容易地测定。下面描述和提及了大量这些化合物，不过，其他雌激素激动剂/拮抗剂对本领域技术人员来说将是已知的。
优选的雌激素激动剂/拮抗剂是屈洛昔芬：(酚，3-[1-[4[2-(二甲氨基)乙氧基]苯基]-2-苯基-1-丁烯基]-，(E)-)和相关的化合物，它们公开在美国专利5,047,431中(其公开内容结合在此作为参考)。
另一种优选的雌激素激动剂/拮抗剂是他莫昔芬：(乙胺，2-[-4-(1，2-二苯基-1-丁烯基)苯氧基]-N，N-二甲基，(Z)-2-，2-羟基-1，2，3-三羧酸丙酯(1∶1))和相关化合物，它们公开在美国专利4,536,516中(其公开内容结合在此作为参考)。另一种相关的化合物是美国专利4,623,660(其公开内容结合在此作为参考)中公开的4-羟基他莫昔芬。
另一种优选的雌激素激动剂/拮抗剂是雷洛昔芬：(甲酮，[6-羟基-2-(4-羟基苯基)苯并(b)噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]-，盐酸化物)和相关化合物，它们公开在美国专利4,418,068中(其公开内容结合在此作为参考)。
另一种优选的雌激素激动剂/拮抗剂是托瑞米芬：(乙胺，2-[4-(4-氯-1，2-二苯基-1-丁烯基)苯氧基]-N，N-二甲基，(Z)-，2-羟基-1，2，3-三羧酸丙酯(1∶1))和相关化合物，它们公开在美国专利4,996,225中(其公开内容结合在此作为参考)。
另一种优选的雌激素激动剂/拮抗剂是星克罗曼：1-[2-[[4-(-甲氧基-2，2，二甲基-3-苯基-苯并二氢吡喃-4-基)-苯氧基]-乙基]-吡咯烷，和相关化合物，它们公开在美国专利3,822,287中(其公开内容结合在此作为参考)。
另一种优选的雌激素激动剂/拮抗剂是碘昔芬：吡咯烷，1-[4-[[1-(4-碘苯基)-2-苯基-1-丁烯基]苯氧基]乙基]和相关化合物，它们公开在美国专利4,839,155中(其公开内容结合在此作为参考)。
其他优选的雌激素激动剂/拮抗剂包括下式化合物
Figure C9618005800211
其中：
A选自CH2和NR；
B，D和E独立地选自CH和N；
Y是(a)苯基，可被1-3个各自选自R4的取代基取代或不取代；
(b)萘基，可被1-3个各自选自R4的取代基取代或不取代；
(c)C3-C8环烷基，可被1-2个各自选自R4的取代基取代或不取代；
(d)C3-C8环烯基，可被1-2个各自选自R4的取代基取代或不取代；
(e)五元杂环，含有不超过选自下列成员的两个杂原子：-O-，-NR2-和-S(O)n-，可被1-3个各自选自R4的取代基取代或不取代；
(f)六元杂环，含有不超过选自下列成员的两个杂原子：-O-，-NR2-和-S(O)n-，可被1-3个各自选自R4的取代基取代或不取代；或
(g)双环系统，由五或六元杂环与苯环稠合组成，所述杂环含有不超过选自下列成员的两个杂原子：-O-，-NR2-和-S(O)n-，可被1-3个各自选自R4的取代基取代或不取代；
Z1是(a)-(CH2)pW(CH2)q-；
(b)-O(CH2)pCR5R6-；
(c)-O(CH2)pW(CH2)q；
(d)-OCHR2CHR3-；或
(e)-SCHR2CHR3-；
G是(a)-NR7R8；
其中n为0，1或2；m为1，2或3；Z2为-NH-，-O-，-S-，或
CH2-；可与一个或两个苯环在相邻碳原子上稠合或不稠合，和可各自被1-3个取代基在碳原子上取代或不取代，和可各自被选自R4的化学上合适的取代基在氮原子上取代或不取代；或
(c)含有5-12个碳原子的双环胺，桥连或稠合的，并可被1-3个各自被选自R4的取代基取代或不取代；或者
Z1和G结合可成
W是(a)-CH2-；
(b)-CH＝CH-；
(c)-O-；
(d)-NR2-；
(e)-S(O)n-；
(f)
Figure C9618005800231
(g)-CR2(OH)-；
(h)-CONR2-；
(i)-NR2CO-；
(j) 或者
(k)-C≡C-；
R是氢或C1-C6烷基；
R2和R3各自为
(a)氢；或
(b)C1-C4烷基；
R4是(a)氢；
(b)卤素；
(c)C1-C6烷基；
(d)C1-C4烷氧基；
(e)C1-C4酸基；
(f)C1-C4烷硫基；
(g)C1-C4烷基亚硫酰基；
(h)C1-C4烷基磺酰基；
(i)羟基(C1-C4)烷基；
(j)芳基(C1-C4)烷基；
(k)-CO2H-；
(l)-CH；
(m)-CONHOR-；
(n)-SO2NHR；
(o)-NH2；
(p)C1-C4烷基氨基；
(q)C1-C4二烷基氨基；
(r)-NHSO2R；
(s)-NO2；
(t)芳基；或
(u)-OH；
R5和R6各自为C1-C8烷基或一起形成C3-C10碳环；
R7和R8各自为
(a)苯基；
(b)饱和或不饱和的C3-C10碳环；
(c)含有选自-O-，-N-和-S-的不超过两个杂原子的C3-C10杂环；
(d)H；
(e)C1-C6烷基；或
(f)与R5或R6形成3-8元含氮环；
线性的或者成环的R7和R8可被各自选自C1-C6烷基、卤素、烷氧基、羟基和羧基的最多三个取代基所取代；
由R7和R8形成的环可以稠合或不稠合到苯环上；
e是0，1或2；
m是1，2或3；
n是0，1或2；
p是0，1，2或3；
q是0，1，2或3；
及其光学和几何异构体；和其无毒的药理学上可接受的酸加成盐，N-氧化物，酯和季铵盐。
优选的本发明化合物是
Figure C9618005800241
其中G为
Figure C9618005800251
或 和
R4是H，OH，F或Cl；B和E各自选自CH和N。
特别优选的化合物是：
顺式-6(4-氟-苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
(-)- 顺式-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
顺式-6-苯基-51[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
顺式-1-[6′-吡咯烷基乙氧基-3′-吡啶基]-2-苯基-6-羟基-1，2，3，4-四氢化萘；
1-(4′-吡咯烷基乙氧基苯基)-2-(4″-氟苯基)-6-羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉；
顺式-6-(4-羟基苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；和
1-(4′-吡咯烷基乙氧基苯基)-2-苯基-6-羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉。
上述本发明化合物可以利用下面的流程所说明的反应而容易地制备。
利用重金属催化剂在反应惰性溶剂中进行氢化，可从不饱和的中间体II按常规制得某些式I化合物
Figure C9618005800253
压力和温度不是关键性的，氢化作用一般在几小时内，在室温和20-80psi的氢气压力下完成。
将氢化产物分离，如果需要，进行纯化，用酸性催化剂在反应惰性溶剂中在0℃-100℃(根据所用的酸性催化剂而定)的温度下使醚基裂开。已发现在高温下的溴化氢、在0℃至室温下的三溴化硼和氯化铝对该反应将是有效的。
利用标准方法将产物式I分离并纯化。
美国专利3,274,213；医药化学杂志 10，78(1967)；医药化学杂志 10，138(1967)；和医药化学杂志 12，881(1969)中描述了式II的中间体，其中A为CH2，B、D和E为CH；这些文献公开的内容结合在此作为参考。它们也可以利用下述方法制备。
流程1显示了式I化合物的制备过程，式中e＝1，A＝CH2，Z1＝OCH2CH2，G＝环烷基胺，B＝CH。利用碳酸钾作为碱，在极性非质子传递溶剂如二甲基甲酰胺中，在高的温度下，用相应的N-氯乙胺将4-溴苯酚烷基化制成化合物1-2，其中D和E为CH。优选温度为100℃。利用亲核排代反应在二溴化物(1-1)上合成化合物1-2其中D或E或二者均为N，在相转移条件下利用羟基乙基环烷基胺得到溴胺(1-2)。见“合成”77，573(1980)。接着利用正丁基锂或镁金属进行卤素金属置换，溴胺(1-2)产生相应的锂或镁试剂，它们在低温下优选在氯化铯存在下(没有氯化铯该反应也可进行)与6-甲氧基-1-四氢萘酮反应，酸化完成后得到甲醇(1-3)或苯乙烯(1-4)。用溴化剂如过溴化溴化吡啶鎓处理甲醇(1-3)或苯乙烯(1-4)得到溴代苯乙烯(1-5)。芳基或杂芳基氯化锌或芳基或杂芳基硼酸与溴化物(1-5)在钯金属催化剂如如四重三苯基膦钯(0)存在下反应得到二芳基苯乙烯(1-6)。[纯化学和应用化学 63，419(1991)和日本化学会通报 61，3008-3010(1988)]。为了制备优选的化合物，在该反应中使用取代的苯基氯化锌或取代的苯基硼酸。相应的锂试剂用无水氯化锌淬冷制备该芳基氯化锌。芳基硼酸不是商业上可获得的，是通过用硼酸三烷基酯，优选硼酸三甲酯或硼酸三异丙基酯淬冷相应的芳基锂试剂，接着用无水酸处理可制得。见斯堪的纳维亚化学学报 47，221-230(1993)。商业上不能获得的锂试剂可通过相应的溴化物或卤化物与正丁基或叔丁基锂进行卤素金属置换而制得。或者，锂试剂可利用“有机反应”27卷第1章中描述的杂原子促进的锂化作用制得。1-6在活性炭上的氢氧化钯存在下的催化氢化，例如，可得到相应的二氢甲氧基中间体，然后利用三溴化硼在0℃下在二氯甲烷中或者48％溴化氢在乙酸中在80-100℃下进行脱甲基作用得到目标结构的化合物(1-7)。这些化合物是外消旋的并可经高压液相色谱利用填充手性固定相的柱子如Chiralcel OD柱而拆分成对映体。另一方面，光学拆分可利用与光学纯酸形成的非对映体盐如1，1′-二萘基-2，2′-二基磷酸氢盐的重结晶来进行。
用碱处理可将 顺式化合物(1-7)异构化为 反式化合物。
如流程1所述，当D和/或E为氮时，中间体(式II)和式I化合物可从相应的二卤代吡啶或嘧啶制得。
其中e＝l，A＝CH2，Z1＝OCH2CH2，G＝吡咯烷，D，E，B＝CH，Y＝Ph的式I化合物的甲基醚也可利用萘福昔定(Upjohn & Co.，700 Portage Road，Kalamazoo，MI 49001)在反应惰性溶剂中在重金属催化剂存在下的氢化作用的第一步而常规地制得。压力和温度不是关键性的；该反应一般在乙醇中在室温下在50psi下进行约20小时。
第二步是甲氧基的裂解，这是在室温下用酸性催化剂如三溴化硼在反应惰性溶剂中，或者在80-100℃下用溴化氢在乙酸中完成的。然后用常规方法将产物分离，如果需要，则转化为酸式盐。
流程1
其中B为氮原子的式1化合物是通过流程2和3说明的方法制备的。
流程2显示了B＝N的式1化合物的合成。芳酰氯(2-1)用伯胺处理得到芳基仲酰胺(2-2)，继而被溶于醚溶剂的氢化锂铝还原得到叔胺(2-3)。随后(2-3)与芳酰氯进行乙酰化反应产生叔胺(2-4)，其在热磷酰氯中环化产生二氢异喹啉鎓盐(2-5)。被硼氢化钠还原为烷氧基四氢异喹啉，接着在二氯甲烷中经三溴化硼脱甲基得到预期结构的化合物。
流程2
Figure C9618005800291
流程3也描述了B＝N的式1化合物的合成。仲胺(3-1)与苄氧芳酰氯(3-2)的乙酰化得到叔酰胺(3-3)，其在热磷酰氯中环化产生二氢异喹啉盐(3-4)。(3-4)经硼氢化钠还原，并经含水盐酸脱苄基得到异喹啉(3-5)。(3-5)与适宜的氯化物官能团进行烷化反应，并经三溴化硼脱甲基得到预期结构的化合物。
流程3
Figure C9618005800301
美国专利4,133,814公开了其他雌激素激动剂/拮抗剂(其公开内容结合在此作为参考)。美国专利4,133,814公开了2-苯基-3-芳酰-苯并噻吩和2-苯基-3-芳酰苯并噻吩-1-氧化物的衍生物。
Lednicer等人在 医药化学杂志12，881(1969)中公开了下述结构的雌激素拮抗剂
Figure C9618005800311
其中R2为苯基或环戊基，R3为H、
Figure C9618005800312
或-CH2CHOHCH2OH。
美国专利3,234,090(其公开内容结合在此作为参考)公开了下式所示的雌激素激动剂/拮抗剂
Figure C9618005800313
其中Ph为1，2-亚苯基，Ar为被叔氨基低级烷氧基取代的单碳环芳基，其中叔氨基与氧原子之间至少间隔两个碳原子，R为氢、脂族基、碳环芳基、碳环芳基-脂族基、杂环芳基或杂环芳基-脂族基，式-(CnH2n-2)-基团代表不分支的具有3至5个碳原子的亚烷基并带有基团Ar和R，其盐，氮氧化物，氮氧化物盐或季铵盐化合物，以及制备这些化合物的方法。
美国专利3,277,106(其公开内容结合在此作为参考)公开了具有下式结构的具有雌激素激动剂/拮抗剂作用的碱式醚
Figure C9618005800321
其中Ph为1，2-亚苯基，Ar为被至少一个氨基-低级烷基-氧基取代的单环芳基，其中氮原子与氧原子之间至少间隔两个碳原子，R为芳基，-(CnH2n-2)-片段代表低级亚烷基，它与Ph结合形成一个六元或七元环，其中的两个环碳原子带有基团Ar和R，其盐，氮氧化物，氮氧化物盐和季铵盐化合物。
美国专利3,274,213(其公开内容结合在此作为参考)公开了具有下式结构的雌激素激动剂/拮抗剂化合物
Figure C9618005800322
其中R1、R2选自低级烷基和相互连接形成五至七元饱和杂环的低级烷基。
本发明的第二种化合物可以是以下所述的能将骨质浓度增加到骨折阈值以上的任一化合物(见发表于世界卫生组织主办的《世界卫生组织研究》上的世界卫生组织研究组的报告：“骨折危险的评定及其在绝经后骨质疏松症普查中的应用(1994)，世界卫生组织技术系列843”)。
任何前列腺素或前列腺素激动剂/拮抗剂均可用作本发明的第二种化合物。本领域技术人员将认识到：还可以使用氟化钠、甲状旁腺激素(PTH)、甲状旁腺激素的活性片段、生长激素或生长激素促分泌素。下文中将更详细地举例描述本发明的第二种化合物。
任何前列腺素均可用作本发明的第二种化合物。前列腺素这一术语指用于治疗骨质疏松的天然前列腺素PGD1、PGD2、PGE2、PGE1和PGF2α的类似化合物。这些化合物与前列腺素受体结合。本领域技术人员可以按标准测定法(如An S.等人前列腺素E2人受体EP2亚型的克隆和表达，生物化学和生物物理研究通讯，1993，197(1)：263-270)容易地测定这种结合。
前列腺素是与母体化合物前列腺烷酸相关的脂环化合物。从羧基碳开始，经戊环至相邻侧链末端碳原子连续计算前列腺素母体的碳原子数。通常相邻侧链具有反式结构。在环戊基部分的C-9有一含氧基团，是E型前列腺素的特征，而PGE2在C13-C14具有反式不饱和双键，并在C5-C6具有顺式双键。
以下描述并提到了大量前列腺素，而其他一些也是本领域技术人员已知的。在两篇美国专利4,171,331和3,927,197(其公开内容结合于此作为参考)中举例公开了一些前列腺素。
Norrdin等人的 体内骨骼中前列腺素的作用，前列腺素白细胞三烯基本的脂肪酸41，139-150，1990，是一篇关于骨骼中活性前列腺素的综述。
任何前列腺素激动剂/拮抗剂均可用作本发明的第二种化合物。术语前列腺素激动剂/拮抗剂是指这样的一些化合物，它们与前列腺素受体结合(如AnS.等人，前列腺素E2人受体EP2亚型的克隆和表达，生物化学和生物物理研究通讯，1993，197(1)：263-270)并具有体内前列腺素的类似作用(如刺激骨骼形成和增加骨质)。这些作用是本领域技术人员可以按标准测定法(如参照下文中记载的合成代谢剂草案，和Eriksen E.F.等人，骨组织形态学测定，Raven Press New York，1994，pages 1-74；Grier S.J.等人.，动物的双能量X-射线吸光测定法，放射学研究，1996，31(1)：50-62；Wahner H.W.和FogelmanI.，骨质疏松的测定：双能量X-射线吸光测定法的临床实践.，Martin Dunitz Ltd.，伦敦1994，1-296页)容易测定的。以下记载并提出了许多此类化合物，而其他一些前列腺素激动剂/拮抗剂也是本领域技术人员已知的。以下记载了前列腺素激动剂/拮抗剂的例子。
共同转让的(Commonly assigned)美国专利3,932,389(其公开内容结合在此作为参考)公开了具有骨形成活性的2-脱羧基-2-(四唑-5-基)-11-脱氧-15-取代-ω-戊醇前列腺素。
共同转让的美国专利4,018,892(其公开内容结合在此作为参考)公开了具有骨形成活性的16-芳基-13，14-二氢-PEG2对-双苯基酯。
共同转让的美国专利4,219,483(其公开内容结合在此作为参考)公开了具有骨形成活性的2，3，6-取代-4-吡喃酮，
共同转让的美国专利4,132,847(其公开内容结合在此作为参考)公开了具有骨形成活性的2，3，6-取代-4-吡喃酮。
美国专利4,000,309(其公开内容结合在此作为参考)公开了具有骨形成活性的16-芳基-13，14-二氢-PEG2对-双苯基酯。
美国专利3,982,016(其公开内容结合在此作为参考)公开了具有骨形成活性的16-芳基-13，14-二氢-PEG2对-双苯基酯。
美国专利4,621,100(其公开内容结合在此作为参考)公开了具有骨形成活性的取代环戊烷。
美国专利5,216,183(其公开内容结合在此作为参考)公开了具有骨形成活性的取代环戊烷。
氟化钠可用作本发明的第二种化合物。术语氟化钠是指所有形式的氟化钠(如缓释氟化钠，持续释放的氟化钠)。美国专利4,904,478公开了持续释放的氟化钠，其公开内容结合在此作为参考。本领域技术人员按生物学方法(如参照下文中记载的合成代谢剂草案，和Eriksen E.F.等人，骨组织形态学测定法，Raven Press New York，1994，pages 1-74；Grier S.J.等人.，动物的双能量X-射线吸光测定法，放射学研究，1996，31(1)：50-62；Wahner H.W.和Fogelman I.，骨质疏松的测定：临床双能量X-射线吸光测定法.，Martin DunitzLtd.，伦敦1994，1-296页)可容易地测定氟化钠的活性。
任何甲状旁腺激素(PTH)均可作为本发明的第二种化合物。术语甲状旁腺激素指可以促进骨形成和增加骨质的甲状旁腺激素、甲状旁腺激素的片段或代谢物，及其结构类似物。本领域技术人员按标准测定法(如参照下文中记载的合成代谢剂草案，和Eriksen E.F.等人.，骨组织形态学测定法，RavenPress New York，1994，pages 1-74；Grier S.J.等人.，动物的双能量X-射线吸光测定法，放射学研究，1996，31(1)：50-62；Wahner H.W.和Fogelman I.，骨质疏松的测定：临床双能量X-射线吸光测定法.，Martin Dunitz Ltd.，伦敦1994，1-296页)可以容易地测定其功能活性。以下记载并提出了大量此类化合物，而其他一些甲状旁腺激素也是本领域技术人员已知的。以下的参考文献公开了甲状旁腺激素的例子。
“脊椎骨质疏松的人甲状旁腺肽疗法”国际骨质疏松杂志(增刊1)：199-203。
“与激素替代疗法联合的骨质疏松症的甲状旁腺激素1-34治疗：生物化学，动力学和组织应答”国际骨质疏松杂志1：162-170。
任何生长激素或生长激素促分泌素均可作为本发明的第二种化合物。术语生长激素促分泌素是指促进生长激素释放或模拟生长激素的作用(如促进骨形成以增加骨质)的化合物。本领域技术人员可以按标准测定法(如下文中描述的)快速地测定这些作用。下述公开的PCT申请WO95/14666、WO95/13069、WO94/19367、WO94/13696、WO95/34311中包括大量此类化合物。其他生长激素或生长激素促分泌素对于本领域的技术人员也将是已知的。
特别优选的生长激素促分泌素是N-[1(R)-[1，2-二氢-1-甲磺酰螺[3H-吲哚-3，4’-哌啶]-1’-基)羰基]-2-(甲氧苯基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺：MK-677。
其他优选的生长激素促分泌素包括：
2-氨基-N-[2-(3a-(R)-苄基-2-甲基-3-氧-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并-[4，3-c]吡啶-5-基)-1-(R)-苄氧甲基-2-氧-乙基]-异丁酰胺或其L-酒石酸盐。
2-氨基-N-[1-(R)-苄氧基甲基-2[3a-(R)-(4-氟代苄基)-2-甲基-3-氧-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并-[4，3-c]吡啶-5-基]-2-氧-乙基]-异丁酰胺，和
2-氨基-N-[2-(3a-(R)-苄基-3-氧-2，3，3a，4，6，7-六氢-吡唑并-[4，3-c]吡啶-5-基)-1-(R)-苄氧甲基-2-氧-乙基]-异丁酰胺。
一般说来，本发明化合物可以通过包括化学领域已知方法制得，尤其按照在此所述的方法。
一些用于制备本发明化合物的制备方法需要外界官能度的保护(如伯胺、仲胺、羧基)。对于这样的保护需要根据外界官能度的性质和该制备方法的条件而定。本领域技术人员可容易地测定这种保护是否需要。这些保护/去保护方法的应用是本领域技术人员已知的。对于保护基及其用途的描述，参见T.W.Greene， 有机合成中的保护基，John Wiley & Sons，New York，1991。
本发明化合物的起始物和试剂是容易得到的，或可以通过本领域技术人员使用常规的有机合成法合成。如，这里所用的许多化合物涉及天然存在的化合物或从它们衍生而来。这些天然化合物具有很高的科学价值和经济价值，因此许多这些化合物可以从商业上得到或在文献中有记载，或从其他商业上可得到的物质利用文献记载的方法容易制得。这样的化合物包括前列腺素。
本发明的一些化合物含有不对称碳原子，因此分为对映体或非对映体。非对映体混合物可以按其物理化学方面的差异通过已知方法分离成各自的非对映体。例如，通过色谱法和/或分步结晶。对映体的分离可以通过将该对映异构体混合物与适宜的光学活性化合物(如醇)反应使之转化为非对映异构体，分离非对映异构体，并将各自的非对映异构体转化(如水解)成相应的纯对映异构体，由此而分离开。所有这些异构体包括非对映异构体、对映异构体及其混合物部属于本发明的一部分。
虽然本发明的许多化合物在生理条件下不会电离，然而有一些在生理条件下是可以电离的。因此，例如本发明的一些化合物是酸性的，它们与药学上可接受的阳离子形成盐。所有这样的盐都属于本发明的范围，它们可用常规方法制备。如，可以将酸、碱物质按化学计量配比简单地混合而制备，可以在水、非水介质中或部分含水的介质中制备。所得的盐的回收或者可以经过滤、用非溶剂沉淀、再过滤、蒸发除去溶剂，或者在水溶液中冷冻干燥而分离。
另外，本发明的一些化合物是碱性的，它们可以与药学上可接受的阴离子形成盐。所有这些盐均在本发明的范围内，可以通过常规方法分离。如，可以将酸、碱物质按化学计量配比简单地混合而制备，可以在水中、非水介质中或部分含水的介质中制备。所得的盐的回收或者可以经过滤、用非溶剂沉淀、再过滤、蒸发除去溶剂、或在水溶液中冷冻干燥而分离。
另外，当本发明的化合物形成水合物或溶剂化物时，仍属于本发明的范围。
本发明的药物组合物和方法均可作为治疗剂用于激活哺乳动物尤其是人的骨质更新、阻止骨吸收、或促进骨形成。由于这些功能与骨质疏松及和骨有关的疾病的发展密切相关，因此这些组合物凭其对骨的这种作用可防止、抑制、减缓或逆转骨质疏松。
本发明化合物作为医药在治疗哺乳动物(如人，尤其是妇女)低骨质(如骨质疏松)疾病方面的实用性，已在以下所述的常规测定和体外、体内测定(化合和连续处理方案；雌激素激动剂/拮抗剂方案；合成代谢剂剂方案；体外雌激素受体结合测定；和生长激素/生长激素促分泌素方案)的活性得到证实。这些检验方法也提供了一种方法用以进行本发明化合物之间的活性及与其他已知化合物活性的比较。这些比较结果用于确定治疗这些疾病时哺乳动物，包括人的使用剂量浓度。
                         联合和相继治疗方案
本领域的技术人员可以对下述方案进行改动。如，可以使用完整的雄性或雌性大鼠，性激素缺乏雄性(去睾丸)或雌性(去卵巢)大鼠。另外，在本研究中可以使用不同年龄的雄性或雌性大鼠(如12月龄)。既可以是完整大鼠，也可以是去生殖腺大鼠(去除睾丸或卵巢)，在一定期间内(如两周至两个月)给予不同剂量(如1、3或6mg/kg/天)的合成代谢剂如前列腺素E2，然后在一定期间内(如两周至两个月)给予不同剂量(如1、5、10mg/kg/天)的抗吸收剂如屈洛昔芬，或在一定期间内(如两周至两个月)用不同剂量的合成代谢剂和抗吸收剂联合治疗。对于去生殖腺大鼠，可以在手术后次日开始治疗(为防止骨损失的目的)或在已发生骨损失后进行治疗(为恢复骨质的目的)。
以下方案使用PGE2作为骨合成代谢剂，屈洛昔芬作为抗吸收剂，不过在本方案中也可以使用其他合成代谢剂和抗吸收剂。
104只12月龄的Sprague-Dawiey雌性大鼠(Charles River，Wilmington，MA)在0月进行假性手术或卵巢切除术(OVX)。术后3个月，OVX大鼠接受已知的骨合成代谢剂PGE2，剂量为3mg/kg/天(皮下注射)，或者3mg/kg/天PGE2(皮下注射)与10mg/kg/天(口服)的屈洛昔芬(DRO)联合给药两个月。随后停止PGE2治疗，这些大鼠用屈洛昔芬(10mg/kg/天，口服)或赋形剂(10％醇的盐水溶液)按下述方案继续治疗1.5月。
组I：8只大鼠在0月时剖检作为基准对照，
组II：8只假性手术大鼠在3个月时剖检作为治疗前对照
组III：8只假性手术大鼠在3-5个月口服赋形剂(10％醇的盐水溶液)，在5个月时剖检，
组IV：8只假性手术大鼠在3-65个月口服赋形剂(10％醇的盐水溶液)，在6.5个月时剖检，
组V：8只OVX大鼠在3个月时剖检作为治疗前对照，
组VI：8只OVX大鼠在3-5个月口服赋形剂(10％醇的盐水溶液)，在5个月时剖检，
组VII：8只OVX大鼠在3-6.5个月口服赋形剂(10％醇的盐水溶液)，在6.5个月时剖检，
组VIII：8只OVX大鼠在3-5个月皮下注射3mg/kg/天PGE2，在5个月时剖检，
组IX：8只OVX大鼠在3-5个月皮下注射3mg/kg/天PGE2，在5-6.5个月口服赋形剂(10％醇的盐水溶液)，在6.5个月时剖检，
组X：8只OVX大鼠在3-5个月皮下注射3mg/kg/天PGE2，在5-6.5个月口服屈洛昔芬(DRO)10mg/kg/天，在6.5个月时剖检，
组XI：8只OVX大鼠在3-5个月皮下注射3mg/kg/天PGE2，并口服屈洛昔芬(DRO)10mg/kg/天，在5个月时剖检，
组XII：8只OVX大鼠在3-5个月皮下注射3mg/kg/天PGE2，并口服屈洛昔芬(DRO)10mg/kg/天，在5-6.5个月口服赋形剂，在6.5个月时剖检，
组XIII：从第3个月到第5个月，给八只OVX大鼠皮下注射3mg/kg/天的PGE2并口服10mg/kg/天的DRO，从第5个月到第6.5个月，单独使用DRO，然后在第6.5个月进行剖检。
无论PGE2(Cayman Chemical Co.，Ann Arbor，MI)还是屈洛昔芬(PfizerInc.Groton，CT)粉末都首先溶解在100％乙醇中，进而用盐水稀释到所需浓度(乙醇终浓度为10％)。PGE溶液每日在背部皮下注射1ml/kg，屈洛昔芬溶液每日口服1ml/只(鼠)。在处死前12天和2天时给所有的鼠皮下注射10mg/kg的钙黄绿素(荧光骨标记物，Sigma Chemical Co.St.Louis MO)，以检测骨组织的动态学变化。
这些鼠在氯胺酮麻醉下处死，测定以下终点数据：
股骨矿物测定：在尸解时取出每只鼠的右股骨并用装备有“局部高分辨率扫描”软件(Hologic Inc.，Whltham，MA)的双能量X-射线吸光测定仪(DXA，QDR1000/W，Hologic Inc.，Whltham，MA)进行扫描。扫描面积为5.08×1.902cm，分辨率为0.0254×0.0127cm，扫描速度为7.25mm/秒。分析股骨扫描图象，测定整个股骨(WF)的骨面积、骨矿物含量(BMC)和骨矿物密度(BMD)、末梢股骨干骺端(DFM)、股骨体(FS)和近端股骨(PF)。
腰椎骨矿物测定：用装有“局部高分辨率扫描”软件(Hologic Inc.，Whltham，MA)的双能量X-射线吸光测定法(DXA，QDR 1000/W，Hologic Inc.，Whltham，MA)测定麻醉鼠的整个腰部脊柱和六根腰椎骨(LV1-6)中每一根的骨面积、骨矿物含量(BMC)和骨矿物密度(BMD)。(腹腔)注射1ml/kg氯胺酮/甲苯噻嗪(比率为4∶3)的混合液将鼠麻醉，然后将其放在实验台上。扫描面积是6×1.9cm，分辨率为0.0254×0.0127cm，扫描速率为7.25mm/秒。得到了整个腰部脊柱的图象并加以分析。测定整个腰部脊柱和六根腰椎骨(LV1-6)中每一根的骨面积(BA)、骨矿物含量(BMC)并计算出骨矿物密度(BMC除以BA)。
近端胫骨干骺端网状骨质骨的组织形态学分析：在尸体解剖时取出右胫骨，分离肌肉并切成3部分。将近端胫骨置于70％乙醇中，在梯度浓度的乙醇中脱水，在丙酮中脱脂，然后嵌入甲基丙烯酸甲酯(Eastman Organic Chemicals，Rochester，NY)。用Reichert-Jung Polycut S切片机切下厚度为4和10μm的近端胫骨干骺端的前部分。用每只鼠的一个4μm和一个10μm的切片进行网状骨质骨的组织形态学分析。4μm的切片被改进的Masson‘sTrichrome染剂染色，而10μm的切片未染色。
利用生物定量OS/2组织形态学测定系统(R&Mbiometrics，Inc，Nashville，TN)进行生长板一骨骺接合处远端1.2-3.6mm间的近端胫骨干骺端的次生松质的静态和动态学组织形态测定。胫骨干骺端区的前1.2mm需要去除以限定测量在次生松质中进行。利用4μm切片测定与骨骼体积、骨结构和骨吸收有关的指数，而10μm的切片用于测定与骨形成和骨更新有关的指数。
I.与小梁骨体积和结构有关的测量和计算：
1.干骺端总面积(TV，mm2)：生长点一骨骺接合处远端1.2-3.6mm间的干骺端面积。
2.小梁骨面积(BV，mm2)：TV中小梁总面积。
3.小梁骨周长(BS，mm)：小梁总周长的长度。
4.小梁骨体积(BV/TV，％)：BV/TV×100
5.小梁骨数(TBN，#/mm)：1.199/2×BS/TV
6.小梁骨厚度(TBT，μm)：(2000/1.199)×(BV/BS)
7.小梁骨分离度(TBS，μm)：(2000/1.199)×(TV-BV)
II.骨吸收的测量和计算：
1.破骨细胞数(OCN，#)：总干骺端面积内的破骨细胞总数。
2.破骨细胞周长(OCP，mm)：被破骨细胞覆盖的小梁骨周长的长度。
3.破骨细胞数/mm(OCN/mm，#/mm)：OCN/BS。
4.破骨细胞周长百分数(％OCP，％)：OCP/BS×100，
III骨形成和骨更新的测量和计算：
1.单钙黄绿素标记的周长(SLS，mm)：以一个钙黄绿素标记物标记的骨小梁周长的总长度。
2.双钙黄绿素标记的周长(DLS，mm)：以两个钙黄绿素标记物标记的骨小梁周长的总长度。
3.内标宽度(ILW，μm)：两个钙黄绿素标记物之间的平均距离。
4.矿化周长百分率(PMS，％)：(SLS/2+DLS)/BS×100
5.矿物聚集率(MAR，μm/day)：ILW/标记物间隔
6.骨形成率/重新形成的骨表面(BFR/BS，μm2/d/μm)：(SLS/2+DLS)×MAR/BS
7.骨更新率(BTR，％/y)：(SLS/2+DLS)×MAR/BV×100
统计学处理
可以使用统计检验4.0方案(StatView4.0 package)(曲线原理，Int.，Berkeley，CA)进行统计计算。可以采用方差分析(ANOVA)及Fisher’sPLSD进行组间差异的比较。
                  雌激素激动剂/拮抗剂方案
雌激素激动剂/拮抗剂是一组抑制骨更新并防止雌激素缺乏引起的骨损失的化合物。去卵巢大鼠骨损失模型已经广泛用作为绝经后骨损失模型。使用这种模型，可以测试雌激素激动剂/拮抗剂化合物在防止骨损失和促进骨吸收方面的功效。
在研究中使用不同龄的(如5月龄)Sprague-Dawley雌性大鼠(CharlesRiver，Wilmington，MA)。在实验过程中大鼠分别置于20cm×32cm×20cm鼠笼中。所有大鼠可自由进食水和含有0.97％Ca、0.85％P和1.05IU/g维生素D3的商品饲料丸(Agway Prolab 3000，Agway CountyFood，Int.，Syracuse，NY)。
一组大鼠(8-10)进行假手术，并口服赋形剂(10％乙醇和90％盐水，1ml/天)，其他大鼠切除双侧卵巢(OVX)，并给予赋形剂(口服)，17β-雌二醇(Sigma，E-8876，E2，30μg/kg，每日皮下注射)，或雌激素激动剂/拮抗剂(如屈洛昔芬，5、10或20mg/kg，，每日口服)一定时间(如4周)。所有大鼠在处死前12天和2天皮下注射10mg/kg钙黄绿素(荧光骨标记物)以测定骨组织中的动态变化。治疗4周后，尸解大鼠。测定以下终点值：
体重增加：尸解时体重减去手术时体重。
子宫重量和组织形态：尸解时摘除大鼠子宫，立即称重。随后对子宫进行组织形态学测定，如子宫横切面组织面积、子宫基质厚度、子宫腔上皮厚度。
总血清胆甾醇：心脏穿刺得到血液并使之在4℃凝固，在2000g条件下离心10分钟。采用高效胆甾醇热量计测定法(Boehringer Mannheim生物化学，Indianapolis，IN.)分析血清样品中的总血清胆固醇。
股骨中矿物质测定：在尸解时取下每只大鼠的右股骨，采用安装有“局部高清晰度扫描”软件(Hologic Inc.，Waltham，MA)的双能量X-射线吸光测定法(DEXA，QDR1000/W，Hologic Inc.，Waltham，MA)扫描。扫描面积为5.08×1.902cm，分辨率为0.0254×0.0127cm，扫描速度为7.25mm/秒。分析股骨扫描影像，测定整个股骨的骨面积、骨矿物质含量、骨矿物质密度、远端骨干骺端、股骨体、和近端股骨。
近端胫骨干骺端网状骨质的骨组织形态测定：尸解时取下每只大鼠的右胫骨，除去肌肉，切成3段。近端胫骨在70％乙醇中固定，在梯度浓度的乙醇中脱水，在丙酮中脱脂，在甲基丙烯酸甲酯中包埋(Eastman有机化学，Rochester，NY)。使用Reichert Jung Polycut组织切片术切取近端胫骨干骺端的前部4和10μm厚度的部分。每只大鼠4μm和10μm的切片用于网状骨质的骨组织形态测定。4μm的切片用改良的Masson’s Trichrome染色法染色，10μm的部分不染色。
生物定量的OS/2组织形态测定系统(R & Mbiometrics，Inc.，Nashville，TN)用于近端胫骨干骺端1.2和3.6mm远端至生长点-骨骺接合处的次生骨松质的组织形态测定。忽略胫骨干骺端的前1.2mm以将测定范围限定在次生骨松质处。4μm切片用于测定骨体积、骨结构、骨吸收，10μm切片用于测定骨形成和骨更新。
I.骨小梁体积和结构的测定和计算
1.干骺端的总面积(TV，mm2)：生长点-骨骺接合处远端1.2和3.6mm之间的干骺端面积
2.小梁骨面积(BV，mm2)：TV中骨小梁的总面积
3.小梁骨周长(BS，mm)：骨小梁的总周长
4.小梁骨体积(BV/TV，％)：BV/TV×100
5.小梁骨数(TBN，#/mm)：1.199/2×BS/TV
6.小梁骨厚度(TBT，μm)：(2000/1199)×(BV/BS)
7.小梁骨分离度(TBS，μm)：(2000×1.199)×(TV-BV)
II.骨吸收的测定和计算
I.破骨细胞数(OCN，#)：干骺端总面积中破骨细胞总数
2.破骨细胞周长(OCP，mm)：被破骨细胞覆盖的骨小梁周长的长度
3.破骨细胞数/mm(OCN/mm，#/mm)：OCN/BS
4.破骨细胞周长百分比(％OCP，％)：OCP/BS×100
III.骨形成和骨更新的测定和计算
1.单钙黄绿素标记的周长(SLS，mm)：以一个钙黄绿素标记物标记的骨小梁周长的总长度。
2.双钙黄绿素标记的周长(DLS，mm)：以两个钙黄绿素标记物标记的骨小梁周长的总长度。
3.内标宽度(ILW，μm)：两个钙黄绿素标记物之间的距离。
4.矿化周长百分率(PMS，％)：(SLS/2+DLS)/BS×100
5.矿化聚集率(MAR，μm/day)：ILW/标记物间隔
6.骨形成率/重新形成的骨表面(BFR/BS，μm2/d/μm)：(SLS/2+DLS)×MAR/BS
7.骨更新率(BTR，％/y)：(SLS/2+DLS)×MAR/BV×100
统计学处理
可以使用统计检验4.0方案(StatView4.0 package)(曲线原理，Int.，Berkeley，CA)进行统计计算。可以采用方差分析(ANOVA)及Fisher’sPLSD进行组间差异的比较。
                       合成代谢剂方案
骨合成代谢剂在促进骨形成和增加骨质方面的活性可以用完整的雄性或雌性大鼠、性激素缺乏雄性大鼠(去睾丸)或性激素缺乏雌性大鼠(去卵巢)进行测试。
在研究中使用不同年龄的(如3月龄)雄性或雌性大鼠。可以是完整大鼠或去生殖腺大鼠(切除睾丸或卵巢)。皮下注射或口服不同剂量的(1、3、6mg/kg/天)如前列腺素E2(PGE2)等合成代谢剂一定时间(如2周至两个月)。去生殖腺大鼠在术后第二天开始治疗(为防止骨损失的目的)或在已发生骨损失后(为恢复骨质的目的)进行治疗。实验过程中所有大鼠可自由进食水和含有1.46％Ca、0.99％P和4.96IU/g维生素D3的商品饲料丸(Teklad Rodent Diet8064，Harlan Teklad，Madison，WI)。所有大鼠在处死前12天和2天时皮下注射10mg/kg钙黄绿素(荧光骨标记物)。
处死大鼠。测定以下结果：
股骨中矿物质测定：在尸解时取下每只大鼠的右股骨，采用安装有“局部高清晰度扫描”软件(Hologic Inc.，Waltham，MA)的双能量X-射线吸光测定法(DEXA，QDR1000/W，Hologic Inc.，Waltham，MA)扫描。扫描面积为5.08×1.902cm，分辨率为0.0254×0.0127cm，扫描速度为7.25mm/秒。分析股骨扫描影像，测定整个股骨的骨面积、骨矿物质含量(BMC)、骨矿物质密度(BMD)、远端股骨干骺端(DFM)，股骨体(FS)、和近端股骨(PF)。
近端胫骨干骺端网状骨质的骨组织形态测定：尸解时取下每只大鼠的右胫骨，除去肌肉，切成3段。近端胫骨在70％乙醇中固定，在梯度浓度的乙醇中脱水，在丙酮中脱脂，在甲基丙烯酸甲酯中包埋(Eastman有机化学，Rochester，NY)。使用Reichert Jung Polycut组织切片术切取近端胫骨干骺端的前部4和10μm厚度的部分。每只大鼠4μm和10μm的切片用于网状骨质的骨组织形态测定。4μm的切片用改良的Masson’s Trichrome染色法染色，10μm的切片不染色。
生物定量OS/2组织形态测定系统(T& M biometrics，Inc.，Nashville，TN)用于近端胫骨干骺端1.2和3.6mm远端至生长点-骨骺接合处的次生骨松质的组织形态测定。忽略胫骨干骺端的前1.2mm以将测定范围限定在次生骨松质处。4μm切片用于测定骨体积、骨结构、骨吸收，10μm切片用于测定骨形成和骨更新。
I.骨小梁体积和结构的测定和计算
1.干骺端的总面积(TV，mm2)：生长点-骨骺接合处远端1.2和3.6mm之间的干骺端面积
2.小梁骨面积(BV，mm2)：TV中骨小梁的总面积
3.小梁骨周长(BS，mm)：骨小梁的总周长
4.小梁骨体积(BV/TV，％)：BV/TV×100
5.小梁骨数(TBN，#/mm)：1.199/2×BS/TV
6.小梁骨厚度(TBT，μm)：(2000/1.199)×(BV/BS)
7.小梁骨分离度(TBS，μm)：(2000×1.199)×(TV-BV)
II.骨吸收的测定和计算
1.破骨细胞数(OCN，#)：干骺端总面积中破骨细胞总数
2.破骨细胞周长(OCP，mm)：被破骨细胞覆盖的骨小梁周长的长度
3.破骨细胞数/mm(OCN/mm，#/mm)：OCN/BS
4.破骨细胞周长百分比(％OCP，％)：OCP/BS×100
III.骨形成和骨更新的测定和计算
1.单钙黄绿素标记的周长(SLS，mm)：以一个钙黄绿素标记物标记的骨小梁周长的总长度。
2.双钙黄绿素标记的周长(DLS，mm)：以两个钙黄绿素标记物标记的骨小梁周长的总长度。
3.内标宽度(ILW，μm)：两个钙黄绿素标记物之间的距离。
4.矿化周长百分率(PMS，％)：(SLS/2+DLS)/BS×100
5.矿物聚集率(MAR，μm/day)：ILW/标记物间隔
6.骨形成率/重新形成的骨表面(BFR/BS，μm2/d/μm)：(SLS/2+DLS)×MAR/BS
7.骨更新率(BTR，％/y)：(SLS/2+DLS)×MAR/BV×100
统计学处理
可以使用统计检验4.0方案(StatView4.0 package)(曲线原理，Int.，Berkeley，CA)进行统计计算。可以采用方差分析(ANOVA)及Fisher’sPLSD进行组间差异的比较。
                   体外雌激素受体结合测定
体外雌激素受体结合测定，是测定本发明的雌激素激动剂/拮抗剂化合物从由酵母重组细胞法得到的人雌二醇受体取代[3H]-雌二醇的能力，用于测定本发明的化合物与雌激素受体的结合亲和力。用于此测定的物质为：(1)测定缓冲液，TD-0.3(含有10Mn Tris，pH7.6，0.3M氯化钾和5mM二硫苏糖醇(DTT)(Sigma Co.)，pH7.6)，(2)所用的放射配体为从New England Nuclear得到的[3H]-雌二醇；(3)所用的冷配体为从Sigma得到的雌二醇；(4)重组人雌二醇受体，hER。
测试化合物的溶液的制备：在TD-0.3中加入4％DMSO和16％乙醇。将氚化雌二醇溶于TD-0.3，使测定中终浓度为5nM。以TD-0.3稀释hER，使每个测定槽中还含有4-10μg总蛋白。使用微量滴定盘，每个培养槽有50ul冷雌二醇(非特异结合)或化合物溶液，20ul氚化雌二醇和30ulhER溶液。每盘含有一式三份的总结合和不同浓度的化合物。这些盘在4℃培养过夜。然后加入在10mM tris，pH7.6中的100mL3％氢氧化磷灰石并混合以终止结合反应，在4℃孵化15分钟。该混合物离心，颗粒用10mM Tris，pH7.6中的1％Tritonx100洗涤4次，将氢氧化磷灰石颗粒悬浮于Ecoscint A中，用β-闪烁法测定放射活性。测定所有一式三份数据点的均值(每分钟计数，cpm’s)。从总结合cpm’s(定义为反应混合物分离后仅含有重组受体、放射配体的剩余数)减去非特异结合cpm’s(定义为反应混合物分离后含有重组受体，放射配体和过量的未标记配体的剩余数)计算出特异性结合。利用IC50测定(抑制50％总特异氚化雌二醇结合所需的化合物浓度)来测定化合物效价。测定不同浓度化合物的特异结合，并计算总特异放射配体偶合的特异结合百分数。将数据作图，成为化合物抑制百分率(线性比例)与化合物浓度(log比例)的函数。
                     生长激素素/生长激素促分泌素方案
用下述方案鉴定能够刺激大鼠垂体的培养细胞分泌GH的化合物。此实验也用于与标准物对比以确定剂量水平。从6周大的雄性大鼠的垂体分离细胞。断头后，分离垂体前叶置于冷的无菌的、不含钙或镁的Hank’s平衡盐溶液(HBSS)中。将组织精细研碎，将其加入到使用10U/mL溶于HBSS液的生物蛋白(EC3.4.24.4，Sigma P-6141)的两个机械助动酶促分散循环中。组织一酶混合物在旋转烧瓶中在5％CO2分压条件下，在约37℃以30rpm转速搅拌约30分钟，在约15分钟和约30分钟后使用一支10mL移液管手动研磨。此混合物在200×g离心5分钟。在上清液中加入马血清以中和过量的蛋白酶。将颗粒重新悬浮在新鲜蛋白酶中，在前述条件下搅拌30分钟以上，然后手动研磨，最后使之通过一23-计量针。再次加入马血清，将从两次消化物得到的细胞合并，颗粒化(200×g约5分钟)，清洗，重新悬浮在培养基中并计数。将细胞在48-孔Costar平皿中以每平方厘米6.0-6.5×104个细胞排列，补充4.5g/L葡萄糖、10％马血清、2.5％胎牛血清、1％非必需氨基酸、100U/mL制霉菌素和50mg/mL硫酸庆大霉素，在dulbecco’s改进的Eagle培养基(D-MEM)中培养3至4天，然后测定GH分泌。
测定之前，冲洗培养槽两次，然后在释放培养基(用25mMHepes缓冲的D-MEM，pH7.4含有37℃的0.5％牛血清白蛋白)中平衡30分钟。将受试化合物溶于DMSO，然后稀释到预热的释放培养基中。每个试样测定4份。在每个培养槽中加入0.5ml释放培养基(有赋形剂或受试化合物)开始测定。在37℃培养15分钟，然后除去培养培养基以终止此过程，在2000×g离心约15分钟除去微孔材料。以采用大鼠生长激素参比制剂(NIDDK-rGH-RP-2)和从Dr.A.Parlow(Harbor-UCLA Medical Center，Torrence，CA)得到的猴中培养(NIDDK-anti-rGH-S-5)的大鼠生长激素抗血清的标准放射免疫测定法测定上清液中的大鼠生长激素浓度。用氯胺T法将另外的生长激素1.5U/mg，#G2414，Scripps Labs，San Diego，CA)碘化，使之产生大约30μCi/μg的特异活性作为示踪物。在猴IgG(Organon Teknika，Durham，NC)中加入山羊抗血清，并加入聚乙二醇MW10,000-20,000至终浓度为4.3％，得到免疫复合物，离心回收。此测定法的操作范围为在基准之上每管0.08-2.5μg大鼠生长激素。活性化合物以高于1.4倍的能力特异地刺激生长激素释放。参考文献：Cheng，K.，Chan，W.-S.，Barreto，jr.，a.，convey，e.m.，Smith，R.G.1989。
大鼠静脉注射测试化合物后外源性刺激生长激素释放的测定
在进行化合物测试之前约1周让21日龄的Sprague-Dawley雌性大鼠(Charles River Laboratory，Wilmington，MA)逐步适应局部自然栖息的饲养条件(24℃，12小时光，12小时黑暗循环)。所有的大鼠都可随意地饮用水和商品食物丸(Agway Country Food，Syracuse NY)。
实验当天，将测试化合物溶于含有1％乙醇，1mM乙酸和0.1％牛血清白蛋白的盐水液的赋型剂中。每种化合物测试时n＝3。将大鼠称重并经腹腔注射戊巴比妥钠(戊巴比妥，50mg/kg体重)进行麻醉。麻醉后第14分钟从尾尖切口采集血样并使血液滴入微量离心管中(基准血样，约100μl)。麻醉后第15分钟，通过静脉注射将测试化合物释放到尾静脉中，总注射量为1ml/kg体重。另外在化合物给药后第5，10和15分钟时从尾部采集血样。血样保存在冰上直到通过离心(1430×g，10分钟，在10℃下)进行血清分离。该血清储存于-80℃下直到利用上述和下述的放射免疫测定法进行血清生长激素测定。
狗口服给药后外源性刺激生长激素释放的评定
实验当天，称取合适剂量的测试化合物并将其溶于水中。在每种给药方案情况下，通过管饲法给4只狗0.5ml/kg量的测试化合物。给药后第0.08，0.17，0.25，0.5，0.75，1，2，4，6和8小时，利用2ml含有肝素锂的采样器(vacutainer)通过直接静脉穿刺预剂量从颈静脉采集血样(2ml)。制得的血浆储存于-20℃下直到进行分析测定。
犬生长激素的测定
利用从Dr.A.Parlow(Harbor-UCLA Medical Center，Torrence，CA)得到的犬生长激素(用于碘化作用的抗原和参考制剂AFP-1983B)和在猴子中培养的犬生长激素抗血清(AFP-21452578)通过标准放射免疫测定方案来测定犬生长激素的浓度。将犬生长激素进行氯胺T碘化到特定活性20-40μCi/μg而制备示踪物。将山羊抗血清加入到加有聚乙二醇，MW10,000-20,000的猴IgG(Organon Teknika，Durham，NC)中到终浓度为4.3％而得到免疫复合物；通过离心完成回收。该测定的操作范围是0.08-2.5μg犬GH/管。
本发明化合物可以经将本发明化合物系统性和/或局部释放的任何方法给药。这些方法包括口服途径，胃肠外，十二指肠内途径等。一般来说，本发明化合物是口服给药，不过，例如当口服给药对直接目标是不合适的或者当患者不能消化药物时，也可通过胃肠外给药(例如静脉，肌内，皮下或髓内)。本发明的两种不同的化合物可以同时给药或者以任何顺序连续给药，或者用包含在药学上可接受的载体中的上述第一种化合物和上述第二种化合物的单一药物组合物给药。
例如，骨合成代谢剂可以单独使用或与抗吸收剂结合使用3个月到3年，之后单独使用抗吸收剂3个月到3年，任意地重复整个治疗周期。另一方面，例如，骨合成代谢剂可以单独使用或与抗吸收剂结合使用3个月到3年，之后在患者的剩余生命期间单独使用抗吸收剂。例如，在优选的一个给药方式中，可以每天给予一次上述的第二种化合物(例如PGE2)，上述第一种化合物(例如雌激素激动剂/拮抗剂)可以单剂量或多剂量每日给药。另外，例如，在另一个优选的给药方式中，两种化合物可以顺序给药，其中上述第二种化合物(例如PGE2)可以每日给药一次，持续足以将骨质浓度增加到骨折阈以上的时间(世界卫生组织研究“骨折危险的评定及其在绝经后骨质疏松症普查中的应用(1994)。世界卫生组织研究组报告。世界卫生组织技术系列843”)，接着再以单剂量或多剂量每日给予上述的第一种化合物(例如雌激素激动剂/拮抗剂)。优选上述第二种化合物(例如PGE2)以迅速释放方式如口服每日给药一次(例如，优选避免使用持续释放方式)。
当然，在任何情况下给药化合物的量和时间将根据所治疗的主体，疾病的严重程度，给药方式和处方医师的判断来确定。因此，由于患者与患者间的变异性，下面所给出的剂量是一个准则，医师可以调整药物的剂量以达到医师认为对具体患者来说合适的活性(例如骨质增加)。在考虑预期的活性程度时，医师必须平衡各种因素如骨质起始浓度，患者的年龄，事先存在的疾病，以及存在的其他疾病(例如心血管病)。例如，雌激素激动剂/拮抗剂的给药可能提供心血管益处，特别是对绝经后妇女。下文中给出了本发明各种成分的优选剂量范围。
抗吸收剂的使用量是通过其作为骨损失抑制剂的活性而确定的。用个体化合物药物动力学方法测定其活性，用前述方法(雌激素激动剂/拮抗剂方案)测定它抑制骨损失的最小和最大有效剂量。
一般地，本发明活性物质的有效剂量，如本发明第一种化合物的骨吸收活性的有效剂量在0.01-200mg/kg/天，优选在0.5-100mg/kg/天。
尤其，屈洛昔芬的有效剂量在0.1-40mg/kg/天，优选在0.1-5mg/kg/天。
尤其，雷洛昔芬的有效剂量在0.1-100mg/kg/天，优选在0.1-10mg/kg/天。
尤其，他莫昔芬的有效剂量在0.1-100mg/kg/天，优选在0.1-5mg/kg/天。
尤其，以下化合物有效剂量在0.0001-100mg/kg/天，优选在0.001-10mg/kg/天：
顺式-6(4-氟-苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
(-)- 顺式-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
顺式-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
顺式-1-[6′-吡咯烷基乙氧基-3′-吡啶基]-2-苯基-6-羟基-1，2，3，4-四氢化萘；
1-(4′-吡咯烷基乙氧基苯基)-2-(4″-氟苯基)-6-羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉；
顺式-6-(4-羟基苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；或
1-(4′-吡咯烷基乙氧基苯基)-2-苯基-6-羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉。
尤其，4-羟基他莫昔芬的有效剂量在0.0001-100mg/kg/天，优选在0.001-10mg/kg/天。
一般说来应使用足以将骨质浓度增加到骨折阈值(如前述世界卫生组织研究中详细记载的)以上的量的骨合成代谢剂(如PGE2)。
一般地，上述骨合成代谢剂的有效剂量为0.001-100mg/kg/天，优选为0.1-10mg/kg/天。
尤其，PGE2的有效剂量在0.001-10mg/kg/天，优选在0.01-1mg/kg/天。
尤其，3S-(3-羟基-4-苯基-丁基)-2R-[6-(2H-四唑-5-基)-己基]-环戊酮的有效剂量在0.001-20mg/kg/天，优选在0.01-10mg/kg/天。
尤其，氧化钠的有效剂量在0.01-50mg/kg/天，优选在0.2-10mg/kg/天。
尤其，甲状旁腺激素及其代谢物和片段的有效剂量在0.00001-1mg/kg/天，优选在0.001-0.5mg/kg/天。
尤其，生长激素或生长激素促分泌素的有效剂量在0.0001-100mg/kg/天，优选在0.01-5mg/kg/天。
本发明化合物一般以药物组合物的形式给药，这些药物组合物含有至少一种本发明的化合物及药学可接受的赋形剂和稀释剂。因此本发明的化合物可以以惯用的口服、胃肠外或经皮剂型单独或联合给药。
口服的药物组合物可以是溶液剂、片剂、丸剂、胶囊剂、粉剂及类似剂型。含有柠檬酸钠、碳酸钙、磷酸钙等赋形剂的片剂可同时使用各种崩解剂，如淀粉，优选马铃薯淀粉或木薯淀粉，还含有一些复合硅酸盐，及黏合剂如聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、明胶、阿拉伯胶。另外，制备片剂还经常使用硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石。软胶囊和硬胶囊也使用类似的固体物质作为填充剂；在这方面优选的物质还包括乳糖及高分子量的聚乙二醇。口服剂型采用水性悬浮剂和/或酏剂时，本发明的化合物可以与各种甜味剂、调味剂、着色剂、乳化剂和/或悬浮剂，及如水、乙醇、丙二醇、丙三醇等稀释剂配伍，或采用各种类似的配伍。
采用胃肠外给药时，可以使用麻油或花生油或水溶性丙二醇溶液，及相应的水溶性盐的无菌水溶液。如果必要，可以以缓冲液调节这些水溶液，液体稀释剂首先以充足的盐或葡萄糖调节等渗透压。这些水溶液尤其适于静脉内、肌内、皮下、腹膜内注射给药。在这方面，可以通过本领域技术人员已知的规范的技术快速得到所需的无菌水性介质。
经皮给药(表面的)时，制备成水溶性或部分水溶性(经常约0.1％-5％浓度)的无菌稀释剂，及与以上胃肠外溶液类似的制剂。
对本领域技术人员而言，用一定量的活性成分制备各种药物组合物的方法是已知的，或参照本申请公开的内容后是显而易见的。例如，参见Remington’s药物学，Mark出版公司，Easter，Pa.，15th Edition(1975)。
本发明的药物组合物可以含有0.1％-95％本发明的化合物，优选在1％-70％。在任何情况下，所用组合物或剂型所含本发明化合物的量将有效地治疗受治对象的疾病/状况。
因为本发明涉及使用可以分别给药的活性成分联合治疗使骨质增长并得以保持，本发明也涉及以试剂盒形式将独立的药物成分结合。此试剂盒包括两个独立的药物成分：雌激素激动剂/拮抗剂和合成代谢剂。此试剂盒包括盛有单独的药物成分的容器，如分隔的瓶或箔质小包。一般地，此试剂盒有服用各独立药物成分的说明。在各成分优选以不同剂型(如口服和胃肠外服用)服用，按不同的剂量间隔服用，或处方医师决定调整组合物各个成分的用量时，此试剂盒尤其便利。
此试剂盒的一个例子是所谓的囊状包装。囊状包装对于包装工业是熟知的，并正在广泛用于药物单剂量剂型(片剂、胶囊及类似剂型)包装。囊状包装一般含有一个相对刚性材料制成的片，此片优选被透明的塑料材料薄膜覆盖。在包装工艺中，在塑料薄膜上形成凹陷。此凹陷具有将被包装的片剂或胶囊的形状和体积。然后，将片剂或胶囊置于凹陷中，将相对的刚性材料制成的片密封在塑料薄膜与形成的凹陷相反的表面。结果，片剂或胶囊剂被密封在塑料薄膜与刚性片之间的凹陷中。片的强度优选在这样的程度：手对片施加压力，在片与凹陷对应的位置形成开口，使片剂和胶囊从囊状包装中脱离。然后片剂或胶囊可以经此开口取出。
优选在刻度板上提供一个记忆装置，如在片剂或胶囊旁有依照每日治疗方案片剂或胶囊应摄入的量。另一记忆装置的例子是在刻度板上印有日历，如“第一周，星期一，星期二，等…第二周，星期一，星期二……”。其他记忆装置是显而易见的。“每日剂量”可以是在一天服用的单片剂或胶囊，或一些丸剂或胶囊。骨合成代谢剂的每日剂量可以含有一个片或胶囊，同时抗吸收剂可以含有多片或胶囊。记忆装置将反映这些内容。
本发明另一具体的实施方案中，调剂师设计按药物所提供的使用方法在同一时间发放每日剂量。优选的，此发放装置安装有记忆装置，以促使进一步符合治疗方案。此记忆装置的一个例子是显示已被发放的每日剂量数量的机械计数器。此记忆装置的另一个例子是电池供能的连接有液晶显示器或听力信号提示器的微型芯片记忆器，它可以读出上次服用的剂量和/或提醒病人何时服用下一剂量。
                           实施例
104只12月龄的Sprague-Dawiey雌性大鼠(Charles River，Wilmington，MA)在0月进行假性手术或去卵巢手术(OVX)。术后3个月，OVX大鼠接受已知骨代谢同化剂PGE2，剂量为3mg/kg/天(皮下注射)，或用3mg/kg/天PGE2(皮下注射)与屈洛昔芬(DRO)10mg/kg/天(口服)联合治疗两个月。随后去除PGE2治疗，以屈洛昔芬(10mg/kg/天，口服)或赋形剂(10％醇的盐水溶液)按下述方案继续治疗1.5月。
组I：8只大鼠在0月时尸解作为基准对照，
组II：8只假性手术大鼠在3个月时尸解作为治疗前对照
组III：8只假性手术大鼠在3-5个月口服赋形剂(10％醇的盐水溶液)，在5个月时尸解，
组IV：8只假性手术大鼠在3-6.5个月口服赋形剂(10％醇的盐水溶液)，在6.5个月时尸解，
组V：8只OVX大鼠在3个月时尸解作为治疗前对照
组VI：8只OVX大鼠在3-5个月口服赋形剂(10％醇的盐水溶液)，在5个月时尸解，
组VII：8只OVX大鼠在3-6.5个月口服赋形剂(10％醇的盐水溶液)，在6.5个月时尸解，
组VIII：8只OVX大鼠在3-5个月皮下注射3mg/kg/天PGE2，在5个月时尸解，
组IX：8只OVX大鼠在3-5个月皮下注射3mg/kg/天PGE2，在5-6.5个月口服赋形剂(10％醇的盐水溶液)，在6.5个月时尸解，
组X：8只OVX大鼠在3-5个月皮下注射3mg/kg/天PGE2，在5-6.5个月口服屈洛昔芬(DRO)10mg/kg/天，在6.5个月时尸解，
组XI：8只OVX大鼠在3-5个月皮下注射3mg/kg/天PGE2，并口服屈洛昔芬(DRO)10mg/kg/天，在5个月时尸解，
组XII：8只OVX大鼠在3-5个月皮下注射3mg/kg/天PGE2，并口服屈洛昔芬(DRO)10mg/kg/天，在5-6.5个月口服赋形剂，在6.5个月时尸解，
组XIII：从第3个月到第5个月，给八只OVX大鼠皮下注射3mg/kg/天的PGE2和口服10mg/kg/天的DRO，从第5个月到第6.5个月，单独使用DRO，然后在第6.5个月进行尸解。
无论PGE2(Cayman Chemical Co.，Ann Arbor，MI)还是屈洛昔芬(PfizerInc.Groton，CT)粉末都首先溶解在100％乙醇中，进而用盐水稀释到所需浓度(乙醇终浓度为10％)。PGE溶液每日在背部皮下注射1ml/kg，屈洛昔芬溶液每日口服1ml/只(鼠)。
腰椎骨矿物测定：用装有“局部高分辨率扫描”软件(Hologic Inc.，Whltham，MA)的双能量X-射线吸光测定法(QDR 1000/W，Hologic Inc.，Whltham，MA)测定麻醉鼠的整个腰部脊柱和六根腰椎骨(LVI-6)中每一根的骨面积、骨矿物含量(BMC)和骨矿物密度(BMD)。(腹腔)注射1ml/kg氯胺酮/甲苯噻嗪(比率为4∶3)的混合液将鼠麻醉，然后将其放在实验台上。扫描面积是6×1.9cm，分辨率为0.0254×0.0127cm，扫描速率为7.25mm/秒。得到了整个腰部脊柱的图象并加以分析。测定整个腰部脊柱和六根腰椎骨(LV1-6)中每一根的骨面积(BA)、骨矿物含量(BMC)并计算出骨矿物密度(BMC除以BA)。
在术后3、5或6.5月，与阴性对照组比较，OVX大鼠整个腰部脊柱和腰椎骨的BMC和BMD明显降低15％到27％。OVX术后3个月单独施以PGE2或联合施以DRO 2个月的大鼠，BMC和BMD完全恢复到阴性对照组水平。单独施以PGE2与联合施以PGE2和DRO的去卵巢大鼠的BMC和BMD没有差异，提示DRO不会抑制PGE2的同化作用。停止PGE2治疗，可以观察到LV1、LV2、LV3的BMD和LV2D的BMC的明显降低。另一方面，OVX大鼠停用PGE2后施以DRO时，完全保持PGE2对骨的恢复作用。类似地，停用PGE2和DRO 1.5个月，这些OVX大鼠不会发现腰部脊柱的骨损失。我们得出结论，抗吸收剂DRO不会抑制PGE2对于成骨大鼠的同化作用。进一步，DRO在停用PGE2后可以有效地保持PGE2对骨的恢复作用。这些数据支持使用合成代谢剂恢复骨质疏松骨骼的骨质，并随后使用抗吸收剂保持骨质恢复。
应认识到本发明并不局限于本文中特别提到的实施方式，一些变化和改进不会脱离以下权利要求定义的新概念的实质和范围。

Claims (31)

1.一种药物组合物，它包含
a.治疗有效量的第一种化合物，所述第一种化合物是雌激素激动剂/拮抗剂，选自屈洛昔芬，雷洛昔芬，他莫昔芬，4-羟基-他莫昔芬，
顺式-6-(4-氟-苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
(-)- 顺式-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
顺式-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
顺式-1-[6′-吡咯烷基乙氧基-3′-吡啶基]-2-苯基-6-羟基-1，2，3，4-四氢化萘；
1-(4′-吡咯烷基乙氧基苯基)-2-(4″-氟苯基)-6-羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉；
顺式-6-(4-羟基苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；或
1-(4′-吡咯烷基乙氧基苯基)-2-苯基-6-羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉，
b.治疗有效量的第二种化合物，所述第二种化合物是前列腺素或前列腺素激动剂/拮抗剂。
2.如权利要求1所述的药物组合物，它还包含药物载体。
3.按照权利要求2的药物组合物，其中第二种化合物是PGD1，PGD2，PGE2，PGE1，PGF2，PGF2α和3S-(3-羟基-4-苯基-丁基)-2R-[6-(1H-四唑-5-基)-己基]-环戊酮。
4.如权利要求3所述的药物组合物，其中雌激素激动剂/拮抗剂是屈洛昔芬。
5.按照权利要求4的药物组合物，其中第二种化合物是PGE2。
6.按照权利要求4的药物组合物，其中第二种化合物是3S-(3-羟基-4-苯基-丁基)-2R-[6-(2H-四唑-5-基)-己基]-环戊酮。
7.按照权利要求3的药物组合物，其中雌激素激动剂/拮抗剂是
顺式-6-(4-氟-苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
(-)- 顺式-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
顺式-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
顺式-1-[6′-吡咯烷基乙氧基-3′-吡啶基]-2-苯基-6-羟基-1，2，3，4-四氢化萘；
1-(4′-吡咯烷基乙氧基苯基)-2-(4″-氟苯基)-6-羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉；
顺式-6-(4-羟基苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；或
1-(4′-吡咯烷基乙氧基苯基)-2-苯基-6-羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉。
8.按照权利要求7的药物组合物，其中第二种化合物是PGE2。
9.按照权利要求7的药物组合物，其中第二种化合物是3S-(3-羟基-4-苯基-丁基)-2R-[6-(2H-四唑-5-基)-己基]-环戊酮。
10.以下a、b两种化合物在制备用于治疗哺乳动物低骨质症的药物中的用途，
a.第一种化合物是雌激素激动剂/拮抗剂，选自屈洛昔芬，雷洛昔芬，他莫昔芬，4-羟基-他莫昔芬，碘昔芬，星克罗曼，
顺式-6-(4-氟-苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
(-)- 顺式-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
顺式-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
顺式-1-[6′-吡咯烷基乙氧基-3′-吡啶基]-2-苯基-6-羟基-1，2，3，4-四氢化萘；
1-(4′-吡咯烷基乙氧基苯基)-2-(4″-氟苯基)-6-羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉；
顺式-6-(4-羟基苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；或
1-(4′-吡咯烷基乙氧基苯基)-2-苯基-6-羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉，
b.第二种化合物是前列腺素或前列腺素激动剂/拮抗剂。
11.如权利要求10所述的用途，其中第二种化合物是PGD1，PGD2，PGE2，PGE1，PGF2，PGF2α和3S-(3-羟基-4-苯基-丁基)-2R-[6-(1H-四唑-5-基)-己基]-环戊酮。
12.如权利要求11所述的用途，其中雌激素激动剂/拮抗剂是屈洛昔芬。
13.如权利要求12所述的用途，其中第二种化合物是PGE2。
14.如权利要求12所述的用途，其中第二种化合物是3S-(3-羟基-4-苯基-丁基)-2R-[6-(1H-四唑-5-基)-己基]-环戊酮。
15.如权利要求12所述的用途，其中低骨质症状是骨质疏松。
16.如权利要求11所述的用途，其中雌激素激动剂/拮抗剂是
顺式-6-(4-氟-苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
(-)- 顺式-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
顺式-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
顺式-1-[6′-吡咯烷基乙氧基-3′-吡啶基]-2-苯基-6-羟基-1，2，3，4-四氢化萘；
1-(4′-吡咯烷基乙氧基苯基)-2-(4″-氟苯基)-6-羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉；
顺式-6-(4-羟基苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；或
1-(4′-吡咯烷基乙氧基苯基)-2-苯基-6-羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉。
17.如权利要求16所述的用途，其中第二种化合物是PGE2。
18.如权利要求16所述的用途，其中第二种化合物是3S-(3-羟基-4-苯基-丁基)-2R-[6-(1H-四唑-5-基)-己基]-环戊酮。
19.如权利要求16所述的用途，其中低骨质症状是骨质疏松。
20.如权利要求12所述的用途，其中第一种化合物和第二种化合物是同时给药的。
21.如权利要求12所述的用途，其中第二种化合物给药期3个月到3年。
22.如权利要求21所述的用途，接着再给予第一种化合物3个月到3年，在这3个月到3年的期间内不给予第二种化合物。
23.如权利要求21所述的用途，接着再给予第一种化合物3年以上，在这3年以上的期间内不给予第二种化合物。
24.如权利要求16所述的用途，其中第一种化合物和第二种化合物是同时给药的。
25.如权利要求16所述的用途，其中第二种化合物给药期3个月到3年。
26.如权利要求25所述的用途，接着再给予第一种化合物3个月到3年，在这3个月到3年的期间内不给予第二种化合物。
27.如权利要求25所述的用途，接着再给予第一种化合物3年以上，在这3年以上的期间内不给予第二种化合物。
28.权利要求1的药物组合物在制备用于治疗哺乳动物的低骨质症的药物中用途。
29.一种药物组合物，它包含以下a、b化合物和药学上可接受的稀释剂或载体：
a.适量的第一种化合物，所述第一种化合物是雌激素激动剂/拮抗剂，选自屈洛昔芬，雷洛昔芬，他莫昔芬，4-羟基-他莫昔芬，碘昔芬，星克罗曼，
顺式-6-(4-氟-苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
(-)- 顺式-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
顺式-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
顺式-1-[6′-吡咯烷基乙氧基-3′-吡啶基]-2-苯基-6-羟基-1，2，3，4-四氢化萘；
1-(4′-吡咯烷基乙氧基苯基)-2-(4″-氟苯基)-6-羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉；
顺式-6-(4-羟基苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；或
1-(4′-吡咯烷基乙氧基苯基)-2-苯基-6-羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉，
b.适量的第二种化合物，所述第二种化合物是前列腺素或前列腺素激动剂/拮抗剂，
如果同时给药则其中单独的第一种化合物的量和单独的第二种化合物的量是不足以达到增加骨形成和减少骨吸收的治疗作用的，且其中适量的第一种和第二种化合物的结合作用大于单独量的第一种和第二种化合物可达到的治疗作用之和。
30.以下a、b化合物在制备用于治疗哺乳动物的低骨质症状的药物中用途，
a.第一种化合物是雌激素激动剂/拮抗剂，选自屈洛昔芬，雷洛昔芬，他莫昔芬，4-羟基-他莫昔芬，碘昔芬，星克罗曼，
顺式-6-(4-氟-苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
(-)- 顺式-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
顺式-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
顺式-1-[6′-吡咯烷基乙氧基-3′-吡啶基]-2-苯基-6-羟基-1，2，3，4-四氢化萘；
1-(4′-吡咯烷基乙氧基苯基)-2-(4″-氟苯基)-6-羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉；
顺式-6-(4-羟基苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；或
1-(4′-吡咯烷基乙氧基苯基)-2-苯基-6-羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉，
b.第二种化合物是前列腺素或前列腺素激动剂/拮抗剂
如果同时给药则其中单独的第一种化合物的量和单独的第二种化合物的量是不足以达到增加骨形成和减少骨吸收的治疗作用的，且其中适量的第一种和第二种化合物的结合作用大于单独量的第一种和第二种化合物可达到的治疗作用之和。
31.含有治疗低骨质症状的试剂盒，它包含：
a.治疗有效量的第一种化合物，所述第一种化合物是雌激素激动剂/拮抗剂，选自屈洛昔芬，雷洛昔芬，他莫昔芬，4-羟基-他莫昔芬，碘昔芬，星克罗曼，
顺式-6-(4-氟-苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
(-)- 顺式-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
顺式-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；
顺式-1-[6′-吡咯烷基乙氧基-3′-吡啶基]-2-苯基-6-羟基-1，2，3，4-四氢化萘；
1-(4′-吡咯烷基乙氧基苯基)-2-(4″-氟苯基)-6-羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉；
顺式-6-(4-羟基苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢化萘-2-醇；或
1-(4′-吡咯烷基乙氧基苯基)-2-苯基-6-羟基-1，2，3，4-四氢异喹啉，
b.治疗有效量的第二种化合物，所述第二种化合物是前列腺素或前列腺素激动剂/拮抗剂；和
c.用于包含所述第一种和第二种剂型的容器。
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