SK118398A3

SK118398A3 - Pharmaceutical composition, a combination of active substances combination therapy for osteoporosis

Info

Publication number: SK118398A3
Application number: SK1183-98A
Authority: SK
Inventors: Hua Zhu Ke; David Thompson
Original assignee: Pfizer
Priority date: 1996-02-28
Filing date: 1996-12-23
Publication date: 2000-07-11
Also published as: HK1018210A1; NO20063853L; CZ297452B6; ATE405273T1; PT883404E; PL187219B1; SI0883404T1; HRP970118A2; IL154379A0; CN1515317A; BG102726A; EP1236475A2; EP1932543A3; CL2004000119A1; PE20011302A1; EP0883404A1; AR005987A1; CO4761063A1; AP9700934A0; US20010009920A1

Description

Oblasť techniky

Vynález sa týka farmaceutickej kompozície agonlstov/antagonlstov estrogénu _: a činidiel, ktoré stimulujú tvorbu kosti a zvyšujú kostnú hmotu. Ďalej sa vynález týka kltov zahrnujúcich také kombinácie a použitie týchto kombinácii na liečenie stavov, ktoré sa prejavujú nízkou kostnou hmotou u cicavcov, vrátane človeka.

Dotera iSí stav techniky

Osteoporúza Je systemická kostrová choroba, pre ktorú Jc charakteristická nízka kostná hmota a zhoršovanie kostného tkaniva, čoho dOsledkom Je zvýšenie krehkosti kostí a náchylnosť k zlomeninám. V USA táto choroba postihuje viac ako 25 miliéruiv ľudí a vyvoláva každý rok viac ako 13 milióna zlomenín zahrnujúcich 500 000 zlomenín chrbtice, 250 000 zlomenín bedier a 240 000 zlomenín zápästia. Najvážnejšie sú zlomeniny bedier-, keďže 5 až 20 X pacientov s týmito chorobami umiera do Jedného roka a viac ako 50 X preživších zostáva invalidnými.

Starší ľudia sú vystavení najväčšiemu riziku osteoporózy a predpokladá sa, že sa tento problém bude významne zväčšovať so starnutím populácie. Odhaduje sa. Že vo svetovom rozmere dOJde počas nasledujúcich 60 rokov k strojnásobeniu počtu zlomenín a podľa jednej štúdie má dOJsť roku 2050 vo svete celkovo k 4,5 i , » miliónu zlomenín bedier. ' ₍

Ženy sú ohrozené osteoporózou viac ako muži. U žien dochádza k významnému urýchleniu straty kostnej hmoty bezprostredne po menopauze. Z Iných faktorov zvyšujúcich stratu kostnej hmoty vedúcej k osteoporóze. Je možné uviesť fajčenie, abúzus alkoholu, sedavý životný štýl a nízky príjem vápnika.

Pri prevencii osteoporózy alebo pri strate kostnej hmoty u žien po prechode sa ako liečivo prvej voľby používa estrogén. Okrem toho Black et al. oznámili v EP 0 605 193 Al, že estrogén, predovšetkým keď sa podáva orálne, znižuje hladinu LDL v plazme a zvyšuje hladinu prospešných lipoproteínov s vysokou hustotou CHDL). Dlhodobá liečba estrogénom sa však dáva do súvislosti s rOznymi poruchami, vrátane zvýšeného ohrozenia rakovinou maternice, rakovinou endometria a možno rakovinou prsníka, čo vedie vela žien k tomu, aby sa takému liečeniu vyhýbali, alebo brali lieky len krátku dobu. Napriek tomu, že sa predpokladá, že riziko endometrlálnej rakoviny Je možné znížiť súčasným podávaným progesterónu, obava z možného zvýšeného ohrozenia rakovinou prsníka pri podávaní estrogénu trvá. Nedávno navrhnuté liečebné režimy zamerané na zníženie ohrozenia rakovinou, ako Je podávanie kombinácií progesterúnu a estrogénu, vyvolávajú u pacientov neprijateľné krvácanie. Ďalej sa predpokladá, že kombinácia progesterónu s estrogénom otupuje účinnosť estrogénu na znižovanie cholesterolu v sére. Významné nežladúce účinky spojené s liečením estrogénom podčiarkujú nutnosť vyvinúť alternatívne terapie osteoporózy, ktoré by mali žiadúci priaznivý vplyv na hladinu LDL v sére, ale ktoré by nemali nežladúce vedľajšie účinky.

Prednedávnom bolo na liečenie osteoporózy navrhnutých mnoho agonistov/antagonistov estrogénu. Bolo oznámené COsteoporosis Conference, Scrip. Νϋ. 1812/13. apríl 16/20, 1993, str. 29), Je raloxifen, 6-hydroxy-2-C4-hydroxyfenyl)-3-Ľ4-C2-piperidinoetoxyJbenzoyllbenzoĽbltlofén, napodobuje priaznivý účinok estrogénu na kosti a lipidy, ale na rozdiel od estrogénu má minimálny stimulačný účinok na maternicu CBlack, L.J. eť al.,, Raloxifene CLY139481 HcDPrevents Bone Loss and Reduces Sérum Cholesterol Uithout Causing Uterine Hypertrophy in Ovarlectomized Rats, J. Clin. Invest., 1994, 93«63 až 69J.

Tamoxifen, l-C4-e-dimetylaminoetoxyfenyl)-l, 2-difenylbut-l-én. Je antiestrogén, ktorý bol navrhnutý ako liečivo osteoporózy. Táto látka má paliatívny účinok na rakovinu prsníka.

alebo bolo oznámené, že má estrogénnu účinnosť v maternici. Glll-Sharma et al.. J. Reproductlon and Fertlllty C1993) 99, 395, uvádzajú. že tamoxlfen v dávke 200 a 400 mg/kg/deň znižuje hmotnosť vajíčok a sekundárnych pohlavných orgánov u samcov krysy.

V US patente č- 5 254 594 (ktorý Je tu citovaný náhradou za

I prenesenie celého Jeho obsahu do tohoto textu) Je popísané použitie droloxlfenu pre liečbu chorôb kostí, ako Je osteoporóza.

Činidlá, ako Je droloxlfen, zabraňujú strate kostnej hmoty a tým znižujú ohrozenie fraktúrou, bez vedľajších účinkov estrogénu. Predpokladá sa však, že estrogén a agonlstl estrogénu samotné znižujú riziko zlomenín len asi o 50 X a približne 50 X osteopenlckých žien stále zostáva ohrozených osteoporotickýml fraktúrami.

Pre liečbu osteoporózy sú tiež navrhované neestrogénoví agonisti/antagonisti, ako sú blsfosfonáty. Blsfosfonátom pre liečbu osteoporúzy, ktorý Je v súčasnosti na trhu. Je napríklad Fosamax^tR>. Ako iné blsfosfonáty, ktoré v súčasnosti podstupujú povoľovaciu procedúr. Je možné uviesť rlsedronát, tiludronát a lbandronát.

Frost et al. v Treatment of Osteoporosls by Manlpulatlon of Coherent Bone Celí Populations, Cllnical Orthopedlcs and Related Research, 143, 227 C1979) popisujú teoretický model, v ktorom Je navrhnuté, že by malo byť možné synchronizovať aktivitu a metabolizmus kostných buniek tak, že sa najprv podá aktlvačné činidlo kostných buniek a potom lnhlblčné činidlo resorpcle koštj.

I a potom sa nechá vytvoriť normálna kosť.

Táng et al., Restorlng and Malntalnlng Bone In Osteogenlc Female Rat Skeleton* I. Changes in Bone ľlass and Structure, J. Bone Minerál Research 7 C9), str. 1093 až 1104. 1992 uvádzajú údaje o koncepte straty, obnovenia a udržovania CLRM koncept Lóse, Restore and Malntalnlng Concept), ktorý predstavuje praktický prístup k reverzii existujúcej osteoporózy. LRM koncept využíva pre obnovu kostnej hmoty a architektúry kosti C fáza +) anabolické Činidlá a potom s cieľom zachovania novej kostnej hmoty Cfáza +/-) prejde k Činidlám s overenou schopnosťou udržiavať kostnú hmotu. Pri štúdii na krysách sa použilo PGE₂a rlsedronát (bisfosfonát) a ukázalo sa, že prevažnú Časť nového sponglózneho a kortikálneho kostného tkaniva indukovaného PGE₂ Je možné podávaním risedronátu zachovať aspoň aspoň 60 dní po prerušení podávania PGE₂.

Kombinácie blsfosfonátov a prostaglandínov pre lleCbu osteoporózy sú známe.

V EP patentovej prihláške 0 381

296 Je popísané použitie kitu, pri ktorom po období aktivácle kosti C1 liečebného režimu nasleduje režim inhlbícle resorpcie kosti. Ako príklady zlúCenín aktivujúcich kostné tkanivo sú v tomto dokumente uvedené paratyreoldný hormón CPTH), anorganické fosfáty. rastový hormón, fluorid. tyreoldný hormón (napríklad tyroxín), urClté metabolity vitamínu D a prostaglandíny (PGE₂ pri dávkovom režime 1Q mg/kg/deň). Ako Činidlá inhibujúce resorpciu kosti sú tu uvedené polyfosfonáty.

V PCT/US93/08529 Je popísaná simultánna dodávka aktivaCného Činidla kostného tkaniva. ako Je prostaglandínu, ktoré Je chemicky kopulované k zlúCenine lnhibujúcej resorpciu kosti, ktorá selektívne dodáva aktivaCné Činidlo kosti do cieľovej oblasti. Hydrolytické produkty vzniknuté postupnou hydrolýzou tejto novej zlúCenlny sú schopné zaistiť inhiblCnú úCinnosť na

resorpciu kosti CpOsobením blsfosfonátov) stimuláciu aktivity kosti CpOsobením PGE₂).	a	rast	kostí alebo
ÚCinky kombinácie prostaglandínu	E2	a	risedronátu
Cbisfosfonátu) sú skúmané v štúdii Lin	et	al..	Effects of

Prostaglandin E2 and Risedronate Administration on Cancellous Bone in Older Female Rats. Bone 15(5), str. 489 až 496, 1994.

□ui et al. v Experimental Study on Antiatherosclerotlc Treatment by PGE₂ Combined Wlth Vitamín E and Estradiol, Chinese

Medical Journal, 108(1), str. 33 až 36, 1995 uvádzajú, že Jediná dávka PGE₂ kombinovaná s vitamínom E a estradlolom vykazovala lepšiu koordinovanú Inhlbíclu v prípade aortálnych a koronárnych aterosklerotických lézlách, ako aj agregácle doštičiek, proliferácie buniek hladkého svalstva a peroxidácie llpldov, ako Jediná dávka PGE₂.

V abstrakte publikácie Nonhormonal Alternatlves f or the Nanagement of Early Menopause ln Younger Women uiith Breast Cancer, Nonogr. Natl. Cancer Inst. (16), 161 až 167, 1994 sa uvádza t Používanie niekoľkých neestrogénových prístupov pri prevencii a liečení osteoporózy predstavuje prísľub do budúcnosti. Tradičné doporučenla na zachovanie celistvosti kostry, ako sú posilňovacie cvičenia strava bohatá na vápnik a obmedzovanie kofeínu, alkoholu a proteínov; vyvarovanie sa fajčeniu; a opatrenia ako minimalizovať úrazy, sa rozširujú o použitie alebo skúmanie liečiv (samotných alebo v kombinácii). Ako príklady takýchto liečiv Je možné uviesť progestíny, metabolity vitamínu D, injekčné alebo intranazálne podávaný syntetický .lososí kalcitonín. blsfosfonáty, fluorid sodný, pyratyreoidný hormón, rastové faktory, tamoxlfen atď.

Napriek tomu. že už existujú rôzne spôsoby liečenia osteoporózy, vzhľadom na len obmedzené úspechy súčasnej medicíny pri znižovaní osteoporotických fraktúr, na tomto poli naďalej pretrváva potreba a hľadanie alternatívnych liečebných možností.

Podstata vynálezu

Predmetom vynálezu Je farmaceutická ' kompozícia, ktorá zahrnuje agonlstov/antagonlstov estrogénu a anabollcké činidlá a Jej použitie pre liečbu stavov, pri ktorých Je prítomná strata kostnej hmoty, ako Je osteoporóza u cicavcov (napríklad ľudí, predovšetkým žien).

Kombinácia zahrnuje terapeuticky účinné množstvo prvej zlúčeniny, ktorou Je agonista/antagonista estrogénu a terapeuticky účinné množstvo druhej zlúčeniny. ktorou Je prostaglandín alebo agonlsta/antagonlsta prostaglandínu.

Ako prednostných agonlstov/antagonlstov estrogénu Je možné uviesť droloxifen, raloxifen, tamoxlfen, 4-hydroxytamoxifen, cls-6-C4-fluórfenyl)-5-E4-C2-plperldin-l-yletoxy)fenyl3-5, 6» 7, 8-tetrahydronaftalen-2-ol;

C-)-cis-6-fenyl-5-C4-(2-pyrolldin-l-yletoxy)fenyl3-5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-ol;

cis-6-fenyl-5-C4-C2-pyrolidin-l-yletoxy)fenyl3-5. 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-ol;

C1S-1-Ľ6'-pyrolldlnoetoxy-3' -pyrldyl]-2-fenyl-6-hydroxy-l, 2, 3. 4-tetrahydronaftalén;

l-(4*-pyrolldlnoetoxyfenyl>-2-C4-fluúrfenyl>-6-hydroxy-l,2,3, 4-tetrahydroizochinolín;

cls-6-C 4-hydroxyfenyl)-5-C 4-C 2-piperidln-l-yletoxy)fenyl]-5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-ol; alebo

1-C4’-pyrolidinoletoxyfenyl)-2-fenyl-6-hydroxy-l, 2. 3, 4-tetrahydrolzochlnolín.

Ako prednostné anabollcké činidlá Je možné uviesť PGDj, PGD₂, PGEx, PGE₂, PGF₂ a PGF₂* a 3S-C3-hydroxy-4-fenylbutyl)-2R-C6-ClH-tetrazol-5-yl)hexyl3cyklopentan<$n.

¹

Podlá ďalšieho aspektu Je predmetom vynálezu spOsob liečenia stavov, ktoré vykazujú nízku kostnú hmotu, pri ktorom sa cicavcovi, ktorý vykazuje nízku kostnú hmotu podáva

a. terapeuticky účinné množstvo prvej zlúčeniny, pričom touto prvou zlúčeninou Je agonlsta/antagonlsta estrogénu; a

b. terapeuticky účinné množstvo druhej zlúčeniny, pričom touto druhou zlúčeninou Je prostaglandín alebo agonlsta/antagonlsta prostaglandínu.

Ako prednostných agonlstov/antagonlstov estrogénu Je možné uviesť droloxifen, raloxifen, tamoxlfen, 4-hydroxytamoxifen, cls-6-C4-fluúrfenyl)-5-C4-C2-piperldln-l-yletoxy)fenylJ-5, 6. 7, 8-tetrahydronaftalen-2-ol;

C-)-cis-6-fenyl-5-E4-(2-pyrolidin-l-yletoxy>fenyU-5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-olj cis-6-fenyl-5-C4-C2-pyrolidin-l-yletoxy)fenyl]-5, 6, 7,8-tetrahydronaftalen-2-ol;

cis-l-C6'-pyrolldinoetoxy-3' -pyridyl]-2-fenyl-6-hydroxy-l,2,3. 4-tetrahydronaftalén;

1-C4'-pyrolidinoetoxyfenyl)-2-<4-fluórfenyl)-6-hydroxy-l, 2, 3, 4-tetrahydroizochinolln;

cls-6-C 4-hydroxyfenyl)-5-C 4-C 2-plperidln-l-yletoxy)fenyll-5, 6, 7, 8-tetrahydronaf talen-2-ol a

1-C4'-pyrolidlnoletoxyfenyl)-2-fenyl-6-hydroxy-l, 2, 3. 4-tetrahydroizochinolln.

Ako prednostné anabollcké činidlá Je , možné uviesť PGD_t, PGDä, PGEí, PGEi, PGF_a a PGF_atf a 3S-C3-hydroxy-4-fenylbutyl)-2R-C6-ClH-tetrazol-5-yl)hexyllcyklopentanón.

V prednostnej realizácii Je stavom, ktorý sa prejavuje nízkou kostnou hmotou, osteoporóze.

Podlá Inej prednostnej realizácie sa pri tomto spôsobe prvá zlúčenina a druhá zlúčenina podávajú v podstate súčasne.

Podlá Inej prednostnej realizácie sa pri tomto spôsobe druhá zlúCenlna podáva počas asi 3 mesiacov až asi 3 rokov.

Po podávaní druhej zlúčeniny poprípade nasleduje podávanie prvej zlúčeniny počas asi 3 mesiacov až asi 3 rokov, pričom druhá zlúčenina sa počas tohoto druhého obdobia (asi 3 mesiacov až asi 3 rokov) nepodáva.

Alternatívne po podávaní druhej zlúčeniny nasleduje podávanie prvej zlúčeniny dlhšiu dobu ako asi 3 roky, pričom druhá zlúčenina sa počas tohoto viac ako trojročného obdobia nepodáva.

Podlá ďalšieho aspektu Je predmetom vynálezu synerglcká farmaceutická kompozícia, ktorá zahrnuje

a. množstvo prvej zlúčeniny, pričom touto prvou zlúčeninou Je agonlsta/antagonista estrogénu; a

b. množstvo druhej zlúčeniny, pričom touto druhou zlúčeninou Je prostaglandín alebo agonlsta/antagonista prostaglandínu;

pričom množstvo prvej zlúčeniny samotnej a množstvo druhej zlúčeniny samotnej Je nedostatočné pre dosiahnutie terapeutických účinkov, ktoré spočívajú v zvýšení tvorby kostnej hmoty a znížení resorpcie kostnej hmoty, ktoré sa dosiahnu. ak sa podávajú súčasne a pričom kombinovaný účinok množstva prvej zlúčeniny ' a množstva druhej zlúčeniny Je väčší ako súčet liečebných účinkov dosiahnuteľných pri použití množstva prvej zlúčeniny a množstva druhej zlúčeniny Jednotlivo, a farmaceutický vhodné riedidlo alebo nosič.

Podlá ešte ďalšieho aspektu Je predmetom vynálezu synerglcký spôsob liečby cicavcov, u ktorých sa prejavuje nízka kostná hmota, pri ktorom sa cicavcovi trpiacemu takýmto stavom, ktorý sa prejavuje nizkou kostnou hmotou, podáva

a. množstvo prvej zlúčeniny, pričom touto prvou zlúčeninou Je agonista/antagonista estrogénu; a

b. množstvo druhej zlúčeniny, pričom touto druhou zlúčeninou Je prostaglandin alebo agonista/antagonista prostaglandinu;

pričom množstvo prvej zlúčeniny samotnej a množstvo druhej zlúčeniny samotnej Je nedostatočné pre dosiahnutie terapeutických účinkov, ktoré spočívajú v zvýšení tvorby kostnej hmoty a znížení resorpcie kostnej hmoty, ktoré sa dosiahnu, ak sa podávajú súčasne a pričom kombinovaný účinok množstva prvej zlúčeniny a množstva druhej zlúčeniny Je väčší ako súčet liečebných účinkov dosiahnuteľných pri použití množstva prvej zlúčeniny a množstva druhej zlúčeniny Jednotlivo.

Podľa ďalšieho aspektu Je predmetom vynálezu klt na liečenie stavu, ktorý sa prejavuje nízkou kostnou hmotou, ktorý obsahuje:

I i

a. terapeuticky účinné množstvo agonistu/antagonistu estrogénu a farmaceutický vhodný nosič v prvej jednotkovej dávkovacej forme;

b. terapeuticky účinné množstvo prostaglandinu alebo agonistu/antagonistu prostaglandinu a farmaceutický vhodný nosič v druhej jednotkovej dávkovacej forme; a

c. obalový prostriedok pre prvú a druhú dávkovaciu formu.

I ·

Podľa iného aspektu Je predmetom vynálezu farmaceutická kompozícia, ktorá zahrnuje

a. terapeuticky účinné množstvo prvej zlúčeniny, pričom touto prvou zlúčeninou Je droloxlfen, raloxifen, tamoxifen alebo idoxifen; a

b. terapeuticky účinné množstvo druhej zlúčeniny, pričom touto druhou zlúčeninou Je fluorid sodný alebo N-C1CR)-Ľ1, 2-dlhydro-l-metánsulfonylspiroC3H-indol-3, 4' -piperidinJ-1' -yl)kai— bonylJ-2-C fenylmetyloxy)etyl]-2-amino-2-metylpropánamid« MK-677.

V prednostnej realizácii tejto kompozície Je prvou zlúčeninou droloxifen.

Podlá iného aspektu Je predmetom vynálezu spôsob liečenia cicavcov, ktoré vykazujú nízku kostnú hmotu, pri ktorom sa cicavcom, ktoré sú postihnuté stavom, ktorý sa prejavuje nízkou kostnou hmotu podáva

a. terapeuticky účinné množstvo prvej zlúčeniny, pričom touto prvou zlúčeninou Je droloxifen, raloxlfen, tamoxifen alebo idoxifen s a

b. terapeuticky účinné množstvo druhej zlúčeniny, pričom touto druhou zlúčeninou Je fluorid sodný alebo N-C1CR)-C1,2-dlhydro-l-metánsulfonylspiroC3H-indol-3, 4' -plperidinJ-ľ -yl)kai— bonyl] -2-( f enylmetyloxy) etyl J -2-amino-2-metylpropánamid» FIK-677.

V prednostnej realizácii tohoto spôsobu Je prvou zlúčeninou droloxifen.

Podlá inej prednostnej realizácie tohoto spôsobu Je stavom, ktorý sa prejavuje nízkou kostnou hmotou, osteoporóza.

Podía. inej prednostnej realizácie sa pri tomto spôéobe prvá zlúčenina a druhá zlúčenina podávajú v podstate súčasne.

Podía inej prednostnej realizácie sa pri tomto spôsobe druhá zlúčenina podáva počas asi 3 mesiacov až asi 3 rokov.

Po podávaní druhej zlúčeniny poprípade nasleduje podávanie prvej zlúčeniny počas asi 3 mesiacov až asi 3 rokov bez podávania druhej zlúčeniny počas týchto asi 3 mesiacov až asi 3 rokov.

Alternatívne Je podávanie druhej zlúčeniny nasledované podávaním prvej zlúčeniny dlhšiu dobu ako asi 3 roky bez podávania druhej zlúčeniny v tejto dobe.

i

Podía ďalšieho aspektu Je predmetom vynálezu synerglcká farmaceutická kompozícia, ktorá zahrnuje

a. množstvo prvej zlúčeniny, pričom touto prvou zlúčeninou Je droloxlfen, raloxlfen, tamoxlfen alebo ldoxlfen; a

b. množstvo druhej zlúčeniny, pričom touto druhou zlúčeninou Je fluorid sodný alebo N-C1CR)-E1,2-dlhydro-l-metánsulfonylsplroC3H-lndol-3, 4' -piperidin3-ľ -yl)karbonyl]-2-Cfénylmetyloxy)etyl!-2-amino-2-metylpropánamld» MK-677,

I pričom množstvo prvej zlúčeniny samotnej a množstvo druhej zlúčeniny samotnej Je nedostatočné pre dosiahnutie terapeutických účinkov, ktoré spočívajú v zvýšení tvorby kostnej hmoty a znížení resorpcle kostnej hmoty, ktoré sa dosiahnu, ak sa podávajú i súčasne a pričom kombinovaný účinok množstva prvej zlúčeniny a množstva druhej zlúčeniny Je väčší ako súčet liečebných účinkov dosiahnuteľných pri použití množstva prvej zlúčeniny a množstva druhej zlúčeniny Jednotlivo, '

I i

I a farmaceutický vhodné riedidlo alebo nosič.

I

I I

V prednostnej realizácii tejto synergickej kompozície Je !

prvou zlúčenipóu droloxlfen. ,

Podía ešte ďalšieho aspektu Je predmetom vynálezu synergický spôsob liečenia cicavcov, ktoré vykazujú nízku kostnú hmotu, pri ktorom sa cicavcovi trpiacemu takýmto stavom, podáva

b. množstvo druhej zlúčeniny, pričom touto druhou zlúčeninou Je fluorid sodný alebo N-Ľ1CRJ-C1,2-dihydro-l-metánsulfonylspiroC3H-indol-3, 4'-piperldin]-ľ-yl)karbonyl]-2-Cfénylmetyloxy)etyl]-2-amlno-2-metylpropánamld: FIK-677, pričom množstvo prvej zlúčeniny samotnej a množstvo druhej zlúčeniny samotnej Je nedostatočné pre dosiahnutie terapeutických účinkov, ktoré spočívajú v zvýšení tvorby kostnej hmoty a znížení resorpcie kostnej hmoty, ktoré sa dosiahnu, ak sa podávajú súčasne a pričom kombinovaný účinok množstva prvej zlúčeniny a množstva druhej zlúčeniny Je väčší ako súčet liečebných účinkov dosiahnuteľných pri použití množstva prvej zlúčeniny a množstva druhej zlúčeniny Jednotlivo, a farmaceutický vhodné riedidlo alebo nosič.

V prednostnej realizácii tohoto synerglckého spôsobu liečenia Je prvou zlúčeninou droloxlfen.

Podľa ďalšieho aspektu Je predmetom vynálezu klt na liečenie stavu, ktorý sa prejavuje nízkou kostnou hmotou, ktorý zahrnuje:

a. terapeuticky účinné množstvo droloxifenu, raloxlfenu, tamoxifenu alebo idoxifenu a farmaceutický vhodný nosič v prvej jednotkovej dávkovacej forme;

b. terapeuticky účinné množstvo fluoridu sodného alebo N-C1CR)-L1, 2-dihydro-l-metánsulfonylspiroC3H-indol-3, 4'-piperidín]-1'-yl)karbonyl]-2-C fénylmetyloxy)etyl]-2-amino-2-metylpropán-

I amldu: FIK-677 a farmaceutický vhodný nosič v druhej jednotkovej dávkovacej forme; a

c. obalový prostriedok pre prvú a druhú dávkovaciu formu.

V prednostnej realizácii tohoto kitu Je prvou zlúčeninou droloxlfen.

Podlá ďalšieho aspektu Je predmetom vynálezu farmaceutická kompozícia, ktorá zahrnuje

a. terapeuticky účinné množstvo prvej zlúčeniny, pričom touto prvou zlúčeninou Je cis-6-C4-fluórfenyl)-5-C4-(2-piperldin-l-yletoxy)fenyl3-5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-ol;

(-)-cls-6-fenyl-5-E4-C2-pyrolidln-l-yletoxy)fenyl]-5, 6. 7, 8-tetrahydronaftalen-2-ol;

cls-6-fenyl-5-Ľ4-C2-pyrolidin-l-yletoxy)fenyl]-5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-ol;

C1S-1-Ľ6'-pyrolidinoetoxy-3'-pyrldylĽ-2-fenyl-6-hydroxy-l, 2, 3, 4-tetrahydronaftalén;

1-C4' -pyrolidinoetoxyfenyl)-2-C4-fluórfenyl)-6-hydroxy-l, 2, 3, 4-tetrahydrolzochlnolín; ¹ cls-6-C 4-hydroxyfenyl)-5-Ľ 4-C 2-piperidln-l-yletoxy)fenylJ-5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-ol a

1-C4' -pyrolidinoletoxyfenyl)-2-fenyl-6-hydroxy-l, 2» 3, 4-tetrahydroizochlnolín a

b. terapeuticky účinné množstvo druhej zlúčeniny, pričom touto druhou zlúčeninou Je fluorid soc(ný, paratyreoidný hormón, rastový hormón alebo sekretagog rastového hormónu.

Podlá Iného aspektu Je predmetom vynálezu spôsobu liečenia cicavcov, ktoré vykazujú nízku kostnú hmotu, pri ktorom sa cicavcom, ktoré sú postihnuté stavom, ktorý sa prejavuje nízkou kostnou hmotou, podáva

a. terapeuticky účinné množstvo prvej zlúčeniny, pričom touto prvou zlúčeninou Je cis-6-C4-fluórfenyl)-5-C4-C2-piperidin-l-yletoxy)fenyl]-5, 6. 7, 8-

-tetrahydronaftalen-2-ol;

C-)-cis-6-fenyl-5-Ľ4-C2-pyrolidln-l-yletoxy)fenyl]-5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-ol;

cis-6-fenyl-5-C4-<2-pyrolidin-l-yletoxy)fenyl]-5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-ol;

cis-l-CG’-pyrolidinoetoxy-3'-pyridyl]-2-fenyl-6-hydroxy-l, 2, 3, 4-tetrahydronaftalén;

1-C4' -pyrolidlnoetoxyfenyl)-2-(4-fluórfenyl)-6-hydroxy-l, 2» 3, 4-tetrahydrolzochlnolln;

cls-6-C 4-hydroxyfenyl)-5-Ľ 4-C 2-plperldln-l-yletoxy)fenyl]-5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-ol a

I

1-C4'-pyrolidinoletoxyfenyl)-2-fenyl-6-hydroxy-l, 2, 3, 4-tetrahydroizochinolln a

b. terapeuticky účinné množstvo druhej zlúčeniny, pričom touto druhou zlúčeninou Je fluorid sodný, paratyreoidný hormón, rastový hormón alebo sekretagog rastového hormónu.

Podlá prednostnej realizácie tohoto spôsobu Je stavom, ktorý sa prejavuje nízkou kostnou hmotou, osteopdróza.

I

Podía inej prednostnej realizácie sa pri tomto spôsobe prvá zlúčenina a druhá zlúčenina podávanú v podstate súčasne.

Podía inej prednostnej realizácii sa pri tomto spôsobe druhá zlúčenina podáva počas asi 3 mesiacov až asi 3 rokov.

Tento spôsob Je poprípade možné uskutočňovať tak. že po podávaní druhej zlúčeniny nasleduje podávanie prvej zlúčeniny počas asi 3 mesiacov až asi 3 rokov bez podávania druhej zlúčeniny počas týchto asi 3 mesiacov až asi 3 rokov.

Alternatívne Je podávanie druhej zlúčeniny nasledované podávaním prvej zlúčeniny počas asi 3 rokov bez podávania druhej zlúčeniny v tomto období.

Podlá ďalšieho aspektu Je predmetom vynálezu synergická farmaceutická kompozícia, ktorá obsahuje

a. množstvo prvej zlúčeniny, pričom touto prvou zlúčeninou Je cis-6-C4-fluórfenyl)-5-C4-C2-plperidin-l-yletoxy)fenyl]-5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-ol;

C-)-cis-6-fenyl-5-Ľ4-C2-pyrolidin-l-yletoxy)fenyl3-5. 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-ol;

cls-6-fenyl-5-C4-<2-pyrolidin-l-yletoxy>fenylJ-5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-ol;

CÍS-1-Ľ6' -pyrolidinoetoxy-3' -pyrldylľl -2-f enyl-6-hydroxy-l, 2, 3. 4-tetrahydronaftalén í

1-C4' -pyrolidinoetoxyfenyl)-2-C4-fluórfenyl)-6-hydroxy-l, 2, 3, 4-tetrahydroizochinolín;

I , cis-6-C 4-hydroxyfenyl)-5-C 4-C 2-piperidin-l-yletoxy)fenylJ-5,6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-ol a

1-C4*-pyrolidinoletoxyfenyl)-2-fenyl-6-hydroxy-l, 2, 3, 4-tetrahydroizochinolín a

b. množstvo druhej zlúčeniny, pričom touto druhou zlúčeninou

Je fluorid sodný. paratyreoidný hormón, rastový hormón alebo sekretagog rastového hormónu.

pričom množstvo prvej zlúčeniny samotnej a množstvo druhej zlúčeniny samotnej Je nedostatočné pre dosiahnutie terapeutických účinkov, ktoré spočívajú v zvýšení tvorby kostnej hmoty a znížení resorpcle kostnej hmoty, ktoré sa dosiahnu, ak sa podávajú súčasne a pričom kombinovaný účinok množstva prvej zlúčeniny a množstva druhej zlúčeniny Je väčší ako súčet liečebných účinkov dosiahnuteľných pri použití množstva prvej zlúčeniny a množstva druhej zlúčeniny Jednotlivo, a farmaceutický vhodné riedidlo alebo nosič.

Podľa ešte ďalšieho aspektu Je predmetom vynálezu synergický spôsob liečenia cicavcov, ktoré vykazujú nízku kostnú hmotu, pri ktorom sa cicavcovi trpiacemu takým stavom, ktorý sa prejavuje nízkou kostnou hmotou, podáva

a. množstvo prvej zlúčeniny, pričom touto prvou zlúčeninou Je cis-6-C4-fluórfenyl)-5-Ľ4-C2-piperidin-l-yletoxy)fenyll-5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-ol;

(-)-cis-6-fenyl-5-Ľ4-C2-pyrolidin-l-yletoxy)fenylJ-5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-ol;

cis-6-fenyl-5-C4-C2-pyrolidin-l-yletoxy)fenylJ-5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-olj

C1S-1-Ľ6'-pyrolldinoetoxy-3'-pyridylJ-2-fenyl-6-hydroxy-l, 2, 3. 4-tetrahydronaftalén;

1-C4’ -pyrolidinoetoxyfenyl)-2-<4'*-fluórfenyl)-6-hydroxy-l, 2, 3, 4-tetrahydrolzochinolín;

cis-6-C 4-hydroxyfenyl)-5-C 4-C 2-piperidin-l-yletoxy)fenylJ-5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-ol a

1-C4' -pyrolidinoletoxyfenyl)-2-fenyl-6-hydroxy-l, 2, 3, 4-tetrahydroizochlnolín a

b. množstvo druhej zlúčeniny, pričom touto druhou zlúčeninou Je fluorid sodný. paratyreoidný hormón, rastový hormón alebo sekretagog rastového hormónu, pričom množstvo prvej zlúčeniny samotnej a množstvo druhej zlúčeniny samotnej Je nedostatočné pre dosiahnutie terapeutických účinkov, ktoré spočívajú v zvýšení tvorby kostnej hmoty a znížení resorpcie kostnej hmoty, ktoré sa dosiahnu, ak sa podávajú súčasne a pričom kombinovaný účinok množstva prvej zlúčeniny a množstva druhej zlúčeniny Je väčší ako súčet liečebných účinkov dosiahnuteľných pri použití množstva prvej zlúčeniny a množstva druhej zlúčeniny Jednotlivo, a farmaceutický vhodné riedidlo alebo nosič.

Podľa ďalšieho aspektu Je predmetom vynálezu kit na liečenie stavu, ktorý sa prejavuje nízkou kostnou hmotou, ktorý zahrnuje»

a. terapeuticky účinné množstvo cis-6-C4-fluórfenyl)-5-C4-C2-piperidln-l-yletoxy)fenyl3-5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-olu;

C-)-cis-6-fenyl-5-C4-C2-pyrolidin-l-yletoxy)fenyl]-5, 6, 7, 8i -tetrahydronaftalen-2-olu;

cis-6-fenyl-5-Ľ4-(2-pyrolldin-l-yletoxy)fenyl]-5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-olu;

C1S-1-C6'-pyrolldinoetoxy-3'-pyridyl]-2-fenyl-6-hydroxy-l, 2, 3, 4-tetrahydronaftalénu;

1-C4’-pyrolldlnoetoxyfenyl)-2-(4-fluórfenyl)-6-hydroxy-l, 2,3.4-tetrahydroizochinolínu;

cis-6-C 4-hydroxyfenyl)-5-C 4-C 2-piperldln-l-yletoxy)fenyl]-5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-olu a

1-C4’-pyrolldinoletoxyfenyl)-2-fenyl-6-hydroxy-l, 2, 3, 4-tetrahydrolzochinolínu a farmaceutický vhodný nosič v prvej jednotkovej dávkovacej forme;

b. terapeuticky účinné množstvo fluoridu sodného, paratyreoldného hormónu. rastového hormónu alebo sekretagogu rastového hormónu a farmaceutický vhodný nosič v druhej jednotkovej dávkovacej forme; a

c. obalový prostriedok pre prvú a druhú dávkovaciu formu.

Podlá ešte ďalšieho aspektu Je predmetom vynálezu farmaceutická kompozícia, ktorá zahrnuje

a. terapeuticky účinné množstvo prvej zlúčeniny, pričom touto prvou zlúčeninou Je raloxlfen, tamoxlfen alebo Idoxlfen; a

b. terapeuticky účinné množstvo druhej zlúčeniny, pričom touto druhou zlúčeninou Je paratyreoldný hormón, rastový hormón alebo sekretagog rastového hormónu.

- Podlá .ešte ďalších aspektov sú predmetom vynálezu spôsoby , ’ I ' liečenia, synerglcké kompozície a kity na báze kompozície popísanej bezprostredne vyššie.

Odborníkom v tomto odbore Je zrejmé, že podobným spôsobom Je možné použiť Iné antiresorpčné činidlá Cblsfosfonát, estrogén, premarín, estrón, estrlol alebo 17<x- alebo 17&-etinylestradlol> spolu s Inými kostnými anabolickými činidlami Candrogénom.

agonlstom/antagonlstom androgénu) alebo Inými činidlami uvedenými v tomto popise.

Tak napríklad Je možné antiresorpčné činidlo droloxlfen kombinovať s Jednotlivými kostnými anabollckýml činidlami, ako Je paratyreoidný hormón, rastový hormón alebo sekretagógy rastového hormónu.

Pod pojmom stav, ktorý sa prejavuje nízkou kostnou hmotou sa rozumie stav, pri ktorom Je úroveň kostnej hmoty pod normálnou hladinou špecifickou pre vek, ako Je definovaná v štandardoch Svetovej zdravotníckej organizácie Assesment of Fracture Risk and lts Appllcation to Screenlng for Postmenopausal Osteoporosls ¢1994), Report of a Uorld Health Organlzatlon Study Group. Uorld Health Organlzatlon Technlcal Serles 943. Patria sem tiež Juvenllné Idlopatlcké a primárne osteoporózy. Do rozsahu liečby osteoporózy tiež patrí prevencia a zmierňovanie dlhodobých komplikácií, ako Je zakrivenie chrbtice, strata výšky, protetická chirurgia a prevencia dysfunkcie predstojnej žľazy. Táto liečba zahrnuje urýchľovanie hojenia zlomenín a urýchľovanie prijatia kostných štepov. Patria sem tiež perlodontálne choroby a úbytok alveolárnej kosti.

Pojem stav, ktorý sa prejavuje nízkou kostnou hmotou a vzťahuje tiež na cicavce, u ktorých Je pravdepodobnosť vývoja niektorej z vyššie uvedených chorôb, ako Je osteoporóza, vyššia ako priemerná [napríklad ženy po prechode, muži nad 60 rokov a osoby liečené liečivami, o ktorých Je známe, že ako vedľajší účinok vyvolávajú osteoporózu Cako sú glukokortlkoldy)3.

I ·

Odborníkom v tomto odbore bude zrejmé, že ša pod pojmom kostná hmota v skutočnosti rozumie hmotnosť kosti na Jednotku plochy, ktorá Je niekedy Caj keď nie úplne presne) označovaná ako minerálna hustota kosti.

Pojem liečenie alebo liečba, ako sa tu používa v tomto texte, takisto zahrnuje preventívnu (napríklad profylaktickú) a pallatívnu liečbu.

Pod pojmom halogén sa rozumie chlór, bróm. Jód alebo fluór.

Pod pojmom alkyl sa rozumie nasýtený uhľovodíkový zvyšok s priamym alebo rozvetveným reťazcom. Ako príklady takýchto alkylskupín Je možné uviesť metyl, etyl, propyl, Izopropyl, butyl, sek. butyl, terc.butyl, pentyl, izopentyl, hexyl a lzohexyl.

Pod pojmom alkoxy sa rozumie nasýtená alkylskuplna s reťazcom priamym alebo rozvetveným, ktorá Je viazaná cez atóm kyslíka. Ako príklady takýchto alkoxyskupín Je možné uviesť metoxy, etoxy, propoxy.

Izopropoxy.

butoxy, Izobutoxy, terc.butoxy, pentoxy, lzopentoxy, hexoxy a lzohexoxy.

Pod pojmom soli s farmaceutický vhodnými aniónmi sa rozumejú soli s netoxickými aniónmi. Ako neobmedzujúce príklady takýchto solí Je možné uviesť chlorid, bromld, Jodid, sulfát, hydrogensulf át, fosfát, acetát, maleát, fumarát, oxalát, laktát, tartrát, cltrát, glukonát, metánsulfonát a

4-toluénsulfonát.

Pod pojmom soli s farmaceutický vhodnými katiónmi sa rozumejú soli s netoxickými katiónmi. Ako neobmedzujúce príklady takýchto solí Je možné uviesť soli, ktoré obsahujú katióny sodíka, draslíka, vápnika, horčíka, amónla alebo protónovaného benzatínu CN,N'-dibenzyletyléndiamínu), cholínu, etanolamínu, dletanolamínu, etyléndlamínu, meglumínu CN-metylglukamínu). benetamínu CN-benzylfenyletylamín), plperazínu alebo trometamínu ¹ · ^{1 1} f · C2-amino-2-hydroxymetýl-l. 3-propándiolu).

Znamienka plus alebo mínus umiestené v zátvorke, ktoré sa tu používajú v chemických názvoch, označujú pre konkrétny stereolzomér smer otáčania roviny polarlzovaného svetla.

Pod pojmom rozpúšťadlá Inertné voči reakcii alebo inertné rozpúšťadlo sa v tomto texte rozumie rozpúšťadlo, ktoré nelnteraguje s východiskovými látkami, reakčnými činidlami, medzlproduktml alebo produktmi spôsobom, ktorý by mal nepriaznivé účinky na výťažok požadovaného produktu.

Odborníkovi v odbore chémie bude Jasné, že určité zlúčeniny podlá tohoto vynálezu budú obsahovať Jeden alebo viac atómov, ktoré môžu byť v zvláštnych stereochemických alebo geometrických konfiguráciách za vzniku stereolzomérov a konfiguračných Izomérov. Všetky takéto Izoméry a Ich zmesi sú predmetom tohoto vynálezu. Do Jeho rozsahu tiež patria hydráty zlúčenín podlá vynálezu.

Odborníkovi v tomto odbore bude zrejmé, že určité kombinácie substltuentov obsahujúcich heteroatómy, ktoré sú uvedené v tomto popise, definujú zlúčeniny, ktoré budú pri fyziologických podmienkach menej stabilné (napríklad zlúčeniny acetalovej alebo amlnalovej väzby). Takým zlúčeninám sa dáva menšia prednosť.

Farmaceutické kompozície podlá vynálezu vedú k rýchlejšiemu a mohutnejšiemu prírastku kostnej hmoty, ako aké sa môžu dosiahnuť pri použití rovnakých dávok vyššie uvedeného agonistu/antagonistu estrogénu samotného alebo vyššie uvedeného činidla, ktoré stimuluje zvýšenie minerálnej hustoty kosti samotného. Táto kombinácia teda vykazuje synergický účinok, ktorý spočíva v zvyšovaní kostnej hmoty a znižovaní početnosti zlomenín vo vyššej miere, ako aký by sa dosiahol pri použití ktorejkoľvek zo zložiek samotných. Tento vynález predstavuje významný príspevok v tomto odbore tým, že poskytuje kompozície a spôsoby, ktoré zvyšujú a zachovávajú kostnú hmotu, čo sa prejavuje prevenciou, ¹ retardáciou a/alebo regresiou osťeoporózy a ' príbuzných kostných porúch.

Ďalšie znaky a výhody budú zrejmé z popisu a nárokov tohoto vynálezu.

Nasleduje podrobnejší popis vynálezu.

Prvou zlúčeninou podlá tohoto vynálezu Je agonlsta/antagonlsta cicavčieho estrogénu. Ako prvú zlúčeninu podlá vynálezu Je možné použiť ktoréhokoľvek agonlstu/antagonlstu estrogénu. Pod pojmom agonlsta/antagonista estrogénu sa rozumejú zlúčeniny, ktoré sú schopné sa viazať na receptor estrogénu, lnhlbovať obrat v kostiach (turnover) a zabraňovať strate kostného tkaniva. Takéto účinky odborník v tomto odbore ľahko stanoví pri použití štandardných skúšobných postupov, ako sú skúšky väzby na receptor estrogénu (pozri In vltro stanovenie väzby na receptory estrogénu ďalej) a štandardných histomorfometrických a denzltometrlckých metód (pozri Protokol o skúšaní agonlstov/antagonistov estrogénu ďalej) a Eriksen E.F. et al.. Bone Histomorphometry, Raven Press, Neu York, 1994, str. 1 až 74; Grier S.J. et al., The Use of Dual-Energy X-Ray Absorptiometry In Anlmals, Inv. Radlol., 1996, 31(1)* 50 až 62; Uahner H.U. a

Fogelman I., The Evaluatlon of Osteoporosls* Dual Energy X-Ray Absorptiometry in Clinlcal Practice, Martin Dunltz Ltd.. London, 1994, str. 1 až 296). Ďalej sú uvedené a popísané rôzne také zlúčeniny, aj keď odborníkom v tomto odbore budú známe ešte iní agonlstl/antagonistl estrogénu.

Prednostným agonlstom/antagonlstom estrogénu Je droloxlfen, ((E)-3-Ľ1-C 4-C 2-(dimetylamino)etoxy3fenyl)-2-fenyl-l-butenyl)fenol) a príbuzné zlúčeniny, ktoré sú popísané v US patente 5 047 431 (tento patent Je tu citovaný náhradou za prenesenie celého Jeho obsahu do tohoto textu).

Ďalším prednostným agonlstom/antagonlstom estrogénu Je tamoxlfen (2-hydroxy-l, 2, 3-propántrlkarboxylát' (Z)-2-C 4-(1, 2I . .·

-dlfenyl-l-butenyl)fenoxy]-N, N-dlmetyl]etánamínu (1*1)) a príbuzné zlúčeniny, ktoré sú popísané v US patente 4 536 516. Ďalšou podobnou zlúčeninou Je 4-hydroxytamoxlfen, ktorý Je popísaný v US patente č. 4 613 660. (Obidva tieto patenty sú tu citované náhradou za prenesenie ich celého obsahu do tohoto textu).

Ďalším prednostným agonlstom/antagonlstom estrogénu Je raloxlfen ( hydrochlorld C 6-hydroxy-2-( 4-hydroxyfenyl)benzoE bltien-3-ylJ-E4-Ľ2-(l-piperidlnyl)etoxyJfenylJmetanónu a príbuzné zlúčeniny, ktoré sú popísané v US patente 4 418 068 (tento patent Je tu citovaný náhradou za prenesenie celého Jeho obsahu do tohoto textu).

Ďalším prednostným agonlstom/antagonlstom estrogénu Je toremlfen C2-hydroxy-l, 2, 3-propántrikarboxylát (Z)-2-Ľ4-(4-chlór-1,2-dlfenyl-l-butenyl)fenoxy]-N, N-dimetyletánamínu (1·1) a príbuzné zlúčeniny, ktoré sú popísané v US patente 4 996 225 (tento patent Je tu citovaný náhradou za prenesenie celého Jeho obsahu do tohoto textu).

Ďalším prednostným agonlstom/antagonlstom estrogénu Je centchróman (1-E 2-Ľ E 4-(3, 4—dihydro—7—metoxy-2, 2-dimetyl—3-fenyl— -2H-l-benzopyran-4-yl)fenoxyletyllpyrolldín) a príbuzné zlúčeniny, ktoré sú popísané v US patente 3 822 287 (tento patent Je tu citovaný náhradou za prenesenie celého Jeho obsahu do tohoto textu).

I

Ďalším prednostným agonlstom/antagonlstom estrogénu Je Idoxlfen (1-E 4-Ľ Ľl-(4-Jódfenyl)-2-fenyl-l-butenyllfenoxy1etyl!pyrolldín) a príbuzné zlúčeniny, ktoré sú popísané v US patente 4 839 155 (tento patent Je tu citovaný náhradou za prenesenie celého Jeho obsahu do tohoto textu).

Ďalšími prednostnými agonlstaml/antagonlstaml estrogénu sú zlúčeniny s všeobecným vzorcom T

kde

A predstavuje skupinu CH₂ alebo NR;

B. D a E predstavuje nezávisle vždy CH alebo N;

Y predstavuje

I (a) fenylskupinu, ktorá Je poprípade substituovaná Jedným až troma substltuentml nezávisle zvolenými z množiny substltuentov vo význame R**;

(b) naftylskupinu, ktorá Je poprípade substituovaná Jedným až troma substltuentml nezávisle zvolenými z množiny substltuentov vo význame R**;

(c) cykloalkylskuplnu s 3 až 8 atómami uhlíka, ktorá Je poprípade substituovaná Jedným až dvoma substltuentml nezávisle zvolenými z množiny substltuentov vo význame R*;

Cd) cykloalkenylskupinu s 3 až 8 atómami uhlíka, ktorá Je » poprípade substituovaná Jedným až dvoma substltuentml nezávisle zvolenými z množiny substltuentov vo význame R*;

Ce) päťčlennú heterocykllckú skupinu. ktorá obsahuje až dva heteroatómy zvolené zo súboru zloženého z -0-, -NR^a- a -SCO)_n- a ktorá Je poprípade substituovaná Jedným až troma substltuentml nezávisle zvolenými z množiny substltuentov vo význame R⁴;

. i . ·' ’ . .

' I

Cf) päťčlennú heterocykllckú skupinu, ktorá obsahuje až dva heteroatómy zvolené zo súboru zloženého z -0-, -NR²- a -S(0)_n- a ktorá Je poprípade substituovaná Jedným až troma substltuentml nezávisle zvolenými z množiny substltuentov vo význame R⁴; alebo

Cg) bicykllcký kruhový systém, ktorý Je tvorený päť- alebo šesťčlenným heterocyklickým kruhom prlkondenzovaným k fenylovému kruhu, priCom tento heterocyklický kruh obsahuje až dva heteroatómy zvolené zo súboru zloženého z -0-, -NR^a- a -SCO)_n- a Je poprípade substituovaná Jedným až troma substltuentml nezávisle zvolenými z množiny substituentov vo význame R*s

Z¹ predstavuje skupinu s všeobecným vzorcom

C a) -CCHa)F.WCCH₂)_A-;

C b) -OCCH_a) p,CR^sR^A;

Cc) -OCCH_a)pWCCH_a>A-í

Cd) -OCHR^aCHR³-s alebo

Ce) -SCHR=CHR³-

G predstavuje skupinu s všeobecným vzorcom Ca) NR^xR^Bs “»-< z* \CH₂)n' kde n predstavuje Číslo 0, 1 alebo 2, m predstavuje

Číslo 1, 2 alebo 3, Z^a predstavuje -NH-, -0-,-Salebo -CH_a-; ktorá Je poprípade kondenzovaná prostredníctvom susediacich atómov uhlíka s Jedným alebo dvoma fenylovými kruhmis a poprípade nezávisle substituovaná na uhlíku Jedným až troma substltuentml a poprípade nezávisle substituovaná na dusíku chemicky vhodným substituentom zvoleným z- množiny významov R**·;

. i ¹ alebo

Cc) bicyklický amínový zvyšok s 5 až 12 atómami uhlíka, ktorý Je buď premostený alebo kondenzovaný a Je poprípade substituovaný Jedným až troma substltuentml nezávisle zvolenými z množiny významov R“* s alebo

Z¹ a G dokopy predstavujú skupinu s všeobecným vzorcom

U predstavuje skupinu so vzorcom

Ca) -CH_Ä-_:

Cb) —CH—CH—;

Cc) -O-s

Cd) -NR³-:

Ce) -SCO)_n-;

Cf) O

II

-C-s

Cg) —CR^aCOH)—;

Ch) -CONR³-;

Ci) —NR^aCO—;

R predstavuje atóm vodíka alebo alkylskupinu s 1 až 6 atómami uhlíka;

R³ a R³ nezávisle predstavuje

Ca) atóm vodíka

C b) alkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka; ,

R“* predstavuje

C a) atóm vodíka;

C b) atóm halogénu;

C c) alkylskupinu s 1 až 6 atómami uhlíka;

C d) alkoxyskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka;

Ce) acyloxyskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka: Cf) alkyltloskupínu s 1 až 4 atómami uhlíka;

Cg) alkylsulfinylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka;

(h) alkylsulfonylskuplnu s 1 až 4 atómami uhlíka;

(I) hydroxyalkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka;

(J) arylalkylskuplnu s 1 až 4 atómami uhlíka u alkylovej časti;

Ck) -CO_aH;

(l) -CN;

(m) -CONHOR;

(n) -SOaNHR;

(o) -NH_a;

(p) alkylaminoskuplnu s 1 až 4 atómami uhlíka;

(q) dlalkylamlnoskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v každej z alkylových častí;

(r) -NHSO_aR;

(s) -N0_a;

Ct) arylskuplnu; alebo

Cu) hydroxyskuplnu;

R® a R^A nezávisle predstavuje vždy alkylskupinu s 1 až 8 atómami uhlíka alebo dokopy tvoria karbocykllcký kruh s 3 až 10 atómami uhlíka;

R⁷ a R® predstavuje nezávisle vždy

C a) fenylskuplnu (b) nasýtený alebo nenasýtený karbocykllcký kruh s 3 až 10 atómami uhlíka;

(c) heterocyklický kruh s 3 až 10 atómami uhlíka, ktorý obsahuje až dva heteroatómy zvolené zo súbor'u zloženého z -0-, -N- a -S-; ¹ (d) atóm vodíka;

(e) alkylskupinu s 1 až 6 atómami uhlíka; alebo

C ť) R⁷ a R® dokopy s R® alebo R^A tvoria troj- až osemčlenný kruh, ktorý obsahuje dusík;

R*¹ a R® v lineárnej alebo kruhové forme sú poprípade substltuo vané až troma substltuentml nezávisle zvolenými zo súboru zloženého z alkylskuplny s 1 až 6 atómami uhlíka, halogénu, alkoxyskuplny, hydroxyskupiny a karboxyskuplny;

kruh.	ktorý Je	tvorený	R⁷ a	R^s	Je poprípade kondenzovaný k
fenylovému kruhu;
e	predstavuje	číslo	0.	1 alebo	2;
m	predstavuje	číslo	1,	2 alebo	3;
n	predstavuje	číslo	0,	1 alebo	2;
P	predstavuje	číslo	0,	1, 2 alebo	3;
q	predstavuje	číslo	0,	1, 2 alebo	3;

Ich optické a geometrické Izoméry, netoxické farmakologicky vhodné adičné soli s kyselinami, N-oxldy, estery a kvartérne amónlové soli.

Prednostnými zlúčeninami podía vynálezu sú zlúčeniny s všeobecným vzorcom

kde predstavuje skupinu so vzorcom

R* predstavuje atóm vodíka, hydroxyskupinu, atóm fluóru alebo chlóru a

B a E predstavuje nezávisle vždy CH alebo atóm dusíka.

Mimoriadne prednostné zlúčeniny sú zvolené zo súboru zloženého z cis-6-< 4-fluórfenyl) -5-Ľ 4-C 2-plperidin-l-yletoxy) fenylJ -5, 6, '7, 8-tetrahydronaftalen-2-olu;

C -) -cis-6-fenyl-5-C4-C 2-pyrolidin-l-yletoxy)fenyl]-5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-olu;

cls-6-fenyl-5-C4-C2-pyrolldin-l-:yletoxy)fenyl)-5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-olu;

C1S-1-C6'-pyrolldlnoetoxy-3’-pyrldylJ-2-fenyl-6-hydroxy-l, 2, 3, 4-tetrahydronaftalénu;

l-(4*-pyrolidinoetoxyfenyl)-2-C4-fluórfenyl)-6-hydroxy-l, 2, 3, 4-tetrahydrolzochlnolínu s cls-6-C4-hydroxyfenyl)-5-Ľ4-C2-plperidln-l-yletoxy)fenylJ- * -5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-olu; alebo l-<4*-pyrolldlnoletoxyfenyl)-2-fenyl-6-hydroxy-l, 2, 3, 4-tetrahydrolzochlnolínu.

Vyššie uvedené zlúčeniny podlá vynálezu sa Xahko pripravujú reakciami Ilustrovanými v ďalej uvedených schémach.

Niektoré zlúčeniny s všeobecným vzorcom I sa účelne pripravujú z nenasýtených medzlproduktov s všeobecným vzorcom II

(II) hydrogenáciou v prítomnosti katalyzátora na báze ušľachtilého kovu v rozpúšťadle, ktoré Je inertné voči tejto reakcii. Tlak a teplota nie sú kritickými parametrami a hydrogenácia sa normálne uskutočňuje počas niekoľkých hodín pri teplote miestnosti pri tlaku vodíka v rozmedzí od 137 kPa do 550 kPa.

I í

Hydrogenovaný produkt sa izoluje, poprípade prečistí a éterová skupina sa rozštiepi pôsobením kyslého katalyzátora v rozpúšťadle inertnom voči reakcii pri teplote v rozmedzí od 0 do 100 °C v závislosti od použitého kyslého katalyzátora. Zistilo sa, že pre túto reakciu Je vhodný bromovodík pri zvýšených teplotách, ako aj bromld borltý a chlorid hlinitý pri teplotách v rozmedzí od 0 °C do teploty okolia.

Produkt s všeobecným vzorcom I sa môže izolovať a prečistiť štandardnými postupmi.

• I , »

Medzlprodukty s všeobecným vzorcom II, kde A predstavuje metylénskupinu a B, D a E predstavujú skupiny so vzorcom CH, sú popísané v US patente č. 3 274 213 s J. Med. Chem. 10, 78 (1967);

J. Med. Chem. 10, 13Θ C1967) a J. Med. Chem. 12, 881 (1969). Všetky vyššie aj ďalej uvedené citácie sú tu uvedené náhradou za prenesenie ich celého obsahu do popisu tohoto vynálezu. Tieto zlúčeniny Je možné tiež vyrobiť postupmi popísanými ďalej.

Výroba zlúčenín s všeobecným vzorcom Z, kde e = 1, A = CH_a, Z¹ - OCH₂CH₂, G = cykloalkylamlnoskuplna a B = CH, Je znázornená v schéme 1. Zlúčeniny 1-2, kde D a E predstavujú vždy skupinu CH, Je možné pripraviť alkyláciou 4-brómfenolu zodpovedajúcim N-chléretylamlnom pri použití uhličitanu draselného, ako bázy, v polárnom aprotickom rozpúšťadle, ako Je dlmetylformamid, pri zvýšených teplotách. Prednostnou teplotou Je 100 °C. Zlúčeniny 1-2. kde D a/alebo E predstavuje atóm dusíka, sa syntetizujú pri použití nukleofilnej vytesňovacej reakcie. Pri tejto reakcii sa na dibromid C1-1) pôsobí hydroxyetylcykloalkylamínmi pri podmienkach fázového prenosu a tým sa získajú brómované amíny C1-2) CSynthesis, 77, 573 (19B0)]. Po výmene halogénu za kov, ktorá sa uskutočňuje pôsobením n-butyllítia alebo kovového horčíka, sa brómované amíny C1-2) prevedú na príslušné organolítne alebo organohorečnaté reakčné činidlá, ktoré sa podrobia reakcii pri nízkej teplote prednostne v prítomnosti chloridu cézneho (bez chloridu cézneho táto reakcia tiež prebieha) s 6-metyl-l-tetralóriom. Po kyslom spracovaní reakčnej zmesi sa získajú buď karbinoly (1-3) alebo styrény (1-4). Reakciou karbinolov (1-3) alebo styrénov (1-4) s bromačným činidlom, ako Je pyridíniumbromidperbromid, sa získajú brómované styrény (1-5). Bromidy (1-5) sa nechajú reagovať s aryl- alebo heteroarylzinokchloridmi alebo aryl- alebo heteroarylbórovýml kyselinami za prítomnosti katalyzátora na bázy kovového paládia, ako Je napríklad tetrakisítrifenylfosfín)paládium(O), za vzniku diarylstyrénov (1-6) CPure & Applied Chem. 63, 419 (1991) a Bull. Chem. Soc. Jpn. 61, 300Θ až 3010 (19B8)J. Pre prípravu prednostných zlúčenín sa pri tejto reakcii použijú substituované fenylzinokchloridy alebo substituované fenylbórové kyseliny.

Arylzinokchloridy lítiovaného sa reakčného pripravujú rozložením príslušného činidla bezvodým chloridom zinočnatým.

Arylbórové kyseliny.

ktoré nie sú obchodne dostupné, sa pripravujú prednostne nasleduje rozkladom trimetylspracovanie príslušného aryllítia trialkylborátom, alebo triizopropylborátom, po ktorom vodnou kyselinou (Acta Chemica Scan. 47,

221 až 230 C1993)). Lítlované reakčné činidlá, ktoré nie sú obchodne dostupné sa pripravujú výmenou halogénu za kov z príslušného bromldu alebo Iného halogenldu pOsobením n-butylalebo terc.butyllítla. Alternatívne Je možné lítlované reakčné činidlo pripraviť lltáclou ulahčenou prítomnosťou heteroatómu; tento spôsob Je popísaný v Organic Reactlons, zv. 27, kapitola 1. Katalytickou hydrogenáclou zlúčenín 1-6 v prítomnosti napríklad hydroxidu paládnatého na aktívnom uhlí, sa získajú zodpovedajúce Intermedlárne dlhydrometoxyzlúčenlny, ktoré sa potom demetylujú pOsobením bromldu borltého v metylénchlorlde pri 0 °C alebo pOsobením 49% bromovodíka v kyseline octovej pri teplote 80 až 100 °C, za vzniku delových štruktúr 1-7. Získané zlúčeniny sú racemlcké a racemáty Je možné štiepiť na enantloméry vysokotlakovou kvapalinovou chromatograflou pri použití stĺpca chlrálnej stacionárnej fázy, ako sú stĺpce Chlracel OD. Optické štiepenie Je možné alternatívne uskutočniť prekryštallzovaním dlastereolzomerlckých solí vytvorených s opticky čistými kyselinami, ako Je napríklad 1,1'-binaftyl-2,2'-diylhydrogenfosfát.

cis-Zlúčeniny C1-7) Je možné lzomerlzovať na trans-zlúčeniny pOsobením bázy.

Ak D a/alebo E predstavuje atóm dusíka, môžu sa medzlprodukty s všeobecným vzorcom II a zlúčeniny s všeobecným vzorcom I pripravovať z príslušných dlahalogénpyrldínov alebo pyrlmldínov spôsobom Ilustrovaným v schéme 1.

ľletyléter zlúčeniny s všeobecným vzorcom I, kde e - 1, A = CH₂, Z¹ = OCH_aCH₂; G = pyrolidínyl. D, EaB = CHaY = f enyl. Je i tiež možné účelne pripravovať tak, že sa' v prvom stupni uskutoční hydrogenácla nafoxidínu CUpJohn & Co., 700 Portage Road, Kalamazoo, 1*11 49 001 USA) v rozpúšťadle inertnom voči tejto reakcii v prítomnosti katalyzátora na báze ušXachtllého kovu. Teplota a tlak nie sú kritickými parametrami pri tejto reakcii. Reakcia sa účelne uskutočňuje v etanole pri teplote miestnosti počas približne 20 hodín pri tlaku 343 kPa.

Druhý stupeň spočíva v odštiepení metoxyskuplny, čo sa uskutočňuje účelne pri teplote miestnosti pri použití kyslého katalyzátora, ako Je bromid boritý, v rozpúšťadle Inertnom voči tejto reakcii, pri teplote 80 až 100 °C pôsobením bromovodíka a kyseliny octovej. Vzniknutý produkt sa izoluje konvenčnými metódami a poprípade prevedie na sol s kyselinou.

Schéma 1

alebo firľnCl firB<0H)_g, Pd(Ph₃P)₄

1-6

1-7

Zlúčeniny s všeobecným vzorcom I, sa pripravujú postupmi kde B predstavuje dusík, ilustrovanými v schémach 2 a 3.

s všeobecným vzorcom I, v schéme 2. Chloridy kyselín C2-1) poskytnú pri reakcii s arylsulbstituované sekundárne ämidy C2-2). redukujú lítiumalumíniumhydridom v

Syntéza zlúčenín dusík. Je znázornená C 2-1) kde B predstavuje arylsubstituovaných primárnymi amínmi Tieto zlúčeniny sa éterovom rozpúšťadle na acyláciou zlúčenín ¢2-3) amidy ¢2-4), ktoré sa oxldochlorlde fosforečnom

C2-3). Nasledujúcou terciárne získajú horúcom na ¢2-5).

sekundárne amíny aroylchloridml sa cyklizujú dihydroizochinolíniové soli sodným sa zo zlúčenín C2-5) Cieľové štruktúry sa získajú z demetyláciou bromidom boritým v metylénchloride.

získajú

Redukciou tetrahydroboritanom alkoxytetrahydroizochinolíny. posledných uvedených zlúčenín ^r°-Ci

R(CH₂),CONHY

R(CH₂>_cCH₂NHY .

1) CH]

2) BBr₃

2-3

Zlúčenina s všeobecným vzorcom I B = dusík

Syntéza zlúčenín s všeobecným vzorcom I, kde B predstavuje dusík. Je tiež popísaná v schéme 3. Sekundárne amíny C3-1) sa acyláciou benzyloxyaroylchlorldmi C3-2) prevedú na terclárne amldy C3-3), ktoré cykllzáclou horúcim oxldochlorldom fosforečným poskytnú soli dlhydrolzochlnolínu C3-4). Redukciou zlúčenín C3-4) tetrahydroborltanom sodným a nasledujúcou debenzyláclou vodnou kyselinou chlorovodíkovou sa získajú izochlnolíny C3-5), ktoré sa podrobia alkylácll vhodne funkclonallzovanýml chloridmi a demetylácll bromldom borltým za vzniku požadovaných cieľových štruktúr.

Schéma 3

C0C1

3-1 fl(CH₂),CH₈NHY

CHgC^Hj

ClCH₂(CH₂)_nG

zlúčenina s všeobecným vzorcom I

3-6

Iní agonlsti/antagonlstl estrogénu sú popísaní v US patente C. 4 133 814 (ktorý Je tu citovaný náhradou za prenesenie celého Jeho popisu do tohoto textu). Predmetom US patentu č. 4 133 814 sú deriváty 2-fenyl-3-aroylbenzotlofénu a 2-fenyl-3-aroylbenzotiofén-l-oxidu.

Lednicer et al.. J. Med. . Chem.. 12. 881 (1969) popisujú antagonistov estrogénu, ktorí zodpovedajú všeobecnému vzorcu

OR³

CH₃0

kde R® predstavuje fenylskupinu alebo cyklopentylskupinu a R³predstavuje atóm vodíka, skupinu so vzorcom

alebo -CH₂CHOHCH₂OH.

V US patente č. 3 234 090 sú popísaní agonlsti/antagonlstl estrogénu s všeobecným vzorcom

Ar

kde Ph predstavuje 1,2-fenylový zvyšok

Ar predstavuje monocykllckú karbocykllckú arylskupinu, ktorá Je substituovaná terclárnou amlno-nlžšou alkyloxyskuplnou, v ktorej Je terciárna aminoskuplna oddelená od oxyskuplny aspoň dvoma atómami uhlíka; R predstavuje atóm vodíka, alifatický zvyšok, karbocykllcký arylový zvyšok, karbocykllcký arallfatlcký zvyšok, heterocykllcký arylový zvyšok alebo heterocykllcký arallfatlcký zvyšok; skupina s všeobecným vzorcom -CC_nH_2ri_2)- predstavuje nerozvetvený alkylénový zvyšok s 3 až 5 atómami uhlíka nesúci skupiny Ar a h; ich soli, N-oxidy, soli ich N-oxidov a kvartérne amóniové zlúčeniny, ako aj spôsob výroby týchto zlúčenín.

V US patente č. 3 277 106 sú popísané bázické étery, ktoré vykazujú estrogén agonlstlcké/antagonlstické účinky, ktoré zodpovedajú všeobecnému vzorcu

kde Ph predstavuje 1,2-fenylénový zvyšok, Aŕ predstavuje monocyklický arylový zvyšok, ktorý Je substituovaný aspoň Jednou amlno-nlžšou alkyloxyskuplnou, v ktorej Je atúm dusíka oddelený od atómu kyslíka aspoň dvoma atómami uhlíka; R predstavuje arylový zvyšok a zvyšok so vzorcom -(C_nH_2n-a)- predstavuje nižšiu alkylénskupinu, ktorá spolu so zvyškom Ph tvorí šesť- alebo sedemčlený kruh, ktoré dva kruhové atómy uhlíka nesú skupiny Ar a R, ich soli, N-oxldy, soli ich N-oxidov a kvartérne amóniové zlúčeniny.

i • _t »

V US patente č. 3 274 213 sú popísaní agonlsti/antagonistl estrogénu s všeobecným vzorcom

kde Ri a R₂ nezávisle predstavuje vždy nižšiu alkylskuplnu alebo obidva dokopy tvoria spolu s atómom dusíka, ku ktorému sú pripojené päť- až sedemčlenný nasýtený heterocyklický zvyšok.

Druhou zlúčeninou podľa vynálezu môže byť ktorákoľvek z ďalej popísaných zlúčenín, ktoré rozmnožujú kostnú hmotu na úroveň, ktorá Je nad prahom kostnej fraktúry (čo Je podrobne popísané vo Uorld Health Organlzatlon Study Uorld Health Organlzatlon, Assessment of Fracture Risk and lts Application to Screenlng for Postmenopausal Osteoporosis (1994). Report of a UHO Study Group. Uorld Health Organlzatlon Technlcal Serles 843).

Ako druhú zlúčeninu podľa vynálezu Je možné použiť akýkoľvek prostaglandín alebo agonlstu/antagonlstu prostaglandínu. Odborníkom v tomto odbore bude zrejmé, že Je takisto možné použiť fluorid sodný, pyratyreoidný hormón (PTH), aktívne fragmenty paratyreoidného hormónu, rastový hormón alebo sekretagogy rastového hormónu. V nasledujúcich odstavcoch sú podrobnejšie popísané príklady druhej zlúčeniny.

Ako druhú zlúčeninu podľa vynálezu Je možné použiť akýkoľvek prostaglandín. Pod pojmom prostaglandín sa rozumejú zlúčeniny, ktoré sú analógmi prírodných prostaglandínov PGD_X, PGD_a, PGEj.,

PGEa a PGFací. ktoré sú užitočné pre liečenie osteoporózy. Tieto zlúčeniny sa viažu na receptory prostaglandínu. Túto väzbu môže odborník v tomto odbore ľahko stanoviť pri použití štandardných skúšobných

Expresslon postupov of the (napríklad An EP_a Suptype

S.

of et al., Cloning and Human Receptors for

Prostaglandín

Biochemlcal and

E_a,

Communication, 1993, 197(1)» 263 až¹270). I ' ' ,

Biophysical Research

Prostaglandíny sú alicyklické zlúčeniny odvodené od základnej zlúčeniny, kyseliny prostánovej. Atómy uhlíka základného prostaglandínu sa počítajú od karboxylového uhlíka cez cyklopentylový kruh k terminálnemu uhlíku na susednom bočnom reťazci. Normálne majú susedné vedľajšie reťazce orientáciu trans. Prítomnosť oxoskupiny na uhlíku C9 cyklopentylového zvyšku Je charakteristická pre prostaglandíny z triedy E, zatiaľ čo PGE_a obsahuje trans nenasýtenú dvojitú väzbu medzi uhlíkmi v polohách C₁₃-Ci4 a cls dvojitú väzbu medzi uhlíkmi v polohách Cs~V nasledujúcom texte sú popísané alebo uvedené rôzne prostaglandíny. Odborníkom v tomto odbore však budú známe ešte ďalšie prostaglandíny. Príklady prostaglandínov sú uvedené v US patentoch 4 171 331 a 3 927 197 (ktoré sú tu citované náhradou za prenesenie celého Ich textu do tohoto popisu).

Norrdin et al., The Role of Prostaglandlns ln Bone In Vivo, Prostaglandlns Leukotriene Essentlal Fatty Aclds 41, 139 až 150, 1990 podáva prehľad o prostaglandínoch s účinkom na kostné tkanivo.

Ako druhú zlúčeninu podľa vynálezu Je možné použiť akéhokoľvek agonistu/antagonlstu prostaglandínu. Pod pojmom agonlsta/antagonlsta prostaglandínu sa rozumejú zlúčeniny, ktoré sa viažu na receptory prostaglandínu Cnapríklad An S. et al., Cloning and Expresslón of the EP_a Subtype of¹Humán Receptors for Prostaglandln E₂> Blochemlcal and Blophyslcal Research Communlcatlon, 1993, 197(1)« 263 až 270) a napodobujú účinok prostaglandínu ln vivo Cnapríklad účinky odborník v tomto odbore ľahko stanoví pri použití štandardných skúšobných postupov, (napríklad Protokol o skúšaní anabollckých činidiel uvedený ďalej; Erlksen E.F. et al.. Bone Histomorphometry, Raven Press, Neu York, 1994, str. 1 až 74; Grier S.J. et al.» The Use of Dual-Energy X-Ray Absorptlometry In Anlmals, Inv. Radlol.. 1996» 31(1) s 50. až 62; Nahner H.U. a Fogelman I., The Evaluatlon of i

Osteoporosls > Dual Energy X-Ray Absorptlometry ln Cllnlcal Practlse, Martin Dunltz Ltd., London, 1994, str. 1 až 296). Príklady agonistov/antagonlstov prostaglandínu sú uvedené ďalej, odborníkom v tomto odbore Je však zrejmé, že existujú aj ďalší agonlsti/antagonlsti prostaglandínu. Konkrétne príklady agonistov/antagonlstov Je možné napríklad nájsť v ďalej uvedených dokumentoch.

V US patente č. 3 932 389 sú popísané 2-dekarboxy-2-

-(tetrazol-5-yl)-ll-deoxy-15-substltuované-omega-pentanorprostaglandíny, ktoré sú užitočné pre tvorbu kostného tkaniva.

V US patente č. 4 018 892 sú popísané p-blfenylestery 16-aryl-13,14-dihydro-PGE_a, ktoré sú užitočné pre tvorbu kostného tkaniva.

V US	patente č. 4 129	483
4-pyróny,	ktoré sú užitočné	pre
V US	patente Č. 4 132	847
4-pyrény,	ktoré sú užitočné	pre

sú popísané 2. 3, 6-substltuované tvorbu kostného tkaniva.

sú popísané 2, 3, 6-substltuované tvorbu kostného tkaniva.

V US patente č. 4 000 309 sú popísané p-blfenylestery 16-aryl-13,14-dlhydro-PGE_a, ktoré sú užitočné pre tvorbu kostného tkaniva.

V US patente č. 3 982 016 sú popísané p-bifenylestery 16-aryl-13, 14-dihyďro-PGE_a, ktoré sú užitočné pre tvorbu kostného tkaniva.

V US patente č. 4 621 100 sú popísané substituované cyklopentány, ktoré sú užitočné pre tvorbu kostného tkaniva.

V US patente č. 5 216 183 sú popísané cyklopentanóny, ktoré sú užitočné pre tvorbu kostného tkaniva.

Ako druhú zlúčeninu podlá vynálezu Je možné použiť tiež ¹ I · fluorid sodný. Pod pojmom fluorid sodný sa rozumejú všetky Jeho formy Cnapríklad fluorid sodný s pomalým uvoľňovaním, fluorid sodný s pretrvávajúcim uvoľňovaním). Fluorid sodný s pretrvávajúcim uvoľňovaním Je popísaný v US patente 4 904 478 (ktorý Je tu citovaný náhradou za prenesenie celého Jeho textu do tohoto popisu). Odborník v tomto odbore ľahko stanoví účinnosť fluoridu sodného pri použití štandardných biologických protokolov (pozri napríklad Protokol o skúšaní anabolických činidiel, tu a Erlksen E.F. et al.. Bone Hlstomorphometry, Raven Press, Neu York, 1994, str. 1 až 74s Grier S.J. et al., The Use of Dual-Energy X-Ray Absorptiometry In Anlmals, Inv. Radlol., 1996, 31(1)* 50 až 62; Wahner H.W. a Fogelman 1., The Evaluatlon of Osteoporosls» Dual Energy X-Ray Absorptiometry in Cllnlcal Practlce, Martin Dunltz Ltd.. London, 1994, str. 1 až 296).

Ako druhú zlúčeninu podľa vynálezu Je možné použiť akýkoľvek paratyreoldný hormón (PTH). Pod pojmom paratyreoldný hormón sa rozumie paratyreoldný hormón. Jeho fragmenty a metabollty a ich štruktúrne analógy, ktoré môžu stimulovať tvorbu kostného tkaniva a zvyšovať kostnú hmotu. Túto funkčnosť odborník v tomto odbore ľahko stanoví pri použití štandardných skúšobných postupov (pozri napríklad Protokol o skúšaní anabollckých činidiel, tu a Erlksen E.F. et al., Hlstomorphometry, Raven Press, Neu York, 1994, str. 1 až 74; Grier S.J. et al., The Use of Dual-Energy X-Ray Absorptiometry In Anlmals, Inv. Radlol., 1996, 31(1)t 50 až 62; Wahner H.U. a Fogelman I., The Evaluatlon of Osteoporoslst Dual Energy X-Ray Absorptiometry in Qlinical Practlce, Martin Dunltz Ltd., London, 1994. str. 1 až 296). Ďalej sú uvedené a popísané rôzne takéto zlúčeniny, aj keď odborníkom v tomto odbore budú známe ešte iné paratyreoldné hormóny. Príklady paratyreoidných hormónov sú uvedené v ďalej uvedených citáciách: Human

Parathyroid

Peptide Treatment of Vertebral Osteoporosls,

Osteoporosls Int., 3, (doplnok 1):

199 až 203;

PTH 1-34

Treatment of Osteoporosls uith Added Hormone Replacement Therapy:

Blochemical, Kinetic and Histologlcal Responses, Osteoporosls

Int. 1: 162 až 170.

' ' . . ¹ ' ' · . '

Ako druhú zlúčeninu podľa vynálezu Je možné použiť akýkoľvek rastový hormón alebo sekretagog rastového hormónu. Pod pojmom sekretagog rastového hormónu sa rozumejú zlúčeniny, ktoré stimulujú uvoľňovanie rastového hormónu alebo napodobujú Jeho účinok (napríklad zvyšujú tvorbu kostného tkaniva, čo vedie k zvýšeniu kostnej hmoty). Túto účinnosť odborník v tomto odbore ľahko stanoví pri použití štandardných skúšobných postupov (napríklad vyššie uvedených). Rôzne tieto zlúčeniny sú napríklad

popísané v	nasledujúcich PCT patentových publikáciách t HO
95/14666, UO	95/13069, UO 94/19367, UO 94/13696 a UO 95/34311.
Odborníkom v	tomto odbore však budú známe ešte Iné sekretagogy

rastového hormónu.

Ako sekretagogu rastového hormónu sa mimoriadna prednosť dáva N-E1C R)-E1,2-dihydro-l-metánsulfonylsplroC3H-lndol-3, 4'-piperldin]-1'-yl)karbonyl]-2-(fenylmetyloxy)etyl]-2-amlno-2-metylpropánamldu s Γ1Κ677.

Ako Iné prednostné sekretagogy rastového hormónu Je možné uviesť >

2-amlno-N-Ľ2-(3a-(R)-benzyl-2-metyl-3-oxo-2, 3, 3a, 4, 6, 7-hexahydropyrazoloE 4, 3-c]pyrldln-5-yl)-1-C R)-benzyloxymetyl-2-oxoetyl]lzobutyramld a Jeho L-tartrátovú soľ s

2-amlno-N—Cl-( R)-benzyloxymetyl-2-Ε 3a-(R)-(4-fluórbenzyl)-2-metyl -3-oxo-2, 3, 3a, 4, 6, 7-hexahýdropyrazoloĽ4, 3-c]pyridin-5-yl]-2-oxoety Dlžobu t yramld a

2—amino—N—E2— (3a—(R)— benzyl-3—oxo—2, 3, 3a, 4, 6, 7—hexahydropyrazolo— Ľ 4, 3-c]pyrldln-5-yl)-l-(R)-benzyloxymetyl-2-oxoetyl]Izobutyramld.

Všeobecne Je možné zlúčeniny podľa vynálezu pripravovať spôsobmi, ktoré zahrnujú postupy známe v odbore chémie, konkrétnejšie v svetle nasledujúceho popisu.

Niektoré préparatívne metódy ' na výrobu f « vynálezu môžu vyžadovať zlúčenín podľa¹

I funkčných skupín chránenie vzdialených (to znamená primárnych karboxyskupín). Potreba a sekundárnych amlnoskupín takého chránenia sa môže a ďalej meniť v závislosti od druhu vzdialenej funkčnej skupiny a podmienok použitých pri príprave. Potrebu takého chránenia môže odborník v tomto odbore ľahko určiť. Používanie metód zavádzanla/od štlepovanla chrániacich skupín leží v rozsahu skúseností bežného odborníka. Všeobecný popis chrániacich skupín a ich používania Je možné nájsť v publikácii T.U. Greene.

John Uiley & Sons,

Protectlve Groups in

Organic Synthesis, Východiskové látky

Neu York, USA

1991.

a reakčné činidlá pre výrobu zlúčenín podlá vynálezu sú syntetizovať ľahko dostupné bežnými metódami tiež alebo

Je organickej možné Ich ľahko syntézy známymi odborníkom v tomto odbore. Tak napríklad mnohé používané zlúčeniny sú deriváty. Na príbuzné prírodným látky tohoto typu sa zlúčeninám alebo Ide o ich upiera značný vedecký záujem a existuje po nich značný obchodný dopyt a v dôsledku toho sú mnohé z týchto medziproduktov obchodne dostupné alebo sú popísané v literatúre alebo sú ľahko prlpraviteľné z iných bežne dostupných látok metódami citovanými v literatúre. Takými zlúčeninami sú napríklad prostaglandíny.

Niektoré zlúčeniny podľa vynálezu obsahujú asymetrické atómy uhlíka a preto sa vyskytujú vo forme enantlomérov alebo diastereoizomérov. Diastereoizomerické zmesi Je možné deliť na individuálne dlastereoizoméry na základe ich fyzikálno-chemlckých odlišností o sebe známymi metódami, napríklad chromatografiou a/alebo * frakčnou kryštalizáciou. Enantioméry Je možné deliť tak, že sa enantiomerlcká zmes prevedie na dlastereolzomerickú zmes reakciou s vhodnou opticky aktívnou zlúčeninou (napríklad alkoholom)), potom sa oddelia dlastereoizoméry a Jednotlivé dlastereoizoméry sa prevedú (napríklad hydrolýzou) na príslušné čisté enantioméry.

Do rozsahu vynálezu patria všetky takéto izoméry, vrátane diastereoizomérov a enantlomérov, ako aj ich zmesi.

Napriek tomu, že mnohé zo zlúčenín podľa vynálezu nie sú ionizovateľné pri fyziologických podmienkach,' niektoré zo zlúčenín podľa vynálezu naopak ionizovateľné pri fyziologických podmienkach sú. Tak napríklad niektoré zo zlúčenín podľa vynálezu sú kyslé a môžu tvoriť soli s farmaceutický vhodnými katiónmi. Všetky takéto soli patria do rozsahu tohoto vynálezu a Je možné ich pripravovať konvenčnými metódami. Tak napríklad Je možné ich pripraviť Jednoducho tak, že sa kyslé a zásadité zložky zmiešajú.

obvykle v stechlometrlckom pomere, vo vodnom, nevodnom alebo čiastočne vodnom prostredí, podlá toho, ako Je to vhodné. Soli s Izolujú buď filtráciou alebo zrážaním nerozpúšťadlom s následnou filtráciou, alebo odparením rozpúšťadla alebo v prípade vodných roztokov tiež lyoflllzáciou, podlá toho, ako Je to vhodné.

Okrem toho, niektoré zo zlúčenín podlá vynálezu sú bázické a môžu tvoriť soli s farmaceutický vhodným aniónom. Všetky takéto soli patria do rozsahu tohoto vynálezu a Je možné Ich pripravovať konvenčnými metódami. Tak napríklad Je možné Ich pripraviť Jednoducho tak, že sa kyslé a zásadité zložky zmiešajú, obvykle v stechlometrlckom pomere, vo vodnom, nevodnom alebo čiastočne vodnom prostredí, podlá toho, ako Je to vhodné. Soli sa Izolujú buď filtráciou alebo zrážaním nerozpúšťadlom s následnou filtráciou, alebo odparením rozpúšťadla alebo v prípade vodných roztokov tiež lyoflllzáciou.

Niektoré zo zlúčenín podlá vynálezu tiež tvoria hydráty alebo solváty a tiež tieto formy patria do rozsahu vynálezu.

Farmaceutické kombinácie a postupy podľa tohoto vynálezu sú všetky prispôsobené liečebnému použitiu ako Činidlá, ktoré buď aktivujú obrat kosti alebo zabraňujú resorpcii kosti alebo zvyšujú tvorbu kostného tkaniva u cicavcov, predovšetkým ľudí. Keďže tieto procesy majú úzku spojitosť s vývojom osteoporózy a kostných chorôb, kombinácie podľa vynálezu svojim účinkom zabraňujú osteoporóze alebo Ju spomaľujú, potláčajú alebo revertujú.

Užitočnosť zlúčenín podľa vynálezu ako liečiv vhodných na I liečenie stavov, ktoré sú sprevádzané nízkou kostnou hmotou (napríklad osteoporózy) u cicavcov (napríklad ľudí, predovšetkým žien). Je možné demonštrovať pomocou účinnosti zlúčenín podľa vynálezu pri konvenčných skúškach a pri skúškach účinnosti in vitro a in vlvo popísaných ďalej (Protokol o kombinačnej a postupnej liečbe; Protokol o skúšaní agonlstov/antagonlstov estrogénu; Protokol o skúšaní anabollckých činidiel; In vlvo stanovenie väzby na receptory estrogénu; a Protokol o skúšaní rastového hormónu/sekretagogu rastového hormónu). Tieto skúšky predstavujú takisto prostriedok umožňujúci porovnanie účinnosti zlúčenín podlá vynálezu vzájomne a s účinnosťou Iných známych zlúčenín. Výsledky týchto porovnávacích skúšok sú užitočné pre určenie úrovne dávkovania u cicavcov. vrátane človeka, pri

I liečení takýchto chorôb.

Protokol o kombinačnej a postupnej liečbe

Nasledujúce protokoly samozrejme odborníci v tomto odbore môžu obmieňať. Tak Je pri štúdii napríklad možné použiť Intaktných samcov alebo samice krysy, krysích samcov alebo samice s deflcienciou pohlavných hormónov (orchidektomlzovaných alebo ovarlektomlzovaných). Okrem toho Je pre skúšky možné použiť samcov alebo samice krysy s rôznym vekom Cako napríklad asi 12 mesiacov). Krysy môžu byť Intaktné alebo kastrované Covariektúmiou alebo orchidektémiou), pričom sa im podávajú anabollcké činidlá, ako Je dávkach (ako napríklad 1, týždne až činidlo, ako prostaglandín E2 (PGE2) v rôznych alebo 6 mg/kg/deň) určitý čas (ako

I potom sa im podáva v rôznych dávkach (ako (ako napríklad 2 týždne mesiace) a napríklad 2 antlresorpčné napríklad 1, L>, až 2 mesiace). Alternatívne sa krysy činidlom a

Je

5, 10 mg/kg/deň) droloxlfen, určitý čas môžu podrobiť kombinačnému ošetreniu anabolickým rôznych dávkach určitý V prípade kastrovaných antiresorpčným činidlom v čas ( ako napríklad 2 týždne až 2 mesiace). krýs môže ošetrenie začať nasledujúci deň po výkone (pre ciele zabránenie strate kostného tkaniva) alebo v čase, kedy už došlo k strate kostného tkaniva (pre ciele Jeho znoVuobnovenla). . * »

I , .

Ďalej sú uvedené protokoly o skúškach pri použití PGE2, ako kostného anabollckého činidla a droloxlfenu, ako antlresorpčného činidla. Pri použití tohoto protokolu Je však možné skúšať aj Iné anabollcké a antlresorpčné činidlá.

104 samíc krysy Srague-Dauley (Charles River, Ullmlngton,

MA, USA) vo veku 12 mesiacov sa v mesiaci 0 podrobí fiktívnej operácií alebo sa ovarlektomlzuje (OVX). Tri mesiace po výkone sa ovarlektomizovaným krysám počas 2 mesiacov podáva buď prostaglandín E₂ (PGE2). známe kostné anabolické činidlo, v dávke 3 mg/kg/deň (subkutánnou injekciou) alebo PGE₂ v dávke 3 mg/kg/deň (subkutánnou injekciou) v kombinácií s droloxifenom (DRO) v dávke 10 mg/kg/deň (orálne). Potom sa ošetrovanie PGE₂preruší a krysy sa počas 1.5 mesiaca ošetrujú vehlkulom (102 alkohol v solnom roztoku) alebo DRO (10 mg/kg/deň. orálne) tak. ako Je to popísané ďalej.

Skupina I: Osem krýs sa obdukuje v čase 0 mesiacov, ako základná kontrola.

Skupina IIt Osem fiktívne operovaných krýs sa obdukuje v čase 3 mesiace, ako kontrola stavu pred ošetrením.

Skupina 111. Ôsmim fiktívne operovaným krysám sa v čase 3 až 5 mesiacov orálne podáva vehlkulum (102 etanol v solnom roztoku) a v čase 5 mesiacov sa uskutoční ich obdukcia.

I

Skupina IV» Ôsmim fiktívne operovaným krysám sa v čase 3 až

6,5 mesiaca orálne podáva vehlkulum (102 etanol v solnom roztoku) a v čase 6,5 mesiaca sa uskutoční ich obdukcia.

Skupina V. Osem ovarlektomlzovaných krýs sa v čase 3 mesiacov obdukuje, ako kontrola stavu pred ošetrením.

Skupina VI> Ôsmim ovarlektomizovaným krysám sa v čase 3 až 5 mesiacov orálne podáva vehlkulum (102 etanol v solnom roztoku) a v čase 5 mesiacov sa uskutoční ich obdukciaí

Skupina VII< Ôsmim ovarlektomizovaným krysám sa v čase 3 až

6,5 mesiaca orálne podáva vehlkulum (102 etanol v solnom roztoku) a v čase 6.5 mesiaca sa uskutoční ich obdukcia.

Skupina VIIIi Ôsmim ovarlektomizovaným krysám sa v čase 3 až mesiacov subkutánne injekciou podáva PGE2 v dávke 3 mg/kg/deň a v čase 5 mesiacov sa uskutoční ich obdukcia.

Skupina IX* Ôsmim ovariektomizovaným krysám sa v čase 3 až 5 mesiacov subkutánne injekciou podáva PGE2 v dávke 3 mg/kg/deň a v čase 5 až 6,5 mesiaca vehikulum a v čase 6,5 mesiaca sa uskutoční ich obdukcia.

Skupina X* Ôsmim ovariektomizovaným krysám sa v čase 3 až 5 mesiacov subkutánne injekciou podáva PGE2 v dávke 3 mg/kg/deň a v čase 5 až 6. 5 mesiaca orálne DRO v dávke 10 mg/kg/deň a potom sa v čase 6,5 mesiaca uskutoční ich obdukcia.

Skupina XI* Ôsmim ovariektomizovaným krysám sa v čase 3 až 5 mesiacov subkutánne injekciou podáva PGE2 v dávke 3 mg/kg/deň a orálne DRO v dávke 10 mg/kg/deň a potom sa v čase 5 mesiacov uskutoční ich obdukcia.

Skupina XII* Ôsmim ovariektomizovaným krysám sa v čase 3 až 5 mesiacov subkutánne injekciou podáva PGE2 v dávke 3 mg/kg/deň a orálne DRO v dávke 10 mg/kg/deň a v čase 5 až 6,5 mesiaca vehikulum a potom sa v čase 6,5 mesiaca uskutoční ich obdukcia.

Skupina XIII* Ôsmim ovariektomizovaným krysám sa v čase 3 až 5 mesiacov subkutánne injekciou podáva PGE2 v dávke 3 mg/kg/deň a orálne DRO v dávke 10 mg/kg/deň a v čase 5 až 6,5 mesiaca samotný DRO a potom sa v čase 6,5 mesiaca uskutoční ich obdukcia.

PGE2 (Cayman Chemical Co., Ann Arbor, Hl, USA) a droloxifen CPflzer Inc. Groton. CT, USA) vo forme'prášku sa najprv rozpustia

I v 100X etanole. Etanollcké roztoky sa ďalej zriedia soľným roztokom na požadovanú koncentráciu (konečná koncentrácia etanolu Je 10 X). Roztok PGE sa podáva denne subkutánnymi injekciami do chrbáta v dávke 1 ml/kg. Roztok droloxlfenu sa podáva perorálne každý deň v dávke 1 ml/krysa. Všetkým krysám sa subkutánnymi injekciami dvanásť dní a dva dni pred usmrtením podá 10 mg/kg kalceínu Cfluórchrómového kostného markeru. Sigma Chemical Co.,

St. Louis, 1*10, USA) s cieľom skúmania dynamických zmien v kostnom tkanive.

Krysy sa usmrtia pod anestéziou ketamínom. Na záver skúšky sa uskutočnia nasledujúce merania»

Stanovenie minerálov vo femure

Pri pitve sa každej kryse vyberie pravý femur a podrobí skenovaniu pri použití zariadenia na räntgenovú absorpclometrlu pri dvoch energetických úrovniach (duálna fotónová räntgenová technika, DXA, QDR 1000/U, Hologic Inc., Ualtham, MA, USA) vybaveného softvérom Reglonal High Resolution Scan CHologic Inc., Ualtham, MA, USA), pričom veľkosť snímaného poľa Je 50,8 x 19, 02 mm, rozlíšenie 0,254 x 0,127 mm a rýchlosť snímania 7,25 mm/s. Analyzujú sa skenové obrazce femuru a stanoví sa kostná plocha, minerálny obsah kosti (BMC) a minerálna hustota kosti (BMD) celého femuru CUF), distálnej femorálnej metafýzy (DFM), drieku femuru (FS) a proxlmálneho femuru (PF).

I

Stanovenie minerálov v bedrovej chrbtici

Pri použití zariadenia na räntgenovú absorpclometrlu pri dvoch energetických úrovniach Cduálna fotónová räntgenová technika, DXA, QDR 1000/U, Hologic ľne., Ualtham, MA, USA) vybaveného softvérom Reglonal High Resolution Scan (Hologic Inc., Ualtham, MA, USA) sa u anestetizovaných krýs stanoví kostná plocha, minerálny obsah kosti (BMC) a minerálna hustota kosti (BMD) celej bedrovej chrbtice a každého zo šiestich lumbálnych stavcov (LV1 až LV6)). Krysy sa anestetizujú lntraperitoneálnou injekciou 1 ml/kg zmesi ketamínu a rompunu u pomere 4:3 a potom umiestia na dosku pre krysy. Veľkosť snímaného poľa Je 60 x 19 mm, rozlíšenie 0,254 x 0,127 mm a rýchlosť snímania 7.25 mm/s. Získané skenové obrazce celej bedrovej chrbtice sa analyzujú. Stanoví sa kostná plocha (BA) a minerálny obsah kosti CBMC). Vypočíta sa minerálna hustota kosti (BMC delené BA) pre celú bedrovú chrbticu a pre každý zo šiestich lumbálnych stavcov (LVI až LV6).

Histomorfometrická analýza spongiózy proxlmálnej metafýzy tibie

Pri pitve sa vyberie pravá holenná kosť, svaly sa odpreparujú a kosť sa nareže na tri časti. Proxlmálna tíbia sa fixuje v 70% etanole, dehydruje etanolom s odstupňovanou koncentráciou, v acetóne zbaví tuku a potom uloží, do

I metylmetakrylátu (Eastman Organlc Chemicals, Rochester, ŇY, USA). Predné časti proxlmálnej metafýzy tibie sa pri použití zariadenia pre mikrorezy Relchert-Jung Polycut S narežú na hrúbku 4 a 10 um. Pre hlstomorfometriu spongióznej kosti sa použije Jeden 4ym rez a Jeden 10um rez od každej krysy. Rezy s hrúbkou 4 um sa ofarbia modifikovaným Massonovým farbivom Trichrome, zatlal čo lOum rezy sa ponechajú neofarbené.

Na statické a dynamické hlstomorfometrlcké merania sekundárnej sponglózy proxlmálnej metafýzy tibie medzi chrupky a epifýzy as použije OS/2 CR&N biometrics, Inc.,

1,2 a 3,6 mm distálne k Junkcil rastovej histomorfometrický systém Bioquant Nashvllle, TN, USA) . Prvých 1, 2 mm metafýzovej oblasti tibie Je nutné vynechať, aby sa meranie obmedzilo

I

Pre stanovenie a resorpcle kosti ukazatelov tvorby ukazateľĽov objemu sa použijú 4um rezy, kostného tkaniva na sekundárnu spongiózu. štruktúry kosti čo pre stanovenie kosti sa použijú kosti, zatiaľ obratu lOjjm rezy.

I. Meranie a výpočty objemu hubovitej kosti a štruktúry*

1. Celková plocha metafýzy CTV, mm^a)x plocha metafýzy medzi

1, 2 a 3, 6 mm distálne k Junkcil rastovej chrupky a epifýzy.

2. Plocha hubovitej kosti	•CBV,	mm®): celková	plocha
hubovitej kosti v TV.
3. Obvod hubovitej kosti CBS,	mm) x	dĺžka celkového	obvodu
hubovitej kosti.

4. Objem hubovitej kosti CBV/TV, %) χ BV/TV x 100.

5. Trabekulárne kostné číslo (TBN, tt/mm) « 1»199/2xBS/TV.

6. Hrúbka hubovitej kosti (TBT. um). (2000/1,199)x(BV/BS).

7. Trabekulárna kostná separácia (TBS, um).

(2000x1,199)x(TV-BV).

II. Meranie a výpočty resorpcle kosti

1. Počet osteoklastov (OCN, #). celkový počet osteoklastov v celej oblasti metafýzy.

2. Obvod osteoklastov COCP, mm). dĺžka obvodu hubovitej kosti pokrytej osteoklastmi.

3. Počet osteoklastov na milimeter (OCN/mrn, #/mm). OCN/BS.

4. Percentný obvod osteoklastov (XOCP, X). OCP/BSxlOO.

I

III. Meranie a výpočty tvorby kostného tkaniva a obratu kosti

1. Obvod raz značený kalceínom CSLS, mm), celková dĺžka obvodu hubovitej kosti s Jednou kalceínovou značkou.

2. Obvod dvakrát značený kalceínom CDLS, mm), celková dĺžka obvodu hubovitej kosti s dvoma kalceínovými značkami.

3. Vzdialenosť medzi značkami CILU, um), priemerná vzdialenosť medzi dvoma kalceínovými značkami.

» !

i

4. Percento mlnerallzovaného obvodu (PNS, X). (SLS/2+DLS)/BSxlOO.

5. Rýchlosť minerálnej apozícle (MAR, um/deň)> ILU/značkový Interval.

6. Rýchlosť tvorby kosti/povrch. ref. (BFR/BS, um^a/deň/um)« C SLS/2+DLS)xMAR/BS.

7. Rýchlosť obratu kosti (BTR, %/rok)» ( SLS/2+DLS)xMAR/BVxlOO.

Štatistické metódy

Štatistické metódy sa vypočítajú pri použití balíčka StatView 4.0 C Abacus Concepts, Inc., Berkeley, CA, USA). Na porovnanie rozdielov medzi skupinami Je možné použiť analýzu varlancie (ANOVA) a potom Flsherove PLSD.

Protokol o skúšaní agonistov/antagonistov estrogénu

Agonlsti/antagonisti estrogénu predstavujú triedu zlúčenín, ktoré inhibujú obrat (turnover) kostí a zabraňujú strate kostného tkaniva indukovanej nedostatkom estrogénu. Ako model postmenopauzálneho úbytku kostného tkaniva sa často používa model s ovarlektomizovanýml krysami. Pri použití tohoto modelu Je možné skúšať schopnosť agonistu/antagonistu estrogénu zabraňovať úbytku kostného tkaniva a lnhlbovať resorpciu kosti.

Pre štúdiu sa použijú samice krysy Sprague-Dauley (Charles Rlver, Uilmington, l*IA. USA) v rôznom veku (napríklad 5 mesiacov). Krysy sa počas skúšky chovajú Jednotlivo v klietkach 20 x 32 x 20 cm. Všetkým zvieratám sa ponechá voľný prístup k vode a peletizovanej potrave dostupnej na trhu (Aguay ProLab 3000. Aguay County Food, Inc., Syracuse, NY, USA) s obsahom 0,97 X vápnika, 0, 85% -fosforu a 1, 05 TU/g vitamínu D₃.

’ . f

I

Skupina krýs (8 až 10) sa podrobí fiktívnej operácii a ošetruje perorálnym podávaním vehlkula (10 % etanolu a 90 % soľného roztoku, 1 ml/deň), zatiaľ čo zvyšné krysy sa obojstranne ovariektomizujú (OVX) a určitý čas (ako napríklad 4 týždne) sa im podáva buď vehikulum (perorálne), 17a-estradlol (Sigma, Ε-Θ876, E_a, 30 ug/kg, denne subkutánnymi injekciami) alebo antagonisti/agonisti estrogénu Cako droloxifen v dávkach 5. 10 alebo 20 mg/kg, denne, perorálne). S cieľom sledovania dynamických zmien v kostnom tkanive sa 12 dní a 2 dni pred usmrtením všetkým krysám subkutánnyml Injekciami podá 10 mg/kg kalceínu Cfluórchrómový kostný marker). Po 4 týždňoch ošetrovania sa uskutoční pitva. Na záver skúšky sa uskutočnia tieto merania·

Prírastok telesnej hmotnosti: telesná hmotnosť pri obdukcil mínus telesná hmotnosť pri chirurgickom výkone.

Hmotnosť a histológia maternice: Počas pitvy sa každej kryse vyberie maternica, ktorá sa hneď odváži. Potom sa maternice podrobia histologickým meraniam, ako Je meranie plochy prierezu tkaniva, hrúbky strómy a luminálnej hrúbky epitelu.

Celkový obsah cholesterolu v sére: Krv získaná srdcovou punkciou sa nechá vyzrážať pri 4 °C a potom sa centrifuguje 10 minút pri 2000 x g. Vzorky séra sa analyzujú na celkový sérový cholesterol pri použití kalorimetrickej vysokovýkonnej skúšky na cholesterol C Boehringer Nannheim Biochemlcals. Indianapolls, IN, USA) .

Stanovenie minerálov vo femure

Pri pitve sa každej kryse vyberie pravý femur a podrobí skenovanlu pri použití zariadenia na róntgenovú spektrometriu pri dvoch energetických úrovniach Cduálna fotónová róntgenová technika, DXA ODR 1000/U, Hologic ľne., Ualtham, NA, USA) vybaveného softvérom Regional High Resolution Scan CHologic Inc., Ualtham, NA, USA), pričom veľkosť snímaného poľa,Je 50.8 x 19, 02 mm, rozlíšenie 0, 254 x 0,127 mm a rýchlosť snímania 7, 25 mm/s. Analyzujú sa skenové obrazce femuru a stanoví sa kostná plocha, minerálny obsah kosti CBNC) a minerálna hustota kosti CBND) celého femuru CUF), distálnej femorálnej metafýzy CDFN), drieku femuru CFS) a proximálneho femuru CPF).

Hlstomorfologická analýza sponglózy proximálnej metafýzy tíbie

Pri pitve sa vyberie pravá holenná kosť, svaly sa odpreparujú a kosť sa nareže na tri časti. Proximálna tíbia sa fixuje v 702 etanole, dehydruje etanolom s odstupňovanou koncentráciou, v acetóne zbav! tuku a potom ulož! do metylmetakrylátu (Eastman Organic Chemlcals, Rochester, NY, USA) . Predné časti proxlmálnej metafýzy tíble sa pri použití zariadenia pre mikrorezy Relchert-Jung Polycut S narežú na hrúbku 4 a 10 um. Pre hlstomorfometrlu sponglóznej kosti sa použije Jeden 4um rez a Jeden 10um rez od každej krysy. Rezy s hrúbkou 4 um sa ofarbia modifikovaným Massonovým farbivom Trichrome, zatiaT čo lOum rezy sa ponechajú neofarbené.

Na statické a dynamické hlstomorfometrlcké merania sekundárnej sponglózy proxlmálnej metafýzy tíbie medzi 1, 2 a 3,6 mm dlstálne k Junkcli rastovej chrupky a epifýzy sa použije histomorfometrický systém Bloquant OS/2 CR&ľl blometrlcs. Tne., Nashville, TN, USA). Prvých 1,2 mm metafýzovej oblasti tíble Je nutné vynechať, aby sa meranie obmedzilo Pre stanovenie ukazateTov objemu a resorpcle kosti ukazatelov tvorby 10um rezy.

sa použijú 4um rezy, kostného tkaniva na sekundárnu sponglózu. kosti, štruktúry kosti zatlaT čo pre stanovenie obratu kosti sa použijú

I. Meranie a výpočty objemu hubovitej kosti a štruktúry»

1. Celková plocha metafýzy CTU, mm²)» plocha metafýzy medzi 1,2 a 3,6 mm dlstálne k Junkcli rastovej chrupky a epifýzy.

2. Plocha hubovitej, kosti (BV, . mm²)» celková* plocha hubovitej kosti v TV. ^{1 1}

3. Obvod hubovitej kosti (BS, mm)» dĺžka celkového obvodu hubovitej kosti.

4. Objem hubovitej kosti (BV/TV, X)« BV/TV x 100.

5. Trabekulárne kostné číslo (TBN, tt/mm): 1,199/2xBS/TV.

6. Hrúbka hubovitej kosti (TBT, um)> C2000/1,199)xCBV/BS).

7. Trabekulárna kostná separácia (TBS, ym)» (2000x1, 199)x(TV-BV).

II. Meranie a výpočty resorpcle kosti

1. Počet osteoklastov (OCN, #)« celkový počet osteoklastov v celej oblasti metafýzy.

2. Obvod osteoklastov (OCP, mm): dĺžka obvodu hubovitej kosti pokrytej osteoklastml.

3. Počet osteoklastov na milimeter (OCN/mm, tt/mm)« OCN/BS.

4. Percentný obvod osteoklastov (XOCP. X)t OCP/BSxlOO.

III. Meranie a výpočty tvorby kostného tkaniva a obratu kosti

1. Obvod raz značený kalceínom (SLS, mm): celková dĺžka obvodu hubovitej kosti s Jednou kalceínovou značkou.

2. Obvod dvakrát značený kalceínom (DLS, mm): celková dĺžka obvodu hubovitej kosti s dvoma kalceínovýml značkami.

3. Vzdialenosť medzi značkami (ILU, um): priemerná vzdialenosť medzi dvoma kalceínovýml značkami.

¹ i ¹ ·

4. Percento mlneralizovaného obvodu (PMS, %): (SLS/2+DLS)/BSxlOO.

5. Rýchlosť minerálnej apozícle (MAR, ym/deň): ILU/značkový Interval.

6. Rýchlosť tvorby kostl/povrch. ref. (BFR/BS, ym*/deň/ym):

(SLS/2+DLS)xMAR/BS.

7. Rýchlosť obratu kosti (BTR. %/rok)· ( SLS/2+DLS)xMAR/BVxlOO.

Štatistické metódy

Štatistické metódy sa vypočítajú pri použití balíčka StatVieu 4.0 C Abacus Concepts. Inc., Berkeley, CA, USA). Na porovnanie rozdielov medzi skupinami Je možné použiť analýzu variancie (ANOVA) a potom Fisherove PLSD.

Protokol o skúšaní anabolických činidiel

Účinnosť činidiel s anabolickým účinkom na kosti pri stimulácii tvorby kosti a zvyšovaní kostnej hmoty Je možné skúšať na intaktných samcoch alebo samiciach krysy alebo na samcoch alebo samiciach krysy s deficienciou pohlavných hormónov Cpo orchidektómii alebo ovariektómil).

I .

I _t

Pre štúdiu sa použijú samci alebo samice krysy v rôznom veku * (napríklad 3 mesiacov). Buď intaktné alebo kastrované (ovariektomizované alebo orchidektomizované) krysy sa určitý čas (ako napríklad 2 týždne až 2 mesiace) ošetrujú subkutánnyml injekciami alebo perorálne anabolickými činidlami, ako napríklad prostaglandínom E2 (PGE2) v rôznych dávkach (ako napríklad 1, 3 alebo 6 mg/kg/deň). V prípade kastrovaných krýs sa ošetrovanie začne nasledujúci deň po výkone (pre ciele zabránenie strate kostného tkaniva) alebo v čase, kedy už došlo k strate kostného tkaniva (pre, ciele Jeho znovuobnovenla).. 'Všetkým zvieratám sa

I \ » počas skúšky ponechá volný prístup k vode* a pelétlzovanej potrave dostupnej na trhu (Teklad Rodent Diét #8064, Harlan Teklad, Madison, Ul, USA) s obsahom 1,46 X vápnika, 0.99 % fosforu a 4,96 lU/g vitamínu D_s * 12 dní a 2 dni pred usmrtením sa všetkým krysám subkutánnyml injekciami podá 10 mg/kg kalceínu (fluórchrómový kostný marker).

Krysy sa usmrtia a uskutočnia sa nasledujúce merania*

Stanovenie minerálov vo femure

Pri pitve sa každej kryse vyberie pravý femur a podrobí skenovaniu pri použití zariadenia na rčntgenovú spektrometriu pri 'dvoch energetických úrovniach (duálna fotónová rčntgenová technika, DXA ODR 1000/W, Hologic Inc., Ualtham, 1*1 A, USA) vybaveného softvérom Regional High Resolution Scan (Hologic Inc., Ualtham, MA, USA), pričom veľkosť snímaného poľa Je 50,8 x 19, 02 mm, rozlíšenie 0, 254 x 0,127 mm a rýchlosť snímania 7, 25 mm/s. Analyzujú sa skenové obrazce femuru a stanoví sa kostná plocha, minerálny obsah kosti (BMC) a minerálna hustota kosti CBMD) celého femuru (UF), distálnej femorálnej metafýzy (DFM), drieku femuru (FS) a proximálneho femuru (PF).

Histomorfologická analýza spongiózy proximálnej metafýzy tíbie

Pri pitve sa vyberie pravá holenná kosť, svaly sa odpreparujú a kosť sa nareže na tri časti. Proximálna tíbia sa fixuje v 70% etanole. dehydruje etanolom s odstupňovanou koncentráciou, v acetóne zbaví tuku a potom uloží do metylmetakrylátu CEastman Organic Chemicals, Rochester, NY, USA). Predné časti proximálnej metafýzy tíbie sa pri použití zariadenia pre mikrorezy Reichert-Jung Polycut S narežú na hrúbku 4 a 10 um. Pre histomorfometriu spongióznej kosti sa použije Jeden 4um rez a Jeden ΙΟμτη rez od každej krysy. Rezy s hrúbkou 4 um sa ofarbia modifikovaným Massonovým farbivom Trlchrome, zatiaľ čo 10um rezy sa ponechajú neofarbené.

I , ·

Na * statické * a dynamické histomorfometrické merania sekundárnej spongiózy proximálnej metafýzy tíbie medzi 1, 2 a 3, 6 mm distálne k Junkcii rastovej chrupky a epifýzy sa použije histomorfometrický systém Bioquant 0S/2 (R&M biometrics, Inc., Nashville, TN, USA). Prvých 1,2 mm metafýzovej oblasti tíbie Je nutné vynechať, aby sa meranie obmedzilo na sekundárnu spongiózu. Pre stanovenie ukazateľov objemu kosti. štruktúry kosti a resorpcie kosti sa použijú 4um rezy, zatiaľ čo pre stanovenie ukazateľov tvorby kostného tkaniva a obratu kosti sa použijú 10um rezy.

I. Meranie a výpočty objemu hubovitej kosti a štruktúry*

1. Celková plocha metafýzy (TV, mm®)» plocha metafýzy medzi

I, 2 a 3, 6 mm dlstálne k Junkcii rastovej chrupky a epifýzy.

2. Plocha hubovitej kosti (BV, mm²)» celková plocha hubovitej kosti v TV.

3. Obvod hubovitej kosti (BS, mm)* dĺžka celkového obvodu hubovitej kosti.

4. Objem hubovitej kosti (BV/TV, %)* BV/TV x 100.

5. Trabekulárne kostné číslo (TBN, #/mm)> 1,199/2xBS/TV.

6. Hrúbka hubovitej kosti (TBT, um): (2000/1,199)x(BV/BS).

7. Trabekulárna kostná separácia (TBS, um)« (2000x1, 199)x(TV-BV).

II. Meranie a výpočty resorpcie kosti

1. Počet osteoklastov (OCN, #)* celkový počet osteoklastov v celej oblasti metafýzy.

2. Obvod osteoklastov (OCP. mm): dĺžka obvodu hubovitej.

> I .

kosti pokrytej osteoklastml.

3. Počet osteoklastov na milimeter (OCN/mm, #/mm): OCN/BS.

4. Percentný obvod osteoklastov (XOCP, %): OCP/BSxlOO.

III. Meranie a výpočty tvorby kostného tkaniva a obratu kosti

1. Obvod raz značený kalceínom CSLS, mm)t celková dĺžka obvodu hubovitej kosti s Jednou kalceínovou značkou.

2. Obvod dvakrát značený kalceínom CDLS, mm)· celková dĺžka obvodu hubovitej kosti s dvoma kalceínovými značkami.

3. Vzdialenosť medzi značkami C ÍLU, um)x priemerná vzdialenosť medzi dvoma kalceínovými značkami.

4. Percento mineralizovaného obvodu C PI*IS, X) x C SLS/2+DLS)/BSxlOO.

5. Rýchlosť minerálnej apozície CMAR, um/deň)x ILU/značkový interval.

6. Rýchlosť tvorby kosti/povrch. ref. CBFR/BS, um^a/deň/um)x C SLS/2+DLS)xMAR/BS.

7. Rýchlosť obratu kosti CBTR, X/rok)x

CSLS/2+DLS)xMAR/BVxlOO.

Štatistické metódy

Štatistické metódy sa vypočítajú pri použití balíčka StatVieu 4.0 CAbacus Concepts, Inc., Berkeley, CA, USA). Na porovnanie rozdielov medzi skupinami Je možné použiť analýzu variancie CANOVA) a potom Fisherove PLSD.

In .vitro stanovenie väzby na receptory .estrogénu i .

Uskutoční sa väzbové skúška in vitro, pri ktorej sa zisťuje schopnosť estrogén agonistických/antagonistických zlúčenín podľa vynálezu vytesniť Ľ^sH]-estradiol z humánneho receptora estrogénu získaného rekombinantnými metódami v kvasinke, s cieľom stanovenia väzbovej afinity zlúčenín podľa vynálezu na receptor estrogénu. Pri tomto stanovení sa použijú tieto látky x

1. skúškový pufer TD-0,3 C s obsahom 10nl*i Trls s pH 7,6, 0,3 ΓΙ chlorid draselný a 5ml*l DTT s pH 7, 6)) ;

2. C³HJ-estradiol, ako rádioligand (od firmy Neu England Nuclear);

3. estradiol od firmy Sigma, ako studený ligand a

4. rekombinantý humánny receptor estrogénu hER.

Vyrobí sa roztok skúšanej zlúčeniny v TD-0, 3 s prísadou 4 % DFISO a 16 % etanolu. Tritiovaný estradiol sa rozpustí v TD-0, 3 na konečnú koncentráciu pre stanovenie 5nM. Tiež hER sa zriedi

TD-0, 3 tak, aby v každej skúšobnej Jamke bolo prítomných 4 až 10 ug proteínu celkovo. Pracuje sa s mikrotitrovými miskami a ku každému inkubátu sa pridá 50 ul studeného estradiolu (nešpecifická väzba) alebo roztoku zlúčeniny, 20 ul roztoku tritiovaného estradiolu a 30 ul roztoku hER. V každej miske sú obsiahnuté vždy tri replikácie celkovej väzbovej a meniacej sa koncentrácie zlúčeniny. Hisky sa inkubujú cez noc pri 4 °C. Potom

I sa väzbová reakcia ukončí prídavkom a premiešaním so 100 ml 3X hydroxylapatitu v lOmľl Tris s pH 7,6. Inkubácie sa uskutočňuje lť minút pri 4 °C. Zmesi sa odstredia a pelety sa 4 x premyjú vždy IX roztokom Hydroxylapatitové A a pri použití všetky dáta sa namáčadla Triton X100 v lOmň

Tris s pH 7, 6.

pelety sa suspendujú v kvapaline Ecoscint e-scintigrafie sa stanoví rádioaktivita. Pre vypočíta stredná hodnota počtu rádioaktívnych impulzov za minútu (cpm) z troch replikácií. Špecifická väzba sa vypočíta ' za minútu odčítaním nešpecifického počtu rádioaktívnych impulzov i (tento počet Je definovaný ako cpm, ktoré zostávajú po oddelení reakčnej zmesi s obsahom rekombinantého receptora.

rádioligandu a nadbytku neznačeného ligandu) od hodnoty cpm zodpovedajúcej celkovej väzbe (táto hodnota Je definovaná ako cpm, ktoré zostávajú po oddelení reakčnej zmesi s obsahom len rekombinantného receptora a rádioligandu). Účinnosť (potencia) zlúčeniny sa vyjadrí hodnotou IC_SO (táto hodnota Je definovaná ako koncentrácia zlúčeniny, ktorá Je potrebná pre 50X inhibíciu celkovej špecifickej väzby trltlovaného estradlolu). Stanoví sa špecifická väzba v prítomnosti meniacich sa koncentrácií zlúčeniny a vypočíta sa percentný podiel špecifickej väzby v celkovej špecifickej väzbe rádlollgandu. Dáta sa vynesú do grafu ako lnhlbícia zlúčeninou CX) (lineárna stupnica) proti koncentrácii zlúčeniny (logaritmická stupnica).

Protokol o skúšaní rastového hormónu/sekretagogu rastového hormónu

Zlúčeniny schopné stimulovať sekréciu rastového hormónu u kultúr buniek krysej hypofýzy Je možné identifikovať pri použití nasledujúceho protokolu. Táto skúška Je tiež užitočná pre porovnanie so štandardami pri stanovení úrovne dávky. Bunky sa Izolujú z podmozgových žliaz šesťtýždenných samcov krysy Uistar. Po dekapltácll sa predné laloky hypofýzy umiestia do chladného sterilného Hankovho vyváženého soľného roztoku, ktorý neobsahuje vápnik a horčík (HBSS). Tkanivá sa Jemne rozmelú, potom podrobia dvom cyklom mechanicky podporovanej enzymatlckej dispergácie pri použití bakteriálnej proteázy (EC 3.4.24.4. Sigma P-6141) v HBSS s koncentráciou 10 Jednotiek/ml. Zmes tkanív a enzýmu sa mieša v rotujúcej nádobe pri frekvencii otáčania 30 min^-1 v atmosfére 5X oxidu uhličitého pri asi 37 °C počas asi 30 minút, po asi 15 minútach a asi 30 minútach ručne trituruje pri použití 10ml pelety. Výsledná zmes sa asi 5 minút centrifúguJe pri 200 x g. K supernatantu sa pridá konské sérum, aby sa neutralizoval nadbytok proteázy. Peleta sa resuspenduje v čerstvej proteáze a vzniknutá suspenzia sa pri vyššie uvedených podmienkach približne 30 minút mieša a ručne trituruje, na záver, ihlou s veľkosťou 23. Pridá sa opäť konské sérum a potom sa bunky z obidvoch výluhov spoja, peletizujú (200 x g počas asi 15 minút), premyjú, resuspendujú v kultivačnom médiu a spočítajú. Bunky sa navzorkujú v množstve asi 6, 0 až 6, 5 x 10** buniek/cm² do 48-Jamkových misiek Costar a 3 až 4 dni kultivujú v Dulbeccom modifikovanom Eaglovom médiu (D-ΙΊΕΜ) doplnenom 4,5 g/llter glukózy, 10X konským sérom, 2,5X fetálnym hovädzím sérom, IX neesenclálnymi aminokyselinami, 100 U/ml nystatínu a 50 mg/ml gentamycínsulfátu a potom skúšajú na sekréciu rastového hormúnu.

Tesne pred skúškou sa kultivačné Jamky dvakrát premyjú a potom ekvlllbrujú asi 30 minút v uvoľňovacom médiu (D-MEM pufroyanom 25mM Hepes, pH 7, 4 a obsahujúcom 0, 52 hovädzí sérový albumín. pri 37 °C). Skúšané zlúčeniny sa rozpustia v dimetylsulfoxide a roztok sa zriedi predhriatym uvoľňovacím médiom. Skúšky sa uskutočňujú so štyrmi repllkáciaml. Skúška sa začne prídavkom 0,5 ml uvoľňovacieho média (obsahujúceho vehlkulum alebo skúšanú zlúčeninu) do každej kultivačnej Jamky.

Inkubácia sa uskutočňuje pri asi °C počas asi 15 minút a ukončí sa odstránením kultivačného média, ktoré sa centrifuguje pri 2000 x g počas asi 15 minút, aby sa odstránil bunkový materiál.

Koncentrácia krysieho rastového hormónu v supernatante sa stanoví pomocou štandardného protokolu rádioimunoeseje pri použití referenčných vzoriek krysieho hormónu (NIDDK-rGH-RP-2) a krysieho antiséra rastového hormónu vypestovaného v opiciach (NIDDK-anti-rGH-S-5) získaného od Dr. A. Parlowa (Harbor-UCLA Medical Center, Torrence, CA, USA). Ďalší krysí rastový hormón (1,5 Jednotky (mg, č. G2414, Scripps, Labs, San Diego, CA, UŠA) sa JóduJe na špecifickú aktivitu približne 30 yCl/ug pri použití metódy s chlóramínom T, ako značka. Imunokomplexy sa získajú prídavkom kozieho antiséra k opičiemu IgG (Organon Teknika, Durham, NC, USA) a polyetylénglykolu s molekulovou hmotnosťou 10 000 až 20 000 do konečnej koncentrácie 4,32; Izolácia sa uskutočňuje centrifugáclou. Táto skúška má rozmedzie pracovných parametrov 0, 08 až 2. 5 ug krysieho rastového hormónu na skúmavku nad základnými hladinami. Účinné zlúčeniny typicky stimulujú uvoľňovanie rastového hormónu viac ako.1, 4-krát. Odkaz: Chepg K., i ' . .

Chán U.-S., Barreto Jr. A., Convéy E.M., Smlth R.G., 1989.

Skúška exogénne stimulovaného uvolňovanla rastového hormónu u krýs po intravenóznom podaní skúšanej zlúčeniny

Samice krysy Sprague-Dauley vo veku 21 dní (Charles Rlver Laboratory, Uilmington, MA, USA) sa nechajú aklimatizovať na miestne podmienky vivárla <24 °C, s cyklom 12 hodín osvitu a 12 hodín tmy) počas asi 1 týždňa pred skúšaním. Všetkým krysám sa ponechá prístup k vode a peletizovanej potrave dostupnej na trhu (Aguay Country Food, Syracuse, NY, USA) ad llbltum.

Ten deň. kedy sa skúša, sa skúšané zlúčeniny rozpustia v vehlkulu obsahujúcom 1% etanol, lmM kyselinu octovú a 0, IX hovädzí sérový albumín v soľnom roztoku. Každá zlúčenina sa skúša pri n = 3. Krysy sa zvážia a anestetlzujú lntraperitoneálnou Injekciou sodnej soli pentobarbltalu (Nembutol, 50 mg/kg telesnej hmotnosti). 14 minút po podaní anestetika sa pre odber krvných vzoriek nadrežú konce chvostov a krv sa nechá kvapkať do mlkrocentrifugačných skúmaviek (základná krvná vzorka, približne 100 nl). 15 minút po podaní anestetika sa Intravenóznymi Injekciami do chvostovej vény podajú skúšané zlúčeniny, pri celkovom objeme injekcie 1 ml/mg telesnej hmotnosti. Ďalšie krvné vzorky sa z chvosta odoberú 5, 10 a 15 minút po podaní zlúčeniny. Krvné vzorky sa udržiavajú na ľade až do centrlfugačného oddelenia séra (1430 x g počas 10 minút pri 10 °C). Sérum sa skladuje pri -80 °C až dQ stanovenia rastového hormónu pomocou rádolmunoeseje, ako Je popísané vyššie a ďalej.

Hodnotenie exogénne stimulovaného uvoľňovania rastového hormónu u psov po orálnom podaní

Ten deň, kedy sa uskutoční 1 pokus, sa naviaže vhodná dávka skúšanej zlúčeniny a rozpustí sa vo vode. Vždy 4 psom pre každý dávkovací režim sa podajú žalúdočnou sondou dávky s objemom 0, 5 ml/kg. Vzorky krvi (2 ml) sa odoberajú z JugulárneJ vény priamou punkciou pred podaním dávky a 0. p8, 0,17, 0, 25. 0, 5, 0, 75, 1, . 2,

I I

4, 6 a 8 hodín po podaní pri použití 2ml vakutajnerov obsahujúcich lítiumheparín. Pripravená plazma sa až do analýzy skladuje pri -20 °C.

Meranie psieho rastového hormónu

Koncentrácia psieho rastového hormónu sa stanoví pomocou štandardného protokolu rádioimunoeseje pri použití psieho rastového hormónu (antigénu pre účely Jodácie a referenčnej vzorky AFP-1983B) a psieho antiséra rastového hormónu vypestovaného v opiciach (AFP-21452578) získaného od Dr. A. Parlowa (Harbor-UCLA ľledical Center, Torrence, CA, USA). Značka sa získa chlóramín-T Jodáciou psieho rastového hormónu na špecifickú aktivitu 20 až 40 uCi/yg. Imunokomplexy sa získajú prídavkom kozieho

Dur ham, NC, USA) a

000 až 20 000 antiséra k opičiemu IgG (Organon Teknlka polyetylénglykolu s molekulovou hmotnosťou do konečnej koncentrácie 4,3X; Izolácia sa uskutočňuje centrifugáciou. Táto skúška má rozmedzie pracovných • parametrov 0, 08 až 2, 5 ug psieho rastového hormónu na skúmavku.

Zlúčeniny podlá tohoto vynálezu Je možné podávať akýmkoľvek spôsobom pre systemickú a/alebo miestnu dodávku zlúčeniny podľa vynálezu. Ako tieto spôsoby Je možné uviesť orálne podávanie, parenterálne podávanie, intraduodenálne podávanie atď. Zlúčeniny podľa vynálezu sa obvykle podávajú orálne. Parenterálne podávanie (Intravenózne, intramuskulárne, subkutánne alebo intramedulárne) Je však možné využiť napríklad v prípadoch, kedy Je orálne , podávanie nevhodné vzhľadom na zvolený cieľ alebo kedy Je pacient neschopný požiť liečivo. Dve rôzne zlúčeniny podľa vynálezu môžu byť spolupodávané simultánne alebo následne v akomkoľvek poradí alebo môže byť podávaná Jediná farmaceutická kompozícia, ktorá zahrnuje prvú zlúčeninu uvedenú vyššie a druhú zlúčeninu uvedenú vyššie vo farmaceutický vhodnom nosiči.

Tak napríklad kostné anabollcké činidlo Je možné používať samotné alebo v kombinácii s antlresorpčným činidlom počas troch mesiacov až troch rokov, po . čom nasleduje doba troch mesiacov až troch rokov, počas ktorej sa podáva samotné antlresorpčné činidlo a celý cyklus liečenia Je možné opakovať. Alternatívne Je napríklad možné kostné anabollcké činidlo podávať samotné alebo v kombinácii s antlresorpčným činidlom počas troch mesiacov až troch rokov a potom sa zvyšok pacientovho života podáva samotné antlresorpčné činidlo. Tak napríklad pri Jednom prednostnom režime podávania môže byť vyššie uvedená druhá zlúčenina (napríklad PGE_a) podávaná raz za deň a vyššie uvedená prvá zlúčenina (napríklad agonista/antagonista estrogénu) môže byť podávaná denne vo forme jednej alebo niekoľkých dávok. Alternatívne pri inej prednostnom režime podávania Je možné podávať dve zlúčeniny následne po sebe, pričom vyššie uvedenú druhú zlúčeninu (napríklad PGE_a) Je možné podávať raz denne tak dlhý čas, , ktorý . Je dostatočný pre zvýšenie kostnej hmoty na úroveň, ktorá Je nad prahom kostnej fraktúry (Health Organization Study Assessment of Fracture Risk and its Applicatlon to Screening for Postmenopausal Osteoporosis (1994). Report of UHO Study Group. Uorld Health Organization Technical Šerieš 843) a potom nasleduje denné podávanie vyššie uvedenej prvej zlúčeniny (napríklad agonistu/antagonistu estrogénu) vo forme jednej alebo väčšieho počtu dávok. V prednostnej realizácii sa vyššie uvedená druhá zlúčenina (napríklad PGE_a) podáva raz denne vo forme na rýchlu dodávku, napríklad vo forme na orálnu dodávku (prednostne Je nutné sa vyhnúť napríklad dávkovacím formám s pretrvávajúcim uvoľňovaním).

Množstvo a doba podávania zlúčenín v každom prípade bude samozrejme závisieť od liečeného subjektu, spôsobu podávania a rozhodnutia predpisujúceho lekára. Vzhľadom na odlišnosti medzi Jednotlivými pacientmi Je nutné ďalej uvedené dávkovanie chápať len ako vodidlo a ošetrujúci lekár môže dávky liečiva modifikovať, aby sa dosiahla účinnosť (napríklad zvýšenie kostnej hmoty), ktorú považuje za vhodnú pre konkrétneho pacienta. Pri posudzovaní stupňa požadovanej účinnosti musí ošetrujúci lekár zvážiť rôzne faktory, ako východiskovú hladinu kostnej hmoty, vek pacienta, predchádzajúcu chorobu, ako aj prítomnosť iných chorôb (napríklád kardiovaskulárnych).. Tak napríklad* podávanie.

• I agonistu/antagonistu estrogénu môže mať kladný vplyv na kardiovaskulárny systém.

predovšetkým u žien po prechode. V nasledujúcich odstavcoch sú uvedené prednostné pre rôzne zložky podľa vynálezu.

Množstvo antiresorpčného činidla, ktoré má rozmedzia dávok byť použité, sa stanoví na základe Jeho účinnosti ako činidla inhibujúceho stratu kostnej hmoty. Táto účinnosti sa stanoví prostredníctvom farmakoklnetlky Jednotlivých zlúčenín a ich minimálnej a maximálnej účinnej dávky pri inhibícii straty kostnej hmoty podľa vyššie popísaného protokolu C protokol o skúšaní agonlstov/antagonlstov estrogénu).

Pre ciele vynálezu, napríklad pre ciele Inhibícle resorpcie * I kosti. leží účinná denná dávka prvej zlúčeniny podľa vynálezu obvykle v rozmedzí od 0, 01 do 200 mg/kg, prednostne od 0. 5 do 100 mg/kg.

Účinná denná dávka droloxlfenu konkrétne leží v rozmedzí od

0,1 do 40 mg/kg, prednostne od 0,1 do 5 mg/kg.

Účinná denná dávka raloxifenu konkrétne leží v rozmedzí od

0,1 do 100 mg/kg, prednostne od 0,1 do 10 mg/kg.

Účinná denná dávka tamoxifenu leží konkrétne v rozmedzí od

0,1 do 100 mg/kg, prednostne od 0,1 do 5 mg/kg.

> I ' Účinná denhá dávka cis-6-C4-fluórfenyl)-5-C4-C2-piperidin-l-yletoxy)fenyl]-5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-olu;

C-)-cis-6-fenyl-5-C 4-C 2-pyrolidin-l-yletoxy)fenyl]-5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-olu;

cis-6-fenyl-5-Ľ4-C2-pyrolidln-l-yletoxy)fenyl]-5, 6, 7, 8-tetrahydronaf.talen-r2-olu;

C1S-1-Ľ6' -pyrolidinoetoxy-3' -pyridyl]-2-fenyl-6-hydroxy-l, 2, 3, 4-tetrahydronaftalénu;

1-C4' -pyrolidinoetoxyfenyl)-2-C4-fluórfenyl)-6-hydroxy-l. 2, 3, 4-tetrahydrolzochlnolínu s cls-6-( 4-hydroxyfenyl) -5-Ľ 4-( 2-piperidin-l-yletoxy ) fenyl] -5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-olu a l-(4‘ -pyrolidinoletoxyfenyl)-2-fenyl-6-hydroxy-l, 2, 3, 4-tetrahydroizochlnolínu leží v rozmedzí od 0, 0001 do 100 mg/kg, prednostne od 0,001 do 10 mg/kg.

Účinná denná dávka 4-hydroxytamoxifenu leží v rozmedzí od 0,0001 do 100 mg/kg. prednostne od 0,001 do 10 mg/kg.

Kostné anabolické činidlo (napríklad PGE_a) sa obvykle používa v množstve, ktoré Je dostatočné pre zvýšenie kostnej hmoty na úroveň, ktorá Je nad prahom kostnej fraktúry (podrobnejšie Uorld Health Organization Study citovaná vyššie).

Účinná denná dávka kostného anabolického činidla uvedeného vyššie obvykle leží v rozmedzí od 0, 001 do 100 mg/kg. prednostne od 0,1 do 10 mg/kg.

Účinná denná dávka PGE₂ leží konkrétne v rozmedzí od 0, 001 do 10 mg/kg, prednostne od 0, 01 do 1 mg/kg.

Účinná denná dávka 3S-(3-hydroxy-4-fenylbutyl)-2R-C6-(2H-tetrazol-5-yl)hexyl]cyklopentanónu konkrétne leží v rozmedzí od 0,001 do 20 mg/kg, prednostne od 0,01 do 10 mg/kg.

Účinná denná dávka fluoridu sodného leží konkrétne v rozmedzí od .0, 01 do 50 mg/kg, prednostne od 0, 2 do Í0 mg/kg.

I

Účinná denná dávka paratyreoidného hormónu. Jeho metabolitov a fragmentov leží konkrétne v rozmedzí od 0,00001 do 1 mg/kg, prednostne od 0, 001 do 0, 5 mg/kg.

Účinná denná dávka rastového hormúnu alebo sekretagogu rastového hormónu leží konkrétne v rozmedzí od 0,0001 do 100 mg/kg, prednostne od 0,01 do 5 mg/kg.

Zlúčeniny podľa vynálezu sa obvykle podávajú vo forme farmaceutickej kompozície, ktorá obsahuje aspoň Jednu zo zlúčenín podľa vynálezu spolu s riedidlom.

Zlúčeniny podľa farmaceutický vhodným vehlkulom alebo vynálezu môžu byť teda podávané

Jednotlivo orálnych.

alebo spoločne parenterálnych v podobe ktorejkoľvek z obvyklých transdermálnych dávkovacích alebo foriem.

Na orálne podávanie tablety, pilulky, kapsulky, sa môžu prášky a obsahujúce rôzne exclplenty, ako použiť roztoky, suspenzie, pod. Je možné použiť tablety Je citran sodný, uhličitan vápenatý a fosforečnan vápenatý, spolu s rôznymi napučiavadlami.

ako Je škrob Cprednostne kukuričný, zemiakový alebo taplokový škrob) a určité komplexné slllkáty s granulačnýml spojivami, ako Je polyvlnylpyrolldón, sacharóza, želatína a živica. Pre tabletovacle ciele môžu byť prídavné prítomné lubrikačné činidlá, ako Je stearan horečnatý, nátrlumlaurylsulfát a mastenec. Pevné prostriedky podobného typu môžu byť tiež prítomné ako náplne v ¹ t ' ¹ ’ * I mäkkých alebo tvrdých želatínových kapsulkách. V tomto prípade obsahujú použité vysokomolekulárne a/alebo elixírov, prostriedky prednostne tiež laktózu alebo polyetylénglykoly. Pri výrobe vodných suspenzií ktoré sú vhodné pre orálne podávanie, sa môže účinná prísada miešať s rôznymi sladidlami alebo aromatlzačnýml látkami, farbiacimi prísadami či farbivami a - ak to Je potrebné - emulgátormi a/alebo suspenznými činidlami a ďalej tiež takými riedidlami, ako Je voda, etanol.

propylénglykol, glycerol a Ich rôzne kombinácie.

Na parenterálne podávanie sa môžu

I použiť roztoky buď v sezamovom alebo arašídovom propylénglykole, ako vodorozpustnej soli.

aj sterilné Vodné roztoky oleji, vodné alebo vo vodnom roztoky zodpovedajúcej by mail byť účelne pufrované (ak Je to nutné) a kvapalné riedidlo by lzotonlzované pridaním dostatočného množstva alebo glukózy. Takéto vodné roztoky sú vhodné malo byť najprv soľného roztoku pre Intravenózne, intramuskulárne, subkutánne a intraperltoneálne Injekčné podávanie. Výroba všetkých takýchto roztokov pri sterilných podmienkach sa lahko uskutočňuje štandardnými farmaceutickými technológiami, ktoré sú dobre známe odborníkom v tomto odbore.

Pre ciele transdermálneho (napríklad toplckého) podávania sa

I používajú zriedené sterilné vodné alebo čiastočne vodné roztoký

I ¹ (obvykle s koncentráciou 0,1 až 0,52), ktoré sa pripravujú podobným spôsobom ako parenterálne roztoky.

Spôsoby výroby rôznych farmaceutických kompozícií, ktoré obsahujú určité množstvo účinnej zložky, sú známe alebo budú odborníkom v tomto odbore zrejmé z tohoto popisu (pozri napríklad Remlngton's Pharmaceutlcal Sclences, Mack Publlshing Company, Easter, Pa, 15. vydanie (1975)).

Farmaceutické kompozície podlá vynálezu môžu obsahovať 0,1 až 95 2. prednostne 1 až 70 2, zlúčeniny alebo zlúčenín podlá vynálezu. V každom prípade však podávaná kompozícia alebo prípravok podlá vynálezu bude obsahovať zlúčeninu, alebo zlúčeniny podlá vynálezu v množstve účinnom pre liečbu choroby/stavu liečeného subjektu.

Keďže sa vynález týka zvyšovania a udržiavania kostnej hmoty pri použití kombinácie účinných zložiek, ktoré môžu byť podávané oddelene. Je predmetom vynálezu tiež kombinácia oddelených farmaceutických kompozícií vo forme kitu. Kit zahrnuje dve oddelené farmaceutické kompozície: agonlstu/antagonlstu estrogénu a anabollcké činidlo. Kit zahrnuje kontajner pre oddelené kompozície, ako Je napríklad rozdelená flaštička alebo rozdelený

I fóliový balíček. Kit obvykle zahrnuje pokyny na podávanie oddelených zložiek. Forma kltu Je velmi výhodná, keď sa oddelené zložky prednostne podávajú v rôznych dávkovacích formách (napríklad orálne a parenterálne), rôznych dávkových intervaloch alebo keď predpisujúci lekár vyžaduje odmeriavanie Jednotlivých zložiek kombinácie.

Ako príklad takého kitu Je možné uviesť tzv. bllstrové Cpretláčacie) balenie. V obalovom priemysle sú bllstre dobre známe a vo veľkej miere sa používajú na balenie farmaceutických Jednotkových dávkovacích foriem (tabliet, kapsuliek a pod.). Bllstre sú obvykle zložené z listu relatívne tuhého materiálu potiahnutého fóliou z prednostne transparentného plastického materiálu. Počas baliaceho procesu sa v plastickej fólii vytvarujú dvorce. Dvorce majú velkosť a tvar balených tabliet alebo kapsuliek. Potom sa do dvorcov umiestia tablety alebo kapsulky a na opačnú stranu (vzhľadom na smer v ktorom boli vytvorené dvorce) plastickej fólie sa pripevní list relatívne tuhého materiálu. Výsledkom Je, že tablety alebo kapsulky sú uzatvorené v dvorcoch medzi plastickou fóliou a listom. Pevnosť listu Je prednostne taká, že tablety alebo kapsulky Je možné z blistra vyberať tak, že sa rukou zatlačí na dvorec, pričom otvor v liste vznikne v mieste dvorca. Tablety alebo kapsulky Je možné vyberať vyššie popísaným postupom.

Do blízkosti tabliet alebo kapsuliek Je vhodné umiestiť pomôcku uľahčujúcu kontrolu odoberania dávkových foriem z balenia. Táto pomôcka môže mať podobu čísel, ktoré zodpovedajú dňom režimu, v ktorom majú byť tablety brané. Ako ďalší príklad Je možné uviesť kalendár, ako “Prvý týždeň, pondelok, utorok... atď., Druhý týždeň, pondelok. utorok...atď. Ďalšie varianty takýchto pomôcok sú úplne zrejmé. Dennú dávku Je možné podávať vo forme jedinej tablety alebo kapsulky alebo vo forme niekoľkých piluliek alebo kapsuliek, ktoré sa berú daný deň. Denná dávka kostného anabolického činidla môže byť zložená z jednej tablety alebo kapsulky. zatiaľ čo denná dávka antlresorpčného činidla môže byť zložená z niekoľkých* tabliet alebo kapsuliek. Tento prípad by mal byť zohľadnený v pomôckach uľahčujúcich kontrolu odoberania dávkových foriem z balenia.

Podľa inej konkrétnej realizácie sa používa dávkovač prispôsobený dávkovaniu denných dávok určitý čas v zamýšľanom poradí. Dávkovač Je prednostne vybavený pomôckou uľahčujúcou odoberania dávkových foriem, ak to pomáha zvyšovaniu kompliancie s režimom. Ako príklad pomôcky uľahčujúcej kontrolu odoberania dávkových foriem Je možné uviesť mechanické počítadlo oddelených denných dávok. Iným príkladom takejto pomôcky Je mikročlpová pamäť napájaná z batérie spojená s displejom s tekutými kryštálmi alebo zvukovým signálom, ktorý napríklad ukazuje dátum, kedy bola odobraná posledná dávka a/alebo pripomína kedy sa má brať ďalšia dávka.

Príklad realizácie vynálezu

Príklad

104 samíc krysy Srague-Dauley CCharles River. Uilmington, l*IA, USA) vo veku 12 mesiacov sa v mesiaci 0 podrobí fiktívnej operácii alebo sa ovariektomlzuje COVX). Tri mesiace po výkone sa ovariektomizovaným krysám počas 2 mesiacov podáva buď prostaglandín E_a (PGE2), známe kostné anabollcké činidlo, v dávke 3 mg/kg/deň Csubkutánnou injekciou) alebo PGE₂ v dávke 3 mg/kg/deň Csubkutánnou injekciou) v kombinácii s droloxlfenom CDRO) v dávke 10 mg/kg/deň (orálne). Potom sa ošetrovanie PGE_apreruší a' krysy sa počas 1,5 mesiaca ošetrujú vehikulom C10% alkohol v soľnom roztoku) alebo DRO C10 mg/kg/deň, orálne) tak, ako Je to popísané ďalej.

Skupina I> Osem krýs sa obdukuje v čase 0 mesiacov, ako základná kontrola.

Skupina II t Osem fiktívne operovaných krýs sa obdukuje v čase 3 mesiace, ako kontrola stavu pred ošetrením.

¹ i , ¹ '

Skupina III. Ôsmim fiktívne operovaným krysám sa v čase 3 až 5 mesiacov orálne podáva vehlkulum C10% etanol v soľnom roztoku) a v čase 5 mesiacov sa uskutoční ich obdukcia.

Skupina IVt Ôsmim fiktívne operovaným krysám sa v čase 3 až

6,5 mesiaca orálne podáva vehlkulum (10% etanol v soľnom roztoku) a v čase 6, 5 mesiaca sa uskutoční ich obdukcia.

Skupina VI; Ôsmim ovarlektomlzovaným krysám sa v čase 3 až 5 mesiacov orálne podáva vehlkulum C1OX etanol v soľnom roztoku) a v čase 5 mesiacov sa uskutoční Ich obdukcla.

I

Skupina VII> Ôsmim ovarlektomlzovaným krysám sa v čase 3 až

6,5 mesiaca orálne podáva vehlkulum (10X etanol v soľnom roztoku) a v čase 6,5 mesiaca sa uskutoční Ich obdukcla.

Skupina VIII. Ôsmim ovarlektomlzovaným krysám sa v čase 3 až 5 mesiacov subkutánne Injekciou podáva PGE2 v dávke 3 mg/kg/deň a v čase 5 mesiacov sa uskutoční Ich obdukcla.

Skupina IX; Ôsmim ovarlektomlzovaným krysám sa v čase 3 až 5 mesiacov subkutánne Injekciou podáva PGE2 v dávke 3 mg/kg/deň a v čase 5 až 6,5 mesiaca vehlkulum a v čase 6,5 mesiaca sa uskutoční Ich obdgkcia.

Skupina X. Ôsmim ovarlektomlzovaným krysám sa v čase 3 až 5 mesiacov subkutánne Injekciou podáva PGE2 v dávke 3 mg/kg/deň a v čase 5 až 6, 5 mesiaca orálne DRO v dávke 10 mg/kg/deň a potom sa v čase 6,5 mesiaca uskutoční ich obdukcla.

Skupina XI. Ôsmim ovarlektomlzovaným krysám sa v čase 3 až 5 mesiacov subkutánne Injekciou podáva PGE2 v dávke 3 mg/kg/deň a orálne DRO v dávke 10 mg/kg/deň a potom sa v čase 5 mesiacov uskutoční Ich obdukcla'. , ,

Skupina XII> Ôsmim ovarlektomlzovaným krysám sa v čase 3 až 5 mesiacov subkutánne Injekciou podáva PGE2 v dávke 3 mg/kg/deň a orálne DRO v dávke 10 mg/kg/deň a v čase 5 až 6,5 mesiaca vehlkulum a potom sa v čase 6, 5 mesiaca uskutoční Ich obdukcla.

Skupina XIII< Ôsmim ovarlektomlzovaným krysám sa v čase 3 až mesiacov subkutánne injekciou podáva PGE2 v dávke 3 mg/kg/deň a orálne DRO v dávke 10 mg/kg/deň a v Čase 5 až 6,5 mesiaca samotný DRO a potom sa v Čase 6, 5 mesiaca uskutoční ich obdukcla.

PGE2 (Cayman Chemlcal Co., Ann Arbor, MI, USA) a droloxifen (Pfizer Inc. Groton, CT, USA) vo forme prášku sa najprv rozpustia i

v 1002 etanole. Etanolické roztoky sa ďalej zriedia solným roztokom na požadovanú koncentráciu (konečná koncentrácia etanolu Je 10 2). Roztok PGE₂ sa podáva denne subkutánnymi injekciami do chrbáta v dávke 1 ml/kg. Roztok droloxifenu sa podáva perorálne každý deň v dávke 1 ml/krysa.

Stanovenie minerálov v bedrovej chrbtici

Pri použití zariadenia na rdntgenovú absorpclometrlu pri dvoch energetických úrovniach (duálna fotónová rčntgenová technika, DXA, ODR 1000/U, Hologic Inc., Ualtham, MA, USA) vybaveného softvérom Regional High Resolution Scan (Hologic Inc., Ualtham, MA, USA) sa u anestetizovaných potkanov stanoví kostná plocha, minerálny obsah kosti (BMC) a minerálna hustota kosti (BMD) celej bedrovej chrbtice a každého zo šiestich lumbálnych stavcov (LV1 až LV6)). Krysy sa anestetlzujú intraperitoneálnou injekciou 1 ml/kg zmesi ketamínu a rompunu v pomere 4*3 a potom umiestia na dosku pre krysy. Veľkosť snímaného poľa Je 60 x 19 mm, rozlíšenie 0,254 x 0,127 mm a rýchlosť snímania 7, 25 mm/s. Získané skenové obrazce celej bedrovej chrbtice sa analyzujú. Stanoví sa kostná plocha (BA) a minerálny obsah kosti (BMC). Vypočíta sa minerálna hustota kosti (BMC delené BA) pre celú bedrovú chrbticu a pre každý zo šiestich lumbálnych stavcov (LV1 až LV6).

' ' ' ' I ¹ '

V dobe 3, 5 alebo 6,5 mesiaca po chirurgii Je u ovariektomizovaných potkanov v porovnaní s fiktívne operovanými kontrolnými zvieratami pozorované významné zníženie BMC a BMD celej bedrovej chrbtice aj všetkých bedrových stavcov a to o 15 až 27 %. Krysy 3 mesiace po ovariektómii ošetrované buď samotným PGE₂ alebo kombináciou s DRO počas 2 mesiacov majú minerály obsah kosti (BMC) a minerálnu hustotu kosti (BMD) úplne obnovené na úroveň fiktívne operovaných kontrolných zvierat. Nebol zistený žiadny rozdiel v BMC a BMD u ovariektomizovaných krýs liečených PGE₂ samotným alebo PGE₂ v kombinácii s DRO, čo ukazuje, že DRO neoslabuje anabolické účinky PGE₂. Po prerušení liečenia PGE₂bolo pozorované významné zníženie BI*ID Ľ VI, LV2 a LV3 a BMC LV2. Oproti tomu, keď týmto ovariektomizovaným krysám bol po prerušení podávania PGE₂ podávaný DRO, bola PGE₂-obnovené kostné tkanivo úplne zachované. Podobne prerušenie podávania ako PGE₂, tak aj DRO počas 1.5 mesiaca viedlo k významnému zníženiu BMD LV3. Keď _t sa však preruší podávanie PGE₂ a v liečení DRO sa pokračuje počas • 1,5 mesiaca, v bedrovej chrbtici ovariektomizovaných krýs nie Je • zistená žiadna strata kostného tkaniva. Dospeli sme k záveru, že

DRO, antiresorpčné činidlo, u osteogenických potkanov neoslabuje anabolické účinky PGE₂. Okrem toho sme zistili, že DRO Je účinný pri zachovaní PGE₂-obnoveného kostného tkaniva po prerušení liečby PGE₂. Tieto dáta podporujú opodstatnenosť prístupu, ktorý spočíva v tom, že sa najprv použije anabolické činidlo, aby sa v osteoporotickej kostre obnovila kostná hmota a potom antiresorpčné činidlo, aby sa obnovená kostná hmota zachovala.

Vynález sa neobmedzuje na konkrétne ¹ popísané realizácie a môže byť obmieňaný alebo modifikovaný bez toho, aby to predstavovalo odklon od ducha vynálezu či Jeho rozsahu, ktorý Je daný pripojenými patentovými nárokmi.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY « * *

1. Farmaceutická kompozícia, v y z n a Č u'J >-ú- c* .a s a t ý m, že zahrnuje

a. terapeuticky účinné množstvo prvej zlúčeniny, pričom touto prvou zlúčeninou Je agonista/antagonista estrogénu; a

b. terapeuticky účinné množstvo druhej zlúčeniny, pričom touto druhou zlúčeninou Je prostaglandíri alebo agonista/antagonista prostaglandínu.
2. Farmaceutická kompozícia podľa nároku 1. vyznačujúca sa tým, že prídavné obsahuje farmaceutický nosič.
3. Farmaceutická kompozícia podľa nároku 2, vyznačujúca sa tým, že agonistom/antagonistom estrogénu Je droloxifen»¹ raloxlfen, tamoxifen,
4-hydroxytamoxlfen, t

cis-6-C4-fluórfenyl)-5-[4-(2-piperidin-l-yletoxy)fenyl]-5,6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-ol;

(-)-cls-6-fenyl-5-[4-(2-pyrolldin-l-yletoxy)fenylJ-5, 6, 7,8-tetrahydronaftalen-2-ol;

cls-6-fenyl-5-C4-(2-pyrolidin-l-yletoxy)fenyl]-5, 6, 7,8-tetrahydronaftalen-2-ol;

I

I

C1S-1-Ľ6'-pyrolidinoetoxy-3’ -pyridyl3-2-fenyl-6-hydroxy-l,2,3,4-tetrahydronaftalén;

l-<4’-pyrolidinoetoxyfenyl)-2-C4-fluórfenyl)-6-hydroxy-l,2,3,4-tetrahydrolzochlnolín;

cis-6-(4-hydroxyfenyl)-5-Ľ 4-C 2-piperidln-l-yletoxy)fenyl]77

-5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-ol alebo

1-C4*-pyrolldlnoletoxyfenyl)-2-fenyl-6-hydroxy-l, 2, 3, 4-tetrahydroizochinolín.

,4. Farmaceutická kompozícia podľa nároku 3, vyznačujúca sa tým, že druhou zlúčeninou Je PGD_t, PGD_a. PGEí, PGE_a, PGF_a. PGF_acŕ alebo 3S-(3-hydroxy-4-fenylbutyl)-2R-C6-ClH-tetrazol-5-yl)hexyllcyklopentanón.

t
5. Farmaceutická kompozícia podľa nároku 4, vyznaču- * Júcasatým. že agonlstom/antagonistom estrogénu Je droloxlfen.
6. Farmaceutická kompozícia podľa nároku 5, vyznačujúca sa tým. že druhou zlúčeninou Je PGE_a.
7. Farmaceutická kompozícia podľa nároku 5, vyznačujúca sa tým, že druhou zlúčeninou Je 3S-<3-hydroxy-4-fenylbutyl)-2R-C 6-< 2H-tetrazol-5-yl)hexyl]cyklopentanún.
8. Farmaceutická kompozícia podľa nároku 4, vyznačujúca sa tým, že agonlstom/antagonistom estrogénu Je cls-6-C4-fluérfenyl)-5-[4-C2-plperidin-l-yletoxy)feriylJ-5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-ol;

<-)-cis-6-fenyl-5-C4-(2-pyrolidin-l-yletoxy)fenylJ-5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-ol;

•I β I·

I · ·.

, ·I cis-6-fenyl-5-C 4-(2-pyrolidin-l-yletoxy)fenylJ-5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-ol;

CÍS-1-E6'-pyrolldlnoetoxy-3'-pyridyl]-2-fenyl-6-hydroxy-l, 2, 3, 4-tetrahydronaftalén;

1-C4'-pyrolidlnoetoxyfenyl)-2-(4-fluórfenyl)-6-hydroxy-l, 2, 3, 478

-tetrahydroizochlnolín;

cls-6-C 4-hydroxyfenyl)-5-E 4-< 2-plperidin-l-yletoxy)fenyl]-5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-ol alebo

1-C4‘-pyrolidinoletoxyfenyl)-2-fenyl-6-hydroxy-l, 2, 3, 4-tetrahydrolzochlnolín.
9. Farmaceutická kompozícia podľa nároku 8, vyznačujúca sa tým, že druhou zlúčeninou Je PGE₂.
10. Farmaceutická kompozícia podľa nároku 8. vyznačujúca sa tým, že druhou zlúčeninou Je 3S-C3-hydroxy-4-f enylbutyl) -2R-E 8-C 2H-tetrazol-5-yl) hexyl] cyklopentariún.
11. Kombinácia účinných látok pre použitie pri liečení stavu, ktorý sa prejavuje nízkou kostnou hmotou, vyznačujúca sa t ý m, že zahrnuje prvú zlúčeninu, ktorou Je agorilsta/antagonista estrogénu; a druhú zlúčeninu, ktorou Je prostaglandín ^lebo agonlsta/antagonlsta prostaglandínu.
12. Kombinácia podľa nároku 11, vyznačujúca sa t ý m, že agonlstom/antagonistoin estrogénu Je droloxlfen, raloxifen, tamoxlfen, 4-hydroxytamoxifen, cis-6-C4-fluórfenyl>-5-[4-(2-piperidin-l-yletoxy)fenyl]-5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-ol;

(-)-cis-6-fenyl-5-C4-(2-pyrolidin-l-yletoxy)feriyl]-5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalpn-2-ol; ¹ * .

cls-6-fenyl-5-C4-<2-pyrolidln-l-yletoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol;

C1S-1-Ľ6'-pyrolldlnoetoxy-3' -pyrldylJ-2-fenyl-6-hydroxy-l, 2, 3, 4-tetrahydronaftalén;

1-C4' -pyrolldinoetoxyfenyl)-2-<4-fluórfenyl)-6-hydroxy-l, 2, 3, 4-tetrahydroizochinolln;

cis-6-( 4-hydroxyf enyl) -5-E 4-C 2-piperidln-l-yletoxy) fenyl] -5,6,7, 8-tetrahydronaftalen-2-ol alebo l-(4' -pyrolldinoletoxyfenyl)-2-fenyl-6-hydroxy-l, 2„3, 4-tetrahydrolzochlnolín.
13. Kombinácia podľa nároku 12, vyznačujúca sa tým, že druhou zlúčeninou Je PGDi, PGD₂, PGEí, PGE₂, PGF_a, PGF_a<* alebo 3S-C 3-hydroxy-4-fenylbutyl) -2R-C 6-( lH-tetrazol-5-yl) hexyl]cyklopentanón.
14. Kombinácia podľa nároku 13, vyznačujúca sa tým, že agonistom/antagonistom estrogénu Je droloxifen.
15. Kombinácia podľa nároku 14, vyznačujúca sa t ý m, že druhou zlúčeninou Je PGE_a.
16. Kombinácia podľa nároku 14, vyznačujúca sa tým, že druhou zlúčeninou Je 3S-C3-hydroxy-4-fenylbutyl)-2R-[6-(lH-tetrazol-5-yl)hexyl]cyklopentanón.
17. Kombinácia podľa nároku 14, vyznačujúca sa tým, že stavom, ktorý sa prejavuje nízkou kostnou hmotou. Je osteoporóza.
18. Kombinácia podľa nároku 13, vyznačujúca sa t ý m, že agonistom/antagonistom estrogénu Je · ' ,

I · cis-6-C4-fluórfenyl)-5-Ľ4-C2-plperidln-l-yletoxy)fenyl]-5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-ol;

(-)-cis-6-fenyl-5-C4-C2-pyrolldln-l-yletoxy)fenyl]-5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-ol;

cls-6-fenyl-5-C4-C2-pyrolldin-l-yletoxy)fenyl)-5»6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-ol;

C1S-1-Ľ6'-pyrolldinoetoxy-3' -pyridyl)-2-fenyl-6-hydroxy-l, 2, 3, 4-tetrahydronaftalén;

»

1-C4'-pyrolldlnoetoxyfenyl)-2-C4-fluúrfenyl)-6-hydroxy-l, 2, 3» 4-tetrahydroizochinolín;

cis-6-C 4-hydroxyfenyl)-5-C 4-C2-p±peridin-l-yletoxy)fenyl)-5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-ol alebo

1-C4’-pyrolldinoletoxyfenyl)-2-fenyl-6-hydroxy-l, 2, 3, 4-tetrahydroizochlnolín.
19. Kombinácia podľa nároku 18, vyznačujúca sa tým, že druhou zlúčeninou Je PGE₂.
20. Kombinácia podľa nároku 18, vyznačujúca sa t ý m, že druhou zlúčeninou Je 3S-_r(3-hydroxy-4-fenylbutyl)-2R- -C 6-<lH-tetrazol-5-yl)hexyl)cyklopentanón.
21. Kombinácia podľa nároku 18, vyznačujúca sa tým, že stavom, ktorý sa prejavuje nízkou kostnou hmotou. Je osteoporóza.
22. Kombinácia podľa nároku 11 pre výrobu liečiva na liečenie stavu, ktorý sa prejavuje nízkou kostnou hmotou.

I .
23. Farmaceutická’ kompozícia, v.yznačujúca.sa tým, že zahrnuje

a. množstvo prvej zlúčeniny, pričom touto prvou zlúčeninou Je agonlsta/antagonlsta estrogénu; a

b. množstvo druhej zlúčeniny, pričom touto druhou zlúčeninou Je prostaglandín alebo agonlsta/antagonlsta prostaglandínu;

pričom množstvo prvej zlúčeniny samotnej a množstvo druhej zlúčeniny samotnej Je nedostatočné pre dosiahnutie terapeutických účinkov. ktoré spočívajú v zvýSení tvorby kostnej hmoty a znížení resorpcle kostnej hmoty. ktoré sa dosiahnu, ak sa podávajú súčasne a pričom kombinovaný účinok množstva prvej zlúčeniny a množstva druhej zlúčeniny Je väčší ako súčet liečebných účinkov dosiahnuteľných pri použití množstva prvej zlúčeniny a množstva druhej zlúčeniny Jednotlivo, t

a farmaceutický vhodné riedidlo alebo nosič.
24. Kombinácia účinných látok pre použitie pri liečenie stavu, ktorý sa prejavuje nízkou kostnou hmotou, vyznačujúca sa tým, že zahrnuje prvú zlúčeninu, ktorou Je agonista/antagonista estrogénu; a druhú zlúčeninu, ktorou je prostaglandín alebo agonista/antagonista prostaglandínu, pričom množstvo prvej zlúčeniny samotnej a množstvo druhej f

zlúčeniny samotnej Je nedostatočné pre dosiahnutie terapeutických I _t ¹ účinkov, ktoré spočívajú v zvýšení tvorby kostnej hmoty ’a znížení resorpcle kostnej hmoty, ktoré sa dosiahnu, ak sa podávajú súčasne a pričom kombinovaný účinok množstva prvej zlúčeniny a množstva druhej zlúčeniny Je väčší ako súčet liečebných účinkov dosiahnuteľných pri použití množstva prvej zlúčeniny a množstva druhej zlúčeniny Jednotlivo.
25. Klt na liečenie stavu, ktorý sa prejavuje nízkou kostnou hmotou, vyznačujúci sa tým, že obsahuje t

• ! * • 1

a. terapeuticky účinné množstvo agonistu/antagonlstu ’ ’ estrogénu a farmaceutický vhodný nosič v prvej jednotkovej dávkovacej forme;

b. terapeuticky účinné množstvo prostaglandínu alebo agonistu/antagonlstu prostaglandínu a farmaceutický vhodný nosič v druhej jednotkovej dávkovacej forme; a

c. obalový prostriedok pre prvú a druhú dávkovaciu formu.
26. Farmaceutická kompozícia, vyznačujúca sa tým, že zahrnuje

I

a. terapeuticky účinné množstvo prvej zlúčeniny, pričom touto prvou zlúčeninou Je droloxlfen, raloxifen, tamoxifen alebo idoxifen; a

b. terapeuticky účinné množstvo druhej zlúčeniny, pričom touto druhou zlúčeninou Je fluorid sodný alebo N-Ľ1CR)-C1,2-dihydro-l-metánsulfonylsplroC3H-indol-3, 4’ -plperldln]-ľ -yl)karbonyll -2-(. fenylinetyloxy) etyl] -2-amino-2-inetylpropánamid« MK-677.
27. Farmaceutická kompozícia podľa nároku 26, vyznačujúca sa tý m, že prídavné obsahuje farmaceutický nosič.
28. Komblnáciä účinných látok pre použitie pri liečení stavu, ktorý sa prejavuje nízkou kostnou hmotou, vyznačujúca sa t ý m, že zahrnuje prvú zlúčeninu, ktorou Je droloxlfen, raloxifen, tamoxifen alebo idoxifen; a druhú zlúčeninu, ktorou Je fluorid sodný alebo N-Ľ1CR5-C1, 2-dihydro-l-metánsulfonylspirot 3H-lndol-3, 4' -plperldlnJ -1' -yl)kar- bonyl] -2-C f enylmetyloxy)etyl]-2-amino-2-metylpropánamid s MK-677.
29. Kombinácia podľa nároku 28, vyznačujúca sa tým, že stavom, ktorý sa prejavuje nízkou kostnou hmotou. Je osteopôróza.
30. Kombinácia podľa nároku 26 pre výrobu liečiva na liečenie stavu, ktorý sa prejavuje nízkou kostnou hmotou.
31. Farmaceutická kompozícia, tým, že zahrnuje vyznačujúca sa

a. množstvo prvej zlúčeniny, pričom touto prvou zlúčeninou Je droloxifen, raloxifen, tamoxifen alebo idoxifen; a

b. množstvo druhej zlúčeniny, pričom touto druhou zlúčeninou Je fluorid sodný alebo N-C1(R)-Ľ1, 2-dihydro-l-metánsulfonylspiroĽ3H-indol-3, 4' -piperidin3-ľ -yl)karbonylJ-2-(fenylinetyloxy)etyl3-2-amino-2-nietylpropánamid» ΙΊΚ-677;

pričom množstvo prvej zlúčeniny samotnej a množstvo druhej zlúčeniny samotnej Je nedostatočné pre dosiahnutie terapeutických účinkov, ktoré spočívajú v zvýšení tvorby kostnej hmoty a znížení resorpcle kostnej hmoty, ktoré sa dosiahnu, ak sa podávajú súčasne a pričom kombinovaný účinok množstva prvej zlúčeniny a množstva druhej zlúčeniny Je väčší ako súčet liečebných účinkov dosiahnuteľných pri použití množstva prvej zlúčeniny a množstva druhej zlúčeniny Jednotlivo, a farmaceutický vhodné riedidlo alebo nosič.
32. Kombinácia účinných látok pre použitie pri liečení ¹ > .' stavu, ktorý sa prejavuje nízkou kostnou hmotou, vyznačujúca sa t ý m, že zahrnuje prvú zlúčeninu, ktorou Je droloxifen, raloxifen, tamoxifen alebo idoxifen; a druhú zlúčeninu, ktorou Je fluorid sodný alebo N-C1CR)-C1, 2-dlhydro-l-inetánsulfonylspiroC 3H-indol-3, 4'-piperidinJ-1’-yl)kar- bonylJ -2-C fenylmetyloxy)etyl!-2-amlno-2-metylpropánamld s MK-677;

pričom množstvo prvej zlúčeniny samotnej a množstvo druhej zlúčeniny samotnej Je nedostatočné pre dosiahnutie terapeutických účinkov, ktoré, spočívajú v zvýšení tvorby kostnej hmoty a , znížení resorpcle kostnej hmoty, ktoré sa dosiahnu, ák sa podávajú súčasne a pričom kombinovaný účinok množstva prvej zlúčeniny a množstva druhej zlúčeniny Je väčší ako súčet liečebných účinkov dosiahnuteľných pri použití množstva prvej zlúčeniny a množstva druhej zlúčeniny Jednotlivo.
33. Kit na liečenie stavu, ktorý sa prejavuje nízkou kostnou hmotou, vyznačujúci sa t ý m, že obsahuje

a. terapeuticky účinné množstvo droloxifenu, raloxlfenu. tamoxifenu alebo ldoxlfenu a farmaceutický vhodný nosič v prvej jednotkovej dávkovacej forme;

b. terapeuticky účinné množstvo fluoridu sodného alebo N-Ľ1CR)-C1, 2-dihydro-l-metánsulfonylspiroC3H-indol-3, 4’-piperidín]-1'-yl)karbonylJ-2-(fenylmetyloxy)etyl]-2-amino-2-metylpropánarnldu· FIK-677 a farmaceutický vhodný nosič v druhej Jednotkovej dávkovacej forme; a

c. obalový prostriedok pre prvú a druhú dávkovaciu formu.
34. Farmaceutická kompozícia, vyznačujúca sa tým, že zahrnuje

a. terapeuticky účinné množstvo prvej zlúčeniny, pričom touto prvou zlúčeninou Je cis-6-C4-fluórfenyl)-5-C4-C2-Íplperidln-l-yletoxy)fenyl]-5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-ol;

(~)-cls-6-feriyl-5-C4-C2-pyrolidln-l-yletoxy)fenyl]-5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-ol;

cls-6-fenyl-5-C4-(2-pyrolidln-l-yletoxy>fenylľl-5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-ol;

cis-l-lľ6' -pyrolidinoetoxy-3’ -pyridyl3-2-fenyl-6-hydroxy-l, 2, 3, 4-tétrahydronaftalén;

1-C4*-pyrolidinoetoxyfenyl)-2-C4-fluórfenyl)-6-hydroxy-l, 2, 3, 4-tetrahydrolzochlnolín;

cis-6-C4-hydroxyfenyl)-5-C 4-C2-plperldin-l-yletoxy)fenylJ-5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-ol alebo

1- C4' -pyrolidlnolotoxyfenyl)-2-fenyl-6-hydroxy-l, 2, 3, 4-tctrahydroizochlnolín a

b. terapeuticky účinné množstvo druhej zlúčeniny, pričom touto druhou zlúčeninou Jc fluorid sodný, paratyreoldný hormón, rastový hormón alebo sekretagog rastového hormónu.
35. Farmaceutická kompozícia podľa nároku 34, vyzná čujúca sa tým, že prídavné obsahuje farmaceutický nosič.
36. Farmaceutická kompozícia podľa nároku 35, vyzná čujúca sa tým, že druhou zlúčeninou Je fluorid sodný.
37. Farmaceutická kompozícia podľa nároku 35, vyzná Čujúca sa tým, žc druhou zlúčeninou Je paratyreoldný hormón.
38. Farmaceutická kompozícia podľa nároku 35, vyzná čujúca sa tým, žc druhou zlúčeninou Je rastový hormón.
39. Farmaceutická kompozícia podľa nároku 35, vyzná čujúca sa tým, že druhou zlúčeninou Jc sekretagog rastového hormónu.
40. Kombinácia účinných látok pre použitie pri liečení stavu, ktorý sa prejavuje nízkou kostnou hmotou, v y z n a č u

J ú c a sa t ý m, že prvou zlúčeninou Je

I | cis-6-C4-fluórfenyl)-5-C4-C2-piperldln-l-yletoxy)fenylJ-5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-olí

C-)-cis-6-fenyl-5-C4-C2-pyrolldin-l-yletoxy)fenyl]-5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-ol;

cis-6-fenyl-5-C4-<2-pyrolidin-l-yletoxy)fenyl]-5, 6, 7, 886

-tetrahydronaftalen-2-ol; cis-l-C6'-pyrolidinoetoxy-3'-pyrldylJ-2-fenyl-6-hydroxy-l, 2, 3, 4-tetrahydronaftalén;

1-C4' -pyrolldlnoetoxyfenyl)-2-C4''-fluórfenyI)-6-hydroxy-l, 2, 3, 4-tetrahydroizochinolín;

cis-6-C 4-hydroxyfenyl)-5-C4-C2-piperidln-l-yletoxy)fenylJ-5, B, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-ol alebo

1-C4'-pyrolidinoletoxyfenyl)-2-feriyl-6-hydroxy-l, 2» 3, 4-tetrahydroizochinolín a druhou zlúčeninou je fluorid sodný, paratyreoldný hormón, rastový hormón alebo sekretagog rastového hormónu.
41. Kombinácia podľa nároku 40. vyznačuj* úca sa t ý m, že druhou zlúčeninou j'e fluorid sodný.

ŕ

I >
42. Kombinácia podľa nároku 40, vyznačuj' úca sa tým, že druhou zlúčeninou j'e paratyreoldný hormón.
43. Kombinácia podľa nároku 40, vyznačuj* úca sa tým, že druhou zlúčeninou je rastový hormón.
44. Kombinácia podľa nároku 40, vyznačuj' úca sa tým, že druhou zlúčeninou j'e sekretagog rastového hormónu.
45. Kombinácia podľa nároku 40, vyzná.čuj' úca sa tým, že stavom, ktorý sa prej'avuj'e nízkou kostnou hmotou, je osteoporóza.
46. Kombinácia podľa nároku 34 pre výrobu liečiva na liečenie stavu, ktorý sa prej'avuj'e nízkou kostnou hmotou.
47. Farmaceutická kompozícia, vyznačuj' úca sa tým, že zahrnuje

a. množstvo prvej zlúčeniny, pričom touto prvou zlúčeninou Je cis-6-C4-fluórferiyl)-5-C4-C2-piperidin-l-yletoxy)fenyl]-5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-ol;

C-)-cis-6-fenyl-5-C4-C2-pyrolidin-l-yletoxy)fenyl]-5, 6, 7, 8- * -tetrahydronaftalen-2-ol;

cls-8-fenyl-5-C4-C2-pyrolldln-l-yletoxy)fenyl]-5, 6, 7. 8-tetrahydronaftalen-2-ol;

C1S-1-Ľ6'-pyrolidlnoetoxy-3’-pyrldyl]-2-fenyl-6-hydroxy-l, 2, 3, 4-tetrahydrona Ftalén;

1-C4'-pyrolidinoetoxyFenyl)-2-C4-fluórfenyl)-6-hydroxy-l, 2, 3, 4-te trahydroizochiriolíri;

I cls-6-C 4-hydroxyfenyl)-5-C 4-C 2-piperldin-l-yletoxy)fenyl)-5, 6, 7, 8-tetrahydronaftaleri-2-ol alebo

1-C4' -pyrolidirioletoxyfenyl)-2-fenyl-6-hydroxy-l, 2, 3, 4-tetrahydrolzochlnolín a

b. množstvo druhej zlúčeniny, pričom toubo druhou zlúčeninou Je fluorid sodný, parabyreoldný hormón, rasbový hormón alebo sekretagog rastového hormónu, * I e , ¹ i pričom množsbvo prvej zlúčeniny samobnej a množstvo druhej * zlúčeniny samotnej Je nedostatočné pre dosiahnutie terapeutických účinkov, ktoré spočívajú v zvýšení tvorby kostnej hmoty a znížení resorpcle kostnej hmoty, ktoré sa dosiahnu, ak sa podávajú súčasne a pričom kombinovaný účinok množstva prvej zlúčeniny a množstva druhej zlúčeniny Je väčší ako súčet liečebných účinkov dosiahnuteľných pri použití množstva prvej zlúčeniny a množstva druhej zlúčeniny Jednotlivo.

a farmaceutický vhodné riedidlo alebo nosič.
48. Kombinácia účinných látok pre použitie pri liečení stavu, ktorý sa prejavuje nízkou kostnou hmotou, vyznačujúca sa tým. že prvou zlúčeninou Je cis-6-C4-fludrfenyl)-5-C4-C2-piperidin-l-yletoxy)fenyl]-5, 6, 7. 8-tetrahydronaftalen-2-ol;

C-)-cls-6-fenyl-5-C4-C2-pyrolidin-l-yletoxy)fenyl]-5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-ol;

cis-6-fenyl-5-C4-C2-pyrolidin-l-yletoxy)fenyl]-5, 6. 7, 8-tetrahydronaftalen-2-ols cis-l-C6' -pyrolldlnoetoxy-3' -pyrldyl]-2-fenyl-6-hydroxy-l. 2, 3, 4-tetrahydronaftalén;

* l‘

1-C4' -pyrolidlnoetoxyfenyl)-2-C4-fluórfenyl)-6-hydroxy-l, 2, 3, 4-tetrahydroizochinolín;

cis-6-C 4-hydroxyf enyl) -5-E 4-( 2-piperldin-l-yletoxy) f enylľl -5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-ol alebo l-(4’ -pyrolidinoletoxyfenyl)-2-fenyl-6-hydroxy-l, 2, 3, 4-tetrahydroizochinolín * | I ’ f , a druhou zlúčeninou Je fluorid sodný, paratyreoldný hormón, rastový hormón alebo sekretagog rastového hormónu, pričom množstvo prvej zlúčeniny samotnej a množstvo druhej zlúčeniny samotnej Je nedostatočné pre dosiahnutie terapeutických účinkov, ktoré spočívajú v zvýšení tvorby kostnej hmoty a znížení resorpcie kostnej hmoty, ktoré sa dosiahnu, ak sa podávajú súčasne a pričom kombinovaný účinok množstva prvej zlúčeniny a množstva druhej zlúčeniny Je väčší ako súčet liečebných účinkov dosiahnuteľných pri použití množstva prvej zlúčeniny a množstva druhej zlúčeniny Jednotlivo, a farmaceutický vhodné riedidlo alebo nosič.
49. Kit na liečenie stavu, ktorý sa prejavuje nízkou kostnou hmotou, vyznačujúci sa tým, že obsahuje

a. terapeuticky účinné množstvo cis-6-<4-fluórfenyl)-5-C4-(2-piperidin-l-yletoxy)fenyl]-5. 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-olu;

<-)-cls-6-fenyl-5-C4-(2-pyrolldin-l-yletoxy)fenyl]-5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-olu;

cls-6-fenyl-5-L4-C2-pyrolldin-l-yletoxy)fenyl]-5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-olu;

C1S-1-C6' -pyrolidinoetoxy-3’ -pyridyl]-2-fenyl-6-hydroxy-l, 2, 3, 4-tetrahydronaftalénu;

1-C4* -pyrolidinoetoxyfenyl)-2-(4-fluórfenyl)-6-hydroxy-l, 2, 3, 4-tetrahydroizochlnolínu;

cis-6-C 4-hydroxyfenyl) -5-Ľ 4-< 2-piperidin-l-yletoxy) f enyl] -5, 6, 7, 8-tetrahydronaftalen-2-olu alebo

I , ·

1-C4' -pyrolidinoletoxyfenyl)-2-fenyl-6-hydroxy-l, 2, 3, 4-tetrahydrolzochlnolínu a farmaceutický vhodný nosič v prvej jednotkovej dávkovacej forme;

b. terapeuticky účinné množstvo fluoridu sodného, paratyreoldného hormónu, rastového hormónu alebo sekretagogu rastového hormónu a farmaceutický vhodný nosič v druhej jednotkovej dávkovacej formes a

c. obalový prostriedok pre prvú a druhú dávkovaciu formu.
50. Farmaceutická kompozícia podlá nároku 26. vyznačujúca sa tým, že prvou zlúčeninou Je droloxlfen.

I
51. Kombinácia podlá nároku 26, vyznačujúca sa tým. že prvou zlúčeninou Je droloxiferi.
52. Farmaceutická kompozícia podlá nároku 31, vyznačujúca sa tý m, že prvou zlúčeninou Je droloxlfen.
53. Kombinácia podlá nároku 32, vyznačujúca sa tým, že prvou zlúčeninou Je droloxlfen.
54. Kit podľa nároku 33, vyznačujúci sa tým, že prvou zlúčeninou Je droloxlfen.
55. Farmaceutická kompozícia, vyznačujúca sa t ý m, že zahrnuje

a. terapeuticky účinné množstvo prvej zlúčeniny, pričom touto prvou zlúčeninou Je raloxifen, tamoxlfen alebo idoxlfen; a

b. terapeuticky účinné množstvo druhej zlúčeniny, pričom touto druhou zlúčeninou Je paratyreoldný hormón, rastový hormón alebo sekretagog rastového hormónu.

I
56. Farmaceutická kompozícia podľa nároku 55, v y, ž n a čujúca sa tým, že prídavné obsahuje farmaceutický nosič.
57. Farmaceutická kompozícia podľa nároku 56, vyznačujúca sa tým, že prvou zlúčeninou Je raloxifen.
59. Farmaceutická kompozícia podľa nároku 56, vyzná91 čujúca sa tým, že druhou zlúčeninou Je paratyreoidný hormón.

59. Farmaceutická kompozícia podľa nároku 56, vyznačujúca sa tým, že druhou zlúčeninou Je rastový hormón.
60. Farmaceutická kompozícia podľa nároku 56, vyznačujúca sa tým, že druhou zlúčeninou Je sekretagog rastového hormónu.
61. Kombinácia účinných látok pre použitie pri liečení stavu, ktorý sa prejavuje nízkou kostnou hmotou, vyznačujúca sa tým, že prvou zlúčeninou Je raloxiten, tamoxlfen alebo idoxifen a druhou zlúčeninou Je paratyreoidný hormón, rastový hormón alebo sekretagog rastového hormónu.
62. Kombinácia podľa nároku 61, vyznačujúca sa t ý m, že prvou zlúčeninou Je raloxiten.

I
63. Kombinácia podľa nároku 61, vyznačujúca sa > t ý m, že druhou zlúčeninou Je paratyreoidný hormón.
64. Kombinácia podľa nároku 61, vyznačujúca sa tým, že druhou zlúčeninou Je rastový hormón.

6b. Kombinácia podľa nároku 61, vyznačujúca t ý m, že druhou zlúčeninou Je sekretagog rastového hormónu.
66. Kombinácia podľa nároku 61, vyznačujúca sa t ý-m, že stavom, ktorý ša prejavuje nízkou kostnou hmotou,. Je

I ' . ' .

osteoporóza.
67. Kombinácia podľa nároku použitie pri liečení stavu, ktorý hmotou.

55 pre výrobu liečiva na sa prejavuje nízkou kostnou

66. Farmaceutická kompozícia, vyznačujúca sa tým, že zahrnuje

a. množstvo prvej zlúčeniny, pričom touto prvou zlúčeninou Je raloxifen, tamoxlfen alebo idoxifen; a

b. množstvo druhej zlúčeniny, .pričom touto druhou zlúčeninou Je paratyreoidný hormón, rastový hormón alebo sekretagog rastového hormónu, pričom množstvo prvej zlúčeniny samotnej a množstvo druhej zlúčeniny samotnej Je nedostatočné pre dosiahnutie terapeutických účinkov, ktoré spočívajú v zvýšení tvorby kostnej hmoty a znížení resorpcle kostnej hmoty, ktoré sa dosiahnu, ak sa podávajú súčasne a pričom kombinovaný účinok množstva prvej zlúčeniny a množstva druhej zlúčeniny Je väčší ako súčet liečebných účinkov dosiahnuteľných pri použití množstva prvej zlúčeniny a množstva druhej zlúčeniny jednotlivo, a farmaceutický vhodné riedidlo alebo nosič.

I
69. Kombinácia účinných látok pre: použitie pri liečení stavu, ktorý sa prejavuje nízkou kostnou hmotou, vyznačujúca sa t ý m, že prvou zlúčeninou Je raloxifen, tamoxlfen alebo idoxifen a druhou zlúčeninou Je paratyreoidný hormón, rastový hormón alebo sekretagog rastového hormónu pričom množstvo prvej zlúčeniny samotnej a množstvo druhej zlúčeniny samotnej Je nedostatočné pre dosiahnutie terapeutických účinkov, ktoré spočívajú v zvýšení tvorby kostnej hmoty a znížení resorpcle , kostnej hmoty, ktoré sa' dosiahnu, ak sa podávajú súčasne a pričom kombinovaný účinok množstva prvej zlúčeniny a množstva druhej zlúčeniny Je väčší ako súčet liečebných účinkov dosiahnuteľných pri použití množstva prvej zlúčeniny a množstva druhej zlúčeniny Jednotlivo, a farmaceutický vhodné riedidlo alebo nosič.
70. Kit na liečenie stavu, ktorý sa prejavuje nízkou kostnou hmotou, vyznačujúci sa tým, že obsahuje

a. terapeuticky účinné množstvo raloxifenu, tamoxifenu alebo ldoxlfenu a farmaceutický vhodný nosič v prvej jednotkovej dávkovacej forme:

b. terapeuticky účinné množstvo paratyreoldného hormónu, rastového hormónu alebo sekretagogu rastového hormónu a farmaceutický vhodný nosič v druhej jednotkovej dávkovacej forme; a

c. obalový prostriedok pre prvú a druhú dávkovaciu formu.